hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ゼブラフィッシュ胚を用いたダイオキシンの神経奇形・発癌機構の解明

神経について特異的に発現する発癌遺伝子OstとEct2の遺伝子発現制御とダイオキシンによる神経分化・奇形・発癌への影響についてゼブラフィシュ胚を用いて研究を開始した。(1)成熟および発達途中のマウス脳を用いたIn situ hybridization法によってOstを介したシグナル伝達系の下流に位置する遺伝子の検索すること。(2)薬物投与によるOst mRNAの発現量変化などを明らかにすることなどを行った。また、培養細胞を用いた実験で、Ostを強制発現させると(1)JNKは活性化されるが、ERKやp38は活性化されていない。(2)転写因子AP-1,SRFを介した転写活性が上昇する。(3)CyclinD1の発現量が変化することが示されている。これらの機構が神経発癌と神経奇形の発生機構に関与しているかどうかを調べるために、神経細胞を使用した実験での癌遺伝子の転写活性化機構を調べている。本年度は、Ostのスプライシングバリアント-αβγの全てを標識でき、脳特異的発現を示すOstのcDNA共通領域をプローブとして、マウス脳のIn situ hybridizationとNorthern blot解析を特に行った。その結果、Ostの特異的発現パターンが、成熟7週令マウスにおいて海馬>視床下部≫大脳皮質の順で発現量が多く、Ostの成熟脳での神経発癌シグナルへの関与が示唆された。
モジュール型生体触媒によるキメラ代謝経路構築と化学品生産への応用

本研究課題は、好熱菌(55°C以上の高温環境下でも生育可能な微生物)などが生産する耐熱性酵素を試験管内で自在に組み合わせ、有用物質生産に利用可能な人工代謝経路を構築する技術の確立を目指し実施されたものである。特に本課題では、解糖系の最終産物であるピルビン酸から、多くの代謝経路のハブとなる重要な中間体であるアセチルCoAへの酸化的脱炭酸反応に着目し、本反応を試験管内で再現するとともに、これを用いた有用物質の生産に取り組んだ。この結果、4種類の耐熱性酵素を用い、ピルビン酸とα-ケトグルタル酸を原料に55% (mol/mol)の高い収率でN-アセチルグルタミン酸を生産することに成功した。研究代表者は、モジュール化した耐熱性酵素を任意に組み合わせ、化学品生産に特化した人工代謝経路をin vitroで再構築する「合成代謝工学」の確立を目指した研究を進めている。このうち、すでに別プロジェクトにおいて構築済みの人工解糖系の最終産物であるピルビン酸を、生体反応で様々な代謝産物への合成中間体となるアセチルCoA生産へと変換するための人工代謝経路を構築することが、本研究課題の主たる目的である。前年度までに、酵素モジュールとして利用可能な耐熱性ピルビン酸脱炭酸酵素(PDC)の取得の取得に成功している。当該年度はアセチルCoA生産経路構築に必要な他の酵素モジュールを完備し、目的経路を完成させることを目的とした。また、本バイパス型経路を用いた有用物質生産の実証試験として、耐熱性グルタミン酸デヒドロゲナーゼおよびグルタミン酸アセチルトランスフェラーゼをカップリングさせた人工経路をデザインした。これにより、ピルビン酸およびケトグルタル酸から化粧品材料などとして付加価値を有するアセチルグルタミン酸へのワンポットでの合成が可能となる。当該年度はT. thermophilusおよびThermotoga martimaの2種類の好熱菌より各酵素遺伝子の単離と大腸菌内での大量発現、ならびに組換え酵素の特性評価を行った。本研究課題は、好熱菌(55°C以上の高温環境下でも生育可能な微生物)由来の耐熱性酵素を試験管内で組み合わせ、有用物質生産に利用可能な人工代謝経路を構築する新規技術の確立を目指し実施されたものである。解糖系の最終産物であるピルビン酸から、多くの代謝経路のハブとなる重要な中間体であるアセチルCoAを生成する酸化的脱炭酸反応に着目し、本反応を試験管内で再現するとともに、これを用いた有用物質生産に取り組んだ。前年度までに、2種類の耐熱性酵素のカップリングにより目的反応であるピルビン酸からアセチルCoAへの変換反応を試験管内で実現することに成功していたが、最終年度はこれにさらに2種類の酵素反応を組み合わせることで、ピルビン酸とグルタミン酸を原料に収率55% (mol/mol)でN-アセチルグルタミン酸を生産することに成功した。さらに、別プロジェクトで並行して構築を進めてきた人工代謝経路に上記の経路を組み合わせることで、次世代型バイオ燃料として着目される1-ブタノール生産のための新規経路構築に応用することにも成功した。一方、同様の方法論に基づき、有機溶媒中での酵素反応による脂溶性物質生産プロセスの構築をスピンアウト課題として設定した。これは好熱菌由来の酵素タンパク質が熱だけでなく有機溶媒などによるケミカルストレスに対しても優れた安定性を示すことに着目したものである。研究代表者らのグループにより基盤研究が進められてきた疎水性細菌Rhodococcus opacus内で好熱菌由来ene reductaseおよびalcohol dehydrogenaseを共発現させ、これを基質を溶解させた有機溶媒内に投入し、酵素反応を実施した。この結果、カロテノイド類などの合成中間体として利用される(6R)-レボジオンを約600 mMの濃度で蓄積させることに成功した。これらの成果を、学会発表のほか、国際科学誌上で報告した。酵素モジュールとして利用可能な十分な耐熱性を有した新規ピルビン酸脱炭酸酵素(PDC)の取得と、すでに報告のある耐熱性アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼおよびアシルCoAシンテターゼとのカップリングによる合成代謝経路を構築することが具体的実施内容となっている。当該年度は、新規好熱菌の取得とPDC活性を指標としたスクリーニングを進めるとともに、各種のデータベース上の情報に基づき、既知PDCの酵素化学的諸性質を精査していった。

