hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
魚類消化酵素の食品製造への利用に関する研究

魚の加工処理残滓の有効利用は、未利用資源の有効利用の点、並びに地域環境の保全の観点から非常に重要である。そこで本研究では残滓を有効に利用するための基礎的知見を得ることを目的として、残滓中の内臓に含まれるプロテアーゼに焦点を当て、その性質を明らかにするとともに、自己消化により残滓中に多く含まれるタンパク質をエキス成分として回収する方法について検討した。1.内臓消化酵素の性質の検討:(1)安定性:粗酵素液を氷蔵した場合,カゼイン分解活性は少なくとも10日間安定であり,また10°Cで24時間加熱したときの残存活性は61.0%と,低温域では比較的安定であった。(2)至適温度:低温域では自己消化活性,カゼイン分解活性ともに低く,10°Cでそれぞれ最大活性の20.5%,2.3%であった。高温域では両者とも強い活性を示し,55°Cで最大となった。(3)至適pH:自己消化活性はpH9.0,粗酵素液はpH10.6で最大活性を示しアルカリ域で強い活性を示した。阻害剤の影響:カゼイン分解活性は,PMSFで47.4%,STIで70.1%阻害され,E-64でも24.5%阻害された。このことから内臓中にはセリンタイプのプロテアーゼばかりではなく,一般的に消化酵素には存在しないとされるシステインタイプのプロテアーゼの存在が示唆された。2.消化条件の検討:消化前後のエキスを比較すると,旨味・不快味共に消化後の方が強く感じられた。また頭部の代わりに可食部である背部普通肉を用いたところ,不快味はあまり感じられなかった。このことから,自己消化エキス中の不快味は,消化によって増加する各種窒素成分や頭部に起因しているものと考えられた。次に全頭部(A),鰓除去頭部(B),鰓・血液除去頭部(C)の3種の頭部からエキスを調製したところ,食味試験において,(A)<(C)<(B)の順に不快味が強く感じられ,鰓・血液の除去によっては不快味を軽減できなかった。
金属中の超多量空孔-水素クラスターの量子状態と水素同位体共存効果

金属中の超多量空孔-水素クラスターの生成機構については、その生成エネルギーが小さい場合は高水素圧下で容易に安定構造に到達するのに対して、生成エネルギーが大きい場合はある水素濃度以上でエントロピー効果が平衡濃度の決定要因となるという実験結果が得られて、その理論的根拠が明らかにされた。これによって水素誘起空孔の重要課題の一つが解決されたことになる。また、超多量空孔生成がもたらす金属原子拡散の促進効果については、Nb-H系での広い温度領域にわたる実験からその全容が明らかにされた。空孔にトラップされた水素の量子状態に関しては、Nb-H合金の空孔内でcage motionをしているプロトンのNMR信号が低温で観測され、その温度依存性からトンネル過程によるものと結論された。当初の計画にあった米国での中性子散乱実験は装置改造のために予定が遅れ、漸く準備が整ったところである。V中H、Dの応力誘起状態変化をチャンネリングと断熱カロリメトリーを用いて調べた結果、T→4Tの状態変化が起こる応力値はHよりDの方が高くなっていた。これはH(D)水素原子間の相互作用を解明する上で重要である。極めて小さな応力で惹き起される水素の状態変化の機構は依然として謎である。また、中性子コンプトン散乱の異常をもたらす原因として提案されていた固体中での水素原子間の量子絡み合いについては、従来の解釈の一部に基本的な誤りのあることが明らかにされた。このような超短時間(10^<-15>s)での原子核や電子の量子状態をいかに記述すべきかは今後の重要な問題である。本研究は、所期の目標であった空孔-水素クラスターの量子状態の解明を十分に果たせたとは言えないが、その理解に近づくための一歩を着実に進めたものと言える。1.空孔-水素クラスターの生成とcharacterization:Cr,Mn,Ni中での空孔-水素クラスターの生成過程を高温・高水素圧下でのX線回折によって調べ,空孔-水素の結合エネルギーを回収試料からの水素の熱放出スペクトル測定によって求めた。また電析金属中の残留水素と高温・高水素圧で導入された水素の熱放出スペクトルを比較した結果、電析金属中にも多量の空孔-水素クラスターが存在することが結論された。Niについては大阪大学・白井教授に陽電子消滅測定を依頼し、空孔の多量生成の確証を得た。2.同位体共存効果:Ta-H-D試料の作成法を確立して電気抵抗の精密測定を行ったが、顕著な効果は見られなかった。しかしながらV-H-D系について行った予備実験の結果ではH-D共存試料でかなり大きな電気抵抗増加が見られたので、今後はこの系を対象とする予定である。3.理論:面心立方格子中で互いに相互作用する水素と空孔の存在状態をモンテカルロシミュレーションによって調べた結果、相互作用の大きさによっては空孔と水素原子の生成・配列に相転移が起こる可能性のあることが知られた。1.空孔-水素クラスターについての実験Cr-H, Mn-H, Fe-H, Mc-H合金について高水素圧下での超多量空孔-水素クラスター生成を新たに観測した。また電析金属中の残存水素は空孔にトラップされた状態にあることがCu, Niについての熱放出スペクトル測定から結論された。Ni中の空孔-水素クラスターについては、陽電子寿命測定による電子状態の研究と、低温比熱測定によるH, Dの量子準位の研究が行われた。現在、量子準位をさらに詳しく調べるために海外共同研究者Dr.Udovicに空孔-水素クラスターを含むCu, Ni試料を送って結果を待っているところである。

