hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
病院感染のパフォーマンス指標の開発と医療技術評価への応用

平成27年度までに研究協力病院の体制構築と本研究課題を検証するためのデータ収集が完了した.平成28年度は統計解析を残すのみとなっていることから,当初予定していた研究課題を滞り無く遂行できると考えられる.平成28年度は,(1)本研究にて開発した手術部位感染標準化感染比の算出モデルを用いた病院間パフォーマンスのフィードバックの有効性研究,(2) DPCデータを用いた抗菌薬投与状況の可視化研究,(3) de-escalationによる薬剤費節減効果の検証を行った.(1)病院間パフォーマンスのフィードバックの有効性研究では,病院間比較が可能なベンチマーク資料のフィードバックを実施した28病院とフィードバックを実施していない31病院における2012年1月から2015年12月までの手術部位感染標準化感染比を用いて,difference-in-differenceによってフィードバックの有効性を検証した.主要消化器外科手術の全てにおいてフィードバック実施は標準化感染比の統計学的に有意な減少を認めなかった.また,本研究にて開発した手術部位感染発生比算出モデルを用いて手術実施直後に当該症例における手術部位感染発生率を予測可能なSSI Risk Engineを開発し,一般公開した.(2) 17施設から研究協力を得て,DPCデータおよびJANIS検査部門データを収集し,DPCデータからは抗菌薬使用密度を,JANISデータからは薬剤感受性率をそれぞれ可視化し,研究協力病院にフィードバックを行った.その結果,これらデータの妥当性について確認を得ることができ,研究利用できることを確認した.(3)本研究の目的は,DPCデータおよびJANIS検査部門データ用いて抗菌薬適正使用の現状と薬剤費削減効果を評価することである.研究協力を得られた1施設における腎盂腎炎患者を対象に評価を行った.その結果,DPCデータおよびJANIS検査部門データを用いることで,抗菌薬のde-escalationの評価可能性およびそれによる薬剤費削減効果の算出可能性を確認した.本研究は,JANIS手術部位感染部門の全例データを用いて,患者重症度を従来よりも適切に調整し,症例別に手術部位感染発生率を予測し,医療機関別にパフォーマンスを評価可能な標準化感染比の算出モデルを開発した.また,研究協力病院からJANISデータおよびDPCデータを収集し,(1)手術部位感染のリスク因子の同定,(2)安全機構付き鋭利器材の有効性および費用対効果の解明,(3)多剤耐性菌(ペニシリン耐性肺炎球菌およびメチシリン耐性黄色ブドウ球菌)感染による追加的医療費の推定,などの成果を挙げることができた.平成26年度は,厚生労働省院内感染サーベイランス事業(JANIS)の全「手術部位感染部門データ」によって開発した手術部位感染発生予測モデルを用いて,手術部位感染のパフォーマンス評価に活用可能な標準化感染比(統計解析モデリングに基づく標準化感染比:SMSIR)と呼ばれる指標のフィードバックを実施することができた.
胃腺粘液糖鎖合成酵素の遺伝子多型と、その胃疾患発症危険因子としての意義

非還元末端にα1, 4結合型N-アセチルグルコサミンを有するο-グリカン(αGlcNAc)は胃腺粘液細胞から分泌される特徴的な糖鎖で、α1, 4-N-アセチルグルコサミン転移酵素(α4GnT)によって生合成される。ピロリ菌感染胃炎・胃潰瘍患者とピロリ菌感染分化型早期胃癌患者の末梢血有核細胞から調整したゲノムDNAと、αGlcNAcを欠損した遺伝子改変マウスの胃粘膜を解析し、A4GNT遺伝子の一塩基多型であるrs2246945は胃分化型腺癌発症の独立した危険因子となり得ること及びαGlcNAcは向腫瘍性慢性炎症を抑えることで胃分化型腺癌の発生を予防していることを明らかにした。α1,4結合型N-アセチルグルコサミン含有O-グリカンは胃腺粘液細胞から分泌される糖鎖で、α1,4-N-アセチルグルコサミン転移酵素(α4GnT)によって生合成される。本研究の目的は、SNPデータベース上でα4GnTの酵素活性に影響するα4GnT遺伝子のcoding SNP(cSNP)を探索し、そのcSNPが胃疾患発症の危険因子となり得るか否かを明らかにすることである。平成21年度は胃内視鏡検査で前庭部小彎・大彎、胃角部小彎、胃体中部小彎・大彎、胃体上部大彎より定点生検を行ったピロリ菌感染者56名とピロリ菌非感染者50名を対象に、末梢血有核細胞からゲノムDNAを調整し、2種類のcSNPに対する特異的プローブを用いたTaqMan PCR法により解析した。218番目のAla(GCC)がAsp(GAC)に変異したアレル(dbSNPrs# 2246945)の出現頻度は感染者群でCC:CA:AA=16%:52%:32%、非感染者群でCC:CA:AA=10%:54%:36%と、両者に有意な差は見られなかった。次に感染者群を対象にUpdated Sydney System(USS)に基づき菌量、腺萎縮、単核球浸潤、好中球浸潤、腸上皮化生の程度を評価し、同アレルの発現頻度との相関を解析した。菌量がUSSスコア10以上の高菌量群ではCC:CA:AA=24%:55%:21%、USSスコア9以下の低菌量群ではCC:CA:AA=7%:48%:45%と、両者に有意な差を認めた(P=0.03)。しかし他の因子と有意な相関は見られなかった。一方、282番目のAsn(AAT)がLys(AAG)に変異したアレル(dbSNPrs# 61740810)の出現頻度はピロリ菌感染の有無に関わらず全例がTTであった。以上の結果より、dbSNPrs# 2246945の出現頻度とピロリ菌量は相関することが示された。平成22年度は218番目のAla(GCC)がAsp(GAC)に変異したSNPs(dbSNPrs# 2246945)に注目し、site directed mutagenesisを行いα4GnT発現プラスミドにこれと同様の塩基置換を加えて変異型のα4GnTを作成、変異型α4GnTと野生型α4GnTでその酵素活性の違いを解析した。変異型α4GnTは野生型α4GnTと比較し、その酵素活性が約60%に減少することを見出した。次に、60歳以上で、性別、飲酒歴をマッチングさせたピロリ菌感染胃炎・胃潰瘍患者(胃炎・胃潰瘍群)42名と、内視鏡的治療を施行したピロリ菌陽性の分化型早期胃癌患者(胃癌群)43名の末梢血有核細胞からゲノムDNAを調整し、dbSNPrs# 2246945における遺伝型の頻度をTaqMan PCR法により解析した。胃炎/胃潰瘍患者群ではCC:CA:AA=11.9%:66.7%:21.4%、分化型早期胃癌患者群でCC:CA:AA=7.0%:48.8%:44.2%であり、遺伝型の頻度は両群間で有意な違いは認められなかった(P=0.0796)。

