hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
特異的膜輸送に関与するSecl/Munc-18ファミリーの構造機能相関

vps45とCe-vps45のキメラ遺伝子によるドメイン解析酵母vps45およびマウスホモログによるCe-vps45変異体のレスキュー活性を調べたところ、マウスホモログにはレスキュー活性があり、酵母vps45にはレスキュー活性が認められなかった。そこで機能的に保存された配列を推定するため酵母、線虫、マウスvps45のアミノ酸配列比較をもとにドメイン解析が進行中である。Secl/Munc-18ファミリーメンバーであるvps45線虫オルソログに着目し、特異的膜輸送と機能的ドメインの相関を解析するため本年度以下の実験を行った。1.syntaxinとの相互作用の解析酵母vps45はsyntaxinメンバーであるTlg2と相互作用し、細胞質からvacuoleへのメンブレントラフィックに関わることが報告されている。Tlg2との相互作用に関わる線虫vps45のドメインを明らかにするためyeast two hybridシステムによりdeletion studyおよびchimerastudyを行った。Sec1/Munc-18ファミリーは3つのドメインから構成されているためN末およびC末から各ドメインを欠失させたconstructおよびunc-18とのキメラ体を各種作成し解析した。その結果ドメイン1単独あるいは全長タンパク質のみTlg2との相互作用能があることがわかった。この相互作用能はドメイン1内のD28N変異により消失した。2.線虫vps45変異体の表現型解析GFPを用いたレポーター解析では、vps45は神経、筋、下皮、腸管など多くの組織で発現がみられた。また、GFPをタグにすることで可視化したカテプシンD蛋白質の動態(ゴルジ体からリソソームヘの輪送)や卵黄蛋白質であるビテロジニニンの卵細胞への取り込み(レセプター仲介エンドサィトーシス)、偽体腔内に強制発現させたGFPのマクロファージ様細胞への取り込み(液相エンドサイトーシス)を変異体バックグラウンドで観察した。その結果線虫vps45は酵母vps45から予測されるゴルジ体からリソソームヘの輸送だけではなくエンドサイトーシスにも必須の機能をもつことを発見した。3.線虫vps45とTlg2との相互作用がどの輸送経路に関わっているのかを解明するため変異体のどの表現型がD28N変異によりレスキューされるのかを解析した。変異体の致死性に対するレスキュー活性は認められなかった。
「妊産婦の全身モデル」の教育訓練用シミュレーターの開発

助産学教育では、性と生殖の課題を中心にしたケアを行うので、直接生殖器に触れて診察(視診、聴診、計測診、聴診、内診等)を行い総合的に診断する能力の育成を目的にしている。しかし日本では出少数の減少に伴い多くの妊産婦に接して学習する機会が減少してきている。確実な診断と安全で苦痛の少ないケアを行うには、演習で十分な技術訓練を行い実践に臨むことが必要である。そこで、妊産婦の全身観察を的確に行える教育訓練用シュミレーター「妊産婦の全身モデル」を開発した。教育訓練用シュミレーターは、妊産婦の全身体型を成し、外診、内診、分娩、産褥等の演習項目に応じてパーツをユニット化し、そのパーツを交換する事により、助産学のシュミレーションが可能な構造とした。このモデルには胎児、胎児付属物、胎児心音発生装置、乳房を備え、開脚を自由に出来る股関節と膝関節を持ちフリースタイルの分娩の演習も可能である。平成9年度は5回の研究者会議を開催した。検討内容と作業進行状況は下記の通りである。最初に、既存品(内診モデル、乳房モデル、分娩介助モデル、沐浴人形、妊婦腹部触診モデル導尿モデル)の問題点を挙げ、改良案を具体的に検討した。具体案に即して全身シュミレーターの基礎となる部分(内診、分娩介助、妊婦腹部触診)の試作品を作成して再度、目的とする機能と付加する機能、及び実物近似性の検討を行った。途中で教材作成の製作工程を主にした工場の見学を行い、全身モデルの骨格を確認し、分娩介助モデルの胎盤の色調、血管分布、卵膜の脱落膜・絨毛膜・羊膜の剥離と性状、臍帯の血管の走行・色調などの再検討を行い、内診モデルの産道の構造や感触、頚管成熟度、外観などの改善状況を確認した。妊婦腹部触診モデルでは胎児の形態や腹部から触診時に触れる胎児部分の硬さや位置の再検討を行った。続いて全身モデルの骨格を元にした全身体形の石膏原形の確認を行い、第一次試作品モデルを作成した。現段階の第一次試作モデルでは、全身モデルの中に内診、導尿、腹部触診、分娩介助、会陰縫合、産褥子宮、乳房管理のパ-ツ装着が可能である。従来の部分モデルに比較した、腹部触診モデルの胎児と分娩介助モデルの軟産道の伸展は大幅に改善され、分娩介助は頭部分娩の介助のみならず、骨盤位の娩出術(牽出法)の訓練も可能である。これからの課題は股関節や肩関節等の関節の可動性と、腹部分大動脈の装着と止血法の組み合わせである。平成10年度には,平成9年に検討した各部分モデルの改良の更なる工夫を行い試作品を完成させた.全身モデルに付与する部分機能の目的に即して,且つ実践可能性を確認して試作品の作成と修正を行い,目的に近づけた.1.フリースタイル分娩が可能な全身骨格と,肘・股・膝関節の固定と可動性の試作と修正を繰り近し,安定性を保てるようにした.2.各部分モデルを完成させた.(1)妊婦腹部診察モデル-胎児の位置と固定状態の確認のために,傾斜をつけた支持版を作成し目的に応じて使用するようにした.(2)内診モデル-ビショップスコアを判断できるように,子宮口の関大を4種類作成し,開大に応じて下降度も調節できるようにした.導尿モデルの装着により,分娩時の導尿の訓練ができる.(3)分娩介助モデル-軟産道・会陰の伸展性が改善され骨盤位の分娩も可能になった.(4)胎盤の精査-柔軟性と卵膜の工夫を行い3枚の剥離状態を確認することや,臍帯断端での3本の血管の確認を加えた.(6)軟産道縫合モデルの装着により,縫合の訓練ができる.(7)産褥子宮モデルは,復古状態の良否を確認することと,乳房モデルは乳腺房を加え産褥早期の乳房の触知と,初乳圧出の訓練が行えるようにした.以上のモデルを目的に応じて全身モデルに組み合わせて訓練ができる.3.教材として活用しやすいように,UTRを作成した.
誤り許容・高バンド幅の光通信を用いた不確実容認コンピューティング

