hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
咬合高径減少時のウサギ下顎頭および関節円板の協調運動動態

これまでの実験から、咬合高径を減少させた場合、下顎頭は関節結節に強く押し付けられ、それに伴い関節円板が強く圧迫されることが予想された。しかし、下顎頭の関節結節方向への運動は関節結節がその力を受け止め、下顎頭運動を制限するため、動きとしてはわずかしか観察できない。そこで、円板が圧迫される状態を運動という形でより観察し易くするために結節を削除し、結節削除前後での咀嚼様運動時の下顎頭運動の変化を観察した。さらに、下顎頭が結節から受けている力の影響を推察し、下顎頭運動における関節結節の機能的役割について検討した。関節結節の削除を行った場合,削除側下顎頭の運動経路は削除前の前後約2mmの運動範囲が全体に約0.5mm(約25%)前上方へシフトした.この現象は,削除側関節結節の作業側,平衡側に共通して認められたが,運動軌跡の形は作業側の場合には咬合相でさらに前上方に押し出される様な運動の変化を認めた.この時期は,作業側咬筋の収縮力が最大となる時点と一致していた.これらの所見から関節結節と下顎頭の間には閉口相,咬合相,開口相のいずれの相においても応力が発生しており,特に作業側の咬合相において応力は最大で,下顎頭の運動経路が絶えず関節結節に沿って作用していることが示唆された.以上のような実験結果は、さらに咬合高径の減少を加えた際の下顎頭運動の変化の比較に役立つデータであり、顎関節症でみられる関節円板の障害が生じるメカニズムを究明する上できわめて重要である。咬合高径の変化が咀嚼筋活動や顎運動に与える影響を調べるため、ウサギを用いて咬合高径を減少させた時の顎運動と筋電図活動の記録を行った。臼歯部削除の影響を調べる前段階の実験として、関節結節を削除し下顎頭の関節結節方向への応力を運動として可視化する実験を行った。その結果、関節結節の削除を行い、削除側が作業側となる場合、咬合相となる時には前方に大きく突出する運動の変化が生じた。また、開口相のように明らかに閉口筋の活動が生じていない区間も含めて全体的に運動経路が前上方にシフトした。これは咀嚼筋の静止張力や周囲の皮膚の弾性等により関節結節は咬合力が発生していないときでも少なくない応力を受けていることを示している。さらに結節を削除した側の臼歯を削合した場合、臼歯削除前よりも運動経路が前方にシフトしたり、作業側咬合相でさらに大きな前方突出が見られるなどの関節結節への応力の増加を示唆する結果が得られた。顎関節症の発症原因は、咬合異常、筋緊張、生活習慣、ストレスなどの多因子によると考えられている。しかし、顎関節に明らかな形態異常や円板の位置異常を引き起こすには、顎関節部への異常な負荷や異常な運動が不可欠であると考えられる。本研究の結果は、円板の位置異常を引き起こすために必要かつ重要な要件を満たしているものであり、関節円板前方転位の発生メカニズムを解明していく上で極めて重要な結果であると考えられる。
分散型交換ネットワークの性能評価に関する研究

本研究の目的は,分散型交換ネットワークを対象として,ネットワーク内での伝送遅延時間のみならず,エンドユーザで新規に発生したパケットがネットワーク内に送出されるまでの待ち時間をも含めた性能評価を行うための同ネットワークのモデル化手法および解析手法を確立し,最適な分散型交換ネットワークを明らかにすることにある.ここでは,このための基礎研究として,Manhattan Street Network(MS-Net)と呼ばれる分散型交換ネットワークを対象に,以下の研究を行った.1.MS-Netにおけるノードのモデルとして,従来のノードモデルに送信バッファを追加した新たなモデルを考え,エンドユーザで新規に発生したパケットは,一旦送信バッファに収容され,次ノードへの中継リンクが使用可能になったとき,ネットワーク内に送出されるとすることにより,エンドユーザで発生したパケットがネットワーク内に送出されるまでの待ち時間の評価を可能にした.2.MS-Netは,mxn(m,nは正整数)個のノードで構成されるが,ノード数を固定しても,その形態は一意に決まらず,mとnの値に応じて様々な形態を取り得る.ここでは,mとnの様々な組合せに対して,1.のノードモデルを用いてシミュレーションを行い,ノード数を固定した場合,エンドユーザ間での平均パケット伝送遅延の面からのMS-Netの最適な形態は,mとnの差が最も小さいときの形態であるということを明らかにした.以上のように,本研究では,エンドユーザーで発生したパッケトがネットワーク内に送出されるまでの待ち時間を得るためのノードモデルを考え,これを用いたシミュレーション結果により,MS-Netの最適な形態を明らかにした.本研究の目的は,分散型交換ネットワークを対象として,ネットワーク内での伝送遅延時間のみならず,エンドユーザで新規に発生したパケットがネットワーク内に送出されるまでの待ち時間をも含めた性能評価を行うための同ネットワークのモデル化手法および解析手法を確立し,最適な分散型交換ネットワークを明らかにすることにある.ここでは,このための基礎研究として,Manhattan Street Network(MS-Net)と呼ばれる分散型交換ネットワークを対象に,以下の研究を行った.1.MS-Netにおけるノードのモデルとして,従来のノードモデルに送信バッファを追加した新たなモデルを考え,エンドユーザで新規に発生したパケットは,一旦送信バッファに収容され,次ノードへの中継リンクが使用可能になったとき,ネットワーク内に送出されるとすることにより,エンドユーザで発生したパケットがネットワーク内に送出されるまでの待ち時間の評価を可能にした.2.MS-Netは,mxn(m,nは正整数)個のノードで構成されるが,ノード数を固定しても,その形態は一意に決まらず,mとnの値に応じて様々な形態を取り得る.ここでは,mとnの様々な組合せに対して,1.のノードモデルを用いてシミュレーションを行い,ノード数を固定した場合,エンドユーザ間での平均パケット伝送遅延の面からのMS-Netの最適な形態は,mとnの差が最も小さいときの形態であるということを明らかにした.以上のように,本研究では,エンドユーザーで発生したパッケトがネットワーク内に送出されるまでの待ち時間を得るためのノードモデルを考え,これを用いたシミュレーション結果により,MS-Netの最適な形態を明らかにした.
上気道難治性粘膜病変の免疫組織学的・分子生物学的研究

