hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
がん細胞のアポトーシス抵抗性を標的とする抗がん物質の探索

小胞体ストレスに呼応して発現上昇する分子シャペロンGRP78は固形がんのアポトーシス抵抗性に関与することが知られている。Streptomycesversipellisと同定した放線菌から得られた新規物質versipelostatin (VST)は、低グルコースや2-デオキシグルコース処理した固形がん細胞に対してGRP78の発現をmRNAレベルで抑制し、選択的細胞死を誘導した。VSTは小胞体ストレス応答の転写活性化因子であるXBP1およびATF4の産生を抑制した。また、MKN74ヒト胃がんを移植したヌードマウスにおいて、VSTは単独で抗腫瘍活性を示し、シスプラチンとの併用ではさらに高い抗腫瘍効果が認められた。がん遺伝子導入細胞に対して選択的にアポトーシスを誘導する物質を探索した結果、Streptomyces olivoviridisと同定した放線菌の培養物中に新規活性物質FL29を見いだした。各種機器分析により、FL29は分子式(イオン)C_<56>H_<93>N_<14>O_<10>S_7+のペプチド化合物であり、多数のチオアミド結合を有する極めてユニークな構造であることが判明した。各種がん遺伝子で形質転換したラット3Y1線維芽細胞に対する作用を調べたところ、FL29はアデノウイルスE1A遺伝子を有する細胞に対して選択的にアポトーシスを誘導し、特に12型アデノウイルスで形質転換したAd12-3Y1細胞に対して高い活性を示した(IC_<50>3.9ng/ml)。Ras依存性細胞に対して選択的アポトーシスを誘導する物質の探索を行った結果、放線菌Saccharothrix sp.AJ9571株から新規活性物質Ammocidinを単離し、NMRを中心とした機器分析により、3分子の糖が結合した20員環マクロライドであることを明らかにした。AmmocidinはIL-3非存在下でRasに依存して生存するBa/F3細胞に対して選択的なアポトーシスを誘導し、そのIC_<50>は66ng/mlであった。AmmocidinはRas下流のMAPKであるERK2のリン酸化を著しく阻害した。IGF-1に依存して生育するMCF-7ヒト乳がん細胞に対して選択的に作用する抗がん物質の探索を行った結果、Byssochlamys nivea M#5187株の培養液中に新規活性物質を見いだし、Byssochlamysolと命名した。Byssochlamysolの分子式は高分解能FAB-MSによりC_<32>H_<50>O_7と決定し、各種2次元NMRを用いた解析により、高度に酸化されたErgostane骨格からなるステロイド化合物であることを明らかにした。ByssochlamysolはIGF-1依存的に生育するMCF-7細胞に対して選択的に増殖を抑制し、そのIC_<50>は20ng/mlであったが、0.5%FBS含有培地中では増殖抑制は認められなかった。また、ByssochlamysolはIGF-1依存的に生育するColo320DMヒト結腸がん細胞に対してはアポトーシスを誘導したが、このアポトーシス誘導活性は0.5%FBS添加によって完全に抑制された。一方、MKN-45ヒト胃がん細胞、Saos-2ヒト骨肉腫細胞、3Y1ラット線維芽細胞に対するByssochlamysolの細胞障害作用は認められず、極めて選択的な活性を有することが明らかになった。IGFに依存して増殖するがん細胞に対して選択的に作用する物質を探索した結果、Gymnascella dankaliensisと同定した糸状菌から新規活性物質を単離し、Gymnasterolと命名した。Gymnasterolの分子式は高分解能FAB-MSによりC_<28>H_<42>O_3と決定し、各種2次元NMRを用いた解析により、エポキシドを含むErgostane骨格からなるステロイド化合物であることを明らかにした。縮合環部分の相対立体配置はNOESYスペクトルの解析により決定した。GymnasterolはIGF-1依存的に生育するMCF-7ヒト乳がん細胞に対して選択的に増殖を抑制し、そのIC_<50>は48ng/mlであったが、0.5%FBS含有培地中における増殖抑制は高濃度でのみ観察された(IC_<50> 2,4μg/ml)。Gymnasterolのこのような選択的作用はその他の細胞に対しては認められず、高濃度では非特異的な細胞毒性が観察された(IC_<50> 1.26.2μg/ml)。がん遺伝子導入細胞に対して選択的に作用する抗がん物質QN5727の立体構造をNMRにおけるスピン結合解析と改良Mosher法により決定した。QN5727は、SV40、アデノウイルスE1A、H-ras、srcなどで形質転換したラット3Y1線維芽細胞に対して低濃度で増殖を抑制したが(IC_<50> 4.531ng/ml)、正常3Y1細胞に対する作用は弱いものであった(IC_<50> 140ng/ml)。フローサイトメトリー解析の結果、QN5727のがん遺伝子導入3Y1細胞に対する作用は細胞周期のG1期停止であることが判明した。QN5727はこれらの細胞においてCDK阻害タンパク質p21の発現を促進したが、p53を欠失しているSaos-2ヒト骨肉腫細胞、KAT0-IIIヒト胃がん細胞、NCI-H358ヒト肺がん細胞においてはp21の発現上昇は認められなかった。

また、QN5727処理細胞において液胞型H+-ATPaseの阻害に基づくオルガネラの酸性化抑制が観察された。アポトーシス抑制性の増殖因子IGFに依存して増殖するがん細胞に対して選択的に作用する物質を探索した結果、未同定の土壌分離糸状菌から活性物質QN23319を単離した。QN23319はユニークなアルキルフェノール誘導体であり、NMR解析と分解実験によりその立体構造を決定した。QN23319は無血清培地中でIGF-1に依存して生育するヒト乳がん細胞MCF-7およびT-47Dの増殖を低濃度で抑制したが(IC_<50>9.7ng/mlおよび32ng/ml)、血清含有培地中における増殖抑制は高濃度でのみ観察された。また、QN23319はこれらの細胞のエストロゲン依存性増殖も阻害した。小胞体ストレスに応答して発現上昇する分子シャペロンGRP78は固形がんのアポトーシス抵抗性に関与することが知られている。GRP78プロモーター下流にルシフェラーゼ遺伝子を挿入したレポータープラスミド導入細胞を用いてGRP78の発現抑制物質を探索した結果、Streptomyces versipellisと同定した放線菌から新規活性物質versipelostatinを単離した。本化合物は3分子の糖を含むテトロン酸マクロライドであり、NMRスペクトルの詳細な検討によりその立体構造を決定した。versipelostatinは、低グルコースや2-デオキシグルコース処理により誘導されるGRP78の発現をタンパク質レベルおよびmRNAレベルで抑制し、低グルコース環境における固形がん細胞に対して選択的細胞死を誘導した。さらに、versipelostatinはMKN74ヒト胃がんを移植したヌードマウスを用いたin vivo試験において抗腫瘍活性を示した。小胞体ストレスに呼応して発現上昇する分子シャペロンGRP78は固形がんのアポトーシス抵抗性に関与することが知られている。Streptomycesversipellisと同定した放線菌から得られた新規物質versipelostatin (VST)は、低グルコースや2-デオキシグルコース処理した固形がん細胞に対してGRP78の発現をmRNAレベルで抑制し、選択的細胞死を誘導した。VSTは小胞体ストレス応答の転写活性化因子であるXBP1およびATF4の産生を抑制した。また、MKN74ヒト胃がんを移植したヌードマウスにおいて、VSTは単独で抗腫瘍活性を示し、シスプラチンとの併用ではさらに高い抗腫瘍効果が認められた。がん遺伝子導入細胞に対して選択的にアポトーシスを誘導する物質を探索した結果、Streptomyces olivoviridisと同定した放線菌の培養物中に新規活性物質FL29を見いだした。各種機器分析により、FL29は分子式(イオン)C_<56>H_<93>N_<14>O_<10>S_7+のペプチド化合物であり、多数のチオアミド結合を有する極めてユニークな構造であることが判明した。各種がん遺伝子で形質転換したラット3Y1線維芽細胞に対する作用を調べたところ、FL29はアデノウイルスE1A遺伝子を有する細胞に対して選択的にアポトーシスを誘導し、特に12型アデノウイルスで形質転換したAd12-3Y1細胞に対して高い活性を示した(IC_<50>3.9ng/ml)。
日本人型シスチン尿症の病因解明の鍵を握るシスチン輸送体結合蛋白質の同定とその役割

