hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
血管内皮細胞の恒常性制御におけるTGF-βファミリーの役割解明

TGF-βファミリーは、細胞の増殖や分化などの生命現象を制御しており、シグナルの異常はがんや難治性疾患などの原因となることが知られている。本研究では血管内皮細胞の恒常性制御に関するTGF-βファミリーシグナルの役割解明を目指して、TGF-βファミリーすべてに必須の分子・Smad4、またはBMPシグナルを伝達するSmad1およびSmad5の遺伝子を内皮細胞特異的に欠損させるマウスを作成し、その影響について検証した。Smad4遺伝子をVE-カドヘリンプロモーター依存的に欠損させると、欠損から3週間以内に死亡したが、BMPシグナルを欠損した場合にはそれよりも早期に死亡することが明らかとなった。この結果は、血管内皮細胞ではTGF-βシグナルよりもBMPシグナルが重要であること、TGF-βシグナルとBMPシグナルの協調または拮抗作用が血管・リンパ管内皮細胞の恒常性維持にかかわっていることを示唆した。これらのマウスを利用して腫瘍血管内皮細胞の解析を行う予定であったが、遺伝子欠損により早期に死亡するため担癌マウスの作製が困難であった。そこで、血行性転移しやすい細胞株を作製し、血管内への浸潤能が9倍高くなった細胞株を作製することができた。これらの細胞ではBMPに対する感受性は変化なかったがTGF-βシグナルへの応答性が増加していることが分かった。これらの細胞のゲノムワイド解析を行ったところ、転移に関与すると予測される分子を複数同定することができた。また低酸素環境においてTGF-βシグナルを増強する分子を見出しており、この分子がSmadの安定化に関与することを現在論文投稿中である。内皮細胞特異的にTGF-βファミリーシグナルを欠損した場合とBMPシグナルのみを欠損させた場合の違いを明らかにすることができた。この違いは生存に関与しており、TGF-βファミリーによるリンパ管・血管内皮細胞の違いは非常に興味深いテーマとなっている。また利用している遺伝子改変マウスは遺伝子欠損を誘導すると早期に致死となってしまうため当初予定していた腫瘍転移に関与する血管内皮細胞の役割を解析することができなかった。そこで方向性を変えて腫瘍細胞の解析から血行性転移を促進する因子の探索を行ったところ、血行性転移にかかわる分子を多数同定できた。今後これら因子の分子メカニズムを解析し、腫瘍転移の分子メカニズムの詳細を明らかにすれば血行性転移を抑制する治療法の開発につながると期待される。さらに、低酸素環境において発現が促進されTGF-βシグナルを増強する分子を同定することができた(論文投稿中)1、Smad4f/f:VE-Cad-iCreERマウスにおける血管構造異常を引き起こすメカニズムを明らかにするために、Smnad4を欠損させて血管内皮細胞を用いて発現が変動している分子を同定する。特に、細胞間接着や血管内皮細胞に強く発現している分子に注目して解析する。血管内皮細胞、リンパ管内皮細胞を分取し、血管の恒常性維持に関与する分子メカニズムを同定する。
半導体・金属・磁性体微粒子を対象とした新しい光トラッピング法

本研究の目的は、偏光が放射状に分布した径偏光レーザービームを用いて、金属や半導体などの微粒子の光トラッピングを実現することである。初年度は、複屈折性を持った光学結晶を用いて共振器内部で偏光成分を空間的に分離し、径偏光あるいは方位偏光のみが安定に発振するようにした、まず、レーザー媒質にはc軸カットのNd:YVO_4結晶を選択した。これを半導体レーザーによるエンドポンピング法で励起したところ、約100mWの出力の径偏光レーザーの発振に成功した。同様の方法で、均一媒質であるNd:YAG結晶を用いた共振器内にノンドープのc軸カットYVO_4結晶を挿入したところ、2Wを超える径偏光レーザーの発振が確認された。次年度は光トラッピングの実験を行った。レーザービームをNAが1.2である水浸対物レンズによって集光した。捕捉しようとするガラス球またはポリスチレンラテックス球などの微粒子を浮遊させたガラスセルに対物レンズを浸し、観察した。まず、光軸と同じ方向の力を測定するために、ガラス球をトラップし、次にレーザー出力を次第に下げていき、粒子がトラップから外れる時の出力を記録した。大きさの異なるいくつかのガラス球に対して、同様の実験を行った。直線偏光のレーザービームに対するトラップ力と比較すると、径偏光ビームの方が大きな力が得られることが分かった。これは、幾何光学に基づいて行なった、トラップ力の計算結果ともよく一致しており、径偏光ビームが光トラッピングに対して、従来よく利用されている直線偏光ビームよりも、有効であることを明らかにすることができた。また、計算においては、粒子の屈折率に対する光トラップの効率も求めたが、それによると、屈折率の大きな粒子の方がより大きな効率を示すことがわかり、半導体のトラップにも有効であることを示すことができた。そのため本年度は、まず安定で十分な出力を持つ径偏光レーザーの発振を目指した。安定性を高めるためには、使用する光学部品数を減らして、できるだけ簡便な構成の共振器とすることが望ましい。そのため、レーザー結晶自体が持つ複屈折性を用いる、新しい方式の径偏光レーザーを製作した。レーザー媒質にはc軸カットのNd:YVO_4結晶を選択した。さらに、Nd:GdVO_4結晶に対してエンドポンピング法を適用して、同様の出力を得た。この場合励起効率が約10倍に向上した。さらに、これらの成果をもとに、均一媒質であるNd:YAG結晶を用いた共振器内にノンドープのc軸カットYVO_4結晶を挿入したところ、2Wを超える径偏光レーザーの発振が確認された。光トラッピングの実験には通常約1Wの出力があれば十分であり、ほぼ必要とされるレーザー出力を達成することができた。また、このようにして得られた径偏光ビームは安定に出力されることも確認され、従来の干渉計法に比べて格段の改善が図られたといえる。現在、実用化を視野に入れて、さらなる性能向上を目指し、偏光選択性ミラーを用いた径偏光レーザーの開発を進めており、来年度の光トラッピングの実現に向けてほぼ準備は整ったと言える。

