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「長い７０年代」の東西欧州知識人交流から人権規範・実践のグローバル・ヒストリーへ

本年度は、異論派を支援した西側知識人の一人、カレル・レーヴがサミズダート文書刊行のために1969年に設置したゲルツェン財団のアーカイヴ資料(国際社会史研究所:アムステルダム、所蔵)の調査を実施した。この調査により、リトヴィノフらが帰国直前のレーヴに手渡したタイプ打ちのメッセージも発見することができ、大きな成果を得た。研究テーマに関わる本財団の調査はおおむね完了したと考えている。ただ、国際社会史研究所には、異論派支援にも取り組んだアムネスティ・インターナショナルの資料群も保管されていることが判明したため、来年度、この調査を実施する予定である。本年度に行ったもう一つの作業は、もう一人の西側支援者であったスティーヴン・スペンダーが創設した「作家学者インターナショナル(WSI)」とアムネスティ・インターナショナルの関係である。アムネスティ・インターナショナルの中心人物の一人が、WSIに設置当初から関わっていたが、アムネスティ・インターナショナルがソ連人権情報誌『時事日誌』の英語版A Chronicle of Current Eventsを刊行し、それを継続するにあたりWSIが深く関与していたことを突き止めることができた。資料調査は着実に進捗し、英語論文の成果も得られている。構想している英文書籍の全体構想もほぼ固まった。出版社からの出版の打診もあるため、本研究プロジェクトの最終目的に向けて、おおむね順調に作業は進展していると考える。これまでに収集した資料の分析が最大の課題である。と同時に、アムステルダムの国際社会史研究所にアムネスティ・インターナショナル関係の資料が所蔵されていることが判明したため、この資料調査も重要な作業となる。今年度中に、企画を進めている英文書籍の第4章にあたる原稿の執筆も進める予定である。本年度は、ソ連異論派の一人、パーヴェル・リトヴィノフを支援した西側知識人の動向を把握するとともに、中心的支援者であったカレル・レーヴェとスティーヴン・スペンダーの二人のプロジェクトのうち、前者が創設した「ゲルツェン財団」のアーカイヴ文書を国際社会史研究所(アムステルダム)にて調査することを予定していた。しかし、今年度は更なる資料調査を見送り、すでに収集済みであった同アーカイヴの文書(オランダ語、ロシア語、英語の資料)の分析を中心に実施した。その結果、レーヴェのプロジェクトとスペンダーのプロジェクトのいずれにおいても、西側支援者の一人であったピーター・レッダウェイ氏の役割が予想以上に大きかったことが判明したため、ワシントンに在住の氏にアプローチすることを優先した。米国人研究者のつてをたどって連絡を取ることに成功し、インタビューを申し入れたが、Emailでのやりとりを望まれたため、その方法で質問をし、本研究プロジェクトに関わる貴重な回答を得た。また、研究作業を進める中で、パーヴェル・リトヴィノフ氏が寄贈した個人文書がスタンフォード大学フーバー研究所のアーカイヴに所蔵されていることが判明したため、研究計画を修正し、リトヴィノフ氏の個人文書(手紙、原稿、インタービュー記録など)を閲読することを29年度の課題の一つとした。30年3月にフーバー研究所を訪問し、氏関連の文書の全体におおよそ目を通し、様々の関係者との間で交わされた手紙、氏が受けたインタビュー記録など、本研究に不可欠な重要資料を数多く得られた。当初予定していた国際社会史研究所(アムステルダム)での資料調査は見送ったものの、すでに得られていた資料の分析を進めることはできたので、作業はおおむね順調に進捗しているといえる。加えて、当初の予定になかったリトヴィノフ・ペーパーズ(フーバー研究所所蔵)の閲読が実現したので、西側支援者サイドではなく、ソ連の異論派サイドの作業が予想以上に進んだ。本研究課題に関係する成果の発表も可能な段階に入りつつあり、全体的にみて順調に進展していると考える。昨年度見送った国際社会史研究所(アムステルダム)でのゲルツェン財団に関わる資料調査を今後もう一度実施し、当財団の活動を解明するうえで不可欠な資料収集を完了する予定である。

また、ゲルツェン財団の文書、スペンダー・アーカイヴ、リトヴィノフ・ペーパーズの資料を詳細に分析し、本研究課題が設定する「長い1970年代」における人権規範・実践のグローバルな展開についてその具体像を明らかにしていく。とともに、これらの人権実践が、1975年のヘルシンキ協定締結のプロセスにどのように作用したのか、当時の国際関係の文脈のなかにそれを位置付け、評価を加えていくことも予定している。これまでに収集した資料の分析が最大の課題である。と同時に、アムステルダムの国際社会史研究所にアムネスティ・インターナショナル関係の資料が所蔵されていることが判明したため、この資料調査も重要な作業となる。今年度中に、企画を進めている英文書籍の第4章にあたる原稿の執筆も進める予定である。次年度使用額が1,320円発生したが、海外出張を実施した際に結果的に余った残額であり、特段の問題はないと考える。繰越額はわずかであり、翌年度分として請求した助成金と合わせて、研究計画にしたがって支出する予定である。投稿論文が受理されるに至る段階で、もう一度、英文校正が必要となる可能性を考慮して、この額を残したが、結果的に経費が発生しなかった。来年度、アムステルダムの国際社会史研究所への1週間程度の再訪を計画していること、原稿執筆の進み具合によっては英文校閲費用が発生することなどから、その費用の一部に残余金をあてる予定である。
清水用低騒音ピストンポンプ・モータの試作研究