平成4年6年度の3年間における研究実績は下記の通りである。1.繊毛上皮細胞を浮遊培養することで繊毛新生の生ずることを世界で始めて明らかにした。そして繊毛細胞への分化がIL-1βやコレラトキシンで促進、繊毛運動はATPで促進、エンドトキシンで抑制されるが、14員環マクロライドやTNF-α、IL-1βなどでは影響を受けないことが分かった。また、この系より分泌細胞に特異的な単クローナル抗体を作成し細胞分化の究明が可能になった。2.慢性副鼻腔炎洞貯留液には1L-1βが多く存在し、好中球の洞内への遊出、血管内皮細胞への装着に関与するほか、遊出後の好中球には1L-1βmRNAの発現をしめすことが確認された。また、洞粘膜の一部では、鼻関連リンパ様組織(NALT)形成がみられ、その過程でHEVを中心にELAM-1、ICAM-1、VLA-1など接着分子発現がみられた。また、白血球接着分子研究の一環の中で、シアリルXがヒト白血球でのみ特異的に発現することを発見した。3.副鼻腔炎粘膜では、ムチン型糖蛋白(フコース、シアル酸)生成促進や両組成の変化と、血清型糖蛋白(マンノース)の顕著な生成抑制などがみられ、鼻アレルギー粘膜とは著しく異なる糖蛋白生成機序がしめされた。このことは、シアル酸転移酵素mRNAの発現の違いでも確認された。14員環マクロライド剤は、これらの分泌異常を調節することを明らかにした。4.上気道乳頭腫組織DNAからはHPV-6とHPV-11型が検出され、これらよりL-2、E-6遺伝子のrecombinant蛋白を生成し、患者での血清診断へ向けた基本的手法を確立した。HPV-16由来の転写調節因子、E2蛋白がE6、E7遺伝子の転写を抑制する新事実を見出した。5.喉頭癌組織のレクチン組織化学的検索により、高分化癌でPNA、未分化癌でSNAが好染されるなど糖鎖発現と癌の生物学的活性の関連の一端が明らかとなった。6.バルーンレーザーサーミアの基礎検討が終了し、鼻アレルギーと上顎癌への効果的な臨床応用が可能となった。1)培養呼吸上皮細胞における内的、外的要因の及ぼす影響に関する研究:ヒト鼻粘膜由来の呼吸上皮細胞を次の2段階培養法により繊毛細胞として長期間培養することに成功した。(] SY.encircled1. [)まず、コラーゲンゲル上で培養し、コンフルエント状態の扁平細胞を増殖させる。(] SY.encircled2. [)次いで、この状態で細胞と一緒にコラーゲンゲルを一旦剥離し、浮遊させてコラーゲンゲル環境下で培養する。その結果、当初の扁平細胞は周囲環境の変化により、隣接細胞の影響を受けながら立方状の形態をとることで繊毛細胞や杯細胞に分化することが分かった。2)副鼻腔炎と接着分子に関する研究:慢性副鼻腔

炎洞貯留液中にはIL-1βが多く存在し、これが好中球のヒト鼻粘膜培養血管内皮細胞への接着にTNFと同等ないしはそれ以上に関与することが明らかとなった。また、in situ hybridizationで好中球の一部にIL-1βmRNAの発現が証明された。さらに、洞粘膜の免疫組織化学的的検索で、ICAM-1の発現が顕著にみられ、また、ELAM-1が上皮下浅層の間質に分布する血管に多く観察された。これらの研究成果は白血球の炎症巣への遊走や炎症の慢性化機序の一端を解明する糸口となろう。難治性鼻副鼻腔粘膜病態研究の一端として、分子生物学的ならびにサイトカインレベルより究明するとともに新療法開発に係わる基礎的研究を行った。それら研究成果の概要は下記のとおりである。1.ヒト培養鼻繊毛細胞の繊毛形成過程の運動様式をハイスピードビデオ装置で解析するのに成功した。これら繊毛運動がexogenous ATPで促進され、インフルエンザ菌エンドトキシンで抑制されること、TNF-alpha、IL-betaでは影響を受けないことなどが明らかになった。また、インフルエンザ菌や緑膿菌は無繊毛細胞表面に接着すること、しかも膜表面のシアル酸など複合糖質末端が密接に関与することも解明された。2.エンドトキシンによる実験的家兎副鼻腔炎モデルの作成に成功した。これらの粘膜病態は副鼻腔繊毛上皮に止まらず嗅上皮にも波及していることが免疫組織化学とin situ hybridization法で解明できた。3.慢性副鼻腔炎洞粘膜にnasal associated lymphoid tissue(NAL)形成のみられること、その形成過程にhigh endothelial venule(HEV)とCD4さらにELAM-1、ICAM-1、VLA-1などの発現と関連あることが免疫組織化学的に明らかにされた。4.ヒト乳頭腫生検試料(HPV-11)のL-2、E-6 fusian蛋白のウエスタンブロットシートを作成し、これらによる患者血清中の抗E6抗体と抗L2抗体を証明する基本的手法を確立した。5.14員環マクロライド系抗生物質(EM、RXM)が培養ヒト鼻血管内皮細胞への好中球接着を抑制すること、好中球活性酸素産生能を亢進例に限って抑制することなどが確認された。なかでも後者の成績はEM小量治療有効例で確認することができた。6.ND:YAGレーザー低出力バルーン温熱装置の原型開発が終了し、鼻粘膜温熱療法に有用と思われる基礎的、臨床的成果が得られつつある。本年度研究実績の概要は下記の通りである。1.浮遊培養繊毛細胞を用いることで繊毛新生過程での形態と運動様式の特徴を超微形態的、ハイスピードビデオシステムで始めて明らかにした。培養繊毛は、(1)コレラトキシン添加で繊毛新生が促進、(2)ATPで繊毛運動が促進、(3)細菌エンドトキシンでは抑制される。しかし14員環マクロライド剤での繊毛打促進作用はみられなかった。2.浮遊培養繊毛上皮細胞より分泌細胞単クローナル抗体を作成し、呼吸上皮における細胞分化を究明する手段を確立した。3.副鼻腔炎粘膜のレクチン組織化学的検索では、ムチン型糖蛋白(フコース、シアル酸)生成が促進、かつ組成に変化がみられるが、血清型糖蛋白(マンノース)では著名な生成抑制がみられた。鼻アレルギー粘膜では、ムチン型糖蛋白の生成はともに亢進しているが血清型糖蛋白の生成には変化がみられない。また、シアル酸転移酵素.mRNAの発現が副鼻腔炎粘膜の分泌細胞で顕著に観察されることが分かった。14員環マクロライド剤は、副鼻腔炎での分泌異常を調節する作用をしめすことも分かった。
α-Mnにおける高圧下での磁気ゆらぎ超伝導の探索

