hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
現代の医療現場における「確かさ」決定のプロセスに関する文化人類学的考察

本研究は主に循環器疾患の治療現場において、エビデンスに基づく未来予測が患者にどのように伝達され、また患者はどのようにそれを受け取るのかを、診察の参与観察、医師と患者へのインタビュー調査により明らかにしようと試みた。エビデンスに基づく未来予測は重篤な病気を予防するうえで重要な実践ではあるが、将来のリスクをゼロにできるわけではない。その結果、治療をしてもなお残るリスクから生じる不安は、患者自身が自らよりやりくりしたり、見ないようにしたりする他はなく、これはリスク管理に基づく医学の道徳的無関心と呼べるものである。一方エビデンスに基づく医学は、臨床医からも培った臨床の技を奪ってしまう側面が観察された。当該年度は主に循環器外来の診察の陪席と患者へのインタビュー、および担当医への聞き取り調査を行い、その成果を学会と研究会で発表をした。患者と医師への調査を続ける中で、高齢化に伴って我が国で罹患者が急増している心房細動に焦点を当てることを決定した。なぜなら、本疾患は、疾患そのものが心臓に与える害はそれほど重篤ではないものの、心房細動により生じた血栓が梗塞を引き起こす場合があり、心房細動が発見され、慢性化した時点で、脳梗塞のリスク対処をどのようにしたらよいかを迫られるからである。脳梗塞のリスクは、抗血栓療法を行うことで減じることができるが、一方で、この治療により脳溢血のリスクが上昇してしまう。したがって、患者も医師も、抗血栓療法を実施してもしなくても、未来に対し大きなリスクをしょい込むことになってしまうのだ。つまり、この病気に対しては患者も医師も大きな不確実性に直面することになる。したがって2013年度は、特に心房細動を持つ患者の参与観察を5名の異なる医師の診察の場で行い、患者と医師が心房細動が持つ不確実性に対してどのような態度を示すかを分析した。2013年度はその態度を類型化しただけにとどまったため、次年度以降は、その態度の質的解析をさらに深めていく予定である。本年度は1これまでに集めたデータの整理・分析と医療現場での2フィールドワークの実績をもとにした成果発表を行った。1については、循環器外来で近年患者数が増加している心房細動に焦点を当てた。前年度までは患者の語りのみに着目をしていたが、今年度より診療の陪席からデータをもとに、医師の語りも分析に加えた会話分析を開始した。そこで判明したもっとも重要な知見は、医学的には異常が見られない患者の訴えがなされた際、医師と患者の会話の堂々巡りが続き、診療時間が長くなること、およびその循環が始まると医師側の医学的な説明が徐々に長くなる傾向があることであった。本研究の目的に照らし合わせると、医師は患者が主訴として表明する自らの身体の不確実性を医学的な知識で何とか解消しようとするが、その手法が患者の求めているものとずれてしまい、結果診察時間が長引くという事実が判明している。この現象は医師の経験値の中ではよく知られているものであるが、一方でこれが言語化され整理されたことは未だなく、最終年度はこの現象をより明らかにするためデザインを精緻化してゆきたい。一方2に関しては、主に文化人類学者に向けて医療現場でのフィールドワークの難しさとそれを乗り越える方法を発信した。文化人類学者が行う帰納的な手法は、調査に入る前に研究デザインをすべて決めておく必要のある医療における調査はバッティングすることがあり、それを乗り越えるためには、医療側に文化人類学的な調査の利点を周知することと文化人類学者側が医療側の求める短時間でのプレゼンテーションや問題解決の手法を提示するといった努力が必要になることが判明している。当該年度は、例年通り調査を進めるとともに、本研究の理論的なベースについての補強を進めた。また循環器医療においての射程を不整脈の一つである心房細動に定めることを決定した。その理由の第一は、心房細動がきわめて不確実性の高い疾患であることにある。心房細動それ自体は、それほど問題のない疾患であるが、心房内に血栓ができやすくなり、それが脳に飛んだ場合、脳梗塞を引き起こす。しかし血栓を作りにくくするための治療である抗凝固療法を受けると、今度は出血しやすくなるために脳出血のリスクが上がってしまう。つまり治療を受けても、受けなくても、重篤な疾患にかかりうるリスクをかかえる疾患なのである。また選定理由の第2は新しい抗凝固剤であるNOACが医療現場に浸透し始めたことであった。NOACは、出血のリスクを下げると言われているが、一方で、従来薬で行われていた、定期的な血液検査による効き目の確認が不要になる。これは使う側にとっては負担の軽減になるが、従来薬のメリットを知る医師にとっては新たなリスクと映る。つまり新薬が新たなリスクを創出したとも言える状態が起こっているのである。このような治療によるリスクの創出は、文化人類学の最先端の理論である存在論的展開の俎上に乗る可能性を秘めているといえる。なぜなら現行の理論は、技術や人間のふるまいが具体的なモノやリスクを創出していると考え、それができあがっていくプロセスに着目をしているからである。以上を総括すると、当該年度の成果は、研究の射程を定められたこと、さらには文化人類学の最前線の理論と本研究の接合点を見つけられたことであると言える。調査計画が遅延している理由は、二つある。

