hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
エピジェネティクスリセットによる革新的ヒト肝発癌メカニズム解析

HCC細胞株に対し山中4因子を導入したところ、約2週間後にiPS細胞様のコロニーが形成された。形成されたコロニーを顕微鏡下で取得し、独立に培養し形態観察、遺伝子発現解析、免疫不全マウスへの移植を行った。未分化マーカーおよび肝細胞マーカーの発現はHCC細胞株に較べ、肝細胞マーカーであるHNF4の発現低下と未分化マーカーであるSox2の発現上昇が見られた。しかしながら、未分化マーカーの発現はiPS細胞と較べ低かった。免疫不全マウス(NOD/scid)の精巣へ移植しテラトーマ形成の有無を検証した。すると樹立したクローンからテラトーマの形成は見られなかった。日本における最新のがん統計によると、がん罹患者は35年前の4倍になっており、その中で、肝臓がんは2012年のがんによる死亡数が多い部位の第5位となっている。肝細胞癌(HCC)原因遺伝子が多様であり、HCCを体系的に理解し治療へ結びつけるためには、エピジェネティック修飾に基づく発癌の理解が重要である。昨年度の解析で樹立した細胞についてリプログラミングが充分に確認できなかったことから、既存のヒト肝癌細胞株には数多くの染色体異常が報告されており、リプログラミング因子を導入後のリプログラミングに必要な因子を欠損しているか、未分化状態を維持する遺伝子が欠損している可能性が考えられた。そこで、ヒト肝癌細胞株と共に正常細胞としてヒト線維芽細胞および臍帯由来内皮細胞を用いてiPS細胞の作成を平行して実施した。昨年度より多くの肝癌細胞株を用い、HNF4の発現低下や未分化マーカーの発現上昇が観察された。しかし、線維芽細胞や臍帯由来内皮細胞を用いて作成したiPS細胞と較べると発現が低く、完全なリプログラミングは観察されなかった。一方、線維芽細胞や臍帯由来内皮細胞より樹立したiPS細胞についてはこれら細胞を用いて肝臓系列細胞へ分化誘導し、肝分化マーカー遺伝子の発現解析およびアルブミン分泌をタンパク質レベルで検出し、実験系に問題が無いことが確認された。以上の事から、より多くの肝細胞癌を対象とした研究を実施することが必要であると考えられる。また、肝癌だけでなく、遺伝子変異が明らかとなっている、膵癌や肺癌を対象とすることで、癌化にかかわるエピジェネティック修飾を明らかにする事が可能となると考えられた。肝細胞癌(HCC)は原因遺伝子が多様であり、HCCを体系的に理解し治療へ結びつけるためには、エピジェネティック修飾異常に基づく発癌の理解が重要である。本研究では、HCC臨床検体を用いてHCCをiPS細胞化することにより、エピジェネティック修飾をリセットするという革新的手法に基づき、リセットしたHCCから分化誘導した肝臓系列細胞(iHCC)において腫瘍形成能が失われるか検討する。エピジェネティック修飾のリセットにより腫瘍形成能が失われるiHCCと、元のHCCの間でのエピジェネティック修飾状態を網羅的に解析することで、エピジェネティクスリセットによる革新的肝発癌メカニズム解析を試みるものである。本年度はヒト肝癌細胞株であるHepG2細胞およびHuh7細胞を用いてiPS因子を導入したところ、iPS細胞に類似した形態のコロニーが出現した。それぞれ、20クローン程度iPS細胞様細胞を樹立し未分化マーカーであるSOx2および肝細胞マーカーであるHNF4の発現を解析したところ、いくつかのクローンにおいてHNF4の発現抑制が見られた。一方、Sox2についても親株のHepG2と較べ高発現するクローンが存在していたが、すでに樹立されている正常細胞由来iPS細胞と較べ発現が低かった。次にこれらのクローンを免疫不全マウス(NOD/SCID)の精巣に移植しテラトーマ形成を観察したが、形成された腫瘍はテラトーマではなかった。既存のヒト肝癌細胞株には数多く染色体異常が起こっていることが報告されていることから、未分化状態にリプログラムに必要な遺伝子を欠損しているか、未分化状態維持に必要な遺伝子が欠損している可能性が示唆された。実験の進捗は順調であり、既にiPS細胞様細胞の樹立と機能解析を実施した。これは当初計画以上の進捗であった。一方、HepG2およびHuh7については機能的にiPS細胞様の未分化能を有する細胞を樹立するには至らなかった。しかしながら、本年度の検討から問題点が明確になったことから次年度へ向けた有用な情報が得られたと言える。本年度の実績を踏まえ、次年度においては遺伝子変異が明らかとなっているマウス膵癌モデルを用いてiPS細胞様細胞の樹立を実施し、本法の有効性を示すと共に、他の肝癌細胞株での実施を行うことを計画している。当初の予定より、消耗品が安価に購入できたため端数が生じ、翌年度に繰り越した。繰り越した研究費は翌年度研究費と合わせて、消耗品費として使用する。
組織内 B-10 分布の新規解析法の開発とそれを駆使した BNCT の研究

