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沖縄地域民間巫者の果たすカウンセリング効果

前年度(平成12年度)、沖縄地域大学生約200名を対象に実施した予備的質問紙調査の結果にもとづいて、より完成度の高い質問紙を作成した。質問紙は、(1)民間巫者への意識および接触経験を調査する質問紙(「大学生用」と「一般用」の2種)、(2)民間巫者との接触経験のあった人にその詳細を問う質問紙(郵送にて回収)を作成した。2現地調査(1)作成した質問紙を、沖縄地域の大学生約200名、沖縄地域の一般住民約130名(20代60代)を対象に実施した。従来の研究で巫者との接触は中年期以降に急速に増大することが報告されているため、大学生だけでなく中年層の一般住民を対象に調査を実施できたことは大きな成果である。この成果は、沖縄在住の臨床心理学者である井村修氏(琉球大学法文学部教授)および古川卓氏(琉球大学保健管理センター講師)の多大な協力によって実現した。(2)民間巫者への面接調査、宗教的面接場面への参与観察を実施し、具体的な事例の収集に努めた。3文献資料検索・収集沖縄県立図書館、東京国立博物館において資料検索・収集を行った。4次年度の計画次年度は研究計画の最終年度であるので、地域住民・大学生を対象にした質問紙調査を継続して進めるとともに、その統計学的分析を行う。そのために、統計を用いた研究実績のある心理学者に本研究への協力を求める予定である。さらに、民間巫者への面接調査および文献資料の検索と収集にも努める予定である。3カ年計画の研究の最終年度であり、吉良と安達、および本年度より研究分担者に加わった福盛(質問紙データの統計学的解析担当)の3名による研究会議にもとづいて、本年度の研究を進めてきた。1沖縄地域住民を対象として実施した質問紙データの分析と考察平成12年度に実施した予備的質問紙調査の結果にもとづいて、平成13年度には、より完成度の高い質問紙を作成して、沖縄地域在住の大学生と一般住民を対象に調査を実施した。本年度は、この質問紙データの分析と統計処理を行った。その結果、(1)沖縄地域に固有の宗教的慣習との親和度やその日常生活への浸透度が民間巫者への接触度と関係していること、(2)民間巫者への接触度には性差が顕著に見られること、(3)民間巫者に対する意識にはアンビバレントな傾向が強いこと、などが明らかになりつつある。この結果をもとに、吉良と福盛は臨床心理学、安達は宗教学の立場から検討を行い、さらに沖縄地域在住臨床心理学者である井村修氏(琉球大学法文学部教授)、古川卓氏(琉球大学保健管理センター講師)の協力を得て、民間巫者の果たすカウンセリング効果について、考察を進めている。2現地調査前年度に引き続き、民間巫者への面接調査、宗教的面接場面への参与観察を実施し、具体的な事例を収集した。3資料検索・収集国立歴史民俗博物館、国立民族学博物館、沖縄県立図書館、青森県立図書館、むつ市立図書館において、諸地域の民間巫者に関する資料検索を行った。
アミド合成に有用なニトリルヒドラタ-ゼのコファクタ-と反応機構に関する研究

酵素を触媒とする新しい省エネルギ-型微生物生産法の研究開発の試みが注目されてきた。我々はニトリルヒドラタ-ゼによるアクリルアミドの生産に関する基礎的研究を長年に渡り検討し、既に本酵素を用いたアクリルアミド生産の工業化に成功した。本方法は大量生産型の原料素材の生産にも酵素反応が利用しうることを初めて示した画期的な研究として世界的な注目を集めている。しかしながら、このような応用的研究の進展に比べて本酵素の基礎的検討は極めて遅れていた。そこで我々は本課題としてニトリルヒドラタ-ゼのコファクタ-と反応機構に関して検討を加えた。Brevibacterium R312,Pseudomonas chlororaphis B23のニトリルヒドラタ-ゼは3価鉄を、Rhodococcus rhodochrous J1のそれはコバルトをコファクタ-として含む。ESRを用いて鉄型酵素の鉄の存在状態や本水和反応機構の解析を試みたところ、本酵素は典型的なrhombic型の低スピンFe(III)のスペクトルを示した。ESRや分光学的検討からFe(III)は基質ニトリルのbindingと活性化に関与し、Fe(III)があたかもヘム環のように4方向からヒスチジンのイミダゾ-ル基と配位して存在していると予想された。また軸方向にシステインのイオウと水が配位しており、ニトリルと水がすみやかに置換することが予想された。さらに本酵素にはピロロキノリンキノン類緑化合物が含まれ、Fe(III)センタ-の近くに位置して両者が機能的に相関していることが強く示唆される研究結果を得た。コバルト型酵素においては鉄のかわりにコバルトが配位していると考えられ、やはりニトリルのbindingに寄与している。しかしながらコバルト酵素にはピロロキノリン類緑化合物は含まれず、ポルフィリン様色素の含有が認められた。鉄型およびコバルト型ニトリルヒドラタ-ゼのクロ-ニングを行い、遺伝子の塩基配列を決定したところ、両遺伝子はきわめて高い相同性を示すことが明らかとなった。近年、酵素を触媒とする新しい省エネルギ-型微生物生産法の研究開発の試みが盛んである。我々が検討してきたニトリルヒドラタ-ゼによるアクリルアミドの生産法はすでに工業化が達成され、大量生産型の原料素材の生産にも酵素反応が利用できうることを示した点で画期的であった。そこで本検討において、応用的にきわめて有意義な本ニトリルヒドラタ-ゼの酵素化学的諸性質を明らかにし、そのコファフタ-および反応機構の解明の検討を試みた。Brevibocterium R312,Pseudomonas chlororaphis B23のニトリルヒドラタ-ゼは3価鉄をコファクタ-として含み,緑色で720km付近に極大吸収を示す。ESRを用いて本酵素の鉄の存在状態や本水和反応機構の解析を試みたところ、本酵素は典型的なrhombic型の低スピンFe(III)のESRスペクトルを示した(gmax=2.284,gmid=2.140,gmin=1.971)。ESRスペクトルや分光学的手法から、Fe(III)は基質ニトリルのbindingと活性化に関与していること、Fe(III)があたかもヘム環のように4方向からおそらきヒスチジンのイミダゾ-ル基の窒素原子と配位して保持されている事が予想された。

