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東京学派の研究

本年度は3回のワークショップ、5回の研究会と1回の国際シンポジウムを開催した。本科研は「東京学派」という発見的な概念を設定するものなので、初年度である本年度は、各分野においてこの概念がいかなる可能性をもつかを中心に議論・検討した。国際シンポジウムはInternational Symposium Global Asia in Interdisciplinary Perspectives: Sustainability, Security and Governanceと題して、シンガポールの南洋理工大学で行ったものである。5回の研究会は哲学、社会学、経済学において顔合わせとブレーンストーミングを兼ねて行ったものである。それに対してワークショップは公開で、以下の通り。第1回は「アジアの概念化」と題して、磯前順一氏と松田利彦氏を国際日本文化研究センターから招き、具体的な研究者を題材にして発表いただいた。東京大学を中心とした学知の形成と流通においてアジアがいかに言説化されたかをめぐって、植民地である京城帝国大学の状況を視野に入れつつ討論をおこなった第2回は「中国哲学をめぐって」と題して、「東京大学中国哲学の歴史的背景とその意義」を討論のテーマに設定した。佐藤将之氏(台湾大学)・小島毅氏(東大)・石井剛氏(東大)の発表により、東京大学の創設以来、日本の哲学者と中国の哲学者とのあいだに活発な影響関係があったことが新たな論点や事実関係とともに提示された。第3回は「学派」としての実態の如何を討論するために、「日本哲学と東京大学の哲学」との題のもと、トマス・カスリス氏(オハイオ州立大学特別名誉教授)と小林康夫氏(東大名誉教授)に発表を依頼した。京都学派との比較や「駒場カルテット」に関する発表・討論をつうじて、「東京学派」を「学派」と呼ぶことの意味内容・可能性・限界について議論することができた。研究代表者からの「東京学派」という問題提起に対して、3回のワークショップと5回の研究会そして1回の国際シンポジウムをつうじて、多種多様な分野の研究者から情報提供や論点提示を得ることができた。もちろんこの挑発的な概念に対して批判も寄せられたが、これも次年度以降に生かせるものであった。毎回のワークショップには東京大学内外から多数の参加者に恵まれ、本テーマの重要性や注目度の高さを確認できた。とりわけ第3回のワークショップは幸い、科研費基盤研究(B)「『哲学雑誌』のアーカイヴ化を基礎とした近代日本哲学の成立と展開に関する分析的研究」(研究代表:鈴木泉)との共催とすることができ、そのおかげで、人的交流を加速することができた。研究プラットフォーム形成という本科研の目的に照らしても上々の初年度となった。以上のことから、科研の初年度である本年度としては、「おおむね順調に進展している」と判断して差し支えないであろう。本年度のワークショップでの討論や問題提起を踏まえて、次年度は「東京学派」の内実を具体化することを目指す。それにともない、「東京学派」に関する研究の途中経過的な文章を作成しはじめることで、研究期間の後半の方向性を明確なものとする。さらに、本年度は哲学と宗教での「東京学派」に議論が集中したきらいがあるため、次年度は社会学、経済学、そして歴史学や文学研究からの視点を重視したいと考えている。以上の目的のために、以下3名を新たに研究分担者にくわえることとした。大木康氏(東大東洋文化研究所教授、中国近世(明清)史)、馬場紀寿氏(東大東洋文化研究所教授、古代インド仏教史)、松方冬子氏(東大史料編纂所准教授、日本近世史・対外関係史)。いずれの研究者も専門分野の学史に詳しいだけでなく、哲学や理論に対する造詣が深いので、本科研での討論を深化してくれることが見込める。次年度は新メンバーをふくめた研究会を早期に実施し、本科研の方針を説明する。その後は、国際シンポジウムを開催し、より領域横断的な研究活動を行う。京都学派との比較や「駒場カルテット」に関する発表・討論をつうじて、「東京学派」を「学派」と呼ぶことの意味内容

・可能性・限界について議論することができた。研究代表者からの「東京学派」という問題提起に対して、3回のワークショップと5回の研究会そして1回の国際シンポジウムをつうじて、多種多様な分野の研究者から情報提供や論点提示を得ることができた。もちろんこの挑発的な概念に対して批判も寄せられたが、これも次年度以降に生かせるものであった。毎回のワークショップには東京大学内外から多数の参加者に恵まれ、本テーマの重要性や注目度の高さを確認できた。とりわけ第3回のワークショップは幸い、科研費基盤研究(B)「『哲学雑誌』のアーカイヴ化を基礎とした近代日本哲学の成立と展開に関する分析的研究」(研究代表:鈴木泉)との共催とすることができ、そのおかげで、人的交流を加速することができた。研究プラットフォーム形成という本科研の目的に照らしても上々の初年度となった。以上のことから、科研の初年度である本年度としては、「おおむね順調に進展している」と判断して差し支えないであろう。本年度のワークショップでの討論や問題提起を踏まえて、次年度は「東京学派」の内実を具体化することを目指す。それにともない、「東京学派」に関する研究の途中経過的な文章を作成しはじめることで、研究期間の後半の方向性を明確なものとする。さらに、本年度は哲学と宗教での「東京学派」に議論が集中したきらいがあるため、次年度は社会学、経済学、そして歴史学や文学研究からの視点を重視したいと考えている。以上の目的のために、以下3名を新たに研究分担者にくわえることとした。大木康氏(東大東洋文化研究所教授、中国近世(明清)史)、馬場紀寿氏(東大東洋文化研究所教授、古代インド仏教史)、松方冬子氏(東大史料編纂所准教授、日本近世史・対外関係史)。いずれの研究者も専門分野の学史に詳しいだけでなく、哲学や理論に対する造詣が深いので、本科研での討論を深化してくれることが見込める。次年度は新メンバーをふくめた研究会を早期に実施し、本科研の方針を説明する。その後は、国際シンポジウムを開催し、より領域横断的な研究活動を行う。(東京大学「国際総合日本学ネットワーク」ホームページ内に設置し、研究会ごとに開催告知と内容報告を公開。)
多様性と非対称性を獲得するRNAプログラム研究の総合的推進

