hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ラットMUC2mucin遺伝子のクローニングとプロモーターの機能的解析

気道分泌亢進における気道上皮杯細胞および粘液細胞の病的増加には、Mucin遺伝子の発現が重要な役割を果たしており、この発現調節機構を探るため、気道と腸管で発現するラットMUC2 mucin cDNAおよびgenomic DNAをクローニングした。ラットMUC2 mucin遺伝子プロモーター領域には、TATA boxおよびSP-1,NF-kB,AP-1などの転写制御因子の認識可能なエレメントを認めた。Mucin遺伝子の転写調節機構について検討するため、遺伝子上流域のプロモーター活性をCAT assayを用いて調べた。転写開始点より上流859bpより順次欠失させたプロモーター領域をレポータープラスミドとしてクロラムフェニコールアセチル化酵素(CAT)の上流に接続し、ムチン産生ヒト大腸腺癌細胞株(HM3胞)、自然にトランスフォームしたラット気管上皮細胞株(SPOC1細胞)およびネガティブコントロールとしてマウス線維芽細胞(NIH3T3細胞)にエレクトロポレーション法によりトランフェクションしCATassayを行った。腸管において、プロモーター活性はプロモーターの方向性に依存することがわかった。859bpより295bpさらに、186bpまで欠失させるとCAT activityは低下し、転写開始点より上流の295bpから186bpまでの間には転写活性を正に制御する領域(positive acting region)の存在が示唆された。98bpより3'側の部位には基本調節エレメントの存在が示唆された。ラットの気管上皮細胞であるSPOC1細胞においては、腸管とは違うパターンの活性を認め、98bpより上流には転写に対し抑制的に働く因子の存在が示唆された。気管において、98bpより下流の領域が転写活性に重要な役割を持っていると考えられた。これらの結果より、rMUC2ムチンは腸管と気管においてそれぞれ異なる組織特異的転写調節機構が存在する可能性が考えられた。
中国思想文献の近世日本社会への伝来とその流通-新儒教と医学思想の文献を中心として

日本を含む東アジア社会を考察するために欠くことのできない新儒教思想(朱子学・陽明学)及びそれと関連のある中国医学の基本文献を対象に研究を行った。朱子学・中国医学では、『朱子語類』・『格致餘論』について、詳細な注を付した平易な現代日本語訳を発表し、一般読書人にも利用しやすいものとした。陽明学では、基本文献の書誌情報や所蔵状況を精査することを通して既知の文献の見直しや新文献の発見を行い、この方面の研究の進展に貢献した。本年度は初年度であり、まず研究対象とする個々の思想家・医学家の基本テクストに関する資料の調査・収集・整理及びその訳注作成に対する基礎作業を中心的に行った。前者については、永冨・難波を平成17年12月から翌2月にかけて3度中国に派遣し、上海図書館、浙江省図書館、湖南省社会科学院図書館、雲南大学図書館の調査を行い、王守仁・劉宗周関係資料を複写・収集した。現在、収集した資料の整理を進めており、順次その成果を発表する予定である。また、この資料の調査・収集と同時に、湖南省社会科学院・岳麓書院等現地の研究機関の研究者と学術交流も行った。後者については、『朱子文集』『朱子語類』の訳注作成と公刊について、垣内・恩田で注の項目・引用文献、技術的な側面等について随時検討を行った。その検討結果に基づき、垣内・恩田が従来から関わり、本科学研究費補助金以前に既に多くの部分が発表されている『朱子語類』巻一三の訳注を整理・公刊するための作業を進めた。この訳注は平成18年度中に刊行する予定であるが、本科学研究費補助金における『朱子語類』の訳注の雛型となるものである。また、医学-思想領域においては、長谷部を中心に恩田が加わり朱震亨『格致余論』の訳注作成に着手した。平成17年11月、平成18年1月、3月の3回にわたって、横浜国立大学において研究組織外の研究者・大学院生も交えて訳注の検討会を開き、「秦桂丸論」「経水或紫或黒論」「石膏論」「脈大必病進論」「生気通天論病因章句弁」「相火論」「悪寒非寒病悪熱非熱病論」「〓逆論」「房中補益論」の諸編についてその訳注の検討を行った。これらのいずれについても、個別論文の他、平成19年度までにまとまった研究報告を公表する予定で研究を進めている。この他、他研究組織の研究者と平成18年度以降の共同研究集会開催について打ち合わせと検討を行った。昨年度に引き続き研究対象とする個々の思想家・医学家の基本テクストに関する資料の調査・収集・整理を行い、その一部にっいて訳注作成作業を進めた。前者については、永冨・難波を平成18年8月に中国安徽・四川省、平成19年2月に台湾に派遣し、安徽省博物館、四川大学、四川省図書館、台湾・故宮博物院等の調査を行い、王守仁・陽明学関係の資料を収集し、整理を行った。これまでの調査によって得られた知見も盛り込んだ単著を永冨が平成19年3月に刊行する予定である。また、永冨・難波は、平成18年9月に中国湖南省で開催された第1回周敦噸国際学術思想研討会に司会等で参加し、これまでの研究成果を披瀝した。後者について、朱子学関係においては、垣内・恩田が『朱子語類』巻一三の訳稿の修正を続け、本年度内でほぼ終了した。現在刊行準備中であり、これが本科学研究費補助金における『朱子語類』の訳注の雛型となる。また、医学-思想領域においては、長谷部を中心に恩田が加わり朱震亨『格致余論』の訳注作成を昨年度に引き続き行った。平成18年7、10、12月の3回にわたって横浜国立大学において研究組織外の研究者・大学院生も交えて訳注の検討会を開き、「倒倉論」「左大順男右大順女論」「茄淡論」「天氣属金説」「張子和攻撃注論」の諸編についてその訳注の検討を行い、『格致余論』の訳稿の第1稿が出そろった。その他、朝鮮思想班と共催で第1回東アジア医学史検討会を平成19年1月に東京大学文学部で主催し、秦玲子氏(米国ウイスコンシン大学オークレア校)、朱建平氏(中国中医科学院医史文献研究所)の研究発表を行った。なお、秦玲子氏は『格致余論』の訳注の担当者でもある。この他、他研究組織の研究者との平成19年度における共同研究集会開催について検討と打ち合わせを行い、その準備に着手した。昨年度に引き続き研究対象とする個々の思想家・医学家の基本テクストに関する資料の調査・収集・整理及び訳注作成を行い、その一部について成果を発表した。

