hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
NK・NKT細胞による骨髄移植片拒絶の基礎研究

がん治療において行われる放射線照射、化学療法は、ともに骨髄由来の顆粒球などを減少させる。故に患者は顆粒球減少症に伴う感染の危険にさらされる。これを防ぐためには骨髄移植が一つの方法であるが、移植骨髄の拒絶が問題である。この拒絶には通常のT細胞が関与するのではなくNK細胞が関与すると考えられてきたが、最近の研究からはNK細胞とT細胞の両方の特質を持ったNKT細胞群の関与も示唆されている。本年度の研究では、移植骨髄片の拒絶に関し、NK細胞ならびにNKT細胞(NKR-P1性T細胞)の機能を検討した。マウスのモデル系を用いてF1親の骨髄を拒絶するハイブリッド抵抗性のエフェクター細胞を解析し、以下の点を明らかにした。rag-2ノックアウトマウスではB細胞、T細胞並びにNKT細胞は分化しないが、NK細胞は正常に分化する。本研究においては、3系統のrag-2ノックアウトマウス、すなわちC57BL/6-[KO]rag-2、C3H/HeN-[KO]rag-2、及びBALB/c-[KO]rag-2を用いて2種類の骨髄移植系を検討した。野生型の(C57BL/6×C3H/HeN)F1(C57BL/6×BALB/c)F1ウスにC57BL/6由来の骨髄を移植すると、移植骨髄は拒絶される。一方、(C57BL/6×C3H/HeN)F1[KO]rag-2や(C57BL/6×BALB/c)F1[KO]rag-2マウスにC57BL/6由来の骨髄を移植したところ、やはり移植骨髄は拒絶された。この事実から、移植骨髄片の拒絶には、主としてNK細胞が重要であり、NKT細胞は必須ではないことが明らかになった。
新しい物質輸送測定系の開発と胎盤物質輸送機構及び胎児発育機序の解明

胎児発育機序を胎盤物質輸送と各種成長因子の胎児細胞に与える影響の両面から検討した。1.ヒト絨毛細胞由来細胞株をTranswell(Costar社)に単層培養しアイソトープラベルしたD-グルコースとリ-クマーカーであるL-グルコースを添加し、培養フィルターの反対側の培養液中に放出される物質の放射活性を測定した。Transwellへ隙間なく単層培養可能なことを光顕及び電顕的に確認した。しかしながら本輸送測定システムでは、90%D-グルコースがリ-クすることが判明した。2.ヒト胎児肝より肝細胞の性格を有する細胞株を樹立することに成功した。3.樹立された肝細胞由来細胞株にEGF及び各種カテコラミンを10^<-7>から10^<-11>濃度で投与したところEGFでは濃度依存性のDNA合成の促進がみられ、またカテコラミンでは10^<-8>-10^<-11>濃度では合成促進に働き10^<-7>では抑制的に働くという新知見が得られた。またHGF(Hepatocyte growth factor)2x10^<-5>から2x10^<-0>ng/mlで容量依存性にDNA合成の促進がみられたがカテコラミンに比較しその効果は弱かった。4.羊水中のHGF濃度を測定したところ妊娠中期では12.4±4.5ng/ml、妊娠後期では10.5±6.6と血中濃度に比べ非常に高値を示しなおかつ出生体重と負の相関がみられた。(r=0.47;p<0.05)また胎児肺には多量のHGF受容体が存在することが免疫組織学的検索により明らかとなった。上述したようにヒト絨毛細胞由来細胞株をTranswell(Costar社)に単層培養し胎盤の物質輸送を検討することは能動輸送以外のリ-クが大きいためにその結果を解析する際には注意を要すると考えられる。羊水中に高濃度に存在するHGFは胎児の発育よりむしろ肺を含めた各種臓器の成熟に重要な働きをしていると考えられた。1)ヒト絨毛細胞由来細胞株をTranswell(Costar社)に単層培養しアイソトープラベルしたD-グルコースとリークマーカーであるL-グルコースを添加し、培養フィルターの反対側の培養液中に放出される物質の放射活性を測定した。その結果本輸送システムでは、90%D-グルコースがリークすることが判明した。この原因として細胞の増殖スピードが遅いためTranswellへ隙間なく単層培養できていないことがわかった。従って培養液中にHGF等の増殖因子を添加し再度実験を行っている。2)ヒト胎児肝細胞由来細胞株にEGF及び各種カテコラミンを10^<-7>-10^<-11>濃度で投与したところEGFでは濃度依存性のDNA合成の促進がみられ、またカテコラミンでは10^<-8>-10^<-11>濃度では合成促進に働き10^<-7>では抑制的に働くという新知見が得られた。またHGF,TGFベータも容量依存性にDNA合成の促進がみられた。3)正常妊娠とIUGR及び妊娠中毒症例の母体血および臍帯血の各種アミノ酸濃度が測定したところ正常妊娠では臍帯血/母体血比が約1.5であったがIUGRではこの比が高値をとり妊娠中毒症では低値をとることが判明した。

上述したようにヒト絨毛細胞由来細胞株をTranswell(Costar社)に単層培養し胎盤の物質輸送を検討することは能動輸送以外のリークが大きいために困難であると考えられる。従って良い結果が得られているヒト胎児肝細胞由来細胞株に対する成長因子やサイトカインの影響を検討することに重点を置きたいと考えている。また胎児発育機序に大きな役割を持つ絨毛細胞細胞の増殖機序もあわせて研究する予定である。1.ヒト絨毛細胞由来細胞株をTranswell(Costar社)に単層培養しアイソトープラベルしたD-グリコースとリ-クマーカーであるL-グリコースを添加し、培養フィルターの反対側の培養液中に放出される物質の放射活性を測定した。Transwellへ隙間なく単層培養可能なことを光顕及び電顕的に確認した。しかしながら本輸送測定システムでは、90%D-グリコースがリ-クすることが判明した。2.ヒト胎児肝より肝細胞の性格を有する細胞株を樹立することに成功した。3.樹立された肝細胞由来細胞株にEGF及び各種カテコラミンを10^<-7>-10^<-11>濃度で投与したところEGFでは濃度依存性のDNA合成の促進がみられ、またカテコラミンでは10^<-8>-10^<-11>濃度では合成促進に働き10^<-7>では抑制的に働くという新知見が得られた。またHGF2x10^<-5>-2x10^<-0>ng/mlで容量依存性にDNA合成の促進がみられたがカテコラミンに比較しその効果は弱かった。4.羊水中のHGF濃度を測定したところ妊娠中期では12.4±4.5ng/ml、妊娠後期では10.5±6.6と血中濃度に比べ非常に高値を示しなおかつ出生体重と負の相関がみられた(r=0.47;p<0.05)。免疫組織学的検索により、羊水中のHGFは羊膜より産生され羊水中に分泌されることが示唆された。また胎児肺の肺胞上皮細胞には多量のHGF受容体が存在することが免疫組織学的検索により明らかとなった。このことからHGFは胎児肺のサーファクタント産生に何らかの役割を果たしていると考えられた。
シャルル＝Ｖ・アルカンとユダヤ的なるもの－１９世紀フランス音楽史の再考へ－

