hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
壊死性腸炎（NEC）に対する補体系制御による治療法の開発

NECは,高浸透圧の経管強制栄養,lipopolysaccharideの胃内投与(1日目および2日目に2回),および低酸素ストレス(1日3回,10分)によって誘発された.対照には母乳が自由に与えられた.NEC + rTM群では,rTMを皮下に2回(1日目および2日目にそれぞれ1回)投与した.96時間以上生存した全ての動物,並びに瀕死状態の動物は安楽死させた.回腸を組織学的評価(NECスコア:04)およびTNF-α,IL-6のmRNA発現の測定のために採取した.結果:NEC + rTM群の生存率は,NEC群(NEC + rTM:64%,NEC:23.5%,p=0.0005)より有意に高かった.NEC + rTMグループのNECスコアは,NECグループよりも有意に低かった(NEC + rTM:1.6±0.8,NEC:2.5±1.2,p=0.0025).TNF-αおよびIL-6のmRNA発現はNEC群で有意に上昇したが,NEC + rTM群では対照群と同じレベルに低下した.結論:今回の研究結果より,rTMがNECの重篤度および発症率を低下させることが明らかとなった.rTMはNEC治療の一つの選択肢となる可能性がある.課題の実験検討はおおむね終了し,論文投稿中であるが採択に至らず改訂中である.補体系の抑制が,NECの発症・重症度を軽減することを明らかにするため,初年度に作成した新生仔ラットのNECモデルを補体抑制群と補体非抑制群の2群に群分けして研究を進める.メシル酸ナファモスタット,コブラ毒素因子(CVF: cobra venom factor),ラビット抗C3a,抗C5a Receptor抗体を補体抑制方法として候補にしているが,どの薬剤が効果的かは明らかでないので効果的な補体抑制方法を検討することを次年度目標とする.採取した検体の分子生物学的検討を行い,その後,論文作成を行っていく予定である.論文投稿に際しての追加実験や再投稿を準備中である.研究を進めていく上で、必要に応じて研究費を執行したため当初の見込み額と執行額は異なった。(理由)研究を進めていく上で、必要に応じて研究費を執行したため当初の見込み額と執行額は異なった。(使用計画)研究計画に変更はなく、前年度の研究費も含め当初予定通りに計画を進めていく。具体的には、消耗品、情報収集あるいは成果発表の為の旅費、投稿料に用いる予定である。研究計画に変更はなく、前年度の研究費も含め当初予定通りに計画を進めていく。
分泌タンパク質の成熟化に伴う動態制御機構の解析

1.小胞体内で高次構造形成に失敗した蛋白は小胞体のレベルでプロテアソームにより分解されると考えられているが、その分解を促進する蛋白EDEMを見いだした。これはERマンノシダーゼIの不活性型と考えられる事から、Man8構造を認識するmisfoldした蛋白の受容体である可能性を示唆した。2.小胞体で高次構造形成を終えた蛋白は、COPIIコートで被われた遷移領域から輸送されるが、その制御についてはこれまで生理機能が不明であったdiacylglycerol kinaseδが抑制的に作用する事を見いだした。これはCOPIIコートの遷移領域への付加を抑制すると考えられ、そのターゲッティングには分子内のsterile αmotifが必要であり、また阻害活性発現には予想に反して、脂質リン酸化活性ではなく、pleckstrin motifが必要な事を報告した。3.oculocutaneous albinism type1(OCA1)はメラニン合成酵素であるチロシナーゼの変異によって引き起こされるが、これらは小胞体に繋留され、カルネキシンから解離した時点でプロテアソームによって分解される事を報告した。さらにOCA3はTRP1の変異により起きるが、これがチロシナーゼの小胞体からの輸送を阻害することでメラニン合成の阻害を引き起こしている事を示した。4.構造形成に失敗した分泌蛋白のプロテアソームによる分解をEDEMが促進する事を先に報告したが、これはERmannosidaseIの下流にあると考えられたので、過剰発現して分解への影響を調べたところ、EDEMとは異なる特性を示した。よって小胞体関連分解においてEDEM依存的な経路と非依存的な経路の2つが存在する事が示された。1)分泌蛋白のジスルフィド結合の形成をトランスフェリンをモデル分子として調べた。その結果、この酸化は内腔において不均一に進行し、新生分子に選択的であり、またEro1αにより促進される過程であることが示された。この選択性はEro1αのBiPとの結合によって引き起こされ、その結合阻害は新生トランスフェリンの酸化を阻害した。2)tyrosinaseのfoldingは可逆的な凝集物形成との平衡において進行する事を見いだし、これを利用してリソソーム膜蛋白の輸送を同期させることでゴルジ体での細胞膜蛋白との選別を示した。3)Oculocutaneous Albinism Type1はtyrosinaseの変異によって引き起こされ、これら変異分子は小胞体内でカルネキシンからの解離と同期して分解される事を示した。4)小胞体内でミスフォールドした分子のプロテアソームによる分解を促進する因子として不活性型のマンノシダーゼ様膜蛋白EDEMを報告した。5)小胞体からのCOPII顆粒形成をdiacylglycerol kinase-deltaか特異的に抑制することを見いだした。1.小胞体で高次構造形成を終えた蛋白は、COPIIコートで被われた遷移領域から輸送されるが、その過程が様々な条件で阻害される事が知られている。そこで、そのCOPIIコートの細胞質プールとの交換反応について、生細胞においてFRAP(蛍光消光回復法)等を用いて調べると、多様なモードでの制御が起きている事を明らかにした。特に、浸透圧ストレスによる分泌阻害の際にはコートの離脱が特異的に阻害されていることが証明され、これはJNKの阻害剤で抑制されたのでCOPIIコートのGAP活性がJNKによる負の調節を受けている事を示唆した。更に、浸透圧ストレスと類似のコート離脱速度の低下が、cdckinase2の特異的な阻害剤によっても観察された。そこで、その阻害剤存在下における分泌蛋白の動態を調べると、foldした蛋白の小胞体からの輸送のうち、fast phaseは変わらないもののslow phaseの輸送が抑制されていた。このような事から構造形成を終えた蛋白の小胞体からの輸送機構において新たなモードが存在する事が示唆された。

2.fibrinogenは3つの異なる(しかし相似の)サブユニットが会合して分子間でジスルフィド結合を形成し、最終的に6個のユニットからなる会合体を作る。このうち、グルコースプロセシングが阻害されるとγ鎖の正しいタイミングでの会合体への組み込みが抑制される事を見いだした。3.構造形成に失敗した分泌蛋白のプロテアソームによる分解をEDEMが促進する事を先に報告したが、これはERmannosidaseIの下流にあると考えられたので、過剰発現して分解への影響を調べたところ、EDEMとは異なる特性を示した。よって小胞体関連分解においてEDFM依存的な経路と非依存的准経路の2つが存在する事が示された。
『緋文字』と17世紀英国文化の表象