またその軸結合位置の一方にシステインのイオウリガンド,その反対方向に水が配位しており、基質ニトリルの添加により、この水がニトリルと速やかに置換することが考えられた。さらにニトリルヒドラタ-ゼには、もう一つのコファクタ-.ピロロキノリンキノン(PQQ)あるいはその類縁化合物が含まれていることを明らかにした。さらにESRを用いた検討により、Fe(III)センタ-の近くにカルボニル基が存在し、これらが教能的に相関していることを強く示唆する実験結果を得た。今までに知られているPQQ酵素はすべて酸化環元酵素の範ちゅうに入る故に、水和酵素であるニトリルヒドラタ-ゼにPQQが含まれていることの意義は大きく、その新しい機能が本酵素反応機構に秘められていると考えられた。酵素を触媒とする新しい省エネルギ-型微生物生産法の研究開発の試みが注目されてきた。我々はニトリルヒドラタ-ゼによるアクリルアミドの生産に関する基礎的研究を長年に渡り検討し、既に本酵素を用いたアクリルアミド生産の工業化に成功した。本方法は大量生産型の原料素材の生産にも酵素反応が利用しうることを初めて示した画期的な研究として世果的な注目を集めている。しかしながら、このような応用的研究の進展に比べて本酵素の基礎的検討は極めて遅れていた。そこで我々は本課題としてニトリルヒドラタ-ゼのコファクタ-と反応機構に関して検討を加えた。Brevibacterium R312,Psendomonas chlororophis B23のニトリルヒドラタ-ゼは3価鉄を、Rhodecoccus rhodochrous J1のそれはコバルトをコファクタ-として含む。ESRを用いて鉄型酵素の鉄の存在状態や本水和反応機構の解析を試みたところ、本酵素は典型的なrhombic型の低スピンFe(III)のスペクトルを示した。ESRや分光学的検討からFe(III)は基質ニトリルのbindingし活性化に関与し、Fe(III)があたかもヘム環のように4方向からヒスチジンのイミダゾ-ル基と配位して存在していると予想された。また軸方向にシステインのイオウと水が配位しており、ニトリルと水がすみやかに置換することが予想された。さに本酵素にはピロロキノリンキノン類緑化合物が含まれ、Fe(III)センタ-の近くに位置して両者が機能的に相関していることが強く示唆される研究結果を得た。コバルト型酵素においては鉄のかわりにコバルトが配位していると考えられ、やはりニトリルのbindingに寄与している。しかしながらコバルト酵素にはピロロキノリン類緑化合物は含まれず、ポルフィリン様色素の含有が認められた。鉄型およびコバルト型ニトリルヒドラタ-ゼのクロ-ニングを行い遺伝子の塩基配列を決定したところ、両遺伝子はきわめて高い相同性を示すことが明らかとなった。
Notchシグナルによる造血幹細胞制御-ヒトES細胞から造血幹細胞誘導を含む-

Notch受容体を介するシグナルにより、造血幹細胞の未分化性を維持したまま増幅することが可能である。しかし骨髄のnicheにおいて造血幹細胞が自己複製する際に、Notchシグナルが重要な役割を果たすかについては明かでない。今回、Notch1及びNotch2遺伝子を種々に欠失するマウス、あるいはNotch阻害薬であるY001027を投与した野生型マウスを用いて、この疑問へのアプローチを試みた。Notch1+/-Notch2+/-マウスに抗腫瘍薬である5-FUを投与、あるいは野生型マウスに5-FUを投与しその後Y001027を投与し、骨髄回復期に造血幹細胞濃縮画分であるLin-Scal+cKit+(LSK)細胞またはCD34-LSK細胞の絶対数を比較した。しかし期待に反し、これらの実験ではコントロールマウスあるいはY001027を投与しない野生型マウスとの間に明確な差は認められず、Notchシグナルが生理的に造血幹細胞維持に関与することは証明できなかった。一方、ヒトES細胞から造血幹細胞への分化誘導が可能となれば、臨床使用を目的とするES細胞由来血球の工業生産システム構築など、さまざまな応用が考えられる。本研究では、胎生期の造血幹細胞発生にとってNotchシグナルが重要な役割を果たすという我々自身の知見を応用し、Notchリガンドを用いることによりヒトES細胞から造血幹細胞への誘導が可能かを検討した。ヒトES細胞はKhES-3を用いた。種々の培養法でKhES-3を分化誘導させ、造血幹(前駆)細胞のマーカー候補とされるCD34,CD133,KDR, CD90,CD150,CD105,PCLP-1,PECAM1,and VE-Cadherin.などの表面マーカーを組み合わせて分取し、造血活性を評価した。しかしながら、これらのマーカーで得られる細胞はいずれも血管内皮細胞やマクロファージへの分化能を示したものの、著明な造血幹(前駆)細胞活性を示す細胞を同定することはできなかった。海面骨表面の骨髄造血幹細胞ニッチにおける幹細胞自己複製シグナルについては未だ明らかでない。Notch1及びNotch2両遺伝子を片アレルずつ欠損(N1+/-N2+/-)、あるいは生後に両アレルとも造血幹細胞で欠損するマウス(N1f/fN2f/f・Tie2-Cre)を作成し、Notchシグナルが造血幹細胞自己複製において果たす役割を明らかにすることを目的として研究を行った。N1+/-N2+/-では、化学療法後に造血幹細胞の頻度が減少していた。N1f/fN2f/f・Tie2-Creマウスは作成中である。一方、ヒトES細胞からの造血幹細胞への分化誘導について研究を進めた。今年度は主に、京都大学で樹立されたヒトES細胞のうち、KhES-3細胞を用いた。まずKhES-3の未分化性を維持しつつ増殖させ、十分な量を凍結保存した。未分化性の維持は、細胞表面抗原SSEA-1,SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60,Oct4の発現パターンで確認した。次に、ディスパーゼを用いてKhES-3細胞コロニーを剥離し、24時間無血清培地中で培養し胚様体(EB)を形成させた。

翌日、培地交換を行い幹細胞因子(SCF)、トロンボポエチン(TPO)、Flt3リガンド(FL)、インターロイキン6-インターロイキン6受容体キメラタンパク質(FP6)、骨形成タンパク質4(BMP4)を添加した培地中でEBを培養し中胚葉系への細胞分化を誘導した。10日後あるいは18日後、EBに酵素処理を行って単一細胞化し、フローサイトメーターでCD31,CD144陽性細胞を分取、これをOP9ストローマ細胞株上で培養したところ、血球様細胞が産生された。血球様細胞コロニーの一部は敷石様に増殖したことから、未分化造血細胞が産生されているものと考えられる。今後さらにこれらの細胞の性状を解析する。Notch受容体を介するシグナルにより、造血幹細胞の未分化性を維持したまま増幅することが可能である。しかし骨髄のnicheにおいて造血幹細胞が自己複製する際に、Notchシグナルが重要な役割を果たすかについては明かでない。今年度は、Notch1+/-Notch2+/-マウス、あるいはNotch阻害薬であるY001027を投与した野生型マウスを用いて、この疑問へのアプローチを試みた。Notch1+/-Notch2+/-マウスに抗腫瘍薬である5-FUを投与、あるいは野生型マウスに5-FUを投与しその後Y001027を投与し、骨髄回復期に造血幹細胞濃縮画分であるLin-Scal+cKit+(LSK)細胞またはCD34-LSK細胞の絶対数を比較した。しかし期待に反し、これらの実験ではコントロールマウスあるいはY001027を投与しない野生型マウスとの間に明確な差は認められず、Notchシグナルが生理的に造血幹細胞維持に関与することは証明できなかった。一方、胎生期の造血幹細胞発生にとってNotchシグナルが重要な役割を果たすという我々自身の知見を応用し、Notchリガンドを用いることによりヒトES細胞から造血幹細胞への誘導が可能かを検討した。ヒトES細胞はKhES-3を用いた。種々の培養法でKhES-3を分化誘導させ、造血幹(前駆)細胞のマーカー候補とされるCD34,CD133,KDRCD90,CD150,CD105,PCLP-1,PECAM1,and VE-Cadherin.などの表面マーカーを組み合わせて分取し、造血活性を評価した。しかしながら、これらのマーカーで得られる細胞はいずれも血管内皮細胞やマクロファージへの分化能を示したものの、著明な造血幹(前駆)細胞活性を示す細胞を同定することはできなかった。
成長関連タンパク43（GAP43）の神経発達障害への影響

