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川辺川ダム建設計画に伴う熊本県五木村の村落再編過程に関する民俗学的調査研究

本年度は、前年度に実施したダム関係資料の収集調査の補充を行いながら、五木村の村落生活や民俗に関する調査を、次のように実施した。1.資料調査及び文献収集(1)川辺川ダム及び球磨地方郷土史関係資料を調査・収集(平成17年9月1416日、熊本県立図書館)し、五木村の村落史の理解を深めた。(2)ダム建設及び村落再編に関する研究文献を随時収集し、研究視点の深化を図った。2.五木村における現地調査(1)平成17年9月2123日、平成18年3月811日の2回実施した。(2)頭地代替地に移転した住民を対象に、新たな村落組織の再編状況について聞書き調査を実施した。(3)水没対象地域内に所在する文化財、村落共有施設(堂など)の移転・維持状況の実態調査を行うとともに、関係者から問題点等について話を聞いた。3.調査結果の入力・整理(1)作業補助者1名の協力(10月21日12月22日)を得て、得られた資料(写真・文書等)を整理しパソコンに入力した。(2)上記のデータも含めて、本年度の調査成果を分析し、最終年度である来年度の課題を整理した。4.本年度のまとめと来年度の課題(1)本年度は、頭地代替地に移転した住民の生活状況を中心に調査を進め、その成果の一部を論文(平成18年度発行予定)に取り上げた。(2)来年度は、川辺川ダム建設計画発表後における水没対象村落の再編過程を編年的に整理したうえで、水没対象集落と非水没対象集落における村落生活の変容の差違を検討し、ダム建設計画が村落生活に与えた影響を抽出し、報告書にまとめる。最終年度である18年度は、研究成果を報告書にまとめることを目標に、次のように実施した。1.川辺川ダム関係行政資料の補充的収集調査(1)五木村役場・頭地資料館やませみにおいて、調査・収集(平成18年12月56日)した。(2)熊本県庁及び熊本県立図書館において、調査・収集(平成19年2月2527日)した。2.五木村における現地調査(1)平成18年9月36日、平成18年9月2910月2日の2回実施した。(2)ダム計画に伴う村落再編が非水没地帯に与えた影響について聞書き調査をした。(3)最大の代替地である頭地代替地における村落生活再編に伴う民俗変容の状況について調査をした。3.調査結果の整理・入力・作業補助者1名の協力(12月1日1月31日)を得て、従来のデータの修正・補正を中心に報告書収録予定資料の整備をした。4.研究成果の発表(1)「山村民俗の変容と現在」(『季刊東北学』第7号、2006年4月、東北芸術工科大学東北文化研究センター発行)に成果の一部を論文にまとめて公表した。(2)五木村の要請により「村づくりと民俗文化財」と題した講演を行い(平成18年9月5日、於:五木村役場)、研究成果の一部を発表した。(3)平成18年10月15日、第58回日本民俗学会年会(於:山形大学小白川キャンパス)において、「村落再編と民俗-川辺川ダム建設計画を例に-」と題して口頭発表を行なった。5. 3年間の研究のまとめ(1)研究成果報告書(冊子)をまとめて刊行した。(2)川辺川ダム計画の経緯と五木村の村落再編過程と民俗変容の状況を踏まえ、研究の結諭として、大規模開発計画には住民の心情と事情への配慮が欠かせず重要であることを提示した。
マルチ銅還元酵素の研究の新展開

銅型亜硝酸還元酵素(NIR)は、2つの銅を含んだ単量体が3つ集まって三角形型の三量体構造を形成していることが知られており、生体系や地球環境における重要性から国内外で多くの研究が行われている。最近、我々はこのNIRのN末端あるいはC末端に新たなドメインを結合した新しいタイプの六量体と三量体のNIRを発見した。本研究では、ニキビ菌と海洋性好冷菌由来のこの新しいNIRの構造・機能相関研究を行った。1)PaNIRの単離、精製:ニキビ菌の大量培養を行ったが、膜画分、可溶性画分のいずれからもPaNIRは得られなかった。2)PaNIR組換体の作製:そこで、PaNIRが持つ膜貫通ヘリックス部分を除いたPaNIR可溶性組換体を、大腸菌を用いて発現させた。この実験により、多量の青緑色PaNIR(単量体のNIRドメインのN末端側にブルー銅ドメインを結合したもの)を単離し、また、その単結晶を得ることに成功した。EPR測定からは、単量体あたりに含まれる3個のCuのうち、2個はCu(II)、1個はCu(I)であることが明らかになった。また、この組換体の酵素活性は低かった。3)PaNIR組換体のX線結晶構造解析:このPaNIRの2.4A分解能X線結晶構造解析に成功した。3個のCu部位構造を見ると、1個のタイプ1銅がCu(I)であることが明らかであった。2)で述べた低酵素活性は、Cu(I)によるものと考えられる。これらの事実は、天然型PaNIRと組換型PaNIRの間には違いがある可能性を考慮しなければならないという問題を提起しており、意義深いものである。(b)海洋性好冷菌由来Pseudoalteromonas haloplanktis亜硝酸還元酵素(PhNIR)の構造・機能の研究1)PhNIRの高分解能X線結晶構造解析:PhNIRの1.95A分解能での高分解能結晶構造解析に成功した。そして、単量体のNIRドメインとそのC末端側のシトクロムドメイン問の相互作用に、水分子がどのように関与しているかを解明する事が出来た。2)シトクロムcドメインを除去した変異体の作製:シトクロムcドメインを切断したNIR部分のみの△PhNIRの発現を、大腸菌を用いて試みたが、タンパク質は得られなかった。今後は、△PhNIRの遺伝子のデザインを検討する必要がある。PaNIRは本来膜タンパク質であるが、前年度は可溶性タンパク質部分(ΔPaNIR)の組換体を作製し、結晶構造解析に成功していた。今年度は、さらにPaNIRの膜貫通部分を持った全体のタンパク質を、大腸菌を用いて発現させようとしたが成功しなかった。同時に、ニキビ菌の大量培養を行い、直接、PaNIRを単離しようともしたが、これも成功しなかった。PaNIRそのものを得る実験はいずれも成功していないので、膜タンパク質と考えられるこの酵素自体を得ることは難しいのであろう。まず、PhNIRのタンパク質内電子移動反応を、パルスラジオリシスにより測定した。それによると、ヘムドメインのヘムからタイプ1銅への電子移動反応速度は1.0×10_4s_<-1>(pH6.0)、次いでタイプ1銅からタイプ2銅への反応速度は基質存在下で、1.0×10_3s_<-1> (pH7.0)であった。また、PhNIRへの電子供与タンパク質の一つは、アミノ酸90残基あたりc型ヘムを1つ含むヘムタンパク質であった。この菌株は既にゲノム解析が行われているので、そのアミノ酸配列の相同性検索からPseudomonasstutzeri由来のシトクロムc_4の一部に29%の相同性があることが分かった。すなわち、シトクロムc_4は190残基のアミノ酸からなり、2つのヘムを有している。190からなるアミノ酸残基配列で100番以降の90残基が、この好冷菌からのシトクロムcと相同性を持つので、我々はこのシトクロムcをシトクロムc_<4A> (Cyt c_<4A>)と名付けることとした。新しいタイプのシトクロムcの発見である。このCyt c_<4A>の還元型スペクトルのピークは、414.5 (Soret帯)、520.5(β帯)、549nm(α帯)であり、酸化型は407.5nm (Soret帯)であり、E_<1/2>は+230mV (vs NHE, pH6.5)であった。また、PhNIRへの電子供与活性は、pH6.5においてAchromobacter xylosoxidans由来のシトクロムc_<551>とNIRの活性と比べて、ほぼ半分であった。この結果は、電子伝達の効率としてはそれほど不適切な値ではないと考えられた。