資料の調査・収集・整理については、永冨が平成19年79月に大英図書館、大英博物館、ケンブリッジ大学図書館、オックスフォード大学図書館、フランス国立図書館、パリ大学図書館の調査、平成19年11月に台湾・故宮博物館、中央図書館、中央研究院の調査、平成20年2月に北京大学、清華大学、中国人民大学の調査を行い、王守仁・陽明学関係の資料を調査・収集し、整理を行った。永冨は、整理を行った。永冨は、平成19年11月に台湾で行われた国際学術検討会及び平成20年1月に行われた文献資料部門のシンポジウムにおいて、昨年度の調査で発見した新資料について報告を行った。また、難波は平成19年8月に致道館・上杉博物館・日新館の調査、平成20年1月大坂の調査を行い、近世日本における新儒教思想の拡がりと、その藩校・私塾等における教育への影響について資料を調査・収集し整理を行った。資料の訳注作成については、朱子学関係において、垣内と恩田が『『朱子語類』巻一三訳注』を平成19年7月に刊行した。これは本科学研究費補助金における『朱子語類』の訳注の雛型とするものである。また、医学-思想領域においては、長谷部を中心に恩田及び研究組織外の研究者・大学院生も交えて、平成19年8月に『格致余論』の訳注の最終修正を行い、9月に研究報告として刊行した。平成20年1月からは、同じく朱震亨の『局方発揮』の訳注作成を開始している。なお、平成19年7月に予定していた、本研究による新資料と従前の陽明学研究との関連を検討する研究集会は、研究組織外の参加予定者の都合により、平成20年度以降に延期した。この他、他研究組織の研究者との平成20年度における共同研究集会開催について検討と打ち合わせを行った。昨年度に引き続き研究対象とする個々の思想家・医学家の基本テクストに関する資料の調査・収集・整理及び訳注作成を行い、その一部について成果を発表した。資料の調査・収集・整理については、永冨が平成20年9月にベルリン、平成21年2月に北京において調査を行い、王守仁・陽明学関係の資料を調査・収集し、整理行った。また、難波は平成20年8月にケンブリッジ大学、9月にベルリン図書館、ベルリン自由大学、フンボルト大学、11月に韓国安東・陶山書院において調査を行い、劉宗周・朱子学・陽明学関係、及び東アジアの書院教育、それとの比較対象としての西ヨーロッパの大学の教育、制度等についての資料を調査・収集し、整理行った。資料の訳注作成については、朱子学関係においで、垣内が『論叢アジアの文化と思想』(『朱子語類』訓門入研究会、巻115116)に、恩田が『汲古」(宋明研究会、巻94)に連載中の『朱子語類』の訳注に成果を発表した。これに加えて、平成21年度の刊行に向けて、恩田が『朱子語類」巻8、垣内が同書巻12・13の訳注稿作成の準備を進めた。また、医学-思想領域においては、長谷部を中心に恩田及び研究組織外の研究者も交え、平成20年1月から開始した朱震亨『局方発揮』の訳注作成を進めた。同時に、平成19年度に研究報告として刊行した間『格致余論』の訳注を出版するための修訂作業に着手した。この他、平成20年12月には重点項目「東アジアにおける<訓読>の思想文化」シンポジウム「儒学テキストを通しでの近世的思考様式の形成-日中における対照的研究-」を、大阪大学中之島センターにおいて日中儒学班・小説芸能班と共催した。同シンポジウムでは垣内がコメンテーターを務めた。研究期間の最終年度であるので、これまでの研究成果をまとめ、公表するシンポジウムを主催した。ただし、研究は今後も継続されるため、研究対象である基本テクストに関する調査及び訳注作成等は昨年度までと同様に行つた。海外における資料調査については、永冨が平成21年7月に上海・寧波、平成21年8月、12月、平成22年2月に北京の大学・図書館・博物館等において陽明学関係資料の調査を、難波が平成21年8月に韓国の紹修書院・陶山書院・屏山書院において書院関係資料の調査を行った。
てんかん発作発現に関わる海馬神経回路の形態学と機能に関する研究

てんかん発作と海馬の苔状線維の発芽について検討し、つぎの結果をえた。1.E1マウスにおける苔状線維の発芽:E1マウスは遺伝性てんかんモデルで、このモデルにおけるけいれん発作は海馬に起源すると考えられている。しかし、E1マウスでは、けいれんの前後のいずれにおいても苔状線維の発芽は観察されなかった。このことは、E1マウスにおける海馬のてんかん源性の獲得には苔状線維の発芽は関与していないことを示している。つまり、E1マウスはてんかん発作発現と苔状線維の発芽との関連性を知るうえでのモデルにはなりえない。2.扁桃核キンドリングに与える顆粒細胞破壊の効果ーWistar系とSD系の比較ー:顆粒細胞の破壊はWistar系のキンドリング形成速度には影響を与えなかった。しかし、キンドリング完成後に顆粒細胞を破壊するとけいれん発作の発現が抑制された。一方、SD系では顆粒細胞の破壊によりキンドリング形成速度が著明に遅延した。しかし、キンドリング完成後の顆粒細胞の破壊はけいれん発作の発現に全く影響を与えなかった。Wistar系ではCA3/CA4上昇層には苔状線維は投射していない。しかし、キンドリング後にはこの領域に苔状線維が発芽してくる。一方、SD系ではキンドリングを行わない正常の状態でCA3/CA4上昇層に苔状線維が分布している。従って、CA3/CA4上昇層に分布する苔状線維は辺縁系発作の全般化に重要な役割を担っていることが示唆される。3.苔状線維の発芽に対応した樹状突起の変化:一般に、苔状線維の発芽は歯状回において最もよく観察される。この部位ではMAP2の免疫反応性が著明に増大していた。MAP2は樹状突起に特異的に存在することから、これは苔状線維の発芽に対応して樹状突起も増加していることを示唆する重要な所見と考えられる。最近、カイニン酸で誘発したけいれんや辺緑系キンドリングによるけいれんを経験したてんかんモデルの海馬において、苔状線維が著しい発芽を示していることが明らかにされた。その後、同様の所見がてんかん患者の脳においてもみいだされ、てんかん発作発現に関わる苔状線維の発芽のもつ機能的意義に関心が寄せられている。本研究では、dibutyry1-cAMP(ab-cAMP)を扁桃核に注入して誘発したてんかん重積モデルを用いて、(1)苔状線維の発芽の状況と、(2)苔状線維の起始細胞である顆粒細胞破壊の効果について検討した。実験動物としてウィスタ-系雄性ラットを用いた。(1)苔状線維の発芽の状況を検討するため、db-cAMPを左側扁桃核に注入してけいれん重積状態を誘発した。その後、Timm染色で苔状線維を可視化して発芽の状況を検索した。(2)顆粒細胞破壊の効果をみるため、コルヒチンを海馬に注入して両側または左側の顆粒細胞を破壊した。その後、左側扁桃核にdb-cAMPを注入し、誘発された発作症状と脳波を観察した。結果は次のようであった。(1)けいれん重積状態を経験したラットでは、両側の海馬歯状回のsupragranular layerに著明な苔状線維の発芽が認められた。(2)顆粒細胞を両側性に破壊すると、db-cAMPの扁桃核注入による辺緑系発作の全般化が著明に遅延し、海馬の刺激症状であるwet-dog shakeが完全に抑制された。