シスチントランスポーターBAT1/rBATの変異は、シスチン尿症を引き起こす。日本人に多く見られるBAT1のP132Lという変異によって、シスチントランスポーターの機能が消失し、これは機能保持に関与するタンパク質が結合できなくなった結果だと考えられた。そこでBAT1結合タンパク質の同定とその機能解析を目指し研究を行った。その結果、BAT1の機能調節に関与すると思われる結合タンパク質をいくつか同定できたが、P132L変異体に結合しなかったものは見つからなかった。シスチン尿症は、腎近位尿細管管腔側のシスチントランスポーターの遺伝的変異によって生じる常染色体劣性の疾患である。日本人のシスチン尿症変異は、欧米人のものとは大きく異なり、欧米人では見出されていないBAT1のC-末端の変異P482L(第482残基であるプロリンのロイシンへの変異)が、日本人症例の約85%を占めている。P482L変異は、トランスポータータンパク質のC-末端細胞内ドメインにあり、基質結合や基質輸送に直接は関与しないと考えられる部位の変異である。これは、この部位でのタンパク質間相互作用が当該トランスポーターの機能活性にとって重要であること、またそのタンパク質間相互作用の障害がP482Lの病態を引き起こすことを示唆している。そこで、BAT1のC-末端に結合し、P482L変異体には結合しないタンパク質の探索を開始した。まず、エピトープタグ付BAT1とそのP482L変異体を作製し、これらのコンストラクトを培養細胞に安定に発現させた。このトランスポーター発現細胞を界面活性剤にて可溶化後、免疫沈降によりトランスポーター複合体を精製・濃縮した。このサンプルを電気泳動法により分離し、クーマシー染色により解析を行った。予想に反し、野生型BAT1と変異体P482Lで結合タンパク質のバンドに差が見られなかった。しかしながら、BAT1の機能発現に重要なタンパク質も含まれている可能性もあるので、タンパク質スポットを切り出し、高速液体クロマトグラフィーと質量分析計を組み合わせてタンパク質の同定を行う予定である。シスチン尿症は、腎近位尿細管管腔側のシスチントランスポーターBAT1/rBATの遺伝的変異によって生じる常染色体劣性の疾患である。日本人のシスチン尿症変異は、欧米人のものとは大きく異なり、欧米人では見出されていないBAT1のC-末端の変異P482Lが、日本人症例の約85%を占めている。そこで、BAT1のC-末端に結合し、P482L変異体には結合しないタンパク質の探索を行った。まず、免疫沈降法やGST-pull down法を用いて、BAT1に結合するタンパク質複合体を精製し、SDS-PAGEにてタンパク質の分離を行った。クーマシー染色や蛍光染色によって得られたタンパク質バンドを切り出し、高速液体クロマトグラフィーと質量分析計を組み合わせてタンパク質の同定を行った。その結果、HSP-70, RACK-1, rBAT, garectin 3 binding proteinなどがBAT1の結合タンパク質として得られた。しかしながら、それらのタンパク質についてP482L変異体との結合実験を行った所、このP482L変異体と結合しないタンパク質は見いだされなかった。
尋常性白斑のメラニン産生幹細胞の活性化

尋常性白斑は全身の皮膚の白斑を生ずる難治性疾患疾患であるがこの疾患を治療する方法としてわれわれは毛嚢部bulge領域に存在するとされる色素産生幹細胞に注目した。ヒト及び動物の外毛根鞘にメラニン再生幹細胞が存在することは古くから知られており、紫外線照射後にメラニン再生は毛包周囲から生じるが、我々は既にこのことがメラニン再生幹細胞が活性化され、毛包より周辺皮膚へと細胞が移動増殖する結果であると報告した。本研究ではこれらの基礎的、臨床的成果を尋常性白斑の治療法開発に応用し、これら再生幹細胞の活性化にチロシナーゼ及びTRP-1遺伝子を選択的に幹細胞に導入する。bulge transplantationによりhostのfollicle切開挿入部よりdonor由来の細胞が遊走し、follicleの外壁に沿って、細胞の層を作る姿が観察された。46の細胞層からなり、その中にTRP1陽性細胞が散見されるという結果を得た。元来にhostにはTRP1陽性細胞は存在しないため、donor由来と考えられた。具体的な方法としては、互いに近交系となるACIラット(毛色黒)とWisterラット(毛色白)を用い、ACIラットのvibrissalよりbulgeを取り出し、wisterラットのbulgeと入れ替える。その後、その移植操作をしたfollicleをnude mouseの皮下に留置しincubateした。埋入から4週もしくは8週経った時点で摘出し、anti-TRP-antibodyにて免疫抗体染色を行なって、陽性細胞の分布を観察し、新たに出現した色素細胞の動態を観察した。現在はbulge organ cultureを行い、niche環境より遊走してくる幹細胞の同定、単離培養法を確立させるべく検討していく。得られた細胞はSSEA-1などの抗幹細胞マーカー抗体にて分化段階を特定していくことも可能である。つい先年までは存在すら疑問視されていたhair follicle bulge内のmelanocyte stem cellは現在ではその存在は確認されたものと考えられており、今後はそれをどう生かし、再生医療の現場で活用するかが焦点となっている。melanocyte stem cellがどういう経路をたどりmature melanocyteと分化していくかについてはいまだ明確な説明はなされておらず、そのために必要な因子も同定されてはいない。推測段階としては、b-FGF、BMP、HGFなどが考えられているのでこれらの遺伝子導入の効果について検討している。このようにして最終的にはmelanocyte stem cellを利用した尋常性白斑の遺伝子治療へと発展させたい。尋常性白斑は全身の皮膚に白斑を生じる難治性の疾患であるが、これを治療する方法として、我々は毛嚢部bulge領域に存在するとされるmultipotent stem cell(色素再生幹細胞)に注目した。本年度はその第1段階として、有色ラットのbulge部を白色ラットのそれと入れ替え、移植された毛嚢内でのmelanocyteへの分化の有無を観察した。bulge部に存在する色素再生幹細胞の同定とその分離・移植は本研究のためにきわめて重要な手法である。HE染色で移植片の定着を観察したところ、hostのbulge領域に定着することから本研究における実験モデルとして用いることが可能である状況と判断している。今後の展開としては、来年度はmelanocyteに特異性を持つtyrosinase, tyrosinase-related protein(TRP)、yp100等の細胞マーカを用いた免疫染色を行い、陽性所見を呈する細胞の存在を観察する予定である。これらmelanocyte抗原認識抗体はmelanocyteの分化とも関連しているので、これにより細胞分化の過程もみる。また、有色ラット由来のbulge部細胞の単離培養法を確立し、melanocyteへの分化発生を観察するとともに最終的にはmelanocyte stem cellを利用した尋常性白班の遺伝子治療へと発展させるための基礎的技術を確立させたい。

