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オーラル・ヒストリーによるフルクサス（Fluxus）研究

本研究は、1960年代に始まった「フルクサスFluxus」という前衛芸術の運動を、口述資料(オーラルヒストリー)を通してみることにより、そのユニークな活動を研究しようとするものである。フルクサスについては従来美術の領域で研究が扱われてきたが、実際には多くの音楽家が関わった運動であった。「音(サウンド)」に焦点を当ててフルクサスのアーティストに直接インタヴューを行なうことにより、これまで知られていなかった活動の実態を掘り起こすことができた。本研究はオーラルヒストリーという手法によって、フルクサスという前衛芸術の活動を調査、研究する試みであるが、オーラルヒストリーというアプローチにも様々なあり方があることが分かってきたため、まずは方法論について調査を行なった。こうした手法が進んでいるのはアメリカであり、音楽と美術の代表的な例として、イェール大学のOral History of American Music (通称OHAM)と、ニューヨークの現代美術館(通称MOMA)を訪ねて、オーラルヒストリーの手法について担当者にインタヴューを行なった。MOMAでは、オーラルヒストリーの手法について一定のガイドラインを定めており、それにしたがって行なわれている。たとえばインタヴューはかならず2人で行ない、1人がおもにインタヴューを行ない、もう1人は機材のチェックや時間の計測などを行なって補佐をする。一方、OHAMでは、そうした規定はとくに定めておらず、かえって1人で行なった方が、話し手が気楽に話せるという意見をもらった。日本美術オーラルヒストリー・アーカイヴは、おもにMOMAの手法に添って行なっているように思われる。またインタヴュー内容をウェブサイトなどで公開する際に、著作権の問題が発生するため、これについても説明をしてもらった。MOMAは事前に情報公開についての許諾書に署名してもらってから、行なっているという。インタヴューについては、アーティストの日程の都合もあり、初年度中には実行できなかった。しかし、次年度には数名にインタヴューをする予定で、このうち1名についてはすでにインタヴューを実施した。資料集めをしながら、またオーラルヒストリーの手法を考えながら、継続していく予定である。平成26年度は、3名のフルクサス・アーティストにオーラルヒストリーのインタヴューを行なった。まず、4月にフルクサス・イン・ジャパンのために来日したデンマークのエリック・アンデルセンに研究代表者がインタヴューを行なった。つぎに、同じフェスティヴァルに参加した靉嘔氏には、研究協力者のヤリタ・ミサコ氏とともにインタヴューを行なった(6月28日)。塩見允枝子氏には研究協力者の竹内直氏とともに2日間にわたってインタヴューを行なった(12月1、2日)。これらについては、書き起しを行ない、アンデルセンのインタヴューは日本語に翻訳した。また靉嘔氏のインタヴューは英語への翻訳を依頼し、ほぼ完成している。塩見氏のインタヴューについては、まだ英訳ができていないが、今後依頼する予定である。フルクサスのオーラル・ヒストリーについては、2014年京都市立芸術大学日本伝統音楽研究センター第39回公開講座・国際シンポジウム「東アジアにおける近代と音楽ーデータベースを軸としてー」において英語による研究発表“The Oral History of Fluxus"を行なった(平成26年11月21日)。またフルクサスについては、音楽学会全国大会(九州大学)のパネル・ディスカッション「日本におけるミニマリズムと現在」において研究発表「ミニマリズムとフルクサス」を行なった(平成26年11月8日)。2015年度は、これまでに行なったインタヴューを大学の芸術資源研究センターのウェブサイトにあげ、公開した。エリック・アンデルセン、靉嘔、塩見允枝子の3名のインタヴューである。英語と日本語の二カ国語で読めるようになっており、海外を含めてより広い層に読んでもらえるように配慮した。また新たにイタリア在住のフィリップ・コーナーのインタヴューを行なった。トリノ在住の音楽学者ルチアーナ・ガリアーノ氏の協力を得て、二人で共同インタヴューを行なった。すでに録音の文字起こしを終えており、これから日本語訳を行なって、ウェブサイトにあげる予定である。イタリアはフルクサスの活動が盛んな場所であり、訪問時にもオノ・ヨーコのインスタレーション『DREAM』が湖畔に展示されていた。その場所を訪問して記録をとった。フルクサス関係の資料も収集でき、一定の成果をあげることができたと考えている。インタヴュー対象者が海外に在住しており、日程の調整がしばしば困難である。ワダ・ヨシマサ氏とはようやくメールで連絡がとれたものの、日程の調整ができていない。また現在はフルクサスとは関係がないと考えるアーティストがいるほか、インタヴュー嫌いの人もおり、インタヴューの協力を得ることについて、なかなか容易にはいかないのが現状である。本年度は締めくくりの年でもあり、かねてより希望していた一柳慧氏へのオーラルヒストリー・インタヴューを、他1名の協力者とともに行った。日本人としてフルクサスの初期にニューヨークで行った活動の一端が、この証言から明らかとなった意義は大きいと思われる。1960年ころのオノ・ヨーコのチェンバーズ・ストリートのロフトでのコンサート、またジョージ・マチューナスのAGギャラリーでのコンサートの模様などの詳細を、当事者の口から直接聞くことができた。インタヴューの録音起こしを行い、また英訳とともに、大学の芸術資源研究センターのウェブサイトに掲載した。

また2017年3月の東京芸術大学における国際音楽学会(IMS)のラウンドテーブルFluxus Here and There (chair: Lydia Goehr)で発表する機会を得た。発表タイトルはFluxus and Soundで、フルクサスが本格的な活動を始める前の時期(プロトフルクサスと呼ばれる)に絞って、日本とニューヨークでの日本人の活動について、音(サウンド)を中心に英語で発表を行った。学会が開催された東京芸術大学でまさに始まったグループ音楽(小杉武久、塩見允枝子、刀根康尚など)の活動と美術のハイレッド・センターの活動、ニューヨークでのオノと一柳の活動、そして彼らの共同作業について発表したが、発表資料の作成にあたってはオーラルヒストリーのインタヴューを活用した。ラウンドテーブルの他の参加者もフルクサスのオーラルヒストリー・インタヴューを読んでくれたようで、一定の成果をあげることができたと思われる。IMSのラウンドテーブルではドイツ、アメリカ、日本の音楽学者、美術研究者、そしてゲストの一柳慧氏とともに、発表及び議論をすることができ、有意義な結果を残すことができた。本研究は、1960年代に始まった「フルクサスFluxus」という前衛芸術の運動を、口述資料(オーラルヒストリー)を通してみることにより、そのユニークな活動を研究しようとするものである。フルクサスについては従来美術の領域で研究が扱われてきたが、実際には多くの音楽家が関わった運動であった。「音(サウンド)」に焦点を当ててフルクサスのアーティストに直接インタヴューを行なうことにより、これまで知られていなかった活動の実態を掘り起こすことができた。初年度のオーラルヒストリーに関する調査をふまえて、3名のインタヴューを実際に行ない、それらの書き起しと翻訳(2名のみ)によって、2ケ国語によるインタヴューを完成させることができた。これらは、芸術資源研究センターのホームページ上で間もなく公開される予定である。ただ、当初予定していたアーティストと連絡がとれないなどの問題があり、インタヴューイーを変更する必要が出てきた。さらに少なくとも2名のインタヴューを行ないたいと考えている。インタヴュー対象者に連絡をとって、日程の調整を行ない、可能なかぎりインタヴューが行なえるようにしたい。エリック・アンデルセン、靉嘔、塩見允枝子、フィリップ・コーナー、一柳慧のインタヴューを掲載した。音楽学最終年度には、イタリア在住のアメリカ人アーティスト、フィリップ・コーナーに、イタリア在住の研究協力者とともにインタヴューを行なう予定である。さらにもう12名のインタヴューを行なうために、現在交渉に向けて準備中である。オーラルヒストリーの方法論については、調査を行ない、ほぼ予定どおり行なった。しかし、インタヴューについては、アーティストの日程の都合もあり、こちらの予定どおりにには実施できていないのが現状である。塩見允枝子氏には初年度にインタヴューを行なう予定であったが、フルクサス・イン・ジャパン2014が急遽4月に開催されることになったために、延期の要請があり、この催しの後に行なうことになった。
セマフォリンシグナルの応答・伝達機構の解明に向けた受容体細胞外領域全長の構造解析

