hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
血小板の接着反応における複合糖質の関与

これらの所見より、ECA陽性のシアリルフコシルラクトサミンを含んだN-グリコシド型糖鎖が、血小板を介した細胞間相互作用に関与していることが考えられる。N末アミノ酸配列の解析結果から、130kDa糖蛋白質はα_5インテグリンと類似しており、抗α_5インテグリン抗体を添加すると、癌細胞と血小板との接着性が有意に阻害されることも明らかとなった。130kDa糖蛋白質と相互作用する血小板側の因子については今後の検討課題であり、インテグリンファミリーによる接着反応に糖鎖がどの様に関与しているかについても注目に値する。血小板の関与する接着反応には複合糖質が重要な役割を担っている。本研究では、マウス大腸癌細胞の血行性転移に際し、癌細胞表面に存在するECA(Erythrina crystagalli agglutinin)陽性糖蛋白質が、血小板との相互作用や肝転移能と密接に関係していることを明らかにしてきた。今回は更に、このECA陽性糖鎖の性状と、血小板との反応性について、高転移性癌細胞と低転移性癌細胞との間で比較検討した。単層培養したマウス大腸癌(colon26)細胞(高転移性、低転移性)に、PRP(多血小板血漿)を添加し、血小板の接着を計測した。また、血小板の接着部位を、抗血小板抗体を用い、ECAとの蛍光二重標識法により共焦点顕微鏡観察した。高転移性癌細胞は、低転移性癌細胞に比し、ECA染色性および血小板接着性いずれも高い傾向を示した。高転移性癌細胞の可溶化膜画分より、ECA-Sepharose結合成分として分子量130kDa糖蛋白を主成分とする複数の糖蛋白質が回収され、癌細胞と血小板との接着性は、この糖蛋白質の添加により有意に抑制された。N末アミノ酸配列の解析結果から、130kDa糖蛋白質はα_5インテグリンと推定され、抗α_5インテグリン抗体を添加すると、癌細胞と血小板との接着性が有意に阻害されることも明らかとなった。インテグリンファミリーによる接着反応に糖鎖が関与する点については注目に値するが、癌細胞のECA染色部位と抗α_5インテグリン抗体染色部位は必ずしも対応せず、他の成分についても更に検討が必要である。
高精度冗長駆動パラレル機構の開発

本研究は,パラレル機構のもつ優れた基本特性を活かしつつさらに高精度化を図るために,機構自由度よりもアクチュエータおよび連結連鎖の数が大きい冗長駆動パラレル機構を取り上げ,高精度化の観点から機構学的および力学的特性を考慮した機構総合と制御を可能にすることを目的として行われた.本年度の研究においては,まず内界センサのみによって高精度な機構キャリブレーションを行うための具体的手法を提案し,センサの分解能を考慮したキャリブレーションに用いる実験点の選定指標を提案した.また,機構キャリブレーションにおける内力効果を調べるために,2入力平面5節機構の受動対偶部に内力を与えて出力変位を測定してキャリブレーションを実際に行った結果,内力を加えた場合の方が加えない場合に比べてキャリブレーション後の出力変位精度が向上することが確認できた.次に,運動の高精度化のために,出力変位精度の空間的等方性の評価指標を定めるとともに,冗長入力変位の情報を利用して入力変位センサの分解能を仮想的に向上させる順運動学解析法を開発した.具体的に3入力の単ループ平面5節機構を取り上げて本順運動学解析手法を用いた場合と冗長入力情報を用いない場合の出力変位精度の空間的等方性の比較を行った.その結果,本手法によれば冗長入力を用いない場合に比べて約10倍の変位精度が達成されることが確認できた.さらに,負荷が作用する際の出力精度に大きな影響を与える出力剛性の制御限界等について検討を加えた.具体的に7入力6自由度空間冗長パラレル機構を対象として理論的および実験的検討を加えた結果,出力剛性は負荷の大きさにより非線形に変化すること,および内力制御により変化させることのできる剛性の限界は作業領域内の出力節ポーズにより大きく変化することが確認された.本年度の研究では,パラレル機構のもつ優れた基本特性を活かしつつさらに高精度化を図るために,機構自由度よりもアクチュエータおよび連結連鎖の数が大きい冗長駆動機構を取り上げ,内界センサのみによるキャリブレーション(セルフキャリブレーション)を高精度に行うための手法について検討を加えた.セルフキャリブレーション法の基本的な特性を把握するために,最も単純な冗長駆動パラレル機構として,1つの閉ループからなり3つの入力節をもつ5節平面パラレル機構を具体的に取り上げた.この機構を対象として,3つの入力節の角変位と節長の関係式を求め,これを全微分することにより各入力角変位および各節長に関する誤差方程式を導出した.この誤差方程式を導出するにあたり,各入力角変位を測定するセンサの分解能を考慮した.キャリブレーション対象の機構パラメータは5つの節長と各入力角変位測定オフセットとした.複数の実験点における誤差方程式をもとに,これらのパラメータを求める基礎式を導出するとともに,センサの分解能によるキャリブレーション誤差を僅少化して高い絶対精度を実現するための実験点選定指標を提案して具体的なキャリブレーションアルゴリズムを明らかにした.実験点の組合せ,センサの分解能を種々に変え,上記の実験点選定指標の数値とキャリブレーション誤差の関係をシミュレーションにより求めるとともに,最小自乗法に基づく一般的なキャリブレーション法との比較も行って,提案手法の有効性について検討を加えた.本研究は,パラレル機構のもつ優れた基本特性を活かしつつさらに高精度化を図るために,機構自由度よりもアクチュエータおよび連結連鎖の数が大きい冗長駆動パラレル機構を取り上げ,高精度化の観点から機構学的および力学的特性を考慮した機構総合と制御を可能にすることを目的として行われた.本年度の研究においては,まず内界センサのみによって高精度な機構キャリブレーションを行うための具体的手法を提案し,センサの分解能を考慮したキャリブレーションに用いる実験点の選定指標を提案した.また,機構キャリブレーションにおける内力効果を調べるために,2入力平面5節機構の受動対偶部に内力を与えて出力変位を測定してキャリブレーションを実際に行った結果,内力を加えた場合の方が加えない場合に比べてキャリブレーション後の出力変位精度が向上することが確認できた.次に,運動の高精度化のために,出力変位精度の空間的等方性の評価指標を定めるとともに,冗長入力変位の情報を利用して入力変位センサの分解能を仮想的に向上させる順運動学解析法を開発した.具体的に3入力の単ループ平面5節機構を取り上げて本順運動学解析手法を用いた場合と冗長入力情報を用いない場合の出力変位精度の空間的等方性の比較を行った.その結果,本手法によれば冗長入力を用いない場合に比べて約10倍の変位精度が達成されることが確認できた.さらに,負荷が作用する際の出力精度に大きな影響を与える出力剛性の制御限界等について検討を加えた.具体的に7入力6自由度空間冗長パラレル機構を対象として理論的および実験的検討を加えた結果,出力剛性は負荷の大きさにより非線形に変化すること,および内力制御により変化させることのできる剛性の限界は作業領域内の出力節ポーズにより大きく変化することが確認された.
セントロメア新生機構の分子解剖

