hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
金剛寺所蔵典籍の集約的調査と研究―聖教の形成と伝播把握を基軸として

本研究は大阪府河内長野市の真言宗寺院金剛寺所蔵の聖教の全体的調査を目的としたが、2007ー2010年の科研費による成果を継承して、より精度の高い調査研究を目指した。その結果として、先に作成した仮目録を再度現物と照らし合わせて点検し、本目録として完成させた。貴重典籍の精査は『宝篋印陀羅尼経』『清水寺縁起』を初めとする資料について行い、その成果は日本および中国で開催したシンポジウムで発表し、また京都国立博物館の特別展「金剛寺名宝展」に出陳して広く一般市民にも公開した。平成23年度の計画として、(1)前科研までの研究成果の検討と統合、(2)重点調査書籍の確定、調査・読解、(3)貴重典籍の調査、(4)重要聖教類識語のデータベース化、(5)関連寺院の文献研究との相関的研究という五つの柱を設定したが、それぞれについての調査研究の成果は以下のとおりである。(1)本科研の調査研究の柱としている、メンバー全員が金剛寺に出張して行う毎月の原本調査において、「棒目」(目録稿)を原本とつきあわせて確認し、補訂を加えるという作業を行った。本年度は、米倉聖教を除く全体55函のうち14函、点数にして2500点あまり、約30%の聖教について、作業を完了した。(2)「善本解題図録」の作成を念頭において、その対象書目の選定作業を行った。また、前述の(1)の作業の中で新たに重点調査書籍を見いだしていくという作業も加味して行った。(3)『延喜式』『宝篋印陀羅尼経』について基本的な書誌調査を行い、今後の本格的調査研究に備えて専門業者に委託して写真撮影を行った。(4)『金剛寺古記』『河内長野市史』など既刊の識語集成の本文を電子化し、その一部を現在の整理番号と照合した。(5)2月に研究分担者・赤尾栄慶の所属先である京都国立博物館にて行った研究会で、連携研究者・宇都宮啓吾及び山崎淳がその研究成果を発表した。宇都宮「訓点資料から見た智積院新文庫聖教の一側面」は、智積院の根来寺関連聖教を中心に、聖教の書写・伝持・流布を巡る問題を取り上げ、和泉国家原寺を経由して智積院に伝来した金剛寺の禅恵写本にも論及した。山崎「地蔵寺所蔵文献調査中間報告-他寺院との関連も含めて-」は、金剛寺と同じ河内長野市内の地蔵寺の文献について、金剛寺を含む他寺院との関連を論じた。また、研究協力者・箕浦尚美は、「聖教の書写-金剛寺聖教の奥書について-」の題目で研究発表を行い、金剛寺の同文奥書を持つ聖教を比較し、聖教の書写と複製について検討した。聖教の全体的調査本研究の柱の一つとして、毎月一度、金剛寺に出張して調査を行い、その成果にもとづいて、先に作成していた『金剛寺聖教目録』に補訂を加えた。金剛寺所蔵の全体55函(米蔵所蔵の聖教函を除く)のうち、29函、点数にして6072点、約62パーセントの聖教について作業を完了した。また、この作業の過程で、禅恵に関する聖教については、奥書を中心として比較精査する必要があることが判明したので、その資料を含む4函については奥書を調査し、比較のため、写真撮影を行い、データとして入力した。貴重典籍の調査今年度は「涅槃経」を集中的に調査し、詳しい調書を作成し、将来の精査、公刊を視野に入れて、専門家に依頼して写真撮影を行った。研究成果の公表平成24年7月21日に国際仏教学大学院大學日本古写経研究所文科省戦略プロジェクト実行委員会との共催で、同大學において、金剛寺所蔵「宝篋印陀羅尼経」(重要文化財)を仏教学、文化財学、国文学等の研究者が多面的に議論する国際シンポジウム「テキストとしての『宝篋印陀羅尼経』とその展開」を開催し、赤尾栄慶(研究分担者)、海野圭介(連携研究者)が研究発表を行った。また、その成果が『金剛寺『宝篋印陀羅尼経』』(平成25年2月)として公刊されたが、これに赤尾栄慶は「文化財的観点からみた金剛寺本宝篋印陀羅尼経」、海野圭介は「和歌史における金剛寺本宝篋印陀羅尼経」を発表した。後藤昭雄(研究代表者)は金剛寺蔵の『文集抄』『和漢朗詠集』『花鳥集』『全経大意』等についての研究成果を著書『本朝漢詩文資料論』(平成24年11月)で公表し、後の2点については本文を翻刻により紹介した。本科研の最終年度であるが、以下のような調査研究を行い、その成果を公表した。

