hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
パルスイオンビームアブレーションを用いた超高硬度材料の作製

従って、HOPGの表面はイオンビームの照射によって一度液化したと考えられる。炭素は高温(5000K)、高圧力(11MPa)下で液化すること知られているので、HOPGの表面もイオンビームの照射によって同様の状態になったと推察される。また、HOPG表面の構造は、照射するイオンビームのエネルギー密度が増加すると、グラファイトの無秩序構造も増加することが判明した。1)大強度パルスイオンビームをB_4Cターゲットに照射してアブレーションプラズマ化し、これを隣接する基板上に堆積して薄膜作製を試みた。その結果、基板加熱なし、後処理なしの条件下で、HV(ビッカース硬さ)2,400の硬さを持つ結晶化したB_4C薄膜の作製に成功した。しかも作製されたB_4C薄膜はゼーベック係数がこれまで知られていた値の3倍程度にも達する大きな熱電特性を示すことが判明した。将来の有望な熱電デバイスが開発されたと言えよう。2)パルスイオンビーム照射前後のターゲットの質量評価、高速度カメラ撮影、電子天秤、カロリーメーター、イオンフラックス計測等から、種々(アルミニウム、鉛、タングステン、銅、銀等)のターゲットを用いてアブレーションプラズマの動特性評価を行った。その結果、成膜はターゲットのアブレーション量に強く依存する事、アブレーション量や成膜量はターゲットの沸点に大きく依存する事、鉛や銀ターゲットでは瞬時に蒸発し、プラズマはターゲットの裏側まで回りこむが、タングステンでは蒸発時間が長く、直線的に膨張する事、アブレーションプラズマが基板に到達すると基板表面温度は断熱的に上昇して結晶化が促進される事、等が判明した。3)イオンビーム・ターゲット相互作用による飛翔体加速軽い質量を持つターゲット(例えばアルミニウム)の表面に、それよりも質量の重いもの(例えば金)を塗布した2層ターゲットにパルスイオンビームを照射すると、軽重2層の或る組合せの時に、飛翔体速度が最大となる。上記結果は、流体近似モデルを用いたコンピューターシミュレーションの結果、実験とシミュレーションは非常に良く一致することが判明した。1.熱伝導シミュレーションによる成膜時の基板温度評価大強度パルスイオンビーム蒸着法(Intense Pulsed Ion-beam Evaporation : IBE法)では、炭化ホウ素(B_4C)のように高硬度で結晶化し難い材料を、室温で容易に結晶化できる。これは、イオンビームにより放出されるアブレーションプラズマが基板に与える影響が大きいためと推察される。そこで、アブレーションプラズマの挙動を高速度カメラで計測すると共に、基板に与える熱量をシミュレーションから求めた。高速度カメラの計測により、アブレーションプラズマは基板上に30μs程度滞在することが判明した。そして、基板上の温度は、アブレーションプラズマによって800°C程度まで上昇することが導出された。従って、アブレーションプラズマが基板に与える熱量が大きいために、室温で結晶化した薄膜を作製できることが判明した。
超高速超音波イメージングによる血管動態の高精度計測

現在,脳梗塞などの重篤な疾患は,動脈硬化病変の破綻によって形成された血栓が内腔を閉塞することにより発症すると言われている.本研究では,病変の易破裂性診断など,動脈硬化症診断のための血管動態の高精度計測法に関する研究を行った.具体的には,心拍にともなう動脈壁の2次元変位の高精度計測方法を開発するとともに, 3500 Hzという従来にない高時間分解能で血流を観察できる全く新しい超音波血流イメージング方法を開発し,その血流イメージから血流速度分布の推定も行った.現在,脳梗塞などの重篤な疾患は,動脈硬化病変の破綻によって形成された血栓が内腔を閉塞することにより発症すると言われている.本研究では,病変の易破裂性診断など,動脈硬化症診断のための血管動態の高精度計測法に関する研究を行った.具体的には,心拍にともなう動脈壁の2次元変位の高精度計測方法を開発するとともに, 3500 Hzという従来にない高時間分解能で血流を観察できる全く新しい超音波血流イメージング方法を開発し,その血流イメージから血流速度分布の推定も行った.現在,脳梗塞などの重篤な疾患は,動脈硬化病変の破綻によって形成された血栓が内腔を閉塞することにより発症すると言われているが,従来の画像診断装置により病変の形状や大きさを測定するといった静的特性の評価では易破裂性診断は難しい.本研究では,病変の易破裂性診断など,動脈硬化症診断のための血管動態の高精度計測法・システムの研究開発を行う.本年度は,心拍にともなう動脈壁の2次元変位の高精度計測方法に関する研究を行った.従来の2次元変位計測法として,超音波信号のパターンマッチング法が挙げられるが,この方法は基本的に超音波信号の標本化間隔に依存する.本研究では血管動態の高精度計測のため,従来の超音波イメージング法(フレームレート数十Hz)に比べはるかに時間分解能の高い計測を行うため(1kHz以上),フレーム間の動脈壁変位は超音波信号の標本化間隔に比べ非常に小さくなり,これをパターンマッチングで計測するためには,超音波信号に対して非常に多くの補間を行う必要があり実用的ではない.特に,超音波信号は横方向の分解能が垂直方向に比べ一般的に低く,横方向変位の高精度計測が難しい.そこで本研究では,超音波信号の位相を用いることで,動脈壁の横方向変位を,超音波信号の補間なしに高精度に計測できる手法を開発した.模擬血管(シリコーンゴム管)を用いた基礎実験により精度評価を行ったところ,従来法(誤差70.8%)に比べ大幅に精度を改善(誤差6.1%)することができた.本申請者がこれまでに開発した超高速超音波イメージングシステムを用いた,新しい超音波血流イメージング法に関する研究を行った.通常の超音波血流計測法では,血球からの微弱な超音波散乱波を検出するために,同じ計測位置に対して複数回超音波を照射している.この際,送受信ともに集束ビームを用いているため,1枚の画像を構成する走査線数分の送受信回数が必要であった.一方,本研究における超高速超音波イメージングシステムでは,広い送信ビーム中に複数の受信集束ビームを形成するため,同じ走査線数を得るための送信回数を低減でき,時間分解能を飛躍的に向上できる.それにより3500Hzという従来にない高い時間分解能で血球からのエコーの動きを観察することが可能となり,頸動脈における実際の血流速度と良く対応する血球からのエコーの動画像を得ることができた.これは,従来の数十Hzの時間分解能では不可能であり,本計測システム・方法を用いた高時間分解能計測により初めて可能となったものである.さらに,この血球エコーの動画像に2次元変位計測法を適用することにより血流速度の大きさだけでなく方向の推定も行った.その結果,血管の長軸方向に沿った血流が見られ,また,内腔中心部に比べ壁に近い領域では血流速度が小さくなるという良く知られた血流プロファイルが得られた.本手法は,高時間分解能計測により血球からの超音波散乱波の動きを動画像で観察することが可能であり,さらに開発した2次元変位計測法と組み合わせることにより血流プロファイルも推定できるという,これまでの超音波血流イメージングでは得られない有用な情報を提示する手法として,循環系の診断に大いに貢献することが期待できる.
日本産殻状紅藻イワノカワ科の系統分類学的研究

