hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
個人参加型細粒度クラウドコンピューティングを実現するネットワーク制御基盤技術

本研究では、個人参加型細粒度クラウドコンピューティング環境を指向した情報ネットワーク制御基盤技術の確立を目的とし、従来の大規模なデータセンタを地理的に限定配置する形態ではなく、細粒度で分散配置された個人もしくは小規模事業者ベースの計算機資源の提供環境を前提としてユーザの極近傍に計算機資源やデータベースを配置し低レンテンシなシステム環境を構築するための要素技術を提案した。特に、「解析・利用データと必要な資源とのマッチング」と「多数のビッグデータと計算機資源間のネットワーク距離短縮」を実現する技術をネットワークアーキテクチャの視点から確立し、ベンチマーク方式に対する性能向上を実証した。(1)ビッグデータと周辺計算機群のマッチング制御技術に関して、鍵となる技術として申請者の提案している計算資源探索制御であるResource Breadcrumbs(RBC)の基本方式に対し、今年度、サプライヤ周りへのRBC配布のみならず、資源提供ノードがユーザに送信するメッセージの経路上にも配布するEn-route RBC方式を拡張提案し、基本探索性能を飛躍的に向上させた。次に、本方式をベースとして、解析対象の散在するビッグデータと解析のための計算機群の組み合わせをそれぞれのローカルなエリア内に構成するBig Data aware Resource Breadcrumbs(BRBC)の実現をめざし、利用する計算機資源とデータ資源群が相互に近傍になるような組み合わせを自律的に発見する方式であるSelection of Proximal Supplier (SPS)方式を提案し、方式設計を行った。上記の各方式に対して、計算機シミュレーションにより基礎評価を行い、有効性を確認した。(2)ビッグデータと計算機群を低レイテンシで密結合させるネットワーク制御技術に関して、ネットワーク基盤の視点から、データと利用可能な計算機資源間のネットワーク距離を如何に縮めるかの解決策として、申請者の提案技術である、ネットワーク仮想化技術に基づくAmeba Network Architecture(ANA)のフレームワークを発展させた。地理的に分散されたノードからなる仮想交換機を構成する内部光パス・光クロスコネクト集合と、それらをつなぐ外部光パスを効率的に発見する改良方式を遺伝的アルゴリズムを応用して提案し、導出解の性能が従来方式よりも改善され、その結果、ノード間距離の短縮が図られることを確認した。本方式をベースとして、仮想交換機を構成するノード集合をBig Dataと計算機群を接続するノード集合と見立てることにより、所期の目的を達成する方式に利用する目途を立てることができた。(1)多数のビッグデータが計算機資源を競合的に奪い合うケースにおける計算機資源の公平な配分を実現する制御機構として、Split Assignment Schemeを提案し詳細設計した。本手法では、各ビッグデータ近傍の計算機資源集合に対し、Assignment Candidate SUPPLIER Listを構築する。そのリスト内の各計算機資源エントリのソーティング順序に関して、プライマリグループ、セカンダリグループを定義し、前者には近傍性を補償しつつ資源使用率、競合度を順次考慮し、後者に関しては近傍性、資源使用率、競合度の順で優先度を考慮した検索順序を確定し、小さな基本単位資源量ずつ各ビッグデータに資源を順次配分する。これにより資源配分に関して近傍性を維持しつつ公平性を達成した。また、そのアルゴリズムを、前年度に基本設計を行ったAmeba Network Architecture(ANA)のフレームワークに組み込み、仮想化光ネットワークの光パスレイアウトと、計算機資源の割り当てを同時並行的に確定するアルゴリズムを、遺伝的アルゴリズムをベースにして融合的に導出する方式を確立した。データと計算機資源のグループが局所的に高密度に多重化される環境を想定し、JPN48ネットワークのGravityモデルで人口対応のトラヒック偏重がある環境下において、提案方式の有効性を実証した。(2)ビッグデータと周辺計算機群のマッチング制御技術の要素技術として、まず、資源探索のアンカーポイントを1箇所に限定せず、複数の候補に向けてクエリを送出する方式として、複数のサロゲートサーバへクエリを送出し、RBCのヒット率向上を図る方式を提案し、その有効性を明らかにした。次に、ビッグデータ周辺に限定的なフラッディングによりクエリを拡散し、必要な計算機資源を探索するuser-side flooding方式を提案し、その有効性を明らかにした。本研究におけるもっとも重要な課題の取組として、光仮想ネットワーク技術を利用して各ビッグデータの周辺計算機資源へのIPホップを低減するパスレイアウト設計を実行しつつ必要な計算機資源を効果的に配分する複合的な手法を新たに確立するに至った。また、本手法に対して実ネットワークを想定したJPN48ネットワークで、日本の人口に応じたトラヒック偏在環境を想定したGravityモデルを導入して評価を行い、その有効性を明らかにしており、実環境への適用可能性を実証することができた。その他、拡張的な提案方式の確立、検討を行うことができた。以上の点から、最終目標を見通すことができたため、おおむね順調に進展していると判断する。(2)ビッグデータと計算機群を低レイテンシで密結合させるネットワーク制御技術として、Ameba Network概念によるビッグデータと計算機資源の近傍エリア内等化制御と計算機資源のビッグデータ間での公平な配分を連携させる手法を詳細設計した。具体的には、光波長パスによる光仮想ネットワークの構成法と,各ユーザと計算機資源間のネットワーク距離に関する公平性の確保や,各計算機資源間における効果的な負荷分散を実現する資源の分割割り当て手法の連携方式である。その際、より柔軟で効果的な光波長パスの配置を可能にする遺伝子表現を適用し、提案方式の有効性を光波長パスの平均ホップ数、資源間距離、資源利用率などの観点から実証した。(3)複数資源

