hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
一般機能オントロジーを核としたオープン型知識運用プラットフォームの開発

本研究は,設計などの工学行為において大きな役割を果たす,人工物の「機能」に関する知識の相互運用を実現する基盤的ソフトウェア(機能的知識運用プラットフォーム,F-Openと呼ぶ)を構築することを目標としている.初年度では申請者が従来から研究を行ってきた装置(デバイス)を中心とした機能概念(デバイス機能概念)が,他の研究で提唱されている機能語彙セットや他分野の機能概念とどのように対応づけられるかを検討し,より広い意味での機能概念をカバーする一般機能オントロジーを構築した.まず,他の研究における機能語彙セット(NISTのFunctional Basis)の機能語彙を,デバイス機能概念の定義に照らし合わせ,機能語彙セット同士がどのような関係にあるかを明らかにした.次に,意味的対応が直接的にっかない概念を抽出し,相違点を明らかにした.デバイス機能概念との違いを表す要素を概念化することで,より広い意味での機能概念の定義を構成する要素(意味定義要素)を同定した.このように抽出された意味定義要素の値の違いに基づいて,デバイス機能よりも広い意味での機能概念を含むような概念の定義を体系的に行った.さらに,得られた概念群の定義をオントロジーの一部を計算機的に定義した.申請者らが開発している法造と呼ばれるオントロジー構築環境を用いて記述し,概念と概念間の関係,それらの公理として概念の意味が明確化された.さらに,人工物と生物器官における機能概念の違いについて研究を行っている科学哲学者コミュニティのワークショップに招待され,そのような機能概念の違いについて議論を行った.それらには部品要素の多コンテキスト性の違いや,それに伴って機能をプロセス(作用)的にみなすのか,性質(能力)としてみなすのかといった機能を捉える際のオントロジー的な違いがあることを明らかにすることができた.本研究は,設計などの工学行為において大きな役割を果たす,人工物の「機能」に関する知識の相互運用を実現する基盤的ソフトウェア(機能的知識運用プラットフォーム,F-Openと呼ぶ)を構築することを目標としている.初年度では申請者が従来から研究を行ってきた装置(デバイス)を中心とした機能概念(デバイス機能概念)が,他の研究で提唱されている機能語彙セットや他分野の機能概念とどのように対応づけられるかを検討し,より広い意味での機能概念をカバーする一般機能オントロジーを構築した.まず,他の研究における機能語彙セット(NISTのFunctional Basis)の機能語彙を,デバイス機能概念の定義に照らし合わせ,機能語彙セット同士がどのような関係にあるかを明らかにした.次に,意味的対応が直接的にっかない概念を抽出し,相違点を明らかにした.デバイス機能概念との違いを表す要素を概念化することで,より広い意味での機能概念の定義を構成する要素(意味定義要素)を同定した.このように抽出された意味定義要素の値の違いに基づいて,デバイス機能よりも広い意味での機能概念を含むような概念の定義を体系的に行った.さらに,得られた概念群の定義をオントロジーの一部を計算機的に定義した.申請者らが開発している法造と呼ばれるオントロジー構築環境を用いて記述し,概念と概念間の関係,それらの公理として概念の意味が明確化された.さらに,人工物と生物器官における機能概念の違いについて研究を行っている科学哲学者コミュニティのワークショップに招待され,そのような機能概念の違いについて議論を行った.それらには部品要素の多コンテキスト性の違いや,それに伴って機能をプロセス(作用)的にみなすのか,性質(能力)としてみなすのかといった機能を捉える際のオントロジー的な違いがあることを明らかにすることができた.
shRNAライブラリーを用いたジフテリア毒素毒性発現に関与する宿主因子の解析

ジフテリア毒素の毒性発現に関わる宿主側因子を明らかにするために、ジフテリア毒素感受性に関与する遺伝子をshRNAライブラリーを用いた網羅的遺伝子同定法で探索した。その結果既知の遺伝子を含む11個の遺伝子を同定した。これらの遺伝子についてさらに解析を加え、コレステロール合成に関わる遺伝子がジフテリア毒素感受性に重要な働きをしていることを明らかにした。本研究計画は、ジフテリア毒素の毒性発現に関わる宿主側因子を、近年開発されたshRNAライブラリーを用いた網羅的遺伝子同定法を用いて明らかにし、ジフテリア毒素の細胞内侵入機構と毒性発現のメカニズムを詳細に解明しようとするものである。平成20年度は、(1)ヒトゲノム8,500をカバーするshRNAライブラリーを組み込まれたレンチウィルスベクターをジフテリア毒素感受性ヒト細胞に感染し、(2)セレクションマーカーを用いてshRNA発現細胞だけの集団を得、(3)ジフテリア毒素によるセレクションを行い、(4)生存細胞をセレクションし、(5)これよりmRNAを抽出し、(6)得られた細胞群の中で発現が低下している遺伝子をDNAアレイの手法で同定し、その候補者リストを作成した(1次スクリーニング)。次に1次スクリーニングで挙がってきた個々の遺伝子について、個別に再度siRNA等の手法で2次スクリーニングを実施し、さらに選別を行った。その結果、コレステロール合成に関係の深い複数の遺伝子群がリストアップされてきたので、現在コレステロール存在下あるいはコレステロールを取り除いた培地で細胞を培養し、コレステロールとジフテリア毒素の毒性発現について、毒素侵入過程のどのステップが抑制されているかを、ジフテリア毒素による蛋白合成阻害、125Iで標識したジフテリア毒素の受容体への結合、細胞内取り込み、等を調べることで解析中である。ジフテリア毒素は毒性の本態であるEF2-ADP-リボシルトランスフェラーゼ活性を担うフラグメントAと、細胞膜貫通ドメインおよび受容体結合ドメインからなるフラグメントBから構成される。この毒素は、宿主細胞表面に存在するジフテリア毒素受容体に結合した後、エンドサイトーシスによりエンドソーム内に取り込まれ、最終的にはフラグメントAがエンドソーム膜を通り抜けて細胞質に至り、ペプチド伸長因子EF2を不活化することで細胞の蛋白合成系を制御する。ジフテリア毒素の毒性発現に関与する宿主側因子については、未だ十分な解析がなされていない。本研究計画は、ジフテリア毒素の毒性発現に関わる宿主側因子を、shRNAライブラリーを用いた網羅的遺伝子同定法を用いて明らかにし、ジフテリア毒素の細胞内侵入機構と毒性発現のメカニズムを詳細に解明しようとするものである。今年度は前年度の研究でリストアップされた遺伝子がジフテリア毒素の毒性発現のどの過程に関与するものであるかを明らかにするために、ジフテリア毒素の結合、細胞内へのインターナリゼーション、EF2のADPリボシル化、等の各ステップを解析することを試みた。そのために、リストアップされた候補遺伝子に対するshRNAを発現し、その遺伝子発現が抑制された細胞株を確立した。この株を用いて上記の実験を開始したが、途中細胞株を保存していたフリーザーの故障で樹立株の大部分を失うというアクシデントがあったために21年度中に予定されていた研究を遂行することができなくなった。そのため研究経費の繰り越し申請を行い、22年度にまたがって計画した研究を行った。その結果、アクシデントによって失った株の約80%を再度樹立することができたので、これらの細胞株を用いて、現在ジフテリア毒素の結合、細胞内へのインターナリゼーション、EF2のADPリボシル化、等の各ステップについて、詳細な解析を行っている。本研究は、ジフテリア毒素の毒性発現に関わる宿主側因子を明らかにし、ジフテリア毒素の細胞内侵入機構と毒性発現のメカニズムを解明することである。ジフテリア毒素の毒性発現に関わる宿主側因子を明らかにするために、ジフテリア毒素感受性に関与する遺伝子をshRNAライブラリーを周いた網羅的遺伝子同定法で探索した。その結果既知の遺伝子を含む11個の遺伝子(HB-EGF, CLTC, WEIL1, ARL1, SEC14L2, HSPA1B, PDIA5, DNAJB6, DHCR7, NSDHL, DPH1)を同定した。上記の遺伝子の中でHB-EGFはジフテリア毒素受容体、DPH1はEF2のHis残基をジフタマイドに修飾するために必要な酵素、として知られており、これらの遺伝子が本スクリーニングでピックアップされたことから本スクリーニング法が確かに機能することが示された。上記の中でコレステロール合成に関わる重要な遺伝子2種類がピックアップされたことから、コレステロールとジフテリア毒素の細胞内侵入機構との関連を解析し、コレステロールがジフテリア毒素の細胞内侵入に必須であること、コレステロールを膜から引き抜く作用があるMBCDがジフテリア毒素の毒性を阻害する作用があることを明らかにした。ピックアップされたシャペロン遺伝子については、その後解析が十分に進まず、これらの因子がジフテリア毒素の細胞内侵入に関連するか否かの結論が出ていない状況にあり、今後の課題である。
オートファジーの炭素代謝制御への寄与とその生理的意義の酵母種横断的な解明

