hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高齢障害者の自立支援給付と介護保険の利用にかかる福祉制度の比較分析

本研究では、高齢障害者への介護保険制度適用の実態に焦点を当て、障害福祉制度として実施される自立支援給付と介護保険制度として実施されるサービスの比較分析をおこなう。その結果をもとに障害者を対象とする福祉制度と高齢者を対象とする福祉制度の重なる高齢障害者の福祉制度の運用と設計の課題を明らかにし、併せて両制度の特色ならびにその背景にある考え方を解明する。今年度は、昨年度に引き続き制度運用側の自立支援給付と介護保険制度への認識ならびに運用状況を把握するため、昨年度実施した地方自治体の介護保険担当部局と更生相談所へ調査票調査の結果を分析した。結果、65歳以上の高齢障害者に対し、補装具による車椅子・電動車椅子が一定数給付されており、並びに継続して自立支援給付による障害福祉サービスを利用している、または介護保険サービスと障害福祉サービスを併用している高齢障害者がいる自治体が一定数存在していることが明らかとなり、必ずしも介護保険制度が優先適用されているわけではないことが示唆された。続いて、利用者側である在宅高齢障害者の介護保険への移行プロセスならびに、自立支援給付と介護保険利用の実態を把握するために、頸髄損傷者連絡会や自立生活センターに協力を依頼し、国立障害者リハビリテーションセンターの倫理審査を受けたうえ、65歳以上の高齢障害者を対象に調査票調査を実施し、現在のサービス利用状況、65歳前後のサービス内容及び自己負担額の変化などを訪ねた。調査結果は現在分析中である。また、日本と諸外国の高齢障害者向け制度の比較を行うために、年齢で区切らず税方式でサービスを提供する国としてスウェーデンを、年齢で区切らず保険方式でサービスを提供する国として中華人民共和国青島市を選定し、実際に現地を訪問して聞き取り調査を実施した。65歳以上の高齢障害者を対象とした調査票調査の実施と回収に時間を要したため、調査結果の分析が終了できていない。研究代表者の諸事情により海外調査が完了できていない。平成30年度は、29年度実施した調査結果の解析をすすめつつ、利用者側である在宅高齢障害者の介護保険への移行プロセスならびに、自立支援給付と介護保険利用の実態の把握を主におこなう。まず、29年度実施した在宅高齢障害者に対する聞き取り調査を継続すると同時に、調査結果をもとに調査票を作成し、、全国の在宅高齢障害者を対象とした調査票調査の調査票を実施する。具体的には在宅高齢障害の利用頻度が高い訪問介護サービスと福祉用具(補装具)関連サービスに焦点を当て、65歳以前の自立支援給付または障害福祉サービスの利用状況と65歳以後の介護保険適用に伴う自立支援給付と介護保険のサービス利用の変化(サービス量、内容、自己負担額)の実態から自立支援給付と介護保険の利用の諸課題を明らかにする。介護保険適用状況、自立支援給付における要支援区分と介護保険制度の要介護度の関係を分析し、両制度の特色と背景にある考え方を明らかにする。あわせて、自立支援給付と介護保険制度の両サービスを提供している事業所数か所を対象に、両サービスの実施状況と、その違いについて聞き取り調査を実施し、現状を把握する。
サファイヤ基板上に形成した炭化珪素薄膜を用いた高温・大電力用FETの作製

サファイヤ基盤上に形成した炭化珪素薄膜を用いて高温・大電力用FETを作製するための基礎的な技術を確立した。また、研究を進める過程で不純物として検討した硼素薄膜が高温用熱起電力素子材料としても可能性があることを見いだした。高温・大電力用EFTを実現するためには、高品位な半導体薄膜の作製に加えて、耐熱性ソース・ドレイン電極の開発、界面特性に優れたゲート絶縁膜の開発が必要とされる。半導体薄膜に関しては、サファイヤ基盤を用いることで大口径化が可能であるが、格子定数の不一致が問題となる。そこで、すでに技術的に確立されているSOS構造の基板を用い、珪素層を炭化した上に炭化珪素を堆積することで高品位な薄膜が得られる可能性を実験的に示した。サファイヤ基板の使用により、高温における基板への漏れ電流の減少が期待できる。また、原料ガスを熱フィラメントで励起する方法が薄膜の高品位化に有効であることを見出した。ソース・ドレイン電極の性能としては、耐熱性に加えて接触抵抗が低いことが求められる。そこで、金属/炭化珪素接触についてその電気的特性を検討した。また、いわゆるTLM法により、接触抵抗ととの温度特性に関する検討を行い、接触抵抗の効果的な評価方法を見出した。FETのゲートとしては,MIS構造とMS構造とが考えられるが、この両者に関して検討した。MS構造では、金属の仕事関数以上に炭化珪素表面の状態が特性を左右することが示された。また、MIS構造に関しては、構成元素の1つである炭素の酸化物の影響を排除するためTEOSを用いたCVD法が有効である可能性を示した。MISダイオードの容量電圧特性は注入型のヒステリシスを示した。また、絶縁膜堆積後の熱処理が界面特性の改善に有効的であった。サファイヤ基板上に炭化珪素薄膜を堆積させる場合、両者の格子定数差が良質な薄膜堆積の妨げとなる。一方、サファイヤ基板上に珪素薄膜を堆積させる技術はすでに一般的であり商品化されている。そこで、サファイヤ基板上への炭化珪素の堆積に先だって、珪素層を薄く堆積させ、それを炭化することにより炭化珪素とし、その上に必要な厚さの炭化珪素層を堆積させることを試みた。今年度は、サファイヤ基板上に直接炭化珪素薄膜を堆積させた場合と、サファイヤ基板上に堆積させた珪素層を炭化させてその上に炭化珪素薄膜を堆積させた場合について比較した。サファイヤ上の珪素層としては市販のSOS(Silicon on Sapphire)基板を使用し、プロパンによる炭化とテトラメチルシランの熱分解による炭化珪素の堆積を行った。作製した薄膜についてX線回折、電子線回折、XPS等による評価を行った結果、炭化層の挿入は薄膜の特性結晶性に著しい効果が有ることが示された。実用的な構造とするためには、界面層となる珪素膜全体を炭化することが可能な厚さに制御する必要がある。今後、FET材料としての電気的特性評価ならびにソース・ドレイン領域の形成について検討を進める。