種別に基づく一般的なコンテンツの探索で、検索の網羅性と迅速性を両立する手法として、網内ノード間で分散ハッシュテーブルを構築・管理するISM方式とキーワードに基づくBreadcrumbsとを融合した、ISM-KABC方式を提案し、その有効性を評価した。また、フラッディング型配布よりも少ないメッセージ量・制御負担で効果的な方式として、ホットスポットなクエリ通過ノードを拠点としたBreadcrumbs Trailを積極的に構築する手法を提案し、BCヒット率の大幅な改善効果を明らかにした。本研究では、個人参加型細粒度クラウドコンピューティング環境を指向した情報ネットワーク制御基盤技術の確立を目的とし、従来の大規模なデータセンタを地理的に限定配置する形態ではなく、細粒度で分散配置された個人もしくは小規模事業者ベースの計算機資源の提供環境を前提としてユーザの極近傍に計算機資源やデータベースを配置し低レンテンシなシステム環境を構築するための要素技術を提案した。特に、「解析・利用データと必要な資源とのマッチング」と「多数のビッグデータと計算機資源間のネットワーク距離短縮」を実現する技術をネットワークアーキテクチャの視点から確立し、ベンチマーク方式に対する性能向上を実証した。当初の予定を遂行するために、ベースとなる提案方式(Resource Breadcrumbs,AmebaNetworkArchitecture)を拡張提案し、その基本性能を飛躍的に向上させた。その上で、(1)ビッグデータと周辺計算機群のマッチング制御技術については、相互に近傍の計算機資源とビッグデータ資源を組み合わせとして探索することが可能なSelection of Proximal Supplier (SPS)方式を提案し基礎評価を行うまでこぎつけることができた。また、(2)ビッグデータと計算機群を低レイテンシで密結合させるネットワーク制御技術についても、拡張提案方式を基にした基本提案方式の概要を確定することができ、一部性能評価を行うまでに至っている。計画はおおむね順調に進んでいると判断されるため、今後は、仮想化技術をさらに見据えた複雑な環境への適用可能性の追求、さらには、プロトタイプ実装を視野に入れた基本設計と基礎評価に向けて研究を推進する予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。情報学・計算基盤・情報ネットワーク・サービス構築基盤技術計画は順調に進捗しているため、基本的には当初通りに計画を遂行していく予定である。本年度の研究成果を基に、さらに2つの視点からの提案方式の詳細設計を進め、その有効性を評価する。ビッグデータグループが互いに高密度に配置され得る場合の対応策や、資源探索・管理手法についてのExploitation型とExploration型の組み合わせによる性能向上の模索を図っていく。さらに、BRBCの段階的プロトタイプ実装に向けた基本設計を進める。
河岸・海岸の持続的管理に有効な植生バイオシールドの構築

バングラデシュ国における側岸侵食の実態と現状で行われている対策方法、堤防被覆に使用可能な植生(草本・木本)を整理した。また、高潮時における被災事例の把握をもとに、堤防や盛土法面を被覆し侵食を防止する植物としてのベチベル草を選定し、水理模型実験の粗度としてモデル化し、堤防を越水する流れに及ぼす草本や低木の効果を定量評価するための実験を行い、せん断力低減効果を評価した。また、側岸侵食防止効果について、高水敷上の水制の長さ・間隔や傾きをパラメータとして、流速低減域と加速域がどのように変化するかについて、水理模型実験を行い、それを表現する数値モデルの開発を行った。さらに、樹木の倒伏限界値の把握に関して、荒川明戸地点・荒川板橋地点・高麗川にて行った樹木引き倒し試験の比較検討を行った。特に、荒川板橋地区にて行った引き倒し試験結果を詳細に解析した.その結果,地上部体積を表すパラメータが転倒限界モーメントMmaxを精度良く表現すること、根茎構造(浅根型,深根型)の相違による根鉢のサイズ(根鉢の表面積および体積)が転倒限界モーメントに大きく影響していること、転倒限界モーメントには地盤の粘着性が大きな影響を与えることなどを明らかにした.樹林帯の高潮減災効果については、数値モデル解析を行い、バングラデシュに存在するマングローブ樹種の効果について、樹林幅・樹種などによる相違を解析した.特に緩勾配条件化では2つの樹種を組み合わせることで高潮に乗っている高波成分の流速の低減には有効であることを示した。バングラデシュ国における側岸侵食の実態と現状で行われている対策方法、堤防被覆植生(草本・木本)の現状と高潮時における被災事例の把握(特に、堤防や盛土法面を被覆し侵食を防止する植物としてのベチベル草の有効性把握)を資料収集ならびに現地調査・ヒアリングで把握した.樹木の側岸侵食防止効果については、ヒサシ状河岸近傍の乱流構造を水理模型実験により把握した.樹木の倒伏限界値の把握に関して、高麗川にて行った樹木引き倒し試験の解析を行った。また、荒川にて新たに引き倒し試験を実施した.高麗川の引き倒し試験では樹木周辺の洗掘が破壊限界に及ぼす影響を解明し、樹木の倒伏を表現する力学モデルを作成した。荒川の引き倒し試験では、地盤強度と根の形状特性が樹木転倒限界に与える影響について、さらに詳しく調査を行った.ヤナギ,オニグルミの転倒モーメントと胸高直径の2乗との相関はやや低く,胸高直径の2乗×樹高との相関が一番高い傾向を示した.旧建設省による平均値式,下限値式と比較したところ,やや係数が大きくなる傾向を示したが,樹種の差は大きくはなかった.ヤナギは深根型,.オニグルミは浅根型の根鉢形状をしていたが,オニグルミは根鉢の深さは浅いもののその反対に水平方向の根のはりが良く根鉢半径も大きくなったためと考えられる.同じ樹木間(ヤナギ)で地盤強度による転倒限界式を別々に作成したところ,地盤強度の高いほうが小さな係数となった.地盤の固いほうが根の深さや量が減少しており,それが土と根をあわせた総合的な強度を減少させていた.地盤強度は転倒限界に影響を与えているが,地盤強度によって根の構造を変化させるなど、興味深い結果が得られた.樹林帯の高潮減災効果については、数値モデル解析を行い、バングラデシュに存在するマングローブ樹種の効果について、樹林幅・樹種などによる相違を解析した.バングラデシュ国における側岸侵食の実態と現状で行われている対策方法、堤防被覆に使用可能な植生(草本・木本)を整理した。
メカニカルストレスによる顎堤の骨吸収メカニズムの解明

