hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
OPGの新規破骨細胞形成抑制機構ー破骨細胞形成促進因子CCN2との相互作用ー

CCN2とOPGの直接的結合について固相化結合法と表面プラズモン共鳴法で解析した結果、OPGとCCN2の結合はOPGの本来のパートナーであるRANKLとの結合にも匹敵することが分かった。さらにOPGはCCN2とRANKとの結合を強く阻害した。次に、CCN2のOPGによるRANKシグナル抑制作用を検討するためマウス骨髄細胞から破骨細胞を誘導する系においてOPGとCCN2を共存させたところ、濃度依存的にCCN2はOPGの抑制作用を阻害した。このことはCCN2がOPGと結合し、その作用を抑制することを示している。以上の結果から、CCN2とOPGは直接結合し、相互にその作用を抑制していると言える。CCN2とOPGの結合に関して表面プラズモン法にて速度論的解析を行った。その結果、CCN2とOPGの解離定数はOPGとRANKLのそれと同等であることが分かった。また、CCN2とOPGの結合を固相化結合実験法で行ったところ、CCN2を固相化したプレートへのOPGの結合量はOPGの濃度依存的に上昇した。これらの結果によりOPGとCCN2が特異的に結合することがさらに裏付けられた。OPGはRANKのデコイレセプターとしてRANKLとRANKの結合を阻害することが知られているため、CCN2とRANKとの結合においてもOPGが同様の抑制作用を発揮しうるかどうかを固相化結合実験によって調べた。その結果、OPGはRANKとCCN2の結合を濃度依存的に強く阻害することが分かった。このことはOPGがRANK-RANKLの結合抑制因子であるのみならず、RANK-CCN2の結合においても負の制御因子として働くことを示している。さらに、マウスの骨髄由来付着性細胞を用いた破骨細胞形成系においてOPGはRANKLによる破骨細胞形成作用を促進するが、このOPGによる促進作用はCCN2を共存させることよって濃度依存的に抑制された。すなわちCCN2はOPGによるRANKL阻害作用を抑制する因子としても機能するといえる。また、OPGはRANK-RANKLの結合のみならずアポトーシス誘導因子でるTRAILとそのレセプターTRAIL-Rの結合をも阻害する作用を有している。そこでTRAIL-TRAILR結合におけるOPGの抑制作用がCCN2によって阻害されるか可能性について固相化結合実験法でけんとうしたところ、CCN2の存在下ではOPGによる抑制作用は減弱することが分かった。このことはCCN2によるOPGの抑制効果が骨代謝系だけでなくガン抑制系においても発揮されている可能性を示している。多機能性の分泌因子であるCCN2は間葉系の組織や細胞において増殖や分化などを促進しているが、その作用機序としてはCCN2が他の生理活性因子と結合し、その作用を制御することによると考えられている。そこでCCN2の新たな機能を明らかにするためにCCN2結合の探索を行った結果、破骨細胞分化に必須のシグナルを伝達する膜タンパク質であるRANKとCCN2が結合し、RANKを介した破骨細胞分化をCCN2が促進している可能性を見いだしてきた。そこで今回はRANKのデコイレセプターとして機能することで知られるOPGとCCNとの結合について検討した結果、両者はCCN2とRANK以上に強力な結合を示すことが分かってきた。この結合の解離定数を表面プラズモン共鳴法によって解析したところ、Kd値が24.5 nMであることが分かった。これはOPGとCCN2の結合がOPGとその結合因子としてすでに知られているRANKLとの結合に匹敵するほどのアフィニティを有していることを示している。また、OPGはCCN2とRANKとの結合を強力に阻害したことからOPGはRANK-RANKL間の結合を阻害するだけでなく、RANK-CCN2結合においても阻害因子として機能する可能性が示された。また、逆にOPGとRANKLの結合におけるCCN2の作用を明らかにするため以下の検討を行った。マウスの骨髄由来の破骨細胞前駆細胞をRANKLで刺激するとTRAP発現陽性の成熟破骨細胞が出現するが、これはOPGによって抑制される。しかし。ここにさらにCCN2を添加するとOPGによるRANKL誘導性破骨細胞形成抑制作用がCCN2によって濃度依存的に阻害されることが分かった。これらのことからCCN2はOPGとは相互に抑制しあう関係であり、RANKのみならずOPGとの結合を介しても破骨細胞形成に促進的に働いていることが証明された。生化学交付申請書の研究計画において25年度内に実行を計画していた研究はほぼ全て終えることができた。さらに計画書になかったTRAILとの関係性についても有益な結果を得ることができた。しかし、CCN2のOPG結合ドメインの解析とCCN2-OPG結合阻害抗体の探索については検討中であり、いまだ明確な結論に至っていない。

これらは今後、CCN2-OPGの結合による作用をin vivoで検討していく上で重要なツールとなる可能性があることからさらなる検討を重ねていく必要がある。今後計画を進めていく上で以下の二点において計画の改善を図る。1.CCN2-OPG結合阻害抗体およびCCN2の結合ドメインの解析についてCCN2-OPG阻害抗体について現在、入手している抗体ではこれらの結合を阻害できない可能性もあり、あらたな抗体を入手する必要がある。また、場合によっては抗体を作成することも視野に入れて検討する。このためにもCCN2の結合ドメインの解析は重要な知見となるが、この検討の為の実験からは安定した結果が得られていない。この実験に必要なCCN2の各ドメインのリコンビナントタンパク質はこれまでに自ら精製してきたものであるが、精製した時期が数年前であり、タンパク質が劣化している可能性が考えられるので再精製して実験を再開する。2.DC-STAMPとCCN2の結合におけるOPGの作用について26年度の実験計画ではDC-STAMPとCCN2の結合におけるOPGの作用について解析をすすめる予定にしていたが、この実験に必要なDC-STAMPの精製効率が低く、実験に必要な量が入手できていない。今後はさらに精製を続けてリコンビナントタンパク質の量を増やすとともに購入品を用いることも検討する。消耗品が予定したよりもいくぶん安く購入できたため。実験に使用する予定のタンパク質の精製量が予定したよりも少ないことから、リコンビナント品を購入する必要がある。このため予定よりも消耗品の購入額が増えると予想される。
シミュレーションを用いた道路交通流・駐車場の総合解析システムの開発