半導体薄膜に関しては、サファイヤ基盤を用いることで大口径化が可能であるが、格子定数の不一致が問題となる。そこで、すでに技術的に確立されているSOS構造の基板を用い、珪素層を炭化した上に炭化珪素を堆積することで高品位な薄膜が得られる可能性を実験的に示した。サファイヤ基板の使用により、高温における基板への漏れ電流の減少が期待できる。また、原料ガスを熱フィラメントで励起する方法が薄膜の高品位化に有効であることを見出した。ソース・ドレイン電極の性能としては、耐熱性に加えて接触抵抗が低いことが求められる。そこで、金属/炭化珪素接触についてその電気的特性を検討した。また、いわゆるTLM法により、接触抵抗ととの温度特性に関する検討を行い、接触抵抗の効果的な評価方法を見出した。FETのゲートとしては,MIS構造とMS構造とが考えられるが、この両者に関して検討した。MS構造では、金属の仕事関数以上に炭化珪素表面の状態が特性を左右することが示された。また、MIS構造に関しては、構成元素の1つである炭素の酸化物の影響を排除するためTEOSを用いたCVD法が有効である可能性を示した。MISダイオードの容量電圧特性は注入型のヒステリシスを示した。また、絶縁膜堆積後の熱処理が界面特性の改善に有効的であった。
伝統的な歌唱法を生かした、小・中学校音楽科授業のための アイヌ歌謡の教材化

1930年代から1950年代にかけて録音された、北海道のアイヌ歌謡の録音について、特に伝統的な歌唱法を中心に据えて研究した。引き続いて、旭川市近文地区のアイヌ歌謡に焦点を絞り込み、その中から小中学校の音楽教科の教材となり得る曲を選曲した。その際、近文の古老から直接歌を教わるなどして、選曲については慎重に行われた。本研究の成果物として、小・中学校の音楽教材として用いられるための、解説書付きDVD「近文のアイヌ舞踊と歌謡を作成した。本研究の目的は、旭川地域に伝わるアイヌ音楽の文化的な価値を、地元の小・中学生に理解してもらうために、アイヌ歌謡を、伝統的な歌唱法を踏まえながら、音楽科表現活動の教材として開発してゆくことにある。平成22年度は、北海道の各地に残るアイヌの歌謡の特徴を調べる為、道立図書館に残る様々な歌謡の記録を調査した。特に道立図書館には、久保寺逸彦が昭和10年頃に収集した貴重な録音が残されており、研究の前半は、それらの録音を聴きながら、北海道のアイヌ歌謡全般にわたる特微を探った。しかしながら、各地で歌謡並びに歌唱法は、特徴が微妙に異なっているため、今年度は大学の所在する旭川近文地区に伝わるアイヌ歌謡に焦点を絞り、その特徴について探ることとした。また、アイヌ歌謡の研究者として重要な論文を執筆している、千葉伸彦氏を招き、特に阿寒方面のアイヌ歌謡の特徴についての講演をお願いした。その講演内容から、阿寒と旭川近文においても歌唱法の違いが確認され、歌唱についての美意識の違いも存在することが明らかとなった。これらの研究と並行して、故杉村キナラブック(アイヌ歌謡の名手であり、録音がアイヌ民族文化研究センターに多く残されている)の娘である杉村フサ氏より、アイヌ歌謡の特徴を直接ご指導いただいた。指導のなかで、アイヌ歌謡の特徴が、音程へのこだわりよりも、よりリズムが重要な意味を持ち、旋律は口承伝承されてゆく中で、常に変化してゆくこと。また、平易な旋律の中に、細かなコブシが盛り込まれていること。さらに、音質の特徴は、自然の描写、動物の鳴き声の模倣などがその基調となっていることが明らかになってきた。23年度は、このことについて論文にしてゆく予定である。北海道先住民族であるアイヌの人々には、数多くの座り歌や踊り歌が伝えられている。(以下座り歌・踊り歌のことをアイヌ歌謡と呼ぶ。ユーカラはここには該当しない)しかし、それらの歌謡本来の美的な価値が、一般の人々の間において十分に知られているとは言い難い。平成22年度には、旭川近文に伝わるアイヌ歌謡を、道立図書館において古い録音から注意深く聴き、その特徴について探った。また、近文の古老より直接歌を聴き取り、それにまつわる情報を収集した。平成23年度前半は、引き続き道立図書館での録音聞き取り調査を行なった。また、旭川のアイヌ歌謡の高名な歌い手であった杉村キナラブックの娘である杉村フサ氏よりアイヌ歌謡を実際に習い分析した。これらの調査で古いアイヌ歌謡の音質の特徴として明らかになってきたことは、古いアイヌ歌謡は、声門閉鎖音が多く使われていることが特徴であることが明らかになってきた。これは、アイヌ語の表記のうえでの閉母音と大きく関係していると考えられる。22年度、23年度に調査した曲のうち、音楽的にあるいは歌詞の内容から学校教育の中で扱うために適切な教材としての考えられる数曲を選び、大学での模擬授業と附属中学校での授業を行った。11月には全日音研で札幌大会(全国大会)アイヌ歌謡の教材化をテーマに発表した。3月にはアイヌ文化振興・研究推進機構の研究員である甲地氏を招聘し、北海道のアイヌ歌謡についての講義を行ってもらい、情報交換を行った。北海道先住民族であるアイヌには、数多くの座り歌や踊り歌が伝えられている。本研究の目的は、アイヌ音楽文化の価値を小・中学生に理解してもらうために、アイヌ歌謡における伝統的な歌唱法を踏まえながら、音楽科表現活動の教材として開発してゆくことにあった。研究初年度からの2年間は、旭川近文に伝わるアイヌ歌謡を、道立図書館において古い録音から注意深く聴き、その特徴について探った。また、近文の古老より直接歌を聴き取り、それに関する情報を収集した。今年度の初めまで引き続き収録調査を行ったが、今年度中盤では調査・収録された曲のうち教材として適切なアイヌ歌謡であるかについて選定をした。

その際、北海道全域に共通な歌謡があるか、音楽的にあるいは歌詞の内容から学校教育の中で扱う為にふさわしい歌謡であるか、また、親しみやすい歌謡であるかなどを判断の軸に据え、いくつかを抽出した。年度の後半では、アイヌの伝承音楽の教材化を具体化するために、現場の教師が授業であるいは教材研究のために参考となるDVDを本研究の成果物として作成した。DVDの内容は、鑑賞編として近文に伝わる舞踊である弓の舞、トドマツの踊り、挨拶の踊りを、歌謡としては坐り歌、踊り歌を収録し、実践編として坐り歌と踊り歌は授業の場面で生徒達とDVDを見ながら練習できるように作成した。また、伝統的な歌唱法についての解説編なども収録した。また、DVD、アイヌ歌謡の解説の他に、付属の解説書にはアイヌ歌謡を譜面化し掲載した。作成したDVD(「近文のアイヌ舞踊と歌謡」DVD解説書付き)は、取材地である近文を中心とする上川地区の小中学校に配布予定である。(200部)22年度23年度でアイヌ歌謡を教材化するための資料は情報が豊富に集められた。(旭川近文の歌謡の特徴を明確化し教材とするために、北海道アイヌ文化振興機構の研究員である甲地氏の助言を得られるたこと、また、阿寒のアイヌ歌謡を研究している千葉氏からの情報を得られたことは、有益であった)24年度が最終年度であるため、記入しない。24年度は、旭川近文のアイヌ歌謡を教材化するための、実質的な研究と作業に取り組む。特に旭川市内の中学校において、音楽担当教員の協力を得ながら実際に授業を行い、最終的な成果とてしてのテキストならびにDVDを作成してゆく。24年度が最終年度であるため、記入しない。
鉄中のボロンの“正規の”および“異常な”拡散

