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超短時間エポキシ処理による自己心膜の石灰化抑止効果

前年度に確立させた超短時間エポキシ処理法に従い、今年度は実際に動物実験を行った。ビーグル犬の肺動脈にパッチとして以下の材料を移植した。I群:エポキシ処理した自己心膜、II群:無処理の自己心膜、III群:グルタールアルデヒド処理ウマ心膜(Xenomedica)。8週後に移植片を採取、その乾燥重量あたりのカルシウム沈着量を原子吸光法で測定し、石灰化の程度を評価した。さらに組織学的にも検討を加えた。カルシウム沈着量は1群:0.245±0.140μg/mgII群:0.706±0,249III群:0.869±0.111 I群はII群、III群に比し有意に(p<0.01、p<0.0001)カルシウム沈着量が低値であった。摘出肉眼標本では、全群共内皮により被覆されていた。組織所見に於いて、心膜外側面でのリンパ球、マクロファージ等の細胞浸潤はI群、II群で少なかったがIII群では著明に認めた。心膜内への新生血管の侵入や線維芽細胞の侵入は、I群、III群で認められなかったのに対し、II群では全例に高度に認められた。本研究ではエポキシcompoundがカルボキシル基と反応するという性質だけに注目し、拒絶されない自己心膜を用いた。そこで自己心膜であるが故に必要となった短時間での処理法を考案した。この処理法により超短時間エポキシ処理された自己心膜は、カルシウム沈着が少なく、さらに組織適合性のよい生体材料であるという結論を得た。今後の心臓血管系の手術の際に利用できる補填材料として有用なものとなりうると考えられる。今年度に行った研究成果として、まずエポキシ処理の条件を設定したことを挙げる。短時間でより効率良く反応させるために、従来のエポキシ処理に改良を加えた点は、触媒を用いたこと、エポキシ化合物の濃度を高めたこと、温度を高めたこと、の3点である。長瀬化成の協力を得て従来法と本研究の方法とで滴定試験による反応率を比較した。結果は従来法が120分まで一貫して反応率0.0%であったのに対し、本法では30分、60分、120分共4.0%の反応率であった。従って高い反応率ではないものの従来法では不可能な短時間処理が本法ではより有益となると考え、エポキシ処理の条件を、40°Cで、エポキシ化合物50ml+ピリジン0.5mlの中に心膜を浸す、とした。完全な反応が得られなくとも、移植片は自己心膜であるので拒絶反応がないことも本法のより良い点である。この反応率で、どの程度カルシウム沈着が抑制されるか、実際に犬に移植する実験はこれから開始する予定である。もうひとつの研究成果は対照群の確立である。無処理の自己心膜、グルタールアルデヒド処理ウマ心膜をビ-グル犬の肺動脈に移植し、2カ月生存させる実験は順調に経過中。順次2カ月間の変化を観察、測定すべく移植した心膜を摘出する実験を行っているところである。カルシウム沈着量はI群:0.245±0.140μg/mg、II群:0.706±0.249IIII

群:0.869±0.111 I群はII群、III群に比し有意に(p<0.01、p<0.0001)カルシウム沈着量が低値であった。摘出肉眼標本では、全群共内皮により被覆されていた。組織所見に於いて、心膜外側面でのリンパ球、マクロファージ等の細胞浸潤はI群、II群で少なかったがIII群では著明に認めた。心膜内への新生血管の侵入や線維芽細胞の侵入は、I群、III群で認められなかったのに対し、II群では全例に高度に認められた。本研究ではエポキシcompoundがカルボキシル基と反応するという性質だけに注目し、拒絶されない自己心膜を用いた。そこで自己心膜であるが故に必要となった短時間での処理法を考案した。この処理法により超短時間エポキシ処理された自己心膜は、カルシウム沈着が少なく、さらに組織適合性のよい生体材料であるという結論を得た。今後の心臓血管系の手術の際に利用できる補填材料として有用なものとなりうると考えられる。
1930年代新聞小説の多角的研究─山本有三・岸田國士・獅子文六を中心に

本研究は、新聞小説を時代・文化の集約点と捉え直し、前史から後代にも目配せをしながら、1930年代の新聞小説(作家)の影響力の形成過程を、多角的な視座から明らかにすることを目的としている。2年目に当たる平成30年度は、研究計画に即して、主に下記の3つの点について研究実績を積んだ。(1)初年度に注目した、新聞(社)の特性と対読者戦略、挿絵の視覚的効果、読者受容、「非常時」の社会背景、イデオロギーの伝播作用等について、さらに考察を深め、具体的な検討を行った。その成果は3本の学術論文を中心にまとめあげ、広い公開を行った。(2)平成30年9月には、JSPS科研費・基盤研究(C)「1940年代の新聞における文芸欄の基礎的研究」(17K02450)、JSPS科研費・基盤研究(C)「新聞小説と挿絵の相関性解明を基盤とする大正昭和期の文化融合に関する総合的研究」(17K02451)との共催による研究会「昭和戦前期の新聞小説を考える」を開催した。そこでは、多様な角度から、既存の研究の現状や課題点等について議論を交わし、本研究テーマの意義と位置、今後の方向性についての確認も行った。(3)平成31年3月には、(2)と同様に、JSPS科研費・基盤研究(C)「1940年代の新聞における文芸欄の基礎的研究」(17K02450)、JSPS科研費・基盤研究(C)「新聞小説と挿絵の相関性解明を基盤とする大正昭和期の文化融合に関する総合的研究」(17K02451)との共催の研究会「新聞小説の時代・領域横断」を開催した。より時代・領域の幅を広げ、既存の研究ならびに各自の成果を報告し、さらに共同討議を行った。あわせて、最終年度の研究計画・調査計画についても検討・調整を行った。それぞれのメンバーの異なる専門領域から複眼的なアプローチを行うという、本研究の特色を最大限に生かし、多角的な観点から分析を進展させている。初年度に構築した基底部をさらに発展させる形で、研究計画は円滑に進んでいる。その成果については、2年目である平成30年度は、特に3本の学術論文と、2度の共催合同研究会を中心に広く公開した。論文については、「昭和一〇年代の新聞小説論ー通俗性・芸術性・社会性」、「昭和10年代における〈文化〉論:Iー大政翼賛会文化部長・岸田國士の発言を中心に」、「挿絵画家としての中村研一ー「海燕」「女の一生」「春の行列」「花と兵隊」」を発表。また、「昭和戦前期の新聞小説を考える」、「新聞小説の時代・領域横断」と題した共催の研究会を2度開催した。さらに、山本有三の郷里である栃木市の栃木図書館で研究成果を報告、公開するなど、研究はおおむね順調に進展している。これまでの研究によって獲得した成果を総合する形で、今後は、山本有三・岸田國士・獅子文六の具体的な考察をまとめあげていく段階に入る。平成31年3月の研究会において、すでに現段階での各自の研究状況は報告済みであり、その複眼性を基盤としながら、研究成果を総合していく。それぞれの研究メンバーの専門領域が異なる特性を生かす形で、これまで以上に緊密な情報交換を行いながら3作家の分析を行い、1930年代新聞小説を時代・文化の集約点と捉え直すという、本研究の大きなテーマに統合していく。「1930年代新聞小説の多角的研究ー山本有三・岸田國士・獅子文六を中心に」と題した本研究では、新聞小説を時代・文化の集約点と捉え直し、前史から後代にも目配せをしながら、1930年代の新聞小説(作家)の影響力の形成過程を、多角的な視座から明らかにすることを目的としている。1年目に当たる平成29年度は、研究計画に即して、主に下記の3つの点について研究実績を積んだ。(1)本研究の基底部を成す、新聞(社)の特性と対読者戦略、挿絵の視覚的効果、読者受容、演劇との関係、「非常時」の社会背景、イデオロギーの伝播作用等について注目し、具体的な検討を行った。その成果は4本の学術論文を中心にまとめあげ、広い公開を行った。(2)平成29年9月には、JSPS科研費・基盤研究(C)「1940年代の新聞における文芸欄の基礎的研究」(17K02450)、JSPS科研費・基盤研究(C)「昭和10年代における文学の〈世界化〉をめぐる総合的研究」(15K02243)との共催による研究会「方法論の再検討ー1930-40年代の日本文学研究」を開催した。そこでは、それぞれのこれまでの研究成果を報告し、研究方法の課題点等について議論を交わし、本研究テーマの意義と位置、今後の方向性についての確認も行った。(3)平成29年12月に開催した研究会では、本研究の中心となる山本有三・岸田國士・獅子文六の3作家について、研究メンバーが既存の研究ならびに各自の成果を報告し、さらに共同討議を行った。あわせて、次年度の研究計画・調査計画についても検討・調整を行った。本研究では、それぞれのメンバーの専門領域を生かす形で、多角的な観点から研究を進めている。その計画が円滑に進んでおり、初年度として、研究の基底部が着実に形成された。その成果については、初年度である平成29年度は、特に4本の学術論文を中心にまとめあげた。

