hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
神経細胞死における情報伝達系のクロストーク-発生、分化と老化をめぐる接点-

estrogenが、神経細胞の発生・分化と深く関わっており老化に伴う神経細胞死のrescueに関与しているという観点から、当初の計画に従って実験をすすめた。この実験の基礎となる事実は、我々のこれまでの実験によるラット辺縁系培養神経細胞のsurvival rateをestrogenが10^<-6>10^<-7>の低濃度では用量依存的に上昇させ、10^<-5>以上の高濃度では逆にsurvival rateを抑制するという結果である。Wistar系雄性ラットにカイニン酸12mg/kgを腹腔内注射した後、脳の各部についてestrogen受容体に対するモノクロナール抗体を用いて免疫組織化学染色を行った。その結果、前頭前野など成熟後はestrogen受容体の見られない部位にその再出現を認め、辺縁系ではestrogen受容体の明らかな増加を見た。さらに、in situ hybridizationによってもカイニン酸投与がestrogen受容体のmRNAの誘導を来すことを認めた。estrogenが神経修復機能を果たすメカニズムのうえでのsignal transductionを追求する実験を行った。具体的には、Wistar系雄性ラットにestradiol 500μg/kg皮下注射後、海馬と大脳皮質についてAP-1結合活性の時間的推移をgel shift assayによって観察した。投与後、30120分へと経時的にAP-1結合活性の明らかな上昇が見られた。カイニン酸全身投与に先立って、あらかじめestrogenを投与することにより、カイニン酸単独投与の場合に比してIGF I mRNAの誘導およびIGF Iそのものの出現が著明に見られることをdot bolt分析法、in situ hybridization、免疫組織化学などの方法によって確認した。PC12細胞にestrogenを加えることにより、ラット海馬のprimary cultureの場合に見られたようなneuron survivalの延長であることを認めた。estrogenが、発生・分化と深く関わっており老化に伴う神経細胞死のrescueに関与しているという観点から、当初の本年度研究計画に従って実験を進めた。この実験の基礎となる事実は、我々のこれまでの実験によるラット辺縁系培養神経細胞のsurvival rateをestrogenが低濃度では用量依存的に上昇させるという結果である。ラット辺縁系培養神経細胞にestrogenを加えることにより、細胞内Ca^<2+>濃度の上昇をきたすことを従来の実験結果より確認している。この実験系にジヒドロピリジン系Ca拮抗薬を加えることによりCa^<2+>のshort termの上昇が抑制された。このことから、estrogenが細胞膜にも特異的結合部位を有しL型Ca^<2+>チャンネルを通じてCa^<2+>の神経細胞内流入をきたすものと結論した。estrogenのin vivo投与に伴う脳内におけるHGF、IGF mRNAの発現をdot blotting, in situ hybridizationによって検証した。その結果、カイニン酸投与による神経細胞の傷害に伴うこれらneurotrophic factors mRNAの発現をestrogenが一層増強させることを認めた。成熟ラットではestrogen受容体の脳内での存在は視床下部、辺縁系に限定されているが、カイニン酸を投与することによって、周生期にみられたと同じように脳内に広くestrogen受容体が再び出現することをestrogen受容体に対するモノクロナール抗体を用いて免疫組織化学的に確認した。estrogenが、発生・分化と深く関わっており、老化に伴う神経細胞死のrescueに関与しているという観点から、研究計画に従って実験をすすめた。さらに、in situ hybridizationによりカイニン酸投与により、海馬のCA3領域などを中心として、estrogen受容体のmRNA発現の増加が見られることを確認した。

このことはestrogenによる神経修復機能を果たすために必要な脳可塑性が神経障害に続いて発現することを示すものである。estrogenが神経修復機能を果たすメカニズムのうえでのsignal transductionを追求する実験を行った。具体的には、Wistar系雄性ラットにestradiol 500μg/kg皮下注射後、海馬とestrogenについてAP-1結合活性の時間的推移をgel shiftassayによって観察した。投与後、30120分へと経時的にAP-1結合活性の明らかな上昇が見られた。大脳皮質においても、その上昇の程度は軽度であったが、ほぼ同様の傾向を示した。カイニン酸全身投与に先立って、あらかじめestrogenを投与することにより、カイニン酸単独投与の場合に比してIGFImRNAの誘導およびIGFIそのものの出現が著明に見られることをdot blot分析法、in situ hybridization、免疫組織化学などの方法によって確認した。PC12細胞にNGFを加えることによってneuronへの分化が起こるとともにestrogen受容体が出現することが知られている。この細胞にestrogenを加えることにより、ラット海馬のprimary cultureの場合に見られたようなneuron survivalの延長があることを認めた。
ＬＣフィルタレス単相１３レベルインバータの超高効率化

