hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
自由テーマ設定型の物理学実験種目の導入効果の研究

近年、物理教育において、アクティブラーニングの効用が説かれている。高等教育の現場である大学の学生実験ではどうであろうか。農工大、物理システム工学科では、2,3年の学生実験に、従来のクッキングレシピ型指導以外に、自分たちでテーマを議論してきめるマニュアルのない、実験を導入した。その教育効果をアンケート、組織的な教員による評価、発表会の成績などで測った。結果として、従来のクッキングレシピ型教育よりも概念理解にすぐれ、学生の意欲が高まるという結果を得た。科研費より補助した自由課題実験(責任者太田)において以下のような成果を得た。自由課題実験の参加学生3年生が第4回サイエンスインカレ(神戸)でポスター部門一位、独立行政法人科学技術振興機構理事長賞を受賞した。また、電気通信大学パスポートプロジェクトと東京農工大学SAILプロジェクトの間で行われた第3回学生自主研究大学間連携発表会(農工大工学部)で、3年生、2年生が、それぞれ、総合優秀賞をもらい、ほか、多数が、グッドジョブ賞、課題やりこみ賞、テーマ探究賞、プレゼン熟達賞などの賞を頂いた。科研費より補助された3年の学生実験において以下のような成果を得た。開発責任(松崎)、3年実験の熱力学実験の開発のため、スターリングエンジンの改良の手始めとして、ナリカ製のデモスターリングエンジンの回転具合をNF回路設計のデジタルロックインアンプで測定した。その報告を平成26年度の東京農工大学工学府技術部の研修発表会で発表を行った。題目は「Wave Form Modulation in Demo Stirling Cycle」である。研修報告書に掲載される予定である。また、畠山が、ビー玉スターリングエンジンの学生の自主作製をテーマにし、指導に加えた。三沢が、計測制御の講義で、費用を用い、学生に自主的な、実験指導を行った。畠山、松崎が、学期ごとの終わりに、自由テーマ設定型の物理学実験種目である熱力学実験の学生の意識改革のアンケート調査を行った。あと、3年間かけてまとめる予定でいる。12月の3年実験発表会におけるアンケートで、熱力学実験のテーマ履修学生が、質疑応答において、高い評価を得た。物理システム工学科の学生として、考えながら、実験を行うこと自身に拒否反応はなく、実験自体を楽しみながら、自らの意見で実験を開発、研究していることが、明らかになってきた。科研費より補助した自由課題実験(責任者秋葉)において、以下のような成果を得た。3年生の一人が、第5回サイエンスインカレの一次審査に合格し、ポスター発表をおこなった。また、電気通信大学パスポートプロジェクトと農工大SAILプロジェクト間の第4回学生自主研究大学間連携発表会においてテーマ探求賞1名、プレゼン熟達賞2名、総合優秀賞、グッドジョブ賞(学生間投票)2名を得た。開発責任(松崎)において、h26年度の技術職員研修報告で、'Wave Form Modulation in Demo Stirling Cycle'が掲載された。H27年度の技術職員研修発表会において、"熱力学実験の開発(低温型スターリングエンジン)について"という題目で、ケニス理化製の低温型スターリングエンジンを用いた実験開発をおこなった報告をした。まだ、不備があるため、完成次第、畠山の行っている3年実験のスターリングエンジンの実験に導入する予定である。3年実験責任者(畠山)において行っている学生実験の模様とその方法、教育効果などを、8月に、第32回日本物理教育学会研究大会(九州大学)にて、自由テーマ設定型熱力学実験の開発とその教育効果」という題目で松崎がポスター発表した。また、昨年度までのまとめとして、アクティブラーニング特集を組んだ、大学教育ジャーナルに研究報告題目「自由テーマ設定型の実験種目の設定とその教育効果」で、関係者全員の名前で掲載された。2年実験責任者(三沢)が、光学実験の指導を開発し、h28年度より、実際に、物理システム工学実験で導入する。3年実験の熱力学実験(スターリングエンジン)において、畠山が行っている指導で、大学教育ジャーナルに載せたアンケート結果より、高い効果が出ていることが分かっている。また、責任者(秋葉)において、昨年度の責任者(太田)に次いで、自由課題実験で成果が出ている。また、h28年度より2年実験責任者(三沢)の成果も期待できる。自由課題実験(責任者小原)において、毎年開かれている電気通信大学のパスポートプログラムとの連携発表会にて、指導した学生が、課題やりこみ賞1名、グッドジョブ賞1名、テーマ探究賞3名、総合優秀賞1名を得た。昨年まで続いたサイエンスインカレの出場者は今回途切れた。2年の学生実験に於いて、本格的に光学実験をアレンジした。伊藤と三沢によって、4週ある実験の内、1、2回目は従来型のマニュアルがある実験、3回目、4回目を、いかにレーザー測距の精度を上げるか考えさせ、それを実際に実験で実証していくテーマ探究型の実験を導入した。秋の日本物理学会領域13で成果発表をした。3年の学生実験に於いて、畠山が責任者としてスターリング実験を続け、自由課題実験の履修者が、討論の核になり、能動的な実践、議論を活発化しているのを、発表会の成績より示せた。また、学生に対するアンケート結果より、学生が考えるのを積極的に行っていることを、夏の物理教育学会に発表した。3月に学科内研究会をもち、全体の目的、成果、現状を把握し、共通認識を持つことができた。また、松崎が、今までの中間的なまとめとして、学内の技術発表会において「考えさせる実験」という題目で、自由テーマ設定型の学生実験の教育効果を発表した。