調査研究の柱とした金剛寺での調査研究により、「金剛寺聖教の総合調査」の成果となる目録は4年に亘る調査の結晶として、9752点の聖教の目録「金剛寺経蔵聖教目録」(2分冊、320ページ)として刊行した。またこの調査のなかで、10月に予定した北京、中国人民大学でのシンポジウムにおける発表、および今後に予定している金剛寺所蔵貴重典籍の刊行を目的とした集中的な聖教の調査も行った。研究会の開催25年度から始めた金剛寺所蔵の古写本「捌釈」の研究会を引き続き行った。研究成果の公表(1)前記「金剛寺経蔵聖教目録」を刊行した。(2)シンポジウムの開催2014年10月25、26日の両日、中国北京の中国人民大学において、同大学との共催で「仏教と文学日本金剛寺仏教典籍調査研究成果報告国際学術研討会」を開催した。金剛寺聖教調査研究の報告と仏教文学の研究を二つの柱として二日に分けて行った。科研メンバー10人が参加して双方に分れて発表を行った(その内容は後に記す)。そのほかに日本、中国の研究者9人がこれに加わった。会議論文集(159ページ)が作成された。(3)研究協力者赤尾栄慶の全面的な協力により、京都国立博物館において「特別展観天野山金剛寺の名宝」が2015年3月4日から同29日まで開催され。「遊仙窟」「注好撰」など21点の聖教が展示され、本科研の研究成果が広く一般市民の目に供された。これは本科研の終了に華を添える慶事と言ってよい。なお14日に赤尾氏による講演「金剛寺学術調査について」も行われた。聖教の全体的調査本研究の柱の一つとして、毎月一度、金剛寺へ出張して聖教の調査を行い、その成果に基づいて、先に作成していた「金剛寺聖教目録」に補訂を加えた。本年度までに金剛寺所蔵の聖教55函分のうち77函、8863点、約91パーセントの聖教について作業を完了した。これによって最終年度である26年度には全部の補訂作業を完了する目処が立った。この作業の過程で判明した金剛寺第13代学頭禅恵関連の写本の集中的な研究の必要に対応するために関係写本約350点の撮影とデータベース化を行った。研究会金剛寺所蔵の古写本「捌釈」の研究会を発足させた。京都国立博物館所蔵貴重典籍の閲覧、勉強会研究分担者赤尾栄慶が所属する京都国立博物館は国宝、重要文化財を含む貴重な典籍を多数所蔵しているので、古写本を見る眼を養うために、同氏の高配により、それら典籍を閲覧する勉強会を開いた。次年度のための準備26年度は本科研の最終年度となるので、どのようなかたちで研究成果を公表するかを話し合う会議を2回開催した。上記の毎月の調査成果を反映させた目録の刊行、及び研究成果の外国へ向けての公表を中心とすることとした。後者については中国で開催することとして、研究代表者の後藤が北京での学会に参加した機会に、北京の中国人民大学の李銘慶教授に依頼して応諾を得たので、具体化に向けて準備を進めることとした。研究成果公表の準備本科研終了後のこととなるが、これまでの研究成果を広く公開する必要のあることから、金剛寺所蔵の貴重典籍を書籍として刊行することを予定して、上記の会議において、どのようなかたちにするか、所収典籍の候補書目、分類、冊数などについて検討を行った。26年度が最終年度であるため、記入しない。25年度までの研究計画として(1)金剛寺所蔵貴重典籍の総合研究と成果公表(2)金剛寺聖教の形成と伝播についての集約的調査(3)金剛寺の経蔵構成の解明を掲げているが(最終年度26年度には「金剛寺聖教の持つ国際性の提示」を計画している)、(1)については毎月一度の金剛寺へ出張しての調査により、以前に作成した目録の補訂作業が上記「研究業績の概要」に記したように順調に進んでおり。26年度に完了し、刊行しうることは確実となった。
胚性腫瘍細胞におけるがん状態と分化の遺伝子支配

本年度は、いくつかの異なった研究を組み合わせて、全体の研究を構成した。(1)、がん状態では活性を有するが、細胞分化によって活性を失う細胞性エンハンサー及び逆の性質を示すウィルスエンハンサーについて、その制御にかかわる結合蛋白質について研究する。(2)、細胞分化初期に発現が消失する遺伝子、また、出現する遺伝子について研究する。(3)、マウスやヒトの胚性組織における制御遺伝子の分布を、組織学的に研究する。(4)、増殖因子、分化抑制因子、チロシンキナーゼ阻害剤などを用して、胚性腫瘍細胞の分化の人為的制御をおこなう。いずれの研究においても、十分な成果をおさめることができたが、特に、研究(1)において、めざましい進展がみられた。濱田班員は、胚性腫瘍幹細胞に固有の転写因子OCt3を固定したのみならず、そのcDNAをクローニングしてアミノ酸配列を決定し、その因子がPOUドメインをもつDNA結合蛋白質に属することを明らかにした。また、丹羽班員によって、モロニー白血病ウィルスのLTRを抑制する因子が同定された。研究(2)については、条件をみたすFT27及びMKの2遺伝子について構造決定がなされ、また、制御領域の分析がなされた。(3)については、マウス胚組織におけるNーmycやMKの発現の消長が詳細に解析され、遺伝子発現の人為的操作の基礎をもたらした。(4)においては、マウスの胚性腫瘍幹細胞に対するLIF(白血病抑制因子)の効果が、ヒトの胚性腫瘍細胞に対しても同様に有効であることが見出され、ヒトの幹細胞の分化制御に新局面をひらいた。またsrk系チロシンキナーゼの抑制が、幹細胞をがん状態から分化状態に向わせる効果をもつことが見出された。
心疾患における転写因子IRF-3の役割の解明