1.カイノカワは,形態学的研究が不十分なため,この種の定義は不明確であった。これまでの研究で,この種が,ブラジルで記載されたP.boudouresqueiと栄養組織と生殖器官の形態が一致することがわかったため,本年度は,ブラジルのP.boudouresqueiの標本を得て,他のイワノカワ科の種とともに核の26S rDNAの部分配列と葉緑体のrbcLについて系統解析を行った。その結果P.boudouresqueiはカイノカワと単系統のグループとなり,他の種とは明らかに区別された。また,26S rDNAやrbcLのほか,ミトコンドリアのcox2-3 spacer領域についてもカイノカワとP.boudouresqueiの配列を比較したところ,いずれの遺伝子の塩基配列においても,日本とハワイのカイノカワとブラジルのP.boudouresqueiに区別できるが,遺伝的変異は種内レベルであった。そのため,P.boudouresqueiは,カイノカワP.japonicaのシノニムとして扱うべきである。2.エツキイワノカワは,日本で記載された種であるが,南アフリカで記載されたP.capensisと栄養組織と四分胞子体や雌性配偶体の生殖器官の形態が類似しているため,P.capensisと同種として扱われる場合がある。しかし,種レベルの分類形質として重要な精子嚢の発達様式が,エツキイワノカワでは不明確であったため,タイプ産地の標本をもとに,エツキイワノカワの定義を再検討した。その結果エツキイワノカワは,P.capensisと栄養組織と生殖器官の形態が一致していた。3.南太平洋でP.capensisとして報告されている種は,原記載の種やエツキイワノカワと異なり,藻体内部に石灰粒を持たないことが以前から指摘されていた。そこで,日本の南西諸島と太平洋各地の石灰粒を持たないP.capensisについて形態観察をしたところ,石灰粒を持たないP.capensisは,石灰粒を持つP.capensisやエツキイワノカワと同様な雌雄の生殖器官の形態をもっていた。しかし,26S rDNA, rbcL, cox2-3 spacer領域の塩基配列による系統解析では,石灰粒を持たないP.capensisは,石灰粒を持つP.capensisとエツキイワノカワのグループとは,別種であることが示唆された。4.また,殻状紅藻の標本114個を北海道大学標本庫SAPへ収蔵する作業を行った。日本新産種3種と,分類学的な検討が必要な既報告種2種について,種を確実に把握するために形態観察や分子系統解析を進めた。1.日本新産属ポリストラータ属Polystrataは,世界的にも分類学的,生態学的知見がとても少ない。そこでPolystrata dura(この属のタイプ種)とP.foslieiを詳細に観察し,これまで未報告だった,この属の雌雄の生殖器官がイワノカワ属と全く同じ形態であることを明らかにした。さらに,これら2種を含むイワノカワ科について行った分子系統解析でも,この属がイワノカワ属に非常に近縁であることが支持された。また,ポリストラータ属は,南西諸島において,無節サンゴモ類と同様にサンゴ礁を形成する役割を担っていた。以上のことを踏まえ,ポリストラータ属2種の形態的特徴とイワノカワ科内での系統的位置についての論文を作成した。2.イワノカワ属Peyssonneliaの日本新産種2種P.armoricaとP.harveyanaについて,形態観察のデータを追加し,論文を投稿した(現在は,査読に基づき改訂中)。3.エツキイワノカワP.cauliferaと日本新産種P.capensisについて類似種と比較し,それぞれの種の独立性を検討したが,分類学的な変更をするのに十分な結果は得られなかった。それゆえ,現段階ではこの2種を残し,P.capensisを日本新産種として報告するため,観察を継続中である。4.日本産P.dubyiは,精子嚢の形態が原記載と異なるため,誤同定である。そこで日本においてこの種が記載された北海道網走市の標本を観察したところ,北海道留萌市で新種記載したP.rumoianaと精子嚢の形態が類似していた。日本産P.dubyiとP.rumoianaが同種であるかどうか研究を継続中である。5.標本採集は国内4地域のほか,海外2カ国において行った。フランスとアイルランドでは,イワノカワ属5種のタイプ産地で採集を行った。そして,それぞれの体構造と雌雄の生殖器宮をもとに確実に同定できた3種について,1.の系統解析に用いた。1.分類学的再検討が必要なエツキイワノカワ,カイノカワ,Peyssonnelia dubyi類,ベニイワノカワ類の観察と分子データの比較のため,北海道南部,東北太平洋岸,瀬戸内海,九州地方ならびにタイでのサンプリングを行い,標本の同定を行った。2.カイノカワは,日本で胞子体のみに基づき記載されたが,後の研究者によって2度,この種そのものの形態の再検討を伴わずに属名の変更が行われ,現在ではイワノカワ属Peyssonneliaとされている。そのため,イワノカワ属の類似種と区別するには,栄養組織や雌雄の生殖器官の形態を明らかにする必要があった。そこで,タイプ標本ならびに新たに採集したタイプ産地の標本を中心に国内約30カ所の標本を観察し,この種が,平行に並ぶ基層の細胞糸,連絡糸から形成される造胞糸,P.dubyi型に発達する精子嚢を持つことを新たに確認した。

その結果,カイノカワは,栄養組織と生殖器官の,すべての分類形質についてP.boudouresqueiと一致したため,この2種は同種の可能性があることが分かった。カイノカワはP.boudouresqueiより先に記載された種であることから,P.boudouresqueiは,Peyssonnelia japonicaカイノカワとして扱うべきであると考えられる。また,国内15カ所とハワイの1カ所のカイノカワの標本について,rbcLとcox 2-3spacer領域の塩基配列を比較した。いずれの場合も,ほかのイワノカワ科や紅藻類の種と比べても,形態をもとにカイノカワに同定した標本は互いに近縁であった。この内容については,平成18年3月に行われる日本藻類学会で発表する予定である。3.平成17年11月にタイで行われた,第4回国際藻類学会に出席し,ポリストラータ属2種の分類学的再検討について発表を行い,同内容を雑誌に投稿した。1.カイノカワは,形態学的研究が不十分なため,この種の定義は不明確であった。これまでの研究で,この種が,ブラジルで記載されたP.boudouresqueiと栄養組織と生殖器官の形態が一致することがわかったため,本年度は,ブラジルのP.boudouresqueiの標本を得て,他のイワノカワ科の種とともに核の26S rDNAの部分配列と葉緑体のrbcLについて系統解析を行った。その結果P.boudouresqueiはカイノカワと単系統のグループとなり,他の種とは明らかに区別された。また,26S rDNAやrbcLのほか,ミトコンドリアのcox2-3 spacer領域についてもカイノカワとP.boudouresqueiの配列を比較したところ,いずれの遺伝子の塩基配列においても,日本とハワイのカイノカワとブラジルのP.boudouresqueiに区別できるが,遺伝的変異は種内レベルであった。そのため,P.boudouresqueiは,カイノカワP.japonicaのシノニムとして扱うべきである。2.エツキイワノカワは,日本で記載された種であるが,南アフリカで記載されたP.capensisと栄養組織と四分胞子体や雌性配偶体の生殖器官の形態が類似しているため,P.capensisと同種として扱われる場合がある。しかし,種レベルの分類形質として重要な精子嚢の発達様式が,エツキイワノカワでは不明確であったため,タイプ産地の標本をもとに,エツキイワノカワの定義を再検討した。その結果エツキイワノカワは,P.capensisと栄養組織と生殖器官の形態が一致していた。3.南太平洋でP.capensisとして報告されている種は,原記載の種やエツキイワノカワと異なり,藻体内部に石灰粒を持たないことが以前から指摘されていた。そこで,日本の南西諸島と太平洋各地の石灰粒を持たないP.capensisについて形態観察をしたところ,石灰粒を持たないP.capensisは,石灰粒を持つP.capensisやエツキイワノカワと同様な雌雄の生殖器官の形態をもっていた。しかし,26S rDNA, rbcL, cox2-3 spacer領域の塩基配列による系統解析では,石灰粒を持たないP.capensisは,石灰粒を持つP.capensisとエツキイワノカワのグループとは,別種であることが示唆された。4.また,殻状紅藻の標本114個を北海道大学標本庫SAPへ収蔵する作業を行った。
書誌計量的アプローチによる日米欧の組織研究成果の分析-文献調査とデータベース構築-