顎堤の骨吸収は,機械的刺激による骨造成と骨吸収の不均衡が一つの原因と考えられる。近年,荷重や張力などの機械的刺激による骨芽細胞や破骨細胞への分子レベルでの影響を検討することが可能となってきた。そこで本研究では,機械的刺激による破骨細胞の分子レベルでの変化を明らかにすることを目的に,周期性伸展刺激がMC3T3-E1細胞およびRAW264.7細胞に与える影響について検討した。本研究の結果より、圧縮や伸展などのメカニカルストレスが骨芽細胞と破骨細胞に作用した際には、骨芽細胞と破骨細胞の反応はそれぞれの力に対して異なることが示唆された。平成24年度は通常の培養条件およびメカニカルストレスの一種である伸展刺激をシミュレートした培養環境下で骨芽細胞を培養した。この伸展刺激の負荷のためにストレックスに専用のシリコンチャンバーを使用した。5%または20%のレベルの周期性伸展刺激を骨芽細胞様細胞株であるMC3T3-E1細胞に負荷し、周期性伸展刺激を負荷した細胞からRNAを抽出し、周期性伸展刺激に対する骨芽細胞の反応をRNAレベルで検討した。平成24年度の研究を発展させ平成25年度は上記の研究をタンパク質レベルで解析した。その結果、伸展刺激の条件によって、MC3T3-E1細胞におけるこれらのタンパク質発現が異なることが判明した。しかしながら骨吸収へと導く周期性伸展刺激の条件を明らかにするまでにはいたらなかった。一方、周期性伸展刺激が破骨細胞に与える影響についても検討を開始した。抜歯後の歯槽骨レベルの低下、義歯床下の顎堤の骨吸収、歯周病やインプラント周囲炎による歯槽骨吸収を抑制することは補綴処置を長期間成功する上で重要である。骨の恒常性は様々な因子によってバランスが取られているが、このバランスが崩れると骨吸収に傾く。外来刺激による骨吸収や炎症性骨吸収では、破骨細胞が活性化され骨吸収が促進されていると考えられている。この破骨細胞を主に活性化する因子がRANKLである。このRANKLは骨芽細胞をはじめ歯肉上皮細胞やT細胞、B細胞などが恒常的または刺激に反応して発現している。さらに最近、骨芽細胞と破骨細胞の相互作用にEphB4とephrinB2の結合の重要性が指摘されている。そこで本研究では、骨の恒常性を保っている因子のなかで特に補綴領域に関連したメカニカルストレスによる破骨細胞の反応(RANKとephrinB2分子の発現)と骨芽細胞におけるRANKLとEphB4発現機構を解析する。平成25年度は上記の研究をタンパク質レベルで解析した。平成26年度は、骨芽細胞と破骨細胞の相互作用にEphB4とephrinB2の結合の重要性が指摘されていることから、これらの分子に着目し、メカニカルストレスに対するこれらの分子の動態を検討した。その結果、圧縮と伸展刺激ではEphB4 mRNAの発現は異なることが示唆された。歯科補綴学シリコンチャンバー上での細胞培養などに関する問題は克服したが、2年間で当初の目的である骨吸収へと導く周期性伸展刺激の条件を明らかにするまでにはいたらなかった点で研究の進展状況はやや遅れ気味と言える。RNAレベルとタンパク質レベルでの解析を予定していたが、本年度はRNAレベルでの解析のみとなった。現在、タンパク質レベルでの解析のための予備実験を開始していることから、若干遅れ気味ではあるが円滑に実験が進行していると考えている。平成26年度は、2年間で得られた結果をとりまとめ、成果発表を関連学会で積極的に行う予定である。また、成果発表時に同じフィールドの研究者と討論し情報収集を行い、骨吸収へと導く周期性伸展刺激の条件を明らかにすることができなかった問題点を探り、今後の研究に生かしていく予定である。平成25年度は、平成24年度に完了しなかったタンパク質レベルでの解析を行うと同時に、周期性伸展刺激の破骨細胞への影響についても検討する。実験の項目が増加するため、研究補助者を増員することによって細胞培養などの効率化をはかり、研究を遂行する予定である。2年間で得られた結果をとりまとめ、成果発表を関連学会で積極的に行う予定である。

また、成果発表時に同じフィールドの研究者と討論し、今後の研究に生かしていく。骨吸収を起こしやすい周期性伸展刺激の条件を明らかにするまでには至らなかったため、次年度の研究課題に加えて、周期性伸展刺激が骨芽細胞と破骨細胞の分化に与える影響について再検討を行う。このため、次年度へ本年度の経費の一部を繰り越すこととする。周期性伸展刺激が骨芽細胞と破骨細胞の分化に与える影響について再検討周期性伸展刺激が最も骨吸収を促進する条件の検索自己点検で述べたように、平成24年度に完了しなかったタンパク質レベルでの解析を平成25年度に行うため、経費の一部を繰り越すこととする。平成25年度は主に骨吸収を起こしやすいと予想される周期性伸展刺激の条件を検討する。この予想条件下で平成25年度は破骨細胞を培養し、周期性伸展刺激が破骨細胞の分化に与える影響について検討する。具体的には可溶性のRANKL添加によって破骨細胞へと分化するRAW264.7細胞に、周期性伸展刺激を負荷する。周期性伸展刺激を負荷した培養破骨細胞よりRNAおよびタンパク質を抽出し、破骨細胞の分化マーカーであるTRAP、cathepsin KおよびDC-STAMPの発現様式を比較検討する。さらに、骨芽細胞が発現するEphB4と深い関係があると言われているephrinB2の発現を詳細に検討し、破骨細胞の分化マーカーの発現と比較検討する。
量子化学計算による酵素の触媒機構解明

本研究課題ではQM/MM(Quantum Mechanical/Molecular Mechanical)法と呼ばれる量子化学計算の手法を用いることで、数万原子からなる生体分子などの巨大な系についてシミュレーションを行い、酵素の活性中心における反応活性種の反応性や電子状態を検討し、酵素による基質の活性化機構を明らかにした。成果としては、フルオロ酢酸デハロゲナーゼ、ヘムオキシゲナーゼ、ジオールデヒドラターゼなどの酵素反応について、QM/MM法による高精度なドッキングシミュレーションや変異体の反応性評価を行い、そのいくつかについて論文を発表した。シトクロムP450BM3は長鎖脂肪酸のアルキル基末端を選択的に水酸化する。荘司らはP450BM3に基質である長鎖脂肪酸とよく似た構造を持つが酸化されないパーフルオロアルキルカルボン酸(PFs:デコイ分子)を取り込ませることで、酵素内部に非天然基質が結合できる空間を形成する戦略(基質誤認識システム)により、従来のアミノ酸置換法を用いずに本来水酸化することのできないプロパンやエタン等のガス状アルカンの水酸化反応に成功している。さらに最近、ベンゼンを一段階でフェノールへと変換する高難度な水酸化反応に成功している。興味深いことに、キシレンの反応ではメタ体とパラ体の場合芳香環の水酸化が選択的に進行し、オルト体ではベンジル位の水酸化反応が優先的に進行した。このような選択性が生じる要因として、基質の反応性だけでなく酵素内部での基質の配向性が大きく関わっていると考えられる。H25年度に基質結合部位のアミノ酸残基のフレキシビリティを考慮したflexible dockingシミュレーションを実行し、この特異な位置選択性の起源を考察した.結晶構造の基質結合部位にキシレンを導入し、近傍のアミノ酸(残基番87,263-269,328,438)、およびPFC9の末端CF3CF2CF2部のフレキシビリティを考慮したflexible dockingシミュレーションをMacroModelプログラムにより実行した。ヘムの鉄原子とキシレンのベンジル位あるいは芳香環の水酸化される炭素原子の距離を5 Åに限定することで、ベンジル位あるいは芳香環の水酸化に有利な配座を、オルト体、メタ体、パラ体のそれぞれについて効率的に決定した。これらの計算の結果、ヘム近傍のPhe87とキシレン間のπーπ相互作用により、芳香環の水酸化の遷移状態が安定化されることが重要と判明した。ヘムオキシゲナーゼはヘムを分解し、鉄、ビリベルジン、一酸化炭素を生成する酵素である。この反応の中間生成物であるα-メソヒドロキシヘムの生成機構として、これまで3つの経路が提案されている。ヒドロペルオキソ配位子の遠位酸素がα位の炭素を攻撃する協奏的反応である経路は、多くの実験的研究に支持されているが、量子化学計算により、その活性化エネルギーは47.4 kcal/molと報告されており、生理的条件下で進行するには高い。我々はシトクロムP450等の反応活性種として知られるオキソ種が水分子を攻撃し、この水分子のO-H結合が開裂し、酸素とα位の炭素間の結合が生成する反応経路を提案した。この経路について、酵素の全原子を考慮したQM/MM計算により、さらなる理論的解析を行った。QM/MM計算によって、O-O結合開裂により生じた水分子は、オキソ配位子の酸素原子及び水分子との水素結合によってヘムのα炭素上に固定されることが明らかになった。さらに、α-ヘリックスの立体障害によって、水分子によるヘムのβ位及びδ位への攻撃が妨げられている。これらの効果により位置選択的にα位が酸化されると判明した。鉄原子、オキソ配位子、およびポルフィリンの電子密度はそれぞれ、1.27、0.84、1.05であり、二重項状態が四重項状態より0.02 kcal/mol安定であった。これらのQM/MM計算で得られた結果は、以前報告したモデル計算の結果とほぼ同等であった。C-O結合生成の活性化エネルギーは18 kcal/molとなり水分子が反応に関与することで有効にヘムが酸化されることが示された。ジオールデヒドラターゼ(DD)はアデノシルコバラミン由来の酵素であり、1,2-ジオールを相当するアルデヒドへと変換する反応を触媒する。虎谷らはSite-Directed Mutagenesisにより変異型酵素を作成し、それらの活性を測定した。変異型では水酸基転移反応の活性化エネルギーの低下に寄与するHis143とGlu170を置換したHis143Ala、Glu170Gln、Glu170Alaの活性を求めた。His143AlaとGlu170Gln変異型の活性はそれぞれ野生型の5.1%と0.02%となり、Glu170Ala変異型では活性はほとんどなかった(<0.01%)。今回、計算ミューテーションを用いてアミノ酸残基の役割および活性に与える影響について検討した。変異導入により水酸基転移反応の活性化エネルギーが大きく上昇していることが判明した。

