hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
矩形波反応ガス流を用いた反応性スパッターによる薄膜作製

化学反応の持つ非線形性を利用して、高効率、高制御性の反応性スパッター法の開発を目的とする。実験方法は反応性ガスを矩形波状にスパッターガスであるアルゴンに加えた反応性スパッターを用い、反応性スパッターに特有な反応性ガスによるターゲット板への被毒効果を低減させつつ、生成薄膜の組成の精密制御を可能にすることを目的とした。平成9年度は、反応系は窒化チタンをステンレスの基板上に堆積させる方法で、反応性スパッターに特有な反応性ガスによるターゲット板への被毒効果を低減させ、最大12割程度の向上が見られた。またこの点の効果には、反応の圧次数が大きく寄与するため、取り扱う反応系の速度論的検討が急務であることと、測定精度が上げられればこの方法で速度論的研究も行いうる点が指摘された。平成10年度は、反応系としては鉄基板上にDiamondlike Carbon(DLC)を堆積させ、3段階の組成傾斜を持った傾斜機能材料型の薄膜を堆積させた。DLC膜はすでに超硬バイト上にコーティングされ、市販製品もあるが、よりいっそうの接着強度も望まれている。そのため組成が変化した中間層を鉄基板とDLC膜との間に堆積させた。このような中間層を間に挟むことにより、より大きな熱応力にも耐えられるコーティング膜が得られ、より高速あるいは切削表面精度の向上が期待される。平成10年度では、3段階の組成をかえた中間層の設定が行いうる条件を見つけ、実際に製作し、組成変化の様子も確認した。化学反応の持つ非線形性を利用して、高効率、高制御性の反応性スパッター法の開発および応用を目的とする。反応系は窒化チタンをステンレス等の基板上に堆積させる方法で、反応性スパッターに特有な反応性ガスによるゲット板への被毒効果を低減させ、かつ生成薄膜の組成制御も可能にすることを目指す。具体的方法としては、反応ガス流量を制御して、反応ガス分圧に変調を加え、反応の非線形性による効果を期待した。反応性ガスによるターゲット板への被毒効果に対しては最大12割程度の向上が見られた。この点の効果には、反応の圧次数が大きく寄与するため、取り扱う反応系の速度論的検討が急務である。逆に測定精度が上げられれば、この方法で速度論的研究も行いうる点が指摘された。そのためには、装置常数を抑える必要がある。我々の現状の装置では、この点の精度、装置常数の詰めが不十分である。具体的には反応ガス圧の矩形波的変化のディケイが大きく、マスフローコントローラーの動作条件をさらに詰める必要がある。今回は流量に関しては、オン・オフの繰り返しとしたが、これによる深さ方向の組成の積層構造は、将来はこれを変化させることにより、連続可変な組成制御の可能性を示す。反応性スパッターにはターゲット板への被毒効果が指摘されているが、これを減ずる結果を得た。すなわち、いわゆる金属モードと化合物(セラミックス)モードの現出割合を金属モード寄りにし、堆積速度の増加ならびに堆積膜組成の向上を同時に見た。化学反応のもつ非線形性を利用して、高効率、高制御性の反応性スパッター法の開発および応用を目的とする。平成10年度は、反応系としては鉄基板上にDiamondlike Carbon(DLC)を堆積させた。従来と同じく反応性ガスを矩形波状にスパッターガスであるアルゴンに加えた反応性スパッターを用い、反応性スパッターに特有な反応性ガスによるターゲット板への被毒効果を低減させつつ、生成薄膜の組成の精密制御を可能にすることを目的とした。そのため、傾斜機能材料的組成が変化した中間層を鉄基板とDLC膜との間に堆積させた。このような中間層を間に挟むことにより、より大きな温度差による熱応力にも耐えられるコーティング膜が得られ、より高速なあるいは切削表面精度の向上が期待されるバイトの製作等が可能となる。平成10年度では、このために基礎データ収集を行った。

それによれば、3段階の組成をかえた中間層の設定が行いうる条件を見つけ、実際に製作し、組成変化の様子も確認した。今回製作した3段階組成変化させたDLC膜の接着強度測定の結果は1段階のものと実験精度をこえる変化は見られなかった。これは、作成した薄膜の厚さが使用したはく離試験器の測定限界程度のためであろうと思われる。なお、反応性スパッターにはターゲット板への被毒効果が指摘されているが、これを減ずる結果を得た。すなわち、いわゆる金属モードと化合物(セラミックス)モードの現出割合を金属モード寄りにし、堆積速度の増加ならびに堆積膜組成の向上を同時に見た。
シンハラ資料を用いた後期パーリ仏教文献の研究

