hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
放射音測定による被衝撃体の機械的性質，欠陥，衝撃力の同時同定手法の開発

衝撃時に被衝撃体から発生する放射音の平面的分布を,擬似的に測定する装置を考案し製作し,以下の成果が得られた.1)衝撃圧力の空間および時間分布を同定する手法を提案し,実際の実験により確認が行われた.これにより,被衝撃体に与えられる外部からの衝撃力の位置,空間分布,および時間変化の同定が,放射音測定により可能であることが明らかになった.2)被衝撃体表面の凹みの位置および形状を同定する方法を提案し,その手法を使い種々の欠陥の同定ができることが確かめられた.直接衝撃ではなく,既知の音を被衝撃体に入力することも可能であることから,本手法を使えば,被接触で欠陥の同定が可能であることが明らかになった.自動的に衝撃量を加える落下装置の開発を行なった.この装置により,同じ衝撃力を繰り返し被衝撃体に加えることが出来る.本年度作成中のマイクロフォンを自動に動かす装置と組み合わせ,コンピューター制御を行なうことにより,複数本のマイクロフォンを使用したことを仮定した疑似的な実験が可能となる.マイクロフォンは数十マイクロの精度で,100mm四方を移動することが出来る事から,疑似的に,被衝撃体表面から離れた,面での音圧の時間変化を利用して,衝撃力等の同定をすることが可能となる.これまでは,最大4点での音圧の測定データを利用していたことに比べると,平面の音圧データーの利用により,同定精度が飛躍的に向上することが期待される.購入した計算機をもちいて,有限要素法のソフトウェアADVENTUREによるシミュレーションを行なった.平板が衝撃力を受ける解析が十分な精度で行なえることが分った.しかし,市販の解析ソフトに比べ,汎用生が乏しいことが分った.マイクロフォンをx-yステージにより移動させながら同じ衝突動作を繰り返すことで,数本のマイクロフォンによって,疑似的に平面上の音圧の分布を測定する装置を開発した.本装置は,コンピューターで完全にコントロールされていて,衝撃実験,音圧測定,解析データ整理までを自動で行うことができる.この装置により,平面上の音圧分布を最高で200 mm ×200 mmの範囲内において2 μmの分解能で測定することができる.実際に衝撃実験を行い, 100 mm ×100 mmの範囲を1 mmの分解能で測定した計10201点から成る平面上の音圧分布のデータを用いて衝撃力の時間変化と衝撃位置の同時同定を行い,それぞれの同定精度の向上が十分可能であることがわかった.この結果は,「平面上の放射音圧分布の測定による衝撃力と衝撃位置の同定」という題目で日本機械学会第27回計算力学講演会において発表された.また,現在学会論文集へ投稿中である.今まで,最大3点で測定していたデータに比べ,データー量が飛躍的に増加したことにより,同定位置の精度や衝撃力の同定結果が飛躍的に向上することがわかった.今後は,結果の位置や大きさの同定の可能性を検討して行く.さらに,測定された平面音圧分布の時間変化を用いて,比衝撃体表面の加速度変化,すなわち表面の動きを直接求める可能性を検討する.表面変位の時間変化を求めることにより,結果の同定や衝撃位置の同定の精度向上が可能であると考えられる.さらなる精度向上のために,24ビット以上の分解能で音圧分布が測定できる機器の購入を検討している.昨年度までに完成した,衝撃時に発生した放射音圧の圧力分布を擬似的に測定する装置を用いて,引き続き種々の衝撃力測定について調べるとともに,新たに衝撃力分布の測定と被衝撃体に存在する欠陥の同定についても実験を行った.得られた成果は,「衝撃を受ける平板から生じる放射音の測定と有限要素法解析,日本機械学会M&M2015材料力学カンファレンス,2015年11月,東京工業大学」,「衝撃を受ける円板からの放射音による円板内欠陥の同定,日本材料学会関東支部学生交流会,2015年11月,東京都市大学」,において発表された.衝撃時に被衝撃体から発生する放射音の平面的分布を,本研究で作成した装置により精密に測定することができるようになった.この装置を使い最終年度に得られた成果は以下のとおりである.1)衝撃圧力分布の同定:従来は,数本のマイクロフォンを使い,最大2箇所に衝撃力を受けた場合の,衝撃位置および,衝撃力の時間変化の同定を行っていた.本装置を使い,衝撃圧力の空間および時間分布の同定する手法を提案し,実際の実験により確認が行われた.これにより,被衝撃体に与えられる外部からの衝撃力の位置および時間変化の同定が,放射音測定により可能であることが明らかになった.2)欠陥位置や形状の同定:被衝撃体表面に凹みを入れ,その凹みの位置および形状を同定する方法を提案し,その手法を使い種々の欠陥の同定ができることが確かめられた.直接衝撃ではなく,既知の音を被衝撃体に入力することも可能であることから,本手法を使えば,被接触で欠陥の同定が可能であることが明らかになった.衝撃時に被衝撃体から発生する放射音の平面的分布を,擬似的に測定する装置を考案し製作し,以下の成果が得られた.1)衝撃圧力の空間および時間分布を同定する手法を提案し,実際の実験により確認が行われた.これにより,被衝撃体に与えられる外部からの衝撃力の位置,空間分布,および時間変化の同定が,放射音測定により可能であることが明らかになった.2)被衝撃体表面の凹みの位置および形状を同定する方法を提案し,その手法を使い種々の欠陥の同定ができることが確かめられた.

直接衝撃ではなく,既知の音を被衝撃体に入力することも可能であることから,本手法を使えば,被接触で欠陥の同定が可能であることが明らかになった.計画通り,測定装置を完成することができた.また,考えた以上に,作成した測定装置の精度が良かった.材料力学作成した装置のさらなる精度向上を試みる.被衝撃体に結果や形状の変化がある場合の同定について検討する.新たな挑戦として,被衝撃体表面の変位分布の時間変化について検討する.有限要素法ソフトアドベンチャーの導入に多くの時間を費やしたが,思ったほどの効果が得られなかった.x, yステージ等,システムの開発費が安く済んだ.本年度はすでに導入ずみのAnsysを使い,シミュレーションの高速化に取り組む.基本的には,構造のシミュレーションはAnsysで行い,放射音は理論解析で行なう方針とするさらなる精度向上のために,今まで8ビットの分解能で測定していた音圧を,24ビットの精度で測定できる装置の購入を検討中である.マイクロフォンをx, y方向に動かすシステムの発注が遅れたため,昨年度購入する機材が本年度にずれ込んだ.x,y方向に動かすシステムはすでに発注ずみである.全体の計画には変更はしょうじない.
腰部脊柱管狭窄症モデルラットの脊髄における間欠性跛行発症の分子機構