この論文は、自動車交通流と駐車場野総合解析システムである。両シミュレーションモデルとも車両の挙動は、各車両の移動が明確に確認できるミクロシミュレーションモデルを用いた。モデルのシステムモジュールは長さLmとし、その先端に信号機を設置した単路を考えた。道路網および駐車場区画は、システムモジュールを直列、並列に組み合わせて任意の道路網や駐車場区画を構築することが出来る。なお、システムモジュールの連結方法はブロック接続表により接続し、車両の流出人はOD表より乱数処理をすることで決定した。また、信号機は、信号機が設置されている場合はその管制方法に従い、信号機がない場合は、常時青信号とした。シミュレーションは、任意の時間間隔で処理できるが、特に指定しないと車両の挙動を考慮して0.2scc間隔とした。なお、各車両の挙動は前車と自車の速度および車頭間隔により自車の速度を決定する追従理論に従い走行させた。車両の挙動として、自由走行、追従走行、加速走行、減速走行、停止、強制停止および強制減速走行の7種類に分けた。作成したシミュネーションモデルを用いて、平成6年に名古屋市・岡崎市および豊橋市の駐車場5カ所で実測を行い、ついて平成5年に名古屋市中区で実施した占用車線実測結果をそれぞれ入力として計算したところ、出力情報として交通量、速度、駐車待ち時間および車頭間隔等の値が実測値に比べて最大・最小値とも5%以内で良好な結果が得られた。また、シミュレーションモデルの一例として、駐車場では豊橋市の駐車場について、交通流では一方向2車線と一方向1車線道路が交差点で交差し、2車線道路側には右折専用車線を持つ道路が連続して5個ある道路を考え、これら道路の交通量、信号機間隔および信号現示との関係を求めることが出来た。平成8年度内に名古屋市内で3ヶ所、岡崎市で3ヶ所、豊橋市で2ヶ所の駐車場での駐車車両の実態調査を実施した。調査項目は、駐車場区画、駐車場容量、駐車車両の入場・出場時刻分布、駐車時間分布、駐車区画までの経路及び所要時間と走行速度、サービス時間分布及び待ち行列等を調査した。駐車場内の車両挙動は、車両の挙動が再現しうるミクロシミュレイションモデルとした。モデルのシステムモジュールとして単路の長さLmで、その先端に信号機を設置した道路を考えた。そしてこれらのシステムモジュールを直列、並列に組み合わせることで任意の道路を構築することが出来る。なお、先端の信号機は、信号が設置されている場合はその管制に従い、信号機がない場合は常時青信号とすることにする。システムモジュールの連結方法はブロック接続表により接続し、車両の流出入はOD表により決定した。また、車両の流入は発生交通量を定義すると、トランケートした指数分布により流出させることが出来る。シミュレーションは任意の時間間隔(UNIT)で処理できるが、駐車場内の車両の挙動を考慮して0.2secとして処理させた。なお、車両の挙動は前車の速度と車頭間隔により自車の速度を評価する追従理論に従わせた。シミュレーションプログラムは、メインプログラムの他に車両の走行挙動、駐車区画の変更、駐車区画への流入、駐車区画での滞留、駐車区画からの流出、完走車の消去及びデータの出力等のサブプログラムから構成されている。走行車両の挙動として6種類にわけ、自由走行、追従走行、加速走行、減速走行、停止及び停止減速走行とした。なお、駐車場内の細かな挙動を取らせるために、前車の走行挙動と前車との車頭間隔により走行状態決定図を作成しこの図により走行させた。作成したシミュレーションプログラムにより、豊橋市内の駐車場についてシミュレートしたところ得られた結果は、極めて良好でありこれを基に道路交通流との総合解析システムの構築に進みたいと考えている。道路交通流内の車両の挙動は、各車両の移動が明確に確認できるミクロシミュレーションモデルを用いた。

モデルのシステムモジュールは長さLmとし、その先端に信号機を設置した単路を考えた。道路網を構成する場合は、システムモジュールを直列、並列に組み合わせて任意の道路網を構築することが出来る。なお、システムモジュールの連結方法はブロック接続表により接続し、車両の流出入はOD表より乱数処理をすることで決定した。また、信号機は、信号機が設置されている場合はその管制方法に従い、信号機がない場合は、常時青信号とした。シミュレーションは、任意の時間間隔で処理できるが、特に指定しないと車両の挙動を考慮して0.2sec間隔とした。なお、各車両の挙動は前車と自車の速度および車頭間隔により自車の速度を決定する追従理論に従い走行させた。車両の挙動として、自由走行、追従走行、加速走行、減速走行、停止、強制停止および強制減速走行の7種類に分けた。作成したシミュレーションモデルを用いて、平成5年に名古屋市中区で実施した占用車線実測結果を入力として計算したところ、出力情報として交通量、速度および車頭間隔等の値が実測値に比べて最大・最小値とも5%以内で良好な結果が得られた。また、シミュレーションモデルの一例として、一方向2車線道路と一方向1車線道路が交差点で交差し、2車線道路側には右折専用車線を持つ道路が連続して5個ある道路を考え、これら道路の交通量、信号機間隔および信号現示との関係を求めたが比較的良い結論が得られた。
伝導路形成時における稀突起膠細胞の髄鞘形成機能発現の機構

