hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
長期継続多読とその効果のしくみに関する実践的研究

高専に7年間在学し20062017年に専攻科を修了した50名の学生を対象に、受講年数と累積読書量、TOEIC得点との関係を調査した。受講年数が1.5年から2.5年に増えたとき、累積読書量は41万語から68万語に増えたものの、TOEIC平均点は350380点にとどまった。受講年数が1.53.5年から4.55.5年に増えたとき、累積読書量は37万語から62122万語に増えるとともにTOEIC平均点は410点から480490点へと上昇した。また受講年数が34年から67年に増えたとき、累積読書量が77万語から106224万語に増えるとともにTOEIC平均点は470から540575点へと上昇した。多読授業は長期継続が有利であり、平均読書量100万語程度が目安と判断できる。また、各学生の読んだ英文レベルとTOEIC得点の伸び率には関係性を見出せなかった。次に、累積100万語以上を読破し計3回以上TOEICを受験した学生を2群: 5年間受講した学生70名(A群:平均3.7年継続)と、7年間受講した学生33名(B群:平均6.4年継続)とに分けて比較した。累積読書語数は、A群が143万語、B群が140万語と同等で、平均読書ペースはA群が年間39万語、B群が年間24万語である。週45分×30回の授業時間の2倍の時間を毎分100語で読んだ場合(27万語)の1.4倍、0.9倍である。両群の最終TOEIC平均得点はA群:475点、B群:550点であり、読書語数に対するTOEIC得点上昇率も、A群:124点/100万語、B群:166点/100万語とB群が有意に高かった。7年間多読を継続した学生は、読書ペースを上げなくてもTOEIC得点が顕著に上昇し、より短期間にハイペースで読む学生よりも高い得点上昇率を持っていた。高専生対象の多読プログラムでは7年間の長期継続が有利である。豊田高専に専攻科まで含めて7年間在学し、20062017年(3月)に専攻科を修了した50名の学生を対象に、多読授業受講年数(37年)と、累積読書量、(3,6,7年次の)TOEIC得点との関係を調査した。本科3年次では、多読授業継続年数が増えたとき(1.5より2.5年が)累積読書量は41万語から68万語まで増えたものの、TOEIC平均点は350380点に止まり、得点上昇はみられなかった。専攻科1年(6年次)では、多読授業継続年数が増えたとき(1.53.5年より4.55.5年で)累積読書量が37万語から62122万語まで増えるとともに、TOEIC平均点は410から480490点へと上昇した。また、専攻科2年(7年次)でも、多読授業継続年数が増えたとき(34年より67年で)累積読書量が77万語から106224万語まで増えるとともに、TOEIC平均点は470から540575点へと上昇した。この結果より、高専生を対象とした多読プログラムでは、47年の長期継続が実践上の要点であり、多くの受講生が累積で100万語以上の読書量に達したとき、TOEIC得点で測定可能な変化が現出するものと判断できる。また、対象学生(の一部)の読書記録から、各学生の読んだ英文レベルとTOEIC得点の伸び率の関係調査を始めた。本科1年生に対して語彙サイズの測定を試みたが、測定結果と現場の教員の観察との乖離が見られ、測定方法の見直しが必要と考えている。長期継続多読学生の学習履歴とTOEIC得点との関係を調査し、TOEIC得点上昇率と英文レベルとの関係の分析を始めた。長期継続多読の効果を調べるため、在学中に累積100万語以上を読破し、100万語読破前後に計3回以上TOEICを受験している学生を2群、すなわち、豊田高専本科で5年間の多読授業を受講した学生70名(A群:平均3.7年継続)と、さらに専攻科まで含めて7年間多読授業を継続した学生33名(B群:平均6.4年継続)とに分けて両者を比較した。両群の累積読書語数は、A群が143万語、B群が140万語と同等であり、平均読書ペースはA群が、年間39万語、B群が年間24万語であり、週45分×30回の授業時間と、同量の自習時間を用いて毎分100語で読んだ場合(27万語)の1.4倍、0.9倍であり、A群は頑張って多読を進めた学生、B群は普通に多読を進めた学生と理解できる。両群の最終TOEIC平均得点はA群:475点、B群:550点であり、B群の方が高かった。また、読書語数に対するTOEIC得点上昇率も、A群:124点/100万語、B群:166点/100万語とB群が有意に高かった。

前年度の研究で観測されていた現象、すなわち、専攻科進学後に多読授業を継続した学生は、読書ペースを上げなくても多読を継続すればTOEIC得点が顕著に上昇することが、より短期間にハイペースで読む本科学生よりも高いTOEIC得点上昇率を持つことが確認できた。今後は、A群とB群の学習内容(英文レベルの分布、および、朗読音声の活用度の違い等)の影響を調べる予定である。このように、高専生を対象とした多読プログラムでは、専攻科までプログラムを伸ばし、受講生が7年間多読を継続できることが実践上の要点であると確認できた。累積100万語読破以上の学生群を継続5年以内と57年の2群に分け、両者のTOEIC得点上昇率の違いを分析した。高専に7年間在学し20062017年に専攻科を修了した50名の学生を対象に、受講年数と累積読書量、TOEIC得点との関係を調査した。受講年数が1.5年から2.5年に増えたとき、累積読書量は41万語から68万語に増えたものの、TOEIC平均点は350380点にとどまった。受講年数が1.53.5年から4.55.5年に増えたとき、累積読書量は37万語から62122万語に増えるとともにTOEIC平均点は410点から480490点へと上昇した。また受講年数が34年から67年に増えたとき、累積読書量が77万語から106224万語に増えるとともにTOEIC平均点は470から540575点へと上昇した。多読授業は長期継続が有利であり、平均読書量100万語程度が目安と判断できる。また、各学生の読んだ英文レベルとTOEIC得点の伸び率には関係性を見出せなかった。次に、累積100万語以上を読破し計3回以上TOEICを受験した学生を2群: 5年間受講した学生70名(A群:平均3.7年継続)と、7年間受講した学生33名(B群:平均6.4年継続)とに分けて比較した。累積読書語数は、A群が143万語、B群が140万語と同等で、平均読書ペースはA群が年間39万語、B群が年間24万語である。週45分×30回の授業時間の2倍の時間を毎分100語で読んだ場合(27万語)の1.4倍、0.9倍である。両群の最終TOEIC平均得点はA群:475点、B群:550点であり、読書語数に対するTOEIC得点上昇率も、A群:124点/100万語、B群:166点/100万語とB群が有意に高かった。7年間多読を継続した学生は、読書ペースを上げなくてもTOEIC得点が顕著に上昇し、より短期間にハイペースで読む学生よりも高い得点上昇率を持っていた。高専生対象の多読プログラムでは7年間の長期継続が有利である。学生が読んだ英文レベルとTOEIC得点上昇率の関係、および、英文聞き取り試験(Dictation)とTOEIC得点との関係を調査、分析する。上記2群を、読書図書の英文レベルの違い、および、朗読音声の活用頻度等、読書スタイルの面から調査、分析する。読書記録の読み取り(ディジタル化)作業を初年度に集中的に行う予定であったが、分析結果を見ながら進めることに変更したため、資料整理補助費が減った。(理由)読書記録の読み取り(ディジタル化)作業は、分析結果を見ながら進めることに変更したため、資料整理補助費が減った。また、昨年度3月の国際会議(Annual TESOL Convention)での発表申込みは不採択だったが、修正論文を6月の会議(5th World Congress of Research in Education)に採択され、発表したので、外国旅費が増えた。(使用計画)読書記録の読み取り(ディジタル化)作業を継続的に行う。読書記録の読み取り(ディジタル化)作業をを継続的に行う。
自己免疫性関節炎における骨破壊の分子機構:破骨細胞分化因子(RANKL)の関与