三沢が、AIMSプログラムの留学生に対して、ラボワークを行い、2年の学生実験と同様の手法でレーザー測距の原理を探る実験指導を行った。松崎が、NI LabVIEWの講習を学内の技術職員に対してマニュアルレスの実験指導の実践として行った。2年3年の実験を通して、全体に自由課題実験履修者が、核となり、テーマ設定型の学生実験のリーダーシップを取っているのがわかってきた。このことから、学生実験がひとつの授業として完結しているのではなく、互いに相互作用し、学生の中で自分で考えて実験するという態度を育成しているのがわかる。このように、能動的な学生実験が、学生の意欲関心態度に影響していることが明白になってきている。本年度も自由課題実験(責任者迫田)において、2年生5名の取り組みがあり、例年行っている電気通信大学のパスポートプログラムとの大学間連携発表会において、受講学生が総合優秀賞及びプレゼン熟達賞を受賞した。また、3年実験のスターリングエンジン実験の取り組みについて日本物理教育学会研究会において、松崎がその取り組みを発表した。畠山が、3年実験の取り組みを大学の物理教育誌に執筆、3月に論文が掲載された。2年実験のレーザー測距の実験を松崎が本年度5月に、大学の物理教育誌に投稿予定である。これらの実験における教育効果と評価法を松崎が物理学会春季大会において発表した。また、3月に開かれた物理学会の教育シンポジウムにおいて、畠山が、取り組み全体について講演し総括を行った。この考えさせる学生実験に関して、本学科が行っている自由課題実験受講者が核となり、テーマ設定型の実験の議論遂行が行われていることがアンケート、発表会の成績、三沢ー伊藤が開発した、教育効果測定法によりわかり、自由課題実験、一般の学生実験、テーマ設定型実験の3つが有機的につながり、効果を上げていることがわかった。以上のようなことから、このような取り組みが、高等教育における学生実験において、有効であると考えられる。実験をより能動的にすることにより教育の効果が上がるように変更、開発されていると考えている。このような取り組みは、既存の学生実験を工夫することにより、教育効果をあげ、学生実験におけるより具体的な成果を上げられることがわかってきた。近年、物理教育において、アクティブラーニングの効用が説かれている。高等教育の現場である大学の学生実験ではどうであろうか。農工大、物理システム工学科では、2,3年の学生実験に、従来のクッキングレシピ型指導以外に、自分たちでテーマを議論してきめるマニュアルのない、実験を導入した。その教育効果をアンケート、組織的な教員による評価、発表会の成績などで測った。結果として、従来のクッキングレシピ型教育よりも概念理解にすぐれ、学生の意欲が高まるという結果を得た。自由課題実験(責任者太田)に関して、指導した学生が、種々の成果を上げ、自分で考え、実験するスタイルが、浸透しつつある。また、3年実験で、畠山が、スターリングエンジンを用いて、学生と相互にディスカッションしながら、学生実験を進める実験形式を確立しつつある。
Ｍ細胞特異的ＳＩｇＡ受容体の解析

本研究は新規粘膜ワクチンの創出を最終目的とし、ドラッグデリバリーの標的分子として腸管粘膜において抗原取り込みに特化したM細胞上に存在している事が示唆されているSIgA受容体の探索を行うものであった。初年度、次年度において、いくつかの試験方法を試みた結果、適切にSIgA受容体を探索することが困難であり、また、新たにM細胞上にはIgGと結合する分子の存在が示唆された。本研究が新規粘膜ワクチンの創出であるため、同時期に同定されたM細胞特異的な抗原取り込み受容体「GP2」を標的としたワクチン創出を行った。ビオチンと特異的に結合するストレプトアビジンと抗GP2抗体の可変領域を繋いだ融合タンパク質をドラッグデリバリーツールとして用いた。当該タンパク質をanti-GP2-SAと名付け、精製度やGP2に対する結合能、糞便中抗原特異的IgA量および誘導されたlgAによる感染防御の評価をマウス組織や、マウスに対する投与試験によって確認した。その結果、anti-GP2-SAは抗体の可変領域とストレプトアビジン領域を同時に持ち、GP2に対する結合能も損傷を受けていないことが示された。さらに、anti-GP2-SAをマウスに経口投与した結果、抗原特異的な分泌型IgAの力価が、対照群に比べ有意に増加している事が示された。抗原を異なるタンパク質、且つ、複数のタンパク質を同時に結合させたものを投与した場合においても、抗原特異的な糞便中IgAの力価が上昇している事が示された。新規粘膜ワクチンanti-GP2-SAによって誘導された抗原特異的なIgAは、致死性のSalmonellaを感染させた場合に、有意に生存率を上げることが出来ることが示された。また、生存率と誘導された糞便中IgA量との間には有意な相関があろうことが示唆された。なお、これらの結果をまとめた論文は英語論文誌へ投稿されている。本研究結果は、腸管に存在するM細胞を標的とした粘膜ワクチンが、これまで経口粘膜ワクチンが実用化されてこなかった原因となるいくつかの課題をクリアし、さらに、腸管免疫の研究をより詳細に解析することの出来る有用なシステムとなる。(抄録なし)初年度の第一目標として、「M細胞の機能評価のための基礎データとして、経口投与法、ループアッセイ法による蛍光ビーズ取り込み試験を行って、野生型マウスでのビーズの取り込み率の個体差による偏りを統計的に明らかにする。」を行った。その結果、個体によってパイエル板M細胞でのビーズの取り込みには最大10倍程度の差があり、また、腸管上部(胃に最も近い)のパイエル板よりも、腸管下部(盲腸に最も近い)のパイエル板の方がビーズをより多く取り込む傾向にあることが明らかになった。また、この結果から、パイエル板のビーズの取り込み能を比較する際、ループアッセイに用いるパイエル板は、上部のものを扱うよりも、下部のものを扱う方が、試験に適切であるという事が明らかになった。続いて、「IgA結合蛍光ビーズと、異なる蛍光色のビーズにIgGなどのIgAとは異なるタンパク質を結合させた蛍光ビーズを用いて、M細胞上のSIgA取り込み率を検討する。」を行った。この結果は、予想とは異なる結果が得られた。これまでの報告では、IgAのみがM細胞に付着、取り込みが行われ、IgGはその限りではないとされてきていた(Mantis et al. JImmunol.169,1844-1851.2002)。しかしながら、本試験で用いた、IgAまたはIgGを結合させた異なる蛍光を発するビーズを同時に投与した場合、蛍光ビーズとIgの組み合わせを入れ替えた場合も考慮すると、その取り込み比率は同等であった。この結果は、M細胞上にはIgA受容体のみならず、IgG受容体の存在を示唆する結果である。本結果は新規のM細胞受容体の存在を示唆し、今後のM細胞研究において、重要な基礎となる。初年度の第一結果として、個体によってパイエル板M細胞でのビーズの取り込みには最大10倍程度の差があり、また、腸管上部(胃に最も近い)のパイエル板よりも、腸管下部(盲腸に最も近い)のパイエル板の方がビーズをより多く取り込む傾向にあることが明らかになった。」を行った。これまでの報告では、IgAのみがM細胞に付着、取り込みが行われ、IgGはその限りではないとされてきていた(Mantis et al.JImmunol.169,1844-1851.2002)。

