hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト細胞表面のウイルス受容体およびその遺伝子発現調節

ポリウイルスの細胞側受容体(PVR)の遺伝子およびcDNAをHeLa細胞から単離し、その構造解析を行った。その結果、少くとも4種類のmRNAがalternative splicingにより生じていることが明らかとなった。これらcDNAをマウスL細胞で発現させ、PVRとしての機能を調べた結果、トランスメンブレン領域を欠いたPVRはPVRとしての機能は持っていないことが明らかとなった。さらに人工変異を与えたPVRを作製し、機能領域を検討したところ、PVRとして機能するには第1の免疫グロブリン様領域とトランスメンブレン領域が必要であることが判明した。次にPVP遺伝子上の転写制御領域の機能を解明する目的でPVRcDNAのコ-ディング領域の上流約500塩基の一次構造を解析したが、明らかにTATAboxと思われる一次構造は存在していなかった。また転写開始点を特定することも出来なかった。したがって特別な転写制御機構が働いている可能性が考えられた。この転写制御機構が他生物でも同様に働くか否かを知るため、ヒトPVR遺伝子をマウス遺伝子に導入し、トランスジェニックマウスを作製した。このマウスはポリオウイルスに対する感受性を獲得していた。各臓器におけるヒトPVR遺伝子の発現を調べたところ、ヒト個体の各臓器での発現と同様に、脳や脊随では強く発現しているが他の臓器での発現は比較的弱いということが明らかとなった。またpolymerase chain reaction(PCR)法による解析の結果、ヒトとマウスの各臓器中で同様にalternative splicingが起きており、HeLa細胞で観察された各種mRNAが検出された。以上のように、ヒトPVR遺伝子の組織特異的発現調節機構は、マウスでも同様に機能することを明らかにしたが、PVR遺伝子の発現調節機構そのものは現在も解析中である。ポリオウイルスのヒト細胞(HeLa細胞)受容体(PVR)の遺伝子をコ-ドすると思われる約40kbのコスミドクロ-ンおよび約3kbのcDNAクロ-ンの単離に成功した。これらDNAはマウスL細胞へのトランスフェクションにより、ポリオウイルス感受性を与える能力を持つことから、それぞれのDNAは、PVRをコ-ドする遺伝子およびcDNAであることが明らかとなった。得られたPVRの遺伝子およびcDNAの一次構造解析により、PVRmRNAは遺伝子上では少なくとも8つのexonに分かれて存在していること、またHeLa細胞中に2種類のPVR(PVR_αとPVR_β)をコ-ドするmRNAがalternative splicingによって生じることが明らかとなった。PVR_αは417アミノ酸からなりシグナルペプチド、3つの免疫グロブリン様ドメイン、トランスメンブレンドメイン、サイトプラズミックドメインと思われる構造を持っていた。PVR_βはトランスメンブレンドメインと推測される領域を含む45アミノ酸が欠失していた。PVR_βを発現させたマウスL細胞の上清には実際にPVR_βが存在しており、欠失部位がトランスメンブレンドメインであることを強く示唆した。次に人工欠損を持つ各種PVRcDNAをマウスL細胞で発現させ、ウイルス感受性との相関々係を調べた。その結果、ポリオウイルスが感染するために認識するPVR上の部位はN末端に最も近い免疫グロブリン様ドメインであることが判明した。このドメインにはNーグリコシレ-ション可能な部位が2ヶ所存在していた。しかしながら、別途分離したサルのPVRcDNAの一次構造解析の結果、サルPVRのこのドメインにはNーグリコシレ-ション部位は存在しないことが明らかとなった。そこでサルPVRとヒトPVRのキメラPVRの発現実験を行った。その結果、PVRのNーグリコシレ-ションはポリオウイルス感染にとって必須ではないことが明らかとなった。ポリオウイルスの細胞側受容体(PVR)をコ-ドするmRNAとしてこれまでに4種類のmRNAが存在することを明らかにした。

4種類のPVR分子のうち、2種類はPVRとしての機能を持つが、他は分泌型分子であり、PVRとしての機能は持っていなかった。4種類のPVRmRNAは、すべてヒト染色体19のq13.1→q13.2に存在するPVR遺伝子からalternative splicingにより生成してくることが明らかになった。PVR遺伝子上のプロモ-タ-を含む転写制御領域と考えられる領域の一次構造および転写開始点を明らかにする目的で、まずmRNAの5'末端をDNA上にマップすることを試みた。しかしながら転写開始点は特定出来なかった。また上流約500塩基中には、明らかにTATAboxと思われる一次構造が存在しないことなどが明らかとなり、特別な転写制御機構が働いている可能性が示唆された。そこでこの転写制御領域の機能が他種の生物でも同様に働くか否かを知るため、ヒトPVR遺伝子全域を持つと思われるコスミドクロ-ンをマウス受精卵に導入し、トランスジェニックマウスを作製した。このマウス個体におけるヒトPVR遺伝子の発現を各臓器におけるmRNAの存否を検討することにより解析した。PVRcDNAをプロ-ブとしたノ-ザンブロット法による解析の結果、PVRmRNAはヒト個体中と同様に、脳や脊髄では強く発現しているが、他の臓器での発現は比較的弱いということが明らかとなった。さらにpolymerase chain reaction(PCR)法による解析の結果、ヒト臓器中で観察されたalternative splicingもマウス臓器中で同様に起きていることが明らかとなった。以上のように、ヒトPVR遺伝子の組織特異的発現調節機構はマウスでも同様に機能することを明らかにしたが、PVR遺伝子の発現調節機構そのものは現在も解析中である。
関節炎の病態における神経ペプチドの影響について

