hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
在日コリアン女性のエスニック・アイデンティティの研究〜その美意識を中心に〜

本年度の調査の主旨は,調査用紙を用いて在日コリアン女性の好む色彩とメイクアップを尋ねることにあった。調査対象者は在日コリアンの集住地区として知られる大阪市生野区とした。そのため,調査協力を聖公会生野センターに依頼し,調査に対する助言を得たところ,保育所を通しての調査が望ましいとの判断から,調査票の配布,回収に関しては当初の郵送によるものから,保育所で直接行うものへと変更することになった。が,結果として,回収率は上がったのではないかと考える。また,調査時期の予定も金日成主席の急逝により延期せざるを得なくなったため,年度末までずれ込むことになった。調査は在日コリアンが多いとされている幾つかの保育所の紹介を聖公会生野センターで受けた後,園長あるいは主事の協力を依頼した。その結果,3つの保育園より調査協力の返事を得た(2月以降,さらにもう1つの保育園より協力の返答が得られたが,このケースは4月以降自費で行うこととする)。それにより,3月1日より7日までの間,愛信保育園,天使の園保育園,こひつじ乳児保育園にて集中的に調査を行った。園児を送迎をする保護者である母親を調査対象者とし,在日コリアンのみに限定せず,日本人の女性もその対象に含めた。日本人女性と在日コリアン女性が日常的に触れ合うことによってどのような影響が相互に見られるかを調べるためである。在日コリアン女性(2・3世)の日本への同化傾向のみならず,日本女性がチマ・チョゴリを数着所有しているといった事実により,文化交流という視点からエスニック・アイデンティティをとらえ直してゆくことが可能になるのではないかと思われる。調査票の回収率はそれぞれの保育園で差があるものの,総じて60%を上回るものであった。かなり私生活(国籍問題・所得の問題等)に踏み込んだ内容の調査であったことから,現場で調査拒否を告げられるケースもあったが,直接に調査の趣旨などの説明することが可能であった事を考えると,当初計画の郵送による調査よりも高い回収率であると考えられる。また,一般的に調査票を用いての社会調査としても,決して低い回収率ではないと考える。あつめた調査票をもとに,電算機を用いて集計し,その結果に分析加えたものは,次年度の関西社会学会において研究発表することを予定している。
がんの遺伝子治療に向けた超機能性人工オリゴヌクレオチドの創製

今回、我々は架橋構造により糖部コンホメーションをN型に固定化した新しい超機能性ヌクレオシド類縁体(2,4-BNA)を効率的に合成する経路の確立に成功し、それらを天然型デオキシリボオリゴヌクレオチド(DーODN)に置換導入して調製した人工オリゴヌクレオチド(BNA-ODN)類の化学的・生物学的活性について評価を行なった。まず、BNA-ODN類と、それに相補的な一本鎖RNAとの二重鎖形成能をTm値を指標に検討したところ、本BNA-ODN類は、D-ODN及び現在もっとも開発が進んでいるアンチセンス分子であるホスホロチオアート結合オリゴヌクレオチド(S-ODN)に比べてはるかに高い二重鎖形成能を示した。また、これに加えて、BNA-ODNが優れた三重鎖形成能を有していること、並びにヌクレアーゼに対する耐性にも優れていることを確認することができた。さらに、ウイルムス腫瘍の原因遺伝子であるWT-1のある特定配列領域を標的としたアンチセンス配列のBNA-ODNを設計・合成し、WT-1の発現が見られるヒト胃癌細胞由来のAz521細胞へ導入したところ、顕著なアンチセンス効果が認められ、Az521細胞のアポトーシス死を効果的に誘導することに成功した。これらの実験結果は、新規BNA-ODNはアンチセンス分子としての極めて優れた特製を有しており、様々な「がん」遺伝子に向けたアンチセンス医薬品開発の素材として有用性が高いことを意味している。
生の現象学・臨床哲学・人文社会学を横断する共同性・文化・多文化性に関する研究

本研究は、国際社会における錯綜した多文化社会の状況を背景として、文化を人間の共同性に基づくものと理解し、この共同性や文化についての人文社会学的研究、および、生の現象学と臨床哲学における哲学的解釈をもとに、現在の多文化社会化の本質的要因と今後の多文化社会で要求される共同化のあり方について検討するものである。そのうち本年は、宗教的対立が社会的抗争や暴力に結びついている現在の社会的状況を踏まえて、宗教性と共同性の関係に焦点をあて、文化人類学、生の哲学、精神病理学、そして、精神療法の観点から、間文化性と宗教性の関係について研究した。とりわけ着目したのは、文化人類学者のターナーが「コムニタス」と名付け、また、ベルクソンが「開かれた社会」と呼ぶ共同性のあり方である。一般に、「文化」とは、人間の生活をとりまく事象に諸々の区切りを入れ、それを意味づけること、あるいは、そうした区切りの産物だと言えるが、こうした文化は、特定の共同体によって伝承されることによって、本来の意味での「文化」として形成される。宗教も、文化の一形態として、そうした「閉じた共同体」に根ざす側面を持つと言える。しかし同時に、ベルクソンが「開かれた社会」と名付ける社会やそれに固有な宗教、あるいは、ターナーが「コムニタス」と名付ける共同体やその宗教的性格のうちには、文化や宗教が特定の共同体や社会に閉じ込められず、人類全体へと開かれてゆく傾向を認めることができる。本年は、とりわけ、こうした「開かれた次元」に着目し、その特質がどこにあるのか、それを可能にする他者関係とはいかなるものか、さらに、この開かれた次元の欠如が人間の本質にいかなる影響を与えるのか、などについて、ターナー、ベルクソンの他、ブーバーの「我ー汝」関係、また、河合隼雄や木村敏の境界性パーソナリティ障害についての研究をもとに検討した。本年度は、11月に、ベルギーのルーヴァン・ラ・ヌーヴで開催された国際コロック"penser LE MONDE etl'habiter"に参加し、研究発表を行うことができた。そこでは、ミシェル・アンリの「世界」概念である「生の世界」(monde-de-la-vie)を、木村敏の共通感覚論をもとに再解釈することを試みた。こうした研究は、多文化社会における人々の共同性のあり方について検討するための礎石になりうるものであり、その意味で、今回、国際学会において、こうしたテーマで発表し、参加者とディスカッションできたことは、本研究の進展にとって、たいへん大きな成果だった。また、3月には、本研究に関連する研究プロジェクトであり、研究代表者もメンバーとして所属している、科研費基盤研究B「間文化性の理論的・実践的探求ー間文化現象学の新展開」(H2630)の活動として実施されたワークショップに、コーディネーターとして参加する機会を得ることができた。本年度の「研究実績の概要」に記述した内容は、主に、このワークショップを機に、研究した内容をまとめたものであり、その意味でも、このワークショップをオーガナイズできたことは、本研究課題にとっても、非常に大きな意味のある取り組みであった。とりわけ、研究代表者とともに、ワークショップにパネラーとして参加して下さった先生方とのディスカッションは、今後、本研究を推進していくうえでの方向性についての大きなヒントを与えてくれた。今後の研究は主に以下の二つの方向性をめざして進めることを計画している。1)まず、ゲルナー、アンダーソン、スミス、ホブズボームなどの、いわゆるナショナリズム論や構築主義の検討を通して、近代以後の共同体の特質をあぶり出すと同時に、そうした共同体のあり方が、現在における多文化社会の問題点といかに関わっているかについて検討する。これによって、現代の多文化社会の根がどこにあるのかを、本質的な観点から、明らかにしたいと考えている。2)また、近代以前から以後にかけての共同体のあり方を、哲学者たちがどのように理解していたのかを明らかにするため、ヘーゲル、およびマルクスの国家論、共同体論(アソシエーション論)を検討する。この研究は、ミシェル・アンリのマルクス解釈に関する考察を意義あるものにするための準備の作業をも兼ねており、今後、研究を進める上で、大変重要な作業となる。こうした二つの方向性の研究を固めた上で、その成果を、多文化化する現代社会において要求される共同性のあり方についての研究へとつなげてゆきたいと考えている。