腰部脊柱管狭窄症モデルラット脊髄において、間欠性跛行発症時にどのような変化、特に虚血に伴って生じる細胞の遺伝子発現及び蛋白発現の変化を捉えることを目的としている。今年度は、特に運動負荷直後の状態での脊髄ニューロンにおける、侵害刺激に対する反応性の変化を中心に検討した。腰部脊柱管狭窄症モデル動物の作成ラット第5腰椎椎弓を部分切除後、第4腰椎及び第6腰椎にシリコンラバーを挿入し、多椎間後方圧迫モデルを安定して作成した。脊髄における各種神経活性物質の遺伝子及び蛋白発現Heme oxygenase-1(HO-1)は、HSP32とも云われ、HSPファミリーの中でも最も鋭敏に早く虚血に対して変化を示す遺伝子であり、狭窄症モデルの走行群と非走行群との比較をするために、脊髄ニューロンにおける発現を検討した。一部の脊髄ニューロンでの発現は、in situハイブリダイゼーション法にて確認できたが、走行・非走行群間では有意差は確認出来なかった。狭窄症モデルに対して走行負荷をかけ走行不能となった直後に、ラット下肢足底に疼痛刺激を与え、2時間後の脊髄L4,5レベルの後角ニューロンにおけるc-fos蛋白の発現を検索した。狭窄症モデルではnaiveラットと比較してc-fos発現の減少傾向が観察された。しかしながら、狭窄症モデルの走行群・非走行群との比較では有意差は確認できなかった。以上、これまでの結果では、モデル作成に起因する変化は、脊髄・後根神経節等で確認できたが走行不能に陥った際の虚血に伴うと考えられる脊髄ニューロンの変化を確認することは出来なかった。特に、虚血で大きく変動するストレス蛋白、各種転写因子、細胞性癌遺伝子などを中心に検索した。脊髄管狭窄症モデル動物の作成ラット第5腰椎椎弓を部分切除後、第4腰椎及び第6腰椎にシリコンラバーを挿入し作成する多椎間後方圧迫モデルは、安定して作成できるようになった。脊髄・知覚神経節・脊髄神経における各種神経活性物資の遺伝子及び蛋白発現神経ペプチド類の脊髄後角ニューロンにおけるmRNA発現は、基本的にsham群と差がないように見られ、また走行群においても同様であった。知覚神経節のCGRP発現は、特に大きな変化はどの群においても観察されていない。各種細胞性癌遺伝子もしくは転写因子の発現に関しては、c-jun及びATF3が知覚神経節ニューロンでの若干の発現増加、脊髄前角での運動ニューロンでの発現増加が観察された。脊髄後角でのc-fos発現は、手術群でも非常に少なく、運動群でも増加は観察されなかった。Mn-SODの発現は、脊髄運動ニューロン、十層及び後角深層の一部ニューロンでの発現が観察された。後根神経節におけるnNOSの発現に関しては、若干のニューロンで発現増強が見られた。しかしながら、走行群、非走行群間には有意差は観察されていない。HSP72の発現は結局同定出来ず、その理由としてはこのLCSモデルのような慢性モデルにおいてはその発現変化は無いか、非常に小さく検出は出来ないためであろう。最後に検索したHO-1は、HSP32とも云われ、HSPファミリーの中でも最も鋭敏に早く虚血に対して変化を示す遺伝子であり、現在の所、発現そのものの確認をするために実験施行中である。
甲状腺腫瘍の悪性化に関与する遺伝子の単離および甲状腺未分化癌に対する遺伝子治療

甲状腺濾胞腫腺細胞株(1種)、乳頭癌細胞株(3種)、濾胞癌細胞株(1種)、未分化癌細胞株(2種)よりRNAを抽出した。それぞれのRNAよりdiifferential display法を用いて細胞間で発現量に差異が認められるバンドを切り出し、その塩基配列を決定した。約半分のクローンがリボゾームRNA、ミトコンドリア遺伝子、fibronectin,R-ras,プロテアソームサブユニット、23kD highly basic poteinなどの既知の遺伝子で、残りのクローンは未報告の遺伝子であった。リボゾームRNAおよびミトコンドリア遺伝子を除いたクローンについてノーザン解析を行ったが、各種細胞間で2倍程度の発現量の差を認めらるものの、それ以上の発現量の差異は認められなかった。このように、これまでに数多くのプライマーの組み合わせを用いて、発現量に差が認められるクローンの単離に努めてきたが、大きな発現量の差が認められる遺伝子の単離には至っていない。今後、各実験ごとのパターンの再現性を高めるための方法の開発が必要である。12種の甲状腺癌細胞株より抽出したゲノムDNAを鋳型として、任意の20merのプライマーを用い、PCRの最初の5サイクルのannealing温度を42°Cとする緩やかな条件で行ったPCR産物を電気泳動し細胞間のバンドパターンを比較した。甲状腺乳頭癌細胞株にシグナルの消失が見いだしたが、サザーン解析を行ったところ明らかな欠失は認められなかった。また、これまでに遺伝子増幅を示すシグナルは認められなかった。甲状腺瀘胞腺腫細胞株(1種)、乳頭癌細胞株(3種)、瀘胞癌細胞株(1種)、未分化癌細胞株(2種)よりRNAを抽出した。それぞれのRNAより4種のオリゴdTプライマーを用いてcDNAを合成した。それぞれのcDNAプールよりオリゴdTプライマーと10merのプライマーを用い、[α-^<32>P]dCTPを基質として増幅されたPCR産物を並べて電気泳動しオートラジオグラフィーにてパターンの差異を比較した。あるいは放射性同位元素を用いずに、PCR産物を電気泳動後エチジウムブロマイド染色することによりパターンの差異を比較した。これまでに20回の電気泳動にて細胞間で差が認められる20種類のバンドを切り出し、PCRにて再増幅後プラスミドにクローン化し、その塩基配列を決定した。約半分のクローンがリボゾームRNA、ミトコンドリア遺伝子、fibronectin、R-ras、プロテアソームサブユニット、23kD highly basic poteinなどの既知の遺伝子で、残りのクローンは未報告の遺伝子であった。リボゾームRNAおよびミトコンドリア遺伝子を除いたクローンについてノーザン解析を行ったが、各種細胞間に発現量の大きな差異は認められなかった。このように、これまでに数多くのプライマーの組み合わせを用いて、発現量に差が認められるクローンの単離に努めてきたが、まだ単離には至っていない。最近、本法は世界中で広く用いられているが、電気泳動のパターンに再現性がないこと、オートラジオグラフィーにてシグナルに差が認められてもノーザン解析にて発現量に差を認めないなどの欠点を有していることが明らかとなった。まず電気泳動のパターンの再現性を高めるためには、プライマーの塩基組成および長さの検討やPCRのannealingの温度の検討、サイクル数の検討が必要と考えられる。甲状腺濾胞腺腫細胞株(1種)、乳頭癌細胞株(3種)、濾胞癌細胞株(1種)、未分化癌細胞株(2種)よりRNAを抽出した。約半分のクローンがリポゾームRNA、ミトコンドリア遺伝子、flbronectin、R-ras、プロテアソームサブユニット、23kD highly basic poteinなどの既知の遺伝子で、残りのクローンは未報告の遺伝子であった。

