hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
政府統計と結合可能な社会実態調査の調査設計と分析技法の研究

平成8年度の研究計画班の一つの岩坪班を編成替えをして、船岡班と垂水班とに分離独立させた。この垂水班では、研究者の個別実態調査が政府統計とどのようにリンケージ可能であるかを検討した。(1)垂水は平成9年(1998年)が第8回岡山行動圏調査の実施年であるので、これまでの7回の調査データをパネル化し、インターネットで公開するとともに、1998年の調査は1995年の国勢調査の18歳以上人口をもとに、標本設計を行い調査を行った。県民の行動圏をこれまで「依存度」「構成比」を中心に分析してきたが、今回は「流出率」に注目して分析し1994年の第7回調査と比較することを試みた。分析結果は別途CD-ROMから出版を行った。1979年の第1回調査から20年を振り返り、第1回調査、第5回調査と今回の調査との比較分析を行っており、報告書を作成中した。また20年間の道路・交通網の整備、大規模小売店の新規開店を地図上にプロットすることにより、行動圏の変化との関係を探った。(2)大友は宇都宮市の1990年国勢調査基本単位区別集計データ、ならびに宇都宮市の調査による1987年と1992年の町丁・字別人口移動データ及び1985年から1995年までの各年の町丁・字別人口移動のをもとに、中心部からの同心円地域を設定し、地域間の人口移動を遷移率で表したモデルを作成し、シミュレーションの結果と現在の人口分布を比較し、このモデルが有効であることを示した。(3)林は東京23区内の入学試験受験生を分析し、地域による成績分布の違いを調べた。ただし、浪人生については現在の居住地しかデータが得られないため、現役生と浪人生との比較には使えるものの、地域分析には不適であることがわかった。現役生に限ると、地域的な特性が見えるものの、その違いの原因についてはさらに研究を必要とする。垂水は第8回岡山行動圏調査の実施年に伴い、これまでの7回の調査データをまとめ、インターネットで公開するとともに、今回の調査のために1995年の国勢調査の18歳以上人口をもとに、標本設計を行い調査を行った。県民の行動圏をこれまで「依存度」「構成比」を中心に分析してきたが、今回は「流出率」に注目して分析し第7回調査と比較することを試みた。分析結果は別途岡山経済研究所から出版される予定でいる。さらに、第1回調査から20年を振り返り、第1回調査、第5回調査と今回の調査との比較分析を行っており、報告書を作成中である。大友は宇都宮市の1990年国勢調査基本単位区別集計データ、ならびに宇都宮市の調査による1987年と1992年の町丁・字別人口移動データ及び1985年から1995年までの各年の町丁・字別人口データをもとに、中心部からの同心円地域を設定し、地域間の人口移動を遷移確率で表したモデルを作成し、シミュレーションの結果と現在の人口分布を比較し、このモデルが有効であることを示した。林は東京23区内の入学試験受験生を分析し、地域による成績分布の違いを調べた。

現役生に限ると、地域的な特性が見えるものの、その違いの原因についてはさらに研究中である。垂水は岡山行動圏調査の第1回から第8回までの調査データをインターネットで公開し、利用者が希望する集計が行えるようにした。プライバシー保護のため、セルのデータ数が少ない場合には秘匿をかけている。また、これまでの調査を第1回と第5回、さらに第8回調査を中心として比較し、各市町村、各商品がどのように変化したかを分析し、報告書にまとめた。その膨大なデータをCD-ROM化することによりオフラインでも使えるようにした。さらに行動圏から「医療圏」をとりあげ、岡山県の「2次医療圏」と住民が重症時に行こうと思っている病院の地域との感覚との差違をデータから明らかにした。岡山県南部地域の医療圏では住民の間隔とズレがないものの北西部の医療圏にズレが見られるという結果が得られた。大友は平成6年全国消費実態調査の個票データを用いて擬似データセットを作り、このデータセット間での統計的照合を行い、データマッチングの結果の信頼性の検討をすすめている。昨年度は仙台市、宇都宮市等の地方都市5都市を取り上げたが、データが少なかったため、今年度は東京都の全データを用いて行っている。村山は昨年度作成し公開していた「インターネットGIS」の評価を行い、改良を進めると共に市町村合併等の情報にきめこまかく対応するようにしている。
フィブロブラスト増殖因子の活性フラグメントの開発とその中枢神経作用の検索

ヒドラを利用した細胞成長因子および関連物質の超高感度検出法(花井他、1987;花井1989)により、食後一過的に脳内で酸性型、塩基性型線維芽細胞成長因子(FGF)活性が増加することが見出された(花井他,1989)。そこで、FGFの脳内での摂食調節機構について様々の角度から検討した。高度に精製されたFGFを利用して抗FGF抗体を用意し、免疫組織化学法によるFGF分布、その動態を検討し、脳内に投与してその効果を検討した(大村他,1989)。また肥満との関係を明らかにするために、遺伝的肥満ラットFattyややせラットLeanを利用して、これらのブトウ糖投与に伴うFGF活性の変化も検討した。この結果、FGFは脳内で内因性摂食調節物質として働き、更に神経栄養因子として中枢神経系の維持にも重要であることが明らかになった。FGFのニュ-ロンレベルにおける作用機序を明らかにするため、視床下部に存在した行動制御に重要な役割を果している化学感受性ニュ-ロンの活動に対する作用を無麻酔および急性麻酔下ラットを用いて調べた。細胞外および細胞内電気現象の記録はテフロン被覆白金イソジウム電極とガラス管多連微小電極で行なった。その結果、FGFはラット視床下部外側野ニュ-ロンの活幼を抑制することがわかった。さらにFGFのこの部位のニュ-ロンへの直接作用をみるため、酵素と機械的処理でニュ-ロンを単離し、これにパッチクランプ法を適用して膜電位固定下に次の結果を得た。FGFは膜電位依存性Na、KやCaチャネルや興奮性アミノ酸による化学伝達には全く影響を与えなかったが、細胞内ATP減少によるGABA応答の減少を防止する作用が認められた。すなわち生体実験でみられたFGFによる視床下部外側野ニュ-ロンが活幼の抑制はGABA受容器へのFGFの賦活作用による可能性が示唆された。この他、視床下部その他脳部位のニュ-ロンの諸性質を明らかにできた(赤池他、文献参照)。酸性型線維芽細胞成長因子(aFGF)様物質が脳脊髄液(CSF)中に食後増加する。ヒドラはaFGFを鋭敏に検出し、1分子のaFGFがヒドラのしかるべき場所に結合すればaFGFに応答する。一方ヘパリン、antiaFGFIgGはこの反応を阻害するので、これらの物質の決められた量の存在下で反応させることによって未知試料中のaFGF量を決定できる。CSF中には食後およそ3ng/mlのaFGFが検出された。CSF中に放出されるaFGF様物質はaFGFで作製した抗体antiaFGF/Sとは反応するが、C端ペプチドに対する抗体のantiaFGF/Yとは反応しない。一方aFGFをトリプシンで限定加水分解すると、CSF中に見出されるものと同じ振舞を示すものが得られた。これのN端側のアミノ酸配列はaFGFのN端と同じだった。従ってCSF中に見出されるものはC端側を一部消失したものである可能性が高い。牛脳より多量の高度に精製されたaFGFを調製し、これに対する抗体antiaFGF/S血清で調製した。この抗血清を利用して免疫組織化学を行なった。絶食ラットでは第III脳室の視床下部近傍の脳室壁上衣細胞にaFGF陽性物質が見出された。

