hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
EU加盟候補国における「国民国家」変容－旧ユーゴスラヴィア・マケドニア共和国

これを踏まえて、2019年度は国名変更後に「北マケドニア共和国」で生じている、国名変更に対する国内外の反応や、アルバニア人勢力の動向、二国間協定に規定された言語問題や歴史認識問題への対応など、「国民国家」としての変容部分にも目配りした分析に着手することが可能になると予想される。2019年度は、「北マケドニア共和国」における現地調査を予定しており、現地研究者との情報交換や意見交換を含む形で、資料収集を実施する。その際、国名改称に付随する歴史認識問題や、二国間協定に関わる国内の反応、また「国民国家」変容に関わる複数言語公用語化問題などについての情報収集に着手する。また、2018年6月の二国間協定締結時には、国名争議が解決されれば2019年6月頃からEUとの加盟交渉が開始されるのではないかと予測されていたが、英国の離脱交渉が長引く中で2019年5月上旬に開催された欧州理事会(EU加盟国首脳によるサミット)において、今後5年程度の新規加盟候補国には言及されなかった。北マケドニア共和国の国名改称は、EUおよびNATO加盟というユーロ・アトランティック構造への参画という目的とセットになって国内では議論された経緯があるため、これら国際組織との関係についても、情報収集を行う。2018年度の文献購入にあたり、1,142円の残高が発生したが、2019年度の文献購入費に算入することで使用予定である。
生体の予測性運動制御機構の理解とロボット制御システムへの応用

生体の予測性運動制御学習メカニズムを解明するために,運動学習の一例である金魚の視運動性眼球運動の周期同調に着目し,行動実験・生理実験,モデルシミュレーションを用いて周期同調の学習機構を明らかにすることを目的とし研究を進めた.本年度は,昨年度から引き続きの行動実験に加え,周期同調のモデルシミュレーション,サル・マウスによる実験を実施した.これまでに金魚,ヒト,ゼブラフィッシュ,メダカを用いた研究により周期同調の学習には眼球速度蓄積機構の時定数が関わっていることが示されている.そこで金魚の前庭神経を切断し眼球速度蓄積機構の時定数を短くすることで予測性眼球運動の学習に差異が現れるのではないかと考えられた.実験では,これまで金魚の前庭神経を切断した研究例が見られなかったため,新たに手術手法を確立し前庭神経切断金魚を作成した.その結果,前庭神経切断金魚は通常金魚と比べ眼球速度蓄積機構の時定数が短くなると共に,周期同調による眼球速度減少量が小さくなった.これらの結果から,周期同調の学習には速度蓄積機構の時定数が重要な役割を担っていることが明らかになった.周期同調のモデルシミュレーションでは,従来の人工小脳モデルとCentral patterngeneratorを組み合わせた新たな周期同調モデルを開発し,金魚と類似した周期同調を再現できることを確認した.また,サル,マウスを用いて周期同調学習実験を行った結果,マウスでは周期同調のような眼球運動が僅かに見られたものの金魚と比べその学習量は非常に小さく,またサルでは予測性の眼球運動が見られなかった.しかしながら視覚刺激のパターン,周期や速度,報酬の与え方などまだ未検討の要素が複数あり,これらの条件次第では予測性眼球運動が生じることも十分に考えられる.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。生体の予測性運動制御学習メカニズムを解明するために,運動学習の一例である金魚の周期同調に着目し,行動実験・生理実験,モデルシミュレーションを用いて周期同調の学習機構を明らかにすることを目的とし研究を進めた.当該年度では,行動実験により周期同調の特性を明らかにすると共に,学習の脳内責任部位を同定することに重点を置き研究を行った.金魚を用いた予測性眼球運動の周期同調学習において,従来研究では左右両方向に回転するの視覚刺激を学習させることにより,刺激方向切り替わりタイミングを予測して眼球速度が低下するTerminationと呼ばれる成分が生じることが知られていた.本研究では新たに刺激の回転・停止を繰り返す視覚刺激を与えることにより,刺激の動き始めを予測したInitiationと呼ばれる眼球速度の上昇が生じることを初めて示した.このInitiationは通常のゲイン適応では表現することができず,従来知られていたTerminationとは異なる学習メカニズムであると考えられる.また,刺激の回転・停止時間をランダムにした刺激を使用し,InitiationとTerminationがそれぞれ独立に学習することを示した.これらの実験を小脳切除金魚に対しても行い,小脳を切除した個体ではInitiationとTerminationの学習が生じず,学習した個体の小脳を切除すると獲得した学習が消失することを示し,小脳がこれらの予測性眼球運動に必要であることを明らかにした.この結果を元に,周期同調学習時の小脳Purkinje細胞の神経電位計測を実施し,視覚刺激のタイミングに合わせて,神経活動が増減するPerkinje細胞の存在を発見した.予測性眼球運動の新たな実験パラダイムにより,従来知られていた知見に加え,新たな予測性眼球運動の成分を発見した.また,これら学習の責任部位が小脳であることを明らかにした.さらに学習中の小脳Purkinje細胞活動を計測することで,予測性眼球運動時の小脳の情報表現を明らかにした.このように,次年度に実施予定のモデル構築に必要な学習の特性,神経活動基盤に関する知見を得ることができており,研究は概ね順調に進展していると言える.生体の予測性運動制御学習メカニズムを解明するために,運動学習の一例である金魚の視運動性眼球運動の周期同調に着目し,行動実験・生理実験,モデルシミュレーションを用いて周期同調の学習機構を明らかにすることを目的とし研究を進めた.本年度は,昨年度から引き続きの行動実験に加え,周期同調のモデルシミュレーション,サル・マウスによる実験を実施した.これまでに金魚,ヒト,ゼブラフィッシュ,メダカを用いた研究により周期同調の学習には眼球速度蓄積機構の時定数が関わっていることが示されている.そこで金魚の前庭神経を切断し眼球速度蓄積機構の時定数を短くすることで予測性眼球運動の学習に差異が現れるのではないかと考えられた.実験では,これまで金魚の前庭神経を切断した研究例が見られなかったため,新たに手術手法を確立し前庭神経切断金魚を作成した.その結果,前庭神経切断金魚は通常金魚と比べ眼球速度蓄積機構の時定数が短くなると共に,周期同調による眼球速度減少量が小さくなった.これらの結果から,周期同調の学習には速度蓄積機構の時定数が重要な役割を担っていることが明らかになった.周期同調のモデルシミュレーションでは,従来の人工小脳モデルとCentral patterngeneratorを組み合わせた新たな周期同調モデルを開発し,金魚と類似した周期同調を再現できることを確認した.