慢性関節リウマチ(RA)等の自己免疫性関節炎においては、滑膜増生・パンヌス形成に引き続いて軟骨・骨組織の破壊が起こる。さらに関節炎の進行に伴い、関節近傍の骨量減少や全身性の骨粗鬆症が生じる。消炎鎮痛剤や免疫抑制剤投与により炎症を沈静化しえても、骨破壊による関節の機能障害が残るため、患者のQOL低下を招く。炎症早期には、サイトカインの作用が重要であるが、進行期の骨破壊病変には破骨細胞が中心的な役割を果たすと考えられている。破骨細胞の最終分化・活性化には骨芽細胞/間質細胞との相互作用が必須とされてきたが、破骨細胞分化因子(RANKL)が破骨細胞分化誘導に不可欠な因子として分離同定され、骨吸収性サイトカインによりその発現が増強することが想定されている。さらに、RANKL受容体であるRANK発現状態、破骨細胞抑制因子Ostcoprotegerinが破骨細胞数や活動性を制御すると考えられている。自己免疫関節炎における骨破壊の分子機構を解明する目的で、マウスのII型コラーゲン誘導関節炎(Collagen Induced Arthritis、CIA)におけるRANKL、RANK、OPG各々の遺伝子発現をin situ hybridization (ISH)法にて解析した。関節炎局所では、炎症性滑膜やパンヌス内に単核多核の破骨細胞(TRAP陽性・RANK陽性)が存在し、炎症性滑膜組織が破骨細胞の増殖と蓄積を支持している事が示唆された。同部位にRANKL陽性滑膜線維芽細胞の増加を認めたことから、滑膜細胞が破骨細胞形成に直接関与する可能性、即ち滑膜線維芽細胞とマクロファージ/単核細胞とのRANKL-RANKを介する相互作用により破骨細胞前駆細胞が形成される機構を明らかにした。以上の成果は内外の学会にて報告するとともに、英文誌Journal of Histochemistry and Cell Biologyに報告した。慢性関節リウマチ(RA)等の自己免疫性関節炎においては、炎症性サイトカインの関与により、滑膜増生・パンヌス形成に引き続いて軟骨・骨組織の破壊が起こる。これらの過程において破骨細胞が中心的な役割を果たすと考えられている。破骨細胞はモノサイト/マクロファージと同系統の造血系細胞に由来するが、その最終分化・活性化には骨芽細胞/間質細胞との相互作用が必須である。近年、破骨細胞分化因子(RANKL)が破骨細胞分化誘導に不可欠な因子として分離同定され、骨吸収性サイトカインによりその発現が増強することが想定されている。さらに、RANKL受容体であるRANK、破骨細胞抑制因子Osteoprotegerinが破骨細胞数や活動性を制御すると考えられている。自己免疫関節炎における骨・軟骨破壊の分子機構を解明する目的で、マウスのII型コラーゲン誘導関節炎(Collagen Induced Arthritis、CIA)におけるRANKL、RANK、OPG各々の遺伝子発現をin situ hybridization(ISH)法にて解析した。CIAマウスにおいては、炎症性滑膜やパンヌス内に単核多核の破骨細胞(TRAP陽性・RANK陽性)が存在し、炎症性滑膜組織が破骨細胞の増殖と蓄積を支持している事が示唆され、同部位にRANKL陽性滑膜線維芽細胞の増加を認める為、滑膜線維芽細胞とマクロファージ/単核細胞とのRANKL-RANKを介する相互作用により破骨細胞前駆細胞が形成される可能性が推察された。以上の成果は、英文誌Journal of Histochemistry and Cell Biologyに報告し印刷中である。
ヒト以外の哺乳類における鼻腔の生理学的機能に関するシミュレーションモデルの開発

本研究計画では、ヒト以外の霊長類をモデル動物として、鼻腔の気流と温度・湿度調整能力を比較検討するための数値流体力学的シミュレーションの計算モデルを作成する手法を開発する。まず、サル類の画像データをもとに、鼻腔の三次元形態のデジタルデータの作成について検討した。マイクロCTの利用を検討した。画像としての空間解像度やデータ収集時間には優れている。ヨウ素溶液による染色により、CTであっても軟組織の可視化が可能である。そのプロトコルを検討し、良好な組織間コントラスを有する画像データを得ることに成功した。よって、今後、マイクロCTで組織形態の情報を収集し、デジタル形態データを作成することにした。一方、生体サル類での鼻腔内温度計測については、ニホンザルとヒヒを対象に、実測実験を実施した。X線テレビを用いて温度計測地点を確認しながら、サーミスタ温度計測装置により、鼻腔内の複数地点での空気温度を実測した。個体間の変異はあるものの、サル類でも、ヒト同様に鼻前庭で、全体の半分以上の加温が起きていることを確認した。しかし、ヒトでは咽頭鼻腔でも加温が終了しないのに対して、サル類では鼻腔中程で完全に加温が終わるのことを示した。サル類では、ヒトに比べて加温機能に優れていることを実測によって示した。これらの画像データと実測データは、ヒト以外の哺乳類で適用できる鼻腔の加温シミュレーションモデルの作成の基礎データとして使用する。当初予定したいた高解像度MRIではなく、より空間解像度の高い画像データを得られるマイクロCTの利用を検討したため、進捗がやや遅れた。手法の改善に時間を要したが、基礎データは順調に収集できた。年度前半にシミュレーションモデルの開発に目処をつけ、所期の目的を達成する。まず、高解像度MRIデータをもとに、鼻腔の粘膜組織の厚さやその分布について解剖学的分析を行い、計算モデルの基礎データを収集する必要がある。そのために、どの程度の空間解像度やコントラストをもつデータにより正確な計算が可能かを、既存の高解像度MRIデータ等を用いて検討した。また、高解像度MRIスキャナーの利用に加えて、京都大学霊長類研究所に新たに導入されたマイクロCTの活用も検討した。画像としての空間解像度やデータ収集時間には優れているが、組織間コントラストは落ちるので、収集可能な組織形態情報が限られる。高解像度MRIで組織形態の情報を収集し、マイクロCTで鼻腔のデジタル形態データを作成する方針を固めた。一方、生体サル類での鼻腔内温度計測については、マカクザルおよびヒヒを対象とした実験計画および機材の準備を進めた。温度計測装置を選定し、標本を用いて、X線テレビを用いた温度計測地点の判定手法、ならびに実測テストを実施した。外気温と湿度の設定の関係上、5-6月、もしくは10-11月に計測を実施する必要がある。これらモデル作成手法の開発に向けた準備とは別に、吸気のみならず、呼気からの温度および湿度回収の機能について、ヒトの鼻腔および外鼻形状の変異とその効果を検討する数値流体力学的シミュレーションに着手した。次年度に向けた画像データ撮像および鼻腔内温度計測の準備を整えることができた。計画通りの推進が可能である。当初計画どおり、画像データ撮像および鼻腔内温度計測を進める。画像解析用計算機の選定が次年度にずれ込んだ。次年度に購入する。画像データの収集方法の検討で作業が遅れ、シミュレーションモデル作成にかかる経費の一部が未使用となった。2019年度には、モデル作成を終えるので、全て使用する。
ｐ６２を介した選択的オートファジー誘導による口腔癌転移阻止療法の開発に関する研究