2.同位体共存効果についての実験VH_XD_yについて電気抵抗の精密測定を行ったが同位体共存効果は見られなかった。チャネリング実験によって歪誘起状態変化を観測したところ、同位体による微妙な違いが見られた。この実験はさらに継続して行う予定である。Ni中の空孔にH, Dが共存してトラップされている状態の低温比熱には明らかな異常が見られていて、H, D間の相互作用を解明する鍵を握るものとして注目している。1.空孔-水素クラスターの量子状態を調べるための試料作成条件を確定するために、水素濃度と生成空孔濃度の関係をNb-H, Fe-H, Co-H, Ni-H, Pd-Hに着いて詳細に調べ、生成空孔濃度は水素圧や温度によらず水素濃度の1乗に比例するという結果を得た。その物理的意味については目下simulationの結果と比較検討中である。2.Crについて電析と高水素圧処理で生ずる構造の相似性を調べ、電析過程における水素の役割についての一般的な見通しを得ることができた。電析Ni試料中の空孔-水素クラスターの量子状態を調べるための中性子散乱実験も引き続き行っている。3.V中にH, Dが共存する単結晶試料についてDの存在状態に及ぼす内部応力の効果を調べるため、He-3ビームを用いたチャンネリング実験を行った結果、V中Hについて見られたのと同様な状態変化が観測された。引き続きV中Dについての実験を行う予定である。金属中の超多量空孔-水素クラスターの生成機構については、その生成エネルギーが小さい場合は高水素圧下で容易に安定構造に到達するのに対して、生成エネルギーが大きい場合はある水素濃度以上でエントロピー効果が平衡濃度の決定要因となるという実験結果が得られて、その理論的根拠が明らかにされた。これによって水素誘起空孔の重要課題の一つが解決されたことになる。また、超多量空孔生成がもたらす金属原子拡散の促進効果については、Nb-H系での広い温度領域にわたる実験からその全容が明らかにされた。空孔にトラップされた水素の量子状態に関しては、Nb-H合金の空孔内でcage motionをしているプロトンのNMR信号が低温で観測され、その温度依存性からトンネル過程によるものと結論された。当初の計画にあった米国での中性子散乱実験は装置改造のために予定が遅れ、漸く準備が整ったところである。V中H、Dの応力誘起状態変化をチャンネリングと断熱カロリメトリーを用いて調べた結果、T→4Tの状態変化が起こる応力値はHよりDの方が高くなっていた。これはH(D)水素原子間の相互作用を解明する上で重要である。極めて小さな応力で惹き起される水素の状態変化の機構は依然として謎である。また、中性子コンプトン散乱の異常をもたらす原因として提案されていた固体中での水素原子間の量子絡み合いについては、従来の解釈の一部に基本的な誤りのあることが明らかにされた。このような超短時間(10^<-15>s)での原子核や電子の量子状態をいかに記述すべきかは今後の重要な問題である。本研究は、所期の目標であった空孔-水素クラスターの量子状態の解明を十分に果たせたとは言えないが、その理解に近づくための一歩を着実に進めたものと言える。
地殻変動モニタと地震情報を連成させた列島確率モデルの構築

研究開始当初の背景:列島地殻応力の3次元分布の推定は地震災害の予測に必須である.しかし,地下10キロ以下の地殻で応力を計測することは不可能である.このため,限られた情報を基に,応力分布の不確からしさを確率的に扱った確率モデルを構築する.各種計測データと同化することで,許容できる地殻応力分布を絞り込むことが考えられる.研究の目的:日本列島の地殻応力の3次元分布に対する確率モデルを構築する.GPSを使った地殻変動と地震ネットワークを使った地震活動のデータを再現することで,確率モデルの絞り込みを行い,再現のみならず相応の信頼度の予測ができるモデルを構築する.構築手法に合わせて,大規模数値計算を前提とした,確率モデルの解析方法を開発する.研究の方法:プレート等の形状等を合わせた物理モデルを構築する.これを基に,不確からしさを確率的に扱った3次元応力分布の確率モデルを合理的に構築する手法を考案する.大規模数値計算を使うモンテカルロシミュレーションによって,確率モデルを絞り込むが,絞り込まれた確率モデルをプロトタイプとして構築する.研究成果:並列計算用の大規模な列島の物理モデルを作成し,この物理モデルを拡張することで,応力分布を取り込んだ確率モデル構築手法を考案した.このモデルを解析する新しい離散化手法を考案した.計測データを使って確率モデルを解き,構築された確率モデルの有効性を検証した.研究開始当初の背景:列島地殻応力の3次元分布の推定は地震災害の予測に必須である.しかし,地下10キロ以下の地殻で応力を計測することは不可能である.このため,限られた情報を基に,応力分布の不確からしさを確率的に扱った確率モデルを構築する.各種計測データと同化することで,許容できる地殻応力分布を絞り込むことが考えられる.研究の目的:日本列島の地殻応力の3次元分布に対する確率モデルを構築する.GPSを使った地殻変動と地震ネットワークを使った地震活動のデータを再現することで,確率モデルの絞り込みを行い,再現のみならず相応の信頼度の予測ができるモデルを構築する.構築手法に合わせて,大規模数値計算を前提とした,確率モデルの解析方法を開発する.研究の方法:プレート等の形状等を合わせた物理モデルを構築する.これを基に,不確からしさを確率的に扱った3次元応力分布の確率モデルを合理的に構築する手法を考案する.大規模数値計算を使うモンテカルロシミュレーションによって,確率モデルを絞り込むが,絞り込まれた確率モデルをプロトタイプとして構築する.研究成果:並列計算用の大規模な列島の物理モデルを作成し,この物理モデルを拡張することで,応力分布を取り込んだ確率モデル構築手法を考案した.このモデルを解析する新しい離散化手法を考案した.計測データを使って確率モデルを解き,構築された確率モデルの有効性を検証した.GPSデータと地震観測データを利用し,3次元地殻状態を推定する解析手法の基礎を検討した.検討は以下の方法で行われた.簡略化されたものではあるが,2次元半無限体を地殻モデルとして構築し,境界条件として与えられた変位に伴って内部の断層が破壊する様子を計算し,模擬的に地表面での変位データと地震波データを発生させる.このデータを利用して,モデル内の断層の位置と破壊の様子を再現するとともに,モデル内部での応力の分布の推定を試みる.モデル内で断層が破壊する様子を計算するためには,粒子離散化という新しい離散化公式を用いた有限要素法を適用している.粒子離散化は,互いに重なり合わない特性関数の和によって関数を表現するものであり,離散化された関数は至るところ不連続とな.この離散化関数は,変位の不連続性を扱う破壊現象の数値解析には適していると考えられる.二次元問題ではあるが,粒子離散化手法を組み込んだ破壊解析用の有限要素法を開発している.模擬的に地表面での変位データと地震波データを使って,断層の位置と破壊を再現することは難しい.簡略化された二次元モデルでありながら,モデル内の断層の位置を同定するにも,高い精度と高い空間分解能が要求される.このようなデータがない場合,計測データの誤差やデータ計測点が少ないことに対応して,同定される断層の位置には不確定性が伴うことになる.さらに破壊過程の様子を再現するためには,断層面のずれ変位の時系列と同時に,断層面の形状(長さと角度)も必要である.位置に不確定性が伴う場合,形状と破壊過程を正確に推定することはきわめて難しい.形状や破壊過程のパラメータにも,位置の不確定性に併せた不確定性が加わることになるからである.データの質や量の限界に起因する断層の位置や形状と破壊過程の不確定性に対し,確率理論を用いた厳密な数理的表現と解析手法を考案中である.本年度は,前年度に考案・検証された二次元確率モデルの構築手法を三次元確率モデルの構築に拡張しつつ,実際の地殻変動と地震情報のデータを用いて列島の確率モデルを構築することを目的とした.地殻構造に関する他のデータも利用できる中国地方を対象として確率モデルの構築を試みた.地殻変動や地震情報のデータに対して,計測ノイズや誤差を考慮してその確からしさを確率的に評価し,分散・相関を含む確率モデル構築のための入力データを作成した.二次元から三次元に確率モデルを拡張することは決して容易ではない.

