hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Ⅲ型分泌系を介した宿主－根粒菌相互作用に関する分子基盤の解明

これまでの研究から、我々はBradyrhizobium elkanii USDA61株の3型分泌エフェクター(T3SSエフェクター)の1つであるNopFがミヤコグサGifu系統(B-129系統)に根粒菌の侵入阻害を誘導することを明らかにした。さらに我々は、ミヤコグサの類縁実験系統のLotus burttiiとミヤコグサMG-20系統では根粒菌の侵入阻害は誘導されないものの、L. burttiiでは根粒の成熟阻害と根粒の早期老化が、ミヤコグサMG-20系統では根粒の早期老化がUSDA61株のT3SSエフェクターによってそれぞれ誘導されることを明らかにした。そこで、根粒菌の感染成立後に誘導される根粒の成熟阻害及び根粒の早期老化に関与するエフェクターを同定するため、iTRAQシステムを利用したUSDA61株の分泌タンパク質の解析から同定されたT3SSエフェクターの機能解析を試みた。その結果、既知のエフェクターであるNopMの破壊株の接種において、野生株のL. burttiiおよびMG-20系統への接種で観察される早期老化根粒が有意に減少することが確認された。この結果から、NopMが根粒の早期老化に関与する原因エフェクターであることが示された。NopFおよびNopMによって発現誘導される遺伝子を解析するため、野生株、nopF破壊株、T3SS破壊株を接種したGifu系統の根及び、野生株、nopM破壊株、T3SS破壊株を接種したMG-20の根におけるRNA-seq解析を行った。その結果、いずれのエフェクターもGifu系統およびMG-20系統に対して防御関連遺伝子の発現を誘導することが確認された。しかし、NopFおよびNopMによって発現誘導される防御関連遺伝子の種類は異なっており、根粒菌の侵入阻害と根粒の早期老化が異なる免疫応答によって誘導されることを明らかにした。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。ミヤコグサ実験系統のB-129に根粒菌の侵入阻害を誘導するBradyrhizobium elkanii USDA61株(USDA61株)の3型分泌エフェクターを同定する目的で、前作でダイズを栽培していた圃場から単離された、B-129に多数の無効根粒を形成するB. elkanii株(14k062株)と、USDA61株の分泌タンパクの比較解析を行った。その結果、3型分泌系依存的な分泌タンパク質のうち、BE61_91540とBE61_78180が14k062株で分泌されないことが明らかとなった。そこで、これらのタンパク質に対応する遺伝子の破壊株を作成し、B-129に対して接種したところ、BE61_91540の破壊株について多数の無効根粒の形成が認められた。この結果から、BE61_91540がミヤコグサに侵入阻害を誘導するエフェクターであることが確認された。また、この破壊株はB-129に成熟根粒を形成できないこと、Lotus burttiiで誘導される根粒の成熟阻害を回避できないことから、BE61_91540は根粒の成熟阻害には関与しないことが示された。さらに、BE61_91540をミヤコグサ根粒菌Mesorhizobium lotiに導入してB-129に接種した結果、根粒がほぼ形成されなくなることが確認され、M. lotiの3型分泌系で導入されたBE61_91540によっても、侵入阻害が誘導されることが示された。並行して進めている、宿主側因子の同定を目的としたゲノムワイド関連解析では、USDA61株のDsRed蛍光標識株を用い、根粒内からの菌の蛍光を指標とすることで、ミヤコグサ野生系統のフェノタイピングの精度を上げることに成功した。現在までに76の野生系統に蛍光標識株を接種して表現型の情報を収集しており、精度を上げた表現型情報を基に再度ゲノムワイド関連解析を実施する予定である。当初の計画では、USDA61株のTn5ミュータントライブラリを用いたスクリーニングから根粒菌の侵入阻害に関与するエフェクターの解析を進める予定であったが、ミヤコグサ実験系統のB-129に多数の無効根粒を形成できる14k062株を用いた解析から、一気にエフェクターを同定・クローニングすることができた。また、2年目に予定していたミヤコグサ根粒菌へのエフェクターの導入実験についても前倒して行うことができ、ミヤコグサ根粒菌でも導入したエフェクターによる根粒菌の侵入阻害の誘導を確認することができた。宿主側因子の解析では、これまでにUSDA61株接種に対するミヤコグサ野生系統の系統間差を利用したゲノムワイド関連解析を進めてきたが、根粒内にUSDA61株がリリースされているか、いないかが曖昧な表現型を示す系統の存在が解析の支障となっていた。しかし、USDA61株のDsRed蛍光標識株を用い、根粒内からの菌の蛍光の状況を観察することでフェノタイピングの精度の向上に成功し、現在までに76の野生系統に蛍光標識株を接種して表現型の情報を収集することができた。ゲノムワイド関連解析の再解析は1年目に予定していたが、根粒菌の侵入阻害に関与するUSDA61株の3型分泌エフェクターを同定でき、そちらの解析を優先的に進めた関係で実施には至らなかった。