オートファジーは真核生物に広く保存された細胞内分解システムであり、様々な基質を液胞に取り込んで分解することが知られている。オートファジーは様々な飢餓条件で誘導されるが、昨年度の本研究により、出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeでは非発酵性炭素源で増殖しているときや炭素源が枯渇しているときにもオートファジーが生じることが示された。具体的には、S. cerevisiaeを0.2%グルコースを炭素源とする合成培地で培養すると、グルコースを使い切った後にエタノールを炭素源として増殖しているとき、および、エタノールが枯渇したときにオートファジーの誘導が認められた。本年度では、このときに生じているオートファジーが何を分解し、酵母細胞にとってどのような意義を持つのかを調べた。1.エタノールを炭素源として増殖している際には細胞質とともに小胞体が分解されること、エタノール枯渇後にはミトコンドリアが分解されていることが示された。これらの分解はオートファジーにより行われていることも示され、特に小胞体とミトコンドリアはそれぞれ典型的なER-phagyとmitophagyにより分解されていた。2.オートファジー欠損株はグルコース枯渇後の増殖に遅延が認められた。また、オートファジー欠損株は長期のエタノール枯渇条件から新たな栄養十分な培地に移した際の再増殖時に遅延が生じることも見出された。3.エタノール増殖時およびエタノール枯渇時に、マクロオートファジーのみならずミクロオートファジーも生じていることが示され、電子顕微鏡解析などから、細胞質や脂肪滴がミクロオートファジーにより液胞に取り込まれていることが見出された。S. cerevisiaeを利用した解析においては、炭素源代謝とオートファジーの関連についての理解は大きく進展したと考えられる。また、当初の想定とは異なり、ミクロオートファジーとの関わりも明らかになってくるなど、当初の予定より進んでいると言える。一方で、本研究では、その他の酵母を利用した解析を予定しているが、S. cerevisiaeで得られた結果の普遍性を検証するに至っておらず、その部分に関しては遅れている。しかしながら、S. cerevisiaeでの研究の進展と総合して、順調に進展していると考えている。本年度のS. cerevisiaseの研究から得られた結果を踏まえながら、その他の酵母種における炭素源とオートファジーの関連を明らかにする。特に、S. cerevisiaseはグルコースを優先的に利用するという特性を持つため、異なる炭素源を優先するような酵母種に焦点を当てて、特異性と普遍性について整理する。オートファジーは窒素源飢餓時にタンパク質分解を促進し、細胞内にアミノ酸を供給する役割と一般的に考えられているが、近年、窒素源飢餓以外の条件でもオートファジーが誘導されることが知られている。しかしながら、その細胞内での役割は依然として未解明な部分が多い。本研究では、エネルギー代謝で主要な役割を担う炭素代謝に着目し、オートファジーの生理的意義を探ることを目的としており、出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeだけではない多様な酵母を解析に加えることで、炭素代謝に寄与するオートファジーの普遍性と多様性を明らかにすることを試みる。本年度では、S. cerevisiaeを中心とし、どのような条件でどのようなオートファジーが誘導されるかを調べるため、以下の解析を行った。1.一般的に広く使われているスタンダードな合成培地では、培地中の炭素源の濃度が高く、培養後期には炭素源以外の要因が酵母の増殖に大きく影響を与えることが示唆された。培養後期においても炭素源のみが酵母の増殖に反映される条件を見出した。2.この条件で培養することで、ダイオキシックシフト時や非発酵性炭素源で増殖しているとき、炭素源が枯渇しているときに、オートファジーが生じることが示された。3. ATG遺伝子破壊株を用いた解析から、それら条件でのオートファジーの機構および機能の一部が明らかになってきた。S. cerevisiaeを利用した解析において、どのようなオートファジーがどのような条件で誘導されるかが見出されたきたとともに、それら条件におけるATG破壊株での表現型を解析することができた点では、当初の予定より進んでいると言える。一方で、本研究では、その他の酵母を利用した解析を予定しているが、現時点では、Yarrowia lipolyticaでATG1破壊株、ATG2破壊株を作製し、その解析の一部を行っている過ぎず、やや遅れている。総合して、順調に進展していると考えている。