リポゾームRNAおよびミトコンドリア遺伝子を除いたクローンについてノーザン解析を行ったが、各種細胞間で2倍程度の発現量の差を認められるものの、それ以上の発現量の差異は認められなかった。このように、これまでに数多くのプライマーの組み合わせを用いて、発現量に差が認められるクローンの単離に努めてきたが、大きな発現量の差が認められる遺伝子の単離には至っていない。今後、各実験ごとのパターンの再現性を高めるための方法の開発が必要である。12種の甲状腺癌細胞株より抽出したゲノムDNAを鋳型として、任意の20merのプライマーを用い、PCRの最初の5サイクルのannealing温度を42°Cとする緩やかな条件で行ったPCR産物を電気泳動し細胞間のバンドパターンを比較した。甲状腺乳頭癌細胞株にシグナルの消失が見いだしたが、サザーン解析を行ったところ明らかな欠失は認められなかった。また、これまでに遺伝子増幅を示すシグナルは認められなかった。
ビッグデータに基づいた医用人工知能の実装に向けた多面的検討

本研究は、医用人工知能に関するELSI(倫理的法的社会的課題)の課題の検討を行うものである。特に1970年代の第二次人工知能ブーム以来の共通の議論として、医用人工知能のトラスト(信頼)に関連する課題がある。AEDも定義によれば医用人工知能と言えるが、結局の所、普及に向けては、医師の責任と人工知能の責任の分界、精度も含めた専門家からの信頼の他、患者からの信頼、導入に伴うリスク・ベネフィット等の観点が重要であると思われる。医用人工知能の社会実装に向けて、米国FDAにおいては、2018年に人工知能(AI)を用いた新たな医療機器の承認がすでになされている一方、我が国のPMDAにおいても承認される医療機器が出てきたもののまだ数は少ない。また、厚生労働省通知によれば、現状における医用人工知能を用いた医療機器は、あくまで診療補助を行う機器であり、医行為に対する責任廃止にあるものとの整理がなされている。本研究では、これまで、こうした過去・現在、国内外の状況に関する整理を行い、共同研究者とともに、医用人工知能の社会実装に向けたトラストのあり方に関する調査内容・対象等に関する検討を進めてきた。本年度は、引き続き、国内外の状況を調査するとともに、実装事例に関するヒアリングをし、医師向けの医用人工知能に関するセミナーシリーズを開催した。また、それらの内容に基づき、H30年度末から医師によるAIに対するトラストに関するアンケート調査を設計し、開始した。その結果をH31年度に取りまとめる予定である。H30年度中にアンケート調査の結果取りまとめを行う予定であったが、アンケート開始の遅れに伴い、回収も遅らせることとなった。アンケート結果の取りまとめを行うとともに、医用人工知能の社会実装に向けた政策提言を進める。医用人工知能に関するELSI(倫理的法的社会的課題)の課題は、1970年台の第2次AIブームにおいても現在と共通のものがいくつか存在していた。たとえば、医療情報におけるプライバシーの保護に関する課題への指摘はすでに見られていたが、当然、現在のインターネットやビッグデータを前提とする議論より限定的な内容にとどまっている。一方で、人工知能の判断を信用したことに由来する不利益への医師の責任等、現在の自動運転等とも共通の議論もなされている。医用人工知能のトラスト(信頼)に関連する課題もいくつか指摘がなされており、スタンフォード大学が開発したエキスパートシステムであるMycinが実用に至らなかった理由として、責任の点の他、精度も含めた専門家からの信頼の問題が大きかった。一方で、自動診断心電図の機構を利用したAEDのように、「医用人工知能」が実装しているものも存在している。そうしたものの実装に際しては専門家による信頼、患者からの信頼、導入に伴うリスク・ベネフィット等の観点が重要であると思われる。医用人工知能の社会実装に向けて、我が国においてはPMDAを中心に医療機器として承認するための基準の検討を進めている。米国FDAにおいてはすでに、2018年に人工知能を用いた新たな医療機器の承認がなされている。本研究では、H29年度にはこうした過去・現在、国内外の状況に関する整理を行い、共同研究者とともに、H30年度に行う医用人工知能の社会実装に向けたトラストのあり方に関する調査内容・対象等に関する検討を開始した。研究計画通り、共同研究者との研究打ち合わせを行い、過去の関連研究状況の整理等を実施し、H30年度の調査に向けた仮説構築等の準備を行うことができた。H29年度の研究結果に基づき、H30年度以降の調査を深める。調査の効率的推進のため、研究協力者を更に得ることとする。文献調査に関しては大学の図書等による最小限度の購入とし、会議に関しても大学の設備を使う等により節約を行った。その分を次年度におけるアンケート調査に当てる計画である。アンケート調査の実施に関し、研究協力機関の協力により大幅な削減が可能となった。
感音難聴に対する新規難聴治療戦略の構築 ～細胞移植と薬物療法を併せた再生治療～