また,サル,マウスを用いて周期同調学習実験を行った結果,マウスでは周期同調のような眼球運動が僅かに見られたものの金魚と比べその学習量は非常に小さく,またサルでは予測性の眼球運動が見られなかった.しかしながら視覚刺激のパターン,周期や速度,報酬の与え方などまだ未検討の要素が複数あり,これらの条件次第では予測性眼球運動が生じることも十分に考えられる.今後はこれまでに得られた行動実験,神経活動記録の結果を元に,数理モデルを構築し計算機上での周期同調のシミュレーションを行う.また,ヒトを用いた周期同調実験を行い,個人間の学習傾向を比較することで,動揺病と視覚刺激の周期性の獲得との関連を評価する.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
Ｉｎ－ｖｉｖｏ計測のためのボクセルベース音響放射圧加振映像法の創出

生体組織の硬さを生体外部から非侵襲的に定量評価できれば、癌や肝硬変など組織弾性が変化する疾病のステージ評価や予後の改善に重要な役割を果たす。しかしずり弾性波は生体組織中を反射、屈折を繰り返しながら複雑に伝播していくので空間分解能や推定精度の低下させる要因となる。本研究ではずり弾性波源を含めた計測システムの高精度化を行い、局所伝播速度推定法を新規に開発し、速度の周波数依存性や異方性の情報等、本手法を用いることにより初めて可能になるずり弾性波速度分布推定法を提案した。また、その有効性を寒天ファントム実験で明らかにし、in-vivo実験により臨床応用への可能性を示唆した。本研究の目的はではずり弾性波源を含めた計測システムの高精度化、伝播速度推定法、病変境界抽出による精度向上法を新規に開発し、これらを組み合わせたずり弾性波速度分布推定法を提案し、その有効性を実験で明らかにしていくことである。本年度は、昨年度開発を行った、走査型4素子超音波トランスデューサアレイにより三次元的な分解能を得る高速三次元ずり弾性波計測システムのハードウエア最適化を行った。本システムは中心周波数5MHz、4バースト長の超音波パルスを送信し、20msの間加振波の伝搬の様子をドップラ計測する。この計測を3mm*40mm*40mmの領域でスキャンし、約4秒で3次元計測を行う。さらに、オフラインで加振による横波の空間変位分布を推定する。単一周波数で加振するため、局所波長は局所速度とみなせる。横波伝搬速度の空間分布を評価するために、微小ROIを設定し2次元フーリエ変換により、加振波の波数ベクトル推定を行い弾性波速度、伝搬方向の推定を行うことができる。しかし、この手法では、速度分布推定において空間分解能の向上のため加振波の波長を短くし、超音波トランスデューサの横方向空間分解能に近づくと変位推定誤差が増加することがわかった。この対策として、ウィナーフィルタを応用した速度推定アルゴリズムを導入し、寒天ファントム実験により推定誤差の向上を確認した。また、任意媒質の速度推定シミュレーションとして、FDTD法に着目し、媒質に弾性特性だけではなく粘性も考慮可能な数値計算コードを開発し、より実際の状況に近いモデル化を可能とした。昨年度、開発した加振ドップラ計測システムにおいて、新たにWignerフィルタを応用したずり弾性波速度推定アルゴリズムを導入し、寒天ファントム実験において推定速度の誤差が向上することを確認できた。本年度は生体において考慮の必要な粘性媒質への適用可能性をシミュレーションによって検討した。有限差分法による任意の粘弾性媒質におけるずり弾性波の伝搬の様子を計算し、その伝搬の様子を生体内の超音波散乱体のドップラ音源として与えるハイブリッド計算法を開発し、より実際の状況に近いモデル化を可能とした。また、粘弾性イメージングにおいて波数ベクトルフィルタリングの概念を導入し、IN-VIVO実験により本手法による異方性の評価や、分散性の評価への可能性を示すことができた。また、本研究により得られた派生的な研究成果として、通常超音波イメージ画像は限られた空間分解能の画像であるが、加振ドップラ計測におけるドップラ周波数イメージを用い超解像化可能なことを示唆した。本研究の目的はではずり弾性波源を含めた計測システムの高精度化、ボクセルベースの伝播速度推定法、病変境界抽出による精度向上法を新規に開発し、これらを組み合わせたボクセルベースずり弾性波速度分布推定法を提案し、その有効性を実験で明らかにしていくことである。本年度は、まず、高速ボクセルベース三次元ずり弾性波計測システムを開発した。

開発したシステムは4素子の超音波トランスデューサアレイをアレイ方向と直交する方向に機械的にスキャンし、三次元的な分解能を得る。超音波パルスは中心周波数5MHz、バースト長4、繰り返し周期は0.1msである。加振によるドップラ情報は20ms、200パルスを単位とし、連続的に計測する。本システムにより3mm*40mm*40mmの領域を約4秒で計測可能である。また、新規ボクセルベースの速度推定アルゴリズムを開発した。得られたずり弾性波の複素振幅分布から、微小ROIを設定し、二次元フーリエ変換することより波数スペクトルが得られる。スペクトルのピークを持つ波数から、そのROIでの伝搬速度が推定できる。本手法により、定在波を起こす振幅の大きい反射波等があったとしても、波数領域で両者を分離することができるため、その影響を低減できる。また、このROIを移動させて局所伝搬速度を推定すれば、伝搬速度の映像化が可能となる。本手法は試作システムにより寒天ファントムでの有効性を確認した。また、任意媒質でのずり弾性波変位について有限時間差分法によるずり弾性波変位の計算コードを開発した。24年度の予定としては、1試作ハードウエアの最適化、2速度推定アルゴリズム最適化、3音響放射圧加振の基礎検討4任意媒質のかしん数値シミュレーションであった。1に関しては概ね順調に進展しており、5mmの空間分解能を達成するのは現状では困難である。加振波が大きく減衰すること、加振波の分解能を上げることにより、変位推定誤差が増加することが原因である。これは、計測装置の電気的ノイズ等の原因ではなく、ランダムに存在する超音波散乱体の微小変動による反射波のドップラ情報を用いて空間を伝搬するずり弾性波の変位を推定しているためである。2においてWignerフィルタをベースとした速度推定アルゴリズムを開発し、空間分解能の向上が見られたが、この手法でも大幅な空間分解能の向上は困難である。3については、ハードウエアの製作等基礎的な検討を行うにとどまっている。23年度の予定は、(1)3次元ずり弾性波変位計測システム、(2)3次元速度分布推定アルゴリズムの開発、(3)任意媒質でのずり弾性波変位並びに、超音波散乱体を考慮したずり弾性変位シミュレーションの開発、(4)の音響放射圧技術であった。(1)に関しては3mm*40mm*40mmの領域を約4秒で計測可能なシステムを開発し、寒天ファントム実験により、本システム妥当性が確認できた。(2)に関しては、加振波の複素変位マップの二次元フーリエ変換により、複数の波を除去し、所望波の速度情報を得る手法を開発し、寒天実験により精度向上が確認できた。また、(3)に関しては有限時間差分法を用いて、任意媒質のずり弾性波変位を計算できることを確認し、寒天実験で妥当性を確認した。(4)については基礎検討にとどまったものの、(1)(2)(3)の結果により、研究は概ね順調に進展していると考えている。速度推定の空間分解能の向上には、加振波の高周波化も重要な技術と考えられ、音響放射圧技術により連続波のずり弾性を発生させる技術が開発できれば、有効であると考えられる。
歯肉線維芽細胞にIL-6とIL-8を誘導するマイコプラズマ由来物質の精製と性状

