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江戸の美学思想の解明―美と藝術の社会的位置づけをめぐって―

上記認識を基礎に「観客の誕生」(『芸術学の100年』担当論文)や台湾での伝統演劇の創出を論じた論考では、江戸の「教化」から明治に於ける国民の「開化」へと啓蒙の理念そのものが組み換えられたことを、能楽のジャンルと理念の変貌を論じて示した。能楽は、江戸の礼楽思想では「音楽」であり近代化100年をへて戦後、「伝統」概念の創出と共に「演劇」へと組み入れられたのである。この間、享受層も大いに変貌した。これらを全体的に展望したものが「変身する身心文化」及び中国での発表論文である。文化領域の価値的分類や藝術の享受層は江戸から明治へと変容した。そこで見失われたのは伝統的教養観念の持つ身心文化の全体性である。逆に身心文化と関わる伝統「藝能」が近代化の過程で要請され生まれた所以である。このように西欧の美的文化を受け止めた明治の翻訳語の「藝術」は、自ずから藝術概念が超歴史的で唯一不変の普遍的なものではなく、江戸の日本ひいては東アジアの歴史性を担い、文化の多様性と共に将来の変化の可能性に開かれていることが了解された。西欧近代に成立した美学や芸術をはじめとする諸学諸文化は、遅れて近代化を遂げることになる国々に於いては、普遍的な学知やまた文化のモデルとして振る舞う。その結果、例えば日本でも江戸の美学や芸術観は、明治以降、西欧の知的精神的な芸術観の影響の下に学術の世界では忘却され、公的教養の場面ではなく、私的教養たる芸道や芸能として展開せざるを得なかった。このことに纏わる問題の構図が明瞭に自覚されて、それを解明することが、ここ10年来の日本の美学や芸術学の分野に於ける一つの重要な知的潮流となっている。もとより、この問題は日本だけでなく汎く遅れて近代化を歩む諸国に共通の政治文化的な構図である。日本が西欧の美学や芸術観をいかに輸入し、近代化を精神面また制度面で果たしていったかを追求するためには、受容の土壌の検討が必須である。その点を扱う下記論考「江戸儒学に於ける<芸>の文化的位置づけ」は、江戸の芸術観が伝統的なハビトス論(その典型は仏教的ハビトス論としての中世芸道である。その核にある概念とイメージを「世阿弥の植物的世界観に於ける美的ハビトスについて」で検討示した。)の儒教的展開であり、その政治的文化的意味づけであることを示した。そこには中国を核とする東アジアの影響が顕著である。西欧と東洋の一点、日本とを文化空間的に比較する従来の比較論的な視点の持つ政治性と素朴な自己中心性を超えて、東アジアの中世以前そして近世から近代、更に現代に至る芸術観の変容を、歴史的文脈の変容と共に一つの文化圏の中で歴史的に分析する必要がある。この点に関する見解を中国の二つの代表的な雑誌に載せて展開した。これらを含め、2001年夏、第15回国際美学会で日本の芸道に焦点を絞って発表し、また、2001年秋の第52回の美学会で国際美学会の報告をシンポジウムで担当し、上記の趣旨と絡む21世紀の美学の展望を述べた。日本が、江戸の美学や藝術意識や社会的制度の上に、いかに西欧の美学や芸術観をいかに輸入し、近代化を精神面また制度面で果たしていったかを藝術教育の面から探求したのは、2002年の夏、中国の青島で発表した"Geidoh(藝道)as an Educational Concept-On Cultivation through Artistic Practice-"である。知育偏重の近代教育は藝術教育についても一種ブッキッシュな教養主義を招来し、公教育の分野からの伝統的な藝術実践の伝統が排除された。伝統的な藝術教育は、芸道や芸能に委ねられ、新たに私的教育の分野で芸事や習い事が成立した。上記論考が、山東大学から英語で、また中国語で浙江師範大学から、刊行の予定である。藝術教育の問題は教育を受容する人間観の問題と関わる。「器の詩学」は、人間を器として理解する伝統を東アジアの中に探り、辿ったものである。その結果、江戸儒学に於ける<芸>と人間の文化的位置づけが解明できた。
先史遺跡の高精度編年と古環境推定のための黒曜石水和層法の開発

年代測定および古環境推定に用いるための黒曜石水和層法の研究を行った。従来用いられているプレパラート法による水和層厚の計測を行った。計測値のばらつきをサンプル内とサンプル間で比較し、信頼性の高い計測値を選びだす方法を示した。北海道の完新世の遺跡から抽出したサンプルを用いて、信頼性の高い計測値を選択し、遺跡の年代推定を行った。また、温度が水和層を発達させる要因となることから、近年用いられているロジャースの公式から水和層の形成に影響する温度を推定した。推定された温度からは、古気候および埋没環境が温度推定に与える影響が示唆された。本研究は信頼性の高い黒曜石水和層法を開発し、先史遺跡の高精度編年と古環境推定に貢献することを目的とする。本年度は、黒曜石水和層の観察・計測のためのサンプルの収集および観察方法の習得を行った。北海道の更新世末から完新世前期(後期旧石器および縄文時代)の遺跡より出土した資料よりサンプルの収集を行った。行政法に基づく埋蔵文化財調査によって得られた資料であるため、サンプルの破壊分析を行なうことが可能な資料を選別しなければならず、そのために時間を要した。結果的に、北海道厚真町ヲチャラセナイ遺跡、北海道帯広市暁遺跡(後期旧石器時代・縄文時代)、同市八千代A遺跡(縄文時代)の黒曜石石器から分析サンプルを抽出した。抽出したサンプルの一部について観察用のプレパラートを作成し、水和層の観察を行ったが、水和層および計測法の確定に時間を要した。具体的には、暁遺跡の後期旧石器の石器サンプルについて計測された水和層の厚さは3.2μであり、同一資料について近堂が報告している計測値(4.0μ)よりも薄い結果となった。このことから水和層の観察法を体系化する必要があることを認識し、アメリカ合衆国の水和層研究者であるトム・オリガー氏の指導を得て、適切なプレパラートの作成と観察・計測法を確認した。この作業と並行し、気温の日較差と年較差を考慮したRogersの公式(Rogers 2007)を用いて、効果温度の推定を行った。帯広市暁遺跡における縄文時代の住居1の床面より出土した黒曜石の水和層発達について、遺跡近傍の気象データを利用して推定された効果温度は、8.96°Cであった。これは近堂(1988)で利用されている同遺跡の効果温度(8.5°C)とほとんど等しいことがわかった。前年度で得た遺跡出土黒曜石の水和層観察と計測を行った。オリガー氏の指導に基づき、新たにサンプルを作成し、水和層の観察と計測に成功した。今年度は、完新世前期に相当する縄文時代の遺跡である北海道厚真町ヲチャラセナイ遺跡の剥片集中から抽出した黒曜石剥片を主たるサンプルとした。これらについてプレパラートを作成し、偏光顕微鏡を利用して観察を行った(200ー500倍)。まず観察によって水和層の有無を確認し、水和層が確認された場合には、剥片の背面と腹面側でそれぞれ3ヵ所ずつ計測を実施した。計測値の平均とばらつきをサンプル内とサンプル間で比較し、サンプル内部の変異が少ないことが確かめられた。これによって、当該サンプルの計測値を年代測定に用いることの妥当性を確認した。計測した水和層厚とこれらのサンプルが得られたヲチャラセナイ遺跡の放射性炭素年代をフリードマンらの公式(Friedman and Smith 1960)に代入し、水和速度を計算した。その水和速度は、該当遺跡の黒曜石石器に多く利用されている北海道置戸産の黒曜石が8ー9°Cの環境に置かれたときの水和速度と近似していることから、導かれた水和速度は妥当であると考えられた。またSIMS(二次イオン質量分析法)によってサンプルの一部について水和層厚を計測した。SIMSによって表面から内部方向にかけての水素イオンの濃度分布が高い解像度で明らかとなり、顕微鏡下で計測した水和層厚と対応することが確認でき、プレパラート法と相互補完的な計測法となることを確かめた。一方、古環境の推定に関しては、水和速度の決定に関わる変数(温度、黒曜石の含水量、元素組成、遺跡形成過程)を考慮する必要があり、水和層形成に関わるデータを多地域より収集する必要があり、国内外の研究者と連携した今後の体系的な検討が課題となる。遺跡出土のサンプル抽出と観察法の確定に時間を要したため、本来のスケジュールよりも遅れることとなった。25年度が最終年度であるため、記入しない。プレパラート法による水和層の適切な観察法と測定法を確認することができたため、今後は抽出したサンプルのプレパラート化と観察・計測を行う。
筋萎縮性側索硬化症における痴呆症状発現の病態生理(海馬におけるイノシトール1, 4, 5三リン酸受容体(IP3)およびリアノジン受容体の変化について)

