hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
栄養状態変化に対するマウスDNAメチル化プロファイルの変動性に関する研究

DNAメチル化は細胞分裂後のゲノムに複製される、細胞固有の情報を維持伝達するエピジェネティクス機構である。哺乳類においてDNAメチル化は遺伝子サイレンシングやクロマチン構造の凝縮を起こし、組織特異的遺伝子発現、細胞分化などに関与している。すなわち、ゲノムワイドなDNAメチル化プロファィルが、細胞のエピジェネティック情報の主体である。本研究ではメチル化プロファイルが栄養状態など細胞の代謝状態の変化に対してどの程度安定であり可変的であるか、個体のエネルギー対象の上で重要な白色及び褐色脂肪細胞を対象にして解析を行った。マウス白色前駆脂肪細胞in vitro系の脂肪蓄積過程におけるメチル化プロファイル解析を行った。RLGS法による約1,100のNotI座位のメチル化状態解析、Vi-RLGS法によるメチル化変動座位の予測、159のNotI座位の定量的リアルタイムPCR及びPyrosequenceによるメチル化状態解析を行い、脂肪蓄積過程でメチル化状態が変化する座位を同定した。またメチル化変化パターンとして一方向遷移と一過的変化が見出され、脂肪蓄積過程でメチル化プロファイルが柔軟に変化することが明らかになった。さらにマウス組織・幹細胞におけるメチル化プロファイルの類似度比較及びプロファイル構成座位のゲノム情報解析を行い、白色及び褐色脂肪細胞とその前駆細胞、及びその他の各種組織・細胞のメチル化プロファイルについて、階層的クラスタリング法による類似度解析を行った。メチル化プロファイルは形質上の類似性を反映することが確認された。さらに脂肪細胞系列間でのメチル化プロファイルはその他の組織・細胞よりも類似度が高いことが明らかになった。代謝状態に応じてメチル化状態は個別の座位では柔軟に変動するものの、プロファイル全体では細胞系列の範囲内での類似性を保ち安定であることが示された。
ヒト子宮筋腫組織皮下移植マウスモデル作成とデコリンによる非ホルモン治療の開発

子宮筋腫は最も頻度が高い婦人科良性腫瘍であるが、発症過程などは十分に解明されていない。本研究では、ヒト筋腫組織を用いた簡便なマウス皮下移植モデルを考案し、移植筋腫の発育を確認するとともに、筋腫組織の移植に適した子宮筋腫摘出術式及び腫瘍内における筋腫の部位を分子生物学的および組織学的な解析を行うことによって探索した。まず、ヌードマウスヒト子宮筋腫皮下モデルを用い、血管新生因子を含有したゲルの有無、estradiol(E2)やprogesterone(P)の必要性について検証したところ、薬剤徐放システムを用いたE2とP両方の持続的な投与が皮下移植した子宮筋腫の発育に必要であることを確認した。次に、子宮筋腫摘出術前のgonadotropin releasing hormone agonist(GnRHa)投与による偽閉経療法の有無、摘出した子宮筋腫のサイズ、組織片採取部位などの因子と、マウスへの筋腫組織片移植後の腫瘍サイズの発育度との関連を組織学的な解析を含めて検討した。結果として1腹式子宮筋腫核出術、2術前のGnRHa投与、310cm以上の子宮筋腫であること、また、4組織採取部位が筋腫辺縁部位であることが移植後の筋腫の発育に重要な因子であることが判明した。本研究により、新しいヒト子宮筋腫マウスモデルを確立した。このマウスモデルは、子宮筋腫に対する新しい治療法の開発に役立つと考えられる。a.最適な移植片の検討:子宮筋腫に対し子宮筋腫核出術または子宮全摘術を行った患者から採取した子宮筋腫組織を、インフォームドコンセントの上、マウスモデル作成に使用する。組織片のまま移植することにより、組織学的に平滑筋種の特徴を保持することをめざすためである。BaLB/Cヌードマウスを用い、移植片の作成には、子宮筋腫の辺縁部より採取する群と中央部から採取する群、および術前GnRHアゴニスト投与の有無も比較対象とする。さらに、摘出筋腫の大きさ別にも分類し、移植片を作成。以上のように多群に分類し、エストロゲンおよびプロゲステロンを含有する徐放ペレットをマウス皮下に埋め込み、筋腫移植後の各移植片の生着および成長の有無を以下の方法で検討した。b.移植組織の生着と成長の検討:移植から8週間経過後に筋腫組織を摘出し、HE染色にて組織学的検討を行い、平滑筋の同定のため抗SMαアクチン抗体、Ki67抗体による免疫染色を行った。さらに、腫瘍の重量を測定し、移植時の組織片の重量と比較し、マウスへ移植後の筋腫組織の増大の有無を検討した。c.ホルモン依存性の確認:子宮筋腫の特徴であるエストロゲンおよびプロゲステロン依存性を確認するため、移植後1か月経過したマウスモデルから子宮筋腫塊を摘出し、抗エストロゲンレセプター(ER)α抗体および抗プロゲステロンレセプター(PR)抗体による蛍光免疫染色を行い、各レセプターの有無を移植前の筋腫組織片と移植後の組織片にて観察した。子宮筋腫モデルマウス作成はおおむねでき論文作成中であるが、デコリン投与による平滑筋細胞の増殖、細胞周期に及ぼす影響などは未だ出来ていない。(目的)子宮筋腫に対する適切な動物モデルを作成するために、ヒト平滑筋腫のための新たな簡単なマウスモデルの開発を試みた。(方法)平滑筋腫組織を、ゴナドトロピン放出ホルモンアゴニスト(GnRHa)処理の有無にかかわらず、異なる外科手術によって切除した筋腫から採取し、エストラジオール/プロゲステロン放出ペレットを用いてBALB /cヌードマウスに皮下移植した。移植組織の生着と成長の検討;移植から8週間経過後に筋腫組織を摘出し、HE染色で組織学的検討を行い、平滑筋の同定のため抗SMαアクチン抗体、Ki67抗体による免疫染色を行った。さらに、腫瘍の重量を測定し、移植時の組織片の重量と比較し、マウスへの移植後の筋腫組織の増大の有無を検討した。また、エストロゲンおよびプロゲステロン依存性を確認するために、移植後1か月経過したマウスモデルから子宮筋腫塊を摘出し、抗エストロゲンレセプター(ER)α抗体および抗プロゲステロンレセプター(PR)抗体による傾向免疫染色を行い、各レセプターの有無を移植後の組織片で調べた。(結果)GnRHa処置による腹部筋腫切除により切除された大きな筋腫の周辺部位から得られた移植された平滑筋腫組織は、移植されたマウスにおいて十分な腫瘍増殖を示した。GnRHaで処置した平滑筋腫は、エストロゲン/プロゲステロン受容体遺伝子、インスリン様増殖因子2(IGF2)および胚平滑筋ミオシン重鎖(SMemb)を高度に発現し、平滑筋腫の増殖を促進することが判明し、マウスモデルの確立には有用な結果と考えられた。このモデルは新しい治療戦略の開発に有用である。成果は論文へ投稿中である。ヒト子宮筋腫組織皮下移植マウスモデル作成は成功したが、デコリンを用いた非ホルモン治療の開発の研究結果が出ていない。