次に、各遺伝型の発現頻度をCC vs CA+AAに分けて検討すると、胃炎/胃潰瘍患者群でCC:CA+AA=11.9%:88.1%、分化型早期胃癌患者群でCC:CA+AA=7.0%:93.0%と両者に有意な違いは認められなかったが、CC+CA vs AAに分けて検討すると、胃炎/胃潰瘍患者群でCC+CA:AA=78.6%:21.4%、分化型早期胃癌患者群でCC+CA:AA=55.8%:44.1%とCの遺伝子型は会化型早期胃癌患者群に比較し、胃炎/胃潰瘍患群で有意に高い頻度で認められた(P=0.0256)。以上より、dbSNPrs# 2246945における遺伝子型Cの存在はピロリ菌感染患者の胃癌発症に予防的に働いている可能性が示された。平成23年度はα4GnTをコードするA4gnt遺伝子を欠損したA4gntノックアウトマウス(A4gnt KOマウス)の胃粘膜に生じる炎症の分子基盤解明を試みた。A4gnt KOマウスの胃粘膜は、5週齢で過形成、10週齢で軽度異形成、50週齢で分化型腺癌を発症することから、5週齢、10週齢、50週齢のA4gnt KOマウス(5週齢n=5;10週齢と50週齢n=6)、及び年齢を揃えた野生型マウス(5週齢n=5;10週齢と50週齢n=6)から摘出した胃粘膜のホルマリン固定パラフィン包埋標本から腺胃領域を切り出し、total RNAを抽出、逆転写後に炎症性ケモカインリガンド、炎症性サイトカイン、成長因子等の発現を定量PCR法で解析した。その結果、Cxcl1、Cc12、Cxcl5、Il-1β、Il-11、Hgf、Fgf7は、10週齢と50週齢のA4gnt KOマウスで、野生型マウスに比べて有意に増加していた。更に、Hgfは5週齢のA4gnt KOマウスでも野生型マウスに比べて有意に増加し、またGrem1は50週齢のA4gnt KOマウスで野生型マウスに比べて有意に増加していた。一方、Amh、Egf、Pthlhは逆に10週齢、50週齢のA4gnt KOマウスで野生型マウスに比べて有意に低下し、さらに前二者は5週齢のA4gnt KOマウスでも野生型マウスに比べて有意に低下していた。次に、5週齢から60週齢のA4gnt KOマウスと野生型マウスの胃粘膜における単核球、好中球浸潤の程度をスコア化した。その結果、何れも5週齢から60週齢へと週齢を重ねるにつれて有意に増加していた。更にF4/80+単球とCD31+血管内皮細胞の出現量を、5週齢と50週齢のA4gnt KOマウスと野生型マウスの胃粘膜においてカウントすると、何れも5週齢では野生型マウスに比べてA4gnt KOマウスで増加傾向があり、50週齢では有意な増加を示した。以上の結果より、A4gnt KOマウスの胃粘膜では向腫瘍性の慢性炎症が生じていることが示唆された。
モンゴルにおける食料市場の発展構造に関する基礎的研究-食肉市場・流通を中心に-

本研究により遊牧民の食肉出荷行動があるていど把握され、都市部での食肉消費者動向も明らかになっている。フチト・ションホ-ル食糧市場やウランバ-トル市の他食料市場の動向を検討し、農村部における遊牧民の食肉出荷過程の調査と農村部における食肉仲買人の活動調査を行った。調査地域としてはヘンテイ県、ゴビアルタイ県とウブルハンガイ県の3つの県を選び遊牧民からの聞き取り調査を実施、彼らの経営経済的諸特徴を把握した。同じく地方仲買人を対象に聞き取り調査を実施し、「遊牧民」と仲買人の取引実態を明らかにするために資料収集している。平成22年度は、研究に関係する資料収集、統計データの分析をした上で、2回に渡ってモンゴルでの現地調査を行った。1回目の調査は近年の都市部食肉市場・流通の動向を把握するために、フチト・ションホール食料市場やウランバートル市の他食料市場の実態調査を行い、価格形成過程に関する問題点が浮き彫りとなった。都市部の食肉市場では、季節的な食肉価格の変動を見越した一部の仲買人による買い溜めがみられるようになり、資本力のある仲買人が市場全体の食肉価格形成に不適切な歪みを生じさせていた。また、食肉小売においても、より利益を得るために小売販売業者間でグループを形成するなどの動きが見られ、食肉市場の各段階で変化がみられた。2回目の調査では、地方農村部における遊牧民の食肉出荷過程の調査と農村部における食肉仲買人の活動を把握するために、ウランバートル市から1000km余りの距離に位置するゴビアルタイ県において遊牧民に対して聞き取りをこなった。この地方を対象とした2回目の調査によって、食肉流通の起点となる遊牧民の流通上の役割と動向がある程度把握された。市場経済化の流れのなかで遊牧民も食肉市場への売買方法が洗練され,地方仲買人に対して自らの所得確保を目的とした行動形態がみられるようになっていた。本年度はウランバートル市から430kmの距離に位置するウブルハンガイ県アルバイヘール市の食肉販売市場の調査を行った。食肉市場関係者に聞き取り調査およびアンケート調査を行った。食肉販売市場は30スタンドの販売スペースがあり、食肉販売者の一日当たりの販売量は少なく、地方での食肉市場の発展状況は小売販売を中心としていた。小売販売者の食肉仕入れ先は遊牧民、皮扱い業者などであり、比較的小規模(大家畜1-2頭、小家畜10頭)の食肉取引が行われていることが分かった。しかしながら、ウブルハンガイ県では食肉市場はあっても食肉卸売市場というのが存在しないこととも判明した。地方からウランバートル市への流通は、このアルバイヘール市の食肉販売市場を通さず、いくつかのグループを形成している食肉地方仲買人が行っていた。この地方仲買人の活動は季節的性格が強く、地方での彼らの活動実態は市場を通さないために掴みづらい点が多い。今回の聞き取り調査から、地方仲買人は家畜を多く所有する遊牧民に直接電話でやり取りを行い、3-4人の遊牧民から1000頭以上の羊を一括で買うといった取引形態が明らかになった。家畜を多数所有する遊牧民は地方において限られており、出荷時期によって、遊牧民と仲買人が取引上有利になったり不利になったりと、その強さが時期により変化することも調査から明らかとなった。本年度調査により、食肉流通の起点となる遊牧民の流通上の役割と動向が有る程度把握された。市場経済化の流れのなかで遊牧民も食肉市場への売買方法が洗練され,地方仲買人に対して自らの所得確保を目的とした行動形態がみられるようになった。本年度はモンゴルの食肉市場全体の動向を分析することを目的に生産者である遊牧民の食肉出荷過程の研究を進めてきた。具体的には、ウランバートル市から430kmの距離に位置するヘンティ県のビンデルソム(自治体)の食肉出荷・販売の現状を調査した。ビンデルソムに住む11の遊牧民に聞き取り調査およびアンケート調査を行った。ソムでは小売店が4つあり、遊牧民が子家畜1-2頭を売る場合に小売店舗に委託をしている。委託販売の手数料は15%であり、一日当たりの販売量は少い。地方での食肉市場の発展状況は小売が中心であり、比較的小規模(大家畜1ー2頭、小家畜10頭)の食肉取引が行われていることが分かった。それより多くの家畜を売る必要がある場合に、遊牧民がウランバートルへ直接自分で売りに行くのが一般である。またウランバートル周辺に家畜を持つ5つの遊牧民の経営状況・食肉出荷について聞き取り調査を行った。ウランバートル周辺では家畜飼養が難しく、遊牧民は家畜を増やすよりは毎年食肉として販売して手放していることが明らかになった。