しかし、このような効果は、注入側のみの顆粒細胞の破壊では不確実であった。また、Timm染色を行うと非破壊側歯状回に苔状線維の発芽が認められた。以上のことから、辺緑系発作の全般化には、両側の顆粒細胞が関与しており、このことが、歯状回の苔状線維の発芽に重要であることが示唆される。てんかん発作と海馬の苔状線維の発芽について検討した。平成5年度にえられた研究成果の概要はつぎのようである。1)E1マウスにおける苔状線維の発芽:E1マウスは遺伝性てんかんモデルで、このモデルにおけるけいれん発作は海馬に起源すると考えられている。しかし、E1マウスでは、けいれんの前後のいずれにおいても苔状線維の発芽は観察されなかった。このことは、E1マウスにおける海馬のてんかん源性の獲得には苔状線維の発芽は関与していないことを示している。つまり、E1マウスはてんかん発作発現と苔状線維の発芽との関連性を知るうえでのモデルにはなりえない。2)扁桃核キンドリングに与える顆粒細胞破壊の効果-Wistar系とSD系の比較-:顆粒細胞の破壊はWistar系のキンドリング形成速度には影響を与えなかった。しかし、キンドリング完成後に顆粒細胞を破壊するとけいれん発作の発現が抑制された。一方、SD系では顆粒細胞の破壊によりキンドリング形成速度が著明に遅延した。しかし、キンドリング完成後の顆粒細胞の破壊はけいれん発作の発現に全く影響を与えなかった。Wistar系ではCA3/CA4上昇層には苔状線維は投射していない。しかし、キンドリング後にはこの領域に苔状線維が発芽してくる。一方、SD系ではキンドリングを行わない正常の状態でCA3/CA4上昇層に苔状線維が分布している。従って、CA3/CA4上昇層に分布する苔状線維は辺縁系発作の全般化に重要な役割を担っていることが示唆される。3)苔状線維の発芽に対応した樹状突起の変化:一般に、苔状線維の発芽は歯状回において最もよく観察される。この部位ではMAP2の免疫反応性が著明に増大していた。MAP2は樹状突起に特異的に存在することから、これは苔状線維の発芽に対応して樹状突起も増加していることを示唆する重要な所見と考えられる。
逐語訳つき日本語作文コーパスによる意図と産出の対応を意識した日中韓の対照分析

平成30年度は主に「作文の収集」を行った。日本国内で日本語を学習している中国語母語話者・韓国語母語話者(各60名、計120名)に、日本語作文(1000字)と、その中国語訳文・韓国語訳文(逐語訳)を執筆してもらった。執筆者の身分は日本の大学あるいは大学院に在籍している者とし、日本語レベルの条件は日本語能力試験N1合格以上とした。執筆を依頼するにあたって「作文収集システム(執筆用WEBサイト)」を構築し、これを利用して自宅等で作文を執筆してもらった。このサイトは以下のような仕様とした。1日本語および中国語・韓国語が滞りなく入力できる。2コピー&ペーストや予測変換などができない。3完成した作文はWEB上でファイル化され、それをEメールで送信してもらう。執筆してもらう作文のジャンルは、その分析の目的に応じて、以下の3つとした。1説明文:あなたの好きな母国の“ことわざ"について説明してください。⇒基本的な文法項目がバランスよく出現することが期待されるため、主に文法項目の分析資料として適する。2描写文:あなたの尊敬する恩師(学校の先生など)とのエピソードを描写してください⇒尊敬語や謙譲語をはじめ、さまざまな敬語が抽出できることが期待されるため、主に待遇表現項目の分析資料として適する。3物語文:4つの絵(執筆者には別途提示)を見て、自由にストーリー(物語)を作ってください。ただし(それぞれの絵に付した)数字の順番は変えても構いません。⇒比喩表現の他にも、文学的表現なども抽出できることが期待されるため、主に表現項目の分析資料として適する。以上を整理すると、収集する作文の目標本数は、合計240本となる。当初の予定では、平成30年度内に、合計240本(日本語作文120本+訳文120本)の作文を収集する予定であった。中国語母語話者の作文は114本(日本語作文57本+訳文57本)収集することができ、おおむね順調に進展した。しかし、韓国語母語話者の作文は48本(日本語作文24本+訳文24本)を収集するに留まった。これは、作文執筆者の資格として「日本の大学あるいは大学院に在籍していること」という条件を課したことによる。日本の大学あるいは大学院に在籍している韓国語母語話者の人数は、中国語母語話者に比して少なく、執筆者を確保することに難航したからである。平成31年度になり、韓国語母語話者の新入生が候補者となり得るので、早急に残りの作文を収集したい。平成31年度は、前項で述べたように、作文の収集を完了させることを、第一の目標とする。これは夏季休暇の前に終わらせたい。この作文の収集と並行して、当初の予定通り、以下の作業も進めていく。まず、収集した作文をデータ化していき(収集したものから順次)、その処理を行う。その際には、作文コーパスの検索でヒットさせるため、誤用を正用に修正する。ただし、誤用の分析にも本コーパスを利用できるようにするため、もとの誤用を追跡できるようにして「誤用タグ」を付しておく。最後に、それぞれの解析結果が出そろった時点で、本研究課題の目的に合わせて詳細な品詞体系のタグ付けを行う(例えば、Mecab(IPA品詞体系)では「は」と「も」は「係助詞」情報タグが付されるだけである)。最終的に整理されたデータは、作文コーパスの検索システム用にSQLデータベースに格納する予定である。

当初の予定では、平成30年度内に、合計240本(日本語作文120本+訳文120本)の作文を収集する予定であった。中国語母語話者の作文は114本(日本語作文57本+訳文57本)収集することができ、おおむね順調に進展した。しかし、韓国語母語話者の作文は48本(日本語作文24本+訳文24本)を収集するに留まった。これは、作文執筆者の資格として「日本の大学あるいは大学院に在籍していること」という条件を課したことによる。日本の大学あるいは大学院に在籍している韓国語母語話者の人数は、中国語母語話者に比して少なく、執筆者を確保することに難航したからである。平成31年度になり、韓国語母語話者の新入生が候補者となり得るので、早急に残りの作文を収集したい。平成31年度は、前項で述べたように、作文の収集を完了させることを、第一の目標とする。これは夏季休暇の前に終わらせたい。この作文の収集と並行して、当初の予定通り、以下の作業も進めていく。まず、収集した作文をデータ化していき(収集したものから順次)、その処理を行う。その際には、作文コーパスの検索でヒットさせるため、誤用を正用に修正する。ただし、誤用の分析にも本コーパスを利用できるようにするため、もとの誤用を追跡できるようにして「誤用タグ」を付しておく。最後に、それぞれの解析結果が出そろった時点で、本研究課題の目的に合わせて詳細な品詞体系のタグ付けを行う(例えば、Mecab(IPA品詞体系)では「は」と「も」は「係助詞」情報タグが付されるだけである)。最終的に整理されたデータは、作文コーパスの検索システム用にSQLデータベースに格納する予定である。以上のような経緯によって、次年度使用額が生じた。平成31年度(令和元年度)となり、韓国語母語話者の新入生が候補者となり得る。早急に残りの作文を収集することによって、これらの金額を使用する計画である。
草津白根火山の熱水循環・マグマ供給システムの描像

