hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
リサイクル飼料の安全化技術の確立と広域流通・市場化推進のためのデータベース化研究

今後、調査冊子の範囲を広げて調査する必要がある。(2)麹菌添加区(OZ-RG区、OZ-SG区)は乳酸菌添加区よりもpHが低く、乳酸発酵が促進された。また、OZ-RG区よりOZ-SG区でpHが低く、乳酸含量が高かった。以上の結果から、良質のトウフ粕サイレージを調製するためには豆麹菌を5から10%添加することが適切である。平成18年度は、繊維分析については国際基準の観点からaNDF分析法への移行が趨勢となっているものの、耐熱性α-アミラーゼの添加方法については一定の基準は提示されていない。そこで、耐熱性αアミラーゼであるSIGMA3403の添加方法をトウモロコシデンプンとトウモロコシ穀実を用いて検討した。その結果、中性デタージェント溶液はA3403を添加せずにトウモロコシデンプンをほぼ100%溶解した。一方、トウモロコシ穀実ではA3403を試料0.5g当たり0.5ml以上添加することで100%に近いデンプン分解を得た。さらに、飼料特性のデータが少ない豆乳粕とビール酵母細胞壁について飼料特性評価に関するデータ蓄積を行なった。その結果、豆乳粕はエーテル抽出物含量は10%前後と高く、粗タンパク質含量も20%を越える高エネルギー飼料である。ビール酵母細胞壁は繊維含量と粗タンパク質含量に富み、A+B1とB3画分比率の高い易溶解性タンパク質とバイパスタンパク質を多く含むことが明らかとなった。また、トウフ粕、ビール粕、飼料イネの成分組成の再評価を行うとともに、近赤外分析のための検量線をそれぞれ作成した。その結果、トウフ粕やビール粕の粗タンパク質含量やエーテル抽出物含量は日本標準飼料成分表(2001)に記載されている値とほぼ同程度であった。しかし、トウフ粕、ビール粕、飼料イネの繊維成分含量のレンジは全体的に広く、中でも飼料イネの有機物含量は16%の大きな幅があった。また、作成した検量線の相関係数はいずれの飼料成分も0.88以上を示した。さらに、ビール粕や飼料イネの総繊維含量を除き標準誤差は0.73以下で検量線として有効であると判断できた反すう用家畜用飼料としてのリサイクル飼料の飼料特性を明らかにすることは、適正な飼料設計を行う上で重要である。特に乳牛の蛋白質給与システムのは第一胃内での蛋白質の溶解性・分解性を把握し、飼料設計に反映させることが必要となっている。しかし、リサイクル飼料についての第一胃内での蛋白質の動態を明らかにした報告はほとんどない。そこで、今年度はわが国での利用が考えられるリサイクル飼料を含む30種類の飼料について、飼料成分組成と第一胃内での蛋白質の溶解性・分解性を測定し、データベースを完成させた。その結果、第一胃内での蛋白質の溶解性や分解性は大きく異なり、溶解性蛋白質含量はサツマイモ皮、コーングラテンフィード,ビール酵母で高く、逆に米ヌカ、ビール粕,緑茶粕、ウーロン茶粕,赤キャベツ粕で低かった。また、非分解性蛋白質含量は麦茶粕、カカオ皮で高かった。有効分解率は,無洗米ヌカ(94.8%)が最も高く、次いでカボチャ(81.9%)、醤油粕(81.1%),コーングルテンフィード(81.1%)であった。逆にベニバナ粕(46.4%)やビール粕(44.4%)、ウーロン茶粕(48.9%)で低かった。赤アン粕や白アン粕の中性デタージェント
深部静脈血栓症予防用具における褥瘡予防の検討

深部静脈血栓症(以下Deep Venous Thrombosis : DVT)予防用具装着部位の褥瘡発生の現状及び看護師の認識について実態調査を行った。対象者の約6割がDVT予防用具使用による褥瘡や皮膚障害発生を経験しており、約7割が病棟看護師はDVT予防用具装着部位に褥瘡発生リスクがあると認識していると回答した。また、DVT予防用具である弾性ストッキング、間欠的空気圧迫装置の各々の単独使用と併用した場合との装着部位の圧を比較検討した結果、間欠的空気圧迫装置の単独使用が着圧の観点から褥瘡発生リスクが低い結果が得られた。深部静脈血栓症予防用具を使用した場合に褥瘡を起こした症例について検討するために、医中誌を用いて過去26年間(1983年2009年)の文献検索を実施した。深部静脈血栓症予防用具によるスキントラブルに関する報告は20件、深部静脈血栓症予防用具による深部静脈血栓症予防効果に関する研究は17件であった。2004年以降、深部静脈血栓症予防具普及に伴い、スキントラブルの報告が見られるようになってきた。スキントラブルの原因としては、摩擦、過圧迫、不適切な装着方法、看護師のケア不足、浮腫などがあり、深部静脈血栓症予防用具自体に起因するもの、看護師のケアに起因するもの、患者に起因するものがあることが分かった。これらの結果をもとに、臨床での深部静脈血栓症予防用具の装着方法や褥瘡、スキントラブルの発生状況、要因を把握するために実態調査を実施した。対象は、病床数が200床以上で外科病棟を有する東北地方の151施設の外科病棟の看護師長とした。回収率は約5割であった。深部静脈血栓症予防用具の使用としては、弾性ストッキング(ハイソックス)の単独使用、次いで間欠的空気圧迫装置と弾性ストッキングの併用が多かった。肺血栓塞栓症/深部静脈血栓症(静脈血栓塞栓症)予防ガイドラインにおいては、間欠的空気圧迫装置と弾性ストッキングの併用を奨める記載ないが、実態調査より約6割が単独使用より深部静脈血栓症予防に効果的であることから併用。また、深部静脈血栓症予防用具の使用が原因で装着部位に褥瘡もしくは皮膚障害が発生した経験があるは56.4%であった。深部静脈血栓症予防用具を各々単独で使用した場合と、弾性ストッキングと間欠的空気圧迫装置を併用した場合のいずれも褥瘡もしくは皮膚障害の発生が見られていた。そして、褥瘡もしくは皮膚障害が発生した要因は、深部静脈血栓症予防用具の局所の圧迫や摩擦、シワやたるみ、ねじれ等、看護師の観察不足が多いことが明らかとなった。弾性ストッキングと間欠的空気圧迫装置を各々単独で使用した場合と、弾性ストッキングと間欠的空気圧迫装置を併用した場合の装着部位にかかる圧を測定し、比較検討を行った。被験者は、健常成人11名(女性4名、男性7名)とし、平均年齢は19.1±0.3歳(平均値±標準偏差値、以下省略)、平均BMIは19.9±1.9であった。測定部位は、膝関節部と踵とした。圧測定器は、ストッキング・包帯圧力測定器AMI3037-SB((株)エイエムアイ・テクノ)を使用した。膝関節部における圧の比較では、被験者全体の平均値で、弾性ストッキング単独使用では32.6mmHg、間欠的空気圧迫装置では23.5mmHg、併用使用では36.3mmHgであった。弾性ストッキング単独使用は間欠的空気圧迫装置単独使用より有意に圧が高く、併用使用は弾性ストッキング単独使用より有意に圧が高かった。また、併用使用は間欠的空気圧迫装置単独使用より有意に圧が高かった。このことより、膝関節部において、弾性ストッキングと間欠的空気圧迫装置の併用は、各々の単独使用よりも有意に圧が高いことが明らかになった。踵部における圧の比較では、被験者全体の平均値で、弾性ストッキング単独使用では111.4mmHg、間欠的空気圧迫装置では49.2mmHg、併用使用では72.0mmHgであった。弾性ストッキング単独使用は間欠的空気圧迫装置単独使用より有意に圧が高く、弾性ストッキング単独使用は併用使用より有意に圧が高かった。このことより、踵部において、弾性ストッキングと間欠的空気圧迫装置の併用は、間欠的空気圧迫装置より有意に高く、弾性ストッキングの単独使用より有意に低いことが明らかになった。
卵母細胞の卵胞腔形式誘導に関する研究

