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現代ロシアの司法制度改革と訴訟構造の転換

また論文「新刑事訴訟法典の成立」をまとめたが、それは前研究「現代ロシアにおける刑事手続上の人権問題(下)」の最終章に組み込んで発表した。前年度は、主としてロシア連邦の検察制度の特質を研究したが、その際新しい検察庁法と弁護士法の翻訳の発表が遅れ、今年度にずれ込んだ。今年度は裁判所制度の実態分析を主たる研究対象とした。体制転換に伴う裁判所制度の転換とその理論については前稿で研究済みなので、今年度は、新制度が、実際に、具体的にどのように展開しているかを研究した。2004年に第6回全ロシア裁判大会が開催されたが、その際多くの裁判関係の統計資料が公表され、裁判の現状が数量的な側面から明らかになった。現代ロシアの裁判の特質を簡潔に表現すれば、「裁判の活性化と混迷」と特徴づけることができる。現代のロシアでは訴訟が激増し、また裁判は大きな社会的関心事となっており、マスコミでも多くの報道が見られる。それは司法権の独立がある程度確立されたことによって、裁判が社会を規定する大きな要因となってきたことにもよる。この点は社会主義時代と大きく異なる点である。かつては裁判所は検察庁に頭が上がらなかったが、最近は最高裁が、検察庁の誤認起訴(ホロドフ事件)を強く批判する特別決定を採択した例もある。他方で、脱税等を理由とした最大の政商に対する政治的弾圧の疑いのあるホドルコフスキー事件裁判のように、裁判所が当局に迎合しているように見える例もある。この事件も含め、最近は弁護士も依頼人の弁護のために活発に裁判闘争を展開する例が増えてきた。かつては裁判所、検察機関、弁護士が一致協力して裁判を運営していたが、現在ではそれぞれ自立して自らの任務を遂行するようになってきているのである。ロシア裁判の以上のような現状を、「現代ロシアにおける裁判の活性化と混迷」という論文にまとめたが、公表は次年度となる。また憲法裁判や、選挙裁判に関する関連論文を著した。(1)司法制度の展開。社会主義崩壊後のエリツィン時代(1991-1999年)には、裁判官の身分保障が進み(終身制)、司法権の独立が前進した。しかし他方で裁判官の独断専行と腐敗(収賄)が拡がった。プーチン政権下では、一般に自由と民主主義の後退が見られるが、裁判制度においても、その腐敗等を理由に引き締めが図られた。例えば、裁判官の定年制(70歳)が導入され、規律責任(解任)・行政責任も強化された。(2)裁判の実態分析。プーチン政権の誕生以後、裁判官に対する執行機関や裁判所上層部による圧力の存在が報告される事例が増えてきた(モスクワ市裁判所のエゴロワ所長によるグジェーシキナ判事への圧力)。違憲判決を頻繁に出してきた憲法裁判所も、社会全体の保守化傾向を敏感に感じ取って、その活動は精彩を欠くようになった。大統領による知事「任命」制も、合憲とされた(2005年)。プーチンの政敵であったホドルコフスキーに対する裁判など、政治裁判が行われている。(3)訴訟構造の転換。訴訟構造が職権主義から当事者主義へと転換し、対審的構造は一応機能している。したがって、司法権の独立の危うさにもかかわらず、裁判が検察(政治権力)の思惑通りには進まなくなっている現実もある。弁護人たちも法廷闘争を展開するし、陪審制の導入も裁判のあり方を大きく変えた。陪審員なしの裁判では無罪率は0.5%であるが、陪審裁判では25%である。
文字学習の発達評価及び教育プログラム開発の研究

本研究の目的は話しことばから、書きことばへ移行しつつある就学前幼児の読みの発達過程を詳しく検討することにより、言語発達遅滞児にたいする指導用プログラムの開発を試みることにあった。そこで、健常な4-6歳児90余名に、単語全体の読みなら可能な段階、語頭と語尾音の違いを理解できる段階、それぞれの音の語内位置を理解し読むことができる段階などを識別する2音節単語検査(手束、1987)を実施し、音韻分解・音韻抽出能力が読みの発達に重要な役割を果たすことを確認した(坂口、崎原、飯高1993)。これは、天野の報告(1970)を支持している。この結果をふまえ、成人の失語症者37名にも同じ検査を実施し、読みの障害の評価と指導に有効であることを見い出した(鈴木、1994;後藤、1994)。これらの結果をふまえ、FCAI(堀口、1988、1989、1990)を適用した発達遅滞児および失語症者の評価・学習用ソフトを現在開発中である。一方、特殊学級に在籍する精神遅滞児(理解語彙年齢4:3)にたいし、音韻分解・抽出活動を取り入れた2-3音節語のしりとり遊びやかるた取りゲームを指導した。現在も指導を継続中であるが、前述調査の知見が実際の指導に活用でき、着実な成果の得られることが示された。これまで蓄積してきた健常児の発達資料から、文字の読み書きに関連する諸能力の発達プロフィールを作成した(平居、飯高、1988;原、飯高、1988;水谷、飯高、1991、1992;崎原、飯高、1990、1991)。それらを参考にしながら障害児の文字言語習得上の偏りや遅れについて検討を重ね、その中から、音韻分解、及び視覚-運動系の構成能力の観点に立つ文字言語習得に関するモデルを導きだした(飯高、崎原1991;崎原、飯塚1992)。以上は、日本特殊教育学会において発表してきた。これらの研究の結果から、読み書き能力の基礎である、音韻分解能力の習得過程のくわしい分析の必要性が再確認された。そこで手束(1987)の失語症2音節語検査を、幼児用に修正し、音韻分解能力の視点から、読み書き能力の発達過程を健常な4、5、6歳児100余名と特殊学級在籍児70名について調査した(坂口、崎原、飯塚1993)。さらにこの修正版を使用して、読み書きにつまづきのある事例にたいし、実験的指導を行った(飯高、崎原、崎山、坂口1993)。現在、この修正版を幼児のみならず、成人失語症者にも使用できるようにと考え、すでの堀口によって開発されたプログラムをいかし、コンピュータのソフトシステムとして作成中である(堀口、1993)。一方、文字発達の基礎能力について、これまでの知見をまとめ、日本発達心理学会におけるミニシンポジウムを企画した(1993年3月29日於横浜国立大学)。この機会を利用し、他大学の研究者や教育現場でさまざまな問題を抱えている教育者らとの交流を期待して準備中である。

これらの結果をふまえ、FCAI(堀口、1988、1989、1990)を適用した発達遅滞児および失語症者の評価・学習用ソフトを現在開発中である。一方、特殊学級に在籍する精神遅滞児(理解語彙年齢4:3)にたいし、音韻分解・抽出活動を取り入れた2-3音節語のしりとり遊びやかるた取りゲームを指導した。現在も指導を継続中であるが、前述調査の知見が実際の指導に活用でき、着実な成果の得られることが示された。
不定根形成に関する温度感受性突然変異体の単離と解析