土壌気体水銀(GEM)放出率測定方法を構築して,箱根火山大涌谷噴気地において観測試験を行い,有効性を確認した.この結果に基づき,草津白根火山においてGEM観測を2017年に行った.その結果,将来噴火口になり得る破砕帯に相当すると思われる,高GEM放出域を白根火砕丘の南および南西斜面に見出した.また,地質調査に基づき,白根火砕丘南側から本白根山にかけて,過去に爆発的噴火が繰り返し発生してきたことが判明した.既存の物理観測網は湯釜火口湖を取り囲むように配置されている.現状よりも南側領域における観測点の整備が,今後の草津白根火山の監視上の課題である.地質調査は,本白根火砕丘本体とその山麓部で行った.調査の結果,これまで単成火山と考えられていた本白根火砕丘が,1活動時期の異なる複数の火砕丘から構成される火砕丘群であること,2各火砕丘が固有の組成をもつマグマの噴出で特徴付けられ,活動が溶岩流期,火砕丘本体形成期,火口拡大期からなること,3火砕丘の活動が南から北へ移動したことが明らかになった.山麓テフラに挟在する炭質物の14C年代測定と,全岩組成により火砕丘本体構成物と山麓テフラの対比により,約5000年前に鏡池火砕丘本体が形成されたこと,約1500年前まで鏡池北火砕丘で活動が起きていたことが明らかになった.このように,本火山の完新世噴火履歴の全容が順調に解明されつつある.熱観測については,本白根火砕丘の鏡池付近で1m深さ地中温度測定をおこなった.それ以前に実施した予察的な調査と併せて検討した結果,周辺よりも温度の高い領域が帯状に存在していることや,その領域が従来まで知られていたよりも更に東方へと伸びていることが明らかとなった.これらは現在の同火砕丘の浅部熱水活動を反映しているか,あるいは伏在断層の存在を反映しているものと考えられる.草津白根火山の山頂部を構成する火砕丘(群)のうち,本白根火砕丘(群)の噴火履歴は平成27年度の調査(火砕丘本体調査と山麓テフラ調査)でほぼ解明された(濁川・他,2016).現在,この研究成果の論文公表のための準備を進めている.また,山麓テフラについては,この地域の指標テフラであり,本白根火砕丘群鏡池火砕丘を噴出源とする12Lテフラ層について全岩組成,粒度組成,粒子形態を重点的に解析しており,そのデータを基に火砕丘の形成発達過程が解明されつつある(亀谷・他,2015).また,山麓テフラ層に含まれる変質鉱物(粘土鉱物)の分析も平成27年度冬から開始しており,テフラ層中の粘土鉱物種とその組み合わせに多様性があることが明らかになり,地下の爆発深度近傍の熱水系の性質や発達過程についての重要な知見が得られつつある(亀谷・他,2015).一方,地球化学的調査については,土壌水銀を計測する装置について,当地で測定を実施するに当たり,感度がやや不足していることが分かった.そのため,次年度は新たに捕集ユニットを導入することで,本格的な調査を行うこととした.草津白根火山の熱水循環系とマグマ供給システムの発達過程を明らかにするために,本年度は近年に水蒸気噴火を繰り返し起こしている白根火砕丘群について詳細な地質調査と噴出物の岩石学的解析を行った.白根火砕丘群を取り囲むように数地点で手掘りトレンチ調査を行い,噴火堆積物の間に挟在する黒土や材試料の年代を測定した結果,約10,000年前にはマグマ噴火による火砕丘群の形成が始まっており,約1100年前頃には既に水蒸気噴火の活動期に入っていたことが明らかになった.白根火砕丘群東麓では大規模トレンチ調査も行い,弓池マールからのサージ堆積物を始め計約20層の噴火堆積物が確認できるなどの成果を挙げることができたものの,黒土や材試料を採取できなかったため各噴火堆積物の年代決定には至らなかった.白根火砕丘群の活動初期に噴出した2枚の溶岩流についての岩石学的解析からは,各溶岩の成因にデイサイト質マグマと苦鉄質マグマの混合が重要な役割を果たしていることが明らかになるなど,マグマ供給システムの描像を行う上で重要な知見も得られた.このほか,熱水系流動経路や浅部地下構造を反映する土壌水銀放出率の測定を行うため,原子吸光法に基づく水銀測定装置を導入している.本年度は,さらに金アマルガム捕集ユニットを追加し,測定精度を大幅に改善させた.ただし,本装置は濃度を測定するものであり,従来提案されていた測定手法も経験的である.そこで,草津白根山で観測を行う前段階として,測定システムを数値モデル化し,計測条件を定量的に検討した.更に,本装置で測定された濃度から,当地における単位面積時間あたりの放出率へと換算する計算手順を定量的に示した.以上の結果に基づき,箱根火山において測定試験を行った.その結果,地熱域へ向かって水銀放出率が増加する様子が捉えられた.前年度までの本白根火砕丘での調査に引き続き,本年度は白根火砕丘における地質調査を本格的に開始した.これにより山頂域と山麓域におけるテフラの対比が進んだこと,山麓域において複数の炭化物を見出して年代測定が実施できたことで,草津白根火山の活動履歴に対して時間軸が入りつつある.