またウランバートル市のソンギノハイルハン区で1200人に対しアンケート調査を行い、食肉消費動向を把握しようと分析を続けている。消費者動向を把握することで遊牧民の食肉出荷構造をよりよくするヒントがあると考えられる。本年度調査により、食肉流通の起点となる遊牧民の流通上の役割と動向や都市ウランバートルの消費者の食肉消費動向が有る程度把握された。2年間の調査によって、地方での食肉市場・流通の発展状況として食肉流通の各段階を通った食肉仲買人グループ化が進んでいることがわかってきた。遊牧民や食肉小売販売、ウランバートル市内の仲買人に対する調査は順調であるが、地方仲買人の取引活動が雑多であるために調査協力が取りづらく、ご取引実態を把握することを困難としている。本年康は協力者を通じて実態把握に勤める予定である。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度の研究計画は、卸売市場を遡る流通を対象に食肉仲買人の活動を把握する。地方仲買人の各段階の取引状況を把握し、食肉価格形成を検討する。本年度はモンゴルの東地方にあるヘンテイ県を選び調査準備を進めている段階である。過去20年間の食肉小売価格の分析と食肉価格とインフレ率の関係について検討し、食肉市場・流通の安定化に繋がる具体的な方向性を提案する。これらを考察するにあたり、モンゴル国全体で述べるために、これによって、モンゴル国の食肉流通の大部分を把握できると考える。
加齢ふたご脳に対する遺伝子の影響　─環境差は可塑性を誘導したのか？─

ヒトの脳にも可塑性があることは広く認められているが、一生の間に環境の影響を受けて脳はどのように変化しているのかについては全くデータがない。自然経過における脳への遺伝と環境の影響を明らかにする最適の方法はふたご研究であり、このたび環境の影響を受けにくい運動感覚機能をあらわす運動誘発脳磁界、および環境の影響をより受ける言語機能の動詞想起課題を行う際の脳活動を、脳磁図を用いて計測した。その結果ふたご間で運動誘発脳磁界の潜時差が有意に小さくなっていた。言語機能については左前頭葉での事象関連脱同期のパワー値が一卵性ふたご間でより高い相関を示し、高齢になっても遺伝の影響と環境の影響は同程度に認められた。長い人生の間に環境の変化がヒトの脳に対してどのような影響を与えるのかについて、脳の可塑性という観点から、高齢ふたごの言語処理及び運動観察の脳活動の差について脳磁計を用いて解析した。双生児ボランティアに協力をいただき、動詞想起課題を行っている際のlowγ帯域の事象関連脱同期(ERD)の類似性を検討した。空間フィルター法を用いたグループ解析により,単語提示後500-1000msから左前頭葉にERDのピークが認められた。この部位にvirtual sensorを設置し時間周波数解析を行ったところ,500-1000msにおける左前頭葉のERDのパワーの相関係数が、一卵性は0.42,二卵性は0.20,他人間は-0.02となり,二卵性や他人間と比較し一卵性で高い相関係数となった。さらに,ERDパワーにおける遺伝と環境の寄与率を共分散構造分析により算出すると,遺伝が50.1%,環境が49.9%となった。運動観察時の脳活動については、被験者に示指または中指伸展挙上運動を観察するよう指示し、その際の脳活動を脳磁図により捉えた。空間フィルター法により各個人の脳活動を算出した後、Group解析により全被験者に共通して強いERDが認められた時刻、脳領域を特定した。そしてその時刻、領域について各個人のERDパワーを算出し、双生児間でのERDの強さの相関係数を評価した。さらに共分散構造分析を行いERDの強さについて遺伝要因と環境要因の影響の割合を推定した。その結果、動画観察開始後300600msにおいて左下頭頂小葉を中心としたβ帯域の強いERDが認められ、同領域のβ帯域ERDの強さは一卵性双生児間で0.68という有意な相関係数が得られたが、二卵性双生児においては0.20となり有意な相関が認められなかった。また共分散構造分析により算出された割合は、遺伝65%、環境35%という結果であった。多くの高齢ふたごの皆様に協力いただいて予定数の脳磁図計測は完了したが、データが膨大で解析にかなりの時間を要したため、年度内に論文執筆まで進めることができなかった。現在期間を延長して論文を鋭意作成中である。ヒト脳の言語機能における遺伝と環境の影響を明らかにする目的で、高齢ふたごの脳磁界測定し、脳の可塑性に及ぼす影響を解析した。対象は大阪大学ツインリサーチセンターに登録されている一卵性双子28組(年齢57.8±12.5才)と二卵性双子11組(年齢60.8±17.6)で、言語タスクには動詞想起課題を用い、脳磁界計測は160チャネル全頭型脳磁計を用いた。結果は、空間フィルターを用いたグループ解析により、単語提示後500msから1000msで左前頭葉に事象関連脱同期のピークを認めた。ピーク部位にバーチャルセンサーを置き時間周波数解析を行ったところ、500msから1000msにおける左前頭葉の事象関連脱同期のパワーの相関係数は一卵性ペアで0.42、二卵性ペアで0.20、他人間で-0.02で一卵性は高い相関を示した。事象関連脱同期パワーの遺伝と環境の寄与率を共分散構造分析により算出すると、遺伝の影響が50.1%、環境の影響が49.9%であった。以上の結果からヒトが言語獲得する小児期の時代をはるかに過ぎた60才前後になっても遺伝の影響を約50%受けており、言語は後天的に獲得する脳機能ではあるが環境の影響は半分程度であることを明らかにした。一方、他者の動作を観察するときの脳活動は乳児の時から認められており、遺伝の影響を強く受けていると考えられるがその程度は明らかではない。そこで示指伸展観察課題を行い、脳磁計を用いて20ペアの一卵性双子、11ペアの二卵性双子についてグループ解析を行ったところβ帯域で左下頭頂小葉に反応のピークが見られた。その領域での事象関連脱同期パワーの相関係数は一卵性で0.68、二卵性で0.14となり、共分散構造分析では遺伝率が72%であった。この結果は、他者の動作を観察している時の脳活動は平均60才という長い年月を経ても遺伝要因が大きく関与していることを明らかにできた。