〈平成10年度〉1 Ms由来物質(MsA)はMs細胞内に存在するタンパク性の物質であり、熱処理を行っても活性が30%以上残っている。2 DEAE-sephacelによるイオン交換クロマトグラフィーにより、MsAは、arginine deiminaseとは明らかに異なる物質であるということがわかった。3さらにCM-sepharose、DEAE-sephacelと、カラムを変えて精製を行った結果、比活性にして30倍以上に達するサンプル(MsA)が得られた。4 MsAのSDS-PAGEを行うと、20.6キロダルトンのメジャーなバンドと2本のかすかなハンド(82.5キロダルトンと40.5キロダルトン)が観察された。5 MaAでTHP-1を刺激したところ、TNF-α、IL-1β、IL-6の産生誘導は見られなかったため、MsAはこれまでに報告されている物質とは異なっている。6 MsAの活性はグラム陰性菌のLPSと異なり、血清の非存在下でも失われることがなかった。〈平成11年度〉ヒト正常歯肉線維芽細胞にIL-6を誘導する物質が、Mycoplasma fermentans(Mf)培養上清中に存在し、その物質について得られた知見は以下の通りである。1 Mfのcfu/mlの増加に伴い、Mf培養上清のIL-6産生誘導活性レベルは上昇し、cfu/mlの減少後も安定していた。2培養上清のゲル濾過クロマトグラフィーでは活性が分散し、proteinaseK処理後も活性が完全に消失することはなかった。3培養上清のproteinaseK処理後、HPLCの逆相クロマトグラフィーにより多くの活性が親水性のひとつのピークに見られた。4 3で得られたピーク(Fraction A)はTHP-1にTNF-α、IL-1βの産生を誘導した。5 Fraction Aの活性はPolymyxin Bで阻害されなかったので、LPSとは異なる物質が活性を担っていることがわかった。1 MS由来のIL-6産生誘導物質はMs細胞内に存在するタンパク性の物質であり、熱処理を行っても活性が30%以上残っていた。2 DEAE-sephacelによるイオン交換クロマトグラフィーにより、IL-6産生誘導物質は、argininedeiminaseとは明らかに異なる物質であるということがわかった。3さらにCM-sepharose、DEAE-sephacelと、カラムを変えて精製を行った結果、比活性にして30倍以上に達するサンプル(MSA)が得られた。4 MsAのSDS-PAGEを行うと、20.6キロダルトンのメジャーバンドと2本のマイナーバンド(82.5キロダルトンと40.5キロダルトン)が観察された。5 MsAでTHP-1を刺激したところ、TNF-α、IL-1β、IL-6の産生誘導は見られなかったため、MsAはこれまでに報告されている物質とは異なっているということがわかった。以上のことについては、現在雑誌に投稿中である。
薬物輸送および代謝のバイオマーカーを統合的に用いた薬物動態予測法の開発