前年度の結果を受けて、腸管内にIgA,IgGが存在しないマウスAICDAノックアウトマウスを導入し、繁殖させている、予備実験としてAICDAノックアウトマウスを用いて結合試験を行った結果、野生型のマウスを用いるよりも、明確な結果が得られた。本研究は新規粘膜ワクチンの創出を最終目的とし、ドラッグデリバリーの標的分子として腸管粘膜において抗原取り込みに特化したM細胞上に存在している事が示唆されているSIgA受容体の探索を行うものであった。初年度、次年度において、いくつかの試験方法を試みた結果、適切にSIgA受容体を探索することが困難であり、また、新たにM細胞上にはIgGと結合する分子の存在が示唆された。本研究が新規粘膜ワクチンの創出であるため、同時期に同定されたM細胞特異的な抗原取り込み受容体「GP2」を標的としたワクチン創出を行った。ビオチンと特異的に結合するストレプトアビジンと抗GP2抗体の可変領域を繋いだ融合タンパク質をドラッグデリバリーツールとして用いた。当該タンパク質をanti-GP2-SAと名付け、精製度やGP2に対する結合能、糞便中抗原特異的IgA量および誘導されたlgAによる感染防御の評価をマウス組織や、マウスに対する投与試験によって確認した。その結果、anti-GP2-SAは抗体の可変領域とストレプトアビジン領域を同時に持ち、GP2に対する結合能も損傷を受けていないことが示された。さらに、anti-GP2-SAをマウスに経口投与した結果、抗原特異的な分泌型IgAの力価が、対照群に比べ有意に増加している事が示された。抗原を異なるタンパク質、且つ、複数のタンパク質を同時に結合させたものを投与した場合においても、抗原特異的な糞便中IgAの力価が上昇している事が示された。新規粘膜ワクチンanti-GP2-SAによって誘導された抗原特異的なIgAは、致死性のSalmonellaを感染させた場合に、有意に生存率を上げることが出来ることが示された。また、生存率と誘導された糞便中IgA量との間には有意な相関があろうことが示唆された。なお、これらの結果をまとめた論文は英語論文誌へ投稿されている。本研究結果は、腸管に存在するM細胞を標的とした粘膜ワクチンが、これまで経口粘膜ワクチンが実用化されてこなかった原因となるいくつかの課題をクリアし、さらに、腸管免疫の研究をより詳細に解析することの出来る有用なシステムとなる。初年度の計画であった、パイエル板の取り込み能について、基礎となるデータをおおむね順調に取得し、かつ、新規の情報として、IgG受容体の存在を示唆することが出来た。初年度の結果から、IgG受容体の存在も示唆されたため、腸管内にIgA、IgGが存在しないマウスAICDAノックアウトマウスを導入したが、繁殖がやや遅く、十分な数を確保できなかった。その結果、予備検討までしか行うことが出来なかったか、野生型のマウスを用いるよりも明確な結果が得られることが示された。本試験では、M細胞による蛍光ビーズの取り込み能を、IgA,IgGそれぞれを結合させたものを投与し、計測しているが、新規にIgG受容体の存在が示唆されたために、本手法のままでは、今後の試験を続けることが難しい。そこで、この問題を解決するために、IgA、IgG以外のタンパクを対照群として用いるなど、当初とは異なる研究手法が必要となる。これまでは、蛍光ビーズの取り込みを見てきたが、直接的にIgA、IgGの結合を確認し、既存のIgG受容体が、M細胞に特異的に発現しているのかどうかを確認する。
胃癌患者における脾臓の免疫学的役割の解明 ―脾細胞のサイトカイン産生能からの検討―

健常マウス(C57BL/6,Balb/C,C3H)の脾細胞を採取し,Th1 inducerである溶連菌製剤OK-432で刺激培養した際のIL-6,IL-10,IL-12,IFN-γ等のin vitroでのサイトカイン産生能はC57BL/6>C3H>Balb/Cであり,マウスの系により反応性の相違があることが明らかになった。また,B16メラノーマ腫瘍細胞を移植したC57BL/6マウスで,担癌状態の脾臓を摘出しサイトカイン産生能を測定したところ,担癌状態の中期(腫瘍移植後23週)でIL-2,IL-6,IL-10,IFN-γなどの産生能が増大したが,IL-12産生能は誘導されていなかった。また,担癌末期になると全てのサイトカイン産生能が低下する傾向にあった。さらに,担癌中期のマウス脾細胞はin vitroでOK-432で刺激することによりIL-12産生が誘導でき,in vivoでOK-432を用いて治療することでIL-12,IFN-γの産出能が維持され抗腫瘍効果が得られる傾向にあった。一方,胃癌患者の脾臓が産生するサイトカインについていは,IL-4,IL-6,IFN-γの産生は観察されるものの,個体差が大きく病期の及ぼす影響が十分には把握できず,継続して検討する予定である。また,マウス癌性腹水モデルでOK-432によるTh1サイトカイン誘導が認められたほか,臨床治療において腹膜再発を防止するために術中腹腔内にMMC,OK-432などの薬剤を投与した胃癌症例で,IL-2,IL-12,IL-15,IFN-γなどが腹腔内に誘導されるresponder症例があり,それらの臨床成績とサイトカイン産生能との関連が示唆された。以上の内容について,すでに掲載済の論文に加えて,3編が現在投稿中および投稿準備中である。健常マウス(C57BL/6,Balb/C,C3H)の脾細胞を採取し,Th1 inducerである溶連菌製剤OK-432で刺激培養した際のIL-6,IL-10,IL-12,IFN-γ等のin vitroでのサイトカイン産性能はC57BL/6>C3H>Balb/Cであり,マウスの系により反応性の相違があることが明らかになった。また,B16メラノーマ腫瘍細胞を移植したC57BL/6マウスの系で,担癌状態の脾臓を摘出しサイトカイン産性能を測定したところ,担癌状態の中期(腫瘍移植後23週)でIL-2,IL-4,IL-6,IL-10,IFN-γなどの産性能が増大したが,IL-12産性能は誘導されていなかった。一方、担癌末期になると全てのサイトカイン産生能が低下する傾向にあった。さらに,担癌中期のマウス脾細胞をin vitroでOK-432で刺激するとIL-12産生が誘導できた。マウスに対しin vivoでOK-432を用いて治療した際の抗腫瘍効果および脾細胞のサイトカイン産生に及ぼす影響についての検討は,OK-432の治療時期の検討を含めて現在進行中である。