ビッグデータ計算に代表される全体としての結果が重要な計算と潜在的な不正確さを持つ問題への近似計算が今後重要となる。これらの並列計算は計算ノード間の通信に膨大な処理時間を要する。そのため、データセンター内の通信が性能向上の鍵となる。しかし、2020年代後半には半導体の集積度の向上が終焉する。つまり、正確な動作のために大きいマージンを取る従来の設計では計算機システムの大幅な性能向上が困難となる。本研究ではマージンを削り、相応のビット化けを許容することで高バンド幅低遅延を実現する光通信を用いた計算機システムの設計技術を確立する。そして、ビット化けによる不確実性を容認する並列計算技術を開発する。人工知能やビッグデータ処理では、並列計算のための通信コストが重要である一方、計算結果は近似値でよい場合が少なくない。本研究ではそのような応用に向け、フォトニクスを用いることで、一定の通信誤りを許容しつつ高バンド幅低遅延の通信を実現するとともに、通信誤りを前提とした計算アルゴリズムを設計することによって、計算機システム全体としての近似計算性能を向上させることを目指している。通信誤りを前提として計算機システムを再設計するというアイデアは斬新である。また研究対象は計算機アーキテクチャから近似アルゴリズムの設計まで幅広く、当該学問分野の発展・融合が期待できる。Society 5.0に向けて人工知能やビッグデータ処理の重要性は増しており、本研究成果の社会への貢献も期待できる。
乳癌患者における骨髄または末梢血中癌細胞に対する高感度同定法の有用性

Cytokeratin19mRNAに対するRT-nested PCR法を用いた乳癌細胞高感度検出法を開発した.本法の検出感度は血中有核細胞100万個当たり乳癌癌細胞25個であった.正常骨髄を計14例検討したところ7例にCytokeratin19mRNAの発現を認めたが,正常末梢血9例中にはその発現は認めなかったので乳癌患者末梢血検体に対して本法による検討を行いその臨床腫瘍学的意義を検討した.初発乳癌患者58例および再発乳癌患者8例に対し,それぞれ手術前と治療前に末梢血を採血し本法によりCytokeratin19mRNAの発現を検討した.それぞれ14例,6例で発現を認め,正常末梢血を含めた3群間でその発現率に有意差を認めた.また病理組織学所見で血管侵襲群と非侵襲群でCytokeratin19mRNAの発現を比較したところ血管侵襲群で有意に発現率が高かった.以上の結果よりCytokeratin19mRNAに対するRT-PCRを用いて乳癌細胞が鋭敏に検出されることが明かとなり,本法を利用することによって血中乳癌細胞を検出しうること,また血中乳癌細胞が腫瘍マーカーとして有用であることが示唆された.Cytokeratin19mRNAに対するRT-nested PCR法を用いた乳癌細胞高感度検出法を開発した.本法の検出感度は血中有核細胞100万個当たり乳癌癌細胞25個であった.正常骨髄を計14例検討したところ7例にCytokeratin19mRNAの発現を認めたが,正常末梢血9例中にはその発現は認めなかったので乳癌患者末梢血検体に対して本法による検討を行いその臨床腫瘍学的意義を検討した.初発乳癌患者58例および再発乳癌患者8例に対し,それぞれ手術前と治療前に末梢血を採血し本法によりCytokeratin19mRNAの発現を検討した.それぞれ14例,6例で発現を認め,正常末梢血を含めた3群間でその発現率に有意差を認めた.また病理組織学所見で血管侵襲群と非侵襲群でCytokeratin19mRNAの発現を比較したところ血管侵襲群で有意に発現率が高かった.以上の結果よりCytokeratin19mRNAに対するRT-PCRを用いて乳癌細胞が鋭敏に検出されることが明かとなり,本法を利用することによって血中乳癌細胞を検出しうること,また血中乳癌細胞が腫瘍マーカーとして有用であることが示唆された.
シミュレーションによる化学ゲルの構造とダイナミクスの研究

化学ゲルに関して、(1)通常のモンテカルロ法および(2)Brownian Dynamicsを用いて、生成過程を研究した。Brownian Dynamicsによる方法は、通常のモンテカルロ法よりも、ゲルが動きやすいという長所がある。(1)により、ゲルの構造に関しては、重合度分布を見た場合に、シングル・ピーク、ロングテイル、2ピークの3つの相があることがわかった。これはゲルの光散乱の緩和関数の分布と定性的に一致する。(2)のBrownian Dynamicsを用いたシミュレーションにおいて、分子内架橋を禁止した系と禁止しない系を比較した。分子内架橋を禁止した場合に、リンカーが分子間架橋により使われるようになり、ゲル生成が促進されることがわかった。分子外架橋は分子内架橋よりも生成に時間がかかる。部分架橋(リンカーの片方が重合した状態)と分子内架橋は、シミュレーション初期に大量に生成される。シミュレーションが示すゲル化の閾値は、実験の閾値よりも高い値を示す。この結果は、系が不均一で高分子の密度が高い領域と低い領域があり、高い領域がシミュレーションに対応していると考えられる。この成果を応用し、今後は生体系のシミュレーションを行う予定である。
発表者のふるまいを観測・フィードバックするプレゼンテーション支援システムの構築