音響外傷性難聴マウスの蝸牛内では4-ハイドロキシノネナール(4HNE)付加蛋白質群が増加する事を見出した。そこで、難聴発症メカニズムにおける活性酸素種とそのシグナル分子の関与を解明する目的で、4-HNEの蝸牛内局所投与による聴覚機能障害について解析した。4-HNEの蝸牛内投与は聴力悪化を引き起こすが、その聴力悪化はカルパインインヒビターにより抑制された。すなわち、感音性難聴発症メカニズムの一部に4-HNE産生を介したカルパインの活性化が関与する可能性が示唆され、感音難聴の治療において、内耳内での脂質過酸化によるカルパイン活性が新たな創薬・治療ターゲットとなりうることが期待された。【目的】感音難聴モデルの一つである音響外傷性難聴モデルマウスの蝸牛内外側壁らせん靱帯において、酸化ストレス産物4-hydroxynonenal(4-HNE)付加タンパク質群が増加することから、本年度は、難聴発症メカニズムにおける4-HNEの関与を解明する目的で、4-HNEの内耳蝸牛内局所投与による新規難聴モデル動物の開発と同モデル動物での内耳障害および聴覚機能障害を解析した。【方法】ddY系雄性マウスの蝸牛内正円窓上部に4-HNEを1時間留置し、蝸牛内に浸透させた。4-HNE処理直後、処理後1、5時間、あるいは、4-HNE処理後1、2、7日での各周波数(4、12、20 kHz)について聴性脳幹反応(ABR)を指標に聴力を測定した。さらに、4-HNE処理後の蝸牛内での形態学的変化について解析した。また、光退色後蛍光回復法(FRAP assay)により、4-HNE処理したマウスの蝸牛外側壁の細胞間コミュニケーション機能について解析した。【結果】ABRによる聴力測定の結果、4-HNE処理群では濃度依存的に聴力が悪化したが、その聴力の悪化は処理後1日に比べ7日では有意に回復した。しかしながら、ファロイジン染色の結果、有毛細胞に形態学的変化は認められなかった。さらに、ヘマトキシリン染色を行ったところ、組織学的変化は認められなかった。また、4-HNEは処理後1時間以内に聴力悪化を引き起こし、同経過後にFRAP assayを行ったところ、4-HNE処理マウスのらせん靭帯では、レーザー照射後に蛍光強度の回復は全くみられなかった。【考察】4-HNEは、蝸牛外側壁の細胞間コミュニケーションの破綻を引き起こすことが明らかとなり、4-HNE産生が感音性難聴の発症メカニズムの一部に関与する可能性が示唆される。すなわち、4-HNEをターゲットとした新規難聴治療の構築・開発が期待される。強大音響暴露により作成した音響外傷性難聴モデルマウスの蝸牛内外側壁らせん靱帯において、酸化ストレス産物4-hydroxynonenal(4-HNE)付加タンパク質群が増加することから、マウス蝸牛内に4-HNEを局所投与することにより、難聴を誘発させることを試みたところ、同マウスでは4-HNE投与1時間後から明らかな聴力障害が認められたことから4-HNEによる新規難聴モデル動物の開発に成功した。また、4-HNEは蝸牛外側壁での細胞間コミュニケーションの破綻を引き起こすことが明らかとなり、4-HNE産生が感音性難聴の発症メカニズムの一部に関与する可能性を見出し、4-HNEをターゲットとした新規難聴治療方法および聴覚機能改善薬の構築・開発が期待された。また、本実験に関連して学術論文1報、学会発表19回(招待講演1回を含む)を報告出来たことから、本研究は順調に進展しているといえる。【目的】感音難聴モデルの1つである音響外傷性難聴モデルマウスの蝸牛外側壁らせん靭帯では、酸化ストレス産物である4-hydroxynonenal(4-HNE)付加たんぱく質群の発現が増加する。そこで、昨年度はマウス内耳蝸牛内に4-HNEを局所投与すると、有毛細胞をはじめ、蝸牛組織内に形態変化を起こすことなく聴力悪化を引き起こすことを明らかにした。本年度は、音響外傷性難聴発症メカニズムを解明するために、4-HNE誘発性難聴モデルマウスにおけるプロテアーゼインヒビターの影響について解析した。【方法】Std-ddY系雄性マウスの蝸牛内正円窓上部に4-HNEを1時間留置し、蝸牛内に浸透させた。4-HNE処理後1、5および24時間後に蝸牛外側壁を切り出し、細胞抽出液を調整した。続いて、得られた細胞抽出液を用いて、細胞間コミュニケーション蛋白質の1つであるコネキシン30の発現について、イムノブロッティング法により解析した。さらに、4-HNEによる聴力悪化に対するPD150606(カルパインインヒビター)の影響を検討するために、4-HNE処理前にPD150606を正円窓上部に30分間留置し、蝸牛内に浸透させた。続いて、正円窓上部からPD150606を除去したのち、4-HNEを1時間留置し蝸牛内に浸透させ、1時間後の聴力を聴性脳幹反応(ABR)を指標に測定した。【結果】イムノブロッティング法の結果、4-HNE処理24時間後ではマウス蝸牛外側壁においてコネキシン30の発現が対照群に比べて有意に減少した。

また、ABR測定の結果、PD150606の前処理は、4-HNEによる聴力悪化を有意に抑制した。【考察】PD150606は、4-HNE誘発性の聴力悪化を抑制することが明らかとなった。すなわち、4-HNE誘発性聴力悪化のメカニズムにカルパインの活性化が関与する可能性が示唆された。これまでに、マウス内耳蝸牛内に4-hydroxynonenal(4-HNE)を局所投与すると有毛細胞をはじめ、蝸牛組織内に形態変化を起こすことなく聴力悪化を引き起こすことが明らかとなった。本年度は、この4-HNE誘発性の聴力悪化は、カルパインインヒビターの前処置によって抑制されることを明らかにした。すなわち、音響外傷性感音難聴の発症メカニズムの一部に4-HNEを介したカルパインの活性化が関与する可能性を見出した。本研究結果から、感音難聴の治療に対して、カルパインインヒビターが聴覚機能改善薬として有用である可能性が示唆された。また、本実験に関連して学術論文1報、学会発表20回を報告出来たことから、本研究は順調に進展しているといえる。これまでに強大音響曝露によって誘発される聴覚機能障害では、マウス内耳内でチロシンニトロ化蛋白質が増加することを明らかとした。本研究では、感音難聴発症メカニズムにおける一酸化窒素(NO)の関与を解明する目的で、NOC-18およびSIN-1の内耳蝸牛内局所投与による内耳聴覚機能障害について解析した。【方法】ddY系雄性マウスの蝸牛内正円窓にNOC-18およびSIN-1を1時間留置し、蝸牛内に浸透させた。NOC-18およびSIN-1処理後1、5時間、1、2、7日での各周波数(4、12、20 kHz)について聴性脳幹反応(ABR)を指標に聴力を測定した。次に、NOC-18およびSIN-1処理7日目に有毛細胞を摘出しファロイジン染色を行った。また、同日の内耳蝸牛切片を作成し、ヘマトキシリン染色により組織学的変化を解析した。さらに、SIN-1処理1時間後のマウス蝸牛外側壁細胞間コミュニケーション機能について、光退色後蛍光回復法(FRAP assay)により解析した。【結果】聴力測定の結果、NOC-18およびSIN-1処理群では聴力の悪化が確認できた。しかしながら、ファロイジン染色では、有毛細胞に形態学的変化は認められなかった。また、ヘマトキシリン染色においても組織学的変化は認められなかった。さらに、SIN-1処理は1時間以内に聴力悪化を引き起こすが、同時間経過後のらせん靭帯においてFRAP assayを行ったところ、レーザー照射後に蛍光強度の回復がみられた。【考察】以上の結果から、NOおよびその生成物は内耳内の組織学的および機能的変化を起こすことなく聴力を悪化させることが明らかとなった。すなわち、内耳内でのNO産生が感音性難聴の発症メカニズムの一部に関与する可能性が示唆され、感音難聴の治療において、内耳内NOシグナルが新たな創薬・治療ターゲットとなりうることが期待される。音響外傷性難聴マウスの蝸牛内では4-ハイドロキシノネナール(4HNE)付加蛋白質群が増加する事を見出した。そこで、難聴発症メカニズムにおける活性酸素種とそのシグナル分子の関与を解明する目的で、4-HNEの蝸牛内局所投与による聴覚機能障害について解析した。4-HNEの蝸牛内投与は聴力悪化を引き起こすが、その聴力悪化はカルパインインヒビターにより抑制された。
血行再建術における移植自家静脈片晩期閉塞の予防に関する実験的研究

