hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
好中球由来ペプチドの膵炎に対する影響と臨床的意義の検討

好中球から分泌されるヒト好中球ペプチド(Human neutrophil peptide; HNP)を高発現するマウスに,急性膵炎を発症させると,体重が減少,血清中の膵酵素が上昇した.HNPは膵炎を悪化させる可能性がある.一方,HNPを高発現するマウスに慢性膵炎を発症させると炎症性マーカーや線維化マーカーが減弱した.HNPは慢性膵炎に対しては保護的に作用する可能性がある.急性膵炎の重症化には好中球や血管内皮細胞の活性化やTNF-αなどの炎症性サイトカインが関連する。また、慢性膵炎は炎症の持続により膵臓の線維化を来す病態である。しかし、これらの膵炎の病態進展の分子機序は十分解明されていない。一方、我々は、好中球から分泌される抗菌ペプチドであるヒト好中球ペプチド(Human neutrophil peptide; HNP)に着目して研究を進めており、その過程で、潰瘍性大腸炎患者血中に上昇するHNP-1-3が疾患活動性と相関すること、HNP-1は潰瘍性大腸炎モデルマウスの病態を増悪させること、アルコール性及び非アルコール性肝炎の肝線維化を増悪させることを報告している。しかし、HNP-1-3と膵炎の病態進展との関連については明らかにされていない。本研究では、HNP-1-3が急性膵炎、慢性膵炎の病態進展に及ぼす影響を解明することを目的とする。本研究により、HNP-1-3が膵炎の疾患活動性マーカーとなる可能性、HNPの制御が病態進展阻害や炎症を鎮静化する可能性があり、最終的には膵炎患者における自然免疫と炎症進展の役割の解明や新しい治療薬の創出につながる可能性がある。急性膵炎患者が少なく,十分な血清サンプルを確保できていない.急性膵炎の重症化には好中球や血管内皮細胞の活性化やTNF-αなどの炎症性サイトカインが関連する。HNPのトランスジェニックマウスに急性膵炎を発症させるとHNPのトランスジェニックマウスでは体重が減少し,血清アミラーゼが上昇した.しかし病理学的に炎症の程度に差は出なかったことから更なる検討を行っている.またHNPトランスジェニックマウスの慢性膵炎モデルを作成し,検討も行っている.基礎研究に協力する大学院生が現在いないため,研究が遅れている.また膵炎患者が少ないことから研究する血清サンプルも不足している.急性膵炎の重症化には好中球や血管内皮細胞の活性化やTNF-αなどの炎症性サイトカインが関連する。HNPのトランスジェニックマウスに急性膵炎を発症させるとHNPのトランスジェニックマウスでは,体重が減少し,血清アミラーゼが上昇した.しかし病理学的に炎症の程度に差は出なかったことから更なる検討を行っている.またHNPトランスジェニックマウスの慢性膵炎モデルを作成し,検討も行っている.好中球から分泌されるヒト好中球ペプチド(Human neutrophil peptide; HNP)を高発現するマウスに,急性膵炎を発症させると,体重が減少,血清中の膵酵素が上昇した.HNPは膵炎を悪化させる可能性がある.一方,HNPを高発現するマウスに慢性膵炎を発症させると炎症性マーカーや線維化マーカーが減弱した.

HNPは慢性膵炎に対しては保護的に作用する可能性がある.引き続き急性膵炎動物モデルに対するHNP-1の影響を検討する.また急性膵炎患者の血清をストックし,血清HNP値と治療経過と比較していく.引き続き急性及び慢性膵炎動物モデルに対するHNP-1の作用を確認する.また膵炎患者の募集を行っていく.膵
ヘリコバクターピロリcag pathogenicity islandの機能解析

我々はこれまで、H.pyloriが胃粘膜上皮細胞に接着すると、cag pathogenicity island内にある4型分泌装置を介してエフェクターであるCagAがH.pyloriから胃粘膜上皮細胞内へと注入されることを明らかにし、上皮細胞内に注入されたCagAは上皮内でチロシンリン酸化を受け、チロシンリン酸化されたCagAが、細胞の増殖や分化に重要な役割を担うSrc homology phosphatase-2(SHP-2)と結合することを報告してきた。今回、CagAによつて脱制御されたSHP-2がRas非依存的にErk MAPキナーゼの持続的活性化を引き起こすことが認められた。Erkの持続活性化は細胞の運動性ならびに細胞周期制御に重要な役割を果たすことが知られており、CagA-SHP-2複合体によるErkの持続的活性化は異常増殖シグナル生成に関与することが推察される。また、CagAにより活性化されたSHP-2が直接脱リン酸化する細胞内基質分子としてfocal adhesion kinase (FAK)が同定された。FAKは細胞-基質間相互作用の基盤となる細胞接着班を制御することにより、細胞運動を制御する。SHP-2はFAKのキナーゼドメイン活性化ループ内に存在するチロシンリン酸化部位を脱リン酸化し、FAKキナーゼ活性を抑制する。FAKの活性低下に伴い細胞接着斑の新生が抑制され、細胞-基質間相互作用の低下による細胞運動能の増大が引き起こされる。一方、CagAはチロシンリン酸化非依存的にPAR1/MARKキナーゼと結合し、PAR1キナーゼ活性は低下し、結果としてPAR1は細胞膜から遊離し、極性や細胞間結合が損なわれることも示された。
リハビリテーション評価のための痙性の臨床的測定法の開発

