hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
シエナ派のフレスコ画におけるストゥッコ技法について

これらを調査した結果、円光以外に、特に傭兵の甲冑の表現を中心にストゥッコ技法が多く取り入れられていたことがわかった。また同現地調査では、国際ゴシック様式が展開する契機となったマルティーニの南フランス招聘について、その足跡を辿った。アビニヨンの教皇庁やドゥーモの壁画装飾に携わったと言われているが、現存するものは僅かでしかも損傷が激しかった。しかし、シノピア(フレスコ画の下描き)からはマルティーニの秀逸を極めた筆触を直に確認することができた。あわせて円光に取り入れられたストゥッコ技法が確認でき、詳細な画像データも入手することができた。今年度最後に、先の工藤、紀井の両氏と絵画技法材料の研究者佐藤一郎金沢美術工芸大学教授を招聘し、壁画の技法研究をテーマに研究セミナー(一般公開)を開催した。(3月25日)当初の研究計画通り、今年度はシエナ派のフレスコ画を中心に現地調査を行った。調査では、今後のストゥッコ技法の解明への手がかりとなる詳細な画像データが入手できた。また先述のとおり、シモーネ・マルティーニの南フランス・アビニヨンでの足跡を辿ったところ、マルティーニの死後に同じくイタリアから招聘されたヴィテルボ出身の画家マッテーオ・ジョバネッティのフレスコ画には、円光にシエナ派の影響と考えられるストゥッコ技法が採用されていた。今後、マッテーオのアビニヨン招聘前の作品を調査する必要性が出るなどの、研究の新たな展開が見えてきた。以上の今年度の研究実績により、現在までの進捗状況はおおむね順調に進展していると判断した。2018年3月に実施したリッポ・メンミのフレスコ画『マエスタ』(サン・ジミニャーノ、ポポロ宮)の現地調査で入手したストゥッコ技法の画像資料を入念に検証し、彼の師であるシモーネ・マルティーニの同主題のフレスコ画におけるストゥッコ技法と比較検証した。また、分担者大村は、フレスコ画の盛り上げ技法から派生したテンペラ画の盛り上げについて研究を展開した。具体的にはカルロ・クリベッリの蜜蝋を取材用とした盛り上げ技法を実証的に解明した。研究発表として、9月に行われた大学美術教育学会で、シエナ派の円光におけるストゥッコ技法について発表した。内容はこれまで調査研究してきたフィレンツェ派の円光とシエナ派のものを比較し、シエナ派の円光技法における特異性を明らかにしたものである。同じく、研究分担者の大村も上記研究成果を大学美術教育学会で発表するとともに、同学会誌に研究論文を発表した。また、金沢大学国際文化資源学センターの研究誌「文化資源学研究」22号に「シエナ派のフレスコ画におけるストゥッコ技法」と題した、これまでの研究調査結果を報告した。なお、同誌は2018年度3月に実施した、西洋絵画技法研究の専門家によるシンポジウム『壁画技法研究会』の記録をメインに報告したものである。本研究の第三者評価として、ビザンティン美術が専門のマケドニア共和国のオフリド・イコン美術館のミルチョ・ゲオルギエフスキ顧問学芸員に、貴重な研究の指導助言をいただくことができた。2月にはサン・ジミニャーノの参事会教会に描かれた『新約聖書伝』に導入された円光ストゥッコを現地調査した。この調査では、漆喰が軟らかいうちに型押しして立体的な装飾を形成するこれまでのシエナ派の手法と部分的にまったく異なった手法の可能性を見いだすことができ、大きな成果を得ることができた。
生合成類似ルートによるタキソールの全合成

当グループが開発したオレフィン環化反応剤水銀トリフラートの特質を最大限に活用し,抗腫瘍性ジテルペン誘導体タキソールの合成研究を展開した.ホモゲラニルアセテートの環化反応により高収率高選択的なタキソールA環の合成に成功し,側鎖の導入,ついでC-3位ケトンと末端アルデヒド基で12員環合成を行った.かくて効率的に合成したビシクロ[9.3.1]ペンタデカトリエンの12員環のコンホメーション解析をCONFLEXのプログラムによって実行し,望ましいアップアップのコンホーマーを優先する基質を見いだした.光延反転により合成したトリエンの水銀トリフラートによる渡環反応の試みは,予想し得ない非常に珍しい転位反応一渡環反応生成物を与え,その反応機構の解析を行いTetrahedron Letters誌に発表した.引き続いて,12員環カチオンのコンホメーション解析を行い,カチオンの制御によるルートでのタキサン骨格構築に向けて再検討を行った.今回は側鎖を1位に導入して,8,9位の間でマクマリー環化を行い,ビシクロ[9.3.1]ペンタデカジエノール骨格を合成することにした.8位の三級水酸基をルイス酸で活性化して,カチオンを誘導する作戦で,この反応を試すために,後一歩まで迫っている.当グループが開発したオレフィン環化反応剤水銀トリフラートの特質を最大限に活用し,抗腫瘍性ジテルペン誘導体タキソールの合成研究を展開した.ホモゲラニルアセテートの環化反応により高収率高選択的なタキソールA環の合成に成功し,側鎖の導入,ついでC-3位ケトンと末端アルデヒド基で12員環合成を行った.かくて効率的に合成したビシクロ[9.3.1]ペンタデカトリエンの12員環のコンホメーション解析をCONFLEXのプログラムによって実行し,望ましいアップアップのコンホーマーを優先する基質を見いだした.光延反転により合成したトリエンの水銀トリフラートによる渡環反応の試みは,予想し得ない非常に珍しい転位反応一渡環反応生成物を与え,その反応機構の解析を行いTetrahedron Letters誌に発表した.引き続いて,12員環カチオンのコンホメーション解析を行い,カチオンの制御によるルートでのタキサン骨格構築に向けて再検討を行った.今回は側鎖を1位に導入して,8,9位の間でマクマリー環化を行い,ビシクロ[9.3.1]ペンタデカジエノール骨格を合成することにした.8位の三級水酸基をルイス酸で活性化して,カチオンを誘導する作戦で,この反応を試すために,後一歩まで迫っている.当研究室では効率的なオレフィン環化反応剤である水銀トリフラートを開発し,様々な多環式テルペノイドの合成研究を展開してきた.また本試薬が水の存在下にも安定でかつ十分な反応性を保持していることに着目し,水存在下にゲラニルゲラニルアセテートの環化反応を行い,カチオン中間体を水で捕捉することに成功した.これは生合成類似オレフィン環化反応が協奏反応ではなく,フレキシブルな立体配座を取るカチオン中間体を経由して段階的に進行することを初めて証明した実験である.水銀トリフラートは従来ニトロメタン中でHgOと無水トリフラートの反応で長時間を要して調製していたが,最近アセトニトリルを溶媒とすることで瞬時に定量的に生成する事を見いだした.さらにアセトニトリル中での水銀トリフラートの反応性を再検討し,ホモゲラニルアセテートの環化反応が高選択的に四置換オレフィン体を与えることを明らかにした.この生成物はタキソ-ルのA環に相当することから,これを活用して生合成類似のルートによるタキソ-ルの合成研究を展開した.A環部に側鎖を導入して,マクマリ-反応でビシクロ[9,3,1]ペンタデカトリエン骨格を構築し,水銀トリフラートによる生合成型の渡環反応を実現してタキサン骨格を合成しようとする計画である.タキソ-ルのB/C環トランスの立体化学を渡環反応で確保すはるためにはup-up型コンホマ-が必要で,これが圧倒的に優先する基質をMM2計算を基に設計し,水銀トリフラートによる渡環反応を検討した.その結果,p-ニトロベンゾエ-ト基が脱離した後に,複雑な転移反応を経由し,最後に好ましくない方向に渡環反応を起こした四環性水銀化合物が単離され,X級結晶解析によりその構造を明らかにした.本合成研究の出発物質はホモゲラニルアセテートで,これを水銀トリフラートによる環化反応にはって高選択的にタキソールA環前駆体に変換した.一方アセチレンのヒドロジルコン化により,側鎖部分を高選択的に合成し,側鎖部分をA環前駆体に縮合させて,ケトアルデヒド体を誘導し,低原子価チタンによる12員環形成を行って,ビシクロ[9,3,1]ペンタデカン骨格を有するジオール体を効率的に合成し,X-線解析により,このジオール体が1,2-シス配置を取っていることを明らかにした.ここで,空間配座探索プログラムCONFLEXによる分子力場計算を行い,1,2位がトランスジオールとし,これを適時保護した化合物が渡環反応に必要なアップアップのコンホーマーを取ることが明らかになった.