そのため本年度は、複屈折性を持った光学結晶を用いて共振器内部で偏光成分を空間的に分離し、径偏光あるいは方位偏光のみが安定に発振するようにした、出力が1W以上のNd:YAGレーザーを用いて光トラッピングの実験を進めた。レーザー光を落射型の光学顕微鏡内に導光し、ダイクロイックミラーによって下方に反射した。これをNAが1.2である水浸対物レンズによって集光した。捕捉しようとするガラス球またはポリスチレンラテックス球などの微粒子を浮遊させたガラスセルに対物レンズを浸し、微粒子の様子を顕微鏡上に取り付けた、CCDカメラによって観察した。ガラスセルを保持している顕微鏡ステージには精密DCモーターを取り付け、一定の速度で移動できるようにした。まず、光軸と同じ方向の力を測定するために、ガラス球をトラップし、次にレーザー出力を次第に下げていき、粒子がトラップから外れる時の出力を記録した。大きさの異なるいくつかのガラス球に対して、同様の実験を行った。光トラップ力は、重力と浮力の釣り合いから求めることができる。直線偏光のレーザービームに対するトラップ力と比較すると、径偏光ビームの方が大きな力が得られることが分かった。これは、幾何光学に基づいて行なった、トラップ力の計算結果ともよく一致しており、径偏光ビームが光トラッピングに対して、従来よく利用されている直線偏光ビームよりも、有効であることを明らかにすることができた。また、計算においては、粒子の屈折率に対する光トラップの効率も求めたが、それによると、屈折率の大きな粒子の方がより大きな効率を示すことがわかり、半導体のトラップにも有効であることを示すことができた。
細胞内に存在する硫酸化糖脂質の生理機能の解明

本研究では、細胞内に存在する硫酸化糖脂質に焦点を当て、その機能を解明する事を目的としている。17年度の研究では、ヒト腎臓癌細胞株SMKT-R3の細胞質画分に硫酸化糖脂質と複合体を作ると思われるタンパク質が存在することを見いだした。18年度はこの硫酸化糖脂質と複合体を作ると思われるタンパク質の精製を行い、MALDI-TOF-MSを用いたペプチドマスフィンガープリント法などにより同定を試みた。前年度の実験ではウエスタンプロットにより約100KDaのタンパク質を見いだしたが、まずこのタンパク質が抗硫酸化糖脂質抗体D18により免疫沈降ができるか否かを検討した。D18をProteinG-sepharoseに結合させSMKT-R3の細胞質画分と混合し通常の免疫沈降実験を行った。その結果、ウェスタンブロツトの結果と同様に約100KDaの場所に沈降タンパク質が観察された。この結果から、目的タンパク質は免疫沈降により精製できる可能性が示唆された。次にSMKT-R3細胞約2x10^7個から細胞質画分を調製し上記免疫沈降法をおこなって、銀染色で解析したところ上記約100KDaのタンパク質と考えられるバンドおよびそれ以外に40KDa付近などにいくつか有意に免疫沈降されてくるタンパク質バンドを見いだした。さらに、これらのタンパク質をできるだけ多く精製するためにSMKT-R3細胞の大スケール培養を行って、それら細胞質画分を用いて上記免疫沈降法により精製を試みた。得られた精製試料をSDS-PAGEで解析しMS分析用銀染色により染色すると、4種類の有意なバンドが検出された。これらについて大阪府立母子保健総合医療センター研究所代謝部門の協力によりMALDI-TOF-MSを用いたペプチドマスフィンガープリント法を行い、各タンパク質の同定を試みた。その結果、40kDa付近のバンド1つについて有意な解析結果を得る事ができ、このバンドがDNA結合タンパク質の一種であるY box-binding protein (YB1)であることが示唆された。17年度は当初計画に従い、1)研究に用いる細胞の樹立と細胞内硫酸化糖脂質の発現確認、2)細胞内硫酸化糖脂質の発現が認められたヒト腎臓癌細胞SMKT-R3細胞の細胞質画分を用いて、抗硫酸化糖脂質抗体により硫酸化糖脂質-細胞内タンパク質複合体が検出できるか否かの確認を行った。1)まず硫酸転移酵素欠損マウス及び野生型マウスより皮膚組織を採取し皮膚組織由来繊維芽細胞を樹立した。さらに上述マウスの精巣から精原細胞を採取した。これら細胞を抗硫酸化糖脂質抗体DI8で染色しその局在を共焦点顕微鏡で確認した。その結果、皮膚組織由来繊維芽細胞においては硫酸化糖脂質の発現が弱く、細胞内における発現もほとんど検出できなかった。従って、皮膚組織由来繊維芽細胞は細胞内硫酸化糖脂質の研究に適さない可能性が示唆された。また、精原細胞の染色も試みたが浮遊細胞系のためうまく局在を観察する事ができなかったので、精巣および精巣上体の組織切片を染色し観察すると、精原細胞内にはごく少量の発現しか認められず、精巣上体上皮細胞において細胞内に発現がみられた。従って、本研究においてはヒト腎臓癌細胞株SMKT-R3細胞、硫酸転移酵素欠損マウス及び野生型マウスの精巣上体細胞を当面用いる事が適当であると判断された。2)ヒト腎臓癌細胞SMKT-R3細胞から細胞質画分を抽出し、硫酸化糖脂質-細胞内タンパク質複合体の存在を抗硫酸化糖脂質抗体DI8によるウエスタンブロット法により確認した。その結果、約100kDa付近にDI8に反応するバンドを見いだした。以上の結果から、このタンパク質は細胞内で硫酸化糖脂質と複合体を形成している可能性が示唆され、DI8抗体は少なくともウエスタンブロットにおいて硫酸化糖脂質-細胞内タンパク質複合体を認識できる抗体であると考えられた。

得られた精製試料をSDS-PAGEで解析しMS分析用銀染色により染色すると、4種類の有意なバンドが検出された。これらについて大阪府立母子保健総合医療センター研究所代謝部門の協力によりMALDI-TOF-MSを用いたペプチドマスフィンガープリント法を行い、各タンパク質の同定を試みた。その結果、40kDa付近のバンド1つについて有意な解析結果を得る事ができ、このバンドがDNA結合タンパク質の一種であるY box-binding protein (YB1)であることが示唆された。
締固め土の強度異方性の表現と斜面安定解析への応用に関する研究