伝導路の形成過程と稀突起膠細胞の髄鞘を形成する時の反応をmld(my elin deficient mouse)という髄鞘形成不全の常染色体性劣性遺伝マウスの稀突起膠細胞の行動を中心に分析することを試みた。以下の点を明らかにした。1.当教室で維持していたmldの系にC57BL/6Jclの野生型を支配して雑種にして、系統を維持した所、ホモ接合体同志で支配繁殖が可能になり、mldのホモ接合体が全ての発育段階で観察可能になった。2.ゴルジ鍍銀像によると髄鞘形成直前の伝導路(精髄後索を使用)における幼若稀突起膠細胞は正常・mldを問わず同じような形態で多突起性で、細胞体周囲がベール状を呈する細胞である。従って、髄鞘形成開始時において、稀突起膠細胞の突起の軸索に対する行動は髄鞘の構成要素の有無には関係ない別の因子によることが示唆された。3.mldの髄鞘は層板中に周期線が形成されず、周期間線を中心とした3層構造が基本となるが、様々な程度に周期線がモザイク状に発現し、個々の稀突起膠細胞の遺伝的性格によって周期線の発現が決定されると考えられた。4.mldの錐体路は3日令で錐体交叉に達し脊髄に進入するが、これに遅れて5日令から急激な稀突起膠細胞の増殖がはじまり、結果としてグリアのhyperplasiaの状態になる。5日令を越えると細胞質内にゴルジ装置、粗面小胞体の崩壊によると考えられる空胞化が生じ、伝導路形成時にピークをもつ活発な生化学的活動が変化した形で表われていると考えられる。この時期は伝導路が標的神経鎖に到達する時期に一致すると考えられ、軸索の機能発現が稀突起膠細胞の機能分化に深く関与することを示唆する。5.shivererとmldの初代雑種から両者はallelicであり、雑種の髄鞘はshivererに近い形態をとるものの、mldの性格もかねそなえていた。正常マウス,髄鞘形式不全マウスであるシバラ, mldおよびシバラとmldの間の初代雑種のマウスを用いて,稀突起細胞の形成分化を発育経過を追いながら,髄鞘形成の過程と関連させて検討した.方法はゴルジ鍍銀法,エポン包理による光顕,電顕,髄鞘塩基蛋白質の免疫組織化学である.結果1.ゴルジ鍍銀像によると幼若稀突起膠細胞は正常,シバラ, mldを問わず同じような形態で多突起性の細胞である.従って,髄鞘形成開始時において,稀突起膠細胞の軸索に対する行動はシバラ, mldともに遺伝的な欠陥はないと推定された.2.mldの稀突起膠細胞は経時的に観察すると幼若型では細胞質内にゴルジ装置,粗面小胞体の崩壊によると考えられる空胞化が生じる.成熟とともに空胞は消え,ゴルジ装置,粗面小胞体が再出現する.しかし,対照に比してその発達は悪い.また〓質においては稀突起膠細胞の過剰発育が見られる.これらの所見はシバラに極めて良く類似する.3.mldの髄鞘はシバラと異なり様々な程度に周期線の発現が見られる.しかも加令とともにその出現頻度は高まり時には正常型の髄鞘,あるいはシバラと同様に完全なラセン配列しないがシバラ型と異なって完全に周期線をもつものが認められた.

mldはシバラ型が髄鞘塩基性蛋白を合成する遺伝子が欠如しているのに対して,この遺伝子が重複しているために転写の機構が不全になっていることが判明した.このことにより,シバラと異なり周期線が発現しうると考えられる.4.シバラとmldの初代雑種はシバラ, mldと同じ稀突起膠細胞の形態(光顕,ゴルジ鍍銀像,電顕)を示し,形成される髄鞘は周期線の量から言ってシバラに近いが,一方, mldに類似して加令とともに形成量が増大した.1.mldのホモ接合体同志の交配による繁殖:当教室で維持していたmldの系はMDB/Dtの系統であるが、これにC57BL/6Jclの野性型を交配して雑種にして、系統を維持したところ、ホモ接合体同志で交配・繁殖が可能になりmldのホモ接合体が全ての発育段階で観察可能になった。2.錐体路の形成過程と稀突起膠細胞の分化:HRPを大脳皮質に注入して順行性に錐体路形成と検討したが十分な資料は得られなかった。高感度蛍光色素DiIを用いた実験では生後3日令で錐体交叉を交叉する線維が証明された。マウス脊髄後索の錐体路部では3日令ではほとんど後索路と識別出来ない程度の量であり、5日令では既に後索前部に錐体路束が形成されていることから、3から5日令が錐体路形成の発生において重要な日時であると推定された。本研究では生後5日令よりmldの稀突起膠細胞が髄鞘形成が完全には行い得ないにもかかわらず異常かつ著明に増殖している。mldの成熟した脳脊髄白質では稀突起膠細胞のhyperplasiaがあるが、これは成長とともに徐々に増加するものでなく、幼若期の髄鞘形成開始時に急激に分裂増殖すると考えらる。、しかも、伝導路が標的神経核に到達する時期に一致することは、軸索の機能の発現が稀突起膠細胞の機能分化に深く関与することを示唆する。一方、mldの稀突起膠細胞は髄鞘形成初期から細胞質内の細胞小器官の異常が発生する。その他の髄鞘形成要素が利用されない状態が細胞小器官の一時的な崩壊として表現されたのであろう。3.髄鞘形成時の稀突起膠細胞の行動:ゴルジ鍍銀像からmldの稀突起膠細胞の形態を見ると、正常と同様に多突起性の幼若型稀突起膠細胞が軸索に対して反応しており、MBP(髄鞘塩基性蛋白質)の遺伝的欠失はグリア細胞の初期の反応には無関係である。
MicroRNAを用いた膵癌Precision Medicineの構築

膵癌は治癒切除された症例でも5年生存率が20%程度と言われている難治性癌である。本邦で行われた膵癌手術症例の術後補助化学療法の無作為化比較試験では治療成績の向上が得られたが、その効力は十分とは言えない。一部には再発が無く長期生存が得られている症例が存在するが、どのような症例で良好な治療効果を得られるかわかっていない。良好な治療効果を予測する因子が明らかになれば、適切な薬剤の選択や、不要な有害事象の回避などを通して治療の個別化に貢献できる。本研究ではマイクロRNAの網羅的解析から膵癌の術後補助化学療法の効果と感受性に関わる分子を探索し、治療効果や予後の予測因子を見出すことで膵癌治療戦略の構築に貢献することを目的としている。最初に条件設定とTraining studyを行う必要があり、当施設での膵臓手術症例を対象として研究を開始した。膵臓癌手術症例の術後補助化学療法の有無と種類、臨床病理学的因子、腫瘍学的予後などの情報を後方視的に収集し、対照群として膵臓癌以外の膵切除症例についても情報を収集した。倫理委員会に申請し承認を得た後に、手術標本から切片を薄切し、レーザーマイクロダイセクション法で癌部を選択的に切り出してRNAを抽出した。RNAは品質チェックを行いその後の実験に使用可能なことを確認した。今後はRNAの抽出作業を継続して行いながら、早期再発例と長期無再発例のサンプルを用いて網羅的解析を行い、それぞれに特徴的なマイクロRNAを同定していく。絞り込まれたマイクロRNAは、細胞株を用いた細胞増殖、細胞死、浸潤性などの実験を行い膵癌における機能解析を行う予定である。研究基盤整備としてプロトコル作成と倫理審査を進めていたが他施設との連携が難しく、当施設の症例を優先して解析することにした。当施設での倫理審査は完了し解析を開始しているが全体としては遅延している。収集できたサンプルから順に抽出処理とマイクロRNA発現解析を進めていく。一定の傾向が見られた段階で、候補となるマイクロRNAを対象にin vitroの実験を行っていく。本邦において毎年約3万人の患者が膵癌に罹患し、約3万人が死亡していると報告されている。さらに、5年生存率が5%未満であり、最も治癒率の低い難治性癌である。治療には、膵切除術が第一選択であるが、切除後に再発、転移をきたす症例も多く、治癒切除されたとしても5年生存率は25%程度とされ、補助化学療法が非常に重要である。近年、本邦においてJASPAC-01試験が行われたが、S-1群が有意に優れていることが報告され術後補助療法としてS-1の優位性が示された。膵癌症例は限られており、単施設では大規模な臨床研究は非常に難しいが、今回、JASPAC-01試験症例の切除標本が臨床試験の付随研究として当該施設へ提供されることとなった。現在のところ、術後補助化学療法に対する、効果予測や副作用予測因子は存在していない。JASPAC-01試験の登録症例を用いて、ホルマリン固定パラフィン包埋標本組織からマイクロRNAを抽出かつ定量する。GEM群とS-1群でのマイクロRNA発現量と予後、再発形式や副作用などの臨床情報をそれぞれ比較することで新薬剤感受性や副作用に対するバイオマーカーの同定を目指している。本年度は、研究基盤整備としてプロトコル作成ならび倫理審査を進め、サンプル集積を行っている。サンプル収集に時間がかかっている。サンプル取得後、miRNAの抽出を行い、臨床病理学的結果と対比し検討を行う予定としている。

