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「大学の劇場」による「ラボラトリー機能」の構築――芸術系大学の実践的研究モデル

京都造形芸術大学舞台芸術研究センター(以下、「センター」)、及び同大学共同利用・共同研究拠点(以下、「拠点」)と連携しつつ、下記の研究活動を実施した。(1)「ラボラトリー機能」の実践的研究である《3つの視点》に基づく「創造のプロセス」構築作業では、1《視点1:伝統》、《視点2:身体》の複合的な研究として、舞踊家の山田せつ子、演出家のシャンカル・ヴェンカテーシュワラン(インド)、能楽師の観世喜正等を交えた、日印の伝統芸能における身体表現の比較研究を、2《視点2》、《視点3:テクノロジー》を中心に据えた研究として、美術家のやなぎみわ、ロボット工学の東善之(京都工芸繊維大学)等の共同研究チームによる、シェイクスピアの戯曲『ハムレット』等をモチーフにした新たなロボット演劇の実験研究を、中心的課題として実施した。(2)「ラボラトリー機能」構築のための基盤研究として、1日本アニメーションと日本伝統演劇の表現構造を比較し、日本の「伝統的表現」の領域横断的な相互作用を学術的に検証する研究プロジェクト(《視点1》)、2前年度からの継続として、美術家等を交えた領域横断的な視点から、劇作家ベケットに関する研究プロジェクト(《視点2》)、3演技研究の平井愛子とラサール芸術大学(シンガポール)とが協働した「アジアにおける近代俳優教育」に関する研究プロジェクト(《視点2》)を、それぞれ実施した。(3)「ラボラトリー機能」のモデル化のためのデータ収集として、昨年度と同様、記録映像資料の購入、歴史的価値の高い記録映像のDVD化を行った。また、前年度の成果を踏まえ、今年度は国内諸機関の現地調査に重点を置き、「アートマネジメント」と「ドラマトゥルク」に関する複数の重要な先行事例の詳細な分析を行った。(1)「ラボラトリー機能」構築の実践的モデル化の作業については、軽微な変更はあったものの、全体として期待以上の成果があった。本報告書「6」ー(1)の1においては、東京の国際舞台芸術祭(=シアターコモンズ)と連携しながら、カースト制度をテーマにした現代インド演劇作品に関する劇場実験(公開)を、日本における「被差別と芸能」や、「日本伝統芸能における身体性」といった多角的な視点から考察し、理論と実践を融合した「創造のプロセス」のモデルケースを構築することができた。また、同「6」ー(1)の2においては、「ヨーロッパ中心主義の衰退」及び「ポスト・ヒューマン」の主題を視野に入れた最先端の「ロボット演劇」実現のためのプロセスを、文理融合的方法を通じて構築することができた。今後改善すべきいくつかの課題の発見も含め、貴重な実例を得た。(2)「ラボラトリー機能」構築の基盤研究(本報告書「6」ー(2)の123)については、ほぼ期待通りの成果をあげた。なお、3については、劇場実験(公開)が不可抗力(=西日本豪雨)のため急遽中止となったが、本企画に参加予定のパネリストに別途インタヴューを実施し、当初の研究目的の主要部分は達成することができた。(3)「ラボラトリー機能」のモデル化をめぐる理論的研究に関しては、前年度の国内外の国際的な舞台芸術祭に加え、本年度の国内文化施設の現地調査が、大きな収穫となった。特に、「山口情報芸術センター」(山口市)、「城崎国際アートセンター」(豊岡市)での調査は、「ラボラトリー機能」の貴重な先行事例として考察することができた。一連の調査に関しては、2名の研究補助職員体制が充分に機能した。こうした調査研究の検証作業を目的として、大学院博士課程の学生も交えた10回の研究ミーティングを継続的に実施し、将来的な「オープンラボトリー」構想を視野に入れたモデル化作業のための基盤構築をほぼ終えた。(1)「ラボラトリー機能」の構築という実践的課題に関しては、これまでの2年間の研究活動を通じて4つの研究プロジェクトを実施することができた。最終年度も2つの研究プロジェクトを実施する予定であるが、これらはすべて3つの《視点》がそれぞれの仕方で交差し合う多様性を備えており、「劇場を活用した研究」によって可能となる「創造のプロセス」が、「現代」にふさわしい多様な舞台芸術作品を、「芸術系大学」という創造環境のもとで生み出すことができることを示すことができる見通しが立っている。今後の課題としては、こうした「プロセス」を、どのようにアーカイブ(またはドキュメント)することが、研究成果の有効な公開に繋がるかを多面的に考察し、独自の方法を構築することが求められる。この点については、最終年度における「ドラマトゥルク研究」において、国内外の実践家や研究者を招いて、集中的に議論する場を設ける予定である。(2)本研究プロジェクトのこれまでの研究成果は、「センター」が刊行する機関誌『舞台芸術』や、「拠点」が刊行する『Annual Report』を通じて積極的な公開がすでになされてきており、研究代表者、研究分担者による論文等の成果発表も順調に蓄積されてきている。同時にまた、「劇場を活用した研究」の成果発表としての「劇場実験」にも、国内外の研究者や実践家が多数訪れている。最終年度においての課題は、こうした多様な成果をベースにした、「ラボラトリー機能」という視点における国際的なアーティストと研究者のネットワークをさらに広げ、研究成果の共有と検証をはかることにある。これまでの研究成果から、「ラボラトリー機能」がより大きな意味を持ちうるのは、アジア圏の舞台芸術においてであろうことが予測できるため、最終年度はその点を重点的に考えていきたい。すでに連携のある韓国、インドとは、引き続き連携研究を進めていくことになる。

