hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
環状オリゴ糖を用いた葉酸レセプター高発現癌細胞選択的な抗癌剤デリバリー法の構築

本研究の目的は、葉酸多分岐修飾メチル化シクロデキストリンを用いて腫瘍細胞選択的な殺細胞効果を有する抗癌剤デリバリー法を構築することである。即ち、腫瘍細胞で発現が上昇する脂質マイクロドメイン(脂質ラフト)との相互作用により抗腫瘍効果が期待されるメチル-β-シクロデキストリン(M-β-CyD)を用いて、新たに葉酸多分岐修飾M-β-CyD (FAn-M-β-CyD)を調製し、腫瘍細胞上に高発現する葉酸レセプター(FR)を特異的に認識する抗癌剤キャリアを構築する。さらに、抗癌剤ドキソルビシン(DOX)をFAn-M-β-CyDに包接または結合させることにより、腫瘍細胞選択的抗癌剤デリバリー能を付与させる。本申請課題で作成するFAn-M-β-CyDは、抗癌剤キャリアとして以下の利点を有する。1葉酸、CyDとも臨床応用されており安全性が高い、2分子サイズが小さく(5 nm程度)、細胞膜透過性に優れる、3標的指向性を有するため、正常細胞への影響が少ない、4腎癌、肺癌、子宮癌、脳腫瘍、骨髄癌など多種類の癌に応用可能、5オートファジーを介した新規細胞死誘導機構を有する、6合成が容易かつ安価である。FAn-M-β-CyDを抗癌剤デリバリーに応用しようとする研究は、国内・国外ともに例を見ず、作用メカニズムからも独創性が高い研究である。平成30年度は、DOX/FAn-M-β-CyD複合体を調製し、担癌マウスに対する抗腫瘍効果を確認した。また、複合体投与後の体内動態および安全性について評価した。本研究課題で作成するFAn-M-β-CyDは、抗癌剤キャリアとして以下の利点を有する。1葉酸、CyDとも臨床応用されており安全性が高い、2分子サイズが小さく、細胞膜透過性に優れる、3標的指向性を有するため、正常細胞への影響が少ない、4多種類の癌に応用可能、5オートファジーを介した新規細胞死誘導機構を有する。平成28年度は、FAn-M-β-CyDの調製を新規に調整し、葉酸導入数および構造を決定に成功した。FAn-M-β-CyDの確認および葉酸置換度の算出は、MALDI-TOF-Massおよび1H-NMRを用いて行った。さらに、FAn-M-β-CyDの葉酸レセプター高発現がん細胞選択的な殺細胞効果を誘導可能なことが示唆された。現在、細胞膜脂質成分に対するFAn-M-β-CyDの影響、FAn-M-β-CyDの細胞表面への会合および細胞内取込みについて検討中である。当初の予定通り、FAn-M-β-CyDの調製の調製および物性評価を進めることができている。in vitroでの評価も開始しており、概ね研究計画通りに進行している。今後、抗がん剤との相互作用や腫瘍選択的なデリバリーを実施する。当初の予定通り、FAn-M-β-CyDの調製および物性評価をすすめることが出来ている。葉酸受容体高発現および非発言細胞での取り込みや殺細胞効果に関する実験もおおむね順調に進行した。

本研究の目的は、葉酸多分岐修飾メチル化シクロデキストリンを用いて腫瘍細胞選択的な殺細胞効果を有する抗癌剤デリバリー法を構築することである。即ち、腫瘍細胞で発現が上昇する脂質マイクロドメイン(脂質ラフト)との相互作用により抗腫瘍効果が期待されるメチル-β-シクロデキストリン(M-β-CyD)を用いて、新たに葉酸多分岐修飾M-β-CyD (FAn-M-β-CyD)を調製し、腫瘍細胞上に高発現する葉酸レセプター(FR)を特異的に認識する抗癌剤キャリアを構築する。さらに、抗癌剤ドキソルビシン(DOX)をFAn-M-β-CyDに包接または結合させることにより、腫瘍細胞選択的抗癌剤デリバリー能を付与させる。本申請課題で作成するFAn-M-β-CyDは、抗癌剤キャリアとして以下の利点を有する。1葉酸、CyDとも臨床応用されており安全性が高い、2分子サイズが小さく(5 nm程度)、細胞膜透過性に優れる、3標的指向性を有するため、正常細胞への影響が少ない、4腎癌、肺癌、子宮癌、脳腫瘍、骨髄癌など多種類の癌に応用可能、5オートファジーを介した新規細胞死誘導機構を有する、6合成が容易かつ安価である。FAn-M-β-CyDを抗癌剤デリバリーに応用しようとする研究は、国内・国外ともに例を見ず、作用メカニズムからも独創性が高い研究である。平成30年度は、DOX/FAn-M-β-CyD複合体を調製し、担癌マウスに対する抗腫瘍効果を確認した。また、複合体投与後の体内動態および安全性について評価した。平成30年度では、ヌードマウスにKB細胞懸濁液を接種して作成した担癌マウスに、FAn-M-β-CyD単独、DOX/FAn-M-β-CyD複合体および結合体を腫瘍内、静脈内および経口投与した後、各投与経路におけるin vivo抗腫瘍効果を腫瘍体積、体重、生存率を指標に評価するとともに、結合体の体内動態を検討する。また、DOX/FAn-M-β-CyD結合体を経口投与後、大腸選択的に薬物を放出し、大腸癌選択的な抗腫瘍効果を発揮するか否かを検討する。動物実験の費用として予算を残していたが、年度末に本学の動物実験が施設の都合上、一時中断せざるを得なくなったために、次年度使用額として残金が生じた。年度末のオートクレーブの故障により、細胞系の研究が中断したため、次年度使用額が生じた。次年度は、計画的な予算執行に努める。6月には動物実験施設が使用可能となるため、次年度の研究計画に沿って予算を執行する。
線維化の増悪に係る「上皮－間葉転換」の形成機序の解明と病理学的・臨床学的意義