突然変異を誘発したシロイヌナズナ集団に対して、胚軸からの不定根形成を指標とする大規模なスクリーニングを行い、1,000近い数の温度感受性変異体候補株を選抜した。このうちの約半数について二次スクリーニングを行った結果、これまでに35系統の温度感受性変異体を新規に単離することができた。温度感受性突然変異体srd2、rrd1、rrd2、rrd4を用いて、不定根および側根形成の解析を行い、以下の成果を得た。制限温度下でsrd2変異体の胚軸あるいは根の断片を培養した場合、胚軸外植片では細胞増殖が起きず根の原基(不定根)も形成されなかったが、根外植片では根の原基(側根)が形成された。制限温度下で形成された根の原基には分裂組織が構築されず、原基全体で細胞増殖が持続して瘤状の細胞塊となった。rrd1およびrrd2変異体の場合は、制限温度下での培養により帯化根の形成頻度が上昇した。これらの結果は、SDR2が増殖能レベルの励起に関与しており,増殖能をもたない胚軸組織での増殖能獲得、分裂組轡形成に先立つ増殖能の再励起に必要であること、分裂組織がそれ以外の部分での細胞増殖を抑制していること、RRD1とRRD2が増殖活性全般に関わっていること、原基あるいは分裂組織の形成に際して増殖活性の低下は増殖域の限定化を弱めること、を示唆する。また、rrd4変異体に関しては、サイトカイニン存在下で増殖能獲得段階が温度感受性を示すことが明らかとなった。srd2変異体胚軸由来カルスに対して野生型ゲノムDNAライブラリーを無作為に導入することによる、SRD2遺伝子のショットガンクローニングを数次にわたって試みた。SRD2遺伝子の導入によって変異形質が相補された可能性のあるカルスが得られたこともあったが、最終的な成功には至らなかった。しかしながら、実験の中で問題となる形質転換効率と作業効率については大幅に改善することができ、本法の実用化にはある程度の目途が立った。不定根形成に関する温度感受性突然変異体を単離するために、EMSで突然変異を誘発したシロイヌナズナのM2世代において一次スクリーニングを行った。本年度は約4,000個体について調査し、発根誘導培地で培養したときに22°Cでは胚軸断片からの不定根形成が認められず、28°Cでは不定根が形成されたもの、522個体を候補株として選抜した。現在次世代の植物体を用いた二次スクリーニングを進めているが、これまでの結果から計算すると30種類以上の温度感受性突然変異体の単離が見込まれ、不定根形成機構の解析に大いに役立つものと期待される。アグロバクテリウムのバイナリーベクター上、T-DNA領域に野生型シロイヌナズナのゲノム断片を組み込み、形質転換用ゲノムライブラリーを作成した。挿入断片長は平均7.3kbp、規模は独立クローン80,000相当であった。これを許容温度下でsrd2変異体(脱分化、根の発達、シュートの形成が温度感受性を示す変異体)の胚軸外植物片約10,000個に無作為に導入して、制限温度下で不定根形成を誘導したところ、温度感受性を示さなくなったカルスが1つ見出された。このカルスからの野生型ゲノム断片の回収にはまだ成功していないが、これらの試行実験により、温度感受性変異体を利用した植物遺伝子のショットガンクローニングの可能性を示すことができた。
シェーグレン症候群の疾患特異的ｍｉｃｒｏＲＮＡの同定とその治療応用

Sjogren症候群(SS)において、異常発現/制御されているmicroRNAの同定をおこなったところ、miR-181bがcontrolに比べ発現上昇していた。また、miR-181bはIFN-γの刺激によりその発現が抑制された。今回の研究でSSではmiR-181bが異常発現しており、その病態に関与していることが示された。今後はmiR-181bの標的遺伝子の同定や、SS唾液腺細胞に与える影響を解析し、その是正によりSSの病態が改善されることを検証していく予定である。研究計画に基づき、口唇小唾液腺生検にて得られた唾液腺細胞を培養し、microRNA(miR)を含むRNAの抽出を行った。研究開始初期には細胞のviabilityの問題があり、RNA収集は計画よりも遅滞しており、現在までに十分なRNAを抽出したサンプルは2例のみである。また、シェーグレン症候群(SS)以外の口腔内乾燥症状を呈する患者の唾液腺細胞の収集も計画しているが、予想に反し症例の集積が困難であり、現在のところ症例を得られていない。そこで、SSのバイオマーカーとしての疾患特異的microRNAの有用性を並行して研究することとし、SS患者および健常ボランティア血清からのmicroRNA抽出を試みる予定とした。現在SS症例集積中であり、集積後にmicroRNAを抽出し、血清中のmicroRNAのプロファイリングを行う予定とした。上記の理由によりSS唾液腺細胞および非SS唾液腺細胞でのmicroRNA発現プロファイリングが困難であったため、予備実験としてSSと同様の自己免疫疾患である関節リウマチ(RA)患者の滑膜線維芽細胞を用い、メトトレキサート(MTX)によるmicroRNAの発現修飾の解析をおこなった。MTXを1uMの濃度で48時間処理した滑膜線維芽細胞(n=4)を用い、microRNAアレイによる網羅的解析をおこなった。Control群にくらべ、MTX処理群ではmiR-4257、miR-188-5pが著明に減少しており、miR-3679-3p、miR-1229の発現上昇を認めた。RA滑膜線維芽細胞においてMTXはmicroRNAの発現変動を介し、RA抑制的に働いている可能性が示唆された。MTXはRA治療において根幹をなすものだが、その滑膜線維芽細胞における効果は解明されておらず、本予備実験がMTXの作用機序およびRA病態の解明につながる可能性が示唆された。前年度に引き続き、口唇小唾液腺生検にて得られた唾液腺細胞を培養し、microRNA(miRNA)を含むtotalRNAの抽出を行った。その後、唾液腺に50個以上の単核球の浸潤を認めず、Sjogren症候群(SS)の診断基準を満たさなかった1例をcontrolとし、SS患者群(5例)とcontrolでのmiRNAの発現の変動を検討した。結果は以下のとおりである。1)mir-181bはSS5例すべてにおいてcontrolと比べ発現の上昇を認めた。2) mir-30cはSS3例で発現上昇していたが、2例では発現が減少していた。3) miR-431はSS1例で発現減少し、残り4例で発現上昇していた。4) miR-4750は3例で発現減少し、1例で発現上昇していた。さらに、すべての群で発現が減少していたmiR-181bについて、SSの病態に関与している分子の刺激による変動を検討した。SS病態に関与している因子としてIFN-&#61543;を選択し、刺激をおこなった。IFN-&#61543;刺激によりmiR-181bの発現は抑制された。本研究により、SSにて発現変動のみられたmiRNAを同定することができた。本研究で明らかとなったSSで異常制御されているmiRNA(miR-181b)がSSの病態に関与している可能性は高い。今後も症例の集積を進め、多数症例での発現を検討し、発現変動を確認した後に、miR-181b異常発現の唾液腺細胞におよぼす影響の機能解析やmIR-181bの標的mRNAの解析を進めていく。症例集積不良および唾液腺細胞のviability不良により、唾液腺細胞からのRNAの収集が遅延しているため。25年度が最終年度であるため、記入しない。口唇生検由来唾液腺細胞からのRNA収集遅延(細胞のviability不良による)および、非SS患者の口唇生検例集積不良のため、比較的収集が容易であるSSおよび健常人血清でのmicroRNAプロファイリングを並行して行い、SS特異的microRNAの抽出を行う予定とする。また、唾液腺細胞でのmicroRNA発現については、非SS患者からの唾液腺細胞入手が困難であれば、SS症例内でのHTLV-1感染の有無や唾液腺細胞浸潤gradeでの層別解析を優先して行っていく。
胆管側膜輸送体による胆汁排泄を介した胆管がん発症分子機構の研究

