hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高次収差解析による近視進行コアメカニズムの解明と新理論に基づく近視抑制CLの開発

球面収差に関してはレンズ前面を非球面にすることにより6mm領域での換算で0.3μm,コマ収差に関してはFCオフセットを行うことにより0.4μmの収差量を意図的に組み込んだ高次収差制御ソフトコンタクトレンズ(SCL)を作成した.これまでに得られた研究結果から,垂直コマが近視進行抑制に働くことが判明したため,コマ収差は垂直方向にデザインした.また様々な屈折状態の被験者に幅広く対応するために,近視度数の幅を-1-6Dまで0.25D刻みで取り揃えた.ボランティア8名にこの試作SCLを装用させ,視力およびコントラスト感度を測定したが,対照の単焦点SCLと遜色ないQOVが得られることを確認した.次にアコモドメーターHS-9G(Kowa)で調節力を測定したところ,試作レンズ装用下では調節力が増加することが確認できた.つまり,この特殊デザインSCLは調節の幅を広げることが判明した.そこで両眼開放レフ(WR-5100K,シギヤ)を用いて,近見時の調節反応量を測定したところ,対照の単焦点SCL装用下よりも平均で0.34Dの調節反応量が軽減することが確かめられた.AA-2(NIDEK)での調節微動評価においても特殊デザイン(高次収差制御)SCL装用下では対照SCLよりもHFCが低下することが確認できた.これらの結果の解釈としては,意図的に組み込まれた高次収差は,偽調節として働くため,見かけ上の調節幅(調節力)が増加し(焦点深度が拡大し),また近見時には少ない調節反応量でも近方視標に焦点が合うため調節負荷が軽減すると考えられた. AA-2による調節微動検査にてもHFCの低下として検出され,つまり調節負荷(眼精疲労)が減少するということが示唆された.以上の結果により,高次収差の増加が調節負荷の軽減を介して近視進行や眼軸長伸長に抑制的に働くというメカニズムの一部を証明することができた.近視学童から得た臨床データを蓄積し,詳細な解析を行ったところ,高次収差成分と眼軸長伸長の密接な相関が確認された.特に垂直コマ収差(C3-1)と球面収差(C40)に関して具体的な数値目標が定まったため,これらの収差量を意図的にソフトコンタクトレンズに組み込むためのデザイン作成を試行錯誤し,目標に合致したレンズの作成に漕ぎ着けた状態である.コマ収差はレンズ前面オフセットにより,球面収差は前面の非球面デザインを採用することにより目標をクリアした.今後,このレンズを健常ボランティアに装用してもらい,視機能や調節におよぼす影響を検討する予定である.多症例において視機能の確保と調節域の拡大効果や調節負荷(調節微動)軽減効果が認められた場合は,近視進行抑制効果を確認するための臨床試験へと移行するが,もし意図するような視機能の確保と調節への好影響が確認できない場合は,レンズデザインの変更を行う予定である.レンズデザインの最適化にはもう少し時間がかかる可能性があるが,現時点では予定よりも早く研究が進行しており.概ね順調と言える.また学童データも並行して集積を継続しているため,ある程度の数が集まったところで再解析を行う予定である.本研究結果は現在世界中で問題となっている近視人口および病的近視の急激な増加を抑制する可能性を大いに秘めているばかりでなく,そしてそれに伴う重篤な眼合併症の減少や医療経済への負荷の軽減も期待できることから極めて有用な研究であると言える.研究は至って順調であり,予想以上の新知見が得られたため特許申請の手続きを進めている状況である.今後の推進方策については当初の研究プラン通りに順を追って進めていく予定である.現時点で変更事項はない.また2年目に予定していた特殊ソフトコンタクトレンズ(高次収差コントロールSCL)の詳細なデザインの決定についても,組み込む収差成分,収差量,収差方向を決定し,試作レンズを作成した.これらの試作品を用いてプレリミナリーなデータを収集中であるが,試作レンズの度数が限られていたため,協力者が現れても度が合わないという事象が生じたため,近視度数の幅を-1-6Dまで0.25D刻みで取り揃え,再度データを収集している状況である.ある程度のデータが集まったところで有効性を判定し,期待される結果に近ければ,近視学童ボランティアを募り,実際に装用してもらい調節への影響や視機能への影響について詳細に検討する予定である.具体的なソフトコンタクトレンズのデザインも決まり,いよいよ臨床応用が近づいたことを実感している.本レンズの有用性が証明されれば実に画期的なことであり,現在世界中で問題となっている近視人口および病的近視の急激な増加を抑制するばかりでなく,そしてそれに伴う重篤な眼合併症の減少や医療経済への負荷の軽減も期待できることから極めて有用な研究であると言える.前年度に得られた結果に関しては特許申請を行った.また本年度に計画していた研究も順調に進んでいる.さらに着実に遂行していく予定である.現時点で大幅な変更事項はない.球面収差に関してはレンズ前面を非球面にすることにより6mm領域での換算で0.3μm,コマ収差に関してはFCオフセットを行うことにより0.4μmの収差量を意図的に組み込んだ高次収差制御ソフトコンタクトレンズ(SCL)を作成した.

これまでに得られた研究結果から,垂直コマが近視進行抑制に働くことが判明したため,コマ収差は垂直方向にデザインした.また様々な屈折状態の被験者に幅広く対応するために,近視度数の幅を-1-6Dまで0.25D刻みで取り揃えた.ボランティア8名にこの試作SCLを装用させ,視力およびコントラスト感度を測定したが,対照の単焦点SCLと遜色ないQOVが得られることを確認した.次にアコモドメーターHS-9G(Kowa)で調節力を測定したところ,試作レンズ装用下では調節力が増加することが確認できた.つまり,この特殊デザインSCLは調節の幅を広げることが判明した.そこで両眼開放レフ(WR-5100K,シギヤ)を用いて,近見時の調節反応量を測定したところ,対照の単焦点SCL装用下よりも平均で0.34Dの調節反応量が軽減することが確かめられた.AA-2(NIDEK)での調節微動評価においても特殊デザイン(高次収差制御)SCL装用下では対照SCLよりもHFCが低下することが確認できた.これらの結果の解釈としては,意図的に組み込まれた高次収差は,偽調節として働くため,見かけ上の調節幅(調節力)が増加し(焦点深度が拡大し),また近見時には少ない調節反応量でも近方視標に焦点が合うため調節負荷が軽減すると考えられた. AA-2による調節微動検査にてもHFCの低下として検出され,つまり調節負荷(眼精疲労)が減少するということが示唆された.以上の結果により,高次収差の増加が調節負荷の軽減を介して近視進行や眼軸長伸長に抑制的に働くというメカニズムの一部を証明することができた.上記に記したように,既に高次収差制御ソフトコンタクトレンズの試作品が出来上がっており当初の予定より早く進行していると言える.上記に記したように,高次収差制御ソフトコンタクトレンズの最終試作品が出来上り,さらに多くの症例に対応できるように近視度数のバリエーションを大幅に拡張した.これらを用いて最終年度の目標を達成できるように順を追って研究を進めていく予定である.現時点で直面している壁や新たな課題等はない.
有機ハロゲン化合物の生成と分解の物理化学

