hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
脂質性シグナル分子、スフィンゴシン1-リン酸の細胞外濃度変化と臨床診断への応用

1.健常者の摂食前後の血中脂質(総コレステロール、HDLコレステロール、LDLコレステロール)濃度、血漿SIP量を測定し、さらに、リポ蛋白質(VLDL、LDL、HDL)ならびにリポ蛋白抽出後の血漿(アルブミン)画分でのS1P分布を比較した。健常者ボランティアのデータを集積している。2.甲状腺機能異常のある(亢進または低下症)患者の血漿で血中脂質濃度を測定し、血漿S1P量、さらに、リポ蛋白質ならびにリポ蛋白抽出後の血漿画分でのS1P分布を調べた。甲状腺機能変化による脂質代謝変化が血中のS1Pまたはその分布に及ぼす影響の解析を行っている。甲状腺機能が正常化した患者の長期的(6から12ヶ月)な血中S1Pの変化を解析する。3.糖尿病患者血漿中の総コレステロール等の脂質濃度を測定し、血漿S1P量、さらに、リポ蛋白質ならびにリポ蛋白抽出後の血漿画分でのS1P分布を調べた。糖尿病コントロールの指標である血糖値やHbAlcとの関連性について検討している。以上は昨年度に引き続き行っている。今後の課題として、小児の冠動脈疾患をおこす川崎病に罹患した患児血清におけるS1Pの変化を調べることを企画している。スフィンゴシン1-リン酸(S1P)は血漿中でリポ蛋白と結合して存在することが示されている。そのため、血中脂質濃度の変化に伴ってS1P濃度が変化することが考えられる。血中脂質濃度に変化を及ぼす因子として短期的には食事摂取の影響を考慮する必要がある。また、糖代謝と脂質代謝が関連していること、血中甲状腺ホルモン濃度の変化は血中脂質濃度に大きな変化をもたらすことは良く知られている。これらの要因、疾患とS1Pの血漿中濃度の関連を調べるため、以下の検討を行った。1.健常者の摂食前後の血中脂質(総コレステロール、HDLコレステロール、LDLコレステロール)濃度、血漿S1P濃度を測定し、さらにリポ蛋白質(VLDL、LDL、HDL)並びにリポ蛋白抽出後の血漿(アルブミン)画分でのS1P分布を比較した。2.甲状腺機能異常のある患者の血漿で脂質濃度を測定し、血漿S1P量、さらにリポ蛋白質ならびにリポ蛋白抽出後の血漿画分でのS1P分布を調べた。甲状腺機能変化による脂質代謝変化が血中のS1Pまたはその分布に及ぼす影響の解析を行った。甲状腺機能が正常化した後の長期的な血中S1Pの変化を解析している。3.糖尿病患者血漿中の脂質濃度を測定し、血漿S1P量、さらに、リポ蛋白質ならびにリポ蛋白抽出後の血漿画分でのS1P分布を調べた。糖尿病コントロールの指標である血糖値やHbA1cとの関連性について検討した。健常者ボランティア16名から空腹時に採血し、血中脂質を解析し、S1P濃度定量や分布を調べた。血漿S1P濃度が平均1153nMでありHDL画分に多く分布すること、そしてHDLに結合するS1P量とアポリポ蛋白A-I、A-II量に相関関係がみられ、LDLに結合するS1P量とアポリポ蛋白B量にも相関関係を認めることなどを、Atherosclerosis178(2005)199-205に発表した。
Remifentanilの抗酸化作用：フリーラジカルの直接的消去活性はあるか？

超高齢社会を迎えた我が国では高齢者の手術が増加している。神経炎症や酸化ストレスが原因とされる術後認知機能障害は高齢者でリスクが高く,その予防や治療の開発が急務である。手術中に鎮静剤として使用されるレミフェンタニルは抗酸化作用をもち,術後認知機能障害の予防に有効であると期待されている。本研究課題は,レミフェンタニルの抗酸化作用の機序(フリーラジカル消去活性)を明らかにすることを目的として実施する。
ゴマの食品機能性リグナン関連物質の生産改良-遺伝資源と栽培環境からのアプローチ-

ゴマのセサミン含量を高める方策を遺伝資源面と栽培制御面から検討した.保存遺伝資源から高セサミン系統(7.57mg/g,タイ国在来白ゴマ種)が選抜された.遺伝資源交雑後代F3集団から高セサミン含量(9.17mg/g)で多収性を備えた有用個体が選抜された.セサミンは低窒素・低リン酸の施肥条件で高含量が得られた.セレン含量は産地間で大きく変動し,ベネズエラ産から4.8μg/gと高含量試料(FONUCLA)が見出された.ゴマのセサミン含量を高める方策を遺伝資源面と栽培制御面から検討した.保存遺伝資源から高セサミン系統(7.57mg/g,タイ国在来白ゴマ種)が選抜された.遺伝資源交雑後代F3集団から高セサミン含量(9.17mg/g)で多収性を備えた有用個体が選抜された.セサミンは低窒素・低リン酸の施肥条件で高含量が得られた.セレン含量は産地間で大きく変動し,ベネズエラ産から4.8μg/gと高含量試料(FONUCLA)が見出された.ゴマの食品機能性に関与するリグナン関連物質(以下,食品機能性リグナン関連物質)の変動要因を栽培環境面と遺伝資源面から精査し,その結果以下の研究成果を得た.1.栽培環境と食品機能性リグナン関連物質の含量変動、窒素施肥量を5水準区設けて南部黒ゴマ種を栽培・収穫し,収量及び食品機能性リグナン関連物質などの化学成分含量への影響を検討した.10a当たり収量は,無施用区78.8Kg,標準区82.5Kg,2倍区82.3Kg,4倍区82.5Kg,6倍区91.7Kgであり,施用量間に有意差は見られなかったものの,収量は窒素肥料を多用するほど増加する傾向が見られた.窒素施肥量5水準区から得た種子1gには,食品機能性リグナン関連物質であるセサミン含量は0.800.95mgの範囲に,セサモリン含量は1.051.20mgの範囲に含まれていた.また,油脂は約44.045.0%の範囲で含まれていた.セサミン・セサモリン及び油脂の含量は窒素施用量間で有意差は見られないものの,いずれの成分も施用量が増大するほど減少する傾向を示した.2.ゴマ属遺伝資源の食品機能性リグナン関連物質の含量変動、ゴマ遺伝資源12系統を世界各地から収集し食品機能性リグナン関連物質であるセサミン及びセサモリンを定量した.セサミン含量は0.937.57mg/gの範囲にあり,平均値は3.41mg/gであった.セサモリン含量は0.311.78mg/gの範囲にあり,セサモリン高含量系統はタイ国在来の白ゴマ種であった.両系統とも4心皮で3さく果性の3QA型であり,粒重はそれぞれ0.104g/100粒と0.108g/100粒の極細粒でであった.今回見出されたセサミン高含量系統は極細粒で劣悪農業形質を持つが,交配母本として有望である.ゴマの食品機能性に関与するリグナン関連物質(以下,食品機能性リグナン関連物質)の変動要因を栽培環境面から検討し,また食品機能性に関連する無機質成分,特にセレンについて産地栽培環境面から検討した.その結果以下の研究成果を得た.1.栽培環境と食品機能性リグナン関連物質の含量変異化成肥料施肥量を5水準区(0,15,30,60,120g/m^2)設けて有限伸育型で無分枝単一茎型の白ゴマ種を栽培・収穫し,収量及び化学成分含量への影響を検討した.収量は30g/m^2区を除いて,施肥により有意に高めたが施肥量間で差異は認められなかった.油脂含量は,油脂は49.952.4%の範囲で含まれ,60g/m^2以上の施用により有意に低下した.脂肪酸組成は,パルミチン酸,スレアリン酸,オレイン酸は施肥により影響されたが,リノール酸,リノレイン酸,アラキジン酸,エイコセン酸,ベヘニン酸は影響されなかった.食品機能性リグナン関連物質であるセサミン含量は4.315.14mg/gの範囲で含まれ,施用により減少傾向を示し,特に120g/m^2施用により有意に減少した.セサモリシ含量は3.743.92mg/gの範囲に含まれ,施用により影響されなかった.2.ゴマ産地と機能性無機質成分の含量変異世界各地から21試料を収集し,食品機能性無機質成分13元素を定量した.セレン含量は0.14.8μg/gの範囲にあり,平均値は0.6μg/gであり,高含量試料はベネズエラ産(品種FONUCLA)の茶ゴマ種であった.鉄含量は44120μg/gの範囲にあり,平均値は66μg/gであり,鉄高含量系統はスリランカ産のミックス種であった.