まず、ヌードマウスヒト子宮筋腫皮下モデルを用い、血管新生因子を含有したゲルの有無、estradiol(E2)やprogesterone(P)の必要性について検証したところ、薬剤徐放システムを用いたE2とP両方の持続的な投与が皮下移植した子宮筋腫の発育に必要であることを確認した。次に、子宮筋腫摘出術前のgonadotropin releasing hormone agonist(GnRHa)投与による偽閉経療法の有無、摘出した子宮筋腫のサイズ、組織片採取部位などの因子と、マウスへの筋腫組織片移植後の腫瘍サイズの発育度との関連を組織学的な解析を含めて検討した。結果として1腹式子宮筋腫核出術、2術前のGnRHa投与、310cm以上の子宮筋腫であること、また、4組織採取部位が筋腫辺縁部位であることが移植後の筋腫の発育に重要な因子であることが判明した。本研究により、新しいヒト子宮筋腫マウスモデルを確立した。このマウスモデルは、子宮筋腫に対する新しい治療法の開発に役立つと考えられる。デコリン投与による平滑筋細胞の増殖や細胞周期に及ぼす影響を調べる。その後、作成出来た子宮筋腫モデルマウスにデコリンを投与し、治療への応用が可能かを調べていく。ヒト子宮筋腫組織皮下移植マウスモデル作成は成功したので、同モデルマウスを用いて、デコリンを用いた非ホルモン治療の開発の研究結果が出ていないため、ヒト子宮筋腫組織皮下移植マウスを用いて、デコリンを用いた移植筋腫の縮小の有無を調べていく予定である。
急速凍結固定-電子顕微鏡法による植物細胞と細胞小器官の超微細構築の研究

急速凍結固定法は液化したプロパン、フレオン、窒素、ヘリウムを用いて10^510^6C/秒の凍結速度で細胞内の水をガラス状(vitereaus)にし、氷晶形成による構造破壊を排除して細胞構造を物理的に固定する方法である。化学固定剤を用いないことと固定時間分解能が高いことにより、理想的な固定法として動物細胞の微細構造研究に用いられている。厚い細胞壁と水分に富む液胞を持つ植物細胞への応用には種々の困難があるとされてきた。この研究では単細胞(酵母、微細藻、花粉など)、プロトプラスト、単離葉緑体を用いた。冷却剤としては液化したプロパン、フレオン、窒素、ヘリウムを、急速凍結法としては浸漬法、圧着法、ジェット法を用いた。研究対象とした細胞構造は微小管やアクチン繊維などの細胞骨格、葉緑体、光合成膜、葉緑体の分裂環構造、ゴルジ体、ミトコンドリア、膜表圧性タンパク質複合体である。これらの構造はいずれも、これまでの化学固定法で研究されているが、適正な条件で急速凍結すればより容易に、明瞭に、再現性よく固定されることが示された。その結果、細胞小器官の動態が正しく捕らえられ、細胞周期や異なる生理的、実験的条件下でのその挙動を解明することができた。急速凍結置換固定によってタンパク質構造体(フィユビリソーム、微繊維、葉緑体分裂環構造)の優れた固定像が得られ、サブユニット構造やその超微細構築を解析し、機能を考察することが可能になった。急速凍結固定した細胞の細胞化学的、免疫顕微鏡的研究も行われ、成果が得られ、今後ひろく用いる道が拓かれた。急速凍結固定法は植物細胞の研究でも優れた固定法として用いることができる。しかし、その難点はどの凍結法を用いても良い固定像の得られる範囲が冷却剤との接触面の近傍(1030μm)に限られることである。多細胞組織への応用はこれからの課題である。研究分担者は目的に従って異なった方法で急速凍結固定した細胞を種々の方法で観察し,細胞と細胞器官の微細構築と動態を明らかにし,いくつかの新知見を得た.購入した急速凍装置(JFDーRFA)も用いられた(村上・長船)(1)田中,平野,大隅は分裂酵母を用いた.田中は細胞分裂に関与すると考えられる細胞内小胞とミトコンドリアの細胞分裂過程での挙動を,平田は減数分裂過程における微小管の挙動を明らかにした.ミトコンドリアが細胞周期を通じて融合・分裂することと,核内微小管が減数分裂中期後期でS型に,後期波型になることは急速凍結固定法で明らかにされた新知見である.大隅はプロトプラストの細胞壁再生過程で,はじめ局所的に形成される壁物質が繊維構造を経て帯状になり細胞表面の全域に及ぶことを示した.(2)急速凍結固定法が化学固定法より優れた方法であることが示された.長船はこの方法がユーグレナのワックス,貯留胞の内部構造および細胞器官相互の膜の連結の観察に,野口は花粉管のゴルジ槽膜接着物質(構造)の観察に優れていることを明らかにし,それぞれ細胞周期と花粉管成長過程における微細構築と動態を追跡している.

植田は急速凍結固定法が免疫電子顕微鏡法でも優れていることを示し,セネデスムスの異なる膜構造(細胞壁,ゴルジ体膜,ゴルジ小胞,原形質膜)が異なるレクチンに反応することから,それぞれの膜系が異なる糖タンパク質を持つと結論した(3)村上は凍結置換法とディープエッチングレプリカ法を用いて,アサクサノリチラユイド膜のE面に10nm膜内粒子と網状構造をはじめて観察した.黒岩はイデユコゴメの葉緑体分裂を細胞骨格阻害剤(サイトカラシンB,クレマート)で阻害すると分裂環構造が消失することを見出した.しかし,免疫電子顕微鏡法でアクチンの存在を分裂環構造に示すことはできなかった.これは今後の課題である.1.田中は分裂酵母の細胞骨格の微細構造を観察するため急速凍結置換固定の条件を検討し、アクチン顆粒(フィラソーム)が微細繊維からなる構造であることを明らかにした。大隅も同じ酵母でフィラソームを確認し、それがプロトプラストの細胞壁再生に関与していることを示す知見を得た。平田は酵母の核分裂に際して形成されるSpindle Polar Bodyの微細構造を明らかにし、加えてc-AMP代謝異常株で細胞質内に微繊維構造が形成されるのを見出した。急速凍結置換固定法が植物細胞の細胞骨格の微細構築と動態を研究するための優れた固定法であることが示された。2.野口は、Na^+イオノフォア(モネンシン、10^<-7>10^<-5>M)処理によって花粉管伸長が阻害されるとともに、ゴルジ体のシスターネがトランス側からシス側に順に膨潤し、シスターネ周辺部での分泌小胞の形成が阻害されることから、分泌小胞の形成阻害が花粉管伸長阻害の原因であるとされることから、分泌小胞の形成阻害が花粉管伸長阻害の原因であると考えた。長船はコーグレナの細胞周期の特定の時間に葉緑体が互に融合し、核とも会合する現象を見出した。野口と長船の研究は急速凍結固定法が細胞小器官の動態の研究に有用な手段であることを示している。3.村上は光合成膜上の親水性タンパク質粒子(ATPアーゼとフィコビリソーム)の、黒岩は葉緑体分裂環構造の微細構築を急速凍結固定法を用いて、通常の化学固定法より容易に、再現性よく、かつ明瞭に示し、それらの成分、超微細構築、形成を考察するための知見を得た。4.植田は、急速凍結固定法と免疫顕微鏡法を組合せていくつかの微細藻細胞の微小管と微繊維を検出し、固定し、細胞分裂過程におけるそれらの挙動を解明した。この研究で、急速凍結固定法は植物細胞でも有用な方法であることが示され、細胞構築についての理解が深まり、細胞化学的研究や免疫電子顕微鏡的研究への応用の道が開かれた。
肥満と高血圧に関与する新しいホルモンに関する基礎的・臨床的検討