野生型では水酸基転移反応においてC-O結合がヘテロリティックに切れることにより電子の非局在化がおき、遷移状態が安定化する。一方、His143Ala変異型ではこの結合がホモリィテックに開裂し、ラジカルが転移する水酸基に局在することが判った。また、Glu170Gln、Glu170Ala変異型では水素を引き抜く残基が存在せず、共鳴安定化が確認されなかった。これらの結果から、His143はとGlu170による相乗効果により遷移状態が安定化することが明らかになった。また、律速段階の活性化エネルギーから計算された酵素の相対活性は実験により得られた相対活性をよく再現しており、酵素反応の解析だけでなく、設計に応用することも期待させる結果となった。計算化学当初の計画通り、シトクロムP450の基質特異性に重要なアミノ酸残基の特定に成功しており、今後他の酵素の反応でも適応なこうな一般的なアプローチを確立した。これらの成果により、おおむね研究の目的を達成したと考えられる。QM/MM(Quantum Mechanical/Molecular Mechanical)法とよばれる量子化学計算の手法を用いることで、数万原子からなる生体分子などの巨大な系についても、充分な精度でシミュレーションを行うことが可能である。本研究はこのQM/MM法を使うことで、酵素の活性中心における反応活性種の反応性や電子状態を検討し、酵素による基質の活性化機構を明らかにすることを目的としている。今年度はこの手法を応用することで、ヘムオキシゲナーゼ、ジオールデヒドラターゼ、B12依存酵素の反応機構を明らかにした。これらの成果は学術誌に掲載された。最新の結晶構造では、フェニル基がヘムに対して垂直であるが、従来の長鎖脂肪酸結合型のP450BM3の結晶構造では平行である。flexible dockingシミュレーションの結果と考え合わせれば、PFC9がPhe87の配向に影響をあたえることで、位置選択性を制御している可能性が示唆される。今後、Phe87のミューテーションや、PFCのアルキル鎖長の変化による位置選択性への影響を評価し、この機構の妥当性を検証したい。一般にシトクロムP450は特定の基質にのみ作用する(基質特異性)。これは酵素の基質結合部位の立体構造が基質分子に結合しやすい形状であることによる。仮に、基質結合部位のアミノ酸を置換することで、自由に立体選択性や位置選択性を制御できれば、天然のP450に無い機能を有する人工酵素の設計が可能となる。申請者の所属する研究室には、創薬の分野でしばしば使われるドッキング・シミュレーションのソフトウェアが導入済みであるので,簡単なシミュレーションであればすぐに実行可能である。必要があれば、我々が最近行ったQM/MM法によるドッキング・シミュレーションを行う。本研究の遂行には多数のワークステーションが必要となる。そこで故障した旧型のワークステーションを更新するためパーツを消耗品費で購入する。主にPC用の汎用パーツを使用するので、価格が安定しており、さらに安価である。経験的には90万円で10台分の更新が可能である。
胆汁酸応答分子の分子内及び分子間活性化制御機構と生理代謝調節