この結果、中温菌であるAcetobacter属細菌(最適生育温度30°C)が産生するPDCが、60°Cでの半減期が2時間強という中温菌由来酵素としては例外的に高い耐熱性を示すものであることを明らかにした。当初、PDCによる触媒反応の生産物であるアセトアルデヒドからアセチルCoAへの変換経路として、アルデヒドデヒドロゲナーゼによるアセトアルデヒドから酢酸への酸化反応、およびアシルCoAシンターゼによるATP依存的な酢酸とCoAの縮合反応の2ステップからなる人工経路を想定していた。1段階目のステップを触媒するアルデヒドデヒドロゲナーゼの分離源としてT. thermophilusを選択し、同株由来の酵素の特性評価を行った結果、本酵素がCoA存在下でCoAアシル化活性を伴ったアセトアルデヒドの酸化反応を触媒することが明らかとなった。この発見により、反応経路の簡略化のみならずATPに依存しない人工経路をデザインすることが可能となった。結果的に最終年度に実施予定であったバイパス型経路を用いた有用物質生産に関する研究を前倒しで開始することとなった。一方、進化工学的手法によるPDCのさらなる耐熱化についても検討を開始しており、現在までにスクリーニングのためのハイスループットな評価系を確立するに至っている。耐熱性酵素の主たる遺伝子ソースである好熱菌においてPDCの存在は未報告であった。そこで、自然界からの新規好熱菌の取得とPDC活性を指標としたスクリーニングを進めるとともに、各種のデータベース上の情報に基づき、既知PDCの酵素化学的諸性質を精査していった。この結果、中温菌であるAcetobacter属細菌(最適生育温度30°C)が産生するPDCが高い耐熱性を示すとの知見を見出した。当該微生物より目的酵素遺伝子を取得し、大腸菌内での過剰発現と組換え酵素の特性評価を行った結果、本酵素が目的の反応を触媒し、60°Cでの半減期が2時間強という中温菌由来酵素としては例外的に高い耐熱性を示すものであることを明らかにした。バイパス型ピルビン酸脱炭酸経路にさらに2段階の酵素反応(グルタミン酸デヒドロゲナーゼおよびグルタミン酸アセチルトランスフェラーゼ)をインテグレートさせたアセチルグルタミン酸生産のための人工代謝経路を構築する。一方、本経路を構成する酵素群のうち、PDCは中温性細菌に由来することからも理解できるとおり、他の酵素に比べて熱安定性に劣り、長時間の利用に不向きである。より効率的な物質生産プロセスの構築に向け、進化工学的手法に基づき本酵素の耐熱性を向上させることがもう一つの実施課題となる。当初の予定ではスクリーニングにより得られた新規PDCの単離精製と対応する酵素遺伝子の同定を平成24年度以降の推進方策としていた。しかし、上述のとおり、初年度において、データベース情報に基づく解析により、すでにAcetobacter属細菌由来耐熱性PDCならびにその酵素遺伝子の取得に成功している。そこで、平成24年度は、ここからさらに歩を進め、進化工学的手法を駆使した当該酵素のさらなる耐熱化に挑戦する。
初期アメリカの体制反乱事件とその文化的・文学的影響に関する研究

本研究は、これまで文学・文化研究領域でほぼ注目されずにきた初期アメリカにおける組織的反乱事件ー具体的には、独立革命直後に勃発したシェイズの叛乱(1789-87)および植民地時代のニューヨーク奴隷陰謀事件(1741)ーの概要を提示し、かつその歴史的重要性と文学的・文化的影響を探るものである。社会的不和・混乱を背景としたこれらの事件は、同時代の文学における体制転覆的想像力を喚起しただけでなく、共和政期、アンテべラム/ポストべラム期を経て、こんにちのアメリカ大衆文学においても、抵抗精神の発露による文学的生成に影響をもたらしていることを、多くの具体的文学作品の分析によって示した。本研究は、アメリカ建国期前後から南北戦争以前期における民衆の組織的反乱や抵抗精神の発露に関して、文学的、文化的、政治的な視座から、総括的な影響関係を探ることを目的としている。初年度の、おもに資料収集による研究の文献整備と周辺領域の考察に続き、研究二年目の2013年度は、いくつかの具体的な成果を発表した。また林は、1前年年度より進行させてきたJames Fenimore Cooperの難解な長編の海洋ロマンス群(nautical romance)の読解を進め、2学内の発表会において、研究報告を行った。3さらに、そのうちの成果の一部を2014年度刊行予定の共著『災害の物語学』、中良子編(京都:世界思想社、2014)に論文「難船体験とアメリカとの遭遇」としてまとめ、2014年5月の刊行を待つ状態にある。本件申請研究は、建国前後アンテべラム・アメリカにおける組織的民衆反乱事件に関する総括的概要提示とその文学的・文化的影響について考察することを目的とする。研究初年度にあたる2012年度は、主に、1741年のニューヨークの奴隷反乱および1831年のナット・ターナーの反乱事件についての資料収集と、2011年に上梓されたSharon Ewellの小説が提起した『告白原本』に対する歴史的解釈について考察した。林は、1クーパー作品における海洋譚のひとつを例に、共和政期の海賊およびスパイ行為の背後に、抵抗の一時例を、環大西洋的視座から読み、口頭発表を行った。2クーパー作品分析に関連し、関連批評についての見解をまとめ、論文として完成させた。3さらに敷衍して、こうしたアメリカ研究を教育の場への適応と絡めてシンポジウム等を行った。本研究は、アメリカ建国期の前後から南北戦争以前期(Early AmericaからAntebellum Americaまで)における民衆の組織的反乱や抵抗精神の生成と発露に関して、文学的、文化的、社会政治的な視座から、包括的な影響関係を探ることを目的としている。初年度の資料収集と文献整理と読解(2012年度)、二年目の資料収集と海外研究者との交流および研究発表は執筆(2013年度)に続き、三年目にあたる2014年度についても、いくつかの具体的な成果を挙げた。ここに概要と合わせて記す。白川は、1初期アメリカの体制反乱事件の一例であるニューヨーク奴隷陰謀事件について、引き続き考察し、その過程で、国内外での複数の口頭発表を行った。2また「アメリカン・ルネサンスにおける情動と身体」(竹内プロジェクト)において、アンテベラム・ニューヨークの煽情物語と反乱についてを関連づける講演を行った。3奴隷制・奴隷反乱関連文学作品について共著および論文を執筆し、出版した。4現在、こうした研究の蓄積と成果をさらに発展的に敷衍させ、新たなトピック(a.建国期の某スキャンダルからみる大衆転覆的想像力、b.民衆の組織的反乱と物語化等)についても、考察中である。林は、1かねてより進行させてきたJames Fenimore Cooperの難解な長編海洋ロマンス群の読解と分析を継続中である。2なお、その成果の発表が決定しており、近く、活字化される予定である。最終的に、Cooper作品に関しての単著執筆を目指している。本場アメリカでも批評的に黙殺されてきた作品群に対する論考は、国内外への大きな貢献となることが期待される。初期アメリカにおける民衆の組織的反乱や抵抗精神の生成に関して、その政治性を含め、文学文化史的視座から包括的な影響関係を探ることを意図して本研究も、最終年度を迎えた。申請当初予定していた考察事項を拡大敷衍する形で進捗してきた本研究の最終年も、複数の成果を残すことができた。白川は、1建国直後のヴァージニアにて起こった名門一族ランドフル家のビザール・スキャンダルとその後のナンシー・ランドフルのガバヌール・モリスとの婚姻から、マイノリティーである「犯罪者」女性の抵抗精神と「幸福追求の権利」について、the Mansion of Happiness(ボードゲーム)の文化史的視座から考察し、シンポジウムで口頭発表した。2奴隷叛乱首謀者であるナット・ターナーを巡る現在の動向についてエッセイを記した。3反乱者ジョン・ブラウンの意思を継ぐものとして、南北戦争時に黒人部隊を指揮したトマス・ウェントワース・ヒギンスンについてコラムを記した。41741年NY奴隷叛乱についての口頭発表を行った。5シェイズの叛乱を背景とした独立革命以降の悪漢自伝『スティーヴン・バロウズの回想録』に関する論文を執筆した(現在印刷中)。6マット・ジョンソンの抵抗する混血出自宣言とこんにちのアメリカの人種状況を示す小説『ラヴィング・デイ』に関する論文を執筆した。7『19世紀アメリカ文学における≪ダブル≫を探る』の書評を執筆した。林は、具体的な執筆はないが、クーパーの海洋ロマンスについて引き続き研究中であり、今後の総括が期待される。