心肥大病態モデルマウスに昇圧剤アンジオテンシン(Ang)IIを投与すると、野生型マウスでは高血圧性心疾患に見られる心臓の線維化が進行するがIRF(IFN regulatory factor)ファミリー遺伝子Irf3欠損マウスでは線維化が起きない事、また骨髄系由来細胞のIRF3がAngII下流でセリン残基リン酸化を受け活性化し、線維化に関与する事を見いだした。さらにDNAマイクロアレイ解析によりAngII-IRF3経路のケモカイン・心疾患関連遺伝子誘導への関与を明らかとした。自然免疫系のシグナル伝達系が心血管病態形成において果たしている役割を解明し、循環器系と免疫系のシグナル伝達のクロストークの解明、及び心血管病の新たな分子標的を発見することを目標とする。我々はinterferon regulatoryfactor (IRF)ファミリー転写因子の中でIRF-3遺伝子欠損マウスにおいて、心血管病態の発症が著しく促進もしくは抑制され、IRF-3のシグナル伝達系が心不全の分子標的であるアンジオテンシンII (AngII)による細胞内シグナル伝達系と一部共通する可能性があることを見いだした。IRF-3がどのような機構で活性化され、どのように免疫系を活性化するのかは不明である。本研究ではIRF-3がAng IIによる心臓線維化誘導にどのように関与しているかを分子レベルで明らかにし、臨床応用の可能性についても検討して行く。また、自然免疫系シグナル伝達に関与する分子の各種遺伝子改変マウスを用いて心不全発症のメカニズムにせまる。平成19年度は骨髄移植、アンギオテンシンIIによるIRF-3活性化の分子機構、標的遺伝子の検索について検討を行った。1.野生型マウスにIRF-3遺伝子欠損マウス由来の骨髄細胞を移入した移植実験を行った結果、野生型マウス由来の骨髄細胞を移入した際にもアンギオテンシンII付加による繊維化の誘導が認められたが、IRF-3遺伝子欠損マウス由来の骨髄細胞の移入では繊維化の誘導は認められなかった。このことから、間葉系由来細胞ではなく、骨髄系細胞で発現しているIRF-3がアンギオテンシンII刺激による心臓の繊維化に重要であるとが、示唆された。2.またメカニズムについて、アンギオテンシンII type Iレセプターを発現させたHEK293T細胞にアンギオテンシンIIで刺激を行い、IRF-3のリン酸化を検討した。IRF-3はウイルス感染時にはリン酸化を受け活性化し、核に移行することによって転写因子として機能することが知られている。実際、IRF-3はアンギオテンシンIIの刺激によってリン酸化を受け、核に移行することがウエスタンブロットにより確認されている。この時、各種キナーゼインヒビターを用いた実験から、このリン酸化のキナーゼを現在同定しつつある。またリン酸化される部位もIRF-3変異体を用い心臓からRNAを調製し、マイクロアレイ解析を行った。その結果、複数の繊維化にかかわるような遺伝子群を同定することができた。現在た解析から同定している。3.IRF-3は繊維化にかかわるような遺伝子の誘導に必須であるのかを検討するため、アンギオテンシンII付加を行ったマウス由来の心臓からRNAを調節し、マイクロアレイ解析を行った。その結果、複数の繊維化にかかわるような遺伝子郡を同定することができた。現在RT-PCR等によって、この結果を確認中である。本研究は自然免疫系のシグナル伝達系が心血管病態形成において果たしている役割を解明し、循環器系と免疫系のシグナル伝達のクロストークの解明、及び心血管病の新たな分子標的を発見することを目標とする。我々はinterferon regulatoryfactor(IRF)ファミリー転写因子の中でIRF-3に着目し、Irf3遺伝子欠損マウスでは心血管病態の発症促進が認められること、またIRF-3のシグナル伝達系が心不全の分子標的であるアンジオテンシンII(AngII)下流の細胞内シグナルと一部共通する可能性があることを見いだした。平成20年度はIRF-3が心臓線維化誘導にどのように関与しているかを分子レベルで明らかにするための検討を行った。1.野生型マウスに野生型マウス由来の骨髄細胞を移入してAngIIを付加すると心臓の繊維化誘導が起こるが、Irf3遺伝子欠損マウス由来の骨髄細胞を移入すると繊維化が誘導されなかった。このことから、間葉系由来細胞ではなく、骨髄系細胞で発現しているIRF-3がAngII刺激による心臓の繊維化に重要であることが示唆された。2.AngIIによるIRF-3活性化メカニズムについて解析するため、AngII type Iレセプターを発現させたHEK293T細胞にAngII刺激を行い、IRF-3のリン酸化をウエスタンブロットにより検討した。IRF-3はウイルス感染時にリン酸化を受け活性化し、核に移行することによって転写因子として機能することが知られているが、AngII刺激によってもリン酸化を受け、核に移行していた。さらに各種キナーゼインヒビターを用い、このリン酸化に関与するキナーゼを同定しつつある。またリン酸化されるアミノ酸部位もIRF-3変異体を用いた解析から同定した。

3.IRF-3が繊維化に重要な遺伝子の誘導に関連するか検討するためAngII付加を行ったマウス由来の心臓からRNAを調製し、マイクロアレイ解析を行った。その結果、IRF-3依存的に発現が変動する繊維化関連遺伝子群を複数同定した。現在これらの結果をまとめ、論文を投稿準備中である。
Rap1-RAPL-Mst1シグナルによる動態制御のメカニズム

RAPLはRap1結合タンパク質で、Rap1活性化によって誘導される接着・遊走に重要な役割を果たしている。このRAPLを欠損するマウスは加齢とともにループス腎炎などの自己免疫疾患やBリンパ腫を発症することがわかった。その発症メカニズムとして、RAPLがCDKインヒビターp27^<kip1>の核内移行を促進することで、リンパ球の増殖を抑えているために、RAPLが欠損するとリンパ球の過剰な増殖を招いていることが明らかとなった。この成果は、リンパ球の接着と増殖が連携して制御されており、両者に関与する分子の破綻は単独でも、リンパ球増殖性疾患の発症につながることを示している。免疫細胞の動態に重要なインテグリンを介する接着・遊走は、Rap1-RAPL-Mst1シグナルにより、細胞内からの極性輸送によって制御されていることが示唆されている。動態制御の分子基盤を明らかにするため、インテグリンの小胞輸送に関与するRab分子を探索するとともに、Mst1によってリン酸化される下流標的分子を解析した。インテグリンの接着制御に関与するRabfamily GTPases68種類を、Cos細胞へRAPL/Mst1と共発現させ、局在が一致するものを選び出し、それらの優性抑制型をBAF/LFA-1細胞へ導入し、LFA-1/ICAM-1を介する接着および遊走への影響を検討した。RAPL/Mst1と共局在し、その優性抑制型の過剰発現により顕著にLFA-1/ICAM-1依存性の接着・遊走を抑制するRab分子が明らかとなった。さらに、その分子の野生型とGST融合蛋白質が、ケモカイン刺激後、核周辺から先端膜へ移行しLFA-1とともにクラスター形成することが明らかとなった。Mst1の下流標的分子を解明するため、Hippoホモログ分子Mob1及びリン酸化プロテオミックスによって同定された候補分子群について解析した。Hippoホモログ分子Mob1分子の35番目のスレオニンのリン酸化を検討した結果、Rap1V12による上昇は認められず、Hippo経路は接着制御には関与しないことが示唆された。また、リン酸化プロテオミックスによって同定されたMst1のリン酸化基質候補の4回再現性良くRap1V12発現細胞で上昇し、Mst1ノックダウンによって低下した3分子についてcDNAを単離し、これらの分子のMst1との会合及びリン酸化をin vitroで解析した。免疫細胞の動態に重要なインテグリンLFA-1を介する接着・遊走は、Rap1-RAPL-Mst1シグナルにより細胞内からの極性輸送によって制御されていることが示唆されている。動態制御の分子基盤を明らかにするため、インテグリンの小胞輸送に関与する68種類のRab family GTPases中から、インテグリンの接着制御に関与する分子を検索し、Rab13を同定した。Rab13-GFP融合タンパク質を作製し、ケモカイン刺激後、細胞内での局在変化を3次元高速走査したところ、Rab13はLFA-1とともに突起状に細胞表面に現れ、それが先端部へ移行後、前方に進展してleadingedgeが形成されることがわかった。また、Rab13の生体内での役割を解明するため、Rab13 conditional knockout miceを作製するためのtarget vectorを完成させ、ES細胞へ導入し組み換えが起きたクローンを得た。リン酸化プロテオミックスによって4回再現性良くRap1V12発現細胞でリン酸化レベルが上昇し、Mst1ノックダウンによって低下するMst1リン酸化基質候補を同定している。その中のGSK 3αについてcDNAを単離した。リン酸化部位と推定される278番目のセリンがMst1によってリン酸化されるかどうか検討するため、このセリンをアラニンに変換した変異体を作製し、GST融合タンパク質を作製した。野生型GSK 3αおよびS297A変異体のGST融合タンパク質を基質として、in vitroリン酸化反応を行ったところ、Mst1によって279番目のセリンがリン酸化されることが確かめられた。免疫細胞の動態に重要なインテグリンLFA-1を介する接着・遊走は、Rap1-RAPL-Mst1シグナルにより、細胞内からの極性輸送によって制御されていることが示唆されている。約60種類のRab family GTPasesのうち、Rab13がこの極性輸送に関与する可能性が示唆された。本年度は、1.Rab13の近縁であるRab8についても、その優性抑制型変異体を過剰発現させることによりLFA-1-ICAM-1依存性の接着・遊走への影響を検討したところ、Rab8の活性化は接着上昇には関与しないことがわかった。2.LFA-1 clusterが細胞内からの小胞輸送によって誘導されることを、LFA-1のα鎖細胞外領域にmRFPを、細胞内領域にPH依存性の蛍光色素フローリンを融合させ、LFA-