上皮ー間葉転換(EMT)は、傷害された上皮細胞が筋線維芽細胞に転換する現象で、線維化の増悪に係る。尿細管、胆管、毛嚢について、それぞれ腎線維化、胆管線維化、皮膚線維化のラットモデルを作製し、解析した。不完全再生尿細管は筋線維芽細胞の特性を獲得し、このEMTは、PGE2やNGALにより抑制され、オステオポンチンにより促進された。後腎芽体には筋線維芽細胞の特徴があり、よって尿細管のEMTは後腎芽体への遡及現象として捉えられる。胆管線維化での胆管と皮膚線維化での毛嚢では、EMTは掴めなかった。筋線維芽細胞は未分化幹細胞に由来する可能性が示された。EMT理論の構築と難治性線維化の治療法の開発に資する。萎縮腎や肝硬変/胆管線維症などの難治性線維化は進行すると組織の機能障害を招く。傷害された上皮細胞の異常分化現象として捉えられている「上皮-間葉転換(EMT)」は、上皮細胞が細胞外基質を過剰に産生する筋線維芽細胞に転換し、その結果線維化の増悪にEMTが係るとされる。しかし、その病理発生機序と臨床学的意義の全貌は解明されていない。昨年度は、腎線維化モデルを用いて、幹細胞を認識するThy-1抗体を指標にEMT現象を解析したところ、発生腎では尿細管上皮細胞への分化能を有する後腎芽体細胞とその周囲の未分化間葉系細胞にThy-1発現がみられた。しかし、分化した尿細管上皮にはThy-1発現はみられなかったことを明らかにした。本年度は、傷害された尿細管上皮に発現する上皮系(β-カテニン)と間葉系(ビメンチン、α-SMA)マーカーの発現を指標に、シスプラチン誘発ラット腎障害モデルを用いて解析を行った。その結果、シスプラチンモデルでは、再生しつつある尿細管上皮の細胞質にWntシグナルに関係するβ-カテニンが発現した。一方、線維化部位のα-SMAを発現する異常な尿細管上皮にはβ-カテニンの発現はみられなかった。β-カテニンは比較的良好な尿細管再生に係わっていると考えられたが、再生尿細管にはビメンチンの発現が常にみられることから、EMTとの関連でさらに追究が必要なことが示された。また、α-Naphthylisothiocyanateによる胆管線維症モデルでは、再生しつつある胆管上皮にビメンチンの発現がみられたが、α-SMAの発現はみられなかった。現在、ネスチン発現と胆管上皮のEMTとの関連を追及しつつある。上皮ー間葉転換(EMT)は、上皮細胞が間葉系の筋線維芽細胞に変化する現象で、難治性線維化の増悪において重要な役割を演じる。1.シスプラチン誘発ラット腎線維化とNRK-52E培養細胞を用いた解析により、COX-1により産生されたPGE2産生はEP4を介して、傷害尿細管に生じるアポトーシスを抑制し、かつEMTの抑制をももたらすことが示された。2.Neutrophil Gelatinase-associated Lipocalin(NGAL)の発現は、シスプラチン誘発ラット腎線維化において、近位尿細管で増加し、再生尿細管上皮細胞数と正の相関を示した。一方、オステオポンチンは、異常な形態を示す傷害尿細管に認められ、その発現は線維原性因子であるTGF-β1の増加や筋線維芽細胞の形成と相関した。NRK-52Eを用いたin vitro実験において、TGF-β1添加によるEMT現象下でNGALは抑制され、一方、オステオポンチンは増加した。EMTにこれらの因子が関わることが示唆された。3.α-Naphthylisothiocyanate(ANIT)投与によるラット小葉間胆管線維化モデルを用いて、GFAP陽性肝星細胞、α-SMA陽性筋線維芽細胞、CK19陽性胆管上皮との関連性を追究したが、EMT現象は確認されなかった。胆管周囲の筋線維芽細胞は、EMT現象ではなく、骨髄幹細胞あるいは肝星細胞に由来する可能性が示唆された。4.未分化間葉系細胞認識抗体A3を用いて皮膚線維化部位における毛包細胞の特性を解析した。毛根鞘間葉系細胞から筋線維芽細胞が形成されることが示されたが、線維化部位の毛包周囲では明らかなEMT現象は観察されなかった。難治性線維化

(肝硬変/胆管線維症、萎縮腎、膵線維化、悪性肉芽組織など)は進行すると組織の機能障害を導く。上皮細胞の異常分化現象「上皮-間葉転換(EMT)」は細胞外基質を過剰に産生する筋線維芽細胞を誘導し、線維化の増悪に係る。しかし、その病理発生機序と臨床学的意義の全貌は解明されていない。本研究では、肝、腎、膵、皮膚のラット線維化モデルを用いてEMTの形成機序を免疫組織化学的・分子病理学的に解明するとともに、EMTは上皮の遡及現象と捉えていることから、幹細胞抗体を用いてその起源細胞を体性幹細胞の観点から追究する。本年度は、以下の点について解析した。EMTは上皮系細胞が脱分化し、その後筋線維芽細胞に異常分化する現象と捉えている。ラットの胎子・新生子の腎組織を用いて上皮系と間葉系マーカーの発現を解析した。特に、Thy-1の発現に焦点を当てて解析した。Thy-1は線維芽細胞に発現する免疫グロブリンスーパーファミリーの一つで筋線維芽細胞の分化に関わる。腎の発生過程におけるThy-1と上皮系マーカーを発現する細胞との係わりを免疫組織化学染色により解析したところ、尿細管上皮細胞への分化能を有する後腎芽体細胞とその周囲の未分化間葉系細胞にThy-1発現がみられた。しかし、分化した尿細管上皮にはThy-1発現はみられなかった。また、成体の正常腎ではThy-1は血管周囲の周皮細胞に発現し、さらに傷害後の線維化腎では一部の筋線維芽細胞にThy-1発現が見られた。筋線維芽細胞の主要マーカーであるα-平滑筋アクチンとThy-1との共発現細胞はみられなかった。以上より、Thy-1は筋線維芽細胞の前駆細胞に発現し、発生学的にその細胞は後腎芽体細胞と関連する可能性が示唆された。また、ラットの胆管上皮におけるEMTと、犬と猫の剖検から得た膵線維化の病態をEMTの観点から解析している。本研究の目標は、難治性線維化に係わる上皮ー間葉転換(EMT)の病理発生を解明し、EMTを新たな病態として確立し、かつその治療法の開発を目指すことである。また、「EMTの幹細胞起源」を追究する本研究の目的は、再生医学の基盤研究となると考える。本年度は、以下の実験を行い、成果を得た。EMTは線維化部位の尿細管上皮、肝内胆管上皮、毛嚢上皮に生じる可能性がある。よって、cisplatin誘発腎線維化、α-Naphthylisothiocyanateによる胆管線維症、皮膚にパンチで創傷を作製しその修復過程で生じる毛嚢周囲の線維化病変を用いてEMTの病態を免疫組織化学的に解析した。まず、EMTの病態解析に必要な新規マーカーの探索を行った。上皮系マーカーとしてケラチンのサブタイプであるAE1/AE3とCK19(上皮系の起源と分化程度を反映)を、間葉系マーカーとしてThy-1(筋線維芽細胞への分化因子)、α-平滑筋アクチン(SMA)/ビメンチン(筋線維芽細胞の細胞骨格)の発現を検討し、これらのマーカーがEMT現象の解析に有用であることを見出した。かつ、これらのマーカーを用いて、再生しつつある尿細管と胆管上皮のEMTを解析することができた。さらに、再生尿細管の検討では、EMTに係るとされるWntシグナルで重要なβ-カテニンの発現を免疫組織化学とmRNA発現レベルで解析することができた。当初の研究計画としていた毛包上皮でのEMT解析とEMTに関わるTGF-β1因子以外のファクターの関わりの検討については、材料を得て現在解析しつつある。3年間の研究期間の2年目が終了したが、「「おおむね順調に進展している」と判断した。以下の項目の研究を行うことを計画した。
新規原子配列調和物質のナノ構造決定と高次物性発現機構解明