ボロンは鉄鋼の組織形成および材料強化の点で魅力的な添加元素と認識されているが,その素姓には不明な点が多く残されている.組織形成において重要な「拡散係数」の信頼できる実験値が得られておらず,格子間型および置換型のどちらが有力な機構か未だ決着がついていない.本研究ではα鉄からγ鉄まで広範な範囲における「ボロンの正規の拡散性」を解明する研究を実施する.また,スパッタリング法でFe-B合金薄膜を純鉄基板に堆積させると,室温で固溶限を大幅に超えるボロンが鉄の内部に侵入することを代表者は発見した.この熱力学的にも速度論的にも奇異な,鉄中の「ボロンの異常拡散」の機構を解明する研究を並行して行う.ボロンは鉄鋼の組織形成および材料強化の点で魅力的な添加元素と認識されているが,その素姓には不明な点が多く残されている.組織形成において重要な「拡散係数」の信頼できる実験値が得られておらず,格子間型および置換型のどちらが有力な機構か未だ決着がついていない.本研究ではα鉄からγ鉄まで広範な範囲における「ボロンの正規の拡散性」を解明する研究を実施する.また,スパッタリング法でFe-B合金薄膜を純鉄基板に堆積させると,室温で固溶限を大幅に超えるボロンが鉄の内部に侵入することを代表者は発見した.この熱力学的にも速度論的にも奇異な,鉄中の「ボロンの異常拡散」の機構を解明する研究を並行して行う.
ヒドラの細胞接着分子

本研究計画の目的は淡水ヒドラの細胞接着分子を分離、同定し、形態形成における機能を明らかにすることにある。研究代表者は日本産チクビヒドラ(Hydra magnipapillata)の突然変異系統を分離し、ヒドラ発生機構の研究を行ってきた。従来の研究の中心は、一様に見える組織のどの部域に将来どの構造が形成されるかが決定されるプレパタ-ン形成過程の解明にあった。本計画は、プレパタ-ン形成段階の決定に従って実際に進行する形態形成過程に焦点を移して研究を行った。形態形成における細胞接着分子の重要性が脊椎動物において明らかにされている。そこで、頭部再生あるいは出芽等のヒドラ形態形成過程に関与する細胞接着分子を分離、同定し、更に接着分子の動的変化を通じてプレパタ-ン形成段階とパタ-ン形成段階の関連性を検討することが必要である。そして更に、分子レベルの研究や進化学的研究に発展させて広い視野に立った接着分子の解明へと発展させる事が必要である。上記の目的のため、ヒドラ細胞再集合系を用い、ヒドラの細胞接着分子に対するモノクロ-ナル抗体のスクリ-ニングを行った。ヒドラ組織を一度はらばらの単離細胞に解離し、その後人為的に再集合させ、個体の再生させることができる。この再集合過程には細胞接着分子が重要な働きをする。そこで細胞接着分子と結合して再集合過程を阻害するモノクロ-ナル抗体のスクリ-ニングを行った。抗体のスクリ-ニングには、ヒドラ細胞を抗原として作成されたモノクロ-ナル抗体ライブラリ-が必要である。そこで大規模な抗ヒドラモノクロ-ナル抗体ライブラリ-を維持しているカリホルニア大学ア-バイン校発生生物学センタ-H.Bode教授の研究室と、ミュンヘン大学動物学研究所C.N.David教授の研究室において、共同研究としてスクリ-ニングを行った。その結果、外胚葉上皮細胞、内胚葉上皮細胞、あるいは間幹細胞の細胞表層に存在する抗原を特異的に識別する抗体を多数得る事が出来た。目下これらの抗原を単離同定し、その機能を明らかにする研究を進めている。また脊椎動物の細胞接着分子遺伝子と相同のヒドラ遺伝子の分離も行った。脊椎動物接着分子カドヘリンc端付近のアミノ酸保存配列に対して作成されたオリゴヌクレオタイドをプライマ-とし、ヒドラcDNAをテンプレ-トして増複されるクロ-ンを分離した。分離クロ-ンは約150bpの大きさを持ち、カドヘリン遺伝子と高い相同性を示す。目下このクロ-ンをプロ-ブとしてヒドラcDNAライブラリ-からcDNAクロ-ンの分離を進めている。
環大西洋におけるカルヴァン主義諸派のディアスポラ形成とピューリタン植民地の展開