一方、胃癌患者の脾臓が産生するサイトカインについて,中期癌患者の脾細胞からはサイトカイン産生が得られているが,例えば臨床病期の進んだスキルス胃癌の摘出脾からのサイトカイン産生は低値である,などの知見が得られつつある。また,腹膜再発を防止するために術中腹腔内にMMC,OK-432などの薬剤を投与した症例の,腹腔内に誘導されるサイトカインについても測定したところ,IL-2,IL-12,IL-15,IFN-γなどが誘導されるrespondor症例があり,それらの術後成績が良いという印象を受けている。以上の結果をまとめて,現在投稿準備中である。健常マウス(C57BL/6,Balb/C,C3H)の脾細胞を採取し、Th1 inducerである溶連菌製剤OK-432で刺激培養した際のIL-6,IL-10,IL-12,IFN-γ等のin vitroでのサイトカイン産生能はC57BL/6>C3H>Balb/Cであり、マウスの系により反応性の相違があることが明らかになった。また、B16メラノーマ腫瘍細胞を移植したC57BL/6マウスで、担癌状態の脾臓を摘出しサイトカイン産生能を測定したところ、担癌状態の中期(腫瘍移植後23週)でIL-2,IL-6,IL-10,IFN-γなどの産生能が増大したが、IL-12産生能は誘導されていなかった。また、担癌末期になるとすべてのサイトカイン産生能が低下する低下する傾向にあった。さらに担癌中期のマウス脾細胞はin vitroでOK-432で刺激することによりIL-12産生が誘導でき、in vivoでOK-432を用いて治療することでIL-12,IFN-γ産生能が維持され抗腫瘍効果が得られる傾向にあった。一方、胃癌患者の脾臓が産生するサイトカインについてはIL-4,IL-6,IFN-γの産生は観察されるものの、個体差が大きく病期の及ぼす影響が十分には把握できず、継続して検討する予定である。また、マウス癌性腹水モデルでOK-432によるTh1サイトカイン誘導が認められたほか、臨床治療において腹膜再発を防止するために術中腹腔内にMMC,OK-432などの薬剤を投与した胃癌症例で、IL-2,IL-12,IL-15,IFN-γなどの腹腔内に誘導されるresponder症例があり、それらの臨床成績とサイトカイン産生能との対比も行った。以上の内容について、すでに掲載済の論文に加えて、あと3編が現在投稿中および投稿準備中である。
高齢者インプロ実践ファシリテーターの熟達プロセスの解明と支援モデルの構築

1インプロ実践におけるファシリテーション技術の理論的・方法論的検討(i)先行研究・実践のレビュー:昨年度に引き続き、国内外のインプロ理論・方法論、インプロを用いた演劇実践研究を整理したほか、ワークショップ・ファシリテーションに関する他領域の先行研究を整理、検討を進めた。(ii)海外インプロ実践の参与観察を通じたファシリテーション技術の検討:インプロの創始者の1人であるキース・ジョンストンによる国際的なワークショップ(ロンドン)において参与観察調査を実施した。ジョンストンの方法論を体験的に検討することに加え、各国のインプロファシリテーターとの意見交流を通して、高齢者を対象としたインプロ実践に求められるファシリテーション技術の実践上の特徴を探った。2柏市でのアクションリサーチ:高齢者インプロ劇団「くるる即興劇団」におけるインプロワークショップを毎月2回、一般公開パフォーマンスを2回開催した。高齢劇団員のファシリテーション技術の向上を目指したプログラムを実験的に導入し、その反応を観察調査およびインタビュー調査によってデータとして収集した。加えて、今年度は、身体的理由により会場に足を運べなくなってしまった高齢劇団員の自宅を他の高齢劇団員とともに訪問する「出張稽古・パフォーマンス」を行うことを通して、様々な身体的特性を有する高齢者も参加可能な高齢者インプロ実践のファシリテーションのあり方について検討した。3成果の報告:以上の研究の中間報告として、1つの国際学会、3つの国内学会で研究発表を実施した。International Drama in Education Research Institute(7月@オークランド大学)、日本教育学会(8月@宮城教育大学)、日本社会教育学会(10月@名桜大学)、日本演劇学会(11月@静岡文化芸術大学)本研究は、演劇未経験者でも参加可能でセリフの暗記等が不要な演劇活動である「インプロ」(即興演劇)に着目し、高齢者インプロ実践を行うにあたり、高齢者自身が主体的にファシリテーション技術を高めていくためのプロセスモデルを構築するものである。2年目である今年度は、昨年度に引き続き、文献レビューおよび柏市でのアクションリサーチを継続的に進めていくことで、最終年度である来年度の最終成果報告に向けたデータ収集につとめた。1文献レビューとしては、国内外のインプロ理論・方法論、インプロを用いた演劇実践研究を整理したほか、ワークショップ・ファシリテーションに関する他領域の先行研究を整理、検討を進めた。2海外先進的事例調査としては、当初予定していた米国の高齢者インプロ劇団「Antic Witties」の招聘が、講師の引退に伴い解散となってしまったため実施困難となった。そこで、英国・ロンドンにおいて開催されたインプロの創始者キース・ジョンストンの国際的ワークショップでの参与観察調査を実施することによって、ジョンストンのファシリテーション技術の高齢者インプロ実践への活用可能性を探るとともに、国外の優れたインプロファシリテーターと意見交換することによって、米国以外の高齢者インプロ実践の状況についても動向を知ることができた。3柏市でのアクションリサーチ:当初の予定通り、毎月2回のワークショップと年2回のパフォーマンス上演を開催し、観察データを蓄積することができた。また、高齢劇団員への個別インタビュー調査を8月に、グループインタビュー調査を3月にそれぞれ実施し、ファシリテーションに対する思いや考えに関する語りを収集した。加えて、身体的理由により会場に足を運べなくなってしまった高齢劇団員の自宅を他の高齢劇団員とともに訪問する「出張稽古・パフォーマンス」を計2回実施し、分析結果を国内学会で発表した。最終年度である2019年度は、主に、1柏市でのアクションリサーチの継続、2高齢者ファシリテーターの熟達プロセスの解明と支援モデルの構築に向けたデータ分析、3成果の報告、の3点に取り組む予定である。1柏市でのアクションリサーチ:2019年度も毎月2回のワークショップと年2回のパフォーマンスを開催するとともに、観察調査、インタビュー調査を通してデータを蓄積する。2高齢者ファシリテーターの熟達プロセスの解明と支援モデルの構築に向けたデータ分析:これまでの調査研究によって得られたデータを整理し、高齢劇団員が「ファシリテーター」になっていくプロセスを解明するとともに、高齢者のファシリテーション技術向上のために求められる支援のあり方について考察する。