本研究の目的は、LCフィルタを用いずに高効率と低歪みを両立できる新しいインバータ回路を構築することである。この回路はPWM制御を用いずに複数の電圧レベルから所望の電位を選択して電圧を出力する。オン抵抗の小さな素子の選定により効率改善を図り、4素子1ユニット構成の基板により拡張性を高めた。また、遅延のない動作を実現する制御方式を検討した。これらの改良を施し3レベルの基本回路で実験を行い、高効率と正確な動作を確認した。これを13レベルまで拡張し、良好な動作特性を検証した。さらにスイッチング動作の見直しを図り、従来のインバータを凌駕する98.5%の高効率と約3%の波形歪みを達成した。平成25年度は、前年度に高効率化と小形化に主眼を置いて設計を行った主回路と、複数のSW素子をマイクロプロセッサで制御する回路を作製して特性を評価した。まず主回路構成については、高効率化を図るために使用するスイッチング素子の見直しを行った。MOS-FETのオン抵抗は高耐圧になるほど増加する傾向があり、出力電圧値と素子耐圧を考慮してルネサスのRJK2511DPK(250V、65A、28mΩ)を選択した。また小形化に関しては、1枚の基板に4つのSW素子とその駆動回路を配置し、4素子単位で増設できるユニット構成とした。これにより電圧レベルの増減に対応でき、また使用素子の違いによる動作特性への影響を比較できるようになった。さらに、このユニット基板のパターンを発生させて専用基板を作製し、回路の製作行程の短縮を図った。制御回路に関しては、汎用的なマイクロプロセッサによるディジタル制御の可能性を検討した。それは、周期が16μsの基準クロックでタイマー割り込みを発生させ、予めプリセットされたカウンタをダウンカウントさせてボローが発生したときにゲート信号を更新する方法である。本方式の動作特性を確認するために、ルネサスのH8/3052マイコンを用いて制御回路を作製した。基準クロックの生成やダウンカウント、データ保持はマイコン内部で行い、ゲート信号の出力はI/Oポートを用いて行った。これらの装置を用いて動作特性試験を行った。直流電源として、テクシオ(株)のPSF-400L2(新規)を3台用いた。出力電圧100V、電力700Wの条件で実験を行ったところ変換効率は97.0%、電圧歪み率は3.47%であった。なお、この結果を学会発表し、電気学会より「ヤングエンジニアポスターコンペティション」、IEEE IASより「Young Engineer Competition Award」を受賞した。平成24年度は、複数のスイッチング素子に所望の制御信号を精度良く出力できる回路構成の検討と高効率化・小形化を考慮した主回路の設計・製作を行った。まず制御回路構成の検討に関しては、本回路が16個のスイッチング素子を用いた回路であることから、制御回路をディスクリートで構成すると膨大なボリュームになり、さらに信号間の遅延やズレによって生じる微少なパルスが電圧ひずみの原因になるため、アナログ回路で構築することは困難であると判断し、マイコンを用いた同期型ディジタル回路で構成することを試みた。タイマー割り込みで基本時間を作り、カウンタ変数で割り込み回数をカウントして、予め設定したカウント値に達したらパルスを反転させる方法を用いた。また16個のスイッチング信号は、8ビットのI/Oポートを2ポート使用することによって、同時出力が可能になった。この方法により、スイッチング時間設定の容易さと正確な制御が実現された。次に主回路の高効率化・小形化の検討に関しては、用途に合うスイッチング素子を選択したのちシミュレーションによって特性比較と損失計算を行った。本回路の場合、単相100Vの電圧を出力することを想定して回路を設計しているため、耐圧のバリエーションの豊富なMOSFETの方がIGBTよりも低損失となることが確認された。また小形化に関する検討では、本回路が双方向スイッチの構成を複数用いているため、素子を2の倍数で使用することが多いことから、1枚の基板に4素子を搭載するユニット構成を採用した。これにより電圧レベル数を増減させる際にもユニット単位で変更することができ、従来の1/3程度まで小形化が実現された。これらの設計思想に基づいて基本単位である3レベルの単相ハーフブリッジ回路を作製し実験を行った。その結果、100W出力時の効率が99.2%であり、高効率化が確認された。平成26年度は、回路の損失発生要因の抽出を行い更なる高効率化を実現するため、主回路及び制御回路の見直しを行った。主回路に関しては、13レベルのマルチレベルインバータに加え、PWM制御が施された同原理の5レベルの回路を作製し、動作特性の検証を行った。

この回路は、13レベルに比べ制御が簡略であり、主回路の違いによる損失比較をより顕著に行うために利用した。5レベルインバータは、13レベルの半分の8素子で構成され、同様に双方向スイッチを切換えながら所望の電圧レベルを出力する回路である。この5レベル回路を用いて実験を行ったところ、LCフィルタありの時の効率は、出力電力が730W時に97.8%、LCフィルタなしの時は出力760W時に98.7%であった。これに対し13レベルインバータは、700W時に97.5%であり、5レベルのPWMスイッチング(LCフィルタあり)と同等の効率であった。このため、スイッチングパルスの最適化や、主回路素子の見直しを行った結果、効率を98.5%まで高めることができ、5レベルと同等の特性が得られた。このことから、同原理で動作する回路で電圧レベル数やスイッチング素子数の違いがあっても、効率に影響しないことが確認された。なお、この効率は、従来のインバータを遙かに超える高い値であり、当初の高効率化の目標が十分に達成されたと言える。波形制御性に関しては、LCフィルタが接続されていないため出力電力を1000Wまで変化させても波形歪みは約0.3%しか増加しておらず、フィードバック制御に匹敵する波形安定性が確認された。しかし、13レベルの階段状の波形は、歪みが最小化されたスイッチングパルスを与えても3%の歪みを含んでおり、高精度な電圧を必要とする用途には電圧レベル数の検討が必要になることが確認された。今後は、これらの結果を基に13レベルインバータを電力系統へ接続し、高効率な系統連系インバータの実現に向けて研究を進めていく予定である。パワーエレクトロニクス本研究の目的は、LCフィルタを用いずに低ひずみ化を実現する高効率インバータ回路を構築することである。その目的を達成するためには、(1)高効率化と小形化を考慮した主回路構成、(2)複数のスイッチング素子を自由にかつ精度良く制御、(3)波形ひずみを低減できる最適スイッチング位相の導出が重要である。これらの課題を解決するための方法を考案し、実験回路を作製して特性試験を行い、改善効果を検証することが本研究の具体的内容である。平成24年度から25年度にかけては、これらの課題の中で(1)高効率化と小形化を考慮した主回路の構成と(2)複数のスイッチング素子の制御について検討した。素子選定、複数素子のディジタル制御についてシミュレーションおよび実験で検証した。実験によると、出力電力700W時における変換効率が97.0%にとどまり、予想を下回る結果となった。提案する回路は、あらゆる電圧レベルにおいても通流素子数が2素子+1ダイオードのみであり、従来のどの回路と比較しても少ない素子数で動作させることができる唯一の回路である。効率が低下した原因を早急に追及し、新たな方策を検討する必要がある。またその他に、電圧レベル切り替え時に瞬間的な電圧低下が不規則に発生することが確認された。これについては、効率だけではなく波形歪みにも影響を及ぼす恐れがあるため、確実に対策を施す必要がある。このようにして、実際に装置を作製して実験を行ったことで、素子の特性や制御回路の遅延などの影響で予期せぬ状況が明らかになった。
感情推定アルゴリズムに基づくオンラインでの性格推定に関する研究