腹腔内ブドウ糖投与後2時間のラットでは、上衣細胞のaFGF陽性物質は消失し、脳実質内のニューロンにaFGF陽性物質が見出された。aFGF陽性物質は視床下部外側野(LHA)の大型ニューロン、延髄の迷走神経背側核近傍(A2領域)のアミンニューロンで顕著に見出された。一方合成CDNAプローブを利用してin situハイブリダイゼーションを行ってみると、絶食ラットでは上衣細胞にaFGFmRNAが見出された。これらのことからaFGFは脳室壁上衣細胞で産生・蓄積され、摂食に伴う何らかの刺激でこれらの細胞より脳室・脳実質ニューロンに放出されると考えられる。FGFが内因性摂食調節物質として働いているかを抗aFGF抗体を利用して検討した。抗aFGF抗体を視床下部外側野に両側性に投与してやると最初の3時間の摂食量が約100%増加した。少量のブドウ糖を脳室内に投与してやると、投与後1時間でaFGF活性は投与前より10^3倍増加した。肥満との関係を調べるために、遺伝的肥満ラットFatty(fa/fa)とやせラットLean(FA/fa)でブドウ糖投与に伴うaFGF活性の変化を検討した。Fattyでは野性株のラット(Whistar)と有意な差は見られなかったが、Leanでは顕著に増加していた。肥満との関係が示唆される。FGFは神経栄養因子として機能することが知られている。そこで虚血に伴う海馬のCA1線維の変性をFGFが妨ぐかどうかを検討した。またマウスの電撃忌避行動の学習に際しては、ブドウ糖の腹腔内投与によって学習の思い出し(recall)に顕著な効果を示すことがわかった。この効果はブドウ糖投与後2時間の時に学習させた時が特に顕著であった。FGFの直接投与によってこの効果が見られるかどうかについて更に検討したい。昭和63年度において、aFGFを多連微小電極法によりラット視床下部外側野のニュ-ロンに直接作用させた時、長い潜時で持続の長い放電活動の抑制が認められた。そこで、ラット視床下部外側野の脳薄切片を作り、これを酵素処理後、パイペッティングによる機械的にニュ-ロンを単離した。この単離ニュ-ロンにパッチクランプ法を適用し、whole-cell様式で膜電位固定を行ない次の結果を得た。膜電位依存性Na、KやCaチャネルはaFGFにより何ら影響されなかった。グルタミン酸やNMDA応答に対してもaFGFは効果を示さなかった。細胞内ATPの減少は特異的にGABA_A受容器応答を減衰させ、いわゆる脱抑制を惹起する。aFGF存在下、使用したニュ-ロンの約50%においてGABAの脱抑制が阻止された。この結果は63年度の電気泳動の実験成績を支持する。
高脂血症による糖尿病性腎症悪化の新たな分子機構:MRP8/TLR4 シグナル経路

近年、生活習慣病の分子基盤として内因性リガンドと病原体センサー間で誘導される自然炎症が注目されている。本研究により、自然炎症の一端を担うMRP8/TLR4シグナル経路の活性化が糖尿病性腎症の進展に重要であることが明らかとなった。さらにMRP8発現はヒト糖尿病性腎症の腎組織においても病態を反映できる可能性が確認され、新しい治療標的として期待される。申請者は糖尿病マウス糸球体を用いた独自のスクリーニング法で着目したTLR4とその内因性リガンドMRP8が、糖尿病マウスへの高脂肪食負荷により糸球体で発現が増強していたため、脂質による糖尿病性腎症悪化に果たすMRP8/TLR4の役割を検討した。その結果、TLR4の欠損により脂質による糖尿病性腎症の悪化が有意に抑制されると同時に糸球体MRP8陽性浸潤細胞が著明に抑制されることが明らかとなった。またマウス糸球体で出現するMRP8陽性細胞はマクロファージ(Mf)であり、in vitroの検討の結果、糖と脂質はMf上に発現するTLR4依存的にMRP8発現を相乗的に誘導することで糸球体病変を進展させると考えられた。ヒト糖尿病性腎症において腎組織MPR8/TLR4 mRNAが増加していることを昨年確認した。さらに当科において腎生検を施行した肥満あるいは2型糖尿病を有し、タンパク尿を呈する患者を含む計65症例でMRP8の免疫染色による評価を行った。糖尿病性腎症群は肥満関連腎症、非肥満・非糖尿病コントロール群と比較して有意に腎組織MRP8発現が高値であった。さらに1)年間血清クレアチニン50%以上の増加あるいは透析導入で定義した腎イベント、2)腎生検1年後の尿蛋白を腎予後指標として予後予測に関する検討を行った。単変量解析では従来の危険因子(血圧、腎機能、尿蛋白、脂質)と腎組織MRP8発現が腎予後指標と関連していた。ロジスティック回帰分析あるいは重回帰分析による多変量解析により、従来の危険因子で補正後もなお、腎組織MRP8発現は独立して腎予後を予測する因子であることが明らかとなった。以上より、MRP8/TLR4シグナルは糖尿病性腎症の進展に重要であり、新規治療標的になりうることが期待される。申請者は糖尿病マウス糸球体を用いた独自のスクリーニング法で着目したTLR4とその内因性リガンドMRP8が、STZマウスへのHFD負荷により糸球体で発現が増強していたため、脂質による糖尿病性腎症悪化に果たすMRP8/TLR4の役割を検討した。野生型(WT)およびTLR4欠損(KO)マウスにSTZ、HFDを投与して両者を比較。WTとKOで糖・脂質代謝異常は同等にも関わらずKOではHFD追加による腎症の悪化が著明に抑制されていた。STZ-HFDマウス糸球体で出現するMRP8陽性細胞の局在はマクロファージ(Mf)であった。MfにMRP8を添加するとLPSと同等のTNFa, IL-1b発現誘導を、そしてMRP8自身のautoinductionを引き起こした。Mfへの脂肪酸刺激は高糖濃度条件下でのみMRP8発現を増強し、TLR4欠損Mfではこの増強効果を認めなかった。以上より糖と脂質はMf上に発現するTLR4依存的にMRP8発現を相乗的に誘導することで糸球体病変を進展させると考えられた。TLR4下流の細胞内シグナルのウエスタンによる検討でTRIF-dependent経路の活性化の関与が推測されたが、網羅的に解析する手法(PCR array)でもこれを裏付ける結果が得られた。さらに一連の研究の中で糖尿病における脂質負荷は腎組織局所のRA系活性化を引き起こすことが分かった。STZマウスへのアンジオテンシンII投与は糸球体内メサンギウム細胞およびMfにおけるMRP8発現を強く誘導した。現在RA系とMRP8/TLR4シグナルのクロストークが病態悪化に果たす役割についても検討を進めている。腎生検標本を用いた検討においてmRNAレベルでヒトにおいても糸球体MRP8発現が糖尿病性腎症で大きく増加していた。さらに免疫染色による検討では糸球体MRP8発現が腎症の程度と関連している可能性を見出している。申請書に記載した当初の23年度計画はほぼ終了し、現在24年度計画および現研究課題実施中に新たに追加した新規研究計画についても開始している。具体的にはMRP8の局在同定、TLR4欠損マウスおよびTLR4欠損マクロファージを用いた機能的意義の検討、およびin vitroの系でマクロファージにおいて糖と脂質がMRP8発現に与える影響の検討などである。また24年度計画で予定しているヒトの腎生検標本を用いた検討についてもmRNA定量や免疫染色によるタンパク発現の評価はすでに終了しており、現在解析を進めている。TLR4下流のTRIF-dependent経路を特異的に遮断するペプチドを用いて病態への効果を検討する。またRA系とMRP8/TLR4