現在、このシトクロムc_4の分子構造を明らかにするために、X線結晶構造解析を進めている。今年度は、N末に膜貫通ドメインを含む本来のPaNIR遺伝子を用いた場合と、さらに、膜貫通ドメインをBacillus由来のMisticと呼ばれる膜蛋白質でドメイン置換した場合(Mistic-PaNIR)の両方で、大腸菌での発現実験を行った。Misticとは、Bacillus種から単離・同定された膜蛋白質で、他の膜蛋白質と遺伝子工学的に融合させることで高効率に組換え膜蛋白質として発現させる際に用いられる蛋白質である。その結果として、本来のPaNIRを用いたケースは発現に成功しなかったが、Misticと融合したMistic-PaNIRにおいて高い収量で発現させる事に成功した。続いて、各種クロマトグラフィーにより膜蛋白質として、Mistic融合PaNIRの部分精製を行った。その紫外・可視吸収スペクトルでは、一昨年度に作成した膜貫通ドメインを含まない膜貫通ドメイン欠損型PaNIRと比べ、吸光係数ならびに吸収バンドピーク強度比が大きく異なる結果となった。今年度も昨年度から継続して、PhNIRの電子供与体であるシトクロムc_<4A>のX線結晶構造解析を行った。結晶化条件のさらなる探索を行い、現在、2.9Aの回折データ収集に成功し分子置換法により位相決定を試行している段階である。また、それと平行して、重原子同形置換法ならびにヘム鉄を利用した多波長異常分散法での位相決定を行うために適した結晶化(重原子ソーク)条件を探索中である。今後、本蛋白質の立体構造を決定する事で、PhNIRの分子間電子伝達機構におけるC末シトクロムドメインの役割・意義を見いだす事が出来ると考えている。
自己脂質および細菌脂質に応答する、CD1依存性獲得免疫システムの構築基盤の解明

MHC分子は、蛋白抗原の断片であるペプチドを結合し、T細胞に抗原提示する。一方、ヒトグループ1CD1分子(CD1a、CD1b、CD1c)は、自己あるいは外来性の脂質、糖脂質、リポペプチドを結合して、T細胞に提示する新しいタイプの抗原提示分子である。グループ1CD1分子の研究は、これまで主としてヒトより樹立したCD1拘束性T細胞株を用いて行われてきたが、その数は十数株にとどまり、グループ1CD1分子を介したT細胞反応のごく一部を観察してきたに過ぎない。そこで、グループ1CD1に相当する分子を欠いたマウスにヒトCD1遺伝子を導入したトランスジェニックマウスを作製し、グループ1CD1分子を認識するT細胞群の種類、機能やその多様性、免疫監視における意義を生体レベルで明らかにすることを目的として本研究を展開した。まず、PCR法を用いてヒトCD1a、CD1b、CD1cゲノム遺伝子を単離し、エキソン領域の核酸配列の解析から、変異の導入がないことを確認した。さらにCD1cゲノム遺伝子についてはトランスジェニックマウスの作製を完了した。このマウスにおいて、CD1c蛋白の発現は樹状細胞に限局しており、末梢血リンパ球やマクロファージにはその発現を認めなかったことから、ヒトと類似した発現分布が確認できた。したがって、ヒトCD1分子を介した免疫応答を生体レベルで解析するのに極めて有用なマウスモデルが樹立された。
技術者における倫理観形成過程の発達心理学的研究