薬物動態を決定する要因として、肝臓に発現する薬物輸送体と代謝酵素が重要である。肝臓のOATP1Bsは高脂血症治療薬や経口血糖降下薬等のアニオン性薬物の肝取り込みを担っており、薬物間相互作用や個人差の観点でも重要である。本研究では、肝OATP1Bsを主要なターゲットとし、プローブ薬を投与することなく、内因性基質の血漿中濃度推移を用いることで、医薬品および候補化合物の体内動態を予測する方法論を構築することを目的とする。生理学的薬物速度論(PBPK)モデルを内因性基質に関して構築することにより、今までのような相関論にとどまることなく初めて定量的な予測が可能となる。平成30年度は、OATP1Bsの内在性基質として感受性・特異性が高いコプロポルフィリンI(CP-I)のPBPKモデルを構築し、重点的に解析した。平成28年度に実施した臨床DDI試験「リファンピシンによるスタチンおよび内在性基質の体内動態への濃度依存的影響」の血漿中濃度測定により得られたデータを用いて、CP-Iに対する影響をもとにin vivo阻害定数(in vivo Ki)を最適化計算し、in vitro Kiの比を考慮した上でスタチンに適用することで、相互作用の説明を試みた。in vitro Kiの基質依存性を考慮しなかった場合に比べて、考慮した場合は濃度推移、AUCとも良好な予測結果となった。さらに、OATP1B1およびOATP1B3の寄与率を求めるin vitro実験(relative activity factor method)を行い、OATP1B1が主要な役割を担うことを定量的に明らかにした。これは、OATP1B1をコードするSLCO1B1の遺伝子多型により、CP-Iの血中濃度が顕著に上がることを示した我々の研究と矛盾しなかった。平成28年度に理研-P1クリニック-東大で共同実施した臨床試験において、OATP1B基質薬として4種スタチンをカセットで投与し、300 mgおよび600 mgのリファンピシン併用によるOATP1B阻害の影響を評価することを目的とした。まずは、OATP1B内在性基質として感受性・特異性が高いと推測されたCP-Iに着目し、非相互作用時の定常状態(CP-Iの場合は日内変動が観察されず)を説明可能な理論式をクリアランス概念および体内物質収支を考慮して導いた。以前に我々が報告した標準的なPBPKモデルの構築法に基づき、CP-IのPBPKモデルを構築した。リファンピシンによるCP-I体内動態への影響を予測する上で、OATP1Bsの阻害定数(Ki)が必要となる。非線形最小二乗法に基づいた臨床データ(非相互作用時および相互作用時)に対する同時フィッティング(最適化計算)により、リファンピシンによるin vivo Kiを含む未知パラメータを最適化した。一方、OATP1B1/1B3発現細胞を用いてKiを評価したところ、基質をCP-Iおよびスタチンとした場合で異なる結果が得られたことから、Kiの基質依存性が考えられた。CP-Iに対するin vivo Kiと、in vitro Kiの比(スタチン/CP-I)を考慮し、in vivo Kiを補正した上でスタチン血漿中濃度推移への相互作用による影響をシミュレーションしたところ、観察データ(血中濃度推移、AUC)を良好に説明できた。さらに現在は、肝取り込み過程におけるOATP1B1/1B3とその他のトランスポーターの寄与率、胆汁排泄過程におけるMRP2の寄与とリファンピシンによる阻害作用の解析、MRP2欠損ラット(EHBR)を用いたCP-IおよびコプロポルフィリンIII(CP-III)の体内動態解析を進めている。平成28年度に理研-九大-東大で共同実施した自主臨床試験では、OATP1B1の遺伝子多型(SLCO1B1 521T>C、機能低下型)で層別化(野生型、変異型ヘテロ、変異型ホモ)した被験者に、ピタバスタチン(OATP+胆汁排泄)、ロスバスタチン(OATP+胆汁排泄+尿排泄)、フルバスタチン(OATP+代謝+胆汁排泄)、アトルバスタチン(OATP+代謝)をカセットで投与し、内因性基質とともに血漿中濃度を測定した。また、最近になって別の研究グループから、SLCO1B1の遺伝子多型で層別化した後に、別のOATP阻害薬(シクロスポリン)による内因性基質への影響を見た臨床試験が報告された。平成31年度は、遺伝子多型によるOATP活性低下率を解析した上で、多型ごとにCP-I血中濃度推移をシミュレーションすることで、PBPKモデルが適切であるかをバリデーションする。さらに、CP-IIIについてもPBPKモデルを構築する。CP-IIIはCP-Iと良く似た体内動態を示すと考えられているが、MRP2の機能低下時(ABCC2遺伝子変異、Dubin-Johnson syndrome)に尿排泄の変動が異なるなど、相違も見られる。CP-IおよびCP-IIIを同時に解析することで、OATP1BとMRP2の相互作用への寄与を分離できる可能性があるため、MRP2欠損ラット(EHBR)やOATP1B/MRP2発現系を用いた解析を実施することにより、体内動態が異なるメカニズムを明らかにし、PBPKモデルに反映させる。本研究を効果的に進めるために、臨床データ解析に基づいたモデル構築とin vitroおよびin vivoにおける検討を並行して実施し、相互に弱点を補うことで、PBPKモデルの高精度化を効率的に実施する。

肝臓のOATP1Bsは高脂血症治療薬や経口血糖降下薬等のアニオン性薬物の肝取り込みを担っており、薬物間相互作用や個人差の観点でも重要である。本研究では、肝OATP1Bsを主要なターゲットとし、プローブ薬を投与することなく、内因性基質の血漿中濃度推移を用いることで、医薬品および候補化合物の体内動態を予測する方法論を構築することを目的とする。生理学的薬物速度論(PBPK)モデルを内因性基質に関して構築することにより、今までのような相関論にとどまることなく初めて定量的な予測が可能となる。平成29年度は、特にOATP1Bsの内在性基質として感受性・特異性が高いと推測されるコプロポルフィリンI(CP-I)を重点的な解析対象とした。PBPKモデル構築に必要な一部の速度論パラメータをヒト肝細胞(取り込み、排出クリアランス、細胞内結合率)およびOATP1B1/1B3発現細胞(リファンピシン阻害定数)を用いたin vitro試験により求めた。また、残りのパラメータは、非線形最小二乗法に基づいた臨床データに対する最適化計算(フィッティング)により求めた。平成28年度に実施した臨床DDI試験「リファンピシンによるスタチンおよび内在性基質の体内動態への濃度依存的影響」の血漿中濃度測定により得られたデータを用いて、CP-Iに対する影響をもとにin vivo阻害定数を最適化計算し、in vitro阻害定数の比を考慮した上でスタチンに適用することで、相互作用の説明を試みた。平成28年度に理研-P1クリニック-東大で共同実施した臨床試験において、OATP1B基質薬として4種スタチンをカセットで投与し、300 mgおよび600 mgのリファンピシン併用によるOATP1B阻害の影響を評価することを目的とした。得られた血漿サンプルを用いてスタチンおよび内在性基質(抱合・非抱合ビリルビン、胆汁酸、CP-I)の濃度を測定した。まずは、OATP1B内在性基質として感受性・特異性が高いと推測されたCP-Iに着目し、非相互作用時の定常状態(CP-Iの場合は日内変動が観察されず)を説明可能な理論式をクリアランス概念および体内物質収支を考慮して導いた。続いて、吉門らは肝OATP1Bsを介したDDIの解析に用いる標準的なPBPKモデルを以前に報告しているが、これをもとにCP-IのPBPKモデル構築を開始した。モデルに必要なパラメータのうち、一部はin vitro試験を実施して求めた。In vitro-in vivo補外の知見が得られているヒト凍結肝細胞を用いた細胞膜透過過程クリアランスおよび細胞内結合の評価と、OATP1B1/1B3発現細胞を用いたリファンピシンのOATP1B阻害定数の評価を実施した。これらを用いて、非線形最小二乗法に基づいた臨床データ(非相互作用時および相互作用時)に対する同時フィッティング(最適化計算)により、リファンピシンによるin vivo阻害定数を含む未知パラメータを求めて、CP-IのPBPKモデルを構築することに成功した。平成29年度はさらに、上記で得られたCP-Iに対するin vivo阻害定数と、in vitro試験で得られたCP-Iとスタチン間の阻害定数の比を考慮し、スタチンに補正したin vivo阻害定数を適用することで、スタチン血漿中濃度推移への相互作用による影響をシミュレーションしたところ、概ね観察データを説明可能であった。
幼児～児童期のこどもの集団的な造形活動における技能の伝搬過程に関する研究