主要なリサーチは、ハーヴァード大学を中心に行った。さらに、英、仏、蘭、伊へ調査に赴き、改革主義の国際的展開に注目した。改革主義は国際的運動ながら各地の環境に応じ特異な発展をする。そのディアスポラ的展開に着目する時、17世紀ニューイングランド研究は、絶対王政のイングランドとの対比より、ヨーロッパ諸都市(蘭、伊)との比較が有用であると思われる。信仰共同体樹立と共に商業を経済基盤として発展したボストン等の都市は、スイス、蘭、伊の共和主義的諸都市に似ている。18世紀以降は、ピューリタニズムと敬虔主義との関係が重要となり、アメリカ特有の福音主義が誕生する。最終年度、D. Hall教授を上智大に招聘した。2012年8月から9月にかけて米国マサチューセッツ州ハーヴァード大学図書館を中心としたリサーチ、オランダ三都市での調査旅行を行った。ハーヴァードではマサチューセッツ湾植民地と奴隷貿易に関する史料を調査し論文をまとめた。また、2013年度に本科研で招聘を予定しているDavid D. Hall教授と来日についての打合せをした他、David Armitage, Joyce Chaplin教授とも研究についての意見交換を行った。さらに、ボストン大学アメリカ研究科所属研究者(Anita Patterson教授他)と今後の研究協力関係について相談した。加えて、奴隷制研究を社会学的視点から研究しているOrlando Pattersonハーヴァード大学教授とも意見交換を行った。内数名の研究者が来日に同意してくれたので、今後の研究関係をさらに推進したい。オランダではアムステルダム、ハーグ、ライデンを訪問し、カルヴァン派ディアスポラの史跡をたどることができた。ライデンではピルグリムズに関する史跡を訪ねて調査をおこなった。現地に赴くことで、カルヴァン主義と寛容の問題、環大西洋奴隷貿易と宗教のテーマについてさらに細かい情報や資料を得ることができた。また、アムステルダム大学アメリカ研究科George Blaustein助教授、ライデン大学ハーグ校Ann Marie Wilson助教授等若手アメリカ研究者と交流し、様々な情報を得ることができた。今年度は『環大西洋奴隷貿易』に関する翻訳書を出版したが、この関連で、特に奴隷貿易とピューリタン植民地に関する調査を行った。マサチューセッツ商人に関してはいくつかの研究書がすでにあるものの、奴隷貿易に着目した研究はあまりない。そこで、今年度は奴隷貿易とピューリタン倫理についての考察が中心研究課題となった。カルヴァン主義の国際的なネットワークがニューイングランド・ピューリタニズムとどのような影響関係を持つのか探ることにより、アメリカのピューリタン運動の特徴を浮き彫りにする研究を行った。研究初年度は、大学のサバティカルにあたり、ハーヴァード大学に研究員として滞在し、図書館や資料館で調査研究にあたると共に研究協力者のDavid D. Hallをはじめとする様々な研究者との交流を持つことができた。期間中、英、仏、蘭、伊の諸都市訪問と資料調査を行った。主な研究成果は二点にまとめられる。(1)宗教と共に経済、植民地建設の中軸となった商人に着目することで新たな観点が得られた。これまでの研究では、ニューイングランドは本国イングランドとの対比で説明されることが多かった。しかし、大陸ヨーロッパの商業都市の方が形態的にボストンを始めとするニューイングランド諸都市と似ている。政治的にも、スイスやイタリア諸都市の共和政治がマサチューセッツ湾植民地の政治体制のモデルとなったと思われる。これについては最終年度に日本ピューリタニズム学会で成果の一部を報告し、論文として発表した。(2)国際カルヴァン主義は共有する神学思想により理念的共有基盤を持つが、一枚岩ではなくそれぞれの地域の事情に応じて多様な展開を見た。信仰告白、信条の作成や会議などで一致点を模索したものの地域差がかなりあったのである。しかし、北アメリカにおいては18世紀植民地時代の終盤、後の13植民地となる地域でかなりの一致点を獲得するようになる。これは、ホィットフィールドやエドワーズを中心とする第一次大覚醒運動が、ボストンの教会やフランクリン等による印刷出版に助けられ、共有意識を作っていったためと解釈できる。アメリカ独立革命直前におきたこの宗教運動は、メソジスト等の敬虔主義運動と融合し、アメリカ福音主義という共有の宗教基盤を形成していったのである。ハーヴァード大学を拠点とした資料収集と調査を特に重点的に行った。研究協力者David D. Hall教授と意見交換を頻繁に行うことができた。歴史学部David Armitage教授、Joyce Chaplin教授、英文学部Werner Sollors教授、John Stauffer教授、ボストン大学英文学部Anita Patterson教授とも複数回意見交換を行った。ニューヨーク公立図書館では奴隷貿易とキリスト教会との関係についての資料にあたった。夏期、フランス国立図書館(パリ)、大英図書館(ロンドン)での資料調査を行った。

この調査で、プロテスタント移住者ディアスポラにおけるstranger churchの働きの重要性が浮かびあがって来たため、研究の方向が当初のde Bryやユグノー画家Le Moineに関する調査から移住者共同体とその商業活動へと移行した。9月以降はボストンでピューリタン商人についての調査を行い、「ピューリタン商人と『カルヴァン主義の倫理』再考ーロバート・キーン『アポロジア』を中心に」(未発表)と題した論文をまとめた。さらにジョン・ハル、サミュエル・シュアールの日誌他の資料を集めた。イングランドではオクスフォード大学クライスト・チャーチ・カレッジで開催された教会史学会(Ecclesiastical History Society)年次大会に参加し、英国側研究者のカルヴァン主義研究の傾向を調査できた。環大西洋研究をより複眼的に行うために、米国以外の研究動向を知ることは大切であると思われる。さらにワシントンD.C.フォルジャー・シェイクスピア図書館で開催された欽定訳聖書400周年記念学会"An Anglo-American History of the King James Version"に出席し、英米側研究者それぞれの研究動向を学ぶことができた。(1)カルヴァン主義ディアスポラとニューイングランド・ピューリタニズムとの関係を、16世紀宗教改革以降の印刷文化や人的交流ネットワークを軸に探る。(2)18世紀第一次大覚醒までに北アメリカ植民地において大きな影響を持つに至ったカルヴァン主義諸派の共同体の展開を探る。以上、二点を目的とした本研究の二年目では人的ネットワークと物資の交流に着目した。そのため、英国ピューリタンの多くが移住したオランダの現地調査に赴いた。カルヴァン主義の現れ方は地域によって異なるが、オランダの寛容政策もまたカルヴァン主義との関係でも考察できる。ライデンではピルグリムズの足跡を訪ねた。オランダの交易品には黒人奴隷が利益を上げる商品として含まれたわけだが、奴隷の交易は17世紀ピューリタン・ニューイングランドでも実践されたので、これに関する史料をハーヴァード大学の図書館等で調べた。これについては、成果の一部を平成25年度内に学会で報告する。この点をさらに追求するには西インド諸島におけるカルヴァン派のディアスポラも研究射程に入れる必要がある。海外調査滞在中、今年度は多くの研究者との交流を持ち、来日に関する打合せをすることができた。H25年は、David D. Hall教授を招聘するので、その打合せも行った。研究者交流とともに、学生や一般に向けての講演を企画することで同意した。調査は順調に進んでいるが、論文執筆の進捗状況は遅い。今後は、執筆により多くの時間を割きたい。
ヒト脊髄歩行中枢の発振現象の制御

本研究は、研究代表者の開発した閉回路型の脊髄刺激法によりヒト脊髄歩行中枢を操作し、刺激で誘発される歩行リズム、ステップ長、歩行様式などを制御できるか検証することを目的としている。研究の初年度にあたる30年度では、脊髄歩行中枢の位置を推定するために脊髄刺激により歩行運動を誘発できる刺激部位を特定すること目標とした。さらに、その特定された刺激場所において、脊髄刺激のリズムを随意的に操作することで、誘発される歩行の開始や停止、速度等が制御可能になるか検証した。その結果、健常被験者において効果的に歩行を誘発できる刺激位置が第1胸椎から第3胸椎までの椎骨間にあることが確認された。また、この位置での脊髄刺激リズムを被験者が自己制御することで誘発される歩行運動の開始および停止が意図時に操作できることが証明された。計画通りに以下にあげる成果を得られているため、本研究は現在まで順調に進捗している。第一に脊髄刺激によって効果的にヒト脊髄歩行中枢を賦活させられる刺激位置を特定することができた。ヒト脊髄への磁気刺激は、歩行だけでなく両脚が同位相で動くうさぎ跳びのような運動を誘発する場合がある。そこで、健常被験者において第11胸椎から第5腰椎までの範囲で刺激位置を探索し、効果的に歩行運動を誘発できる位置が第1腰椎から第3腰椎までの椎骨間にあることを確認した。また、1名の脊髄損傷患者においても、健常被験者と同様に脊髄の刺激位置に依存して誘発される下肢運動が異なることを確認した。第二に、閉回路型の脊髄刺激法により、脊髄刺激リズムを自己制御することで誘発される歩行運動の開始や停止が意図的に操作できることも確認できた。以上のように、本研究の目的を達成するために順調に研究が進捗している。研究計画の2年目にあたる本年度は、被験者自身が操作した脊髄歩行中枢への刺激によって歩行機能回復を促すことが可能であるか検証する。それにより、歩行機能障害のリハビリテーションとして本研究で用いる閉回路型の脊髄磁気刺激が有効であるか検証する。歩行機能障害のある脊髄損傷者を対象に約6ヶ月の脊髄刺激による介入を行う。脊髄磁気刺激は横臥位姿勢で、被験者自身の制御によって行う。介入の効果を脊髄磁気で誘発される下肢の歩行様運動の3次元動作解析や筋電図解析から評価する。脊髄刺激の反復による誘発歩行運動のステップ幅やペースの変化を測定し、脊髄歩行中枢の可塑的変化を短期的および長期的に評価する。
胚中心B細胞の発生・分化機構と異常に関する研究

