hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
羊膜由来細胞外基質コートPLGA担体の生物学的活性効果の検証と軟骨再生治療の応用

羊膜は抗炎症効果や線維化抑制効果を持つことから創傷治療への応用が有用であるとされている。PLGA三次元担体に羊膜由来細胞外基質をコートした新たな治療材料(ECM-PLGA)を開発し、ラット骨軟骨欠損モデルにおいて一定の軟骨修復促進効果を持つことを確認したため、その修復メカニズムについての解析を行っている。関節内の炎症において、滑膜中マクロファージが重要なエフェクターとして働いており、種々の炎症性サイトカイン分泌などを介したシグナルによって関節内炎症環境の調節を担っているとの報告が相次いでいる。羊膜由来細胞外基質が持つ抗炎症効果や組織修復効果も、同様にマクロファージを介した細胞間シグナルに依存している可能性が高いと考え、マクロファージ分化に羊膜細胞外基質がどのように関わっているかを調べる実験を行った。ヒト末梢血から分離・培養したCD14陽性単球をM-CSF添加培養によりマクロファージへ分化誘導し、ECM-PLGAとの共培養モデルにてマクロファージの表現型(M1/M2)解析を行った。炎症性マクロファージ(M1マクロファージ)のマーカー遺伝子であるCD80、CD83および抗炎症性マクロファージ(M2)のマーカー遺伝子であるCD163、CD206の発現比(M1/M2比)についてECM-PLGAを置かないコントロールと比較したところ、ECM-PLGAとの共培養においてよりM1/M2比が高い結果となった。さらに培養上清中の炎症性サイトカインの濃度をELISA法により計測したところ、ECM-PLGAとマクロファージを共培養した方が、マクロファージ単独で培養を行った場合よりもIL-1bおよびIL-6の濃度が高い結果となった。以上より、ECM-PLGAとの接触によりマクロファージはよりM1の表現型を示しやすく、炎症性サイトカインの産生も高まると考えられ、実験前の仮説とは異なる結果となった。羊膜由来細胞外基質が炎症環境に与える影響を調べるために、羊膜由来細胞外基質をコートした培養皿で平面培養を行ったヒト滑膜由来線維芽細胞のILー1β刺激に対する反応を観察する実験を行った。細胞外基質をコートしていない培養皿に比べて、基質をコートした培養皿ではより高濃度の炎症性サイトカインの分泌(ILー6,ILー8)が認められた。この結果はILー1β刺激の有無とは関係がなく、細胞外基質に対する線維芽細胞接着における反応であると考えられた。同様に基質をコートした培養皿ではMMPー1, 3, 13,ADAMTSー4といった軟骨分解に関わる酵素の遺伝子発現が亢進した。3次元担体であるPLGAに羊膜由来細胞外基質をコートして作製した軟骨修復用生体材料であるECMーPLGAにヒト滑膜由来間葉系幹細胞を播種し、ILー1βを添加した軟骨分化培地による分化培養を行った。21日間の培養を行ったものの軟骨組織様の組織の形成は得られなかった。定量的RTーPCRによる遺伝子発現解析を行ったが、ILー1βの添加による軟骨分化マーカーの発現抑制はECMーPLGA上で培養を行っても回復しなかった。これまでに得られた結果は当初予想していた羊膜由来細胞外基質の抗炎症効果とは相反するものである。一方で羊膜由来細胞外マトリックスの新たな生物活性を示唆するものである可能性があり、実験系に更なる改良・工夫を加えて、解析を進める必要がある。ヒト滑膜由来細胞の採取・樹立方法や、実験方法・材料の捨取選択、炎症性サイトカインの培養液への添加や上清中の濃度の測定方法などについて条件検討などを行うことができたため。羊膜は免疫原性が低く他家移植が可能で、抗炎症効果や線維化抑制効果を持つことから創傷治療への応用が有用であるとされている。関節内の炎症においては滑膜中マクロファージが重要なエフェクターとして働いており、種々の炎症性サイトカイン分泌などを介したシグナルによって関節内炎症環境の調節を担っているとの報告が相次いでいる。羊膜由来細胞外基質が持つ抗炎症効果や組織修復効果も、同様にマクロファージを介した細胞間シグナルに依存している可能性が高いと考え、マクロファージ分化に羊膜細胞外基質がどのように関わっているかを調べる実験を計画した。ヒト末梢血からMACSによりCD14陽性単球を分離・培養し、さらにM-CSF添加培地での培養によりマクロファージへ分化誘導し、さらにECM-PLGAとの共培養モデルにてマクロファージの表現型解析を予定している。CD14陽性単球の分離・培養環境立ち上げにやや時間を要したが概ね完了した。今後マクロファージへの分化誘導と共培養実験を進める予定である。羊膜由来細胞外基質のもつ軟骨修復促進作用がマクロファージを介した抗炎症、組織修復などのシグナルによる可能性について実験を進めるつもりであったが、準備段階に想定以上の時間を要したため。

関節内の炎症において、滑膜中マクロファージが重要なエフェクターとして働いており、種々の炎症性サイトカイン分泌などを介したシグナルによって関節内炎症環境の調節を担っているとの報告が相次いでいる。羊膜由来細胞外基質が持つ抗炎症効果や組織修復効果も、同様にマクロファージを介した細胞間シグナルに依存している可能性が高いと考え、マクロファージ分化に羊膜細胞外基質がどのように関わっているかを調べる実験を行った。ヒト末梢血から分離・培養したCD14陽性単球をM-CSF添加培養によりマクロファージへ分化誘導し、ECM-PLGAとの共培養モデルにてマクロファージの表現型(M1/M2)解析を行った。炎症性マクロファージ(M1マクロファージ)のマーカー遺伝子であるCD80、CD83および抗炎症性マクロファージ(M2)のマーカー遺伝子であるCD163、CD206の発現比(M1/M2比)についてECM-PLGAを置かないコントロールと比較したところ、ECM-PLGAとの共培養においてよりM1/M2比が高い結果となった。さらに培養上清中の炎症性サイトカインの濃度をELISA法により計測したところ、ECM-PLGAとマクロファージを共培養した方が、マクロファージ単独で培養を行った場合よりもIL-1bおよびIL-6の濃度が高い結果となった。以上より、ECM-PLGAとの接触によりマクロファージはよりM1の表現型を示しやすく、炎症性サイトカインの産生も高まると考えられ、実験前の仮説とは異なる結果となった。新たな培養形態を用いて、羊膜細胞外基質の炎症性サイトカインに対する反応を観察する。同時に、ブロック状以外の形態でのECMーPLGAの培養方法の構築を行う。さらに、ECMーPLGAの持つ細胞遊走誘導能について検討を行なう。羊膜由来細胞外基質の持つ軟骨修復作用についてマクロファージを介した抗炎症、組織修復作用および細胞遊走(走化性)効果の検討を進める。研究室に以前からストックのある消耗品で、実験に使用する消耗品の大部分をまかなえたので、予定より使用額が少なくなった。計画よりやや遅れを生じたため次年度使用額が生じた。マクロファージへの分化誘導およびECM-PLGAとの共培養実験に必要な試薬や器具の購入に使用する予定である。H28年度に実施できなかった動物実験や、他形態でのECMーPLGAの培養方法構築を中心に、動物購入費や実験器具・試薬に使用してく予定である。
地球表層環境におけるジルコニウムの挙動解明のためのジルコン・インデックス構築