本研究は、幼児児童期のこどもの集団的な造形活動について、時系列の活動記録と視線分析を併せて用いながら、技能伝搬におけるこども同士の相互作用の過程を明らかにした。活動への見通しが未確定で不安定な状況下のこどもが、自ずと他者の造形行為に眼差しを向け、そこで何らかの手がかりが得られた場合に、さらに注視を続けていく過程を明確に示すことができた。他者の造形行為への注視行動は、技能伝搬の契機につながるほか、幼児においては模倣による関係性構築のきっかけとなる場合があることも分かった。他者観察をあまり行わない場合でも、他者の制作物や発話内容から情報を得ていくことも明らかとなった。本研究は、幼児児童期のこどもを対象として、集団的な造形活動のなかでの技能の伝搬過程を明らかにするものである。活動中のこどもの様子について横断的かつ縦断的な記録を詳細に行い、相互作用における特徴的な行動と、継承される技能が有する要素について分析することで、技能が伝搬する状況について具体的に把握しようとする。平成26年度は前者の分析を中心に行い、特に他者へ眼差しを向ける行為について注目した。具体的には、造形ワークショップにおける抽出児の活動記録について、行動コーディングシステムを用いて他者への眼差し行為の出現回数と注視時間について算出しつつ、具体的な行動内容について時系列で書き起こしていった。これらの量的なデータと質的なデータの双方を組合せることによって、他者へ眼差しを向ける行為と、こども同士の相互作用との関連を調べていった。その結果、抽出児は、自らが置かれた状況によって他者に対して頻繁に眼差しを向けており、必要に応じて情報を取得しようとしていることが分かった。また、そこで何らかの手がかりが得られた場合は、他者の活動の様子をさらに注視することによって、技能を自らの内に取り込んでいることが明らかとなった。なお、上記の研究成果は論文としてまとめ、自身が所属する学会のジャーナルにおいて発表した(武田信吾,2015,「こどもの集団的な造形活動における技能の伝搬過程に関する研究ー他者への眼差し行為に着目した相互作用の分析ー」,『美術教育学研究』,No.47,大学美術教育学会,pp.183-190)。本研究は,幼児児童期のこどもを対象として,集団的な造形活動のなかでの技能の伝搬過程を明らかにするものである。活動中のこどもの様子について横断的かつ縦断的な記録を詳細に行い,技能が伝搬する状況について具体的に把握しようとする。平成26年度に実施した研究では,抽出児のみを詳細に記録していたため,活動に参加している全てのこどもの行為が,全体のなかでいかに相互作用を起こしているのかを捉えることまでできなかった。そのため,平成27年度に行った研究では,次の2つの対応をとった。第1に,鳥取大学地域学部附属こども発達・学習センターの協力のもと,同センター内行動観察室を造形ワークショップ会場として使用した。当該施設には,室内の様子を多方向から動画として記録する設備が整っており,活動に参加した全てのこども達の様子をより詳細に捉えることが可能となった。第2に,保護者の同意のもとで,活動に参加する全てのこどもの頭部にワイアレス小型カメラをつけてもらい,活動中に何を見ているのかを確認できるようにした。鳥取大学附属幼稚園の協力のもと,同年齢の園児4人が1グループとなって行う造形活動を実施した(年少児グループ3組,年中児グループ2組,年長児グループ2組)。その結果,活動の方向性が未確定や不安定な状況で,他者観察が行われたことで後の活動に影響を与えていく過程について,グループ全体の相互作用として捉えることができた。また,行為の観察だけでなく,言葉のやり取りや制作物からも活動のヒントを得ている状況も併せて確認することができた。年長児グループでは,年少児や年中児で構成されたグループでは見られなかった共同的な活動や見立て活動が自然発生的に現れており,こうした活動内容の発達段階的な特徴が相互作用の在り方に大きく関わっていることも分かってきた。「研究実績の概要」欄に示した通り,頭部装着のビデオカメラを使用する必要性が新たに加わったため,研究実施計画を一部変更して小型のポータブルビデオカメラ及び専用ヘアバンド(幼児の頭囲にも調整可能)を購入した。人間の眼球の構造上,他者に意識的に視線を向けている場合,当該対象は頭部装着ビデオカメラの動画記録にほぼ映り込むと判断できる。同機器の使用により,造形活動に参加している全てのこどもの視線について,いつ,誰に対して向けられているものなのか,一層明確に把握することが可能となった。なお,研究成果を報告するために行う所属学会での発表に関しては,大学美術教育学会第54回大会(横浜国立大学,平成27年9月20・21日)において発表を行った。加えて,乳幼児を対象とした調査の結果について,その発達的な特徴に関して保育学の見地から検討を行う必要性があるため,事業期間を延長する形で,日本保育学会第69回大会(東京学芸大学,平成28年5月8日)において発表を行うこととした。左記の取り組みによる他研究者との意見交換を踏まえながら,研究成果をまとめた論文を作成し,所属学会ジャーナルへ投稿する予定である。以上,研究の実施状況に関して,研究実施計画に記載した内容から若干変更させた部分はあるものの,研究目的の遂行において必要に応じて行ったものであり,その成果は「研究実績の概要」欄に示した通りである。概して,本研究はおおむね順調に進展していると判断した。