そこで,光延反応によって2位を反転させたp-ニトロペンゾエート体を合成した.そして,アセトニトリル中で酸捕捉剤TMUの1.2当量存在下に,水銀トリフラートとの反応を行ったところ,22%の収率で得られた主生成物のNMRは一見してp-ニトロベンゾイル基が欠落した,渡環反応生成物である可能性が示唆された.しかし,X-線解析が示した構造は,A環上のジェミナルのジメチル基が環の外に飛び出してしまって,とんでもない転位反応と渡環反応生成物であった.意外ではあったが,非常に興味深い反応で,反応機構を考察するとともに,この段階で,Tetrahedron Letters誌に発表することにした.合成の努力はここからカチオンの制御に焦点を合わせることにし,1,2位の保護基にはカーボネートを採用することにした.Mullerのパラメーターを用いて,12員環カチオンのコンホメーション計算を実行し,渡環反応前駆体に望ましい中間体を導き出すことに成功した.8位に水酸基を持つビシクロ[9.3.1]ペンタデカジエンを合成して,渡環反応の実現を図っている.当グループが開発したオレフィン環化反応剤水銀トリフラートの特質を最大限に活用し,抗腫瘍性ジテルペン誘導体タキソールの合成研究を展開した.ホモゲラニルアセテートの環化反応により高収率高選択的なタキソールA環の合成に成功し,側鎖の導入,ついでC-3位ケトンと末端アルデヒド基で12員環合成を行った.かくて効率的に合成したビシクロ[9.3.1]ペンタデカトリエンの12員環のコンホメーション解析をCONFLEXのプログラムによって実行し,望ましいアップアップのコンホーマーを優先する基質を見いだした.光延反転により合成したトリエンの水銀トリフラートによる渡環反応の試みは,予想し得ない非常に珍しい転位反応-渡環反応生成物を与え,その反応機構の解析を行いTetrahedron Letters誌に発表した.引き続いて,12員環カチオンのコンホメーション解析を行い,カチオンの制御によるルートでのタキサン骨格構築に向けて再検討を行った.今回は側鎖を1位に導入して,8,9位の間でマクマリー環化を行い,ビシクロ[9.3.1]ペンタデカジエノール骨格を合成することにした.8位の三級水酸基をルイス酸で活性化して,カチオンを誘導する作戦で,この反応を試すために,後一歩まで迫っている.
酵素ヒドロゲナーゼの蛋白質工学による改質とその応用

本研究は微生物を用いる水素生産の効率化を目指して水素産生菌の水素産生を支配している酵素、ヒドロゲナーゼの分子レベルからの改良を目的として研究を行った。まず、当研究室でクローニングに成功しているヒドロゲナーゼ系遺伝子、hydAおよびhydBの機能を類推したところ、それぞれ活性発現の調節およびヒドロゲナーゼを構成するサブユニットの一部であることが示唆された。そこで、hydAの遺伝子配列を変更し、ヒドロゲナーゼ活性の改良を試みた。すなわち、DNAシンセサイザーを用いて目的部位を変更した遺伝子を合成し、これらを大腸菌中に形質転換して各々のヒドロゲナーゼ活性を測定した。その結果、hydAのシステインをセリンに変更した遺伝子を有する株のヒドロゲナーゼ活性が野性株の133%まで向上していた。これはhydA産物のアミノ酸置換が起ったことにより、ヒドロゲナーゼ活性発現の調節に変化が起った結果と推察された。また、他のアミノ酸置換を行った遺伝子を含む株はヒドロゲナーゼ活性が検出されなかったことから、これらの部位がヒドロゲナーゼ発現にきわめて重要な部位であることがわかった。一方、hydB欠損株がNイオン存在下で培養するとヒドロゲナーゼ活性を回復することを見い出した。そこでhydB欠損株を他の金属イオン存在下で培養したところ、FeやVイオン存在下でもヒドロゲナーゼの水素吸収活性が回復した。しかしヒドロゲナーゼの水素発生活性は回復しなかった。このようにヒドロゲナーゼの活性中心に関与している金属を交換することによりその性質を改質することに成功した。以上のように本研究では酵素ヒドロゲナーゼを蛋白質工学的手法により分子レベルから改造することに成功した。この成果は今後の微生物水素生産の効率化に大いに貢献すると期待される。昭和62年度の設備備品費でDNAシンセサイザーを購入し,ヒドロゲナーゼの遺伝子配列の変更に用いるDNAを合成した.一般に酵素の安定性には酵素中のSーS結合が重要な役割をしている.そこでまず大腸菌ヒドロゲナーゼ系遺伝子hydAのSーS結合に関与するアミノ酸のシステインをコードした塩基配列部分の変更を試みた.すなわちシステインをコードする遺伝子部位をセリンをコードする遺伝子に変更した遺伝子配列(17塩基)をDNAシンセサイザーを用いて合成した.一方,酵素の活性や高次構造は構成するアミノ酸の疎水性,親水性のバランスに著じるしく影響される.そこで,大腸菌hydA中の親水性アミノ酸をコードする塩基配列を疎水性アミノ酸をコードする塩基配列に変更した3種類のDNAを合成した.以上のように調製した計4種類の遺伝子を含むhydAを大腸菌に形質転換した.この結果,生じてくるヒドロゲナーゼ蛋白質は自然界のものとはアミノ酸配列が異なるために酵素の安定性や活性に変化が生じると期待された.大腸菌のヒドロゲナーゼの活性中心にはニッケルが含まれていることが知られている.大腸菌の他のヒドロゲナーゼ系遺伝子hydBはニッケルの輸送,結合に関与している蛋白質をコードしているとされている.そこで大腸菌hydB欠損株を高濃度のニッケルを含む培地で培養したところ,ヒドロゲナーゼ活性が回復した.したがって明らかにhydBはヒドロゲナーゼ合成時にニッケルの取り込みに関与している蛋白質をコードしていることがわかった.このことからhydB遺伝子産物と金属との親和性を改良することによりヒドロゲナーゼの活性の改良,安定化が行えると期待される.このように本年度は,大腸菌hydAに関する蛋白質工学を開始するとともにhydBを蛋白質工学で改良する上での重要な知見が得られた.昭和62年度の設備備品費で購入したDNAシンセサイザーでヒドロゲナーゼ遺伝子の変更に用いるDNAを合成し、これによりヒドロゲナーゼの改質を試みた。すなわち大腸菌ヒドロゲナーゼ系遺伝子hydAのシスティンをコードする塩基配列をセリンに変更した。