本研究では、これまで未解明であったセントロメア新生反応機構について、分裂酵母の卓越した遺伝学を用いた新たに分子的な解剖を試み、セントロメア生来の必須機能の分子的な本質の理解を行ってきた。セントロメア機能傷害の発生に際して、染色体上の別座位に新たにセントロメア機能(ネオセントロメア)が獲得される現象は既に高等細胞で見出されているが、その出現を偏りなく人為的に誘導する実験系はこれまで報告がない。私たちは、高等生物と同等の分子構造を示す分裂酵母セントロメアに人為操作を加え、細胞内で条件的にセントロメアを染色体から切除するシステムを構築し、セントロメア欠失という致死的な傷害を既定の細胞集団に誘発する系を確立した。ネオセントロメアの新生をこの致死的細胞集団からの復帰生存株の出現という細胞応答として検出し、その反応素過程を分子生物学的に解析した。昨年までの解析により、分裂酵母第一染色体および第二染色体からのセントロメア欠失はネオセントロメア獲得細胞を再現性よく生成し、そのネオセントロメア形成領域として染色体両端のテロメア近傍が集中して選ばれていることが判明していた。テロメアの重要性を探るため、本年度はまずテロメア末端を欠失した染色体でのセントロメア欠失を行った。その結果、テロメアを欠く細胞ではいかなる復帰生存株も生まれないことを見出した。テロメア構造は染色体再編成に必須なことが示唆された。また、ネオセントロメア形成後の遺伝子発現の変動を人為的発現誘導によって解析し、セントロメアの転写に対する柔軟性がさらに明確に示された。我々は、セントロメア破壊の人為的誘導によって致死的となった細胞集団からネオセントロメア獲得細胞を遺伝的に選択する分裂酵母実験システムを用いて、セントロメア新生機構についての分子レベルでの解明を進めた。これまでに、第一染色体セントロメアの欠失による致死性からの復帰生存株にはネオセントロメア形成株とテロメア融合株が含まれ、ネオセントロメアはテロメア近傍にヘテロクロマチンに接するかたちで形成されていること、ヘテロクロマチン変異株ではネオセントロメア形成細胞の出現頻度が相対的に低下することを見出し、本年8月にScience誌に論文発表した。また、ヘテロクロマチン領域をセントロメアとテロメア近傍以外の染色体腕部MAT座位にもつ第二染色体のセントロメア破壊も試みた。その結果、ネオセントロメアはテロメア近傍にしか形成されず、MAT座位がネオセントロメアとなる現象は見出されなかった。従って、ヘテロクロマチン領域がネオセントロメアの主要な誘起要因である可能性は極めて低い。テロメア近傍は転写抑制遺伝子が集積する領域であり、連続した転写不活性化領域がネオセントロメア誘起要因である可能性についても検討した。高発現遺伝子の挿入によってネオセントロメアとなるテロメア近傍領域の連続した低転写活性を阻害したが、ネオセントロメアの形成は阻害されなかった。しかしセントロメア蛋白質は挿入した高発現遺伝子のみを避けるかたちで分布し、セントロメア形成の柔軟性が明らかとなった。
ＡＰＰ細胞内ドメインによって誘導される神経細胞選択的細胞死の解析

我々は、培養細胞を用いてAPPの細胞内ドメイン(AICD)が核へ移行し、多くの遺伝子の発現を変化させ、神経細胞死を引き起こす事を示している。本研究では、AICD結合転写因子を同定し、遺伝子発現を変化させる原因である事を示した。また、AICDの核移行を調節しているAICD脱リン酸化酵素を部分的に精製した。今後、それをマススペクトルによって同定する予定である。さらにAICDを脳選択的に発現するトランスジェニックマウスの作製を試みたが、AICDの神経毒性のため胎生致死となった。今後、毒性を回避するためにBrainbowを用いて、半数以下の脳神経細胞でAICDを発現するマウスを作製する予定である。我々は、神経幹細胞分化におけるNotchやDeltaの解析から、γーセクレターゼの本来の生理機能はAPPを含む1型膜蛋白質のシグナル伝達の調節にあり、それがアルツハイマー病の発症に関係しているのではないかと考えている。現在までに、我々は神経細胞に分化誘導できるテラトカルチノーマ細胞P19を用いて、APPの細胞内ドメイン(AICD)が核へ移行し、神経細胞選択的にアポトーシスを引き起こす事を示している。また23年度は、DNAマイクロアレイを用いた解析により、この神経細胞選択的アポトーシスの過程でAICDがダイナミックに遺伝子の発現を変化させる事を明らかにし、APPのシグナル伝達機構がアルツハイマー病の発症機序に関係する可能性を示唆して論文を発表している。γーセクレターゼによって細胞膜から切り出されたAICDは、核に移行して転写因子と結合し転写を変化させ、神経細胞死を誘導しているのではないかと考えられるが、24年度はAICDの核移行にAICD自体のリン酸化が関係しているのではないかと考えられる結果を得ている。このように分子レベルでは、AICDがダイナミックに遺伝子発現を変化させ、神経細胞選択的アポトーシスを誘導する事を明らかにしている。この細胞死がアルツハイマー病の発症を反映していないのかを調べるために、共同研究先の新潟大学脳研究所で、AICDを発現するトランスジェニックマウス(Tg)の作製を試みているが、おそらくはAICDの強い毒性のために胎生致死となり、Tgが得られていない。今後、このAICDの強い毒性による胎生致死を回避するために、Brainbowベクターを用いて、ほぼ半数の脳神経細胞でAICDを発現するマウスを作製する予定である。AICDを発現するTgが得られ次第、早急に解析をおこなう。我々は、NotchやDeltaの解析を基に、γーセクレターゼの本来の生理機能はAPP等の1型膜蛋白質のシグナル伝達の調節にあり、それがアルツハイマー病の発症に関係しているのではないかと考えている。現在までに、我々は培養細胞を用いて、APPの細胞内ドメイン(AICD)が核へ移行し、神経細胞選択的にアポトーシスを引き起こす事を示している。また、DNAマイクロアレイを用いた解析により、この神経細胞選択的アポトーシスの過程でAICDがダイナミックに遺伝子の発現を変化させる事を明らかにし、APPのシグナル伝達機構がアルツハイマー病の発症機序に関係する可能性を示唆している。γーセクレターゼによって細胞膜から切り出されたAICDは、核に移行して遺伝子発現を変化させ、神経細胞死を誘導していると考えられるが、昨年度までに、このAICDの核移行にAICD自体のリン酸化ー脱リン酸化が関係しているのではないかと考えられる結果を得ていた。今年度は、このAICDのリン酸化及び脱リン酸化に関係する酵素の精製を行なっており、現在、最終段階に入っている。今後、精製した蛋白質をマススペクトルによって同定する予定である。このように培養細胞レベルでは、AICDがダイナミックに遺伝子発現を変化させ、神経細胞選択的アポトーシスを誘導する事を明らかにしている。この培養細胞で観察される細胞死がアルツハイマー病の発症を反映している事を示すため、共同研究先の新潟大学脳研究所で、AICDを発現するトランスジェニックマウス(Tg)の作製を試みているが、おそらくはAICDの強い毒性のために胎生致死となり、Tgが得られていない。今後、このAICDの強い毒性による胎生致死を回避するために、Brainbowベクターを用いて、ほぼ半数の脳神経細胞でAICDを発現するマウスを作製する予定であり、現在ベクターの作製等、準備中である。我々は、NotchやDeltaの解析から、γーセクレターゼの本来の生理機能はAPPを含む1型膜蛋白質のシグナル伝達の調節にあり、それがアルツハイマー病の発症に関係しているのではないかと考えている。実際、我々は神経細胞に分化誘導できるテラトカルチノーマ細胞P19を用いて、APPの細胞内ドメイン(AICD)は核へ移行し、神経細胞選択的にアポトーシスを引き起こす事を示している。