得られた細胞はSSEA-1などの抗幹細胞マーカー抗体にて分化段階を特定していくことも可能である。つい先年までは存在すら疑問視されていたhair follicle bulge内のmelanocyte stem cellは現在ではその存在は確認されたものと考えられており、今後はそれをどう生かし、再生医療の現場で活用するかが焦点となっている。melanocyte stem cellがどういう経路をたどりmature melanocyteと分化していくかについてはいまだ明確な説明はなされておらず、そのために必要な因子も同定されてはいない。推測段階としては、b-FGF、BMP、HGFなどが考えられているのでこれらの遺伝子導入の効果について検討している。このようにして最終的にはmelanocyte stem cellを利用した尋常性白斑の遺伝子治療へと発展させたい。
VF検査に代わる非侵襲的な嚥下検査の構築

我々は,非侵襲的にベッドサイドで実施できる嚥下機能評価方法を開発してきた。ピエゾフィルム(圧電素子)を頸部の皮膚に装着して,頸部の振動から嚥下機能を評価する方法を考案した。本装置で得られる波形成分から舌骨の移動時間を計測できることを明らかにした。健常被験者10名(平均年齢42歳、男性7名、女性3名)の5mlの飲水(3回施行)の際のVF撮影とピエゾ波形解析等、定量的データ解析を行い、コントロール値を算出した。結果はピエゾ波形PS1、PS2の潜時が嚥下初期の舌骨の動態を反映することが分かった。われわれはピエゾフィルムを頸部に貼り、得られるピエゾ波形から嚥下機能を評価する方法を考案した。本装置は非侵襲的に嚥下運動が測定でき、同一条件の嚥下運動で得られる波形は高い再現性がある。さらに、われわれは本装置で得られる波形から嚥下咽頭期の舌骨の運動を評価できることを見出した。これまで嚥下咽頭期の機能評価はX線嚥下造影検査に頼ることが多いため,放射線被曝をはじめ倫理的にも制約が大きい。多くの研究者が嚥下障害を舌骨の運動に着目して障害の評価,治療効果の基準としてきたが,多くはX線嚥下造影検査に頼るものであった。しかし、本装置を用いた測定はベッドサイドでの測定が可能であり,嚥下動態を極めて安全にかつ高精度に分析することが可能となり、嚥下障害者における診断および治療経過の評価のみならず健常者における嚥下機能の多面的な解明にも応用できる。当該年度に5名の健常被験者を対象にピエゾ波形、表面筋電図,X線嚥下造影検査の同時測定を行い、舌骨の移動に伴う波形成分の詳細な解析を行った。その結果、ピエゾ波形の潜時から舌骨の移動時間、舌骨の移動に伴う軌跡の予測が可能であることが判明した。さらに、本装置を用いた健常者の嚥下運動の標準値作成においては、予定人数で波形解析を行った結果からは、舌骨の移動時間、移動パターンには個体差が大きく正常嚥下の標準値の作成には、さらに被験者数を増やして、ピエゾ波形のパターン分類を行い、それぞれのパターンに対する基準値の作成が必要となった。初年度にピエゾ波形とX線嚥下造影検査の画像を同期させ、そこから予測される舌骨の動きと嚥下動態の関連付けを行い、舌骨の後方移動をS1,前上方移動をS2,舌骨が元に移動する動きをS3とした。当該年度に20名の健常被験者を対象にピエゾ波形による正常嚥下の基準値作成を行うために、空嚥下、蒸留水1,3,5,10,15mlによる嚥下時のピエゾ波形のS1,S2,S3の変化を解析した。その結果、健常者では、5ml,10mlの嚥下波形で固体内変動が少なく、安定した波形解析を行うことが可能であった。空嚥下および1mlによる嚥下では、S1,S2の潜時は不安定であったが、確実な嚥下に対して波形パターンは同じ傾向を示した。嚥下障害者では、空嚥下あるいは、0.4ml以下の極少量の水を咽頭上部に滴下する誘発嚥下で安全に嚥下検査が実施できることから少量嚥下のピエゾ波形の解析による嚥下評価が可能であることが示唆された。

本研究はピエゾフィルム(圧電素子)を頸部の皮膚に装着して,頸部の振動から嚥下機能を評価する方法(以下本法と記す)を考案し、データの解析を行ってきた。平成21年度にピエゾ波形とX線嚥下造影検査の画像を同期させ、そこから予測される舌骨の動きと嚥下動態の関連付けを行い、舌骨の後方移動をS1,前上方移動をS2,舌骨が元に移動する動きをS3とし、試験的に画像解析が行える事を報告した。さらに平成22年度に健常被験者を対象にピエゾ波形による正常嚥下の解析を行うために、空嚥下、蒸留水1,3,5,10,15mlによる嚥下時のピエゾ波形のS1,S2,S3の変化を試験的に解析し、安定した波形解析を行うことが可能であった。嚥下障害者では、空嚥下あるいは、0.4ml以下の極少量の水を咽頭上部に滴下する誘発嚥下で安全に嚥下検査が実施できることから少量嚥下のピエゾ波形の解析による嚥下評価が可能であることが示唆された。平成23年度には、健常被験者10名(平均年齢42歳、男性7名、女性3名)の5mlの飲水(3回施行)の際のVF撮影とピエゾ波形解析等、定量的データ解析を行い、コントロール値を算出した。VF上の舌骨の動態時間のS1,S2,S3、及びピエゾ波形解析とも各回(13回)の比較をKruskal Wallisによる3群比較を行うと、有意差はない結果であった。この結果は本法の再現性が高いことを示唆する。さらにS1、S2ではVF潜時とピエゾ波形の潜時間に有意な相関(Spearman順位相関係数)が認められたが、S3では相関は認められなかった。以上の結果はピエゾ波形S1、S2の潜時が嚥下初期の舌骨の動態を反映することを意味する。このデータは今まで、嚥下造影検査をしなければ、知り得ない結果であったが、ピエゾセンサーを頚部に装着するだけで得られるデータである。つまり、非侵襲的に嚥下に要する時間を定量的に測定できる世界で最初のデータとなり、その臨床的意義は大きい。
救急初療看護におけるケアの質評価に関する基礎的研究