ホウ素中性子捕捉療法(BNCT)の研究ではホウ素分布の検索が重要である。αオートラジオグラフィーはその画像化技術として有用であるが、標準法では10Bの正確なマイクロ分布の検出は不可能である。我々はエッチングピットの形状に着目し、その円形度を指標に10Bの位置を正確に特定する簡単かつ迅速な方法を開発した。新法では、4um厚未満の組織サンプルの場合、エッチングピットの位置から最大1.7umの誤差で10Bの位置を検出できる。ホウ素中性子捕捉療法は10B(以下ホウ素)原子核が中性子捕獲に伴い放出する細胞径を超えない極飛程で生物効果の極めて大きいα粒子とLi原子核の殺細胞効果を利用する放射線治療の一種で、ホウ素化合物が腫瘍選択的に集積すれば、細胞レベルの選択的照射が可能な放射線治療である。しかし、ホウ素中性子捕捉療法を発展させるには未解決の技術要素がある。その核心はホウ素化合物の開発に絡む技術で特に腫瘍を含む生体組織中での化合物のミクロ分布を正確かつ簡便に把握する画像技術の開発である。この技衛の確立のためにαオートラジオグラフィーの改良を試みた。ホウ素化合物を投与したマウスの薄切組織(スライドガラス上)に1ミクロン厚のマイラーを重ね、その上にCR-39を置いた。その状態で中性子を照射した(αオートラジオグラフィー)。この時、薄切組織とCR-39の間に差し挟むマイラーを増やしていくと、CR-39上に形成されるα粒子とLi原子核のピット数は減少すると同時に、中性子と反応したホウ素原子が存在した位置の分解能が高まることが確認された。次に誤差を最小限にしつつピットの位置と細胞の関係を再現することが必要になった。そこで、全ての組織で共通に見られる構造である血管に着目し、ホウ素化合物が血中に十分量存在する時期に採取した組織を薄切して上記の方法でαオートラジオグラフィーを行ったところ、染色した薄切標本で見られる血管内腔の形状に一致する形に密集した粒子のピットが認められ、この両者を正確に合わせることによって、ピットの位置を細胞上に正確に再現できる目途がたった。BPAやBSHの修飾体の合成も出来ており、その生物活性も腫瘍について検索されているので、来年度には本法で検索できるミクロ分布情報と合わせて効果の包括的理解が可能となると期待している。ホウ素中性子捕捉療法は10B原子核が中性子を捕獲し放出する10ミクロン以下の極短飛程で生物効果の極めて大きいα粒子とLi原子核の殺細胞効果を利用する腫瘍選択的放射線治療であり期待が大きい。しかし、本法の発展のためには未解決の技術要素がある。その核心は10B化合物の開発とそれに絡む基盤技術、特に腫瘍を含む生体組織中での化合物のミクロ分布を正確かつ簡便に把握する画像技術の開発である。そのため、既存のαオートラジオグラフィー技術の改良による高精度化を試みた。10B化合物を投与したマウスの薄切組織をα粒子などの固体検出器CR-39に載せ中性子を照射した。なお、後の画像融合のメルクマールにする線をCR-39上に刻しておいた。次にCR-39上の薄切組織のヘキスト染色蛍光画像を作成し、更にCR-39に化学処理を施してα粒子などが形成した飛跡を表出させた。ただ、10B原子核のミクロ分布の観察には飛跡サイズが細胞径に近い程に大きいため、固体検出器CR-39に斜入して飛跡を残す粒子ではホウ素原子核の位置精度が保証できない。しかし、多数の飛跡の中から正円のものを選択すれば10B原子の位置を特定できることが23年度の研究で分かった。更に固体検出器CR-39に前もって刻した線をメルクマールに飛跡画像と薄切組織の蛍光画像をコンピューター画像技術で融合させる。これによって10B原子核の位置を細胞上で正確に特定する技術が確立できた。BPAやBSHの修飾体の合成も出来ており、その生物活性も腫瘍について検索されているので、24年度には本法で検索できるミクロ分布情報と合わせて効果の包括的理解が可能となると期待している。BNCTはB-10原子核が中性子を捕獲し放出する10ミクロン以下の極短飛程で生物効果の大きいα粒子とLi原子核の殺細胞効果を利用する腫瘍選択的放射線治療である。電荷を持たない中性子の分布を任意に成形することはできない為、ホウ素化合物の腫瘍選択的分布が線量分布の選択性を保証する。それ故に、ホウ素化合物の開発がBNCTの発展に決定的に重要な要素である。而るに新規ホウ素化合物の開発には不可欠にして未確立の技術要素がある。腫瘍を含む生体組織中での化合物のミクロ分布を正確かつ簡便に把握する画像技術の開発である。我々は既存のαオートラジオグラフィー技術を改良した高精度技術の開発に成功した。B-10化合物を投与したマウスの薄切組織をα粒子等の固体検出器CR-39に載せ中性子を照射した。

後の画像融合のメルクマールにする線をCR-39上に刻した後、CR-39上の薄切組織の蛍光染色画像を作成、次にCR-39に化学処理を施してα粒子等が形成した飛跡を表出させた。飛跡のサイズから窒素と中性子の核反応による陽子のそれは除外することができた。次に、多数の飛跡の中から正円に近いものを選択することによって位置精度を高めることができた。正円度、0.9951.000のものを選択すれと、薄切試料厚が4ミクロンの場合、位置精度の最大誤差は1.7ミクロンとなり、更に歪みの方向から最大誤差の方向も特定できることが分かった。固体検出器CR-39に前もって刻した線をメルクマールに飛跡画像と薄切組織の蛍光画像をコンピューター画像技術で融合させると、組織中でのB10原子の分布を、細胞内か細胞外か、将又、細胞核内かを弁別できることが分かった。ホウ素化合物BPAが投与されたマウス組織でのB10原子分布の解析に応用し、本法の有用性を確認した。BPA、BSHはもとより、新規化合物の効果の包括的理解に資すると期待される。本研究の基盤技術である組織内B-10分布の新規解析法の開発に手間取ったためである。具体的には研究の概要で述べた如くホウ素原子核の薄切組織上の位置と放出粒子が検出媒体CR-39上に最長9ミクロンのサイズで形成される飛跡位置との一致精度を極限まで高めるために想定した種々のアイデアが技術的に上手く行かなかったためと、薄切組織画像とCR-39上の飛跡画像を高精度で一致させるための想定アイデアが技術的に上手く行かなかったためである。しかし、新たの発想に基づくアイデアを導入することによって23年度末には何れも解決できた。本法に関する論文を準備中であり、本年度は本法を駆使して研究を進めることが出来る。24年度が最終年度であるため、記入しない。(1)開発した高精度αオートラジオグライーによる10B化合物分布の検索とヌードマウス移植ヒト腫瘍に実験的BNCTを行った結果の比較検討によって、BNCTによる選択的治療が期待できる腫瘍種をで明らかにする。肺癌(中皮膿を含む)モデルについては既に研究を始め、中性子による照射研究も行っており継続する。また、浸潤性および表在性膀胱癌(膀胱癌では膀胱へ空気の注入が可能であるので中性子の強度の減弱を大幅に級和できることから、BNCTの対象と考え得る)(2)合成済みの新規ホウ素化合物の分布と効果の特性を現行のBPA、BSHと比較検証する。BSHを含有するPEGイムノリポソーム、温度感受性リポソーム、またポリアルギニン標識の細胞膜透過性BSH製剤の腫瘍ならびに正常組織への移行・集積を高精度αオートラジオグライーで検索すると共にBSHおよびBPAに対する単クローン抗体を使った検索の結果と比救検証する。高精度αオートラジオグライーでは集積したホウ素化合物の濃度の検索も可能であるので濃度推定を試みる。グラム単位の試料でのホウ素濃度の測定は、原子炉中性子を利用する即発ガンマ線分析(設備は設置済み)と1CP(整備済み)を用いて行う。(3)現在使用可能な棚素化合物(BPAとBSH)の腫瘍選択的集積性の向上を図る手法を検索する。腫瘍血管の正常化を誘導し、抗がん剤などの腫瘍内での分布の不均一を低減すると報告されている抗VEGF抗体薬であるAvastinがホウ素化合物の腫瘍中分布に及ぼす効果を検索する。
培養シナプスモデルを用いた神経筋接合部の形態と機能に関わる分子メカニズムの解析