生物の持つ複雑で巧妙な形態・機能の獲得には、RNA段階での遺伝子発現制御プログラムが極めて重要な役割を果たします。発生・分化の基本原理としての「非対称性」と遺伝子産物の「多様性」の獲得原理を理解するためには、RNAレベルでの制御(RNAプログラム)を包括的に理解する必要があります。本新学術領域研究「多様性と非対称性を獲得するRNAプログラム(RNA制御学)」は、このRNAプログラムの分子機構とその生理的意義の解明を目指しました。RNAレベルでの制御を研究する若手ならびに中堅の研究者を中心とした組織を構成し、手法、材料や情報を共有しながら交流を行い、研究を進めました。分子・細胞レベルから遺伝学を用いた高次生命現象解析まで、幅広いアプローチでRNA研究を展開し必要に応じて共同研究を積極的に進めました。平成20ー24年度までの研究期間において、計画研究のみならず公募研究においても優れた研究成果を上げる事ができ、当初の目的を概ね達成できました。また、多数の若手ならびに中堅研究者がプロモーションされました。領域内の連携を促進する支援班活動等を行った結果、共著論文も発表することが出来ました。平成25年度は、理化学研究所や関連する新学術領域研究「非コードRNA」とRNA Sciences in Cell and Developmental Biology III共催した、内外のRNA研究者から高い評価をうけ、本領域における優れた研究を国内外に宣伝する非常に良い機会となりました。また、研究成果報告書を作成し、班員と評価者の先生方、関連分野の研究者に配布しました。25年度が最終年度であるため、記入しない。生物の持つ複雑で巧妙な形態・機能の獲得には、RNA段階での遺伝子発現制御プログラムが重要な役割を果たす。すなわち、個体発生の過程において、様々な「非対称性制御プログラム」により、単一の受精卵から非対称な細胞群が生成され、「多様性獲得プログラム」により、分化過程で形成される細胞が担う多様な機能の獲得に必要な遺伝子産物自体の多様性が獲得される。さらに、「品質保証プログラム」による厳密な監視により、RNAレベルでの制御の正確性が保証される。本領域では、複雑で巧妙な生命体構築の基本原理としての遺伝子産物の「非対称性」と「多様性」の獲得機構と、それを支える「品質保証」機構の理解を目的とし、その最も重要な分子基盤である『RNAプログラム』の分子機構の解明を目指した。総括班では、研究者間の交流と共同研究を推進するために、全体班会議を主催した。支援班活動によって領域全体の研究を下支えし、若手主体のミーティングを支援した。多様性と非対称陸の獲得機構とそれを支えるmRNA品質管理機構というRNAプログラムに関する数多くの重要な成果が得られた。国内外シンポジウムの主催や、日本語総説の特集号の編集などを積極的に行い、研究成果を広く公表した。本領域では、複雑で巧妙な生命体構築の基本原理としての遺伝子産物の「非対称性」と「多様性」の獲得機構と、それを支える「品質保証」機構の理解を目的とし、その最も重要な分子基盤である『RNAプログラム』の分子機構の解明を目指す。日本におけるRNA研究者集団の動向と他の大型研究プロジェクトとの関係を考慮し、本領域研究提案においては、発生・分化の基本原理としての「非対称性」と遺伝子産物の「多様性」の獲得原理の理解に焦点を絞り、本領域の目的に関係しない機能不明の非コードRNAの機能解析の網羅的研究は行わないこと、を基本的戦略とする。領域全体の有機的連携を促進するために、総括班において、各研究の進捗状況を的確に把握し、成果を評価し、助言を行い、研究間の調整を図る。また、各総括班員が役割を分担し、全体班会議やシンポジウム、若手研究者によるRNAフロンティアミーティングへの支援、インターネット上のホームページにより外部への情報発信等を分担して行う。平成20年度は特に期間が限られていたため、全体班会議とインターネット上のホームページの作成を優先して行った。具体的には平成21年2月24日に名古屋(ガーデンパレス)において全体班会議を行い、計画研究の基本的研究目的と実験計画について各計画研究者が発表し、活発な意見交換を行った。また総括班において、本領域の基本的な運営方針を評価者に対して説明を行い、領域の班員全体で再確認を行った。ホームページは事務局が担当して作成し、1月末から公開を開始した。業績や領域が主催または関連するシンポジウム等の情報について随時更新を行っている。平成21年度から公募班が参加した。具体的な活動は以下の様である。

1)班会議:平成22年1月にスペースアルファ神戸(神戸市)で計画班員、公募班員全員の成果報告を行った。2)シンポジウム:国際シンポジウムの準備委員会を立ちあげた。日時(平成22年5月10-12日)と場所(理研CDB神戸)を決定し、招待講演者の選定を行った。3) RNAフロンティアミーティングへの支援:平成21年9月26-28日に、湘南国際村で100名余が参加した。会議費等の補助を行い、計画班員も多数参加した。4)支援班:質量分析については、班員から200サンプル余の要請があり、理研CDBで解析を行った。本領域では、複雑で巧妙な生命体構築の基本原理としての遺伝子産物の「非対称性」と「多様性」の獲得機構と、それを支える「品質保証」機構の理解を目的とし、その最も重要な分子基盤である『RNAプログラム』の分子機構の解明を目指す。総括班では、領域全体の有機的連携を促進するために、各研究の進捗状況を的確に把握し、成果を評価し助言を行い、研究間の調整を図った。また、各総括班員が役割を分担し、全体班会議やシンポジウム、若手研究者によるRNAフロンティアミーティングへの支援、・インターネット上のホームページにより外部への情報発信等を行った。平成22年度の具体的な活動は以下である。【1】中間評価:資料を提出し、専門委員会におけるヒアリング審査を受けた。領域全体の活動に対し、中間評価では、「個々の研究では着実に研究成果を挙げつつあり、また、研究内容・成果の積極的公表・普及についても十分に行っている」との評価(A)をいただいた。【2】班会議:平成23年1月に京都ガーデンパレス(京都市)で計画班員、公募班員全員の成果報告を行った。【3】シンポジウム:本領域と理研CDBならびに非コードRNA領域との共催で、国際シンポジウム「RNA Science in Cell and Developmental Biology」(平成22年度5月10-12日)を開催し、RNA関連研究に関する国内外の優れた研究者が一同に会する機会となった。invited speakerを中堅のPIを中心にし、若手研究者への支援を充実させたことで、活発な議論が行われた。ミーティングにおける議論の活発さと日本のRNA研究のレベルについて、内外の研究者に高く評価された。国内でもBMB2010におけるシンポジウムやワークショップにおいて、本領域の成果発表を行った。【4】RNAフロンティアミーティングへの支援:平成22年9月27-29日に富士教育研修所(静岡県裾野市)で開催され、100名余が参加した。【5】支援班:質量分析について班員から数十の要請があり、理研CDBで解析を行った。
自然免疫における生体防御レクチンの役割