本研究は,p62による選択的オートファジー亢進させ,扁平上皮癌細胞のインテグリンαv分解を誘導することでαv発現を低下させ,その結果,口腔癌の増殖や浸潤,転移を阻止する新しい口腔癌治療法を開発することを目的として,口腔癌扁平上皮癌細胞におけるインテグリンαvの蛋白翻訳後修飾について検討した.口腔扁平上皮癌においてインテグリンαvはオートファジーの抑制により発現量が増加したことから,オートファジーによる蛋白翻訳後修飾の可能性が示唆された.また,扁平上皮癌細胞においてインテグリンαv発現量とp62発現量は相関しているとともに,p62は細胞増殖,生存に必要な分子であることも示唆された.(1)オートファジー誘導による口腔癌細胞のインテグリンαv発現と増殖能及び浸潤能の変化の検討オートファジー誘導には,mTOR阻害剤であるラパマイシンを用い,ラパマイシンによるオートファジー誘導の確認はオートファゴソームの膜タンパクであるLC3発現を解析することで確認した.さらに,オートファジー誘導薬剤であるラパマイシンが,口腔扁平上皮癌細胞のインテグリン発現と増殖能と浸潤能に与える影響について解析した.ラパマイシンの影響によると考えられる癌細胞の増殖減少を認めたため解析は困難であった.今後ラパマイシン濃度の調整と培地の調整を行い解析を進める予定である.(2) mammaliantwo-hybrid法を用いたp62とインテグリンαvの複合体形成の検索扁平上皮癌細胞における,p62とインテグリンαvの複合体形成について解析するため,扁平上皮癌細胞内にGAL4 DNA-Binding Domain Cloning VectorであるPM(spelloutすること)にp62遺伝子を導入したp62ーPMと,Activation Domain Cloning VectorであるpVP16にインテグリンαvを導入したαvーpVP16,及びReprorter VectorであるpG5SEAPを導入したが,p62ーPMによるP62発現の明らかな増加を認めなかった.今後再度遺伝子導入を行い,p62とインテグリンαvの結合を解析する予定である.(1)オートファジー誘導による口腔癌細胞のインテグリンαv発現と増殖能及び浸潤能の変化の検討オートファジー誘導には,mTOR阻害剤であるラパマイシンを用い,ラパマイシンによるオートファジー誘導の確認はオートファゴソームの膜タンパクであるLC3発現を解析することで確認したが,ラパマイシン投薬が原因と考えられる癌細胞の生存率低下が起こっている.他剤への変更や,投与時間,投与量,基礎培地等の変更により実験方法を見直す必要があると考えられる.(2) mammaliantwo-hybrid法を用いたp62とインテグリンαvの複合体形成の検索P62過剰発現を認めなかったことから再度施行する必要があると考える.研究は,選択的オートファジーのアダプター分子であるp62による選択的オートファジー亢進させ,扁平上皮癌細胞において増殖能,造腫瘍能,浸潤能を亢進させる因子であるインテグリンαv分解を誘導することでαv発現を低下させ,その結果,口腔癌の増殖や浸潤,転移を阻止する新しい口腔癌治療法を開発することを目的としている.これまでに扁平上皮癌細胞のインテグリンαvが,タンパク翻訳後にオートファジー/リソソーム系にて分解されることを見いだした.さらに,αv抗体とp62抗体を用いた共免疫沈降法により,扁平上皮癌細胞中のインテグリンαvがp62と複合体形成を示唆する所見を得ている.ユビキチン化されたインテグリンαvがアダプター蛋白p62と複合体形成する可能性が示唆された研究結果から,扁平上皮癌細胞において,インテグリンαvはタンパク翻訳後にユビキチン化され,p62を介した選択的オートファジーによる分解等の修飾を受け,機能発現していると考えている.口腔扁平上皮癌においても同様に,インテグリンαvはタンパク翻訳後にユビキチン化され,p62を介した選択的オートファジーによる分解等の修飾を受けているか検討した.口腔扁平上皮癌においてインテグリンαvはオートファジーの抑制により発現量が増加したことから,オートファジーによる蛋白翻訳後修飾の可能性が示唆された.また,扁平上皮癌細胞においてインテグリンαv発現量とp62発現量は相関しているとともに,p62は細胞増殖,生存に必要な分子であることも示唆された.以上より口腔扁平上皮癌においてもインテグリンαvはタンパク翻訳後にオートファジーによる分解等の修飾を受けており,その修飾にはp62を介している可能性があると考えられた.本研究は,p62による選択的オートファジー亢進させ,扁平上皮癌細胞のインテグリンαv分解を誘導することでαv発現を低下させ,その結果,口腔癌の増殖や浸潤,転移を阻止する新しい口腔癌治療法を開発することを目的として,口腔癌扁平上皮癌細胞におけるインテグリンαvの蛋白翻訳後修飾について検討した.口腔扁平上皮癌においてインテグリンαvはオートファジーの抑制により発現量が増加したことから,オートファジーによる蛋白翻訳後修飾の可能性が示唆された.また,扁平上皮癌細胞においてインテグリンαv発現量とp62発現量は相関しているとともに,p62は細胞増殖,生存に必要な分子であることも示唆された.(1)オートファジー誘導による口腔癌細胞のインテグリンαv発現と増殖能及び浸潤能の変化の検討再度実験条件について検討し,施行する予定である.(2) mammaliantwo-hybrid法を用いたp

62とインテグリンαvの複合体形成の検索再度GAL4 DNA-Binding Domain Cloning VectorであるPM(spelloutすること)にp62遺伝子を導入したp62ーPMの作成並びにp62とインテグリンαvの結合を解析する予定である.28年度が最終年度であるため、記入しない。外科系歯学28年度が最終年度であるため、記入しない。
enChIPによる遺伝子座特異的ヒストン修飾酵素複合体とエネルギー代謝機構の解明

