hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
格付取得と利益調整行動の実証研究

本研究の目的は日本の格付市場の特徴を踏まえ格付取得と利益調整行動との関係、その経済的帰結を実証的に検証することである。一般的にBBB格以上の格付は投資適格、BB格以下の格付は投資不適格に区別される。投資不適格に区別された社債は流動性が著しく低下することから、社債発行企業にとって投資適格格付の取得は非常に重要である。本年度の前半では、日本の格付市場の特徴について整理し、検証論点の明確化を行った。先行研究を整理したところ、日本においても投資適格格付を取得するインセンティブが強く存在することが明らかになった。しかし、日本における投資適格と投資不適格の区分については見解が分かれている。区分の元になった社債発行規則は、当初、無担保社債はA以上、担保付社債はBBB以上の格付の取得を求めていた。また、日本の特徴として単一格付を取得する企業が多数存在することがあげられる。そこで本研究は、日本の制度的特徴をふまえ、投資適格と投資不適格の区分に近い企業に着目し、顕著な利益調整行動が確認されるかを検証した。また、複数格付の取得が利益調整行動にどのような影響を与えるかを検証した。検証の結果、A-とBBB+の格付が付与された企業は利益マネジメントを実施していることが確認された。また、複数格付がA-とBBB+の格付が付与された企業の利益マネジメントを抑制させることも発見した。近年では、複数格付が格付の質を低下する可能性があることが主張されており、複数格付の効果について議論が分かれている。日本企業に着目することにより、単一格付と複数格付の差異をより明確に確認することができる。本研究成果は、投資適格と不適格の区分は制度的背景によって異なり得ること、また複数格付が格付の質を向上させる可能性があることを示唆しており、格付及び利益マネジメントの研究蓄積に貢献している。本年度は、当初の計画通りに研究を進展することができた。本年度の目標は、パイロットテストの実施及び結果に基づくワーキング・ペーパーの執筆であった。パイロットテストに関しては、本年度の前半に研究課題の明確化とリサーチデザインの構築、本年度の後半からデータ収集を行い研究課題の検証を行うことが具体的な目標であった。計画通り、本年度の前半には研究課題とリサーチデザインを構築した。また、本年度の後半からデータベースを契約し、必要なデータを収集した。また、データを用いてパイロットテストを実施し、仮説と一貫した結果を得ることができた。パイロットテスト実施後は、検証結果をまとめ、ワーキング・ペーパーを執筆した。本年度中にワーキング・ペーパーの執筆は完了し、執筆したペーパーは第42回EAA Annual Congressに投稿した。その結果、学会報告のアクセプトを得ることができた。以上の理由から、本年度の計画通りに研究を進展することができたと考えられる。平成31年度(令和元年度)は本年度に執筆したワーキング・ペーパーに基づいて学会報告を行い、学会でのコメントを反映し、研究成果の発展を目指すことを予定している。この計画通り、平成31年5月のEuropean Accounting Association 42th Annual Congressでの報告を予定している。学会報告のコメントを反映し、ワーキング・ペーパーを推敲する予定である。令和2年度は当初の計画通り、本年度に執筆したワーキング・ペーパーを海外学術雑誌へ投稿することを目指す。

パイロットテストに関しては、本年度の前半に研究課題の明確化とリサーチデザインの構築、本年度の後半からデータ収集を行い研究課題の検証を行うことが具体的な目標であった。計画通り、本年度の前半には研究課題とリサーチデザインを構築した。また、本年度の後半からデータベースを契約し、必要なデータを収集した。また、データを用いてパイロットテストを実施し、仮説と一貫した結果を得ることができた。パイロットテスト実施後は、検証結果をまとめ、ワーキング・ペーパーを執筆した。本年度中にワーキング・ペーパーの執筆は完了し、執筆したペーパーは第42回EAA Annual Congressに投稿した。その結果、学会報告のアクセプトを得ることができた。以上の理由から、本年度の計画通りに研究を進展することができたと考えられる。平成31年度(令和元年度)は本年度に執筆したワーキング・ペーパーに基づいて学会報告を行い、学会でのコメントを反映し、研究成果の発展を目指すことを予定している。この計画通り、平成31年5月のEuropean Accounting Association 42th Annual Congressでの報告を予定している。学会報告のコメントを反映し、ワーキング・ペーパーを推敲する予定である。令和2年度は当初の計画通り、本年度に執筆したワーキング・ペーパーを海外学術雑誌へ投稿することを目指す。今年度の研究費はデータベース利用料(月額払い)に充てている。想定よりも多くの費用が今年度に必要となったことから、本年度において研究費の前倒し請求を行った。これはデータベース利用料の支払いタイミングに起因するものである。その結果、差額分が発生した。差額分は引き続き次年度のデータベース利用料に使用する。
銅酸化物高温超伝導体の擬ギャップと超伝導ギャップ