日本の救急医療システムは、その地域の特性によって形態を異にしていること、また対象の特性より救急初療以降の療養が継続されることより、構造指標や結果指標によって判断することは妥当ではなく、過程指標に着目した。過程指標はケアを提供する行為や環境、患者と看護師の相互作用を評価と視点として捉えているが、本研究では、二次・三次救急患者が救急外来において看護師から受けたケアをどのように捉えているのか、全身状態が安定したことを確認した後聞き取り調査を行った。対象者(心臓・血管系に障害をもつ患者)が回想しながら語った事柄は、看護師から受けたケアと言うよりも当時の対象者自身の体験に集約された。聞き取り調査の内容を記述化してグラウンデッドセオリーアプローチによって分析を行った。その結果、患者の体験は【信じて実を委ねる】【自分が自分でない感覚】【現状への驚愕】【今後をイメージできる情報を希求】の4カテゴリーが生成された。救急初療を受ける患者は、戸惑い困惑する中で医療者へ依存しながらも自分らしさを維持して生を求め、それを捉えようとしていた。看護師は、救急初療の各局面において患者に対して安らぎと安心を与え、生命の危機に陥った患者を支えることで、患者は継続されるケア療養法を受けとめていくことが可能になると考えられる。この研究結果より、救急初療に関わる看護師には危機的状況下にある患者との間において、理解と納得を得る合意形成を志向したコミュニケーション技術、これを支える人間理解と看護倫理の感性を高めることのできる教育の必要性が示唆された。またこれらの視点を重視しケアが提供され評価される必要がある。救急初療看護の特徴は、既に確定診断がなされた重症集中治療看護とは異なり、顕在する問題は基より潜在的問題への対応、確定診断の着かない状況による全身状態が不安定かつ流動的であることより、一段と看護師の患者への緻密な観察や注意、気配りが等の重要性が増すことである。患者は突然の健康問題の出現によって、身体的苦痛に伴う不安や恐怖、またその状況を理解できずに戸惑う事が予測される。初療にかかわる看護師は、このような危機的状況によって生ずる患者の反応にも注意を向け、それに対応することが責務であり、初療時からの介入を行うことが望ましいと考えられる。医療機関の機能分化・専門性の発揮が求められることとなり、救急医療の担う役割が重要視され、多くの問題点が指摘されている。また、看護基礎教育における救急看護学教育の必要性、救急看護師の役割拡大の可能性についても議論されているが、その具体的な対策とその実現には至っておらず、特に教育面からの救急看護の新たな展開が要求されている。本研究は、初療を受ける患者の実態を明らかにすることで対象の理解を深め、効果的な看護実践を提供するため視点としての基礎的研究である。

また、看護基礎教育における救急看護学教育の必要性、救急看護師の役割拡大の可能性についても議論されているが、その具体的な対策とその実現には至っておらず、特に教育面からの救急看護の新たな展開が要求されている。本研究は、初療を受ける患者の実態を明らかにすることで対象の理解を深め、効果的な看護実践を提供するため視点としての基礎的研究である。本年度は、対象者への質問項目の検討、新規調査フィールドの選定、フィールドへの調査協力を依頼し、合意を得る作業を行った。対象者への質問項目については、これまでの研究結果(基盤研究C:課題番号13672521)と先行研究による看護の質に影響を及ぼす看護ケアの内容分析によって得られた項目を基盤として、対象者への質問項目について、看護実践者を交えて検討した。救急医療の現場において、救急看護師が提供する看護ケアは、(1)蘇生、(2)静かに見守る、(3)変化を予測しながら身体機能の保護と悪化防止、(4)安全を保証しながら現状認知を繰り返し促す、(5)直ぐ側で、常に注意を向ける、(6)今後の成り行き説明、(7)確実な情報の集約と公開、(8)効果、および効率促進のための環境調整等、8つの中心的事柄が挙げられる。これらを構成するサブカテゴリーには、看護の質に影響を与えると考えられるケア内容である人間尊重や信頼関係の重視、苦痛の緩和、看護師の姿勢、家族へのケア、モニタリング機能等の要素が含まれていた。対象者(二次救急患者、およびその家族)は、これらに関連する、あるいは意味づけられた看護ケアをどのように受け止め捉えているのか。また、救急医療場においてケアを受ける対象者は、何を希望し、期待しているのか等について、平成17年度に質問(聞き取り)を行う。新規調査フィールドの選定においては、救急部門を有し、二次救急患者を受け入れている施設への調査研究への協力依頼を行っている。今後、調査研究の承諾を得たのち、17年度実施予定について具体的な調査期間の打ち合わせを行う予定である。本年度は、昨年度の検討された質問項目に沿って、聞き取り調査を実施した。調査開始前に、学内倫理審査委員会の承認を得る手続きを行い、その後施設管理者、および病棟管理者への説明を行い、研究協力の許可を得た。また病棟管理者より、現場スタッフへの周知が図られ、最終的には、研究者から(2)現場スタッフへの説明を行い、協力を得ることに同意を得た。対象者は、二次、および三次救急患者とその家族であり、全身状態の安定が図られたことを病棟管理者に確認し、管理者より患者への研究調査承諾に関する内諾を得た後、研究者より再度説明し、調査研究に対する承諾書に署名を得た。聞き取り内容の中心は、救急部門を受診したときの医療職者とのかかわり、それに対する認識である。救急患者の特徴より、当時の記憶が全くない、あるいは記憶が途切れている、当時を思い出したくない等の理由より、十分な情報が得られることが困難な状況であった。現在、心血管系疾患を中心とする患者とその家族からのデータを得ることができ、一部分析を進めている。患者とその家族は、自らの身体状況を思い起こしながら、状況を再構成して語っていることが特徴であり、その状況に対して、看護者を中心とする医療職者がどのような関わりを実施し、それに対する受け止めが中心的な事柄である。次年度においても、データ収集を継続しながら、最終的な分析とまとめを進めていく予定である。
穂発芽耐性遺伝子の単離と機能解明によるイネの環境適応力強化

