hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
胚中心B細胞の成熟分化過程におけるCETPの発現とその意義について

Choresteryl ester transfer protein (CETP)は血漿中に存在し、主としてリポ蛋白の輸送に関連する分子である。これまで本分子に関する研究のほとんどがこの血漿中での働きを解析した研究であった。血漿中以外、脾臓やリンパ節に存在するとは知られていたがその子細や機能については殆ど不明である。我々は、正常ならびに悪性リンパ腫におけるCETPの発現を主として組織化学的手法ならびに分子生物学的方法にて検索した。in situ hybridization法による正常リンパ節および脾臓における局在は濾胞中心と一部周辺帯(marginal zone)に発現を示し、このCETP陽性細胞はCD3-,CD20+,CD19+,CD79+を示すB細胞であった。CETPに対するのウサギポリクロナール抗体を作成し(CETPアミノ酸配列433-443)免疫組織化学的に観察でも同様な局在性を確認できた。悪性リンパ腫141例についてCETP免疫組織化学的に検索したところ、検索した症例の66%に陽性を示しその内訳は、濾胞性リンパ腫では6/7例に陽性、MALTリンパ腫では7/12例で陽性、びまん型では52/67例に陽性を示した。mantleリンパ腫、Plasma細胞腫はいずれも陰性を示した。ホジキンリンパ腫では18/22例の陽性をしめし、いずれもB細胞由来であった。びまん性リンパ腫におけるCETP陽性細胞とCD10とBc16との関連性について検索したが有為差は見られなかった。びまん型リンパ腫例15例についてRT-PCRにてCETPmRNAを検索したところ、13例で完全な長さを持つCETPと若干短いバンドが確認されたが、2例で短い長さのみで構成されているバンドが確認された。この短いバンド2例ともCETP Exon9の欠落を示していた。Exon9の欠落はCETPの機能低下に影響することが分かっておりリンパ腫との関連性を考える上で興味有る所見であった。Cholesteryl ester transferprotein(CETP)は血漿中のリポ蛋白の輸送を修飾する分子であるが、これまで本分子に関する研究の殆どがこの血漿中の働きを解析した研究である。しかし血漿中以外、脾臓やリンパ節などに存在することが知られているがその子細については不明であった。我々は本分子の局在とその機能について検索した。CETPはノーザンブロット法による解析では正常ヒト扁桃、リンパ節、脾臓にmRNAの強い発現を認めた。in situ hybridization法による解析で主としてこれらのリンパ濾胞中心に存在し一部周辺(marginal zone)に存在していた。CETP陽性細胞はCD3-,CD20+、CD19+CD79a+を示すB細胞であることが確認された。CETPの免疫組織化学による検索のためにCETPアミノ酸配列433-443の部位に対するウサギポリクロナールを作成した。作成した抗体の特異性はCos-7細胞にCETPの全長とGFPとのキメラ蛋白導入させ、得た蛋白のウェスタンブロット法により特異性を確認した。この抗体を使用した免疫組織化学的解析により、正常のリンパ組織では、in situ hybridizationと同様な分布を確認した。悪性リンパ腫141例についてCETPの免疫組織学的検索では103例のB細胞性リンパ腫のうち68例(66%)が陽性を示した。濾胞性リンパ腫では6/7例に陽性、MALTリンパ腫では7/12例で陽性を示し、びまん性大細胞では52/67例で陽性を示した。

mantleリンパ腫、plasma細胞リンパ腫では陰性を示した。ホジキンリンパ腫では18/22例で陽性を示した。いずれのT細胞性リンパ腫では陰性を示した。CETP陽性びまん性B細胞リンパ腫の性格を知るためにCD10、Bc16との関連性を調べた。CETP陽性例では53%にBc16の陽性を示したが陰性例との有為差は見られなかった。CETP陽性例におけるCD10陽性は6.9%に陽性を示し、同様に有為差は見られなかった。以上、CETPは胚中心および胚中心後の正常B細胞とそのneoplastic couterpartsに発現した。Choresteryl ester transfer protein(CETP)は血漿中に存在し、主としてリポ蛋白の輸送に関連する分子である。これまで本分子に関する研究のほとんどがこの血漿中での働きを解析した研究であった。血漿中以外、脾臓やリンパ節に存在するとは知られていたがその子細や機能については殆ど不明である。我々は、正常ならびに悪性リンパ腫におけるCETPの発現を主として組織化学的手法ならびに分子生物学的方法にて検索した。in situ hybridization法による正常リンパ節および脾臓における局在は濾胞中心と一部周辺帯(marginal zone)に発現を示し、このCETP陽性細胞はCD3-,CD20+,CD19+,CD79+を示すB細胞であった。CETPに対するのウサギポリクロナール抗体を作成し(CETPアミノ酸配列433-443)免疫組織化学的に観察でも同様な局在性を確認できた。悪性リンパ腫103例についてCETP免疫組織化学的に検索したところ、検索した症例の66%に陽性を示しその内訳は、濾胞性リンパ腫では6/7例に陽性、MALTリンパ腫では7/12例で陽性、びまん型では52/67例に陽性を示した。mantleリンパ腫、Plasma細胞腫はいずれも陰性を示した。ホジキンリンパ腫では18/22例の陽性をしめし、いずれもB細胞由来であった。びまん性リンパ腫におけるCETP陽性細胞とCD10とBcl6との関連性について検索したが有為差は見られなかった。びまん型リンパ腫例15例についてRT-PCRにてCETPmRNAを検索したところ、13例で完全な長さを持つCETPと若干短いバンドが確認されたが、2例で短い長さのみで構成されているバンドが確認された。この短いバンド2例ともCETP Exon9の欠落を示していた。Exon9の欠落はCETPの機能低下に影響することが分かっておりリンパ腫との関連性を考える上で興味有る所見であった。
ストレンジネス原子核の理論的研究