3成果の報告:国内学会を中心に本研究の成果を積極的に発表していくほか、学会誌への論文投稿を行っていきたいと考えている。また、本研究の成果を研究者でない人々に幅広く伝えるため、書籍(一般書)の刊行を予定している。加えて、より実践に直結した形で成果を発信するため、一般参加者にも開かれた「柏くるる即興劇まつり」を夏期に開催することを検討している。1インプロ実践におけるファシリテーション技術の理論的・方法論的検討:国内外のインプロ理論・方法論、インプロを用いた演劇実践研究を整理したほか、ワークショップ・ファシリテーションに関する他領域の先行研究を整理、検討を進めた。2柏市におけるアクション・リサーチ:高齢者インプロ劇団「くるる即興劇団」におけるインプロワークショップを毎月2回、一般公開パフォーマンスを2回開催した。ワークショップでは、毎回冒頭1015分間を、高齢劇団員が持ち回りでファシリテーションを行う時間として活用し、段階的にファシリテーション技術を高めていくプロセスを解明するためのデータを収集した。インプロのパフォーマンスにおいても、高齢劇団員が、ファシリテーション・ディレクション(演出)を担える場を複数設定し、そこで起こったことを記述するとともに、個別インタビュー調査を実施し、高齢劇団員のファシリテーションに対する意識変容のプロセスを解明するためのデータを収集した。また、他者のワークショップからファシリテーション技術を体験的に学ぶために、ゲストファシリテーターを複数名招聘し、それぞれのファシリテーションの特徴を考察した。3成果の報告:以上の研究の中間報告として、次の4つの学会で発表した。日本教育学会(8月@桜美林大学、「高齢者インプロ(即興演劇)

実践にみる〈老い〉への抵抗と受容」)、日本質的心理学会(9月@首都大学東京、「高齢者と非高齢者におけるインプロ(即興演劇)の意味付けの乖離:「ボケ防止」をめぐって」)、日本教育方法学会(10月@千葉大学、「高齢者インプロ実践のアクション・リサーチ」)、日本演劇学会(11月@愛媛大学、「仮面を用いた高齢者の即興演劇にみる〈老いた身体〉(福田寛之氏と共同発表)」。本研究は、演劇未経験者でも参加可能でセリフの暗記等が不要な演劇活動である「インプロ」(即興演劇)に着目し、高齢者インプロ実践を行うにあたり、高齢者自身が主体的にファシリテーション技術を高めていくためのプロセスモデルを構築するものである。本年度は、初年度ということもあり、文献レビューと、実践におけるデータ収集につとめた。1文献レビューとしては、国内外のインプロ理論・方法論、インプロを用いた演劇実践研究を整理したほか、ワークショップ・ファシリテーションに関する他領域の先行研究を整理、検討を進めた。2海外先進的事例調査としては、当初予定していた米国の高齢者インプロ劇団「Antic Witties」の参与観察・インタビュー調査については、講師の引退に伴い解散となってしまったため、調査を実施することが困難となった。同劇団の他に、国内外において活動を継続する高齢者インプロ劇団についてリサーチしたが、管見の限り見当たらなかった。そこで、今年度は、国内において活動する優れたインプロ劇団(高齢者ではない世代で構成)の実践者をゲストファシリテーターとして招聘し、高齢劇団員自らがそのファシリテーションを体験する取り組みを行った。そして、高齢者ではない世代のファシリテーションと比較することによって、高齢者インプロにおけるファシリテーションの特徴を探究することを試みた。3柏市でのアクションリサーチ:当初の予定通り、毎月2回のワークショップと毎年2回のパフォーマンス上演を開催し、観察データを蓄積することができた。また、高齢劇団員への個別インタビュー調査を8月と3月にそれぞれ実施し、ファシリテーションに対する思いや考えに関する語りを収集した。1インプロ実践におけるファシリテーション技術の理論的・方法論的検討(i)先行研究・実践のレビュー:昨年度に引き続き、国内外のインプロ理論・方法論、インプロを用いた演劇実践研究を整理したほか、ワークショップ・ファシリテーションに関する他領域の先行研究を整理、検討を進めた。(ii)海外インプロ実践の参与観察を通じたファシリテーション技術の検討:インプロの創始者の1人であるキース・ジョンストンによる国際的なワークショップ(ロンドン)において参与観察調査を実施した。
非天然アミノ酸を用いた新規T細胞誘導型ペプチドワクチン開発の基礎研究

近年、腫瘍ならびにウイルス感染症において、T細胞誘導型の治療ならびに予防ワクチンの開発が進められているが、どのようなT細胞応答を誘導すれば有効であるのか明らかではない。本研究により、抗ウイルスT細胞応答は野生型抗原によって規定されている可能性が明らかになった。このことは、適切な抗原の選択することがウイルス感染に対するワクチンを考える上で重要であること示唆しており、合理的なT細胞誘導型のワクチン開発に繋がると期待される。近年、腫瘍ならびにウイルス感染症において、T細胞誘導型の治療ならびに予防ワクチン開発が進められている。さらに機能的なT細胞の誘導を目的として、T細胞に強く認識されるアゴニストペプチドの探索が行われているが、依然として合理的な有効な方法は確立されていない。本研究では、本研究では、全く新しい試みとして、T細胞受容体の抗原認識に重要な天然アミノ酸の一部を構造的に良く似た非天然アミノ酸に置換することで、より精密に抗原ペプチドをデザインし、機能的な抗ウイルスT細胞免疫応答を誘導する分子基盤の確立を目的とした。我々は、マウスレトロウイルスであるフレンドウイルス感染におけるCD4T細胞応答をモデルとして検証を行った。これまで同定した複数のCD4エピトープの内、i18エピトープ(FV env: 462-479)は唯一回の免疫操作でレトロウイルス感染に対し強い抵抗性が誘導出来ることを示した。その一方で、fnエピトープ(FV env: 122-141)では、50%しか抵抗性を示さなかった。そこで、我々は弱い抵抗性しか示さないfn特異的CD4T細胞応答に着目して、機能的なCD4T細胞応答の誘導を目的として抗原ペプチドの改変を試みた。まずfnペプチドをアラニン置換したペプチドライブラリーから、野生型よりも強いCD4T細胞応答を誘導できるペプチドを見出した。さらに非天然アミノ酸で置換したfnペプチドにおいても、野生型より強い応答を示した。現在、改変ペプチドならびに非天然アミノ酸を含むペプチドで誘導したCD4T細胞の機能ならびに感染防御能について解析中である。