神経筋接合部は運動神経からの筋収縮のシグナルを筋細胞へ伝達する場である。運動神経から放出されるアセチルコリンが筋細胞膜に存在するニコチン性アセチルコリン受容体に結合することによって筋が収縮する。ニコチン性アセチルコリン受容体は数種類のタンパク質とともに集積して機能しているが、集積のメカニズムは明らかにされていない。そこで、光学顕微鏡と電子顕微鏡で同一視野を観察する相関観察を行うことによって、ニコチン性アセチルコリン受容体集積の分子メカニズムについて解析した。ニコチン性アセチルコリン受容体(nAChR)は神経筋接合部(NMJ)のポストシナプスにおいて集積しており、その集積あるいはシグナル伝達に関わる様々な分子と共にクラスターを形成している。このクラスターの形態は、NMJの成熟や疾患により大きく変化する。本研究は、このクラスターの形態と機能に関わる分子メカニズムを解明する事を目的とする。今年度、分化C2C12筋管細胞上に、分化NG108-15神経細胞とそれと同細胞数のシュワン細胞を添加して3者共培養の検討を行い、1週間培養維持することに成功した。また、NMJの成熟度を判断するために、NMJに形成されるヒダ状形態を光学顕微鏡で観察する手法の検討も行った。nAChRと細胞膜の二重染色法を検討し、成熟したラット横隔膜のNMJにおけるヒダ状構造を可視化する方法を確立した。本手法によって観察した3者共培養1週目のNMJにはヒダ状構造は認められなかったが、シュワン細胞の添加によって共培養におけるnAChRクラスターの形成が促進され、3者細胞間において相互作用が起こっていることを確認できた。また、クラスター構成分子を光学顕微鏡および電子顕微鏡の両方で観察するための分子標識として、金属結合タンパク質であるメタロチオネイン(MT)、フィトケラチンのαアミノ酸アナログであるEC20、およびこれらを融合した標識MT-EC20について検討を行った。これら種々の遺伝的タグをマルトース結合タンパク質(MBP)遺伝子に融合し大腸菌に導入した。標識に用いる元素には微結晶を形成すると蛍光を発することが知られているカドミウムイオンおよび亜セレン酸イオンを用いた。その結果、MBP-MT-EC20を発現している大腸菌において蛍光を検出することができた。さらに電子顕微鏡観察によって、大腸菌のペリプラズム空間で微結晶様構造物の存在を確認することができた。C2C12細胞由来筋管細胞を用いて、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAChR)クラスターが成熟するまでの過程において、nAChRおよび筋特異的受容体チロシンキナーゼ(MuSK)のクラスターの数や大きさを共焦点レーザースキャン顕微鏡(LSM)で、クラスター内でのそれぞれの分子局在を走査型電子顕微鏡(SEM)で観察した。その結果、従来、成熟クラスターのモデルとしてはアグリン添加後16時間後の筋管細胞を観察に用いてきたが、アグリン依存的なnAChRクラスターの成熟はアグリン添加後約2時間から起こることが分かった。また、クラスターの成熟に関与するシナプス間隙に存在する分子としては、プレシナプスから放出されるアグリン以外に、シナプス間隙で細胞外マトリックスを構成するラミニンも報告されている。LSMとSEMを用いた相関観察の結果より、アグリンによって成熟したクラスターとラミニンによって成熟したクラスターでは、クラスター内のnAChRとMuSKの分子分布が異なる傾向が観察された。LRP4を介してシグナルが伝達されると考えられているアグリンに対して、ラミニンはジストログリカンを介したシグナル伝達機構に関わっていると考えられている。本来生体内では両者が存在しているが、クラスター成熟時にnAChRを集積する経路が両者で異なっていること示す結果となった。また、NG108-15とC2C12の2者共培養にシュワン細胞を添加した3者共培養では、2者共培養と比較して、nAChRクラスターの形成が促進される。しかし、生体の神経筋接合部(NMJ)のようなヒダ状構造の形成は認められない。そこで本年度はより生体のNMJに近いin vitro NMJを作製するために、マウスES細胞から運動神経を分化誘導させる系を確立した。マウスES細胞から運動神経を分化させる系を確立した事で、より生体のNMJに近いin vitro NMJを用いた実験を展開することが可能になった。また、当初の実施計画通り、C2C12細胞膜表面で発現しているnAChRに対して免疫標識法を用いて標識を施し、nAChRクラスター構造が成熟するまでの発生段階を追って、LSMとSEMを利用した相関観察法によりnAChRの分子局在を観察した。今年度は、C2C12細胞での観察を重点的に行ったため、ES細胞から分化させた運動神経との共培養系で得られるシナプスモデルでは分子局在についてまだ充分なデータが得られていないが、C2C12細胞での分子局在についてはnAChRだけでなく、次年度に観察予定であったMuSKについても同時標識することで併せて観察を行うことができた。以上のことから、おおむね順調に進展していると考えられる。近年、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAChR)クラスター構造の成熟時には、シナプス外の細胞膜に存在しているnAChRがエンドサイトーシスされ、細胞内を経由してポストシナプス膜へ移動する可能性について示唆されている。

また、nAChRクラスター構造の成熟に必須なポストシナプスタンパク質である筋特異的受容体チロシンキナーゼ(MuSK)のエンドサイトーシスが、運動神経からの分泌タンパク質であり、クラスター構造成熟の引き金となるagrinによって促進されるという報告があることから、agrin依存的なnAChRとMuSKの局在変化について、細胞膜表面だけでなく細胞内についても検証を行った。方法としては、初期発生型の未成熟nAChRクラスターを生じているC2C12細胞由来培養筋管細胞膜上のnAChRとMuSKに直径の異なる金ナノ粒子と蛍光標識を施し、agrin存在下で筋管細胞の培養を続けることによってクラスター構造の成熟を促進させ、nAChRとMuSKの局在を共焦点レーザースキャン顕微鏡(LSM)と走査型電子顕微鏡(SEM)を用いた相関顕微鏡法で調べた。金ナノ粒子で標識した細胞内タンパク質の分子局在を電子顕微鏡で観察する場合には、超薄切片を作製して透過型電子顕微鏡で観察方法が一般的である。しかしながら、LSMで蛍光観察したnAChRクラスター部位を電子顕微鏡で探し、広範囲に渡ってnAChRまたはMuSKがエンドサイトーシスされた小胞を探すためには、超薄切片は向いていない。そこで超薄切片より厚くて大きな準超薄切片を作製し、反射電子検出器を利用してSEMで広範囲に渡ってnAChRとMuSKの細胞内局在を調べた。また、ES細胞から分化させた運動神経とC2C12細胞由来筋管細胞による共培養系でも、シナプスでnAChRクラスターの形成を確認することができた。神経筋接合部は運動神経からの筋収縮のシグナルを筋細胞へ伝達する場である。運動神経から放出されるアセチルコリンが筋細胞膜に存在するニコチン性アセチルコリン受容体に結合することによって筋が収縮する。ニコチン性アセチルコリン受容体は数種類のタンパク質とともに集積して機能しているが、集積のメカニズムは明らかにされていない。そこで、光学顕微鏡と電子顕微鏡で同一視野を観察する相関観察を行うことによって、ニコチン性アセチルコリン受容体集積の分子メカニズムについて解析した。当初の予定通り、神経細胞・筋細胞・シュワン細胞の3者を共培養する方法を確立できた。そして3者の細胞が同時に培養されているだけでなく、細胞間で相互作用することも確認できた。NMJに形成されるヒダ状構造を光学顕微鏡で観察するための方法も確立し、3者共培養におけるNMJの観察も行った。また申請者がこれまで開発していた遺伝的コード化標識法を改良し、さらに使用する添加元素を従来のカドミウムイオンのみから、カドミウムイオンと亜セレン酸イオンにすることで、細胞内で蛍光と微結晶様構造物を検出し、光学顕微鏡および電子顕微鏡の両方で観察できる分子標識法を確立することができた。本研究に関わる成果について3つの学会等で発表しており、おおむね順調に進展していると考えられる。本研究により確立させた培養シナプスモデルで、シナプスに局在するタンパク質の分子局在解析を行う。nAChRクラスター構造が発生、成熟する過程では複数のタンパク質分子がシナプスのヒダ状構造形成やnAChRの集積に関与していることが知られている。そこで、nAChRの集積に深く関与すると考えられているMuSK、rapsyn、LRP4などをそれぞれ遺伝的標識法または免疫標識法を用いて分子標識する。
可視光応答型光触媒をベースとした電界効果型水素センサデバイスの開発