H30年度はα-Mnの純良単結晶育成と高圧下電気抵抗測定を行った。単結晶育成はフラックス法により行われ、直径1mm弱の多面体形状の単結晶が得られた。X線回折実験により単結晶であることを確認し、電気抵抗測定により残留抵抗比が70を超える純良単結晶であることが明らかになった。このレベルの試料における研究は前例がない。より純良な結晶やより大きな結晶を育成するために、いくつかのフラックスについて試し、Mnとフラックスの質量比を検討した。α-Mnの高圧下電気抵抗測定では、従来スポットウェルド法により端子付けを行っていたが、純良単結晶では残留抵抗が増大したり、試料が割れたりすることが分かった。スポットウェルドでは、非常に短時間であるが金線と試料の接点をジュール熱で高温にして融着させるが、その際に試料表面がβ相やγ相に転移しているためと推察しており、現在銀ペーストを用いて測定を行っている。得られた結果は従来の圧力ー温度相図を概ね再現しているが、今回の実験で新たに反強磁性秩序相と圧力誘起磁気秩序相の相境界が決定された。1.4 GPaでの電気抵抗の温度変化は逐次転移を示し、高温側の転移点では電気抵抗が減少し、低温側の転移点では常圧同様のハンプ状の異常が観測された。0.1 GPaの加圧により逐次転移は消失し、反強磁性相の消失は急激である。圧力誘起磁気秩序相が消失する臨界圧力Pc近傍では転移が急激に広がり、Pcの決定には至っていないが、以前報告されている5.0 GPaより低く観測されそうである。転移が広がる原因として静水圧性には十分な注意が必要で、Pcは圧力媒体(ダフネ7474)の室温での凝固圧力を超えているため、加熱・溶解し加圧する必要がある。α-Mn単結晶の育成は予定より順調に行われたが、電気抵抗測定の端子付けに時間を要した。以前の実験ではスポットウェルド法で行っており問題はなかったが、純良単結晶試料では試料の劣化や割れが発生し、これが本質的であることを理解することが必要であった。高圧下電気抵抗測定は順調に進んでおり、臨界圧力近傍での実験での超伝導・磁気ゆらぎ効果が期待される。臨界圧力近傍を除いて圧力ー温度相図は決定しており、高圧下電気抵抗測定による臨界圧力の決定を急ぐ。臨界圧力近傍において、極低温までの超伝導探索を行うとともに、磁気ゆらぎ効果の探索を行う。圧力誘起相の磁気秩序状態を明らかにするため、高圧下NQR測定を千葉大グループと協力して行う。また、Biフラックス法により大型の単結晶が得られたため、中性子散乱実験を行ない、NQRと相補的に圧力誘起相の磁気秩序状態を明らかにする。

圧力誘起相の磁気秩序状態を明らかにするため、高圧下NQR測定を千葉大グループと協力して行う。また、Biフラックス法により大型の単結晶が得られたため、中性子散乱実験を行ない、NQRと相補的に圧力誘起相の磁気秩序状態を明らかにする。当初予算ではNMR関連装置を計上しているが、電気抵抗測定を優先し、NMRは千葉大との共同研究で進めているため整備が遅れている。また、消耗品として液体ヘリウムを計上しているが、圧力ー温度相図の作成(圧力のチューニング)に時間を要しており、希釈冷凍機を用いた超伝導探索実験をまだ行っていないため、次年度使用の予定となっている。
中分子創薬に適した特性を有する環状ペプチド分子設計手法の開発

環状ペプチドによる中分子創薬では、薬理活性を有するペプチド配列を迅速に発見できるスクリーニングシステムが開発されており、試行錯誤的な合成展開を要する従来型の低分子創薬を凌駕する効率的な創薬が可能になると期待されている。しかし、標的への良好なアフィニティを確保できる反面、薬として持つべき特性を欠いた候補分子が多数得られてしまうという大きな問題点を抱えている。具体的には、ヒト細胞膜の透過性の確保と、血漿タンパク質結合率を適正範囲に保つことの2点が特に課題である。当研究では、これら2点において創薬に適した特性を有する環状ペプチド分子を設計する手法の開発を目指している。ヒト細胞膜透過性の予測では、膜透過の過程を詳細に評価するために分子動力学シミュレーションの適用が有効だと考える。拡張アンサンブル法により大幅に加速された分子動力学シミュレーション(Supervised MD)を用いて、平成30年度は6残基の環状ペプチドの細胞膜透過シミュレーションを約100件程度実施した。得られたトラジェクトリーからPMFを見積もり、膜透過速度を推定したところ、実験値と予測値の相関係数R=0.55程度を得た。上記のシミュレーションの実行には1件あたり23日程度かかるため、日常的な設計支援のためには、より高速な評価手法が必須である。そこで、ペプチド構造の2次元特徴記述子を用いた機械学習による回帰予測を実施し、同じく6残基については相関係数R=0.87程度の予測ができた。非天然アミノ酸を含む特殊環状ペプチドでは可能な設計空間が膨大であるため、過学習でないことを証明するために多様な残基種での検証が待たれる。一方、血漿タンパク質結合率(PPB)の予測に対しては、2次元特徴記述子を用いた機械学習による回帰予測を実施し、同種データの検証でR=0.90程度、異種データによる試験でもR=0.87程度の予測ができた。細胞膜透過性予測については、分子動力学シミュレーションを通じた膜透過速度の推定について、残基長n=6においてはおおむね成功している。特殊環状ペプチドに関しては、膜透過シミュレーションの報告はなく、また約100分子をシステマティックに計算していることから、おそらく世界でも最大規模の突出した研究成果を得られている。科研費を活用して、ほぼ通年にわたりスパコンの長時間利用が可能となったおかげであると考えている。一方、医薬品としての薬効を発揮する上で期待ができる6残基よりも大きな環状ペプチドのシミュレーションを実施しようとすると、脂質二重膜や水層の幅や高さを現状よりも大きく取る必要がある。系の原子数が増えれば、およそ原子数の二乗に比例してステップあたりの時間がかかる上に、さらに透過現象自体が起きにくくなることから必要ステップ数自体が大幅に増加すると見積もられている。このため最終年度に向けて、より大型のシミュレーションを、いかに本質的な部分だけに限定して実施できるか、どのような加速が可能か、などの様々な工夫が待たれている。また、研究実績の概要でも述べたとおり、最終的には機械学習等による迅速な評価方法がなければ、現実的な設計支援システムとしては使いにくいものとなる。このため最終年度に向けては、機械学習モデルの構築に、さらに力を注ぐ必要がある。一方、血漿タンパク質結合率(PPB)予測のテーマについては、当初はタンパク質とのドッキング計算なども必要と想定していたのであるが、機械学習モデルでおおむね良好な予測結果を得られるとの感触を既に得ている。特殊環状ペプチドでは可能な設計空間が膨大であるため、より多くのデータでの評価検証が待たれるものの、当初計画どおりに、期間内での予測モデルの確立ができるのではないかと考えている。1)細胞膜の透過性予測昨年度までに100件程度のシミュレーションを実施したが、これを200300件程度に増加することを目指して、多数のシミュレーションの同時並列実行が自動的に行えるような環境構築を目指すとともに、膜透過性に特に寄与する特性の評価に絞ることなどによる計算の高速化を試す計画である。また機械学習に基づく回帰モデルの作成においては、ペプチド構造内でのグローバルな特徴とローカルな特徴をいかに組み合わせるかについて、入力の次元数を過度に増加させずに実現する手法を考案していく計画である。2)血中タンパク質結合率予測必要な記述子の選抜と計算方法の整備を引き続き実施する。最終年度においては、これまで試してこなかったタンパク質ドッキングにおける独自のスコア関数を本研究に適合させる方策も再度検討する。血中の主要なタンパク質であるアルブミン等と環状ペプチドの簡易的なドッキングスコアを考えることで、これまでの機械学習に基づく回帰モデルの性能が向上し得るかどうかについて評価する。本研究では、環状ペプチドを用いた中分子創薬の支援を目的とし、環状ペプチド創薬の開発で現在懸案となっている、ヒト細胞膜の透過性の予測および血漿タンパク質結合率の予測を可能とする手法の開発を実施する。本年度の実施計画に基づき、ヒト細胞膜の透過性予測においては、分子動力学シミュレーション環境の確立と実験値等の収集を実施した。拡張アンサンブル法の一種であるSteered MD, Supervised MD, Metadynamicsの3手法をそれぞれ実装し、さらに入力となる分子配座の自動生成システムも構築した。また、特殊ペプチドに含まれる人工残基を扱えるようにするために、分子形状と電荷分布の重ね合わせに基づく分子距離行列を作成した。一方、血漿タンパク質結合率の予測においては、2次元および3次元特徴記述子を用いた機械学習による回帰予測を実施した。実験値を良く再現する少数の記述子の組合せを得るために、スパースモデリングの一種であるLasso法を複数回適用する手法を開発した。