カルシュウム含量は7.215.0mg/gの範囲にあり,平均値は11.4mg/gであり,高含量試料は中国湖北省産試料の黒ゴマ種とベネズエラ産(品種FONUCLA)であった.ゴマの食品機能性に関与するリグナン関連物質(以下,食品機能性リグナン関連物質)の変動要因を遺伝資源面と栽培環境面とから検討し,以下の研究成果を得た.1.食品機能性リグナン関連物質の高含有系統の選抜多収性系統の中国産35(中国在来種)を母本として,セサミン高含有系統のラオス産淡紫(ラオス在来種)交配した(以下,CRW).また,多収性系統の伊佐郡産(鹿児島県在来種)を母本として,セサミン高含有系統のラオス産黒(ラオス在来種)を交配した(以下,IRB).交雑後代F_3集団から高食品機能性リグナン関連物質高含有個体の選抜を行った.CRW群では,高リグナン含量9.17mg/gと高収量性を兼ね備えた有用個体が見出された.IRB群では,セサミン9.05mg/g・セサモリン含量4.65mg/gともに高い有用個体が見出された.2.食品機能性リグナン関連物質含量の施肥条件による変異(1)有機肥料(食品排水汚泥堆肥,厩肥)を17年間連用した圃場土壌を用いて黒ゴマ種と白ゴマ種を有機栽培し,食品機能性リグナン関連物質含有量への影響を慣行栽培と比較した.収量は両種ともに有意に厩肥で高まった.食品機能性リグナン関連物質うち,セサミン含量は白ゴマ種では慣行栽培に比べて有機栽培で高かったが,黒ゴマ種では両栽培間で差異は見られなかった.セサモリン含量は両種ともに有意に厩肥で高まった.(2)リン酸肥料施肥量を5水準区(0,7.5,15,30,60g/m^2)設けて黒ゴマ種と白ゴマ種を栽培し,収量及び化学成分含量への影響を検討した.収量は施用量に伴って増加する傾向が見られた.油脂含量,脂肪酸組成,窒素含量は施用量と一定の傾向が認められなかった.食品機能性リグナン関連物質うち,セサミン含量は施用で低下する傾向が見られたが,セサモリン・セサミノール配糖体含量は一定の傾向は認められなかった.
高齢者虐待防止法で保護されない虐待事例検証と広範な事例を救済しうる虐待概念の創出

本研究は高齢者虐待に精通した学識経験者と松戸市役所管理職で形成されたチームによって行う。平成16年度から平成29年度に松戸市に通報された高齢者虐待事例をレビューし、「虐待を受けていながら、加害者要件の課題から法的に虐待と該当しない虐待事例」を抽出する。次に、抽出事例の類型化を行ない、それらの事例を包括する虐待概念について検討する。そして「虐待を受けていながら、加害者要件の課題から法的に虐待と該当しない事例」を保護・救済するための新たな高齢者虐待概念(仮説)の開発を行う。結果を検証したうえで、「新たな虐待概念での支援を推奨する」とともに高齢者虐待防止法の法解釈の修正提案、法文面の修正提案を行う。
高輝度蓄光剤を用いた超省エネ長日条件で稚魚の成長を促進できるのか