これらの分解はオートファジーにより行われていることも示され、特に小胞体とミトコンドリアはそれぞれ典型的なER-phagyとmitophagyにより分解されていた。2.オートファジー欠損株はグルコース枯渇後の増殖に遅延が認められた。また、オートファジー欠損株は長期のエタノール枯渇条件から新たな栄養十分な培地に移した際の再増殖時に遅延が生じることも見出された。3.エタノール増殖時およびエタノール枯渇時に、マクロオートファジーのみならずミクロオートファジーも生じていることが示され、電子顕微鏡解析などから、細胞質や脂肪滴がミクロオートファジーにより液胞に取り込まれていることが見出された。S. cerevisiaeを利用した解析においては、炭素源代謝とオートファジーの関連についての理解は大きく進展したと考えられる。また、当初の想定とは異なり、ミクロオートファジーとの関わりも明らかになってくるなど、当初の予定より進んでいると言える。一方で、本研究では、その他の酵母を利用した解析を予定しているが、S. cerevisiaeで得られた結果の普遍性を検証するに至っておらず、その部分に関しては遅れている。しかしながら、S. cerevisiaeでの研究の進展と総合して、順調に進展していると考えている。今回の条件におけるそれぞれのオートファジーがどのようなシグナルで生じるのかを明らかにする。また、これらのオートファジーがどのような生理的意義を果たすのかを解明する。S.cerevisiaseで明らかになってきたオートファジー誘導条件をその他の酵母でも確かめ、特異性と普遍性について整理する。本年度のS. cerevisiaseの研究から得られた結果を踏まえながら、その他の酵母種における炭素源とオートファジーの関連を明らかにする。特に、S. cerevisiaseはグルコースを優先的に利用するという特性を持つため、異なる炭素源を優先するような酵母種に焦点を当てて、特異性と普遍性について整理する。
遷移金属化合物におけるスピン－軌道相関と量子揺らぎに関する研究

強相関電子系では、電荷・スピン・軌道・格子といった固体内自由度を制御することによって、電気・磁気・弾性・熱といった固体の応答を制御する。本研究では、特に強相関電子系におけるスピン自由度と軌道自由度の結合したゆらぎを検出し、それを活かした巨大な物性応答を創出することを目標とした。まず、スピネル型酸化物MnV2O4では、J-PARCにおいて中性子非弾性散乱を用いて、従来スピン波と考えられてきた22 meV付近の磁気散乱がスピン軌道混成励起である可能性を提案し、その微視的なモデルを提唱した。また、温度変化を詳細に調べることで、その提案を裏付ける実験的な根拠を得た。さらに、SPring-8のBL43LXUにおいてMnV2O4のX線非弾性散乱実験を行い、MnV2O4のフォノンモードの同定に成功した。中性子非弾性散乱で観測された22 meVの励起の分散関係や散乱強度をモデル計算と比較したところ、フォノンではないことがわかった。以上から、スピン自由度と軌道自由度が結合した固体内素励起の存在を実験的に初めて明らかにした。次に、CoNb2O6における量子臨界点近傍での弾性定数のソフト化の起源を調べた。その起源は、横波超音波に含まれる格子回転の寄与によることを実験的に明らかにした。その大きさは、従来のf電子系の物質と比べて、はるかに大きな効果であった。立方対称場のCo2+イオンの電子状態を仮定して、格子回転を含んだハミルトニアンを理論的に導出し、スピン軌道相互作用によるスピン軌道混成効果と量子ゆらぎが結合して現れるのではないかと結論づけた。以上のように、スピンと軌道の自由度が相関した新規な固体内素励起を発見した。また、スピンと軌道の量子ゆらぎに起因して、格子回転と呼ばれる横波音波の非対称な応答が巨大化することを発見した。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では,スピンおよび軌道自由度を有する物質における量子スピン液体状態を低温・外場下での超音波計測を用いて行い,その弾性的性質を明らかにすることが目的である.強相関電子系と呼ばれる一連の物質群では,固体中の電子が有するスピンや軌道自由度が物性発現に重要な役割を果たす.本研究課題では,このスピンおよび軌道自由度が相関して生じる量子スピン液体状態に注目している.今年度前期は,主にFeSc2S4/MnSc2S4の試料育成を行い,化学気相輸送法によって,約300μm角の単結晶試料の育成に成功した.しかしながら,本研究課題で当初強磁場下での超音波測定を行う予定であったFeSc2S4が,すでに他グループに先行されていることが年度の途中で判明したため,対象物質を変更した.そこで,スピン及び軌道自由度を有する,他の量子臨界点を有する物質に対象を変更した.今年度後期は,ドイツにあるドレスデン強磁場研究所に三か月滞在することで定常磁場およびパルス磁場下での超音波測定技術を習得した.まだ,進行中の研究のため詳細は伏せるが,滞在期間中も対象物質の測定を行い,大変興味深い結果を得ることに成功した.今後,この結果に関して原著論文としてまとめていく予定である.帰国後は,所属研究室において,超音波測定系の立ち上げを行い,高周波数の超音波測定を行えるような測定系に改良し,いくつかの物質に関して実際に測定を行った.超音波測定系の立ち上げおよび試料合成も予定通り進めることができた.また,海外滞在中に得られた結果に関しても原著論文として発表する予定であり,国内学会での発表も行うことができた.したがって,おおむね順調に進展していると判断した.本研究課題では、スピン・軌道相関した遷移金属化合物において、スピン・軌道結合した量子揺らぎを超音波測定を用いて検出することを目的としている。今年度は、昨年度ドイツでの研究滞在中に観測した、「量子臨界点近傍における巨大なソフト化」の起源を調べた。まず、研究室内で構築した超音波測定系を用いて、同一の試料について、結果の再現性を検証した。構築した測定系で再現性が確認できたので、さらに横波音波の進行方向と磁場方向の関係を調べた。その結果、横波音波に対して磁場が平行な配置では垂直な配置と比べて、およそ5倍のソフト化を示すことが分かった。また、対角線方向に縦波音波を入れた場合には、ソフト化は観測されないことから、このソフト化は対称歪みに由来するものではないことがわかった。以上の結果から、巨大なソフト化は、格子回転効果によるものであると結論付けた。この効果は、スピン軌道相互作用に由来するものであるため、量子臨界点近傍において巨大なスピン軌道揺らぎの検出に成功したといえる。得られた結果は、日本物理学会での口頭発表を行い、現在は投稿論文を作成中である。上記の研究に加えて、今年度は、放射光回折実験も精力的に行い、「巨大電気磁気効果の解明に向けた磁気格子異常の観測」や「円偏光X線を用いたスピン格子相関の直接観測」、「非共鳴X線非弾性散乱を用いた、スピネル型ヴァナジウム酸化物のフォノン分散の観測」などを行い、これらの結果に関して、シンポジウムや日本物理学会での発表を行った。昨年度得られた結果について再現性の確認もとれ、また構築した測定系を用いて新たに非常に興味深い結果を得ることができた。また、今年度より開始した新しいテーマに関しても着実に結果を得ており、いくつかの追加実験ののち、来年度中にまとめることができると判断したため、おおむね順調に進展していると判断した。