一定の傾向が見られた段階で、候補となるマイクロRNAを対象にin vitroの実験を行っていく。サンプル収集の状態に合わせ、今後はmiRNA抽出と解析を開始できるため、本年度は、実際のin-vitro実験は始まっていないことから、次年度の使用額が発生した。サンプル収集に合わせて実験開始する予定である。。全体の進行が遅れているが今後はマイクロアレイでの網羅的解析やPCRを用いた多数検体での解析が予定されている。これまでの年度より多くの費用を要することが見込まれるため、上記の使用額が発生した。
大規模光回路の高精度解析設計システムの開発とその並列・分散処理化

平成19年度の研究では,大規模光回路解析のための有限要素法に基づく導波路不連続問題解析の並列処理化に関する研究を行った.近年のワークステーションのマルチCPU化,およびCPUのマルチコア化によって急速に普及しつつある共有メモリ型並列計算機を対象とした並列化を行っている.並列化にはOpenMPを使用し,線形ソルバーにはleft/right looking法,スーパーノード,パイプライン並列化による直接法スパース・ソルバーを用いることによって計算およびメモリ使用量の効率化を図っている.また,有限要素行列作成部分では,一般に要素番号に対するループが用いられるが,このようなループはデータレースが発生するため並列化することはできない.そこで,節点番号によるループとするこにより有限要素行列作成の並列化を行っている.具体的に,シリコン細線導波路を突き合わせ結合したフォトニック結晶波長合分波器の動作特性解析に本手法を適用している.このような大規模な光回路の特性解析には計算の簡便性から時間領域の解法が用いられてきたため,波長分散を考慮することが非常に困難であった.周波数領域の解法である本手法では,波長分散を考慮した解析を行い,その影響は非常に小さいことを明らかにした.また,並列化により4CPU使用時に行列作成部分の並列化を行っていない場合には1.7倍から2.2倍,並列化を行った場合には1.8倍から2.4倍の高速化が達成されていることを確認した.光回路の高精度な解析・設計を行うために大規模化する数値解析モデルに対して高効率な数値解析を実現するために,PCクラスタをはじめとする並列・分散処理環境に対応し,かつ,効率のよい並列・分散処理を行うために並列・分散処理に関するプリプロセス部分における新たな負荷を数値解析システムのユーザである光回路の設計者に意識させることのない,プリプロセスとメインプロセスの間に繋ぎ目のないシームレスな光回路の解析・設計手法の実現を目的として,空間の離散化にメッシュレス法の一種であり,有限要素法(FEM)を直接メッシュレス化したフリーメッシュ法を適用した時間領域ビーム伝搬法(TD-BPM)の開発を新たに行った.本研究では,広帯域解析のためのパデ近似,解析領域端において生じるスプリアス反射を抑制するための完全整合層(PML)吸収境界条件を導入することによって本手法の高性能化を行っている.また,与えられた節点分布から各中心節点の周囲に分布する衛星節点を選択し局所要素を作成する際に,衛星節点の候補となる節点の探索アルゴリズムとして,木構造を用いることによって効率のよい探索を行うことができるとともに,3次元への拡張も用意である長方形領域探索アルゴリズムを採用することによって,局所要素および全体行列の作成の効率化を実現している.具体的に,本手法を屈折率変調型光グレーティングの特性解析に適用することによって,本手法の妥当性および有効性を確認している.平成19年度の研究では,大規模光回路解析のための有限要素法に基づく導波路不連続問題解析の並列処理化に関する研究を行った.近年のワークステーションのマルチCPU化,およびCPUのマルチコア化によって急速に普及しつつある共有メモリ型並列計算機を対象とした並列化を行っている.並列化にはOpenMPを使用し,線形ソルバーにはleft/right looking法,スーパーノード,パイプライン並列化による直接法スパース・ソルバーを用いることによって計算およびメモリ使用量の効率化を図っている.また,有限要素行列作成部分では,一般に要素番号に対するループが用いられるが,このようなループはデータレースが発生するため並列化することはできない.そこで,節点番号によるループとするこにより有限要素行列作成の並列化を行っている.具体的に,シリコン細線導波路を突き合わせ結合したフォトニック結晶波長合分波器の動作特性解析に本手法を適用している.このような大規模な光回路の特性解析には計算の簡便性から時間領域の解法が用いられてきたため,波長分散を考慮することが非常に困難であった.周波数領域の解法である本手法では,波長分散を考慮した解析を行い,その影響は非常に小さいことを明らかにした.また,並列化により4CPU使用時に行列作成部分の並列化を行っていない場合には1.7倍から2.2倍,並列化を行った場合には1.8倍から2.4倍の高速化が達成されていることを確認した.
シャープペンシル芯振動電極を用いた微量重金属の分析