京都造形芸術大学舞台芸術研究センター(以下、「センター」)、及び同大学共同利用・共同研究拠点(以下、「拠点」)とも連携しつつ、下記の研究活動を実施した。(1)「ラボラトリー機能」構築の理論的検証作業として、その基盤となるアートマネジメント研究、ドラマトゥルク研究の先行研究をふまえつつ、1基礎資料の収集、2先行事例の検証、3現地調査を実施した。1については、「劇場を活用した創造のプロセス」に不可欠な演劇史上に残る歴史的作品の記録映像(DVD)を約40本購入したほか、「センター」に手付かずのまま保存されていた同様の記録映像(VHS約200本)のDVD化作業を集中的に行った。2については、「拠点」と「センター」の連動により「創造のプロセス」が生み出した本格的舞台作品である『繻子の靴・全曲版』(上演時間約8時間)の全過程を、4回の研究会(非公開)を軸に客観的に検証する作業を実施し、3については、国内外の舞台芸術祭(7箇所)、及び韓国・ソウルにおける教育機関と劇場制度の連携状況を現地調査し、事後報告会とレポートにより共有した。(2)「ラボラトリー機能」構築の実践的モデル化の作業として、《視点2:身体》に関する以下2つ(12)の劇場実験を伴うプロジェクトを実施した。1「サミュエル・ベケットを〈展示〉する:もうひとつの劇場空間に向けて」は、小崎哲哉氏を研究協力者に迎え、劇場ホワイエを活用した実験的な展示空間の創出と、ベケットに関する最新の研究成果を発表するレクチャー(いずれも一般公開)を実施した。2「ダンスの創造的行為を巡って」は、山田せつ子氏を研究協力者に迎え、演劇とダンスのジャンル越境的な実験作品の劇場を使った創作(一般公開)及びそのための連続研究会を実施した。当初の計画から若干の変更はあったが、全体として順調に初年度を終えることができた。(1)「ラボラトリー機能」構築の理論的検証作業については、連携研究者との共同研究会は予定回数をやや下回ったが、その分、現地調査に十分な予算と時間を割き、基盤研究として予想以上の成果を挙げた。国内では、東京、横浜、名古屋における規模も機能も異なる3つの舞台芸術祭を、京都と比較しながら詳細に調査することができ、国外については、規模と歴史のかなり異なる3つの舞台芸術祭(パリ、シドニー、バンクーバー)を多角的に検証することができた。とりわけ、名古屋の「サウンドプラットフォームパフォーマンス2018」とバンクーバーの「PuSh国際舞台芸術祭」は、比較的小規模ながらも、舞台芸術と音楽の領域横断性に主眼を置いたイベントであり、舞台芸術作品の未来のあり方とその創造プロセスの構築をめぐって、多くの示唆を得ることができた。(2)「ラボラトリー機能」構築の実践的モデル化の作業については、軽微な変更はあったものの、2度の劇場実験を通じた「創造のプロセス」研究の公開発表はほぼ予定通り行われ、期待以上の成果をあげた。本報告書「6」ー(2)の1は、世界演劇史を代表する劇作家ベケットをテーマとした創造プロセスの構築、2は、京都・関西圏の演出家・ダンサー、及び研究者との継続的な協働作業による創造プロセスの構築がそれぞれ主眼となっていたが、いずれにおいても、劇場空間を大胆に活用した実験的なプロセスが生成され、将来の「オープン・ラボラトリー」創設に関する、タイプの異なる2つの貴重な事例を得ることができた。
保育ママが働きやすい環境モデルの構築

子ども・子育て支援新制度が施行され、家庭的保育事業への新たな財政支援が行われ、保育の場の拡充が図られている。しかし家庭的保育者の働く環境が守られなければ、質の高い保育を保障することはできない。本研究では、新制度移行前後における家庭的保育者の労働環境の実態と、精神的・身体的負担感に関する調査を実施した。その結果、家庭的保育者は、職務満足度は高いものの、生活習慣の乱れや身体的・精神的負担感が高い傾向にあり、労働環境としては過重な労働時間,休暇保障,欠員対策,緊急一時預かり体制の4つの問題点が明らかとなった。改善策として、事業の透明性と市区町村の格差是正、個々の希望にそった受託条件等があげられる。少子化対策として、出産・子育て・就労の希望がかなう社会を作るためには、子どもの預け先の確保は最重要課題である。現在、子ども・子育て支援法において小規模保育サービスの一環である家庭的保育事業の拡充を図っているところである。しかし、いくら制度の拡充を図っても、その制度の下で働いている保育ママが、安心して働ける環境におかれていなければ良質なサービスは提供できず、子どもの生育環境を保障することにはならない。本研究では、1)保育ママの労働環境の実態解明、2)保育ママの精神的・身体的負担感の度合いの定量化及び、これらを規定する要因分析、3)行政担当者への調査をすることにより、保育ママが「安心して働ける環境づくり」のモデル案を構築することを目的としている。平成25年度は、保育ママの労働環境の実態を解明するために、行政資料の調査および保育ママへの実態調査を実施した。行政資料調査では、家庭的保育事業の実施基準や保育要件、人数、体制整備などの実態を、家庭福祉員の会が発行している現況報告書やその他行政資料により調査し、市区町村格差の状況を分析、観察した。対象地域は、待機児童の多い東京都23区とし、資料は特別区決算状況、住民基本台帳による東京都の世帯と人口、保育サービス利用状況等について、福祉・衛生統計年報、各区の予算執行の実践報告書や決算書より収集した。保育ママへの実態調査では、東京都家庭的保育者の会の協力のもと、保育ママ数名にインタビューを、会員(保育ママ)103名(回収率71%)を対象に質問紙調査を実施し、労働条件や欠員対策など支援体制に関する実態について調査した。両調査の結果、労働条件や補助金など地域間格差が生じていることが明らかとされた。質問紙調査においては、これら格差に対する不満や、働くことへの不安も表出された。本年度の研究成果は、乳幼児教育学会、保育学会で発表している。今年度より、子ども・子育て支援新制度が施行されたが、新制度でも保育所待機児童対策として、小規模保育サービスの一環である家庭的保育事業の拡充を図っている。しかし、いくら制度の拡充を図っても、その制度の下で働いている保育ママが、安心して働ける環境におかれていなければ良質なサービスは提供できず、子どもへの良質な生育環境を保障することにはならない。本研究では、1)保育ママの労働環境(雇用条件、実施基準、体制整備等)の実態解明、2)保育ママの精神的・身体的負担感の度合いの定量化及び、これらを規定する要因分析、3)行政担当者への調査をすることにより、保育ママが「安心して働ける環境づくり」のモデル案を構築することを目的としている。平成26年度は、子ども・子育て支援新制度の移行準備年度として、家庭的保育者(保育ママ)への調査が実施できず、行政資料の収集(家庭的保育者への説明会資料の収集、新制度への移行状況、区の方針、条例など)と、東京都家庭的保育者の会への協力をいただき、地区委員への聞き取り調査のみを実施した。その結果、新制度に対する取り組みや考えの違い、新制度を実施する区、実施しない区、大幅に制度を見直す区など、各区の特色、取り組みの違いがみられた。また、家庭的保育者も、新制度に向けて、家庭的保育事業の説明、移行の意思・確認、移行への手続き上の膨大な書類準備などで、保育以外の時間を大幅にとられ、さらに事業の変更点への理解や、設備、補助者の整備など、精神的にも身体的にも負担の多い年度であった。新制度へ移行する区では、経過措置はとられたものの、「食事提供および連携施設に関する事項」は、大きな変更点であり、家庭的保育者の不安と負担感を増大させていることが見えてきた。少子化対策として、子どもの預け先の確保は最重要課題である。現在、子ども・子育て支援新制度が施行され、地域型保育として家庭的保育の拡充を図っている。しかし制度の拡充を図っても、働いている家庭的保育者が安心して働ける環境でなければ良質なサービスは提供できず、子どもへの質の高い保育を保障することができない。そこで本研究では、新制度移行前と後における家庭的保育者の労働環境の実態把握と、家庭的保育者の精神的・身体的負担感に関する調査を実施し得られた結果から、家庭的保育者が働きやすい環境づくりを検討した。新制度以前の家庭的保育事業では、実施主体が市区町村であるため、実施基準や支援体制にばらつきがあり、不平等さに対する不満があった。初年度は、東京都23区において家庭的保育事業の格差の実態を調査。その結果、受託率,家庭的保育事業費,保育料,補助金額等に格差が生じていることが明らかとなった。