例えば,初期応力分布に対しても3方向の釣合式が拘束条件となる.この条件を応力分布の期待値や分散に課したり,また,データと整合する分布を決めたりすることには極めて煩雑な手間がかかるが,既知の構造を初期値とし,カルマンフィルタを通して時系列データを利用し,モデルの更新を実行することを試みた.二次元である面で計測された地殻変動のデータと同定の誤差が大きい中小地震や深部の地震のデータを使って,確率モデルとはいえ,三次元のモデルを列島に対して構築することには限界があることは否定できなかった.この限界は,確率モデル構築手法を数理的に洗練しても,実際のデータを使って構築される三次元モデルでは,構造や初期応力分布の分散が極めて大きな値をとることに対応する.すなわち,列島モデルの不確からしさが大きくなるのである.この点を考慮し,別途,大規模なモンテカルロシミュレーションを使って列島モデルの不確からしさを定量的に検討することを開始した.このシミュレーションに必要な計算量は極めて膨大であるが,代替案がない.本年度は,大規模数値計算を使って,列島の3次元確率モデルを構築することを目的とした.計測された地殻変動と地震情報のデータに対し,計測ノイズや誤差を考慮して,列島確率モデルの確からしさを確率的に評価することを試みている.前年度に検討した超大規模モンテカルロシミュレーションを実施し,基礎的な解析データを作成した.これは,想定された列島確率モデルを使って,そのモデルに従う列島モデルをモンテカルロシミュレーションによって生成し,同一の境界条件の下での変形や地震活動をシミュレートし,計測データと比較することで,元の確率モデルの妥当性を定量的に検証するものである.生成された一つのモデルのシミュレーションには,変形の他,破壊を伴う地震活動の3次元解析が必要である.通常の有限要素法に比較して,破壊に至る変形の計算を効率良く計算する手法を整備し,超大規模すうち活動計算効率が相応の時間で完了することを試みている.しかし,モデルの生成や,一モデルのシミュレーションに想定以上に大規模な計算が必要であることが分かった.これは,純静的な変形から(シミュレーションの時間スケールでは一瞬の)動的破壊をシームレスに計算することの計算上の安定性が悪いため,シミュレーションの時間ステップを細かくすしなければならないためである.本年度は平成19年度終了予定の研究を繰り越した年度である.これは,開発された確率モデルと数値解析手法の妥当性を実証するために行った繰越である.平成19年9月に,近畿大学沖中講師が,超高速CCDカメラを使って破壊現象のばらつきと応力分布を計測する実験である.確率モデルと数値解析手法の妥当性を実証するには,この高速光弾性実験との比較が望ましく,この比較を行った.沖中講師の実験は,平行亀裂を入れたエポキシ樹脂性の板材である.亀裂の位置と長さを様々変えて供試体を作成している.光弾性による応力フリンジが計測され,破壊に伴う応力場を調べることができる.供試体に対応した確率モデルを作成し,破壊と応力場を計算し,実験結果と包括的な比較をした.十分な精度とは断言できないところもあるが,定性的には確率モデルの数値計算結果は実験結果を再現していることが確認された.列島に対して構築された確率モデルとその解析手法に対し,間接的にではあるが,その有効性を検証することができたと考えている.
ユダヤ的なものの言語態:フロイト、レヴィナス、デリダ

本研究では、フロイト・レヴィナス・デリダが共有している「ユダヤ的なもの」を彼らのテクストに則して考察し、その議論に内包される「母なるもの」への眼差しが、性的差異の観点からして伝統的な男性優位の考え方にはもはや収容されないということ、またその限りにおいて彼らの言説が従来想定されてきたのとは別のユダヤ性を提示しているということを明らかにした。本研究の目的は、「コダヤ的なものの言語態:フロイト、レヴィナス、デリダ」という主題のもと、タイプの異なる三人のユダヤ人に焦点をあてながら、彼らの思想に秘められたユダヤ性を考察することにある。本年度は、まず第一に、後代のユダヤ人思想家の反応を考慮に入れた上で、フロイトの『モーセと一神教』そのものを読み直し、次いで第二に、以上の考察を踏まえて、フロイトの説に対するレヴィナスとデリダの反応を整理し、彼らの議論を比較検討した。第一点に関しては、論文「留保された未来-フロイトと偉大な男たち」を執筆した。この論文では、フロイトがモーセに比肩しうる「偉大な男」の例として「ゲーテ、レオナルド・ダ・ヴィンチ、ベートーヴェン」という三人の芸術家の名をあげている点に着目し、その意味を考察した。フロイトは音楽という分野にはとくに明るくはなかったはずであるのに、ベートーヴェンという名をあげた理由は一体どこにあるのか、この問いに答えるべく試みつつ、そもそもフロイトにとって「モーセという男」がいかなる存在であるのかを検討した。結論としては、フロイトの思考にはロマン・ロランという友人から示唆を受けた痕跡があり、これが彼をして「母なるもの」に眼差しを向けさせたことを明らかにした。第二点に関しては、「ジャック・デリダのおかげで(ジャック・デリダに感謝)」と題されたブランショの論考を補助線とし、フロイトの説に対するレヴィナスとデリダの思考の差異を考察した。その結果、モーセをエジプト人とみなすフロイトの説にレヴィナスもブランショも否定的な見解を示している一方、モーセが殺されたとする説にデリダは肯定的な見解を示しており、これら一連の議論をより明確に整理する必要があることが理解された。この理解は、来年度に研究を継続していくなかで、重要な手がかりとなるだろう。本年度の研究は、フロイトの『モーセと一神教』に関する昨年度の研究成果をもとに、フロイト・レヴィナス・デリダが共有している「ユダヤ的なもの」を明らかにすることにあった。彼らの議論に内包される「母なるもの」への眼差しが、性的差異の観点からして伝統的な男性優位の考え方にはもはや収容されないということ、またその限りにおいて彼らの言説が従来想定されてきたのとは別のユダヤ性を提示しているということ、これを彼らのテクストに則して示すことが本研究の目的であった。そのために、今年度はまずレヴィナスとデリダの差異に着目しながら、にもかかわらず彼らがいかにして同じユダヤ性を共有しうるのか検討した。この点に関しては、フランス国立図書館で関連資料の調査を行った結果、彼らの共通の友人であったモーリス・ブランショの言説から、とくに大きな手がかりを得た。戦後のフランス思想にとって、三者の友愛は実り豊かな発展をもたらしたが、彼らがつねに一定の見解を示しているとは限らない。むしろその差異こそが「ユダヤ的なもの」の理解にとって重要でり、この観点から現在研究成果を論文としてまとめている。また以上を踏まえ、あらためてフロイトのモーセ論を検証し直した結果、宗教そのものに対する考え方において、フロイト自身の立場が一定ではなかったことがさらに理解された。フロイトは宗教的教義を「錯覚」ないし「幻想」と捉えているが、彼自身もまた一種のフィクションに拘束されていたのであり、その拘束力こそが『モーセと一神教』を成立させている。この点についてはフロイトの友人であったロマン・ロランの宗教観と比較しながら武蔵大学人文学会にて口頭発表を行ったが、その内容を発展させて上記とは別の論文としてまとめており、こちらもできるだけすみやかに発表したいと考えている。
含フッ素遷移金属カルベン錯体の調製と、それを用いた含フッ素化合物の合成