関節炎においては変形性関節炎、リウマチ性関節炎のいずれにせよ患者は持続的な痛みを感じ、しばしば骨変形を生じるが、そのメカニズム、つまり、神経と骨代謝の関係についてはほとんど分かっていなかった。近年、神経ペプチドのレセプターが骨組織の細胞にも存在し、神経ペプチドが骨芽細胞、破骨細胞の細胞上のレセプターを介して、直接的に骨に作用することや、関節滑膜細胞に神経ペプチドのレセプターが存在し、神経ペプチドが滑膜細胞を介して間接的に骨代謝に関与することが明らかになった。しかしながらこれらの研究において、実際にin vivoにおいてどの神経ペプチドがいつ、どのように作用しているのかについては解明されていない。平成18年度は、in vivoのモデルとして、関節炎の中でも特にリウマチ性の関節炎に着目した。リウマチ性の関節炎では滑膜の肥厚とそれに伴う関節の骨、軟骨破壊が症状としては特徴的である。そこで、アジュバントもしくはコラーゲンを用いて顎関節に投与し、関節炎ラットの作成を行った。顎関節は膝関節に比べ関節炎が生じにくいとされているが、アジュバントの顎関節投与後のラットをホルマリン固定し、凍結切片を作成して顎関節にリウマチ性関節炎様組織像を呈するかを調べた。その結果、アジュバント投与後の顎関節では初期の炎症症状は見受けられるものの、今のところ長期的なリウマチ性関節炎の症状は観察されなかった。現在、アジュバントの投与方法を再検討するとともに、コラーゲンを用いた関節炎モデルラットの作成を進行中である。
遺伝子治療を併用した緑内障濾過手術の開発

本研究では、トランスフォーミング成長因子β1(以下TGFβ1)の発現をアンチセンスデオキシオリゴヌクレオチド(以下ASDON)で抑制することにより、緑内障濾過手術後の過剰な瘢痕化を抑制し、その手術予後を改善することを目的とした。本年度は、培養細胞による実験を中心に、一部、病理組織による研究も行った。培養ヒト眼テノン嚢線維芽細胞は、TGFβ1非添加でも、基礎的分泌としての結合組織産生が確認されたので、この基礎分泌を、TGFβ1ASDONで、抑制することは困難との結論を得た。そこで、TGFβ1による培養嚢線維芽細胞の細胞外マトリックス代謝の変化を検討し、細胞外へのコラーゲン、ファイブロネクチンの亢進と細胞層への沈着増加を確認し、同時に基底膜成分ラミンンは影響されないことを見いだした(投稿中)。予備実験として、結合組織成分を転写レベルで抑制するγインターフェロンをTGFβ1刺激細胞に添加すると、コントロールレベル以下にまで、結合組織産生を抑制したことから(投稿中)、同刺激細胞を培養条件下での創傷モデルとして使用し、次年度の研究に入る。一方、眼結膜局所の瘢痕化での結合組織代謝を研究する目的で、ヒト臨床材料や動物眼を用いて結合組織成分、TGFβ1などの成長因子、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)を標的として、病理組織標本による免疫組織化学、in situハイブリダイゼイションを行った。結合組織代謝、成長因子発現の亢進を確認し、うち、MMPの発現亢進を報告した。以上のように、この結合組織代謝の亢進には、TGFβ1の発現亢進が関与していると考えられた。次年度の動物眼で結膜下瘢痕へのTGFβ1ASDON実験のための基礎データを得た。
変換波・反射波を用いた上部・下部マントルのS波偏向異方性領域の研究

平成10年度に、アジア東部、特に中国大陸を研究対象地域とし、IRISのデータを用いてS波偏向異方性の解析をおこなった。その結果、中国北部における上部マントルと地殻の異方性の積算値は0.2sec程度で、下部マントルの異方性の値は0.4sec程度であることがわかった(Iidaka and Niu,1998)。平成11年度では、上部マントルと地殻の積算値として観測された0.2sec程度の異方性について、地殻による異方性と上部マントルでの異方性の分離を試みた。本研究ではP-SmS波を用いたS波偏向異方性の解析をおこなった。P-SmS波は、観測点近傍の地表でP波からS波に反射・変換され地表とモホ面の間をS波で反射した波であり、地殻だけをS波で伝播するため上部マントルの異方性の影響をまったく受けていない。そのためP-SmS波を解析して観測された異方性は、地殻のみの異方性を表わすものである。このP-SmS波とScS波(核-マントル境界面での反射波)の異方性を比較することによって、地殻の異方性とマントルの異方性を明らかにした。このP-SmS波は、中国大陸の東の沿岸に位置する観測点で観測され、その波から求められた異方性の大きさは0.05sec以下とひじょうに小さな値が求められた。また、ScS波から観測された異方性と比較することにより、中国東部沿岸地域でのマントルの異方性は0.2secから0.5sec程度であることがわかった。このようにして本研究は、地球内部の境界面での反射・変換波を用いることにより、これまで困難とされてきた異方性の深さ分布の分解能の向上に大きな進展をもたらしたものと考えられる。本研究は、地球内部に存在するさまざまな不連続面における変換波や反射波のS波偏向異方性を調べることによって、これまでほとんど議論がなされていなかった異方性の深さ分布を明らかにすることを目的とするものである。平成10年度では、アジア東部特に中国大陸を研究対象地域として、世界中に展開されているIRISのデータからSKS,P-660s,P-SmSの波形データの収集を行い、さらにそれらのデータを用いてS波偏向異方性の解析をおこなった。SKS波は、外核と下部マントルの境界面でP波からS波に変換された波であり、SKS波の解析によって得られた異方性は、マントルから観測点までの積算された異方性の値である。つまり、D′′層、下部マントル、上部マントル、地殻、すべての層の異方性の積算値である。得られた積算値の異方性から、各層による異方性の値を求めるために、まず、P-660s波の解析を行った。P-660s波は、660km不連続面でのP-S変換波(P波からS波への変換波)であり、P-660s波の偏向異方性を観測することによって、上部マントルと地殻の異方性の積算値を知ることができる。そのため、SKSの異方性の値からP-660sの値を差し引くことによって、下部マントル(D′′域を含む)の異方性を推定できる。この手法を用いて解析を行った結果、中国北部における上部マントルと地殻の異方性の積算値は0.2sec程度で、下部マントルの異方性の値は、0.4sec程度であることがわかった。また、その下部マントルで検出された0.4sec程度のS波偏向異方性が、D′′層に存在していると仮定すると0.5%の異方性で説明でき、下部マントル全体にあると仮定すると0.08%の異方性で説明できることがわかった。

また、ScS波から観測された異方性と比較することにより、中国東部沿岸地域でのマントルの異方性は0.2secから0.5sec程度であることがわかった。このようにして本研究は、地球内部の境界面での反射・変換波を用いることにより、これまで困難とされてきた異方性の深さ分布の分解能の向上に大きな進展をもたらしたものと考えられる。
膜利用による青果模のCAセル貯蔵に関する基礎的研究