本研究で着目する穂発芽耐性量的形質遺伝子座qSdr6aについて、研究が進展したので報告する。qSdr6aの候補領域に予測される遺伝子は無かったことから、qSdr6aは近傍の遺伝子発現を制御すると考えられた。そこで、コシヒカリ(Ksh)とNILを対象に、qSdr6aの近傍に位置する遺伝子の発現解析を行った。その結果、GeneXの発現は登熟後期の吸水時にKshと比べてNILで有意に低く、GeneYの発現は登熟初期の吸水時にKshと比べてNILで有意に高かった。以上の結果から、qSdr6aの候補遺伝子はGeneXかGeneYのいずれか、あるいは両者であると考えられた。RAP-DBより、GeneXは機能未知のタンパク質をコードしていたが、KshとNILともに登熟に伴ってその発現量が増加すること、TAIRよりGeneXの相同遺伝子がシロイヌナズナの芽生えで発現していることから、qSdr6aは登熟後期に発芽を促進するGeneXの発現を負に制御し、穂発芽耐性を付与することが推察された。この仮説は、KshとNIL間で登熟初期における発芽抑制因子Sdr4やDOG1Lsの発現量に有意な差がなかった事からも支持される。KshとNIL間で登熟後期における発芽促進因子GA20ox1やHB20の発現量に有意な差がなかったことから、GeneXは新規な経路で発芽を促進すると考えられるが、そのメカニズムの解明にはさらなる解析が必要である。一方、GeneYについては、TILLING法で単離した複数のgeney突然変異体が易発芽性を示したことから、qSdr6aの責任遺伝子はGeneYであることが強く示唆された。これまでの研究によって、穂発芽耐性メカニズムの一端が解明されたとともに、得られた新規な穂発芽耐性遺伝子(座)の育種利用が期待される。これまでの研究で、穂発芽耐性量的形質遺伝子座qSdr6の候補領域の絞り込みに成功した。特にqSdr6aについては、候補領域の近傍に位置する遺伝子発現解析と、TILLING法を用いた逆遺伝学的解析によって、責任遺伝子を2つまで特定することに成功した。これは当初の計画通りである。一方、qSdr6bについては、さらに候補領域を絞り込むために、新規な実験系統の作出を試み、これまでにBC5F2 1万個体から候補領域220kbp内に組換えを有する20系統の選抜に成功した。これも、当初の計画通りである。これまでの成果は、H30年度において、日本育種学会第134回講演会、第13回東北育種研究集会、東北植物学会第8回大会にて、研究発表を行い、そのうち1つの大会では、研究成果が認めれれ優秀発表賞を受賞した。以上より、これまでのところ、おおむね順調に進展していると判断した。当初の計画通り、新規となる穂発芽耐性量的形質遺伝子座の責任遺伝子の同定を試み、得られた遺伝子の機能解析によって、イネにおける穂発芽耐性メカニズムを考察する。qSdr6aについては、責任遺伝子候補として同定された2つの遺伝子について、TILLING法による突然変異体の選抜と表現型調査を行い、どちらが真に穂発芽耐性遺伝子であるか、特定する。さらに、これまでに明らかにされている、発芽関連遺伝子の網羅的な遺伝子発現解析によって、得られた遺伝子の機能を推察し、イネにおける穂発芽耐性メカニズムを考察する。一方、qSdr6bについては、新規に得られたBC5F2 20系統に発芽試験を行い、さらなる候補領域の絞り込みを行い、責任遺伝子を特定する。候補となる遺伝子が特定されれば、qSdr6aと同様に、TILLING法による突然変異体の選抜と表現型調査を行い、候補遺伝子が真に穂発芽耐性遺伝子であるか、特定する。最終的に、本研究によって、イネにおける穂発芽耐性メカニズムの一端を解明するとともに、得られた新規な穂発芽耐性遺伝子(座)の育種利用を促進させたい。人間活動の高度化に端を発する地球温暖化は、近い将来、確実に穀物の生産力低下を引き起こす。これを未然に食い止めるために、穀物に「環境適応力」を付与させることは、穀物の栽培現場において早急に解決すべき課題である。地球温暖化の解決策には、一般的に環境を「守る」手法が採用されるが、本研究は、植物自身が環境変動から身を守るために有する機能を積極的に強化する、「攻めの」手法を採用する。本研究は、穀物の環境適応力強化の対象に「穂発芽耐性」を選定し、人為的に「穀物の穂発芽耐性を強化する」ための分子基盤を構築することによって、人間活動を支えるエネルギー源を確保し、将来における人間活動の礎を築こうとするものである。穂発芽耐性遺伝子、【Sdr6a】と【Sdr6b】について、それぞれの候補領域の間で組換えを有する57系統群を実験材料に、遺伝子型調査と穂発芽調査を統合させた分子遺伝学的手法により、「穂発芽耐性」遺伝子の候補領域を調査した。その結果、Sdr6aとSdr6bの候補領域は、第1染色体短腕の約250 kbpという比較的近い物理距離の中で、それぞれ1,400 bpと220 kbpまでに絞り込むことに成功した。Sdr6bについては、候補領域内にまだ多くの遺伝子がある中で、発芽への関与が予想される2つの遺伝子の存在が確認された。

Sdr6aについては、1,386 bpの候補領域内にコシヒカリとノナボクラ間で大規模な欠損や挿入変異は存在せず、1塩基置換や最大4塩基の欠損あるいは挿入変異が合計14ヶ所確認された。興味深いことに、この候補領域中には、遺伝子が存在しないことから、Sdr6aは近傍に位置する遺伝子の発現を変化させることにより、穂発芽耐性を示すことが示唆された。出穂後3から10週の胚における吸水処理後の網羅的な発現解析から、Sdr6aによって発現が誘導される遺伝子の特定に成功した。これまでの研究において、種子休眠性遺伝子座Sdr6aの候補領域は、特に塩基の多型が集中していた1,386 bpまで絞り込むことに成功した。RAP-DBより、この候補領域中には、遺伝子が存在しないことから、Sdr6aは近傍に位置する遺伝子の発現を変化させることにより、穂発芽耐性を示すことが考えられたことから、出穂後3から10週の胚における吸水処理後の網羅的な発現解析を行った。これまでの結果、Sdr6aによって発現が誘導される遺伝子の特定に成功し、この遺伝子が真に穂発芽耐性を制御しているか、解析を進めているところである。これは当初の計画を上回る成果である。一方、Sdr6bは、作成した組換え系統が保有する遺伝子型の偏りによって候補領域は220 kbpと、未だ遺伝子を特定できるまでに候補領域を絞り込めていない。今後、さらなる候補領域の絞り込みを行うために、これまでに狭まったSdr6b候補領域付近のみノナボクラアリルを有する2系統を選定し、それぞれコシヒカリと交配させ、新たな組換え系統の作出を試みた。これは当初の計画からやや遅れているものの、想定内の範囲である。以上の進捗状況より、全体としては、おおむね順調に進展していると判断した。本研究で着目する穂発芽耐性量的形質遺伝子座qSdr6aについて、研究が進展したので報告する。qSdr6aの候補領域に予測される遺伝子は無かったことから、qSdr6aは近傍の遺伝子発現を制御すると考えられた。そこで、コシヒカリ(Ksh)とNILを対象に、qSdr6aの近傍に位置する遺伝子の発現解析を行った。その結果、GeneXの発現は登熟後期の吸水時にKshと比べてNILで有意に低く、GeneYの発現は登熟初期の吸水時にKshと比べてNILで有意に高かった。以上の結果から、qSdr6aの候補遺伝子はGeneXかGeneYのいずれか、あるいは両者であると考えられた。RAP-DBより、GeneXは機能未知のタンパク質をコードしていたが、KshとNILともに登熟に伴ってその発現量が増加すること、TAIRよりGeneXの相同遺伝子がシロイヌナズナの芽生えで発現していることから、qSdr6aは登熟後期に発芽を促進するGeneXの発現を負に制御し、穂発芽耐性を付与することが推察された。この仮説は、KshとNIL間で登熟初期における発芽抑制因子Sdr4やDOG1Lsの発現量に有意な差がなかった事からも支持される。KshとNIL間で登熟後期における発芽促進因子GA20ox1やHB20の発現量に有意な差がなかったことから、GeneXは新規な経路で発芽を促進すると考えられるが、そのメカニズムの解明にはさらなる解析が必要である。一方、GeneYについては、TILLING法で単離した複数のgeney突然変異体が易発芽性を示したことから、qSdr6aの責任遺伝子はGeneYであることが強く示唆された。これまでの研究によって、穂発芽耐性メカニズムの一端が解明されたとともに、得られた新規な穂発芽耐性遺伝子(座)の育種利用が期待される。
中央アンデスにおける近代化の民俗学的研究-ペルー国民文化も形成と地域アイデンティティー