1型イノシトール1, 4, 5-三リン酸(IP_3)受容体の生理学的機能を分析する目的で、同受容体を欠損したマウス(Matsumoto et al. Nature 379: 168-171, 1996)のIP_3結合能および行動様式を観察した。野性型マウスでは、脳内IP_3結合は、我々が既に砂ネズミで報告しているごとく、小脳皮質で最も高く(674±73 fmol/mg)、海馬CA1(375±71 fmol/mg)や線条体(357±63 fmol/mg)がそれに次いで高い値を示していた。一方、1型IP_3受容体欠損マウスでは、脳内IP_3結合は、小脳皮質で133±29 fmol/mg、海馬CA1: 209±74 fmol/mg、線条体: 114±32 fmol/mgと有意に減少していた。残存していたIP_3結合は、2型や3型などのIP_3受容体によるものと考えられた。この1型IP_3受容体欠損マウスは胎内でかなりの割合が死亡するが、生まれてきたものでは生直後は特に行動異常は認められなかった。しかし、生後9日目より小脳失調症状が出現し、歩行が不安定化した。更に生後15日頃より躯幹をねじ曲げる姿勢異常が出現し、生後20-23日後より繰り返す強直間代発作が明らかとなり、脳波上大脳にて棘徐波の広範な出現が観察された。またオピストトーヌスも間歇的に出現し、生後25日前後で死亡した。上記痙攣発作はpentobarbitalで抑制され、diazepamで抑制された発作はflumazenil投与により再出現した。以上より、1型IP_3受容体は小脳による協調運動機能および大脳皮質を中心とした神経細胞興奮性の調節に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。更に、各種神経疾患におけるIP_3受容体の変動を明らかにする目的で、脳虚血時の脳内IP_3受容体結合能の変動を砂ネズミ一側総頸動脈閉塞モデルを用いて観察した。その結果、30分の重度虚血では脳内各領域でのIP3結合能は保たれていたが、2時間の重度虚血時には海馬CA1で同結合能が選択的に低下していることが明らかとなった。虚血侵襲に対し大変脆弱な海馬CA1でこのような変動が認められたことは、虚血性損傷にIP_3を介するセカンドメッセンジャー系が密接に関与している可能性が示唆された。脳虚血病態解明の一助として脳内セカンドメッセンジャー系に注目し検討してきた。特にアデニレートシクラーゼ系、プロテインキナーゼCあるいはエンドセリンの各受容体特異的結合能の定量的測定をそれぞれ^3H-

forskolin,^3H-phorbol 12,13-dibutyrate (PDBu)や^<125>I-endothelinなどの放射性同位元素を用いたオートラジオグラム法で行ってきた。砂ズミの脳で、一側総頸動脈を結紮することにより脳虚血を作製し、これらセカンドメッセンジャー系が虚血時にどのように変化し、また、時間的にもどのように変化していくかを検討してきた。今回IP_3あるいはリアノジンにおいても同様のモデルで現在検討しており、特にIP_3受容体については海馬において虚血により特異的に障害される結果を我々は得てた。即ち、記憶機能と密接な関連のある海馬は正常脳において特にIP_3受容体の集積している部位であるが、虚血に対して最も鋭敏にIP_3受容体が反応することを明らかにした。脳虚血病態解明の一助として細胞内情報伝達系のうちでもセカンドメッセンジャーに注目し検討してきた。特にアデニレートシクラーゼ系、プロテインキナーゼCあるいはエンドセリンの各受容体特異的結合能の定量的測定をそれぞれ^3H-forskol in,^3H-phorbol 12,13-dibutyrate (PDBu)や^<125>I-endothelinなどの放射性同位元素を用いたオートラジオグラム法で行ってきた。実験対象として砂ネズミの脳で、一側総頸動脈を結紮することにより脳虚血を作製し、これらセカンドメッセンジャー系が虚血時にどのように変化し、また、時間的にもどのように変化していくかを検討してきた。今回用いるIP_3あるいはリアノジンにおいても同様のモデルで現在検討しており、特にIP_3受容体については海馬において虚血により特異的に障害される結果を我々は得ている。即ち、記憶機能と密接な関連のある海馬は正常脳において特にIP_3受容体の集積している部位であるが、虚血に対して最も鋭敏にIP_3受容体が反応することを明らかにしている。本年度は、1型イノシトール1,4,5-三リン酸(IP_3)受容体の生理学的機能を分析する目的で、東京大学医科学研究所の御子柴教授のもとで開発された同受容体を欠損したマウス(Matsumoto et al. Nature 379: 168-171, 1996)の、IP_3結合能および行動様式を観察した。野生型マウスでは、脳内IP_3結合は、我々が既に砂ネズミで報告しているごとく、小脳皮質で最も高く(674±73fmol/mg)、海馬CA1(375±71fmol/mg)や線条体(357±63fmol/mg)がそれに次いで高い値を示していた。一方、1型IP_3受容体欠損マウスでは、脳内IP_3結合は、小脳皮質で133±29fmol/mg、海馬CA1: 209±74fmol/mg、線条体: 114±32fmol/mgと有意に減少していた。残存していたIP_3結合は、2型や3型などのIP_3受容体によるものと考えられた。この1型IP_3受容体欠損マウスは胎内でかなりの割合が死亡するが、生まれてきたものでは生直後は特に行動異常は認められなかった。しかし、生後9日目より小脳失調症状が出現し、歩行が不安定化した。更に生後15日頃より躯幹をねじ曲げる姿勢異常が出現し、生後20-23日後より繰り返す強直間代発作が明らかとなり、脳波上大脳にて棘徐波の広範な出現が観察された。またオピストトーヌスも間歇的に出現し、生後25日前後で死亡した。上記痙攣発作はpentobarbitalで抑制され、diazepamで抑制された発作はflumazenil投与により再出現した。以上より、1型IP_3受容体は小脳による協調運動機能および大脳皮質を中心とした神経細胞興奮性の調節に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。
生殖医学におけるＴＩＭＰの役割－着床障害マウスにおける不妊症と妊娠高血圧症候群－