本研究では、ナノ空間での実空間・逆空間の回折データ、元素・結合分析・電子状態解析、理論計算による構造最適化・高次物性計算から、ナノ空間での3次元原子配列の可視化・新規物性予測を可能とする原子配列調和物質(Atomaterial)Projectという独自のプロジェクトを推進した。原子配列調和物質は、金属・無機・有機・生命体物質が原子レベルで構造的に調和し、新規高次物性・生命機能を発現する物質である。本研究では、新規Co@BNナノカプセル大量合成法開発及びPL/STMによる電気特性評価、新規BNナノチューブ合成、5回対称BN・ダイヤモンド・Auナノ粒子の形成と構造安定性計算等により、新規合成プロセス開発及び新規ナノ構造の創成を達成し、更に微細構造を高分解能電子顕微鏡-EDXにより調べ、その形成メカニズムを解明した。またLa@(BN)_<36>メタロフラーレンの創成、C/BNナノ構造への水素吸蔵可能性の検討等を、分子軌道法・ab initio第一原理計算・DV-Xα法・分子動力学法により原子配列モデル構築・構造最適化・電子状態計算・物性予測を行い、将来的なナノデバイス適用可能性を考察した。さらにB_<12>系ボライドのHREMによる3次元原子配列検出法の確立、HREM-NEDによる原子位置精密構造解析、Hg-Tl-Pb系超伝導酸化物の表面・界面原子配列の決定等を行い、原子位置直接決定法確立及び物性発現機構解明に大きく貢献した。これらの成果に加えて、原子配列調和物質の概念を生命体系にまで拡張することを可能とし、原子配列調和物質の構造・機能とカオス解析を行い、生体機能のリアプノフ指数及びエントロピーの増大及び減少を観測し、現在詳細な解析を進めている。特に人間生命体は究極の原子配列調和物質であり、21世紀のマテリアルサイエンスにおいて最大のフロンティアであり、今後のさらなる発展が期待される。本研究では、高分解能電子顕微鏡、理論計算による構造最適化、HREMシミュレーションの結合により、アーク溶解法による新規La@(BN)_<36>メタロフラーレンの創成を示唆した。このLa@B_<36>N_<36>クラスターに加えて、Re@B_<36>N_<36>クラスターも既に報告している。これらのさまざまな元素内包BNクラスターについて、第一原理計算(DV-Xα)Fにより電子状態計算を行った結果、Fe、La等の元素を内包することによってクラスターサイズ及びB-N結合距離が大きくなり、エネルギーギャップE_g=0.0958eV、0.025eVとB_<36>N_<36>クラスターの約5eVと比較して非常に小さい値を有することが明らかとなった。これらのメタロフラーレンの大きな問題は単離であり、単離されたメタロフラーレンであれば質量分析等の解析が可能となるが、単離できない場合、HREMによる検出が一つの有力な方法となるであろう。今後C系メタロフラーレンとの組み合わせにより、大きな展開が期待される。B_<12>系クラスター固体は、新規半導体・軟X線モノクロメータ及び熱伝材料として注目されている。YB_<56>はB_<156>及びB_<80>クラスターの中にY-holeが存在する構造を有するが、そのY原子位置を極微細領域(14nm×14nm)から得られたHREMおよびナノ電子電子回折パターンのデータから、正確に決定することが示された。決定されたYB_<56>のY原子間距離結晶は0.2740nm(誤差0.88%)であり、HREM

像のみから決定された0.2171nm(誤差20.1%)と比較して非常に高精度でY原子位置を決定することができた。この手法は、ナノ領域の位相情報と回折強度を結合させることにより、Y原子位置を誤差範囲1%以下(0.0024nm)という高精度で決定することが可能であることを示しており、高精度での原子位置を決定法として今後の発展が期待される。本研究では、ナノ空間での実空間・逆空間の回折データ、元素・結合分析・電子状態解析、理論計算による構造最適化・高次物性計算から、ナノ空間での3次元原子配列の可視化・新規物性予測を可能とする原子配列調和物質(Atomaterial)Projectという独自のプロジェクトを推進した。原子配列調和物質は、金属・無機・有機・生命体物質が原子レベルで構造的に調和し、新規高次物性・生命機能を発現する物質である。本研究では、新規Co@BNナノカプセル大量合成法開発及びPL/STMによる電気特性評価、新規BNナノチューブ合成、5回対称BN・ダイヤモンド・Auナノ粒子の形成と構造安定性計算等により、新規合成プロセス開発及び新規ナノ構造の創成を達成し、更に微細構造を高分解能電子顕微鏡-EDXにより調べ、その形成メカニズムを解明した。またLa@(BN)_<36>メタロフラーレンの創成、C/BNナノ構造への水素吸蔵可能性の検討等を、分子軌道法・ab initio第一原理計算・DV-Xα法・分子動力学法により原子配列モデル構築・構造最適化・電子状態計算・物性予測を行い、将来的なナノデバイス適用可能性を考察した。さらにB_<12>系ボライドのHREMによる3次元原子配列検出法の確立、HREM-NEDによる原子位置精密構造解析、Hg-Tl-Pb系超伝導酸化物の表面・界面原子配列の決定等を行い、原子位置直接決定法確立及び物性発現機構解明に大きく貢献した。これらの成果に加えて、原子配列調和物質の概念を生命体系にまで拡張することを可能とし、原子配列調和物質の構造・機能とカオス解析を行い、生体機能のリアプノフ指数及びエントロピーの増大及び減少を観測し、現在詳細な解析を進めている。特に人間生命体は究極の原子配列調和物質であり、21世紀のマテリアルサイエンスにおいて最大のフロンティアであり、今後のさらなる発展が期待される。
肝星細胞由来の新しい因子の遺伝子クローニングと抗体作製および機能解析