CA貯蔵のガス環境調整装置として気体分離膜を用いたガス交換システムを作試し、その可能性を検討した。使用した気体分離膜は二酸化炭素、酸素、窒素の順に透過係数が大きいものである。試作装置の特徴は一つの気体分離膜モジュ-ルに接続する回路を切り替えることにより二酸化炭素排出操作、酸素導入操作、窒素導入操作を行えることで、これらの操作を組み合わせることにより貯蔵庫内の気体組成を維持する。またパ-ソナルコンピュ-タ-を用いてこのシステム全体の計測と制御の自動化を図った。ガス交換実験により、二酸化炭素排出操作および酸素導入操作は効率よく二酸化炭素濃度を低下させ、また酸素濃度を高め得ることを確認した。しかし窒素導入操作には検討の余地が残された。そこで、一つの分離膜で酸素導入操作と窒素導入操作が可能かどうか検証するためにコンピュ-タシミュレ-ションを行った。気体分離膜に供給される気体流量に対する透過気体流量の比をカットとし膜供側圧力に対する透過側圧力の比を圧力比とすると、シミュレ-ションの結果、カットが小さいほど透過側により高濃度の酸素を得ることができカットが大きいほど非透過側により高濃度の窒素を得られ、いずれ場合にも圧力比は小さいほど濃度を高め得ることが認められた。つまり酸素導入操作の際にはカットを小さくし、窒素導入操作の際にはカットを大きくすればよいことになる。したがって、気体分離膜に供給する気体の流量と透過流量、すなわちカットを選択することにより一つの気体分離膜で酸素導入操作、窒素導入操作が可能であることが分かった。そこで、このガス交換システムを改良して窒素導入操作を可能にし、また酸素導入操作における分離性を向上させた。これらの各操作を用いてガス濃度制御を行う上で必要な考え方を示した。今後はこのシステムを用いて、様々なCA条件に対応する気体分離膜の選択基準を作成していく予定である。本年度は、CAセル(チャンバー)を試作し、このCAセルを用いて気体分離膜の基本特性を調べる実験を行った。また、この気体分離膜を組み込んだCA貯蔵システムを試作した。CAセルは内径298mm、長さ600mmの円筒型で気密構造になっている。気体分離膜として酸素富化膜を選択し、二酸化炭素、酸素の透過特性をとらえるための実験として、CAセル内の組成を調整した後濃度を測定し、気体分離膜にCAセル内の気体を供給してCAセル内の圧力と濃度の計測を行なった。圧力と濃度変化からこの分離膜がどの程度の気体を透過するかを求めた。この結果をもとに、この気体分離膜を用いたCA貯蔵システムを構成し、ガス交換実験を行なった。また、パーソナルコンピューターを用いてこのシステム全体の計測と制御の自動化を図った。ガス交換実験はCAセル内の過剰な二酸化炭素を除去する二酸化炭素排出操作と不足した酸素を補給する酸素導入操作を行なった。その結果、過剰な二酸化炭素を除去することは可能であることが明らかになったが、不足した酸素を補う時に酸素濃度が上昇し過ぎる傾向がみられ、今後窒素富化膜を導入することにより窒素導入操作を検討して入る。また、ガス交換時のCAセル内の圧力変動は計測値に影響を及ぼすことが分かり、この対策としてバッファの取り付け等を検討している。来年度の研究予定は、窒素富化膜の基本特性をとらえ、CA貯蔵システムを再構成する。そしてCAセル内に青果物を貯蔵し、CAセルの容積及び維持すべきCA環境と気体分離膜の性能との関係を捉え、CA貯蔵システムの設計基準及び制御アルゴリズムを確立する。次に、現行のCA貯蔵法と気体分離膜を用いた方法で貯蔵した青果物の品質を評価し、その有効性を検討する。対象とする青果物は、果実を一種類と野菜を一種類予定しており、それらの品質は酸度、糖度、クロロフィル含有量や目減り及び外観(表面色)等で評価する。

前年度は、CAセルとガス交換システムを試作しCAセル内の濃度制御を行うためにガス交換システムに3つの機能を持たせた。そのうち二酸化炭素排出操作、酸素導入操作については良好な結果が得られ、窒素導入操作については再検討の必要があることを報告した。本年度は窒素導入操作の可能性と酸素導入操作における分離特性の向上について検討した。酸素導入操作、窒素導入操作とも外気を気体分離膜に供給し、透過側には酸素富化気体が得られたが、非透過側には窒素富化気体は得られなかった。そこで一つの分離膜で酸素導入操作と窒素導入操作が可能かどうか検証するためにコンピュ-タシミュレ-ションを行った。供給気体は酸素21%、窒素79%の二成分混合ガスとした。気体分離膜に供給される気体流量に対する透過気体流量の比をカットとし膜供給側圧力に対する透過側圧力の比を圧力比とすると、シミュレ-ションの結果、カットが小さいほど透過側により高濃度の酸素を得ることができカットが大きいほど非透過側により高濃度の窒素を得られ、いずれの場合にも圧力比は小さいほど濃度を高め得ることが認められた。つまり酸素導入操作の際にはカットを小さくし、窒素導入操作の際にはカットを大きくすればよいことになる。したがって、気体分離膜に供給する気体の流量と透過流量、すなわちカットを選択することにより一つの気体分離膜で酸素導入操作、窒素導入操作が可能であることが分かった。ガス交換システムを改良し圧力比を小さくするために透過側を真空ポンプにより減圧できるようにした。また気体供給用エアポンプに接続するパイプを2つに分流し片方には流量調節弁を設けて供給気体の流量を減らし、どちらのパイプを通過するかによってカットを二種類選択できるようにした。今後はこのシステムを用いたガス濃度制御実験により、様々なCA条件に対応する気体分離膜の選択基準を作成していく予定である。
酸素や食物が内包する毒性に対する細胞の適応・応答の分子機構の解明