しかし同時に、ベルクソンが「開かれた社会」と名付ける社会やそれに固有な宗教、あるいは、ターナーが「コムニタス」と名付ける共同体やその宗教的性格のうちには、文化や宗教が特定の共同体や社会に閉じ込められず、人類全体へと開かれてゆく傾向を認めることができる。本年は、とりわけ、こうした「開かれた次元」に着目し、その特質がどこにあるのか、それを可能にする他者関係とはいかなるものか、さらに、この開かれた次元の欠如が人間の本質にいかなる影響を与えるのか、などについて、ターナー、ベルクソンの他、ブーバーの「我ー汝」関係、また、河合隼雄や木村敏の境界性パーソナリティ障害についての研究をもとに検討した。本年度は、11月に、ベルギーのルーヴァン・ラ・ヌーヴで開催された国際コロック"penser LE MONDE etl'habiter"に参加し、研究発表を行うことができた。そこでは、ミシェル・アンリの「世界」概念である「生の世界」(monde-de-la-vie)を、木村敏の共通感覚論をもとに再解釈することを試みた。こうした研究は、多文化社会における人々の共同性のあり方について検討するための礎石になりうるものであり、その意味で、今回、国際学会において、こうしたテーマで発表し、参加者とディスカッションできたことは、本研究の進展にとって、たいへん大きな成果だった。また、3月には、本研究に関連する研究プロジェクトであり、研究代表者もメンバーとして所属している、科研費基盤研究B「間文化性の理論的・実践的探求ー間文化現象学の新展開」(H2630)の活動として実施されたワークショップに、コーディネーターとして参加する機会を得ることができた。本年度の「研究実績の概要」に記述した内容は、主に、このワークショップを機に、研究した内容をまとめたものであり、その意味でも、このワークショップをオーガナイズできたことは、本研究課題にとっても、非常に大きな意味のある取り組みであった。とりわけ、研究代表者とともに、ワークショップにパネラーとして参加して下さった先生方とのディスカッションは、今後、本研究を推進していくうえでの方向性についての大きなヒントを与えてくれた。今後の研究は主に以下の二つの方向性をめざして進めることを計画している。1)まず、ゲルナー、アンダーソン、スミス、ホブズボームなどの、いわゆるナショナリズム論や構築主義の検討を通して、近代以後の共同体の特質をあぶり出すと同時に、そうした共同体のあり方が、現在における多文化社会の問題点といかに関わっているかについて検討する。これによって、現代の多文化社会の根がどこにあるのかを、本質的な観点から、明らかにしたいと考えている。2)また、近代以前から以後にかけての共同体のあり方を、哲学者たちがどのように理解していたのかを明らかにするため、ヘーゲル、およびマルクスの国家論、共同体論(アソシエーション論)を検討する。この研究は、ミシェル・アンリのマルクス解釈に関する考察を意義あるものにするための準備の作業をも兼ねており、今後、研究を進める上で、大変重要な作業となる。こうした二つの方向性の研究を固めた上で、その成果を、多文化化する現代社会において要求される共同性のあり方についての研究へとつなげてゆきたいと考えている。
ラベンダーの香質改変に関する遺伝解析