本研究は、これまで文学・文化研究領域でほぼ注目されずにきた初期アメリカにおける組織的反乱事件ー具体的には、独立革命直後に勃発したシェイズの叛乱(1789-87)および植民地時代のニューヨーク奴隷陰謀事件(1741)ーの概要を提示し、かつその歴史的重要性と文学的・文化的影響を探るものである。社会的不和・混乱を背景としたこれらの事件は、同時代の文学における体制転覆的想像力を喚起しただけでなく、共和政期、アンテべラム/ポストべラム期を経て、こんにちのアメリカ大衆文学においても、抵抗精神の発露による文学的生成に影響をもたらしていることを、多くの具体的文学作品の分析によって示した。資料収集や、読解・分析およびその成果発表については、一定以上の成果をあげている。その意味においては、「当初の計画以上に進展している」と考えてもよい。ただし、本件研究が措定する考察範囲が広範で、新たなテクストや事象を発見・発掘するたびに、多くの派生的なトピックが生じてくるため、研究対象が敷衍的に拡散したこともまた事実である。従って、上記の自己評価としているものの、「初期アメリカにおける体制反乱事件とその文化的・文学的影響」に含まれうる、未紹介の事象については、今後も積極的に取り上げつつ、研究修了期間までに、まとまりのある総体としての構築を目指す。人文学次年度の研究完成年に向けて、引き続き、資料の分析および口頭、執筆による成果発表を続ける。白川は、1NY奴隷反乱事件の口頭発表の成果を論文としてまとめ、2建国期の某スキャンダル事件についての考察を口頭と執筆により発表し、3最終年度としての、これまでに全ての論文・論考を包括的・相対的に成果報告書としてまとめる。林は、1ここ数年の研究成果をCooperの海洋ロマンス群を中心に文字化し、2このジャンルでの、相互干渉・往還の動態を探る研究を進捗させつつ、形成期あまりか小説がはらむイデオロギー性を剔出する論考群を世に問う。3また、研究最終年にあたり、これまでの複数の海洋譚に関する論考を総括してまとめる。前年同様、資料収集および、研究成果の発表や出版に関しては、かなり順調であると言えるだろう。ただし、本件研究が本来的に考察課題と定めていた内容に対して、派生テーマの広がりが想定以上に大きく、中心課題として想定していた具体的事象の考察・発表になかなか到達できずにいるのもまた事実である。申請時に構想していた内容が、広がり、様々に敷衍しつつ、恐らくは他所での取り扱いがないであろうテクストを発掘・紹介し、考察の上、成果を出せることは、嬉しい誤算であるものの、研究完了期間にも目配りをしつつ、コア課題でも、目に見える形の成果を上げることを目指したい。初年度のNY Conspiracyに関する資料収集は、順調であり、また、そこから派生した事象・作品分析の成果も、口頭発表・論文出版とも、それなりの成果を上げている(以下の「研究成果」を参照)。
看護学生のクリティカル・シンキングを育てるシミュレーション教育モデルの開発

本研究の目的は、患者の急変徴候を看護学生が観察・アセスメントし、迅速な対応をするために必要なクリティカル・シンキングを育成するシミュレーション教育モデルを開発することである。看護系大学を対象とした質問紙調査の結果では、学習目標に合わせた状況設定が可能であるとして、教員がシミュレーション教育に強い関心を抱いていることが明らかになった。また、看護学生及び新人看護師を対象とした急変対応に関する質問紙調査の結果、到達すべきコンピテンシーレベルと卒業時の実践力の差が確認され、この結果に基づいて演習プログラムを作成した。今年度は研究課題の達成に向けた準備段階と位置付けており、高性能シミュレータを用いた効果的なシミュレーション看護教育の実践法についての情報の収集と教材開発に向けたコンピテンシーの引き上げを目標とした。情報収集の具体的内容は以下のとおりである。1.シミュレーション教育において先進的な取り組みを行っている米国大学に於けるシミュレーション教育の原理と教育メソッドの理解。2.米国の医療現場において単独業務に就き、自律的機能を要求される救命救急看護師のためのトレーニングへの内容。3.日本国内医療施設のシミュレーションラボ及び病棟で実施しているジェネラリスト看護師を対象としたシミュレーション教育の実際と課題。4.成人学習者のコンピテンシーを向上させるために必要なインストラクショナル・デザインの実践例の効果検証。5.シミュレータを用いた学習の効果測定と限界。6.高性能シミュレータ操作法及びプログラミング法の理解。また、日本国内看護系大学におけるシミュレーション教育の動向を明らかにするために、シミュレータを用いた教育実践の実態と、高性能シミュレータを用いた演習導入及び継続に向けた成人看護学領域担当教員の意識に関する質問紙調査を全国の看護系大学に対して実施した。1.全国の看護系大学の看護基礎教育におけるシミュレーション教育実施状況調査の分析本調査の目的は、シミュレーション教育の導入期における看護系大学成人看護学領域におけるシミュレーション教育の実態について明らかにするものである。対象校192校のうち47校(回収率24.5%)より回答が得られた。このうちシミュレーション教育を実施しているのは41校(872%)であり、そのうち12校は学科内技術演習室以外にもシミュレーション専用スペースが使用できる環境にあった。シミュレーション教育の課題としては、高度忠実度シミュレータが高額であり入手しにくいことがあげられ、普及の方策として、価格の値下げのほか教員向け研修の必要性も指摘された。2.急変時の対応およびクリティカル・シンキングに必要な新卒看護師のコンピテンシーの明確化と、看護学生への教育内容の精選急変時対応に関する書籍及び急変時クリティカル・シンキングに関わる文献から、看護学生の卒業時の到達目標を設定する目的で、新卒看護師に求められるコンピテンシーの抽出を行った。3.初心者レベルの看護師・看護学生を対象とした緊急時対応等のシナリオ試作とシミュレーション演習導入に向けた準備シミュレーション教育に関する国内外の学会参加と演習視察、文献検索により、看護におけるシミュレーション教育効果のエビデンスの確認に加え、シミュレーション演習実施における課題解決と成人看護学領域におけるシミュレーション項目の整理を行った。1.コンピテンシーリストの作成:看護基礎教育を修了した直後の新卒看護師に求められる実践能力を、看護学生の到達すべきコンピテンシーレベルと定めた上で、患者急変時対応のコンピテンシー原案を国内外の文献等から作成した。専門家の意見を聴取した上で、新卒看護師が遭遇する可能性が高く且つ緊急対応優先度の高い臨床症状と必要な実践項目を抽出した結果、(1)心筋梗塞を疑わせる胸痛、(2)脳梗塞を疑わせる脳神経症状、(3)呼吸困難の3つの臨床症状が確認され、それぞれについて問診・観察・フィジカルアセスメント・看護診断・急変時対応から成るコンピテンシーリストを作成した。2.質問紙調査:看護学生(臨地実習以外の臨床経験なし群)及び新卒看護師(臨床経験1年群)を対象として、3種類の急変事例を提示し、認知レベルのコンピテンシーを測定する目的で自記式質問紙調査を実施した。結果として、各事例について、問診、観察、フィジカルアセスメント、看護診断、急変時対応、急変対応の自信の程度のいずれの項目においても、両群に有意差は認められなかった。急変との遭遇は、看護学生は臨地実習中に19%が、新卒看護師は就職後の1年間に46%が経験しており、初心者レベルの看護師に対する急変対応トレーニングの必要性が改めて示唆された。3.演習プログラムの作成:胸痛発作、脳神経症状、呼吸困難発生時の急変対応演習プログラムのシナリオと、これに付随して演習進行に必要な指導者(ファシリテータ)用ガイド及び演習参加者用ワークブックを作成した。また、シナリオ別の視聴覚教材を作成した。演習参加者は、各自のパフォーマンスを録画で振り返り、ファシリテータによるデブリーフィングセッションを受けるのに加え、視聴覚教材でモデルパフォーマンスを確認し評価用紙を活用することによって自己評価が可能となった。年度毎の目的に沿っておおむね計画通りに進展している。24年度が最終年度であるため、記入しない。

