hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
花き老化についての分子生物学的解析と制御に関する研究

本研究では、エチレン非依存的に老化が進行する花きとしてグラジオラスを対象に、エチレン受容体とシステイン・プロテアーゼ遺伝子を単離し、この構造および機能の解析を行うこと、及び花きを発達中のそれらの発現解析を行い、老化における役割を推定することを目的とする。1)エチレン受容体遺伝子の単離・解析:植物の既知のエチレン受容体遺伝子の配列情報に基づいて、RT-PCRとRACE-PCRを行い、2種類のエチレン受容体遺伝子の全長cDNAを単離することに成功した。これらの配列と構造解析の結果、ERS1型エチレン受容体であると考えられ、GgERS1a及びGgERS1bと命名した。GgERS1bは、GgERS1aのGAFドメインをコードする配列の一部が欠落した新規のエチレン受容体遺伝子であった。メロンのERS1受容体の特異抗体を用いた実験から両遺伝子ともタンパク質に翻訳されていることが示唆された。グラジオラス花きの発達に伴う両遺伝子の発現解析を行った結果、GgERS1aは、花器官の発達と老化に伴って発現が増減すること、GgERS1bはそれらの期間に渡って一定の割合で発現していた。従って、GgERS1aがグラジオラスの花き老化に関与している可能性が高いと考えられた。GgERS1bは新規のエチレン受容体であるので、この成果を中心に投稿論文を作成している。2)システイン・プロテアーゼ遺伝子の単離・解析:単子葉植物の既知のシステイン・プロテアーゼ遺伝子の情報に基づいて、RT-PCRとRACE-PCRを行い、グラジオラスから1種類のシステイン・プロテアーゼ遺伝子を単離し、構造解析を行った。グラジオラスでは新規の遺伝子であったのでGgCYP1と命名した。花き発達に伴い発現解析を行った結果、老化に先立って発現しており、花きの老化に関連する遺伝子であると考えられた。本成果についても投稿論文を作成している。
ベルグマン空間に作用するリーマン・スティルチェス型積分作用素の解析

正則関数からなる関数空間上のリーマン・スティルチェス型積分作用素およびそれに関連の深い合成作用素の性質を、作用素を構成する関数・写像により与えられる定義領域における境界挙動などの函数論的な性質を用いて特徴付ける研究を行った。主な研究手法は、関数空間を特徴付ける条件を個々の関数に対する高階導関数を用いて与え、その結果として得られる関数空間に自然に導入される標準ノルムに同値なノルムを見出す。この同値ノルム評価を利用して、作用素に付随する作用素ノルムを作用素の構成因子から定まるBerezin型変換などを用いて解析することである。整関数から構成されるバーグマン・フォック型空間に対する高階微分作用素を利用した特徴付けと、この解析関数空間に付随する標準ノルムに同値なノルムによる評価不等式の確立についての研究を行った。この研究の対象であるバーグマン・フォック型空間は、有界領域上のブロッホ空間やベルグマン空間に相当する解析関数空間であり、本研究は積分作用素の性質を解析する際に必要不可欠な理論の構築を実現することが、ベルグマン空間に関するこれまでの研究からわかる。N変数の正則関数に対する微分作用素として通常の各変数毎の微分と正則関数の同次多項式展開から定まるRadial Derivativeを利用する特徴付けを考察した。通常の意味での高階(m階)微分作用の場合には、1/(1+|z|)のm乗、Radial Derivativeをm回反復作用させる場合には、1/(1+|z|)の2m乗がそれぞれ重み関数として、バーグマン・フォック型空間の特徴付けに現れることが分かった。今回得られたこれらの特徴付けによりバーグマン・フォック型空間の標準ノルムに同値なSobolev型のノルムが導入されることも分かった。さらに特徴付けに現れる重み付き高階導関数の局所的Lp-積分平均がやはりバーグマン・フォック型空間を特徴付けることを明らかにできた。ここで考察したバーグマン・フォック型空間には全空間で有界という条件を無限遠点で消滅するという条件に置き換えられる部分空間が自然に付随する。この部分空間に対する高階微分作用素による特徴付けも考察し、上記で得られた特徴付けに類するものが得られた。Bergman-Fock型関数空間に対する特徴付け問題を中心に、解析関数の定義域の一般化、重み関数の一般化を試みながら評価不等式の確立を目指す研究を行った。この種の研究は本課題においては、積分作用素の解析手段として期待されるものであり、同値ノルムによる評価不等式は解析関数空間の個々の性質についての情報を与えてくれるものである。A.K.Sharma氏と共に上半平面上のBloch型空間に作用する合成作用素を特徴付ける研究を行った。単位円板の場合とは異なり、任意の解析関数は有界な合成作用素を構成しないこと、コンパクトな合成作用素は存在しえないことを明らかにした。T.Mengestie氏と共に一般化された重み関数で定義されるFock空間を導入し、その関数空間に備わる標準ノルムと同値なノルムに対する評価不等式に関する研究を行った。重み関数についてある条件を課すことで同値ノルムによる評価が得られたが、その仮定が最適かどうかの検証が残っている。また、この場合についての積分作用素の解析が可能となり、従来のFock空間に対する結果に類似した特徴付けが得られた。上記2つの共同研究による結果は何も然るべき学術雑誌に投稿し、現在査読中である。積分作用素のノルム評価を目的とした微分作用を利用した関数空間に対する同値ノルム不等式の確立を目指してきた。前年度得られた1変数の結果をもとにして多変数の場合へ拡張された不等式が確立できた。また、研究対象となる解析関数の定義される領域の一般化(上半平面など)と関数空間を定義する重み関数の一般化への方向性が得られた。当初予定していた通り、積分作用素を解析するための手法・知見が揃いつつある。解析関数空間に対する特徴付け問題、およびそれらの応用として生じる合成作用素・積分作用素の基本性質を作用素構成因子の持つ函数論的な性質で特徴付けることを目標とする研究を行った。本研究課題において、解析関数空間の特徴付け問題は具体的に定義される線形作用素の解析手段として期待される同値ノルムによる評価不等式の確立が主たる目標である。合成・積分作用素の解析は解析に必要な試験関数の構成など、解析関数空間に固有な特徴に大きく依存する研究である。いずれの研究も解析関数空間の個々の性質についての情報を与えてくれるものであるため、解析関数空間論の分野では広く研究されているものである。N変数の単位球上で定義されるZygmund空間を導入し、この空間はRadial Derivativeの高階微分を帰納的に定義した微分作用素の挙動により特徴付ける研究を行った。研究過程において、この微分作用素の挙動とZygmund空間のノルムとを関連付ける同値ノルム評価不等式まで確立できた。今後は、Radial DerivativeのLp平均の挙動やCarleson測度の挙動によるZygmund空間の特徴付けを目指したい。1変数の上半平面で定義されるBloch型空間を導入し、同じく同値ノルムによる評価不等式などを見出した。上半平面上のBloch型空間では合成作用素・積分作用素の研究があまり行われていない。今回、A.K.Sharma氏とともにBloch型空間上の合成作用素・積分作用素の特徴付けに関する研究を進めた。Sharma氏との共同研究の結果(一部)は雑誌:Mediterranean Journal of Mathematicsに掲載された。

