hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
カフェインの輸送と蓄積の分子機構の解明

カフェインはツバキ科植物であるチャに特異的に蓄積されるプリンアルカロイドである。ツバキ科植物からカフェイン合成酵素の相同遺伝子として、20個のモチーフB'メチルトランスフェラーゼ遺伝子を単離し、分子系統解析を行った。これらの遺伝子がコードする酵素タンパク質の立体構造を推定し、基質結合部位を比較した。さらに、チャの植物体からカフェインを蓄積する緑色カルスを誘導し、カフェインの輸送と蓄積を研究するためのモデル実験系を確立した。カフェイン(1,3,7-トリメチルキサンチン)は、細胞内のサイトゾルで合成され、液胞に蓄積される。この研究はカフェインが合成されてから蓄積されるまでの分子機構を明らかにすることを目的とする。まず、カフェインを蓄積しない近縁の植物には、合成、輸送、蓄積のすべてのメカニズムが欠除しているのか、それともその一部だけが作動していないのかも明らかになっていない、そのため、カフェインを蓄積しないツバキ科植物に存在する、カフェイン合成酵素のオーソロガス遺伝子の単離を試みた。その結果、調べた限りのツバキ科植物で、オーソロガス遺伝子の転写産物の存在が認められた。しかし、カフェイン合成酵素との相同性は4080%であった。これらの遺伝子の全長の単離を進めている。さらに、全長の単離に成功した遺伝子から、基質特異性を特定するための組換え型酵素を作製を進めている。さらに、カフェインが合成された後の液胞への細胞内輸送とその蓄積を明らかにするために、チャ葉およびチャの白色培養細胞から液胞の単離方法の確立をめざし、検討を重ねた。液胞を単離するために必要な細胞のプロトプラスト化の条件を検討した。一般的なプロトプラスト化の条件では、両材料ともにプロトプラスト化の効率が低く、収率の向上をめざしたさらなる条件検討が必要であることがわかった。そのため、並行して、新たに実験モデルとなりうる材料を模索し、新たにカフェイン合成能の高い培養細胞の作出に取り組んでいる。植物内で合成されたカフェインの輸送と蓄積を調べるために、チャ(Camellia sinenesis)葉の伸長時にカフェイン合成酵素の転写産物と同じ発現パターンを示すトランスポーターの候補遺伝子を検出した。この遺伝子はMRP型ABCトランスポーター遺伝子と推定され、チャ葉の若い時期に最も高く発現し、葉が展開していく過程で発現量が減少した。現在、この遺伝子の解析を進めると共に、チャの培養細胞やカルスでの発現状況を追跡している。一方で、カフェインを蓄積しないツバキ属以外のツバキ科植物に存在するカフェイン合成酵素のオーソロガス遺伝子の単離と解析を行った。研究材料としたカフェインを蓄積しない10種のツバキ科植物にも、オーソロガス遺伝子およびその転写産物は存在していたが、葉の伸長時における転写産物の発現パターンはチャのカフェイン合成酵素とは明らかに異なっていた。これらの遺伝子がコードするタンパク質は、構造内に4つの保存領域をもつサイトゾルに存在するメチルトランスフェラーゼであるが、その多くは真の基質の同定までは至らなかった。しかし、テオブロミン合成に関与すると推定されるメチルトランスフェラーゼ遺伝子も得られ、この組換え型酵素の性質は、以前に報告したツバキ属植物の性質と類似していた。これらのカフェインを蓄積しないツバキ科植物において、チャ葉で検出されてたカフェイン輸送に関与する可能性のあるMRP型ABCトランスポーター遺伝子候補の存在について検討を行っている。10種のツバキ科植物に存在するカフェイン合成酵素のオーソロガス遺伝子の単離と解析を昨年度に引き続き行った。得られた遺伝子がコードするモチーフB'メチルトランスフェラーゼの基質の同定を、組換え型酵素を用いて試みた。その結果、テオブロミンシンターゼとサリチル酸メチルトランスフェラーゼを同定することができた。プリンアルカロイドを蓄積しないツバキ科植物にもテオブロミンシンターゼが発現していた。これらのオーソロガス遺伝子のコードするメチルトランスフェラーゼを、Clarkia breweriのサリチル酸メチルトランスフェラーゼを鋳型としてホモロジーモデリングによる立体構造の推定を行った。得られたメチルトランスフェラーゼのアミノ酸配列の相同性は低い場合では40%程度であるが、立体構造には共通した特徴がみられた。しかし、基質が結合すると思われる空間の形状はさまざまであり、酵素遺伝子の進化の過程でこの空間が変化することにより新たなメチル化の機能を獲得して、多様な二次代謝産物を生む原動力となったことが示唆された。一方で、カフェインを蓄積するチャ(Camellia sinensis)の緑色カルスの系を確立することに成功した。このカルスにジャスモン酸を投与することでカフェイン合成を誘導することが可能となった。ジャスモン酸によって発現誘導される遺伝子のうち、カフェイン合成酵素遺伝子の転写制御に関与すると思われる遺伝子断片の情報を得ることができた。カフェイン輸送に関与するトランスポーターの候補遺伝子を解析中である。24年度が最終年度であるため、記入しない。

昨年度までに、チャの生葉からの液胞の単離方法が確立できなかったことから、カフェイン合成能の高いチャの緑色カルスを新たに誘導した。今年度は、生葉と並行してカルスを用いて、液胞に関する研究を進めて行く予定である。24年度が最終年度であるため、記入しない。
細胞質内シャペロンネットワークにおけるスモールヒートショックプロテインの機能

