hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アスペクト比を制御した蛍光体ナノロッド配向膜による新規偏光制御平面発光素子の実現

偏光子を必要としない偏光発光デバイス実現のためにY2WO6ナノロッドの合成および配向膜の成膜を行った.Y2WO6ナノロッドはLiClフラックスを用いたフラックス法により合成した.Gdを添加することにより非ロッド形状の粒子の析出を抑えつつ,100 nmの直径を持つナノロッドを合成し,Y2WO6の母体発光である460 nmの青色発光を観測することに成功した.得られたナノロッドを用いてディップコート法およびエレクトロスピニング法により配向膜の成膜を行った.いずれの方法においてもナノロッドをある程度配向させることには成功したが,得られた偏光はきわめて低かった.平成27年度は,蛍光体ナノロッドの合成と基本的な発光特性の評価を行った.ナノロッド蛍光体からの発光の偏光は,ナノロッド側面付近の発光中心の励起状態または基底状態の波動関数の対称性によるため,発光の遷移の種類(f-f遷移,d-f遷移,d-d遷移,p-s遷移)に依存すると考えられる.そのため,Y2WO6母体ナノロッドに対し,Eu,Sm,Er(f-f遷移),Ce(d-f遷移),Mn(d-d遷移),Sn(p-s遷移)の添加を試みた.また,ナノロッド側面と発光中心の間の距離にも大きく依存すると考えられるので,Euに対し添加濃度を変化させ,側面からの平均距離を変化させることも試みた.Y2WO6ナノロッド蛍光体はLiClを用いたフラックス法により合成した.原料溶質としてY2O3,WO3と添加物(すべて2mol%)であるEu2O3,Sm2O3,Er2O3,CeCl3,MnCO3またはSnCl2を700°CのLiClフラックスに溶解させ,LiClの蒸発による過飽和度の増加を利用して結晶成長,徐冷後,温水でLiClを除去することでナノロッド蛍光体を得た.その結果,f-f遷移のEu,Sm,Er以外からの発光を観測することはできなかった.そのため,Y2WO6を母体とする際には,f-f遷移(および母体発光)を用いる必要があることがわかった.また,Euの添加濃度を増大させたところ,Y2WO6の構造を保つのは10%まであることがわかった.また,ロッドの直径は濃度に関係なく10%まで約100nmを保つが,発光強度は添加濃度とともに増大することがわかった.この発光強度の増大には側面付近のEuが関与していると考えられるので,平成28年度以降は,Euを10%添加したY2WO6ナノロッドの配向膜の作製と,偏光特性の評価に着手する予定である.初年度は蛍光体ナノロッドの合成と基本的な特性評価に費やされたが,本課題は追加採択で研究開始が10月であったので,研究期間を考えるとおおむね順調であるといえる.初年度に今後用いる蛍光体ナノロッドの合成条件をほぼ決定することができたので,本課題の主目標である配向膜の作製と偏光特性の評価に移行したい.平成28年度は,蛍光体ナノロッドの高品質化するとともに,面内の一方向にナノロッドを配向させる方法についての検討を行った.Eu添加Y2WO6ナノロッドの合成には平成27年度同様,原料溶質を700°CのLiClフラックスに溶解させ,LiClの蒸発による過飽和度の増加を利用して結晶成長させるフラックス法を用いたが,原料溶質としてこれまでのY2O3,WO3,Eu2O3に加え,すでに合成済みのEu添加Y2WO6ナノロッドを種結晶として導入することにより,合成される結晶の高品質化を試みた.その結果,ナノロッド以外の形状を持つ結晶の析出をほぼ抑えることができ,発光強度も約5倍向上した.また,得られたナノロッド蛍光体を面内の一方向に配向させるために,ディップコート法による成膜を試みた.ナノロッド蛍光体をポリビニルピロリドン溶液(溶媒はイソプロパノール)に分散させ,基板を浸漬後,ゆっくりと引き上げるが,その際,毛細管力と溶媒の蒸発に由来する流動力が働くことにより,ナノロッド蛍光体が配向することが期待できる.実際に得られた膜を電界放射型走査電子顕微鏡で観察すると,ナノロッド蛍光体が不完全ながらも配向していることが分かった.そのため,平成29年度は,ナノロッドを完全に配向させるため,ディップコーティングの条件,すなわち,ポリビニルピロリドンの重合度および濃度(溶液の粘度),溶媒の種類(蒸発速度),ナノロッドを分散させる量,引き上げ速度の検討を行い,最終目標である偏光特性の評価に着手する予定である.ナノロッド蛍光体を面内の一方向に配向させる目処が立ったため,おおむね順調であるといえる.平成27年度にナノロッド蛍光体の合成条件を決定,平成28年度にその高品質化と配向方法の確立ができたので,平成29年度は主目標である配向膜作製条件の最適化および偏光特性の評価に移行する.平成29年度はナノロッドの高品質化と面内一方向への配向に加え,最終目標である偏光特性評価を行った.ナノロッド偏光特性を明確に観測するため不純物Euからの赤色発光ではなくY2WO6母体からの青色発光(ロッド形状の影響を受けやすい)を利用すべく,添加不純物を可視領域で発光しないGdに変更した.ナノロッドの合成には平成28年度までと同様,LiClフラックスを用いたフラックス法を用いた.その結果,Gd添加により母体発光を示しつつ,無添加で観測されるナノロッド以外の形状を持つ結晶の析出をほぼ抑えることができた.