光は多くの魚類の成長促進に重要な役割を果たしている。本研究では、高輝度蓄光性顔料(ルミノーバ)を従来の人工光源の代わりに利用することで、魚類の成長を促進する新たな方法の開発に挑戦した。サンゴ礁に生息するゴマアイゴ(およびヤイトハタ)の当歳魚に、ルミノーバから発せられる青緑光を夜間照射した。その結果、ルミノーバから発せられる光を照射した魚の成長が促進された。ルミノーバは、電気エネルギーの過度な浪費を抑えた成長促進のための新たな光源として利用することができる。ルミノーバは暗闇で緑色光を長時間発光する特徴を持つ蓄光性夜光顔料である。本研究の目的は、ルミノーバを従来の人工光源の代わりに利用し、魚類の成長を促進する新たな方法の開発に挑戦することである。熱帯・亜熱帯浅海域を生息中心にもつゴマアイゴとヤイトハタを実験材料として用い、平成25年度には、研究全般の基盤となる分子生物学的な研究を進めるとともに、ゴマアイゴ稚魚を用いてルミノーバ光の広域照射実験を開始した。1)分子生物学的研究成長関連遺伝子(Insulin-like growth factor: IGF-1)と時計遺伝子(Cryptochrome; Cry1, Cry2, Cry3)のクローニングを行い、それらの特性を明らかにした。また、クローニングを終了した遺伝子の発現解析をRT-PCRで行い、IGF-I遺伝子(ゴマアイゴ)の発現は肝臓で高いことが再確認された。一方、ヤイトハタのCry遺伝子(MgCry1とMgCry2)の発現は調べた全組織で確認でき、中枢組織における発現量は末梢組織のそれよりも有意に高かった。細分した中枢組織で各遺伝子の発現量を比較した結果、全ての部分で高い発現がみられたが、小脳における発現量が他の部分よりも高かった。また、小脳及び間脳域におけるMgCry1とMgCry2遺伝子の発現は24:00より12:00で高かった。2)広域照射実験ゴマアイゴの当歳魚と1歳魚を、ルミノーバを含んだシート(対照群はルミノーバを含まないシート)で被った水槽で2ヶ月間飼育し、経時的に体重と体長を測定した。その結果、実験群(当歳魚)の体重と体長は対象魚のそれらよりも有意に大きくなった。一方、1歳魚には差は認められなかった。ルミノーバシートは日没後も緑色光を発光し続けるため、ゴマアイゴ幼魚は日没後にルミノーバから得られる光を長日と認識し、体成長が促進されたと考えられる。また、この効果は若齢魚ほど高いと考えられた。熱帯・亜熱帯浅海域を生息中心にもつゴマアイゴとヤイトハタを実験材料として用い、平成26年度には、ゴマアイゴとヤイトハタを用いて以下の実験を進めた。1)分子生物学的研究昨年度クローニングした成長関連遺伝子(Insulin-like growthfactor: IGF-1)と時計遺伝子(Cryptochrome; Cry1, Cry2, Cry3)の発現解析を行った。IGF-I遺伝子(ゴマアイゴ)の肝臓における発現を飢餓条件と飽食条件で比べた結果、飢餓条件の方が高くなった。Cry遺伝子(ヤイトハタ)のうち、MgCry2遺伝子の発現の月周リズムが間脳と脳下垂体で認められ、この遺伝子が新月時の明期におけるMgCry2の発現量は他の月相の明期のそれよりも高くなった。下垂体におけるMgCryの発現は月光を遮断することにより高くなった。MgCry2は下垂体基底部に強く発現していた。下垂体のこの部位が、光に関係する成長の内分泌制御に関係する可能性があった。2)広域照射実験沖縄県栽培漁業センターから分与を受けた当歳魚を、ルミノーバを含んだシート(対照群はルミノーバを含まないシート)で被った水槽で飼育し(広域照射実験)、経時的に体重と体長を測定した。しかしながら、広域照射実験を開始した当初に死亡したため、結果を得るには至らなかった。水産生物学当初予定していた分子生物学的研究と広域照射実験を行うことができた。本研究をヤイトハタで行う場合には沖縄県栽培漁業センターからサンプルの分与を受ける必要があったため、研究に先立ち本学理学部と同センターとの共同研究の覚書を交わした。これにより、平成25年度後半からのサンプルの分与が可能となり、ゴマアイゴで行ったのと同様の広域照射実験が可能となった。当初、分子生物学的研究で光受容体遺伝子のクローニングや発現解析を予定していた。

しかし、沖縄のサンゴ礁の普通種であるルリスズメダイで行った先行研究で、光受容体遺伝子は発現量に明暗差が認められない可能性があった。この結果を受けて、分子生物学的研究には光誘導性の時計遺伝子を検討課題に加えた。今後も時計遺伝子に着目しつつ研究を進めていく予定である。沖縄県栽培漁業センターと琉球大学理学部との間で共同研究の覚書を交わした関係上、ヤイトハタの実験開始が平成25年度後半にずれ込んだ。本来であれば、ヤイトハタの予備実験も平成25年度前半に開始する予定であったが、これが同年後半にずれ込んだことにより、予算の執行にずれが生じた。ヤイトハタの種苗が入手可能になった段階で、平成25年度に予定していた予備実験を即座に終了する予定である。これによってヤイトハタに使用する予定の予算を計画通り執行する。
音楽構造と建築空間の深層における共通構造の知識表現を通した総合表現システムの研究

本研究において、芸術、美学、工学の観点から、(1)建築や庭園などに見られる象徴的な空間の構成的な原理、(2)時空問に展開される音楽の構成的な原理を明らかにし、さらに、(3)それらの構成的原理の深層にある共通性を明らかにした上で、(4)視覚、身体感覚、聴覚をダイナミックかつインタラクティブに結びつけるアート(建築・庭園+音楽)の創造を支援する3つの音/映像システムを構築した。そして現在までにいろいろな形で経験として、時には漠然とそう考えられている事項、または理論として知られている事項を実際にシステムに統合し体験可能なものとした.そのシステムの体験を通して可能な範囲でその正否、限界などを見極めることができた.今回の研究で得た最も大きな成果は空間認識と音楽認識との認知レベルにおいての対応関係には恣意的はない、ある確実な関係性があることを知る事ができたことである。その一対一ではない間接的な関係性の様相を体験的に確認し、その事が内包する発展の可能性について考察を行った。池泉式回遊庭園において空間構成及び物理的環境を調査し,回遊シーケンスにおいて体験されるシーンをデータ化した。同データに基づいて音楽を生成する実験システムのプロトタイプを作成した。同システムを用い,等持院庭園の体験を音楽として表現し,庭園空間と音楽のマッピングについて考察し,次のような仮説が得られた。空間的事象と音楽的事象の関係には主に二つのはっきりと区別できるレベルがある。第一のレベル(存在のレベルと名付けた)の対応関係は大変強く一対一の対応であることに対し、第二のレベル(質,量のレベルと名付けた)の対応関係は明確でなく、多義的な多対多の対応関係にある(研究は音楽情報科学にて発表された)。また、これらから得られた知見の表現方法の模索として平成17年度9月1日25日、東京芸術大学美術館のDJ-Brand展にて床上の空間に置かれたオブジェの位置(空間構造)からインタラクティブに音楽がシステムによって生成されるSMALL-FISH(Installation Version)を展示した。平成18年、1月6日21日、東京芸術大学陳列館のスキノデリック展にてスキノデリックミュージック(Sound Installation Version)を音楽空間と彫刻/建築空間を統合するサウンドインスタレーションとして展示した。また平成17年、9月6日8日には国際コンピューター音楽学会会議(バルセロナ/スペイン)へ参加しTangible Music Instrument(卓上の物体の空間情報によって音楽を生成するシステム)のセッションのパネリストとなり、音楽構造と空間構造を結びつけるための研究について意見交換した。昨年度の研究では音楽イベントと空間の中に存在するモノ=オブジェクトの存在との対応関係の優位が確認された。それをふまえ昨年の池泉式回遊庭園の体験データから音楽を生成する実験システムのプロトタイプに検討を加え、空間の中に配置されているオブジェクトの位置関係を中心に音楽を生成するように、抜本的な改変を加えた。その基本路線に沿って桂離宮などで調査、データ収集を行い。それを実験システムヘ統合した。現在、桂離宮の映像とそれをコンピュータ内の仮想空間に3G-CGで表示したもの、およびにそれらから生成された音楽を同時に表示/演奏が可能なシステムが完成している。これらから得られた知見の表現方法の模索として平成19年度3月18日にフロリダ州、ハリウッド市にオープンしたミレミアム噴水公園における樹齢400年のバオバブの本を中心としたサウンドインスタレーションが制作された。また平成18年度12月8日には研究の成果をふまえた37チャンネルの音による空間構造の音楽作品"PolyReading"がドイツのZKM(center for art and media, Karlsruhe)において発表された。
嫌気性下廃水処理における糖・蛋白・脂質の分解に係る硫酸塩還元反応の役割