具体的には、以下のとおりである。「浅井忠と〈舞台美術〉ー明治三十年代京阪の演劇改良・翻案劇・新聞小説」「石井鶴三と舞台装置・序説ー石井鶴三宛木村荘八書簡を補助線に」では、広い時代・地域を視野に入れつつ、明治期からの新聞小説の命脈・京阪神への注目・演劇との関係・挿絵等の考察を展開した。「「通読」される新聞連載小説ー山本有三「生きとし生けるもの」「波」「風」の評価軸の形成」では、新聞社の特性と対読者戦略・読者受容等の考察を展開した。「吉川英治『宮本武蔵』〈後半〉における〝道〟ーパラテクストと石井鶴三挿絵」では、文化統制・「非常時」の社会背景・挿絵・イデオロギーの伝播作用等の考察を展開した。以上のように、幅広い対象に関する考察を複眼的な視座から進めていく、本研究体制の特性を生かす形で、研究はおおむね順調に進展している。本研究は、新聞小説を時代・文化の集約点と捉え直し、前史から後代にも目配せをしながら、1930年代の新聞小説(作家)の影響力の形成過程を、多角的な視座から明らかにすることを目的としている。2年目に当たる平成30年度は、研究計画に即して、主に下記の3つの点について研究実績を積んだ。(1)初年度に注目した、新聞(社)の特性と対読者戦略、挿絵の視覚的効果、読者受容、「非常時」の社会背景、イデオロギーの伝播作用等について、さらに考察を深め、具体的な検討を行った。その成果は3本の学術論文を中心にまとめあげ、広い公開を行った。(2)平成30年9月には、JSPS科研費・基盤研究(C)「1940年代の新聞における文芸欄の基礎的研究」(17K02450)、JSPS科研費・基盤研究(C)「新聞小説と挿絵の相関性解明を基盤とする大正昭和期の文化融合に関する総合的研究」(17K02451)との共催による研究会「昭和戦前期の新聞小説を考える」を開催した。そこでは、多様な角度から、既存の研究の現状や課題点等について議論を交わし、本研究テーマの意義と位置、今後の方向性についての確認も行った。(3)平成31年3月には、(2)と同様に、JSPS科研費・基盤研究(C)「1940年代の新聞における文芸欄の基礎的研究」(17K02450)、JSPS科研費・基盤研究(C)「新聞小説と挿絵の相関性解明を基盤とする大正昭和期の文化融合に関する総合的研究」(17K02451)との共催の研究会「新聞小説の時代・領域横断」を開催した。より時代・領域の幅を広げ、既存の研究ならびに各自の成果を報告し、さらに共同討議を行った。あわせて、最終年度の研究計画・調査計画についても検討・調整を行った。それぞれのメンバーの異なる専門領域から複眼的なアプローチを行うという、本研究の特色を最大限に生かし、多角的な観点から分析を進展させている。初年度に構築した基底部をさらに発展させる形で、研究計画は円滑に進んでいる。その成果については、2年目である平成30年度は、特に3本の学術論文と、2度の共催合同研究会を中心に広く公開した。論文については、「昭和一〇年代の新聞小説論ー通俗性・芸術性・社会性」、「昭和10年代における〈文化〉論:Iー大政翼賛会文化部長・岸田國士の発言を中心に」、「挿絵画家としての中村研一ー「海燕」「女の一生」「春の行列」「花と兵隊」」を発表。また、「昭和戦前期の新聞小説を考える」、「新聞小説の時代・領域横断」と題した共催の研究会を2度開催した。さらに、山本有三の郷里である栃木市の栃木図書館で研究成果を報告、公開するなど、研究はおおむね順調に進展している。1年目の研究成果によって形成された基底部を土台としながら、今後は、山本有三・岸田國士・獅子文六のより具体的な考察に進展させていく。
成人後に診断を受けた軽度発達障害者の現状に関する研究