面内一方向への配向のため平成28年度に用いたディップコート法による成膜をGd添加Y2WO6に対して試みた.ナノロッドをポリビニルピロリドン溶液(溶媒はイソプロパノール)に分散させ,基板を浸漬後,ゆっくりと引き上げる際,毛細管力と溶媒の蒸発に由来する流動力が働くことにより,ナノロッドが配向することが期待できる.ポリビニルピロリドン濃度,ナノロッド分散量,引き上げ速度等の成膜条件を平成28年度のものからさらに最適化することにより,ナノロッドの配向を向上させることに成功した.得られたナノロッド配向膜からの発光の偏光特性を評価したところ,わずかながらであるが10:8程度の偏光が生じていることがわかった.ナノロッドの配向の不完全性,膜質の不十分さ等による内部および表面における発光の散乱により偏光が乱されていると考えられる.本研究期間終了後も,配向度および膜質を向上させることで,より偏光した光が得られるよう,また青色以外の発光においても偏光した光が得られるよう研究を継続する予定である.偏光子を必要としない偏光発光デバイス実現のためにY2WO6ナノロッドの合成および配向膜の成膜を行った.Y2WO6ナノロッドはLiClフラックスを用いたフラックス法により合成した.Gdを添加することにより非ロッド形状の粒子の析出を抑えつつ,100 nmの直径を持つナノロッドを合成し,Y2WO6の母体発光である460 nmの青色発光を観測することに成功した.得られたナノロッドを用いてディップコート法およびエレクトロスピニング法により配向膜の成膜を行った.いずれの方法においてもナノロッドをある程度配向させることには成功したが,得られた偏光はきわめて低かった.Euを10%添加したY2WO6ナノロッドの配向膜をスリットコート法により作製する.ナノロッドを,アクリレート系の紫外線反応性メソゲンを1wt%程度添加したネマティック液晶混合物に添加し,スリットコーターにより,ITO透明導電性ガラス基板上に塗布する.塗布中の基板の移動に伴い液晶の流れが生じ,液晶分子は基板に平行に配向し,分散させた蛍光体ナノロッドも液晶の流れにより配向することが期待される.すでに,蛍光体ナノロッドを添加した液晶混合物の塗布を試みているが,現在使用しているスリットノズルはナノロッドを添加することを想定してないため,すぐに詰まってしまい再現性よく実験を繰り返すことが困難であることが判明している.そのため,特注のスリットノズルを導入する予定である.Euを添加したY2WO6ナノロッド蛍光体の配向膜をディップコート法により作製する.その際の条件,すなわち,ポリビニルピロリドンの重合度および濃度(溶液の粘度),溶媒の種類(蒸発速度),ナノロッドを分散させる量,引き上げ速度の最適化を行う.それと並行して,発光の偏光特性を評価する測定系を構築し,最適化された条件で作製された配向膜の偏光特性を評価する.また,Y2WO6以外のナノロッド蛍光体(ZnO等)や,ディップコート法以外の成膜法(スリットコート法や電界紡糸法)の利用についても検討したい.光物性物理学本課題は追加採択で研究開始が10月であったので,研究期間を考えるとほぼ順当に予算を消化しているといえる.本課題は追加採択で研究開始が平成27年10月であったため,研究期間を考えるとほぼ順当に予算を消化しているといえる.理由に述べたように半年分の遅れがあるので,遅れを取り戻すべく,助成金を有効的に活用し,研究のペースを上げていく予定である.理由に述べたように研究期間を考えるとほぼ順当に予算を消化しているので,最終年度は最終目標に向け助成金を最大限に活用する予定である.
新医薬品の創製をめざしたホモイソカルバサイクリンの化学合成

プロスタサイクリン(PGI_2)1は、血小板凝集抑制作用や、血管平滑筋の弛緩作用、細胞保護作用など強力な生物活性を有するオ-タコイドである。しかしながら、化学的に不安定な化合物であり、また、副作用の原因となる多様な作用を示すことからPGI_2の安定類縁体の開発とその生物活性に興味が持たれている。我々は、平成3年度にホモイソカルバサイクリンと命名した化合物2を合成し、2が、代謝安定性に優れ、薬理作用の分離という点で優れることを見いだした。4年度の研究は、ホモイソカルバサイクリンの化学修飾により、更に優れた安定性と生物活性を有する化合物を開発し、医薬品として供することを目的とした。合成を完了した下記3、4、5の生物活性試験の結果より化合物4が最も代謝安定性と薬理作用の分離に優れていることがわかった。そこで5年度は、下記6、7、8、9を合成し、医薬品の候補の最終的な選択を行い、7が最も優れた物質であることを確認した。近年プロスタサイクリン安定類縁体による医薬品創製研究が世界的に活発である。これらのプロスタサイクリン安定類縁体は、主に5員環-5員環を基盤とした化合物である。これに対してつい最近我々は、5員環-6員環骨格を基盤とした化合物(1.ホモイソカルバサイクリンと命名)にも優れたプロスタサイクリン様作用があることをつきとめた。平成3年度の研究は、ホモイソカルバサイクリン1の異性体2および3の合成を達成し、さらに生物活性を検討して最良の基本骨格を選択することにあった。【chemical formula】2はアリルシラン合成中間体のプロトデシリル化を鍵工程として合成し、3は分子内ラジカル反応を鍵工程として合成した。分子内ラジカル反応によるヒドリンダン骨格の構築法は、トランス-ヒドリンダンの一般的構築法となりえると考えている。2および3の生物活性を評価したところ、2はホモイソカルバサイクリン1と同程度の活性を呈したが、3の生物活性は極端に低下した。以上の結果および合成法の容易さを考慮して、ホモイソカルバサイクリン1を最良の基本骨格として選択した。ホモイソカルバサイクリン誘導体である下記1、2、3の合成を完了し、生物活性を詳細に検討した。その結果、化合物2が代謝安定性、薬理作用の分離という点で最も優れていることがわかり、α-鎖の構造修飾を完成した。またα-クロロアルミナムエノラートによるアルドール反応の条件および三重結合への変換条件を明確にすることができ、平成5年度の研究方法の基礎(例えば4→5)を築くことに成功した。この他、平成5年度には下記化合物6→9も合成し、生物活性を詳細に検討し化合物の最終的な選択をしたい。プロスタサイクリン(PGI_2)1は、血小板凝集抑制作用や、血管平滑筋の弛緩作用、細胞保護作用など強力な生物活性を有するオータコイドである。既に我々は、ホモイソカルバサイクリンと命名した化合物2を合成し、2が、代謝安定性に優れ、薬理作用の分離という点で優れることを見いだしていた。本年度の研究は、ホモイソカルバサイクリンの化学修飾により、更に優れた安定性と生物活性を有する化合物を開発し、医薬品として供することを目的とした。昨年度までに合成を完了した下記3、4、5の生物活性試験の結果より化合物4が最も代謝安定性と薬理作用の分離に優れていることがわかった。そこで本年度は、下記6、7、8、9、を合成し、医薬品の候補の最終的な選択を行い、7が最も優れた物質であることを確認した。
遺伝子改変動物を用いた外傷および関節炎における疼痛・ストレス反応の分子基盤の解明