正則関数からなる関数空間上のリーマン・スティルチェス型積分作用素およびそれに関連の深い合成作用素の性質を、作用素を構成する関数・写像により与えられる定義領域における境界挙動などの函数論的な性質を用いて特徴付ける研究を行った。主な研究手法は、関数空間を特徴付ける条件を個々の関数に対する高階導関数を用いて与え、その結果として得られる関数空間に自然に導入される標準ノルムに同値なノルムを見出す。この同値ノルム評価を利用して、作用素に付随する作用素ノルムを作用素の構成因子から定まるBerezin型変換などを用いて解析することである。申請時の研究計画に沿って必要とされる知見が得られ、目標とする積分作用素についての結果が部分的に明らかにできつつある。1変数からN変数への拡張の方法も確立でき、チェザロ型積分作用素の性質を特徴付ける作用素ノルムおよび本質ノルムに対する評価不等式への応用も進んでいる。平成27年度の研究において、研究の対象としているフォック空間の重み関数を一般化することがソボレフ型のフォック空間の導入に繋がることが判明したため、微分作用素とフォック空間の関連を明確にするためにも、この重み関数の一般化する問題を考え、必要な同値ノルム不等式の確立を目指す。また、多変数の解析関数からなる関数空間を考察する場合は通常の微分作用素だけでなくラプラシアンやグラディエントなどを利用した同値ノルムも考えられる為、先ずは新たな同値ノルム評価不等式の導出を目指すことになる。ここで得られる評価を応用するために、積分作用素とラプラシアンとの親和性を調べる必要があるが、基本的な合成作用素から始めて段階を踏んで一般化していく。この際に合成作用素もしくは荷重合成作用素に対する特徴付け条件、変数変換公式などが必要になるはずなので、必要に応じて合成作用素の研究にも関わっていく。解析関数空間論N変数のバーグマン・フォック型空間で定義される積分作用素の特徴付けおよびその作用素ノルム・本質ノルムに対する評価不等式の確立を目指す。高階微分作用素による特徴付けからソボレフ型のフォック空間の導入が見え始め、さらに一般化された重み関数に対するフォック空間が想定される。これまでの先行研究を踏まえ、一般化されたフォック空間に対する個々の関数の持つ挙動や関数空間の備える性質などを詳細に解析し、同様の高階微分作用素による特徴付けを確立する。所属変更の手続き(公募面接、引越準備)により計画していた国内出張(研究打ち合わせ:1回、研究集会:1回)を中止しなければならなかった。次年度使用額は購入予定図書(洋書)の出版遅延のため生じた。これらは既に発注依頼済みであるが、所属機関の会計システム上、26年度内に納入されないものは次年度会計になること、また26年度内予算は2月初めの期日までに購入依頼、出張申請などを行わなければならないことがあり、やむなく生じたものである。翌年度分と合わせて、主に研究課題に関連する図書(洋書)の購入に充てたい。購入依頼は継続しているので、本使用額はそのまま図書(洋書)購入に充てる。
CRMP2の機能解明に基づく神経変性疾患の治療法開発

CRMP2はアルツハイマー病の病理所見で異常リン酸化が報告されている。我々は、CRMP2の異常修飾が神経内輸送・オートファジー・リソソームの機能異常を引き起こし、神経変性疾患の病態に関与していると仮説を立てた。本研究では、MSAを中心とした神経変性疾患の病態をCRMP2とオートファジー、神経内輸送の観点から検討し、MSAの治療法開発につながる知見を獲得するとともに、ほかの神経変性疾患に展開することを目的とする。凍結脳(小脳)の可溶性分画分、不溶性画分に分け、それぞれの画分におけるtotal CRMP2、リン酸化CRMP1/2の発現をWestern blottingにてMSAとコントロールで比較した。total lysateと考えられるS1におけるリン酸化CRMP1/2は、小脳皮質で疾患コントロールと比較し、明らかな低下を認めた。不溶画分であるP3では、S1と比較し、MSAでリン酸化CRMP1/2の発現がみられており、MSAでは不溶画分にリン酸化CRMP1/2が蓄積する傾向があると考えられた。免疫組織染色において、MSAの小脳では白質を中心に、頚椎症、PSPと比較し、total CRMP2、リン酸化CRMP1/2の染色性が上昇していた。MSAにおけるリン酸化CRMP1/2は一部リン酸化αシヌクレインと共局在を示したことから、リン酸化CRMP1/2の一部はグリア細胞質封入体(GCI)に存在すると考えられた。CRMP遺伝子変異マウスでの検討では、CRMP2欠損マウスでは、LC3II/Iが低下し、リソソーム輸送が亢進していた。MSAの小脳において、リン酸化CRMP2はLC3とも共局在を示すことからCRMP2がオートファジー・リソソームの輸送を修飾し、GCIに蓄積する機序が考えられた。
逆ミセル中の微水環境の性質並びにそこに可溶化された蛋白質の構造上及ぼす塩の影響