細胞外マトリックス分解酵素Matrix Metalloproteinase (MMP)を抑制するTIMP3(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3)に注目し、妊娠初期マウス子宮への一過性遺伝子導入系を作製し、妊娠子宮に及ぼす影響を検討した。その結果、TIMP3導入マウスはコントロールマウスに比べて、妊娠14.5日以降の収縮期血圧が有意に上昇し、胎仔にIUGRを引き起こした。TIMP3は、妊娠高血圧症候群の成因に関与している可能性が示唆された。平成24年度は、TIMP-3を妊娠初期マウス子宮に遺伝子導入する手技が安定し、交配後6.5日目の妊娠マウス子宮局所に、TIMP-3を安定的に遺伝子導入できるようになり、妊娠高血圧症候群モデルマウスを作成できるようになった。TIMP-3遺伝子導入マウスは、妊娠後半期の尾動脈収縮期血圧の上昇を認め、着床期子宮内膜側のTIMP遺伝子のmanipulationが妊娠高血圧症を惹起する可能性を示唆する結果となった。しかし、TIMP-3遺伝子導入妊娠マウスの胎盤所見からは、妊娠高血圧症に特徴的な子宮脱落膜への浅い浸潤(shallow placentation)を確認することはできなかった。さらに、TIMP-3遺伝子導入妊娠マウスは、コントロールマウスと比較し、尿中タンパク濃度の有意な上昇を認めなかった。従って、現在のところTIMP-3の子宮への遺伝子導入のみでは、妊娠高血圧症候群に伴う全ての表現型を再現することはできないと考えている。また、レンチウイルスを用いてTIMP-2を透明帯除去マウス胚盤胞へ遺伝子導入することにより、着床期胎盤でのTIMP-2の過剰発現に成功した。現在TIMP-2過剰発現マウスの解析を開始するところである。さらに、TIMP-3遺伝子導入妊娠マウスは、コントロールマウスと比較し、尿中タンパク濃度の有意な上昇を認めず、腎臓の病理学的変化を確認することはできなかった。従って、TIMP-3の子宮局所への遺伝子導入のみでは、妊娠高血圧症候群に伴う全ての表現型を再現することはできないとの結論に至った。我々はヒト妊娠高血圧症候群の病態解明のため、子宮局所へのTIMP-3一過性遺伝子導入法を用いて、TIMP-3の子宮局所における機能とそのシグナルトランスダクションの解明を試みてきた。すなわち、(1)TIMP-3の発現が認められない時期に、TIMP-3を子宮局所で強制発現させる事により妊娠高血圧症候群モデルマウスを作製する。(2)正常妊娠経過におけるTIMP-3の発現誘導の機序についてDNAマイクロアレイ解析を行う。(3)これまで妊娠高血圧症候群に関係するいくつかのTIMPsのサブタイプが報告されており、どのサブタイプが重要な役割を果たしているかを同定する。(4)絨毛細胞と子宮内膜との接触(着床現象)におけるTIMP-2の役割の解析を行う。現在のところ、(1)と(4)については、現在データ解析を進めているところである。しかし、(2)、(3)の研究については、明確な結論を引き出すには至らず、今後の研究に委ねなければならない。不妊治療において、着床障害による不妊症に対する治療法は確立されていない。また、妊娠高血圧症候群は、妊娠合併症の中で、母児双方の生命予後を脅かすきわめて重篤な疾患である。私たちは、これらの諸問題に取り組むため、Tissue inhibitors of matrix metalloproteases (TIMPs)に注目し、TIMP-3をマウス着床期子宮内膜に高発現させると、妊娠高血圧症候群が発症すること、TIMP-2をマウス着床期胎盤に高発現させると、胚の着床率が上昇することに注目し、着床現象を細胞生物学的・分子生物学的に解明することを目的に研究を進めている。本申請の3年間の間に、我々がこれまで取り組んできた一過性子宮局所における遺伝子導入法を用いて、妊娠高血圧症候群の病態の解明を目標として、TIMP-3の子宮局所における機能とそのシグナルトランスダクションを解明したいと考えている。さらに、レンチウイルスを用いた着床期胎盤への遺伝子導入法を用いて、子宮内膜との相互作用におけるTIMP-2の役割の解明を目標とする。