本研究課題では、急性疼痛ストレスにおける中枢神経系(視床下部-下垂体-副腎系および脊髄後角の反応)および末梢(炎症部位)での疼痛・ストレス受容反応の分子基盤を疼痛受容と神経内分泌反応との機能連関という視点での解明を目的とした。具体的には、(1)急性疼痛ストレスモデルであるホルマリンテストによる視床下部における神経内分泌反応を明らかにした。(2)ニューロンの活動性の指標として汎用される前初期遺伝子の脊髄後角や視床下部室傍核における動態を明らかにした。(3)疼痛機序において、痛み・酸・温度センサーとして注目されているtransient receptor potentialをはじめとした受容体活性型Ca2+チャネルの疼痛受容反応における役割を明らかにした。本年度は、遺伝子改変動物(バゾプレッシン(AVP)-eGFPトランスジェニックラットおよびc-fos mRFPトランスジェニックラット)を用いて、急性疼痛ストレス時におけるeGFP遺伝子発現とeGFP蛍光の変化およびmRFP蛍光の変化を検討した。また、視床下部□下垂体□副腎(HPA)軸の変化についても検討した。結果は以下の通りである。(1)急性疼痛ストレスモデルとして5%ホルマリン液をAVP-eGFPトランスジェニックラットの後肢に皮下注射すると、注射後15分で血中AVP濃度が上昇し、2時間後には正常化していた。視床下部室傍核におけるeGFP mRNAレベルは注射15分後では変化を認めなかったが、2時間および6時間後では有意に発現が増加した。また、室傍核の大細胞群と小細胞群の両方でeGFP mRNAレベルが増加したが、特に小細胞群での増加が著明であった。室傍核におけるcorticotropin-releading hormone(CRH)mRNAレベルは注射2時間後に上昇したが、15分および6時間後では有意な変化を認めなかった。(2)室傍核におけるeGFP蛍光は大細胞群と小細胞群(CRH産生細胞が局在)の両方で増強し、小細胞群の増強が著明であった。また、下垂体後葉でも蛍光の増強が見られた。(3)急性疼痛ストレスモデルとして5%ホルマリン液をc-fos mRFPトランスジェニックラットの後肢に皮下注射すると、注射後90分で脊髄後角、ならびに視床下部室傍核と視索上核にFosタンパクが発現することを免疫組織化学的染色法で確認した。また、mRFP蛍光も注射90分後に脊髄後角や室傍核ならびに視索上核で観察された。以上の結果から、急性疼痛ストレスにおいてAVPはストレス応答に密接に関連しており、HPA軸の賦活化に重要な役割を担うことが2種類のトランスジェニックラットを用いて明らかとなった。本年度は遺伝子改変動物(c-fos-mRFPトランスジェニックラット)を用いて、急性疼痛ストレス時における免疫組織化学的染色法によるFosタンパクとmRFP赤色蛍光の発現の経時的変化を検討した。今回得られた結果は以下の通りである。急性疼痛ストレスモデルとして5%ホルマリン液をc-fos-mRFPトランスジェニックラットの両側後肢に皮下注射すると、(1)視床下部室傍核では免疫組織化学的染色法において注射後90分にFosタンパクの発現が最も増加し、6時間後まで発現の増加を認めた。一方、mRFP赤色蛍光は注射後3時間をピークに90分から6時間にかけて増強し、Fosタンパクと同様の結果を得た。(2)下肢からの疼痛刺激を受容する第3腰椎レベルの脊髄後角では第II層で注射後90分から3時間までFosタンパクの発現の増加を認めた。一方、mRFP赤色蛍光も脊髄後角第II層で注射後90分から6時間まで増強を認めた。さらに、脊髄後角におけるmRFP赤色蛍光はFosタンパクより約3倍多く発現しており、疼痛刺激に鋭敏に反応する事が明らかになった。以上の結果から、急性疼痛ストレスを負荷されたラットは脊髄後角第II層、ならびに視床下部室傍核においてニューロンの活動性の指標として汎用されるc-fos遺伝子産物であるFosタンパクが発現し、全身性の反応を引き起こしている事が明らかになった。また、これまでFosタンパク発現の有無を確認するには免疫組織化学的染色法を必要としていたが、c-fos-mRFPトランスジェニックラットを使用することで蛍光顕微鏡によって簡便かつ鋭敏にc-fos遺伝子の発現を赤色蛍光として検出することに成功した。

本年度は、痛み・酸・温度センサーとして注目されている受容体活性型Ca2+チャネルのtransient receptor potential V1(TRPV1)ならびにTRPV4ノックアウトマウスを用いて急性疼痛モデルにおける中枢神経系の反応(視床下部-下垂体-副腎(HPA)軸の反応)と末梢(炎症部位)での疼痛受容反応を生体防御反応の積算時間、ならびにニューロンの活動性の指標として汎用されるc-fos遺伝子産物であるFosタンパクの発現を免疫組織化学的染色法により定量評価した。今回得られた結果は以下の通りである。急性疼痛ストレスモデルとして0.5%ホルマリン液を野生型マウス、TRPv1ノックアウトマウス、TRPV4ノックアウトマウスの片側足底に皮下注射すると、(1)ホルマリンによる直接刺激とされる第1相(注射0分10分)では野生型マウスが有意にTRPV1やTRPV4ノックアウトマウスよりも生体防御行動を多く認めた。炎症を介した二次性の疼痛とされる第2相(注射10分60分)ではTRPV1ノックアウトマウスのみ生体防御行動を野生型よりも多く認めた。(2)脊髄後角第I、II層におけるFosタンパクの発現は、注射側が非注射側よりも増加し、かつ野生型マウスがTRPV1ならびにTRPV4ノックアウトマウスと比較して有意に増加した。一方、視床下部室傍核におけるFosタンパクの発現は、TRPV1ノックアウトマウスが野生型マウスよりも有意に増加した。この結果は、上記(1)における第2相の生体防御行動をおおむね反映するものであった。以上より、ホルマリン注射の直接刺激による疼痛受容にはTRPV1とTRPV4が関与し、炎症を介した二次的な疼痛受容にはTRPV1が関与していると考えられた。
ヘミングウェイのキューバ・コネクション――フィンカ・ビヒア資料と政治性

本研究は、キューバで人生の三分の一を過ごしたノーベル賞作家ヘミングウェイの現地での生活、創作活動、政治活動を、蔵書リサーチと現地インタビューにより明らかにすることを目的とした。2012年度と2013年度に各1回、キューバでの現地調査を行い、調査の途中経過をキューバで行われた国際学会(2013)で発表した。現地調査では、ヘミングウェイの蔵書リサーチを行い、自筆書き込みの確認とカメラ撮影による資料の保存を行った。さらにフィンカ・ビヒアのヘミングウェイ博物館館長であるローザ氏と、生前のヘミングウェイと交流があったフィーコ氏とカユーコ氏にインタビュー調査を行った。本研究の目的は、キューバのヘミングウェイ邸フィンカ・ビヒアに残された蔵書などの資料を調査し、キューバで人生の三分の一を過ごしたノーベル賞作家のキューバでの生活を明らかにすることである。2013年の研究実施計画では、調査旅行を、ハバナで開催される国際ヘミングウェイ・コロキアムに合わせることにして、研究発表も行う事にした。また、博物館館長の紹介で、生前のヘミングウェイを知る人にインタビュー調査をアレンジすることができた。2013年6月に渡航し、学会発表、蔵書の調査、現地でのインタビュー調査を無事終える事ができた。また昨年度予定していたMiriam B. Mandel氏とも、ハバナで面談をすることができた。2014年度には、これらの調査を踏まえた研究成果を、日本ヘミングウェイ協会の全国大会で発表する予定である。