hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
表面修飾技術による高い薬物担持率と分散安定性を併せ持つ抗がん性ナノ薬剤の創出

申請者らは、抗がん活性を持つ化合物だけで作られたナノ薬剤の作製に既に成功しているが、動物実験における薬剤輸送効率に改善の余地があることが判明した。そこで、本申請研究では、1)ナノ薬剤の表面修飾、2)細胞実験による評価、3)動物実験によるナノ純薬の腫瘍部位への集積性および抗腫瘍活性の評価を通じて、腫瘍組織にナノ薬剤を効率的に輸送させる手法を確立する。
世界自然遺産の小笠原の乾性低木林樹木の乾燥耐性の解明と温暖化影響下での森林保全

小笠原では特に近年乾燥が頻発しており、2019年に入って降水量が極端にするなく、2019年冬の3月時点で、小笠原の乾燥尾根部に発達している乾性低木林で多くの樹木枯死が見られている。樹木の乾燥枯死は近年世界各地でも見られており、今後の乾燥化による森林衰退や、乾燥害を受けた森林修復のため、樹木の乾燥枯死を起こす生理メカニズムの研究が活発に行われ出している。我々は特に、小笠原の在来樹種であるウラジロエノキを用いて、樹木の乾燥枯死を起こす生理メカニズムの解明を行った。樹木の乾燥枯死を起こす生理メカニズムとして、道管内の水切れによる通水欠損仮説と、乾燥による光合成の低下による糖欠乏仮説の二つが、それぞれ証拠を持って議論されている。しかし我々の結果からは、乾燥初期には通水欠損が生じ、乾燥後期には糖欠乏によって枯死に至るという、乾燥枯死の生理メカニズムがわかってきた。さらに特に幹基部の材木部で、乾燥初期には糖含量が上昇し、その後糖量が低下してくると乾燥枯死に至ってしまうことがわかり、幹基部の糖含量は、樹木の乾燥ストレスの指標になることがわかってきた。また通水欠損を起こす際も、枝の道管の水切れよりに先んじて、根系の衰退や葉脈部による通水欠損が先んじている可能性、また糖含量の低下とともに、脱水による細胞活性の低下や枯死が生じることがわかってきた。これらの研究成果は、様々な樹種間や、実生から成木といった発達ステージ間で、樹木の乾燥枯死を起こす生理メカニズムや乾燥枯死を起こしやすさの解明、また乾燥街を起こした森林の修復技術の開発に大きく繋がる。特に樹木の乾燥枯死の生理メカニズムの解明に関しては、オープンジャーナルの国際誌であるCommunications Biologyに2019年1月号に掲載され、これらの研究成果はプレスリリースを行い、全国誌である日本産業新聞などで取り上げられた。また2019年に入って小笠原ではすでに強い乾燥が入っており、森林や樹木の乾燥害をモニタリングするための体制を作っている。そのために新たに1名、研究分担者を増やすことにした。2019年に入って小笠原ではすでに強い乾燥が入っており、樹木の乾燥枯死がすでに起きている。そこで森林や樹木の乾燥害をモニタリングし、どのような場所でどのような樹種が乾燥枯死しやすいかを調べる。また多樹種間で、道管の水切れ耐性や糖貯蔵能を調べるとともに、樹木が乾燥枯死を起こす生理要因を多樹種間で比較する。
ナノファイバー化技術を用いたきのこ栽培廃菌床の持続的利用技術の開発

きのこの菌床栽培の際に大量に生じる廃菌床は利用用途が無く、廃棄物として処理されているが、豊富に含むセルロースとキチンを利活用できれば、持続可能な資源利用システムが構築可能であると考えられる。セルロース、もしくはキチンをナノファイバー化して製造できるバイオナノファイバーには、農業分野と食品分野に貢献できる機能が備わっている。本研究では、「きのこ栽培廃菌床から製造したバイオナノファイバーの農業・食品分野での利用をベースとした持続的な資源利用システムの構築」を最終目標とし、バイオナノファイバーに関するこれまでの研究成果と独自のナノファイバー化技術を活用した研究を、農工連携の異分野融合研究により展開した。きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーについては、シイタケを栽培した後の廃菌床を原料に製造し、その物性の評価を行うことで、高結晶性のセルロースとキチンから成るだけでなく、βグルカンも含むことを明らかにした。また、本ナノファイバー複合体を用いて不織布を作成し、その物性を評価した結果、キチンもしくはセルロースナノファイバーと比較して優れた力学的特性を備えていることも明らかになった。得られたきのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーについて、農業と食品分野で既に明らかにしている機能を指標に評価を行った。小麦粉生地への添加では、生地強度の強化効果は確認できなかった。しかしながら、植物に処理することで、キチンもしくはセルロースナノファイバーよりも有意に高いエリシター活性と病害抵抗性が誘導されることが明らかになった。今後はきのこ栽培廃菌床から効率的にナノファイバーを製造する方法を確立すると共に、植物ときのこを用いた機能評価を引き続き実施する予定である。当初時間がかかると予想された「きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーの製造技術開発」については、昨年度にキチンナノファイバーとセルロースナノファイバーの混合物が得られることが明らかになっていた。本年度はキチン含量が最も多いと見積もられたシイタケの廃菌床の粉末を脱脂し、Wise法に従ってリグニンとヘミセルロースを除去し、得られた抽出残渣の水懸濁液を石臼式磨砕機で処理して粉砕することで得ることができた。粉砕物は水中に均一に分散しており、電子顕微鏡によりナノサイズの長繊維の形状が確認できた。得られたナノファイバーは高結晶性のセルロースとキチンから成り、他にβグルカンも含むことを特徴としていた。このナノファイバー複合体から成る不織布は優れた力学的特性を備えていた。得られたきのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーについて機能評価を行った結果、小麦粉生地への添加試験については、キチンもしくはセルロースナノファイバーで見られた生地強度の強化効果は観察されなかった。植物を用いた評価も実施した結果、きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーを処理したシロイヌナズナにおいて、病害抵抗性誘導能の指標となる活性酸素種の顕著な生成が観察された。また、アブラナ科黒すす病菌に対する抵抗性も有意に向上していることも明らかになった。興味深いことに、本ナノファイバーはほとんどキチンを含んでいないにも関わらず、同量のキチンナノファイバーよりも明らかに強い病害抵抗性が誘導された。また、シイタケの菌床栽培時に添加した場合、キチンもしくはセルロースナノファイバーを添加した場合と同様に、収量の増加が見られた。本研究の根幹を成す「きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーの製造技術開発」が概ね確立できたので、今後は機能をもつキチンが多く含まれるナノファイバーが得られるよう、供試する廃菌床の種類や製造工程に関して検討を行う。得られたきのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーについては、本素材の有効性を証明するために、農業・食品分野での機能評価を継続して行う。具体的には、キチンナノファイバーとセルロースナノファイバーについて既に明らかにしている機能である、植物の病害抵抗性誘導能と成長促進効果、きのこの成長促進効果、および穀類粉食品の食感に関しての評価を行う。「きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーの製造技術開発」と本素材の物性と機能に関しては新規なものなので、特許出願や研究発表を行っていく予定である。また、昨年度得られたキチンナノファイバーとセルロースナノファイバーの小麦粉生地への添加効果に関する成果については、学術論文として査読付きの学術雑誌に掲載された。本研究では、「きのこ栽培廃菌床から製造したバイオナノファイバーの農業・食品分野での利用をベースとした持続的な資源利用システムの構築」を最終目標とし、バイオナノファイバーに関するこれまでの研究成果と独自のナノファイバー化技術を活用した研究を、農工連携の異分野融合研究により展開する。きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーについては、複数の栽培きのこの廃菌床を原料に用いて製造できることが明らかになった。得られたキチンナノファイバーとセルロースナノファイバーの混合物に関しては、含有率、化学構造、形状、分散液の透明性等を評価した。また、きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーが得られるまでに、きのこ栽培廃菌床内のキチン/セルロースの存在比率を参考にキチンナノファイバーとセルロースナノファイバーの混合液を調製し、農業と食品分野で既に明らかにしている機能を指標に、これらのナノファイバーの評価を行った。きのこの菌床栽培時に添加した場合は、生育等に大きな変化は見られなかった。小麦粉生地への添加により、ナノファイバー混合液による生地強度の強化効果を確認した。