本研究では,地球表層環境におけるジルコニウムの挙動を評価するためのジルコン・インデックスの開発を目的としている.ジルコン中の極微量元素含有量分析手法開発を行った.低質量数側磁場安定のための磁場制御装置のスペアを一定期間オーストラリア国立大学より借用することが可能となったため,それらを高感度高分解能イオンマイクロプローブ(SHRIMP)に設置し,ジルコン中の低質量数側(Li)から高質量数側(Zr)までの含有量分析手法開発を行った.この際,同時に東南極ナピア岩体の微量元素含有量分析を行い,結果を地球化学会年会において報告した.熱水変質作用を受けた形跡のある岩石試料(アメリカ合衆国ミネソタ州ダルース複合岩体の斑れい岩質斜長岩及びガボン共和国オクロ地域北部Bidodouma streamに産する珪長質凝灰岩)について解析を進めた.鉱物分離作業を行い,分離されたジルコン粒子の低真空走査型電子顕微鏡による詳細な観察及びSHRIMP分析試料ディスク作製を行った.この際,表面精密研磨用ジグを開発,作製し,分析用試料ディスク作製に用いることで,より精密な研磨量のコントロールと平坦な研磨面を得ることが可能となった.熱水変質作用ジルコンの湿式化学分析についての試料選定及び打ち合わせを行った.西南日本飛騨変成帯(岐阜県)の打保岩体にて,野外地質調査とサンプリングを行った採集した岩石試料の初期記載及び鉱物分離を行った.また,飛騨変成帯の神岡地域から採集された岩石試料のジルコンを対象としてSHRIMPによる分析を行い,成果を国際誌へ発表した.平成30年度は野外調査,試料採集と選定,予備実験及びテスト分析を中心に行い,分析手法と得られたデータの解析が進んだ.今後,追加の試料採集が必要となるが,採集地点等はこれまでの野外調査データに基づき,決定している.前年度開発した手法に基づき,熱水変質作用を受けた痕跡のある試料である,アメリカ合衆国ミネソタ州ダルース複合岩体の斜長岩及びガボン共和国オクロ地域北部Bidodouma streamに産する珪長質凝灰岩に含まれるジルコンのSHRIMPを用いた微量元素含有量分析を行う.ダルース複合岩体の斜長岩中のジルコンを対象に,湿式化学分析を行う.西南日本飛騨変成帯(岐阜県)の打保花崗岩体及び周辺地域への野外調査と追加の試料採集を行う.前年度に鉱物分離済みの試料を用いて,SHRIMP分析用試料ディスクを作製する.岩石試料の全岩化学組成(主要元素及び微量元素組成)の分析を行う.本研究では,地球表層環境におけるジルコニウムの挙動を評価するためのジルコン・インデックスの開発を目的としている.ジルコン中の極微量元素含有量分析手法開発を行った.低質量数側磁場安定のための磁場制御装置のスペアを一定期間オーストラリア国立大学より借用することが可能となったため,それらを高感度高分解能イオンマイクロプローブ(SHRIMP)に設置し,ジルコン中の低質量数側(Li)から高質量数側(Zr)までの含有量分析手法開発を行った.この際,同時に東南極ナピア岩体の微量元素含有量分析を行い,結果を地球化学会年会において報告した.熱水変質作用を受けた形跡のある岩石試料(アメリカ合衆国ミネソタ州ダルース複合岩体の斑れい岩質斜長岩及びガボン共和国オクロ地域北部Bidodouma streamに産する珪長質凝灰岩)について解析を進めた.鉱物分離作業を行い,分離されたジルコン粒子の低真空走査型電子顕微鏡による詳細な観察及びSHRIMP分析試料ディスク作製を行った.この際,表面精密研磨用ジグを開発,作製し,分析用試料ディスク作製に用いることで,より精密な研磨量のコントロールと平坦な研磨面を得ることが可能となった.熱水変質作用ジルコンの湿式化学分析についての試料選定及び打ち合わせを行った.西南日本飛騨変成帯(岐阜県)の打保岩体にて,野外地質調査とサンプリングを行った採集した岩石試料の初期記載及び鉱物分離を行った.また,飛騨変成帯の神岡地域から採集された岩石試料のジルコンを対象としてSHRIMPによる分析を行い,成果を国際誌へ発表した.平成30年度は野外調査,試料採集と選定,予備実験及びテスト分析を中心に行い,分析手法と得られたデータの解析が進んだ.今後,追加の試料採集が必要となるが,採集地点等はこれまでの野外調査データに基づき,決定している.前年度開発した手法に基づき,熱水変質作用を受けた痕跡のある試料である,アメリカ合衆国ミネソタ州ダルース複合岩体の斜長岩及びガボン共和国オクロ地域北部Bidodouma streamに産する珪長質凝灰岩に含まれるジルコンのSHRIMPを用いた微量元素含有量分析を行う.ダルース複合岩体の斜長岩中のジルコンを対象に,湿式化学分析を行う.西南日本飛騨変成帯(岐阜県)の打保花崗岩体及び周辺地域への野外調査と追加の試料採集を行う.前年度に鉱物分離済みの試料を用いて,SHRIMP分析用試料ディスクを作製する.岩石試料の全岩化学組成(主要元素及び微量元素組成)の分析を行う.当初購入予定であった,高感度高分解能イオンマイクロプローブ(SHRIMP)専用低質量数側磁場制御装置をオーストラリア国立大学より一定期間借用可能となったため残額が発生したが,この差額の一部は,精密研磨用ジグの開発及び作製費用とSHRIMP分析消耗品等に使用した.平成30年度に3回計画していた西南日本飛騨変成帯の野外地質調査及び試料採集の回数を減少させたため,旅費分の金額が残額となった.残額は次年度の野外調査及び試料採集の旅費に使用する計画である.
フォールディング・エレメント間相互作用に基づく蛋白質構造形成機構の解明