この他、同様にhydA中の親水性のアミノ酸をコードする遺伝子配列を疎水性アミノ酸をコードする遺伝子に変更した。以上の様にして調製した遺伝子を大腸菌に形質転換し、形質転換体のヒドロゲナーゼ活性を測定した。その結果、hydAのシステインをコードする遺伝子をセリンに変更した遺伝子が導入された株の水素生産活性が野生株の133%まで向上していることがわかった。他の遺伝子配列の変更が導入された株はヒドロゲナーゼ活性を示さなかった。以上の結果から、ヒドロゲナーゼ系遺伝子の変換により大腸菌の水素生産能を向上することができることがわかった。さらにhydAの産物がヒドロゲナーゼ発現の調節系として機能しているのではないかという研究結果を考慮すると、hydAのアミノ酸変換によりヒデロゲナーゼの発現機能が強化されたものと考えられた。また他のアミノ酸置換によりヒデロゲナーゼ活性が発現しなかったことから、これらの部位はこの酵素にとってきわめて重要な部位であることがわかった。一方、前年度に大腸菌hydB欠陥株がニッケンイオン添加下で培養するとヒドロゲナーゼ活性を回復することを確認した。そこで本年度は他の金属イオン存在下で培養し、ヒドロゲナーゼの機能改質を試みた。その結果、ニッケルイオン以外にもバナジウムイオンおよび鉄イオン存在下ヒドロゲナーゼ活性が回復することがわかった。しかし、得られてヒドロゲナーゼは水素吸収の活性しか示さず改変されていた。このように、活性中心に関与すると考えられている金属を変異株を用いて変換することにより酵素機能を改質できることがわかった。
肥満を基盤とするメタボリックシンドロームにおけるプロテアーゼ受容体―２の意義

肥満を基盤とするメタボリックシンドローム(MetS)は、心血管疾患の発症率が高く、慢性全身性炎症状態であるとされるが、血管機能障害におけるprotease-activated receptor-2 (PAR-2)の関連性に着目した報告はない。そこで、MetSモデルラットを用いてPAR-2依存性動脈拡張能を検討した。結果、MetSラットの動脈では、MetSの発症に伴い一酸化窒素(NO)に対する反応性が減弱するが、PAR-2を介した拡張はNO合成酵素活性亢進が生じることにより正常を保持していることを見いだした。また、MetSにおける動脈周囲脂肪組織は、拡張能低下を補っている可能性を見いだした。プロテアーゼ活性化型受容体(Protease-activated receptors; PARs)は、炎症反応や組織障害などの病的状態における存在意義が注目されている。その中でもPAR-2は、血管壁に発現していること、炎症性サイトカイン刺激により誘導が亢進されることなどが知られているが、病態生理学的意義については不明な点が多い。一方、肥満を基盤とするメタボリックシンドロームは、動脈硬化性血管障害や糖尿病などの発症率が極めて高いことで注目されている。そこで、「メタボリックシンドロームでは、アディポカインにより血管壁PAR-2応答の亢進が生じ、血管組織障害が促進される」という仮説を立て研究を開始した。初年度は、18週齢(メタボリックシンドローム症状維持期)のSHRSP.Z-Leprfa/IzmDmcr (SHRSP.ZF)ラットの動脈では、正常対象Wistar-Kyotoラットに比べ、血管平滑筋の一酸化窒素(NO)に対する拡張機能は減弱しているが、PAR-2活性化ペプチド2flyによる拡張反応は正常を維持していることを見いだした。本年度は、PAR-2依存性動脈拡張機能の週齢(メタボリックシンドローム状態の曝露期間)による影響を検討し、1)早期には血管内皮細胞のNO産生が低下し、次いで血管平滑筋細胞のNOに対する反応性が減弱すること、2) 2flyによる血管拡張反応の減弱は、他のNO依存性血管拡張薬に比べ遅発性であること、3)高週齢SHRSP.ZFラット腸間膜動脈に生じる拡張機能の低下は、動脈周囲脂肪が存在することによりマスクされることを見いだした。以上、PAR-2依存性血管拡張機構は、メタボリックシンドローム状態の早期では維持されていることを明らかにした。また、血管周囲内臓脂肪が血管抵抗性維持に関与している可能性を示唆する興味ある知見が得られた。メタボリックシンドロームは、動脈硬化性血管障害の発症率が極めて高いことで注目されている。このうち、PAR-2は、血管壁に発現していること、炎症性サイトカイン刺激により誘導が亢進されることなどが知られている。そこで本研究では、PAR-2の病態生理学的意義を明らかにするため、メタボリックシンドロームにおける血管機能障害への関与について検討した。これまでの研究で、メタボリックシンドローム症状を発症したSHRSP.Z-Leprfa/IzmDmcr (SHRSP.ZF)ラットの動脈では、メタボリックシンドローム発症の早期から血管内皮細胞NO産生能の障害が生じており、次いで平滑筋細胞のNOに対する反応性が減弱すること、このような状態でもPAR-2依存性動脈拡張能は正常を保持していることを見いだした。そこで今年度は、始めに、PAR-2に特異的にみられる動脈拡張能の保持機構について検討した。その結果、PAR-2刺激によるNO合成酵素活性化の亢進が関与すること、シクロオキシゲナーゼ経路の関与はないことを明らかにした。このことは、メタボリックシンドロームにおいて、PAR-2は血管緊張性を正常に保持するための機構として存在する可能性を示唆している。次いで、腸間膜動脈周囲の脂肪組織の及ぼす血管拡張能への影響を検討した。その結果、NO依存性動脈拡張能が低下する週齢においてのみ血管拡張を増強させることを見いだした。メタボリックシンドロームにおける血管周囲脂肪は、血管抵抗性維持に寄与することが示唆される。プロテアーゼ活性化型受容体(PAR)は、炎症や組織障害など病的状態における存在意義が注目されている。中でもPAR-2は、血管壁に発現していること、炎症性サイトカインにより誘導されることが知られているが、生理学的意義については不明な点が多い。一方、肥満(慢性炎症状態)を基盤とするメタボリックシンドロームは、動脈硬化や糖尿病などの発症率が極めて高いことで注目されている。そこで、メタボリックシンドロームでは、アディポカインにより血管壁PAR-2応答の亢進が生じ、障害が促進されるという仮説を立てた。