また、得られたきのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーを植物栽培の水耕液に添加した場合は、成長が促進される傾向が見られた。きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーの製造技術が確立できたので、今後はその機能評価を中心に行って行く予定である。当初時間がかかると予想された「きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーの製造技術開発」については、主に木粉からの紙パルプの精製工程を利用することで、高純度のセルロースとキチンを同時に抽出することができ、キチンナノファイバーとセルロースナノファイバーの混合物が得られることが明らかになった。ただし、きのこ種の違いでキチン含量に大きな差が見られたこと、および予想よりもキチン含量が低いことから、供試する廃菌床の種類や製造工程について検討する必要がある。また、セルロースナノファイバーとキチンナノファイバーを製造し、他の試験に提供も行った。一方、きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーを得るには時間がかかると考え、当初はきのこ栽培廃菌床内のキチン/セルロースの存在比率を参考にキチンナノファイバーとセルロースナノファイバーの混合液を調製したものの評価を行った。その結果、きのこの菌床栽培時に添加した場合、期待していた生育等への影響は見られなかった。添加方法や濃度、タイミング等を詳細に検討する必要があると考える。小麦粉生地への添加試験については、キチンとセルロースの比率に関わらずナノファイバーによる生地強度の強化効果が観察されたが、セルロース含量が高まるとその効果が弱まる傾向があることが明らかになった。植物を用いた評価については、きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーを用いた試験も行い、植物栽培の水耕液に添加した場合は成長が促進される傾向が見られた。病害抵抗性に関する評価にも着手しているところである。きのこの菌床栽培の際に大量に生じる廃菌床は利用用途が無く、廃棄物として処理されているが、豊富に含むセルロースとキチンを利活用できれば、持続可能な資源利用システムが構築可能であると考えられる。セルロース、もしくはキチンをナノファイバー化して製造できるバイオナノファイバーには、農業分野と食品分野に貢献できる機能が備わっている。本研究では、「きのこ栽培廃菌床から製造したバイオナノファイバーの農業・食品分野での利用をベースとした持続的な資源利用システムの構築」を最終目標とし、バイオナノファイバーに関するこれまでの研究成果と独自のナノファイバー化技術を活用した研究を、農工連携の異分野融合研究により展開した。きのこ栽培廃菌床由来バイオナノファイバーについては、シイタケを栽培した後の廃菌床を原料に製造し、その物性の評価を行うことで、高結晶性のセルロースとキチンから成るだけでなく、βグルカンも含むことを明らかにした。
ルネサンスにおける自然観の総合的研究

1平成9年度12年度にかけて,学習院女子大学・同志社大学・京都大学を会場に,計8回の研究発表会を開催し,毎回,4050名の参加者を得て,ルネサンスの自然観に関して,さまざまな観点から検討を行った。また,平成10年度には,他の組織との共催で国際研究集会を開催した。2これらの研究発表会における,主たる論点は,(1)初期ヒューマニストたちの医学批判に見える,反スコラ的な自然観,(2)ペトラルカ以来の文学に現われる,古典的・牧歌的な自然像,(3)アヴェロエス主義的な自然についての合理主義的研究と,ガリレオを嚆矢とする数学をモデルとする自然理解,(4)ヘルメス主義者を代表とする魔術的・秘儀的な宇宙観,(5)ルネサンス美術における,遠近法と自然主義を特徴とする自然観,などである。3これらの論点を中心に行われた議論の内容は多岐にわたったが,結果的に明らかになった点は,(1)中世のスコラ的自然観に替わるルネサンスの新たな自然観は,自然科学上の発見によってだけではなく,自然に対する見方が,哲学・文学・芸術を含む人間の文化的活動総体の中で転換したことに起因すること,(2)この転換は,「人間における自然」(人間本性)の理解においても起こって新しい人間像の創出を促し,また人間の共同体である社会・国家の新しい体制を提示したこと,である。4その他,研究課題に関わる邦語ルネサンス文献目録の作成のために資料の蒐集を継続的に行ない,コンピュータへの入力作業を行なった。1本年度の全体的研究活動としては、研究代表者・研究分担者および多くの研究協力者の出席によって、平成9年6月(学習院女子短期大学)と12月(同志社大学文学部)で開催した研究発表会が挙げられる。2上記研究会においては、各専門領域からの研究発表を行ったのち、討論を通じて「ルネサンスの自然観」の総合的把握を行なおうと試みた。この過程で明らかになったことは、近年のルネサンス研究の飛躍的な発展により、各分野で従来の諸解釈の見直しが行なわれている点であり、こうした研究動向を踏まえて、あらためて総合的把握のための共同研究の必要性が痛感させられた。3研究上の課題としてとくに議論されたのは、ルネサンスが前提とするキリスト教的自然観が、ギリシア・ローマの文化の復興を経ていかに変容したのか、また、勃興しつつある合理的・数学的自然観をいかに受容していったのかという点である。この問題は、各研究分野に応じてさまざまな展開が見られるが、全体的な展望を獲得するために、15世紀フィレンツェの新プラトン主義の特徴であるシンクレティズム(諸説混合)をひとつの視座と措定する可能性が提起された。4そのほか、研究課題に関わる邦語ルネサンス研究文献目録の作成のために資料の収集を行ない、コンピュータへの入力作業を行った。また、研究情報の交換と研究成果の公開を目的とする、インターネット上のホームページ作成のための準備作業を行なった。1平成10年6月に学習院女子大学で、12月に同志社大学で研究発表会を開催し、研究代表者・分担者のほか、多くの研究協力者の参加を得て、当該の課題をめぐって論議を深めた。2これらの研究会においては、(1)「ブラマンテにおける古代受容」や「マンテーニャ〈サン・ゼーノ祭壇画〉の視覚的源泉」など美術史的な問題、(2)「ブルーノにおけるコペルニクス」や「ガリレオとアカデミア・デイ・リンチェイ」など科学史的な問題、(3)「14-15世紀イタリア諸都市における反ソドミー政策」など歴史学的問題、「セイチェントのナポリ演劇」など文学史的問題などが採り上げられ、各学問分野における「自然観」を具体的に考究した。3これらの研究をふまえた議論を通じて明らかになったことは、ルネサンスという転換期においては、外界の「自然」と人間の「自然」(人間本性)の両方において、中世のキリスト教神学の自然観から逸脱した、新しい、さまざまな自然観が登場したという点である。