1 cluster形成時における両者の蛍光の変化を観察することで検討したところ、mRFPでは検出されるがフローリンでは認められないLFA-1小胞が観察された。3.Rab13とLFA-1が先端膜で共局在することが分かっているので、Rab13がどのようなメカニズムでLFA-1を前方へ輸送しているのかを解明する手がかりを得るため、EB3およびLifeact-mcherryを、Rab13-GFP導入リンパ球系細胞へ発現させ、先端膜形成時にRab13と共局在するかどうか検討したところ、Rab13はF-actinに沿って前方へ移動することが明らかになった。4.Rab13-GTPに結合することがわかっているMICAL分子のRab13結合領域のGST融合タンパク質を作成し、pull-down法によりケモカイン刺激10分後をピークにRab13は活性化されることが判明した。5.GTP結合型Rab13は特異的にMst1に会合することがわかった。しかしながら、Rab13とMst1の間には、直接的に相互を活性化する働きはないことが判明した。
カイラル対称性と核子の内部構造の研究

この研究の目的は、カイラル対称性とその自発的破れを強調した量子色力学(QCD)の有効模型としての南部・ジョナーラシニオ(NJL)模型による核子の内部構造の研究を発展させ、核子の構造関数などその動力学的側面を調べるとともに、この模型に欠けている閉じ込めの要素を取り入れることと核媒質中での核子の内部構造の変化を研究することであった。そのためにまずNJL模型の光円錐上での定式化を行った。光円錐上ではフェルミオンの4成分中2成分が従属変数となることが知られているが、これを消去するために補助場を導入し、その補助場に対する方程式を1/N展開法で解くことにより、カイラル対称性の自発的破れが記述できることを示した。また、これに基いてハミルトニアンを求め、パイオンが南部・ゴールドストーン粒子として現れることを示して、その構造関数を計算した。光円錐上の場の理論では発散の正則化が重要な問題となるが、通常の定式化での正則化とほぼ同等なものと同時に、光円錐座標の特性を生かしたものを考察し、後者が優れていることを指摘した。この枠組は、光円錐上でのカイラル対称性の記述という、より一般的な課題への第一歩となると期待している。3個のクォークの相対論的束縛状態としての核子にこの手法を応用し、その構造関数を計算することは現在進行中で、一部はすでに発表した。閉じ込めに関しては、相対論的調和振動子クォーク模型による核子の核媒質中での振舞いを、色透明度(color transparency)の問題と関連して研究した。また、ストレンジネス核物質の可能性に関連してH-ダイバリオン同士の相互作用の研究も行った。強い相互作用の基礎理論である量子色力学(QCD)の低エネルギーにおける重要な要素であるカイラル対称性の自発的破れを強調した南部ジョナラジニオ(NJL)模型で3個のクォークに対する相対論的Faddeev方程式の解として核子を記述する研究において,本年度は得られた解を用いて電磁的モーメントと弱い相互作用の結合定数を計算し,また,同じNJL模型での核子の記述法として知られている平均場近似との関係を明らかにすることを試みた。前者では,先ず,最も簡単な軸性ベクトル結合定数を計算し,アイソベクトル部分については実験値と矛盾しない値を得たが、アイソスカラー部分は,高エネルギー電子,ミュオン実験で得られている陽子のクォークスピン期待値の実験値より相当大きな計算値となった。真空偏極による1粒子演算子への補正が重要であろうと考えられる。また,磁気モーメントでは,陽子・中性子の比は実験を大体再現したが,絶対値は実験値の2/3程度であった。これはバクグ模型など相対論的クォーク模型に共通の弱点で,やはり真空偏極が必要なのかもしれない。電荷半径については,陽子,中性子ともに実験値と矛盾しない値を得た。これはFaddeev方程式の解としての核子が合理的な大きさをもつことを意味する。平均場近似との比較では,クォーク間の中間子交換、特にパイオン交換が重要であること,これが平均場近似におけるカイラル場の重要性と対応していること等がわかった。これらの研究は,大学院生浅海および原振特別研究員石井との共同研究で行なわれた。昨年度行った,南部・ジョナ-ラジニオ模型に基く相対論的Faddeev方程式の解としてのクォーク3体束縛状態による核子の記述の研究をさらに進め,核子の形状因子および構造関数の計算を目指した。そのためには,光円錐座標による定式化が有利であることがわかり,まず,NJL模型を光円錐座標でのハミルトニアン形式で記述することから出発し,1/Nc展開法でハミルトニアンを求めることに成功した。これを用いて,真空を定める(構成クォークの質量を定めることと同等)キャップ方程式,中間子に対するTamm-