研究計画に対応して主な実績を概説する:(1)少数系からp殻をふくむ軽いΛハイパー核の精密計算と,LS力やodd成分やσ_Λ・σ_N成分の役割が明らかにされた.これとの関連でNijmegenグループと協力して新しいOBE模型核力を提案した.重いハイパー核では有効質量や一粒子軌道分離とYN核力の関連性を明確にした.また,(e,e'K+),(γ,K+)反応の強度関数が計算されて中重核で有用であることが示された.(2)^7Liなど典型核でΛによる芯核の収縮の理論が最近のγ線データにより確証された(3)飛翔K^-実験により明らかになった^4_ΣHeの束縛状態について,Λ-Σチャネルを結合させた枠組みで詳細な理論的解析を行い,その状態の準位と幅を確定した.(4)strangeness-2のハイパー核については,hyperon混合が状態依存的であり,励起状態(s_Λp_Λ)で混合が大きくなること,またクオーク模型RGM-F相互作用ではΛΛ-ΞN-ΣΣ結合の効果は一般に強くなる傾向が明らかされた.(4)生成率については,直接反応に引き続き微視的輸送理論が適用されて,Ξ状態からシングルおよびツインやダブルハイパー核生成に至る詳細な結果を得た.また,生成反応の終状態相関からΛΛ相互作用を引き出す試みがなされた.(5)quark模型によるbaryon間相互作用理論を発展させて,HNおよびHH相互作用のquark模型による計算で斥力引力効果を調べ,H物質の可能性を調べた.(6)非中間子型弱崩壊については,Direct Quark過程による崩壊振幅の計算により,特にJ=0では△I=3/2遷移の重要な役割を明らかにし,中性子と陽子誘起崩壊比も改善の方向が得られることを示した.またカレント代数の方法を用いて,π+放出の崩壊過程が△I=3/2の非中間子崩壊と強く関連していることを指摘した.(7)他方においては,1π交換の次のオーダーの相関2πの交換として,2π/ρ及び2π/σ交換過程による弱崩壊相互作用を理論的に評価し,軽い核のΓ_<nm>を説明出来ること,Γ_n/Γ_pは0.3-0.4程度の改善を与えることから,これらの相互作用は重要であることを示した.同時に,中重ハイパー核寿命の実験データを約15%以内の違いで説明できることを示した.研究計画に対応して主な実績を概説する:(1)少数系からp殻をふくむ軽いΛハイパー核の精密計算と,LS力やodd成分やσ_Λ・σ_N成分の役割が明らかにされた.これとの関連でNijmegenグループと協力して新しいOBE模型核力を提案した.重いハイパー核では有効質量や一粒子軌道分離とYN核力の関連性を明確にした.また,(e,e'K+),(γ,K+)反応の強度関数が計算されて中重核で有用であることが示された.(2)^7Liなど典型核でΛによる芯核の収縮の理論が最近のγ線データにより確証された(3)飛翔K^-実験により明らかになった^4_ΣHeの束縛状態について,Λ-Σチャネルを結合させた枠組みで詳細な理論的解析を行い,その状態の準位と幅を確定した.(4)strangeness-2のハイパー核については,hyperon混合が状態依存的であり,励起状態(s_Λp_Λ)で混合が大きくなること,またクオーク模型RGM-F相互作用ではΛΛ-ΞN-ΣΣ結合の効果は一般に強くなる傾向が明らかされた.(4)生成率については,直接反応に引き続き微視的輸送理論が適用されて,Ξ状態からシングルおよびツインやダブルハイパー核生成に至る詳細な結果を得た.また,生成反応の終状態相関からΛΛ相互作用を引き出す試みがなされた.(5)quark模型によるbaryon間相互作用理論を発展させて,HNおよびHH相互作用のquark模型による計算で斥力引力効果を調べ,H物質の可能性を調べた.(6)非中間子型弱崩壊については,Direct Quark過程による崩壊振幅の計算により,特にJ=0では△I=3/2遷移の重要な役割を明らかにし,中性子と陽子誘起崩壊比も改善の方向が得られることを示した.またカレント代数の方法を用いて,π+放出の崩壊過程が△I=3/2の非中間子崩壊と強く関連していることを指摘した.(7)他方においては,1π交換の次のオーダーの相関2πの交換として,2π/ρ及び2π/σ交換過程による弱崩壊相互作用を理論的に評価し,軽い核のΓ_<nm>を説明出来ること,Γ_n/Γ_pは0.3-0.4程度の改善を与えることから,これらの相互作用は重要であることを示した.同時に,中重ハイパー核寿命の実験データを約15%以内の違いで説明できることを示した.(1)軽いΛハイパー核(A=6,7)に対して,従来のα+x+Λモデルをrefineした詳細な計算が実行されて信頼性を高めるとともに,Nハロ-やストレンジネス・ハロ-等の新しい興味ある様相の提起がなされた。(2)^4He(in-flight/stopped K^-,π^±)

反応の理論的解析が精力的に行われ,最近のBNL実験の解析と対応して,^4_ΣHeの束縛状態の存在を確証する上で大きく貢献した。また,ΣNN3体状態の構造解析が進展した。2.S=-2のハイパー核の生成と構造変化(1)(K^-,K^+)反応によるΞ核状態生成を経由する方法が提起され,具体的に^9Be核をターゲットとした場合についてダブルΛ核の生成率を評価し,一方で弱崩壊の様相を理論的に予測した。(2)(K^-,K^+)反応および静止Ξ^-吸収反応におけるS=-2系の生成と破砕の過程について,微視的なシミュレーション行い,2段階過程の重要性等を明らかにした。(3)静止Ξ^-が核が吸収されるとき,液体Heや中性子過剰核をターゲットにすれば非常に高い割合でダブルハイパー核ができることが示された。(1)Quark模型による研究では,SU(3)対称性の制限が強い長距離での中間子交換と,短距離でのquark交換の双方の効果による反対称LS力の現れ方について調べた。(2)S=-2系のbaryon間相互作用に関連して,Hの存在を仮定したH-N相互作用を研究し,Hが原子核に束縛される可能性が高いこと,またH-H相互作用の斥力引力要因を調べた。4.ストレンジネス原子核の崩壊過程と弱相互作用(1)非中間子型崩壊について,π交換に加えて2π/ρ交換および2π/σ交換を取り入れると,s殻ハイパー核の崩壊幅はほぼ説明できるが、比Γ_n/Γ_pはまだ不十分であること等が示された。(2)クォークの4体弱相互作用によるDirect Quark過程があり,Γ_n/Γ_p比の説明や,ΔI=3/2遷移の重要性が指摘された。主な成果や進展等の状況を簡潔にまとめる:(1)軽いΛハイパー核構造の精密な計算により,LS力やodd成分やσ_Λ・σ_Ν成分の役割が明らかにされ,p殻領域と比較検討可能となった.また一連の解析を通じて^4_ΣHeの束縛状態の存在を確証する上で大きな貢献をした.(2)^7Liおよび^9Beを標的とした(K^-,K^+)反応でできるΞ状態からダブルハイパー核生成に至る詳細な計算が行われ,特定のΛΛ核や励起状態の生成率が大きいなど,それぞれ注目すべき結果を得た.また準弾性のΞを経由するΛΛ核生成のシナリオが提出された.(3)中間子交換とquark交換によるYN,YY相互作用については,特にLS力の定量的役割あるいは反対称LS力の効き方とSU(3)の破れの効果等が明らかにされた.中間子交換模型による新しい試みとそれらの異同についても検討が進んでいる.またHNおよびHH相互作用のquark模型による計算で斥力引力効果を調べた.(4)非中間子型弱崩壊については,4体quark弱相互作用に基づく直接過程のΔI=3/2遷移の重要な役割が指摘され,また1π,2π交換の役割と効果についても解析が進んだ.ΛΛ核のπ中間子型崩壊の一連の予測がなされた.(5)シミュレーション計算の手法を静止K^-吸収や静止Ξ^-吸収あるいは(K^-,K^+)反応に適用して,hyperfragments生成に関与するクラスター相関や各種2段階過程の分析が進んだ.(6)K^-やΞ^-原子過程の詳細な解析がなされた.研究計画に対応して主な実績を概説する:(1)少数系からp殻をふくむ軽いΛハイパー核の精密計算と,LS力やodd成分やσ_Λ・σ_N成分の役割が明らかにされた.これとの関連でNijmegenグループと協力して新しいOBE模型核力を提案した.重いハイパー核では有効質量や一粒子軌道分離とYN核力の関連性を明確にした.また,
分散型大規模動力学計算により環境変化予測機能を持つ混雑環境下行動ヒューマノイド