ポテンショメトリックストリッピング分析(PSA)は,一般に,攪拌溶液中で行われるが,試料溶液の交換の度に攪拌子等の配置が一定せず,濃縮量および酸化剤の電極への到達量が変化するので,再現性のよい測定に熟練を要する.この問題の解決に,圧電振動子(バイモル社BF-301型)を用いるシャープペンシル芯(GRC,ぺんてるHi-Polymer for Pro)振動電極(GRCVE)のPSAへの利用を試みた.自作ポテンショスタットの定電位電解および電極電位測定モードの切り替えには半導体スィッチを用い,PSA操作をパソコン自動制御した.【GRCVE】Cd(II)およびPb(II)をGRCVEを用いるPSAの試験物質に用いた.支持電解質溶液は,10mlの0.1mMHg(II)イオンおよび0.05M硝酸を含む0.1MKNO_3である.攪拌溶液中のPSAにおける遷移時間(τ)は式(1)で与えられている.τ∝t_<dep>(δ_2D_MC_M)/(δ_1D_<Hg>C_<Hg>)(1)t_<dep>は前電解時間,δ_1,δ_2は前電解と溶出過程での拡散層の厚さ,C_M,C_<Hg>は目的金属イオンと酸化剤であるHg(II)のバルク濃度,Dは拡散係数である。同一溶液条件下で,τは10から100Vまでの振動電圧に依存せずに一定であったことから,δ_2/δ_1が一定値に保たれ,GRCVEが拡散層の厚さを制御している。τは,30-1000μMのHg(II)濃度に反比例し,5-600秒までの濃縮時間の増加に伴って直線的に増加し,5×10^<-8>-1×10^<-5>MまでのPb(II)濃度に比例した.これらの関係は,式(1)を満足しているので,GRCVEがPSA用電極として従来法に代わって使用できる.【マイクロセル】GRCVEを,50μl程度の微小量試料のPSAに利用した.自作のシリコンゴム製マイクロセルの外側に窒素ガスを10分以上通気して溶存酸素を除去した。測定毎に溶液を交換した場合,各々の金属イオンに対するτの相対標準偏差は2%程度であり,微小試料を用いて再現性よく高感度に定量可能である.ポテンショメトリックストリッピング分析(PSA)は,一般に,攪拌溶液中で行われるが,試料溶液の交換の度に攪拌子等の配置が一定せず,濃縮量および酸化剤の電極への到達量が変化するので,再現性のよい測定に熟練を要する.この問題の解決に,圧電振動子(バイモル社BF-301型)を用いるシャープペンシル芯(GRC,ぺんてるHi-Polymer for Pro)振動電極(GRCVE)のPSAへの利用を試みた.自作ポテンショスタットの定電位電解および電極電位測定モードの切り替えには半導体スィッチを用い,PSA操作をパソコン自動制御した.【GRCVE】Cd(II)およびPb(II)をGRCVEを用いるPSAの試験物質に用いた.支持電解質溶液は,10mlの0.1mMHg(II)イオンおよび0.05M硝酸を含む0.1MKNO_3である.攪拌溶液中のPSAにおける遷移時間(τ)は式(1)で与えられている.τ∝t_<dep>(δ_2D_MC_M)/(δ_1D_<Hg>C_<Hg>)(1)t_<dep>は前電解時間,δ_1,δ_2は前電解と溶出過程での拡散層の厚さ,C_M,C_<Hg>は目的金属イオンと酸化剤であるHg(II)のバルク濃度,Dは拡散係数である。測定毎に溶液を交換した場合,各々の金属イオンに対するτの相対標準偏差は2%程度であり,微小試料を用いて再現性よく高感度に定量可能である.
シンチレーションアクティブコリメータによるPET/SPECT同時定量撮像法の確立

前臨床・創薬のための分子イメージング分野においてPET・SPECT核種を同時定量するためには、検出器が優れた解像度と高い感度を両立している必要がある。最新の研究では、画像再構成アルゴリズムの開発などソフト的アプローチが多く行われている一方、ハードウェアに関する研究の報告はほとんどない。本研究では、申請者が新規開発を目指す手法(シンチレーションアクティブコリメータ)を用いて、高解像度かつ高感度にPET・SPECT核種を同時定量撮像する手法を確立する。研究方法としてGEANT4でコリメータ形状の最適化を行ったのち、プロトタイプを製作し、NEMAファントムを用いて原理検証、性能の定量評価を行う。
肺線維化病変成立過程に関する分子生物学的研究

気管支肺胞洗浄(BAL)細胞からの各種サイトカインの放出は,肺線維症,サルコイド-シスなどのびまん性肺疾患において数多くの報告がある。これらの多くはin vitroでのLPSやPHA刺激後のサイトカインの産生能を調べたものであり,無刺激の状態でのBAL細胞におけるmRNAレベルでの発現を検討したものは未だ少なく,我々はこれらびまん性肺疾患BAL細胞における各種サイトカインのmRNAレベルでの発現を検討することを目的としてreverse transcription palymerase chain reaction(RTーPCR)法を用いた実験を開始した。対症は特発性肺線維症(IPF)3例,サルコイド-シス4例,好酸球性肺炎2例,健常者3例。2×10^6個のBAL細胞からpoly(A)+RNAを分離抽出し,MーMLVreverseーtranscriptaseを用いてcDNAを合成し,各種サイトカインに特異的配列を持つプライマ-を用いてPCRを行った。PCR産物は2%アガロ-スゲル上で電気泳動を行い,エチジウムブロマイド染色し,紫外線励起下にバンドが検出されたものを陽性とした。サルコイド-シス患者BAL細胞について従来報告されているILー1,ILー2,ILー8,TNFα,IFNγの発現が本実験でも高率に認められた。一方,IPFにおいてこれらのサイトカインの発現はサルコイド-シスに比しいずれも低率であった。現在,preliminaryな実験段階であり,今後,喫煙の影響,年令,性差等の因子による影響を健常者に関して十分に検討した上で,疾患特異的発現,及び疾患の活動性,病期による発現の差を検討し,これらサイトカインの,肺病変形成上の役割をその相互作用も併せて考察する予定である。
初等・中等教育課程を通した化学，生物領域が連携した理科教育教材の開発研究