本研究は可視光応答型の光触媒材料である酸化タングステンと貴金属触媒を組み合わせた電界効果型水素センサデバイスを作製し,超低濃度水素ガス(10ppm程度)を室温で高速に検出することを目指すものである.本研究の成果は水素ステーションなどでの水素漏洩状況を常時モニタリング可能なガス漏洩検知システムの実現に寄与するだけでなく,可視光触媒の応用分野を更に広げるものである.本研究は可視光応答型の光触媒材料である酸化タングステンと貴金属触媒を組み合わせた電界効果型水素センサデバイスを作製し,超低濃度水素ガス(10ppm程度)を室温で高速に検出することを目指すものである.本研究の成果は水素ステーションなどでの水素漏洩状況を常時モニタリング可能なガス漏洩検知システムの実現に寄与するだけでなく,可視光触媒の応用分野を更に広げるものである.
光ビート法を用いたブリルアン散乱分光による分子振動緩和の解析

分子の振動緩和現象を光を用いて解析する方法のうち、光熱分光法による気相分子の振動脱励起の速度の解析、および分子性液体の二液相界面の界面波による光散乱スペクトルによる解析について検討を行った。まず、光熱分光法による解析では、赤外パルスレーザーで振動励起された気体分子(CCIF_2CH_2ClおよびCH_3F)の振動緩和速度に対する添加気体の効果を測定した。なお、測定方法として熱レンズ法を採用した。添加気体は励起レーザーにより直接に光励起されない希ガス(ヘリウム、アルゴン、キセノン、クリプトン)、窒素、メタン、四フッ化炭素、四塩化炭素とした。これらの分子が衝突により相手分子を緩和させる効果を求めた結果、添加気体の性質の中でも、分子間ポテンシャルの深さと添加気体分子の振動状態密度が衝突相手を緩和させる効果に大きく寄与していることが明らかになった。次に分子性液体の液液界面における分子の振動緩和に関する知見を得るために、液液界面の界面波(キャピラリー波)によるプリルアン散乱スペクトルを光ビート法を用いて測定する方法の確立を試みた。界向波のスペクトルから界面の動的な粘性と界面張力に関する情報が得られるが、前者の振動数依存性を検討することにより分子の振動緩和に関する情報が得られることが期待される。本研究では水-アセトン、および水-ニトロベンゼン界面の動的な粘性と界面張力が求まったが、振動緩和を議論するためのデータとしては精度がやや足りなかった。なお、得られた界面波のスペクトルを、両相の密度および粘性、界面張力を考慮した理論に回帰すると、いずれの系でも粘性係数がバルクで知られている値より小さくなった。分子動力学の計算によると、界面の極近傍では分子の配向や異相分子の潜り込みの可能性があり、現在のところ、これらの効果が界面近傍に特有の物性値を与える原因になっていると考えている。本年度は分子振動緩和の解析のためのブリルアン散乱分光の測定を,低波数領域で非常に高い分解能が得られる光ビ-ト法を用いて行う方法を確立することを目的としてきた.低波数領域を高分解能で測定するため,これまでには問題にならなかったような現象が顕在化することが本研究で明らかになった.試料としてはクロロフルオロエタン(CC1F_2CHC1_2)を検討した.この分子は分子内回転の自由度を持っているため、低温でのフォノンの減衰挙動は興味あるところである.光ビ-ト法によるブリルアン散乱スペクトルをローレンツ分布関数に回帰し,その半値幅を求めると入射光強度および試料セル中での測定位置に依存することがわかった.このことはフォノンの減衰によるスペクトルの広がりに加えて他の効果が存在することを示している。その原因として、励起光ビームによって生成する熱レンズによるビーム広がりの効果があげられる.レーザー強度を増大させることによるスペクトル幅の増加,あるいは、セルの出口側に近いところでの測定で半値幅が増大することも熱レンズ効果によるビームの広がりにより説明できる.さらに詳細に検討するとスペクトルの広がりは左右対称でないことがわかる。このことは、熱レンズ効果によるビームの広がりが励起光ビームに対しては対称であるが,励起光ビームに対して角度を持っているプローブ光ビームに対しては対称でないことから理解できる.熱レンズによるビームの広がりを回避するにはビーム強度を十分に下げることが要求される.ビーム強度が低いときに十分なS/Nを得る方法を今後検討する必要がある.分子の振動緩和現象を光を用いて解析する方法のうち、光熱分光法による気相分子の振動脱励起の速度の解析、および分子性液体の二液相界面の界面波による光散乱スペクトルによる解析について検討を行った。
カドヘリンによる細胞接着の制御機構