2012年、印刷事業所における塩素系有機溶剤曝露に関連した職業性胆管がんの発生が社会問題となった。ハロゲン化炭化水素への大量曝露が胆管がん発症の原因であると強く疑われているが、これを裏付ける作用機序は見出されていない。本研究は、ハロゲン化炭化水素によるヒト胆管がん発症リスクの評価およびその分子機構の解明を目的として企画された。本研究により、肝臓中で生じた発がん性候補物質が胆管側膜輸送体ABCC2を介して胆汁中へ排出されることが見出された。本成果は塩素系有機溶剤への大量曝露と職業性胆管がんの発症とを結びつける重要な発見であり、今後の研究の発展が期待される。2012年、印刷事業所における有機溶剤曝露による職業性胆管がんの発生が社会問題となった。ハロゲン化炭化水素への大量曝露が胆管がん発症の原因であると強く疑われているが、これを裏付ける分子生物学的証拠は見出されていない。本研究は、肝臓中で生じたハロゲン化炭化水素由来代謝物が胆管側膜輸送体を介して胆汁中へ排出され、胆管内に蓄積し胆管上皮細胞に作用することで発がん性を示すという仮説に基づき、ハロゲン化炭化水素によるヒト胆管がん発症リスクの評価およびその分子機構の解明を目的とした研究である。研究開始年度にあたる本年度(平成26年度)は、主に以下の点に取り組んだ。●ハロゲン化炭化水素1, 2-ジクロロプロパンの代謝・体内動態に関する網羅的理解ジクロロプロパンを投与した実験動物の分泌液を対象とする網羅的成分分析の結果および文献情報を参照し、代謝経路を推定した。その結果、ジクロロプロパンがグルタチオン抱合を経て、メルカプツール酸に至る経路が強く示唆された。さらに、ジクロロプロパン投与時に変動する血中成分を複数見出すことに成功した。その中には、ジクロロプロパン代謝物も含まれており、バイオマーカー候補物質としての可能性をさらに検討していく予定である。また、ヒト化肝臓マウスを用いた検討から、有力な発がん性候補物質であるグルタチオン抱合ジクロロプロパンが、ヒトにおいても胆汁排泄される可能性が示唆された。平成27年度に、より詳細な解析を予定している。●グルタチオン抱合ジクロロプロパンの胆汁排泄を制御する分子の同定グルタチオン抱合ジクロロプロパンの胆汁排泄を制御する分子を同定することを目的として、胆管側膜輸送体ABCG2およびABCC2に着目した解析を行った。各輸送体の機能欠損動物を用いた胆汁排泄試験ならびにin vitro輸送実験の結果、候補輸送体としてABCC2を見出すことに成功した。研究二年度目にあたる本年度(平成27年度)には、引き続き、ハロゲン化炭化水素1,2-ジクロロプロパンの代謝・体内動態に関する研究を進めた。研究一年度目(平成26年度)の研究により、1,2-ジクロロプロパンに由来する発がん性候補物質であるグルタチオン抱合ジクロロプロパンが胆管側膜輸送体のひとつであるABCC2を介して胆汁排泄されることが強く示唆された。ABCC2機能欠損動物であるEisaiHyper-bilirubinemia Rat (EHBR)を用いた詳細な検討の結果、この動物モデルではグルタチオン抱合ジクロロプロパンの胆汁排泄能が野生型ラットと比較して顕著に低下していることが見出された。このことは、ABCC2がグルタチオン抱合ジクロロプロパンの胆汁排泄を担う主要な分子であることを意味している。また、in vitro代謝実験の結果、1,2-ジクロロプロパンへのグルタチオン抱合は、非酵素反応によっても進行することが見出された。このことは、特定のグルタチオン抱合酵素が関与しなくても、体内に取り込まれた1,2-ジクロロプロパンから反応性代謝物が生じてしまう可能性を示唆している。ハロゲン化炭化水素(1, 2-ジクロロプロパン)の代謝経路および体内動態に対する検討が順調に進み、研究二年度目に予定していた輸送体分子に関する検討に着手、関連分子を見出すことができたため。自己紹介(研究室ホームページ内)

医療系薬学研究二年度目となる次年度(平成27年度)には、一年度目に構築された各種実験系を用いて、物質量の定量的評価を交えたより詳細な解析を行うとともに、各代謝物の発がん性に対する検討を進める。ジクロロプロパンを投与した実験動物を用いた網羅的成分分析に使用している質量分析機器の故障・修理が相次いだため、本研究に関する実験が行えなかった時期があるため。現在は当該機器の修理は完了しており、順調に実験が進行している。平成26年度と同様、各種試薬や実験用動物購入費用などの消耗品費として主に使用することになるが、一部は得られた研究成果を学会等において発表するための旅費、英文誌への論文投稿のための校閲費・印刷費・研究成果投稿料としての謝金・その他の費用として使用する予定である。
乳牛の分娩後生殖機能回復モニタリングに基づく繁殖効率向上プログラムの開発