本研究では、SNSなどに投稿された記事の内容から、著者の見せかけの性格を推定するための手法について検討した。特に、Blogのように推敲を重ねて公開される記事と、Twitterのようにその場その場の思いつきで投稿される記事とでは、表面的に現れる個性、性格に大きな違いがあることを被験者実験により確認している。また、見せかけの性格と著者本来の性格の間にも大きな差が生じていることを確認している。本手法を自動化するために感情推定アルゴリズムとの相関分析を行い、Big Fiveの5因子との関連を抽出している。本年度は、オンラインでの振る舞いから想定される性格に関して、人工知能学会,言語理解とコミュニケーション研究会ならびに国際会議KEODにおいて成果報告を行っている。これらの報告では、オンライン資源からの性格推定を行う場合,BlogやTwitterをその対象とするが、それぞれの媒体がどのような傾向にあるかを分析している。特にTwitterを素材とする場合、感情を有する表現がBlogよりも多く含まれる傾向に有り、感情推定アルゴリズムと性格推定との親和性が高いことが傾向として現れている。また、既存の感情推定アルゴリズムは対応できる語彙数に制約があり、固有名詞や新語を多数有しているオンライン資源を利用する場合、適切に語の情報を取得できない問題がある。これに対し、大規模な概念ベースを構築することによって対応することとし、国際会議KES2016において研究協力学生が報告予定である。特に、感情推定のための連想基盤として概念ベースを構築しており、従来の概念ベースと比較しても連想精度として遜色のないものを自動構築することに成功しており、対応可能な語彙数を12万語から130万語へとおよそ10倍の拡張を行っている。感情推定アルゴリズムは主として文字情報にのみ着目していることから、文字のみでは抽出できないような細かな感情を取りこぼすことがあった。そこで、文字情報の補足情報として付与されている顔文字に関する大規模な知識ベースを構築し、感情推定アルゴリズムの拡張を考えている。顔文字の分析に関しては、およそ40000種の顔文字に対してタグ付けを行い、顔文字の原形を定義することによって、今後も増え続けると予想される顔文字を効率的に扱うための基盤を構築している。平成27年度の研究活動については、ほぼ当初の予定通り進行している。主題である性格推定に関しては、TwitterもしくはBlogのいずれが感情推定アルゴリズムとの親和性が高いかを検討しており、処理対象のオンライン資源を決定するとともに、その傾向を抽出できている。また、感情推定アルゴリズムに関しては、従来からの問題である語彙数に関して、WikipediaやEDR電子化辞書を用いて概念ベースを自動構築することによって、連想基盤としての性能を落とすことなく語彙数を拡充することに成功している。さらに、文章から適切に勘定を取得できない場合においても、顔文字を考慮することによって補足情報を付与し、感情を推定できるよう拡張している。特に顔文字に関しては、他の研究では見られない大規模な分析を進めており、知識ベースの公開を求められている状況にある。周辺研究者へ与える影響を考慮しても、十分に研究が進められていると考えられる。しかし、懸念材料として、平成28年度から所属が変わり、研究設備を満足に利用できる環境ではなくなっているところに大きな問題がある。現状として、遠隔操作でサーバシステムを利用しているが、故障が相次いでおり、手元に研究設備がないことから復旧作業等に時間を要している状況である。研究設備を現任校へ移設することが決定し前任校と現任校の間で調整が完了していたが、急遽移設が認められなくなってしまったため、大規模な計算を行うための機器を効率的に使用できない状況である。現在も移設に関して交渉を進めている段階ではあるが、本課題が終了するまでに対応可能かどうかが分からず、その点を考慮して研究を進めていく必要がある。本研究では,既存の感情推定アルゴリズムを用いて,TwitterやBlogの記事内容から投稿者の見かけの性格を推定する手法について検討した.Twitter,Blogから推定された見かけの性格は,双方ともに投稿者本人の本来の性格とは異なる傾向を示すことをBig Fiveに基づく性格検査により明らかにした.特に,Blogのような推敲を重ねて投稿される文書は著者本来の性格との剥離が大きく既存の感情推定アルゴリズムとの相関もあまり見られなかった.一方で,Twitterのようにその場の思いつきで気軽に投稿できる文書であれば,著者本来の性格と見かけの性格は異なるものの,既存の感情推定アルゴリズムとの相関が強く表れ,見かけの性格を自動推定することが可能であることを示している.また,本研究では,既存の感情推定アルゴリズムを拡張するため,顔文字の解析を同時に進めている.顔文字が持つ感情成分は前後の文脈に依存したり,ともに使用されるオノマトペなどとの関連によっても変化することを明らかにしている.そこで,大規模な顔文字の辞書を構築し,顔文字を個々のパーツに分割した結果,顔文字には基本感情を示す原形と,その周辺のパーツが存在し,パーツによって指し示す感情の傾向が変化していることを明らかにしている.現在,約4万種の顔文字にアノテーションを実施しており,言語資源としての公開を予定している.なお,本研究の主体は見かけの性格推定にあるが,顔文字に関する知見が増加してきていることから,顔文字に関する詳細な分析,顔文字の自動生成といった新たなタスクを展開していきたいと考えている.本研究では、SNSなどに投稿された記事の内容から、著者の見せかけの性格を推定するための手法について検討した。

また、見せかけの性格と著者本来の性格の間にも大きな差が生じていることを確認している。本手法を自動化するために感情推定アルゴリズムとの相関分析を行い、Big Fiveの5因子との関連を抽出している。実績の概要や進捗状況で述べたとおり、研究活動はおおむね順調に進んでいる。性格推定に関しては、他機関においても活発に研究が進められており、アプリケーションとして公開されているものもいくつか存在している。そのため、それらの技術と本研究で目指している性格推定の技術の相違点に着目しながら研究を進めていく。感情推定に関しては、大規模な顔文字の知識ベースが完成してきているため、既存のアルゴリズムと合わせて、より人間らしい感情推定を行うためのソフトウェア開発が今後の課題である。特に、日本語の環境においては、英語やドイツ語と異なり、空気を読む、察するといった能力が大きな影響を及ぼす。その一助となるべく顔文字が付与されており、言外情報を効率的に扱えるアルゴリズムの開発を目指す。本年度は本課題の最終年度であるため、年度の前半はシステム・アルゴリズム開発を進め、後半には国際会議や論文誌への投稿ができるよう、データのまとめを行っていく。性格推定に関しては、人工知能学会や言語処理学会のみならず、日本心理学会などの分野にも投稿できるように進めていきたい。なお、本研究では大規模なテキストデータの解析が必須であるが、進捗状況で述べたとおり、当初予定していた研究設備を効率的に使うことが難しい環境にある。そのため、小規模実験での代替処理を行うか、小規模設備での効率的な分析を可能とするアルゴリズムの開発を行うか、検討していく必要がある。現時点においては、効率的なアルゴリズム開発の方に力を入れており、可能な限り前処理を行った上での分析を進められるようにしていきたい。知識工学
骨格筋特異的な低酸素応答が持久性走運動訓練の効果に与える影響