本研究では,学校で用いることのできる化学と生物の連携性を実感できる教材の開発を行った。具体的には,小・中学校のpHの実験で用いられるアントシアニンに注目し,アントシアニン含有植物の栽培を通した生物領域への興味関心を高め,植物からアントシアニンを抽出してpHやイオンの実験を行うことで化学領域への興味関心を高める教材の開発を検討した。栽培する植物としては紫カイワレ大根に注目した。紫カイワレ大根は水耕栽培で簡単に栽培が可能であること,410日で栽培が可能であること,アントシアニンの含有量が豊富で,抽出が容易であることが特徴である。本研究の成果は東京書籍(株)の中学校理科の自由研究として採択された。本年度は,アントシアニンを抽出する植物として,紫カイワレ大根に注目し,本植物について検討を行ってきた。紫カイワレ大根は通常水耕栽培で栽培される。この手法は根の観察に適しているが,市販されている容器は大量に栽培するためものものであり,値段も個人で揃えるには高価であった。そこで,児童・生徒が個人で使える自作の水耕栽培容器の開発を行った。製作した栽培容器を用いて,中学生を対象に実践を行い良好な結果を得た。しかしながら,水耕栽培は,毎日水を替えなければならないこと,容器の転倒による水の漏出の問題があり,学校では用いにくい栽培法であることが明らかとなった。そこで,紫カイワレ大根を栽培する培地について検討を行った。9種類の培地について検討を行った結果,株式会社ベネッセコーポレーションから入手した植物栽培用ポリマー「めばえジェル」が有用であることを明らかにした。めばえジェルは透明ジェル状ポリマーであり,予め栄養素が添加された状態で手に入れることができる。使用の際には,ジェルをプラスチックカップに入れて,種を乗せ,暗条件下,2025°Cで,1日1回霧吹きで水をやるだけで栽培可能である。また,ジェルは粘度が高いため容器を倒してもこぼれにくい。この「めばえジェル」と栽培用園芸土を用いて,大学生を対象に栽培実験を行った。その結果,いずれの場合でも問題なく,紫カイワレ大根の栽培が可能であることが明らかとなった。紫カイワレ大根からのアントシアニンの抽出法は,小学校理科のムラサキキャベツと同様に,採取した紫カイワレ大根を5 mm程度にはさみで刻んで煮出すことで可能であること,得られたアントシアニンの色調変化はムラサキキャベツと遜色ないことを明らかにした。以上の結果より,紫カイワレ大根の教材化について成功し,株式会社ベネッセコーポレーションおよび東京書籍株式会社にて,教科書への掲載が検討されている。本年度は,抽出したアントシアニンの利用法について検討を行った。植物中のアントシアニンはイオンによって呈色し,植物に多彩な色が見られるが,イオンとアントシアニンの関係についての教材は検討されていない。また,中学校理科では現行指導要領になってイオンが復活しているが,イオンを学ぶための教材が少ないことが課題となっている。そこで,アントシアニンとイオンの呈色の教材化について検討を行った。中学校理科で取り上げられるイオンは,ナトリウムイオン,リチウムイオン,カリウムイオン,カルシウムイオン,マグネシウムイオンである。これらのうち,ナトリウムイオン,リチウムイオン,カリウムイオンは1価の陽イオンであり,カルシウムイオンとマグネシウムイオンは2価の陽イオンである。アントシアニンは2価以上の陽イオンと錯形成して呈色するが,1価の陽イオンとは錯形成しない。そのため,教科書では取り上げられているものの,その意味は学習しない「イオンの価数」について実感を伴った理解を得られる教材になる可能性がある。アントシアニン水溶液に,1価の陽イオン水溶液を加えたところ色の変化は起こらず,2価の陽イオン水溶液を加えたところ,カルシウムイオンでは青,マグネシウムイオンでは緑に呈色した。これによって,教科書では「数字」としてしか取り扱われないイオンの価数は物質の性質を決める要因であることが理解できる可能性が示された。また,紫カイワレ大根を,高濃度カルシウム溶液やマグネシウム溶液中で栽培してもアントシアニンは呈色しないことから,陽イオンは根から吸収されていないこと,切り花にして水溶液に入れることで呈色することから細胞中には吸収されること,またイオンの種類によって呈色の有無があり,細胞は,カルシウムイオンはチャネルを通じて取り入れるが,マグネシウムイオンは細胞膜の半透性により取り入れないことなどが明らかとなった。アントシアニンを抽出する植物の保存性を向上させるために,植物を乾燥させることによるアントシアニンの分解について検討した。乾燥させる利点は以下の通りである。(1)植物から水分が抜けることでカビの発生などの腐敗が進行しないため,開放条件下でも保管が可能である。(2)質量が軽くなり,体積が小さくなることによって省スペースで保管が可能になる。(3)常温の水に投入するだけでアントシアニンが抽出可能になる。以上の利点を有効に活用するために,植物の種類と部位によって保存性がどの程度向上するのか,またアントシアニンの抽出効率がどのように変化するのかを検討した。具体的には,すでに論文で報告した紫カイワレ大根,教科書に掲載されるメジャーなムラサキキャベツのほか,ソライロアサガオ,アジサイについて,採取直後と乾燥後の保存性とアントシアニンの抽出量を比較した。その結果,葉からアントシアニンを抽出する紫カイワレ大根およびムラサキキャベツは乾燥によって,保存性が著しく向上し,水から良好にアントシアニンを抽出することが可能であった。