発達障害成人当事者の研究のこれまでは、主に著書を著している者や幼少期から支援を受けていた者を研究対象としていたが、これに当てはまらない成人後に診断を受けた発達障害当事者の現状に関する聞き取り調査を9名に行った。特にアスペルガー症候群の場合、幼少期の対人関係について幼少期から多くの困難さを抱えており、早期発見に至る可能性のあったエピソードが多く語られた。また同時にいじめられ体験も高い割合で認められた。二次障害と思われるエピソードについて2つのピークが存在していることが示唆された。1点目ピークは思春期前後における時期であり、不眠やうつ状態などが見られた。2点目のピークとして就労後に、自己の能力を超えるような仕事と直面した時であった。特に就労に関する二次障害の場合、現在の困りごとに関して発達障害の問題より経済的問題が優先事項となり、現実的問題に直面することが多く認められ、二次障害対策の重要性が示唆された。自己の感情認知の問題では、困難を示す結果が得られており、他者の心情理解と同時に、今後の支援のありかたとして自己感情認知の問題の重要性が示唆された。また彼らを支えるものとして重要であるのは認められ体験であり、これは他者から頼りにされたりほめられたりなどの経験によってもたらされるもの以外にも、宗教や思想などによってもたらされたものもあった。また自身の感情を認知することが困難だと語るものも多く、新たな知見としてこの点は重要であると考えられた。発達障害成人当事者の研究のこれまでは、主に著書を著している者や幼少期から支援を受けていた者を研究対象としていたが、これに当てはまらない成人後に診断を受けた発達障害当事者の現状に関する聞き取り調査を4名に行った。アスペルガー症候群の場合の共通点として、小学校入学前からの対人関係における困難さを意識していたということが挙げられた。既に幼稚園などでの集団行動に困難さを持ち、他者と自己の違和を抱いていたことがあげられた。このような対人関係において他者をタイプごとに分類・分析することで、自分の振る舞いの調整を行なっていたという報告があった。また同じくアスペルガー症候群共通の悩みとして挙げられたのは自己の感情認識に関する問題であった。自身が感じているはずの感情に対し、リアルタイムでラベリングすることが困難であるというものであった。これまでの研究では心の理論を中心に他者の感情認知の問題が多く報告されていたが、他者との関係性の中で自己の感情認知はコミュニケーション活動上、大きな問題を生じさせることが予想され、今後の研究における課題として重要となることが示唆された。一方、学習障害を持つ当事者では、学童期に漢字が苦手だった困り感が成人後には、顔の識別問題となって現れ、コミュニケーションに大きな問題を示すものではない学習障害の生涯発達支援において新たな課題を示唆するものであった。
連結型dpcb配位子およびその遷移金属錯体の合成と性質の研究

まず平成16年度の本課題研究で得られた1,2-ジチエニル-3,4-ジホスフィニデンシクロブテン(DPCB-Tと略す)を連結した形の高分子量化合物の合成について検討した。即ち、スペーサー部分として、フルオレンやベンゼンのようなπ共役系を用いた高分子量型DPCB誘導体を合成し、その性質について検討した。さらに、これら高分子量型DPCB誘導体を配位子とする遷移金属錯体を合成し、その性質について検討した。次に、dpcb-Tユニットを順次連結していくことについて検討した。即ち、まず同種のDPCB-Tユニットを連結していくことを検討し、次いで異種のDPCB-Tユニット(例えば電子的な影響を与える立体保護基を有する種々のDPCBユニット等)を配列を制御しながら連結していく方法の開発について検討した。その結果、DPCBの分解や異性化を伴わないヨウ素導入法を見い出すことができ、従来の問題点を克服した。さらにDPCB-Tの片方のチエニル基のみにヨウ素を導入する反応条件について検討し、これを基にして、幾つかの非対称置換DPCB-T誘導体を合成することもできた。この非対称置換DPCB-T誘導体は今後の研究展開の鍵となる重要なビルディングブロックである。そこでこの非対称置換DPCB-T誘導体を利用して、クロスカップリング反応等による配列制御型連結(ただの非対称連結とは異なり、さらなる連結可能部位を残しており、非対称連結による延長が可能なもの)について検討した。この連結手法は、2-チエニル誘導体および3-チエニル誘導体の双方に応用可能であることがわかった。また単量体型DPCB誘導体の効率的な合成法についても研究を続け、電子的な影響を与える立体保護基を有する種々のDPCB-Tユニットを合成した他、種々の新たなDPCB誘導体を合成した。本研究では、まずチエニル基を有する3,4-ジホスフィニデンシクロブテン(DPCB)誘導体を合成し、そのチエニル部分をリチオ化し、DPCB連結のための幾つかの官能基を導入した。この研究過程において、ホスファアレンを前駆体とする新規なDPCB合成法も見い出した。さらにエチニルホスフィンに触媒量のブチルリチウムを作用させるだけでジホスファフルベン類が得られることがわかり、簡便かつ有用な合成法として確立することができた。またフェロセニル基やフェナントレン骨格を有するDPCB誘導体およびその錯体を合成し、その性質について検討した。1,2-ジチエニル-DPCBを合成することができたことを受けて、これをチエニル基間でカップリングさせた誘導体およびその金属錯体も合成した。一方では、典型的なDPCB配位子を用いて、その錯体触媒の応用について検討した。例えばDPCB-π-アリルパラジウム錯体あるいはDPCB-ヨウ化銅存在下での臭化アリールと1級アミンもしくは2級アミンとの反応は、良好な収率で対応するカップリング体を与えた。さらに、α,ω-ビス[(ホスフィノエチニル)チエニル]アルカン型前駆体を合成し、DPCBポリマーに誘導、そのジクロロパラジウム錯体を合成し、触媒能を持つことを確認できた。続いて、共役π系型DPCBポリマーの合成を検討し、ジチエニルDPCBユニット間をベンゼン誘導体やフルオレン誘導体で連結したポリマーおよびその錯体を合成することができた。これとは別に、p-位に電子的な影響を与える官能基を導入した立体保護基を開発して、ホスファアルケン類・ホスファアルキン類・ジホスフェン類を合成し、p-位官能基がリンのπ多重結合に与える影響について評価し、さらに電子的な官能基を有する立体保護基あるいはターフェニル型立体保護基を持つDPCB誘導体およびその錯体を合成した。
室町期漢籍注釈における五山僧・公家学者間のネットワークと学問環境の実態解明