本研究では、1970年代から90年代にかけて欧米の組織研究を対象に行われた計量書誌学的アプローチの研究成果を参照し、各年代の日米欧の組織研究の内容、対象、強調点、方法論、価値観、方向性などの地域的特性を明らかにすることを目的としている。すなわち、日米欧(イギリスを含む)の代表的な組織研究雑誌に掲載された論文ならびにそこに所収の引用文献から、国や地域の特異性あるいは類似性を探ろうとするものである。文化・社会が異なる国・地域において、学問のパラダイムや方法論が異なると考えるのは自然のことであろう。そうであれば、わが国の組織研究の方法や内容にも独特の地域性が認められるかもしれない。われわれの先行研究において、欧米の組織論の研究方法は、新しいアプローチの誕生により一定のパラダイムに収斂したり、多様化したりと、収斂と分岐を繰り返していることが明らかとなった。北アメリカでは、3つの研究群に、そしてヨーロッパでは4つの研究群に収斂あるいは統合の方向に進むとともに新しいパラダイムを生み出そうとする方向性もみられる。わが国の組織論研究の代表的学術誌である、組織学会編『組織科学』(白桃書房)の1967年(Vo1.1-1;創刊号)から2003年(Vol.36-3)までに同誌に掲載された全142冊(号)961篇の論文より、主題、著者名、所属機関、キーワード、参考文献ならびに注についての全データをエクセルに入力することから始まった。『組織科学』は、ほとんどが日本人の研究者の論文で編集されており、欧米と比較してかなり地域性が高い。同誌に掲載されている外国人の論文の数が全体に占める割合は、およそ3%程度に過ぎないが、その反面、日本人研究者の外国文献の被引用数/割合は相対的に高いのが特徴である。また、同誌に5回以上執筆した者が、掲載論文の全体の27.0%つまり4分の1強を占めていた。そして、当然のことながら、同誌に論文が掲載された回数と、それが他の研究者によって参考・引用される回数には、高い相関関係がみられた(ρ=0.77)。1990年(Vol.23-1)から2002年(Vol.36-1)までの組織学会編『組織科学』(白桃書房)に掲載された論文より、主題、著者名、所属機関、キーワード、参考文献ならびに注についてのデータを入力したが、そのうちの(1)執筆者、(2)論文タイトル、(3)キーワード、(4)注・参考文献についての(単語の)出現回数を求めるに留まった。まず、(1)執筆者についてだが、対象期間の51号(冊)にわたり340名の投稿があった。そのうち281名が1回のみの掲載で、2回が38名、3回が11名、4回が6名であった。それ以上は各1名で、野中郁次郎(一橋大学-9回)、日置弘一郎(京都大学-7回)、高橋伸夫(東京大学-6回)、今田高俊(東京工業大学-5回)となっている。ちなみに、同誌は平均1巻につき4号で構成され、1冊(号)には平均6.7本の論文が掲載されている。

次に(2)論文タイトルについてだが、当然、組織(55回)、システム(27)、企業(23)、日本企業(20)、マネジメント(17)、ネットワーク(16)、モデル(11)などといった語句が入った論文が多い。これは、(3)キーワードについても同様で、システム(45)、組織(41)、ネットワーク(31)、モデル(28)、企業(23)、理論(16)、情報(13)、キャリア(11)、プロセス(11)、リーダーシップ(11)、情報技術(10)、支援(10)、知識(10)と続く。とくに関心を引くものに、アイデンティティ(9)、学習(9)、ボランティア(8)、NPO(8)、コミットメント(7)、組織学習(7)、アウトソーシング(6)、エコロジー(6)、文化(6)、日本的経営(6)、組織文化(6)、企業倫理(5)、自己組織性(5)などがある。本研究の調査対象期間である1990年代全般は、わが国ではバブル経済崩壊後の不況期であるため、コンピュータや情報技術(IT)をインフラとする新しい合理的管理イデオロギーが支配的になるはずであり、それが組織研究に反映すると考えられる。例えば、上述したもの以外では、情報技術(10)、イノベーション(7)、情報システム(7)、生産性(6)、情報処理(5)、研究開発(5)などがそれを表している。また、ヨーロッパやイギリスでみられる、より哲学的あるいは批判的な研究アプローチに関連するキーワードは、『組織科学』において、わずかに近代合理主義的組織観批判(1)という語句しかなかった。前年度に引き続き、組織学会編『組織科学』(白桃書房)に掲載された論文より、主題、著者名、所属機関、キーワード、参考文献ならびに注についてのデータを追加入力した。その結果から、(1)総目録データ一覧、(2)年度別書誌事項一覧、(3)重要キーワード初登場巻号数年一覧、(4)代表的執筆者論文の年代別注・参考文献登場回数などを作成した。まず、この(1)の総目録データ一覧は特集テーマ、巻頭書・テーマ・発刊の辞(執筆者)、掲載論文数をはじめ目次の内容を整理したものである。その特徴は、特集テーマに沿った論文を中心に自由論題と書評を柱とした構成になっており、掲載論文数は、1本とか19本といった例外を除けば、およそ4本から8本程度である。ただ、創刊後10年間は、投稿論文、研究ノート、資料、文献紹介、学会展望をはじめとして、目次構成に多様性がみられたが、しだいにスリムになってきた。(2)の年度別書誌事項一覧は、(1)執筆者、(2)論文タイトル、(3)キーワード、(4)注・参考文献について、創刊号から2003年分まで検索・ソートできる状態に整理したものである。このデータを用いて(単語の)出現回数を求めた。(3)の重要キーワード初登場巻号数年一覧では、日本的経営(3-1:1969年)、情報化(4-1:1970年)、リーダーシップ(4-2:1970年)、キャリア(13-2:1979年)、教育(16-3:1982年)、OA(16-4:1982年)、ベンチャー(17-4:1984年)、グローバル(18-4:1985年)、コーポレート・ガバナンス(28-4:1995年)、NPO(31-2:1997年)等のキーワードが論文に登場した巻号数ならびに年数を整理した。(4)の代表的執筆者論文の年代別注・参考文献登場回数は、創刊から長期間にわたり注・参考文献として用いられてきた代表的研究者の年代別掲載回数をみたものである。
琳派の系譜 その継承と交流 -神坂雪佳を中心に