末梢動脈血行再建術後の晩期閉塞は、その前病変として再建動脈の内膜肥厚による狭窄が殆どを占める。我々はこれ迄に、この狭窄性変化は再建動脈が異常血流波形(我々のII形波形)を示すものに多く認められるという臨床的所見をふまえて、犬後肢大腿動脈に臨床例と類似のpoorrunoffモデルを作成し、内膜肥厚の発生進展に関して実験的検討を行なった。その結果、異常血流条件下に移植された移植自家静脈片は、移植後4週目迄に、コントロールの正常血流条件群に比し、著名な内膜肥厚を示し、この内膜肥厚の本体は、壁平滑筋細胞の増殖によることを明らかにしてきたが、内皮細胞修復後も内膜肥厚の進展が認められるため、異常血流条件下での内皮細胞の透過性についての検討を行った。方法は、従来我々が用いているpoorrunoffモデルの犬後肢動脈に自家静脈移植を行い、移植後1、2、3、4、6週目にHorseradish peroxidase(100mg/kg)を静注し、内皮細胞のvesicular transport及びjunctional transportの程度を正常血流群との間で比較検討した。その結果、再生内皮細胞の透過性は異常血流条件下で亢進傾向にあり、vesicular transportでは、1、2週目ででjunctional transportでは3週目で正常血流条件群に比し、統計学的に有意差が認められた。また内皮下のHorseradish peroxidase反応産物の沈着の量及び深達度は、4週目迄に異常血流条件群に著明に認められたが、6週目では両者間に有意差はみられなかった。これらの実験的事実より、異常血流条件下では、移植早期、3週目迄に、再生内皮細胞の透過性が亢進しており、その結果、何らかの血漿成分の壁内しみこみが、自家静脈片壁平滑筋細胞の増殖と密に関連していることを推定させる。末梢動脈血行再建術では、術後再閉塞を極力防止する必要がある。殊に術後晩期閉塞の病態発生については不明な点が多く有効な防止対策が確立されていない。臨床における晩期閉塞は、その前駆病変として吻合部を含む再建動脈の内膜肥厚による狭窄が多く。この狭窄病変は異常血流波形(我々の【II】型波形)を示す症例に発生しやすい。我々は、これ迄、この晩期閉塞の前病変である内膜肥厚の実験的再現を試み、犬膝窩動脈に分節的閉塞を作り(【II】型波型流れ)、その中枢側の大腿動脈に自家静脈移植を行なったところ、1)移植片内膜に臨床例と類似の著明な内膜肥厚がおこり、この内膜肥厚は平滑筋細胞の異常増殖によるものであること。2)内膜肥厚に一義的に関与する血行力学的因子は壁面剪断応力値の低下であること。3)移植片内面への血小板付着の推移を【^(51)Cr】標識自己血小板を用いて、移植後経時的に測定すると、異常血流状態では正常血流状態に比し、移植後24時間迄に血小板付着の亢進が有意に認められ、血小板の内膜肥厚に及ぼす移植直後の影響が示唆された。等の知見が得られた。然し乍ら、形態学的には移植片内皮細胞の修復が完成されたにも拘らず内膜肥厚が亢進していることの疑問が生じているため、今後はHRP(Horseradish peroxidase)などのTracerを用いた超微形態学的観察により、異常血流条件下での移植片内皮細胞の透過性の推移についての機能的観察と、内皮細胞の【PGI_2】活性の動態についての検討が必要となると考えられる。末梢動脈血行再建術後の晩期閉塞は,その前病変として再建動脈の内膜肥厚による狭窄が殆んどを占める.この狭窄性病変は,異常血流条件下(我々の波形分類によるII型波形条件下)を示すものに発生しやすい.そこで,この晩期閉塞の前病変である内膜肥厚の実験的再現を試み,犬膝窩動脈に分節的閉塞を作り(II型異常血流波形流れ),その中枢側大腿動脈に自家静脈移植を行なった.その結果, 1)移植片内膜に臨床例と類似の著明な内膜肥厚がおこり,この内膜肥厚は血管壁平滑筋細胞の異常増殖によるものであること.2)移植後早期の内膜肥厚は,血流条件を正常化することにより,退縮するものであること等の知見を得た.また,この内膜肥厚に及ぼす血小板の影響をみると,異常血流条件下では,正常血流条件下に比し,移植3日目迄の血小板の内膜への粘着が亢進しており,移植後早期の血小板粘着亢進による血小板由来の平滑筋細胞増殖因子の関与が示唆された.一方, Horseradish peroxidase(HRP)を用いた内膜肥厚課程における内膜透過性の検討の結果,異常血流条件下では,移植片内膜が内皮細胞に被覆されたにも拘らず,移植後3週目まで透過性の亢進がみられており,内膜肥厚には,血小板由来の平滑筋細胞増殖因子のみならず,血中成分による増殖刺激反応の関与も推定された.

また,人為的に,移植後早期の異常血流条件を正常化させると,移植片内膜への血小板粘着の程度が明らかに抑制されている結果も得ており,今後,異常血流条件下における内膜肥厚予防法の確立のために重要な指針を与えるものと考えられた.末梢動脈血行再建術後の晩期閉塞は、その前病変として再建動脈の内膜肥厚による狭窄が殆どを占める。我々はこれ迄に、この狭窄性変化は再建動脈が異常血流波形(我々のII形波形)を示すものに多く認められるという臨床的所見をふまえて、犬後肢大腿動脈に臨床例と類似のpoorrunoffモデルを作成し、内膜肥厚の発生進展に関して実験的検討を行なった。その結果、異常血流条件下に移植された移植自家静脈片は、移植後4週目迄に、コントロールの正常血流条件群に比し、著名な内膜肥厚を示し、この内膜肥厚の本体は、壁平滑筋細胞の増殖によることを明らかにしてきたが、内皮細胞修復後も内膜肥厚の進展が認められるため、異常血流条件下での内皮細胞の透過性についての検討を行った。方法は、従来我々が用いているpoorrunoffモデルの犬後肢動脈に自家静脈移植を行い、移植後1、2、3、4、6週目にHorseradish peroxidase(100mg/kg)を静注し、内皮細胞のvesicular transport及びjunctional transportの程度を正常血流群との間で比較検討した。その結果、再生内皮細胞の透過性は異常血流条件下で亢進傾向にあり、vesicular transportでは、1、2週目ででjunctional transportでは3週目で正常血流条件群に比し、統計学的に有意差が認められた。また内皮下のHorseradish peroxidase反応産物の沈着の量及び深達度は、4週目迄に異常血流条件群に著明に認められたが、6週目では両者間に有意差はみられなかった。これらの実験的事実より、異常血流条件下では、移植早期、3週目迄に、再生内皮細胞の透過性が亢進しており、その結果、何らかの血漿成分の壁内しみこみが、自家静脈片壁平滑筋細胞の増殖と密に関連していることを推定させる。
アフィンヘッケ代数の幾何学的表現論とその周辺