次に、新制度移行前後での家庭的保育者への労働環境調査を実施し、実態を把握することとした。新制度移行前の調査結果では、1過重な労働時間,2休暇保障,3欠員対策,4緊急一時預かり体制の4つの問題点が明らかとなった。最終年度は、これらを受け、新制度移行後の労働環境の実態と移行に対する意識ならびに精神的・身体的負担感について調査した。その結果、家庭的保育者は、職務満足度は高いものの、生活習慣の乱れや身体的・精神的負担感が高い傾向にあった。補助金額は約9割が増額されていたが、新制度移行に対して賛成している者は3割に満たなかった。本研究により、新制度移行前後における家庭的保育者の労働環境の実態が明らかとなった。新制度は、補助金額の増額,連携施設,調理員の確保等、保育の質の向上に寄与するものだが、家庭的保育者の労働環境の改善には、事業の透明性と市区町村の格差是正、個々の希望にそった受託条件の検討が必要である。子ども・子育て支援新制度が施行され、家庭的保育事業への新たな財政支援が行われ、保育の場の拡充が図られている。しかし家庭的保育者の働く環境が守られなければ、質の高い保育を保障することはできない。本研究では、新制度移行前後における家庭的保育者の労働環境の実態と、精神的・身体的負担感に関する調査を実施した。その結果、家庭的保育者は、職務満足度は高いものの、生活習慣の乱れや身体的・精神的負担感が高い傾向にあり、労働環境としては過重な労働時間,休暇保障,欠員対策,緊急一時預かり体制の4つの問題点が明らかとなった。改善策として、事業の透明性と市区町村の格差是正、個々の希望にそった受託条件等があげられる。子ども・子育て支援新制度への移行準備となった年度となり、予想以上に、現場に混乱が生じていたため、家庭的保育者への質問紙調査が実施できなかったため。保育者の労働環境平成26年度の結果において、新制度に対する取り組みや考えの違い、新制度を実施する区、実施しない区、大幅に制度を見直す区など、各区の特色、取り組みの違いがみられた。また、家庭的保育者も、新制度に向けて、家庭的保育事業の説明、移行の意思・確認、移行への手続き上の膨大な書類準備などで、保育以外の時間を大幅にとられ、さらに事業の変更点への理解や、設備、補助者の整備など、精神的にも身体的にも負担の多い年度であった。新制度へ移行する区では、経過措置はとられたものの、「食事提供および連携施設に関する事項」は、大きな変更点であり、家庭的保育者の不安と負担感を増大させていたことが、聞き取り調査から見えてきた。平成27年度は、これら資料から得られた知見をもとに、新制度後の、各区の状況調査および家庭的保育者への精神的・身体的負担感の調査を実施することで、本研究テーマである保育ママ(家庭的保育者)の働きやすい環境モデルを構築したいと考えている。平成25年度の研究計画で予定していた行政資料の調査、保育ママへの実態調査など、計画通りに進展している。次年度の本調査の準備が整っているといえる。今年度が、子ども・子育て支援新制度の実施準備年度により、予想以上に、現場の混乱が生じたため、実施予定であった家庭的保育者への質問紙調査が実施できなかっため。平成25年度の研究結果において、今、家庭的保育者がおかれている現状および労働条件や支援体制に関する地域間格差の実態が明らかとなった。
造血幹細胞ニッチ因子としての代謝物の時空間構成と機能解明

これまで造血幹細胞を制御するニッチ因子の研究が数多くなされてきた。その結果、種々のサイトカイン等のタンパク質や酸素分圧が、造血幹細胞の機能や数を制御する重要なニッチ因子であることが明らかとなった。ニッチ因子は造血幹細胞内の代謝物の構成を変化する代謝プログラムを起動して、造血幹細胞の「幹細胞性」ー細胞周期の静止期性や自己複製能、多分化能などーを制御していることが研究代表者らの研究によって知られるようになっている。しかしながら、ニッチの細胞外における代謝物の構成や分布と、造血幹細胞をはじめとする血液細胞へと及ぼす影響はいまだ不明である。本研究では、マウス骨髄の代謝物の構成と分布を明らかにし、造血幹細胞ニッチ因子としての機能と作動機構の解明を目的とする。初年度は、骨髄の代謝物構成と時期や病態における変容の同定についての実験検討を実施する。骨髄は含有している栄養素が豊富な組織であると考えられているが、実際にどのような代謝物を多く含むかは不明であった。そこで初年度は、メタボローム解析をマウス骨髄で実施して、骨髄中に含まれる代謝物の網羅的な同定を行うべく実験を実施した。また、本解析と並行して、メタボローム解析に資する骨髄からの代謝物回収法の改善も行い、既存の骨髄フラッシュアウト法による骨髄の回収法以外にも急速凍結などのさまざまな方法を検討することで確実な骨髄代謝物プロファイルを得ることができることを確認した。初年度はほぼ予定通りに実験を実施することができ、技術的な問題も特段生じなかったため。今後は各種の状況や時期の骨髄の代謝物プロファイリングと、候補代謝物そのものあるいはそれが駆動するシグナルの意義の検討を行い、目的達成のために着実に研究を進める。
コーティング薄膜及び熱処理法を併用した鉄鋼材料の傾斜機能化に関する基礎研究

本研究では傾斜機能化熱処理を施したオーステンパ球状黒鉛鋳鉄材を母材とし、その表面に金属のコーティング薄膜を蒸着することによってき裂発生、き裂伝ぱにより効果のある傾斜機能材料を開発する為の基礎技術を確立することを目的とした。具体的には、傾斜機能を持たせたオーステンパ球状黒鉛鋳鉄材の表面に最も低コストで簡便に一様なコーティング層を生成することが可能である真空蒸着装置を用いて、延性の優れた金やチタンのコーティングを温度、膜厚、真空度といった条件を種々変化させ施し、その場合の機械的性質を評価することによって、多層構造物とした傾斜機能材料の強度評価を行い次のことが明らかとなった。多層構造とした鋳鉄材の疲労強度試験を行った結果、母材のみの場合のものより疲労き裂の発生は著しく遅れ、なおかつき裂伝ぱ速度も遅くなっていた。また、この疲労寿命及び疲労き裂伝ぱ特性の向上には母材に残留しているひずみないしは応力が大きく影響を及ぼしていた。さらに、母材の最適な傾斜機能化熱処理法を確立し、併せてX線プロファイル解析及び残留応力評価技術の開発を行うことにより微視的格子ひずみ、転位密度を求め多層構造物の非破壊的な評価法を確立した。この手法により母材の最適熱処理条件が決まりコーティング後の機械的性質も安定したものが得られるようになった。また、最適なコーティング条件を効率よく決定することも可能となった。得られた知見の内一部はX線解析を主体に後述の研究業績として発表した。以上の研究結果から傾斜機能材料開発の製造プロセス確立のための有用な多くの知見を得ることができた。
子どもの叱り方尺度の作成とタッチを用いた怒鳴らない叩かない子育てプログラムの開発