文献から抽出したコンピテンシー原案について専門家の点検を受けた後、看護学生が到達すべきコンピテンシー項目を整理する。作成されたコンピテンシーリストを基に演習プログラムを作成する。また演習を効果的に進めるための教材を作成する。24年度が最終年度であるため、記入しない。
東アジアおよび北米地域のモンゴロイド系集団の歯の形態にもとづく系統関係

本研究は、当面は基礎データの収集と文献的データの収集が主な仕事である。基礎データの収集は、計測による研究を主にし、歯冠近遠心径頬舌径の計測をおこなった。非計測的データ(22項目)もあわせて収集した。対象とした材料は、日本およびアメリカの各研究施設に所蔵されているアジア系モンゴロイド人骨合計2249の上・下顎歯である。分析は統計的な解析方法(多変量解析)を用いた。それにもとづいて、まず日本国内の各時代・各地域の集団を調査し、それぞれの変異を明かにした。計測的なデータから得られた分析結果と非計測的なデータから得られた分析結果とは、現在収集している日本人のデータに関するかぎり、かなり高い関係が見られた。どちらの方法によっても「縄文・アイヌ」の集団と「弥生・中世・現代人」の集団とに分離された。この他、古墳人は弥生時代人に最も近く、現代人の含まれる集団の方に属している。ただし、種子島の弥生人は「縄文・アイヌ」の集団に近く位置し、やや特殊な位置にある。このような地方差や時代差を検討するためには、日本人の祖先となるモンゴロイドの大陸からの流入に関しても、琉球列島経由にようものと朝鮮半島経由によるものとの相互関係を詳しく調べる必要がある。縄文人では、東日本縄文人と西日本縄文人との間の歯の大きさに差があり、東日本縄文人の方がやや小さかった。このように、縄文時代人の中での歯の大きさの変異は地理的な分散と対応している。今後の分析には、日本人の直接的な祖先となったと考えられる系統をひいている中国人のデータが必要になり、次年度の調査目標である。これらの歯の調査の他に、アジア・オセアニアおよび北米のモンゴロイドの歯に関する文献データベースを集積中である。
尾根の変形を前兆現象として、付加体山地の深層崩壊の発生場所を予測する手法の開発