ブタおよびウシの卵巣から切り出した直径0.50.7mmの初期胞状卵胞から卵母細胞-顆粒膜細胞複合体を採取し,コラーゲンゲルに包埋して培養した。1.ブタ卵胞の卵胞腔形成に及ぼすFSHおよびEGFの影響:培養1日後,卵母細胞-顆粒膜細胞複合体は一旦閉じた構造を形成した。培養2日以降,FSH無添加区ではこの構造に変化は認められなかったが,FSH添加区では卵母細胞う-顆粒膜細胞複合体は卵胞腔様の構造を再形成し,その形成率は培養23日後に最高となった。形成された卵胞腔様構造の内部の液には,体内で形成された卵胞腔内の卵胞液と同様なタンパクが検出された。EGFは顆粒膜細胞を増殖させたが,卵胞腔の形成を誘導しなかった。2.ブタ卵胞の卵胞腔形成に及ぼすdbcAMPおよびエストロジェンの影響:dbcAMPは卵母細胞-顆粒膜細胞複合体の卵胞腔の形成を誘導したが,エストロジェンは誘導しなかった。FSHによる卵胞腔の形成がcAMPを介して起こることが示唆された。3.ウシ卵胞の卵胞腔形成に及ぼすヒポキサンチン,FSHおよびEGFの影響:ブタとは異なり,ウシの卵母細胞-顆粒膜細胞複合体はFSH無添加培養液中においても卵胞腔を形成した。ヒポキサンチンおよびFSHは卵胞腔形成率を増加させた。一方,EGFは顆粒膜細胞を増殖させたが,卵胞腔の形成を誘導しなかった。4.卵胞腔形成に及ぼす卵母細胞の影響:FSHあるいはdbcAMPは,卵母細胞を除去した壁顆粒膜細胞に卵胞腔の形成を誘導した。しかし,培養日数の経過とともにこの構造を消失した。一方,卵母細胞を含む壁顆粒膜細胞において形成された卵胞腔は長期間維持され,卵母細胞が卵胞腔の構造維持に機能していることが示唆された。
九-十世紀イスラム脅威下のビザンツ=西方関係

既存研究では、東西皇帝称号問題や東西教会問題の視点で考察されてきた910世紀のビザンツ=西方関係史を、本研究では対イスラム匪賊に対するビザンツと西方の共同防衛体制の観点から考察しなおした。その結果明らかとなったのは、同時期の西方はイスラム海賊に対抗し得る海軍力を欠いており、海賊対策にはビザンツ艦隊の援助が不可欠であった点である。しかしビザンツは対ブルガリア、黒海方面、東方戦線をも抱えており、西方の期待に応えて艦隊を常時提供するだけの余裕はなかった。南イタリアでのランゴバルド国家の反乱の時期を見ると、シチリアのイスラム勢力の内紛時に勃発しており、その背景には十分な戦力を提供してくれないビザンツに対する積年の不満を見て取ることができる。その証拠に、イスラムの侵入があると反乱側はすぐにビザンツに陳謝し、援軍の要請を行っていた。既存研究では東西皇帝称号問題のクライマックスとされるビザンツとオットー大帝との問題にしても、実際の交渉では皇帝称号にはほとんど言及されず、話題は両国間の婚姻同盟であるが、ビザンツ皇女テオファノの降嫁の翌年には、南仏プロヴァンスを拠点に北イタリアやアルプスにまで勢力を拡大していたイスラム海賊の巣窟フラクシネトゥムがビザンツ艦隊の海上封鎖のもとで陥落したことが示すように、オットーの婚姻同盟政策は艦隊提供をビザンツから勝ち取るためのものであったと結論した。そして、ビザンツの南イタリア征服とフラクシネトゥム陥落によって南イタリアからアルプス以北を結ぶルートの安全が確保されたことで、交流が活性化し、ビザンツ図像表現や東方聖者伝などのキリスト教文化が伝播し、また共治帝や摂政というビザンツ政治文化が受容された。そしてビザンツ文化の広範な受容の背景にも、フランスやレオンが対イスラム用にビザンツ艦隊に対する援助要求がうかがわれることを指摘した。16年度については、九世紀後半から915年までの所謂ビザンツ帝国の南イタリア再征服について考察した。既存研究では、このビザンツの再征服の契機が、南イタリアのバーリやタラント等を拠点とするイスラム勢力の脅威の増大に対して、ローマ教皇やカロリング朝皇帝の軍事援助要請に応えたという宗教戦争的文脈で語られてきた。しかしこれらの南イタリアのイスラム勢力は、当時抗争を繰り広げていた現地勢力に傭兵として雇われていた者達であった。つまり当時南イタリアで展開していたのは、キリスト教とイスラム教の混成軍同士の戦いであったのである。ただ、これらのイスラム勢力は南イタリアでの軍事衝突が無い時には、ローマ教皇領等の中部イタリアで略奪を行うのが慣例化するようになり、イスラムとの共存が望めない中部イタリア勢力がビザンツに南イタリアのイスラム勢力の一掃を依頼したというのが実情であった。つまりビザンツの再征服は、イスラムからの南イタリア解放ではなく、中部イタリアに対するイスラムの脅威の除去という性格のものであったと評価すべきなのである。そのためビザンツの対イスラム派兵に対して、当初南イタリア諸勢力は静観の構えを見せていた。しかしビザンツのイスラム拠点の個別撃破によってイスラム傭兵の供給が枯渇していくと、ナポリを初例として諸勢力はビザンツとの外交関係の樹立によって、ビザンツ軍の提供を受ける事で兵力を補填するようになる。つまりビザンツの南イタリアにおける勢力確立は、従来の諸勢力の抗争の延長線上に為された事になる。それはビザンツの再征服は、現地におけるイスラム傭兵時代に終止符を打ったものとして認識されるべきである事を示している。そして、傭兵と違ってビザンツ兵同士を戦わせる事は不可能であった事で、南イタリア社会の安定化に寄与したと言える。17年度については、十世紀にイスラム海賊の巣窟として悪名を馳せた南仏のフラクシネトゥムと、ビザンツ=西方関係との関連について考察した。