生体防御システムの一つである補体レクチン経路においては、マンノース結合レクチン(MBL)が異物の表面糖鎖を認識し、複合体を形成するセリンプロテアーゼMASPが活性型に転じ、次いで補体系が活性化される。本研究では、3種類のMASP欠損マウスの表現型解析と再構成実験を進め、レクチン経路の分子構成と作用機序を解明するとともに、レクチン経路の機能低下が細菌やウィルスに対する易感染性の原因であることを明らかにした。また、MASP-1で惹起される独自のルート(MASP-1経路)が存在し、補体第二経路の活性化と深く関連していることを明らかにした。sMAPがレクチン経路の制御因子であることを解明し、レクチン経路が活性化と制御の機構を有する高度に発達した経路であることを明らかにした。さらに、フィコリンがレクチン経路の第二の認識分子であることを発見し、その認識の分子基盤を解明した。フィコリン欠損マウスの解析から、フィコリンがレクチン経路を介して感染防御に働くことを明らかにした。系統発生学的解析からは、獲得免疫をもたない脊椎動物円口類や無脊椎動物尾索類に原始的なレクチン経路が存在し、生体防御系として重要な役割を果たしていることを明らかにした。これらの動物からレクチン経路の構成成分であるMASP、MBL、フィコリンおよびC1qの相同分子を単離し、その一次構造、遺伝子構造および機能の解析から、その分子進化を明らかにした。さらに、その成果は、自然免疫で働くレクチン経路から獲得免疫で働く古典的経路に至る進化の経路を解明した。一連の成果は、自然免疫に働くレクチン経路の分子基盤、役割そして系統発生の全容解明に大きな成果と前進をもたらした。血清中に存在するマンノース結合レクチン(MBL)やフィコリンは自然免疫に働く生体防御レクチンである。本研究の目的は、生体防御レクチンの自然免疫における役割を明らかにするもので、1)MBL-MASP、ficolin/P35-MASPの活性化機構の解明をする。2)フィコリンとMASP,sMAPのノックアウトマウスを作製し、それら分子の自然免疫における役割を解明する。3)ホヤやホヤ同様古典的経路のない円口類のヤツメウナギでのMBL様レクチン、フィコリン、ガレクチン等の構造と機能の解析等を行う。本年度は以下の成果を得た。1.すでにヒト血清からFicolin/P35を精製し、このFicolin/P35が補体レクチン経路を活性化することを明らかにしてきた。本研究では、Ficolin/P35と類似の構造を持つフィコリン、博多抗原(H-ficolin)を精製し、博多抗原もMASP-1/MASP-2/MASP-3/sMAPと複合体を形成し、補体レクチン経路を活性化することを明らかにした(J.Immunol,in press)。2.ジーンターゲッティング法により、マウスMASP-1/-3遺伝子の第2エクソンを欠落した遺伝子改変マウス(Masp-1(+/-)と略)を作製し、更にMasp-1(+/-)同士の交配により両染色体に遺伝子変異を持つホモ型MASP-1欠損マウス(以下、Masp-1(-/-))を得た。Masp-1(-/-)はMASP-1とMASP-3をどちらも欠損していた。3.下等動物におけるレクチン経路の解析:マボヤ体液からフィコリンに相当するレクチンを2種類精製し、そのcDNAのクローニングを行った結果、4種類のフィコリンが得られた(J.Biol.Chem.276,19959,2001)。また、MBL様レクチンGBLがマボヤ補体を活性化し、原始補体系を形成することを明らかにした(J.Immunol 167 4506 2001)。

更に、円口類のヤツメウナギにおいて2種類の新規なレクチンを発見し、その構造と機能を解析中である。血清中に存在するマンノース結合レクチン(MBL)やフィコリンは自然免疫に働く生体防御レクチンである。本研究の目的は、生体防御レクチンの自然免疫における役割を明らかにするもので、本年度は以下の成果を得た。1.イギリスのと共同研究で抗ガン剤の投与により、免疫力が低下している患者さんにおいてMBLとフィコリンの血中濃度を測定し、生体内での役割を推定した(投稿中)。また、マウスフィコリン欠損動物の作製に着手した。2.当研究室で作製したMASP-1/3欠損マウス血清を用いて、補体レクチン経路の活性化機構について検討した。まず、蛋白としてのMASP-1とMASP-3が欠損していることを確認し、C4,C2を活性化するMASP-2の活性化におけるMASP-1の役割りを検討した。この結果、MASP-2はそれ自体で活性化を起こすが、MASP-1の存在下ではその効率が著しくよくなることが判明した(投稿準備中)。さらに、MASP-2遺伝子の欠落した遺伝子改変マウスを作製し、交配により両染色体に遺伝子変異を持つホモ型MASP-2欠損マウス欠損マウスの誕生を待つばかりである。3.円口類のヤツメウナギにおいて2種類の新規なレクチンを発見し、その一つは、コラーゲン構造を持つMBLであり、興味深いことにもう一つのレクチンは、C1qであった。このことは、補体レクチン経路から古典的経路へ進化したことを示す。また、両生類のゼノパスにおいて4種類のフィコリンの遺伝子をクローニングし(Immunogenetics, in press)、MASPの分子進化について明らかにした(J.Immunol, in press)。本研究の目的は、生体防御レクチンの自然免疫における役割を明らかにするもので、血清レクチンであるL-フィコリンとH-フィコリンが、MBLと同様にセリンプロテアーゼMASPと複合体を形成して存在し、レクチン経路の認識分子として働くことをすでに明らかにした。本年度は以下の成果を得た。1.L-フィコリンがグラム陽性細菌の細胞壁成分の1つであるリポテイコ酸(LTA)やカビ類の細胞成分である1,3-β-D-グルカンに結合し、補体レクチン経路を介して補体を活性化することを明らかにした。一連の成果は、フィコリンが特異的に微生物表面の糖鎖を認識し、補体レクチン経路を介して異物の除去に働くという自然免疫機構の分子基盤の1つを明らかにした。また、本研究ではフィコリンA欠損マウスを作成し、その表現型の解析を進めている。2.当研究室で作製したMASP-1/3欠損マウスの表現型は、レクチン経路の初動が遅延していること、MASP1がMASP2の活性化にも関与していること、インフルエンザウィルスに易感染性であることなどを明らかにした(投稿準備中)。さらに、MASP-2遺伝子の一部、sMAPを欠落した遺伝子改変マウスを作製し、現在その表現型の解析を進めている3.円口類のヤツメウナギにおいて2種類の新規なレクチンを発見し、その一つは、コラーゲン構造を持つMBLであり、興味深いことにもう一つのレクチンは、C1qであった。
慢性疼痛のある高齢者における在宅リハモデルの実証的構築