まず一つは、申請者の所属機関が一昨年より変わっており、新しい機関での業務に思った以上に時間を取られ、フィールドワークに出向く時間が減ってしまったこと、いまひとつは、調査においてどこに焦点を絞り、設問を以下にするかを決定することに計画以上の時間を要したことにある。当該年度の反省を踏まえ、今年度は遅れを取り戻すべく努力する所存である。【研究内容】本年度は、診察の録音の許可が始めており、20例の診察の参与観察と録音をすることができた。調査における大きな前進である。また医師側へのインタビューも、予備調査の段階ではあるものの、スタートすることができた。本調査の目的を遂行するためには患者側への着目だけでは不十分であることがこれまでの研究から明らかであり、これは大きな進展と言える。【研究成果における実績】循環器の調査における学術的な貢献を文化人類学、社会学のリスクの理論と絡めながら、総論として論文にまとめることができた。また漢方と循環器外来の調査結果の双方を著書の中の2章として収録することができた。漢方に関する章では、漢方の歴史的な展開および漢方を取り巻く政治情勢をフィールドワークで得られた診察室の状況に結び付けている。循環器おいてはエビデンスが診察室においてどう取り扱われるのかを描いた。いずれも本調査の題目につながる医療の不確実性がテーマである。【本研究の重要性】本研究は文化人類学ではいまだ数の少ない、診察室での医療の実践を取り扱ったものであり、またこちらもほとんどなされていない疫学統計の結果がどのように臨床の現場で実践されているのかを観察の対象にいれいてる点で意義があると考えられる。またその成果を文化人類学の内部だけではなく、医師の協力の元、医学的な雑誌やがいいあで発表をしているところにも応用としての意義があるといえるだろう。研究結果の総括が計画より遅れており、そのために研究機関の1年間の延長を申し出ることとなった。疫学統計に基づき未来を予測する予防医学の広まりに伴い、早期発見・早期介入の呼び声の元、心身の不調を何も感じていない個人にまで医学はその対象を広げている。しかしその一方で、その介入が確立に基づくものである限り、介入をしたら懸念されている疾患にならない、逆に、介入をせねば懸念されている疾患に罹患しないと言い切ることはできない。その意味で不確実性は常に残存する。このような背景に基づき本研究は主に循環器疾患でのフィールドワークを中心に医療現場および患者の日常生活においていかに扱われるのかを明らかにすることを目指した。5年間にわたるフィールドワークを通じて明らかになったのは、1医療者から患者への不確実性を伴う介入は、エビデンスのそのものの提示ではなく、むしろエビデンスのナラティブ化により信頼性が担保されていること、2患者は将来自分が何か重篤な病気になるかもしれないという不安を、身体感覚・知識・情報をそのつど組合せ、ありあわせの疾患理解を作り上げることを通じて対処しているということであった。またその一方で、エビデンスが作られ、かつ伝達される際の政治的な側面は、医療現場ではミュートされる傾向にあった。本研究を踏まえた今後の研究の方向性としては、ある科学的知識が伝達される際の、受け手側の感情的な側面、およびその知識をもとに作り出される未来図を、エビデンスが作り出される現場、および伝えられる現場という包括的な空間において、描写する試みが必要であろうと思われる。
甲殻類におけるペプチドホルモン-受容体系の共進化と構造機能相関

クルマエビの眼柄ペプチドホルモンのうち血糖上昇ホルモン族ペプチド(血糖上昇ホルモン(CHH)および脱皮抑制ホルモン(MIH))について以下の結果を得た。1.CHHのすべての分子が、MIHが有しているN末端から12番目のGlyを有していない。このGlyがCHH活性にとって不要なものか、あるいは逆に活性を低下させるのかを明らかにするために、CHHのうちのひとつCHH-IについてN末端から12番目のGlyを挿入した組み換え体を作製し、そのCHH活性を調べた。その結果、挿入したものは挿入しないものの約1/10の活性しか示さなかった。このことから、このGlyが入らないことが高活性を維持するのに重要であることがわかった。2.CHHの立体構造はこれまでMIHの立体構造に基づいてモデリングで推定されているだけであった。CHHの実際の立体構造を解析するために^<13>Cおよび^<15>NでダブルラベルしたCHH-Iの組み換え体を大腸菌で発現した。この分子は封入体に回収されたので、いったん還元したあとNi樹脂上でリフォールディング反応を行ったが、ラベルしないときは進んだ反応がラベルした分子では同じようには進行しないことがわかった。現在、この反応の収率を上げることを検討中である。3.MIHとMIH受容体の結合について、標的器官であるY器官の膜画分を用いてスキャッチャード解析を行った結果、解離定数Kd=4.76x10^<-10>M、最大受容体結合量Bmax=5.51x10^<-12>Mであると推定された。これらの値は、他の甲殻類で報告されている値とほぼ同程度であった。クルマエビの眼柄ペプチドホルモンのうち血糖上昇ホルモン族ペプチド(脱皮抑制ホルモン(MIH)および血糖上昇ホルモン(CHH))について以下の結果を得た。1.これまでにMIHの立体構造から推定された機能部位について主に表面に出ている残基について一残基置換およびN末端、C末端の数残基を欠失したペプチドを大腸菌を用いて調製し、それらの脱皮抑制活性を検定した。その結果、13、71、72残基目の置換が著しく活性を低下させたことから、これらの残基が直接受容体と相互作用しているものと推定された。また、C末端3残基の欠失は影響を及ぼさなかったが、N末端4残基の欠失は活性を低下させた。2.CHHのすべての分子がC末端にアミド構造を有していることから、その前駆体であるグリシン付加体を調製し、血糖上昇活性を測定したところ、約1桁低下したことから、予想したとおりアミド構造が重要であることがわかった。3.MIHを放射性ヨードで標識し、クルマエビのいろいろを組織の膜画分との結合を調べたところ、脱皮ホルモンの合成器官であるY器官に由来する画分だけに結合が見られたことから、受容体はY器官にのみ存在していることが推定された。また、この画分と化学架橋実験を行ない、電気泳動にかけたところ、約78kDaにバンドが認められたことから、受容体の分子量は約70kDaと推定された。4.CHHの立体構造を解析するために、大腸菌発現系を用いてCHHを効率良く調製する方法を検討した。封入体として発現されたので、可溶化した後、リフォールディングおよびアミド化反応によって天然と同等の活性を有する組み換え体を得た。
慢性病エンドオブライフ期の望む生き方を支えるコミュニケーションガイド日本版の開発