平安遷都されてから、既に1200年以上の歳月が流れた京の都において美術・工芸は連綿と受け継がれてきた。当館では、1963年開館当初より日本画・洋画・工芸・写真など日本の近代美術、とりわけ京都の近代美術に重点を置いて調査・研究を行ってきた。その成果は美術館である当館では展覧会として発表し、鑑賞とともに研究成果を公開としてきた。近代の京都では工芸の近代化が進められ、絵画界と工芸界の結びつきも密接であった。神坂雪佳は絵画、工芸の両分野で活躍し、工芸界のみならず美術界にも大きな影響を与えた。とくに図案家あるいは装飾の分野では、明治末から大正、昭和前期にかけて琳派を再出させ江戸のデザインを時代の要求に合わせ、当時の工芸や装飾に用いたことに類い希なる才能を発揮したといえよう。同時に海外では琳派の画家として認識され高く評価されており、今日もなお多くの作品が流出している。しかし、その流出後の作品の所在は不明なものが多いことも事実である。本研究では、前述の状況を踏まえ、琳派を再出させた日本画家、図案家、そして工芸界の指導者という様々な側面を持っ神坂雪佳が遺した作品・資料などを発掘・検証し、その役割と影響を明らかにすることであった。そのために研究分担員がそれぞれの専門領域を活かして、神坂雪佳の作品、著作物などの発掘・調査・研究を行い、神坂雪佳を中心に総合的な研究を行った。本年度は、明治維新以降の社会構造の近代化・産業化の中で、琳派を基礎として、京都を中心に新時代に相応しい日本独自の芸術・工芸を模索した運動の中心人物であった神坂雪佳の調査を主として行った。神坂雪佳(1866-1942)の活動時期は、明治半から昭和初であるが、没後2年目の昭和19年に現在の京都市美術館を会場として遺作展が開催された外は、彼の作品・活動が纏まった形で紹介されることは現在に至るまで一切なかった。そこで、『遺作展出品目録』ならびに出品作のうち代表作のみを白黒写真で掲載した『遺作展図録』、そして昭和56年に出版された雪佳に関する唯一の包括的文献である『近代の琳派神坂雪佳』(榊原吉郎著)を手がかりに、作品の所在を確認することが本年度の最重要課題であり、国内外に関して一定の成果を得た。とりわけ、雪佳が昭和7年を機に京都市中心部の自宅から嵯峨野に隠棲した、その晩年の住居が未だに遺されており(但し母屋は震災で損壊)、ご遺族の協力を得て4回にわたり土蔵内部を調査したところ、遺作展以降所在が不明であった作品が再発見された。また、雪佳が収集・使用した書籍・写真・書画・工芸品が数多く確認され、雪佳、ひいては当時の京都における芸術運動の動向を探る上での貴重な資料となった。しかし、これら資料は広範囲かつ相当数に上るため、本格的な分類・分析は平成15年度に行うこととした。また、雪佳の、とりわけ絵画作品は、1960年代以降相当数が海外へと流出している。その多くが個人コレクターの元にわたっており、本年度は、アメリカのバーミングハム美術館の協力を得て、合衆国本土・カナダ・フランスにおいて作品の所在確認ならびに調査を行った。本年度は、本研究の中心的人物である神坂雪佳とその交流のあった画家や工芸家の関係を、維新以後大きく変化した明治、大正、昭和の初期の京都の工芸界、美術界を中心に考察した。神坂雪佳(1866-1942)の活動は、明治の中期から昭和初期までであり、とくに明治後期からの30年間が本研究のテーマである琳派の継承と交流という面で重要な時期といえる。ちょうどこの時期は、明治維新から明治中頃にかけて世界各地で開催された万国博覧会への参加、陶磁器や染織、漆芸の輸出などで多くの美術工芸作品が制作された時であり、とくにこの分野では、明治後期になると造形や器物の装飾意匠などの形骸化したものからの刷新を迫られてきたのである。

神坂雪佳が活躍した時代は、正しく明治から始まる西洋近代化の歩みと、世界への進出の時代であり、我が国が本来持っていた美術のあり方を学び、それを再構成した形で雪佳が装飾芸術を美術・工芸界に提示したことは大きく取り上げるべきことであろう。本年度は、その解明にあたり神坂雪佳がとくに力を入れ中心となり、多方面の画家や工芸家、また学識経験者らと発行していた「京都美術協会雑誌」の完全版マイクロフィルムを入手し、それらの記述にでてくる様々な事柄から神坂雪佳を中心とした京都の美術・工芸界の交流や関係などを探った。また、膨大な一次資料を分類、調査研究するために写真撮影を行い、来年度の発行の報告書に向け準備を始めた。個人所蔵家などの調査は国内外心含め、おおかた済んだ、一部関係機関の調査が残っており、来年度それらの調査を行い本研究を纏めるつもりである。本年度は研究の最終年度として、本研究の中心人物である神坂雪佳と交流のあった画家や工芸家の関係について、報告書のかたちにまとめるべく資料の精査を行った。遺族のもとに残されていた膨大な一次資料についてはそのほとんどを館内に一時借用して、展覧会カタログと本研究の報告書で紹介すべく、館内で整理と研究を続け、あわせてまだ調査ができていなかった所蔵家、機関について調査を続行した。この結果、工芸と美術、西欧と日本、伝統と革新といったさまざまな領域や地域、時代を媒介する作家としての雪佳の位置づけが明確になったと思われる。本研究の一部は既に平成15年度に開催した「神坂雪佳琳派の継承・近代デザインの先駆者」展とその際に発行した詳細なカタログの中に反映されているが、この展覧会は本年度、アメリカのロサンジェルスカウンティ美術館とバーミングハム美術館(アラバマ州)を巡回した。この機会に海外所蔵の作品や資料について詳しい調査を進めることができた。研究最終年度となる本年は神坂雪佳のみならず、琳派全体をより広い文脈で検証するという本研究の趣旨に基づいて、洋画と日本画のアール・ヌーヴォー、琳派と現代美術といったテーマに沿った研究も研究担当者によって進められ、これらを研究成果報告書として世に問うべく、現在、編集作業が進行中である。
フッサールとウィトゲンシュタイン-20世紀の「ロゴス」をめぐる批判的対話