本研究の目的は、測定例が非常に少ないダイオキシン類の蒸気圧等の物理化学物性値を明らかにすることである。具体的には、低温における蒸気圧の精密測定および熱力学データの測定・計算である。また、蒸気圧測定法を応用して、ダイオキシン類の種々の化合物への吸着特性も測定した。開発したクヌッセンセル熱重量質量分析システムを用いて、ダイオキシン類の低温(293K500K)における蒸気圧を測定した。塩素系ダイオキシン類(PCDD/Fs)に関しては、DDも含め17種のPCDDs異性体、DFも含めた5種のPCDFs異性体を測定し、クラウジウス-クラペイロンの式を用いて、蒸気圧と温度の関係より昇華のエンタルピーを導出した。また、臭素系ダイオキシン類であるOBDDの蒸気圧および数種の臭素系難燃剤の蒸気圧も測定した。各種酸化物および活性炭のダイオキシン類の吸着特性をクヌッセンセル法を応用して評価した。活性炭、Fe_2O_3、Ca(OH)_2、グラファイト粉末を、それぞれOCDD粉末と混ぜ合わせ、見かけの蒸気圧を測定した。その結果、活性炭の場合、見かけの蒸気圧がほぼゼロとなった。得られた結果を、比表面積等で検討した。量子化学計算により、PCDD/Fsおよび臭素系ダイオキシン類(PBDD/Fs)の298Kから1500Kの熱力学データ(比熱、生成エンタルピーおよびエントロピー)を求め、データエース化した。DD、DF、OCDD、OCDFに関しては、DSCにより固体純物質の比熱、融点、融解エンタルピーを測定し、計算結果と整合させた。データベース化した熱力学データは、将来的に、廃棄物焼却炉における塩素系および臭素系ダイオキシン類の生成挙動に関する、熱力計算シミュレーションに用いる予定である。本研究の目的は、これまで殆ど測定例がないダイオキシン類の低温における蒸気圧の精密測定とダイオキシン類と種々の酸化物との反応速度、機構を明らかにすることである。初年度は、そのためにまったく新しいクヌッセンセル熱重量質量分析システムを開発した。開発したシステムはクヌッセンセル内の試料(ダイオキシン類)からの蒸発ガス量と蒸発速度を測定するための熱重量分析計(TG)と蒸発するガス種を四重極型質量分析計(Q-MS)にて同時にモニター分析するための各部から構成されており、室温1000°C(示差熱天秤TG(-DTA)の測定温度範囲)までの測定が行える。熱重量測定部の性能はTG測定レンジ:±0.1±250mg/FS、分解能:0.1μgで今回予定しているクヌッセンセル熱重量での質量変化を測定できる。クヌッセンセル熱重量法では、測定セル内の真空度が重要であるが、作製した装置の真空度は0.1Paであり、これもあらかじめこれまで計算により推定されているダイオキシン類の蒸気圧から算出した必要真空度に達している。質量分析部と熱重量測定部はシャッターで遮断されており、質量分析を行なう時のみシャッターを開き差動排気でガスを質量分析装置に導入するシステムとなっている。質量1000まで測定可能であり、もっとも質量数が大きいOCDDも測定可能である。さらに予定しているBr化ダイオキシンも低Br化ダイオキシンについては測定が可能である。本年度完成したこの装置を用い、来年度予定どおり、ダイキシン類の低温における蒸気圧を測定し、そのデータをもとに分子軌道法の計算を行い、ダイオキシン類の熱力学諸量を決定する。本研究の目的は、測定例が非常に少ないダイオキシン類の低温における蒸気圧の精密測定とダイオキシン類と種々の酸化物との反応速度、機構を明らかにすることである。

本年度は、初年度に開発したクヌッセンセル熱重量質量分析システムを用いて、ダイオキシン類の低温における蒸気圧を測定した。用いたクヌッセンセルはアルミニウム製で、セルの肉厚は0.1mm、内径は4.4mm、高さは4.6mmである。セル上蓋のオリフィスのサイズは0.05、0.10、0.15、0.20mmと4種類のものを用いた。まずはナフタレンの蒸気圧の測定を行い、信頼のおける文献値と比較することにより本研究の測定法の精度を確認した。その結果、開発したクヌッセンセル熱重量質量分析システムにより十分に精度良く蒸気圧が測定できることが確認された。ダイオキシン類に関しては、DD、DF、OCDDおよびOCDFについて21°Cから230°Cの間で蒸気圧を測定した。測定時に質量分析計にてダイオキシン類が分解しないことを確認した。本研究以外のダイオキシン類蒸気圧の系統的な研究はRordorf^<1)>によるもののみである。Rordorfは飽和ガス流法で測定しているが、ダイオキシン類のような難揮発性物質に対してはクヌッセンセル法の方が適している。DDおよびDFに関しては、室温ではRordorfの結果と良く一致していたが、温度の上昇とともに本測定値の方が若干低くなっていた。OCDDおよびOCDFに関しては、本測定値とRordorfの値は測定温度範囲が異なるものの温度変化に対してほぼ同一線上に乗っていた。クラウジウスークラペイロンの式を用いて、蒸気圧と温度の関係より昇華のエンタルピーを導出した。本研究の昇華のエンタルピーはRordorfの値より1020kJ/molほど低かった。来年度は、臭素系を含めた他のダイオキシン類異性体の蒸気圧測定および分子軌道法計算による熱力学諸量の決定、さらにダイオキシン類と種々の酸化物分解触媒との反応機構の調査を行う。本研究の目的は、測定例が非常に少ないダイオキシン類の低温における蒸気圧の精密測定および物理化学物性値のデータベース化、さらには、ダイオキシン類と種々の酸化物との吸着および反応機構を明らかにすることである。本年度は、昨年度に引き続き、初年度に開発したクヌッセンセル熱重量質量分析システムを用いて、ダイオキシン類の低温における蒸気圧を測定した。昨年度は、DD、DF、OCDDおよびOCDFについて293Kから500Kの間で蒸気圧を測定したが、今年度は、1-MCDD,2,3-DCDD,1,6-DCDD,2,7-DCDD,1,2,4-TrCDD,1,2,3-TrCDD,1,7,8-TrCDD,1,3,6,8-TeCDD,1,3,7,9-TeCDD,1,2,3,4-TeCDD,1,2,6,7-TeCDD,1,2,4,7,8-PeCDD,1,2,3,4,6,9-HxCDD,1,2,3,4,6,7,9HeCDDの蒸気圧を293Kから500Kの間で測定し、クラウジウスークラペイロンの式を用いて、蒸気圧と温度の関係より昇華のエンタルピーを導出した。また、臭素系ダイオキシン類であるOBDDの蒸気圧も測定した。量子化学計算により、臭素系ダイオキシン類(PBDD/Fs)および臭素化塩素化ダイオキシン類(PXDD/Fs)の生成自由エネルギーを求め、データベース化した。活性炭、Fe_2O_3、Ca(OH)_2およびグラファイトのダイオキシン類吸着特性をクヌッセンセル法を応用することにより測定した。
単離傍気管神経節細胞におけるセカンド・メッセンジャーを介する細胞応答の解析