近年、CRISPR-CAS9システムによるゲノム編集技術、これを応用したengineered DNA-binding molecule-mediated chromatin immunoprecipitation (enChIP)法が開発され、特異的な遺伝子座に結合する核酸やタンパク質の解析が可能となりつつある。本研究ではこれらの技術を用いて実際にβ1アドレナリン受容体遺伝子Adrb1の遠隔エンハンサーを欠失させ、アドレナリン刺激依存的な転写誘導が見られなくなること、そして、このメカニズムとしてクロマチンの高次構造変化が損なわれることを示した。1-1.レトロウィルスベクターを用いたenChIP用CRISPR系の作製。ガイドRNAをデザインし、目的とする遺伝子座にdCAS9をターゲットさせる仕組の構築に成功した。未分化褐色脂肪細胞を用い、目的とする遺伝子座領域にガイドRNAを作製し、これらのウィルスベクターを発現させ、クロスリンクの後Flagタグでクロマチン免疫沈降(ChIP)を行い、十分にこの領域のDNA濃縮が得られることを確認した。1-2. enChIP-Seq法によるUcp1, Adrb1遺伝子プロモーターと相互作用しているゲノム領域の網羅的同定。Ucp1やAdrb1は成熟褐色脂肪細胞に分化して十分量が発現してくる遺伝子である。そこで成熟脂肪細胞でenChIPを行うために、予備検討を行った。良好な濃縮が未分化前駆褐色脂肪細胞では得られたものの、脂質の蓄積した脂肪細胞に分化させると、タンパク質複合体解析や次世代シーケンサー解析に耐えうる十分な濃縮が得られなかった。1-3. enChIP-MS法を用いたゲノム間相互作用を媒介する分子の同定。上述したとおり、脂肪滴を蓄積した脂肪細胞では現在十分な濃縮が得られず検討中である。2. S265A変異-JMJD1Aノックインマウスの作製: PKAによりリン酸化されるセリンをアラニンに変異させたマウスJMJD1aのコンストラクトの作製を進めノックインマウスを樹立した。現在順調に繁殖しており、寒冷刺激での低体温、肥満が起こるかなどの実験を予定している。前年度の進捗と研究推進可能性の実務的考察に基づき、DNA切断活性のある3xFLAG-Cas9-NLSを一過性に発現させ熱産生遺伝子Ucp1もしくはAdrb1の遠隔にある活性化エンハンサー領域を欠失させる細胞を樹立してproof of conceptの実験を行うことを優先する推進方策をとった。CRISPR-CAS9の系で、β1アドレナリン受容体(Adrb1)の遠隔エンハンサー領域(-44kb)を欠失させることを目的に、この領域で核内受容体型転写因子PPARγが結合する部位を挟むようにガイドRNAを作製し、2つの異なるガイドRNAをCRISPR-CAS9に組み込んだ発現ベクターを不死化褐色脂肪細胞にトランスフェクションを行った。細胞のソーティングを行い、シングルクローンを選び出した。父方母方の2つのアレルがともに欠失しているクローン5個を約100個のシングルクローンスクリーニングから得ることに成功した。これに先立ち、不死化脂肪細胞はシングルクローン化し、脂質染色で一様に染まる分化度の良いクローンを選んで上記のプロセスを施行した。結果、遠隔のエンハンサー領域を欠失した褐色脂肪細胞はAdrb1のβアドレナリン(βAR)刺激に伴う遺伝子発現が減少し、我々がNat Commun (2015) 6, 7052に報告したβAR刺激依存的にAdrb1領域のクロマチンの高次構造変化により急速に転写が制御されることを証明した。平成26年には成熟褐色脂肪細胞でのenChIPを樹立する予定であったが、脂肪をため込まない前駆脂肪細胞でのみ系が確立している。一方ノックインマウス作製の計画はジェノタイピングから、予定通り進んでいる。転写因子、シグナル、エピゲノム、ゲノム編集成熟脂肪細胞でのChIP効率が悪いのは、取り除けきれない脂肪が邪魔をしているのかも知れないが、使用しているプロモーターがLTRというウィルス由来の弱いプロモーターを使っていることも懸念される。よって、レンチウィルスを用いて、EF1などより強いプロモーターでドライブされるベクターを構築する。一方で、分化させない前駆脂肪細胞ではFlagタグで目的とする遺伝視座にターゲットさせることは可能となった。前駆脂肪細胞において、脂肪細胞のマスターレギュレーター遺伝子上でDNA切断活性のないdCAS9を発現させ、enChIP-seq, enChIP-MSを樹立することが現実的によりハードルが低いのでこれを優先して行う。さらに、DNA切断活性をもつ3xFLAG-Cas9-NLSを一過性に発現させ、すでに明らかにしてきたUcp1遺伝子の遠隔にある活性化領域を欠失させる細胞株を構築し、proof of conceptを行う。実際にAdrb1の44kb上流のエンハンサー領域の遺伝子を2対欠失させることに成功した。

Βアドレナリン刺激でより遺伝子発現上昇の見られるUcp1遺伝子13kb上流に新規に同定した活性のあるエンハンサー領域を欠失させるためにトランスフェクションをおこない、2対の遺伝子の双方ともにこの領域が欠失している細胞をFacsでGFPをマーカーにソーティングした後、2対の遺伝子も目的の場所で欠失された細胞を選択中である。
稀土類金属およびその化合物の電子状態の計算