ラベンダー精油の香調改変を目的として,1)遺伝解析に有効なSSRマーカーの作成,および2)精油の主要成分の一つであるリモネン合成酵素遺伝子を導入した形質転換体の作出を行った.ラバンジンのゲノムDNAからSSR配列を単離し,11マーカーを作出できた.これらマーカーはLavandula節植物の識別に有効であり,他の遠縁種でも一部利用可能であった.また,リモネン合成酵素遺伝子を導入したラバンジンでは,葉においてリモネンのみならず他の環化モノテルペンの生産が増加しており,他方,花穂ではリモネンとリナロールの生産が抑制され,器官によって導入遺伝子が異なる挙動を示すことが明らかとなった.本年度は作成したSSRマーカーの有効性の検証ならびにリモネン合成酵素遺伝子導入個体の精油生産性評価を行った.(SSRマーカーについて)Lavandulaangustifolia,L.×intermedia,L. stoechas,L. heterophyllaおよびL. lanataの5種15品種を用いて23年度に構築した51種類のSSRマーカーの多型解析を行った.51のうち42マーカーでPCR増幅産物が認められたが,塩基配列情報から推定されたサイズの産物が得られたものは10マーカーのみであった.これらの10のうち9マーカーにおいて,L. angustifoliaの9品種内に多型を確認し,残る1マーカーも種間において多型が得られた.また,連鎖地図作成のためのF1集団を作成するため,L. angustifoliaの`濃紫2号',`エレガンス・アイス'および`アロマティコ'を用いて種内交配を行い,35粒のF1種子を採種し,発芽・生育した11株を育成している.(精油生合成遺伝子導入個体について)リモネン合成酵素遺伝子導入個体について,葉および花穂における精油生産性を評価した.葉では,リモネンのみならず,複数の環化モノテルペン量が増加しており,精油の生産性が有意に増加していた.一方,花穂では,精油全体の生産性が低下しており,特に,リモネンおよびリナロールの生産量が著しく減少していた.このことは,mRNAの発現量でも同様の傾向が認められ,35Sプロモーターでリモネン合成酵素遺伝子(LIMS)を発現させることにより,LIMSおよびリナロール合成酵素遺伝子(LINS)でCo-supressionが誘導されることが推察された.このように導入遺伝子の発現が器官によって異なることにより,精油の生産性に大きく影響を及ぼすことが明らかとなった.本年度は作成したSSRマーカーの有効性の検証ならびにリナロール合成酵素遺伝子(LINS)導入個体の精油生産性評価を行った.(SSRマーカーについて)Lavandula属6種19品種を用いて24年度に引き続き,SSRマーカーの多型解析を行った.11マーカーを用いて解析したところ,7マーカーについては真正ラベンダー9品種内で多型が認められ,LAMS33マーカーでは9品種内に8個の対立遺伝子が存在していた.一方,真正ラベンダーの品種内で単型であった4マーカーのうち2マーカーについても,Lavandula属の種間において多型を示した.しかし,Lavandula節以外のL. stoechasやL. canariensisの品種においてはDNA断片が増幅しないマーカーが認められ,特に遠縁であるL.canariensisについては2マーカーのみの増幅であった.また,連鎖地図作成のため,L. angustifoliaの`濃紫3号'と`エレガンス・アイス'間で交配を行い,150株以上のF1集団を作成することに成功した.(精油生合成遺伝子導入個体について)リナロール合成酵素遺伝子導入個体について,葉における精油生産性およびLINS発現量を評価した.LINS導入個体獲得率は0.13%でり,リモネン合成酵素導入個体獲得率と大きくは変わらなかった.形質転換体におけるリナロール生産量は非形質転換体と比較して35倍に増加していた.同時にLINS発現量も増加していたが,精油の香調を変化させるまでには至らなかった.ラベンダー精油の香調改変を目的として,1)遺伝解析に有効なSSRマーカーの作成,および2)精油の主要成分の一つであるリモネン合成酵素遺伝子を導入した形質転換体の作出を行った.ラバンジンのゲノムDNAからSSR配列を単離し,11マーカーを作出できた.これらマーカーはLavandula節植物の識別に有効であり,他の遠縁種でも一部利用可能であった.また,リモネン合成酵素遺伝子を導入したラバンジンでは,葉においてリモネンのみならず他の環化モノテルペンの生産が増加しており,他方,花穂ではリモネンとリナロールの生産が抑制され,器官によって導入遺伝子が異なる挙動を示すことが明らかとなった.本年度はSSRマーカーの作成と精油生合成遺伝子導入個体の作出を行った.(SSRマーカーの作成)真正ラベンダーとスパイクラベンダーの種間雑種であるラバンジンのゲノムDNAからSSR濃縮ライブラリーを作成し,塩基配列を解読後,51種類のSSR増幅用プライマーを構築した.本研究では,GT(TG)およびCT(TC)リッチな配列を標的としてライブラリーの作成を行っていたが,得られたSSRの多くはTC(CT)およびAG(GA)リッチな配列であった.(精油生合成遺伝子導入個体の作出)遺伝子データベースを利用し,真正ラベンダーの花穂由来mRNAからリモネンおよびリナロール合成酵素遺伝子をクローニングしてcDNAを作成した.得られたcDNAを強発現する形質転換用バイナリープラスミドに挿入し,Agrobacterium tumefaciensに導入した.リモネン合成酵素遺伝子については,A.tumefaciensを用いてラバンジンに導入し形質転換体を数個体獲得することができた.形質転換体については,現在も培養を継続して作出を行っている.

得られたリモネン合成酵素遺伝子導入個体について,葉における導入遺伝子の転写量は非形質転換体の2から8倍程度高かったが,リモネンの成分比に有意な差は認められず,他方,ボルネオールやカンファーの成分比に著しい差異のある個体が認められた.(SSRマーカーの作成)SSRについては,プライマーの有効性の検証を終了しており,有効なマーカー数は少ないものの,利用可能なマーカーの選抜は終了している.また,F1個体の作出と解析用F2集団の育成にとりかかっており,申請書の予定通り進行している.(精油生合成遺伝子)精油生合成遺伝子導入個体については,リモネン合成酵素遺伝子導入個体で,精油の生産性評価が終了しており,導入遺伝子が器官別によって異なる発現を行うことを明らかにしている.さらに,リナロール合成酵素遺伝子導入個体についてもすでにいくつか作出しており,精油の生産性評価を行うために増殖を行っているところである.ここまでは,申請書に示した予定と大きく異なることはなく,概ね順調に推移しており,かつ遺伝子導入による精油生合成について興味深い知見が得られている.このため,本研究の大きな軸となる2大課題について概ね順調に進展しているといえる.(SSRマーカーの作成)SSRについては,濃縮ライブラリーの作成,ライブラリーの塩基配列解読ならびにプライマーの構築まで完了しており,申請書の予定通り進行している.(精油生合成遺伝子)精油生合成遺伝子については,真正ラベンダーよりリモネン合成酵素ならびにリナロール合成酵素遺伝子cDNAを単離し,バイナリープラスミドに導入が完了している.また,リモネン合成酵素遺伝子では,Agrobacteriumを用いてラバンジンに導入し,形質転換体をいくつか作出している.ここまでは,申請書に示した予定と大きく異なることはなく,概ね順調に推移している.このため,本研究の大きな軸となる2大課題について概ね順調に進展しているといえる.(SSRマーカー)有効性が確認されたSSRマーカーを用いてLavandula属各種における遺伝的多様性評価を行う.また,真正ラベンダー(L. angustifolia)の連鎖地図作成のため,F2集団の作成を行うとともに,多型解析を行う.(精油生合成遺伝子)リナロール合成酵素遺伝子を導入したラバンジン形質転換体について,葉および花穂の精油を抽出し,導入遺伝子が精油生合成に及ぼす影響を調査する.(SSRマーカー)23年度に作成したSSRマーカーの有効性を検証するため,多品種のラベンダーを用いて多型性の有無を確認する.また,他のシソ科植物での利用可能性を検証する.さらに,連鎖地図作成のため,F1雑種集団の作成を行う.(精油生合成遺伝子)リナロールおよびリモネン生合成遺伝子を導入したラバンジン形質転換体の作出を行う.得られた形質転換体について,葉および花穂の精油を抽出し,導入遺伝子が精油生合成に及ぼす影響を調査する.(SSRマーカー)
腸リンパ組織由来のリンパ球動態機構および抗原刺激の影響