肝星細胞(伊東細胞)は特異な機能を有する肝類洞壁構成細胞で、サイトカインや増殖因子などさまざまな因子を産生し、肝疾患の病態に重要な役割を果たしていると考えられている。これまでに形態学的、生化学的および分子生物学的な解析がなされてきたが、その増殖と分化および機能発現にかかわる遺伝子機構はいまだ明らかにされていない。本研究は肝星細胞の分化および機能発現に重要な役割を果たす遺伝子ならびに肝星細胞が有する新しい因子のクローニングおよび抗体作製を目的として施行された。平成11年度は、SV40温度感受性肝星(伊東)細胞株を大型T抗原が発現する許容温度(33度)およびT抗原が消失して分化が誘導される非許容温度(39度)にて培養し、各々の細胞のRNAから肝星細胞がそれぞれの分化状態において特異的に発現している遺伝子の候補を選択し、クローニングを行った。肝星細胞の静止状態および活性化状態に特異的に発現していると考えられる遺伝子についてそれぞれシークエンスを行い、またこれらの遺伝子の一部については、In situ hybridizationおよびnorthern blottingを用いて、静止状態および活性化状態に特異的に発現していることを確認できた。平成12年度は、この遺伝子を用いて、正常肝組織や肝硬変組織および慢性肝炎組織においてIn situ hybridizationおよびnorthern blottingを行い、肝星細胞およびその活性化がこれらの疾患における肝障害の程度等において重要な役割を果たしているという知見を得た。平成13年度は、肝星細胞の活性化に伴う細胞内シグナル伝達機構の研究を行い、星細胞の活性化と遺伝子発現に関する論文の投稿中である。クローニングした遺伝子から発現した蛋白に対する抗体作製およびトランスジェニックマウスの作製は続行しており、線維化の遺伝子治療の開発に役立てる目的で研究を行っている。SV40温度感受性肝星(伊東)細胞株を大型T抗原が発現する許容温度(33度)およびT抗原が消失して分化が誘導される非許容温度(39度)にて培養し、各々の細胞からRNAを調整し、differential display法を用いて、肝星細胞のそれぞれの分化状態において特異的に発現している遺伝子の候補を選択し、さらにpolymerasechain reaction法にて増幅した。肝星細胞の静止状態および活性化状態に特異的に発現していると考えられる遺伝子についてそれぞれシークエンスを行い、またこれらの遺伝子の一部については、In situhybridizationおよびnorthernblottingを用いて、静止状態および活性化状態に特異的に発現していることを確認できた。現在その遺伝子から発現した蛋白に対する抗体を作製中である。この抗体およびプローブを用いてクローニングした遺伝子の機能解析を形態学的、生化学的および分子生物学的に行うことを計画している。

前年度には、SV40温度感受性肝星(伊東)細胞株を大型T抗原が発現する許容温度(33度)およびT抗原が消失して分化が誘導される非許容温度(39度)にて培養し、各々の細胞のRNAから肝星細胞がそれぞれの分化状態において特異的に発現している遺伝子の候補を選択し、クローニングを行った。肝星細胞の静止状態および活性化状態に特異的に発現していると考えられる遺伝子についてそれぞれシークエンスを行い、またこれらの遺伝子の一部については、In situ hybridizationおよびnorthern blottingを用いて、静止状態および活性化状態に特異的に発現していることを確認できた。今年度は、この遺伝子を用いて、正常肝組織や肝硬変組織および慢性肝炎組織においてIn situ hybridizationおよびnorthern blottingを行い、肝星細胞およびその活性化がこれらの疾患における肝障害の程度等において重要な役割を果たしているという知見を得た。現在その遺伝子から発現した蛋白に対する抗体作製をひきつづき行っている。また、クローニングした遺伝子を用いてトランスジェニッタマウスやノックアウトマウスの作製を行っている。肝星細胞(伊東細胞)は特異な機能を有する肝類洞壁構成細胞で、サイトカインや増殖因子などさまざまな因子を産生し、肝疾患の病態に重要な役割を果たしていると考えられている。これまでに形態学的、生化学的およぴ分子生物学的な解析がなされてきたが、その増殖と分化および機能発現にかかわる遺伝子機構はいまだ明らかにされていない。本研究は肝星細胞の分化およぴ機能発現に重要な役割を果たす遺伝子ならびに肝星細胞が有する新しい因子のクローニングおよび抗体作製を目的として施行された。これまでに、SV40温度感受性肝星(伊東)細胞株を大型T抗原が発現する許容温度(33度)およびT抗原が消失して分化が誘導される非許容温度(39度)にて培養し、各々の細胞のRNAから肝星細胞がそれぞれの分化状態において特異的に発現している遺伝子の候補を選択し、クローニングを行った。肝星細胞の静止状態および活性化状態に特異的に発現していると考えられる遺伝子についてそれぞれシークエンスを行い、またこれらの遺伝子の一部については、In situhybridizationおよびnorthern blottingを用いて、静止状態および活性化状態に特異的に発現していることを確認できた。また、この遺伝子を用いて、正常肝組織や肝硬変組織および慢性肝炎組織においてIn situ hybridizationおよびnorthern blottingを行い、肝星細胞およびその活性化がこれらの疾患における肝障害の程度等において重要な役割を果たしているという知見を得た。今年度は、肝星細胞の活性化に伴う細胞内シグナル伝達機構の研究を行い、星細胞の活性化と遺伝子発現に関する論文の投稿中である.
病態心におけるギャップ結合リモデリングと致死性不整脈発生基質の解明