シグナルのクロストークによる病態の解明を目指してARB投与効果やin vitroでは糸球体内在細胞とマクロファージを用いた検討を行う。内因性リガンドMRP8の機能解析を目的としてリコンビナントタンパクの投与実験をin vitro, in vivoで、さらには遺伝子改変動物の作製も計画していく。腎生検標本の検討ではさらに症例数を増やして横断的検討のみならず腎予後との関連についても検討する。TLR4下流の細胞内シグナルや内因性リガンドMRP8の詳細な機能解析を行うために必要な試薬、タンパクの購入、並びに遺伝子改変動物作成に向けてのconstract構築に必要な物品の購入。ヒト腎生検標本処理のための費用など。他、消耗品など
寒冷地の住宅建築の活用実態と変容過程に関する研究

本研究は、北海道における住宅建築の活用実態と変遷過程を明らかにした。札幌市都心部では、5つの住宅建築タイプを確認し、活用実態は主に文化財として保存活用されるものと商業用途に転用されるものであった。函館市西部地区では、7つの住宅建築タイプを確認することができ、歴史的建造物群保存地区として保護されていることもあり様々な活用実態が把握できた。さらに、函館市西部地区では住宅建築の外観調査と、具体的な所有形態や増改築に関するワークショップを実施し、変容過程を明らかにした。本研究は、北海道の都市部を対象に、寒冷地の住宅建築の活用実態と空間の変容過程を明らかにすることを目的として実施した。当該年度は、北海道の住宅建築に関する基礎的な文献を収集し、都心部の住宅建築の元型として、漁場建築、町家、商家、社宅に着目する視座を得た。一方で、住宅建築の活用実態について、1)札幌市の円山公園から大通り、2)函館市西部地区について住宅建築の写真撮影を行い、活用実態のデータベースを整理した。函館市の事例では、実測調査が可能であった木造住宅を対象に、町家型戸建住宅を評価する指標をまとめた。その成果は、「函館市西部地区における町家型戸建て住宅の構成」として札幌市立大学研究論文集に掲載予定である。さらに、文献を整理する中で、北海道の木造住宅の構造は漁業建築との類似性が指摘されることから、北海道における住宅建築の変遷を理解する際に、比較的原始的なタイプとして羅臼町における番屋の現地調査を行った。その成果の一部は、「羅臼町カモイウンベ地区における漁業小屋の構成」として日本建築学会大会で口頭発表を予定している。以上の成果から、北海道の住宅建築の元型について把握することができた。また、機能面では、特に既存不適格木造建築については居住性能が低いこともあり、都心部では商業的な利用が多いことが特徴としてみたれた。一部の事例ではあるが、外壁のメンテナンスを繰り返しながら住居として使用を続ける事例がみられた。現在までに、文献資料や現地調査で得た資料から、おおむね北海道の住宅建築の特徴とその変容過程については把握することができている。しかしながら、当初計画していた調査に加え、北海道の住宅建築の元型といえる漁業建築の資料不足を調査で補ったことで、住宅タイプの残存状況のリスト化については十分に行えていない面もある。2年目はリストのさらなる充実と、寒冷地の住宅建築に関する活用方法の体系化が課題である。2017年度は、2016年度の研究活動を通じて、歴史的な文脈も踏まえた研究として方法を見直し、函館市西部地区の住宅建築を中心とした研究内容に変更した。具体的には、活用実態リストをもとに函館市西部地区宝来町、青柳町における住宅建築を対象として変容過程に関する調査を実施した。本調査では、函館市西部地区の宝来町と青柳町において、住宅建築1131件の外観調査を実施した。この2地区は、昭和9年の函館大火で被災した隣接地区であるが、宝来町は明治期には蓬莱貸座敷や芝居小屋など商業地区、青柳町は大正期に郊外として開発された住宅地区と異なるコンテクストを持つ地区として選択した。また、住宅から転用事例に着目し事例の多くみられた函館市西部地区元町、弁天町、末広町、弥生町で札幌市立大学の学生によるまち歩きワークショップを実施した。ワークショップでは、上記の研究結果を踏まえ、共通の調査項目を記載した調査シートを事前に作成し、3グールプで実施し、具体的な所有形態や増改築の変容過程を把握した。成果としては、元町30件、弁天町38件、末広町13件、弥生町4件の調査シートが得られた。宝来町と青柳町における調査結果とワークショップの結果については、論文投稿を予定している。計画当初は情報をホームページなどにより公開し積雪寒冷地住宅の具体的な指針となることを目指していたが、期間内には情報公開に至らなかったため、研究終了後に構築する予定である。当該年度に実施した内容では、北海道の住宅建築について、いかにデザインするかといった計画者側からの検証が少なかったため、建築家などのヒアリング調査を実施し、その特徴を明らかにしたい。また、近年多くみられる不動産業者などが介在するリノベーションじぎょうについても、函館市ではその活動が活発である様子が現地調査によって明らかになったため、関係者へのヒアリング調査を実施したい。さらに、並行して住宅タイプの残存状況のリスト化を早期に完成させるとともに、現地調査を継続して行う。また、上記の研究成果をもとに、寒冷地の住宅建築の実態をCAD化した図面やアクソメ図、写真を用いて分かりやすい形でまとめ、その変容過程のモデルを作成し、学生とのワークショップに具体的な住宅建築の提案を行う予定であることから、その準備を行う。デザイン学
両親媒性ポリアミノ酸の形状制御とアジュバント機能