痙性(spasticity)とは,脳血管障害片麻痺患者などにおいて認められる筋緊張の亢進した状態であり,上肢であれば屈筋群の痙性によって,肘関節の屈曲,前腕の回内,手指の屈曲などの肢位をとりやすく,下肢であれば,足関節の底屈・内反の肢位をとりやすい.そして,これらの痙性や随意性の低下などの機能障害によって,食事動作や歩行動作などの日常生活動作が障害される.痙性の臨床的な評価法としては,一般的に徒手による他動的伸張に対する抵抗を検者が主観的に感じ取って順序尺度に分類するModified Ashworth Scaleなどが用いられている.しかし,このような主観的な評価法では,痙性の質的・量的な特性を客観的に解析することが困難であるとともに,再現性に関しても低いため,物理療法や運動療法による痙性の変化を科学的に検証することが困難である.そこで,本研究では,臨床場面において痙性の特性を客観的に測定することができる簡易的痙性測定装置を開発し,臨床応用の可能性を検討することを目的とした.簡易的痙性測定装置は,圧ひずみセンサーを装着したプレートと固定用ベルト,そして,アナログ出力から構成した.痙性の測定方法は,検者の手掌面にベルトでプレートを装着し,次に,プレートを被検者の前腕遠位部にあて,他動的に低速,中速,高速で肘関節を屈伸した時の抗力をアナログ信号で導出することによって実施した.導出したアナログ信号は,サンプリング周波数1kHzでパーソナルコンピュータに取り込み,多用途生体情報解析プログラム(キッセイコムテック製,BIMUTAS II)を用いて解析を実施した.その結果,本測定装置を用いた解析法により,他動的伸張刺激に対する抗力の特性を量的な振幅値と,質的な波形特性の両面から解析することができたため,脳血管障害片麻痺患者を対象とした痙性の簡易的な臨床評価法の1つとして,有用であることが示唆された.痙性(spasticity)とは,脳血管障害片麻痺患者などにおいて認められる筋緊張の亢進した状態であり,上肢であれば屈筋群の痙性によって,肘関節の屈曲,前腕の回内,手指の屈曲などの肢位をとりやすく,下肢であれば,足関節の底屈・内反の肢位をとりやすい.そして,これらの痙性や随意性の低下などの機能障害によって,食事動作や歩行動作などの日常生活動作が障害される.痙性の臨床的な評価法としては,一般的に徒手による他動的伸張に対する抵抗を検者が主観的に感じ取って順序尺度に分類するModified Ashworth Scaleなどが用いられている.しかし,このような主観的な評価法では,痙性の質的・量的な特性を客観的に解析することが困難であるとともに,再現性に関しても低いため,物理療法や運動療法による痙性の変化を科学的に検証することが困難である.そこで,本研究では,臨床場面において痙性の特性を客観的に測定することができる簡易的痙性測定装置を開発し,臨床応用の可能性を検討することを目的とした.簡易的痙性測定装置は,圧ひずみセンサーを装着したプレートと固定用ベルト,そして,アナログ出力から構成した.痙性の測定方法は,検者の手掌面にベルトでプレートを装着し,次に,プレートを被検者の前腕遠位部にあて,他動的に低速,中速,高速で肘関節を屈伸した時の抗力をアナログ信号で導出することによって実施した.導出したアナログ信号は,サンプリング周波数1kHzでパーソナルコンピュータに取り込み,多用途生体情報解析プログラム(キッセイコムテック製,BIMUTAS II)を用いて解析を実施した.その結果,本測定装置を用いた解析法により,他動的伸張刺激に対する抗力の特性を量的な振幅値と,質的な波形特性の両面から解析することができたため,脳血管障害片麻痺患者を対象とした痙性の簡易的な臨床評価法の1つとして,有用であることが示唆された.張力測定装置の開発について徒手的な他動的伸張時の筋張力測定を行うために,検者の手掌部に直接装着できる圧ひずみセンサーを用いた筋張力測定装置を開発した.当初,手袋型の計測装置の手掌面に剛性部を作り,同部分の45ヶ所に歪み計を設置する方法を試みた.しかしながらこの方法では,計測面の接触性に優れるものの,複数の動歪み測定器が必要であり,しかも手掌面に加わる力を合成して,筋カに変換するための計測回路が必要となり,安定した筋力測定には限界があった.そこで,手掌面に収容できる2枚の剛体の間に4個の小型ロードセルを設置し,それらの出力を演算回路で合成した出力を1台の動歪み計で計測し,較正値をもとに直接筋力を計測できるものとした.完成した計測端子は,外寸95×40×15mmで,筋カ測定時の検者手掌部への固定性は良好である.また測定値の直線性は020kgで良好であった.現在,健常者を対象とし,肘関節屈筋および伸筋に対する徒手による他動的伸張を行い,伸張時の痙性筋の抗力を張力測定装置から,伸張反射性筋放電を現有の筋電計から,関節運動変化を角度・加速度計からそれぞれ導出して計測しているが,安定した計測が可能になっている.

次年度は片麻痺を中心とした痙性麻痺を有する対象群の計測を開始する予定である痙縮は,相動性筋伸張反射の病的亢進状態として定義され,臨床的には徒手的筋伸張検査法により経験的な分類基準で測定されてきた.しかし普及している尺度は順序尺度であるAshworth Scaleとその変法に限られ,中枢障害の多様な痙縮を測定するためには分類階級が粗く,個別症例の痙縮程度の測定には有用ではない.そこで臨床的に有用な痙縮の測定法を開発する目的で以下の研究を行った.片麻痺患者24例の肘関節屈伸運動について徒手的筋伸張検査を実施し,その過程で,(1)上腕筋の筋活動(患者と検者の上腕二頭筋と上腕三頭筋の筋電図),(2)肘関節運動(患者と検者に電気角度計を設置),(3)筋伸張反射抗力(患者と検者との間に新たに開発した筋力計を設置),(4)関節運動速度変化(患者の手関節部に加速度計を設置)を測定し,測定結果をデータ分析システムにて検討し,さらに等速性筋力測定装置による相動性筋伸張刺激法による検査と比較検討し,以下の結果を得た.1.徒手的筋伸張検査による筋伸張反射活動は(1)定型的伸張反射型,(2)類随意同相性運動性,(3)二者の合併型,(4)その他の4型に分類可能であった.2.断続的な相動性筋伸張刺激を徒手的に加えた時の筋活動の常同性は,検者の随意活動に比し患者の反射活動の方が明らかに強く,検者が意識下で何らかの運動制御を行っていると推定された.3.等速性筋力測定装置による相動性筋伸張刺激法と徒手的検査法を比較すると,筋伸張反射活動は角速度が同一であるにもかかわらず明らかに後者の刺激による方が高度であり,徒手による筋伸張刺激時に検者が筋伸張反射に対し何らかの交互的制御を行っていると推定された.以上より今後の研究課題として徒手的筋伸張検査時の検者の筋感覚のさらなる検討が示唆された.
ブファリンの標的Na,K-ATPase阻害と分化や細胞死の誘導機構解明と抗癌剤開発