古典型アフィンヘッケ環の既約表現の分類の新しい枠組みであるeDL対応[1,2]を用いて緩増加表現のモデルをヘッケ環のパラメタに関して連続的な族を成すように構成した[3]。さらにそれを用いる事によりeDL対応を用いた全ての同じランクの古典型アフィンヘッケ環に対して同時にその離散系列指標を計算してゆくアルゴリズムを確立した[5]。この事の応用としてOpdam-Solleveldによって計算されていたアフィンヘッケ環の形式次数の定数部分を決定し、古典型アフィンヘッケ環に対してPlancherel測度の計算が終わった。さらにBushnell-Henneirt-Kuszkoの結果を法とするとそれは古典型p-進代数群のPlancherel公式の各項を決定した事になる(はずである)。本年度はexotic Deligne-Langlands対応に現れる多様体の幾何学構造、および対応自身の表現論的構造を調べた。幾何学サイドでは我々の枠組みの一つの説明が標数2における斜交群の冪零錐の非自明な標数0へのリフトとして与えられる事を示した。この事は従来代数群の表現論の理論の中で「悪い標数」として避けられてきた部分が「良い標数」として盛んに研究されていた部分よりもある意味で素直であるという事を示唆する為、意外な結果であるとも言える。その現から導かれる事実としては標数2での斜交冪零錐の正規性、exotic版Springer表現と通常の斜交群のSpringer表現の基底を含めた標準的な同型、等を示した。後者の応用としては実簡約群の表現論において非常に基本的なcoherent continuation表現の構成要素を奇直交群、斜交群の場合だけではあるが全ての表現に対して(少なくともひとつ)求めたことが挙げられる。(論文"Deformations of nilpotehtcones and Springer correspondences"として投稿、accept済。)表現論サイドでは我々の枠組みにおいて緩増加表現を与えるパラメタをすべて決定した。これにより我々の幾何学と通常のLusztig-Opdam-Solleveldによる一般Snringer対応を用いた緩増加表現の記述が本質的に異なる分類を与えていることが明確になった。(Utah大学のDan Ciubotaru氏との共同研究)昨年度に引き続きeDL対応の枠組みの中で(古典型)アフィンヘッケ環の緩増加表現についての研究を行った。アフィンヘッケ環の緩増加表現の指標はいわゆる一般Springer表現を用いて記述できる為、特にLusztig-庄司アルゴリズムと呼ばれるアルゴリズムによって記述できる事が知られている。ところが、一般Springer対応にはパラメタを入れる余地がないためアフィンヘッケ環側から見るとパラメタを動かすと指標がどのように変わるかが分からないという点において不満が残るものであった。しかし、今年度の研究においてアフィンヘッケ環に"tempered delimits"と呼んでいる表現の族を導入し、緩増加表現の族やその重要な部分族である離散系列表現の族ではなくこの族の挙動を解析すると少なくとも離散系列表現の指標についてはパラメタが動いた時にどのように指標が変わってゆくのかが分かるようだという観察を得た。この観察をきちんとひとつの話として仕上げる事は次年度の課題である。また、アフィンヘッケ環の幾何学的佐武対応における双対サイドの対象であるアフィングラスマン多様体におけるMVサイクルと呼ばれる特殊なサイクル(これ自体affine Hecke環の元の"精密化"と見る事ができる)が自然な融合積に対してどう振る舞うかについての評価式を得て、プレプリントの形にまとめた。(Kato-Naito-Sagaki, Polytopal estimate of Mirkovic-Vilonen polytopes lying in a Demazure crystals, arXiv : 0912. 0586)昨年度に引き続きeDL対応の枠組みの中で(古典型)アフィンヘッケ環の緩増加表現についての研究を行った。今年度は昨年度アフィンヘッケ環に導入した緩増加表現を含む特別な表現の族である"Tempered delimit"達がアフィンヘッケ環のパラメータの変化によってどのように振舞うのかを決定した。このことから特に次のような事が従う:a)パラメタが十分大きかったり、また十分小さかったりした場合には緩増加表現の指標は簡単な形で書け、b)そこからパラメタが変化してゆくと(例えば次元が等しいといった意味で)アフィンヘッケ環のランクによって定める特殊なパラメタまでは連続的な変形を持ち、c)

特殊なパラメタまではそのまま既約となり、d)さらに値を超えた時の緩増加表現(一般には別の表現になる)と同じ"パケット"に入り、e)そしてその"パケット"に属する既約表現の指標達は簡単な線形関係式を満たすという事が分かった。特にe)の線形関係式は特殊なパラメタから見て片側の指標が分かるともう片側の指標が分かるという事を意味し、これによりLusztig-庄司アルゴリズムとは異なりパラメタを変化させたときに緩増加表現の指標を帰納的に計算してゆくアルゴリズムを得た。この結果については現在Dan Ciubotaru氏、加藤翠氏との共著論文としてまとめて投稿中である。
経胎盤的母胎間シグナル伝達による胎児脳の発育調節

胎盤のインターフェイス機能として、新たに白血病抑制因子(LIF)と副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)を基軸とする母-胎児間(母胎間)シグナルパスウエイを発見した。このパスウエイでは、母親由来のLIFが胎盤からACTHの分泌を誘導し、このACTHが胎児赤血球から再びLIFの分泌を誘導する。そして、LIFが胎児大脳皮質ニューロンの増殖を促進する。実験動物をマウスからラットに変更し、以下の研究成果が得られた。1.ラット胎児各週齡における脳脊髄液、血清および羊水におけるLeukemia inhibitoryfactor(LIF)濃度を、初年度に導入した超高感度ELISAアッセイ(EnVision,パーキンエルマー)を用いて計測し、その結果を統計的に解析した。その結果、胎児脳脊髄液中のLIF濃度は血清よりも有意に高いことが明らかになった。羊水では、脳脊髄液、血清に比べ著しく低濃度であった。2.母獣へのラットリコンビナントLIFの投与により、胎児血中のACTH濃度が上昇する事が明らかとなった。また胎盤の免疫染色の結果、胎盤絨毛giant cellにACTHおよびLIF受容体(LIFR)の発現が確認された。LIFRはgiant cellの母体絨毛間腔側細胞表面に局在する傾向が認められた。このことより、母体血液中のLIFシグナルはgiant cellを刺激することにより、胎児へのACTH分泌を誘導する可能性が示唆された。現在、胎児におけるACTHの標的細胞と胎児性LIFのソースが一致するであろうという仮説のもとに、これらの発現スクリーニングを行っている。【母由来UIF→胎盤絨毛細胞由来ACTH→胎児血球由来LIFの誘導】母由来のLIFが胎盤からACTHを誘導し、それが胎児細胞から再びLIFを誘導することを明らかにするため、LIFを妊娠ラット母獣に投与したところ、胎児血清中のACTHおよびLIFの濃度上昇さらに胎児脊髄液中のLIF濃度上昇が確認された。【培養胎盤絨毛細胞のLIF刺激およびUIF受容体のノックダウン】ラット絨毛幹細胞をLIF刺激するとACTH分泌が亢進し、gp130およびUIFRをノックダウンすると、LIF刺激によるACTHの分泌誘導が抑制されることが確認された。【胎児赤血球に対するACTH刺激】初代培養ラット胎児有核赤血球をACTH刺激するとLIFの分泌が誘導され、またMC2および5受容体に対する中和抗体でブロックすることにより、ACTH刺激によるUIFの誘導が抑制されることが明らかとなった。【母体LIF濃度上昇の胎児神経前駆細胞分裂への影響】【母体側LIF濃度上昇に伴う胎児側LIF濃度変化および神経細胞産生への影響】胎齢(E)12.5、14.5および16.5日のラット母獣にリコンビナントLIFを腹腔内投与し、24時間後に母獣にBrdUを投与した。BrdU投与2時間後に胎児を摘出し、大脳脳室帯におけるBrdU-labeling index(Bl)を計測したところ、E14.5にLIFを投与した群のみで、対照群に比較して有意にBlの上昇が確認された。この結果より、母体からのLIF刺激は、胎児大脳脳室帯における神経細胞産生に対して促進的に作用するが、その感受性には時期特異性が存在することが示唆された。同時に、胎児の血清ACTH、LIF濃度および胎児脳脊髄液中のLIF濃度を測定したところ、Blの結果と同様の時期特異的な感受性が示された。【LIFに対する胎児大脳神経上皮および脈絡叢の反応】E15ラット母獣にLIFを投与した後、胎児における遺伝子発現をDNAマイクロアレイにて網羅的に解析した結果、大脳神経上皮では約60種類の遺伝子発現上昇が認められ、発現低下したのは3種のみであった。一方、脈絡叢では約250種類が発現変動していた。現在、発現プロファイルの詳細な検討を行っている。【研究成果の意義・重要性】胎盤によって伝達される母親由来のLIFシグナルが、胎児の脳発生に重要な働きをしていることが示された。この研究によって、胎児が母体のサイトカイン・ホルモンネットワークの制御化にあるとする、母-胎児間シグナルリレーのモデルが提唱された。
ミオグロビンの新たな生理機能:過酸化水素の除去と酸素毒性の抑制