締固め地盤の強度異方性に関して過去2年間に行ってきた研究の主要な成果(15)と、今後の展望(68)を要約すれば下記のようである:1.締固め地盤の種々の方向からサンプリングされた供試体に対して多数の三軸圧縮試験を実施した。そして、クーロンの破壊規準、破壊時のモ-ル円、ならびに供試体中のせん断面の傾角から、異方性を考慮したせん断強度式を導出した。2.異方せん断強度式中に現れる粘着力と内部摩擦角は共に最大主応力方向の関数となっている。そしてこれらの関係が不連続面(弱面)を有する堆積岩に対して提案されたMcLamoreらの式で一般表示できるという興味深い事実が明らかとなった。3.拘束圧の増大に伴って異方性の度合いが次第に減少して行くことが知られた。4.異方せん断強度式中に現れる粘着力と内部摩擦角を、主働破壊域において、成層方向(水平方向)と破壊面(すべり面)とのなす角の関数として曲線表示した。これによって異方性を考慮した盛土斜面の安定解析が大部分の斜面において可能となった。ただし、受働破壊域における強度式の一般形は不明のままであるため、受働破壊域が卓越する部分では安定解析を行うことはできない。5.異方性を考慮した斜面安定解析結果によれば、等方性を仮定することに比べて、臨界すべり面が相対的に浅い位置に現れること、及び最小安全率の値がより小さく出ることが判明した。6.受働破壊域における強度定数の分布を明らかにすること。7.主働・受働破壊域を含む強度式の一般形を特定すること。8.上の一般式に現れるパラメータを同定するための逆解析法を構築すること。本研究は振動ローラ等締固め重機で転圧された地盤内のせん断強度異方性を実験的に解明し、これに基づく斜面安定解析プログラムを開発することを第一の目的に、また異方性強度式中に現れるであろう3つ以上のパラメータを効率的に決定する方法論を確立することが第二の目的である。平成5年度は第一の目的を中心に研究を進めてきた。まず、小型ローラにより室内モデル地盤を作成し、種々の角度からサンプリングした供試体に対して多数の三軸圧縮試験を実施した。そうして、クーロンのせん断強度式、破壊時のモール円、ならびに供試体中に発生するせん断面の傾角を基にして、異方性を考慮した破壊規準を提案した。その結果、モール円に共通接線を引く既往の破壊線と、異方性を考慮したそれとの間には明らかに差異の有ることが確認された。すなわち、締固め土中には明白に異方性の生じることが確かめられた。異方性を取り込んだ斜面の安定解析を行うために、三軸供試体中に発生したせん断面と締固め時に形成される層のなす角度の関数として、異方性強度式中の粘着力と内部摩擦角を表現した。次いで簡便分割法に基づく異方性を考慮した斜面安定解析プログラムを開発した。盛土斜面を想定し、上記プログラムのもとに幾通りかの安定解析を行い、地盤を等方性とみなす既往の方法と比較した。それによると、多くの場合、臨界すべり面の位置、最小安全率ともに異方性と等方性で大きく異なることが判明した。特に、最小安全率の値の差が顕著であって、常に異方性を考慮した場合の最小安全率が、等方性の場合のそれより小さく現れることが明らかになった。この知見は重要であり、今後精度の高いBishop法等に基づく安定解析を通して一層深く検討と考察を加える必要がある。昨年度に引き続き、小型ローラにより室内モデル地盤を作成し、種々の角度からサンプリングされた供試体に対して多数の三軸圧縮試験を実施した。

この際、供試体の変形性状を一様とするため、端面摩擦の除去と、すべり面の測角に十分な注意を払った。その結果、異方性強度式中に現れる粘着力と内部摩擦角が、サンプリング角度つまり最大主応力方向の関数として、NcLamoreらの弱面を有する堆積岩の一般式で十分表現できるという極めて興味深い事実が明らかとなった。一方、異方性を取り込んだ斜面の安定解析を行うためには、上述の一般式ではなく、三軸供試体中に発生したせん断面と締固め時に形成される層のなす角度の関数として異方性強度式中の粘着力と内部摩擦角を一般表示せねばならない。ところが、三軸圧縮試験においては、締固め土の場合、受働破壊域におけるせん断面(すべり面)を発生し得ないという大変やっかいな問題のあることが判明した。そこで、とり合えず、主働破壊域に限定した上で、すべり面と成層間のなす角度と、強度定数との間の関係曲線に基づく安定解析用ソフトを開発した。そこでは無論精度の高いBishop法が用いられている。そして種々の問題を解決した結果、従前の等方性を仮定する場合に比べ、幾つかの新しい事実が明らかになった。ただし、受働破壊域の振舞いが不明のままであるため、この研究の元来の目的の1つであった、逆解析法の構築までには至らなかった。この点については目下研究遂行中である。
花器官分化調節物質の開発と分化調節機構の解明

花器官分化調節物質の開発、花器官分化に関係する代謝と花器官分化に対する植物ホルモンの役割について知見を得るため、本研究を実施したので、その概要を報告する。1、微生物由来の花器官分化調節物質の探索放線菌(Streptomyces hygroscopicus)をphaseolotoxin培地で培養し、培養ロ液から酸性ブタノール抽出物を得た。得られた抽出物は、各種クロマトグラフィーを用い精製し、目的とする含リン化合物と含リンアミノ酸をそれぞれ1種類単離した。単離した2種類の化合物を用いシロイヌナズナ生育試験を行ったところ、含リン化合物に生殖生長期における生育遅延と草丈の伸長抑制を示した。2、花の相称性に対する含リンアミノ酸の役割グリホサートをペチュニアに高濃度(1mM以上)で処理すると、葉が黄化し花芽形成が阻害される。一方、低濃度処理(0.1mM0.5mM)では、花の形が放射相称から左右相称へ変化することが観察される。この原因を明らかにするため、花弁の成分分析を行ったところ、アミノ酸とタンパク質含量、および芳香族アミノ酸の生合成と代謝には影響が見られないが、RNA生合成の抑制が認められた。さらに、RNAを構成するuridineの類縁ヌクレオシドである2',3'-dideoxyuridineをペチュニアに処理したところ、グリホサート同様、花形に対し影響を示した。以上の結果から、花の形の変化は、グリホサートの一次作用点であるEPSP合成酵素の阻害および芳香族アミノ酸の生合成と代謝系によるものではなく、RNAまたはRNA関連タンパク質による可能性が高いと推察される。3、花器官分化に対する植物ホルモンの役割糸状菌Aspergillusterreusの生産するシロイヌナズナ花粉形成阻害物質aspterric acid(AA)とオーキシンであるIAAとの相互作用の研究から、IAAはAAによる花粉形成阻害を抑制し花粉形成が回復することを見出した。また、AA処理したシロイヌナズナのIAA含量は未処理のものと変わらず、オーキンン極性輸送阻害剤であるNPAとも生理作用が異なる。そのため、AAの作用機作は生殖生長におけるIAAの生合成阻害や輸送阻害ではなく、花粉形成に重要な役割を持つタンパク質に対するIAAとの競争阻害により花粉形成が阻害されると推察される。花器官分化調節物質の開発、花器官分化に関係する代謝と花器官分化に対する植物ホルモンの役割について知見を得るため、本年度の研究を実施したので、その概要を報告する。1、微生物由来の花器官分化調節物質の探索これまでの知見から含リン化合物に花器官分化調節作用があることを見出しており、約100種類の微生物抽出物について、リンの呈色反応を指標として含リン化合物を含む抽出物を選抜した。選抜した菌を少量培養し、得られた培養ろ液から、含リン化合物を単離するための精製方法を確立した。現在、生産菌を大量培養し、目的とする含リン化合物の精製を行っている。2、花の相称性に対する含リンアミノ酸の役割これまでの検討結果から、含リンアミノ酸であるグリホサートにペチュニア花弁の相称性を変化させる作用を見出しており、本物質を処理した花弁の成分をコントロールと比較した。