採用1、2年目の研究成果を踏まえ、最終年度の研究実績を以下の3点にまとめて報告する。1.アルカンの古典理解に関して、手紙と実際の編曲方法との比較調査をモーツァルトからベートーベンに拡げて実施した。ドイツやベルギーの図書館、アーカイブで当時出版されていた版を収集し調査した。その結果、アルカンはリショー版ではなくペータース版の元になった版の楽想指示を書写したことが判明した。その前提に立てば「モーツァルトは楽想記号を変更してはならないがベートーベンは変更しても残るものがある。」という1852年の手紙の内容と大きく齟齬する。即ちアルカンは実際にはベートーベンではなくモーツァルトにおいて多数変更しているのである。ここにアルカンの古典理解の顕示を通した自己表象戦略の一端が伺える。またF.ヒラーへのアルカンのまだ活字化されていない73通の手紙の判読から、ベートーベンのピアノ協奏曲第3番のカデンツの編曲ではF.ヒラーにアドバイスを求めていたことが判明した。2.アルカンの超絶技巧については、それを多用するアハヴァ・ラバー旋法による作品を演奏する際に、胴体を動かさず反復音型を演奏していたことに加え、ピアノ独奏による交響曲第1番には同時代のリストと比較して借り指、貸し指が極度に少なく、このことが編曲における「交響性」の装置として作用しているという新たな見解を提示した。3.1960年以降のアルカンリバイバルはシオニズムに関わるユダヤ系アメリカ人のみならず、今回のベルギー王立図書館収蔵のコンサート記録等の調査により、1988年を皮切りに穏健派団体を母体とするユダヤ系ベルギー人によっても推進されていたことが明らかになった。このことから、両者においてアルカンのユダヤ性の捉え方に差が見出せる可能性も出てきた。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、ユダヤ系フランス人作曲家のシャルル=ヴァランタン・アルカンにおけるユダヤ性の考察、そしてそれによる19世紀フランス音楽史の再検討を目的とし、本年度はその端緒となる事項の調査を行った。その過程で、具体的な音楽作品を分析する上では、そもそもユダヤというアンブレラタームに頼らず、その内実を具体的な事項に分けて考察する必要に迫られた。そこで研究実施計画からは少し離れ、アルカンやアルカン受容におけるユダヤを、1聖典としての旧約聖書、2地理としての東方的なもの、3民族としてのドイツ(アシュケナジー)的なもの、4態度としてのユダヤ神秘主義的なもの、そして5われわれが持つイメージとしてのユダヤの五つに分類し、当初の研究計画をこれらと柱の下に再編成した。また、アルカンにおけるユダヤ性について何らかの知見が得られたとして、それがアルカンのユダヤへの眼差しに特異的なものであるかを考察するための比較対象が必要と考えた。そこで6アルカンにとってはユダヤに並び立ったとも考えうる権威としてのウィーン古典派に、アルカンがいかなる態度で接していたのかにも、調査範囲を広げることにした。本年度はとりわけ、1に関してアルカンによる旧約聖書の翻訳と音楽化に特異な音韻構造が見られることや伝統的なシナゴーグの聖書解釈からズレが見られること、並びに2に関して当時東方風と考えられていたユダヤ旋法の使用法が当該旋法の成立背景の中での位置付けをめぐり、他の人物との比較も交えて調査を進め、成果の一部を国際音楽学会及び日本音楽学会にて発表した。また、3のドイツという柱に関しては、リストがアルカンの音楽にシューベルトとの親和性を認めていたのではないかという観点から、具体的な音楽作品及び手紙資料の再検討を行い、その成果を国際美学会にて発表した。上述の理由で研究の組み直しを行ったため、進んだ部分と遅れた部分がある。以下に示す通り、計画より進んでいる部分の方が多いと考え、(1)を選択した。遅れたのは、新たに4で神秘主義の柱に組み直した、アルカンの《大ソナタ》とダヴァール概念の関わりについてである。この概念に関する先行研究の収集は進んでいるが、アルカンとは文脈が異なるものが多く、参考にしづらい状態にとどまっている。しかし、《大ソナタ》そのものの楽曲分析は捗っており、その分析結果は幸い、後述の通り別文脈で有効な比較対象となっている。進んでいるのは、1で旧約聖書の柱の下で進めているアルカンによる聖書翻訳と音楽化に関する調査、及び2で東方の柱の下に組み直したユダヤ旋法に関する調査である。旧約聖書に関しては、アルカン訳と同様の工夫が認められる翻訳を、ローゼンツヴァイクとブーバー共訳版など、ドイツ語にまで範囲を広げて探索している。また、アルカンによる聖書の音楽化では、《大ソナタ》など他の典拠テクストを持つ作品と比べ、主題の変奏法に大きな違いが見られることも明らかとなった。ユダヤ旋法に関しても、アルカン作品での探索が進み、またその用法を文脈化可能な先行研究の調査も順調に進んでいる。特にイーデルソーンによる議論、それを受けたタルシによる議論等から、アルカンによるユダヤ旋法の用法を歴史的に位置付けることができた。また、ナタン等の他のユダヤ人音楽家におけるユダヤ旋法との比較分析も徐々に進んでいる。また学振採用以前には、アルカンとドイツ語圏の関連に関する研究を行っていた。思いがけぬ進展として、その研究が3のアシュケナジーという共通項から、そして6で一つの比較対象として、学振の課題研究に結び付き始めている。