嫌気性処理の酸生成段階における硫酸塩還元の役割を解明した。利用した嫌気性流動床ではスキムミルク主体に硫酸塩を加えた基質で馴致した微生物群が反応を行った。炭水化物としてグルコース、ガラクトース、乳糖、キシロースを用いた。この内五単糖であるキシロースは分解されなかった。炭水化物の分解には直接硫酸塩還元反応は関与せず、硫酸塩の存在条件下で酢酸の生成量が増加し他の炭水化物分解産物の乳酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸等の生成が少なくなることが確かめられた。つぎに乳酸の分解にはプロピオンが酸菌が活動し硫酸塩還元は関与していないことが確かめられた。プロピオン酸の分解に硫酸塩還元が間接的に関与していると推定され、酢酸の生成が確かめられた。さらにこの硫酸塩還元反応は水素を電子受容体とする独立栄養的反応であることが証明された。炭水化物の分解産物であるエタノールの分解には硫酸塩還元は関与しないでプロピオン酸、酢酸が生成した。タンパク質の分解実験としてポリペプトンを利用した。ポリペプトンで馴致した嫌気性流動床の水理学的滞留時間を60分以上にしてもタンパク質の分解は進行しなかった。この場合上限は75%程度であった。好気性の活性汚泥では95%以上の分解がえられる場合がある。タンパク質のポリペプチド結合を解裂する酵素を有する嫌気性微生物が少ないことが原因である。ポリペプトンの構成アミノ酸を混合した基質(G1u.、Va1.、G1y.、Met.、Leu.、Phe.、Lys.)の分解実験では、それぞれアミノ酸はよく分解して酢酸、プロピオン酸、アンモニアの生成が認められ、硫酸塩の還元はプロピオン酸の分解と酢酸の生成の段階で関与していることがわかった。脂質の分解について研究時間が不足し成果がでていない。しかし炭水化物や有機酸の研究から硫酸塩還元は基本的に有機酸の分解と同じ役割であると考えられる。
ICUせん妄予防に向けた基盤研究 ― 新規抗不眠症薬スボレキサントの有効性の検討

集中治療室(ICU)におけるせん妄が、死亡率、ICU入室期間・入院期間延長、医療費増加、長期精神的予後といった多くの問題に関連することが知られている。本研究の目的は、オレキシン受容体拮抗薬であるスボレキサントのせん妄予防効果を、ICUにおけるせん妄発症の高リスク群である心臓手術症例を対象に検証することである。平成28年度:二重盲検無作為化比較試験のデザイン、研究体制の構築を行った。自施設ICUにおける心臓手術後のせん妄発症率を調査し、61.3%の結果を得た。より一般化された検証のため、多施設共同研究とすることとした。本学研究倫理委員会の承認を得た。平成29年度:共同研究施設の募集のため日本集中治療教育研究会臨床研究委員会等でプレゼンテーションを行い、研究参加を希望する施設を得た。人を対象とする医学系研究に関する倫理指針の改正があり、研究プロトコールを改訂し、再度本学研究倫理委員会の承認を得た後、症例集積を開始した。平成30年度:研究同意の取得が順調でないため、次年度の研究継続を模索し、共同研究者および本学次世代臨床研究センターと協議した。本研究は臨床研究法における特定臨床研究に該当し、次年度以降同法に対応して研究を継続することは、マンパワーから困難と判断した。12症例から同意を取得した。研究開始前に1例、研究開始後に1例の中止症例が発生し、10例をプライマリーアウトカム(ICU滞在中1度でもCAM-ICUによる評価でせん妄あり、となる症例の割合)の解析対象とした。せん妄は、スボレキサント投与群、プラセボ群で、5例中4例(80%)、5例中3例(60%)に観察された。また、セカンダリーアウトカム(CAM-ICU評価回数のうちせん妄ありと評価された回数の割合)は、スボレキサント投与群、プラセボ群ではそれぞれ、45回中19回(42.2%)、30回中7回(23.3%)であった。平成27年度は、スボレキサントのせん妄予防効果を検証する二重盲検無作為化比較試験のデザイン、研究体制の構築を行った。まず、自施設ICUにおける心臓手術後のせん妄発症率を調査し、61.3%の結果を得た。また近隣施設におけるせん妄発症率の調査を行ったところ、施設による違いだけでなく、同じ施設においても種々の非薬理学的予防策の導入などにより変化することが明らかになった。よって、より一般化されたスボレキサントのせん妄予防効果の検証のため、多施設共同研究とすることとした。共同研究施設の募集のため日本集中治療教育研究会臨床研究委員会(JSEPTIC-CTG)等でプレゼンテーションを行った。これまでに自施設含め3施設を内定しており、参加施設募集は今後も行う。複数施設からの症例登録、割付け、データ管理の信頼性を確保するため、横浜市立大学附属病院次世代臨床研究センターを研究者とは独立したデータセンターとすることとした。精神科医師の協力を得て、被験者候補の術前評価基準を策定した。ICUでの看護師によるせん妄評価の信頼性を高める為、指導的看護師と協力して看護師のCAMーICU評価の教育を行った。以上の研究体制を構築したのちに、本学研究倫理委員会に研究申請を行い、承認を得た。●当初予定していた単施設の無作為化比較研究を、他施設共同研究に拡大させたため、相応の研究体制の確立が必要となった。●2017年5月の「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針」の改正に対応する必要があった。平成28年度:スボレキサントのせん妄予防効果を検証する二重盲検無作為化比較試験のデザイン、研究体制の構築を行った。データセンターの確保、せん妄評価の信頼性確保のための教育を行い、本学研究倫理委員会に研究申請を行い、承認を得た。平成29年度:前年度に引き続き、共同研究施設の募集のため日本集中治療教育研究会臨床研究委員会(JSEPTIC-CTG)等でプレゼンテーションを行った。研究参加を希望する施設を得ている。人を対象とする医学系研究に関する倫理指針の改正があったため、研究プロトコールを改訂し、再度本学研究倫理委員会に申請し、承認を得た。また、被検者保護のため、臨床研究保険に加入した。