室町期の学者たちがいかに学問に取り組んでいたのか、また、その学者たち同士でどのような交流があったのかを、注釈書・抄物の読解、ならびに同時期の日記・記録類との照合から明らかにした。あわせて、室町期の研究成果が江戸期の学者たちに与えた影響についても検討した。さらには、『太平記』、『三国志演義』、アーサー王伝説の比較を通して、学問を発展させた場として神社や寺院が存在していたことを指摘し、学問が行われた“場"の実態について考察した。江戸時代に成立した、『太平記賢愚鈔』と『太平記鈔』内の三国志叙述を検討し、両テクストに室町期の五山僧間で展開されていた学問が継承されていることを確認した。これについては「『太平記鈔』における三国志の享受-『太平記賢愚鈔』との比較を始点として-」(三国志研究5 2010.9)にまとめたとおりである。室町期から江戸初期にかけて三国志が徐々に浸透していく過程に、室町期の学問が多大なる影響を与えていることに関しては、先の論文の他、「結びつけられる三国志と太平記-近世初期の学問・思想の一齣として-」(三国志学会第5回大会2010.9)、「中近世日本における三国志享受-『太平記』との関わりから-」(International Conference on"The Romance of the Three Kingdoms" : Its Historical Transmission and Enjoyment in East Asian Context 2010.11)でも紹介した。さらに『太平記』と『三国志演義』の比較を行い、物語を作成する上で、学僧たちがいかに影響を与えているのかについて、考察した。その成果は「『三国志演義』と『太平記』における怨霊と聖地-関羽・新田義興の比較、付・アーサー王伝説との類似性-」(『中世の軍記と歴史叙述』竹林舎2011.4刊行予定)にまとめたが、この考察にあたっては、イギリスのグラストンベリ修道院における修道士たちの活動についても若干の言及を試みた。また継続的な課題となるが、月舟寿桂が手がけた『史記鈔』を起点として、彼の人脈、交流関係の様を整理している。同書内には、散逸テクスト名も散見されることから、室町期の漢籍流入の様、そしてそれを利用し発展させていく五山僧の学問の実態が明らかになるものと考える。その成果は来年度中に論文化するつもりである。室町期から江戸期にかけての寺社の学問活動を垣間見るべく、『三国志演義』と『太平記』、さらには、イギリスのグラストンベリ修道院のアーサー王伝説について、比較検討を行った。その成果を、「『ぎ三国志演義』と『太平記』における怨霊と聖地-関羽・新田義興の比較、付・アーサー王伝説との類似性-」(『中世の軍記と歴史叙述』竹林舎2011・4)として発表した。本年の主たる課題としては(昨年度からすでに着手してきたものではあるが)、室町期の学者たちの日記やその他のテクスト類に見える、医学関連記事・情報を収集整理を行ってきた。その成果の第一弾として、桃源瑞仙の『史記抄」、月舟寿桂とその弟子たちが手がけた国立歴史民俗博物館蔵南宋黄善夫刊本『史記』(南化本)を取り上げ、両テクスト内の「倉公扁鵲伝」に施された注解について比較検討を行い、両者の志向性の違い、さらにはその違いを受けて、月舟の医学的領域への関与の深さを指摘した。詳しくは「『史記抄』「扁鵲倉公伝」にみる桃源瑞仙の志向性-室町期の学者たちと医学・医書-」古典遺産61 2012・3刊行予定)に論じた通りである。さらに、上記の論文の続稿を用意するべく、月舟個人に焦点を絞り、当該時期における彼の医学への取り組み方の特異性について、月舟の著述を同時代の学者たちの日記と比較することで明らかにしてきた。その結果については、今現在、投稿に向けて最終調整段階にあるところである。地震により、予定していた調査、資料閲覧ができなかった鄙分もあり、当初の計画通り順調に課題を進められたとはいえず、保留となってしまった部分もある。それらについては、科研費は終了するが、来年度以降引き続きの課題として研究を進め、論文化していくつもりである。
ウイルスのプロテアーゼの基質認識機構

多くのRNAウイルスでは宿主細胞への感染後、ポリタンパク質と呼ばれる巨大なタンパク質が合成され、そこから必要な酵素群が切り出されてくる。この切り出しにかかわる特殊なプロテアーゼもポリタンパク質に含まれていることが多い。SARSコロナウイルス(SARS-CoV)では3CLプロテアーゼがこれに関わる主要なプロテアーゼで、それ自身自己プロセシングにより切り出されてくる。SARS-CoVではポリタンパク質は486 kDaあるいは790 kDaと巨大であるため、この過程を明らかにするためのモデルペプチドとして、その一部である3CLプロテアーゼ領域の前後10アミノ酸残基を含む領域を大腸菌の無細胞タンパク質合成系で発現させたところ、N末端側C末端側両プロセシング部位において自己切断が起こり、成熟型の酵素が生成することを確認した。次に、このモデルペプチドのプロテアーゼ部分のN末端側10アミノ酸残基とC末端側10アミノ酸残基を残し、中央部分を別のタンパク質配列と置き換え、基質としてのポリタンパク質モデルとした。そして、その各種変異体基質に対する切断活性を調べ、N末端側プロセシング部位とC末端側プロセシング部位の認識に差異があることを見いだした。C末端側プロセシング部位では切断箇所の3アミノ酸残基下流のフェニルアラニン残基(Phe)認識されているのに対し、N末端側ではP3'部位は認識されていなかったのである。この認識の差異は切断箇所のN末端側2残基上流のアミノ酸残基(P2部位)に依存し、C末端側プロセシング部位におけるP2部位のPheをN末端側と同じロイシン(Leu)に変換するとP3'部位のPheは認識されなくなった。すなわち、C末端側プロセシング部位ではP2(Phe)とP3'(Phe)が認識されているのに対し、N末端側プロセシング部位ではP2(Leu)のみが認識されているのである。SARSコロナウイルスのポリタンパク質プロセシングに関わる酵素3CLプロテアーゼの自己プロセシング(活性化)において、N末端側とC末端側で基質認識が異なることを見いだした。プロテアーゼ切断生成物は、一般的に、そのプロテアーゼに対する阻害物質として働く可能性があるため、自己切断において生成する成熟体のC末端領域には阻害活性が存在する可能性がある。したがって、C末端側プロセシング部位における特殊な認識機構は、成熟体におけるC末端領域が自己に対する阻害を引き起こさないようにするためにウイルスが発達させた機構である可能性がある。この仮説を補強するために、両プロセシング部位における認識メカニズムの差異をX線結晶構造解析を行うとともに、成熟体のC末端領域の4アミノ酸残基からなるペプチドの阻害活性も検討しており、十分な結果は得られていると考えている。SARSウイルス近縁のMERS-CoV(Middle Eastern Respiratory Syndrome Corona Virus)、手足口病ウイルス(Coxackievirus)等ピコルナウイルス、ノロウイルス、などピコルナウイルス様スーパークラスターに属するウイルスの3Cプロテアーゼまたは3CL(3C様)プロテアーゼ等、数種類のウイルスの3Cまたは3CLプロテアーゼについて、大腸菌由来の無細胞タンパク質合成系での発現を行い、自己プロセシング部位由来の基質を用いた酵素学的研究を行う。これには申請者の開発した方法を用い、簡便に酵素学的パラメーターを得ることができる(Muramatsu et al., FEBS J. 280,2002-2013 (2013))。具体的には、ポリタンパク質中でのウイルス領域とその前後のプロ配列10アミノ酸残基を含む形で発現するプラスミドを作成する。プロテアーゼのコア領域をサイズの異なる別のタンパク質(たとえばGFP)に置き換え、これを基質とする(オートプロセシングによる切断の特異性をトランス反応により調べる)。プロテアーゼ(3CL)および基質を大腸菌無細胞タンパク質合成系により別個に発現し、それらを混合し、インキュベートすることにより基質の分解をSDS-PAGEによりモニターする。この際、酵素(3CL)の希釈系列を作成し、一定時間に50%基質を分解する希釈率でkcat/KMを見積もる。この際、ある一つの基質について別に測定したデータ(ラインウィーバーバークプロット)を基準とする。それぞれの酵素について、基質分子の、P4,P3,P2,P1,P1', P2', P'3, P4'位のアミノ酸置換を行い、特異性を検討する。この際、各部位の変異導入よる切断されやすさを検討するとともに、各部位間での協同性も検討する。