そして、その基礎付けにおいて、古典古代の学芸が果たした役割を見定めなければならないという点である。次の課題としては、各分野における新しい自然観が、いかに相互に連関しているかを総合的に把握することが挙げられる。4そのほか、前年度に引き続いて、研究課題に関わる邦語ルネサンス文献目録の作成のために資料の蒐集を行ない、コンピュータへの入力作業を行なった。また、研究情報の交換と研究成果の公開を目的とする、インターネット上のウェブサイト作成のための準備作業を行なった。1平成11年6月に学習院女子大学で研究発表会を行い、「ガリレオ的学知の問題」、「兄弟会の研究の現状-メディチ家と兄弟会」、「東西中世の<小鳥への説教>説話と図像」をめぐって討論した。2平成11年12月に同志社大学で研究発表会を行い、「sanguignoを着る女-ベアトリーチェ、ラウラ、エミリア」、「1539年のフィレンツェの祝祭-コジモ1世の即位の正統化をめぐって」、「人文主義から科学革命へ-ルネサンスにおける実践的学問観」をめぐって討論した。3以上の研究発表会における議論を通じて明らかになった点は、(1)ガリレオを始めとするルネサンス科学の勃興において、科学・技術上の進歩だけではなく、総体的な自然観の変容が決定的な意味を持ったこと、(2)ルネサンスの都市における宗教的・政治的活動において、新しい自然観が重大な影響を及ぼしていること、(3)色彩を中心とする感覚の変容が、ルネサンスの文学作品において認められること、である。また、新たな課題として、日本における自然観とヨーロッパにおける自然観の比較文化・比較思想的な考察を、国文学研究者を研究協力者として招いて行った。1平成12年6月に学習院女子大学で研究発表会を行い,「コムーネと占星術-パードヴァのパラッソォ・ラジォーネの壁画装飾を中心に」.「裸体に羽織る男物の外套の意味-ジョルジョーネ作《ラウラ》」,「プラトン・アカデミーとフィレンツェ大学」の発表をめぐって討論した.2平成12年12月に京都大学で研究発表会を行い,「15世紀イタリアの医師のまなざしとジェンダー-Michele Savonarolaの論考をもとに」,「アルチャーティ『エンブレム集』の展開と影響」,「デカルトにおける数学的実在論批判-『規則論』を中心に」の発表をめぐって討論した.3以上の研究発表会における議論を通して明らかになった点は,(1)中世・ルネサンスにおける占星術の図像のあるものは,当時の自然観を背景にしながら,政治的な文脈も有していたこと,(2)ヴェネツィア派の美術において,人間の自然(本性)に関わってジェンダー的に相対的な視点が見られること,(3)ルネサンス医学史における.人間の自然(本性)へのアプローチに変化が現れること,(4)エンブレム・ブックという文学ジャンルにおいても,新たな自然観が反映されていること,(5)ルネサンスの自然観がデカルトの数学論の形成に対して影響していること,などである.
聴神経腫瘍による耳鳴の発生機構に関する基礎的、臨床的研究