逆ミセルへのタンパク質の抽出に及ぼす水相添加塩の効果について、逆ミセル中の微水環境の性質およびそこに抽出されたタンパク質の可溶化状態の観点から検討した。界面活性剤AOTの対イオンをNa^+からK^+とCa^<2+>に置換したM(AOT)_n(Mは金属イオン)からなる逆ミセル溶液を調製した。これに二相接触法および粉末添加法によってタンパク質リゾチームの可溶化を行い、その蛍光スペクトルを測定した。逆ミセル中の蛍光スペクトルはミセルサイズに関わらず、水中に比べて同程度短波長側にシフトした。これはリゾチームが逆ミセル中で極性の小さい環境に存在することを示す。ESRスペクトルの結果との比較より、リゾチームは逆ミセルの界面活性剤層に入りこんだ状態で可溶化されていると推測された。しかし、対イオン種による蛍光スペクトルの違いは観測されず、添加塩は逆ミセル内部におけるタンパク質の可溶化状態にほとんど影響しないことを示唆する。続いて逆ミセル溶液のバルク的性質を調べるために導電率を測定した。導電率は液中の水分量が増すとともに緩やかに増加した後、ある閾値以上で急激に増加し、パーコレーション現象を示した。パーコレーション閾値に対する塩効果はほとんどみられなかったことから、逆ミセル間相互作用に対イオンが影響しないことが示唆された。以上より、逆ミセルによるタンパク質の抽出において添加塩の効果はタンパク質と逆ミセルとの静電的相互作用に帰することがわかった。界面活性剤AOTの対イオンをNa^+から他のアルカリあるいはアルカリ土類金属イオンに置換したM(AOT)_n(Mは金属イオン)からなる逆ミセル溶液を、イオン交換法によって調製した。これに適量の水を添加することで逆ミセル径を制御する。逆ミセル内の微小水相の性質は、その粘性および極性を水溶性ラベル剤3-カルバモイルプロキシルを添加することによってESRを用いて調べた。対イオン種としてNa^+のもの及びLi^+,K^+,Rb^+,Cs^+,Ca^<2+>,Sr^<2+>,Ba^<2+>に置換したものを比較したが、l価イオンと2価イオンの間には差がみられたが、同じ価数のものは有意差がみられなかった。すなわち、極性はl価イオン置換の方がわずかに高く、粘性は2価イオンの方が高かった。続いて、種々のM(AOT)_n逆ミセル溶液とタンパク質水溶液との二相接触法によってタンパク質の可溶化を行い、そのCDスペクトルを検討した。タンパク質としてリゾチーム、リボヌクレアーゼA、シトクロムcを用い、対イオン種としてNa^+のもの及びK^+,Ca^<2+>,Ba^<2+>に置換したものを比較したが、イオン種によるCDスペクトルの違いは観測されなかった。これらの結果は、逆ミセルによるタンパク質の抽出において添加塩は逆ミセル微小水相およびタンパク質コンフォメーションにほとんど影響しないことを示唆する。すなわち、添加塩の効果はタンパク質と逆ミセルとの静電的相互作用に帰することがわかった。
発癌防止におけるアポトーシス依存的貪食反応の役割

細胞周期のチェックポイントに検知されて修復過程に入った異常細胞のうち、完全修復に至らなかった細胞はアポトーシス依存的に貪食除去されると考えられる。しかし、貪食の必要性は示されていない。研究代表者は、チェックポイントとアポトーシスを同時に阻害して発癌を起こさせるショウジョウバエ実験系において、アポトーシスではなく貪食を阻害した時の発癌の有無を調べることにした。発癌が起これば、癌細胞予備軍の除去にアポトーシスだけでなく貪食も必要と結論される。最初の1年半をかけて発癌モデルが完成し、貪食の必要性をみる動物の作成に入った。しかし、研究期間内に完成せず、当初の目的を達成することができなかった。癌発症における貪食反応の関与1.発癌モデルショウジョウバエの作成他研究者により発表された方法(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109:20549)に基づいて、細胞周期チェックポイントに必要な遺伝子の発現を抑制すると同時にアポトーシスを阻害することによって、癌を発症するショウジョウバエを作成する。平成26年度では、RNAiによりチェックポイント遺伝子の発現を抑制し、caspase阻害タンパク質p35の強制発現によりアポトーシスを阻害したショウジョウバエの樹立をめざした。engrailed遺伝子のプロモーターを使ってGAL4を発現させるGAL4-UASシステムを利用し、RNAiとp35発現を翅原基の後部で誘導することを目論んだ。年度内の完了を見込んでいたが、いくつかの理由により年度末時点ではまだ目的とするショウジョウバエは作成されていない。2.貪食受容体を欠損させた発癌モデルショウジョウバエの樹立貪食反応の関与を知るために、実験1においてアポトーシス阻害のかわりに貪食受容体欠損を起こさせたショウジョウバエにおける癌の発症を解析する。ショウジョウバエの主要な貪食受容体であるDraperとintegrinの二つを同時に欠損させるため、実験1と比べてショウジョウバエ樹立には長期間を要すると見込まれていた。年度末までおよそ2/3の工程が完了した。癌発症における貪食反応の関与1.発癌モデルショウジョウバエ株の作成他研究者により報告された方法(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109:20549)に基づいて、細胞周期チェックポイントに必要な遺伝子の発現を抑制すると同時にアポトーシスを阻害することによって、特定の細胞群に癌を発生させるショウジョウバエを作成する。平成27年度では、前年度に引き続き、RNAiによりチェックポイント遺伝子bub3の発現を抑制し、caspase阻害タンパク質p35の強制発現によりアポトーシスを阻害した「発癌モデルショウジョウバエ株」の樹立をめざした。engrailed遺伝子のプロモーターを使ってGAL4を発現させるGAL4-UASシステムを利用し、RNAiとp35発現を翅原基の後部で誘導した。その結果、翅原基後部側の細胞群の過剰増殖が観察され、目的とするショウジョウバエ株が樹立された。今後は、この株を使って発癌に影響する外部及び体内の環境要素の同定をめざす。2.貪食受容体を欠損させた発癌モデルショウジョウバエの樹立貪食反応の関与を知るために、実験1で樹立されたショウジョウバエ株において、アポトーシス阻害のかわりに貪食を阻害した時の癌の発生程度を調べる。貪食阻害は、ショウジョウバエの主要な貪食受容体であるDraperとintegrinの二つを同時に欠損させることで達成する。前年度に引き続き、染色体の交叉やショウジョウバエ株の交配を繰返して目的のショウジョウバエの作成をめざした。しかしながら、達成までの8ステップのうちで完了したのはステップ4までであり、今年度内に目的のショウジョウバエを得ることができなかった。実験に必要なショウジョウバエの作成が数ヶ月遅れている。次年度には、この遅れを取り戻し、当初の目的を達成させる。生化学癌発症における貪食反応の関与1.発癌への貪食の関与:アポトーシスを阻害した発癌モデルショウジョウバエが完成したら、抗生剤投与で常在細菌を無くした動物での癌の発症を調べる。対照のショウジョウバエでの場合と比較することにより、癌発生への常在細菌の影響が判明する。2.発癌への貪食の関与:貪食受容体を欠損させた発癌モデルショウジョウバエが樹立されたら、貪食受容体の有無での癌の発症程度を比較する。これにより、癌発症への貪食反応の影響が判明する。3.研究全体のまとめ:癌発症における貪食反応の関与の研究を総括する。研究の進展状況の都合により、実験動物(キイロショウジョウバエ)のいくつかの種類について使用する必要がなくなった。それに伴って、飼育に要する物品の購入費が低くおさまった。上記の実験
CFRP深部欠陥のイメージングのための渦電流試験法