銅酸化物の高温超伝導機構の解明にとって最も重要な擬ギャップ問題に取り組んだ。光学スペクトル測定から、擬ギャップは超伝導ギャップと共存し、超伝導前駆現象ではないことが明らかとなった。更に、擬ギャップ温度と超伝導転移温度Tcの中間で超伝導前駆現象が観測され、その温度はTcとは逆に、キャリアドープと共に減少することもわかった。このことは超伝導対形成機構に強い電子間相互作用が重要であることを示唆している。また、擬ギャップ・超伝導ギャップ共存状態が、観測される超伝導ギャップの特異な振舞の原因になっていると思われるいくつかの実験的証拠も見出した。銅酸化物高温超伝導体の積年の謎である擬ギャップの正体を突き止めるための意義ある成果がいくつか得られた。一つは、Zn置換したYBa_2Cu_3O_y超伝導体のc軸偏光の光学反射スペクトルの解析から、擬ギャップは超伝導転移温度以下でも存在していることが判明し、擬ギャップ状態が超伝導の前駆現象である可能性はなくなった。最低温度では、競合秩序である擬ギャップ状態と超伝導状態とが混在している"混合状態"ということになる。一方、光学スペクトルの詳細な解析から、擬ギャップ温度と超伝導転移温度の中間領域で、超伝導キャリアが現れる前駆現象が出現することが判明した。しかも、この前駆現象の開始温度は、キャリアドープ量が減少するにつれて上昇していき、超伝導機構にモット絶縁体秩序が関係していることを強く示唆する結果となった。擬ギャップと超伝導ギャップの関係を調べるため、伝導面外に乱れを導入して超伝導転移温度を意図的に下げたBi_2Sr_2CaCu_2O_z結晶を作製し、ラマン散乱分光からギャップ構造の変化を観測した。するとk空間の(π,π)方向を見るB_<2g>偏光スペクトルのギャップは、どんな場合にも超伝導転移温度Tcと相関するのに対し、(0,π),(π,0)方向を見るB_<1g>偏光スペクトルのギャップは、Tcの変化に対して全く応答しない場合と正の相関を見せる場合とがあることがわかった。これは面外乱れによって擬ギャップのエネルギーが全く変化しないことと関係があると思われ、B_<1g>偏光で観測されるギャップは、純粋なd波超伝導ギャップの最大値ではなく、擬ギャップの影響を強く受けたものであると解釈される。このことは、ラマン散乱スペクトルと角度分解光電子分光スペクトルの比較研究からも明らかになりつつある。このように擬ギャップの影響を超伝導ギャップが受けるという現象は、二つのギャップが実空間上で共存していることを示唆するものである。まず、YBa2Cu3Oy単結晶を用いて、酸素同位体置換効果のキャリアドープ量依存性を詳細に調べた結果、以下のことがわかった。最適キャリアドープでは同位体効果係数がほぼゼロであるが、ドープ量が減少するにつれてほぼ線形に増加することがわかった。これは、超伝導転移温度の低下と共に競合秩序が成長し、それに同位体置換効果が現れたと考えられる。このことから、キャリアドープ量減少と共に超伝導転移温度が低下するのは、何等かの競合秩序によって超伝導転移温度が抑制されているためである可能性が高い。競合秩序の候補として最も可能性が高いのが擬ギャップであるが、擬ギャップ現象が単なるスピンに関連した秩序ではなく、同位体効果を示すような電荷が関与したものであるという知見は、非常に大きな成果である。第2の成果は、擬ギャップと超伝導ギャップの関係を調べるため、同一試料で測定したラマン散乱スペクトルと角度分解光電子スペクトル(ARPES)を比較検討した結果、超伝導ギャップの組成依存性をほぼ明らかにしたことである。ARPESの実験データからラマン散乱スペクトルを計算するという試みは初めてであり、今回その計算モデルを確立したこと自体、大きな成果である。さらに、そのモデルを使った計算で、超伝導ギャップエネルギーがラマン散乱の偏光方向により異なるドープ量依存性を示すことの原因を解明しつつある。ギャップ最大値を示す運動量空間付近では、超伝導ギャップが著しく擬ギャップの影響を受けて増大しており、その影響は角度分解光電子分光のほうがラマン散乱より大きく受けていることがわかった。昨年度までの成果をもとに更に研究を進め、次のような成果があった。まず、同一試料で測定したBi2Sr2CaCu2Ozのラマン散乱スペクトルと角度分解光電子分光(ARPES)スペクトルについて、両者の定量的な比較を行うことに成功した。ARPESの実験データから久保公式を用いて、ほぼ完ぺきにラマンスペクトルを再現できることがわかった。

このことから、これまで謎であったB2g偏光のラマンスペクトルで見られる超伝導ギャップの組成依存性が、d波ギャップの大きさの変化に依るのではなく、超伝導に寄与するフェルミ面領域が減少しているためであることがわかった。d波超伝導ギャップはARPESでの測定結果の通り、組成依存していないことが結論づけられた。また、B1g偏光のギャップエネルギーは、ARPESデータからは再現できず、この運動量空間領域のギャップが擬ギャップの影響を強く受けていること、その影響の程度は測定プローブごとに異なること、も明らかとなった。もう一つの成果は、昨年度までに発見した“光学スペクトルに現れる高温での超伝導前駆現象"が普遍的なものであるかどうかの確認である。c軸偏光スぺクトルにおいて観測された超伝導前駆現象が、ab面内方向でも観測できるかどうか、同じYBa2Cu3Oy結晶を用いて測定を試みた。その結果、面内偏光では前駆現象が非常に見えにくいことがわかった。これは、常伝導状態ですでに反射率が高いため、超伝導転移による反射率の増加が観測しにくいことによるものと思われる。反射型テラヘルツ時間領域分光を用いて、種々の組成の(La,Sr)2CuO4について超伝導前駆現象の探索も行った。どの組成についても、超伝導転移温度より10K程度高温から超伝導揺らぎが観測されたが、Y系で見られたような非常に高温からの前駆現象は観測できなかった。これも測定手法の精度の問題によるものと考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。物性物理学26年度が最終年度であるため、記入しない。擬ギャップの起源については、かなり明確な結論が出つつある。それに加えて、超伝導前駆現象を光学スペクトルで観測できたこと、またそのキャリアドープ依存性を調べられたことは、超伝導機構解明の道筋を示す成果となった。擬ギャップの起源については、超伝導前駆現象ではなく、むしろ超伝導と競合する現象であるということが結論できた。どのような競合秩序であるかは確定できていないが、同位体置換効果が現れるような電荷秩序である可能性が高いことを明らかにした。加えて、超伝導前駆現象を光学スペクトルで観測できたこと、またその前駆現象温度がキャリアドープ減少と共に上昇することを見出したことは、モット絶縁体をもたらす強い電子相関が超伝導対形成機構に深く関与していることを示唆するものである。この結果は、超伝導機構解明に大きく近づいた成果と言える。更に、角度分解光電子スペクトルとラマン散乱スペクトルの比較も順調に進んでおり、組成依存性などさらにデータを積み重ねることで、超伝導ギャップと擬ギャップの共存状態を明らかにできる目途が立ちつつある。昨年度見出した超伝導前駆現象が、銅酸化物高温超伝導体の普遍的現象であるかどうかを確認するための実験を行う。また、擬ギャップと超伝導ギャップの相互干渉について明らかにすべく、ラマン散乱や角度分解光電子分光の解析を行う。これまでに見出した超伝導前駆現象が、銅酸化物高温超伝導体の普遍的現象であるかどうかを確認するための実験を行う。具体的には、YBa2Cu3Oyの面内偏光スペクトルで前駆現象を観測すること、それが成功した場合には、他の高温超伝導体についても確認する。
光線力学活性を利用したドラッグデリバリーシステムの開発