この研究の目的は、深層崩壊が発生する恐れのある付加体山地の場所を、初期山体変形を示す地形の判読によって検出する手法を開発することである。四国山地の尾根は至る所が裂け、線状凹地が発達している。その線状凹地と密接に関係した変動地形が深層崩壊の前兆を検出するためのターゲットとなる。尾根の変形は山向き小崖をつくる断層の形成で始まる。その断層が連続性の良い線状凹地に成長するに伴って、尾根頂部を含む領域が陥没し、山上平坦面が形成される。線状凹地を見つけ出すことは難しいが、山向き小崖起源のやせ尾根と平坦面からなる特異な地形なら、1/2500地形図の読図でも容易に検出することができる。一度発生すれば、甚大な被害を発生する深層崩壊の発生場所を、尾根の変形を指標に予測する方法を開発することが本研究の最終目的である。そこでとくに着目している尾根の変形は尾根の頂部に発達する裂け目である。本年度は2件の主要テーマを設定した。ひとつ目は、四国地方における尾根の裂け目に関する詳細調査である。初年度の平成24年度の末に運良く入手できた航空レーザー測量の数値データーから作成した航空レーザー測量図(LP図)を用いて、詳細な変動地形調査を行った。2万5千分の1地形図ではもちろんのこと空中写真判読でも把握することができない規模の裂け目の全体を、LP図の判読によって正確に把握することができるようになった。LP図で大局を把握したうえで、簡易レーザー測距儀を用いた詳細な変動地形の現場計測を行った。裂け目形成に伴って、大なり小なり、尾根が陥没していることが明らかになってきた。山上平坦面の形成に尾根の陥没が関係していることを予感させる。これは当初予測した結果である。ふたつ目は、中部地方南アルプス四万十帯の崩壊地、赤崩の滑落崖周辺および背後の斜面から尾根にかけて発達する裂け目や山向き小崖が地層の谷側への傾動に伴って発生したものかどうかの検証が目的であった。しかし、層理面の山差し構造が地質時代のものか谷側への傾動によるものかは決着がつかなかった。ただ、同じ四万十帯の付加体でありながら、四国、近畿、中部、それぞれの地域で、地質、岩盤特性、地形にかなり差異があり、そのことが、前兆現象としての初生山体変形や深層崩壊の運動様式にも違いとなって現れているように思われた。本研究の主目的からすると、今後は、尾根の裂け目が多発している四国山地に調査・研究の重点をおくのが望ましい。詳細な変動地形の解析をベースに、尾根の裂け目と山上平坦地の関係を解明し、付加体山地の深層崩壊の発生場所を予測に結びつけたい。深層崩壊は地下深部の岩盤中に破壊面をもつ崩壊である。崩壊物は高速で移動し、その体積が106m3以上に達する場合にはしばしば河川を堰き止めて天然ダムを形成するなど、発生域のみならず下流域にまでも大きな被害を及ぼすことがある。その発生場所を予測することは重要な課題である。付加体山地の深層崩壊は尾根頂部の破壊から始まる。この特徴に着目し、尾根に現れた変動地形と変形構造を深層崩壊の前兆現象と捉えて、その発生場所を予測する手法を開発するのが、本研究の目的である。深層崩壊の前兆現象の指標には、山上の裂け目やそれを起源とする線状凹地のほか、山向き小崖、山上平坦面、変動地質構造がある。深層崩壊の発生場所の予測手法の開発とは、これらの前兆現象の指標の検出の仕方・見方を示すことである。1年目の今年は線状凹地・裂け目の発達している山上平坦地の中から課題解決に適したサイトを検出することを目的として、四国で7か所、近畿の1か所で現地調査を実施した。四国山地のある事例では、尾根の頂部に裂け目を起源とする線状凹地が一条から二条発達し、凹地の幅が大きいところでは山上平坦面も広くなっている。このような山上平坦面は裂け目にそって尾根が陥没し、平坦面が形成された可能性がでてきた。2011年豪雨で発生した紀伊半島赤谷の大規模深層崩壊では、崩壊を規制する断層と尾根の裂け目の関係が検討された。崩壊面は付加体形成同時期および付加体形成後期の断層群に規制され、移動体の内部では、斜面と平行に発達する断層群(おそらくスラスト)やユニット境界をなす序列外断層に規制されたシート状岩盤が断層にそって分離・移動をくり返しながら崩壊したことが推察された。尾根頂部の裂け目は被覆層で埋積されていたが、それと断層群は連結している可能性が高く、裂け目から浸透した地下水が破壊の引き金になったと思われる。

簡易レーザー測距儀を用いた微地形計測によって、線状凹地形成に関わった断層群のひずみ像と運動像の解析を試みた。解析の手順は次の通りである:1簡易レーザー測距儀を使って、尾根の両側の斜面を含めて、線状凹地が発達している尾根の微地形を計測する。2非変動域の斜面を外挿して、線状凹地形成前の尾根の地形を復元する。3計測した斜面を、変動前から存在していた地表面と変動に関わった裂け目の断層面とに区分する。4変動前から存在していた地表面について、現在の勾配と変動前の勾配との比較から、地表面の傾動の有無を判断し、ブロックの回転の程度を推定する。5断層面沿いの地表面の段差から、地表面の上下変位のセンスと量を推定する。6断層面を地中に内挿して、線状凹地群形成に関わった断層群の幾何学的形態を明らかにする。7尾根の変形全体の形成プロセスの復元を試みる。解析を行った高知県いの町代次では、東西方向の尾根の南斜面において、斜面の走向とほぼ平行な山向き小崖をつくる断層が形成され、変動が始まった。この断層の成長に伴って、変動は尾根の頂部から北斜面に向かって広がり、変動域は次第に陥没した。最終的には、山向き小崖を形成していた尾根は連続性の良いやせ尾根(非変動斜面の一部)となって残った。やせ尾根に沿う断層は規模の大きな線状凹地に成長し、陥没領域内には多数の開口型の断層群が形成され、小規模な線状凹地群を生じた。これらの断層群の運動様式は狭い範囲で変化し、1面状正断層群、2リストリック正断層群、3共役面状正断層群、4共役リストリック正断層群が形成され、変動域全体が山上平坦面になった。こういった尾根の変動は、片理や岩相境界といった地質構造の変化や異常樹木(横山・横山、2004)から推定された地盤の動きと調和的であった。ノンテクトニック構造地質学まず、交渉の末、国交省四国地方整備局四国山地砂防事務所所有の航空レーザー測量の数値データーを提供して頂けることとなった。これにより、科研費の予算で航空レーザー測量図(LP図)を図化することができた。LP図を用いれば、2万5千分の1地形図はもちろんのこと空中写真判読でも把握することができない規模の裂け目(線状凹地)を正確に把握することができるようになった。これに、簡易レーザー測距儀による現地測量を組み合わせることによって、裂け目(線状凹地)の正確な分布だけでなく、裂け目形成に伴う尾根の沈降域の範囲、規模の把握が可能になり、さらには地面の回転の有無や回転の方向も議論できるようになった。LP図および簡易レーザー測距儀による現地測量の有効性と限界も明確になり、今後、精度の高い変動地形計測の手法の確立に向けて展望が開けた。調査結果としては、当初予想した尾根の裂け目に伴う尾根の陥没が現実味を帯びてきて、山上平坦面の形成に尾根の裂け目が関係していることが明らかになってきた。本年度の第一の目的である課題解決に適した線状凹地・裂け目の発達している山上平坦面の検出に成功した。具体的には、1山上平坦面の地形的特徴から、侵食地形としての山上平坦面から変動地形としての山上平坦面を識別する手法を開発する前段階として、変動地形として生じた可能性のある山上平坦面を複数検出した。2線状凹地形成の運動像解明に、線状凹地の両側斜面の勾配の非対称性が手がかりになることがわかった。32の一例として、同じ地質構成と地質構造をもつ連続した尾根において、線状凹地の発達している尾根では、山頂が裂けていない尾根の形態と比較して、山頂が低くなると共に平坦になっている事例を発見した。
炎症性γδT細胞の分化機構の解明

gdT細胞は胸腺にて分化する非典型的T細胞であり、炎症性サイトカインを産生することで生体防御の一助を担う。しかし、gdT細胞がどのようにサイトカイン産生能を獲得するのかは十分に理解されていない。本研究では、IL-17産生型gdT細胞に着目し、その分化を制御するT細胞受容体シグナル伝達メカニズムの解明に挑む。さらに、IL-17産生型gdT細胞を特徴づけるTCRレパトアの解明を目指す。将来的には、未知のgdTCRリガンドの同定や疾患におけるgdT細胞の制御に必要とされる重要な情報基盤を提供し、基礎医学の発展に貢献する。
積雪放射伝達モデルの高精度化,及び雪氷圏リモートセンシングへの応用