2002年、キューバのヘミングウェイ邸フィンカ・ビヒアの地下室に埋もれていたヘミングウェイの原稿、手紙、メモ、その他の書き物が発見され、世界中に大きな衝撃を与えたことは記憶に新しい。アメリカ合衆国とキューバとの合意のもとで資料の電子アーカイブ化が進められ、約3,000点の資料について、2009年ようやく研究者からのアクセスが可能になった。これまで謎が多かったキューバ時代のヘミングウェイにアプローチするための重要な手がかりとなることは必須である。本研究の目的は、これらの資料を調査し、植民地的政治闘争の最中にあった当時のキューバで人生の三分の一を過ごしたノーベル賞作家の政治的な側面を紐解き、彼の文学テクストに隠された政治性を、当時のアメリカ合衆国とキューバの関係の中で明らかにすることである。2012年度の研究実施計画では、アメリカ合衆国での学会発表、ハバナでの資料調査、Miriam B. Mandel氏との研究打ち合わせを予定していた。そのうち、学会発表については、ミシガン州で2012年6月に開催された国際ヘミングウェイ学会で研究発表をし、Debra A. Moddelmog氏と意見交換をすることができた。ハバナでの資料調査は2013年3月に実施し、ヘミングウェイの蔵書リストを閲覧して、次の現地調査に向けた準備を整える事ができた。さらにヘミングウェイ博物館館長のAda Rosa氏にインタヴューを実施し、キューバ革命とヘミングウェイの関係についての概要を得る事ができた。また今後の研究協力を依頼して承諾を得た。Mandel氏との研究打ち合わせは未実施だが、2013年6月に実施予定である。アメリカ合衆国とキューバとの合意のもとで約3,000点の資料についてボストンのJFK図書館で電子アーカイブ化が進められており、これらにアクセス可能となれば、これまで謎が多かったキューバ時代のヘミングウェイにアプローチするための重要な手がかりとなることは間違いないが、JFK図書館での資料の全面的な公開はまだ実現していない。本研究は、JFK図書館で未公開となっているこれらの資料をキューバで調査し、キューバで人生の三分の一を過ごしたノーベル賞作家の現地での生活、創作活動、政治活動を、蔵書リサーチと現地インタビューにより明らかにすることを目的とした。本研究では、2012年度と2013年度に各1回、キューバでの現地調査を行い、調査の途中経過をキューバで行われた国際学会(2013)で発表した。現地調査では、ヘミングウェイの蔵書のなかで動物行動学に関するものを中心にリサーチを行い、自筆書き込みの確認とカメラ撮影による資料の保存を行った。最終年度にあたる2014年度は、主として2013年に行ったインタビュー調査の結果を踏まえ、とりわけ動物行動学へのヘミングウェイの関心に焦点をあてて論文1本を執筆し(共著として出版予定)、国内学会での発表を1回行った。アメリカ文学キューバでの資料調査とインタビュー調査を実施することができた。さらに国際ヘミングウェイ・コロキアムで、研究成果を発表することができた。本年度の目的はおおむね果たせたといえる。

とりわけ、インタビュー調査は、当初の予定に含まれていなかったので、計画以上の成果といえる。反面、計画時に調査の対象としていたヘミングウェイの政治的活動に関する資料については、保管場所が政府の機関に写されていたため、博物館での閲覧ができなかった。確実に資料を見るには、キューバにある現物ではなく、ボストンに保管されているマイクロフィルムにアクセスする方がよいかもしれない。このことを2014年度の検討課題とする。本研究ではキューバでの資料調査が必須であるが、ヘミングウェイ博物館館長のAda Rosa氏にコンタクトを取る事ができ、2013年3月に現地調査を実施した。具体的にはヘミングウェイの蔵書リストを閲覧して、次回の調査に向けた準備を整え、Rosa氏にインタヴューを実施して、キューバ革命とヘミングウェイの関係についての概要を得た。さらにRosa氏には今後の研究協力を依頼して承諾を得ることができたので、今後のキューバでの研究調査を軌道に乗せる事ができたといえる。Mandel氏との研究打ち合わせは未実施だが、2013年6月に実施予定である。当初、調査の対象としていたヘミングウェイの政治的活動に関する資料については、保管場所が政府の機関に写されていたため、博物館での閲覧ができなかった。これまでの調査で明らかになったヘミングウェイの私的な生活に関しては、すでに十分な資料を入手しており、調査を踏まえた研究成果を、日本ヘミングウェイ協会の全国大会で発表する予定である。2013年6月にキューバで開催される国際ヘミングウェイ・コロキアムに参加し研究発表を行う。また同学会参加予定のMandel氏と、今後の研究についての意見交換を行う。学会終了後、ヘミングウェイ博物館での資料調査と、現地でのインタビュー調査を行う予定である。帰国後は、ヘミングウェイの蔵書リストのうち、研究に関連する図書を購入し、文献調査を行う。調査結果に基づき研究を進め、その成果を、2013年10月に開催予定のミシガン・ヘミングウェイ学会で発表することを予定している。残額が、旅費や謝金として使用するには不足するため、次年度と合算して使用する。次年度の使用計画として、学会発表のための出張旅費、英語論文作成のための英文校閲費、必要に応じて調査良好のための出張旅費としての使用を予定している。旅費として、2013年6月に国際ヘミングウェイ・コロキアムでの研究発表ならびにヘミングウェイ博物館で調査する為の旅費として名古屋ーハバナ間の渡航費、宿泊費が必要となる。キューバでは、通訳も必要である。さらに2013年10月にミシガン州で開催されるヘミングウェイ学会で研究発表を予定しているので、そのための渡航費、宿泊費も必要となる。物品費は、キューバでの資料調査ならびにインタビュー調査に必要な機材の購入にあてる。また、調査結果に基づき、図書購入の必要が見込まれる。
ヤマノイモの腋芽をむかごへと誘導する現象を細胞化学的・生理化学的観点から解析する

むかごへと発育する葉腋にある副芽までBrdUを輸送して細胞分裂頻度の計測を試みたが、期待した成果が得られなかった。しかし、むかごの発育に作用する枝葉と新芋の発育の関係では、葉重から枝重、地上部重から葉重の回帰式を算出すると、いずれも決定係数(R2)が0.8880.950と高いことが明らかとなった.また、時期別の灌水量の大小で、枝葉と新芋の発育が促進または抑制されることを明らかにした。さらに、施肥方法は各器官への乾物の分配率に作用し、施肥量が不足する場合、新芋への乾物の分配を促進し、過多の場合、枝葉への乾物の分配を促進することが示された。今後はこれらの知見を活用して研究を進める予定である。本研究は,葉腋内の本来側枝になる腋芽が,ヤマノイモ特有の器官である「むかご」へと発育する特異な現象を細胞化学的および生理化学的観点から解析することを目的とする.初年目である今年度は,垂下処理後のむかご(坦根体)の発育に影響する枝葉(坦根体)の発育量と新芋の発育の関係を検討した結果,枝葉と葉数および葉重との回帰式では高い決定係数を示したが,枝葉と新芋重との回帰式では,低い決定係数であり,新芋の発育に作用する要因は複数あることが示唆された.