研究実施のための施設内の体制構築、教育を行い、症例集積を開始している。●人を対象とする医学系研究に関する倫理指針の改正に伴い、プロトコールを修正し、再度倫理委員会に申請する必要があった。集中治療室(ICU)におけるせん妄が、死亡率、ICU入室期間・入院期間延長、医療費増加、長期精神的予後といった多くの問題に関連することが知られている。本研究の目的は、オレキシン受容体拮抗薬であるスボレキサントのせん妄予防効果を、ICUにおけるせん妄発症の高リスク群である心臓手術症例を対象に検証することである。平成28年度:二重盲検無作為化比較試験のデザイン、研究体制の構築を行った。自施設ICUにおける心臓手術後のせん妄発症率を調査し、61.3%の結果を得た。より一般化された検証のため、多施設共同研究とすることとした。本学研究倫理委員会の承認を得た。平成29年度:共同研究施設の募集のため日本集中治療教育研究会臨床研究委員会等でプレゼンテーションを行い、研究参加を希望する施設を得た。人を対象とする医学系研究に関する倫理指針の改正があり、研究プロトコールを改訂し、再度本学研究倫理委員会の承認を得た後、症例集積を開始した。平成30年度:研究同意の取得が順調でないため、次年度の研究継続を模索し、共同研究者および本学次世代臨床研究センターと協議した。本研究は臨床研究法における特定臨床研究に該当し、次年度以降同法に対応して研究を継続することは、マンパワーから困難と判断した。12症例から同意を取得した。研究開始前に1例、研究開始後に1例の中止症例が発生し、10例をプライマリーアウトカム(ICU滞在中1度でもCAM-ICUによる評価でせん妄あり、となる症例の割合)の解析対象とした。せん妄は、スボレキサント投与群、プラセボ群で、5例中4例(80%)、5例中3例(60%)に観察された。また、セカンダリーアウトカム(CAM-ICU評価回数のうちせん妄ありと評価された回数の割合)は、スボレキサント投与群、プラセボ群ではそれぞれ、45回中19回(42.2%)、30回中7回(23.3%)であった。2017年5月に「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針」が改正になるため、これに沿った研究計画の修正が必要となる。主幹施設で倫理委員会承認が得られたため、被験者の組み入れを開始する。また、共同研究施設での倫理委員会申請、研究開始を進めるとともに、共同研究施設の募集も引き続き行っていく。共同研究施設での倫理委員会申請、研究開始を進め、症例集積のペースアップを図る。平成29年度より当施設での症例集積を開始したことで、研究を実施していく上での課題が明確となり、対応方法が蓄積されつつある。これにより共同施設での円滑な研究進行を得る。本研究では、臨床研究保険とデータセンター関連費用が大きな支出となる予定である。多施設研究となったことで、保険料が高額となり、データセンター設置が必要となったためである。倫理指針改正などに伴い、倫理委員会承認・症例組み入れが遅れ、平成27年度には上記の出費が発生しなかった。(理由)本研究では、臨床研究保険とデータセンター関連費用(多施設研究のため)が大きな支出となる。臨床研究保険は平成29年度に契約を締結し、保険料の支出を行った。データセンター関連費用については、平成29年度に一部支払いを行ったが、症例集積は平成30年度も継続するため、30年度にも大きな支出が予定されている。(使用計画)
非酵素的糖化後期生成物による網膜色素上皮細胞の老化誘導過程の解明とその予防的治療

本年度はまず前年度に引き続き、網膜色素上皮細胞(RPE)における非酵素的糖化後期生成物(AGE)による遺伝子発現変化を検討した。マイクロアレイでは検索した遺伝子数の約20%が発現変化を認めた。中でもTNF-α、TGF-β、FAS抗原、Caspase 8などアポトーシスを誘導する遺伝子の発現が上昇する一方でBc1-2やHSP70などアポトーシスを抑制する遺伝子の発現低下がみられ、全体としてアポトーシスの実行へ向けた流れが特徴的であった。これは、実際にアポトーシスの発生を確認した前年度の結果からも裏付けられる。また、PDGF-BやCTGFなど糖尿病網膜症の発生に関与しているとされる遺伝子の発現が上昇していることから加齢性黄斑変性症の発生病態(例えば新生血管の発生など)に糖尿病網膜症と共通するメカニズムが存在する可能性が示唆された。酸化ストレスとAGEの関係についてはAGE負荷をしたRPEを抗酸化物質のアスコルビン酸を添加して培養すると細胞のviabilityや分裂寿命が延長することからAGEが酸化ストレスを介して細胞に影響を与えていることが伺われた。最近の報告でもAGEの作用に酸化ストレスが介在する可能性が指摘されており、今回はその結果を追認する形となった。D-ガラクトースを数週間腹腔内注射して作成するAGE誘発マウスに関しては過去の報告に基づいた予備実験を行った所、処置後の眼内組織検索にてブルッフ膜にAGEらしき沈着物を認めるもののコントロール群との間に有意差を検出することができなかった。現在、さらに適当な生体モデルの開発を研究中である。少量のサンプルからDNAダメージの定量を行うため、培養網膜色素上皮細胞からの抽出DNAに超音波やピペッティングなどの物理的損傷または過酸化水素による化学的損傷を与え、DNA末端をポリA鎖にて標識した後スロットブロットを行う方法で分析した。結果、20ngの染色体DNAがあればダメージ定量が充分可能であり、ダメージの程度によっては2ngのDNAサンプルからも定量可能であった。このサンプル量では従来のゲル電気泳動を主体とした方法では分析不可能であった。Advanced glycation endproduct(AGE)負荷群ではコントロール群と比べてDNAダメージが上昇していた。これは細胞内における酸化ストレスが上昇していることと関係しているものと考えられるが、酸化ストレスは幾つかの系を通してアポトーシスを誘発することが分かっており、またAGEによるアポトーシス誘導も認められたことからDNAダメージが酸化ストレスによる直接的なものか、アポトーシス誘導の過程で起こっているものかをさらに詳細に解析する必要がある。AGE負荷による遺伝子の発現変化ではTGF-β2やTNF-αあるいはP53、Caspase8などのアポトーシス関連遺伝子の発現上昇が見られる一方、DNA修復関連遺伝子やBcl-2、HSP70などの抗アポトーシス遺伝子の発現低下が見られた。これらの遺伝子発現変化は老化RPEの誘導に関与していると考えられ、また実際の培養細胞も老化細胞の形態を示す事から興味深い。結果の一部は現在欧文誌に投稿中である。
血清マイクロリボ核酸による膵癌早期診断の可能性