23年度は、DNAマイクロアレイを用いた解析により、この神経細胞選択的アポトーシスの過程でAICDがダイナミックに遺伝子の発現を変化させる事を明らかにし、APPのシグナル伝達機構がアルツハイマー病の発症機序に関係する可能性を示唆して論文を発表した。さらに、細胞膜から切り出されたAICDは、核に移行して転写因子と結合し転写を変化させているのではないかと考えられるが、現在のところ、その核移行にAICD自体のリン酸化が関係しているのではないかと考えられる結果が出ている。このように、本研究の基礎となる分子及び細胞レベルでの解析では、AICDがダイナミックに遺伝子発現を変化させ、神経細胞選択的アポトーシスを誘導する事を明らかにした。より生理的な状態でもこの細胞死がアルツハイマー病の発症を反映していないのかを調べるために、共同研究先の新潟大学脳研究所で、AICDを発現するトランスジェニックマウス(Tg)の作製を試みているが、タンパク質レベルでのAICDの発現は認められなかった。今後この原因を検討するとともに、より強力なCAGプロモーター等を用いて、再度AICDを発現するTgの作製を試みる予定である。AICDを発現するTgが得られた場合、信州大学において早急に解析をおこなう予定である。我々は既に、本研究の基礎となる細胞レベルでの解析において、神経細胞に分化誘導できるテラトカルチノーマ細胞P19を用いて、APPの細胞内ドメイン(AICD)は核へ移行し、神経細胞選択的にアポトーシスを引き起こす事を発表している。23年度は、DNAマイクロアレイを用いた解析により、この神経細胞選択的なアポトーシスの過程でAICDがダイナミックに遺伝子の発現を変化させる事を明らかにし論文化した。細胞膜から切り出されたAICDは、核に移行して転写因子と結合し転写を変化させていると考えられ、核移行のメカニズムの解明は極めて重要である。本年度の成果として、AICDの核移行にAICD自体のリン酸化が関係しているのではないかと考えられる結果を得ている。これらのことから、研究はおおむね順調に進展していると言う事ができる。当初の計画では、この神経細胞選択的な細胞死の分子レベルでのメカニズムの解明、及びより生理的な状態でもこの細胞死が起る事を示すために共同研究先の新潟大学脳研究所で、AICDを発現するトランスジェニックマウス(Tg)を作製する予定であった。24年度は共同研究先の新潟大学脳研究所でAICDを発現するTgの作製を試みたが、生まれてきたTgではタンパク質レベルでのAICDの発現は認めらなかった。おそらく、AICDの強い神経毒性のため、Tgが胎生致死になってると考えられる。従って、このTgの作製に関しては現在のところうまくいっておらず、次年度はこの胎生致死を回避するためにBrainbowベクターを用いて、ほぼ半数の脳神経細胞でAICDを発現するTgを作製する予定である。我々は、本研究の基礎となる細胞レベルでの解析において、神経細胞に分化誘導できるテラトカルチノーマ細胞P19を用いて、APPの細胞内ドメイン(AICD)は核へ移行し、神経細胞選択的にアポトーシスを引き起こす事を示している。
１７３０年代におけるＪ．　Ｓ．　バッハの音楽活動　－伝記・様式研究総合の試み－

ドレスデン宮廷楽団は、ヨハン・ゼバスティアン・バッハ(1685-1750)や彼と同時代の音楽家が着目した楽団の-つである。そのため、この楽団がバッハをはじめとする音楽家に与えた影響を解明することは、バロック音楽研究における課題の一つとなっている。今年度は、18世紀前半のドレスデン宮廷において作成されたヴァイオリン協奏曲のパート譜を中心に研究を行った。パート譜の中には、通奏低音声部を担う楽譜が「バッソ・リピエーノBasso R.」一つ、「バッソーノBassono」一つ、「チェンバロCembalo」一つとなったものが確認された。研究では先行研究の論に基づき、これらの楽譜が低音弦楽器1挺あるいは2挺、ファゴット1本、チュンバロ1台によって演奏されたと推測した。他方研究では、ヨハン・ヨーアヒム・クヴァンツ(1697-1773)の著作『フルート奏法試論』(1752)に着目した。クヴァンツは1741年までドレスデン宮廷楽団に属した音楽家である。彼はこの著作においてオーケストラの編成を論じ、ヴァイオリン6挺に対してはヴィオラ1挺、チェロ1挺、「コントラヴィオローンContraviolon」1挺、ファゴット1本、チェンバロ1台をあてるよう指示している。そのため研究では、クヴァンツが推奨する編成の一部分、すなわちチェロ1挺、「コントラヴィオローン」1挺、ファゴット1本、チェンバロ1台が、先述のパート譜から推測される通奏低音声部を担った楽器の編成、低音弦楽器1挺または2挺、ファゴット1本、チェンバロ1台に似ていることを指摘した。クヴァンツの『フルート奏法試論』とドレスデン宮廷における演奏の実践との関連は、未だに十分には解明されていない。先に指摘した編成の類似は、バッハとほぼ同時代の音楽家クヴァンツの著作とドレスデン宮廷との関連を示唆する一例として、バロック音楽研究に貢献できるのではないかと考える。(抄録なし)本年度は主に4つの調査を行った。以下に各々の調査について概要を記す。まずひとつ目は、主にJ.S.バッハの伝記研究に関わるものであり、1730年代のバッハが関連を持っていた諸組織について調査した。そして特にドレスデン宮廷に注目することとなった。当時のドレスデン宮廷との関係は、バッハ研究において重要視されてきた研究項目のひとつだからである。また宮廷に設置された音楽組織についても、先行研究を参照することにより情報を収集した。そして宮廷楽団を中心に、楽団員の報酬や活動内容の概要を確認することができた。次に第2の調査として、1730年代のバッハが、ドレスデン宮廷のために用意したとされる作品全般を調べた。そしてその中から《ミサ曲》(BWV 232^I、<キリエ>と<グロリア>)に着目した。この作品のパート譜(D-D1,Mus.2405-D-21)は1733年に、ザクセン選定侯フリードリヒ・アウグスト2世に献呈されている。このミサ曲については、先行研究により種々の指摘がなされている。それらの指摘から特に着目したことは、ファゴットの音域に関する事柄、すなわち《ミサ曲》では、同時期のバッハ作品よりも比較的高い最高音、一点イが用いられていることである。よって第3にはファゴットに関する調査を行い、この楽器自体について先行研究の確認を行った。それらの研究では、18世紀前半において楽器の名称や種類は複数存在していたことなどが示されていた。またトレスデン宮廷に所属していたファゴット奏者についても調べを行った。先行研究からは、ドレスデン宮廷楽団に所属したファゴット奏者の名前と年棒などが明らかにされているだけであった。よって詳細については研究の余地が残っていると理解している。本研究は、1730年代におけるヨハン・ゼバスティアン・バッハJohann Sebastian Bach(1685-1750)の活動に含まれる、ドレスデン宮廷に対する働きかけに着目している。今年度はドレスデン宮廷楽団のファゴット・パートに関する先行研究を収集することからはじめたが、このパートについて詳述したものは見られなかったため、独自に調査を進めることとなった。調査の一つは、ファゴットが編成に含まれるレパートリーに関するものである。ドレスデン宮廷において1730年代から1750年代の間に筆写された協奏曲からは、ファゴットの三つの役割が確認された。木管のソロ部分において、ファゴットは他の低音楽器やチェンバロと異なり、単独で通奏低音声部を奏でること、ヴァイオリン協奏曲の独奏部分では、他の低音楽器が休止しているにも関わらず、ファゴットはチェンバロと共に通奏低音声部を担っていること、木管楽器が独奏する協奏曲の場合、通奏低音声部を奏するだけの「チェロVioloncello」や「バッソBasso」と違い、ファゴットは独奏も行うことである。当時のドレスデン宮廷楽団におけるファゴットの役割は、「弦楽器奏者への総奏における補強Tuttiverstarkung der Streicher」と述べられるにとどまっていた^1。よって今年度の研究を通して明らかとなったこれらの役割により、当宮廷楽団のファゴットに関する理解は改められるだろうと考える。また今年度はドレスデン宮廷楽団のファゴット奏者についても調査を行い、ドレスデン州立図書館に所蔵されている「年鑑Konigl. Polnischer und Churftirstl.Sachsischer Hof und Staats-Calender」を参照した。その結果、ファゴット奏者の数は1733年から1756年の間に増加していることが明らかとなった。