生体は、環境ストレスに適切に応答して恒常性を維持している。本研究は、酸化ストレス・異物に対するセンサーであるKeap1-Nrf2システムを検証し、ストレス感知の新たな分子機構、疾患との関連を明らかにした。また、低酸素ストレスについては、エリスロポエチン遺伝子の発現制御を通じて、組織ごとに異なる多様な低酸素応答に対する遺伝子発現制御機構について新たな知見を得た。生体は,食物および酸素の内包する毒性やそれらの過不足に由来するストレスに対して,適切に応答して恒常性を維持している。これまでの解析によって、このようなストレスに対する防御系は、遺伝子の発現レベルで制御されていることが明らかとなっている。本研究は,環境ストレスに応答して転写制御が行われる際のセンサー機能の分子機構を明らかにすることを目的として、以下の2つのテーマで研究を実施している。(1)Nrf2-Keap1システムによるストレス感知機構および同システムと発癌との関連性の解析:Keap1は、酸化ストレス・親電子性毒物に対するセンサー分子として機能し、転写因子Nrf2の活性化を制御している。Nrf2とKeap1のセンサーとしての分子機能を構造学的手法で明らかにする。また、これら分子のマウス個体での評価系を確立し、Keap1のセンサーとして重要なシステイン残基の個体においての重要性、Nrf2の機能ドメインの解析を実施する。また、Keap1-Nrf2システムの疾患との関連を明らかにする。(2)エリスロポエチン(Epo)遺伝子制御機構と低酸素感知機構の解析:低酸素に応答して遺伝子発現が誘導されるEpo遺伝子の制御機構を、大腸菌人工染色体を用いたトランスジェニックマウスの手法を用いて解明する。特に、腎臓でのEpo遺伝子の発現に注目し、その細胞特異的転写制御機構、産生細胞の同定、及びその株化を試みることで、新規の低酸素応答機構を解明する。生体は,食物および酸素の内包する毒性やそれらの過不足といった環境ストレスに対して,応答して恒常性を維持している.本研究では,環境応答転写制御におけるストレスセンサーの分子機構を明らかにする事を目的としているNrf2-Keap1システムによる親電子性物質・酸化ストレス感知機構の解析:本年度は,ストレスセンサーとして働くKeap1-Nrf2複合体の結晶構造解析を目的として,これら分子を大腸菌発現系にて発現・精製した.現在,結晶化の条件を検討している.動物個体レベルの解析として,Keap1あるいは,その変異体を発現するトランスジェニックマウスを作製し,Keap1欠損マウスの表現型のレスキュー解析を行った.その結果,Keap1の複数のシステイン残基が,親電子性試薬の応答に必須であり,それぞれ性質が異なることが明らかとなった.Epo遺伝子制御機構の解析よる低酸素感知機構の解析:Epo遺伝子の制御機構の解析を解析することで,腎臓での新たな低酸素応答の分子機構を明らかにすることを目的とし.今年度は,同遺伝子制御領域を含む大腸菌人工染色体(BAC)に緑色蛍光蛋白質(GFP)遺伝子を組み込み,レポータートランスジェニックマウスを作製した.その結果,Epo遺伝子転写制御領域に,これまで知られている低酸素応答領域とは別の,腎臓特異的・低酸素応答性の転写制御領域が存在することを明らか,その領域の範囲を2kbpにまで狭めることに成功した.生体は,食物および酸素の内包する毒性やそれらの過不足に由来する環境ストレスに対して,適切に応答して恒常性を維持している。本研究は,環境に応答して転写制御が行われる際に、ストレスを感知するセンサーの分子機構を明らかにすることを目的としている。Nrf2-Keap1システムによるストレス感知機構および同システムと発癌との関連性の解析:オートファジー系の異常により分解されずに蓄積したp62が、Keap1蛋白質のNrf2結合部位に競合的に結合し、Nrf2の恒常的活性化を惹起することを明らかにした。このことは、Keap1遺伝子やNrf2遺伝子自身に変異が存在しなくても、Keap1によるNrf2の活性化調節機構の破綻が、癌化、癌悪性化の誘因となる可能性を示唆している。発癌予防や癌治療に向けて、Keap1-Nrf2システムを標的とした臨床開発が期待される。また、様々ながん細胞において、Keap1-Nrf2系が破綻していることを明らかにし、癌細胞の生存戦略の新たなモデルを提唱した。エリスロポエチン(Epo)遺伝子制御機構と低酸素感知機構の解析:腎臓でのEpo遺伝子発現は成体の低酸素応答で極めて重要である。本研究では、Epo遺伝子の発現制御機構を詳細に解析することで,新たな低酸素応答の実体を明らかにすることを目的としているが、本年度は、同遺伝子の腎臓特異的なエンハンサーとして同定した領域には、複数の制御シスエレメントが存在することを明らかにし、また、このエンハンサー以外にもEpo遺伝子の腎臓特異的な発現を支持する制御領域が存在することを示した。現在、その詳細を解析している。本研究は、生体がストレスを感知するセンサーの分子機構と、ストレスによって惹起される生体防御機構の解明を目的としている。

Nrf2-Keap1システムによるストレス感知機構および同システムと発癌との関連性の解析:電子線単粒子解析により、酸化ストレスセンサーであるKeap1分子の全長構造を明らかにした。疾患との関連については、マウスの喫煙モデルにおいて、Nrf2が肺気腫に対して保護的な役割を果たしていることを実証した。また、Keap1欠損マウスを用いた解析で、親電子性物質刺激によるNrf2標的遺伝子の誘導と遺伝子の発現誘導の比較検討を実施し、新たなNrf2活性化機構が存在することを明らかにした。本研究成果は、Nrf2活性化は単にNrf2蛋白質の蓄積だけでなく他のシグナル経路が深く関与している可能性を示唆している。疾患予防を目指したNrf2活性剤開発においても重要知見である。エリスロポエチン(Epo)遺伝子制御機構と低酸素感知機構の解析:Epo遺伝子領域を含む大腸菌人工染色体の導入によるEpo遺伝子欠損マウスのレスキュー実験を行った。レスキューマウスではEpo欠損による胎生致死性は回避され、成体に貧血や多血症は認められず、貧血誘導に対するEpo産生、および、赤血球産生の反応も野生型と同等であった。同じ領域を用いた緑色蛍光蛋白質(GFP)レポーターマウスにおいて腎臓Epo発現細胞におけるGFP発現を認められ、この領域内に内在性Epo発現を過不足なく再現可能な転写活性が存在することが示された。一方、トランスジェニックレポーター法による検討を重ね、Epo遺伝子上流の領域に腎臓における低酸素誘導性の発現を制御する領域があることを明らかにした。また、GFP発現を指標に腎臓におけるEpo産生細胞を単離し、遺伝子発現解析を行った。生体は、環境ストレスに適切に応答して恒常性を維持している。本研究は、生体がストレスを感知するセンサーの分子機構とストレスによって惹起される生体防御機構の解明を目的としている。Nrf2-Keap1システムによるストレス感知機構および同システムと発癌との関連性の解析:構造学的解析により、酸化ストレス感知に重要なシステイン151を含むKeap1 BTBドメインの結晶構造を明らかにした。トランスジェニック(TG)マウスを用いた解析では、二量体化部位に変異を持つKeap1を発現するマウスにおいて、Nrf2が恒常的に活性化することを示し、Keap1二量体化がNrf2抑制に必須であることを個体レベルで実証した。また、Nrf2との結合部位に変異を有するKeaplと野性型Keap1の二量体にはNrf2抑制能がないことが示し、がん細胞ではKeaplヘテロ型変異によっても恒常的なNrf2活性化が起こり、がん悪性化に寄与していること示した。エリスロポエチン(Epo)遺伝子制御機構と低酸素感知機構の解析:Epo遺伝子制御領域下で緑色蛍光タンパク質(GFP)を発現するマウスの腎臓からGFP陽性細胞を単離する方法を改良し、これまでの510倍の効率で腎Epo産生細胞を得ることに成功した。得られた細胞を用いて、生体外での増幅や株化の条件を検討している。また、これまでに同定した肝臓の制御領域のみでEpo遺伝子を発現するTGマウスを作製し、Epo遺伝子欠損マウスのレスキュー解析を実施した。
ヒト肉腫における新しい特異的染色体および遺伝子異常の同定と病理診断への応用