聴神経腫瘍(AN)症例における耳鳴の性状について検討するための基礎的資料を得る目的で、耳鳴検査装置(TH-10)を用いた耳鳴検査法の有用性及び短期再現性について検討した。オ-ジオメータに比べて耳鳴検査装置(TH-10)ではより詳しい耳鳴の性状の把握が可能であり、短期再現性にも優れていた。従って、多彩な臨床像を示すANにおける耳鳴の評価が可能となることが期待された。聴力保存手術を施行されたAN85例において、術前術後の耳鳴につき聴力保存群と非保存群に分けて検討したが、耳鳴の有無、耳鳴の大きさの変化、耳鳴の気になり方の変化に関して、聴力保存群と非保存群の間に明らかな差は認められなかった。また、耳鳴の気になり方の変化に関しては、個々の症例によってばらつきのある結果となったが、両群ともに術前術後をとおしてそれほど気にならない人が大部分であった。現在、ANにおける耳鳴検査所見の詳細を分析中である。ANにおける蝸牛障害の責任部位を検討するために、蝸牛遠心性神経及び外有毛細胞の機能を反映すると考えられる耳音響放射所見について検討した。AN95症例について耳音響放射を測定し、メニエール病確実例と比較し。AN症例のうち平均聴力レベルが60dBを超えるものでEOAEが誘発可能だった症例は3例認められたが、Repro、TEPの値は健側に比較して明らかに低下しており、ANのほとんどの症例で蝸牛遠心性神経及び外有毛細胞の障害が生じていると考えられた。現在、耳鳴抑制効果を有するリドカインのANにおける耳鳴に対する影響について、耳鳴の自覚的変化と耳音響放射の変化を経時的に観察しているが、現時点ではそれぞれの変化は症例により様々で、一定の傾向は認めていない。基礎的研究として、これら臨床的に観察された現象をANモデル動物を用いて検討中である。ANモデルとして小脳橋角部で蝸牛神経を機械的に圧迫する蝸牛神経障害、及び光増感反応による蝸牛神経循環障害を作成しているが、今後これらANモデルにおける耳音響放射所見を詳細に検討する予定である。臨床的研究として聴神経腫瘍における耳鳴の自覚的検査および他覚的検査所見、特に内耳障害の他覚的検査法として注目されている耳音響放射所見について検討した。その術前、術後の変化を観察し、その他の原因による内耳性難聴に伴う耳鳴症例の耳音響放射所見と比較検討した。その結果、聴神経腫瘍では後迷路性難聴を示す症例で中等度高度難聴にもかかわらず耳音響放射が検出できたが、内耳性難聴を示す症例での耳音響放射検出は低率であった。また、耳鳴と耳音響放射所見との間には明確な関係は認められなかった。聴神経腫瘍の耳鳴と耳音響放射との関係の検討には、耳音響放射測定法の改良が必要であると考えられ、現在新しい測定システムを考案し検査を行っている。基礎的研究としては聴神経腫瘍のモデル動物を作製し、その内耳、蝸牛神経障害と耳音響放射所見との関連についての基礎的実験を行った。聴神経腫瘍モデル動物として、実験的内耳障害モルモット、および実験的蝸牛神経障害モルモットの耳音響放射(誘発、歪成分)を測定し、比較検討した。

内耳障害モデルでは耳音響放射の消失が顕著であり、障害作成直後より耳音響放射は消失した。しかし、蝸牛神経障害モデルでは難聴の程度より考えて耳音響放射の障害は軽微であり、耳音響放射が内耳障害を反映することが確認された。臨床的研究聴神経腫瘍症例における耳鳴の性状について詳細に検討した。聴力保存手術を施行された聴神経腫瘍85例において、術前術後の耳鳴につき聴力保存群と非保存群に分けて検討したが、耳鳴の有無、耳鳴の大きさの変化(増強、減弱、変化なし)、耳鳴の気になり方の変化に関して、聴力保存群と非保存群の間に明らかな差は認められなかった。また、耳鳴の気になり方の変化に関しては、個々の症例によってばらつきのある結果となったが、両群ともに術前術後をとおしてそれほど気にならない人が大部分であった。聴神経腫瘍における耳鳴に対するリドカインの影響について、耳鳴の自覚的変化と歪成分耳音響放射の変化を経時的に観察たが、それぞれの変化は症例により様々で、一定の傾向は認めなかった。基礎的研究歪成分耳音響放射に対するリドカインの影響について検討し、リドカインは歪成分耳音響放射を一過性に抑制することが明らかとなった。また、単離外有毛細胞はリドカインにより収縮し、細胞内カルシウム濃度も上昇した。以上の結果より、リドカインによる末梢性の耳鳴抑制機序が明らかになったが、聴神経腫瘍モデル動物を用いた検討は現在進行中であり、明確な結果は得られていない。
日本語指導教員の成長過程に関する研究-成長を支えるシステムに着目して-

本グループはこれまで日本語指導等を必要とする外国人児童生徒等の教育に対応できる教員に求められる資質能力を明らかにし、その教育の内容や方法について提案してきた。その成果を踏まえて本研究では、日本語指導教員の育成について、行政等と連携しながら各地で教員養成・研修の実践を行い、これまでの提案の妥当性を検証した。また、成長ステージや職務内容の多様性に合わせた研修を行い、日本語指導教員の成長を支えるシステムのあり方について考察した。さらに、研究成果を全国に普及するため「多文化教員養成フォーラム」を開催し、この領域への関心を喚起し、関係者のネットワーキングを進めた。本課題に先立つ「多言語・多文化化する学校に対応できる教員養成・教員研修システムの開発に関する研究」から継続して一年繰り上げで本課題の研究を開始した。本年5月に文部科学省は「日本語指導が必要な児童生徒を対象とした指導の在り方に関する検討会議」の「審議のまとめ」を公表した。その中で,日本語指導を学校教育の中の「特別の教育課程」に位置付け,編成・実施することが適切であると示された。「特別の教育課程」を実施するための要件として,指導者は教員免許状を有している必要があり,日本語指導に必要な資質・技能を備えた教員がこれまで以上に求められる。そこで,これまでの本プロジェクトの研究成果を足がかりとして,現職教員,学部教員養成課程を問わず,日本語教育に関わるあらゆる指導者に対して,求められる資質を養うためのプログラムのあり方についての議論を行うため,現職教員研修,学部教員養成課程での日本語科目の成果を整理し,多文化教員養成に必要な要素を整理することを試みた。また,外国人集住地域にある4つの市との合同により現職教員を対象とした研修パッケージを開発し実施した。この研修パッケージでは,日本語指導が必要な児童生徒への学習支援の方法を,教員自身が参加する体験活動を通じて考えてもらう。また,体験の後には理論的枠組みに関する講義を行い,体験と理論を結びつけられるようにした。受講者にアンケートを行い,授業前後の変容を分析した。さらに本年度の実績と前課題の成果の総括を行い,報告書を作成,関係者および諸機関に配布した。本年度も現職教員を対象に,日本語指導を必要とする児童生徒の教育に求められる技能・資質を養成する教育プログラムの開発を継続した。今年度の成果の一つは,昨年度開発した「出前研修」について,参加者アンケートを分析し,研修にどのような効果があったかを分析したことである。研修はおおむね高く評価されており,また教員の認識の変容にも一定の効果が見られた。また,同じ研修でも,学部養成課程の学生と現職教員とではその評価が異なることも明らかになった。この差を今後の養成・研修システムの改善に活かしていきたい。また,昨年度までに開発したリソースをウェブ上で公開するシステムを作成した。このサイトでは実践者が各々の作成したリソースや実践例を交換しあうことが可能になっている。このサイトについて,関係者に依頼して評価を求めた。昨年度,教員養成,現職教員研修のコンテンツをデータベース化してウェブ公開した。今年度もウェブサイトを継続して運営した。データベースには教員養成・研修だけでなく日本語指導者自身が作成した日本語指導のコンテンツを共有し,感想を書き込むことで成長に結びつけるようなシステムを整備し「多文化教員の広場」と名付けた。今年度の計画は以下の通りであった。(1)学会発表や本グループメンバーが行う現職教員研修等の機会を活用し,ウェブサイトの広報を行う。(2)データベースにリソースを提供してくれた人やリソースをダウンロードしてくれた人に調査を行い,データベースの有用性を検証する。(3)分担者による教員養成,教員研修とそのコンテンツの蓄積を継続する。(1)については,ウェブサイトは好評をもって受け入れられたが,データベースにリソースを登録したり,すでに登録されたリソースを活用して感想を書き込む人は残念ながらほとんどいなかった。そのため,(2)を実施することができなかった。現職教員によるウェブ上のコンテンツの共有は盛んに行われているが,教員の成長を支えるシステムとしての活用には限界があることが明らかになった。今後システムの改善が求められる。また対面での情報共有の機会としてフォーラムを開催したが,このフォーラムの出席者の満足度は高かった。(3)について,各研究分担者が各自の現場で行う教員養成,教員研修を継続し,コンテンツの蓄積をおこなうとともに,それらの研修の有効性の検証を行った。体験活動を伴う研修や実際に指導計画を作成する研修は有効性が高いことが明らかになった。教員養成・現職教員研修のためのさまざまなコンテンツをウェブ上にデータベース化して公開した。データベースの有効性を確かめるため,学会発表や現職者研修を通じて呼びかけたが,アクセス数が予想より少なかった。データベースの有効性を検討することはできなかったが,教師の成長を支えるシステムとしてのウェブの活用は,すくなくとも現時点では課題が大きいことが明らかになったという点では,大きな示唆を与えてくれたと考えられる。本研究グループはこれまで日本語指導を必要とする外国人児童生徒等の教育に対応できる教員に求められる資質は何か,また教員養成や現職教員教育として有効なプログラムはいかにあるべきかを検討してきた。本年度より2ヶ年をかけて以下を実施する計画である。(1)教員養成,教員研修のリソース開発と実践の分析の継続,(2)自律学習型リソースの内容の策定,(3)自律学習の方法論の策定,(4)自律学習型リソースの開発,(5)研究者,教師教育者のネットワークを構築する。このうち本年はまず,養成課程の学部学生,現職教員(初心者,経験者)といった対象別の自律学習型のリソースの開発に向けた作業を行った。