遺伝子改変による心臓突然死マウスや心室細動ストームウサギモデルを用いて、病態心におけるギャップ結合リモデリングと不整脈発生基質について解析した。病態心では心室筋の介在板領域におけるconnexin43発現が低下し、興奮伝導速度の低下や活動電位再分極の不均一性増強に基づくリエントリー不整脈の形成・持続が促進されることが判明した。ギャップ結合リモデリングにはrenin-angiotensin系やcalmodulin/CAMKII活性化が関与することも明らかになった。心不全における死因の多くは心室細動・頻拍などの致死性心室不整脈である。心肥大や心筋梗塞などの病態心では、心筋イオンチャネルやCa調節機能の変化とともに、ギャップ結合を介する細胞間電気結合特性が大幅に変化して、致死性不整脈発生につながると考えられている。本研究では、病態動物モデルを用いて、心室筋細胞のギャップ結合の発現・分布や機能的変化が、心室細動・頻拍発生の電気生理学的基盤の形成(不整脈発生基質)にどのように関わりを解明することを目指す。今年度の研究では、心筋胎児型遺伝子発現抑制に関与する転写因子(NRSF)の優性抑制変異体を心臓特異的に発現させた遺伝子改変マウス(dnNRSF-Tg,京都大学桑原先生から供与)を用いて、心室不整脈の発生機序を解析した。dnNRSF-Tgマウスでは、生後発育とともに心筋収縮機能が低下し、心室細動・頻拍による突然死が多発する。dnNRSF-Tgマウス心室筋では、対象と比べてギャップ結合構成蛋白(connexin43, Cx43)発現が有意に低下し、Ser279/282リン酸化が亢進していた。摘出心の活動電位光学マッピングでは、心室筋の活動電位が延長して早期後脱分極(EAD)が発生するとともに、興奮伝導速度が著しく低下し、スパイラル型興奮旋回が形成され、持続性心室頻拍・細動の発生につながることが観察された。レニン阻害薬aliskirenは、dnNRSF-TgマウスのCx43発現変化や興奮伝導障害を軽減し、心室頻拍の持続を短縮した。以上より、病態に伴う心筋ギャップ結合リモデリングにはレニン-アンジオテンシン系が重要な役割を果たすことが明らかになった。除脈誘発心肥大モデルについては、ウサギの房室結節破壊により高度除脈を数週間持続させると、心室細動ストームが高率に発生することを確認した。病態モデル動物に関しては、今年度は主に、高度除脈誘発ウサギモデル作成を行い、心室細動ストームが高率に発生することを確認した。また、摘出心臓の活動電位光学マッピングを用いた実験の一部では、スパイラル型興奮旋回が形成されることも観察された。また、今年度は当初予定していなかった不整脈突然死をきたす遺伝子改変マウス(dnNRSF-Tg)を用いた研究も行い、病態に伴う心筋ギャップ結合リモデリングにおけるレニン-アンジオテンシン系の関与について明らかにすることができた。心肥大や心筋梗塞などの病態心では、心筋イオンチャネルやCa調節機能の変化とともに、ギャップ結合を介する細胞間電気結合特性が変化して、致死性不整脈発生につながると考えられている。本研究では、心室筋細胞のギャップ結合の発現・分布や機能的変化が、心室細動・頻拍発生の電気生理学的基盤の形成(不整脈発生基質)にどのように関わりを解明することを目指す。病態心では心筋細胞のcalmodulin(CaM)/Ca2+依存性リン酸化酵素(CaMK II)が活性化が亢進し、致死性心室性不整脈の発生に重要な役割を果たす。CaMK IIは心筋イオンチャネルの開口動態やタンパク発現を変化させ、不整脈発生基質をもたらすことが報告されているが、ギャップ結合を介する作用については十分解明されていない。今年度の研究では、CaMあるいはCaMK II阻害薬がウサギ心室筋のギャップ結合蛋白(Cx43)発現と興奮伝播および心室細動・頻拍の持続に及ぼす作用を調べた。CaM阻害薬(W7)の急性投与は心室筋の興奮伝導速度を増加し、細胞間電気結合の指標である空間定数も上昇させた。また、W7あるいはCaMK II阻害薬(KN93)は心室筋の介在板部分におけるCx43発現(Triton X不溶性分画)を有意に増加し、この結果は免疫組織染色の定量解析結果によっても確認された。更に、W7作用下では心室細動および持続性頻拍の誘発率が有意に低下し、活動電位光学マッピングによる興奮伝播解析では、W7作用下では心室細動・頻拍おけるスパイラル興奮波の旋回中心が心室内を大きく移動し、房室間溝の興奮障壁と衝突することによりリエントリーが停止することが観察された。以上より、CaM/CaMK II阻害は心室筋の介在板におけるCx43局在を増加して興奮伝導特性を向上させ、致死性心室性不整脈を抑制することが判明した。高度除脈誘発ウサギモデルについては心室細動ストームが高率に発生することを確認し、活動電位光学マッピング装置を用いて、心室筋の興奮伝播と心室細動・頻拍動態を解析する実験を開始した。しかし、この実験の途中で、光学マッピング装置の一部(高速度ビデオカメラ)が故障し、その修理に長時間を要した。

そのため、今年度は、電気生理学実験の代わりに分子生物学および免疫組織化学実験を主体に行い、その結果、心室筋のCaM/CaMK IIがギャップ結合蛋白の介在版局在を変化させ、致死性心室性不整脈の発生に重要な役割を果たすことを明らかすることができた。心不全における死因の多くは心室細動・頻拍などの重症不整脈である。心肥大や心筋梗塞などの病態心では、心筋細胞のイオンチャネルやギャップ結合蛋白の発現や性質が変化して電気生理学的特性や細胞内Ca2+動態の異常を生じ、異常電気興奮の生成や興奮波の旋回による不整脈発生につながると考えられている。本年度の研究では、ウサギ房室結節破壊による高度除脈依存性の心室細動ストームモデルを用いて、心室筋のギャップ結合の発現と活動電位波形変化を解析し、心室細動の発生基質について調べた。トルサード・ド・ポアンツ(TdP)型心室頻拍が頻発して心室細動ストームを呈するウサギでは、心室筋細胞のギャップ結合を構成するconnexin43の発現が低下していた。高分解能光学マッピングによる電気生理学的解析では、心室細動ストームウサギの心室筋では、対照ウサギと比べて、活動電位持続時間(APD)が延長していた。これは主に遅延整流K+チャネル発現低下を反映するものと考えられる。さらに、心室の部位によりAPD延長の程度が大幅に異なっており、活動電位再分極時相に心室内較差が生じていた。心臓灌流液にepinephrineを添加すると、APDが更に延長して再分極時相に著しい心室内較差が生じた。興奮伝播の解析では、早期興奮波が再分極遅延領域を迂回して伝播することにより渦巻型興奮旋回が形成され、TdP型心室頻拍が発生する様子が観察された。遅延Na+電流を抑制するranolazineは、APDを短縮して再分極時相の心室内較差を改善した。以上より、高度除脈依存性の心室細動ストームにおけるリエントリー性不整脈の発生には、K+およびNa+チャネルの変化とギャップ結合の発現変化による活動電位再分極の不均一性増大が重要な役割を果たすことが明らかになった。遺伝子改変による心臓突然死マウスや心室細動ストームウサギモデルを用いて、病態心におけるギャップ結合リモデリングと不整脈発生基質について解析した。病態心では心室筋の介在板領域におけるconnexin43発現が低下し、興奮伝導速度の低下や活動電位再分極の不均一性増強に基づくリエントリー不整脈の形成・持続が促進されることが判明した。ギャップ結合リモデリングにはrenin-angiotensin系やcalmodulin/CAMKII活性化が関与することも明らかになった。心室細動ストームウサギモデルについて、持続性心室頻拍・細動発生に関わる心筋ギャップ結合リモデリングと、それを基盤とするスパイラル型興奮旋回の形成について、、摘出灌流心臓の活動電位光学マッピングを用いて研究を進める。また、それらを抑制するには、どのような方法が効果的かつ安全性が高いかについて検討する。更に、これらの動物実験と並行して、数理モデルを用いた心筋活動電位興奮伝播のコンピュータ・シミュレーションを行い、動物実験の結果を検証するとともに、その理論についても考察する予定である。今年度装置の故障のため行うことができなかった、高度除脈に伴う心室細動ストームウサギの活動電位光学マッピングを用いた心室筋興奮伝播解析および心室細動・頻拍動態を解析を行い、心室細動ストームにおける心室筋ギャップ結合の変化と不整脈発生との関係を明らかにする。
造成海草藻場動物群集の種多様性や個体密度をより高めるには？‐タイ沿岸の環境修復‐