比較的大動力の伝動システムとして、制御特性に優れた油圧駆動が広く採用されている。しかしながら、石油系作動油を作動流体とするため、火災危険性、作業環境や廃油処理の問題がある。本研究は、清水(水道水)を採用して、油圧システムの特徴を保持しながら、これらの問題を解決し、人間ならびに地球に優しい液圧システム、すなわち、水圧システムの確立を目的とする。低粘度で防錆性に劣る液体であるため、水圧システム開拓上の最大課題は、エネルギー変換を司るポンプ・モータにある。このため、使用圧力14MPa、押しのけ容積15cc/rev、回転数3000rpmのピストンポンプ・モータの開発を選定した。研究経費を合理的に使用するため、市販のポンプ・モータを基本として、清水を用いること、ならびにモータ作動時の低速特性を重視し、しゅう動部に流体潤滑の実現を図ることとした。具体的には、弁板-シリンダブロック間しゅう動部について、流体膜形状を定める運動方程式を解き、弁板上に設ける静圧パッドの寸法を、あるいは、ピストン-シリンダボア間の損失を低減するピストン寸法を理論的に決定した。特に、静圧軸受部に設ける絞りは小径となるため、加工上の困難さから、数種につき検討し最終的にオリフィス絞りとした。上記設計に基づき作製されたポンプ・モータを、ポンプとして圧力14MPa、回転数1500rpm以下で性能試験を実施した。最高効率は81%であり、このとき容積効率は92%、機械効率88%であり、予測値を下回った。この原因は、静圧軸受部の絞りの加工精度にあると考えられる。金属以外の材料に対する加工精度の向上、ならびに寸法許容差の大きい静圧軸受の開発を進める要がある。作動流体として清水(水道水)を採用して、油圧技術の特長を保持しながら、人間ならびに環境に優しい液圧技術の確率が要請されている。この最大の課題は、性能と耐久性とに優れたポンプ・モータの開発であり、このため、本研究は最高使用圧力14Mpa、押しのけ容積15cc/rev、回転数1500rpmのピストンポンプ・モータを試作することを目的としている。低粘度でかつ潤滑性に劣る水道水を用いることによる第1の問題は、ポンプ・モータの摺動部の潤滑である。防錆性および防電蝕性を実現し、また研究経費節減のため、市販品をベースとし、その主要摺動部に静圧軸受理論に基づく新設計法を適用することとした。設計対象とした摺動部は、弁板-シリンダブロック間、ピストン-シリンダ壁間およびピストンスリッパー斜板間である。特に、前2者の摺動部について、作動条件の変化にも関わらず、微少な流体膜を維持する点、あるいは損失動力を減少させる点から、新寸法を理論的に求めた。一方、低騒音化を図るため、閉じ込み空間におけるシリンダ室内の液体圧力変化を理論的に解析し、適切な弁板ポート形状を求めた。これらの結果に基づき、新しいまた効率の良いポンプを設計し、製作にとりかかっている。現在、まだ製品が納入されていないため、実験的な検討は今後に待つことになる。この実験的検証を踏まえ、ポンプとしての高速化、モータとしての性能向上、さらに、加工の容易さと材料の選定などを来年度に実施する予定である。本研究は、清水(水道水)を採用して、油圧システムの特徴を保持しながら、これらの問題を解決し、人間ならびに地球に優しい液圧システム、すなわち水圧システムの確立を目的とする。

このため、使用圧力14MPa、押しのけ容積15cc/rev、回転数3000rpmのピストンポンプ・モータの開発を選定した。研究経費を合理的に使用するため、市販のポンプ・モータを基本として、清水を用いること、ならびにモータ作動時の低速特性を重視し、しゅう動部に流体潤滑の実現を図ることとした。具体的には、弁板-シリンダブロック間しゅう動部について、流体膜形状を定める運動方程式を解き、弁板上に設ける静圧パッドの寸法を、あるいは、ピストン-シリンダボア間の損失を低減するピストン寸法を理論的に決定した。特に、静圧軸受部に設ける絞りは小径となるため、加工上の困難さから、数種につき検討し最終的にオリフィス絞りとした。上記設計に基づき製作されたポンプ・モータを、ポンプとして圧力14MPa、回転数1500rpm以下で性能実験を実施した。最高効率は81%であり、このとき容積効率は92%、機械効率88%であり、予測値を下回った。この原因は、静圧軸受部の絞りの加工精度にあると考えられる。金属以外の材料に対する加工精度の向上、ならびに寸法許容差の大きい静圧軸受の開発を進める要がある。
カロテノイド生産乳酸菌が持つ新規酸化ストレス応答因子と抗酸化物質の探索

カロテノイド生産乳酸菌には、特有の酸化ストレス応答機構が存在することが明らかとなってきたことから、本研究ではカロテノイド生産乳酸菌を研究材料として、新規抗酸化物質の探索を行っている。昨年度までに得られた発現株7株を菌体破砕機で破砕し、菌体粗抽出液をTotal Antioxidant Capacity(TAC) Assay Kitで測定したところ、抗酸化が強い株が確認できなかった。そこで、Enterococcus属の別の種についてゲノム情報を検索したところ、これまでのカロテノイド生合成遺伝子とは異なる推定カロテノイド生合成遺伝子の存在が確認できた。また、推定カロテノイド遺伝子についてRTーPCRで発現を確認したところ、既知のカロテノイド遺伝子と同様に発現し、ストレス応答していることが確認できた。そこで、既知のカロテノイド生合成遺伝子と、ゲノム情報を基に推定した遺伝子をクローニングしシャトルベクターに導入後、Lactococcus lactis MG1363に導入したところ、菌体が薄いオレンジ色に変化した。既知のカロテノイド遺伝子のみ導入した場合の菌体は黄色で、推定カロテノイド生合成遺伝子を導入することでオレンジ色になったことから、今回クローニングした遺伝子は、既知のカロテノイドを修飾する遺伝子であることが明らかとなった。非発現株に比べると、推定カロテノイド修飾遺伝子発現株は、酸化ストレス耐性が向上する傾向にあった。本研究成果によって、乳酸菌の新たなカロテノイド生合成機構の存在が示唆された。Enterococcus属から推定カロテノイド修飾遺伝子を単離することができた。当該遺伝子の発現株で酸化ストレス耐性が向上する傾向があったことから、現在、色素を抽出し、次年度予定であるヒト細胞への添加予備試験を開始している。以上のことから、「本研究はおおむね順調に進展している」とした。Enterococcus属が生産するカロテノド産物がヒト細胞に与える影響を調べる。細胞に対する抗酸化作用を調べるため、過酸化水素等の酸化物質を細胞に接種後、核酸酸化は8-hydroxyguanosine (8-OHG)、脂質酸化は2-チオバルビツール酸反応性物質(TBARS)を指標に、細胞内酸化レベルを調べる。上記は特定の酸化レベルを測定しているが、必要に応じて、網羅的遺伝子発現解析等を行い、細胞への影響について網羅的解析を行い、その影響について詳細に検討する。乳酸菌が生産する抗酸化物質は、乳酸菌自身の酸化ストレス耐性向上や、動物では酸化ストレスで生じる大腸炎予防に繋がることが報告されており、乳酸菌の新たな抗酸化物質の発見が重要視されている。このような背景のもと、カロテノイド生産乳酸菌には特有の酸化ストレス応答機構が存在することが明らかとなってきたことから、本研究では、カロテノイド生産乳酸菌について、カロテノイド生産関連遺伝子および機能未知遺伝子をターゲットとして、新規抗酸化物質の探索を行う。今年度は、1Lactobacillus属の酸化ストレス応答遺伝子をトランスクリプトーム解析で明らかにして機能未知遺伝子を抽出するとともに、2Enterococcus属の持つ機能未知遺伝子の抗酸化作用について検討した。1Lactobacillus plantarumを用いて、カロテノイド生合成遺伝子の発現量変化を定量PCRで確認した結果、好気培養におけるLb. plantarumのカロテノイド生合成遺伝子は、嫌気培養と比較して最大2倍程度発現量が増加し、経時的に変化することが明らかとなった。次に、カロテノイド生合成遺伝子の発現量が最も増加した培養時間においてRNAを回収し、トランスクリプトーム解析で網羅的な遺伝子発現解析を行った。その結果、嫌気培養に比べて3倍以上発現量が増加した機能未知遺伝子が4個確認できた。2Enterococcus gilvusについて、過去の成果で得られたトランスクリプトーム解析結果をもとに、好気培養で発現量が増加する機能未知遺伝子を選択し、シャトルベクターに連結して乳酸菌Lactococcus lactisに導入し、異種発現株を7株作製した。次に、7株を過酸化水素を含む培地に接種して生育を調べた結果、1株は過酸化水素に対する耐性が向上する傾向にあり、乳酸菌の新規抗酸化物質の存在が示唆された。Lb. plantarumから、好気培養で誘導された新規抗酸化物質をコードすると予想される候補遺伝子を得た。また、E. gilvusから得た機能未知遺伝子を異種発現させることで、酸化ストレス耐性が向上する株を得た。一方、酸化ストレス耐性が大きく向上した株が得られず、発現株自体の抗酸化能については未確認であることから、今後、さらなる発現候補遺伝子を選択し、発現株自体の抗酸化能を検討する必要がある。その点を考慮し、「研究はやや遅れている」とした。