アドレノメデュリンは、血管拡張作用や抗酸化ストレス作用を有する多機能性ペプチドである。申請者は、脂肪細胞におけるアドレノメデュリンの発現を世界で最初に明らかにして、アドレノメデュリンがアデポカインの一つであること証明した。さらに、脂肪細胞分化時においては、アドレノメデュリンの発現を抑制ならびに促進する機構が脂肪細胞には備わっており、抑制にはアドレノメデュリン遺伝子プロモーター領域に存在するADRE-ARが、促進にはSp1結合領域が関与していることを明らかにした。アドレノメデュリン遺伝子プロモーター領域に存在するSp1結合領域には、転写因子Sp1と転写因子AP-2が複合体を形成して結合して、アドレノメデュリン遺伝子転写を促進している可能性を示唆した。新規アドレノメデュリン関連ペプチドであるアドレノメデュリン2の測定系を確立した。視床下部を含む脳、下垂体、心臓、腎臓における存在を明らかにした。特に、下垂体と腎臓において高濃度であることを明らかにした。また、心臓の心外膜周囲の脂肪組織の免疫組織化学的検討にて、脂肪細胞にアドレノメデュリン2が発現している事実をはじめて明らかにした。副腎と副腎腫瘍におけるアドレノメデュリンとアドレノメデュリン2の発現を検討し、これら2つのペプチドの発現が副腎皮質腫瘍の病態に深く関与する可能性を示唆した。また、アドレノメデュリン2の遺伝子多型と高血圧が関連する可能性を示唆するデータも得られた。脂肪細胞から分泌されるアドレノメデュリンは、代謝症候群の合併症の進行に防御的に作用すると考えられる。特に、その生理作用から高血圧と高血圧に伴う心臓・腎臓障害の進行を防御していると推測される。今後、代謝症候群の新規治療法の開発に向けて、また糖尿病との病態への関与の解明も含めて、検討を続ける予定である。アドレノメデュリンは、様々な細胞から産生される血管拡張性ペプチドである。アドレノメデュリン遺伝子ノックアウトマウスのヘテロ接合子では、老齢化するに従い耐糖能低下をきたすことから、抗糖尿病作用も有すると考えられる。これまで、血管内皮・平滑筋細胞、心筋細胞、線維芽細胞、マクロファージ、神経細胞、グリア細胞、上皮細胞等、種々の細胞からのアドレノメデュリンの産生・分泌が知られていたが、我々は脂肪細胞からもアドレノメデュリンが産生されることを初めて明らかにした。3T3-L1細胞がデキサメサゾン・インスリン等の刺激にて脂肪細胞に分化する際には、初期にアドレノメデュリン発現が低下する。この遺伝子発現抑制に関与するアドレノメデュリン遺伝子プロモーター領域を同定して、ADRE-ARと命名した。他方、ヒト間葉幹細胞が脂肪細胞に分化する際には、初期にアドレノメデュリン発現が増大する。この際には、アドレノメデュリン遺伝子プロモーター領域(-70/-29)に、転写因子であるSp1が作用して遺伝子発現を誘導していることを明らかにした。アドレノメデュリン遺伝子プロモーター領域(-70/-29)には、転写因子AP-2の結合配列が多数存在しているので、今後Sp1とAP2のアドレノメデュリン遺伝子転写への相互作用を検討予定である。さらに、新規生理活性ペプチドであるアドレノメデュリン2の特異的、高感度測定系を作成して、ヒト組織におけるアドレノメデュリン2の分布を明らかにした。申請者は、昨年までの検討にて、脂肪細胞におけるアドレノメデュリンの発現を世界で最初に明らかにして、アドレノメデュリンがアデポカインの一つであること証明した。

さらに、脂肪細胞分化時においては、アドレノメデュリンの発現を抑制ならびに促進する機構が脂肪細胞には備わっており、抑制にはアドレノメデュリン遺伝子プロモーター領域に存在するADRE-ARが、促進にはSp1結合領域が関与していることを明らかにした。今年度の検討において、アドレノメデュリン遺伝子プロモーター領域に存在するSp1結合領域には、転写因子Sp1と転写因子AP-2が複合体を形成して結合して、アドレノメデュリン遺伝子転写を促進している可能性を示唆した。新規アドレノメデュリン関連ペプチドであるアドレノメデュリン2の測定系を確立した。視床下部を含む脳、下垂体、心臓、腎臓における存在を明らかにした。特に、下垂体と腎臓において高濃度であることを明らかにした。また、心臓の心外膜周囲の脂肪組織の免疫組織化学的検討にて、脂肪細胞にアドレノメデュリン2が発現している事実をはじめて明らかにした。副腎と副腎腫瘍におけるアドレノメデュリンとアドレノメデュリン2の発現を検討し、これら2つのペプチドの発現が副腎皮質腫瘍の病態に深く関与する可能性を示唆した。また、アドレノメデュリン2の遺伝子多型と高血圧が関連する可能性を示唆するデータも得られた。脂肪細胞から分泌されるアドレノメデュリンは、代謝症候群の合併症の進行に防御的に作用すると考えられる。特に、その生理作用から高血圧と高血圧に伴う心臓・腎臓障害の進行を防御していると推測される。今後、代謝症候群の新規治療法の開発に向けて、また糖尿病との病態への関与の解明も含めて、検討を続ける予定である。
痴呆疾患の発症と神経病理の形成に及ぼす遺伝的要因の研究