膵癌の早期診断を目的に、膵癌患者血液中のmicroRNAをマイクロアレイ法によって解析を行った。その結果、hsa-miR-188-5p、hsa-miR-1275及びhsa-miR-3648が、健常者あるいは良性膵疾患患者に比べて、膵がん患者において有意に上昇していた。特にmiR-1275は平均3.6倍に上昇していることが確認された。今後はさらに、これらmiRNAの膵癌における意義、機能を解析していく予定である。膵癌は、がんにおける死因の第5位を占める。また、膵癌は予後不良のがんであり、膵癌患者全体の5年生存割合は5%に満たない。膵癌患者の予後が不良である原因は、再発・進行膵癌に対する有効な薬剤が限られていることに加え、早期発見の手段が確立していないことが挙げられる。従って膵癌患者の予後改善のためには、非侵襲的な早期診断法の確立が必要不可欠であり、血清miRNAを用いた膵癌のマーカーの検討を行った。具体的には、患者血清からRNAを単離しマイクロアレイ法によって解析を行った。その結果、hsa-miR-188-5p、hsa-miR-1275及びhsa-miR-3648が、膵癌患者において有意に上昇していた。今後はさらに、これらmiRNAの膵がんにおける意義、機能を解析していく予定である。膵癌のスクリーニングには、様々な画像検査のほかに、腫瘍マーカー検査が行われているが、膵癌診断に有効なマーカーが存在しないのが現状である。近年、microRNA(miRNA)が注目され、様々な生物学的プロセスへの関与が明らかになってきた。本研究では、膵癌に関連する血液中に存在する分泌型miRNAの同定を目指し、早期診断や正確な予後因子の同定、ならびに治療標的となるmiRNAの単離を目指した。血液中に存在する分泌型miRNAにはエキソソーム/microvesicleに内包されて存在するものと、Ago2 complexに結合して存在するmiRNAがある。miRNAは、いずれの状態においても、血液中においてRNase抵抗性である。平成24年度は、膵癌患者18例、健常者4例の血液サンプルを十分な説明と同意のもとに取得し、これらのmiRNAに関して、ショ糖密度勾配による遠心法によって分離し、その後miRNAを単離し、Agilent社のマイクロアレイ法によって解析した。平成25年5月現在、これらの結果は解析中であり、結果が判明次第、平成25年度の研究を引き続き行っていく。膵臓がんは、がんにおける死因の第5位を占める。また、膵臓がんは予後不良のがんであり、膵臓がん患者全体の5年生存割合は5%に満たない。膵臓がん患者の予後が不良である原因は、再発・進行膵臓がんに対する有効な薬剤が限られていることに加え、早期発見の手段が確立していないことが挙げられる。従って膵臓がん患者の予後改善のためには、非侵襲的な早期診断法の確立が必要不可欠であり、血清miRNAを用いた膵がんのマーカーの検討を行った。これまでの研究においては、患者血清からRNAを単離しマイクロアレイ法によって解析を行い、hsa-miR-188-5p、hsa-miR-1275及びhsa-miR-3648が、膵がん患者において有意に上昇していることを明らかにした。今年度は、さらに多くの検体を用いて、これらmiRNAの有用性を検討した。一方miRNAの血清診断を考慮すると他の消化管疾患での検討も必要になってくる。そこで、今年度我々は幾つかの消化器疾患においてもmiRNAの検討を行い、hsa-miR-188-5p、hsa-miR-1275及びhsa-miR-3648の有用性の検討を行った。膵臓外科患者血清の取得は概ね順調に行われているが、前年度と同じく、血清miRNAの測定キットは、ある程度まとまった症例数がないと解析が行えないため、当初の予定より若干の遅れが出ている。患者血清の取得はおおむね順調に行われているが、血清miRNA解析は、測定キットの関係から、ある程度まとまった症例数がないとできず、一括して行う必要がある。このため、測定時期が年度末になったために、当初の予定より若干の遅れが出ている。1.膵癌患者血液中に存在するmiRNAの同定:前年に引き続き、膵癌患者特異的に、変化するmiRNAを同定していく。また、症例数を増やすことにより、各Stageでの変化も明らかになる。さらに、術前後のデータの比較や、予後との相関も行っていく。2.膵癌細胞におけるエキソソーム/microvesicleの蛋白解析:LC-MS/MSによるタンパク質解析を中心に行う。同定されたタンパク質に関しては、抗体の作製を同時に行っていく。

3.膵癌を標的としたmiRNAの単離:前年で単離された、アポトーシスを誘導する候補miRNAに対するanti-miRNA LNAを合成し、その効果を判定していく。これらのanti-miRNA LNAは、miRNAの効果を抑制するため、腫瘍増殖を増加させることが予測される。もし、このanti-miRNA LNAが増殖効果を示さない場合は、治療薬として不適当なmiRNAと判断される。4.マウス実験による抗腫瘍効果及び安全性の検討:平成25年以降は、前年に引き続き、マウス移植モデルを用いた検討を行う.平成24年度は、エキソソームの産生にHEK293を用いる予定であるが、臨床応用を目指し、産生細胞を検討していく。具体的には、エキソソームは、生体成分であるがゆえにMHCクラスI,IIの発現があり、生物製剤として免疫拒絶の問題がある。そこで、本研究項目では、免疫学的寛容を提示するHLA-Gを発現している胎盤の羊膜細胞においてエキソソームの産生を検討する。具体的には、マウス胎盤より羊膜を単離し、短期培養の後、TERT及びBmi-1によって羊膜細胞を不死化させる。この細胞よりエキソソームを単離後、マウスに投与し抗腫瘍効果を検討していく。平成25年度は引き続き、膵癌患者特異的に、変化するmiRNAを同定していく。また、症例数を増やすことにより、各Stageでの変化を明らかにする。さらに、術前後のデータの比較や、予後との相関も行っていく。一方、血漿中のmiRNAのコントロールには、miR-638やmiR-16が用いられているが、用いるmiRNAによってデータが変化することも問題である、本項目では、コントロールmiRNAに関しても、充分に注意をしながら検討していく。また、膵癌細胞におけるエキソソーム/microvesicleの蛋白解析として、LC-MS/MSによるタンパク質解析を中心に行う。同定されたタンパク質に関しては、抗体の作製を同時に行っていく。さらに、膵癌を標的としたmiRNAの単離として、前年で単離された、アポトーシスを誘導する候補miRNAに対するanti-miRNA LNAを合成し、その効果を判定していく。予定していたmiRNAの解析が遅れたことにより、解析に用いた試薬を次年度に購入するため、平成25年度の支出が予定よりも抑制できたため最終年度のため、予定症例数を集めて、当初の予算額をすべて使用するように計画する。当初の計画通り、大部分を消耗品費(検体測定、動物実験等)として使用するが、研究成果がまとまった時点で学会発表、誌上発表を行うものとする。
機械学習手法による半構造データマイニングと情報抽出