まずは,特別研究員の研究計画調書のテーマに沿った博士学位論文の題目として,「物理・論理統合計算環境で認識し行動獲得するヒューマノイドシミュレータの構成法」を設定した.次に,この博士学位論文において解決対象とする行動実験例として,これまでのヒューマノイドロボットの行動実験において未だに実現できていないが,問題の解決ができれば研究の波及効果が高い行動実験例として,「シミュレータ内で,複数のヒューマノイドロボットが人間の生活空間内における剛体・柔軟物(布など)・流体(飲み物など)に対して物理的な相互作用を考慮してうえで,協調行動を行うことによって人間の生活空間における片付け行動といった支援行動を行う行動実験」を設定した.そして,上記で上げた行動実験を解くために,外部ライブラリのインポート機能やループ制御機能,インタプリタ方式といった拡張性が著しい統合基盤上に,以下のような8つの革新的な主要機能を持つ物理・論理統合計算環境としてのヒューマノイドシミュレータFEATHERを独自に構築した.(1)人間の日常生活環境中の剛体・関節・布・柔軟物の計算(2)記号を扱えて高次計画機能を持つシミュレータ(3)ヒューマノイドロボットの経路移動・全身動作プランナを持つシミュレータ(4)ロボットの試行動作によって学習するシミュレータ(5)複数のロボットの並行物理シミュレーションと分散フレームワーク(6)シミュレーションの中断・再開(7)複数のヒューマノイドロボットの協調行動実験(8)Pythonによる対話型プログラミングによる軽量開発プロセスによるロボットコントローラ・シミュレータシステムの開発その結果として,柔軟物操作や複数のヒューマノイドロボットの協調行動を扱う日常生活支援行動生成を行う統合行動実験の評価によって,構築したシステムの有効性を示した.(1)高性能・並行実行可能な対話型マルチヒューマノイドロボットシミュレータ将来的に複数のヒューマノイドロボットによる協調行動やプランニングを実現する人工知能開発のためには、複数のヒューマノイドロボットの同時シミュレーションや並行シミュレーションが可能な新しいロボットシミュレータが要求される。そこで、高性能・並行実行可能な物理演算ライブラリであるPhvsXを用いて、マルチヒューマノイドロボットのシミュレーションと並行シミュレーヨンに対応し、さらにロボットシミュレータを効率的に制御するために動的に制御可能な対話型ロボットシミュレータを構築した。(2)ロボットの動作の動力学効果を実現するインタプリタ方式に某つくロボットシミュレータ従来型のロボットシミュレータは、運動学シミュレータと動力学シミュレータの2種類に分類できた。しかし、前者はロボットと環境の相互作用がなく、一方で後者は環境中の全ての物体と相互作用し合うため、そのロボットコントローラの作成が困難だという問題があった。そこで本研究では、インタプリタにより運動学モードと動力学モードを動的に切り替えられる対話型ロボットシミュレータによって、ロボットの動作結果に応じた環境変化のシミュレーションを実現した。まずは,特別研究員の研究計画調書のテーマに沿った博士学位論文の題目として,「物理・論理統合計算環境で認識し行動獲得するヒューマノイドシミュレータの構成法」を設定した.次に,この博士学位論文において解決対象とする行動実験例として,これまでのヒューマノイドロボットの行動実験において未だに実現できていないが,問題の解決ができれば研究の波及効果が高い行動実験例として,「シミュレータ内で,複数のヒューマノイドロボットが人間の生活空間内における剛体・柔軟物(布など)・流体(飲み物など)に対して物理的な相互作用を考慮してうえで,協調行動を行うことによって人間の生活空間における片付け行動といった支援行動を行う行動実験」を設定した.そして,上記で上げた行動実験を解くために,外部ライブラリのインポート機能やループ制御機能,インタプリタ方式といった拡張性が著しい統合基盤上に,以下のような8つの革新的な主要機能を持つ物理・論理統合計算環境としてのヒューマノイドシミュレータFEATHERを独自に構築した.(1)人間の日常生活環境中の剛体・関節・布・柔軟物の計算(2)記号を扱えて高次計画機能を持つシミュレータ(3)ヒューマノイドロボットの経路移動・全身動作プランナを持つシミュレータ(4)ロボットの試行動作によって学習するシミュレータ(5)複数のロボットの並行物理シミュレーションと分散フレームワーク(6)シミュレーションの中断・再開(7)複数のヒューマノイドロボットの協調行動実験(8)Pythonによる対話型プログラミングによる軽量開発プロセスによるロボットコントローラ・シミュレータシステムの開発その結果として,柔軟物操作や複数のヒューマノイドロボットの協調行動を扱う日常生活支援行動生成を行う統合行動実験の評価によって,構築したシステムの有効性を示した.
活性酸素種による翻訳後修飾を検出する蛍光バイオセンサー

酸化活性種による翻訳後修飾過程を可視化する蛍光バイオセンサーとして、特に、タンパク質チオール基の翻訳後修飾に関与している主たる酸化活性種であるNOに注目して蛍光NOバイオセンサー(NOセンサー)を構築した。NOにより翻訳後修飾を受けることが知られているTRPC5(Nat. Chem. Biol., 2006)の構造変化メカニズムに着目し、NOにより構造変化を誘起される部分構造をNO反応モジュールとして採用し、申請者らがこれまでに培ったバイオセンサー構築戦略(Bioorg. Med. Chem. 2009など)を応用したNOセンサーを設計し、評価をおこなった。分割型GFPを用いたNOセンサーでは、試験管内においてNOの存在により、有意な蛍光変化を観測することができた。しかしながら、そのS/N比は充分なものではなく、細胞内においてNOを検出するためには、より大きなダイナミックレンジでNOを検出することができるNOセンサーであることが望まれる。それと同時に、例えば過酸化水素など他の酸化活性種との選択性も重要になってくる。そこで、現在有用な結果が得られている分割型NOセンサーを、より大きなダイナミックレンジでNOを検出できるよう分割型GFPに導入するリンカーを含んだNO反応モジュールの最適化をおこなった。さらに、他の酸化活性種との選択性も評価し、高選択的にNOを検出可能なNOセンサー構造を最適化した。試験管内にて最適化をおこなったうえで、細胞内での機能評価をおこなった結果、395 nmと466 nmでの励起による蛍光強度比の変化が向上したNOセンサーを得た。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
圏論的モデル理論の新展開：分類トポスの手法、およびモデル理論の代数幾何化