既知のカロテノイド遺伝子のみ導入した場合の菌体は黄色で、推定カロテノイド生合成遺伝子を導入することでオレンジ色になったことから、今回クローニングした遺伝子は、既知のカロテノイドを修飾する遺伝子であることが明らかとなった。非発現株に比べると、推定カロテノイド修飾遺伝子発現株は、酸化ストレス耐性が向上する傾向にあった。本研究成果によって、乳酸菌の新たなカロテノイド生合成機構の存在が示唆された。Enterococcus属から推定カロテノイド修飾遺伝子を単離することができた。当該遺伝子の発現株で酸化ストレス耐性が向上する傾向があったことから、現在、色素を抽出し、次年度予定であるヒト細胞への添加予備試験を開始している。以上のことから、「本研究はおおむね順調に進展している」とした。Lb.plantarumおよびE. gilvusから得た機能未知遺伝子を乳酸菌で異種発現させ、発現株の酸化ストレス耐性を調べる。さらに、発現株自体の抗酸化能について、菌体破砕物あるいは培養上清の抗酸化活性を、OxiSelect ORAC & HORAC活性測定アッセイ(OxiSelect)等の抗酸化能測定キットを用いて測定する。また、候補となる機能未知遺伝子が少ないため、予定通り抗酸化活性の高い発現株を得られない可能性もある。その場合は、E.gilvusおよびLb. plantarum以外の乳酸菌のゲノム情報を用いて、カロテノイド生産乳酸菌特有の機能未知遺伝子を選択し、発現株を作製する。Enterococcus属が生産するカロテノド産物がヒト細胞に与える影響を調べる。細胞に対する抗酸化作用を調べるため、過酸化水素等の酸化物質を細胞に接種後、核酸酸化は8-hydroxyguanosine (8-OHG)、脂質酸化は2-チオバルビツール酸反応性物質(TBARS)を指標に、細胞内酸化レベルを調べる。上記は特定の酸化レベルを測定しているが、必要に応じて、網羅的遺伝子発現解析等を行い、細胞への影響について網羅的解析を行い、その影響について詳細に検討する。異種発現候補となる機能未知遺伝子が少なく、発現株作製の経費が縮小、また、発現株の抗酸化活性を次年度に移行したため、次年度使用額が生じた。今年度、カロテノイド修飾遺伝子を分離し、発現株が容易に得られたこと、候補物質の抽出についても、既知の方法通りにできたことから大腸菌での発現、Hisタグ等による候補物質の精製が必要でなくなり、次年度使用分が生じた。次年度使用分については、ヒト細胞の抗酸化作用を調べるためのキット購入、必要に応じて遺伝子発現等の網羅的解析に使用し、カロテノイド産物がヒト細胞に与える影響を明らかにする。異種発現株の抗酸化活性の測定および、新たな発現株の作製のために使用する。
メラトニンの生理学的ならびに病理学的作用に関する研究

1.これまでに私共は、幼若ラットを用いて実験において、メラトニンには、糖質ステロイドホルモンに対して拮抗する作用のあることを見出してきたが、さらにこの現象が成熟ラットを用いた実験においても、メラトニンが糖質ステロイドホルモンに対して拮抗する作用のあることを確認した。即ち、糖質ステロイドホルモンであるデキサメタゾンを大量かつ長期にわたり投与したウイスタ-系雌の8週齢成熟ラットに認められた、体重減少、胸腺や副腎の皮質萎縮、尿糖出現、血糖値、血中インスリン値などの諸変化が、メラトニンを投与することにより、いずれも明かに軽減されるという事実を見出した。2.以上の諸実験の過程で、メラトニンには脂質代謝に対しても作用を有している可能性が示唆されたので、二種類のラットを用いてメラトニンの脂質代謝に対する作用を調べた。その結果、メラトニンには、高コレステロ-ル血症を抑制する作用のあることが明かとなった。即ち、普通食で飼育していても自然に高コレステロ-ル血症を発症する、遺伝性の自然発生高コレステロ-ル血症ラットを用いた実験において、離乳直後からメラトニンを合せ投与することにより、血中総コレステロ-ル値の著名な減少が見られた。さらに病理組織学的に、遺伝性自然発生高コレステロ-ル血症ラットに見られる脂肪肝の程度が、メラトニン投与により明かに軽減した。さらに、高コレステロ-ル食で飼育したラットにメラトニンを投与したところ、血中総コレステロ-ル値の上昇が明かに抑制された。また血中リポタンパクについては、超低比重リポタンパク及び低比重リポタンパク値の増加、及び高比重リポタンパクの減少がいずれも抑制された。これまでに私共は,幼若ラットを用いた実験において,メラトニンには糖質ステロイドホルモンに対して拮抗する作用のあることを見出した.今年度は,まずこの現象が成熟したラットやハムスターにおいても観察されることを確認した.すなわち,糖質ステロイドホルモンであるデキサメタゾンを大量かつ長期にわたって投与したウイスター系雌の8週齢成熟ラットに認められた,体重減少,脳腺や副腎の皮質萎縮,尿糖出現,血糖値,血中インスリン値,血中諸脂質値の上昇,などの諸変化が,メラトニンを投与することによって,いずれも明らかに軽減されるという事実を見出した.また,これとまったく同様の現象が8週齢の雌ハムスターを用いた実験でも認められ,さらに病理組織学的検査の結果,デキサメタゾンを投与することによって生じる膵臓ランゲルハンス島の著しい過形成やβ細胞の増生が,メラトニンを投与することによって明らかに軽減することも判明した.一方,これらの実験とは別に,以上のような諸実験の過程の中で,メラトニンには,糖質ステロイドホルモンに対する作用のみらず,脂質代謝に関しても少なからず作用を有している可能性があることを知り,二種類のラットを用いてメラトニンが脂質代謝に対してどのような作用を及ぼすかを調べた.その結果,メラトニンには高コレステロール血症を抑制する作用のあることが明らかになった.すなわち,ラットを高コレステロール食で飼育して生じる血中コレステロール値をはじめとする血中諸脂質値の上昇が,メラトニンをあわせ投与することによって明らかに軽減された.また,普通食で飼育していても自然に高コレステロール血症を発症する遺伝性の自然発生高コレステロール血症ラットを用いた実験においても,離乳直後からメラトニンをあわせ投与することによって,高コレステロール血症や脂肪肝の程度が明らかに軽減することが観察された.これまで私どもは、幼若ラット,及び成熟ラットを用いた実験において、メラトニンにも糖質ステロイドホルモンに対して拮抗する作用のあることを見出した。即ち、糖質ステロイドホルモンであるデキサメタゾンを大量かつ長期にわたり投与したウィスター系雌の8週齢成熟ラットに認められた。