サンプル数が1,000件を超える低分子データ(Ingle, et al. J Chem Inf Model 2016)においては5種類の記述子で相関係数0.72となる予測を達成できたが、構築された予測器を環状ペプチド分子(32サンプル)に適用した結果は相関係数0.49に留まり、環状ペプチド分子におけるデータの拡充や、転移学習的枠組みが引き続き必要であることが明らかとなった。本年度の実施計画に基づき、ヒト細胞膜の透過性予測においては、分子動力学シミュレーション環境の確立と実験値等の収集を実施した。拡張アンサンブル法の一種であるSteered MD, Supervised MD, Metadynamicsの3手法をそれぞれ実装し、東工大TSUBAME 3.0スパコン上で実行できる環境を整えた。さらに入力となる分子配座の自動生成システムもOpenBabelライブラリを用いて構築した。また、特殊ペプチドに含まれる人工残基を扱うために、分子形状と電荷分布の重ね合わせに基づくMD-MVO法によって分子距離行列を作成した。D体アミノ酸分子も含め、100×100の分子距離行列を構築し、標準アミノ酸については既存の置換行列との比較解析も実施した。血漿タンパク質結合率の予測においては、2次元および3次元特徴記述子を用いた機械学習による回帰予測を実施した。実験値を良く再現する少数の記述子の組合せを得るために、スパースモデリングの一種であるLasso法を複数回適用する手法を開発し、適用した。血漿タンパク質結合率の値をそのまま目的変数にする場合と、結合定数の対数値(ln Ka)に換算する場合とで検証した結果、サンプル数が1,000件を超える低分子データ(Ingle, et al. J Chem Inf Model 2016)においては5種類の記述子で相関係数0.72となる予測を達成したが、構築された予測器を環状ペプチド分子(32サンプル)に適用した結果は相関係数0.49に留まり、環状ペプチド分子におけるデータの拡充や、転移学習的枠組みが必要であることが明らかとなった。以上の結果はAPBC2018国際会議のポスター発表で報告を行った。環状ペプチドによる中分子創薬では、薬理活性を有するペプチド配列を迅速に発見できるスクリーニングシステムが開発されており、試行錯誤的な合成展開を要する従来型の低分子創薬を凌駕する効率的な創薬が可能になると期待されている。しかし、標的への良好なアフィニティを確保できる反面、薬として持つべき特性を欠いた候補分子が多数得られてしまうという大きな問題点を抱えている。具体的には、ヒト細胞膜の透過性の確保と、血漿タンパク質結合率を適正範囲に保つことの2点が特に課題である。当研究では、これら2点において創薬に適した特性を有する環状ペプチド分子を設計する手法の開発を目指している。ヒト細胞膜透過性の予測では、膜透過の過程を詳細に評価するために分子動力学シミュレーションの適用が有効だと考える。
骨髄幹細胞による腎構成細胞の再構築と腎疾患治療への再生医療の応用に関する研究

1.骨髄幹細胞による腎構成細胞の再構築に関する検討今回、骨髄細胞により腎構成細胞が再構築されうるか検討するため、GFP transgenicマウスとB6マウス間での骨髄移植を行った。その結果、骨髄移植後4週より糸球体、糸球体周囲、腎間質および腎内血管内に明らかにドナー骨髄細胞由来のGFP陽性細胞を認めた。免疫染色の結果、[GFP→B6]マウスの糸球体内にはマクロファージ、T細胞の浸潤を示唆する所見はなく、デスミン陽性細胞にGFPが陽性であったことより、B6レシピエントマウスにおいてメサンギウム細胞はGFPドナー骨髄細胞により再構築されることが示唆された。さらに、骨髄移植後24週時に、[GFP→B6]マウスの糸球体を単離培養したところ抗培養細胞の大半がデスミン陽性細胞であり、デスミン陽性細胞の約60%にGFPの発現を認めた。つぎに培養細胞のAngII刺激に対する反応性を検討したところ、AII負荷10分後に培養細胞は収縮性を示し[GFP→B6]マウスより分離培養されたGFP陽性細胞がメサンギウム細胞であることが確証された。2.糖尿病性腎症(DMN)における腎障害進展機序と腎前駆幹細胞による組織修復への関与DMNにおける腎障害進展機序を解明する目的でDMNマウスに片側尿管結紮(UUO)術を行い検討した。その結果、+m/+mマウスではUUO後8日目には近位尿細管細胞(PTC)におけるp27の発現は低下したのに対し、db/dbマウスではUUO腎PTCにおけるp27の発現が遷延していた。さらにdb/dbマウスのUUO腎では間質内炎症細胞、線維化が軽度であった。つぎにCD133陽性腎前駆幹細胞を検討した結果、非UUO腎間質内ではPTC周辺にCD133陽性細胞を認めたが、UUO腎間質内にはその存在は消失していた。以上より、DMNでは高糖に伴う特異的な尿細管間質反応性を示すこと、さらにUUO腎間質では間質炎症線維化により腎前駆幹細胞が減少し尿細管間質障害の修復過程が障害されている可能性が考えられた。骨髄細胞による糸球体構成細胞の再構築について(目的)骨髄由来細胞により糸球体構成細胞が再構築され得るか、さらに糸球体病変の改善に骨髄由来計細胞が関与しているかを検討した。(方法)GFP-transgenicマウスおよび正常C57BL/6j(H-2b)マウスよりlgA腎症自然発症(HlGA)(non-H-2b)マウスへ放射線照射後に骨随移植を行った。移植後32週後にキメラマウスの抹消血リンパ球および骨髄細胞におけるH-2bあるいGFP染色性をFACSにて解析し、レシピエントの骨髄細胞がドナー細胞に完全に再構築された時点で腎組織学的検討を行った。(結果)H-2b陽性C57BL/6jマウスでは糸球体にH-2b陽性細胞を認めたのに対し、H-2b陰性HIGAマウスではH-2b陽性細胞は認められなかった。一方、(C57BL