2016年5月8日、日本保育学会第69回大会において、2015年度に実施した研究成果を発表し、他研究者とのディスカッションを通じて、特に幼児を対象とした調査の結果について保育学の見地からの検討を行った(学会による発表可否の通知が2015年度内であったため、科研費助成事業実績報告書としては、2015年度のものの「研究発表」欄に当該業績を記載している)。左記の取り組みで得られた知見を踏まえながら、当該研究内容を論文としてまとめ、自身が所属する学会誌(査読付)に投稿した。その概要は以下の通りである。2015年度に行った調査では、幼児の集団的な造形活動について、その相互作用の全体像を、視線分析を活用しながら明らかにしようとした。分析データを得るために行った造形活動では、活動の構成メンバー全員の頭部にビデオカメラを装着し、各幼児の視界に広がる世界を個別的に捉えられるようにした。各動画記録は、誰が、いつ、どれだけの時間を伴って映っているのか、行動コーディングシステムを用いて数量化し、それぞれ幼児ごとに、他者に視線を向け続けている可能性が高い場面を特定していった。その結果、当該場面のなかで展開される造形行為の伝搬過程を捉える一方で、幼児が他者の制作物や発話からもアイデアを得ていることも明確化できた。また、応答としての造形行為の模倣や、協同関係にある者の造形行為の確認に伴う視線のやり取りも顕在化し、各幼児の他者への関わり方の特性が、他者に視線を向ける行動の差異として現れていく様相が確認できた。上記の成果は、こどもの集団的な造形活動における相互作用の意味について、行為及びその意図の認識と社会的関係性という新たな観点を得ること、モノを介在したこども同士の学び合いに対する新たな捉え方を提起すること、こどもの成長・発達について理解する視座を拡充することなどにつながると考える。本研究は、幼児児童期のこどもの集団的な造形活動について、時系列の活動記録と視線分析を併せて用いながら、技能伝搬におけるこども同士の相互作用の過程を明らかにした。活動への見通しが未確定で不安定な状況下のこどもが、自ずと他者の造形行為に眼差しを向け、そこで何らかの手がかりが得られた場合に、さらに注視を続けていく過程を明確に示すことができた。他者の造形行為への注視行動は、技能伝搬の契機につながるほか、幼児においては模倣による関係性構築のきっかけとなる場合があることも分かった。他者観察をあまり行わない場合でも、他者の制作物や発話内容から情報を得ていくことも明らかとなった。当初の計画では、研究対象とする造形ワークショップは大阪市平野区民ホールで行う予定であったが、研究代表者が平成26年4月に常磐会学園大学(大阪)から鳥取大学に異動したため、会場を別に設定する必要性が生じた。しかしながら、鳥取市こども科学館及び鳥取大学附属小学校の協力により、造形ワークショップを行う機会を得ることができた。また、当初、購入予定としていた行動コーディングシステムが異動先の鳥取大学地域学部内で管理されており、借用することができたため、研究費の使用に関して、造形ワークショップ使用材料の購入等に重点的に再配分した。加えて、研究成果を報告するために行う所属学会での発表に関して、予定していた大学美術教育学会
生体アミンによる前頭前野でのシナプス形成維持機構

生体アミンによるシナプスの形成維持機能は5-HT2A受容体によって介在されることがわれわれの研究によって明かになっている。5-HT2A受容体は7回膜貫通型の蛋白であるが、C末の融合蛋白とN末の合成ペプチドによって抗5-HT2A受容体抗体を作成した。それらの抗体を使ってラット脳での免疫組織化学法による5-HT2A受容体の観察を行った。その結果、前頭前野をはじめとする大脳皮質全域に免疫陽性産物が強く発現していた。ほぼ全ての大脳皮質のニューロンが5-HT2A受容体をもっており、特に細胞体と先端樹状突起に強い陽性反応が観察された。ニューロン以外にもアストロサイトに5-HT2A受容体が発現していることが、アストロサイトに特異的な抗GFAP抗体による二重染色で明らかになった。従来からの形態学的手法では小脳には5-HT2A受容体は見られずにいたが、機能的には存在する可能性が推測され矛盾する結果となっていた。しかし、免疫組織化学法では小脳のプルキニエ細胞が樹状突起の先端まで強く陽性反応を呈した。また、遺伝子レベルで大脳皮質の5-HT2A様塩基配列が確認できた。大脳皮質での5-HT2A受容体の電子顕微鏡による観察を行った。5-HT2A受容体はグルタメート作動性と考えられる非対称性シナプスの後膜肥厚の直下に限局して観察された。セロトニンによる5-HT2A受容体を介したグルタメート受容体の調節機構が存在することが考えられたので、この点について解析を試みた。セロトニン除去薬であるp-chlorophenylalanieを6週齢ラットニ投与して、1週後の大脳皮質でのAMPA受容体は40-50%増加していた。サブタイプとしてGluR2受容体は40%増加しており、グルタメート作動性神経伝達におけるカルシウム透過性の変化が考えられた。生体アミンである、セロトニン(5HT)、ノルアドレナリン(NA)、ドーパミン(DA)、アセチルコリン(Ach)を選択的に除去する薬物、それぞれp-chrolophenylalanine,DSP-4、DA receptor D2antagonist、AF64Aを6週齢ラットに一週間投与し、その後電子顕微鏡写真から前頭前野各層のシナプス密度を定量化した。その結果、5HTまたはAchの除去ではシナプス密度に変化は見られなかった。しかし、DAまたはNAの除去では生理的食塩水投与の対照群と比べ、DAでは約20%のシナプス密度の低下が、NAでは18%の有為なシナプス密度の増加が起こった。従来の研究結果では、5HTまたはNAを除去すると、頭頂皮質や視覚領野では大幅にシナプス密度が低下することが明らかにされた。しかし前頭前野のシナプス維持機構は他の大脳皮質のそれとは大きく異なることが示唆された。前頭前野ではNAがDAを持続的に抑制していることが知られており、NAによるシナプス密度の増加はDAを介した結果と理解できるが、現在この点について解析を行っている。いずれにしても腹側被蓋からのDA線維はラット大脳皮質では前頭前野にのみ分布しており、ここではDA線維のみがシナプスの形成維持機構に関与していることを示唆する今回の研究結果はきわめて興味深い。今後はDAによるシナプスの形成維持作用の生後の発達と加齢による変化について検討する予定である。セロトニンによるシナプス形成維持機能を介在する受容体サブタイプは2A型受容体であることが以前の研究で確かめられた(Neurosci.Lett.Vol.195(1995)159)。

2A受容体蛋白の融合蛋白または合成ペブチドを抗原として抗体を作製した。それらの抗体により、前頭前野を含むラット大脳皮質での2A受容体の分布を解析した。その結果、2A受容体はほとんど全ての大脳皮質のニューロンに発現していた。特に錐体細胞の細胞体と先端樹状突起に強い免疫反応が観察された。電子顕微鏡レベルでは非対称性シナプスの後膜肥厚の直下に2A受容体が局在していた。非対称性シナプスのほとんどはグルタメート作働性と考えられるので、セロトニンは2A受容体を介してグルタメート神経系に何らかの影響を及ぼしていることが推測された。そこで、セロトニンを薬物で1週間除去してグルタメート受容体の変化を調べた。その結果、AMPA受容体が数十パーセント増加していること、受容体サブタイプではGluR2が増加していることが明らかになった。セロトニンはシナプスの数とカルシウムの透過性を調節することによりシナプスの可塑性を維持していることが明らかになった。従来の形態学的手法では2A受容体は小脳には存在しないとされていた。しかし、抗体により免疫組織化学的にプルキニエ細胞が強く2A受容体を発現していることが確かめられた。小脳には大脳皮質の2A受容体様のDNAが存在しており、若干の塩基配列に違いのあるサブタイプがあることが確かめられた。小脳にはセロトニン線維が少なく、高密度の2A受容体の存在はミスマッチである。さらに脊髄神経節ではセロトニン線維は全く存在しないのに、神経節細胞には高密度の2A受容体が分布している。このようなミスマッチから、脳脊髄液や血液のセロトニンによる調節機構の存在が示唆される。
ASD児と養育者の情緒的かかわりの理解と把握のための実証的アセスメント法の検討