本研究は腰部脊柱管狭窄症の手術後も痛みが残っている高齢者において痛みの対処方法や痛みのとらえ方がメンタルヘルスや普段の活動量に影響を与えているかどうかを確かめ、さらに、痛みの対処方法を変化させることでメンタルヘルスや普段の活動量が改善するかどうかを検討することを通じ、慢性的な痛みのある高齢者における在宅リハモデルを確立させることを目的としている。過去2年間の研究により、腰部脊柱管狭窄症の手術後も痛みが残っている高齢者は健康関連QOL(生活の質)が低下しており、また、その健康関連QOLは痛みの強さだけではなく痛みの対処方法(消極的対処=安静臥床、積極的対処=身体活動量の増加)の影響を受けていることが分かった。そこで、平成30年度においては、引き続き腰部脊柱管狭窄症の手術後も痛みが残っている高齢者を対象に、積極的対処である身体活動量の増加を狙った介入研究を企画したものの、実施環境が十分に整えられなかった。そこで、健康関連QOLを調査するとともに、身体活動量を活動量計(オムロン社製HJA-750C)を用いて定量的に測定する観察研究に切り替え、健康関連QOLと身体活動量の関係を定量的に検証した。その結果、低強度よりも中等度の強度の生活活動を多く行うほど、健康関連QOLの一側面(全体的な健康感)が良好であったことが確認された。この結果から、痛みへの消極的な対処方法を選択する機会を減らし、中等度の強度の身体活動を向上させるように導くことが健康関連QOLの改善につながることがひとつの可能性として示された。本来は身体活動量を増加させることを狙った介入研究を行うことを計画したが、その環境が十分に整わなかったため。現在、介入研究から観察研究に切り替え、活動量計を用いて活動量を定量的に測定するとともに、それと健康関連QOLとの関連性を検証している。残り1年間、調査を継続し、データを蓄積することで、研究成果を充実させる。本研究の目的は、腰部脊柱管狭窄症の手術を受けた高齢者において、1痛みを訴える人々の割合や痛みの特徴、メンタルヘルス、普段の活動量の実態、2【痛みの対処方法】や【痛みのとらえ方】とメンタルヘルスおよび普段の活動量との関連性、3有酸素運動が与えるメンタルヘルスおよび普段の活動量への効果、について明らかにすることである。その結果、182人から回答があり、うち、171人から有効な回答が得られた(有効回答率:60.2%)。171人中120人がnumerical rating scaleで2点を超える疼痛を有していることが明らかとなった(70.2%)。また、numerical rating scaleで2点を超える疼痛がある人々と疼痛がない、または、2点以下の疼痛がある人々との間でメンタルヘルスおよび普段の活動量を比較したところ、2点を超える疼痛がある人々の方が統計学的に有意にメンタルヘルスが不良で普段の活動量が低いことが示された。以上のことから、腰部脊柱管狭窄症の手術を受け、術後にも継続して疼痛を有する高齢者に対するリハビリテーション支援が必要であることが確認された。平成28年度中の成果の公表には至っていないものの、当初の計画はすべて実行されデータの解析は完了しているから。平成28年度においては腰部脊柱管狭窄症の手術後も痛みが残っている高齢者は、痛みが残っていない高齢者と比較して健康関連quality of life(QOL)が低下していることを明らかにした。平成29年度においては、痛みのある高齢者の健康関連QOLに影響を与えている因子を明らかにし、平成30年度に予定されている介入研究の介入方法について検討するための資料を作成することを目的に質問紙調査を実施した。103人から得られたデータをもとに構造方程式モデリングを用いて検証した結果、痛みのある高齢者の健康関連QOLは痛みの強さだけではなく痛みの対処方法の影響を受けていることを示す良好なモデルが構築できた。具体的には「身体活動を制限し臥床すること」や「他者に助けを求めること」を痛みの対処方法として積極的に採用している高齢者は健康関連QOLが低かった。このことから、身体活動を向上させることが健康関連QOLを高めることに寄与することが示唆された。平成30年度においては身体活動量を向上させる介入を行う計画である。当初の予定通り、年度内に平成30年度の介入研究において採用する介入手段を検討することができたため。

そこで、平成30年度においては、引き続き腰部脊柱管狭窄症の手術後も痛みが残っている高齢者を対象に、積極的対処である身体活動量の増加を狙った介入研究を企画したものの、実施環境が十分に整えられなかった。そこで、健康関連QOLを調査するとともに、身体活動量を活動量計(オムロン社製HJA-750C)を用いて定量的に測定する観察研究に切り替え、健康関連QOLと身体活動量の関係を定量的に検証した。その結果、低強度よりも中等度の強度の生活活動を多く行うほど、健康関連QOLの一側面(全体的な健康感)が良好であったことが確認された。この結果から、痛みへの消極的な対処方法を選択する機会を減らし、中等度の強度の身体活動を向上させるように導くことが健康関連QOLの改善につながることがひとつの可能性として示された。本来は身体活動量を増加させることを狙った介入研究を行うことを計画したが、その環境が十分に整わなかったため。本研究は概ね順調に進展していることから、平成29年度も当初の計画に従って研究を実行していく。平成28年度の研究に協力してくれ、かつ、疼痛があると回答した人々に対して平成29年度の研究への協力を呼びかけることで対象者を確保する。多施設で介入研究を実施するため各施設の調整役と緊密に連携していく。特に介入内容を統制することに留意する。現在、介入研究から観察研究に切り替え、活動量計を用いて活動量を定量的に測定するとともに、それと健康関連QOLとの関連性を検証している。残り1年間、調査を継続し、データを蓄積することで、研究成果を充実させる。安価な物品を用いることで当初計画していた使用額(物品費150,000円)を下回ったから。活動量計の購入数を必要最低限としたこと、国内学会のみの参加であったことなどにより次年度使用額が生じた。活動量計は予備がない状況であり、故障への対応ができないため次年度追加購入する予定である。また、積極的に学会での成果公表、情報収集を進める。介入研究から観察研究に切り替えたことと、活動量計を安価に購入することができたことから次年度使用額が生じた。次年度使用額は、観察研究を継続するのに必要な費用と研究成果の公表に要する費用に充当する予定である。平成29年度では加速度計を用いる計画であり、それに充当する計画である。
血管内皮細胞における安定な遺伝子発現系の開発

本年度の研究では以下の成果を得た。1)膜融合リポソームの実用化に向けて製剤としての安全性に関わる問題を検討し、病原性ウイルスの混入を10^<-16>以下に押さえながら活性と安全性を保つことができる精製と不活化の条件を決定した。また最終的な製剤としての形状を検討した。2)人工染色体構築のための必須条件である染色体の安定性を決定する因子の解析を進め、染色体末端のテロメア配列に結合するTRF1というタンパク質にその活性があることを見いだした。さらに、TRF1は単に染色体を安定化する因子であるばかりでなく、細胞の寿命を決定しまた不死化に深く関与するなど、遺伝子治療において外来遺伝子を導入した細胞の寿命を選択的に延ばすなどの新しい方向性を示した。3)自立複製しつつ細胞質で遺伝情報を発現するRNAレプリコンの開発に必要なRNA依存性RNAポリメラーゼの検討を進め、センダイウイルスのNPタンパク質にその活性があることを同定した。またRNAレプリコンの鋳型となるcDNAを作成し、ラムダファージを使って安定に大量調製することに成功した。4)新しい発想の非ウイルスベクターとしてヒト免疫不全ウイルスのTatタンパク質由来のペプチドを表面に発現するTat-Phageの開発を行い、このペプチドに依存して細胞内にファージ粒子内のDNAが導入されて発現することを見いだした。この結果、Tat peptideを使った合成ポリマーによる遺伝子導入ベクターの開発に道を開くことができた。
Ｅｐｈ受容体シグナル破綻によるグリオブラストーマ悪性化の分子機構の解明