更に,重機を用いたトレンチ掘削調査により,これまで成因時期が不明であった弓池マールに関連するサージ堆積物を見出したことは特筆に値する成果である.弓池付近は観光地化されており,その活動履歴を解明することは,今後の火山防災計画策定にも大きく貢献するであろう.また,水蒸気噴火発生場に関係する熱水活動を捉えるための土壌水銀放出率測定についても,測定精度の大幅な向上がなされ,更に測定手法の数値的検討が進んだ.本年度は,浅部熱水流動が比較的よく分かっている箱根火山・大涌谷周辺で試験観測を行い,地熱活動の中心域へ向かって,土壌水銀放出率が増加してゆく様子が捉えられた.このような傾向は地中温度観測では認められず,浅部熱水活動を把握する手段としての有効性が示された.以上の通り,研究計画は当初目的に沿って順調に進んでいる.一方で,草津白根火山の活動活発化による立ち入り規制が長引いており,本調査もいくつかの制約の元に実施されている.そのため,当初見込みよりもやや進捗が緩やかで,論文として取りまとめるための,こまやかなデータ収集がやや遅れている.草津白根山の噴火履歴を明らかにし,将来起きる得る噴火のリスクを評価するため,重機を用いた掘削調査を行った.この結果,同山に見られる多数の火砕丘やマール・火口列の形成年代,噴火の地点・頻度・規模などの一部を明らかにした.すなわち,湯釜火口湖を有する白根火砕丘群において,近年,大規模な水蒸気噴火が発生していたことを初めて認識した.引き続き,弓池マールで約1400年前にマグマ水蒸気噴火が発生し,約1000年前から白根火砕丘群の南山腹の火口列が形成されはじめ,そして近年のようなの小規模水蒸気噴火期へと推移した.大規模な熱水系が発達する一方で,その近傍でマグマの噴出も起きており,数千数百年という短期間かつ狭隘な空間で異なる噴火様式・火口位置の噴火が発生するなど,火山防災上きわめてリスクの高い火山であることが明らかとなった.前年度までの調査の結果,本白根火砕丘群においてはマグマ噴火が繰り返されてきたことが判明し,物理観測強化に向けた取り組みを開始していた.しかし,2018年1月の噴火では犠牲者を出す結果となった.これに先立つ2014年以降,白根火砕丘群では地殻変動が観測されていたことから,DD法に基づく精密震源決定を実施した.その結果,両火砕丘群の地震活動に時間・空間的な関連性がないことが示唆された.両火砕丘群で過去に噴出してきたマグマの化学組成は類似する一方,水蒸気噴火を起こす熱水供給場は複雑である.多点土壌気体水銀放出量の測定は,より噴火リスクの高いと判断していた白根火砕丘群で2017年に行った.その結果,前述の南山腹火口列付近において,周辺よりも明瞭に高い水銀放出量域を見出した.これらの領域は将来噴火を起こす場所と考えられる.それは植生や地中温度分布では認識できず,引き続き水銀の繰り返し観測を継続するとともに,本白根火砕丘群でも測定を実施する.土壌気体水銀(GEM)放出率測定方法を構築して,箱根火山大涌谷噴気地において観測試験を行い,有効性を確認した.この結果に基づき,草津白根火山においてGEM観測を2017年に行った.その結果,将来噴火口になり得る破砕帯に相当すると思われる,高GEM放出域を白根火砕丘の南および南西斜面に見出した.また,地質調査に基づき,白根火砕丘南側から本白根山にかけて,過去に爆発的噴火が繰り返し発生してきたことが判明した.既存の物理観測網は湯釜火口湖を取り囲むように配置されている.現状よりも南側領域における観測点の整備が,今後の草津白根火山の監視上の課題である.
物理的環境(磁場・電場)の生体影響

磁場・電場の生体影響研究は最近になってかなりの広がりを見せてきたが、その中で本研究班の特徴は、(1)学際的な協力関係のもと、(2)生体の素反応についての物性的な視点に立ち、(3)曝露強度ー反応量関係の定量的検討を行った点である。本班の成果の主なものを以下に挙げる。(A)血液中の赤血球挙動に対する磁場効果:1T前後の不均一磁場下で常磁性赤血球の牽引が確立され(志賀ら)、引続き3ー4Tの均一磁場中での反磁性赤血球の配向が明らかになり(伊達ら)、いずれも通俗解説で強調されているようなローレンツ力による効果とは異なるメカニズムによることを確かめた。現行の磁場安全基準が職業人について低目に抑えられている1つの根拠として、脱酸素化した鎌状赤血球の磁場内配向の実験があるが、実験・理論共に未完成であり、血流と磁場との関係を明確に示した点は本研究の一つの成果である。(B)ヒト・培養Tリンパ球の増殖抑制が、6.3T定常磁場で検出された(法村)。これは今後も追求すべき課題である。培養細胞の膜輸送について定常磁場1.6Tまで磁場効果は検出できなかった(宮本)。(C)ラジカル対を中間体とする系の反応速度は磁場によって変化する(谷本)、しかしヘム蛋白と酸素の関係する反応系については現在のところ磁場効果が検出されなかった(飯塚)。(D)電界の安全基準に関連して、周辺環境の湿度による生体作用の変動(松本ら)も従来の考えの盲点をつく結果である。(E)このほか、フィブリン形成に及ぼす強磁場の効果(東ら)、生体内の強磁性体に関する研究(前田)が行われた。
オブジェクト指向属性文法OOAGの記述管理機構の実現に関する研究

本年度の研究目的は以下の2点であった。1.オブジェクト指向属性文法OOAGのによる記述をPCシステム上で実行可能にすること。2.OOAGをどのように利用できるのかを実際のアプリケーション構築---具体的にはOSLトランスレータとコード管理システムの記述で示すこと。この目的に沿い、プログラミング及び実行システムMAGEのコア部分のWindows OS上への移植作業、ODBMSを利用した永続記憶の実現、を順に進めた。1項目めについては、OOAG属性評価器に加えMAGEのネットワークライブラリやサーバもWindows OSにおいてコンパイル・実行可能になった。また、実行中の属性つき木の様子をグラフィカル表示し、属性値情報などの確認機能を持つブラウザもWindows上に移植出来た。これによりWindows OS単体でのOOAG記述のデバッグが可能になったが、現在の状態ではWindows用のトランスレータが未完成でありコード生成することは出来ていない。また、フリー配布版のODBMSであるObjectStore/PSEを用いてのMAGE実行系中のNodeクラスライブラリのプロトタイプが動作し、OOAGの属性つき木を永続記憶上に構築可能とし、属性評価器の実行サイクルとは無関係に永続記憶上でのインクリメンタルな属性評価が可能になった。これによりOOAGの記述管理機構を実現するための基礎システムが動き始めたことになる。現在ノーマルのSTLバージョンとObjectStoreバージョンのライブラリソースコードのマージを進めている段階である。もう一つの目的であった、OSLバージョンのトランスレーションシステム構築は、永続記憶機能の実現に手間を取られ思うように進展させることが出来なかった。ただし、Synthesizer Generatorを属性文法処理系として利用したトランスレータのコードが存在するため、OSLプログラム構造をOSLでそのまま記述することは容易である。しかし、本研究で確かめたかったプログラムのパーズッリーとその属性値としてのオブジェクトコードの群をうまく扱うためのOSL上のプログラミングテクニックを見つけるという点に付いては依然研究途上のままと言わざるを得ない。ODBMSとの融合による永続記憶管理機構の導入とともに、実行システムの不安定さが目立つ状態にあるため、MAGEにより応用システムを実現するにはもう少しシステムの安定性を高める必要がある。MAGEシステムをマルチプラットフォームによる分散的な環境で利用できるようにするための研究を行い、以下の成果を得た。トランスレーションシステムをOSL自身により記述する実験を行ったが、Synthesizer Generator(SG)で実装されている現在のトランスレーションシステムでは、OSL記述のコードサイズが大きくなりすぎ、処理しきれなくなることが判明した。また、現在のOSL構文では、属性宣言の方法などに問題があり、コードサイズの増大、特に属性数の増大にともない、記述性が大変に悪くなることが確かめられた。これに対応するため、OSL言語の記述構造自体の見直しを行い、オブジェクト指向言語的記述構造を導入したOSL+言語の設計を行い、そのトランスレータの実装を現在のSGベースのシステムに組み込んだ。発生した問題に対応できるだけの改良が済んだため、中断しているOSL自身によるトランスレータ実装を完成させる。属性評価器を多くのODBMSで利用できるISO標準のSTLライブラリにより実装した。これにより、多くの処理系で属性評価器を動作させることができるようになると同時に、ODBMSのC++言語インタフェースからほぼそのまま利用できるようになった。今後、ObjectStore PSE,Objectivityなど、パソコン用のフリーで利用できるODBMSを用い、MAGEシステムを用いてODB生成できるところまで実装を進める。
共生および感染免疫に関わる糖質を基盤としたケミカルプローブの合成とその評価