トリフルオ口メチル基が直接結合しているカルベン種は、薬理活性天然物の機能向上を目指した含フッ素アナログ及び機能性材料合成に重要であると考えられるが、非常に不安定な活性種であるためにこれまでその有効な調製法が開発されていなかった。本研究はその等価体である遷移金属カルベン錯体の創製法について研究するものである。特に合成化学的有用性を考えて、トリフルオロメチル基及びアミノ基を有するカルベン錯体の合成に照準を絞っている。これまでの研究成果を以下に示す。(1)従来法を用いる目的化合物合成の試み遷移金属カルベン錯体(非フッ素系)の合成法として確立されているFischerらの手法に倣って目的のカルベン錯体を得ることを試みた。すなわちこの手法はクロム等の遷移金属錯体に対し、トリフルオロメチル基、続いてアミノ基を別個に導入するものである。実際にこれに従う多くの実験を行ったが、目的のカルベン錯体は得られなかった。これはトリフルオロメチル化求核種の反応性、安定性の低さに起因すると考えたので、次に示す手法を用いて目的錯体の合成を行なった。(2)前駆体を経由する目的カルベン錯体の合成トリフルオロメチル基及び窒素官能基を有する遷移金属錯体(前駆体)を合成し、この錯体を異性化させることにより目的のカルベン錯体を得る手法を考案した。具体的に前駆体として用いた錯体は、当該研究室で開発されたハロゲン化トリフルオロアセトイミドイルをパラジウムに酸化的付加させ、得られるイミドイルパラジウム錯体である。目的のカルベン錯体前駆体に相当するトリフルオロアセトイミドイルパラジウム錯体の合成、単離に成功し、この錯体のX線結晶構造解析を行なった。この前駆体に対し、トリメチルオキソニウムテトラフルオ口ホウ酸塩を作用させてイミノ窒素原子上にメチル基を導入することにより、目的のカルベン錯体の合成が達成された。トリフルオロメチル基が直接結合しているカルベン種は、薬理活性天然物の機能向上を目指した含フッ素アナログ及び機能性材料合成に重要であると考えられるが、非常に不安定な活性種であるためにこれまでその有効な調製法が開発されていなかった。これまでの研究状況を以下に示す。(1)遷移金属カルベン錯体(非フッ素系)の合成法として確立されているFischerらの手法に倣って目的のカルベン錯体を得ることを試みた。実際にこれに従う多くの実験を行ったが、最初のトリフルオロメチル化が進行せず、目的のカルベン錯体は得られなかった。これはトリフルオロメチル化求核種の反応性、安定性に起因すると考えたので、次に示す手法を試みた。(2)トリフルオロメチル基及び窒素官能基を有する遷移金属錯体(前駆体)を合成し、この錯体は異性化させることにより目的のカルベン錯体を得る手法を考案した。目的のカルベン錯体前駆体に相当するトリフルオロアセトイミドイルパラジウム錯体である。目的のカルベン錯体前駆体に相当するトリフルオロアセトイミドイルパラジウム錯体の合成に成功し、この錯体の単離及びX線結晶構造解析を行った。現在、求電子剤を用いるカルベン錯体の異性化及びこれを用いる有機合成反応の開発を行っている。

目的のカルベン錯体前駆体に相当するトリフルオロアセトイミドイルパラジウム錯体の合成、単離に成功し、この錯体のX線結晶構造解析を行なった。この前駆体に対し、トリメチルオキソニウムテトラフルオ口ホウ酸塩を作用させてイミノ窒素原子上にメチル基を導入することにより、目的のカルベン錯体の合成が達成された。
ポリカチオンおよびポリアニオンによるレクチン刺激リンパ球の幼若化促進機構の解明

コンカナバリン-A(ConA)などのレクチンによるリンパ球幼若化に対するコンドロイチン硫酸A(Chs-A)の作用をDNA合成,幼若化細胞出現率,細胞の表面荷電,幼若化に伴うCA^<2+>の関与,さらにはDNAポリメラーゼα,β,γ活性などを検討し,以下に示す知見を得た。Chs-A(167μg/m1)はConA(10μg/m1)による幼若化を賦活化させた。さらに,より低濃度(42μg/m1)のChs-Aが生存率の上昇および総細胞体積の増加を起こすことを明らかにした。Chs-Aによる生存率上昇は細胞表面陰性荷電の増加と関係がある。Chs-Aによる幼若化の亢進はChs-AがConAの結合部位をマスクすることなく,細胞表面に作用してConAの結合を強めるか,分布などを変えることで起るものと考えられる。DNA合成はinterleukin2(IL-2)にもよるのでChs-Aはリンパ球のIL-2に対する反応にも作用すると考えられる。幼若化の初期には,一過性のCa^<2+>流入亢進が生じるがChs-A添加により影響はなかった。DNAポリメラーゼ活性についてはレクチンとしてアメリカヤマゴボウ(PWM)から分離精製し30,42,60,KDaの3種を得たが,このうち60KDaを主として用い,比較のためにインゲン豆レクチン(PHA)を使用した。リンパ球にこれらレクチンを添加後,α活性は著しく上昇した。特にChs-A(42μg/m1)添加では約40%増加した。これらの活性のピークはPHAで4日目に単一の,PWM 60KDaでは5日目と8日目に2つのピークが認められた。またリンパ球よりT細胞のみを分離して同様の実験を行ったところ,PHAは4日目に,PWM60KDaは5日目のいずれも単一ピークで,Chs-A添加により前者は約30%後者は約40%の活性増大がみられた。β活性はChs-A添加により約10%増大し,活性のピークは両レクチン共に2日目に認められ,α活性より早い時期に活性が亢進されることが見出された。γ活性についてはChs-A添加により明確な差異は認められなかった。コンカナバリンーA(ConA)によるリンパ球幼若化に対するコンドロイチン硫酸A(ChsーA)の作用をDNA合成および幼若化細胞出現率、細胞の表面荷電に及ぼすChsーAの影響、さらに幼若化に伴うCa^<2+>流入に及ぼすChsーAの影響などを検討し、以下に示す知見を得た。ChsーA(167ug/ml)はsuboptimal doseのConA(10ug/ml)によるリンパ球幼若化を賦活化させた。このChsーAの濃度はLarsenらによって報告された濃度とほぼ一致した。さらに、より低濃度(42ug/ml)のChsーAが生存率の上昇および総細胞体積の増加を引き起こすことを明らかにした。