チロシンキナーゼ受容体ファミリーに属するEph受容体は、そのリガンドであるephrinと結合し、下流へシグナルを流すことで、本来発生過程における胚形成、形態形成において重要な役割を果たしている。Eph受容体・ephrinシグナルが破綻することで、発がん・がんの悪性化が引き起こされることが明らかになっている。Eph受容体の一つであるEphA2は、悪性度の高い脳腫瘍であるグリオブラストーマを含む様々ながんにおいて過剰発現しており、発現量と、がんの悪性度との間に相関関係があることが報告されている。これまでに、我々は、EGF刺激やEphA2の過剰発現によるEphA2のチロシンキナーゼ活性の上昇により、MEK/ERK/RSK経路が活性化され、EphA2の897番目のセリン(S897)がリン酸化されることにより、神経膠芽腫細胞の増殖が促進されることを明らかにした。しかしながら、EphA2のS897リン酸化の下流でどのような分子が働き、細胞増殖を促進させているのかは現在のところ明らかにされていない。そこで、今年度の研究では、EphA2に結合する分子に着目し、EphA2のS897リン酸化による細胞増殖の促進に関わる分子メカニズムについて検証した。神経膠芽腫細胞の溶解液をEphA2の抗体で免疫沈降を行い、EphA2と細胞内で結合しているタンパク質について質量分析法を用いた網羅的な解析を行った。同定されたタンパク質について、in vitroにおけるEphA2との結合性についても確認することができた。さらに、今年度は、神経膠芽腫細胞において高発現が確認されているEphA3受容体に着目し、EphA3ノックアウト細胞及び過剰発現細胞をそれぞれ神経膠芽腫細胞で作成し、これらの細胞を用いてEphA3受容体の発現が、がん細胞の凝集体形成に及ぼす影響について解析を行った。今年度は、1)神経膠芽腫においてEphA2と複合体を形成するタンパク質の網羅的解析、2) EphA3による神経膠芽腫細胞の凝集体形成制御の解析を行った。1)については、EphA2と細胞内で結合しているタンパク質について網羅的な解析を行い、同定されたタンパク質について、in vitroにおけるEphA2との結合性についても確認しており、今後はその機能的意義について調べていく予定である。2)については、EphA3ノックアウト細胞及び過剰発現細胞をそれぞれ神経膠芽腫細胞で作成し、浮遊培養条件下で形成される細胞の凝集体の大きさを比較した。その結果、EphA3ノックアウト細胞では神経膠芽腫細胞の浮遊培養条件下で形成される細胞の凝集体の大きさが有意に小さくなった一方、EphA3過剰発現細胞では凝集体の形成が促進された。がん細胞の凝集体の大きさは、がん細胞の増殖及び生存と相関関係があることが報告されている。また、浮遊培養条件下では神経膠芽腫の悪性化に大きく関わっているEGFによってEphA3の発現がタンパク質レベルで制御され、それにはEGFによるAktの活性化が必要であることも示唆された。さらには、EphA3がN-cadherinの発現上昇を促進することで、凝集体の形成を促進していることも見出された。以上の結果から、EphA3はEGF-Aktシグナル経路によってリガンド非依存的に制御され、浮遊培養条件下での神経膠芽腫細胞の凝集体形成促進に働いていることが示唆された。これらの内容について学術論文として発表した。今年度行った研究により、EphA2と細胞内で結合しているタンパク質を同定することができた。これまでに、EGF刺激により、MEK/ERK/RSK経路の下流でEphA2のS897がリン酸化されることにより、神経膠芽腫細胞の増殖が促進されることがわかっている。今後は、同定されたEphA2結合タンパク質がEphA2受容体シグナルによる神経膠芽腫細胞の増殖促進にどのように関わっているかについて検証を行う。まず、結合タンパク質をsiRNAによりノックダウン、あるいはsgRNAを作成してノックアウト細胞を樹立し、EGF刺激を介した神経膠芽腫細胞の増殖促進、さらにはEphA2による神経膠芽腫細胞の増殖促進に与える影響を調べる。また、様々な変異体を用いて、EphA2と結合タンパク質との結合部位の同定を行い、両者の結合が神経膠芽腫細胞の増殖促進に与える影響を調べる。次に、EphA2のS897リン酸化との関係を明らかにするため、897番目のセリンをアラニンに置換したEphA2-S897A変異体を用いて、EphA2野生型と比較して、結合に変化が見られるか検討する。また、EphA2の発現を抑制した神経膠芽腫細胞を用いて、EphA2が高発現することによって発現が変化する遺伝子をマイクロアレイ解析により網羅的に解析を行い、得られた解析結果から遺伝子がEphA2受容体シグナルによるがん悪性化にどのように関わっているかについて、同様に、siRNAによるノックダウン、あるいはsgRNAを作成してノックアウト細胞を樹立することにより検討する。

Eph受容体の一つであるEphA2は、悪性度の高い脳腫瘍であるグリオブラストーマを含む様々ながんにおいて過剰発現しており、発現量と、がんの悪性度との間に相関関係があることが報告されている。これまでに、EphA2の897番目のセリン(S897)がAkt、RSK、あるいはPKAによりリン酸化されることで、グリオブラストーマを含む様々ながんの悪性化が促進されるということが明らかになっている。しかしながら、EphA2のチロシンキナーゼ活性が、がん細胞においてどのように働いているかはまだあまりわかっていない。本研究では、EphA2のチロシンキナーゼ活性と、S897リン酸化との関係性に着目し、S897リン酸化が引き起こされるメカニズムについて検証した。今年度の研究では、野生型のEphA2受容体の過剰発現により、ERKの活性化が誘導され、EphA2のS897のリン酸化が引き起こされることで、グリオブラストーマの細胞増殖が促進されるということを見出した。さらに、キナーゼ活性を欠失させたEphA2-K646M変異体の過剰発現においては、ERK活性化、あるいはEphA2のS897リン酸化は誘導されず、グリオブラストーマの細胞増殖の促進も見られなかった。これらのことから、EphA2が過剰発現しているとき、EphA2のチロシンキナーゼ活性を介してERK活性化が誘導され、それによりEphA2のS897リン酸化が促進され、グリオブラストーマの細胞増殖が促進されるということが示唆された。グリオブラストーマは、悪性度の高い脳腫瘍の中で最も発症頻度が高い腫瘍である。外科的手術、放射線療法、化学療法が併用されているが、5年生存率は未だに10%程度であり、より効果的な治療法が必要とされている。Eph受容体の一つであるEphA2は、成人の正常な脳組織ではほとんど発現していないのに対し、グリオブラストーマにおいて過剰発現しており、発現量と、がんの悪性度との間に相関関係があることが報告されている。EphA2は、グリオブラストーマの新たな治療ターゲットとして注目されており、EphA2によるがん悪性化のメカニズムの解析が進められている。これまでに、EphA2の細胞内ドメインに存在する897番目のセリン(S897)がリガンド非依存的にAkt、RSK、PKAによりリン酸化されることにより、がん細胞の運動性、浸潤性が促進され、がんの悪性化に繋がるということが明らかになっている。これまでの研究から、我々は、増殖因子の刺激により、Raf/MEK/ERK/RSKシグナル経路が活性化され、EphA2の897番目のセリンがリン酸化されることでグリオブラストーマの増殖が促進されること、さらに、EphA2の過剰発現により、EphA2のチロシンキナーゼ活性を介してERK活性化が誘導され、EphA2のS897リン酸化が促進されることで、グリオブラストーマの細胞増殖が促進されるということを明らかにした。29年度の研究では、これまであまりわかっていなかった、EphA2のチロシンキナーゼ活性とS897リン酸化との関係性に注目し、EphA2のチロシンキナーゼ活性がS897リン酸化促進的に働くということを見出した。今後の研究では、EphA2の下流でどのような分子が働き、グリオブラストーマの細胞増殖の促進を誘導しているのか、これまで作製したEphA2の変異体などを用いて、明らかにしていく予定である。
ヒトパラインフルエンザウイルス3型の診断補助薬開発と予防・治療に向けた基礎研究