われわれは家族性AD(FAD)の原因遺伝子および弧発性ADの発病リスクファクターの探査を行った。1.FDAおよび非アルツハイマー型家族性痴呆患者の遺伝子変異の同定FDAのDNAからamyloid precursor protein(APP)、presenilin 1(PS1)、およびpresenilin 2(PS2)のミスセンス変異を検索している。数家系のFDA家系を発見し、遺伝子変異を解析した。また非アルツハイマー型家族性痴呆症について1家系を見いだし、tau蛋白の遺伝子変異について解析し報告した。2.弧発性アルツハイマー型痴呆の発症危険遺伝子の探索PS1およびPS2は上に述べたようにFDA、特に若年性FADの発症にはきわめて大きな意義を有している。われわれは弧発性非家族性AD、特に若年発症ADにおいてもこのPS蛋白の遺伝子変異ないし遺伝子多型がADの発症に関与しているのではないかと考え、PS蛋白のミスセンス変異を検索している。現在のところまだ成果は得られていないが、今後症例を増やして検索して行くつもりである。3.PS1イントロン遺伝子多型、ブチリルコリンエステラーゼ(BChE-K)遺伝子K多型、α1-ACT遺伝子多型およびLRP遺伝子多型それぞれの遺伝子多型出現頻度は早発性、晩発性ADのいずれにおいても、それぞれの健常対照群とほぼ同じであった。また、遺伝子多型とApoE e4多型の間にも相関関係は認めなかった。4.apoE遺伝子多型apoEε2多型についてはADの発症を抑制するという指摘がある。早発性ADにおいてはapoEε2多型の出現頻度が有意に高く、ε2は早発性ADに対しては、むしろ発症を促進させる方向にはたらくとした報告もなされている。われわれの自験例では、apoEε2は遅発性AD、特に女性では発症防御的に作用するのにたいして、早発性ADでは一定の傾向はみられなかった。1.家族性アルツハイマー病患者(FDA)および家族集積性の高い非アルツハイマー型痴呆患者の遺伝子変異の同定家族性発症を認めるアルツハイマー病患者(FDA)のDNAからamyloid precursorprotein(APP)、presenilin 1、およびpresenilin 2のミスセンス変異を検索している。現在数家系のFDA家系を発見し、遺伝子変異を解析中である。とくにpresenilin2のミスセンス変異を伴うFDAはまだ世界的にも数家系しか報告されておらず、解析の結果が待たれている。また非アルツハイマー型家族性痴呆患者とくにパーキンソン症状を伴う家族性痴呆症について1家系を見いだし、tau蛋白の遺伝子変異について解析中である。2.アルツハイマー型痴呆の発症危険遺伝子の探索presenilin1、およびpresenilin2は上に述べたようにFDA、特に若年発症のアルツハイマー型痴呆(AD)の発症にはきわめて大きな意義を有していると考えられている。われわれは散発生、すなわち非家族性AD、特に若年発症ADにおいてもこのpresenilin蛋白の遺伝子変異ないし遺伝子多型がADの発症に関与しているのではないかと考え、presenilin蛋白のミスセンス変異を検索している。Alzheimer病の分子遺伝学、発病リスクファクターAlzheimer病(AD)の約10%は家族歴を有する家族性AD(FAD)であるが、残りの約90%は孤発性ADである。apolipo蛋白E(apoE)が遅発性FAD病および孤発性ADの発症危険因子であると考えられており、apoE以外には未だ見いだされていない。

われわれは弧発性ADを対象として発病リスクファクターの探査を行った。1.プレセニリン1イントロン(PS1)遺伝子多型PS1イントロンのアレル1出現頻度は早発性、晩発性ADのいずれにおいても、それぞれの健常対照群とほぼ同じであった。またPS1遺伝子多型とApoE e4多型の間に相関関係は認めなかった。2.ブチリルコリンエステラーゼ(BChE-K)遺伝子K多型AD群と健常対照群の間で全年齢、早発性および晩発性のいずれに分類した場合においても、BChE-Kの出現頻度に有意差はなかった。また、晩発性AD群においてApoE e4アレルとBChE-Kの合併出現頻度が有意に高値であるという事実も認めなかった。3.apoE遺伝子多型apoE ε2多型についてはADの発症を抑制するという指摘がある。apoE ε2をもつ人は死亡率が高いことを考慮して、発症後の経過年数を短く限定すると、早発性ADにおいてはapoE ε2多型の出現頻度が有意に高く、ε2は早発性ADに対しては、むしろ発症を促進させる方向にはたらくとした報告もなされている。われわれの自験例でも、apoE ε2は遅発性AD、特に女性では発症防御的に作用するのにたいして、早発性ADでは一定の傾向はみられなかった。
PETとMRSの融合による新しいヒト脳内薬物濃度・受容体占拠率測定法の開発

これまでの福島県立医科大学先端臨床研究センターにおける測定により、3テスラ(3T)のMR装置を用いたMR spectroscopy(MRS)の感度では、服薬した薬物自体の脳内濃度の推移を追跡するのは測定感度が不十分で技術的に困難であることが示された。次いで、岩手医科大学の超高磁場先端MR研究センターの7テスラ(7T)の高磁場MR装置に福島医科大学で測定したものと同一のファントムを持ち込んでMRS測定を行った。しかし、ファントム中の薬物の検出は困難であった。総合的に評価すると、ヒトにおける生理的濃度よりも高く調整した高濃度サンプル内の薬物分子は、3T-MRSでは比較的良好に測定できていたが、7T-MRSでは測定効率はむしろ低下した。以上の所見から、7T-MRSは高磁場により感度が高くなっているものの、検出感度の大幅な向上は期待できず、MRSを用いた微量物質検出に用いるためには信号検出やノイズ除去等を含む測定方法の最適化が必要であると考えられた。現時点での結論としては、ヒト脳における微量物質の検出を行う場合、3T-MRSが適していると考えられた。さらに、本年度は、FDG-PETを実施して、60分間のダイナミックPETデータへの影響を評価した。脳内の代謝動態においてジフェンヒドラミン等の抗ヒスタミン薬の影響は認められたが、その変化は小さく、プラセボ条件に比べて有意な差を検出するのは困難と考えられた。脳のブドウ糖消費量の定量も行ったが、脳全体のブドウ糖消費量に関して薬剤間の有意差は認められなかった。脳のブドウ糖消費量という指標に注目した場合、薬剤間で差が見られるのは、安静時よりもむしろ認知課題などの負荷がかかった場合であることも示唆された。抗ヒスタミン薬服用時はプラセボ服用時に比べて、抗ヒスタミン薬服用時にはより多くのブドウ糖消費が起こることが観察された。本研究の進捗が遅れていることの主たる原因は、当初、東北大学大学病院倫理委員会における審査に予想外の時間がかかってしまったことと考えられた。そのため、平成28年度予算を繰り越して準備を進めた。加えて、東北大学の倫理委員会の承認が得られたあとも、測定施設となっている福島県立医科大学先端臨床研究センターにおけるマシンタイムの確保のための相談と調整に予想以上の時間がかかってしまったことも大きな原因であったと考えている。当初予定していたMRS測定が実施できるまでに約2年を要したことがことが最大の理由である。また、薬物血中濃度の測定も平成29年度中の完了を予定していたが、予算が大幅に不足してしまい、やむを得ず薬物血中濃度の測定を翌年度以降に持ち越すこととなった。予算不足となった理由としては、科研費申請時および交付時に福島県立医科大学先端臨床研究センターの分担研究者から連絡を受けていた施設使用料金(時間単価)が、最終的には約2倍になってしまったことが挙げられる。その結果、残りの検体の薬物血中濃度の測定を平成30年度に計画したが、PET測定の費用と合わせるとどうしても不足してしまい、平成31年度にまとめて測定する方針とせざるをえなかった。平成31年度には全ての情報が揃う見込であるため、それらを総合して考察をさらに深める予定である。これまでの福島県立医科大学先端臨床研究センターの3T-MRSおよび岩手医科大学超高磁場先端MR研究センターの7T-MRSを用いて測定した結果、現段階では、3T-MRSのほうが臨床測定への最適化が進んでいるものと考えられた。こうした総括結果は将来の関連プロジェクト実施の参考になる情報と期待される。今年度は、ヒト測定で得られた残りの血液検体の測定を完了させる計画であり、それにより、測定結果が全て揃うことになる。今後は全てのデータを総合的に解析して、脳ブドウ糖消費量の指標も加味して、脳内代謝物のMRSパラメーターのうちで投与薬物の血中濃度の変化と強い相関をもって変化するパラメーターを見出すことを目標とする。これまでに実施されたMRS測定試験で得られた血液データを用いて薬物血中濃度の測定を行い、薬物血中濃度と脳内MRSデータの経時的変化との関連性を探ることを計画している。薬物血中濃度と有意に相関する変化を示すようなMRS測定パラメーターがないかどうかを探索することを目指す。また、今年度は、本研究の最終年度として、研究の総括を行い、学会発表および論文執筆を進める計画である。福島県立医科大学先端臨床研究センターにおいてこれまでに実施した測定により、以下の結果が得られた。3テスラ(3T)のMR装置を用いたMR spectroscopy(3T-MRS)の測定では、ヒトが薬物を服用した際の標準的な薬物血中濃度に近い濃度に調整した溶液を充填した「ファントム」の測定において、薬物由来の信号を直接検出することはできなかった。アセトアミノフェンに関しては、アセトアミノフェン標準血中濃度の3040倍程度の濃度に調整したファントムでは直接信号を検出することができた。上記の所見から、MRSの感度をあと数十倍に高めることができれば、ヒト脳内におけるアセトアミノフェンの信号を直接MRSで検出できる可能性があると推測された。次に、ヒト服用時の標準的な血中濃度に近いジフェンヒドラミン溶液を充填したファントムでも直接信号を検出することはできなかった。ジフェンヒドラミンに関しては、標準的な濃度の1000倍以上の濃度がないと検出が困難であることが示された。