本研究の目的は、1叱り方尺度の作成、2叱り方の影響要因と臨床的介入、3叱り方と子どもの問題行動との関連、4身体接触を用いた叱り方プログラムの効果(FTP)を検討することであった。本研究では、叱り方尺度の4因子構造(暴力的な身体接触・愛情的な身体接触・肯定的なしつけ・感情的しつけによる罪悪感)が確認された。肯定的なしつけと母親の抑うつに負の関連があった。叱る時の愛情的な身体接触は子の自己抑制を低め、肯定的しつけは子の自己主張を高めることが見いだされた。叱り方プログラム(FTP)は、母親の肯定的な養育行動(例子どもの気持ちを考える)を高め、否定的な養育行動(例子どもを怒鳴る)を少なくした。平成26年度の研究計画:子どもの叱り方尺度の作成<研究1:子どもの叱り方尺度の質問項目の作成>1研究目的:子どもの叱り方の質問項目を明らかにする。2研究方法:怒鳴らない子育て講座に参加する父親1名と母親7名。対象者に十分な説明と同意を得た後、子どもの叱り方で困難を感じる点を面接を行った。3研究結果と意義:面接内容から、叱る場面と叱り方のエピソードを抽出した。叱り方の予備的質問紙(麻生,2010)の項目をエピソードの内容と合わせて一部項目を修正した。<研究2:子どもの叱り方尺度の検出力の検討>1研究目的:子どもの叱り方尺度の検出力を検討する。2研究方法:怒鳴らない子育て(CSP)講座に参加する父親1名と母親7名に子どもの叱り方尺度の質問紙調査を行った。3研究結果と意義:実施前後で平均値の差の検定を行った結果、10項目(子どもを怒鳴る等)が実施後に減少し、検出力が認められた。今後は下位尺度ごとに検討を行う予定である。<研究3:子どもの叱り方尺度の信頼性と妥当性の検討>1研究目的:子どもの叱り方尺度の妥当性を検討する。2研究方法:公立保育園4園に在籍する母親400名に子どもの叱り方尺度等の質問紙調査を行い126名回収した。(回収率31.5%)。3研究結果と意義:現在データ入力を行っている。データ数が少ないため、今後は調査に協力していただける保育園を探し、協力依頼を行っていく。<研究4:子育て支援プログラムの予備的検討>1研究目的:怒鳴らない、叩かない子育てプログラムの有効性を予備的に検討する。2研究方法:保育士24名に、怒鳴らない、叩かない子育てプログラムの一部を実施した。3研究結果と意義:実施前後で効果測定を行った結果、10項目(癇癪時のタッチがわかる等)で、実施前より実施後の方が有意に高かった。今後はプログラムの内容を洗練させていく。<研究1:叱り方尺度の信頼性と妥当性の検討>1研究目的:叱り方尺度の因子構造を検討する。2研究方法:認定保育園に在籍する母親350名に質問紙調査を行い85名回収した。3研究結果と意義:因子分析を行い、4つの下位因子(肯定的しつけ、感情的しつけ、愛情的身体接触、暴力的身体接触)が見出された。共分散構造分析により、因子構造の妥当性が確認された。<研究2:親の養育態度と幼児の自立性の検討>1研究目的:親の養育態度と幼児の自立性との関連を検討する。2研究方法:認定保育園に在籍する400名に質問紙調査を行い150名回収した。3研究結果と意義:分析途中であるが、親の養育態度と子ども行動との関連があると考える。<研究3:怒鳴らない子育てプログラムの効果>1研究目的:怒鳴らない子育てプログラムの効果を検討する。2研究方法:叱り方に悩む母親7名に、7回の怒鳴らない子育てプログラムを実施し、実施前後で質問紙調査を行った。3研究結果と意義:有意差はないが、実施前後で感情的しつけが減り、肯定的しつけが増え、このプログラムの教育的効果が認められた。<研究4:叱り方のタッチプログラム(FTP)の効果>1研究目的:叱り方のタッチプログラム(FTP)の効果を検討する。2研究方法:叱り方に悩む幼児をもつ母親6名に8回プログラムを実施し、実施前後で質問紙調査を実施した。3研究結果と意義:有意差はないが、実施前後で愛情的身体接触が増え、このプログラムの教育的効果が認められた。<研究5:支援者向け叱り方講座の効果>1研究目的:支援者向け叱り方講座の効果を検討する。2研究方法:子育て支援の支援者45名に2時間の叱り方講座を実施し、た。3研究結果と意義:実施前後で質問紙調査を行い、「かんしゃくの対応がわかる」や「泣きの対応がわかる」、「身体の距離の重要性がわかる」で有意差が認められ、この講座の教育的効果が認められた。平成27年度の研究計画:叱り方尺度の信頼性と妥当性の検討と叱り方プログラムの検討研究1で、子どもの叱り方尺度が4因子構造であることが見いだされた。これより、叱り方プログラムの効果測定で、4因子を指標とすることが可能となった。

研究3と4で、2つの叱り方プログラム(怒鳴らない子育て講座・タッチプログラム)の効果を検討したが、愛情的身体接触や肯定的しつけで有意差は認められなかった。これは、サンプル数が少ないことも一因であるが、研究5の叱り方のワークの一部を構成した講座では、癇癪や泣きの対応など3項目で有意差が認められている。今後はより効果的なワークと効果的でないワークを弁別し、プログラム構成を洗練させていく必要がある。<研究1:母親の叱り方と子どもの問題行動との関連>1研究目的:母親の叱り方と子どもの問題行動との関連を検討した。2研究方法:保育園に在籍する母親126名に質問紙調査を行い47名回収した。3研究結果と意義:母親の内的作業モデルの安定性と肯定的しつけとの間に正の相関があり、暴力的及び感情的しつけとの間に負の相関が認められた。肯定的しつけと、子どもの泣きへのなだめのタッチと愛情的タッチとの間に正の相関が認められた。また、感情的しつけと子どもの自己抑制との間に正の相関が認められた。以上より、母親の肯定的しつけは、泣きへのなだめのタッチ等を増やし、感情的しつけは子どもの自己主張を抑制する可能性が示唆された。<研究2:身体接触を用いた多世代交流講座>1研究目的:身体接触を用いて多世代交流する子育て支援講座の効果を検討した。2研究方法:親子連れや成人、思春期の子どもをもつ保護者、支援者44名に講座実施前後に質問紙調査を実施した。3研究結果と意義:講座の実施前と実施後において、「子育てにタッチが大事」や「コミュニケーションにタッチが大事」などの4項目が有意に高くなった。本講座により、対人関係に身体接触が重要であるという認識が高まった。<研究3:身体接触を用いた叱り方プログラムの効果>1研究目的:叱り方プログラムの効果を検討した。2研究方法:叱り方に悩む幼児をもつ母親7名に8回プログラムを実施し、実施前後で質問紙調査を実施した。3研究結果と意義:抑うつ得点や叱り方尺度の各因子得点は、講座の実施前後では有意差が認められなかった。しかし、「ほめるタッチがわかる」や「問題行動への対応がわかる」など7項目が、実施前より実施後が有意傾向に高かった。また、「子に話しかける」や「子をほめる」の養育行動が、実施前よりも実施後が有意に多かった。本研究の目的は、1叱り方尺度の作成、2叱り方の影響要因と臨床的介入、3叱り方と子どもの問題行動との関連、4身体接触を用いた叱り方プログラムの効果(FTP)を検討することであった。本研究では、叱り方尺度の4因子構造(暴力的な身体接触・愛情的な身体接触・肯定的なしつけ・感情的しつけによる罪悪感)が確認された。肯定的なしつけと母親の抑うつに負の関連があった。叱る時の愛情的な身体接触は子の自己抑制を低め、肯定的しつけは子の自己主張を高めることが見いだされた。叱り方プログラム(FTP)は、母親の肯定的な養育行動(例子どもの気持ちを考える)を高め、否定的な養育行動(例子どもを怒鳴る)を少なくした。平成26年度の研究計画:子どもの叱り方尺度の作成研究1の実施により、子どもの叱り方尺度の質問項目を吟味した結果、33項目を設定することが出来た。研究2により、叱り方尺度の検出力を見出すことが出来た。研究3の叱り方の尺度の信頼性と妥当性の検討では、保育園に在籍する保護者を対象に約400部配布が終了した。現在データ入力中であるが、回収データ数が少ないため、今後は、保育園の協力機関を増やしデータ数を確保する必要がある。
シベリアの諸言語における「膠着性」