B細胞の生存、活性化、免疫記憶に重要な胚中心に関しては不明な点が多い。本研究は、胚中心B細胞の同定法の確立、胚中心B細胞の増殖・分化、クラススイッチや超変異(hypermutation)の分子機構を明らかにし、それを撹乱する要因を明らかにするとともに、その制御法の開発を試みることを目的とした。(研究成果)(1)B細胞の生存延長や活性化を誘導するIL-5、IL-4、抗CD38および抗CD40抗体刺激に注目し、これらの胚中心B細胞に対する作用を解析した。その結果、胚中心B細胞の一部がIL-5RないしCD38を発現しており両分子をともに発現しているB細胞も検出された。また、胚中心B細胞のほとんどがIL-4RとCD40分子をともに発現していることを明らかにした。(2)B220^+/IgD^-/PNA^+を指標として濃縮した胚中心B細胞はIL-4、IL-5、抗CD40抗体刺激が共存した場合に最も効率よく抗原特異的IgG1抗体産生細胞へと分化させることがわかった。(3)脾臓B細胞は抗CD38抗体刺激により増殖が誘導されたがIg産生は見られなかった。その系にIL-5を共存させると増殖反応は10倍以上亢進し、Blimp-1遺伝子の発現とIg産生が誘導された。またCD38刺激にともないBruton's tyrosine kinase(Btk)のチロシンリン酸化が見られ、Btk遺伝子に変異のあるXIDマウスのB細胞はCD38刺激に応答しないことが初めてわかった。(4)IL-5刺激に反応してVav,Shc,PI-3 kinaseが速やかにリン酸化されることなどを初めて明らかにした。また、IL-5刺激にともないBtkの活性化が見られXIDマウスのB細胞はIL-5に応答しないことがわかった。(5)IL-5Rα鎖の細胞内ドメインのプロリン残基に富む領域がシグナル伝達(増殖、チロシン残基のリン酸化、protooncogeneの発現)、JAK2キナーゼの活性化とリン酸化およびSTAT5の活性化に必須であることを明らかにした。(研究目的)本研究は、(i)胚中心B細胞の発生・分化における樹状細胞の役割、B細胞の細胞表面機能分子の役割とその発現調節機構の解明、(ii)B細胞細胞表面上の抗原受容体複合体やサイトカイン受容体を介する細胞内シグナル伝達機構の検討、(iii)胚中心B細胞の分化誘導やトレランス誘導の試験管内実験系の確立、(iv)X染色体連鎖B細胞不全(XID)マウスにおける胚中心B細胞の検討、などを行い胚中心におけるB細胞の発生・分化機構とその異常を明らかにすることを研究の目的とする。(研究方法と研究成果)(i)B細胞の発生・分化における各種機能分子の役割を明らかにするため、XIDマウス、正常マウス、IL-5受容体α鎖トランスジェニックマウス(5Rα-Tg)の骨髄細胞を長期培養し、IL-5やIL-7依存性B細胞株を樹立した。合計42種類の株化細胞を樹立した。XIDマウス由来株価細胞の場合BP-1陽性細胞株がえられず、XIDマウスでは前駆

B細胞から成熟B細胞への分化過程に異常のあることがわかった。また、新しいB細胞機能分子を同定するため3種類の特異性を異にする単クローン抗体を調製した。(ii)B細胞細胞表面上の機能分子(抗原受容体複合体、サイトカイン受容体、接着分子)を介する細胞内シグナル伝達機構を明らかにするため、pro-B細胞株,pre-B細胞株、成熟B細胞株を用いて、チロシン燐酸化蛋白の同定、それに関与するキナーゼやその会合分子をIL-5/IL-5R系をモデルとして解析した。IL-5刺激により速やかなShc,Vav,HSlなどの細胞内シグナル伝達分子のチロシンリン酸化が見られた。(iii)IL-5はB細胞の試験管内生存を延長するので、抗IL-5R抗体を用い胚中心B細胞がIL-5Rを発現しているか、胚中心B細胞をPNAを用いて精製しIL-5に応答性を示すか、bcl-2遺伝子の発現亢進があるか、Fas遺伝子の発現の抑制があるか解析している。(iv)IL-5のB細胞発生・分化における生理的意義を明らかにすべく、IL-5Rα鎖染色体遺伝子の相同組み替えマウスの作製を試みている。B細胞の生存、活性化、免疫記憶に重要な役割を果たすと考えられている胚中心に関しては不明の点が多い。本研究は、胚中心B細胞の同定法の確立、胚中心B細胞の増殖・分化気候ならびに超変異(hypermutation)の分子機構を明らかにし、それを撹乱する要因を明らかにするとともに、その制御法の開発を試みることを目的としている。(研究方法と研究成果)(1)胚中心B細胞はPNAにより染色されるが、B細胞の生存を延長させるIL-5とCD38に注目し、それらが胚中心B細胞上に発現されているのかを抗IL-5レセプター(IL-5R)抗体と抗CD38抗体を用いた組織染色法で調べた。その結果、胚中心B細胞の一部がIL-5RないしCD38を発現しており、両分子をともに発現しているB細胞も検出された。伴性B細胞不全マウス(XID)のB細胞はIL-5に応答しないが、XIDマウスの胚中心にもIL-5RないしCD38を発現しているB細胞の存在が確認された。(2)脾臓B細胞を抗CD38抗体で刺激すると有意な増殖反応が見られたがIg産生は見られなかった。その系にIL-5を共存させると増殖反応は10倍以上増加し、Ig産生が見られるようになった。両刺激によりB細胞の生存が延長された。(3)IL-5R鎖はIL-5との特異的な結合に必須であるのみならず、シグナル伝達にも必須である。α鎖の細胞内ドメインのプロリン残基に富む領域(Pro-Pro-X-Pro)がシグナル伝達(増殖、チロシン残基のリン酸化、proto-oncogeneの発現誘導)に必須であること、3個のProのうち1個の存在がβcのdimerizationおよびJAK2キナーゼの活性化とリン酸化に必須であること、IL-5刺激に対応しSH2/SH3ドメインを有するシグナル伝達関連分子(Vav,Shc,HS1,PI-3 kinase)が速やかにリン酸化されることなどを初めて明らかにした。またIL-5刺激にともないBruton's tyrosine kinase(Btk)の活性化が見られ、Btk遺伝子に変異のあるXIDマウスのB細胞はIL-5に応答しないことが初めて明らかになった。B細胞の生存、活性化、免疫記憶に重要な役割を果たすと考えられている胚中心に関しては不明な点が多い。
オントロジー工学を用いた言語学習における文化差要因のモデル化と日本人のための英語学習支援システム