成長円錐のリン酸化プロテオミクスにより同定された神経発達に重要なタンパクリン酸化部位のうち、統合失調症および自閉スペクトラム症(Autism Spectrum Disorder; ASD)のリスク遺伝子であるGAP-43遺伝子の機能解析を進めている。ヒトASD患者において同定され、in silico解析により遺伝子機能に強い影響を与えていると予測されたGAP43遺伝子のAsp23Gly変異のプラスミドベクターを作成した。そして、この変異をHela細胞にリポフェクション法を用いて導入し、抗GAP43抗体を用いて免疫組織学的に観察した。その結果、Asp23Gly導入細胞は野生型GAP43導入細胞に比べて、GAP43の核周囲の発現が少ないという所見を得た。研究代表者が総合病院に転勤のため臨床業務で多忙となり、予定通りに研究を遂行することが困難であった。共同研究している基礎研究室との連携をより密にして協力を得つつ本研究計画を進めていく。成長円錐のリン酸化プロテオミクスにより同定された神経発達に重要なタンパクリン酸化部位のうち、自閉スペクトラム症(Autism Spectrum Disorder; ASD)のリスク遺伝子であるGAP43遺伝子の機能解析を進めている。GAP-43機能に最も重要と予測されるリン酸化部位であるSer41部位の変異(Ser41Ala)のヘテロノックインマウスを作成、それらのマウスを交配させホモノックインマウスを作成し、その全脳ホモジネートを調整した。GAP43野生型のマウスについても全脳ホモジネートを調整し、抗GAP43リン酸化部位(pS41)抗体もしくは抗GAP43抗体を用いてイムノブロッティングによるタンパク定量を行った。その結果、GAP43自体の量に有意差はなかったが、pS41のリン酸化量はホモノックインマウスで消失していた。今後は同ノックインマウスの初代神経細胞培養を行い、免疫組織学的にGAP43_Ser41リン酸化タンパクの分布について確認する予定である。この変異をHela細胞にリポフェクション法を用いて導入し、抗GAP43抗体を用いて免疫組織学的に観察したところ野生型GAP43を導入した細胞と比較して、GAP43の細胞膜への分布が減少しているという予備的な結果を得た。Ser41部位の変異(Ser41Ala)のホモノックインマウスの確立や株化細胞におけるGAP43遺伝子のAsp23Gly変異の機能解析など概ね計画通りに実験を進行できた。GAP43のSer41AlaおよびAsp23Glyの機能解析を初代培養神経および遺伝子改変マウスを用いた機能解析を進めていく。前年度の研究の進行に遅れが生じたため、次年度の研究のために予算を残す必要があった。
哺乳類細胞の分裂期染色体凝縮、脱凝縮の制御機構

バキュロウイルス系で発現、精製したmyt1はcyclinE/CDK2を燐酸化せず、cyclinB/cdc2を特異的に燐酸化し、wee1はcdc2およびCDK2のいずれをも燐酸化した。一方、Sf-9細胞中ではmyt1はcyclinB/cdc2の14Thrおよび15Tyrの両残基を燐酸化したがcyclinE/CDK2を基質としなかった。wee1はcdc2キナーゼ、CDK2いずれも燐酸化した。この時、cdc2キナーゼに対してはmyt1による燐酸化がwee1キナーゼによる燐酸化より効率が高かった。またp35/CDK5はwee1により燐酸化されたがmyt1による燐酸化は観察されなかった。以上よりmyt1、wee1はCDKsの基質特異性に違いがあることが確認された。それら酵素の細胞内局在はHeLa細胞中でGFPとの融合蛋白質として発現したwee1は核に局在するのに対して、myt1は細胞質に存在し、myt1の配列中に含まれる膜局在シグナルと思われる領域を欠損させるとこの局在は解消され、細胞内に均一に存在するようになった。APCに関係してはGST-サイクリンB/cdc2複合体、ビオチン化ユビキチンを基質として、マウスユビキチン活性化酵素(E1)とHeLa細胞の抽出液を酵素源としたin vitroサイクリンBユビキチン化の系を用いてサイクリンBのユビキチン化に関与するE2、hE2Cを単離した。またこのhE2Cは分裂酵母のCut2もdestruction box依存的にユビキチン化した。さらにこのhE2Cを餌に酵母2ハイブリッド系により新規遺伝子を単離した。この遺伝子はユビキチンリガーゼの活性を有していた。このE3様タンパク質がサイクリンB特異的であり、APCの成分であるかどうか興味深いところである。またこのユビキチン化の研究段階で癌抑制遺伝子産物p53をユビキチン化するリガーゼとして癌遺伝子MDM2を同定した。
秋吉石灰岩層群中の生物礁フレ-ムワ-クの古生態学的復元