CFRPは軽量で高い剛性と強度を有する材料であるが,繊維うねりや層間はく離などの特有の欠陥が発生し,機械的特性や強度の低下につながる.非破壊検査法の一つである渦電流試験は非接触検査が可能という利点を有するが,渦電流はCFRP表面近傍に集中するため,表面から離れた深部欠陥の検出が困難であるという問題がある.そこで,本研究では相対的に内部の渦電流量を増大させて深部欠陥の検出を可能とする試験法の確立を目的とする.CFRPは軽量で高い剛性と強度を有する材料であるが,繊維うねりや層間はく離などの特有の欠陥が発生し,機械的特性や強度の低下につながる.非破壊検査法の一つである渦電流試験は非接触検査が可能という利点を有するが,渦電流はCFRP表面近傍に集中するため,表面から離れた深部欠陥の検出が困難であるという問題がある.そこで,本研究では相対的に内部の渦電流量を増大させて深部欠陥の検出を可能とする試験法の確立を目的とする.
メリステムにおける遺伝子産物の発現と細胞内動態の高感度解析

班員からの依頼を受け、網羅的な遺伝子発現解析を行い、そのデータを提供することによる支援をおこなった(のべ39研究室・計143件)。これらの解析から、ペプチドと植物ホルモンとのシグナル伝達のクロストークの発見をはじめとする、植物メリステム研究に寄与する数多くの成果が挙がった。また、BiFCベクターの配布と共焦点レーザー顕微鏡によるイメージング解析支援(15研究室・計15件)により、メリステム機能に関わる重要な制御蛋白質間の植物細胞内における相互作用が明らかになり、植物メリステム研究に寄与する成果に結びついた。植物の発生研究は、代表的な発生過程や形態形成に関わる多くの遺伝子が単離されるとともに、遺伝子発現の網羅的解析も進められている。また、多数の低分子RNAの関与が明らかになるとともに、DNAメチル化などによるエピジェネティックな制御が、植物固有の様式で重要な役割を果たすことが示されている。今後の研究においては、(1)ゲノム全体にわたって遺伝情報・エピジェネティックな情報を取得し、メリステム形成・維持における役割を解析すること、また、(2)個々の遺伝子の機能解析においても、それぞれがコードするタンパク質の組織・細胞内における機能を動的に解析すること、が必要不可欠であると考えられる。そこで、本支援研究においては、シロイヌナズナのタイリングアレイを利用して、低分子RNAの発現、およびchip-on-chipによるゲノムの化学修飾を網羅的に解析する方法を確立し、この技術を計画研究・公募研究の班員に提供することを目的とする。これにより、ゲノム発現データの蓄積されることを目指す。また、タンパク質の組織内・細胞内局在の解析の技術情報や、植物細胞内におけるタンパク質間相互作用解析のためのベクター、茎頂メリステムの細胞動態を解析するための材料などを整備し、計画研究・公募研究の班員に提供するとともに、必要な班員には設備利用の便を図ることを目的とする。先端的な研究を進める班員から広く情報を収集し、技術交流などを通して本特定領域研究全体でそれを共有する体制を構築する。本年度は初年度に当たるため、来年度からの支援実施のための基盤整備を中心に進めた。本支援班のひとつの目的は、植物の発生研究にとって必須となってきた、全ゲノムに渡る網羅的遺伝子発現解析とタイリングアレイを利用した低分子RNAの発現、およびchip-on-chipによるゲノムのメチル化、アセチル化を網羅的に解析する方法を確立し、この技術を計画研究・公募研究の班員に提供することにある。このために、本年度は、購入したDNA解析装置の調整と、網羅的遺伝子解析技術の習得及び開発を行った。その結果、シロイヌナズナ及びヒャクニチソウ遺伝子の網羅的発現解析が可能となった。また、ゲノム修飾の実験系の立ち上げを行い、培養細胞を用いての解析が可能となった。もう一つの目的は、タンパク質の組織内・細胞内局在の解析の技術情報や、植物細胞内におけるタンパク質間相互作用解析のためのベクター、茎頂メリステムの細胞動態を解析するための材料などを整備し、計画研究・公募研究の班員に提供することである。このために、本年度は、バージョンアップした共焦点レーザー走査顕微鏡の利用環境の整備とこれを用いた植物細胞内におけるタンパク質間相互作用の試験的解析をおこなった。また、解析技術のひとつである、Bi-molecular fluorescent complementation (BiFC)法に用いるベクターの構築を進め、平成20年度から配布できる準備を整えた。これと合わせて、このBiFC法について紹介した和文総説を公表した。本年度は2年度に当たり、本年度から参加した公募班員を含む班員に対する支援事業を進めた。本支援班では、植物の発生研究にとって必須となってきた、全ゲノムに渡る網羅的遺伝子発現解析とタイリングアレイを利用した低分子RNAの発現、およびchip-on-chipによるゲノムのメチル化、アセチル化を網羅的に解析する方法を確立し、この技術を計画研究・公募研究の班員に提供することを目的としている。本年度は、昨年度確立した網羅的遺伝子解析法を用いて、班員の研究支援を行った。その結果、延ベ20件(7研究室)の解析依頼に応えて解析を行った。これらの解析から、発生過程での新規遺伝子の発見など、多くの成果があった。また、本支援班では、蛍光標識したタンパク質の組織内・細胞内局在の解析の技術情報や、植物細胞内におけるタンパク質間相互作用解析のためのベクター、茎頂メリステムの細胞動態を解析するための材料などを整備し、計画研究・公募研究の班員に提供するとともに、必要な班員には共焦点レーザー顕微鏡の利用の便を図ることも目的としている。本年度は、BiFC法による茎頂メリステムにおけるタンパク質間相互作用の可視化をFTとFDをテストケースとしておこない、良好な結果を得た。2009年1月より、BiFC法によるタンパク質問相互作用解析のためのベクターの配布を開始した。これまでに3件(3研究室)の配布をおこなった。