本研究は、昭和58-60年度の文部省科学研究費補助金による「固体の凝集エネルギーの理論的計算」に引続き、それを更に発展させたもので、遷移金属だけでなく稀土類金属を含むより広い化合物において「個々の固体の結晶構造の安定性について、またその磁気的性質について、どの程度理論的に(非経験的に)予測可能か」を調べ、個々の固体の物性をその電子レベルからより深く理解するとともに、いわゆる「物資設計」なるものがどの程度現在可能か」を調べようとしたものである。得られた結果の主なものは以下の通りである。1.遷移金属間ラーベス相化合物1AB_2〔A=Y_2Zr,Nb;B=Mn,Fe_2Co,Ni〕の電子構造を、局所電子密度近似の枠内で、LMTO法により系統的に計算し、その全エネルギーの比較から、その結晶構造の安定性、強磁性反強磁性の出現を調べ、種々の実験事実が非経験的に説明できることを明らかにした。TiFe_2、Ti_<1-x>ScxFe_2のFeラーベス相化合物に見られる複雑な磁気相図、YMn_2の反強磁性転移に見られる大きな磁気体積効についても、その電子構造から自然に説明できることを示した。2.最近注目を浴びている強磁性新物質Nd_2Fe_<14>B(ネオマックス)の電子構造を明らかにするためにR_2Fe_<14>B(R=Y,Ce,Gd,Nd)の電子状態をLSD近似の枠内で、LMTO-ASA法によって、その状態密度曲線、6種類のFeイオンの磁気モーメント、磁化の大きさ(30 ^μ_β/FU)を計算し、実験とよく一致することを示した。またRFe_2、RFe_5、RFe┣D217、CR=Y,Ce,Gd)の電子状態も系統的に計算した。3.LMTO-ASA法を用いて、NiSi_2/SiおよびCoSi_2/Sこの金属は半導体界面の電子構造の計算を行い、空孔をうまく使えば充分良い結果を得られることを示した。1.4f電子系(LaLu)および5f電子系(Th,Pa,V)について、局所電子密度近似(LSD近似)の枠内で、格子定数および凝集エネルギーの計算を行い、5f電子系ではバンドモデルがよいが4f電子系ではむしろ局在モデルの方が良いことを示した。4f局在軌道として共鳴軌道を選びこれに直交した空間でセルフコンシステントなバンド計算を行うことにより、2価と3価の格子定数の違いをほぼ定量的に説明できること、凝集エネルギーも自由イオンの段階でLSD近似に補正を考りょすればよく理解できることを示した。また4f軌道の準位のLSD近似による計算値と光吸収や光電効果による4f準位の実験値の間の関係を明らかにした。また稀土類金属・アクチナイド金属を含む多くの化合物の電子構造を系統的に計算し、f軌道とまわりのイオンの軌道との混成の行列要素を定量的に調べ、酸化物・硫化物・遷移金属合金等ではf軌道とまわりのイオンのp,d軌道との混成が強く、この効果を取り入れた計算を行う必要がある。そのような計算が現在進行中である。2.最近注目を浴びている強磁性新物質【Nd_2】【Fe_(14)】

B(ネオマックス)の電子構造を明らかにするためにその電子状態をLSD-LMTO法で計算し、その状態密度曲線,6種類のFeイオンの磁気モーメント,磁化の大きさ(30【ll-B】/FU)を明らかにした。またNdの5d電子のスピン分極とFeのd電子のスピン分極が逆向きであるため、Ndのf電子スピンと遷移金属のd電子スピンの結合が反強磁性的であることを明らかにした。3.C14型ラーベス相Ti【Fe_2】の色々な磁性状態の電子状態をLSD-LMTO法で計算し、(【Sc_x】【Ti_(1-x)】【Fe_2】で観測されている強磁性→反強磁性転移および強磁性→強磁性転移の機構を明らかにした。1.遷移金属間ラーベス化合物AB_2[A=Y,Zr,Nb/B=Mn,Fe,Co,N〓]の電子構造を,局所電子密度近似の枠内で, LMTQ法により系統的に計算し,その全エネルギーの比較から,その結晶構造の安定性,強磁性反強磁性の出現を調べ,種々の実験事実が非経験的に説明できることを明かにした.特にC14型ラーベス相化合物T〓_<1-x>ScxFe_2の場合, C14型の反強磁性状態(T〓Fe_2型1^M_B/Fe)と2種類の強磁性状態(1.5^M_B/Fe)の強い強磁性と0.8^M_B/Feの弱い強磁性状態)が,エネルギー的に複雑に競合し,格子定数が大きい時には,強い強磁性状態が,格子定数が小さくなり大きなモーメントが持てなくなると,弱い強磁性か反強磁性のいずれかが安定になることを示した.これらの理論的予測は,西原等が測定した実験事実とよく一致する.またC14型ラーベス相化合物Nb Fe_2も反強磁性,弱い強磁性(0.1^M_B/Fe),常磁性の3つの状態が,エネルギー的に互いに競合している可能性があることを理論的に示した.2.稀土類金属を含むラーベス相化合物RFe_2[R=Y,Ce,Nd,Sm,Gd,Tm]の電子構造も計算した.R=Nd,Sm,Gd,Tmの場合には4f電子に対して,前年度開発した局在モデルの方法を用いた.いずれの場合もRイオンのスピン分極がFeの3dスピンの分極と逆向きであるため,一般に遷移金属中の稀土類金属の4fスピンは遷移金属の3dスピンと逆向きになる方がエネルギーが低くなることを示した.ラーベス相化合物の場合, Feの3d電子と4f電子の混成が強いので,この取扱いを現在検討中である.もっと複雑な化合物, RCo_5, R_2Fe_<17>, R_2Fe_<14>Bの電子構造も, LMTQ法で計算し,結果を現在解析中である.特にSmCo_5の結晶場をフルポテンシャルの方法で電子構造を計算することにより,どの程度明かにできるかも検討中である.63年度は最終年度に当たり、印刷費しか認められなかったので、これまでの成果を「ラーベス相化合物の電子構造と磁性」を中心に論文として発表した。ラーベス相AB_2、特にAFe_2でA原子が稀土類金属の場合および、ネオマックスとその周辺の化合物、即ちR_2Fe_<14>BCR=Y,Ce,Nd,Gd)の場合、RFe_2,RFe_5,R_2Fe_<17>CR=Y,Ce.Gd)の場合、SmCo_5の磁気異方性の研究は、LMTQ法では無理なのでもっと精度の高い、例えば、FLAPW法のような計算が必要になるが、FLAPW法はLMTQ法の1000倍以上の計算時間が必要となることが判明したので、この科研費の中では不可能なため見送ることとした。その電子構造、磁気モーメント等についてはLMTQ法の計算で充分意味があるので、現在論文を準備中である。当科研費によるものではないが、本研究テーマの継続として、LaB_6およびCeB_6の電子構造をFLAPW法で計算し、更にその陽電子消滅のプロファイルを計算して実験と比較しこれらの化合物におけるベンドモデルの妥当性を調べた。
培養系で再構成した造血微小環境の解析によるがんと間質の相互作用の研究

骨髄の造血微小環境を培養系で再構成するために、骨髄間質細胞株をフィーダーとして用いて、幹細胞維持培養系、ミエロイド系列へ誘導する共培養系、およびBリンパ球系列へ誘導する共培養系を確立した。そして、間質細胞依存的に未分化状態が維持される造血前駆細胞株としてDFC-28細胞を樹立し、間質細胞が直接的な接着により未分化血球細胞の可逆的が分化のスイッチを制御していることを示した。この可逆的な分化のスイッチの制御に働く因子として、間質細胞側のEphB4と、血液細胞側のephrin-B2の相互作用が重要であることを明らかにした。間質細胞側制御遺伝子として多数の間質細胞の造血支持機能と対応して発現している遺伝子として新規のミオシンとしてMysPDZ(Myo18として分類された)を同定した。MysPDZは、PDZ,KEドメインを欠いたisoformが、神経細胞、筋細胞、血液細胞で組織特異的に発現していること、とくに、筋分化に伴って誘導されるisoformがあり、その過剰発現はfilopodia形成など細胞形態に大きな変化を与えることを見いだした。また、MysPDZがactinと結合することを示し、その結合はこれまで同定されていないN-末端の新規のドメインによっていることを発見した。さらに、造血支持に関与する遺伝子を探索するため、造血支持機能の異なる多様な間質細胞株を用いて遺伝子発現プロファイルのマイクロアレイ解析を行い、造血支持機能に働く候補遺伝子としてtenescin Cを同定し、SiRNAによる機能阻害実験により、tenescin Cが赤血球造血の重要な制御因子であることを明らかにした。
ゼオライト複合錯体光電荷分離触媒に関する研究