1.2つの研究プロジェクトの実施本研究では、これまで目が向けられてこなかった建設技術者の建設プロジェクトへの参加過程を具体的に把握するに当たり、「関係の中の個人」と「日常活動への参加」をキーコンセプトとして、研究を計画した。研究1「ネットワーク分析を用いた建設技術者社会の分析調査報告」は、「関係の中の個人」に比重を置いてなされた質問紙調査の報告である。建設技術者の行動は、技術者が所属するネットワークによって規定されると考える「ネットワーク分析」を援用して、技術者社会がどのようなネットワークによって構成されているのかを解明した。分析の結果、建設技術者の行動は、所属する集団が建設技術者社会において占める位置特性に強い影響を受けることが明らかになった。研究2「建設現場に於ける技術者集団の意思決定過程と倫理形成過程のフィールド調査報告」は、「日常活動への参加」に比重を置いてなされたフィールド調査の報告である。トンネルの建設という共通の目標の下に組織された技術者集団において、日々の活動の中でどのような判断がいかになされているのかを、フィールドワークによって直接的に把握することを試みた。分析の結果、建設現場では他者との関係において自己を表出する「相互協調的自己観」が共有されており、気づいていても発話しにくい状況があることなどが明らかになった。技術者同士の実際の相互作用過程に注目した研究は、本邦初と思われる。2.技術者を対象にした技術者倫理に関する教材の開発本研究では、2つの研究調査を通して得た結果を踏まえて、より有効な技術者倫理教育の方法を提案することも試みた。現役技術者および外国人技術者を対象にした技術者倫理に関する教材を開発した。本年度は、次年度に実施予定のインタビュー調査に向けて、必要な準備を行った。その具体的な内容は、以下の通りである。1.技術者倫理の形成過程に関する文献および関連研究の収集技術者倫理に関する文献・論文の収集、および成人の職業的発達過程に関する文献・論文の収集を行った。2.インタビュー領域の模索と検討(1)先行調査の再分析横浜国立大学において、2002年から2004年にかけて行った技術者倫理に関する技術者への質問紙調査の生データの再整理・再分析を行った。その結果を踏まえて、次年度に実施予定のインタビュー調査の内容について検討した。(2)予備調査の実施横浜国立大学において、学部および大学院で倫理教育をテーマとした講義を行った。特に公開講座と連携させて実施した大学院講義では、30代から50代の現役技術者にインフォーマル・インタビューを行い、現役技術者の倫理に関する見解についての基礎データを得た。3.インタビュー調査の方法論の精緻化本研究で採用するインタビュー法およびインタビューデータの質的分析の手法について、系統的な知見の整理と考察を行い、その成果を単著(柴山真琴『子どもエスノグラフィー入門』)として出版した。4.学会での発表研究代表者は、研究手法に関する研究成果を学会で発表した。発表の詳細は、次の通りである。・柴山真琴「質的研究と量的研究をいかに繋ぐか」(日本質的心理学会第2回大会シンポジウム/2005年9月/於東京大学)2年目である今年度は、これまでの共同研究で得られている成果を踏まえて、技術者の倫理観の形成過程を直接的に把握することを目的として、フィールドワークによるデータの収集を行った。計画策定の段階では、技術者の倫理観形成を検討する上で重要なキーパーソンを選定し、半構造化インタビューを行う予定であったが、キーパーソンと接触する中で、ある建設会社(Z社)のトンネルの建設現場でフィールドワークができるという絶好の機会が得られたため、参与観察と聞き取りが同時に可能となるフィールドワークを実施することにし、データ収集計画を微修正した。

フィールドワークは、フィールドワークの技法の基礎を習得した研究協力者が、2006年10月23日から11月10日までの3週間、Z社のトンネルの建設現場に実習生として住み込み、トンネル建設に関わる多様な人々と交流しながら参与観察と聞き取りを行うことを通して、多くの質的なデータを収集した。フィールドワーク当時、現場はトンネル掘削後のコンクリートの打設のプロセスにあり、技術者集団の倫理的な判断に関わる意思決定のプロセスを直接に把握することが可能となった。なお、フィールドワークの全過程において、研究代表者と研究分担者は、研究協力者からの調査報告に基づいて適宜、指導と助言を行った。フィールドワークの結果、技術者の倫理観形成の過程を知る上で極めて重要なデータを収集することができた。具体的には、「バイブレータのかけ方」、「作業中のタバコの喫煙について」、「あふれた生コンを戻してよいか」、「防水シートとキャンバーの打ち方」、「水漏れ箇所を修復するまでのプロセス」、「ヘルメットのつば」と名づけた6つエピソードを含む多数のエピソードを収集することができた。これらのエピソードは、いずれも観察直後にフィールドノーツとして記録された。本年度の研究の最大の成果は、「技術者集団としての意思決定プロセス」に関する極めて貴重な質的データを収集できただけでなく、日本人技術者の倫理観形成は技術者集団の意思決定過程と分かち難く結びついているらしいという示唆が得られたことである。1.最終報告書作成に向けてのデータの整理と分析本年度は、質問紙調査(研究1)とフィールドワーク(研究2)によって得たデータを整理して、分析を行った。研究1から、建設技術者の行動は、所属する集団が建設技術者社会において占める位置特性に強い影響を受け、他から配慮を受ける(立場が強い)側の集団に所属する建設技術者は高い倫理性を発揮することが可能であることがわかった。それに対し、他に強く配慮する(立場が弱い)側の集団に所属する建設技術者は、取り巻く周囲の職業集団から強い拘束を受け、高い倫理性を持っていてもそれを発揮できない可能性があることも明らかになった。また、研究2では、分析の過程で、1)現場では「相互協調的自己観」が共有される、2)情報はその事を重要にとらえている人にしか受容されない、という2つの仮説を生成し、その仮説の確かさを検証した。この相互協調的自己観を打ち破る存在として、その現場に常駐してはいない外来者の存在に注目した。他者や周囲のあり方が個人の言動に大きく作用する日本では発話されにくい問題も、外来者の発言が問題の解決や事故の未然の防止に大きな影響を与えていることを見出した。2.技術者を対象にした披術者倫理に関する教材の開発上述の2つの研究成果を踏まえて、現役技術者および外国人技術者を対象にした技術者倫理に関する教材を開発した。3.最終報告書の作成1と2を盛り込んだ最終報告書を作成した。
高精細な発光トモグラフィを実現する生物発光源の開発