本年度は、前年度に行った野外調査デ-タと採集試料を処理して作製した石板や薄片の解析に重点を置いた。また、2度の補足的な野外調査を行った。その結果として、下記の新知見を得た。1)秋吉石灰岩層群の起源となる生物礁複合体(秋吉生物礁複合体)フレ-ムワ-クは、四放サンゴ類、石灰藻類、コケ虫類、ケ-テテス類を生体とする化石群によって構築される。2)このフレ-ムワ-クは以下の3つの大きな特徴を持つ。i).構成化石群のdiversityが極めて高い。iii).化石群が組合わさることによって強固なwave resistance structuresを構築する。これらの特徴は、近年の付加テクトニクスの立場とは別の見地から、秋吉生物臭複合体がoceanic reef(high energy reef)起源であることを示している。3).reef frontの斜面上に成長する平盤状の群体四放サンゴ(Ivanovia)の付着面とgeopetal構造との関係からreef frontが実際に3040度の傾斜角を持つ斜面であることを実証した。4).デボン紀末の造礁生物大絶滅後の生物礁不毛の時代と言われる石炭紀にあって、秋吉生物礁複合体がhigh energy reefとして存在しえた事は、石炭紀の造礁化石群が強固なフレ-ムワ-クを構築する能力を、少なくとも中期石炭紀には回復していたことを示している。本年度は、野外地質調査と石灰岩・化石試料の採集および採集試料の処理に研究の重点を置いた。山口県美祢郡秋芳町秋吉台のセメント鉱山(住友セメント鉱山KK南台採石場)内に分布する、前期中期石炭紀の生物礁フレ-ムワ-ク石灰岩を対象に延べ約1ケ月の野外調査を行ない多くの新知見(フレ-ムワ-クを構築する化石群の産状やフレ-ムワ-クの時空的分布など)を得た。また、極めて重要な大・小の石灰岩・化石試料を大量に採集した。これらの採集試料は石材工場や研究室で処理し、大型研磨石板や薄片に加工したが、現在ようやく処理を終えた段階であり、作製した試料の詳しい検討は平成3年度に行う予定である。現時点で得られている新知見として下記の諸点が挙げられる。1).中部石炭紀の生物礁フレ-ムワ-クは構築化石群の種類と組み合わせ、その成長形態から大きく5つに分帯できる。2).フレ-ムワ-クの外洋側は四放サンゴ類を主体とする化石群から構成され、礁湖側は石灰藻類を中心とする化石群から構成される。3).ケ-テテス類はその成長形態を変えることで環境に適応し、フレ-ムワ-クの外洋側ー礁湖側のすべての部分に普遍的に分布する。4).フレ-ムワ-クを構築する化石の優占度は時代とともに変化する。すなはち、前期中期石炭紀にかけて、四放サンゴ類→石灰藻類→ケ-テテス類と優占化石が変化する。5).前期中期石炭紀にかけて、海退に伴う少なくとも3つの大きな堆積不連続がある。「秋吉生物礁複合体」はこの時期に部分的に陸化し、このことがその後の生物礁の形態や、化石群や石灰質堆積物の分布を大きく規定している。
演奏実践に投影された音楽美学思想〜20世紀の線的・対位法的演奏解釈が根ざすもの〜

これまでの思想史的研究の成果をふまえ、Energetik的音楽理論が演奏実践へ及ぼした影響と当時の「線的志向」との相関関係にアプローチした。Energetikerの一人クルトの造語である「線的対位法」という術語は、最終的に、ロマン派的和声を克服するものとして「新音楽」あるいは「新即物主義」から重宝され、「線」という語は1920年代のスローガンにまでなったが、注意しなければならないのは、シェンカーら調性音楽に依拠したEnergetikerたちも、この「新即物主義者」の作曲家や演奏家たち同様「線への志向」=対位法的思考重視という結論に至ったことである。実はこうした対立関係は、調性音楽を擁護しシェンカーと逆にそれを否定したシェーンベルクの各々の『和声論』での論争にもみられるが、彼らは結局同根であった。それは、シェーンベルクに傾倒したグールドの演奏美学に、シェンカーの演奏技法論と通ずる点が多いことからもわかる。まさにシェーンベルクの12音技法の目的が結局調性音楽の完全否定ではなくその継承にあったのと同様に、グールドの演奏における対位法的志向は、ゲーテの有機体美学に根ざしたシェンカーに通底する、(シュナーベル経由の)非常に19世紀的な自律的音楽作品観へのオマージュになっている。同様に、「ロマン的解釈」の指揮者として語られることが多くシェンカーに熱心に師事していたフルトヴェングラーの演奏は生演奏で最大限の効果を発揮するので、演奏会を否定し録音した多数のテイクからの継ぎ接ぎをいとわなかったグールドのそれとは、まったく相容れないように思えるが、やはり楽曲の、「構造」に分析的に肉薄するという姿勢は通底しており、それは結局対位法的思考の重視へと必然的に帰結した。シェンカーやクルトの的音楽理論は戦後、音楽記号論へ大きな影響を及ぼしたが、音楽記号学者がグールドの演奏分析を好んで行うのも、実はここに一因があると言いうる。初年度であ.る平成13年度は、音楽学における楽曲分析の一つの主な流派となっているシェンカーふう分析が由来するシェンカーの音楽思想と現代における対位法的要素を強調した演奏の代表者であるグレン・グールドとの思想的連関について検討し、その結果、グールドが直接シェンカー理論について言及することはなかったが、多くの思想的共通点があり、密接な関連がみられることが明らかとなった。シェンカーのUrlinieやZugといった線的概念は、有機体としての音楽作品に内在する、時として遠くに離ればなれになっている因果関係、即ち「楽譜の数ページにも及ぶ大きな連関」を聴取するこの「遠聴」を説明するためのものであったが、まさに大指揮者フルトヴェングラーがシェンカー理論の核と認めたのがこの概念であり、やはりフルトヴェングラー同様シェンカー理論に大きな形響を受けたシュナーベルを尊敬していたグールドの線的構造分析に基づく対位怯的要素が強調された演奏美学の淵源をシェンカーの音楽思想に措定することも強ち無理とはいえない。また、グールドにとって、対位法的音楽とは美的にだけでなく倫理的にも優れているものであったが、まさに、厳格な規則の下で管理されて音が配列された対位法的音楽は、純粋なるもの、絶対的なるものといった概念と結びっき、集中的な「構造的聴取」を要求する。