グリホサートには、芳香族アミノ酸生合成阻害作用が知られているが、花弁のアミノ酸含量・組成とタンパク質含量・組成には違いが認められず、芳香族アミノ酸代謝に関係があるフェニルプロパノイド含量、リグニン含量およびIAA含量にも違いが認められなかった。しかし、硝酸態窒素含量が減少しており、さらに検討した結果、RNA含量が減少していることを明らかにした。3、花器官分化に対する植物ホルモンの役割Aspterric acid (AA)はシロイヌナズナ花粉形成阻害作用を示し、この作用をIAAが抑制し、花粉形戒が回復することを見出している、この結果は、IAAが花粉の生長に影響していることを示している。現在、IAAの極性移動阻害剤であるN-(1-ナフチル)フタルアミド酸(NPA)を用い、シロイヌナズナの生長に対する影響を検討している。NPA処理したシロイヌナズナは、生育抑制を示すが、花粉形成は阻害しない。さらに、NPAとIAAを併用処理しても生育抑制は回復しないことから、AAとNPAのIAAとの相互作用は異なることを示した。花器官分化調節物質の開発、花器官分化に関係する代謝と花器官分化に対する植物ホルモンの役割について知見を得るため、本年度の研究を実施したので、その概要を報告する。1、微生物由来の花器官分化調節物質の探索放線菌(Streptomyces hygroscopicus)培養液から目的物質を単離し、生物作用を検討した。St.hygroscopicusをphaseolotoxin培地で培養し、培養口液から酸性ブタノール抽出物を得た。得られた抽出物は、各種クロマトグラフィーを用い精製し、含リン化合物と含リンアミノ酸を単離した。単離した2種類の化合物を用いシロイヌナズナ生育試験を行ったところ、含リン化合物に生殖生長期における生育遅延と草丈の伸長抑制を示した。2、花の相称性に対する含リンアミノ酸の役割グリホサートをペチュニアに高濃度(1mM以上)で処理すると、葉が黄化し花芽形成が阻害される。一方、低濃度処理(0.1mM0.5mM)では、花の形が放射相称から左右相称へ変化することが観察される。この原因を明らかにするため、花弁の成分分析を行ったところ、芳香族アミノ酸の生合成と代謝には影響が見られないが、RNA生合成の抑制が認められた。さらに、RNAを構成するuridineの類縁ヌクレオシドである2',3'-dideoxyuridineをペチュニアに処理したところ、グリホサート同様花形に対し影響を示した。以上の結果から、花の形の変化は、グリホサートの一次作用点であるEPSP合成酵素の阻害および芳香族アミノ酸の生合成と代謝系によるものではなく、RNAまたはRNA関連タンパク質による可能性が高いと考えられる。3、花器官分化に対する植物ホルモンの役割糸状菌Aspergillusterreusの生産するシロイヌナズナ花粉形成阻害物質aspterric acid(AA)とオーキシンであるIAAとの相互作用の研究から、IAAはAAによる花粉形成阻害を抑制し花粉形成が回復することを見出した。
固体表面近傍における高分子鎖の運動性-蛍光プローブ法の経時的深さ方向分析への応用

膜厚50μmのポリカーボネート(PC)フィルムを用いて、水銀灯を光源に用いた真空中における光照射によりフィルム表面近傍に親水性のフェニルサリチレート(PS)構造を生成させ、水の接触角およびケイ光挙動の経時変化を測定した。PCは光照射により、光源側の表面が著しく親水化した。ことに後退角の変化が顕著であった。光照射により親水化したフィルムを室温で保存した際には接触角が増加(回復)したが、77Kで保存した場合には変化が認められなかった。このことから、PC表面上での水の接触角変化は、77Kで凍結するような親水性官能基(PS構造)の動的挙動と結びついていることが明らかになった。一方、光照射されたPCのケイ光発光スペクトルにはPSに基づくピークが470nm付近に現れた。この発光を詳細に検討した結果、PSはPC中での濃度が高く(0.18mol/L以上)なるとPS自身および副生するジヒドロキシベンゾフェノン(DHBP)構造により消光することが判明した。この現象を利用して、光照射によってPC表面近傍(約4μm以内)に生成したPS構造が、室温における保存中に拡散し、PC中の濃度を低下せせる現象を観測することに成功した。以上の結果については、現在投稿準備中である。また、室温以外の保存温度における変化については、現在検討を続行中である。次に、種々の濃度でPSおよびDHBPを分散させたPC薄膜をスピンコーティング法によって調製した後に積層し、ケイ光スペクトルを測定することにより、PSをケイ光プローブとする深さ方向分析のための検量線を作成することを試みた。しかし、PSのケイ光が消光される程度は主にPSの濃度に依存したため、単一波長の励起光によるケイ光測定では深さ方向の情報を正確に見積もることは困難であった。そこで現在、複数波長の励起光を用いることにより、PSの存在深さに関する知見を得る方法について検討を行っている。
SGLT2阻害による非生理的尿糖排泄下の糖代謝制御に関する新規数理モデルの構築

本研究はSGLT2阻害薬服用者の正常血糖高インスリンクランプでの解析データを基に、「SGLT2阻害薬による非生理的範囲の尿糖排泄という要因を含んだ新規な糖代謝制御に関する数理モデル」を構築することを目的とする。このような新規な数理モデルの解析を通じ、SGLT2阻害薬の代謝・ホルモン環境への影響や薬効予測要因の同定に加え、未知の耐糖能決定要因の解明に繋がる可能性もあることから、その学術的意義は大きいといえる。2型糖尿病患者を対象にSGLT2阻害薬を常用量服用させ、開始6日目までに経口ブドウ糖負荷試験ならびに正常血糖高インスリンクランプを実施し、血糖値、血清インスリン値、血漿グルカゴン値及びCPR値の時系列データと尿糖排泄量のデータを収集する。非生理的尿糖排泄や肝糖産生、グルカゴン分泌の刺激と抑制等の流速を加えた新規な数理モデルを構築し、収集するデータと既に収集済みのSGLT2阻害薬非服用者のデータをモデルに代入し、各流束のパラメーターを決定する。パラメーター間及びSGLT2阻害薬を服用・非服用者間のパラメーターの関係を検討し、SGLT2阻害薬の代謝に及ぼす影響や血糖恒常性維持に関わる新規な法則を見いだすことを目指す。平成29年度は、約40名のSGLT2阻害薬を服用した際の被験者における経口ブドウ糖負荷試験ならびに正常血糖高インスリンクランプの血糖値とホルモン値の時系列データを収集することを計画していたが、平成29年度のデータ収集数は22名にとどまった。平成30年度は、平成29年度に引き続き、正常血糖高インスリンクランプと経口ブドウ糖負荷試験のデータ収集を継続した。平成30年度は約60名のデータ収集を計画していたが、データ収集数は17名であり、研究開始時より累積39名にとどまった。当初の計画では、研究対象者を「耐糖能が正常型または境界型のボランティアならびに2型糖尿病患者」としていたが、「2型糖尿病患者」に変更となったことにより、研究対象者集団が小さくなり、研究対象者のリクルートが計画よりも遅れているため。また、正常血糖高インスリンクランプを施行する際に用いる機器の不具合により、本研究に必要な検査を施行することができない期間があったため。研究の進捗が遅れているため、本年度も引き続き、数理モデル構築のためのデータ収集を行っていく予定である。昨年度に引き続いて、より一層研究対象者のリクルートを促進していく。研究に用いる機器については、定期的なメンテナンスを行い、本研究に必要な検査を施行可能な状態に維持する。非生理的尿糖排泄や肝糖産生、グルカゴン分泌の刺激と抑制等の流束を加えた新規な数理モデルを構築し、収集するデータと既に収集済みのSGLT2阻害薬非服用者のデータをモデルに代入し、各流束のパラメーターを決定する。平成30年度は、さらに被験者のリクルートを促進し、引き続き数理モデル構築のためのデータ収集を行っていく予定である。当初の計画では、研究対象者を「耐糖能が正常型または境界型のボランティアならびに2型糖尿病患者」としていたが、「2型糖尿病患者」に変更したことにより、研究対象者集団が小さくなり、研究対象者のリクルートが計画よりも遅れているため。