そのため、この楽団がバッハをはじめとする音楽家に与えた影響を解明することは、バロック音楽研究における課題の一つとなっている。今年度は、18世紀前半のドレスデン宮廷において作成されたヴァイオリン協奏曲のパート譜を中心に研究を行った。パート譜の中には、通奏低音声部を担う楽譜が「バッソ・リピエーノBasso R.」一つ、「バッソーノBassono」一つ、「チェンバロCembalo」一つとなったものが確認された。研究では先行研究の論に基づき、これらの楽譜が低音弦楽器1挺あるいは2挺、ファゴット1本、チュンバロ1台によって演奏されたと推測した。他方研究では、ヨハン・ヨーアヒム・クヴァンツ(1697-1773)の著作『フルート奏法試論』(1752)に着目した。クヴァンツは1741年までドレスデン宮廷楽団に属した音楽家である。彼はこの著作においてオーケストラの編成を論じ、ヴァイオリン6挺に対してはヴィオラ1挺、チェロ1挺、「コントラヴィオローンContraviolon」1挺、ファゴット1本、チェンバロ1台をあてるよう指示している。そのため研究では、クヴァンツが推奨する編成の一部分、すなわちチェロ1挺、「コントラヴィオローン」1挺、ファゴット1本、チェンバロ1台が、先述のパート譜から推測される通奏低音声部を担った楽器の編成、低音弦楽器1挺または2挺、ファゴット1本、チェンバロ1台に似ていることを指摘した。クヴァンツの『フルート奏法試論』とドレスデン宮廷における演奏の実践との関連は、未だに十分には解明されていない。先に指摘した編成の類似は、バッハとほぼ同時代の音楽家クヴァンツの著作とドレスデン宮廷との関連を示唆する一例として、バロック音楽研究に貢献できるのではないかと考える。このように自己評価した理由は以下の通りである。すなわち研究対象をドレスデン宮廷やそこに属していたファゴット奏者などに絞ることができたからである。またこれらの研究対象については、研究の余地があることを確認できたことも理由として挙げられる。現時点では、研究に必要な一次資料などが入手できているため、このように達成度を区分できると考える。また資料の数は十分とはいえないものの、ドレスデン宮廷楽団のファゴット奏者たちに関する情報も徐々に把握されてきている。なお一方では、当楽団のファゴットを研究する目的を、さらに明確にしようと考えている。ファゴットという楽器や奏者に関する調査は、それ自体でひとつの大きな研究となる。そのため、ファゴットに関する先行研究の内容をさらに確認し、特にドレスデン宮廷やバッハに関連する研究課題を探し出すことが、今後の推進方策として重要であると考える。また、本研究に関した先行研究が、言及していない一次資料も現存すると思われる。よって研究に必要な資料が保存されているであろう研究機関に出向き、直接一次資料を調査する必要もあると考える。今後も継続して、1730年代のドレスデン宮廷楽団の特徴を把握することに努める。
動物実験モデルを用いた顎舌異常運動症の解析