本研究では、両親媒性ポリアミノ酸からナノーマイクロ構造体を調製し、ワクチンアジュバントとしての機能を評価した。ポリ(γ-グルタミン酸)(γ-PGA)に疎水性アミノ酸を導入した疎水化γ-PGAは、その疎水化度や良溶媒から貧溶媒への置換の条件を制御することで、ナノ粒子、マイクロ粒子、中空粒子、多孔質粒子、ファイバー等の構造体が形成可能であった。また、疎水化γ-PGAから中空マイクロ粒子は、抗原ペプチドを効率よく担持することが可能であり、マウス免疫実験により既存のアジュバントよりも高い免疫誘導効果を示した。本研究では、両親媒性ポリアミノ酸からナノーマイクロ構造体を調製し、ワクチンアジュバントとしての機能評価を目的としている。初年度(平成27年度)では、ポリ(γ-グルタミン酸)(γ-PGA)の疎水化度や分子量の異なる疎水化γ-PGAを合成し、様々なサイズ・形状を有する構造体の調製方法を確立した。分子量の異なるγ-PGA(分子量50, 200, 500万)に疎水性アミノ酸であるL-フェニルアラニンエチルエステル(Phe)を縮合剤を用いて導入した。Pheおよび縮合剤の仕込み量を変化させることで、Phe導入率が4080%の疎水化γ-PGAを合成した。得られた疎水化γ-PGAを各種有機溶媒(DMSO、クロロホルム等)に溶解し、その溶液を貧溶媒に添加することで、導入したPheの疎水性相互作用による構造体形成を行った。その結果、Pheの導入率、良溶媒の種類、ポリマー濃度、ポリマー溶液(良溶媒)の水(貧溶媒)への置換速度によって、ナノ粒子、マクロ粒子、中空粒子、多孔質粒子、ファイバー等の構造体が形成可能であることが、動的光散乱(DLS)測定、走査型電子顕微鏡(SEM)・位相差顕微鏡観察より明らかとなった。次年度は、上記で得られた疎水化γ-PGAからなるナノーマイクロ構造体の基礎的な物性を解析し、蛋白質、ペプチド、核酸等のキャリアおよび細胞賦活化剤としての機能を評価することで、ワクチンアジュバントとして有効性を明らかにする。本年度は当初の計画通り、疎水化γ-PGAからなるナノーマイクロ構造体の形状制御方法を確立することができた。ポリ(γ-グルタミン酸)(γ-PGA)に疎水性アミノ酸であるフェニルアラニンエチルエステル(Phe)を縮合剤を用いて導入し、Phe導入率が4080%の疎水化γ-PGAを合成した。得られた疎水化γ-PGAを各種有機溶媒(DMSO、クロロホルム等)に溶解し、その溶液を貧溶媒に添加することで、構造体形成を行った。その結果、Pheの導入率、良溶媒の種類、ポリマー濃度、良溶媒から貧溶媒への置換速度によって、ナノ粒子、マイクロ粒子、中空粒子、多孔質粒子、ファイバー等の構造体が形成可能であることが明らかとなった。また、O/Wエマルション法を用いた調製した疎水化γ-PGAからなる中空粒子・多孔質粒子は、粒子内部にペプチドを効率良く担持することができた。モデルペプチドとして卵白アルブミン(OVA)のエピトープペプチド(SIINFEKL)を担持した中空マイクロ粒子を調製し、マウス免疫実験により中空マイクロ粒子のワクチンアジュバントとしての機能を評価した。その結果、ペプチドのみを免疫した群においては、細胞性免疫の誘導が認められなかったのに対して、中空マイクロ粒子を用いた免疫群で高い免疫誘導効果が確認された。この免疫応答は、ペプチドワクチンのアジュバントして臨床研究によく用いられているIFAより高い値を示した。疎水化γ-PGAからなる中空マイクロ粒子は、内包ペプチドを抗原提示細胞に効率よくデリバリーすることで、優れた免疫誘導効果を示したと考えられる。ナノーマイクロ構造体の形状制御可能な疎水化γ-PGAは、ワクチンアジュバントの素材として有望なツールになると期待される。研究計画通り、平成27年度に得られたナノーマイクロ構造体の物性と機能に関する研究を推進し、構造体の形状とワクチンアジュバント機能との関連性を明らかにする。バイオマテリアル
中国5～8世紀の如来蔵思想の根本的再評価

インド大乗仏教史の中期に展開した如来蔵思想という考え方を示す代表的著作に,『ラトナ・ゴートラ・ヴィバーガ(宝のような種姓の弁別)』というサンスクリット語仏典があり,7世紀前半におけるその漢訳として『宝性論』(正式名称は『究竟一乗宝性論』,以下『宝性論』と略記)がある。この漢訳仏典のもつ意義を再評価することを目標として掲げる李子捷氏は,この一年間,本研究課題に関する研究を行い,以下の論文を積極的に執筆した。いずれも『宝性論』を価値および,『宝性論』と他文献の関係を思想史的に論ずる単著の日本語論文の原稿である。1.「南北朝隋唐仏教と『菩薩地持経』」(主たる内容:『宝性論』に先行する如来蔵思想にの特徴について),2.「『論語義疏』と南北朝仏教の種姓説」(主たる内容:如来蔵思想の特徴である種姓(ゴートラ)説と中国伝統思想との関連および中国仏教が中国伝統の儒学に与えた影響について),3.「嘉祥吉蔵における真如と仏性」(主たる内容:『宝性論』が漢訳された後に中国に与えた影響の一環として),4.「法蔵の真如・種姓説についてー『宝性論』と『地持経』の位置づけ」(主たる内容:『宝性論』が漢訳された後に中国に与えた影響の一環として),5.「『瑜伽論記』に見られる『楞伽経』引用」(インド仏教における如来蔵思想の位置づけについて)。私はこれらの論文について,著者の意図を汲み取りながらそれぞれの原典資料の引用・訳・解釈・論旨を逐一注意深く読み,評価すべき点を指摘する一方で,改善の余地があると判断した箇所を指摘し,具体的に改善案を示すという形で原典に基づく意見交換を行い,最近の研究動向も討議した。私の理解と異なる訳文から新発見できたことも少なくなかった。また文献学における基礎的手法と従来の研究史については私から李子捷氏に提案できたことも少なくなかった。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
血液脳関門が仲介する感染性体温低下機構の解明

