hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
子どもの虐待予防に向けた連携と協働モデルの開発―親性と家族機能に焦点をあてて―

我が国における児童虐待の相談対応件数は、年々増加しており虐待はますます深刻な社会問題となっている。研究者らは、親性と家族機能に焦点をあて、子ども虐待予防のために出産施設と地域保健機関との連携と協働モデルを開発することを目的に研究を進めた。まず、継続的に行う調査項目、特に親性と家族機能に影響すると考えられる内容の検討を行った。次に家族機能の特性を再検討するために合計特殊出生率が全国平均よりも高い地域におけるフィールド調査を行った。その結果地域特性や家族構成が親性と家族機能に大きく影響することが再確認されたので、研究フィールドとなる地域の特性についての現在行われている育児支援の現状を把握した。親性と家族機能に焦点をあて、子どもへの虐待予防のために、出産施設と地域保健機関との連携と協働の開発モデルを開発することを目的に研究を進めている。妊娠・出産・育児期の継続的看護の視点からアンケート調査を含む研究であるが、平成24年度・平成25年度は虐待予防における現状把握とアンケート内容の項目、特に親性と家族機能に影響すると考えられる内容の検討を行い、調査場所の開拓と連絡と調整を課題としていた。アンケート内容としては、研究者らが開発し信頼性と妥当性が検証された育児期の親性と西出らが開発した家族アセスメントインベントリー(FAI)を尺度として用いる。そして、3年目には、出産後の家族を対象とする出産施設と地域保健センターでのアンケート調査を縦断的に行う予定である。平成25年度における研究の成果として、親性と家族機能に関連する要因(アンケート調査における属性の内容)を再検討するために合計特殊出生率が、全国平均よりも高い特殊な地域である沖永良部島でフィールド調査を行い、育児期の親性と家族機能との関連および親性と家族機能に影響する要因をアンケート結果から分析し、地域特性について考察を深めた。今後関係学会で発表予定である。子ども虐待予防の現状把握のために、「日本母性衛生学会」等の学会に参加し、看護師・助産師で虐待予防にかかわっている方々と積極的に交流をもち意見交換を行った。ドイツのバーデン・ヴュルテンベルク州、ハイデルベルグでの視察に基づき「Fruhe Hilfen und Kinderschutz」(HEIKE)プロジェクトとファミリー助産師の役割関して「第54回日本母性衛生学会」にて発表した。妊娠期・出産・育児期の継続的看護の視点からアンケート調査を含む研究であるが。平成24年度はまず、虐待予防における現状把握とアンケート内容の項目、特に親性と家族機能に影響すると考えられる内容の検討を1年目の課題としていた。親性と家族機能への影響要因については、出産後の親を対象とした継続的なアンケート調査の属性として問う内容である。24年度の研究の成果として、親性と家族機能に影響する要因を再検討するために、文献検討と、合計特殊出生率が、全国平均よりも高く(平成23年1.64)地域・家族特性に特徴的な地域である鹿児島県の沖永良部島(人口約13850人平成24年、合計特殊出生率1.64(鹿児島県)のフィールド調査を行った。地域特性や家族構成が親性と家族機能に非常に大きく影響することを再認識することができた。また、子ども虐待防止の現状把握のために「日本助産学会」「日本母性衛生学会」「日本子ども虐待防止学会」に参加し、関係職種の方々と活発な意見交換を行った。さらに、ドイツのバーデン・ヴュルテンベルグ州のハイデルベルグで行われている。「Fruhe Hilfen und Kinderschutz」システムのHEIdelberg Kinderschutz Engagement(HEIKE)で行われているの現状を視察した。Keiner fallt durchs Netzをスローガンに、妊娠期から子どもと家族を守るために多職種が連携して活動しており、その中心的役割としてFamilien-hebammenという存在があり、特に産後の家庭訪問な度を行うことで家族に寄り添う看護が行われていることを知ることができ、今後の研究に生かしていきたいと考える。親による子どもの虐待は年々深刻化し大きな社会問題となっている。親性と家族機能に焦点をあて、子どもへの虐待予防のために、出産施設と退院後の地域保健機関との連携と協働のモデルを開発することを目的に研究を進めている。妊娠期・出産・育児期の継続的看護が重要であるという視点から、親を対象とした継続調査を含めた研究である。まず、虐待予防における現状把握とアンケート内容の項目の検討を踏まえ、親性と家族機能への影響要因については、その属性を検討し、研究者らが開発した“育児期の親性尺度"と家族アセスメントインベントリー(FAI)を尺度として用いる。現在までの研究の成果として、親性と家族機能に影響する要因を再検討するために、文献検討と、合計特殊出生率が全国平均よりも高い地域における、アンケート調査とフィールド調査を行った。さらに、ドイツのバーデン・ヴュルテンベルク州、ハイデルベルクでの視察に基づき「Fruhe Hilfen und Kinderschutz」(HEIKE)プロジェクトとファミリー助産師の役割について、第54回日本母性衛生学会で発表を行った。また、子ども虐待とその予防の支援の現状を把握するために、「日本子ども虐待防止学会」等に参加し、子ども虐待予防に関与している多職種の方々と活発な意見交換を行った。今後は出産後の家族を対象とし出産施設と地域保健センターでのアンケート調査を行う予定である。