セマフォリンは軸索ガイダンス因子として発見された蛋白質であり、細胞表面受容体であるプレキシンと相互作用することでシグナルを伝達する。広範な研究から、セマフォリンとプレキシンによるシグナル伝達は、神経発生のみならず、免疫応答や器官形成など、様々な生命現象に関わっており、その異常はがんなどの疾患にもつながることが知られている。ヒトでは、計20種のセマフォリンと9種のプレキシンが存在するが、結合選択性は厳密に規定されており、その組み合わせによって生命現象特異的なシグナルが伝達される。興味深いことに、セマフォリンとプレキシンは、配列が相同なセマドメインと呼ばれる領域を有しており、互いのセマドメインを介して結合する。プレキシンは、計8個または10個のモジュールからなる巨大な細胞外領域を有しており、細胞質側にはGAPドメインが存在する。細胞外におけるセマフォリンとの相互作用は、プレキシンのGAPドメインの活性化を引き起こすが、その詳細な分子機構は不明のままである。また、セマフォリンとプレキシンの結合選択性についても十分な説明はなされていない。そこで、本研究では、プレキシン細胞外領域の構造解析と構造未知のセマフォリン・プレキシンのペアの構造解析に取り組んだ。プレキシン細胞外領域の構造解析については、長鎖の断片について結晶が得られたが、原子レベルの分解能に達しなかったため、結晶性の改善に向けて糖鎖の除去に取り組んだ。糖鎖を3箇所まで変異で取り除いたものについては、大量発現と精製にも取り組んだ。構造未知のセマフォリン・プレキシンのペアについては、それぞれ単独の構造決定に成功し、複合体の結晶も得られた。現状では、分解能が不十分であるため、複合体については精密構造の決定には至っていないが、結晶内での2分子の配置はすでに決定されており、結合選択性の議論を行うための情報は取得できた。26年度が最終年度であるため、記入しない。研究代表者は、神経軸索のガイダンス因子として知られるセマフォリンとその受容体プレキシンを対象とした構造研究に取り組んでいる。セマフォリンが伝達するシグナルは、軸索ガイダンス以外にも免疫応答、器官形成、血管新生なども制御することが明らかになっており、その異常は、がんや自己免疫病など多種多様な疾患にも関わることが報告されている。このように医学的に非常に重要な分子であることから、セマフォリン、プレキシンともに精力的な構造研究が展開されており、2010年には代表者のグループも含めて、計3つのグループが異なるサブクラスのセマフォリン・プレキシンの複合体構造を決定している。一連の構造研究から、セマフォリンとプレキシンは、いずれのサブクラスについても2対2のヘテロ4量体構造を形成し、シグナル伝達を行うことが示されているが、サブクラス間の結合選択性がいかにして決定され、また、細胞外における複合体形成が膜の反対側にどのような変化をもたらすかについては未だ不明な点が多い。そこで、本研究では、この結合選択性と受容体活性化の作用機序の解明に向け、さらなる構造解析に取り組んだ。本年度の研究では、特に結合選択性の解明に関わる結晶学的研究において大きな進展が見られた。これまで構造の明らかになっていなかったサブクラスのセマフォリンとプレキシンのペアそれぞれについて、中程度の分解能ながらも十分モデル構築に用いることができるX線回折データが得られた。いずれについても、ほぼモデル構築は完了しており、今後は複合体解析や構造に基づいた変異体解析などを進めて行きたいと考えている。

26年度が最終年度であるため、記入しない。結合選択性の解明に向けた研究については、当初の予想を上回るスピードで研究が進展している。すでに結晶の得られていたセマフォリン分子については、結晶の凍結条件の最適化などの結果、構造解析可能な回折データが得られるようになり、構造解析のステージに達することができた。また、本研究課題において発現系の構築を開始したプレキシン分子についても、動物細胞を用いた安定発現株の構築、高密度培養による大量発現、アフィニティークロマトグラフィーによる精製、結晶化という各段階を順調に進めることができ、3.6Åという中程度の分解能ながらも構造決定可能な回折データが得られた。分子置換法による位相決定も行い、モデル構築もほぼ完了した状態にある。一方、受容体細胞外領域の長鎖の断片の発現と結晶化については、糖鎖除去変異体の作製を進めており、一部の変異体については、大量発現を行うため、安定発現株の構築に取り組んだ。本年度の研究で、単独構造の決定に成功したセマフォリンとプレキシンのペアに関しては、2者を混合し、共結晶化に取り組む予定である。また、2者の相互作用は非常に弱いことも分かっており、超遠心分析を利用した相互作用解析を行うことで、親和性の定量化も行うことを計画している。複合体構造の決定の後は、外部研究者との共同研究によってプレキシン発現細胞を用いた変異体解析を行うことで、セマフォリンとプレキシンの結合選択性を決定している領域の同定を進めて行きたい。また、プレキシン細胞外領域の長鎖の断片については、本年度に構築した安定発現株を用い、順次、高密度培養や精製に取り組み、単独状態およびセマフォリンとの複合体の状態での結晶化に取り組んでいきたいと考えている。
垂直的市場構造に関する理論的・実証的研究