本研究では、合成ケミカルプローブを利用する生物化学、計算化学および分析化学の融合技術に基づいた共生と免疫に関わる糖鎖の機能とそのメカニズムを明らかにすることを目的とした。その結果、共生と免疫にかかわる3種類の糖鎖(サンゴと褐虫藻の共生を仲介するフォルスマン抗原5糖、ヒト自然免疫活性能を有するβグルカン多糖およびリポマンナンリン酸糖脂質)の新規効率的合成法および、その構造活性相関に関わる有益な知見を得た。本研究は、「共生および感染免疫に関わる糖質を基盤としたケミカルプローブの合成とその評価」と題し、ケミカルプローブを利用する生物化学、計算化学および分析化学の融合技術に基づいた共生と免疫に関わる糖質の機能とそのメカニズム解明を目的とした。具体的には、共生と免疫にかかわる3種類の糖鎖(サンゴと褐虫藻の共生を仲介するフォルスマン抗原5糖、ヒト自然免疫活性能を有するβグルカン多糖およびリポマンナンリン酸糖脂質)の構造活性相関とそれが誘起する生物現象メカニズムの解明をめざした。本年度は、サンゴと褐虫藻との共生関係の構築に関わるフォルスマン抗原関連糖鎖の合成を検討した。まず、フォルスマン5糖はαとβグリコシドが交互に繋がった構造をしているため、αグリコシル化とβグリコシル化が連続的に行える脱離基と活性化剤の組み合わせについて検討した。その結果、ヘミアセタールを糖供与体として用いることにより、化学選択的かつα選択的かつα選択的グリコシル化が可能であることを明らかにした。さらに、本反応条件は、続くチオグリコシドの活性化を妨げないことを見出している。本反応を利用したワンポットグリコシル反応により、効率的にフォルスマン5糖保護体を合成した。えら得た保護5糖保護体は、固相脱保護法を適応することにより、簡便に脱保護することに成功している。これらの手法を用いて、フォルスマン5糖誘導体の合成を達成した。得られたフォルスマン5糖の標的タンパク質SLL2への結合評価試験を行ったところ、有意な結合活性が確認された。本年度は、リポマンナンの部分構造であるリン酸糖脂質の誘導体合成を目指した。特に、リポマンナンが有する免疫増強作用おける糖鎖構造の構造活性相関を明らかにする目的で、合成の最終段階で糖鎖部の導入が可能な合成戦略の開発を行った。まず、リン酸ジエステル存在下、水酸基へのグリコシル化反応の反応条件の検討を行った。その結果、イミダート糖に対し、量論量のTMSOTfを用いたと時に、良好な収率で目的物を与えることを明らかにした。続いて、リン酸ジエステルを有する4、6ジオール型のリポマンナン糖受容体に対すいる6位選択的なグリコシル化を検討した。しかしながら、その場合は、複雑な混合物を与えた。一方、6位水酸基のみ遊離な糖受容体を用いた場合には、良好な収率で目的となるグリコシル化体を与えた。本手法を用いて、側鎖部の糖鎖の長さのことなるリポマンナン類縁体4種を合成した。本研究は、「共生および感染免疫に関わる糖質を基盤としたケミカルプローブの合成とその評価」と題し、ケミカルプローブを利用する生物化学、計算化学および分析化学の融合技術に基づいた共生と免疫に関わる糖質の機能とそのメカニズムを解明を目的とした。具体的には、共生と免疫にかかわる3種類の糖鎖(サンゴと褐虫藻の共生を仲介するフォルスマン抗原5糖、ヒト自然免疫活性能を有するβグルカン多糖およびリポマンナンリン酸糖脂質)の構造活性相関とそれが誘起する生物現象メカニズムを明らかにすることを目的としている。本年度は糖鎖ユニットをスペーサーを介して直線状に結合する直線型多糖モデルの合成を検討した。まず、グルカンユニットをトリアゾールスペーサーを介して直列に結合させた直線型βグルカン誘導体の液相合成を行なった。その結果、両末端にアセチレンとアジドを有する4糖ユニットを合成し、順次[3+2]環化付加反応により伸長し4糖を4ユニット含む16糖の合成に成功した。さらに、本手法を用いて、固相上における糖鎖ユニットの結合を検討した結果、固相上にて3糖ユニットを3つ含む9糖誘導体の合成に成功した。また、別途合成した16糖からなるβグルカン誘導体とレセプタ蛋白質Dectin-1との相互作用についてSTD-NMRを用いた解析を行なったところ、グルコースの3位の水素に相対的に強い相互作用が観測された。

このことより、Dectin-1とβグルカンとの相互作用様式における新しい知見が得られた。目的としたフォルスマン5糖の効率合成法を達成している。さらに、得られた5糖が目的の機能を有することも確認しているため。25年度が最終年度であるため、記入しない。フォルスマン抗原5糖類縁体およびβグルカン誘導体の合成法の開発に成功している。さらに、これらの化合物が生物作用を示すことも明らかにしている。得られたフォルスマン5糖誘導体については、今後、生物評価を進めて行くことにより、サンゴの共生に関する知見を収拾する。また、他の生体機能性糖鎖については、合成法の確立をすすめてく。今後は、これらを基盤とした誘導体合成および、合成した化合物の機能評価を進めて行く。
マインドフルネスが回避行動の低減に及ぼす影響：ランダム化比較試験による検討

マインドフルネスとは「意図的に、今この瞬間に、価値判断をすることなく、注意を向けること」と定義される(Kabat-Zinn, 1994)。うつ病や不安症に対しての有効性が実証されつつある。本研究では、マインドフルネスが回避行動の低減に及ぼす影響を明確にし、うつ病や不安症に対する治療の有効性を検討する。そのために、1大学生を対象とした質問紙調査、2コミュニティサンプルに対象を拡大した質問紙調査、3対象者を無作為にマインドフルネストレーニング群と統制群に割付けたランダム化比較試験、を実施する。こうした研究により、回避行動に焦点をあてたマインドフルネスの有用性を明らかにする。
NK細胞のLicensingと活性に関する研究～臨床応用に向けて