2017年度の主なテーマであった「Boolean pretoposがなす2-圏の構造」の研究からテーマを変更し、2018年度は「モデル理論的ガロア理論の圏論的解釈」について研究した。モデル理論におけるガロア理論的現象を調べるには、“Lascar群"と呼ばれるコンパクト位相群が重要な役割を果たす。特に、Lascar群の閉部分群と有界超仮想元の集合とのガロア対応が知られている。一方で、任意のコンパクト位相群はLascar群として表現できる。そこで、副有限群に対するガロア圏の理論の一般化として、Lascar群を圏論的に構成することを試みた。ガロア圏的な構造から位相群を構成する様々な方法を比較・検討した結果、一般のコンパクト位相群を構成するような先行研究はなく、また既存の手法を拡張することも容易ではないことが判明した。その一方で、“トポスの基本群"の構成とNoohi-Bhatt-Scholzeによる“pro-etale基本群"の構成とが類似していることに気がついた。トポスの基本群は、位相群ではなくlocalic groupとして構成される代わりに、トポスの広いクラスに対して構成が可能である。pro-etale基本群は、圏に強い条件を課す代わりに、副有限群より少し広いクラスの位相群を構成できる。これらの両者の強みを活かすことで、より一般の位相群を“圏の基本群"として構成することを試みているのが現状である。今後、分類トポスとの関連性を調べることにより、当初の目的である「スキームのガロア理論の一般化」といった問題に対しても有益な知見が得られると期待している。圏論的な部分で技術的な困難が多く、具体的な成果には未だ結実していないため。上述のトポスの基本群の研究と並行して、(Lascar群の商として得られる)副有限群に対応するガロア圏をモデル理論的に構成することを試み、限定的な形でも何らかの成果が得られるよう尽力したい。主として、Boolean pretoposが成す2-圏BPretop*の構造(特に重み付き余極限)について調べた。これを調べることは、「理論のモデル理論的構成と分類(プレ)トポスの圏論的構成の対応を用いてモデル理論的現象を考察する」という本研究の大目標の1つを実現するための基盤となる。当初は、2-モナドの理論を援用することでBPretop*における重み付き余極限の構成を試みたが、既存の方法では抽象的な構成しか与えられておらず明示的構成を得られなかった。そこでアプローチを変更し、修士論文で得られた「理論の双圏ThがBPretop*と双圏同値」という成果を用いることで、syntacticな方法で重み付き余極限の明示的構成を与えた。次に、BPretop*における具体的な重み付き余極限、特に(錐形)フィルター余極限および2-余核についての考察を試みた。ここで、フィルター余極限および2-余核は、それぞれモデル理論におけるタイプや基本図式、および定義可能性定理と関係するため、本研究において重要な具体例である。残念ながら、当初の目標としていた「タイプや基本図式に対応するフィルター余極限の特徴づけ」や「2-余核のsyntacticな構成を用いた理論の拡大の特徴づけ」を完成するには至らなかった。しかし、分類トポスの専門家であるOlivia Caramello氏(イタリア・インスブリア大学)との議論を経て、本問題の解決の障害となっている純圏論的問題が明らかになった。今後も引き続き、この問題に取り組む。なお、上述の修士論文で得られた成果については、国際学会TACL2017(2017年6月開催)にて発表済みである。当初は既存の2-圏論的/トポス理論的研究を利用することで、モデル理論的問題にアプローチできると予想していた。しかし、本研究から生じた多くの圏論的問題に対しては、先行研究を直接適用することができないことが判明してしまった。これらの問題を解決しようと試みたが、具体的な結果が得られなかったのが当該区分にした理由である。

今後、分類トポスとの関連性を調べることにより、当初の目的である「スキームのガロア理論の一般化」といった問題に対しても有益な知見が得られると期待している。圏論的な部分で技術的な困難が多く、具体的な成果には未だ結実していないため。2017年度の研究を通して、Grothendieck toposやBoolean pretoposが成す2-圏の構造について純圏論的な研究を行う必要性が生じた。Grothendieck toposが成す2-圏の構造については、本研究で調べているモデル理論的な側面だけではなく、幾何的側面とも関わりが深い。そこで今後は、幾何的な具体例での観察を通して、どの程度の条件をつければ目的の定理を示せるか吟味し、実際に純圏論的な証明を与えるための指針を得る。上記の方針には多くの技術的困難が伴うことが予想される。そこで並行して、Caramello氏と共同で「位相亜群を用いた分類トポスの表現」について研究を行う。この領域はCaramello氏による数多くの先行研究が存在し、幾何的な応用も期待できる。また、共同研究で得た幾何的知見を先述の問題に還元できると期待している。上述のトポスの基本群の研究と並行して、(Lascar群の商として得られる)副有限群に対応するガロア圏をモデル理論的に構成することを試み、限定的な形でも何らかの成果が得られるよう尽力したい。
虹彩色の人種間の違いが色の見えに及ぼす影響について