パーリ文献ないし上座仏教研究にとって,土着の文献資料はこれまで各上座仏教国の外ではほとんど研究されてこなかった.日本の場合は,ビルマ語研究者によるビルマ仏教史については,勝れた研究と翻訳が出されているが,シンハラ語仏教文献については,ほとんど知られていない.しかし,スリランカの中世期(1215世紀)には,スリランカの仏教徒により,パーリ語だけでなくシンハラ語による仏教文献の著作が盛んに行われるようになり,その時期に,ビルマやタイにも強力な王国が出現して,こぞってスリランカから,正当な仏教としての,スリランカ上座仏教を取り入れた.このスリランカ国内の仏教研究の最盛期のシンハラ語による著作には,パーリ文献の翻訳,語釈があり,また独自の著作も作られた.これらの翻訳や語釈,解釈本は,その当時のスリランカのパーリ文献の読みと解釈を伝える資料として,非常に有用であることが明らかとなった.また,パーリ文献でも,アッタカターには次第に大乗的な色彩が見えてくることが指摘されているが,中世期のシンハラ仏教文献には,パラークラマバーフ1世王による,保守的マハーヴィハーラ派上座部への仏教統一後も,それまでに伝えられ,民衆の中に入り込んだ北伝・大乗的要素が,残っており,現地調査により,北伝的・大乗的説話が寺院の壁画に描かれ,また一般のスリランカ仏教徒にも語り伝えられ生きていることがわかり,我々が抱いていた上座仏教のイメージが実際とは相当に異なることが洞察することができた.収集した資料で入手困難なものや,寺院壁画はHPで順次整理公開して,研究者の利用に供する.パーリ文献ないし上座仏教研究にとって,土着の文献資料はこれまで各上座仏教国の外ではほとんど研究されてこなかった.日本の場合は,ビルマ語研究者によるビルマ仏教史については,勝れた研究と翻訳が出されているが,シンハラ語仏教文献については,ほとんど知られていない.しかし,スリランカの中世期(1215世紀)には,スリランカの仏教徒により,パーリ語だけでなくシンハラ語による仏教文献の著作が盛んに行われるようになり,その時期に,ビルマやタイにも強力な王国が出現して,こぞってスリランカから,正当な仏教としての,スリランカ上座仏教を取り入れた.このスリランカ国内の仏教研究の最盛期のシンハラ語による著作には,パーリ文献の翻訳,語釈があり,また独自の著作も作られた.これらの翻訳や語釈,解釈本は,その当時のスリランカのパーリ文献の読みと解釈を伝える資料として,非常に有用であることが明らかとなった.また,パーリ文献でも,アッタカターには次第に大乗的な色彩が見えてくることが指摘されているが,中世期のシンハラ仏教文献には,パラークラマバーフ1世王による,保守的マハーヴィハーラ派上座部への仏教統一後も,それまでに伝えられ,民衆の中に入り込んだ北伝・大乗的要素が,残っており,現地調査により,北伝的・大乗的説話が寺院の壁画に描かれ,また一般のスリランカ仏教徒にも語り伝えられ生きていることがわかり,我々が抱いていた上座仏教のイメージが実際とは相当に異なることが洞察することができた.収集した資料で入手困難なものや,寺院壁画はHPで順次整理公開して,研究者の利用に供する.中世シンハラ語仏教文献『シーハラ・ボーディヴァンサヤ』(シンハラ語菩提樹史)2章のUnicodeフォントによるローマ字化を行い,パーリ語の『マハーボーディヴァンサ』との比較研究を行った.研究の経過において,他の中世シンハラ語文献の重要性(パーリ語仏教文献の諸注釈として,本文の読み,および解釈にとって非常に有益であること,今まで知られていなかった北伝仏教の影響が見られること)が明らかになった.中世シンハラ語文献の多くは,19世紀末20世紀初頭のイギリス植民地時代にシンハラ文字で多く印刷出版されたが多くは今散逸し,失われようとしているので,その所在の調査とデジタル化が急務であることも判明した.世界でも最もこれらの資料を集めた故ベッヒェルト教授のコレクションについてウィーン大学,ゲッティンゲン大学,ミュンヘン大学で調査し,そのいくつかを入手したが,今後組織的な収集が必要であることも判明した.また,12月1月にかけてスリランカの仏教関連遺跡を調査し,スリランカ仏教史の様々な知見を得ることができた.研究成果は,9月に国際サンスクリット学会(京都大学),同じく9月の日本印度学仏教学会(大谷大学)で発表し,また4月はハンブルク大学で,日本の玉虫の厨子に描かれるジャータカとスリランカ所伝の聖典外ジャータカの関連について講演し,このような,北伝と南伝伝承を新しい角度で研究する意義について理解が得られた.中世シンハラ語仏教文献『サッダルマーランカーラヤ』2章のUnicodeフォントによるローマ字化と解読を通じ,中世期以降スリランカ仏教徒の間で知られたジャータカ,特にブッダの発願と燃燈仏授記に関連して,北伝仏教との明らかな繋がりについて,現存するもっとも古い証拠を得ることができた。これらは19世紀イギリスの伝道師Spence Hardyの記録で知られていたが,パーリ文献には存在しない物語であった。これらの物語が,北伝の漢訳仏教文献や中央アジアのキジル石窟等の絵画とも一致し,スリランカ仏教における北伝仏教の影響に関する研究の方法と資料について,確かな根拠を示すことができた。また,5月のドイツ出張ではゲッティンゲン大学の文献学・歴史学部門図書館に残されている故ベッヒェルト教授が集めたシンハラ語仏教文献の現状を調査し,現在では入手困難な貴重な文献が残されていることからDr.Vladislav Lierの協力を得て,カタログのデジタル化を行った。

これは次年度以降,さらに著者別,タイトル別に検索可能なカタログを作成し,重要な文献のデジタル撮影と公開を目標とすることとなった。また,12月のスリランカ現地調査では,大谷大学の清水洋平氏と寺院壁画中のジャータカを撮影し,その配置と撮影写真をHP上で公開すべく,作業に着手している。研究成果は,5月にベルリン・アカデミーで北伝仏教の捨身飼虎本生と法顕,法盛の旅行記,法盛の訳出したT172経とガンダーラおよびスリランカの関連について講演し,9月の日本印度学仏教学会(立正大学)では,燃燈仏授記物語の北伝伝承を整理し,パーリ聖典ならびに後期パーリ・シンハラ文献との関連について論じた。本年度は、研究課題の最終年度にあたるため、スリランカ中世(12世紀15世紀ごろ)に、スリランカ仏教徒自身により著作された文献を調査・収集したものの成果を発表すべく、特に入手困難となっている、19世紀末から20世紀前半にイギリスから持ち込まれた印刷機で印刷された、シンハラ語仏教文献のうち、スリランカでも忘れ去られ、再刊されない古い文献Saddharmaratnakaraya等をドイツやスリランカで入手したものをPDF化し、HPで閲覧、ダウンロードを可能とした。また、ゲッティンゲン大学歴史・文献学部図書館に所蔵されながら、カタログ化されていない、故ハインツ・ベッヒェルト教授が蒐集した1000点以上の文献のリストを作成し、これもHPで公開した。また、スリランカでの現地調査は、後期パーリ文献(例えば、ラサヴァーヒニー)に登場する地名、寺院の位置関係について、それが、古いパーリアッタカターや、さらにそれが基づいた古いシンハラ語伝承にかなり正確に一致していること、寺院内の壁画からは、正当パーリ聖典およびアッタカター以外の、北伝仏教の影響が明らかな説話が描かれていること、また今年度は、これまで入ることができなかった、東南部の仏教遺跡の調査により、さらに、中世に描かれた壁画、寺院建築(例としては、アリヤヴァンサの説法が行われたという、アッタカターの記述が事実であったことが確かめられる建物の基壇の碑文)を実見することができた。スリランカの上座仏教(パーリ仏教)の歴史上中世期は特に著作活動が盛んであり、また南インド、ミャンマリ、タイや、さらにはチベットとも交流があり、これまでに出来上がった南方の保守的上座仏教と、北方の進歩派大乗仏教をともすると峻別する今日の仏教学の通念は見直さされるべき実態があったことがわかり、今後の仏教研究において、さらに中世シンハラ語仏教文献の研究の重要性を解明することができた。
膜タンパク質の膜貫通領域におけるタンパク質―タンパク質相互作用の検出