超好熱性古細菌Thermococcus strain KS-1(TKS1)における、スモールヒートショックプロテイン(sHsp)と他の分子シャペロンとの協調機構解明を目的に研究を行った。超好熱性古細菌に存在する分子シャペロンの中で、タンパク質フォールディング活性が確認されているのはグループ2型シャペロニン(CPN)だけである。我々は、以前、プレフォルディン(PFD)が変性蛋白質を捕捉後、CPNに受け渡し、CPNがATP依存的にフォールディングを行う協調機構を明らかにしている。そこで、PFD-CPNシステムとsHspの協調機構を解析した。その結果、以下のような協調機構が明らかになった。高温条件下において、sHspは複合体が解離することで変性状態の基質を捕捉し凝集を抑制する。その後、低温に温度変化すると、解離状態から再び複合体を形成することで基質がはずれ、CPNがその基質を捕捉しATP依存的にフォールディングを行う。sHspはPFDとは協調することはなく、条件や基質により使い分けられていることが示唆された。また、最近、T.KS1の近縁種であるT.kodakaraensisKOD1株において、AAAタンパク質をコードする遺伝子がsHsp遺伝子と隣接して存在し、同時に転写制御されることが報告された。我々は、このAAAタンパク質が超好熱性古細菌においてsHspと協調して機能していると考え、TKS1からこのAAAタンパク質(TKS1-cdcA)の遺伝子をクローニングし、大腸菌で発現させた。精製したTKS1-cdcAの構造をHPLCのゲル濾過クロマトグラフィーと透過型電子顕微鏡を用いて解析したところ、6量体リング状構造を形成していることが明らかとなった。また、他のAAAファミリータンパク質と同程度のATPase活性を有していた。さらに,クエン酸合成酵素やIPMDHをモデル基質とした、変性タンパク質の凝集抑制能及びリフォールディング活性などを解析した。sHspは生物界に普遍的に存在する分子シャペロンであり、変性タンパク質の不可逆的凝集を抑制する機能を持つ。通常の温度条件下では、分子量1243kDaのサブユニットが大きなオリゴマーを形成しており、熱によってそのオリゴマー構造が可逆的に解離する。解離したsHspは疎水性表面を露出し、変性タンパク質と相互作用することでその凝集を防ぐと考えられている。本年度は、超好熱性古細菌、分裂酵母と磁性細菌のsHsp及びsHspと協調して機能するタンパク質の機能の解析を行った。超好熱性古細菌Thermococcus sp.KS-1においてsHspの遺伝子と隣接した遺伝子にコードされているAAAタンパク質に着目し、その発現と機能解析を行った。磁性細菌Magnetospirillum magneticum AMB-1のゲノムには3つのsHsp遺伝子が存在した。分子量からそれぞれHsp17.8、Hsp17.5、Hsp18.3と命名し、発現して機能及び構造解析を行った。いずれも分子シャペロンとして機能していたが、Hsp17.8は球状のオリゴマーを形成しているのに対し、Hsp17.5、Hsp18.3は巨大なフィラメント構造を形成していた。これまでにもsHspがフィラメント構造を形成する報告はあるものの、タンパク質の凝集抑制能を有するものとしては、初めての例である。分裂酵母については、協調して機能する分子シャペロン群に着目し、Hsp90の機能構造解析を継続するとともに、in vivoでのシャペロンネットワーク解析でのシャペロンネットワーク解析を目的にHsp70、40及び104の分裂酵母での発現系の構築を行った。
高圧力磁気測定の技術開発がもたらす磁性・超伝導材料研究のブレイクスルー

SQUIDを用いた高圧力下磁気測定システムを開発した。市販のSQUID磁束計を用いた手法ではダイヤモンドアンビルセルの材質を変更し、精密磁化測定の手法を確立した。また、更なる高精度を実現するために、コイル振動型SQUID磁束計を立ち上げた。これらの測定技術を、NdFeB永久磁石、銅酸化物超伝導体、有機強磁性体、固体酸素等の高圧実験に適用した。また、単一元素超伝導体においては、超伝導転移温度Tcをこれまで以上に上昇させるために、強歪み加工材の高圧力実験を行った。さらに、Y-124, Hg-1223系の銅酸化物超伝導体の一軸性圧縮実験においては、Tcを効果的に上昇させる構造変形を明らかにした。本研究は、100GPaを視野に入れた高圧力下での磁化・磁化率測定の基盤技術を構築し、“水銀系銅酸化物超伝導体"“NdFeB永久磁石"“固体酸素"に対して先駆的な物理現象を発掘することを目指す研究である。以下、平成26年度の具体的な研究成果を列挙する。・水銀系銅酸化物超伝導体(Hg1223, Hg1212)の高圧力下磁化率測定においては、試料空間体積・圧力媒体の諸条件を変えて測定を繰り返したものの、キュービックアンビルセルを用いた電気抵抗測定で観測された超伝導転移温度を上回る結果を得ることはできていない。しかし、Ln-1111系の鉄系超伝導体においては、キュービックアンビルセルを用いた電気抵抗測定の結果を矛盾しない結果を得ており、そこでは体積分率の圧力変化に関する新しい物理的知見を得た。・Ti合金製ダイヤモンドアンビルセルの開発による高圧力下磁化曲線測定については、等方性NdFeB磁石に対して400Kまでの温度域・±7Tまでの直流磁場域で10GPaまでの高精度な測定に成功した。これまで得られてこなかった保磁場・飽和磁化の温度・圧力変化に関する知見を得られたことは、元素戦略的観点に立った研究という意味からも価値のある成果である。その成果の一部は有機ラジカル磁性体の実験に活用された。・固体酸素の磁気測定については、使用するガスケット材の再吟味と酸素封入過程の最適条件探索によって、1年前の段階では3GPaであった最高測定圧力が10GPaまで向上したことは大きな成果である。また、β-液体転移、δ-β転移、ε-β転移(非磁性-磁性転移)も研究対象にすることができるようになったことは本研究を勢いづける成果である。また、YBa2Cu4O8系銅酸化物超伝導体のYサイトにCaがドープされた試料に対する高圧力効果の結果を論文発表することができた(JPSJ2016,低温工学)。マイスナー効果の消失を起こす応力領域において、静水圧力・一軸歪み(ab面平行・ab面垂直)の効果を調べ、歪みのスタイルの違いによって、超伝導状態がいかに変化するかを系統的に調査した。Hg-1223系銅酸化物超伝導体においては、静水圧力・一軸歪み(ab面平行・ab面垂直)の測定を行い、超伝導転移温度を上昇させるために一番適した歪みスタイルを実験的に明らかにした。静水圧力実験については、圧力媒体を系統的に変えた実験も行った。これらの成果を応用物理学会・物理学会(九州支部例会)において発表した。100GPaに迫る圧力領域での磁気測定を開拓すべく、超伝導量子干渉素子(SQUID)とコイル振動型磁気測定方式(vibrating coil magnetometer: VCM)を融合したスタイルの磁気測定方法にダイヤモンドアンビルセル(DAC)を使用する実験システムの開発を進めた。10GPaまでの領域で測定実績を積み上げることには成功しており[物理学会(九州支部例会)にて発表]、今後は更なる圧力領域の拡大を目指す。また、研究分担者の山本と竹下は、Hg-1223系銅酸化物超伝導体を高圧合成し、キャリア数の異なる試料に対して高圧力下電気抵抗測定を行い、論文発表を行った(Nat. Commun. 2016)。そのほかにも、キラル磁性体と有機ラジカル強磁性体においても、磁気測定・構造解析の両面で高圧力実験を遂行し、磁性と構造と相関を系統的に研究した(JAP2015, JACS2015)。論文発表も数本あり、装置開発の面でも大きな進展があった。まだ、論文発表できていない研究材料が数多くあるので論文作成のペースは落とせない。また、より大きなブレイクスルーに繋げるためにも装置開発のスピードを上げていかなければならない。常圧下で最も高い超伝導転移温度Tcを示す物質であり、かつCuO2面の3枚積層がone packageになっている水銀系銅酸化物超伝導体Hg-1223は、静水加圧で元来の130Kから150Kを超えるレベルまでTcが上昇することが知られている。本研究では、Hgサイトを一部Reで置換した単結晶試料において、一軸性圧縮実験ならびに静水加圧実験を系統的に行った。そこで、Hg-1223のTcを圧縮下で上昇させる上で、等方的に外力を印加する静水加圧が最適であることを明らかにした。この結果は、第一原理計算によるバンド計算の結果によっても支持された。Tcが上昇する現象において、HgサイトからCuO2 packageへのホールキャリアドープが重要な役割を果たしていることを突き止めた。