5のイメージとしてのユダヤに関しては、近年のアルカン受容における肖像画や写真の使用例の収集が、当初の予定通りのペースで進んでいる。当初アルカンとユダヤに関する四つの観点から研究を進めたが、《大ソナタ》とCDジャケットに関する事項は調査を中止した。前者はその序文と関連すると考えたダヴァール思想の19世紀パリでの詳細に不明点が多いため、また後者そのデザインが本課題と無関係な慣例に従う場合が多かったためである。これらに代わり、次の三つの事項の調査に注力した。一つ目はアルカンの古典理解である。モーツァルトに関し、アルカンの手紙と編曲処理に大きな乖離が浮上し、古典理解の顕示を自己表象戦略と解釈し表象文化論学会で発表した。古典を武器に他者を欺いたことから、アルカンの手紙全体に疑問が生じ調査したところ、非ユダヤ人への手紙には多少の嘘が見出された。非ユダヤ人を欺くことを躊躇しないタルムードのユダヤ至上主義が意識されるため、ユダヤ人への手紙にはどれほど嘘が含まれるのか、比較のため調査中である。二つ目はアルカンの超絶技巧である。アハヴァー・ラバー旋法の多くが超絶技巧を要する曲に見られたため、アルカンの超絶技巧には他にユダヤと関連する側面がないか調査した。胴体を動かさずに反復する技巧等が他のユダヤ人作曲家と共通して見出されており、使用技法のカタログ化を進めている。また先述の特質に関し、国際音楽図像学会にて研究結果を発表した。三つ目は1960年代以降のアルカン受容である。R・ルーウェンソールによるアメリカのアルカン復興を支えた人物に、ユダヤ人音楽家や批評家、極右シオニズム団体に資金提供された人物、音楽上のユダヤ至上主義者等が浮かび上がり、ユダヤ人と支援者たちが復興の鍵を握ったことが判明した。また現代でも、マソルティーの研究者D・コンウェイがウィキペディアでアルカンのユダヤ性を強調する方向に編集を行うなど、復興の背後にいるユダヤ人の把握が進んだ。また《バビロンの流れの畔で》に関する以前からの研究結果を論文発表した。本研究においては、当初研究対象とする予定であったアルカンの《大ソナタ》及びCDジャケットに関する内容の調査を、研究実績の概要で述べた理由から中止せざるを得なかった。中止を決めるまでにこれらの内容の調査に費やしたリソースが実らぬ形となったことが、計画以上に進展させることができなかった理由である。しかし、昨年度はアルカンにおけるユダヤ音楽との比較対象としてしか位置づけていなかったアルカンにおける古典理解の調査から、タルムード的なユダヤ至上主義と関連し得る非ユダヤ人への欺きという側面が見出されたり、またCDジャケットの調査を通して既に人物名等の把握が進んでいたアメリカでの1960年代以降のアルカン受容を支えた人物に、多くのユダヤ人やその支援者たちが浮上した等、研究開始時点では予期していなかった論点が見出されたことは、思わぬ進展となった。
遷移金属触媒反応による水,水酸基許容のC-C結合形成反応の開発

1)イソプレンユニットの連続連結反応の開発自然界ではisoprenyl-OPPを原料として、酵素を触媒とする多彩な天然化合物が合成されている。ニッケルを触媒、Et_3Bを還元剤として用いるジエンによるアルデヒドのホモアリル化は、水、水酸基に対して許容である。この極めて有用な反応特性を利用して、その応用的な展開を計る。アルデヒドとしては、普通のアルデヒド、および水中でしか安定に存在しえないアルデヒド(ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、グルタルアルデヒドなど)を検討対象とし、多大の成果を得た。また、アルドイミンに対する反応にも成功した。2)Pd・Et_3B触媒系による、トリプトファンのアリルアルコールによる環化・アリル化の開発Pd・Et_3B触媒系を用いた、アリルアルコールによる選択的なインドールの3位でのアリル置換反応を既に報告した。同反応をトリプトファンに適用すると、環化・アリル化が一挙に進むことを最近発見した。生成物は単一で、Flustramine Bなどのピロロインドールアルカロイド類の全合成に応用可能である。この反応の特徴は1)アリルアルコールを直接アリルカチオン源として用いること、2)二種類存在するアミノ基を保護することなく、また、これらのアミノ基は最終生成物として(アリル化されることなく)フリーな形で得られる。アリルアルコールの種類、トリプトファンの置換様式を種々変えて、この反応の一般性や天然生体機能分子の合成を検討するとともに、有用含窒素、含酸素複素環化合物やフェノール類のアリル化をも検討し、多大の成果を得た。2-メチレン-1,3-プロパンジオールの双極活性化も検討する。1)ニッケル触媒による、ジメチル亜鉛、アルキン、1,3-ジエン、アルデヒド、アミンの1:1:1:1:1連結反応、および1:1:2:1:1連結反応を開発した。前者は芳香族アミンを用いた場合に選択的に進み、後者は脂肪族アミンを用いた場合に選択的に進む。この反応では、反応系中でアミンとアルデヒドから調製したアルドイミンにジメチル亜鉛、アルキン、1,3-ジエンが求核攻撃し、一挙に上記反応が選択的に進行する。触媒反応としてニッケルのみを用い、助触媒を必要とせず、また、水存在下、室温で進むなどの合成的メリットの高い反応である。さらに、アルドイミンはカルボニル化合物としては最も反応性の低い官能基であるにも拘わらず、高収率で多成分連結反応が得られることは画期的である(JACS, 2006, 128, 6332-6333)2)ニッケル触媒によるジメチル亜鉛、ω-ジエンイン、アルドイミンの反応を検討した。ω-ジエンインのアルキン部分にジメチル亜鉛が共役付加し、ジエン部分で環化し、ついでイミンに求核付加するという、効率的な環化-求核反応が進むことを明らかにした。この際、遠隔位(1,5-)の高い立体選択性がみられた。反応系中でアミンとアルデヒドから調製したアルドイミンを用いた。遠隔位(1,5-)立体選択性はアルデヒドで見られたものとは逆転したものであった(Chem.Commun.2006, 2813-2815).3)パラジウムを触媒として、トリエチルホウ素存在下、アリルアルコールと1,3,5-ベンゼントリオールを反応させると、2,4,6-位にヘキサアリル化が進むことを見いだした。ナフトールやピロールでも同様のアリル化反応が進む。ヘキサアリル-1,3,5-シクロヘキサノンは対称性の良いオレフィン部位に富んだ化合物でポリマーのリンカーとして、またデンドリマーや機能性物質合成の原料として有用である。
医療サービスにおけるデザイン導入による待合環境改善の研究