本研究はタンパク質の疎水性の膜貫通領域の相互作用をどう評価するかを主眼として、系統的に膜タンパク質の機能、構造を見ていくことを目的とする。本研究期間での具体的な研究目的は膜タンパク質の相互作用の検出方法の構築であった。化学修飾試薬DTBPA(4,4'-Dithiobis(1-azidobenzene))は疎水的な性質を持つ膜内領域への化学修飾試薬であり、クロスリンカーでもある。これを使用し、膜内領域において近接しているタンパク質を検出する方法の開発を行った。当研究室では以前より赤血球膜の膜内ペプチドを検出できる系を確立してたが、質量分析計とHPLCとの併用により、さらに高感度にかつ定量的に赤血球膜タンパク質の膜内ドメインのトリプシン分解ペプチドを検出できる方法を開発した(投稿中)。また、有機溶媒による抽出法により、赤血球膜タンパク質の存在状態を簡便かつ迅速に検出する方法を開発した(投稿中)。DTBPAおよびその他のクロスリンカーによる修飾とこれらの方法を併用し、現在膜内ペプチドの近接部位の同定を続けている。さらにこれらの方法といくつかの化学修飾を組み合わせ、膜蛋白質band3の活性発現に重要な部位の検出を行った(投稿準備中)。これらの方法の開発は、現在当研究室で行っているband3蛋白質の構造解析を行ううえでも重要な知見となっている。様々な膜タンパク質についての構造と機能の解析は世界各地で精力的に行われている。しかし、これまで膜タンパク質は疎水性性質のため解析の手法が限られているのも事実である。今回のこの研究はこれら膜タンパク質の相互作用の解析方法に一石を投じるものとなると信じている。
光合成細菌による有機廃液から生分解性プラスチックの生産

本年度は有機性廃液を原料にして、まず廃液中のBOD源を嫌気処理により有機酸にし、引き続いて光合成細菌によってこの有機酸を菌体内に生分解性プラスチックであるポリヒドロキシアルカノエ-ト(PHA)として蓄積させることを目的に研究を実施した。生分解性プラスチックの合成条件はC/N比の大きいことであるので、廃液としてはBODは20000ppmと非常に高いが、窒素源は200ppm程度と比較的低いパームオイル廃液をとり上げた。本研究ではまず、パームオイル廃液を廃液処理場より採取したスラッジを用いて嫌気的に処理したところ、廃液中のBOD源は有機酸に効率的に変換された。有機酸の組成は処理pHに強く依存し、pHが低いほどギ酸の含量が増加した。pH7で嫌気的処理すると、廃液中のBOD源は70%以上の収率で酢酸とプロピオン酸に変換された。合成廃液による実験で、光合成細菌はギ酸を迅速に処理できず、PHAにも変換されなかった。一方、pH7の嫌気処理に基づいて生成された酢酸とプロピオン酸は、光合成細菌により完全に処理され、50%の対有機酸収率と50%以上の含量でPHAを菌体内に蓄積させることができた。一方、実際にパームオイル廃液を嫌気的に処理したものを原料に、光合成細菌を用いてPHAを合成させたところ、そのポイントは、光合成細菌によって廃液を処理させる前に嫌気処理で用いられたスラッジを取り除くことであった。これはスラッジが光合成細菌が光を受ける機会を少なくするためと考えられる。本研究を通じ、実際の有機廃液の処理と生分解性プラスチックの合成という当初の目的は達成することができた。
オーラルアプライアンス用硬質シート圧接時の適正温度についての研究

吸引型成形器による硬質熱可塑性レジン(PET製シート材、厚さ1.5mm)の圧接において、適正な軟化温度を検討することを目的とした。まず硬質熱可塑性レジンを示差走査熱量計でガラス転移温度を調べ、この結果を参考にして静的荷重試験をおこない軟化温度範囲(120160°C)を得た。次に義歯床用金型から得られた石膏模型に120160°C(10°C間隔)で硬質熱可塑性レジンを軟化圧接しその適合状態を比較した。適合状態の算出は、フラットヘッドスキャナで模型を読み込み、コンピュータによる画像の重ね合わせ結果の間隙を測定し、その平均値を比較検討した。その結果、軟化温度が高くなるに従って間隙は、外側部では中央部、辺縁部ともに減少し、内側部の中央部では増加、辺縁部では差が認められなかった。また、辺縁部と中央部の比較では、外側部では差がなかったが、内側で辺縁部の間隙は大きかった。これらのことから、硬質熱可塑性レジン(PET製シート材)の圧接時の適正温度が130150°Cであると結論づけ、内容を第31回日本歯科技工学会学術大会で発表した。また現在、日本補綴歯科学会誌に論文を投稿中である。オーラルアプライアンスは、ライフサイクルから考えた場合各年代で多様に利用できる。またオーラルアプライアンスの製作には、従来行われていた重合法と比較して、作業の簡便性や作業時間の短縮、コストパフォーマンスに優れているとの理由から、義歯床用熱可塑性レジンによるサーモフォーミングテクニックは、今後臨床に広く取り入れられると考える。しかし現在、硬質熱可塑性レジンの加工に関しては術者の経験によるところが大きいが、今回硬性義歯床用熱可塑性レジンの適正な軟化温度は130150°Cであると示唆された。しかし、軟化圧接温度以外にもシートの延伸挙動が適合に大きく関与していることも解明され、他の因子に関しても引き続き検討が必要である。
局所的ケイジド試薬の活性化を用いた外分泌腺細胞の機能の解明

本研究ではケイジド試薬を利用して外分泌腺細胞の分泌機能を解明することを試みた。局所的ケイジド試薬活性化や、その他いろいろな事を試みた結果、特に、冷却CCDカメラとケイジド試薬を用いた研究において以下の様な著しい研究成果がでた。1)外分泌腺細胞において、アゴニストによる細胞内ストアからのCa放出で分泌の起きている局所でCa濃度が10μモルに達する事を低親和性Ca指示薬と冷却CCDカメラを用いて初めて見出した。2)新たに見つかったマイクロモルのCa上昇は外分泌腺の開口放出に必須であることがわかった。3)これに対して、低濃度のCa上昇はCa依存性イオンチャネルの活性化しか起こさない。この様に、マイクロモルのCa上昇には低濃度上昇とは別の大きな機能的意義があることがわかった。4)低親和性Ca指示薬と高親和性Ca指示薬を共用する4波長画像処理法を開発し、腺細胞先端部トリガ性ゾーンでCaドメインと呼ばれる高濃度Ca領域がある事を見出した。5)神経終末ではこのCaドメインは伝達物質放出に決定的な意義を持っていることが想定されているが、外分泌腺の開口放出では、Caドメインは寄与しないと考えられた。これは、外分泌腺の分泌顆粒のCaセンサーのCa結合が遅いためである。この様に、Caドメインの細胞機能への関与の違いを論証したのはこの仕事が初めてである。これらの結果については現在論文を投稿中である。本年度は所定の機器を設置し、様々のケイジド試薬をパッチクランプ法によって膵臓腺細胞の細胞内に注入し、任意の場所に紫外線を照射し、膜電流や膜容量を測定する実験を行った。実験目的に応じたケイジド試薬の選択などのノウハウを蓄積し、現在データを取り進んでいるところである。ピンホールによる活性化の場合には、紫外線強度が強いこと、カルシウムケイジド試薬へのカルシウムの負荷の度合が重要で、適切な条件のもとでは、ピンホール照射部位に限局した一過性のカルシウム上昇をイメージングで記録し、同時に2種類のカルシウム依存性チャネル電流を記録することが可能となった。その結果、予想されたように塩素チャネルの分布が非常に腺管側に多いことが確かめられたが、その分布は腺管膜より広く、むしろ分泌顆粒の存在部位にまで広がっており、溶液分泌のモデルに修正が必要なことがわかってきた。更に詳細なマッピングを現在進めている。開口放出を現す膜容量変化を紫外線照射で起こすことにも成功している。この際、カルシウム親和性が内分泌細胞著しく低い(現在20μモルと推定)こと、カルシウムを更に大きく上げないとアゴニスト作用の時に見られる速い開口放出が起きないことがわかってきた。また、この開口放出の際、zymogen granuleの大きさから予想されるような大きさの膜容量変化があまり起きない。そこで、今後、この開口放出に必要な局所カルシウム濃度の推定、分泌顆粒の同定を目的とした解析を進めている。間該年度は、引き続きケイジド試薬を用いた外分泌腺細胞の開口放出の時間及びカルシウム依存性を膜容量測定法を用いて更に精密に調べた。外分泌腺には最低5μモルのCa上昇を必要とし、10μモルの親和性を持つ、遅い開口放出路と、最低10μモルのCa上昇を必要とし、20μモルの親和性を持つ速い開口放出路が存在することが確定的となった。遅い開口放出路は現在までに生化学的に調べて来た、アミラーゼの分泌のCa依存性に合致し、zymogen granuleの開口放出を見ていると考えられた。さて、これらの低親和性の開口放出が生理的に何故起きるかを、究明すべく、低親和性Ca指示薬、BTC、によってCa画像解析を行なった結果、生理的アゴニスト刺激で、トリガー領域(先端部)のCa濃度が10μモル程度まで上昇することをつきとめた。このμモルのCa勾配は開口放出に不可欠であり、サブμモルのCa勾配が起きた時には、Ca依存性イオンチャネルの活性化が起き、溶液輸送は起きるが、開口放出は起きなかった。