C末端側プロセシング部位では切断箇所の3アミノ酸残基下流のフェニルアラニン残基(Phe)認識されているのに対し、N末端側ではP3'部位は認識されていなかったのである。この認識の差異は切断箇所のN末端側2残基上流のアミノ酸残基(P2部位)に依存し、C末端側プロセシング部位におけるP2部位のPheをN末端側と同じロイシン(Leu)に変換するとP3'部位のPheは認識されなくなった。すなわち、C末端側プロセシング部位ではP2(Phe)とP3'(Phe)が認識されているのに対し、N末端側プロセシング部位ではP2(Leu)のみが認識されているのである。SARSコロナウイルスのポリタンパク質プロセシングに関わる酵素3CLプロテアーゼの自己プロセシング(活性化)において、N末端側とC末端側で基質認識が異なることを見いだした。プロテアーゼ切断生成物は、一般的に、そのプロテアーゼに対する阻害物質として働く可能性があるため、自己切断において生成する成熟体のC末端領域には阻害活性が存在する可能性がある。したがって、C末端側プロセシング部位における特殊な認識機構は、成熟体におけるC末端領域が自己に対する阻害を引き起こさないようにするためにウイルスが発達させた機構である可能性がある。この仮説を補強するために、両プロセシング部位における認識メカニズムの差異をX線結晶構造解析を行うとともに、成熟体のC末端領域の4アミノ酸残基からなるペプチドの阻害活性も検討しており、十分な結果は得られていると考えている。SARSウイルス近縁のMERS-CoV(Middle Eastern Respiratory Syndrome Corona Virus)、手足口病ウイルス(Coxackievirus)等ピコルナウイルス、ノロウイルス、などピコルナウイルス様スーパークラスターに属するウイルスの3Cプロテアーゼまたは3CL(3C様)プロテアーゼ等、数種類のウイルスの3Cまたは3CLプロテアーゼについて、大腸菌由来の無細胞タンパク質合成系での発現を行い、自己プロセシング部位由来の基質を用いた酵素学的研究を行う。これには申請者の開発した方法を用い、簡便に酵素学的パラメーターを得ることができる(Muramatsu et al., FEBS J. 280,2002-2013 (2013))。具体的には、ポリタンパク質中でのウイルス領域とその前後のプロ配列10アミノ酸残基を含む形で発現するプラスミドを作成する。プロテアーゼのコア領域をサイズの異なる別のタンパク質(たとえばGFP)に置き換え、これを基質とする(オートプロセシングによる切断の特異性をトランス反応により調べる)。プロテアーゼ(3CL)および基質を大腸菌無細胞タンパク質合成系により別個に発現し、それらを混合し、インキュベートすることにより基質の分解をSDS-PAGEによりモニターする。この際、酵素(3CL)の希釈系列を作成し、一定時間に50%基質を分解する希釈率でkcat/KMを見積もる。
現存社会主義における「人民代表制」の理論と実態

社会主義における「人民代表制」は、その憲法上の規定にもかかわらず、形骸化してきたし、またいまもそうであることに大方の異論はないであろう。人民の権力たるべく社会主義の国家権力が、党や行政機関のアパラチキによって「纂奪」され、その両者の癒着によって「党=国家体制」が成立していたとよい。こうしたソ連をはじめとする社会主義の政治システムまたは政治支配の構造は、ペレストロイカの言葉ととも、当の諸国においても、反省的に批判的検討が始まっている。ソ連とは異なったプロセスを歩んでいるハンガリーやポーランドの政治的複数主義をめぐる動向、それに独自の自主管理社会主義モデルを追求してきたユーゴスラビアの社会的動揺は、ソビエト議会主義を提唱するにいたったソビエト憲法学にも大きなインパクトを与えずにはおかない。現状分析を以上のようにまとめるについては、とくにソ連についていいうるのだが、革命前の「立憲主義」の伝統の有無又は濃淡の分析が必要であった。新旧の支配的イデオローグの一部にそれは「定着」していたとしても、社会全体として人民が「我がもの」としてはいなかったし、人民の闘争もその「舞台」のうえで展開されてこなかった。その歴史的な負の遺産は大きい。今日の事態は、いずれの既存の社会主義モデルだが、その「生命力」を喪失するかの「危機」にあることを示している。そのなかでの「ブルジョア」的とされてきた諸概念・諸制度の再評価・再構築の一つの模索が進んでいるので、引きつづき事態の正確なフォロが必要であろう。しかし、このテーマに限っていえば2年間の補助金交付のおかげで基本的文献を入手でき、全体としてのまとめの作業に入りうる段階にまで至ることができたと考えている。社会主義における「人民代表制」は,その憲法上の規定にもかかわらず,形骸化している.党二国家体制ともいうべき党機関と行政機関との癒着による政治支配の構造は,当の社会主義諸国においても近年克服の対象として議論されはじめた.歴史的構造の分析を踏まえて,社会主義における「人民代表制」の横断的研究を進める格好の時期といえよう.この課題にとって,従来はブルジョア議会制がもっぱら批判・克服の対象とされ,継承の問題として議論されなかったのはなぜかの解明が不可欠である.今年は,帝政期の議会の資料を集め,ソビエト政権が克服の対象としたものの分析に着手したが,なお資料の読解・検討中である.社会主義諸国を多様化しているのであって,比較憲法的分析も重要である.今年は,ペレストロイカの進行過程で注目された「地方ソビエト」の「複数選挙」の実験をフォローしてまとめた(『ペレストロイカ』に所収).またユーゴスラビアでも「政治改革」「憲法改正」が日程にのぼっている.社会主義における「複数主義」は,「人民代表制」にとっても大きな意味をもつ.こうした過程については紹介的にまとめておいた.この両国において共通して議論されているのが「自主管理」の問題である.生活者としての勤労人民が,労働の場と消費の場の双方で真にその管理の主体として登場しうる,そのような社会構造を求める人類史は運動はまだほんの出発点にあることが改めて確認された.次年度は,引き続き比較研究を進めつつ,歴史研究に見るべき成果を出すことが要請されよう.社会主義における「人民代表制」は、その憲法上の規定にもかかわらず、形骸化してきたし、またいまもそうであることに大方の異論はないであろう。ソ連憲法が88年12月に改正され、ソビエトの在り方の大幅な改組が注目される。年2回程度、しかも1会期23日という立法機関としてはあまり弱体であったが、数百人規模の「常設的」議会といいうる最高ソビエトに再編し、新たに人民代議員大会を創設した。議会にソビエトの権威を高めるべく、ソビエト議長のポストも新設された。一般に「大統領」的議長ともいわれているものである。従来からの「古典的」な社会主義憲法理論にみる「人民代表制」論は、こうして大きな再編の時期にさしかかっているといってよい。