生薬センソ成分のブファリンは、細胞膜表面に普遍的に存在するNa^+,K^+-ATPaseの阻害を介して、ヒト白血病細胞株に対し分化やアポトーシスを誘導すると考えられている。本研究は、ブファリンの作用がMAKPカスケードを活性化すること、種々のプロトオンコジーンを変動させることなどの知見が、Na^+,K^+-ATPase阻害とどのように関連するかをさらに明確にし、ブファリンをリ-ド化合物とする新たな作用機構をもつ制ガン剤の開発を目的とする。1)ブファリンによるヒト単球性白血病細胞THP-1の分化誘導過程において、細胞周期変化とCD11bやCD14などの分化マーカー発現を、フローサイトメトリーにより解析した。ブファリンの濃度依存的に細胞はG2/M期で停止した。さらにG2/M期にある細胞で分化マーカー発現が強く認められた。2)ブファリンはウシ大動脈血管内皮細胞の増殖をG2/M期で停止させ、管空形成を阻害した。3)HL60細胞のトポイソメラーゼIIはブファリンにより18時間以内に著しく減少した。これに伴い、DNA断片化の経時的な増加が認められた。免疫組織学的検討により、カゼインキナーゼ2はブファリン処置後直ちに核内へ移行することを認めた。この際カゼインキナーゼ2は更に、トポイソメラーゼIIとの複合体を形成することを明らかにした。4)単独では分化誘導作用を示さない濃度において、ブファリンと他のブファジエノリドとの併用効果を検討した。ブファリンとシノブファギンあるいはレジブフォゲニンとの併用により、細胞毒性を示すことなく選択的に分化を誘導した。
学生の安全技術と特許マインドの向上を目的とした商品改良演習の構築

本研究では,安全技術と特許マインドを身に付けた技術者を育成するために,以前に開発した商品改良演習(世の中に流通している安全配慮に欠けた商品に対して,学生がグループ単位でリスクアセスメントを実施して,商品の安全性を高める演習)に「特許教育」,「特許考案の支援」,「特許出願のアドバイス」の3項目を組み込んだ新しい演習プログラムを構築し,本校専攻科機械・電子システム専攻の学生に試行した.担当教員と外部講師が連携しながら,各項目を効率的に実施した結果,幾つかのユニークな発明が考案された.また,アンケートを通して学生から良好な評価を得たことが確認された.昨年度に実施した「特許教育」「特許考案の支援(1特許検索端末配備,2設計援用システム配備)」の評価を進めた.試行後の学生のアンケートより,「特許申請できるアイデアの有効範囲について,良く理解できた.」,「特許を調べてみて,特許とはどういうものか具体的に理解できた.」,「3D-CADの使い方を学ぶことができた.」などの肯定的な意見が多くみられ,概ね良好の評価を得ることができた.また,学生の特許・知財に関する知識をさらに向上させるために,公共機関発行の特許関連教材や民間のe-learning教材を配備した.「特許考案の支援(3試作システムの配備)」を構築するためにラピッドプロトタイピング機器(3D-Printer)の導入を行い,設計援用システムとのリンクを行った.まず,研究代表者がラピッドプロトタイピング機器の販売元の研修を受講し,機器のセットアップ方法,使用方法等を習得し,その後,本校に導入された機器のセットアップを行い,設計援用システムであるパーソナルコンピュータとのリンクを行った.また,学生に対して,円滑な導入を行うための使用マニュアルや簡単な造形例題集の作成の検討を行った.特に,機器は精密であり危険な個所も存在するため,機器運用や製作指導方法において十分な検討が必要であることが判明した.さらに,高度な試作を希望する学生の製作指導や学生作業時の安全確保のため,本校実習工場付きの技術職員による試作サポート体制も整えた.本研究では,安全技術と特許マインドを身に付けた技術者を育成するために,以前に開発した商品改良演習(世の中に流通している安全配慮に欠けた商品に対して,学生がグループ単位でリスクアセスメントを実施して,商品の安全性を高める演習)に「特許教育」,「特許考案の支援」,「特許出願のアドバイス」の3項目を組み込んだ新しい演習プログラムを構築し,本校専攻科機械・電子システム専攻の学生に試行した.担当教員と外部講師が連携しながら,各項目を効率的に実施した結果,幾つかのユニークな発明が考案された.また,アンケートを通して学生から良好な評価を得たことが確認された.「特許教育」の構築:学生の特許マインド向上の動機付けを行う特許教育の構築を行った.まず,研究代表者は民間の特許取得教材を使用し,特許教育に関する知識を一層深めた.さらに,特許権取得に豊富な実績を持つ研究協力者の常深真一郎氏(元本校産学連携コーディネータ)と共に特許教育の内容の検討を行った.「特許考案の支援(1特許検索端末の配備)」の構築:学生の商品改良案が確実に特許取得に結びつくように,国内外の特許情報を学生が自由に閲覧できる環境を配備するとともに,利用ガイダンスの導入を行った.さらに学生の理解が深まるよう特許取得検索に関する演習問題を作成した.「特許考案の支援(2設計援用システムの配備)」の構築:学生の商品改良案の設計を援用するためにするために3次元CADソフトウェアが動作するパーソナルコンピュータシステムの導入を行い,システム本体や周辺機器のセットアップを行った.本校専攻科1年の学生に対して,以上の「特許計画」および「特許考案の支援12」を組み込んだ商品改良演習を模擬的に実施し,評価を行った.また,得られた研究成果を国内で開催された学会の学術講演会で報告した.本研究では,安全技術と特許マインドを身に付けた技術者を育成するために,以前に開発した商品改良演習(世の中に流通している安全配慮に欠けた商品に対して,学生がグループ単位でリスクアセスメントを実施して,商品の安全性を高めるもの)に(1)特許教育,(2)特許考案の支援,(3)特許出願のアドバイスの3項目を組み込んだ新しい演習プログラムを構築した.(1)特許教育:演習の冒頭で学生に特許権や特許制度等の基礎的な知識を習得させ,さらに特許創出のプロセスや取得のための申請方法等を理解させる授業を開発した.(2)特許考案の支援:学生は考案した発明(商品改良案)が効率的に具現化されるように,3次元CADソフトウェアおよび3次元プリンタから構成される試作支援システムを導入した.CADソフトウェアについては,学生が短時間で使用方法を習得できるように,使用マニュアルと設計例題集を作成・導入した.(3)特許出願のアドバイス:特許出願用書類については学生の労力と時間的な制約を考慮し,「パテントコンテスト」で用いられている発明提出書を採用した.さらに,学生が教員や(特許権取得に豊富な経験を持つ)外部講師のアドバイスを受けながら書類を仕上げる体制を整えた.以上の項目を組み込んだ演習を本校専攻科機械・電子システム工学専攻の学生6名に対して試行した.担当教員と外部講師が連携しながら,特許教育,特許考案の支援,特許出願のアドバイス等の項目を効率的に実施した結果,幾つかのユニークな発明が考案された.また,アンケートを通して学生から良好な評価を得たことが確認できた.ロボティクス概ね順調に進んでいるが,学生に導入したラピッドプロトタイピング機器を故障なく,安全に使用してもらうため,学生の製作指導や安全確保を十分検討する必要があった.