これらの発見は、μモルオーダーのCa上昇が上皮細胞でも起き、り、が開口放出という重大な機能に直結している事を初めて示すものであり、すべての細胞においてBTCのような低親和性の色素を用いてCa画像処理はやり直すべきであるという事を強く促すものである。
語用論・関連性理論からみた接続助詞の意味・用法と日本語教育への応用

研究計画に基づいて、主節が省略された複文の使用例を、小説・雑誌・パソコン通信から得られるテキストデータ等から、約200例収集した。このうち、「ノニ」「テモ」「ガ」「ケ(レ)ド」を中心に分析作業を行った。特に、「PノニQ」「PテモQ」については、従来「Pならば-Q」を前提とするとされてきたが、本研究のデータを検討した結果、この前提が成立しないと考えられる場合が数多く存在することが明らかとなった。また理由を表わす「カラ」と置きかえても知的意味に変更を及ぼさない逆接の「ノニ」も多数あることが実証できた。このような文については、外国人日本語学習者を対象にテストを行った結果、正確な意味の把握が上級レベルの学習者であっても困難であり、誤解を生じやすいことが明らかとなった。さらに、逆接の接続助詞の誤用例を約50例収集したが、これについては、データ数を増やした上で分析していく予定である。
西アジア乾燥地帯への食料生産経済波及プロセスと集団形成

ユーフラテス河中流域シリア沙漠において野外調査をふくむ各種調査を実施し、食糧生産経済集団の乾燥地進出経緯について調べた。その結果、青銅器時代前期に、それ以前とは質的に異なる本格的開発が開始されたことが判明した。遊牧民が展開したものと推定される。また、集落、墓、仕事場など青銅器時代前期の遺跡群は、複数の階層的クラスターをなして分布することも明らかになった。この事実は、複数の部族レベルからなる部族社会がその担い手であったことを示唆していると考える。本研究は年間降雨量が400mmに満たないような西アジア乾燥地にいかに食糧税産気偉材が波及したかという、いわゆる周縁地帯の二次的新石器化の問題を解明することを主眼としている。本年度は主に三つの研究をおこなった。第一は、シリア砂漠北部において過去に調査された新石器遺跡のデータベース作成である。ビシュリ山系西部にあたるエルコウム盆地とパルミラ盆地における既知の遺跡を網羅的にリスト化して検討した。その結果、100近くの遺跡を認めた。いずれも先土器新石器時代末期以降の遺跡であり、当地の新石器化もその頃始まったことが推定された。また、北方のユーフラテス川流域に類似する伝統をもつものと南方のアラビア砂漠に近似するものという二つの集団が混在して進出していることも明らかになった。第二は、その砂漠外縁部にあたるシリア東北部でのフィールドワークと収集した新石器時代標本の分析である。ハブール地区で最古の新石器時代集落とされるテル・セクル・アル・アヘイマルの動物骨、植物残滓を分析し、紀元前8000年頃当地へ進出した新石器時代人は、当初より植物栽培・家畜飼育技術を有していたことを明らかにした。第三は、イラン南西部、ザグロス山中の乾燥高原、マルヴダシュト地方における食料生産経済波及プロセスの研究である。東京大学総合研究博物館に収蔵される1950-60年代の発掘標本を再分析した。放射性炭素年代測定も実施した結果、当地の新石器化は農耕牧畜発祥の地よりも2000年近く遅い紀元前6千年紀であったことなどがわかった。西アジアにおける農耕牧畜の起源の研究は、その自力発生プロセスの研究と、拡散の研究に分かたれる。本研究は年間降雨早が400mmに満たないよ、うな西アジア乾燥地にいかに食糧生産経済が波及したかという、後者の問題を解明することを主眼としている。昨年に引き続き、本年度もこれを三つの点から調べた。第一は、シリア砂漠、パルミラ盆地における新石器時代遺跡の出現過程の研究である。東京大学所蔵標本を再検査し、旧石器時代以降の遺跡数時期別増減を詳細に突き止めた。その結果、紀元前6500年頃、先土器新石器時代末期にほとんど無人であった当地に遺跡が急増すること、しかも、それらの遺跡はキャンプ地とみrたれるものに限定されていることがわかった。これは、牧畜民が進出したことを示唆している。第二は、シリア砂漠外縁部にあたるシリア東北部のテル・セクル・アル・アヘイマル遺跡の研究である。この遺跡は、北メソポタミア平原で最古の新石器時代集落とされる。動物骨、植物残津等の分析結果によって、植物栽培・家畜飼育技術の双方が先土器新石器時代後期に持ち込まれたことが確認できた。放射性炭素年代測定をすすめたところ、その時期は紀元前7300年まではさかのぼること.がわかった。東京大学総合研究博物館に収蔵される1950-60年代の発掘標本、特に、昨年調べきれていなかったギャプ遺跡の出土物などを再分析した。ここでは、紀元前5800年頃、農耕牧畜技術が進入し、以後の生活の基本が形作られたことがわかった。ビシュリ山系を中心とするシリア砂漠新石器時代遺跡のデータベース化、同地域にあるガーネムアルアリ遺跡の発掘、ワディロボム周辺での遺跡分布調査をおこない、初期食料生産民すなわち新石器時代人の乾燥地拡散プロセス解明に関わる基礎データを入手した。そして、その解析により、急速な拡散が生じたのは前7千年紀初頭、いわゆる先土器新石器時代末のことであること、その担い手はユーフラテス川流域で進展した農耕牧畜社会から派生した最初期の遊牧民であろうとの見通しが得られた。また、現地政府保管あるいは東京大学収蔵のオリジナル資料を用いて西アジア各地の乾燥地における同時期の状況を比較解分析し、ビシュリ山系で得られた成果の評価を試みた。比較地域の一つはシリア砂漠外縁部にあたるハブール平原、他は、イラン高原の乾燥地帯であるマルヴ・ダシュト平原である。その結果、年代はそれぞれ異なるものの、ビシュリ同様、牧畜技術の完成期に新石器時代集落が急増することが明らかになった。