フラクシネトゥムの海賊はティレニア海一帯を荒らしまわり、931年にビザンツ領南イタリアでも略奪をはたらいたことで、同年ビザンツ海軍は敵の本拠地に報復攻撃を加え多大の被害を与えた。しかしフラクシネトゥムは一本道の隘路の山城であったため、これを陥落させるには海上封鎖と陸上包囲の両面作戦による長期戦でなければ攻略は不可能なためビザンツ海軍のみでの攻略は不可能であった。そしてフラクシネトゥムは早期に勢力を回復し、932年にジェノヴァに壊滅的な被害を与えた。翌年にローマの権門テオフィラクトゥスの総帥アルベリクス二世がビザンツに外交上急接近するのは、当時教皇領の海岸線をビザンツの派遣艦隊が防衛していたことと無関係では有り得ない点を指摘した。またフラクシネトゥムは陸上においても南仏はアルル地方、北イタリアはモンペリエ地方、さらにはアルプスへと略奪基地を設け、一時期「スイスの主人」となったとも評される脅威へと成長していた。この状況を打破し、フラクシネトゥムを陥落させたのが、ビザンツ海軍とオットー一世との連合軍であったことに着目した。なぜなら、この共同作戦はビザンツ皇女テオファノとオットー二世との婚姻同盟の折衝と同時進行で練られたのが状況的に確実であるからである。通常オットー朝とビザンツとの外交折衝はオットーのローマ皇帝称号を巡る東西対立の構図で考察されてきたが、史料上実際の交渉の場面では両陣営による皇帝称号を巡る激しい応酬は無く、またオットーは終生皇帝称号に「ローマの」という修飾語は使用しなかった点から、オットー側の意図はフラクシネトゥム攻撃のために、渋るビザンツに海軍を提供させようとすることにあったと指摘した。18年度については、プロヴァンスのイスラム海賊の拠点であり、アルプスに砦を築いて南北間の交通を阻害してきたフラクシネトゥム陥落後の、ビザンツと西方との交流とビザンツ諸文化の西方での伝播と受容について考察した。オットー・ルネサンスと呼ばれる十世紀後半から十一世紀初頭にかけての文芸復興については、近年のビザンツ文化史研究者によって、ビザンツ文化の影響が指摘されるようになってきている。図像については、髭のあるキリストやパントクラトール(全能者)キリスト図、ニンバス(光背)やデーシス(中央のキリストの左右に聖母マリアと洗礼者ヨハネを代願者として配した図)、それまでアルプス以北では絵画表現の題材とはならなかった聖母マリアがバシリッサ(ビザンツ皇女)型マリア像や聖母子像が受容された。文学作品では、聖ニコラオスを中心とした東方聖者伝がナポリを中心とした南イタリアで初めてラテン語に翻訳され、西欧に広く伝播し、その影響はイベリア半島での東方聖者崇拝によっても確認されている。加えて、近年の研究の最大の特徴は、ビザンツの政治文化の西方での受容である.皇妃称号や共治統治者や摂政という制度は、ビザンツ帝国のオリジナルであったものが、十世紀の後半以降西方の有力支配層に採用されたものである。ビザンツ皇女からオットー二世の妃となったテオファノは、オットーの生存中に既に勅許状に連署する共同統治者であり、夫の死後は摂政として幼い息子
複合機能希土類触媒による精密物質変換反応の開発

本研究では、優れた物性や新機能を持つ高分子材料の合成や高効率な物質変換反応を目指して、希土類錯体の特異な性質を利用した高活性、高選択的な錯体触媒の開発を行っている。本年度は、希土類錯体(C5Me4SiMe3)Sc(CH2C6H4NMe2-o)2と[Ph3C][B(C6F5)4]の触媒系を用いてアニシルプロピレンとエチレンの共重合を行うことにより、比較的高分子量の共重合体を得ることに成功した。各種2次元NMRによる構造解析の結果、アニシルプロピレンとエチレンとの交互ユニットに加え、エチレンーエチレン連鎖を持つ構造であることが明らかとなった。この共重合反応のメカニズムについては、アニシルプロピレンおよび触媒配位子のかさ高さの影響でアニシルプロピレンの連続挿入が抑制され、アニシルプロピレンとエチレンの交互挿入が優先的に進行し、短いエチレン連鎖の形成を伴うユニークなマルチブロック共重合体が生成している。得られた共重合体の引張り試験を行った結果、伸び率が2200%以上と優れたエラストマー物性を示し、分子量が増加するに従って破断強度が増大し、最高10.2 MPaに達した。さらにこれらの共重合体は、乾燥空気中のみならず、水や酸、アルカリ性水溶液中でも自己修復性能や形状記憶性能を示すことが明らかとなった。さまざまな測定の結果、エラストマー物性や自己修復性および形状記憶特性を発現する理由の一つとして、アニシルプロピレンとエチレンとの交互ユニットが柔らかい成分として働き、エチレン-エチレン連鎖の硬い結晶ユニットが物理的な架橋点として働くことができるネットワーク構造の構築が重要な鍵となっていることが明らかとなった。本研究では、スカンジウム触媒系を用いることにより、希土類金属触媒を用いることにより、アニシルプロピレンとエチレンとの精密共重合を達成し、乾燥空気中のみならず、水や酸、アルカリ性水溶液中でも自己修復性能や形状記憶性能を示す新しい機能性ポリマーの創製に成功した。本研究成果は、今後の自己修復性材料の設計・開発にとって重要な指針を与えた。以上のように、自己修復性能や形状記憶性能を示す新しいエチレンとアニシルプロピレンの共重合体の合成に成功し、当初の計画以上に進展している。希土類触媒による新規重合反応の開発においては、まずこれまでの実験結果を踏まえて、引き続き、中心金属や配位子を適切に組み合わせて、対応する様々な希土類ジアルキル錯体を合成し、これらを触媒として用いてヘテロ原子の配位を適切に活用した精密重合および共重合反応を検討していく。具体的には置換アニシルプロピレンの他に、アリルアニリンやアリルスルフィド類とエチレンの共重合を行い、機能性ポリオレフィンを開発する。我々は希土類錯体(C5Me5)Sc(CH2C6H4NMe2-o)2と[Ph3C][B(C6F5)4]の触媒系を用いて、スチレン重合に連鎖移動剤としてアニソール類を用いることにより、末端にアニシル基を有するsPSの触媒的合成に成功した。本年度は、この重合反応における活性種の単離および反応性に関する研究を行い、詳細な反応機構の解明を試みた。カチオン性スカンジウム錯体にアニソールを添加したところ、アニソールの酸素がスカンジウム金属に配位したカチオン性ハーフサンドイッチ型スカンジウムモノアミノベンジル錯体(1)が高収率で得られた。この触媒系はアニソールを連鎖移動剤とするスチレン重合に高い活性を示すことから、錯体1からカチオン性アニシル錯体(A)が容易に生成するものと想定していたが、室温24時間では全く反応は起こらず、70°Cの加熱で錯体1は徐々に反応するがアニシル錯体(A)の生成は確認できなかった。しかしながら、錯体1にスチレンを加えて重合反応を行うと末端にジメチルアニリンを有するポリスチレンの他に、末端にアニソールを有するポリスチレンが得られた。このことから、錯体1とカチオン性アニシル錯体Aは平衡状態で存在していることが示唆された。さらに、スカンジウム触媒系を用いることにより、ヘテロ原子(酸素、硫黄、セレン、リン、窒素)を含むα-オレフィンとエチレンとの共重合を任意の混合比で実現し、さまざまなヘテロ原子を含む高分子量の機能性ポリオレフィンの合成に成功した。さらに、α-オレフィンのヘテロ原子が金属イオンに配位して、重合反応が進行する作用機構を理論計算によって明らかにした。単離および構造解析に成功したアニソールが配位したベンジルスカンジウム錯体は、ベンジル錯体とアニシル錯体との間で平衡状態が存在することが明らかとなった。さらに、アニソールだけではなく、ジメチルアミノトルエンが連鎖移動剤として機能することが明らかとなり、末端官能基化されたシンジオタクチックポリスチレンの効率的な合成に成功した。これは、高分子合成だけではなく、有機合成化学的にも興味深い研究成果であると考えている。本年度は、希土類錯体(C5Me4SiMe3)Sc(CH2C6H4NMe2-o)2と[Ph3C]