我が国における児童相談所の児童虐待の相談対応件数(平成26年度)は、児童虐待防止法施行前(平成11年度)の7.6倍に増加(88,931件)しており、ますます深刻な社会問題である。研究者らは、親性と家族機能に焦点をあて、子ども虐待予防のために出産施設と地域保健機関との連携と協働モデルを開発することを目的に研究を進めた。妊娠期・出産・育児期の継続的看護支援の視点から研究者らが所属している大学が設置されている地域での関係施設と関連職種の連携体制の構築に向けて今年度は主に活動した。また、12th International Family Nursing Conference(デンマーク)に参加し、他国の家族看護のスペシャリスト達と交流を持ち、積極的に意見交換を行った。デンマークでの妊娠期からの継続的な育児支援については、平成24年度に視察した、ドイツのハイデルベルクでの「Fruhe Hilfen und Kinderschtz」システムにも共通する内容があり、日本国内でも実現可能な方法であった、今後研究フィールドとなる地域での支援に取り入れていきたいと考える。平成24年度の調査結果から、地域特性や家族構成が親性と家族機能に大きく影響することが再確認されたので、新たに研究フィールドとなる地域の特性について情報収集を行い、現在行われている育児支援の現状を把握した。それらの活動から特に児童虐待予防への継続的な支援は、長期にわたり多機関多職種との連携、協働が必要となるため、調整機関、調整役についての構築とシステムの調整について、さらに医療機関における虐待予防と早期対応の体制整備についても大学の看護学部の教員としての立場から関わることの重要性を認識できた。今後はさらに、地域特性を踏まえたうえで、妊娠期から育児期にかけての母親のメンタルへの関わりと貧困層の状況把握に努め、親性と家族機能の評価ツールを用いた連携・協働モデルの構築を進めていく。我が国における児童虐待の相談対応件数は、年々増加しており虐待はますます深刻な社会問題となっている。まず、継続的に行う調査項目、特に親性と家族機能に影響すると考えられる内容の検討を行った。次に家族機能の特性を再検討するために合計特殊出生率が全国平均よりも高い地域におけるフィールド調査を行った。その結果地域特性や家族構成が親性と家族機能に大きく影響することが再確認されたので、研究フィールドとなる地域の特性についての現在行われている育児支援の現状を把握した。子ども虐待予防に関連する国際学会に参加し、看護職をはじめとする子ども虐待予防に関与している多職種の方々と活発な意見交換を行うことができた。また、アンケート調査内容についてその属性についての過去の調査結果の分析と文献検討による再検討することもできた。しかし、研究協力施設の開拓と依頼、調整が難航したため、研究進捗状況に遅れが生じている。看護調査実施に向けて、医療施設と地域の保健センター等の協力機関施設の開拓と調査依頼が最優先事項となる。
ホウ素パイ電子系を基本骨格とする新規機能性分子の合成と物性

ボロールは,シクロペンタジエピルカチオンと等電子構造であり,4π電子系の反芳香族性化合物として興味深い化合物である.ペンタフェニルボロールが1969年にEischらにより合成されたが,これまでそのX線結晶構造の報告例はなかった.本研究では,ボロールのホウ素上の置換基として,フェニル基の他,トリル基,トリメチルシリルフェニル基,フルオロフェニル基をもつ一連の2,3,4,5-テトラフェニル-1-アリールボロール誘導体を合成した.不活性ガス雰囲気下で,反応溶液から直接再結晶を行うことで,ポロール誘導体の単結晶を得ることができ,これらのX線結晶構造解析に成功した.本研究を遂行中に,BraunschweigらもペンタフェニルボロールのX線結晶構造解析に成功し,ボロール骨格における結合交代が基底一重項状態として理論的に予測された結合交代より小さいことを報告した.彼らは,これを結晶構造で見られる分子間でのホウ素とフェニル基との相互作用のためであると報告している.これに対して,一連の2,3,4,5-テトラフェニル-1-アリールボロールの結晶構造では,ボロール骨格には比較的大きな結合交代が見られ,ペンタフェニルボロールの場合とは異なって,4π反芳香族性を示す基底一重項状態として理論計算により最適化された構造と良い一致を示すことを明らかにした.さらに,ペンタフェニル体および2,3,4,5-テトラフェニル-1-トリメチルシリルフェニル-ボロール体について,カリウムを用いて二電子還元し,これらのジアニオン塩の単離と結晶構造解析にも成功した.いずれの結晶構造でも,カリウムカチオンに対してボロール誘導体が分子間で配位して一次元につながった構造をとることがわかり,本研究で合成した一連のボロール誘導体がマルチデッカー型錯体の配位子として有用であることを示すことができた.ボロールは,シクロペンタジエピルカチオンと等電子構造であり,4π電子系の反芳香族性化合物として興味深い化合物である.ペンタフェニルボロールが1969年にEischらにより合成されたが,これまでそのX線結晶構造の報告例はなかった.本研究では,ボロールのホウ素上の置換基として,フェニル基の他,トリル基,トリメチルシリルフェニル基,フルオロフェニル基をもつ一連の2,3,4,5-テトラフェニル-1-アリールボロール誘導体を合成した.不活性ガス雰囲気下で,反応溶液から直接再結晶を行うことで,ポロール誘導体の単結晶を得ることができ,これらのX線結晶構造解析に成功した.本研究を遂行中に,BraunschweigらもペンタフェニルボロールのX線結晶構造解析に成功し,ボロール骨格における結合交代が基底一重項状態として理論的に予測された結合交代より小さいことを報告した.彼らは,これを結晶構造で見られる分子間でのホウ素とフェニル基との相互作用のためであると報告している.これに対して,一連の2,3,4,5-テトラフェニル-1-アリールボロールの結晶構造では,ボロール骨格には比較的大きな結合交代が見られ,ペンタフェニルボロールの場合とは異なって,4π反芳香族性を示す基底一重項状態として理論計算により最適化された構造と良い一致を示すことを明らかにした.さらに,ペンタフェニル体および2,3,4,5-テトラフェニル-1-トリメチルシリルフェニル-ボロール体について,カリウムを用いて二電子還元し,これらのジアニオン塩の単離と結晶構造解析にも成功した.いずれの結晶構造でも,カリウムカチオンに対してボロール誘導体が分子間で配位して一次元につながった構造をとることがわかり,本研究で合成した一連のボロール誘導体がマルチデッカー型錯体の配位子として有用であることを示すことができた.
癌細胞へのホメオボックス遺伝子導入による転移能の変化に関する研究

動物胚の発生過程において形態シグナルを位置情報に変換する遺伝子はホメオボックス遺伝子と呼ばれる。この遺伝子は、形態シグナルを位置情報に変換して細胞と細胞あるいは細胞と細胞外基質の相互作用を通して形態形成を調節する。癌の転移および組織形態の異常を発生生物学的に考察すると、基本的には細胞の持つ固有の位置情報の変化が原因と考えることができる。本研究では、我々がクローニングに成功したHOX D3ホメオボックス遺伝子を癌細胞に導入して癌細胞の運動能、浸潤、組織形態および転移能が変化するか否かを調べた。HOXD3遺伝子を発現ベクターpMAMneoに組み込んでヒト乳癌細胞株MCF-7に導入し、安定に発現をする細胞をクローニングした。対照としてneo遺伝子のみを発現する細胞を作製した。両者および親株の生物学的な相違を調べた結果、HOXD3発現細胞では、haptotaxisis(接触走化性)が著しく低下した。インテグリンの発現を調べたところ、インテグリンβ3は全く発現しておらず、インテグリンαの発現量は全く変化しなかった。一方、ヒト肺癌細胞株A549で同様な実験を行ったところ、インテグリンβ3の発現が増加し、haptotaxisが著しく上昇した。以上の結果から、本来インテグリンβ3を全く発現していないMCF-7細胞ではHOXD3によってhaptotaxisが低下し、本来インテグリンβ3をわずかに発現しているA549細胞ではHOXD3によってインテグリンβ3とhaptotaxisが上昇する結果が得られた。現在、HOXD3が癌細胞のhaptotaxisを制御する機序を解析中である。
遺伝子解析による, 胃癌の悪性度診断法の研究