本研究は学会等での発表を行う者が自主的にプレゼンテーション練習を行なう際に,自分の発表内容を確認し,その分析を客観的に行なうことができるシステムの構築を目標としている.その実現のため,インストラクショナルデザインのADDIEモデルに着目し,『「分析(Analyze)」を行うための「プレゼンテーションのアーカイブ・発表者のふるまいの観測」』,および『「評価(Evaluate)」のための「設定された評価項目との一致・不一致の検証」』を可能とするシステムの開発について取り組んだ.本研究は学会等での発表を行う者が自主的にプレゼンテーション練習を行なう際に,自分の発表内容を確認し,その分析を客観的に行なうことができるシステムの構築を目標としている.その実現のため,インストラクショナルデザインのADDIEモデルに着目し,『「分析(Analyze)」を行うための「プレゼンテーションのアーカイブ・発表者のふるまいの観測」』,および『「評価(Evaluate)」のための「設定された評価項目との一致・不一致の検証」』を可能とするシステムの開発について取り組んだ.本研究はインストラクショナルデザインのADDIEモデルに基づき,発表者が自主的にプレゼンテーション練習を行なう際に,自分の発表内容を確認し,その分析を客観的に行なうことができるシステムの構築を目標としている.その実現のためには,『1.「分析(Analyze)」のための「プレゼンテーションのアーカイブ・発表者のふるまいの観測」』『2.「設計(Design)」のための「事例に即した典型的な設計方針の選出」』『3.「実施(Implement)」のための「設計方針に従った指示の提示」』『4.「評価(Evaluate)」のための「設定された評価項目との一致・不一致の検証」』を可能とするシステムの開発が必要である。平成20年度は上記の1,2の実現のため,「プレゼンテーションアーカイブシステムの構築」と「プレゼンテーション事例の収集」について取り組んだ.「プレゼンテーションアーカイブシステムの構築」については,プレゼンテーション全体を記録するカメラ,発表者の様子を観測するカメラ,および発表者音声を記録するマイクを配置したシステムを構築した.これにより,簡易にプレゼンテーションとそのときの発表者のふるまいをアーカイブすることが可能となっている.ただし,獲得された発表者の様子や音声に対する画像処理・音声処理の部分については,ふるまいの基本的な単位(発表者の発話(音量,抑揚等)・手首の動き・位置・向き)への変換処理が十分ではないため,この実現が急務である.「プレゼンテーション事例の収集」については,実際のプレゼンテーション練習についての事例をすでに10件程度獲得している.今後,上記のふるまいの基本的な単位への変換処理が実現し次第,それらのパターンを入力データとし,実際のプレゼンテーション練習で行なわれた指摘事例を教師信号としたクラスタリングにより,発表者のふるまいと支援内容との関連についての分析を行っていく.本研究はインストラクショナルデザインのADDIEモデルに基づき,発表者が自主的にプレゼンテーション練習を行なう際に,自分の発表内容を確認し,その分析を客観的に行なうことができるシステムの構築を目標としている.その実現のためには,『1.「分析(Analyze)」のための「プレゼンテーションのアーカイブ・発表者のふるまいの観測」』『2.「設計(Design)」のための「事例に即した典型的な設計方針の選出」』『3.「実施(Implement)」のための「設計方針に従った指示の提示」』『4.「評価(Evaluate)」のための「設定された評価項目との一致・不一致の検証」』を可能とするシステムの開発が必要である。平成21年度は上記の2,4の実現のため,「収集したプレゼンテーションアーカイブシステムの分析手法の検討」および「プレゼンテーション事例の継続収集」について取り組んだ.「収集したプレゼンテーションアーカイブシステムの分析手法の検討」については,以前構築したシステムから獲得したプレゼンテーションと発表者の映像,および発表者音声に対して画像処理・音声処理をかけ,ふるまいの基本的な単位(発表者の発話(音量,抑揚等)・手首の動き・位置・向き)へと変換処理を行う部分を構築することでふるまいの基本的な単位を分析する準備を行った.これにより,プレゼンテーションからの頻出パターンの抽出といった項目評価の処理が今後可能になることが予想できる.「プレゼンテーション事例の継続収集」については,実際のプレゼンテーション練習についての事例を510件程度追加で獲得している.今後,上記の結果を踏まえ,それらのパターンを入力データとし,実際のプレゼンテーション練習で行なわれた指摘事例を教師信号としたクラスタリングにより,発表者のふるまいと支援内容との関連についての分析を行っていく.本研究はインストラクショナルデザインのADDIEモデルに基づき,発表者が自主的にプレゼンテーション練習を行なう際に,自分の発表内容を確認し,その分析を客観的に行なうことができるシステムの構築を目標としている.その実現のためには,『1.「分析(Analyze)」のための「プレゼンテーションのアーカイブ・発表者のふるまいの観測」』『2.「設計(Design)」のための「事例に即した典型的な設計方針の選出」』『3.「実施(Implement)」のための「設計方針に従った指示の提示」』『4.「評価(Evaluate)」のための「設定された評価項目との一致・不一致の検証」』を可能とするシステムの開発が必要である.平成22年度は上記の2,4の実現のため,ひきつづき「収集したプレゼンテーションアーカイブシステムの分析手法の検討」について取り組んだ.

「収集したプレゼンテーションアーカイブシステムの分析手法の検討」については,以前構築したシステムから獲得できるプレゼンテーションと発表者の映像,および発表者音声から,ふるまいの基本的な単位(発表者の発話(音量,抑揚等)・手首の動き・位置・向き)へと変換処理を行う処理部を構築し,実際のシステムを用いて獲得したデータに対するふるまいの基本的な単位の抽出について取り組んだ.この処理を通じて,プレゼンテーションからの頻出パターンの抽出といった項目評価の処理についても検討した.現在,分析結果と支援のための設計方針選出および提示については不十分なため,今後はシステムで分析したパターンと,実際のプレゼンテーション練習における指摘事例の相関から,発表者のふるまいと支援内容との関連についての分析を行う必要がある.
細胞死抑制因子ＢＴＢＤ１０の発現量はなぜＡＬＳ脊髄運動神経細胞で減少するのか？