一方,花弁から抽出するソライロアサガオでは乾燥による保存性の向上が認められず,また乾燥過程でアントシアニンが分解し,乾燥後にはアントシアニンが抽出できないことが明らかとなった。萼から抽出するアジサイは乾燥による保存性の向上は認められたが,ソライロアサガオと同様にアントシアニンが分解し,抽出ができなかった。乾燥に用いる器具について,学校で用いやすい食品乾燥器を用いた乾燥について検討した。食品乾燥器は通信販売で,1台4000円程度で購入が可能であり,また乾燥時間も48時間程度であるため,学校現場で栽培した植物を乾燥させて保管することで,簡単に保管できる。以上の結果より,粒子領域と生命領域の連携性を実感する教材としての開発が完了した。本研究では,学校で用いることのできる化学と生物の連携性を実感できる教材の開発を行った。具体的には,小・中学校のpHの実験で用いられるアントシアニンに注目し,アントシアニン含有植物の栽培を通した生物領域への興味関心を高め,植物からアントシアニンを抽出してpHやイオンの実験を行うことで化学領域への興味関心を高める教材の開発を検討した。栽培する植物としては紫カイワレ大根に注目した。紫カイワレ大根は水耕栽培で簡単に栽培が可能であること,410日で栽培が可能であること,アントシアニンの含有量が豊富で,抽出が容易であることが特徴である。本研究の成果は東京書籍(株)の中学校理科の自由研究として採択された。東京書籍中学校理科教科書の自由研究への掲載,学術論文の掲載,日本化学会,日本理科教育学会での学会発表,中学校での実践,株式会社ベネッセコーポレーションとの連携,東京書籍との連携などの実績を挙げ,現行指導要領で復活したイオンを学習するための教材開発,新たな植物からのアントシアニンの抽出,植物の保存性の向上などの新たな試みの端緒についた。また,本事業成果を社会に還元する「ひらめき☆ときめきサイエンス」事業が採択され小学生を対象として開発した教材を使った授業を実施した。化学教育これまで,植物からのアントシアニンの抽出は生葉や冷凍食品などが用いられてきた。本研究では,取り扱いをより簡便にするため,現在乾燥葉を用いた手法について検討を行っている。乾燥葉は,常温下でも腐敗せず容易に保存ができること,またアントシアニンの抽出が極めて容易であることの2点について優れた性質を示すことがわかってきた。これらを教材として用いる方法について検討したい。また,様々な植物を栽培して,アントシアニンを抽出し,その手法と教材としての可能性,および抽出されるアントシアニジン構造について検討したい。紫カイワレ大根の教材化に成功し,教材として株式会社ベネッセコーポレーションおよび東京書籍株式会社にて教科書への掲載が検討されている。これらについては現在理科教育研究誌へ投稿中である。また,紫外吸収装置を用いた補助教材作成も進んでいる。前年度が学生の研究引き継ぎ年度に辺り,研究の進捗に空白が生じたことにより,予算消化速度が計画と異なった。学生の研究理解度の向上と研究の進捗を勘案して,次年度へ予算を繰り越すことで,研究費の有効な活用を計画したため。
HTMLとCGIによるアンケートの自動作成プロセッサの可能性に関する研究

Webを介して実施する電子アンケートを作成する支援システムHCGene08B(具体的には簡易言語によって定義されたアンケート定義ファイルからHTMLファイルとCGIファイル,コーディングブック等を自動生成する機能を有する)を作成し、数理社会学会(山形大学),日本社会学会(熊本大学)にて研究成果を報告した.また平成17年3月には,HCGene08Bを収録したCD-ROM付きの「電子アンケート作成支援ツールHCGene08.plβ利用マニュアル&簡易文法ガイド」を研究成果報告書として印刷し配布している.本支援システムは,いまだβバージョンであるが,以下の機能を有している.1.自動質問番号・選択肢番号付番機能(LaTeXの機能に似ている)2.変数名・変数値自動コーディング3.非該当設定による論理エラーチェック4.コーディングブックの自動生成5.連続的なスケール・データの収集機能(ポインティング・デバイスを利用したドラッグ&ドロップによる)6.サブ・クエスチョンの設定機能7.欠損値処理・例外処理も自動化しているこれまではLinux上で開発された経緯もあり,Linux上での動作しか確認していなかったが,16年度ではMS-Windows上で,Perlインタプリタでの動作を確認している.スケール・データの収集機能は,Tcl/Tkプラグイン機能で実装しているが,動作が不安定であり漢字表示機能も不完全なことから,今後の改善が検討課題であろう.なお,電子アンケート・システムの安定的な運用と紙による調査票との比較は今後の重要な研究課題である.商用の電子アンケート・システム(NEC)や埼玉大学の電子アンケート・サーバをサーベィした。また,電子アンケート自動作成プロセッサが必要とする仕様に関して検討を行い,16年度の予定であった試作システムのインプリメントを繰り上げて行い,PerlによってHTMLとCGIスクリプトを生するプロセッサのβバージョンの作成までを行った。社会調査の調査票の回答結果を電子データとして受信する際には,httpdから送信された文字列から簡易データベースを構築する方法と逐次文字列を処理してファイルに保存する方法とが考えられる。本研究では広く使用されているCSVフォーマットとの親和性及びデータの逐次チェック可能性から,CSVフォーマットでのファイルへの保存を採用している。プロセッサは,質問項目に関する定義データを読み込むとHTMLファイルとそれを処理するCGIファイルを生成する。生成時にプロセッサには,以下の社会調査において非常に有効な機能を有している。1.自動質問番号・選択肢番号付番機能(LaTeXの機能に似ている)2.変数名・変数値自動コーディング3.論理エラーチェック(これらの機能とそのソースプログラムはGPLにて保護されている)このβバージョンを研究代表者(池)が製作し,これらの研究成果に関して,年度末に研究合宿にて報告し,各分担者及び研究協力者等で活発な討論を行った。14年度は上記の研究により実用システムへの足がかりを得た。来年度は,より広範囲なOS上での稼動と,より簡単なインターフェイスの実装を目指すことにする。ただし,スケール・データの収集に関しては,インプリメントが済んでいない。これも来年度の主な課題である。前年度に引き続き、電子アンケート自動作成プロセッサのβバージョンの開発を進めた。前年度積み残したScale形式の設問形式を、従来の紙上に丸を付けるような精度ではなく、より高精度な連続的な数値として収集できるように、またそれをグラフィカルなインターフェイスで体感的に実現するためにTcl/Tkを用いてインプリメントを試行的に行った。また、HTMLのマルチメディア環境を生かして、写真や絵という画像イメージに対する反応を計測できるような属性を備えることも考慮して開発を継続中である。また、海外共同研究者であるH.Smith教授を日本に招聘し、インターネット上でのデータ収集とその成果に関する研究会やシンポジウムを日本の以下の大学(帝京大・昭和女子大・上智大・東北大・北大・立教大)で行った。また詳細な研究打ち合わせも実施できた。我われは、既にWWW上で動作する電子アンケート・プログラムをアメリカのインディアナ大サーバー上に設置して、日本(東大)からのAffect Control Theoryに関するデータ収集を実施したが、H.Smith教授と研究代表者(池)による研究打ち合わせを経て、その調査結果を上記の日本の各大学で報告し、電子的なデータ収集の成果を問うたものである。参加者からは貴重なる意見を戴くことができた。本研究課題からすれば副産物ではあるが、社会心理学的な知見としても興味深い結果を得ている。それらの経緯や成果に関して、研究代表者の池は、Affect Control Theoryに関するデータ収集の分析結果を共著論文集の『市民社会と批判的公共性』中の「社会的行為に対する感情形成の計量の試み---Affect Control Theoryへの招待---」を発表し、研究者に献本して好評を得ている。Webを介して実施する電子アンケートを作成する支援システムHCGene08B(具体的には簡易言語によって定義されたアンケート定義ファイルからHTMLファイルとCGIファイル,コーディングブック等を自動生成する機能を有する)を作成し、数理社会学会(山形大学),日本社会学会(熊本大学)にて研究成果を報告した.また平成17年3月には,HCGene08Bを収録したCD-ROM付きの「電子アンケート作成支援ツールHCGene08.plβ利用マニュアル&簡易文法ガイド」を研究成果報告書として印刷し配布している.本支援システムは,いまだβバージョンであるが,以下の機能を有している.1.自動質問番号・選択肢番号付番機能(LaTeXの機能に似ている)2.変数名・変数値自動コーディング3.非該当設定による論理エラーチェック4.コーディングブックの自動生成