平成12年度13年度に至る本研究で得られた主な結果は次の通りである。種々の肉腫例の外科材料から細胞株の樹立を試みたところ、悪性末梢神経鞘腫瘍(MPNST)、類上皮肉腫、滑膜肉腫、多形型横紋筋肉腫、悪性胃腸間質腫瘍(GIST)から新しい細胞株を樹立できた。特に多形型横紋筋肉腫とGISTは、樹立細胞株としてはこれまでに報告がなく、初例であると考えられる。これらのうち、新たに樹立したGIST由来細胞株では核型は複雑で非特異的であったが、3q26-27,5p12-5などの増幅が示唆された。類上皮肉腫由来細胞株では22q12(EWS, NF2が局在)の再構成を、多形横紋筋肉腫由来細胞株では1p36(PAX7が局在)の再構成を新たに同定した。腫瘍組織ないし症例の検討では、卵巣の良悪線維性腫瘍で、tetrasomy12を同定するとともに、tetrasomy12と腫瘍増殖能との正の関連性を示唆した。神経芽腫ではSWI1の欠損が患者の予後不良を示唆する因子であることを明らかにした。また、T-カドヘリンの発現が骨肉腫や神経芽腫の生物学的態度(特に転移)に関連性が深いことを示唆した。滑膜肉腫に関しては、特異的キメラ遺伝子SYT-SSX1にクロマチン再構成因子hBRM/hSNF2alphaが結合することが、その発生に関連していることを示唆した。原発腎腫瘍から滑膜肉腫の特異的キメラ遺伝子(SYT-SSX2)を同定し、腎臓にも滑膜肉腫があることを初めて証明した。さらに、SYT-SSX蛋白に対する抗体を開発し、それを用いて患者血液中からSYT-SSXを同定するなど、この腫瘍の診断応用への糸口を見出した。本課題研究では、種々の肉腫の染色体および遺伝子レベルの解析から得られた知見を病理診断に応用すべく、蓄積されていた症例、新しい症例や樹立した肉腫細胞株について検討した。本研究でこれまでに染色体ないし遺伝子の一方、もしくはその両方が解析できた肉腫には、悪性神経鞘腫瘍(MPNST)、多形型横紋筋肉腫、胃腸間質腫瘍(GIST)などがあり、主な結果の概要に以下について述べる。(1)MPNSTでは、今回樹立した2細胞株、HS-Sch-2とHS-Sch-3は、共に複雑な核型を示し、特異的パターンは不明であった。今後は、NF2の異常の有無を中心に検討したい。(2)多形型横紋筋肉腫では、今回樹立した1細胞株、HS-RMS-1は、染色体分析では、複雑な核型を示し、特異的パターンは不明であった。しかし、横紋筋への発生分化に関与する遺伝子myoD1とmyogeninの転写産物および蛋白レベルの発現を証明できた。本細胞株は、この腫瘍からの樹立細胞株としては最初のものである。(3)GISTでは、樹立した細胞株GIST-T1は複雑な核型を示し、CGHとFISHによる詳細な検討で3q26-27,5p12-15などの増幅を示した。今後は、これらに局在する癌遺伝子との関連を明らかにしたい。(4)類上皮肉腫では、樹立した細胞株HS-ES-1aと1bで22qの再構成を認めたことから、EWSを含む異常の有無を検討したが予想に反し、その異常は明らかでなかった。今後は、同じ22qにあるNF2に関連する異常があるか否か検討したい。

(5)滑膜肉腫では、2例の腎病変についてパラフィン包埋外科材料を用いてRT-PCRにより、特異的なSYT-SSX2を同定した。腎においても本腫瘍が存在することを明らかにした。(6)卵巣の線維性腫瘍においては、tetrasomy12がその増殖能の増強に関連することをパラフィン切片を用いたFISHにより明らかにした。本研究は、上記の研究課題により、平成12年度から引き続き行ってきたものであり、本年度における主な研究成果は下記の通りである。種々の肉腫例の外科材料の新鮮組織から培養細胞株の樹立を試みたところ、類上皮肉腫、悪性胃腸間質腫瘍(GIST)などから新たに培養細胞株を樹立できた。GISTについては、樹立細胞株としてはこれまでに報告がなく、本細胞株が初例と考えられる。このGIST由来細胞株では、核型は複雑で非特異的であったが、3q26-27,5p12-15などの明らかな増幅が示された。類上皮肉腫由来細胞株では、22q12(EWS、NF2が局在)の再構成が認められた。多形横紋筋肉腫由来細胞株では、1p36(PAX7が局在)の再構成を新たに同定した。症例を用いた解析では、神経芽腫でSWI1の欠損例の存在を明らかにするとともに、その欠損が患者の予後不良因子であることを示唆した。また、骨肉腫や神経芽腫では、T-カドヘリンの発現がそれらの腫瘍の生物学的態度(特に転座など)と関連性が深いことを示唆した。滑膜肉腫に関しては、特異的キメラ遺伝子SYT-SSX1にクロマチン再構成因子であるhBRM/hSNF2alphaが結合することが、その腫瘍発生に重要な役割を担っていることを示唆した。一方、SYT-SSX蛋白に対する抗体を開発し、それを用いて患者の血液中からSYT-SSX蛋白を同定するなど、この腫瘍の診断応用への糸口を見出した。
カントにおけるパトリオティズムとリパブリカニズム：18世紀思想史の一断面