ロシア共和国内シベリア地域には系統の異なる言語が多く分布している。これら諸言語はその話者である諸民族の移動に伴い、複雑に接触を繰り返して今日に至っている。これらの諸言語間の系統を越えた類似性は語彙のレベルだけでなく、音韻、形態、統辞等の広範なレベルに及んでいる。本年度はこれら言語接触に起因する可能性のある類似点について、特に「膠着性」に着目して研究した。類似点から発して逆に個々の系統に属する特徴の反映にも注目すべき点があった。本研究においては特にこの地域の諸言語に比較的短期間に集中的にしかも均質な接触を持ったロシア語からの語彙の借用形態をスケールとすることにより、シベリアに分布する諸言語間に「膠着性」の程度において言語帯とも言うべき段階性が見られることを示した。具体的には主にチュルク諸語とツングース諸語を中心に研究を進めた。シベリアを言語地域として様々な観点からの言語接触の研究をすすめる上での一視点をあげることができた。その成果は第43回日本ロシア文学会全国大会(於・神戸市外大1993・10・22)において「シベリアの諸言語におけるロシア語受容」という題で発表した。現在、このテーマに関連した論文を準備中である。尚、上記のチュルク語とツングース語の接触の結果成立したと考えられる北西シベリアに分布するドルガン語についての著作を公表する機会を得、多角的に研究を進めることができた。今年度の助成金により研究上、たいへん有益な研究会や打ち合わせに参加し、また資料収集も順調に行えた。今年度の成果を踏まえて今後もさらに多様なアプローチでシベリアの諸言語を扱っていきたい。
ラット中枢神経系における神経ペプチド動態のin vivo, in vitro相関

視交叉上核(SCN)における種々の神経伝達物質放出のサーカディアンリズムおよび光や薬物に対する反応性をin vivoとin vitroの両実験系を用いて解析することを目的とした。in vivo実験では、12時間明12時間暗の条件下で繁殖飼育したWistar系成熟雄ラットを用いて、連続3日間のマイクロダイアリシスを行い、明暗サイクル下での興奮性アミノ酸の放出にサーカディアンリズムがあるかどうか、連続暗および連続明でリズムが存続するかどうかを確かめた。連続暗の第2日目に短時間の光照射を行い、光刺激による興奮性アミノ酸放出の変動、その位相依存性等を確かめた。その結果アスパラギン酸とグルタミン酸の両興奮性アミノ酸は、明暗サイクル下では相関がみられ暗期に上昇し、明期に減少するリズムを示した。連続暗および連続明1日目ではそのリズムは減少した。光パルスは有意の変動を示さなかった。ウレタン麻酔ラットでも両興奮性アミノ酸は、暗期に上昇するリズムが認められた。以上よりSCN近傍細胞外液中のアスパラギン酸とグルタミン酸リズムは、光の入力よりも生物時計の出力を反映していて、外界の明暗に修飾されて昼夜変動が増大すると考えられた。in vitro実験では、Wistar系ラットの生後1週間目の仔ラット視床下部から、厚さ375μmの前額断切片を作りSCNを切り出し、14日間回転培養を行った後実験に供した。連続6日間、2時間ごとの培養液の回収を行った。Arginin Vasopressin (AVP), Vasoactive Intestinal Peptide (VIP)とも約20時間のきれいなサーカディアンリズムがみられ、両ペプチドの位相差は2時間以内であった。この系に3日目にNMDAを投与すると、AVP, VIPの位相差は大きく変化し、最大ではAVP, VIPの位相がほぼ逆転した。このことから、AVP, VIPの放出にはそれぞれ異なる振動体によって、調節されていると考えられる。また、Ca^<2+>を含まない培地で培養したSCNでもアスパラギン酸、グルタミン酸、グリシンは顕著なサーカディアンリズムを示し、その頂点位相は一致しAVPの頂点位相とも一致した。このことから、概日時計は、その振動機構に細胞外Ca^<2+>を必要としないことが示唆された。in vivo実験では、12時間明12時間暗の条件下で繁殖飼育したWistar系成熟雄ラットを用いて、連続3日間のマイクロダイアリシスを行い、明暗サイクル下での興奮性アミノ酸の放出にサーカディアンリズムがあるかどうか、連続暗でリズムが存続するかどうかを確かめた。連続暗の第2日目の短時間の光照射を行い、光刺激による興奮性アミノ酸放出の変動、その移送依存性等を確かめた。また、上記と同様の実験系でプッシュプルダイアリシスを行い、透析液を回収した。その結果アスパラギン酸とグルタミン酸の両興奮性アミノ酸は明暗サイクル下ではスパイク状のパターンを示しました。また明暗条件下ではアスパラギン酸とグルタミン酸の間には相関がみられ、ミーンコサイナ法で統計処理すると暗期に上昇し、明期に減少するリズムを示した。連続暗1日目ではそのリズムは減少した。このことからSCN近傍細胞外液中のアスパラギン酸およびグルタミンさん