しかし、今回フェノタイピングの精度を上げることができたことで、これまでに同定された遺伝子座以外にも、新たな遺伝子座が同定できると期待している。以上のことを鑑みて、本研究はおおむね順調に進展していると考えている。我々はこれまでの解析から、ミヤコグサB-129に根粒菌の侵入阻害を誘導するBradyrhizobium elkanii USDA61株(以下USDA61株)の3型分泌エフェクターとしてNopFを同定しており、NopFを導入したミヤコグサ根粒菌Mesorhizobium loti(以下M. loti-nopF株)がB-129に根粒菌の侵入阻害のみを誘導できることを確認している。そこで、B-129と、M. loti-nopF株の接種で根粒が形成されるMG20の組み合わせで作成された組み換え近交系統(RILs)を用いたQTL解析から、根粒菌の侵入阻害に関与する宿主側因子の同定を試みた。70系統のRILsに対してM. loti-nopF株を接種し、表現型の解析を行った結果、RILsは根粒が形成されないB-129型の系統と根粒が形成されるMG20型の系統に分類され、この表現型情報を用いたQTL解析を行った結果、3番染色体に単一の有意なQTLが検出された。候補領域をさらに絞り込むため、QTL解析で検出された領域が組み変わっているRILsをさらに22系統選抜し、M. loti-nopF株の接種を行った結果、これらの系統もB-129型とMG20型に分類され、根粒菌の侵入阻害に関与する宿主側因子の候補領域が3番染色体のペリセントロメア領域に位置する約422kbpに絞り込むことができた。一方で、ミヤコグサ野生系統を用いたゲノムワイド関連解析では、これまでに104系統のミヤコグサ野生系統にDsRedで標識したUSDA61株を接種し、表現型の解析を行った。DsRedの蛍光の状況から、根粒菌の侵入阻害が誘導される系統と、根粒菌の侵入を許す系統の2つのグループに分類してゲノムワイド関連解析を行った結果、2番染色体上に有意な遺伝子座を検出することができた。これまで行われてきたQTL解析では、USDA61株とB-129×MG20のRILsを用いた解析が行われてきたが、B-129はUSDA61の接種に対して根粒菌の侵入阻害と根粒の成熟阻害の2つの反応を誘導するため、2つの反応を同時に解析する形となり、RILsの表現型の明確な分類が難しかったことから有意なQTLは検出されていなかった。しかし、M. loti-nopF株がB-129に根粒菌の侵入阻害のみを誘導できること利用した今回のQTL解析から、根粒菌の侵入阻害に関与する宿主側因子の候補領域を約422kbpにまで絞り込むことができた。当初の計画では侵入阻害に関与する宿主側因子を同定する予定であったが、候補領域がペリセントロメア領域に座上している関係で、候補領域のさらなる絞り込みが難しく、遺伝子の同定までには至らなかった。しかし、DsRedで標識したUSDA61株の接種により得られた、高精度のミヤコグサ野生系統の表現型情報を用いたゲノムワイド関連解析からも、表現型と有意にリンクする遺伝子座が検出されており、ゲノムワイド関連解析により宿主側因子にアプローチできることが示された。一方で、ミヤコグサに根粒の成熟阻害を誘導するエフェクターの解析については、iTRAQシステムを利用したUSDA61株の網羅的な分泌タンパク質の解析から、10個のエフェクター候補を同定しており、破壊株の作成による機能の解析を順次行う予定である。
キチナーゼの結晶性キチン分解メカニズム

キチナーゼの基質であるキチンは結晶性で強固な多糖であり、結晶性キチン分解メカニズムの解明はキチナーゼ研究にとってきわめて本質的な課題である。本研究では細菌キチナーゼの結晶性キチン分解機構を解明するためにBacillus circulans WL-12のキチナーゼA1とSerratia marcescens 2170のキチナーゼAをモデルとして研究を行い、結晶性キチン分解機構の理解を飛躍的に前進させる以下のような成果を得た。(1)B.circulans WL-12キチナーゼA1の露出した芳香族アミノ酸残基の機能キチナーゼA1は、活性ドメイン・2つのFnIIIドメイン・キチン吸着ドメインの3種、4つのドメインから構成なる。活性ドメイン表面に露出し活性クレフトに向かって直線上に並んだ2つめ芳香族アミノ酸残基が見いだし、これらの残基がキチン結晶表面のキチン鎖を活性クレフトに導く役割を果たしていることを明らかにした。(2)キチナーゼA1のFnIIIドメインの立体構造キチナーゼA1を構成するドメインのうちFnIIIドメインだけが立体構造が不明であった。このドメインのNMRによ構造解析に成功した。立体構造の面からも、このドメインが動物から水平伝播によって獲得されたという仮説が支持された。(3)S.marcescens 2170キチナーゼAの結晶性キチン分解機構キチナーゼAの表面に活性クレフトに向かって直線上に並んだ4つの芳香族アミノ酸残基を見いだした。これらの残基の結晶性キチン分解への寄与を解析し、次のような結晶性キチン分解機構のモデルに到達した。「キチナーゼAはその表面の芳香族アミノ酸残基と結晶性キチン表面の一本のキチン鎖との相互作用によってキチンに吸着する。そして、そのキチン鎖が活性クレフトに導かれて、還元末端側から2糖単位で順次分解されることによって、キチナーゼAは非還元末端方向に移動しながらプロセッシブにキチンを分解する。」キチナーゼの基質であるキチンは結晶性で強固な多糖であり、結晶性キチン分解メカニズムの解明はキチナーゼ研究にとってきわめて本質的な課題である。」本研究は、Bacillus circulans WL-12のキチナーゼA1をモデルとして、細菌キチナーゼによる結晶性キチン分解機構を解明することを目的としている。キチナーゼA1は3種、4つのドメインから構成されるキチナーゼで、これまでの研究によって活性ドメインとキチン吸着ドメインの立体構造が決定されている。以下に述べるように、平成12年度の研究によって、結晶性キチン分解に必須の構造が活性ドメインに存在することが証明された。1)基質結合クレフトに存在する芳香族アミノ酸の機能キチナーゼA1の基質結合クレフトには7つのサブサイトが存在する。これらのサブサイトに存在する芳香族アミノ酸の機能を調べるために、部位特異的によってアラニンに置換し、性質の変化を解析した。その結果マイナス側のサブサイトの芳香族アミノ酸が、結晶性キチン分解に必須であることが明らかとなった。このことから、結晶性キチンからのキチン鎖はマイナス側から導入され、そこに存在する芳香族アミノ酸がキチン鎖の保持とクレフト内の移動に重要な役割を果たしていることが強く示唆された。2)活性ドメイン表面に存在する芳香族アミノ酸の機能キチナーゼA1の活性ドメイン表面に、基質結合クレフトの延長線上に並んでいる2つの芳香族アミノ酸が見いだされた。これらのアミノ酸残基をアラニンに置換し、性質の変化を解析した。その結果、結晶性キチンの分解活性のみが顕著に低下した。