マウスレトロウイルス感染におけるCD4 T細胞をモデルとして、MHCIIテトラマーの調製やサイトカイン産生解析等のCD4 T細胞の機能に関する評価系を確立し、野生型よりも強いT細胞応答を示すアラニン置換ペプチドならびに非天然アミノ酸を含むペプチドを見出した。近年、腫瘍ならびにウイルス感染症において、T細胞誘導型の治療ならびに予防ワクチンの開発が進められている。しかしながら、どのようなT細胞応答を誘導すれば有効であるのか、その分子機序は明らかではない。本研究ではウイルスの感染防御に関わるT細胞応答の特性を明らかにすることで、機能的な抗ウイルスT細胞免疫応答を誘導する分子基盤の確立を目的とした。さらに、これらを基にして、T細胞の抗原認識に重要なアミノ酸を置換した改変ペプチドを用いて、機能的な抗ウイルスT細胞免疫応答が誘導出来るか検討を行なった。我々はマウスレトロウイルスであるフレンドウイルス感染におけるCD4陽性T細胞応答をモデルとして検証を行った。これまで同定した複数のCD4エピトープの内、i18エピトープは唯一回の免疫操作でフレンドウイルス感染に対し強い抵抗性を示したが、fnエピトープでは50%しか抵抗性を示さなかった。強い感染防御能を与えるi18ペプチドは、fnペプチドに比べて、ウイルス感染後、早期に機能的な抗原特異的CD4陽性T細胞を誘導することが明らかになった。次に感染防御能が弱いfnペプチドに着目し、改変ペプチドを用いて機能的なT細胞応答を誘導出来るか検討を行った。fnペプチドの一部をアラニンならびに非天然アミノ酸に置換した改変ペプチドは野生型に比べて強く認識された。しかしながら、それらを免疫したマウス個体におけるウイルス感染後の生存率には有意な上昇は認められなかった。このことは、誘導されるT細胞応答は野生型の抗原によって規定されている可能性が示唆された。マウスモデルを用いたIn vivoの実験系において、改変ペプチドで誘導したT細胞応答の詳細な解析を継続して進める。本研究をさらに発展させるには、ヒトの実験系での検証、ならびに、結晶構造解析による分子レベルでの評価が必要である。そこで、次年度にはHIV感染における病態発症に深く関わるT細胞エピトープをモデルとした分子レベルの解析を行う予定であり、その準備はすでに整っている。免疫学当該年度に使用予定だった消耗品は概ね申請書通りであったが若干の端数が出た。そのため、次年度購入予定の消耗品購入代として繰り越した。次年度予算は申請額ならびに繰越額の合計額となるが、繰越額は消耗品購入に使用予定であり、全体的には大きな変更はなく申請書に記載された計画通りに使用予定である。
網羅的発現遺伝子解析により抽出された高血圧関連遺伝子AT4/IRAPの役割

高血圧や糖尿病に関係するたんぱく質の遺伝子について、DNAチップを用いて発現様式を網羅的に選び出すクラスター解析とより正確な測定法であるRT-PCR法によりAT4/IRAPを抽出しました。高血圧の病態に重要なレニン-アンジオテンシン系や、糖尿病に重要なインスリンと関係の深いタンパク質です。ELISA法による測定系を確立し、生活習慣病の病態と関係する可能性を見出しました。これまで本報告者らは腎生検標本を用いたトランスクリプトームの網羅的解析を行い高血圧や糖尿病などで特異的に発現低下を示す遺伝子クラスターを抽出した。そのGene Ontology解析とPathway解析によりアンジオテンシンII消去系遺伝子群であるC9orf3、ACE2、AT4/IRAPなどが抽出された。腎疾患の進展にレニン-アンジオテンシン系(RAS)が重要な役割を演じていることはよく知られているが、この方法で抽出されたAT4/IPAP(アンジオテンII4型受容体、別名、インスリン調節性アミノペプチダーゼ、insulin regulated aminopeptidase)の役割は明らかでない。そこでこの組織発現をより詳細に評価し、また血中や尿中の濃度測定法を開発し、疾患進展における役割を明らかとした上で、さらにバイオマーカーや治療ターゲットとしての可能性を評価することを目的とする。すでに抽出されているAT4/IRAPは膜タンパクであるが、遺伝子の構造から可溶性成分のあることが想定されている。すなわちPhe154とAla155の間で分解され、Ala155以降、約800アミノ酸配列分がSoluble Formとなると想定されている。実際血液での活性測定は可能とされている。そこで3か所の抗体作製イデオタイプ部位を各19残基で設定し、ウサギを免疫し、3イデオタイプの抗体を作成、6通りの組み合わせによるサンドイッチ法によるELISAの系の確立を試みることが本年度の目標である。作製された抗体を用い、標準品をもちいて検量線の作製を試みたところ、ELISAとしての測定系が成立することが確認された。さらに、実際の血漿標本で測定したところ、測定感度以内で、反応の確認される標本のあるととが確認された。今回、トランスクリプトーム解析により得られたバイオマーカー候補であるAT4/IRAPについて、測定系がほぼ完成した。今後、当初の予定に沿って、臨床症例の検体として血漿、尿での濃度を測定し、バイオマーカーとしての意義を検討する。これまで申請者は腎組織を用いたトランスクリプトームの網羅的解析を行い高血圧や糖尿病などで特異的に発現低下を示す遺伝子クラスターを抽出した。そのGene Ontology解析とPathway解析によりアンジオテンシンII消去系遺伝子群であるNLN、ENPEP、ANPEP、Cqorf3、ACE2、AT4/IRAP等が抽出された。腎疾患の進展にレニン-アンジオテンシン系(RAS)が重要な役割を担っていることはよく知られているが、この方法で抽出されたAT4/IPAP(アンジオテンンII4型受容体、別名、インスリン調節性アミノペプチダーゼ、insulin regulate daminopeptidase)の役割は明らかでない。そこでこの組織発現をより詳細に評価し、また血中や尿中の濃度測定法を開発し、疾患進展における役割を明らかとし、バイオマーカーや治療ターゲットとしての可能性を評価することを目的としている。平成22年度末までで、RT-PCRによる評価で特に発現量の変化が示唆されたAT4/IRAPについて、遺伝子の構造から可溶性成分のあることが想定されていることから、約800アミノ酸配列分のSoluble Formに対して3か所の抗体作製イデオタイプ部位を各19残基で設定し抗体を作成した。6通りの組み合わせによるサンドイッチ法によるELISA系の確立を試み、ELISAによる測定系がほぼ完成していた。当該年度は予定通りに、この二抗体法によるELISAの測定系としてのキットを作製し、プレートリーダーによる実際の測定で、極めて精度の高い測定が可能であることを確認した。