近年、我が国の医療機関では、患者のニーズに応えるために、経営上の課題として医療活動の効率化、患者満足獲得の実現が求められている。しかし、患者が不満を示す項目は、診察までの待ち時間や診察時間が上位を占めている。本研究は、患者およびメディカルスタッフの双方の視点による、診察の待ち時間や待合空間に関する改善要素を明らかにし、デザインの視点による改善策を講じることで患者の不満減少に貢献することを目的とする。このことは、医療活動効率の向上にも連動し、デザインが医療経営に資すると考える。
医薬品・医療機器の費用対効果評価におけるNDBの活用可能性の検証

本研究は、医薬品・医療機器の費用対効果評価におけるNDB(ナショナル・データベース)の活用可能性の検証と課題の抽出、NDB以外のデータの必要性の検討を行うことを目的として実施し、具体的事例として白癬菌抗原キット、及び主に乳がん手術後の乳房再建に用いられるティッシュ・エキスパンダー及びインプラントについて、NDBデータを用いて費用対効果評価を行う。公衆衛生上の大きな課題である公的医療保険財政の悪化を抑制し、限られた資源配分を行う手法として注目されている費用対効果評価をいち早く実施すること、またその分析にNDBという悉皆性の高い二次データを用いて実施する方法論を構築する点で独創的である。本来調査対象によって費用対効果評価研究の分析手法は異なるが、NDBを用いた標準的な分析手法を開発する点は政策的意義も大きい。平成30年度は、まず白癬菌抗原キットの費用対効果評価について分析環境の整備および先行研究に関する調査を行った。NDBの利用について厚生労働省に申請を行った結果、個票の利用について申請が認められたが、研究代表者の研究機関転出に伴って、NDBの保管・解析環境にも変更が発生したことから、改めて厚生労働省に利用申請をおこなった結果、有識者会議の審査の結果、利用が承認された。NDBデータの保管・解析環境構築は整っており、データを受領次第、解析を実施する予定である。また、乳がん手術後の乳房再建に用いられるティッシュ・エキスパンダー及びインプラントについて費用対効果評価を行うため、乳がん手術後の患者のQOL測定に向けた準備として、先行研究収集及びQOL測定の調査設計を実施した。次年度の前半には、QOL測定調査を実施する予定である。研究者の所属が異動したことにより、NDBの保管・解析のための環境再構築及び利用申請を再度実施した。また、NDBの提供が認められた後も、実際にデータ提供されるまで、当初想定された期間よりも時間がかかっていることから、研究解析の着手に時間がかかっていることから、課題の進捗が遅れている。しかし、保管・解析環境はすでに構築が終了しており、次年度はデータの入手と共に解析を進める予定である。白癬抗原キットの費用対効果評価については、NDBの利用について認められているため、データの入手を受けて解析を進め実行する。また、人工物を用いた乳房再建の費用対効果評価に向けたQOL調査を次年度前半に実施し、その結果について発信する。平成29年度は、主に白癬菌抗原キットの費用対効果評価について準備を行った。具体的には臨床症状による鑑別診断が新たに承認された白癬菌抗原キットに置き換わることで「偽陽性」の件数が減少し、不要な治療が削減されることを想定した費用最小化分析を実施する。過去の研究では、爪白癬の患者数や治療にかかる医療費については、様々なデータを外挿する必要があったため、NDBを用いることでリアルワールドデータに基づいた患者数や医療費を推計することが可能となるため、より妥当性の高い検証が可能となる。本年度は、NDBを用いた解析を行うための環境の整備及びデータ利用に掛かる申請を行った。研究者の所属が異動したことにより、NDBの利用のための環境構築を再度行う必要が生じた。また、これに伴い、利用申請を再度行う必要が生じたため、解析の実施が当初の想定より遅延している。

また、乳がん手術後の乳房再建に用いられるティッシュ・エキスパンダー及びインプラントについて費用対効果評価を行うため、乳がん手術後の患者のQOL測定に向けた準備として、先行研究収集及びQOL測定の調査設計を実施した。次年度の前半には、QOL測定調査を実施する予定である。研究者の所属が異動したことにより、NDBの保管・解析のための環境再構築及び利用申請を再度実施した。また、NDBの提供が認められた後も、実際にデータ提供されるまで、当初想定された期間よりも時間がかかっていることから、研究解析の着手に時間がかかっていることから、課題の進捗が遅れている。しかし、保管・解析環境はすでに構築が終了しており、次年度はデータの入手と共に解析を進める予定である。白癬抗原キットの費用対効果評価に向けて、現在NDBの利用申請手続きを再実施しており、平成30年度中の解析及び成果の発信を行う。また、平成30年度には、人工物を用いた乳房再建の費用対効果評価に向けた調査を実施する。白癬抗原キットの費用対効果評価については、NDBの利用について認められているため、データの入手を受けて解析を進め実行する。また、人工物を用いた乳房再建の費用対効果評価に向けたQOL調査を次年度前半に実施し、その結果について発信する。先に述べたとおり、研究代表者の所属異動に伴い、NDBの利用申請を再度行う必要が生じたため、データの利用開始が遅延した。そのため、その解析や解析結果の検討、および学会等における結果の報告が次年度に繰り越されたためである。その結果として、解析に係る物品購入、学会発表にかかる出張旅費などの利用が次年度使用額として繰り越されることになった。なお、研究代表者は既に新しい研究施設に於いて研究を開始しており、データ解析環境等の整備を終えているため、2018年度には解析を進めることが可能である。研究代表者の異動に伴ってNDBの提供時期が遅れたことにより、解析のタイミングに遅延が生じたことに伴って、研究費の執行も遅延している。次年度、QOL調査の実施及び、研究結果の発信に伴って、研究費の執行を行う予定である。
緑藻クレブソルミディウムのペルオキシソームと微小管のGFPによる可視化