長期的治療を要する慢性疾患患者(非がん)は、人生の最後を一般病棟で迎えることが多く、患者、家族、医療者との良好なコミュニケーションは極めて重要である。本研究の目的は、慢性疾患エンド・オブ・ライフケア(以下、EOLC)実践における看護師のコミュニケーションガイドを開発することである。1患者と家族の「望ましい生活」の構成要素2一般病院におけるEOLC実践を進めるコミュニケーションの阻害要因・促進要因の抽出、3慢性疾患臨床医のEOLC実践の認識4シンガポールにおけるEOLコミュニケーション実態踏査による文化的配慮の検討により、患者家族、スタッフコミュニケーション促進を意図した実践ガイド案を作成した。本研究の目的は、エンドオブライフ期を生きる慢性疾患患者の多様な軌跡、複雑な生活状況、医療福祉ケア専門職者との相互作用により生まれる固有の死生の意味に即するケアアプローチの一つとして、病と共に生きる慢性疾患患者のエンドオブライフ期の望む生き方を支える専門職者のためのコミュニケーションガイドを開発することである。平成25年度は、第1段階として文献調査と既存研究のデータ再分析を行った。1地域一般病院における熟練看護師7名のエンドオブライフケア実践の語りを再分析し、一般病院における患者、家族、チーム、地域ケアスタッフと、身体状態が変化する患者の意向を尊重し支えるためのエンドオブライフケア実践を明らかにし、コミュニケーションをすすめるための実践指標を分析した。2地域の病院に通院または入院している患者と家族のエンドオブライフに関する既存データを再分析し、患者と家族の望む生活を支える要因・阻む要因を分析した。3海外のアドバンス・ケア・プランニングプログラムの実践に関する海外文献を渉猟し、アドバンス・ケア・プランニングプログラムの評価指標を分析した。4糖尿病患者のエンドオブライフケアに関する文献検討に着手した。病とともに生きる慢性疾患患の代表として、糖尿病患者の望む生き方を支えるエンドオブライフケアの現状と課題、ケア推進のための要件について検討する予定である。これら文献検討の結果と研究代表者の既発表の研究成果を統合し、地域の一般病院でケア提供者が、患者の望む生活を支えるための相互作用を起こしていくためのコミュニケーションガイドの枠組み作成に着手している。1.地域中核病院における非がん疾患患者のエンドオブライフケアを推進に向けた看護師のコミュニケーションの実態調査本年度は、地域中核病院2病院において、非がん疾患患者のエンドオブライフケア推進の中核を担う看護師と、病棟看護師など連携看護師を対象としてインタビューを行った。インタビューは、患者の意向を尊重したケア推進をするために、だれとどのようなかかわりを行っているか,阻害・促進要因について、ケア事例の実際から詳細に聴取した。2病院で8名の看護師に、合計14回のインタビューを行った。その結果、ケアを推進するためのコミュニケーションのパターンには、患者の意向を捉えるコミュニケーションと、患者の意向をつなぐコミュニケーションのパターンがあり、それぞれに含まれるコミュニケーションパターンの下位パターン、ならびに関連要因について分析中である。2.アドバンスケアプランニング(以下ACP)の導入した海外の実施状況の視察当研究メンバー過去に受講したACPプログラム(米国Respecting Choices)を国策として導入したシンガポールAIC(Agency for Integrated Care)を訪問し、国策の背景・方針、病院における導入の実際についてレクチャ-および病院視察により実践者との意見交換を行った。医療制度システムの構築の基本的な考え方は日本とは異なるものの、高齢社会が急速に進行する事情や、医療政策の方向性、対象の意思を尊重するエンドオブライフケアにおけるコミュニケーションを実際に行う際の態度や配慮は、日本の文化的態度と類似する特徴があると考えられた。また、視察では、本研究課題に関するプレゼンテーションを行った。本視察は、日本におけるACP実践を先駆的に行っている施設メンバーをチームに加えて行い、日本の今後の課題の共有、意見交換を行った。今後の国際研究、国内研究に向けた連携の可能性について検討中である。1.一般病棟看護師のエンドオブライフケア実践の実態調査準備:平成26年度に実施した地域中核病院2施設の看護師インタビューの分析結果について、データ収集施設の研究協力者にフィードバックを行い、意見交換を行った。一般病院の看護師にとって重要となる内容、理解しやすい表現等について、意見聴取を行った。また、一般病院における臨床看護師のエンドオブライフケア実践の国内外の文献を渉猟し、看護師のエンドオブライフケア実践におけるコミュニケーションに影響する背景要因を検討した。これらの結果から、一般病院における一般病棟臨床看護師のエンドオブライフケア実践の実際調査にむけた質問紙を作成した。2.慢性疾患患者家族のコミュニケーションニーズの分析:エンドオブライフ期慢性疾患患者・家族の望む生活を支えるためのコミュニケーションニーズについて、研究者らの先行研究のデータを用いて質的に分析を行った。3.ホームページの開設:本研究成果を発信するためのホームページを開設した。研究協力施設や協力者との双方向のコミュニケーションが可能なシステムを搭載した。当初計画では、エンドオブライフ期慢性疾患患者家族にインタビュー調査を実施する予定であったが、研究協力施設の関連部署の調整に時間を要し、結果として承諾を得ることができなかった。そのため、研究計画の変更を行った。これらのことにより、予想外に時間を要した。また、研究補助の候補者が見つからなかったことも研究の遂行が遅れたことの原因の一つである。1.一般病院看護師のコミュニケーションの実態調査:緩和ケアチームを有する関東地方の設置主体の異なる地域中核病院4施設の臨床看護師を対象に、これまでの調査と海外論文の知見を踏まえた質問紙を作成し、エンドオブライフケア実践の実態調査を行った。調査内容は、エンドオブライフケアの実践項目の重要性の認識と実践の程度、およびコミュニケーションの内容、困難の程度と実践課題の認識である。

調査は自記式質問紙調査で、合計配布数1306、回収数661、有効回答数660、有効回収率は56.8%であった。回答者は、40歳台以上が半数を占め、経験年数は10年以上が7割を超えた。結果は、単純集計ならびに統計パッケージSPSSを用いた解析、ならびに自由記述は質的に内容分析を行った。2.一般病院慢性疾患治療医のエンドオブライフケア実践の認識調査:患者の意向(望む生き方)を支えるためには、多職種とのコミュニケーションが必要である。慢性疾患(非がん疾患)患者は、長期的に何らかの治療を必要としてきたことから特に終末を見据えたケアの見極めが困難であり、治療医とのコミュニケーションは要であった。そこで、慢性疾患の日常診療に携わる治療医(呼吸器内科医師5名、腎臓内科医師5名)を対象に、エンドオブライフケアの実践と認識に関するインタビューを実施し、質的に分析を行った。3.研究成果の統合:本研究結果を統合し、一般病院における慢性疾患患者のエンドオブライフケア実践の、看護師のためのコミュニケーションの指針を検討した。長期的治療を要する慢性疾患患者(非がん)は、人生の最後を一般病棟で迎えることが多く、患者、家族、医療者との良好なコミュニケーションは極めて重要である。本研究の目的は、慢性疾患エンド・オブ・ライフケア(以下、EOLC)実践における看護師のコミュニケーションガイドを開発することである。1患者と家族の「望ましい生活」の構成要素2一般病院におけるEOLC実践を進めるコミュニケーションの阻害要因・促進要因の抽出、3慢性疾患臨床医のEOLC実践の認識4シンガポールにおけるEOLコミュニケーション実態踏査による文化的配慮の検討により、患者家族、スタッフコミュニケーション促進を意図した実践ガイド案を作成した。前年度の倫理審査過程の遅れにひきつづき、データ収集のためのインタビューの日程調整に時間を要したこと、分析に時間を要していることが原因である。また、研究事務を十分に確保できなかったことが、研究の進行全体に影響を及ぼしている。研究計画変更に伴い、研究期間の延長を申請する。あらたに研究補助者を雇用し、研究事務が円滑にすすむようにする。28年度が最終年度であるため、記入しない。看護学1.人的資源を確保する。研究事務を担うスタッフを確保し、データ収集や分析を分担する研究メンバーを増員する。2.昨年度のデータ収集の分析結果に、文献検討を加えてコミュニケーションガイド案を作成する。
NF-κB/IKKβと二重特異性ホスファターゼを介した炎症と発癌のレドックス制御