日本人が英語を学習する場合には,日本語,ひいては日本の文化に深く染まっている学習者が英語,そして英語文化という未知の世界との相違に起因する困難さを克服することを支援する必要がある.本研究は,日英文化差の要因分析の成果を利用して,日本人が英語を学習する際に遭遇する困難さを日英の文化差の観点から分析して,オントロジー工学の手法を用いて体系的に記述し,それらの困難さを説明するモデルを構築する.そして,モデルに基づいて困難さを克服する英語学習指導方略を構成し,それを組み込んだ,日本人用英語学習支援システムを開発することを目指した.1.構築されたオントロジーを用いて種々の困難さを説明するモデルを記述完成している.2.困難さを説明するモデルを参考にしつつ,それを回避するための教授戦略に関する考察を特定の例を使いながら行った.3.日本人に英語を教えている教師にインタビューすることによって教師が持つ経験則的教授戦略を収集完成した.4.対象とする英語教材とシステムの評価をしてくれる組織を選定した.5.予想以上に問題が難しかったこともあり,英語学習支援システムのプロトタイプシステムの開発は行わず,システム構築の知識の組織化に重点を置いて行った.その際フランス人が英語を学ぶときの困難さと日本人の場合の困難さとを比較検討して,文化差と言語学習の困難さの一般理論を得る手がかりを得た.6.プロトタイプシステムの振る舞いを模擬して英語教師に提示するとともに,システムの構成やオントロジーを用いて構造化された日欧の文化差を説明する知識を見てもらい,良好な評価を得た.7.評価を分析して,知識やシステムの設計に反映させている.従来,言語学習は対象とする言語の性質に合わせた学習方式がとられてきた.ところが,言語学習の難しさは,学習者の母国語と対象言語との相違にあり,学習支援方式は両者の差異に依存するものでなければならない.日本人が英語を学習する場合には,日本語,ひいては日本の文化に深く染まっている学習者が英語,そして英語文化という未知の世界との相違に起因する困難さを克服することを支援する必要がある.本研究は,本特別研究員の博士論文の成果である,日英文化差の要因分析の成果を利用して,日本人が英語を学習する際に遭遇する困難さを日英の文化差の観点から分析して,オントロジー工学の手法を用いて体系的に記述し,それらの困難さを説明するモデルを構築する.そして,モデルに基づいて困難さを克服する英語学習指導方略を構成し,それを組み込んだ,日本人用英語学習支援システムのプロトタイプを開発することを目的としている.今年度は4ヶ月という短い期間しかないので,次年度のための準備を行った.1.従来研究の成果である,日英文化差の要因分析の成果を整理した.2.日本人が持つ英語学習における困難さを調査した.3.それらの要因を言語学習に特に関係の深い部分を再検討して,言語学習における文化差の影響を調べた.4.オントロジー工学を検討して,文化や言語に関するオントロジー構築の先例を調査し,調査結果を分析して,オントロジー工学を適用する際の注意事項を纏めた.-オントロジー工学を検討して,文化や言語に関するオントロジー構築の先例を調査する。調査結果を分析して,オントロジー工学を適用する際の注意事項を纏めた.-日本人が持つ英語学習の困難さを,表層的な言語差に依存する部分と文化差にも依存する部分とに分けて詳細に検討した。日本に来る前の研究(博士)、教師との議論、授業参観、英語と日本語で書いた論文などの検討も行った。-文化差で説明できる困難さに関して更に詳細に分析した.-検討結果に基づいて,オントロジー工学を用いて相違点に潜む概念構造を分析して,その概念の組織化を行い,オントロジーを構築した.-日本人に英語を教えている教師にインタビューすることによって教師が持つ経験則的教授戦を収集した.そしてそれらがL1(日本語)を話す学習者が出会う困難さを回避するための有効性に関する考察を行った(3月と4月)-現在大阪大学で日本語の授業を受けており,それが研究の役に立った.-所属している研究室で非公式にではあるが英語の授業を行っており,日本人が英語を習得することの困難さを見分けることに役立った.-言語学習とCALL(コンピュータ支援言語学習)について学会とワークショップに参加した。そのおかげで研究と関係のある人的ネットワークが広がって来て、特に日本で勤めている英語教師と学者と知り合い,意見交換することができた。-2005年で行ったJALT(全国語学教育学会)が主催する学会の進行諮問委員会のメンバーとして、私の研究と関係のある会議プログラムを検討した。-2006年に行われる学会のAbstractを提出した。日本人が英語を学習する場合には,日本語,ひいては日本の文化に深く染まっている学習者が英語,そして英語文化という未知の世界との相違に起因する困難さを克服することを支援する必要がある.本研究は,日英文化差の要因分析の成果を利用して,日本人が英語を学習する際に遭遇する困難さを日英の文化差の観点から分析して,オントロジー工学の手法を用いて体系的に記述し,それらの困難さを説明するモデルを構築する.そして,モデルに基づいて困難さを克服する英語学習指導方略を構成し,それを組み込んだ,日本人用英語学習支援システムを開発することを目指した.1.構築されたオントロジーを用いて種々の困難さを説明するモデルを記述完成している.2.困難さを説明するモデルを参考にしつつ,それを回避するための教授戦略に関する考察を特定の例を使いながら行った.