平成4年度は、まず、口腔の構音運動の障害の一つである吃音(どもり)に発生の生理学的背景について検討する目的で口蓋帆運動を担う口蓋帆挙筋と気道内の気流感覚との生理学的関係について成犬を用いて検討を行った。その結果、口蓋帆挙筋は声門下ならびに声門上での気流によってその活動が賦活化されることが明らかとされた。このことは、吃音でみられるBlock現象(発声の一次的停止)から爆発的に生じる破裂音の連続は、この様な声門下ならびに声門上での増大した気流量を知覚することにより口蓋帆が反射的に活動を示すことにより生じることを示すものと考えられた。Oral Dyskinesiaの発生には、口腔内の感覚の異常が起因していることが推察されている。そこで、実験では従来より報告されているOral Dyskinesiaを誘発するD1,D2 agonist(Quinpirole、SKF38393)を投与を行い顎舌運動を誘発させた状態で、口腔内知覚を麻痺させ、その影響をラットを用いて検討した。その結果、口蓋部に浸麻を施すことにより誘発されたOral Dyskinesiaの回数は急激に減少することが観察され、口腔内の知覚がOral Dyskinesiaの誘発に大きな影響を及ぼしていることが明らかになった。また、サルを用いて臼歯部に不良補綴物を装置し経過を観察したところ、弄舌を伴う下顎の不随意運動が発生し、ヒトのOral Dyskinesiaと同様な症状が発現することが示された。しかしながら、従来指摘されているパーキンソン病治療薬の慢性投与では明らかな下顎の不随意運動は観察されなかった。このことからOral Dyskinesiaの発生には口腔内の知覚異常が関与していることが明らかとなった。Oral dyskinesia、舌弄癖等の異常運動を解析するために、まず本年度は開閉口筋および外舌筋の統合運動を明らかとし、指標として使うべく、成犬の咀嚼筋と外舌筋の呼吸性筋放電の観察から行なった。咀嚼筋として咬筋(閉口筋)、顎二腹筋前腹(開口筋)、外舌筋として茎突舌筋、オトガイ舌筋の呼吸性筋活動を観察し、デ-タレコ-ダ-(PCー108M)に記録した。再呼吸回路を用いて動脈血中のPaCO_2の上昇とPaO_2低下を促すと、咬筋、顎二腹筋前腹、茎突舌筋、オトガイ舌筋の全てから呼吸性の筋放電が観察された。その活動は咬筋においては呼息から吸息時にかけて、顎二腹筋前腹からは呼息相に同期して、茎突舌筋、オトガイ舌筋では吸息相に同期して認められた。ことに、茎突舌筋、オトガイ舌筋においては呼吸性活動の発現はPaCO_2の上昇により影響されることが明らかとなった。そこでまず、茎突舌筋、オトガイ舌筋の呼吸性活動の役割について検討するため、実験的に気流を流したところ両筋の呼吸性活動により経口気流が増大することが明らかとなった。この活動は口腔咽頭の気流知覚により増幅されることも認められた。電気刺激装置SENー7203、SSー102Jを用いて、下喉頭神経の分枝に電気刺激を与えて、声門の動きによる影響も併せて観察したところ声門閉鎖運動は上喉頭神経の求心性回路を通してオトガイ舌筋の呼吸性活動を抑制することが示された。下顎骨を切断し、オトガイ部を前後させ、舌根部の広さを変えると、舌根部の狭窄によりオトガイ舌筋の活動が増幅され、拡大により茎突舌筋の活動が増幅された。

以上の結果より咬合に異常なく、顎舌の異常運動の認められない状態では、閉口筋、開口筋、外舌筋に呼吸に併う筋活動が認められ、さらに外舌筋の動きは舌根部の広さを調節し、経口呼吸を促進することが明らかとなった。平成4年度は、まず、口腔の構音運動の障害の一つである吃音(どもり)の発生の生理学的背景について検討する目的で口蓋帆運動を担う口蓋帆挙筋と気道内の気流感覚との生理学的関係について成犬を用いて検討を行った。その結果、口蓋帆挙筋は声門下ならびに声門上での気流によってその活動が賦活化されることが明らかとされた。このことは、吃音でみられるBlock現象(発声の一次的停止)から爆発的に生じる破裂音の連続は、この様な声門下ならびに声門上での増大した気流量を知覚することにより口蓋帆が反射的に活動を示すことにより生じることを示すものと考えられた。Oral Dyskinesiaの発生には、口腔内の感覚の異常が起因していることが推察されている。そこで、実験では従来より報告されているOral Dyskinesiaを誘発するD1,D2 agonist(Quinpirole、SKF38393)を投与を行い顎舌運動を誘発させた状態で、口腔内知覚を麻痺させ、その影響をラットを用いて検討した。その結果、口蓋部に浸麻を施すことにより誘発されたOral Dyskinesiaの回数は急激に減少することが観察され、口腔内の知覚がOral Dyskinesiaの誘発に大きな影響を及ぼしていることが明らかとなった。また、サルを用いて臼歯部に不良補綴物を装着し経過を観察したところ、弄舌を伴う下顎の不随意運動が発生し、ヒトのOral Dyskinesiaと同様な症状が発現することが示された。しかしながら、従来指摘されているパーキンソン病治療薬の慢性投与では明らかな下顎の不随意運動は観察されなかった。このことからOral Dyskinesiaの発生には口腔内の知覚異常が関与していることが明らかとなった。
葉の形態形成における遺伝子発現制御ダイナミクス

(1)構成的な転写活性化能をもつ改変Athb-1(HDZipl-VP16)を形質転換タバコ内で発現すると、柵状組織の形成阻害や暗所における葉の展開など葉に特異的な形態的変化が引き起こされる。さらにHDZip1-VP16にグルココルチコイド・レセプターのレセプタードメインを付加し(HDZipl-VP16-GR)、タバコ内に導入することにより上記の形態的変化を人為的に誘導することができる。このHDZipl-VP16-GRをタバコBY-2細胞に導入し、ディファレンシャルディスプレイ法を用いてAthb-1 DNA結合ドメインの標的遺伝子の検索を行った。その結果、ヒストンH3と相同な遺伝子および機能が未知の2つの遺伝子が同定された。これらの遺伝子が本来どのような状況において発現されるものであるかを解析中である。(2)パーティクルボンバードメント法による実験から、Athb-1のDNA結合ドメインのC端側に存在する酸性アミノ酸に富んだ領域が非常に強い転写活性化ドメインとして働くことが明らかになった。しかし、タバコにおいてAthb-1はHDZipl-VP16に較べて弱い表現型しかもたらさない。Athb-1による表現型は低温下において強められることと併せて、Athb-1の転写活性化能は何らかの形で負に制御を受けていると考えられる。(3)HDZipl-VP16-GR遺伝子およびHDZip2-VP16-GR遺伝子を導入した形質転換アラビドプシスを作成した。HDZipl-VP16-GRを有する形質転換体では、子葉および葉の短軸方向における伸長阻害、暗所における子葉および葉の展開など、葉の形態形成に関する変化がグルココルチコイドの添加により誘導された。HDZip2-VP16-GRを有する形質転換体では、明所、暗所ともに胚軸の伸長阻害および水平方向への肥大成長が誘導された。Athb-2を35Sプロモータにより強制発現させた形質転換体では胚軸の伸長が促進されること、およびHDZip2-VP16-GRは誘導時において強い転写因子として働くと考えられることから、Athb-2そのものは負の転写因子である可能性が示唆された。
重元素の動的ふるまいに着目した銀河団ガスの化学進化の研究

X線観測が明らかにしてきた銀河団に存在する大量の重元素はどこからやってきたのか。重元素は星の核融合でしか生まれないため、星の一生の最後に起こる超新星爆発により重元素は銀河に放出され、銀河から銀河団へ何らかの形で供給され、銀河団全体に広がる。超新星による重元素生成の理論モデルから、銀河団中の重元素の起源を解明する試みが今までなされてきた。しかし、そのモデルでは到底説明できない大量の重元素が、どのように銀河から銀河団へ供給され、銀河団全体へ広がっていくのか遅々として分かっていない。本研究は、この本質的なプロセスに1つ1つ着目し、今までにないアプローチから重元素の起源を解明することを目的とする。本年度は私はおとめ座銀河団の銀河NGC4388から、重元素が放出されている現場をX線で初めて検出した。銀河団に対して高速で走る銀河から、ガスが放出されている現場を捉えた。このことは銀河ガスが動圧によりはぎ取られたことを強く支持しており、X線観測ははぎ取られたガスを直接検出するのに最善のプロープであると言える。この成果を論文として提出し、現在審査中である。これを出発点として、Chandra衛星の高精度のX線撮像で、近傍の銀河団が空間的に分離しやすいことに着目し、最も近いおとめ座銀河団のX線観測を軸に、銀河団の重元素の起源解明に迫ることにした。銀河ガスのひしゃげ具合から、どれも銀河団ガスによる動圧を受けたような兆候が見られた。さらに、遠方銀河団まで含めたメンバー銀河について、銀河ガスの広がり、明るさ、質量を系統的に調べたところ、動圧によるはぎ取り効果が一般的に起こっていることを立証することができた。これは銀河から銀河団へ重元素が供給されるメカニズムそのものであり、以上の結果を博士論文としてまとめた。
エイズの総合的基礎研究柱4.エイズの病態に関する研究