/6→HlGA)キメラ群では、糸球体内に浸潤細胞のみならずH-2b陽性細胞を認めたことより、C57BL/6ドナー由来の骨随細胞によりHIGAマウスの糸球体構成細胞の一部が再構築された可能性が示唆された。さらに(GFP→HlGA)キメラでは糸球体内GFP陽性細胞数と免疫グロブリン(lg)沈着の程度は負の相関を示し、GFP陽性細胞が局在する部位ではlg沈着程度は軽減していた。なお糸球体内GFP陽性細胞はマクロファージおよび好中球の細胞マーカー陰性であった。(結語)骨髄由来細胞により一部の糸球体構成細胞が再構築され、骨髄由来糸球体細胞が糸球体病変の改善に関与している可能性が示唆された。(目的)現在、進行性糖尿病性腎症の実験モデルはない。そこで、糖尿病性腎症の糸球体障害の修復過程における骨髄細胞の関与を明らかにする目的で糖尿病性腎症モデル(db/db)マウスに高脂肪食を負荷し、進行性糖尿病性腎症モデルの作成を試みた。(方法)8週齢時雄db/dbマウスおよびそのコントロール(+m/+m)マウスで片側腎摘出を行いその後より、通常(SD)食および高コレステロール(HD)食で飼育した。各マウスで経時的に採血、採尿し生化学的検索を行い、さらに飼育後14週間目に腎組織的検討を行った。(結果)HD食マウスではSD食マウスに比し糸球体硬化度が強く、さらに糸球体内における泡沫化細胞数も有意に高値を示した。HD食マウスでは血清中TCおよびLDL-C値は有意に高値であった。腎組織上db/dbマウスでは+m/+mマウスに比しメサンギウム内のスカベンジャー受容体発現が増強しており、HD食摂取db/dbマウスではHD食摂取+m/+mマウスに比して糸球体内泡沫化細胞は増加し、III型コラーゲンの発現も増強していた。一方、糸球体内泡沫化細胞はマクロファージの表面マーカーであるF4/80抗原およびLFA-1抗原が陰性であったことよりメサンギウム細胞由来と考えられた。(結語)糖尿病性腎症モデルであるdb/dbマウスでは、メサンギウム細胞のスカベンジャー受容体の発現が増強しており、高脂肪食はメサンギウム細胞の泡沫化を誘導し、糸球体硬化を促進させることが示唆された。(今後の展望)今回の研究結果より、糖尿病性腎症発症マウスではメサンギウム細胞におけるスカベンジャー受容体の発現が増強していることが明らかになった。現在までにわれわれは、骨髄細胞がメサンギウム細胞に分化することを報告しており、今後、コントロール(+m/+m)マウスの骨髄細胞をdb/dbマウスに移植し糸球体病変への影響を検討する。尿細管間質障害における尿細管上皮細胞の細胞周期関連蛋白の発現とその意義について(目的)進行性腎障害では尿細管肥大を認めるが、まだその意義は不明である。一方、肥大尿細管上皮細胞はG1期に静止しており、細胞周期関連蛋白p21,p27などの発現が重要と考えられている。したがって、尿細管上皮細胞の再生を考える上で尿細管間質障害における尿細管上皮細胞(TEC)の細胞周期関連蛋白の発現とその意義を解明することは重要と考えられる。そこで、糖尿病発症(db/db)マウスで片側尿管結紮モデル(UUO)を作成し、TEC内のp27の発現を解析し、間質病変の発症におけるその意義を検討した。(方法)8週齢時db/dbマウスおよびコントロール(+m/+m)マウスにUUOを施行し、経時的に腎組織内p27,PCNA,α-SMAおよびマクロファージの浸潤度を検討した。(結果)
沿岸域の都市化に伴う二酸化炭素循環変化と酸性化進行度の推定

近年、流域の下水道整備が大きく進行している浜名湖において、現場観測データと過去の公共用水域データ(1995年)を用いて、1二酸化炭素収支の長期変動、2pH・炭酸カルシウム飽和度の長期変動を明らかにする。さらに、『下水処理水の変化量』・『大気と湖面の二酸化炭素交換量』・『有機物分解実験による二酸化炭素生成量』の解析結果から、3各プロセスによる二酸化炭素収支・酸性化への寄与を定量的に評価する。
量子電磁力学における電子の安定性の数学的研究

平成20年度は廣島文生氏(九州大学)とともに次の2つの研究を行った:(1)準相対論的Pauli-Fierzモデルのスペクトル解析、(2)準相対綸的Nelsonモデルのスペクトル解析。研究目標はそれらの系のハミルトニアンの基底状熊の存在をしかるべき条件のもとで証明することであった。非相対論的なモデルであるNelsonモデルやPauli-Fierzモデルの基底状態の存在についてはほとんど解明されており十分な結果が得られていたが、それらのモデルに含まれているSchrodinger作用素を準相対論的な作用素で置き換えた(1)(2)のモデルのハミルトニアンについてはほとんど解析されていなかった。我々はさらに粒子の運動エネルギーをBernstein関数に置き換えるという一般化を行い-これは非相対論的なハミルトニアンと串相対論的なハミルトニアンを含んでいる-これらのモデルを統一的に考察した。我々の考察によれば運動エネルギーをBernstein関数に置き換える一般化は作用素論的・確率論的に自然であり、非相対論的なモデルで得られていた多くの性質をより一般的な見地から証明することができた。(2)のモデルに対してはすべての結合定数と紫外切断の値に対して次の(a)-(d)の性質を証明することによって基底状態の存在を示した:(a)Binding conditionと呼ばれる最小エネルギーに対する不等式、(b)ボース場が質量m>0を持つと仮定した場合のlocalization estimate,(c)ボース場が質量m>0を持つ場合の基底状熊のBoson Number bound、(d)ボース場が質量mを持つ場合の基底状態のExponential Decay、(d)無質量極限(m→+0)での基底状態の強収束。また(1)のモデルに対しては粒子の質量が小さい場合に上記の条件(a)の性質示し、条件(b)-(d)についてはすべての結合定数に対して証明することができた。したがって(2)のモデルの基底状態の存在は満足のいく形で証明されたといえる。そして(1)のモデルについては(a)の条件以外については満足のいく性質を導けたと考えてよい。これらの解析に対で特筆すべき小はnon-local作用素に対して上記の条件をすべての結合定数に対して評価できたことである、またnon-local作用素に対して(d)のExponential Decayを証明することは難しく、この問題はLevy Processによる確率論的表示を用いた方法によって解決された。
細胞膜Ca受容体の機能とその異常病態に関する臨床研究

