hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ウイロイド感染に対する基礎的自然免疫・防御反応と矮化・壊疽病徴発現機構の解析

A. RNAサイレンシングのキー因子ダイサー様リボヌクレアーゼDCL2と4をノックダウンしたトマト(品種;マネーメーカー)DCL2&4i-72E(以下72E系統)にジャガイモやせいもウイロイド(PSTVd)を感染させると激しい矮化・葉巻と全身壊疽を生じる。72E系統では自然免疫の指標となる活性酸素種(ROS)を消去する酵素スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)とSODに銅を運搬するシャペロンタンパク質CCS1の発現を負に制御するマイクロRNA(miR398、miR398a-3p)が活性化されていたので、宿主自然免疫による防御反応からウイロイド感染に特徴的な壊疽病徴の発現に至る分子機構を分析した。すなわち、PSTVdを感染させると、72E系統では対照区には見られない激しい黄化・壊疽が現れ、壊疽発症葉では、異常に高いROS発生とmiR398/398a-3pの発現がみられた。一方、細胞質局在性のSOD1(SlSOD1, 2)とCCS1(SlSOD4)、及び葉緑体局在性のSOD2(SlSOD3)の発現レベルは低下していた。B.PSTVdの病原性ドメインから大量に生成するウイロイド特異的small RNA(以下PSTVd-sRNA-44M)が、それと相補性の高い配列を含むユビキチンリガーゼ遺伝子(UBR7)を転写後発現調節で抑制する可能性を検証した結果、PSTVd感染/発病トマト植物体中のUBR7の転写量は変化せず、仮説を支持する結果は得られなかった。C.RNAiでジベレリン水酸化酵素(GibβH)遺伝子発現をノックダウンした形質転換トマト(以下GibβHi-762)にPSTVdを接種すると、GibβHi-762系統では対照区に見られない激しい矮化・葉巻症状がみられた。感染トマトから全RNAを調製し、次世代シークエンサーによるRNAseq解析を実施し、再現性の高い結果を得た。RNAサイレンシングのキー因子ダイサー様リボヌクレアーゼDCL2と4をノックダウンしたトマト72E系統にPSTVdを感染させた時に生じる激しい黄化・壊疽症状と活性酸素種(ROS)の発生、ストレス応答性のマイクロRNA398/398a-3pの発現量の分析、及びROSの消去酵素スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)遺伝子の発現量解析の結果、特に、PSTVd感染で壊疽が生じている葉では、葉緑体局在性のマイクロRNA398a-3pの発現レベルが異常に高くなり、その結果、葉緑体局在性のCu/Zn依存性SOD2(SlSOD3)の発現が低レベルに抑えられた状態になり、結果として宿主の自然免疫に基づく防御反応により発生するROSの消去機能が低下し、ウイロイド感染に特徴的な黄化・壊疽病徴が発現することを明らかにすることができたまた、RNAiでジベレリンβ水酸化酵素(GibβH)遺伝子発現をノックダウンした形質転換トマトGibβHi-762系統にPSTVdを感染させ、次世代シークエンサーによるRNAseq解析を実施し、再現性の高い高品質のデータを取得することができた。RNAサイレンシングのキー因子ダイサー様リボヌクレアーゼDCL2と4をノックダウンしたトマト72E系統にPSTVd感染で生じる激しい全身性の壊疽症状の分析から、壊疽症状の発生機構を明らかにすることができた。壊疽症状はウイロイド感染で生じる最も典型的且つ重大な病徴であるので、次年度はウイロイド感受性のトマト品種Rutgersを用いて、栽培トマト品種で発生する壊疽症状もこれと同じ機構で発生しているのかどうかを確認する。具体的には、病原性の異なるPSTVd変異体を用いて黄化・壊疽病徴の強さとROS発生量、及びマイクロRNA398/398a-3pの発現量とSOD遺伝子発現レベルを分析する。栽培品種で壊疽が生じる機構とウイロイドの病原性の関係を明らかにすることができれば、今後、耐病性品種開発につながる有益な情報が得られるものと期待される。また、DCL2と4をゲノム編集技術で破壊した変異体トマトの作出を継続する。一年目で取得したRNAiでジベレリン水酸化酵素(GibβH)遺伝子発現をノックダウンした形質転換トマトGibβHi-762系統から取得した次世代シークエンサーによるRNAseq解析データを基に、当初の計画通り、ウイロイド感染による植物ホルモン生合成系遺伝子発現ネットワークの変動と異常の全体像を明らかにし、特に重要な役割を果たすジベレリン生合成関連遺伝子群の定量的発現解析を行う予定である。

一方、細胞質局在性のSOD1(SlSOD1, 2)とCCS1(SlSOD4)、及び葉緑体局在性のSOD2(SlSOD3)の発現レベルは低下していた。B.PSTVdの病原性ドメインから大量に生成するウイロイド特異的small RNA(以下PSTVd-sRNA-44M)が、それと相補性の高い配列を含むユビキチンリガーゼ遺伝子(UBR7)を転写後発現調節で抑制する可能性を検証した結果、PSTVd感染/発病トマト植物体中のUBR7の転写量は変化せず、仮説を支持する結果は得られなかった。C.RNAiでジベレリン水酸化酵素(GibβH)遺伝子発現をノックダウンした形質転換トマト(以下GibβHi-762)にPSTVdを接種すると、GibβHi-762系統では対照区に見られない激しい矮化・葉巻症状がみられた。感染トマトから全RNAを調製し、次世代シークエンサーによるRNAseq解析を実施し、再現性の高い結果を得た。RNAサイレンシングのキー因子ダイサー様リボヌクレアーゼDCL2と4をノックダウンしたトマト72E系統にPSTVdを感染させた時に生じる激しい黄化・壊疽症状と活性酸素種(ROS)の発生、ストレス応答性のマイクロRNA398/398a-3pの発現量の分析、及びROSの消去酵素スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)遺伝子の発現量解析の結果、特に、PSTVd感染で壊疽が生じている葉では、葉緑体局在性のマイクロRNA398a-3pの発現レベルが異常に高くなり、その結果、葉緑体局在性のCu/Zn依存性SOD2(SlSOD3)の発現が低レベルに抑えられた状態になり、結果として宿主の自然免疫に基づく防御反応により発生するROSの消去機能が低下し、ウイロイド感染に特徴的な黄化・壊疽病徴が発現することを明らかにすることができたまた、RNAiでジベレリンβ水酸化酵素(GibβH)遺伝子発現をノックダウンした形質転換トマトGibβHi-762系統にPSTVdを感染させ、次世代シークエンサーによるRNAseq解析を実施し、再現性の高い高品質のデータを取得することができた。RNAサイレンシングのキー因子ダイサー様リボヌクレアーゼDCL2と4をノックダウンしたトマト72E系統にPSTVd感染で生じる激しい全身性の壊疽症状の分析から、壊疽症状の発生機構を明らかにすることができた。壊疽症状はウイロイド感染で生じる最も典型的且つ重大な病徴であるので、次年度はウイロイド感受性のトマト品種Rutgersを用いて、栽培トマト品種で発生する壊疽症状もこれと同じ機構で発生しているのかどうかを確認する。具体的には、病原性の異なるPSTVd変異体を用いて黄化・壊疽病徴の強さとROS発生量、及びマイクロRNA398/398a-3pの発現量とSOD遺伝子発現レベルを分析する。栽培品種で壊疽が生じる機構とウイロイドの病原性の関係を明らかにすることができれば、今後、耐病性品種開発につながる有益な情報が得られるものと期待される。また、DCL2と4をゲノム編集技術で破壊した変異体トマトの作出を継続する。一年目で取得したRNAiでジベレリン水酸化酵素(GibβH)遺伝子発現をノックダウンした形質転換トマトGibβHi-762系統から取得した次世代シークエンサーによるRNAseq解析データを基に、当初の計画通り、ウイロイド感染による植物ホルモン生合成系遺伝子発現ネットワークの変動と異常の全体像を明らかにし、特に重要な役割を果たすジベレリン生合成関連遺伝子群の定量的発現解析を行う予定である。
矩形板の弾塑性分岐現象および塑性座屈モードの局所化現象の解明