光線力学療法は、光増感剤を光照射により励起し、細胞殺傷能の高い一重項酸素を産生させることで、標的細胞を死滅させるガン治療法の1つである。本研究課題では、薬剤の放出制御や安定化、病巣への選択的輸送などにより薬の副作用を押さえ薬効を高めるドラックデリバリーシステムに、光線力学療法の原理を応用し、光増感剤が産生する一重項酸素を薬剤キャリアに作用させ、その構造を変化させることで薬剤の放出制御するシステムの構築を目指した。本課題は、フラーレンやポルフィリンなどの光増感剤が、光励起することで一重項酸素を発生する性質を利用し、ドラッグデリバリーシステムに用いられている薬剤キャリアーを一重項酸素により構造変化を受ける様に改良を加え、薬剤キャリアー内に、光増感剤と抗癌剤などの薬剤を同時に内包させることで、光照射により薬剤キャリアーの構造を変化させ、内包する薬剤の放出制御が可能なドラッグデリバリーシステムの開発を行なうことを目的としている。本年度は、一重項酸素が不飽和脂質と反応性する性質を利用し、不飽和脂質からなるリポソーム内にフラーレンを導入し、光照射依存的な薬剤放出制御が可能かの検討を行った。その結果、リポソーム内に蛍光色素とフラーレンを同時に内包させたモデル実験系において、光照射依存的に蛍光色素が漏出することが確認された。この蛍光色素の漏出は、フラーレンを内包していないリポソームでは観察されないことより、不飽和脂質からなるリポソームが一重項酸素感受性薬剤キャリアーのプラットホームとして有用であることが示唆された。また、これまでに、生体内に存在し、一重項酸素と高い反応性を有していることが報告されているアミノ酸、L-ヒスチジンが、リポソームに内包したフラーレンが産生する一重項酸素と反応性を有するかの検討を行った。その結果、フラーレン内包リポソームの光依存的な一重項酸素を介した細胞障害活性が、L-ヒスチジン存在下で著しく阻害されることより、フラーレン内包リポソームより産生された一重項酸素がL-ヒスチジンと反応することが確認された。今後は、この生体適合性の高いL-ヒスチジンと一重項酸素との反応性を利用し、不飽和脂質からなるリポソームの系に導入することで、一重項酸素感受性が高い薬剤キャリアーの開発を行う予定である。本課題は、光増感剤が一重項酸素を産生する性質を利用し、薬剤キャリアを一重項酸素により構造変化を受ける様に改良を加え、光増感剤と抗癌剤などの薬剤を同時に内包させることで、光照射により内包する薬剤の放出制御が可能なドラッグデリバリーシステムの開発を行なうことを目的としている。昨年度においては、不飽和脂質からなるリボソームをキャリアとし、光増感剤としてフラーレンを導入することで、光照射依存的に擬似薬剤として内包させた色素の放出を制御することに成功していた。本年度では、用いる不飽和脂質における不飽和結合の数(一重項酸素との反応部位)が与える影響に関しての検討を行った。その結果、リボソームを構成する脂質のアルキル鎖において、不飽和結合が1つ存在すれば、それ以上存在する場合と同等に擬似薬剤が放出されることが明らかとなった。一方、不飽和脂質からなるリボソームは、飽和脂質からなるリボソームとの比較実験において、光を照射していない定常状態においても擬似薬剤の放出が観察されることより、定常状態における安定性の向上が必要であることが示唆された。そこで、飽和脂質からなるリボソームに、一重項酸素との反応部位としてコレステロールを導入し、光増感剤からの一重項酸素の産生に与える影響を、光増感剤の細胞殺傷能を比較することで評価した。その結果、コレステロールを導入した光増感剤含有リボソームにおいて、コレステロールを導入していないものと比較し細胞殺傷能の低下が観察されたことより、光増感剤から産生された一重項酸素がコレステロールと反応し細胞殺傷能が低下していることを示唆する結果が得られた。今後は、コレステロールを導入した飽和脂質からなるリボソームを用い、光照射時における擬似薬剤の放出を検討するとともに、コレステロール以外にも一重項酸素と反応する分子をリボソームに導入することで、システムの向上を目指す予定である。
リッチ・ソリトンの部分多様体論に基づいた研究

微分幾何学において、曲面や部分多様体のガウス写像は、その幾何学的性質を調べるうえで基本的に重要である。球面内の向きつけられた超曲面については、1997年にB.Palmerが、ユークリッド空間の向きつけられた2次元部分空間のなす、実グラスマン多様体へのガウス写像を考察し、その像が実グラスマン多様体の自然なケーラー構造に関してラグランジュ部分多様体であることをしめした。本研究では、正則断面曲率が一定である、複素射影空間内の実超曲面に対して、複素ユークリッド空間の複素2次元部分空間のなす、複素グラスマン多様体へのガウス写像を構成し、ホップ超曲面の場合にはその像がケーラー部分多様体となることを示した。リッチ曲率が0であるケーラー多様体、すなわちカラビ・ヤウ多様体内の特殊ラグランジュ部分多様体は、その重要性から幾何学のみならず数理物理においても盛んに研究されている。関連して、実ユークリッド空間あるいは球面内のaustere部分多様体から、複素ユークリッド空間あるいは球面の余接束内の特殊ラグランジュ部分多様体が構成できることが知られている。本研究では、複素射影平面内の実超曲面の、Hopfファイブレーションによる逆像であるような5次元球面内の超曲面でaustereとなるものについて考察した。その重要な例として、4つの異なる一定主曲率をもつ極小等径超曲面があるが、複素射影平面内のHopf超曲面による特徴づけを与えた。さらに、複素射影平面内の実超曲面がLevi平坦であるとき、そのHopfファイブレーションによる逆像であるような5次元球面内の超曲面でaustereとなるものを新たに構成した。一方、複素射影空間内のHopf超曲面は、focal mapの階数が一定という条件の下で、複素部分多様体上のtubeと同じであることが知られているが、本研究ではHopf超曲面の複素2-平面グラスマン多様体へのガウス写像の像が、四元数ケーラー構造に関する全複素部分多様体であることを明らかにした。同様に、複素双曲空間内のHopf超曲面についても、不定値複素2-平面グラスマン多様体へのガウス写像の像が、パラ四元数ケーラー構造について性質の良い部分多様体であって、構造ベクトル場の主曲率の値によって大きく3通りに分けられるクラスを統一的に捉えることができた。球面内のaustere部分多様体は、その球面の余接束に導入されるCalabi-Yau計量に関する特殊Lagrange部分多様体を構成できるので、重要かつ興味深い研究対象であるが、本年度5次元球面内のaustere超曲面で、単位複素数の作用で不変なものについて研究した。特に、対応する複素射影平面内の3次元実超曲面がHopf超曲面である場合には、そのHopf超曲面は等質で複素2次曲面上のtubeであることを示し、この時の5次元球面内のaustere超曲面は、4つの異なる主曲率をもつ等径超曲面であることを示した。また、複素射影平面内の実超曲面がLevi-flatであるときには、全測地的実射影平面によって葉層化されていて、以前の研究より、特殊ユニタリー群SU(3)の1-パラメーター部分群による実射影平面の軌道となっていることが分かった。また対応する5次元球面内のaustere超曲面は4つの異なる主曲率をもつことが具体的な計算により分かった。そのようなaustere超曲面は等径超曲面以外には知られておらず、新しい例である。リッチ・ソリトンの部分多様体論的考察については、定曲率空間内の超曲面で特にgradient Ricci solitonについて、Potential関数のレベル超曲面に着目して研究を進めている。さらに、複素空間形内のHopf超曲面について、(不定値)2次元部分空間のなす複素Grassmann多様体へのGauss写像を考察することにより、複素射影空間内の場合には、四元数ケーラー構造に関する全複素部分多様体、複素双曲空間の場合にはそのHopf曲率に応じて、totally complex, totally para-complexあるいは冪零的な構造に関する不変部分多様体が対応することを示した。複素射影空間および複素双曲空間内の実超曲面について、複素ユークリッド空間内の複素2次元部分空間が作るグラスマン多様体へのガウス写像を定義して、特に複素射影空間の実超曲面の構造ベクトル場が主曲率ベクトルである「ホップ超曲面」の場合には、ガウス写像の像が複素グラスマン多様体の四元数ケーラー構造に関して「全複素部分多様体」であることを示した。特に、複素射影空間のホップ超曲面は、常に(ガウス写像の像である)ケーラー多様体上のサークルバンドルの全空間となっていることが示された。また、複素双曲空間の「ホップ超曲面」については、その(一定)ホップ主曲率の値に応じて、ガウス写像の像も3つの場合に分けられて、それらがすべて(不定値)複素グラスマン多様体のパラ四元数構造を用いて統一的に理解できることもわかった。また、複素2ー平面のなす複素グラスマン多様体内全複素部分多様体から複素射影空間内のホップ超曲面を逆構成することも、複素グラスマン多様体のツイスター空間を用いて示すことができて、現在論文を準備中である。また、複素双曲空間のホップ超曲面については、そのガウス写像の像において、不定値複素グラスマン多様体の自然なニュートラル計量からの誘導計量が退化するので、光的部分多様体を考えていく必要がある。