初年度は、メタボリックシンドロームモデルSHRSP.Z-Leprfa/IzmDmcr (SHRSP.ZF)ラットを用い、胸部大動脈および腸間膜動脈のPAR-2を介する血管反応性およびPAR-2蛋白/mRNA量を、正常対象Wistar-Kyotoラット(WKY)と比較検討した。1. SHRSP.ZFラットの動脈では、PAR-2アゴニスト(2-fly)により拡張反応が生じ、その程度はWKYと差がなかった。アセチルコリンおよびニトロプルシッドに対する拡張反応は、WKYに比べ減弱した。2. 2-flyによる血管拡張反応は、シクロオキシゲナーゼ(COX)阻害薬およびCOX-2選択的阻害薬により影響されないが、NO合成酵素またはグアニル酸シクラーゼの阻害薬処置、内皮細胞除去により消失した。3. SHRSP.ZFラットの動脈において、PAR-2蛋白/mRNA量はWKYに比べむしろ低下していた。以上、メタボリックシンドロームでは、血管平滑筋におけるNOを介する拡張機能は減弱するが、PAR-2を介する拡張反応性は維持されることを見いだした。このことは、PAR-2を介した血管拡張機構は他の血管拡張薬とは異なる可能性を示唆しており、メタボリックシンドロームにおいても維持されることは興味ある知見である。研究計画に従い、内臓脂肪の有無による血管拡張機能への影響を検討し、メタボリックシンドロームモデルラットの血管周囲内臓脂肪は血管抵抗性維持に関与している可能性を示唆する興味ある知見を得た。一方、計画していたPAR-2を介する血管拡張機能変化に対するアディポカインの影響についての検討は継続実施中である。初年度研究計画に従い、メタボリックシンドローム発症時における血管壁PAR-2発現およびその応答変化について検討し、上記の結果を得た。一方、当初計画していた血中アディポカイン量とPAR-2を介する拡張機能変化との関連性についての検討については、現在継続検討中である。今後は、メタボリックシンドローム発症時における血管壁PAR-2発現およびその応答変化とアディポカインとの関連性について引き続き検討するとともに、PAR-2アゴニストin vivo投与による血管拡張機能への影響についても検討を行う予定である。今後は、始めに、初年度研究計画であり実施途中であるメタボリックシンドローム発症時における血管壁PAR-2発現およびその応答変化と血中アディポカイン量との関連性について引き続き検討する。次いで、H24年度研究計画である腸間膜動脈周囲脂肪によるPAR-2依存性血管拡張機能への影響について検討する。該当なし研究計画に従い、経費のほとんどを物品費として使用する他、初年度研究で得られた成果を国際高血圧学会(2012.9.29-10.4、シドニー)に参加し発表するための旅費として使用する予定である。
グライコミクスを応用したIgA腎症の炎症制御機構解明とバイオマーカー開発

IgA腎症における糖鎖不全IgAによる糸球体炎症制御機構を解析した。糖鎖不全IgA刺激にて培養ヒト糸球体細胞はアディポネクチンが発現低下し、IgA腎症の糸球体にてその発現が低下した。生体における糖鎖不全IgAの証明を行った。腎組織の糖鎖不全IgAをHAレクチン染色で証明した。尿中糖鎖不全IgA検出法としてレクチンを組み合わせた方法を開発しIgA腎症は他疾患と比較し有意な糖鎖不全IgAを認めた。IgA腎症に関連する因子であるとされる糖鎖異常を有するIgA分子による炎症制御機構の解明、糖鎖不全IgAの検出によるバイオマーカーの開発を目的として、当該年度における計画を実行した。平成24年度計画の腎組織及び尿における糖鎖不全IgAの証明について検討を行った。1腎組織における糖鎖不全IgAを証明するため、ガラクトース不全を認識するHAレクチン染色を行い、画像解析にて本疾患においてはIgA沈着領域でのHAレクチン染色を検出することが可能であった。2糖鎖不全IgAの尿中バイオマーカーとしての有用性の検討のため、尿検体でのHAレクチンとシアル酸検出するSNAレクチンによるレクチンアッセイをおこない、組み合わせる方法を開発した。IgA腎症は他疾患と比較し有意な糖鎖不全IgA(HA/SNA比)を認めた。これらの成果はPLoSOne誌に報告を行った。今後の研究進展に向けて他の腎病態での検討を計画している。平成23年度計画として糖鎖不全IgAによる糸球体炎症制御機構を明らかとするため、以下を実施した。(1)糖鎖不全IgAによる炎症制御を解明するため、培養ヒト糸球体メサンギウム細胞並びにヒト糸球体血管内皮細胞に対する、糖鎖不全IgA刺激によるサイトカインアレイ解析を行った。糖鎖不全IgAはいずれの細胞においてもアディポネクチンがダウンレギュレーションされた。(2)アディポネクチンの腎生検標本上での発現解析の検討では、IgA腎症においてはその発現が糸球体において低下した。平成24年度計画の腎組織及び尿における糖鎖不全IgAの証明について一部検討を行った。(1)腎組織における糖鎖不全IgAを証明するため、ガラクトース不全を認識するHAレクチン染色を行い、本疾患においてはIgA沈着領域でのHAレクチン染色を検出することが可能であった。(2)糖鎖不全IgAの尿中バイオマーカーとしての有用性の検討のため、尿検体でのHAレクチンとシアル酸検出するSNAレクチンによるレクチンアッセイをおこない、組み合わせる方法を開発した。平成23年度の計画に関しては、IgA腎症患者血清からのIgA1分離に成功していないが、それ以外はほぼ完了した。さらに平成24年度計画についても糖鎖不全IgAの検出法を腎組織ならびに尿中で証明し、本疾患での有用性を見出した。これらの成果はPLoSOne誌に報告した。PLoS One. 2012;7(3):e33965. Epub 2012 Mar23平成23年度の研究計画よりIgA腎症患者からの糖鎖不全IgAの分離の検討を行い、培養系での解析を行う。また平成24年度計画においても、一部疾患との間の比較は可能であったが、計画の通り、前年度成果のあったアディポネクチンとの関連、また治療による影響などの検討をさらに行っていく。主に培養実験、染色、ELISAに使用する物品費が中心となる。また、さらに研究成果がまとまれば、学会報告、論文作成の費用として使用する。
議会による軍の統制-アメリカ、カナダ、日本の憲法学的考察