一様圧縮を受ける矩形平板が、材料の塑性化に伴なって弾塑性座屈を生じ、平板のまま圧縮される主径路から非対称な変形を伴なう分岐径路へと移行する過程を数値解析で追跡した。ここで採用した動的緩和法はvon Karman-Marguerreの支配微分方程式を数学的近似として差分形に変換し、さらに動的問題と見なして定常解=静的な解を得るという単純な原理に基づいた手法ではあるが、数値解が微分方程式に対して直接的に忠実に得られること、材料非線形性の導入が極めて容易であるという長所を有している。また、振動問題の定常解として静的な解を求めることから、構造不安定を伴なう分岐点近傍でも、現実に起こり得る安定なつりあい径路のみを振動が減衰する過程で取捨選択して自動的に追跡することができると考えられる。つまり、分岐解析を行なわなくとも安定なつり合い径路が自動的に求まるはずであり、これは大きな長所である。ことろが逆に、どこが分岐点であるか、どの径路からどの径路へ移ったのかという情報が入手されないことにもなるので、そもそもの分岐解析が不可能となる短所も有する。これは解析手法の再考を要する最大の理由となり得る。数値的検証例として単純なモデル解の結果を他のFEM解析例と比較した。塑性座屈の発生、塑性座屈モードの局所化現象の発生など大枠では合っているものの、細部で異なる結果が得られた。これは数値解析上の問題で、座屈を伴なう問題では数値的なstrain reversalという現象が生じることに起因する誤差であると考えられる。そこで、この数値的disadvantageを克服する方法として、1増分ステップ間では材料特性の変化(塑性化や除荷など)がないと仮定する代わりに荷重増分を小さく設定する方法を採用した。この結果、他の解析例とほぼ一致する解を得ることが可能となり、本手法の実用性が確認された。ただし、いずれの解が正しいかはいまだ不明である。しかし、いずれの手法を用いても、解析上の長所・短所があり、特に塑性座屈や後座屈挙動解析のような従来の非線形解析以上の高次非線形問題に対する厳密解を得る努力は今後とも継続すべきであると考える。
竹材の長繊維束を用いた木質構造用接合具の開発

竹繊維からピンとプレートを作製し、それらを木質構造物の接合に使用した。アルカリ処理したマダケ材から長繊維を櫛で掻き取り、残渣として絡み合った繊維を得た。絡みあった繊維を1cm長さに切断し、短繊維を得た。イソシアネート系の接着剤を含浸した長繊維を治具内に一軸配向させて挿入し、その治具を熱圧プレスで圧縮し、繊維配向材料を作製し、それより長さ260mm、φ12のピンを調製した。一方、イソシアネート系の接着剤を含浸した長繊維と同じ接着剤を噴霧した繊維をマット成形用の木枠内に交互に積層して得られたマットを熱圧プレスで圧縮し、5層および3層のプレートを得た。φ12の丸ピンについて三点曲げ試験を行った結果、強度は368MPa、ヤング率は54GPaであった。このピンの曲げ強度は、軟鋼のそれに匹敵した。カラマツ集成材の両側にカラマツ集成材の副材を置き、これらに上下2つの穴あけ、φ12の2本のピン挿入し、ピンの二面せん断試験を行った。ピンの降伏耐力、最大荷重、初期剛性および吸収エネルギーは、それぞれ6.8kN、12.4kN、1.84kN/mmおよび173Jであった。調製したプレートに1列にφ12およびφ16の2つの穴を設け、それらに金属のピンを挿入し、プレートのせん断試験を行った結果、破壊した後の荷重低下が少なく、大きな塑性率を示した。カラマツ集成材の土台と柱の接合において、プレートを1枚または2枚を挿入し、ピンを柱および士台にそれぞれ2本を使用し、接合性能試験を行った。プレートが1枚または2枚の場合の降伏荷重は、それぞれ11.4kNおよび20.1kNであった。プレート2枚の場合はZマーク金物のT字型金物の降伏荷重である12kN以上であった。アルカリ水溶液で処理した竹材から長繊維束を掻き取り,長繊維を分離した.残渣として,絡み合った繊維束を得たが,それを1cm長に切断して,短繊維束を調製した.長繊維束にイソシアネート接着剤を添加し,それらを一軸配向させて成形し,繊維配向材料を得た.それより,φ12で長さ26cmの丸ピンを調製した.一方,接着剤を添加した長繊維束と短繊維を交互に積層してマットを形成し,それを熱圧成形し,プレートを作成した.丸ピンについて,3点曲げ試験を行って得られた強度は415MPa,ヤング率は50GPaであった.これらのピンの強度は,軟鋼のそれに匹敵した.調製したプレートの表層はランダム配向の短繊維の層で,芯層は一軸配向の長繊維の層である.プレートにピン用の穴を上下二つ設け,それぞれに金属のピンを挿入し,それぞれを反対方向に引っ張って,プレートのせん断試験を行った.プレートの芯層の長繊維の配向方向が荷重方向と平行の場合,プレートの最大荷重および支圧強度は,それぞれ8.94kNおよび61.5MPaであった.一方,長繊維の配向方向が荷重方向と直交する場合,プレートの最大荷重および支圧強度は,それぞれ0.87kNおよび4.83MPaであった.前者のプレートは,後者のプレートに比べ1桁以上の最大応力およびヤング率が得られた.このことより,プレートは,長繊維の配向方向と荷重の方向を一致させて使用することが必要であることが明らかとなった.