本研究課題では、集束超音波と相互作用することで変調する生物発光源を開発し、高精細な発光トモグラフィを実現する基本原理を開拓することを目指した。そのために初年度は、生物発光源と集束超音波の相互作用を検出する装置を自作した。更に、野生型ルシフェラーゼにおいて確認された超音波応答性を増強するために、超音波によって生成されるROSに応答して発光を増加するルシフェラーゼ分子の設計を試みた。しかし、試作した分子のROSへの応答性は非常に小さく、実用に足る生物発光源の開発は困難であると考えられたことから、最終年度は、超音波によって生成される圧力波に応答する生物発光源の開発に注力した。その分子設計には細胞内相転移を利用したタンパク質相互作用検出センサーFluoppiの原理を参考にした。Fluoppiにおいて、細胞内に形成される液相転移濃縮体(LPTC: liquid-phase transition condensation)では、高密度に分子が集合することで、生体分子の反応性が変化することや、外部からのせん断応力に対して柔軟にその形状を変化させることが知られている。そこで、超音波の圧力波が発光分子を含むLPTCと相互作用することで、ルシフェラーゼの発光反応に影響を与えることを期待した。ルシフェラーゼと複数のタンパク質相互作用ドメインを含む分子を設計・最適化し、LPTCを形成する発光分子(LPTC発光分子)を開発した。次に、LPTC発光分子を培養細胞に発現させ、様々な周波数の集束超音波を細胞に照射した時、細胞内のLPTCを発光顕微観察したが、LPTCの形態や、LPTCから生成される発光強度の変化は検出できなかった。現在、超音波と相互作用することで変調する生物発光源の開発は道半ばであるが、超音波とLPTC発光分子の相互作用解析系を確立したことで、今後、更なる研究の進展が期待できる。29年度が最終年度であるため、記入しない。生体深部組織に位置する生物発光源の空間分布情報を得るために、集束超音波と相互作用して、発光強度を変調する遺伝子コード型生物発光レポーターの開発に取り組んだ。今年度は、当初の計画に従って、(1)集束超音波と生物発光源の相互作用をリアルタイムで検出する測定装置の自作、(2)集束超音波によって生成される活性酸素種(ROS)に応答して発光強度が変化するルシフェラーゼセンサーの開発を進めた。(1)に関しては、ポリカーボネイト容器内に配置した発光酵素・基質混合溶液、もしくは発光酵素発現細胞に対して、専用のシリコンゴム導波管を用いることで、1 MHzの高周波集束超音波の減衰を最小限にとどめて照射するシステムを、可視から近赤外波長領域に十分な感度をもつ微弱光検出機に組み込んだ。開発した計測装置の動作確認のために、共同研究者である東北工業大学・小林研究室で開発された装置との比較実験を実施し、野生型ホタルルシフェラーゼと集束超音波との相互作用を検出可能であることを確認した。更に、超音波の周波数を変化させることで、ホタルルシフェラーゼの発光反応の応答性が変化することに加え、ウミシイタケルシフェラーゼとセレンテラジンの発光反応についても、集束超音波と相互作用することが明らかになった。(2)に関しては、ROSと反応して立体構造を変化させる大腸菌由来のタンパク質ドメインを分割型ホタルルシフェラーゼに組み合わせることで、ROS応答性ルシフェラーゼの開発を目指したが、非常に小さなROS応答性しか得られず実用に足る発光システムの開発には至らなかった。集束超音波と生物発光源の相互作用解析装置の開発は計画通り進展したものの、分割型ルシフェラーゼを基本原理に用いたROS応答性ルシフェラーゼの開発に関しては期待していたような成果は得られなかった。ROS応答性ドメインを組み込む位置や分割型ルシフェラーゼのタイプも複数検討し、30種類近くの分子設計を試したが、ROS応答性は非常に小さく、ROS応答性ドメインの構造変化が十分大きくないことも考えられた。

現在、超音波と相互作用することで変調する生物発光源の開発は道半ばであるが、超音波とLPTC発光分子の相互作用解析系を確立したことで、今後、更なる研究の進展が期待できる。超音波が生体分子に相互作用する要因として、ROSの他に機械的な圧力が考えられている。超音波が生体材料を透過する際、局所的な圧力変化が生じ、キャビティの生成・崩壊が伴う。その時、衝撃波が発生し、生体分子に何らかの影響を与えるとされている。今年度の検討から、ROS応答性ルシフェラーゼの開発が困難であると考えられたため、次年度は、機械的な圧力変化に応答する発光源の開発に取り組む。29年度が最終年度であるため、記入しない。
心筋梗塞後リモデリングにおけるADAMTS4の役割と治療応用

心筋梗塞におけるADAMTS4の発現を検討した。梗塞心の梗塞辺縁領域に強いADAMTS4の発現誘導を認めた。次にADAMTS4ノックアウトマウスを用いて解析を行った。まず、ADAMTS4ノックアウトマウスの心臓形成には明らかな異常は認めなかった。次にADAMTS4ノックアウトマウスを用いて心筋梗塞を作成し、野生型と比較した。梗塞後の生存率には有意な差はなく、炎症細胞の浸潤度および梗塞後の心機能にも有意な差は見られなかった。以上より、19ある他のADAMTSメンバーがADAMTS4ノックアウト心筋梗塞マウスにおいて代償的に働いている可能性が示唆された。心筋梗塞後に起きる左室リモデリングは、心筋梗塞の予後を規定する因子である。細胞外マトリックスはコラーゲンやプロテオグリカンの集合体からなり、バーシカンは心臓における主要な細胞外マトリックス構成成分である。申請者は、近年行っている心血管疾患における細胞外マトリックスの役割についての研究過程で、この心臓に重要であるバーシカンが、心筋梗塞の治癒過程で分解されることを発見した。さらに後述するように、バーシカン分解酵素であるADAMTSファミリーが心筋梗塞後に一過性に発現上昇することを見出した。バーシカン分解およびその分解酵素ADAMTSの心筋梗塞における役割を解明する。ADAMTSの解析により、左室リモデリングのメカニズムの解明につながる。まず、今年度は、以下の実験を行った。(1)心筋梗塞におけるADAMTSの発現検討雄性SDラットを用いて、心筋梗塞モデルを作製し、経時的に心臓を摘出し、リアルタイムPCR法によるADAMTSのmRNA発現に関する定量的評価・解析を行った。次に免疫染色法・ウエスタンブロッティング法によるタンパクレベルでのADAMTSの評価・解析を行った。心筋梗塞後のADAMTSはそれぞれ固有の発現パターンを示した。このことより、それぞれのADAMTSが心筋梗塞の治癒過程において固有の役割を担っていることが示された。(2)ノックアウトマウスにおける心臓表現型の解析ADAMTSノックアウトマウスを本学動物実験施設に搬入し、飼養を開始した。心筋梗塞を作成に取り掛かっており、心筋梗塞後、7日目の心臓をノックアウトマウス5匹、野生型5匹でそれぞれ作成した。生存率には明らかな差は現在までの匹数においては見られなかった。心筋梗後に起きる左室リモデリングは、心筋梗の予後を規定する因子である。ADAMTSの解析により、左室リモデリングのメカニズムの解明につながると考えている。今年度は、以下の実験を行った。(1) ADAMTS4ノックアウトマウスでの心筋梗塞作製ADAMTS4ノックアウトマウスおよび野生型C57/B6マウスを用いて、心筋梗塞モデルを作製し、経時的に心臓を摘出し、2日・7日・28日と経時的に血圧測定、心臓超音波検査を実施し、心筋梗塞後の心機能の変化について検討を行った。血圧測定、心臓超音波検査にては今回検討した範囲では有意な差は認めなかった。(2) ADAMTS4ノックアウトマウスでの梗塞心臓における表現型の解析まず、心筋梗塞作成後の生存率に関して、術後の心臓破裂の発生頻度には差はなかった。その後心臓を摘出しHE染色・アザン染色などを行い、線維化の有無などについて検討した。近年行っている心血管疾患における細胞外マトリックスの役割についての研究過程で、この心臓に重要であるバーシカンが心筋梗塞の治癒過程で分解され、さらにバーシカン分解酵素であるADAMTSファミリーが心筋梗塞後に一過性に発現上昇することを見出した。(1)ADAMTS4ノックアウトマウス梗塞後リモデリング解析ADAMTS4ノックアウトマウス心筋梗塞モデルを作製した。バーシカン分解が細胞浸潤に影響を与えることが予想されるので、F4/80陽性細胞として検出される炎症細胞浸潤の程度などを野生型の場合と比較を行った。梗塞後7日目の時点における細胞浸潤とバーシカン分解の関連を検討したが、野生型と有意な差は認めなかった。(2)ADAMTS4ノックアウトマウス