緑藻クレブソルミディウムのペルオキシソームと微小管のGFPによる可視化を目的として,パーティクルボンバードメント法を用いたGFPマーカー遺伝子の導入を試み、GFP蛍光を発する細胞の有無を調べたところ,ミカヅキモのCAB1プロモーターまたはCMV35Sプロモーター、0.4 μmの金粒子、ガス圧450psi,金粒子の細胞までの到達距離12cmの条件でGFP蛍光を発する細胞が2個確認することができた.緑藻クレブソルミディウムのペルオキシソームと微小管のGFPによる可視化を目的として,パーティクルボンバードメント法を用いたGFPマーカー遺伝子の導入を試み、GFP蛍光を発する細胞の有無を調べたところ,ミカヅキモのCAB1プロモーターまたはCMV35Sプロモーター、0.4 μmの金粒子、ガス圧450psi,金粒子の細胞までの到達距離12cmの条件でGFP蛍光を発する細胞が2個確認することができた.緑藻クレブソルミディウムのペルオキシソームと微小管の細胞周期における動態をGFP等によって可視化して明らかにすることが本研究の目的である.初年度の計画は,クレブソルミディウム細胞にgfp融合遺伝子を導入する方法としてパーティクルーボンバードメント法を試み,その条件を見つけることであった,パーティクルーボンバードメント法に用いる金粒子のサイズ,金粒子を撃ち込む際の圧力,マクロキャリアから試料までの距離これら3つの変数の組み合わせについて検討した.しかし,これまでのところ,ほとんどの組み合わせについて行ったが,GFPが発現していると思われる細胞は3例,そのうち明らかに発現していると判断できたのは1例のみであった.発現レベルが低いために,gfp融合遺伝子が導入されていたにもかかわらず識別できなかった可能性もある.しかし,形質転換細胞がわずかであったとはいえ,この結果は,クレブソルミディウムで形質転換が可能であることを示しており,一定の成果であったと言える.2年目の23年度では,発現強度の高い形質転換体を得るために,プロモーターを改変したgfp融合遺伝子を用いてパーティクルーボンバードメント法を再度試みる.また,電気穿孔法による形質転換も行う.この方法に必要なクレブソルミディウム細胞のプロトプラストは,22年度中に,高い効率で得られることを確かめており,実験の準備がすでに整っている.また,GFPによる可視化による観察の信頼性を高めるために,蛍光抗体法による可視化も並行して行うことが必要と考え,22年度では蛍光抗体法による微小管の可視化も行い,細胞周期における微小管の動態を明らかにし,終期において微小管が分裂面に垂直に太い束を形成することなど新知見が得られた.終期の微小管の太い束は娘核の移動とペルオキシソームの分裂・分配において機能していることが示唆された.緑藻クレブソルミディウム(Klebsormidium flaccidum)は,細胞が一列につながった糸状の藻である.細胞内に核,葉緑体,ペルオキシソーム(マイクロボディ)が1個ずつ,そして少数のミトコンドリアを持ち,細胞は非運動性である.したがって,細胞周期におけるオルガネラの動態を,顕微鏡下で同一の生細胞で連続的に観察することが可能である.また,急速凍結固定が容易で,微細構造を電子顕微鏡によって高解像度で観察することもできる(Honda & Hashimoto, 2007).本研究の目的はクレブソルミディウムのペルオキシソームと微小管のGFPによる可視化である.この目的の中で最も根幹をなすのが,この生物における形質転換法の確立である.藻類ではシロイヌナズナなどとは違って,一般に形質転換が容易ではなく,形質転換法が確立している種は少ない.初年度(22年度)において,パーティクルボンバードメント法を用いたDNA導入実験によりble-cgfp遺伝子が発現した一過性形質転換細胞が見出された-その数は僅かでGFPの発現レベルも低かったが,クレブソルミディウムの形質転換が可能であることを示唆しており,重要な成果であった.この成果を踏まえ,23年度はble-cgfp遺伝子の発現レベルと一過性形質転換体の出現率を高めることに主眼を置いた.そのために,パーティクルボンバードメント法を行う際の,金粒子のサイズやDNAを金粒子に付着させる条件,そしてGFP遺伝子に連結するプロモーター領域などについてさらに検討した.その結果,金粒子が細胞内に入り,期待通りに核から(用いた融合遺伝子の産物は核内に局在することが期待される)GFPの蛍光が発している細胞が見出された.出現率は高くはないものの,初年度に見出された形質転換細胞に比べれば,その率もGFPの発現レベルも増加し,今後の進展が期待された.クレブソルミディウムの形質転換系確立のため,前年度の結果を踏まえて,その問題点を検討した.GFP融合タンパク質をマーカーとしたとき,形質転換体選別の際、細胞の加齢やボンバードメント法で金粒子が撃ち込まれた時に発する自家蛍光が形質転換体を識別する上で大きな障害となった。そこで以下の検討を行った.(1)自家蛍光像と細胞の状態を比較分類して形質転換体を選別するための判断基準の一つとした.(2)金粒子が小さいほど細胞の傷害も低減され,自家蛍光も弱くなると期待して直径0.6μmのものだけでなく,0.4μmのものも試みた.また、撃込みの条件との組み合わせについても検討した.(3)また,薬剤耐性遺伝子をマーカーとして,植物で広く用いられているアグロバクテリウムを用いた形質転換法も試みた.

その結果、(1)については、擬陽性の蛍光像として3つのパターンを同定し,選別の際にそれらの蛍光像を示す細胞を効率よく除外することが可能になった.(2)については、直径0.4μmの金粒子を用い,プロモーターとしてミカヅキモCAB1またはCaMV35Sを用いた条件で,今のところ頻度は低いが,形質転換体と考えられる細胞が得られた.使用したマーカーのGFP融合タンパク質は核内に局在することが期待されたが、実際その通りであった.(3)については,薬剤耐性を示した細胞にマーカー遺伝子が実際に導入されているかどうかをPCR法で調べたが、今のところ検出されておらず、この方法で形質転換体が得られたという結論は得られていない。また、予備培養および選択培地の組成が異なると、それ自体で抗生物質耐性に差が生じることがわかり、選別法そのものも再検討する必要があることが分かった.以上,頻度は低いものの,上記の条件でクレブソルミディウムの一過性の形質転換が可能であることが示され,安定形質転換体作出への道が開かれた.形質転換が可能であることは示すことができたが,今までのところ,形質転換細胞の出現率と発現レベルが高くない.ペルオキシソームや微小管をGFP蛍光によって可視化するために必要なレベルの,形質転換細胞の出現率と発現が可能な形質転換法の確立に時間を要している.24年度が最終年度であるため、記入しない。24年度においては,形質転換の条件を以下のようにさらに検討する.(1)これまで行ってきたパーティクルポンバードメント法の諸条件のさらなる検討.(2)アグロバクテリウムを用いた形質転換を試みる.(3)形質転換細胞を選別するために,導入する遺伝子コンストラクトにはフレオマイシン耐性遺伝子が組み込まれているが,効率よく選別するために,培地の条件等をさらに検討する.(4)クレブソルミディウムの死んだ細胞やダメージを受けた細胞からはGFP蛍光とある程度紛らわしい自家蛍光が出るため,それらを排除または容易に区別する方法を検討する.形質転換法の確立を目指すことと平行して,細胞周期におけるペルオキシソームと微小管の関わりについての,電子顕微鏡観察による研究も進める.24年度が最終年度であるため、記入しない。
代数幾何学における正標数還元手法の研究