タイ南部沿岸域において造成したモザイク状の海草藻場、外縁が凹凸の海草藻場およびコントロール海草藻場において出現する魚類群集の構造を調べたところ、種数には違いは見られないものの総個体密度は外縁が凹凸の造成海草藻場でやや高くモザイク状の造成海草藻場でやや低いという傾向がごくわずかに認められた。また、出現各種の密度パターンは外縁が凹凸の造成海草藻場とコントロールで相対的に類似性が高かったが、モザイク状の海草藻場ではこれらの区とはやや異なっていた。ハビタットの等質性やエッヂの形状などが群集構造にもたらす影響を明らかにするためには今後さらにモニタリングを継続する必要がある。本研究課題はタイ沿岸域で海草藻場造成実験を行い、効率的に造成海草藻場動物群集の種多様性や個体密度を高めるためにはどうすればよいか明らかにすることを目的とする。本年度は、前研究期間中に造成した面積の異なる海草藻場等における動物群集のモニタリングなども継続して行った。得られた成果の一部はすでに学会発表の形で公表した。また、以前より日本国内で行っていた本課題に関連した研究の成果を学術論文の形で公表した。ここでは本年度に得られた成果の一部を述べる。本調査期間中、調査地において、オープンな砂泥地であった場所にHalophila ovalisが繁茂し、新たに海草藻場が形成された。この現象は海草藻場造成を模した自然の実験といえる。そこで、このH. ovalis海草藻場、および近隣の砂泥地とEnhalus acoroides天然海草藻場における動物群集構造のモニタリングを行った。その結果、このH. ovalis海草藻場にはLethrinus lentjanやHalichoeres bicolorなど、E. acoroides海草藻場の魚類群集を特徴づけるものも出現することがわかった。また、平均種数と総個体密度にはH. ovalis海草藻場と砂泥地の間では明確な違いはみられなかったものの、E. acoroides海草藻場と比べた場合、いずれも前2ハビタットでは顕著に少ないこと、出現種の密度パターンにはこれらのハビタット間で有意な違いがあることなどが判明した。例えば底質上/内を利用するハゼ類の密度に有意な違いがみられたことなどから、海草の根の有無やその形状などに起因する底質の性質の違いなどが魚類群集構造の違いをもたらしている可能性等が示唆された。これらの知見はH. ovalisを用いて海草藻場を造成する際に基礎となる情報である。本研究期間には、前研究期間中に造成したEnhalus acoroides海草藻場と周囲の天然E. acoroides海草藻場、砂泥地の動物群集モニタリングを行った。造成海草藻場と天然海草藻場に共通して出現したのは47種(天然海草藻場魚種の77%)であり、その中には天然海草藻場を特徴づけるある種のベラ類や水産上重要種のフエフキダイ類などが含まれていた。また出現魚のほとんどが稚魚などの小型個体であった。これらのことから、適切にデザインされた造成海草藻場は時間はかかるものの天然海草藻場と同様の機能を果たすようになると考えられた。また、前研究期間中に形成されたHalophila ovalis海草藻場でもモニタリングを行った。この海草藻場の魚類群集構造は周囲の砂泥地とは明確に異なっており、砂泥地ではほとんどみられないある種のフエフキダイ類などが多く出現した。餌の量は海草藻場でより多かったことなどから、これらは餌が多い等のメリットのため、海草藻場により多く出現するものと考えられた。一方、砂泥地により多く出現した種もいたが、これらは海草藻場の物理構造が巣穴を作る際あるいは餌を摂餌する際に障害となるため、海草藻場を好まない可能性が考えられた。以上の知見はH. ovalis海草藻場と砂泥地がそれぞれ独特の魚類群集を育むことを示すものである。したがって、ある地域の砂泥地がすべてH. ovalis海草藻場に遷移した場合、逆にH. ovalis海草藻場がすべて砂泥地になった場合、その地域全体の種多様性は低下してしまうであろう。すなわち砂泥地も含む様々なハビタットタイプが存在することにより、はじめて地域全体の多様性が高く保たれると考えられる。前研究年度に引き続き造成したEnhalus acoroides海草藻場と周囲の天然E. acoroides海草藻場、砂泥地の動物群集モニタリングを行い知見を蓄積した。造成海草藻場に出現した魚類の中には天然海草藻場魚類群集を特徴づけるベラ類や水産上重要種のフエフキダイ類などが含まれており、また出現魚のほとんどが稚魚などの小型個体であった。さらに水産上重要な甲殻類も出現したことなどから、適切にデザインされた造成海草藻場は天然海草藻場と同様の機能を果たすと考えられた。また、前期間に観察された砂泥地からHalophila ovalis