[B(C6F5)4]の触媒系を用いてアニシルプロピレンとエチレンの共重合を行うことにより、比較的高分子量の共重合体を得ることに成功した。各種2次元NMRによる構造解析の結果、アニシルプロピレンとエチレンとの交互ユニットに加え、エチレンーエチレン連鎖を持つ構造であることが明らかとなった。この共重合反応のメカニズムについては、アニシルプロピレンおよび触媒配位子のかさ高さの影響でアニシルプロピレンの連続挿入が抑制され、アニシルプロピレンとエチレンの交互挿入が優先的に進行し、短いエチレン連鎖の形成を伴うユニークなマルチブロック共重合体が生成している。得られた共重合体の引張り試験を行った結果、伸び率が2200%以上と優れたエラストマー物性を示し、分子量が増加するに従って破断強度が増大し、最高10.2 MPaに達した。さらにこれらの共重合体は、乾燥空気中のみならず、水や酸、アルカリ性水溶液中でも自己修復性能や形状記憶性能を示すことが明らかとなった。さまざまな測定の結果、エラストマー物性や自己修復性および形状記憶特性を発現する理由の一つとして、アニシルプロピレンとエチレンとの交互ユニットが柔らかい成分として働き、エチレン-エチレン連鎖の硬い結晶ユニットが物理的な架橋点として働くことができるネットワーク構造の構築が重要な鍵となっていることが明らかとなった。本研究では、スカンジウム触媒系を用いることにより、希土類金属触媒を用いることにより、アニシルプロピレンとエチレンとの精密共重合を達成し、乾燥空気中のみならず、水や酸、アルカリ性水溶液中でも自己修復性能や形状記憶性能を示す新しい機能性ポリマーの創製に成功した。本研究成果は、今後の自己修復性材料の設計・開発にとって重要な指針を与えた。以上のように、自己修復性能や形状記憶性能を示す新しいエチレンとアニシルプロピレンの共重合体の合成に成功し、当初の計画以上に進展している。希土類触媒による新規重合反応の開発においては、まずこれまでの実験結果を踏まえて、引き続き、中心金属や配位子を適切に組み合わせて、対応する様々な希土類ジアルキル錯体を合成し、これらを触媒として用いてヘテロ原子の配位を適切に活用した精密重合および共重合反応を検討していく。具体的には希土類触媒を用いた、1,4-ジメトキシベンゼンとノルボルナジエンのCーH結合重付加反応に加え、メトキシスチレン類の連鎖逐次同時重合などによって得られた末端にアニソールユニットを有する交互共重合体や多分岐ポリマーを連鎖移動剤として活用し、様々なオレフィン類の重合反応を行い、極性ユニットと非極性ユニットを有する新規マルチブロック共重合体を合成する。具体的には置換アニシルプロピレンの他に、アリルアニリンやアリルスルフィド類とエチレンの共重合を行い、機能性ポリオレフィンを開発する。
サケ科魚類の性成熟を制御する日長情報の伝達におけるメラトニンの関与

サクラマス0歳魚早熟雄の性成熟は,6月からの短日処理(LD 8:16)で早まり,長日処理(LD 16:8)では遅れる.一般に脊椎動物において,松果体から分泌されるメラトニンの血中レベルは,明期に低く暗期に高い明瞭なパターンを示すことから,メラトニンが日長情報を伝達すると考えられる.長日条件下の0歳魚早熟雄にメラトニンを経口投与してその分泌パターンを長日型から短日型に変えたところ,性成熟の進行が早まることが昨年度に判明した.このことから,サクラマス0歳魚早熟雄では,メラトニンが日長情報を伝達して性成熟に関わることが示唆された.今年度は,メラトニンが日長情報を伝達して性成熟に及ぼす役割についてさらに検討した.6月から10月まで,長日(LD 16:8)あるいは短日(LD 8:16)条件下で,多量のメラトニン(7.5μg/g-fish)を経口投与して明暗に対するサクラマス自身のメラトニン分泌パターンを消失させて,日長に対する反応について調べた.通常餌投与群では,短日条件下では8月上旬に,長日条件下では9-10月に,生殖腺体重比(GSI)とテストステロン濃度が高値となり,それぞれ発達した精巣組織像が観察された.メラトニン餌投与群においても,GSIとテストステロン濃度は,対応する日長の通常餌投与群と同様の変化をした.メラトニン餌投与は,長日条件下ではGSIとテストステロン濃度の増加を抑制した.長日条件下でメラトニンを経口投与してその分泌パターンを短日型に変えると性成熟の進行が早まったという昨年度の結果を考慮すると,メラトニン分泌パターンと性成熟の進行との間に関連があることが強く示唆された.さらに,メラトニン投与群間では,日長処理によってGSIとテストステロン濃度に差が生じたことから,視覚などからの日長情報が性成熟の進行に関与することも示唆された.サクラマス(Oncorhynchus masou)には0歳の秋に性成熟する早熟雄が出現する.早熟雄の排精時期は日長により制御されており,6月からの短日処理(8L16D;8時間明期16時間暗期)では8月に,長日処理(16L8D)では10月に排精する.すると,日長情報がどのような経路で伝わるのかが問題となる.サクラマスにおいて,松果体ホルモンであるメラトニンの分泌は夜間に昂進し昼間は低下する明瞭なパターンを示す.この分泌パターンにより日長情報が伝達されることが考えられる.今年度は,日長情報がメラトニンを介して伝達される可能性について検証した.まず,長日条件下(16L8D;light on 04:00-20:00)で飼育したサクラマス早熟雄にメラトニンを経口投与することによって,その血中パターンを短日型に変えることができることを確認した.すなわち,11時にメラトニン含有餌を体重の1%(5μg/10g-fish)投与すると,血中メラトニン濃度は短日型のパターンを示すことが判明した.そこで,6月中旬に0歳魚早熟雄を選別し,長日条件下でメラトニン含有餌を毎日11時に経口投与して10月まで飼育し,性成熟の進行について対照群と比較した.生殖腺体重比(GSI)は実験期間を通じてメラトニン投与群で先行して増加する傾向があった.両群とも10月に排精した.また,血中テストステロン濃度を時間分解蛍光免疫測定法で測定したところ,8月にはメラトニン投与群で有意に高い値となった.以上より,長日条件下でメラトニンを経口投与して短日条件下でのメラトニン分泌パターンを模すことによって,性成熟の進行が亢進することが示唆された.しかし,短日条件下で飼育した場合に比べて,性成熟の進行は顕著ではなかったことから,日長情報の伝達に関与しているのはメラトニンだけではないことも示唆された.サクラマス0歳魚早熟雄の性成熟は,6月からの短日処理(LD 8:16)で早まり,長日処理(LD 16:8)では遅れる.一般に脊椎動物において,松果体から分泌されるメラトニンの血中レベルは,明期に低く暗期に高い明瞭なパターンを示すことから,メラトニンが日長情報を伝達すると考えられる.長日条件下の0歳魚早熟雄にメラトニンを経口投与してその分泌パターンを長日型から短日型に変えたところ,性成熟の進行が早まることが昨年度に判明した.