自然経過における脳への遺伝と環境の影響を明らかにする最適の方法はふたご研究であり、このたび環境の影響を受けにくい運動感覚機能をあらわす運動誘発脳磁界、および環境の影響をより受ける言語機能の動詞想起課題を行う際の脳活動を、脳磁図を用いて計測した。その結果ふたご間で運動誘発脳磁界の潜時差が有意に小さくなっていた。言語機能については左前頭葉での事象関連脱同期のパワー値が一卵性ふたご間でより高い相関を示し、高齢になっても遺伝の影響と環境の影響は同程度に認められた。本研究は当初から単年度の研究であり、延長はしているが今回行った結果の論文を書き上げれば終了となる研究である。双生児研究は大変貴重なデータを得ることができるので、このコホートを活用してさらに重要な脳機能の解析を行うことが期待されるが、研究責任者は定年退職のため、研究協力者達が研究を引き継いで発展させてくれるものと期待している。磁気神経生理学論文作成が当該年度内に完了しないことが明確になった段階で、論文投稿料および英文査読料を確保しておく必要性が生じたためこの額を残した。期間延長を認めていただき、論文を作成中である。使用計画は、論文投稿料が202,226円、英文査読料が50,556円です。
合金超微粒子におけるマルテンサイト変態の結晶学的及び熱力学的研究

1.本研究では,先ず,以前に真空蒸着法で作製したFe-NiおよびAu-Cd合金ナノ粒子のマルテンサイト変態についての実験で得た知見を熱力学的に考察した。Fe-Ni系では母相とマルテンサイト相の熱力学的平衡温度T_0温度に大きな差はなく,これに対して,Au-Cd系ではT_0温度が大きく低下する。このような相異が生じる熱力学的条件を提示した。すなわち,Au-Cd系では(Δs^<P→M>)_<buik><(Δs^<P→M>)_<particle>のとき,Fe-Ni系では,(Δs^<P→M>)_<bulk>【approximately equal】(Δs^<P→M>)_<particle>で,かっ,(Δh^<P→M>)_<bulk>【approximately equal】(Δh^<P→M>)_<particle>である。ここで,Δh^<P→M>,Δh^<P→M>はそれぞれ母相からマルテンサイト相へ変態する際のエントロピー,エンタルピーの変化量である。2.通常の物理的方法では作製が困難な単分散粒径分布をもつ合金ナノ粒子集合体が573K以下の低温で化学的に合成できることを示したSunら(Science,2000)の手法により,専ら,Fe-x at.%Pt(x≦25)の低Pt濃度合金ナノ粒子の作製を試みた。はじめ,金属の原材料としてFe(CO)_5とPt(acac)_2を用い,次の段階として,有毒なFe(CO)_5の代わりにFe(acac)_3を用いた。作製試料の室温における構造と加熱・冷却時の相変化は通常の透過電子顕微鏡(CTEM)観察および電子回折により調べた。また,高分解能透過電顕(HRTEM)観察により微粒子の相と微細構造を,そして,薄膜EDX分光器付高分解能分析電顕により微粒子の平均組成を調べた。(1)合成したままの試料はナノメータサイズ域の比較的大きさの揃った粒状の生成物からなる。しかし,その生成物は配合組成をもつ合金ナノ粒子ではなく,例外なく,ほとんど純白金に近いPt-rich γ相Pt-Fe合金と鉄酸化物(マグネタイト:Fe_30_4)の混合であった。マグネタイトの相対量は白金錯体に対する鉄錯体のモル比が大きい試料ほど多い。(2)1073Kまでの電顕内加熱により鉄と白金の合金化が進行し,加熱後の室温では,配合組成近傍の組成をもつFe-rich γ相単相の合金粒子あるいはFe-rich αとγ相合金粒子の混合となる。この加熱処理により,合金粒子の平均粒径は約15nmに増大する。(3)かくして生成したγ相合金ナノ粒子は10at.%Pt以下の低Pt濃度組成でも室温までの冷却で変態せず,さらに103Kに冷却してもマルテンサイト変態を起こさない。(4)したがって,Fe-Pt合金ナノ粒子のM_3温度は低Pt濃度ではバルクと比べて500K以上低下し,ナノ粒子においてγ相が異常に安定化することが実験的に明らかになった。

マグネタイトの相対量は白金錯体に対する鉄錯体のモル比が大きい試料ほど多い。(2)1073Kまでの電顕内加熱により鉄と白金の合金化が進行し,加熱後の室温では,配合組成近傍の組成をもつFe-rich γ相単相の合金粒子あるいはFe-rich αとγ相合金粒子の混合となる。この加熱処理により,合金粒子の平均粒径は約15nmに増大する。(3)かくして生成したγ相合金ナノ粒子は10at.%Pt以下の低Pt濃度組成でも室温までの冷却で変態せず,さらに103Kに冷却してもマルテンサイト変態を起こさない。(4)したがって,Fe-Pt合金ナノ粒子のM_3温度は低Pt濃度ではバルクと比べて500K以上低下し,ナノ粒子においてγ相が異常に安定化することが実験的に明らかになった。本年度は,1)以前にFe-NiおよびAu-Cd合金ナノ粒子のマルテンサイト変態に関する実験で得た知見を熱力学的に考察し,また,2)アルコール還元法による合金微粒子の有機合成を試みた。1)Fe-NiおよびAu-Cd合金ナノ粒子のマルテンサイト変態は変態前後の結晶構造の点ではバルクと変わらないが,変態温度に関しては大きな変化があり,いずれの合金系においても,ナノ粒子の変態温度はバルクに比して著しく低い。しかしながら,Fe-Ni系では,母相とマルテンサイト相の熱力学的平衡温度,T_0温度,は大差なく,これに対して,Au-Cd系ではT_0温度が大きく低下する。このような相異が生じる熱力学的条件を提示した。すなわち,Au-Cd系では(Δs^<p→M>)_<bulk><(Δs^<p→M>)_<particle>のとき、Fe-Ni系では、(Δs^<p→M>)_<bulk>【approximately equal】(Δs^<p→M>)_<particle>で、かつ、(Δh^<p→M>)_<bulk>【approximately equal】(Δh^<p→M>)_<particle>である。ここで,Δs^<p→M>,Δh^<p→M>はそれぞれ母相からマルテンサイト相へ変態する際のエントロピー,エンタルピーの変化量である。2)Sunら(S.Sun et al., Science(2000))の方法に従い,鉄ペンタカルボニル(Fe(CO)_5)の熱分解と白金アセチルアセトネート(Pt(acac)_2)の1,2-ヘキサデカンディオールによる還元をデオクチルエーテル溶媒中で行うことにより,Fe-Pt合金微粒子の合成を試みた。Fe(CO)_5とPt(acac)_2の配合モル比,還流温度および時間を種々設定し,その都度,TEM観察と電子回折により評価した。as-grown試料は還流時間に依存して,2,3nmから数十nmの比較的粒径の揃った微粒子からなっていた。電子回折図形に現れた回折リングは,マグネタイト(Fe_3O_4),少量の白金を含む鉄および少量の鉄を含む白金からのものとして説明できた。薄膜EDXスペクトロメトリーにより調べたas-grown試料の組成はFe(CO)_5とPt(acac)_2の配合モル比にほぼ等しいことがわかった。これらの結果はSunらの結果と異なるように思われるので,さらに検討する必要がある。合金のマルテンサイト変態に及ぼすサイズ効果を実験的に解明するには,合金微粒子のサイズを揃えることが重要である。
熱性けいれんおよびてんかん焦点形成における神経ペプチドの役割に関する実験的研究