3.日本人に英語を教えている教師にインタビューすることによって教師が持つ経験則的教授戦略を収集完成した.4.対象とする英語教材とシステムの評価をしてくれる組織を選定した.5.予想以上に問題が難しかったこともあり,英語学習支援システムのプロトタイプシステムの開発は行わず,システム構築の知識の組織化に重点を置いて行った.その際フランス人が英語を学ぶときの困難さと日本人の場合の困難さとを比較検討して,文化差と言語学習の困難さの一般理論を得る手がかりを得た.6.プロトタイプシステムの振る舞いを模擬して英語教師に提示するとともに,システムの構成やオントロジーを用いて構造化された日欧の文化差を説明する知識を見てもらい,良好な評価を得た.7.評価を分析して,知識やシステムの設計に反映させている.
神経変性における病因遺伝子産物構造変化の解析

神経変性疾患の原因の一つに蛋白質のミスフォールディング、凝集体形成の関与が示唆されている。われわれはポリグルタミン鎖を安定性の極めて高い蛋白質の一つであるマッコウクジラミオグロビンへ挿入し、ポリグルタミン鎖の構造およびポリグルタミン挿入に伴うホスト蛋白質の構造変化を検討した。その結果変異型ミオグロビンに挿入された伸長したポリグルタミン鎖は分子内ベータシート構造をとっていることが判明した。また、35、50のリピート数をもつミオグロビンは凝集体を形成し始めると分子間ベータシート構造を含んでいることが明らかになった。アミロイドベータタンパクなどではprotofibrilと呼ばれる中間体の方が毒性は強いといわれており、ポリグルタミンにおいても同様のものが存在するか、理研播磨研究所のSpring8を用いてX線回折とX線小角散乱法による解析を行った。Q50をX線小角散乱法で解析する過程で線維形成前に特異な重合体の形成を検出し、電子顕微鏡像ではこの重合体は線維を形成していないことを認めた。非線維形成凝集体はその表面にポリグルタミンが露出していることが1C2抗体の染色性から示唆され、一方このエピトープは線維形成に伴い隠される。このような現象は非繊維型凝集体が独自の毒性の構造上の基盤を持つことを示唆する。このような構造体の存在から我々はポリグルタミン凝集体の細胞内機能分子のrecruitingには二つのメカニズムが存在すると考える。すなわちベータシートを形成した表面に露出したポリグルタミン鎖に結合する形でのポリグルタミン病共通のrecruitingおよびホスト蛋白に結合する蛋白のrecruitingである。同疾患の治療戦略はこの両方の凝集体形成阻止が必要と考える。
鉄・マンガン水酸化物と水溶液間の希土類元素の分配に関する実験的研究

本研究の目的は,鉄・マンガン水酸化物と水溶液間の希土類元素の分配係数を実験的に決定することによって,(i)天然水におけるランタニドとYおよびScの分別は,鉄・マンガン水酸化物と天然水との平衡分配反応に規制されながら起っていることを示し,(ii)この分配係数を4f電子数の関数として考察することによって,分配係数に反映されているテトラド効果,溶液および沈澱におけるランタニドイオンシリーズ内での配位状態の変化を識別することである。この為に,常温付近の温度条件下で,REE(Y,Scを含む)を添加したNacl溶液から鉄・マンガン水酸化物沈澱物を生成させ,pHの測定の後,溶液とその沈澱物を分離し,両相のREE濃度を測定することによって,分配係数の実験値を求める方法を確立した。10個の実験試料を恒温下で同時に攪拌する恒温攪拌装置を製作するとともに,超音波ネブライザーをICP発光分析計に接続することによって,REE測定の定量下限を従来の十分の一程度に改善することが出来るようになった。(i),(ii)の目的に関してはほぼ想定した成果が得られた。弱酸性条件下で見られる分配係数の上に凸なテトラド効果は,鉄・マンガン水酸化物と共沈するランタニドイオンのラカ-係数が,水和ランタニドイオンのラカ-係数よりかなり小さいことによる。更に,分配係数には,水和ランタニドイオンにおける構造変化とともに,沈澱物中の重希土類元素イオン(Tm,Yb,Lu)の配位状態の異常も反映されていることが判った。(1)NaCl水溶液(I=0.1-0.5M)と(Fe,REE)(OH)_3のあいだに於けるREE^<3+>の分配係数をpH=5-6,T=20-35°Cの実験条件でもとめた。このような条件下では,分配係数はNaCl濃度に依存した系統的変化を示さず,REEとCl^-イオンの錯体形成効果は無視できることが判った。得られた分配係数にはテトラド効果が明瞭に認められるが,LaからEuまでとTmからLuまでの部分にはテトラド効果では説明出来ない変化も見られる。これらはREE^<3+>(aq)のLREEに於ける配位数変化とHREE(OH)_3における六方晶系から立方晶系への構造変化を,それぞれ反映したものである。更に広い温度範囲でのデータを得るべく実験を継続している。(2)Jorgensen-Kawabeの理論式から,REE^<3+>(aq)のLREEに於ける配位数変化と同形型REE(III)錯体の溶解・錯生成反応の熱化学パラメーターのテトラド効果について考察した。そして,REE^<3+>(aq)のLREEに於ける配位数変化を伴う構造変化の熱化学パラメーターを求めた。さらに,REE^<3+>(aq)を含むいくつかのREE(III)錯体種間のRacahパラメターの系統的変化を発見した。これらの成果は,2編の論文として国際誌に現在投稿中である。また関連するもう一つの論文を国内の英文誌に投稿し,査読後の改訂原稿を返送した状態になっている。(3)本研究経費にて購入したICP-AES用の超音波ネブライザーは、ICP-AES測定において,これまでのネマッチックネブライザーに比べ,10-20倍の測定感度向上もたらすことを確認した。感度の安定性については,水晶発振子の汚染除去に注意すれは従来のネブライザーとそれほど違わない安定性が確保出来ることも判明した。ルーチン分析に威力を発揮している。(4)分配係数に対する重炭酸・炭酸イオンの効果を検討し,これらの陰イオン濃度の増大がHREEの分配係数を大きく低下させることを確認した。これはREEイオンと上記の陰イオンとの錯形成定数がHREE側で大きくなることと良く対応しいる。

この結果は,トレイサ-REEを用いて求められている単独REEイオンの炭酸・重炭酸イオンとの錯形成定数の値とは,定性的には一致するものの,定量的には一致していない。この不一致の理由については,現在検討中である。本研究の目的は,鉄・マンガン水酸化物と水溶液間の希土類元素の分配係数を実験的に決定することによって,(i)天然水におけるランタニドとYおよびScの分別は,鉄・マンガン水酸化物と天然水との平衡分配反応に規制されながら起っていることを示し,(ii)この分配係数を4f電子数の関数として考察することによって,分配係数に反映されているテトラド効果,溶液および沈澱におけるランタニドイオンシリーズ内での配位状態の変化を識別することである。この為に,常温付近の温度条件下で,REE(Y,Scを含む)を添加したNaCl溶液から鉄・マンガン水酸化物沈澱物を生成させ,pHの測定の後、溶液とその沈澱物を分離し、両相のREE濃度を測定することによって,分配係数の実験値を求める方法を確立した。10個の実験試料を恒温下で同時に撹拌する恒温撹拌装置を製作するとともに,超音波ネブライザーをICP発光分析計に接続することによって,REE測定の定量下限を従来の十分の一程度に改善することが出来るようになった。(i),(ii)の目的に関してはほぼ想定した成果が得られた。弱酸性条件下で見られる分配係数の上に凸なテトラド効果は,鉄・マンガン水酸化物と共沈するランタニドイオンのラカ-係数が,水和ランタニドイオンのラカ-係数よりかなり小さいことによる。更に,分配係数には,水和ランタニドイオンにおける構造変化とともに,沈澱物中の重希土類元素イオン(Tm,Yb,Lu)の配位状態の異常も反映されていることが判った。
膵癌の治療奏功性・抵抗性におけるVCAM-1の機能解析と臨床における有用性