ヒトパラインフルエンザウイルス3型(HPIV-3)は、乳幼児を中心に呼吸器感染症を引き起こす。感染力が強く、保育所、高齢者施設の集団発生、院内感染の原因となる。日本では、感染症法で規定される把握対象疾患に含まれていないため、国内の詳細な動向は不明である。また、医療機関で実施可能な診断補助薬は実用化されていない。本研究では、HPIV-3の迅速診断キットを開発し、診察現場での病原体検出、国内での実態解明につながる知見獲得を目的とする。
コレシストキニン-B受容体を介する中枢神経機能とその生理的意義の解明

私達は遺伝子クローニングによりコレシストキニン(CCK)-B受容体は胃ガストリン受容体と単一の7回膜貫通型のG蛋白共役型受容体であり、リガンド依存性の細胞増殖促進作用や細胞骨格再構成能などを持つことを明らかにした。また、本受容体を介する細胞内シグナル伝達機構は、複数の三量体G蛋白を介し、チロシンキナーゼ型増殖因子やインテグリンなどの細胞接着因子受容体の細胞内シグナル伝達系とクロストークし、細胞の増殖および分化の制御にも関与していると考えられる。これら脳腸管ペプチドは内分泌ホルモンとしてばかりではなく、パラクリンまたはオートクリン機構により様々のヒト腫瘍細胞株の増殖促進にも関与していることも見いだした。また、CCK-B/ガストリン受容体を介する細胞増殖能の固体における生理的意義を明らかにするために、本受容体遺伝子ノックアウトマウスを作成した。ホモ変異マウスには発生異常や外表奇形は見られないが、高ガストリン血症や胃酸基礎分泌の低下のみならず、胃粘膜細胞の著明な発育障害が見られ、ヒスチジン脱炭酸酵素、クロモグラニンAなどの遺伝子発現の著しい抑制が確認された。すなわち、CCKBR発現細胞の固体における生理的な細胞増殖に本受容体がたいへん重要な役割を果たしていることが証明された。中枢神経系においてはCCKBRは、大脳皮質の錐体細胞に最も強く発現し、その他嗅球、梨状葉、扁桃、線状体などにも領域特異的な発現が認められる。しかしこれらの領域の神経細胞の形態異常は認められず、中枢神経系においてもCCKBR欠損にともなうCCK-A受容体発現への影響は確認されず、両者の受容体発現には代償的な調節機構が存在しない。CCKBR遺伝子欠損マウスの解析は、CCK-A受容体を介さないCCKBR機能の代償機構の存在をはじめとして、本受容体の中枢神経系における生理的機能の解明に極めて有用であると期待される。また、本受容体を介する細胞内シグナル伝達機構は、イノシトールリン酸産生や細胞内Ca^<2+>を上昇させるのみならず、c-fos,c-myc, c-junなどの初期応答遺伝子発現の誘導、Ras-MAPキナーゼ経路や低分子量G蛋白Rhoを活性化、p125^<FAK> (Focal Adhesion Kinase)およびpp^<60c-src>などの細胞質蛋白のチロシンリン酸化を誘導する。すなわち、複数の三量体G蛋白を介したCCK-B/ガストリン受容体からのシグナルはチロシンキナーゼ型増殖因子やインテグリンなどの細胞接着因子受容体の細胞内シグナル伝達系とクロストークし、細胞の増殖および分化の制御にも関与していると考えられる。また、CCK-B/ガストリン受容体を介する細胞増殖能の個体における生理的意義を明らかにするために、本受容体遺伝子ノックアウトマウスの作成を試みた。私たちは、世界で初めて2系統のCCK-B/ガストリン受容体遺伝子欠損マウスの作成に成功し、本受容体は胃粘膜の種々の細胞の生理的な増殖抑制に中心的役割を担っていることを見いだした。すなわち、ホモマウスでは、高ガストリン血症とともに胃粘膜の著明な萎縮が観察された。

これまでにも、G蛋白共役型受容体に作用する種々のペプチドホルモンや神経伝達物質がin vitroにて細胞増殖能を示すことが報告されてきたが、CCK-B/ガストリン受容体が成熟固体において生理的な細胞増殖制御に重要な働きをしていることが証明された初めてのG蛋白共役型受容体である。中枢神経系のコレシストキニン(CCK)は食欲、不安や自発運動などの高次機能や下垂体機能調節やモルヒネ耐性への関与、ドパミン系の神経伝達を調節することなども示唆されているがその詳細は明らかでない。私達は、遺伝子クローニングにより大脳CCK-B受容体(CCKBR)が胃ガストリン受容体と同一のG蛋白共役型受容体であり、そのリガンド依存性増殖増殖能を世界で初めて明らかにした。また、CCKBRは神経栄養因子などのチロシンキナーゼ型受容体よりの細胞内情報伝達系とクロストークし細胞骨格蛋白の制御にも関与していることも報告した。これらの細胞生物学的機能が中枢神経細胞の生理的機能にどのような意義をもつか、個体レベルで解析してゆく系を確立することを目的としてCCKBR遺伝子欠損マウスの作成した。ホモ変異マウスには発生異常や外表奇形は見られないが、高ガストリン血症や胃酸基礎分泌の低下のみならず、胃粘膜細胞の著名な発育障害が見られ、ヒスチジン脱炭酸酵素、クロモグラニンAなどの遺伝子発現の著しい抑制が確認された。すなわち、CCKBR発現細胞の個体における生理的な細胞増殖に本受容体がたいへん重要な役割を果たしていることが証明された。中枢神経系においてはCCKBRは、大脳皮質の錐体細胞に最も多く発現し、その他嗅球、梨状葉、扁桃、線状体、視床、視床下部や橋などにも領域特異的な発現が認められる。しかしこれらの領域の神経細胞の形態異常は認められず、中枢神経系においてもCCKBR欠損にともなうCCK-A受容体発現への影響は確認されず、両者の受容体発現には代償的な調節機構が存在しないことが明らかとなった。CCKBR遺伝子欠損マウスの解析は、CCK-A受容体を介さないCCKBR機能の代償機構の存在をはじめとして、本受容体の中枢神経系における生理的機能の解明に極めて有用であると期待される。
「半議院内閣制」の日独比較研究