HIVの外被糖蛋白gp120に対するモノクロナル抗体0.5βが認識するエピト-プが固定され、それが中和抗体活性部位に存在することが明らかになった。マウスでつくられたモノクロナル抗体をヒトIgGの形にすることが遺伝子工学的に可能であり、0.5βについても試作されている。さらに中和エピト-プのストレイン間の比較,合成ペプチドによる抗体の作製が行なれた(高月)。エイズ死亡症例の脳の神経病理学的検索が行われ、1例ではHIV leukoencephalopathyの所見が見られ、他の1例では日和見感染による多発性の大きなトキソプラズマ性肉茅腹と診断されたが、その病単とは離れた大脳白質においてもミクログリアの増生と血管周囲のマクロファ-ジの集簇が認められ、HIV感染に伴う共増の白質病変の存在が示峻された(納)。HIVプロウイルスDNAを定量的に検出できる系をPCRを用いて作成し、臨床に応用して有用性を確めた。さらにRIを使わずにAZTのリン酸体を測定する方法を開発し、それによってAZT投与法を工夫した(木村)。多数例の血友病患者のHIV感染状況を経過観察し、6年間の免疫能の推移から、病勢の進行と各マ-カ-の変動を検討した(藤巻)。プロウィルスDNA、血清RNAをtwoーstep PCRにより検出する系をつくり、臨床応用した。エイズ側では症状が発現し免疫能が低下する前にRNAの強陽性が持続し予後推定のよい指摘となることを指摘した(三間屋)。HLAタイプ,HTLV-JやHCVとの重感染,β_2ミクログロブリン,NK活性,TNF活性,IFN-αおよびδなどを検討したが免疫不全進行因子としてはっきりした成績は得られなかった(白幡)。
骨格筋電気刺激による新たな糖尿病運動療法の確立

運動は糖尿病の予防・治療の基本であるが、肥満や高齢に伴う関節痛などによって推奨されるような運動を実施できない患者が多いため、寝たままでも実施できる骨格筋電気刺激のような代替手段の開発が期待されている。本研究では、健常者に対して4週間の骨格筋電気刺激のトレーニングを実施した結果、下肢筋力や持久力が改善した。この結果は継続的な骨格筋電気刺激が筋や心肺機能を変化させたことを意味する。この結果をもとに、骨格筋電気刺激が2型糖尿病患者の糖・脂質代謝を改善できるかどうかを検証した。その結果、体脂肪率や糖・脂質状態の改善する結果が得られた。しかしながら、実施した糖尿病患者数が少なく今後の継続が必要である。【研究の目的】糖尿病患者は年々増加しており、医療経済にも大きな影響を与えている。運動療法は糖尿病治療の柱であるが、高齢化に伴い、運動療法を実施できない患者が多くなっていることは社会的な問題といえる。近年、運動が実施できない寝たきり患者などへの代替手段として、骨格筋電気刺激が注目されており、研究代表者は骨格筋電気刺激が2型糖尿病患者の食後血糖値の上昇を抑制できるなど急性効果を明らかとしてきた。しかし、中・長期的にトレーニングとしての効果は明らかとなっておらず、本研究では、骨格筋電気刺激の中期的なトレーニングが血糖コントロールに及ぼす影響を明らかにすることを目的としている。本研究によって、寝たきり患者や整形外科疾患などの運動を実施できない患者への応用が可能となるため、医療・介護分野への貢献は大きいと考えられる。【研究計画の実績】本研究では、平成25年度に健常者で継続的な電気刺激の有効性と刺激条件を確認し、平成26年度に糖尿病患者への臨床研究を実施することを計画している。平成25年度の研究実績平成25年10月平成26年1月において、健常大学生11名を対象として実施した。対象者は骨格筋電気刺激を週4回、4週間実施した。刺激強度は事前に設定した3-4METsとし、1回30分間実施した。平成26年2月に全てのデータを解析した結果、介入前後において、体重、体脂肪率は有意な変化を認めなかったが、持久力の指標である最大酸素摂取量、換気性作業閾値や膝伸展筋力に有意な改善を認めたことが明らかとなった。【研究の目的】糖尿病患者は年々増加しており、医療経済に大きな影響を与えている。しかし、中・長期的なトレーニングとしての効果は明らかとなっておらず、本研究では、骨格筋電気刺激の中期的なトレーニングが血糖コントロールに及ぼす影響を明らかにすることを目的としている。本研究によって、寝たきり患者や整形外科疾患などによって運動を実施できない患者への応用が可能となるため、医療・介護分野への貢献は多大であると考えられる。【研究計画】本研究の計画は以下の通りである。1.健常者における骨格筋電気刺激によるトレーニング効果の検証、2.2型糖尿病患者に対する継続的な骨格筋電気刺激の有効性を明らかにする【研究計画の実績】1.平成26年8月10月において、平成25年度に実施した健常者におけるトレーニング効果の検証の継続課題を実施した。平成25年度は骨格筋電気刺激による介入群の測定を実施し、筋力および持久力の向上を認めたが、本年度のコントロール群の測定では、筋力および持久力は有意な変化を認めなかった。2.平成26年4月12月において、2型糖尿病患者における骨格筋電気刺激の臨床介入試験のプロトコル作成、スタッフ間調整、倫理審査申請を行った。平成27年1月より2型糖尿病患者のリクルートを行った結果、14名が登録され、平成27年3月末時点で、全症例とも16週間の介入試験を継続している最中である。26年度が最終年度であるため、記入しない。リハビリテーション医学26年度が最終年度であるため、記入しない。平成25年度の予定は、健常者を対象として電気刺激の中・長期的効果の検証を行うことであり、予定通り実施することが可能であった。平成25年度の検証によって、骨格筋電気刺激が筋力改善、持久力改善に有効なトレーニングツールであることが明らかとなり、代謝疾患である糖尿病患者の筋機能を改善し、糖代謝の改善に有効である可能性が示唆された。