てんかん発作に伴って海馬歯状回におけるcorticotropin-releasing factor(CRF)とprostaglandin(PG)の産生が著しく増加する。てんかん発作の発現とてんかん焦点形成におけるPGおよびCRFの役割を明らかにするため、以下の4つの実験をおこなった。1.幼若ラットを被験体として、熱性けいれんの誘発に対するCRFの関与を検討した。CRF type I受容体拮抗薬であるCRA1000(20mg/kg,i.p.)は熱性けいれんの誘発閾値温度を上昇させたが、その効果は統計的に有意なものではなかった。2.てんかん発作に伴うシナプス伝達増強(KIP)はてんかん焦点形成において促進的な役割を果たしていると考えられる。成熟ラットを被験体に、慢性電場電位記録法を用いて、KIPに対するCRA1000の効果を検討した。CRA1000(10mg/kg,i.p.)は、発作後EPSP抑制およびKIPに対して有意な効果を及ぼさなかった。3.KIPと同様に、海馬長期シナプス伝達増強(LTP)はkindlingてんかん焦点形成を促進する。しかし、CRA1000(10mg/kg,i.p.)は、LTPに対しても有意な作用を及ぼさなかった。以上の実験結果から、細胞興奮性を上昇させると推測されているCRF type I受容体の賦活は、てんかん発作の発現およびてんかん焦点形成には関与していないものと結論された。熱性けいれん重積発作から難治側頭葉てんかんへの進行過程には神経ペプチドを含む様々な内因性物質が関与しているものと考えられるが、内因性発熱物質であるprostaglandin(PG)もてんかん発作の発生に重要な役割を果たしているものと推測されてきた。しかし、てんかん発作におけるPGの役割については未だ明確な結論が出されていない。本研究において、われわれは次の2つの実験によりてんかん発作におけるPGの役割を明らかにした。1.Cyclooxygenase-2(COX-2)遺伝子ノックアウト・マウスを用いた実験:通常、脳内のPG濃度は極めて低いが、外因性発熱物質やてんかん発作などによってCOX-2遺伝子が賦活されると急激にPG濃度が上昇する。本実験では、COX-2ノックアウト・マウスを用いててんかん発作の誘発と発作後抑制(postictaldepression)におけるPG合成の役割を検討した。その結果、初めて発作を誘発する時の閾値とその発作持続時間には両群間に有意差はなかった。しかし、COX-2ノックアウト・マウスにおける発作後抑制の強さは、野生型マウスのそれよりも有意に強かった。すなわち、脳内PGは発作後抑制を弱め、発作の再発生を促進しているものと考えられる。2.COX-2阻害薬、ニメスリドを用いた実験:COX-2阻害薬であるニメスリドを経口投与して、脳内PG合成阻害がてんかん発作の誘発と発作後抑制にいかなる影響を及ぼすか検討した。結果はCOX-2遺伝子ノックアウト・マウスを用いた実験結果と同じく、脳内PG合成阻害は発作後抑制を増強することが明らかとなった。以上の結果から、内因性発熱物質であるPGは発作後抑制に拮抗して発作重積状態を促進するものと結論された。Corticotropin releasing factor(CRF)は、てんかん発作により脳内での合成が促進されるばかりでなく、その脳室内投与により重篤な辺縁系発作が誘発される。また、熱性けいれんや年令依存的てんかん発作がCRF受容体拮抗薬の投与により抑制される。これらの事実は、てんかん発作の発現においてCRFが重要な役割を果たしていることを示唆している。さらに、最近、てんかん焦点形成において促進的な役割を果たす長期シナプス伝達増強もCRF受容体拮抗薬により強く抑制されることが明らかになった。本年度の研究では、熱性けいれんおよびてんかん発作発現におけるCRFの役割を明らかにするため、3つの実験を行い、次の結果を得た。1.海馬長期シナプス伝達増強(LTP)に対するCRF_1受容体拮抗薬の効果:CRF_1受容体の選択的拮抗薬であるCRA

1000(10mg/kg)は、海馬のLTP誘発に対して有意な作用を及ぼさなかった。LTP誘発率は、海馬貫通路に対する高頻度電気刺激60分後、コントロール群で132.7±3.2%、CRA1000投与群で131.2±42.6%であった。2.キンドリング誘発シナプス伝達増強(KIIP)に対するCRF_1受容体拮抗薬の効果:キンドリング発作によってもLTPと類似の海馬長期シナプス伝達増強(KIP)が誘発される。キンドリング発作3時間後におけるKIP誘発率は、コントロール群で122.7±9.6%、CRA1000(10mg/kg)投与群で111.4±21.3%と、CRF_1受容体拮抗薬による抑制傾向が示されたものの、この差は統計的に有意ではなかった。3.熱性けいれん誘発に対するCRF_1受容体拮抗薬の効果:生後1113日令のWistar系ラットを被験体とした熱性けいれんの誘発に対してCRA1000(30mg/kg)は有意な効果を及ぼさなかった。
歯周病における非翻訳RNAの統合的機能解析-細菌と宿主細胞との相互作用を中心に