カドヘリンはカルシウム依存性の細胞間接着分子で、組織構造の形成あるいは維持において中心的な働きをしている。従って、カドヘリンの働きを制御することは、細胞間の接着をコントロールすることになる。また、その破綻は、癌細胞でしばしば見られる浸潤性の獲得と転移へとつながる。細胞はいくつかの異なるレベルでカドヘリンの働きを制御している。我々はこれまで、カドヘリンの制御はカドヘリン自身が直接制御されるばかりでなく、アクチン骨格へリンクさせるβ-カテニンやα-カテニン、またp120などによっても間接的に制御されることを明らかにしてきた。さて、カドヘリンも他のタンパク質と同じように、小胞体で合成されゴルジ体を通過し、細胞表面に輸送される。また、極性細胞ではE-カドヘリンは側底部と呼ばれる細胞同士が接着している部位に存在していることが分かっている。今回、偶然にある変異カドヘリンの細胞表面への輸送が阻害されることを見い出した。カドヘリンは細胞表面に輸送されて機能する分子であるので、その輸送が阻害する機構が存在すると言うことは、この輸送の制御もカドヘリン活性の制御機構のひとつになると考えた。そこで一連の変異カドヘリンをMDCKという細胞という極性を持った上皮細胞の代表的細胞で発現させ、その細胞内存在部位を調べた。その結果、β-カテニン結合部位を欠損したE-カドヘリン変異体が細胞表面に輸送されず、核周辺に蓄積することを発見した。そこで、このβ-カテニンが結合しないために細胞内で留まっている変異カドヘリン発現細胞株を中心に、特定部位を削ったり、異なるアミノ酸に置換した変異株を作製し、それを発現させてその局在や極性を調べることによって、E-カドヘリンの輸送阻止のメカニズムを解明しようとした。その結果、膜貫通部位に隣接した領域が輸送の阻止に関わることが判明し、さらにアミノ酸残基の同定にも成功した。我々ヒトを含めて多細胞生物ができあがり、その体制を維持するには細胞と細胞あるいは細胞と細胞外マトリックス間の接着が必須である。細胞間の接着には多様な分子が機能しているが、その中でもカドヘリンは中心的働きをしている。そのため、カドヘリンの発現異常や機能異常は癌細胞の示す浸潤性や転移と密接に関連している。さて、細胞間の接着は一度作られたらその後安定に存在するという訳ではない。例えば細胞の増殖あるいは形態形成等においては、細胞間の接着は作られては壊されての繰り返しが見られる大変ダイナミックなものである。そこで本研究では、この点を明かにすることを目的とする。カドヘリンの活性制御において、カドヘリンの細胞質ドメインの膜貫通部位に隣接した領域(MP領域)が重要なはたらきをしていることが示され、そこに結合する分子としてp120が注目されている。また、この領域にはv-Srcによりリン酸化を受け、その結果、Hakaiによるユビキチン化と細胞内への取り込みに関与しているとされるチロシン残基が存在する。そこで、この領域に注目して解析を行った。各種変異カドヘリンをL細胞で発現させ、その接着活性を測定した。その結果、次の点が明らかになった。カドヘリンの貫通ドメイン隣接領域にはp120の結合部位があるが、これに変異を導入してp120が結合できないようにしたカドヘリンも接着活性を示し、米国のグループが報告しているようなコンパクションを起こす活性がなくなることもなかった。

また、このp120結合部位の近傍にはv-Srcによりリン酸化を受け、その結果Hakaiによるユビキチン化と細胞内への取り込みに関連すると報告されているチロシン残基を含む領域もあるがこのチロシン残基に置換を導入しても活性に変化は認められなかった.カドヘリンはカルシウム依存性の細胞間接着分子で、組織構造の形成あるいは維持において中心的な働きをしている。従って、カドヘリンの働きを制御することは、細胞間の接着をコントロールすることになる。また、その破綻は、癌細胞でしばしば見られる浸潤性の獲得と転移へとつながる。細胞はいくつかの異なるレベルでカドヘリンの働きを制御している。我々はこれまで、カドヘリンの制御はカドヘリン自身が直接制御されるばかりでなく、アクチン骨格へリンクさせるβ-カテニンやα-カテニン、またp120などによっても間接的に制御されることを明らかにしてきた。さて、カドヘリンも他のタンパク質と同じように、小胞体で合成されゴルジ体を通過し、細胞表面に輸送される。また、極性細胞ではE-カドヘリンは側底部と呼ばれる細胞同士が接着している部位に存在していることが分かっている。今回、偶然にある変異カドヘリンの細胞表面への輸送が阻害されることを見い出した。カドヘリンは細胞表面に輸送されて機能する分子であるので、その輸送が阻害する機構が存在すると言うことは、この輸送の制御もカドヘリン活性の制御機構のひとつになると考えた。そこで一連の変異カドヘリンをMDCKという細胞という極性を持った上皮細胞の代表的細胞で発現させ、その細胞内存在部位を調べた。その結果、β-カテニン結合部位を欠損したE-カドヘリン変異体が細胞表面に輸送されず、核周辺に蓄積することを発見した。そこで、このβ-カテニンが結合しないために細胞内で留まっている変異カドヘリン発現細胞株を中心に、特定部位を削ったり、異なるアミノ酸に置換した変異株を作製し、それを発現させてその局在や極性を調べることによって、E-カドヘリンの輸送阻止のメカニズムを解明しようとした。その結果、膜貫通部位に隣接した領域が輸送の阻止に関わることが判明し、さらにアミノ酸残基の同定にも成功した。
アポトーシスの核医学的画像化に関する研究:癌治療効果早期判定法の開発

ヒトependymoblastomaをヌードマウスの右後肢に皮下移植し、低線量のX線照射(2,5,10Gy)を行い、6時間後に尾静脈よりI-125-annexin V 370KBqを注入、2時間後に安楽死させ腫瘍部を凍結、切片を作製し、オートラジオグラフィーを作製した。またTUNEL法によるアポトーシス頻度の評価も行った。さらに、5Gyを照射した後、3,6,12時間後に凍結切片を作製、オートラジオグラフィーを作製した。オートラジオグラフィー上の腫瘍へのI-125-annexin V集積は、腫瘍集積/周囲筋集積比(TMR)で評価した。またアポトーシス頻度はapoptosis index(AI)を測定し評価した。結果は、対照群(非照射群)でのTMRが1.4に対し、照射群では有意に(p<0.05)高値を示した(2Gy群2.8,5Gy群2.6,10Gy群2.4)。AIも対照群(2%)に対し照射群で高値(2890%)を示した。また、照射後の時間に関しては、6時間後が最も高い集積(TMR)を示した。以上の結果より、腫瘍への低線量放射線照射後のアポトーシス発現の核医学的画像化の可能性が示唆された。アポトーシスは放射線治療効果の先行指標として期待されている。本研究結果は、非侵襲的な放射線治療効果予測法の可能性を示す有意義なものと考えられる。annexinVはアポトーシス早期の細胞表面に結合することが知られており、最近RI標識annexinVを用いたアポトーシスのイメージングが試みられている。パーキンソン病では、黒質繊密層の神経細胞にアポトーシスが生じているとの報告があるが、これまでのところRI標識annexinVを用いたパーキンソン病脳内病変の画像化に関する報告はない。今回我々は、パーキンソン病モデルマウスを用いて、RI標識annexinVによる黒質繊密層のアポトーシス発現の画像化を試みた。行った実験はマウスを用いた動物実験である。マウスはC57BL/6、8週の雄(体重21-25g)を用いた。パーキンソン病の誘導は、確立された誘導薬剤MPTPを用い、RI標識annexinVとしてはI-125-annexinVを用いた。まずマウスにMPTP50mg/Kgを腹腔内投与し、2時間後あるいは12時間後に1-125-annexinVを尾静脈より投与、2時間後に安楽死させ頭部を凍結し、黒質を含む切片のオートラジオグラフィを作製した。得られたオートラジオグラフィ画像の結果、対照群(MPTP非投与群)に対しMPTP投与群で黒質級密層に集積増強が認められた。この結果は、パーキンソン病患者において黒質繊密層に生じているアポトーシスの画像化が可能であることを示唆するものである。今後はさらに種々のプロトコールでの実験を行い、学会・論文発表の準備をすすめる予定である。ヒトependymoblastomaをヌードマウスの右後肢に皮下移植し、低線量のX線照射は2,5,10Gy)を行い、6時間後に尾静脈よりI-125-annexin V 370KBqを注入、2時間後に安楽死させ腫癌部を凍結、切片を作製し、オートラジオグラフィーを作製した。さらに、5Gyを照射した後、3,6,12時間後に凍結切片を作製、オートラジオグラフイーを作製した。