ミオグロビンは酸素運搬体であると共に、活性酸素の生成とその消去に関連して新たな関心を呼んでいる。本研究は、ミオグロビンがフェリル型中間体の生成を介して、過酸化水素を持続的に除去し得るという知見に基づき、ミオグロビンと過酸化水素との反応の分子論的メカニズムを明らかにしようとする試みの一部である。今回は、フェリルミオグロビンの生成における遠位残基の関与について、比較生化学的な検討を行った。通常、メト型ミオグロビンに過酸化水素と反応して、フェリルミオグロビンを生成する。しかし、遠位ヒスチジン残基を欠くアメフラシ(Aplysia Kurodai)のミオグロビンでは、過酸化水素との反応によって得られる酸化生成物の吸収スペクトルはフェリルミオグロビンのそれとは大きく異なり、また、還元剤を加えてもメト型に還元されなかった。そこで、遠位残基として、ヒスチジン、バリン、グルタミンを持つ9種のミオグロビン(内3種は無脊脊椎動物のもの)を用いて、過酸化水素との反応によって生じる酸化生成を比較検討した。その結果、遠位残基としてヒスチジンを含むものでは、いずれも典型的なフェリル型分子種を得ることが出来た。一方、遠位残基が置換された5種のミオグロビンでは、酸化生成物のスペクトルはフェリルミオグロビンのものとは大きく異なり、さらに、還元剤を加えても、元のメト型には戻らず、ヘム自身に不可逆的な修飾を受けているものと思われた。更に興味深いことは、得られた酸化生成物の吸収スペクトルが、遠位残基の種類によって、それぞれ特徴あるものとなったことである。殊に、遠位グルタミンを持つアフリカゾウとヤモリザメのものでは、それ以外の一次構造上の近似性が極めて低いにも関わらず、同一の特徴を持つ酸化生成物が得られたことである。これは、メトミオグロビンと過酸化水素との反応に遠位残基が決定的な役割を果たしていることを示唆するものである。
数理モデルによる魚類錐体モザイク形成機構の解明

魚類錐体モザイクパターン形成機構について、4種類の分化済みの錐体細胞が細胞間接着力に応じて近接する細胞と位置を入れ替えるというcell rearrangement modelを用いたモデリングを行った。このモデルに基づいた詳細な計算機シミュレーションを行い、典型的なモザイクパターンである、rowmosaic, square mosaicという二種類のパターンを同一のモデルで再現可能であることを明らかにした。またそれぞれのモザイクパターンが再現されるために必要な細胞問接着力の条件を理論的解析から明らかにし、計算機シミュレーションの結果と一致することを確かめた。それらの解析結果から錐体モザイクパターンの魚種間での多様性をもたらすパラメータを明らかにした。この研究結果は、Journal of theoretical Biologyに掲載されることが決定している。また並行してシロイヌナズナにおける葉脈形成プロセスについて数理モデルを用いて研究を行った。オーキシンを消費しながら葉脈が伸張していくという、オーキシン消費型反応拡散モデルを構築し、解析を行った。葉脈形成に関しては過去にcanalization hypothesis, activator-inhibitor型反応拡散モデルという二つの仮説が提唱されてきたが、両者とも葉脈パターンの形成を完全に説明するものではなく、またこれらの仮説は対立すると考えられてきた。しかし我々の提案した新しいモデルにより過去の両モデルは無理なく統合でき、従来説明困難であったパターンを説明可能であることが示された。また、シロイヌナズナのパターンのみならず、単子葉植物での葉脈パターンについても同一のモデルのパラメータの違いによって説明できることを示した。成果は現在取りまとめ中である。
ヒスチジン脱炭酸酵素の翻訳後レベルにおける活性調節機構の解析