1.傍気管神経節細胞の単離エーテル麻酔下に、1-2週齡のウイスターラットの胸部を開き、気管を摘出。その気管から傍気管神経節を切り離し、酵素処理を施行。それをピペッティングすることにより神経節細胞を単離した。2.イオン電流の記録(1)膜電位依存性イオン電流についての検討膜電位依存性イオン電流はconventional patch-clamp methodならびにnystain methodとも記録された。今回記録された膜電位依存性イオン電流の生理・薬理学的特性は以前報告されたものと同様であった。上記4物質により惹起されるイオン電流は、どちらの方法を用いても記録されなかった。膜電位依存性イオン電流に対して、上記4物質は影響を与えなかった。今後は、上記4物質以外の神経活性物質について検討する必要があると考えられた。1.傍気管神経節細胞の単離エーテル麻酔下に、1-2週齢のウイスターラットの胸部を開き、気管を摘出。2.イオン電流の記録以上の実験系を用いて以下の項目について検討を行った。(1)膜電位依存性イオン電流についての検討膜電位依存性イオン電流は,conventional patch-clop methodならびにnystatinmethodとも記録された。
崩災の規模・様式・発生頻度とそれにかかわる山体地下水の動態

研究を効率的に進めるため、大きくつぎの2班に分かれ、適宜会合を持ち討議、打合せを行って、研究内容のチェックあるいは整合を計った。(A班)町田,古谷,中村,奥西ー主として古文書記録,崩災の調査資料を整理する一方、地形解析を加えて著名崩災の全国的なカタログ作りを行なった。その数は200例を越えるが、本報告ではその大部分を添付資料として加えた。以上の外、代表例として十二湖(青森県),葉山(神奈川県),倉並(長野県)をとりあげ、現地調査を実施し課題の前半部分を追究した。つぎにB班の研究との関連性に重点を置いて、上記の資料に基づき、崩壊の発生機構とそれが拡大して、いわゆる大規模崩災と呼ばれるようなものに発展する過程を追究した。これについても代表的流域をとりあげ、その調査結果を検討材料に加えた。(B班)新藤,太田,沖村,北岡ー山地における大規模な土木工事によって得られた水理地質資料,湧水記録を整理し、山体地下水の特質を明らかにする一方、特定試験地を設定し、山体地下水の存在場の特質,山体地下水の動態を明らかとした。また崩災の素因としての山体の不安定ポテンシャルを水質特性のうえから類推することの可能性について検討した。上記の研究のために設定された試験地はつぎのとおりである。(1)第三紀丘陵地ー多摩丘陵(東京)(2)花崗岩山地(六甲)(3)花崗岩山地(三河)(4)火山性堆積岩地域(別府)、以上の各試験地において、貫入試験あるいはボーリングを実施し、上層構造を明らかにするとともに、これらを観測井として仕上げ、地下水位の変動特性を追った。また多数地点において地中水分の動き、また流出量を観測し、課題の後半部分を追究した。最終報告では上記A班,B班での成果を総合し、総括的結論を導いた。報告書は現在印刷中である。
新規卵白アレルゲンL-PGDSの高感度定量法の開発と低アレルゲン化