このことから,サクラマス0歳魚早熟雄では,メラトニンが日長情報を伝達して性成熟に関わることが示唆された.今年度は,メラトニンが日長情報を伝達して性成熟に及ぼす役割についてさらに検討した.6月から10月まで,長日(LD 16:8)あるいは短日(LD 8:16)条件下で,多量のメラトニン(7.5μg/g-fish)を経口投与して明暗に対するサクラマス自身のメラトニン分泌パターンを消失させて,日長に対する反応について調べた.通常餌投与群では,短日条件下では8月上旬に,長日条件下では9-10月に,生殖腺体重比(GSI)とテストステロン濃度が高値となり,それぞれ発達した精巣組織像が観察された.メラトニン餌投与群においても,GSIとテストステロン濃度は,対応する日長の通常餌投与群と同様の変化をした.メラトニン餌投与は,長日条件下ではGSIとテストステロン濃度の増加を抑制した.長日条件下でメラトニンを経口投与してその分泌パターンを短日型に変えると性成熟の進行が早まったという昨年度の結果を考慮すると,メラトニン分泌パターンと性成熟の進行との間に関連があることが強く示唆された.さらに,メラトニン投与群間では,日長処理によってGSIとテストステロン濃度に差が生じたことから,視覚などからの日長情報が性成熟の進行に関与することも示唆された.
近世日本漢詩総集『煕朝詩薈』についての総合的研究

近世漢詩総集『煕朝詩薈』の収録漢詩に、作品番号を付し、詩題等の電子化テキストを作成した。これによって、収録詩人数、収録作品数を特定した。『煕朝詩薈』の作品及び「煕朝詩薈総目」「錦天山房詩話」等をもとに、『煕朝詩薈』に採録された漢詩の典拠となった詩集を確認し、採録の経緯を検討した。『煕朝詩薈』の編集方法について、他の漢詩集との直接的な関係を検討して考察した。採録された詩人を特定し編者友野霞舟との関係等を通して、『煕朝詩薈』について文学史的に考察した。1,『煕朝詩薈』の伝本の研究について、今年度は、国会図書館所蔵の別本について、調査した。国会図書館蔵鶚軒文庫本と同じく、基本伝本である旧昌平坂学問所蔵の伝本の転写本であろうと考えられる。2,『煕朝詩薈』は、総集を典拠とするもの、また各別集を典拠とするものが混在する。『煕朝詩薈』の典拠詩集について、『煕朝詩薈』冒頭三巻について詳細に分析した。総集としては、松平頼寛編『歴朝詩纂後編』のほか『楽ハン集』『嚮風草二編』『徳山雑吟』から採択している。別集としては『壷山集』『猗蘭臺集』である。これらと『煕朝詩薈』冒頭三巻と対照させ、採択状況を具体的に明らかにした。即ち『煕朝詩薈』巻三までは『歴朝詩纂後編』巻六から巻十三までに、そのほとんどを依拠して編纂されている。『煕朝詩薈』巻三までは諸大名の詩を収録するものであり、その材料は主に『歴朝詩纂後編』だったのである。3,冒頭三巻以下の各巻について、各別集を典拠とするものについて、巻の順に従って、典拠詩集を調査し、『煕朝詩薈』巻五十二までについて、別集の典拠詩集の調査を行った。相当数の典拠詩集が明らかになり、そのほとんどが国立公文書館内閣文庫蔵の旧昌平坂学問所蔵の本であることが判明。しかもこれらの諸伝本には、典拠となった詩集という意味を超えて、『煕朝詩薈』編纂に直接に使用された本そのものであると思われる痕跡も残されていることが明らかになった。これは『煕朝詩薈』編纂の場と意義を考察する上で、重要な意義をもつと考えられる。4,『煕朝詩薈』の巻三十までについて、作者・詩題・作品巻頭詩句の電子化テキストの素稿を作成した。作者・詩題・作品のデータベース作成の基礎となるものである。各作品のデジタル画像データと連動させることにより作品の検索機能を確立するための、基礎的データとして用いるものである。1,『煕朝詩薈』は110巻から成る大規模な漢詩総集である。その伝本は写本でのみ伝わる。本研究の基礎となる伝本について、国立公文書館内閣文庫蔵の旧昌平坂学問所蔵の伝本を確認し調査した。また、国会図書館鶚軒文庫蔵の伝本を確認し調査した。鶚軒文庫蔵本は内閣文庫本からの転写本であろうと推定した。2,内閣文庫本を『煕朝詩薈』の原型本とし以下の研究はこれを基本に展開することとした。巻頭の『煕朝詩薈』の作者総目について、作者の重複・脱落・誤記などを正し、別称などを追記し、出現番号を付して「修訂煕朝詩薈総目」を作成した。これによって、『煕朝詩薈』の採択作者数を1456名と特定した。3,『煕朝詩薈』が典拠とした漢詩総集・別集の調査を開始した。総集としては、『歴朝詩纂後編』『日本詩選』『日本詩選続編』『ケン園録稿』『扶桑名勝詩集』『八居題詠』等が現在までに確認できた。これらの詩集から採録した『煕朝詩薈』の各巻についても一定程度特定することができた。別集については、まず多数の作品を入集する作者詩人を中心に、典拠詩集の調査を開始した。典拠詩集の調査とその特定の研究は、本研究の中核をなすところと位置づけ、今後も継続して実施される。4,『煕朝詩薈』編者の友野霞舟について、従来の研究を集約し、昌平校を中心としての学者としての活動状況を確認した。また、詩人としての側面を示す業績を詩集『霞舟吟巻』等の資料を収集して確認した。友野霞舟について、今後は学者と詩人の両面からの人物研究を進める必要があるとの方向性を確認した。5,『煕朝詩薈』の巻二十までについて、作者・詩題・作品巻頭句の電子化テキストの素稿を作成した。作者・詩題・作品のデータベース作成の第一段階に着手した。各作品のデジタル画像データと連動させて作品の検索機能を確立するための、基礎的データの作成及びその方向性を定めることができた。1,『煕朝詩薈』の伝本研究について、前年度までの内閣文庫蔵旧昌平坂学問所蔵の自筆写本、国会図書館蔵の2種の伝本研究の成果に加えて、静嘉堂文庫蔵、尊経閣文庫に写本が伝わることを確認し、今後の伝本調査の方向性を検討した。