この結果と立体構造上の位置から、活性ドメイン表面に存在するこれらのアミノ酸残基は、キチン結晶表面からキチン鎖をひきはがし基質結合クレフトに導入する役割を果たしていることが強く示唆された。キチナーゼの基質であるキチンは結晶性で強固な多糖であり、結晶性キチン分解メカニズムの解明はキチナーゼ研究にとってきわめて本質的な課題である。本研究では細菌キチナーゼの結晶性キチン分解機構を解明するために、Bacillus circulans WL-12のキチナーゼA1とSerratia marcescens2170のキチナーゼAをモデルとして研究を行い、結晶性キチン分解機構の理解を飛躍的に前進させる以下のような成果を得た。キチナーゼA1は、活性ドメイン・2つのFnII Iドメイン・キチン吸着ドメインの3種、4つのドメインから構成なる。活性ドメイン表面に露出し活性クレフトに向かって直線上に並んだ2つの芳香族アミノ酸残基が見いだし、これらの残基がキチン結晶表面のキチン鎖を活性クレフトに導く役割を果たしていることを明らかにした。(2)キチナーゼA1のFnII Iドメインの立体構造キチナーゼA1を構成するドメインのうちFnII Iドメインだけが立体構造が不明であった。このドメインのNMRによる構造解析に成功した。立体構造の面からも、このドメインが動物から水平伝播によって獲得されたという仮説が支持された。(3)S.marcescens2170キチナーゼAの結晶性キチン分解機構キチナーゼAの表面に活性クレフトに向かって直線上に並んだ4つの芳香族アミノ酸残基を見いだした。これらの残基の結晶性キチン分解への寄与を解析し、次のような結晶性キチン分解機構のモデルに到達した。「キチナーゼAはその表面の芳香族アミノ酸残基と結晶性キチン表面の一本のキチン鎖との相互作用によってキチンに吸着する。そして、そのキチン鎖が活性クレフトに導かれて、還元末端側から2糖単位で順次分解されることによって、キチナーゼAは非還元末端方向に移動しながらプロセッシブにキチンを分解する。」
有望系統AZ-97とマダガスカルリン欠乏土壌を基盤とするイネのリン獲得戦略の解明

熱帯アフリカでは、植物に必要なリンが欠乏した土壌が多く、肥料購入が困難な農家の作物収穫量は大きく制限されている。イネは、リンが欠乏すると分げつ(茎の枝分かれ)の発生が抑制されるが、申請者らはマダガスカルのリン欠乏土壌においても、分げつの発生を維持し、良好な生育を示す有望系統「AZ-97」を見出した。本研究は、マダガスカルのリン欠乏環境と「AZ-97」を活用した国際共同研究により、「AZ-97」がリン欠乏環境にどのように適応しているかを植物・土壌・微生物の分野が協力して解明することを目的とし、リン欠乏環境でも高い収穫量を上げるイネの品種開発や栽培技術開発を目指す。
ナノ構造制約下におけるモータタンパク質による物質輸送系の設計原理構築

平成27年度においては,前年度までに確立した動的マイクロチャネル形成デバイスを利用し,高さ1マイクロメートル以下のチャネル内への微小管固定およびキネシン運動アッセイを確立した.マイクロチャネル内におけるキネシンの運動を観察した結果,このような微小な構造に制限された環境下でキネシンの運動は阻害されず,ナノスケールのアクチュエータとして利用できることを示した.また,キネシンによる輸送量を,チャネルの断面を単位時間あたりに横切るキネシン分子数を用いて評価した.同じチャネル内で,濃度勾配によって駆動される拡散輸送と比較したところ,キネシンによる能動輸送は1マイクロメートル当たり2 nM程度の濃度差がある場合の拡散による輸送量と同程度であることがわかった.これらの結果は微小管およびキネシンを利用したマイクロ・ナノスケールにおける輸送系の構築に向けて,重要な知見であると考えられる.また,マイクロ・ナノファブリケーションをキネシン運動機構のより詳細な計測に応用することを目指した.具体的には,幅100ナノメートル程度のナノスリットを利用して,従来の手法では不可能な高濃度の蛍光ATP存在下におけるATP加水分解サイクルとキネシンステップ運動の同時計測を目的として実験系の構築を行った.まず,トラック中における励起光電場分布をシミュレーションし,適切なトラックの設計及び電子線描画を利用した製作プロセスを確立した.また,キネシン加水分解サイクルの基質活性を持つ蛍光ATPを選定し,キネシン運動と蛍光ATPの同時1分子観察が可能な分子系および光学系を確立した.これらの結果は,理学的に重要なキネシン運動機構の解明に向けて有用な手法となり得ると考えられるとともに,工学的な応用にむけても,キネシン機能の評価手法として有用なものとなることが期待できる.27年度が最終年度であるため、記入しない。27年度が最終年度であるため、記入しない。当該年度においては, 1)2次元微小構造内でのモータ運動状態解析,および2)3次元微小構造内でのアッセイ手法確立,を目標に研究を行った.1)については,微小管アレイ上を運動するキネシン・ダイニンの位置を,画像処理を用いて数10nmの精度でトラッキングするとともに,微小管とその位置制御に必要な溝構造の位置についても高精度で位置の同定を行い,これらの位置関係がモータタンパク質の運動に与える影響について検討した.この結果については2013年5月に学会発表を行った. 2)については, μmスケールのトラック内に微小管アレイを作成して,キネシンを導入した後にトラックの天井部を閉鎖することでチャネル構造を形成し,上面が閉鎖された構造内でのモータタンパク運動系を構築した.チャネル中をキネシンが一方向に運動することで時間経過に伴うキネシン分布の偏りが観察され,閉鎖構造中でのモータタンパク質を利用した物質輸送の可能性が示された.これらの結果については, 2013年12月に国内学会で, 2014年1月に国際学会で発表を行った.また,トラック構造閉鎖に基づいたモータタンパク質実験系の再現性および拡張性を高めるため,空気圧駆動のバルブを組み込んだマイクロ流路デバイスの開発を行った.デバイス中で圧力印加により流路構造を変形させ,トラック構造上面を閉鎖させることでチャネル構造を形成した。これまでに,チャネル内での微小管運動・チャネルを介した能動的な微小管移動を実現できている.この実験系をさらに拡張することで, 3次元的な構造を用いたモータタンパク質の運動制御,および物質輸送系の構築につなげられると考えている.当該年度においては,初年度において実証した1μmスケールのマイクロチャネルを空気圧駆動のバルブを用いて動的に形成するデバイス内でのキネシン・微小管アッセイを確立し,マイクロチャネルによって隔離された2つの領域間での微小管の移動を観察・解析した.開発したデバイスは2層のシリコンゴムとPDMSとガラス基板から構成されており,ガラス基板と下側のPDMSメンブレンで形成された流体チャネルの天井を上側のPDMSスラブに形成された制御チャネルで加圧することで,流体チャネルを閉鎖し流れを制御する.また,チャネルの底部ガラス面にフォトリソグラフィで形成された溝構造を同様のバルブ動作によって閉鎖することで,幅・高さが溝構造の大きさに対応したマイクロチャネルを形成できる.デバイス内にキネシンを固定してマイクロチャネルを形成した後,両端のうち片方のみに微小管とATPを含んだ溶液を導入することで,マイクロチャネル内での安定したアッセイを確立するとともに,マイクロチャネル中を微小管が能動的に運動することでチャネルっを介した反対側の領域へと微小管が移動していく実験系を実現した.微小管分布の時間変化についての解析結果と,マイクロチャネル内での圧力駆動流および拡散による物質移動について比較・考察した結果,マイクロチャネルによって拡散・圧力駆動流による物質移動を抑制し,微小管の能動的な運動によって分子レベルの輸送が可能であることを示した(図2).また,デバイスに窒素ガス流路を付加することによって溶液中の活性酸素種を減少させることで,従来報告されてきたPDMSデバイス内での実験に比較して運動性を長時間維持できることを示した.これらの結果について,国内学会2件,国際学会1件,論文1件の発表を行った.平成27年度においては,前年度までに確立した動的マイクロチャネル形成デバイスを利用し,高さ1マイクロメートル以下のチャネル内への微小管固定およびキネシン運動アッセイを確立した.マイクロチャネル内におけるキネシンの運動を観察した結果,このような微小な構造に制限された環境下でキネシンの運動は阻害されず,ナノスケールのアクチュエータとして利用できることを示した.