アンデス諸国特にペルーにおいては、かつての階層化された民族の差異が弱体化する一方で、地域差が顕著になるという現象が認められる。それを検証するためには地域差の実態を明らかにする必要がある。本調査においてはそれをペルーの中部(アヤクチョ)地域と南部(クスコ)地域を対象として、社会、宗教、芸能、芸術表現の諸側面にわたって比較しうる資料の収集に努めた。詳細ね分析は今後の課題であるが、地域差を生み出す要因はきわめて複雑で、錯綜しているようにみえるが、基本は都市/農村関係の特性に規定されている。ペルーにおける近代化の過程は都市部から農村部へと波及するが、同時に1960年代末以来の農村部から都市への膨大な人口移動に伴って、「氾濫」とまでよばれることのあるアンデス化が生じている。すなわち山岳農村地帯の社会・文化伝統が都市生活の重要な部分を形成するにいたっている。つまり、農民出身者が単に都市住民に変わったというだけでなく、社会や文化のさまざまな局面でアンデス高地農村地帯の制度,習慣、観念が普及・一般化し、その一部は広く国民文化として受容されている。本報告書の第1部で扱われたアヤクチョ地方の民族舞踏ハサミ踊りや民衆芸術表現としての箱型祭壇レタブロが広くペルーの都市部で人気を得ていることは、その良い例である。この報告書は1997,1998,1999の3年度にわたってペルーにおいて実施した調査に基づいている。第1部は1998年に国立民族学博物館調査報告9号として公刊した『アヤクチョ社会の歴史、宗教、儀礼』.を収めたものであり、第2部は2000年に刊行を予定する南部(クスコ)に関する調査報告に掲載する論文草稿をまとめたものである。ペルーにおける地域性の形成過程については、北部も含めて今後さらに比較検討を行う。三年計画による「中央アンデスにおける近代化の民族学的研究」の初年度としてペル-国において実施した調査の実績を既提出の実施計画に従って以下に記す。1.社会(都市/農村関係を通じての地域統合)首都リマにおける三世代にわたるアヤクチョ地方出身者の家族親族関係・同郷出身者組織(クラブ・協会)の実施態様を通じて、1.「同一地方出身者の強固な社会的連帯」2.「その連帯感に果たす祝祭・民族芸能の重要性」が明らかになった。(担当:友枝)2.宗教(カトリック祝祭と地域統合)南部山地都市クスコにおいては、農村人口の流入に伴う十字架信仰が顕著であり、その一例としての「十字架の奇跡」現象の発生・組織化・定着過程の調査を通じて、「公的カトリシズムと民衆カトリシズムの動態的関係」が明らかになった。(担当:加藤)3.思想・芸術表現(地域アイデンティティーの民族表象)首都圏におけるアヤクチョ地方出身者による民族芸術(箱型祭壇・焼きもの・聖人像など)の製作・流通販売の実態調査を通じて、1.「この種の芸術表現の国民文化の一部としての受容」2.「伝統の普遍化の過程」が明らかになった。一方、国際観光都市クスコ市においては、観光客の介在によって、国民文化へと直接つながらない形での地方伝統の再生と変容の姿が明らかになった。(担当:藤井、木村)なお、4名の現地研究分担者は、上記諸現象の背景として重要になるペル-近現代社会経済史の史料収集と分析を、北部・中部・南部をそれぞれ分担して遂行した。(担当:ミリョネス、ガマラ、フローレス)三年計画による「中央アンデスにおける近代化の民族学的研究」の二年度としてペルー国において実施した調査は以下の通りである。1.社会(都市/農村関係を通しての地域統合):首都

リマにおけるアヤクチョ地方出身者を対象としてインフォーマル・セクターのの実態調査を行い、都市生活の安定には同郷出身者間の相互扶助が不可欠であることが注目された。担当:友枝。首都リマにおける箱型祭壇製作者の調査を行い、この民衆芸術表現がペルー国民文化の一部として広く受容されていく過程を明らかにした。担当:藤井。南部地方都市クスコと農村の社会的・経済的関係を明らかにするためワマ村においてインテンシブ調査をおこない、孤立化する村落の条件を検証した。担当:木村。2.宗教(カトリック祝祭と地域統合):ペルー南部の地方都市における民衆カトリックの祝祭や十字架信仰の実態調査を行い、これらが地域住民のアイデンティテー形成に働くだけでなく地域発展を促す契機となっていることが明らかになった。担当:加藤・フロレス。3.歴史(地域統合における植民地統治の影響):アヤクチョ地方の文書資料の調査により、植民地統治とカトリック改宗の局面において地域形成過程を明らかにした。担当:ミリョネス・ウェルタス。4.広域調査(ペルー北・中・南の地域差):スペイン語の普及と先住民言語の消失、道路交通網の整備、都市部への移住などこれまでの地域格差が失われる傾向が見られる一方で、各地域や地方での歴史や民俗の掘り起こしによる地域文化の再生産をはかる主張や運動が顕著になっていることが注目される。担当:友枝・藤井・加藤・木村。5.一次・二次調査成果の一部をアヤクチョ地方に関する報告書として刊行した。1.3年継続調査・研究の最終年度に当たり、短期の補充調査を以下の通り行った。(1)ペルー国首都リマにおける地方出身者の組織、母村との関係を調査:都市における地方出身者間の強固な連帯と母村との恒常的な関係維持が顕著であり、これを通じて地方文化伝統の大都市への波及、一般化が認められた。担当:友枝(2)首都リマにおける民族芸術制作に関する調査:特定の民族芸術表現が都市に受容され、普及する条件を、高地都市クスコの例と比較することで明らかにした。担当:藤井(3)高地都市クスコの都市移住者の調査:同村、同郷出身者の連帯は、首都リマにおけるほど顕著ではなく、組織化、制度化もされていない。移住者と母村との関係は、きわめて日常的なものとなっている。担当:木村(4)クスコにおけるカトリック祝祭の歴史変化:高地都市クスコのコルプス・クリスティ祝祭の調査により、スペインの祝祭との顕著な相違が明らかとなり、正当カトリシズムの祝祭においても、アンデス的特性が認められた。担当:ミリョネス2.なお、1次、2次調査成果の一部をアヤクチョ地方に関する報告書として刊行したが(1998)、今年度の補充調査の成果を加えて、クスコ地方に関する報告書を2000年5月に刊行予定している。
ワクチンによる感染症予防策に消極的な保護者の意思決定過程、リスク認識に関する研究