今年度は、正標数還元に関係する研究として、極小対数的食い違い係数に関する逆随伴公式を正標数還元技術を用いてアプローチする方法を考えた。これには理由があり、逆随伴公式的性質はF特異点においてScwede,高木俊輔らの研究らによりよく振る舞うことは知られている。この研究は本研究のアバンダンス予想の研究につながる極小モデルの存在問題に関連する。その良い性質を正標数還元で抽出できないか?というのが希望である。大域的F正則多様体についての研究も昨年に引き続き行った。大域的F正則多様体について消滅定理および単射性定理などは割と満足のいく形まで得られたと思う。従った次はそのカテゴリーの中で固定点自由化定理および錐定理を示すことが目的となってくる。そのためにはF特異点のセンターについての研究が不可欠になってくるであろう。また飯高加法性予想の対数化の研究として対数的なvariationの基本的な性質の研究を行った。これを用いてVihwegによる加法性C_{n,m}^+の対数化をすることができ、川又氏によるファイバーがgood minimal modelを持つ場合の解決の対数化を目指すことができることとなる。現在もその対数化に挑戦しているところである。今年度は、この研究題目と関連したこと次の研究集会で発表した:平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。今年度は、研究計画に書いた飯高加法性予想に関する川又の定理の対数化の研究は、とりあえず対数的フィーベック変量の定義は完成した。さらに川又の定理の対数化を証明するには、LC自明ファイブレーションに対するその変量の比較が問題であることまで明らかにできた。正標数の極小モデル理論の研究として、曲面特異点に関するフロベニウス正則性についての研究をPaolo Cascini氏とKarl Schewede氏と共同で行った。結果、有限集合を固定するとその集合に依存して十分大きな素数pに対して,その集合に係数に持つ標数p上の川又対数的端末2次元特異点はフロベニウス正則であることを証明した。アバンダンス予想の研究として当時鹿児島大学(現東北大学)の松村慎一氏と多重標準系に対する拡張定理の研究を行った。それにより、もし標準因子によい計量が作れれば、アバンダンス予想の証明に必要な拡張部分が解決することを明らかにした。そのよい計量とは、ルロン数がいたるところで消えているような計量で、非特異エルミート計量ならそれを満たしている。その後も、そういう計量の構成に松村氏と挑んでいるがまだ完成とはいたっていない。さらにLille大学のAmael Broustet氏と非自明な偏極自己準同形射を持つ代数多様体を調べる共同研究を始めた。その結果、「森ドリーム空間で非自明な偏極自己準同形射を持てば、それは対数的カラビ・ヤウ型多様体である」ことが証明できた。この結果を含めたpreprintは今準備中である。今年度、当初の予定にはなかった有限体上3次元のlog Fano多様体の有理点の研究をImprial CollegeLondonの田中さんと東大数理の中村さんと行い論文としてまとめてArXivに投稿しある学術雑誌に投稿中である。標数7以上の有限体上の三次元対数的ファノ多様体の有理数の個数についての研究を行った。実際はこの研究のために川又対数的特異点のWitt有理性とそういうファノ多様体が有理鎖連結であることを研究した。この研究は当初の予定にはなかったかが正標数上の高次元代数幾何学の消滅定理についての考察を含んでいるのでとても満足している。またLille第一大学のAma\"el Broustetと非自明な自己準同型射を持つ代数多様体の構造の研究を昨年度に引き続き行い曲面の場合にそれが対数的カラビ・ヤウになることを証明したが、まだ結果をまとめていない。この証明には極めて正標数上のフロベニウス写像の振る舞いからのインスピレーションを受けている。結果自体は標数0のものだが正標数上の代数幾何に関連していると言って良いと思う。また今年度、共同研究On rational connectedness of globally F-regular threefoldsがAdv. Math.、Surface of globally F-regular and F-split typeがMath. Ann., Uniformbounds for strongly F-regular surfacesがTrans. Am. Math. Soc.から出版された。当初の予定とは違う方向には行っているが,予想外に面白いことがわかってきたので順調であると思う。正標数上の代数幾何学に十分貢献できてると思う。2016年度行った主な研究活動はLille第一大学のAma\"el Broustetとの共同研究の非自明な偏曲自己準同型射を持つ多様体の対数的カラビ・ヤウ構造の研究をまとめて発表した。またこの年Caucher Birkar氏によるBorisov--Alexeev--Borisoの特異点付きのFano多様体の有界性についての予想(BAB予想)の証明が発表され、その証明の検証を行った。これは玉原代数幾何学サマースクール2016およびWorkshop on Singularities, linear systems, Fano varietiesで発表した。これは当初予定していなかった研究活動であるが、極めて重要な仕事であった。