本成果は、代表的な超伝導体の一つであるHg-1223の超伝導転移温度上昇のメカニズムを解明したこととして意義深い。レニウムの強ひずみ加工材において、せん断歪みによってTcが約2倍にも上昇することを観測し、高圧力下構造解析と第一原理計算によるバンド計算から、せん断ひずみ印加による単位胞の膨張が原因であることを突き止めた。また、ニオビウムの強ひずみ加工材を静水加圧することによって、従来の無歪み材の静水圧力下でのTcの上昇を、僅かであるが上回るTcの上昇を観測した。単一元素系超伝導体のTc上昇の新たなアプローチを開拓した。装置開発面では、高圧力実験対応のコイル振動型SQUID磁束計の立ち上げにおおむね成功した。特に、検出コイルとガスケット材の配置関係について十分な試行錯誤を重ねることができた。また、50GPa以上を狙うための、ガスケット開発にも成功し、ハード面の整備はおおむね満足いくものになった。また、有機強磁性体においては、圧力印加によって強磁性転移温度の世界記録を更新した。SQUIDを用いた高圧力下磁気測定システムを開発した。市販のSQUID磁束計を用いた手法ではダイヤモンドアンビルセルの材質を変更し、精密磁化測定の手法を確立した。また、更なる高精度を実現するために、コイル振動型SQUID磁束計を立ち上げた。これらの測定技術を、NdFeB永久磁石、銅酸化物超伝導体、有機強磁性体、固体酸素等の高圧実験に適用した。また、単一元素超伝導体においては、超伝導転移温度Tcをこれまで以上に上昇させるために、強歪み加工材の高圧力実験を行った。さらに、Y-124, Hg-1223系の銅酸化物超伝導体の一軸性圧縮実験においては、Tcを効果的に上昇させる構造変形を明らかにした。・広範囲の温度域での高圧力下磁化曲線測定においては着実に測定技術を向上できている。今後、大幅に改良できることは限られているが、測定対象を吟味すれば、30GPaまでの測定も夢ではないレベルにある。・固体酸素の高圧力下磁気測定の圧力領域の拡大には目覚ましいものがあり、今後は更なる測定精度の向上を図ることで、固体酸素の新規物性を磁気測定から発掘できる状況にある。・銅酸化物超伝導体の高圧力下磁気測定の圧力領域は25GPaまで拡大できている。しかし、圧力容器内の静水圧性が問題してか、キュービックアンビルセルを用いた電気抵抗測定の結果をしのぐ成果は得られていない。測定試料を吟味するところにまで立ち戻って、研究計画を検討する必要がある。Hg-1223系銅酸化物超伝導体の静水圧力の結果と一軸圧縮効果の結果を論文発表する。静水圧性の向上と超伝導転移温度の上昇度合の関係を追及する研究は今年度も継続する。超伝導体と装置開発に注力するあまり、固体酸素の高圧力下磁気測定が手薄になっているので、平成28年度はこの研究を精力的に行う。最後に、SQUID-VCM方式の磁気測定の開発のスピードを速め、100GPaまでの磁気測定を何とか成功させたい。この測定システムを用いて、希土類強磁性体と巨大歪み処理された単一元素超伝導体の高圧力下磁気測定を進めていく。28年度が最終年度であるため、記入しない。高圧物性・より広範囲の温度域での高圧力下磁化曲線測定においては、ダイヤモンドアンビルの先端径を小さくする一方で、アンビルの高さを高くするなどのダイヤモンドの強度を軽減しない環境を作りながら、圧力領域を着実に上昇させつつ、磁気測定の統計平均処理を駆使することで測定環境の拡充を図る。・固体酸素の高圧力
細胞分化に伴う膜ステロ-ルのグリコシレ-ション

真性粘菌Pyhsarum polycephalumが半数体のミクソアメ-バから2倍体の変形体へと分化する過程において、その膜画分にステロ-ルグルコシドが出現することを見出し、その物質と分離・精製して分析したところ、構造はポリフェラステロ-ルモノグルコシドであることが分かった(J.Biol.Chem.262、16719に発表)。又、その物質を合成する酵素、UDP-グルコ-スケポリフェラステロ-ルグルコシルトランスフェラ-ゼが分化に伴って発現することを認め、部分精製した酵素について諸性質を調べた。分子量は72,000、至適pHは7.0で、ポリフェラステロ-ルの他に、シトステロ-ル、カンペステロ-ルがよい基質となったが、ポリフェラステロ-ルのC-24エピマ-であるスティグマステロ-ルは、よい基質とはならなかった。UDP-グルコ-スとポリフェラステロ-ルに対するKm値はそれぞれ、1.2×10^<-4>M,4.8×10^<-6>Mであった(Biochim,Biophys,Acta 992、412に発表)。また、Physarum polycephalumの突然変異体コロニア株は、ミクソアメ-バから核相の変化なしに変形体へと分化するが、この株では、ミクソアメ-バの時期から既にUDP-グルコ-ス:ポリフェラステロ-ルグルコシルトランスフェラ-ゼ活性を持ち、ポリフェラステロ-ルモノグルコシドを合成していることが分かった。また、この株は、野生株と比べてはるかに高いグルコ-ス取り込み能と、膜融合能を示す。ステロ-ルグルコシドの膜における生理的役割を探るために、共に膜と構成しているリン脂質と、ステロ-ルグルコシドの前駆体である遊離ステロ-ルの動態について検討を行った。その結果、リン脂質組成とその分解酵素の活性が分化の過程で大きく変化すること(Biochim,Biophys,Acta印刷中)と、遊離ステロ-ル組成に僅かの変化があること(Cell Struct,Funct,12、519)を見出した。63年度は、ポリフェラステロールにグルコースを転移するUDP-グルコース:ポリフェラステロールグルコシルトランスフェラーゼ活性の動態と、その酵素の性質についての検討を行った。その結果、この酵素活性が粘菌のアメーバ期には全く検出されず、アメーバの接合を境に発現して、ポリフェラステロールモノグルコシドの合成を開始することが確かめられた。また、この酵素の性質を調べたところ、分子量は約72000で至適pHは7.0、ポリフェラステロール、シトステロール、カンペステロールが反応のよい基質となり得た。また、ポリフェラステロールのC-24エピマーであるスティグマステロールはよい基質とはならなかった。反応のKm値は、UDP-グルコースに対しては1.2×10^<-4>M、ポリフェラステロールに対しては4.8×10^<-6>Mであった(以上、Biochim.Biophys.Actaに投稿、印刷中)。また、接合を経ずしてアメーバからプラズモディウムヘと分化する突然変位株(コロニア株)では、アメーバ期に既にUDP-グルコース:ポリフェラステロールグルコシルトランスフェラーゼ活性を発現し、ポリフェラステロールモノグルコシドを合成していることが確かめられた。