胆汁酸応答性核内受容体のリガンド依存性転写活性化に伴う構造変化解析を、蛍光共鳴エネルギー転移(FRET)を用いて行った。2)AmCyan-VDRとEYFP-RXRをHEK293細胞に共発現させ、3種類のビタミンDアナログ(1,25-(OH)2D3,LCA,ADTT)によるヘテロダイマー形成能を比較検討した結果、合成ビタミンDアナログであるADTTは、添加30分においてVDR/RXRのヘテロダイマー形成を引き起こさないことがわかった。3)リガンド非存在下で、AmCyan-VDRはコリプレッサーであるEYFP-SMRTと強く結合し、リガンド添加でこれらのVDR/SMRTの結合は素早く解離される結果が得られた。SMRTのVDRからの解離において、ビタミンDアナログの構造的な違いによる違いは見られなかった。4)リガンド非存在下で、AmCyan-VDRはコアクチベータであるEYFP-SRC1と弱く結合し、1,25-(OH)2D3,合成ビタミンDアナログADTTによってこれらVDR/SRC1の結合は増加されたが次2次胆汁酸であるLCAによるVDR/SRC1の相互作用は処理30分においてその増加がほとんど見られなかった。胆汁酸による核内受容体の転写活性化に伴う構造変化解析を、蛍光共鳴エネルギー移転(FRET)を利用して行うための実験系の構築を行った。1.胆汁酸応答性核内受容体の一つであるビタミンD受容体VDRと、VDRとヘテロダイマーを形成する核内受容体、レチノイドX受容体(RXR)の蛍光標識体を作製し、蛍光スペクトル及びルシフェラーゼレポーターアッセイによる転写誘導活性をリガンドの非存在化及び存在化で評価した。ますFRETシグナルの検出効率の最適な蛍光体の組み合わせを検討するため、4種類の蛍光蛋白質ECFP、EYFP、Cyan及びYellowの遺伝子を含む発現ベクターへ全長のVDRとRXRaをそれぞれ挿入して、それらの受容体の融合蛍光体を作製した。作製した蛍光VDRと蛍光RXRaを単独もしくは共にHEK293細胞にトランスフェンションし、活性型ビタミンD3添加による蛍光スペクトルの変化(2分子FRET)を観察した。その結果、CyanとEYFPの組み合わせが、FRET検出効率が最も良好であることが明らかになった。Cyan-VDR/EYFP-RXRa及びCyan-RXRa/EYFP-VDRを用いて、蛍光VDR及び蛍光RXRaの細胞内での局在、蛍光顕微鏡下での生細胞内VDR/RXRa相互作用のFRETの解析の予備検討を行っている。2.核内受容体の標的遺伝子の転写調節に重要な役割をするとされるコファクターの蛍光体の作製、また両側に異なる蛍光体を有するCyan-hVDR-EYFP及びECFP-hVDR-EYFP(1分子FRET)の構築も行っている。3.VDRのリガント結合領域の一点変異体の作製し、2分子FRET及び1分子FRETにより、リガンド依存性立体構造変化及びコファクター複合体の解析の準備を行っている。胆汁酸応答性核内受容体のリガンド依存性転写活性化に伴う構造変化解析を、蛍光共鳴エネルギー移転(FRET)を用いて行った。1.胆汁酸応答性核内受容体の一つであるビタミンD受容体VDRと、VDRとヘテロダイマーを形成する核内受容体、レチノイドX受容体(RXR)の蛍光標識体を作製し、それぞれの細胞内局在とVDRめ天然リガンドである活性型ビタミンD3によるこれら2分子間FRETを蛍光スペクトルメータと蛍光顕微鏡で観察した。その結果、蛍光VDRは細胞質と核に、蛍光RXRは主に核だけに局在し、活性型ビタミンD3添加により蛍光VDRとRXR間でFRETが観察されるが、蛍光VDR同士間のリガンド依存的なFRETは見られなかった。VDRはリガンド依存的にRXRとヘテロダイマーを形成する事がFRETを用いた手法でも明らかとなった。2.核内受容体の標的遺伝子の転写調節に重要な役割をするとされるコファクターの蛍光体を作製し、蛍光VDRとめリガンド非存在下・存在下での2分子FRETを行った。リガンド非存在下でコリプレッサーであるEYFP-SMRTとAmCyan-VDR間で強いFRETが観察されたが、活性型ビタミンD3の添加により消失した。一方、コアクチベーターであるEYFP-SRC-1とAmCyan-VDR間ではリガンド非存在下でFRETは観察されなかったが、活性型ビタミンD3添加によりFRETが観祭された。3.胆汁酸と合成ビタミンDアナログを用いて、VDRとこれらコファクター間のダイイナミックなFRETの解析を進めている。4.胆汁酸受容体FXR及びオキシステロール受容体LXRの蛍光標識体、及びVDRを含めたこれらの受容体のアミノ酸変異体の作製を継続している。

SMRTのVDRからの解離において、ビタミンDアナログの構造的な違いによる違いは見られなかった。4)リガンド非存在下で、AmCyan-VDRはコアクチベータであるEYFP-SRC1と弱く結合し、1,25-(OH)2D3,合成ビタミンDアナログADTTによってこれらVDR/SRC1の結合は増加されたが次2次胆汁酸であるLCAによるVDR/SRC1の相互作用は処理30分においてその増加がほとんど見られなかった。
関節リウマチにおける滑膜細胞の異常増殖機構の解明とその制御

関節リウマチ(RA)患者由来の滑膜細胞が増殖因子刺激により腫瘍様増殖を示す点に注目し、生理的条件に近いコラーゲンゲルを用いた3次元培養系を確立した。RA滑膜細胞は無刺激では球形に近い形態をとるが、増殖因子刺激によりシグナル分子の活性化とアクチン再構成を介して突起の著明な伸長を示して増殖し、それらは増殖因子受容体阻害薬イマチニブで阻害された。また、滑膜細胞の増殖はTリンパ球との共培養で促進された。以上より、RAの病態における増殖因子とリンパ球浸潤の役割、ならびにイマチニブのRA新規治療薬としての有用性が示された。関節リウマチ(RA)患者滑膜の特徴は、血管新生、炎症細胞浸潤、および滑膜細胞の異常増殖である。特にRA患者由来の滑膜細胞は、単なる活性化ではなく、腫瘍様のtransformationを生じていると考えられている。そこで、RA滑膜細胞が血小板由来増殖因子(PDGF)などの特定の刺激によりanchorage非依存性の腫瘍様増殖を示す点に注目し、RA滑膜細胞の3次元培養系を確立した。まず、軟寒天ゲル内で滑膜細胞を培養すると、PDGF刺激依存性のコロニー形成を示した。ここで、PDGF受容体からのシグナル伝達におけるアダプター蛋白の役割を検討すると、PDGF刺激によりPDGF受容体のみならず、アダプター蛋白Gab1、Gab2が速やかにチロシンリン酸化されることが見いだされた。しかも、PDGF受容体の活性化阻害活性を有するimatinib mesylateにより、PDGF依存性のGab1、Gab2のチロシンリン酸化ならびにanchorage非依存性の増殖がほぼ完全に抑制され、PDGF受容体からの増殖シグナルにおけるアダプター蛋白の重要な役割、ならびにimatinib mesylateのRA治療薬としての可能性が強く示唆された(Kameda H et al. Clin Exp Immunol, in press)。次に、コラーゲンゲル内で培養すると、RA滑膜細胞は無刺激では円形に近い形態をとるが、PDGF刺激により突起の著明な伸長という特異的な形態学的変化を示し、2次元培養と同様の紡錘状の形態をとりながら増殖した。従って、軟寒天ゲルとコラーゲンゲルでは全く異なる細胞形態や増殖様式を示すことが明らかとなり、RA滑膜細胞の三次元増殖における細胞外マトリックスの重要性が明らかとなった。まず、軟寒天ゲル内で滑膜細胞を培養すると、PDGF刺激依存性のコロニー形成が観察された。しかも、PDGF受容体の活性化阻害活性を有するimatinib mesylateにより、PDGF依存性のGab1、Gab2のチロシンリン酸化ならびにコロニー形成がほぼ完全に抑制され、PDGF受容体からの増殖シグナルにおけるアダプター蛋白の重要な役割、ならびにimatinib mesylateのRA治療薬としての可能性が強く示唆された(Kameda H et al.Clin Exp Immunol,2006)。次に、より生理的条件に近づけたコラーゲンゲル内で培養すると、RA滑膜細胞は無刺激では円形に近い形態をとるが、PDGF刺激により突起の著明な伸長という特異的な形態学的変化を示し、2次元培養と同様の紡錘状の形態をとりながら増殖した。しかもこの反応はT細胞との共培養で促進され、滑膜に浸潤したT細胞は滑膜細胞の3次元増殖を促進していることが明らかとなった(Arthritis Rheum,2006suppl)。しかも、PDGF受容体の活性化阻害活性を有するimatinib mesylateにより、PDGF依存性のGab1、Gab2のチロシンリン酸化ならびにコロニー形成がほぼ完全に抑制され、PDGF受容体からの増殖シグナルにおけるアダプター蛋白の重要な役割、ならびにimatinib mesylateのRA治療薬としての可能性が強く示唆された(Kameda H et. al.Clin Exp Immunol,2006)。