昨年度は、GALT(gut-associated lymphoid tissue)を構成する腸管リンパ管およびパイエル板という異なった組織由来のリンパ球(Tcell)のmigration patternの相違を検討した。両群とも各組織での局在パターンは同様であったが、リンパ球注入2、12時間後の標識リンパ球の組織内への数はパイエル板由来リンパ球は腸間膜リンパ節傍皮質域へ、腸管リンパ由来リンパ球はパイエル板傍濾胞域により有意に多く観察され、接着分子の発現は、α4-integrin、L-selectinは腸管リンパ由来リンパ球における発現が有意に強く、migration patternの相違と接着分子の関連が推測された(第22回日本リンパ学会98年6月、Lymphology31:99,1998)。今年度はリンパ球活性化の影響に関し、すでに抗原刺激としてエンドトキシンを投与したratでのmigration patternが変化することは発表しているが、in vitroでエンドトキシンを負荷したTcellのmigrationを検討した。【方法】Wistar系雄性ラットを実験に用い、腸管リンパ管よりリンパ液を採取後Tリンパ球を分離、FITCの標識後リンパ静脈より注入した。経時的にバイエル板、腸間膜リンパ節を採取、凍結組織切片6μmを作製し、rabbit anti-FITCを第1ルオキシダーゼ標識goat anti-rabbit IgGを第2抗体とした酵素抗体法を施し標識リンパ球の組織内局在および数を検討分離Tリンパ球をLPS5μg/mlにてインキュベーションしたLPS処置群とコントロール(無処置)群と比較検討を行った。【成績】標識リンパ球注入後30分で両群ともパイエル板旁濾胞域での局在が観察されたが、その数はLPS処置群におトロール群より有意に多く認められた。【考察・結語】LPSによる腸リンパ管リンパ球のパイエル板へのmgrationの増加の一因としてリンパ球への直接作用示唆された。(GALTにおける腸リンパ管T cell migrationに対するエンドトキシンの影響。第40回日本消化器病学会大会98年10月にて発表)リンパ球migrationの臓器特異性については徐々に明らかにされてきたが、GALT(gut-associated lymphoid tissue)を構成する腸管リンパ官およびバイエル板という異なった組織由来のリンパ球(Tcell)のmigration patternについての相違につき検討を行った。【方法】Wistar系雄性ラットを実験に用い、腸管リンパ管、バイエル板よりリンパ球を採取した。洗浄後ナイロンカラムを通してT cellを分離し、FITC(fluorescein is othiocyanate)をインキュベーションにより標識し、標識リンパ球を頚静脈より注入した。経時的にバイエル板、腸間膜リンパ節、脾臓を採取し、PLP固定凍結組織切片を作製、抗FITC抗体を用いた免疫組織化学により標識リンパ球の組織内局在を検討した。すなわちリンパ球に対するマウスモノクローナル抗体( W3/13(CD3)、W3/25(CD4)、OX8(CD8) )およびrabbit anti-FITCを1次抗体とし、PE-goatanti-mouse IgG、FITC-goat anti-rabbit IgGを2次抗体とした蛍光抗体法による二重染色を施しsubsetでの相違を含めた検討を行った。さらに、両組織由来のT cellの接着分子(LFA1α、α4-integrin、L-selectin)の発現をflowcytomeryにて解析しfluorescence intensityにて比較した。【成績】両群とも各組織での局在パターンは同様の傾向が認められた。リンパ球注入2、12時間後の標識リンパ球の組織内在局在の単位面積あたりの数は脾臓において相違はみられなかったが、バイエル板由来リンパ球は腸間膜リンパ節傍皮質域へ、腸管リンパ由来リンパ球はバイエル板傍濾胞域により有意に多く観察された。各組織にmigrationしたリンパ球のCD4/CD8比は両群での相違はみられなかった。【成績】

標識リンパ球注入後30分で両群ともパイエル板旁濾胞域での局在が観察されたが、その数はLPS処置群におトロール群より有意に多く認められた。【考察・結語】LPSによる腸リンパ管リンパ球のパイエル板へのmgrationの増加の一因としてリンパ球への直接作用示唆された。(GALTにおける腸リンパ管T cell migrationに対するエンドトキシンの影響。第40回日本消化器病学会大会98年10月にて発表)
栄養疫学における食事パターンの活用に関する研究

我々が毎日摂取する食事の内容(質)は、摂取する人の健康状態、年齢、家族構成、学歴、経済的要因などと関連している。そのため、個々の食事内容(質)は、多様性があると考えられる。その個々の食事内容(質)を集団全体から見て特徴づけることができれば、“食事パターン"の形成が想定される。形成された“食事パターン"と健康情報を解析することで、栄養指導あるいは介入戦略の立案などの栄養疫学における重要な指標として活用できる可能性がある。以上から、本年度の研究は、「妊婦の食事パターンの確立」と「食事パターンによる妊婦および児の健康情報解析の検討」を目的とした。これまで食事パターン解析手法として、主成分分析やクラスター解析が主なものであった。しかし、大規模データをグループ化する場合、適切なグループ分割とグループ内の均質化が必要となる。そのため、複数のクラスタリング手法(PLS, OPLS, O2PLSを組み合わせた手法など)が有効な方法と考えた。そこで本研究は、食事パターン解析を確立するために、多変量解析ソフトSIMUCAを用いて、以下の手順で食事パターンのグループ化を行った。1得られたデータを標準化、2そのデータを主成分分析し、3Hotelling's T2理論に基づき外れ値となる検体を算出、4さらに信頼区間内サンプルの主成分得点に基づいたクラスター分析を行った。この手法を用いてグループ化を試みた。次に、食事パターンによる妊婦および児の健康情報解析の検討を行った。妊婦および児の健康情報を解析する上で、食事調査の集団の基本属性を含めた特徴を評価する必要がある。しかし、食事調査の回答には過少・過大評価の存在が報告されている。その要因として、身体的、心理的、文化的要因が存在すると考えられるが、その要因について日本における研究報告は少ない。そこで食事量の過少評価する集団の要因について検討を行った。
境界要素法による連続体の動的問題解析に関する研究

静的問題の基本解を用いる境界要素法によって平板の動的問題を解く際には、通常、慣性項が領域積分のまま残り、有限要素法と同様に領域内についても要素分割を行う必要がある。音響問題などではこれを回避する手法としてDual Reciprocity Method(以下DRM)が知られている。本研究ではこれを弾性平板の自由振動と過渡応答の問題に適用し、その精度について検討を行った。DRMによればその領域積分項を等価な境界積分に変換することができるため、最終的に扱う行列が小さくて済み、入力データの作成や数値計算を短時間で行うことができるなどの利点がある。しかしながらその精度は、積分を変換する際に用いる領域内のたわみ分布の近似関数に大きく依存する。本研究では、要素接点間の相対距離を用いる近似関数を8通り試すと共に、要素分割数による解の収束状況、境界条件と近似関数の適性などについて検討した。また、リッツ法や有限要素法など他の解法による結果との比較も行った。その結果、静的変形の問題に適した近似関数であっても必ずしも振動問題には適さない場合があることが分かった。しかし、正方形板と円板の振動解析にそれぞれ適した近似関数を見いだすことができ、低次の固有振動数については精度良く求めることができた。また、応答計算においては、時間に関する常微分方程式をいくつかの数値積分法を適用して解析した結果、Houbolt法が最も精度の良い解を与えることが分かった。しかし、低次の波形はよく再現できるが高次の波形まで精度良く計算するにはさらに近似関数を改善する必要があることが分かった。
透析患者の後天性嚢胞腎に発生する腎癌モデルの作成に関する研究