2008年11月には、連携研究者(奈良先端大・島本功教授)がオーガナイザーとなり、テクニカル・ワークショップ「視る生物学3」(奈良先端大植物支援事業との共催)をおこない、技術交流を図った。3年度目に当たる本年度は、昨年度から参加した公募班員を含む班員に対する支援事業を進めた。本支援班の一つ目の目的は、シロイヌナズナDNAチップ、ヒャクニチソウDNAチップ、シロイヌナズナタイリングアレイを用いた網羅的な遺伝子発現解析を、計画研究・公募研究の班員に提供することである。本年度は、9研究室から延べ27件の遺伝子解析の依頼があった。これらの依頼に応えて解析を行い、その遺伝子発現データを班員に戻した。これらの解析から、植物の特殊な発生過程で働く新規遺伝子の発見、ペプチドと植物ホルモンとのシグナル伝達のクロストークなど、植物メリステム研究に寄与する多くの成果があがった。またシロイヌナズナタイリングアレイを利用した非翻訳領域の低分子RNAの発現解析をゲノムワイドで行い、転写因子により特殊な低分子RNAの発現が上昇するという新規の結果が得られた。また、本支援班では、蛍光標識したタンパク質の組織内・細胞内局在の解析の技術情報や、植物細胞内におけるタンパク質問相互作用解析のためのベクター、茎頂メリステムの細胞動態を解析するための材料などを整備し、計画研究・公募研究の班員に提供するとともに、必要な班員には共焦点レーザー顕微鏡の利用の便を図ることも目的としている。本年度は、FTと相互作用する新規因子としてTCP, YABBY, KANの各ファミリーの転写因子をBiFC法による植物細胞におけるタンパク質間相互作用の可視化アッセイを用いて同定した。本年度は、BiFC法によるタンパク質間相互作用解析のためのベクターの配布を4件(4研究室)おこなった。また、3件(1研究室)の技術支援をおこなった。2009年11月には、連携研究者(奈良先端大・島本功教授)がオーガナイザーとなり、テクニカル・ワークショップ「視る生物学4」(奈良先端大植物支援事業との共催)をおこない、技術交流を図った。4年度目に当たる本年度は、公募班員を含む班員に対する支援事業を進めた。本年度は、10研究室から延べ23件の遺伝子解析の依頼があった.これらの依頼に応えて解析を行い、その遺伝子発現データを班員に戻した。これらの解析から、ペプチドのターゲット遺伝子の発見、エピジェネティクスに関与する遺伝子、側根形成を支配する遺伝子など、植物メリステム研究に寄与する多くの成果があがった。またシロイヌナズナタイリングアレイを利用したゲノムワイドの解析も進められた。
コンピューターリテラシーを援用して量子無機化学基礎教育を補完する演習教材の集成

これまで有機化合物を対象として行われてきた計算化学演習の適用では対応できない無機化合物の電子状態に特有な概念として、配位数の多様性、酸化数の概念、および多様な色の起源である励起遷移の帰属などが挙げられる。また、奇数電子系分子も不安定なラジカルではなく安定な化合物として存在できることが有機化合物とは本質的に異なる無機化合物の特質として挙げることができる。このような無機化合物の電子状態は、有機物に適用して大きな成功を収めたRHF近似では統一的に取り扱うことが困難で、UHF近似にも対応できる半経験的分子軌道法を用いることによりはじめて取り扱うことが可能となる。本研究では、UHF近似に対応した半経験的分子軌道法を用いる計算化学演習のカリキュラムを立案し、分子軌道法の概要と使用法の解説を含めた、90分15回の演習授業のシラバス構想を作成した。要望があれば、実際の授業の担当あるいは授業アシスタントに対応することができる。
慢性腎臓病に合併する高度動脈硬化症に対する創薬標的としての可溶性FLT-1の研究

慢性腎臓病患者では重症動脈硬化症が死因の第一位を占める.我々は,胎盤成長因子(PlGF)およびその内因性拮抗物質である可溶性FLT-1(sFLT-1)が腎不全時に加速される動脈硬化症の発症に重要な影響を及ぼすことを提唱してきた.本研究では, sFLT-1とApo-E KOの二重欠損マウスの発現形態および腎不全を合併させたApoE-KOマウスに対するリコンビナントsFlt-1投与の効果を検討し,腎機能障害病態においてsFlt-1を補充する治療が合併する動脈硬化症の進展に対する有効な治療法となる可能性を示した.慢性腎臓病患者では重症動脈硬化症が死因の第一位を占める.我々は,胎盤成長因子(PlGF)およびその内因性拮抗物質である可溶性FLT-1(sFLT-1)が腎不全時に加速される動脈硬化症の発症に重要な影響を及ぼすことを提唱してきた.本研究では, sFLT-1とApo-E KOの二重欠損マウスの発現形態および腎不全を合併させたApoE-KOマウスに対するリコンビナントsFlt-1投与の効果を検討し,腎機能障害病態においてsFlt-1を補充する治療が合併する動脈硬化症の進展に対する有効な治療法となる可能性を示した.慢性腎臓病(chronic kidney dsease : CKD)患者では心血管病合併症が死因の第一位を占め保健衛生および医療行政における重大な問題とっている.我々は,可溶性FLT-1は腎臓が心血管の恒常性維持のために血中に分泌する重要な分子である可能性を発見し,さらに機能の低下した腎臓での本分子の産生低下が腎不全時に加速される動脈硬化症の発症に直接的な影響を及ぼすことを提唱した.本年度に実施した研究の成果により,(1)ヒト試料を用いて可溶型Flt-1が腎臓で産生され腎静脈を介して大循環系に分泌されること。(2)腎臓での可溶型Flt-1産生がCKDの重症度に比例して低下すること。(3)ヒトCKD症例で、血中の可溶型Flt-1濃度がCKDの重症度に比例して低下すること(4) CKDの重症度に合わせて冠動脈硬化は重症化するが、CKD症例で冠動脈の重症度と血中のPIGF/可溶型Flt-1比が上昇すること(5)動脈硬化のモデルマウスであるApoEノックアウトマウス(ApoEKO)に腎不全を作成すると、ヒトと同様に腎臓での可溶型Flt産生が低下し、血中の可溶型Flt-1濃度が低下すること。(7) ApoEKOに腎不全を作成すると動脈硬化が増悪すること。(8)リコンビナント可溶型Flt-1を作成し、ApoEKOの腎不全モデルマウスに投与すると、動脈硬化の増悪を有意にレスキューできること。(9)可溶型Flt-1を投与している大動脈では対照と比べ有意に大動脈プラーク内へのマクロファージの浸潤が少ないことを確認し,Circulation誌(2009;120:2470)に発表した。動脈硬化症を原因とする心血管病合併症は慢性腎臓病(chronic kidney disease : CKD)患者での死因の第一位を占め保健衛生および医療行政における重大な問題とっている.我々は,可溶性FLT-1は腎臓が心血管の恒常性維持のために血中に分泌する重要な分子である可能性を発見し,さらに機能の低下した腎臓での本分子の産生低下が腎不全時に加速される動脈硬化症の発症に直接的な影響を及ぼすことを提唱した.本年度においてはCirculation(2009;120:2470),Am J Cardiol(2009;104:1478)に発表した検討結果に基づいて,1)CKD患者における血中可溶性FLT-1値と長期的な心血管イベントの追跡すること,2)動脈硬化発症ワタナベウサギに腎不全を合併するモデルを作成して動脈硬化病変の変化を観察すること,および3)腎不全合併ワタナベウサギにリコンビナント可溶性FLT-1を投与することの効果について検討している.CKD患者において採血時の可溶性FLT-1および胎盤成長因子(PIGF)は平均60ヶ月の追跡期間における総死亡および心血管イベント発症に対する予後不良の予測因子である可能性が認められた.ワタナベウサギに3/4腎摘を作成することによりCKDの状態を作成することが可能であることを確認し,現在動脈硬化病変の病理学的検討,リコンビナントタンパク投与の影響を検討している.動脈硬化症を原因とする心血管病合併症は慢性腎臓病(chronic kidney disease:CKD)患者での死因の第一位を占め保健衛生および医療行政における重大な問題とっている.