さらに、(4)絨毛細胞と子宮内膜との接触(着床現象)におけるTIMP-2の役割の解析を行う。以上が3年間の目標である。現在のところ、(1)と(4)の研究が順調に進んでいる。しかし、(2)、(3)の研究については、今年度より開始する予定である。TIMP-3を発現ベクターpcDNA3にサブクローニングし、pcDNA3-TIMP-3/HVJ-Eベクター(GenomONETM-Neo、石原産業(株))懸濁液として、胎盤形成期にあたる交配後6.5日目のICRマウス(8-12週齢)の子宮に導入した。子宮脱落膜において、交配7.5日目にTIMP-3の発現を認め、それによりMMP9の発現の減弱を認めた。さらに、TIMP-3遺伝子導入マウスは、コントロールと比較し、交配後14.5日目以降、収縮期血圧の有意な上昇を認めた。我々はこのマウスが、純粋型妊娠高血圧症候群の解析のためのモデルになりうると考え、妊娠高血圧症候群に対する治療法の開発に取り組みたいと考えている。今後の研究としては、次の2項目となる。1正常マウス妊娠経過におけるTIMP-3の子宮局所発現の制御機構についてDNAマイクロアレイ解析を行う。また、これまでいくつかのTIMPsのサブタイプが報告されており、妊娠高血圧症候群に関係するサブタイプを同定する。これにより、ヒト妊娠高血圧症候群における子宮脱落膜のTIMPsと絨毛細胞のMMPの発現制御についての妊娠経過における発現制御について詳細な解析を行い、治療の可能性について検討する。2我々は、着床に関わる遺伝子を解析する目的で、TIMP-2遺伝子をマウス胚盤胞へ導入し、着床期絨毛細胞特異的にTIMP-2を導入する予備実験に成功し、TIMP-2遺伝子導入を行ったマウス胚盤胞には、胎盤特異的なTIMP-2遺伝子導入を確認した。さらにTIMP-2遺伝子を絨毛細胞に導入したマウス胚盤胞と、コントロール遺伝子を導入した胚盤胞をそれぞれ偽妊娠マウス子宮に同数ずつ胚移植し、産仔数を比較したところ、TIMP-2導入マウスからの産仔数が、有意に上昇した。TIMP-2遺伝子の着床部位の発現パターンを確認し、着床部位における他のMMPs/TIMPsサブタイプの発現プロフィールを免疫組織学的に検討し、TIMP-2の着床における役割を詳細に検討する予定である。pcDNA3-TIMP-3/HVJ-Eベクター(GenomONETM-Neo、石原産業(株))
走査トンネル顕微鏡による吸着高分子鎖の形態の研究

走査トンネル顕微鏡(STM)を用いてグラファイト上に吸着または析出させた高分子鎖の形態観察を行った。まずやわらかい高分子であるポリビニルカルバゾ-ルを用いヨ-ドをド-ピングすることにより吸着高分子鎖の大局的吸着形態をとらえることができた。またこの形態は孤立吸着鎖に対する理論予測とも合うことが分った。ついでDNA分子の二重らせん構造(2型)の観測にも成功した。これらをふまえグラファイト表面が疎水性であり,この表面上で分子を孤立させるには分子表面の疎水性・親水性のバランスが必要ではないかと考え,でんぷんを構成する高分子であるアミロ-スをえらび,これのSTM観察を試みた。アミロ-ス分子表面は疎水性と親水性をかね備えていると考えたからである。予想通りアミロ-ス分子の孤立した分子像の観測に成功し,一重らせん構造をとらえることができ,分子の全長は分子量から求めた値と一致し更にらせんのピッチも結晶構造と一致することが分った。つづいて電解質多糖であるKーカラゲナンゲルの架橋領域の観測にも成功し,架橋領域が23本の棒状カラゲナン分子の平行配列的なス-パ-ストランドから成り,カラゲナン分子がピッチ25A,太さ15Aのヘリックスであることも明らかにできた。これらはいづれも世界で始めての観測例である。以上をまとめるとSTM観察に成功するか否かはグラファイト表面と高分子表面の相互作用の適当なバランスが必要ということになり,改めて高分子の分子表面科学という新分野の研究の重要性を指摘した。走査トンネル顕微鏡(STM)ナノスコーブΙ型は昨年秋に到着し、直ちに研究に入った。高分子試料をのせる基板のグラファイトのSTM像は良好な観察結果が得られ、グラファイト表面の蜂の巣型構造を確認しえたが、これに高分子超希薄溶液(ポリスチレン等)の液滴をのせ、溶媒蒸発後高分子像を観測する試みはまだ成功していない。その理由として吸着分子のSTM像をうるためには基板が(a)できるだけ平坦(b)高分子を通しての充分な電流量のほかに(c)基板表面上での高分子のモビリティ(可動性)の抑制が必要と考えられる。グラファイト表面上では吸着力等の問題もあり吸着分子が滑り易く、また溶媒の蒸発によって吸着高分子が動き、更に液滴の表面張力によって高分子が溶液周辺部に凝集するためではないかと考えられている。現在の状況を突破するためには(1)もっと広範囲のSTM像の走査(スキャン)を可能とするXーYステージの導入と(2)別の吸着固定化法、例えばガラス状カーボンを基板として使用することなどを検討しつつある。走査トンネル顕微鏡(STM)による有機分子の直接観察は、(1)有機分子が一般には導電性をもたないこと、(2)観察に用いられる高配向グラフファイト基盤と有機分子の分子間力、すなわち吸着力が弱いため分子が基盤上を動き易い(すべり易い)という2点のために観測が極めて困難であることが分かった。そこで本年度はまず高分子にトンネル電流に対する導電性を附与することを思いつき、ポリビニルカルバゾ-ルおよびポリビニルピリジンを選び、これらのモノマ-単位当りヨ-ド分子が1個あるいは2個となるような組成で溶媒中で電荷移動錯体を形成させ、へき開したHOPG上に滴下しSTM観察を行った。ごく低濃度溶液から析出させたとき高分子像をとらえることはできたが孤立した高分子像はとらえられなかった。むしろ高濃度溶液から析出させた時のSTM像が吸着高分子に予想されるル-プ・トレイン・テイル形態を保ちつつ固体表面上に析出した高分子の大局的な像に合うことが分かった。またこの吸着STM像の直径がほぼ溶液中のランダムコイルの直径に近く、したがってド-ピング法によって吸着鎖の大局的形態が観測できることが分かった。

しかしこのヨ-ドによるド-ピング法では分子構造の詳細がえられる程の解像度がえられないことも分かった。もう一つの重要な知見として、グラファイト基盤上の分子運動を減らす全く一般的な方法は基盤と相互作用する分子当りのセグメント数を増加させることにあるということが分かったことである。これは全く高分子吸着に特長的なこととして、従来われわれが主張してきたことと合致している。本年度は走査トンネル顕微鏡(STM)による生体高分子観察に画期的進歩がえられた。まず液晶を形成する4ーシアノー4ーnーデシルビフェニルの2次元液晶配列の観察に成功したこと,ついで液晶形成能をやはり持つDNAの二重らせん構造の観察に成功した。この結果必ずしもド-ピングして試料を導電性にすることがSTM観察に必要ないことが判った。しかしながら一本一本の高分子にグラファイト上で分離して観察することにはDNAでも成功しなかった。グラファイト表面が疎水性であり,この表面上で分子を孤立させるには分子表面の疎水性・親水性のバランスが必要ではないかと考え,まずでんぷんを構成する高分子としてアミロ-スをえらび,これのSTM観察を試みた。アミロ-ス分子表面は疎水性と親水性をかね備えていると考えたからである。予想通りアミロ-ス分子の孤立した分子像の観測に成功し,一重らせん構造をとらえることができ,分子の全長は分子量から求めた値と一致し更にらせんのピッチも結晶構造と一致することが分った。つづいて電解質多糖であるКーカラゲナンゲルの架橋領域の観測にも成功し,架橋領域が23本の棒状カラゲナン分子の平行配列的なス-パ-ストランドから成り,カラゲナン分子がピッチ25A^^°,太さ15A^^°のヘリックスであることも明らかにできた。以上をまとめるとSTM観察に成功するか否かはグラファイト表面と高分子表面の相互作用の適当なバランスが必要ということになり,改めて高分子の分子表面科学という新分野の研究の重要性を指摘した。
遊びの中に見られる幼児の数学的思考力, 表現力の育ちに関する研究