そのため,使用マニュアルや造形例題集の作成の完成には至らず,また,学生による評価や成果発表を実施することができなかった.次年度の計画の中で行いたいと考える.概ね計画通りに研究が進んでいる.本校学生に対して模擬演習を行った後,アンケートを実施し,その結果を元に,研究代表者と学生による演習の評価を行った.時間の都合上,演習全体の評価は行えたが,「特許教育」「特許考案の支援12」等,個別の十分な評価は行えていない.次年度の計画の中で行いたいと考える.引き続き,導入したラピッドプロトタイピング機器の使用方法を十分検討し,使用マニュアルや造形例題集の作成の完成を目指すとともに,本校専攻科生に模擬演習や使用機器の評価を依頼する.研究代表者と研究協力者が共同で,学生から提出された成果報告書に基づいて特許や実用新案の可能性を検討し,具体的な出願の助言を行うための方法を構築する.また,特許願書類(特許請求の範囲,明細書,図面,要約書)の作成の指導方法について試行する.さらに学生の希望に応じて,パテントコンテスト等の出場についてのサポート体制も整える.さらに,本研究の成果を発表したいと考える.引き続き「特許教育」「特許考案の支援12」の評価を行う.さらに,「特許考案の支援(3試作システムの配備)」を構築するためにラピッドプロトタイピングの導入を行い,設計援用システムとのリンクを行う.また,入門者のための使用マニュアルや簡単な造形例題集を作成し円滑な導入を図る.さらに,高度な試作を希望する学生のために,本校実習工場付きの技術職員による試作サポート体制も整える.研究代表者と研究協力者が共同で,学生から提出された成果報告書に基づいて特許や実用新案の可能性を検討し,具体的な出願の助言を行うための方法を構築する.また,特許願書類(特許請求の範囲,明細書,図面,要約書)の作成の指導方法について試行する.さらに学生の希望に応じて,パテントコンテスト等の出場についてのサポート体制も整える.使用マニュアルや造形例題集の検討に時間を要し,模擬授業に対する学生評価や成果発表が実施できなかったため.本校専攻科5名へ模擬授業を実施し,学生による評価をまとめる.さらに次年度の成果を含めた成果の発表を行う.学生の商品改良案の試作支援のためにラピッドプロトタイピングを導入する.また,引き続き,特許権取得に豊富な経験を持ち,元本校産学連携コーディネータの常深真一郎氏を研究協力者として作業を進める.また,各研究課題において本校専攻科生に模擬演習や使用機器の評価を依頼する.さらに,得られた研究成果を学術講演会で報告する.
手話言語版MLAT(現代言語適性テスト)の開発と活用

日本では第二言語習得理論に基づいた日本手話習得・通訳養成カリキュラムの開発が遅れている。そこで本研究では学習者の手話言語適性(外国語学習の成功を予測する認知的能力)を把握し,適正プロフィールを活かした効果的な日本手話習得指導につなげるために,手話言語版MLAT(現代言語適性テスト)の開発とその活用について検討する。学習者個々の言語適性を把握し,適性に合った指導方法を検討することは,手話言語習得・通訳養成の指導カリキュラムの整備や指導法の開発に大きな示唆を与え,また,視覚/聴覚モダリティの相違を超えた言語適性の本質とは何か,第二言語/外国語習得の本質とは何か,について迫ることができる。
不確実性下における雇われ兼業農家の労働供給に関する研究

農業および非農業への労働供給が、農業部門の不確実性への農家の応対として決定されているのではないかという仮説に基づき、理論モデルおよび計量モデルの検討、データの収集・整理等を行った。理論モデルに関しては、まず、不確実性を含まない雇われ兼業農家のモデル(中嶋、1986;辻井、1992等)と、不確実性下の企業モデル(Sandmo,1971等)をベースにし、不確実性下の雇われ兼業農家モデルを構築した。そして、雇われ兼業農家が、農業および非農業(雇われ兼業)部門というリスクの程度が異なる二つの部門から収益を得る点に注目し、資産選択の理論(Sandmo,1969;Diamond and Stiglitz,1974等)を応用して、農業部門と非農業部門との間の収益におけるリスクの差がそれぞれの部門への労働供給に影響するようなモデルを検討した。このモデルから、資産選択の分析に用いられているCapital Asset Pricing Mbdel等の計量モデルを構築して計量分析を行う予定であるが、計量モデルにうまくつながる理論モデルの構築の点が未解決になっている。計量分析に用いるデータに関しては、竹歳(1993)で用いた、日本の農家経済調査の都道府県別クロスセクショナル・タイムシリーズ・データを再整理するとともに、不十分な部分を補った。また、このような集計データでは不十分な推計結果しか得られないことも予想されるため、タイおよびマレーシアにおける農業調査の戸別データを入手し、分析に耐えるよう整理中である。使用する計量モデルによっては、このデータを用いることも考えている。
小児期発症の難治てんかんにおけるてんかん原性形成機序の解明