本研究の目的は、ASD幼児と養育者を対象にアタッチメメント上のリスクとなる徴候を見出すための実証的なアセスメント法を検討することにある。まず、健常児と養育者の相互的な影響をEASによる情緒的側面から評価し、その結果をQ分類法による評価と比較する。次に、ASD児と母親のEASを実施し、信頼性と妥当性を確認するとともに健常母子のデータと比較する。加えてアタッチメントの多面的理解のために、子どもの発達や向社会性、親のストレスなどの評価を行う。これらの結果を、ASD母子と健常母子を比較検討することで、ASD児と母親の情緒的交流の特徴を、包括的な視点から理解し把握するアセスメントのあり方を検討する。
親和的な個性の獲得・制御メカニズムの解明

社会的動物は同種間だけでなく、異種間においても親和的な関係性を構築する。このような異種への親和性を司る個性の形成・制御メカニズムを明らかにすることを本研究課題の目的とした。これまでの研究および関連する別の研究種目(若手B, 15K18978)により、長期間撫で刺激を与えることで、1ラットの不安行動が減少し、撫で刺激を快刺激として嗜好するようになること、2撫でることにより快刺激の指標となる50 kHz帯域の超音波をラットが発声すること、3撫で刺激により視床下部室傍核尾側領域のオキシトシン産生細胞が活性化すること、4自分が撫でられない状況下で他個体が撫でられている時に不快情動の指標となる22 kHz帯域の超音波を発声すること、5これらの反応には雌雄差があり、メスラットでより顕著であること、6視床下部室傍核尾側領域のオキシトシン産生細胞が帯状回皮質や運動野を含む皮質領域、視床下部に多くの軸索を伸ばしていること、7撫で刺激によりこれら領域が活性化すること、が主に明らかになった。また、8行動学的な反応の個体差が大きく、これら反応とオキシトシン産生細胞の活性に正の相関関係があることが明らかになった。本年度は上記4の22 kHz帯域の超音波発声の際にも視床下部室傍核尾側領域のオキシトシン産生細胞が活性化するか調査した。その結果、22 kHz帯域の超音波を発声する条件下でオキシトシン産生細胞が活性化することが分かった。また、撫でられた時に発する50 kHz帯域の超音波と同様、22 kHz帯域の超音波発声回数や周波数などの音声特性にも大きな個体差が認められた。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。研究代表者は撫でる接触刺激をラットに長期間与えることでラットの不安行動が減少し、撫で刺激に対して快情動を示すようになることを明らかにしてきた。また、撫で刺激により視床下部室傍核尾側領域のオキシトシン産生細胞が活性化することも判明していた。その一方で、これら反応性には個体ごとのばらつき、個性があることも確認していた。そこで、オキシトシン産生細胞の活性と撫で刺激およびヒトに対する反応性に関連があるか解析したところ、正の相関関係があることが判明した。とくに、撫でられた時に発声する快情動の指標となる50kHz帯超音波の発声回数とオキシトシン産生細胞の活性レベルに強い正の相関関係が認められた。このことから、視床下部室傍核尾側領域のオキシトシン産生細胞が親和的な個性の制御因子として機能していることが示唆された。上記実験ではラットが特定のヒトとの間に親和的な関係性を構築するのかどうかはわからなかった。そこで、より長期間ラットを撫でることで、撫で刺激を与える特定のヒトに対して嗜好性を示し、親和的関係性が構築されるのか調査した。その結果、長期間撫で刺激を含む接触をヒトと繰り返してきたラットは、第三者と撫で刺激を与えた実験者とを明確に識別し、実験者に強い嗜好性を示すことが明らかになった。さらに、これらラットは自分が撫でられない状況下で他個体が撫でられる様子を知覚すると不快情動を示すことが明らかになった。これら反応性にも強い個性があった。撫で刺激によるオキシトシン産生細胞の活性と撫で刺激に対する行動学的な反応性に相関関係があり、親和的な個性の制御因子の一つとしてオキシトシンが機能する可能性が見出された。また、別の研究種目(若手B,研究課題/領域番号15K18978)とも関連する研究により、これらオキシトシン産生細胞が帯状回皮質などに軸索を伸ばしていること、撫で刺激を与えることで島皮質が活性化することも明らかとなり、親和的な個性を司る神経ネットワークを調査するために必要な基礎データを得ることができた。撫で刺激を与える期間をより長期間に変更したことで、ラットが特定のヒトとの間に親和的関係性を構築することや、嫉妬様行動を示すこと、さらにこれら反応性に個性があることも明らかとなり、予期していなかった興味深い研究成果を得ることができた。

また、8行動学的な反応の個体差が大きく、これら反応とオキシトシン産生細胞の活性に正の相関関係があることが明らかになった。本年度は上記4の22 kHz帯域の超音波発声の際にも視床下部室傍核尾側領域のオキシトシン産生細胞が活性化するか調査した。その結果、22 kHz帯域の超音波を発声する条件下でオキシトシン産生細胞が活性化することが分かった。また、撫でられた時に発する50 kHz帯域の超音波と同様、22 kHz帯域の超音波発声回数や周波数などの音声特性にも大きな個体差が認められた。1.オキシトシン機能阻害実験オキシトシンの機能を阻害することで、撫で刺激および撫で刺激を与える実験者によってもたらされる行動学的な反応(親和的な反応)が阻害されるのか検証する。2.親和的反応と神経活性の相関解析オキシトシン産生細胞の軸索が存在する脳領域や撫で刺激を与えた際に活性化する脳領域の活性が親和的な反応性と相関するのか解析し、親和的な個性を制御する神経ネットワークなのかどうか検討する。さらに、他個体が撫でられている様子を見た際に示す不快情動が嫉妬様行動なのか検証するとともに、この不快情動の個体差を生み出す神経活動が親和的な個性を制御する神経ネットワークによるものなのか調査する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
ヒト腎癌におけるCD40刺激及びインターフェロン-γの生物学的効果の研究