Daneof近似等が通常の定式化と同等になり得ることを示したが,発散の正則化の選び方が重要な意味をもつこともわかった。正則化は形状因子や構造関数の計算結果にも直接影響を与える。一方,核子の内部構造の反応過程への反映を調べる研究として,大きな運動量移行を伴う準弾性散乱での始および終状態相互作用に関する色透明度(color transparency)の可能性を検討した。相対論的調和振動子クォーク模型を用いた計算の結果,色透明度が観測できるためには,(e,e'p)過程では相当大きな運動量移行が必要になること,(p,2p)過程では顕著な効果が期待できることなどがわかった。カイラル対称性とその自発的破れを強調した量子色力学(QCD)の有効模型としての南部・ショナ-ラシオ(NJL)模型による核子の内部構造の研究をさらに発展させ,まず,NJL模型の光円錐上での定式化を試みた。光円錐上では独立な力学変数の数が半分になることが知られているが,従属変数となったフォルミオンの成分を1/N展開法によって消去し,力学変数のみによって表されてハミルトニアンを構築した。このハミルトニアンに基いて,適当な正則化の下に,カイラル対称性の自発的破れが記述できること,パイオンが南部・ゴールドストーン粒子として現れることを示し,パイオンの構造関数を計算した。この記述法を核子の場合に拡張し,3フォーク系に対する相対論的Faddeev方程式の近似解としてのフォーク・ダイクォーク模型によって,核子の構造関数も計算した。また,相対論的クォーク模型の応用として,高エネルギー反応における色透明度(color transparency)を議論し,核媒算中でのハドロンの振舞いに一般化した。同様なカイラル対称性を強調した模型による重粒子の記述,核物質の状態方程式,さらにストンジネス-2の粒子として予想されているHダイハリオンの性質についても調べた。
気液混合境界層に着目した気象-海象場応力相互作用モデルの開発

水面勾配を用いた海面せん断応力より求めた抵抗係数は,風の吹き始めにおいて既存の経験式よりも強風下になると約1オーダー大きな値を示すことを明らかにし,波浪推算や海流モデルにおける一様な抵抗係数の取り扱いには検討の余地があることを示唆した.さらに,MPS法特有の圧力振動問題に対して,圧力のポアソン方程式のソース項の修正に着目した手法を取り込み,従来のMPS法との比較を行った.二相連成解析において,圧力振動が力の相互作用および弾性体の変形に強い影響を与えることを明らかにした.水面勾配を用いた海面せん断応力より求めた抵抗係数は,風の吹き始めにおいて既存の経験式よりも強風下になると約1オーダー大きな値を示すことを明らかにし,波浪推算や海流モデルにおける一様な抵抗係数の取り扱いには検討の余地があることを示唆した.さらに,MPS法特有の圧力振動問題に対して,圧力のポアソン方程式のソース項の修正に着目した手法を取り込み,従来のMPS法との比較を行った.二相連成解析において,圧力振動が力の相互作用および弾性体の変形に強い影響を与えることを明らかにした.風洞水槽実験の結果を基に,大気-海洋境界層の応力モデルの確立を試みている.本年度では,海象場の数値シミュレーションの開発を重点的に行って来た.数値水槽の開発に用いた計算手法には,水粒子をラグランジュ的に解析することが可能な粒子法の一つであるMPS法を用いた.MPS法は非構造格子であるため,境界面のダイナミックな変形に適用でき,また,海面境界層に存在する水粒子に風からの応力を直接与えることができるため,海面下の流速の発達に起因する支配因子のモデル化を容易に確立することができると考えられる.粒子数に依存した計算時間の負荷に対応したICCG法による大規模疎行列の高速解法を組込んだ基本的な計算スキームは完成し,ベンチマーク問題の水柱崩壊による精度検証を行ったところ,実験結果と良好に一致することを確認した.また,固-液混層流場ではあるが,二層場の複雑な計算も初期値を設定するだけで,容易に計算することが明らかとなり,応力モデルが構築できれば気-液混層場への適用も可能と考えている.しかし,海面に与える風からのせん断応力および砕波応力のモデル化は非常に困難であり,未解明のままとなっている.そこで次年度では,実験で得た画像データを基に,風による水面勾配を利用した風応力の算定を行う.また,PIV解析より得られた流速データより,レイノルズ応力の算出も試みる.これら二つの応力を海面応力として与え,海面下の流速の鉛直分布が実験結果とどの程度一致するのかについて検討を行い,モデルの確立を目指す予定である.風洞水槽実験の結果を基に,大気-海洋境界層の応力モデルの確立を試みている.本年度では,昨年度に引き続き数値水槽の開発を行うと共に,風波画像データを基に,海面せん断応力の推定を行った.数値水槽の開発では,風のせん断応力が波に与える影響を明らかにするため,造波境界の改良を行った.MPS法を用いた数値水槽において,側面の壁粒子を一定の範囲で稼働できるように制御することにより,孤立波および周期波を発生させることが可能となった.造波境界によって発生させた波の波高の値と実験結果を比較したところ,良好な一致を示した.この結果,波の存在する場に風応力を作用させたとき,波および流れにどのような変化が現れるのかを詳細に検討することができると考えられる.また,高速度ビデオカメラで撮影した断面二次元の風波画像データを基に,二値化やフィルタリング,細線化処理を用いて波形を抽出した.その波形の勾配を利用して,海面せん断応力を算出し,既存の実験・観測データとの比較を行ったところ,風速6.715.1m/sの範囲において, 1オーダー大きく見積もられたが,風速の増加に伴って海面せん断応力も増加すると言った同様な傾向を示し,定性的に妥当な結果を示した.次年度では,水中に投下された中立粒子をラグランジュ的に追尾し,海面極表層の流速データの取得を行い,数値計算に用いる基礎方程式に風応力の項を加え,計算結果と画像解析で得られる流速との比較を行い,逆解析的に風応力のモデル化を行う予定である.気液境界層の相互作用モデルの開発を粒子法の一手法であるMPS法を用いて行って来た.従来のMPS法で計算される圧力は,時間的・空間的に激しく振動するため,計算が不安定になる場合があり,その振動が異なる境界層の相互作用に影響を及ぼす恐れがある.そこで本研究では,圧力のポアソン方程式のソース項の修正を行い,圧力振動を抑制させることによって,精度の高い二相連成数値解析の開発を行った.その結果,非圧縮条件を基準粒子数密度が満たす条件と速度の発散がゼロになる条件のそれぞれの利点を生かした圧力振動抑制モデルによって,滑らかな圧力値を得ることが可能となり,二相連成解析の精度が向上した.加えて,計算条件に適した緩和係数および疑似圧縮係数の設定が必要不可欠であり,最適な係数の選択が今後の課題である.また,風波下の流速を得る手法として非接触型のPIV手法が代表的ある.そこで,気液混合境界層の高精度な流速値を得るために,適切なダイナミックレンジの検討を行った.