研究成果を以下の3つの論文として公刊した。各論文の内容は次のようなものである。(1)「流通・取引慣行の経済分析」(『経済法学界年報』)では、「長期継続的な取引関係」「あいまい契約」「信用の重視」で特徴づけられる日本の商取引の基本特性について、その経済的機能を不確実性への取引上の対応という側面から検討した。さらにこうした日本の商取引の基本特性と、返品制、建値制、系列店制といった個別的な商慣行との関係を検討し、個々の商慣行が日本の商取引の基本特性と強く結ばれた制度的補完制(institutional complementarity)を持つことを明らかにした。(2)「規制緩和と日本の産業社会」(『ビジネス・インサイト』)では、規制緩和の流れを日本経済のマクロ構造調整とミクロ経済改革の両面から検討し、規制緩和を手段として描き出される日本の産業社会の方法性を論じた。そのベースとして、規制の経済理論を再検討するとともに、最近の内外における規制緩和に関連した理論的・実証的研究を整理・検討した。
透明物質へのフォトンナノマニピュレーション

フェムト秒レーザーの干渉場および偏光特性を利用することによって、材料表面を損傷させることなく、内部に周期的ナノ構造を形成した。フェムト秒レーザーパルスは、極めて光電場強度が高く、電子と格子が熱平衡状態に達する前に光エネルギーを効率的に材料内部に注入できため、光誘起プラズマ電子波(プラズモン)とレーザーパルス(フォトン)を相互作用させることに成功した。特に、石英ガラスの場合、レーザー光のシングルビームのみの集光照射によって、偏光方向に垂直な方向に周期間隔200nm、幅20nmの酸素欠陥が自己組織的に形成され(ナノグレーティング)、ガラス組成がSiO_2からSiO_<1.4>に変化することを見出した。一方、アルカリ金属やアルカリ土類金属を含む多成分ガラスでは、偏光に依存したナノグレーティングは形成されず、NaやCaなどが周囲に拡散した。さらに、音響光学結晶であるTeO_2単結晶に適用したところ、偏光方向に垂直な方向に空孔欠陥が周期的に形成した。これは、石英ガラスに比べてTe-Oの結合エネルギーが低く、融点が低い(733°C)ためと考えられた。ナノ構造の形成メカニズムを解明するため、レーザー光強度を変化させ、ナノ構造へ及ぼす影響を系統的に調査した。レーザー光強度の増加に伴い、ナノグレーティングの周期間隔が100から400nmに変化することから、ナノグレーティングの形成はレーザー光により誘起したプラズマに由来し、特にプラズマ電子温度により理論的な解釈が可能であることを見出した。以上の基礎検討に基づき、微小光学素子をガラス内部に形成し、透過・反射特性を評価した結果、ナノグレーティングの周期間隔や配列方向に依存した反射スペクトル、透過光強度の変化を確認した。回折格子や偏光分離素子、さらに微小アッテネータ等の微小光学素子をガラス内部や光ファイバー内部に集積化させることにも成功し、超小型光デバイスを開発した。フェムト秒レーザーのシングルビームを石英ガラス(SiO_2)に照射し、レーザー光の偏光方向に依存したナノ周期構造を形成した。ナノ周期構造の形成メカニズムはレーザー光と焦点付近で発生したプラズマ電子波の干渉によるものと実験、理論の両方から検証した。さらにナノ周期構造は酸素欠陥が自己組織的に偏光方向に垂直な方向に形成されることを明らかにした。石英ガラス内部にナノ周期構造を形成した後、レーザーの伝搬方向に平行平面から研磨を行い、電界放射型走査電子顕微鏡(FE-SEM)を用いてナノ周期構造を三次元的に評価した。レーザー光の偏光を円、直線(垂直、水平)に変え、焦点をx-y平面内でスキャンし、形成された誘起構造を研磨、フッ酸によるウェットエッチングを行った断面についてFE-SEMを用いて観察し、レーザーの伝搬方向にも三次元的なナノ周期構造が形成されることを明らかにした。なお偏光に依存したナノ周期構造はレーザー光の焦点内部に三次元的に形成されることを明らかにした。レーザーの伝搬方向に形成されたナノ周期構造の周期間隔は石英ガラス中のレーザー光の波長(800nm/1.45=550nm)にほぼ一致し、それぞれ2つのレーザー光とプラズマ電子波の計4つ波数ベクトルによりレーザー光の伝搬方向にもナノ周期構造が形成されたものと考えられた。また高NAレンズにより形成される偏光依存ナノ周期構造は焦点の前後約15μmに形成した。高NAレンズの場合、フィラメンテーション領域にはナノ周期構造は形成されないが、フィラメンテーションが顕著に起こる低倍レンズの場合、チャープの影響により、スパイラル状にナノ周期構造が形成されると考えられる。

フェムト秒レーザーのシングルビームを石英ガラス(SiO_2)、二酸化テルル単結晶(TeO_2)に照射し、レーザー光の偏光方向に依存したナノ周期構造を形成した。SiO_2では偏光に垂直な方向に酸素欠陥が200nmの間隔で周期的に形成されたが、TeO_2は融点が低い(730°C)ため、空孔からなる欠陥が100nmの間隔で周期的に形成された。SiO_2内部にナノ周期構造を形成した後、レーザーの伝搬方向に平行平面から研磨を行い、購入したハロゲン光源を使用した側面観察および電界放射型走査電子顕微鏡(FE-SEM)を用いてナノ周期構造を三次元的に評価した。レーザー光の偏光を円、直線(垂直、水平)に変え、焦点をx-y平面内でスキャンし、形成された誘起構造を研磨、フッ酸によるウェットエッチングを行った断面についてFE-SEMを用いて観察し、レーザーの伝搬方向にも三次元的なナノ周期構造が形成されることを明らかにした。さらに偏光に依存したナノ周期構造はレーザー光の焦点内部に三次元的に短冊状に形成されることを明らかにした。レーザーの伝搬方向に形成されたナノ周期構造の周期間隔はSiO_2中のレーザー光の波長(800nm/1.45=550nm)にほぼ一致した。レーザー光の集光照射により、プラズマ電子波が2つ発生し、レーザー光(フォトン)と2つのプラズマ電子波(プラズモン)が干渉して、レーザー光の伝搬方向にもナノ周期構造が形成されたものと考えられた。発生した2つのプラズモンのうち、一方は材料中を縦波として伝搬するが、もう一方は伝搬できずに減衰するという新しいプラズモン崩壊モデルを立てた。さらに購入した分解タイプ石英ガラスリアクターを使用して液体中に保持された金属粒子でも同様の現象が起こることを確認した。アルコール溶液の場合、レーザー光の照射により、アルコールが分解して水素ガスが発生し、金属の酸化が抑制されていることを購入した島津キャピラリガスクロマトグラフシステムにより確認した。フェムト秒レーザーを石英ガラス、金属アルミニウムを出発原料に使用したアルミノシリケートガラスに照射し、空間的に制御されたナノ構造を三次元的に形成した。石英ガラスでは偏光に垂直な方向に酸素欠陥が200nmの間隔で周期的に形成され、一方で金属アルミニウムを出発原料に使用したアルミノシリケートガラスでは、直径数十ナノメートルのシリコンナノ粒子が、集光部領域に形成された。また、偏光をそれぞれ90度変えたフェムト秒レーザーのダブルパルスを同軸で石英ガラスに照射したところ、斜め方向に酸素欠陥が形成された。これまでに偏光依存のナノ構造は、レーザー光の集光照射により発生するプラズマ電子波(プラズモン)とレーザー光(フォトン)との干渉により形成されると結論付けているが、さらにフェムト秒レーザーのダブルパルスの間隔を制御することによって、発生するプラズマ電子を制御できることを示唆しているものと考えた。さらに金属アルミニウムを出発原料として利用することによって、SiO2構造内の酸素欠陥をシリコンにまで還元させることが可能であることを確認できた。これは、金属アルミニウムによるテルミット反応をレーザー照射部近傍でのみ誘起できた結果であると考えられる。
異常輸送現象を伴う溶質輸送シミュレータと地下水硝酸リスクマップの開発・検証