蛋白質のフォールディング・エレメント(FE)とは、「主鎖の連結が天然構造形成に必須な部位」であり、蛋白質のfoldabilityの決定因子を解明する上での重要な手がかりになると期待されている。本研究では、ジヒドロ葉酸還元酵素(DHFR)をモデル蛋白質として用い、FE巻相互作用という新たな観点から、蛋白質のフォールディング機構を解明することを目的として研究をすすめている。本年度は以下の成果を得た。1.FE間相互作用の形成過程:連続フロー蛍光TCSPC法を用いて、サブミリ秒の時間域におけるDHFRのフォールディング反応を測定した結果、ミリ秒以内にFE3,FE4,FE5周辺の相互作用が部分的に形成されることが示唆された。また、FE外領域に蛍光プローブAEDANSを導入し、TrpとAEDANS間の蛍光エネルギー移動を測定することにより、ラベル導入部位周辺のFE間相互作用を観測することを試みた結果、折り畳み反応開始後30μ秒以内に、DHFRのアデノシン結合サブドメインの構造がコンパウトになっているのに対し、ループ・サブドメインはやや広がった構造をしていることが示唆された。2.FE間相互作用の効率的な形成方法の探索:FEの連結方法、FE間リンカーにおける制約を調べることを目指して研究を行った。DHFRを3つのブロックに分け、それらの連結順序を様々に変えた変異体を作成し、蛋白質の構造形成能を調べた結果、蛋白質がfoldableになるためには、FEの連結順序に制約があること、また、FE間リンカー長が可変であることなどが明らかになった。
小沢蘆庵収集「写本家集」(百科集)の研究

主要伝本のコピーに、書き入れ等の朱・青筆の区別を記入する作業を完了し、それを踏まえて、蘆庵本の特徴を判断する基礎データを24家集について収集した。その結果、伝本には臨模本と校訂本の2系統があることと、伝本間の親疎関係を解明した。また、入江昌喜所蔵家集が全て蘆庵本になった訳ではないことを、『俊頼集』を事例して証明した。先ず、研究の基盤となる小沢蘆庵手沢の紅梅文庫旧蔵62家集の内、今治市河野美術館蔵47家集中の36家集について、コピーを国文学研究資料館で入手した。8月下旬に今治を訪ね、朱・青筆等による書き入れの確認を行い、19家集について作業を完了した。また、残る14家集を所蔵する東海大学図書館を訪問し、7家集について、本文を書写した(写真撮影不許可のため)。また、この関連で、国文学研究資料館蔵本と龍谷大学写字台文庫本を調査するとともに、甲賀市立水口図書館蔵本21冊中の11冊について、マイクロ撮影を行い、紙焼き写真を入手した。これらの調査の結果、蘆庵「写本家集」の伝本は、仮名遣いの訂正書き入れや本文のミセケチ、集付や上欄注、行間の広狭まで、全て原本の通りに書写してある「臨模本」の系統と、明かな誤りについては、正しい本文に改めて書写してある「校訂本」の系統の2種類があることが判明した。また、手沢本の「基礎データ」については、山田法師・頼実・在良・成仲・大納言典侍・兼行・元良親王・師氏の8家集について、調査を完了した。最初の6家集については、蘆庵手沢本と新日吉神宮本との関連を、龍谷大学本や水口図書館本等をも加えて、解明した(19年度中に論文化の予定)。加えて、蘆庵「写本家集」と入江昌喜所蔵本との関連では、『散木棄歌集』を調査し、昌喜旧蔵本(勝海舟旧蔵本)と国文学研究資料館蔵蘆庵本の本文の比較検討から、昌喜旧蔵本をもとにして資料館本が書写されていることが判明した。また、関西大学図書館本と水口図書館本の調査から、蘆庵本の2種類の奥書は、資料館本が最初に書写されたものであり、関西大学・水口図書館本は、更に蘆庵によって校訂の手が加えられたものと考えられることが判明した(19年度中に論文化の予定)。先ず、研究の基盤となる小沢蘆庵手沢の紅梅文庫旧蔵62家集の内、今治市河野美術館蔵47家集中の残り11家集について、国文学研究資料館でコピーを入手した。その上で、当該美術館を訪問し、朱・青筆等による書き入れの確認を行い、17家集について作業を完了した。また、14家集を所蔵する東海大学附属中央図書館を訪問し、残る7家集中の6家集について、本文を書写した(写真撮影不可のため)。また、国文学資料館蔵本と京都大学大学院蔵本を調査するとともに、甲賀市立水口図書館蔵21冊の残り10冊について、マイクロ撮影を行い、紙焼き写真を入手した。これらの調査をもとにして、「写本家集」の基礎データとしては、現存伝本間の親疎を把握するのに有益なものを優先して、千里・相如・伊勢大輔・小馬命婦・道成・広言・忠度・二条院讃岐の8家集について、調査を基本的に完了した(一部伝本について、朱墨等の区別が未確認)。以上の調査結果と前年度のそれとから、新日吉神社蔵芦庵文庫6家集は、庵自筆奥書本とは認めがたいものの、本文的には最も誤写が少ない善本であり、これに次ぐのが臨模本である紅梅文庫旧蔵本(河野美術館本と東海大学本)であり、更に、龍谷大学写字台文庫本・京都大学本が位置付けられること。また、校訂本である水口図書館本は、本文的には最も遠い関係となることが判明した。また、蘆庵「写本家集」と入江昌喜所蔵本との関連では、昌喜旧蔵本『忠度集』『二条院讃岐集』の2家集が関西大学図書館岩崎美隆文庫に所蔵されていることを知り、調査した。その結果、『忠度集』については、蘆庵本とかなりの異同が見られ、昌喜本が全て蘆庵本の親本となったのではないことが判明した。尚、蘆庵本『散木棄歌集』に2種類の奥書がみられるのは、国文学資料館本が最初の伝本であり、関西大学本や架蔵本はその誤りを校訂したものであることを、論文として執筆した。先ず、研究の基盤となる紅梅文庫旧蔵62家集の朱・青筆による書き入れ調査について、今治市河野美術館所蔵47家集の未調査11家集について実施し、完了した。また、東海大学附属中央図書館所蔵14家集の未調査1家集についても実施し、完了した。(個人所蔵の「国基集」は未調査)

また、朱・青筆による書き入れ調査は、龍谷大学写字台文庫本・京都大学文学研究科図書館本(尾崎宍夫旧蔵本)・東京大学本居文庫本(本居大平旧蔵本)・川越市立図書館本(清水浜臣旧蔵本)・天理図書館本(横山由清旧蔵本)について実施し、天理本の一部を除いて完了した。以上の調査に基づいて、本文異同を確認した結果、「実頼集」を例に取れば、臨模本5本の親疎関係は、河野本・写字台本・京都大学本と国文学研究資料館本・本居本の2グループに大別することができ、校訂本である川越本の本文は、本居本に近いことが判明した。但、天理本は、本文及び書き入れの有無から非蘆庵本であることが判明した。(由清は、井上文雄や山川正扮等の所蔵家集を書写しており、蘆庵本を一括して入手することはできなかったようである)蘆庵本と大平・浜臣・由清の国学者との関連については、「師氏集」(川越本・天理本は蘆庵本)「道長集」(川越本・天理本は非蘆庵本か)と併せて、詳細な分析の活字化を予定している。蘆庵本の基礎データ調査は、師輔・高明・恵慶・安法・実方・公任・匡衡・散木棄歌集(俊頼集)の8家集について、基本的に完了した。また、蘆庵「写本家集」と入江昌喜所蔵本との関連では、「散木棄歌集」について、国文学研究資料館本(蘆庵初稿本)と初雁文庫本を比較検討し、共通する伝本をもとにして書き入れがなされている実態を解明し、論文化した。ノートルダム清心女子大学本「忠盛集」についても、調査を完了した。
マウスの音声コミュニケーションにおける行動理解と自他比較