光エネルギーの化学エネルギーへの変換を行なうためには、逆電子移動を抑え、かつ酸化サイトと還元サイトが分離可能なシステムを開発する必要がある。本研究では、ゼオライト中に有機光受容体分子と還元サイトとして機能する金属イオンを閉じ込めると、光電荷分離触媒として有効に機能することを見いだした。この反応機構の解明を目指し、ゼオライト反応場における光電荷分離の基礎となるゼオライト-溶液界面における電子移動過程についての知見を得た。1.ゼオライト反応場における光電荷分離反応電子源として鉄2価イオン、光増感剤として10-メチルアクリジニウムイオンを交換したY型ゼオライト(AcrH^+/Fe^<2+>/ゼオライトY)を種々の電子受容体を含むアセトニトリル溶液中に懸濁させ、光照射することで、ゼオライト中には鉄3価イオン、また溶液中にはラジカルアニオン種が生成し、完全な電荷分離が達成された。この光電荷分離系は逆電子移動過程が非常に遅い特徴を有していることがわかった。2.ゼオライト-溶液界面電子移動反応機構強い-電子酸化剤であるトリスビピリジン鉄(III)錯体([Fe(bpy)_3]^<3+>)をシップ-イン-ボトル合成によりYゼオライト中に閉じ込め、溶液中の電子供与体とのゼオライト-溶液界面における電子移動反応について検討した。その結果、ゼオライト-溶液界面における電子移動は長距離で起こり、非断熱型となることがわかった。このため、光電荷分離反応系において逆電子移動過程が抑制され、高効率な電荷分離が達成できたものと考えられる。また、長距離の非断熱型電子移動に特徴的な、Marcusの逆転領域をゼオライト-溶液界面において初めて観測できた。
新規マイオカイン R3hdmlによる骨格筋糖代謝、多臓器連関に関する検討

本研究の目的は我々が同定した筋芽細胞分泌たんぱくであるR3hdmlの骨格筋における糖取り込みにおける役割ならびにマイオカインとしての機能を明らかにすること目的としている。本年度は計R3hdmlをアデノウイルスベクターを用いて肝臓に過剰発現させた後、ストレプトゾトシン(STZ)を投与し糖尿病を惹起した際の糖代謝や生存曲線に与える影響を検討した。その結果、R3hdml過剰の有無により空腹時血糖値に差はなかったものの、R3hdml過剰マウスで有意な生存曲線の延長が観察された。以上より肝臓で過剰発現され分泌されたR3hdmlが全身の組織、細胞に影響を与える可能性が示唆され、さらに分泌されたR3hdmlと脂質代謝との関連を調べた。R3hdmlを過剰発現した肝臓では脂質代謝のマスターレギュレーター膜結合型転写因子SREBPの発現が低下することやR3hdmlを過剰発現したAd293細胞では飽和脂肪酸の一種、パルミチン添加に伴う細胞障害が軽減されることが明らかとなった。R3hdmlと全身の脂質代謝との関連が示唆され、今後さらに研究を進めてゆく予定である。本年度は計画通りにR3hdmlをアデノウイルスベクターを用いて肝臓に過剰発現させた後、ストレプトゾトシン(STZ)を投与し糖尿病を惹起した際の糖代謝や生存曲線に与える影響を検討した。R3hdmlを過剰発現した肝臓では脂質代謝のマスターレギュレーター膜結合型転写因子SREBPの発現が低下すること、やR3hdmlを過剰発現したAd293細胞では飽和脂肪酸の一種、パルミチン添加に伴う細胞障害が軽減されることが明らかとなった。計画書に則り、2019年度以降も下記の実験を継続する。1R3hdmlの肝、骨格筋における糖取り込み機構における役割を明らかにする。2R3hdmlのマイオカインとしての役割を明らかにする。この目的で、R3hdmlノックアウト(KO)マウスに加齢、筋障害、肥満を惹起した際の表現型を野生型と比較する。3R3hdmlを肝、骨格筋において過剰発現したさいに糖代謝、脂肪肝ならびに情動性をはじめとした全身への影響を検討する。そのために以下の研究を予定した。1.骨格筋の糖取り込みにおけるR3hdmlの役割を明らかにする。加齢R3hdml KOにおける骨格筋糖取り込み抑制機序を検討する。この検討により、一般的なサルコペニアに伴う骨格筋糖取り込み低下機序が明らかとなる。2.マイオカインとしてのR3hdmlの役割を明らかにする。脂肪細胞、肝臓ならびに中枢(脳)に対する作用を明らかにし、R3hdmlを用いた糖尿病、脂肪肝うつ病など全身疾患に対する新たな治療戦略開発の基盤とすることを目的としている。以上より肝臓で過剰発現され分泌されたR3hdmlが全身の組織、細胞に影響を与える可能性が示唆された。本年度は計画通りに研究計画が進んだだめ、今後も研究計画に従って研究を進めてゆく。

以上より肝臓で過剰発現され分泌されたR3hdmlが全身の組織、細胞に影響を与える可能性が示唆され、さらに分泌されたR3hdmlと脂質代謝との関連を調べた。R3hdmlを過剰発現した肝臓では脂質代謝のマスターレギュレーター膜結合型転写因子SREBPの発現が低下すること、やR3hdmlを過剰発現したAd293細胞では飽和脂肪酸の一種、パルミチン添加に伴う細胞障害が軽減されることが明らかとなった。R3hdmlと全身の脂質代謝との関連が示唆され、今後さらに研究を進めてゆく予定である。計画書に則り、平成30年度以降も下記の実験を継続する。1R3hdmlの肝、骨格筋における糖取り込み機構における役割を明らかにする。2R3hdmlのマイオカインとしての役割を明らかにする。この目的で、R3hdmlノックアウト(KO)マウスに加齢、筋障害、肥満を惹起した際の表現型を野生型と比較する。3R3hdmlを肝、骨格筋において過剰発現したさいに糖代謝、脂肪肝ならびに情動性をはじめとした全身への影響を検討する。計画書に則り、2019年度以降も下記の実験を継続する。
味噌由来エクオール産生菌の同定と前立腺肥大症に対するエクオールの作用機序の解明