カントの人間学と道徳哲学で繰り返し言及される、思考の秩序とも呼びうる原理としての「思考様式」がパトリオティズム論に導入されることによって、素朴な感情とともに理解されうる「祖国」を、純粋な法概念に基づく「共和制」として把握し、現状をパターナリスティックな統治(専制)として理解するパトリオティズムの視点が開かれる。カントは、フランス革命の考察において、熱狂とともに共和制を求める思考様式がドイツの人々にも広がっていることを論じ、国家元首(君主)にも祖国的な思考様式をもつことを促している。カントのパトリオティズムをめぐる議論は、共和制の実現に向けた戦略的な議論の一環として展開されているのである。2015年度はカントの道徳哲学および政治思想におけるパトリオティズム概念の位置づけを解明するために、カントの用いているドイツ語の表現「祖国的(patriotisch)」と「思考様式(Denkungsart)」に即して、「祖国(patria=Vaterland)」と「思考様式」のそれぞれについて、カントの1780年代以降のテクストを中心に分析を行い、次の成果を得られた。(1)「祖国」概念の多面性カントの「祖国」概念の内実を掘り下げて検討した結果、歴史や伝統ではなく権利の保障に国家を祖国として評価する基準が置かれていることが明らかになった。カントは専制を批判する文脈で「祖国」を「共和国」と同一視している。「共和国」とは何よりも人間の権利を法によって保障する政治制度であり、これが実現されている状態が「公共の福祉(公共善)」と呼ばれる。以上の内容を論文として纏めて『社会思想史研究』に投稿し、第5回社会思想史学会研究奨励賞を受賞した。(2)パターナリズム的統治批判さらに専制は政治制度の観点からだけではなく、被治者を「未成年状態」に置くという啓蒙の問題としても論じられていることに注目して、統治批判と啓蒙論との関係を考察した。カントは道徳哲学に関する著作で、意志決定において感性の影響を優先してそのまま承認する態度を厳しく批判している。「思考様式」は感性の影響に対して理性理念を優先して行為の指針(格率)を決定する点を強調するために用いられる概念である。本研究ではカントが専制批判の文脈で公的な意志決定における格率の吟味の重要性を論じていることを解明し、格率を吟味する過程が公開されることで、被治者の「未成年状態」が回避されうることを考察した。専制批判の文脈で展開されるカントの共和制国家の構想を再構成し、雑誌論文の形で研究成果として公表することができた。思考様式と政治的意志決定の関係についても雑誌論文を準備している。ただし、カントの道徳哲学における「思考様式」の位置づけについては扱うべき文献が多いため、成果を纏めるためにはさらに時間が必要だと考えられる。カントが政治的体制とパトリオティズムに関する考察を展開した論考『理論と実践』を掲載した『ベルリン月報』の寄稿者、および同時代のその他の論者たちの議論を取り上げ、18世紀後半のドイツ語圏における政治的イデオロギーの観点から、以下のようなパトリオティズムの諸類型を析出した。(1)神聖ローマ帝国と結びついたパトリオティズム類型:郷土への忠誠よりも神聖ローマ帝国への愛着を優先するべきことを説いたF・C・フォン・モーザーのテクストや、身分制的な国家論を展開したJ・メーザーの『郷土愛の夢』から、「祖国」理解の一類型を引き出した。(2)君主政と結びついたパトリオティズム類型:「祖国」概念を明示的に共和政ではなく君主政と結びつけてパトリオティズム論を展開したT・アプトのテクストをもとに、共和主義と結びついていたパトリオティズム理解の転換を確認した。(3)啓蒙主義的パトリオティズム類型:フランス革命勃発後の時期に『ベルリン月報』に掲載されたW・A・テラーやE・F・クラインの論考を分析し、そこから啓蒙絶対主義を前提として官房学的、功利主義的観点から発展段階的に論じられる祖国愛や、自由で高貴な「思考様式」を促進する政府への愛を、パトリオティズムの一類型として把握した。これらの類型と比較することによって、カントの「思考様式」を軸にしたパトリオティズムが共和制概念と結びつき、専制的(家父長的)統治を批判する論理を構成するものであること、さらに、そのような「思考様式」が、フランス革命の考察において、人間学のテクストで強調される真の意味での熱狂をもたらすものであること、が確認された。当初の計画にしたがって、次年度は、当時のドイツ語圏の思想家たちの政治的イデオロギーの観点からパトリオティズムの諸類型を析出し、これらの類型と比較することによって、カントの「パトリオティズム」概念を再構成し、その特徴を明らかにする予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。政治思想史28年度が最終年度であるため、記入しない。
筋発揮の推定および用具挙動にもとづくゴルフクラブの統合評価システムの開発