本研究課題では,機械学習手法による半構造データマイニングと情報抽出について研究を行い,本年度は次の成果を得た.Web空間の爆発的な発展に伴い,インターネット上の大規模分散コンテンツを流通・提供・活用するための手法やシステムの研究開発が求められている.機械学習技術を適用することは,人に優しい情報通信技術やフレンドリーな情報処理システムの開発に有効である.本研究課題では,HTML/XMLファイルなどのWeb文書が半構造性を持つことに注目し,機械学習技術を活用して,半構造データからのデータマイニング技術を発展させ,Webデータから有用なコンテンツを発見する手法,すなわち情報抽出技術を確立することを目的とする.均質でない半構造文書からの情報抽出に応用するため,半構造文書に共通する構造的特徴を表現する木構造パターンである,高さ制約変数付きの極大頻出タグ木パターンを発見するアルゴリズムを与えた.電気図面などTTSPグラフでモデル化できる半構造データに共通する構造パターンを表現するTTSP項グラフを多項式時間で帰納推論する学習アルゴリズムを与えた.半構造データを効率よく比較・照合するための様々な手法を統一的に記述できる一般的なフレームワークを与え,従来知られていなかった編集距離に基づく木の近似照合クラス間の関係を明らかにした.複数の半構造データを統合するため,近似照合から2つの木を結合する効率的なアルゴリズムを提案した.半構造データのフィルタリングやクラスタリングを行うために,半構造データからの局所位相情報に基づく距離を考案し,これを高速に計算する手法を開発した.本研究課題では,機械学習手法による半構造データマイニングと情報抽出について研究を行い,本年度は次の成果を得た.Web空間の爆発的な発展に伴い,インターネット上の大規模分散コンテンツを流通・提供・活用するための手法やシステムの研究開発が求められている.機械学習技術を適用することは,人に優しい情報通信技術やフレンドリーな情報処理システムの開発に有効である.本研究課題では,HTML/XMLファイルなどのWeb文書が半構造性を持つことに注目し,機械学習技術を活用して,半構造データからのデータマイニング技術を発展させ,Webデータから有用なコンテンツを発見する手法,すなわち情報抽出技術を確立することを目的とする.半構造データから,意味がある知識や情報を抽出するためには,それらを特徴づける木構造パターンを発見することが必要である.半構造Web文書から特徴的な木構造パターンである,縮約可能変数つきの極大頻出なタグ木パターンをすべて生成する手法を提案した.HTML/XMLで記述された半構造化文書は,内部ノードにタグ情報を,葉にはタグ間にある文章を保持した順序木により表現することができる.半構造化文書における単語間の構造の特徴を抽出するために,単語間の連結経路として単語間連結経路パターンを提案し,頻出する単語間連結経路パターンを抽出するデータマイニング手法を開発した.半構造データの近似マッチング手法を用いたWebページからの情報抽出手法を提案した.二階一般化および頻出単調DNF式の抽出に関して研究を行った.本研究課題では,機械学習手法による半構造データマイニングと情報抽出について研究を行い,本年度は次の成果を得た.Web空間の爆発的な発展に伴い,インターネット上の大規模分散コンテンツを流通・提供・活用するための手法やシステムの研究開発が求められている.機械学習技術を適用することは,人に優しい情報通信技術やフレンドリーな情報処理システムの開発に有効である.本研究課題では,HTML/XMLファイルなどのWeb文書が半構造性を持つことに注目し,機械学習技術を活用して,半構造データからのデータマイニング技術を発展させ,Webデータから有用なコンテンツを発見する手法,すなわち情報抽出技術を確立することを目的とする.均質でない半構造文書からの情報抽出に応用するため,半構造文書に共通する構造的特徴を表現する木構造パターンである,高さ制約変数付きの極大頻出タグ木パターンを発見するアルゴリズムを与えた.電気図面などTTSPグラフでモデル化できる半構造データに共通する構造パターンを表現するTTSP項グラフを多項式時間で帰納推論する学習アルゴリズムを与えた.半構造データを効率よく比較・照合するための様々な手法を統一的に記述できる一般的なフレームワークを与え,従来知られていなかった編集距離に基づく木の近似照合クラス間の関係を明らかにした.複数の半構造データを統合するため,近似照合から2つの木を結合する効率的なアルゴリズムを提案した.半構造データのフィルタリングやクラスタリングを行うために,半構造データからの局所位相情報に基づく距離を考案し,これを高速に計算する手法を開発した.
効率的なマダニ体内伝播に係わるボレリア属細菌新規因子の同定

本研究は、マダニ媒介性感染症病原体の一部が獲得した、効率的なマダニ体内伝播に関与すると考えられる因子の究明を目的として行ったものであり、マダニ媒介性病原体の1つである回帰熱群ボレリアに特異的に見いだされ、脱皮後マダニ体腔内で発現が上昇している複数遺伝子を同定した。これら遺伝子は、マダニ体内、特に未吸血状態での回帰熱群ボレリアの生存に強く関与していることが示唆され、回帰熱群ボレリアが進化の過程で獲得した効率的な病原体の維持・伝播機構の一端であることが予想された。本年度は、軟ダニであるOrnithodoros moubataに実験的に計5種のボレリアを接種し、マダニ体内(唾液腺内、体腔液内)での生存率の変化を経時的に分離培養にて確認すると同時に、各臓器からのRNA抽出を行なった。また、2週間後も菌が検出された株については、2ヶ月以上経過後にその生存の有無を確認した。その結果、回帰熱群ボレリアが長期間(2ヶ月以上)マダニ体内で維持されることを確認した。他方、ライム病群ボレリアは接種後早期に体内から排除され、爬虫類関連ボレリアは一部個体において12週間程度は感染が維持されるものの、その後全て排除されることが明らかとなった。菌の排除は体腔内において顕著に観察され、回帰熱群以外のボレリアは全て1週間以内に体腔内から消失していた。本実験は複数回行ない、再現性を確認した。さらに、マダニ体内での遺伝子発現解析が本研究計画では最も重要な実験であることから、効率的な解析方法を選ぶために、上記実験にて複数種のボレリアを接種したマダニとコントロール群の各臓器から個別にRNAを抽出し、共同研究者から情報提供されたマダニ免疫関連遺伝子についてその発現解析を行なった。その結果、自然免疫に関連する遺伝子群の転写因子が発現していること、ボレリア接種群においてその発現量に多少の違いが見られることが明らかとなった。ボレリア側の遺伝子群の抽出では、合計5種以上のプラスミド配列を含むボレリア属細菌ゲノム配列を用いた比較解析により、回帰熱群ボレリア特異的と推定される遺伝子群を100以下にまで絞り込むことが出来た。現在特異的プライマーの設計を行なっている。ゲノム配列を用いた比較解析により、回帰熱群ボレリア特異的と推定される遺伝子群合計94遺伝子について、Borrelia duttoniiのゲノム配列を元にリアルタイムPCRのプライマー設計を行い、1枚の96穴プレートで解析を行える系を立ち上げた。まず、Borrelia duttoniiのゲノムDNAを用いて遺伝子の有無を確認した所、78遺伝子について保有していることが確認された。これは、ゲノム株と比較し、当研究室に保管されていた株ではplasmidの欠損が起こっていたためであると考えられる。次に、培地中で増殖中のBorrelia duttoniiからRNA抽出を行い、逆転写反応により合成したDNAを用いて上記78遺伝子の発現を確認した所、いずれの遺伝子も発現が確認された。その上で、軟ダニであるOrnithodoros moubataに実験的にBorrelia duttoniiを接種し、数日後の体液と唾液腺をプールしたものからRNAを抽出し、逆転写反応により合成したDNAを元にリアルタイムPCRにて解析を行った。この際、参照遺伝子としてflaB遺伝子を用い、flaB遺伝子の発現量に対する相対値として候補遺伝子の発現量の比較を行った。その結果、6遺伝子がマダニ体内において培地中と比較し、相対的に発現上昇していることが確認された。なお、上記実験は複数回行い、複数の実験にて発現が上昇していた遺伝子を候補とした。これら6遺伝子の内、少なくとも4遺伝子はin silico解析により、菌体膜上に出ていると推定された。ライフイベントのため、多少実験に遅れが出たが、わずかであり、おおむね順調である。本研究は、マダニ媒介性感染症病原体の一部が獲得した、効率的なマダニ体内伝播に関与すると考えられる因子の究明を目的として行ったものであり、マダニ媒介性病原体の1つである回帰熱群ボレリアに特異的に見いだされ、脱皮後マダニ全身に感染可能な形質に関与すると考えられるボレリア菌の複数遺伝子を同定した。具体的には、回帰熱群ボレリアに特異的に見いだされる遺伝子群(約100程度)をコンピューターによるin silico解析により抽出した。これら遺伝子群について、未吸血マダニ体内に菌を接種し、数日後のマダニ体内生存中の菌と、培地発育中の菌を比較することで、発現が大きく変動している遺伝子を抽出した。本研究により、計30個の遺伝子においてマダニ体内での発現上昇が認められた(独立3回の実験)。この内、21個はコンピューターによるin silico解析により、菌体膜上に出ていると推定された。このため、これら21遺伝子について、発現量の定量を行った所、全ての遺伝子で3倍から多いものでは100倍以上、培地中と比較しマダニ体内で発現が上昇していることが明らかとなった。以上のことから、これら21個の遺伝子(群)がマダニ体内での回帰熱群ボレリアの生存に強く関与していることが示唆された。本研究はこれまであまり注目されてこなかった、マダニによる病原体の維持・移行機構を分子レベルで解明する第一歩となることが期待される。