筋萎縮性側索硬化症(ALS)は進行性に上位・下位運動神経細胞が変性脱落する神経難病である。本研究では、我々が以前に同定したALS関連運動神経細胞死抑制因子であるBTBD10発現量が、ALS患者並びに、ALSモデルマウス脊随運動神経細胞において低下する事を明らかとした。また、培養運動神家細胞株、線虫を用いた実験系で、内在性BTBD10発現量を抑制することによって、運動神経細胞死が惹起される事を明らかとした。これらのことから、運動神経細胞におけるBTBD10発現量低下がALS病態発症並びに進行の一因となる事が示唆された。筋萎縮性側索硬化症(ALS)は進行性の運動神経変性疾患で、症状進行を止める治療薬の無い難病の一つである。我々はこれまでに、ALS関連神経細胞死がRac1/PI3K/Akt経路を介して抑制可能である事を報告し、さらにこの経路におけるAkt活性増強因子としてBTBD10を同定した。また、培養神経細胞や線虫においてBTBD10発現量を低下させる事で細胞死が誘導される事、さらには孤発性ALS患者や、ALSモデルマウスの脊髄運動神経細胞でBTBD10発現量が低下している事を明らかとした。本年度は、昨年度に引き続きBTBD10ノックアウトマウス並びにBTBD10トランスジェニックマウス作製を行った。ノックアウトマウスに関しては、C57BL/6Jバックグラウンドにするための戻し交配を行っている。BTBD10トランスジェニックマウスは、長期飼育を開始し、寿命、体重変化、神経症状の有無、発ガン傾向などの観察を行っており、6ヶ月齢時点では野生型動物と差異は認められていない。さらに、BTBD10トランスジェニックマウスを筋萎縮性側索硬化症(ALS)モデルマウスの一つであるA315T-TDP-43トランスジェニックマウスと交配し、ダブルトランスジェニックマウスを作製した。現在はこのBTBD10/A315T-TDP-43トランスジェニックマウスを用いて、BTBD10の高発現によりALS症状の発症時期、進行速度がA315T-TDP-43トランスジェニックマウスと比較して遅延するか検討を行っている。また、本年度は上記の研究に加えBTBD10ホモログであるKCTD20の生理機能解析を行い、KCTD20がBTBD10同様にAkt全てのアイソフォームと結合する事並びに、Aktのリン酸化を上昇させる事を明らかとした。本研究は、筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者脊髄における神経細胞死抑制分子BTBD10の発現低下機構解明を目的としている。本年度はBTBD10遺伝子欠損マウスの作製を行い、現在はこのマウスの遺伝子背景を一致させるためC57BL/6Jマウスにバッククロスを行っている。また、BTBD10トランスジェニックマウスの作製も行い、複数のファウンダーを得た。現在はファウンダーマウスとC57BL/6Jマウスとを交配中である。我々はこれまでにALS原因遺伝子の1つであるFused in sarcoma (FUS)がBTBD10の発現量をmRNAレベルで低下させる事を明らかとした。本研究では、FUSによるBTBD10発現量低下と運動神経細胞死との関連性を明らかとすべく、ALS関連FUS変異体あるいは野生型FUSを発現するFUSトランスジェニック線虫を作製した。また、ALS関連TDP-43変異体あるいは野生型TDP-43を発現するTDP-43トランスジェニック線虫の作製も同時に行った。作製中のALS関連変異体過剰発現線虫は、導入遺伝子のコピー数制御が可能であり、現在は低コピーから高コピーまで複数ラインの樹立を行っている。さらに本年度は培養細胞にプロテアソームインヒビターやタンパク合成阻害剤を添加し、BTBD10の分解機序を検討した。その結果、内在性BTBD10発現量はタンパク質合成阻害剤添加1時間後には半減するが、プロテアーゼインヒビターを培地中に同時に添加する事によってBTBD10発現量低下は完全ではないが抑制される事を明らかとした。この事からBTBD10の分解の一部はユビキチンプロテアソームシステムにより行われている事が示唆された。本研究は筋萎縮性側索硬化症(ALS)脊髄運動神経細胞における神経細胞死抑制分子BTBD10の発現低下機構解析、並びにBTBD10発現量低下がALS病態に与える影響を解析する事を目的としている。本年度は昨年度に引き続きBTBD10ノックアウトマウスの作製のために遺伝背景をC57BL/6Jに揃えるための戻し交配を行い、10回目の戻し交配が終了した。更に、このマウスと全身性にCreリコンビナーゼを発現するマウスとを交配し、ヘテロノックアウトマウスを得た。

今後はヘテロノックアウトマウス同士を交配し、ホモノックアウトマウスを作製後、寿命、ALS様症状並びに他の神経症状の有無、発癌性などを観察する予定である。また、平成24年度に作製したBTBD10トランスジェニックマウスを継続して長期飼育しているが、現時点では野生型と比較して寿命が短いという事はなく、また、BTBD10がAkt活性増強因子である事から発癌傾向を観察しているが、癌の発生は認められていない。さらに、本年度はBTBD10トランスジェニックマウスとALSモデルマウスの1つであるA315T-TDP-43トランスジェニックマウスとを交配し、複数のBTBD10/A315T-TDP-43ダブルトランスジェニックマウスを得た。現在はBTBD10過剰発現がALS症状進行に与える影響を観察中である。分子病態薬理学我々はこれまでにAkt活性化を介して細胞死抑制に働くBTBD10の発現量が、ALS患者脊髄運動神経細胞で低下する事を明らかとしており、ALSモデルマウスの1つであるG93A-SOD1トランスジェニックマウスの脊髄運動神経細胞においてもBTBD10発現量がALS症状進行依存的に低下する事も明らかとした。これらの事から、ALS脊髄運動神経細胞におけるBTBD10発現量低下が、ALS関連神経細胞死の原因の1つである可能性が考えられる。本研究ではメインテーマを2つ設け、1)ALSモデルマウスとBTBD10トランスジェニックマウスを交配する事でALS症状の進行抑制あるいは、発症時期の遅延が観察されるか、2)BTBD10ノックアウトマウスでALS様症状が観察されるか否かを検討する。1つ目の項目に関しては、本年度は予定通りBTBD10トランスジェニックマウスとALSモデルマウスの交配を行い、BTBD10/A315T-TDP-43ダブルトランスジェニックマウスを作製し、表現型の解析をする為の動物数を確保している段階であり、このまま順調に進めば予定通り平成26年度中旬までには解析が終了する予定である。2つ目のBTBD10ノックアウトマウスのC57BL/6Jバックグラウンドへの戻し交配は予定通りに進んでいる。尚、今回作製するBTBD10ノックアウトマウスはCre-loxPシステムを用いたノックアウトである為、現段階ではBTBD10遺伝子のノックアウトは完了していない。研究がこのまま予定通り進行すると、平成26年度初旬に10回目の戻し交配を終了し、Cre発現マウスと交配する事でBTBD10ノックアウトマウスの作製、表現型解析、並びにALSモデルマウスとの交配が可能となる予定である。平成24年度の目標はBTBD10トランスジェニックマウス並びにBTBD10ノックアウトマウスの作製と、BTBD10発現量調節機構の解析であった。BTBD10トランスジェニックマウス作製に関してはファウンダーマウスを得て、現在C57BL/6Jマウスと交配中であり、平成25年度はその表現型解析並びにALSモデルマウスとの交配が可能となり、おおむね順調に進展している。
胆道ドレナージ症例における胆汁酸分画の変化と経口胆汁酸負荷の効果に関する研究