海草藻場へのハビタット遷移に伴う魚類群集の変化がどのようなメカニズムで生じるのか明らかにするため、H. ovalis海草藻場とその周囲の砂泥地で餌生物量や被捕食リスクを調べた。海草藻場には砂泥地ではほとんどみられないフエフキダイ類などが多く出現した。そこで、このフエフキダイ類を用いて糸つなぎ実験を行ったところ、被捕食リスクは海草藻場でより低い可能性が示唆された。また、これらの主な餌であるヨコエビ等は海草藻場で多かった。したがって、これらは被捕食リスクが低いことや餌が多い等のメリットのため、海草藻場に多く出現すると考えられた。一方、キス類やテッポウエビ類と共生するハゼ類などが砂泥地により多く出現した。前者については密生した海草が底質中の多毛類等を摂餌する際に障害となることや体が明色なため海草藻場上の水柱では捕食者の目につきやすいこと、後者については共生エビが巣穴を形成する際に障害となるライゾーム等が底質中に存在する海草藻場をあまり好まないことなどが分布パターンの形成に寄与していると思われた。モンスーン期の大嵐等により、造成した海草藻場の一部が破壊されてしまった。現在、海草苗の不足のため、完全には復旧できていない。本研究課題はタイ沿岸域で海草藻場造成実験を行い、効率的に造成海草藻場動物群集の種多様性や個体密度を高めるためにはどうすればよいか明らかにすることを目的とする。前研究年度に引き続き造成した様々な形状のEnhalusacoroides海草藻場と天然E. acoroides海草藻場、それらの周囲の砂泥地の動物群集モニタリングを行い、知見を蓄積した。また、海草藻場が単一の海草種で形成される場合と複数の海草種で形成される場合とで生息する魚類群集構造がどのように異なるのか明らかにするため、調査地に生息する海草のうちE. acoroides、Thalassia hemprichiiおよびHalophila ovalisが形成する単一種/複数種海草パッチを対象に調査を行った。その結果、海草種やその組み合わせによって魚類群集構造が大きく異なることが明らかになった。すなわち、海草パッチが単一の種で形成されている場合よりも複数の種で形成されている場合の方が、出現魚種数が多く、かつ総個体密度も高くなる傾向にあった。特にE. acoroidesとT. hemprichiiによって形成される複数種海草パッチにおいては、出現種数はそれら2種が単独で形成する海草パッチで記録された種の総数よりも多く、また総個体密度も後2者における密度の合計よりも高くなっていた。また、群集構成種の密度パターンも海草パッチのタイプにより大きく異なっていた。このような現象は海草藻場の持つ捕食リスク軽減等の機能が海草の種類によって異なり、また、複数の海草種により形成される海草藻場では、単一の海草により形成される海草藻場よりも、それらの機能が増強される場合があることなどによって生じている可能性が考えられた。タイ南部沿岸域において造成したモザイク状の海草藻場、外縁が凹凸の海草藻場およびコントロール海草藻場において出現する魚類群集の構造を調べたところ、種数には違いは見られないものの総個体密度は外縁が凹凸の造成海草藻場でやや高くモザイク状の造成海草藻場でやや低いという傾向がごくわずかに認められた。また、出現各種の密度パターンは外縁が凹凸の造成海草藻場とコントロールで相対的に類似性が高かったが、モザイク状の海草藻場ではこれらの区とはやや異なっていた。
要介護高齢者の各種真菌の口腔感染状況と全身の健康との関連の解明

本研究により療養型医療施設・高齢者施設入所高齢者291名の口腔内に生息する真菌種が特定され、脆弱な高齢者の口腔にはCandida菌のみならずMalassezia restrictaをはじめとする多様な真菌が存在していることが明らかになった。さらに健常者の口腔における主要な真菌種であるC. albicans以外の真菌の過増殖を起こしている被験者は高頻度に発熱している者が有意に多く、脆弱な高齢者における口腔真菌分布と健康状態との関連性が示唆された。当該年度は、昨年度確立したLength Heterogeneity PCR法を用いた口腔真菌構成解析系を用いて施設入所高齢者の口腔真菌構成の解析を行ったのち、健康状態との関連について検討した。対象は大牟田市の療養型医療施設(3施設)および高齢者施設(7施設)に長期にわたって入所する高齢者291名(86.0±7.4歳)とし、スプーンスパチュラを用いて得られた舌苔を検体とした。291名の舌苔抽出DNAについて定量PCR法を用いて総真菌数を測定したところ、128名で舌苔検体あたり10^4 CFU以上の真菌が検出され、そのうち35名では10^5 CFU以上認められた。10^4 CFU以上の真菌が認められた128名について真菌構成を解析した結果、もっとも高頻度で検出されたのはCandida albicans(105名;82.0%)であり、続いてCandida dublinensis(78名;60.9%)、Malassezia restricta(56名;43.8%)、Candida tropicalis(45名;35.2%)、Candida glabrata(26名;20.3%)などが多くの被験者で認められた。舌苔採取の前後約6か月からなる1年間の観察期間における1週間以上の発熱の有無と真菌分布との関係について統計学的に検討したところ、総真菌数が10^5 CFU以上と真菌の過増殖が起きている被験者ではC.albicans以外の真菌が検出される場合、特にC.glabrataやC.tropicalisが検出される場合に発熱との関連が認められた。このような関連は舌苔の湿潤度、義歯の使用、生活活動動作、認知機能障害、嚥下障害、抗生剤の使用、脳血管疾患といった発熱関連因子を多変量ロジスティック回帰分析にて調整した際にも有意であった。本研究により高齢者の口腔内の真菌種の分布が明らかになり、さらにその構成と宿主の健康状態との関連性が示唆された。
人間上肢の運動制御における視覚情報と力感覚情報のメカニズムの解明