生物の求愛行動は、多様で、複雑で、魅力的なトピックである。このコミュニケーション行動の理解を目指し、本研究では、げっ歯類の音声コミュニケーションに着目して研究を進める。ネズミ目の一部の種は、求愛の段階に応じて発声を複雑に変化させる。この音声コミュニケーションの理解には、1聞き手がどのように音声を処理し、行動決定しているのか、2その聞き手の応答を発し手が読み取っているのか、という点が重要となってくる。本研究では上記二点を行動学、神経科学、進化学的側面から検討していき、複雑な音声コミュニケーションの成り立ちを解明する。
高等生物染色体の動態制御に必須な新規RNA干渉分子複合体の解析

本研究では独自に発見した線虫DRH-3タンパク質の分子機能解析を目指した。DRH-3と線虫RNA干渉因子とのタンパク質間相互作用解析から、新規タンパク質E1を同定することに成功した。これは、DRH-3が当該タンパク質と相互作用して機能することを強く示唆しており、今後、DRH-3タンパク質複合体の分子機能を解明する上で重要な手がかりになると考えられる。また一連の発現解析から、DRH-3が細胞内に局在し、生殖腺の形成に働くことが示唆された。近年、国内外で盛んに研究が進められているRNA干渉(RNAi)については未だその生理機能について不明な点が多い。研究代表者は、線虫の新規RNAi関連遺伝子drh-3が染色体安定化に関与することを独自に見いだした。今年度はDRH-3分子複合体の機能解明に関連する以下の研究項目を実施した。(1) DRH-3タンパク質を含む機能分子複合体の解明:研究計画に従い、免疫沈降法を利用してDRH-3タンパク質複合体の単離と分析を行うために必要とされるDRH-3抗体の調製を進めた。ウサギをDRH-3ペプチド(2種類)で免役し、抗DRH-3抗血清の作成を行った。今後、項目2に挙げたDRH-3タンパク質を用いてDRH-3固定化カラムを作成し、抗DRH-3抗体を精製し、免疫沈降実験や免疫染色解析を行う予定である。(2) DRH-3タンパク質の大量調製:抗体調製や生化学的解析に必要なnativeなDRH-3タンパク質を大量調製するため、大腸菌を利用したタグ融合DRH-3タンパク質の誘導発現系について検討した。通常の方法では不溶化してしまったが、様々な条件を検討した結果、コールドショック誘導によるタンパク質発現系を用いることで効率良くDRH-3タンパク質を可溶化できることを明らかにした。現在、DRH-3タンパク質の精製を進めており、さらにDRH-3の生化学的解析と抗体調製を行う予定である。(3) drh-3遺伝子の発現様式の解析:RT-PCR法とin situ hybridization法により、drh-3遺伝子の発現解析を行った結果、線虫の発生・成長過程に伴って発現量が上昇することを明らかにした。増殖阻害剤等を用いた実験から、drh-3遺伝子発現と卵巣形成との関連性が強く示唆された。以上の研究を継続することで、これまで不明であった高等生物のRNAiによる染色体動態制御機構の一端をタンパク質レベルで解明できると期待される。近年、国内外で盛んに研究が進められているRNA干渉(RNAi)については未だその分子機能について不明な点が多い。研究代表者は、線虫の新規RNAi関連遺伝子dth-3が染色体安定化に関与することを独自に見いだした。(1)DRH-3タンパク質を含む機能分子複合体の解明:DRH-3ペプチドで免役したウサギ血清から粗抽出した抗体画分についてウエスタンブロットで評価を行ったが、免疫沈降に用いる充分な特異性を確認できおらず、現在、DRH-3アフィニティカラムによる精製を試みている。並行して、線虫のRNAi関連タンパク質14種類についてcDNAクローニングを行い、酵母two-hybrid解析を進めた。これまでにRDE-2とMUT-7など複数のRNAi因子間の相互作用を同定できたことから、網羅的な相互作用解析に基づいて、RNAi機能複合体の構成因子を解明できることが示された。(2)DRH-3タンパク質の大量調製:抗体調製や生化学的解析に必要なnativeなDRH-3タンパク質を大量調製するため、前年度に確立したコールドショック誘導によるタンパク質発現系を用いて、可溶化DRH-3タンパク質をメタルアフィニティカラムで精製することに成功し、さらに複数種のカラムで精製を進めた。またDRH-3の3種類の変異タンパク質発現プラスミドを作成し、DRH-3の生化学的解析に向けた準備を完了した。今後、酵母two-hybrid法による網羅的な相互作用解析を進めることで、DRH-3を含めた線虫RNAi複合体構成因子を同定し、新たな構成因子の生化学的解析や相互作用ドメインの解明を目指す。本研究では、研究代表者が独自に発見したDRH-3タンパク質と相互作用する線虫タンパク質の同定や生化学的性状解析を通じて、新たな染色体安定化に関わるRNA干渉機構の解明を目指した。本年度の研究から得られた成果は以下の通りである。(1)線虫RNA干渉因子(22種)について、それらのcDNAクローニングを行い、酵母two-hybrid用コンストラクトを構築して、タンパク質間相互作用解析を行った結果、DRH-3と相互作用する新規タンパク質(E1)を初めて同定することに成功した。cDNAサイズが大きいため、完全長cDNAのクローニングができていなかった3遺伝子(dcr-1,rrf-3,ego-1)についても、RT-PCRにより欠失断片の増幅と完全長cDNAの構築に成功した。

(2)生化学的解析に必要なタグ融合DRH-3タンパク質の大腸菌発現系と精製条件を確立し、部分精製を行うとともに、予測機能ドメインに関する3種類の変異体タンパク質の発現コンストラクトを構築した。(3)DRH-3タンパク質の細胞内挙動を調べる目的で、培養細胞でのタンパク質発現解析を行い、GFP融合DRH-3タンパク質が細胞内の一部領域に局在することを初めて明らかにした。以上の知見は、DRH-3タンパク質がE1タンパク質と相互作用して機能すること、およびDRH-3が細胞内の限られたドメインで機能することを示唆しており、今後、DRH-3タンパク質の分子機能を解明する上で重要な手がかりになると考えられる。
動物細胞の細胞分裂機構に関する研究