これまでに味噌由来エクオール産生菌の単離、同定とエクオールによる下部尿路閉塞ラットの膀胱過活動の発生予防について検討を行った。・味噌由来エクオール産生菌の単離と同定米味噌、豆味噌、麦味噌の各味噌の抽出物を高速液体クロマトグラフィーで測定したところ、豆味噌中にのみエクオールが存在していることを見出した。そこで、火入れ前の味噌からこのエクオール産生菌の単離を試みた。まず、味噌からDNAを抽出し、これまでに報告のあるエクオール産生遺伝子を標的にPCRを行ったが、目的遺伝子は検出されなかった。次に、エクオールが検出できた味噌から菌を単離培養し、豆乳をイソフラボン源として使用し培養上清のエクオールを測定したところ、Pediococcus属の菌がエクオールの産生に関与していることがわかった。Pediococcus属は味噌の乳酸菌として知られており、すでに利用されている微生物であることから、エクオールの効率的な産生条件を検討し、すぐにでも応用可能だと思われる。・下部尿路閉塞ラットにおける膀胱過活動発生に対するエクオールの予防効果現在、男性の過活動膀胱の動物モデルである下部尿路閉塞(BOO)ラットを用いて、エクオール摂取による膀胱過活動の発生への影響を検討している。ラットはSham群、BOOコントロール群、BOOダイゼイン摂取群、BOOエクオール摂取群の4群で行っている。餌は大豆成分を抜いた特殊飼料をベースに、ダイゼイン群はダイゼイン(0.25 mg/g, 1日約5mg換算)を添加した飼料、エクオール群はエクオール(0.25 mg/g, 1日約5mg換算)を添加した飼料を使用した。これまでに約半数の測定を終えたところであるが、エクオール投与群>ダイゼイン投与群で膀胱過活動の発生が抑制されている傾向が見られた。日常的にエクオールもしくは豆製品を摂取することで過活動膀胱の予防が期待できる。・味噌由来エクオール産生菌の単離と同定火入れ前の味噌からエクオール産生菌の単離を試みた。次に、エクオールが検出できた味噌から菌を単離培養し、豆乳をイソフラボン源として使用し培養上清のエクオールを高速液体クロマトグラフィーで測定を行い、エクオールが検出できた菌の16S rRNAのシークエンスにより菌の同定をしたところ、Pediococcus属の菌がエクオールの産生に関与していることがわかった。・下部尿路閉塞ラットにおける膀胱過活動発生に対するエクオールの予防効果現在、男性の過活動膀胱の動物モデルである下部尿路閉塞(BOO)ラットを用いて、エクオール摂取による膀胱過活動の発生への影響を検討した。・味噌由来エクオール産生菌の単離と同定豆味噌から検出できたエクオールはごく微量のため、味噌を作る条件では十分量のエクオールを作ることはできないと考えられる。今後の研究では、はじめに、豆味噌からエクオール産生菌として単離したPediococcus属の菌のエクオール産生遺伝子が既に報告されている遺伝子のPCRでは検出できないため、単離した菌の全ゲノムシークエンスを行いエクオール産生遺伝子を同定する。また、現在の培養条件では微量のエクオールしか検出できないため、このままでは食品への応用はできないと考えられる。そのため、エクオールを効率よく産生する培養条件の検討を行い、エクオールの産生量を増加させる。・下部尿路閉塞ラットにおける膀胱過活動発生に対するエクオールの予防効果現在までに予定している例数の約半数を終えたところであり、今後残りの検討を行い、組織学的検討や酸化ストレスマーカーの測定などを行い、作用機序の検討を行う。また、臨床試験として前立腺肥大症患者の尿を解析し、エクオール産生者と過活動膀胱発症者に関連があるか検討する。

・下部尿路閉塞ラットにおける膀胱過活動発生に対するエクオールの予防効果現在、男性の過活動膀胱の動物モデルである下部尿路閉塞(BOO)ラットを用いて、エクオール摂取による膀胱過活動の発生への影響を検討している。ラットはSham群、BOOコントロール群、BOOダイゼイン摂取群、BOOエクオール摂取群の4群で行っている。餌は大豆成分を抜いた特殊飼料をベースに、ダイゼイン群はダイゼイン(0.25 mg/g, 1日約5mg換算)を添加した飼料、エクオール群はエクオール(0.25 mg/g, 1日約5mg換算)を添加した飼料を使用した。これまでに約半数の測定を終えたところであるが、エクオール投与群>ダイゼイン投与群で膀胱過活動の発生が抑制されている傾向が見られた。日常的にエクオールもしくは豆製品を摂取することで過活動膀胱の予防が期待できる。・味噌由来エクオール産生菌の単離と同定火入れ前の味噌からエクオール産生菌の単離を試みた。まず、味噌からDNAを抽出し、これまでに報告のあるエクオール産生遺伝子を標的にPCRを行ったが、目的遺伝子は検出されなかった。次に、エクオールが検出できた味噌から菌を単離培養し、豆乳をイソフラボン源として使用し培養上清のエクオールを高速液体クロマトグラフィーで測定を行い、エクオールが検出できた菌の16S rRNAのシークエンスにより菌の同定をしたところ、Pediococcus属の菌がエクオールの産生に関与していることがわかった。・下部尿路閉塞ラットにおける膀胱過活動発生に対するエクオールの予防効果現在、男性の過活動膀胱の動物モデルである下部尿路閉塞(BOO)ラットを用いて、エクオール摂取による膀胱過活動の発生への影響を検討した。・味噌由来エクオール産生菌の単離と同定豆味噌から検出できたエクオールはごく微量のため、味噌を作る条件では十分量のエクオールを作ることはできないと考えられる。今後の研究では、はじめに、豆味噌からエクオール産生菌として単離したPediococcus属の菌のエクオール産生遺伝子が既に報告されている遺伝子のPCRでは検出できないため、単離した菌の全ゲノムシークエンスを行いエクオール産生遺伝子を同定する。また、現在の培養条件では微量のエクオールしか検出できないため、このままでは食品への応用はできないと考えられる。そのため、エクオールを効率よく産生する培養条件の検討を行い、エクオールの産生量を増加させる。・下部尿路閉塞ラットにおける膀胱過活動発生に対するエクオールの予防効果現在までに予定している例数の約半数を終えたところであり、今後残りの検討を行い、組織学的検討や酸化ストレスマーカーの測定などを行い、作用機序の検討を行う。
高血圧自然発症ラット(SHR)における高血圧発症機構の分子生物学解析