強相関電子系では、電荷・スピン・軌道・格子といった固体内自由度を制御することによって、電気・磁気・弾性・熱といった固体の応答を制御する。本研究では、特に強相関電子系におけるスピン自由度と軌道自由度の結合したゆらぎを検出し、それを活かした巨大な物性応答を創出することを目標とした。まず、スピネル型酸化物MnV2O4では、J-PARCにおいて中性子非弾性散乱を用いて、従来スピン波と考えられてきた22 meV付近の磁気散乱がスピン軌道混成励起である可能性を提案し、その微視的なモデルを提唱した。また、温度変化を詳細に調べることで、その提案を裏付ける実験的な根拠を得た。さらに、SPring-8のBL43LXUにおいてMnV2O4のX線非弾性散乱実験を行い、MnV2O4のフォノンモードの同定に成功した。中性子非弾性散乱で観測された22 meVの励起の分散関係や散乱強度をモデル計算と比較したところ、フォノンではないことがわかった。以上から、スピン自由度と軌道自由度が結合した固体内素励起の存在を実験的に初めて明らかにした。次に、CoNb2O6における量子臨界点近傍での弾性定数のソフト化の起源を調べた。その起源は、横波超音波に含まれる格子回転の寄与によることを実験的に明らかにした。その大きさは、従来のf電子系の物質と比べて、はるかに大きな効果であった。立方対称場のCo2+イオンの電子状態を仮定して、格子回転を含んだハミルトニアンを理論的に導出し、スピン軌道相互作用によるスピン軌道混成効果と量子ゆらぎが結合して現れるのではないかと結論づけた。以上のように、スピンと軌道の自由度が相関した新規な固体内素励起を発見した。また、スピンと軌道の量子ゆらぎに起因して、格子回転と呼ばれる横波音波の非対称な応答が巨大化することを発見した。FeSc2S4に関して,超音波測定による測定のみならず,放射光回折実験を並行しながら,その性質を明らかにしていきたいと考えている.また,パルス磁場だけではなく圧力下での超音波計測を行っていきたいと考えている.来年度は、これまでに得られた結果を投稿論文としてまとめる。また、キュービックアンビルセルを用いた圧力下超音波測定系の構築を開始しており、来年度は試料の測定に移行する予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。
上皮細胞分化のフレキシビリティ-の制御に関わる間充織因子

本研究の目的は、ニワトリ胚の消化器官をモデル系として、器官成形時の形態形成と分化のフレキシビリティ-を調節する間充織因子についてその性質を明らかにすることである。従来の研究から、ニワトリ胚前胃および砂嚢の間充織はそれぞれ部域特異的誘導能力を有し、消化管上皮の分化はこのような誘導能と上皮の反応性の組み合わせで決定されることが明らかになっていた。本重点研究ではこれらの基礎的知識に基づいて、以下の研究がなされた。1.食道、前胃、砂嚢上皮を前胃間充織と共に培養すると前胃上皮のマ-カ-であるペプシノゲン産生が誘導されるが、このとき上皮細胞は上皮細胞の中間径フィラメントの一つであるサイトケラチンのうち、PKK1抗体と反応する成分(PKK1抗原)を特異的に失う。すなわち、前胃間充織はペプシノゲン産生とPKK1抗原抑制を同時に誘導するわけで、このことは間充織の誘導作用を調べる上で極めて興味ある知見である。2.前胃と砂嚢の間充織の誘導能の差異を分子的に明らかにするために、両間充織を区別しうる単クロ-ン抗体GM1を得た。この抗原は前胃間充織にはわずかしか存在しないが、砂嚢間充織には上皮直下の数細胞層にわたって多量に存在し、かつGM1抗体は前胃、砂嚢の分化を培養条件下で阻害する。今後GM1抗原の性質を明らかにすることは、間充織誘導因子の本性を知る上で有用であると考えられる。3.腸上皮は発生の極めて初期から、ペプシノゲン発現能を失っていることが明らかになった。今後腸上皮細胞のペプシノゲン遺伝子発現抑制機構の解明から、間充織因子の探索へと進む道が開けた。4.前胃間充織による誘導作用には、上皮細胞との直接接触が不可欠であることが示された。この事実は誘導現象に細胞外物質が関与している可能性を示唆しており、今後の解析に重要な手掛かりを与える。
教育における障害者差別解消の推進と自治体教育政策過程との相互関係に関する研究

2016年から施行されている障害者差別解消法によって、国、都道府県、市町村などの行政機関は障害者に対する「差別的取り扱い」を禁止されるとともに、「合理的配慮の提供」を義務づけられるようになった。ただし、実際には自治体による障害者差別解消をめぐる政策、施策は多様であり、教育においても自治体別に多様性が生じている。先進的に学校教育分野での障害者差別解消を推進している自治体を取り上げて、その推進要因について自治体の教育政策の形成・実施過程の特徴について明らかにする。
歯科矯正治療時の歯の移動・骨リモデリングにおけるヘッジホッグシグナルの役割の解明