前年度の研究を引き受けるかたちで,当年度は,今日特に「直接的実在論」と呼ばれる知覚の哲学における一つの立場とフッサールの知覚論を突き合わせ,両者の差異と共通点を明らかにすることを試みた。その成果を学会発表において公表した。一方の発表において,特にフッサールの「理性」論を考慮しながら,知覚ないし知覚的認識と現実・実在とのあいだに成り立つ関係のあり方を考察した。フッサールの見解は,一面直接的実在論的な知覚論に近い発想を含んでいるが,しかし他面,フッサールにとって,知覚的認識の可能性は,理性の媒介を含んだ直接性という独特な仕方で成り立つものである以上,端的に素朴実在論的な知覚論と同一視されうるわけではない。「媒介を含んだ直接性」というこの事態は,なお詳細に研究される必要のあるものであるが,この研究は単に狭い意味での現象学的研究となるだけでなく,今日の知覚の哲学における諸議論と照らし合わせれば,豊かな哲学的洞察の源泉となることが期待される。もう一方の発表においては,いわゆる「選言主義」とその背景にある思想とフッサールのそれとを比較しながら,前述の論点をさらに敷衍して論じた。いわゆる選言主義が,他人の心をめぐるウィトゲンシュタインの考察と並んで,心の「内」と「外」との二分法に支配されてきた伝統的な知覚論に対する攻撃を含む以上,この研究は,フッサール現象学における「志向性」の概念をより洗練された仕方で論じるための一つの重要な視点を示唆するものであった。当年度においてなされた諸研究は,なお今後のさらなる研究を促すものであり,その成果はその意味においても,確かに有意義なものであったと言えよう。本年度はフッサール現象学における言語・論理に関する諸論考、特にその「意味」の理論を主題とする研究に取り組んだ。初期の『論理学研究』を研究の基礎としつつ、第二の主著となる『イデーンI』に至るまでの思想の変遷を追い、それを現代の論理的意味論及びいわゆる「指示」の理論との関連を踏まえながら、それを二つの論文にまとめた。特に1906年から1908年にかけて行われた関連する講義(『論理学と現象学的認識論への序論』、『意味の理論についての講義』)を読み解き、そこに得られた知見を以って、英米圏におけるフッサール研究と対峙し、フッサールの論理的思想が未だなお研究に値する十分な価値を持っているということを改めて確認するとともに、20世紀の言語・論理哲学のなかにどのように位置づけられうるかという、本研究上一つの道しるべとなるであろう問いに対して、一定の解答を与ええた。現象学と分析哲学という二つの思想潮流の対話というより包括的で、今後国内の現象学研究の分野において主流となるであろう傾向において、本年度の研究は一定の成果を挙げた。今年度は,特に知覚と我々の信念,知識との関係に関する問題群を扱う研究を進めた。この研究の重要性は,我々の信念と世界との関係をめぐる古来からの哲学的問題に照らしても明らかであるが,特に本研究の意図からしても,是非とも必要な研究であった。問題は,ウィトゲンシュタインの私的言語論以来一般的となった観念論的傾向を持つ哲学への批判,すなわち「正しいと思うことと正しいということとは区別されなければならない」という批判にある。知覚論を通じて世界を論じる現象学的なスタイルは,まさにこうした批判に答えるのでなければならない。というのも,知覚というのは,一見するかぎり主観的な体験にほかならないように思われるからである。こうした課題に対して,私は,現象学的知覚概念が単なる主観的な経験概念とは異なるということを確認し,しかも当該知覚概念が我々と世界とをまさに取り結ぶものとして理解されるべきであるということを強調し,学会にて発表した。この点で,現象学的知覚概念といわゆる「直接的実在論」的な知覚概念とは類似しているが,もちろん現象学にとって構成的な方法を踏まえて言えば,それらは完全に重なるわけではない。このズレを際立たせながら,現象学的知覚概念のポイントを強調することがさらに望まれる。
組織切片局所からの脂質表面抽出質量分析法による病態解析

質量分析による溶媒抽出表面分析法は、サンプル表面から直接代謝分子を抽出してナノエレクトロスプレーイオン化測定を行うため、サンプルの抽出、濃縮、再溶解等の過程におけるロスが無く、組織局所のような微量サンプルにおいても十分な感度で測定が可能であることが判った。特に、リン脂質やトリアシルグリセロール等の脂質分子種分析には非常に有効であった。今後、病態サンプルと正常サンプルの脂質分子種の局所変化の簡便解析法として有効と思われる。本年度は、fat-1マウス(fat-1+)と野生株マウス(fat-1-)について脂肪酸の含有量の異なる2種類の餌を切り替えて飼育したサンプルをオクラホマ大学松本らとの共同研究により提供して貰い、各条件下におけるマウス肝臓組織切片の脂質分子種を解析し、n-6系およびn-3系脂肪酸含有リン脂質の食餌による影響を検討した。その結果、食餌やfat-1遺伝子の導入が体内における脂質合成に大きく影響を与えることが示された。次に、脂肪酸鎖C16からC18への伸長酵素Elovl6の遺伝子欠損マウスについて、野生型マウスとのリン脂質分子種の比較解析を筑波大学島野らとの共同研究により行った。この実験では脳組織の局在部位の解析にLESAを用いた。LESAによる解析の結果、16:0をsn-1に持つリン脂質分子種の割合が増えて、18:0をsn-1に持つ分子種が減少することが判った。また、中部大学野田らとの高血圧発症モデルラットの共同研究において、食塩水の濃度の違いによる高血圧の発症時におけるリン脂質分子種の変化を観察した。この実験では高血圧の発症する12週令からその心臓のホスファチジルコリン(PC)においてリノール酸を含む分子種の減少とアラキドン酸を含む分子種の増加が観察された。LESAは、サンプル表面から直接抽出してナノESI測定を行うため、サンプルの抽出、濃縮、再溶解等の過程におけるロスが無く、組織局所のような微量サンプルにおいても十分な感度で測定が可能であった。その他、リピドミクスの活用による共同研究により、幾つかの成果を得た。24年度はナノフローESI装置NanoMateによる微量解析と、新たに開発された溶媒抽出表面直接分析(LESA)を組み合わせて、病態臓器切片局所及び臨床体液サンプルの脂質メタボロミクスへの応用の可能性を試みた。組織切片からの直接解析を2通りの質量分析システムにより検討した。まず、4000Qtrapによる部分構造特異的な包括的解析ではリン脂質の各クラス毎の選択的同定や酸性糖脂質のシアル酸や硫酸基による特異的な同定が可能であった。また、Orbitrapによる高分解能、精密質量による解析では、その質量精度の高さから、微妙な元素組成の違いを区別することが可能であった。これらの手法を同時に組み合わせる事により、高度不飽和脂肪酸の変動解析や新規酸化脂質の解析を組織局所レベルでおこなえる可能性が開けてきた。この表面分析法は各種病態モデル動物の病態組織局所や炎症性疾患患者の血しょう等の体液における酸化脂質のメタボローム解析に有効であることが確認できた。具体的にはマウスやラットの脳、腎臓、心臓等の臓器局所についてそのリン脂質分子種の局在特異性を解析した。また、肥満や高血圧発症モデルラットにおいて多価不飽和脂肪酸含有リン脂質の有意な変動を観察できた。また、ヒトの血しょうや唾液の直接解析についても、ほぼ10μLの液量で可能であることが確認出来た。今後これらについての論文発表を順次行う予定である。今年度の成果については、質量分析をもちいたリン脂質、糖脂質の同定などに関する共同研究の成果を上げた。高度肥満に由来する糖尿病等の生活習慣病は、食事に対するし好性や選択制等が影響するため、最近、肥満の強制的な抑制法の一つとして、消化器官に対して直接外科手術を施すメタボリックサージェリーが注目され始めている。術後2-10日という予想以上の短期間でインシュリン抵抗性の有意な改善が見られることが判ってきており、その生理的なメカニズムの解明が肥満、糖尿病などの予防、治療に有効であることが予想される。本年度の研究ではそのメタボリックサージェリーの術式により異なる効果が、どのように生ずるかを、手術経過日数ごとに臓器、血しょう中の脂質代謝物を測定することにより、その生理的メカニズムを明らかにし、肥満や糖尿病等の治療や病態マーカーとして利用可能な脂質代謝分子を発見することを目的として行われた。結果として肥満・糖尿病の発症に連動して増加する特定の高度不飽和脂肪酸分子種が肥満手術後のインスリン抵抗性の改善に連動して変化することを見出し、この分子が非常に有効なマーカーである可能性を明らかにした。昨年度までの研究成果として、食餌やfat-1遺伝子の導入が体内における脂質合成に大きく影響を与えることが示された。また、脂肪酸鎖C16からC18への伸長酵素Elovl6の遺伝子欠損マウスについて、LESAによる解析の結果、16:0をsn-1に持つリン脂質分子種の割合が増えて、18:0をsn-1に持つ分子種が減少することが判った。