梗塞後リモデリングの生理学的解析ADAMTS4ノックアウトマウス心筋梗塞モデルを作製する。ADAMTS欠損が生理的機能に影響を与える可能性が新たに考えられたので、梗塞後7日目の時点における心機能・左室駆出率など生理的機能を心臓エコー検査などにて検討したが、明らかな差は見られなかった。今回の結果の考察として、部位または病態特異的な代償メカニズムが働いている可能性が考えられる。すなわち、ADAMTS4以外の他のバーシカン分解酵素が代わりに働いている可能性が挙げられる。現在ADAMTSには19種類が知られており、このうちバーシカン分解酵素として働くものはADAMTS1,4,5,9などがある。これら他のADAMTSメンバーの発現動態など、さらに詳細なADAMTSの解析により、左室リモデリングのメカニズムの解明につながるものと考えられた。
中枢神経組織の修復に関わる血管由来分子の探索

脳脊髄組織内の髄鞘は、神経活動の伝達に重要な役割を担っている。種々の神経疾患において髄鞘は傷害され、傷ついた髄鞘を修復させることが症状の寛解に繋がることと考えられている。研究代表者らは過去に、血管から放出される物質が神経組織の修復を導くことを報告している。本課題では、血管から放出される物質が髄鞘に働きかける作用を中心に研究した。髄鞘の発達も血管から放出される物質によって促進するか検討するため、血管内皮細胞が恒常的に発現する分子(既知のもの)が培養オリゴデンドロサイトの発達に与える作用について検討した。その結果、in vitroで、血管内皮細胞由来の物質がオリゴデンドロサイトの遊走を促進させることを見出した。さらにそのメカニズムについて、細胞内シグナル伝達機構について検討した。その結果、血管内皮細胞由来の物質は、オリゴデンドロサイトの細胞内cAMPの増加させることで、細胞遊走を促進することが示唆された。この結果は、in vivoにおいても観察され、脱髄モデルマウスにおける髄鞘の修復にも血管由来因子が関与することが示唆された。さらに、血管が神経細胞に与える作用についても解析をすすめた。in vitroで血管内皮細胞と神経細胞を共培養したところ、血管と神経細胞の直接的な接着が、神経突起の伸長に作用することも見出した。そのメカニズムには、神経細胞側のインテグリンベータ3の発現が関与することを報告した。26年度が最終年度であるため、記入しない。脳脊髄の傷害は、種々の神経機能障害をもたらすものであり、その症状を改善させることは喫緊の課題である。症状の改善には、傷ついた神経組織の修復が必要になる。傷害の中心部では神経系細胞が死滅しているため、傷害部の周辺のペナンブラ領域が修復のターゲットに有望視されている。種々の神経疾患のペナンブラ領域では、しばしば髄鞘の脱落が観察される。一方、ペナンブラ周囲には、髄鞘の元となるオリゴデンドロサイト前駆細胞が存在する。そのため、オリゴデンドロサイトを成熟オリゴデンドロサイトへ成長させるメカニズムを解明し、その作用を高めることで、種々の神経機能障害に対して治療的な作用を発揮することが期待される。本研究では、髄鞘の発達機構について検討した。その結果、髄鞘の発達を促す細胞内シグナル伝達機構を同定するにいたった。また、同定した分子メカニズムの作用を高める処置を施したマウスに対して、脱髄誘導剤を処置し、その後の髄鞘修復効果を検討した。その結果、同定したメカニズムは、個体レベルでの髄鞘修復機構にも関与することが示唆された。以上の結果は、髄鞘の発達に関わる分子機構の一端を明らかにするものであるとともに、髄鞘修復に対する新規治療標的分子を提案するものである。髄鞘の修復機構の一端を解明することに成功したため。髄鞘の修復は、オリゴデンドロサイト前駆細胞の増殖、遊走、分化、成熟のステップからなる。各ステップに関わる細胞内シグナル伝達機構について、細胞内シグナル伝達阻害剤のアレイを用いて網羅的に解析する。オリゴデンドロサイト前駆細胞の発達のすべてのステップに共通する細胞内シグナル伝達機構を同定し、その作用をin vivoで高める処置を施して、個体レベルでの治療効果の検討を実施する。
現代チベット語西部方言の記述およびキナウル語との言語接触について