プレートの表裏にカラマツ製材を置き,これらを貫通してφ12を挿入する穴を一つあけ,ピンを通した後,カラマツ製材を試験機内に置き,プレートの上面より荷重を加え,ピンのせん断試験を行った.ピンの塑性率および降伏耐力は,それぞれ4.51および2.76kNであり,プレートとして十分な性能を示した.マダケを2規定の水酸化ナトリウム水溶液で5時間処理し得られた長繊維お職維より作製したピンおよびプレート用いて、木質構造物の柱と梁および土台と柱の接合を行った。柱と梁の接合には、厚さ10mmのプレート1枚とφ12、長さ110mmのピン7本用いた。プレートの形状は凸型とした。カラマツ集成材の柱および梁をプレートとピンで接合し、加力フレームにT型に設置した。垂直の材は梁である。梁端部にオイルジャッキを用いて正負交番繰返し荷重を与えた。梁の変位が1/15radを経験した後、破壊に至らしめた。破壊形状は、プヒートの長繊維の方向が荷重に対し垂直のものではピンが破壊し、平行のものではプレートに亀裂破壊が生じた。梁部ではピンとプレートともに破壊が生じていなかったことより、より性能を向上するには、柱部のプレートの面積を大きくし、ピンの数とプレートの枚数を増やすこと、回転中心に作用する集中荷重を分散させるプレートの形状にすることが考えられた。繰返し変形による梁の傾きについては、良好な結果が得られた。土台と柱の接合には、5mmプレートを1枚または2枚を挿入し、φ12のピンをカラマツ集成材の柱および土台}とそれぞれ2本を使用し、接合性能試験を行なった。プレートが一枚または2枚の場合の降伏荷重は、それぞれ11.4KNおよび20.1KNであった。プレート2枚の場合はZマーク金物のT字型金物の降伏荷重である12KN以上であった。
ダイズの根粒・菌根二重共生系の成立に必須なストレス応答遺伝子の発現特性とその役割

申請者は、ダイズの根粒・菌根二重共生系において発現している宿主遺伝子を網羅的に解析したところ、二重共生系の成立に必須な遺伝子の解明に成功し、その中に環境ストレス応答遺伝子であるType1メタロチオネイン遺伝子(GmMT1)が含まれていることを明らかにした。本研究は、このGmMT1の発現特性と共生系における役割を解明し、二重共生系を強化した低肥料性・ストレス耐性ダイズの分子育種に資する基礎的知見を得ることを目的とした。具体的には、1ダイズの生育に伴うGmMT1の発現変化と発現を引き起こすシグナル物質の解明、2菌根・根粒内でのGmMT1発現の局在性解析、3GmMT1の共生系での役割解明、を行い以下の結果を得た。(1)RT-リアルタイムPCR法を用いてダイズ根と根粒におけるGmMT1の発現変化を検討したところ、根と根粒の子実肥大期のGmMT1発現量はいずれも開花期よりも高いことを明らかとした。またシグナル物質である過酸化水素のジアミノベンジジンによる検出と画像解析による定量化に成功した。(2)GUS染色法を用いてGmMT1は根では感染している菌根菌の樹枝状体の周囲で発現していること、また根粒ではバクテロイド感染領域の周囲で発現していることが見出された。(3)ダイズ根および根粒におけるGmMT1の発現量は過酸化水素含量と強い相関関係にあり、GmMT1は根および根粒中の活性酸素の消去を行っている可能性が示唆された。そこでRNAi法を用いて作出したダイズ毛状根のGmMT1発現抑制変異体の菌根形成と根粒着生について検討したところ、本変異体では親株に比べて菌根形成率および根粒重が減少し、根および根粒の過酸化水素含量が増大していることが認められた。このことからGmMT1は共生器官における活性酸素種を消去し根粒および菌根を酸化ストレスから保護する役割を担っていると結論された。平成28年度はダイズの二重共生系におけるストレス応答遺伝子の内、Type1メタロチオネイン遺伝子(GmMT1)について以下の検討を行った。実験に供試したダイズ(品種エンレイ)は温室内で栽培した。根粒菌はBradyrhizobium japonicum USDA110株、アーバスキュラー菌根菌はGigaspora roseaMAFF520062株を用いた。ダイズは6週間(開花期)および9週間(子実肥大期)栽培し、それぞれ根と根粒を採取した。研究代表者である坂本は、RT-リアルタイムPCR法を用いてダイズの生育に伴う根および根粒中のGmMT1遺伝子の発現特性について調べた。根と根粒から抽出したtotal RNAを試料とし、リアルタイムPCR法に必要なGmMT1遺伝子増幅用のプライマーの設計や増幅条件の検討を行い、遺伝子発現量を測定することを試みた。その結果、根と根粒におけるGmMT1遺伝子発現を定量化することに成功した。根と根粒の子実肥大期のGmMT1発現量はいずれも開花期よりも高いことが明らかとなった。研究分担者である園田は、GmMT1遺伝子の発現を誘導するシグナル物質を特定することを試みた。シグナル物質として活性酸素種のひとつである過酸化水素の検出と定量を試みたところ、過酸化水素の特異的染色試薬であるジアミノベンジジンを用いることで、根と根粒内の細胞で生成されている過酸化水素の検出に成功した。またインターネット上にあるソフトを用いた画像解析によって、ジアミノベンジジンによる細胞の染色度合を数値化できることがわかり、過酸化水素発生の定量化に成功した。本研究は、ダイズの根粒・菌根二重共生系の成立に必須なストレス応答遺伝子の発現特性とその役割について解析を進めている。初年度である平成28年度はダイズの二重共生系において発現するストレス応答遺伝子の内、Type1メタロチオネイン遺伝子(GmMT1)の発現特性の実態解明と本遺伝子の発現を誘導するシグナル物質の検出と定量について検討を行った。これまでに得られた成果は以下のようにまとめられる。1.GmMT1遺伝子の発現特性の実態解明:RT-リアルタイムPCR法を用いてダイズ根および根粒におけるGmMT1遺伝子発現量の測定するために、プライマーの設計やPCRの増幅条件の検討を行った。その結果、本法を用いて根と根粒におけるGmMT1遺伝子の発現を正確に定量化することに成功した。本法を用いてダイズの生育に伴う根と根粒におけるGmMT1遺伝子発現量の変化を測定した。その結果、根と根粒ともに子実肥大期のGmMT1発現量が開花期よりも高いことが明らかとなった。2.シグナル物質の検出と定量:GmMT1遺伝子の発現を誘導するシグナル物質として活性酸素種のひとつである過酸化水素の検出を試みた。その結果、過酸化水素の特異的染色試薬であるジアミノベンジジンを用いることで、ダイズ根と根粒内の細胞で生成されている過酸化水素の検出に成功した。インターネット上にあるソフトを用いた画像解析によって、ジアミノベンジジンによる細胞の染色度合を数値化できることが明らかになり、本法を用いて過酸化水素発生の定量化に成功した。以上のような種々の成果が得られたことから、本研究はおおむね順調に進展していると評価される。平成29年度はダイズの二重共生系におけるストレス応答遺伝子のひとつであるType