歯周病細菌Aggregatibacter actinomycetemcomitasとPorphyromonas gingivalisにおける非翻訳RNAおよびRNAシャペロン蛋白であるHfqもしくはCsrA/RsmAをコンピューター予想分析と分子生物学的実験アプローチであるショットガンクローニング法で同定した。またマイクロアレイで細菌リポ多糖を作用させた際のヒト線維芽細胞におけるncRNAsの発現様態についても分析した。近年、新規遺伝子発現調節因子として、タンパク質に翻訳されない機能性非翻訳RNA(non-coding RNA: ncRNA)分子が細胞の増殖や代謝制御また病原細菌の病原性発現に関わっていることが明らかにされ、注目されている。そこで本研究課題「歯周病における非翻訳RNAの統合的機能解析-細菌と宿主細胞との相互作用を中心に」に沿って、本年度は1)全ゲノム解析が終了したAa、Porphyromonas gingivalis(Pg)について、バイオインフォマティクス技術を駆使して、ncRNA候補分子を探索した。その結果、Aaでは大腸菌ncRNA分子と高い相同性(60%以上)を示す8つのncRNA候補分子とRNAシャペロン蛋白遺伝子としてhfqとrsmA(csrA)様遺伝子を特定した。Pgでは大腸菌ncRNA分子とRNAシャペロン蛋白と相同性を示す候補分子は見出せなかった。現在、RT-PCR法によってAaにおけるncRNA候補分子の発現を確かめている。またhfqとrsmA(csrA)様遺伝子についてはAaでそれぞれの遺伝子欠損株を作成し、蛋白発現パターンを親株と比較して、RNAシャペロン蛋白の機能について検討している。2)ヒト歯肉線維芽細胞に大腸菌LPSあるいはPg LPSを作用させて、その発現様態をmicroRNAアレイで比較して、歯周病の感染炎症病態に発現するncRNAの役割や機序について解析を進めている。AaおよびPgの全ゲノム配列と大腸菌で既報の80種のncRNAおよびRNAシャペロンhfqとrsmA (csrA)配列の相同性を検索した。ncRNA候補遺伝子発現はRT-PCR法で検出した。Aa ATCC29523株のRNAシャペロンhfqとrsmA (csrA)様遺伝子欠損株を作成した。それぞれの遺伝子欠損株とATCC29523株の菌体蛋白を二次元電気泳動法によって解析した。Aaにのみ大腸菌のncRNAと相同性(60%以上)を示す8個のAa ncRNA候補遺伝子とRNAシャペロンであるhfqとrsmA (csrA)様遺伝子を同定し、3候補(ssrA、ffs、ssrS)の発現をRT-PCR法で確認した。hfq様遺伝子欠損株では6つの蛋白スポットとrsmA (csrA)様遺伝子欠損株では5つの蛋白スポットで蛋白発現量が増加していた。nRNAがRNAシャペロンを介してのmRNAサイレンシングに関与し、Aaにおいても他の病原細菌と同様にncRNAによる遺伝子制御機構の存在が示唆された。培養ヒト歯肉線維芽細胞や実験動物歯周炎モデルにおけるmicroRNA発現様態ついて解析を進め、歯周病感染炎症病態に発現するncRNAの役割や機序について宿主と病原体の両面から今後、検討して行きたい。病原細菌であるコレラ菌や緑膿菌では、非翻訳RNA (non-coding RNA : ncRNA)分子による遺伝子制御機構が病原性や増殖に関係している。これまでにバイオインフォマティクス技術を駆使して歯周病細菌沼Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)については、大腸菌ncRNA分子と高い相同性(60%以上)を示す8つのncRNA候補分子とRNAシャペロン蛋白遺伝子としてhfqとrsmA (csrA)様遺伝子を特定できた。しかしながら、Porphyromonas gingivalis (Pg)についてncRNA分子やRNAシャペロン蛋白の候補遺伝子は見出せなかった。そこで、今年度はショットガンクローニング法を用いて全RNA画分からPgのncRNAを同定することを目的に研究を進めた。PgW83株から全RNAを抽出し、15%変性アクリルアミドゲルを用いて鎖長が30-300ntに相当するRNAを分画した。得られたRNAを精製し、逆転写とPCR反応を行った。増幅した遺伝子をTAクローニングベクターに組込み、遺伝子ライブラリーを作製した。クローン化遺伝子について塩基配列を調べ、Pgゲノム上の位置を特定した。さらに、クローン化遺伝子の発現をノーザンブロット法で確認した。クローン化した155個のPg遺伝子断片の塩基配列解析の結果、78クローンがPgのゲノム上の遺伝子間領域に、34クローンが遺伝子上のセンス鎖に、そして16クローンが遺伝子のアンチセンス鎖に位置していた。また、残り27クローンはリボソームRNA遺伝子の混入であった。重複してクローン化された10遺伝子を選択し、ノーザンブロット解析の結果、5遺伝子の発現を確認した。これらはPgのncRNAとして機能している可能性が高く、Pgの病原遺伝子の発現や増殖制御にどのように関わっているのかが興味深い。
腸内フローラが司る歯周病の免疫制御機構の解明

本研究は、生体における歯周病原細菌への免疫応答が腸管をはじめとする全身にあるという我々が見出している知見に基づき、腸内フローラが歯周病感受性に及ぼす影響を動物実験の系を用いて解明するとともに、歯周病原細菌のT細胞責任抗原を応用したモデル動物の作製と解析を通して、腸内フローラが司る歯周病病態の全貌を解明していきます。1)腸内フローラが歯周病の病態と発症に及ぼす影響の解明a、歯周病における腸内フローラの役割の解明:SPFマウスに抗菌剤を飲水中に入れて投与することで腸内フローラの一部を破壊し、抗菌剤投与マウス群間の腸内フローラを次世代シーケンサーにて比較解析しました。b、歯周病の病態とTh17細胞分化の解析:歯周病原細菌による口腔感染歯周病発症モデルマウスを用いて、IL-17産生を指標に無菌マウスにおけるTh17細胞の分化誘導をSPFマウスと比較解析しました。c、腸管で誘導された歯周病責任Th17細胞の生体内での細胞遊走の解析:腸管で誘導された歯周病責任Th17細胞の生体内での細胞遊走を追跡する実験系を構築し、実験を開始しました。2)歯周病原細菌のT細胞責任抗原を応用したモデル動物の作製とその解析a、Th17細胞を分化誘導する歯周病原細菌のT細胞責任抗原の特定:歯周病原細菌のT細胞責任抗原の候補となる精製タンパク質を作製し、Th17細胞への分化能の解析を行いました。b、新しい歯周病実験モデル動物の作製:歯周病原細菌菌体成分を野生型マウスへ胃ゾンデにて投与し、腸管を介して責任抗原反応性Th17細胞を分化誘導し、口腔内に歯周病原細菌を感染させて歯周病発症を誘導して、その経過を比較検討しました。c、歯周病病態モデル遺伝子改変マウスの作製:研究計画に従って購入したプレートソーティングを活用し、歯周病原細菌菌体成分を特異的に認識するT細胞クローンの樹立を開始しました。研究計画に従い今年度の本科研費で購入したプレートソーティングを有効に活用することで、歯周病原細菌菌体成分を特異的に認識するT細胞クローンの樹立を開始することができました。また、研究計画に従って実験補助員1名を雇用して研究を推進しています。これらによって、歯周病における腸内フローラの役割の解明、ならびにTh17細胞を分化誘導する歯周病原細菌のT細胞責任抗原の特定に関する解析が大きく進展しました。このように計画に沿って進行していることから、予定通りにおおむね順調に進展していると考えられます。これまでのところ研究はおおむね順調に進行しており、研究計画に従って研究を予定通りに実施していくことで、成果をあげていきます。歯周病の病態とTh17細胞分化の解析と歯周病原細菌のT細胞責任抗原を応用したモデル動物の作製を進めることで、腸内フローラが司る歯周病病態の全貌を解明していきます。本研究は、生体における歯周病原細菌への免疫応答の「場」が腸管を主体とする全身にあるという新たな知見に基づき、腸内フローラが歯周病感受性に及ぼす影響を無菌マウスの実験系を用いて解明するとともに、歯周病原細菌のT細胞責任抗原を応用したモデル動物の作製と解析を通して、腸内フローラが司る歯周病病態の全貌を解明していきます。1)腸内フローラが歯周病の病態と発症に及ぼす影響の解明a、無菌マウスを用いた歯周病における腸内フローラの役割の解明:1研究計画に従って購入したレーザー(マルチカラーFACS)を有効に活用することで、P. gingivalisに反応する無菌マウスのヘルパーT細胞のIL-17産生を指標にin vitroでのTh17細胞の分化誘導についてSPFマウスと比較解析しました。2生体における腸内フローラの役割を解明するために、無菌マウスの腸内に胃ゾンデを用いてP. gingivalisを投与した後、各種リンパ組織を採取し、P. gingivalisに反応するヘルパーT細胞のIL-17産生を指標にTh17細胞の分化誘導についてSPFマウスと比較解析しました。3SPFマウスにアンピシリンといった抗菌剤を飲水中に入れて投与することで腸内フローラの一部を破壊して同様の解析を行いました。これらの抗菌剤投与マウス群間の腸内フローラを次世代シーケンサーにて比較解析を開始しています。2)歯周病原細菌のT細胞責任抗原を応用したモデル動物の作製とその解析a、Th17細胞を分化誘導する歯周病原細菌のT細胞責任抗原の特定1P. gingivalis細菌菌体の分画成分→逆走高速液体クロマトグラフィー→二次元電気泳動→プロテオミクス解析という手法により、歯周病原細菌のT細胞責任抗原の候補となる抗原タンパク質を同定しました。候補の精製タンパク質を作製し、Th17細胞への分化能の解析を進めています。今年度の研究計画に従い本科研費で購入したレーザーを有効に活用することで、マルチカラーFACSでTh17細胞の分化誘導について解析することができました。これによって、無菌マウスを用いた歯周病における腸内フローラの役割の解明、ならびにTh17細胞を分化誘導する歯周病原細菌のT細胞責任抗原の特定に関する解析が大きく進展しました。