また、高血圧発症モデルラットの高血圧の発症する12週令からその心臓のホスファチジルコリン(PC)においてリノール酸を含む分子種の減少とアラキドン酸を含む分子種の増加が観察された。LESAは、サンプル表面から直接抽出してナノESI測定を行うため、サンプルの抽出、濃縮、再溶解等の過程におけるロスが無く、組織局所のような微量サンプルにおいても十分な感度で測定が可能であった。脂質生化学研究室の経験のある博士研究員が退職したため、研究補助員と大学院生1名で研究を遂行しており、進行度が遅れ気味である。しかし、遺伝子欠損や病態モデル動物における研究の成果は、上記に述べたように、かなり十分な程度に出てきている。また、当初に計画した溶媒抽出表面分析による新しい測定法の有効性と応用可能性の確認はできた。田口自身が夏以降体調を崩したため、9月に予定していた国際学会での発表を急遽取りやめる等のアクシデントがあり、学会発表や論文化が当初予定したより遅れている。しかし、溶媒抽出表面分析法そのものの組織切片への適用は順調に進んできており、糖尿病や高血圧発症モデルラットへの解析応用も有効であることが確認出来ている。今年度はアルツハイマー発症モデル細胞におけるガングリオシドの解析(Neurosci.Lett., 2012)、C型肝炎ウイルスの複製におけるスフィンゴ脂質の解析(ProS Pathog.,2012)、ホスファチジルイノシトールのアシル基リモデリングの解析(Mol.Biol.Cell,2012)、ハムスター拡張心筋症モデルの脂質代謝解析(J.Mol.Cell Cardiol.,2013)、グロボ系糖脂質によるT細胞レセプター制御の解析(Pro.Natl.Acad.Sci.USA,2013)、脂質メディエータープロテクチンD1のインフルエンザに対する効果の解析(Cell,2013)等について共同論文の形で、リピドミクスの成果を報告した。平成26年度は、これまでの研究結果の取りまとめと論文化などを中心に進める予定である。溶媒抽出表面分析法(LESA)の臓器局所における脂質代謝物解析の有効性について、これまで得られた実験結果を基に、その利用可能性などを中心に取りまとめる予定である。溶媒抽出表面解析法liquid extraction surface analysis(LESA)の組織切片からの脂質分子種分析への活用をさらに進める。具体的には肥満を中心とする生活習慣病等に対するマウスやラット等の発症モデル動物と、それに対する遺伝的又は科学的処置により酸化ストレスの促進又は抑制処理などを施した場合の脂質変動や脂質酸化の状態を従来法と直接抽出測定法により包括的に分析する。さらに、実際にLESAの手法を共同研究等の個別病態モデルや臨床サンプルに適用して得られた包括的データをもとに、自動脂質同定検索ソフトLipid Searchを用いて解析する。また、Simuca P+等の多変量解析ソフトを用いて、サンプル間や代謝物間の差異や類似性等の関係性を明らかにし、病態に関わる主要な代謝因子の検出について検討する。該当なし。
血小板のフィブリンへの粘着におけるインテグリンおよび非インテグリン受容体の関与

凝固第×III因子によりcross-linkされたフィブリン表面へのヒト血小板粘着の際に仲介する接着受容体を、固相化フィブリノゲン(Fgn)への粘着の際のそれと比較しながら探索した。1. 1時間の粘着時間で、フィブリン面には15.7±2.3%(M±SD,n=11),固相化Fgnには11.3±1.2%(n=5)の血小板が粘着した。RGDペプチドは双方の粘着を抑制したが、フィブリノゲンγ鎖のC末端のdodecapeptideは前者を抑制しなかった。2.血小板凝集阻害性の抗β3モノクローナル抗体(Mab)T74は、血小板の固相化Fgnへの粘着を対照の4.7%にまで低下させたが、フィブリン粘着の抑制は軽度であった。3.血小板を予め4mMEDTAで37°C1時間処理してその表面のintegrin α||bβ3の機能を不可逆的に喪失した血小板の固相化Fgnへの粘着は、対照血小板の25%まで低下したが、フィブリンへの粘着は対照の80%を維持していた。同様に血小板無力症の血小板は固相化Fgnには粘着しないが、フィブリン表面には対照の75%も粘着した。4.走査電子顕微鏡にて観察すると、フィブリン表面は密に交叉した直径30-70nmのフィブリン線維から成り立っていた。正常血小板はこの上に長い偽足を伸長して伸展していた。EDTA処理後の血小板あるいは無力症血小板は、いずれも変形反応は起こすが、伸展は全く起こさず、短い偽足を有する球状のままで接着していた。5. β1族インテグリンに対するMabのうちでJBS5およびLM534はいずれも血小板のフィブリンへの粘着を約2025%抑制したが、固相化Fgnへの粘着は全く抑制しなかった。6. β3族およびβ1インテグリンに対する抗体を併用しても、フィブリンへの粘着は対照の4050%程度にしか減少しなかった。これらの成績はフィブリンへの血小板粘着においては、β3族のみならずβ1インテグリンも関与していることを示した。しかし両者でも全体をカバーするものではなく、その他の接着性受容体の関与が示唆された。さらに本成績からフィブリノゲンからフィブリンへの変化においてβ1インテグリンに対して接着活性をもつペプチドが分子の表面に出現することをも示唆された。イムノプレートのwellで、ヒトフィブリノゲン,トロンビン,およびCaCl_2を混合して、フィブリンを作成した。非特異的な粘着部位は0.3%ウシアルブミンにてブロックした。比較のために同じプレートに固相化フィブリノゲンをも作成した。蛍光色素(BCECF-AM)を負荷したヒト血小板をHEPES-Tyrode液にて洗浄し、同液に最終浮遊させた。粘着時の擬集を避けるために血小板数は5×10^4/mlに調整した。洗浄血小板液100μ