HhシグナルのレセプターであるPatched1(Ptch1)haploinsuficient(+/-)マウスを用いて解析を行った。結果、顎顔面骨・長管骨において高代謝回転型の骨リモデリングが行われている事が確認された。さらにin vitroでの解析からPtch1+/-の骨芽細胞では細胞増殖ではなく、分化能が、また破骨細胞支持能が亢進している事がわかった。このことから、成体の骨組織の恒常性維持にHhシグナリングが関与する事が明らかとなった。1.生理的条件下におけるPtc1+/-マウスの顎顔面骨代謝の解析(1)顎顔面骨組織の解析:Ptc1+/-マウス(Ptc1KO)と野生型マウス(WT)の顎顔面骨についてX線撮影・マイクロCTにて骨のサイズ、形状、質、骨密度、骨量をマクロ的に評価し、あわせて組織学的解析による質的検討も行った。組織学的解析としては、HE染色、von Kossa染色、TRAP染色、カルセイン二重標識を行った。Ptc1KOでは高代謝回転型の骨量増加を認めた。(2)骨芽細胞の増殖・分化・survivalの解析:Ptc1KOとWTの新生仔頭蓋骨由来骨芽細胞の増殖・分化を、チミジン取り込み能、アリザリンレッド染色による基質合成能、Real time RT-PCRによる分化マーカーの発現検討によって評価した。Ptc1KO骨芽細胞では増殖は変わらないものの、分化能が亢進していることが明らかとなった。(3)骨芽細胞の破骨細胞形成支持能、および破骨細胞の分化・活性・survivalの解析:Ptc1KOとWTの培養骨芽細胞と造血系細胞(骨髄細胞または脾細胞)の共存培養をおこない、TRAP陽性多核細胞形成能を測定した。また、培養骨芽細胞における破骨細胞分化因子(RANKL)のmRNAレベルを評価した。形成破骨細胞に関しては、象牙片上での吸収窩測定によりその活性を評価するとともに、生存期間の検討も行った。Ptc1KO骨芽細胞においてはRANKL発現の著しい上昇が認められ、破骨細胞支持能が亢進していた。一方、Ptc1KO破骨細胞前駆細胞には異常は認められなかった。骨芽細胞・破骨細胞におけるHhシグナル下流遺伝子と相互作用分子の解析1.Hhシグナル下流遺伝子の同定Hhによる骨芽細胞・破骨細胞分化誘導効果に与える影響を分化マーカーの発現と基質合成能を指標検討した。骨芽細胞に対するHhシグナルの影響をマーカー遺伝子の発現上昇を指標に経時的に評価した。これを元にタイポイントを設定しgonechipによる網羅的解析を行った。結果、今まで予想されなかった下流遺伝子が候補として同定された。今後はこの下流遺伝子の機能解析を行っていく予定である。Ptcl+/-マウス・サイクロパシン投与マウスの実験的歯の移動・後戻り評価モデルを用いた歯科正学的・分子生物学的評価1.動物および実験的歯の移動評価モデル野生型マウスを用いて実験的歯の移動モデルを作製し、両者の間で歯の移動度と周囲組織の変化を比較・観察した。この動物モデルが歯の移動・後戻り評価に有用であることが示された。2.歯の移動に関する歯科矯正学的・分子生物学的評価野生型マウスの歯周組織において、in situ hybridizatio法により腱・靱帯などの強靱結合組織に発現が見られる遺伝子であるScleraxis、Tenomodulinの発現が確認された。今後は歯周組織において、これらの遺伝子が、歯の移動の際にどのように調節されるか検討していく予定である。
戦前期日本企業海外活動拠点の形成と発展―商社支店が構築したネットワーク

◇シドニーでの史料調査:ニュー・サウス・ウェールズ州立文書館、シドニー市公文書館、ニュー・サウス・ウェールズ州立図書館、オーストラリア国立公文書館シドニー分館において史料調査を実施し、シドニー商業会議所年報、日本企業関係登記書類、商工名鑑などを複写収集した。また、戦前期日本企業事務所所在地等の現地踏査を行った。◇米国国立公文書館での史料調査と史料複写収集:米国国立公文書館カレッジパーク分館(メリーランド州)において、戦前期在米日本企業関係接収史料(RG131史料)の調査を行い、現地業者による複写収集対象史料を選定した。本年度中に現地業者への発注により29,800コマの複写画像を収集した。◇史料目録の整備と公開:複写収集した史料画像利用のために史料細目録データベースの入力作業を進めた。◇研究会の開催:史料調査の進め方の検討と史料を用いての商社海外支店活動拠点形成に関する共同研究のために、研究代表者と連携研究者により研究会を開催した。シドニー、ニューヨークにおける史料調査は概ね順調に進み、各地での日本企業支店進出状況を把握できた。米国国立公文書館(カレッジパーク)における史料調査(複写収集対象史料の選定)も順調に進んだが、現地業者の事情により2018年3月末までの複写収集が困難となったので、補助金の繰越申請を行い承認を受けた。繰り越した事業計画(RG131史料の複写収集、史料細目録データベース入力)については繰越申請時の予定通り2019年初頭までに実施できたが、それを踏まえての史料分析に若干の遅れが生じている。2017年度に実施したシドニー、ニューヨークでの調査結果を踏まえて、海外拠点への日本企業進出状況把握のための史料調査を引き続き進める。調査候補地の史料保存状況について事前情報収集に努め調査地の再検討を行った。その結果、2018年度中にはフランス国立公文書館ルーベ分館での史料調査を実施し、2019年度には上海での史料調査を行うこととした。米国国立公文書館でのRG131史料の複写作業については、史料選択作業の結果に基づき現地業者による複写収集作業を進めている。複写収集した史料についての史料細目録データベース入力作業も引き続き進めている。また、関連する史料として東京大学経済学部史料室が所蔵する横浜正金銀行関係史料の調査と収集を2019年度中に進める予定である。米国、オーストラリア等で複写収集した史料の画像並にそれら史料の細目録データベースを在外日本企業史料研究会並に公益財団法人三井文庫の協力のもとで公開する準備を進めている。収集した史料の分析を、研究代表者と研究協力者が協力して進め、戦前期日本商社の海外進出と貿易圏形成に関する論文集の刊行を目指している。また、2020年9月に開催される第2回世界経営史会議(2nd World Congress on Business History)に向けて本研究課題に関連したセッションの応募準備を進めている。
スターリン時代の芸術政策と視覚芸術の様式-写真とリアリズム絵画の興隆