乳牛の繁殖効率を向上させる新しい繁殖管理プログラムの開発を目的に、牛乳中のホルモン測定等の応用による分娩後の生殖機能回復モニタリングを実施し、その有用性を検討した。その結果、モニタリングに基づいて繁殖管理を行うことは、乳牛の繁殖成績の向上に有効であることが明らかにされた。特に、分娩後生殖機能回復正常例を選択して初回の繁殖にETを応用することは、有効な繁殖技術となりうることが示唆された。また、さらに、分娩生殖機能を促進するためには、栄養・繁殖モニタリングが有用であることが示唆された。(1)乳牛の分娩後日数の経過と人工授精(AI)による受胎率との関係山口県内および北海道の計14の牛群の767頭の乳牛と新潟県および長野県内の4牛群の計70頭の乳牛について、定期的な乳汁中黄体ホルモン測定により、分娩後の卵巣機能回復モニタリングを行い、分娩後AIまでの期聞と受胎率との関係およびAIまでの期間に影響する要医の解析を行った。初回AI受胎率は分娩後40日以内では低く、その後徐々に上昇し、81100日でピークを示し、その後はまた徐々に低下した。AI開始を遅くさせる要因は、胎盤停滞、子宮内膜炎、代謝病および卵巣機能回復異常などであった。(2)分娩後繁殖開始時におけるAIと和年胚移植(ET)による繁殖成績の比較分娩後の初回繁殖にETを用いた場合と、AIを用いた場合の繁殖成績の比較を2牛群で行った。牛群Aの初回ET群の初回受胎率は53.8%、210目以内妊娠率は88.5%、空胎目数は98±44日であり、AI群に比べ、優れた繁殖成績が得られた。B牛群でも同様の傾向が認められた。(3)分娩後卵巣機能回復正常例におけるET実施の効果広島大学附属農場の牛群において分娩後生殖機能回復正常と判定された乳牛だけを用い、無作為に初回繁殖ET群とAIのみの対照群に分け、繁殖成績を比較する試験を実施中である。21年3月現在、ETおよびAIの実施を開始した段階にある。以上のように、分娩後の生殖機能回復モニタリングに基づいて、初回繁殖にETを応用することは、乳牛の繁殖成績の向上に有効であることが示唆された。昨年度に引き続いて乳牛の分娩後繁殖機能回復モニタリングを実施し、分娩後初回の繁殖を人工授精(AI)で行った場合と、胚移植(ET)で行った場合の繁殖成績の比較を行うとともに、繁殖成績に影響する要因ついて解析を行った。(1)山口県内の2牧場(A,B牛群)における分娩後初回ETとAIによる繁殖成績の比較A牛群では、分娩牛71頭中36頭が初回繁殖にETを、残りの35頭はAIを実施された。B牛群では60頭中36頭が初回にETを、24頭がAIを実施された。A群の、分娩後80日内におけるETの受胎率は55.0%と、AIの受胎率(46.2%)よりも高い傾向があった。また、初回ET実施例35頭における分娩後210日以内妊娠率は90%、平均空胎日数は105±53日であり、初回AI実施例の144±74日に比べ、著しく少なかった(P<0.05)。B牛群でも、初回ET群の方が、AI群に比べ、分娩後210日以内妊娠率が局い傾向があった(86.1% vs 66.7%)。このように、飼い主の判断に基づいて、分娩後初回にETまたはAIを実施した場合、初回ET群の方がAI群よりも繁殖成績が優れていることが分かった。(2)分娩後初回ETの受胎率に影響を及ぼす要因の解析初回ET受胎率に影響を及ぼす可能性のある要因として、産次数、分娩季節、ET実施時の季節、分娩後卵巣機能回復異常、黄体形成からの日数、子宮内膜炎、尿膣を取り上げ、解析を行ったところ、A, B両牛群とも、卵巣機能回復異常が影響していることが明らかになった。(3)大学付属農場の牛群の分娩後卵巣機能正常回復例における比較試験広島大学および新潟大学の牛群において分娩後生殖機能回復モニタリングを実施し、正常回復例をET群とAI群に区分し、受胎率およびその後の繁殖成績の比較を行う試験を開始した。ET, AIとも実施例数がまだ不十分であり、22年度においても、さらに試験を継続し、例数の集積を行っている。以上のとおり、分娩後繁殖機能モニタリングにより、卵巣機能回復正常例を早期に判定し、ETを応用することは乳牛の繁殖成績向上に有益な方法であることが示唆された。乳牛の分娩後23か月以内の人工授精による受胎率の低下の主な原因は、卵胞内卵子の受精・発育能の低下にあると考えられる。

したがって、このような場合は、人工授精ではなく、むしろ、正常な胚を子宮内に移植することによって、受胎率の低下を防ぐことができるものと考えられる。そこで、生殖機能回復のモニタリングを行い、生殖機能の回復状況に基づいて、和牛胚の移植を行うことが、乳牛の分娩後における受胎率向上に有効かどうかを明らかにするために試験を行った。また、今年度は、分娩後生殖機能回復モニタリングと、特に乾乳期から分娩後泌乳最盛期にかけての栄養状態のモニタリングを組み合わせた繁殖成績向上プログラム開発のための検討も行った。新潟大学農学部附属フィールド科学教育研究センターにおいては、これまで22頭についてモニタリングを行い、卵巣機能回復正常例8頭のうち6頭にETを行い、うち3頭が受胎した。広島大学附属フィールド科学教育研究センターでは、これまで45頭についてモニタリングを行い、卵巣機能回復正常例7頭のうち5頭にETを行ったが、受例はなかった。対照牛が得られなかった。2010年6月から3か月間、ドイツ・ハノーバー獣医科大学で行った共同研究においては、乾乳期からの栄養モニタリングを合わせて行い、乾乳期においてエネルギー不足を示す牛が21%、分娩後1か月以内に潜在性ケトーシスにり患している牛が29%いることを発見し、これらが、分娩後生殖機能回復に悪影響を及ぼしていることを認めた。
翻訳、横断性、共同体の問いに関する総合的研究