本研究は、生体における歯周病原細菌への免疫応答が腸管をはじめとする全身にあるという我々が見出している知見に基づき、腸内フローラが歯周病感受性に及ぼす影響を動物実験の系を用いて解明するとともに、歯周病原細菌のT細胞責任抗原を応用したモデル動物の作製と解析を通して、腸内フローラが司る歯周病病態の全貌を解明していきます。1)腸内フローラが歯周病の病態と発症に及ぼす影響の解明a、歯周病における腸内フローラの役割の解明:SPFマウスに抗菌剤を飲水中に入れて投与することで腸内フローラの一部を破壊し、抗菌剤投与マウス群間の腸内フローラを次世代シーケンサーにて比較解析しました。b、歯周病の病態とTh17細胞分化の解析:歯周病原細菌による口腔感染歯周病発症モデルマウスを用いて、IL-17産生を指標に無菌マウスにおけるTh17細胞の分化誘導をSPFマウスと比較解析しました。c、腸管で誘導された歯周病責任Th17細胞の生体内での細胞遊走の解析:腸管で誘導された歯周病責任Th17細胞の生体内での細胞遊走を追跡する実験系を構築し、実験を開始しました。2)歯周病原細菌のT細胞責任抗原を応用したモデル動物の作製とその解析a、Th17細胞を分化誘導する歯周病原細菌のT細胞責任抗原の特定:歯周病原細菌のT細胞責任抗原の候補となる精製タンパク質を作製し、Th17細胞への分化能の解析を行いました。b、新しい歯周病実験モデル動物の作製:歯周病原細菌菌体成分を野生型マウスへ胃ゾンデにて投与し、腸管を介して責任抗原反応性Th17細胞を分化誘導し、口腔内に歯周病原細菌を感染させて歯周病発症を誘導して、その経過を比較検討しました。c、歯周病病態モデル遺伝子改変マウスの作製:研究計画に従って購入したプレートソーティングを活用し、歯周病原細菌菌体成分を特異的に認識するT細胞クローンの樹立を開始しました。研究計画に従い今年度の本科研費で購入したプレートソーティングを有効に活用することで、歯周病原細菌菌体成分を特異的に認識するT細胞クローンの樹立を開始することができました。また、研究計画に従って実験補助員1名を雇用して研究を推進しています。これらによって、歯周病における腸内フローラの役割の解明、ならびにTh17細胞を分化誘導する歯周病原細菌のT細胞責任抗原の特定に関する解析が大きく進展しました。このように計画に沿って進行していることから、予定通りにおおむね順調に進展していると考えられます。研究はおおむね順調に進行しており、研究計画に従って研究を予定通りに実施していくことで、成果をあげていきます。歯周病の病態とTh17細胞分化の解析と歯周病原細菌のT細胞責任抗原を応用したモデル動物の作製を進めることで、腸内フローラが司る歯周病病態の全貌を解明していきます。これまでのところ研究はおおむね順調に進行しており、研究計画に従って研究を予定通りに実施していくことで、成果をあげていきます。
大面積・超高輝度紫外LEDへの挑戦

平成20年度は紫外LED製作のため、サファイアを窒化することで得られるAINを形成することと、その上に形成する三角錐ナノ結晶構造、CrN基盤の形成過程に関するGaNテンプレート製作技術を開発した。具体的には(1)窒化条件の最適化、(2)多重バッファー層(AlNとCrN)とその上に成膜するGaNテンプレートの結晶性評価、(3)サファイア基板/AIN/CrNナノ結晶の界面における結晶性評価、転位及び欠陥分析である。1.窒化条件の最適化スパッタリング法によりc面サファイア基板上にGr膜の成膜を行い、高温炉内でNH3による窒化を実施することでCrNの形成とサファイアを窒化することによるAlNの形成を行い多重バッファー層を形成する。すなわち、サファイア基板にCr薄膜を成膜、その後炉内(1,080°CNH3)で窒化プロセスを行うことで単結晶CrNの三角錐ナノ結晶構造を形成した。この際、Cr薄膜の厚さと窒化時間によるCrNナノ結晶の表面モフォロジーとCrNの結晶性の向上に関する研究を実施した。2.多重バッファー層(AlNとCrN)とその上に成膜するGaNテンブレートの結晶性評価さまざまな窒化条件によってCrNバッファー層上にGaNテンプレート層を成長して、これらGaNの結晶性を分析した。この結果、CrNの結晶性が良いほどGaNの結晶性が向上するのではなく、三角錐ナノ結晶構造の分布及び大きさによってGaNの結晶性が変わることが確認できた。3.サファイア基板/AlN/CrNナノ結晶の界面における結晶性評価、転位及び欠陥分析最適のGaNを成長した後XRD、PL法を利用して結晶性及び不純物の評価を行った。またSEM、AFMによる表面観察及びTEMによる欠陥密度を評価した。その結果、今までの研究結果より少ない刃状転位密度を持っている良質のGaN結晶成長が出来ているということを確認した。
新規癌抗OFA-iLRPを標的とした肺癌に対する腫瘍特異的免疫療法の検討