低酸素トレーニングは、持久性スポーツを専門とするアスリートに広く受け入れられているトレーニング方法である。これまでに、常酸素環境下で全身性に低酸素応答を引き起こす遺伝子改変マウスを用いて、低酸素トレーニングの効果を明らかにしてきたが、その効果における骨格筋での低酸素応答の重要性は明らかになっていなかった。このことを受け、持久性トレーニング効果に骨格筋での低酸素応答が与える影響を明らかにすることを目指し、速筋線維特異的に低酸素応答を起こす遺伝子改変マウス(mKOマウス)を用いた検証を行った。4週間の持久性トレーニングを行わせその前後で持久性運動能力テストを実施した結果、コントロールマウスとmKOマウス間においてその効果に有意な差は認められなかった。また、最大速度テストにおいても有意な差は認められなかった。更に、運動機能に重要な意味を持つ骨格筋線維タイプの組成を現在解析中である。またmKOを用いた検証の結果を受け、新たなマウス系統を実験に追加することとした。骨格筋全体で低酸素応答を起こす遺伝子改変マウス(skmKOマウス)を作出し、骨格筋においてより強力な低酸素応答を引き起こすマウスモデルでの検証を目指した。作出したskmKOマウスは既に血液プロフィール等解析済みであり、次年度に行動学的解析を行う予定である。更に、骨格筋細胞における低酸素応答の詳細な解析を可能にするため、CRISPR/Cas9を用いて恒常的に低酸素応答が亢進する筋芽細胞株を作成した。作成した細胞は分化誘導によって筋分化することが確認され、今後、低酸素応答が骨格筋細胞に及ぼす影響の検証に用いる予定である。骨格筋全体で低酸素応答を引き起こすことができる新しいマウスモデルを作出したことは、本研究の進展において意義があり、次年度に行動学的解析を行う準備が完了している点から、研究はおおむね順調に進展していると言える。今後は作出した骨格筋全体で低酸素応答を引き起こすskmKOマウスを用いた検証を進めていく。また、トレーニング効果だけでなく、骨格筋そのものの詳細な解析も併せて行っていく。更に、作成した低酸素応答亢進筋芽細胞を使用して、より詳細なメカニズム解析も行っていく予定である。本年度実施予定だったELISA実験を次年度以降の実施に変更したため。次年度は抗体・試薬の購入と併せて、本年度購入しなかった分のキット購入も予定している。
IL-17を標的としたDNAワクチンによる関節リウマチ骨破壊抑制治療の確立

IL-17AエピトープDNAワクチンをDBA/1Jマウスに2週間隔で3回投与した後、II型コラーゲンを投与して関節炎を惹起させ、関節炎スコアの上昇程度をワクチン無投与群と比較した。その結果、IL-17Aワクチン群で抗IL-17A抗体の産生と、有意な関節炎スコアの抑制が認められた。DBA/1Jマウスに抗II型コラーゲンモノクローナル抗体カクテルおよびLPSを投与することにより関節炎を惹起するモデルでも同様の実験を行った。IL-17Aワクチン予防投与群で、有意な関節炎スコアの抑制が認められた。この抑制効果は抗マウスIL-17A中和抗体の治療投与群よりも有意に優れていた。1)関節リウマチを標的疾患としたIL-17Aワクチン療法の開発IL-17AエピトープDNAワクチンをDBA/1Jマウスに2週間隔で3回投与した後、II型コラーゲンを投与して関節炎を惹起させ、関節炎スコアの上昇程度をワクチン無投与群と比較した。DBA/1Jマウスに抗II型コラーゲンモノクローナル抗体カクテルおよびLPSを投与することにより関節炎を惹起する、より重症度の高いモデルでも同様の実験を行った。その結果、IL-17Aワクチン予防投与群で、有意な関節炎スコアの抑制が認められた。またワクチン群、対照ワクチン群、抗コラーゲン抗体投与(ー)群の関節破壊の程度をマイクロCTを用いて確認した。その結果、ワクチン群で関節破壊の抑制が観察された。これらの結果から本ワクチンは関節リウマチに対して治療効果が期待できると考えられた。現在は疾患モデルマウスの関節炎の組織学的評価や、IL-17Aワクチン療法の最適化の検討などを進めている。2)ヒト関節リウマチ培養滑膜への治療効果の検討およびヒト関節軟骨滑膜器官培養モデルでの検討本ワクチンのエピトープ配列はヒトとマウスで2アミノ酸だけが異なっている。このヒトとマウスのエピトープには交差反応性があることを確認しているが、ヒト培養細胞を用いる実験にはヒトエピトープのワクチンを用いることとした。そこでヒトエピトープのIL-17AワクチンをBalb/cマウスに2週間隔で3回投与し、経時的に血清を回収した。ELISAで抗体価を確認し、in vitro実験に必要な抗IL-17Aヒトエピトープ抗血清を作成した。IL-17AエピトープDNAワクチンのマウス関節炎モデルにおける有効性を示すデータが得られ、本ワクチンの関節リウマチに対する有効性がin vivoにおいて示された。また28年度の計画であるIL-17Aワクチンの最適化にも着手しており、in vitroの評価もヒトIL-17Aエピトープワクチンを投与した抗血清の取得など研究が進行中である。以上よりおおむね順調に進展していると評価できる。脊椎関節炎モデルラット(HKA-B27 TGラット)を導入した。近年ヒトHLA-B27及びミクログロブリンを過剰発現したトランスジェニックラットが確立され、ラインごとにヒトHLA-B27及びミクログロブリンのコピー数を管理し、homozygous、heterozygosや雌雄の組み合わせによって、脊椎炎、関節炎、腸炎などの多彩なフェノタイプを呈することが知られている。UT Southwestern MedのKoel D. Taurog博士からこのラットの使用許可を得て国内輸入を行い、SPF化を行った後にそれぞれのラインの系統維持のためのPCR条件を確立して交配を開始した。ヒトHLA-B27およびミクログロブリンのコピー数が管理できるようにreal time PCRでの検討をしながら、脊椎間接炎のモデルを作成するためにダブルトランスジェニックラットを作成する。このラットモデルを用いた薬効試験の準備として、IL-17AワクチンのDNAワクチンおよびペプチドワクチンを用いたラットでの抗体価上昇に関する評価を行った。DNAワクチンはB型肝炎コア蛋白のB-cellエピトープ部位に抗原であるIL-17A配列の一部を挿入したプラスミドを構築した。ペプチドワクチンは抗原配列にKLHのキャリアを結合させたものをワクチンとして合成し、アジュバントとともに投与を行った。いずれも2週間毎に2回ないし、3回投与することによりIL-17Aに対する抗体価が有意に上昇することが確認できた。DNAワクチンの投与量は200μg、ペプチドワクチンの投与量は100μg程度を目安としているが、今後投与法を皮内・皮下・筋肉内などに条件を変えたときの最適な濃度を見極めた上で薬効評価を行う予定である。関節リウマチモデルでの研究は順調に進捗していると考えられるが、IL-17Aをターゲットにした場合より実臨床で効果が期待される脊椎関節炎モデルでの検討を将来的に考慮しH28年度は脊椎関節炎モデル動物の確立を試みた。関節リウマチモデル動物のように未だ実験モデルの系が確立されておらず、現在実感モデル動物の系を確立中である。脊椎関節炎の動物モデルとして、ヒトHLA-B27及びβ2ミクログロブリンを過剰発現したトランスジェニックラットを導入した。本モデルは脊椎炎、関節炎、腸炎などの多彩なフェノタイプを呈するが、ラインごとにヒトHLA-B27及びβ2ミクログロブリンのコピー数を管理することによって、おのおののラインの掛け合わせおよびhomozygous、heterozygosや雌雄の組み合わせによって、それぞれの疾患に特徴的なフェノタイプを呈した。