また,キネシンによる輸送量を,チャネルの断面を単位時間あたりに横切るキネシン分子数を用いて評価した.同じチャネル内で,濃度勾配によって駆動される拡散輸送と比較したところ,キネシンによる能動輸送は1マイクロメートル当たり2 nM程度の濃度差がある場合の拡散による輸送量と同程度であることがわかった.これらの結果は微小管およびキネシンを利用したマイクロ・ナノスケールにおける輸送系の構築に向けて,重要な知見であると考えられる.また,マイクロ・ナノファブリケーションをキネシン運動機構のより詳細な計測に応用することを目指した.具体的には,幅100ナノメートル程度のナノスリットを利用して,従来の手法では不可能な高濃度の蛍光ATP存在下におけるATP加水分解サイクルとキネシンステップ運動の同時計測を目的として実験系の構築を行った.まず,トラック中における励起光電場分布をシミュレーションし,適切なトラックの設計及び電子線描画を利用した製作プロセスを確立した.また,キネシン加水分解サイクルの基質活性を持つ蛍光ATPを選定し,キネシン運動と蛍光ATPの同時1分子観察が可能な分子系および光学系を確立した.これらの結果は,理学的に重要なキネシン運動機構の解明に向けて有用な手法となり得ると考えられるとともに,工学的な応用にむけても,キネシン機能の評価手法として有用なものとなることが期待できる.26年度においては当初計画を達成するために不可欠な,動的に3次元マイクロチャネルを形成するマイクロデバイスの作成およびこれを用いたキネシン・微小管アッセイを確立した.安定したアッセイを行える実験系の構築により,流路デバイス内にマイクロチャネルによって隔てられた2つの領域を形成し,それらの間での微小管運動を定量的に評価することができた.また,デバイスに窒素ガスの供給チャネルを追加することで,酸素透過性の高いPDMSデバイス内でのモータタンパク質利用において問題とされてきた失活の速さを抑制できた.得られた知見,実験技術に基づいて研究目標を達成することができると考えている.27年度が最終年度であるため、記入しない。1)マイクロチャネル内で固定した微小管上でのキネシン運について研究を進める.マイクロチャネル内でのキネシンによる輸送では,溶液全体の体積に対して基板表面の比率が大きくなることから,溶液中に存在するキネシンのうち,基板に固定された微小管上で運動効率が向上することを確認している.この実験系の再現性,安定性をさらに向上させるとともに,運動系による輸送の定量的評価,モデルの確立を行う.これらの結果から得られた知見を用いて,分子スケールの輸送系として利用するデバイス,実験技術の確立および輸送系の設計論確立を目指す.年次目標として設定した, 2次元微小構造内でのモータ運動状態解析,および2)3次元微小構造内でのアッセイ手法確立,について一定の成果を得ることができた,これらの成果に基づいて研究を進展させることで, 26年度・27年度の研究目標も達成できると考えられる.27年度が最終年度であるため、記入しない。25年度に研究を行った3次元微小構造内でのモータタンパク質アッセイ手法にもとついて,キネシン・ダイニンによる能動的な物質輸送を行う実験系を確立する.
聴覚中枢路における音源定位認識機構の解明