リズムは生物時計の入力よりはむしろ出力ほ表現する内因性のリズムで、下界の明暗に修飾されて昼夜変動が増大すると考えられた。in vitro実験ではWistar系ラットの生後1週間目の子ラットの視床下部より切り出したSCN細胞のディスパーゼ培養を行っている。現在約一ケ月の期間培養を行うことが可能である。一定期間ごとの培養液を回収し、培養液中のホルモン測定を行っている最中である。AVP、VIPに関しては例数が少ないながらも、ほとんどの培養細胞で24時間に近いリズムを持っているように思われる。これから長期間における神経ペプチドの連続測定により、サーカディアンリズムの有無、リズムの位相、振幅の関係などが明らかになると思われる。in vivo実験では、12時間名12時間暗の条件下で繁殖飼育したWistar系成熟雄ラットを用いて、約10時間のSCNプッシュプルダイアリシスを行い、神経ペプチドの回収を試みた。SCNが脳底に近いために、プローブがつまりやすく長時間のプッシュプルダイアリシスを行うことが難しかった。そのため、24時間を3つの時間帯に分けそれぞれ約10時間のプッシュプルダイアリシスを行い、透析液を回収した。回収した透析液中のAVP,VIPをそれぞれRIAで測定した。現在、明暗条件下での神経ペプチドのサーカディアンリズムが、無麻酔無拘束でどのようであるか検討中である。また、もっと長期に渡ってプッシュプルダイアリシスを行う方法についても検討中である。in vitro実験ではWistar系ラットの生後1週間目の仔ラット視床下部より切り出したSCN細胞のディスパーゼ培養を行っている。培養可能期間は約一ヶ月である。連続6日間、2時間ごとの培養液の回収を行った。培養液中のAVP,VIPの測定をEIAで行った。AVP,VIPとも約20時間のきれいなサーカディアンリズムがみられ、両ペプチドの位相差は2時間以内であった。また、振幅はVIPの方がAVPよりモル濃度で5倍ほど高かった。しかし、この系に3日目にNMDAを投与すると、AVP,VIPの位相差は大きく変化し、もっとも変化したものはAVP,VIPの位相がほぼ逆転した。また、NMDA投与後12日目に測定した結果も、AVP,VIPのピーク位置は予想された時間にあった。このことから、AVP,VIPの放出にはそれぞれ異なる振動体によって調節されていると考えられる。
細菌進化を加速する環境シグナル統合機構の解明

黄色ブドウ球菌において、DNA取り込み装置の発現条件は全く未知であった。本研究ではそれらの発現を直接制御するシグマ因子SigHの活性を詳細に調べることで、「SigHは細胞集団のごく一部でのみ活性化される」という事実を見出した。さらにそのメカニズムとして、独立した2つ、すなわち、1)sigH領域の重複による新規融合遺伝子の生成による活性化機構、および2)特定の培養条件で誘導される偶発的活性化、を見出し、さらにそれらの頻度解析や実際の分子機構の幾つかを明らかにした。黄色ブドウ球菌では、特殊な環境下でコンピテンスを発現するためのシグマ因子SigHが活性化される。同培養条件でDNA取り込み装置の遺伝子群が発現するが、取り込んだDNAをゲノムに取り入れるための遺伝子群は一部発現しておらず、DNAを主に栄養源として利用している可能性が示唆された。また、sigHのコンディショナルミュータントを作成し、これを用いて実際SigHが当該条件下での発育に重要な役割を果たすことを明らかにした。なお、機能未知であったリステリア菌のSigHもコンピテンス遺伝子を正に制御することを初めて確認することができた。SigH活性化のための情報伝達系は生育環境やSigHの働きに合わせて種ごとに大きく進化したものと思われる。Clp系やAgr系など関与が推察される因子の検討に先立って、本年度はSigHの活性制御因子を網羅釣にスクリーニングする系の構築を優先して行った。具体的には、SigH依存的にupp遺伝子を発現する遺伝子操作株(upp発現細胞は5-fluorouracil添加により増殖不能となるため、カウンターセレクションが可能)とそのトランスポゾンライブラリーを作成した。現在スクリーニングを進めており、これにより本菌の特殊な環境情報伝達因子群もあわせて同定できると期待される。また、トランスクリプトーム解析によって、コンピテンス遺伝子以外にも幾つかの代謝遺伝子群がSigHの支配下にあることが示唆された。今後はこれらの代謝関連遺伝子群についても解析を進める予定である。1、SigHの活性制御因子を網羅的にスクリーニングする系を構築しスクリーニングを行った。当初はトランスポゾンライブラリーの利用を考えていたが、驚くべき事に、SigH活性化細胞は、トランスポゾン無しでも、非常に低い頻度で出現することが明らかになった。さらにそのような細胞は遺伝的に比較的安定であり、ゲノム配列の変化が原因であると考えられた。得られたミュータントの解析をいくつかの角度から行った結果、最終的にsigH遺伝子自身の変化が原因であることが見出された。変化したsigH遺伝子は元のサイズのSigHとはことなる大きさのSigH蛋白質を発現すべく変化しており、このことは抗sigH IgY抗体を用いたウエスタン解析によっても確認された。このような遺伝的な変換が、人為的な選択なしで生じているかどうかを、現在逆方向PCRを用いて検討しようとしている。いずれにせよ、新しい遺伝子活性化機構の手がかりを得ることができたと考えており、さらに詳細なメカニズムを追求していきたい。2、コンピテンス活性を、SigH活性化細胞で検出するための実験を繰り返しているが、形質転換体は得られていない。一方、SigHが制御するある代謝系にっいて、遺伝子破壊株を作成して解析した。当該遺伝子群は通常の生育にも重要であり、SigH活性のない条件でも増殖速度の著しい低下が見られた。従って、SigH活性化がどのような局面において有利に働くかについてはまだ明確な回答が得られておらず、本年度も継続して解析していきたい。1. SigH活性化細胞ではsigH遺伝子領域の再編成によって新たなsigHキメラ遺伝子が生じ、これが発現していることを明らかにした。このような遺伝子再編成メカニズムによる活性化が見出されたのは初めてのことである。さらに、SigH活性化細胞から生じるSigH消失株(復帰株)では、sigH遺伝子領域が元に戻っていることを明らかにした。すなわち、sigH領域の再編成は一過的に生じるものであらた。このことは、本遺伝子の例外的に速い進化速度の理由であることが推察された。2.本菌の形質転換(コンピテンス)にはファージ成分が必要であることが過去に報告されていたが、SigHが誘導するcomシステムとの関連はこれまで不明であった。本研究において、ファージ依存的なコンピテンスは、comシステムを必要とせず、全く別のものであることを遺伝学的に証明した。comシステムがDNA取り込み装置として働くかどうかに関しては繰り返し検証したが、現在のをころその活性を検出するには至っていない。comシステムは分泌装置蛋白質とも相同性を示すことから、今後はDNA取り込みとは異なる機能も考える必要がある。3.遺伝子重複メカニズム以外のメカニズムによっても、ある特殊環境でSigHが偶発的に活性化されることを見出した。さらに、この活性化にはagrクオラムセンシング系が関与することを明らかにしたが、これは必須ではなく、近縁種でのcom誘導システムとは全く異なる制御システムの存在が示唆された。
非対称、対称構造を持つ層状ニューラルネットの認知、記憶機構の計算論的研究