脊椎炎の発症モデルとなるように2つのラインを交配し、ジェノタイピングによってモデルラットを作成し、その病態を解析した。ヒトHLA-B27過剰発現ラットとβ2ミクログロブリンラットを掛け合わせたダブルへテロ過剰発現ラットの雄のみが100-200日齢にかけて関節炎、脊椎炎、睾丸炎を60ー70%の割合で発症した。一方、雌ラットは全く発症しなかった。IL-17Aワクチンによる治療介入を行った。IL-17Aの部分配列を抗原ペプチドとし、キーホールリンペットヘモシアニンと融合させたものをワクチンとして用い、アジュバントと同時に皮内投与を行った。本コンセプトをDNAワクチンに応用し、高効率な抗体産生のためB型肝炎ウイルスのコア蛋白(HBc)のB cellエピトープにIL-17Aの部分蛋白(抗原)に相当する塩基配列を挿入することで分泌蛋白とした。HBcの自己凝集能を生かしてIL-17Aの部分蛋白(抗原)が球表面に多数提示されることで標的抗原として認識されやすく抗体産生能を高められる特性を用いたDNAワクチンを作成した。IL-17AペプチドワクチンあるいはDNAワクチンを疾患モデルラットに皮内あるいは筋肉内投与で1ヶ月毎に2回行ったところ、特にペプチドワクチンで抗体価の有意な上昇を確認した。加えて、ペプチドワクチンを投与したラットでは関節炎、脊椎炎の発症が抑制されていた。IL-17AエピトープDNAワクチンをDBA/1Jマウスに2週間隔で3回投与した後、II型コラーゲンを投与して関節炎を惹起させ、関節炎スコアの上昇程度をワクチン無投与群と比較した。その結果、IL-17Aワクチン群で抗IL-17A抗体の産生と、有意な関節炎スコアの抑制が認められた。DBA/1Jマウスに抗II型コラーゲンモノクローナル抗体カクテルおよびLPSを投与することにより関節炎を惹起するモデルでも同様の実験を行った。IL-17Aワクチン予防投与群で、有意な関節炎スコアの抑制が認められた。この抑制効果は抗マウスIL-17A中和抗体の治療投与群よりも有意に優れていた。IL-17AエピトープDNAワクチンの関節リウマチモデルにおける有効性を確認した。このワクチンを臨床応用するためには、より高効率に高い抗体産生が持続する投与方法などの最適化も重要である。そこで抗コラーゲン抗体カクテル誘導関節炎モデルを用いて、ワクチンの投与間隔等の最適化や、治療効果の増強に関与する因子の解析を引き続き行っていく。またこのワクチンにおいて産生された抗IL-17A抗体が関節破壊や軟骨破壊の抑制に寄与するメカニズムの詳細については未だ不明な点が多い。そこでワクチン療法の最適化と並行して、細胞培養・器官培養を用いたin vitroの評価系で解析を進めていく予定である。異なる脊椎関節炎モデルラット(HKA-B27 TGラット)ラインの交配を行い、HLA-B27およびミクログロブリンのコピー数を揃えた雌ラットが脊椎関節炎モデルの自然発症モデルとなる。
アラビドプシスにおけるサイトカイニンを介した窒素源情報伝達機構の解明

高等植物において、窒素栄養は最も欠乏しやすい栄養素の一つである。そのため、植物はその栄養状態を感知し、応答する機構を高度に発達させていると考えられる。近年、根圏における窒素栄養情報がサイトカイニンを介して地上部へと伝達される系が存在することが強く示唆された。また、そのサイトカイニンの情報伝達にはHis-Aspリン酸リレー系の関与が示唆されている。本研究ではHis-Aspリン酸リレー情報伝達系のレスポンスレギュレーターARRの機能解析から、高等植物の窒素情報伝達系の分子機構解明を目指した。特にその発現がサイトカイニンによって誘導されることが特徴であるタイプA ARRについて研究を進めた。サイトカイニンセンサーAHK4の下流でその発現が制御されるタイプA ARRの探索を行った。そしてAHK4機能欠損変異体cre1-1において、ARR15とARR16のサイトカイニン誘導性が顕著に低下することを明らかにした。AHK4とARR15、ARR16が共にサイトカイニン情報伝達系を構成することが示唆された。タイプA ARRであるARR15についてT-DNA挿入変異体を1ライン取得した。この変異体では、ARR15転写産物レベルが顕著に低下していた。その表現型をサイトカイニンに対する応答に焦点を当てて詳しく調べたが、特に変化は見られなかった。ARR15と重複した機能を果たす他のタイプA ARRが存在することが示唆された。ARR15についてその過剰発現体を作製して、その表現型の解析を行った。通常の栽培条件では、特にその形態に異常は見られなかった。サイトカイニンに対する応答に焦点を絞ってその表現型の解析を行ったところ、カルスの緑化及び根の伸長阻害実験から、サイトカイニンに対する感受性が特異的に低下していることを明らかにした。ARR15はサイトカイニンの情報伝達の負の出力調節機能をもつことが強く示唆された。ARR15はサイトカイニンセンサーAHK4によって発現誘導され、AHK4の下流のサイトカイニン情報伝達系のネガティブフィードバックループを形成すると考えられる。
4nπ系の渡環π-π相互作用