本研究の目的は、膵癌患者の血漿を用いてVCAM-1と膵癌の治療抵抗性もしくは奏功性との関連を明らかにし、さらにVCAM-1の機能解析を加えることで実地臨床に有用な生体マーカーかつ治療標的分子としてのVCAM-1の有用性を示すことである。我々はこれまでの研究で、まず膵癌化学療法患者から採取した血漿検体を用いて可溶性VCAM-1の値と患者の予後、治療奏功性・抵抗性との相関についての検討から、血中の可溶性VCAM-1の減少とgemcitabineによる化学療法の無増悪期間の延長に相関が見られることを示した。その後、膵発癌マウスモデル(遺伝子型Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+;Tgfbr2flox/flox)から樹立した膵癌細胞株などを用いた検討により、膵癌細胞におけるVCAM-1の発現はin vivoで腫瘍の増大に影響を持つことを示した。またVCAM-1はマクロファージの遊走能に影響し、マクロファージと腫瘍細胞の相互作用により膵癌細胞株がgemcitabineへの耐性を増す可能性を示した。これらの結果を踏まえ、膵癌モデルマウスに対してVCAM-1中和抗体及びgemcitabineとVCAM-1中和抗体の併用療法を行ったところ、いずれも生存延長効果、腫瘍縮小効果が認められた。また膵癌細胞のマウス皮下移植モデルに対しても同様の治療を行ったところ、腫瘍の縮小効果が認められた。一方、いずれの実験においても、VCAM-1中和抗体とgemcitabineの併用療法において明らかな相乗効果は認められなかった。VCAM-1は腫瘍間質の繊維芽細胞でも発現が認められており、腫瘍細胞のみではなく、間質も含めた腫瘍全体から分泌されて腫瘍の増大および進展に寄与していると考えられた。1)まず膵癌化学療法患者から我々が採取し蓄積している多数例の経時的な血漿検体を用いて測定した可溶性VCAM-1の値と患者の予後、治療奏功性・抵抗性との相関について統計学的な検討を行った結果、血中の可溶性VCAM-1の減少とgemcitabinemによる化学療法の無増悪期間の延長に相関が見られることが明らかとなり、VCAM-1が化学療法の耐性を示す指標となることが示された。2)次に可溶性VCAM-1や細胞表面に発現するVCAM-1の持つ機能について検討するために、我々の樹立した膵発癌マウス(遺伝子型Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+;Tgfbr2flox/flox)から分離培養した細胞株を用いてVCAM-1のノックダウンや恒常発現細胞株を作成した。VCAM-1の発現の変化のみでは培養時の細胞増殖速度に変化が見られなかったのに対し、マウス皮下に移植した腫瘍の増殖速度は増加した。また培養上清中の可溶性VCAM-1がVCAM-1ノックダウン株では減少し、恒常発現株では増加していることを確認し、この上清やrecombinant VCAM-1に対してマクロファージ細胞株がVCAM-1濃度依存的に遊走することを確認した。また膵癌細胞株とマクロファージ細胞株の共培養により膵癌細胞株のgemcitabine感受性が変化することを示した。3)これらの結果を踏まえ、膵癌モデルマウスを用いてVCAM-1の中和抗体投与もしくはgemcitabineとの併用療法による治療抵抗性の克服効果についてin vivoで検討を行っている。

平成26年度の研究計画については、以下のように、ほぼ予定通りに進捗したと考える。まず我々はこれまで蓄積した膵癌化学療法患者の血漿を用いてELISAでの測定により可溶性VCAM-1の経時的な変化を検討し、患者の予後、無増悪期間などの臨床情報と照らし合わせて治療抵抗性との相関について検討し,VCAM-1値の変化と無増悪期間との関連を示した。マウス膵癌やヒト膵癌の組織切片を用いて、免疫染色により癌組織におけるVCAM-1の発現を検討した。さらに我々がモデルマウスから樹立したマウス膵癌細胞株と癌関連繊維芽細胞株を用いて上清中の可溶性VCAM-1を測定し、gemcitabine投与による発現の変化について検討した。可溶性VCAM-1の産生について、ADAM17による細胞表面のVCAM-1の切断が寄与するかについても検討を加えた。VCAM-1の機能解析として、recombinant VCAM-1を用いたマクロファージの遊走試験を行った。さらに、膵癌細胞株に対してレンチウイルスの系を用いてVCAM-1のノックダウン細胞株や恒常的発現株を作成し、これらの細胞の上清に対するマクロファージの遊走試験やVCAM-1の発現量の変化による腫瘍浸潤能、腫瘍増殖能への影響について検討を行った。また中和抗体を用いて可溶性VCAM-1の機能を阻害した場合に、これらの結果がどのように変化するかについても検討した。癌関連線維芽細胞との相互作用についても検討を行った。また抗癌剤に対する耐性への寄与についての検討として、繊維芽細胞やマクロファージと癌細胞との共培養を行った。また免疫抑制マウスに対してこれらの膵癌細胞株を皮下移植し、in vivoでの腫瘍形成能、腫瘍増殖能の変化を評価した。癌細胞におけるVCAM-1の発現制御機構やシグナル伝達に関してはまだ検討の余地があり、平成27年度以降の検討課題と考えられる。前年度の実験結果を踏まえ、VCAM-1の阻害とgemcitabineとの併用治療を膵発癌マウスに対して施行し、その抗腫瘍効果・生存期間を検討する。膵発癌マウスを対照群、gemcitabine単独群、VCAM-1阻害剤単独群、gemcitabine+VCAM-1阻害剤併用群の4群に分け、死亡まで投与継続する。その治療効果の実際の生体内での機序を確認するため、腫瘍組織・血液サンプルを収集し、様々なシグナルの活性化や阻害、間質構成成分の変化(血管新生・マクロファージ浸潤・線維化・細胞外マトリックス成分等の変化)についてウェスタンブロットや定量的PCR,免疫染色などにより詳細に検討する。この併用治療に対しては、gemcitabine単独とはまた異なる遺伝子発現プロファイル・血中液性因子プロファイルの変化が出現することが予測される。それはこの併用治療による治療効果を示すものであると共に、事前に予測されなかった新たなシグナルのクロストークを示す変化が現れている可能性がある。ヒトへの臨床応用を考える上では、Adverse effectにつながる変化がないかということについても詳細に検討する必要があるため、マイクロアレイによる網羅的な解析を行うことも検討する。