1.胆道ドレナージ前後における胆汁酸の変動の検討ドレナージ前の総胆汁酸は134mumole/l,その97.8%は抱合型でグリシン/タウリン(G/T)比は0.90,コール酸/ケノデオキシコール酸(CA/CDCA)比は1.61であった.黄疸改善群と非改善群とに分けて検討すると前者はドレナージ前に119.6mumole/l,ドレナージ24時間後では12.36mumole/l,(10.9%)まで改善した.G/T比は0.94から1.10へ上昇したが,CA/CDCA比は変化しなかった.非改善群ではドレナージ前に57.98mumole/lであったのがドレナージ24時間後でも39.85mumole/l(68.7%)までしか改善しなかった.G/T比は0.67から0.69とわずかに変化したのみでCA/CDCA比は変化しなかった.2.胆道ドレナージ症例における胆汁酸経口投与の検討胆管完全閉塞7例にPTBDを施行した.総ビリルビン値が3.0mg/dl以下となった時点でICG検査を行うとICGの胆汁中排泄量は静注後経時的にゆっくり上昇し,2時間後から検査終了までほぼ一定値を示した.一方,UDCA投与後ではICGの胆汁中排泄は早期から認められ,ICG静注2時間後にピークを示し以後漸減した.静注後4時間のICG排泄量はUDCA投与によって15.9から25.4mumole/4hrsと有意に増加した.UDCA投与により4時間の胆汁流量,胆汁酸排泄量,リン脂質排泄量もそれぞれ95から152ml/4hrs,415から575mumole/4hrs,243から325mumole/4hrsと有意に増加していた.合計14回のICG検査における4時間後の胆汁酸排泄量とICG排泄量の関係を検討すると,両者間にr=0.624と有意(p<0.02)な正の相関が認められた.以上より,UDCA経口投与によりICGの胆汁中排泄量が有意に増加したこと,及び胆汁中の胆汁酸排泄量とICG排泄量に相関がみられたことから胆汁酸は有機陰イオンの胆汁中排泄のdriving forceであることが示唆された.1.胆道ドレナージ前後における胆汁酸の変動の検討ドレナージ前の総胆汁酸は134mumole/l,その97.8%は抱合型でグリシン/タウリン(G/T)比は0.90,コール酸/ケノデオキシコール酸(CA/CDCA)比は1.61であった.黄疸改善群と非改善群とに分けて検討すると前者はドレナージ前に119.6mumole/l,ドレナージ24時間後では12.36mumole/l,(10.9%)まで改善した.G/T比は0.94から1.10へ上昇したが,CA/CDCA比は変化しなかった.非改善群ではドレナージ前に57.98mumole/lであったのがドレナージ24時間後でも39.85mumole/l(68.7%)までしか改善しなかった.G/T比は0.67から0.69とわずかに変化したのみでCA/CDCA比は変化しなかった.2.胆道ドレナージ症例における胆汁酸経口投与の検討胆管完全閉塞7例にPTBDを施行した.総ビリルビン値が3.0mg/dl以下となった時点でICG検査を行うとICGの胆汁中排泄量は静注後経時的にゆっくり上昇し,2時間後から検査終了までほぼ一定値を示した.一方,UDCA投与後ではICGの胆汁中排泄は早期から認められ,ICG静注2時間後にピークを示し以後漸減した.静注後4時間のICG排泄量はUDCA投与によって15.9から25.4mumole/4hrsと有意に増加した.UDCA投与により4時間の胆汁流量,胆汁酸排泄量,リン脂質排泄量もそれぞれ95から152ml/4hrs,415から575mumole/4hrs,243から325mumole/4hrsと有意に増加していた.合計14回のICG検査における4時間後の胆汁酸排泄量とICG排泄量の関係を検討すると,両者間にr=0.624と有意(p<0.02)な正の相関が認められた.以上より,UDCA経口投与によりICGの胆汁中排泄量が有意に増加したこと,及び胆汁中の胆汁酸排泄量とICG排泄量に相関がみられたことから胆汁酸は有機陰イオンの胆汁中排泄のdriving forceであることが示唆された.
門脈-静脈血薬物濃度差を利用した門脈吸収動態および肝クリアランス評価に関する研究

抗炎症剤であるdiclofenacを腸肝循環モデル薬物として、覚醒時ラットにおける門脈吸収および肝臓初回通過効果の新規評価法の確立を試みた。方法として軽いエーテル麻酔下でラットの門脈上部および頸静脈に同時カニューレを施し覚醒後、diclofenacを静脈瞬時投与し、適当な時間間隔で同時採血を行った。消化管からdiclofenacの再吸収がないときは門脈血と静脈血のdiclofenac濃度に差は見られなかったが、吸収があるときは門脈血濃度が静脈血濃度よりも高くなった。(門脈-静脈薬物濃度差;P-V difference)。この濃度差に門脈血流速(9.8ml/min)を掛けることにより門脈吸収速度を求めた。その積分値より門脈吸収率を求め、さらに体循環血への吸収率の比より肝臓通過率を求めた。Diclofenacは40%が腸肝循環により再吸収され、肝臓で約半分が消失して、結果として20%の体循環への吸収率となった。また同様の系において消化管に胆汁を供給したラットと供給しない覚醒ラットでdiclofenacの吸収をみたところ、胆汁を供給したラットの門脈への吸収率が明確に大きくなった。さらに麻酔剤pentobarbitalのdiclofenacの吸収の影響をみた。その結果pentobarbitalはdiclofenacの肝クリアランスは変化させないが胆汁排泄を大きく阻害することが示された。このP-V difference法の結果をさらに確かめるために、一回通過肝灌流実験を行った。この実験においても灌流液中にpentobarbitalがある場合はdiclofenacの胆汁中排泄が大きく阻害されることが示された。
肝障害・肝疾患研究に資するzone特異的肝細胞の創出技術の開発