我々は,胎盤成長因子(PlGF)の内因性拮抗物質である可溶性FLT-1は腎臓が心血管の恒常性維持のために血中に分泌する重要な分子である可能性を発見し,さらに機能の低下した腎臓での本分子の産生低下が腎不全時に加速される動脈硬化症の発症に重要な影響を及ぼすことを提唱した.本研究においては,我々がCirculation(2009;120:2470),Am J Cardiol(2009;104:1478)に報告した結果に基づいて, 1)CKD患者における観察開始時の血中PIGFおよび可溶性FLT-1濃度と長期的な心血管イベント発症との関連性を追跡すること, 2)可溶性FLT-1を選択的に欠損させたマウス(sFLT-1KO)の特徴の観察,および3)sFLT-1KOと動脈硬化自然発症マウス(Apo-EKO)の二重欠損マウスの発現形態について検討した.Wildマウスと比較してsFLT-1KOマウスの形質発現には明らかな変化は認められなかった.一方,sFLT-1KOとApo-EKOの二重欠損マウスの大動脈における動脈硬化病巣の形成は,Apo-E単独欠損マウスに比して有意に促進されており,内因性のsFLT-1が動脈硬化巣の形成に対して抑制的に作用していることが確認された.
ASEANと日本をつなぐ科学教育実験教材開発

本研究ではASEAN-日本共通科学教育実験教材開発を行う事を目的としている。ASEANでの実験ベースでの科学教育の基礎データの収集と解析を進めた。また、実験実習を基盤とするプログラム開発をおこなった。科学・教育文化を通して学習できるように発展するため、新たな個別学習装置「パーソナルデスクラボ(PDL)」の改変や開発を行ってきた。とくに、新たに実験実習教材の開発もおこない、国内の中高生を対象に講座を実施し、教材の有用性についても研究を進めた。今年度はASEANでの実験ベースでの科学教育の基礎データの収集と解析を中心に研究を進めた。ASEANにおける科学教育に対する先進的取り組みを調査し、日本における科学教育との相違点を明らかにすること、その内から日本独自の視点を抽出し、評価し、さらに推進すべき点、改善を要する点を検討するために、実験実習を基盤とするインドネシア、タイ、ベトナム、シンガポール、カンボジアの主要10大学の協力を得て、科学・理科教育実施のための基礎データの収集と解析を1)現状、2)ニーズ、3)展望の三つの観点からおこない、プログラム開発の基礎データの収集をおこなった。また、すでに開発済みのPDLを日本の科学文化背景を視点とし、単に科学を伝えるのではなく、科学・教育文化を通して学習できるように発展するため、この過程で必要に応じ新たな個別学習装置「パーソナルデスクラボ(PDL)」の改変や開発を行ってきた。さらに、ASEAN-日本共通という視点からPDL及びその学習プログラムを改変することに加え、学習プログラムのASEAN諸国での認知をはかるため、ASEANの協力校を中心としたスタッフとのプログラムの交流活動もおこなった。今年度は、昨年度に引き続き、ASEANでの実験ベースでの科学教育の基礎データの収集と解析と、科学理解の状況、文化理解などの項目もふまえた教材開発を中心に研究を進めた。ASEANと日本における科学教育との相違点を明らかにし、その内から日本独自の視点を抽出し、評価し、さらに推進すべき点、改善を要する点を検討するために、実験実習を基盤とするインドネシア、タイ、ベトナム、シンガポール、カンボジアの主要10大学の協力を得て、科学・理科教育実施のための基礎データの収集と解析を1)現状、2)ニーズ、3)展望の三つの観点からおこない、プログラム開発をおこなった。また、すでに開発済みのPDLを日本の科学文化背景を視点とし、単に科学を伝えるのではなく、科学・教育文化を通して学習できるように発展するため、この過程で必要に応じ新たな個別学習装置「パーソナルデスクラボ(PDL)」の改変や開発を、昨年度に引き続き行ってきた。新たに実験実習教材の開発もおこない、国内の中高生を対象に講座を実施し、教材の有用性についても研究を進めた。さらに、ASEAN-日本共通という視点からPDL及びその学習プログラムを改変することに加え、学習プログラムのASEAN諸国での認知をはかるため、ASEANの協力校を中心としたスタッフとのプログラムの交流活動も、昨年度に引き続き進めた。本研究の達成度は、おおむね順調に進展している。本研究の計画では、1ASEANでの実験ベースでの科学教育の基礎データの収集と解析、2ASEAN-日本共通実験ベース科学教育教材開発、3科学文化を通したASEANー日本相互理解促進教育プログラム開発をあげている。特に今年度は"ASEANでの実験ベースでの科学教育教材開発を中心に研究を進める予定であり、ASEANの10大学の協力をえて、教材開発を進められた。また、いくつかの開発教材を利用して、国内の中高生に対して実施を行い有用性の確認を進めたことがその理由である。昨年度に引き続きASEANでの実験ベースでの科学教育の基礎データの収集と解析を中心に研究を進めた。今年度は、我が国で積極的に開発が進められている、有機トランジスタ、有機太陽電池、有機LEDなどの有機デバイスの教材開発に取り組んだ。有機色素増感太陽電池については、インドネシアの3校で授業を実施した。有機LED教材については実験実習教材の開発をおこない、国内の中高生を対象に有機LEDの作製講座を実施し、教材の有用性についても研究を進めた。さらに、ASEAN-日本共通という視点からPDL及びその学習プログラムを改変することすることに加え、学習プログラムのASEAN諸国での認知をはかるため、昨年度に引き続き、ASEANの協力校を中心としたスタッフとのプログラムの交流活動もおこなった。