(1)細胞膜Ca受容体の機能とその異常病態悪性腫瘍に伴う高Ca血症の原因であるPTHrPをコードしているヒト遺伝子上にPTH遺伝子と同様のビタミンD反応性抑制エレメントが存在することを見いだし、このエレメントにビタミンD受容体(VDR)が結合すること、ヘテロダイマーを形成しうるレチノイン酸受容体RXRは結合しないことを培養細胞系で示した。VDRの結合は1,25-(OH)2D3によって抑制され、その結果転写活性が低下するが、この抑制作用にはVDRのリン酸化とKu抗原が関与することが示唆された(JBC 273:10901,1998)。(2)細胞外ストレス刺激に対する細胞の応答機構本研究の過程で、細胞外の浸透圧変化、張力刺激、さらには熱や重金属といったストレスに対して細胞外Ca濃度変化が影響を与える細胞内調節機構が関与している可能性が示唆された。このような刺激の標的遺伝子の一つであるc-fos遺伝子を利用して、調節の分子機構の解析を行った。従来これらの刺激に対する反応は同遺伝子上にあるSREを介するというのが通説であったが、50mM亜砒酸・100μM Cdによるc-fos mRNAの発現亢進が43°C,1時間の熱ショックの前処置で抑制される傾向が観察されたことから、HSP70ないしHSP90を介した転写調節であることを推測し、c-fosプロモーター領域にHSEの存在することを予測した。その結果、ヒト・ラット・マウスのc-fos遺伝子上流、転写開始点より-450塩基付近に、HSEに特徴的と言われるGAA/TTCのブロックが保存されていることを見いだした。このエレメントの機能について、ゲルシフトアッセイ、スーパーシフトアッセイ、レポーターアッセイなどにより、HSF-1の結合するHSEとして転写調節に関与することを証明した(BBRC 254:566,1999)。1.背景これまで行われた、細胞外および細胞内のカルシウム(Ca)代謝と遺伝子の発現調節、物理的刺激による細胞形態の変化とCaによる遺伝子発現調節との連関、Ca代謝異常病態における細胞膜Ca受容体の機能に関する臨床・基礎研究という一連の研究により蓄えられた基礎的知見(J Biol Chem 266:21903-21910,1991、J Clin Invest 89:1268-1273,1992、J Biol Chem,269:27855-27862,1994、J Biol Chem,271:8593-8598,1996)の臨床応用的研究として計画された。2.目的ANP遺伝子にはPTH遺伝子に見られるnegative Ca反応性エレメントがあり、その分泌が細胞外Caによって負の調節を受けることが動物実験で明らかにされているが、ヒトでCa負荷を行って検討されたという報告はない。さらにこの分泌抑制が、細胞外Caの直接作用によるのかについても判明していない。本年度はこれらを明らかにする目的で以下のような臨床研究を行った。3.成果(1)家族性低Ca尿性高Ca血症(FHH)の患者、特発性副甲状腺機能低下症の患者、正常コントロールそれぞれ2例ずつにCaを経静脈的に負荷した。経時的に血清Ca濃度、血漿レニン活性などの細胞外液量の指標となるパラメータとともに血漿ANP濃度を測定した。その結果、負荷前の血清Caレベルが全く異なるものの、3群全群で細胞外Caの上昇が見られ、これに伴う血漿ANP濃度の低下が認められた。

血中CaとANP濃度をプロットしたところ、FHH群ではPTH分泌における血中Caのセットポイントと同様に、ANP分泌における血中Caのセットポイントも異なっていることが判明した。したがってANPの分泌抑制に血中Caレベルが直接関与している可能性があり、FHH群でセットポイントがシフトしていたことから、細胞外CaによるANPの分泌抑制もPTH分泌の場合と同様に、細胞外Ca受容体が関与している可能性が示唆された(日本内分泌学会1997、日本内分泌学会誌73:190,1997)。(2)本家系におけるCa受容体遺伝子変異を検出する目的で末梢血有核細胞からDNAを抽出し、Ca受容体遺伝子の各エクソンを同定するためのプローブ作成を完了した。一方、治療面での応用として、(3)現在臨床応用が待たれているCa受容体アゴニスト(KRN-R568)を用いた副甲状腺機能亢進症の治療法確立のための治験第2相試験をスタートさせた。また、このアゴニストのより広汎な治療適応の可能性とその理論的根拠を明らかにする目的で、培養細胞にCa受容体cDNAを発現させたシステムを確立し、予備実験を開始している。さらに、(4)この調節型は血清浸透圧の変化によっても作動することが示唆され、この機序について培養細胞系を用いた基礎検討を行った。(1)細胞膜Ca受容体の機能とその異常病態悪性腫瘍に伴う高Ca血症の原因であるPTHrPをコードしているヒト遺伝子上にPTH遺伝子と同様のビタミンD反応性抑制エレメントが存在することを見いだし、このエレメントにビタミンD受容体(VDR)が結合すること、ヘテロダイマーを形成しうるレチノイン酸受容体RXRは結合しないことを培養細胞系で示した。VDRの結合は1,25-(OH)2D3によって抑制され、その結果転写活性が低下するが、この抑制作用にはVDRのリン酸化とKu抗原が関与することが示唆された(JBC 273:10901,1998)。(2)細胞外ストレス刺激に対する細胞の応答機構本研究の過程で、細胞外の浸透圧変化、張力刺激、さらには熱や重金属といったストレスに対して細胞外Ca濃度変化が影響を与える細胞内調節機構が関与している可能性が示唆された。このような刺激の標的遺伝子の一つであるc-fos遺伝子を利用して、調節の分子機構の解析を行った。従来これらの刺激に対する反応は同遺伝子上にあるSREを介するというのが通説であったが、50mM亜砒酸・100μM Cdによるc-fos mRNAの発現亢進が43°C,1時間の熱ショックの前処置で抑制される傾向が観察されたことから、HSP70ないしHSP90を介した転写調節であることを推測し、c-fosプロモーター領域にHSEの存在することを予測した。その結果、ヒト・ラット・マウスのc-fos遺伝子上流、転写開始点より-450塩基付近に、HSEに特徴的と言われるGAA/TTCのブロックが保存されていることを見いだした。このエレメントの機能について、ゲルシフトアッセイ、スーパーシフトアッセイ、レポーターアッセイなどにより、HSF-1の結合するHSEとして転写調節に関与することを証明した(BBRC254:566,1999)。
軸索損傷神経細胞の生存・再生の分子メカニズムの解析