予防接種なしで育児中の保護者を対象に、意思決定までの過程や育児方針、感染症への対応策等について聞き取り調査を実施した。結果、意思決定の主な情報源は先輩ママ、サークル、友人が多かった。接種なしに至った理由は権威的存在の影響、地理的要因、法的拘束力(法律上は努力義務)、情報の偏りと不足(副作用の情報が多い、説明が難解、必要性が不明)、不安、心配(かわいそう、化学物質を与えたくない)、育児方針(代替医療を利用)等が見られた。接種に代わる防御策は多くの保護者が食事への配慮で可能と述べていた。全員が育児に熱心であったが、地域での蔓延という感染症のメカニズムへの対応策は充分ではないことが明らかになった。我が子に予防接種を投与することなく育児を行っている保護者に対し、忌避の理由、そこに至るまでの意思決定過程、乳幼児の集団感染についての知識など、個別の聞き取り調査から得られた情報を集約し、予防接種忌避保護者に共通する特徴と対応方法を探ることが本調査の目的である。本年度、予定数以上の保護者(約50名)の協力を得た。調査参加保護者の平均年齢(±SD)は、28.0(±3.7)歳、全体の約半数が大卒・大学院卒であった。年間世帯収入の中央値は550万円、主観的暮らしぶりは80%以上が「普通」または「余裕がある」と回答していた。参加者全体の20%(10名)が完全拒否者であった。その理由は、地理的要因、法的拘束力の問題、情報の偏向性と情報不足、保護者の感情・子育て方針の4つに(暫定的に)大別された。特に「情報の偏向性と情報不足」の内訳には“成分や副作用の情報から(4/10)"“種類の多さから(4/10)"“納得できない(2/10)"が見られた。「保護者の感情・子育て方針」には“代替物としての食物への期待、こだわり(6/10)"“児自身の自己免疫力への期待(6/10)"“医療への忌避感、不信感(3/10)"などがみられた。保護者の意思決定を支えた存在には、ホメオパシー、宗教、マクロビオティック等があげられた。保護者自身の非接種例は1名のみであった。先行研究と共通する特徴(高学歴、高収入)が見られた一方、地理的要因(医療機関へのアクセスのよさから予防策を拒否)は、新しい知見であった。また、保護者が「自然な子育てをしたいので(接種を拒否する)」と述べていたことは興味深い知見である。予防接種が予防ではなく非自然という記号で語られている点は、保護者への対応方法を探る際の手がかりとなる。高学歴であるにもかかわらず一部保護者には予防接種への誤解(1歳をすぎて受けたい等)があることも新たな知見であった。乳幼児の感染症対策の研究として、自児への予防接種を拒否している保護者と接種に強い不安を持つ保護者を対象に個別聞き取り調査を実施した。全国各地で調査に協力して下さった者は60名であった。高学歴の専業主婦が多く年齢層も高かった。世帯年収の中央値(最小ー最大)は600(200-1500)万円で経済的にも安定していた。接種拒否者(20名/61名)の理由は「情報の偏向性、情報不足」、「児の免疫力への過信」「子育て方針、感情」、「法的拘束力(がない)」、「地理的要因(緊急時の救急外来の利用可能)」の4点に集約された。保護者には誤解や思い込み、感染症の知識と危機感の不足、代替医療への依存がみられた。保護者は育児に熱心かつ丁寧で、育児サークル等にも積極的に参加する社会性の高い者が多かった。乳幼児のケアの知識と家庭看護力があり、病院利用を極力控える育児を心がけていた。多くの保護者が「自然を大切にした子育て」を育児方針の1つとし、遊具や食事、水、オムツ等にこだわりがあった。その延長線上で『ワクチン=自然ではない(naturalでない)』いう発想から「異物(化学的物質)を児に与えたくない」ことを拒否の理由とする保護者は少なくなかった。自児(ワクチン未接種児)が他者から「ワクチンで予防可能な感染症」をうつされるリスクについては、全ての接種拒否保護者から「想定内であり、仕方がない。責任は接種を拒否した私にある、甘受する。」という責任感が見られた。ところが、逆の場合を想定した問い、つまり自児が他者(接種年齢未到達児や免疫機能低下者等)へ当該疾患を感染させる可能性とその責任の所在については、明確な回答は1名(宗教的上の拒否者)のみであった。つまり対象者の予防接種拒否は「我が子」のみへのリスクの判断であり、感染症の特徴である共同体の中での相互感染リスク意識が欠落していることが問題として示唆された。