【目的】2-amino-4,5-diphenyl-thiazole(DPT)をラットに投与することにより、腎に嚢胞性変化が生じることを過去に報告したが、今回WistarラットにおけるN-ethyl-N-hydroxyethyl-nitrosamine(EHEN)によるrenal carcinogenesisに対するDPTの長期投与の影響について検討した。【方法】6週齢のWistarラット144匹を用い、第1群:EHEN1000ppm2週投与_+1.06%DPT30週投与群、第2群:1.06%DPT30週投与群、第3群:EHEN1000ppm2週投与_+1.06%DPT14週投与群、第4群:1.06%DPT14週投与群、第5群:EHEN1000ppm2週投与群、第6群:無処置対照群の6群に分け、各群とも8、16、24、32週目に屠殺し、腎の病理組織学的検討を行った。【結果】DPT投与群では、8週目より皮髄境界を中心に嚢胞性変化が生じ、以降経時的に進行したが、DPT投与を14週で中止した第3群、第4群ではDPT投与中止後、嚢胞は徐々に縮小した。腎に発生した腫瘍はすべて病理組織学的にrenal cell tumorで、その頻度は第1群が16週目に1匹(16.7%)、24週目に4匹(66.7%)、32週目に6匹(100%)、第3群の24週目に1匹(20%)、32週目に6匹(100%)、第5群の24週目に2匹(33.3%)、32週目に5匹(83.3%)であった。一方、腫瘍のmultiplicityは、32週目で第1群では6.33±4.46、第3群では3.83±1.57、第5群では1.00±0.58で、第1群、第3群とも第5群に比して有意に(p<0.05)増加していた。また嚢胞内に認められたrenal cell tumorは、第1群と第3群にのみ認められた。BrdU-labelingindexは32週目で、第1群が55.94±21.08(cells/mm^2)、第3群が53.75±12.38(cells/mm^2)と第5群の22.38±6.98(cells/mm^2)に比して有意に(p<0.05)増加していた。【結語】DPTはラットの腎に嚢胞性変化を生じさせるが、投与を中止すると嚢胞は徐々に縮小したことより、14週の短期間投与によりその変化は可逆性であると考えられるが、長期投与による非可逆性変化の発生については今後の検討が必要である。また、EHENの腎腫瘍発生は、DPT投与により促進されるが、DPTの投与を中止することにより、その効果も抑制されることが示唆された。BrdU-labeling

indexは32週目で、第1群が55.94±21.08(cells/mm^2)、第3群が53.75±12.38(cells/mm^2)と第5群の22.38±6.98(cells/mm^2)に比して有意に(p<0.05)増加していた。【結語】DPTはラットの腎に嚢胞性変化を生じさせるが、投与を中止すると嚢胞は徐々に縮小したことより、14週の短期間投与によりその変化は可逆性であると考えられるが、長期投与による非可逆性変化の発生については今後の検討が必要である。また、EHENの腎腫瘍発生は、DPT投与により促進されるが、DPTの投与を中止することにより、その効果も抑制されることが示唆された。
超高磁場MRIを用いた頸部頸動脈壁の性状評価に関する研究

1)悪性グリオーマ術後に放射線療法を行なった患者6例を対象とし超高磁場MRIにて造影効果を認めた部位のFractional anisotropy (FA)値を算出した。FA値は、拡散テルソシ画像を撮後しT1強調画像の造影効果部位に一致したROIを設定し算出した。症例1、2、3においては、造影された領域のFA値は全て0.2以上であった。症例4、5、6では、全例でFA値が0.1前後と著明にFA値が低下している領域が存在した。術後の病理組織学的診断は、症例1、2、3では腫瘍再発であったが、症例4、5、6では放射線脳壊死と診断された。MRI増強効果部位のFA値を評価する事により、腫瘍再発と放射線脳壊死とを鑑別できる可能性が示唆された。1)悪性グリオーマ術後に放射線療法を行なった患者3例を対象とし超高磁場MRIにて造影効果を認めた部位のFractional anisotropy(FA)値を算出した。FA値は、拡散テルソン画像を撮像しT1強調画像の造影効果部位に一致したROIを設定し算出した。症例1、2においては、造影された領域のFA値は全て0.2以上であった。症例3では、一部0.11と著明にFA値が低下している領域が存在した。術後の病理組織学的診断は、症例1、2では腫瘍再発であったが、症例3では腫瘍再発と放射線脳壊死の領域が混在していた。
脳梗塞に対する細胞移植・再生医療における健常対側大脳半球の制御メカニズム解明

Sparague-Dawleyラットを使用し、ナイロン糸を中大脳動脈分岐部まで挿入し、左内頸動脈遮断下に血管閉塞を行った。腹側頸部正中切開し、総頸動脈、外頸動脈、内頸動脈を露出させ、総頸動脈より4-0ナイロン糸を用い閉塞とした。梗塞24時間後にヒト骨髄由来間葉系細胞(human mesenchymal stem cell :hMSC)を経動脈的に移植した。イソフルレン吸入麻酔下、頸部皮下を正中切開し、頚動脈あるいは頚静脈を露出し、頚動脈的投与はポリエチレンカテーテルを用いて同側頚動脈より緩徐に注入した。投与細胞数は1×1000,000個、PBS投与の2群に振り分けた。評価項目として、modified neurological severity score (mNSS), cylinder testによる行動学的評価、cresyl violet染色による梗塞size評価、更に免疫組織染色を行い同側、及び対側の遊走神経幹細胞を定量を行った。一方で、細胞移植群は脳梗塞後の体重減少がコントロール群と比較して有意に改善しており、神経学的評価mNSSでは有意差はないものの、改善傾向であった。脳梗塞モデルについてはTTC染色にて均一の大きさを持つ脳梗塞の確立が達成された。しかしながら移植細胞の効果による影響を見るために移植細胞を標識する染色がうまくいかない。移植細胞自体の生存率が低い可能性がある。移植幹細胞のソースを変更する。若年由来のヒト脂肪幹細胞が入手できるため、これまで確立した脳梗塞モデルに対して、ヒト間葉系幹細胞で行った経動脈投与と同世の手法で、ヒト脂肪幹細胞の投与を行う。その後、ヒト細胞核マーカーにて蛍光免疫染色、DAB染色を行い、長期的な移植細胞の生存率を確認する。平成30年度に行う予定だった対側大脳半球におけるの栄養因子活性の網羅的検索について、蛍光免疫染色による移植細胞の同定が困難であったため、栄養因子の同定には至らなかった。使用計画として、移植細胞の生存率を評価することが先決であると考えられたため、組織評価およびプロテインアッセイの予定とした。移植細胞ソースとしてヒト脂肪幹細胞の使用を計画しているため、令和元年度は、ヒト脂肪幹細胞及び、ヒト幹細胞マーカー(試薬)、及び組織染色とプロテインアッセイの試薬を購入予定である。
毛髪がタイガーテールを呈するトリコチオジストロフィーの遺伝子変異と臨床症状の関連