そのため,垂下処理後のむかごの大小を検討する場合,枝葉との関係をできるだけ排除し,簡易な条件で検討する必要があることが明らかになったので,次年度は検討する予定である.葉腋内の腋芽には主芽と副芽が形成され,むかごは副芽が組織形態的に変化したものである.この組織形態学的な変化を可視化するため,蛍光顕微鏡を活用して,チミジンの代わりにBrdUが取り込まれることを利用して,モノクローナル抗体と酵素または蛍光色素を結合した2次交代を用いると細胞分裂頻度を可視化することを検討した.この試験では,BrdUがむかごへの変化する直前の腋芽に安定して取り込まれる手法を明らかにする必要がある.そのため,腋芽までの取り込み時間を計測するため,葉腋が含む節部切片を色素液に生けて検討したが,葉への輸送は確認されるものの,葉腋への輸送が認められなかったため,今後も色素の種類を変更して再度葉腋への輸送の有無および速度を解明する必要がある.今年度は、細胞分裂頻度の可視化するために、分裂部位の細胞を染色する手法の確立に取り組んだ。しかし、期待した細胞分裂部位が十分に染色されずに、可視化することができなかかったので、色素を赤から青に切り替えたところ、可視化の可能性が示唆された。また、可視化する場合の切片について、リアルタイムで作成でき、利便性の高い切片作成である凍結切片を導入した。切片作成の前処理や切片作成の条件を組み合わせた結果、当初、期待した切片が得られなかったが、液体窒素とドライアイスとの併用で、十分に質の高い切片が得られるようになった。オーキシンと糖代謝酵素の局財性については、上記の試験を優先するため、十分には進められなかった。むかごの発育が枝葉の発育に強く作用することから、異なる種芋重で、枝葉の発育に作用する灌水量と追肥時期の影響を検討した結果、枝葉の発育は、6月より多灌水した(6月多)で大きい傾向が認められ,8月より多灌水した8月多で同程度の大きさであったが,6と8月少では,逆に枝葉の発育は、小さい傾向が認められた.つまり,6月少による抑制効果はその後回復できないこと,8月の多灌水では枝葉の発育は促進されないことが示唆された.この影響は、特に種芋重50gで顕著であった.追肥時期と回数の影響は、対照の2回より1回少ない7月と8月追肥は同程度に小さい傾向が認められたが,無施肥とも同程度の大きさであったので,追肥が枝葉に及ぼす影響は不明瞭であった。期待した色素の染色および切片作成が十分に進展しなかったため、その改善のため、その実験を優先したので、他の実験の進みが遅れた。しかし、切片作成については、利便性の高い凍結切片の作成方法がほぼ確立できたので、今後は加速度的に進展するものと期待している。むかごの発育に作用する枝葉の発育についての知見も得られているので、特段問題なく進展できるものと考えている。今年度も,昨年度改善できた利便性の高い凍結説法法を活用して,細胞分裂頻度の可視化に取り組んだが,残念ながら期待した成果は得られなかった.

しかし,むかごの発育が枝葉の発育に強く影響することから,枝葉の発育に作用する施肥方法の影響を15gと50gの種芋からの個体で比較した結果,枝葉の最大繁茂期である8月下旬の掘り取りで,種芋重15g区の場合,全乾物重は,対照で最も大きく,次いで,無施肥+6月および前期と後期高ECで同程度に大きかったが,無施肥+7月で,無施肥の順に小さい傾向が認められた.さらに,各器官の乾物の分配率で比較すると,対照,無施肥+6月,無施肥+7月および前期と後期高ECで,葉重と枝重で70%以上を占めたのに対して,無施肥では48%程度と低い傾向が認められた.しかし,新芋重は,それらの処理区で高くても20%程度であったのに対して,無施肥では30%程度と高い傾向を示した.つまり,無施肥のように栄養状態が悪い場合,枝葉の発育より新芋の発育を優先する生育特性が示された.逆に,生育初期から栄養状態が良好な場合,枝葉と葉重が占める割合が高まり,特に,葉重で50%程度と高い傾向が認められたが,逆に新芋では11%程度と低い傾向が認められた.この結果は,昨年度不明瞭であった,多灌水で枝葉と新芋の発育を促進した原因と考えられた.最終掘り取りでは,種芋重15g区で400g程度の大きさとなり,種芋重50g区と同程度またはそれ以上の大きさとなり,新芋重/種芋重で示す肥大率も種芋重15g区で大きい傾向が認められたが,その要因については,今後詳細に検討する必要があり,むかごの発育の促進・抑制にも関連する知見であるので,今後も引き続き検討する予定である.むかごへと発育する葉腋にある副芽までBrdUを輸送して細胞分裂頻度の計測を試みたが、期待した成果が得られなかった。しかし、むかごの発育に作用する枝葉と新芋の発育の関係では、葉重から枝重、地上部重から葉重の回帰式を算出すると、いずれも決定係数(R2)が0.8880.950と高いことが明らかとなった.また、時期別の灌水量の大小で、枝葉と新芋の発育が促進または抑制されることを明らかにした。さらに、施肥方法は各器官への乾物の分配率に作用し、施肥量が不足する場合、新芋への乾物の分配を促進し、過多の場合、枝葉への乾物の分配を促進することが示された。今後はこれらの知見を活用して研究を進める予定である。枝葉と新芋の関係が明らかになったものの,葉腋へ副芽がむかごへと組織形態学的に変化する過程を可視化できるところまで達成できていない.今年度は初年目でもあり今後の発展を期待して,この試験に比重を置いて取り組んだため,他の研究への取り組みを遅らせた.ただし,次年度は,この可視化には取り組むものの,他の研究にも予定通り進める予定である,そのため特段の問題なく,最終年度までには研究目的が達成できうるものと考えている.今年度、むかごの細胞分裂頻度を計測するのに必須である。切片作成の技術がほぼ確立できたこと、新たな色素の使用により、細胞分裂の部位の染色が期待できることから、目標とする細胞分裂頻度の視覚化が可能と判断している。また、むかごの発育には、追肥された窒素の大小が影響されるため、窒素の動態も含め検討する予定である。さらに、今年度取り組めなかったオーキシンや糖代謝酵素の局在性についても、精力的に取り組む予定である。野菜園芸学今年度は,初年目ということを鑑み,腋芽からむかごへと組織形態学的な変化を可視化することを重点的に取り組んだが,十分に期待した成果が得られないものもあった.しかし,改善する手法もある程度検討しているため,明らかにできる可能性が高い.次年度は,それとともに,他の研究にも配慮して進める予定である.そのため,本研究の取り組みについては,特段の問題はないものと考えている.本年度、前年度の繰り越しがあったことに加えて、予定していた実験の進捗が遅れたため、その実験に使用する試薬の購入費が少なくすんだこと、予定していた旅費の支出もなかったこと,予定していた人件費の支出も少なかったことが次年度使用額が生じた理由である。当初予定していた,種芋購入や試薬などの消耗品を購入せずに対応できたものがあったため,少なかった.最終年度であることを考慮し、計画的な支出を予定している。物品費として、試薬とキット、データ処理PCおよびサーモカメラの購入費を75万円、旅費で40万円(国際学会発表含む)、実験を補助用の人件費を57万円、英文校閲に10万円と計画し、510月で7割の支出、11翌年3月まで3割の支出を計画している。2年目である平成27年度に,研究を加速度的に進展させるため,必要な消耗品の購入費として使用する計画である.