ChsーAによるリンパ球の生存率上昇の機構についてはまったく不明であるが、細胞表面陰性荷電の増加と関係がある可能性も観察された。またChsーAは組織のマトリックスを構成する多糖体のひとつであり、細胞の生存、保持に適する条件を備えているのであろう。ChsーAによるリンパ球幼若化の亢進は、ConA、ChsーAの添加順序に関係なく生じたことから、ChsーAはConAの細胞表面の結合部位をマスクすることはなく、むしろ細胞表面に作用してConAの結合を強めるか、結合の仕方・分布などを変えることで低濃度のConAに反応するようにさせ幼若化に至らせたと考えられる。またDNA合成がinterleukin 2(ILー2)によってcommitされることからChsーAはリンパ球のILー2に対する反応にも作用するものと考えられる。幼若化の初期には、一過性のCa^<2+>流入亢進が生じるがChsーAがConAによるCa^<2+>流入亢進を強めることができなかったことから、ChsーAによる幼若化の賦活化はCa^<2+>を介する生化学的反応の亢進によるものではないことが考えられる。しかし、Ca^<2+>流入については集団としての測定であり、個々の細胞また細胞質内の微小環境での変化については今後検討する予定である。コンカナバリンーA(ConーA)刺激によるリンパ球芽球化(幼若化)におけるコンドロイチン硫酸A(ChsーA)の作用を本年度は生存率,DNA合成および芽球様細胞出現率につき検討し、DNA合成は平均16%亢進し、芽球様細胞は13.421.0%増加させる結果を得たので、その関連酵素であるDNAポリメラ-ゼα,β,γ活性を測定し、比較検討した。レクチンとしてはB細胞マイト-ジェンであるアメリカヤマゴボウ・レクチン(PWM)、T細胞マイト-ジェンであるインゲン豆レクチン(PHA)2種計3種を用いた。これらのレクチン添加着のα活性は著しく上昇する。特にChsーA添加(42ug/ml)では無添加に比べて約30%増大した。これら活性のピ-クはPHAでは培養34日目に単一ピ-クが、またPWMでは4日目と6日目に2つのピ-クが認められた。γ活性についてはChsーA添加による影響はほとんど認められなかった。以上のことからChaーA添加により未刺激リンパ球の生存率6.7%の増加およびDNA合成16%の増加した事実とDNAポリメラ-ゼαおよびβの活性増大との相互関係につきさらに検討したいと考えている。またChsーA添加により生存率が増大した結果によるものか、培養72時間後の総細胞体積が平均31%増加することも観察している。またChsーAがリンパ球のインタ-ロイキン-2の産生に関与する反応にも関係があるような結果を得ているので検討している。本年度はレクチン刺激によるリンパ球芽球様化(幼若化)におけるコンドロイチン硫酸A(Chs-A)の作用につきDNA合成、特にDNAポリメラーゼα,β,γ活性につき検討した。一方レクチンはB細胞マイトージェンとして知られているアメリカヤマゴボウ(PWM)から分離精製し、30,42,60KDaの3種を得たが、このうち60KDaについての諸性質は全く報告が見られないので、本研究においてはこの60KDaを主として用い、比較のためにT細胞マイトージェンとして知られているインゲン豆レクチン(PHA)を使用した。リンパ球にこれらレクチンを添加後、DNAポリメラーゼα活性は著しく上昇した。特にChs-A(42μg/ml)添加では無添加に比ベ約40%増加した。これらの活性のピークはPHAでは4日目に単一のピークが、PWM 60KDaでは5日目と8日目に2つのピークが認められた。昨年度市販PWM(30,42,60KDaなどの混合物)の場合は4日目と6日目に2つのピークが観察され、今回と若干の差異が認められた。
空間局在光場並列制御によるナノ除去加工分解能・新概念光励起加工法の挑戦

光エネルギーが本質的に有している,優れた空間エネルギー分布のリモート制御性,並列制御性,高速制御性に,光触媒ナノ粒子を先端チップとする新しい概念のフォトン励起型マイクロ加工工具を融合させ,「究極の微小加工エネルギー媒体」といえる電子を,三次元空間内の所望位置に,直接作用させることが可能な空間光場制御・フォトン励起型マイクロ加工法の有効性について理論・実験の両面から検討する。
子宮内膜症病変におけるユビキチン化蛋白の存在意義