体重減少、胸腺や副腎の皮質萎縮、尿糖出現、血糖値、血中インスリン値の上昇などの諸変化が、メラトニンを投与することにより、いずれも明らかに軽減されるという事実を見出した。また、これと全く同様の現象が8週齢の雌ハムスターを用いた実験でも認められ、さらに病理組織学的検索の結果、デキサメタゾンを投与することにより生ずる膵臓ランゲルハンス島の著しい過形成やβ細胞の増生が、メラトニンを投与することにより明らかに軽減されることを見出した。今年度は、大量デキサメタゾンを短時間幼若ラットに投与した後、中止後に見られる変化が、メラトニンを同時に投与しておくことにより軽減されるか否かを観察した。即ち、コントロール群として、4週齢の雄ラットに5日間にわたり大量のデキサメタゾンを投与し中止すると、中止直後ないし1日後にリバウンドショックによると考えられる状態で多くが死亡した。これに対し、メラトニンを同時に投与していた投与群においては、死亡率がやや低く、デキサメタゾン投与中止後のショックが軽減されることが示唆された。この際、生存したラットの副腎重量はコントロール群に比べ投与群で重く、メラトニン投与により、副腎萎縮が軽減されることが示された。さらに、死亡したラットについても、コントロール群に比べ投与群で重く、副腎萎縮が軽減されることが示された。現在、デキサメタゾン及びメラトニンの投与量、及び投与期間を変えることにより、リバウンドショックによる死亡を防ぐことが可能であるが、検討中である。これまで私共は、幼若ラット、及び成熟ラットを用いた実験において、メラトニンには糖質ステロイドホルモンに対して拮抗する作用のあることを見出した。また、これと全く同様の現象が、8週齢の雌ハムスタ-を用いた実験でも認められ、さらに病理学的検索の結果、デキサメタゾンを投与することにより生ずる膵臓ランゲルハンス島の著しい過形成やβ細胞の増生が、メラトニンを投与することにより明らかに軽減されることを見出した。また、ラットを用い、高コレステロ-ル食を投与することにより起こる脂質代謝異常のうち、高コレステロ-ル食投与初期における、血中総コレステロ-ル値の上昇が抑制されることを見出した。本年はこれらの脂質代謝異常に対するメラトニンの拮抗作用を詳細に検索した。即ち、SD系雄ラットを普通食或は高コレステロ-ル食で飼育した。メラトニンは1日当たり4mgを、また対照群には生理食塩水を何れも腹腔内に注射した。各実験期間中、血中脂質,血中リパ-ゼ及び肝組織像について検索した。さらに血中リポタンパクについては、アガロ-スゲル電気泳動法、超遠心法、HPLC法を用い分析した。普通食飼育ラットにおいてメラトニンの投与は体重、血中脂質に変化を与えず、高コレステロ-ル食飼育ラットにおいて、血中総コレステロ-ル上昇を抑制した。しかしトリグリセリド及びグルコ-スに変化は見られなかった。血中リポタンパクについて、高コレステロ-ル食飼育ラットでは超低密度リポタンパク(VLDL)及び低密度リポタンパク(LDL)の上昇と、高密度リポタンパク(HDL)の低下を認めたが、メラトニン投与により、VLDLとLDLの上昇及びHDLの低下はいずれも抑制された。さらにリポタンパクの組成を調べると、メラトニン投与により、VLDL及びLDL中の総コレステロ-ルのみが減少し、トリグリセリド及びタンパク量に変化は認められなかった。
乳癌悪性化を担うTRIMファミリー蛋白質の作用メカニズムと臨床応用