音源定位認識機構の解明は、当初高橋によりメンフクロウの蝸牛神経核で単一神経細胞活動記録を行うことから始めた.この研究の結果、音源の認識は両耳に入った音の時間差が最適な場合蝸牛神経核ニューロンの興奮、不適当な時間差によって興奮性の低下が起こることがわかった(Saberi and Takahashi、2002).すでに従来の研究で知られているごとく、この情報は上位の中枢である下丘に到達して音源の定位認識がなされている.ヒトにおける音源定位認識機構および両耳聴効果については多くの研究がなされている.しかし、補聴器具を装用した難聴者における機構については殆ど知られていない.そこで我々は、補聴器および人工内耳を装用した高度難聴者における両耳装用効果および音源定位認識の研究を進めた.予備試験において、人工内耳単独より補聴器併用時に雑音下の聴取能の改善が認められた(井脇、久保、1999).騒音負荷の下に語音聴取能を自動的、定量的に検査するために、米国House Instituteにて開発され、欧米においては標準的検査法となっている(Hearing in Noise Test ; HINT : Nilsson and Soli,1994).我々は、難聴者のおいて両耳聴の効果を調べるためHINTの日本語版を作成した(HINT-Japanese : Shiroma et al.,2002).この検査を用いて、正面、左右のそれぞれのスピーカより、音圧の校正された言葉およびマルチトーカノイズを聞かせ、単耳聴および両耳聴時における明瞭度の差を調べた.すなわち、人工内耳単独使用(CI)の場合と、人工内耳と補聴器(CI+HA)の両耳併用の場合において、静寂時と雑音負荷時の条件で語音聴取検査を実施した.結果は、補聴器単独では、語音聴取能が0%とほとんど補聴効果が得られない症例においても両耳併用することにより人工内耳単独で得られる補聴効果よりも大きな効果が得られ、統計学的にも有意な改善が認められた(松代ら、2003).人工内耳と補聴器の両耳併用により、認知レベルでの拮抗はなく、しかも語音聴取能は改善されおり、人工内耳と補聴器の併用によっても両耳聴効果が得られることが明らかにされた.音源定位認識機構の解明は、当初高橋によりメンフクロウの蝸牛神経核で単一神経細胞活動記録を行うことから始めた.この研究の結果、音源の認識は両耳に入った音の時間差が最適な場合蝸牛神経核ニューロンの興奮、不適当な時間差によって興奮性の低下が起こることがわかった(Saberi and Takahashi、2002).すでに従来の研究で知られているごとく、この情報は上位の中枢である下丘に到達して音源の定位認識がなされている.ヒトにおける音源定位認識機構および両耳聴効果については多くの研究がなされている.しかし、補聴器具を装用した難聴者における機構については殆ど知られていない.そこで我々は、補聴器および人工内耳を装用した高度難聴者における両耳装用効果および音源定位認識の研究を進めた.予備試験において、人工内耳単独より補聴器併用時に雑音下の聴取能の改善が認められた(井脇、久保、1999).騒音負荷の下に語音聴取能を自動的、定量的に検査するために、米国House Instituteにて開発され、欧米においては標準的検査法となっている(Hearing in Noise Test ; HINT : Nilsson and Soli,1994).我々は、難聴者のおいて両耳聴の効果を調べるためHINTの日本語版を作成した(HINT-Japanese : Shiroma et al.,2002).この検査を用いて、正面、左右のそれぞれのスピーカより、音圧の校正された言葉およびマルチトーカノイズを聞かせ、単耳聴および両耳聴時における明瞭度の差を調べた.すなわち、人工内耳単独使用(CI)の場合と、人工内耳と補聴器(CI+HA)の両耳併用の場合において、静寂時と雑音負荷時の条件で語音聴取検査を実施した.結果は、補聴器単独では、語音聴取能が0%とほとんど補聴効果が得られない症例においても両耳併用することにより人工内耳単独で得られる補聴効果よりも大きな効果が得られ、統計学的にも有意な改善が認められた(松代ら、2003).人工内耳と補聴器の両耳併用により、認知レベルでの拮抗はなく、しかも語音聴取能は改善されおり、人工内耳と補聴器の併用によっても両耳聴効果が得られることが明らかにされた.予備実験として、セキセイインコが聴覚中枢における神経回路網の解析に適した実験動物になり得るかを、解剖学的、電気生理学的に検討を行った。両内耳からの聴神経は同側の聴神経核である大細胞核(Nucleus Magnocellularis,NM)に投射し、同神経核細胞は両側の聴神経核である角状核(Nucleus Laminaris,NL)に投射する。両耳からの入力が最初に統合されるNLの神経細胞はニワトリでは単層に配列し、フクロウでは比較的大きな核内に広く疎に分布する。本研究において解剖学的検討を行ったところセキセイインコではその中間の様式、つまり数層の列状の細胞配列が認められた。このことはニワトリより容易に単細胞記録しうる可能性を示唆した。また細胞外記録法により、NLの細胞が、フクロウで良く知られているように、両耳間時間差(Interaural Time Difference,ITD)特異的に、且つ周波数特異的に反応することを見出した。

これらの事実はセキセイインコもフクロウと同様、聴覚中枢における神経回路網の解析に適した実験動物であることを示している。本研究の目的である音源定位認識機構の解析に代表される両耳情報統合機構の解析には、NL細胞からの細胞内記録による解析が重要な情報をもたらすと考えられる。その細胞内記録に必要な解剖学的、電気生理学的知見をこれまでの研究で得た。これらの研究の一部はCalifornia Institute of Technology(カリフォルニア工科大学)小西正一教授との共同研究で行っている。セキセイインコの聴覚中枢における神経回路網の解析に必要な予備実験を、本研究の目的とする層状核(Nucleus Laminaris,NL)からの投射先である下丘(Inferior colliculus,IC)、さらに上位に位置する上丘(Optic Tectum,OT)で、電気生理学的に検討を行った。メンフクロウにおいてはICやOTの細胞の様々な音刺激に対する興奮発火を検討することで神経回路網の結合様式が明かにされつつあり、その検討は重要な位置を占める。しかしセキセイインコにおいてはICやOTの細胞の機能はこれまで明らかでなかった。細胞外記録法により、NLの細胞が、両耳間時間差(Interaural Time Difference,ITD)特異的に且つ周波数特異的に反応するように、セキセイインコのOTの細胞もITD特異的に反応することを見出した。この事実はセキセイインコもフクロウと同様、聴覚中枢において両耳間時間差を重要な手がかりとして音源の空間認知を行っていることを示唆する。さらに、セキセイインコにおいても聴覚中枢路での、両耳融合能や周波数統合機構の解析が可能であることを意味する。音源定位認識機構の解明は、当初高橋によりセキセイインコの蝸牛神経核で単一神経細胞活動記録を行うことから始めた.この研究の結果、音源の認識は両耳に入った音の時間差が最適な場合蝸牛神経核ニューロンの興奮、不適当な時間差によって興奮性の低下が起こることがわかった.すでにメンフクロウを用いた研究(Konishi, Takahashi)で知られているごとく、この情報は上位の中枢である下丘に到達して音源の定位認識がなされている.ヒトにおける音源定位認識機構および両耳聴効果については多くの研究がなされている.しかし、補聴器具を装用した難聴者における機構については殆ど知られていなし.そこで我々は、補聴器および人工内耳を装用した高度難聴者における両耳装用効果および音源定位認識の研究を進めた.正面、左右のそれぞれのスピーカより、音圧の校正された言葉およびマルチトーカノイズを聞かせ、単耳聴および両耳聴時における明瞭度の差を調べた.その結果、両耳装用によって語音明瞭度の改善がみられ、こえrは雑音負荷の条件において有意差が認められた.その他にも、音源定位が確かになる、音に柔らかみがでる、自然の音に近ずく、といった効果がみられた.現在、これらの現状を客観化するように試みている.さらに、これらの実験結果を論文としてまとめている段階である.
脳卒中片麻痺上肢に対するニューロフィードバック療法の開発とその効果検証