本研究の目的は積雪面の放射特性を精度良く再現するための高精度な積雪放射伝達モデルを開発することである.今年度は複雑な境界形状を有する実空間内の光を定量的に再現することが可能なモンテカルロ法を用いた積雪放射伝達モデルを開発し,積雪表面がサンクラスト(表面近傍にできる薄い硬い氷層)で覆われた融雪期の積雪の反射率をモデル化することに成功した.このモデルは理論式をベースにした物理モデルであり,サンクラストの厚さ,空間分布,傾斜など考慮することが可能である.現在,地上に設置した全天分光日射計データを用いて2冬季間測定された積雪反射率の理論的解釈を行っている.その他,雪粒子の光散乱特性に及ぼす波長に依存した吸収の効果を幾何光学近似法にもとづく数値計算によって調べた.また人工雪を用いて実際に雪粒子の光散乱特性を測定し,数値計算結果の妥当性を評価した.一方,積雪放射伝達モデルの衛星リモートセンシングへの応用として,現在グリーンランド氷床,および南極氷床上の積雪物理量(積雪粒径,積雪中に含まれる不純物)の変化を監視し,現在も継続して監視している.また高分解能リモートセンシングデータを用いたローカルスケールの積雪物理量の監視も行った.論文成果としては過去の研究のレビューを行い,積雪反射率に対するサンクラストの効果を調べた論文を投稿した.1.低温実験室において球形粒子と非球形粒子(樹枝状粒子)の人工積雪をつくり,波長域0.35-2.5μmにおいて分光器による波長別アルベド測定をおこなった.この低温実験室の構造をモンテカルロモデルで再現し,観測値と理論計算値の比較を行った.理論計算では球形粒子にはMie理論,樹枝状結晶粒子には円柱モデルを適用した.その結果,モデル計算で光源,雪面,センサの幾何学的条件の影響を定量的に再現することができた.また非球形粒子の効果がアルベドに与える効果は非球形粒子の体積と表面積の比(V/A比)を求め,同じV/A比を持つ球形粒子で置き換えることができることを確認した.さらに,積雪粒子が凝集した効果はMie理論で計算したアルベドよりも数%減少させることを確認した.この結果,粒子が凝集した効果はそれを構成している個々の粒子よりもわずかに大きな粒子として扱えることがわかった.2.新雪とざらめ雪の雪面に対する双方向反射率を測定し,非球形粒子による双方向反射率モデルの理論計算値と比較した.その結果,新雪では積雪粒子として円柱モデル,ざらめ雪では回転楕円体モデルが適切であることが分かった.また積雪粒子の表面にラフネスを導入することにより,より観測値に近い結果が得られることが分かった.3.リモートセンシングデータから積雪物理量を空間的に精度良く推定されているかどうか検証するためにアラスカ縦断積雪調査を行った.調査項目は積雪深,積雪粒径,積雪密度,積雪温度,積雪不純物濃度などの基礎物理量である.積雪深はマイクロ波放射計データから,積雪粒径,積雪不純物は可視・近赤外センサから推定される物理量である.その結果,推定された積雪深は地域によってばらつきがあるもののツンドラ域では積雪深の傾向はほぼ一致していた.タイガにおいては森林の影響により積雪深を過小評価している傾向にあった.積雪粒径,積雪不純物濃度については現在解析中である.衛星データから積雪物理量を抽出するためのアルゴリズムでは,積雪放射伝達モデルから計算した積雪表面における双方向反射率(または双方向反射分布関数,以下BRDF)が推定精度に大きな影響を及ぼす.従来のモデルでは積雪粒子の形に球形を仮定していたが,雪質によって粒子の形を変えた非球形粒子の光学特性を考慮することにより,精度良くBRDFを計算できるようになった.詳細なBRDF観測と解析によって,新雪では積雪粒子の形に円柱モデル,ざらめ雪では回転楕円体モデルが適切であることが分かった.また積雪粒子の表面にラフネスを導入することにより,より観測値に近い結果が得られることが分かった.一方,融雪期は積雪表面がサンクラスト(表面近傍にできる薄い硬い氷層)で覆われるため,従来のフラットな雪面を仮定したモデルでは限界があった.そこで,積雪表面のサンクラストを考慮するためモンテカルロ法を用いた積雪放射伝達モデルを開発し,サンクラストの効果を考慮した積雪BRDFの計算を行うことができるようになった.このモデルはグリーンランドや南極大陸など雪面に凹凸がある場合にでも適用することが可能であり,今後,さらに汎用性の高いモデルに改良していく予定である.論文成果としては過去の研究のレビューを行い,非球形粒子の光学特性を考慮した積雪放射伝達モデルについて2編論文を投稿した.また,その他に積雪の双方向反射率特性についてまとめた.本研究の目的は積雪面の放射特性を精度良く再現するための高精度な積雪放射伝達モデルを開発することである.今年度は複雑な境界形状を有する実空間内の光を定量的に再現することが可能なモンテカルロ法を用いた積雪放射伝達モデルを開発し,積雪表面がサンクラスト(表面近傍にできる薄い硬い氷層)で覆われた融雪期の積雪の反射率をモデル化することに成功した.このモデルは理論式をベースにした物理モデルであり,サンクラストの厚さ,空間分布,傾斜など考慮することが可能である.現在,地上に設置した全天分光日射計データを用いて2冬季間測定された積雪反射率の理論的解釈を行っている.その他,雪粒子の光散乱特性に及ぼす波長に依存した吸収の効果を幾何光学近似法にもとづく数値計算によって調べた.

また人工雪を用いて実際に雪粒子の光散乱特性を測定し,数値計算結果の妥当性を評価した.一方,積雪放射伝達モデルの衛星リモートセンシングへの応用として,現在グリーンランド氷床,および南極氷床上の積雪物理量(積雪粒径,積雪中に含まれる不純物)の変化を監視し,現在も継続して監視している.また高分解能リモートセンシングデータを用いたローカルスケールの積雪物理量の監視も行った.論文成果としては過去の研究のレビューを行い,積雪反射率に対するサンクラストの効果を調べた論文を投稿した.
筋ジストロフィーに対するアンチセンスDNAによる化学的治療法の開発