虹彩色の異なる2群間における色の見えの差異を明らかにするために、虹彩色が青-緑系の自人女性と茶系の黄色人女性を対象に、100 hue testを用いて照度500lxと30lxの2条件下で色彩弁別能力を測定し比較した。その結果、次のような結果が得られた。総偏差点を比較すると、30lxでは両群間に差は認められなかったが、500lxでは両群間に差が認められ、茶系群の色彩弁別能力が高かった。500lxは、茶系群にとっては弁別しやすい照度であったと推察された。青-緑系群は、照度500lxで緑(G)青紫(PB)領域にかけて、茶系群より弁別しにくく、明所では青(B)領域の比視感度が下がる現象がみられた。両群ともに、赤(R)を中心とした領域は30lxの弁別能力が低く、照度間に有意差がみられた。茶系群は、青(B)領域で照度間に有意差がみられ、30lxの弁別能力が低かった。虹彩色の異なる2群間で、異なる見えの現象が認められたことから今後、様々な虹彩色の違いにも着目したユニバーサルデザインの必要性が示唆された。さらに、サングラスの使用頻度別に色彩弁別能力をみると、茶系群では、500lx、30lxの両条件下でサングラスを使用していない群の総偏差点は、時々あるいは頻繁に使用する群よりわずかに高かった。青-緑系群では、500lxで使用していない群の総偏差点と時々あるいは頻繁に使用する群の総偏差点との間に有意差が認められ、使用していない群の総偏差点は高く色彩弁別能力が劣っていた。虹彩色が青-緑系でサングラスを使用しない群は、紫外線の影響を受けているのではないかと推察された。IT社会の発展に伴い、Webサイトのアクセシビリティは大変重要になってきている。Webサイトだけでなくさまざまなデザイン分野の規格においてもアクセシビリティの視点から視覚特性に配慮する必要がある。そこで、本研究は目の虹彩の色の違いに着目した。人種により、肌や髪の色が異なるように目の色も、黒、青、緑、茶など様々である。この目の色の違いは、目に入る光の量を調節する「虹彩」部分の色が異なるためである。虹彩は、眼球の角膜と水晶体の間にあり、その色はメラニン色素の量で決まる。メラニン色素が多ければ黒く見え、少なければ、青っぽく見える。皮膚や目に存在するメラニン色素は、紫外線から肌や目を守る役目をしている。メラニン色素の少ない人種は、多い人種よりも光を眩しく感じるため、日常的にサングラスを着用したり、直接照明ではなく間接照明を好むといわれている。このメラニン色素の量の違いは、色の見え方に何らかの影響を及ぼしているのではないかと考えられる。そこで、本研究では、100hueテストを用いて虹彩の色の違いが色の見え方に及ぼす影響を検討した。平成17年度は、長崎県と高知県において虹彩色が青、緑系の白人女性23名、・虹彩色がライトブラウン系の女性7名、虹彩色が茶系の黄色人(日本人)女性30名を対象に視力検査ならびに100hueテスト(約500Luxと約30Luxの照度2条件)を実施した。

これらの調査結果を統計的に処理し、それぞれの照度ごとに虹彩の色の違いによって、100hueテストの総偏差点に有意差が認められるか、ならびにそれぞれの虹彩の色ごとに、照度2条件の違いによって、100hueテストの総偏差点に有意差が認められるか分析を行っている。また、総偏差点だけでなく100色別に有意差が認められるか分析を行っている。平成18年度の研究では、平成17年度実施した調査結果を詳細に分析し、問題点等を明らかにし、それらを基に新たな調査計画が必要であると考えている。虹彩色の異なる2群間における色の見えの差異を明らかにするために虹彩色が青-緑系の女性と茶系の女性を対象に100 hue testを用いて照度5001xと301xの2条件下で色彩弁別能力を測定し比較した。その結果、次のことが明らかとなった。(1)総偏差点では、照度5001xと301xでの結果を比較すると、両群ともに5001xの場合の総偏差点が低かった。その差は茶系の場合の方がやや大きい傾向にあった。また、301xでは両群間に差は認められなかったが、5001xでは両群問に差が認められ茶系群の色彩弁別能力が高かったことから、5001xは、茶系群にとっては弁別しやすい照度であったと推察された。(2)照度5001xと301xにおいて、虹彩色の異なる2群間で100色相別にどのような違いがみられるか分析した結果、照度5001xの方が照度301xより、両群における識別能力の差がみられた。特に、照度5001xでは、青-緑系群は、緑(G)青紫(PB)領域にかけて、茶系群より弁別しにくいことが認められた。(3)両群において異なる照度間でどのような違いがみられるか比較した結果、青-緑系群では、赤(R)、黄赤(YR)、黄(Y)領域で、5001xと301xでの偏差点に有意差がみられ301xでの色弁別能力が低かった。茶系群では、赤紫(RP)、赤(R)、黄赤(YR)に加え、青(B)、青紫(PB)領域に有意差が認められ301xでの色弁別能力が低かった。赤(R)を中心とした領域は両群ともに、301xの弁別能力が低いことからプルキンエ現象によることが推察された。青(B)領域は、茶系群のみ301xと5001xとの間に有意差がみられた。青-緑系群では、有意差は認められず、5001xで、緑(G)青紫(PB)領域にかけて弁別しにくかったことから、明所では青(B)領域の比視感度が下がる現象がみられたと推察した。虹彩の色の多型性に着目し、虹彩色が茶系と青-緑系の異なる2群を対象に、日常生活での紫外線に対する意識や対策の実態を調査した。さらに100hueテストを用いて色彩弁別能力を測定し、サングラスの使用頻度別に色の見えに違いがあるか検討した。その結果、茶系群の方が青-緑系群より日頃紫外線を気にしており、その対策として、茶系群は日傘や帽子を使用し、青-緑系群はサングラスや帽子を使用していた。それらの使用目的については、茶系群は目の保護よりも日焼け防止のためが多かった。青-緑系群は、目の保護を意識して行っていた。これは、虹彩色の違いより、文化や環境、習慣による違いと思われる。サングラスの使用頻度別に色彩弁別能力をみると、茶系群では、5001x、301xともに使用していない群の総偏差点が高かったが、有意差は認められなかった。100色相別の分析結果も同様であった。青-緑系群の場合、5001x、301xでサングラスを使用していない群の総偏差点が最も高く、色彩弁別能力が劣っていた。100色相別に分析した結果、サングラスを使用しない群は、黄緑(GY)から青緑(BG)領域と紫(P)から赤紫(RP)領域で、平均偏差点が高く色彩弁別能力が劣っていた。これは、先行研究の高齢者の色彩弁別能力と類似していた。このことから、サングラスを使用しない群は、目に紫外線の影響を受けているのではないかと推察される。また、毎日使用している群は、サングラスを使用しない群の次に総偏差点が高く、頻繁に使用している群や時々使用している群より総偏差点が高かった。
イネにおけるファイトアレキシン生合成遺伝子クラスターの発現制御機構の解明