翻訳と文化の横断性に関する理論的・歴史的考察を軸に、それらが<他なるもの>としての文化・社会の受容、理解、共存という課題にどういう視点や展望をもたらしうるのかを考察した。自らの文化的同一性(固有性、本来性)を求める動きは、多くの場合均質で単一化された共同体を目指す運動へと収斂させられてきたが、そうした動きの内実をヨーロッパと非ヨーロッパ地域の双方の文学と思想を突き合わせつつ研究することで、どのような文化も<異なる他者>を広い意味での翻訳を通して自らの内に取り込むことでしか成立しえないことを明らかにした。平成22年度の研究成果として、特筆すべきは、平成23年1月28日に東京大学駒場キャンパスにて開催した国際シンポジウム「同一者は他者か?-翻訳と文化横断性再考」であり、フランスから2名の研究者を招聘し、うち1名は、東アフリカの複数言語使用状況を背景として、ケニアの作家グギ・ワ・ジオンゴの活動を翻訳の問題とからめて論じ、もう一名は、フランスにおけるアラビア語文学の翻訳状況を日本文学の翻訳状況との比較において、やはり歴史的社会的文脈に十分な検討を加えつつ論じた。本研究グループからは星埜が、自身が行ったカリブ海の作家シャモワゾーの小説作品の日本語訳を巡ってどのような問題が生じたかを報告した。これらの報告はそれぞれ冷戦終結後の世界におけるポスト・コロニアルな文化状況がもたらしている問題系や現象の解明に翻訳と文化横断性という視座から集中的に取り組むという研究課題に答えるものであり、当日の充実した討議と合わせて、多くの示唆が得られたと考える。山田は本シンポジウムの準備にあたるとともに、自身の研究課題である19世紀末のインターナショナリズム運動であるアナキズムと文学、芸術との関わりについて解明を進めるために、フランス国立図書館等で資料調査を行い、フェネオンやオクターヴ・ミルボーといった作家たちについていくつかの新しい資料を発掘した。これについては研究論文にまとめるべく準備中である。連携研究者の田尻は、南アフリカの作家クッツェーの研究を進めるのと平行して、アフリカを題材とした重要な作品を残したコンラッドの研究を行い、アメリカのコンラッド研究者を招いてセミナーを開催した。22年度に引き続いて、翻訳と文化横断性という視座から冷戦終結後の世界におけるポスト・コロニアルな文化状況がもたらしている問題系や現象の解明に集中的に取り組んだ。星埜はカリブ海アンティール諸島と太平洋のニューカレドニアにおけるクレオール文学の研究にとりくみ、とくにニューカレドニアについては、政治、経済、文化のあらゆる面でフランスやフランス語の大きな影響下にある現地の現代文学の状況の入念な調査を行ったうえで、現地の研究者を招聘し、講演会を開催、貴重な証言を日本に聴衆に伝えた(実施は24年度)。山田は22年度は「同一者は他者か?」という国際シンポジウムを開催し、東アフリカやアラビア語圏における翻訳と現地語文学の問題の解明に取り組んだが、23年度は研究代表者として研究全体の組織化(とくに連携研究者の研究のとりまとめ)に意を用いつつ、当初からの課題である、国民国家的な共同体を最上位にあるものとみなす理念・信念に対抗して起こった連帯の思想であるアナキズム的なインターナショナリズムの運動と文学、芸術との関係について、共同体の問題を念頭におきつつ主としてフランスに事例を求め、フェネオン、ミルボー、ダリアンといった作家たちの再評価を目指して彼らの作品の検討を続行した。また狭義の専門であるヴァレリーの研究と翻訳の実践(『ヴァレリー集成IV』)にも本研究の趣旨は生かされている。湯浅は〈翻訳〉の問題系と〈他者との関係〉の問題系がどのように交錯するのかという根底的なテーマについて、理論的な観点からの考察を行い、その成果を具体的な事例に則して展開したものを『翻訳のポイエーシス』という著書にまとめ、世に問うに至った。また連携研究者の田尻は、ロンドン大学より代表的なベケット研究者の一人であるギブソン教授を招聘し討議する中で、アイルランド文学の伝統との関連でベケットについての新たな知見を得た。翻訳と文化横断性という視座から世界におけるポスト・コロニアルな文化状況がもたらしている問題や現象の解明を目指すという本研究の目標は、南ア出身の作家クッツェーや、ケニアのグギ・ワ・ジオンゴの研究を通じて、またカリブ海やニューカレドニアの文学の研究を通じて一定の成果を収めることができた。それは文化というものを一言語、一共同体の内部でだけ考えようとすることがいかに実態と乖離した所作であるかを証明した。他方で、国家に収斂する共同体や文学とは別のものを目指そうとしたアナキズムの文学・芸術運動の研究はまだ道半ばにとどまっている。

本年度の研究成果の還元としては、ヨーク大学のアトリッジ教授を招いてのクッツェーの作品についての共同討議、ニューカレドニア教員養成学院のアミド・モカデム教授によるニューカレドニアの現代文学についての講演会の開催、ショアー研究の第一人者である歴史家ヴィヴォルカ教授を中心にした「ショアの表象」と題するシンポジウムの開催などをあげることができる。またギリシア悲劇と能の構造との興味深い比較を行ったパリのマルクス教授の講演は狭義の影響関係を越えた越境的文化研究のモデルケースを与えるものであった。日本との関わりで言えば、同時にドイツ語と日本語の二言語で創作を行っている作家、多和田葉子氏をゲストに彼女の提唱するエクスフォニーという概念を中心に開催したシンポジウムは多くの聴衆との間の活発な議論をよんだ。もう一つ、本年度の活動として特筆すべきは、2011年3月の東北大震災と原発事故の衝撃を本研究の枠内でもまた取り上げたことであり、その一つは日本にとどまらない多くの作家がこの衝撃にどのように対処したかを議論したシンポジウム「災害と文学」の開催であった。また、研究分担者である星埜は、マルチニックに招待されて3.11以降の日本を主題とする講演を行っている。23年度に招聘予定であった数名の研究者の招聘を半年ほど順延せざるをえなかったが、それ以外はほぼ順調に進行している。24年度が最終年度であるため、記入しない。23年度の成果を踏まえてさらに各自の研究テーマを深める。連携研究者との連絡を密にしつつ、最終年度は、論文(論文集)にまとめる作業を行う。
プラナリアの領域特異性の決定と頭部、咽頭の再生

再生能力の強いプラナリアの分子生物学を進めるために、Hox遺伝子など領域を決定する遺伝子や、組織特異的遺伝子の検索を進めてきた。本研究では、プラナリアに対するin situ hybridization(以下、in situ法)を確立し、形態形成に関わる遺伝子発現の形態的側面を報告する。I.同定したプラナリアの7種のHox遺伝子群のうち、RT-PCRで調べた結果、2種の発現は正常虫の尾部に高く、頭部に低い勾配をなすことがわかっている。改善されたin situ法によって、正常虫でのHox遺伝子の発現はPT-PCRで予測されたパターンであると確認された。また、頭部と尾部を除去した再生虫では、頭部再生芽ではHox遺伝子の発現はなく、尾部再生芽において、切断2日目には発現が強まることが判明した。II.動物の脳の領域指定に働くOtxとOtpのプラナリアのホモログを検索し、プラナリアOtx1, Otx2そしてOtp遺伝子がえられた。in situ法から、Otx1は脳の内側、Orx2は脳の外側そしてOtpは脳突起を含むさらに外側で発現していた。頭部神経節とも表現されるプラナリア脳が遺伝子発現からみて確かに脳であり、プラナリア脳も領域化されていることが判明した。III.プラナリアの体の構造遺伝子の発現から、互いに重ならない領域に区分できる。頭部はPC2 (prohormone converting enzyme)遺伝子の発現、咽頭領域は咽頭特異的なMHC (myosin heavy chain)遺伝子の発現、尾部はPN5 (mucous core protein)遺伝子の3本ストライプ状の発現によって特徴づけられる。プラナリア尾部断片からの再生において、尾部のPN5の発現領域に重なるようにMHCの発現が始まり、その前方でPC2の発現が始まった。頭部片からの再生においても、頭部領域に重なるように後方の領域が再生してきた。プラナリアの再生過程では、古い組織や細胞の存在とは独立して、新しい位置価の指定、それに基づく全能性の新生細胞の分化が起こると推定される。
D-セリン/ラセメース系による形態形成調節機序の包括的検討