19世紀の作家の例に漏れず、ホーソーンが歴史家顔負けの第一史料の読み手であったことは、コラカチオを初めとするニュー・ヒストリシズムの批評家たちも指摘する所である。17世紀アメリカを舞台とする『緋文字』においても歴史的解釈は盛んである。けれども従来の歴史的批評には(1)アメリカ性の強調は顕著だが英国への目配りが欠けている。(2)歴史的観点とはいえ、政治や宗教など理論に偏り、具体的事物である文化表象は等閑視されている。これではテクストの正確な読みはできない。当研究は、「楽しいイングランド」をひきずった「イギリス生まれの」「イギリス人」からなる、『緋文字』第一世代のピューリタンたちの持ち込んだ17世紀英国の豊かな文化表象に焦点を当てた。またアメリカの都市の歴史をヨーロッパの都市とのつながりで見ることにより、『緋文宇』解釈にこれまで気づかなかった一側面を強く意識するに至り、筆者のこれまでの研究を同じ方向へ、さらに深く進展させることとなった。特にルネッサンス人を惹きつけてやまなかった古典的<メランコリー>の図像を主要登場人物に見ることで、従来のピューリタニズム一辺倒では読みとれなかった「黒」に、新しい意味のベクトルをひらいた。従来の研究に当該研究成果を加えて『緋文字』論を世に出すことが残されている。今後は『緋文字』以後のロマンスへと研究対象を広げる。読みの方法も基本的には同じだが、イギリスだけでなくより広範な地域の文化表象に目配りし、ホーソーン言うところの「ロマンス」の本質を明らかにし、ホーソーンの望む読み手となることを目指すことになろう。17世紀ニューイングランドを背景にしたアメリカ文学であるナサニエル・ホーソーンの、『緋文学』における17世紀英米文化との関わりを研究するため、特にイギリスの宮廷の衣装・紋章・祭式・建築・室内装飾などの文化表象と、ニューイングランドの初期マサチューセッツ湾植民地特権階級の文化表象について、8月12日から9月5日までの日程で現地調査をおこなった。(1)英国では紋章院、ウオーバーグ研究所、バッキンガム宮殿、ロンドン塔、大英博物館を初め幾つかの美術館を訪れた。実物をみて細部を確かめることができたことは研究上の大きな成果であった。(2)アメリカではボストンに滞在し、ハーヴァード大学ホートン図書館、ボストン・パブリック・ライブラリー、Massachusetts Historical Society、古い墓地などを訪れ、見逃していた古物の検証や背景の資料収集をおこなった。今までおこなってきた研究を更に裏付けることができ、仮説に自信をもつことができた。(3)総じて計画通り実行できたが、残念なことにミレニアム準備で英米共に整理のために休館中の所が多く、せっかく訪れたが、目指していたものを閲覧できなかったのは残念である。来年度または再来年度を期待している。本年度は単に17世紀英国との関わりだけでなく、17世紀や19世紀のヨーロッパや日本など一層広範な視野でホーソーンの研究を進めた。特にアメリカという国の理念が視覚的な形をとって表現された首都ワシントンの考察により、ホーソーンに関する思わぬ発見があった。英米の死の慣習については、ホーソーンが愛読していた17世紀の英国の書物を参考に、<許されざる罪>に関するキリスト教の伝統的な解釈との関連で考察した。この過程で、研究活動を始めて以来のライフワークとも言える古典的<メランコリー>のテーマをも融合させることとなった。しかし、衣装関係については古い資料や、ホーソーンの諸作品を調べなおし、さらに考察を加えるにとどまった。特筆すべきものとして『緋文字』発刊150年の記念企画があり、二つの企画に加わった。一つは『英語青年』の『緋文字』特集の企画である。

この特集ではメンバーの選択を含む全体構想を任され、論文も執筆したおかげで、最近の批評の動きを含め『緋文字』を総合的にとらえる機会となった。もう一つは日本ナサニエル・ホーソーン協会の『緋文字』150周年記念論文集刊行であり、刊行委員会のメンバーとして論文の審査に加わり、また自分自身でも論文の原稿を提出した。審査の過程では他人の読みを通してもう一度テキストを精密に読む機会を与えられ、自分の読みの検討に役だった。今年度は海外での資料収集を見合わせる計画であったが、来年度の完成年度を迎えるに当たり調査と資料収集が必要であることが判明した。そこでボストンに出かけ、ハーバード大学ホートン図書館、ワイドナー図書館などで、芸術、宗教関係の古い書類、書物にあたり、研究を支える裏付けを得た。今年度は完成年度に当たるので、海外での資料収集は行わず、文献を取り寄せたり、図書館等にでかけたりして、主として国内で研究に従事し、考察に時間を費した。『緋文字』論をまとめるべく昨年度の研究成果をふまえた同じ方向での研究の進めかたであった。すなわち単に17世紀英国との関わりだけでなく、17世紀や19世紀の、ヨーロッパや日本など一層広範な視野をもって研究を進めてきた。その過程で今まで見えていなかった側面が見えてきた。アメリカという国の理念が視覚的に表現された首都ワシントン、特に<ペンタゴン>の考察はルネッサンスの文化表象という広い視野から行われたので、『緋文字』に対する視野がさらに開けた。また英米の死の慣習については、ホーソーンが愛読していた17世紀の英国の書物から、<許されざる罪>に関するキリスト教の伝統的な解釈と古典的<メランコリー>の図像的解釈を『緋文字』のヘスターに試みた。落ち穂拾いによって『緋文字』論完成へと近づいた。研究の具体的内容は次の点に要約される。1昨年度に引き続き、17世紀英国文化を他の国と比較しながら、儀式や慣習、芸術など文化表象から研究した。特に今年度は懸案の衣装に関して重点的に考察した。2従来ピューリタニズムに焦点を当てていたホーソーンのキリスト教思想を、英国国教会、カトリックを含め、時代をこえたキリスト教の正統的共通認識から考察した。『緋文字』の舞台と同じ17世紀前半のロバート・バートンの『憂欝の解剖』の詳細な読みと、古典的<メランコリー>の図像からのアプローチを合体させ、謎めいたヘスターの描写の含む意味を解明した。3ノヴェルでなくロマンスだと自作品を定義するホーソーンの文学理論を、視覚的芸術と重ね合わせて考察した。
重症虚血肢に対する老化制御遺伝子BubR1導入による革新的血管新生療法