昨年は、社会主義における複数主義との関わりでこの「人民代表制」論の新たな動向を整理したが、今年は「議会主義」「法治国家」などの議論をフォローし、併せてブルジョア憲法学説とされてきたそれらの議論を発展的に継承するというよりは、その批判的克服こそを強調してきたソビエト憲法学が、今日直面している課題の意味とその大きさ・困難さを把握することに努めた。またユーゴスラビア、ハンガリー、ポーランドなどそれぞれに特徴をもつ東・中欧の社会主義諸国の憲法改正や立法動向も大きく動いた。いずれも「人民代表制」論の新たな枠組みの設定に重要な視点・視座を提供するものであった。いずれも、現に展開中のものであり、資料・文献の収集およびその検討・分析に追われ、全体をまとめあげるには至らなかった。
駐車支援に用いる広範囲監視のための複数アンテナを使用したレーダネットワークの検討

自動車周囲に存在する障害物を検出するべく障害物検出システムの構築を行ってきている.駐車支援などで使用される近距離用システムにおいて必要とされる広い監視エリア,高い位置推定精度を実現すべく,本研究では分散配置されたセンシングデバイスをネットワークでつないだ「レーダネットワーク」による実現を検討している.送信機のアレイ化による監視領域の広域化,アレイ化による指向性情報や反射マルチパスの利用による位置推定精度向上などに取り組んだ.自動車周囲に存在する障害物を検出するべく障害物検出システムの構築を行ってきている.駐車支援などで使用される近距離用システムにおいて必要とされる広い監視エリア,高い位置推定精度を実現すべく,本研究では分散配置されたセンシングデバイスをネットワークでつないだ「レーダネットワーク」による実現を検討している.送信機のアレイ化による監視領域の広域化,アレイ化による指向性情報や反射マルチパスの利用による位置推定精度向上などに取り組んだ.申請者は,自動車周囲・近距離に存在する障害物を検出するべく障害物検出システムの構築を行ってきている.遠距離に存在する対象物を検出するシステムは実用化に至っている一方で,近距離用は駐車補助など利便性が高いのにも関わらず未だ研究段階である.近距離用システムでは広い監視エリアが必要とされ,さらに高精度位置推定が必要とされる.このため,本研究では複数のセンシングデバイスを分散的に設置を行う「レーダネットワーク」による実現を検討している.広い監視エリアの達成と高い位置推定精度の達成を目標にかかげ,現在まで以下の点に取り組んできた.1. (送信アンテナのアレイ化の検討)前方監視用であれば車両前方にレーダを分散配置する(障害物を取り囲むように設置できない).この場合,車幅方向に推定誤差が大きく発生する.この誤差を低減させるために,送信機側においてアレイアンテナ化を行い,ビームを細く,かつ広範囲に指向性を制御することを検討した.送信機の指向性情報を位置推定時に利用するアルゴリズムを提案し,車幅方向の位置推定誤差の低減を達成した.2. (マルチパス環境下での位置推定アルゴリズムの検討)本研究では近距離に存在するターゲットの検出を念頭にしている.また,歩行者などの反射の弱いターゲットの場合,受信感度を上げて受信する必要がある.ターゲットが近距離かつ受信感度を上げた際に生じるマルチパス信号を有効に利用し,位置推定誤差を低減させる手法を検討した.3. (受信アンテナの配置位置の検討)車載用では限られた設置可能スペースで可能な限り高い精度での位置推定が望まれる.受信アンテナの配置がターゲットの位置推定特性に与える影響について導いた.申請者は,自動車周囲・近距離に存在する障害物を検出するべく障害物検出システムの構築を行ってきている.遠距離に存在する対象物を検出するシステムは実用化に至っている一方で,近距離用は駐車補助など利便性が高いのにも関わらず未だ研究段階である.近距離用システムでは広い監視エリアが必要とされ,さらに高精度位置推定が必要とされる.このため,本研究では分散配置されたセンシングデバイスをネットワークでつないだ「レーダネットワーク」による実現を検討している.広い監視エリアの達成と高い位置推定精度の達成を目標にかかげ,昨年度までの検討に加え本年度は以下の点に取り組んできた.1.(マルチパス環境下での位置推定アルゴリズムの追加検討と成果発表)歩行者などの反射の弱いターゲットの検出の場合,受信感度を上げて受信する必要がある.ターゲットが近距離かつ受信感度を上げた際に生じるマルチパス信号を有効に利用し,位置推定誤差を低減させる手法を検討してきた.提案手法を計算機上に実装をし,評価を行った結果を成果とし,評価を受けるために成果の発表を試みた.さらに,監視エリアを予め限定することでさらに有効に提案手法が働くことを導いた.2.(送信アンテナのアレイ化の検討)前方監視用であれば車両前方にレーダを分散配置する(障害物を取り囲むように設置できない).この場合,車幅方向に推定誤差が大きく発生する.この誤差を低減させるために,送信機側においてアレイアンテナ化を行うことを検討してきた.指向性は敢えて複数のローブを発生させ,その指向性情報を位置推定時に利用する.これまでの計算機上での評価に加え,DSPボードによる実装によって提案手法の有効性を確認した.申請者は,自動車周囲に存在する障害物を検出するべく障害物検出システムの構築を行ってきている.遠距離対象物用は実用化に至っている一方で,近距離用は駐車補助など利便性が高いのにも関わらず検討が不十分である.近距離用システムでは広い監視エリアが必要とされ,さらに高精度位置推定が必要とされる.このため,本研究では分散配置されたセンシングデバイスをネットワークでつないだ「レーダネットワーク」による実現を検討している.昨年度に続き,本年度は以下の点に取り組んできた.●特性把握と成果発表超音波センサとテキサス・インスツルメンツ社製DSPボード,平塚エンジニアリング社製拡張AD/DAボードを利用し実装した提案手法を評価した.検討をしてきた提案手法の中でも「指向性を持たせて信号を放射.受信後の推定手法でその指向性情報を利用する手法」を実装した.本年度は成果発表の年であるため,シミュレーションでの結果も加えて論文にまとめ,成果発信を行った.また,研究期間に行った上記手法の他の手法も論文誌を通じて2件の発信を行った.また,2件の口頭学会発表も行った.●さらなる特性改善と評価に基づいた新たな課題への取り組み本年度は,次フェーズへの取り組みを練る年度としても位置付けている.