本研究は、まず健常者の道具操作および観察・イメージ時の運動関連領域の脳活動をNIRS-EEGシステムを用いて検出し、それから得た脳活動を基に閾値を設定し、その閾値を超えると視覚フィードバックを与えるニューロフィードバック装置を開発した。なお全ての対象者において左運動前野の活動が明確であったため、その領域の活動に焦点を置いた。この装置を用いて、脳卒中後に上肢運動障害を呈した10名の患者に対して2週間の介入を行った。結果、道具操作観察・イメージ時に左運動前野の閾値を超える活動を認めた6名は、介入によって有意な機能改善を認めた。一方、閾値を超えなかった4名は介入によって著明な効果が見られなかった。前年度に得られた健常者の日常生活動作時およびそれをイメージした時の脳活動をもとにニューロフィードバック装置の開発を行った.その実際は,NIRS-EEG同時計測システムのリアルタイムデータ転送機能を利用して,NIRS,EEGそれぞれの信号についてリアルタイムで信号処理を行い,判定基準に満たす変化が検出されたことを対象者にリアルタイムで通知するソフトウェアの開発である。具体的には,ヒトが利き手(右側)で道具を使用する際の上肢到達運動および手把握操作運動,そしてそれをイメージ想起した時のNIRSデータから,空間的に有意性のあるチャンネルについてGLM統計ソフトウェアを用いて抽出し,t値マッピング表示を行った.さらに動作およびイメージ想起の両方において有意性を示した領域を同定し,標準的な活動量を算出した.この標準的活動量をもとにNIRS装置と同期化した視覚的フィードバック装置を製作した.結果として,動作時およびイメージ時の両方において有意な活動を示した脳領域は左腹側運動前野であることが判明した.したがって,運動前野の活動が閾値を超えた場合にフィードバックが付与されるシステムを開発した.その実際は,課題時の信号について,安静時からの信号強度の変化量を閾値と比較し,閾値を超えた際に,そのタイミングで観察しているPCディスプレイ上に表示するものである.一方,感覚運動野の活動に関してはNIRSに同期したEEGを用い,パラメータには前年度に得たMu律動(813Hz)の標準値を用いた.同じようにMu律動の値が閾値を超えた場合に視覚的フィードバックを付与するシステムを開発した.その実際は,課題時の単位時間ごとの特定の周波数成分(今回は813HZ)のスペクトル強度について,安静時と比較し,変化量が閾値を超えたタイミングでPCディスプレイ上に示すものである.今年度は、前年度に開発したニューロフィードバック装置を用いて、その装置を用いた介入が脳卒中後の上肢機能改善に効果を示すか検証した。対象は脳卒中後に上肢運動機能障害を呈した入院患者10名である。平均年齢は56.3±12.5歳であった。介入は2週間(計10日間)行われた。対象者は日常生活場面における道具の操作映像を観察するように求められた。なお、すべての対象者は通常の理学療法、作業療法の診療を受けており、本介入が別に加えられた形となる。介入における観察時の脳活動をfunctional near-infrared spectroscopy(fNIRS)を用いて記録し、道具操作に関わる運動関連脳領域の活動を記録し、腹側運動前野の活動が閾値を超えるとフィードバックが対象者に与えられた。介入前後の上肢機能アウトカムには、Wolf motor function test (WMFT)における課題遂行時間ならびにFunctinal ability scale(FAS)、そして10秒テストが用いられた。結果、10名中4名において、ビデオ映像観察中のいずれにおいても閾値を超える腹側運動前野の活動を認めなかった(活動なし群)。残りの6名においては腹側運動前野の活動が閾値を超える場合があり、適宜、ニューロフィードバックを試みた(活動あり群)。活動なし群に比べ、活動あり群の介入前のWFMTの課題遂行時間に有意な減少(p<0.05)、そしてFASと10秒テストに有意な増加が認められた(p<0.05)。また、介入前と後の各アウトカムの改善ポイントを比較すると、WFMTの課題遂行時間のみに活動あり群で有意なポイントの増加を認めた(p<0.05)。これらの結果から、本ニューロフィードバック課題の効果を引き出すためには、ビデオ映像観察中の腹側運動前野の相応の活動が必要であることが示唆された。目的:健康な成人を対象にNIRS-EEGシステムを用いて、道具操作およびそのイメージ想起に関わる脳活動を空間的かつ時間的に分析し責任領域を明確にすること。対象:健康な20代30代の成人13名(男性7名女性6名)。方法:道具は箸とハンマーを用い、それを使用している映像を作成した。

被験者は以下の3条件にて脳活動が測定された。1)道具使用時、2)道具使用のイメージ時、3)道具使用の映像観察時。脳活動測定には脳波計Active Twosystem (Biosemi)と近赤外線スペクトロスコピーFOIRE 3000(fNIRS島津製作所)を同期して用いた。各々15秒間の脳活動を測定した。前頭葉と頭頂葉を覆うようにファイバならびに電極を取り付けた。EMSE脳波解析プログラム、MRIフュージョンソフトウェア、NIRS-SPMを用いて解析した。脳波解析は国際10-20法に準拠し事象に関連したC3・Cz・C4(感覚運動野領域)のα波帯域(8-13Hz)のパワー値を求めた。一方NIRSはSPM解析を行い、責任領域を明らかにした。結果:3条件間にて感覚運動野領域のα周波数帯域のパワー値に有意な差が認められなかった。NIRS-SPM解析においては、3条件で安静時に比較して運動関連領野の有意な酸素化ヘモグロビン濃度長の増加が認められた(p<0.01)。特に運動前野の活動が明確であった。結論:これらの結果により道具操作時、イメージ時、観察時の感覚運動野の活動が等価的であることが判明した.またNIRS-SPM解析によって3条件ともに運動関連領野を活性化させることが明らかになった。この結果は運動実行を伴わないイメージや観察においても運動関連領野を活性化させることを示唆した。こうしたデータを標準としてニューロフィードバック装置の開発につながることが期待される。本年度はニューロフォードバック装置の開発が目的であったため,それが完成したことから研究はおおむね順調に進行していると判断した.おおむねデータ解析は順調に進んでいるが、研究費の交付が遅れたことから、被験者のリクルート開始が遅れ、そのため当初予定した母集団とはなっていない。速やかに予定した母集団にする予定である。開発したニューロフィードバック装置を用いて,まずは健常者を対象にその精度を明らかにする.具体的にはデータの再現性,妥当性を調べる.その後,その装置を使用して臨床介入を脳卒中片麻痺患者に対して行い,その効果に関して無作為化比較試験(並行群間比較試験)を用いて明らかにする.研究協力機関にて脳卒中片麻痺を呈した参加者を無作為に対照群と介入群の2群に振り分ける.介入期間は4週間とし,通常のリハビリテーション治療(理学療法,作業療法など)に加えてニューロフィードバック療法を介入する手続きを用いる.平成24年度は、昨年度のデータ測定を継続し、母集団が相当数となった時点で得られた脳活動をもとにニューロフィードバック装置の開発を行う。その実際は、上肢到達運動および手把握操作運動とそれをイメージ想起した時のNIRSデータから、空間的に有意性のあるチャンネルについてGLM統計ソフトウェア(島津製作所製)を用いて抽出し、t値マッピング表示を行う。運動およびイメージ想起の両方において有意性を示した領域を同定し、標準的な活動量を算出する。この標準的活動量をもとにNIRS装置と同期化した聴覚的フィードバック装置を製作する。具体的には。
高次元双有理幾何の分類問題