1930年代のソヴィエト絵画の様式、社会主義リアリズムとの関連という観点から、スターリン政権下の芸術政策において写真が果たした役割を明らかにすることが研究の全体的な目的である。本年度は昨年度に引き続き、1930年代に発達したフォト・オーチェルク(写真エッセイ)の調査および当時の写真に関する議論に関して研究を行った。昨年度モスクワに滞在し、主に国立レーニン図書館において、「与えよ」「建設のソ連邦」「三十日」などのグラフ雑誌、「ソヴィエト写真」「プロレタリア写真」などの写真雑誌、そして写真を用いたパンフレットや写真アルバムなどの調査を行ったが、本年度はこれらの資料の分析と考察を行い、研究成果の一部をニューヨーク大学との協同のもとに行われた東京大学GCOE「共生のための国際哲学教育研究センター」主催Graduate Student Conferenceにおける口頭発表、および論文「社会主義の理想は日常生活の中に-ソヴィエトにおけるフォト・オーチェルクの発展」(『日本スラヴ人文学会スラヴィアーナ』)として発表した。さらに本年度の後半は、フォト・オーチェルクを映画や文学、ジャーナリズムなどのジャンルを含むソヴィエトのドキュメンタリー運動という幅広い文脈に位置づけるための研究を行った。その成果は口頭発表「ソヴィエトにおけるアーカイヴ・モメント-ファクトの文学、ヴェルトフ、フォト・エッセイ」において披露され、論文としてフランスの学術誌『1895』および『日本ロシア文学会ロシア語ロシア文学研究』への投稿を行った。ソヴィエトのフォト・エッセイはその芸術性の高さをしばしば指摘されてきたが、本格的な研究は世界的に見ても多くはない。本研究は写真のみならずエディトリアル・デザインやキャプション、シナリオを含めてフォト・エッセイを詳細に分析し、プロパガンダ計のメディアとしての特色を明らかするものである。それと同時に、スターリンの芸術政策やドキュメンタリー運動という文化的な背景、および五ヵ年計画という政治的・社会的背景との関連性をも明らかにした。1930年代のソヴィエト絵画の様式、社会主義リアリズムとの関連という観点から、スターリン政権下の芸術政策において写真が果たした役割を明らかにすることが研究の全体的な目的であるが、本年度の前半は、レーニンの肖像に見られる写真とリアリズム絵画の考察に重点をおいて研究活動を行った。この研究に関しては、表象文化論学会およびカナダのオタワ大学で行われたワークショップにおいて口頭発表を行い、学会誌『表象』3号に論文を寄稿した。これらの研究をとおして、「ファクトの文学」を中心とする写真およびドキュメンタリー運動の展開と議論、美術における社会主義リアリズムの基盤となった画家グループ「アフル」の活動、ソヴィエトにおけるフォト・モンタージュ技術の発展を明らかにした。本年度は、1920年代後半から30年代にかけて発達したソヴィエトのグラフ雑誌を中心に研究活動を行った。9月から10月には約一ヶ月間モスクワの国立ロシア人文大学に受け入れを要請し、主に国立レーニン図書館において「与えよ」「建設のソ連邦」「三十日」などのグラフ雑誌、「ソヴィエト写真」「プロレタリア写真」などの写真雑誌、そしてパンフレットや当時出版された写真理論の書籍など、ロシア国外では入手しがたい一次資料の収集をおこなった。調査の成果の一部に関しては、日本スラヴ人文学会で報告を行った。この研究は現在でも継続中であり、2009年5月にはニューヨーク大学との協同のもとに行われる、東京大学GCOE「共生のための国際哲学教育研究センター」主催Graduate StudentConferenceにおいての発表を予定している。ソヴィエトのグラフ雑誌はその芸術性の高さをしばしば指摘されてきたが、本格的な研究は多くはない。本研究では写真のみならずエディトリアル・デザインおよび記事や見出しといった文章を詳細に分析し、プロパガンダのメディアとしての特色を明らかにすることを試みる。
間葉上皮転換（MET)モデル作製とモデルを用いた生体内MET分子制御機構の解明

間葉-上皮転換(MET)現象は、間葉系細胞が組織浸潤を行い、再度上皮様構造を形成する状況が想定され、生体内では初期段階で生じる重要な現象の一つである。この現象をin vitroまたはin vivoで明らかにするため、上皮細胞特異的なプロモーター領域を導入したルシフェラーゼ発光及びVenus蛍光蛋白質を同時に発現するレンチウイルスベクターを構築し、MET現象に伴い化学発光を確認できる細胞株を構築した。本年度は間葉系幹細胞及び不死化子宮内膜間質細胞に導入を行い、培養条件検討によりin vitroで上皮特異的なプロモーターの活性化による化学発光を認める細胞が出現した。また3D培養法や新たに2017年Cellで報告された子宮腺上皮細胞を用いたオルガノイド形成法を用いて、METを再現できないかと研究を進めたが芳しい結果は得られなかった。In vivo実験として、卵巣移植や腎被膜下移植を用いてマウス生体内に移植を行いIVISにてその発光の検出を試みたが発光は認められず、生体内METモデルの作製は困難を示した。しかしながら薬剤を用いて間葉系幹細胞を使用したMET誘導実験では一部の薬剤でMET誘導がかかり、蛋白質レベルで間質マーカーであるN-Cadherinの減少や上皮マーカーであるCytokeratinやE-cadherinの発現上昇が認められ、METシグナルを解明する一端になると考えられた。シグナルを明らかにし、MET制御因子を同定するところまでには至れなかったが、今後使用した薬剤のシグナルを検討し、今後の発展につなげたいと考える。動物成体内のMET現象は、間葉系細胞が組織浸潤を行い、再度上皮様構造を形成する状況が想定される。そこで子宮内膜症モデル動物において、発光タンパク質と蛍光タンパク質を同時に発現するレンチウイルスベクターを構築し、このレンチウイルス感染細胞を移植することで、IVISを用いて動物体内での細胞動態をリアルタイムに観察できる系を確立した。そこでMET現象をおさえる為にこのベクターのプロモーターを上皮細胞特異的プロモーターに変換し、新たなプラスミドを作成した。上皮細胞特異的プロモーターとして、Cytokeratin18(CK18)、Cytokeratin 19(CK19)、epithelialcell adhesion molecule(EpiCAM)の3種類を作成した。これらは発現のタイミングが異なると考えられるので、METを起こした際、どの上皮マーカーが最初に発現するかを考慮したものである。これらを間葉系幹細胞株UE6E7T-11細胞に感染させて現在実験を行っている。またin vitroでのMETモデルの作成にも着手している。間葉系幹細胞誘導子宮内膜症モデル細胞を用いたマトリゲル包埋およびコラーゲンゲル包埋三次元培養法やスフェロイドを用いた上皮培養液中分化誘導法等を実践しているが、現在in vitroにおけるMETモデルの完成には至っていない。申請者は平成28年9月より慶應義塾大学医学部産婦人科へ移動となり、移動前の1ヶ月は引継ぎや引越等で時間が割かれたこと、また着任後は赴任先の仕事を軌道に乗せることに加え、新たに若手Bの実験の基盤を作ることに時間がかかったことから、予定していた研究進捗が遅れている理由である。間葉-上皮転換(MET)現象は、間葉系細胞が組織浸潤を行い、再度上皮様構造を形成する状況が想定される。そこで子宮内膜症モデル動物において、発光タンパク質と蛍光タンパク質を同時に発現するレンチウイルスベクターを構築した。Cytokeratinなどの上皮細胞特異的プロモーター領域を導入し、METを起こすと化学発光を確認できる系を作製した。上皮由来の子宮癌細胞株であるIshikawa細胞や子宮内膜腺細胞株であるHemo1に導入し、IVISで化学発光を確認した。さらに子宮内膜間質細胞株であるTHESCや不死化骨髄由来間葉系幹細胞株UE6E7T-11に導入し、化学発光が認められないことも確認した。これらのことから、今回作成したベクターはMET解析に使用できることを確認できた。これまで超免疫不全マウスNSGマウスに間葉系幹細胞誘導子宮内膜症モデル細胞を移植した際にMETを起こしたものを蛍光免疫染色法で確認していたが、現段階ではプロモーター活性が認められる結果は得られていない。誘導されている細胞の量が少ない可能性もあることから現在、別の手法を検討している。しかしながらin vitroモデルの作成に伴い、間葉系幹細胞誘導子宮内膜症モデル細胞においてCKプロモーター導入細胞に関して化学発光が認められた。現在通常の細胞と誘導細胞におけるマイクロアレイ解析を行う準備を行っている。また昨年Cellより子宮内膜上皮細胞のOrganoid培養法について報告されたことから、現在、この方法を用いて腺管構造を形成できるin vitroモデルを作成できないか検討を行っている。さらに現在、数種類の薬剤を用いて強制的METモデルの作成についても検討を行っている。In vivo及びin vitroモデルが完成していないこと、MET制御因子の同定に至っていないことから、「やや遅れている」とする。本年度は間葉系幹細胞及び不死化