5.連続的なスケール・データの収集機能(ポインティング・デバイスを利用したドラッグ&ドロップによる)6.サブ・クエスチョンの設定機能7.欠損値処理・例外処理も自動化しているこれまではLinux上で開発された経緯もあり,Linux上での動作しか確認していなかったが,16年度ではMS-Windows上で,Perlインタプリタでの動作を確認している.スケール・データの収集機能は,Tcl/Tkプラグイン機能で実装しているが,動作が不安定であり漢字表示機能も不完全なことから,今後の改善が検討課題であろう.なお,電子アンケート・システムの安定的な運用と紙による調査票との比較は今後の重要な研究課題である.
メダカES細胞でのジーントラップ法による初期発生特異的遺伝子の検索

1胚性幹細胞の培養と移植: 1994年度においては、メダカ胚性幹細胞の培養法を開発することに重点をおいた。メダカ胞胚期の胚から分離した細胞を、そのまま培養液中において培養すると細胞の集団は自律的に分化し、頭部から尾部にかけての色々な組織が生じることが観察された。しかし、この細胞をピペッティングによって分散させ、フィーダー細胞上に培養すると、形態的には胚性幹細胞と見られる細胞の集団が得られた。増殖してきた細胞集団をそのまま培養すると、細胞集団は種々の組織に分化するが、集団をトリプシン処理により分散させ継代培養を行なうことで、胚性幹細胞の形態が保たれた。この細胞を胞胚期の胚に移植したところ、多くの奇形胚が観察されたが、正常に発生する個体も得られた。奇形胚が観察されたのは、移植した細胞に分化した細胞が含まれていたことが示唆される。この点で、移植する細胞集団から胚性幹細胞を分離する方法を考慮する必要があると考えられる。正常に発生した個体では、移植細胞が生殖系列に伝達されるかどうかについて観察を続けている。また、胚性幹細胞の継代培養のための培地の条件についてさらに検討を続けている。2培養胚細胞に対する遺伝子移入:培養した胚細胞に対してエレクトロポレーションによって、マーカー遺伝子を移入する条件を検討したところ、11.5kvでマーカー遺伝子による形質転換が観察された。この結果から、胚性幹細胞への遺伝子移入の条件を決定することができた。
人間と機械における情報の表現と意味に関する研究

本年度は最終年度にあたるため,言語の意味理解を中心に,これまでに得られた理論的基礎を整理し,計算機上でその有効性を評価・検証することに留意しつつ,以下の3つの課題に大別し研究を行い,以下の成果を得た.(1)意味情報の構造モデルと表現:高次コミュニケ-ションのための有用な手段である比喩理解のための意味情報の構造モデルとそれを用いた比喩理解のプロトタイプを作成し,モデルの検証を行った.文を読み進めるにつれて漸進的に曖昧性を解消する計算モデルを開発し,その有効性を確認した.次に,既存の国語辞典の動詞見出しの語釈文を計算機で解析することにより,動詞概念の上位/下位関係を半自動的に抽出する方式を開発し,その有効性を明らかにした.(2)計算の意味論:人間の与えるプログラムの仕様を的確に表現し厳密な意味でそれを満たすプログラムを合成し,又,そのプログラムの性質を推論する体系を与え,実際にそれを実行する環境を計算機上に実現するために,2つの論理体系を提案した.この新しい体系と,そこに含まれるプログラム言語に基づき,計算機上に証明,検証システムを実現した.以上により,仕様記述,検証,証明を統一したシステムで実行できることを示した(3)自然言語の意味論:知性と感性と考慮した心のモデルを構築し,それに沿って人の認識,思考,行動過程を考察するために,イソップ物語を題材にして研究を行った.欲求,情緒の状態を監視するデモンを実現し,喉が乾くなどの高次のプランを,水を探すという,より低次のプランに展開する方式を開発した.言語生成過程では,より自然な文章の生成を行うために,視点概念の導入を試みた.以上を統合化した自然言語理解システムのパイロットシステムを実現し,その有効性を確認した.本年度は最終年度にあたるため,言語の意味理解を中心に,これまでに得られた理論的基礎を整理し,計算機上でその有効性を評価・検証することに留意しつつ,以下の3つの課題に大別し研究を行い,以下の成果を得た.(1)意味情報の構造モデルと表現:高次コミュニケ-ションのための有用な手段である比喩理解のための意味情報の構造モデルとそれを用いた比喩理解のプロトタイプを作成し,モデルの検証を行った.文を読み進めるにつれて漸進的に曖昧性を解消する計算モデルを開発し,その有効性を確認した.次に,既存の国語辞典の動詞見出しの語釈文を計算機で解析することにより,動詞概念の上位/下位関係を半自動的に抽出する方式を開発し,その有効性を明らかにした.(2)計算の意味論:人間の与えるプログラムの仕様を的確に表現し厳密な意味でそれを満たすプログラムを合成し,又,そのプログラムの性質を推論する体系を与え,実際にそれを実行する環境を計算機上に実現するために,2つの論理体系を提案した.この新しい体系と,そこに含まれるプログラム言語に基づき,計算機上に証明,検証システムを実現した.以上により,仕様記述,検証,証明を統一したシステムで実行できることを示した(3)自然言語の意味論:知性と感性と考慮した心のモデルを構築し,それに沿って人の認識,思考,行動過程を考察するために,イソップ物語を題材にして研究を行った.欲求,情緒の状態を監視するデモンを実現し,喉が乾くなどの高次のプランを,水を探すという,より低次のプランに展開する方式を開発した.言語生成過程では,より自然な文章の生成を行うために,視点概念の導入を試みた.以上を統合化した自然言語理解システムのパイロットシステムを実現し,その有効性を確認した.