1.研究の背景と目的:胃癌症例において,14番染色体q32.3領域の詳細な解析と,同領域にみられるloss of heterozygosity(LOH)と臨床病理学的因子および予後との関連を検討することにより,胃癌の転移に関する分子生物学的解析や,悪性度の判定に有用な情報が得られるものと推測し本研究を行った.2.材料と方法:当科および関連病院で切除された胃癌症例58例の,癌部および非癌部正常粘膜から組織を採取した.癌部組織はすべて病理組織学的に腺癌であることを確認した.組織からのDNAの抽出はプロテイナーゼK/フェノール-クロロフォルム法にて行った.PCR用に溶液を作製し,5種類のプライマーを加え,反応液を作成した.PCRは基本的には35cycles行った.ヘテロ接合性の検出は,SSCP法で行った.3.結果: SSCPにてheterozigosityが認められ,LOHの有無を確認できたものは42.7%であった.D14S65で最高67%(21/31)のLOHが認められ,以下D14S68で61%(11/18),D14S62で52%(13/25),D14S267で41%(11/27),D14S250で26%(7/27)であった.臨床病理学的因子とこれらのマーカーにおけるLOHの関連性を検討すると,D14S267でリンパ管侵襲およびリンパ節転移とLOHの間に有意な相関が認められた.4.総括: 14番染位体の胃癌におけるLOHの報告はなく,われわれの検討では,とくにDl4S267において,有意にLOHとリンパ管侵襲及びリンパ節転移との間に相関が認められ,この領域に転移とくにリンパ行性転移に関連する癌抑制遺伝子の存在が示唆された.このことは,癌のリンパ行性転移の分子生物学的解明にひとつの足がかりとなるのみでなく,胃癌のリンパ節転移や悪性度の診断に極めて有意義な情報となる可能性が示唆された.1.研究の背景と目的:胃癌症例において,14番染色体q32.3領域の詳細な解析と,同領域にみられるloss of heterozygosity(LOH)と臨床病理学的因子および予後との関連を検討することにより,胃癌の転移に関する分子生物学的解析や,悪性度の判定に有用な情報が得られるものと推測し本研究を行った.2.材料と方法:当科および関連病院で切除された胃癌症例58例の,癌部および非癌部正常粘膜から組織を採取した.癌部組織はすべて病理組織学的に腺癌であることを確認した.組織からのDNAの抽出はプロテイナーゼK/フェノール-クロロフォルム法にて行った.PCR用に溶液を作製し,5種類のプライマーを加え,反応液を作成した.PCRは基本的には35cycles行った.ヘテロ接合性の検出は,SSCP法で行った.3.結果: SSCPにてheterozigosityが認められ,LOHの有無を確認できたものは42.7%であった.D14S65で最高67%(21/31)のLOHが認められ,以下D14S68で61%(11/18),D14S62で52%(13/25),D14S267で41%(11/27),D14S250で26%(7/27)であった.臨床病理学的因子とこれらのマーカーにおけるLOHの関連性を検討すると,D14S267でリンパ管侵襲およびリンパ節転移とLOHの間に有意な相関が認められた.4.総括: 14番染位体の胃癌におけるLOHの報告はなく,われわれの検討では,とくにDl4S267において,有意にLOHとリンパ管侵襲及びリンパ節転移との間に相関が認められ,この領域に転移とくにリンパ行性転移に関連する癌抑制遺伝子の存在が示唆された.このことは,癌のリンパ行性転移の分子生物学的解明にひとつの足がかりとなるのみでなく,胃癌のリンパ節転移や悪性度の診断に極めて有意義な情報となる可能性が示唆された.【目的】多段階発癌は胃癌においても示唆されているが,大腸癌の場合と異なりK-rasの異常もAPC遺伝子の変異も少ないとされている.したがって別の未知の遺伝子の変異が必要と思われる.ところで高頻度の染色体の欠失は癌抑制遺伝子の存在を示唆しており,我々の教室では大腸癌を対象として14番染色体q32領域の欠失の詳細な検討を行ってきた.その頻度は約40%に上ることからこの領域に癌抑制遺伝子の存在が推測された.この領域の欠失は大腸癌以外では腎癌で核型解析により,神経芽細胞腫ではRFLP法により5030%の頻度で報告されており,本領域に推測される遺伝子はこれらの腫瘍に共通すると思われる.しかし胃癌も含め他の消化器系の腫瘍での検討は行われていない.そこで14番染色体の大腸癌と共通の領域に胃癌においても欠失が起きていないか検討した.【結果】60検体中54検体がimformative.31検体(51.7%)に少なくとも一ヶ所のマーカーでLOHを確認した.現在再検中であるがD14S68,D14S62,D14S65において50%前後、D14S250で約30%のLOHを認めた.

その欠失領域は大腸癌と共通しており,未知の癌抑制遺伝子が存在するなら両腫瘍に共通すると思われた.今後は検討するマーカーを増やし共通欠失範囲をせばめる予定である.1.目的:高頻度の染色体の欠失は癌抑制遺伝子の存在を示唆しており,我々の教室では大腸癌を対象として14番染色体q32領域の欠失の詳細な検討を行ってきた.その頻度は3781%に上ることからこの領域に癌抑制遺伝子の存在が推測された.この領域の欠失は大腸癌以外では腎癌で核型解析により,神経芽細胞腫ではRFLP法により5030%の頻度で報告されており,本領域に推測される遺伝子はこれらの腫瘍に共通すると思われる.しかし胃癌も含め他の消化器系の腫瘍での検討は行われていない.そこで14番染色体の大腸癌と共通の領域に胃癌においても欠失が起きていないか検討した.2.方法:手術標本より採取した58症例60サンプルの胃癌組織および正常胃粘膜を凍結保存.フェノールクロロホルム・プロテネースK消化法を用いてDNAを抽出した.それぞれに対して14番染色体q24-32領域の4個のマイクロサテライトマーカーを用いてPCR(polymerase chain reaction)を行った.ヘテロ接合性の検出は非RI(radioisotope)によるSSCP(single-strand conformation polymorphism)法で検出した.3.結果:60検体中54検体がimformative.31検体(51.7%)に少なくとも一ヶ所のマーカーでLOH(loss of het erozygosity)を確認した.D14S68,D14S62,D14S65において5267%,D14S250で26%のLOHを認めた.その欠失領域は大腸癌と共通しており,14番染色体長腕に胃および大腸癌に共通する癌抑制遺伝子の存在が強く示唆された.
Toll様受容体の様受容体の内因性リガンドへの応答とその調節機構の解明