DNA損傷修復機構に異常を来す遺伝病のひとつにトリコチオジストロフィー(TTD)がある。TTDは非常に稀な疾患であり、これまで本邦報告例はない。本研究では、全国の大学病院、付属施設の小児科、神経内科、皮膚科、計290施設に、TTDと診断されている症例とTTDが疑われる症例がないかにつきアンケート調査を行った。その結果、TTDが疑われる症例をみとめ、現在解析をおこなっている。紫外線やさまざまな化学物質によるDNA損傷を除去し修復する機構である、ヌクレオチド除去修復に異常をもつ遺伝病には、色素性乾皮症(XP)、トリコチオジストロフィー(TTD)、コケイン症候群がある。TTDは、光線過敏、魚鱗癬、脆弱毛、知能障害、生殖能力低下および低身長を特徴とする非常にまれな疾患であり、これまで日本での報告例はない。TTDは非常にまれで、臨床症状が多様で重症度も様々であるため、臨床医にとって、臨床症状からのみ診断することが難しい疾患のひとつである。多様な臨床症状を呈するTTD患者を診断するためには、毛髪を顕微鏡で観察することが重要である。今回の研究では、毛髪を顕微鏡で観察するという、簡便、迅速で非侵襲的検査法で、日本におけるTTD患者を診断し、日本におけるTTD患者の毛髪異常、相補性群分布、遺伝子変異分布からgenotype-phenotypeの関連を明らかにすることを目的としている。全国の大学病院へのアンケート調査から、TTDが疑われる症例、XPと診断されている症例の毛髪検査をするにあたり、コントロールとして日本人6例の毛髪について観察を行った。はさみで切った毛髪をスライドグラスにのせ、カバーグラスでおおい、光学顕微鏡で観察した。観察した項目は、(1)毛髪表面の不規則性;キューティクルの異常、(2) trichoschisis ;明らかな毛髪の断(3) trichorrhexis nodosa-like fracture ;毛上皮の剥離をともなう結節(4) ribboning ;毛の捻れ(5)径の大小不同の有無(6)異常のある毛髪の割合である。さらに、偏光レンズを用いて(7) Tiger tailを呈するかを観察した。その結果、正常例では(1)(7)の異常を認めなかった。この結果より、(1)(7)は日本人におけるTTDを診断するのに有用な検査であることが明らかにされた。アンケート調査を行った。アンケートでは、脆弱な毛・爪、魚鱗癬様皮膚、発達障害があり、(1)これまでTTDと診断されている症例(2)TTDが疑われるが診断がついていない症例の有無につき回答を依頼した。対象としたのは、全国の大学病院、付属施設の小児科、神経内科、皮膚科で、291施設にアンケート調査用紙を送付した。これまで189施設から回答があり、回答率は64%である。現在確定診、断症例、疑い症例につき解析をすすめている。
双曲型方程式系の新しいクラスに関する研究

双曲型2次特性点の分類について,ほぼ最終的な結果を得た.双曲型2次特性点で,その点でのハミルトン写像の固有値がすべて純虚数からなる場合を非効果的双曲型特性点と呼び,その周りでの初期値問題がC^∞適切になるかどうかが,残されていた基本的な問題であった.このとき,2次特性点を,その周りでの零陪特性帯の挙動が,2次特性多様体に対して安定であるかどうか,すなわち,この2次特性点を極限点とする零陪特性帯が存在するか否かで分類する.このとき,以下の結果を得た.零陪特性帯の挙動が安定な場合は,作用素の主表象が,この点の周りで,いわゆる基本分解可能となって初期値問題はC^∞適切となる.一方,陪特性帯の挙動が安定でない場合には,基本分解不可能であり,C^∞適切でない.さらに詳しく,C^∞適切ではないが,Gevreyクラスの5では初期値問題は適切である.このGevrey指数5は最良である.すなわち,零陪特性帯の挙動が安定でなければ,Gevrey指数が5より大なるGevreyクラスではもはや適切でない.これらの結果をうけて以下の萌芽的結果を得た.2次特性多様体の余次元が3のとき,ハミルトン写像が,固有値は純虚数のままで,そのスペクトル構造が変化する場合には,初期値問題はGevreyクラスの5で適切となる.双曲型2次特性点の分類について,ほぼ最終的な結果を得た.双曲型2次特性点で,その点でのハミルトン写像の固有値がすべて純虚数からなる場合を非効果的双曲型特性点と呼び,その周りでの初期値問題がC^∞適切になるかどうかが,残されていた基本的な問題であった.このとき,2次特性点を,その周りでの零陪特性帯の挙動が,2次特性多様体に対して安定であるかどうか,すなわち,この2次特性点を極限点とする零陪特性帯が存在するか否かで分類する.このとき,以下の結果を得た.零陪特性帯の挙動が安定な場合は,作用素の主表象が,この点の周りで,いわゆる基本分解可能となって初期値問題はC^∞適切となる.一方,陪特性帯の挙動が安定でない場合には,基本分解不可能であり,C^∞適切でない.さらに詳しく,C^∞適切ではないが,Gevreyクラスの5では初期値問題は適切である.このGevrey指数5は最良である.すなわち,零陪特性帯の挙動が安定でなければ,Gevrey指数が5より大なるGevreyクラスではもはや適切でない.これらの結果をうけて以下の萌芽的結果を得た.2次特性多様体の余次元が3のとき,ハミルトン写像が,固有値は純虚数のままで,そのスペクトル構造が変化する場合には,初期値問題はGevreyクラスの5で適切となる.当該研究の初年度であることから、まず次のような研究からスタートした。2階2変数の一般の双曲型偏微分作用素を考え、特性根が実であることだけを仮定して、どのようなジュブレイの空間で、初期値問題が適切になるかどうかを研究した。作用素が時間変数にのみ依存する場合には、シンボルのある種の積分をエクスポネンシャルの肩にのせたものが、適切性を導く先験的評価を得るのに効果的であることが分かっている。そこで、係数が一般に空間変数に依存する場合にもこの重み関数が効果的であろう、との予想からこの重み関数を研究した。係数が空間変数に依存すると、この重み関数はもはや、擬微分作用素の表象とはならず、擬微分作用素として扱うことができない。そこでこの重み関数をまず滑らかな関数で近似することを考えた。モリファイヤーによる近似を考えるが、時空間に関する一様な近似では、特性根が重複する辺りでは、この近似は全く効果的でなくなる。そこで作用素の表象の時間微分を距離として導入し、この距離に関して一様に重み関数をモリファイした。このようにして得られた新しい重み関数は擬微分作用素としては、ワイルーヘルマンダークラスに属す擬微分作用素となる。ワイルーヘルマンダーカリキュラスを利用して、ジュブレイ指数が5/2以下ならば、先験的評価が得られることが分かった。これにより、重み関数が高々多項式程度の増大度しかもたないときには、初期値問題がジュブレイ指数が5/2以下の空間で適切となることが分かった。2階2変数の一般の双曲型偏微分作用素で,とくにD^2_t-D_xa(t,x)^nの形をしたものを考え,このべき指数nを変えるとどのようなジュブレイの空間で、初期値問題が適切になるかを研究した.一般にnが大きくなると,特性根の退化度が大きくなって,初期値間題はより狭い空間でしか適切でなくなる,と予想されるが,この予想に反して,初期値問題はジュブレイの1+n次の空間で適切となることが分かった.この事実は多変数の双曲型作用素に対しても成立するであろう,と予想される.これは次年度以降の課題である.他方,前年度の研究によって2階2変数の一般の双曲型偏微分作用素に対しては初期値問題がジュブレイ指数が5/2以下の空間で適切となることが分かっている.この事実から,m階2変数の双曲型偏微分作用素に対して,従来から知られている初期値間題が適切となるるクラスの次数m/(m-1),が最良であるかどうかが新たな問題として出てきた.これについて,準備的な研究をおこなった.