防衛出動を含む自衛隊の行動に国会承認を法律要件としている現行法に、憲法的根拠や立憲主義の伝統は明確に見出しえない。アメリカは憲法に明文の規定があり、議会関与は立憲主義といえるが、大統領は最高司令官ともしていて、海外への軍の出動に議会承認が必要かは争いがある。カナダはウエストミンスター型の立憲主義的伝統で、軍権に議会が関与する憲法原理をもたない。議会を軍の出動にどのようにかからわせるかは、それぞれ立憲主義的伝統に規定されるといえる。わが国における軍隊(自衛隊)の行動に議会(国会)がどのように関与するかの制度を整理し、かかる法制度が憲法と具体的な関係をもつか、持つとしたらどのような原理なのかを研究した。まず、現行の自衛隊の各行動と、それぞれについての国会承認の是非について現行法と立法経緯を整理し、国会の関与の程度と自衛隊の行動の指揮権に具体的な関係があるかを検討した。一般にシビリアン・コントロールが国会関与の根拠とされるが、憲法的意義は不明確であり、防衛出動にはついての憲法原理が係わるものの、それ以外の行動に国会の承認を要するか、いかなる関与が適当かは憲法問題とは言い難く、立法時の政治状況で決せられるとの知見を得た。しかし、個別法で国会承認を要求する法伝統が形成され、自衛隊の海外派遣には国会承認を要する法原理が熟成したとみるべきで、恒久法の論点を提供するものと思料する。次に、日本国憲法には国会と軍との関係を示唆する規定は一切ないため、自衛隊(軍)の行動に国会承認を要するとの法原理は法伝統に求められるかを考えるため、戦前の立憲主義での軍と議会の関係を観察した。そこでは軍の指揮権は統帥権として天皇の大権に属し、議会は勿論、国務大臣でさえ関与できないとの憲法原理が確立していた。議会承認を要件とする議論はついぞ憲法学では議論されなかったと観察される。この統帥権が憲法で与えられたというより憲法以前にすでに慣習として確立していた。しかしその範囲は不明であり、軍国主義のなか解釈と運用で議会などの政治が関与する場が排除されていった。この反省の契機が国会関与の法制度につながる要素があったのではないかと考えた。議会と軍の比較憲法学的考察として、アメリカ憲法における軍と議会の関係を考察した。第1に、憲法上軍の統制はどのような仕組みになっているのかを整理した。憲法は大統領を軍の最高司令官としており、それがいかなる意味であるのかを憲法学的に分析し、判例や学説を検討した。軍事行動の究極的決定を含む完全な指揮命令権を有するとの考えもあるが、民兵召集権を含む憲法上認められた権限も、具体的には制定法に基づくのであり軍権に関して大統領固有の権限は見出しがたいとし、制定法に羈束されると解し、ただ日常的な作戦統制権は議会は関与しえないと結論付けた。第2に、それでは議会はいかなる権限を軍に対してもっているのか。軍の存立にかかわる規則制定権や財政権は憲法の明文で議会が有するとしているから問題ないものの、議会の宣戦権(憲法1条8節11項)の意味は、これまで大統領が戦争をイニシエートしてきたことから問題となる。議会の戦争権限の問題であり、議会優位(Procongress)と大統領優位(Proexecutive)の対立と捉え判例学説を検討し、憲法制定定期から9-11に至るまで戦争権限がどう議論されてきたかの歴史的展開を整理したうえで、現代的課題を考察した。戦争権限は現実には大統領と議会の協働で行使されそれが実務では踏襲されている点を指摘するとともに、戦争権限はアメリカ憲法学の一大争点であることを改めて喚起させるにいたった。集団安全保障の枠組で米軍が参加する場合での大統領と議会の憲法上の権限の対立を検討し、両者の協働のモデルがあることを観察した。そして、アメリカ憲法における戦争権限と対比させながら、憲法に議会の戦争権限の規定がないカナダでは、軍の出動に議会は法的にどう関与するのかを、立憲主義原理から紐解き、その構造や運用例を中心に検討した。カナダはイギリス立憲主義を継承しているから、イギリスの展開を参照しなければならない。イギリスは軍権を国王大権とする立憲的伝統を認めたうえで、議会関与の解釈や改革が志向されている。カナダは、同じ国王大権の伝統をもち、軍権=執行権専権の立憲主義が確固としてあり、憲法解釈や立法で軍の出動に議会関与を要件とする憲法議論はほとんどなされていないとの知見をえた。カナダ憲法の歴史や学説からはアメリカのような議会の戦争権限の発想は出てこない。軍の治安出動や緊急事態で議会を関与させる法制度はあるが、武力行使を含む海外派兵に議会の承認や同意を要件とする憲法的思考はない。もっとも、次の3点から全く議会が関与できないというわけではない。