ヒスタミンは多彩な生理作用を有し、アレルギーや炎症といった病態形成においても重要な生理活性物質である。生体内ではヒスチジン脱炭酸酵素(HDC)により合成されるが、その活性制御は転写レベルだけではなく、タンパクレベルにおいても翻訳後プロセシングや細胞内局在性の変化を介して調節されていることが予想されている。本研究では、骨髄由来培養マスト細胞、腹腔浸潤好中球、精巣におけるヒスチジン脱炭酸酵素の活性調節機構を翻訳後レベルに重点をおいて検討し、以下の知見を得た。1)骨髄由来培養マスト細胞においてIgE結合により誘導されるHDC分子種の検討IL-3依存性骨髄培養マスト細胞においてIgE添加により、抗原非存在下においても細胞内へのカルシウム流入が生じ、HDCが転写レベルで誘導されることを見いだした。この際に誘導されるHDC分子種は74-kDaの分子量を有する前駆体であり、53-kDa分子種は検出されなかうた。2)腹腔浸潤好中球におけるHDC分子種の解析カゼインの腹腔内投与により集積する好中球には高いHDC活性が認められ、イムノブロットの結果、主として53-kDa成熟体分子種が顆粒酵素として存在することが明らかとなった。また浸潤好中球をin vitroで培養すると速やかな酵素活性の低下が観察されたが、この時HDCタンパク量はほとんんど変化がないことから、翻訳後修飾による酵素の不活性化機構が存在することが推察された。3)精巣に発現するHDC分子種の解析マウスにおいてHDCが精子細胞、精子の先体領域に発現することを見いだした。カルシウムイオノフォア刺激により精子に先体反応を誘導したところヒスタミンの遊離が認められた。精子に発現する分子種は約35kDaの分子量を示し、生殖細胞において特殊なプロセシングが起こっている可能性が考えられた。ヒスタミシは多彩な生理作用を有し、アレルギーや炎症といった病態形成においても重要な生理活性物質である。本研究では、マスト細胞株、腹腔浸潤好中球を用いてヒスチジン脱炭酸酵素の活性調節機構を翻訳後レベルに重点をおいて検討し、以下の知見を得た。1)HDCの小胞体移行に関わる結合タンパク質の同定HDCのC-末端領域ペプチドをGST融合タンパク質として調製し、ラットマスト細胞株(RBL-2H3)から調製したサイトゾル画分とインキュベートすると、分子量60-kDaと70-kDaの2種のタンパク質がATP依存的にHDCと特異的に結合することを見いだした。2)HDCの翻訳後プロセシングにともなう細胞内局在性の変化マウスマスト細胞株(P-815)を酪酸で処理するとHDCは誘導含成される。この際、HDC分子種は成熟体の53-kDaが主であり、翻訳後プロセシングの亢進があることを見いだした、次いで、抗HDC抗体を用いた蛍光抗体法を用いて、この酪酸誘導によるHDCは顆粒に存在することを明らかにした、なお、TPAにより誘導されるHDCは主に前駆体74-kDaであり、細胞質に局在していた。3)腹腔浸潤好中球におけるHDC分子種の解析カゼインの腹腔内投与により回収したマウス好中球に高いHDC活性の存在を初めて見いだした。イムノブロットにより、HDCは主として成熟体分子種であり、その細胞内局在は、matrix metallo protease(MMP)-9と同じように顆粒であることがわかった。
現代日本における平和への課題化

本年度の目的は3点あった。第一は、高知県西部幡多地域の地域づくりの試みについてのインタビューを通して、暴力性を生まない生産-消費のシステムを生成する学びの論理を明らかにすることだった。幡多地域の試みからは、地域の自然と格闘しながら生業を成立させてきた住民の知恵に学びながら、移住者や地元生産者、消費者が出会う場(市)の規範が焦点になることが明らかになった。私達が平和を追求する際には、食えるか食えないかという生活するリアリティを切り離して考えることは出来ないが、こうした生産ー消費の次元から平和を捉え返す学習の論理が明らかになったことは、平和学習をより現実的なものにする手がかりを掴める可能性につながると考える。第二は、これまでの3年間でお世話になってきた各実践の種差を把握することであった。これについては、3つの実践に横断的に関わった若者達の事例を対象にすることで、明らかにすることができた。若者達にとって平和学習が現実的に展開するには、居場所的性格の学びの場、論争的な性格の学びの場、そして生活を具体的にイメージできる学びの場が必要なことが分かった。これらは、それぞれの実践が役割分担をして、若者達に関わることで総体的に存立可能であった。第三は、以上の実践から明らかになったことを、現代日本の平和問題との関わりで位置づけることであった。現在、日本で権力的に言われる「平和」は、洗練された暴力によってグローバル資本の競争秩序を乱すものを恫喝するという暴力性を客観的には指しているが、調査に協力頂いた実践から導き出された平和は、自然との関わりの中で命を大切にする価値観のもと、常に多様な他者と対立し合いながらも対話して、協働して生活をつくっていくような他者関係を特質としており、現在権力的に流布している「平和」とは別の民衆的な平和が導出された。(抄録なし)本年度の研究の主要な目標は、「研究の目的」に照らせば、以下の二点であった。一点目は、H22年度からの課題としてあった札幌郷土を掘る会における現代社会の暴力性の課題化の論理を、補足調査を行い、成果発表することであった。二点目は、高知県における「平和資料館・草の家」を対象にして、分析枠組みを明確化し、調査を行うことであった。一点目について。札幌郷土を掘る会をはじめとする民衆史掘りおこし運動における理論的な焦点は、具体的には、タコ部屋労働の現場で働く労働者を監督する「棒頭」の存在であった。棒頭は、タコ部屋労働者をリンチ、殺害した加害者でありながら、棒頭自身も期日を労働者に守らせなければ、自身もタコ部屋労働者に落とされる=被害者としての側面も同時に持ち合わせた存在であった。民衆史運動では、彼らの存在を正確に読み取ることによって、社会システムにおける本当の敵を理解するに至った。同時に、この被害と加害の同時存在は、彼らの声を聴き取る実践者自分たち自身にも貫徹されているものであることを、東アジアの戦争犠牲者による戦争保障問題の追及から彼等は課題化した。理論的には、この点をフレイレが共同探究者たる条件を明らかにしていなかったことに即して、共同探究者の条件として明らかにした。以上は、東日本大震災などでボランティアの存在がますます重要性を帯びているが、「人を助ける」ときの条件とは何なのか、本当のニーズをくみ取れる支援者とはどのような存在なのかを理論化する糸口になる。二点目について。「草の家」は、特段高知全体の地域を視野に入れて研究をおこなった。現時点で明らかになっていることは、大都市-高知という関係のなかで、大都市の消費に左右されがちな高知のお金の流れに対抗する営みが局所的であるが、草の家の実践を通して現実化しているということである。この点については、翌年の成果発表としたい。本年度の研究の目的は、戦争システムを転換するための生活の総体をどのように描けばいいのか、そこに至る学習の論理の解明を、高知県「平和資料館・草の家」の実践分析を通して明らかにすることだったといえる。研究計画に照らして言えば、予定通りに6月の日本平和学会、8月の日本生活指導学会で発表し、有効な意見をもらうことが出来た。そして、その意見を参照して1月に生活指導学会に投稿した。この査読結果は、現在待っている状態にある。研究の内容としては、第一に草の家実践を担った大人世代が、1962年からの北海道の恵庭事件での援農体験を原点に実践を組織していったことが明らかになったこと。第二に、そこでの経験は、草の家の運動スタイルを単に人とのつながりだけではなく、農業や炭焼きといった自然と関わる仕事とのネットワークをつくりあげていくことにつながったこと。第三に、これが基盤となって、2005年から始動した若者サークルは、平和を人間と人間の関係のみならず、自然との関係をも視野に入れて、自らが戦争批判としてすべき生活の在り方を具体化していくことが出来たことなどが明らかになった。以上の明らかになった内容は、これまでの平和理解に対して重要な提起を行うことが出来るものであったと考える。平和は、人間と人間の対立・争いを解決するものとしてとらえられがちである。しかし、人間と人間の対立は、実際にはその人の職業や消費生活を通して自然とのかかわりを不可欠に持っており、自然を視野に入れた平和把握をしないと現実的にはならない。