また5月にはパリ第6大学のVaillant教授と協同研究を行い,m×m複素数値行列を係数とする,一階の偏微分方程式系において,空間の点を固定するごとにこの系が対角化可能であり,さらに考えている点での系の還元次数がm^2-m+2以上ならばこの系は滑らかに対称化可能であることを示した.2階2変数の一般の双曲型偏微分作用素で,とくにD^2_t-D_xa(t,x)^nD_x+b(t,x)D_xの形をしたものを研究した.昨年度の研究から,b=0のときには,初期値問題はジュブレイの1+n次の空間で適切となることが分かっていた.今回は,反例を構成することによって,この指数が最良であることを示した.更にb≠0のときに,bがいかなる条件を満たせばこのジュブレイ空間で適切になるかを研究し,bが|b(t,x)|【less than or equal】Ca(t,x)^<(n-1)/2>をみたせば1+n次のジュブレイ空間で適切となること,またこの結果が最良であることも示した.この結果は6月にイタリアのフェラーラで開催された国際研究集会で発表した.この事実は多変数の双曲型作用素に対しても成立するであろう,と予想される.これは最終年度の課題である.他方,以前からの懸案であった,2次特性点を極限点とする陪特性帯の存在する2階双曲型方程式の特徴付けに関する研究を行い,これがIvrii分解不可能なことと同値であることの証明を大幅に簡略化した.その副産物として,Ivrii分解不可能なときには,ジュブレイの5次の空間で適切となることを示した.この指数が最良であるかどうかは今後の研究課題である.この結果は11月にイタリアのピエンツァで開催された国際研究集会で発表した.Ivrii分解不可能なときに初期値問題がC^∞適切でないことはごく最近E.Bernardiによって証明された.双曲型2次特性点の分類について,ほぼ最終的な結果を得た.双曲型2次特性点で,その点でのハミルトン写像の固有値がすべて純虚数からなる場合を非効果的双曲型特性点と呼び,その周りでの初期値問題がC^∞適切になるかどうかが,残されていた基本的な問題であった.このとき,2次特性点を,その周りでの零陪特性帯の挙動が,2次特性多様体に対して安定であるかどうか,すなわち,この2次特性点を極限点とする零陪特性帯が存在するか否かで分類する.このとき,以下の結果を得た.零陪特性帯の挙動が安定な場合は,作用素の主表象が,この点の周りで,いわゆるIvrii分解可能となって初期値問題はC^∞適切となる.一方,陪特性帯の挙動が安定でない場合には,Ivrii分解不可能であり,C^∞適切でない.さらに詳しく,C^∞適切ではないが,Gevreyクラスの5では初期値問題は適切である.このGevrey指数5は最良である.すなわち,零陪特性帯の挙動が安定でなければ,Gevrey指数が5より大なるGevreyクラスではもはや適切でない.以上のことから,2次特性多様体上で,ハミルトン写像のスペクトル構造が一定の場合には,双曲型2次特性点の初期値問題の適切性による分類は基本的には完成した.これらの結果をうけて,ハミルトン写像のスペクトル構造が2次特性多様体上で変わる場合の典型的な例について,その初期値問題の適切性にかんする研究も行った.この研究に関しては以下の萌芽的結果を得た.2次特性多様体の余次元3のとき,ハミルトン写像が,固有値は純虚数のままで,そのスペクトル構造が変化する場合には,初期値問題はGevreyクラスの5で適切となる.
癌の転移におけるTGF-beta/BMPシグナルの解析

本研究では、スキルス胃癌細胞において、癌幹細胞様の性質を持つ細胞集団の同定と解析を行った。Aldehyde dehydrogenase (ALDH)1は、様々な組織由来の正常細胞と癌細胞において幹細胞マーカーとして使うことができることが示唆されている。スキルス胃癌細胞株であるOCUM-2MLN細胞とHSC-39細胞からALDH1陰性細胞とALDH1陽性細胞を単離し、腫瘍形成能を比較した。ALDH1陽性細胞は、ALDH1陰性細胞に比較して、腫瘍形成能が高く、さらに、ALDH1陽性細胞が自己複製能を有することが示唆された。ALDH1陽性細胞に対するTGF-βの作用を検討した結果、TGF-βは、スキルス胃癌細胞株において、ALDH1のmRNAとタンパクの発現を抑制し、ALDH1陽性細胞の割合を減少させた。以上の結果から、スキルス胃癌細胞株においてALDH1陽性細胞が癌幹細胞様の性質を持つこと、REG IVがALDH1陽性細胞の腫瘍形成能に重要な役割を持つこと、TGF-βがALDH1陽性細胞の数を減少させることが示唆された。本研究の成果は、スキルス胃がんの新たな治療法の開発にもつながる重要な発見であると考えられる。種々の癌において高い腫瘍形成能を持つ癌幹細胞を濃縮できるマーカーが同定されているが、スキルス胃癌の癌幹細胞のマーカーはまだ見つかっていない。そこで、スキルス胃癌の癌幹細胞を濃縮できるマーカーを同定し、スキルス胃癌幹細胞の維持におけるTGF-βシグナルの役割を解析した。ALDH1がスキルス胃癌幹細胞のマーカーの候補となり得るかを検討するため、スキルス胃癌の症例から得られた一連の細胞株を用いてALDH1 mRNA発現を比較した。ALDH1は、スキルス胃癌患者の原発腫瘍から得られた細胞を同所移植したマウスの転移組織から得られた細胞株において高い発現が見られた。以上の結果から、ALDH1がスキルス胃癌幹細胞の重要なマーカーの1つであり、TGF-βがスキルス胃癌幹細胞の数を減少させることが示唆された。
肝線維芽細胞による免疫細胞との相互作用と肝発癌のメカニズムの解明