我々はまずヒト腎癌細胞株である769-P,786-O,A-498及びA-704の細胞表面でのCD40の発現を,抗CD40抗体を用いてflow cytometryにて検索した。これらがCD40陽性である事を確認した後,interferon-γによるCD40発現の増強効果を検討したところ,接触6-12時間後に最も強い発現を見た。次に,遺伝子組み替えにより作られた可溶性CD40ligandを用いて,MTTassayにて腎癌細胞株に対する抗腫瘍効果を検索したところ,769-P及び786-Oは可溶性CD40ligandとともに培養する事により,その増殖が抑制された。メカニズムとしては,TUNELassay,電顕等にてapoptosisの存在を確認した。また,この抑制効果はinterferon-γの併用により増強された。我々はこれらの腎癌細胞株5X10^6個を,severe combined immuno-deficiensy(SCID)mouseの腹腔内に移植,コントロール群は第25-30日目で腹腔内播種または肝転移にて死亡したが,これら担癌マウスを可溶性CD40ligand10μgにて治療したところ,有意な生存期間の延長が得られた。更に,in vitro同様interferon-γを併用投与したところ,有意差は得られなかったがマウスの生存期間の延長が見られた。現在これらデータの追試とともに,論文作成中である。平成10年度の研究進行状況は以下の通りである.1).細胞株;ヒト腎癌細胞株(769-P,786-O,A-498,A-704),ヒト前立腺細胞株(PC-3,LNCaP),ヒト膀胱癌細胞株(HT-1197,HT-1376)(以上ATCCより購入)の細胞膜表面のCD40発現を,の蛍光抗体法にて検討したところ,769-P,786-O,PC-3,LNCaPにおいて陽性であった.3).この抗腫瘍効果のメカニズムを,769-Pについてapoptosis/necrosisの両面から検討するため,1.flow cytometry(PI staining),2.tripan blue stsiningにて検討したところ,apoptosisが観察された.1).6週齢以上のCB-17/SCIDマウス(日本クレア)に,5x10^6個のヒト腎癌細胞株769-Pを腹腔内投与したところ,平均30-40日後に腫瘍にて死亡した.現在までの研究進行状況は上記の通りである.今後は,in vivoにての可溶性CD40 ligandの,腎癌細胞株に対する抗腫瘍効果を検討する計画である.我々はまずヒト腎癌細胞株である769-P,786-O,A-498及びA-704の細胞表面でのCD40の発現を,抗CD40抗体を用いてflow cytometryにて検索した.これらがCD40陽性である事を確認した後,interferon-γによるCD40発現の増強効果を検討したところ,接触6-12時間後に最も強い発現を見た.次に,遺伝子組み替えにより作られた可溶性CD40 ligandを用いて,MTTassayにて腎癌細胞株に対する抗腫瘍効果を検索したところ,769-P及び786-Oは可溶性CD40 ligandとともに培養する事により,その増殖が抑制された.メカニズムとしては,TUNEL assay,電顕等にてapoptosisの存在を確認した.また,この抑制効果はinterferon-γの併用により増強された.我々はこれらの腎癌細胞株5X10^6個を,severe combined immuno-deficiensy(SCID)mouseの腹腔内に移植,コントロール群は第25-30日目で腹腔内播種または肝転移にて死亡したが,これら担癌マウスを可溶性CD40 ligand10μgにて治療したところ,有意な生存期間の延長が得られた.更に,in vitro同様interferon-γを併用投与したところ,有意差は得られなかったがマウスの生存期間の延長が見られた.現在これらデータの追試とともに,論文作成中である.
ヒト iPS 細胞由来血液脳関門モデルを用いた病態モデルの構築

虚血性脳血管障害は脳血管の塞栓によって発症する。グルコースや酸素の供給が滞ることで本来の血管内皮細胞の性質が失われ、結果として血液ー脳関門(BBB)の破綻が起きることは広く知られているものの、in vitroの良い病態モデルが存在しないため、iPS細胞を用いた病態モデルの確立を試みた。虚血状態を模倣するためにヒトiPS細胞由来脳血管内皮細胞をグルコース非存在下かつ低酸素条件で培養したところ、バリア機能が著しく減弱した。虚血を発症した後、血栓が取り除かれることで血液の再灌流が起こるが、その状況を再現するために虚血条件下に曝したヒトiPS細胞由来脳血管内皮細胞に対してグルコースや酸素を再供給したところ、バリア機能が12時間程度で回復した。齧歯類由来の内皮細胞を用いた従来の報告と比べて再灌流後のバリア機能の回復が極めて早いことから、ヒトiPS細胞由来脳血管内皮細胞は恒常性の維持能力が高いことが示唆された。虚血時には脳内に存在する細胞によって数多くの炎症性メディエーター放出されることが知られている。そこで、各種炎症性メディエーターが膜間電気抵抗値におよぼす影響を調べたところ、TNF-aが最もバリア障害能が高いことが明らかとなった。TNF-aは主にアストロサイトやミクログリアから放出される。そこで、再灌流条件時においてTNF-aをヒトiPS細胞由来脳血管内皮細胞に対して作用させたところ、再灌流条件で観察されたバリア機能の回復が著しく妨げられた。ただし、TNF-aの作用メカニズムについては脳血管内皮細胞へのアポトーシスを介さないものであった。以上より、本研究では酸素濃度、グルコース供給に加えて、周囲の細胞が産生する炎症性メディエーターに対しても考慮した虚血性脳血管障害モデルを確立した。初年度は、ヒトiPS細胞を利用した血液ー脳関門(BBB)モデルを利用して、虚血性脳血管障害の病態をin vitroで反映させることができた。すなわち、虚血時および再灌流時のBBBバリア能の変化について培養条件を変動させることにより再現させることに成功した。また、虚血性脳血管障害が生じる原因物質を網羅的に探索した結果、TNF-aを同定することに成功した。したがって、当初の予定通り順調に進捗しているといえる。近年、種々の疾患においてBBBの障害が報告されている。本年度は、虚血性脳疾患におけるBBBバリア能の低下について検討した。今後は、他の疾患におけるBBBバリア能の変化について検討する必要がある。重症熱中症患者の一部ではBBBの破綻により脳浮腫や意識障害を呈することが知られている。そこで、ヒトiPS細胞を用いて、熱中症時のBBBのバリア能が障害される病態をin vitroで再現し、障害に関与する分子を探索する。