野性株のアメーバとコロニア株のアメーバとの間には、膜の種々の性質の違いが観察される。以上の知見を基にして、粘菌をモデル系として用い、細胞の膜におけるステリルグルコシドの役割について、現在、検討を進めている。昭和63年度までに、真性粘菌Physarum polycephalumのミクソアメ-バから変形体への分化に伴って、ポリフェラステロ-ルモノグルコシドが出現すること(J.Biol.Chem.262、16719)、粘菌細胞の主要ステロ-ル成分が変化すること(Cell Struct Funct,12,519)を明らかにし、更に、ポリフェラステロ-ルにグルコ-スを転移する、UDP-グルコ-ス:ポリフェラステロ-ルグルコシルトランスフェラ-ゼが、分化に伴って発現することを見出した。そして、この酵素を部分精製し、性質について詳しい検討を行った(Biochim.Biophys.Acta 992,412)。平成元年度は、Physarum polycephalumの突然変異体であるコロニア株を用いて、次のことがらを明らかにした。コロニア株は、核相の変化なしに、ミクソアメ-バから変形体へと分化する。この株は、野生株と異なって、ミクソアメ-バ期から既にUDP-グルコ-ス:ポリフェラステロ-ルグルコシルトランスフェラ-ゼ活性を有し、ポリフェラステロ-ルモノグルコシドの合成を行っていることが分かった。(第42回細胞生物学会大会で発表)。また、野生株と突然変異株では、D-グルコ-スの取り込み能と膜融合能に大きな差があることが観察された。膜の機能におけるステロ-ルグルコシドの役割を明らかにするため、共に膜を構成しているリン脂質の動態を調べた。その結果、膜のリン脂質とその分解酵素が、細胞分化に伴って著しく変化することが分かった。この変化は、野生株とコロニア株でほとんど同様であった。(Biochim.Biophys,Acta,印刷中)。現在、これらの成分を大量に分離・精製する方法を開発し、純粋な系での解析を行うための準備をしている。
グリア細胞由来リポプロテインによる緑内障治療法の開発

日本の失明原因疾患第一位である緑内障の発症機序とグリア細胞由来リポプロテインによる神経保護機構の解明および新規治療法の開発を本研究の目的とした。緑内障では視神経を構成する網膜神経節細胞の変性が誘導されることから、初代培養網膜神経節細胞に神経障害を誘導し、その変性機構とリポプロテインによる神経保護機構を詳細に解析した。その結果、リポプロテインはカルシウム過剰流入を阻害することで保護効果を発揮することを明らかにし、新規治療法開発に繋がる成果を得た。緑内障は神経変性疾患の一つであり、日本における中途失明原因疾患の第1位、世界の第2位である。本疾患に対する危険因子は加齢、高眼圧、糖尿病などがあるが、本質的な発症原因は不明である。現在、緑内障に対する治療効果が証明されている唯一の治療法は眼圧下降であるが、治療効果が限定的なため、新たな治療法や治療薬の開発が切望されている。本研究では、研究代表者が以前の研究で明らかにしたグリア細胞由来アポリポ蛋白E(アポE)含有リポ蛋白によるリポタンパク受容体(low density lipoprotein receptor-related protein 1 : LRP1)を介した神経保護機構の詳細な解析を行った。実験には視神経を構成する網膜神経節細胞の初代培養細胞を使用した。神経細胞培養液に、栄養因子欠乏または興奮性アミノ酸、炎症性サイトカイン障害を誘導し、24時間後のアポトーシス細胞の割合を核染色により計測した。栄養因子欠乏および興奮性アミノ酸はアポトーシスを誘導したが、炎症性サイトカインではアポトーシスが誘導されなかった。アポE含有リポ蛋白は栄養因子欠乏および興奮性アミノ酸神経障害に対し、強力な神経保護効果を発揮した。この神経保護効果にはアポEが脂質と結合することが必要であり、アポE含有リポ蛋白による神経保護にはLRP1を介したカルシニューリンやグリコーゲンシンターゼキナーゼ3βの不活性化が重要であることが示された。本研究により、緑内障治療薬の開発に繋がると考えられる視神経保護機構の一端が明らかとなった。今後、さらに本研究を発展させることで、緑内障の治療法開発に寄与できる重要な成果であると考えている。緑内障は日本における中途失明原因疾患の第1位、世界における第2位である。本疾患に対する危険因子は加齢、高眼圧、糖尿病などが知られているが、本質的な発症原因は不明である。現在、緑内障に対して治療効果が証明されている唯一の治療法は眼圧下降であり、緑内障の病型によっては治療効果が限定的なため、新たな治療法・治療薬の開発が期待されている。研究代表者は以前の研究で、グリア細胞由来のアポリポプロテインE(アポE)含有リポプロテインが、リポプロテイン受容体を介して、初代培養網膜神経節細胞の栄養因子欠乏による神経細胞死を強力に阻害することを明らかにした。そこで本研究では、緑内障モデルマウスであるグルタミン酸トランスポーター欠損マウス(GLAST欠損マウス)を用いて、アポE含有リポプロテインが神経保護効果を発揮するかを検討し、それと同時に詳細な神経保護機構を、初代培養網膜神経細胞を用いて解析する実験計画を立てた。先行して行った初代培養網膜神経細胞による研究では、神経細胞培養液中に興奮性アミノ酸(グルタミン酸)を添加することで神経障害を誘導した。細胞内シグナル伝達系の解析の結果、網膜神経節細胞のグルタミン酸による細胞死は、ミトコンドリアを介したカルシウム依存性であり、アポE含有リポプロテインは、このカルシウム流入を阻害することで神経保護効果を発揮することが明らかとなった。またコンパートメント培養法を用いた実験で、グルタミン酸神経毒性は、神経細胞の細胞体周辺部で誘導されることが示された。緑内障モデルマウスを用いた予備実験では、弱いながらも神経保護効果が観察された。本研究で得られた実績により、緑内障治療薬の開発に繋がると考えられる視神経変性機構およびアポE含有リポプロテインによる神経保護機構の一端が明らかとなった。
改変型TRECK法による消化管ペースメーカー細胞再生機構の解明