平成29年度までに、肝細胞同士(あるいは肝細胞と非実質細胞の間)の相互作用解析によりWnt7BおよびWnt8Bがzone3肝細胞の形成に関与し、肝細胞ー胆管上皮細胞間の相互作用解析によりWNT inhibitory factor 1(WIF-1)がzone1肝細胞の形成に関与することを見出した。平成30年度は、Wnt7BやWnt8B、WIF-1を過剰発現することにより、さらにzone特異的な機能を高めたヒトES/iPS細胞由来肝細胞の作製を実施した。しかし、ヒトES/iPS細胞由来肝細胞のzone特異的肝機能獲得に関与するWntシグナル関連因子は培養液中で不安定である。そのため、本研究では、Zonation形成因子を搭載したファイバー改変型アデノウイルスベクターの作製を行い、Zonation形成因子をヒトES/iPS細胞由来肝細胞に遺伝子導入する実験を行った。その結果、Wnt7BあるいはWnt8Bを過剰発現することにより薬物代謝能などのzone 3機能が向上し、WIF-1を過剰発現することにより、尿素産生能などのzone 1機能が向上した。続いて、zone特異的ヒトES/iPS細胞由来肝細胞を用いて、zone特異的な肝障害を予測できるか検討した。薬物代謝能が向上しているzone1およびzone 3ヒトES/iPS細胞由来肝細胞に対して、アセトアミノフェンを作用させたが、細胞生存率に顕著な差が認められなかった。現在、アセトアミノフェンの代謝物の量を測定することにより、細胞生存率に差が生じなかった原因を究明中である。肝障害は、1肝臓がびまん性に障害を受けるものと、2不均一に障害を受けるものの2種に大別される。2の例として、門脈域のzone1肝細胞が障害を受けるウイルス性肝炎、中心静脈域のzone3肝細胞が障害を受ける薬物性肝障害などの数多くの『zone特異的な肝障害』がある。肝障害にzone特異性が生じる原因は、肝細胞がzoneに応じた特異な機能を有することにあるが、肝障害研究に使用される既存のヒト肝細胞モデルはzone特異的な機能を持たない。そのため、現行の創薬技術では、肝臓のzonationを加味した肝障害の予防法や治療技術の開発が実施できない。そこで本研究では、zone特異的機能を獲得したヒトiPS細胞由来肝細胞の作製法を開発した。しかし、肝臓のzonation形成機構はほとんど明らかになっていないため、肝臓を構成する種々の細胞が織りなす相互ネットワークを手掛かりにzone特異的肝細胞の作製を目指した。その結果、肝細胞同士の相互作用解析によりWnt7BおよびWnt8Bがzone3肝細胞の形成に関与し、肝細胞ー胆管上皮細胞間の相互作用解析によりWNT inhibitory factor 1(WIF-1)がzone1肝細胞の形成に関与することを見出した。今後、Wnt7BやWnt8B、WIF-1を過剰発現することにより、さらにzone特異性を高めた肝細胞の作製を実施したい。さらに、Wnt7BやWnt8B、WIF-1による肝細胞のzone特異性獲得に関する詳細なメカニズム解析を実施するとともに、zone特異的肝細胞を用いた創薬試験等を実施していきたい。これまでに、研究代表者らは、ヒトiPS細胞由来肝細胞を肝細胞の培養上清を用いて培養することによりzone3肝細胞、胆管上皮細胞の培養上清を用いて培養することによりzone1肝細胞を作製できることを見出していた。本研究では、胆管上皮細胞および肝細胞の培養上清に含まれる液性因子等の中から、zonation形成に関わる因子の同定を試みた。胆管上皮細胞および肝細胞において、肝臓のzonation形成に関与すると言われているWntシグナルに関連する因子の発現プロファイルを取得し、zonation形成因子の絞り込みを実施した。その結果、胆管上皮細胞および肝細胞においてWnt7BとWnt8Bが高発現しており、胆管上皮細胞のみでWIF-1が高発現していることを見出した。また、ヒト肝臓の生検サンプルを用いた免疫染色実験を実施したところ、胆管上皮細胞がWIF-1を高発現していることが確認できた。次に、Wnt7BとWnt8B、WIF-1が、肝細胞のzone特異的機能の獲得に関与するかどうか調べた。Wnt7BとWnt8B、WIF-1をノックダウンした胆管上皮細胞および肝細胞の培養上清を用いてヒトiPS細胞由来肝細胞の培養を行い、zone特異的肝機能を解析した。その結果、肝細胞におけるWnt7BとWnt8Bをノックダウンすることにより、zone3特異的機能が消失すること、胆管上皮細胞におけるWIF-1をノックダウンすることにより、zone1特異的機能が消失することを確認した。以上のことから、肝細胞が産生するWnt7BとWnt8Bがzone3肝細胞形成に関与し、胆管上皮細胞が産生するWIF-1がzone1肝細胞形成に関与することが示唆された。以上の研究成果から、当該年度は、おおむね順調に進展していると判断した。

平成30年度は、Wnt7BやWnt8B、WIF-1を過剰発現することにより、さらにzone特異的な機能を高めたヒトES/iPS細胞由来肝細胞の作製を実施した。しかし、ヒトES/iPS細胞由来肝細胞のzone特異的肝機能獲得に関与するWntシグナル関連因子は培養液中で不安定である。そのため、本研究では、Zonation形成因子を搭載したファイバー改変型アデノウイルスベクターの作製を行い、Zonation形成因子をヒトES/iPS細胞由来肝細胞に遺伝子導入する実験を行った。その結果、Wnt7BあるいはWnt8Bを過剰発現することにより薬物代謝能などのzone 3機能が向上し、WIF-1を過剰発現することにより、尿素産生能などのzone 1機能が向上した。続いて、zone特異的ヒトES/iPS細胞由来肝細胞を用いて、zone特異的な肝障害を予測できるか検討した。薬物代謝能が向上しているzone1およびzone 3ヒトES/iPS細胞由来肝細胞に対して、アセトアミノフェンを作用させたが、細胞生存率に顕著な差が認められなかった。現在、アセトアミノフェンの代謝物の量を測定することにより、細胞生存率に差が生じなかった原因を究明中である。ヒトiPS細胞由来肝細胞のzone特異的肝機能獲得に関与すると予想されるWnt7BやWnt8Bは培養液中での半減期が短く不安定である。より高いzone特異的肝機能を有したヒトiPS細胞由来肝細胞を作製するために、高濃度のzonation形成因子を暴露する実験を行う。Zonation形成因子を搭載したアデノウイルスベクターの作製も行い、zonation形成因子をヒトiPS細胞由来肝細胞に遺伝子導入する実験を行う予定である。本研究で作製したヒトiPS細胞由来zone特異的肝細胞を用いて、zone特異的な肝障害を予測できるか検討する。アセトアミノフェン(APAP)、フェノバルビタール(PB)などの薬物は中心静脈域に強い細胞障害を引き起こすことが知られている。そこで、zone特異的肝細胞を用いて、APAPやPBによる肝毒性をin vitroで再現できるか検証する。
改変メクセンの創製と空気電池電極への適用