炎症と発癌の連関における分子機構はほとんど不明である。この機構の解明のために、炎症の制御に重要な役割を有するNF-κB/IKKβ系と、炎症および細胞増殖で重要な役割を有するMAFキナーゼ系の連関の分子機構についての解析を行った。腫瘍壊死因子(TNFα)に応答したNF-κB/IKKβ系とMAPキナーゼ系とのクロストーク機構についての解析を行ったところ、NF-κB/IKKβ系が抑制されている状態ではTNFαは細胞死を誘導するが、このときに大量の活性酸素(ROS)が細胞内に蓄積されることが判明し、このROSがMAPキナーゼの活性化に重要であることが明らかになった。ROSはMAPキナーゼボスファターゼの活性を抑制することによりJNKの持続性の活性化を誘導し、さらにJNKの下流ではユビキチンリガーゼ系を介したカスパーゼの活性化により細胞死が誘導されることが判明した。興味深いことにMAPキナーゼホスファターゼなどの二重特異性ホスファターゼと同様にチロシンホスファターゼファミリーに属するPTENも、TNFαに応答して産生されたROSにより活性が制御されていることが見いだされた。ところがPTENの下流で機能するAktやPDK1はカスパーゼにより分解されてしまうために、PTENを介したROSのシグナルはブロックされてしまう事が判明した。すなわちNF-κB/IKKβ系はROSの産生を制御することによりMAPキナーゼホスファターゼとカスパーゼの活性化により細胞死を亢進し、この結果として生じる組織障害が発癌を亢進すると考えられた。炎症と発癌の連関における分子機構の解明のために、腫瘍壊死因子(TNFα)の細胞内シグナル伝達系と細胞内レドックス制御機構についての解析を行った。NFーκB/IKKβ系が抑制されている状態ではTNFαは細胞死を誘導するが、このときに大量の活性酸素(ROS)が細胞内に蓄積される。このROSはMAPキナーゼホスファターゼの活性を抑制することによりJNKの持続性の活性化を誘導するが、さらにJNKの下流ではユビキチンリガーゼ系を介したカスパーゼの活性化により細胞死が誘導されることが判明した。ところがPTENの下流で機能するAktはカスパーゼにより分解されてしまうために、PTENを介したROSのシグナルはブロックされてしまう。一方、細胞死に対して促進的に機能するJNK1にはα1,α2,β1,β2が存在するが、それぞれのJNK1のアイソフォームはカスパーゼによる特異的な制御を受容することが見いだされた。さらにカスパーゼによるそれぞれのアイソファームの制御が細胞死に密接に連関することが見いだされた。一方、近年のJNK1およびJNK2のノックアウトマウスを用いた解析により、この二つのキナーゼでは細胞死に対する関与が異なることが見いだされている。興味深いことにJNK2に関してはJNK1で観察されたようなカスパーゼによる制御は機能していない。ユビキチンリガーゼ系とカスパーゼを介した制御がJNK1とJNK2の生理的作用の差異に関与している可能性が示唆される。現在、この機構の炎症と発癌への連関について解析を進めている。炎症は発癌の主要な要因の一つであるが、炎症と発癌の連関における分子機構はほとんど不明である。この機構の解明のために、炎症の制御に重要な役割を有するNF-κB/IKKβ系と、炎症および細胞増殖で重要な役割を有するMAPキナーゼ系に着目した解析を行った。とくに腫瘍壊死因子(TNFα)に応答したNF-κB/IKKβ系とMAPキナーゼ系とのクロストーク機構についての解析を行った。

まず、NF-κB/IKKβ系が抑制されている状態ではTNFαは細胞死を誘導するが、このときに大量の活性酸素(ROS)が細胞内に蓄積される。このROSはMAPキナーゼホスファターゼの活性を抑制することによりJNKの持続性の活性化を誘導するが、さらにJNKの下流ではユビキチンリガーゼ系を介したカスパーゼの活性化により細胞死が誘導されることが判明した。興味深いことにMAPキナーゼホスファターゼなどの二重特異性ホスファターゼと同様にチロシンホスファターゼファミリーに属するPTENも、TNFαに応答して産生されたROSにより活性が制御されていることが見いだされた。ところがPTENの下流で機能するAktやPDK1はカスパーゼにより分解されてしまうために、PTENを介したROSのシグナルはブロックされてしまう事が判明した。すなわちNF-κB/IKKβ系はROSの産生を制御することによりMAPキナーゼホスファターゼとカスパーゼの活性化により細胞死を亢進し、この結果として生じる組織障害が発癌を亢進すると考えられた。
幼児の課題遂行における対人関係の役割

5歳児があらかじめ持っている対人関係が協同課題遂行においていかに機能するかを検討した。すなわち、対人関係の枠組みが「母親型」(母親が相対的に重要な役割を果している者)と「仲間型」(仲間が相対的に重要な役割を果している者)とでは、協同作業の相手が“母親のような年齢の未知の女性のおとな"の場合と“仲間となりうる未知の子ども"の場合では、それぞれ異なるであろうことが実験的に検証された。すなわち、【.encircled1.】対子ども課題では、協同作業をする相手の子どもとして「母親型」でも「仲間型」でもない「中間型」の子ども計30名を選び、ターゲットの子どもと2人ひと組とし、2人でひとつの課題(2人で協同でひとつの家を積木で造る)に取り組ませた。また、【.encircled2.】対おとな課題では、ターゲットの子どもと母親に近い年齢のおとなの実験者とをひと組とし、2人で作業(5歳児がひとりでするには難しいジグソーパズル)をするように教示した。このそれぞれの子どもの2種の課題遂行の課程をすべてVTRに記録し、相互交渉の課程をすべて記録するようなプロトコルを作成し、行動を詳細に分析した。その結果、それぞれのタイプの子どもが“未知のおとな"および“未知の子ども"とそれぞれ協同作業をした場合「母親型」ではおとなとの協同作業が、「仲間型」では子どもとの協同作業がよりうまくいくという仮説が支持された。
Etsがん遺伝子群転写因子E1AFの細胞周期調節機構の解析