本研究においては、TRIM(Tripartite Motif)ファミリー蛋白質を切り口として、新たな乳がん悪性化・治療抵抗性にかかわる分子メカニズムの解明とその応用を目指している。昨年度に、臨床検体を用いた検討においてTRIM44、TRIM47が乳がんの予後不良因子であることを示したことを踏まえ、平成30年度はそれぞれの分子の機能解析を進めた。それぞれの分子のN末に、Flag-Mycエピトープを付加したコンストラクトを作成し、それらを乳がん細胞株MCF7に発現させた。細胞溶解液をFlagおよびMycの抗体により逐次的に免疫沈降を行うことにより、結合蛋白質を精製した。質量分析を用いた解析により、陰性コントロールとのスコアに差の生じた蛋白質に関しては、HAエピトープを付加したコンストラクトを作成し、HEK293細胞にTRIM44もしくはTRIM47と共発現させた。また、TRIM47に含まれる核内受容体結合配列に着目し、複数の核内受容体もTRIM47結合蛋白質の候補に加え、HAエピトープを有するコンストラクトを作成した。免疫沈降法およびウエスタンブロッティングにて相互作用を確認したところ、評価した蛋白質のうち10種以上の蛋白質が結合蛋白質として確認された。TRIM47に関しては、機能解析の一環として、マイクロアレイによる発現遺伝子の変化を解析した。乳がん細胞株MCF7において、siRNAを用いてTRIM47発現を抑制した際の遺伝子発現変化を包括的に解析することにより、TRIM47の抑制により発現が誘導される遺伝子群を同定した。定量的real-time PCR法により、誘導が確認できた遺伝子の中には、NFkappaBシグナルによって抑制される遺伝子が含まれており、TRIM47のNFkappaBシグナル活性化作用を裏付ける結果を得た。研究対象としているTRIM44、TRIM47の結合蛋白質を複数同定することができ、乳がん悪性化のメカニズムを解明する手掛かりを得ることができた。さらに、TRIM47のNFkappaB活性化作用のエフェクターとなる候補遺伝子を複数同定し得た。TRIM47はRINGドメインを有するE3ユビキチンリガーゼであり、TRIM44は脱ユビキチン化酵素であることが報告されている。結合蛋白質は、基質同定の手掛かりになると考えられ、結合蛋白質の修飾状態、安定性等を解析予定である。また、結合蛋白質の乳がん患者における発現を調べることにより、予後因子および治療標的になる可能性を検討する。最終的には、マウスを用いたプレクリニカルな治療を行い、効果や有害事象を評価し、臨床応用につなげる。本研究においては、TRIM (Tripartite Motif)ファミリー蛋白質を切り口として、新たな乳がん悪性化・治療抵抗性にかかわる分子メカニズムの解明とその応用を目指している。平成29年度には、本研究で着目しているTRIMファミリー蛋白質であるTRIM47の発現が予後予測のバイオマーカーとなるかどうかを手術検体の免疫染色により検討し、TRIM47の高発現がホルモン療法耐性に関する予後不良因子であることを見出した。エストロゲン受容体陽性乳がん細胞株MCF-7およびMCF-7より樹立したタモキシフェン耐性株を用いた機能解析において、TRIM47の発現を抑制すると細胞増殖が抑制されることを示した。また、TRIM47の発現抑制により、NF-kappaBシグナルが抑制されていることをIkappaBalphaのリン酸化抗体を用いたウエスタンブロッティングおよびレポーターアッセイにて示した。一方、エストロゲン受容体陽性および陰性乳がん双方の予後不良因子であることを見出していたTRIM44に対し、そのメカニズムの解析を行い、TRIM44の発現抑制により、エストロゲン受容体陽性乳がん細胞株MCF-7およびエストロゲン受容体陰性乳がん細胞株MDA-MB-231の増殖が抑制されることを示した。また、TRIM44の発現抑制により、MDA-MB-231の細胞運動能が低下することも見出した。さらに、そのメカニズムとしてNF-kappaBシグナルの活性化、CDK19遺伝子の抑制, MMP1遺伝子の誘導を示した。これらの結果より、私たちの研究室からの既報であるEfp/TRIM25を含め、TRIM44、TRIM47という3つのTRIMファミリー蛋白質が乳がんの予後悪化因子として作用することを示すことができた。臨床検体の解析からTRIM44, TRIM47の発現が、乳がんにおける予後不良因子としであるという裏付けを得ることができ、メカニズム解析や新たな治療法の開発へ研究を進めることができた。

免疫沈降法およびウエスタンブロッティングにて相互作用を確認したところ、評価した蛋白質のうち10種以上の蛋白質が結合蛋白質として確認された。TRIM47に関しては、機能解析の一環として、マイクロアレイによる発現遺伝子の変化を解析した。乳がん細胞株MCF7において、siRNAを用いてTRIM47発現を抑制した際の遺伝子発現変化を包括的に解析することにより、TRIM47の抑制により発現が誘導される遺伝子群を同定した。定量的real-time PCR法により、誘導が確認できた遺伝子の中には、NFkappaBシグナルによって抑制される遺伝子が含まれており、TRIM47のNFkappaBシグナル活性化作用を裏付ける結果を得た。研究対象としているTRIM44、TRIM47の結合蛋白質を複数同定することができ、乳がん悪性化のメカニズムを解明する手掛かりを得ることができた。さらに、TRIM47のNFkappaB活性化作用のエフェクターとなる候補遺伝子を複数同定し得た。Efp/TRIM25、TRIM47はその分子構造からE3ユビキチンリガーゼであると考えられ、TRIM44は脱ユビキチン化酵素であると考えられる。TRIM25, TRIM44に関しては、既に私たちおよび他の研究室より基質の報告があるが、未知の基質があると考えており、結合蛋白質の精製を手掛かりにその同定を進める。同定された新規基質の乳がんの病態に及ぼす影響を解析しつつ、乳癌患者由来の検体におけるそれらの蛋白質の発現を調べることにより、予後因子および治療標的となる可能性を検討する。さらに、基質・共役因子を標的とした最適な治療法の検討を行う。最終的にはマウスを利用したプレクリニカルな治療を行い、効果や有害事象を評価し、臨床応用につなげる。TRIM47はRINGドメインを有するE3ユビキチンリガーゼであり、TRIM44は脱ユビキチン化酵素であることが報告されている。結合蛋白質は、基質同定の手掛かりになると考えられ、結合蛋白質の修飾状態、安定性等を解析予定である。また、結合蛋白質の乳がん患者における発現を調べることにより、予後因子および治療標的になる可能性を検討する。最終的には、マウスを用いたプレクリニカルな治療を行い、効果や有害事象を評価し、臨床応用につなげる。TRIM25の結合蛋白質精製のために、初年度に多くの出費を予定していたが、TRIM44、TRIM47の臨床病理的な解析を優先させたため、初年度の使用額は予定よりも少額となった。次年度以降は、結合蛋白質精製を予定しており、消耗品等の出費が予測される。本年度の出費を抑えることができたため、次年度以降に使うことができる金額が増え、このためさらなる研究の加速が期待できる。本実験計画においては、初年度に多くの出費を予定していたが、臨床病理学的な解析を優先させたため、初年度の使用額が予定よりも少額となった影響で、本年度も次年度使用額が生じた。
造血幹細胞の増殖・分化能を維持する骨髄間質細胞由来の膜蛋白分子の分離・同定と応用