以上の所見から、標準用量のジフェンヒドラミンを服用した際のヒト脳内のジフェンヒドラミンを直接MRSで検出するには感度を1000倍以上に高める必要があることが必要と考えられ、実現は困難であると考えられた。これらの結果を受けて、脳内に分布した薬物自体を3T-MRSで検出することは現時点では技術的に困難であると考えた。本研究プロジェクトでは、むしろ薬物内服以後の種々の脳内代謝物濃度の経時的変化を追跡して、薬物血中濃度の経時的変化との関連性を吟味することを主たる目標とした。実際には数名の健常被験者を対象として、アセトアミノフェン300mgの内服後に約3時間にわたり、ジフェンヒドラミン50mgの内服後では約5時間にわたり、3T-MRSを用いた追跡測定を行った。種々の代謝物の経時的変化のデータを収集することができた。本研究の進捗が遅れていることの主な原因は、測定施設となっている福島県立医科大学先端臨床研究センターにおけるマシンタイムの確保のための相談と調整に予想以上に時間がかかってしまったことにあると考えている。また、施設使用料金に関して、科研費申請時に示されていた金額に比べて、実際の使用料が約2倍になってしまったため、当初計画していた測定の全てを完了させることができなくなった。当初は、MRS測定と並行して被験者から収集した血液検体の薬物濃度測定を行うことを予定していたが、実際には、予算が大幅に不足してしまい、やむを得ず、薬物血中濃度の測定を次年度に持ち越すこととした。福島県立医科大学先端臨床研究センターおよび東北大学サイクロトロン・RIセンターにおいて実施した測定により、以下の結果が得られた。3テスラのMRS(3T-MRS)の測定結果により、3T-MRSを用いて脳内に分布した薬物自体の信号を検出するのは技術的に困難と考え、薬物内服以後の脳内代謝物濃度の経時的変化を追跡して、薬物血中濃度の経時的変化との関連性を吟味した。健常被験者を対象としてアセトアミノフェン300mgの内服後に約3時間にわたり、3T-MRSを用いて追跡測定を行った。加えて、健常被験者を対象としてジフェンヒドラミン50mgの内服後約5時間にわたり、3T-MRSを用いて追跡測定を行った。その結果、数多くの代謝物のうち、アセトアミノフェン服用後にはグルタミン+グルタミン酸やN-アセチルアスパラギン+N-アセチルアスパラギングルタメートなどの濃度が増強することが示された。加えて、ジフェンヒドラミン内服後にはアセトアミノフェン服用後にはグルタミン+グルタミン酸やN-アセチルアスパラギン+N-アセチルアスパラギングルタメートなどの濃度が増強することが示された。加えて、MRS測定結果も参考にしつつ、抗ヒスタミン薬ジフェンヒドラミン服用時の脳PET画像への影響を多面的に調べた。当初予定していた[11C]doxepin PETの実施は、MRSデータと薬物血中濃度のデータが全て揃わないと実施できないため、比較的低コストで実施できる[18F]FDG PETを用いた検討を進めた。抗ヒスタミン薬のジフェンヒドラミン服用後の脳内の状態を評価するために、[18F]FDG PETを用いたdouble injection法は有用と考えられるが、その評価のための基礎測定を行った。検討の結果、double injection法を用いて抗ヒスタミン薬の脳への影響を評価することが可能と考えられた。
光環境を受容するフィトクロム遺伝子群のゲノム進化がもたらす多様性形成機構の解析