lをのせ、37°Cにてincubateして非粘着血小板を捨て、残存の血小板を蛍光リーダーにて測定した。これまで以下の成績を得た。(1)1時間の粘着時間で、フィブリン面には15.7±2.3%(M±SD,n=11),固相化フィブリノゲンには11.3±1.2%(n=5)の血小板が粘着した。(2)血小板の擬集の阻害能を有する抗β3(GPIIIa)モノクローナル抗体T74は、血小板の固相化フィブリノゲンへの粘着を、対照の4.7%にまで低下させた。ところがフィブリン膜表面への粘着は対照血小板の79.8%にまで抑制するにすぎなかった。(3)血小板の洗浄過程で、4mM EDTA 37°Cで1時間処理すると、血小板のintegrin αIIbβ3は不可逆的に解離してその機能(特に擬集機能)を喪失する。固相化フィブリノゲンへのこのEDTA処理血小板の粘着は、対照血小板の24.9%にまで低下する。ところがフィブリンへのEDTA処理血小板の粘着は、非処理血小板の79.5%を維持していた。(4)走査電子顕微鏡観察すると、フィブリン表面は密に交叉した直径30-70nmのフィブリン繊維から成り立っていた。EDTA非処理の血小板はこの上に長い偽足を伸長して伸展していた。EDTA処理後の血小板は変形反応は起こすが、伸展は全く起こさなかった。凝固第X111因子によりcross-1inkされたフィブリン表面へのヒト血小板粘着の際に仲介する接着受容体を、固相化フィブリノゲン(Fgn)への粘着の際のそれと比較しながら探索した。1.フィブリン面と固相化Fgnへの血小板の粘着を平行して検討した。RGDペプチドは双方の粘着を抑制したが、フィブリノゲンγ鎖のC末端のdodecapeptideは前者を抑制しなかった。2.血小板無力症の血小板は固相化Fgnには粘着しないが、フィブリン表面には対照の75%も粘着した。3.走査電子顕微鏡にて観察すると、フィブリン表面は密に交叉した直径30-70nmのフィブリン線維から成り立っていた。正常血小板はこの上に長い偽足を伸長して伸展していた。血小板無力症血小板は変形反応は起こすが、伸展は全く起こさず、短い偽足を有する球状のままで接着していた。この形態はEDTA存在下37°C処理後の血小板に酷似していた。4. β1族インテグリンに対するMabのうちでJBS5およびLM534はいずれも血小板のフィブリンへの粘着を約2025%抑制したが、固相化Fgnへの粘着は全く抑制しなかった。5. 13族およびβ1インテグリンに対する抗体を併用しても、フィブリンへの粘着は対照の4050%程度にしか減少しなかった。これらの成績は、固相化Fgnへの血小板粘着はほぼ独占的にβ3族インテグリンに仲介されているが、フィブリンへの血小板粘着においては、β3のみならずβ1インテグリンも関与することを示し、さらにその他の接着性受容体の関与も示唆した。さらに本成績からフィブリノゲンからフィブリンへの変化においてβ1インテグリンに対して接着活性をもつペプチドがフィブリン表面に出現することをも示唆された。
収束電子回折による結晶内原子の静的変位量の評価

結晶に関する重要なパラメタ-である結晶構造因子を電子線回折により求める方法を確立するために、まずαーAl_2O_3を例にとって、運動学的回折理論が適用できる条件、ブラッグ条件を同時に満足する複数の回折強度を試料の同一箇所から得る条件を探した。次に、大角度収束電子線回折法に注目して、αーAl_2O_3の特定の反射の結晶構造因子を求め、これから単位胞内のAl原子位置を決定することを試みた。本研究で明らかになった点は以下の通りである。1.αーAl_2O_3の試料厚さが約350nm以下で、00l系統のl》30の高次反射であれば、その強度は厚さとともに振動することはなく、運動学的近似が成り立つ。2.収束角度2α》35mradの入射電子線を試料の微小領域(1020nmφ)に照射すると89個の00l反射が同時にブラッグ条件を満足し、しかも1枚のフイルムに記録できる。3.加速電圧200kVで観測したl=36と42の2つの反射の強度比と運動学的回折理論をもとに計算したそれとを比較することにより、αーAl_2O_3のAl原子の位置を決定した。得られた結果は動力学的多波回折理論に基づく解析結果と良く一致するだけでなく、X線回折や中性子回折による過去の結果とも一致した。4.原子位置を決めるには、原子散乱因子とB因子(熱振動の様子)の値が既知でなければならない。B因子を無視すると原子位置は約10%ずれる。試料を冷却して原子の熱振動を押さえると測定精度は向上する。5.今回検討した手法は、αーAl_2O_3以外の結晶、例えば酸化物超伝導体にも適用可能である。フイルムの替わりに、イメ-ジングプレ-トやスロ-スキャンCCDカメラ等を使用すれば応用法はさらに拡大する。1.収束電子回析強度から単位格子内の原子位置を決定する方法を確立するために、αーAl_2O_3結晶のAlイオンの静的変位量の測定を行った。αーAl_2O_3の結晶構造はコランダム型であり、理想的な構造は六方最密充填した酸素イオンから成る層と、それらの酸素が作る八面体の中心を占めるAlイオンから成る層が交互に積み重なったものである。酸素八面体の中心のうち、1/3が空いているため、実際にはAlイオンがC軸方向に、酸素イオンがC面内でそれぞれ理想的な位置からずれているといわれている。高純度単結晶から〔110〕を法線方向にもつディスク状試料を切り出し(本補助金で購入されたディスクカッタ-を使用)、イオン研磨後200kV透過型電子顕微鏡で回析実験を行った。2.(1)006l系統の反射の構造因子にはAlイオンのC軸方向のずれδの影響のみが現れるので006l系統反射を励起し、l=59の五つの反射が同時にBragg条件を満足するように、入射電子ビ-ムを大きく収束させると、これらの回析線の強度は一枚のフィルムに記録される。したがって、それらの相対強度を理論計算値と比較することができる。(2)運動学的回析理論に基づいて求めたδと動力学的多波回析理論によるδとは実験誤差範囲内で一致し、運動学的取り扱いが妥当である。(3)今回求めたδは過去にX線、中性子回析実験で得られた値ともよく一致し、収束電子回析法が有用であることがわかる。