カハールの介在細胞(ICC)はペースメーカー細胞として消化管運動を制御している。本研究では、TRECK法を用いて後天的にICCを特異的に欠損したマウスを作製し、さらにGFP-間葉系幹細胞を移植し、ICCの再生過程とペースメーカーと消化管輸送能との連関を解析することで、消化器疾患における新たな治療標的としてのICC再生医療の基盤を構築することを目的にした。ANO-1およびc-kit遺伝子における発現調節領域約15-20kbを、ヒト由来のDTレセプター(hDTR)/loxp配列遺伝子、およびCreリコンビナーゼ遺伝子に接続した2つのコンストラクトを作製し、両トランスジェニックマウスの作製を試みた。本研究では、1改良型TRECK(Toxin Receptor mediated Cell-Knockout)法により、マウス体内からInterstitial cells of Cajar (ICC)をコンディショナルかつ特異的に欠損可能なマウスを作製し、2このICC欠損マウスにGFP-間葉系幹細胞を移植し、ICCの再生過程と、ペースメーカー機能や消化管輸送能との連関を解析することで、消化器疾患における新たな治療標的としてのICC再生医療の基盤を構築する、ことを目的とする。初年度は、Ano-1およびc-kit遺伝子を標的にしたICCのDouble Promoter-Derived-TRECK(DPD-TRECK)マウスを作製するために、コンストラクトを作製した。具体的には、ANO-1およびc-kit遺伝子における発現調節領域約15-20kbを、両端にloxP配列を配置したkanamycin耐性遺伝子(kan)等のマーカー遺伝子を介してヒト由来のDTレセプター(hDTR)遺伝子に接続、およびCreリコンビナーゼ遺伝子に接続した2つのコンストラクトを作製した(Ano-1/Creとc-kit/loxp/ hDTR)。Ano-1のトランスジェニックマウスの作製を行い、全部で5ラインのTGマウスを樹立した。現在、Creの活性検証を実施し、どのラインを用いるか検討している。一方、c-kit/loxp/hDTRについては、上手くトランスジェニックマウスが得られず、コンストラクトを作り直すなどして対処した。結果として、幾つかのマウスが得られ、現在ジェノタイピングによる確認作業中である。確認作業の後、複数のラインを樹立し、loxpの機能確認実験を行い、Ano1/Creマウスとの交配を極力早く開始する。c-kit/loxp/hDTRコンストラクトの受精卵へのインジェクションが上手く進まず、子供を得るのに時間がかかった。結局、コンストラクトを作り直すことで標的遺伝子を組み込んだマウスの作出目処を立てることができた。現在は、Ano-1/Creマウスの機能発現が正常であるか確認するとともに、両系統のマウスの交配準備を行っている。消化管は自動能を持つ臓器であり、間葉系幹細胞由来の「カハールの介在細胞」(Interstitial Cells of Cajal; ICC)がペースメーカー細胞として機能することで蠕動運動が維持されている。近年、ICCの分化や機能を制御する遺伝子の先天的異常や、様々な炎症性刺激によってICCの機能が低下し、消化管運動機能が障害されることが報告されている。特に遺伝子異常による疾患は致死的であり、再生医療を視野に入れたICCの機能再建が期待されている。特異的に欠損可能なマウスを作製し、2このICC欠損マウスにGFP-間葉系幹細胞を移植し、ICCの再生過程と、ペースメーカー機能や消化管輸送能との連関を解析することで、消化器疾患における新たな治療標的としてのICC再生医療の基盤を構築する、ことを目的とした。ANO-1およびc-kit遺伝子における発現調節領域約15-20kbを、両端にloxP配列を配置したkanamycin耐性遺伝子(kan)等のマーカー遺伝子を介してヒト由来のDTレセプター(hDTR)遺伝子に接続、およびCreリコンビナーゼ遺伝子に接続した2つのコンストラクトを作製し、各々トランスジェニック(Tg)マウスの作製を試みた。ANO1-Creマウスならびに、c-kit-Creマウスの作出に成功した。現在、それぞれ3種の異なるトランスジェニックマウスについて標的遺伝子の発現状態について解析中である。また、ANO1-loxp/hDTRならびにc-kit-loxp/hDTRマウスの作製中である。今後、これらを交配してc-kit/ANO-1 DPD-TRECKマウスの作出を試みる。DPD-TRECK法によるマウス作出においては、2系統のTGマウスを作出しなくてはならず、それぞれの系統でのTGのラインの選定作業などを考慮すると、本DPD-TRECKマウス作出には、まだ時間がかかると考えられる。今後、なるべく早い時期に、Ano1/Creマウスとc-kit/loxp/hDTR

マウスの機能発現確認を終え、両系統の交配に着手する。得られたICC/DPD-TRECKマウスを用いて、DTによるICC傷害の程度の確認はc-kit抗体による免疫染色法で行い、この際、消化管運動機能について、摘出腸管を用いたEx vivo実験とデキストランビーズを用いた消化管輸送能試験で行う。初年度は、TRECKマウス作製のためのコンストラクトの作製に時間がかかり、初年度が終了する段階で、Ano1/Creトランスジェニックマウスについては、漸く5匹のマウスが得られたため、現在5つのTGラインを作製中である。また、c-kit/lox/hDTRについては漸くマウスが数匹得られた段階で、これからGenotypingで遺伝子の挿入を確認する必要がある。このように、初年度はDPD-TRECKマウス作出に至っていないことから次年度に予算を残す事とした。次年度は、Ano-1/Creのラインとc-kit/lox/hDTRの各TGラインを樹立し、そこからICC/DPD-TRECKマウスの作出を第一段階として目指す。残した予算は、これらのマウスの作出に大方使用する予定である。さらに、得られたマウスにDTを投与し、ICCの傷害誘導を引き起こす実験条件などの詳細を決定し、後天的にICC傷害を引き起こした際のICCの再生と機能回復について解析していく。
在日外国人の日本語学習支援ツール「日本語ポートフォリオ」を媒介とした支援者の学び