加齢は血管新生を減弱させ、血管内皮細胞の機能低下を引き起こし、高齢者において、心血管疾患の罹患率と後遺症を増加させ、生命や肢の予後を悪化させる。この現象は50年以上前より報告されているが、加齢に伴う血管新生能力低下に関しての分子的機序は、これまで十分には明らかにされていない。BubR1 (budding uninhibited by benzimidazole-related 1)は、有糸分裂において姉妹染色体が正しく分裂しているかどうかを観察する、紡錘体形成チェックポイント機構の中心的な構成要素の一つである。BubR1の発現を低下させたマウスにおいては、染色体の異数性形成、白内障、亀背、皮下脂肪の減少、創傷治癒遅延、短命、不妊等、加齢を示す表現型を早期から呈することが明らかにされている。しかしながら、血管疾患や血管新生においてBubR1が果たす役割は、これまで明らかにされていない。血管新生は複数の血管新生因子を含めた、種々の細胞による多様の遺伝子産物が関与した複雑な過程である。血管内皮増殖因子VEGF、肝細胞増殖因子HGF、繊維芽細胞増殖因子FGF-2は強力な血管新生調節因子である。我々は以前in vivoでの実験で、虚血肢モデルマウスにおいて、FGF-2がVEGFとHGFの発現を増加させることを示した。虚血は低酸素状態をもたらし、VEGFや他の血管新生因子の分泌を刺激し、新生血管を誘導する。BubR1の血管新生に対する生理学的関連性は、まだ明らかにはされていない。従って本研究で我々は、血管新生におけるBubR1の役割を明らかにするためにBubR1の発現を低下させたマウス(BubR1L/-)を作製し、実験を行った。BubR1の発現低下は、虚血誘導後の下肢において、血管新生を減弱させ、下肢の脱落をもたらした。BubR1は重要な血管新生因子であり、虚血肢の治療において有用なものとなる可能性が示唆されたが、BubR1の血管新生に関する更なる分子機序の解明、及びBubR1を補充もしくは、他の遺伝子との同時補充により血管新生を回復できるか検討する必要があるため。BubR1が血管新生における鍵となる因子であり、虚血性の疾患に対して治療学的な標的となる可能性を現在までの研究で示せた。BubR1の発現の低下は、虚血肢におけるVEGF蛋白の発現を低下させ、下肢の救肢率も低下させており、BubR1は、救肢率を改善させる重要な役割を果たす可能性があることが示唆された。加齢に伴いBubR1の発現が低下した際に、VEGFなどの虚血に対峙する血管新生因子の発現の低下のために、血管新生の減弱がもたらされる。よって、BubR1の発現の低下は血管新生を遅らせ、下肢の脱落という結果をもたらすことになりうると考えられる。本研究にはいくつかの限定事項が存在する。HGFやFGF2ではなく、VEGFの発現のみを選択的に調整するような、BubR1を含んだシグナル伝達経路が十分に解明されていないことに加え、新生血管形成時に、BubR1の発現の低下によって、未熟な血管ががどれくらいの割合で誘導されているかが、はっきりとしないままであることである。慢性、または急性の下肢虚血患者に対する、BubR1の発現の低下の影響を明らかにするためには、更なる研究が必要である。“ヒトは、動脈とともに老いる;William Osler (1848-1919)"の格言のごとく老化は、血管新生を抑制しまた内皮機能をも低下させ心血管イベントを高率に発症し下肢切断をもたらす致死的な疾患の要因となる。しかし、未だ老化に対する治療法は皆無である。そこで老化に影響を与える遺伝子群の同定・解析・治療への応用は急務である。我々は、平成16年度萌芽研究、平成2224度基盤研究(C)、平成2527度基盤研究(C)によって細胞周期遺伝子BubR1の低下は、老化現象を起こし、血管系においても老化の原因になることを解明してきた。(Matsumoto,et al Stroke 38: 1050-1056, 2007)(Guntani, Matsumoto,et al J Surg Res 170: 143-149, 2011)(Kyuragi, Matsumoto,et al ATVB35: 341-347, 2015)今回は、BubR1遺伝子の低下が血管新生にどのような影響を与えるかを検討し、その結果を踏まえた老化制御に対する治療法の開発を目指す。BubR1 low expressingmouse(BubRL/L mice)と片方のBubR1 alleleを破壊したマウス( BubR1 hetero knockout mice;BubR1-/+)を交配させ、Low/null BubR1 expressingmutant(BubR1L/-)

miceを作製し7回のBack crossを終了し、虚血肢モデルを作製している。野生型マウスでは、下肢虚血モデル作製後14日目では下肢の血行は保たれていたのに対し、BubR1L/-miceでは、高度虚血を認めた。下肢虚血モデル作製後の血管新生因子の解析を行った。加齢は血管新生を減弱させ、血管内皮細胞の機能低下を引き起こし、高齢者において、心血管疾患の罹患率と後遺症を増加させ、生命や肢の予後を悪化させる。この現象は50年以上前より報告されているが、加齢に伴う血管新生能力低下に関しての分子的機序は、これまで十分には明らかにされていない。BubR1 (budding uninhibited by benzimidazole-related 1)は、有糸分裂において姉妹染色体が正しく分裂しているかどうかを観察する、紡錘体形成チェックポイント機構の中心的な構成要素の一つである。BubR1の発現を低下させたマウスにおいては、染色体の異数性形成、白内障、亀背、皮下脂肪の減少、創傷治癒遅延、短命、不妊等、加齢を示す表現型を早期から呈することが明らかにされている。しかしながら、血管疾患や血管新生においてBubR1が果たす役割は、これまで明らかにされていない。血管新生は複数の血管新生因子を含めた、種々の細胞による多様の遺伝子産物が関与した複雑な過程である。血管内皮増殖因子VEGF、肝細胞増殖因子HGF、繊維芽細胞増殖因子FGF-2は強力な血管新生調節因子である。我々は以前in vivoでの実験で、虚血肢モデルマウスにおいて、FGF-2がVEGFとHGFの発現を増加させることを示した。虚血は低酸素状態をもたらし、VEGFや他の血管新生因子の分泌を刺激し、新生血管を誘導する。BubR1の血管新生に対する生理学的関連性は、まだ明らかにはされていない。従って本研究で我々は、血管新生におけるBubR1の役割を明らかにするためにBubR1の発現を低下させたマウス(BubR1L/-)を作製し、実験を行った。BubR1の発現低下は、虚血誘導後の下肢において、血管新生を減弱させ、下肢の脱落をもたらした。BubR1は重要な血管新生因子であり、虚血肢の治療において有用なものとなる可能性が示唆されたが、BubR1の血管新生に関する更なる分子機序の解明、及びBubR1を補充もしくは、他の遺伝子との同時補充により血管新生を回復できるか検討する必要があるため。In vitroで大動脈平滑筋、ヒト線維芽細胞(MRC5)を用いsiRNAを用いBubR1を低下させ血管新生因子への影響を検討する。細胞を低酸素下状態にし、BubR1低下による各種血管新生因子(FGF2, HGF, VEGF)への影響を検討する。In vitroで大動脈平滑筋、ヒト繊維芽細胞(MRC5)、大動脈内皮細胞を用いsiRNAでBubR1を低下させ血管新生因子への影響を検討する。更には、そのsignaling pathwayを検討する。BubR1が血管新生における鍵となる因子であり、虚血性の疾患に対して治療学的な標的となる可能性を現在までの研究で示せた。
線型微分方程式の幾何学的研究