20世紀の初頭にシェンカーが敢えて『対位法』2巻を世に問うたのも、曲の本質を無視して大衆の好みに迎合しようとした演奏が氾濫している当時の音楽界を憂えたからであり、まさに、そうした面でも「コンサートは死んだ」としたグールド的姿勢とシェンカー的思想は「対位法」をキーワードに密接に関わり合っていることが看取できるのである。そして、グールドのレパートリーが独墺系に偏していた点も、シェンカー、フルトヴェングラー、シュナーベル、そしてひいてはアドルノの系譜に列していることを如実に物語っているのである。初年度は、対位法的演奏解釈に特色があるピアニスト、グレン・グールドの音楽演奏美学に関連して、その線的・対位法的演奏解釈の淵源を調査したが、2年目の年度にあたる平成14年度は、彼の「構造」志向をについて更に追究したアドルノがシェーンベルクの音楽を最後の1音まで作曲しつくされているとして褒め称えたのと同じ文脈で、グールドは「論理的な」音楽への賞賛を惜しまなかった。彼は、自らの演奏習慣の根拠が楽曲の「構造」にあるとし、構造をいかに明確に表現するか、則ち、いわば演奏表現を構造にいかに従属させるかといった点に重きをおいていた。こうした観念主義的傾向は本人も認めているようにシェンカーに傾倒していたピアニスト、シュナーベルに由来している。一方、「録音」に対してはグールドとは正反対の立場にある(つまり「録音」を拒否した)カリスマ的指揮者セジュ・チェリビダッケについて、グールドも賞賛したフルトヴェングラー的な影響が現代にどう伝わっているかを示す例として取り上げた。概して「遅いテンポ」に特色があるとされる彼の演奏は、実は、解釈ではなく存在論的に発生するものという信念にもとづいており、グールドにみられた音楽の即興的要素に対する侮蔑といった面と通底する面が看取できた。こうしたシェンカーの「遠聴」概念に通ずるアドルノ的「構造的聴取」志向は、(シェンカーの弟子であった)フルトヴェングラーから共に大きな影響を受けたグールドにもチェリビダッケにもみられるが、前者は「構造」を線的・対位法的側面を際だたせることによって浮かびあがらせたのに対して、後者は、フルトヴェングラーやアドルノに列する、すでに失われたものの「救済者」的志向の系譜にを最後まで連なったと言いうることが明らかになった。最終年度にあたる本年度は、これまでの思想史的研究の成果をふまえ、Energetik的音楽理論が演奏実践へ及ぼした影響と当時の「線的志向」との相関関係にアプローチした。Energetikerの一人クルトの造語である「線的対位法」という術語は、最終的に、ロマン派的和声を克服するものとして「新音楽」あるいは「新即物主義」から重宝され、「線」という語は1920年代のスローガンにまでなったが、注意しなければならないのは、シェンカーら調性音楽に依拠したEnergetikerたちも、この「新即物主義者」の作曲家や演奏家たち同様「線への志向」=対位法的思考重視という結論に至ったことである。実はこうした対立関係は、調性音楽を擁護しシェンカーと逆にそれを否定したシェーンベルクの各々の『和声論』での論争にもみられるが、彼らは結局同根であった。それは、シェーンベルクに傾倒したグールドの演奏美学に、シェンカーの演奏技法論と通ずる点が多いことからもわかる。まさにシェーンベルクの12音技法の目的が結局調性音楽の完全否定ではなくその継承にあったのと同様に、グールドの演奏における対位法的志向は、ゲーテの有機体美学に根ざしたシェンカーに通底する、(シュナーベル経由の)非常に19世紀的な自律的音楽作品観へのオマージュになっている。
ストリーム処理技術を応用したシステム自動修復技術に関する研究

画像、ウェブやセンサネットワークからのデータ(一般のビッグデータ)を処理する際には、同じ計算を個々のデータに適用するという処理が繰り返される。それらのデータをストリームと呼ばれるデータの流れで表現し、個々の計算は表を多重に引くことで処理する新規手法を考案した。表を多数用意しておくことで、異なるデータに対する異なる処理を超並列に実行できる(パイプライン処理と呼ばれる)。表はメモリで構成されるため、従来のプロセッサベースの計算に対して、メモリベースコンピューティングとも呼ばれる。特に、一定範囲で表に不具合が発生した場合に、周りの表を修正することで、自動修復する技術を中心に研究開発した。本研究では、メニコア・FPGA・GPU向けの処理高速化のためのストリーム化およびその設計支援、加えて、それによって得られる高速なシミュレーションを前提としたシミュレーションに基づく完全な検証や設計修復に関する研究開発を行った。今年度は、シミュレーションに用いるテストパタン生成手法と設計修正手法の研究を実施した。テストパタン生成手法によって得られたパタン集合は、高速化されたシミュレーション環境において、設計の正しさを完全に検証するために利用される。ここでの「完全」とは、設計をいくつかの部分回路に分割し、部分回路における任意の論理変化を設計誤りと定義するとき、そのような設計誤りの範囲において(それ以外の設計誤りは存在しないと仮定して)、設計の正しさが証明されるいうことである。そのような検証を可能とするテストパタン集合の生成手法は、設計全体が仕様を満たすような部分回路論理を同定できるパタン集合である。本研究では、このテストパタン生成手法を提案し、ISCASベンチマーク回路において、実際にテストパタン生成が可能であることを示した。設計修正手法についても、設計の一部をプログラム可能な部分回路で置換し、その論理を設計が正しくなるように求める手法に基づいている。このとき、部分回路の入力変数の不足によって、修復ができない場合があるため、効率的な追加変数探索手法を提案し、評価を行った。研究期間全体を通しては、津波シミュレーションおよびニューラルネットワークシミュレーションを例題としたストリーム化による処理の高速化、シミュレーションによって完全な検証を行うためのテストパタン生成手法、誤りを持つ設計の自動修復手法を得ることができた。現在、many-core, GPU, FPGAなどが多数利用可能な計算環境が広く利用できるようになってきているが、効率的に計算を行うためには、それぞれに合わせたプログラム開発が必要である。本研究では、処理全体をストリームに対する演算・操作という形で実装するストリーム化実装のための設計支援技術を開発し、ほぼ同一のプログラムでmany-core, GPU, FPGA上への実装を可能にし、システム一般を高速化する環境を構築する。また、これを利用した効率的なデバッグ支援技術の研究を行う。今年度は、応用として予定しているデバッグ支援技術の研究開発と実装を行った。これは、計画では平成25年度に実施する予定であったが、ターゲットとなるアプリケーションを明確にすることにより、計画しているストリーム処理化設計技術に必要な要件(ストリームの表現方法、ストリームの変換、など)を整理することができると考えたためである。このデバッグ支援技術としては、論理回路に対するアサーション抽出手法、および、論理回路のバグを検出するためのテストパターン数削減手法の研究を行った。アサーション抽出手法では、与えらえた大量のシミュレーションパターンの全てにおいて、論理回路内の信号間で常に成り立つ関係を抽出する。得られたアサーションを設計者がチェックすることにより、設計バグによって意図しない関係が成り立っているかどうかを判断することができる。この抽出は、高度に並列化することが可能であり、GPU上での初期実装・評価を完了し、汎用プロセッサによる実行に対する高速化を確認できた。テストパターン数削減手法については、回路中の任意の機能誤りを検出できる故障モデルを定義し、その検出に必要なテストパターン生成手法を研究している。初期評価により、いくつかの回路において、非常に少ないパターン数で故障の有無を判定できることが分かった。今年度は、当初計画では、平成25年度に予定していたデバッグ支援技術の研究開発を前倒しで行い、ストリーム化設計支援技術に必要となる要件の整理を行った。デバッグ支援技術自体については、手動でGPU上に初期実装を行い、有意義な高速化を達成できている。また、本来、今年度に実施する予定であったストリーム化設計においてストリームを表現する手法についても、既に、初期検討を行っており、ライブラリに登録された演算器(パイプライン化されたものを多数含む)の組合せによってストリーム化された設計を表現するという着想に至っている。このアイデアを具体化し、デバッグ支援技術やその他の処理のストリーム化で利用する手前の段階まで来ている。以上より、当初の計画とは研究の順序を変えているものの、進捗はおおむね順調であると考えている。次年度は、計画の最終年度であり、ストリーム化設計支援技術の確立と、その評価として、設計デバッグ支援技術への適用を行うことを予定している。