ボランティアが『日本語ポートフォリオ』をどのように使うかは、ボランティアの『日本語ポートフォリオ』への関心の度合いとともに、学習者側の要因にも影響されている。学習者側の要因には、ボランティアが『日本語ポートフォリオ』を使うことの障害になるものも、助けとなるものもある。ボランティアの『日本語ポートフォリオ』への関心の度合いは日本語教育についての専門知識があるかどうかとは関係がない。ボランティアへのアドバイジングには、ボランティアの学びを助ける機能がある。また自分の学習活動の録音を聞くことも学びを促進する。本研究は、在日外国人の日本語習得を支援するボランティアが、学習ツール『日本語ポートフォリオ』を使いこなせるようになるまでにはどのような学びの過程を経るのか、その過程で必要なサポートはどのようなものかを明らかにすることである。本年度は以下の作業を行った。1.学習者向けJLP使用の手引きと依頼書の作成と翻訳2.調査2名のボランティアの協力を得て、それぞれに関して以下のことを行った。(1)事前インタビュー、(2)『日本語ポートフォリオ』を使った学習活動の録音(8回)、(3)各ボランティアへのアドバイジングとその録音(7回ないし8回)、(4)アドバイジングを行う大学院生との打ち合わせ(8回)、(5)事後インタビュー3名のボランティアの調査を行う予定だったが、協力してくれる学習者探しが難航したこと、ボランティアと学習者の家庭の事情や健康上の理由で調査終了が遅れたことが原因で、2名しか行えなかった。3.データ整理(1)録音データの文字化、(2)文字化データの一部のチェック4.『日本語ポートフォリオ』のベトナム語版および韓国語版の作成これは当初の計画にはなかったが、これらの版があれば、協力者が確保できる見通しが立ったので作成した。今年度はこれらの版を使った調査ができなかったが、来年度以降の研究に継続し使用する。本研究は、在日外国人のための日本語学習支援ツール『日本語ポートフォリオ』(JLP)を開発し、ユーザーである学習者と学習支援をするボランティアへのサポート・システムを構築するという長期的なプロジェクトの一部である。本研究の目的は、在日外国人の日本語習得を支援するボランティアが、学習ツール『日本語ポートフォリオ』を使いこなせるようになるまでにはどのような学びの過程を経るのか、その過程で必要なサポートはどのようなものかを明らかにすることである。1.調査3名のボランティアの協力を得て、それぞれに関して以下のことを行った。(1)事前インタビュー、(2)『日本語ポートフォリオ』を使った学習活動の録音(8回)、(3)各ボランティアへのアドバイジングとその録音(7回ないし8回)、(4)アドバイジングを行う大学院生との打ち合わせ(8回)、(5)事後インタビュー2.データ整理(1)録音データの文字化、(2)文字化データの一部のチェック3.データ分析前年度にデータを収集した2名のボランティアのデータについて、1名ごとにデータをトピックごとに分割し、それらのカテゴリー化と時系列にそった並べ替えの2つの作業を行い、どのようなできごとがどのような学びにつながったのかを時間の流れの中で記述した。うち1名の分析結果をケーススタディとして、ベルゲン大学で行われた、The 10^<th> Nordic Conference on Learner Autonomy in FL classroomで発表した。本研究は、在日外国人のための日本語学習支援ツール『日本語ポートフォリオ』(JLP)を関発し、ユーザーである学習者と学習支援をするボランティアへのサポート・システムを構築するという長期的なプロジェクトの一部である。1.データ整理(1)2009年度収集録音データの文字化、(2)文字化データのチェック2.データ分析前年度にデータを収集した3名のボランティアのデータについて、1名ごとにどのようなできごとがどのような学びにつながったのかを時間の流れの中で記述した。うち1名の分析結果について、特にボランティアにアドバイジングを行ったアドバイザーの役割に焦点をあて、ケーススタディとして、香港教育学院で行われた、The 2^<nd>East Asian International Conference on Teacher Educationで発表した。分析の結果わかったことは以下の3点にまとめられる。1)ボランティアが『日本語ポートフォリオ』を使って成果を挙げるために、自己主導型学習の意義と『日本語ポートフォリオ』の役割を理解していれば、日本語に関する専門知識は必ずしも必要ない。2)ボランティアが『日本語ポートフォリオ』を使うのを助ける学習者側の要因がある。3)ボランティアは学習のリソースや方法に関する選択肢だけではなく、1回のセッションの構造、複数回にわたる計画の立て方、時間管理などの学習活動のマネジメントに関することもサポートを必要とする。3.報告書の作成3年間の調査に関して報告書を作成した。
ルーマニアにおけるシオランと「シオラン」の生成

本年度は二つの領域に区分して研究を遂行した。1.戦間期ルーマニア思想史の研究、ならびに2.フランスのジャック・ドゥセ図書館に所蔵されているシオランの草稿の研究である。1.については、昨年度までの研究成果に基づきつつ、シオランの同世代の知識人ブクル・ツィンクとミルチャ・エリアーデに焦点を当てた。ツィンクは西欧主義者、エリアーデは伝統主義者と、両者は正反対の思想的・政治的潮流に属するが、彼らはほとんど同じ語彙と概念を利用して自らの論を組み立てている。そのなかでももっとも重要なものが「精神」であり、両者ともこれを「政治」と対立するものとみなしている。つまり、どちらも「精神」を肯定し「政治」を否定しながら、一方は西欧世界と自由主義を、他方は伝統世界と反自由主義を称揚することができたことになる。このことが示しているのは、戦間期ルーマニアの若き知識人たちにおいて、政治というものがいかに忌避される存在であったかということである。このことは、ルーマニア・ファシズムの勃興において現行の「政治屋」的な民主主義体制への不満が少なからぬ役割を担ったという事実との深い関連を思わせるものであるが、他方で1933年以降のシオランは明確に政治的なものを肯定しながら活動したということを考えると、一概に断言できない問題であり、さらなる検討を要する。2.については、当年度10月-11月にフランスに滞在、パリはジャック・ドゥセ文学図書館所蔵のシオランの草稿を調査した。その結果、遺稿は膨大な数にのぼり、全体を通して研究するためには、より長期間当地に滞在する必要があることが判明した。この草稿の研究について、現時点で言えることは、これまで以上にシオランのフランス語時代とルーマニア語時代の連続性を想定しなければならないということであり、彼はこの断絶が不確かな曖昧さを、亡命状態において最大限に利用したということである。27年度が最終年度であるため、記入しない。平成25年度においては、戦間期ルーマニアのナショナリスティックな思想的コンテクストの解明のため、9月-10月間にルーマニアに滞在し、研究に必要な文献を調査した。本年度は、上記調査までに利用できた文献の関係上、まずはフランス時代のシオランの思想に限って研究を遂行した。その上で憎悪とペシミズムというテーマに着目し、当初実際上の暴力を伴った憎悪が、その深まりとともに逆に暴力を消滅させていくこと、その憎悪の運動の原動力がペシミズムであることを確認した。これはシオランのペシミズムの哲学の可能性を考える上で契機となりうるものであり、また彼の思想の発展史的理解においても、ルーマニア時代の「生の哲学」からの変化をどう考えるかという点において重要なものである。次いで文献調査の成果を利用しつつ、同世代の哲学者ミルチャ・ヴルカネスクとシオランとを比較検討した。ルーマニア時代の著書『ルーマニアの変容』でルーマニアの過去とそれを称揚する伝統主義者を否定し、ルーマニアを歴史の流れに参入させようとするシオランに対して、ヴルカネスクはそれに反対する。ヴルカネスクはルーマニア民族の、西欧のそれとは分かたれた永遠の本質・固有の民族的特性の存在を主張し、そこから脱却させようとするシオランの試みを非難するが、しかし同時にヴルカネスクは、ルーマニア民族・文化を歴史的なものとして把握しており、本研究員はここに歴史と永遠の緊張関係があることを明らかにした。このことはヴルカネスクが自らの師であるナエ・イオネスクの思想から自身を引き離そうとしたことに起因しているが、ミルチャ・エリアーデも指摘しているように、そのナエ・イオネスクにおいても神学と歴史哲学の間に緊張関係を宿している。以上の歴史と永遠という対立を軸に、次年度においてもルーマニア民族とその民族性をめぐる言説の研究を、特に政治への発展性に留意して進めていく予定である。本年度は、主に戦間期ルーマニアの知的世界において重要な役割を果たした人物に重点を置いて研究を遂行した。なかでも本年度注目した人物はナエ・イオネスクとブクル・ツィンクである。ナエ・イオネスクはシオランの師にあたる人物であり、特に当時の若者が極右の運動に参加する点で大きな影響力をもった。それゆえ彼の思想をその政治への接続という観点において検討した。ナエ・イオネスクの思想はとりわけその宗教的・ナショナリスティックな側面において「正教主義」と呼ばれるが、それは彼がルーマニア民族の本質を正教に見たからである。この考えにはもちろん民族の本質というものの存在を想定する本質主義の考え方を前提しているが、彼はこの本質主義的思考をきわめて静的な仕方で展開し、現実の政治の文脈においてこの思考を適用し、その結果としてルーマニア・ファシズム組織である鉄衛団のイデオロギーと親和性を持つに至った。本年度は以上のことを教会と国家との関係についての彼の思想の変化という観点から確認した。ブクル・ツィンクはシオランと同郷出身の同世代の知識人であるが、彼は著書『文明の防衛』において、シオランの『ルーマニアの変容』に影響されつつもこれに反対する主張を行い、フランス革命以来の西欧的価値を擁護した。注目に値するのは、ツィンクがこの擁護にあたって理念や価値の体系としての「精神」の優位を前面に押し出したことであり、またこれによってミルチャ・エリアーデやニキフォル・クライニクのような「精神性」(霊性)の称揚を通じて右翼の領域に入っていく傾向に対抗し、「精神」を右翼の陣営から取り戻そうとしたということである。