病原体センサーであるToll-like receptor (TLR)は非自己である病原体を直接認識することで、獲得免疫の活性化を誘導する。B細胞では抗原受容体と相乗的に機能することで抗原に対するB細胞応答に大きく影響を及ぼす。TLR7/TLR9がDNAやRNAに対する自己抗体産生に貢献し、自己免疫疾患に関与していることがモデルマウスにおいて示されている。TLR7/9の特異性は、必ずしも病原体に特異的ではなく、自己の核酸に対しても応答することが分かっている。したがって、TLR7/9の応答性は、感染防御には十分であるけれども、自己免疫疾患を誘導しない程度に制御される必要がある。しかしながら、その制御機構については、まだ不明な点が多い。我々は、TLR7/9の応答性を制御する分子の検索をこれまで進めてきた。その結果、Unc93B1という分子がTLR7、TLR9の応答性を相反的に制御しているという結果を得た。Unc93B1はTLR7、TLR9に会合し、TLR7/9を小胞体から、エンドリソソームに輸送する分子である。TLR7/9は小胞体に普段は局在しているが、リガンドである核酸はエンドリソソームに輸送される。したがって、Unc93B1によって輸送されなければ、TLR7/9はリガンドに応答できない。今回、我々の結果から、Unc93B1との会合は、TLR7、TLR9との間において競合しており、しかもUnc93B1はTLR9を優先的に輸送していることが明らかとなった。このような制御機構が破綻するとどうなるのか、今後明らかにする必要がある。病原体センサーであるToll-like receptor(TLR)は非自己である病原体を直接認識することで、獲得免疫の活性化を誘導する。マウスB細胞はTLR7/9以外に、TLR2, TLR4, RP105を発現しており、これらのTLRが自己免疫疾患に関わっているのかどうかは明らかではない。この点を検討するために、我々は自己免疫疾患モデルマウスであるMRL/1prにRP105ノックアウト(KO)マウスを掛け合わせ、解析した。RP105が欠損すれば、B細胞においてTLR4、TLR2、ともに機能低下することを我々は報告しており、RP105KOマウスを使うことで、B細胞においてTLR4、TLR2、両方の機能が低下した場合に自己免疫疾患がどう影響されるか検討できる。その表現型を調べた結果、疾患は軽減することが明らかになった。興味深いことに、自己抗体産生や糸球体腎炎には変化がなかったが、腎臓の血管炎の頻度が低下しており、リンパ節の腫大も軽減していた。TLR7、TLR9が核酸に対する自己抗体産生に関わっているのに対して、RP105/TLR4/TLR2は、自己抗体産生には直接かかわらないことが明らかとなった。今後、これらのTLRがいかにして、MRL/1prの自己免疫疾患の病態に関わっているのか、明らかにしてゆく必要がある。
発光タンパク質のクロモフォア構造に関する生物有機化学的研究

フォラシンのクロモフォア(発光を司る化学構造)を詳細に解明することを目的として、1)13C標識デヒドロセレンテラジン(DCL)の化学合成、2)アポ発光タンパク質の調製、3)高輝度発光する非天然型基質のデザインと合成に取り組んだ。その結果、標識炭素を効率的に合成する経路を確立し、遺伝子発現によるアポタンパク質の調製、高輝度発光DCL誘導体の合成に成功し、発光活性を高める分子デザインにおける指針を得ることができた。フォラシンのクロモフォア(発光を司る化学構造)は、活性部位のシステイン残基とデヒドロセレンテラジン(DCL:発光基質)とが結合して生成することを明らかにしてきたが、いまだ詳細な構造は不明である。そこで、酸素との結合が予想される炭素を13Cで同位体標識すれば、核磁気共鳴装置(NMR)による測定で、クロモフォアに関するより詳細な化学構造の情報が得られると考えた。この標識炭素はsp2混成軌道であるが、酸素と結合するとsp3混成軌道となるので、13C-NMRスペクトル上での区別が容易となるり、クロモフォア構造に関する詳細な情報が得られる。本年度は、この13C標識デヒドロセレンテラジン(DCL)の化学合成を目的とした。DCLの化学合成には様々な手法があるが、申請者は安価なグリシンを出発原料としてDCLを合成する手法を開発している。そこで、市販されている13C標識グリシンを出発原料として13C標識DCLを化学合成することにした。まずは、非標識グリシンからオキサゾロン、そしてアズラクトンを調製する段階について詳細に条件検討した結果、、反応温度と反応時間を精密に調整することで、反応収率がほぼ定量的になるように最適化できた。その後、フェニルピルビン酸へと加水分解し、セレンテラミンと縮合してDCLを化学合成する段階についても可能な限り反応条件を最適化した。この一連の条件検討の結果、13C標識の効率を高める事に成功し、13C標識グリシンを出発原料として13C標識DCLを化学合成する手法が確立できた。当初の計画通り、13C標識DCLを化学合成する手法を確立できたので、研究はおおむね順調に推進している。昨年に引き続き、発光タンパク質(フォラシン)の発光を司るクロモフォアに関する詳細な化学構造と、発光開始段階において活性酸素種(ROS)が関与する仕組み(分子機構)の解明を目指し研究に取り組んだ。当該年度はフォラシンの活性部位の分光学的解析を目指し、発光タンパクのアポ型の調製と人工基質の化学合成について検討した。市販のフォラシンには天然基質がすでに取り込まれているためにアポ型へ変換が難しいという問題点があった。しかしながら、昆虫細胞を用いた発現のための遺伝子を得ることができたので、アポタンパクの遺伝子発現による調製に目途がついた。ついで人工基質の合成に取り掛かった。基質であるDCLにヘテロ原子を組み込んだ新規誘導体の合成に成功し、天然型DCLより高輝度に発光する人工基質が完成した。共通の前駆体から様々な誘導体が合成できたので、構造活性相関を調べた。その結果、導入するヘテロ原子の効果は隣接する芳香環上のフッ素原子の数によってコントロールできることが判明した。さらに、フォラシンの活性部位解析のためのプローブ合成にも取り組んだ。活性部位に取り込まれるものの、発光活性を示さない人工基質を合成した。これをフォラシンに加えたところ、その発光活性が低下した。これは天然基質とこのプローブが交換していることを示しており、この化合物を利用してフォラシンの活性部位を分光学的に解析することが可能になった。フォラシン活性部位の解析のために解決しなければならなかった問題をクリアすることができたことから、以上の成果には今後の研究の進展において重要な意義がある。発光タンパク(フォラシン)のクロモフォア構造の解析のためには、活性部位に関する分光学的測定が欠かせない。さらに、その解析を可能にする基質やプローブが必要になる。様々な人工基質やプローブを合成することに成功し、構造活性相関に関するデータも得られたので、概ね研究は順調に進展している。昨年に引き続き、発光タンパク質(フォラシン)の発光を司る化学構造であるクロモフォアの詳細な化学構造と、発光開始段階における活性酸素種(ROS)が関与する仕組みの解明を目指し研究に取り組んだ。これまで、フォラシンのアポタンパク質は市販のフォラシンを利用していたが、内在する天然型DCLも含まれているために、DCLに関する正確な構造活性相関はできず、昨年度までに合成した非天然型DCLに関する正確な発光効率を求めることができない状況であった。そこで、遺伝子発現したアポフォラシンに人口基質を加えて半合成フォラシンの調製を目指した。昨年度取得したフォラシン人工遺伝子を用いて発現フォラシンの調製を試みた。分泌シグナル領域をもったアポフォラシンを、昆虫細胞により発現させた。その結果、目的とするアポフォラシンが糖鎖修飾された状態で発現させることに成功し、発現量は十分得られるることが分かった。アフィニティークロマトグラフィーにより精製し、純粋なアポフォラシンを得ることができた。これにDCLを加えて半合成フォラシンを再構成し、その発光活性を測定した。コントロールとして市販のフォラシンと比較した。その結果、発現アポフォラシンから再構成した半合成フォラシンの発光効率は、天然型フォラシンに比べると、同一濃度では低いという結果が得られた。糖鎖修飾には問題がないため、シグナル領域の切除とフォールディングについて、さらに精査する必要性が明らかになった。