また、実験実習を基盤とするプログラム開発をおこなった。科学・教育文化を通して学習できるように発展するため、新たな個別学習装置「パーソナルデスクラボ(PDL)」の改変や開発を行ってきた。とくに、新たに実験実習教材の開発もおこない、国内の中高生を対象に講座を実施し、教材の有用性についても研究を進めた。本研究の計画においては、1ASEANでの実験ベースでの科学教育の基礎データの収集と解析、2ASEAN-日本共通実験ベース科学教育教材開発、3科学文化を通したASEANー日本相互理解促進教育プログラム開発をあげている。特に今年度は1ASEANでの実験ベースでの科学教育の基礎データの収集と解析を中心に研究を進める予定であり、ASEANの10大学の協力をえて、基礎データの収集が進められた。また、同時に学習教材の開発もあげており、いくつかの教材の開発と、国内の中高生に対して実施を行い有用性を確認できていることがその理由である。今後の研究の推進方策としては、当初の研究計画どおりの研究計画を予定している。平成28年度においても、ASEANの10大学の協力をえて、ASEAN-日本共通実験ベース科学教育教材開発を進める。昨年度に引き続き、科学文化を背景にした実験実習教材の開発を行い、これをもとにASEANの研究者と討議し、それぞれの国情に合致する点および相違点を明らかにする。教材開発には現地の学生や現職教員にも参加してもらい、指導する立場からの意見、評価を得る。これら評価をもとに、実験のために必要な予習的課題や解説もテキストとして作成し、現場で活用されやすい教材開発に努める。科学文化を通したASEANー日本相互理解促進教育プログラム開発については、ASEAN研究者の協力のもと収集したデータに基づきプログラムの基本構造を提案し、セミナーの開催や交流活動を実施する計画である。最終的には、協力校にて、作成した教育プログラムの実施を行う。電子工学今後の研究の推進方策としては、当初の研究計画どおりの研究計画を予定している。平成27年度においては、ASEANの10大学の協力をえて、ASEAN-日本共通実験ベース科学教育教材開発を進める。特に、科学文化を背景にした実験実習教材の開発を行い、これをもとにASEANの研究者と討議し、それぞれの国情に合致する点および相違点を明らかにする。教材開発には現地の学生や現職理科教員にも参加してもらい、指導する立場からの意見、評価を得る。今年度は、研究の進行計画によって、教材の開発の一部を翌年度までに延長したために、今年度使用額が当初予定額より減少した。
銅代謝異常を伴うLECラット肝癌発生の分子機構の解明

LECラットの肝炎発症遺伝子に関して、エステラーゼD(ESD)、Rb1、セルロプラスミンン(CP)遺伝子および各染色体由来の18種のマイクロサテライトDNAと連鎖分析を行ったが、いずれもhts遺伝子との連鎖は見られず、特定染色体上の位置づけはできなかった。昨年、ウイルソン病の発症遺伝子はカナダとアメリカのグループによりクローニングされた。現在、カナダのグループにより、そのDNAのプローブを供与してもらえることになっており、手に入り次第、LECラットにおいてもクローニングを行う予定である。その遺伝子の機能を解析し、肝炎および肝癌発症との関連について明らかにする。2.銅代謝異常と肝癌の発生の検索LECラットでは生下時により細胞型グルタチオン・ペルオキシダーゼの発現が肝臓で特異的に低下している。また、Cu-、Zn-SODも低値を示していた。さらに、肝臓において銅と結合していないメタロチオネンの量も病変の進行とともに増加していることが明らかにされた。これら活性酸素の消去酵素が生下時より低下している。このような事実は、銅代謝異常による銅イオンの介在により産生された活性酸素が肝細胞障害による肝炎の発症および肝癌の発生に関与していることを示唆している。事実、抗酸化作用を持つビタミンEをLECラットに投与することにより肝障害の発症が抑制された。
溶融塩を用いた有機塩素化合物の完全無排気型の処理

溶融塩中における気液反応の動体解析これまでの分解処理における接触時間は、0.1秒程度であったが、接触時間を1秒程度とすることによってワンスルーの分解試験においても99%以上の高い分解率が得られた。ダイオキシン類についても溶融塩への吹き込み深さや溶融塩中での気泡径が、重要な因子であることを平成11年度の実績としてすでに報告している。しかしながら、常温では溶融塩の物性を模擬することができないだけでなく、特に高温では反応性に富むため溶融塩中における気液反応の動体解析は困難を極める。平成12年度では、高温の溶融塩中における気液反応の動体解析を行うための新たな手法に着手し、高温融体中での気泡の動体解析を行うことによって厳密な接触時間、反応面積を決定することができた。このことにより、CFC類の反応速度はその濃度に対し一次の速度式に従うことが明らかとなった。有機塩素化合物の分解処理申請者らは、これまで四塩化炭素、トリハロメタンなどのハロカーボン類、CFC-11、CFC-12などCFC類、ニトロトルエンなどのニトロ化合物、クロロベンゼン類、焼却飛灰中に含まれるダイオキシン類などの分解処理を試みた。これまでの分解処理における接触時間は、0.1秒程度であるため、GC/MSによりいくつかの副生成物を確認した。平成12年度においては、溶融塩との反応時間を1.0秒以上実現可能な反応手法に着手し、これまで循環方式による分解でなければ高い分解率が得られなかった化合物についてもワンスルーによる分解試験で99%以上の高い分解率を達成することができた。また、溶融塩中に鉄やニッケルイオンが数%混入することより飛躍的に反応速度が増大し、溶融塩中において安定した触媒作用があることも新たな知見として得られた。CFC類の分解処理水酸化ナトリウム混合溶融塩を密閉容器内に常圧で500700°Cに加熱し、CFC類を導入し分解を行った。この装置は、反応容器、冷却器、予熱・気化器、循環ポンプからなり、容器内の気体を不活性気体に置換後、気体を循環させる。溶融塩は水酸化ナトリウムを主成分とする混合溶融塩である。CFC類70gに対し水酸化ナトリウムを主成分とする無機塩を200g反応容器にとり、窒素で気体を置換した後、600°Cに加熱溶解させた。これらの有機塩素化合物は予熱して完全に気化させた後、水蒸気と混合して溶融塩中に圧力ー定(ほぼ大気圧)のもと導入した。反応容器内の気体はガスクロマトグラフィー(FID)で分析した。分解処理を行う際に水蒸気を添加しない場合は、いずれの化合物についても十分な分解率は得られなかった。特にCFC-12の分解率は3.3%と非常にわずかで、CFC-114などの他のCFC類への転化率も大きい。これに対し、CFC類を水蒸気とともに溶融塩中に導入すると、これらの化合物は速やかに分解した。反応容器内の気体を分析した結果、CFC類の濃度は検出限界以下となった。水蒸気の添加により高分解率が得られた理由として、溶融塩中において高温の水蒸気により加水分解を受け、塩素やフッ素が強アルカリに引き抜かれやすくなったと考えられる。CFC-12を分解処理後、溶融塩の分析を行った結果、C1^-、F^-、CO_3^<2->イオンとして塩中に捕捉されていることも確認できた。分解に伴って発生した凝縮水は、ヘキサンで抽出後に分析した結果、CFC類、その他の有機塩素化合物の濃度は検出限界以下であり、有機塩素化合物を実用レベルで安全に分解できることが明らかとなった。飛灰中のダイオキシン類処理焼却飛灰を約10g石英ボートに入れ、500°Cに加熱して飛灰中の有機塩素分を気化させ、窒素により混合溶融塩に導入した。溶融塩通過後のキャリアガスを冷却したトラップで処理し、有機塩素化合物を定量した。また飛灰中の有機塩素化合物を分析し、気化率を測定した。飛灰中の有機塩素化合物の分解率は、溶融塩の深さ(反応時間)、気泡径に依存する傾向があることが分かった。温度500°C、深さ100mmてはダイオキシン類の分解率は96%であり、溶融塩の深さを400mm程度とすれば目標とする分解率99.9%に到達するものと予想される。一方、2時間の加熱で最大98%程度のダイオキシン類が気化した。このため、飛灰あるいは土壌中からのダイオキシン類除去には、気化部を工夫し気化率を向上させることが今後の課題であると考えられる。