肝癌に対して肝切除を行った症例について、9例から癌部と非癌部の線維芽細胞の抽出に成功した。それぞれ抽出した細胞については、分離培養を行った。癌関連線維芽細胞(CAF)と非癌部線維芽細胞(NF)の培養上清を抽出し、HCC細胞株に添加したところ、CAFによる刺激のほうが有意に浸潤能を上昇させた。また、健常人の単球に上清を添加したところ、CAFによる刺激のほうが有意に遊走能を上昇させた。CAFとNFの発現する遺伝子の比較をアレイで行ったところ、CAFではBMP4の発現が上昇していることが明らかとなった。実際に、肝癌切除症例の標本において、BMP4の免疫染色を行ったところ、非癌部の線維芽細胞に比べて、癌周囲の線維芽細胞に多く染色された。BMP4の刺激を線維芽細胞に加えたところ、IL-6やIL-8などの炎症性サイトカインの発現が上昇し、p16やp21などの老化マーカーの発現も増えた。BMP4強制発現株でも同様の所見がえられ、CAFに対してBMP4を発現抑制した場合は逆の変化が確認された。また、NFに対して、BMP4強制発現株を作成し、発現遺伝子や発現タンパクを比較したところ、BMP4強制発現によりサイトカインの発現が上昇し、老化マーカーの発現や線維化マーカーの発現が増強した。逆に、CAFにBMP4のshRNAを導入し、BMP4発現抑制株を作成し比較したところ、BMP4の発現を抑制することによって、サイトカインの発現、線維化マーカーの発現、老化マーカーの発現はいずれも低下した。以上のことから、肝臓の線維芽細胞において、BMP4はサイトカインの発現、線維化マーカーの発現、老化マーカーの発現を制御する因子の一つであり、肝癌においてはCAF化するために重要な因子であることが明らかになった。本研究については、2018年JDDWで学会発表し、また、2019年にJournal of Gastroenterologyに論文がアクセプトされている。市販のエクソソーム分離キットを用いて、培養上清からエクソソームの分離を行った。エクソソームの表面マーカーの発現をウエスタンブロットにて確認し、エクソソームが抽出できていることを確認した。抽出したエクソソームを肝癌細胞株に添加し、細胞増殖、遊走能、浸潤能に関する影響を確認したところ、癌関連線維芽細胞(CAF)から抽出したエクソソームを加えた場合、遊走能と浸潤能が促進された。細胞増殖については変化は認めなかった。以上のことより、癌関連線維芽細胞のエクソソームは、癌細胞の遊走や浸潤を促進することが明らかとなった。また、培養上清中のサイトカインについてサイトカインアレイを用いてCAFにおいて増加しているサイトカインを検索したところ、IL-6,IL-8、GROa等の増加が確認された。ヒトの切除標本から線維芽細胞の分離培養に成功し、in vitroにおける機能分析も行えている。今後は、遊走や浸潤の促進に作用している分泌タンパクやmiRNA等の検索を行い、新たな治療標的の探索を行える。CAFのエクソソームの肝癌細胞株への機能解析はある程度すすんでおり、今後はエクソソームをmiRNAの網羅的解析や含有するタンパクの網羅的解析を行い、具体的な機能分子を探索する。

それにより得られた分子に関して、過剰発現モデルや発現抑制モデルを作成し、CAFにおけるその分子の意義や役割について明らかにして、治療標的として可能性について評価する。
ルーマニアとモルドバにおけるブルガリア系住民の言語保持に関する社会言語学的研究

本研究は、ルーマニア、及びモルドバのマイノリティであるブルガリア系住民のブルガリア語方言の言語使用の実態と言語保持のしくみについて、フィールドワークの手法を用いて、社会言語学の観点から体系的に明らかにすることを目的とする。現地調査によって一次資料を収集し、それをもとに体制転換後のルーマニア・モルドバ両国におけるブルガリア系住民の現在の言語状況の記述・分析を行う。また、両国のブルガリア語方言の現状を踏まえて、マイノリティであるブルガリア系住民の言語文化の保持の問題について、言語政策や言語意識などの社会言語学的な要因に注目し、両国の状況の比較を踏まえた検討・考察を行う。
安定同位体-メタゲノムテクノロジーの融合による新規有用遺伝子の探索と利用

メタンモノオキシゲナーゼは、メタン→メタノールを常温常圧下で触媒することから、産業上きわめて価値が高い。しかし既知のタンモノオキシゲナーゼ遺伝子は大腸菌での発現が極めて弱く、実用化には至っていない。そこで申請者は発想を逆転させて、既得の遺伝子の発現を試みるのでは無く、「大腸菌で発現可能な遺伝子」を直接自然界から探し出すことを考えた。昨年度、メタン資化生菌のDNAのみを^<13>Cに置き換えることを目的に、各種土壌サンプルを^<13>Cでラベルしたメタン存在下に暴露後、全DNAを抽出し、超遠心により^<13>C-DNAを選択的に回収して、メタン資化性菌のみからなるメタゲノムライブラリーを構築した。本ライブラリから16SrDNAを増幅、クローン解析を行った結果、未知の新規メタン資化性菌が多数含まれていることを確認した。次にここからスクリーニングに十分な長さの遺伝子断片を回収し、大腸菌に導入するための基本技術を確立した。今年度はこのライブラリーからhybridization法によりメタンモノオキシゲナーゼオペロンの取得を行った。その結果、5,000クローンのライプラリーから1種類の新規なparticulate MMOの取得に成功した。土壌1グラム中には10^8の微生物がいるといわれているが、実は人間の手で培養可能な微生物はその数%に過ぎない。近年「メタ(超)ゲノム」スクリーニングと呼ばれる新たな概念と手法が広まりつつある。古典的なスクリーニングでは通常微生物を探すが、この方法では土壌より直接DNAを抽出し(メタゲノム)、これを大腸菌に組み込んで発現させ、この大腸菌に対してスクリーニングを行う。この方法によって、培養不可能な微生物由来の有用酵素遺伝子を直接得ることができる本研究では培養不可能な微生物からの有用遺伝子を、メタゲノムスクリーニングに安定同位体を組み合わせることにより効率的に取得することを目的としている。ターゲットとする酵素には、産業上有用な酵素ではあるが大腸菌での遺伝子発現が困難であるため、遺伝子改変や大量発現等の実用化プロセスに移行できない可溶性メタンモノオキシゲナーゼ(sMMO)を取り上げた。メタン資化生菌のDNAのみを^<13>Cに置き換えることを目的に、各種土壌サンプルを^<13>Cでラベルしたメタン存在下に暴露し、最適な結果を得るためのメタン濃度、暴露期間についての検討を行った。ここから全DNAを抽出し、超遠心により^<13>C-DNAを選択的に回収して、メタン資化性菌のみからなるメタゲノムライブラリーを構築した。本ライブラリから16SrDNAを増幅し、クローン解析を行った結果、未知の新規メタン資化性菌が多数含まれていることを確認した。また、またゲノムライブラリから当該遺伝子を含むクローンを効率的に検出する手法を検討した。