今年度は、昨年度に引き続き、主としてインド西北部ヒマーチャル・プラデシュ州のキナウル地区においてキナウル語の調査、記述を行った。調査地は昨年度と同様キナウル地区の中心地であるレコンビオから西に約10km程度にあるPangiという集落であるが、調査期間の後半には、Baspa渓谷のSanglaとChitkulにおいても語彙調査を行った。Pangiの調査においては、主として動詞の範列的な語形変化を記録した。キナウル語は、動詞に、主語または目的語を表す、代名詞起源と思われる形態素を付加するという特徴をもった代名詞化言語である。主語を表す形態素は、1人称と2人称が区別され、接尾辞として語末に付加される。3人称は特別な形式をもたない。目的語を表す接辞は、1・2人称が同形であり、動詞語幹と相を表す接尾辞の間に挿入される。3人称は特別の形式をもたない。また、能格性や直示表現などで興味深い例が得られ、今後の調査の課題となった。SanglaおよびChitkulにおける調査では、短期間であったため、J.A.Matisoflによる200語の語彙リストをもとに語彙調査を行った。この調査から、Sanglaでは発音上の違いはあるものの、Pangiとの語彙上の差異は大きくなく、Chitkulにおいては語彙の違いが大きくなることがわかった。また、いくつかの語彙でチベット語と同形のものがあるが、同源であるのか借用であるのかは今後の調査を必要とする。今年度は、インド西北部ヒマ-チャル・プラデシュ州のキナウル地区においてキナウル語の調査、記述を行った。キナウル語はチベット・ビルマ系の言語であり、チベット・キナウル諸語に分類される。すでに20世紀初頭、数編の論文が発表されたが、その後の研究は多くなく、1980年代にいたって、ようやく文法書が著された。しかし、この文法書は信頼性が低く、十分な研究とは言えない。そこで、本研究において、まずキナウル語の現地調査が行われた。今回の調査において、主として基礎語彙の収集にあたった。その結果、アジア・アフリカ言語文化研究所の『アジア・アフリカ言語調査票』に基づく500語の単語と、数十語の生活語彙が収集された。これらの語彙の分析の結果、母音体系については、6個の短母音とそれに対応する長母音が認められた。また、いくつかの鼻母音が存在する。二重母音はこれまでのところ認められないが、今後の研究が必要である。(なお、母音体系については日本言語学会第115回大会において口頭発表を行った。)超分節的要素であるストレスアクセント、ピッチアクセント、声調などは体系的には認められない。しかし、数語ではあるが、声調の対立を持つものがあり、また、固定的なアクセントがある。これは必ずしも予測可能ではなく、今後音韻的な超分節的要素に発展する可能性を残している。子音の分析はまだ十分ではない。なお、本研究の目的としてチベット語西部方言の記述を行う予定であったが、今年度においては、すでに公刊されている資料の収集を進めるのみで、現地調査を行うことはできなかった。
「健康日本21」実践のための食事評価法に関する研究

料理の組合せ方で食事を分類・パターン化する方法と基準を設定することにより、食事状況の料理レベルでの科学的な評価手法を確立することを目的とした。これにより、個人の食事状況の把握はもちろん、集団の食生活実態の的確な把握が可能になると考える。料理の分類方法については、中年男女や女子大生を対象に行った2,685日分の食事調査データを用いて、簡便性や汎用性・再現性・妥当性について確認、分類方法を決定した。また、料理の組合せ方から食事のパターン化を行い、個人の食事状況や、個人の集まりとしての集団の食生活実態を分かりやすく提示できることを明らかにした。なお、食事評価のための判定基準については、現在検討中である。一方、既存の栄養指導支援システムと指導用媒体作成システムを一体化させ、一連の作業を簡便化し、料理の栄養計算を行うと同時に「主食」「主菜」「副菜」等の料理分類を行い、料理の栄養価を分かり易く図示できるようにした。上記システムを用いて、各種集団の食事調査データの料理分類とその組合せ方に基づく食パターン分類を行い、食生活実態を料理レベルで明らかする意義について、平成15年9月日本栄養改善学会(岡山)で、「中年主婦と女子大生の食事状況の比較」「食生活実態の把握や食事評価に食パターンを用いることの意義」「栄養指導の前後の食パターン変化」として発表。また、同年10月日本公衆衛生学会(京都)では、「『健康日本21』実践のための食事評価法の検討」の標題の下に、「中高年男女の1日の食事状況」「中高年男女の食事別食事状況」「料理・食事レベルからの評価」の3題を発表、現在これらに関連した論文を作成中である。1.料理分類基準の決定と判定基準の検討19952002年に中年男女や女子大生を対象に行った2685日分の食事調査データを用いて、料理分類方法の簡便性や汎用性・再現性・妥当性について確認し、分類基準を決定した。さらに、食事を料理レベルで診断するための判定基準を提案した。なお、その判定基準の妥当性については現在検討中である。2.食事調査データ入力・チェックシステムの整備及び既存システムとの一体化ドキュメントスキャナを用いて食事調査票の手書き文字入力とその読取りができるようにするために、新たな調査票の様式を考案し、OCRソフトによりシステム化することによって、データ入力を機械的に行えるようにした。また、既存の栄養指導支援システムと指導用媒体作成システムを一体化させ、一連の作業を簡便化した。3.栄養指導への活用と指導効果の検討個人の食事状況を栄養素・食品レベルだけでなく、料理・食事レベル(食パターン)を総合的に把握することにより、的確で分かりやすい栄養指導が可能となり、指導効果が向上した。また、栄養素・食品摂取量等個々の平均値や分布では把握できない、個人の集まりとしての集団レベルの総合的な食事の評価にも有効であることを明らかにした。4.研究成果の発表以上の研究成果については、2003年9月に開催された日本栄養改善学会第50回大会(演題:食生活実態の把握や食事評価に食パターンを用いることの意義・他2題)、及び2003年10月に開催された日本公衆衛生学会第62回大会(演題:「健康日本21」実践のための食事評価法の検討料理・食事レベルからの評価・他2題)において報告した。1.料理分類結果の判定基準の設定と妥当性の検討中年男女・女子大生合計544名、2,877日分の食事記録データを用いて、実際の食生活の中で飲食物がどのように摂取されているか、昨年度設定した分類条件に基づき42,508品の料理を分類、各料理群の出現頻度を調べ、食品群別・栄養素等摂取量との関係を明らかにし、判定基準の設定を行った。なお、その妥当性については、平成17年度からの食事摂取基準を念頭に検討中である。2.対象別食事評価と群別比較検討

上記食事記録データを用いて、中年男性・中年女性・女子大生の別に食物摂取状況を栄養素・食品・料理の摂り方から詳細に分析し、性・年代別の特徴を明らかにした。特に、集団を構成する個々人の食べ方の特徴、栄養素等摂取の偏りの原因が食品や料理の摂り方のどこに起因しているのかを、食事別の料理の組合せ方(食パターン)で的確に把握できることが分かった。3.栄養指導前後の食事評価・指導効果判定方法の検討本学新入生を対象に実施した栄養指導前後の食物摂取状況を、栄養素・食品群・料理群別摂取量と食パターンを用いて比較し、指導前後の食事状況の変化から指導効果の判定を行い、栄養指導のあり方についても検討した。特に、主菜の適正量を的確に示す教育ツールの必要性を明らかにした。4.研究成果の発表以上の研究成果については、「中年男女の食生活実態」と「栄養指導前後の新入生の食事内容の変化」の原著論文を福岡女子大学人間環境学部紀要に掲載、「料理に含まれる栄養素あるいは食品群によるクラスター分類」「料理の表現方法と栄養的意義栄養素および食品摂取との関係から」「料理の組合せ方による食事評価」に関する論文の投稿を予定している。
権利アプローチによる女性のエンパワメント実現に向けた実践的枠組の構築