また、複素射影空間内の実超曲面の、ホップファイブレーションによる逆像となっているような、奇数次元球面内の超曲面がリッチ・ソリトンとなっている場合についても、研究中である。複素双曲空間内の実超曲面について、複素ミンコフスキー空間内の不定値2次元部分空間の成す、複素グラスマン多様体への「ガウス写像」を考察することにより、複素双曲空間内のホップ超曲面の特徴付けを与えた。複素双曲空間内のホップ超曲面については、そのホップ主曲率の絶対値が大きい場合には、複素射影空間内のCecil-Ryanによる著名な結果と同様に、複素部分多様体上の半径一定のチューブとなることが(対応するfocal mapの階数が一定という条件の元で)Montielによって示されていた。一方で、そのホップ主曲率の絶対値が小さい場合には数年前にIveyが微分式系の理論により、その構造定理を示した。しかしながら、両者の関係は明確ではなく、その中間の場合の構造もわかっていない。本研究では上記のガウス写像を用いて、複素双曲空間内のホップ超曲面の構造を統一的に把握することができた。それらは、そのホップ主曲率の絶対値によって大きく3つの場合に分けられるが、パラ四元数ケーラー構造を用いて、「ケーラー構造」、「パラケーラー構造」と「べき零的構造」と対応することが分かった。その結果は、Topology and its application誌に掲載されたのとともに、ブルガリアのVarnaおよび首都大学東京で開催された国際研究集会で講演した。また、複素射影空間内の測地的超球面で、その半径がある値以上であるものを、実超曲面の各点を通る「外的測地線」によって特徴づけた。複素射影空間および複素双曲空間内の実超曲面の、複素グラスマン多様体へのガウス写像を用いた考察は、特にホップ超曲面の構造の統一的な理解に重要な役割を果たすものであり、学術論文を発表するのと共に、様々は国際研究集会で発表してきた。複素射影空間内のホップ超曲面については、focal写像の階数に関する付帯条件の下でその構造定理が知られていたが、本研究では一般の実超曲面から(複素2次元の部分空間が作る)複素グラスマン多様体へのガウス写像を考察することにより、ケーラー多様体上の円束の全空間となっていることが示せた。逆に、複素2平面のなす複素グラスマン多様体のツイスター空間内の、(正則)ルジャンドル部分多様体に対して、その上の円束を複素射影空間内の(特異点をもつかもしれないが)ホップ超曲面として実現できることがわかった。このとき、複素2平面のなす複素グラスマン多様体のツイスター空間と、複素射影空間の(向きつけられた)測地線(あるいは、測地的同心円)の空間が自然に同一視できることが本質的に重要である。複素双曲空間のホップ超曲面については、複素双曲空間の正則断面曲率を4とするときに、ホップ超曲面の構造ベクトル場の(一定な)主曲率の絶対値が2を境にして3通りに分かれる。2より大きい場合は、複素射影空間の場合と同様な構造定理が知られていたが、2未満の時には数年前に全く異なる構造定理が得られている。本研究では、複素双曲空間内の実超曲面に対して、複素ミンコフスキー空間内の不定値2平面のなす複素グラスマン多様体へのガウス写像を考察することにより、そのパラ四元数構造を用いてホップ超曲面の統一的な構造定理を得ることができた。この場合も、複素双曲空間内の全測地的複素双曲直線における「測地線」「ホロサイクル」
水疱性角膜症に対する新しい角膜内皮移植術（DMEK）の確立と、術後視機能の解析