(1)アブラナ科ミヤマタネツケバナにおけるPHYE遺伝子の南北間分化を比較した。PHYE遺伝子を単離して、クローニングを進め、高機能高変異性を示すN末端側をクローニングすることができた。この構築されたプラスミドは、大腸菌に形質転換することでタンパク質を合成する機能を持つ。(2)緯度に応じて開花応答性が大きく異なるマメ科ミヤコグサで、光受容遺伝子群の分化を検証した。PHYA, PHYB, PHYEにおいて多数の非同義的置換が産地間にあり、そのアミノ酸置換の多くはGAFドメインなどの機能中枢に偏在していた。本年度は、ミヤマタネツケバナCardamine nipponicaの高緯度(北海道)と低緯度(中部山岳)の比較系において、全ての光受容遺伝子(赤色光受容に関わるphyと、青色光受容に関わるcryの全ての遺伝子)を対象にして塩基配列を解析した。その結果、フィトクロムE(phyE)遺伝子だけが自然選択を受けていることが明確になった。この知見は、3本の論文にして公表した(Genetics, Molecular Biology and Evolution)。引き続き、寒冷な高山で直射日光を受けて生きる高山植物において、数ある光受容遺伝子の中でphyEだけが選択的に適応進化していることを検証するために、コメバツガザクラArcterica nanaにおいて、同様に全ての光受容遺伝子における自然選択を検証した。その結果、やはりphyEだけにおいて、特定の塩基サイト(C360T)が集団内に出現する頻度が、緯度に沿った傾斜をもっており、自然選択を受けていることが判った。このサイトはアミノ酸置換を伴う変位であった(Pl20L)。この結果は、Molecular Ecologyに受理された。このように、phyEは、寒冷な高山で直射日光を受けて生きる高山植物において、周囲の光環境を受容して適応することに寄与していることが、複数の種で重層的に検証できた。また、ミヤマタネツケバナの高緯度型と低緯度型の間で、光応答性の違いが表現形に現れる違いについて検証した。両地域の種子を発芽させて、同一条件下の光環境下で生育をさせたところ、胚軸長において低緯度地域のほうが高緯度地域よりも有意に伸長することが明らかになった。その一方で、フィトクロムEの高緯度型・低緯度型における、色素タンパク質としての特性や機能を生理生化学的に検証する研究は継続中であり、とくに論文にまとめるレベルには至らなかった。本研究は、光受容色素タンパク質:フィトクロムの遺伝子が、日本列島の中で高緯度低緯度、高標高低標高の環境傾度の中で、どのように適応して機能分化を起こしており、これが種内の進化多様性にどのように寄与したかについて解析を行った。日本の高山植物であるミヤマタネツケバナと、さらに北方の周極地域に生育するCardamine bellidifolia用いて、光受容色素タンパク質PHYE(フィトクロムE)のコード遺伝子:phyEが、高緯度低緯度の間でどのような遺伝子型に分化しているのかを検証した。その結果、周極のC.bellidifoliaは、北海道のミヤマタネツケバナとほぼ同一のphyEアリルを共有していることがわかった。このことは、phyE遺伝子が、「種species」を超えて、高緯度環境に適応的な遺伝子型を保有することによって機能分化を起こしていることを示唆している。比較のために、ほかの核遺伝子座も複数検証したが、こちらはミヤマタネツケバナとC.bellidifoliaの種のユニットが支持されたので、phyEのみが環境適応に関わっていることを示唆している。逆の視点から見ると、ミヤマタネツケバナという日本固有種は、北海道と中部山岳地域の間で、著しい環境適応の違いを保有していることを意味していることが判った。さらに本年度は、南北両タイプのミヤマタネツケバナが赤色光・近赤外光に対する環境応答がどのように異なるのかを検証するために、花芽形成や種子発芽、胚軸伸長などの表現形を比較した。期待通りに南北タイプの間で応答が異なっていた。さらに、南北両タイプのフィトクロムE分子の色素タンパク質としての分光光学的な性質を比較するための実験を行うために、ミヤマタネツケバナの南北両タイプのphyE遺伝子全長をベクターに挿入した。次年度はこれを大腸菌に組み込み、PHYE分子の分光光学的性質の解析を行いたい。本研究では、光受容色素タンパク質(フィトクロムやクリプトクロム)などの花成に関与する遺伝子が、南北に長く起伏に富んだ日本列島の中で高緯度低緯度、高標高低標高の環境傾度の中で、どのように適応して機能分化を起こしており、これが種内の進化多様性にどのように寄与したかについて解析を行った。これまでに申請者らが研究で蓄積してきた「植物の分子系統地理学」の知見を生育環境への適応進化の観点から検討すること、換言すると、植物の進化多様性を形成する機構をゲノムレベルで解明して推進することを目的とするものである。

本年度は、ミヤマタネツケバナとCardamine bellidifolia、ミヤコグサ、ダイスの野生種であるツルマメを用いて、フィトクロムやクリプトクロムが、高緯度低緯度、高標高低標高の環境傾度の中で、どのように適応して機能分化を起こしており、これが種内の進化多様性にどのように寄与したかについて解析を行った。ミヤマタネツケバナとC.bellidifoliaは共通祖先から種分化を起こした姉妹群であることを確認した上で(C.bellidifoliaは北海道よりも北に分布する)、PHYE遺伝子だけが、中部山岳vs.東北北海道・C.bellidifoliaの二型に分化していた。これには日本の中部山岳の環境特異性(高山植物の分布として極端に南に位置する)が関与していると考察された。また、ツルマメの国内産地間では、クリプトクロム遺伝子が馴化淘汰を受けている一方で、フィトクロム遺伝子や概日時計系遺伝子に変異が見出された。ミヤコグサでは、PHYA、PHYB、PHYEの機能中枢部位に非同義的置換が蓄積しており、これらが地理的な構造を持たずにstanding variationとして種内に保持されている状況が明らかになった。
マイクロＲＮＡ導入マウス心筋症におけるヘキソキナーゼ２とMAS受容体シグナル解析

2017年度に報告したように、心筋特異的HK2トランスジェニックマウス(TG)および心筋特異的MASTGを複数系統樹立し、心筋特異的miR-143/145TG(miRTG)と交配したが、病態は改善されなかった。しかし、興味ある事に、miRTGではHK2の発現が劇的に低下しているにも関わらず、ヘキソキナーゼアッセイでは殆どmiRTGと野生型に差が見られなかった。そこで心筋におけるもう一つの主要なヘキソキナーゼであるHK1の発現を調べた所、特に増加は見られなかった。よってmiRTGでは何らかのメカニズムにより、グルコース6リン酸のレベルを維持している可能性が示唆された。また、HK2は解糖系のみではなく、ペントースリン酸経路(PPP)の重要な酵素である。しかし、miRTGでは還元型グルタチオンが増加していたが、その生合成にPPPで作られるNADPHが大きく関与している。そこでグルコース6リン酸から6ーホスホグルコノ-1,5ラクトンへの変換を行うG6PDの発現を調べた所、miRTGで亢進していた。よって、miRTGではHK2の低下をG6PDの亢進により補っている可能性が示唆された。そのメカニズムは明らかではないが、miRTGで発現が亢進しているp62は解糖系やPPPに関与する一連の分子の発現を亢進するという報告があり、p62の発現増強がHK2の低下をマスクしている可能性が示唆された。一方、2017年度にACE阻害剤のカプトプリルがIGF1受容体のリン酸化を抑制することを報告した。そこでAT1受容体阻害剤(ARB)について検討したが、明らかな抑制は見られなかった。よってIGF1受容体のリン酸化の抑制にはアンジオテンシンーAT1受容体以外の経路の関与が示唆された。また、miR-143が炎症や発癌に関わる重要な分子を標的にしている事が明らかになり、現在病態への関与を解析中である。心筋特異的miR-143強発現トランスジェニックマウス(miRTG)は拡張型心筋症様の症状を呈する。これらのマウスでは解糖系律速酵素であるヘキソキナーゼ2(HK2)の発現が有意に低下していた。そこで我々はHK2の心筋特異的トランスジェニックマウス(HK2TG)を樹立し、miRTGと交配し、症状をレスキュー出来るかどうかを検討した。しかしながらmiRTG x HK2TGダブルTGにはmiRTGと比べて病態の改善は見られなかった。またアンジオテンシン1-7の受容体であるMAS1の発現がmiRTGの症状進行と共に低下する事実を見出していたため、MAS1の発現低下はアンジオテンシン1-7のシグナルを低下させ、アンジオテンシンIIのシグナルを亢進させるとの仮説に基づき、MAS1の発現を補填する事を試みた。心筋特異的にMAS1強発現のTGを作成し、miRTGと交配した。しかし意外にもMAS1との交配により症状の進行は逆に促進された。またMASTGの中で最も発現の強い系統は心不全により早期に死亡した。一方、最近HK2がmTORC1を抑制する事により、心筋のオートファジーを活性化するという報告があったので、miRTG心におけるオートファジーを解析した。ウエスタンブロット法による解析ではmiRTGにおいて24時間絶食後にLC3IIが低下し、p62が増加しており、オートファジーの抑制が示唆された。そこでより直接的に評価するために、GFP-LC3マウスをmiRTGと交配した。しかしながら絶食時においてもGFP-LC3のシグナルにはmiRTGと野生型との間に有意な差が認められなかった。以上より、当初本病態に深く関与していると考えられたHK2の発現低下は少なくとも本病態にメジャーな役割を担っているとは考えにくいと思われた。miRTGで発現が低下しているHK2とMAS1に注目して、それらを補填する事により病態の改善が計られるとの仮説のもと、それらの心筋特異的TG(それぞれHK2TG, MASTG)を作成し、miRTGと交配する実験を試みた。もしこれらの試みにより病態が改善されれば、それらの分子の発現低下が本病態に深く関与している事が示唆されると共に、それらのダブルTGを解析する事により本病態の中核を成すシグナル経路を抽出出来るのではないかと考えた。当初の予定通りHK2TGとMASTGの強発現系統を複数樹立する事に成功した。しかしながら、これらの分子の心筋特異的強発現では本病態をレスキューすることが出来なかったため、それ以降の研究の展開を推進する事が出来なかった。ただ、MAS1の最も発現の強い系統はそれのみで拡張型心筋症様の症状を呈するため、MAS1を生理的レベルに発現するマウスを樹立出来ないと目的とするレスキュー実験が困難と考えられた。またオートファジー解析用のマウスGFP-LC3マウスとの交配も計画通り進行した。しかし予想に反してmiRTG x GFP-LC3ダブルTGにおいてオートファジーの活性低下が見られなかったため、本試みもこれ以降の展開が困難になった。以上より、当初予定した遺伝子改変マウスは全て予定通り樹立あるいは入手できたが、その結果が予期されたものではなかったため、計画の修正が必要になった。