合成開始と同時に、(4n)π系のモデルとしてシクロブタジエン(n=1)とシクロオクタテトラエン(n=2)を用い、これらの分子の構造を平面に固定した状態で完全に重なり合うように接近させた場合に、渡環π-π相互作用がどの程度系を安定化させるか、半経験的分子軌道計算法であるMOPACを用いて見積った。その結果、二個の(4n)π系が接近するにつれて生成熱が小さくなり、系は熱力学的に大きく安定化する事が予測された。一方、ベンゼンやシクロデカペンタエンなどの(4n+2)π系どうしの相互作用は、系をわずかに不安定化させる事がわかった。本来不安定な(4n)系アヌレンでも二個重ね合わせる事により、比較的大きな安定化が期待できるという計算結果は、(4n)π系を二個つないだアヌレノファンが比較的安定に存在し得ることを示唆している。まず、(4n+2)(4n+2)π系の相互作用を調べる目的で10π系の1、6-methano[10]annuleneを含む[3.3]シクロファン類の合成を計画した。種々の環化反応を検討した結果、シアナミドのジアルキル化を用いると、温和な条件下でブロモメチル化合物が容易に環化してジアザ[3.3]アヌレノファンを与えることがわかった。二個のアヌレンからなるアヌレノファン類の合成は報告例がなく、今回合成した化合物が最初の例になる。(4n+2)π系をさらに拡張した14π系の15,16-dihydropyreneを含むシクロファンの合成も進行中である。一方、上記の研究と同時進行で(4n)(4n)π系の相互作用を調べるためのモデルである12π系の8b,8c-diazacyclopent[fg]acenaphthylene単位二個を[3.3]シクロファン骨格に組み込んだ化合物の合成にも着手し、現在、環化反応の前駆物質であるビスブロモメチル化合物の合成を行なっている。今後、これらの化合物の合成が終わり次第、実験結果および理論計算の両面から渡環π-π相互作用について詳細に検討する予定である。合成開始と同時に、(4n)π系のモデルとしてシクロブタジエン(n=1)とシクロオクタテトラエン(n=2)を用い、これらの分子の構造を平面に固定した状態で完全に重なり合うように接近させた場合に、渡環πーπ相互作用がどの程度系を安定化させるか、半経験的分子軌道計算法であるMOPACを用いて見積った。その結果、二個の(4n)π系が接近するにつれて生成熟が小さくなり、系は熱力学的に大きく安定化する事が予測された。本来不安定な(4n)πアヌレンでも二個重ね合わせる事により、比較的大きな安定化が期待できるという計算結果は、(4n)π系を二個つないだアヌレノファンが比較的安定に存在し得ることを示唆している。まず、(4n+2)(4n+2)π系の相互作用を調べる目的で10π系の1、6ーmethano[10]annuleneを含む[3.3]シクロファン類1の合成を計画した。

種々の環化反応を検討した結果、シアナミドのジアルキル化反応を用いると、温和な条件下でブロモメチル化合物2が容易に環化してジアザ[3.3]アヌレノファン(1a,1b)を与えることがわかった。生成した二種の異性体はCー500カラムを用いて高速液体クロマトにより分離した。二個のアヌレンからなるアヌレノファン類の合成は報告例がなく、今回合成した化合物が最初の例になる。(4n+2)π系をさらに拡張した14π系の15,16ーdihydropyreneを含むシクロファン3の合成も進行中である。一方、上記の研究と同時進行で(4n)(4n)π系の相互作用を調べるためのモデルである12π系の8b,8cーdiazacyclopent[fg]acenaphthylene単位二個を[3.3]シクロファン骨格に組み込んだ化合物4の合成にも着手し、現在、環化反応の前駆物質であるビスブロモメチル化合物5の合成を行なっている。今後、これらの化合物の合成が終わり次第、実験結果および理論計算の両面から渡環πーπ相互作用について詳細に検討する予定である。第一段階として、(4n+2)(4n+2)π系の渡環π-π相互作用を調べるために、10π系の1,6メタノ[10]アヌレン[3.3]シクロファン骨格に組み込んだN,N-ジシアノ-2,16-ジアザ[3.3](2,7)(1,6-メタノ[10]アヌレノ)ファンを合成した。生成物は完全重なり型と部分重なり型の二種の異性体の混合物として得られ(収率22%,生成比1.0:2.4)、分取高速液体クロマトグラフィーによりそれぞれの異性体に分離した。二個のアヌレン環を含むアヌレノファン類の合成はこれが初めての例である。半経験的分子軌道法計算による予測をもとに、これらの化合物の構造と渡環π-π相互作用を^1HNMRおよび電子スペクトルにより調べた。次の段階として、さらに大きな14π((4n+2)π,n=3)系のトランス-15,16-ジメチルジヒドロピレン二個をエチレン鎖でつないだ二層アヌレンを分子設計して合成を進めている。このジヒドロピレンは空気による酸化や熱に安定であり、テトラヒドロフラン中でカリウム還元すると容易に16π系(4n,n=4)のジアニオンになることが知られているので、合成した二層アヌレンでは溶液中で4nπ系の相互作用が観測される可能性がある。
肺癌のキナーゼ阻害剤治療の新しい展開・獲得耐性の克服と新規標的の探索

日本人肺癌の30-40%をしめる上皮成長因子受容体(EGFR)遺伝子変異陽性肺癌に対するEGFRチロシンキナーゼ阻害剤の治療効果はすでに確立している。しかしほとんどすべての症例で耐性を獲得する。本研究の第1の目的はこの耐性機序を明らかとし、その克服をめざすことであり、本年度は下記の成果を得た。DEGFRキナーゼ阻害剤獲得耐性における上皮間葉転換の関与の同定EGFR変異を有するHCC4006肺癌細胞株をErlotinibに長期曝露させることによりErlotinib耐性株を樹立、親株と耐性株を比較することにより、EGFRキナーゼ阻害剤獲得耐性機序を探索した、その結果、耐性株では上皮系のマーカーの消失、間葉系マーカーの発現亢進を認め、上皮間葉転換が起きていることを同定した。さらに、親株にTGFbetaを用いて上皮間葉転換を起こさせることにより、EGFRキナーゼ阻害剤の感受性低下をもたらすことを見出した(Suda K,et al.J.Thorac.Oncol.2011)。さらに、今年度の研究において、(1)HER2変異肺癌細胞株よりIIER2キナーゼ活性抑制作用のある複数の薬剤より獲得耐性株を樹立、また、(2)第3世代EGFRキナーゼ阻害剤とも呼ばれるT790M特異的EGFRキナーゼ阻害剤を用いて、EGFR変異肺癌細胞株より獲得耐性株を樹立した。現在、これらの獲得耐性株の耐性機序について解析を進めている。2種類のEGFRキナーゼ阻害剤獲得耐性株について解析が終了しており、さらに1種類のHER2変異肺癌キナーゼ獲得耐性株および第3世代のEGFRキナーゼ阻害剤獲得耐性株も樹立できており、本研究は目的に沿っておおむね順調に進展していると考えられる。樹立したHER2変異肺癌キナーゼ阻害剤獲得耐性株および第3世代のEGFRキナーゼ阻害剤獲得耐性株について、その耐性機序や耐性株の特性について、引き続き解析を進める予定である。
アジア・太平洋戦争　カトリック教会における「動員」