本研究では,有限要素法を用いて,スイングからインパクトまでにおけるクラブやボールの挙動を高い精度で表現できるシミュレーションモデルを構築するとともに,筋骨格シミュレーションを用いてスイング時における筋発揮を推定することにより,スイング中のクラブ挙動および身体負荷を考慮した各指標の提案を行い,用具挙動および身体負荷の両面からクラブを統合的に評価するシステムを開発することを目的としている.このうち,本年度は,スイングからインパクトまでのクラブの挙動を表現できる有限要素モデルを構築することを中心に研究を進めた.まず,ロボットを用いた実験から,スイング中のクラブ挙動とインパクト後のボール挙動を,それぞれ光学式モーションキャプチャシステムと高速度ビデオカメラを用いて撮影した.同時にシャフトの挙動を把握するために,シャフトのひずみ応答を計測した.この実験を通して,モデルを構築するために必要なスイング運動と,モデルの精度を検証するためのクラブおよびボール挙動に関する実験データを,それぞれ取得することができた.次に,実験より得られたロボットのグリップ部の動きから,スイング運動を,ロボットの上肢,手首,シャフト軸まわりの各回転によって表現するような,スイングのモデル化を行い,スイングからインパクトまでを一連に扱うことができるシミュレーションモデルを構築した.同時に,解析から得られたクラブおよびボールの挙動,シャフトのひずみ応答を実験結果と比較することにより,構築したモデルが高い精度を持つことを確認した.また,筋骨格解析ソフトウェアを導入し,スイングを表現するために必要となる三次元動作計測の内容を吟味した.その上で,被験者によるスイングの動作計測を行い,取得した動作データを用いて筋骨格解析に導入するためのデータ処理を行った.本年度の当初計画を,有限要素法を用いてシミュレーションモデルを構築することとしており,モデルの精度に一部改善の余地を残しているものの,おおむね達成できている状況にある.これに加えて,当初は次年度に実施する予定としていた被験者によるスイングの動作計測を,本年度に実施することができ,筋骨格モデルを用いてスイングを表現するための初期検討まで進めることができている.次年度は,被験者によるスイング動作の計測データをもとに,逆動力学解析による筋骨格シミュレーションモデルを構築することにより,スイング時における筋発揮を推定すること,および推定した筋発揮に関する結果からクラブの評価につながるような身体負荷を考慮した指標を検討することを中心に研究を進める.動作計測時に,身体およびクラブグリップ部に貼付したマーカの位置関係が近いことから,モーションキャプチャシステムによって計測されたデータにおいて,これらのマーカの区別が自動的に行われない可能性がある.そのため,まずはスイングを表現する動作データとして適切な補正を行い,筋骨格シミュレーションに導入できるようにする.また,シミュレーションより推定される筋発揮や関節トルクなどの生体内力については,その時間変化と動きとの関係を比較することにより,妥当性を検証する.推定される結果の精度には,入力する動作計測データが影響を及ぼしている可能性があることから,必要に応じて動作計測データのフィルタリング処理などを行うことにより,推定結果への影響を調べていく.このことにより,モデルの精度が改善できる場合には,処理後の計測データを用いるなどの対応を行っていく.身体負荷を考慮した指標を提案するにあたっては,スイング動作の発現に寄与する部位に着目したり,スイング開始からインパクトに至るまでにおける動作の特徴に区分したりするなど,スイング中の筋発揮や関節トルクに関する最大最小値のみに着目するのではなく,着目した動作範囲における生体内力の積分値など,動作の特徴との関係性を考慮した検討を進めていく.また,インパクト時のヘッド速度などクラブ側の挙動にも着目し,クラブ挙動との関係も踏まえながら,提案した指標を吟味していく.本研究では,有限要素法を用いて,スイングからインパクトまでにおけるクラブやボールの挙動を高い精度で表現できるシミュレーションモデルを構築するとともに,筋骨格シミュレーションを用いてスイング時における筋発揮を推定することにより,スイング中のクラブ挙動および身体負荷を考慮した各指標の提案を行い,用具挙動および身体負荷の両面からクラブを統合的に評価するシステムを開発することを目的としている.このうち,本年度は,スイングからインパクトまでのクラブの挙動を表現できる有限要素モデルを構築することを中心に研究を進めた.まず,ロボットを用いた実験から,スイング中のクラブ挙動とインパクト後のボール挙動を,それぞれ光学式モーションキャプチャシステムと高速度ビデオカメラを用いて撮影した.同時にシャフトの挙動を把握するために,シャフトのひずみ応答を計測した.この実験を通して,モデルを構築するために必要なスイング運動と,モデルの精度を検証するためのクラブおよびボール挙動に関する実験データを,それぞれ取得することができた.次に,実験より得られたロボットのグリップ部の動きから,スイング運動を,ロボットの上肢,手首,シャフト軸まわりの各回転によって表現するような,スイングのモデル化を行い,スイングからインパクトまでを一連に扱うことができるシミュレーションモデルを構築した.同時に,解析から得られたクラブおよびボールの挙動,シャフトのひずみ応答を実験結果と比較することにより,構築したモデルが高い精度を持つことを確認した.また,筋骨格解析ソフトウェアを導入し,スイングを表現するために必要となる三次元動作計測の内容を吟味した.

その上で,被験者によるスイングの動作計測を行い,取得した動作データを用いて筋骨格解析に導入するためのデータ処理を行った.本年度の当初計画を,有限要素法を用いてシミュレーションモデルを構築することとしており,モデルの精度に一部改善の余地を残しているものの,おおむね達成できている状況にある.これに加えて,当初は次年度に実施する予定としていた被験者によるスイングの動作計測を,本年度に実施することができ,筋骨格モデルを用いてスイングを表現するための初期検討まで進めることができている.次年度は,被験者によるスイング動作の計測データをもとに,逆動力学解析による筋骨格シミュレーションモデルを構築することにより,スイング時における筋発揮を推定すること,および推定した筋発揮に関する結果からクラブの評価につながるような身体負荷を考慮した指標を検討することを中心に研究を進める.動作計測時に,身体およびクラブグリップ部に貼付したマーカの位置関係が近いことから,モーションキャプチャシステムによって計測されたデータにおいて,これらのマーカの区別が自動的に行われない可能性がある.そのため,まずはスイングを表現する動作データとして適切な補正を行い,筋骨格シミュレーションに導入できるようにする.また,シミュレーションより推定される筋発揮や関節トルクなどの生体内力については,その時間変化と動きとの関係を比較することにより,妥当性を検証する.推定される結果の精度には,入力する動作計測データが影響を及ぼしている可能性があることから,必要に応じて動作計測データのフィルタリング処理などを行うことにより,推定結果への影響を調べていく.このことにより,モデルの精度が改善できる場合には,処理後の計測データを用いるなどの対応を行っていく.身体負荷を考慮した指標を提案するにあたっては,スイング動作の発現に寄与する部位に着目したり,スイング開始からインパクトに至るまでにおける動作の特徴に区分したりするなど,スイング中の筋発揮や関節トルクに関する最大最小値のみに着目するのではなく,着目した動作範囲における生体内力の積分値など,動作の特徴との関係性を考慮した検討を進めていく.また,インパクト時のヘッド速度などクラブ側の挙動にも着目し,クラブ挙動との関係も踏まえながら,提案した指標を吟味していく.本年度に導入した,筋骨格ソフトウェアに新たなライセンス形態が展開され,そのライセンスには初期導入費用のほかに,年間保守費用が発生する.研究期間中,この保守を維持するために必要となる予算を,翌年度および翌々年度まで確保できるようにするために,翌年度以降における当初の交付額を踏まえて,本年度の使用計画を変更している.翌年度以降は,当初の計画にある使用額に加えて,保守費用を見込んで使用していく予定である.
プリン性化学伝達の出力装置の構造・機能と生理的意義