本研究では、最先端の角膜内皮移植である、DMEK(Descemet's Membrane Endothelial Keratoplasty)の術式の確立と術後視機能の解析を試みた。DMEKとは、水疱性角膜症に対する角膜内皮のみを移植する技術であり、術後視力が良く、回復が早く、拒絶反応が生じないなど様々な利点を有するが、難易度が高いのが問題である。今回の研究では、当初の予定のごとく、DMEKの際のデスメ膜を剥離する器具、微細な空気を注入する器具などを開発することが出来た。さらに、共焦点顕微鏡や前眼部光干渉断層計を用いて、DMEK術後角膜の微細な生体構造を解析することに成功した。角膜内皮細胞が様々な原因で傷害されると、角膜が浮腫状に混濁して視力が極端に低下し、最終的に激しい痛みを伴う水疱性角膜症を発症する。これまでは「全層」角膜移植術が唯一の根治的手術療法であった。ただし、本術式は角膜全層切開に起因する眼球の脆弱性、縫合糸に関連した感染症、拒絶反応、高度角膜乱視、術中駆出性出血など様々なリスクを伴っている。近年、角膜内皮のみを交換する手術(角膜内皮移植術)が可能となり、様々な術式の改良を経て、現時点ではDSAEK(Descemet's Stripping Automated Endothelial Keratoplasty)が水疱性角膜症に対する第一選択の手術術式として欧米を中心に行われている。ごく最近、デスメ膜と内皮細胞のみを移植する究極の角膜内皮移植術であるDMEK(Descemet's Membrane Endothelial Keratoplasty)が提唱され、欧米のごく一部の術者の間で実験的に試みられている。ただし、この手術の難易度は極めて高く、一般眼科医が行うには、更なる技術革新と専用器具の開発が必要である。また、術後の詳細な視機能の評価や、術後角膜の組織学的な解析はまだ行われていない。今回の研究では、レーザー共焦点顕微鏡と前眼部光干渉断層計を用いたDMEK後角膜の超微細構造の詳細な生体解析(2次元および3次元構造)とその経時的変化の解析を行い、DMEK術後にはDSAEKと比較してドナーレシピエント層間の混濁が少ないことを見出し、それがDMEK術後の高視力に関係する可能性を見出した。さらに、デスメ膜の剥離を安定して行えるドナーパンチホルダーの開発に成功した。また、ドナーを接着させる際に微小な空気を前房内に注入する必要があるが、それを可能とする33ゲージカニューラの開発にも成功した。本年度の研究では、レーザー共焦点顕微鏡と前眼部光干渉断層計を用いてDSAEKとDMEK後角膜の2次元ならびに3次元構造を明らかにし、DSAEK・nDSAEKとの違いを探求することである。いずれの研究においても、既にpreliminaryな解析が終了し、いずれのデータもOphthalmology誌に掲載された。また、DMEK後の他覚的視機能(視力、コントラスト感度、高次収差など)の解析を進めているところである。さらに、DMEK関連器具の試作にも成功し、実験は順調に経過している。今回の研究の目的は、デスメ膜と角膜内皮細胞層のみからなる角膜内皮シートを移植する最新の角膜内皮移植術(DMEK)の術式の確立と術後視機能の評価である。

本術式は技術的な難易度が極めて高いため、安定した術後成績を得るための専用器具の開発を予定していたが、当初の計画どおり、デスメ膜を除去する器具、ドナー作成を安定して行える器具、ドナーのセンタリングに有効な器具を開発することに成功した。また、レーザー共焦点顕微鏡や前眼部光干渉断層計などを用いたDMEK後角膜の超微細構造の詳細な生体解析(2次元および3次元構造)とその経時的変化の解析を行った。これらの研究から、日本人の水疱性角膜症眼に対しても安全にDMEKを行うことが可能となった。本研究では、最先端の角膜内皮移植である、DMEK(Descemet's Membrane Endothelial Keratoplasty)の術式の確立と術後視機能の解析を試みた。DMEKとは、水疱性角膜症に対する角膜内皮のみを移植する技術であり、術後視力が良く、回復が早く、拒絶反応が生じないなど様々な利点を有するが、難易度が高いのが問題である。今回の研究では、当初の予定のごとく、DMEKの際のデスメ膜を剥離する器具、微細な空気を注入する器具などを開発することが出来た。さらに、共焦点顕微鏡や前眼部光干渉断層計を用いて、DMEK術後角膜の微細な生体構造を解析することに成功した。本研究では、レーザー共焦点顕微鏡と前眼部光干渉断層計を用いてDMEK後角膜の2次元ならびに3次元構造を明らかにし、DSAEK・nDSAEKとの違いを探求することが第一の目的であるが、既にpreliminaryな解析が終了し、いずれのデータもOphthalmology誌に掲載された。また、DMEK後の他覚的視機能(視力、コントラスト感度、高次収差など)の解析を進めているところである。さらに、DMEK関連器具の試作にも成功し、実験は順調に経過している。眼科学今後は、DMEK後角膜の微細構造の生体解析をされに進め、さらに、米国アシコ社との協力により、新たなDMEK専用器具の作成を行い、日本人眼に適したDMEKの手術手技の確立をめざす。当初の目的である、DMEKを安全に行うための器具の作成に成功した。ひとつはデスメ膜の剥離を安定して行えるドナーパンチホルダーであり、もうひとつは、ドナーを接着させる際に微小な空気を前房内に注入するための33ゲージカニューラである。また、レーザー共焦点顕微鏡と前眼部光干渉断層計を用いたDMEK後角膜の超微細構造の詳細な生体解析(2次元および3次元構造)とその経時的変化の解析を行い、DMEK術後にはDSAEKと比較してドナーレシピエント層間の混濁が少ないことを見出し、それがDMEK術後の高視力に関係する可能性を見出した。今後の研究の方向として、DMEK専用器具の更なる開発や、DMEK後の他覚的視機能の解析を予定している。具体的にはDMEK後患者、DSAEK後患者、nDSAEK後患者、全層移植後患者について、術後視力、角膜内皮細胞密度とその減少率、コントラスト感度測定、高次収差(オクルス社製前眼部解析装置ペンタカムを使用)、眼圧の測定を行い、他覚的な視機能検査を行う予定である。また、得られたデータについて、Statviewソフトウェアを用いた統計解析を行い、DMEK後患者とDSAEK/nDSAEK/全層角膜移植術後患者群間の視機能に差があるかどうかを評価する予定である。次年度に当該研究の成果を海外で発表するための旅費が必要なため、残しておく必要が生じたため。2014年5月と10月に米国にて研究発表を行う予定があり、その際に旅費として使用する予定である。
生体情報系における糖鎖の生理機能の研究