新規癌抗原であるOFA-iLRPは腫瘍特異的免疫療法の有望な標的であると考えられている。本研究ではOFA-iLRPを標的とした肺癌に対する腫瘍特異的免疫療法の臨床応用の可能性にっいて検討を行つた。その結果、OFA-iLRPがヒト肺癌組織において発現すること、OFA-iLRP由来ペプチドで刺激した樹状細胞により細胞障害性丁リンパ球が誘導されることを明らかにした。以上の結果は進行性肺癌に対する腫瘍特異的免疫療法の確立につながる有益な結果であると考える。腫瘍特異的免疫療法では患者の癌組織に発現している癌抗原を標的とする事が必須であり、新規癌抗原であるOncofetal antigenimmaturelaminin receptor protein(OFA-iLRP)は多くのヒト肺癌細胞株に発現する事より、肺癌に対する腫瘍特異的免疫療法の有望な標的であると考えられる。本研究ではOFA-iLRPを標的とした腫瘍特異的免疫療法の臨床応用の可能性について評価する事を目的としている。平成20年度は最初にヒト肺癌組織アレイを用い、免疫染色法によって肺癌組織におけるOFA-iLRP発現の検出を行った。この実験ではOFA-iLRPを検出するためにヒト肺癌細胞株においてOFA-iLRPが検出可能であった特異的抗体を用いて検討を行った。その結果、ヒト肺癌組織においてもOFA-iLRPの発現が検出された。特にヒト肺癌細胞株で高発現していた小細胞肺癌、扁平上皮癌の組織においてOFA-iLRPが高発現することが確認された。この結果より、OFA-iLRPが肺癌、特に難治例の多い小細胞肺癌の治療において重要な標的となりうることが証明された。次にOFA-iLRP特異的抗体を用い抗体依存性細胞障害(ADCC)、ならびに補体依存性細胞障害(CDC)について検討を行った。ターゲット細胞としてOFA-iLRP高発現肺癌細胞株、エフェクター細胞としてヒト単核球細胞を用いADCCの測定を行ったが、今回の検討ではADCC活性は認められなかった。またCDC活性に関しても同様であった。今後、実験条件を変更し、再度検討を行う必要があると考えられる。平成21年度は平成20年度に引き続き、OFA-iLRP特異的抗体を用い抗体依存性細胞障害(ADCC)、ならびに補体依存性細胞障害(CDC)について検討を行った。ターゲット細胞としてOFA-iLRP高発現肺癌細胞株、エフェクター細胞としてヒト単核球細胞を用い種々の実験条件でADCCの測定を試みたが、今回の特異的抗体ではADCC活性は認められなかった。次にOFA-iLRP特異的細胞障害性T細胞(CTL)の誘導について検討を行ったところ、OFA-iLRP由来ペプチドで刺激した樹状細胞によりCTLの誘導が認められた。癌抗原由来ペプチドによるCTL誘導の確認は、進行性肺癌に対する癌ワクチンや樹状細胞療法の確立につながると考えられ、非常に有益な結果が得られたと考えられる。
クライアントが効果を実感できる聴き方の支援：傾聴概念再考と傾聴教育プログラム開発

本研究の目的は、クライアントが効果を実感できるためにはセラピストはどのように聴けばによいのかを解明することである。(1)傾聴概念の再考:臨床心理面接コーパスを構築・活用することで、感情推移観測システムによるカウンセリングの傾聴評価、傾聴概念の把握、臨床学習への応用をはかった。さらに、マイクロカウンセリングとの対応や傾聴評価者による評定の特徴を見いだした。(2)傾聴教育プログラムの開発:(1)に基づいて、カウンセリングの学習者や現場実践者が役立てることのできる、傾聴にまつわる知識をテキストを通じて提供した。研究の目的カウンセリングでは、セラピスト(Th)が聴いているつもりでも、クライアント(Cl)はそう思えなかったり、聴いてくれていると思えても聴いているだけでなにも変わらないと不満に思ったりすることがある。このようなThの傾聴とClの感情状態とのあいだで「ズレ」はいかに生じ、解消しうるのか?本研究は、Clが効果を実感できる聴き方を支援することを目的に、(1)傾聴概念の再考と(2)傾聴教育プログラムの開発に取り組む。(1)傾聴概念の再考では、発話・身振り・口振りと感情の評価値に関する定量的な観測データをもとに、質問技法や受容的な言葉がけが、どのように傾聴概念を構成するかを明らかにする。(2)傾聴教育プログラムの開発では、傾聴にまつわる「ズレ」を解消しながら「聴く」ために、Thが効果的に運用し得る知識を実践的に明らかにする。研究実施計画本研究は、Clが効果を実感できる聴き方を支援することを目標として、(1)傾聴概念の再考と(2)傾聴教育プログラムの開発の2課題について、当該年度に以下のように着手した。(1)傾聴概念の再考:臨床心理面接データに関して、発話内容のテキストとマイクロカウンセリング手法で導入されている評定ラベル(たとえば、かかわり行動の有無、質問、発話の促し等)を付与することを開始した。改良した感情推移観測システムを用いて、臨床心理面接データについてセラピスト/来談者のそれぞれが相手の話を「聴いている/聴いていない」という連続評価量を入力することを試みた。(2)傾聴教育プログラムの開発:(1)での傾聴概念の構成にかんする定量的な検討をふまえて、そもそも傾聴とは何か、ということについて、本質的な議論を継続的に行った。これにより、傾聴にまつわる「ズレ」を解消しながら「聴く」上で、Thが効果的に運用し得る知識について、定性的側面からの展望をもつことができた。研究の目的:カウンセリングでは、セラピスト(Th)が聴いているつもりでも、クライアント(Cl)はそう思えなかったり、聴いてくれていると思えても聴いているだけでなにも変わらないと不満に思ったりすることがある。研究実施計画:(1)傾聴概念の再考:収録済みの44件の臨床心理面接データに関して、発話内容のテキストとマイクロカウンセリングによる発話の特徴ラベル付与をすすめた。当初、臨床心理学を専攻する学習者らによるアノテーションをすすめたが、テキストの書き起こしの段階で評定者間の一致率が低くなった。そこで安定した評定をすすめていくために、より専門性の高い作業者2名を確保し、研究メンバーとともにビデオデータを見ながら、アノテーション作業のための視点の共有や見直しの徹底をはかることで、傾聴評価の質を高めた。(2)傾聴教育プログラムの開発:前年度までに、傾聴にまつわる「ズレ」を解消しながら「聴く」上で、Thが効果的に運用し得る知識について、定性的側面からの展望をもつことができた。これをうけて、当該年度は定量的側面からの検討に着手し、プログラムの開発にむけた体制整備が完了した。(1)傾聴概念の再考:当初テキスト書き起こしの作業については、複数の作業者で並行してすすめる体制を想定していた。ところが、発話区切りの観点等にばらつきが生じることが明らかとなり、これを解消するために一定・同程度の専門性を確保した作業者らによる評価体制の構築を行ったことによる。(2)傾聴教育プログラムの開発:当初定量的側面からの検討に際し、EMO system(感情推移観測システム)のEMObarの使用にあたっては、現行のパソコンですすめることとしていた。しかし、現行のパソコンでは、臨床心理面接データの再生に際して動作が不安定になることが当該年度末に明らかとなった。データ量の軽減等の対策を講じているが、十分なスペックを備えるパソコンへの更新が必要となり、作業体制は整備できたものの、実作業は次年度に持ち越されたことによる。このようなThの傾聴とClの感情状態とのあいだで「ズレ」はいかに生じ、解消しうるのか?