また、ビシュリ山系は遊牧民、ハブール平原は天水農耕+牧畜民、マルヴ・ダシュト平原は灌漑農耕+牧畜民による開発であるとの結果が得られた。さらに、これら三地域の全てにおいて系統を異にする遊牧民の石器類が持ち込まれていることが明らかになり、集団間の接触ならびにその経緯に関する考察を進めることができた。すなわち、乾燥地への進出、集団形成過程についてのいくつかのパタンがあったことを指摘することができた。シリア北部、ビシュリ山系において二度の野外調査を実施し乾燥砂漠へ進出した初期食糧生産民の足取りを追うとともに、国内においては関連文献の収集、解析、成果の総合にむけてのモデル化を開始した。主たる研究実績は次のとおりである。(1)ビシュリのような乾燥地に残されているのは定住集落ではなく、遊牧・放牧などの際に短期逗留したいわゆるキャンプ跡が主である。したがって、そこで採集されるのはもっぱらが不定形の石器のみであり、その時期鑑定、同定の精度が進出過程のモデル化の確度に大きな影響を与える。そのため、既に時代の判明している遺跡、すなわち本特定領域で発掘中のガーネム・アル=アリ遺跡、また、東京大学がかつて調査したテル・コサック・シャマリ、ドゥアラ遺跡の石器群を年代別に分析し、不定形石器の時期鑑定法についての見通しを得た。(2)これまでの調査によって、当地においては先土器新石器時代の末に遺跡が急増することがわかっていた。今回、さらに詳細な踏査をおこなった結果、次に遺跡が急増するのが青銅器時代前期、すなわちセム系集団の確立期であることがわかった。この間の時期の遺跡が少ないことから、何らかの社会変化、生活構造の変化が生じていたに違いないと推察されるため、その解明に向けた関連情報の収集、分析を開始した。(3)ビシュリ山系に近接するパルミラ盆地でかつて東京大学が実施した遺跡踏査の成果、採集標本の再分析結果を整理し、時期別遺跡数の増減にかかわる論文を執筆した。これは、上記の結果を比較、解釈するための基礎情報を提供する。シリア北部、ビシュリ山系、ユーフラテス河中流域において、初期食料生産民の乾燥地開発状況をさぐるための遺跡分布調査、標本研究を二シーンにわたって実施した。また、国内では、その調査で得られたデータの解析、および文献調査などで得た所見の整理、統合作業を実施した。主たる成果は以下のとおりである。(1)ユーフラテス河中流域で本特定領域総括班が進めているガーネム・アル=アリ遺跡の出土石器を詳細解析し、青銅器時代に特徴的な製作技術を解明、定義することに成功した。石器は大半が不定形の剥片であり、従来、同定不能とされてきたものである。その同定法を開発し得たことは、乾燥地に展開した遊牧民が残した短期逗留地を同定するための強力な武器となりうる。(2)上記の鑑定法をもとに乾燥地で見つけた100以上にのぼる遺跡群を時代鑑定した。その結果、新石器時代、そして青銅器時代前期に遺跡数が急増していることが確定できた。セム系部族集団の形成が青銅器時代前期の遊牧民集団出現と一致するであろうことは従来、文献学の立場から示唆されてきたが、それを初めて考古学的証拠をもって裏付けたことになる。また、新石器時代・青銅器時代間に相当する銅石器時代の遺跡が著しく少ないことから、両者の社会は接続するものではなく、青銅器時代初めに大きな社会変化が生じたことも推察された。
ヒト発癌過程でのSmad4発現減少を成因とするTGF-β不応性獲得機構の解析

我々は,遺伝子変異と,TGF-βの容量反応曲線を20種類の細胞株において検討した.TGE-βに対して全く反応の無い細胞株と,TGF-βII型受容体またはSmad4に遺伝子変異が認められた細胞株は完全に一致した.他の細胞株は,(1).TGF-βにより増殖を受ける細胞株,(2)TGF-βにより増殖抑制を受ける細胞株の2種に分類できた.(2)TGF-βにより増殖抑制を受ける細胞株では,全ての細胞株において,高濃度(10ng/ml)のTGF-βによっても80%以下の増殖抑制のみが認められた.次に,癌細胞と正常細胞のTGF-βII型受容体,Smad2,3,4,6,7の遺伝子発現をmRNAレベルで比較・検討した.その結果,Smad4に遺伝子変異のない21癌細胞株すべてにおいて,Smad4の発現が正常組織の1/20以下に低下していることを見いだした.Smad4の発現低下は,TGF-βII型受容体が変異を起こしている細胞株でも認められた.さらに,このSmad4の発現低下を引き起こす機構を調べるため,Smad4プロモーターをクローニングし,メチル化によるプロモーターの不活化が存在するか検討した.いずれの細胞株においてもプロモーターのメチル化は認められなかった.western blottingにおいて,一つの癌細胞株からは再現性良く常に同量の′Smad4蛋白が抽出されたが,正常組織からは,再現性が得られなかった.本研究において得られた結果は以下のようである.1.TGF-βII型受容体に変異のある細胞株においては,Smad4の発現減少により,TGF-βシグナル伝達系に内在するligand independentの増殖抑制からのescapeが起こっている.2.Smad4に変異のある細胞株では,TGF-βシグナル伝達系に内在するligand independentの増殖抑制はもともと存在せず,癌細胞はTGF-βシグナル伝達系から完全に開放されている.3.TGF-βII型受容体およびSmad4の両者に異常の無い細胞株においては,Smad4の発現減少により,TGF-βシグナル伝達系に内在するligand independentの増殖抑制からのescapeが起こっている.4.Smad4の発現低下は,プロモーターのメチル化が原因ではない.我々は,遺伝子変異と,TGF-βの容量反応曲線を20種類の細胞株において検討した.TGE-βに対して全く反応の無い細胞株と,TGF-βII型受容体またはSmad4に遺伝子変異が認められた細胞株は完全に一致した.他の細胞株は,(1).TGF-βにより増殖を受ける細胞株,(2)TGF-βにより増殖抑制を受ける細胞株の2種に分類できた.(2)TGF-βにより増殖抑制を受ける細胞株では,全ての細胞株において,高濃度(10ng/ml)のTGF-βによっても80%以下の増殖抑制のみが認められた.次に,癌細胞と正常細胞のTGF-βII型受容体,Smad2,3,4,6,7の遺伝子発現をmRNAレベルで比較・検討した.その結果,Smad4に遺伝子変異のない21癌細胞株すべてにおいて,Smad4の発現が正常組織の1/20以下に低下していることを見いだした.Smad4の発現低下は,TGF-βII型受容体が変異を起こしている細胞株でも認められた.さらに,このSmad4の発現低下を引き起こす機構を調べるため,Smad4プロモーターをクローニングし,メチル化によるプロモーターの不活化が存在するか検討した.いずれの細胞株においてもプロモーターのメチル化は認められなかった.western blottingにおいて,一つの癌細胞株からは再現性良く常に同量の′Smad4蛋白が抽出されたが,正常組織からは,再現性が得られなかった.本研究において得られた結果は以下のようである.1.TGF-βII型受容体に変異のある細胞株においては,Smad4の発現減少により,TGF-βシグナル伝達系に内在するligand independentの増殖抑制からのescapeが起こっている.2.Smad4に変異のある細胞株では,TGF-βシグナル伝達系に内在するligand independentの増殖抑制はもともと存在せず,癌細胞はTGF-βシグナル伝達系から完全に開放されている.3.TGF-βII型受容体およびSmad4の両者に異常の無い細胞株においては,Smad4の発現減少により,TGF-βシグナル伝達系に内在するligand independentの増殖抑制からのescapeが起こっている.4.Smad4の発現低下は,プロモーターのメチル化が原因ではない.
摩耗面トポグラフィーを用いた表面損傷と潤滑状態・評価システムの研究