平成12年度では、高温の溶融塩中における気液反応の動体解析を行うための新たな手法に着手し、高温融体中での気泡の動体解析を行うことによって厳密な接触時間、反応面積を決定することができた。このことにより、CFC類の反応速度はその濃度に対し一次の速度式に従うことが明らかとなった。有機塩素化合物の分解処理申請者らは、これまで四塩化炭素、トリハロメタンなどのハロカーボン類、CFC-11、CFC-12などCFC類、ニトロトルエンなどのニトロ化合物、クロロベンゼン類、焼却飛灰中に含まれるダイオキシン類などの分解処理を試みた。これまでの分解処理における接触時間は、0.1秒程度であるため、GC/MSによりいくつかの副生成物を確認した。平成12年度においては、溶融塩との反応時間を1.0秒以上実現可能な反応手法に着手し、これまで循環方式による分解でなければ高い分解率が得られなかった化合物についてもワンスルーによる分解試験で99%以上の高い分解率を達成することができた。また、溶融塩中に鉄やニッケルイオンが数%混入することより飛躍的に反応速度が増大し、溶融塩中において安定した触媒作用があることも新たな知見として得られた。
モンゴルにおける家畜のピロプラズマ病の疫学に関する調査研究

1)ウマバベシア病の血清診断法の検討培養で得られたウマバベシア原虫を抗原とした間接蛍光抗体について、抗原の処理、蛍光標識抗ウマ抗体のロットを選択することにより、高い特異性を再現できることが判明した。また、B.equiのメロゾイト表面抗原(EMA-1)およびB.caballiのロプトリー抗原の組み換え抗原(BC48)を作成し、EUSA用抗原としての有用性を実験感染馬の血清を用いて検討した結果、高い特異性ならびに感度を示した。2)ウマバベシア原虫に対する抗体調査モンゴルの首都近郊及び西北のフブスグル県から得られた血清を間接蛍光抗体法およびELISA法により抗体調査を行ったところ、B.equlおよびB.caballiに対する抗体を高率に保有していることが判明した。3)モンゴルのウマから分離されたバベシア原虫の遺伝子解析モンゴルのウマ血液40標本から試験管培養法によりパペシア原虫の分離を試みたところ、33検体から、B.equi原虫が検出された。そのうち、21検体の分離株で連続培養が可能であった。さらに、メロゾイト表面抗原の1と2(EMA-1およびEMA-2)の遺伝子をPCRで増幅し、遺伝子配列を決定しUSDA株と比較したところ、それぞれDNAレベルで86%と89%、予想アミノ酸レベルで83%と85%の相同性が認められた。4)ウマバベシア原虫を媒介するダニの調査モンゴルではDermacentar nuttalli、D.silbarum、Hyalomma dromedariがウマに寄生するダニとして知られている。今回D.nuttalliにおけるB.equiのEMA-1およびB.caballiのBC48遺伝子の検出をnested PCR法により試みたところ、54サンプル中B.equiのEMA-1では全例、B.caballiのBC48では7例で遺伝子が認められた。5)モンゴルのウシにおけるバベシア原虫の調査モンゴルの西北のフブスグル県、北部のセレンゲ県から得られた血液から作製された、ギムザ染色した塗抹標本では、バベシア原虫は認められなかった。また、PCR法によるB.bovis遺伝子断片も検出されなかった。6)モンゴルのウシにおけるバベシア抗体の調査上記のサンプルの血清を間接蛍光抗体法により抗体の検出を行ったが、B.bovisおよびB.blgeminaに対する抗体は認められなかった。更に、B.bovisのロプトリー抗原の組み換え抗原を作製し、ELISA法による抗体検出を行ったが、抗体の検出は認められなかった。1.モンゴルのウマにおけるバベシア抗体の調査モンゴルの首都近郊及び西北のフブスグル県から得られた血清を間接蛍光抗体法により抗体調査を行ったところ、80%以上がB.equiおよびB.caballiに対する抗体を保有していることが判明した。2.リコンビナント抗原の作成B.equiのメロゾイト表面抗原およびB.caballiのロプトリー抗原の組み換え抗原を作成し、ELISA用抗原としての有用性を検討した。その結果、実験感染馬の血清では高い特異性ならびに感度を示した。

3.モンゴルウマからのバベシア原虫の検出モンゴルのウマ血液20標本から試験管培養法によりバベシア原虫の分離を試みたところ、17検体から、B.equi原虫が検出された。現在、アメリカで分離された原虫との違いの有無を検討するため、遺伝子解析を行っている。1.モンゴルのウマから分離されたバベシア原虫の遺伝子解析平成11年度にモンゴルのウマのサンプルから培養によりB.quiが分離され、そのMEA-1の塩基配列を決定した。アメリカ大陸で分離された原虫と比較のため、更に検体を増やして塩基配列を検討中である。2.モンゴルのウシにおけるバベシア抗体の調査モンゴルの西北のフブスグル県、北部のセレンゲ県から得られた血清を間接蛍光抗体法により抗体調査を行ったところ、B.bovisに対する抗体はほとんど認められなかった。引き続き、B.bigeminaに対する抗体調査を検討している。3.リコンビナント抗原の作製及びPCR法の検討ELISA法による抗体検出のため、B.bovisのロプトリー抗原の組み換え抗原を作製し、その有用性を検討した。また、B.bovis感染を診断するためのPCR法の適性条件が検討された。また、B.bigeminaについても同様に検討中である。