卵白アレルゲンであるLipocalin-type prostaglandin D synthase (L-PGDS)を定量するため、高感度な免疫複合体転移測定法(ICT EIA法)を開発した。組換え型L-PGDSを標準としたICT EIA法の検出感度は0.01 ng/mlであり、従来法の2,000倍高感度であった。卵白たんぱく質粗抽出液の測定では、阻害物質の存在が示唆され、複合体解析を行った結果、L-PGDSがオボアルブミンと結合していることが明らかになった。硫安沈殿により分画した卵白たんぱく質(0.66 μg/ml)をICT-EIA法に用いると、濃度依存的な蛍光強度の増加が観られた。免疫複合体転移酵素免疫測定法の開発には、抗lipocalin-type prostaglandin D synthase (L-PGDS)抗体のペプシン処理により、Fc部を切断し、Fab'を得る必要がある。過去に調製し、残っていたlipocalin-type prostaglandin D synthase (L-PGDS)に対する4種のモノクローナル抗体(5E, 3B, 2A, 12F)について、まず、予備的にペプシン処理を行った。その結果、2A, 12FはFab'が分解されてしまい、そのまま用いること困難であった。そこで、抗L-PGDS抗体(5E, 3B)の大量調製を行うこととした。各ハイブリドーマクローンを常法に従って、Balb/cマウスにそれぞれ投与し、腹水を得た。得られた腹水から抗L-PGDS抗体をアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。精製した抗L-PGDS抗体(5E, 3B)の特異性を確認するため、卵白タンパク質のSDS-PAGE/Western blot解析を行った。その結果、L-PGDSと特異的に反応することが確認された。抗L-PGDS抗体(5E, 3B)をそれぞれペプシン処理し、ウルトロゲルにてFab'を精製した。抗L-PGDS Fab' (5E)をガラクトシダーゼで標識し、抗L-PGDS Fab' (3B)については、DNP化、ビオチン化を行い、それぞれ抗L-PGDS Fab' (5E)-Gal,抗L-PGDS Fab' (3B)-DNP-Bioを得た。免疫複合体転移酵素免疫測定法には、L-PGDSの標準品が必要となる。今後、常に同じロットで検討を行うため、我々が既に構築していた組換え型鶏L-PGDS (rL-PGDS)発現系を用いて、glutathione-S-transferase (GST)との融合タンパク質として大腸菌にて大量発現させ、抽出した。これをアフィニテイーカラムによって精製し、融合タンパク質を特異的プロテアーゼにより切断してrL-PGDSを得た。当初の計画通り、抗体の大量調製を行い、高感度免疫測定法開発のために必要な2種の抗L-PGDS抗体をそれぞれガラクトシダーゼ標識、DNP化/ビオチン化を終えている。また、既に、高感度免疫測定法の検討に着手しており、予備的なデータも得られ、高感度化が期待される結果が得られている。現在、競合物質についての解析を進めている。ELISA法、ICT EIA法ともに卵白中の何らかの成分により反応阻害が観られた。硫安沈殿後に透析を行っても、その阻害は、やや軽減された程度であった。したがって、阻害物質は、たんぱく質である可能性が高いと考え、現在、native PAGE/SDS-PAGEの二次元電気泳動後に抗L-PGDS抗体を用いたウエスタンブロットを行って、L-PGDSと結合するたんぱく質の同定を進めている。昨年度までに卵白アレルゲンであるLipocalin-type prostaglandin D synthase(L-PGDS)に対するモノクローナル抗体(5E、3B)を用いて、ガラクトシダーゼで標識した抗L-PGDS Fab' (5E)-Gal、DNP化とビオチン化を行った抗L-PGDS Fab' (3B)-DNP-Bioを作製し、ICT EIA法の確立を行った。本法は、以前に開発したサンドイッチELISA法と比べて、感度が約2000倍となった。卵白中のL-PGDSの測定には、卵白たんぱく質粗抽出液および90%飽和硫安沈殿の画分を用いたが、濃度依存的な測定ができず、何らかの競合物質が存在していることが示唆された。そこで、本年は、鶏卵白中のL-PGDSの測定を阻害する物質を明らかにすることを目的に、鶏卵白中L-PGDSの複合体解析を行った。Blue native/SDS-PAGE後にウエスタンブロットを行った結果では、一部のL-PGDSが複合体を形成している可能性が考えられたが、SDS-PAGEのみの電気泳動を行う場合と比べて還元が不十分で、一部のL-PGDSが複合体を形成したまま分離されている可能性が考えられた。そこで、抗L-PGDS抗体を用いて免疫沈降を行った。4種の抗L-PGDSモノクローナル抗体(5E、3B、2A、12F)は、いずれも免疫沈降に用いることができることができ、L-PGDSの一部はオボアルブミンと結合することが明らかとなった。しかしながら、用いる抗体によって免疫沈降されるL-PGDSの量や、複合体組成に差異が観られた。

このことから、抗体のエピトープが異なることや、複合体を形成したL-PGDSのコンフォメーションが変化することが影響しているものと考えられ、L-PGDSの存在形態は複数あると考えられた。卵白アレルゲンであるLipocalin-type prostaglandin D synthase (L-PGDS)を定量するため、高感度な免疫複合体転移測定法(ICT EIA法)を開発した。組換え型L-PGDSを標準としたICT EIA法の検出感度は0.01 ng/mlであり、従来法の2,000倍高感度であった。卵白たんぱく質粗抽出液の測定では、阻害物質の存在が示唆され、複合体解析を行った結果、L-PGDSがオボアルブミンと結合していることが明らかになった。硫安沈殿により分画した卵白たんぱく質(0.66 μg/ml)をICT-EIA法に用いると、濃度依存的な蛍光強度の増加が観られた。免疫複合体転移酵素免疫測定法(高感度免疫測定法)の検討を引き続き行い、測定系の確立を行う。従来法との比較ならびに、本法における特異性の検討も行った後、実際に卵白、卵黄中のL-PGDSの測定を行う。この際、感度的には前処理等は必要ないと思われるが、卵白または卵黄中に抗原抗体反応を阻害する物質が含まれる等の理由により、上手く測定できない場合は、硫安沈殿等の前処理の検討を行う。その際の回収率については、先の組み換え型鶏L-PGDSを内部標準として添加し、求める。鶏卵は産卵直後のものが必要となるため、県の畜産試験場や養鶏場から購入する。鶏卵種による違いや、保存温度や保存期間による鶏卵中L-PGDS量および局在(濃厚卵白、水様卵白、胚盤、卵黄など)の変化を明らかにする。濃厚卵白と水様卵白は佐藤らが報告した方法(日畜会報, 29, 297-300.)によって分離する。濃厚卵白は鶏卵が古くなるにつれて水様卵白となることが知られていることから、保存期間と局在の検討は同時に行う。鶏卵種の検討で、L-PGDS含量の低いものと高いものとで鶏の系統や飼育状況等の関連性を明らかにし、L-PGDS含量の少ない鶏卵の開発へと繋げる。L-PGDSは、睡眠や痛みなどに関与し、脳や生殖器などに多く発現することが知られている。このため、飼育環境によってL-PGDS含量が異なることも考えられる。保存温度によって差が認められれば、また、鶏卵の局在によってL-PGDS量に明らかな差が認められれば、その部分を取り除く簡便な方法の検討を行い、残りの部分のみを使用した離乳食の検討も行う。現在、native PAGE/SDS-PAGEの二次元電気泳動後に抗L-PGDS抗体を用いたウエスタンブロットを行って、L-PGDSと結合するたんぱく質の同定を進めている。阻害物質がたんぱく質の場合は、等電点沈殿など、L-PGDSと当該たんぱく質の性質の違いを利用して、分離を試み、測定を行う。阻害物質がL-PGDSと結合するのではなく、抗体と結合する可能性も考えられるが、SDS-PAGE/ウエスタンブロットの結果から、変性条件下では、我々が作製したL-PGDSに対するモノクローナル抗体は、特異的に結合することが明らかとなっている。したがって、卵白たんぱく質を変性させた後に、透析を行い、その後、測定する方法等を考えている。阻害物質がたんぱく質でない場合も考えられるが、かつて、L-PGDSを精製した際の条件から、還元剤を用いるなど、阻害物質の影響を受けずに測定する方法について検討し、卵白たんぱく質のL-PGDSを測定するための、サンプルの前処理方法を確立する。
口腔癌患者末梢血中の循環ミトコンドリアＤＮＡモニタリングによる予後判定法の開発