1)射影平面上の6直線で分岐する二重coverとしてのK3曲面は4次元族をなす。この族の周期写像は(3,6;1/2)型超幾何微分方程式の射影的解となり,その局所的,大域的性質を調べた。2)上記周期写像の逆写像をI型領域上のテーター凾数を用いて書いた。3)(k,n)型超幾何微分方程式のモノドロミイ群の生成元を求めるアルゴリスムを与え,(3,6)型の場合に計算を実行した。4)〓(線型関数の複素ベキ)×有理関数の積分はtwisted cohomologyとtwisted homologyのpairingと解釈できる。これらのtwisted homologyの交叉理論とtwisted cohomologyの交叉理論(一次元の場合)を完成した。5)Sn-対称性をもつ退化した超平面配置に属する超幾何型積分のみたす微分方程式系を求めて,その性質を研究した。6)アソシエーションスキームの分類問題と代数的組合せ論の方法を用いてのスピンモデルなどの数理物理学的対象の研究.7)Alexaudrov空間の等長変換群がLie群になる事を証明し,それを用いて断面曲率と直径が各々下と上に一様に有界なリーマン多様体の基本群の有限性に関する結果を得た。
在米日本漢籍の蔵書学―今関天彭蒐集書を事例として―

アメリカ合衆国カリフォルニア大学バークレー校ほか同国諸図書館に散在する、近代日本の漢学者・今関天彭蒐集の、清朝学術調査資料に書誌調査を加え、蔵書の旧態を再構築した上、その目録、解題、蔵書紀要を作成する。その成果に拠り、書籍固有の価値を顕彰すると共に、蔵書の特質を形象化した上、同時代の対アジア文化事業との関わりや、清朝考証学の受容を機軸として近代日本漢学との関わりを検討し、その学術史上の位相と意義を明らかにする。また今関天彭の活動を素材として、国際的な討議研究を展開し、近代日中文化交流及び、文献学・書誌学の展開を考え、日中米の立場を超えた共通認識を確立、人文学の世界的発展に貢献する。
日本型探究学習の概念構築とその実現に向けた教員養成・教員研修に関する研究

日本の探究学習の特長を生かしつつ、欧米の優れた面が根付くような、いわゆる日本型を基盤とした融合型の「日本型の探究学習」の概念構築を進めた。同時に、探究学習の鍵を握る教員の資質・能力の向上を図るため、教員養成・教員研修に係る実践・検討を並行して行い、以下のような成果があった。(1)「前仮説段階を考慮した探究過程」の実践モデルを適応し、日本型探究学習の概念構築ができた。特に探究過程における日本的な「こだわり」と日本の教育文化に根ざす探究モデルの課題を明確にした。(2)英国・オランダの探究学習を調査し、多様性教育、個別指導(学習)、理科学習・総合学習の探究学習のプロセス(授業)・教材開発、評価システム等を分析・検討した。日本型探究への導入を試みた。(3)学校において探究学習を実現するためのコア・ティーチャー(学校・地域の理科教育を企画・運営・指導する)という新たな役割を遂行できる教員養成・教員研修のカリキュラム・プログラムを開発した。(4)日本型探究学習に基づく理科学習、自然学習、総合学習の教材・プロセス・カリキュラムの開発を継続して行った。日本の探究の特長を生かしつつ、欧米の優れた面が根付くような、いわゆる日本型を基盤とした融合型の「日本型の探究学習」の概念構築を試みた。同時に、これまでの研究の成果を反映させるために、探究学習の鍵を握る教員の資質・能力の向上を図るため、教員養成・教員研修に係る実践を並行して行い、以下のような成果があった。(1)「前仮説段階を考慮した探究過程」の実践モデルを適応し、理論と実践の円滑な相互作用のもとに、日本型探究学習の概念の概容が見えてきた。探究過程における日本的な「こだわり」を位置づけ、日本の教育文化に根ざす探究モデルを検討した。(2)欧米の探究学習を調査し、多様性教育、個別指導(学習)、理科学習・総合学習の探究学習のプロセス(授業)・教材開発、評価システム等を分析・検討した。日本型探究への導入・融合を試みた。(3)学校において探究学習を実現するためのマネージメント(学校の理科教育を企画・運営・指導する)という新たな役割を遂行できる教員養成・教員研修のカリキュラム・プログラムを開発した。
長期間の身体運動トレーニングに対する消化・吸収系機能の適応過程の解明

食事によって摂取した栄養素は胃や小腸などで消化・吸収され、体内の様々な臓器へと届けられる。したがって、食事による効果は、この消化・吸収系の能力による影響を強く受ける。運動後の疲労回復を促進したり、トレーニング効果を高めたりするためには、適切な食事・栄養補給を行うことが重要となるが、スポーツ選手が行うような長期間の身体運動トレーニングによって消化・吸収系機能がどのような影響をうけるのかはほとんど明らかとなっていない。本研究では、長期間のトレーニングによって消化・吸収系機能がどのように変化するのか検討し、スポーツ選手のためのより適切な食事・栄養補給法の確立を目指す。
COLD-PCRによる遺伝子変異エンリッチ法の確立と肺癌の体液診断への応用