マダニ媒介性病原体は、媒介種であるマダニにおける感染効率を高めることを生存戦略とし、進化をしてきたと考えられる。本研究によりマダニにおける効率的な病原体の維持・移行機構の一端が明らかになることで、将来的にはボレリアのみならず、その他のマダニ媒介性感染症病原体の生存戦略の解明につながり、ひいてはマダニ媒介性感染症の感染予防法の開発にもつながることが期待される。本研究は、マダニ媒介性感染症病原体の一部が獲得した、効率的なマダニ体内伝播に関与すると考えられる因子の究明を目的として行ったものであり、マダニ媒介性病原体の1つである回帰熱群ボレリアに特異的に見いだされ、脱皮後マダニ体腔内で発現が上昇している複数遺伝子を同定した。これら遺伝子は、マダニ体内、特に未吸血状態での回帰熱群ボレリアの生存に強く関与していることが示唆され、回帰熱群ボレリアが進化の過程で獲得した効率的な病原体の維持・伝播機構の一端であることが予想された。接種実験により、菌株毎、臓器毎の生存率の違いを明らかにできた。さらに、マダニ側免疫関連遺伝子も発現に変化があったことから、遺伝子発現解析は順調に進捗している。他方、予備実験にて行なった一部遺伝子の発現解析において、発現量が少ないために、conventional RT-PCRでは検出感度が問題となることが明らかとなった。現在、リアルタイムPCRによる検出系に変更し、条件検討を行なっている。本年度抽出した6遺伝子について、絶対定量のためのコントロールplasmidの作成を行い、発現量の定量を行う。また、ライム病群ボレリアの一種であるBorrelia burgdorferiに候補遺伝子を導入する形質転換株の作成を行い、作成した株をOrnithodoros moubataに実験的に接種し、マダニ体内における菌の生存動態を解析する予定である。さらに、マダニの全身感染に関連すると推察された遺伝子については、大腸菌を用いて組換体を作成し、これをマウスに免疫を行うことでモノクローナル抗体を作成し、菌体表面への発現を確認する予定である。マダニ媒介性細菌感染症今年度は抽出を行なった各遺伝子について、マダニ体内と培地中の発現量の違いをRT-PCRにて確認する。発現量の少ない遺伝子が有る事を想定し、リアルタイムPCRを用いた高感度の検出系を用いて検出を行なう予定である。同時に、発現に顕著な違いが見られた遺伝子群について、ライム病群ボレリアの一種であるBorrelia burgdorferiに候補遺伝子を導入する形質転換株の作成に着手する予定である。
再発期肺がん患者の家族の情緒的安定を支援するプログラムの開発と評価

本研究の目的は、再発期肺がん患者の家族の情緒的安定を支援するサポートプログラム(以下、プログラムとする)を開発、実施し、プログラムの効果を明らかにすることである。本研究の対象者は初発期肺がん患者の家族も含む5名の肺がん患者の家族であった。プログラムは既存のものからスケジュールを変更して提供し、全対象者がプログラムすべてに参加できた。プログラム終了後には対象者の心理的負担感を軽減するが、持続的ではない傾向にあった。先行研究による評価および既存の文献資料をもとに、既存のサポートプログラムの修正について検討したが、内容としては修正する必要がなく、「再発期肺がん患者の家族の情緒的安定を支援するサポートプログラム(以下、プログラムとする)」として使用することとなった。このプログラムを用い、本学の施設と協力を得られた病院において、「肺がん患者の家族のためのサロン(以下、サロンとする)」を計4回企画し、実施した。サロンへの参加者は、本学の施設と研究協力を得られた病院において、ポスターの掲示、チラシの配布により公募した。その結果、研究対象者となったのは2名であった。対象者より、サポートプログラムでの情報提供については、興味ある内容であり、有意義であったとの評価を得た。また、サロンの運営についても評価はよかった。サロンに参加することで、気持ちを表出することができ、悩みを聴いてもらえ、抱えている問題解決の糸口を得るなどの状況があった。サポートプログラムの効果については、POMS短縮版、新版STAI、GSES、対人ストレス尺度、ソーシャルサポート尺度を用いて測定しているが、対象者が少ないため、統計的な検証はされていない。傾向として、実施前に比較し、実施直後は効果が見られているようである。今後、対象者を増やし、検証を継続していく必要がある。また、同じ境遇にある家族同士のサポートグループとしての機能が発揮されないため、対象者の獲得は今後の重要な課題である。本研究の目的は、再発期肺がん患者の家族の情緒的安定を支援するサポートプログラムを開発、実施し、プログラムの効果を明らかにすることである。また、今後の発展に向けてサポートグループの運営における課題を検討することである。本年度の目標は、(1)プログラムの効果の判定を行い、(2)安定的にサポートプログラムの提供ができる体制をつくるために、プログラム内容及び運営方法における課題を検討することであった。プログラム提供の場の企画を行ったが、対象者の確保が難しく、プログラム内容の検討を行い、セッションの回数を3回から2回とし、1回の所要時間を90分から120分とした。また、対象者を再発期肺がん患者の家族としていたが、肺がんの初回治療を行う患者や家族からも参加の申し出があり、初発の肺がん患者の家族も含めることとした。これによる対象者の確保(5名、平均年齢47.8歳)ができ、プログラムの提供を実施できた。プログラムの効果について、プログラム提供前、提供直後、提供2週間後の時点で、気分、不安、自己効力感、対人ストレス、ソーシャルサポートを既存の尺度によって測定した。すべての尺度において、プログラム提供直後に改善が見られるものの、2週間後には提供前のレベルに戻っており、効果の継続が見られなかった。プログラム提供の方法を変更したことによって、性急にプログラム内容の理解を促してしまった可能性がある。しかし、対象者からはプログラム内容や運営についてよい評価が得られており、「また集まれるようにしてほしい」「このような会は必要である」など、サポートグループの継続的な活動を求めていた。居住地域に肺がんだけの患者・家族会や、対面での専門家が介入するプログラムの提供がなかったためと考えられる。プログラム提供については、実施施設でも必要性を感じており、提携しながらの運営を模索している。