Nd-YAG LASER Systemを用いた肝細胞癌の治療に関する臨床的研究

1.目的2.対象と方法病理学的もしくは臨床的に肝細胞癌と診断された患者15例26病巣(腫瘍平均サイズ17mm)を対象とした.超音波ガイド下もしくはCTガイド下にレーザーファイバーを腫瘍内に挿入し照射を行った.照射方法は2W/1520分の連続照射を6例7病巣,5W/5分のパルス照射を10例17病巣,5W/4分の連続照射を2例2病巣に行った.治療効果判定は本治療後7-14日後と1カ月後,その後2-6カ月毎にダイナミックCTを用いて行った.3.結果平均照射回数2.1回,平均照射エネルギー2019Jであった.治療後1ヶ月以内の初期治療効果として,11例18病巣(69%)で腫瘍の完全壊死を認めた.5例8病巣(31%)では照射直後に腫瘍の残存が確認されたため,2例に抗癌剤動注療法が,2例に手術が追加された.完全壊死を示した18病巣のうち,9例14病巣(78%)が,224カ月後(平均7.1カ月)に再発が認められ,再治療が施行された.合併症としては照射中の軽度熱感と疼痛が全例に認められた.また治療後に一過性の肝胆道系酵素の上昇が全例に,肝被膜下血腫が5例に見られたが,いずれも保存的に軽快した.一方,重度合併症としては穿刺部における腫瘍播種が1例,消化管穿孔が1例に見られたがいずれも手術により回復した.消化管穿孔は直接的照射によるものではなくパルス照射による余熱の波及が原因と考えられた.4.結論今回の臨床研究結果は,期待に反し不十分な治療成績に終わった.その原因として腫瘍および腫瘍周囲の肝血流(肝動脈および門脈血流)が腫瘍内の加温を妨げたものと思われた.したがって今後本治療法を確立していく上では,血流遮断術の併用や照射方法の更なる見直しが必要と考えられた.1.目的2.対象と方法病理学的もしくは臨床的に肝細胞癌と診断された患者15例26病巣(腫瘍平均サイズ17mm)を対象とした.超音波ガイド下もしくはCTガイド下にレーザーファイバーを腫瘍内に挿入し照射を行った.照射方法は2W/1520分の連続照射を6例7病巣,5W/5分のパルス照射を10例17病巣,5W/4分の連続照射を2例2病巣に行った.治療効果判定は本治療後7-14日後と1カ月後,その後2-6カ月毎にダイナミックCTを用いて行った.3.結果平均照射回数2.1回,平均照射エネルギー2019Jであった.治療後1ヶ月以内の初期治療効果として,11例18病巣(69%)で腫瘍の完全壊死を認めた.5例8病巣(31%)では照射直後に腫瘍の残存が確認されたため,2例に抗癌剤動注療法が,2例に手術が追加された.完全壊死を示した18病巣のうち,9例14病巣(78%)が,224カ月後(平均7.1カ月)に再発が認められ,再治療が施行された.合併症としては照射中の軽度熱感と疼痛が全例に認められた.また治療後に一過性の肝胆道系酵素の上昇が全例に,肝被膜下血腫が5例に見られたが,いずれも保存的に軽快した.一方,重度合併症としては穿刺部における腫瘍播種が1例,消化管穿孔が1例に見られたがいずれも手術により回復した.消化管穿孔は直接的照射によるものではなくパルス照射による余熱の波及が原因と考えられた.4.結論今回の臨床研究結果は,期待に反し不十分な治療成績に終わった.その原因として腫瘍および腫瘍周囲の肝血流(肝動脈および門脈血流)が腫瘍内の加温を妨げたものと思われた.したがって今後本治療法を確立していく上では,血流遮断術の併用や照射方法の更なる見直しが必要と考えられた.今年度の研究実績として,1)血管造影およびCTにて造影効果を有さない高分化型肝細胞癌,2)抗癌剤動注療法にて効果が得られなかった肝細胞癌,を対象にinterstitial hyperthermia療法を行った.腫瘍径が3cm以上で個数が4個以上の病変は治療の対象から除外した.治療方法として2W/1520分の連続照射を4患者6病変に,また5W/5分のパルス照射を8患者12病変に施行した.結果として,両照射法とも術中に軽度の痛みは少ないながらみられたものの,他の合併症は認められなかった.超音波所見上,5W/5分のパルス照射では照射開始後30秒後に全病変でhyperechoic areaの出現が認められ,同領域は経時的に拡大した.照射終了直後の時点では,hyperechoic areaの最大径は平均で1.1cmであった.また,hyperechoic areaを取り囲むように38mm幅のhypoechoic areaの出現が8病変で認められた.一方,2W/1520分の連続照射ではhyperechoic areaの出現は照射開始後24分と遅かったが,照射終了直後の超音波所見はパルス照射とほぼ同様であった.

本臨床研究の前に行った家兎を用いた基礎実験では,hyperechoic areaとhypoechoic areaの両方を含めた領域がthermal necrosisの病理所見を呈しており,従って臨床上も両照射法とも1回の治療で15mm以上の壊死領域が期待できるものと思われた.しかしながら,2Wの連続照射では5W/5分のパルス照射と同様な治療効果を得るのに,1520分の治療時間が必要となり,患者に対する負担の点から臨床的にはパルス照射の方が現段階では望ましいと考える.今後は両照射法の症例蓄積ならびに長期成績と,更に照射時間の短縮を計る目的で7Wまたは10Wのパルス照射を家兎の基礎実験の裏付けを基に臨床研究を行う予定である.今年度の研究実績として,1)血管造影およびCTにて造影効果を有さない高分化型肝細胞癌,もしくは2)抗癌剤動注療法にて効果が得られなかった肝細胞癌,を対象にinterstitial hyperthe mia療法を行った.腫瘍径が3cm以上で個数が4個以上の症例は治療の対象から除外した.治療方法として5W/5分のパルス照射を4患者6病巣に施行した.腫瘍の平均サイズ1.5cm,平均照射回数2.4回であった.結果として,超音波所見上,照射開始後30秒後に全病変でhyperechoic areaの出現が認められ,同領域は経時的に拡大した.一回の照射で腫瘍全体がhyperechoic areaにならない腫瘍に対しては追加照射をした.照射終了直後の時点では,hyperechoic areaの最大径は平均で1.5cmであった.また,hyperechoic areaを取り囲むように数mm幅のhypoechoic areaの出現が6病変で認められた.照射中に強い痛みを訴え,照射を中止した例が1例あった.その他の例では軽度の痛みや少量の被膜下血腫がみられたものの,他の重篤な合併症は認めなかった.4病巣で腫瘍の再発が見られず経過良好である(平均観察期間5.2カ月).1病巣では照射効果不良のため手術が施行された.1病巣では7カ月後に再発し再度interstitial hyperthermiaをおこない現在経過良好である(観察期間2カ月).本臨床研究の前に行った家兎を用いた基礎実験では,5W/5分のパルス照射にて直径約15mmの範囲でthermal necrosisの病理所見を呈しており,従って臨床上も1回の治療で15mm以上の壊死領域が期待できるものと思われた.しかしながら,実際には腫瘍および腫瘍周囲の肝血流により加温が妨げられthermal necrosisの範囲は小さいと思われた.今後は症例蓄積ならびに長期成績と,更に照射時間の短縮を計る目的で10Wのパルス照射を家兎の基礎実験の裏付けを基に臨床研究を行う予定である.今年度の研究実績として,血管造影もしくはCTにて造影効果を有さない高分化型肝細胞癌を対象にInterstitial Hyperthermia療法を行った。本年度の計画ではパルス照射5W/5分であったが,さらなる時間短縮のため5W/4分(1200J)の連続照射を2例2病巣に施行した.腫瘍の平均サイズ15mm,平均照射回数2回であった.結果として,2例とも超音波上,照射開始後30秒後にhyperechoic areaの出現が認められ,同領域は経時的に拡大した.照射終了直後の時点では,hyperechoic areaの最大径は平均で20mmであったが,2例ともに一回の照射で腫瘍全体がhyperechoic areaにならなかったため追加照射を試みた.1例では追加穿刺中に強い痛みを訴えたため追加照射を中止した.直後のCTにて少量の肝被膜下血腫がみられたものの,特に重篤な合併症は認めなかった.他の1例では100J,400Jと2回の追加照射を試みるも腫瘍がhyperechoic areaを呈さず,またレーザーファイバーの先端が超音波上確認できなくなったため中止した.2病巣とも平均3ヶ月後にCT上腫瘍の局所再発が認められ,血管造影上著名な腫瘍濃染像を呈したため,抗腫瘍剤動脈内注入療法を施行した.