小児期に発症する難治てんかん患者において、てんかん原性の形成機序を解明するため、剖検脳での免疫組織化学的解析と患者髄液での代謝物解析を並行して行い、West症候群の大脳皮質での電位依存性ナトリウムチャンネル発現とオートファジーの異常、ならびに乳児けいれんでの神経アミノ酸やモノアミンの代謝異常を明らかにした。さらに日本での発生頻度が増加している亜急性のてんかん性脳症に関して、患者血清を用いた対照脳での免疫組織化学染色により新規の抗神経抗体のスクリーニングを進め、難治けいれん発症との関連を追究した。これらの研究成果は難治てんかんに対する新規治療法開発に有用と考えられる。小児期発症難治てんかんのてんかん原性の形成機序を解明し、新規治療法の開発に寄与することを目的に、病理材料での組織化学的解析と患者髄液での解析を並行して進めた。(1).剖検脳でのイオンチャンネルに関する免疫組織化学的解析: West症候群(WS)で発症しLennox症候群(LGS)に移行した仮死後遺症(HIE)と滑脳症の大脳辺縁系で市販の抗体を用いてNav1.1表出を検討し、2012年10月第46回日本てんかん学会で発表した。さらに進行性ミオクローヌスてんかん(PME)の病因として重要な歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症(DRPLA)の剖検例でNav1.1表出を検討したが、PME既往との関係を見出せなかった。以前、DRPLAでPME発症での関与を解明した酸化ストレスとの関連で注目されているautophagyに関する解析を開始した。(2). WS乳児での髄液中アセチルコリン、神経ペプチド、モノアミン代謝物のHPLC測定結果をまとめた英文論文がISRN Neurologyで出版された。(3).亜急性または再発・再燃を示すてんかん性脳症の病態解明:急性期・回復期の患者(17例)血清による対照脳切片での平成24年度の免疫組織化学的解析結果をオーストラリアで開催された国際小児神経学会議(第12回)・アジア大洋州小児神経学会議(第11回)合同会議で発表した。免疫組織化学染色を17例から30例に増やして進め、加えて市販の脳抗原添加メンブレインでのimmunoblottingも行った。免疫染色陽性の19例中7例で陽性バンドを認めた。さらに免疫染色結果の一部をBrain Dev(Epub)に発表した。小児期発症難治てんかんの病態を解明し治療法開発に寄与することを目的に、剖検脳での組織染色と患者髄液での解析を並行して進めた。(1).剖検脳でのautophagyに関する免疫組織化学的解析: West症候群(WS)の既往を有する仮死後遺症と滑脳症の大脳、ならびに進行性ミオクローヌスてんかんの病因として重要な歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症(DRPLA)の小脳で、パラフィン固定ヒト脳におけるautophagyマーカーLC3・p62に関する免疫組織化学的解析を行い、2013年10月11日第46回日本てんかん学会で口演発表した。WS既往例の大脳では、LC3染色では異常はなかったが、約半数で病因とは無関係にp62陽性astrocyte増加を認めた。DRPLAの小脳では、Purkinje細胞のLC3染色性低下とp62陽性astrocyteの増加を見出した。(2).髄液での神経ペプチド・神経伝達物質の代謝研究:乳児けいれんのてんかん原性を解明するため、乳児けいれん患者の髄液においてアミノ酸とモノアミン代謝物をHPLC測定により定量した。予後良好な胃腸炎関連けいれん患者における抑制性・興奮性アミノ酸の上昇と、モノアミン代謝物の低下を見出し、2014年4月12日第117回日本小児科学会で口演発表した(現在、英文学会誌に論文を投稿中)。(3).亜急性または再発・再燃を示すてんかん性脳症の病態解明: 80例前後の患者血清・髄液において、ラット・ヒト脳切片ならびにラット培養細胞での免疫組織化学染色によるスクリーニング、細胞内抗原に関するImmunoblot、細胞表面抗原に関するCellbased assay、ELISAを組み合わせた網羅的解析を進め、約40%の症例で病態における抗神経抗体の関与を明らかにした。研究成果の一部をBrain Dev 2013;35(7):670-4に論文発表した。(1).剖検脳でのイオンチャンネルに関する免疫組織化学的解析: West症候群(WS)で発症しLennox症候群(LGS)に移行した仮死後遺症(HIE)と滑脳症、両症候群の既往を有さないHIE例、対照の4群の大脳辺縁系で市販の抗体を用いてNav1.1表出を検討した。

既往例、疾患対照で、対照と同様に、大脳皮質にNav1.1陽性の神経細胞が少数確認された(2012年10月第46回日本てんかん学会で発表予定)。一方、海馬、扁桃体での表出は一部の症例で障害されていた。(2).難治てんかんにおける神経ペプチド・モノアミン神経異常の解明: WS乳児例と対照乳児において、髄液中のアセチルコリン、神経ペプチド、モノアミン代謝物を比較・測定したところ、アセチルコリン値の上昇、抑制性神経ペプチドのグリシン・GABAならびにセロトニン代謝物(5-HIAA)の値の低下を見出した(ISRN Neurology投稿中)。(3).亜急性または再発・再燃を示すてんかん性脳症の病態解明:精神症状・不随意運動が持続する自己免疫性脳炎において、急性期・回復期の患者血清による脳切片での免疫組織化学染色を行い、症状と関連する脳部位と結合する新規抗神経抗体のスクリーニングを進めた。17例での解析結果をまとめ、"Pathology: New Research"に発表した。10例で精神症状、不随意運動に関連して大脳皮質、大脳基底核・視床に陽性所見がみられた。さらにてんかん性脳症、辺縁系脳炎に関する症例報告を2編、Brain Dev(Epub)に発表した。本研究は、従前の基盤研究(C)(2) 145707929「進行性ミオクローヌスてんかん発症機構に関する神経病理学的検討」、17591129「難治性てんかんの治療法開発のための神経病理学的検討」、20591238「急性・慢性の小児神経疾患における難治性てんかん形成機序の解明」での研究成果を発展させ、病理材料での組織化学的解析と患者髄液での解析を並行して進めることにより、小児期発症難治てんかんのてんかん原性の形成機序を解明し新規治療法の開発に寄与するため、企画された。てんかん原性におけるナトリウムチャンネルの関与を明らかにするため、剖検脳でのイオンチャンネルに関する免疫組織化学的解析を行い、難治てんかん(West症候群、Lennox-Gastaut症候群、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症)の既往を有する剖検脳の大脳辺縁系でナトリウムチャンネルの表出異常を、世界で初めて明らかにし、難治てんかんでのイオンチャンネル発現異常の可能性を指摘した。さらに酸化ストレスとの関連でautophagyに関する解析を開始した。同時にWest症候群を含む難治けいれん患者の髄液でHPLCによるアセチルコリン、神経ペプチド、モノアミン代謝物の測定も進めている。一方、急性脳炎・脳症での難治てんかん発症機序を解明し、てんかん発作難治化の予防に貢献するため、日本で数多く報告されている亜急性のてんかん性脳症において、患者血清による抗神経抗体スクリーニングと髄液をヒト対照脳での免疫組織化学染色とimmunoblottingを用いて進め、症例報告を英文論文として発表した。本研究は、従前の基盤研究(C)(2) 145707929「進行性ミオクローヌスてんかん発症機構に関する神経病理学的検討」、17591129
次世代高速シークエンサーと高密度マイクロアレイを用いた遺伝性疾患病 因遺伝子の同定