3.電子線強度とフィルム黒化度の対応性の問題、格子振動の影響、運動学的取り扱いの適用性の限界等を明らかにする。さらに、酸化物高温超伝導体結晶への応用を試みる。前年度は、大角度収束電子回折パタ-ン中の高次回折線の強度に解析することにより、単位胞中の原子の座標が求まることを明らかにした。さらに、この手法をαーAl_2O_3に適用し、AlイオンのC軸方向のずれ(静的変位)の量δの値を見積もった。今年度は解析に用いる運動学的回折近似の妥当性とその適用限界および解析に必要な温度因子、吸収係数の不確定性の影響、さらに解析精度におよぼす加速電圧の効果、電子密度とフィルムの黒化度の対応性の問題などを調べた。1.αーAl_2O_3の00l系統反射の場合、l≫30の時の消衰距離ξ_1は700nm以上あり、厚さ200nm以下の試料を用いれば、運動学的近似があてはまる。したがってl≫30を満たす反射強度のみを利用すれば運動学的取り扱いができる。2.解析の際にB因子を無視した場合と、室温での実測のB因子を使った場合とで変位量δは約10%異なる。B因子が小さいほど反射強度はδによってより敏感に変化するので、試料温度を下げる方が測定精度は向上する。3.いろいろな吸収係数の値を用いて反射強度を計算した結果、求められるδの値そのもには影響を与かないことがわかる。しかし、試料の厚さが増大すると吸収のため反射強度自体が低下し、測定誤差が大きくなる恐れがある。4.加速電圧の増加とともに、多波励起効果が増大し、l≫30の反射強度は低下するので、加速電圧はむしろ低いほうが解析にも測定にも好都合である。5.回折パタ-ンの撮影にはフイルムの黒化度が飽和しないような適正な露出をえらび、2つの反射強度の大小の比較からδが決まるような反射を探すようにすればフイルム法でも十分な精度がえられる。
培養オルガノイド由来パネト細胞を用いた口腔細菌と腸管自然免疫のクロストーク解明

本研究は、口腔細菌の腸管への影響を自然免疫の観点から解明するために、腸管自然免疫の主要エフェクターである抗菌ペプチド・α-defensinを分泌し自然免疫や腸内細菌叢の恒常性維持に寄与するPaneth細胞に焦点をあてた新規腸管自然免疫評価系を開発することを目的とした。本研究により、オルガノイド培養法とα-defensinを定量可能なELISAを応用することで、Paneth細胞顆粒分泌を反映した自然免疫評価系が確立できた。この評価法を応用することで、口腔細菌と腸管自然免疫の相互作用解析が可能となる。口腔と腸管は解剖学的に連続しており口腔常在菌や歯周病菌などの病原菌が腸管の細菌叢や機能に影響を及ぼすことは容易に考えられる。しかし、今日までに口腔常在菌・病原菌の腸管への影響を自然免疫の観点から詳細に検討した報告はない。この理由として、in vitroで基礎的検討を実施することが出来る適切な腸上皮細胞株が存在していないことと、定量的かつ簡便な自然免疫学的評価法が確立されていないことが考えられる。そこで本研究では組織構造体(オルガノイド)培養法を応用して、小腸上皮を構成し、腸管自然免疫の主要エフェクターである抗菌ペプチド・αディフェンシンを分泌し自然免疫や腸内細菌叢の恒常性維持に寄与しているPaneth(パネト)細胞の株化を目標とする。得られたパネト細胞株に口腔常在菌や口腔病原菌を暴露し、その培養上清を申請者が開発したαディフェンシンに高感度で特異性の高いsandwich enzyme-linked immunosorbentassay (ELISA)を用いてαディフェンシン量を測定する。さらには、細胞株の遺伝子的変化を解析することで自然免疫機構の評価を行う。本研究は、口腔常在菌・病原菌の腸管における自然免疫系と細菌叢へのクロストークをαディフェンシンの分泌と殺菌機能および分子機構の両面から定量的に評価することで、口腔細菌による生活習慣病などの疾患発症のメカニズム解明を目的とし、研究期間内に1オルガノイド培養法を応用したパネト細胞株の樹立、2口腔細菌の小腸上皮細胞・パネト細胞への影響の検討、を実施する。平成26年度は、マウス小腸上皮オルガノイド培養法を確立するために最適な培養条件を検討し、さらに得られたオルガノイドがパネト細胞を含み、それが刺激物質によりαデフェンシンを分泌するのかを検討した。口腔と腸管は連続しており口腔常在菌や歯周病菌などが腸管の細菌叢や機能に影響を及ぼすことは容易に考えられる。しかし、今日までに口腔細菌の腸管への影響を自然免疫の観点から詳細に検討した報告はない。この理由として、基礎的検討を実施することが出来る適切な腸上皮細胞株が存在していないこと、定量的かつ簡便な自然免疫学的評価法が確立されていないことが考えられる。そこで本研究では組織構造体(オルガノイド)培養法を応用し、腸管自然免疫の主要エフェクターである抗菌ペプチド・αディフェンシンを分泌し自然免疫や腸内細菌叢の恒常性維持に寄与しているパネト細胞の株化を目標とする。平成27年度は、パネト細胞の株化を目指してオルガノイドを構成する上皮細胞よりパネト細胞と腸上皮幹細胞の分離を試みた。オルガノイドを細胞単位に分離後、パネト細胞と小腸上皮幹細胞の表面マーカーCD24を認識するモノクローナル抗体で標識し、フローサイトメーターにてCD24発現量と細胞形態を解析してパネト細胞と腸上皮幹細胞とをそれぞれソーティングした。得られた腸上皮幹細胞とパネト細胞をエンテロイドと同じ条件で培養した結果、細胞同士が接触後、コロニーを形成し、時間依存的に増殖、7日後にはエンテロイドへと成長した。次に、口腔から侵入した菌が腸管上皮に及ぼす影響を評価できる測定系を構築するために、エンテロイド内腔(腸管内腔側)にマイクロインジェクション法を応用して蛍光溶液が細胞を障害せず適切に注入可能かを検討した。その結果、短時間でエンテロイド内腔に、任意量の蛍光溶液を注入できる技法が確立できた。以上より、エンテロイドとマイクロインジェクション法の応用により、培養パネト細胞内腔側細胞膜に菌成分等を直接曝露できる実験基盤が樹立できた。今後、この方法を応用して口腔常在菌や病原菌のパネト細胞への影響を検討していく。平成27年度は昨年度から引き続き、パネト細胞の株化を目指した。培養オルガノイドを細胞単位に分離した細胞集団から、細胞形態とCD24抗体標識によりパネト細胞をソーティングし長期培養できる条件の検討(培養液、培養基質など)を行ったが増殖を維持することはできず、株化には至らなかった。しかし、パネト細胞分離と同時に腸管上皮幹細胞を分離し、この2種類の細胞をエンテロイドと同様の培養条件(R-spondin1等を含む無血清培地、Mtrigel包埋)によりコロニー形成から細胞増殖が見られ、パネト細胞を陰窩部位に含むエンテロイドに成長した。また、培養エンテロイドの内腔に任意の物質をマイクロインジェクションで注入できることが可能となった。以上より、培養条件下でのパネト細胞と口腔細菌との相互作用を詳細に評価・研究する基盤が確立され、本研究課題はおおむね順調に伸展している。