琉球語と古代語の文法体系を類型論的視点から再構築する研究

南琉球石垣宮良方言の謙譲語は、「主語<補語」「主語≧補語」の両方で使用できることを明らかにした。謙譲語の機能は補語尊敬が必須であり、同時に主語への尊敬機能もある。古代語の謙譲語にも「主語≧補語」の例があり、宮良方言同様、主語に尊敬機能がある可能性を指摘した。宮良方言の指示詞はku/u/kaの三体系を持つ。共通語のコソア指示詞と異なり、人称との連動が無い。単独の物はuriで指示し、複数の物を対比的に指すときにkuriとkariを用いる。対比が原則であり距離は相対的遠近で捉えられる。古代語に聞き手領域の物をアレと指す例がある。古代語も相対的遠近の原則がある可能性を指摘した。平成25年度の研究計画の一点目は,南琉球石垣宮良方言の敬語の謙譲語uyoohun(差し上げる)の詳細な文法を調べることであった。調査の結果,共通語の謙譲語とは異なり,補語尊敬用法だけでなく,主語尊敬用法も見られた。この用法は,uyoohun(差し上げる)だけでなく,ssIsarin(申し上げる),kuyoomun(拝顔する)にも認められる。また,sikeehun(ご案内する)が同様の謙譲語であるか調査中である。主語尊敬の用法を持っていると,一人称主語では「私」が主語となるため,自分を敬うことになる。しかし,話者は「自分敬い」はないと判断する。この点は,主語尊敬用法と矛盾する。そのため,「一人称主語の場合は補語尊敬を優先して,主語尊敬用法を抹殺するしかない。この地域は補語尊敬用法専用の敬語がないためである」という仮説を立てた。現在,この仮説を修正しつつ調査中である。また,南琉球竹富町の黒島方言の文法記述も本格的に始めた。石垣川平方言話者や,竹富町西表船浮方言話者にも調査協力をお願いした。研究計画の二点目は,北琉球語の喜界島では接辞/-eer/の調査を本格化させることであった。調査の結果,聞き手尊敬と主語尊敬の両方の用法を持つのではないかと考えている。指示詞に関しては,共通語では記憶指示に遠称のア系指示詞を用いて「あの人,どうしているかな」と使用するのに対し,南琉球語では中称のu系指示詞を使うため,指示詞の指示領域の記述を目的としていた。調査の結果,近称のku系指示詞も記憶指示用法で使用できることが分かってきた。また,現場指示用法も調査するため,野外での談話を取った。その談話の中で遠くのものでも近称のku系で差していた。ku系の範囲が,現場指示でも,記憶指示でも共通語の近称のコ系と異なることが,明らかになってきた。平成26年度の研究目的の一点目は,謙譲語「差し上げる」の文法を明らかにすることであった。南琉球八重山地方宮良方言の「差し上げる」には,共通語の謙譲語とは異なる文法が見られる。共通語の謙譲語は,補語を尊敬をする機能を持っているが,宮良方言の「差し上げる」は,補語だけでなく,時に主語も尊敬する機能を持っているようである。本年度は,この用法を詳細に調べるために,補助動詞用法を初めて調査した。だが,結果は,年代差によって許容度に差が出てきたため,今後,さらに確かめる必要が出てきた。また目的の二点目は,「差し上げる」以外の謙譲語を調査することであった。「申しあげる」「お連れする」「拝謁する」を調査した。だが,年代差があるかどうかはまだ調べていない。これらに関しても,次年度以降,調査を続ける予定である。三点目は,八重山地方の丁寧用法について調査することであった。八重山には共通語の「です,ます」にあたる形態素がない。だが,尊敬辞-ooruN(いらっしゃる)を使用して,聞き手を敬う言い方があることが分かった。詳細に調査をすると,使用には制限があり,存在動詞aruか,コピュラのyaruに下接した場合にしか使用できないことが分かった。具体的には「昔,ここに大きな家がある+ooruN(→ありなさった)」とすると,聞き手への敬意となる。しかし,主語に関する制限が80歳代と60歳代で差があったので,この用法についても継続して調査を続ける。また,指示詞の研究は遅々として進んでいない。現場指示用法の例を集めるため,ビデオの書き起こしを地道に続けている。さらに,計画にはなかったが,新たに黒島のアクセント調査も開始した。話者の高齢化が目立ってきたので,急いで記述文法を書くことの重要性を感じている。本研究では,琉球語と古代語を比較しながら,古代語の文法体系を再構築することを目的とした。主な文法項目は,敬語体系と指示詞体系である。敬語ではまず,謙譲語の文法を調査した。古代語も南琉球八重山地方も「謙譲語+尊敬語」の二方面敬語が発達しており「主語<補語」のみならず,「主語>補語」の人物関係で使用できる。八重山地方宮良方言での詳細な調査の結果,謙譲語単独でも「主語>補語」で使用できることを明らかにした。その理由として,主語へも尊敬機能があると結論づけた。

しかし,主語に尊敬機能があるのに,なぜ一人称主語で言えるのかは明らかにできず,引き続き調査をしている。この結果を基に古代語でも主語尊敬機能がある可能性を模索している。また,丁寧語の文法調査も行った。八重山では丁寧語の形態素がなく,コピュラに尊敬動詞を下接して聞き手への敬意を表すことを確認した。指示詞文法に関して,宮良方言では現代語のような近称・中称・遠称という距離による区別や人称との連動がないことを明らかにした。宮良方言指示詞はku/u/kaの三体系を持つ。従来「これ,それ,あれ」と解釈されてきたが,距離に無関係で単独の物を指すときにuriが使用できることを明らかにした。対比構造があるとき,両者とも近だとuriとkuri(これとこれ),遠だとuriとkari(あれとあれ)を使用する。場における相対性が指示詞文法の基本である。鎌倉時代には,聞き手領域にある物をアレと指す例があり,相対的遠近という観点から,今後古代語との対照研究を行えることを指摘した。さらに,現場指示用法と文脈指示(記憶指示用法を含む)が,ほぼ同じ理論で扱える可能性も指摘した。