AIも対照群(2%)に対し照射群で高値(28-90%)を示した。また、照射後の時間に関しては、6時間後が最も高い集積(TMR)を示した。以上の結果より、腫瘍への低線量放射線照射後のアポトーシス発現の核医学的画像化の可能性が示唆された。アポトーシスは放射線治療効果の先行指標として期待されている。本研究結果は、非侵襲的な放射線治療効果予測法の可能性を示す有意義なものと考えられる。
仮想現実の自律神経・視覚影響測定装置の開発

コンピュータの発達により、バーチャルリアリティ(Virtual Reality : VR)技術を始めとする3次元画像技術は進歩を続けており、VRの特徴である映像との一体感によるリハビリテーションなどの応用や高齢者の遠い記憶をもとにした幼少時のふるさと体験の再現などが考えられる。本研究では、種々の立体画像に対する自律神経・視覚機能の特性を測定する装置の開発が、本研究の目的であった。そのため、機器を開発し、ジェットコースターを含むバーチャルリアリティーの映像提示に対して、音声を入れた場合と、立体画像だけの場合とで、視覚機能や重心動揺・心電図R-R間隔をはじめとする自律神経・平衡機能などがいかなる影響を受けるかについて、研究を行った。VR酔いや平衡失調、その他自律神経系の変化がどのようにあらわれ、音声と映像の双方の複合影響を明らかにした。さらに、シングル・イメージ・ステレオグラムのパネルに対する視覚機能の年齢影響についても、詳細な分析を加え、論文として発表した。立体画像の生理・心理・視覚影響を総合的に測定し、評価することは、世界的にも貴重なことであり、この装置の開発で、今後一層、研究の発展が期待できる。また携帯電話や携帯情報端末(PDA)の普及が著しく、小画面で、文字や画像の読み取りが求められるが、本研究で開発した装置を用いて、この面で多大な貢献ができた。携帯電話の画面の見易さの改良に根拠を与えることができた。本研究で開発した自律神経・視覚機能測定装置は、今後の立体画像・VR複合影響の評価に使用することが可能であり、有用であることが確認できた。両眼視差を利屈した立休ー像表示システムを評価する一基準として、生休の視覚機能である水晶体焦点調節を取り上げ、これに関して生体への影響を観察する実験・分析を行った。立体ディスプレイを注視する両眼立体視下および自然視下における焦点調節の変化から、ディスプレイ機能と焦点掬節機能との関連性を実証し、それをもとに、より「見やすい」立体ディスプレイへの評価を行った。立体視において、「心理・記憶的要因」から得られる立体感について検討し、それが人間の視覚系にどのような影響を及ぼすかについて、遠近法で描かれた平面画像やNecker Cubeを見ている際の、眼の水晶体の焦点調節を測重し評価を行った。この結果、平面両像においても、そこに遠近が認知されるならば、焦点調節もそれに応じて変化することを明らかにした。融合限界が高い立体映像は融合し易く、視覚疲努の少ない立体映像と言える。画面条件を融合機能で優利にすることにより、見やすい立体映像を得る条件を示すことができた。平成11年度は、Single Image Stereogramを用いて、通常のウインドーズ環境のパソコンに、立体画像を表示し、これを生体がどのように認知しているかについて、視覚機能を中心として、測定を行なった。Single Image Stereogramは株式会社中国サンネットが開発したストレッチアイを用いた。左右に5cm程度の間隔をおいて鳥や魚や気球などが規則的にならんでおり、被験者は平行視によって鳥などが遠くに飛んでいくように見える。こうした立体視が不可能な被験者は約10%であった。被験者が遠見視する際に、開発中の測定機器によって調節を測定し、合わせて輻輳の正確な測定が可能なように調整を行なった。この成果は、日本産業衛生学会の平成11年5月の総会で発表し、さらに大韓民国人間工学会における日韓ジョイントカンファレンスに演題として採用されている。携帯電話が普及し、画像やゲームが携帯電話で通信によって送られ、注視する時代が近づいており、こうした小画面に立体画像・3D画像を表示することの、生体負荷の測定に関して検討を行なった。この成果は2000年2月の日本人間工学会カーナビ・携帯電話シンポジウムで発表した。仮想現実感、あるいは人工現実感は、近年さまざまな領域で用いられているが、立体画像はその表示技術として重要な要素となっている。ものを立体的に見るには、多くの手がかりがある。