duplicate sampleでのCV値を評価し、十分低値であることが確認しえた。また測定感度にかかる検体について、別の回での測定間の相関も悪くないと考えられた。しかしこれまでの測定の結果からは、実際の血漿での濃度はかなり低めであることが想定されたため、一次抗体反応時間、二次抗体反応時間、発色反応時間、反応温度、検量線段階希釈濃度などについて様々な組み合わせを試み、測定法の十分な適正化を進めた。これまで申請者は腎組織を用いたトランスクリプトームの網羅的解析を行い高血圧や糖尿病などで特異的に発現低下を示す遺伝子クラスターを抽出しました。そのGene Ontology解析とPathway解析によりアンジオテンシンII消去系遺伝子群であるNLN、ENPEP、ANPEP、C9orf3、ACE2、AT4/IRAP等が抽出されました。このうちAT4/IPAP(アンジオテンシンIV 4型受容体、別名、インスリン調節性アミノペプチダーゼ、insulin regulated aminopeptidase)の役割は明らかではありません。そこで血中濃度測定法を開発し、バイオマーカーや治療ターゲットとしての可能性を評価することを目的としました。

前年度末までで、RT-PCRによる評価で特に発現量の変化が示唆されたAT4/IRAPについて、可溶性成分のあることが想定され、3か所の抗体を作成しました。6通りの組み合わせによるサンドイッチ法によるELISA系の確立を試み測定法の適正化を進め感度0.01nmol/mlレベルの測定系を確立しました(IBL社No 99666)。当該年度は予定通りに、血液などのサンプルの収集などを進め、連続症例652例の血漿濃度を測定し、93例(14.3%)で感度以上の値が得られ(陽性群)、高血圧など各種生活習慣病関連指標や内分泌代謝系検査値等との解析を行いました。陰性群と陽性群の分散分析による比較では、BMI:24.0±3.9 vs 23.1±3.7 (p=0.042)、Angiotensin I(対数変換値):1.84±0.67 vs 1.57±0.84 (p=0.001)などの有意差が得られました。すなわち陽性群で有意にBMIが低値であり、かつ有意にアンジオテンシンIが低値であるとの成績が得られました。生物学的な解釈としても整合性のある成績と考えられます。ほぼ計画通りに、(1)トランスクリプトームの網羅的解析により得られた遺伝子群についてRT-PCRによる解析を完了し、(2)マーカー遺伝子候補のAT4/IPAPに対する抗体を作製し、ELISAによる測定系の確立にほぼ成功し、(3)これをキット化し、測定の再現性などの評価を行い、(4)一次抗体反応時間、二次抗体反応時間、発色反応時間、反応温度、検量線段階希釈濃度などについて測定法の十分な適正化を進め得たと考えられるため。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後はさらに血液、尿などのサンプルの収集、データベースの整備を進めるとともに、測定法の適正化を一定の段階で終了とし、実際の症例について1,000例規模での測定を進め、高血圧、糖尿病、高脂血症、慢性腎臓病などの臨床例における測定と解析を通して、今回のキットによる測定でバイオマーカーとしての評価に一定の結論にまで至らせる。成績により臨床的に有意義な測定である可能性等により、今後モノクローナル抗体法によるさらなる測定法開発などの必要性など評価する。
語および言語上の演算

実施計画の「全ての原始語からなる言語は文脈自由言語かどうか?」に関しては、回文からなる文脈自由言語を生成する文法の研究が研究代表者、P.DomosiおよびSz.Fazekasとの共同研究として行われ、その成果は、研究代表者とDomosiの共著書Context-Free Languages and PrimitiveWords(World Scientific,Singaporeより刊行予定)の一節に盛り込まれた。この面の研究に関して、研究分担者は、非原始的な回文からなる文脈自由言語の構造の研究を行った。研究結果はInternational Journal of Foundation of Computer Scienceで公刊される。主テーマの「語および言語上の演算の研究」に関して研究代表者は、複製される語の集合が有限集合の場合には、正規言語の重複閉包は必ずしも正規言語にならないことの証明、重複閉包演算で正規性が保存されるための条件等を検討した。その成果は、ハンガリーで開催された国際会議での招待講演として発表された。研究分担者は、語および言語の回文補完演算の研究をおこなった。研究結果は、国際会議ComputabilityinEurope2012に於いて発表される。その他の研究代表者の研究として、研究代表者は、オートマトンの状態集合に層とよばれる概念を導入しそれを用いてオートマトンの新しい構造理論を構築された。この結果はTheoretical Computer Scienceで公刊された。研究分担者のその他の研究としては、グラフの位相的な性質を用いての計算理論の研究がある。結果は創薬への応用が期待される。雑誌Natural Computingで公刊される。共同研究の最終目的は、「全ての原始語からなる言語は文脈自由言語かどうか?」という未解決の問題の解決にある。研究分担者は上記言語の計算量を計算することで、上記の言語が文脈自由言語でないことを証明する試みを行った。結果としては未だ成功していないが、この方向での問題解決はかなり有望であると思われる。上記の問題に関連する言語の研究に関しては、研究代表者および研究分担者は個別に種々の研究を行ってきた。それらの研究の突き合わせと新しい結果の紹介と検討を行った。たとえば、ある制限下にある複製閉包演算による正規言語および文脈自由言語の保存性に関して、研究代表者は数学的に正確な証明を与え研究分担者とともに検討しその正しさを確認した。この結果は本年8月にハンガリーで開催される国際会議13th International Confefence on Automata and Formal Languagesで招待講演Restricted duplicationclosuresとして発表される。また研究分担者は正規言語の複製閉包演算の逆演算で得られる複製根からなる言語の正規性に関し新しい結果を得た。その結果の検証を研究代表者と行った。この結果は未だ論文のかたちで正式には発表されていないが、最終目的にむけての一歩を踏み出したものと考えられる。研究代表者と研究分担者が共同で行った研究としては回文から構成される文脈自由言語の構造の決定がある。たとえば、この種の言語はA→aBa,A→aaあるいはA→a(ここでA,Bは変数、aは字母系の文字である)というかたちの生成規則を持った文脈自由文法で生成されること等が示された。この共同研究の結果は、現在共著論文として作成中で上記ハンガリーの国際会議で発表される。