摩耗面トポグラフィーが材質の組み合わせや潤滑状態によってどのように変化するかをまず実験的に確かめ、さらに摩擦・摩耗過程のモニタリングの方法として、光ファイバーを利用した非接触表面粗さ測定器および高精度レーザ変位系を用い、同時にCCDカメラを併用して、最も観察しやすいアブレシブ摩耗機構ならびに摩擦・摩耗過程を評価した結果、次のようなことが明らかになった。1.無潤滑下のセラミックス対金属、無潤滑下および潤滑下の金属同士、潤滑下のセラミックス同士の組み合わせにおいて微細条こんの平均深さSp/b、傾斜角の平均値θと傾斜角分布の標準偏差θrms、平均線深さ1σ、平均突起先端半径r_0などを摩擦・摩耗過程において常時検出できれば、比摩耗量や潤滑状態の変化ならびに焼き付きへの遷移状態を評価できることが明らかになった。2.微細条こんの総断面積に対する摩耗粉の排出割合α_bや表面損傷の程度と摩耗変質層の厚さを評価できる摩耗性指数Гが増加すると、一般的には比摩耗量は増大する。ただし、移着粒子によって摩耗面が覆われてしまうような場合は逆にГが増加すると比摩耗量は減少する。この傾向は摩耗面のパラメータSp/b、1σにもみられる。3.二元アブレシブ摩擦・摩耗の場合には光ファイバーを利用して非接触表面粗さ測定器によってリアルタイムで摩擦係数や比摩耗量の評価ができる。また、高精度レーザ変位系とCCDカメラによってもディスク上の摩耗粒子の移着状態とその量から、摩擦係数と相手ピンの比摩耗量の評価ができることが明らかになった。以上のような結果を有効に利用するためにはデータの高速の演算が可能な計測システムを開発しなければならい。ピン・ディスク型摩擦・摩耗試験機を用いてAgとCu金属ピンと4種類のセラミックディスクを組み合わせ、無潤滑下で垂直荷重W=3.6412.6N、摩擦速度0.08m/s一定で、摩擦距離15005000mとして摩擦試験を行った。また、その結果と摩擦面の微細凹凸の幾何学的形状の測定結果との比較検討を行った結果、次のことが明らかになった。1.微細条痕の平均深さSp/bと傾斜角分布の標準偏差θrmsが増加するほど金属ピンとセラミックディスクの比摩耗量が増大する。また、Sp/bやθrmsが同じでもAl_2O_3ディスクのように金属ピンの摩耗粒子がディスクに移着するときにはディスクの比摩耗量は減少する。2.ピンの摩耗面の平均線深さ1σが増加し、平均突起先端半径roが減少するほどピンの比摩耗量は増大する。3.摩耗性指数Γの値によってCuピンよりも硬さの小さいAgピンの摩耗性が大きいことも評価できる。このことは理論解析の妥当性を定性的に検証している。また、高精度レーザ変位計とCCDカメラを用いてピン・ディスク型摩耗試験機でアブレシブ摩耗過程のモニタリングを行った。この際、アブレシブディスク上に生じる金属ピン(Pb, Cu, Fe)摩耗粒子の移着・成長・脱落の過程を観察し、その定量的評価を試みた結果、次のようなことが明らかになった。4.研磨紙上の移着粒子の最高点の変位と移着粒子の平均高さのモニタリングを行えば、摩耗粒子の分散状態や摩耗機構の推移をある程度評価できる。5.移着粒子の最高点の変位は金属の移着特性に依存し、その平均高さは摩耗粒子の分散挙動特性に依存する。摩耗面トポグラフィーが材質の組み合わせや潤滑状態によってどのように変化するかをまず実験的に確かめ,さらに摩擦・摩耗過程のモニタリングの方法として,光ファイバーを利用した非接触表面粗さ測定器および高精度レーザ変位計を用い,同時にCCDカメラを併用して,最も観察しやすいアブレシブ摩耗機構ならびに摩擦・摩耗過程を評価した結果,次のようなことが明らかになった.

1.無潤滑下のセラミックス対金属,無潤滑下および潤滑下の金属同士,潤滑下のセラミックス同士の組み合わせにおいて微細条こんの平均深さSp/b,傾斜角の平均値θと傾斜角分布の標準偏差θrms,平均線深さ1σ,平均突起先端半径r_0などを摩擦・摩耗過程において常時検出できれば,比摩耗量や潤滑状態の変化ならびに焼き付きへの遷移状態を評価できることが明らかになった.2.微細条こんの総断面積に対する摩耗粉の排出割合α_bや表面損傷の程度と摩耗変質層の厚さを評価できる摩耗性指数Γが増加すると,一般的には比摩耗量は増大する.ただし,移着粒子によって摩耗面が覆われてしまうような場合は逆にΓが増加すると比摩耗量は減少する.この傾向は摩耗面のパラメータSp/b,1σにもみられる.3.二元アブレシブ摩擦・摩耗の場合には光ファイバーを利用して非接触表面粗さ測定器によってリアルタイムで摩擦係数や比摩耗量の評価ができる.また,高精度レーザ変位計とCCDカメラによってもディスク上の摩耗粒子の移着状態とその量から,摩擦係数と相手ピンの比摩耗量の評価ができることが明らかになった.以上のような結果を有効に利用するためにはデータの高速の演算が可能な計測システムを開発しなければならない.
プロシューマーによる循環的支援関係のモデル構築に関する研究