細胞増殖のシグナル伝達機構:培養細胞の増殖刺戟に伴う高分子量微少管結合蛋白質(MAPs)のリン酸化と、リン酸化酵素(MAP-2キナーゼ)の活性化を証明し、そのキナーゼを同定することに成功した。このキナーゼはヒストーンやカゼインは基質とせず、MAP-2とミエリン塩基性蛋白質のみを特異的にリン酸化する新たなキナーゼである。また、ある種の培養細胞では微少管の脱重合が増殖のシグナルとなることを直接的に証明した。これらは、増殖シグナル伝達のリン酸化カスケードにMAP-2キナーゼがその一員として含まれることを強く示唆するとともに、シグナル伝達機構への微少管細胞骨格の関与を証明し、増殖シグナル伝達の解明に新たな視点を提起した。分裂装置の形成機構:中心体を構成する主要蛋白質-51-RD蛋白質-を同定し、その星状体形成能を明らかにした。等電点9.8の塩基性蛋白質でGTP結合能を有し、一種のG蛋白質であることが証明された。さらに、GTP結合型51-RD蛋白質とGDP結合型51-RD蛋白質の相互変換を証明し、GTP型51-RD蛋白質が微少管形成のシグナル蛋白質となることを明らかにした。これは、分裂装置の形成機構に全く新たな展開をもたらした。即ち、中心体の微少管形成能がGTP【double half arrows】GDP型51-RD蛋白質の変換によって支配されることを直接的に証明すること分裂シグナルの伝達機構:分裂シグナルの伝達に深く関わる輸送モーター(キネシン)の精製と酵素的性質を明らかにし、分裂収縮環の形成に伴い膜直下に集積する260K蛋白質を同定精製し、その作用を解析した。さらに、分裂装置から細胞表層に伝達される分裂シグナルが、細胞膜貫通糖蛋白質を微少管依存的に収縮環の前駆体構造として予定分裂面を細胞膜に集合させることを証明した。【◯!1】.分裂装置形成中心の構成蛋白とその機能:イ)分裂装置形成中心は中心子をとり囲む直径90nmの単位顆粒(微小管形成顆粒、MTOG、と命名)の集合体で、この顆粒から分裂装置の紡鍾体と星状体の骨格を形成する数千本の微小管が成長する。ロ)単離分裂装置から中心体を分離しチューブリンを添加すると中心体から微小管が伸び、人爲的に星状体を形成させることができる。ハ)中心体から更に分離したMTOGにチューブリンを添加すると、MTOGから微小管が放射状に成長して小星状体が形成される。ニ)MTOGは分子量51,000の蛋白を主に数種の蛋白成分からなる。この蛋白成分はMTOGに自己集合し、微小管形成能を保持する【◯!2】.染色体運動機構:有系分裂期のウニ卵から、DMSO/グリセロール/NP-40法を用いて分裂装置を単離し、invitroでの染色体の両極への移動のモデル系を更に開発した。その結果、臨界濃度前後のチューブリン、CAMP、ATPの存在下で、リン蛋白脱リン酸化酵素の阻害剤を添加すると、このモデル系による染色体運動の再現性が著るしく向上することが明らかになった。【◯!3】.分裂シグナルの解析:シグナルの表層への伝達前後に細胞表層を単離し、表層内の蛋白成分の検出を行ったところ、シグナル伝達完了後に細胞表層から失われる細胞骨格系蛋白が発見された。この蛋白の同定と解析が進行中である。【◯!4】細胞増殖の引き金

機構:EGF受容体、インスリン受容体、srcキナーゼを精製し、それらの基質蛋白質の検索を行った。イ)マイクロフィラメント関連蛋白では、細胞膜の裏打ち蛋白であるフォドリンが上記3種のチロシンキナーゼに共通して良い基質となる。ロ)微小管関連蛋白では、微小管結合蛋白、特にMAP2が増殖因子受容体の良い基質蛋白となるが、srcキナーゼではあまりリン酸化されない。ハ)EGF受容体とインスリン受容体はその基質特異性が類似し、srcキナーゼは異ることが判明した。1.増殖因子や血清による細胞増殖のシグナルは、in vitroのみならずin vivoでもMAPsのリン酸化を伴うことが証明された。2.シグナル伝達系に密接に関わるプロテインキナーゼCによってもMAPsがリン酸され機能変化を伴うことが示唆され、微小管結合蛋白のリン酸化による微小管脱重合が増殖シグナルの一要因である可能性が強く示唆されている。3.中心体の構成蛋白成分の一つ51K蛋白質を分離精製し、それがin vitroで星状体を形成させる主要な蛋白因子であることを証明した。関接蛍光抗体法により、51K蛋白はin vitroの星状体形成中心に存在するとともに、中心体に存在することが証明された。4.新たに分裂装置に局在する15K蛋白質が発見され、その抗体を用いた解析から、15K蛋白質は分裂装置の形成に必須なCa結合蛋白質であることを証明した。5.ダイニンのモノクローン抗体を用い、細胞質ダイニンが分裂装置の紡錘体、特に動原体に近い部分に主に局在することを明らかにした。6.脱リン酸化酵素阻害剤を用いた解析から、染色体運動系にリン酸化反応系が関与することが強く示唆された。7.分裂シグナル伝達に関わることが予想される輸送モーター"キネシン"の精製とその抗体の作成を行い、また培養細胞で微小管と挙動を共にするMAPを新たに発見した。このMAPは多くの組織や培養細胞に普遍的に存在し、細胞周期の各期で微小管と挙動を共にし、特に分裂期には分裂装置に密に局在することが明らかになった。したがって、微小管に沿った分裂シグナルの伝達とこの微小管結合蛋白質(190kDaMAPと命名)の関連が重要な研究課題として浮び上ってきた。8.細胞表層にのみ局在する分子量26万(260K蛋白)のアクチン結合蛋白を新たに発見し、そのアクチン束化作用を明らかにした。間接蛍光抗体法により、260K蛋白が分裂収縮環に存在することが証明された。1)細胞増殖の引金機構:種々の増殖因子による早い細胞応答として,(1)アクチン系細胞骨格の再配列による波状膜形成と細胞外液の細胞内への取込み,(2)高分子量微小管結合蛋白質を特異的基質とするプロティンキナーゼの一過的活性化,が証明された.(2)のキナーぜは今回新たに見出された酵素で,微量のCaイオンで活性が抑制される特有な性質をもつ.リン酸化された高分子量微小管結合蛋白は微小管から遊離し,結果として微小管が脱重合する.同じく微小管を脱重合させる分裂毒(コルヒチンなど)で培養細胞を処理すると,増殖因子なしに細胞はDNA合成を行い,分裂することが新たに発見された.従って,今回微小管細胞骨格系が増殖因子によるシグナルトランスダクションの初期過程で構造変化をおこすことが細胞増殖の開始に密接に関与するという概念が確立された.2)有系分裂の開始機構:微小管形成中である中心体を構成する蛋白, 51K蛋白,の同定と,その分裂装置形成における役割が明確にされた.特に51K蛋白の抗体を用いた分析結果から,
バセドウ病を発症した抗TSH受容体抗体遺伝子導入マウスによる病因解明と応用研究