多細胞生物の細胞社会は相手を認識し、相手に認識されるながら情報を交換することで成立している。細胞外の情報伝達の多くは糖鎖によって行なわれている。ところが糖鎖の構造は複雑で、長年、適当な解析手段がなく化学合成も困難であったため、すでに単離された糖タンパク質の中でも糖鎖部分の解析は不十分であった。そのため糖鎖の構造と機能や生合成・修飾過程に関する統一的理解にも達していない。生体情報でオリゴ糖は通常、脂質やタンパク質と結合しており、細胞質、細胞膜そして細胞外液や細胞外マトリクスに複合糖質として存在している。糖鎖機能の重要性について幾つか提唱されているが、糖鎖の多様性を統一して説明することはできない。本研究では複合糖質糖鎖の機能について、有機合成化学による方法(プロテオグリカンの糖鎖部分、GPIアンカー、糖タンパク質の糖鎖部分、糖脂質)、遺伝子工学的手法(ラット胎盤性ラクトジェンやウマ絨毛性性腺刺激ホルモンのcDNAクローニングとそれらの遺伝子組み替えタンパク質の発現)、生物現象に関連した糖資質の組成の生化学的手法(ラット胎盤の解析)および糖鎖抗体やレクチンを用いた形態学的手法(マウス胎盤細胞、ヤギ精巣細胞)などを駆使して研究した。申請者らは、hCGの糖鎖のなかでNー結合型糖鎖の機能を解明する目的で、既に構造解析されている糖鎖の中で特異な構造を選択し、それらの合成研究を行なってきた。その成果として、hCGに特異的な5ないし7糖単位の化学合成に世界で初めて成功している。また、糖タンパク質の糖鎖修飾に重要なG1c_3ManーOCH_2CCH_2H_3を合成し糖分解酵素の糖鎖認識部位の特異性に対する立体構造の解析を行った。さらに、微生物関連糖鎖として、新たな複合糖質構造として注目されているトリパノソ-マ・ブルセイのGPIアンカ-の糖鎖部分の中核7糖鎖の化学合成を行ない、その後、その全合成に成功した。また、大腸菌との接着に関与するグロボ系糖脂質の合成にも成功した。申請者らは先に、rPLで妊娠中期に分泌されるrPLーIはその分子量の約50%が糖鎖であり、タンパク質との結合部で糖鎖を切断すると受容体に全く結合しなくなることから、糖鎖部分がその生理作用に重要であること、この糖鎖は一連の糖鎖切断酵素実験より、複合型の糖鎖であることを明らかにした。これらを含む糖蛋白質(胎盤性ラクトジェン、妊馬血清性性腺刺激ホルモン、αーガラクトシダ-ゼ)の糖鎖部分について糖鎖のピリジルアミノ化による蛍光標識法を用いた構造解析と糖鎖切断酵素による機能解析の解析を開始した。さらに、下垂体膜蛋白(TSP)膜糖脂質生殖腺分化関連糖質の生化学的・組織化学的手法による細胞種と細胞内局在の決定を行ない、TSPはプロラクチン細胞特異的な膜タンパク質であることを明らかにした。また、ラットの胎盤の糖脂質について解析したところ、時期特異的に現われる特異糖脂質が存在することが明らかになった。申請者らは、hCGの糖鎖のなかでN-結合型糖鎖の機能を解明する目的で、既に構造解析されている糖鎖の中で特異な構造を選択し、それらの合成研究を行なってきた。また、糖タンパク質の糖鎖修飾に重要なGlc3Man-OCH2CH2CH3を合成し糖分解酵素の糖鎖認識部位の特異性に対する立体構造の解析を行った。さらに、微生物関連糖鎖として、新たな複合糖質構造として注目されているトリパノソーマ・ブルセイのGPIアンカーの糖鎖部分の中核7糖鎖の化学合成にを行ない、その後、その全合成に成功した。これらに加えて本年度はヒト赤血球膜成分であるグリコホリンAのN端側ペンたペプチドの合成にモデル系で成功した。申請者らは先に、rPLで妊娠中期に分泌されるrPL-Iは複合型の糖鎖であることを示した。新たに妊娠中期ラクトジェンPL-Imの遺伝子クローニングとアミノ酸配列を決定した。興味深いことにPL-lmはPL-IとPL-Ivのモザイク構造と取り、PL-lm独自の配列は存在しない。

PL-IとPL-Ivは異なった糖鎖を有していることから、PL-Imの糖鎖構造の解析により貴重な糖鎖付加情報が得られることが期待される。また、妊馬血清性性腺刺激ホルモン遺伝子α、βサブユニットの遺伝子クローニングも成功した。これらを基発現系を確立しピリジルアミノ化による蛍光標識法を用いた構造解析と糖鎖切断酵素による機能解析の解析を行う予定である。また、ラットの胎盤の糖脂質について解析したところ、妊娠中期にはGM3が多く、後期にはGD3が増加すること、それに伴い、シアル酸転移酵素の活性が上昇することが明らかになった。これと並行して、ラット栄養膜細胞腫瘍株RCHO-1の解析も行い、正常ラットの胎盤と糖脂質組成はほぼ同じであることが明らかになった。申請者らは、糖タンパク質の糖鎖修飾に重要なGlc_3Man-OCH_2CH_2CH_3を合成し、糖分解酵素の糖鎖認識部位の特異性に対する立体構造の解析を行った。また、微生物関連糖鎖として、新たな複合糖質構造として注目されているトリパノソーマ・ブルセイのGPIアンカーの糖鎖部分の中核7糖鎖の化学合成に成功した。さらに、ヒト赤血球膜成分であるグリコホリンAのN端側ペンタペプチドの合成にモデル系で成功した。糖脂質では、グロボ系糖脂質、GD2、神経細胞表面に存在する糖エピトープである硫酸化グルクロン酸含有スフィンゴ糖脂質の化学合成に成功した。申請者らは妊娠ラット血清中より精製したPL-αが親水性、WGAレクチンに対する結合性、抗PL抗体反応性をPL-Iと異にする、新規妊娠中期特異的PLであることを明らかにした。さらに、新たに妊娠中期に発現されているPL-Imの遺伝子クローニングとアミノ酸配列を決定した。バキュロウイルス-昆虫細胞タンパク質発現系を完成させた。PMSGを精製し、4種のアイソフォームに分離することに成功した。PMSGのアイソフォームは、それぞれの糖鎖構造の違いにより異なるFSH・LH活性を有することが期待された。下垂体膜表面のプロラクチン分泌に関係した膜タンパク質であるTSPに対する、数種類の新たな単クローン抗体の作製に成功した。胎盤ガン由来の株化培養細胞Rcho-1をin vitroで培養するとCMH,CTH,GM3が、同細胞を腎被膜下に移植した場合にはGD3が現われることが示された。申請者らは、これまでに、糖タンパク質の糖鎖修飾に重要なGlc_3Man-OCH_2CH_2CH_3を合成し、糖分解酵素の糖鎖認識部位の特異性に対する立体構造の解析を行ってきた。また、微生物関連糖鎖として、新たな複合糖質構造として注目されているトリパノソーマ・ブルセイのGPIアンカーの糖鎖部分の中核7糖鎖の化学合成と、ヒト赤血球膜成分であるグリコホリンAのN端側ペンタペプチドの合成にモデル系で成功した。糖脂質では、グロボ系糖脂質、GD2、神経細胞表面に存在する糖エピトープである硫酸化グルクロン酸含有スフィンゴ糖脂質の化学合成に成功している。また、先に申請者らは妊娠中期に発現されている胎盤特異糖タンパク質PL-Imの遺伝子クローニングとアミノ酸配列を決定に成功した。本年度はバキュロウイルス-昆虫細胞を用いた糖タンパク質発現系を完成させ、糖鎖を有する遺伝子組換えPL-Im(rPL-Im)を生産した。rPL-Imはラット肝臓の受容体に結合することが示された。
高次元データの理論と方法論の総合的研究