さまざまな癌種において、末梢循環血液中の癌関連因子を検出することは困難であった。しかし、ヒト口腔癌細胞を用いたマウスの実験では、臓器や血液サンプルから大量のミトコンドリアDNA(mtDNA)を検出できた。そこで、本研究では、口腔癌患者に対する血中mtDNAを用い、ミトコンドリア全ループ領域を解析した。その結果、5領域で塩基置換による突然変異を同定した。口腔癌患者61例から術前、術後、術後4週で採取した末梢血中mtDNAをこの5領域について解析した。経過不良であった全ての患者は原発腫瘍に有意に異常mtDNAを有していた。以上の結果から、本検査法が癌の予後判定に有用であることが示唆された。原発巣切除断端陰性と診断されるも再発や転移に至る症例が存在する。現行の腫瘍マーカーでは早期の再発を予測できないため、近年、循環血液中癌由来遊離核酸(CNAs)の検出により微小転移を予測し予後診断に役立てる試みがある。しかし、CNAsは量に乏しく検出効率に限界がある。そのため、本研究では細胞内に核酸DNAの数百倍のコピー数があるミトコンドリアDNA(mtDNA)をターゲットとし、検出感度および特異性に優る高解像度融解曲線分析法(HRMA)を用いて検討し、簡便で正確な予後診断法の開発を目的とした。先行研究では、口腔癌患者の末梢循環血液中癌由来DNA(circulating tumor-related DNA: ctrDNA)を術前後で調べ、術前で52%にその存在を確認し、術後4週経過してもctrDNAが検出された4症例は全て予後不良であった。本研究では口腔癌患者の臨床サンプル(原発巣組織、術前および術後定期採取末梢血)を採取し、抽出・精製したDNAを元にmtDNAの変異を検出した。口腔癌細胞株5種類(HSC2, HSC4, Ca9-22, Sa3, H1)とヒト正常口腔粘膜上皮細胞(HNOKs)に関して、ヒトミトコンドリア全ループ領域の塩基配列解析を行い比較したところ、Dループ領域塩基c.68C>T、12S-rRNA領域塩基c.1107A>G、16S-rRNA塩基c.3190T>C、ND2領域塩基c.5108T>C、ND3領域塩基c.10398A>Gの全ての領域に塩基置換による変異を認めた。この5領域について、臨床検体によるqPCR-HRMA法を用いretrospective studyを行ったところ口腔癌の予後判定に有用であった。また5領域の中で、16S-rRNA領域が検査として最も有用であると考えられた。原発巣切除断端陰性と診断されながら再発や転移にいたる症例がある。現行の腫瘍マーカーは早期に再発を予測する事ができないため、近年循環血液中癌由来遊離核酸(CNAs)の検出により微小転移を予測し予後診断に役立てる試みがなされている。しかしCNAsは量的に少なく検出効率に限界がある。本研究では細胞内に核酸DNAの数百倍のコピー数があるミトコンドリアDNA(mtDNA)をターゲットとし、検出感度と特異性向上のために近年開発された高解像度融解曲線分析法(HRMA)を用いて検討を行い、簡便で正確な予後診断法の開発を目的とした。我々は、先行した研究において口腔癌患者の末梢循環血液中癌由来DNA(circulating tumor-related DNA:ctrDNA)を術前術後について調べ、術前では52%にその存在を確認し、術後4週間経過しても末梢循環血液中に癌由来DNAが検出された4症例は予後不良であった。本研究において口腔癌患者の臨床サンプル(原発巣組織、術前および術後定期採取末梢血)を採取し、抽出・精製したDNAをもとにヒトミトコンドリアDNAの変異の検出を行った。口腔癌細胞株5種類(HSC2,HSC4,Ca9-22,Sa3,H1)とヒト正常口腔粘膜上皮細胞(HNOKs)に関して、ヒトミトコンドリア全ループ領域の塩基配列解析を行い比較したところ、Dループ領域塩基c.68C>T、12S-rRNA領域塩基c.1107A>G、16S-rRNA塩基c.3190T>Cの3領域において塩基置換による変異が認められた。次年度は、前述した3領域以外の他領域における変異の検出を目指すこと、実際の臨床検体を用いてqPCR-HRMA法による変異mtDNA量について検量線を作成し、融解曲線パターンによる変異の検出を解析することにより、口腔癌の予後判定因子としての新規判定法の開発について検討する予定である。

今年度はおおむね計画通りに研究成果を上げており、ヒトミトコンドリア塩基配列における複数領域の塩基置換の同定を行った。次年度では、さらなる変異領域の同定を行うために現在準備中である。昨年度は細胞株における変異パターンの解析より3領域の変異を検出した。臨床研究において診断検査の有用性を検討する手法としてROC曲線(Receiver Operatorating Characteristic curve)がしばしば用いられる。今年度は口腔癌患者の臨床サンプルを用いたヒトミトコンドリア領域における塩基配列解析による変異量を測定し、その変異量からROC曲線を用いて変異領域ごとのカットオフ値を設定し、予後判定法の診断能としての有用性について評価する。該当なし。
労働市場におけるマッチング効率性の分析