これが解決できれば、人工基質を用いて再構成した半合成フォラシンに関する正確な構造活性相関研究、そしてフォラシンのクロモフォアに関する詳細な化学構造を解明できると考えている。フォラシンのクロモフォア(発光を司る化学構造)を詳細に解明することを目的として、1)13C標識デヒドロセレンテラジン(DCL)の化学合成、2)アポ発光タンパク質の調製、3)高輝度発光する非天然型基質のデザインと合成に取り組んだ。その結果、標識炭素を効率的に合成する経路を確立し、遺伝子発現によるアポタンパク質の調製、高輝度発光DCL誘導体の合成に成功し、発光活性を高める分子デザインにおける指針を得ることができた。本年度確立した13C標識DCLの化学合成方法により、標識体を供給し、実際にタンパク溶液での測定を目指す。遺伝子発現させたフォラシンを大量に入手できる方法を確立する必要がある。また、生細胞中での発現には成功しているので、より明るく発光する非天然型DCL誘導体の開発も目指す。今後は、アポタンパクの調製と人工基質を用いてフォラシンを再構成し、その発光活性を調べることが重要になる。遺伝子発現、人工基質の各種合成を達成し、活性部位に関する分光学的解析を目指す。生物有機化学
分子シャペロンを用いた糖尿病再生医療戦略

今回、膵臓特異的にheart shock factor1を発現されることはできなかったが、脂肪細胞においてメタボリックシンドロームにおいて重要な以下の結果を得た。成熟した脂肪細胞で高血圧作動物質の添加でLipoprotein lipaseの発現の抑制を認めた。しかし、未熟の脂肪細胞では、逆にLipoprotein lipaseの発現の亢進を認めた。つまり、メタボリックシンドロームのように成熟脂肪細胞が多く存在すると、Lipoprotein lipaseの発現が低下して高中性脂肪の原因となる。平成27年9月17日PLOS ONEにacceptされた。In-vitroの結果:HSF1に変異を加えて、HSPによる活性制御させず、HSPを発現させる転写遺伝子として作用する常時活性型HSF1を、ブトウ糖の濃度に反応して、insulinを分泌するマウス膵β細胞であるMIN-6細胞に過剰発現させたところ、遺伝子変異のない野生型のHSF1に比べて、ブドウ糖添加時に1.27倍のinsulin分泌を促進させた。そして注目すべきことは、ヒトの空腹時に血糖にあたる100mg/dl程度のブドウ糖刺激では、コントロールであるLacZ遺伝子を発現させたMIN-6細胞とInsulin分泌は同程度であったことである。このことは、ヒトに応用した場合、常時活性型HSF1を膵β細胞に過剰発現した場合、空腹時には作用せず、低血糖の弊害が起こりにくいことを示している。そして、この常時活性型HSF1によるinsulin分泌メカニズムに介しては、以下のことが分かった。HSF1で誘導されたどのHSPが関与しているかに関して、HSP16, HSP32, HSP60 HSP70, HSP90を過剰発現して、MIN-6細胞でInsulin分泌を誘導するか、調べたところ、HSP90を介していることが分かった。また、HSP90の活性阻害薬である17-AAGを投与すると常時活性型HSF1によるinsulin分泌は阻害された。この二つの結果から、常時活性型HSF1はHSP90の発現を介してinsulinを分泌させることが分かった。また、HSP90は、nitric oxide synthaseの活性化を調節しているので、neuronal nitric oxide synthaseの活性化に関して調べたところ、nNOSのリン酸化を認められた。これ以降の関してであるが、Insulin分泌に関与している。β細胞での血糖のセンサであるグルコキナーゼが常時活性型HSF1で活性化することが分かった。グルコキナーゼとneuronal nitric oxidesynthaseとの関係であるが、免疫沈降でを行ったところ、直接、グルコキナーゼとneuronal nitric oxide synthaseの結合を認めた。分子シャペロンを用いて、脂肪細胞に分化させた3T3L-1細胞に過剰発現させ、lipoprotein lipase, Leptin等の発現を調べていたが、その実験の途中で3T3L-1細胞が継代を重ねたためか、デキサメサゾン、IBMX、Insulinの脂肪分化誘導剤で、成熟した脂肪細胞へ分化しなくなった。そのため、培養細胞でなく、ラットから単離した初代脂肪細胞を用いて過剰発現を試みた。一般的に継代細胞に比べて初代細胞は過剰発現が難しいといわれている。ことに、細胞分裂しない初代細胞はアデノウイルスを含めて過剰発現させることが極めて困難であった。もともと3T3L-1細胞も含めて、脂肪細胞は過剰発現の困難な細胞の一つである。アデノウイルスの感染に関しては、ウイルスの感染量を増やす、プラスミドを細胞内に導入させる際に使用する細胞膜を融合させるlipofectamineを添加するも、アデノウイルスを単離した初代脂肪細胞に過剰発現させることはできなかった。3T3l-1細胞はもともとFibrocyteから単離されたので、初代脂肪細胞の単離の際に、得られるFibrocyteを用いて、3T3Lー1細胞同様の分化誘導剤を添加すると、約1週間で脂肪細胞に分化し、Fibrocyteは細胞分裂するため、アデノウイルスによる過剰発現が可能であったが、単離したFibocyteは5継代で細胞分裂しなくなった。脂肪細胞として安定した結果を得ることができなかった。結果的に、脂肪細胞を用いての遺伝子の過剰発現が困難であった。糖尿病の治療経過において重要なのは体重のコントロールである。脂肪細胞の増加によりインスリン抵抗性が増加し、血圧も上昇する。脂肪細胞と高血圧の関連性に関して調べることとした。前年度からの引き継ぎ、今年度は最終年度であり、投稿でまでたどりつけたものの、まだ5月現在、acceptまで至っていない状態である。脂肪細胞において、高血圧作動物質の添加でLipoprotein lipaseの発現の抑制を認めた。この作用のメカニズムに関して以下のことが解明された。成熟した脂肪細胞では、GPCR Gq、Phosholipase c、Protein kinase c、induciblenitric oxideの関与を認めた。