○研究目的:本研究は、幼児の数学的な概念や思考力に関する研究である。「算数科」としては切り取られていない幼児の園での生活や遊びの場面で、子ども達はどのように数学的感覚をもち、育まれていくのかを検証する。本研究によって、小学校就学前の子ども達がどのような数的世界を味わい、数学的な概念や思考力・表現力を獲得し、教科としての「数学的学び」に結びついていくのかを明らかにする。○研究方法:1幼稚園での生活、遊びでの数学的体験、環境設定の実態を調査する。園内の遊びや環境を改めて見直し、数を数える、形を捉える、量・長さを比較する等の数学的活動と見られる事例を集め、子ども達の数学的な世界への興味関心を把握する。2幼児期の数学的体験を生かした算数科導入期の授業構想を練る。小学校1年生の算数科の授業の導入時期を参観し、「幼児期の数学的体験を生かした授業づくり」「園内に見られる数学的活動について」小学校教諭と情報交換を行う。3先進園・校を視察し、園内の環境設定や遊びの観察、また新学習指導要領全面実施に向けての「算数科」の動向を学ぶ。4子ども達が数学的世界に親しみ数学的思考を育むような遊び、一斉の活動、環境づくりを工夫する。○研究成果:園内での数学的環境、活動は想像以上に多く、3歳児から日常的に触れていることがわかった。特に、子ども達が使用し易いように整理された道具類も、「形を捉える」「身の回りの物をある観点から分類する」という数学的体験・活動であり、幼児が「これはどの仲間か」と課題意識をもって分類し思考している姿を実感した。また数唱はどの年齢でも親しまれているが、「物を数える楽しさ」から徐々に「数量的な意味」をもった数の理解へとつながっていく。小学校「算数科」の実感を伴った理解への土台づくりとして、幼児期には、数学的知識を獲得することよりも、子どもの数学的興味関心に寄り添い、子どもの思いや願いを叶えられる豊かな体験をさせることが必要であると考えた。
銀板写真と19世紀前半のアメリカ文学

1839年の銀盤写真の登場が19世紀前半のアメリカ文学に与えた影響について研究した。2度の米国での資料調査では、当時の銀盤写真に関する反応を明らかにするため、新聞、雑誌、写真などを広く調査した。新たな歴史的資料を発見することができた調査の成果を、3本の論文にまとめた。1840年代のフィラデルフィアにおける銀盤写真家、肖像画家と作家との関係を分析した論文では、写真が直接登場しない作品においても、写真というこの新たな表現媒体が暗示的に示され、その影響を読みとることができる点を指摘した。新たな作品の読み方を提示すると同時に、視覚芸術と文学ジャンルの連動性を提示した。平成26年度は、米国ロチェスター大学George Eastman House Library Rare Books、ニューヨーク公立図書館Stephen A. Schwarzman Buildingでの調査を中心に、ほぼ計画通りに順調に研究を進めることができた。1840年代の銀板写真家が残した作品や当時の新聞記事など貴重な資料を数多く収集した。また肖像画家と銀板写真の関係性など、研究開始当初視野に入れていなかった点の重要性を再認識する発見もあり、本研究がさらに大きく前進する可能性を感じる大変意義ある資料調査となった。特に、ポーとも親交が深かった画家トーマス・サリー、ロバート・サリーの資料をニューヨーク公立図書館で読むことができたことで、当時の肖像画と銀板写真との関係性に新たな視点を見出すことができた。銀板写真のみならず、視覚芸術というより広い視点から今後の研究を進めていくべく、軌道修正をして、今後の研究を進めていく計画である。また、ニューヨーク州立大学バッファロー校での指導教官であったデイビッド・シュミッド教授、また博士論文審査委員のキャリー・ブレイメン教授と会い、研究に関して多くの助言を得られたのも大きな励みとなった。夏以降、持ち帰った資料の分析と論文執筆に取り掛かった。本研究は、19世紀前半のアメリカ文学に銀板写真が与えた影響について、ホーソーン、メルヴィル、ポー、エマーソン、そしてファニー・ファーンら女流作家らの作品、手紙、手記を通じて明らかにすることを目的としているが、現在執筆中の論文はホーソーンとポーを中心に銀板写真との関係性を考察するものである。動物磁気学と銀板写真の関連性を両作家の作品を通じて論じると共に、ポー作品における死者の蘇りや反復といったテーマを銀板写真、肖像画をとりまく当時の言説と併置させて分析し、新たな解釈の可能性を提示することを目指している。これらの調査結果、資料を帰国後に分析し、19世紀前半のアメリカ文学に銀板写真が与えた影響について新たな解釈を示すべく論文執筆作業にとりかかった。資料分析の他、写真と文学の関連性についての先攻研究を体系的に網羅するために伊藤詔子、Michael J. Deas, Barbara Cantalupo, Susan Elizabeth Sweeney, Susan S. Williams, John Treschらの研究書にあたり執筆を進めた。直接写真を作品に登場させていない作品にも、写真という新たな表現媒体が与えた影響を読みとることができる点を、個々の作品に即して明らかにし、新たな作品の読み方を提示すると同時に、視覚芸術と文学というジャンルの連動性を示すことを目指す論文を執筆し米国雑誌に投稿した(現在査読審査中)。研究計画では口頭発表をする予定であったが、論文として投稿することに変更したために、論文執筆により多くの時間を費やした。また完成した論文を査読審査期間が約半年という米国雑誌に投稿したため、成果が認められるかどうか判明するまで時間を要している。冬にも渡米を計画していたが、校務や他の論文執筆に時間を要したため実現できなかった。以上の理由から、本年度は研究計画よりもやや遅れているため3を選択した。米国雑誌PoeStudies: History, Theory, Interpretation(イェール大学出版)に投稿していた英語論文が査読審査を通り、平成29年3月に2回目の修正作業を終え、平成29年度中に出版されることが決定した。エドガー・アラン・ポー研究の国際的学術雑誌として権威ある本雑誌への掲載は、本研究の大きな成果と言える。本論文は同時代作家ナサニエル・ホーソーン、ラルフ・ウォルドー・エマソン等の先行研究を踏まえた上で、1840年代のフィラデルフィアにおける銀盤写真家、肖像画家、そして作家エドガー・アラン・ポーの関係性を新たな歴史的資料に基づいて論じたものである。平成26年度及び27年度のロチェスターのジョージ・イーストマン・ハウス貴重書図書館、イェール大学美術館、ニューヨーク公立図書館貴重書部門、フィラデルフィア等での渡米調査によって得られた一次資料の分析が大きく貢献していることは言うまでもない。また査読過程で指摘された文献を精読することによって、当時の銀盤写真に関して最新の研究を踏まえた多角的な視点を持つことができたことは、本研究を進める上で大きな助けとなった。哲学や心理学と視覚芸術論を結びつける先行研究を読んだことで、本研究を進めるうえだけでなく、今後の研究の方向性を考えていくうえでも大きな示唆を得ることができた。本研究は、19世紀前半のアメリカ文学に銀盤写真が与えた影響を検証することを目的として進めてきたが、本論文の掲載によって、上に挙げた作家についての検証は概ね計画を遂行できたと考えている。遅延の主な理由としては、米国雑誌に投稿していた英語論文の査読1次審査への修正に平成28年夏季休業中のほとんどの時間を費やし、2度目の修正に最後の数ヶ月を要したことがある。掲載に非常に近いレベルにあるという評価ではあったが、さらに参照すべき文献が20冊以上リストアップされており、それらを読み、より精密な分析を加えた上での再提出が求められた。