WドープMXeneナノシートを、選択エッチングによってWドープMAX前駆体から調製した。ドーピングされたWは、MAX結晶中の2つのうちの1つのTi席を優先的に占有する事を解明した。この席は、MXeneに転換された際に表面に暴露される。窒素雰囲気中でMXeneを加熱する事で生成する炭窒化チタンの生成過程を調べた。層状のチタン炭窒化物が、表面官能基の脱離、炭窒化チタンへの変換、炭窒化チタンの再結晶化を含む3段階の反応を介して形成されることを明らかにした。また、非晶質の硫黄炭素化合物をTi2SC MAXからチタンを選択的に抽出することによって合成し、Naイオン電池の正極に適用した。。MXene(メクセン、マキシン)は、近年出現した、高電気伝導性、高比表面積ののシート構造、多様な化学組成、官能基修飾された表面等の特徴を持つ新しい機能性物質である。本研究では、通常金属成分であるサイトに多様な化学組成、官能基改質など、部分選択制御の方法論を確立する。このような改変MXeneを電子構造や化学結合の観点から特徴を明らかにしつつ、水溶液系での酸素還元・発生特性への効果を実証することを目的とし、研究を進めた。前駆体となるTi-Al-C系のMAX相への種々の遷移金属元素を添加し、これをエッチングによってMXeneに転換した際にも、MXene中に高く保持される元素の探索を行った。SPS法により、前駆体MAX相の合成条件の検討を行い、添加する元素ごとでの最適条件を得ている。前駆体およびMXene中へのドーパント保持量を評価した。その結果、いくつかの元素が有効であることが分かり、新しいMXeneファミリーとなることが分かった。このようなナノシート化合物中へのドーパントの占有位置特定のためには、単純な回折法が直ちに適用できないため、電子顕微鏡法による特定に取り組んでいる。幾つかのドーパント系で検討を行い、個別の元素を特定する目途を得た。硫化物系のMXeneの合成も試みた。本グループでの結論としては、アモルファス化により、MXeneを得ることができないという結論に至っているが、これに反する報告があるため、今後議論を深めていく予定である。どのような元素のドーピングが有効であるかは、未知の状態で探索を始め、結果として新しい発見を得ることができた。初年度中に本格的な酸素還元・放出特性の評価を行う予定であったが、年度末に評価系の目途を立てることができた。また協力研究者との共同研究も好適に進めることができている。MAX相と呼ばれる金属複炭化物から、原子層Aを選択溶解することで生成する金属炭化物ナノシートは、MXeneと呼ばれ、電気化学・センシングデバイスへの応用が期待されている。代表的な組成はTi3AlC2からAlを選択溶解したTi3C2Tx(Tx :表面官能基)である。Mは前期遷移金属元素のNb, Vなどに置換することができるとされるが、それ以降の遷移金属を主要成分とするMAX相、MXeneの報告はごく少数に限られている。本研究により、従来M元素としての報告例のないWを導入したTi3-xWxAlC2の組成を持つMAX相を前駆体とすることで、Wを副成分として導入したMXene : Ti3-xWxC2Txの合成に成功した。Ti3C2Txの表面にWが部分置換することで、終端する表面官能基の脱フッ素化が容易であることが分かった。MXene系の前駆体から、硫黄と炭素からなるA/X複合材料(S/C複合材料)の合成、構造再評価およびLiおよびNaイオンの吸蔵性能評価を行った。Naイオンとの反応では、Liイオンとの反応に比べ、より硫黄の溶出が起こりやすいことを明らかにした。また、MXene特有のシート構造を維持した窒化チタンTiNが生成することを、本研究で見出した。シート状のTiNの合成例はこれまでに無く、MXeneの種類を変化させることで様々なシート状窒化物の作製が期待できる。Ti3C2Txの加熱過程を詳細に調べ、TiNの生成機構を明らかにした。また上記によって得られた改変MXene系材料について、空気電池の正極反応である酸素還元/発生特性の評価を行っており、イオン電池系電極としての特性と併せて、評価を継続している。。ドーピング元素の、前駆体での占有位置やMXene中での占有位置を明らかにする。複数の元素について系統的なデータを得る。理論計算に前駆体およびMXene中の安定性や、電子状態を明らかにすることにより、特定の元素の占有や安定性の起源を明らかにする。また、表面官能基への影響と、実験によって得られる酸素還元特性への影響について明らかにする。無機工業材料
D-D炉の点火と燃焼動特性に関する研究

アドバンス燃料プラズマに特有の衝突素過程で、従来考慮されることの少なかったものに、反応で生じた高エネルギー粒子と燃料イオンの間の核弾性散乱(NES)がある。NESは散乱当りのエネルギー変化が大きいので反応生成物の減速を速め、イオン加熱を促進する。また反跳イオンをつくり、正味の反応率をふやす可能性を持つ。本研究では初めにNESを考慮して減速過程を解析し、次にNESがアドバンス燃料炉の点火条件と燃焼動特性に及ぼす影響を調べた。減速過程の記述には多群法を用いた。対象とした炉はトカマク型CAT-D炉と磁場反転ミラー(FRM)方式によるDD【^3He】炉である。主な結果は以下のとおりである:1.核弾性散乱(NES)を考慮すると点火条件が緩和される。所要n【Γ_E】値の低下率はシンクロトロン放射の壁面吸収率【K_C】に依存する。例えば【K_C】=0.1%の時20%、【K_C】=1%の時50%である。これはCAT-D炉、DD【^3He】炉のいずれについても同じである。2.NESを考慮すると点火プラズマの熱的不安定性が増し、摂動に対する応答が速くなる。CAT-D炉の場合、不安定性の臨界温度が20keV上昇する。DD【^3He】炉ではこの上昇は30keVである。しかし、減速時間を考慮しない従来の計算に比べると、本計算で得たプラズマの時間的変動はゆるやかであり、燃焼制御は可能である。例えばCAT-Dトカマク炉の場合には膨張・圧縮法と燃料注入率制御の併用で安定化が得られる。DD【^3He】炉に対しては燃料注入率の制御だけで十分である。
脳卒中回復期リハビリテーションプログラムの再構築と帰結予測