ドナー特異的免疫寛容に果たす肝臓の役割

(1)ACIラットの胸腺を0.1-0.3mm立方に細切、これをLewisラットの門脈内に投与した。リンパ球の門脈内投与群に比べては胸腺を細切したクラスターを門脈内に投与した群は心移植の生着延長を認めなかった。しかし、リンパ球の皮下投与群に比べては有意に反応性の低下を認め、心移植の生着延長も認めた。肝臓内に移植した胸腺クラスターは一部分が胸腺の組織と同様な形態で肝臓内に生着しておりその形態を保っていた。(2)BALB/C toB6のマウス実験系を用い、胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞を門脈内に投与し、単なるリンパ球の投与群と比べてMLR反応の差を検討したが、皮下投与、静脈内投与群に比べて有意に反応性の低下を認めたが、脾臓細胞の門脈内投与した群と胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞を門脈内投与した群に有意差は見られなかった。(3)ACIラットの胸腺クラスターをLewisラットの肝臓内に移入した後、末梢血中、脾臓、リンパ節内のリンパ球にドナー細胞が存在するキメリズムがおきているかついて、MHCをマーカーにして免疫染色にて調べたがLewisラットの細胞からACIラット由来の細胞は検出できなかった。(4)糖尿病ラット同系ラ氏島門脈内移植で、血糖正常化に必要なラ氏島数を検討した。ラ氏島は平均直径150μmのものを1IQとして算定した。その結果、20IQ以上で血糖が正常化した。胸腺クラスターと混合投与数を20IQとした。(5)ACI toLewis膵臓ラ氏島移植の生着延長のために胸腺混合投与を行い検討した。胸腺クラスター5-8個を混合投与すると、門脈投与すると門脈塞栓が起きた。このため、胸腺クラスターを厳密に5個投与したが、門脈塞栓を引き起こした。次に、胸腺クラスターをトリプシン処理し、5個分に相当するsingle cell suspensionをクラスターの代わりに投与した。しかし、門脈塞栓を引き起こした。予備実験胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞の分離今までに報告してきた方法にてBALB/Cマウスの胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞を分離した。[A]胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞を門脈内に投与BALB/C toB6のマウス実験系を用い、胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞をを門脈内に投与し、単なるリンパ球の投与群と比べてMLR反応の差を検討したが、皮下投与、静脈内投与群に比べて有意に反応性の低下を認めたが、脾臓細胞の門脈内投与した群と胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞を門脈内投与した群に有意差は見られなかった。[B]胸腺を細切したクラスターを門脈内に投与することによる免疫寛容の導入ACIラットの胸腺を1mm立方に細切し、これをLewisラットの門脈内に投与した。リンパ球の皮下投与、静脈内投与群に比べて有意に反応性の低下を認め、心移植の生着延長も認めた。リンパ球の門脈内投与群に比べて胸腺を細切したクラスターを門脈内に投与した群は心移植の生着延長を認めた。

肝臓内に移植した胸腺クラスターは一部分が胸腺の組織と同様な形態で肝臓内に生着しており、30日はその形態を保っていた。このことが、心移植の生着延長に寄与していると考えたれた。[C]胸腺細胞の肝臓への移入後のキメリズム胸腺クラスターを肝臓内に移入した後、末梢血中、脾臓、リンパ節内のリンパ球にドナー細胞が存在するキメリズムがおきているかをMHCをマーカーにして調べたが、確認できなかった。これらの成果をふまえ、平成15年度以降はキメリズム、肝臓内マクロファージ、クッパー細胞の役割などこの免役抑制のメカニズムを解明するとともに、移植グラフトのさらなる長期生着を得る方法を探究する。I胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞の分離今までに報告してきた方法にてBALB/Cマウスの胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞を分離した。II胸腺を細切したクラスターを門脈内に投与することによる免疫寛容の導入ACIラットの胸腺を1mm立方に細切し、これをLewisラットの門脈内に投与した。リンパ球の門脈内投与群に比べては胸腺を細切したクラスターを門脈内に投与した群は心移植の生着延長を認めなかった。しかし、リンパ球の皮下投与群に比べては有意に反応性の低下を認め、心移植の生着延長も認めた。肝臓内に移植した胸腺クラスターは一部分が胸腺の組織と同様な形態で肝臓内に生着しておりその形態を保っていた。III胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞を門脈内に投与BALB/C toB6のマウス実験系を用い、胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞を、門脈内に投与し、単なるリンパ球の投与群と比べてMLR反応の差を検討したが、皮下投与、静脈内投与群に比べて有意に反応性の低下を認めたが、脾臓細胞の門脈内投与した群と胸腺上皮細胞、胸腺ナース細胞を門脈内投与した群に有意差は見られなかった。IV胸腺細胞の肝臓への移入後のキメリズム胸腺クラスターを肝臓内に移入した後、末梢血中、脾臓、リンパ節内のリンパ球にドナー細胞が存在するキメリズムがおきているかをMHCをマーカーにして調べたが、確認できなかった。V胸腺細胞と膵臓ラ氏島の混合投与膵臓ラ氏島移植の生着延長のために混合投与を行ったが、ラ氏島の分離状態が悪く同系移植においてもほとんど生着していなかった。このためラ氏島の分離の方法を変更した。