次に、より生理的条件に近づけたコラーゲンゲル内で培養すると、RA滑膜細胞は無刺激では円形に近い形態をとるが、PDGF刺激により突起の著明な伸長という特異的な形態学的変化を示し、2次元培養と同様の紡錘状の形態をとりながら増殖した。しかもこの反応はT細胞との共培養で促進され、滑膜に浸潤したT細胞は滑膜細胞の3次元増殖を促進していることが明らかとなった(Arthritis Rheum,2006suppl)。また、このコラーゲンゲル内培養においてもimatinib mesylateはPDGF刺激による形態変化と増殖促進の双方を抑制した(Arthritis Rheum,2007suppl)。以上より、RAの病態におけるT細胞の役割とimatinib mesylateのRA新規治療薬としての有用性が示された。関節リウマチ(RA)患者滑膜の特徴は、血管新生、炎症細胞浸潤、および滑膜細胞の異常増殖である。特にRA患者由来の滑膜細胞は、単なる活性化ではなく、腫瘍様のtransformationを生じていると考えられている。そこで、RA滑膜細胞が血小板由来増殖因子(PDGF)などの特定の刺激によりanchorage非依存性の腫瘍様増殖を示す点に注目し、RA滑膜細胞の3次元培養系を確立した。軟寒天ゲルより生理的条件に近づけたコラーゲンゲル内で培養すると、RA滑膜細胞は無刺激では円形に近い形態をとるが、PDGF刺激により突起の著明な伸長という特異的な形態学的変化を示し、2次元培養と同様の紡錘状の形態をとりながら増殖した。その作用機序として細胞骨格蛋白への寄与が示唆された。そこでrhodamine-phalloidin染色によるアクチンの変化を検討したところ、PDGF刺激によるアクチンの再構成がimatinibにより完全に阻害され、このことが形態変化や増殖に対する影響に関連していると考えられた(亀田秀人日本臨床免疫学会会誌,in press)。以上より、RAの病態におけるPDGFとT細胞の役割、ならびにimatinib mesylateのRA新規治療薬としての有用性が示され、imatinibの作用機序の1つに細胞骨格蛋白の機能変化があることが明らかとなった。
食作用を軸としたサンゴ褐虫藻共生系のマトリョーシカ的進化基盤

本年度は、予定していた全ゲノム規模での遺伝子発現解析、および分子系統からの進化研究をほぼ完成させることができた。まず、RNAseqデータの元データから高品質配列のみを取り出すフィルダリングを改善し、これまでよりも精度の大幅に向上したマッピング(ゲノム配列との参照、位置同定)データを得ることができた。そこから遺伝子の環境変動(温度、光)に対する発現変動パターンを、共生状態および白化(非共生)状態のセイタカイソギンチャクにおける解析したところ、温度環境などの変化によって発現変動が見られる遺伝子群は、共生の有無によって大きく異なっていたことから、褐虫藻との細胞内共生が宿主刺胞動物の遺伝子発現ネットワークそのものに大きな影響を与えることが示された。この結果は古典的な共生観を覆し、共生現象を理解する上で新規の知見を提供する重要な貢献を果たしたと言える。また、共生成立に重要な役割を持つと考えられている食作用に関わる遺伝子ファミリーの中で、共生状態および白化状態では、同じファミリーに属する別々の遺伝子が発現変動を示すことがわかった。このことは、共生体の有無により遺伝子発現のレパートリーが変化しても、同じような機能を持つ別の相同遺伝子の発現を調節することで、細胞全体としての遺伝子機能は保持されることを示唆している。細胞構造学的な解析についても、褐虫藻と刺胞動物との共生系だけでなく、同じく食作用構造の顕著な緑藻類においても、免疫染色、外来遺伝子発現、蛍光プローブ追跡観察などの手法を検討・開発し、解析を進めることができた。27年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、当初の大きな目標のうちの特に二つが大きく進展した。一つはRNA調整とトランスクリプトーム解析、in silicoでの発現パターン解析についてであり、新学術領域ゲノム支援の援助も受けることができたため、セイタカイソギンチャク・褐虫藻をモデルとした細胞内共生系における遺伝子発現解析を、イルミナ社トランスクリプトーム解析系を用いて行い、褐虫藻を共生させたイソギンチャクを異なる環境下で飼育した際に異なる発現量変動を示す遺伝子を複数同定することができた。現在、この結果を精査している段階であるが、予備的な解析では、飼育海水温度を上昇させた時の変動候補遺伝子の中には紫外線などを浴びた際のストレス応答に関わるとされる遺伝子も含まれていた。水温上昇は、イソギンチャク体内において共生関係が崩壊するきっかけとなる最も顕著な環境条件であることから、今回の遺伝子発現変動が、実際に共生崩壊が進行する初期段階の反応を表している可能性が高く、今後も詳細な検討を進めていく。もう一つはこのトランスクリプトームデータを基にしてイソギンチャクの遺伝子リストを作製し、共生が起こる際に働くと考えられるファゴサイトーシス(食作用)関連遺伝子を複数同定することができた。セイタカイソギンチャクは、サンゴ・褐虫藻共生系のモデルとして近年にわかに注目を集めているが、まだまだモデル生物としての認知度やリソース整備は遅れており、今回の解析によって世界中のコミュニティに発信できるビッグデータが将来の共生研究に活かされる日も近いと考えられる。遺伝子発現解析については、ゲノム支援からの援助を受けることができたことなどにより、予想以上の進展が見られた。特に、褐虫藻を共生させたセイタカイソギンチャクに関する解析だけでなく、培養技術の向上および新たな実験処理に関する情報交換などを経ることにより、人為的に褐虫藻を失うような処理を行って藻類との共生を行わなくなった非共生株(白化株)を作製し、それを基に遺伝子発現解析を行うことに成功した。現在次世代シーケンサを用いてcDNA配列の網羅的な解読を行っているところであり、共生株との比較により、これまで殆ど分っていなかった共生藻類による宿主刺胞動物への影響を遺伝子レベルで解析するための基盤を開発することができたと期待している。