ストリーム化設計支援技術としては、前述のように、ストリーム処理(または、ストリーム化された設計)の表現方法の確立、あるストリーム表現から他のストリーム表現への自動変換、それらの自動変換の前後での等価性検証を研究開発する。また、これらの手法を適用して、デバッグ支援技術をGPUやFPGA上に実際に実装し、汎用プロセッサによる実行では適用が困難な大規模設計例題のデバッグ・解析を実現することを目指す。全てをストリームとして表現された設計記述は、many-core, GPU, FPGAのいずれでも効率よく高速に実行することができ、設計システムに対する高速なエミュレーション環境を利用できる環境に応じて柔軟に実現できる。設計の自動修復は、その高速エミュレーション結果を利用して設計の内部動作をアサーションの形で収集し、そのアサーションを解析して、検証すべき新たなエミュレーションのためのテストパターンを自動的に生成、それらを用いてさらにエミュレーションを実行することでアサーションをさらに収集するという処理を繰り返し、設計の検証・解析を進めていく。結果的に集められたアサーションを整理して設計者に示し、「設計者の意図」としてアサーションそれぞれの妥当性を確認する。妥当ではないとされたアサーションは、関係する設計部分を抽出し、修正(デバッグ)する。次年度使用額は、物品費と旅費として使用する。物品費については、今年度は研究で使用するFPGAボードの調達をしていないため、その調達費用の一部とする。また、旅費支出が予定より少なかったことに、予定していた学会発表が論文執筆が予定より遅れたこともあり実現しなかったためである。次年度には、未発表の今年度の成果を国内会議、国際会議において発表していく予定であり、その費用として使用する。
世代間関係の動態とその規定要因にかんする社会学的研究

本年度は研究最終年度として、一昨年度に実施した第1次の祖父母調査(祖父母から見た祖父母-孫関係の調査)データについて、多変量解析による分析をさらに行うとともに、地域レベルデータの整備を進めた。また、第1次祖父母調査の追跡調査を実施した。第1次祖父母調査は名古屋市在住の60歳以上の高齢者1200名を層化2段無作為抽出により選挙人名簿から抽出し2005年に自記式郵送調査によって約700名の回答を得たものである。これら高齢者の居住する20数カ所の地区について、2000年および2005年国勢調査データの小地域統計を入手しその整備を進めた。これら地区データを含めたデータセットについて、多変量解析の手法による分析を進めた。上記に並行して、加齢にともなう祖父母-孫関係の変化について明らかにするため、第1次祖父母調査の縦断的調査を2008年2月にかけて実施し、調査協力依頼に対する承諾を昨年度得た364名を対象に郵送自記式の調査を行い、90%以上の回収率を得た。データについてはクリーニングを終了次第、パネルデータとしての分析を進める予定である。本年度は第1次の祖父母調査(祖父母から見た祖父母-孫関係の調査)を実施した。第1次の孫調査については、関係機関との調整が不調に終わったため、次年度以降に実施する予定である。第1次祖父母調査として、名古屋在住の60歳以上の高齢者1200名を層化2段無作為抽出により選挙人名簿から抽出し、2005年10月から11月にかけて自記式郵送調査を行った。調査項目は、子・孫の有無、子・孫の居住距離および接触頻度、精神的健康を中心とした。約700名(回収率59%)の回答を得た。データはコンピュータ入力のうえ分析した。サンプルの男女比はほぼ1対1であり、有配偶者が77%を占める。年齢構成は64歳以下が28%、75歳以上が13%であった。同調査の分析結果として、以下のような知見が得られている。(1)抑うつを高める要因として社会経済的地位の低さ、身体的健康の高さが有意である。(2)抑うつの高さは社会参加の頻度と負の相関がある。(3)抑うつは子との接触頻度との間に弱い相関があるが、孫との接触頻度との間に相関は見られない。(4)生活満足度は子との接触頻度とは相関しないが、孫との接触頻度との間に正の相関がある。現在、上記の結果を多変量解析の手法を用いて確認するとともに、少なからぬ欠損値が見与れた抑うつ尺度について欠損値の処理を進めている。また、多変量解析から得られた知見を論文および学会報告として報告する準備を進めている。本年度は昨年度に実施した第1次の祖父母調査(祖父母から見た祖父母一孫関係の調査)データについて、多変量解析による分析を行うとともに、地域レベルデータの整備を進めた。孫側の調査は調査事情による困難のため実施せず、祖父母調査データの分析を通じて祖父母-孫関係の時系列的変化に焦点を絞ることとし、来年度実施予定の祖父母調査の追跡調査に向けて第1次調査協力者への協力依頼を兼ねた意向調査を実施した。第1次祖父母調査では名古屋市在住の60歳以上の高齢者1200名を層化2段無作為抽出により選挙人名簿から抽出し2005年に自記式郵送調査によって約700名の回答を得た。これら高齢者の居住する20数力所の地区について、2000年国勢調査データの小地域統計を入手しその整備を行った。具体的には各地区における社会統合度に関連が高いと判断される諸指標を算出し、地区レベルデータとして個票データにマージした(2005年国勢調査結果の公開後はデータの差し替えを行う)。上記に並行して、第1次祖父母調査の縦断的調査を前回調査から2年経過した平成19年度に実施する準備として、前回調査において既に追跡調査を実施する予定は伝えているが、この間の移動や調査協力意思の変更有無を知るための意向調査を2007年1月から2月にかけて実施した。約700名への調査協力依頼に対して7割以上の回答者から協力許可の回答を得ることができた。現在データの整備を進めているところである。
タングステン中の空孔型欠陥による水素捕獲とその水素による成長促進効果の研究