新しい遺伝子解析機器である次世代高速シークエンサーと高密度マイクロアレイを用いて、これまで原因不明であった遺伝性疾患の病因遺伝子を探索した。その結果、筋萎縮や筋力低下をきたすミオパチーの病因遺伝子を明らかにすることができた。また、先天奇形症候群や内分泌疾患でもこれまでに知られていない新しい病因遺伝子を解明した。以上の成果は、各疾患の病態解明に役立つとともに、将来的には治療法の開発に有用と考えられる。本研究ではこれまでに病因遺伝子が同定されていない遺伝性疾患を有する家系を対象として、次世代高速シークエンサーと高密度マイクロアレイを用いた原因遺伝子の同定を実施し、病因遺伝子変異を同定しようとするものである。本年度は、(1)各検体におけるエクソン領域の捕捉・濃縮を行ったSureSelect Human All Exon Kit (アジレント社)を用いて、各検体のゲノムDNAから約38 Mbのエクソン領域(ヒトゲノム領域の約1%)を捕捉・濃縮した。(2)上記で得られた検体について、次世代高速シークエンサーを用いた解析をおこない、全エクソンの塩基配列情報を得た。(3)エクソームシークエンス結果の情報処理による解析を実施した。まず、東北大学医学部の情報処理専門家の協力を得て、この部分の情報解析パイプラインの構築をおこなった。次に、1アミノ酸置換を伴う塩基置換、2エクソン/イントロン境界のスプライス部位に存在する塩基置換、3翻訳領域に存在する欠失・挿入を抽出したのち、dbSNPなどのデータベースに存在する遺伝子多型をフィルターして取り除くとともに、家系内での連鎖を検討した。(4)得られた候補遺伝子変異についてはキャピラリーシークエンサーによる遺伝子変異の再確認をおこなった。そのうち糸球体腎炎家系に関しては倫理員会の承認を得て、家族のうち6名(罹患者3名、非罹患者3名)のDNA検体の解析を実施し、3名の罹患者でヘテロ接合体、3名の非罹患者でホモ接合体を示す42個の候補遺伝子変異を同定した。このなかで、その遺伝子発現や1000人ゲノムの情報から候補遺伝子を更に絞り込み、キャピラリー・シークエンサーによる変異の確定を行った。(2)上記で得られた検体について、次世代高速シークエンサー(SOLiDTM4 System、アプライドバイオシステムズ社)を用いた解析をおこない、全エクソンの塩基配列情報を得た。次に、(1)アミノ酸置換を伴う塩基置換、(2)エクソン/イントロン境界のスプライス部位に存在する塩基置換、(3)翻訳領域に存在する欠失・挿入を抽出したのち、dbSNPなどのデータベースに存在する遺伝子多型をフィルターして取り除くとともに、家系内での連鎖を検討した。(4)得られた候補遺伝子変異についてはキャピラリーシークエンサーによる遺伝子変異の再確認をおこなっている。次世代シークエンサーの故障(結露、ソレノイドバブル動作不良など)のため、解析作業にやや遅れが生じたが、研究全体としてはほぼ順調に進展している。1.次世代高速シークエンサーによる解析。前年度に引き続き解析を続行する。2.エクソームシークエンス結果の情報処理による解析。前年度に引き続き、必要に応じてフィルター条件を変えて候補遺伝子探索をおこなう。3.病因候補遺伝子の機能解析。エクソームシークエンスとマイクロアレイによって絞り込まれた病因候補遺伝子について、その遺伝子に関して過去に報告されている知見を参考に、遺伝子機能の探索と遺伝子変異による機能変化を解析する。候補遺伝子によって、生理学的な手法による実験、免疫学的な手法による実験など、現時点ではどのような手法が必要となるかは予測できないため、その都度、当該分野の専門家の協力を得ながら解析を進めていく。研究全体としてはほぼ順調に進展しており、当初の計画通りの研究費使用を行う予定である。
糖・脂質代謝研究に有用なin vitro小腸モデルの構築と臓器間相互作用の解析