KIR分子群はNK細胞が持ち、Licensingにも深く関わることが示唆される一連のIgG様ドメインを持つ細胞膜結合型タンパクで、活性/抑制の種々のシグナルを伝達するが、そのリガンドであるHLAを極めて高精度で認識することが分かっている。しかも個々のNK細胞によってその発現パターンは異なり、例えば6つの分子に着目すると2^64通りのNK細胞が存在することが分かる。我々が開発した高活性NK細胞の増幅培養技術を用い、その活性化の過程でのKIRの発現の変化を詳細に解析した。その結果、特定のKIRの発現を除いて多くのKIRの発現が活性化と共に消失していくことが明らかとなった。即ち、この高活性NK細胞はHLAから受け取るnegative signalが極めて弱いことが示唆されるものの、極めて高い精度で腫瘍細胞と正常細胞とを識別可能であり、35株のCell lineに対する傷害活性を確認した一方で、PBMCやHUVEC等の正常細胞には一切傷害活性を示さなかった。NK細胞が持つ活性化型レセプターのうち、会合分子が持つITAM(細胞内で活性化シグナルを伝達するモチーフ)の数が特に多いのはIgGのFcを認識するCD16を除けばNKp30とNKp46が挙げられる。そこで高活性NK細胞が正常細胞と腫瘍細胞とを高精度に見分けられる理由が、これら活性化型レセプターのリガンド発現パターンにあるという仮説のもと、高活性NK細胞が腫瘍を認識する際にNKp30/p46にどれだけ依存しているかを確認した。その結果は予想に反し、障害活性はいずれの分子のリガンドの多寡とも相関せず、加えてNKG2Dにおいても同様であった。前提としていた高活性NK細胞AdoptCellの培養系は安定してワークし、予定していたKIR発現や傷害活性の確認を順調に進めることが出来た。当初計画に加えてNKG2Dについても検討を加えた。NK細胞が持つ抑制型レセプターは、活性化型レセプター以上に未解明と言える。これまでの研究結果から、Licensingは主に接着系の細胞(恐らく単球)を介して行われている可能性が高い。そこで、HLAのタイピング結果と照らしながら培養行程中のNKのKIR発現パターンをモニタリングすると共に、培養中に接着系の細胞とNKとをHLA/KIRタイピング結果の異なる細胞とスワッピングし、Licensingの状態変化を確認する。ここで、Licensing状態を「傷害活性とKIRの発現量変化」として定義し、今後の評価を進める。これらの研究結果は臨床応用を目指して並行して行われる研究開発へのフィードバックをしつつ進められる予定である。
KIF遺伝子群のタキサン系抗癌剤耐性に果たす役割の解明と耐性克服治療法の開発

タキサン系抗癌剤の耐性メカニズムについて解析した。癌で特異的に発現増強を示していることが確認できた微小管作動性遺伝子であるKIF遺伝子群にフォーカスをあて、さらにタキサン系抗癌剤耐性遺伝子としてKIF4Aを同定した。口腔癌由来細胞株にshRNAを導入し耐性度を算出したところ、親株と比較して耐性の減少を認めた。さらにトランスフォーマントをマウスに移植し解析したところ耐性に関与している事が確認できた。KIF遺伝子は微小管を介して染色体の分離、紡錘体の配置、細胞質分裂に関与する遺伝子であり、紡錘体チェックポイント(SAC)に関係する遺伝子の発現状態をKIF4Aが発現制御していることも確認した。本研究では、マイクロアレイにより癌で特異的に発現増強を示していることを確認できた微小管作動性遺伝子であるkinesinfamily(KIF)遺伝子群にフォーカスをあて、タキサン系抗癌剤に対する作用を明らかにする。さらに、KIF遺伝子群、あるいは遺伝子パスウエイ上でKIF遺伝子群の上流遺伝子に対する阻害剤や発現増強剤を検索・同定し、タキサン系抗癌剤に対する耐性克服治療薬の可能性を検討する。KIF遺伝子群の発現状態を調べたところ、KIF4Aは口腔癌由来細胞株全てにおいて、正常扁平上皮細胞と比較し有意な発現亢進を認めた。KIF4Aの臨床検体における発現の確認を行ったところ臨床検体30例中19例で発現亢進を認めた。real time PCR法の結果よりKIF4Aの発現が増加している癌由来細胞株(HSC-3、Ca9-22)と減弱している癌由来細胞株(Ho-1-u-1,Ho-1-N-1, SAS)を選出した。選出した細胞株を用いてMTS assayを行い、タキサン系抗癌剤に対するIC50を求め、耐性度を算出した。shKIF4A細胞株(HSC-3sh、Ca9-22sh)を作成、遺伝子発現抑制を確認した。これらのshKIF4A細胞株を用いて、タキサン系抗癌剤に対するIC50を求め、耐性度を算出した。親株とshKIF4A細胞株におけるIC50を比較したところ、shKIF4A細胞株のタキサン系抗癌剤に対する感受性の低下を認めた。KIF遺伝子が微小管を介して染色体の分離、紡錘体の配置、細胞質分裂に関与する遺伝子であるので、これらに関係した遺伝子群(BUB1, MAD2, CDC20,cyclin B1)の発現状態を確認したところ、Mockと比較してshKIF4A細胞株のBUB1、MAD2、cyclin B1の発現増強およびCDC20の発現低下を認めた。shKIF4Aをヌードマウスに移植し、増殖能を調べたところ、Mockに比べ、shKIF4A導入細胞株では腫瘍径が有意に減少し、増殖能の減弱が明らかになった(P<0.05)。現在、in vivoで、KIF遺伝子がタキサン系抗癌剤耐性に関わること確認中である。微小管動性遺伝子であるkinesinfamily( KIF)遺伝子群にフォーカスをあて、タキサン系抗癌剤に対する作用を明らかにする。さらに阻害剤を検索・同定し、タキサン系抗癌剤に対する耐性克服治療薬の可能性を検討する。KIF遺伝子群の発現状態を調べたところ、KIF4Aは口腔癌由来細胞株全てにおいて正常扁平上皮細胞と比較し有意な発現亢進を認め、臨床検体30例中19例で発現亢進を認めた。特徴的な発現を認めた口腔癌ン由来細胞株を選出しタキサン系抗癌剤に対するIC50を求め耐性度を算出した。さらに選出した癌由来細胞株にshを導入しトランスフォーマントを作製し、これらのshKIF4A細胞株を用いてタキサン系抗癌剤に対するIC50を求め耐性度を算出した。shKIF4A細胞株のタキサン系抗癌剤に対する感受性の低下を認めた。in vivoでは、shKIF4A細胞株をヌードマウスに移植したところMockと比べshKIF4A導入細胞株では腫瘍径が有意に減少し、増殖能の減弱が明らかとなった。タキサン系抗癌剤を作用させ機能解析を行ったところ、shKIF4AはshMockと比較し増殖能が低下していることを確認した。KIF遺伝子が微小管を介して染色体の分離、紡錘体の配置、細胞質分裂に関与する遺伝子であるので、これらに関係した遺伝子群の発現状態を確認した。阻害剤としてTriamcinolone acetonideを同定し癌由来細胞株に作用させ、KIF4Aが制御されていることを確認した。KIF4Aを耐性遺伝子として同定し、in vitroおよびin vivoで耐性に関与していることを明らかにした。さらに、KIF4A発現を制御するTriamcinolone acetonideを同定し、今後のタキサン系抗癌剤耐性克服薬の開発の糸口になると期待できるのではないかと思われる。