28年度の研究でHK2あるいはMAS1を心筋特異的に発現したトランスジェニックマウス(Tg)を複数系統樹立して、miR-143/miR-145トランスジェニックマウス(miRTG)と交配したが、miRTGをレスキューする事は出来なかった。そこで29年度は研究計画を見直して、以下の様に研究を遂行した。最近miR-143とmiR-145の標的として解析がされているインスリン様成長因子1受容体(IGF1R)の発現を調べた所、意外にも受容体やその下流のAKTのリン酸化は亢進していた。面白い事にACE阻害剤のカプトプリルの投与で、IGF1Rのリン酸化は有意に抑制された。カプトプリルはこのマウスの病態を改善させることが判っており、ACEの発現増強とIGF1Rのリン酸化は症状の重い系統で観察されるので、ACE/IGF1R axisが本マウスの病態に大きく関与している可能性が示唆された。心臓におけるIGF1Rは動物実験では血圧負荷等の病的ストレスを抑制する事が示されている。しかしヒトでは高濃度のIGF1が心不全のrisk factorになるという報告もあり不明な点が多く、miRTGは心不全におけるIGF1Rを介したシグナルの新しい機能解析モデルになると思われる。また、本マウスで活性酸素を反映するTBARSアッセイを行った所、野生型と殆ど差は見られなかった。また酸化還元状態の指標であるGSH/GSSGの比はmiRTGでは増加しており、むしろ還元状態にシフトしていると考えられた。そこで抗酸化ストレスのマスターレギュレーターであるNrf2欠損マウスと交配した所、生存期間の低下は認められなかった。一般的に酸化ストレスが心不全の憎悪因子である事は広く知られているが、抗酸化剤の治療効果はあまり芳しくない事から、本マウスの病態解析は心筋症の新しい分子メカニズムの発見に繋がる可能性がある。当初計画していたHK2とMAS1の補填によるmiRTGのレスキュー実験は成功しなかったので、大きく研究の方向転換を余儀なくされた。依然として何故心筋細胞におけるmiR-143の高発現がACEの強発現や心筋症を起こすかの分子メカニズムの解明に至っていない。しかしながら、病態シグナルに関する新しい知見を複数得ることが出来て本マウスの病態の理解の糸口をつかんだと考える。2017年度に報告したように、心筋特異的HK2トランスジェニックマウス(TG)および心筋特異的MASTGを複数系統樹立し、心筋特異的miR-143/145TG(miRTG)と交配したが、病態は改善されなかった。しかし、興味ある事に、miRTGではHK2の発現が劇的に低下しているにも関わらず、ヘキソキナーゼアッセイでは殆どmiRTGと野生型に差が見られなかった。そこで心筋におけるもう一つの主要なヘキソキナーゼであるHK1の発現を調べた所、特に増加は見られなかった。よってmiRTGでは何らかのメカニズムにより、グルコース6リン酸のレベルを維持している可能性が示唆された。また、HK2は解糖系のみではなく、ペントースリン酸経路(PPP)の重要な酵素である。しかし、miRTGでは還元型グルタチオンが増加していたが、その生合成にPPPで作られるNADPHが大きく関与している。そこでグルコース6リン酸から6ーホスホグルコノ-1,5ラクトンへの変換を行うG6PDの発現を調べた所、miRTGで亢進していた。よって、miRTGではHK2の低下をG6PDの亢進により補っている可能性が示唆された。そのメカニズムは明らかではないが、miRTGで発現が亢進しているp
近世絵画における宗教表現の研究　－　「地獄極楽めぐり図」を中心に