本研究は、D-セリン調節の中枢神経系における生理的意義、および調節異常がヒト疾患に与える影響を明らかにすることを目的としている。生理的意義として、(1) D-セリン分解が脊髄では運動神経入力繊維に沿って行われていることを明らかにした。病態生理として、(2)神経変性疾患の一つ筋萎縮性側索硬化症においてD-セリンの分解異常がD-セリン上昇を来たし運動神経変性を起こすこと、(3) 1型糖尿病モデルにおいてインスリン依存的な海馬D-セリン調節異常を来すこと、を明らかにした。本研究では哺乳類の中枢神経系に豊富なD体セリン(D-セリン)とその制御機構および神経形成への寄与を明らかにし、さらには神経変性疾患における病態生理上の重要性を示すことが目的である。本年度は、研究の遂行上必須となるD-セリン合成酵素:セリンラセメース(SRR)のノックアウトマウス作成およびその解析を行った。また、D-セリンの測定においては、2次元HPLC装置を導入し、amolのレベルの極微量まで定量できる環境を整えた。SRRノックアウトマウスでは、タンパク質レベルでもSRRの発現は認めず、D-セリン量は大脳皮質レベルで10分の1にまで減少していた。D-セリンはL-セリンのラセミ化反応によって自然に生じること、エサに含まれること、腸内細菌叢による生成されることを考慮すると、10分の1量認められるD-セリンはこれらの要因由来ではないかと考えられる。また、SRR抗体の特異性を組織学的に検討したところ、SRRノックアウトマウスでは完全に抗原性は消失していた。この抗体を用いた免疫組織化学では、SRRは大脳半球、海馬、嗅球、視床、側坐核、被核に豊富であり、一方で小脳や脊髄では相対的に発現が少なかった。これらの結果から、前脳領域を中心としたSRRの発現およびそれに一致したD-セリンの生合成が明らかとなった。D-セリンはグルタミン酸受容体のNMDA受容体NR1サブユニットに結合し、NMDA受容体の活性に必須であることを考慮すると、本発見によりその分布に生理的重要性が示唆された。本研究は、D-セリン調節の生理的意義、および調節異常が神経変性疾患に与える影響を明らかにすることを目的としている。本年度は、まず、生理的意義の検討として、D-セリン合成酵素セリンラセマーゼの結合因子の探索を行ったところ、MALDI-TOFFにてglyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)を同定した。セリンラセマーゼはGAPDHと結合し、活性を顕著に上昇させることから、糖代謝と神経伝達との密接な関連が示唆された。また、病理的側面の研究から、2次元HPLCを使用して神経変性疾患モデルにおいてD-セリン量を測定したところ、パーキンソン病、アルツハイマー病モデルのいずれにおいても有意な変化は認められなかったものの、筋萎縮性側索硬化症モデル動物の脊髄において顕著なD-セリン上昇を確認した。このメカニズムを明らかにするため、合成系および分解系それぞれの寄与を評価したところ、分解の低下に伴うD-セリン上昇が優位であることが明らかとなった。また、臨床サンプルにおけるD-アミノ酸の測定意義を明らかにするため、健常人ボランティアから体液を回収し、基準値設定を行い、疾患識別値設定のための基盤作りを行った。次年度は、これらのそれぞれを発展させ、D-セリンの生理的意義や病理的意義を明らかにしていく予定である。本研究は、D-セリン調節の生理的意義、および調節異常がヒト疾患に与える影響を明らかにすることを目的としている。昨年度までに、生理的意義の検討として、D-セリン合成酵素セリンラセマーゼの結合因子GAPDHの同定、神経変性疾患の一つ筋萎縮性側索硬化症におけるD-セリンの調節異常メカニズムの同定、ヒトの血清/尿中D-アミノ酸の基準値設定にむけた臨床研究を行ってきた。本年度は、さらにこれらの研究を発展させ、セリンラセマーゼとGAPDHの結合とエネルギー代謝異常における生理的意義の解明、D-セリンと中枢神経系発生における生理的アポトーシスとの関連性の解明、糖尿病における中枢神経機能とD-セリン代謝異常の病態解明、筋萎縮性側索硬化症におけるD-セリン分解酵素の病態生理的意義の解明と治療法開発に向けた治療薬シードの探索、ヒト疾患(神経疾患、肝不全、腎不全)におけるD-アミノ酸測定の臨床的応用に向けた疾患識別値の設定、に関連した研究を推進した。この結果、1型糖尿病発症期に中枢神経系においてD-セリン異常が生じること、筋萎縮性側索硬化症においてD-セリン分解酵素の運動神経路での活性低下とD-セリン蓄積が運動神経変性に関与することを論文にまとめ、後者はすでに論文受理となった。また、ヒト研究においては、筋萎縮性側索硬化症、肝移植前肝硬変、急性/慢性腎不全を標的とした、D-アミノ酸測定意義の開発に向けた臨床研究を継続している。
０～12歳までの発達を主題とする造形カリキュラムの研究－保幼小接続へ向けて―