本年度は,研究期間に製作した長さ2m,高さ0.8m,奥行き0.03mの規模を有する溶質輸送実験装置を用いて,自然の地質状態を模擬した地下水流れ場を形成するとともに,水溶性物質の輸送挙動について実験的・数値解析的に考究した.溶質の空間変動性に大きく寄与すると考えられる透水係数分布の自己相関性を変えた複数の地質状態をターゲットに設定した.その結果,相関性の増加,ならびに,不均質性の増加に応じて,非フィック則となる異常輸送現象の発現により,溶質の分散性が高まる点を捉えることができた.つまりは,相関長が高い場ほど低透水領域から高透水領域までの溶質の移行距離が長くなり過程での異常輸送性の発生により,溶質が拡大しやすい結果につながることがわかった.並行して,硝酸態窒素のような水溶性物質が揚水井に到達する領域をランダムウォーク粒子追跡法により解析・可視化する方法を考案し,リスクマップとして三次元確率空間分布を時系列で推定する方法を提示した.実フィールドを対象として,揚水井への溶質粒子到達とトラベルタイムの算定,任意幅のアンサンブル格子の導入,既定時間内に集粒域になる格子確率の導出から構成されるアルゴリズムについて言及した.不均質性の異なる場に対して,三次元集粒域の時系列結果を提示するとともに,任意の確率以上の格子から成る三次元集粒域の体積は不均質度に依存せず,揚水量に依存することを示した.また,各格子の確率をエントロピーと関連付けて,不均質度の増加は非ゼロ確率から成る三次元集粒域の体積増加につながる点を定量評価した.また,ラボ実験と連動することによって,不均質透水場を移行する溶質の分布形態を定量するとともに,揚水井での物質回収状態と所要時間の関係について定量化し,開発した溶質移行シミュレータによって,時間・空間分布に応じたリスクマップを提示した.本年度は,2mの移流規模を実現可能な溶質輸送実験装置を作製し,20種類を超える透水係数分布を実現できる土質試料を整備した.成層ならびに不均質配置による透水場を形成することで,フィールドの透水係数分布を反映した成層地盤を対象に溶質輸送実験を実施した.既存の画像解析技術の精度を向上させるとともに,空間モーメント法を利用して,色素水溶液の空間変動に基づいて,成層地盤における溶質のマクロ分散長の空間変動を推定した.その結果,マクロ縦分散長は透水係数の不均質性の影響を受けて,輸送距離に応じて増加し,マクロ横分散長は溶質の初期配置の影響によって減少する結果が得られた.また,動水勾配を変化させて溶質輸送を定量化した結果,マクロ分散長は動水勾配に対する依存性は低いことがわかった.数値解析技法の進展を目指して,溶質輸送実験をランダムウォーク粒子追跡法により追随することで,実験推定値の精度と数値解析手法の妥当性を確認した.さらには,揚水井に流入する汚染物質の領域を表す集粒域を三次元的に時系列で推定する方法を考案した.複数の透水係数分布に対する移流分散挙動をランダムウォーク粒子追跡法により解析し,任意の幅に設定できるアンサンブル格子を導入することで,揚水開始から既定時間内に集粒域になる格子確率を求め,集粒域の確率空間分布を時系列推定するアルゴリズムを記した.三次元集粒域の時系列分布を提示するとともに,0.5を超える格子確率を対象とすると,三次元集粒域の体積は不均質度に依存せず揚水量に依存することがわかった.また,不均質度の増加は非ゼロ確率から成る三次元集粒域の体積増加につながることを定量的に示した.従来の研究事例に比べると規模の大きい溶質輸送実験装置を作製するとともに,予備実験,本実験を良好に実施できている.また,マクロ分散現象の定量化手法についても既存の手法を改善するとともに,精度のよい推定結果が得られている.さらには,数値解析手法により実験結果の妥当性を確認できていることに加えて,ランダムウォーク粒子追跡法の新たな応用面を見出すことができている.具体的には,揚水井に流入する汚染物質の領域を表す集粒域を二次元にとどまらず,三次元へ拡張できており,地下水汚染の浄化の可視化や効率化に貢献できる成果が得られている.よって,おおむね順調に進展していると評価した.本年度は,昨年度に製作した2mの移流規模を実現可能な溶質輸送実験装置を用いて,不均質地盤内を移動する水溶性物質の輸送挙動について定量的に考究した.硝酸性窒素の地下空間移動,ならびに,フィールド状態を反映できる透水係数分布の不均質性を念頭に置いて,透水係数分布の自己相関性をターゲットの1つに設定した.実験装置内に,一辺3cmのブロック状で透水係数を担う土質試料を充填し,マトリクス状に1440個の配置することで,実空間を確率統計的にラボレベルで再現した.光量の点で既存の画像解析技術の精度を向上させるとともに,空間モーメント法を利用して,色素水溶液の空間変動に基づいて,成層地盤における溶質のマクロ分散長の空間変動,ならびに,選択輸送となる輸送経路の同意定を可能とするシステムを構築した.その結果,相関性の増加に応じたマクロ分散性の増加を捉えることができた.また,相関性の低い場では,低透水領域から高透水領域までの距離が短い一方で,相関長が高い場ほど低透水領域から高透水領域までの移行距離も長くなり,溶質が拡大しやすいことがわかった.他方,数値解析的アプローチの発展を目指して,また,フィールドにおける水質管理や水利用計画に資するべく,トレーサ試験を模擬した移流分散解析を実施した.