筋シズトロフィーに対するアンチセンスDNAによる治療法開発の基礎的研究を行い、以下の成果を得た。まず、マウスdystrophin遺伝子のオリゴ添加によるexon-skipを簡便に評価するため、筋管細胞への分化誘導が可能なC2筋芽細胞を用いた実験系を確立した。この実験系にRNA-splicingに重要なコンセンサス配列に対するアンチセンスオリゴを添加し、3日間培養後exon-skipの有無を調べた。5'-および3'-のsplice siteに対するアンチセンスオリゴDNAの添加によって正常splicing産物であるexon22+23+24の生成が顕著に減少してexon22+24のバンドが現れ、exon-skipが確認された。また、より長いアンチセンスの効果を観察するためexon23全長を含むintron22からintron23にわたるdystrophinミニ遺伝子を作製し、センスおよびアンチセンスの細胞発現系を構築した。両プラスミドをC2細胞に導入後、ミニ遺伝子発現細胞をG418耐性によって選択した。これら細胞を無血清にすることで分化を誘導し、発現したdystrophin遺伝子をRT-PCRによって調べた。残念ながらセンスおよびアンチセンスdystrophinミニ遺伝子の発現によて顕著なexon22+24の生成の増加は観察されなかった。一方、5'-および3'-のsplice siteのアンチセンスオリゴが実際に細胞内のsplicingを抑制したことはdystrophin遺伝子のexon-intron境界の塩基配列の固定の重要性を高めるものとなった。そこで、協和発酵工業東京研究所・穴沢博士、新海博士らと共同でヒトdystrophin遺伝子のexon46およびexon5255等のexon-intron境界の塩基配列の決定を行い、ヒトでの応用に道を開いた。筋ジストロフィーに対するアンチセンスDNAによる治療法開発の基礎的研究として今年度は以下の実験を行った。マウスdystrophin遺伝子のオリゴ添加によるexon-skipを簡便に評価するため、筋管細胞への分化誘導が可能なC2筋芽細胞を用いた実験系を確立した。C2を無血清培地で培養することによって細胞は筋管細胞へと分化し、分化誘導3日後以降にdystrophin遺伝子を発現することが確かめられた。上記の実験系にRNA-splicingに重要な配列であるexon23の5'-および3'-splice site、branch point、GA rich配列等に対するアンチセンスオリゴを添加し、4日間培養後exon-skipが起こったか否かを判定するため、RT-PCRを行った。5'-および3'-splice siteに対するアンチセンスオリゴDNAの添加によって正常splicing産物であるexon22+23+24の生成が顕著に減少し、exon22+24と思われるバンドが現れた、さらに5'-splice siteでは、センスオリゴでも同様であった。一方、intron22に存在するpyrimidineの多い領域に対するアンチセンスオリゴの添加では変化はみられなかった。この結果は、オリゴ添加によってdystrophin遺伝子のexon23を含むsplicingが抑制されうることを示している。添加によって変化のないオリゴもみられるので、この効果はオリゴの配列によると考えられる。また、従来splicing抑制に最も効果があるとされている5'-および3'-のsplice siteが実際に細胞内のsplicingを抑制したことは、我々の予測どうりであった。また、上記実験において生成されたバンドをクローン化後塩基配列を決定し、実際にexon22+24が生成していることを確かめた。
Ｓｕｐｅｒｓｉｎｇｕｌａｒアーベル多様体のｍａｓｓ公式に関する研究

今年度の研究内容について述べる前に、昨年度得られた結果について簡単に述べることにする。昨年度、正標数の代数多様体の変形理論へ応用するために、フロベニウス分裂性を定量化したフロベニウス分裂高さという概念を導入し、準フロベニウス分裂多様体を定義した。昨年度の主な成果の一つは、カラビヤウ多様体に対して、フロベニウス分裂高さとArtin-Mazur高さが一致することを示したことである。本年度の研究内容は大きく三つに分けられる。一つ目は、この新たに定義されたフロベニウス分裂高さ及び準フロベニウス分裂性の性質を研究することである。本年度はこの方針のもとで、準フロベニウス分裂多様体上の豊富な直線束の1次以上のコホモロジーが消滅することを示した。この性質はMehtaとRamanathanがフロベニウス分裂性を導入した動機であった。またエンリケス曲面のフロベニウス分裂高さを計算した。本年度の研究の二つ目は、特異点論との関連を研究することである。特にフロベニウス分裂性に関するFedderの判定法をフロベニウス分裂高さに対して拡張することを試みたが、満足のいく結果は得られなかった。フロベニウス分裂高さにはWitt環の理論が密接に関係しているが、Witt環のイデアルをコントロールすることが難しく、このことにより判定法の構成が格段に困難になっている。この点については来年度以降の研究課題である。研究の三つ目は3次元カラビヤウ多様体の変形理論、特に正標数のカラビヤウ多様体の標数0への持ち上げ可能性についてである。この問題について見識を深めるため、10月4日から18日まで、この分野において先駆的な業績があるドイツ、デュッセルドルフ大学のStefan Schroeer教授の元に滞在し議論を重ねた。28年度が最終年度であるため、記入しない。今年度の主な研究実績について述べる。正標数の楕円曲線は通常型楕円曲線と超特異楕円曲線の二つに分類される。この分類は幾つかの同値な定義を持つが、その一つとして、楕円曲線に付随する形式群を用いるものがある。このことの高次元化として、カラビヤウ多様体のArtin-Mazur高さによる分類がある。これはカラビヤウ多様体に付随するArtin-Mazur形式群を用いるものである。Arin-Mazur高さは正の整数と無限大に値をとるものである。3次元以上の正標数のカラビヤウ多様体は一般には標数0に持ち上げることができないことが知られている。これまで知られている持ち上げることのできない多様体のArtin-Mazur高さは無限大であることに注目した。高さが有限ならば標数0にリフトできると予想し、実際同じ仮定の元で長さ2のWitt環上にリフトできることを示した。照明のポイントはArtin-Mazur高さを別の言葉で特徴づけることである。Artin-Mazur高さ1のカラビヤウ多様体はFrobenius分裂することが知られていた。一般のFrobenius分裂多様体は長さ2のWitt環上にリフトできることが知られていた。そこで多様体の分裂高さを以下の性質を満たすように定めた。1)Frobenius分裂多様体の分裂高さは1、2)分裂高さが有限の多様体は長さ2のWitt環上にリフトできる。さらにカラビヤウ多様体に対しては、Artin-Mazur高さと分裂高さが一致することを示した。これらの結果は論文「Every Calabi-Yau variety of finite height can be lifted to W_2」としてまとめ、投稿し現在査読中である。カラビヤウ多様体のArtin-Mazur高さは1970年代から知られていたが、本年度別の特徴づけを得ることができた。高さはモジュライ空間の階層を定めるため、正標数のモジュライ空間の研究への応用が期待される。