それの応用として、Batyrevの錐予想の対数的標準対への拡張の研究を行った。BAB予想の肯定的解決を受けて、その後はフリップの停止問題について研究を始めた。これは当初の予定にはなかったが申請書にあるアバンダンス予想の解決に向けて重要なステップである。また国内外合わせて、17講演行った。また今年度高木俊輔氏との共同研究"Surface of globally F-regular and F-split type" Math. Ann. 364 (2016), no. 3-4, 841--855.が出版された。当初正標数還元の研究を主として考えていたが、業界的な進歩が多様体の有界性について研究にシフトしていった。そのため方向転換が必要となったが概ね最終目標のアバンダンス予想のためには進展しているといえる。今年度は反標準因子の正値性の研究を行った。その結果、Hacon--MckernanのQuestionに肯定的な解答を江尻祥氏との共同研究で得られた。それをまとめたのが論文"Nef anti-canonical divisors and rationally connected fibrations"であり、Arxivに置き、投稿済みである。Hacon--MckernanのQuestionとは反標準因子の飯高次元を極大有理連結ファイブレーションのファイバーの次元で上から抑える不等式である。この論文では、Viewegの弱正値性定理が証明の鍵となる。またこの論文では任意標数上のさらに非特異射についての江尻氏の問題も解決している。正標数上の場合、ここでは、F特異点についての江尻氏の正値性定理を用いた。今年度は、モスクワ、北京、台北、イスキア、ソウル、大阪市立大、関西学院大で講演をおこなった。また錐定理の拡張の研究をおこなったがこちらはまだ進行中である、さらに極小対数的食い違い係数(MLD)のvariantの研究を行ったが、こちらはまだまとめるには至らない。さらに来年度以降そのあたりの研究を深めていきたいと思っている。F正則多様体の単射性定理は、将来的に対数的ファノ多様体の特徴ずけに役にたつ可能性を秘めている。この研究はすでに部分的に得ていたが、今年度完全な満足のいく形で証明することができた。これは大きな進展と言える。また江尻氏との共同研究は当初の予定にはなかったが、反標準因子の飯高予想の類似物的な雰囲気がある。さらにこれは相対標準因子の直像層の正値性が使われており、新しいバージョンの正値性定理を示すことができたので、これは当初の予定より進展していると言える。今年度は、正標数還元に関係する研究として、極小対数的食い違い係数に関する逆随伴公式を正標数還元技術を用いてアプローチする方法を考えた。これには理由があり、逆随伴公式的性質はF特異点においてScwede,高木俊輔らの研究らによりよく振る舞うことは知られている。
不育症における解毒酵素遺伝子(Cyp1A1,GSTs)多型に関する解析

新潟大学医歯学総合病院産婦人科を受診した不育症症例(妊娠はするものの流産を繰り返す症例)に対し、一般的な原因検索を実施しているが、これにより原因が不明であると判断された症例に対し、研究に関する十分な説明を実施。同意が得られた症例を対象として研究を進めてた。対象患者に対し、アルコール摂取、タバコ吸引、コーヒー摂取などについてのアンケート調査を行うとともに、末梢血を採取、単核球を分離し、genomic DNAを分離した。このDNAについてCytochrome P450(CYP1A1),Glutathion-S-transferase-π(GST-π),GST-μ、GST-θの各酵素の遺伝子多型を判定した。これらの判定はPolymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP法)により実施した。すなわちGenomic DNAをそれぞれの遺伝子の多型領域に設定したprimerにより増幅、増幅されたDNAをCYP1A1については制限酵素であるNco Iで、GST-πについてはAlw26Iにより切断し、切断されたDNAをpolyacrylamide上で電気泳動、切断片の長さにより型を判定した。GST-μ,GST-θについてはPCRによる増幅の後、電気泳動を行い、バンドの発現の有無により、型を判定した。研究期間中に、原因不明不育症症例44例、コントロール症例(流産歴のない健常婦人)30例について各遺伝子の型を判定した。両群間で遺伝子頻度を比較したところ、GST-π(Ia,Ibの2種類の多型あり)について、症例においてIaの頻度が有意に高いという結果を得た。今後さらに症例を増やしアルコール摂取、タバコ吸引などとの関連性を確認することが重要と判断される。同意が得られた症例を対象として研究を進めている。対象患者に対し、アルコール摂取、タバコ吸引、コーヒー摂取などについてのアンケート調査を行うとともに、末梢血を採取、単核球を分離し、genomic DNAを分離している。このDNAについてCytochrome P450(CYP1A1),Glutathion-S-transferase-π(GST-π),GST-μ、GST-θの各酵素の遺伝子多型を判定している。これらの判定はPolymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP法)により実施している。すなわちGenomic DNAをそれぞれの遺伝子の多型領域に設定したprimerにより増幅、増幅されたDNAをCYP1A1については制限酵素であるNco Iで、GST-πについてはAlw26Iにより切断し、切断されたDNAをpolyacrylamide上で電気泳動、切断片の長さにより型を判定している。GST-μ,GST-θについてはPCRによる増幅の後、電気泳動を行い、バンドの発現の有無により、型を判定している。現在まで、原因不明不育症症例33例、コントロール症例(流産歴のない健常婦人)20例について型を判定している。次年度にはさらに症例数を増やし、各遺伝子多型の両群間における有意差の有無を解析することを予定している。このDNAについてCytochrome P450(CYP1A1), Glutathion-S-transferase-π(GST-π),GST-μ、GST-θの各酵素の遺伝子多型を判定した。

これらの判定はPorymerase chain reaction-restriction fragment length polymolphism(PCR-RFLP法)により実施した。すなわちGenomic DNAをそれぞれの遺伝子の多型領域に設定したprimerにより増幅、増幅されたDNAをCYP1A1については制限酵素であるNco Iで、GST-πについてはAlw26Iにより切断し、切断されたDNAをpolyacrylamide上で電気泳動、切断片の長さにより型を判定した。GST-μ,GST-θについてはPCRによる増幅の後、電気泳動を行い、バンドの発現の有無により、型を判定した。研究期間中に、原因不明不育症症例44例、コントロール症例(流産歴のない健常婦人)30例について各遺伝子の型を判定した。両群間で遺伝子頻度を比較したところ、GST-π(Ia,Ibの2種類の多型あり)について、症例においてIaの頻度が有意に高いという結果を得た。今後さらに症例を増やしアルコール摂取、タバコ吸引などとの関連性を確認することが重要と判断される。
疾患モデル動物を用いた多段階発がん研究:腎発がんの遺伝情報システム