今回の研究成果は,レーダなどの測距センサを用いた障害物の位置検出システムである.多くの事故は交差点で発生しており,相手車輌をいち早く検出することが望まれる.現在の提案手法は,対象物が見通しで見えていないと検出できない.そこで,「交差点に進入しようとする死角領域の相手車輌の接近を検知する新たな手法の検討」という新たな課題を設定した.この課題に対し,レーダネットワークによって(1)受信強度,(2)ドップラ周波数などの特徴量から接近車輌を検出する手法を提案し,基礎検討を行った.本手法についても,学会発表を通じて成果発信を行った.
DNAマイクロアレー法を用いた抗アポトーシス関連分子の探索

我々はこれまでに,ヒト白血球細胞株HL-60が酸化ストレスや放射線照射により容易にアポトーシスにより細胞死に至るが,これに接着班キナーゼFAKのcDNAを導入した細胞株HL-60/FAKは,アポトーシスに対して,高度に抵抗を示すことを明らかにしてきた.FAKを高発現するグリオーマ細胞株などは,抗がん剤に耐性を示すことが知られている.そこでFAKによって誘導される抗アポトーシス機構を解析する為に,FAKならびに変異体を導入した細胞株を樹立し,種々の抗アポトーシスタンパク質ならびに抗酸化ストレスタンパク質の解析を行うことをめざした.すなわち,1.DNAマイクロアレー法によりFAK導入細胞において,とくに,細胞周期(cdcキナーゼ,サイクリンなど)やシグナル伝達(MAPキナーゼ,TRAFファミリー,c-Relファミリーなど)に関与する分子種の発現上昇が認められた.これらの遺伝子の発現はさらに,RT-PCR法ならびにウエスタンブロットなどにより,確認された.2.2次元電気泳動法とLC/MS, TOF/MSによる解析により,上記遺伝子のほか,HSP90やタンパク質合成に関わる分子,レドックス制御に関わる分子などの発現上昇を認めた.さらに,これらのタンパク質の発現上昇とmRNA発現との関連,また,これらの分子群の抗アポトーシス作用に果たす役割を明らかにすることができた.本研究により,アポトーシスと抗アポトーシスに関与するタンパク質の新たな相互作用を明らかにすることができた.今後これらの分子の,in vivoにおけるアポトーシス誘導ならびに抗アポトーシス解除の可能性を検討する予定である.我々はこれまでに,ヒト白血球細胞株HL-60が酸化ストレスや放射線照射により容易にアポトーシスにより細胞死に至るが,これに接着班キナーゼFAKのcDNAを導入した細胞株HL-60/FAKは,アポトーシスに対して,高度に抵抗を示すことを明らかにしてきた.FAKを高発現するグリオーマ細胞株などは,抗がん剤に耐性を示すことが知られている.そこでFAKによって誘導される抗アポトーシス機構を解析する為に,FAKならびに変異体を導入した細胞株を樹立し,種々の抗アポトーシスタンパク質ならびに抗酸化ストレスタンパク質の解析を行うことをめざした.すなわち,1.DNAマイクロアレー法によりFAK導入細胞において,とくに,細胞周期(cdcキナーゼ,サイクリンなど)やシグナル伝達(MAPキナーゼ,TRAFファミリー,c-Relファミリーなど)に関与する分子種の発現上昇が認められた.これらの遺伝子の発現はさらに,RT-PCR法ならびにウエスタンブロットなどにより,確認された.2.2次元電気泳動法とLC/MS, TOF/MSによる解析により,上記遺伝子のほか,HSP90やタンパク質合成に関わる分子,レドックス制御に関わる分子などの発現上昇を認めた.さらに,これらのタンパク質の発現上昇とmRNA発現との関連,また,これらの分子群の抗アポトーシス作用に果たす役割を明らかにすることができた.本研究により,アポトーシスと抗アポトーシスに関与するタンパク質の新たな相互作用を明らかにすることができた.今後これらの分子の,in vivoにおけるアポトーシス誘導ならびに抗アポトーシス解除の可能性を検討する予定である.我々はこれまでに,ヒト白血球細胞株HL-60は,酸化ストレスや放射線照射により容易にアポトーシスにより細胞死に至るが、これに接着班キナーゼFAKのcDNAを導入した細胞株HL-60/FAKはアポトーシスに対して,高度に抵抗を示すことを明らかにしてきた。FAKを高発現するグリオーマ細胞株などは,抗がん剤に耐性を示すことが知られている。そこでFAKによって誘導される抗アポトーシス機構を解析する為に、FAK導入細胞における種々の抗アポトーシスタンパク質ならびに抗酸化ストレスタンパク質の増大ならびに活性の亢進を明らかにした。今年度はさらに,DNAマイクロアレーによる発現遺伝子の解析ならびに2次元電気泳動による発現タンパク質のプロファイル作成を試みてきた。DNAマイクロアレー法によりFAK導入細胞においてはとくに、細胞周期(cdcキナーゼ,サイクリンなど)やシグナル伝達(MAPキナーゼ,TRAFファミリー,c-Relファミリーなど)に関与する分子種の発現上昇が認められた。これらの遺伝子の発現はさらに,RT-PCR法により確認された。一方,2次元電気泳動法とLC/MS,TOF/MSによる解析により、上記遺伝子のほか、HSP90やタンパク質合成に関わる分子、レドックス制御に関わる分子などの発現上昇が認められた。今後,これらのタンパク質の発現上昇とmRNA発現との関連,また,これらの分子群の抗アポトーシス作用に果たす役割を明らかにしてゆく予定である。我々はこれまでに,ヒト白血球細胞株HL-60が酸化ストレスや放射線照射により容易にアポトーシスにより細胞死に至るが、これに接着班キナーゼFAKのcDNAを導入した細胞株HL-60/FAKはアポトーシスに対して,高度に抵抗を示すことを明らかにしてきた。そこでFAKによって誘導される抗アポトーシス機構を解析する為に、FAKならびに変異体を導入した細胞株を樹立し,種々の抗アポトーシスタンパク質ならびに抗酸化ストレスタンパク質の解析をめざした.方法としては,DNAマイクロアレーによる発現遺伝子の解析ならびに2次元電気泳動による発現タンパク質を同定することを試みてきた.すなわち,1.DNAマイクロアレー法によりFAK導入細胞においてはとくに、細胞周期(cdcキナーゼ,サイクリンなど)やシグナル伝達(MAPキナーゼ,TRAFファミリー,c-Relファミリーなど)に関与する分子種の発現上昇が認められた。これらの遺伝子の発現はさらに,RT-PCR法ならびにウエスタンブロットなどにより確認された.