これらは,2015年度秋季大会(日本語学会)で発表を終えたばかりであり,今後,論文化の予定である。南琉球石垣宮良方言の謙譲語は、「主語<補語」「主語≧補語」の両方で使用できることを明らかにした。謙譲語の機能は補語尊敬が必須であり、同時に主語への尊敬機能もある。古代語の謙譲語にも「主語≧補語」の例があり、宮良方言同様、主語に尊敬機能がある可能性を指摘した。宮良方言の指示詞はku/u/kaの三体系を持つ。共通語のコソア指示詞と異なり、人称との連動が無い。単独の物はuriで指示し、複数の物を対比的に指すときにkuriとkariを用いる。対比が原則であり距離は相対的遠近で捉えられる。古代語に聞き手領域の物をアレと指す例がある。古代語も相対的遠近の原則がある可能性を指摘した。話者が高齢のため膝や腰の痛みを訴えており,一回の調査の時間が制約されている。また,以前は,一週間の調査期間があると,二回ほど協力してもらっていたが,話者が病院に行く予定が多く,複数回の予約が取りにくない状況になっている。そのため,調査票を用意しても,調査票をすべて終わることができなかった。話者が身体の不調を抱えていながら,可能な限り協力してくださるので,もっと質問を精査して,今後の調査に臨みたい。言語学話者の体力が落ちているので,今後の調査を急ぐ必要があると考える。特に指示詞に関しては,まだ,全く用法が分かっていないので,高齢者へ直接的な質問を次年度は行う予定である。ただし,指示詞の質問は複雑で難しく,話者が疲れる可能性が高いので,できるだけ,ゲーム感覚で飽きないような質問票を作成する努力をする。一方で,本年度と同じく,自然談話のビデオを書き起こしは,続けていくこととする。可能な限り時間を工面して現地へ赴き調査を行った。しかし,話者が高齢化していることもあり,突然具合が悪くなったり,身内の不幸があったりして,調査自体がキャンセルになることが何度も生じた。また,座っていると年配者は膝が痛くなることが多く,調査時間も短縮することになり,そのため,予定より調査が遅れている。一つは,航空路線にスカイマークが入り,航空運賃が大幅に下がったことがある。そのため,予算が安く付いている。しかし,2015年3月に石垣ー那覇路線から撤退したので,次年度は,運賃が上がることが予想される。二つめは,年度末の3月に調査に行く予定にしていたのだが,準備が十分に整わなかった。
角膜内皮細胞の電解質制御機構の研究

角膜が透明性を維持していることは,良好な視機能の保持に極めて重要なことである。この角膜に透明性維持には,角膜内皮細胞のポンプ作用による水と電解質の輸送が必須である。また,角膜内皮細胞のみならず,角膜上皮細胞の正常な機能維持も角膜の透明性保持に大切である。この細胞の水と電解質輸送にどのようなメカニズムが関与しているのかは未だ不明であるが,cAMPとカルシウムの2つの細胞内セカンドメッセンジャーが関与していると想定される。今年度は,角膜上皮細胞を中心に,エンドセリン依存性の細胞内カルシウムイオン濃度変化およびcAMP産生について検討するとともに,角膜上皮細胞の増殖についするエンドセリンの効果についても検討を加えた。その結果,次にまとめて示すような新知見を得た。1)家兎角膜上皮細胞は,エンドセリンを産生する。2)エンドセリンは,濃度依存性に家兎角膜上皮細胞の増殖能を亢進させる。3)エンドセリンによって角膜上皮細胞の細胞内カルシウム濃度が上昇する。以下にその詳細を述べる。1)角膜上皮細胞のエンドセリン産生培養家兎角膜上皮細胞よりmRNAを抽出し,逆転写酵素を作用させて鋳型DNAを作成した。この鋳型DNAを使用して,プレプロエンドセリンに特異的なプライマーを使いpolymerasechainreaction(PCR)を行った。得られたPCR産物をプラスミッドにsubcloningし,その塩基配列を決定したところ,エンドセリンに合致する配列を得た。また,家兎角膜上皮細胞の培養上清中のエンドセリン濃度をラジオイムノアッセイで測定した。その結果,角膜上皮細胞培養上清は,276±53pg/24hr/10^6cells(n=3)のエンドセリンを含むことが明らかとなった。このように,角膜上皮細胞がエンドセリンを産生することが証明された。2)エンドセリンによる角膜上皮細胞の増殖エンドセリン1は,濃度依存性の角膜上皮細胞の増殖を約2倍に亢進させた(EC50=0.3nM)。このとき培養液中に低濃度の牛胎児血清が存在すると,上皮細胞の増殖能はさらに増強した。このことは,エンドセリンが,角膜上皮細胞に対するcomitogenであることを示している。3)エンドセリンによる細胞内カルシウム濃度上昇エンドセリンは,培養角膜上皮細胞の細胞内カルシウム濃度を有意に上昇させた。この効果は,エンドセリン1>エンドセリン2>エンドセリン3であった。エンドセリン1の場合0.1μMで約50%の細胞に反応が認められ,細胞内カルシウム濃度の上昇は約270nMであった。エンドセリン1,2,3の効果によりこの反応はtypeAの受容体を介する反応であることが考えられる。また,細胞内カルシウム濃度上昇にイノシトール燐酸の代謝回転が先だっていた。ニカルジピン前処理により,エンドセリン依存性の細胞内カルシウム濃度上昇は完全に抑制され,細胞外液にEGTAを添加すると反応は部分的に抑制された。このことは,このカルシウム濃度上昇が細胞外からのカルシウム流入とともに細胞内カルシウム貯蔵部位からの放出の2つの要素からなっていることを示している。ニカルジピンの効果は,細胞外からの流入がL型カルシウムチャンネル以外のカルシウムチャンネルを介していることを示している。以上のように,家兎角膜上皮細胞におけるエンドセリンの生理作用について研究するとともに,この物質が角膜細胞の電解質輸送にたいする影響の可能性を検討した。2)エンドセリンによる角膜上皮細胞の増殖エンド