プロスタグランジン(PG)E2合成酵素の遺伝子欠損マウスを用い、感染ストレス時にはPGE2の体温上昇刺激と同時に中枢性に働く体温低下作用をもつ内因性因子が存在し、この因子の作用する機構の一部が少なくともエストロゲンに感受性をもつことを明らかにした。また、組織特異的なインターロイキン1I型受容体(IL-1R1)の遺伝子欠損マウスを用い、末梢からの感染刺激が中枢に伝達される際には血管内皮細胞に存在するIl-1R1が重要な働きをもつことを示した。感染刺激を仲介する主要な炎症性サイトカインの一つであるインターロイキン1の受容体の遺伝子欠損マウス(IL-1R1 KO)を実験に使用した。実験的な感染刺激として汎用されているリポ多糖(Lipopolysaccharide, LPS、120 μg/kg)を腹腔内投与し、摂食量、体温の変化および視床下部ー下垂体ー副腎軸の神経内分泌学的な応答を野生型マウス(WT)と比較した。摂食量はLPSによってKOでもWTと同程度に抑制された。神経興奮の指標となる視床下部でのc-Fosの免疫陽性細胞数、血中のACTHおよびコルチコステロン濃度はLPSにおいてそれぞれ増加、上昇したが、遺伝子型間で有意な差は見られなかった。その一方で、KOでは脳脊髄液中のプロスタグランジンE2濃度上昇が抑制されており、感染性の発熱も低下していた。IL-1, IL-6, TNF-αなどの炎症誠意とカインの血中濃度は両遺伝子型でLPS投与により同程度増加した。続いて血管内皮細胞特異的にIL-1R1を欠損したマウスにLPS処置を行った結果、上で用いたKOマウスと同様の発熱抑制がみられた。ここまでの結果から、血管内皮細胞に存在するIL-1受容体は末梢性の感染刺激を仲介して中枢性のプロスタグランジンE2産生を増加させ、発熱に寄与することが明らかとなった。IL-1R1 KOマウスについては繁殖も順調に進み、実験に必要な個体数も安定して供給されている。実験計画に挙げたA.脳内体温低下中枢領域の同定B.脳血管で産生される感染刺激伝達物質の同定C.血液脳関門で感染刺激を伝えるのは内皮細胞か血管周囲細胞かのうち、今期はCについて重点的に検討した。その結果前述のように内皮細胞に存在するIL-1受容体の重要性が明らかとなった。mPGES-1 KOマウスは昨年7月に当研究室で繁殖を開始し、現在実験に必要な個体数を確保できている。中枢性熱源物質であるプロスタグランジンE2の合成酵素mPGES-1の遺伝子を欠損したマウス(KO)を実験に用いた。マウスの腹腔内に体温測定用のテレメーターを埋込み、実験的な感染刺激として汎用されているリポ多糖(Lipopolysaccharide, LPS、120 μg/kg, ip)を投与してその後の体温変化を観察した。野生型マウス(WT)では雌雄ともに、顕著な発熱を呈した。一方、KOでは雌のうち約半数でLPS投与後約5時間を底とする強度の体温低下が観察された。残りの雌および雄では発熱も体温低下も見られなかったことから、雌特有の周期的な内分泌環境変化である性周期の関与を疑い、膣スメア像による性周期判別を毎日行った。その結果、KOでは性周期回帰に異常はないこと、LPS投与後に体温低下を示すのは発情前期および発情期のもののみであることが明らかとなった。そこで卵巣摘出後の個体に同様の処置を行ったところ、個体の割合は減ったものの、6匹中1匹では依然としてLPS投与後の体温低下を示した。さらにこれらの卵巣摘出雌に高濃度のエストロゲンを処置した後にLPSを投与すると、WTでもKOと同様の体温低下を示す個体が確認された。以上の結果から、LPSの投与時にはPGE2の体温上昇刺激と同時に中枢性に働く体温低下作用をもつ内因性因子が存在し、この因子の作用する機構の一部が少なくともエストロゲンに感受性をもつことが明らかとなった。この一方で組織学的な解析として、体温低下の底が見られるLPS投与5時間後の脳を採取し、低下が起きない雌(発情休止期/終期の雌)や発熱が起きているWT雌の脳との神経興奮状態をcFosの免疫染色によって比較中である。今後はmPGES-1 KOマウスを用いた実験を中心に行っていく。感染刺激時の中枢応答について、免疫組織学的な手法や脳脊髄液内因子の濃度測定などでWTのマウスと比較する。神経内分泌
希土類元素添加カルコゲナイドガラスの基礎物性

カルコゲナイドガラスは赤外や近赤外の光透過率が他のガラスに比べて大きいため、希土類元素の添加による発光を利用することにより、光ファイバ増幅器としての大きな潜在力をもつ。酸化物ガラスを母材料にするのと違い、希土類元素を直接励起しなくても光ファイバ領域の発光が観察されるのが特徴であるが、本研究の主題は1)カルコゲン母材からエネルギーがどのように伝達されるのか、2)非幅射エネルギーがどのようにかかわるか、以上2点を明らかにすることにあった。本研究は非幅射エネルギーを"雑音"としてとらえようとする全く新しい試み(興味)から出発した。そのため、1)雑音(電気信号のノイズとしてとらえる)の測定システムを構築し、発光、非発光との関連をつかむことを一番の目標とした。次いで2)デバイスとしての将来を考えて薄膜化を試みた。結果を以下に列記する。雑音の測定システムを構築し、標準カルコゲナイドガラス薄膜で測定を開始している。1)有名な1/f雑音を観測し、光照射のもとでのスペクトル変化と解析は現在進行中である。2)Pr(希土類)を添加したAs-Se薄膜をスパッタ法で作製した(知る限りまだこのような膜での発光の報告はない)。光ルミネッセンスの観察を試みているが、まだ発光は検知できていない。3)カルコゲナイドガラスは光照射によって準安定な構造変化(光膨張など)が生じ、本研究の主題と関わるので、基本的光物性の研究も同時に行い、速報を含む研究論文を出版した。希土類元素(電子の遷移レベルをになう)を使った固体レーザの母材として、近赤外、赤外光の透過性が高いカルコゲナイドガラスは、光通信領域では酸化物より優れることが予想される。カルコゲナイドガラスに特徴的なことは、カルコゲナイドガラスを光励起しても(直接希土類元素の励起ではない)希土類元素からの発光がみられる。これは新しいポンピングの機構が存在することを示している。この新しいポンピング機構(カルコゲナイドから希土類へのエネルギー輸送)の解明は新レーザの実用と、それに加えてカルコゲナイドガラス本体のエネルギー輸送機構を知るという二つの面で大変重要な意味をもつ。アモルファス半導体のような不規則系では“非発光過程"が大きな役割を果たす。そのような場合、光学的研究には限界がある。本研究は発光スペクトルの定常状態(熱平衡)、動的性質(時間分解;非熱平衡)と同時に、キャリアの生成-発光過程(一種の雑音)を、電気伝導度の揺らぎ(雑音スペクトル)の測定から総合的な解析を行おうとする全く新しい試みで出発した。出発試料はバルクである(将来の展開を考え、薄膜にも挑戦しているが、今のところ所定の組成のものが得られていない)。雑音研究から“非発光過程"と関連する(?)新しいスペクトルが観察され、通常の温度雑音と分離解析中である。予備実験であるが、励起光を選択する中で、サブギャップ光(希土類元素の励起ではない)も発光と雑音に強い相関をもつのがわかってきた。このことはバンドテイル(不規則系特有の伝導帯と価電子帯のエネルギーギャップ中への裾)の役割が需要であることを示唆している。アモルファス物質に特有なバンドテイルの役割を考察する途上で、バンドテイルが光構造変化と光黒化に主要な役割を果たしていることに気づき研究速報(Letters)を出版した。