当院回復期リハビリテーション病棟に2001.4.1から2004.11.30までに入退院し,診断の大分類が脳卒中であった1237名においては、入退院時FIM運動項目が平均47.4点、63.6点であり、平均在院日数70.5日で除したFIM運動項目効率が0.230であった。脳幹病変、両側障害や、再発などによる途中中断・転院を除き、リハを一通り行ったテント上脳卒中636名で集計すると、入退院時FIM運動項目が平均50.6点、69.3点であり、平均在院日数が67.4日、FIM運動項目効率が0.286であった。FIT programの中での病棟環境の影響を検討するために、廊下を挟んで病室と訓練室が向かい合う病棟でのenriched-FIT program(236名)と主訓練室は病棟外にあるordinary-FIT program(46名)、旧来の週5日訓練(52名、平成12年まで)とを比較した。FIM運動項目合計利得は順に24.2,20.8,20.3であった。平均在院日数は順に74.9日、75.9日、92.2日であった。Enriched-FIT programとordinary-FIT programの差はFIM運動項目合計利得に現れており、これが訓練室と病棟の一体型の環境効果と考えられた。対象は平成12年12月から平成15年11月までに当院に脳卒中リハ自的で入退院した患者のうち、週7日訓練を行い、入院中のリハが他の要因で阻害されなかったFIT群と、平成11年10月より平成12年9月までに週5日訓練を受けた5日群である。発症から入院までが80日未満、入院時のFIM運動項目合計(以下FIMM)が70点未満の患者に限定し、FIT群は334名、5日群は52名となった。FIT群、5日群の順に、FIMM利得平均(SD)が24.2±10.0点、20.3±10.5点、平均在院日数は74.9±24.7日、92.2±20.8日でありFIT群と5日群との間に有意差を認めた。重回帰分析で予備的に帰結予測を行った。FIT群、5日群をあわせ、従属変数を退院時FIMM年たは在院日数、独立変数を入院時FIM、年齢、発症から入院までの期間、男女、麻痺側、リハビリ方法(FIT群で1、5日群で2)とした。退院時FIMMの重回帰式はR=0.88、リハビリ方法の計算式上の係数が-3.0であった。在院日数の重回帰式はR=0.66、計算式上の係数が15.7であった。FIT群は5日群に較べ、退院時FIMMが3点高く、在院日数が約16日短いと解釈しうる。週7日訓練、訓練室一体型病棟は在院日数短縮、最終到達ADL向上に寄与していることが証明されたとともに、帰結予測を行う際に訓練方法を加える必要性が示唆された。
酸化モリブデンのプロチウム誘起ナノ構造体化に関する研究

水素気流中で373773Kまで昇温し,112時間水素還元したPt/MoO_3のMo平均酸化数と表面積の関係を検討した.MoO_3の還元が進行するとともに表面積が増大し,平均酸化数2.51.8,すなわちMoO_<1.25>MoO_<0.9>で表面積が240m^2g^<-1>と最大となった.Ptが存在しない場合には,還元温度の影響を受け,高表面積MoO_xは623K以下の水素還元でのみ生成した.これに対して,水素還元したPt/MoO_3の表面積は還元温度によらずにMoの平均酸化数で整理できることが明かとなった.平均酸化数が3.64までは細孔の生成はみられないが,還元がさらに進行すると630Åの細孔が生成した.Mo平均酸化数が1.8以下ではDv/Dr値が低下し,細孔構造が崩壊していることが示唆された.このことより,ナノ細孔の生成により表面積が増大していることが明かとなった.XRD測定より、Pt/MoO_3を水素気流中で昇温して還元した場合には昇温過程(298473K)でモリブデンブロンズH_xMoO_3相が生成し,その後この相が分解,還元されていることが示された.多孔性高表面積MoO_x生成に対するH_xMoO_3相の役割を明らかにするため、窒素気流中で673Kまで昇温し、124時間水素還元した試料およびPt/MoO_2を水素還元した試料の表面積を測定した.窒素気流中で昇温した場合にはMoの平均酸化数によらず表面積は約40m^2/gとなり,細孔は生成しなかった.また,Pt/MoO_2を水素還元した場合も表面積の増大はみられなかった.以上のことより,ナノ細孔を有する高表面積MoO_xは水素化物H_xMoO_3から生成することが明かとなった.水素気流中で373773Kまで昇温し,112時間水素還元したPt/MoO_3のMo平均酸化数と表面積の関係を検討した.MoO_3の還元が進行するとともに表面積が増大し,平均酸化数2.51.8,すなわちMoO_<1.25>MoO_<0.9>で表面積が240m^2g^<-1>と最大となった.Ptが存在しない場合には,還元温度の影響を受け,高表面積MoO_xは623K以下の水素還元でのみ生成した.これに対して,水素還元したPt/MoO_3の表面積は還元温度によらずにMoの平均酸化数で整理できることが明かとなった.平均酸化数が3.64までは細孔の生成はみられないが,還元がさらに進行すると630Åの細孔が生成した.Mo平均酸化数が1.8以下ではDv/Dr値が低下し,細孔構造が崩壊していることが示唆された.このことより,ナノ細孔の生成により表面積が増大していることが明かとなった.XRD測定より、Pt/MoO_3を水素気流中で昇温して還元した場合には昇温過程(298473K)でモリブデンブロンズH_xMoO_3相が生成し,その後この相が分解,還元されていることが示された.多孔性高表面積MoO_x生成に対するH_xMoO_3相の役割を明らかにするため、窒素気流中で673Kまで昇温し、124時間水素還元した試料およびPt/MoO_2を水素還元した試料の表面積を測定した.窒素気流中で昇温した場合にはMoの平均酸化数によらず表面積は約40m^2/gとなり,細孔は生成しなかった.また,Pt/MoO_2を水素還元した場合も表面積の増大はみられなかった.以上のことより,ナノ細孔を有する高表面積MoO_xは水素化物H_xMoO_3から生成することが明かとなった.
保育者用GRIT尺度開発とストレスマネジメントプログラムの提案

近年、保育士の早期離職が問題となっている。これまでの研究において保育者養成校の学生への調査の結果、ストレスへの対処の違い、やり抜く力が早期離職と関連していた。つまり、学生時代から適切な対処法を身に着ければ早期離職を予防できることは可能であろう。本研究では、保育者および養成校の学生のやり抜く力(GRIT)と早期離職との関連を明らかにし、保育者用のストレスマネジメントプログラムの提案をおこなっていく。