プロシューマーとしてサービスの受け手から送り手となる構造には、ある状況が整えば新たなプロシューマー・ポジションを生成するプロセスがあることが解明された。一方で状況が整わずプロシューマー・ポジションが生成されない場合は、プロシューマーとしての固有性を生かすことができない《葛藤》におしつぶれてしまい辞職休職へ至ることは少なくない。これまでのコンシューマー・ポジション(サービスの受け手側)とプロバイダー・ポジション(サービスの提供者側)の線形的支援関係から、可変力動的なプロシューマー・ポジションを加えることによってより自由度の高い支援関係を構築することができることが明らかになった。プロシューマーには、消費-提供のバランスを保ち、新たな関係性を構築する固有の機能をもち、さらにリカバリーを継承していくという固有の価値をもつことを明らかにした。プロシューマーが新たな職種として位置づく社会的な意味のみならず、それらが精神保健福祉システムをリカバリー志向に向けてパラダイム変革を引き起こす可能性を持つものである。障害福祉分野における「プロシューマー」に着目した研究は少ないものの、関連領域としての「セルフヘルプ」「ピアサポート」「ピアカウンセリング」「オルタナティブ」などの概念による研究は多数みられる。福祉分野における「プロシューマー」は、これらの概念および理論的系譜によって生成されてきたものと考えられ、まずはこれらの用語および概念の整理を行う必要がある。先行研究として主に精神障害者分野における「セルフヘルプ」「ピアサポート」等の用語および概念整理を行った。専門職との関係性においては、(1)協働をとなえるもの、(2)専門職排除をとなえるもの、それぞれの立場の系譜があり、そのなかで生成されてきた「プロシューマー」にも同様に両者の立場をとるものがみられる。本年はさらに、聞き取り調査地の選定をして、プロシューマー22名(11事業体)とそれぞれの雇用主および専門職支援者(同僚)への聞き取りを実施した。聞き取りにおいては、縦断的変化を観察するために、一人の被調査者に対して36か月おきに数回の聞き取りを実施した。詳細な分析結果は次年度以降に実施する。先行研究については他障害を含めたさらなる整理の必要があるものの、プロシューマーを切り口に整理を行ったことに意義がある。本研究は、障害福祉分野においてサービスの受け手でありかつ送り手である人々(以下、プロシューマー)が、受け手・送り手の間を行き来するところの構造を明らかにし、彼らをとりまく状況との関連性について検討することを目的としている。主に欧米による先行研究より、プロシューマーには「セルフヘルプ」「権利擁護」「就労」の三つの系譜が流れていることが判明し、また「リカバリー」の普及によりプロシューマーが広がっていったことが明らかとなった。特に北米においては「認定ピアスペシャリスト」としてより専門性のあるケアチームの一員として社会的地位を確立していることなども明らかとなった。調査については全国11団体に所属するプロシューマー29名に対し36ヵ月ごとの聞き取り調査を述べ90回実施した。さらに調査対象となったプロシューマーの雇用主9名および支援者(同僚)6名に対してもそれぞれ14回および6回の聞き取り調査を実施し、プロシューマーの聞き取り調査による語りとの関連性や比較を行った。また北米(ウィスコンシン州、ワシントン州、コロラド州、カリフォルニア州、ジョージア州)のプロシューマー23名に26回、雇用主3名3回、支援者(同僚)3名3回の聞き取り調査を実施した。結果および分析にはライフストーリー分析およびポジション理論を援用し、ツールとしてMAXQDAを用いた。暫定的結果として、支援の受け手と送り手の二つの立場(ポジション)を行き来するプロセスのなかのプロシューマーの葛藤および変化の有無は社会的状況(スーパービジョンの有無、採用方法、雇用主や機関全体の考え方など)に影響を受けていることがうかがえた。北米調査からはプロシューマーがエンパワメントする社会的状況の条件について示唆する結果を得た。本研究の目的は、障がい福祉分野おいてサービスの受け手でありかつ送り手である人(以下、プロシューマー)に焦点を当て、受け手と送り手の二つのポジションを行き来するところの構造を明らかにすると共に、プロシューマー導入によりプロシューマー自身の変化およびシステム全体の力動的変化の具体について明らかにすることである。これまで、先行研究によりプロシューマー生成の系譜について、(1)セルフヘルプ、(2)権利擁護、(3)就労・働くの三つの系譜とそれらを包括する「リカバリー」概念について整理した(平成20年度報告)。また、先行実践として、北米にいてケアチームの一員として働いているプロシューマーのきっかけとなった州認定資格制度について現状を明らかにした(平成21年度)。

そのうえでプロシューマーおよびその雇用主、同僚を対象に日本(34名)および北米(31名)にインタビュー調査を実施し、「ポジション」を軸に【やりがい】と《葛藤》の語りを分析し、日米比較を行った。その結果、日本のプロシューマーは辞職・休職事例が多く、また《葛藤》の語りが豊かに表れ、一方北米では【やりがい】の語りが豊かであった。その差異に影響を及ぼしているのは社会的状況(スーパービジョンの有無、採用方法、雇用主や機関全体の考え方等)であり、さらには「プロシューマー・ポジション」の生成プロセスにあることが明らかとなった。これまでの受け手・送り手間の線形的支援関係に、新たなポジションとしてプロシューマーが導入されることにより力動的変革を起こし、循環的支援関係を構築する可能性をもたらす新たな職種であることが北米の先行実践からも明らかになっている。わが国においては未だ実証的研究は皆無に等しいなか、本研究はプロシューマーの構造およびその実態を明らかにしたことで今後の可能性の具体を示した意義は大きいと考える。
心臓丸ごとの拍動時のエネルギー変動を１細胞レベルで解析するシステム開発