ダイポール試験や自然勾配試験など,原位置トレーサ試験を反映できるモデルを構成するとともに,時間モーメントを用いた透水係数推定を実施した.その結果,各試験方法に対する孔間距離と推定精度の関係を示すことができた.また,自然動水勾配試験では複数点で試験することで領域全体の透水係数分布を概ね推定できる結果を得た.輸送距離が2mとなる規模の溶質輸送実験は世界的に例が少ない.予備実験を経て,本実験を繰り返し良好に実施できており,実験データの精度についても,分散現象の定量化手法を段階的に改善できており,安定したデータ取得を可能としている.相関長に着目した類似のラボ実験は希少であることから,研究成果をとりまとめている最中である.さらには,数値解析手法により原位置トレーサ試験を反映した透水係数分布の推定を良好に達成できていることに加えて,異常輸送を伴ったランダムウォーク粒子追跡法の新たな応用面を見出すことができている.したがって,おおむね順調に進展していると評価した.本年度は,研究期間に製作した長さ2m,高さ0.8m,奥行き0.03mの規模を有する溶質輸送実験装置を用いて,自然の地質状態を模擬した地下水流れ場を形成するとともに,水溶性物質の輸送挙動について実験的・数値解析的に考究した.溶質の空間変動性に大きく寄与すると考えられる透水係数分布の自己相関性を変えた複数の地質状態をターゲットに設定した.その結果,相関性の増加,ならびに,不均質性の増加に応じて,非フィック則となる異常輸送現象の発現により,溶質の分散性が高まる点を捉えることができた.つまりは,相関長が高い場ほど低透水領域から高透水領域までの溶質の移行距離が長くなり過程での異常輸送性の発生により,溶質が拡大しやすい結果につながることがわかった.並行して,硝酸態窒素のような水溶性物質が揚水井に到達する領域をランダムウォーク粒子追跡法により解析・可視化する方法を考案し,リスクマップとして三次元確率空間分布を時系列で推定する方法を提示した.実フィールドを対象として,揚水井への溶質粒子到達とトラベルタイムの算定,任意幅のアンサンブル格子の導入,既定時間内に集粒域になる格子確率の導出から構成されるアルゴリズムについて言及した.不均質性の異なる場に対して,三次元集粒域の時系列結果を提示するとともに,任意の確率以上の格子から成る三次元集粒域の体積は不均質度に依存せず,揚水量に依存することを示した.また,各格子の確率をエントロピーと関連付けて,不均質度の増加は非ゼロ確率から成る三次元集粒域の体積増加につながる点を定量評価した.
抗腫瘍効果に及ぼす腫瘍組織中トランスポーター発現の日周リズム

本研究では、腫瘍組織中MRP2発現及びGSH濃度、GST活性の日周リズムの検討を行った後、CDDPの抗腫瘍効果に投与時刻が影響するか否かについて検討した。さらにMRP2発現及びGSH濃度、GST活性の日周リズムとの関連について検討した。細胞膜上のhuman MRP2 protein発現量には17:00に最高値を、5:00に最低値を示す明瞭な日周リズムが認められた。このMRP2 proteinの日周リズムを基盤にCDDPの投薬時刻を5:00と17:00に設定し、投薬時刻の違いによるCDDPの抗腫瘍効果の影響を検討したところ、17:00投薬群が5:00投薬群と比較して有意に高い腫瘍増殖抑制を示した。その機序として、血液中タンパク非結合型CDDP濃度及び腫瘍中総Pt量について検討したところ、投薬時刻間で血液中CDDP濃度及び腫瘍中総Pt量に有意な差は認められなかった。さらにGSH濃度,GST活性についても5:00と17:00の間に有意な差は認められなかったことから、MRP2発現、GSH濃度、GST活性は投薬時刻の違いによるCDDPの抗腫瘍効果の変化に直接的な影響を及ぼしていないことが示唆される。腫瘍組織中に移行したCDDPのうち実際に抗腫瘍効果を示すのは、Hsp90などの重要な生理機能を持ったタンパク質やDNAと結合しているCDDPである。今回の検討では両投薬時刻間の腫瘍中総Pt量に有意な差異が認めらなかったが、DNA-Pt複合体や特定のタンパク質-Pt複合体の量が投薬時刻に違いによって変化している可能性がある。そこで今後、投薬時刻の違いによって腫瘍中の様々なPt複合体量が変化するか否か検討を行い、さらに腫瘍中でDNA-Pt複合体やタンパク質-Pt複合体の生成に影響するmetallothionein分子種、excision repaircross-complementing分子種等の発現に日周リズムが存在するか否か検討する必要があると考えている。本研究では、P-glycoprotein(P-gp)の基質薬剤であるadriamycin(ADR)を対象に、抗腫瘍効果に及ぼす投薬時刻の影響を評価した。また、その要因として血漿中及び腫瘍組織中ADR濃度および5種の薬物トランスポーターのmRNA発現の影響について評価した。腫瘍にはP-gp発現が報告されているEhrlich ascites tumor cells(EAC)を用いて、ICRマウスにEACを皮下移植し、明期前半の10:00もしくは暗期前半の22:00にADRを尾静脈より投薬した。その結果、22:00投薬群はControl群と比較し腫瘍増殖を約3倍抑制した。また、10:00投薬群と比較し22:00投薬群で腫瘍増殖抑制効果が有意に向上した。以上より、投薬時刻の違いによって抗腫瘍効果が変化することが明らかとなった。そこで、血中・腫瘍組織中ADR濃度および腫瘍組織中薬物トランスポーターmRNA発現量を測定した。ADR投薬後48時間、経時的に血中および組織中ADR濃度を測定したが、投薬時刻の違いによる有意な差は認められなかった。同様に、腫瘍組織中mdr1a, mdr1b, mrp1, mrp2, bcrpのmRNA発現量を測定したが、いずれも明確な日内変動は認められなかった。また、腫瘍組織中薬物トランスポーターmRNA発現量には投薬後の薬物トランスポーターmRNA発現量は、いずれも腫瘍組織中ADR濃度との相関関係が認められなかった。以上のことからADR抗腫瘍効果に対する投薬時刻の影響として、薬物動態学的な関与の可能性は低いと考えられた。今後、ADRの投薬時刻の違いによる抗腫瘍効果に差異が現れた機序について、アポトーシスの指標であるCaspase-3活性やADRの標的酵素であるTopoisomerase-IIなどについて評価する。

そこで今後、投薬時刻の違いによって腫瘍中の様々なPt複合体量が変化するか否か検討を行い、さらに腫瘍中でDNA-Pt複合体やタンパク質-Pt複合体の生成に影響するmetallothionein分子種、excision repaircross-complementing分子種等の発現に日周リズムが存在するか否か検討する必要があると考えている。
北朝初期の文芸における治世観　―花園天皇から光厳天皇へ―