酸化物ガラスを母材料にするのと違い、希土類元素を直接励起しなくても光ファイバ領域の発光が観察されるのが特徴であるが、本研究の主題は1)カルコゲン母材からエネルギーがどのように伝達されるのか、2)非輻射エネルギーがどのようにかかわるか、以上2点を明らかにすることにあった。本研究は非輻射エネルギーを“雑音"としてとらえようとする全く新しい試み(興味)から出発した。そのため、1)雑音(電気信号のノイズとしてとらえる)の測定システムを構築し、発光、非発光との関連をつかむことを一番の目標とした。次いで2)デバイスとしての将来を考えて薄膜化を試みた。結果を以下に列記する。雑音の測定システムを構築し、標準カルコゲナイドガラス薄膜で測定を開始している。1)有名な1/f雑音を観測し、光照射のもとでのスペクトル変化と解析は現在進行中である。2)Pr(希土類)を添加したAs-Se薄膜をスパッタ法で作製した(知る限りまだこのような膜での発光の報告はない)。光ルミネッセンスの観察を試みているが、まだ発光は検知できていない。3)カルコゲナイドガラスは光照射によって準安定な構造変化(光膨張など)が生じ、本研究の主題と関わるので、基本的光物性の研究も同時に行い、速報を含む研究論文を出版した。
緑茶が及ぼす加齢ラット脳外傷後の脳機能改善効果及び神経再生促進効果に関する研究

緑茶は世界で広く飲用されており、その主成分はEGCGであり、抗酸化作用を有する。今回、老齢ラット脳外傷モデルを用いてEGCG飲料による脳外傷後の脳機能の改善効果を調べた。24か月齢のwistar ratsに0.1%ECGC(ECGC群)またはwater(water群)を受傷前4週より与え受傷させた。脳外傷後にwater飲料群はssDNA, 8-OHdG, 4-HNE陽性細胞及び過酸化脂質量の有意な増加認めた。EGCG飲料群でNeuN陽性細胞数で有意な増加を認めた。脳機能評価でEGCG飲料群で有意な改善効果が認められた。脳外傷後に起こる脳機能不全をEGCG飲料群は有意な改善効果をしめした。目的;我々は加齢ラット脳外傷モデルで外傷後の外傷局所で神経幹細胞の出現と高度な高次脳機能障害を発症することを明らかにした。脳外傷後に高次機能障害を発症する加齢ラット脳外傷モデルにおいて緑茶カテキン(エピガロカテキンガレート、EGCG)が脳外傷後に出現する神経幹細胞数の増加や神経幹細胞から成熟神経細胞への分化・生存・維持を促進し、脳外傷後に起こる高次脳機能障害を改善するであろうと考えた。本研究は加齢ラットを用いて1EGCGが及ぼす脳外傷部局所の神経再生2EGCGによる高次脳機能障害の改善効果3蛋白レベル、遺伝子レベルでのEGCGによる神経再生と高次脳機能障害の改善効果の機序を組織学的、生化学的、生理学的および運動学的手法を用いて解明することを目的とした。方法及び結果;Pneumatic controlinjury deviceを用いてWistarラット(2年齢♂)に脳外傷を与えた。ECGC飲料群は受傷前4週より屠殺時まで、EGCG水溶液を自由飲料させた。対照群には水道水を与えた。外傷直後より14日間連続で脳内の分裂細胞をラベルするためにBrdUを1日、2回投与した。EGCG飲料による加齢ラット脳外傷後の高次脳機能障害の回復促進効果を調べるために、受傷後7日にMorris water mazeテストを行い、EGCG飲料による高次脳機能障害の回復効果を対照群と比較し明らかにしている。EGCG飲料群では非飲料群に比較し、有意な改善効果を示した。脳外傷受傷ラット作製時に加齢ラットが死亡し、使用匹数に不足が生じたために実験の進捗がやや遅れた。(目的)我々は、加齢ラット脳外傷モデルで外傷後の外傷局所で神経幹細胞の出現と高度な高次脳機能障害を発症することを明らかにした。本研究は加齢ラットを用いて1EGCGが及ぼす脳外傷部局所の神経再生2EGCGによる高次脳機能障害の改善効果3蛋白レベル、遺伝子レベルでのEGCGによる神経再生と高次脳機能障害の改善効果の機序を組織学的、生化学的、生理学的および運動学的手法を用いて解明することを目的とする。(方法と結果)Pneumatic controlinjury deviceを用いてWistarラット(2年齢♂)の大脳表面に脳外傷を与えた。ECGC飲料群は受傷前4週より屠殺時まで、自由飲料させ、対照群には水道水を自由飲料させた。さらに両群とも外傷直後より脳内の分裂細胞をラベルするためにBrdUを投与した。EGCG飲料による加齢ラット脳外傷後の高次脳機能障害の回復促進効果を調べるために、EGCG飲料群及び対照群を受傷後にMorris water mazeテストを行った。受傷後7日後及び30日後に行ったMorris water maze試験においてEGCG飲料群では、対照群に比較し、有意な改善効果が認められた。さらにEGCG飲料群では、BrdU陽性細胞数の有意な増加、脳外傷面積の有意な減少が認められた。このことから加齢ラットを用いた脳外傷の修復及び神経再生においてEGCG飲料が有効であることが示された。前年度は、脳外傷受傷ラットが高齢のため死亡し、使用匹数に不足が生じたために実験がやや遅れたが、本年では匹数が順調に充足し、おおむね順調に進行している。しかしながら前年度からの遅れが有り全体的にやや遅れている。Pneumatic controlinjury deviceを用いてWistarラット(2年齢♂)に脳外傷を加え脳外傷モデルを作製する。加齢ラット脳外傷受傷4週間前から屠殺するまでエピゴロカテキンガレート(EGCG)を自由飲料させる。対照群には水道水を自由摂取させる。受傷後7日、90日にMorris water mazeテスト等を行い、緑茶飲料による高次脳機能障害の改善効果を確認する。受傷後3、7、14、30日後及び2回目のwater mazeテストを終了した直後(90日後)にラットを屠殺し、脳外傷部周囲の神経細胞や神経線維を中心に連続切片を作製し、大脳皮質傷害部位の組織学的変化や傷害部位の大きさを測定する。さらに神経髄鞘や神経細胞、神経線維を染色し組織学的な観察評価を行う。その連続切片を用いて神経再生としてBrdU、新生神経細胞としてDCX、成熟神経細胞としてNeuN,酸化ストレスとして8-OHdG, 4-HNE,アポトーシスとしてssDNA等の免疫染色を行い緑茶飲料による神経再生の効果を確認する。