当研究室で既に確立しているディファレンシャル・ディスプレイにより新たな神経再生関連遺伝子探索を行ったところ、いくつもの候補クローンが得られた。昨年度のcDNA全長クローニングにより、得られた候補遺伝子のうちのひとつは新規膜一回貫通型メタロプロテアーゼであることが明らかとなっていたため今年度はその機能解析を中心に進めた。本分子の特徴は神経系特異的に発現していること、末梢・中枢神経軸索損傷に対して極めて効率良く発現応答する点であることから、我々はDINE(Damage Induced Neuronal Endopeptidase)と名付けた。DINEはECE(Endothelin Converting Enzyme)とファミリーを形成しており、ニューロペプチドやサイトカインなどの前駆体プロセッシング酵素である可能性が高い。これらの分子群の発現は障害後の神経細胞において顕著に上昇することが従来より知られており、障害神経細胞に対し何らかの保護作用を持つものと考えられている。そこで、培養細胞を用いてDINEの生存維持活性性を検討した。その結果DINE過剰発現細胞ではセラミドによる細胞死が軽減されることが明らかとなった。このような生命維持活性を示す理由の一つとして、フリーラジカルスカベンジャーであるSOD(superoxide dismutase)が活性化することを我々は見いだした。SODへ至るシグナリング経路は不明でありこの点が今後の課題とされる。またin vivoでのDINEの機能評価を行うため、現在作製したアデノウイルスを用いて神経障害モデル動物への遺伝子導入を試みている。
熱帯地域に潜む未知の蚊媒介性ウイルスの網羅的探索

アジア、アフリカで急性発熱患者や蚊などの節足動物を採取して培養細胞を用いてウイルス分離を行った。分離したウイルスは既知のウイルスを検査した後、未同定のサンプルについて培養上清を蛋白分画と核酸分画に分け、前者はトリプシンで分解し質量分析計(nLC/MS)にてアミノ酸配列情報を、核酸分画は次世代シークエンサー(NGS)にて解析し遺伝子情報を得た。得られた情報をそれぞれ既存のマスコット解析とBLAST解析にて既知のウイルスタンパク、遺伝子との相同性を検索した。データベースでヒットしないアミノ酸配列と遺伝子配列について総当たりの相同検索を実施してこれまで存在が知られていなかったウイルスを複数発見した。交付申請時の計画に従い、ケニア、ベトナム、フィリピンの研究協力者の支援を得て、申請者と分担研究者はそれぞれの地域において検体の採取を実施した。得られたサンプルは既知の急性ウイルス感染症について、既存の血清診断法、遺伝子増幅法等の手法によりウイルス検査を実施し、陰性のサンプルを適切に保存した。また、媒介蚊についても上記の3つの地域において検体採取を実施した。サンプルは現地実験室において、ヒトスジシマカ培養細胞(C6/36)、サル細胞(LLCーMK2、SLAMノックインVero細胞)、複数のヒト単核球系細胞に接種して1週間培養し細胞変性効果を指標にしてウイルス分離を行った。細胞変性が確認された培養液は分離株として海外拠点に保存するとともに、一部サンプルは細胞培養液上清を濃縮して核酸を精製し、蛋白分画と合わせて長崎大学に搬送した。蛋白分画は前処理した後、トリプシンで分解し日立社製のnLC/MS(質量分析計)にて1検体あたり約2万ペプチドのアミノ酸配列情報を得た。核酸分画はロッシュ社製の高性能シークエンサーにて解析し1株あたり20万200万リード(1リード当たり、約400塩基)の遺伝子情報を得た。得られた情報をそれぞれ、既存のマスコット解析とBLAST解析にて既知のウイルスタンパク、遺伝子との相同性を検索した。また、データベースでヒットしないアミノ酸配列と遺伝子配列は別途保存した。上記の、プロテオミクスとゲノミクスの未知配列データを順次、比較解析しており、現時点で、既知のウイルスに加えて、これまで報告の無いウイルスと思われる分離株も同定している。2年次計画に従い、ケニア、ベトナム、フィリピンにおいてヒト、媒介蚊検体の採取を実施した。得られた検体は既知の幾つかの病原ウイルスについて、血清診断法、遺伝子増幅法等の手法により検査を実施した。陰性のサンプルについては現地研究施設で、ヒトスジシマカ培養細胞(C6/36)、サル細胞(LLCーMK2、SLAMノックインVero細胞)、複数のヒト単核球系細胞に接種して1週間培養し細胞変性効果を指標にしてウイルス分離を行った。今回、発見した新種ウイルスの一つ、Tanayウイルスを用いて、本プロジェクトで開発しているプロテオミクスとゲノミクスの未知配列データを比較解析する手法での未知ウイルス配列(塩基配列、残基配列)の検出プロプログラムの有効性について検討し良好な結果を得た。当初計画に従い、ケニア、ベトナム、フィリピン、加えて日本国内においてヒト、媒介蚊等の検体採取を実施した。得られた検体はデングウイルス等の既知の病原ウイルスについて、血清診断法、遺伝子増幅法等の手法により検査を実施した。陰性のサンプルについてはヒトスジシマカ培養細胞(C6/36)やサル細胞(LLCーMK2、SLAMノックインVero細胞)および、複数のヒト単核球系細胞に接種して1週間培養し細胞変性(CPE)を指標にしてウイルス分離の有無を確認した。細胞変性が確認された培養液は再度培養細胞に接種してCPEを確認できた場合に分離株として保存するとともに、一部サンプルは細胞培養液上清を濃縮して核酸を精製し、蛋白分画と合わせて長崎大学熱帯医学研究所に搬送しその後の解析を実施した。蛋白分画は日立社製のnLC/MS(質量分析計)にてアミノ酸配列情報を取得し、核酸分画はロッシュ社製の高性能シークエンサーにて解析し遺伝子配列の情報を取得しそれぞれマスコット解析とBLAST解析にて当初想定外ではあるが既知の、ナムディンウイルス、チクングニアウイルス、蚊フラビウイルスの分離が確認された。しかし、既存のデータベースでヒットしないアミノ酸配列と遺伝子配列は別途保存し、本プロジェクトで開発しているプロテオミクスとゲノミクスの未知配列データを比較解析する手法での未知ウイルス配列(塩基配列、残基配列)の検出プログラムを用いて新規ウイルスの可能性のある遺伝子配列とアミノ酸配列を抽出し、その情報からPCRのプライマーを合成して、元のサンプル中に標的遺伝が存在するか否かを確認したのち、ジーンウオーキングにより2つの新規ウイルスゲノムの配列を確認した。さらにこれらのウイルスを検知するための高感度リアルタイムPCRとLAMP法を確立した。