本研究では、花園天皇(1297-1348)と光厳天皇(1313-64)を中心とする北朝初期の文芸を取りあげ、そこに込められた治世観を検討した。はじめに、研究の基礎作業として、北朝の文芸・学問に関する資料を収集・分析した。次に、花園天皇の作品を注釈・読解し、治世観を分析した。主な研究成果としては、「誡太子書」の詳細な注釈を発表し、そこにこめられた治世観が花園天皇の自意識と密接に関わることを指摘した。さらに、光厳天皇の作品を注釈・読解し、治世観を分析した。主な研究成果としては、『風雅和歌集』『光厳院御集』などに収録された光厳天皇の和歌に、治者としての自己を謙遜する態度が見られることを指摘した。本年度は、1典籍利用に関する調査、2文芸資料の基本調査、3『風雅和歌集』四季部・雑部の出典調査・注解の作業を行った。については、「仙洞御文書目録」、『花園天皇日記』所学目録の二点に拠りつつ作業を行ったが、奥書等の集成についてはいまだ取りかかれておらず、次年度の課題である。2については、花園天皇全歌集の作成を目標とし、勅撰集所見分についてはほぼ網羅できた。今後はこれに漏れたものを継続して調査してゆく必要を感じている。3については、全作品を通観し、漢籍・経書とかかわりを持つ作品を一覧化した。あわせて特に重要と思われる光厳院の作品について、10首程度の注釈を作成した。このほか、当初、2017年度に予定していた4『光厳院御集』等に見える治世観の研究、の一部を前倒しして行った。34の作業から、特に光厳院詠(『風雅集』『光厳院御集』所収歌そのほか)の治世観についてまとまった調査結果を得たため、これを論文化し、学術誌に投稿した(現在、査読の結果を待っている)。研究計画段階では、『風雅集』に関する論文と『光厳院御集』に関する論文は別個に発表するつもりであったが、両者を統合したほうがより研究成果を効果的に発表できると考え、このようなかたちを取った。また、以上とは別に、3の調査過程で伏見院の隠棲歌について新たな発見があったので、これを論文化して公表した(2015年12月)。2015年度の研究計画のうち、二点が完成せず、次年度も継続して作業を行う必要が生じている一方で、2016年度に予定していた作業の一部を前倒しして2015年度内に行うことができたため。本年度は、昨年度からの積み残しとなっていた典籍に関する調査を行い、完了した。また、花園天皇「誡太子書」に見える治世観の研究を実施した。先行研究を網羅した上で、まず同書に関する詳細な注釈を作成し、論文として公表した。さらに、注釈作業によって明らかになった花園院の治世観について研究発表を行った。花園院は、天皇としての心構えを「誡太子書」にまとめ、光厳院に与えた。同書は北朝の治世観を考える上で重要な文献だが、これまでその文学的研究や注釈はほとんどなかった。本研究では、応募者の漢文学に関する研究実績を生かし、「誡太子書」の全文に注釈を施し、典拠を指摘した上で、文中に見られる治世観を分析し、あわせて同書にあらわれる花園院の自意識を探り、文学作品としての位置づけを検討した。さらに、前年度一部を前倒しして行った『光厳院御集』等に見える治世観の研究を継続し、同集において漢籍典拠を持つ和歌を一覧化した。家集『光厳院御集』及び光厳の詠んだ全歌について、経書・漢籍を典拠とする作品を調査し、そこにあらわれた治世観を分析した。また、その思想的背景について、政治史・思想史の立場から検討を加えた。以上のほか、『菟玖波集』に見える治世観の研究を行った。ただし、同集に収録される、花園院、光厳院の作品は数が限られており、本研究の目的に合致するような、治世観とかかわる句は多少見られるものの、そこからしかるべき論を導くことは、現段階では不可能であった。以上を総合し、花園院、光厳院二代の治世観を検討した。2015年度に完了しなかった課題については、本年度も継続して行う。また、2015年度内に前倒しして行った作業については、完了したものとして、本年度の研究計画から除く。それ以外については研究計画通りに行う。28年度が最終年度であるため、記入しない。
FDG-PETと機械学習を用いて非典型例や亜種に着目した認知症自動鑑別診断

本研究では、FDG-PETを中心としたPETデータとMRIを用いた認知症自動鑑別診断支援の実現を目的とし、単一被験者の画像入力に対して機械学習等を用いて正常例および認知症の原因疾患(アルツハイマー病、前頭側頭葉変性症、びまん性Lewy小体病)の鑑別を行い、画像から得られる客観的指標として疾患特異度と進行度の出力で認知症の鑑別診断支援を行うことが可能となる仕組みの実現を目指している。平成30年度は、近年PET/CTに導入が進む再構成法であるblock sequential regularizedexpectation maximization (BSREM)法について、脳FDG-PETの計測における点広がり関数(PSF)補正の有無による定量性の変化について検討を行った。ホフマンファントム用いて脳の放射能分布を模擬したデータ、および実際の臨床例をBSREM法や既存の3D-OSEM法などを用いて再構成し、比較した。既に、一般的な3D-OSEM法などの再構成法においては、脳PETにおけるPSF補正は、組織の輪郭部分において不自然な分布を生むことが知られているが、今回検討したBSREM法においても同様のアーチファクトが検出された。BSREM法においても、脳PETで使用する場合、定量性を損なわないためにはPSF補正を含まない手法が望ましいことがわかった。本研究成果は該当年度に国内学会で一部発表され、平成31年度にも国際会議での発表を予定している。精度向上のためにも学習及びテストに使用する臨床データの追加が必要であると考えられるがその進捗が遅れている。また、これまでの検討に使用してきたデータを測定してきたPET装置が更新され、以後計測されるデータは最新のPET/CT機によるデータであり、現状はこれらを併用することはできないと考えられており、工夫が必要である。アルゴリズムの改良や計測によるデータの追加についても引き続き検討を進めると共に、再構成条件の再検討などを含む、機種間差補正法の検討などを行い、機種間差を吸収して複数機種のデータをまとめて一つのデータ群として扱うことができるような仕組みを検討および検証していく予定である。費用対効果を考慮し、当該年度は既存のクラスタタイプの計算機群におけるメモリ増設などを行って計算機環境の増強を行った。次年度以降、研究の進捗に応じて新規ワークステーションの導入などを行っていく計画である。
F-18フルオロデオキシマンノース(FDM)によるPETがん診断法の開発