国連機関やNGOの多くが「開発における権利・人権アプローチ(権利アプローチ)」を採用するようになっているが、特に女性の権利に関しては、「伝統」や「文化」を理由とする反発も根強く、文化の多様性や特異性に配慮した丁寧な取り組みが求められる。本研究では、「権利アプローチ」に基づいて活動するインドのNGOの協力を得てフィールド調査を実施し、女性たちが、「伝統」「文化」を理由とする抵抗に対し、どのような戦略を駆使し対応・克服しているかに関する知見を得た。「対話を通じた協議・調整」を促進する丁寧なコミュニケーションや、権利意識を共有する親密なネットワークの支援が重要な役割を果たすことが理解できた。2013年度は、文献による調査と分析に力を注ぎ、本研究の枠組の精緻化をおこなった他、2013年7月、2013年10月、2013年12月に京都女子大学でおこなわれた研究会において、本研究に関する報告をおこなった。また、国連女性の地位委員会の政府代表や女性差別撤廃委員会委員への聞き取りをおこない、女性の権利に関し、国際的にどのような議論がおこなわれてきたかについても検討した。570)と題する論文を発表した他、安保理決議1325号の実施を通じた女性の権利実現に関し、(公財)世界人権問題研究センター『研究紀要』第19号(2014年3月)に、「安保理決議1325号と関連決議の実施を通じた『女性と平和・安全保障』の課題への取り組みの現状と課題」と題する論文を執筆した。平成26年度は、前年度に引き続き、文献による調査と分析をおこなった他、これまでに実施したインドでのフィールド調査の結果を発展的に活用し、今回の研究に有機的に結びつけるために、フィールド調査の手法や具体的な調査内容・実施方法について検討をおこなった。また、研究課題に関連する学会や研究会に積極的に出席し、「女性差別撤廃委員会」の政府報告書審査に関する勉強会や「女性と平和・安全保障」に関連する安保理決議の地域的実施についての研究会に参加した。司法的アプローチを通じた「権利アプローチ」の発展に関しては、ドイツ、フラウエンキムジーで開催された学会で報告をおこなった。27年度は、5月に首都大学東京で開催された日本法社会学会学術大会の「企画関連ミニシンポジウムII権利の実質化の条件」において、「『権利アプローチ』と個々人のエンパワメント地域的文脈を踏まえた権利支援の現場から」と題する報告をおこない、本研究の成果に関し、学術的な議論を深める機会を得ることができた。同報告では、権利アプローチの実践例として、アフリカで開発され世界各地で広く実施されてきているHIV/エイズ予防研修「ステッピング・ストーンズ」の成果と課題を検証し、権利アプローチが具体的な効果を上げるために必要な条件を検討した。また、報告内容については、『法社会学第82号』において論文として公表した。さらに、これまでに進めてきた文献研究を引き続きおこなうと同時に、権利アプローチの具現化に向けた実践的な枠組の構築に向けて、インドにおけるフィールドワークを実施した。インドでは、マハーラーシュトラ州プネー郊外に拠点を置き、権利アプローチに基づいて、健康の問題を切り口に、様々な分野における農村女性のエンパワメントのために活動しているNGOスタッフの女性たちへの聞き取り調査を実施した。調査からは、「文化」や「伝統」を理由とする「権利」への抵抗と反発に対する女性たちの戦略的対応について重要な知見を得ることができた。これらの成果を分析すると同時に検証を加え、本研究の目的である「権利アプローチ」に基づいて女性のエンパワメントを実現するための実践的枠組の検討と構築に向けた作業をおこなった。文献調査は順調に進展しており、研究結果をまとめるために十分な文献を既に検討してきている。昨年度に計画されていたフィールド調査が、国内での業務のために十分に調整できず実施できなかったことが、「おおむね順調に進展している」と評価した理由である。ジェンダー研究、開発学、人権27年度は、インドでのフィールド調査を実施し、これまでの成果を踏まえ、本研究の完成を目指すこととする。インド、マハーラーシュトラ州プネのNGOであるマスムの協力を得て、8月から9月にかけて、フィールド調査を実施する予定である。予定されたペースで文献調査や聞き取り調査が進んでいる他、2014年度に実施する予定であるインドにおけるフィールド調査についても準備を進めている。2014年度は、8月から9月にかけてインド、マハーラーシュトラ州プネのNGOであるMASUMの協力を得てフィールド調査をおこない、2013年度に構築した権利アプローチの実践的展開に関する枠組の有用性や課題を検討する予定である。
数理形態学(モルフォロジカルフィルター)による新しい骨形態画像診断