我々は少数の遺伝子の異常が本態性高血圧症の遺伝子的素因を構成しているという作業仮説を立て、高血圧自然発症ラット(SHR)を使用して主に細胞内情報伝達に関わるタンパクの遺伝子の構造について正常ラットとの異同を調べてきた。一昨年、SHRのホスホリパーゼC(PLC)のδ1アイソフォームにアミノ酸置換を伴う遺伝子変異が存在することを報告したことに基づき本年度は以下の研究を行った。変異部を含む部分ペプチドを合成しNMRを用いた予備的実験を行ったところ、SHR型ペプチドは正常型ペプチドと比べて疎水性が高く、正常型ペプチドから得られるβ構造由来の信号が見られなかった。遺伝子から推定される立体構造変化が実際の分子を反映している可能性が高い。また、PCR-RFLP法による遺伝子連鎖解析により、PLCδ1のSHR型の遺伝子型が血圧とは緩い逆相関を示すことを報告し、このアレルが血圧上昇に対して抑制的に作用している可能性を示した。最近PLCのδ型アイソフォームが細胞内Ca^<2+>動員2次伝達物質であるIP_3と結合することが示され、このアイソフォームの細胞内Ca^<2+>調節機構における役割に興味が持たれ始めているが、大腸菌で発現させたPLCδ1もIP_3結合活性を示した。現在SHR由来のcDNA発現産物と正常ラット型発現産物のPLC酸素活性ならびにIP_3結合活性を詳細に比較検討中である。また発現産物を用いてモノクローナル抗体を作製した。また我々はPLCδ1の遺伝子座がIP_3受容体と同じ第8染色体に位置することを決定した。さらにPLCδ1と相同性をもつ遺伝子が、酵母の増殖において重要な役割を果たし、ラットの遺伝子が酵母の遺伝子に代わり得ることを明らかにした(東大理・植物との共同研究)。今後我々は、血管内皮・平滑筋細胞にPLCδ1の遺伝子あるいはそのアンチセンスを導入し、その影響を調べる予定であるが、これに関して細胞膜膜融合性ペプチドを用いた標的細胞への効率的な遺伝子導入法を開発した。
プロスタグランジン(PG)受容体欠損マウス皮膚の生理学的, 病理学的解析

PGE(PGE受容体にはEP1.EP2、EP3、EP4の4種のアイソフォームが存在する)、PGD、PGF、PGI、TX、合計8種のプロスタノイド受容体があるが、今回はPGD受容体、TX受容体、PGE受容体、それぞれを欠損したノックアウトマウスの皮膚を肉眼的、組織学的に観察し、正常の同系マウスと比較した。一部のPGE受容体ノックアウトマウスでは体毛の異常がみられたが、皮膚自体には肉眼的、組織学的に、有意な異常はみられなかった。次いで、マウス皮膚に中波長紫外線を照射することにより、皮膚の炎症を作製し、耳介の紅斑、腫脹をノックアウトマウスと正常マウスと比較した。ノックアウトマウスの方が炎症反応がやや弱い傾向がみとめられたが、組織学的には日焼け細胞の分布、数には変化はみられなかった。また、マウス耳介にフォルボールエステルを塗布し、一次性刺激性皮膚炎を生じさせ、耳介の紅斑、腫脹を比較したが有意な変化はみられなかった。マウス耳介にDNCBを塗布し、アレルギー性接触皮膚炎を生じさせ、耳介の紅斑、腫脹をノックアウトマウスと正常マウスとを比較したが有意な変化はみられなかった。これらの炎症の組織学的所見もノックアウトマウスと正常マウスとでは同一であった。さらに、マウス背部に実験的皮膚潰瘍を作製し、その創傷治癒を比較した。PGD受容体ノックアウトマウスと正常マウスとでは差がみられなかったが、PGE受容体とTX受容体ノックアウトマウスでは、正常マウスに比較して、若干、創傷治癒に遅延がみられた。以上の結果から、PGE,PGD、TX、など単独のプロスタノイド受容体が欠損しても、プロスタノイドは相互に類似しており、他のプロスタノイドが代償するので、全体としては皮膚には異常が出現しないのではないかと考えられた。体毛の異常については今後検討の予定である。PGE(PGE受容体にはEP1、EP2、EP3、EP4の4種のアイソフォームが存在する)、PGD、PGF、PGI、TX、合計8種のプロスタノイド受容体があるが、今回はPGD受容体、TX受容体それぞれを欠損したノックアウトマウスの皮膚を肉眼的、組織学的に観察し、正常の同系マウスと比較した。しかし、皮膚には肉眼的、組織学的に、有意な異常はみられなかった。次いで、マウス皮膚に中波長紫外線(UVB)を照射することにより、皮膚の炎症を作製し、耳介の紅斑、腫脹をノックアウトマウスと正常マウスと比較した。ノックアウトマウスの方が炎症反応がやや弱い傾向がみとめられたが、組織学的には日焼け細胞(Sunburn cell)などの分布、数には変化はみられなかった。また、マウス耳介フォルボールエステルを塗布し、一次性刺激性皮膚炎を生じさせ、耳介の紅斑、腸脹をノックアウトマウスと正常マウスとを比較したが有意な変化はみられなかった。マウス耳介にDNCBを塗布し、アレルギー性接触皮膚炎を生じさせ、耳介の紅斑、腸脹をノックアウトマウスと正常マウスとを比較したが有意な変化はみられなかった。PGD受容体ノックアウトマウスと正常マウスとでは差がみられなかったが、TX受容体ノックアウトマウスでは、正常マウスに比較して、若干、創傷治癒に遅延がみられた。

以上の結果からPGD、TX、など単独のプロスタノイド受容体が欠損しても、プロスタノイドは相互に類似しており、他のプロスタノイドが代償するので、全体としては、皮膚に異常が出現しないのではないかと考えられた。PGE(PGE受容体にはEP1.EP2、EP3、EP4の4種のアイソフォームが存在する)、PGD、PGF、PGI、TX、合計8種のプロスタノイド受容体があるが、今回はPG波容体、TX受容体、PGE受容体、それぞれを欠損したノックアウトマウスの皮膚を肉眼的、組織学的に観察し、正常の同系マウスと比較した。一部のPGE受容体ノックアウトマウスでは体毛の異常がみられたが、皮膚自体には肉眼的、組織学的に、有意な異常はみられなかった。次いで、マウス皮膚に中波長紫外線を照射することにより、皮膚の炎症を作製し、耳介の紅斑、腫脹をノックアウトマウスと正常マウスと比較した。ノックアウトマウスの方が炎症反応がやや弱い傾向がみとめられたが、組織学的には日焼け細胞の分布、数には変化はみられなかった。また、マウス耳介にフォルボールエステルを塗布し、一次性刺激性皮膚炎を生じさせ、耳介の紅斑、腫脹を比較したが有意な変化はみられなかった。マウス耳介にDNCBを塗布し、アレルギー性接触皮膚炎を生じさせ、耳介の紅斑、腫脹をノックアウトマウスと正常マウスとを比較したが有意な変化はみられなかった。これらの炎症の組織学的所見もノックアウトマウスと正常マウスとでは同一であった。さらに、マウス背部に実験的皮膚潰瘍を作製し、その創傷治癒を比較した。PGD受容体ノックアウトマウスと正常マウスとでは差がみられなかったが、PGE受容体とTX受容体ノックアウトマウスでは、正常マウスに比較して、若干、創傷治癒に遅延がみられた。以上の結果から、PGE,PGD、TX、など単独のプロスタノイド受容体が欠損しても、プロスタノイドは相互に類似しており、他のプロスタノイドが代償するので、全体としては皮膚には異常が出現しないのではないかと考えられた。体毛の異常については今後検討の予定である。