幼児期の造形から小学校の図工につながる力は、1色や形、場所などの物や環境に関わって子どもがつくりだしていく基礎的な技能であり、2自分なりの造形を楽しみ追求しようとする心情や意欲、そして、3自ら考え工夫する、創造する経験であると考えた。子どもにとっては身近にある材料用具と出会い、自分の興味に合わせて感触を味わったり、構成をしたり、イメージをもってつくりだし、その過程で、試行錯誤を繰り返し、造形を楽しむ気持ちも子どもにとっては造形の基礎となる。小学校での図工における創造性は幼児期から不可欠であるため、乳幼児期から子どもの自分なりの思考であり表現が生まれる自由が保障される活動が重要である。本研究では、0歳から小学校までの造形教育のカリキュラムを考察するために、小学校で獲得しておきたい造形の力について中学校美術教員にインタビューを行い、小学校における造形教育のゴールを中学校からの視点から理解した。技法の獲得以前に、子ども自身の表現を試行錯誤して追及する姿勢や、自ら学ぶ意欲などが、基礎となると思われた。また、美術科教育学会の乳・幼児造形研究部会では、美術文化を守り、伝えるという側面が強い中等教育以上の造形教育と、子どもの生きる社会の中での発達という側面の強い乳幼児の造形教育は、同じではなく、次第に目的を変えていく学びであることを主張し、人間の生涯発達という視点から造形教育を捉える提案を行ってきた。しかしながら、造形教育で得られる子どもの学びについては、年齢に関わらず共通した学びがあるという点についても述べた。つまり、子どもの発達過程・段階によって造形教育は異なる価値と共通する価値をもっていることを提案している。そこで、こうした長期的視野の下、発達が著しく、心身の未分化な乳・幼児期にこそ大切にしたい造形教育の特徴を明確にするべく模索中である。今後、特徴について焦点化することができれば、教育のねらい、題材化の例などを検討していくことができると考えている。加えて、低年齢の子ども、乳・幼児の造形についての研究事例は未だ多くはないので、これについても保育現場と協力して、保育者との相談のもと、カリキュラムや保育案等の検討を行ってきており、多様な事例を集め、題材紹介などを進められるように考えている。本研究は、乳児が幼児、児童となる育ちの著しい時に焦点を当て、人間形成を目的とした連続性のある造形カリキュラムを提案することを目的としている。そこで、先年度は、特に乳幼児の造形における意味とあり方、材料素材と保育者の援助について明確にするべく、調査を行ってきた。乳幼児の造形についての意味とあり方については、イタリアはレッジョ・エミリア市にあるブルーノ・ムナーリ幼稚園やフランスの幼稚園、保育園の保育施設、OECD見学と会場での討議に参加し、造形における保育がどのような視点で行われているかについて調査を行った。また、海外の乳幼児から小学校低学年を対象とした国際学会であるAIEC(Art in Early Childfood)における論文を概観し、その動向をまとめ、先のイタリア、フランスの調査と併せて、美術科教育学会上越大会で口頭発表を行った。そこから分かったことは、低年齢児の造形における教育(保育)の動向としては、子どもの思いを表現する表現主義や、子どもの認識を広げることといった認識主義的な美術教育から、親子のコミュニケーション、美術館におけるファミリーセンターや地域における伝統的文化の継承、科学や社会、地域文化、そして、個人のアイデンティティなど、視野が拡大しているということであった。国内の小学校教育における図画工作より、広く柔軟な視野で研究や実践が進められていた。そのため、方向性を見直し、低年齢児からの造形では、これまでの材料用具や発達に加えて、題材設定やプロジェクト型などの方法の柔軟性をもって、小学校へも接続していけるように考えている。本研究は、乳児から幼児、児童を対象とした発達的視点に基づく造形カリキュラムを提案することを目的としている。そこで、平成27年度は、乳幼児の造形に関して、乳児(0、1、2歳)クラスに焦点を当て、乳児クラスの造形に関わる遊びについて題材の材料素材と用具、環境設定について事例収集を行った。また、保育については、ビデオ記録と協議を併用したカンファレンスを繰り返し行い、保育記録をまとめることで、保育者は、保育力の向上、省察につなぎ、結果、保育の質の向上について調査し、日本保育学会のポスター発表で公表をしている。加えて、これまでの成果を書籍『乳幼児の造形』を共著にて出版し、幼小接続における造形を開設するページを担当し、各教科とのつながり、図工とのつながりについて説明している。また、Koyasan幼児造形研究会において、5歳児クラスで幼小接続を主題とする造形遊びを公開保育にて自ら実践し、翌日の実技研修においても参加者にこれまでの研究成果から接続の要点を説明、その他、複数の保育及び幼児教育施設や小学校における研修会や公開研究会においても、講演や助言などを行い、保幼小それぞれについての異なる考え方と共通性について説明をしてきた。その具体的内容としては、材料用具の発達的移り変わり、保幼小で共有したいねらいを理解するため図工科での目標と評価の説明、幼児期にこそ大切にしたい活動、発達を考慮した保育及び授業準備、支援と援助などの提案である。平成28年度については、発達的視点から保幼小の造形題材についてテーマを分析し、これまでの研究結果と合わせて学会などでの公表、保幼小における研修会などの講師としても説明をしていく予定である。申請時には予定をしていなかった学会の会員管理・会計業務担当理事の業務を初年度2年間請け負ったことに加えて、年末より健康診断で病気が発覚し手術入院をすることになり、療養期間が必要になったため。4月半ばより復職しているが、仕事を厳選して行っていく予定に変更する。

平成28年度は、入院休職期間があり、体調が優れず、復職後も思うような研究の成果は出せなかった。そのため、研究を継続することで成果をあげられるように、研究方法を修正し、調査協力を依頼し、翌年以降も資料を集められるように変更を行った。実際の成果については、2点である。日本保育学会のシンポジウム「幼児の造形活動から考える小学校図画工作との連続性と非連続性」においてパネラーとして発表を行った。また、共著で出版した『DVDでわかる!乳幼児の造形』では、保幼小の造形が多様な教科への接続と展開、位置づけなどについて解説を行っている。この2点の内容を以下に簡単にまとめる。1)幼児の造形と小学校の教科としての図工の違いについて説明。幼児の造形活動は、総合的であるために自然材をすりつぶして色を出していくなどの例にみられるように科学的試行を行ったり、協同で制作したりなど、「環境」や「人間関係」といった他の領域との関連が強く、小学校では図工のみならず、他の教科にもつながっていく。小学校の図工は、関心・意欲・態度、発想や構想、創造的な技能、鑑賞といった評価の4観点を持ち、限られた時間の中で、子供の造形的な思考や創造性を授業のねらいにそって高めていくものである。このことから、幼・小では、ねらい・目標の範囲が異なることを報告している。そのため、幼・小の造形と図工とは、連続しているものの実際は同じものではないとした。2)幼児の造形と小学校の図工の連続性について、具体的に理解しやすいものとして過去の筆者の研究成果を基に説明し、材料用具を扱う経験についてつなぎやすい点として紹介した。幼小の造形と図工は、いずれも人間形成という目的を共有していること、幼児期にこそ大切にすべき物との愛着を育む経験や時間を保証していくこと、発達的視点から子供の気持ちに着目することが提案された。幼児期の造形から小学校の図工につながる力は、1色や形、場所などの物や環境に関わって子どもがつくりだしていく基礎的な技能であり、2自分なりの造形を楽しみ追求しようとする心情や意欲、そして、3自ら考え工夫する、創造する経験であると考えた。子どもにとっては身近にある材料用具と出会い、自分の興味に合わせて感触を味わったり、構成をしたり、イメージをもってつくりだし、その過程で、試行錯誤を繰り返し、造形を楽しむ気持ちも子どもにとっては造形の基礎となる。小学校での図工における創造性は幼児期から不可欠であるため、乳幼児期から子どもの自分なりの思考であり表現が生まれる自由が保障される活動が重要である。申請時には予定をしていなかった学会の会員管理・会計に関わる本部事務局の担当理事にな任命され運営を行ってきたため、昨年度同様に学会業務が多忙化していたため、研究の進行が大幅に遅れた。ただし、担当する学会業務の外部委託を完了、2015年3月末で理事を辞任したため、4月よりようやく研究の進行が可能になった。平成28年度は、遊びの題材におけるテーマ(主題)を各年齢で分析し、発達的視点がどのように関わっているかを調査する。
スピン輸送現象の実空間その場観察手法の開発