パラメーター間及びSGLT2阻害薬を服用・非服用者間のパラメーターの関係を検討し、SGLT2阻害薬の代謝に及ぼす影響や血糖恒常性維持に関わる新規な法則を見いだすことを目指す。平成29年度は、約40名のSGLT2阻害薬を服用した際の被験者における経口ブドウ糖負荷試験ならびに正常血糖高インスリンクランプの血糖値とホルモン値の時系列データを収集することを計画していたが、平成29年度のデータ収集数は22名にとどまった。平成30年度は、平成29年度に引き続き、正常血糖高インスリンクランプと経口ブドウ糖負荷試験のデータ収集を継続した。平成30年度は約60名のデータ収集を計画していたが、データ収集数は17名であり、研究開始時より累積39名にとどまった。当初の計画では、研究対象者を「耐糖能が正常型または境界型のボランティアならびに2型糖尿病患者」としていたが、「2型糖尿病患者」に変更となったことにより、研究対象者集団が小さくなり、研究対象者のリクルートが計画よりも遅れているため。また、正常血糖高インスリンクランプを施行する際に用いる機器の不具合により、本研究に必要な検査を施行することができない期間があったため。これまでの研究対象者のリクルートは、そのほとんどが神戸大学医学部附属病院の入院患者からであったため、今後は外来患者からのリクルートも増やすようにする。また、神戸大学医学部附属病院だけではなく、関連病院でも研究対象者をリクルートできるようにするなど、研究対象者のリクルートの範囲についての改変も検討する。研究の進捗が遅れているため、本年度も引き続き、数理モデル構築のためのデータ収集を行っていく予定である。昨年度に引き続いて、より一層研究対象者のリクルートを促進していく。研究に用いる機器については、定期的なメンテナンスを行い、本研究に必要な検査を施行可能な状態に維持する。平成29年度は情報収集、討論のために計上していた国内旅費を使用しなかったこと、当初計画していた被験者数よりも少ない被験者数であったため、消耗品費の使用が予定よりも少なくなったことにより、次年度使用額が生じる結果となった。平成30年度は、平成29年度に引き続き正常血糖高インスリンクランプ法と経口ブドウ糖負荷試験のデータ収集を継続する予定である。グルコースクランプ法に必要な薬品、物品等の購入と、情報収集、討論のための旅費に研究経費の使用を計画している。平成30年度は、情報収集、討論をより活発に行っていくため、旅費の使用が見込まれる。また、被験者のリクルートを促進することにより被験者数が増加し、本研究に必要な物品等の消耗品費の使用が増加することが見込まれる。データ収集が遅れているため、物品費として計上している経費が使用されておらず、次年度使用額が生じている。今後も引き続き、データ収集を行うことにより、次年度以降に物品費として使用することを計画している。
古細菌CMGヘリカーゼとDNAポリメラーゼDの相互作用に関する構造生物学的研究

DNA複製は生命の健全な維持にとって最も重要な細胞内イベントの一つであり、多数のタンパク質群が関与し、複雑ながらも精巧な仕組みによって執り行われる。DNA複製開始初期過程では、ORCによる複製開始点認識後、鋳型DNAを解きほぐす役割を果たすMCMヘリカーゼ(6量体)がリクルートされる。MCM単独では非常に低いヘリカーゼ活性しか有さないが、GINS(4量体)およびCdc45(古細菌ではGAN)という活性化因子を伴って総分子量約30万近いCMGヘリカーゼ複合体を形成することで必要な活性を持つようになる。本研究では真核生物と良く似たDNA複製機構を持つ古細菌に着目し、(1)真核生物と共有するCMGヘリカーゼ複合体と(2)現段階では古細菌固有と推定されるDNAポリメラーゼD(PolD)について、生化学解析により明らかとなった直接相互作用の機能的重要性を原子レベルで解明するため、2者複合体の高分解能結晶構造解析を目指す。今年度は相互作用解析により見出したCMG-PolD間の機能的部分複合体1について結晶構造解析実験を実施した。試験管内で再構成した複合体をカラムクロマトグラフィーによって、結晶化に適した純度にまで精製した。その間、精製過程での構成因子の著しい脱離は観測されず、この複合体が比較的安定であることが分かった。次に結晶化条件検索を行い、構造解析可能と見込まれる単結晶を取得した。シンクロトロン放射光を用いたX線回折実験を行い、3.0Å分解能のデータセットを数セット取得することに成功した。CMG-PolD機能的部分複合体1について、3.0Å分解能のX線回折データを取得しており、次年度早期には基本構造を決定し、CMGとPolD間の主要な相互作用様式を原子レベルで決定できると見込まれるため。CMG-PolD機能的部分複合体1について、まずは3.0Å分解能での基本構造決定を試みる。分子置換法による構造決定可能と見込んでいるが、構造が決定出来ない場合はセレノメチオニン置換体タンパク質を用いた解析を実施する。一方、今年度の本結晶のX回折実験にて、到達分解能2.8Åの回折点も観測しており、結晶調製条件の精密化により、3.0Åを上回る高分解能のデータセットの取得、およびより精密な複合体構造決定の可能性も有り、引き続き、部分複合体1の解析を継続する。X線回折データ保存用のハードディスク等の購入を計画したが、本年度中に購入が必須の状況とはならなかったため、次年度に繰越し、ディスク容量や転送速度等、状況により適した物品を購入する方針に切り替えたため。研究進行には影響は全くない。
Pick病の病因追求による病的老化過程の解明