本研究では、今まで明らかにしてきた非対称構造、対称構造についての研究手法および結果を網膜レベルより上位にある視覚系の神経回路、すなわち、大脳皮質のV1野およびそれを入力とするMT野に適用して、V1野の刺激に対する方向性のベクトルの強さの観点から、研究を進め、層状ニューラルネットの次の層である、MT野のベクトルの強さが、さらに強くなることを計算論的手法により示した。本研究では、大脳皮質のV1野とそれに続くMT野の層状の回路が、非対称構造のネットワークを基本として、高次の非線形性で表わされることを計算論的に明らかにした。本研究では、ニューラルネットの非対称構造および対称構造の機能を、われわれが進めてきた、catfishなどの網膜神経回路に見られる非対称構造の機能解析の結果を、大脳皮質の視覚領の部位のV1野及びMT野に適用して、これらの大脳皮質の回路構造の特徴を計算論的に明らかにすることである。われわれはニューラルネットワークの基本構造の単位として、線形性経路および非線形性経路からなる非対称構造のネットワークについて、刺激の左右の動きに対して、どのような回路としての反応性を示すかについて、計算論的に明らかにしてきた。この結果、非線形回路構造でも、奇数次の非線形性と偶数次の非線形性を持つ非対称構造が、左右の刺激の動きに対して、きわめて、敏感であることを計算論的に明らかにしてきた。視覚機能を司るV1野及びMT野の研究はニュラルネットの層構造であり、非線形作用を分解することにより、非線形の高次までを含む、非対称構造を形成することを計算論的に示した。ここで高次の非対称性は低次の非対称回路の機能と同じになることを示した。さらに、本研究では、冗長性を有する非対称構造の並列処理による、アンサンブル処理が、ニューラルネットの特徴の一つであることから、このアンサンブル処理の機能をテキスト分類精度という別の観点からの有効性を明らかにした。本件球では、このアンサンブル処理と、ネットワークのゲインコントロールが非対称機能の構造の機能をより、強調するという示唆が得られた。この結果はニューロサイエンス分野でのV1野に比べて、MT野の方向性に関しての神経細胞がより大きな方向性の強さを示すという知見と合致している。この高次の非線形性の非対称回路は、MT野においては、非線形性を有する非対称構造の基本回路の冗長性のある回路構造となることを計算論的に示した。このことはMT野の方向性刺激に対して、強い方向性ベクトルを有することに帰着し、MT野に引き続く、MST野でのベクトル場の生成の基本要因となることを示唆することになる。ここでは、新しい混合ガウス性刺激の入力についての計算論的手法の示唆が得られた。さらに、層状ネットワークのアンサンブル処理の機能について着目し、アンサンブル処理を取り入れたテキスト分類という新しい分類処理法に展開した。
バイオフィルム形成機構に立脚した阻害法の開発

黄色ブドウ球菌の分泌タンパク質Eapと細胞壁タンパク質SasGのバイオフィルム(BF)形成と病原性への関与を調べた。EapとSasGの二重欠損のBF形成、病原性は低下したが、単独欠損では変化しなかった。以上よりEapとSasGの相補的な機能を解明した。BF形成阻害剤を探索し、norgestimate(NGM)がMRSAのBF形成を阻害することを見出した。また、NGMが細胞外マトリックスの産生を抑制することを明らかにした。黄色ブドウ球菌は、ヌクレアーゼ産生により環境中pH依存的にBF dispersalを引き起こした。BFからの遊離細菌は好中球に貪食されにくくマウスにおいて高い病原性を示した。メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)MR23株に多量に発現しているEap(extracellular adherence protein)のバイオフィルム形成メカニズムの解析を試みた。精製したEapをバイオフィルム低形成株に添加するとバイオフィルム形成を増強した。そこで、MR23株のEap欠損株を作成したが、バイオフィルム形成はほとんど影響を受けなかった。そこで細胞壁にタンパク質を共有結合させるsortese A(srtA)との二重欠損株を作成したところ著しくバイオフィルム形成阻害を認めた。このことからEapは他のタンパク質と共同してバイオフィルム形成を増強していると考えられた。黄色ブドウ球菌のバイオフィルム形成を経時的に定量すると、数時間でバイオフィルム形成が最高に達し、その後減少することを見いだした。そこで、バイオフィルムの培養上清中に破壊因子が発現してくると考えた。既に形成したバイオフィルムに一晩培養したバイオフィルム上清を添加すると、バイオフィルムが破壊されることが判明した。培養上清を画分すると、1050kDaと100kDa以上の画分にバイオフィルム破壊活性があることを見いだした。東京大学創薬オープンイノベーションセンターとの連携により、バイオフィルム形成を阻害する化合物のスクリーニングを行うため、分注ロボットと多穴プレートを用いたハイスループットスクリーニングシステムを構築した。黄色ブドウ球菌実験室株SH1000(MSSA:メチシリン感受性黄色ブドウ球菌)と臨床分離株MR23(MRSA)のバイオフィルムをターゲットとして、約60,000化合物のスクリーニングを行った。SH1000株のバイオフィルム形成阻害化合物15個、MR23株のバイオフィルム形成阻害化合物6個を取得した。黄色ブドウ球菌の細胞外分泌タンパク質Extracellularadherence protein (Eap)は、バイオフィルム形成を促進した。臨床分離株のEap単独欠損株を作製したが、バイオフィルムの形成は低下しなかった。このことよりEapは他のタンパク質との相補的に機能し、バイオフィルム形成に関与していると考え、細胞壁にタンパク質を共有結合させる膜タンパク質であるsortase A(srtA)との二重欠損株としたところ、著しいバイオフィルム形成の低下を認めた。srtAはグラム陽性菌に存在する20数種の特徴的なmotifをもつタンパク質を細胞壁に局在化できるため、これらのタンパク質のいずれかとEapが相補的に機能することでバイオフィルム形成に関与していると考えられた。そこで、細胞壁タンパク質の欠損株ライブラリーを作製した。その結果、EapとSasGの二重欠損株で著しくバイオフィルム形成が低下することを見いだした。黄色ブドウ球菌バイオフィルム形成の経時的変化を解析したところ、バイオフィルム形成後に崩壊がみられ、この崩壊メカニズムの解明を試みた。バイオフィルムの細胞外マトリクス解析から、バイオフィルム崩壊に伴いマトリクス中の核酸の分解がみられた。崩壊したバイオフィルム上清中にはヌクレアーゼ活性がみられ、ヌクレアーゼの添加によりバイオフィルムは崩壊した。以上より菌が産生するヌクレアーゼがバイオフィルムマトリクス中の核酸を分解することによってバイオフィルムの崩壊が起こることが示唆された。バイオフィルム阻害剤を探索するため、化合物ライブラリーからスクリーニングを行った。MRSAのバイオフィルム形成を阻害する化合物を21個取得した。バイオフィルム阻害活性の高い化合物についてその作用機序を解析した結果、多糖の形成を阻害することが判明した。1黄色ブドウ球菌のバイオフィルム形成において、Eapと相補的に機能する細胞壁アンカータンパク質を同定できた。2黄色ブドウ球菌のバイオフィルムの崩壊に寄与するヌクレアーゼを特定できた。3ハイスループットスクリーニングにより、MRSAのバイオフィルム形成阻害活性を示す複数の低分子化合物を取得し、作用機序の一端を解明できた。計画書の作成段階で、予想される問題点を明確にしていたことと、具体的な達成目標を定め多方面からの検討を柔軟に行ったことにより、おおむね計画通りに進んだ。また、研究代表者と分担者が互いの専門領域で柔軟に対処したことも大きな要因と言える。黄色ブドウ球菌の分泌タンパク質Extracellularadherence protein (Eap)は、バイオフィルム形成を促進することを見出した。臨床分離株(MRSA)のEap単独欠損株を作製したが,バイオフィルムの形成量は低下しなかった。このことよりEapは他のタンパク質との相互作用の結果バイオフィルム形成に関与していると考えられた。そこでEap欠損株を用い細胞壁タンパク質の欠損株ライブラリーを作製した。その結果、EapとSasGの二重欠損株で著しくバイオフィルムの形成が低下することを見出した。SasGはAドメインとBドメインの繰り返し構造から構成され,C末端にLPXTGモチーフを有している。SasGのコンプリメンテーションの解析により,LPXTGモチーフを欠き細胞壁にアンカーしないSasGはバイオフィルムの形成量を回復させないことを見出した。黄色ブドウ球菌のバイオフィルムdispersalメカニズムを解析した。