子宮腺筋症病変におけるI kappa Bのユビキチン化の亢進が,その病変形成に関与する可能性を,昨年度はヒトの検体を用いて示したが,本年度は,ラット子宮内膜症モデルの作成による検討を開始した.SDラットの腹膜上皮に,子宮内膜を自家移植し,内膜症病変の形成を確認後,GnRHアゴニスト(GnRHa)を4週間連日腹腔内投与した.現在,GnRHaの子宮内膜症病変に与える影響などにつき検討中である.次にサイクリン依存性キナーゼ(CDK)インヒビターp27Kiplの子宮内膜症増殖への関与についても検討を開始した.p27Kiplによる細胞増殖抑制は,p27蛋白のユビキチン化による分解で制御されており,ユビキチンリガーゼのSkp2の関与が知られている.そこでヒト正常子宮内膜および子宮腺筋症子宮内膜におけるp27の発現様式と,子宮腺筋症に対するGnRHa治療の影響について検討した.p27は子宮内膜腺上皮(GE)の細胞核に存在した.子宮腺筋症正所性子宮内膜(EuE)のGEでは,増殖期に比べ分泌期で有意にp27の核染色陽性率が上昇し,正常子宮内膜(NE)でも同様であった.さらにEcEのKi67陽性率とp27陽性率,Skp2陽性率とp27陽性率の間には逆相関を認めた.しかし子宮腺筋症異所性子宮内膜(EcE)でのp27陽性率には,EuEでみられた周期性が存在しなかった.またGnRHa使用群ではEuEのGEで,増殖期に比し有意にp27陽性率が高値となったが,EcEについては有意差を認めなかった.p27は子宮腺筋症の正所性および異所性子宮内膜において異なる発現様式を示し,その発現量は子宮腺筋症病変の増殖活性と逆相関した.ヒト正常子宮では,ユビキチン化蛋白が子宮内膜の腺上皮細胞で,細胞核においては恒常的に,細胞質においては月経周期の黄体期のみに存在することが免疫組織化学染色により示された.また子宮内膜症の一種である子宮腺筋症についても検討してみたところ,正所性子宮内膜では正常子宮内膜と同様の存在様式を示したが,病変部位の異所性子宮内膜では,細胞核のみならず細胞質においても月経周期を通じてユビキチン化蛋白が検出された.そして,子宮内膜症に対する治療薬であるGnRHアゴニストの使用により,異所性子宮内膜における恒常的なユビキチン化蛋白の検出が抑制されることも確認した.ところで炎症性疾患でもある子宮内膜症の増殖・進展には,NF kappa Bの活性化が関与していることが報告されている.このNF kappa Bの活性を制御しているI kappa Bはユビキチンの標的タンパク質であり,子宮腺筋症病変で検出されたユビキチン化蛋白の1つと予想された.子宮腺筋症の正所性および異所性子宮内膜におけるI kappa Bの局在とそのリン酸化を免疫組織化学的手法にて検討すると,I kappa Bは子宮内膜腺上皮細胞の細胞質に主に存在していた.そして異所性子宮内膜では,月経周期を通じてリン酸化されたI kappa Bの発現が認められた.またGnRHアゴニスト治療により,異所性子宮内膜腺上皮細胞におけるI kappa Bの発現には変化を認めなかったが,リン酸化I kappa Bの発現は有意に抑制された.さらに免疫沈降法とWestern Blottingにより,主に異所性子宮内膜でユビキチン化されたI kappa Bの存在が確認された.以上より,子宮腺筋症病変でのI kappa Bのリン酸化を介したユビキチン化の亢進が,その病変形成に関与している可能性が示された.子宮腺筋症病変におけるI kappa Bのユビキチン化の亢進が,その病変形成に関与する可能性を,昨年度はヒトの検体を用いて示したが,本年度は,ラット子宮内膜症モデルの作成による検討を開始した.SDラットの腹膜上皮に,子宮内膜を自家移植し,内膜症病変の形成を確認後,GnRHアゴニスト(GnRHa)を4週間連日腹腔内投与した.現在,GnRHaの子宮内膜症病変に与える影響などにつき検討中である.次にサイクリン依存性キナーゼ(CDK)インヒビターp27Kiplの子宮内膜症増殖への関与についても検討を開始した.p27Kiplによる細胞増殖抑制は,p27蛋白のユビキチン化による分解で制御されており,ユビキチンリガーゼのSkp2の関与が知られている.そこでヒト正常子宮内膜および子宮腺筋症子宮内膜におけるp27の発現様式と,子宮腺筋症に対するGnRHa治療の影響について検討した.p27は子宮内膜腺上皮(GE)の細胞核に存在した.子宮腺筋症正所性子宮内膜(EuE)のGEでは,増殖期に比べ分泌期で有意にp27の核染色陽性率が上昇し,正常子宮内膜(NE)でも同様であった.さらにEcEのKi67陽性率とp27陽性率,Skp2陽性率とp27陽性率の間には逆相関を認めた.しかし子宮腺筋症異所性子宮内膜(EcE)でのp27陽性率には,EuEでみられた周期性が存在しなかった.またGnRHa

使用群ではEuEのGEで,増殖期に比し有意にp27陽性率が高値となったが,EcEについては有意差を認めなかった.p27は子宮腺筋症の正所性および異所性子宮内膜において異なる発現様式を示し,その発現量は子宮腺筋症病変の増殖活性と逆相関した.
タイプ2子宮体癌における癌幹細胞の同定およびターゲット治療の探索

本研究では、子宮体癌における転移抑制因子メタスチンの機能、およびその受容体GPR54の発現機構について検討した。GPR54陽性の子宮体癌は有意に予後良好であり、メタスチンにより浸潤・転移が抑制された。さらに、GPR54遺伝子がエピジェネティックに発現制御を受けることを初めて明らかにし、GPR54陰性の子宮体癌においても、脱メチル化剤などの併用により、その発現誘導が可能ならば、メタスチンの転移抑制効果が得られる可能性を示した。平成21年度にはマイクロアレイを用いた子宮体癌のゲノムワイドな解析およびエピジェネティックな遺伝子発現解析を行った。当研究では癌幹細胞など子宮体癌において活発な転移形態や化学療法への高い抵抗性を示す予後不良な細胞集団の存在を明らかにし、予後不良なType2子宮体癌に特異的に発現変化が見られる遺伝子の中から分子標的治療の対象となる分子を同定することを当研究の目的としている。そこでまず子宮体癌57例のマイクロアレイ解析を行い、転移抑制分子metastinの受容体であるGPR54の遺伝子発現がType2体癌で低いことが示唆されたため、子宮体癌におけるGPR54の発現制御およびその機能を検討した。まず、92例の子宮体癌臨床サンプルにおいてmetastinおよびGPR54の免疫組織染色を施行したところ、Type2体癌で有意に発現が確認され、生存率解析でもGPR54発現低下群は有意に予後不良であった。さらにmetastin添加により子宮体癌細胞株の浸潤が制御されることを確認し、エピジェネティックな遺伝子発現解析にてGPR54発現低下は遺伝子プロモーター領域のメチル化によってもたらされていることを確認した。以上より、メチル化阻害剤とmetastinを組み合わせることでGPR54発現低下子宮体癌の予後が改善される可能性が示唆され、下記学会発表を行った。同様に、腫瘍細胞の浸潤・播種に影響を及ぼす腫瘍周辺の微小環境の検証や、マイクロアレイ解析の妥当性について他臓器癌モデルでの検証、さらに他の予後規定遺伝子のエピジェネティックな発現解析も並行的に行い論文発表することで、当研究手法の妥当性・重要性を確認している。他方、予後不良な子宮体癌の多様な病態を明らかにするために積極的に症例報告を行い、常に臨床に即した研究計画の推進を目指している。平成22年度には前年に行った基礎解析をさらに推し進め、転移抑制分子metastinの生体内での転移抑制効果を検討した。すなわち、metastinの受容体であるGPR54を発現する子宮体癌細胞株を子宮に移植したマウスにmetastinを投与したところ、子宮からリンパ節への転移が有意に抑制された。子宮からリンパ節への転移は、ヒトでも最も多くみられる子宮体癌の転移経路かつ生命予後を決定する独立予後因子であるため、同経路をブロックする臨床的意義は非常に高い。さらに、GPR54発現が低下している子宮体癌では遺伝子プロモーター領域のメチル化によってGPR54発現低下がもたらされていることを示し、GPR54発現が低い子宮体癌細胞株にメチル化阻害剤を作用させることで発現が回復することを明らかにした。metastin単独では同細胞株の浸潤能は抑制されなかったが、メチル化阻害剤と併用することで浸潤能が有意に抑制されたことから、この2剤を組み合わせることでGPR54発現が低い子宮体癌でもリンパ節転移を抑制し予後を改善する可能性が示唆された。以上の結果をまとめ、下記学会発表および論文発表を行った。
マイクロ波超低レベル発生試験解析システムの開発