自律学習型リソースの開発に先立ち,このリソースによる学習の到達目標を明確にし,リソースに求められる要件や学習へのアプローチのあり方を明らかにするため,対面型授業の効果の質を明らかにしようと試みた。各自が授業を担当する学部生を対象として,授業における受講生の認識の変容を調査した。また,現職教員については,その認識の特徴を調査することが必要と考え,そのための質問紙調査を開始した。調査用紙を策定し,パイロットスタディを終え,本調査の一部をすでに開始している。調査結果は,日本語指導に関する経験年数の点から認識の違いを分析する予定である。リソース開発作業については,その成果の一部を図書として公刊した。さらに,研究成果を普及するためのフォーラムを開催した。フォーラム参加者とのネットワーキングにも資するものとなった。2ヶ年での自律学習型リソースの開発の初年度を終え,リソース開発の基礎資料の収集を行うことができた。また一部の成果は書籍化し、公刊された。本研究グループでは、日本語指導等を必要とする外国人児童生徒等の教育に対応できる教員の成長を支えるシステムに関する研究を行ってきた。今年度も引き続き、日本語指導を必要とする外国人児童生徒等の教育に求められる資質は何か、また教員養成や現職教員研修において扱うべき内容や有効な教育・研修の方法はどのようなものかについて調査と考察を行うとともに、プロジェクトの最終年度としての総括を行った。研究活動としては、昨年度開発した「日本語指導に関するビリーフ調査」調査票を用いて、全国の学校教員、日本語教師の養成課程の学生や指導者の日本語指導に関するビリーフを調査し、その結果を分析して公表した。分析はまだ途中であるが、学生と現職教員のそれぞれの特徴、学生におけるボランティア経験の有無等、グループの特性によって特徴的なビリーフの傾向が見られることが明らかになった。今後の教員の成長を支えるシステムの開発にとって有益な示唆が得られた。また、開発した研修システムを試行するため、いくつかの現職教員研修の場を借りて、研修の有効性の検証を行った。本研究プロジェクトの最終年度に当たり、プロジェクト全体を振り返るとするなら、日本語指導に当たる教員の養成・研修のあり方に関する関係者の関心を喚起し、その重要性に関する認識を広めることができたことが最大の成果として挙げられるだろう。この1年間で、多くの学会、協議会のセミナー等として外国人児童生徒等の教育やそれを担う教員の養成・研修がテーマとして取り上げられるようになった。また、公益社団法人日本語教育学会が文部科学省からの委託を受け「外国人児童生徒等教育を担うモデルプログラム調査開発事業」を開始することとなった。本研究の成果が今後の研究開発に活用されることを期待している。
経済危機と経済学 : 1970年代日本のマクロ経済思想と経済政策の歴史的考察