1メタロチオネイン(GmMT1)遺伝子の役割解明に関する以下の実験を行なった。研究代表者である坂本は、ダイズ根および根粒中の金属イオン(亜鉛・銅)含量と平成28年度に確立した方法を用いて過酸化水素発生量を測定し、GmMT1遺伝子が1共生菌の定着に伴う細胞内金属イオンの濃度変動を調整している可能性と、2共生菌の定着によって発生する過酸化水素(活性酸素種)の消去を行っている可能性を検討した。その結果、ダイズ根および根粒におけるGmMT1遺伝子の発現量は、金属イオン含量とは相関関係を示さず、過酸化水素発生量と強い相関関係にあることが明らかとなった。従ってGmMT1の役割として、ダイズ根および根粒中の活性酸素の消去を行っている可能性が示唆された。研究分担者である園田はGmMT1遺伝子の発現部位の解明を行なった。まずGmMT1遺伝子のプロモーター領域を増幅するプライマーを設計し、これを用いてダイズ根からプロモーター領域を含む配列を増幅した。GUS遺伝子を含むbinary vectorへこれを組み込み、さらにAgrobacterium rhizogenesへ導入した。ダイズの下胚軸に本菌を接種し毛状根を発生させた。毛状根に根粒菌とアーバスキュラー菌根菌を接種し、数週間生育させた後にGUS染色を行なってGmMT1遺伝子の発現部位を特定、観察した。その結果、GmMT1遺伝子はダイズ根では感染しているアーバスキュラー菌根菌の樹枝状体の周囲で主に発現していることが認められ、また根粒中ではバクテロイド感染領域の周囲で発現していることが見出された。以上のことからGmMT1遺伝子は両共生菌に接する部位で発現していることが明らかとなり、本遺伝子は共生特異的に発現していることが明確となった。本研究は、ダイズの根粒・菌根二重共生系の成立に必須なストレス応答遺伝子の発現特性とその役割について解析を進めている。平成28年度と29年度に得られた成果は以下のようにまとめられる。(1)GmMT1遺伝子の発現特性:RT-リアルタイムPCR法を用いてダイズ根および根粒におけるGmMT1遺伝子の発現量を測定することを試みた。その結果、ダイズ根と根粒ともに子実肥大期のGmMT1発現量が開花期よりも高いことを明らかにした。(2)シグナル物質の検出と定量:GmMT1遺伝子の発現を誘導するシグナル物質として活性酸素種のひとつである過酸化水素の検出と定量を試みた。その結果、過酸化水素の特異的染色試薬であるジアミノベンジジンを用いることで、ダイズ根と根粒内の細胞で生成されている過酸化水素の検出に成功した。また画像解析によって過酸化水素発生量の定量化に成功した。(3)GmMT1発現量と金属イオン含量および過酸化水素発生量との関係:ダイズ根および根粒中の金属イオン含量と過酸化水素発生量を測定し、GmMT1発現量との関係について検討した。その結果、GmMT1遺伝子発現量は過酸化水素発生量と強い相関関係にあることが明らかとなり、GmMT1はダイズ根および根粒中の活性酸素の消去を行っている可能性が示唆された。(4)GmMT1遺伝子の発現部位の解明:GUS法を用いてGmMT1遺伝子の発現部位の解明を行なった。その結果、GmMT1遺伝子はダイズ根では感染しているアーバスキュラー菌根菌の樹枝状体の周囲で発現していること、また根粒中ではバクテロイド感染領域の周囲で発現していることが見出された。
オンデマンドで撤去可能な歯科用スマートセメントのインプラントへの応用

本研究では申請者が所属する徳島大学大学院医歯薬学研究部生体材料工学分野が発案し、研究を進めてきた「必要な時に通電による接着力低下が可能な歯科用スマートセメント」を応用し、インプラントの上部構造の材料である非導電性素材(セラミックス、ハイブリッドレジン)を介したときのセメントへ通電可能な上部構造のデザインの考案と、その有効性の確認を行い、新たなインプラントの着脱様式を開発する。
小型魚類を用いたストレスシグナルの可視化と生理機能の解明