本研究は糖・脂質代謝研究に有用な「真に使えるin vitro小腸モデル」の作成とその有用性の検証を目的としており,昨年までに小腸モデル細胞として汎用されているヒト結腸癌由来Caco-2細胞および特殊な多孔質膜上で細胞を生体内に近い立体的な状態で培養できる3次元培養容器を用いて実験モデルを構築した.本年はこの実験モデルがどの程度小腸を模倣できているかを調べた.Apical AccessとBasolateral Accessのグルタミン濃度を測定したところ,コンフルエントに達してから18日程度でApical Accessのグルタミン消費がほとんど起こらなくなることを確認した.一方でグルコース代謝に関してはApical AccessとBasolateral Accessでほとんど差は見られなかった.次にオレイン酸(終濃度0.4mM)とタウロコール酸(終濃度0.5mM)を混ぜ,Apical Accessに添加して脂質負荷を12時間行ったところ,Basolateral Accessにカイロミクロン,VLDL, LDL, HDLなどのリポタンパク質が分泌されることを確認した.以上のように小腸の機能を完全には再現できていないものの,本モデルが脂質代謝研究に有用であることが明らかとなった.次にホスファチジン酸ホスファターゼで脂質代謝調節因子としても働くlipinファミリー(lipin-1, lipin-2, lipin-3)の遺伝子発現変化をリアルタイムPCRを用いて解析したところ,Caco-2の分化にともないlipin-2の発現が上昇することが分かった.また,脂質負荷による実験ではこれらの遺伝子発現量に変化は見られなかった.現在,Caco-2細胞のBasolateral Access側にヒト肝癌由来HepG2細胞を共培養し,Apical Accessに脂質負荷を行った際の脂質代謝関連遺伝子の発現量変化について解析を進めている小腸は消化・吸収を司る臓器としてエネルギー代謝のフィートステップを担っており,生体の代謝機能に重要な役割を果たすと考えられる.しかしながらこれまで良い小腸実験モデルは存在しなかったことから,本研究は糖・脂質代謝研究に有用な「真に使えるin vitro小腸モデル」の作成とその有用性の検証を目的としている.本年度は小腸モデル細胞として汎用されているヒト結腸癌由来Caco-2細胞と,特殊な多孔質膜上で細胞を生体内に近い立体的な状態で培養できる3次元養容器を用いて実験モデルの構築を試みた.0.2×10^6個のCaco-2細胞を直径30mmの上記培養容器に播種し,1, 4, 7, 11, 14, 16, 18日後の細胞数をWST-1アッセイで確認した.この結果,7日後には吸光度がプラトーに達し,16日後までほぼ一定の値を示した.この間,細胞塊や浮いている細胞などは観察されず,数日間に渡り安定したモノレイヤーを形成することが示唆された.小腸粘膜細胞はアミノ酸の一種であるグルタミンを主要なエルギー源として利用し,消化された単糖類は小腸粘膜内ではほとんど使われることなく門脈へと運ばれることが分かっている.現在,この性質を利用して3次元培養を行った際のApical AccessとBasolateral Accessのグルコース濃度およびグルタミン濃度をそれぞれ専用キットを用いて測定を進めており,小腸の機能を模倣できるかを調べている.今後本モデルを応用し,ヒト肝癌由来Hep G2細胞などを共培養することにより,代謝臓器間連携における小腸の役割について解明を試みる.本研究は糖・脂質代謝研究に有用な「真に使えるin vitro小腸モデル」の作成とその有用性の検証を目的としており,昨年までに小腸モデル細胞として汎用されているヒト結腸癌由来Caco-2細胞および特殊な多孔質膜上で細胞を生体内に近い立体的な状態で培養できる3次元培養容器を用いて実験モデルを構築した.本年はこの実験モデルがどの程度小腸を模倣できているかを調べた.Apical AccessとBasolateral Accessのグルタミン濃度を測定したところ,コンフルエントに達してから18日程度でApical Accessのグルタミン消費がほとんど起こらなくなることを確認した.一方でグルコース代謝に関してはApical AccessとBasolateral Accessでほとんど差は見られなかった.次にオレイン酸(終濃度0.4mM)とタウロコール酸(終濃度0.5mM)を混ぜ,Apical Accessに添加して脂質負荷を12時間行ったところ,Basolateral Accessにカイロミクロン,VLDL, LDL, HDLなどのリポタンパク質が分泌されることを確認した.以上のように小腸の機能を完全には再現できていないものの,本モデルが脂質代謝研究に有用であることが明らかとなった.次にホスファチジン酸ホスファターゼで脂質代謝調節因子としても働くlipinファミリー(lipin-1, lipin-2, lipin-3)の遺伝子発現変化をリアルタイムPCRを用いて解析したところ,Caco-2の分化にともないlipin-2の発現が上昇することが分かった.また,脂質負荷による実験ではこれらの遺伝子発現量に変化は見られなかった.現在,Caco-2細胞のBasolateral Access側にヒト肝癌由来HepG2細胞を共培養し,Apical Accessに脂質負荷を行った際の脂質代謝関連遺伝子の発現量変化について解析を進めている
ベトナム・中国二国間関係の下で揺れ動くベトナム華人に関する歴史的研究

2018年度は、7月にライチョウ省トゥアチュア県で、サファン人の居住地を訪問、9月には大航海時代にハノイの外港として繁栄していたフンイエン省フォーヒエンの町を訪ね、さらにクアンニン省のクアンラン島で、現在はベトナム人に同化している元客家の人々について、資料収集とインタビュー調査を実施した。また12月にはメコンデルタをまわって華人と明郷について、3月にハノイの旧市街と西湖周辺でベトナム化した中国系の人々について調査した。まずサファン人は、華人のサブグループとして民族分類表には載っているものの、先行研究がなく、どういう人たちなのか全く不明であったが、かれらが雲南省から100年以上前に移住してきて、現在も母語の雲南語を維持し、モン族優勢の地域で村における地位は低いものの、勉学に熱心で学歴は比較的高く都会へ出て大学へ行っている若者もいることがわかった。一方他地域の中国系集団と同様、1970年代末の中越関係悪化の影響を受けて中国に戻った人も多く、最近はそのネットワークを利用した雲南への出稼ぎも激増している状況であることなどが明らかになった。フォーヒエンでは、かつての町に残る中国系住民の建てた天后宮などを確認し、漢方薬を現在まで家業としている温家を訪問して一族の歴史の聞き取りを行い、フォーヒエンの華人街がベトナム化していく過程を把握した。中越国境に近いクアンラン島では漁民である華人(主に客家)がベトナム戦争に動員されて、戦略物資の重要な回路輸送に携わり(海のホーチミンルートの一端を担い)、中越の国家関係に翻弄されながらも、次第にベトナム化されてきている過程が明らかになった。メコンデルタの調査では、北部のような「エスニシティ」の差異は見えにくく、古くから人が居住する地域では混血があたりまえで、純粋な「〇〇人」は実は存在せず、言語も文化も大きく混淆している状況が明らかになった。7月のライチョウ省トゥアチュア県の調査では、出発の2日前にベトナム北部に洪水の被害が出て、山間部である調査地にたどり着けるかどうか危ぶまれ、急遽迂回路を探したり手間をとられたが、当日は水が少しひいて数時間前まで小舟に乗り換えなければ通れなかった地域が車で通行可能になっていたため安堵した。またトゥアチュア県は山間部の交通事情がかなり改善した現在のベトナムにおいても、丸二日がかりでようやくたどりつける山奥であり、トイレも家から出て歩いて行かねばならない1990年代のベトナムの田舎のような大変な地域であったが、ハノイ人文社会国家大学のチン教授の指示で、事前に村との調整をしてくれた二人の学生のおかげで、ベトナムの少数民族地域では通常不可能な民家宿泊ができ、どうにか調査を敢行できた。その他、今年度はハノイの中心部を除き、国境地域の調査ばかりで不慣れな地域が多かったが、研究分担者の協力も仰いで、概ね計画どおりの資料収集とインタビュー調査を実施することができた。ベトナムと中国の政治的関係に中国系住民が翻弄される状況をより多くのインタビューを重ねて具体化することができたことは収穫である。かつ、古い時代に中国から移住して現在は完全にベトナム人化している人々と、新しく移住してきた、あるいは同様に数百年前に移住しても、「華人」としてのアイデンティティを維持している人たちの違いも、何が要因なのか徐々にわかってきた。事例を集めるにしたがって、大きな歴史的な背景や政治情勢に加えて、それぞれのおかれた環境の地理的な違いや、個々人の職業や地位、ジェンダーの違いなども、同化の過程に細かな違いを生み出してきていることが明らかになりつつある。最終年度の2019年度は、8月にベトナム南中部のビントゥアン省・ニントゥアン省で1週間程度のフィールド調査を予定している。ビントゥアン省ソンマウは、北部中越国境でフランス植民地期に「ヌン自治国」を形成していたガイと呼ばれる客家系の人々が、1954年の南北分断時にサイゴンに渡り、その後再移住して住み着いた地域である。かれらを訪問して、インタビューと資料収集を行いたい。またニントゥアン省の中心都市ファンランには、海南島出身者たちの大きな会館があるが、先行研究は全くないので、そこでも資料収集し、中南部の華人の歴史と現況の一端を明らかにする予定である。最終年度であるので、12月に京都と東京で、研究分担者2人に加え、ベトナム側で一貫して研究に協力していただいたハノイ人文社会国家大学のグエン・ヴァン・チン先生を招いて、4人でまとめのセミナーを開催する予定である。内容はまだ仮の状態ではあるが、1978-79年の中越関係悪化時のハノイの華人の状況、同時期の中越国境クアンニン省の省政府の華僑・華人政策、南部メコンデルタにおける「明郷」とはどういう人々なのか、また中部の古都フエにおける明郷による伝統医療の継承と実践、といったものになる予定である。2016年は6月と12月にそれぞれ約一週間ホーチミン市総合科学図書館にて新聞資料収集を行った。ここはベトナムで唯一南ベトナム政権時代に中華街であるチョロンで発行されていた各種華字紙を保存している。これにより、同化政策を行ったと言われるゴ・ディン・ジエムによる華僑・華人政策の実態と、それに対する華僑側の反応が具体的に明らかになった。