直接相互相関法によるPIV解析の結果,非砕波から白波砕波を伴う風波下において,風速に依らずエラーベクトルの発生を抑えるためには,検査領域の1.5倍の探査領域が最適であることを示唆したが,各風速において有義波高程度の深さから水面に向かって速度が減少する傾向となった.水面下の流速が風速の約3%と言われることを考慮すると,取得画像および解析手法に問題があり,更なる画像の取得および処理の工夫が必要であり,風波下に適したPIV手法の開発が強く望まれる.
敗血症時の呼吸筋疲労

我々は、以下の薬剤が腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下に及ぼす影響についてin vitroにて検討した。1)phosphodiesterase阻害薬であるaminophylline, theophyllineは、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下を改善した。細胞内のcAMPを測定した結果、aminophylline, theophylline投与は細胞府のcAMP濃度を上昇させた。以上の結果から、phosphodiesterase阻害薬による、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下を歳善させる作用には、細胞内のcAMP濃度上昇が関与していることを明らかにした。2)heat shock protein 70(HSP70)を細胞内に誘導するGeranylgeranylacetoneが、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能に及ぼす影響について検討した。まずGeranylgeranylacetone前投与により、横隔膜筋中においてHSP70が増加することを明らかにした。Geranylgeranylacetone前投与により、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下が拮抗された。活性酸素の代謝産物であるMDAの測定の結果から、Geranylgeranylacetone前投与による腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下の拮抗作用には、HSP70による抗活性酸素作用が関与していることを明らかにした。3)pentoxifylline前投与により、エンドトキシンショック時の横隔膜機能低下が拮抗された。PentoxifyUine投与により、血清TNF-α濃度ならびに横隔膜筋中のMDA濃度も低下した。一方、細胞内cAMP濃度に有意な変化が認めちれなかったことから、pentoxifyllineはTNF-αを介した活性酸素の産生を抑制することにより、エンドトキシンショック時の横隔膜機能低下を改善することを明らかにした。本年度、我々はフォスフォ・ジエステラーゼ・インヒビターが、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下に及ぼす影響についてin vitroにて検討した。フォスフォ・ジエステラーゼ・インヒビターであるrolipram、aminophylline, theophyllineは、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下を改善した。細胞内のcAMPを測定した結果、ammophylline, theophylline投与は細胞内のcAMP濃度を上昇させた。またdibutyryl cAMP投与は、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下を改善した。以上の結果より、フォスフォ・ジェステラーゼ・インヒビターによる、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下を改善させる作用には、細胞内のcAMP濃度上昇が関与していることを明らかにした。さらに、heat shock protein 70(HSP70)を細胞内に誘導するテプレテノンが、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能に及ぼす影響について検討した。まずテプレテノン前投与により、横隔膜筋中においてHSP70が増加することを、ウエスタンプロッティング法により明らかにした。テプレテノン前投与により、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下が拮抗された。活性酸素の代謝産物であるMDAの測定の結果から、テプレテノン前投与による腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下の拮抗作用には、HSP70による抗活性酸素作用が関与していることを明らかにした。本年度、我々はβ2アドレノセプターアゴニストが、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能低下に及ぼす影響についてin vitroにて検討した。(1)腹膜炎敗血症時の横隔膜収縮力低下の原因を検討するために、蛍光抗体法を用い細胞内のカルシウムの濃度変化を測定した。腹膜炎敗血症時には、電気刺激に対する細胞内カルシウム放出の低下が認められた。すなわち、腹膜炎敗血症時の横隔膜収縮力低下の原因として、筋小胞体からのカルシウム放出の減少であることを明らかにした(2)次に、β2アドレノセプターアゴニストが、腹膜炎敗血症時の横隔膜機能に及ぼす影響について検討した。

まず、薬理学的にcaffein、ryanodine、methoxy-verapamilが、β2アドレノセプターアゴニストの陽性変力作用に及ぼす影響について検討した。methoxy-verapamilは、β2アドレノセプターアゴニストの陽性変力作用に影響を与えなかった。caffein、ryanodineは、β2アドレノセプターアゴニストの陽性変力作用を抑制した。以上の結果より、β2アドレノセプターアゴニストは、筋小胞体からのカルシウム放出を促進しすることにより、腹膜炎敗血症時の横隔膜収縮力を改善させることを明らかにした。(3)さらに、蛍光抗体法を用い、β2アドレノセプターアゴニストが、細胞内のカルシウムの濃度変化に及ぼす影響について検討した。β2アドレノセプターアゴニスト投与により、電気刺激に対する細胞内カルシウム放出の低下が改善された。本年度、我々は敗血症ラットの横隔膜機能に対するペントキシフィリンの効果につき、in vitroにて検討した。1,目的:敗血症時の呼吸不全の一因として横隔膜収縮力低下が知られている。我々はこれまでにペントキシフィリン(PTX)が敗血症時の横隔膜収縮力低下を改善し、これにTNF産生抑制が関与していることを報告した。PTXはphospodiesterase阻害作用によりマクロファージ細胞内cAMP濃度を上昇させTNF産生抑制を来す。同様に、横隔膜筋細胞内cAMP濃度を上昇させることで収縮力低下を改善させる可能性がある。今回、我々はPTXによる横隔膜収縮力低下改善作用に、横隔膜組織内cAMP濃度上昇が関与しているかを検討すると共に、同組織内の脂質過酸化指標としてマロンジアルデヒド(MDA)濃度を測定した。2,方法:Winster系ラットを以下の3群に分けて検討した。E群;エンドトキシン(ET)(20mg/kg)を腹腔内に投与し敗血症を作成。E+PTX群;PTX(100mg/kg)をET投与30分前に腹腔内に投与。C群;生食を腹腔内に投与。ET投与4時間後に左横隔膜標本を摘出し組織ホモゲネートを用いEIA法によりcAMP濃度を、N-methyl-2-phenylindoleを用いた比色法によりMDA濃度を測定した。3,結果:(1)横隔膜組織内cAMP濃度は3群間で有意差を認めなかった。(2)ET投与により横隔膜組織内MDA濃度は有意に上昇したが(P<0.01)、その上昇はPTX投与により有意に抑制された(P<0.01)。4,結論:PTXは横隔膜組織内cAMP濃度変化を来すことなく横隔膜収縮力低下改善作用を示した。横隔膜組織内MDA濃度の結果から敗血症の進展の抑制が横隔膜への酸化ストレスを防いだものと考えられた。
菌体外に多糖複合繊維を産生する酢酸菌ナノビルダーの創生