近年の通信機器暴露の特性である変調波超低レベルマイクロ波を、シミュレーションできる装置を開発するために、0.01mW/cm^2以下のマイクロ波の発生装置である信号発生器、パワーアンプ、暴露部位としてのSholded TEM lincを多重に立体的に結線し、マイクロ波超低出力発生装置を開発した。この装置を用い、電子機器からの超低レベル変調波マイクロ波のモニタリングを再現した。2,10mW/cm2のマィクロ波暴露によるラット結腸温の90分値は、暴露前値と比べ、それぞれ0.98±0.12,3.70±0.15°C(平均値+標準誤差)の上昇を認めた。180分値は、それぞれ0.22±0.19,1.69±0.20°Cの上昇となった。マイクロ波暴露時には、その熱作用によって子宮胎盤循環障害が生じ、結果として流産が生じることが知られている。10mW/cm2のマイクロ波に際しての子宮胎盤血流量減少は、非可逆的であるが、2mW/cm2のマイクロ波によってはその減少は、可逆的であった。Progesterone受容体抵抗剤のMifepristoneの前投与では、2mW/cm2の暴露によっても非可逆性の子宮胎盤血流量減少が生じ、その際のProstaglandin(PG)E_2の減少が認められた。また、NK細胞活性の低下は有意ではなかった。したがって、マイクロ波暴露によって生じる非可逆性の子宮胎盤血流量の減少は、ProgesteroneとPGE_2系の障害が中心となり、さらに細胞性免疫が関与するという内分泌的-免疫系機序が想定された。このため、変調波超低レベルマイクロ波の妊娠への影響の元では、内分泌的-免疫系のホメオスターシスが働くことが窺い知れた。近年の通信機器暴露の特性である変調波超低レベルマイクロ波を、シミュレーションできる装置を開発するために、0.01mW/cm^2以下のマイクロ波の発生装置である信号発生器、パワーアンプ、暴露部位としてのShelded TEM lineを多重に立体的に結線し、マイクロ波超低出力発生装置を開発した。その際、暴露波が平行になるように、暴露部位から5cm以上の距離を有するように、電解センサーをTEM空間内に配置した。そこでパワーメーターを介し、それぞれのセンサーからの入力をチャージアンプによってreal timeでパソコンにinputすることで、モニタリングシステムを組んだ。その結果、暴露近傍におけるマイクロ波の特性である磁界と電界のずれが認められないことがわかった。したがって、この装置では、純粋にマイクロ波の暴露装置として働き、かつ超低周波暴露が可能であることが認められたため、電子機器からの超低レベル変調波マイクロ波のモニタリングを再現できることが示された。現実のマイクロ波暴露環境による生体影響を調べるために、ラットの長期暴露による睡眠行動、自発行動、食行動、下垂体-副腎皮質系ホルモンへの影響を観察した。睡眠、食行動を含むラットの自発行動には0.01mW/cm^2のマイクロ波暴露によって有意な影響をもたらさなかった。下垂体-副腎皮質系の指標としてのcorticosterone値の日内変動にも影響をもたらさなかった。しかしながら、妊娠中や、あるいはさらに長期間の影響については今度の研究によらなければならない。

2, 10mW/cm^2のマイクロ波暴露によるラット結腸温の90分値は、暴露前値と比べ、それぞれ0.98±0.12, 3.70±0.15°C(平均値±標準誤差)の上昇を認めた。180分値は、それぞれ0.22±0.19, 1.69±0.20°Cの上昇となった。マイクロ波暴露時には、その熱作用によって子宮胎盤循環障害が生じ、結果として流産が生じることが知られている。10mW/cm^2のマイクロ波に際しての子宮胎盤血流量減少は、非可逆的であるが、2mW/cm^2のマイクロ波によってはその減少は、可逆的であった。Progesterone受容体拮抗剤のMifepristoneの前投与では、2mW/cm^2の暴露によっても非可逆性の子宮胎盤血流量減少が生じ、その際のProstaglandin(PG)E_2の減少が認められた。また、NK細胞活性の低下は有意ではなかった。したがって、マイクロ波暴露によって生じる非可逆性の子宮胎盤血流量の減少は、ProgesteroneとPGE_2系の障害が中心となり、さらに細胞性免疫が関与するという内分泌的-免疫系機序が想定された。このため、変調波超低レベルマイクロ波の妊娠への影響の元では、内分泌的-免疫系のホメオスターシスが働くことが窺い知れた。
フィードバック制御を用いた三次元電流刺激法による聴覚野皮質インプラントの開発

本研究は、フィードバック制御機構を持つ、ラット聴皮質への三次元電極インプラントの開発を目的とし、平成23年度は、主に一次聴覚野(A1)のコア領域に関して(I-a)(I-d)の4つの課題を計画した。(I-a)は、A1における体積導体モデルの作成である。A1での電気伝導率は、電気的特性が体性感覚野バレル領域とほぼ同等の性質を持っていることがわかり、後藤らが以前に測定した電気伝導率を導体モデルに用いた。次に、その導体モデルを用いて、(I-b)のA1における三次元細胞外電位記録を行い、各層によって神経発火と局所電位の関係性が異なることを示した(Ogawa et al,J Neurosci,2011)。また、同様の三次元細胞外電位記録を体性感覚野で行い、脳波の信号源となる神経活動を明らかにした(Riera et al,J Neurophysiol,査読中)。(I-c)の電位感受性蛍光イメージング法によるA1の各層間の解剖学的・機能的結合の調査は、東日本大震災による実験機器への損傷があり、実験を行うことができなかった。しかし、(I-d)に示した、聴覚刺激と各層におけるA1の神経活動を関係づけるデータベースである聴覚情報処理ライブラリー作成は、(I-b)の実験データを用いて作成することが出来た。さらに、大脳皮質の主要な興奮性神経細胞である第6層の錐体細胞の数学モデルの作成も行い(Wang et al,JComp Neurosci,査読中)、聴覚情報処理ライブラリーを用いた神経活動群シミュレーションを行う準備ができた。また、研究代表者のグループのみならず、フランス・リヨン神経科学センター(リエラ、後藤、小川)、米国・フロリダ国際大学(後藤)、ノルウェー・ノルウェー大(リエラ、後藤)など、幅広い分野の研究者との共同研究が円滑に行われ、これらの研究成果を上げることができた。
真菌カンジダ・アルビカンス呼吸欠損変異株のミトコンドリアDNAの制限酵素地図