生理的なものには、両眼立体視・運動視差・調節と輻覆などがあり、網膜像から得られる要因には、像の大きさ、線還近法、空気接近法、重なり合い、陰影、きめ(地肌模様)の勾配、視野の大きさなどが指摘されている。立体画像を観察するときの視覚系の状態は、実空間を観察するときとどう異なるのか、ということは立体画像の設計にも・視覚機能の解明にも必要である。本年度は次の研究を行った。パソコン作業がさまざまな視機能に影響することは知られているが、なかでも、調節機能に及ぼす影響が大きいことが指摘されている。特に、パソコン作業などの長時間の近見作業は、過度な調節力を使うこととなり、眼の焦点調節運動における毛様体筋、毛様体小帯の緊張状態の連続をまねく。その結果、眼が疲れやすいといった眼疲労をまねく。原因となる毛様体筋、毛様体小帯の緊張を緩和するには、遠望が効果的かつ安全な方法である。そこで、パソコン画面上にsingle image stereogramの原理で立体映像を表示するソフトを製作し、この三次元画像『ストレッチ・アイ』による、眼疲労の自覚症状の改善、遠望の視覚生理学的測定(ストレッチアイ画面を注視したときの水晶体言周節の測定)、視力変化の追跡という3側面からの効果を検証した結果、パソコン画面上で立体映像を毎時間23分間目兆めることで、焦点調節における緊張が緩和され、さらに、近見と遠望視が繰り返されたことにより、眼の毛様体筋、毛様体小帯のストレッチ効果による眼疲労の改善がみられ、作業時視力が向上した。コンピュータの発達により、バーチャルリアリティ(Virtual Reality:VR)技術を始めとする3次元画像技術は進歩を続けており、VRの特徴である映像との一体感によるリハビリテーションなどの応用や高齢者の遠い記憶をもとにした幼少時のふるさと体験の再現などが考えられる。本研究では、種々の立体画像に対する自律神経・視覚機能の特性を測定する装置の開発が、第1の目的である。そのため、機器を開発し、ジェットコースターを含むバーチャルリアリティーの映像提示に対して、音声を入れた場合と、立体画像だけの場合とで、視覚機能や重心動揺・心電図R-R間隔をはじめとする自律神経・平衡機能などがいかなる影響を受けるかについて、研究を行った。VR酔いや平衡失調、その他自律神経系の変化がどのようにあらわれ、音声と映像の双方の複合影響を明らかにした。さらに、シングル・イメージ・ステレオグラムのパネルに対する視覚機能の年齢影響についても、詳細な分析を加え、論文として発表した。本研究で開発した自律神経・視覚機能測定装置は、今後の立体画像・VR複合影響の評価に使用することが可能であり、有用であることが確認できた・
3次元超高周波造影超音波による乳癌腋窩リンパ節微小転移診断法の開発

本研究は造影超音波によるリンパ節微小転移検出法を確立することを目的とする.具体的には,1.術中造影超音波による1対1対応の画像と病理所見の対比術前造影超音波で見られたperfusion defectが,微小転移によるものであることを確認するために,術中センチネルリンパ節生検時に造影超音波を行い画像と病理を対比する.2.リンパ節の3次元超高周波造影超音波撮像法とperfusion defect検出法の開発微小転移の検出率を上げ,複数個のリンパ節の評価をするためにリンパ節の3次元超高周波造影超音波撮像法とperfusion defect検出法を開発する. 3.術前3次元超高周波造影超音波によるリンパ節微小転移検出能の確認術前3次元超高周波造影超音波画像からperfusion defectを検出し,リンパ節微小転移診断能を確認する.乳癌術前症例で3次元造影超音波画像を取得した.術前CT,MRI,非造影超音波で明らかな腫大リンパ節を認めない臨床的リンパ節転移陰性症例を対象として,術前日に造影超音波を施行した.年間100例の撮像を予測している.2次元超音波を使った初期検討では5例に1例に微小転移が見られた.初年度では年間70例の撮像で15例の転移症例を認めた.現在、微小転移例を術前3次元造影超音波で正しく予測できたかどうかを検証している.偽陰性,偽陽性症例では,主病変の因子(古典的組織型,ホルモンレセプター,HER2抗体の発現,Ki-67labelingなど)やリンパ節自体の因子(転移の大きさ)が影響しているかどうかも検証中である.順調に患者登録と撮影画像の取得が進行している。現在、微小転移例を術前3次元造影超音波で正しく予測できたかどうかを、画像解析の技術を用い検証している.偽陰性,偽陽性症例では,主病変の因子(古典的組織型,ホルモンレセプター,HER2抗体の発現,Ki-67labelingなど)やリンパ節自体の因子(転移の大きさ)が影響しているかどうかも検証中である.本研究は造影超音波によるリンパ節微小転移検出法を確立することを目的とする.具体的には,1.術中造影超音波による1対1対応の画像と病理所見の対比術前造影超音波で見られたperfusion defectが,微小転移によるものであることを確認するために,術中センチネルリンパ節生検時に造影超音波を行い画像と病理を対比する.2.リンパ節の3次元超高周波造影超音波撮像法とperfusion defect検出法の開発微小転移の検出率を上げ,複数個のリンパ節の評価をするためにリンパ節の3次元超高周波造影超音波撮像法とperfusion defect検出法を開発する. 3.術前3次元超高周波造影超音波によるリンパ節微小転移検出能の確認術前3次元超高周波造影超音波画像からperfusion defectを検出し,リンパ節微小転移診断能を確認する.乳癌術前症例で3次元造影超音波画像を取得した.術前CT,MRI,非造影超音波で明らかな腫大リンパ節を認めない臨床的リンパ節転移陰性症例を対象として,術前日に造影超音波を施行した.年間100例の撮像を予測している.2次元超音波を使った初期検討では5例に1例に微小転移が見られた.初年度では年間70例の撮像で15例の転移症例を認めた.現在、微小転移例を術前3次元造影超音波で正しく予測できたかどうかを検証している.偽陰性,偽陽性症例では,主病変の因子(古典的組織型,ホルモンレセプター,HER2抗体の発現,Ki-67labelingなど)やリンパ節自体の因子(転移の大きさ)が影響しているかどうかも検証中である.順調に患者登録と撮影画像の取得が進行している。現在、微小転移例を術前3次元造影超音波で正しく予測できたかどうかを、画像解析の技術を用い検証している.偽陰性,偽陽性症例では,主病変の因子(古典的組織型,ホルモンレセプター,HER2抗体の発現,Ki-67labelingなど)やリンパ節自体の因子(転移の大きさ)が影響しているかどうかも検証中である.予想より登録症例数が少なく支出が少なかった。残額は新たな登録症例に対する造影剤購入のため,使用する予定である.
東南アジア島嶼部における国境管理レジームと境域社会の変容―地域間比較の視点から