ノイズ掃き出し法とクロスデータ行列法という2つの高次元PCAを考案した。固有値にパワースパイクモデルを提唱し、固有値・固有ベクトル・主成分スコアの一致推定を与えた。バンド幅信頼領域・2標本問題・判別分析・変数選択・回帰分析・パスウエイ解析等の推測に、先駆的成果をあげた。高次元の特徴量に不偏推定を低コストで与える拡張クロスデータ行列法を考案し、相関係数ベクトルの検定に応用した。多群判別分析を考え、線形判別・幾何学的判別・特徴抽出判別がスパース正則化分類器に優り、誤判別率は高次元で零になることを証明した。研究成果は医学やビッグデータ等多くの領域に応用でき、既存の方法よりも低コスト且つ高精度である。青嶋と矢田は、高次元データの共分散行列の幾何学的構造を解明し、それに基づいて2つの推定法を提案した。一つは「ノイズ掃き出し法」という幾何学的構造に依存した方法、他方は「クロスデータ行列法」というノンパラメトリックな方法である。これらは固有空間の次元数推定、固有値・固有ベクトル・主成分スコアのPCA、クラスター分析などを高次元データで扱う際に、従来の方法論と比べ圧倒的な威力を発揮する。また、青嶋と矢田は、バンド幅信頼領域、2標本問題、2次判別分析、変数選択、LASSO、パスウエイ解析などについて、高次元データに対して精度を保証する新しい推測理論を提案した。従来の統計学の土台になっている大標本漸近理論では、高次元データの推測理論を支えきれない。青嶋と矢田により大標本漸近理論に替わる高次元漸近理論の構築に成功したことが、研究の発展に繋がった。さらに、青嶋と矢田は、異常値が混在する高次元空間における潜在分布の推定を行い、β-ダイバージェンスとLASSOに基づくモデル選択基準を提案した。赤平は、母数の実数値関数が整級数展開可能であるときに、完備十分統計量に基づく(その関数の)一様分散不偏推定量の構成法を発見した。また、非正則な場合に統計量の情報量損失の非正則性に関する構造を解明した。佐藤は、性能の向上を目的としたファジィクラスタリングに基づくPCAを提案した。さらに、ノイズデータに対する非線形クラスタリングモデルにおいて、学習に基づく方法を提案した。青嶋と矢田は、高次元データの様々な統計的推測について、特徴量の不偏推定量を統一的に与えるための方法論として「拡張クロスデータ行列法」を考案した。高次元データの相関係数ベクトルの検定に応用して、各種特徴量の不偏推定量にについて検定統計量を構築し、高次元における漸近正規性を証明した。また、拡張クロスデータ行列法によって与えられる不偏推定量が、母集団分布にガウス性の条件を課して得られる先行研究の不偏推定量と、同等の漸近分散を有することを証明した。なお、先行研究の不偏推定量はガウス性の仮定が崩れると不偏性をもたず、分散は有界にさえならない。それに対して、拡張クロスデータ行列法で与えられる不偏推定量は、分布の仮定に依らず、常に不偏性を有し漸近分散を保証する。検定統計量の漸近正規性にについて、有意水準と検出力を漸近的に目標値に近づけるための標本数を推定して、検定の精度保証を理論的に証明した。さらに、高次元データに対する多重検定の理論も構築した。青嶋と矢田は、高次元データのパターン認識について、kクラスの分類問題を考えた。高次元において誤分類率がゼロになることを理論的に保証する、極めて単純な判別方式を考案した。赤平と大谷内は、切断指数型分布族における関心のある母数の最尤推定量を研究し、局外母数を既知とした場合と未知とした場合に、漸近正規性を漸近展開によって証明した。小池は、ベイズ推測における事前分布の情報量を、標本数に換算するための基準を研究し、それが先行研究の問題点に解決策を与えることを示した。佐藤は、高次元データの分類手法を研究し、分類の不確定性を積極的に認める方法として知られているファジィクラスタリング手法に注目し、高次元データに滴用するための方法を提案した.青嶋と矢田は、高次元データの固有空間を正しく表現するためのパワー・スパイクモデルを提唱し、固有空間の推測を精密に研究した。本研究課題で開発したクロスデータ行列法が従来型PCAの性能を遥かに凌ぐことを、理論的に証明し且つ数値的に明らかにした。また、遺伝子ネットワークの推定に、計算量の問題を克服するための拡張クロスデータ行列法の応用を研究した。研究成果について、青嶋は2013年7月に米国で開催されたFourth International Workshop in Sequential Methodologiesで1時間の基調講演を行い、満員の会場から多数の質問を受け、高い関心を集めた。

青嶋と矢田は、同年8月に香港で開催されたThe 59th World Statistics Congressの招待セッション、同年11月に開催された韓国統計学会の招待セッションでも招待講演を行い、他にも米国と台湾の幾つかの大学から招聘を受けて招待講演を行った。青嶋と矢田の一連の研究は、日本統計学会研究業績賞受賞者特別寄稿論文として出版され、さらに、特徴ある研究として日米研究インスティチュート(USJI)リサーチレポートで紹介された。佐藤は、高次シンボリックデータに適用可能な方法として、分類構造に基づく相関を用いたPCAとその応用について研究した。赤平と大谷内は、切断分布族の位置母数推定問題において、最良位置共変推定量と荷重推定量を漸近集中確率の観点から比較検討した。小池は、ベイズリスクの下界を改良する不等式を与え、さらに、裾従属係数と弱裾従属係数の接合関数との関係式を導いた。なお、2013年11月に研究課題に関する研究集会「高次元データ解析の理論と方法論、及び、関連分野への応用」を筑波大学で開催して、広く研究成果の発表と情報交換の場とした。青嶋と矢田は、Aoshima and Yata (2011)で考案した高次元データの幾何学的表現に基づく判別分析の一致性を証明した。相似な機能をもった遺伝子など、高次元データにおいて相関が高い変数をグループにして抽出する変数選択を考え、相関係数ベクトルに関する多重検定を構築した。Yata and Aoshima (2010)のクロスデータ行列法を精度に関して漸近最適化した拡張クロスデータ行列法を開発した。ノンパラメトリックな設定で推測の精度を保証するための標本数の決定法を与えた。研究成果は、2012年6月にイスラエルで開催された「International Workshop on Applied Probability」での招待講演や、9月に行った日本統計学会研究業績賞受賞講演などで発表した。また、2012年7月に開催した「IMS Asia Pacific Rim Meetings」と、2013年3月に開催した日本統計学会春季集会において、研究課題に関する特別セッションを企画し、研究成果の発表と情報交換の場とした。赤平と大谷内は、密度関数の両端点での高さが異なる非正則な場合について、極値統計量からなる荷重推定量の情報量損失を研究した。佐藤は、多次元のデータを低次元空間で説明するために、データに予め与えられた分類構造を用いる方法と、データから探索的に得られる分類結果を用いる方法を提案した。小池は、Bayesリスクに対する情報不等式について、従来の下界を改良した。なお、研究課題に関する実績は、次の3つの受賞に結びついた。青嶋誠・矢田和善:日本統計学会研究業績賞(2012年)研究計画の最終年に当たる平成26年度は、(1)高次元データの効率的ネットワーク推定法の確立、(2)高次モーメントを利用したパターン認識法の確立、という2つの目的を掲げた。(1)では、遺伝子ネットワークを構築するための遺伝子のグループ間検定を考えた。従来のネットワーク推定法は計算量が膨大となり、数千という遺伝子でも現時点の計算機の性能では十分な解が得られず、また、遺伝子の依存関係を明らかにするには標本数が不足する。
核内受容体共役因子病の新しい疾患概念の確立