1970年代日本のマクロ経済思想と経済政策の関係について歴史的な考察を行った。この場合の歴史的というのは、経済史的な事実を踏まえるだけではなく、経済学史、経済思想史的な観点から、当時のマクロ経済政策を分析することを意味している。この研究では、大きく言って三つの成果を得た。第一に、1970年代の大インフレはそれを許容する経済思想のもとで生まれた。当時の政策担当者の間においてはインフレを許容する思想が強かった。為替政策については円高を恐れる発想が強く、財政政策については福祉国家建設が。第二に、日本銀行においては複数の思想があったものの、70年代の経験を通じて物価安定化を強調する思想が強化されることになった。第三に、国際通貨制度の変化に対して当時の政策担当者、経済学者は一部の例外を除いてブレトン・ウッズ体制を前提としており、それが70年代大インフレに貢献したと考えられる。平成22年度は3カ年計画の基礎研究調査期として位置づけられる。第一に、70年代大インフレについての研究をおこなった。海外の文献展望、日本への研究をはじめ、すでに先行している部分である。海外における研究展望を中心とした『危機の経済政策』(日本評論社、2009年)での展望に続き、まだ手薄である日本の70年代に即して問題の所在を明らかにする論文を執筆し、海外学会で発表した。第二に、70年代マクロ経済学・経済思想についての研究を行った。大インフレとの関係では、アメリカのマクロ経済学、とくに経済学者ミルトン・フリードマンの業績を再評価することが中心となった。なぜならば、フリードマンこそは金融政策の重要性を早くから強調することで、大インフレの原因と処方箋について学術的かつ啓蒙的に大きな貢献を成し遂げたからである。このフリードマンの業績について研究代表者は最新の文献展望を行った。これについては2011年度の経済学史学会で発表することが決まっている。第三に、大インフレを含む物価変動を経済学者がいかに捉えてきたかについての展望的論文を執筆した。ここではグローバルな貨幣の動きをいかに統御するかという問題に焦点を置き、主に国際通貨制度と経済学の関わりを分析した。これについては、経済学史学会60周年記念出版において刊行される予定である。第四に、海外学会での論文発表を行った。日本の経済学史学会で2009年度に報告した論文をさらに発展させて、2010年度の全米経済学史学会(History of Economic Society)で発表を行った。第五に、海外での資料調査、学会発表や研究協力者との交流を通じての意見交換を行った。研究期間中間の年として研究進捗状況についての自己点検を行った。調査研究から次第に成果発表に重点を移行した。1.70年代は国際通貨制度が激しく変化した時代でもある。ことに1971-73年のブレトン・ウッズ体制の崩壊は大インフレと深くかかわる。国際通貨制度と経済思想の密接な関連については、70年代大インフレとの関係だけでなく、経済学全体と国際通貨制度の関係を分析した論文を刊行する予定である(「グローバル化と貨幣」『古典から読み解く経済思想史』ミネルヴァ書房、2012年5月刊行予定)。2.70年代のマクロ経済学について、主として日本におけるケインズ主義とマネタリズムとの関係について議論した。その前提として、マネタリズムの代表としてとりあげられるミルトン・フリードマンについては経済学史学会の査読付学術雑誌である『経済学史研究』に展望を兼ねた論文を書くように依頼をされ、執筆が終わり、以下として刊行される予定(「歴史としてのミルトン・フリードマン」『経済学史研究』第54巻第1号、2012年7月刊行予定)。また、日本におけるケインズ主義とマネタリズムとの関係について2本の論文を執筆し、1本は全米経済学史学会で発表を行った。もう1本も近日中に刊行される予定である(「貨幣理論のない日本のケインズ主義」浜田宏一・原田泰編『金融政策とデフレ脱却(仮)』中央経済社、2012年刊行予定)。3.70年代インフレについて重要な役割を果たした日本銀行の政策思想について論文を執筆し、イタリアで報告をした。4.内外学会で3本の発表を行った。最終研究年度として、研究成果の発表に力点を置いた。第一に、1970年代の経済政策思想に大きな影響を及ぼしたミルトン・フリードマンについて、研究展望と歴史的評価を行う論文を書いた。

そこではフリードマンの巨大な業績が現在でも論争の的であるという意味で現代にも生きていることを示した(「歴史としてのミルトン・フリードマン:文献展望と現代的評価」(『経済学史研究』第54巻第1号、2012年7月、22-42頁)。第二に、70年代初頭に起きたブレトン・ウッズ体制の崩壊の歴史的意義について論じた(「グローバル化と貨幣ージョン・ロックからベン・バーナンキへー」経済学史学会ほか編『古典から読み解く経済思想史』ミネルヴァ書房、2012年5月、37-61頁)。当初目的とした単行本の執筆にはいたっていないものの、英文論文2本、日本語論文3本を執筆し、国際通貨制度、経済思想、経済政策思想についての3分野については予備的な成果を発表できたと考える。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後の研究課題については、昨年度の研究計画を踏まえ、これまで発表してきた学会発表を論文とすること、論文を単行本にすることを目標とする。また最終年度ということもあり、これまでの研究をまとめることに主眼を置きたい。
慢性血栓塞栓性肺高血圧症に対する機能的電気刺激療法の開発

【研究の目的】肺高血圧症(PH)のサブグループの一つである慢性血栓塞栓性肺高血圧症(CTEPH)は、治療や診断の進歩により長期生存が可能となりつつある疾患群である。CTEPH患者に対して、心臓リハビリテーションが有用であることは報告されているが、運動耐容能、健康関連QOLの改善効果に関する研究は未だ乏しい。機能的電気刺激(FES)は、慢性心不全患者の運動耐容能、健康関連QOLの改善に有用であることが報告されているが、CTEPH患者に対する介入効果の検証が行われていない。本研究の目的は、近赤外線分光装置(NIRS)を用い、CTEPH患者の下肢骨格筋酸素動態を明らかとすること、更に、NIRSによって明らかになる下肢骨格筋酸素動態に基づいたFESの施行がCTEPH患者の運動耐容能、健康関連QOLの改善へ及ぼす効果について検証することである。【平成30年度の研究実績】平成30年度はCTEPH患者に対するFES介入研究の前段階研究として、NIRSを用い、心肺運動負荷試験(CPX)中のCTEPH患者における下肢骨格筋酸素動態を明らかとすることとしていた。研究計画については、第24回日本心臓リハビリテーション学会(関連学会ジョイントセッション:肺高血圧症のリハビリテーション)にて学会発表を行った。また、CTEPH患者に対する侵襲的治療方法の差異による健康関連QOL改善効果についての論文報告を行った。測定に使用する予定であるNIRSは高額であるため、短期間レンタルを行い、年度後半よりNIRSを用いCPX中のCTEPH患者における下肢骨格筋酸素動態を測定する予定であったが、前段階としての予備実験や臨床での環境調整が十分でなかったため、測定を実施できなかった。平成30年度実施予定であった研究計画に関連する環境調整を行い、CTEPH患者に対するFES介入研究の前段階研究であるCPX中のCTEPH患者における下肢骨格筋酸素動態を測定を実施していく。平成30年度研究計画にて使用予定であった近赤外線分光装置(NIRS)レンタル費用を繰り越したため、平成31年度にはNIRSをレンタルし、平成30年度に予定していた研究計画を実行予定である。
Stanley-Reisner環のBetti数に関する研究