8月には約2週間、ハノイ人文社会科学大学のグエン・ヴァン・チン准教授の協力を得て、研究分担者2人と共に、明朝崩壊時に清朝の支配を嫌ってベトナムに入植した中国系住民の入植地であったドンナイ省と、ホーチミン市で、資料収集とインタビュー調査を行った。更にドンナイ省では、東北部中越国境にフランス植民地時代に存在した「ヌン自治国」の主要住民であった客家系ガイ人が、社会主義政権の支配を嫌って、南北分断時の1954年以降入植した地域を訪問した。この移住先のガイ人については、ほとんど知られていなかったが、彼らが移住後どのように生きてきたのか初めて明らかになった。その後、中部の大都市ダナンで華人会館や華語教育について聞き取り調査を行い、近郊のホイアンでは、各華人会館を訪問して個々の華人のライフヒストリーを聞き取った。南部のメコンデルタとは違い、観光地であるホイアンは国家の庇護を受け、建物のメンテナンスなどが充実している一方、華人が国家の強い支配下に置かれていることもわかった。また2017年3月にはホーチミン市チョロンで、研究分担者以外に、広州曁南大学の鄧応文准教授を加え、漢方薬を扱う商人や、伝統医療に携わる医師たちに対し聞き取りを実施した。鄧氏が広東語のネイティブのため、母語が広東語の華人たちは、ベトナム語でインタビューするより率直に答えてくれ、漢方薬取引ネットワークや、伝統医学医師の養成において、国家が華人よりベトナム人を優遇し始めている様相が明らかになった。中越関係悪化のなかで、ここ数年華人研究は完全なタブーとなっており、公式の許可は申請しても出るはずがないことがわかっていたので、チン教授のつてをたどってのフィールド調査を実施した。しかし期待以上の成果があがった。ホーチミン市では、会社経営者数名にインタビューすることができ、かれらが国家からの介入を嫌って、銀行などを全く頼りにせず、親族のネットワークだけをつてに商売を行っていること、1975年以降海外に脱出した家族・親族のネットワークが大きくものを言っていることなどが明らかになった。また「研究実績の概要」でも述べたように、ドンナイ省のガイ人(客家系)の人々から直接話を聞くことができたのは大きな成果で、フランスがベトミンに対抗して中越国境に設立したとされていた「ヌン自治国」の実態がわかった。フランスが中華系住民を利用して、中国との間に緩衝地帯をつくっていたわけでユニークな存在である。中部ダナンとホイアンにおいては、「華人」と「明郷(ベトナム人化した華人)」に複数インタビューできたことで、かれらの違いは何であるのか、おぼろげながら見えてきた。かれらの自己認識の基準は、ベトナムにやってきた年代が古く母親にベトナム人がいて同化が進んでいるかどうかだけではなく、社会の比較的上層で知識階層に属した人々が科挙などを受けて地元の有力者となり「明郷」と認識するようになったケースが多く、商売のみに注力してきた人々が「華人」と自己認識しているようだが、これは更に精査して論文としたい。またホーチミン市チョロンで商売をしている漢方薬商や、医院を開業している伝統医学医師を訪問したが、思っていたよりずっとベトナム人(多数派のキン)の進出が進んでおり、政府がそれを後押ししている様子もかいま見えた。アテンドを頼んだ華人学生の紹介やアテンドが非常によかったことも思った以上の成果を挙げられた理由である。2017年度はハノイ、フエ、メコンデルタで華人と明郷についての調査を行った。まずハノイでは旧市街の元華人街を中心にインタビューを実施、短期間ではあったがしつこく何度も通ったかいがあり、水面下に残る華人ネットワークをたどって、1978年の中越関係悪化時に中国に戻らず、ベトナムに残っている人たちの証言を得ることができた。
頸動脈エコー動画解析による動脈硬化度の定量－生活習慣病・膠原病での検討－

現在臨床応用されている動脈硬化の定量的指標として、頸動脈エコー検査による内膜・中膜厚(IMT)と四肢血圧同時測定による心臓足首血管指数(CAVI)がある。我々は、動脈壁そのものの硬化度に注目し、頸動脈エコーでの経時的な壁の動き(動画撮影)から動脈壁(主として外膜)の硬さを測定する新たな動脈硬化指標(弾性係数:E1)を開発し、それから頸動脈年齢の推定が可能になっている。本研究では、特に生活習慣病患者と膠原病患者を対象にこの方法を用いて健常者との血管年齢差を明らかにするとともに、種々の薬物療法導入前後での測定によって血管年齢への効果を検証する。