変異株を用いた解析から菌自身の産生するヌクレアーゼによってdispersalが起きていることが明らかとなった。またその働きには環境中のpHが重要であることが判明した。更にバイオフィルムdispersalに伴って菌表面の分子発現に変化が見られたことから、バイオフィルムから遊離した菌は、異なる病原性を発揮する可能性が示唆された。バイオフィルム形成阻害剤を取得するため化合物ライブラリーをスクリーニングし、黄色ブドウ球菌のバイオフィルム形成を阻害する化合物を21個取得した。特に高い活性を示した化合物について詳細な検討を行った結果、細胞外多糖と細胞外タンパク質の産生を抑制することが示された。構造類縁体を用いた解析により、活性に重要な官能基を決定することができた。また本化合物は、黄色ブドウ球菌のβラクタム系抗菌薬に対する感受性を向上させることが明らかとなった。1黄色ブドウ球菌のバイオフィルム形成においてEapと相補的に機能する細胞壁アンカータンパク質SasGを同定した。SasGのコンプリメンテーション解析の結果、LPXTGモチーフを欠く細胞壁にアンカーしないSasGはバイオフィルム形成量を回復させないことを見出した。2ハイスループットスクリーニングにより得られたヒット化合物について構造活性相関研究を行い、バイオフィルム形成阻害活性に重要な構造の情報を得ることができた。3黄色ブドウ球菌のdispersalメカニズムを解析した。黄色ブドウ球菌自らが産生するヌクレアーゼによってdispersalが起こることを示した。また、ヌクレアーゼ活性は環境中のpHが重要であることを見出した。黄色ブドウ球菌のバイオフィルム(BF)は、菌自身の産生するヌクレアーゼによってdispersalが引き起こされることを見出した。BFからの遊離細菌の病原性についてplanktonic細菌と比較したところ好中球による貪食に抵抗性を示し、またマウス感染モデルにおいて、マウス生存率を著しく低下させた。以上よりBFから遊離した菌は病原性が高くなっていることが示唆された。ハイスループットスクリーニングによって得られたnorgestimate(NGM)が黄色ブドウ球菌のBF形成を阻害することを見出した。NGMは細胞外マトリクス(ECM)内の多糖とタンパク質の量を減少と、BF形成への関与が知られるsurface protein Gやenolaseの発現低下を誘導することが示された。NGM存在下では細胞壁の肥厚化や隔壁合成異常が認められた。
ヘテロ半導体-分子ナノ構造の創製と走査型プローブ顕微鏡を用いた構造・電子状態の解析

本研究では、Si結晶面を基板として、規則的に配列したナノ構造を持つSi-Ge、Cなどのヘテロ半導体膜を調製し、その構造と電子状態を走査型プローブ顕微鏡(SPM)で解析することを第一の目的とした.このヘテロ膜上に、異種半導体材料や機能・生体分子を配向させ、機能電子材料を創製し、電気伝導性が悪い材料でも原子スケールで観察できる非接触原子間力顕微鏡(nc-AFM)を利用して、ハイブリッド材料のナノ構造を解析すること、さらに、SPMの原子・分子操作機能を利用して、ナノ構造の創製・改質の技術発展を図ることを次の目的とした.本年度は、超高真空走査型トンネル顕微鏡(STM)をAnsari博士の専用機としてフルに稼働させた.本装置は1x10^<-11>Torrの真空度を誇る高性能機である.昨年度までに、Ansari博士自身で装置のテストを重ね、Ge、C蒸着源の試作し、動作に不備がある真空機構部の補修や研究目的に適した試料ホルダーなどの製作を完了した.それらを利用して、Si(111)-7x7再構成表面をSTMで原子分解能観察し、この表面の上に、Ge、Cの超薄膜を成長させた.Si(111)7x7面にGeを様々な条件(基板温度、蒸着量、蒸着速度)で成長させ、基板温度:室温、蒸着量(膜厚):0.5ML、蒸着速度:0.005ML/minで、7x7構造の半単位胞を一つのユニットにしたハニカム状の長周期規則構造を均一に作製することに成功した.周期は約2.7nmであり、この程度の大きさをもつ分子を規則的に配列させるための基板としての応用が期待できる.この成果は、3月、9月の応用物理学会、9月の国際会議(JAISTNT2004、石川県)で発表した.また、Surface Science Letters誌に投稿し受理され、現在、印刷中(web上で公開中)である.本研究では、Si結晶面を基板として、規則的に配列したナノ構造を持つSi-Ge、Cなどのヘテロ半導体膜を調製し、その構造と電子状態を走査型プローブ顕微鏡(SPM)で解析することを第一の目的とした.このヘテロ膜上に、異種半導体材料や機能・生体分子を配向させ、機能電子材料を創製し、電気伝導性が悪い材料でも原子スケールで観察できる非接触原子間力顕微鏡(nc-AFM)を利用して、ハイブリッド材料のナノ構造を解析すること、さらに、SPMの原子・分子操作機能を利用して、ナノ構造の創製・改質の技術発展を図ることを次の目的とした.本年度は、超高真空走査型トンネル顕微鏡(STM)をAnsari博士の専用機としてフルに稼働させた.本装置は1x10^<-11>Torrの真空度を誇る高性能機である.昨年度までに、Ansari博士自身で装置のテストを重ね、Ge、C蒸着源の試作し、動作に不備がある真空機構部の補修や研究目的に適した試料ホルダーなどの製作を完了した.それらを利用して、Si(111)-7x7再構成表面をSTMで原子分解能観察し、この表面の上に、Ge、Cの超薄膜を成長させた.Si(111)7x7面にGeを様々な条件(基板温度、蒸着量、蒸着速度)で成長させ、基板温度:室温、蒸着量(膜厚):0.5ML、蒸着速度:0.005ML/minで、7x7構造の半単位胞を一つのユニットにしたハニカム状の長周期規則構造を均一に作製することに成功した.周期は約2.7nmであり、この程度の大きさをもつ分子を規則的に配列させるための基板としての応用が期待できる.この成果は、3月、9月の応用物理学会、9月の国際会議(JAISTNT2004、石川県)で発表した.また、Surface Science Letters誌に投稿し受理され、現在、印刷中(web上で公開中)である.