1.高い浸潤活性を持つ口腔扁平上皮がん細胞HSC3にAd12型E1A発現プラスミドを遺伝子導入したところ、MMPとE1AF mRNAおよびタンパク発現が低下した。この過程にはAd12型E1Aによる転写因子E1AFの発現を抑制するネガティブフィードバック機構が存在することを示唆するものだった。2.口腔扁平上皮癌由来細胞株Ca9.22にメタロチオネイン誘導E1AF発現ベクターを遺伝子導入し、ZnC12刺激によりE1AFを発現するMT9.22F細胞を樹立した。E1AF誘導細胞では、MMPの産生亢進と同時にp21waf1/cip1の発現亢進が認められることが明らかになり、口腔扁平上皮がん細胞の浸潤活性の亢進は、細胞周期の中で増殖期以外の時期に生じ、この過程にはE1AFが関与している可能性があることが示唆された。3.E1AFによるp21遺伝子の転写の活性化に及ぼすp53の影響をルシフェラーゼアッセイで検索した結果、E1AFとp53は相乗的にp21プロモーターを活性化した。両タンパクの結合を調べた結果、E1AFとp53はin vitroおよびin vivoで両タンパクは結合した。さらに、E1AFのTumor Suppressor活性およびApoptosis活性について検索したところ、E1AFはTumor suppressor活性を有するがApotosis活性はもたないことが示された。これらの結果より、E1AFはp21の転写調節領域上でp53タンパクと相互作用し転写活性を上げ細胞周期を止めることによりTumor suppressorを示しているものと考えられる。p2lwaf1/cip1の転写調節領域にはp53の結合部位が存在し、p53により転写活性化されることが知られているが、これに加えてp53結合部位の近傍にETS結合部位が存在していることを我々は見いだした。そこで、p53の欠失しているヒト肺がん細胞株H1299に、レポーターとしてp21waf1/cip1プロモーターを持つレポータープラスミド(P21Pr.-Luc)、エフェクターとして野生型p53とE1AFの発現ベクターをコトランスフェクションし、24時間後、ルシフェラーゼアッセイを行った。その結果、E1AFとp53は相乗的にp21遺伝子の転写を活性化することが証明された。In Vitroで作成したHA-E1AFとp53を混合し、抗HA抗体を用いて免疫沈降を行い、それらのサンプルをp53抗体でウエスタンブロットした結果、E1AFとp53はin vitroでの結合が認められた。H1299細胞に、HA-E1AFとp53の発現ベクターをコトランスフェクションし免疫沈降およびウエスタンブロットを行ったところ、in vivoでの両タンパクの結合が証明された。E1AFのTumor Suppressorとアポトーシス誘導能について検索した。マウスNIH3T3細胞に、アデノウイルス5型のE1A遺伝子と活性型ras遺伝子の発現ベクターをコトランスフェクションし、それと同時にp53とE1AF(pCMVE1AF)の発現ベクターを導入しそれらの遺伝子のTumor suppressor活性を調べた。その結果E1AFを導入したディッシュではp53を入れた物と同様、コロニーの数が減少し、E1AFにはTumor suppressor活性のあることが示された。しかし、Saos-2細胞を用いてGrowth Suppression Assayを行った結果、E1AFはアポトーシス誘導能は持たないことが示された。以上の結果より、E1AFは野生型p53と共同で細胞周期を調節することにより細胞のがん化を抑制することが考えられた。

この過程にはAd12型E1Aによる転写因子E1AFの発現を抑制するネガティブフィードバック機構が存在することを示唆するものだった。2.口腔扁平上皮癌由来細胞株Ca9.22にメタロチオネイン誘導E1AF発現ベクターを遺伝子導入し、ZnCl2刺激によりE1AFを発現するMT9.22F細胞を樹立した。E1AF誘導細胞では、MMPの産生亢進と同時にp21waf1/cip1の発現亢進が認められることが明らかになり、口腔扁平上皮がん細胞の浸潤活性の亢進は、細胞周期の中で増殖期以外の時期に生じ、この過程にはE1AFが関与している可能性があることが示唆された。3.E1AFによるp21遺伝子の転写の活性化に及ぼすp53の影響をルシフェラーゼアッセイで検索した結果、E1AFとp53は相乗的にp21プロモーターを活性化した。両タンパクの結合を調べた結果、E1AFとp53はin vitroおよびin vivoで両タンパクは結合した。さらに、E1AFのTumor Suppressor活性およびApoptosis活性について検索したところ、E1AFはTumor suppressor活性を有するがApoptosis活性はもたないことが示された。これらの結果より、E1AFはp21の転写調節領域上でp53タンパクと相互作用し転写活性を上げ細胞周期を止めることによりTumor suppressorを示しているものと考えられる。
多孔質の流動伝熱現象における相似性に関する研究

多孔質は、その高い伝熱性能のため種々の伝熱機器に利用されている。しかしこの多孔質の伝熱性能の整理式は、金網、多孔質金属、充填粒子層など箇々の形状のものについては提案されているが、多孔質全体を包含した整理式はまだない。本研究においては金網状あるいは多孔質金属については直接通電加熱により直接熱伝達係数を測定し、また充填粒子層については、流人気体の人口温度をステップ状に変化させて、その温度変化から熱伝達係数を求める、非定常法により測定した。あわせて圧力損失の実験も行い、その結果を加味して多孔質全体に適用可能な熱伝達の整理式を得ることができた。すなわち多孔質の圧力損失は-dp/dx=aμu_o+bpu_o^2(u_oは流速、μ、ρは流体の粘性係数、密度)の式で表現できる。このaは粘性抵抗係数で、bは慣性抵抗係数である。ここでl =1/D8aD8は長さの次元を持つので、これを代表寸法lとして、又セルト数(Nu=α_vl ^2/k、k=流体の熱伝導率、α_v=多孔質体の体積熱伝達係数)とレイノルズ数(Re=u_oρl /μ)を定義し、これに空隙率εをパラメータとして加えて整理すると、種々の多孔質体の熱伝達係数を一括して整理しうることが分かった。したがって多孔質体の熱伝達係数の整理式として、下記の式を提案した。Nu=0.9Re^<1.95>〔1-exp(0.8Re^<-1.27>)〕この左辺の値を縦軸に、Reを横軸にとって、われわれの実験結果と、熱伝達係数および圧力損失の両方が測定してある他の研究者の実験結果とをプロットすると、それらの実験結果は上記の整理式に対して±40%の誤差の範囲でおさめられる。ちなみにbも長さの次元をもっており、これをb/D8aD8の無次元数で考慮してみたが、この影響は非常に小さいことが分かった。
卵巣癌における糖鎖遺伝子の機能解析と抗がん剤感受性に関する検討