骨格構造がシンプルな腰椎より摘出した骨ブロックを使用して骨強度と骨格構造との関係についてより詳細に検討した。すなわち高年齢者の第3腰椎から作製した18個の海綿骨骨ブロックを使用して、骨強度と骨梁構造、bone mineral density(BMD)との関係から骨粗鬆症の治療効果判定のための骨強度指標の確立を試みた。その結果、BMDとelasticityとの相関は低く、骨ブロックによってはBMDがほぼ同じでもelasticityは大きく異なった。そして、連続性が高く、線状で縦方向と横方向の混在する格子状の骨格パターンほど高いelasticityを示した。SKPとelasticityとの相関はsubset、sumset imageともに認められなかった。一方、Vtとelasticityはsubset image(n=1,2,3,5,6)およびsumset imageでBMDの時よりも高い相関を示し、connectivity of trabecular skeletalstructureが骨強度に強く関係していることを示した。そして、VtとBMDとの相関が認められないことから、高齢者におけるBMDの骨強度への関与は極めて小さいことを示した。さらに骨粗鬆症患者への臨床応用において、大腿骨ward's三角部および第3腰椎に対する治療効果は骨格構造の改善として2値画像上に描出され、それはSkP、Vtの変動として定量評価された。骨構造解析のためのmorphological filterとしてskeleton processingを考案し,cathod ray tube上に作製した種々のサインウェーブテストチャートを使用してその骨格特徴抽出能について検討した。そして,computed radiographyを組み合わせて,骨梁の骨格パターンを選択的に二値画像として抽出することを試みた。さらに,実際の臨床応用の可能性について検討するために,正常者と骨粗鬆症患者の骨梁骨格構造の比較および骨粗鬆症患者の大腿骨と腰椎に対する治療効果判定を試みた。その結果,morphological filterは空間周波数0.11.0cycles/mmの範囲で作製した種々のテストチャートの骨格特徴を抽出した。そして,それは階調の変動および連続したコントラストの変化による影響を受けなかった。また,二次元テストチャートにおいても同様の骨格特徴抽出能を示した。ランダムノイズを加算したテストチャートに対しても,処理回数を増やすとノイズが消失し骨格が抽出された。さらに,skeleton processingをCRと組み合わせて骨粗鬆症症例に応用した結果,骨梁の連続性や断裂を視覚的に認識可能な骨格二値画像として抽出することに成功した。摘出されたヒト大腿骨骨頭および第3腰椎を用いてMorphology処理による骨格2値画像,DXAによる骨塩量(BMD)および骨強度(Elasticity)を測定し,それぞれの関係について検討した結果下記の結論を得た.1.大腿骨,腰椎ともにBMDと骨強度は相関していなかった.(r=0.48,0.098).2.横方向と縦方向の混在した無秩序な骨格を有する構造,もしくは規則正しい格子状をした内部骨格構造が高い強度(Elasticity)を示した.3.荷重方向に対して水平に走る内部骨格構造を有するものが最も高い強度を示し,内部骨格構造の連続性,断裂の有無が骨強度に大きく影響していることが解った.これらの結果より,BMDと骨強度とは必ずしも相関していないことが解った.そして,骨強度と骨構造とは密接に関係しており,BMDに偏重することなく,骨構造も加味した骨強度という概念で骨粗鬆症等の診断や治療効果判定を考慮することの重要性が示唆された.さらに,骨格二値画像の定量化にstar volume解析を応用した結果,骨格成分の量,骨格構造の連続性や断裂を表す特徴量として有効であることが示唆された.また,モルフォロジカルフィルターをパノラマデジタル画像へ応用したところ,骨粗鬆症患者の顎骨骨格パターンの変化を視覚的にとらえることができた。すなわち高年齢者の第3腰椎から作製した18個の海綿骨骨ブロックを使用して、骨強度と骨梁構造、bonemineral density(BMD)との関係から骨粗鬆症の治療効果測定のための骨強度指標の確立を試みた。

その結果、BMDとelasticityとの相関は低く、骨ブロックによってはBMDがほぼ同じでもelasticityは大きく異なった。そして、連続性が高く、線状で縦方向と横方向の混在する格子状の骨格パターンほど高いelasticityを示した。SKPとelasticityとの相関はsubset、sumsetimageともに認められなかった。一方、Vtとelasticityはsubsetimage(n=1,2,3,5,6)およびsumsetimageでBMDの時よりも高い相関を示し、connectivityof trabecular skeletal structureが骨強度に強く関係していることを示した。そして、VtとBMDとの相関が認められないことから、高齢者におけるBMDの骨強度への関与は極めて小さいことを示した。さらに骨粗鬆症患者への臨床応用において、大腿骨ward's三角部および第3腰椎に対する治療効果は骨格構造の改善として2値画像上に描出され、それはSkP、Vtの変動として定量評価された。
血管内皮細胞由来IL-33による血管炎病態形成メカニズムの解析

ANCA関連血管炎患者における血清中のIL-33発現についての評価を行った。HumanIL-33ELISAQuantitationKit(geneway)を用いANCA関連血管炎患者6名(Wegener肉芽腫1名顕微鏡的多発血管炎3名チャーグ・ストラウス症候群2名)について測定した。チャーグ・ストラウス症候群1名で2.254pg/mlと血清中IL-33の上昇を認めたが、他の5名では感度以下であった。我々はマウス骨髄由来mastcellを用い、invitroにてrecombinantIL-33刺激によるそのvaiabilityへの影響に関しての検討を行った。ReconbinantIL-33刺激群で有意なcellviabilityの上昇を濃度依存性に認めた。CFSEdilutionassayでは細胞増殖を認めなかったため、apoptosisassay(AnnexinVstain)を行い、IL-33がmastcellのapoptosisを阻害しcellviability上昇に寄与することを明らかにした。Human IL-33 ELISAQuantitation Kit (geneway)を用いANCA関連血管炎患者6名(Wegener肉芽腫1名顕微鏡的多発血管炎3名チャーグ・ストラウス症候群2名)について測定した。チャーグ・ストラウス症候群1名で2.254 pg/mlと血清中IL-33の上昇を認めたが、他の5名では感度以下であった。Mast cellは血管壁および血管内皮細胞周囲に多数存在し、とくにラットアジュバンド誘導血管炎モデルでその活性化および病態への関与が報告されている。我々はマウス骨髄由来mast cellを用い、in vitroにてrecombinant IL-33刺激によるそのvaiabilityへの影響に関しての検討を行った。Reconbinant IL-33刺激群で有意なcell viabilityの上昇を濃度依存性に認めた。CFSEdilution assayでは細胞増殖を認めなかったため、apoptosis assay(Annexin V stain)を行い、IL-33がmast cellのapoptosisを阻害しcell viability上昇に寄与することを明らかにした。Mastcytosisは血管炎以外でも関節リウマチや特発性肺線維症で報告されており、そのメカニズムの解析は、血管炎以外の難治性疾患における病態解明にも寄与する可能性が示唆される。Apoptosis阻害作用に関してはIL-33刺激により、antiapoptotis分子であるBcl-XLの発現上昇を認め、apoptosis阻害効果に寄与していると予測される。今後症例数を増やし、再度検討を行う必要がある。今後さらにapoptosis阻害メカニズムに関して検討を行う。ANCA関連血管炎患者の血清中IL-33濃度の上昇を認めていない。今後症例数を増やし検討を行う必要がある。また臓器病変におけるmast cell活性化の評価に関して患者検体数が集まっておらず、今後検体の集積が重要である。引き続き臨床検体を用いIL-33の血管炎患者における発現に関して血清・臓器病変で検討を行う。またマウス骨髄由来mast cellを用い、IL-33のapoptosis阻害のメカニズムに関して検討を行う。Recombinant IL-33刺激によるmast cell apoptosisの阻害効果に関しては確認できており、apoptosis関連分子(特にBcl-2,Bcl-XL等)のIL-33刺激下での発現に関しての検討を進める。