食作用に関する細胞構造の観察については、食胞構造の安定的な固定と可視化するためのプローブ開発などが技術的に困難であり、やや難航しているが、本年度より異動のため所属変更があったのを機に、新たに他の研究者との交流や情報交換を活発に行うことにより、問題を克服していけるものと期待している。27年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、まず遺伝子発現解析および分子系統解析など、バイオインフォマティクスを中心とした解析を完了させ、論文投稿へとつなげていくことを第一義に考えていく。また蛍光顕微鏡などを用いた遺伝子産物の局在解析も合わせて準備していき、セイタカイソギンチャクだけでなく他の刺胞動物や原生生物など視野を広げて食作用という共通機能に関連する構造を観察できるよう検討していきたい。
プロレニンを標的とした糖尿病網膜症の新規治療薬の開発

今回我々は、糖尿病網膜症での組織低酸素によって生じる変化に着目して研究を開始した。網膜虚血再灌流では、組織低酸素と酸化ストレスが生じるが、プロレニン、(プロ)レニン受容体から構成される受容体随伴プロレニン系は亢進しなかった。改めて糖尿病、非糖尿病患者のデータを解析したところ、高血糖と高血圧が受容体随伴プロレニン系に深く関与していることを明らかにした。現在、我々プロレニンの網膜での役割を明らかにするために、ブタ摘出網膜血管を用いて新たな研究を進めている。本研究はプロレニンを標的とした糖尿病網膜症の新規治療薬の開発を目的としてきた。昨年度の実施実績報告書に報告したように、実験結果が当初の予想と反するものとなった。我々の仮説では、人為的な網膜低酸素状態でプロレニンの発現が亢進し、さらにVEGFをはじめとする増殖因子や炎症性サイトカインの発現が増加し神経網膜の障害が起きると考えていた。昨年度の研究では、人為的に網膜に低酸素状態を再現してもプロレニンに変化がみられない事と、プロレニンに変化がなくても神経節細胞死が起きる事が確認された。申請した実験計画書に記載しているように、網膜虚血再灌流モデル以外のモデル、すなわちレーザー網膜静脈閉塞症モデルを作成し、ここでも網膜内のプロレニンの発現を確認したが、やはりプロレニン、(プロ)レニン受容体の発現に変化が見られなかった。本研究からは単なる網膜組織の低酸素では、プロレニン、(プロ)レニン受容体の発現に変化がなく、やはり糖尿病による網膜組織の慢性的な高血糖がプロレニンに影響していると考えられた。昨年度にこれまでの臨床データを改めて解析して、プロレニンの発現には種々の因子の中で高血糖が最も深く関与していることを報告した(近日中に論文投稿予定)。最終年度では、糖尿病のみならず高血圧がプロレニンの発現に影響を与えていないかどうかを検討した。糖尿病網膜症の発症に対する危険因子として高血圧の合併が知られていたが、本研究ではじめて高血圧を合併している糖尿病患者では、合併していない糖尿病患者に比べてプロレニンがより強く網膜循環の悪化に関与していることを報告した(論文投稿中)。さらに本研究では、プロレニンの直接的な網膜への影響を観察するために、摘出ブタ網膜血管に異なる濃度のプロレニンを暴露し、網膜血管への影響を検討するための実験系を確立したところであり、今後も研究を継続していく予定である。本研究は、受容体随伴プロレニン系の制御機構を解明し、糖尿病網膜症の新規治療薬の開発の可能性を探ることを目的とする。実験結果が当初予想されていた結果と反するものになったため、当初の予定より遅れている。これに関しては、『現在までの達成度』の箇所で詳細を報告することとする。我々は、実験を開始する以前は、虚血網膜では受容体随伴プロレニン系が亢進すると考えていた。すなわちプロレニンのみならず(プロ)レニン受容体の発現が亢進すると予想していた。これまでの検討では、虚血網膜における(プロ)レニン受容体の発現量が低下していることが確認された。実験方法の整合性を確認するために、pERKの発現を確認したところ、これまでの報告と同様に亢進していた。すなわち実験方法によるエラーではなく、今回の我々の結果は、虚血網膜では(プロ)レニン受容体の発現が低下している事を示唆している。この予想外の結果から、改めて血清プロレニン値の再検討を行った。すなわち非糖尿病患者の血清プロレニン値を測定し、糖尿病網膜症以外の眼症候が血清プロレニン値と関連があるかどうか、また糖尿病以外の因子で血清プロレニン値に関連するものがあるかどうかを検討した。この検討では、拡張期血圧が血清プロレニン値と負の相関を示したことと、今回のデータを我々の以前に報告した糖尿病患者における血清プロレニン値と比較したところ、糖尿病患者で有意に高値を示した。以上のことから、改めて受容体随伴プロレニン系が糖尿病網膜症に特異的に関連があることと、その測定の意義、新たな治療法開発の標的となりうることを、第116回日本眼科学会に報告した。さらに、英文論文にする予定である。現時点での進捗状況は、当初の予定より遅れている。その理由としては、当初想定していた結果に、反する結果が出たことにある。具体的には、実験開始以前は、虚血網膜において受容体随伴プロレニン系は亢進していると考えていたが、最も重要と考えられる(プロ)レニン受容体の発現が低下していたことにある。(プロ)レニン受容体は、受容体随伴プロレニン系におけるアンジオテンシン依存性経路と非依存性経路のハブとしての役割を担っている。すなわち(プロ)レニン受容体の発現が低下することは、いずれの経路の活性が低下していることが考えられる。

(プロ)レニン受容体の発現量の低下が、必ずしも受容体随伴プロレニン系の活性低下になるとは結論づけることができないが、受容体随伴プロレニン系自体の活性化の定量法がないことが、進捗の遅れの主因となっている。推進方策の一手として、研究計画書に記載してあるように、網膜虚血再灌流モデル以外での検討を行う。すなわちレーザーを用いて虚血網膜症を作成し、その網膜における(プロ)レニン受容体の発現を定量する。我々はこれまでに網膜虚血再灌流モデルを用いて、酸化ストレスが神経節細胞死に重要な役割を果たしていることを報告し、糖尿病網膜症と同様のメカニズムであることを証明した。しかしながら、これまでに網膜虚血再灌流モデルにおける受容体随伴プロレニン系と糖尿病における受容体随伴プロレニン系の発現の相違性は検討されておらず、網膜虚血再灌流モデルと並行して、その他の虚血網膜モデルを併用することとした。次に、当初の実験計画書には記載はないが、当研究室で使用可能な培養血管内皮細胞を用いて高血糖負荷を行い、(プロ)レニン受容体の発現が網膜血管内皮細胞で、どのように発現しているかを検討する。本来であれば神経節細胞を用いるべきであるが、まずは当教室で使用可能な細胞を用いる事により、余計なコストをかけず局所でのプロレニン受容体の発現を確認する。我々は以前に糖尿病患者における血清プロレニン値が高くなることを報告したが、(プロ)レニン受容体の発現はまだ確認していない。実験を開始する前は、糖尿病では受容体の発現も亢進すると予想していたが、(プロ)レニン受容体の発現が低下している可能性がある。以上の検討を行う事により、(プロ)レニン受容体の発現が亢進すると仮定した当初の予想の妥当性を検討する事により、新たな知見を見いだすことができ、さらに今後の実験計画を適当なものにすることができる考えられる。収支状況報告書に記した次年度使用額が発生した事由は、当初の予定では、初年度にHRPを合成して、網膜虚血再灌流モデルに投与することになっていたが、それを実施することができなかったためである。先述したとおり、網膜虚血再灌流モデルでは、(プロ)レニン受容体の発現が亢進すると考えていたが、それとは反する結果となってしまったため投与を行わなかった。上述した、培養血管内皮細胞での発現、あるいはレーザーによる虚血網膜症による結果を勘案して、HRPの投与の妥当性を検討する。次年度の研究費に関しては、新たなモデル作成、培養系に関する設備備品への投資は発生しない。これらに関するものは、既に当施設にあるものを活用できる。研究費の使途に関しては、主に消耗品、学会旅費、論文作成に当てられる。研究成果としては、非糖尿病患者における検体を用いた検討を、平成24年5月の米国での国際学会で発表予定である。また消耗品に関しては、計画書に示してある通り免疫染色やウェスタンブロッティングなどの蛋白定量に用いる抗体に、主に使われる事になる。受容体随伴プロレニン系自体が新しい概念であるために、現在でも新しい抗体が製品として各メーカーから販売されている。それぞれの抗体の特徴を活かして研究に活用していく事になる。
議会制民主主義の変容と政党への国庫補助の比較憲法的研究