基本となる旧昌平坂学問所蔵の自筆写本と、これら他の伝本との関連性について検討することは今後の課題となる。2,『煕朝詩薈』が編纂に用いた資料である典拠詩集の調査では、総集については、『煕朝詩薈』全体に亘って典拠となる詩集をほぼ特定した。別集については、巻五十三以降の大半の詩人について、ほぼ典拠詩集が明らかになった。3,『煕朝詩薈』の編集について、一つの巻の中核を成す作者詩人の詩の採択を契機として、その系に属する詩人が採択され、関連する詩集が用いられる等、巻単位の編集方法の一端が明らかになった。『煕朝詩薈』の各巻は、別集を典拠にして少数の詩人で詩人あたりの詩は多数採択される巻と、総集を典拠にして多数の詩人で詩人あたりの詩は1乃至数首という少数の詩が採択される巻と、その混合タイプの巻と、おおよそ三様の編集方法であることが明らかになった。4,『煕朝詩薈』巻四を詳細に分析した。ここでは、一つの藩に限られた総集である『南紀風雅集』からの採択の様相について明らかにし、他の巻も含めて『南紀風雅集』から採択された詩人を特定することができた。このような一つの藩に限られた総集からの採択は、ほかにも『楽ハン集』『絃歌余韻』などがあり、それらの様相についてもほぼ実態を確認した。5,『煕朝詩薈』の巻五十までについて、詩人名・詩題・作品冒頭一聯詩句の電子化テキストの素稿を作成した。継続して進行している、詩人名・詩題・作品のデータベース作成の基礎となるものである。1,『煕朝詩薈』の伝本は、内閣文庫所蔵旧昌平坂学問所蔵本の他、国立国会図書館鶚軒文庫本2種、前田家尊経閣文庫蔵本などの伝本があるが、改めて内閣文庫所蔵旧昌平坂学問所蔵本を基軸とすることを確認した。2,『煕朝詩薈』が編纂に用いた典拠資料の調査では、全巻に亘って、総集・別集ともにほぼ典拠詩集を明らかにすることができた。3,朝鮮通信使との唱和詩群の採択状況について調査した。『煕朝詩薈』は、漢詩集からだけではなく、記録的詩集からも採択するが、その最も顕著な例が朝鮮通信使との唱和詩である。具体的には、『韓客贈答別集』『韓館唱和』『韓館唱和続集』『桑韓唱和ケンチ集』『鶏林唱和集』(数種)などが、確認できた。これらにより朝鮮通信使来聘の歴史的展開を漢詩文学史との関わりで検討することを開始した。5,『煕朝詩薈』の巻七十五までについて、詩人名・詩題・作品冒頭一聯詩句の電子化テキストの素稿を作成した。本研究は当初計画で、はじめ3年度は基礎的研究を中心に進め、後の2年度は文学史的研究(主に方法丙)を中心に進めることととしてきた。27年度は、本研究の4年度めにあたり文学史的研究の1年度目にあたる。併せて前年度に引き続き基礎的研究を並行的に継続した。文学史的研究では、『煕朝詩薈』の編纂にあたって採択に用いられた詩集の位置との関連づけを中心に検討した。(1)総集で具体的に用いられた詩集、(2)及びその中で採択された詩人群の様相、(3)別集で具体的に用いられた詩集を検討した。(4)新たに、採択が想定されるが採択されなかった詩人の掲出を開始した。(5)加賀藩等地方を含めて漢詩文化の拡がりの実態を考察し、『煕朝詩薈』編纂に至る漢詩史的視点を検討した。(6)文学史的な視点からの研究で新たな成果は、朝鮮通信使との唱和詩群の採択状況である。(7)具体的には、『韓客贈答別集』『韓館唱和』『韓館唱和続集』『鶏林唱和集』数種などが確認できた。朝鮮通信使来聘の歴史的展開を漢詩文学史との関わりで検討することを開始した。(8)基礎的研究では、典拠詩集の特定については、引き続き『煕朝詩薈』正編の典拠となった漢詩集の資料収集を行ない、全体に亘ってほぼ収録詩人の典拠詩集を確認した。
高齢者補綴における義歯への順応過程の研究

本研究は、高年齢の患者が新義歯の装着という口腔環境の変化に対して、順応あるいは適応する経過を客観的に評価することができるような臨床検査法を確立するのに必要な基礎資料を得ることを目的とする。無歯顎者1名に実験義歯を製作して、実験義歯装着後の咀嚼運動機能を経時的に長期間にわたって測定した。試験食品は、レーズン・ピーナッツ,チューインガムである。各食品咀嚼時の下顎運動記録と筋電図に設けた計7種の時間的計測項目(開口相・閉口相・停止相・周期、筋放電持続時間・同間隔時間・Interval-2)の平均値と散布度を指標として求めて、各指標の経時的推移を比較検討し、以下の結論を得た。1.同一義歯床で臼歯部人工歯のみが交換可能な実験義歯を製作して、咬頭傾斜角度が30°の人工歯を用いた義歯を旧義歯(30度義歯)とみなして装着した後に、20°人工歯に交換した義歯を新義歯とみなして装着して、長期間にわたり実験記録を行った。2.臨床検査の試験食品には、嚥下閾と咀嚼動作の難易度からみて、レーズンが最も適している。3.咀嚼運動機能を対象とした臨床検査では、第1回目の検査値は参考程度に留めるのが安全である。4.新義歯に対する生体反応は、下顎運動に先行して筋の機能に現われる。5.無歯顎補綴の臨床検査には、下顎運動および筋活動の時間的計測項目が極めて有効な指標となるこが示された。特に、下顎運動の閉口相,停止相,周期および筋活動の筋放電持続時間の平均値は、口腔環境の変化に対して敏感に反応を示す指標である。5.人工臼歯の咬頭傾斜角度は、咀嚼運動機能に影響する。その程度は、筋放電持続時間に強くあらわれ、20度義歯は30度義歯より実時間が延長した。7.旧義歯で形成された、いわゆる習癖は新義歯になっても少なくとも2週間ほど残留すること、義歯の"慣れ"の現象は新義歯装着8週目前後から生じることを認めた。本研究は高年齢者が新義歯に順応する経過を追求して,高齢患者への負担を最小にして,高い精度で情報を得る臨床検査法への基礎資料を得ることを目的とする.まず心身の健康に直結する咀嚼と関連が深い人工歯の咬合面形態に着目して,無歯顎者1名に, same denture base法で臼歯部人工歯が交換可能な実験用義歯を製作した.実験は30°人工歯義歯を装着した後で, 20°人工歯に交換して,咀嚼運動の推移を長期間測定した.試験食品はピーナッツ・レーズン・ガムである.各食品の咀嚼時の下顎運動と筋活動電位の同時記録から運動と筋活動に設けた計7項目の時間的計測パラメーターの実時間とバラツキ度を定量的に検討した.結果を要約する.1.試験食品:嚥下閾と咀嚼動作の容易度からみて,臨床検査にはレーズンが適している.2.計測値の信頼度:30°義歯の第1回目の計測値は実時間・バラツキ度ともに全実験期間中で,値が最も大きい.これは実験自体に関する慣れなどの現象とみるべきであり,初回のデーターは参考に止めるのが安全である.3.下顎運動:30°義歯のバラツキ度は義歯装着後より順次値が減少し,装着後5週目より値が安定した.20°義歯の停止相では5週目より実時間が減少し,バラツキ度が増加した.4.筋活動:30°義歯の実時間とバラツキ度は一部のパラメーターを除き,装着後より順次値が減少し, 5週目で一定化した. 20°義歯の筋放電持続時間は30°義歯より値が大きく,時間の経過に伴い増大の傾向を示すが, 5週目より値が減少し始め, 7週目で値が安定する傾向を示した.以上の結果は,新義歯装着による顎口腔系の環境変化に対する生体の慣れの現象を示すものであり,人工歯の咬頭傾斜角度が咀嚼運動に影響することを示したものである.持続して検討中である.本研究は、高年齢の患者が新義歯の装着という口腔環境の変化に対して、順応あるいは適応する経過を客観的に評価することができるような臨床検査法を確立するのに必要な基礎資料を得ることを目的とする。