卵巣癌細胞における糖脂質発現と細胞生物学的特性および抗癌剤感受性の関連を検討した。卵巣明細胞癌は抗癌剤感受性が低く、また予後不良な組織型であることから、新たな細胞生物学的特性に関する解析が待たれている。一方、各種糖鎖のなかでH型糖鎖の抗原決定基(フコースα1,2ガラクトース)はGDPフコースβガラクトシドα1,2フコースにより合成されるが、H型糖鎖遺伝子を大腸癌細胞に導入するとアポプトーシス抵抗性の獲得、5-FUへの感受性の変化が報告されている。そこで、すでに我々は卵巣明細胞腺癌由来培養細胞株を用いてH型糖鎖遺伝子を導入する実験系を確立しているので、同実験系を用いてH型糖鎖遺伝子導入株における糖鎖変化や抗癌剤感受性を検討した。卵巣明細胞腺癌由来培養細胞株にマウスおよびヒトのフコース転移酵素遺伝子を導入すると、α1,2フコース転移酵素活性は約2030倍に増加した。糖鎖発現については1型糖鎖であるH1糖鎖や2型糖鎖であるルイスY型糖鎖の発現が増加し、一方nLc4CerやルイスX型糖鎖のシアル化が抑制された。このように卵巣癌由来培養細胞株へのH型糖鎖遺伝子導入によって、1型糖鎖および2型糖鎖のフコシル化が促進され、2型糖鎖のシアル化は抑制された。細胞生物学的特性に関しては、H型糖鎖遺伝子導入株はコントロール細胞に比べin vitroにおける腹膜中皮細胞への接着能が亢進した。また、H型糖鎖遺伝子導入株はコントロール細胞に比べ5-FU添加培地における生細胞数は増加した。したがって、卵巣明細胞腺癌細胞ではH型糖鎖遺伝子導入に伴うフコシル化の増加とシアル化の減少によって細胞の接着能が亢進し、また5-FUに対する感受性が低下する可能性が示唆された。
I型インターフェロンによるT細胞機能制御機構の研究

既に申請者らが、IFN-α/βシグナルの生理的な抑制分子であることを明らかにした転写因子IFN制御因子2(IRF-2)を欠損するマウス(IRF-2-^<-/->マウス)においては、Th2細胞へのシフトが起こっている。我々は、DO11.10由来T細胞受容体(TCR)をトランスジーンとして発現するIRF-2^<-/->マウスを作製し、そのCD4^+T細胞のTh1/Th2分化を詳細に検討した。その結果、IRF-2^<-/->マウスのナイーブCD4^+T細胞には異常はなく、生体内でCD4^+T細胞がメモリー型CD4^+T細胞に分化する際の環境が、Th2型へのシフトを誘導している事、脾臓中の好塩基球が、最初期のIL-4を産生し、T細胞をTh2型へとシフトさせていることが分かった。また、このようなIL-4産生はIRF-2xIFN-α/β受容体二重欠損マウス脾臓では見られないが、IRF-2xStat6二重欠損マウスでは観察されることから、IL-4もしくはIL-13に非依存的で、IFN-α/βシグナルに依存している事が明らかになった。一方、IRF-2^<-/->マウスにおいては、生後数ヶ月までに、ポリクローナルなCD4^+およびCD8^+メモリー型T細胞(それぞれCD62L^<high>およびCD44^<high>Ly-6C^+)が野生型マウスと比較して多量に蓄積することから、IRF-2はメモリーT細胞のホメオスタシスを制御していると考えられた。IRF-2はT細胞中で機能していること、内因性もしくは環境抗原等による持続刺激の結果ではなく、T細胞にintrinsicな異常に起因すること、IRF-2がメモリーT細胞のホメオスタシスを制御する機構は、IFNシグナルの制御機構とは異なる、これまでに知られていない新規のものであることなどが分かった。IRF-2欠損マウスにおけるメモリーT細胞の蓄積機構を明らかにするため、IRF-2欠損マウスよりCD8^+T細胞を単離し、T細胞を欠くIRF-2xRAG-1二重欠損マウスおよびRAG-1欠損マウスに移入した。その結果、移入するT細胞が、IRF-2を欠損していなければ、たとえIRF-2を欠損する環境におかれても、移入直後はメモリー型表現型(CD44^<high>Ly-6C^+)を示すが、その形質を維持できず、長期にわたるメモリー型T細胞の蓄積は見られなかった。また、P14T細胞受容体トランスジーン(P14tg)を発現し、ほとんどすべてのT細胞がLCMVペプチドに向かっているIRF-2欠損マウスを作成した。野生型P14tgマウスにおいては、ほとんどすべてのCD8^+T細胞がナイーブ型であったのに対し、IRF-2欠損P14tgマウスにおいては、多くがメモリー型を示した。以上の結果から、IRF-2欠損マウスにおけるメモリー型T細胞の蓄積について以下の二つの結論が導かれた。(1)T細胞自体のIRF-2の欠損が原因であって、他の細胞におけるIRF-2欠損はこの表現型には寄与していない。(2)感染や、自己抗原との交差反応による抗原刺激は重要な役割を果たしてはいない。

(1)の結論は、IRF-2欠損マウスで見られる皮膚炎症が、皮膚細胞でIRF-2が欠損することに依存していることと対照をなし、おそらく皮膚炎症とメモリーT細胞の蓄積は異なる遺伝子の発現異常に原因していると考えられる。実際、皮膚炎症を発症しないIRF-2xインターフェロン-α/β受容体二重欠損マウスでもメモリーT細胞の蓄積が見られていることも、この結論を支持する。既に申請者らが、IFN-α/βシグナルの生理的な抑制分子であることを明らかにした転写因子IFN制御因子2(IRF-2)を欠損するマウス(IRF-2^<-/->マウス)においては、Th2細胞へのシフトが起こっている。我々は、DO11.10由来T細胞受容体(TCR)をトランスジーンとして発現するIRF-2^<-/->マウスを作製し、そのCD4^+T細胞のTh1/Th2分化を詳細に検討した。その結果、IRF-2^<-/->マウスのナイーブCD4^+T細胞には異常はなく、生体内でCD4+T細胞がメモリー型CD4^+T細胞に分化する際の環境が、Th2型へのシフトを誘導している事、脾臓中の好塩基球が、最初期のIL-4を産生し、T細胞をTh2型へとシフトさせていることが分かった。また。このようなIL-4産生はIRF-2xIFN-α/β受容体二重欠損マウス脾臓では見られないが、IRF-2xStat6二重欠損マウスでは観察されることから、IL-4もしくはIL-13に非依存的で、IFN-α/βシグナルに依存している事が明らかになった。一方、IRF-2^<-/->マウスにおいては、生後数ヶ月までに、ポリクローナルなCD4^+およびCD8^+メモリー型T細胞(それぞれCD62L^<high>およびCD44^<high>Ly-6C^+)が野生型マウスと比較して多量に蓄積することから、IRF2はメモリーT細胞のホメオスタシスを制御していると考えられた。IRF-2はT細胞中で機能していること、内因性もしくは環境抗原等による持続刺激の結果ではなく、T細胞にintrinsicな異常に起因すること、IRF-2がメモリーT細胞のホメオスタシスを制御する機構は、IFNシグナルの制御機構とは異なる。これまでに知られていない新規のものであることなどが分かった。
化学ポテンシャル勾配を応用したエコスティールの開発