本研究は伝導電子のスピン偏極度の、平衡状態からのずれであるスピン圧を、「局所的」かつ「電気的」に簡便に測定できる、メカニカルなプローブを開発することが目的である。そのためにはスピン圧と電圧を変換するための機構をプローブ先端の微細なスペースに作りこむことが必要であり、その原理、構造や材質を選定する必要があり、これが研究の要となる。当初の予定通り、スピン圧と電気的信号の変換には、磁性体および非磁性体へスピン注入した際の電位差を利用することとし、本年度は幾つかの試案を基に、構造の大まかな設計、およびその特性のシミュレーションを行った。各種構造について、デバイス作成の困難さおよび測定の確度・分解能の検討を行ったが、予想されていた通り、磁性体と非磁性体の距離が近いほど通常の電圧である電荷電圧の影響を排除でき、相対的にスピン圧の検出性能が向上することを確認した。これはおおよそ距離の1次の関係であった。一方で、磁性体と非磁性体の距離を接近させるのは微細加工を行う上で限界がある。その限界を突破すべく構造を検討したところ、3極以上の複数の電極を用い、1次・2次、およびより高次の補完を行うことでプローブ間隔の制限を大幅に超えられるであろうことを発見した。あまり多数の電極を整形し、プローブとして動作させる事も困難であるため、現実的には直線状に3つの電極を並べ、1次までの補完を行えるプローブが良いだろうと判断し、具体的な設計を行ったところである。プローブの構造について多数のアイデアを検討したが、いま現在存在しないデバイスのため、設計や加工の様々なプロセスを検討するのに予定より時間がかかってしまった。また、実際に制作すると費用がかかるため、シミュレーションに力をいれたことも遅延の要因となっている。試作プローブの設計が完了したので、今後はこのプローブを実際に制作し、多探針STMへと搭載してその性能を見る。スピン圧の生成には、過去に制作した純スピン圧生成プローブを用い、電荷電圧とスピン圧の独立した、同時計測が可能かどうかを中心に、性能の検証を行う。また、その性能・特性に応じて、必要ならば随時再設計・再制作を行う。プローブの機能の検証が終わった場合、具体的な表面においてスピン輸送特性の計測を行う。現在のところグラフェンにおけるスピン輸送の測定を計画している。プローブの設計に時間をかけたため、実際のプローブの製作が多少おくれているため、必要な機材の購入を後回しにしたため、機材購入分だけ次年度使用額が発生することとなった。来年度、プローブの製作にはいるため、その動作確認のために機材を購入する。
リゾリン脂質によるβ2-ミクログロブリンアミロイド線維の伸長促進効果

(1)透析患者における血中脂質プロフィールの解析103人の血液透析患者、及び14人の健常対照群について、血漿リゾリン脂質濃度(リゾフォスファチジン酸、リゾフォスファチジルコリン)を測定した。その結果、血液透析患者では、健常対象群と比して、血漿リゾフォスファチジン酸濃度が有意に高く、リゾフォスファチジルコリン濃度が有意に低かった。(2)透析患者血漿のβ2-ミクログロブリン(β2-m)アミロイド線維伸長促進効果、及び脱重合抑制効果に関する検討透析患者血漿を1/5、1/25、及び1/100の割合で加えた中性緩衝液中で、β2-mアミロイド線維をインキュベートしβ2-mアミロイド線維脱重合抑制効果を調べた。その結果、透析患者血漿のうちリゾフォスファチジン酸濃度が高値の血漿は、1/25、及び1/100量添加した場合、健常群と比して有意に脱重合を抑制し、一方でリゾフォスファチジン酸濃度が低値の血漿は1/5量添加した場合、脱重合抑制効果が有意に低かった。また、同様の条件でβ2-mモノマーのみ、あるいはモノマーとシードとなる断片化線維を共にインキュベートしてもアミロイド線維の形成、アミロイド線維の伸長促進効果は認められなかった。(3)健常人血漿の脱重合抑制効果に対するリゾフォスファチジン酸添加の影響リゾフォスファチジン酸を透析患者血漿の濃度に相当するよう(0.25μM25μM)に健常人血漿に添加し、脱重合抑制効果を検討したが、有意な脱重合抑制効果の増強は認められなかった。昨年度、及び今年度の研究結果より、リゾリン脂質(特にリゾフォスファチジン酸)は単独の、そして主要な因子ではないにしても、β2-ミクログロブリンアミロイド線維の伸長を促進し、脱重合を抑制することで、透析アミロイドーシスの発症・進展に関わっていることが示唆された。(1)中性pHでβ2-ミクログロブリン(β2-m)アミロイド線維を伸長させるリゾリン脂質の探索親水基の異なる5種類のリゾリン脂質について、それぞれ疎水基である脂肪酸の炭素数が異なるものを数種類ずつスクリーニングした(リゾフォスファチジルコリン:5種類、リゾフォスファチジルグリセロール:4種類、リゾフォスファチジルセリン:2種類、リゾフォスファチジン酸:5種類、リゾフォスファチジルエタノールアミン:4種類)。リゾリン脂質を種々の濃度で添加した中性緩衝液中で、シードとなる断片化線維をβ2-mモノマーとともにインキュベートし、線維伸長反応を行い、チオフラビンTを用いた分光蛍光定量法、並びに電顕観察にてアミロイド線維伸長の有無を確認した。その結果、疎水基である脂肪酸の炭素数が1418で、中性pHで親水基に陰性荷電を持つ、リゾフォスファチジン酸、およびリゾフォスファチジルグリセロールが、100μM以上の濃度でβ2-mアミロイド線維の伸長促進効果を持つことを明らかにした。(2)リゾリン脂質がβ2-m分子の立体構造に与える影響の解析線維伸長効果が認められたリゾフォスファチジン酸のうち疎水基の脂肪酸の長さが16のもの(MPPA)に関して、β2-mモノマーの立体構造に及ぼす影響をCDスペクトル測定により調べた。その結果、MPPAが100μM以上の濃度でβ2-mモノマーを部分的にunfoldさせることを明らかにした。(3)リゾリン脂質の構造と線維伸長効果、及びβ2-m立体構造変化との関係の解析リゾリン脂質分子の構造(親水基の種類、電荷、疎水基である脂肪酸鎖の長さや二重結合の有無など)と線維伸長効果の有無及び線維伸長効果の強さとの相関を解析し、陰性に荷電した親水基と適度な長さ(C:1418)の脂肪酸を1本持つという構造が、β2-mアミロイドの線維伸長に重要だろうという結論に至った。(3)健常人血漿の脱重合抑制効果に対するリゾフォスファチジン酸添加の影響

リゾフォスファチジン酸を透析患者血漿の濃度に相当するよう(0.25μM25μM)に健常人血漿に添加し、脱重合抑制効果を検討したが、有意な脱重合抑制効果の増強は認められなかった。昨年度、及び今年度の研究結果より、リゾリン脂質(特にリゾフォスファチジン酸)は単独の、そして主要な因子ではないにしても、β2-ミクログロブリンアミロイド線維の伸長を促進し、脱重合を抑制することで、透析アミロイドーシスの発症・進展に関わっていることが示唆された。