平成18年度は以下の実験結果を得た:我々を含めた幾つかの研究グループにより発見された2種の膜(糖)蛋白に着目し、造血幹細胞/前駆細胞に対する支持能力、増幅能力に関する生物機能を解析した。一つは上野・齋藤らがストローマ細胞株OP9細胞からシグナル配列単離法で単離に成功した膜糖蛋白mKirre/NEPH2であり、もう一つは最近、高柳・中内らにより単離・同定され、未熟な造血幹細胞の膜上に発現していることが判明した膜蛋白Tmtsp/Thsd1である。マウスC57BL/6の骨髄とOP9細胞から抽出したRNAを用いてRT-PCRを行い、マウス骨髄とOP9細胞に膜蛋白質遺伝子mKirreとTmtspが発現していることを確認した。また、骨髄内においては間葉系細胞に限局したmKirre蛋自の発現が判明した。両膜蛋白の機能を解析するため、mKirreについては、マウス骨髄のcDNAライブラリーからスクリーニングしたcDNAとOP9細胞から抽出したRNAにRT-PCRを用いて得たものを発現ベクターにサブクローニングした。Tmtspについては、骨髄から抽出したRNAにRT-PCRを用いて得たcDNAを発現ベクターにサブクローニングした。これらをOP9細胞をはじめとする間葉系細胞(株)、及びCOS7やCHO-k1などの非間葉系細胞(株)に、それぞれトランスフェクションさせ、膜蛋白遺伝子強発現株細胞(mKirre強発現株及びTmtsp強発現株)を樹立し、造血支持能の検索に供した。マウスC57BL/6の骨髄細胞を抗表面抗原抗体カクテルを用いてフローサイトメトリーにて純化した造血幹細胞KSL(CD34^+c-Kit^+Sca-1^+Lin^-)をmKirre強発現細胞と10週間に渡って共培養した。そこから得られた細胞を回収しメチルセルロース半固形培地で12日間培養しコロニーを形成させた。このコロニー数をカウントすることでLTC-IC (Long Term Culture-Initiating Cell)のコロニー形成能を算定し、造血能を測定した。その結果、膜蛋自mKirre強発現間葉系細胞(株)との共培養により得られたコロニー数は対照培養(mock導入間葉系細胞と共培養)より得られたコロニー数に比べ有意に増加した。同様に、KSL細胞をTmtsp/Thsd1強発現間葉系細胞(株)と共培養したところ有意なLTC-ICコロニー数の増加を認めた。すなわち、間葉系細胞に発現する2種の膜(糖)蛋白mKirre及びTmtspは造血に対する支持能を有することが示めされた。一方、遺伝子強発現非間葉系細胞との共培養では造血支持能の増加は認められなかったことから、間葉系に特異的な膜因子が造血能支持に必須なことが示唆された。さらに未熟な、真の造血幹細胞と言われるSP細胞などに対する増幅能の有無を現在検討している。平成16年度は以下の実験結果を得た:造血能測定法のDexter培養原法に種々の修飾を加え、間質(ストローマ)細胞の細胞膜上に発現する分子の造血幹細胞支持能を無血清培養系で測定した。造血幹細胞は骨髄単核細胞分画から、抗体カクテルを利用してKSL細胞(c-kit^+,Sca-1^-,lin^-)として分離し実験に供した。膜型糖蛋白分子mKirre/NEPH2やWntファミリー分子(Wnt2、Wnt3a、Wnt5a)など、単離した候補遺伝子クローンを間質細胞株又は非間葉系細胞株に遺伝子導入して得られる安定導入細胞株を用い、LTC-IC法(Long-term cultureinitiatingcellassay)にて造血支持能の変化を解析した。間葉系細胞で発現している造血幹細胞を制御する膜型・分泌型蛋白分子は、N末端シグナル配列を持つ蛋白質が細胞膜へ輸送されることを利用した発現クローニング法、シグナル配列単離法、を応用して実施した。Wntファミリー遺伝子はDegenerate RT-PCRを用いて同1定し、全長遺伝子を取得した。同定された膜型糖蛋白分子mKirre/NEPH2やWntファミリー(Wnt2、Wnt3a、Wnt5a)遺伝子を、無血清培地中で培養可能なマウス問質細胞(または非間葉系細胞)に導入後、KSL細胞(c-kit^+,Sca-1^-,lin^-)と共培養した。Wntファミリー分子単独では造血幹細胞増殖/造血支持能が促進されなかった。また、間質細胞に発現させたmKirre/NEPH2膜糖蛋白分子は造血支持能を有し、siRNAでmKirre発現を抑制すると、この造血支持能は有意に抑えられたが、非間葉系細胞に発現させると造血支持能は見出されなかった。間葉系細胞に特異的な他の因子との相互作用が示唆された。平成17年度は以下の実験結果を得た:1)造血幹細胞の維持増幅を促進する因子を発現していると考えられているマウス骨髄ストローマ細胞およびマウス・ストローマ細胞株OP9をはじめ、間葉系細胞株STO、MS-5、S17細胞などから、機能が未知の膜タンパク質を検索した。多数の完全長膜タンパク質cDNAをRT-PCR法で単離し、発現ベクターpcDNA3.1に導入し、マウス繊維芽細胞NIH3T3から樹立した亜株NIH3T3clone6細胞およびCOS-7にトランスフェクトし遺伝子が発現しているトランスフェクタントを得た。

造血幹細胞KSL細胞(c-kit^+,Sca-1^-,lin^-)をトランスフェクタントと共に無血清培地で培養し、造血幹細胞の増幅能を指標にアッセイし、造血幹細胞の維持増幅を促進させるcDNAを同定した。その配列解析から、この遺伝子にコードされている膜タンパク質は、最近報告(Blood First Edition Paper, prepublished online February 2,2006)されたThsd1/Tmtsp(Transmembrane molecule with a thrombospondin domain)と同一であることが判明した。更に造血幹細胞とThsd1/Tmtspを発現するフィーダー細胞(NIH3T3トランスフェクタント及びCOS-7トランスフェクタント)を無血清培地で共培養することにより、造血幹細胞を分化させることなく効率よくin vitroで増幅することが出来た。2)本研究者らが既に作出に成功したスフィンゴ糖脂質ガングリオシドGM3合成酵素遺伝子欠損マウスSAT-1^<-/->の造血能の検索を、LT-BMC法、LTC-IC法(Long-term culture initiating cell assay)を駆使して行い、膜分子ガングリオシドの造血能における機能を解析した。遺伝子欠損マウスでは脳組織をはじめ各組織のガングリオシド組成が著変し、正常マウスで主成分を成しているガングリオ系分子種が完全に欠損し、アシアロ系並びにα系分子種が主成分を形成していた。造血能に関しては、骨髄系造血、リンパ球系造血ともに、遺伝子欠損マウスと正常マウス間に有意な変化は認められなかった。一方、我々は、ガングリオシドGM3合成酵素欠損マウスの大脳から分離した顆粒細胞を使って、ボツリヌス毒素C型受容体BoNT/Cは毒性効力(グルタミン酸遊離阻害作用)を発揮できないが、BoNT/Dはグルタミン酸遊離を阻害できることを見出した。このことは、BoNT/CはガングリオシドGD1b及びGT1bを機能性受容体として認識し、一方、BoNT/Dはガングリオシド非依存性に、恐らくホスファチジルエタノールアミンとの結合を介して、毒性を発揮するものであることを示唆した。平成18年度は以下の実験結果を得た:我々を含めた幾つかの研究グループにより発見された2種の膜(糖)蛋白に着目し、造血幹細胞/前駆細胞に対する支持能力、増幅能力に関する生物機能を解析した。一つは上野・齋藤らがストローマ細胞株OP9細胞からシグナル配列単離法で単離に成功した膜糖蛋白mKirre/NEPH2であり、もう一つは最近、高柳・中内らにより単離・同定され、未熟な造血幹細胞の膜上に発現していることが判明した膜蛋白Tmtsp/Thsd1である。マウスC57BL/6の骨髄とOP9細胞から抽出したRNAを用いてRT-PCRを行い、マウス骨髄とOP9細胞に膜蛋白質遺伝子mKirreとTmtspが発現していることを確認した。また、骨髄内においては間葉系細胞に限局したmKirre蛋自の発現が判明した。両膜蛋白の機能を解析するため、mKirreについては、マウス骨髄のcDNAライブラリーからスクリーニングしたcDNAとOP9細胞から抽出したRNAにRT-PCRを用いて得たものを発現ベクターにサブクローニングした。Tmtspについては、骨髄から抽出したRNAにRT-PCRを用いて得たcDNAを発現ベクターにサブクローニングした。
膀胱の神経再生を制御する分子機構の解析