1.建設的不信任制度などに支えられている連邦首相の地位は強いが、連立与党の連邦議会議員団からの支持を保ち続けなければならず、連立相手の小政党との関係も重要となる。2.連邦政府と連邦参議院が権力分立の関係に立つ「半議院内閣制」であることから、連立与党が連邦参議院で少数派となる分割政府時には、連邦野党との交渉が立法過程を左右する、3.戦後ドイツの要政党として、小政党ながら二大政党を凌ぐ政権参加歴を有したFDPは、ドイツ統一後、中長期的な支持を支えていた外交政策での意義を失って野党期が増加したことにより、政治家育成機能を大きく低下させてポピュリスト政党化の傾向を強め、党の凋落を加速させた。研究の初年度であることから、今後の基礎となる先行研究の整理を進めつつ、ドイツの事例についての分析を開始した。まず、戦後ドイツの統治機構に関する研究を進め、(1)連邦首相の制度的な権限はそれなりに強いものであるが、連邦議会との間には議院内閣制の仕組みがあるため、与党連邦議会議員団の意向を無視することはできず、政党配置の状況によっては連立与党の意向にも配慮しなければならない、(2)連邦政府と連邦参議院が権力分立の関係に立つ「半議院内閣制」であることから、連邦与党が連邦参議院で少数派となる分割政府状態の時には、連邦野党との交渉が必要不可欠となってくる、といった知見を得て、その成果を活かした論文を執筆した。また、それと並んで、戦後ドイツにおける要政党(pivotal party)として政権形成に大きな影響を及ぼしてきたアクターである自由民主党(FDP)についての研究も進め、(1)二大政党を凌ぐ戦後最長の政権参加歴を誇ってきたFDPは、ドイツ統一後、党の中長期的な支持獲得の礎となってきた外交政策での意義を喪失した、(2)1980年代以降の多党化がドイツ統一後に一層進展したことによって、要政党としての地位を動揺させた、(3)選挙で低迷したFDPは野党に転落し、党の貴重な政治的資源であった政治家育成機能を大きく低下させた、(4)自前の政治的資源が乏しくなったFDPは、与党への非現実的な批判を繰り返すポピュリスト政党化の傾向を強め、党の政権担当能力を逆に毀損した、との知見を得て、同党についての研究論文を執筆した。研究の2年目に当たる平成27年度は、前年度の研究で得られた知見を活用しながら、学会・研究会などで他の研究者との意見交換を積極的に展開するなどして、戦後ドイツの統治機構上の特徴が政策立案・立法過程・政党政治の態様に与える影響について研究を進めた。その結果、政党政治への影響についての知見として、(1)建設的不信任案制度や政綱決定権をはじめとする様々な制度的権限に支えられている連邦首相の地位は強力なものであるが、議院内閣制であることから、連立与党の連邦議会議員団からの支持を保ち続けなければならない、(2)連邦首相を出している政党の連邦議会議員団からの支持獲得は党内問題であるが、連立を組んでいる小政党(ジュニアパートナー)の連邦議会議員団からの支持を左右するのは連立与党間関係であり、次元を異にする問題として分析していくる必要がある、(3)小政党からの支持を保ち続ける上では、小政党側の意向を政権運営に反映させることが重要であり、そのための手段としては連立与党間協議の実質化が重要なものとなる、(4)小政党側からの影響力は、小政党が政権離脱の現実的な威嚇力を有しているか否かという点に大きく左右されるが、その威嚇力は、政党システムの態様に大きく影響される、といった知見を得て、その成果を活かした学会報告の準備を進め、2016年10月に立命館大学で開催される日本政治学会(分科会E-4「連立政権におけるジュニアパートナーの研究」)で報告する予定である。データの収集や現地調査などの面では当初の計画よりも遅れ気味であるものの、分析・検証は着々と進んでおり、全体的に見れば、おおむね順調に進展しているものと評価できるため。平成28年度は、「半議院内閣制」という戦後ドイツの統治機構上の特徴が政権運営に与えた影響に関する研究報告を日本政治学会2016年度研究大会(於・立命館大学)で行った。そこで得られた知見は、(1)小政党側からの影響力は、最大野党との合計議席率というサイズの問題と、政党間の連立可能性という政策距離の問題という2つの要素によって規定される、政権離脱の現実的な威嚇力に左右される、(2)戦後ドイツの政党政治は、小政党の影響力という観点から、大きく3つの時期に区分される(第1期は、小政党が最大野党と提携しても過半数を取れずに最大与党CDU/CSUが圧倒的優位に立つ194961年、第2期は、小政党が最大野党に乗り換えると政権交代が生ずる3党制の時期(196183年)、第3期は、多党化が進み、連立相手の組み替えだけでは政権交代が難しくなった1983年以降の時期)。研究期間全体を通じて得られた知見は以下の通りである。(1)建設的不信任制度など様々な制度的権限に支えられている連邦首相の地位は強力なものであるが、議院内閣制であることから、連立与党の連邦議会議員団からの支持を保ち続けなければならず、連立相手の小政党との関係も重要となる。(2)連邦政府と連邦参議院が権力分立の関係に立つ「半議院内閣制」であることから、連立与党が連邦参議院で少数派となる分割政府状態の時には、連邦野党との交渉が立法過程を大きく左右する、

(3)戦後ドイツにおける要政党(pivotal party)として、小政党ながら二大政党を凌ぐ政権参加歴を誇ってきたFDPは、ドイツ統一後、党の中長期的な支持獲得を支えてきた外交政策での意義を喪失し、野党期が増加したことによって、党の政治的資源であった政治家育成機能を大きく低下させてポピュリスト政党化の傾向を強め、党の凋落を加速させていった。1.建設的不信任制度などに支えられている連邦首相の地位は強いが、連立与党の連邦議会議員団からの支持を保ち続けなければならず、連立相手の小政党との関係も重要となる。2.連邦政府と連邦参議院が権力分立の関係に立つ「半議院内閣制」であることから、連立与党が連邦参議院で少数派となる分割政府時には、連邦野党との交渉が立法過程を左右する、3.戦後ドイツの要政党として、小政党ながら二大政党を凌ぐ政権参加歴を有したFDPは、ドイツ統一後、中長期的な支持を支えていた外交政策での意義を失って野党期が増加したことにより、政治家育成機能を大きく低下させてポピュリスト政党化の傾向を強め、党の凋落を加速させた。データの収集や現地調査などの面では当初の計画より若干の遅れが見られるものの、分析・検証や研究成果の講評といった面では当初の計画以上に進展しているところもあるため、全体的に見れば、おおむね順調に進展しているものと評価できるため。今後は、日本の事例についての分析・検証を推進することによって、全体的な日独比較分析としての意義を強化していく。比較政治今後は、文献・新聞データベースなどを活用することによる分割政府状況下での立法過程についてのデータ収集をさらに進めるとともに、ドイツでの立法過程についての情報収集を行うために現地調査を行い、さらに、日本の事例についての分析・検証を推進して、全体的な分析枠組みの精緻化に努める。平成28年2月以降の研究活動において、旅費や物品費等の支出が必要となることを予想し、一定程度の研究費を残していたが、本務校での業務と健康上の理由により、次年度に繰り越す結果となった。平成27年2月以降の研究活動において、旅費や物品費等の支出(特に海外調査に伴う支出)が必要となることを予想し、一定程度の研究費を残していたが、本務校での業務と健康上の理由により、次年度に繰り越す結果となった。データ収集に若干の遅れが見られるので、その分野での調査活動に次年度私用が相当分を充てる計画である。データ収集に若干の遅れが見られるので、その分野での調査活動に次年度使用額相当分を充てる計画である。
栄養と炎症を直結するシグナル伝達経路の糖尿病への関与の解明