子宮内膜間質細胞に導入を行い、培養条件検討によりin vitroで上皮特異的なプロモーターの活性化による化学発光を認める細胞が出現した。また3D培養法や新たに2017年Cellで報告された子宮腺上皮細胞を用いたオルガノイド形成法を用いて、METを再現できないかと研究を進めたが芳しい結果は得られなかった。In vivo実験として、卵巣移植や腎被膜下移植を用いてマウス生体内に移植を行いIVISにてその発光の検出を試みたが発光は認められず、生体内METモデルの作製は困難を示した。しかしながら薬剤を用いて間葉系幹細胞を使用したMET誘導実験では一部の薬剤でMET誘導がかかり、蛋白質レベルで間質マーカーであるN-Cadherinの減少や上皮マーカーであるCytokeratinやE-cadherinの発現上昇が認められ、METシグナルを解明する一端になると考えられた。シグナルを明らかにし、MET制御因子を同定するところまでには至れなかったが、今後使用した薬剤のシグナルを検討し、今後の発展につなげたいと考える。今後、作製した上皮プロモーター導入間葉系幹細胞を子宮内膜症モデル細胞へ誘導し、免疫不全マウスへ移植した細胞がMETを起こした時期を非侵襲的に観察する。また子宮内膜癌細胞等へ同様に上皮プロモーターを導入したレンチウイルスベクターを感染させ、同様の実験を行う。さらに、構築された組織から、細胞で発現している蛍光蛋白と上皮特異的な表面抗原を認識する蛍光標識抗体の組み合わせにより、セルソーターを用いて自発的にMETを起こした細胞のみを純化して回収をおこなう。赴任場所が変わったことから次世代シークエンス等の使用が可能ではなくなったが、単離した自発的MET細胞と、METを起こす前の細胞をNSGやDNAマイクロアレイ等の解析を行い、MET制御に関与する鍵因子の同定を試みる。同定したMET制御の鍵因子と予想される候補因子について、強制発現や発現抑制、また入手可能であれば機能亢進/阻害薬剤等を用いるなどの手法によって、MET制御機構への関与を明らかにする。in vitroモデルで誘導が認められる細胞についてリアルタイムRT-PCR及びウエスタンブロット法を用いてMETが起きているのかについて確認を行う。また既存薬を使用してMETの評価も行い、両者ともにMETが起きている可能性が示唆されればDNAマイクロアレイ等の解析を行い、MET制御に関与する鍵因子の同定を試みる。In vivoモデルに関しては腎被膜下移植などより細胞の成長が促される場所での検討を行う。細胞の増殖が認められればその構築された組織から、細胞で発現している蛍光蛋白と上皮特異的な表面抗原を認識する蛍光標識抗体の組み合わせにより、セルソーターを用いて自発的にMETを起こした細胞のみを純化して回収をおこなう。単離した自発的MET細胞と、METを起こす前の細胞をNSGやDNAマイクロアレイ等の解析を行い、MET制御に関与する鍵因子の同定を試みる。
論理的記述力を高めるためにコンパクトライティングをとりいれることの効果の測定

本研究は,論理的記述力を高めるためのコンパクトライティングの有効性を明らかにする。研究実施計画に沿って,前年度実施した取り組みも合わせて4単元(大造じいさんとがん,時計の時間と心の時間,やまなし,海の命)でコンパクトライティングをとりいれた授業実践を行い,検証した。本研究の成果として,以下の3点について報告する。1コンパクトライティングの質的な効果コンパクトライティングは, 200字程度という条件が設定されていることから,適切な語彙の記述が求められる。引用数や思考操作の語彙がしぼられ,ねじれのある文章や内容の重複が減り,一定の効果があったと言える。自由記述とは異なり,字数制限があるために,何を伝えたいのか,何を伝えなければならないのかを明らかにしなければならず,伝えたいことをコンパクトに表現することができた。2コンパクトライティングの量的な効果コンパクトライティングをとりいれることによって,語彙数や引用数,思考操作の語彙など量的な効果は明らかにすることはできなかった。上記1でも示したように, 200字程度という字数制限があるために,要約したり,語彙を取捨選択したりすることの育成につながったと考える。引用数や思考操作が多いほど,煩雑な文章になる傾向が見られた。3指導の留意点コンパクトライティングは語彙力との関係が重要であることが明らかになった。語彙を知り(理解語彙),活用できることが求められる(使用語彙)。そのため,年度当初から児童に身につけてほしい語彙を取り上げ,計画的・継続的に指導する必要がある。また,全ての教材や指導でコンパクトライティングが有効であるかどうかは,さらに多くの実践と分析,検証が必要であると考える。今後は,語彙力に焦点をあて,語彙力と論理的記述力の関係性について検討していく。
可逆電極電位をプローブとする溶融ガラスの酸・塩基機能の評価