2.臨床検査の試験食品には、嚥下閾と咀嚼動作の難易度からみて、レーズンが最も適している。3.咀嚼運動機能を対象とした臨床検査では、第1回目の検査値は参考程度に留めるのが安全である。4.新義歯に対する生体反応は、下顎運動に先行して筋の機能に現われる。5.無歯顎補綴の臨床検査には、下顎運動および筋活動の時間的計測項目が極めて有効な指標となるこが示された。特に、下顎運動の閉口相,停止相,周期および筋活動の筋放電持続時間の平均値は、口腔環境の変化に対して敏感に反応を示す指標である。5.人工臼歯の咬頭傾斜角度は、咀嚼運動機能に影響する。その程度は、筋放電持続時間に強くあらわれ、20度義歯は30度義歯より実時間が延長した。7.旧義歯で形成された、いわゆる習癖は新義歯になっても少なくとも2週間ほど残留すること、義歯の"慣れ"の現象は新義歯装着8週目前後から生じることを認めた。
高等植物液胞膜のエネルギ-変換酵素に関する研究

高等植物の液胞膜に局在する2種の水素イオン輸送性酵素(プロトンポンプ)、すなわちATPase(酵素番号: 3.6.1.34)と無機ピロリン酸ピロホスファタ-ゼ(酵素番号:3.6.1.1)について、ヤエナリを材料にタンパク質分子レベルおよび酵素学的解析を進め、下記に示すいくつかの重要な知見を得た。【プロトン輸送性ピロホスファタ-ゼ、H^+ーPPase】H^+PPaseは分子サイズ73 kDaの単一のタンパク質で構成されている。精製酵素標品を用いた生化学的な解析により73Kタンパク質が二量体の形態をとり、これが具体的な機能単位であることが示された。酵素の高次構造の安定化にはMg^<2+>の存在が不可欠であり、Mg^<2+>は酵素安定化作用だけでなく酵素機能の活性化にも不可欠である。したがってH^+ーPPaseはMg^<2+>を必須要素とする金属酵素といえる。一方、Ca^<2+>はPPaseに対して強い阻害作用を示す。反応溶液中でCaPPi複合体を形成され、これが基質(MgPPi)結合部位に高い親和性をもつためである(Ki,17μM)。液胞膜H^+ーPPaseは他の可溶性PPaseあるいは動物ミトコンドリア、光合成細菌の膜結合型PPaseとは、酵素学的性質に共通点があるもののタンパク質としては異種分子であることも明らかにした。【プロトン輸送性ATPase】植物細胞には細胞膜、ミトコンドリア、葉緑体そして液胞の4種のH^+ATPaseが存在し、その中の液胞ATPaseを対象とした。ヤエナリの液胞膜ATPaseは9種(分子サイズ、68,57,44,38,37,32,16,13,12 kDa)の異種タンパク質分子の集合体であり、このうち16Kサブユニットはプロトンチャンネルを、他の8種のサブユニットは膜から露出した親水性部位を形成している。N末端側のアミノ酸配列から68Kは動植物、古細菌に共通な触媒サブユニットであることも明らかにした。高等植物の液胞膜に局在するATPaseと無機ピロリン酸ピロホスフイァタ-ゼの2つのプロトンポンプについて、本年度はタンパク質レベルでの実体解明と生化学的性質の解明に焦点を当て、いくつかの重要な知見を得た。ピロホスファタ-ゼは分子サイズ73kDaの単一のポリペプチドで構成されている。ゲルろ過法あるいは界面活性剤共存下でのポリアクリルアミド電気泳動での挙動は、この酵素が単量体ではなく多量体構造をとっている可能性を強く示唆した。73kDaのタンパク質がプロトン輸送能を保持していることは、プロトンチャンネル阻害剤であるDCCDがタンパク質に共有結合して活性を抑制すること、特異抗体が加水分解活性のみでなく膜小胞でのプロトン輸送を阻害する、などの点から確認できた。液胞膜の酵素は、他の膜結合型あるいは可溶性型ピロホスファタ-ゼとはMg^<2+>要求性、過剰基質による阻害などいくつかの共通点を持つものの、分子サイズ、抗体の反応性、K^+による活性促進、リン脂質要求性などの点で明らかに異なっている。一方液胞膜のATPaseについては、これまで言われてきた3種ではなく合計9種の分子サイズの異なるサブユニットで構成されていることを明らかにした。