ヒト真菌症の主要な起因菌であるカンジダ・アルビカンスは、呼吸欠損変異が起こらない酵母とされていたが、我々は高温下での化学変異原処理により呼吸欠損株の誘発・分離に成功し、それらの形態学的並びに生理学的性状を報告してきた。本研究では野生親株と呼吸欠損株のミトコンドリア(Mt)DNAの制限酵素地図を構築し、その差違を明らかにすることを目的とした。実験には野生親株(K株)とチトクロ-ムaを欠き、Mtのクリステ構造のない呼吸欠損株(KRDー19)を用いた。通常酵母細胞に含まれるMtーDNAの量は、核DNAの数%に過ぎず、その分析にあたっては核DNAの混入をなくすことが必須である。そこで先ず、K株を用いてMt純化法を検討した。細胞壁溶解酵素処理で得たプロトプラストから、分画遠心を繰り返し核を除いて得たMt標品、分画遠心の途中でDNA分解酵素処理を行ない核DNAを除いたMt標品のいずれからも核DNAの混入のないMtーDNAを得ることができた。このMtーDNAを数種の制限酵素で分解し、生じたDNA断片のアガロ-ス・ゲル電気泳動分析から、分子サイズが約4万塩基対の環状MtーDNAの制限酵素地図を構築することができた。次にKRDー19株からMtを分離・精製し、そのDNAを分析した。その結果、高分子DNAは分離されていたが、これを制限酵素で分解しても分解物はゲル全体に広がり、特定の分子サイズを持つDNA断片は生成されなかった。この結果はMt標品にまだ核が混入しており、MtーDNAの分析を妨げていることを示唆している。現在、核DNAの混入を除くためCsCl密度勾配遠心法でMtーDNAを精製しており、この方法で変異株のMtーDNAの制限酵素地図の構築を目指している。昭和63年度においては、Candida albicans親株を用いて概略以下の成績を得た。1.ミトコンドリア(Mt)純化法の確立本研究に用いているC.albicans親株細胞は1数個の巨大Mtを含んでおり、そのMtには約8個のMt核様体が存在していることが蛍光染色法で確認された(Ito-Kuwa et al.、1988)。細胞に含まれるMt-DNA量は核DNAの数%であり、その分析に際しては核の混入のないMt純化法の確立が重要である。種々検討の結果、以下の方法によりMt純化標品を調整することができた。細胞を高浸透圧下(0.9Mソルビトール)で細胞壁溶解酵素処理して得たスフェロプラストを穏やかに破壊した。低速遠心で核と未破砕細胞を除き、上清画分を高速遠心してMtを集め、低温下でDNase処理すると、混入核DNAは分解されるがMt-DNAは未分解のままに残った。こうして得たMtより抽出したDNAには核DNAの混在は認められなかったので、以後の制限酵素分解実験に用いた。Mt-DNAを種々の制限酵素で分解し、生じたDNA断片をゲル電気泳動法で分析し、それら断片の数およびサイズを求めた。DNA断片の数は、制限酵素EcoRIでは5、PvuIIでは6、BamHIでは4、XbaIでは4ケであった。いずれの場合も各断片のサイズを合計すると約40キロ塩基対の大きさになった。

これらの酵素処理により得られたDNA断片の数と大きさは、Mt-DNAの制限酵素地図の構築に適しており、変異株のMt-DNAの分析に応用する予定である。3.制限酵素地図の構築前年度において、野生親株細胞のミトコンドリア(Mt)の分離・精製法を確立した。さらにその方法で調整したMt標品からMt-DNAを抽出し、その制限酵素地図を構築することができた。そこで今年度においては、親株でえた成果を基に呼吸欠損変異株のMt-DNAの分析を行なった。先ず親株の場合と同様に、分画遠心の途中にDNase処理を加えた方法並びに加えない方法で精製したMtからDNAを抽出した。その結果いずれの場合も、アガロ-ス・ゲル電気泳動でやや広がりのある高分子DNAを調整することができた。このDNAを数種の制限酵素(EcoRI,PvuII,HindIIIなど)で分解し、ゲル電気泳動したところ、分解産物はゲル全体に広がり、特定の分子サイズのDNA断片は検出されなかった。繰り返し行なった実験でも同様の結果であった。変異株でこのようなことが生じた理由として、(1)変異株のMtはクリステを欠く退化構造であるため、遠心分画で野生親株のMtと異なる挙動を示し、Mt標品に核の混入が多くなる、(2)変異株ではMt-DNA上の制限酵素切断部に大きな変化が起き、その結果制限酵素分解で特定部位の切断が起こり易くなった、の二つが考えられる。こられのうち、前者の可能性が高いと推察している。現在、DNaseを用いない方法で調整したMt標品からDNAを抽出し、CsCl密度勾配遠心に懸けて目的のMt DNAを混在している可能性のある核DNAから分けて採取し、このDNAの制限酵素分解分析を行なっている。この方法で変異株のMt-DNAの制限酵素地図の構築が可能となるであろう。
Cyclin D1過剰発現リンパ腫の分子病理学的解析と臨床病態の解明

リンパ球増殖性疾患におけるcyclin D1過剰発現:513例のリンパ球増殖性疾患において検索した結果cyclin D1過剰発現は136例で観察された。この過剰発現は少数例の慢性リンパ球性白血病や形質細胞骨髄腫にも観察されるが、94%はマントル細胞リンパ腫の組織像を示した。しかしながら、組織学的にマントル細胞リンパ腫と診断された症例の15%ではcyclin D1の過剰発現は認められなかった。すなわち、臨床病理学的な疾患単位であるマントル細胞リンパ腫が、分子病理学的な特徴であるcyclin D1により過剰発現群と非過剰発現群の2群に分類し得ることが判明した。臨牀病態の解明:1.病理学的検討組織学的諸因子を検討したが、両者を区別することは不可能であった。また、CD5やCD23など鑑別に有用とされるマーカーにおいてもその発現に有意差はなかった。2.臨床的検討両群ともに高齢者、男性優位で、進行病期にて発症する傾向があった。PS,LDH値は正常範囲内が多いにもかかわらず、それぞれ68%59%に節外臓器浸潤が観察された。。3.予後因子解析施行された治療法や臨床病期、国際予後因子に大差なのにかかわらず、両群の生存率の推移は明らかに異なっていた。非過剰発現群は1例の他病死を除きすべての症例が生存中であったのに対し、過剰発現群においては中央無病期間2.8年、中央生存率3.5年と治療抵抗性の結果を示した。また、単変量解析では、国際予後因子、臨床病期、治療反応性、核分裂像およびcyclin D1過剰発現の有無が有意でり、これらの因子を含めた多変量解析ではcyclin D1過剰発現がもっとも有意な予後因子であった(p<0.05)。これらのことは、臨床病理学的に区別は困難であるが、明らかな予後の差が存在することから臨床的な対応が異なるべき疾患として認識されるべきと考えられる。。