森は、藤野と共に、小平の標準束公式の一般化を与え、応用として、小平次元が3以下の代数多様体の標準環が有限生成になる等を証明した。また、宮岡、高木、コラールとともに、3次元標準Fano多様体の有界性を証明した。さらに、2点の非Gorenstein特異点を持つsemistable extremal nbdで中心曲線が既約なものの座標による具体的記述を与えた。向井は,種数9でクリフォード指数が極大の代数曲線が6次元シンプレクティックグラスマン多様体の線型切断になるという結果を証明した.齋藤政彦は,パンルベ方程式の初期値空間を代数幾何学的に特徴付けた代数曲面とその反有理因子の対である岡本・パンルベ対の概念を導入し,その変形論を用いて,逆にパンルベ方程式が得られる事を示した.中山は、解析空間上のある種の楕円ファイバー空間の双有理同値類全体を∂-エタールコホモロジーによって記述した。並河良典は、複素シンプレクティツク多様体の間の双有理写像を研究し、複素シンプレクティック多様体のカテゴリーでは、「リードの夢」の類似は成立しないことを示した。また、.複素シンプレクティック多様体に対する双有理トレリ問題の反例を構成した.小木曽は,Klein曲線の特徴付けのK3版として、位数168の単純群の4次拡大が忠実に作用するK3曲面は,Klein-向井のK3曲面に限ることを示した.高木は,竹内聖彦の手法を一般化して,指数2のQ-Fano 3-foldの分類表を作成し,幾つかの場合に存在を確認した.藤野は4次元標準因子対に関してログフリップの無限列が存在しないことを証明した.森は、藤野と共に、小平の標準束公式の一般化を与え、応用として、小平次元が3以下の代数多様体の標準環が有限生成になる等を証明した。また、.複素シンプレクティック多様体に対する双有理トレリ問題の反例を構成した.小木曽は,Klein曲線の特徴付けのK3版として、位数168の単純群の4次拡大が忠実に作用するK3曲面は,Klein-向井のK3曲面に限ることを示した.高木は,竹内聖彦の手法を一般化して,指数2のQ-Fano 3-foldの分類表を作成し,幾つかの場合に存在を確認した.藤野は4次元標準因子対に関してログフリップの無限列が存在しないことを証明した.森重文は、宮岡、高木、コラールとともに3次元標準Fano多様体の有界性の証明を出版した。これは川又雄二郎による、Q-分解的でピカール数が1の端末Fano多様体の有界性を一般化したものである。また、超曲面特異点に関するGurjarの興味深い結果が知られているが、その証明の簡易化と、Gurjarの条件を満たす、任意次元での明解な例を与えた。また、藤野と共に、小平の標準束公式の一般化を与え、その応用を論じた。具体的には、小平次元が3以下の代数多様体であれば、任意次元で標準環が有限生成になる等を証明した。また、3次元のk2A型の半安定extremal近傍を具体的に分類・表示し、フリップも具体的に表示した。宮岡洋一は、長さがn+1となる端射線を持つn次元Fano多様体は射影空間に限ること、およびその一般化の証明を与えた。斎藤政彦は、岡本-Painleve対の概念を導入し、その分類を行なった。更に、岡本-Painleve対の変形理論により、Painleve微分方程式系を導き、有理2形式をたもつ事から、ハミルトニアン形式の意味付けを与えた。並河良典は、複素シンプレクティック多様体の間の双有理写像を研究した。またその結果を用いて、複素シンプレクティック多様体のカテゴリーでは、「リードの夢」の類似は成立しないことを示した。小木曽啓示は、双対ケーラー錘の内点に格子点をもつ非特異ケーラー曲面は射影的であること(Huybrechtsの発見)に厳密な証明を与えた。早川貴之は、(cD/2)型3次元端末特異点についてそれらのblowing upで例外因子が食い違い係数1/2の既約因子を分類した。藤野修は、3次元半対数型標準多様体に関する豊富性定理を証明し、その応用として、端末的でない対数型標準特異点の指数の有限性に関する結果を証明した。