もう一方で、脳損傷部周囲組織からmRNA、タンパク質を抽出し、bFGF, NGF, BDNF, IGF1, GH等についての神経の再生や修復遺伝子及びタンパク質の発現を測定する。加えて脳損傷部周囲での過酸化脂質量の測定、酸化ストレスの評価を行う。上記作製した連続切片を用いてbFGF, NGF, BDNF, IGF1, GH, CNTF,の免疫染色を行い、発現している細胞を同定し作用機序の解明を行う。さらにクリオスタットにて凍結切片を作製しマイクロダイゼクション法にて組織を採取する。その2種類の組織サンプルをVoyger DE STRを用いてプロテオーム解析を行い、さらにGeneChip Systemを用いてマイクロアレイ解析を行う。以上の結果を踏まえて緑茶飲料における加齢ラット脳外傷への影響を評価する。緑茶は世界で広く飲用されており、その主成分はEGCGであり、抗酸化作用を有する。今回、老齢ラット脳外傷モデルを用いてEGCG飲料による脳外傷後の脳機能の改善効果を調べた。24か月齢のwistar ratsに0.1%ECGC(ECGC群)またはwater(water群)を受傷前4週より与え受傷させた。脳外傷後にwater飲料群はssDNA, 8-OHdG, 4-HNE陽性細胞及び過酸化脂質量の有意な増加認めた。EGCG飲料群でNeuN陽性細胞数で有意な増加を認めた。脳機能評価でEGCG飲料群で有意な改善効果が認められた。脳外傷後に起こる脳機能不全をEGCG飲料群は有意な改善効果をしめした。加齢ラットの匹数を増やすことにより受傷ラットの匹数が確保され、実験が計画どうりに進行すると考えられる。加齢ラットの使用匹数が、充足してきているために実験を計画的に行う。神経病理学脳外傷受傷ラットモデル作製時に加齢ラットが死亡し、使用匹数の不足が生じたために実験の進捗に遅れを生じた。前年度の実験動物作製の遅れのために実験計画がやや遅れ気味になっているために使用金額に差が生じた。加齢ラットの使用匹数の不足分は解消されており今後、実験計画どうりに進行すると考えられる。順調に前年度の遅れを取り戻すことが出来たために今後は順調に進行する。
オンサイトセルプラント方式による生分解性プラスチックの発酵から合成までの一貫生産

本研究は、バイオプラスチック生産コストを化石由来の汎用性プラスチック程度に下げることを目標に安価なキャッサバを主原料とした環境調和型オンサイト一貫バイオプラスチックの生産システムを確立することである。キャッサバを原料に原料から製品までオンサイトで一貫生産することでポリ乳酸の生産コストは大幅に削減することが期待できる。ポリ乳酸の生産プロセスは、1.乳酸発酵プロセス2.分離精製プロセス3.乳酸ポリマー合成プロセスの3つのプロセスから成る。本研究はオンサイトで上記3つのプロセスを運転するためのプロセス開発を行った。そのためにはそれぞれのプロセスをオンサイト仕様にする必要がある。オンサイト仕様とは(1)Simple,(2)Compact,(3)Safety(4)high productivityそして(5)long lifetimeで運転できるように各プロセスを開発することである。本研究を通して、各プロセスについて以下の成果を得た。1.発酵プロセスに関して、a.一般にデンプンから乳酸を発酵するためにはる糖化過程をへて次に乳酸を発酵する2段プロセスを取るが、発酵菌にStreptococcus bovisを用いることでダイレクト1段プロセスで乳酸を直接生産できる。2.分離精製プロセスに関して、a.エステル化反応ではBroth中のデンプンやグルコースがあると反応転嫁率は下がる。b.加水分解反応では茶色を呈し、活性炭などの脱色工程が必要である。3.合成プロセスに関してa.ポリ乳酸の合成は安全のため無触媒で圧力と温度を制御することでダイレクトに重合することが出来た。本研究は、生産コストを汎用性プラスチック程度に下げることを目標に安価なキャッサバを主原料とした環境調和型オンサイト一貫バイオプラスチックの生産システムを確立することである。ポリ乳酸の生産プロセスは、1.収穫したキャッサバの前処理(滅菌など)と乳酸を発酵するプロセス2.発酵ブロスから乳酸成分を合成可能なレベルまで分離精製するプロセス3.精製乳酸を乳酸ポリマーにする合成プロセスの3つのプロセスから成る。すなわち(1)Simple,(2)Compact,(3)Safetyで運転できるように改善することである。これらの検討の結果、以下の結果を得た。1.一般にデンプンから乳酸を発酵するためには先ず酵素や化学処理による糖化過程をへて次に乳酸を発酵する2段プロセスを取るが、発酵菌にStreptococcus bovisを用いることで糖化工程を要しないダイレクト1段プロセスで乳酸を直接生産できること2.豆腐製造廃液や水産物加工処理廃液などを調製した食品製造廃液を培地に用い、最適酵条件(pH5.5、温度=39°C)の下で発酵させると、標準培地Tripto soya-broth(TSB)と同等の発酵特性を呈する3.ポリ乳酸の合成は安全のため無触媒で行い、ラクチドの開環重合を経ないで圧力と温度を制御することでダイレクトに重合することが出来た。本研究は、2年目の継続研究で生産コストを汎用性プラスチック程度に下げることを目標に安価なキャッサバを主原料とした環境調和型オンサイト一貫バイオプラスチックの生産システムを確立することである。オンサイト仕様とは(1)Simple,(2)Compact,(3)Safety,(4)high productivityそして(5)flexibleで運転できるように各プロセスを開発することである。

1.発酵プロセスに関して、a.一般にデンプンから乳酸を発酵するためにはる糖化過程をへて次に乳酸を発酵する2段プロセスを取るが、発酵菌にStreptococcus bovisを用いることでダイレクト1段プロセスで乳酸を直接生産できる。b.豆腐製造廃液や水産物加工処理廃液などを調製した食品製造廃液を培地に用い、最適酵条件(pH5.5、温度=39°C)の下で発酵させると、標準培地Tripto soya-broth(TSB)と同等の発酵特性を呈する。2.分離精製プロセスに関して、a.エステル化反応ではBroth中のデンプンやグルコースがあると反応転嫁率は下がる。b.加水分解反応では茶色を呈し、活性炭などの脱色工程が必要である。c.温度コントロールを正確に行なえば、60-70%の乳酸の収率が可能。3.合成プロセスに関してポリ乳酸の合成は安全のため無触媒で圧力と温度を制御することでダイレクトに重合することが出来た。
膵島移植におけるノッチリガンドを用いた新たな免疫寛容誘導の開発