平成4年度は、3年間にわたる本研究の最終年度であったため、2年間の成果をふまえ総括的な検討をおこなった。すなわち、日本を含む先進資本主義国の従来の憲法学における議会制民主主義と政党制の理論史的枠組みを検討し(1年目)、各国の集中的検討による普遍性と固有性を析出し、あわせて日本の現状分析をおこなう(2年目)という研究成果にもとづき、日本の政治文化状況のもとで政党への国庫補助の妥当性にかんして一定の結論をみちびき出した。具体的には、アメリカ、イギリス、フランス、ドイツ、スイス、イタリア、ニュージランドの各国における政党国庫補助の現状分析と、それを支え、あるいは批判する理論状況を検討したが、その結果みえてきたのは、各国における大衆社会の進行による議会制民主主義の形骸化、それにともなう選挙戦の変容などの共通点とともに、その背景にある各国の議会制民主主義の歴史の偏差であった。これらの成果をふまえ、日本で進行中の「政治改革」による選挙制度改革と政党国庫補助導入の動きを批判的に分析した。かくして、日本の「政治改革」を、先進資本主義諸国で共通に進行する新たな統治戦略としての政治改革との連動性のなかに位置づけることができ、日本固有の政治風土のなかで、いかに国民主権と民主主義を実現することが可能かについての共通の認識をうることができた。平成2年度は、2回にわたり研究会を開催した。今年度は3年間の研究の初年度にあたることから、まず、最終年度に行なう予定としている提言に向け、従来の憲法学における議会制民主主義と選挙・政党制をめぐる理論状況、および日本における選挙制度改革の最近の動向などを概観したうえで、政党への国庫補助の導入をめぐる議論について研究をすすめていくなかで検討すべき諸論点を明らかにし、以後の比較研究を行なっていくうえでの視座を確定した。そのうえで、ドイツ、フランス、イタリア、アメリカ、イギリスの各国における政党への国庫補助の現状とその特徴、それをめぐる理論状況について各担当者で研究をすすめたうえで、2回目の研究会を開催し、その時点までの研究成果を相互交流し、批判的検討を行なった。そこでは、各国で導入されている国庫補助制度の歴史と現状についての知識を各人で共有するとともに、それらの国々において政党が議会において実際に果たしている役割には多くの共通性があるにもかかわらず、それぞれの国の制度相互の間に導入時期、制度の内容および運用についての相違が存在することが確認され、その背景となっている各国の議会制民主主義をめぐる歴史と理論の比較検討、結社一般と政党の憲法上の位置付けの異同の検討、最近選挙運動のなかで大きな位置を占めるようになったマス・メディアと選挙法制との関連、税制と選挙法制との関連の検討がそれぞれ必要であることが共通の認識となった。なお、各国の議会・選挙・政党に関する図書の購入は、新刊を中心にして行なった。平成3年度には、第3回、第4回の2回にわたり研究会を開催した。第3回研究会においては、まず、前回第2回研究会に引きつづき、各国(スイス、イギリスおよびドイツ)における政党への国庫補助の現状の報告を行い、また、1990年11月に出された自民党基本要綱を軸にして日本の現状を分析した。さらに、政党国庫補助をめぐる理論分析しとて、前回の研究会までに課題として共通認識された以下の諸問題を検討した。第一に、近代議会制における政党の役割について、議会政治が政党制を必須とする論理をイギリスに即して再検討し、第二に、選挙とメディアについて、つまり政党国庫補助が世界的に登場する背景をなした、マスメディアを利用した選挙に莫大な費用がかかるようになったことの功罪について、民主制論から吟味した。最後に、結社の自由論と政党制について、アメリカの議論を素材に「政党の自由」を人権論から構成する論点を、最近の「団体と個人」問題に触れつつ考察した。第4回研究会においては、新たな分析視角から引きつづき各国(前回の諸国に加えニュ-ジ-ランド)の現状分析を行い、理論的検討としては、とりわけマスメディアと選挙のテ-マを堀り下げた。

議会制民主主義と選挙・政党制をめぐる従来の理論状況および各国の最近の動向の概観と論的諸課題の摘出をほぼ完了し、最終年度は、予定している日本のおける選挙制度改革と政党への国庫補助導入に対する提言に向けて、さらに議論を深めていく予定である。平成4年度は、3年間にわたる本研究の最終年度であったため、2年間の成果をふまえ総括的に検討をおこなった。すなわち、日本を含む先進資本主義国の従来の憲法学における議会制民主主義の政党制の理論史的枠組みを検討し(1年目)、各国の集中的検討による普遍性と固有性を析出し、あわせて日本け現状分析をおこなう(2年目)という研究成果にもとづき、日本の政治不化状況のもとで政党への国庫補助の妥当性にかんして一定の結論をみちびき出した。具体的には、アメリカ、イギリス、フランス、ドイツ、スイス、イタリア、ニュージランドの各国における政党国庫補助の現状分析と、それを支え、あるいは批判する理論状況を検討したが、その結果みえてきたのは、各国における大衆社会の進行による議会制民主主義の形骸化、それにともなう選挙戦の変容などの共通点とともに、その背景にある各国の議会制民主主義の歴史の偏差であった。これらの成果をふまえ、日本で進行中の「政治改革」による選挙制度改革と政党国庫補助導入の動きを批判的に分析した。かくして、日本の「政治改革」を、先進資本主義諸国で共通に進行する新たな統治戦略としての政治改革との連動性になかに位置づけることができ、日本固有の政治風土のなかで、いかに国民主権と民主主義を実現することが可能かについての共通の認識をうることができた。