バセドウ病は抗TSHレセプター抗体(TRAb)によって惹起される臓器特異的自己免疫疾患であるがその作用機序や産生機構についてはほとんど解明されていない。一方我々はバセドウ病患者のリンパ球からTRAb産生B細胞クローンを単離・解析してきた。今回,TRAbの作用機序,産生機構を内分泌学的・免疫学的に解明するために,TRAb遺伝子導入トランスジェニックマウスを作製した。刺激型TRAb産生B細胞クローンであるB6B7クローンのリンパ球ゲノム遺伝子から,プロモーター及びイントロンエンハンサーの領域を含むHeavy chainとLight chainを単離し,IgM型DNAコンストラクトを作製した。同DNAをC57BL/6Jマウスにマイクロインジェクションし,トランスジェニックマウスを作製した。サザンブロット法によって遺伝子導入を確認した5系統において,分泌型・膜型のヒトIgMの発現を確認した。12-16週齢のTG(n=74)とNTG(n=38)の血清中のfT4とTSHの濃度を測定では、fT4;TG2.1±0.63ng/dl(mean±SD), NTG1.2±0.30ng/dl : TSH;TG1.3±1.2ng/ml, NTG4.4±2.2ng/mlと有意な差がみられた(P<0.0001)。TGで,fT4とヒトIgM(相関係数(r)=0.507)の相関が見られ(p<0001), N=51(69%)にhyperthyroidismが認められた。^<9.9m>technetium pertechnetate甲状腺摂取率では、120分値(peak値);TG(n=3)16.4±3.14%, NTG(n=3)7.8±0.644%と有意な差が見られ(p<0.001), planer像でもuptakeの差が認められた。TGにおいて、末梢血、骨髄、脾臓のいづれにおいてもB細胞数の減少が認められ、自己寛容の成立が示唆された。また、lipopolysaccharide(LPS)投与によって同病の発症が引起され、環境因子の投与が示唆された。

12-16週齢のTG(n=74)とNTG(n=38)の血清中のfT4とTSHの濃度を測定では、fT4;TG2.1±0.63ng/dl(mean±SD),NTG1.2±0.30ng/dl : TSH;TG1.3±1:2ng/ml, NTG4.4±2.2ng/mlと有意な差がみられた(P<0.0001)。TGで,fT4とヒトIgM(相関係数(r)=0.507)の相関が見られ(P<0001),N=51(69%)にhyperthyroidismが認められた。^<99m>technetium pertechnetate甲状腺摂取率では、120分値(peak値);TG(n=3)16.4±3.14%, NTG(n=3)7.8±0.644%と有意な差が見られ(P<0.001), Planer像でもuptakeの差が認められた。TGにおいて、末梢血、骨髄、脾臓のいづれにおいてもB細胞数の減少が認められ、自己寛容の成立が示唆された。バセドウ病は抗TSHレセプター抗体(TRAb)によって惹起される臓器特異的自己免疫疾患であるがその作用機序や産生機構についてはほとんど解明されていない。一方我々はバセドウ病患者のリンパ球からTRAb産生B細胞クローンを単離・解析してきた。本研究では,TRAbの作用機序,産生機構を内分泌学的・免疫学的に解明するために,TRAb遺伝子導入トランスジェニックマウス(TG)を作製した。刺激型TRAb産生B細胞クローンであるB6B7クローンのリンパ球ゲノム遺伝子から,プロモーター及びイントロンエンハンサーの領域を含むHeavy chainとLight chainを単離し,IgM型DNAコンストラクトを作製した。同DNAをC57BL/6Jマウスにマイクロインジェクションし,TGを作製した。サザンブロット法によって遺伝子導入を確認した5系統において,分泌型・膜型のヒトIgMの発現を確認した。昨年度から本年度にかけてはこれらTGの内分泌学的機能解析を行った。すなわち、12-16週齢のTG(n=74)とNTG(n=38)の血清中のfT4とTSHの濃度を測定では、fT4;TG2.1±0.63ng/dl(mean±SD),NTG1.2±0.30ng/dl:TSH;TG1.3±1.2ng/ml,NTG4.4±2.2ng/mlと有意な差がみられた(P<0.0001)。TGで,fT4とヒトIgM(相関孫数(r)=0.507)の相関が見られ(P<0001),N=51(69%)にhyperthyroidismが認められた。^<99m>technetium pertechnetate甲状腺摂取率では、120分値(peak値);TG(n=3)16.4±3.14%,NTG(n=3)7.8±0.644%と有意な差が見られ(P<0.001),planer像でもuptakeの差が認められた。さらに、本年度はTGの免疫学的機能解析を行い、末梢血、骨髄、脾臓のいづれにおいてもB細胞数の減少が認められ、自己寛容の成立が示唆された。また、lipopolysaccharide(LPS)投与によって同病の発症が引起され、環境因子の摂与が示唆された。
環状デプシペプチド類の合成と固相合成法への応用