NotchリガンドのひとつであるDeltaファミリーは免疫応答を正に制御していることが示されている。しかし、もう一つのNotchリガンドであるJaggedファミリーの免疫応答における機能はまだ明らかになっていない部分が多い。今回我々は、NotchリガンドであるJagged1の免疫応答における機能、特に免疫応答抑制作用に焦点を当てて研究を行った。in vitoの結果では、Delta1発現樹状細胞では細胞増殖およびCTL活性の増強が認められたが、Jagged1発現樹状細胞では細胞増殖、CTL活性反応のいずれにおいても対照群と比較して低下していた(2006年3月31日第106回日本外科学会ポスターセッションで報告)。この研究より、Jagged1は免疫応答を負に制御しており、Tリンパ球を介して移植免疫においてドナー特異的低反応性を誘導できる可能性が示された。また、移植免疫に加えて、Notchリガンドの腫瘍免疫における役割についても研究を行った。in vivoの結果では、Jagged2を導入したA20細胞では、コントロールと比較して腫瘍面積が縮小した。また、Jagged2遺伝子を導入することにより、IFN-_、Granzyme Bの分泌が増加し、NK cellの活性化が認められた。(Proc Natl A cadSci USA(2008)in press)これらから、Notchリガンドは移植免疫のみならず、腫瘍免疫においても関与が認められ、Notchリガンドを用いた移植におけるドナー特異的免疫拒絶反応の制御や、腫瘍に対する新規治療薬の開発に結びつく可能性が示唆された。これまでに、NotchリガンドのひとつであるDeltaファミリーは免疫応答を正に制御していることが示されている。しかし、もう一つのNotchリガンドであるJaggedファミリーについては免疫応答における機能はほとんど明らかになっていない。そこで我々は、NotchリガンドであるJagged1の免疫応答における機能、特に免疫応答抑制作用に焦点を当てて検証を行っている。【方法】(In vitro)レトロウイルスによる遺伝子導入法によりJagged1あるいはDelta1を過剰発現させたC57BL/6マウス由来の樹状細胞を用いてBALB/Cマウス脾細胞との混合培養試験を行い、^3H-TdR取り込みによる細胞増殖、^<5'>Cr放出アッセイによるCTL活性について検査を行い、Notchリガンドの役割を検討した。(in vivo)次に、生体内でのJagged1の機能を検討する目的で、卵白アルブミン(OVA)抗原遺伝子とJagged1遺伝子を直接マウス筋内に導入し、OVA抗原特異的な免疫反応をOVA/H-2^dテトラマー染色、グランザイム染色、OVA特異的抗体産生を指標に解析した。【結果】これまでの結果通りDelta1では細胞増殖およびCTL活性の増強が認められたが、Jagged1発現樹状細胞では細胞増殖、CTL活性反応のいずれにおいても対照群と比較して低下していた。in vivoにおいても、Jagged1遺伝子を導入したマウスでは抗原特異的な免疫反応が低下していた。(2006年3月31日第106回日本外科学会ポスターセッションで報告済み)以上のことから、Jagged1は免疫応答を負に制御しており、Tリンパ球を介して移植免疫においてドナー特異的低反応性を誘導できる可能性が上記より示された。今後、Jagged1による免疫抑制機序を詳細に解析することで、移植おけるドナー特異的免疫拒絶反応の制御へ応用できる可能性が示唆された。これまでに我々は、Jagged1が免疫応答を負に制御しており、Tリンパ球を介して移植免疫においてドナー特異的低反応性を誘導できる可能性を示したが(平成18年度科研費実績報告書で報告)、それに加えてNotchリガンドの腫瘍免疫における役割についても検証を行った。[方法]実験1.メラノーマ細胞(B16)にNotchシグナルを阻害するMam1-DN遺伝子を導入し、C57/B6

マウスの皮下に接種した。腫瘍生着までの期間や浸潤経路、またMam1-DN導入によるNotchリガンド発現の変化を検討した。実験2.NotchリガンドによるDCやNK細胞の活性の変化を検討するために、Jagged2遺伝子とコントロール遺伝子を導入した骨髄腫瘍A20をそれぞれマウスに皮下接種した。[結果]実験1.Mam1-DN群では対照群と比較して、腫瘍生着までの期間は延長する傾向があった。また、Mam1-DN群におけるNotchリガンド発現をFACs解析した結果、対照群と比較してDeltalの発現低下、Jagged1、Jagged2の発現上昇が認められた。(平成19年外科学会で発表)実験2Jagged2を導入したA20群では、コントロールと比較して腫瘍面積は縮小した。また、Jagged2遺伝子を導入することにより、IFN-_、GranzymeBの分泌が増加し、NK cellの活性化が認められた。(Proc Natl Acad Sci USA(2008)in press)以上から、Notchリガンドは移植免疫のみならず、腫瘍免疫においても関与が認められ、Notchリガンドを用いた移植におけるドナー特異的免疫拒絶反応の制御や、腫瘍に対する新規治療薬の開発に結びつく可能性が示唆された。
嫌気性条件下におけるアオコ形成藍藻の物質生産に関する研究

一般的に藍藻類は、高等植物と同じように光合成によって無機物を利用し、生命を維持し、増殖を行う独立栄養型の生き方をしていると受けとめられている。しかしながら、藍藻類の中には、有機物を利用しエネルギーを得る従属栄養型の行き方が可能な種も多い。いずれにせよ、これらのエネルギー産生の場は、細胞質であり、栄養獲得形態によって、産生される物質は異なると考えられる。また、申請者は、これまで、主に淡水産藍藻類のプロテアーゼ阻害物質の探索を行い、多数の新規ペプチドを単離・構造決定しているが、Microcystis aeruginosa(NIES-98)が細胞外に分泌されるaeruginosin関連化合物を産生することをみいだした。本研究では、M.aeruginosa(NIES-98)を用い、MA培地を基本培地とする8培養条件によりaeruginosin関連化合物の産生の差を検討した。すなわち、1.通常の条件、2.アルゴンで置換した嫌気的培養、3.全暗条件、4.嫌気条件かつ全暗条件、5.NO_3濃度を5倍、6.NO_3濃度5倍で嫌気的条件、7.NO_3濃度5倍で全暗条件、8.NO_3濃度5倍で嫌気的条件かつ全暗条件で培養を行った。Aeruginosin関連化合物の分析には、逆相系のHPLCを用い、210nmで検出した。NO_3濃度が通常の各培養条件下では、2、3、4の条件のいずれにおいても、1(Stanndard)より5倍10倍、aeruginosin関連化合物の産生能が増加した。また、NO_3濃度を5倍にした場合でも、産生能が増加し、かつ2、3、4の条件よりもaeruginosin関連化合物の生産量は多かった。以上、M.aeruginosa(NIES-98)では培養条件の違い、特に嫌気的条件、全暗条件化で物質生産が高まることが示唆され、栄養獲得形態の差によって物質生産に差が出ることが明らかにされた。