研究の三つ目は3次元カラビヤウ多様体の変形理論、特に正標数のカラビヤウ多様体の標数0への持ち上げ可能性についてである。この問題について見識を深めるため、10月4日から18日まで、この分野において先駆的な業績があるドイツ、デュッセルドルフ大学のStefan Schroeer教授の元に滞在し議論を重ねた。Artin-Mazur高さを用いたK3曲面のモジュライ空間の研究が桂利行氏とG.van der Geer氏により行われてきた。その研究において古典的な超特異楕円曲線に対するDeuring mass公式の高次元化とみなすことのできる公式を証明していた。分裂高さを用いることで、エンリケス曲面のモジュライ空間に対し同様の研究を行う予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。
糸球体メサンギウムのlgA免疫複合体沈着におけるFcα-receptorの役割

3人の腎腫瘍患者の摘出腎正常皮質部からジービング法にて単離糸球体を採取し3系統のヒト培養メサンギウム細胞(CHMC)を樹立した。このCHMCのFcα受容体(FcαR)遺伝子発現をRT-PCRとノーザン・ブロット(NB)にて検討した。1系統のCHMCのみにRT-PCRでFcαR遺伝子発現が同定された。しかし、NBでは同定できなかった。次に、CHMCにIL-1,IL-6,IL-8,TNF-α,PDGF,TGF-β,熱凝集lgAを12および24時間添加培養しRI-PCRおよびリボヌクレアーゼ・プロテクション・アッセ-法にてFcαR遺伝子の発現調節を検討した。IL-1,IL-6,TNF-α添加によりFcαR遺伝子発現のわずかな増加傾向かみられたが、有意なものではなく、用量および時間による変化も認めなかった。FcαR細胞内ドメイン蛋白をGlitathione-S-Transferase(GST)融合蛋白として大腸菌で発現させグルタチオン・セファロース・カラムにて分離精製した。このリコンビナント蛋白を家兎に免疫し、FcαR細胞内ドメイン蛋白に対するポリクロナール抗体を作成した。この抗体とCHMC可溶化液の免疫沈降では、約60kDの沈降物を認めFcαR蛋白と考えられた。また、間接蛍光抗体法による腎生検組織の免疫染色を試みたが、明確な染色像は得られなかった。本研究により、CHMCにFcαRの遺伝子および蛋白の発現を同定した。CHMCのFcαR発現はわずかな不安定なものであり、サイトカインなどによる発現変化もほとんど認めなかった。以上より、メサンギウム細胞のFcαRはわずかな構成的な発現で、メサンギウムでのlgA免疫複合体沈着・異化における役割よりもlgA分子を介するメサンギウム細胞への情報伝達において重要な役割を果たしていると推測された。今年度は、培養メサンギウム細胞でのFcalpha-receptor(FcalphaR)の発現を遺伝子レベルで証明し、サイトカインによるメサンギウム細胞FcalphaRの発現調節を検討した。人腎細胞癌の摘出腎正常組織より、型のごとくsieving法により単離糸球体を採取し、collagenase処理後継代培養を行い人培養メサンギウム細胞を樹立した。同様に、BALB/cマウスよりマウス培養メサンギウム細胞を樹立した。この培養細胞よりRNAを抽出し、human histiocytic lymphoma cell line U937よりクローニングされたhuman FcalphaR cDNAをprobeとしたnorthern blot analysisを行った。その結果、人培養メサンギウム細胞では約2.8kbにbandを認め、FcalphaRの発現が確認された。マウス培養メサンギウム細胞でも淡いbandが見られたが、用いたprobeがhuman FcalphaR cDNAであり、種差のためか再現性に乏しくFcalphaRの発現は明かではなかった。次に、人培養メサンギウム細胞を用い、IL-1,IL-2,IL-6,INF-gammaを各々0.1,1.0,10ng/mlの各濃度で培養上清に添加し、24,48時間培養後にFcalphaRの発現をnorthern blot analysisにて検討した。IL-2,IL-6で24時間後よりFcalphaRの発現増強を認めた。しかし、技術的問題もあるためか用量依存性は明かではなっかた。以上まとめると、人培養メサンギウム細胞でFcalphaRの存在が遺伝子レベルで証明された。人培養メサンギウム細胞のFcalphaRは、IL-2,IL-6などの炎症性サイトカインによりその発現が増強することが明かとなった。

メサンギウム細胞でのFcα-receptor(FcαR) mRNAの発現は微量であるため、昨年検討したnorthern bloting法では同定が難しく、再現性にも問題があることが解った。そこでFcαRに特異的なプライマーを作成しRT-PCR法による同定を試みた。その結果、人培養メサンギウム細胞におけるFcαRの同定が可能となった。次に、競合的RT-PCRの系を確率し、サイトカインによるFcαR mRNAの発現調節を再検討した。人培養メサンギウム細胞を用い、IL-1,IL-2,IL-6,INF-γ,を各々1ng/ml,10ng/mlおよび100ng/mlの濃度で培養上清に添加し24時間後のFcαR mRNAの発現を検討した。その結果、これらのサイトカインでは人培養メサンギウム細胞におけるFcαR mRNAの発現量には、明かな変化は見られなかった。FcαRのDNA polymorphismの検討では、細胞外ドメインをコードする部位にSty1によるpolymorphismの存在が明かとなった。そこで、同部位の塩基配列を検討したところ、FcαR cDNAの670番塩基がシトシンからチミンへの点変異であることが同定された。しかし、合成されるアミノ酸はともにロイシンであり、FcαRの構造には影響のないsilent mutationであることが解った。FcαRの細胞内ドメイン蛋白をグルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)融合蛋白として大腸菌に合成させ、精製後家兎に免疫し抗FcαR抗体を作成した。この抗体を用いて行った人培養メサンギウム細胞との免疫沈降反応では、約60KDの単一バンドを認め、分子量よりFcαR蛋白を考えられた。また、この抗体を用い間接蛍光抗体法による腎生検組織のFcαR染色を試みたが、明かな染色性は見られなかった。リボヌクレアーゼ・プロテクション・アッセイ(RPA)法によるヒト培養メサンギウム細胞のFcα-receptor(FcαR)mRNA発現の検討ヒト脾細胞cDNAライブラリーよりPCR法にて採取したFcαR α鎖cDNA fragmentをサブクロー化しcDNAプローブとした。このcDNAからT7RNAポリメラーゼによりRNAを合成しRNAプローブを作成した。3系統の異なるヒト培養メサンギウム細胞(4-6継代)よりAGPC法にて型のごとくRNAを抽出しRPAを行った。その結果、1系統の細胞のみにFcαR mRNAの発現を認めた。このFcαR mRNA発現培養メサンギウム細胞を用い、IL-1,IL-6,TNFα,PDGF,TGF-βおよび熱凝集IgA_1,IgA_2を添加培養しFcαR mRNAの発現調節を検討した。IL-6,TNFαおよび熱凝集IgA_<1,2>でFcαR mRNA発現の増加傾向がみられたが有意なものではなく、用量および反応時間による差異もみられなっかた。腎生検組織でのFcαR mRNAの検討