申請者はこれまでにがん細胞におけるmTORC1の活性化がFOXK1の活性化を誘導することで、がん炎症を惹起するという結果を得ていた。がんにおけるFOXK1の活性化は炎症性ケモカインであるCCL2の発現を上昇させ、M2型マクロファージの集積を誘導する。この結果に基づき、同じくmTORC1の異常活性化が観察され、なおかつCCL2の発現上昇とマクロファージの集積が認められる肥満脂肪組織の慢性炎症についても、がんと同様にmTORC1依存的なFOXK1の活性化が寄与するという仮説を立てた。この仮説に基づき脂肪組織のFOXK1を特異的に欠損したマウスを作製した。FOXK1 floxマウスに脂肪細胞とマクロファージの両方で発現するaP2-Creマウスを掛け合わせたマウスを作製したところ、通常食投与時には体重、血糖値ともに有意な差は見られず、高脂肪食投与時においても体重に有意な差は見られなかった。しかしながら高脂肪食投与時における耐糖能については有意な改善が見られた。以上の結果から脂肪組織における脂肪細胞・マクロファージのどちらかのFOXK1の活性化が耐糖能の異常に寄与していると考えられた。体重に差がないものの耐糖能のみに違いが見られるメカニズムは今後明らかにする必要がある。またマクロファージと脂肪細胞のどちらのFOXK1が機能しているかについて明らかにする必要があるため、現在は脂肪細胞特異的にFOXK1が欠損するマウス(Adiponectin-Creマウスとの掛け合わせ)を作製し、現在解析を進めている。脂肪組織特異的なマウスの作製とその解析は順調に進んでいる。aP2-CreによるFOXK1欠損マウスにおける耐糖能の改善という表現型も確認でき、仮説の一部は立証された。脂肪細胞とマクロファージのうち、どちらの細胞のFOXK1が表現型に寄与するか、またそのメカニズムの詳細を今後は解析していく必要があるものの、現状ではおおむね順調に進展していると考えられる。今後の課題として、肥満脂肪細胞のFOXK1の活性化が耐糖能異常に寄与するか否かのについての検証を行う。aP2-Creマウスとは異なり、マクロファージのFOXK1については欠損させず脂肪細胞のみで欠損させるマウス(Adipinectin-Creマウス)を作製し、耐糖能異常の改善が見られるかを観察する。これまで得られたデータではマウスの体重には異常が見られず耐糖能のみに変化が見られた。この詳細なメカニズムについても解析してゆく。
神経変性疾患の発症におけるVCPの酸化修飾の役割の解析

VCPは、AAAファミリーに属する蛋白質で、膜融合や蛋白質分解に関与している。当研究室では、神経変性疾患の発症において、細胞障害・死を誘導する蛋白質としてVCPを同定した。さらに最近、家族性筋ミオパチーの一群であるIBMPFDの原因遺伝子としてVCPが同定された。ATPase活性を失った変異体VCPは、ユビキチン化蛋白質の蓄積や細胞質の空胞、細胞死を誘導する。このことから、病理的な状況におけるVCPのATP分解活性の制御機構を解析することが神経変性疾患の発症機構の解明にとって重要であると考えられた。本研究では、まずVCPのATPase活性を制御する機構を明らかにした。VCPのATPase活性が、活性酸素/窒素種によって低下することを見いだし、その活性制御が、522番目のシステイン残基の酸化修飾によって担われていたことを示した。そして、過剰な活性酸素種が、VCPの機能低下を介して、小胞体の機能障害および細胞死を誘導することを示した。つづいて、IBMPFDで見いだされた変異体VCPの解析を行った。IBMPFDの病理像が、ATPase活性を失った変異体VCPが引き起こす細胞障害と共通点を持つことから、変異体VCPのATPase活性は低下していることが推測された。しかし、実際活性を測定したところ変異体VCPの活性はすべて亢進していた。さらに、IBMPFDの変異体VCPが、蛋白質凝集体の形成を促進する活性を有していることを見出した。以上の結果から、IBMPFDは、VCPの活性が低下したためではなく、活性が亢進した変異体VCPによって凝集体形成が促進されたために病理像を引き起こしていることが示唆される。以上本研究は、VCPのATPase活性の制御機構および凝集体形成におけるVCPの役割を明らかにした。活性酸素(ROS)や活性窒素(RNS)の過剰な発生は、様々な疾病、がん、神経変性疾患、炎症などを引き起こすと考えられている。VCPは、AAAファミリーに属する蛋白質で、細胞周期、膜融合そして蛋白質分解など多様な細胞機能に関与している。我々は、これまでの研究で、ATPase活性を失った変異体VCPが異常蛋白質の蓄積や空胞形成を誘導し、最終的に細胞死を引き起こすことを示してきた。すなわち、VCPのATPase活性がこれらの細胞機能の制御に関与していることが推測されるが、VCPのATPase活性を制御する分子機構は明らかとされていなかった。今回我々は、ROS/RNSがVCPのATPase活性を低下させることを見いだした。さらに、ROS/RNSによるATPase活性の制御に必須な1つのシステイン残基を特定し、このたった一つのシステイン残基を別の酸化を受けないアミノ酸に置換することでROS/RNS耐性型VCPを得ることが出来た。また、このROS/RNSによるVCPのレドックス制御が、蛋白質分解の制御機構に関与する可能性を示した。さらに、酵母を用いて、このVCPのレドックス制御が生体内でも利用され、細胞周期停止や細胞死の誘導に関与することを明らかにした。以上の結果から、VCPがROS/RNSの重要なターゲットの一つであり、ROS/RNSによるVCPのATPase活性の低下が、蛋白質分解や細胞周期などの制御に関与していることが示唆された。以前よりVCPは、神経変性疾患やガンの発症に関係している可能性が指摘されている。したがって、過剰なROS/RNSによるVCPの機能障害が、細胞障害および細胞死を誘導し、様々な疾患、神経変性疾患やがんなどの発症にも関与していることが推測される。