第1に、議会は執行権統制の伝統的ツールとして予算権限をもっており、下院の安全保障の議論と関心は、9・11意向を含むカナダのNATO・国連中心の安全保障政策において重要となっている。第2に、法的な拘束力はないが、留意決議(take note debate)は議会の審議と国民の関心を喚起するという点で無意味ではない。第3に政治統制(civil control)の法原理で、国務大臣の軍の統制が責任政治を憲法原理とするカナダの有効な軍統制になり、大臣が議会に責めを負うシステムが徹底されているといえる。カナダ立憲主義原理や戦争権限はわが国の憲法学では研究されておらず、比較憲法学的意義も認められる。
化学性呼吸調節機構の分子基盤の解明

延髄に存在する中枢化学受容器細胞(CRC)は、血液ガスとpHの恒常性の維持に重要である。内因性CRCを同定するために、高CO_2液の短時間負荷(秒単位)に対する、細胞内Ca、細胞内pH及び膜電位の応答をラット延髄由来初代培養細胞にて計測した。グリア細胞高密度培養系では、細胞内の酸性化がCa応答に先行し、細胞外酸性化に非依存的に引き起こされた。このCa応答はTRPチャネル阻害剤によって減弱された。また、高CO_2負荷Ca応答細胞群の一部は、TRP活性化剤によってもCa応答を示した。従って、TRPチャネルは、中枢化学受容機能分子の有力候補と示唆された。延髄は血液ガスとpHの恒常性の維持に重要な役割を担う中枢化学受容器が存在するが、その化学受容器及びその発現細胞は同定されていない。本研究では、延髄由来のニューロン細胞、グリア細胞の共培養系の安定的な単離法を確立している。この細胞に蛍光色素であるFluo-4やSNARF-1を染色し、特殊高速高感度光計測システムを用いてCO_2/pH負荷によるCa応答及び細胞内pHのイメージングに成功している。これまでにpH6.8のHEPES緩衝溶液の負荷に対するCa応答はタランチュラ毒由来のpsalmotoxin 1によって阻害されることから、pH7.0以下の酸性で活性化するASIC1aを介したCa流入であることを見出している。一方で、生理的な範囲の5%CO_2から12%CO_2へ通気を変化させた26mMHCO_3緩衝液では、細胞外pHが7.4から7.1への変化であるにも関わらず、細胞内Ca上昇が観察された。従って、細胞外pHではなくCO_2負荷によりCa応答が引き起こされると推察された。perforated patch-clamp法により、このCa応答は2.34mVの膜電位変化を伴っていた。このl-V curveの解析により、グリア細胞であると同定できた。さらに、細胞内pHのイメージングにより、pH7.23から7.12に酸化していることを見出し、この細胞内酸化と細胞内Ca応答が、炭酸脱水酵素の阻害剤によって阻害された。従って、負荷したCO_2は炭酸脱水酵素によって触媒され、細胞内を酸化し、Ca応答を誘発する経路が推定された。この細胞内酸性化を感知し、Ca応答を引き起こすCaチャネルの候補は、薬理学的スクリーニングの結果、サブタイプV1、M8などのransient receptor potential(TRP)が推定された。現在、この成果を論文投稿中である。本年度の研究では、血液ガスとpHの恒常性の維持に重要な役割を担う中枢化学受容器が、脳幹延髄来のグリア細胞に存在していることを示した。即ち、延髄由来のニューロン・グリア共培養細胞を用い、CO_2/pH負荷によるCa応答及び細胞内pHのイメージングを行った。その結果、細胞外pHではなくCO_2負荷によりCa応答が引き起こされると推察された。更に、perforated patch-clamp法により、このCa応答にて膜電位変化が起き、I-V curveの解析により、グリア細胞であると同定できた。細胞内pHのイメージングにより、細胞内のpH低下(酸化)に伴い、Ca応答が起きていることが示唆された。この細胞内酸性化を感知し、Ca応答を引き起こすCaチャネルの候補として、薬理学的スクリーニングの結果、サブタイプV1、M8などのransient receptor potential (TRP)が推定された。また、脳幹延髄由来グリア細胞にTRPV1、M8が発現していることをRT-PCRにて確認した。従って、延髄グリア細胞に発現するTRPチャネルが中枢化学受容機能を持つことを見出した。この成果を論文にて報告した(Hiratra & Oku Cell Calcium 2010)。更に、TRPの他のサブタイプの可能性も示唆されることから、それらの発現を特異的に抑制するRNAi搭載プラスミドを作製した。このプラスミドは同時に発現する赤色蛍光性蛋白質により細胞を同定できる。ネッパジーン社製の遺伝子導入装置を用いて、この赤色性蛍光性蛋白質の発現が、これまで困難であった神経やグリア細胞において成功している。現在、Ca応答と組み合わせたTRPサブタイプの同定を検討している。また、個体レベルでの換気応答が減弱するか否か評価できるwholebodyplethysmography法が確立しており、TRPの遺伝子欠損マウスの検討準備中である。本研究により、これまで謎であった中枢化学受容器としてTRPが化学性呼吸調節の働きを持つこと示唆できた。
メトトレキサート関連リンパ増殖性疾患の臨床病理学的特徴の確立