タングステンは核融合炉のプラズマ対向材料として研究が進められている。タングステンは水素が殆ど溶解せず、高融点で耐摩耗性に優れている。しかし、プラズマ等の照射で作られる空孔型欠陥にはかなりの量の水素(水素同位体)が捕獲される可能性がある。単原子空孔中の水素については先行研究があるので、本研究では二原子空孔中の水素の安定構造や結合エネルギーを第一原理計算に基づいて計算した。さらに、他の金属と違いタングステンの二原子空孔は単原子空孔よりもエネルギー計算によると不安定であることが予測される特異な金属であることも併せて研究対象とした。二原子空孔自身の安定性や二原子空孔に捕獲された水素原子の安定構造を詳細に計算した。また、水素の零点振動エネルギーを計算することで水素同位体による違いも調べた。計算は主に、第一原理の計算コードであるVASPを使った。また、計算機は九州大学の大型計算機や量研機構の計算機を用いた。タングステンの二原子空孔は<111>方向の配置が安定である。水素を捕獲してもその構造は変わらない。また、水素はO-siteと呼ばれる位置の近傍が安定であるが、タングステンでは二原子空孔の接合部にあるO-siteの方が水素を引き付ける力が強い。そのため接合部に優先的に水素が配置されることがわかった。これより、水素の最安定構造の法則性が見えてきた。また、二原子空孔自身はエネルギー計算によると単原子空孔よりも不安定である。しかし、水素を捕獲することで著しく安定化する。本研究で予測していた水素による空孔型欠陥の安定化の証拠が見えてきた。さらに、水素同位体によって安定化の程度が違い、重い水素同位体(重水素や三重水素)の方が通常の水素よりも安定化に大きく寄与する。これは燃料として水素同位体を使う核融合炉の材料研究にも関与する現象と考えられる。タングステン中の二原子空孔の安定構造、さらにそこに捕獲された水素および水素同位体の安定構造の詳細な計算が終わった。さらに、水素同位体の種類によって安定な構造が異なることも分かってきた。また、二原子空孔でも単原子空孔で見られたような特異な水素の安定構造が見つかった。通常のBCC金属中の空孔型欠陥ではO-siteと呼ばれる場所の近傍に水素が1つだけは位置される。しかし、タングステンの空孔では1つのO-siteを2個の水素が共有する配置をとることができる。このような配置がタングステンとモリブデンにだけ見られる特異な安定構造である。そのためO-siteの数以上に水素が空孔型欠陥内に捕獲される可能性がある。本研究では当初予期していなかったことがあった。それは、タングステン中の二原子空孔は不安定であることが計算では予測された。しかし、空孔型欠陥の構造を観測できる陽電子消滅寿命測定を行っている実験では、二原子空孔やそれよりも大きな多原子空孔も生成されるという結果が得られた。このことは、本研究で行ったエネルギー計算と実験結果が矛盾していることを示唆する重要なできごとである。そこで、その矛盾を解決するためにタングステン材料中に多くある不純物元素の影響や振動エントロピーによる効果含めた計算を始めた。その結果、空孔型欠陥を安定化させる要因としては、不純物も振動のエントロピーの影響も考えられて、実験結果を説明できることが分かってきた。当初の予測とは異なるものの新しい研究課題が得られたと考えている。本研究で行っている第一原理計算と陽電子消滅寿命測定を行っている実験の連携を考えている。当初の予想に反してタングステン中では単原子空孔が結合して二原子空孔が形成されることが実験的に示された。しかしながら、これは計算で想定していなかった試料中の不純物元素や振動のエントロピーによる影響を考慮すると説明ができることが分かってきた。そこで、水素以外の元素の影響も含めてタングステン中の空孔型欠陥やその安定性について研究を進めてゆく予定である。さらに、自由エネルギーを考慮することで温度の影響についても研究してゆく予定である。密度汎関数法に基づき第一原理計算を行うことで、タングステンの二原子空孔に捕獲された水素の安定構造について計算した。この計算では系全体のエネルギーや水素の零点振動エネルギーが計算できる。空孔内のOサイト近傍が水素の安定な位置である。二原子空孔内にはOサイトは全部で12個存在する。そのため、水素が複数個捕獲された場合はどのOサイトを占めるか組み合わせが多く考えられる。そのため十分慎重に検討する必要があった。この1年の計算により水素の最も安定な構造について結論づけることができたことが最も重要な成果であると思う。タングステンの二原子空孔は<111>方向に並ぶ。この<111>二原子空孔の接合部分にある6個のOサイトを優先して水素は占有してゆくことがわかった。次に、水素の存在による二原子空孔の生成促進効果に関して計算した。エネルギー計算をすると、タングステンの単空孔が結合して二原子空孔になるのは損である(結合エネルギーが負で-0.22eV)。従って、通常は二原子空孔は形成されないことが予測できる。しかしながら、単空孔中に水素が捕獲された空孔水素複合体同士の結合を考えると、結合エネルギーは正になり結合は起こると考えられる。

水素が1個でも存在すると結合エネルギーは正(0.02eV)になる。当初、予想していたように水素による二原子空孔の生成促進効果がある。また、空孔内に捕獲された水素の個数が多くなるほど、結合エネルギーも大きくなる。実際には空孔水素複合体のままでは拡散移動が起こり難い。そこで、水素を捕獲して持って止まっている空孔水素複合体に空の単空孔が接近して結合するような過程が考えられる。さらに、水素の存在は鉄など他の金属空孔同士の結合も促進する方に作用する。当初計画していたように1年目はタングステン二原子空孔中の水素の安定構造に関する計算が終了した。詳しい計算によって水素の存在は空孔同士の結合を促進する方向に作用することが明らかになった。ほぼ、予定したスケジュールの通りに研究が進んでいるように思う。タングステンは核融合炉のプラズマ対向材料として研究が進められている。タングステンは水素が殆ど溶解せず、高融点で耐摩耗性に優れている。しかし、プラズマ等の照射で作られる空孔型欠陥にはかなりの量の水素(水素同位体)が捕獲される可能性がある。単原子空孔中の水素については先行研究があるので、本研究では二原子空孔中の水素の安定構造や結合エネルギーを第一原理計算に基づいて計算した。さらに、他の金属と違いタングステンの二原子空孔は単原子空孔よりもエネルギー計算によると不安定であることが予測される特異な金属であることも併せて研究対象とした。二原子空孔自身の安定性や二原子空孔に捕獲された水素原子の安定構造を詳細に計算した。また、水素の零点振動エネルギーを計算することで水素同位体による違いも調べた。計算は主に、第一原理の計算コードであるVASPを使った。また、計算機は九州大学の大型計算機や量研機構の計算機を用いた。タングステンの二原子空孔は<111>方向の配置が安定である。水素を捕獲してもその構造は変わらない。また、水素はO-siteと呼ばれる位置の近傍が安定であるが、タングステンでは二原子空孔の接合部にあるO-siteの方が水素を引き付ける力が強い。そのため接合部に優先的に水素が配置されることがわかった。これより、水素の最安定構造の法則性が見えてきた。また、二原子空孔自身はエネルギー計算によると単原子空孔よりも不安定である。しかし、水素を捕獲することで著しく安定化する。本研究で予測していた水素による空孔型欠陥の安定化の証拠が見えてきた。さらに、水素同位体によって安定化の程度が違い、重い水素同位体(重水素や三重水素)の方が通常の水素よりも安定化に大きく寄与する。これは燃料として水素同位体を使う核融合炉の材料研究にも関与する現象と考えられる。タングステン中の二原子空孔の安定構造、さらにそこに捕獲された水素および水素同位体の安定構造の詳細な計算が終わった。さらに、水素同位体の種類によって安定な構造が異なることも分かってきた。また、二原子空孔でも単原子空孔で見られたような特異な水素の安定構造が見つかった。通常のBCC金属中の空孔型欠陥ではO-siteと呼ばれる場所の近傍に水素が1つだけは位置される。しかし、タングステンの空孔では1つのO-siteを2個の水素が共有する配置をとることができる。
ニホンザルの成長発達時における学習能の変容について