新しく考案されたCOLD-PCRは遺伝子変異を濃縮する方法として有効である。そこで今回、COLD-PCRを用いてK-ras変異の検出系を構築し、臨床材料への応用を試みた。癌細胞株を用いた検出感度の実験をまず行った。NEDATEから抽出したDNAを正常型DNAで1:10から1:200の割合に段階的に希釈し、full COLD-PCRおよびconventional nested PCRで増幅した。conventional nested PCRによる増幅産物は、塩基配列決定法では1:20希釈で、SSCP法では1:50希釈で、変異型を検出できなくなった。しかしながら、full COLD-PCRによる増幅産物は、塩基配列決定法でもSSCP法でも200倍希釈の変異型が明らかに検出できた。他の2種類の変異型もfull COLD-PCRの方が少ない変異型を高感度に検出することができた。よって、COLD-PCRは変異型の濃縮に有用であり、少量の変異型を含む臨床材料を使用する際にも変異型のスクリーニングに有効であることが判明した。また、COLD-PCRとSSCP法の組合せは塩基配列決定法などに比べて高感度であり、簡便であると考えられた。SSCP法には分離することで量的な解析を行えるとともに分離アレルの遺伝型を同定できるという大きな利点を有するが、時間と手間がかかるという欠点があるため、COLD-PCR産物をそのまま高感度融解温度解析(high resolution melting ; HRM)で変異型の検出が可能かどうかを検討した。その結果、通常のnested PCRよりCOLD-PCRで感度が高かったが、SSCP法よりもその優位性は劣っていた。ただ、自動化、多検体処理が可能であるという大きな利点を有した。これから、このHRMとSSCP法を比較しながら、臨床検体での検討を行う。
チクングニア熱等を媒介するヒトスジシマカの生息数に基づく感染症リスクマップの作成

2014年-2016年(7-9月)にかけて内陸性気候地域の蚊相の分布の特徴を明らかにするために、ヒトスジシマカ(以下A.a.)に注目し、長野・山梨両県で成虫、幼虫調査を行った。成虫は全88地点(標高1681534m)にCDCトラップを設置し、捕獲調査を行った。幼虫は、全68地点、171ポイントから試料を得た。これらの結果から、A.a.が生息・定着している地域(成虫と幼虫が確認:区分1)、A.a.が生息している地域(成虫のみが確認:区分2)、A.a.が生息していない地域(成虫も幼虫も捕獲されない:区分3)の3区分に分類し、感染危険地域を絞り込んだ。垂直分布限界は標高800mであると思われた。(1)長野県内におけるヒトスジシマカの発生動態を把握するために、上田市(標高460m)において、5月30日から10月20日にかけて原則毎日、ネット法で吸血飛来する成虫を捕獲し、計測した。成虫の吸血飛来数は、6月9日(1個体/6分間)から10月5日(4個体/6分間)まで認められ、年最高捕獲数は8月11日に16個体/6分間と記録された。調査期間中に合計296個体の成虫を捕獲することができた。日平均最低気温が15°C以上になると、成虫が吸血飛来に訪れ、10°C以下になると成虫の吸血活動は終束する傾向が認められた。(2)ヒトスジシマカの1日の吸血飛来時間帯を明らかにするために9月14日午前7:00から9月16日午前7:00までの48時間、3時間おきに日周調査を行った。どの時間帯でも吸血飛来にくる個体が確認され、1日目は午前中、2日目は日の入りの時期にピークがあるように見え、はっきりとした吸血飛来時間があるとは認められなかった。(3)長野県内におけるヒトスジシマカの生息分布を明らかにするために、大町、白馬地域、飯山市を中心とした4市町村(飯山市、信濃町、木島平村、野沢温泉村)の調査を行った。冬期積雪の多い長野県北部地域においてもヒトスジシマカの定着が確認された。しかし、白馬、大町地域においては、幼虫が捕獲されなかったことから、定着しているかどうかについては不明であった。松本市の上高地、東御市、上田市真田地区、軽井沢町など、高標高地域においては、成虫、幼虫の生息が認められず、長野県内では、ヒトスジシマカの分布の限界高度が存在する可能性が示唆された。(1)長野県内におけるヒトスジシマカの発生動態を把握するために、上田市(標高460m)において、6月1日から10月17日にかけて原則毎日、ネット法で吸血飛来する成虫を捕獲し、計測した。成虫の吸血飛来数は、6月10日(1個体/6分間)から10月3日(1個体/6分間)まで認められ、年最高捕獲数は7月10日、8月21日、9月4日にそれぞれ16個体/6分間ずつ記録された。調査期間中に合計332個体の成虫を捕獲することができた。昨年同様、日平均最低気温が15°C以上になると、成虫が吸血飛来に訪れ、10°C以下になると成虫の吸血活動は終束する傾向が認められた。(2)ヒトスジシマカの1日の吸血飛来時間帯を明らかにするために7月24日、8月27日、9月20日の各日午前7:00から2日後の午前7:00までの48時間、3時間おきに日周調査を行った。どの時間帯でも吸血飛来にくる個体が確認され、日没前にどの月も吸血飛来に来る個体数の割合が多い傾向が認められた。しかし、再現性に問題があるように見られ、再度の調査の必要性を感じている。(3)これまでに、長野県内におけるヒトスジシマカの生息分布のパターンを明らかにすることができたので、同じ内陸性気候帯の山梨県内において、ヒトスジシマカの分布パターンを検討した。8月30日から9月1日までの間に、成虫を対象に県内16地点、幼虫を対象に14地点を選び、調査を行った。幼虫調査では14地点43か所から410個体の蚊幼虫を捕獲し、10地点から183個体のヒトスジシマカを確認した。成虫調査では、16地点から430個体の蚊成虫が捕獲され、ヒトスジシマカは9地点から62個体捕獲された。調査地点の標高が800m以上の所からは、ヒトスジシマカの幼虫も成虫も捕獲できず、長野県内で得られた知見と同様の傾向が認められた。H26年同様、長野県上田市内定点におけるヒトスジシマカの発生動態を把握すること、ヒトスジシマカ成虫の1日の吸血時間帯を明らかにすることが大きな目標であった。1日の飛来時間帯については、発生期間中、毎月、調査を行ったが、はっきりとした傾向が認められず、H28年度にデータを積み重ねることとした。長野県内で得られた知見を同じ内陸性気候である山梨県内で検証したところ、同様な傾向が認められたが、調査地点の選定に誤りがあり、再度、H28年度に詳細な調査を行う予定にしている。概ね計画通り進んでおり、いずれの調査項目においても、詰めの時期に来ている。