多施設より得られたメソトレキサート関連リンパ増殖性疾患(methotrexate-associated lymphoproliferative disorder: MTX-LPD)患者の臨床検体(ホルマリン固定パラフィン包埋切片)および臨床情報を統計学的解析し、特徴的な組織像に対応した臨床所見を見出し、MTX-LPDの各組織型の診断基準を確立した。さらに頻度の高い1反応性型(RH)2多形型(Poly-LPD)3びまん性大細胞B細胞リンパ腫(DLBCL)型4古典的ホジキンリンパ腫型(CHL)症例の統計学的解析では各組織型間で多数の臨床病理学的特徴およびメソトレセート中止後の病勢が有意に異なっており、さらに各組織型のMTX中止後の病勢予測因子を複数同定した。免疫染色およびEBV in situ hybridizationで得られた画像をLeica社の画像解析ソフト(Aperio Image Scope)を用いて客観性・再現性の高い方法で解析し、EBV陽性細胞数がRH・Poly-LPD間で、腫瘍細胞におけるEBV陽性率がDLBCL・CHL間で有意に異なってた事を見出した。またDLBCLにおいてEBV感染・非感染症例間で節外病変・壊死の有無を含め多数の臨床病理学的特徴が有意に異なっていた。これらの結果を第58回リンパ網内系学会総会発表し、優秀演題口演として選出された。現在論文化が進行中である。一方で、患者血液中のEBVコピー数の評価は症例収集不足のため解析が進まず、MTX-LPD発症リスク因子の同定は行えなかった。今後は得られた結果をさらに発展させ、確立したMTX-LPDの各組織型の分子学的特徴を明らかにするため、当初予定していた解析に加えてホルマリン固定パラフィン包埋切片に対して新たな免疫組織化学染色およびnCounter Analysis System (NanoString Technologies)を用いた遺伝子発現解析を行う。臨床情報を伴う多数の症例集積が進み、論文化が進行中。本研究から関節リウマチ患者などで発症するMTX-LPDでは組織分類および各組織型での予後因子がMTX中止後の病勢予測に有効である事が示唆された。これらの結果は2017年12月に米国アトランタで開催された第59回米国血液学会年次総会で発表した。臨床情報を伴う多数の症例集積が進み、さらに統計学的解析で良好な結果が得られているため。分類した各MTX-LPDの組織型の分子生物学的特徴を解析し各組織間での違いを同定する。また免疫チェックポイントに関与する蛋白等の免疫染色を追加しMTX-LPDの免疫表現型の特徴および病態形成を明らかにする。さらに治療前後の患者血中のEBV copy数を調査しMTX-LPD発症リスクおよび組織中のEBV感染との相関性を評価する。また免疫不全を伴わないLPDとMTX-LPDを比較し、MTX-LPDの疾患概念を確立する。29年度に予定していた免疫染色の一部(各転写因子(TBX1,GATA3,FOXP3等)および免疫チェックポイントに関与するタンパク質(PDL1,PDL2,CTLA-4等))、免疫グロブリンおよびT細胞受容体の遺伝子再構成の評価、治療前後の患者血液中のEBVコピー数の調査、および一部の症例でのEBV in situ hybridizationの解析が所属研究機関の異動のため準備に時間を要し施行出来なかった。これらの解析は30年度施行予定である。また免疫染色およびEBV in situ hybridizationで得られた画像をLeica社の画像解析ソフト(Aperio Image Scope)を用いて客観性・再現性の高い方法で解析する予定である。

さらに上記予定している解析の結果を含めこれまでに得られた結果を論文発表する予定である。収集した臨床検体・臨床情報よりメソトレキサート関連リンパ増殖性疾患の臨床病理学的特徴を解析し各組織型を確立した。さらにこれら確立した組織型ではメソトレセート中止後の病勢が有意に異なっていた事を国内外の学会で発表した。これらの結果をさらに発展させ、確立した組織型の分子学的特徴を明らかにするため、当初予定していた解析に加えて新たな免疫組織化学染色および遺伝子解析を行うため。
地球環境負荷を考慮した品質ライフサイクル・アセスメントの調査研究

今日の大量生産システムによって生産されるアイテム(製品)の品質ライフサイクル(生産・消費・廃棄のサイクル)の基本的評価は急務の課題である.すなわち,品質のライフサイクルのコスト評価,環境評価,再資源評価について新しいパラダイムを構築することである.以下の項目について研究成果を得た.アイテムの信頼性・保全性の研究は品質ライフサイクル・アセスメントの基本的な研究であり,今後も研究を続けなければならない重要なテーマである.在庫を考慮した保全システムについて研究した.過剰在庫とそれに付随した過剰生産,あるいは在庫不足とそれに付随した生産効率の低下など,在庫システムに関する多くの研究成果を得た.ソフトウェアの信頼性は重要な研究テーマである.品質ライフサイクル・アセスメントの立場からもソフトウェアの信頼性は最も急務なテーマである.ソフトウェア信頼度成長モデルの構築とその評価及び最適ソフトウェア・リリース問題について研究成果を得た.品質ライフサイクル・アセスメントの立場からアイテム(製品)の信頼性及び保全性についての基本的な研究を展開した.今後はより一般的なモデルを構築し,その品質ライフサイクル・アセスメントをより詳細に研究すべきである.本研究が品質ライフサイクル・アセスメントの基礎的研究に貢献した.今日の大量生産システムによって生産されるアイテム(製品)の品質ライフサイクル(生産・消費・廃棄のサイクル)の基本的評価は急務の課題である.すなわち,品質のライフサイクルのコスト評価,環境評価,再資源評価について新しいパラダイムを構築することである.以下の項目について研究成果を得た.アイテムの信頼性・保全性の研究は品質ライフサイクル・アセスメントの基本的な研究であり,今後も研究を続けなければならない重要なテーマである.在庫を考慮した保全システムについて研究した.過剰在庫とそれに付随した過剰生産,あるいは在庫不足とそれに付随した生産効率の低下など,在庫システムに関する多くの研究成果を得た.ソフトウェアの信頼性は重要な研究テーマである.品質ライフサイクル・アセスメントの立場からもソフトウェアの信頼性は最も急務なテーマである.ソフトウェア信頼度成長モデルの構築とその評価及び最適ソフトウェア・リリース問題について研究成果を得た.品質ライフサイクル・アセスメントの立場からアイテム(製品)の信頼性及び保全性についての基本的な研究を展開した.今後はより一般的なモデルを構築し,その品質ライフサイクル・アセスメントをより詳細に研究すべきである.本研究が品質ライフサイクル・アセスメントの基礎的研究に貢献した.今日我々が直面している深刻な問題は大量生産・大量消費によってもたらされた資源の枯渇と地球規模の環境汚染である.化石資源の大量消費は世界のあらゆる地域で環境汚染をもたらした.そして,PCB,ダイオキシンなどはたとえ少量であったとしても人類を含めた地球生態系の存亡に関わる問題として認識されるようになった.国際標準化機構(ISO)は今後の品質ライフサイクル(生産・消費・廃棄のサイクル)を考慮した2シリーズを提案した.(1)ISO 9000シリーズ(2)ISO 14000シリーズISO 9000シリーズは主に国際貿易ルールの基礎となる国際品質保証規格を求めたものである.一方,ISO 14000シリーズは環境マネージメントシステム規格をまとめたものである.本研究においてはISOに準拠した品質ライフサイクルコスト評価を目標に研究を進める.特に,システム全体が動作・故障を繰り返すとき,システム保全のためのいろいろな保全モデルを提案し,コスト概念を導入した期待費用の最小化について論及した.これらの品質モデルは単にハードウェアでなく,ソフトウェアモデルについても論及した.そして,ソフトウェア信頼性モデル,データベースシステムの保全モデルについても適用可能であることを示した.今後はISOに準拠した新しい品質ライフサイクルコストの新しいパラダイムの提案に向けて研究を進める予定である.その第1ステップとして,いくつかの数理モデルを提案し,解析した.次年度の研究の基礎としていくつかの成果をまとめた.今世紀に完成した大量生産・消費の文明社会は地球規模の環境破壊・汚染をもたらした.アイテム(製品)の品質ライフサイクル(生産・消費・廃棄のサイクル)の基本的評価は急務の課題である.国際貿易を円滑に進めるためのISO9,000シリーズはもちろんのこと,地球規模の環境管理システムを目指すISO14,000シリーズの積極的採用によって品質ライフサイクル・アセスメントの新しいパラダイム構築を目指した.コンピュータシステムの自動スリープ機能による省電力化の研究は急務の課題である.定常状態における期待消費電力を最小にする最適スリープ時刻を解析的にもとめ,その効果を数値的に示した.屋内不点故障発生件数を正確に予測するための確率モデルを提案した.更に,ニューラルネットワークを用いて推定を行い,その推定結果は十分に利用可能であることを示した.特に,夏季における電力需要の変動の大きい時期においては確率モデルよりもニュラルネットワークの推定が良く適合していることを示した.品質ライフサイクル・アセスメントの立場からアイテム(製品)の信頼性及び保全性についての基本的な研究を展開した.今後はより一般的なモデルを構築し,その品質ライフサイクル・アセスメントをより詳細に研究すべきである.本研究が品質ライフサイクル・アセスメントの基礎的研究に貢献した.
液相中における反応余剰エネルギーの散逸機構の解明