遺伝性ラット(Tsc2およびBhd変異体)腎発がんの研究から、その過程で発見されたERC遺伝子が、ヒト「アスベスト・中皮腫」の診断・腫瘍マーカーの開発に進み、抗体治療を含めた、新規治療法の開発へと展開した。さらに、ヒト結節性硬化症の原因遺伝子産物であるtuberin(Tsc2産物)は、ラパマイシン感受性mTOR経路を抑制する機能を持つ。この経路の遮断による結節性硬化症の臨床治験が試みられているが、必ずしも著効を示す結果は得られていない。我々はtuberinの機能の全体像を明らかにした。新たな治療・予防法の標的となる経路の解明に資する。個体レベルで、リファインされたユニークな疾患モデル(特に腎がんモデル)を用いて、「遺伝情報システム異常と発がん」を発がんの起始遺伝子を起点とした遺伝子ネットワークの異常ととらえ(発がんの連盟的首位性の分子機構の解明)、その特異点の分子を解析し、ヒトがんの治療に資する。Tsc 2 mutant(Eker) ratに対するrapamycin(mTOR阻害剤)の効果を確認した。重要なことに、mTORとは異なるsignalの存在することも明らかにした。また、発がん過程に高発現してくる、新規NibanおよびErc遺伝子を発見し、そのknockoutマウスの作製に成功し、機能解析を進めている。Erc遺伝子産物は血中に分泌されることが明らかとなり、ELISA測定系を開発した。腫瘍マーカーとしてEker ratの血液診断が可能となった(投稿中)。ヒトELISA測定系も開発した(投稿中)。正常では、ラット、ヒトとも、中皮細胞特異的遺伝子であることが判明し、最近の大きな社会問題である「アスベスト・中皮腫」の血液検査でも注目されている。Nihonラットの原因遺伝子(Bhd遺伝子;新規の腎がん抑制遺伝子)の同定に成功した。BhdがNihonラットの原因遺伝子であることを最終的に証明すると共に、個体レベルでBhd遺伝子の機能を解析する実験系を確立するため、野生型Bhdトランスジェニックラット(Bhd遺伝子プロモーターによる発現系)の系統を樹立した。導入遺伝子により、NihonラットのBhdヘテロ変異体の腎発がんとホモ変異体の胎生致死が完全に抑制されることがわかった(in press)。腎発がん過程に高発現してくる、新規NibanおよびErc遺伝子を発見し、そのknockoutマウスの作製にも成功し、個体レベルでも機能解析を進めた。さらに、新規の腎がん抑制遺伝子(Bhd)の機能解析を進めた。Niban産物の機能はPERK/eIF2aとmT0R/S6K1/4E-BP1という異なる二つの翻訳制御系に関わり、全体として翻訳を促進する方向に機能することが示唆された。すなわち、NibanはERストレスによって発現される一方で、ストレスによる蛋白翻訳抑制に桔抗する、ある種の負のフィードバック機構の一員として働い、ている可能性が考えられた。また、HeLa細胞ではNibanの発現抑制により、細胞死が促進されることを見出している。これらの結果から、Nibanはストレス環境下において細胞の生存に重要な役割を担っている可能性が示唆された。腫瘍マーカーとしてEker ratの血液診断が可能となった。ERC遺伝子産物は、正常では、中皮細胞で発現しており、ヒト中皮腫の腫瘍マーカーとして可能性を示した。Bhd産物は出芽酵母のLst7産物に相同性を示すものの、これまでのところ機能の詳細は不明のままであった。今回我々は、Nihonラット由来Bhd欠損腎癌細胞株へのBhd発現系導入、およびsiRNAによるBHD抑制を利用し、Bhd産物の機能解析を進めた。また、我々は上記の培養細胞を利用して、Bhdに結合する分子の検索も進めた。「がんの原因論」を明確にし、「がんの制御」の根拠を示し、「がん進展阻止」の実際を示すことを目的とする。具体的には、個体レベルで、リファインされたユニークな疾患モデル(特に腎がんモデル)を用いて、「遺伝情報システム異常と発がん」を発がんの起始遺伝子を起点とした遺伝子ネットワークの異常ととらえ(発がんの連盟的首位性の分子機構の解明)、その特異点の分子を同定し、ヒトがんの治療に資する。(1)TSC2遺伝子の機能解明:N525S変異はパートナーであるTSC1産物との結合やmTOR経路を抑制する活性を保持する変異であるにも関わらず、発症に関わっている。一方、G1556

S変異は、mTOR経路を抑制する能力を失う変異であるにも関わらず、患者の症状が軽度である。これらの変異を持つ導入遺伝子(Tg)のトランスジェニック・ラットの作製を進めたところ、G1556S型変異のTgラットは個体得ることができたが、N525S型変異に関しては胎生致死の誘発によりTgラットを得ることができなかった(submitted)。多段階発がんにおけるmTORとは異なるsigna1の存在することを明らかにした。(2)発がん過程の初期に高発現してくるErc遺伝子の機能解析:Knockoutマウスを作製し、Tsc2mutantマウスとの交配実験により、Tsc2+/-:Erc-/-では腫瘍サイズの抑制を確認した。(inpreparation)。Erc遺伝子の個体レベルでの腫瘍発生における機能が明らかとなった。これまで、mTORC1抑制能が損なわれるヒトG1556S型変異(GSM)を持つTsc2発現系を導入したトランスジェニック(Tg)・Ekerラットの作製を行い、ENU誘発腎癌が抑制されることを報告していた。本年度、長期飼育を継続し、ENU誘発系の場合と同様に一部に微少な腫瘍発生が認められるものの、自然発生の腎発癌も抑制されることが確認された。これらの結果からGSM-Tsc2産物(tuberin)に残存する活性の腫瘍抑制への関与が改めて示唆される。GSM-tuberinの活性を調べる培養細胞系の実験系として、GSM-tuberinを安定的に発現するTsc2欠損マウス腎腫瘍細胞株を作製した。ヌードマウスへの皮下移植実験においてGSM-tuberin発現細胞も野生型tuberin発現細胞と共に、造腫瘍能を抑制する傾向を示した。これらの細胞群の表現型を引き続き分析している。一方、昨年度tuberinの発現抑制によりBhd遺伝子産物(Flcn)のリン酸化が促進されることを見出していたが、ノックダウン実験やin vitroキナーゼ・アッセイ等により、そのリン酸化はmTORC1の下流においてmTORやS6K1以外のキナーゼによって司られていると予想された。これまで同定したリン酸化部位(S62やS302)に対する抗リン酸化抗体を作製し分析したところ、tuberin抑制によるFlcnリン酸化にはラバマイシン非感受性のリン酸化が一部関与していること、S62のリン酸化の亢進は血清飢餓条件で顕著になり、それぞれのリン酸化部位は異なる挙動を示すことなどがわかった。Flcnはtuberinの下流において、mTORC1依存性・非依存性の複雑な制御を受けていることが予想される。GSM-tuberinに残存する活性とラバマイシン非依存性のFlcnリン酸化の関連を含め、今後研究を進める予定である。1.TSC遺伝子変異におけるmTOR以外のsignal pathwayの同定:N525S(mTOR経路を抑制する活性を保持する)変異とG1556S(mTOR経路を抑制する能力を失う)変異を持つ導入遺伝子(Tg)のトランスジェニック・ラットの作製を進めたところ、N525S型変異Tgラットでは胎生致死、G1556S型変異Tgラットでは腎発がんを抑制する知見を得た。