2009年にATP濃度を可視化するFRET蛋白質としてATeamが開発され、細胞株内部のATP分布と変動が報告された。そこで本研究ではこのATeamを応用して高解像度・高速反応性かつ定量的にATPを測定できる新規ATeamを利用して、マウス生体内でATP変動を測定できるシステムを構築することに世界で初めて成功した。このマウスを用いて正常な心臓が拍動する時に取るATPの動態を蛍光顕微鏡を用いて計測した。その結果、心臓の拍動と共にATP量が変動している事が明らかとなってきた。ATP量とその変動を感受するFRETプローブ(ATeam)をマウスROSA26領域へノックインしたマウスを作出し、生体内においてATP量と変動を計測できるようになった。またこのマウスの受精後13日胚から樹立した繊維芽細胞(MEF)を用いて、細胞膜に穴を開ける処理をした後に培養液中に様々なATP量を添加する事により、ATP量とFRET ratio値の関係を調べた。その結果、0.2-20mMの間で直線的に正の相関を示す事を明らかにした。これよりこのマウスを用いれば生体内のATP濃度を定量的に計測できる事が示唆された。更に、このマウスを麻酔処置した後に人工呼吸器管理下で開胸して顕微鏡下で観察した。その結果、心筋の弛緩と収縮時にATP量の増減が観察された。特に心室より心房において、このATP量の増減は大きく観察された。この変動を現在、単離心筋細胞を用いて詳細に解析をしている。心臓は全ての動物の生命活動の中枢となっている臓器である。ヒトにおいて、特に先進国では心疾患は主要な死亡原因の一つである。また、心臓は常に収縮と弛緩を繰り返す事で血液を送り出すポンプとしてエネルギー(アデノシン3リン酸(ATP))を消費・供給している重要な臓器である。血液を送り出すポンプ機能に直結する生理学的な心機能の知見は培養細胞レベルと個体臓器レベルで乖離が存在している。そのような中、2009年にATP濃度を可視化するFRET蛋白質としてATeamが開発され、細胞株内部のATP分布と変動が報告された。更に、このATP量の変化を高解像度かつ定量的に計測できている事が明らかとなった。また、成熟したマウスの心臓からコラゲナーゼを用いる事で単離して得られる成熟心筋細胞を用いて、電気刺激可能な培養液灌流型のチャンバー内で収縮と弛緩運動を行うように電気刺激した。その結果、成熟心筋細胞でも心臓丸ごとで観察されたATP量の変動と同様のATP動態を観察する事に成功した。大学間の異動に伴うマウス生体移動及び研究室の引越のため。代謝イメージングマウス成体心臓での各部位におけるATP量の増減を詳細に調べると共に、単離心筋細胞における筋肉の収縮-弛緩とATP量の増減を詳細に調べる。これにより、心臓が収縮運動を起こしているときのATP量の増減を臓器レベルで明らかにする。大学間の異動に伴うマウス生体移動及び研究室の引越のため、実験動物及び試薬・プラスチックやガラス基部の購入が先延ばしされたため。また、異動のため学会発表へ行く時間が取れず、国内旅費・外国旅費を使用する事ができなかったため。異動先の大学での実験動物及び試薬・プラスチックやガラス器具の購入。学会発表へ行くための国内旅費・外国旅費に使用する。
幹細胞型精原細胞にのみ局在する抗原分子のcDNAクローニングとその性質

脊椎動物で、ウナギは、唯一、in vitro系で精子形成を完全に再現できる動物であり、これまでに生殖腺刺激ホルモン/11-ketotestosterone(精子形成誘起ホルモン)/アクチビンβというカスケードで精子形成が開始することが明らかとなっている。この研究は精子形成開始の分子機構を「生殖細胞の分化/細胞分裂周期の転換」という側面から明らかにすることによって精子形成過程における生殖細胞と体細胞間の協関を明らかにすることを目的とする。最近、筆者が作製したポリクローナル抗体の一つが、少なくとも、ウナギを含む数種の硬骨魚類(メダカ、ゼブラフィッシュ、ティラピア、ニジマス)と無尾両生類(アフリカツメガエル)の精巣組織内の約38kDaの蛋白質を特異的に認識すること、さらに、幹細胞型の精原細胞の細胞質の一部のみを認識し、精子形成の方向に分化した精原細胞(8型/二次精原細胞)、精母細胞、精子細胞、精子、精巣体細胞を認識しないことを免疫組織化学法によって確かめた。この抗体をプローブとして、この抗原分子をコードするcDNAをクローニングし、この抗原分子の化学的実態を解明することを試みている。ウナギの精巣組織のmRNAより作製した発現ライブラリーを上述した抗体(anti-spermatogoniaspecificantigen-1:anti-SGSA-1)でイムノスクリーニングを行った結果、既に幾つかのポジティブクローンを得た。現在、得られたcDNAがコードしているタンパク質のリコンビナントを用いて抗体の作製を行なっており、このcDNAがSGSA-1であるか否かの検定を継続中である。また、SGSA-1抗体を用いてSGSA-1の性質を調べたところ、上述の精巣での分布を調べた動物において、精原細胞以外に卵巣中の幹細胞型の卵原細胞、増殖型の卵原細胞、そして卵母細胞(いわゆる肥大卵母細胞のステージまで)の細胞質に特異的な免疫反応産物がみられた。また、イムノプロット解析から精巣組織と同様に約38kDaの蛋白質を特異的に認識することを確かめた。現在まで、この分子の実態は明らかになっていないが、これら一連の結果はSGSA-1が生殖細胞の性分化に重要な役割を果たしていることを強く示唆するものである。脊椎動物で、ウナギは、唯一、in vitro系で精子形成を完全に再現できる動物であり、これまでに生殖腺刺激ホルモン/11-ketotestosterone(精子形成誘起ホルモン)/アクチビンBというカスケードで精子形成が開始することが明らかとなっている。最近、筆者が作製したポリクローナル抗体の一つが、少なくとも、ウナギを含む数種の硬骨魚類と無尾両生類の精巣組織内の約38kDaの蛋白質を特異的に認識すること、さらに、幹細胞型の精原細胞の細胞質の一部のみを認識し、精子形成の方向に分化した精原細胞(B型/二次精原細胞)、精母細胞、精子細胞、精子、精巣体細胞を認識しないことを免疫組織化学法によって確かめた。ウナギの精巣組織のmRNAより作製した発現ライブラリーを上述した抗体(anti-spermatogoniaspecific antigen-1 : anti-SGSA-1)でイムノスクリーニングを行った結果、既に幾つかのポジティブクローンを得た。現在、得られたcDNAがコードしているタンパク質のリコンビナントを用いて抗体の作製を行なっており、このcDNAがSGSA-1であるか否かを検定しようとしている。また、SGSA-1抗体を用いてSGSA-1はミトコンドリア画分ではなく、ミクロゾーム画分に局在することが明らかとなった。このようなSGSA-1の性質を調べたところ、精原細胞のミトコンドリア・リッチな部域にみられること、精原細胞から調整した細胞内小器官の画分を用いたウェスタン解析からSGSA-1の精原細胞内の局在は、過去に記載されている精原細胞の微細構造の記載と考え合わせると非常に興味深い。現在、免疫電顕法によって、この局在の詳細を明らかにしようとしている。

現在、得られたcDNAがコードしているタンパク質のリコンビナントを用いて抗体の作製を行なっており、このcDNAがSGSA-1であるか否かの検定を継続中である。また、SGSA-1抗体を用いてSGSA-1の性質を調べたところ、上述の精巣での分布を調べた動物において、精原細胞以外に卵巣中の幹細胞型の卵原細胞、増殖型の卵原細胞、そして卵母細胞(いわゆる肥大卵母細胞のステージまで)の細胞質に特異的な免疫反応産物がみられた。また、イムノプロット解析から精巣組織と同様に約38kDaの蛋白質を特異的に認識することを確かめた。現在まで、この分子の実態は明らかになっていないが、これら一連の結果はSGSA-1が生殖細胞の性分化に重要な役割を果たしていることを強く示唆するものである。