求核置換反応を用いた^<18>F-フルオロデオキシマンオース(FDM)の標識合成法の開発を行った。まず、FDM合成のための3種類の前駆体をデザインし合成した。そのうち前駆体3を用いた標識合成により高収率(56%)、高純度(>98%)のFDMの合成に成功した。また担癌ラットを用いた体内分布実験およびイメージング実験により、FDMの高い腫瘍集積性、相対的に低い脳集積、腎臓からの速やかな排泄を確認した。さらにFDMの臨床応用を開始するための急性毒性試験をマウスで行い、安全性を確認した。^<18>F標識2-フロロデオキシマンノース(^<18>F-FDM)は、^<18>F-FDGと比較してC-2のFの立体配座のみが異なる構造異性体であり、^<18>F-FDGと同程度に腫瘍集積性を示す一方で、小腸や脳への集積性が低く、また血中からの消失速度も速い特徴を有する。従来、^<18>F-FDMは^<18>F-F2を使ったFDG合成法における副産物として合成されたが、比放射能および収量が低くなるという欠点があった。将来的に^<18>F-FDMの臨床研究への展開を考慮した場合、効率的な18F-FDM標識合成法の確立が求められる。そこで本年度は、^<18>F-の求各置換反応により効率的に^<18>F-FDMを合成できるように、新規FDM標識前駆体の開発を行った。前駆体の構造としては、C-2以外の水酸基をAc基で保護し、C-2位に脱離基としてBr、I、OTf基を有する2-デオキシグルコース(DG)誘導体の合成を目指した。BrおよびI基を脱離基に持つ前駆体は、それぞれTBAB、TBAIを求核剤として、1,3,4,6-テトラ-0-アセチル-2-0-Tf-マンノース(FDG前駆体)に対するSN2反応により収率よく合成することに成功した。一方、OTf基を有するFDM前駆体については、まず、Dickの方法に従いペンタアセチルグルコースを出発原料としてそのC-1位を塩化アルミニウムによりCl化した後、加水分解により1,3,4,6-テトラ-0-アセチルグルコースを合成した。そしてC-2のOH基をTf20によりTf化し、目的とする2-0-Tf-FDM前駆体の合成に成功した。以上、本研究により開発した前駆体を用いれば理論的に既存の効率的FDG標識合成法や合成装置を利用することが可能となり、比放射能に優れたFDMを高収量で標識合成できるようになると期待される。次年度以降は、標識合成法のつめを行うとともに、腫瘍集積性、正常臓器分布などの生物学的特性の評価を行うことにする。本年度は、[^<18>F]FDMの臨床応用実現に向けた実用的標識合成法の確立を目的として研究を進めた。標識合成は、前年度開発した[^<18>F]FDMの新規標識前駆体2化合物を用いて、求核置換反応(SN2)によるF-18標識を試みた。この前駆体は、[^<18>F]FDGの標識前駆体と同様に水酸基をアセチル基で保護した構造として設計されたが、結果的に放射化学的収率(RCY)は非常に低く(数%)、実用的合成は実現できなかった。原因は、フッ素導入部位に隣接する水酸基の保護基がアセチル結合であったためと推察された。そこでより結合安定性に優れるアルキルエーテル型保護基を導入した前駆体を新たに設計し、合成した。その前駆体を用いてSN2によるF-18標識を行い、酸性条件下での脱保護反応を経て目的とする[^<18>F]FDMの合成を試みたところ、良好なRCY(>60%)と放射化学的純度(>95%)で[^<18>F]FDMを得ることができた。この結果は[^<18>F]FDGの標識合成に匹敵する結果であり、当該合成法は将来的に十分臨床応用可能なものであることが示唆された。また、反応機序的にこの[^<18>F]FDM合成法は、FDG合成装置を利用出来る。このように実用的標識合成法を確立したことから、実際にその合成法で得られた[^<18>F]FDMの腫瘍集積性について、予備的にラット腫瘍(LY80)モデルを用いて検証した。[^<18>F]FDM投与60分および120分後の組織集積率を調べたところ、腫瘍組織が最も高い値(2.12.2%ID/g)となり、ついで高い集積を示した脳に対しても約1.9倍(60分)あることが確認された。

以上、本年度の研究によって腫瘍イメージング剤として期待できる[^<18>F]FDMの実用的標識合成法を確立することができ、次年度以降の臨床応用に向けた研究基盤が整った。^<18>F・フルオロデオキシグルコース(FDG)は腫瘍診断用PET診断薬として有用であるが、脳への集積が高く脳腫瘍の診断には適さないこと、炎症にも集積するなどの弱点がある。一方FDGの異性体である^<18>F-フルオロデオキシマンオース(FDM)は、申請者の過去の研究によりFDGよりも脳への集積が低いこと、血液クリアランスが早いことなど、FDGより優れたPET癌診断薬である可能性が指摘されていた。しかし、大量合成ができないために臨床応用には至らなかった。そこで、PET癌診断薬としての実用化を目的として、FDMの合成法の開発、すなわち求核置換反応による18F標識合成のための前駆体の開発と、前駆体を利用した高収率・高純度での[18F]FDM標識合成法を行った。3種類のFDM前駆体を設計・合成し、それぞれの前駆体を用いて求核置換反応によるFDM合成を試みた。3種類のFDM前駆体(1-3)の合成に成功し、FDM前駆体3を利用した標識合成では[18F]FDMを高収率(56%)、高純度(>98%)再現性良く合成することができた。また担癌ラットにおいてFDMが腫瘍に高い集積を示し、腎臓を介して速やかに排泄されていることを体内分布実験およびγカメラによるイメージングで確認できた。また、in vitroでFDMが肝癌細胞AH109Aに高い取り込みを示すこと、その取り込みがGlucose、FDGに濃度依存的に阻害されることから、FDMはグルコースおよびFDGと共通の代謝系で代謝されることが分かった。さらに、非放射性のFDMを用いてマウスの急性毒性実験を行った結果、一般状態、体重減少、死亡および剖検における異常所見などの検討項目において、問題となる毒性は観察されなかった。以上、FDMによるPET癌診断の臨床応用を開始するための基礎開発研究および前臨床試験を終了することができみ。
CSFを用いたOKー432刺激好中球の抗腫瘍活性増強法の試みに関する研究