目的:Pick病の神経細胞に出現する重要な変化として注目されている二つの変化, Pick嗜銀球(Pick body以下PB)と腫脹神経細胞(Swollen chromatolytic neuron以下SCN)の関係を,免疫組織化学的,並びに超微形態的方法を用いて追求した.対象:病理学的にPick病の診断のついた13例の脳組織が本研究の対象である. PBとSCNを伴う群が9例,伴わない群が4例である.方法:肉眼的萎縮を示した皮質の各部位並びに海馬を含むホルマリン固定パラフイン包埋標本より6um厚切片を作成し, ABC法による酵素抗体免疫染色を施した.抗体は,抗phosphorylated tau抗体(以下抗p-tau,Ihara et al 1986),抗ubiquitin抗体(polyclonal,Haas et al 1985,and monoclonal,Mori et al 1987)を用いた.またホルマリン固定材料を急速凍結し,クリオスタットで6um厚の切片を作成し,酵素抗体間接法で染色後, osmium後固定,脱水epon包埋の上,超薄切片を作成し電顕的に観察した.また海馬及び新皮質のいくつかの部位について通常の電顕的観察を行った.結果:PBは抗p-tauにより100%認識された. PBだけでなく周辺のneuropilも細かく染色された.またSCNの胞体内の嗜銀性の部分が認識された.抗ubiquitinでもPBは染色されたが,陽性に染色されるPBの比率は部位によりまた症例によりかなりの差が存在し, PBを含まない神経細胞の胞体,樹状突起,核がしばしばびまん性に染色された.SCNは胞体がびまん性に染色された.免疫電顕では抗p-tauによる免疫反応はPB内の線維構造に限局していた.免疫電顕上PB類似の構造が周辺のneuropilに認められた.超微形態上, PB類似の構造が樹状突起やSCN内に認められた.結論:1.Pick病の病的過程は神経細胞体のみならず,樹状突起にも特異的に及んでいる.2.PBとSCNには免疫組織化学的にも超微形態上も移行が存在し,同じ細胞病理学的過程の異なった段階を示していると考えられる.目的:Pick病の神経細胞に出現する重要な変化として注目されている二つの変化, Pick嗜銀球(Pick body以下PB)と腫脹神経細胞(Swollen chromatolytic neuron以下SCN)の関係を,免疫組織化学的,並びに超微形態的方法を用いて追求した.対象:病理学的にPick病の診断のついた13例の脳組織が本研究の対象である. PBとSCNを伴う群が9例,伴わない群が4例である.方法:肉眼的萎縮を示した皮質の各部位並びに海馬を含むホルマリン固定パラフイン包埋標本より6um厚切片を作成し, ABC法による酵素抗体免疫染色を施した.抗体は,抗phosphorylated tau抗体(以下抗p-tau,Ihara et al 1986),抗ubiquitin抗体(polyclonal,Haas et al 1985,and monoclonal,Mori et al 1987)を用いた.またホルマリン固定材料を急速凍結し,クリオスタットで6um厚の切片を作成し,酵素抗体間接法で染色後, osmium後固定,脱水epon包埋の上,超薄切片を作成し電顕的に観察した.また海馬及び新皮質のいくつかの部位について通常の電顕的観察を行った.結果:PBは抗p-tauにより100%認識された. PBだけでなく周辺のneuropilも細かく染色された.またSCNの胞体内の嗜銀性の部分が認識された.抗ubiquitinでもPBは染色されたが,陽性に染色されるPBの比率は部位によりまた症例によりかなりの差が存在し, PBを含まない神経細胞の胞体,樹状突起,核がしばしばびまん性に染色された.SCNは胞体がびまん性に染色された.免疫電顕では抗p-tauによる免疫反応はPB内の線維構造に限局していた.免疫電顕上PB類似の構造が周辺のneuropilに認められた.超微形態上, PB類似の構造が樹状突起やSCN内に認められた.結論:1.Pick病の病的過程は神経細胞体のみならず,樹状突起にも特異的に及んでいる.2.PBとSCNには免疫組織化学的にも超微形態上も移行が存在し,同じ細胞病理学的過程の異なった段階を示していると考えられる.
中等教育を一貫する論証能力の形成に関する文化論的・人間学的研究

初年度となる2018年度の研究の目標は,本研究における「論証能力」の概念規定を行い,それを研究メンバー間で共有することであり,「論証能力」は本研究課題の最重要概念であるため,国内外の数学教育学研究の文献調査だけでなく,数学や論理学,教育方法学,及び関連教科・領域の文献を精査し,概念規定の妥当性や独自性を複数の研究者によって検討することであった。そのために2018年9月に研究集会を開催し,上記目標の達成のために研究メンバーの相互の発表を基に当該概念の共有を図った。また,これをベースに,メンバーが個別に研究を進め,2019年2月に開催された欧州数学教育学会(CERME11)に参加し,研究成果を発表した。なお,この場において,2020年に招聘予定のBerta Barquero博士(バルセロナ大学,スペイン)との招聘に関わる打合せも行った。また,2019年3月には,外国人研究者(David reid博士,ブレーメン大学,ドイツ)を招聘して,証明の学習と指導に関する国際研究集会を開催し,本科研のメンバーの多くが参加して準備や運営を行った。国際研究集会では,研究セミナー,講演会,ワークショップを通して,本科研の研究課題に関わる研究活動の国際化を推進した。研究実施計画に従って,予定した研究集会を開催し,研究成果を積み上げてきている。また,その成果を,国内外の学会で発表してきていることから,「おおむね順調に進展している」と判断される。加えて,次年度(2019年度)に向けての計画・準備ともに順調に四天していることもあげられる。本年度(2019年度)は,「証明のフォーマット」を視点として,国内外の数学的証明の指導と学習についての調査・分析を行うことを主たる目的とする。これは,前年度(2018年度)招聘したDavidReid博士(ブレーメン大学,ドイツ)との共同セミナーから示唆を得たものであり,本視点を中心に据えて,これまでの本研究プロジェクトの反省的前進を図りたい。具体的には,教授人間学理論(ATD)における教授学的転置論上の知識に対応するものとして「証明のフォーマット」を捉えるとき,各institutionにおける様相とその転置について吟味・検討を行うだけでなく,国際比較をする上でも,有効な視点となり得ると考えられる。また,本研究プロジェクトのこれまでの成果としての「証明を捉える枠組み」を拡充するものとして,証明の指導と学習における歴史的,文化的な考察を可能とする理論枠組みとなる可能性も含んでいる。更に,本年度は,上記の活動に加え,「探究活動」と「論証」との連関,特にATDにおけるStudyandResearchPaths(SRP)にも視野を広げていくと同時に,教師のpara-didactic活動にも焦点を当てることで,教授実践を理論的に捉えるだけでなく,教師の実践の背後にある営みについても調査・分析を行う。これは,次年度(2020年度)に予定される海外研究者招聘による国際共同セミナーへの準備的な活動としても位置づけられる。本年度は,こうした活動について,ATD Advanced Program(67月,Barcelona, Spain),日本科学教育学会(8月,宇都宮大学),ICMT3(9月,Paderborn, Germany),日本数学教育学会(11月,東京学芸大学),全国数学教育学会(12月,広島大学)の各学会において,プロジェクト共同,ならびに個人による研究成果の発表を行うことを予定している。