サーチ理論に関する研究では、個別サーチ活動と投票による集団サーチ活動に違いがあるのかを経済実験から検証した。求人企業と求職者のマッチングの効率性に関する研究では、マイクロデータを使用したマッチング関数の推計とサーチ活動の期間と再就職後の勤務年数の関係を検証した。Kudoh and Sasaki(2011)の労働需要モデルがデータの説明力が高いかを日本の集計データを利用して確認した。ローテーションと配置転換が自動車工場の従業員の生産性に影響を与えたかを検証した。配置転換やローテーションによって新しいタスクを任されるが、OJTによって生産性は向上すると従業員は認識する。本研究の目的は、労働市場における求職者と求人企業のマッチング効率性を決定する要因を解明することである。具体的には、求職者と求人企業のマッチング効率性を賃金上昇率、新たな就職先での定着率、そして求職期間の指標に分け、各指標が相手と出会う過程(遭遇過程)と出会ったうえで雇用契約を受諾する過程(受諾過程)のうちどちらのマッチング過程の改善で効率性が向上するのかを検証する。今年度の成果は大きく分けて2つある。1つは、以前から継続していた経済実験のプロジェクトが完成し、国際査読誌(European Economic Review)に掲載されたことである。もう1つ継続している経済実験、そして新たに計画している経済実験のプロジェクトがある。2013年度引き続き経済実験の研究を進めるつもりである。2つ目は、求職者の個票データを使った求職期間の決める要因分析の成果である。<11.現在の達成度>(1)に記載しているように、求職者と求人企業の個別マッチング関数の推計した論文は国際査読誌(Japanese Economic Review)に掲載されることが決定した。その他の2つのプロジェクト、<11.現在の達成度>(5)、<12.今後の研究の推進方策など>(今後の推進方策)(1)は順調に進展している。加えて、中国労働者に関する研究、<11.現在の達成度>(6)はディスカッション・ペーパーとして発表した。詳細は、<11.現在の達成度><12.今後の研究の推進方策など>を参照。サーチ理論に関する研究では、個別サーチ活動と投票による集団サーチ活動に違いがあるのかを実際に被験者にプレーさせて検証する経済実験を実施した。この論文はEuropean Economic Reviewに掲載された。求人企業と求職者のマッチングの効率性に関する研究では、2本の論文を発刊した。1つ目は、マイクロデータを使用したマッチング関数の推計で、日本の労働市場におけるマッチング関数の形態を統計的に示した。この論文はJapanese Economic Reviewに掲載された。もう1つの研究は、サーチ活動の期間と再就職後の勤務年数の関係を検証した。時間を掛けて求職すればマッチした仕事に再就職できるはずなので勤務年数は長いと仮定した。結果は必ずしも仮定を支持するものではなかった。この論文は、Journal of the Japanese and International Economiesに掲載された。Kudoh and Sasaki(2011)の労働需要モデルが従来の労働供給モデルよりもデータの説明力が高いかを日本の集計データを利用して確認した。労働需要モデルでは、採用する際にサーチ・フリクションがある状態で、企業が最適な労働者数と労働時間を決定する。結果は、変数の標準偏差をデータと比較すると、労働者数や労働時間はデータに対する説明力が高かったが、反対に、失業率や求人率に関しては説明力が低かった。企業内の組織形成が生産性にどのように影響を与えるかを1企業に対するアンケート調査から検証した。ここでは特にローテーションと配置転換が自動車工場の従業員の生産性に影響を与えたかを検証した。この工場は需要ショックに対応するために従業員に対してマルチ・スキルを要求することがわかった。具体的には、求職者と求人企業のマッチング効率性を賃金上昇率、新たな就職先での定着率、そして求職期間の指標に分け、各指標が相手と出会う過程(遭遇過程)と出会ったうえで雇用契約を受諾する過程(受諾過程)のうちどちらのマッチング過程の改善で効率性が向上するのかを『職業安定業務統計』(厚生労働省)の集計データやアンケート調査を利用して検証する。今年度の研究実績は2つある。1つ目は、『職業安定業務統計』のデータを使用した個別のマッチング関数の推計を完成させたことである。ハローワークに登録している求人企業と求職者との間にあるフリクションの程度をデータから検証した。得られた結果から、求人や求職者の規模が大きくなるにつれ求人と求職者とのマッチング数は逓減に増加していることが分かった。

また、非自発的離職者も自発的離職者も雇用給付期間が長いほど再就職する確率が減少した。これは、サーチ理論から導かれた予想と整合的であることが確認できた。更に、給付日数が同じでも非自発的離職者の方が自発的離職者よりも再就職する確率が高かった。これは非自発的離職者と自発的離職者の就業に対する嗜好の違いを表していると解釈できる。2つ目は、若年層の就業形態の変化を探るために高卒の就業活動と就業形態を決定する要因を分析した。得られた結果から、社交性が現在の就業形態に大きな影響を与える要因であることがわかった。反対に、高校当時の成績は現在の就業形態の決定に影響を与えないことがわかった。また、高校卒業直後の初職が今後の就業形態の決定に重要であることもわかった。すなわち、高校卒業後すぐに正社員として働くと、それ以後も正社員として働く傾向がある。ただ、その初職効果は年齢を重ねるにつれ小さくなる。(1)個票データを利用した個別マッチング関数の推計:改訂版のJapanese Economic Reviewへの掲載が決定した。(2)集団サーチ・モデルの経済実験:改訂版のEuropean Economic Review2013年夏号への掲載が決定した。(3)日本の製造業(自動車産業)における職業訓練と生産性の関係:この研究では、ある自動車工場で働く従業員と彼らを管理する組長からアンケート調査し、OJT(on the job training)と個人の生産性の伸びとの関係を推計した。この研究は、Journal of the Japanese and International Economies2013年春号に掲載が決定した。(4)求職活動期間と再就職先の勤続年数の関係:求職者の個票データから、求職期間と再就職先の勤続年数との関係を検証した。求職期間が長いことは失業期間が長いことを意味するのでできれば短い方が良いという議論がある。しかし、時間を掛けて仕事を探すことは、自分に適した仕事をマッチングする確率が高くなる。それは再就職先での勤続年数が長くなることで有り、マッチングの効率性の向上を意味する。本研究では、求職期間が長いほど、再就職先でのマッチング効率性が高くなるのかを検証した。本研究結果はJournal of the Japanese and International Economiesに再投稿中である。(5)中国における都市に移住してきた労働者と都市生まれの労働者の職歴と賃金の推移を独自のアンケート調査を使用して比較した。都市に移住してきた労働者は都市生まれの労働者に比べて当初の賃金は低いが、転職を重ねるにつれその差が縮まることが分かった。IZA(Institute for Labor Study)のディスカッション
双曲型ナビエ・ストークス方程式に基づいた高レイノルズ数遷音速流解析の革新的高速化