接種に代わる防御策は多くの保護者が食事への配慮で可能と述べていた。全員が育児に熱心であったが、地域での蔓延という感染症のメカニズムへの対応策は充分ではないことが明らかになった。研究の目的:自分の子どもにワクチンを投与せずに子育てをしている保護者に対し、育児に対する考え方や、ワクチン忌避に至るまでの意思決定過程や保護者の社会性、乳幼児の集団感染についての意識などの調査を行いワクチン忌避の理由を明らかにすることが本調査の目的である。これまでの成果:当初の研究計画通り、平成23年度は聞き取り調査対象者の募集、登録、調査を実施した。「全てのワクチンを忌避している保護者」に加えて、「一部のワクチンを忌避している保護者」、「接種は行ったが不安や悩みがあった保護者」も対象として追加募集した。調査協力者は32名、全て母親であった。居住地は九州10名、東海17名、関西5名であり、聞き取りは全て横尾が行った。平均年齢は母親が36.9(±5.4)歳、配偶者は39.6(±6.8)歳であった。一人あたりの平均子ども数(調査時点)は1.7(±0.8)人であった。ワクチン接種状況は、全ての接種を控えている者5名(15.6%)、一部を控えている者23名(71.9%)、ワクチンを接種した者3名(9.4%)であった。一部のワクチンを控えている者の多くはポリオ(生)ワクチンであり、他にHPV、水痘、流行性耳下腺炎などの任意接種があげられた。接種を控えている理由には、母親の感情(乳児に化学物質を入れたくない)、子育て観(ワクチンに頼らない、免疫力の高い子を育てたい)、メディアの影響(ポリオ生ワクチンに関するTV報道)、母親の信仰や志向(ホメオパシー、マクロビオティック等)などが見られた。理由数は1つが多く複数の理由から接種を控えているという例はこれまでのところ見られていない。接種の判断に家族(配偶者、実父母、義父母)が関与した例は2例(義父母が接種を説得、配偶者が接種を強行)であり、ほとんどは母親に判断と決定権が委ねられていた。聞き取り調査は平成24年度上半期も継続実施予定である。ー大学間異動による研究の一時的遅滞について計画では平成24年度中に聞き取り調査を終了する予定であったが、昨年度途中に活水女子大学から西九州大学へ勤務先を異動したため、それに伴う雑事等により昨年度下半期は調査出張が困難な状況であった。既に昨年度中に協力の申し出を受けているケースに対しては平成25年度上半期に聞き取り調査を実施し、平行してデータ解析調査を行う。平成25年度上半期に予定していたはフォーカスグループインタビューは本年度下半期のできるだけ早い時期に実施することで遅れを取り戻す予定である。当初の計画では、平成24年度に開始予定であったワクチン接種を忌避している保護者を対象とした聞き取り調査を、平成23年度下半期に前倒しで開始できた点は当初の計画以上に進展している。聞き取り調査の継続について:平成23-24年度に実施してきた予防接種を忌避する保護者を対象とした聞き取り調査を平成25年度上半期も継続実施する。当初の計画で想定していた調査対象者数(約50名)を超えた協力が期待されるため、エビデンス向上のためにもできるだけ多くの保護者から聞き取りを行う。フォーカスグループインタビューの実施:予防接種を与えて子育てを行っている(行っていた)保護者、第一子を妊娠中の妊婦でそれぞれ2つのフォーカスグループを作成し、予防接種忌避保護者の意見や考え、理由について説明し、親の立場あるいはこれから子どもを持つ立場からどう考えるか、ディスカッションしてもらう。調査対象地域の拡大について:居住地が近い予防接種忌避保護者は同じ育児サークルであったり、友人であったりするため、接種理由や忌避の過程が類似している例がおおい。
希釈系酸素・窒素モノレイヤーの磁気相転移

黒鉛上酸素モノレイヤーの研究から、その磁気相転移は基盤を介した酸素分子間の相互作用が重要な役割を担っていることが明らかになった。そこで、基盤としてBNを使った場合と、黒鉛上にXeモノレイヤーを成長させたものを使った場合の2種類の試料について磁化測定とx線回折実験を行ない、黒鉛上のものと比較した。1.酸素モノレイヤー/BN黒鉛上のものでは現れてなかった磁気秩序相を発見した。この相の構造は酸素分子軸が黒鉛層に平行に近く、面心長方格子を持つと推測している。磁気相転移に際して、その格子定数が急激に変化し、格子歪みを伴った1次相転移であることが明らかになった。磁気測定より、秩序相の基底状態は単純なものでなく、多くの準安定相が縮退しているものと考えられる。酸素分子軸が黒鉛層に垂直になるような高い被覆率のモノレイヤーでは黒鉛上のもので観測された磁気秩序相が現われる。2.酸素モノレイヤー/Xe/黒鉛黒鉛、BN上のものとは全く違った磁気秩序相(長距離秩序相であるかどうかは現在不明)が現われる。構造は、黒鉛上の高密度相のものと近い3角格子であることが推定されている。現在、放射光を使った精密な構造決定を行なっている。当初の目的であった、希釈系酸素・窒素モノレイヤー系では、十分によい結晶性の試料の作製が困難であったため、結果導出までには至らなかったが、結晶作製条件はほぼ押さえられたので、これから構造解析及び磁化測定を行なっていく予定である。
白色光レーザと蛍光色素法を応用した細胞可視化計測の医用における実用化の研究

ILISPOT装置の自動化、小型化のため平成10年度に取り組んだ具体的なテーマとその結果を以下に示す。1)細胞観察部分の自動化:自動焦点あわせ機構、細胞試料スキャンの自動化、測定用可動ステージ部分の小型化の3点の検討を行った.前者2項目は目的を達成した。特に、「測定した画像信号からのフィードバック制御」により手動部分を排除できる可能性を見いだした。2)蛍光色素の合成および結合法の確立:含フッ素カルボン酸トリフルオロエチルエステルがアミン類と選択的かつ定量的に反応する事を見いだした。また、炭素-フッ素結合の赤外吸収の顕微マッピングがILISPOT法と相補的に活用できることも見いだした。これらの進展結果は実システムへの適用までには至っていないが、今後の展開が期待される。3)測定した画像信号の処理:輝度分布が均一な疑似スポットと勾配を持つ標的スポットとをソフトウエア処理で識別する手法を確立した。この手法によりハードウエア的改変を用いずに信号の高S/N化も同時に達成できた。さらに、輝度分布の高精度解析により焦点あわせやスキャンの自動化への信号フィードバックが可能になった。4)レーザー光源の検討:光源装置小型化の実現はできなかったが、一つのフッ化リチウム結晶中に2種類の組成領域を持つ新たな結晶を作成できれば、現在のレーザ装置よりも40%の小型化が可能であることがわかった。Mirov研究員は本プロジェクトの実験遂行中、波長可変レーザを用いて細胞を断層イメージングしうることを発見した。この(レーザラマン顕微鏡)装置は近い将来免疫検査に活用できる高い可能性を有する。表題の研究課題を達成するための具体的なテーマは、ILISPOT装置の自動化、小型化への改良である。このために研究初年度の平成9年度に取り組んだテーマとその結果は以下の通りである。1.細胞観察部分の自動化(焦点合わせ機構、細胞資料アドレッシング、測定用移動ステージ部分などの小型化):オートフォーカス機構、細胞資料アドレッシングは実用に耐えうるレベルまで到達しているが、ステージの小型化は実現できておらず2年目の課題とした。2.蛍光色素の合成(さらに高効率な色素の検討とその合成):含フッ素カルボン酸無水物・新規なトリフルオロエチル化剤の組み合わせを採用することにより、高い効率で色素を抗体やDNAに結合できる技術を見出した。2年目にあたる平成10年度にはこの方法をさらに改良してILISPOT装置の自動化に有効な実用的色素導入法を確立することになる。3.測定した信号のノイズ除去(疑似蛍光スポットの排除、測定信号の高S/N化):前者は疑似蛍光スポットがクリヤな境界を持つことに着目しソフト的に解決を計り、いまだ実用的とは言えないが、開発段階では十分な画像処理が可能となった。後者については、次の項目4と色素との組み合わせにより結果が左右されるが、今後信号処理のためのソフトウエアによる積算を検討すれば達成できると予測している。4.レーザ光源の検討(高輝度化に向けた最適波長の吟味、光源部分の小型化):光源としてアラバマ大学のグループがすでに完成している超広帯域カラーセンターレーザを用いるのが、課題達成のために最も効果的であることを確認したが、同時に当該レーザー装置の小型化が大きな課題となることも明らかとなった。