このことから、平成26年度には、糖尿病患者に臨床応用を実施し、研究目的である骨格筋電気刺激の中期的なトレーニングが2型糖尿病患者の血糖コントロールに及ぼす影響を明らかにすることが可能ではないかと考えられる。以上のことから、研究計画は予定通り進んでおり、何ら問題ないと思われる。2型糖尿病患者における骨格筋電気刺激のトレーニング効果の検証を行うことを予定している。平成26年4月9月において、対象患者のリクルートメントを行い、当該施設と連携して、計画実施の環境を整える。その後、平成26年10月平成27年2月において、15名程度の2型糖尿病患者を対象として、4週間の骨格筋電気刺激介入を実施する。刺激装置、刺激条件は、平成25年度と同様とし、実施時間帯は低血糖発作を考慮し、食後での実施とすることとする。その後、介入前後における実験データの解析と血液データをはじめとする結果の整理を行う。平成25年度、26年度に実施した研究結果については、誌上、および国内外での発表を行う予定としている。
現代日本語の自他に関する構文的研究

本研究の目的は「構文」に関する文法的知識が実際に使用される文の生成・解釈において重要な役割を果たすことを、現代日本語の自他構文を例にして明らかにすることである。本年度は、接続助詞的な意味を表す「のが」と「のを」を持つ文を、自動詞構文・他動詞構文からの拡張と位置付け、それぞれ自動詞構文・他動詞構文の基本的な意味をどのように受け継いでいるか、どこまで元の意味を失っているかを詳細に検討した。その結果、「のが」「のを」は、状態変遷性を表す自動詞構文の主格・対抗動作性を表す他動詞構文の目的格という格助詞の意味から、二つの事態を「逆接」「対比」の意味でつなぐものへと拡張した実例が見いだせるものの、拡張するにつれ(自動詞構文・他動詞構文の特徴が失われるにつれ)許容度は下がり、動的事象の変化の解釈が得られない状況での「逆接」「対比」用法は受け入れがたいことが明らかになった。この拡張の結果としての逸脱的な「のが」の文と「のを」の文の意味は接近しているが、「のを」の文が「のが」の文に近づく関係にあることも明らかにした。「のが」「のを」を用いて動的事態変化ではない、「対比」を表す場合、発話者は自動詞構文・他動詞構文の構文的意味である「変化」の意味を、《対比する》という思考のプロセスに写像して表現したものと考えられ、「に対して」などの表す「対比」とは意味が異なることを明らかにした。「逆接」や「対比」の意味そのものが発話者の主観と言われるが、その「逆接」「対比」を、自動詞構文・他動詞構文の持つ構文的意味を鋳型として主体的に捉え表現するという意味でも、「のが」「のを」文の「逆接」「対比」は主観的であると言える。本研究の中心である、自動詞構文・他動詞構文の構文的意味の考察として「のが」「のを」の文の考察を深めることができた。収集した実例に基づく考察の他、逸脱的特徴を持つ例に関する許容度調査も行い、自動詞構文・他動詞構文の構文的知識の重要性を論じる基盤が整えられた。構文に関する知識により、逸脱文の生成や解釈がなされていることを明らかにするため、これまでは逸脱文の実例の持つ構文的特徴の残存の分析や、構文的特徴の濃淡に対する母語話者の許容度の変化を調査してきた。特に、後者については、構文的知識を持っていることを前提とし日本語母語話者への調査のみをしてきたが、その比較として、非母語話者の許容度調査等も行う予定である。補足調査の分析も加え、現代日本語の自動詞構文・他動詞構文の拡張としての、接続助詞的な「のが」「のを」の文の意味生成・解釈に構文的知識が有用に働いていることを最終的にまとめていく予定である。本研究の目的は、「構文」という単位の持つ、形式と意味の慣習的結びつきに関する知識が、実際の言語使用場面での意味生成・理解のプロセスにおいて重要な役割を果たすということを、日本語文法論の立場から論じることである。本年度は、構文研究の成果を広く学ぶための研究会を主催し、日本語事例として恩恵構文「てもらう・てくれる」が、「てもらわないと・てくれないと」という中断した形(中断節)で、対人関係的な行為要求の意味(=聞き手に行為をさせる意味)を派生する現象を考察した。特に、使用実態調査から「てもらわないと」の方が「てくれないと」よりも頻用されることを明らかにした。この結果を構文的意味が拡張する要因という観点から考察し、「てもらう・てくれる」の元々の文構造の違いから「てもらう」の方が丁寧な行為要求の意味となるためとした。その過程で、構文の意味の拡がりの要因は、統語論的・意味論的・語用論的特徴から多角的に説明できることを示した。この成果は日本語文法学会パネルセッション「構文と意味の拡がり」、国立国語研究所シンポジウム「日本語文法研究のフロンティアー形態論・意味論・統語論を中心にー」で口頭発表した。また、自他構文の考察対象となる接続詞的な「それが」文・接続詞的な「それを」文の収集のため、国立国語研究所「現代日本語書き言葉均衡コーパス」・名大会話コーパスを調査し、さらに自然会話を録音し文字化を進めた。主として次年度以降に計画していた構文研究の理論的側面の考察について、研究会・学会・シンポジウムにおける口頭発表と質疑応答を通して、予定以上の進展があった。他方、本年度の主たる予定であった自他構文の分析のための実例収集については、十分な数量に達したとは言えない。本研究の目的は、日本語の自他構文の分析を通し「構文」という単位の持つ形式と意味の慣習的結び付きに関する知識が実際の言語使用の場面での意味生成・理解のプロセスに重要な役割を果たすことを論じることである。本年度は、本研究の土台となる「構文」研究の理論的・一般的課題の整理を行った。第1に、広く日本語以外の言語も含めた構文研究の相互交流として、構文の意味とその拡がりに関する論文集を編集し、現代日本語研究分野における構文研究の総説を分担執筆した。また、この論文集において、「てもらう」「てくれる」を用いた恩恵構文の意味拡張の問題を論じた。「てもらう」「てくれる」が「ないと」形の従属節に現れ、「てもらわないと」「てくれないと」で中断する場合、いずれも相手に対して行為を要求する意味に解釈される。