KIF遺伝子は微小管を介して染色体の分離、紡錘体の配置、細胞質分裂に関与する遺伝子であり、紡錘体チェックポイント(SAC)に関係する遺伝子の発現状態をKIF4Aが発現制御していることも確認した。計画通りの研究成果をあげでおり、16のサブファミリーを有するKIF一大遺伝子群の中から口腔癌において影響が考えられるKIF4Aを特定した。KIF4Aの形質転換細胞を作成し、in vitroでKIF遺伝子がタキサン系抗癌剤の耐性メカニズムに関与することを同定した。さらにin vivoで、KIF遺伝子がタキサン系抗癌剤耐性に関わること確認している。医歯薬学今後は、タキサン系抗癌剤作用メカニズムに対するKIF遺伝子群の作用を明らかにする。KIF遺伝子、あるいはKIF遺伝子の上流遺伝子に対する阻害剤や発現増強剤を検索・同定し、タキサン系抗癌剤に対する耐性克服治療薬の可能性を検討する。
膠芽腫に対する新たな治療戦略の開発－低線量放射線高感受性に関する基礎的検討

膠芽腫は最も難治性の中枢神経原発悪性腫瘍である。低線量照射に対する細胞反応は放射線高感受性であることに着目し、基礎的検討を行った。膠芽腫細胞株に対して低線量照射を行い、細胞生存率と細胞周期、アポトーシス誘導を測定した。コロニー形成法による検討では、放射線超感受性を示唆する生存曲線が複数のセルラインで観察された。細胞周期やアポトーシス誘導の変化は検出困難であった。そこで低線量照射を反復して行ったところ、照射間隔が比較的長い(30分)群で細胞生存率の低下が観察され、照射後早期(30分)でG1期分画比率の減少とG2/M期分画の増加、アポトーシス分画の比率の増加が観察され、有効な治療法と考えられた。ヒト由来グリオーマ細胞の複数のセルラインに対して低線量単回照射(0.2Gy、0.4Gy、0.6Gy、0.8Gy)を行い、細胞生存率をコロニー形成法で測定した。線量依存性に細胞生存率の低下が観察され、0.8Gy照射における細胞生存率(3回の平均値)がU_87、LN_229、U_251、LN_428でそれぞれ0.81±0.10、0.89±0.84±0.03、0.86±0.03であった。LN_428における0.2Gy照射時とLN_229における0.4Gy照射時に比較的急峻な生存率低下が見られたが、これはU_87とU_251においては認められなかった。この結果からセルラインによる照射感受性の違いが推測された。他の手法による生存率の確認としてトリパンブルー染色による細胞数測定・生存率測定を複数回施行したが、データのばらつきが大きくプロトコールの再検討が必要と考えられた。これに続いて、反復照射の実験として各セルラインの照射間隔(1分、3分、5分)を変じて0.2Gy×10回の低線量放射線照射を行い、コロニー形成法で生存率を測定した。いずれのセルラインにおいても、照射間隔が長くなるに従って生存率の低下が見られた。さらに、セルラインに対して低線量単回照射(0.2Gy、0.4Gy、0.6Gy、0.8Gy)を行い、フローサイトメトリー法で細胞周期を測定した。明らかなG0/G1期とG2/M期の比率変化は認められなかったが、低線量照射においても、U_251を除いた3種類のセルラインU_87、LN_229、LN_428でDNA量のピークのシフトが認められた。昨年度に続いて、ヒト由来グリオーマ細胞の複数のセルラインに対して低線量単回照射(0.2Gy、0.4Gy、0.6Gy、0.8Gy)を施行し、細胞周期について追加検討を行った。細胞の回収は照射終了後30分、24時間、48時間で行った。いずれにおいても、明らかなG0/G1期とG2/M期の比率変化は認められなかった。次に低線量反復照射(0.2Gy×10回)を様々な照射間隔(1、3、10、30分)で行い、コロニー形成法で生残率を測定した。照射間隔が長くなるに従い、生残率の低下が観察された。そこで低線量反復照射後に細胞周期の変化をフローサイトメトリー法で測定した。その結果、照射間隔が長く、照射30分後に回収、測定した群でG0/G1期の低下が10%程度観察された。U_87の例では、G0/G1期の細胞比率がコントロール、0分、3分、10分、30分でそれぞれ56、56、58、55、45%であった。次に、アネキシンVを用いた早期アポトーシスの検出をフローサイトメトリー法で測定したところ、照射間隔が長い方がアポトーシス細胞の比率が増加した。LN_229の例では、コントロール、0分、3分、10分、30分でそれぞれ、0.5、1.0、0.8、1.2、3.4%であった。以上から、照射間隔が比較的長い低線量反復照射により、グリオーマ細胞の生存率低下、アポトーシス細胞の増加が観察され、照射直後では、細胞周期にも変化が観察された。グリオーマ細胞セルラインを用いたコロニー形成法では、低線量反復照射において、前年度同様に再現性のある結果を得ることができた。コロニー形成法は結果が判明するまでに時間を要することから、他の実験と並行して施行することで、実験を効率的に進め、期間内に結果が判明するようにしている。前年度に続いて低線量単回照射後の細胞周期をフローサイトメトリー法にて測定した。本年度も細胞周期の明らかな変化は検出できなかった。DNA量のピーク値にシフトが見られることについては、文献等も参考に他の解析法でも結果を確認、検討する。低線量反復照射後の細胞周期の測定結果から、照射間隔30分のサンプルを照射30分後に観察したところG0/G1期細胞の比率が軽度低下していた。アポトーシス細胞比率の増加も観察されたことから、注目すべき結果と考えている。全体として、低線量反復照射による検討(コロニー形成法、フローサイトメトリー法)の結果より、30分間隔と比較的照射間隔が長い低線量反復照射に焦点を当て、さらに放射線超感受性の機序を詳細に検討する方向性が導き出されており、予定の実験をすべて終了していないものの2年目としてはおおむね順調であると考えている。