向井茂は、1958年に永田雅宜により与えられた、代数群の多項式環への線型作用で不変式環が有限生成でない例を改良した。すなわち、永田の例では群の次元が13であったのを3次元に落し、2次元を未解決問題として提出した。齋藤政彦は、Verrilが定義した、rigidカラビ-ヤウ多様体が、レベル6の楕円モジュラー曲面の自己ファイバー積と有理数体上、双有理同値である事を示し、モジュラー性予想、すなわちその3次コホモロジーで定義されるガロア表現のL関数がレベル6重さ4のモジュラー関数のL関数と悪い素点のオイラー因子を除いて等しい事を示した。中山昇は、自分自身への、同型でない、全射を持つ非特異曲面で小平次元が-∞のものを分類した。並河良典は、Moishezonによる定理「KaehlerかつMoishezonならば射影的」を、1-rational特異点をもった場合に一般化した。その応用として、特異点をもった複素シンプレクティック多様体のモジュライのなかで、射影的なものが稠密に存在することを示した。藤野修は、Shokurovの論文に関連して、低次元のログ極小モデルプログラム(定理)の仮定の下で、特殊終止定理の厳密な証明を与えている。向井は,種数9でクリフォード指数が極大の代数曲線が6次元シンプレクティックグラスマン多様体の線型切断になるという結果を証明した.宮岡は,射影空間の新たな特徴付けを与え、複素シンプレクテック多様体へ応用した.齋藤政彦は,パンルベ方程式の初期値空間を代数幾何学的に特徴付けた代数曲面とその上の反有理因子の対である岡本・パンルベ対の概念を導入して,その変形論を用いて,逆にパンルベ方程式が得られる事を示した..中山は,高々商特異点しかもたない正規解析空間Sとその上の因子DでS\D⊂Sがトロイド埋め込みになるものに対し,S上定義された印付き楕円ファイバー空間でS\D上スムーズなものの双有理同値類全体を∂-エタールコホモロジーによって記述した.小木曽は,Klein曲線の特徴付けのK3版として、位数168の単純群の4次拡大が忠実に作用するK3曲面は,Klein-向井のK3曲面に限ることを示した.並河は,複素シンプレクティック多様体に対する双有理トレリ問題の反例を構成した.また,端末特異点を持つカラビーヤウ多様体が変形によってスムージングできるための必要十分条件を与えた。高木は,竹内聖彦の手法を一般化して,指数2のQ-Fano 3-foldの分類表を作成し,幾つかの場合に存在を確認した.藤野は,楕円曲面についての小平標準因子公式の詳細な一般化を,一般ファイバーがK3曲面もしくはアーベル多様体の時に行った.また,小平次元の不等式に関する飯高予想を特殊な場合に確認した.早川は,重み付き爆発を応用して,3次元フリップを双有理射を用いて3次元フリップの新しい存在証明を与えた.森は,一般型曲面の退化で極限として現れる曲面の各既約成分の「次数」のエフェクティブな評価を与えた.また,標数2の場合の3次元非特異Fano多様体の分類において,標数0の向井・森の手法が使えない,野性的コニック束の直接的な分類を与えた.向井は,Hilbertの第14問題の永田(雅宜)型の反例(2001)を一般化して,不変式環が3本足Dynkin図形T_<p,q,r>のWeyl群による対称性をもつものを構成した.永田型の場合と同様Weyl群が有限でないなら不変式環も有限生成でない.齋藤盛彦は,多項式写像について無限遠点におけるモノドロミーの固有値1に対応するJordanブロックのサイズの評価を与えた.また,コホモロジー上のGillet-Soule整的重みフィルトレーションを用いて,1モチーフに関するDeligne予想を同種を除いて証明した.
カテプシンの機能解析を目的としたＦａｓｃｉｏｌａ属における遺伝子組換え技術の確立

本研究は第1にFasciola属において遺伝子組換え技術を確立すること、第2に確立した遺伝子組換え技術を用い、カテプシン等の病原性分子の機能解析を行うことを目的とした。まず、ウイルスベクターを用いた遺伝子導入法の検討を行った。レポーターアッセイの結果、レポーター遺伝子の導入は確認できなかった。次に、エレクトロポレーション法を用い、Fasciola sp.の幼虫に対し、蛍光色素で標識をしたレポーター遺伝子のmRNAを曝露した。蛍光顕微鏡を用いて蛍光標識したmRNAを観察したところ、微弱ではあったが、幼虫の体内に蛍光シグナルを確認でき、体内にmRNAを導入することができたと考えられた。しかしながら、レポーターアッセイの結果、mRNA曝露に伴う発色強度の増加は認められなかったことから、エレクトロポレーションによるmRNAの導入は、その導入効率および翻訳効率が不十分であることが示唆された。次に、dsRNAを用いたカテプシンL1遺伝子の発現抑制を試みた。幼虫にカテプシンL1に対するdsRNAを曝露した結果、カテプシンL1遺伝子の発現抑制は認められなかった。そこで、カテプシンに代わる病原性分子として、タンパク質Aを標的とした。幼虫にタンパク質Aに対するdsRNAを曝露した結果、タンパク質Aの発現抑制が確認された。次に、マウス腸管ループ試験を行い、腸管外へ脱出した幼虫の割合を比較した結果、曝露群と非曝露群の間に差は認められなかった。このことから、タンパク質Aは幼虫の腸管脱出には関与しない可能性が示唆された。次に、マウスを用いた肝臓移行試験を行った結果、曝露群では肝臓における肝蛭遺伝子のコピー数が減少する傾向がみられた。このことからタンパク質Aは肝臓への侵入時または肝実質内の移動時に働くことが示唆された。29年度が最終年度であるため、記入しない。Fasciola属(肝蛭)において、体内移行メカニズムの解明を目的とした形質転換法の確立を試みた。まず、ウイルスベクターを用いた遺伝子導入の検討を行った。肝蛭の虫卵、幼虫の各ステージに対し、レポーター遺伝子を挿入した組換えウイルスを曝露し、肝蛭への遺伝子の導入を評価した。その結果、いずれのステージにおいても、レポーター遺伝子の導入は確認できなかった。次に、mRNAを導入する方法を試みた。エレクトロポレーション法を用い、脱嚢幼虫にレポーター遺伝子のmRNAを曝露した。幼虫体内へのmRNAの導入は確認された一方で、レポーター遺伝子の発現は確認できなかった。このことから、エレクトロポレーションによるmRNAの導入は、その導入および翻訳効率が不十分であることが考えられた。そこで、発現抑制による遺伝子の機能解析を試みた。脱嚢幼虫の腸管穿孔あるいは肝臓侵入といった体内移行に関与すると予想されるタンパク質Aを標的としたdsRNAを用い、タンパク質Aの発現抑制を試みた。その結果、dsRNA脱嚢後7日の幼虫において、タンパク質Aの発現抑制が確認された。次に、マウス腸管ループ試験を行い、タンパク質Aは幼虫の腸管脱出には関与しない可能性を見出した。さらに、曝露幼虫をマウスに経口感染し、肝臓へ移行した幼虫の数を定量的に評価した結果、dsRNA曝露により、感染マウス肝臓における肝蛭遺伝子のコピー数が減少する傾向が認められた。このことから、タンパク質Aは幼虫の肝臓への侵入あるいは肝実質内における肝蛭の生存に重要な機能を有する可能性が示唆された。本研究は肝蛭に代表される寄生蠕虫類における体内移行メカニズムを明らかにするため、形質転換法を確立することを目的とした。しかしながら、ウイルスベクターやmRNAを用いた形質導入法に成功しなかったため、代替法としてdsRNAを用いた発現抑制法を用いた機能解析を行った。

発現抑制法を用いることで、体内移行に関与すると考えられる他のタンパク質について機能解析を行う。また、個々のタンパク質のみならず、タンパク質間の相互作用についても解析も行う予定である。さらに、寄生蠕虫類の体内移行メカニズムを俯瞰的に理解するため、類似した移行動態を示す他の蠕虫類においても同様の解析を行い、その相違点を探る。29年度が最終年度であるため、記入しない。