近年提案された双曲型ナビエ・ストークス方程式に基づいた解析手法を、航空機の数値流体解析に適用する研究である。双曲型の手法を3次元に拡張し、非構造格子流体解析ソルバのFaSTARに組み込んだ。元々のナビエ・ストークス方程式は5本の方程式であるが、双曲型を採用すると、微分量の方程式が増えるため、20本の方程式になる。これを陰的に時間発展する場合、20×20の行列を扱う必要があり、計算コストが大きな課題になる。本研究では、ヤコビアン行列の計算を簡略化する方法を提案し、陰解法の計算コストを格段に下げ、従来手法よりも高速に計算できることを実証した。本研究では、双曲型ナビエ・ストークス方程式に基づいた解析手法を、航空機の数値流体解析(CFD: Computational Fluid Dynamics)に適用する研究である。従来のCFDの常識を覆すような、精度と速度が期待されているが、1次元、2次元における検証にとどまっており、実用的な検証がされていない。研究代表者がこれまで開発してきたFaSTARに本手法を導入し、高い精度を維持しつつ、高速に計算できることを実証する計画となっている。今年度は、1次元、2次元の移流拡散方程式に対して、双曲型で定式化し、Method of Manufactured Solutions (MMS)を用いて検証解析を行った。収束性、精度、レイノルズ数依存性などを調査し、この手法が有効であることを確認した。その次に、1次元、2次元、3次元の双曲型Navier-Stokes方程式に取り組んだ。この方程式を解くためには、流束のヤコビアン行列とその固有値、固有ベクトルを導出する必要がある。1次元、2次元に対しては、既報のものと一致するものが得られた。しかし、3次元に対しては、報告例がなく、式が煩雑なため、現在も導出中である。1次元、2次元の問題に対しては、予定通り実施することができた。しかし、3次元に関しては、流束のヤコビアン行列とその固有値、固有ベクトルの導出が煩雑で、計画よりも遅れている。一方で、双曲型コードのベースとなるFaSTARの完成度は高く、乱流の基礎的なベンチマーク問題を解いて、世界の代表的なCFDコードと同じ結果が得られている。総合的に考え、やや遅れていると評価した。本研究では,双曲型ナビエ・ストークス方程式に基づいた解析手法を,航空機の数値流体解析(CFD: Computational Fluid Dynamics)に適用する研究である.従来のCFDの常識を覆すような精度と速度が期待されているが,1次元や2次元における検証にとどまっており,実用的な検証がされていない.研究代表者がこれまで開発してきたFaSTARに本手法を導入し,高い精度を維持しつつ,高速に計算できることを実証する計画となっている.今年度は,昨年度に引き続き,1次元,2次元の移流拡散方程式に対して,双曲型で定式化し,Method of Manufactured Solutions (MMS)を用いて検証解析を行った.従来の差分式と比較して,極めて高速に収束することが確認できた.しかし,レイノルズ数の依存性があることが明らかとなり,今後はその問題にも取り組む予定である.また,格子を増やした場合に,従来の手法では計算時間が格子数の2乗に比例して大きくなるのに対して,双曲型では1乗に比例することが確認できた.大規模な格子に対して本手法が有効であることがわかった.また,世界的にもあまり検討されていない陰解法に関する調査を行い,ヤコビアンを近似して陰解法のLU-SGSを使用することで,大幅に計算コストを削減できることを示した.本成果は,第30回数値流体力学シンポジウムで発表した.また,国際学会のSciTech2017で本研究に関する情報交換をした.1次元,2次元の問題に関しては,世界でもほとんど調べられていない陰解法に関する研究を行い,それを学会発表することができた.ただし,3次元の問題には,まだ取り組めていないことから,やや遅れていると判断した.本研究では、双曲型ナビエ・ストークス方程式に基づいた解析手法を、航空機の数値流体解析(CFD: Computational Fluid Dynamics)に適用する研究である。従来のCFDの常識を覆すような精度と速度が期待されているが、1次元や2次元における検証にとどまっており、実用的な検証がされていない。これまでに、1次元及び2次元の移流拡散方程式に対して、双曲型で定式化し、Method of Manufactured Solutions(MMS)を用いて検証解析を行った。従来の差分式と比較して、極めて高速に収束することが確認できた。また、格子を増やした場合に、従来の手法では計算時間が格子数の2乗に比例して大きくなるのに対して、双曲型では1乗に比例することが確認できた。これは大規模な格子に対して本手法が有効であることを示している。最終年度では、双曲型の手法を3次元に拡張し、非構造格子ソルバのFaSTARに組み込んだ。3次元の問題では、元々のNavier-Stokes方程式は5本の方程式であるが、双曲型を採用すると、微分量の変数が増えるため、20本の方程式になる。さらに、これを陰的に時間発展する場合、20×20の行列を扱う必要があり、計算コストが大きな課題になる。

本研究では、双曲型に対し、計算コストの低いLU-SGS法を組み合わせる手法を提案し、ヤコビアン行列の計算を簡略化することで、陰解法の計算コストを格段に下げ、従来手法よりも高速に計算できることを実証した。この成果を2018年のAIAA SciTechで発表するとともに、AIAA Journalに論文投稿した。近年提案された双曲型ナビエ・ストークス方程式に基づいた解析手法を、航空機の数値流体解析に適用する研究である。双曲型の手法を3次元に拡張し、非構造格子流体解析ソルバのFaSTARに組み込んだ。元々のナビエ・ストークス方程式は5本の方程式であるが、双曲型を採用すると、微分量の方程式が増えるため、20本の方程式になる。これを陰的に時間発展する場合、20×20の行列を扱う必要があり、計算コストが大きな課題になる。本研究では、ヤコビアン行列の計算を簡略化する方法を提案し、陰解法の計算コストを格段に下げ、従来手法よりも高速に計算できることを実証した。1月に米国で開催された国際学会SciTech2016で、世界で初めて、双曲型ナビエ・ストークス方程式を用いた3次元計算が発表された。その論文には、当初予定していた式とは若干異なるが、流束のヤコビアン行列とその固有値、固有ベクトルが詳細に掲載されている。28年度は、この定式化も含めて検討する。3次元の非粘性流束、粘性流束の風上差分式を導出し、ヤコビアン行列を導出してGauss-Seidelを用いた陰解法を構築する。基礎的な流平板境界層、NACA0012翼の層流計算などで検証する。従来手法に比べて収束性が向上することを実証する予定である。また、ある程度、結果がまとまった段階で、学会発表や研究協力者との打ち合わせを予定している。1次元や2次元の問題に関して,成果をまとめ学会発表および論文投稿する.また,3次元の問題にも取り組む予定である.数値流体力学次年度以降の研究費に充てるため、ワークステーションのスペックを当初予定よりも、安いものに変更した。また、研究の遅れから、海外の研究者との打ち合わせを、来年度に繰り越した。研究の遅れから,研究費を来年度に繰り越した.次年度以降の、海外の研究者との打ち合わせや、国際学会の旅費に使用する。パラメータを変えて計算するための計算機や,学会等の旅費に使用する.
コンプロマイズド宿主における尿路感染局所の免疫応答と、BRMによるその修飾の研究