本研究の目的は日本近世絵画に描かれた「いのりのかたち」に焦点を絞り、江戸時代の庶民信仰の様相を美術史の視点から明らかにするものである。本研究課題の主軸をなす河鍋暁斎筆「地獄極楽めぐり図」(静嘉堂文庫美術館蔵)は、暁斎の有力なパトロンであった勝田五兵衛の娘、田鶴が夭折した際に追善供養のため制作された作品である。最終年度においても引き続き「地獄極楽めぐり図」研究を行い、河鍋暁斎記念美術館のご協力を得ながら口頭発表や論文執筆を通じて研究成果を発表した。本年度の研究成果として第一にあげられるのが、「地獄極楽めぐり図」において田鶴が摩耶夫人に見立てられている事を指摘した点であろう。この点については拙稿「河鍋暁斎筆『地獄極楽めぐり図』について(四) 田鶴に投影された摩耶夫人の表象」(『河鍋暁斎研究誌暁斎』第115号、河鍋暁斎記念美術館、2015年1月)にまとめた。本稿では中でも本作第三十八図「田鶴の極楽往生」に注目している。本図は田鶴が浄土に達した場面を描いたものだが、その構図やモチーフは伝統的な浄土図と趣が異なる。研究を進めていく中で、摩耶夫人がルンビニ園で釈迦を出産した様を描いた「釈迦誕生図」の構図やモチーフを基盤として、本作第三十八図が描かれたことがわかってきた。「釈迦誕生図」は版画や粉本を通じて江戸時代に広く流布したことは既によく知られており、河鍋暁斎記念美術館所蔵の粉本「中国仏閣図」も実際には「釈迦誕生図」を描いたものであることが本研究によって明らかにされ、ここに描かれた摩耶夫人の姿勢や表情が「地獄極楽めぐり図」第三十八図の田鶴と著しく類似することが判明した。以上、三年間の採用期間を通じ、全40図からなる「地獄極楽めぐり図」を一図ずつ解明していくことで、江戸時代における宗教表現の研究を遂行した。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題の主軸をなす河鍋暁斎筆「地獄極楽めぐり図」(静嘉堂文庫美術館蔵)は、暁斎の有力なパトロンであった勝田五兵衛の娘、田鶴が天折した際に追善供養のため制作された作品である。第65回美術史学会全国大会(2012年5月18日於國學院大學)では、「河鍋暁斎筆『地獄極楽めぐり図』に見る転換期の追善供養一法隆寺天保出開帳、極楽行き列車、そして五代目尾上菊五郎-」と題し研究発表を行った。本発表では、天保法隆寺出開帳に出陳された古代宝物、'明治期を代表する歌舞伎役者・五代目尾上菊五郎、そして文明開化の象徴である列車といった、幕末明治という時代の転換期にしか生まれえなかったモチーフが田鶴追善と深く関わっていることを新たに指摘した。『待兼山論叢』美学篇(大阪大学文学会、2012年12月刊)においては、「河鍋暁斎筆『地獄極楽めぐり図』と勝田家菩提寺」と題した論文を発表した。本論での検証により、本作の施主である勝田家菩提寺は東京都台東区西浅草に位置する日輪寺(時宗)であることが判明し、本作第5・6図に描かれた境内は明治初年当時の日輪寺を忠実に表していることも併せて明らかとなった。さらに、「六十万人決定往生」と記された門柱、阿弥陀如来の「賦算」、「遣迎二尊」といった時宗の教義に基づいたモチーフが本作に描かれていることも指摘した。また過去帳の記録から、本作第37図に描かれる人力車中の幼子は明治五年六月末に亡くなった田鶴の従兄弟である可能性が高まり、その幼子らを田鶴が迎え出ていることで彼女自身の仏性が高まっているものと解釈した。この様に、一人の少女を追善するために制作された作品を丹念に調べることで、江戸時代の追善供養の様相と祈りの在り方を明らかにした。本研究の目的は日本近世絵画に描かれた「いのりのかたち」に焦点を絞り。江戸時代庶民信仰の様相を美術史の視点から明らかにするものである。本作に描かれた同時代のモチーフが、田鶴という娘を追善するイメージとどう結びついているのかを考察した論文「河鍋暁斎筆『地獄極楽めぐり図』再考ー幕末明治の表象と追善供養のかたちー」を美術史学会誌『美術史』(第175号、美術史学会、2013年10月、査読有)に投稿し採択された。また、第34回暁斎研究会「河鍋暁斎筆「地獄極楽めぐり図」について(三)ー「奏の河原」に描かれた赤い欄干に注目して」(口頭発表、2014年2月23日、於河鍋暁斎記念美術館)においては、本図に描かれた欄干の構図や石積みをする子供達の図像は、洪武二十八年版『出相観音経』の「現童男童女身」を典拠にしていることを指摘した。

このことから、寳の河原の子供達の石積みは「回向の塔」であると同時に「仏塔」でもあると解釈でき、「地獄極楽めぐり図」における宗教表現の解明の足がかりを築くことができたと考えている。美術史学会西支部例会「歌川国芳筆『源頼光公舘土蜘作妖怪図』再考ー妖怪の図像源泉と五雲亭貞秀作品との関わりをめぐって一」(口頭発表、2013年9月21日、於大阪市立東洋陶磁美術館、査読有)では、これまで天保の改革を風刺した錦絵としてしか扱われてこなかった歌川国芳「源頼光公舘土蜘作妖怪図」について新たな解釈を試みた。その研究の過程において疱瘡除けの図像と死のイメージが対立するように描かれていることを論証し、「病を退けたい」という江戸庶民の願いや祈りの表象が「金太郎」や張り子の木兎・達磨といった「疱瘡除け玩具」に託されてることを再確認し、近世の庶民信仰の諸相の一片を具体的に提示できたと思う。本研究の目的は日本近世絵画に描かれた「いのりのかたち」に焦点を絞り、江戸時代の庶民信仰の様相を美術史の視点から明らかにするものである。本研究課題の主軸をなす河鍋暁斎筆「地獄極楽めぐり図」(静嘉堂文庫美術館蔵)は、暁斎の有力なパトロンであった勝田五兵衛の娘、田鶴が夭折した際に追善供養のため制作された作品である。最終年度においても引き続き「地獄極楽めぐり図」研究を行い、河鍋暁斎記念美術館のご協力を得ながら口頭発表や論文執筆を通じて研究成果を発表した。本年度の研究成果として第一にあげられるのが、「地獄極楽めぐり図」において田鶴が摩耶夫人に見立てられている事を指摘した点であろう。この点については拙稿「河鍋暁斎筆『地獄極楽めぐり図』について(四) 田鶴に投影された摩耶夫人の表象」(『河鍋暁斎研究誌暁斎』第115号、河鍋暁斎記念美術館、2015年1月)にまとめた。本稿では中でも本作第三十八図「田鶴の極楽往生」に注目している。本図は田鶴が浄土に達した場面を描いたものだが、その構図やモチーフは伝統的な浄土図と趣が異なる。研究を進めていく中で、摩耶夫人がルンビニ園で釈迦を出産した様を描いた「釈迦誕生図」の構図やモチーフを基盤として、本作第三十八図が描かれたことがわかってきた。「釈迦誕生図」は版画や粉本を通じて江戸時代に広く流布したことは既によく知られており、河鍋暁斎記念美術館所蔵の粉本「中国仏閣図」も実際には「釈迦誕生図」を描いたものであることが本研究によって明らかにされ、ここに描かれた摩耶夫人の姿勢や表情が「地獄極楽めぐり図」第三十八図の田鶴と著しく類似することが判明した。以上、三年間の採用期間を通じ、全40図からなる「地獄極楽めぐり図」を一図ずつ解明していくことで、江戸時代における宗教表現の研究を遂行した。26年度が最終年度であるため、記入しない。当初の研究目的および目標を、計画以上に達成できた。これまでの研究発表、および研究論文は常に高い評価を得ており、美術史学会誌『美術史』への投稿論文(2013年10月発刊予定)は特に評価が高く、査読意見では「新知見に満ちた新鮮な論文」、「出色の論文」、「今後の研究が大いに期待できる」と評された。中でも、河鍋暁斎筆「地獄極楽めぐり図」の注文主である勝田家の菩提寺を特定し、さらに過去帳の調査から新たな事実を指摘できたことは計画以上の成果であり、本研究を深めてゆく上で核となる要素となる。「地獄極楽めぐり図」研究を続ける一方で、歌川国芳筆「源頼光公館土蜘作妖怪図」をテーマとした研究を進めたい。なかでも、河鍋暁斎筆「地獄極楽めぐり図」の主人公である田鶴に摩耶夫人のイメージが投影されているという可能性を新たに提示でき、当初の計画以上のことを進めることができた。江戸時代における「摩耶夫人信仰」の諸相という新たなテーマを獲得でき、これは今後研究を続けていく上での大きなテーマとしていきたい。