昨年度に引き続き強力な抗HIV活性を有する環状デプシペプチドであるパプアミド類の全合成研究を行った。構成成分のうち絶対立体化学が不明であった新規長鎖脂肪酸Dhtdaについては、これを含む分解産物について理論上存在する全8種類の異性体を合成した。さらにそのスペクトルデータを天然物由来のものと比較することによってDhtdaの絶対立体化学を2種類の候補にまで絞りこむことに成功した。環状デプシペプチドに対する側鎖アミノ酸の伸長においては構造異常アミノ酸であるジメチルグルタミンの縮合においてアミド基の脱水反応が問題となったが、縮合剤としてDEPBTを用いることで脱水反応を抑制し、きれいに目的とするカップリング体が得られることを見出した。この知見は側鎖にアミド基を有する難結合性アミノ酸の縮合においてアミド基を無保護のままカップリングするための一般法として広く応用可能となることが期待でき、意義深いと考えられる。このようにして合成したペプチド部分と先に述べたDhtda部分とのカップリングを経て、(2S,3R,8S)-Dhtdaに由来するパプアミドBの全合成を達成した。これによりパプアミドBへの合成ルートが確立されたので、今回合成した(2S,3R,8S)-Dhtdaに由来するパプアミドBのスペクトルデータの更なる詳細な解析や他の立体化学を有するDhtda由来のパプアミドBの合成を通じてDhtdaの絶対立体化学の最終的な決定が可能になると考えられる。また今回の全合成達成がパプアミド類の各種類縁体合成への足がかりとなり、構造活性相関の解明、さらにはより強力な活性を有するアナログの創出にもつながることが期待される。ハリペプチン類は海綿由来の強力な抗炎症活性を有する環状デプシペプチドである。これまでに抗炎症活性を有する環状デプシペプチド類の例は数少ないことから、本化合物は従来にない新しいタイプの抗炎症薬へのリード化合物として、また生体内での炎症の発生メカニズムを解明するための分子プローブとして大きな可能性を秘めているといえる。また、本化合物中にはN-メチル-5-ヒドロキシイソロイシンといった構造異常アミノ酸残基や多置換の新規脂肪酸が含まれており、有機合成化学的にも興味深い構造を有している。これらのことからハリペプチン類を化学的に合成し、構造活性相関を調べることは大変意義深いと考え、本化合物の全合成研究を行なった。今年度までにハリペプチンAの不斉全合成を達成した。ハリペプチンAの構成成分の合成には、キラルボラン試薬を用いた不斉アルドール反応、プロリンを触媒とした酸化反応、およびキラル双環状ラクタムを利用した立体選択的なマイケル反応を鍵反応として用いた。また、環状部分の構築に際しては、シアン化銀を用いたラセミ化を伴わないエステル化反応、縮合剤BMTB、酸塩化物法を利用し、最後の閉環は縮合剤HATUを用いて行なった。さらに本合成研究の過程においてハリペプチンAに含まれるチアゾリン環に隣接するメチル基の立体化学が、離れた位置で行われる閉環反応の反応性に影響を与えるという興味深い知見を見出した。今回の全合成達成がハリペプチンAの各種類縁体合成への足がかりとなり、構造活性相関の解明、さらにはより強力な活性をもつアナログの創出につながることが期待される。昨年度に引き続き、強力な抗炎症活性を有する環状デプシペプチドであるハリペプチン類の全合成研究を行った。昨年度までにハリペプチンAの全合成は完了したが、その際合成上の問題点として側鎖脂肪酸の水酸基に対するアラニンの導入が残っていた。この部分は非常に立体障害が大きい場所であり、通常の縮合剤を用いた条件ではアラニンのエピメリ化が問題となった。当初はシアン化銀存在下における酸塩化物法を適用することによってアラニンのエピメリ化は回避できたものの、その収率には依然として問題を残していた。そこで立体障害の小さな1級水酸基にアラニンを導入しておき、これを縮合剤EDCI存在下トリフルオロ酢酸で処理することによって、より立体障害が大きな2級の水酸基へと高収率かつエピメリ化を伴うことなく転位させることに成功した。この方法は本系のみならず、立体障害が大きい水酸基を有する1,3-ジオールへの新規エステル化反応として応用されることが期待でき、非常に意義深いと考えられる。さらにこの方法を適用することによって、ハリペプチン類縁体のひとつであるハリペプチンCの全合成も達成した。今後は残る類縁体の合成も完了することでハリペプチン類が有する抗炎症活性に関する構造活性相関の解明や、さらに強力な活性を有するアナログの創出が期待される。パプアミド類はハリペプチン類よりも複雑な構造を有する環状デプシペプチドで、強力な抗HIV作用などの興味深い生物活性を有している。今年度までにパプアミド類の構成成分であり、その相対および立体化学が不明である新規長鎖脂肪酸Dhtdaについて理論上存在する全8種類の異性体の合成を完了した。今後はすでに合成が完了している環状デプシペプチド部分と側鎖アミノ酸、および今回合成したDhtda部分とのカップリングを経て、パプアミドBの全合成を達成するとともにDhtdaの立体化学を決定する予定である。

環状デプシペプチドに対する側鎖アミノ酸の伸長においては構造異常アミノ酸であるジメチルグルタミンの縮合においてアミド基の脱水反応が問題となったが、縮合剤としてDEPBTを用いることで脱水反応を抑制し、きれいに目的とするカップリング体が得られることを見出した。この知見は側鎖にアミド基を有する難結合性アミノ酸の縮合においてアミド基を無保護のままカップリングするための一般法として広く応用可能となることが期待でき、意義深いと考えられる。このようにして合成したペプチド部分と先に述べたDhtda部分とのカップリングを経て、(2S,3R,8S)-Dhtdaに由来するパプアミドBの全合成を達成した。これによりパプアミドBへの合成ルートが確立されたので、今回合成した(2S,3R,8S)-Dhtdaに由来するパプアミドBのスペクトルデータの更なる詳細な解析や他の立体化学を有するDhtda由来のパプアミドBの合成を通じてDhtdaの絶対立体化学の最終的な決定が可能になると考えられる。また今回の全合成達成がパプアミド類の各種類縁体合成への足がかりとなり、構造活性相関の解明、さらにはより強力な活性を有するアナログの創出にもつながることが期待される。
自閉症に対するビタミンB6投与の有効性評価:ランダム化比較試験