ガラス製造技術面のみならず。種々の物性面においても重要であるガラス融液の酸・塩基機能を酸素イオン濃淡電池の起電力測定および特定イオンの電極電位の測定から評価した。アルカリホウ酸塩二成分ガラス【R_2】O-【B_2】【O_3】、およびアルカリ珪酸塩二成分ガラス【R_2】O-Si【O_2】(ここでR=Li,Na,K,Cs)について種々の酸素イオン濃淡電池たとえば(【O_2】)Ptl【NA_2】0・2【B_2】【O_3】【ll】×【R_2】O・(1-x)【B_2】【O_3】【l】Pt(【O_2】)を組立て8501,300°Cにおける超電力を測定し、種々のガラス融液の【Na_2】O・2【B_2】【O_3】または【Na_2】O・2Si【O_2】基準の酸素イオン活量を算出した。【R_2】O-【B_2】【O_3】系の酸素イオン活量は【Li_2】0,【Na_2】O系では【R_2】O=20mo1%で極小を示すが他の系では【R_2】Oの増加につれて大きくなった。この極小現象はB-B距離の収縮に対応している。【R_2】O-Si【O_2】系では【R_2】Oの増加とともに酸素イオン活量は単調に増加し、分極性の大きな酸素の増加を反映した。またいずれの系でもCs>K>Na>Liの順に酸素イオン活量は増加し、アルカリイオンの分極能の小さいもの程、陰イオンの酸素イオン供与性を増大させることが明らとなった。一方、(【O_2】)Ptl【Na_2】O・2【B_2】【O_3】【ll】【Na_2】O・2Si【O_2】lPt(【O_2】)の起電力測定より得た共通尺度によるホウ酸塩と珪酸塩の酸素イオン活量の比較より、等温・等アルカリ濃度では珪酸塩の方が酸素イオン活量は大きくなり、非架橋酸素がガラスの酸・塩基性に大きな影響を及ぼすことが明らかになった。他方、プローブイオンとして【Sb^(3+)】-【Sb^(3+)】および【Cd^(2+)】-【Cd^0】対を選び、これらイオンのガラス融液中での電極反応を白金電極を用いて調べた。x【R_2】O・(1-x)【B_2】【O_3】融液における【Sb^(5+)】/【Sb^(3+)】,【Cd^(2+)】/Cdの還元電極電位はいずれもガラス融液の酸素イオン活量が増加するに従って負電位側にずれた。【Na_2】O・2【B_2】【O_3】共通基準に換算されたこれらイオン溶媒和エネルギーはガラスの塩基性が増すにつれ大きくなった。このことは、【Sh^(5+)】,【Cd^(2+)】イオンの酸素との結合力がガラスの塩基性の増加とともに大きくなることを意味する。一方、(【O_2】)Ptl【Na_2】O・2【B_2】【O_3】【ll】【Na_2】O・2Si【O_2】

lPt(【O_2】)の起電力測定より得た共通尺度によるホウ酸塩と珪酸塩の酸素イオン活量の比較より、等温・等アルカリ濃度では珪酸塩の方が酸素イオン活量は大きくなり、非架橋酸素がガラスの酸・塩基性に大きな影響を及ぼすことが明らかになった。他方、プローブイオンとして【Sb^(3+)】-【Sb^(3+)】および【Cd^(2+)】-【Cd^0】対を選び、これらイオンのガラス融液中での電極反応を白金電極を用いて調べた。x【R_2】O・(1-x)【B_2】【O_3】融液における【Sb^(5+)】/【Sb^(3+)】,【Cd^(2+)】/Cdの還元電極電位はいずれもガラス融液の酸素イオン活量が増加するに従って負電位側にずれた。【Na_2】O・2【B_2】【O_3】共通基準に換算されたこれらイオン溶媒和エネルギーはガラスの塩基性が増すにつれ大きくなった。このことは、【Sh^(5+)】,【Cd^(2+)】イオンの酸素との結合力がガラスの塩基性の増加とともに大きくなることを意味する。
非古典的MHC細胞表面抗原Millの立体構造解析

細胞表面抗原である主要組織適合性抗原(MHC)の多様なメンバーのうち、特殊な生物学的機能を有するものが非古典的MHCと呼ばれる一群である。最近、見出された新規の非古典的MHCクラスI様分子のMILLファミリー(MILL1およびMILL2)は以下の性質を有することがわかった:(1)ペプチド提示能を有さない、(2)GPIアンカー型分子である、(3)軽鎖(β2ミクログロブリン)に結合する、(4)MILL1は胸腺髄質上皮細胞に発現し、MILL2は免疫系以外のかなり多くの細胞に発現する。しかし、MILLの生理機能の解明は不十分であり、立体構造も決定されていない。そこで、私たちはMILLの立体構造を明らかにすることで、MILLの生理機能を解明することを目指している。昨年度から引き続き、大腸菌発現と巻き戻しにより調製したMILL2の細胞外ドメインの結晶を用いて2.2Åの高分解能データにより構造解析を行った。重原子同型置換法により位相決定後、モデル構築を行った結果、通常のMHCでは見られない大きなドメイン間の構造の柔軟性が観測された。しかし、興味深いことに、β2ミクログロブリンとの会合状態は通常のMHCで見られる配向を維持していた。これらの構造的特徴を踏まえて、MILL特異的レセプターの結合部位を予測した。さらに、MILLと結合することを確認できた細胞群を用いて、先の予測に基づく変異体解析を行った。これらは通常の古典的MHCと異なり、細胞表面にペプチド分子を提示するのではなく、脂質などの特殊な分子を提示するものや、提示能そのものが欠損し他の生理機能を有するものが存在する。最近、見出された新規の非古典的MHCクラスI様分子のMILLファミリー(MILL1およびMILL2)は以下の性質を有することがわかった:(1)ペプチド提示能を有さない、(2) GPIアンカー型分子である、(3)軽鎖(β2ミクログロブリン)に結合する、(4) MILL1は胸腺髄質上皮細胞に発現し、MILL2は免疫系以外のかなり多くの細胞に発現する。これらの性質は他の非古典的MHCの特徴と合致する部分もあるが、MILLそのものの生理的な機能の解明を目指して、本年度はMILL分子の作製とX線結晶構造解析に取組んだ。大腸菌を用いた発現と巻き戻しにより、MILLの細胞外ドメインを調製した。これを用いてMILL2については結晶化に成功した。ヨ-素誘導体の結晶データを収集した結果、位相決定に成功した。2.2Åの高分解能データのデータ収集に成功し、現在精密化を進めている。現時点では、これまでに報告されてきたMHCでは見られたことの無い大きなドメイン構造の変化が観測され、かなりユニークな構造を有する非古典的MHCと言える。これらの構造的特徴を基に機能を類推することを進めている。