このため夏季休業中に予定していた米国調査を取りやめ、加筆修正作業に専念した。結果として、本論文で扱ったポー、ホーソーン、エマソンらの作家に関しては概ね計画通りに研究を進めることができた。しかしその反面、計画していた他の同時代作家(ウォルター・ホイットマンや同時代の女流作家)に関しては十分な研究に着手することができなかった。本研究は、19世紀前半の作家と銀盤写真の関係を包括的に分析することを目的とするため、これまでの研究で論じた作家以外についても取り上げて検証する必要性のある作家が多く存在している。以上の理由の他にも、その他の業務の多忙さもあり、これらの作家についての検証が予定通り進んでいないことから、(4)「遅れている」を選択した。同時に、最終年度の今年は、米国調査で得た資料や査読過程で指摘された文献に改めて目を通し、本課題が今後の研究の中でどのように発展しうるかを模索した。より多角的な視点から写真と文学の関係性について検証すべく、心理学と視覚芸術論を結合させた先行研究、19世紀の日本、フランスにおける銀盤写真の受容などに関しても調査を行った。その結果、リアリズムの立役者ともなった写真が一般的に普及するにつれ、文学と写真、絵画の共同作業とでも呼べる相互依存的な関係が構築されていく点に気がついた。例えばトルーマン・カポーティやガートルード・スタインの作品がその傾向を顕著に表している。写真や絵画と極めて関わりが深いにも関わらず、視覚芸術との関係性という側面からは十分な分析がなされてこなかった作家を取り上げ、文学と視覚芸術が互いに影響し合う様を検証する学術的意義を強く感じた。その後、文学と視覚芸術を領域横断的に研究する際の論点、着眼点、そして意義を先行研究で検討した。大きなテーマではあるが、段階的に検証することによって研究可能であり、かつ意義のあるテーマだと考え、平成30年度の科研課題として申請し、採択されるに至った。視覚芸術と文学との関連性を考察するという今後の大きな研究プロジェクト課題を見出すと共に、その一環をなす研究に着手するための基盤を築づくことができた。最終年度の研究を発展的に締めくくることができた。1839年の銀盤写真の登場が19世紀前半のアメリカ文学に与えた影響について研究した。2度の米国での資料調査では、当時の銀盤写真に関する反応を明らかにするため、新聞、雑誌、写真などを広く調査した。新たな歴史的資料を発見することができた調査の成果を、3本の論文にまとめた。1840年代のフィラデルフィアにおける銀盤写真家、肖像画家と作家との関係を分析した論文では、写真が直接登場しない作品においても、写真というこの新たな表現媒体が暗示的に示され、その影響を読みとることができる点を指摘した。新たな作品の読み方を提示すると同時に、視覚芸術と文学ジャンルの連動性を提示した。
レセプター分子との複合体における糖鎖の高精度選択的検出法の開発

核磁気共鳴(NMR)法によるタンパク質-リガンド複合体の分子間相互作用の検出方法の開発を行った。従来は、重水溶媒(100% D_2O)での測定例が多かったが、試料調製の効率化の観点から軽水溶液(95% H_2O+5% D_2O)での試料溶液に対して、容易に測定できる手法の開発を行った。また、汎用性と実践面を考慮し、水シグナル近傍のリガンドシグナルの検出も可能となる、要請度が高いと思われる測定方法の開発に取り組んできた。医薬品の開発過程において有効なスクリーニング系の確立は不可欠であり、特にin vitroでのスクリーニング系として簡便、廉価な方法が望まれる。ここ数年、核磁気共鳴(NMR)法の薬剤スクリーニングへの応用が試みられており、新規なスクリーニング法として、製薬会社などで注目されている。現在までにSTD, NOEポンピング法など数種類の測定法が提案されているが,サンプル依存性が高く,汎用性のある測定法がないのが現状である.この現状を踏まえ、軽水溶液(90%H_2O,10%D_2O)において測定可能な、高精度なNMR測定法の開発を目指した。レセプター-リガンド複合体のモデルシステムとして、リゾチーム-グルコースおよびヒト血清アルブミン-トリプトファンを使用した。STD法およびWater-LOGSY法は他の方法と比較して、高親和性のリガンドに対しても応用可能と報告されていることより、これら2つのパルスシーケンスをベースに、高感度測定法の開発を行った。(1)Water-LOGSY法の開発:WATERGATE-W5シーケンスを最初に使用し、水の磁化を選択的に残した。次に、水の磁化を複合体に移動させ、最終的に低分子であるリガンド(グルコースまたはトリプトファン)シグナルを検出した。(2)STD法の開発:WETシーケンスを取り入れて、不要な水シグナルを選択的に消去し、直後にタンパク質のメチル領域を選択照射した。この手法により、タンパク質の磁化をリガンドに移して、リガンドシグナルを選択的に検出することに成功した。上記の2つの方法は共に、軽水溶媒(90%H_2O,10%D_2O)においても有効であることが判明し、特にSTD法はWETシーケンスの導入により、水近傍のリガンドシグナルの観測も可能になった。ここ数年、核磁気共鳴(NMR)法の薬剤スクリーニングへの応用が、製薬会社などで試みられており、分光学的なスクリーニング法として注目されている。現在までにSTD,NOEポンピング法など数種類の測定法が提案されているが,サンプル依存性が高く,汎用性に欠ける短所がある。本研究課題では、軽水溶液において測定可能な信頼度の高いNMR測定法の開発を目指した。STD法およびWater-LOGSY法は、高親和性のリガンドに対しても適用可能との報告がこれまでにあり、これら2つの測定法をベースに高感度化・高精度化を目標とした。リガンドレーセプター複合体のモデルシステムとして、リゾチーム-グルコースおよびヒト血清アルブミン-トリプトファンを使用した。STD法では、タンパク質シグナルを選択照射し、その磁化を結合しているリガンドに移して検出する。軽水溶液の場合、ほとんどの1Hが水分子由来であるので、これをできる限り選択的に消去する必要がある。この手法として、WATERGATEおよびZ-filterを使用し検討したところ、Z-filterを2回繰り返して使用したパルスシーケンスが最も水シグナルの消去が効果的であった。開発途中で生じた問題点として、タンパク質の消え残りのシグナルが挙げられる。特に、リゾチーム-グルコース複合体において顕著であった。これはリゾチームの分子量がヒト血清アルブミンの約25%程度と小さいためと考えられる。そこで、T2-filterをFID信号の取り込み直前に導入し、タンパク質シグナルの軽減を行った。核磁気共鳴法(NMR)により、リガンドーレセプター複合体の相互作用解析のための新規測定法の開発を行った。(1)モデルシステムとして使用した複合体モデルシステムとして、卵白リゾチームーグルコースおよびヒト血清アルブミンートリプトファンを使用した。リゾチームおよびヒト血清アルブミンは、共に市販品であり入手可能である。モデル化合物として実際に使用したタンパク質関連の試料溶液は以下の3種類である。(1)50mMグルコース+0.4mMリゾチーム(10mMリン酸緩衝液pH7.5)(2)2.OmMトリプトファン+0.1mMヒト血清アルブミン(3)2.OmMトリプトファン+0.1mMヒト血清アルブミン+2.OmMグルコース(2)NMR測定法NMR測定法として、STD法およびWater-LOGSY法の2種類が、高親和性のリガンドに対しても適用可能との報告がある。