植物は、病原菌感染を特異的な機構で認識し、抗菌性二次代謝産物であるファイトアレキシンの生産を含む様々な防御応答を示して生存を図っている。申請者は、イネの主要ファイトアレキシンの一つであるモミラクトン類の生合成に関与するジテルペン環化酵素遺伝子2種が4番染色体上で近接して存在し、さらにその周辺にP450酵素遺伝子2種(CYP99A2&CYP99A3)、デヒドロゲナーゼ遺伝子が存在すること、そしてこれらの5種の遺伝子がイネ培養細胞においてはキチンオリゴ糖エリシター処理により同調的に発現することを発見した。そこで、本研廃では、これら5つの遺伝子がモミラクトン生合成遺伝子クラスターを形成している可能性について追究するとともに、当該遺伝子クラスターの同調的発現制御機構を解明することを目的として研究を行った。その結果、CYP99A2/CYP99A3二重発現抑制株ではエリシター処理下でモミラクトン類の生産が特異的に抑制され、デヒドロゲナーゼ遺伝子はモミラクトンA合成酵素をコードしていることが示された。こうして、モミラクトン生合成遺伝子クラスターの存在が明らかになった。また、当該クラスターの同調的発現制御に関与するマスター転写因子であるOsTGAP1の同定にも成功した。OsTGAP1過剰発現株においては、エリシター処理により、モミラクトン類だけでなくファイトカサン類の生産も顕著に促進されることが示された。高等植物において単一物質の生合成酵素遺伝子がクラスターを形成している例はいくつか知られているが、いずれも構成的に発現しているものであり、誘導的に発現される遺伝子クラスターはモミラクトン生合成遺伝子クラスターが初めての例と思われる。イネの主要なジテルペン型ファイトアレキシンであるモミラクトンの生合成に関与するジテルペン環化酵素遺伝子OsKS4のプロモーター解析を行い、そのエリシター誘導の発現にbZIP型転写因子が関与している可能性を示した。そこで、OsKS4の発現の制御に関与するbZIP型転写因子を同定する目的で、キチンエリシター処理したイネ培養細胞を用いたマイクロアレイ解析及び定量的RT-PCRを行った。その結果、2種のbZIP遺伝子(OsTGA1、OsbZIP21)がキチンエリシター応答性を有していることが確認された。また、これら2種のbZIP遺伝子のTos17挿入変異株の内、Ostga1挿入変異株においてOsKS4のエリシター応答性、モミラクトン類の生産の顕著な低下が認められた。さらに、この変異体を用いてマイクロアレイ解析を行った結果、OsKS4を含むテルペノイド生合成に関与する遺伝子の多くがその発現を減少させていた。また、GST融合タンパク質として大腸菌で発現させたOsTGA1を用い、ゲルシフトアッセイを行ったところ、OsKS4上流域に存在するエリシター応答性転写制御領域への結合が認められた。さらに、OsTGA1が転写活性化能を有することも示された。以上の結果は、OsTGA1がOsKS4の発現を直接制御する転写因子として機能していることを強く示唆している。イネ培養細胞においては、キチンエリシター処理によりファイトアレキシン(モミラクトン類やファイトカサン類を主成分とする)の生産が誘導される。本研究は、イネの4番染色体に存在するモミラクトン類の生合成遺伝子クラスターの同調的発現制御機構の解明と、2番染色体におけるファイトカサン生合成遺伝子クラスターの存在の証明を目的とするものである。昨年度は、4番染色体上のクラスターに存在するOsKSL4の発現を制御する転写因子OsTGA1を同定したが、そのknockout体においてはOsKSL4だけでなくクラスター上の他の4種の遺伝子の発現も抑制されていた。

本年度は、OsTGA1過剰発現体培養細胞を作製し、エリシター処理後のモミラクトンレベル、およびクラスターを構成する遺伝子の転写レベルを定量したところ、野生型に比べていずれも顕著に増加していることが示された。こうして、OsTGA1がクラスター上の5種の遺伝子の同調的発現に深く関与していることが示された。一方、2番染色体には、ファイトカサン類の生合成に関与するジテルペン環化酵素遺伝子2種の近傍に6種のP450遺伝子が存在している。そこで、これらのP450の機能解析を行うこととした。まず、相互に相同性が高いCYP71Z6/7の2種のP450についてRNAi法によるdouble knockdown体培養細胞の作製を試みたところ、CYP71Z6についてはもともと発現量が低いため発現抑制の効果は評価できなかったものの、CYP71Z7の発現抑制は確認できた。そこで、得られた形質転換体培養細胞について、ファイトカサン生産能を調べたところ、ファイトカサンA,B,Dなど2位に酸素官能基が導入されたファイトカサン類の生産が顕著に抑制されていることがわかった。こうして、CYP76Z7がファイトカサン類の2位水酸化酵素をコードしていることが強く示唆された。
唐宋変革期における中間層と人間関係の研究

(1)「中間層」に関する先行研究の収集・整理を行なった。その中心は無論唐宋変革期に関するものであるが、清末民国期の研究にも重要な研究があるので、それも整理した。(2)『清明集』を中心とする史料の分析を行なった。特にこの数年来続けてきた『清明集』懲悪門の訳注作成の作業を完結させることができた。その結果、南宋期に活動していた中間層のうち、いわゆる豪民層の実態がかなり詳細に把握できた。それは、従来地主層と規定された階層であるが、地主という属性でのみ把握することは全く不十分である。今後概念規定を再検討せねばならない。前項の「中間層」が社会の中核となって存在し、また国家機構の末端に地位を占めた結果、社会における人間関係の基本的特性もこれを中心に構成されてきた。「金と権力がすべて」という現代中国の民衆の指向は実にこの延長線上に存在することが推測できる。
イスラーム期の西アジアにおける墓地と都市

西アジアの都市史研究において、墓地の研究はこれまで光が当てられることが少なく、研究上の弱点となってきた。しかし、都市の全体像を把握し、その構造や機能について考察する際に、墓地の研究は不可欠であろう。そのため、本申請は西アジアにおける墓地の存在を歴史的かつ多角的に検討し、都市の空間構造や社会的機能について、墓地から考察を加えるものである。その際にエジプトを主たる舞台に設定し、7世紀のアラブ・イスラーム勢力の到来以降の時代を研究対象とする。そして、単に古代から西アジア都市の系譜を辿るのではなく、イスラーム期から現代に至る都市の構造的変容や、現代に連なる都市の諸問題についても考察を加えたい。
プラナリアの再生を制御するセロトニン受容体系の分子生物学的解析

1、プラナリアG蛋白質の解析:三量体G蛋白質αサブユニットに加えプラナリアの低分子量G蛋白質ADP-ribosylation factor(ARF)を見出し、そのcDNAをクローニングした。このプラナリアが多量に発現するARFはN末に特徴的な配列を持つARFであることが示された(Biochim.Biophys.Acta1309:205-210、1996)。2、プラナリア新生細胞におけるセロトニン受容体PLAR4の発現:(1)プラナリアの膜画分のセロトニン受容体活性を特異的に阻害するアンタゴニストが、プラナリア頭部の再生を著しく抑制し、特に中枢神経系の頭部神経節の再構築を阻害することが、組織学的解析から明らかになった(Neuroreport8:173-178,1996)。(2)当初計画したサイズごとに分別したプラナリアの各細胞におけるセロトニン受容体ファミリーPLAR4の発現の解析は、解離細胞の維持・分別が非常に難しいため、まず個体レベルでPLAR4発現の詳しい解析を行い、再生との関係を考察した。再生過程を追ったNorthem blot解析により、PLAR4 mRNAの発現は再生開始後増加してゆくこと(6d,約300%)が判明し、再生時にこの受容体を持つ細胞が活性化されていることが示唆された(Gene in press、1997)。また、感度の高いRT-PCR法を用いて再生開始直後から2時間の間にPLAR4 mRNAの一過性の減少が観察された。これは他の多くの受容体で知られているリガンド刺激後の受容体の発現低下に相当すると考えられ、PLAR4のリガンドと想像されるセロトニンを正常なプラナリアの飼育水に添加し、PLAR4の発現を調べた。その結果、発現低下がセロトニン添加のみにより起こったことから、再生過程でPLAR4がセロトニンを伝達物質として受容している可能性が強いと考えられる。以上の解析から、プラナリア再生の初期過程でセロトニン受容体が重要な機能を果しており、PLAR4がその分子に相当する可能性が高いことが示唆された。
視床下部の神経伝達物質応答解析に基づく大豆イソフラボンの食欲抑制効果の機構解明