この用法は互換可能に見えるが、実際の使用例調査の結果、その使用数は「てもらわないと」に傾いていることがわかった。この理由を、語彙論・統語論・語用論のレベルで考察し、元々の「もらう」が持つ〈相手に乞う〉意味が保持されていること、「てもらう」は発話者が主格となり発話者の意志的動作を表すが「てくれる」は表さないこと、自身の動作を評価する意味を表すことにより、相手の行為を要求する無礼さを軽減することが考えられるとした。先行研究では「てもらう」と「てくれる」では「てくれる」の方が構文の意味拡張が進んでいるとされるが、「てもらう」の方が促進的な用法があることを述べ、構文の意味拡張の要因・傾向が複雑であることを論じた。また、本研究の自他にも関わる使役構文研究について先行研究を吟味し、主として使役構文の意味拡張の問題を考察し書評論文にまとめた。また、反復構文研究についての先行研究を吟味し、構文の意味拡張として多く見られる対人関係的意味についての考察を深め書評論文にまとめた。自他構文の主として構文研究の理論的側面の考察について、中間的成果を論文にまとめた。自他構文のデータの取得と、その分析も予定通りに進めた。本研究の目的は「構文」に関する文法的知識が実際に使用される文の生成・解釈において重要な役割を果たすことを、現代日本語の自他構文を例にして明らかにすることである。本年度は、接続助詞的な意味を表す「のが」と「のを」を持つ文を、自動詞構文・他動詞構文からの拡張と位置付け、それぞれ自動詞構文・他動詞構文の基本的な意味をどのように受け継いでいるか、どこまで元の意味を失っているかを詳細に検討した。その結果、「のが」「のを」は、状態変遷性を表す自動詞構文の主格・対抗動作性を表す他動詞構文の目的格という格助詞の意味から、二つの事態を「逆接」「対比」の意味でつなぐものへと拡張した実例が見いだせるものの、拡張するにつれ(自動詞構文・他動詞構文の特徴が失われるにつれ)許容度は下がり、動的事象の変化の解釈が得られない状況での「逆接」「対比」用法は受け入れがたいことが明らかになった。この拡張の結果としての逸脱的な「のが」の文と「のを」の文の意味は接近しているが、「のを」の文が「のが」の文に近づく関係にあることも明らかにした。「のが」「のを」を用いて動的事態変化ではない、「対比」を表す場合、発話者は自動詞構文・他動詞構文の構文的意味である「変化」の意味を、《対比する》という思考のプロセスに写像して表現したものと考えられ、「に対して」などの表す「対比」とは意味が異なることを明らかにした。「逆接」や「対比」の意味そのものが発話者の主観と言われるが、その「逆接」「対比」を、自動詞構文・他動詞構文の持つ構文的意味を鋳型として主体的に捉え表現するという意味でも、「のが」「のを」文の「逆接」「対比」は主観的であると言える。本研究の中心である、自動詞構文・他動詞構文の構文的意味の考察として「のが」「のを」の文の考察を深めることができた。収集した実例に基づく考察の他、逸脱的特徴を持つ例に関する許容度調査も行い、自動詞構文・他動詞構文の構文的知識の重要性を論じる基盤が整えられた。接続詞的な「それが」文・「それを」文に関する実例収集を2017年度の早い段階で終了させ、分析を進めていく。2017年8月のカナダ日本語教師会で構文研究についての口頭発表をする予定であり、同時に、非母語話者の自他構文に関する逸脱文の意味理解に関する調査を行う。2017年度後半でその調査結果をまとめる。2018年度以降は予定通りに日本語の自他構文の考察を行う。
生殖細胞で発現するPIWI-piRNAによるオス性分化制御機構の解明

メダカ性分化におけるPIWI-piRNAシステムの役割を明らかにするため、前年度に作出したPIWIノックアウトメダカを用いて組織学的解析を行った。メダカではPiwil遺伝子は2つ存在し、どちらのノックアウト個体も不妊となることを前年度に明らかにしている。メダカではアンドロゲン依存的にヒレにおいて2次性徴が現れるが、Piwil1ノックアウトのXY個体ではこれらの2次性徴を示さないこと、アンドロゲンレベルがコントロールに比べ低いことを明らかにした。Piwil2ノックアウトメダカの雌個体では卵巣特徴的な構造である卵巣腔が確認されたが、Piwil1ノックアウトでは明瞭な卵巣腔は確認されなかった。さらに、Piwil1ノックアウト雌個体ではエストロゲンレベルがコントロールに比べ有意に低いことを明らかにした。Piwil1ノックアウト個体における2次性徴をより解析するため、in situ hybridizationにより性分化関連遺伝子の発現状態を解析したところ、Piwil1ノックアウト個体では両性ともに、p450-11βやaromataseの発現が確認されないことを明らかにした。これらの結果から、Piwil1ノックアウト個体では生殖腺の性分化に異常があるため、性ホルモンレベルの減少から2次性徴の異常が起こると示唆された。Piwil1の遺伝子発現は生殖細胞特異的であることをin situ hybridizationと免疫染色から明らかにしているため、これらの減少は生殖細胞でのPiwil1の機能欠失によるものと考えられ、PIWI-piRNAによる性分化への関わりが予想される。PIWIノックアウトメダカを用いて組織学的解析から、Piwil1ノックアウト個体では生殖細胞でのPiwi機能欠失依存的に生殖腺の性分化に異常が起こるため、性ホルモンレベルの減少および2次性徴の欠損が導かれることを示した。本研究は高等脊椎動物において、生殖細胞におけるPIWI-piRNAが性分化へ関わることを示す新たな知見になると期待される。Piwil1ノックアウト個体において性分化に関わるpiRNAの同定を行うため、ノックアウトメダカにおける網羅的small RNA解析を行う予定である。そのため、メダカPiwil1を特異的に認識する抗体の作製している。しかしながら、抗体作製におけるタンパク誘導に問題があり現在のところ抗体作製に遅延が生じている。抗体部位の変更を行い、再度抗体作製を行う予定であり、これら抗体を用い特定した分化段階の生殖細胞においてCLIP-seqを行うことにより、PIWIl1に結合するpiRNAを分離/同定を行う。野生型メダカとPiwiノックアウトメダカを比較することで、性分化に関わるpiRNAならびに標的遺伝子の単離を目指す。メダカ性分化におけるPIWI-piRNAシステムの役割を明らかにするため、次世代シークエンサーを用いた網羅的解析とPIWIノックアウトメダカによる組織学的解析を行った。網羅的解析では卵巣および精巣を用いてsmall RNAプロファイルと遺伝子発現状態の解析を行い、雌雄ともにpiRNAの特徴的な長さの小分子RNAが認められ、興味深いことにpiRNAの長さのプロファイルには雌雄差がみられた。次に、メダカゲノムへの小分子RNAのマッピングを行い、以下3点の雌雄差が認められるpiRNAを同定した。1:エクソン領域にマップされ、雌雄差が認められるpiRNA。2:トランスポゾンにマップされ、雌雄差が認められるpiRNA。3:piRNAクラスターと定義される領域で雌雄差が認められるpiRNA。Piwil1とPiwil2の2つの遺伝子を欠損したノックアウトメダカをCRIS PR/Cas9により作製したところ、どちらのノックアウトメダカも不妊であり、興味深いことにPiwil1を欠損したXY個体では雄性分化に異常が認められた。異常が認められたPiwil1欠損個体の生殖腺では、性分化関連遺伝子の発現にも異常がみられた。これらの結果から、PIWI-piRNAによる性分化への関わりが示唆された。ノックアウトメダカの解析からPIWIは性分化に関わルコとを示し、網羅的解析から性分化に関わると考えられる性特異的なsmall RNAを単離することが出来た。昨年度ではそれぞれのPiwi欠損個体における生殖細胞数と性分化関連遺伝子の発現を解析し、Piwil1とPiwil2が生殖細胞で働く時期、分化段階を特定することが出来たため、本年度はこれら特定した分化段階でのサンプリングを行い、ノックアウトメダカでの網羅的解析に繋げることが可能となった。また、網羅的解析のパイプラインも構築することが出来たため、ノックアウトメダカでの解析も容易になると期待される。