SAPK/JNKは、物理化学的ストレスをはじめ多様な刺激に応答して活性化されるキナーゼであり、JNKの活性化状態を捉えることは、発生、細胞死、老化などの基本生命現象に加え、癌の病態発症を理解する上でも極めて重要である。しかし、従来の解析手法ではJNK活性化状態の時空間的変遷を捉えることが難しく、この分野の研究進展の障壁となってきた。そこで本研究では、生きた個体の中で、活性化型JNKの時空間的挙動をリアルタイムに可視化し、JNK活性化の生理的役割を解明することを目的とした。これまでに細胞レベルで使用可能なプローブの作出に成功し、現在、個体レベルで使用可能であるか否かをトランスジェニックメダカの作出で検討している。ストレス応答性MAPキナーゼであるstress-activated protein kinase(SAPK、別名JNK)は、UV照射,DNA損傷,熱ショック,浸透圧変化などの物理化学的ストレスや炎症性サイトカイン、増殖因子など多岐にわたる刺激に応答して活性化されるキナーゼであり、ハエからヒトに至るまで幅広く保存されている。JNKシグナル経路は生命維持に必須の役割を果たしており、JNKの活性化状態を生化学的に捉えることは、発生、細胞死、老化などの基本生命現象に加え、癌やII型糖尿病等の病態発症を理解する上での重要な尺度と考えられている。しかしながら、抗リン酸化JNK抗体を用いたJNK活性化の検出では、ブロット用に検体をすり潰す、または細胞組織染色用に検体を固定する必要があり、JNKの活性化状態の連続した時間的変化、および活性化部位の変遷、細胞内移動などの空間的変化を捉えることは不可能である。こうした理由から、発生時および病態発症時のJNK活性化の実態を充分に捉えることができず、この分野の研究進展の大きな障壁となっている。そこで本研究においては、生きた1細胞や個体全体の中で、活性化型JNKの時空間的挙動をFRETを用いてリアルタイムに可視化し、JNK活性化の生理的役割を明らかにすることを目的とした。既に脱リン酸化酵素SHP由来のSH2ドメインとJNKを融合し、YFP-JNK-SH2-CFP融合タンパク質を発現可能なJNK-FRET発現ベクターを作製済みである。このJNK-FRET発現ベクターを培養細胞に導入し、物理化学的ストレス、炎症性サイトカイン、増殖因子など各種刺激時におけるJNKの細胞内局在と活性変化を共焦点顕微鏡ならびにタイムラプス装置を用いて検討している。これと並行して、YFP-JNK-SH2-CFPを組織特異的に発現可能なトランスジェニックメダカの作出を試みている。ストレス応答性MAPキナーゼであるSAPK/JNKは、UV照射DNA損傷,熱ショック,浸透圧変化などの物理化学的ストレスや炎症性サイトカイン、増殖因子など多岐にわたる刺激に応答して活性化されるキナーゼであり、ハエからヒトに至るまで保存されている。JNK経路は生命維持に必須の役割を果たしており、JNKの活性化状態を生化学的に捉えることは、発生、細胞死、老化などの基本生命現象に加え、癌やII型糖尿病等の病態発症を理解する上での重要な尺度と考えられている。従来のJNKの活性化を捉える手法は免疫沈降と放射性同位元素を用いたJNKキナーゼアッセイから始まった。その後、JNKの活性化がJNKの"TPY(Thr-Pro-Tyr)"部位のThrとTyrのアミノ酸残基のリン酸化と一致していることが明らかとなり、抗リン酸化JNK抗体が開発され、JNKキナーゼアッセイに必要な煩雑な実験から開放された。この抗リン酸化JNK抗体はJNKの活性化を知る上での重要なツールとして世の中に広く流布し、JNKの研究の進歩を促した。しかしながら、抗リン酸化JNK抗体を用いたJNK活性化の検出では、プロット用に検体をすり潰す、または細胞組織染色用に検体を固定する必要があり、以下の根本的な問題の解決ができていない。1)同一細胞での連続した時間的変化を捉えることができない。2)活性化部位の変遷、細胞内移動など空間的変化を捉えることができない。そこで本研究においては、生きた1細胞や個体全体の中で、活性化型JNKの時空間的挙動をリアルタイムに可視化し、JNK活性化の生理的役割を明らかにすることを目的として研究を進めた。その結果、細胞レベルで使用可能なプローブの作出に成功し、現在、小型魚類(メダカやゼブラフィシュ)個体レベルでの使用可能であるか否かをトランスジェニック体の作出で検討している。
移動表現に関わる中間言語研究と言語教育への応用：英語・日本語を対象に

本研究では、日本語と英語を主な対象とし、基本的表現であるにも関わらず、非常に誤用も多く習得困難な移動表現(e.g. John ran up the stairs.)を取り上げた。産出実験を通して、母語と学習言語を双方向に比較(母語話者の英語・日本語、英語母語話者の日本語、日本語母語話者の英語)し、移動表現における学習者言語の特徴とそれを生み出す要因を探った。その結果から、学習者言語に共通する特徴として、表現の簡略化や、母語の影響を明らかにした。また、様々な経路表現を比較することで、各言語学習者にとっての習得困難である移動事象表現を明らかにし、今後の日本語教育・英語教育で注意すべき点を示した。本研究の目的は、移動表現における第二言語としての英語・日本語学習者の学習者言語特徴とその変容を明らかにすることであり、そのため学習者作文コーパスと、産出実験を利用した分析を行うものである。様々な表現の基本であるにも関わらず、誤用も多く習得困難な移動表現を取り上げ、学習者の特徴とその変容を明らかにすることで、現状の言語教育の問題点を明らかにし、いかに学習者に移動表現を教えるかについても示唆が得られるものと信じている。平成27年度は、以下の四つの内容を行った。1移動表現に関する先行研究の収集と分析:移動表現についての第一言語・第二言語でのこれまでの議論を整理し、問題点を明らかにした。2学習者コーパスデータの分析:英語に関しては、日本人英語学習者コーパスにおける学習者の移動表現の特徴を分析し、その成果を投稿した。日本語学習者コーパスでは分析に十分な移動表現が得られなかったため、予定を変更し、平成28年度予定であった3を前倒しして行うこととした。3実験映像とプログラムの完成:1、2から得られた結果をもとに、次年度行う予定であった映像実験のデザインを検討し、先行研究での経路表現の種類の問題と、英語学習者における各経路表現と共起する動詞の片寄りが明らかになったため、実験映像には様々な経路を含めることにし、実験映像作成を行い、完成させた。4研究成果の発表:本研究につながるこれまでの共同研究の成果も含め、移動表現の第一言語での類型的分析、第二言語習得上の特徴について成果の一部を学会で発表し、意見を得たうえで、論文を学会誌に投稿することができた。今年度、実験映像とプログラムが完成したことで、平成28年度は実際に実験を実施し、その分析を行うことになる。「研究実績の概要」で記載したように、平成28年度に作成予定であった実験映像とプログラムを前倒しして完成することができたためである。その他、計画されていた内容はすべて計画通り行うことができている。ただし、日本語学習者作文データで分析に十分な分量のデータが得られなかった点で、予定していた研究が一部行えなかった。今後学習者作文コーパスの充実を待って再度分析可能か検討したい。本研究の目的は、移動表現における第二言語としての英語・日本語学習者の学習者言語の特徴を明らかにすることであり、そのため産出実験を利用した分析を行うものである。移動表現は、様々な表現の基本となる表現であるにも関わらず、誤用も多く習得困難であるため、その学習者の特徴を明らかにすることで、現状の言語教育の問題点を明らかにし、移動表現をどのように教えるかについても示唆が得られるものと確信している。平成28年度は、以下のような取り組みを行った。1移動表現に関する先行研究の収集と分析:平成27年度からの継続であるが、新しく発表されたものについて、その議論を整理し、問題点を明らかにした。2実験の実施:平成27年度に作成した実験プログラムを利用し、英語母語話者、日本語母語話者、日本語母語英語学習者、英語母語日本語学習者のデータを主にイギリスと日本で収集した。各10人15人分のデータを得ることができた。3データの分析と成果発表準備:2で収集したデータを経路表現に着目して分析し、母語話者と各学習者の表現傾向(どこで経路を表すのか、経路の種類ごとに差異は観察されるのか)を検討した。それをもとに国際学会に応募し、採択された。来年度発表を行う予定である。4論文投稿と掲載予定論文の改訂作業:本研究につながるこれまでの共同研究の成果を含め、移動事象の言語化における第二言語習得上の特徴について、成果の一部を国際学会で発表した。また、学会誌に投稿し、査読中である二本の論文の改訂作業を行った。平成29年度は採択されている国際学会での発表を含め、研究成果の発表と社会への還元のため、ワークショップ形式での発表を計画している。平成27年度に前倒しで実験映像の撮影からプログラム作成までを行うことができたため、平成28年度は当初の予定より少し早く実験を開始することができた。日本語母語話者、英語母語話者、日本語を母語とする英語学習者、英語を母語とする日本語学習者のデータを予定通り収集し、分析を行うことができた。また、その成果の一部を国際学会に応募し、採択もされている。また関連する研究業績の刊行と、国内外での学会発表も行うことができ、そこで得られた意見を本課題のデータ分析にも生かしたいと考えている。このため、「おおむね順調に進展している」とした。本研究の目的は、移動表現における第二言語としての英語・日本語学習者の学習言語の特徴を明らかにすることであり、そのため産出実験を利用した分析を行うものである。