平成2年度の研究で,癌性腹水モデルにGーCSFとOKー432を腹腔内併用投与した場合,OKー432先行投与後GーCSFを投与すると,腹腔内遊出好中球のChcmiluminescence(CL)活性が相乗的に増加し,生存日数が延長したが,OKー432後行投与では相乗効果はみられなかった.本年度はCL活性を全血法で追試し,かつOKー432先行投与で相乗効果が得られた理由と好中球の抗腫痛作用をWinn中和試験で評価した.また腫瘍の存在部位とOKー432あるいはGーCSFの投与経路による影響を検索し,以下の結果を得た.(1)好中球のCL活性は分離好中球を用いた場合も,全血で検索した場合も略同様所見が観察された.(2)OKー432先行投与の意義は,好中球のCL活性がOKー432刺激後24時間目頃にpcakに達するが,GーCSF刺激の場合は6ー12時間目にpcakに達するため,この時間的な差で相乗効果が生じると推察された.(3)背部皮下移植腫瘍を用いOKー432を皮下投与後GーCSFを皮下投与した場合には生存期間の延長は見られず,採取した末梢血好中球のCL活性の増強も観察されなかった.(4)OKー432刺激好中球あるいはGーCSF刺激好中球を用い,MRMTー1と25/1の割合で混合し皮下移植した場合,OKー432では腫瘍増殖抑制傾向がみられたが,GーCSFでは対照群と差はなく抗腫瘍効果は無いものと推察された.(5)SD系ラットにMRMTー1を背部皮下移植した場合,担癌末期に末梢血好中球が有意に増加するが,この好中球をOKー432で刺激した場合,抗腫瘍効果は殆ど観察されず,逆にGーCSFで刺激した場合は腫瘍増殖促進様所見が推察された.以上の結果,腫瘍の存在部位とOKー432やGーCSFの投与経路が異なると,好中球の抗腫瘍作用が異なる可能性が推察された.また好中球を用いた中和試験で担癌早期の好中球はOKー432やGーCSF刺激によりCL活性や抗腫瘍作用の増強を示したが,末期では逆の作用を示す可能性が推察された.平成2年度の研究で,癌性腹水モデルにGーCSFとOKー432を腹腔内併用投与した場合,OKー432先行投与後GーCSFを投与すると,腹腔内遊出好中球のChcmiluminescence(CL)活性が相乗的に増加し,生存日数が延長したが,OKー432後行投与では相乗効果はみられなかった.本年度はCL活性を全血法で追試し,かつOKー432先行投与で相乗効果が得られた理由と好中球の抗腫痛作用をWinn中和試験で評価した.また腫瘍の存在部位とOKー432あるいはGーCSFの投与経路による影響を検索し,以下の結果を得た.(1)好中球のCL活性は分離好中球を用いた場合も,全血で検索した場合も略同様所見が観察された.(2)OKー432先行投与の意義は,好中球のCL活性がOKー432刺激後24時間目頃にpcakに達するが,GーCSF刺激の場合は6ー12時間目にpcakに達するため,この時間的な差で相乗効果が生じると推察された.(3)背部皮下移植腫瘍を用いOKー432を皮下投与後GーCSFを皮下投与した場合には生存期間の延長は見られず,採取した末梢血好中球のCL活性の増強も観察されなかった.(4)OKー432刺激好中球あるいはGーCSF刺激好中球を用い,MRMTー1と25/1の割合で混合し皮下移植した場合,OKー432では腫瘍増殖抑制傾向がみられたが,GーCSFでは対照群と差はなく抗腫瘍効果は無いものと推察された.(5)SD系ラットにMRMTー1を背部皮下移植した場合,担癌末期に末梢血好中球が有意に増加するが,この好中球をOKー432で刺激した場合,抗腫瘍効果は殆ど観察されず,逆にGーCSFで刺激した場合は腫瘍増殖促進様所見が推察された.以上の結果,腫瘍の存在部位とOKー432やGーCSFの投与経路が異なると,好中球の抗腫瘍作用が異なる可能性が推察された.また好中球を用いた中和試験で担癌早期の好中球はOKー432やGーCSF刺激によりCL活性や抗腫瘍作用の増強を示したが,末期では逆の作用を示す可能性が推察された.1.好中球のin vivo抗腫瘍活性(1)腹腔内遊出好中球数(PEN)の経時的変動:SD系雌ラットにOK-432(5KE/匹)ip投与後のPENはip後数時間以内に増加し、24時間目でpeak(20×10^6)に達した後、48時間目で半減したが、proteose-peptone(P-P)では12時間目にpeak(30×10^6)となり、48時間でも高値であった。(2)PENの貧食能(CL活性):PEN3×10^6あたりのCL活性はOK-432ip投与の場合は12時間目で、4979cpm.24、48時間目でもほぼ同様の高い活性が認められた。

P-Pip投与の場合は12時間目で7087cpmとpeakに達した後、24時間目以降に著減し、48時間目では1573cpmと低下した。従って、48時間目のOK-PENのCL活性はP-P投与群のそれに比べ有意に高値であった。(3)細胞障害活性:OK-PENのMRMT-1腫瘍に対する^3H-Thymidine取り込み阻害率(cytostatic活性)はip後24時間でP-Pのそれに比べ有意の高値を示した。(4)in vivo抗腫瘍活性:SD系雌ラットに1×10^6個のMRMI-1腫瘍を移植すると平均14日で腫瘍死するが、5KE/匹のOK-432ip投与後48時間目に移植した場合、50日生存率は85.7%とP-P及び生食水投与群(それぞれ14.3%、0%)及び、OK-432ip後12、24時間目に移植した群の何れに比べても有意に延命した。また、ipあるいはSCへOK-432を投与後、経時的にMRMT-1腫瘍をSC移植した場合、生食水、P-P投与群に比べ約310日目まで腫瘍増殖抑制を有意に認めたが、生存率に差はみられなかった。(5)形態学的観察:PENの菌体成分貧食後の変化を透過型電顕を用い経時的観察した結果、OK-432ip投与後、24時間以内に菌体成分を貧食、分解、消化して48時間目前後に抗腫瘍活性を獲得する可能性が示唆された。2.CSF、KW2228in vivo効果:SD系雌ラットにG-CSFあるいはKW2228を10ug/匹ip投与するとWBCは511時間目に約23倍、PBN比率は12.5%4060%と増加した。またPENはG-CSFおよびKW2228とも約2×10^7個遊出したが、そのpeakはG-CSFは9時間目に、KW2228では3時間目に観察された。平成元年度にSD系ラツトにOKー432,proteoseーpeptone(pp)あるいは生食水を腹腔内投与した場合の抗腫瘍効果,および健常者末梢血好中球をOKー432あるいはpp添加培地で培養刺激した場合の,好中球数とその貧食能(CL活性)の変動を経時的に観察した。またSD系ラツト腹腔内へ顆粒球コロニ-形成刺激因子(GーCSF)を投与した場合の腹腔内あるいは末梢血中の好中球増加程度を経時的に観察し前回報告した。本年度はGーCSF(KU2228とrhGーCSFを使用,10μg/匹)とOKー432(5KE/匹)をラツト腹腔内へ単独あるいは併用投与した場合のCL活性増強程度と,MRMTー1に対する抗腫瘍効果を検討し以下の結果を得た。1.OKー432とGーCSFを腹腔内併用投与すると,腹腔内遊出好中球数はOKー432単独投与時(2×10^7個で24時間目にpeak)に比べ,KW2228では6×10^7個に,rbGーCSFでは4×10^7個に増加し,12時間目にpeakを認めた。しかし,CL活性はOKー432単独投与時と比べ,CSF併用による増強効果は認められなかった。2.OKー432とKW2228を腹腔内へ単独,あるいは併用投与し12,24あるいは48時間目に1×10^6個のMRMTー1腫瘍を腹腔内注入移植した場合,生存日数はOKー432単独投与の場合は48時間目移植群で最も優れていたが,KW2228単独投与の場合は延命効果は観察されなかった。またOKー432とKW2228を併用投与した場合,OKー432単独投与時に比べ,OKー432先行投与後KW2228を併用投与した場合には生存日数は更に延長したが,KW2228先行投与後OKー432を併用投与した場合には延命効果はみられなかった。以上の結果,GーCSF腹腔内投与により末梢血および腹腔内に好中球が多数動員されたが,動員好中球の貧食能増強効果は軽度であった。またGーCSFはOKー432により刺激誘導された好中球の抗腫瘍活性を更に増強したが,GーCSFにより局所へ動員された好中球をOKー432で刺激した場合は抗腫瘍活性増強程度は軽度で,OKー432とGーCSFで動員される好中球亜型には差が存在する可能性が示唆された。