酢酸菌Acetobacter xylinumは、幅0.5-1.0μm、長さ2-10μmの好気性のグラム陰性細菌で、微生物セルロース(マイクロビアルセルロース)とよばれる幅約50nm、厚さ約10nmのセルロースナノファイバーを菌体外に産生することが知られている。酢酸菌は、セルロースナノファイバーの噴出エネルギーを駆動力としてファイバーの噴出方向とは反対方向へ走行する。研究代表者らは、この現象を制御、利用することで、パターンを有するセルロース三次元構造体を構築する研究を遂行してきた。三次元構造体の応用をさらに展開するため、酢酸菌に、免疫賦活作用を有することで知られる天然多糖である(1→3)-β-グルカンを産生させることができないかと考えた。そこで、本研究では遺伝子導入により酢酸菌に(1→3)-β-グルカンを生合成させることを目的とした。すなわち(1→3)-β-グルカンの合成酵素遺伝子を挿入したプラスミドベクターを酢酸菌へ導入して形質転換し、酢酸菌に(1→3)-β-グルカンを生合成させる。その前段階として、今回は酢酸菌への遺伝子導入の条件を設定するため、遺伝子挿入前のプラスミドベクターpTrc99A(PTA99)をエレクトロポレーション法により酢酸菌へ導入する検討を行った。その結果、AY201株へのプラスミドベクターの導入が可能であることがわかった。また、プラスミドベクター導入時の処理電圧とプラスミドベクターの導入によりアンピシリン耐性を獲得した酢酸菌数の指標となるアンピシリン添加寒天培地上での培養により形成されたコロニー数との関係から、処理電圧が低くなるほど酢酸菌へのプラスミドベクター導入の頻度が高くなることがわかった。これらのことから、AY201株を用いた遺伝子導入による形質転換への可能性が示唆され、セルロースナノファイバー以外の物質も同時に生合成するキメラ酢酸菌の創製へつながることが期待された。酢酸菌は、幅0.5-1.0μm、長さ2-10μmの桿菌であり、幅約50nmで厚み約10nmのセルロースナノファイバーを菌体外に噴出し、その反作用を駆動力として走行する。この酢酸菌の任意の方向への走行が、産生ナノファイバーをペリクルと呼ばれる三次元網目構造形成へと導く。近年、近藤らは一軸方向に配向しながらも非結晶性を示すネマチックオーダーセルロース(NOC)^<1)>フィルムを開発した。さらに、このNOCは配向方向への強固な相互作用によって他の分子を一方向に配列させる性質を有することから、これを培養基板として用いた酢酸菌の走行制御法が提案された^<2)>。この基板上で酢酸菌を培養することにより、菌体は配向方向へナノファイバーを産生しながら走行しつづけ、その結果、パターンが制御されたセルロース三次元構造体を構築することが可能となった。上記のような三次元構造体の材料として微生物由来ナノファイバーを考えた場合、ハイブリッド繊維を産生させることで、新規な機能の発現が期待される。そのためには、セルロース以外の物質の合成系を酢酸菌へ導入して形質転換し、さらにその物質をセルロースナノファイバーと同時に菌体外へ産生させる可能性を探る必要がある。そこで本研究では、樹木の二次代謝において、セルロースとともに合成される(1→3)-β-グルカンに注目した。(1→3)-β-グルカンは、免疫賦活作用、抗腫瘍作用などの性質を有していることで知られている。さらに(1→3)-β-グルカン合成酵素は、遺伝子研究の進んでいる酵母に存在していることから、酵母から(1→3)-β-グルカン合成酵素遺伝子を抽出し、酢酸菌へ導入して形質転換する試みを行う。そのためまず、酵母から核酸の抽出を行った。次に、これを用いてPCR法およびRT-PCR法により(1→3)-β-グルカン合成酵素遺伝子の増幅を検討し、得られた遺伝子断片の解析を行った。

また、プラスミドベクター導入時の処理電圧とプラスミドベクターの導入によりアンピシリン耐性を獲得した酢酸菌数の指標となるアンピシリン添加寒天培地上での培養により形成されたコロニー数との関係から、処理電圧が低くなるほど酢酸菌へのプラスミドベクター導入の頻度が高くなることがわかった。これらのことから、AY201株を用いた遺伝子導入による形質転換への可能性が示唆され、セルロースナノファイバー以外の物質も同時に生合成するキメラ酢酸菌の創製へつながることが期待された。
Ｗｎｔシグナル制御による骨肉腫細胞増殖抑制薬の可能性検証