具体的には,教授人間学理論(ATD)における教授学的転置論上の知識に対応するものとして「証明のフォーマット」を捉えるとき,各institutionにおける様相とその転置について吟味・検討を行うだけでなく,国際比較をする上でも,有効な視点となり得ると考えられる。また,本研究プロジェクトのこれまでの成果としての「証明を捉える枠組み」を拡充するものとして,証明の指導と学習における歴史的,文化的な考察を可能とする理論枠組みとなる可能性も含んでいる。更に,本年度は,上記の活動に加え,「探究活動」と「論証」との連関,特にATDにおけるStudyandResearchPaths(SRP)にも視野を広げていくと同時に,教師のpara-didactic活動にも焦点を当てることで,教授実践を理論的に捉えるだけでなく,教師の実践の背後にある営みについても調査・分析を行う。これは,次年度(2020年度)に予定される海外研究者招聘による国際共同セミナーへの準備的な活動としても位置づけられる。本年度は,こうした活動について,ATD Advanced Program(67月,Barcelona, Spain),日本科学教育学会(8月,宇都宮大学),ICMT3(9月,Paderborn, Germany),日本数学教育学会(11月,東京学芸大学),全国数学教育学会(12月,広島大学)の各学会において,プロジェクト共同,ならびに個人による研究成果の発表を行うことを予定している。
アパタイト析出法を利用した象牙質知覚過敏症の治療法に関する研究

象牙質知覚過敏症の治療法としてはこれまで種々の方法が試みられてきたが、決定的に有効な治療法は確立されていない。本研究では我々が開発したリン酸カルシウムのpHに対する溶解度差を利用して開口象牙細管内深部にまでリン酸カルシウムを析出させて封鎖する方法に改良を加え、より耐酸性に優れ、歯質成分でもあるアパタイトを即時に析出させる方法の開発を試みた。アパタイト析出液としてはリン酸カルシウムを含有した酸溶液(1M CaHPO_4・2H_2O、2M H_3PO_4)を、pHを上げるための後処理液としては1N-NaOHに00.1mol/L濃度のNaFを添加し、フッ素添加が析出物組成および象牙細管封鎖効果に及ぼす影響を検討した。知覚過敏を想定して酸処理にて象牙細管を開口させた象牙質プレートにアパタイト析出液を綿球にて1分間塗布し、綿球にて乾燥した後、種々のフッ素濃度の後処理液を1分間塗布した。このプレートを走査型電子顕微鏡により観察した結果、後処理液に含有されるフッ素濃度にかかわらず象牙細管は緻密な結晶性物質によりプレート表面より約10ミクロンの深さまで封鎖されており、後処理液へのフッ素添加は封鎖深度に影響を与えないことが分かった。象牙細管内析出物の組成を検討するため、X線微小分析により調べた結果、析出物のCa/P比はフッ素を添加しない場合は1.0であったが、フッ素濃度に比例してその価は大きくなり、0.1molのNaFを後処理液に添加した場合には1.25と有意に高い値であった。この析出物の粉末を粉末X線回折およびフーリエ変換赤外線分光法(FT-IR)により分析した結果、0.05mol濃度以上のNaFを後処理液に添加した場合には析出した結晶はアパタイトであることが分かった。本処理法により開口した象牙細管を深部にまでアパタイトで即時に封鎖できる可能性が示唆された。
ユビキチン化タンパク質の26Sプロテアソームへの効率的ターゲティングの機構と意義

細胞内のタンパク質分解システムとして,ユビキチン・プロテアソーム系が脚光を集めている.このユビキチン・プロテアソーム系により分解されるタンパク質は,まずユビキチン化酵素群により選択的にポリユビキチン化され,それをシグナルとして26Sプロテアソームが捕捉し分解するという2つのステップにわけられていた.私を含むいくつかのグループが,この2つのステップ間をつなぐリクルート因子を同定し,ユビキチン化の後のステップ(ポリユビキチン化タンパク質のプロテアソームへのターゲティング)において重要な役割を果たしているというモデルを提唱した.現在,このモデルはユビキチン-プロテアソーム系の研究の焦点となっている.(1)26Sプロテアソームにより分解される任意のユビキチン化基質をユビキチンリガーゼの1つRsp5を用いることにより試験管内で簡便に調製する系を確立した.興味深いことに本方法により形成されるポリユビキチン鎖は,プロテアソームによる分解に関与しないはずのLys63リンクのユビキチン鎖であることを質量分析により同定した.この発見は従来の定説を覆すものである.本年度,Rsp5の生理的な基質かつ,26Sプロテアソームにより分解される基質を探索し同定した.現在,プロテアソーム変異体より,ユビキチン化された基質タンパク質を精製し,ユビキチン鎖のトポロジーを質量分析で解析中である.(2)上記の解析中,26Sプロテアソーム内在性のユビキチンレセプターは1つではなく複数存在することが明らかになった.現在,架橋剤と質量分析を用いて新規ユビキチンレセプターの同定を試みている.細胞内タンパク質分解システムとして,ユビキチン-プロテアソーム系(以下UPS, Ubiquitin-Proteasome System)が脚光を集めている.UPSにおいて分解される運命にあるタンパク質は,まずユビキチン化酵素群により選択的にユビキチン化され,それをシグナルとして26Sプロテアソームが捕捉し分解するという2つのステップにわけられる.われわれを含むいくつかのグループがこの2つのステップ間をつなぐ因子Rad23/Dsk2を同定し,現在,このユビキチン化タンパク質のプロテアソームへのターゲティング機構がUPS研究の焦点となっている.今年度,このターゲティング機構の解析を目的とし,ユビキチン化酵素と26Sプロテアソームについて,それぞれ解析を進めた.上記Rad23/Dsk2と遺伝学的にかつ物理的に相互作用するUFD系のユビキチン化を解析したところ,ユビキチン伸長因子であるUfd2は1つのユビキチン-ユビキチン結合を認識し,分解のためのユビキチン鎖を形成させることを質量分析等を用いて明らかにした.また,ユビキチンリガーゼRsp5を用いることにより様々なユビキチン化タンパク質を試験管内で調製する系を確立した(Methods in Enzymology,印刷中).一方,26Sプロテアソームのアフィニティ精製により,DNA損傷に関わる因子Dss1の酵母ホモログが26SプロテアソームのLidサブユニットであることを発見した.同じくLidサブユニットのRpn6,Rpn7についても解析を進め,これらのサブユニットがプロテアソームのユビキチン化タンパク質分解活性に必須であることを明らかにした.また,ユビキチン鎖アナログであるタンデムユビキチンを細胞内で発現させることにより26Sプロテアソームを特異的に阻害することを明らかにした.次年度は,これらの知見と材料により,ユビキチン化タンパク質がどのような機構で26Sプロテアソームにターゲティングされるか解析を進める.細胞内のタンパク質分解システムとして,ユビキチン-プロテアソーム系が脚光を集めている.このユビキチン-プロテアソーム系により分解されるタンパク質は,まずユビキチン化酵素群により選択的にポリユビキチン化され,それをシグナルとして26Sプロテアソームが捕捉し分解するという2つのステップにわけられていた.私を含むいくつかのグループが,この2つのステップ間をつなぐリクルート因子Rad23/Dsk2を同定しユビキチン化の後のステップ(ポリユビキチン化タンパク質のプロテアソームへのターゲティング)において重要な役割を果たしているというモデルを提唱した.現在,このモデルはさらに拡大し,ユビキチン-プロテアソーム系の研究の焦点となっている.今年度,本研究課題の遂行を目的とし,26Sプロテアソームにより分解される任意のユビキチン化基質をユビキチンリガーゼの1つRsp5を用いることにより試験管内で簡便に調製する系を確立した(Methods in Enzymology,399,2005,215-227).興味深いことに本方法により形成されるポリユビキチン鎖は,プロテアソームによる分解に関与しないはずのLys63リンクのユビキチン鎖であることを質量分析により同定した.この発見は従来の定説を覆すものである.Rsp5の生理的な基質であるRNAポリメラーゼIIのラージサブユニットRpb1の分解を試験管内で再構築に成功し,前述の発見が支持された.現在,細胞内においてRpb1がどのような経路で分解されるかの詳細を解析中である.細胞内のタンパク質分解システムとして,ユビキチン・プロテアソーム系が脚光を集めている.このユビキチン・プロテアソーム系により分解されるタンパク質は,まずユビキチン化酵素群により選択的にポリユビキチン化され,それをシグナルとして26Sプロテアソームが捕捉し分解するという2つのステップにわけられていた.