先に我々は大豆イソフラボン・ダイゼインを雌ラットに与えると飼料摂取量が低下することを見出した。卵巣摘出術はダイゼインによる飼料摂取量低下に影響を与えなかったが、オスでは低下は見られなかった。この作用機構を求め、視床下部食欲関連神経伝達物質の遺伝子発現および血中食欲関連シグナルのプロファイルを調べた。卵巣摘出メスラットにおいてダイゼイン摂取7および14日目に視床下部遺伝子発現を広範にプロファイリングしたがこれらにダイゼインの効果を説明しうる変化は見られなかった。この実験ではデータにバラツキが多く、飼料摂取量の低下を説明する現象は捉えられなかった。自由摂取で飼料摂取タイミングがまちまちな飼育形態では正確なデータを捉えることができないためと推測した。そこで1日2回一定の短時間飼料を自由摂取させる2食制の飼育形態で飼料摂取タイミングを揃え、データを取得することを試みた。2食制では10日間の馴化の後にも自由摂取時の80%程度の飼料摂取量にとどまり、この際ダイゼインの摂取は飼料摂取量に影響を与えなかった。自由摂取では視床下部の食欲関連遺伝子発現に差は見られなかったが、2食制では摂食時間終了直後の食欲抑制物質のCARTが有意に増加した他、食欲促進物質のNPY、AGRPでも有意な増加が観察された。2食制ではダイゼインの効果が見られておらず、パラメータの変動の意義が明確でないため、3食制により飼料摂取量を自由摂取に近づけることを試みた。3食制では5日間の馴化で自由摂取と同等の飼料摂取量を十分確保でき、この際ダイゼイン摂取は自由摂取時と同様に飼料摂取量を低下させた。摂食時間終了直後の視床下部食欲関連遺伝子発現のバラツキは小さくなったもののダイゼインによる効果は認められなかった。今後さらに詳細なパラメータについてダイゼイン摂取直後からの詳細な経時変化を調べる必要がある。先に我々は大豆イソフラボンを高含量で含む発酵大豆抽出物がメスラット特異的な飼料摂取量低下をもたらすことを見出した。本研究はこの作用物質と機構を解明することを目的とし、本年度は以下の成果を得た。7週齢のSD系オス、メスおよび卵巣摘出メスラットに主要な大豆イソフラボンであるダイゼインおよびゲニステインを添加した飼料を与え4週間飼育したところ、ダイゼインのみがメスおよび卵巣摘出メスラットの飼料摂取量を低下させた。この効果はオスには見られなかった。これによりメスラット特異的な食欲抑制効果をもたらしているのはダイゼインであることが明らかになった。また同様のラットにエストラジオールを連続的に皮下投与したところ、飼料摂取量はオスと卵巣摘出メスでのみ顕著に低下した。効果発現の性差がエストロゲンと異なったことから、ダイゼインの食欲抑制効果は単純なエストロゲン様作用によりもたらされている訳ではないと推測した。卵巣摘出メスラットにおいてダイゼイン摂取7および14日目に視床下部の食欲関連神経伝達物質の遺伝子発現を食欲抑制に関連したCRF、CART、GLP1等、促進に関連したNPY、ガラニン、オレキシン等、広範にプロファイリングした。同様な実験を2回繰り返したがこれらの遺伝子発現にダイゼインの食欲抑制効果を説明しうる変化は見られなかった。今後さらに実験系を修正し、データを蓄積する必要がある。食欲抑制シグナルである血清レプチン濃度はダイゼイン摂取によりむしろ低下しており、血清インスリン濃度に変化は見られなかった。これらの血中情報が直接的にダイゼインの食欲抑制に関わっている可能性は低いが、血清レプチン濃度の低下はレプチン産生部位である脂肪組織量が変動する以前のダイゼイン摂取早期から見られており、機構に何らかの関係があると見て、CCK等さらに広範な血中情報も含め引き続き検討する。本研究はこの作用物質と機構を解明することを目的とし、昨年度はメスラット特異的な食欲抑制効果をもたらしているのはダイゼインであることを明らかにした。消化系や脂肪組織等から送られる液性および神経シグナルが視床下部での食欲関連神経伝達物質の発現を刺激し、食欲を制御する機構が注目され、近年盛んに研究されている。これに基づき作用機構を解明すべく、卵巣摘出メスラットにおいて、昨年度はダイゼイン摂取7および14日目について、本年度はさらに1および3日目について、視床下部の食欲関連神経伝達物質の遺伝子発現を広範にプロファイリングしたが、データにばらつきが大きく、これらの遺伝子発現にダイゼインの食欲抑制効果を説明しうる変化は見られなかった。この原因のひとつはサンプリング時の摂食状況にあると推測された。ここまでの検討は自由摂取下で行ってきたが、自由摂取ではラットの食餌タイミングがばらついており、サンプリング時摂食最中であったラットとそうでないもののデータ間に大きな差が生じる可能性がある。そこで本年度は1日の所定時刻に所定の短時間だけ自由摂取させる食餌様式による検討を試みた。この様式で1日2回摂食させる2食制では自由摂取と同等の摂取量を確保することができず、この条件化ではダイゼインの食欲抑制効果は発現しなかった。3食制では適応に1週間ほど要するものの自由摂取と同等の摂取量が確保でき、ダイゼインの摂取による有意な飼料摂取量の低下が見られた。3食制においても、ダイゼイン摂取14日目の視床下部の食欲関連神経伝達物質の遺伝子発現に有意な差は認められなかった。