本研究調査の目的は、Stanley-Reisner環のBetti数についてその可換環論的、組合せ論的性質を考察し、また、一般の次数つき環のBetti数との関係を探ることにあった。本年度も昨年度に引き続きBetti数を研究する上で重要な不変量であるregurarityについて重点を置いて研究した。このregurarityに対して、次のニつの概念を用いて研究した。一つはGroebner基底である。Groebner基底は、計算機における数式処理において基本的な役割を果してきた。それは、連立方程式の解などを実用のレベルで求めるのに画期的なアルゴリズムを与えているし、さらに最近は図形処理にも大きな役割を果たしている。したがって、環のヒルベルト関数を求めることは、近年、Groebner基底の理論を用いることにより、計算機によって、計算できる様になってきた。ここでは、generic Groebner基底の理論を用いて、一般の次数つき環とスタンレーライスナー環の間の不変量の関係を調べた。もう一つは、アレクサンダー双対複体である。Eagon氏とReiner氏によって、アクレサンダー双対複体を用いて、スタンレーライスナー環におけるCohen-Macaulay性と線形な極小自由分解をもつということの間の関係が明らかにされたのが、その出発点であった。本研究においては、それをさらに一般化し、スタンレーライスナー環のdepthとそのアレクサンダー双対複体のスタンレーライスナー環のregularityの間の関係を定式化した。そのことにより、regularityの問題をdepthの問題に帰着させて研究することが可能になった。そのことを利用して、Eisenbud-Goto予想のモノミアル版について肯定的に解いた。本年度は、Betti数を研究する上で重要な不変量であるregurarityについて重点を置いて研究した。より具体的に言うとあるregularityを持つ次数つき環のヒルベルト関数は、どのような値の範囲を取りうるか、という問題について考察した。この問題に対して、次の二つの概念を用いて研究した。Groebner基底は、計算機における数式処理において基本的な役割を果たしてきた。それは、連立方程式の解などを実用レベルで求めるのに画期的なアルゴリズムを与えているし、さらに最近は図形処理にも大きな役割を果たしている。ここでは、generic Groebner基底の理論を用いて、一般の次数つき環とスタンレーライスナ-環の間の不変量の関係を調べた。Eagon氏とReiner氏によって、アレクサンダー双対複体を用いて、スタンレーライスナ-環におけるGohen-Macaulay性と線形な極小自由分解をもつということの間の関係が明らかにされたのが、その出発点であった。本研究においては、それをさらに一般化し、スタンレーライスナ-環のdepthとそのアレクサンダー双対複体のスタンレーライスナ-環のregularityの間の関係を定式化した。
全身性エリテマトーデスに関連するB細胞シグナル伝達制御分子多型の機能解析

1.これまでにわれわれが全身性エリテマトーデス(SLE)との関連を見出したFcγ受容体遺伝子(FCGR2B)-I232T多型につき、病態発症との関連の機序を探るため、FCGR2B欠損ヒトB細胞株(ST486)に各アリルを遺伝子導入し、B細胞受容体との共架橋による活性化シグナルを、細胞内Ca^<2+>濃度の測定により検討した。この結果、SLEとの関連を有する232Tアリル導入細胞は、232I導入細胞と比較して、FCGR2Bに由来する抑制性シグナルが減弱していることが観察され、SLEにおける過剰なB細胞活性化を説明しうる知見と考えられた。さらに、この現象の機序を解明するため、種々の生化学的解析を加え、232Tアリルでは、raftへの局在、FcγRIIb蛋白のチロシンリン酸化、SHIP動員のいずれもが232Iアリルと比較して低下を示すことを示唆する予備的な結果を得た。2.同様に過去にわれわれがSLEとの関連を見出したB細胞シグナル伝達分子であるCD19の3'非翻訳領域のGTリピート多型と、末梢血B細胞におけるCD19mRNAレベルの関連を、定量的RT-PCRを用いて検討した。検体数が少なく、統計学的有意差には達しなかったものの、SLE関連アリルを有する個体では、有しない個体に比べ、平均2030%のCD19mRNAレベルの低下が検出された。これは、過去にマウスにおいて自己抗体産生などの表現型と関連しうることが示されている程度の発現量の変化に相当することから、ヒトにおいても、SLE発症との関連する可能性が示唆された。申請者らは、B細胞および単球に発現し、抑制性シグナルを伝達するヒトFcγ受容体IIb遺伝子(FCGR2B)に、膜貫通領域のアミノ酸置換をコードする多型I232Tを検出し、全身性エリテマトーデス感受性との関連を見出した。本研究計画では、このアミノ酸置換が蛋白レベルでおよぼす機能的影響を検討することが目的である。本年度は、それぞれのアリル産物を発現するtransfectantを、以下のように作製した。まず、今後の実験を容易にするために、細胞外ドメインがマウスのFcγRIIbであり、膜貫通領域、細胞内ドメインが今回検出したそれぞれのアリルに対応するヒト型のFcγRIIbであるような組換え蛋白をコードする遺伝子を作製した。それぞれのアリルについて、FcγRIIbの二つのsplicing isoformであるIIB1, IIB2のそれぞれに対応するconstructを作製した。これらを、内在性FcγIIbを欠如したヒトB細胞株ST486に遺伝子導入した。この細胞に対する遺伝子導入は困難を極めたものの、最近、それぞれのアリル産物を発現するtransfectantが得られた。これらの実験と平行して、本細胞株を用い、BCRのクロスリンクによるチロシンリン酸化解析系の条件設定を行った。また、機能解析系の一つとして用いる、cDNA microarrayのアッセイ系を、ほかの培養細胞を用いて、本研究室において確立した。
シヌクレイノパチー脳における異常αシヌクレインの意義と結合タンパク質の役割