移動表現は、様々な表現の基本となる表現であるにも関わらず、誤用も多く習得困難であるため、その学習者言語の特徴を明らかにすることで、現状の言語教育の問題点を明らかにし、移動表現をどのように教えるかについても示唆が得られるものと確信している。平成29年度は最終年度として、以下のような取り組みを行った。1実験データの分析:平成28年度に収集した英語母語話者・日本語母語話者・日本語母語英語学習者・英語母語日本語学習者のデータを分析し、母語話者と学習者の表現傾向を比較した。2成果発表:国際学会で4件、国内学会1件で発表を行い、研究成果の一部を論文として三本発表した。データの分析から分かった学習者の言語化傾向は、次の二点である。1学習者は母語話者に比べ、移動事象に含まれるすべての意味概念に言及する割合が低い。2特に複数の経路から成る複雑経路を含む移動事象では省略が起こりやすく、その場合着点が優先される。日本語母語英語学習者では、さらに時間的な並びに反して、着点が最初に置かれることが多いという傾向が見られた。3ダイクシスの表出頻度や動詞で表す意味概念などにおいて母語の影響が観察された。今後、研究成果全体のまとめを、平成30年6月に開催される関西言語学会で、ワークショップを行い(採択済み)、発表することと、本研究課題の研究成果を含めた移動表現に関する第二言語習得研究の成果を原稿としてまとめ、出版する準備を進めている。本研究では、日本語と英語を主な対象とし、基本的表現であるにも関わらず、非常に誤用も多く習得困難な移動表現(e.g. John ran up the stairs.)を取り上げた。産出実験を通して、母語と学習言語を双方向に比較(母語話者の英語・日本語、英語母語話者の日本語、日本語母語話者の英語)し、移動表現における学習者言語の特徴とそれを生み出す要因を探った。その結果から、学習者言語に共通する特徴として、表現の簡略化や、母語の影響を明らかにした。また、様々な経路表現を比較することで、各言語学習者にとっての習得困難である移動事象表現を明らかにし、今後の日本語教育・英語教育で注意すべき点を示した。平成28年度については、すでに実験映像とプログラムが完成済みであるため、データの収集と分析を予定より前倒しで行うことを計画している。すでに一部からはデータ収集を開始しており、早期に必要なデータをすべて収集し、分析に移りたいと考えている。平成29年度が最終年度である。すでに実験でデータは収集済みであり、コーディングも進められているため、最終年度にはその分析と、必要であれば追調査を行い、得られた成果を学会で発表する予定である。すでに国際学会には採択されており、複数の経路要素を含んだ場面の言語表現の特徴について発表を行う予定である。また、国内においても、平成29年度学会での発表を計画しており、本研究ので得られた研究成果を様々な観点からワークショップ形式で、研究分担者各自が発表する計画である。さらにそこでの意見を反映させ、論文投稿もしくは書籍化を目指す計画である。言語学、英語学
1, 3-不斉転写を鍵とする分子内SN2'型環化反応と複素環状天然物の全合成研究