私を含むいくつかのグループが,この2つのステップ間をつなぐリクルート因子を同定し,ユビキチン化の後のステップ(ポリユビキチン化タンパク質のプロテアソームへのターゲティング)において重要な役割を果たしているというモデルを提唱した.現在,このモデルはユビキチン-プロテアソーム系の研究の焦点となっている.(1)26Sプロテアソームにより分解される任意のユビキチン化基質をユビキチンリガーゼの1つRsp5を用いることにより試験管内で簡便に調製する系を確立した.興味深いことに本方法により形成されるポリユビキチン鎖は,プロテアソームによる分解に関与しないはずのLys63リンクのユビキチン鎖であることを質量分析により同定した.この発見は従来の定説を覆すものである.本年度,Rsp5の生理的な基質かつ,26Sプロテアソームにより分解される基質を探索し同定した.現在,プロテアソーム変異体より,ユビキチン化された基質タンパク質を精製し,ユビキチン鎖のトポロジーを質量分析で解析中である.(2)上記の解析中,26Sプロテアソーム内在性のユビキチンレセプターは1つではなく複数存在することが明らかになった.現在,架橋剤と質量分析を用いて新規ユビキチンレセプターの同定を試みている.
19世紀における「移民大国」アイルランドと北米大陸の相互関係についての研究

本研究は19世紀におけるアイルランド移民について、大西洋をはさんだ4地域(南北アイルランド、アメリカ合衆国、カナダ)を取り上げ、多くの移民を送り出した「移民大国」アイルランドの移民前夜の状況、そして多くの移民を受け入れた「移民国家」カナダとアメリカ合衆国両国におけるアイルランド移民の影響を、さらには移民たちが外国に定住した後に祖国アイルランドに与えた影響を、歴史的・文化的・宗教的に検証し、「移民大国」と「移民国家」の内実を相互関係のうちに探求したものである。具体的には次の3点において明らかにした。(1)南北アイルランドにおける移民排出の歴史的背景についての考察(2)北米大陸にアイルランド移民が及ぼした社会的・文化的影響についての考察(3)移民を通してみたアイルランドと北米大陸の両地域の相互関連性についての考察。本研究の対象は大西洋をはさむ4地域であり、下記のように4人の研究者がそれぞれ一つの地域を担当する。南アイルランドからの移民(奥田良二)、北アイルランドからの移民(佐藤亨)、アメリカ合衆国への移民(稲垣伸一)、カナダへの移民(佐藤郁)。以上が担当地域であるが、研究方法や一次資料として用いたテキストは、統計(数値)をもとにした分析もあれば、詩や小説などの文学テキスト、あるいはソングなど多岐にわたる。なお、各研究者によって地域分担が決まっているものの、地域を横断するものが移民であるゆえ、南・北アイルランド担当者が北米大陸について、そして北米大陸担当者が南・北アイルランドについて言及した場合もある。また、本研究の成否は、各地域の研究を有機的に関連付けられるかどうかにかかっており、次の3点の具体的な作業を前提としたものである。(1)各地域についての先行研究(二次資料)の収集・読解(2)各地域における現地調査、及び一次資料の収集・読解・データベース化(3)研究者間の日常的な情報交換と定期的な研究会の実施。われわれはアイルランド系移民を扱った大著Kerby A.Miller, Emigrants and Exilesの精読を共有する了解のもとに、会合、メール等での連絡を重ねながら研究を進めた。以下に各人の成果を記す。佐藤亨は3月にニューヨークの移民博物館、アイリッシュ・アーツ・センター等で移民の足跡を、17日の聖バトリックの祝日ではアイルランド文化の継承を確認した。論文ではアメリカ産のフォークソングが北アイルランド紛争の文脈で歌われる意味を探り、また、アイリッシュ・アメリカンのバンド、ソーラスのバラッド「人食いアヌス」を通しアメリカ合衆国におけるアイルランド性を論考した。奥田は北アイルランド出身で1987年以降北米に定住する「移民」詩人ポール・マルドゥーンを取り上げた。ポストモダン、コスモポリタンと形容される詩風のなか祖国の豊かな歴史や伝説や両親との思い出をにじませながら望郷の念を表出させる作品を通し、アイルランド系移民の心的状態の一端を明らかにした。佐藤郁は大飢饉時のカナダにおけるアイルランド系移民の受け入れをテーマとし、なかでも移民船の環境の劣悪さが多くの死者や病人を出し、それがカナダ側に混乱をもたらしたことに着眼し、8月にはベルファストとロンドンのUlster Museum、Ulster Folk Museum、National Maritime Museum等を視察し、移民船の状況を調査した。現在、カナダのグローセ島とケベック周辺での孤児の受け入れに関する論文を執筆中である。稲垣は9月に、アイルランド系移民が大挙して押し寄せたニューヨーク州エリー運河沿岸の諸都市を訪ね、収集した新聞・雑誌・パンフレット等の一次資料と19世紀末の小説家Stephen Craneの作品数編における移民の描写とを比較した。アイルランド系移民は飲酒習慣との関連で描かれることが多く、合衆国における社会問題と関係しており、次年度は禁酒運動の黎明期である1840年代のアメリカ社会との関係を取り上げる。まずは研究者それぞれの成果を列記する。