プリン作動性化学伝達とはATPを伝達物質として用いる細胞間情報伝達系である。中枢だけではなく全身に分布しており、痛みや味覚触覚などの感覚受容や、神経再生・血液凝固や糖代謝、血圧、炎症など多彩な生理機能を制御している。小胞型ヌクレオチドトランスポーター(Vesicular nucleotide transporter, VNUT)はプリン作動性化学伝達の出力系を構成する基盤膜分子である。VNUTは、ATPを分泌するといわれている細胞にもれなく発現しており、その発現を抑制すると、その程度に応じてATP分泌が抑制された。この結果は、VNUT機能を制御することで、プリン作動性化学伝達の出力を制御することができることを示唆している。本研究により、VNUTの構造と機能を追求し、その特性を明らかにした。特筆すべきはVNUTを制御するための二つのツールを開発したことである。すなわち、(1) in vivoでも有効なVNUT活性制御剤を開発した。(2) VNUTのノックアウトマウスを作製した。このマウスではVNUTにより駆動されるプリン作動性化学伝達が消失ないし大幅に低下している。すなわち、VNUTを自在に制御することでプリン作動性化学伝達の全体像を解明する事ができる。企画中の60%程度を本年中に途成した.以下.概要を述べる.(1)精製VNUTの再構成系を用いて、VNUTのATP輸送活性の必須アミノ酸残基を2つ同定した.これはvesicular glutamate transporterの活性残基と相同なものであった。(2)精製VNUTの再構成系を用いて、VNUTがヌクレオチドを輸送する過程で同時にCa2+イオンなどの二価金属カチオンを輸送することを見いだした。これは分泌小胞におけるvesicular Ca2+/Mg2+transporterの初めての同定である。(1)(2)の成果を合わせ、論文を準備中である.(3) VNUTの塩素イオン結合部位と相互作用するアニオンを同定した.これらのアニオンとATPの結合を測定する実験系を構築した。現在、このシステムと隅解析により、結合部位の同定を試みている.(4)特筆すべきは、塩素イオンによる活性化がSLC17ファミリーに共通する性質であることを実証したことである。これにより塩素イオンにより化学伝達制御がATP分泌についても起こっていることを証明した(これらの成果は現在投稿中である)。(5)神経とアストロサイトにおけるVNUT含有小胞を同定した.神経においては一部のsynaptic vesicleとdense-cored vesicleアストロサイトにおいてはdense-cored vesicleにVNUTが存在し機能していた.アストロサイトにおいてはこのAIP分泌が神経/アストロサイト相互作用の中核である証拠を得た(山梨大、小泉教授との共同研究)。(6) VNUTの抗体を用いて複数めATP含有小胞を同定した.(7)ショウジョウバエのVNUTを同定した。ノックダウンすると致死性となるラインがあることを発見した.ショウジョウバエにおいてはVNUTは脳神経系とともに唾液腺に高発現していた。(8) VNUTのKOmiceを確立した。(9) VNUTの結晶化は継続中1,結晶構造の解析大腸菌大量発現精製法により調製した数十mgオーダーの活性型VNUT(野生型変異体)を用いて約1000の条件(界面活性剤・タンパク濃度など)で結晶作製を試みた。Eunnse blue存在下での実験で一応の成果あり、次年度に継続する。2.分子機構企画書に示したとおりアブラー配列を中心に10種類のバリン変異体を作製し,そのATP輸送能を測定した。その結果,ほとんどは野生型と同じ活性同じ塩素イオン要求性を示したが、一種類の塩素イオン感受性が変化していた。化学修飾法エネルギートランスファーにより活性部位のアミノ酸残基の一部の絶対距離を推定した。VNUTが2価金属イオントランスポーターとしても機能することを見いだした。3.発現部位とその機能:VNUTのよいポリクローンおよびモノクローン抗体を作製した。β細胞、α細胞、血小板、T細胞、膀胱膜細胞などを見いだした。電子顕微鏡により局在をオルガネラレベルで決定した。血小板およびクローン細胞MEGOIにおけるVNUTの高発現を観察。そのATP蓄積とADP分泌に及ぼす意義を解明した。4.VNUT KO miceの示す種々の行動・phenotypeを綱べた。

確かにVNUTが欠失しているかどうかをRT-PCR Western blotならびにImmunohistochemistryで調べた。さらにクロマフィン細胞を調製しATP分泌能が失われている事を実証した。現在、論文を作製中である。VNUTはプリン性化学伝達の出力機構を解明する強力で唯一の膜分子である。本研究により、VNUTの構造・輸送と制御の分子機構・生理的意義を統合的に解明し、プリン性化学伝達の全体像を明らかにすることを目的とした。サブテーマならび成果を記す。1.結晶構造を解析する。これまでの収率を100倍向上させた大腸菌による大量発現・精製系を構築し、数十mgのほぼ純粋な機能を維持したVNUTを調製した。この標品を用いて現在数千の条件で結晶作成を実施、現在、構造解析を進めている。イスラエルとの共同研究として実施している。2.輸送と制御の分子機構を生化学的に解明する。塩素イオンの結合部位に近傍に蛍光団を導入しenergy transferが起こる事を実証した。現在、この現象をもとにVNUTの機能単位(3量体ないし4量体)を決定中である。また、VNUTが二価金属イオンを輸送することを実証した。ヌクレイチドと二価金属イオン複合体を基質として認識するためである。VNUTはmultivalent anionを基質とする始めてのトランスポーターである。3.ATP分泌細胞と蓄積顆粒を同定、その分泌機構を解明する。新たに血液系細胞やケラチノサイトがATP分泌細胞であることを実証した。その生理的意義も一部明らかにした。4.活性調節剤を開発する。ケトン体は塩素イオン結合部位において塩素イオンの親和性を低下させ、結果として可逆的にVNUTを阻害する。アセト酢酸は培養した神経からのATP分泌を阻害する。すなわち、アセト酢酸はプリン性化学伝達を、可逆的に元から断つことができる(Neuron2010)。さらに、この実験系を改良して、アセト酢酸よりも10倍程度in vivoにおいても有効な調節剤を開発した。5.ノックアウトマウスを作製し、ATP分泌の生理的意義を解明する。構築した。複数の表現系を見いだした。現在論文を投稿中である。