ほぼ同時期に発表された他のグル-プの論文もこれを支持している。ATPaseは液胞型の他にF_1型(ミトコンドリア、葉緑体)とP型(真核細胞の細胞膜)が知られている。本研究の結果は、液胞膜ATPaseが酵素阻害剤に対する感受性等についてはF_1型P型のいずれとも異なるが、サブユニット構成あるいは4次構造の点ではF_1型に似ていることを示した。このことは触媒サブユニットの抗体反応性からも示唆されていた。ただ、調節サブユニットの1つと考えられる38kDaサブユニットに対する抗体は、植物ミトコンドリアATPaseのいずれのサブユニットとも反応しなかった。高等植物の液胞膜に局在する2種の水素イオン輸送性酵素(プロトンポンプ)、すなわちATPase(酵素番号:3.6.1.34)と無機ピロリン酸ピロホスファタ-ゼ(酵素番号:3.6.1.1)について、ヤエナリを材料にタンパク質分子レベルおよび酵素学的解析を進め、下記に示すいくつかの重要な知見を得た。【プロトン輸送性ピロホスファタ-ゼ、H^+ーPPase】H^+ーPPaseは分子サイズ73kDaの単一のタンパク質で構成されている。精製酵素標品を用いた生化学的な解析により73Kタンパク質が二量体の形態をとり、これが具体的な機能単位であることが示された。酵素の高次構造の安定化にはMg^<2+>の存在が不可欠であり、Mg^<2+>は酵素安定化作用だけでなく酵素機能の活性化にも不可欠である。したがってH^+ーPPaseはMg^<2+>を必要素とする金属酵素といえる。一方、Ca^<2+>はPPaseに対して強い阻害物用を示す。反応溶液中でCaPPi複合体を形成され、これが基質(MgPPi)結合部位に高い親和性をもつためである(Ki,17μM)。液胞膜H^+ーPPaseは他の可溶性PPaseあるいは動物ミトコンドリア、光合成細菌の膜結合型PPaseとは、酵素学的性質に共通点があるもののタンパク質としては異種分子であることも明らかにした。【プロトン輸送性ATPase】植物細胞には細胞膜、ミトコンドリア、葉緑体そして液胞の4種のH^+ATPaseが存在し、その中の液胞ATPaseを対象とした。ヤエナリの液胞膜ATPaseは9種(分子サイズ、68,57,44,38,37,32,16,13,12kDa)の異種タンパク質分子の集合体であり、このうち16Kサブユニットはプロトンチャンネルを、他の8種のサブユニットは膜から露出した親水性部位を形成している。N末端側のアミノ酸配列から68Kは動植物、古細菌に共通な触媒サブユニットであることも明らかにした。
Trk導入髄芽腫細胞株のNGF誘導細胞死モデルにおけるapoptosis機構解明

これまでの研究で、髄芽腫細胞株のD283に神経成長因子(NGF)の受容体であるTrkを遺伝子導入したD283trkが、NGFにより細胞死(アポトーシス)を起こすことを示してきた。今回その再現性をみるため、同一患者から得られたD425(原発巣)とD458(播種した細胞から)細胞株に同様にtrkA mRNAを導入した。この高発現細胞(D425trk,D458trk)にNGFを添加すると、D425trkはD283trkと同様短期間でapoptosisが誘導されたが、D458trkは長期間のNGFの添加により、分化が誘導されることを示した。このD425trkとD458trkの分子機構の違いを時系列で詳しく検討した。Northen blottingを用い、NGF添加前と12時間、24時間、72時間後のD425,D425trk,D458,D458trk細胞のRNAで比較した。NGF添加12時間後でtrk細胞はすでにtrkAをupregulateしており、時間経過とともにその発現量を増していた。また他のNGF receptorであるp75NGFRはD458trkにおいて72時間後に発現してきたが、他の細胞には発現していなかった。またp75NGFR蛋白の発現は免疫染色で見たところ、一週間後にはっきり発現が認められた。今回の実験により、各細胞間での発現の違いだけでなく、時間経過でtrkA,p75NGFRの発現のパターンを示すことができた。我々は、髄芽腫細胞株のD283に神経成長因子(NGF)の受容体であるTrkを遺伝子導入したD283trkが、NGFにより細胞死(アポトーシス)を起こすことを示した。従来のNGF/Trkが分化誘導や細胞死阻止に働くという結果と全く異なるため、そのメカニズムを解明する前にまずこの現象がD283に特有の現象なのか、髄芽腫に特徴的なものかを検討した。同一患者から得られたD425(原発巣)とD458(播種した細胞から)細胞株を用いた。これらの細胞は内因性のtrkAを発現していないことを確認した。trkAmRNAの遺伝子導入後、高発現細胞(D425trk,D458trk)のNGFに対するリン酸化反応をホスホタイロシン抗体により確認した。形態学的に、D425trkはD283trkと同様NGFにより短期間で(4日以内)apoptosisが誘導されたが、驚くべきことに同一患者由来のD458trkは長期間(4-5週間)のNGFの添加により、分化-擬集した細胞塊より長い神経様突起を多数伸長-を示した。これらの結果から、D283trkでのアポトーシス分子機構の検討と共に、全く異なる反応を示したこのD425trkとD458trkの分子機構の違いをRT-PCRとNorthern blottingにより検討した。両細胞ともにtrkAはNGF添加後増加していたが、もう一つのNGF受容体である低親和性NGF受容体p75NGFRは、D425trkでは発現が認められなかったが、D458trkでNGF添加後に発現がみとめられた。更に免疫染色(蛍光抗体法)でNGF添加後D458trkの細胞表面にp75蛋白発現を確認した。今後は、D283trkと共に、D425trk-D458trkシステムで、シグナル伝達(PI3-K等)やその他の因子をmRNAと蛋白レベルで観察する予定である。
4D-CT画像加算処理技術を用いた造影剤80%減量CTAの臨床応用

新たな造影剤減量法として4D-CT画像加算処理技術を用いた造影剤80%減量CTAngiographyの臨床応用を最終目標とし、まずは研究実施計画に基づき、ファントム実験を行った。4CT-CTデータの補正や加算処理後の画像における標的血管の形態や計測値の精緻性を検証し、造影剤投与やCT撮影の至適プロトコールを探索した。ファントム実験の結果より、加算処理による形態や計測値の変化がないことを確認し、大動脈領域における必要最低限の造影剤量と被ばく線量となる撮影プロトコールを確立した。続いて、腹部大動脈瘤に対するステントグラフト内挿術(EVAR)を受ける候補者で腎機能障害を合併している症例を対象とし、従来CT Angiographyとの前向き比較試験に向けての予備研究を開始した。腹部大動脈瘤に対するステントグラフト内挿術(EVAR)は他大動脈領域の血管内治療と比較し、症例数も豊富であり、術前に詳細な血管の評価を必要とするため、予備研究に適すると判断した。現在、症例データを蓄積し、解析中である。なお、予備研究にあたっては施設内倫理委員会の承認を得ている。予備研究ではEVAR術前検査として4D-CTを撮像し、加算処理した画像を基にEVARの術前計画を行うが、ファントム実験と同様に加算処理に伴う大動脈の形態や計測値の信頼性などの画質評価と造影剤腎症やEVARの結果などの臨床的評価を行っている。予備研究の解析結果については国内学会ないしは国際学会にて発表予定であり、海外雑誌への投稿を検討している。臨床研究にあたり、対象を腎機能障害を有する症例に限定しており、予想よりも症例の確保にやや難渋しているが、おおむね順調と考えている。腹部大動脈瘤に対するステントグラフト内挿術(EVAR)を受ける候補者で腎機能障害を合併している症例を対象とし、EVAR術前検査として4D-CTを撮像し、加算処理した画像の画質評価と4D-CT撮像に伴う安全性やEVAR結果などの臨床的評価を行っている。現在、症例データを蓄積し、解析中であり、解析結果については国内学会ないしは国際学会にて発表予定であり、海外雑誌への投稿を検討している。今後、従来CT Angiographyとの前向き比較試験を計画しているが、研究デザインを再考中である。購入予定であった動態ファントムについては同施設で所有していたファントムを借用できたため、次年度使用額が生じたと考えている。また、現時点では保存が必要なデータ量が多くはなく、学会等への参加や消耗品、人件費への使用がなかったことも理由に挙げられる。次年度使用額については、臨床研究のデータ解析や保存、学会などでの研究成果発表などに使用予定である。