反応余剰エネルギーの緩和は、液相中での化学反応を理解するうえで非常に重要な過程である。初期の振動励起状態およびそこからの分子内、分子間緩和過程を調べるにはアンチストークスラマン線強度が直接的なプローブとなる。一酸化炭素結合形ミオグロビン(MbCO)の光解離反応では、解離直後に振動励起されたヘムが生じる。われわれはMbCOの光解離状態について、面内振動や面外振動の各モードの振動エネルギー緩和速度を求めた。ニッケルポルフィリンで観測されたようなバンド強度の立ち上がりの遅れは、ミオグロビンヘムではいずれのモードについても観測されなかった。面内振動についてはν_5モード以外は統計的分布の予想値と合うが、ν_5モードの時定数は統計的分布の予想値に比べて3倍程度大きいことがわかった。これはヘムの振動緩和過程において、ν_5モードと他のモードとの間のエネルギーのやり取りが遅いことを示唆している。ν_3、ν_4、ν_6、ν_7モードはいずれもポルフィリン環のπ共役系構成原子の変位を伴う振動であり、互いに非調和性結合が大きいと考えられる。これに対して、ν_5モードはピロール環の炭素原子と側鎖の炭素原子との間の伸縮振動であるため、他の面内振動モードとの間の非調和性結合が比較的小さいと予想され、上述のずれを生む原因と考えられる。また、低波数側に観測された2つの面外振動[ν(Fe-His)およびγ_7モード]はいずれも統計的分布の予想値に比べ小さな時定数を示した。これは面内振動と面外振動との間の非調和性結合が小さいことに由来すると考えられる。このプローブを用い、われわれは一酸化炭素結合形ミオグロビン(MbCO)の光解離状態とニッケルオクタエチルポルフィリン〈NiOEP)の(d,d)励起状態について、金属ポルフィリンの振動エネルギー緩和を調べた。NiOEPのν_4バンドについて、中心波数、線幅の遅延壁間依存性を測定した。いずれの変化も単一の指数関数でうまく表すことができ、時定数はそれぞれ9.6±1.2ps、9.5±3.3psであった。また、MbCOのν_4バンドについても同様の変化が見られ、中心波数、線幅変化の時定数はそれぞれ2.1±0.7ps、1.4±0.8psであった。これらはアンチストークスラマン線強度の時間依存性から求めた振動エネルギー緩和の時定数と非常によく一致した。NiOEPとMbCOでは振動エネルギー緩和速度が5倍ほど異なるにもかかわらず、どちらの分子についても、ストークスバンドの線形が振動エネルギー緩和と同じ速度で変化していることから、観測された線形変化は振動エネルギー緩和に関連していると考えられる。波数のシフト幅が大きいことから、単に低波数側に現れるホットバンドが振動エネルギー緩和に伴い減衰していくという考え方では、実験結果をうまく説明できない。したがって、ν=0→1遷移の振動数が振動エネルギー緩和に伴い変化すると考えられる。その原因としては、他の振動モードとの非調和カップリングがあげられる。また、他のバンドについても調べてみると、いずれも変化の速度はν_4バンドとほぼ同じであるが、変化の大きさはバンドによって異なった。上のモデルと考え合わせると、このバンドによる違いは非調和カップリングの大きさの違いを反映している可能性がある。
CAGリピート伸長による、神経細胞死の組織特異性の解析

(1)DRPLA遺伝子の発現調節を解析するために、まず5'上流域の塩基配列を決定したところ、すでに報告されているHD遺伝子の上流域と極めて類似していた。そこでDRPLAおよびHDについて、相同領域のプロモーター活性を測定して比較し、転写調節因子や薬剤に対する効果に違いを見出した。(2)アポトーシス過程におけるDRPLA蛋白質の限定分解CAGリピート伸長病における神経細胞死とアポトーシスの関係が示唆されている。アポトーシス過程でDRPLA蛋白質は限定分解を受けることを見出し、caspase-3の関与を推定し、切断部位を同定した。さらにDRPLA蛋白質の細胞内局在化と、アポトーシス切断後の細胞内局在化を解析した。(3)DRPLA遺伝子の機能DRPLAと相同性の高いアミノ酸配列を有する、EST-M78755で代表される遺伝子の単離を進め、また、DRPLA蛋白質と会合できる蛋白質の分離を進めている。
高次元代数多様体の分類理論

半安定退化を持つ3次元スキームに対する極小モデルの存在定理が証明できた。当初考えていた正標数の場合だけでなく、混標数の場合、つまり数論的スキームの場合にも同様のことが証明できた。従って、数体上の一般型の曲面に対して、それが半安定退化を持てば、整数環上に定義された標準モデルの存在が結論される。この定理は基本的であり、今後の応用が期待できる。上智大学の並河氏との共同研究では、正規交差を持った既約でない多様体を、滑らかな多様体に変形することを考えた。東工大の加藤氏らによる対数構造の考え方をとりいれると、このような変形がうまく扱えることに気がつき、その応用として、退化した多様体からカラビ・ヤウ多様体が構成できることを証明した。ロシア人のショクロフ氏の論文の付録として発表した短い論文では、任意の3次元末端特異点に対して、期待され得るうちで最も小さな食違い係数を持った例外因子が、実際に存在する事を証明した。この結果は簡単なものではあるが、3次元多様体に関するいろいろな双有理変換が、有限回でストップするといったタイプの議論で、キーになる補題である。