また、未熟な脂肪細胞では、GPCR Gi c-Src, p38MAPKの関与を認めた。同種の脂肪細胞であるが、成熟度によってsignal transductionが異なっていることは、興味深く、メタボリックシンドロームのように成熟脂肪細胞が多く存在すると、protein kinase cの活性化や、inducible nitric oxideの発現の亢進し、言わいる慢性炎症という状態になる。今まで、この漫然と肥満は慢性炎症と言われていたが、今回の研究でそのメカニズムが解明された。結果をまとめ、Figure、Tableを整え、論文を英文化しcoverletterを作成し、netive speakerの英文校正を受け、投稿規約に従って字数、構成、Figure, Tableを調整し、Journal of biochemistyに投稿中で、review中となっている。糖尿病結果データのばらつきが大きく、また、継代を重ねたため、膵β細胞の培養細胞であるMIN6cellの状態が良くない。上記研究実績の概要に記載したように、遺伝子の過剰発現の技術的問題で、苦戦をしている。初代脂肪細胞への遺伝子導入の方法論の確立することはが困難なため、達成は遅れている。In vivoの実験でアデノウイルスをratの膵β細胞に過剰発現させる実験にて、膵ベータ細胞に特異的に発現させるために、ヒトインスリンのpromoterを結合した、常時活性型HSF1のアデノウイルスを作成した。MIN6細胞では、培養液のグルコース濃度依存性に常時活性型HSF1の発現を確認した。しかし、ラットの膵β細胞への常時活性型HSF1の発現に関して、実験中である。初代脂肪細胞への遺伝子導入の方法論の確立することとと、糖尿病の治療経過において重要なのは体重のコントロールである。脂肪細胞の増加によりインスリン抵抗性が増加し、血圧も上昇する。脂肪細胞と高血圧の関連性に関して調べることも平行して行うこととした。上記研究推進方策に記載したように、1、初代脂肪細胞への遺伝子導入の方法論の確立することとと、2、脂肪細胞の単離のする技術を獲得できたので脂肪細胞と高血圧の関連性に関して調べることも平行して行うこととした。
高温トカマクプラズマにおける光学的禁制スペクトル線を用いた高Z不純物の密度計測

本研究の目的は2つあり、1)光学的禁制スペクトル線を用いてトカマクプラズマにおける高Z不純物(原子番号が大きい不純物)の蓄積量を計測すること、および2)1)を遂行するために必要な基礎データの生産である。1)について、A.アルゴンイオンの密度測定とB.タングステンイオンの密度測定を試みた。A:9価電離状態のアルゴンイオン(Ar^<9+>)の基底状態間の遷移に伴うスペクトル線(Ar X 2p^5 ^2P_<3/2> -2p^5 ^2P_<1/2>)をトロイダル磁場に平行および垂直な偏光成分に分離して同時に計測することに成功した。その偏光の方向からこのスペクトル線は光学的禁制スペクトル線の一種である磁気双極子放射によるスペクトル線であることが確認された。その発光弾度を解析するため基底準位間の遷移強度、寿命などの原子データを計算し、それを用いたモデルを構築した。このモデルで計算されたこのスペクトル線の発光率と計測されたスペクトル線強度から、Ar^<9+>密度を求めた。その密度は不純物輸送コードを用いて計算されたAr^<9+>密度と約2倍の誤差で一致し、本手法の有用性が示された。B:上記Ar^<9+>と同様の手法でW^<52+>の基底状態間の遷移に伴うスペクトル線(W XXXXXIII 3d^3_<3/2>3d_<5/2>,J=2-3)の測定を試みた。構築したモデルによる計算では、電子密度に対するW^<52+>の密度が0.1%以上であれば、このスペクトル線は計測可能である。しかし、今年度までに行った実験ではプラズマの温度が低かったためタングステンの電離が進まずW^<52+>の密度が低かった。そのため、このスペクトル線は観測されず、タングステンイオンの密度計測には成功しなかった。しかし、Ar^<9+>でこの手法の有用性が示されたように、次期核融合装置などさらに高温プラズマではこの手法によるタングステン密度計測は有用な手法であると期待される。本研究の目的は2っあり、1)光学的禁制線を用いてトカマクプラズマにおける高Z不純物(原子番号が大きい不純物)の蓄積量を計測すること、および2)1)を遂行するために必要な基礎データの生産、である。本年度は主に1)に関してJT-60での実験でしばしば用いられるアルゴンに対して実験データの解析を行った。実験では、9価電離状態のアルゴンイォンの基底状態間の磁気双極子遷移によるスペクトル線(ArX2p52P3/2-2p52P1/2)の計測に成功し、そのドップラー拡がりから求めたイオン温度は200-300eVであった。別な計測システムで測定された温度200-300eVの領域は規格化小半径が0.84近傍に対応することから、この領域に存在する9価電離状態のアルゴンイオンからの発光が計測されたと考えられる.これを1次元の不純物輸送コードを用いて検証したところ、9価電離状態のアル:ゴンイオンは規格化小半径0.86近傍にピークを持っように分布していることが示され、実験データをほぼ再現する結果が得られた。よって、このような手法によって高Z不純物の密度が計測できると期待される。不純物イオン密度の導出にはスペクトル線の絶対強度を求める必要があるが、分光システムの絶対感度校正はJT-60のメンテナンスの都合上、未だ実施されていない。また、絶対強度から密度へ換算するにはモデル計算が必要であるが、モデル計算に必要な基礎データを原子構造計算コードによって計算している段階である。今後、整備した近紫外測定用分光器をJT-60本体室に設置し、さらに原子番号の大きいクリプトン、キセノン、タングステンの磁気双極子遷移線を計測する予定である。