H26年、東京都代々木公園ほかで、デング熱の国内感染が起こったこと、H27年-H28年にかけて、ジカ熱が世界的に問題となっていることもあり、本研究で対象としているヒトスジシマカに注目が集まっている。本研究の成果を社会に発信すべく、これまでの予備調査の結果も踏まえ、各種学会で積極的に発信できたことは特記すべきことでもある。また、県内の新聞紙にも複数回取り上げられ、社会への還元が積極的にできたと自負している。デング熱、ジカ熱などの感染症媒介蚊であるヒトスジシマカの生態調査をこれまでに引き続き行った。また、感染症媒介蚊による感染症ハザードマップの作成を行った。(1)年による気候変動があることから、長野県内におけるヒトスジシマカの発生動態をより正確に把握するために、上田市(標高460m)定点において、継続して原則毎日、6月から10月にかけて、ネット法で吸血飛来するヒトスジシマカ成虫を捕獲し、飛来密度を計測した。成虫の吸血飛来数のパターンに再現性があるのかを検討した。特に気温との関連性は重要であると思われた。(2)ヒトスジシマカの1日の吸血飛来時間帯を明らかにするために、7月、8月、9月に、午前7:00から翌々日の午前7:00までの48時間、3時間おきに成虫の吸血飛来調査を行った。季節により、吸血飛来時間が異なっており、夕方と朝方に、相対的に吸血飛来密度が高い傾向を示した。(3)山梨県内におけるヒトスジシマカの生息分布を明らかにするために、未調査都市の調査を実施した。特に県北部の標高の高い小淵沢地区を重点的に行った。成虫/幼虫の両方が捕獲されるところ、成虫のみが捕獲されるところ、両者が捕獲されないところの3パターンがあり、平均気温との関連性が示唆され、標高と分布との関連性が明らかとなった。(4)長野県内のヒトスジシマカの分布パターンが、内陸性気候地域の分布パターンに一般化できるのか、山梨県など、近県の分布調査結果をまとめ、検討した。(5)感染症媒介蚊のハザードマップ作成を行い、学会にて発表を行った。(6)学会発表は、積極的に実施でき、論文執筆も今後、積極的に行っていく予定である。2014年-2016年(7-9月)にかけて内陸性気候地域の蚊相の分布の特徴を明らかにするために、ヒトスジシマカ(以下A.a.)に注目し、長野・山梨両県で成虫、幼虫調査を行った。成虫は全88地点(標高1681534m)にCDCトラップを設置し、捕獲調査を行った。幼虫は、全68地点、171ポイントから試料を得た。これらの結果から、A.a.が生息・定着している地域(成虫と幼虫が確認:区分1)、A.a.が生息している地域(成虫のみが確認:区分2)、A.a.が生息していない地域(成虫も幼虫も捕獲されない:区分3)の3区分に分類し、感染危険地域を絞り込んだ。垂直分布限界は標高800mであると思われた。本年度の当初の予定では、(1)長野県上田市内の定点(標高460m)におけるヒトスジシマカの発生動態を把握すること、(2)長野県内におけるヒトスジシマカ成虫/幼虫の生息分布を明らかにすることが、大きな目標であった。現状では、それに加えて、(3)ヒトスジシマカ成虫の1日の吸血時間帯の調査も実施することができ、大きな成果を上げることができた。東京都代々木公園で、デング熱の国内感染が起こったこともあり、本研究の成果を社会に発信すべく、これまでの予備調査の結果も踏まえ、各種学会で積極的に発信できたことは特記すべきことでもある。また、県内の新聞紙上にも複数回取り上げられ、「社会への還元も積極的に行えた」と自負している。(1)年による気候変動があることから、長野県内におけるヒトスジシマカの発生動態をより正確に把握するために、上田市(標高460m)定点において、継続して原則毎日、6月から10月にかけて、ネット法で吸血飛来する成虫を捕獲し、計測する。成虫の吸血飛来数のパターンに再現性があるのかを検討する。特に気温との関連性は重要であると思われる。
リーマン部分多様体の幾何学的研究

同じ手法の延長線上の結果として、小林亮一(名古屋大学)との共同研究で、S.T.Yauの予想の次の一般化された部分的解答を得た。Mを非負Ricci曲率のd次元完備非コンパクト多様体とする。このとき、もしMの体積増加がd次より大か、あるいはその直径増加が0次であるならば、そのd-1次元ホモロジー群は{0}であるか、あるいはMはd-1次元コンパクト多様体上の平坦実線束に等長である(執筆中)。また、小林氏とは正則断面曲率が1【greater than or equal】K_<hol>>0とピンチされたコンパクトケーラー多様体の内、CP^nの体積に関する剛性を示した(執筆中)研究分担者の西原は、局所凸空間E上のリーマン領域(Ω,ψ)から複素リー群Gへの正則写像について研究し、Eが有界近似性をもつフレッシュ空間(特別な場合としてC^nを含む)の場合にΩが擬凸であることと、G値正則写像の存在領域であることの同値性を示した。
加齢による摂食嚥下セルセンシング不全の機序解明とそれの再生医療への応用

高齢者嚥下反射障害は温度感受性TRPチャネルの機能不全であることを見出した。そこで認容性よく温度感受性TRPチャネル応答を再生すべく、辛みを惹起すしないカプサイシン類縁物質カプシエイト、また香料赤ワインポリフェノール混合により、TRPV1応答再生法を見出した。さらにこれら温度感受性TRPチャネル再生法の組み合わせにより、嚥下障害患者の食事開始プロトコールを開発した。これにより誤嚥性肺炎患者が食事を再開した時の再誤嚥の頻度が3分の1になった。嚥下に関係する高次脳機能部位である島皮質を効果的に活性化する方法が嚥下に関係する高次脳機能の活性化する方法であり、究極の摂食嚥下改善法と考えられる。温度感覚のうち温度識別感覚の求心路の最終地点の一つは大脳島皮質である。したがって温度識別感覚刺を効率的に刺激することが効率的に高齢者の低下した嚥下機能を改善するものと考えられた。温度識別感覚の末梢受容体は温度感覚受容体であり、そのアゴニストは食品の香辛料成分であるカプサイシンやメンソールである。これらのアゴニストを利用して嚥下に関係する高次脳機能の活性化を図るという方法が考えられる。ところがこれらの香辛料には当然のことながら好き嫌いがあり、嫌いな人にこれらの香辛料を使用することはたとえ有効な方法であってもコンプライアンスの面で問題がある。そこでほとんど無味無臭の温度感受性受容体(TRPV1)アゴニストである辛みのない唐辛子CH19-甘の辛味成分であるカプシエイトを抽出し、これを用いて、嚥下反射の遅延した嚥下障害高齢者に対して、カプシエイトが嚥下反射を改善するか検討した。辛みのない唐辛子であるCH-19甘の株を栽培し、カプシノイドであるカプシエイトを有機溶媒にて抽出する。嚥下障害のある患者12人(男性7人、女性5人)年齢63-93歳(平均年齢79.8歳)。嚥下反射は、経鼻細管を用いた簡易嚥下誘発試験で、嚥下潜時をカプシエイト溶液を用いて評価した。するとカプシエイトの用量依存性に嚥下反射を改善することが分かった。これらの濃度のカプシエイトにおいては高齢者に辛みを惹起することはなかった。したがってカプサイシン類縁体であるカプシエイトがコンプライアンスのよいTRPV1を介する島皮質刺激嚥下改善剤であることが示唆された。前年度までの研究で高齢者の摂食嚥下障害の原因は嚥下反射に関与するTRPV1受容体のセルセンシング不全であることがわかった。したがってTRPV1の機能を回復させることが、高齢者の嚥下障害の改善に重要である。しかしながらTRPV1の機能を高齢者のコンプライアンスよく回復させる方法はこれまでなかった。今回我々はTRPV1受容体の応答を増強する物質を探索的に調査した。探索の結果、赤ワインポリフェノールにTRPV1受容体の応答を増強させる作用があることを見出した。そこでその赤ワインポリフェノールのTRPV1マウス後根神経節にパッチクランプ法を適用し、その機序は赤ワインポリフェノールのカプサイシン惹起TRPV1応答の増強作用にあることを解明した。マウスの後根神経節のニューロンをを急性単離し、パッチクランプ法ホールセルモードで膜電位固定(VH=-60mV)でのカプサイシン、赤ワインポリフェノールの惹起電流を観察した。マウス後根神経節の単離ニューロンにパッチクランプ法ホールセルモードを適応し、膜電位を-60mVでクランプした状態でカプサイシンを投与したところ下向き電流が惹起された。それにカプサイシンと赤ワインポリフェノールの混合液を投与したところ、カプサイシンによって惹起された下向き電流が劇的に増強された。それらに対して、これらの反応が本当にTRPV1を介しているかどうかTRPV1選択的アゴニストであるカプサゼピンを同時投与して調べたところ全ての電流が抑制された。このことより、赤ワインポリフェノールは嚥下障害高齢者のTRPV1機能不全を回復する可能性が示唆された。前年度までの一連の研究より高齢者の嚥下反射の遅延を回復させるには、末梢神経機構だけでなく嚥下反射を制御している上位中枢である島皮質関連脳領域を賦活させること肝要であることを見出した。そこで島皮質関連脳領域を刺激する方法を探索的にスクリーニングする方法として、気道防御反射衝動を測定する方法を開発。その方法の検証として、加齢と誤嚥性肺炎患者での気道防御反射衝動の変化調べた。すると衝動系は確かに加齢のみによっても多少低下するが、誤嚥性肺炎患者になるとさらに大きな低下をもたらすことが判明した。したがって、気道防御衝動系の検査は嚥下反射に関与する島皮質関連脳領域刺激法を探索的に調べるよい方法であることが示唆された。