引き続き、3食制で多数の時点における検討を行う予定である。先に我々は大豆イソフラボン・ダイゼインを雌ラットに与えると飼料摂取量が低下することを見出した。卵巣摘出術はダイゼインによる飼料摂取量低下に影響を与えなかったが、オスでは低下は見られなかった。この作用機構を求め、視床下部食欲関連神経伝達物質の遺伝子発現および血中食欲関連シグナルのプロファイルを調べた。卵巣摘出メスラットにおいてダイゼイン摂取7および14日目に視床下部遺伝子発現を広範にプロファイリングしたがこれらにダイゼインの効果を説明しうる変化は見られなかった。この実験ではデータにバラツキが多く、飼料摂取量の低下を説明する現象は捉えられなかった。自由摂取で飼料摂取タイミングがまちまちな飼育形態では正確なデータを捉えることができないためと推測した。そこで1日2回一定の短時間飼料を自由摂取させる2食制の飼育形態で飼料摂取タイミングを揃え、データを取得することを試みた。2食制では10日間の馴化の後にも自由摂取時の80%程度の飼料摂取量にとどまり、この際ダイゼインの摂取は飼料摂取量に影響を与えなかった。自由摂取では視床下部の食欲関連遺伝子発現に差は見られなかったが、2食制では摂食時間終了直後の食欲抑制物質のCARTが有意に増加した他、食欲促進物質のNPY、AGRPでも有意な増加が観察された。2食制ではダイゼインの効果が見られておらず、パラメータの変動の意義が明確でないため、3食制により飼料摂取量を自由摂取に近づけることを試みた。3食制では5日間の馴化で自由摂取と同等の飼料摂取量を十分確保でき、この際ダイゼイン摂取は自由摂取時と同様に飼料摂取量を低下させた。摂食時間終了直後の視床下部食欲関連遺伝子発現のバラツキは小さくなったもののダイゼインによる効果は認められなかった。今後さらに詳細なパラメータについてダイゼイン摂取直後からの詳細な経時変化を調べる必要がある。
粘膜免疫誘導ワクチンとしてのアデノウイルスベクターの開発とメカニズム解明

粘膜面を初発感染部位とする新興・再興感染症に対する効果的なワクチンとしては、全身及び粘膜の双方において強い免疫応答を誘導可能であることが望まれている。アデノウイルスベクター(Adv)を筋肉内へ投与すると、全身だけでなく粘膜面においても搭載抗原特異的なCD8+ T細胞を強く誘導可能である。本研究では、Advのワクチン効果発現メカニズムについて検討し、I型インターフェロン(Type I IFN)によって誘導されるIL-17産生性ヘルパーT細胞(Th17)が重要であることを明らかにした。アデノウイルスベクター(Adv)ワクチンの効果向上を目指し、Adv投与後の獲得免疫応答誘導メカニズムについて、I型インターフェロン(Type I IFN)受容体ノックアウト(IFNAR2 KO)マウスを用い、種々の検討を行った。投与部位の所属リンパ節における抗原特異的な細胞傷害性T細胞(CTL)の誘導、ならびにそのCTLにおける腸管ホーミング分子の発現は、野生型マウスとIFNAR2 KOマウスとの間で差が認められなかった。すなわち、CTLそのものはType I IFNシグナル非依存的に誘導されることが示され、腸管へ移行する可能性が示された。CTLの誘導や活性化にはヘルパーT細胞による制御が関与することが知られており、これまでの我々の研究成果からAdvワクチンによる粘膜面での抗原特異的なCTL誘導におけるTh17の重要性を示すデータが得られている。そこで次に、Adv投与後のTh17誘導に関わる抗原提示細胞の同定を試みたところ、Adv投与後の所属リンパ節における炎症性樹状細胞がType I IFNシグナル依存的に増加することを明らかにし、Th17誘導に炎症性樹状細胞が関与している可能性を見出した。今後は、Adv投与部位である筋肉においてどのような抗原提示細胞がType I IFNシグナルの制御を受けているのかを明らかにし、その活性化レベルを明らかにする。また、in vitroでナイーブT細胞と共培養することで、同定した抗原提示細胞のTh17分化誘導能を評価する。また、in vitroで分化誘導させたTh17移入によって、IFNAR2 KOマウスにおけるAdv投与後の粘膜面での抗原特異的なCTL誘導が回復するかどうかを明らかにする。さらに同様の検討を野生型マウスについても実施し、Th17の活性化というストラテジーが全身投与型の粘膜ワクチンにおいて重要であることを明らかにしていく。まず、投与部位の所属リンパ節におけるCTLの誘導、ならびにそのCTLにおける腸管ホーミング分子の発現についてフローサイトメトリー解析を行った。その結果、野生型マウスとIFNAR2 KOマウスとで差が認められなかった。CTLの誘導や活性化にはヘルパーT細胞による制御が関与することから、Advワクチンによる粘膜免疫応答誘導においては特定のヘルパーT細胞サブセットが重要な役割を担っているのではないかと考えられた。これまでの検討により、IFNAR2 KOマウスの粘膜面でIL-17産生性ヘルパーT細胞(Th17)が減少していること、ならびに所属リンパ節におけるTh17誘導に関わるサイトカインの発現低下を見出していたが、本年度の検討により所属リンパ節でのTh17の減少も見出した。次に、Th17誘導を担う抗原提示細胞を明らかにすべく、Adv感染細胞の同定を試みた。その結果、Adv投与後のTh17誘導に炎症性樹状細胞が関与している可能性を明らかにし、Adv投与後の所属リンパ節における炎症性樹状細胞の増加がType I IFNシグナル依存的であることも明らかにした。次に、所属リンパ節において、Th17誘導に重要なIL-6はType I IFNシグナル依存的に発現上昇することから、IL-6を搭載したAdvを作製した。細胞株への感染実験ではIL-6発現は十分に確認できたものの、マウス筋肉内投与後の所属リンパ節ではIL-6発現はほとんど認められなかった。このことから、筋肉内でIL-6を過剰発現させたことで炎症性樹状細胞の所属リンパ節への移行が阻害された可能性が示唆される。以上のように、当初の計画どおりAdvのTh17誘導メカニズムについて解析を行い、重要な知見を得ている。アデノウイルスベクター(Adv)ワクチンの効果向上を目指し、Adv投与後の獲得免疫応答誘導メカニズムについてI型インターフェロン(Type I IFN)受容体ノックアウト(IFNAR2 KO)マウスを用い、種々の検討を行った。これまで我々は、Adv投与後の所属リンパ節における炎症性樹状細胞がType I IFNシグナル依存的に増加に伴いTh17が誘導されることで、Advワクチンによる粘膜面での抗原特異的なCTL誘導が増強される可能性を見出してきた。今回我々は、Adv投与後の筋肉において、どのような抗原提示細胞がType I IFNシグナルの制御を受けているのかについてフローサイトメトリー解析を行ったところ、炎症性単球がType I IFNシグナル依存的にAdv投与部位である筋肉内に動員・活性化されることを明らかにした。さらに、この炎症性単球の筋肉内への動員にはCCL2またはCCL7、あるいはその両方が重要であることも明らかにした。炎症性単球は炎症性樹状細胞の前駆細胞であることから、活性化した炎症性単球が所属リンパ節へと移行し、炎症性樹状細胞へ分化すると考えられた。次に、IFNAR2 KOマウスにおけるAdv投与後の粘膜面での抗原特異的なCTL誘導の減弱がTh17の減少によるものかどうかを明らかにするため、in vitroで分化誘導させたTh17の移入実験を行った。