新しい有機化学反応を展開し、それを用いて天然化合物を合成した。即ち、2価Pd触媒を用いる反応により光学活性テトラヒドロピラン環や、テトラヒドロフラン環、ピペリジン環化合物を選択的に合成した。この反応機構を提唱しそれを実験的に証明した。またテトラヒドロイソキノリン合成ではルイス酸触媒としてBi(OTf)_3が有効であることを見出した。その合成例として抗がん活性天然物(-)-apicularen Aのほか天然アルカロイドである(-)-trollineなどを合成出来た。申請者は、これまでε位やζ位に水酸基やアミノ基を有する光学活性アリルアルコールに、2価Pdを作用させる事で、1,3-不斉転写を伴う光学活性酸素環状化合物や窒素環状化合物の合成を行なって来た。しかしながら、この反応の原料を合成するには、光学活性アリルアルコールをその基質毎に作り出す必要があった。今回、クロスメタセシス反応を用いる事により、水酸基やアミノ基を有する末端アルケン化合物と光学活性アリルアルコール部分を結合させることにより、簡便に環化前駆体を合成する事ができた。この方法により、合成段階を簡略化できるとともに、前もって複数の各ユニットを準備しておくことにより、フレキシビリティの高い光化学活性複素環化合物の合成が可能になった。また、この1,3-不斉転写を伴う光学活性窒素環状化合物の一環として、光学活性テトラヒドロイソキノリンについて試み、2価Pd触媒による環化では3:1の選択比でしか反応が進行しなかったが、新たにビスマストリフラートを触媒として用いる事により、高い不斉収率、高い化学収率で目的の光学活性テトラヒドロイソキノリンが得られる事を見いだした。しかしながら、単純なピペリジン環の合成ではビスマストリフラートは効率的な触媒としては機能しないことが明らかにした。一方、2,6-トランスジヒドロピラン環を有するアピクラレンAの環化反応はほぼ完全に立体特異的に進行し、目的の骨格に導く事が出来た。また、この反応の基になるオキシパラデーションのメカニズムはこれまで長く議論されてきたが、分子間における不斉転写のメカニズムがシンオキシパラデーションを介して進行する事を証明できた。申請者は、1,3-不斉転写を伴う光学活性酸素環状化合物や窒素環状化合物への環化反応の研究を行なって来た。この申請計画に従って、平成22年度は以下の結果を得る事が出来た。(1)がん細胞に対してナノモルレベルの濃度で強力な殺細胞毒性を有する抗がん活性天然化合物アピクラレンAの全合成を達成できた。特にその全合成におけるアプローチは、PdCl_2(CH_3CN)_2を触媒に用い1,3-不斉転写を伴うエンド型環化反応を用いるジヒドロピラン環形成であり、完壁な立体制御でこの反応を進行させる事が出来た。またジヒドロピラン環上の11位α水酸位を側から位置選択的に水酸基を導入する必要があったが、この立体および位置選択的反応は水銀トリフラートを用いるオキシ水酸化続く還元反応により達成することができた。過去の全合成で最も収率の悪いステップであり大きな問題であった側鎖のジエナミド部分の導入は、ヨウ化銅を等量使用する事で90%の収率で目的を達成する事ができた。そして最終的にアピクラレンAの全合成を完成する事が出来た。(2)また、この1,3-不斉転写を伴う光学活性窒素環状化合物の一環として、光学活性テトラヒドロイソキノリンの合成について試みた。ビスマストリフラートを触媒とする方法では2価Pd触媒による環化を上回る、高い不斉収率、高い化学収率で光学活性テトラヒドロイソキノリンが得られる事を見いだし、その反応のscope and limitationを明らかにする事が出来た。特に、6位水酸基やメトキシ基ではSN1'型の反応により不斉転写率が著しく低下したが、これをアシルオキシ基とすることにより、高い1,3-不斉転写率を達成した。これまで申請計画に従って、光学活性アリルアルコールを原料に、1,3-不斉転写を伴う光学活性酸素環状化合物や窒素環状化合物への環化反応の研究を行なって来たが、平成23年度は以下の結果を得る事が出来た。(1)アピクラレンAの誘導体と抗がん活性;前年度には、がん細胞に対してナノモルレベルの濃度で強力な殺細胞毒性を有する抗がん活性天然化合物アピクラレンAの全合成を達成できた。その鍵となる環化反応には、PdCl_2(CH_3CN)_2を触媒に用い1,3-不斉転写を伴う2級水酸基によるエンド型環化反応で、ジヒドロピラン環が立体化学を制御して形成された。このジヒドロピラン環上のアルケンを利用して、10位11位の修飾を行ないアピクラレンAの誘導体を合成した。その結果、10-11位デヒドロ体がアピクラレンAと同等の抗がん活性を示すことを見出した。特に前立腺がん細胞に対しては3倍の強い活性を示すことを明らかにすることが出来た。(2)窒素環状化合物の合成;

1,3-不斉転写を伴う光学活性窒素環状化合物の一環として、光学活性テトラヒドロイソキノリンの合成についていくつかの新しい触媒を見出した。ビスマストリフラートや過塩素酸、メチルトリフラートを触媒とする方法では2価Pd触媒による環化を上回る、高い不斉収率、高い化学収率で光学活性テトラヒドロイソキノリンが得られる事を見いだした。そして、この方法を、ピロロイソキノリンアルカロイドである(-)-trolline,(+)-crispin A,(+)-oleracein Eの全合成に用い、それを達成することが出来た。また、この方法を光学活性β-カルボリン骨格の合成に用いたところ、インドール環上の窒素電子対の影響で1,3-不斉転写率が大きく減少することが分かった。
胎生期グルココルチコイド暴露が大脳皮質形成/神経ネットワーク形成へ与える影響

精神疾患発症を説明する仮説の一つとして神経発達障害仮説が提唱されている。これは胎児期の脳発達異常が思春期・成人期の発症リスクを高めるという説である。本研究ではストレスホルモンであるグルココルチコイドを齧歯類胎生期に投与し、大脳皮質形成および神経ネットワーク形成へ与える影響を検討した。本研究では胎生期におけるグルココルチコイド曝露が将来抑制性ニューロンとなる介在ニューロンの移動障害を起こし、胎生期の皮質内不均一分布を起こすことを確認している。また胎生期グルココルチコイド曝露後、思春期前後においても前頭前野の体積減少が起きていること、加えて白質での神経線維走行異常といったネットワーク形成障害を起こすことを明らかにした。ヒト、齧歯類において胎生期・新生児期のストレス/グルココルチコイド曝露は脳発達障害・神経ネットワーク形成障害を起こし、思春期・成人期の行動異常および精神疾患発症の素因となることがすでに報告されている。しかしながらその分子メカニズムは未だ解明されていない部分が多い。本研究では胎生期ラット・マウスにストレス応答性ホルモンであるグルココルチコイドを曝露し、後の大脳皮質形成障害および神経ネットワーク形成過程異常を分子メカニズム含め解析することを目的とする。大脳皮質形成障害は介在ニューロンの細胞形態および移動様式、特に正中隆起からの接線方向移動およびその後の皮質内への進入時期に注目した。解析はグルタミン酸脱炭酸酵素67遺伝子に緑色蛍光蛋白質遺伝子をノックインした(GAD67-GFP)マウスを用いた。妊娠後期のグルココルチコイド曝露は移動中の介在ニューロンの不均一分布をもたらした。特に脳室下帯/中間帯を移動する細胞の割合が減少し、一方で正常群よりも早く皮質に分布する細胞の割合が増えた。また介在ニューロン細胞培養下では、グルココルチコイドが細胞突起の分枝異常をもたらすことを発見した。次に胎生期にグルココルチコイド曝露されたラットの青年期における発達および神経ネットワーク形成を磁気共鳴画像法にて解析を行った。脳組織部位ごとに体積を測定し比較すると前頭前野、白質の体積が減少すること。さらに拡散テンソル画像法を用いて軸索束走行を可視化した結果、扁桃体から海馬間の軸索走行異常を見出した。統合失調症、うつ病を始めとする精神疾患の発症原因を包括的に説明する仮説の一つとして神経発達障害仮説が提唱されている。これは胎児期の脳発達異常、その後の神経ネットワーク形成異常が思春期・成人期における疾患発症リスクを高めるという説である。遺伝的要因に関して近年、ゲノムワイド関連解析が様々な施設で施行され、いくつかの脆弱性領域が報告されている。しかしながら環境要因から分子メカニズムレベルまで検討されている報告は少ない。本研究では胎生期ラット・マウスにストレス応答性ホルモンであるグルココルチコイドを曝露し、後の大脳皮質形成障害および神経ネットワーク形成過程異常を分子メカニズム含め解析することを目的とし研究を行った。平成22年度はグルタミン酸脱炭酸酵素67遺伝子に緑色蛍光蛋白質遺伝子をノックインした(GAD67-GFP)マウスを用い、妊娠後期のグルココルチコイド曝露が移動中介在ニューロンの不均一分布をもたらすことを明らかにした。そこで、平成23年度は介在ニューロン細胞培養を用いグルココルチコイド曝露により変化する移動に関連する因子の検索を行った。結果、皮質で分泌される走化性物質の受容体mRNA発現が低下することを発見した。また平成22年度に引き続き、胎生期にグルココルチコイド曝露されたラットの青年期における神経ネットワーク形成障害について11.7T MRIによる拡散テンソル画像法を用いて検討した。結果、グルココルチコイド曝露群で白質後部におけるfractional anisotropy値の低下が認められた。
人工心肺における白血球・血小板機能障害誘発機構の基礎的解明