島嶼部東南アジアにおける国境の政治的意味は、第二次世界大戦後、様々に変化してきた。その過程で国境を跨ぐ境域社会もまた、自らの文化やアイデンティティを変容させてきた。本研究は、現地調査を基に、同地域の境域社会では、1跨境社会文化圏を部分的に含む国民国家との交渉を通じた再編、2在地の跨境社会文化圏を枠組みとする復興、3非在地の越境的な社会関係(欧米のNGOとの関係等)を基盤とする創造の三つのパターンで文化・アイデンティティを変容させる傾向がみられることを明らかにした。同時に、変容の志向性が移民世代や階層によって異なること、またひとつの社会に複数の変容パターンが併存しうることも指摘した。本研究組織は、まず6月に東洋大学において最初の打合せを行った。各メンバーは4年間および本年度の研究計画を提出し、それを全体で検討した。同時に計画に関わる文献リストも提出した。打合せをふまえて、境域社会担当者は、生活圏・ネットワーク・民族編成の変容に関するフィールド調査ないし資料調査を、国境管理レジーム担当者は、国境管理に関連する資料調査をそれぞれ実施した。メンバーのうち3名は長期在外研究の機会を得たため、同研究による滞在中に本プロジェクトの調査を実施した。また1名は育児休暇をとった。こうした事情により、助成基金には繰越が生じた。調査の概略は次のとおり。(境域社会担当者)長津と加藤は、インドネシア・リアウ島嶼州において、同州とシンガポール・マレーシア間の越境移動と民族間関係に関する調査をおこなった。他に長津はサバ州でも同様の調査を実施した。また、国境・越境移動に関する新聞記事の簡易データベースも作成した。青山は、8月から長期滞在した米国ハーバード・イェンチン研究所(HYI)でフィリピンにおける物流と宗教のグローバリゼーションに関する資料調査を行った。また、フィリピン・ダバオ調査に関してHYIの研究者から助言を受けた。伊藤はインドネシア・北カリマンタン州タラカンを中心に、主としてブギス移民の生業活動に関する調査、資料収集をおこなった。福武は東ティモール民主共和国ボボナロ県およびエルメラ県において、住民の国境を跨ぐ言語文化圏と親族関係の広がりに関する調査をおこなった。左右田は11月から長期滞在したクアラルンプルにおいて、国境を超える「マレー世界」運動としての「ドゥニア・ムラユ・ドゥニア・イスラーム」運動に関する資料調査をおこなった。本名は、8月から長期滞在したジャカルタにおいて、インドネシアの海洋安全保障政策とその変遷に関する資料調査をおこなった。各メンバーは,昨年までの調査を継続した。境域社会担当者は,生活圏・ネットワーク・民族編成の変容に関するフィールド調査ないし資料調査を,国境管理レジーム担当者は,国境管理に関連する資料調査をそれぞれ実施した。全体としては9月に長崎県対馬市役所において,臨地研究セミナー「2000年以降の東南アジア島嶼部における国境社会のダイナミクス」を開催し,同時に各メンバーの調査の進捗状況を確認した。調査の内容は次のとおり。(境域社会担当者)長津と伊藤は,マレーシア・サバ州タワウとインドネシア・北カリマンタン州ヌヌカンの間の国境を往来調査し,両国に跨るセバティク島などにおいて,ブギス人やバジャウ人の越境移動,越境交易,国境を超える社会関係に関する調査をおこなった。また,長津はサバ州のフィリピンとの国境地帯でも同様の調査を実施した。昨年に続き,国境・越境移動に関する簡易データベースも作成した。青山は,フィリピン・ダバオ市においてキリスト教団体による開発援助と文化的アイデンティティ」関するフィールド調査を実施,各教会の牧師に予備的なインタビューを行った。加藤はマレーシア・ヌグリスンビラン州の博物館の民族文化展示に関する調査をおこない,また同州のアダット・リーダーを対象に聞き取り調査を行なった。福武は昨年に引き続き,東ティモール民主共和国において,住民の国境を跨ぐ言語文化圏と親族関係の広がりに関する調査をおこなった。左右田は国内において「ドゥニア・ムラユ・ドゥニア・イスラーム」(=「マレー世界・イスラーム世界」)運動をはじめとする,「マレー世界」の連帯と汎マレー・アイデンティティの復興をめざす政治的な動きに関する資料調査を行った。本名は,ジャカルタにおいて,インドネシアの人身取引を中心とする越境組織犯罪と安全保障政策に関する資料調査および治安関係当局において聞き取り調査を行った。境域社会担当者は,境域社会の生活圏・ネットワーク・民族編成の変容に関する調査を,国境管理レジーム担当者は,国境管理に関連する調査をそれぞれ継続した。全体としては10月に台湾中央研究院において,臨地研究セミナー「東南アジア島嶼部における国境社会のダイナミクス」を開催した。12月には,境域社会担当者がConsortium for Southeast Asian Studies in Asia(京都)のパネルEthnic Re/formation at Marginsにおいて報告した。各メンバーの調査の概要は次のとおり。(境域社会担当者)長津はインドネシア・東ヌサ・トゥンガラ州のサマ人を対象に,同州からオーストラリア海域への越境出漁や移民輸送の歴史過程に関する調査をおこなった。また,同州の東ティモール国境域においても人とモノの移動の観察調査をおこなった。加藤は,マレー半島ヌグリスンビラン州において,同州の歴史・文化とインドネシア西スマトラ州の歴史・文化との繋がりがいかに表象されているのかについて調査をおこなった。伊藤は,マレーシア・サバ州タワウの華人・マレー人を対象に,移民社会タワウの形成に関する資料調査をおこなった。青山は,フィリピン・ダバオ市において,火災後の生活再建におけるキリスト教団体と海サマ人社会の相互作用に関する関する調査をおこなった。

福武は,東ティモールとインドネシア西ティモールの間の人口移動と言語文化動態に関する調査をおこなった。(国境レジーム担当者)左右田は国内において「マレー世界・イスラーム世界」運動に関する資料調査を日本とマレーシアで継続して行った。本名は,ジャカルタとバリにおいて,インドネシアにおける海洋法の解釈,海洋安全保障政策,海洋警備態勢,違法漁業について調査を進めた。10月の臨地研究セミナー「東南アジア島嶼部における国境社会のダイナミクスー台湾海域との比較を視野において」(台北,中央研究院)において各メンバーの調査の進捗状況は確認できている。また12月のConference of the Consortium for Southeast Asian Studies in Asia(SEASIA,京都)で代表者が組織したパネル“Ethnic Re/formation at Margins: Negotiations with Global Institutions, NGOs and Missionariesin Insular Southeast Asia,"において境域社会担当メンバーは論文の骨子を報告した。本プロジェクトの成果は,これらの報告を基盤にしてまとめられることになる。また,これらの報告においては,国境に跨がって居住する集団の生活圏・ネットワーク・民族編成の変容を,民族誌的に観察可能な国家間での差異に留意して比較の観点から理解する必要性が明らかになった。こうした留意点は,本プロジェクトの最終成果の方向性を探るなかで確認された事項ではあるが,進捗状況にかかる問題ではない。各メンバーは,昨年までの調査を継続し,それぞれの課題の総括作業をおこなった。全体としては2016年7月に会合を開き、最終成果とりまとめの方針を確認した。各自の調査の内容は次のとおり。(境域社会担当者)長津はインドネシア・東ジャワ州、南スラウェシ州の移動漁民を対象に、越境の系譜とアイデンティティ形成に関する調査をおこなった。また本プロジェクトの成果を「インドネシア人類学誌国際シンポジウム」(ジャカルタ)で報告した。加藤は、マラヤ大学ザバ図書館にてマレーシアの観光政策史に関する文献調査を行なった。その過程で『消えることのない一滴のインク:1999、2000年アダット・プルパティ母系氏族祭り』を見つけることができた。伊藤は,マレーシア・サバ州おいて、ブギス同郷会の分裂問題について同会の会長等から聞き取り調査をおこなった。青山は,フィリピン・ダバオ市の海サマ人が2014年4月火災後に援助物資を利用しながら分散居住した様相について一次資料を収集した。福武は、東ティモール民主共和国の国境周辺域で調査を実施した。