我々は,平成10,11年度で,アンドロゲン受容体のAF-1蛋白質を用いたGST-pull-down実験でアンドロゲン受容体共役因子異常症患者者で特異的に欠損する90kDaの蛋白質を同定した。平成13年度はこの90kDaタンパク質をクローニングする目的で,アンドロゲン受容体AF-1をbaitとして,酵母Two-Hybridシステムを用いてスクリーニングした結果,941アミノ酸からなる既知のタンパク質を得た。このタンパク質はその分子内にTPR(Tetratrico Peptide Repeat)モチーフを19回反復するという特徴を有するため仮にTPRタンパク質と名付けている。このタンパク質は,レポーターアッセイでアンドロゲン受容体の転写活性化能を35倍増加させ,GST pulldown assayでアンドロゲン受容体AF-1領域に直接結合することが判明しているが,エストロゲン受容体の転写活性化能は増加させない。このTPRが本疾患の病因であるかどうかを明らかにするため現在このcDNAの12のprimerを作成し,PCRでmutationを検討中である。更にDNAチップを使い正常細胞に比べ,本疾患患者で欠損している遺伝子を同定中である。アンドロゲン受容体(AR)の新規のAF-1特異的共役因子遺伝子のクローニングを目的として以下の事項を検討した。(1)キメラ受容体を用いた機能解析AR遺伝子に異常の存在しない完全型精巣性女性化症の皮膚線繊維芽細胞においてARおよびGRのAF-1ドメインとAF-2ドメインを入れ替えたキメラ受容体をレポーター遺伝子とともに導入し、正常と本症例で転写活性化能を比較した結果、本症例ではARのAF1ドメインからの転写活性化シグナルの基本転写装置への伝達が途絶していることが判明した。このAF1からの転写活性化シグナル伝達障害は既知のAF2特異的共役因子(p300,TIF2,SRC-1,ARA70)あるいはAF-1特異的共役因子(SRA)の強制発現では回復できなかった。この結果はARのAF1に特異的な未知の因子が本症例では欠損していることを強く示唆するものである。(2)GSTプルダウンアッセイによるAR-AF-1特異的共役因子の分子量の解析GST-AR-AF-1とGST-AR-AF-1蛋白をバキュロウィルス系で調製、これらに結合する蛋白を、上記患者および正常対照群の皮膚線維芽細胞抽出液からGSTプルダウンにて検討したところ、SDS-PAGE上、S90KDaの蛋白が、本症例では欠失していることが判明し、今後のクローニングの糸口を得ることができた。(3)共焦点顕微鏡による高性能3次元画像構築システムの作成ARとGFP(緑色蛍光)とのキメラを作成し、発現させた細胞を多数の断層面で撮影、3D構築用コンピューター処理により3次元画面に再現する手法を開発し、リガンド依存性に活性化されたARは核内レセプターに分布するのではなく特定の領域にドット状に分布することを明らかにした。我々はアンドロゲン受容体(AR)AF-1領域に結合するAR特異的転写共役因子のクローニングを試みている。平成11年度では、AR AF-1領域に、分子量約90kDaのタンパク質が結合し、正常AR遺伝子を有する完全型睾丸性女性化症患者ではこの結合が観察されないことを線維芽細胞のwhole cell lysateを用いたGSTプルダウン法で証明した。そこで、平成12年度では、酵母two hybrid assayを用いてこのタンパク質のcDNAクローニングを試みた。まず、核抽出液を線維芽細胞より得、GSTプルダウン法によりこの90kDaのタンパク質が核タンパク質であることを確認した。正常ヒト線維芽細胞よりcDNAライブラリーを作製し、Clontech社のMatchmaker LexA Two-hybrid Systemを用いて、AR AF-1領域cDNAをbaitとしてtwo hybrid assayを施行した。1000000個のIndependent colonyをスクリーニングし、陽性クローンのcDNA断片を用いて再度ヒト線維芽細胞cDNAライブラリーをスクリーニングした結果、分子量102 kDaの既知のタンパク質をコードする完全長cDNAを得た。このタンパク質はレポーター実験で用量依存的にリガンド依存性AR活性、リガンド非依存性AR AF-1活性を3から5倍増強した。現在、エストロゲン受容体、グルココルチコイド受容体に対する影響を観察すると同時に、免疫共沈実験、GSTプルダウン法を用いて、このタンパク質のAR AF-1領域への結合を確認中である。

我々は,平成10,11年度で,アンドロゲン受容体のAF-1蛋白質を用いたGST-pulldown実験でアンドロゲン受容体共役因子異常症患者者で特異的に欠損する90kDaの蛋白質を同定した。平成13年度はこの90kDaタンパク質をクローニングする目的で,アンドロゲン受容体AF-1をbaitとして,酵母Two-Hybridシステムを用いてスクリーニングした結果,941アミノ酸からなる既知のタンパク質を得た。このタンパク質はその分子内にTPR(Tetratrico Peptide Repeat)モチーフを19回反復するという特徴を有するため仮にTPRタンパク質と名付けている。このタンパク質は,レポーターアッセイでアンドロゲン受容体の転写活性化能を35倍増加させ,GST pulldown assayでアンドロゲン受容体AF-1領域に直接結合することが判明しているが,エストロゲン受容体の転写活性化能は増加させない。このTPRが本疾患の病因であるかどうかを明らかにするため現在このcDNAの12のprimerを作成し,PCRでmutationを検討中である。更にDNAチップを使い正常細胞に比べ,本疾患患者で欠損している遺伝子を同定中である。