表面改質技術の一つである溶射技術は,防食,防錆から装飾を目的としたものまで,一般に広く用いられている.その中でも自溶合金溶射,とりわけNi基自溶合金溶射による皮膜は耐摩耗性,耐食性,耐熱性に優れ,製鉄,自動車から機械部品,ボイラーチューブなど広く利用されている.この自溶合金溶射皮膜は,皮膜形成後,フュージングと呼ばれる再溶融処理を施すところに特徴がある.しかしこの再溶融処理によって,皮膜側から母材側に浸炭がおこり,接合界面に浸炭層が形成することが実用上問題となっている.そこで本年度は,これまで得られた化学ポテンシャル勾配によるCの拡散現象についての知見をNi基自溶合金へ適用し,母材への浸炭について,C原子の拡散挙動をシミュレーションすることにより考察し,浸炭の抑制について検討した.その結果以下の結論が得られた.(1)Ni基自溶合金溶射皮膜の形成上問題となる,フュージング時におこる浸炭現象をJIS1種,4種の皮膜について再現することができた.(2)Ni基自溶合金にNbを添加したが,母材への浸炭を抑制することができなかった.これは炭化物形成元素として期待されたNbがほう化物を生成し,浸炭の駆動力であるCの化学ポテンシャルの低下に影響しなかったためである.Ni基自溶合金にTiを添加することで,母材への浸炭が抑制されることを予測できた.また皮膜へのC原子の拡散に伴い,TiCがより晶出することが予測され,これは硬度や耐摩耗性に乏しいJIS1種皮膜に対して有用である.表面改質技術の一つである溶射技術は,防食,防錆から装飾を目的としたものまで,一般に広く用いられている.その中でも自溶合金溶射,とりわけNi基自溶合金溶射による皮膜は耐摩耗性,耐食性,耐熱性に優れ,製鉄,自動車から機械部品,ボイラーチューブなど広く利用されている.この自溶合金溶射皮膜は,皮膜形成後,フュージングと呼ばれる再溶融処理を施すところに特徴がある.しかしこの再溶融処理によって,皮膜側から母材側に浸炭がおこり,接合界面に浸炭層が形成することが実用上問題となっている.そこで本年度は,これまで得られた化学ポテンシャル勾配によるCの拡散現象についての知見をNi基自溶合金へ適用し,母材への浸炭について,C原子の拡散挙動をシミュレーションすることにより考察し,浸炭の抑制について検討した.その結果以下の結論が得られた.(1)Ni基自溶合金溶射皮膜の形成上問題となる,フュージング時におこる浸炭現象をJIS1種,4種の皮膜について再現することができた.(2)Ni基自溶合金にNbを添加したが,母材への浸炭を抑制することができなかった.これは炭化物形成元素として期待されたNbがほう化物を生成し,浸炭の駆動力であるCの化学ポテンシャルの低下に影響しなかったためである.Ni基自溶合金にTiを添加することで,母材への浸炭が抑制されることを予測できた.また皮膜へのC原子の拡散に伴い,TiCがより晶出することが予測され,これは硬度や耐摩耗性に乏しいJIS1種皮膜に対して有用である.従来の圧接による鉄系クラッド材は、それぞれの材料の特性を生かすために界面での拡散を阻止するように製造されている。しかし、化学ポテンシャルの勾配を利用して、低C系普通鋼と高C系HSLA鋼を圧接して拡散処理すると、通常の感覚とは違い、高CであるHSLA鋼が普通鋼のCをほとんど吸収し、より高いC組成を有するような逆拡散をする可能性がある。本研究では、このような逆拡散を利用した鉄系クラッド材の組織制御に関する基礎的研究を行うことを目的として、本年度は異種鉄鋼材料をクラッドした場合の界面におけるCの拡散挙動を拡散方程式の数値的解法により研究した。計算結果の一例として、内側に厚さ0.045mのFe-0.3wt%Si-0.05wt%C3元系合金、外側に厚さ0.005mのFe-13wt%Cr-0.10wt%C3元系合金をクラッドし、温度1173K、圧力101325Paで拡散させたところ、時間が経過するにつれて、鋼中のC量が接合界面より内側から外側へ吸収されている様子がよく再現されることがわかった。この結果表面層にCr_<23>C_6が析出することから、拡散処理理後の表面層に、有効な機能を持つ炭化物などを析出させ、鉄系表面改質材の製造プロセスに応用できる可能性が確認できた。これ以外にも、Tiを含むステンレス鋼を汎用鋼の表面にクラッドすることにより、表面層における微細なNaCl型炭化物の析出がおこることなど、多くの計算実績を積み重ねた。これにより、本研究における基本概念が正しいことが確認されたので、次年度以降は、この方法の具体的な応用について考えていく予定である。従来の圧接による鉄系クラッド材は、それぞれの材料の特性を生かすために界面での拡散を阻止するように製造されている。