シヌクレイン分子(Syn)の異常凝集を特徴とするシヌクレイノパチーでは、異常凝集を抑制することができれば、病態改善だけでなく、根本的な治療につながる可能性がある。我々はタンパク質分解関連分子NUB1がシヌクレイノパチーに深く関与することを報告してきた。本研究では、NUB1の異常凝集に対する効果を明らかにするために遺伝子改変マウスを用いて検討を行った。作製したNUB1トランスジェニック(Tg)マウスおよびNUB1/synダブルTgマウスは行動学的および病理的解析には差異は認められなかった。今回の結果を踏まえ、異常凝集を抑制するための新たなアプローチを模索し現在準備を進めている。αシヌクレイン(aS)はシナプス末端に局在するタンパク質であり、神経伝達物質の貯蔵および放出の調節に関与することが示唆されている。本来、ASはタンパク質分解酵素で容易に可溶化されるが、シヌクレイノパチー(パーキンソン病、レビー小体型認知症および多系統萎縮症)では不溶性となることから、生理的機能が損なわれ、シヌクレイノパチーの病因の一つと考えられている。本研究において、不溶性ASの結合タンパク質の一つとして新規ユビキチン様タンパク質NUB1を同定した。本研究では、異常ASに焦点を当て、以下のことを目的とする。(1)多量に存在する異常ASの特徴(結合タンパク質、毒性、オリゴマーとの関連)を明らかする。(2)NUB1およびAS遺伝子改変動物を用い、生体内における異常ASの意義を明らかにする。進行状況および結果(1)昨年度に作製したウサギ抗NUB1抗体を用いて、p62/sequestosome1(p62)との共沈および結合を確認した。さらにNUB1結合のp62量が正常対照例と比較してDLBでは増加していた。現在、リン酸化特異的p62抗体を作製し、シヌクレイノパチーを含む神経変性疾患での検討を行っている。(2)以下4群のマウス(30-52週齢)を用いた。(1)家族性の点突然変異(A53T)を導入したASトランスジェニック(Tg)マウス、(2)ヒト型NUB1を導入したNUB1 Tgマウス、(3)NUB1/ASダブルTgマウス、および(4)同腹の正常対照マウスである。現在行動学的および生化学的解析が進行中である。病理学的にはAS Tgマウスでは細胞質内にASの凝集体や前シナプスにタンパク質分解酵素に耐性を示す異常ASが認められる。一方、NUB1/ASダブルTgマウスでもこれらの凝集体および異常ASが認められた。シヌクレイノパチー(パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症)では、アルファーシヌクレイン(a-syn)の異常蓄積が細胞内の胞体内、樹状突起および軸索末端に認められる。その蓄積機序として細胞内分解システムの機能低下や障害が示唆されており、実際にオートファジーの基質(p62、Keap1、NBR1など)やプロテアソーム関連タンパク質(NUB1、TRIM9)が正常対照例と比較して、質的および量的に異なることをこれまでに報告してきた。特に、NUB1はシヌクレイノパチーの病態に深く関与しており、a-synの異常蓄積と酷似した蓄積分布を示す。以上の結果を踏まえ、今回の研究では、異常a-synに果たすNUB1の役割を明らかにするために遺伝子改変マウスを用いて行動学的および病理学的に検討を行った。作製したNUB1トランスジェニック(Tg)マウスは行動学的および病理的解析には異常は認められなかった。次にNUB1/ a-synダブルTgマウスを作製し、行動学的および病理学的に検討したが、a-syn Tgマウスとの違いは認められなかった。これらの結果から、以下二点が明らかとなった。生体内でNUB1は発現亢進しても異常は起こさないこと。NUB1は異常a-synと結合するが、その分解をするには不十分、もしくは分解しないことが示唆された。その後の検討により、NUB1にはもう一つアイソフォームとしてNUB1Lが存在する。特にNUB1Lには異常分子との結合部位が3つ存在する。一方、NUB1はその結合部位が2つである。今後、NUB1Lに焦点を絞り検討をすすめていく予定である。αシヌクレインはシナプス末端に局在し、神経伝達物質の貯蔵および放出の調節に関与することが示唆されている。αシヌクレインはタンパク質分解酵素で容易に可溶化されるが、シヌクレイノパチー(パーキンソン病、レビー小体型認知症および多系統萎縮症)では、不溶性となり、本来の生理的機能が損なわれる。このことがシヌクレイノパチーの病因の一つと考えられている。

本研究において、不溶性αシヌクレインの結合タンパク質の一つとして新規ユビキチン様タンパク質NUB1を同定した。本研究では、異常αシヌクレインに焦点を当て、以下のことを明確にすることを目的とする。(1)多量に存在する異常αシヌクレインの特徴(結合タンパク質、毒性、オリゴマーとの関連)を明らかする。(2)NUB1およびシヌクレイン遺伝子改変動物を用い、生体内における異常αシヌクレインの意義を明らかにする。進行状況および結果(1)に関しては作製したNUB1抗体を用いて、免疫沈降後、30種類以上の抗体を用いてスクリーニングをおこなったところ、p62/sequestosome1との結合を確認した。興味深いことに、DLBではNUB1-p62/sequestosome1結合量が増加しており、更なる検討をおこなっている。(2)順調にNUB1およびシヌクレインのダブル遺伝子改変マウスが誕生し、現在、行動観察(トラクションメーター法による筋力測定、水迷路試験)をおこなっている。また病理組織学的検索をαシヌクレイン、ユビキチン、NUB1を含めて30種類以上の抗体を用いて行っている。興味深いことに興奮性シナプス末端に顕著に異常αシヌクレインが蓄積していることを見出している。さらに生化学的に解析を行うための材料を集めている段階である。遺伝子改変動物および複数の抗体を作製し、新知見が得られている。主に解析方法として、ヒト試料およびモデル動物を利用している。ヒト試料を用いた生化学的、病理学的解析では当初の予定通り、結合タンパク質を同定することができ、さらに解析を進めている途中である。一方、モデル動物は計画通り誕生し、現在、行動観察および生化学的解析用の試料を集めている。試料が準備でき次第、次のステップへ移行予定である。予定通り計画を進行する。遺伝子改変動物の行動学的および生化学的解析を重点的に詰めることにより最終年度の総括を行う予定である。予定通り、ヒト試料を用いた解析を継続しつつ、動物の個体数(少なくとも10例)が整い次第、生化学的解析を行う予定である。動物の行動観察は引き続き行う。H24年度残額は消耗品(ピペット、チップおよび細胞の培養液)として使用する。またH25年度研究費は計画通りに使用する。(A)結合タンパク質の同定すでに一回目の実験において、p62/sequetosome-1を同定した。今回確認のため、再度再度行う。脳抽出物は、DLBの大脳皮質(約5g)および正常対照脳を用いる。ショ糖密度勾配遠心後、1mlずつ分画する。Fraction-1,5,8,12,14,16から&#61537;シヌクレイン抗体を用い免疫沈降、精製する。予備実験で既に抗体への非特異的な吸着を最小限にする条件検討を行っている。大型電気泳動槽を利用して電気泳動を行い、DLB例に特異的なスポットの切り出し後、質量分析装置を利用する。同定されたタンパク質をもとに、必要な場合はcDNAをクローニングする。作製した抗体の特異性を確認後、ヒト剖検脳組織の免疫染色ならびに脳抽出物のWestern blot解析を行う。(B)分子量の推定(オリゴマーとの関連)上述の各Fractionをゲル濾過カラムで分子量ごとに分画する。&#61537;シヌクレイン抗体を用いてスロットブロット解析を行い、対照例では認められない