自閉症におけるビタミンB6反応性を予測する徴候・バイオマーカーを明らかにするため介入試験を実施した。17名の患者が研究に参加し、介入前後に神経学的検査、血液検査を受け、体重1kgあたりビタミンB6 5mgを2週間、10mgを2週間、計4週間服用した。その結果、17名中3名が有効群と判定された。有効群と無効群を比較すると、「音への過敏」と「不器用さ」を同時に有していること、または「血中グルタミン濃度が低値」であることがビタミンB6反応性を予測することが明らかとなった。自閉症と診断されるこどもたちのうち、ビタミンB6反応性を予測する徴候・バイオマーカーを明らかにし、より精度の高いビタミンB6反応性予測因子を解明するため、宮城県の「かくたこども&アレルギークリニック」、「宮城県立精神医療センター」、東京都の「国立精神・神経センター病院」、「NTT東日本関東病院」、「フジモト新宿クリニック」、「表参道クリニック」、「心身障害児総合医療療育センター」、大阪府の「安原こどもクリニック」との研究協力体制を構築し、必要な倫理審査を受け、研究プロトコールの承認を得た。適格基準を満たした5名の患者およびその親権者から研究参加の同意を得、患者は体重あたりビタミンB6 5mgを2週間、10mgを2週間、計4週間服用した。患者の平均年齢は8.4歳で、男が4名、女が1名であった。ClinicalGlobal ImpressionのGlobal Improvementの評価では、「非常に改善された」が1名、「かなり改善されたわずかに改善された」が2名、「変化なし」が2名であった。改善のみられた3名と変化なしとされた2名を比較すると、広汎性発達障害日本自閉症協会評定尺度、異常行動チェックリスト、S-M社会生活能力検査などの神経学的検査の各得点に大きな違いはみられず、血中セロトニン値、血中ドーパミン値にも大きな違いはみられなかった。一方、血中アドレナリン値(基準値100pg/mL以下:A値)、血中ノルアドレナリン値(基準値100-450pg/mL:N値)には大きな違いがみられた。変化なしとされた2名のA値、N値の平均はそれぞれ、36、310であり、改善のみられた3名のそれはそれぞれ、71、428で、A値、N値とビタミンB6反応性との関連が示唆された。自閉症におけるビタミンB6反応性を予測する徴候・バイオマーカーを明らかにするため、適格基準を満たした12名の患者およびその親権者から研究参加の同意を得た。患者は体重1kgあたりビタミンB65mgを2週間、10mgを2週間、計4週間服用した。平成19年度の5名と合わせ、17名の患者の研究結果について統計解析を行った。患者の平均年齢は8.6歳で、男児が14名、女児が3名であった。ClinicalGlobal ImpressionのGlobal Improvementの評価および広汎性発達障害日本自閉症協会評定尺度、異常行動チェックリスト、S-M社会生活能力検査などの神経学的検査の各得点の変化から、4名が「非常に改善された」(有効群)、13名が「わずかに改善された変化なし」(無効群)と判定された。有効群4名と無効群13名との間で、臨床観察による徴候の違いを比較したところ、音への過敏を有する者の割合に大きな違いがみられた。有効群4名のうち3名に音への過敏がみられ、無効群13名のうち、音への過敏がみられたのは4名であった(p=0.002,Fisherの直接確率計算法)。その他の臨床観察による徴候には、有効群と無効群間で統計学的に有意な違いはみられなかった。現時点でアミノ酸分析結果を含めたすべての血液検査結果が得られているのは17名中8名で、このうち4名が有効群、4名が無効群であった。血中のセロトニン値、ドパミン値、アドレナリン値、ノルアドレナリン値には大きな違いはみられなかった。一方、血中アミノ酸値のうちグルタミン値(基準値420-700nmol/mL : Gln値)には大きな違いがみられた。有効群4名のGln値のビタミンB6服用前の平均値は397.2、無効群のそれは462.5で、これらは統計学的に有意な差であった(p=0.01)。また、有効群4名のGln値の平均はビタミンB6服用前後で397.2から474.0へと変化し(p=0.04)、無効群では462.5から483.9への変化であった(P=0.55)。以上から、音への過敏および血中グルタミン値の低値がビタミンB6反応性と関連する可能性が示唆された。研究に参加した20名の患者データを統計解析に供した。

患者の平均年齢は8.7歳で、男児が16名、女児が4名であった。ClinicalGlobal ImpressionのGlobal Improvementの評価によって、3名が「非常に改善された」(有効群)、17名が「わずかに改善された変化なし」(無効群)と判定された。有効群3名と無効群17名との間で臨床観察による徴候の違いを比較すると、「音への過敏」並びに「統合運動障害(不器用さ)」を有する者の割合に違いがみられた。音への過敏においては、有効群3名のうち3名に同所見がみられ、無効群17名のうち同所見がみられたのは7名であった(p=0.11,Fisherの正確検定)。統合運動障害においては、有効群3名のうち3名に同所見がみられ、無効群17名のうち同所見がみられたのは6名であった(p=0.07,Fisherの正確検定)。以上の結果から、音への過敏と統合運動障害を同時に有する者の割合を比較したところ、有効群3名のうち3名に同所見がみられ、無効群17名のうち同所見がみられたのは1名で、統計学的に有意な違いがみられた(p=0.004,Fisherの正確検定)。昨年度までの予備解析によって、バイオマーカーとして血中アミノ酸濃度が有望であった。20名中17名から血液検査データが得られ、これを解析に供した。ビタミンB6有効群と無効群との間で血中アミノ酸濃度のうちグルタミン値(基準値420-700nmol/mL:Gln値)に大きな違いがみられた。有効群3名のビタミンB6服用前のGln値の平均値は400.5(標準偏差20.6)、無効群のそれは481.4(標準偏差39.0)で、これらは統計学的に有意な差であった(p=0.004)。また、有効群3名のGln値の平均はビタミンB6服用前後で400.5から486.8へと変化し(p=0.09)、無効群では481.4から473.3へと変化した(P=0.62)。これら変化の差の検定を行ったところ、両者は統計学的に有意であった(p=0.02)。以上から、「音への過敏」並びに「統合運動障害」を同時に有すること、または血中グルタミン濃度の低値がビタミンB6反応性と関連する可能性が示唆された。
低出生体重児出生予防のための妊娠期パーソナライズドアプリケーションの開発と検証

本研究は、研究代表者が一貫して実施してきた我が国の低出生体重児に関する包括的研究(平成24ー25若手B平成26ー28若手B)の知見を基に、妊娠中の女性を対象とした適切な体重増加と食事摂取に関するパッケージを作成し、モバイルアプリケーションを用いた介入を実施することを目的としている。現在、アプリケーションの開発に向けたプログラムをアプリケーション開発業者と議論を重ねながら開発中である。具体的には、データ解析、データベース基盤構築・アプリコンテンツ開発を実施し、アプリケーションに盛り込むプログラム作成に取り組んでいる。本研究の進捗が遅れている理由として、大きく3点あげられる。1点目は、アプリケーション開発のための基盤となる研究の論文の投稿に時間を要している。2点目は、アプリケーション開発業者の選定に時間を要したためである。3点目は、研究代表者である大田えりかが産前休暇・育児休暇に入ったためである。今後はデータ解析、データベース基盤構築・アプリコンテンツ開発を実施する。成育のエコチルバースコホートをSPSSを用いて解析し、妊娠中の適切な体重増加量を予測するモデルを作成する。そして、アプリケーションに盛り込むプログラム作成を進め、アプリケーションを開発する。その後、ランダム化比較試験によって、開発した個別介入プログラムのアプリケーションの有効性を検証する。本研究は、研究代表者が一貫して実施きた我が国の低出生体重児に関する包括的研究(平成24ー25若手B平成26ー28若手B)の知見を基に、妊娠中の女性を対象とした適切な体重増加と食事摂取に関するパッケージを作成し、モバイルのアプリケーションを用いた介入を実施することを目的としている。現在、アプリケーションの開発に向けたプログラムをアプリケーション開発業者を選定し、議論を重ねながら開発中である。具体的には、エコチルコホートデータのデータ解析を行った。また、データベース基盤構築・アプリコンテンツ開発を実施し、アプリケーションに盛り込むプログラム作成に取り組んでいる。本研究の進捗が遅れている理由として、大きく3点挙げられる。3点目は、研究代表者である大田えりかが産休・育休に入ったためである。今後はデータ解析、データベース基盤構築・アプリコンテンツ開発を実施し、アプリケーションに盛り込むプログラム作成を進め、アプリケーションを開発する。