本研究では、このような逆拡散を利用した鉄系クラッド材の組織制御に関する基礎的研究を行うことを目的として、本年度は異種鉄鋼材料をクラッドした場合の界面におけるCの拡散挙動を拡散方程式の数値的解法により研究し、以下の成果を得た。また、このようなクラッド法ばかりでなく、溶射を用いた表面改質についても本研究手法の適用を試みた。その結果、溶射において表面層から炭素がマトリックス材に侵入し、界面における材料の硬化および割れの発生などが報告されていたが、そのような現象の回避の方法について考察できた。表面改質技術の一つである溶射技術は,防食,防錆から装飾を目的としたものまで,一般に広く用いられている.その中でも自溶合金溶射,とりわけNi基自溶合金溶射による皮膜は耐摩耗性,耐食性,耐熱性に優れ,製鉄,自動車から機械部品,ボイラーチューブなど広く利用されている.この自溶合金溶射皮膜は,皮膜形成後,フュージングと呼ばれる再溶融処理を施すところに特徴がある.しかしこの再溶融処理によって,皮膜側から母材側に浸炭がおこり,接合界面に浸炭層が形成することが実用上問題となっている.そこで本年度は,これまで得られた化学ポテンシャル勾配によるCの拡散現象についての知見をNi基自溶合金へ適用し,母材への浸炭について,C原子の拡散挙動をシミュレーションすることにより考察し,浸炭の抑制について検討した.その結果以下の結論が得られた.(1)Ni基自溶合金溶射皮膜の形成上問題となる,フユージング時におこる浸炭現象をJIS1種,4種の皮膜について再現することができた.(2)Ni基自溶合金にNbを添加したが,母材への浸炭を抑制することができなかった.これは炭化物形成元泰として期待されたNbがほう化物を生成し,浸炭の駆動力であるCの化学ポテンシャルの低下に影響しなかったためである.(3)Ni基自溶合金にTiを添加することで,母材への浸炭が抑制されることを予測できた.また皮膜へのC原子の拡散に伴い,TiCがより晶出することが予測され,これは硬度や耐摩耗性に乏しいJIS1種皮膜に対して有用である.
異常タンパク封じ込め機構における小胞体シャペロンBiPの機能解析

AVPプロモーター下Venus発現rAAVベクターをマウス視索上核へ投与しAVPニューロン特異的なVenusの発現を認めた.BiP,BiP shRNAを導入したrAAVベクターにてFNDIマウスAVPニューロンに特異的なBiPの過剰発現,ノックダウンを施行したが,その解析は現在進行中である.また,BiPと同様の作用を持つケミカルシャペロン4-PBAがFNDIマウスの尿量やERAC形成に及ぼす影響を検討した.4-PBA投与により尿量とERACは減少した.以上より,BiPと同様の作用を持つ4-PBAは変異タンパクの処理を促進することでERACを減少させ多尿の進行を抑制したものと考えられた.家族性中枢性尿崩症(FNDI)モデルマウスのバソプレシン(AVP)ニューロンでは,小胞体の一部に変異タンパクが隔離された区画(ERAC: Endoplasmic reticulum-associated compartment)が形成される.本研究では,FNDIマウスのAVPニューロンにおいて小胞体シャペロンBiPのERAC形成に及ぼす影響を解析し,小胞体における異常タンパク処理機構の解明,さらには小胞体ストレスが関与する様々な疾患の治療戦略の開発につなげることを目的とする.AVPプロモーター制御下にBiP shRNAまたはBiPを発現させる組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ベクターをFNDIマウスの視索上核にマイクロインジェクションすることで,視索上核のAVPニューロンに特異的にBiPをノックダウンもしくは過剰発現させる.AVPプロモーターを搭載したベクタープラスミドのAVPプロモーターの下流に4種類のマウスBiP shRNAおよびマウスBiP cDNA,Venus cDNAをそれぞれ導入し,それらを基にそれぞれのrAAVベクターを作成した.今後は,実験系の有効性を確認するために,AVPプロモーター制御下Venus発現rAAVベクターを視索上核に投与しAVPニューロン特異的なVenusの発現を確認する.その上で,FNDIマウス視索上核におけるAVPニューロン特異的BiPノックダウンもしくは過剰発現を行い,ERAC形成や多尿などの表現型に及ぼす影響を解析する.平成27年度の研究計画は,1.AVPプロモーター制御下BiP shRNA,BiP,Venus発現rAAVベクターの作製,2.FNDIマウス視索上核に対するrAAVベクター投与による視索上核AVPニューロン特異的BiPノックダウンおよび過剰発現の確認,であったが,rAAVベクターの作製のみに留まっている.家族性中枢性尿崩症(FNDI)モデルマウスのバソプレシン(AVP)ニューロンでは,小胞体の一部に変異タンパクが隔離された区画(ERAC: Endoplasmic reticulum-associated compartment)が形成される.本研究では,FNDIマウスのAVPニューロンにおいて小胞体シャペロンBiPのERAC形成に及ぼす影響を解析することで小胞体における異常タンパク処理機構を解明すること目的とする.AVPプロモーター下にVenus,BiP,BiP shRNAを導入した組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ベクターを作製し, Venus発現rAAVベクターをマウスの視索上核へ投与することでAVPニューロン特異的なVenusの発現を認め,この実験系の有効性を確認した.次にBiP,BiP shRNAを導入したrAAVベクターを用いてFNDIマウスのAVPニューロン特異的なBiPの過剰発現およびノックダウンを施行したが,この実験の完遂には時間を要することが予想された.そのため上記実験と同時並行で,BiPと同様の作用によりタンパクの折りたたみを促進するケミカルシャペロン4-PBAがFNDIマウスの表現型やAVPニューロンにおけるERAC形成に及ぼす影響を検討した.4-PBA投与によりFNDIマウスの尿中AVP,尿浸透圧は増加し尿量は減少した.またAVPニューロンのERACは減少した.以上より,BiPと同様の作用を持つ4-PBAはFNDIマウスのAVPニューロンにおいて,変異タンパクの処理を促進することでERACを減少させ多尿などの表現型の進行を抑制したものと考えられた.今後,ERAC形成におけるBiPの直接的な役割を検討する目的に,rAAVベクターを用いたFNDIマウスのAVPニューロン特異的なBiPの過剰発現およびノックダウンによる検討を続けていく予定である.AVPプロモーター下Venus発現rAAVベクターをマウス視索上核へ投与しAVPニューロン特異的なVenusの発現を認めた.BiP,BiP shRNAを導入したrAAVベクターにてFNDIマウスAVPニューロンに特異的なBiPの過剰発現,ノックダウンを施行したが,その解析は現在進行中である.また,BiPと同様の作用を持つケミカルシャペロン4-PBAがFNDIマウスの尿量やERAC形成に及ぼす影響を検討した.4-PBA投与により尿量とERACは減少した.以上より,BiPと同様の作用を持つ4-PBAは変異タンパクの処理を促進することでERACを減少させ多尿の進行を抑制したものと考えられた.完成したAVPプロモーター制御下BiP shRNA,BiP,Venus発現rAAVベクターを用いてFNDIマウス視索上核へのマイクロインジェクションを行い,視索上核AVPニューロン特異的BiPノックダウンおよび過剰発現の確認を早急に行う.FNDIマウスにおけるERAC形成や多尿などの表現型に及ぼす影響の解析は,これまでの経験から滞りなく行えるものと考えられる.内分泌内科