この方法を用いた知見よりさまざまなセルセンシング刺激法を見出し、誤嚥性肺炎患者の絶食から食事再開をする時の摂食嚥下機能回復プロトコールを作成した。重症の誤嚥肺炎患者が入院したときは当然のごとく絶食であるが、抗生剤治療しある程度回復し経口摂取を開始するときに安易に食事を開始すると再誤嚥し、再び誤嚥性肺炎となってしまう。そこで絶食時から嗅覚刺激、温度覚刺激、口腔痛覚刺激を集約することにより嚥下反射関連大脳皮質領域を効率よく賦活化させる経口摂取開始プロトコールを開発したのである。東北大学病院老年科に入院した患者においてこの経口摂取開始プロトコールを使用した場合とそうでない場合を比較すると、本プロトコール使用により経口摂取開始一か月間の再誤嚥性肺炎の頻度が約3分の1に抑えられることが分かった。したがってアロマチップを用いた嗅覚刺激、TRPV1やTRPM8アゴニスト含有食品による温度覚刺激、口腔ブラッシングによる口腔痛覚刺激を組み合わせた包括的嚥下リハビリテーションは高齢者の摂食嚥下障害を改善し、誤嚥を予防し経口摂取を可能にする高齢者人間性再生方策となる可能性が高いものと考えられる。
プリオン蛋白を模した合成ペプチドの抗原性についての検討

プリオンはヒトなどに海綿状脳症を起こす病原体である。その本体については、通常の病原体と違って特異的核酸を持たず、主に蛋白のみから成るというプリオン説が有力視されている。すなわち、宿主ゲノムにコードされているプリオン蛋白(PrP^C)の高次構造が変化したもの(PrP^<Sc>)がPrP^CをPrP^<Sc>に変換する能力を持つという機構によって、その感染性が説明されている。高次構造が異なるために、PrP^<Sc>は感染宿主脳よりアミロイドの形で単離されるが、正常なPrP^Cはアミロイドを形成しない。興味深いことに、PrP^Cのアミノ酸配列を基に人工合成したあるぺプチドはそれ自身でアミロイド構造を形成することが知られている。そこで、本研究に於いては、このアミロイド原性を有するペプチドに何らかの生物学的活性がないかどうか、就中、その抗原性の有無について検討した。方法。マウスプリオン蛋白のアミノ酸配列を基に人工合成したペプチドをマウスに腹腔内投与してのち血清を採取した。また、プリオン感染マウスの血清を採取した。血清サンプルは、合成ペプチドを抗原としたELISA法によって抗体価の測定を行った。結果。1)合成ペプチドに毒性は認められなかった(6カ月)。2)合成ペプチドに抗原性は認められなかった。3)プリオン感染マウスの血清について、先の合成ペプチドに対する抗体濃度の上昇は認められなかった。考察。アミロイドーシスにおいては一般的に免疫応答がない。アミロイド蛋白は宿主ゲノム上にコードされており、一次構造的には自己抗原である。しかし、高次構造の点では、宿主体内に存在しない非自己であり、この構造に関して抗原性が認められてもよい筈である。ところが、今回、アミロイド原性の合成ペプチドについて検討したところ、やはり、抗原性は認められなかった。アミロイドは生体の免疫応答のどこかの段階で異物認識網から免れているように思われる。方法。結果。考察。
免疫修飾作用を持つ分子標的薬と免疫療法の併用療法における新機軸の開発