構築したモデルによる計算では、電子密度に対するW^<52+>の密度が0.1%以上であれば、このスペクトル線は計測可能である。しかし、今年度までに行った実験ではプラズマの温度が低かったためタングステンの電離が進まずW^<52+>の密度が低かった。そのため、このスペクトル線は観測されず、タングステンイオンの密度計測には成功しなかった。しかし、Ar^<9+>でこの手法の有用性が示されたように、次期核融合装置などさらに高温プラズマではこの手法によるタングステン密度計測は有用な手法であると期待される。
光ダイナミックス機能を持つ有機・無機複合結晶の設計と合成

緒言モンモリロナイト(Mont)粘土層間はイオン交換により、様々なカチオン種をインターカレートすることはよく知られている。単なるイオン交換による取り込みでなく、層間にイオン交換したZn(II)イオンと錯体化が期待されるスピロオキサジン(SPO)の粘土層間でのホトクロミズムを検討した。実験方法ヘキシルトリメチルアンモニウムイオンを吸着させた疎水化Montを、SPO(50mol%)とZnCl2(500mol%)の混合物と40h、光照射(300-400nm)しながら攪拌・処理し、SPOの開環亜鉛錯体(着色)として吸着させた。このように作成した粘土SPO複合錯体は、乾燥粉末として取り出した後、蛍光光度計で開環体と閉環体の変化を測定した。結果と考察このように作成した複合体は、520nmに発光極大を持つ開環体の亜鉛錯体として吸着されていることが明らかになった。この開環体は、暗所に数日放置しても安定であった。ついで、この開環体を450nmにて光照射すると、次第に520nmの発光は減少し、亜鉛イオンが解離して、閉環体に戻ることを認めた。粘土に吸着させるときの光照射時間がSPOの粘土への吸着量に及ぼす効果を検討したが、照射時間にはほとんど無関係であることがわかった。また、SPOの亜鉛錯体は、濾液中には溶出しないことから、高い吸着力で粘土層間にインターカレーションされていることが明らかになった。本実験での結論として、疎水化した粘土層間においてSPOの亜鉛錯体の形成と解離を光により、制御できることがわかった。序論層状無機化合物であるモンモリロナイトは有機ゲスト分子を層間にインタカレーションする。ゲスト分子は一定の配列を持って層間に吸着さるため、複合化による機能性材料としての展開も期待される。今年度、先ず、粘土層間化合物の材料化の第1歩として、ケイ酸ガラスマトリックス中に有機修飾したモンモリロナイト粒子をドープし、そのマトリックス中でのモンモリロナイト粒子の分散状態と配向性について検討した。実験モンモリロナイトは、合成粘土、Sumecton SA(クニミネ工業)を用いた。カチオン交換容量は99.68ミリ当量/100gであった。この粘土水分散液ににラウリルピリジニウムクロライド(Cl2H22-Py+Cl-)、スチルバゾリウム塩などのカチオン性ゲスト分子と撹拌し、吸着させた。一夜、撹拌放置後メンブレンろ紙によりろ過して、白色粉末を得た。このものを有機-粘土複合体とし、マトリックスに分散させた。マトリックスとしてはゾル-ゲル法によるケイ酸ガラスを用いた。まず、ゾル-ゲル溶液としてTEOS(テトライソプロポキシシラン)のDMF溶液に、EtOH、NH4O H aq.を加え、加水分解および脱水重合させ、その分散溶液中へ複合体を加えて超音波で分散させた。その後スピンコーターにて基板に展開し、薄膜とした。結果と考察ゾル-ゲル溶液中で有機ゲスト分子を複合化した粘土層間化合物は均一に分散していることが、電顕写真、光学顕微鏡の観察により明らかになった。また、粘土層間化合物は、層から分子が脱離したり、層構造が壊れることなく薄膜にドープすることができ、スピンコートにより100nm程度の強靱な透明薄膜が得られた。マトリックス中に分散された粘土粒子は、積層させた薄膜をXRD測定することによりd001強度が相対的に強いことが明らかとなり、この結果から基板上の複合体粒子はc軸方向に方向を配向していると結論された。またd001値は粘土層間中での有機分子の配向状態によって変化する。