本研究では水シグナル近傍のリガンドシグナル観測の観点より、STD法をベースに高感度化・高精度化を目指した。pre-saturationおよびZ-filterを繰り返して2回用いたシーケンスが水シグナルの消去に大変効果的であった。(3)リガンドシグナルの選択的検出リゾチーム+グルコース複合体においてリガンド(グルコース)シグナルの選択的検出を試みたところ、(2)で述べたpre-saturationおよびZ-filterの組み合わせにより、水シグナルの近傍にある全てのグルコースシグナルを検出できた。ヒト血清アルブミン+トリプトファン複合体にも応用したところ、巨大な水シグナルが線幅の細いシグナルとして観測され、水シグナルの近傍にあるグルコースの1位のシグナルも鮮明に観測された。この複合体においては、結合に関与しないグルコースが同一の溶液中に存在しても、リガンドであるトリプトファンの選択的検出が可能であった。
細胞記憶の揺らぎとその補正機構の解明

今年度はこれまでの転写メカニズムの概念を超える新規概念を導くきっかけがつかめた。樹立したES細胞におけるレチノイン酸応答、およびマウスの表現型やin situ hybridizationの結果から、ASH1Lによるメチル化は意外にもHox遺伝子発現の維持には必要ないが、細胞のレチノイン酸応答の感度のみに異常が疑われた。このことは同じtrxGであるMLL1と比較して根本的に機能が異なることを示唆している。ASH1Lのin vitroにおけるメチル化活性においては世界的にまだコンセンサスが得られていない(H3K4?or H3K36?)。これを解決すべく、活性ドメインを含んだ組み換えタンパク質を大腸菌で発現させ、ヒストンH3K36を特異的にメチル化することを確認できた。さらにES細胞のクロマチン解析を行い、in vivoにおいてもASH1LがヒストンH3K36を特異的にジメチル化することを確認した。一般的にヒストンH3K36のメチル化は転写の結果と考えられているが、今回我々はこれを覆すデータを取得することができた。すなわち、我々はDRBというP-TEFb活性阻害剤を用いることによりRNAポリメラーゼIIのS2リン酸化を阻害し、ASH1Lによるヒストンのメチル化がRNAポリメラーゼIIのS2リン酸化の前に起こることを証明できた。さらにヒストンH3K36のメチル化とRNAポリメラーゼIIのS2リン酸化の間には、ヒストンH4K16のアセチル化が関わっていることがわかってきた。すなわち、ヒストンH3K36のメチル化、ヒストンH4K16のアセチル化、RNAポリメラーゼIIのS2リン酸化というように、タンパク質修飾カスケードが存在することがわかったのである。ポリコーム群/トリソラックス群(PcG/trxG)は幹細胞の維持・分化の制御をはじめ様々な生物学的役割を持ち、生化学的にはクロマチンのリモデリング・修飾・ヒストン交換などを介して標的遺伝子の転写状態を維持している。本研究ではマウスのtrxGのひとつであるヒストンメチル化酵素ASH1Lに着目して、遺伝学的および生化学的解析を行い、その転写制御メカニズムを明らかにすることを目的とする。平成20年度に予定していた実験のほとんどが完了できた。まず、変異ES細胞を樹立できたことは今後の解析において重要な意義を持つ。マウスの表現型やin situ hybridizationの結果から、ASH1Lによるメチル化は意外にもHOX遺伝子発現の維持には必要ないが、細胞のレチノイン酸応答の感度に異常が疑われる。このことは同じtrxGであるNLL1と比較して根本的に機能が異なることを示唆している。今後ES細胞を用いてex vivoで仮説を検証したい。また、ASH1LとNEL18の遺伝学的解析では、それぞれの表現型を抑圧するというポジティブな相互作用の結果が得られ、ASH1Lは確かにtrxGとして機能することが哺乳類独自の実験で確認できた。さらに、ASH1Lのin vitroにおけるメチル化活性においては世界的にまだコンセンサスが得られていないところがある(H3K4?or H3K36?)が、これを解決すべく、活性ドメインを含んだC末端組み換えタンパク質を発現するHEK293細胞株を樹立できた。今後はこれを精製し、きちんとした形でメチル化の標的や数を確認したい。本年度の成果によって論文の基本部分ができたので、これから上述した発展的な実験を行い、仕上げをしたい。
ピコ秒時間分解能の磁気共鳴法開発と光化学素過程の研究