学習能の発達は他の諸行動の発達過程と同様に、おそらく臨界期に該当するものが存在し、漸進的にではなく、段階的な発達を遂げるのではあるまいか。もしそうならばそれはいつ頃発現するのか。こうした疑問を明らかにするために誕生直後,若令,成年に至るさまざまな年令段階におけるニホンザル(Macaca fuscata)を対象として同一条件下で逆転弁別課題(Rambaugh970)を用いて課題遂行の成績を比較した。被験体は1歳群5頭,2歳群6頭,3歳群5頭,5歳群5頭そして7歳以上の成体群5頭である。実験手続きは、被験体に視覚刺激による弁別課題を矯正法で一定の獲得基準まで学習させた後、その逆転課題を非矯正法で10試行のみ課し、その成績を測定することにした。逆転前の獲得基準は67%と80%の2段階とした。まず獲得基準67%で逆転課題を最低10問題行った。その後基準を80%にしてやはり最低10問の逆転課題を課した。各試行はすべてパーソナルコンピュータによって自動制御され、正反応の場合は食物によって強化された。結果は、獲得基準67%レベルでは1,2,3歳群よりも5歳群および成体群ですぐれた成績がみられた。すなわち比較的威長発達の順に従っている。しかし獲得基準80%レベルでは13歳群まで成績が上昇するが、その後5才と成体で下降傾向がみられた。この事実は、学習能の発達に不可欠の要素である可塑性能力の発達が、少なくとも3歳までにある頂点が存在することを示唆している。他方、自然死した0歳,1歳,2歳,3歳および成体のニホンザル58頭の大脳皮質各葉の表面積,中心溝,シルビウス溝,弓状溝,月状溝などの長さをそれぞれ3次元ディジタイザで計測し、その成長を詳細に検討した結果、0歳より2歳までの間に著しい大脳皮質の発達を遂げることがわかった。この形態学的事実は学習行動の発達に関する実験結果を支持するものとして興味深い。
長残光蛍光体ナノ粒子を用いた蛍光イムノクロマト技術の構築

イムノクロマト技術は特別な機器を使用せずに診断できる非常に簡便な方法である。「光」を用いた蛍光検出は,「色」よって判断する従来法よりも高感度検出が可能であるが,蛍光検出装置が必要であるため簡便性に欠ける。そこで本研究では,機能性セラミック材料である長残光蛍光体に着目し,暗室下に置くだけで検出できる「無励起光型蛍光イムノクロマト技術」の開発に取り組んだ。ボールミルによる粉砕条件を検討することによって,バルク材料の特異な光物性を保ったままナノ粒子化することに成功した。さらに表面修飾法についても種々検討を重ねた結果,葉酸あるいは抗人型骨肉腫抗体を含む長残光蛍光体ナノ粒子の効率的な合成経路を確立した。遊星ボールミルを用いた長残光蛍光体バルク材料のナノ粒子化条件について種々検討したところ,トルエン中0.1 mmのビーズを用いて2時間撹拌したものが,バルク体の長残光特性を保持したまま100 nm程度の粒子を与えることがわかった。ナノ粒子の耐水性を高めるため,粒子表面に長鎖アルキル基を導入し,さらに両親媒性ポリマーPluronic F127を作用させることにより水に対する高い分散性を付与させることに成功した。このポリマーの両末端は水酸基であり,様々な置換基を結合させることができる。まず,両末端に葉酸FAを修飾し,葉酸受容体FRとの結合について検討した。得られたFA修飾長残光蛍光体をFRが過剰発現しているHeLa細胞と低発現株であるMCF-7に対してそれぞれ作用させ,細胞内への取り込みについて評価した。その結果,HeLa細胞内からのみ強い発光が観測され,FRへの結合を介したエンドサートーシス機構で取り込まれていることが明らかとなった。次いで,抗体を結合させ,抗体を介した認識能について検討した。抗ヒト型アルカリホスファターゼanti-hALP抗体を修飾した長残光蛍光体ナノ粒子を合成し,hALPの発現量が異なる2種類の骨肉腫株を用いた。その結果,hALPが高発現株の方が多く結合していることがわかり,抗体を用いることによって高い選択性を与えることがわかった。さらにナノ粒子からの発光は励起光源の非存在下においても確認され,蛍光灯由来の光を蓄光し,暗室にするだけで特定の細胞を認識できることに成功した。
ATL腫瘍細胞のウイルス抗原発現抑制機序の研究

ヒトT細胞白血病ウイルス(HTLV-I)は試験管内ではヒトT細胞をトランスフォームし生体内では成人T細胞白血病(ATL)をおこす。HTLV-IによるT細胞の腫瘍化にはHTLV-I taxが関与していると考えられている。しかし、HTLV-I感染細胞は末梢血内では一時的にウイルス抗原発現が抑制されている。このことは感染細胞が免疫監視機構から逃れて増殖する一因となっていると考えられる。本研究の目的は、このHTLV-I発現抑制機序を細胞学的、ウイルス学的に解析することである。生体内HTLV-I感染細胞としてATL患者の末梢血単核球分画を用い、HTLV-Iゲノム及び抗原発現を調べた。この結果、末梢血から分離直後のHTLV-I発現は非常に低く、これが培養後誘導される症例と誘導されない症例があった。PCR法を用いた解析では分離直後と誘導後でのHTLV-I DNAレベルは不変であり、mRNA発現の増加が認められた。ATL患者以外に、HAM/TSP患者、HTLV-I感染に伴うぶどう膜炎患者、及び無症候HTLV-I感染者について、末梢血リンパ球におけるHTLV-I発現を調べたが、発現レベルに個体差はあるものの、培養前の発現抑制には疾患特異性はなく、感染者共通の現象であった。細胞周期の解析では、培養前に比べ培養後にはG2/M期の割合が増加しており、抗原発現に伴って細胞周期の回転が亢進することが示唆された。更に患者血漿をこの系に加えると抗原発現が抑制され、非感染者血漿にも類似の抑制が認められたことから、血漿成分に抑制活性物質が含まれると考えられた。ヒトT細胞白血病ウイルスI型(HTLV-I)は試験管内でヒトリンパ球をトランスフォームさせる。このような細胞株には、安定したHTLV抗原発現がある。しかし、末梢血内ではHTLV-I感染細胞はほとんどウイルス抗原を発現していない。本研究では、このHTLV-I発現抑制機序を調べることを目的とした。本年度は生体内HTLV-I感染細胞として成人T細胞白血病の末梢血単核球分画を用い、HTLV-Iゲノム及び抗原発現を調べた。また、この誘導前後でのHTLV-IDNAレベルは不変であり、発現調節は転写レベルであることが示唆された。現在細胞株を用いた発現誘導システムを試作中である。HTLV-I感染細胞は末梢血内ではほとんどウイルス抗原を発現していない。生体内HTLV-I感染細胞として成人T細胞白血球(ATL)の末梢血単核球分画を用い、HTLV-Iゲノム及び抗原発現を調べた。ATL患者以外に、HAM/TSP患者、HTLV-I感染に伴うぶどう膜炎患者、及び無症候HTLV-I感染について、末梢血リンパ球におけるHTLV-I発現を調べたが、発現レベルに個体差はあるものの、培養前の発現抑制には疾患特異性はなく、感染者共通の現象であった。