2018年度は、日本カトリック教会の第一次世界大戦観について、当時のカトリック系雑誌記事を中心に分析・考察を行った。これは、本来の研究目的の一つである、アジア・太平洋戦争期(19311945年)の日本人カトリック教会指導者たちの戦争をめぐる言説の考察を深めるべく、日本カトリック教会がそもそも抱いていた戦争観を明らかにすることを目的とするものである。その結果、日本カトリック教会の第一次世界大戦観は、同時代のフランスの教会に強かった「戦争の神学」、すなわち、戦争は信仰の復活をもたらすなどの恵みをもたらす神の摂理の業、神の愛の発現であるという戦争観と重なる部分が多く、教会は、その悲惨さを上回る「福利」があるとして戦争を強く肯定していたという、これまで指摘されてこなかった教会の戦争観の一面を明らかにし得た。この研究の成果を日本カトリック神学会第30回学術大会(上智大学)にて発表し、カトリック教会は戦争反対の立場をとるはずにもかかわらず、国家や軍部の圧迫、特に、1932年の上智大学靖国神社参拝拒否事件を契機に、いわば社会に迎合する形で戦争協力をするに至ったという、従来の見方に修正を迫った研究として評価を受けた。発表原稿はその後論文としてまとめ、『日本カトリック神学会誌』第31号に掲載予定である。また、現在『福音宣教』(オリエンス宗教研究所発行)に近代日本カトリック教会史に関して「時の階段を下りながら」と題して連載を行っているが、その第16回に「カトリック教会と『忠君愛国』」と題して、当時の教会がどのような神学に基づき、国家や天皇について考えていたかに関する論考も発表した。そして、上記の研究と並んで、本研究課題の一つである、カトリック教会の反共産主義に関する文献調査を開始した。上記でも述べたように、当初予定していた研究課題とは別の課題に取り組む必要が生じたため、研究実施計画の一部を変更せざるを得なくなったためである。また、私的なことであるが、私が予想外の入院・手術を受けなければならなくなり、退院後も自宅療養を余儀なくされたため、予定していた東京その他での史料調査が行えなかったことも理由の一つである。2019年度は、当時の教会が抱いていた反共産主義の実態の解明を目指す。これは、日中戦争を支持する教会の言説に反共産主義が明確に打ち出されているため、教会の抱く戦争観と並んで、反共産主義の実態を解明することによって、本研究課題である教会の戦争協力の内的動機と内的「動員」をより深く理解できると考えるからである。そこで、カトリック系雑誌を中心に教会の反共産主義に関する言説を分析・考察し、その具体的な内容や、それが教会の戦争協力にどう作用したかについて解明する。そして、その成果を学会で発表し、論文執筆をめざす。また、それと並行して、当時の日本カトリック教会が、信徒に教会の教えとして語っていた国家や戦争に関する神学的言説に関する調査を行う。

そして、その成果を学会で発表し、論文執筆をめざす。また、それと並行して、当時の日本カトリック教会が、信徒に教会の教えとして語っていた国家や戦争に関する神学的言説に関する調査を行う。昨年度の春休みに東京その他で史料調査を行う予定が、私的理由(入院・手術)のために実施できなかったためである。繰り越し分を2019年度中に実施できなかった史料調査の交通費・滞在費などに充当する予定である。
エズラ・パウンドの能体験と「抽象」

本研究は、モダニズム文学の中心人物として知られるアメリカの詩人Ezra Poundが能から受けた影響と彼のイメージ論及び「抽象」観との関係を明らかにすることで、パウンドの能体験の再評価を試みるものである。この目的に則し、フェノロサの草稿をもとにパウンドが出版した"Noh"or Accomplishment:A Study of the Classical Stage of Japan、パウンドが能をもとに書いた戯曲集Plays Modeled on the Noh、Gaudier-Brzeska:AMemoirをはじめとする評論などを対象にした文献調査を行い、パウンドの能体験とこの時期に育まれた彼の詩論、特にその「抽象」観との関係について検討した。調査の結果、次の知見を得た。(1)パウンドの能解釈、とりわけ、"Noh"or Accomplishmentにおいて繰り返される能の性格付け-能はイメージであり、また、そのイメージは単なる映像ではなく、舞、台詞、謡などによって複合的に形成される抽象的な複合体である--が、同時期にイマジズム運動を展開した彼のイメージ観及び抽象観と連動していること。(2)パウンドの能解釈に見られるイメージ観がThe Cantosの構成原理と考えられる「表意文字的手法」創出の一つのきっかけとなった可能性が認められること。(3)後年パウンドが能を模して書いたWomen of Trachisには作品を抽象的な複合体として提示する主張が乏しいが、このことは1930年代後半から見られるとされる「表意文字的手法」の後退と関連していると考察されること。本研究により、1910年代のパウンドの詩と詩論、とりわけ彼の「抽象」観と「表意文字的手法」の確立において、フェノロサの漢字論など他の要因と並んで、彼の能体験が少なからぬ役割を果たした可能性を明らかにしえたと考える。平成18年度には、能体験と「抽象」の観点から見たパウンドの詩と評論および書簡の再検討を行った。より具体的には、フェノロサの草稿をもとにパウンドが出版した"Noh"or Accomplishment : A Study of the Classical Stage of Japan、パウンドが能をもとに書いた戯曲集Plays Modeled on the Noh、Gaudier-Brzeska : AMemoirをはじめとする評論、同時期に書かれた書簡等を再読し、パウンドの能体験とこの時期に育まれた彼の詩論、特にその「抽象」観との関係について検討した。当時パウンドは、イマジズムおよびヴォーティシズムという革新的な芸術運動を唱導し、また主著The Cantosの創作原理となる「表意文字的手法」を確立しつつあったが、これらの活動の背後には、抽象名詞を用いることなく、具体物の「併置」により抽象概念を喚起することへの関心があった。上記の調査は、パウンドのこうした「抽象」への関心と彼の能体験との関係を明らかにするためのものである。調査の結果、パウンドの能解釈、とりわけ、"Noh" or Accomplishmentにおいて繰り返される能の性格付け--能はイメージであり、また、そのイメージは単なる映像ではなく、舞、台詞、謡などによって複合的に形成される抽象的な複合体である--が、パウンドの抽象観と連動していることなどの知見が得られた。平成19年度には、文献調査をさらに進めて、1910年代に見られるパウンドの能理解と抽象観の連動性が、彼の後の作品、特に後期のThe CantosおよびWomen of Trachisにおいてどのように変化するかを明らかにする予定である。また、研究の成果を論文のかたちにまとめる予定である。なお、平成18年12月には、フィラデルフィア美術館等にて、同時代の芸術における抽象の動向について調査した。