このようなツィンクの議論は、エマニュエル・ムーニエに代表されるフランスの「エスプリ」派の影響を大いに受けているが、このことは、当時のルーマニアがヨーロッパ中の思想的潮流が合流し対決する場であったことを如実に示している。本年度は二つの領域に区分して研究を遂行した。1.戦間期ルーマニア思想史の研究、ならびに2.フランスのジャック・ドゥセ図書館に所蔵されているシオランの草稿の研究である。1.については、昨年度までの研究成果に基づきつつ、シオランの同世代の知識人ブクル・ツィンクとミルチャ・エリアーデに焦点を当てた。ツィンクは西欧主義者、エリアーデは伝統主義者と、両者は正反対の思想的・政治的潮流に属するが、彼らはほとんど同じ語彙と概念を利用して自らの論を組み立てている。そのなかでももっとも重要なものが「精神」であり、両者ともこれを「政治」と対立するものとみなしている。つまり、どちらも「精神」を肯定し「政治」を否定しながら、一方は西欧世界と自由主義を、他方は伝統世界と反自由主義を称揚することができたことになる。このことが示しているのは、戦間期ルーマニアの若き知識人たちにおいて、政治というものがいかに忌避される存在であったかということである。このことは、ルーマニア・ファシズムの勃興において現行の「政治屋」的な民主主義体制への不満が少なからぬ役割を担ったという事実との深い関連を思わせるものであるが、他方で1933年以降のシオランは明確に政治的なものを肯定しながら活動したということを考えると、一概に断言できない問題であり、さらなる検討を要する。2.については、当年度10月-11月にフランスに滞在、パリはジャック・ドゥセ文学図書館所蔵のシオランの草稿を調査した。その結果、遺稿は膨大な数にのぼり、全体を通して研究するためには、より長期間当地に滞在する必要があることが判明した。この草稿の研究について、現時点で言えることは、これまで以上にシオランのフランス語時代とルーマニア語時代の連続性を想定しなければならないということであり、彼はこの断絶が不確かな曖昧さを、亡命状態において最大限に利用したということである。第1年度において、次年度以降に予定していた研究を先行して遂行し、計画上では第1年度に遂行する予定であった研究を第2年度に遂行し発表するなど、研究計画の遂行において前後するものがあった。そのため第2年度の研究の後半部分を第3年度に発表を予定する結果となったが、第3年度の研究はフランスに滞在し資料収集を行うことを前提としているため、フランス渡航までの期間を研究発表に当てるとともに、第1年度において先行して行った研究を考慮すれば、全体としておおむね順調に進展していると考える。27年度が最終年度であるため、記入しない。今後の研究にあたって、以下の点が重要と考える。1.戦間期ルーマニアの知的世界を、当時のヨーロッパ中の思想的潮流が合流し融合しつつ対決する場として捉え直すこと。ブクル・ツィンクがエマニュエル・ムーニエら「非順応主義者」と言われる知識人らに多大な影響を受けたように、アクション・フランセーズやフランス・トマス主義、イタリア・ファシズムとコーポラティヴィズム、パリの亡命ロシア人知識人や、さらにはナチズム、ボリシェヴィズムといったあらゆる思想が当時のルーマニアに流れ込んでいた。
自閉症児におけるパソコンを用いた概念形成学習および達成度評価システムの開発