増殖が盛んな骨肉腫細胞を骨芽細胞様に分化させ、増殖を殖抑させる創薬を想定し、骨芽細胞分化(骨形成)シグナルの解明を試みた。Wntによるβ-catenin経路の活性化が骨形成を促進する報告があるが、数多あるWnt分子と下流活性化シグナルの関連は不明な点が多い。そこで、Wnt関連分子を網羅的に、既知の4種の下流シグナル経路の活性化度および骨形成活性化度の対比することを試みた。その結果、骨形成活性化度は、既知シグナル経路以外あるいは既知のシグナル活性化モード以外の機構により制御されることを見出した。現在も解析継続中であるが、新たな骨形成シグナル制御様式の発見による骨関連疾患治療標的同定が期待される。本年度は、骨芽細胞や骨肉腫細胞において骨形成を制御するWnt/Fzdシグナル伝達に関する更なる検討を試みた。昨年度の解析から、Wnt3a発現抑制下においては、骨芽細胞分化が大きく抑制されたものの、下流において活性化する既知のシグナル経路であるβ-catenin経路、Ca2+経路、JNK経路、cAMP経路は、いずれもWnt3a強制発現あるいは発現抑制によって大幅な活性変動は認められなかった。そこで、他の活性化経路の候補として骨芽細胞分化を促進することが報告されていたERK経路とWnt3aの関係を検討した。骨芽細胞分化が著しく亢進したWnt3a/Fzd5の組み合わせを強制発現を強制発現させたERK上流のMEKに対する阻害剤を処理した際の骨芽細胞分化を評価したところ、阻害剤処理群における分化度の低下は見出されず、ERK経路の関与が小さいことが示唆された。そこで、下流の活性化シグナル経路が異なるのではなく、活性化の制御モードが異なる可能性を検証した。昨年度構築した評価系では、Wnt分子、Fzd受容体に加え共受容体LRP5/6またLRPの阻害剤Dkk1の添加条件において、既知4経路の活性化を評価していたが、この制御様式では評価できないモードを検討した。Wnt/Fzdシグナル伝達経路に関して、近年Ror1/2が共受容体として機能することが示唆されている。そこで、Ror1/2遺伝子をクローニングし、発現アデノウィルスを構築した。構築したアデノウィルスを用いて、Ror1/2過剰発現時の昨年度構築した下流シグナル活性化度を評価した。予備検討の結果、Wnt3a/Fzd5導入によるCa2+経路の活性化は、Ror2導入時において大きく低下することが見出された。今後、骨芽細胞および骨肉腫細胞でのWnt/Fzdによる骨形成促進の全体像にRorの関与を検討することが必要であると考えられた。本申請研究では、骨肉腫細胞を骨芽細胞様分化を促進し、骨肉腫細胞の増殖を抑制することが近年報告されたWnt/Fzdシグナルが、骨肉腫治療における新規創薬標的となり得るか検証することとした。同様のシグナル経路が機能していると考えられる骨芽細胞と対比し、骨芽細胞分化シグナルの実態解明と骨細胞特異的な同定を狙い研究を遂行した。はじめに正常骨芽細胞に対する解析を行った。マウス骨芽細胞由来細胞株MC3T3-E1細胞、および初代培養骨芽細胞におけるWnt/Fzの発現プロファイルをRT-PCRにて確認し、Wnt:13種類、Fzd:9種類の発現が認められた。発現が認められた分子関し、アデノウィルス発現系を構築し、その導入系によって適切に骨芽細胞分化への影響が評価可能か検討した。過去の報告と合致し、例えばWnt3aをMC3T3-E1細胞に導入した場合、骨形成マーカーであるALP活性の上昇が認められ、実験系の妥当性が検証された。次いで、アデノウィルス発現系を用いて各Wnt/Fzdの下流シグナルの検討を進めた。これまでに下流経路としてβ-catenin経路、JNK経路、Ca2+経路、cAMP経路が報告されており、これらの経路に与える影響をレポーターアッセイにより評価し、網羅的な活性化プロファイルを取得した。その結果、骨芽細胞分化が認めらたWnt3a導入系では、各シグナル経路の有意な変動は認められなかった。さらに、siRNAにより各Wnt、Fzdを発現抑制した検討においても、Wnt3a抑制下では骨芽細胞分化度は低下したが、下流4シグナル経路の有意な変動は認められなかった。以上の結果から、骨芽細胞や骨肉腫細胞においてWnt/Fzdシグナル下流で骨形成を制御しているシグナル経路は、未知シグナル経路が関与していることが示唆された。そこで、この未知経路の解明を優先し、解析を進めている。本年度は、既に報告されているWnt/Fzd下流

シグナル経路に関する活性化の検出系の構築、さらに各細胞に発現が認められた分子に関する発現系の構築、および内在性に発現する分子の発現抑制系の確立を行い、各Wnt/Fzdにが有する下流活性化プロファイルの取得が計画されていた。既に報告されているWnt/Fzdシグナルの下流経路であるβ-catenin経路、JNK経路、Ca2+経路、cAMP経路のシグナル活性化評価系として、それぞれ、Tcf/lef、AP-1、NFAT、CREの各転写因子活性を検出するレポーターアッセイ系構築に成功した。また、各細胞に発現するWnt/Fzdの発現系としては、アデノウィルス発現系を構築し、解析に使用する細胞において充分に機能することが確かめられた。さらに、発現抑制に用いるsiRNAに関しては、すべての分子に関して、siRNA配列は確定し、mRNA発現量を大幅に低下させうる使用条件も確定している。これらの系を用い、MC3T3-E1細胞および、初代培養骨芽細胞において遺伝子導入時あるいは各分子発現抑制時の下流シグナル経路の活性化プロファイルの取得に成功している。解析の結果、従来から想定されている知見とは異なり、骨芽細胞分化を制御するWnt/Fzdシグナルの下流経路は、上記4経路以外の経路が寄与している可能性が示唆された。そこで、当初、既報告4経路に関して骨芽細胞と骨肉腫細胞での活性化プロファイル対比を行う予定であったが、骨芽細胞分化を制御する下流経路の実態解明を行うことを優先し本研究を遂行している。当初計画と異なるが、骨芽細胞様細胞への分化を正確に評価するために不可避で有り、かつ、分子細胞生物学的にも重要な知見となることが期待されるため、本研究において遂行することが適切である。これらを考慮すると、本申請研究は順調に進展していると考えられる。Wnt/Fzdシグナル下流において、骨芽細胞分化を担う経路の探索として、現在以下の方策を行っている。1.様々なシグナル経路に対する阻害剤を用い、Wnt3aによる骨芽細胞分化活性化が抑制される経路の探索2.骨芽細胞分、および、骨形成を惹起することが明らかとなっている別シグナル経路が、Wnt3aの下流で活性化プロファイルが変動するかの検証(具体的には、SMAD、STAT、HIF、Runx2といったTGFβシグナルやmTORシグナル下流において活性化する転写因子に対するレポーターアッセイによる評価を行う)これらの検討を通じて、目的の下流経路が見出されると想定される。見出された下流経路が実際に機能しているかを、阻害剤処理や経路関連分子の発現抑制により検証する。骨芽細胞分化に関与する下流経路が同定された後、この経路の活性を評価可能な系を構築し、骨芽細胞、骨肉腫細胞を含め、網羅的な活性化プロファイルを取得する。骨肉腫において特異的に見出されるなWnt/Fzdの組み合わせによる下流活性化を見出し、どの分子を標的した場合に骨肉腫細胞特異的な骨芽細胞分化を誘導できるか同定する。最終的に、これらin vitroで得られた知見を、骨肉腫モデルマウスを用いて、同定されたシグナル経路の活性化を惹起した場合、あるいは、特定のWnt/Fzdを過剰発現または発現抑制した場合の骨形態変化や、骨肉腫の大きさ、骨肉腫細胞の細胞状態の変化(骨芽細胞様分化の有無)を表買うすることで、最終的に骨肉腫細胞を骨芽細胞様細胞に分化させることによる骨肉腫治療の可能性を生体レベルで検証する。該当なし