即ち、電気直線2色性を静電場にて測定し、たとえば、4-メトキシスチルバゾールイオンはマトリックスに分散された粘土粒子中で、約21度のチルト角で傾いた一分子膜状態で配向状態にあることが判明した。また、複合体の粉末状態とゾル-ゲル薄膜中でのXRD測定のd001値を比較すると、ゾル-ゲルマトリックス中の方が、数オングストロームだけ圧縮していることがわかった。これは、ゲル化の段階で層間の溶媒が除去されたか、別の溶媒に置換されたものと推定した。1緒言層間に有機イオン種としてフルギド型のホトクロミック材料をインターカレートしたモンモリロナイト粘土分散液を、シリカ基板にスピンコートした粘土・フルギド薄膜を用いて、そのホトクロミック特性を検討した。特に、粘土層間では、ゲスト分子の配向が起こるので、その偏光照射によるホトクロミズムの光異方性に注目し、その超分子構造、コンフォメーションについて明らかにした。2実験方法フルギド型のホトクロミック材料として1.2-[ジ3-(2-メチル-5-ビリジニウム)チオフェニル]パーフルオロシクロヘキセンを合成し、その水溶液とカチオン交換粘土(クニビアF:クニミネ工業製、カチオン交換容量119meq/100g)の水分散液(5meq/1)、一夜室温で撹拌したところ、ほぼ定量的に吸着された。得られた粘土複合化ホトクロミック物質は、スピンコートによりシリカ基板上に薄膜化し、ホトクロミズム性を検討し、偏光紫外可視分光法とX線回折法(理学電機、形式RINT2000)により解析した。3結果と考察定常光照射により、本粘土複合化薄膜は着色(青色、λmax567nm)と消色(淡黄色、λmax300nm)を繰り返す。薄膜は透明性がよく、光学的に優れた性質を持つ。イオン交換容量に対して、10%の色素と90%のカチオン界面活性剤をインターカレートした場合にもっとも繰り返し安定性が向上し、6時間以上の繰り返しでも色素の分解は見られなかった。吸着量が足りないときには、2点吸着が起こり、チオフェン環は平行に揃った不動体となって、可逆性が低下するが、1点吸着ではその弊害がないと考えられる。次に、偏光分光で、二色性比の入射角度依存性とX線回折からフルギド分子は、10%吸着でz軸方向に38.5゚傾いたコンフォメーションを取り、5%、1%と吸着量が減少するに従って、33゚、29.5゚と倒れて行く。この傾向は、X線解析による眉間距離の測定の結果ともよく一致した。今後、残された本研究計画年度内で、本分散液をゾルゲルシロキサンマトリックス中に分散薄膜化し、その光異方性が安定に実現された段階で、偏光子によるホトクロミズムを検討し、偏光スイッチング機能を追求したい。緒言モンモリロナイト(Mont)粘土層間はイオン交換により、様々なカチオン種をインターカレートすることはよく知られている。単なるイオン交換による取り込みでなく、層間にイオン交換したZn(II)イオンと錯体化が期待されるスピロオキサジン(SPO)の粘土層間でのホトクロミズムを検討した。実験方法ヘキシルトリメチルアンモニウムイオンを吸着させた疎水化Montを、SPO(50mol%)とZnCl2(500mol%)の混合物と40h、光照射(300-400nm)しながら攪拌・処理し、SPOの開環亜鉛錯体(着色)として吸着させた。このように作成した粘土SPO複合錯体は、乾燥粉末として取り出した後、蛍光光度計で開環体と閉環体の変化を測定した。結果と考察
塞栓部血流高速再開通のための標的型無侵襲超音波併用血栓溶解療法の開発

塞栓部高速血流再開通のための標的部位に対する超音波照射と経静脈的血栓溶解剤(TPA)投与の併用による血栓溶解療法を提案し、その実用化試験研究を行い、実用化の基礎となる次の成果を得た。(1)超音波周波数依存性:血栓溶解効果を血栓重量減少率、FDP-DDの測定実験から周波数100KHz300KHZの間に溶解率を高める特異性を認めた(in vitro実験)。(2)照射パワー依存性:超音波パワー増強にほぼ比例した溶解率の上昇を認めた(in vivo実験)。(3)血栓溶解産物:血栓溶解液の電気泳動実験による測定分析から、超音波照射による特異的な分解産物は産生されず、t-PA単独使用時に比べ分解産物の濃度のみが上昇した。(in vitro実験)。(4)犬冠動脈再開通の高速化:急性心筋梗塞に対応する左前下行枝急性閉塞犬実験モデルで、超音波併用法がt-PA単独使用の1/3の開通時間(15分)程度とすることを確認した(in vivo実験)。(5)安全性評価:光顕及び電顕的に心筋に損傷を与えないことを確認した(in vivo実験)。(6)生体適用パワーレベル:胸壁における超音波減衰を実測し、生体組織への損傷を与えないパワーレベルで、塞栓部高速血栓溶解に有効な超音波照射の可能なことを確認した(in vivo実験)。(7)陳旧化血栓への有用性評価:クモ膜下出血などの血腫に対応する陳旧化血栓の溶解実験から、陳旧化血栓(24時間)に対しても本併用法が優位なことを確認した(in vitro実験)。(8)実用化の見通し:以上の基礎的検討からヒト心臓領域への安全な適用見通しを得た。また、再開通時間の短縮について理論的限界時間(約5分)は脳血栓塞栓部への適用可能性も示した。塞栓部血流を高速再開通させるための標的型無侵襲超音波併用血栓溶解療法に関し、その基礎として先ずIn vitro実験で血栓溶解剤濃度を固定し、超音波照射条件(周波数とパワー)を変え、溶解率(血栓重量減少率)及びFDP生産量を比較し,以下の結果を得た。(1)周波数を固定した連続波照射では、パワー上昇にほぼ比例した溶解率の上昇、FDP値の上昇を認めた。(2)上記比例係数には周波数特異性があり、最も高い値を示す周波数は100KHz300KHzにあることが示唆された。(3)血栓溶解液を電気泳動法で分析した結果、超音波照射によるスペクトルの変移を明確には認めず、単に分解量の増加のみを認め、超音波照射は単に血栓溶解剤固有の融解能力を増強させるものであることを確認した。In vivo実験において次の点を確認し、安全性確保の見通しを得た。(1)胸壁による超音波減衰は約6.0dB/MHz/cm程度であった。(2)組織の安全性限界1W/cm^2に対し、上記比率で換算すれば、心筋内では約0.6W/cm^2の照射強度を得ることが可能で十分な促進効果の得られることを確認した。(3)また0.8W/cm^2以下の照射強度で心筋損傷のないことを光顕的並びに電顕的に確認した。超音波ビームの持つ指向性を活用した高い標的性を加えた経静脈的血栓溶解剤投与法(tissue plasminogen activatorを使用)を開発した。この方法は、超音波の溶解剤と複合的作用によって塞栓部の血流再開通を高速化する特徴を持つものである。本年度は次の成果をあげ、実用化の基礎を築いた。

1.超音波周波数依存性:血栓重量評価、FDP-DD評価で再度検討を加え、周波数範囲100KHz300KHzに選択的に溶解効率の高い領域のあることを確認した。2.超音波照射パワー依存性:パワーに比例して溶解率は上昇する。ただしプラスミノーゲン濃度に比例してその上昇直線の傾きも増加する。3.陳旧血栓に対する有効性:血栓は陳旧化に伴い、フィブリン塊は硬化するが、陳旧化血栓に対しても併用法は有用であった。t-PA単独では効果が指数関数的に減少するのに対し、有効性が持続する傾向を示した。4.超音波減衰と安全評価:犬In vivo実験にて、胸壁での減衰と心筋への到達度を評価し、有効なパワーレベルを確保しても、皮膚等超音波伝搬組織の安全性が確保され、損傷などの悪影響のないことを確認した。5.血流再開通の高速化の評価:In vivo及びIn vitro実験成果の比較から、調整すれば冠動脈再開通時間を6分程度に短縮可能な見通しを得た。これは脳梗塞などの発症早期へ適用の有効性を示唆するものである。