2.2次元電気泳動法とLC/MS, TOF/MSによる解析により、上記遺伝子のほか、HSP90やタンパク質合成に関わる分子、レドックス制御に関わる分子などの発現上昇を認めた。さらに,これらのタンパク質の発現上昇とmRNA発現との関連,また,これらの分子群の抗アポトーシス作用に果たす役割を明らかにすることができた.本研究において,アポトーシスと抗アポトーシスに関与するタンパク質の新たな相互作用を明らかにすることができ,今後in vivoでの応用を目指したい.
ヘリウムレス極低温用高性能トルク磁力計の試作

本研究の目的は液体ヘリウムを用いないで10000ガウスの磁場と4K300Kの温度範囲をカバーできる磁気トルク計を自動測定できるシステムを試作することにあった。初年度、(1)ボア48φ磁場10000ガウスまでの磁場可変永久磁石MM-1000-48型をMagnetic Solutions社(アイルランド)購入した。(2)4K300Kの温度範囲が可変な冷凍機システムを設計し、Janis社(米国)より購入した。(3)両者を設置する精密可動板を有する冷凍機架台を設計し大阪府立大学生産技術センターにて製作・組み立てを行った。(4)冷凍機は3時間で4Kまで冷却にできた。(5)サンプルはトップローディング方式で、その空間でヘリウム純ガスを液化することにより1.48Kの低温が約1時間に亘って維持できることが確かめられた。従って、温度範囲を1.5Kから300Kと修正することができた。(6)トルクについては当初、計画していた光学位置測定電磁的フィードバック機構は、冷凍機の振動のため十分な性能が出せないことが分かった。(7)そこで、ピエゾ抵抗方式のカンチレバーにねじり力がかかったときに電気抵抗が変化する原理で、トルクを制御する方式を採用した。(8)カンチレバーに取り付けた校正用コイルに電流を流し10000ガウスの磁場中でトルクの測定ができることを実証した。(9)測定はLabVIEWにより、自動化している。これらの準備により、最終年度では、ヘリウムレス極低温用高性能トルク磁力計の試作が完了し、性能評価を実施して初期の性能が確保できたことを確認した。本研究の目的は液体ヘリウムを用いないで10000ガウスの磁場と4K300Kの温度範囲をカバーできる磁気トルク計を自動測定できるシステムを試作することにある。本年度は、(1)ボア48φ磁場10000ガウスまでの磁場可変永久磁石MM-1000-48型をMagnetic Solutions社(アイルランド)購入した。これらの準備により、最終年度である平成13年度には、ヘリウムレス極低温用高性能トルク磁力計の試作が完了し、性能評価ができるものと考えている。このプロジェクトでは、(1)ボア48φ磁場10000ガウスまでの磁場可変永久磁石MM-1000-48型をMagnetic Solutions社(アイルランド)購入した。

(3)両者を設置する精密可動板を有する冷凍機架台を設計し大阪府立大学生産技術センターにて製作・組み立てを行った。(4)冷凍機は3時間で4Kまで冷却にできた。(5)サンプルはトップローディング方式で、その空間でヘリウム純ガスを液化することにより1.48Kの低温が約1時間に亘って維持できることが確かめられた。従って、温度範囲を1.5Kから300Kと修正することができた。(6)トルクについては当初、計画していた光学位置測定電磁的フィードバック機構は、冷凍機の振動のため十分な性能が出せないことが分かった。(7)そこで、ピエゾ抵抗方式のカンチレバーにねじり力がかかったときに電気抵抗が変化する原理で、トルクを制御する方式を採用した。(8)カンチレバーに取り付けた校左用コイルに電流を流し10000ガウスの磁場中でトルクの測定ができることを実証した。(9)測定はLabVIEWにより、自動化している。これらの準備により、最終年度である平成13年度には、温度コントローラーを導入しヘリウムレス極低温用高性能トルク磁力計の試作が完了した。
ハロロドプシン族のイオン選択性

アルゼンチンから持ち帰った塩試料から単離した好塩菌のうち、これまでのどの属にも属さない新たな好塩菌(arg-4)を見つけた。そこで、ハロロドプシン族のヘリックス組換え実験を行う前に、イオンポンプの情報をさらに得るために、arg-4株から光駆動性イオンポンプの単離を行った。arg-4株の光反応(外液のpH変化)は明らかではなかったが、保存領域を利用したPCR法により、プロトンポンプ、アニオンポンプの遺伝子断片が増幅した。これらの断片をプローブとして用いて、ゲノムDNAからプロトンポンプとアニオンポンプの遺伝子をクローニングした。arg-4のプロトンポンプは、既知のどのプロトンポンプとも約50%の相同性を示した。さらに、プロトンポンプに必須と推定されるアミノ酸残基は全て保存されており、この遺伝子がコードする産物は機能性タンパクであると判断した。また、arg-4のアニオンポンプは、既知のどのアニオンポンプとも6070%の相同性を示した。これも、機能的に必須と推定されているアミノ酸残基は全て保存されていた。さらに、アニオンポンプの保存性が、プロトンポンプの保存性と比べて高いことは、機能制約のかかったイオンポンプ一般の特徴である事から、これらの2つのバクテリアのイオンポンプの遺伝子は、偽遺伝子ではなく、発現しうるクリプテイック遺伝子と推定した。この新たな2種の細菌レチナ-ルタンパクの遺伝子をバクテリオロドプシンの発現系に相同組み換えを利用して導入し、発現産物の物性を測定する予定である。同時に、この新たなアニオンポンプの構造から、B-Cループの重要性が再認識された。そこで、ハロロドプシンのB-Cループを、ファラオニスハロロドプシンで置き換えた組み換え体を作成中である。得られた成果は、公表する予定である。