MRIなどに代表されるような広い分野で活用される磁気共鳴装置は、短寿命活性化学種の観測には不向きな装置である。この問題点の解決を目指し、最高でピコ秒時間分解能をもつ磁気共鳴分光装置を、レーザー光磁気効果を利用した原理に基づいて設計製作した。このような装置を用い、光化学反応や光物理過程で発生するスピン分極した常磁性分子の超高速観測実験を行い、装置の利点や欠点について総括した。初年度は、超短パルスレーザーの磁気光学効果によるラーモア歳差運動観測を行う光学システムの製作を行った。開発している光学システムでは、1台のピコ秒YAGレーザー(本年度申請経費で導入済)で、(1)ラジカルや光励起状態生成用の励起パルス、(2)ファラデー回転プローブ用のパルス、の2つの直線偏光した超短パルス光を出力する。励起パルスでセル中にラジカルを作り磁化を発生させる。遅延時間を置いてプローブパルスを入射し、磁気光学効果(ここではファラデー効果)で磁化を検出する。溶液サンプル用セルはフロータイプとし、磁場発生のためにセル全体を均一磁場でカバーする永久磁石を設計した。磁場とプローブレーザーの配置は、(1)磁場ベクトルとレーザーの波数ベクトルが垂直(Voigt配置)、および(2)平行(Faraday配置)である。2つの配置の装置では、Voigt配置がラーモア歳差運動と位相緩和を、またFaraday配置は磁化の大きさやエネルギー緩和の測定に用いる。試運転として、リンを含有する芳香族ケトンのサンプルに直線偏光ピコ秒355nmレーザーを照射し、光分解反応でリン中心ラジカルを発生させた。この反応では熱分布の数百倍のスピン分極が生じるので、これをプローブレーザーパルスのファラデー効果で観測し、超高速ESRスペクトルの観測を行う。本年度ではこの反応でのファラデー効果の測定準備を行い、装置の問題点や改良点を探った。2年度は、超短パルスレーザーの磁気光学効果によるラーモア歳差運動観測を行う光学システムを完成させ、その試運転をモデル分子に対して行うことを目的とした。本研究で開発中の光学システムでは、初年度に導入した1台のピコ秒YAGレーザーを用い、(1)励起パルスでセル中にラジカルなどを作って磁化を発生、および(2)生成した分子のファラデー回転プローブ、を行う。本装置では、サンプルのセルを電磁石が作る磁場中に置く。その磁場強度については、(1)ファラデー回転周波数がレーザーの時間分解能で検出可能な領域にする、(2)光反応の際に発生するスピン分極をなるべく大きくする、の2点が条件である。この条件について理論計算した結果、1000Gから3000Gが適当と結論した。本年度は、この理論計算に基づいた電磁石の導入を行った。その後、設置された電磁石の形状をもとにレーザー光路の設計を行い、現在光学系の調整を行っている。測定システムの製作とは別に、試運転に用いるのに適した観測対象を模索する予備実験を行った。紫外線照射で効率よく分解しかつ大きなスピン分極を発生する分子が適しているため、時間分解ESR装置で光分解生成ラジカルのスピン分極強度測定を行った。いくつかの系を検討し、イミド系ラジカルを生成するオキシムエステル類が、これまでモデルとして想定していたりん系ラジカルと同じくらい強いスピン分極を生成することを見出した。製作した超短パルスレーザーの磁気光学効果によるラーモア歳差運動観測を行う光学システムを用い、いくつかのモデル分子系に対して超高速時間分解ESRスペクトルの測定を試みた。分光計測でピコ秒で光分解することがわかっているオキシムエステル系の化合物やりんを含む芳香族ケトン類の光分解反応を、パルスESR法で観測し、これらの立ち上がり速度がサブナノ秒であることを磁化の測定からも確認した。また、レーザー照射直後の数百ナノ秒間は極めて大きな非熱分布電子スピンによる巨大磁化が発生することも確認した。これらのサンプル溶液を観測対象に選別し、制作した装置内に設置されている小型の電磁石中のフローセル中を通し、ピコ秒励起による光分解を行った。電磁石から発生させることのできる磁場が0から4000ガウス程度であり、この範囲の様々な磁場に対して光分解とファラデー効果による磁化の観測実験を行ったが、モニターに用いるファラデー回転用のプローブ光を検出する光学系の設置に問題があり、明瞭にラーモア周波数を決定するに耐えるだけの磁化の時間変化は観測できなかった。この結果をもとに、プローブに用いる偏光のクオリティーの問題や、ファラデー効果が大きく発現するプローブ波長の選別が大切であるとの考察を行った。装置は組み立て終わったので、今後は、ピコ秒レーザーの波長を変換することで、明瞭なファラデー効果の超高速時間分解観測を行い、本研究の目的達成を今後も遂行する。
ニッチシグナル阻害によるCD34抗原陰性白血病幹細胞を標的とした抗体療法の開発

白血病幹細胞は、正常造血幹細胞の階層制と同様に、CD34+CD38-細胞分画に存在すると考えられてきた(Nature 367: 645, 1994)。しかし我々の提唱する正常造血幹細胞の新たな階層性モデル(Blood 101:2924,2003,plenary paper)に基づいて、CD34-HSCのleukemic counterpartとしてCD34-LSCが存在するとの仮説を立て、骨髄内直接移植法を用いたNOG/NSGマウスへのヒト白血病細胞移植実験によりそれを実証した。移植実験により白血病を再構成した白血病検体を免疫原として、Balb/cマウスに免疫を行い、回収したマウスリンパ球とマウス骨髄種細胞株(SP2/0)と融合させて抗体産生ハイブリドーマを作製した。これまでにALLに対する3クローン、CMLに対する3クローンのモノクローナル抗体を作製している。これらのうちALLに対する1クローン(303-23)について標的抗原(抗原X)が同定されているが、あらたに別のALLに対する1クローン(303-10)に対して標的抗原の同定を進めている。303-10抗体が強い結合性を示す細胞株KU812を材料として免疫沈降を行い、抗原バンドサンプルを質量分析した。その結果、抗原候補として抗原Yが示された。抗原Yについて複数の方法を用いて確認実験を行ったが、別の抗原であるZである可能性を示す結果が得られている。現在確定的な結果は得られていないが、Zは固形腫瘍治療において注目されている抗原でありさらに確認実験を進める予定である。303-23を白血病モデルマウスに投与することによりin vivoにおける抗白血病効果を確認した。303-23についてはヒトキメラ抗体の作製、及びCAR-T療法への応用のためのCARコンストラクトの作製を現在行っている。しかし我々の提唱する正常造血幹細胞の新たな階層性モデル(Blood 101: 2924, 2003, plenary paper)に基づいて、CD34-HSCのleukemic counterpartとしてCD34-LSCが存在するとの仮説を立て、骨髄内直接移植法を用いたNOG/NSGマウスへのヒト白血病細胞移植実験によりそれを実証した。現在、リコンビナント蛋白を用いたELISAによる確認実験、ついで強制発現系を用いた確認実験を進行させている。また、さらなる抗白血病効果の判定実験に用いるため抗体の大量増産が必要である。これまでに無血清培地を用いて純度の高い精製抗体を303-10抗体について42mg、303-23について33mg得ており、in vivo実験をおこなうのに十分な量を獲得している。これまでに6クローンのモノクローナル抗体の作製を行っている。また、そのうち新たに1クローンの抗原同定が予定通り進捗している。予定通りH29年度以降にはこれらの抗体の抗白血病効果の判定のための実験に移行できる見通しであり、おおむね順調に進展しているといえる。