当初、神経因性膀胱でNGFによる神経再生過程を明らかにしようとしたが、機能障害膀胱では線維性硬化が回復の弊害となっていた。また、組織修復ではTGF-βなのnegative factorに拮抗する肝細胞成長因子(HGF)が注目されてきたため、方向転換を図って尿道閉塞膀胱をモデルとし、機能障害過程でHGF、TGF-βとそれら受容体の発現を蛋白レベルで解析した。メスSDラットを用い、はじめに尿道を結紮し、急性期(24時間)で膀胱組織内HGF、TGF-β1、c-Met(HGF受容体)の発現をELISA法およびウェスタンブロッティング法で検討した。HGFに有意な変化を認めなかったが、TGF-β1は術後6時間で著名に上昇し、以後24時間持続した。c-Metは、6時間より減少し、24時間ではほとんど発現が認められなくなった。次に部分尿道閉塞ラットで、術後1、3、5、7日後、2、4、12、16、20、28週後に膀胱を摘出した。5日以降で有意な膀胱重量の増加が認められた。組織学的には平滑筋細胞の肥大に加え結合組織の増加が認められた。HGFとTGF-β1は術後急激に増加して5日後ころにピークに達したが、TGF-β1は7日後にcontrolレベルに復した。c-Metは、術後すぐに減少し観察期間を通じてそのままであった。このように、尿道閉塞のような膀胱へ負荷がかかる病態では、急性期よりTGF-β1が過剰発現し、いっぽうでHGFの受容体であるc-Metは持続的に抑制されてしまうことが明らかになった。このことが、膀胱の線維性硬化を起こす一因と考えられる。機能障害膀胱の再生をめざす研究の一環として、糖尿病性膀胱機能障害をモデルとして神経ならびに筋組織の変化の検討を試みた。このような慢性機能障害が組織学的に線維化を伴うことから、まずTGF-β1の発現変化について、また再生に関わる増殖因子として最近種々の臓器で注目されているhepatocytegrowthfactor : HGFならびにそのレセプターであるc-Metの発現変化についてELISA法やWesternbloting法を用いて検討した。糖尿病モデルとしてラットにストレプトゾシンを投与して膀胱機能障害を誘発したが、完成に時間がかかり効率が悪かったため、併行して最も簡単な機能障害モデルとしてラットの尿道を結紮した閉塞膀胱を作り、上記増殖因子の発現変化を検討した。閉塞膀胱の急性期においては、膀胱組織にTGF-βの高発現を認めた。血漿と膀胱組織中のHGFの発現増加傾向も認めたが、シャム手術群でも同様の増加傾向があり、閉塞膀胱に特異的変化ではなかった。現在c-Metの発現変化を検討中であり、続いて慢性期の変化も検討予定である。膀胱にc-Met発現が認められるならば、外因性HGFを補充することによりTGF-βの作用に拮抗して線維化の進行を食い止め、機能障害を抑制できる可能性があり、現在HGF遺伝子を組み込んだプラスミドベクターの直接導入法も検討中である。機能璋害膀胱の再生をめざす研究の一環として、ラットの閉塞性膀胱機能障害をモデルとし、再生・修復を促進する増殖因子であるhepatocyte growthfactor : HGF、対して拮抗的に組織線維性硬化を促進する増殖因子であるTGF-β1に注目し、これらの膀胱における発現ならびに相互作用の検討を試みた。なぜならば、このような慢性機能障害が組織学的に線維性硬化を伴うからであり、これを抑制することができれば、機能障害も阻止することが可能と考えるからである。メスSDラットを用いて、尿道を結紮し、術後6、12、18、24時間後に膀胱を摘出した。

シャム手術群を対象として、HGF、TGF-β1ならびにHGFのレセプターであるc-Metの発現をELISA法なならびにWesternbloting法を用いて検討した。閉塞膀胱の急性期においては、膀胱組織に,TGF-βの強い発現上昇を認めた。一方、膀胱HGFはやや減少傾向を示したが、c-Metにおいては顕著にその発現が減少した。このことから、閉塞牲膀胱機能障害においては、TGF-β1が過剰発現し、HGF/c-Met系の発現を抑制しているのではないかと考えられた。HGFはTGF-βと相互拮抗的に作用するとされるため、膀胱に外因惟HGFを補充することによりTGF-βの作用に拮抗して線維化の進行を食い止め、機能障害を抑制できる可能性がある。そこで、超音波を用いたHGF遺伝子を組み込んだプラスミドベクターの膀胱への導入を検討中である。
理科離れを未然に防ぐために理科(化学)の実験や学習を支援するホームページの開発