心臓血管手術では、人工心肺、低体温などの影響で血小板機能障害がおこり、止血凝固系異常が生じて、術中術後の止血に難渋することもあるが、そのメカニズムは不明な点が多い。本研究では、高感度ミトコンドリア酸素呼吸測定装置によりミトコンドリア酸素消費量を測定し、呼吸能を解析した。予定症例数は30例であったが、除外症例が発生したため、まだ30例に達していない。実施済みの研究結果から、人工心肺開始後に時間経過とともにミトコンドリア呼吸能が低下するが、翌日には回復することが分かった。呼吸能低下の原因としては、Complex1と2が関与する可能性が示唆された。本研究は、心臓血管手術における人工心肺による白血球、血小板機能障害への影響を、ミトコンドリア酸素消費量を測定して、呼吸能を解析することで解明するものである。ミトコンドリア酸素消費量は、高感度ミトコンドリア酸素呼吸測定装置を用いて測定するが、これまで測定手順の確立、測定手技の向上のため、スウェーデンルンド大学の研究協力者をまじえて行うなど、本実験にむけての準備をしてきた。しかし、高感度ミトコンドリア酸素呼吸測定装置の不具合が発生したため、ルンド大学の研究協力者と再度、連携をとり、問題解決にあたっている。それにより、研究計画に遅延を生じている。高感度ミトコンドリア測定装置不具合の問題解決後はすみやかに実験再開する予定である。これまで測定手順の確立、測定手技の向上のため、スウェーデンルンド大学の研究協力者をまじえて行うなど、本実験にむけての準備をしてきた。本研究は心臓血管手術における人工心肺による白血球、血小板機能障害への影響を、ミトコンドリア酸素消費量を測定し呼吸能を解析することで解明するものである。ミトコンドリア酸素消費量は、高感度ミトコンドリア酸素呼吸測定装置を用いて測定するが、これまで測定手順の確立、測定手技の向上のため、スウェーデンルンド大学の研究協力者を交えて行うなど、本実験に向けての準備をしたが、ミトコンドリア酸素呼吸測定装置の不具合が発生し、研究計画に遅延を生じた。高感度ミトコンドリア測定装置の不具合に対し、ルンド大学の研究協力者と再度連携をとり、問題解決した。実験再開後は順調に症例数を消化しているが、症例数に限りがあり、いまだ研究の遅れを回復していない。初年度の高感度ミトコンドリア酸素呼吸測定装置の不良はスウェーデンルンド大学の研究協力者を交えて対応して解消した。現在は順調に症例を重ねているが、症例数に限度があり、研究の遅延を解消できていない。高感度ミトコンドリア酸素呼吸測定装置によりミトコンドリア酸素消費量を測定し、呼吸能を解析する。研究初年度に機器の不良により大幅に研究が遅延した。その後は、対象手術が予定よりも少なかったため、遅延を回復するに至っていない。昨年度中に、予定症例数30例には達したものの、除外症例が発生したため、追加で残り症例を実施している。機器のトラブルにより、初年度の症例数が大幅に予定を下回り、大きく遅延した。その後、機器トラブルは改善したが、対象となる手術数が予想を下回ったため、さらなる遅延をきたした。高感度ミトコンドリア酸素呼吸測定装置の不具合が発生したため、ルンド大学の研究協力者と連携をとり、問題解決にあたっている。それにより、研究計画に遅延を生じているが、高感度ミトコンドリア測定装置不具合の問題解決後はすみやかに実験再開する予定である。現在は順調に症例数をこなしているが、初期の高感度ミトコンドリア酸素呼吸測定装置のトラブルによる研究遅延が解消できていない。症例数に限りがあるため、対象症例の拡大も検討課題である。機器やテクニカルな面では現在、問題なく順調に研究は進んでいる。しかし、対象手術が予想を下回った状態が続いているため、研究期間の延長はやむを得ないものと考える。除外症例となった症例数を今年度は早急に追加で行う。高感度ミトコンドリア測定装置の不具合により、研究計画に遅延が生じている。遅延に伴い、その実験がまだ進行しておらず、試薬等の実験に伴う物品費が繰り越しとなったため、次年度使用額が発生した。初年度の高感度ミトコンドリア酸素呼吸測定装置トラブルによる研究遅延で、現在までの症例数が予定を下回っているため。

研究が遅延し、症例数がまだ少ないため、経費が少ないが、今後、必要となる。また、症例数が達成したのちは、統計解析などのデータ解析を行うため、その費用も今後発生する。今年度使用予定であった物品は、高感度ミトコンドリア測定装置の不具合の解決後、実験再開に伴い次年度に使用、計上される見込みである。目標症例数に達するまでの費用、および測定後の統計その他処理に対し使用予定。研究遅延により使用時期が後ろ倒しになっている。