本研究では可操作度による拘束運動での制御手法を提案した。本手法では、アーム部分が協調的に動くことによって指部分の可操作度を目標値以上に制御するため、特異姿勢に強いロバスト性を実現した。また、Miiller-Lyer錯視刺激を与えた場合の上肢運動を測定し、認知上の錯視現象を確認でき、上肢運動にも大きな影響を与えたことを明らかにした。さらに、視覚情報の濃度の低下の場合運動精度が徐々に落ちる結果から、視覚情報の濃度と運動生成に必要な情報の取得率に何らかの関連があることを示唆し、今後の研究に有用な手係りが得られた。高度な冗長性をもつ人間の体が多数の関節の運動をどのように決めるかの問題は、体の運動制御の不良設定問題である。この問題を解決するため,Flashらは躍度最小モデルを提案し、宇野らは上肢の運動ダイナミックスを用いた上肢運動のトルク最小モデルを提案した。これらの運動モデルは、上肢部を独立な運動構成として自由空間での随意運動を物理的にどのように生成したかを検討したものである。しかしながら、作業中において手先の自由度の一部が拘束されることは多く、作業を遂行するため、体の感覚器からの情報を用いて運動制御を行うことが必要である。この場合、異なる感覚器からの情報の役割と関連、そして肢体の運動制御に及ぼす影響について、従来の運動モデルによって説明できない。申請者らは、これまでに9自由度フィンガ・アームの制御問題を取り上げ、人間上肢の動きを真似し、フィンガの可操作度が一定なレベルに下回らないように、アームを協調的に動かすという制御手法を積極的に研究してきた。これまでの研究成果から、人間はいつも手部の可操作度を高く保つようにアームを協調的に動かすではないかという仮説を考えた。この仮説を検証するため、申請者らは、上肢の運動モデルを用いて速度パターンの変化、可操作度、エネルギなどの指標を用いて自由空間における上肢の随意運動を測定し、可操作度と運動エネルギの観点から上肢の運動規範を精力的に検討してきた。これらの測定結果から、手先の位置制御のみの場合、人間の上肢運動は従来のモデルによって予測した軌道と一致したが、手先の自由度が部分的に拘束される場合の上肢運動についてこれまでの理論で説明できないことが分かった。高度な冗長性をもつ人間の上肢が多数の関節の運動をどのように決めるかという問題は、体の運動制御の不良設定問題であり、ベルンシュタイン問題として知られている。本研究は、モーションキャプチャシステムを用いて人間の上肢運動のメカニズムを解明するものである。従来に提案された運動モデルは、上肢部を独立な運動構成として自由空間での随意運動を物理的に、力学的にどのように生成したかを検討したものであった。しかしながら、作業中に手先の自由度の一部が拘束されることは多く、作業を遂行するため、体の感覚器からの情報を用いて運動制御を行うことが必要である。昨年度は運動機構冗長性に着目し、可操作度によって運動を生成した仮説に基づいて冗長マニピュレータの自由空間での運動を実現した。本年度の主な結果としては、昨年度までの研究成果を発展させ、手先拘束運動に可操作度による運動生成手法を適用した。このときアーム部分が協調的に動いたことによって指部分の可操作度を一定なレベル以上に維持したため、リンク長の短い指部分が特異姿勢に落ちにくくなり、強いロバスト性を実現した。また、上肢運動に視覚情報の影響について調べを行った。まず、Muller-Lyer錯視の刺激を与えた場合の上肢運動を測定した。このとき錯視現象が起きることだけではなく、錯視情報が上肢運動まで大きな影響を与えたことを明らかにした。さらに、運動軌道の生成に、視覚情報の濃度が低下することに連れ運動精度が徐々に落ちる結果から、視覚情報の濃度と運動軌道生成に必要な情報の取得率に何らかの関連があることを示唆し、今後の研究に有用な手係りを与えた。
腸内細菌叢に注目した膀胱尿管逆流症例に対する再発性尿路感染症の新規予防法の確立

膀胱尿管逆流(VUR)は、有熱性尿路感染症(fUTI)を反復し腎障害を生じる可能性がある。近年の大規模研究で、VUR症例のfUTIの予防にST合剤の予防内服(CAP)の有用性が示された。通常尿路は、乳酸菌主体の腸内細菌叢が産生する活性酸素や酸性物質などが抗菌作用を発揮し無菌的に保たれている。効果的にfUTIを予防するには腸内細菌叢の是正することが必要ではないかと考えた。本研究は、プロバイオティクスを投与し腸内細菌叢を是正することで、より効果的なfUTIの予防法を確立することを目的とする。平成30年度は、ST合剤によるCAPが乳幼児の腸内細菌叢におよぼす影響を明らかにするために、fUTIの乳幼児18例を対象とし、VURIII度以上を認めた11症例に対してはST合剤によるCAPを開始し(CAP群)、VURを認めなかった7症例にはCAPを行わず経過観察とした(非CAP群)。抗菌薬治療前、治療中、fUTI発症1-2、3-4、5-6か月後の5ポイントで便検体を採取し、腸内細菌叢をCAP群と非CAP群の間で検討した。結果は、1.急性期の抗菌薬治療開始7日目には腸内細菌のほぼすべてがLactobacillales目となり、治療開始前と比較して腸内細菌叢の多様性は低下した。2.CAP群と非CAP群の両群ともfUTI発症1-2か月後には多様性の改善を認め、その多様性は維持され2群間で差はなかった(p=0.20)。3.構成菌目について、CAP群は有意にLactobacillales目が多く(p=0.005)、Enterobacteriales目が少なかった(p=0.003)。以上から、ST合剤によるCAPは、fUTIの主要な起因菌である大腸菌やクレブシエラが属するEnterobacteriales目の増殖を選択的に抑制するため、乳幼児の腸内細菌叢を乱すリスクは低いと考えられた。現在、症例の登録も順調に進んでおり、便検体の回収も進んでいる。本研究で明らかにする項目は以下の通りである。1.fUTI初期治療(抗菌薬投与)による腸内細菌叢への影響と治療後の腸内細菌叢の変化2.ST合剤のCAPによる腸内細菌叢への影響3.fUTI初期治療後のプロバイオティクス投与を使用した場合の腸内細菌叢の変化4.高度VUR症例にプロバイオティクスを使用した場合のfUTIの予防効果現在1、2の研究が進んでおり、結果が明らかとなってきている。1.fUTI初期治療(抗菌薬投与)による腸内細菌叢への影響と治療後の腸内細菌叢の変化2.ST合剤のCAPによる腸内細菌叢への影響3.fUTI初期治療後のプロバイオティクス投与を使用した場合の腸内細菌叢の変化4.高度VUR症例にプロバイオティクスを使用した場合のfUTIの予防効果現在1、2の項目の研究は順調に進んでいるため、本年度は、3についての研究を進めていく予定である。現在症例登録も進んでおり、解析を進める予定である。

1.fUTI初期治療(抗菌薬投与)による腸内細菌叢への影響と治療後の腸内細菌叢の変化2.ST合剤のCAPによる腸内細菌叢への影響3.fUTI初期治療後のプロバイオティクス投与を使用した場合の腸内細菌叢の変化4.高度VUR症例にプロバイオティクスを使用した場合のfUTIの予防効果現在1、2の研究が進んでおり、結果が明らかとなってきている。本研究で明らかにする項目は以下の通りである。1.fUTI初期治療(抗菌薬投与)による腸内細菌叢への影響と治療後の腸内細菌叢の変化2.ST合剤のCAPによる腸内細菌叢への影響3.fUTI初期治療後のプロバイオティクス投与を使用した場合の腸内細菌叢の変化4.高度VUR症例にプロバイオティクスを使用した場合のfUTIの予防効果現在1、2の項目の研究は順調に進んでいるため、本年度は、3についての研究を進めていく予定である。現在症例登録も進んでおり、解析を進める予定である。