理科離れを少しでも未然に防ぐため,理科(化学)の実験や学習を支援するため,化学研究室のホームページを次の様に充実させた.水溶液の作り方について,過酸化水素水の作り方等の6種類の自動サービスを作成した.化学実験のシミュレーションについて,酸・塩基滴定等の4種類の自動サービスを作成した.質問箱の回答数は2006年度が120件,2007年度が66件,2008年度が70件であった.各年度の成果をまとめた報告書を教員等に配布した.教育学部の多数の学生にホームページを紹介して活用を勧めた.理科(化学)の面白さは実験を通して伝えられることが多い.ところが,小学校教員の中には化学実験の基礎である濃度計算や調製方法を修得していない者が多数おり,実験を嫌うので理科離れの原因の1つになっている.このような教員にも授業中に,なるべく多くの実験をやってもらうことが1つ目の目的である.児童・生徒の中には授業内容についていけず,理科(化学)の現象や考え方(概念)が充分に理解しきれず,理科嫌いになる者がいる.そうなる前に児童・生徒に理科(化学)の現象や考え方を理解してもらうことが2つ目の目的である.そこで,実験や学習を支援する目的で,化学研究室のホームページ(溶液の作り方,実験のシミュレーション,質問箱)を開発している.理科離れを少しでも未然に防ぐため,理科(化学)の実験や学習を支援するため,化学研究室のホームページを次の様に充実させた.水溶液の作り方について,過酸化水素水の作り方等の6種類の自動サービスを作成した.化学実験のシミュレーションについて,酸・塩基滴定等の4種類の自動サービスを作成した.質問箱の回答数は2006年度が120件,2007年度が66件,2008年度が70件であった.各年度の成果をまとめた報告書を教員等に配布した.教育学部の多数の学生にホームページを紹介して活用を勧めた.理科離れを少しでも未然に防ぐため,理科(化学)の実験や学習を支援するため,化学研究室のホームページ(3ヶ所)を下記の様に充実させた.水溶液の濃度計算と調製方法について,前年度までに食塩水,塩酸,酢酸,硝酸,硫酸,アンモニア水,水酸化ナトリウム水溶液の日本語版を作成済みである.本年度はこれらの英語版を作成し,自動サービスを開始した(ダウンロード可能).本年度はさらに,二酸化炭素と石灰水(気体発生量・沈殿生成量等の計算,化学的性質の説明),固体無水物の溶解度(ショ糖,ホウ酸,硝酸ナトリウム等の9種類,溶解度曲線,温度変化による溶解・析出量の計算,注意事項)の2つを試作した.化学実験のシミュレーションについて,本年度は酸・塩基滴定(2価,1価)を試作した.酸は硫酸,シュウ酸,塩酸,酢酸から,塩基は水酸化バリウム水溶液,石灰水,水酸化ナトリウム水溶液,アンモニア水から選択できる.滴下液と非滴定液の入れ替えが可能で32種類の実験をシミュレーションできる.指示薬(7種類)・濃度・体積・目盛の変更,滴定の一時停止・再開や滴定曲線の記憶(6本)等ができる.質問箱の年間の閲覧総数は約45,000件である.平成18年度は質問の受付をほとんど制限せず,116件の質問に回答した.必要に応じて日常生活に例えて,平易な言葉を用いてできる限り速やかに質問者にe-mailで回答し,ホームページにも公開した.質問内容から考えて,質問者の多くは高校生と大学生である(合わせて約7割).教員や指導主事等からの質問も増加傾向にあるが,まだまだ少ない.そこで,本年度の成果(質問箱の回答集と溶液の作り方等)を約400冊印刷・製本した.指導主事,卒業生(小学校高校教員等),大学説明会の参加者等に配布する.また,教育学部の多数の学生(教員の卵)にホームページを紹介し,教育実習や学校の授業における活用を勧めた.理科離れを少しでも未然に防ぐため,理科(化学)の実験や学習を支援するため,化学研究室のホームページを下記の様に充実させた。水溶液の濃度計算と調製方法について,前年度までに食塩水,塩酸,酢酸,硝酸,硫酸,アンモニア水,水酸化ナトリウム水溶液,二酸化炭素と石灰水,固体無水物の溶解度(9種類)を作成済みである(ダウンロード可能)。本年度は,シュウ酸水溶液とシュウ酸ナトリウム水溶液の2つを試作した。化学実験のシミュレーションについて,前年度までに酸・塩基滴定(2価,1価)を作成済みである。本年度は,酸・塩基の混合滴定を試作した。塩基は水酸化ナトリウム,炭酸水素ナトリウム,炭酸ナトリウムのうち23種の混合水溶液であり,これを塩酸で滴定する。さらに,酸化・還元滴定(硫酸酸性)を試作した。酸化剤は過マンガン酸カリウム水溶液であり,還元剤はシュウ酸,シュウ酸ナトリウム,過酸化水素,硫酸鉄の水溶液から選択できる。両方とも,濃度・体積・目盛の変更,滴定の一時停止・再開や滴定曲線の記憶等ができる。質問箱の年間の閲覧総数は約27,000件であった。平成19年度は質問の受付をほとんど制限せず,約90件の質問に回答した。必要に応じて日常生活に例えて,平易な言葉を用いてできる限り速やかに質問者にe-メールで回答し,ホームページにも公開した。質問内容から考えて,質問者の約7割は高校生と大学生である。教員や指導主事等からの質問も増加傾向にあるが,まだまだ少ない。そこで,本年度の成果(質問箱の回答集と溶液の作り方等)を約500冊印刷・製本した。

さいたま市・埼玉県等の小学校高校教員や指導主事等を中心に約350冊を配布済みである。残りは大学説明会の参加者に配布する予定である。また,教育学部の多数の学生(教員の卵)にホームページを紹介し,教育実習や学校の授業における活用を勧めた。理科離れを少しでも未然に防ぐため,理科(化学)の実験や学習を支援するため,化学研究室のホームページを下記の様に充実させた。水溶液の作り方(濃度計算,調製方法,注意事項)について,前年度までに食塩水,塩酸,酢酸,硝酸,硫酸,アンモニア水,水酸化ナトリウム水溶液,二酸化炭素と石灰水,固体無水物の溶解度(9種類),シュウ酸水溶液,シュウ酸ナトリウム水溶液を作成済みである(ダウンロード可能).本年度は,過酸化水素水の作り方およびミョウバンとその関連物質の溶解度(8種類)の2つを試作した.化学実験のシミュレーションについて,前年度までに酸・塩基滴定(2価,1価),酸・塩基の混合滴定,酸化・還元滴定(硫酸酸性で過マンガン酸カリウムで滴定)を作成済みである.本年度は,酸化・還元滴定(ヨウ素滴定)を試作した.滴定液はチオ硫酸ナトリウム水溶液であり,被滴定液は過マンガン酸カリウム,さらし粉,次亜塩素酸ナトリウム,過酸化水素,硫酸銅の水溶液から選択できる.質問箱の年間の閲覧総数は約29,500件であった.今年度は追加の質問を含めて約70件の質問に回答した.必要に応じて日常生活に例えて,平易な言葉を用いてできる限り速やかに質問者にe-メールで回答し,ホームページにも公開した.質問内容から考えて,質問者の約6割は高校生と大学生である.教員や指導主事等からの質問も増加傾向にあるが,まだまだ少ない.そこで,本年度の成果(質問箱の回答集と溶液の作り方等)を約560冊印刷・製本した.さいたま市・埼玉県等の小学校高校教員や指導主事等を中心に約440冊を配布済みである.残りは大学説明会の参加者に配布する予定である.また,図書館の学術情報発信システムSUCRA-IRを通じてweb上でもpdf版の報告書を配布している.さらに,教育学部の多数の学生(教員の卵)にホームページを紹介し,教育実習や学校の授業における活用を勧めた.