障害児の概念学習に関しては, 2014年10月12月,放課後デイサービスに通う特別支援学校小学部23年生4名(いずれも男子)について予備実験を行った。この結果は,2015年9月の日本心理学会第93回大会において報告した。本実験は2015年8月10月,別の放課後デイサービスに通う対象児も含め,写真課題を8名,彩色した線画課題を4名,線画課題を8名について実施した。対照群普通児に関しては,2016年2月中旬,年少児,年中児,年長児のクラスに対し,写真,線画,彩色した線画の3条件につき各10名,全90名に対して課題を行った。これらの結果は現在分析中であり,漸次紀要,学会誌等に投稿予定である。自閉性障害や発達障害を有する子どもの概念発達に関する発達心理学、認知科学的研究の資料および情報の収集を、本学データベースEBSCOや札幌における日本心理学会、東京大学等で行った。これらの知見を取り入れながら、概念学習プログラムの基本設計を考案した。さらに上記構想をプログラム開発協力者や、この領域における専門家に伝え、調整を行いながら概念学習プログラムの開発を開始した。第一段階として、対象児たちは写真、線画のうちどの刺激による情報処理が効果的かを見る。さらに概念が未形成の対象児たちは、どのような次元によって刺激をカテゴライズしているのか、その傾向を見る。可能ならばいくつかの反応パタンによって分類する。このため、ターゲット1項目と、それに対する3要因のディストラクター3項目からなる課題を30試行、それぞれ人工物、自然物の2カテゴリについて授業受講生の協力を得て作成した。これら240項目について、大学院生および非常勤職員に、それぞれ線画図版、写真図版の作成とスキャナーでの取り込みを依頼した。またこれとは別途に、協力校の開拓に着手し、近隣の公立特別支援学校に協力を依頼した。最初の説明会では協力の内諾を得たが、後日呼び出され、保護者との連絡方法等を問われ、その後協力できない旨通知を受けた。その後他府県の支援学校の協力も取り付けたが、翌年度に入り校長の交代に伴って断りの連絡を受けた。現在、さらに別の支援学校に打診を試みる予定である。最終的に不調の場合は、とりあえず概念未発達の普通幼児に実施し、発達による一般的な傾向を見る。このデータは統制群のデータとして分析に活用する。それとともに、支援学校の協力が得られれば、即時に障害児を対象とする研究に着手できるよう、実施環境を整備しておくことを心掛けている。【1.概念学習課題に用いる刺激項目の作成】概念学習課題は,最初にPC画面の上段中央にターゲット刺激画面が現れ,次に下段に選択肢画面が3個並列に出現する。対象児はターゲットと同じ「仲間」を下段の選択肢から選び,ターゲット刺激画面から選択肢画面へドラッグアンドドロップする。練習課題を3課題行ってから本課題に入る。最初にそのための刺激項目を作成する。大学生85名に対してアンケートを実施し,ターゲット項目1項目と,それに対する選択肢の候補を考えさせた。【2.刺激図版の作成】美術専攻の学生1名に,上記刺激項目として使用する線画図版を作成させた。また,専門学校学生他1名に,上記項目に対応する写真図版を作成させた。【3.概念学習PCプログラムの作成】当初の研究計画に記入した基本設計を反映したPCプログラムを情報技術サービス会社に外注し,新規購入したタブレットPC3台にインストールした。【4.課題の実施】放課後デイサービスに通う特別支援学校小学部23年生4名(男子)を対象に,パソコンによる概念学習プログラムを実施した。この結果は,2014年9月の日本心理学会第79回大会にて発表される。【5.パソコンプログラムのカスタマイズ】概念学習プログラムを使用中に不具合の生じた点,および改良が望ましい点を技術情報サービス会社に改良させ,平成27年度の実施予定の本格的な概念学習プログラムの実施に備えた。【6.図版の改良】当初の線画図版は描線が細く,刺激図版として必ずしも最適とはいえなかったため,専門学校生1名に,デジタル加工により描線を太くさせた。さらに,彩色を施した別バージョンも作成させた。これらは平成27年度に予定している本格的な概念学習プログラムにおいて使用される。本研究の目的は,自閉スペクトラム症などの発達障害児において,概念学習の促進に寄与する刺激条件を明らかし,これらの外的要因と,知的水準,言語習得度などの個人内要因との相互作用の分析を通じて,個人のタイプ別の最適学習条件を解明することである。学習課題に用いる刺激としては,子どもにとって親和性のある自然物及び人工物から各15項目を選び,ターゲット刺激項目とした。これらの各項目に対し,同一概念内にある,連合する,視覚的に類似する,の各1項目からなる3つの選択肢項目を選定した。これをもとに写真,線画,彩色した線画の3種類の概念学習課題を作成し,各種類と対象児の個人内要因との交互作用を分析できるようにした。対象児は,ターゲット刺激項目と「同じ」選択肢項目を指摘することを求められた。教示は練習課題とそれに対する正反応のフィードバックにより,非言語的にも理解できるようにした。また,課題提示,反応記録はすべてタブレット・パソコンにて自動的に行った。課題は同一児に対しおおむね週1回,計4回行い,各提示条件,対象児における個人条件別学習効果の分析を可能にさせた。

障害児の概念学習に関しては, 2014年10月12月,放課後デイサービスに通う特別支援学校小学部23年生4名(いずれも男子)について予備実験を行った。ここでは時間的制約等により,線画刺激条件のみ課題を行った。この結果は,2015年9月の日本心理学会第93回大会において報告した。本実験は2015年8月10月,別の放課後デイサービスに通う対象児も含め,写真課題を8名,彩色した線画課題を4名,線画課題を8名についてそれぞれ実施した。対照群普通児に関しては,2016年2月中旬,幼稚園年少,年中,年長児の各クラスに対し,写真,線画,彩色した線画の3条件につき各10名,全90名に対して課題を行った。これらの結果は漸次紀要,学会誌等に投稿予定である。本実験は2015年8月10月,別の放課後デイサービスに通う対象児も含め,写真課題を8名,彩色した線画課題を4名,線画課題を8名について実施した。対照群普通児に関しては,2016年2月中旬,年少児,年中児,年長児のクラスに対し,写真,線画,彩色した線画の3条件につき各10名,全90名に対して課題を行った。これらの結果は現在分析中であり,漸次紀要,学会誌等に投稿予定である。近年個人のプライバシー保護の見地から,障害を有する被験児の確保が困難になっており,本研究でも最大の障害はその点である。したがって今後も統計的処理が可能になるほどの対象児の数を確保すること,発達検査のデータを活用することは,プライバシー保護,個人情報保護との関連で最大の課題となる。この点が研究の若干遅れた理由である。教育心理学上記【現在までの達成度】の「理由」欄にも触れたが,障害児対象の研究では協力を得ることが以前にもまして困難になっている。現在,直ちに有効な対応策は思い浮かばない状態である。平成25年度夏から協力校の開拓に着手し、近隣の公立特別支援学校に協力を依頼した。最初の説明会では協力の内諾を得たが、後日呼び出され、保護者との連絡方法等を問われた。後日協力できない旨通知を受けた。その後他府県の支援学校の協力も取り付けたが、翌年度に入り校長の交代に伴って断りの連絡を受けた。現在、さらに別の支援学校に打診を試みる予定である。また、外注した絵画図版、写真図版のうち写真図版の出来栄えが悪く、平成26年度夏をめどに作成しなおすことに決定した。このため、当初は絵画図版のみによって研究を実施する予定である。主としてこれらの理由から、研究の計画通りの実施が遅れることとなった。統計ソフトウェアオプションの購入を次年度に回したため。最初の段階では、開発された概念形成プログラムを組み込んだタッチパネル式ノートパソコンを協力校に貸与し、自閉性障害・発達障害を有する対象児に対して概念学習プログラムを実施する。まず最初は正答のフィードバックを行わず、対象児の反応傾向を見る。