本研究は、モダニズム文学の中心人物として知られるアメリカの詩人Ezra Poundが能から受けた影響と彼のイメージ論及び「抽象」観との関係を明らかにすることで、パウンドの能体験の再評価を試みるものである。平成18年度の調査において、能はイメージであり、また、そのイメージは単なる映像ではなく、舞、台詞、謡などによって複合的に形成される抽象的な複合体であるとする1910年代のパウンドの能理解が、彼の「表意文字的手法」に及ぼした影響を確認したが、平成19年度には、この考察を補完するために、評論Gaudier-Brzeska: AMemoir中心とする諸テクストの分析をさらに進め、また、後年パウンドが能を模して書いたWomen of Trachisを分析して、1910年代の彼の能理解の「その後」について考察した。研究の結果、Women of Trachisには作品を抽象的な複合体として提示する主張が乏しいことが明らかになった。その理由を解明するためには、「表意文字的手法」の後退が指摘される後期の『詩篇』におけるスタイル上の変化を分析する必要がある。本研究の成果をもとに、7月には国際エズラ・パウンド学会(イタリア、ヴェニス市)にて研究発表を行い、モダニズム詩と「抽象」の問題について参加者と意見交換した。10月には金城学院大学にてパウンドに関する講演を行い、また、日本アメリカ文学会中部支部9月例会(中京大学)にて研究発表を行った。なお、研究成果は別途学術論文としても発表の予定である。
Vogt-小柳-原田病における細胞性免疫応答と臨床像の関連性に関する研究

Vogt-小柳-原田病(VKH)は,自己メラノサイトを抗原とする自己免疫疾患であると考えられているがその詳細な免疫学的解析はなされていない.VKH患者末梢血中リンパ球(PBL)はヒトメラノーマ株P-36に対し細胞傷害活性を示すことは既知の事実であるが,本研究では細胞傷害活性を示す細胞のより詳細な免疫学的性質を解析することを目的とした.VKH患者のPBLをエフェクター細胞とし,標的細胞として^<51>Cr標識P-36を用い細胞傷害活性を調べ,さらに,VKH患者のP-36特異的細胞傷害性T細胞が認識するP-36細胞膜上メラノーマ抗原と複合体を形成するヒト主要組織適合抗原(HLA)を解析するために抗HLA-class I抗体および抗HLA-class II抗体による阻止試験を行った.その結果,P-36特異的細胞傷害活性は抗HLA-class I抗体で阻止できなかったが,抗HLA-class II抗体で阻止され,VKH患者のP-36特異的細胞傷害性T細胞はP-36のメラノーマ抗原-HLA-class II抗原複合体を認識していることが判明した.昨年度は,VKH患者の血清,前房水および脳脊髄液中のインターロイキン-2(IL-2)およびIL-6をELISA法で解析した.さらに,VKH患者より得たPBLをIL-2の刺激のもとにP-36と長期混合培養しP-36特異的細胞傷害性Tcell lineを確立した.このcell lineはCD4^+CD8^-CD25^+HLA-DR^+TcRαβ^+TcRγδ^-で,IL-6およびIFN-γを産生することが判明した.このことから,VKHの免疫学的発症機序には各種リンフォカインの関与が示唆された.今年度は,このcell lineとT細胞腫CEMとのハイブリドーマを作成し,その免疫学的性質を解析したところ,このハイブリドーマはCD2^+CD4^+CD8^-CD25^±HLA-DR^-TcRαβ^±TcRγδ^-CDlla^+CD28^+で,P-36に細胞接着はするが,細胞傷害活性は示さず,その上清中には,IL-6,IL-2およびIFN-γは検出されなかった.Vogt-小柳-原田病(VKH)は,自己メラノサイトを抗原とする自己免疫疾患であると考えられているがその詳細な免疫学的解析はなされていない.VKH患者末梢血中リンパ球(PBL)はヒトメラノーマ株P-36に対し細胞傷害活性を示すことは既知の事実であるが,本研究では細胞傷害活性を示す細胞のより詳細な免疫学的性質を解析することを目的とした.VKH患者のPBLをエフェクター細胞とし,標的細胞として^<51>Cr標識P-36を用い細胞傷害活性を調べ,さらに,VKH患者のP-36特異的細胞傷害性T細胞が認識するP-36細胞膜上メラノーマ抗原と複合体を形成するヒト主要組織適合抗原(HLA)を解析するために抗HLA-class I抗体および抗HLA-class II抗体による阻止試験を行った.その結果,P-36特異的細胞傷害活性は抗HLA-class I抗体で阻止できなかったが,抗HLA-class II抗体で阻止され,VKH患者のP-36特異的細胞傷害性T細胞はP-36のメラノーマ抗原-HLA-class II抗原複合体を認識していることが判明した.昨年度は,VKH患者の血清,前房水および脳脊髄液中のインターロイキン-2(IL-2)およびIL-6をELISA法で解析した.さらに,VKH患者より得たPBLをIL-2の刺激のもとにP-36と長期混合培養しP-36特異的細胞傷害性Tcell lineを確立した.このcell lineはCD4^+CD8^-CD25^+HLA-DR^+TcRαβ^+TcRγδ^-で,IL-6およびIFN-γを産生することが判明した.このことから,VKHの免疫学的発症機序には各種リンフォカインの関与が示唆された.今年度は,このcell lineとT細胞腫CEMとのハイブリドーマを作成し,その免疫学的性質を解析したところ,このハイブリドーマはCD2^+CD4^+CD8^-CD25^±HLA-DR^-TcRαβ^±TcRγδ^-CDlla^+CD28^+で,P-36に細胞接着はするが,細胞傷害活性は示さず,その上清中には,IL-6,IL-2およびIFN-γは検出されなかった.Vogt-小柳-原田病(VKH)は、自己メラノサイトを抗原とする自己免疫疾患であると考えられているがその詳細な免疫学的解析はなされていない。VKH患者末梢血はヒトメラノーマ株P-36に対し、細胞傷害活性を示すがその詳細な免疫学的解析はなされていない。そこでVKH患者より得られた末梢血リンパ球をヒトメラノーマ株P-36の刺激のもとに長期培養しP-36特異的細胞傷害性cell lineを確立し、その免疫学的性質を解析した結果、このcell lineはCD4^+CD8^-CD25^+、TcRαβ^+であることが解明した。また、このcill lineは、IL-6およびγIFNを産生した。