ダサチニブ治療を受けている慢性骨髄性白血病およびフィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病の患者の末梢血でメモリー様NK細胞が増加していることを見出し,リンパ球増加の要因としてサイトメガロウイルス再活性化が重要な役割を果たしていることを明らかにした。さらにこれらの患者ではPD-1陽性のCD56陰性NK細胞サブセットが増加しており,これらの細胞の細胞傷害活性が抗PD-1抗体ニボルマブにより増強することを示した。マウス大腸癌細胞株CT26を用いた腫瘍モデルにおいては,ダサチニブと抗PD-L1抗体の併用による相乗効果は認められなかった。分子標的薬と免疫療法は抗腫瘍効果を発揮するメカニズムが異なることから,併用による相乗効果が期待できる。特に,フィラデルフィア染色体陽性白血病に対する治療薬である分子標的薬ダサチニブは,BCR-ABLキナーゼ阻害作用に加え,免疫修飾作用というユニークな効果を併せ持っており,分子標的薬と免疫療法の併用療法を開発する上で非常に興味深い薬剤である。我々はダサチニブ内服中の慢性骨髄性白血病患者において,末梢血のT細胞,およびNK細胞に抑制性共刺激分子PD-1が高発現していることを見出した。そのことから,本研究課題では,ダサチニブによる分子標的療法と,PD-1/PD-L1シグナル阻害抗体による免疫チェックポイント阻害療法を組み合わせることによって期待される抗腫瘍効果の増強を検討し,「免疫修飾作用を持つ分子標的薬」と「免疫療法」の併用療法についての新機軸を打ち立てることを目的として研究を行っている。平成26年度は,ダサチニブ内服患者の臨床検体を用いて,末梢血白血球分画におけるPD-1発現の解析,およびK562細胞株を用いたNK細胞の細胞障害活性のアッセイを行った。免疫チェックポイント阻害剤は,既存治療が無効のがん患者にも有効性を示し,免疫療法ががん治療の新たな領域を切り拓く力を持っていることを明確にした。しかし,免疫チェックポイント阻害剤の奏効率は,多くの癌種で約20%前後に留まっており,決して高いとは言えない。また,一部の患者で免疫反応の過剰活性化による重篤な副作用を来たすこともあることが問題点である。一方,フィラデルフィア染色体陽性白血病の治療薬として開発されたチロシンキナーゼ阻害薬ダサチニブは,治療標的であるABLキナーゼのみならず,広範なキナーゼを阻害するオフターゲット効果を持ち,免疫細胞における重要なシグナル伝達を担うSrcファミリーキナーゼなどのキナーゼを阻害し免疫修飾作用を持つ。実際,ダサチニブ治療を受けている患者の一部でCD8陽性T細胞,NK細胞などのリンパ球が増加し,リンパ球増加のある患者では治療効果が高いことが示されている。つまり,ダサチニブに抗腫瘍免疫を高める働きがある可能性が示唆されている。我々はこのようなダサチニブの免疫修飾作用が免疫チェックポイント阻害剤の治療効果を増強することができるのではないかと考え,研究を行っている。本年度は,ダサチニブ治療を受けている患者の免疫活性化の作用機序を明らかにするため,ダサチニブ治療を受けている慢性骨髄性白血病患者のリンパ球,特にNK細胞の表面マーカーを詳細に解析した。解析は終了し,現在論文作成中である。また,免疫チェックポイント阻害剤とダサチニブの併用療法をマウスの腫瘍モデルで検証する実験を計画しており,その予備実験としてマウスの複数の腫瘍細胞株のチロシンキナーゼ阻害薬に対する感受性をin vitroで見る実験を行った。マウスのin vivo腫瘍モデルの実験を本年度中に開始する予定であったが,マウス腫瘍細胞株のin vitroにおけるチロシンキナーゼ阻害薬に対する感受性を検証する実験系の確立に時間がかかったため,マウスのin vivoモデルの実験を今年度中に始めることができなかった。免疫チェックポイント阻害剤はがん免疫療法のブレークスルーをもたらし,外科療法,化学療法,放射線療法につぐ,新たながん治療の柱として免疫療法の地位を確立させた。免疫チェックポイント阻害剤は,既存治療が無効のがん患者にも有効性を示し,がん免疫療法ががん治療の新たな領域を切り拓く力を持っていることを明確にした。免疫チェックポイント阻害剤とダサチニブの併用療法をマウスの腫瘍モデルで検証する実験を計画しており,予備実験としてマウスの複数の腫瘍細胞株のチロシンキナーゼ阻害薬に対する感受性をin vitroで見る実験を行った。また,免疫反応に関与する分子の発現がIFN-γ刺激によって増強される反応がチロシンキナーゼ阻害薬によってどのような影響を受けるかを検証している。

In vitroにおけるマウス腫瘍細胞株に対するチロシンキナーゼ阻害薬による影響を検証する実験に時間がかかった。また,研究を遂行している大学院生がマウスの実験手技の習得に時間がかかり,in vivoモデルでの検証の実験の進行が遅れている。しかし,すでにin vivoモデルにおける検証は開始しており,今後は研究を進めることができる。チロシンキナーゼ阻害薬ダサチニブの治療を受けているフィラデルフィア染色体陽性白血病患者の一部では,末梢血中のT細胞やNK細胞が増加することが報告されている。我々はこれらの患者のNK細胞を詳細に解析し,ダサチニブ治療中に起こるNK細胞の表面形質の多様な変化が,サイトメガロウイルスの再活性化によって起こる変化として統一的に解釈できることを主成分分析を用いて明らかにした。この結果はダサチニブ治療によるNK細胞増加とサイトメガロウイルスの再活性化に密接な関係があることを示している(Ishiyama K, Kitawaki T, et al. Leukemia. 2017;31(1):203-212.)。上記の研究においてダサチニブ治療中の一部の患者でNK細胞にPD-1が高発現していることを見出したことから追加の解析を行った。その結果,PD-1の発現上昇がCD56陰性NK細胞サブセットの増加と強く相関しており,CD56陰性NK細胞サブセットでPD-1発現がより高いこと,また,PD-1陽性NK細胞ではPD-1シグナルにより細胞傷害活性が抑制されているが,免疫チェックポイント阻害剤ニボルマブにより抑制が部分的に解除されることを見出した(投稿準備中)。これらの結果はダサチニブ治療中,NK細胞にPD-1発現が誘導されることによってNK細胞の機能が抑制されるが,免疫チェックポイント阻害剤を併用することによってNK細胞の機能を回復させ,NK細胞による抗腫瘍免疫を増強させられる可能性があること示している。この可能性をin vivoの系で検証するため,マウスの腫瘍モデルにおいてダサチニブと抗PD-L1抗体の併用効果を見る実験を行っている。各薬剤の単独治療群と比較して,併用療法群では腫瘍の増殖スピードが遅くなる傾向のある結果を得ている。この系に関しては,今後さらに検討を進める予定である。ダサチニブ治療を受けている慢性骨髄性白血病およびフィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病の患者の末梢血でメモリー様NK細胞が増加していることを見出し,リンパ球増加の要因としてサイトメガロウイルス再活性化が重要な役割を果たしていることを明らかにした。さらにこれらの患者ではPD-1陽性のCD56陰性NK細胞サブセットが増加しており,これらの細胞の細胞傷害活性が抗PD-1抗体ニボルマブにより増強することを示した。マウス大腸癌細胞株CT26を用いた腫瘍モデルにおいては,ダサチニブと抗PD-L1抗体の併用による相乗効果は認められなかった。発症頻度の高くない疾患であることもあり,症例の臨床検体の集積が遅れている。本プロジェクトを担当する大学院生の人員を2人に増やし,計画進行の促進を図る。