分離したウイルスは既知のウイルスを検査した後、未同定のサンプルについて培養上清を蛋白分画と核酸分画に分け、前者はトリプシンで分解し質量分析計(nLC/MS)にてアミノ酸配列情報を、核酸分画は次世代シークエンサー(NGS)にて解析し遺伝子情報を得た。得られた情報をそれぞれ既存のマスコット解析とBLAST解析にて既知のウイルスタンパク、遺伝子との相同性を検索した。データベースでヒットしないアミノ酸配列と遺伝子配列について総当たりの相同検索を実施してこれまで存在が知られていなかったウイルスを複数発見した。平成26年度は調査地域において、蚊媒介性のウイルス感染症の流行が発生し、媒介蚊の採取も問題なく実施できた。採取した検体については予定通りの検体処理を実施して、多くはデングウイルスであったが、蚊からのサンプルについては同定不能のウイルス様検体が採取できた。本研究は、プロテオミクスの情報とゲノミクスから得られる大量の遺伝子情報を比較解析することで1)未知のウイルスを迅速に同定する手法を確立する、2)アジア・アフリカの熱帯地域で調査を実施して、ヒトに病原性を示す可能性のある蚊媒介性ウイルスを網羅的に同定する、3)同定した新型ウイルスについて特異的診断法を創出して疾病の流行実態を明らかにする事を目的としているが、1)に関してはプログラムデザインが完了し、目的にそった機能をもつことを確認できた、2)に関しては新ウイルスを発見して、国際誌に発表した。3)については新ウイルス(Tanayウイルス)の特異的高感度遺伝子検出系を作製した。以上のように研究は計画にそって進展している。27年度が最終年度であるため、記入しない。ウイルス学最終年度も当初計画にそって、研究を推進する。すなわち、初年度、2年度に実施したフィールドでのウイルス分離と長崎大学でのプロテオミクス、ゲノミクス融合による新規ウイルスの探索作業を継続する。加えて、新たに発見したウイルスについてウイルス学的な解析を進めるとともに、ウイルス特異的な抗体検査と遺伝子検出技術を開発する。また、新規ウイルスについてこれまでに保存された検体についてその存在の有無を検索する。検体採取については、これまで2年間大過なく実施されたため、予備に保存していた過去のサンプルについての検索は実施しなかったが、最終年度は検体採取の状況にかかわりなく、過去にベトナム、フィリピン、ケニア等において我々がヒトと蚊から分離した、未同定のウイルス株についても検査を完了する。熱帯地域では蚊によって媒介される熱帯特有のアルボウイルスなど、ウイルス感染症が猛威を振るっている。しかし、ウイルス感染症と思われる症例でも、原因ウイルスを特定できない場合も多い。本研究は、熱帯地域とくに、ケニアやベトナムなどアフリカ・アジア諸国で発生する原因不明の発熱・脳炎症例および、自然界の蚊から同定不能のウイルスを分離し、プロテオミクスの情報とゲノミクスから得られる大量の遺伝子情報を比較解析することで1)未知のウイルスを迅速に同定する手法を確立する、
先進産業国家における利益集団構造の形成および変容に関する比較政治的統計分析

本研究の目的は、比較可能な統計的データを体系的に収集し、利益集団データを作成すること、さらにそれに基づき基に先進国の利益集団の形成・変容をできるだけ客観的位置づけることであった。またそれにより先進国政治体制論争に理論的寄与をする素材を提供することであった。筆者は、二年度の研究によって日本、韓国、アメリカに加えて、イギリス、ニュージーランド、カナダ、オーストラリアの団体に関する国勢調査データ(団体従事者、非営利団体従事者)、ほぼすべて国家のINGO数量データ(INGO本拠数、INGO参加数)、NP(非営利)セクターに関する統計等を共同研究者とのデータ交換や海外調査による作業などによって収集しえた。二年度目にははある程度完成したこの利益集団データベースに依りつつ、日本、韓国、APEC構成国、日韓比較、日米比較などの歴史分析および比較分析を遂行した。結果として、日本の位置に関して、発展の時系列的特性(4つの波)、総体としての発展度(先進国中、中位以上)、産業系団体への片寄り(特にビジネス)、市民系の把握困難さと推定される未発達、1980年代以降の新しい動向(その他団体の急増)、国際NGOの国内未発達(欧州の優位)と国際参加の急増、NPO(非営利)セクターの特性などの点で、新しい発見が析出しえた(別記の諸論文参照)。こうした発見は世界的にも初めて確証され分析されたものもあり、政治体制論に新しい視角を提供するものである。また、1990年代中葉の政治変動理解への構造的視角、日本の世界戦略への示唆、韓国などアジア諸国の位置づけなどに関しても新しい光を投じるものである。筆者は現在、この研究に基づき現代政治体制論および比較利益集団論を書物の形で執筆中である(1996年度内に刊行予定)。本年度の第一の課題は、比較可能な2種類のデータを先進国、中進国の中からできるだけ多く収集することであった。すなわち『国勢調査』、『人口統計』の中に、非営利団体、政治・経済・文化団体、宗教団体、社会福祉・社会事業団体に従事する人のデータを見いだすこと、また『事業所統計』およびその等価物において、同様な団体に関する統計を見いだすことである。もう1種類のデータは団体統計の外在的な変数にあたる社会統計、例えば産業別人口構成や都市化率などの統計を収集する必要がある。そのために、研究者のネットワークを通じて、また統計を作成する統計局のネットワークを通じて、統計の存否を調査し、存在する場合は必要な箇所の複写を行った。また統計以外の利益集団データ、例えばCDROMに入った団体年鑑データ、たとえばEncyclopedia of Associations,Gale,USAなどを体系的に収集し、上記のデータと比較することを開始した。さらに第2の課題として、引き続き内容の検討、データベースへの入力を行い、データ分析を開始した。その他、国際比較研究を行っている二つのチーム、「ジョンズ・ホプキンス大学非営利セクター国際比較研究プロジェクト」、「日本国際交流センター、アジア太平洋地域共同体の基盤としての民間非営利活動の実態調査プロジェクト」と研究協力を行い、データを入手し分析を行った。本年度研究の目的は、すでに収集した比較可能な統計的データを基に先進国の利益集団の形成・変容をできるだけ客観的位置づけることであった。筆者は、今年度に入り日本、韓国、アメリカに加えて、イギリス、ニュージーランド、カナダ、オーストラリアの団体に関する国勢調査データ(団体従事者、非営利団体従事者)、ほぼすべて国家のINGO数量データ(INGO本拠数、INGO参加数)、NP(非営利)セクターに関する統計等を共同研究者とのデータ交換や海外調査による作業などによって収集しえた。今年度はある程度完成したこの利益集団データベースに依りつつ、日本、韓国、APEC構成国、日韓比較、日米比較などの歴史分析および比較分析を遂行した。

結果として、日本の位置に関して、発展の時系列的特性(4つの波)、総体としての発展度(先進国中、中位以上)、産業系団体への片寄り(特にビジネス)、市民系の把握困難さと推定される未発達、1980年代以降の新しい動向(その他団体の急増)、国際NGOの国内未発達(欧州の優位)と国際参加の急増、NPO(非営利)セクターの特性などの点で、新しい発見が折出しえた(別記の諸論文参照)。こうした発見は世界的にも初めて確証され分析されたものもあり、政治体制論に新しい視角を提供するものである。また、1990年代中葉の政治変動理解への構造的視角、日本の世界戦略への示唆、韓国などアジア諸国の位置づけなどに関しても新しい光を投じるものである。