3年間の研究実績を概説する。大腸菌または緑膿菌を経尿道的にマウスに膀胱注入することにより実験的上行性腎盂腎炎を発症させ、経時的に感染局所の感染免疫応答を検討した。正常免疫能宿主の局所感染粘膜免疫応答としては、非感染時より少数の抗原提示能を有するIa陽性細胞が存在し、感染と同時に局所で増加し、続いて感染早期の6時間目にはマクロファージ、好中球、T細胞(CD4,CD8,γ/δ型)が浸潤し、少し遅れてIgA陽性B細胞が浸潤することが判明した。これは従来考えられていたより早期にT細胞が感染局所に浸潤し、急性感染の防御に直ちに関わっていることが判明した。一方、コンプロマイズド宿主としての好中球遊走能障害宿主では好中球のかわりにマクロファージ、CD4陽性T細胞、IgG陽性B細胞の浸潤が増加し、またT細胞障害宿主ではT細胞とB細胞浸潤は激減し、好中球が顕著に浸潤した。また好中球とT細胞機能が障害された糖尿病宿主では好中球とマクロファージの浸潤が顕著であった。このようにコンプロマイズド宿主では障害細胞を他の免疫関連細胞が補足するような免疫応答であった。次に宿主側に対する治療目的でT細胞障害宿主に対し、IL-2,IFN-γ,TNF-αを投与したところ、TNF-αはそれ程効果は認められなかったものの、IL-2とIFN-γはT細胞の機能を回復させた。しかし、糖尿病宿主に対し、治療目的でIL-2,TNF-α,G-CSFを投与しても明らかな免疫応答の回復は認められなかった。そこで免疫関連細胞の局所浸潤を調節していると考えられる炎症性サイトカインmRNAと接着分子であるICAM-1の細胞浸潤との関連を検討したところ、各種免疫関連細胞の浸潤は経時的にこれらに調節されていることが考えられた。正常免疫能マウスの実験的腎盂腎炎局所の感染免疫応答を昨年の調書に報告した方法で検討した。非感染時からIa陽性細胞、マクロファージ、T細胞が若干数局所リンパ組織として存在していた。そして、感染後は大腸菌と緑膿菌では菌種によりほとんど差はなく、6時間の早期からIa陽性細胞、マクロファージ、好中球、ヘルパー、キラーおよびγδT細胞が有意に浸潤し、少し遅れて1日目以降にIgA、IgM陽性B細胞、7日目以降にIgG陽性B細胞が浸潤して継続した。一方、コンプロマイズド宿主の感染免疫反応と比較するために白血球遊走能障害マウスとT細胞障害マウスと糖尿病マウスを作成し、同様に腎盂腎炎の実験を行った。好中球遊走能障害マウスでは、感染3日目まで好中球の浸潤が減少したのに対し、マクロファージは正常より多数浸潤した。T細胞は3日目以降ヘルパーT細胞が正常より優位に浸潤した。B細胞はIgG陽性B細胞が正常より早期に浸潤していた。T細胞障害マウスでは、好中球は正常に比して強い応答を示したが、マクロファージは正常と同程度であった。T細胞の浸潤は激減し、特にヘルパーT細胞の減少は顕著であった。B細胞の浸潤もT細胞と同様に顕著に減少していた。糖尿病マウスでは、好中球とマクロファージは正常より顕著に浸潤した。T細胞の浸潤は減少し、B細胞浸潤も同様に減少していた。

以上のように、好中球の動員が障害された宿主ではマクロファージとヘルパーT細胞の浸潤が増強する方向に、またT細胞が障害された宿主では好中球の浸潤が増強する方向に、また好中球機能障害に加えてT細胞数も減少した糖尿病宿主では好中球とマクロファージの浸潤が増強する方向に免疫応答が変動することが考えられた。平成8年度の新たな知見としては、compromisedマウスに対する実験的尿路感染発症時に、種々のBRM(1L-2,TNFなど)を宿主側の感染免疫能を高める目的で治療投与し、下記の結果を得た。T細胞障害マウスに対しの回復を期待してIL-2またはIFN-γを投与したところ、CD4陽性T細胞とCCD8陽性T細胞とB細胞の局所浸潤が回復した。またTNF-αを投与した場合はCD4陽性T細胞が若干回復した。一方、糖尿病マウスに対し、T細胞の機能回復を期待してIL-2またはNFT-αを投与したところ、CD4陽性T細胞とCD8陽性T細胞が若干回復した。しかし、好中球機能の回復を期待してG-CSFを投与した場合は免疫応答細胞浸潤の回復は認められなかった。その他に各種感染免疫関連細胞の産生するサイトカインの局所存在を明らかにするために感染局所の1L-1αとTNF-αの発現をRT-PCRにより検討したところ、それぞれのmRNAは感染初期のまだ免疫関連細胞の浸潤が認められない感染2時間後に発現が認められた。したがって、エイズ患者のようなT細胞機能が障害された宿主に対しては、IL-2またはIFN-γをT細胞機能回復目的で投与することにより効果が期待されるが、TNF-αはあまり効果が期待されないと考えられた。一方、糖尿病宿主に対しては、好中球機能を回復させる目的でG-CSFを、T細胞障害を回復させる目的でIL-2またはTNF-αを投与してもあまり効果が期待されないことが考えられた。以上のように、一部の易感染性患者に対して、一部のBRMが感染免疫能を回復させる可能性が明らかになってきた。また、感染局所のサイトカイン発現の結果については、感染直後の感染免疫関連細胞の浸潤が認められる前からIFN-γとTNF-αのmRNAが発現して粘膜免疫として感染防御を行っていると考えられるが、これは非感染時から粘膜層に存在するIEL(上皮内リンパ球)や単球が産生していることが考えられた。最終年度である9年度の研究としては、大腸菌を経尿道的にマウスに膀注し、実験的上行性腎盂腎炎を発症させ、経時的に感染腎盂のみを摘出し、腎盂組織内の各種炎症性サイトカイン(IL-1,IL-6,IFN-γ,TNF-α)mRNAの検出時期をRT-PCR法にて検討した。そして免疫関連細胞浸潤時期との関係を比較した。感染早期の細胞浸潤が認められない時期(感染30分後)から既にIL-1,IFN-γ,TNF-αmRNAが検出された。IL-6mRNAは感染6時間後にIgA陽性B細胞が感染局所に浸潤する時期と一致して検出された。一般にB細胞の分化、成熟にはIL-6が関与していると考えられるが、尿路においても腸管と同様にIgA応答にはIL-6が重要な役割を果たしていると考えられた。また接着分子(ICAM-1)の粘膜免疫応答に対する機序を検討した。その結果、感染4時間以降、上述のIL-1,IFN-γ,TNF-αなどの刺激により感染巣近傍の粘膜下に存在する血管内皮細胞表面にICAM-1の発現が増強され、並行して好中球の浸潤増加が観察された。しかし、感染7日後にはICAM-1の発現が減少し、好中球との浸潤程度とは相関しなくなった。これはICAM-