hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
顎関節数学モデルによる顎運動時の関節内力の解析

顎関節の数学モデルを用いたシミュレーションの手法により正常な開閉口運動の再現および生体における急速顎運動に近似させたシミュレーションを行い、開閉口時の下顎頭、円板動態および関節内力を解析し、関節内力の大きさ、作用点を計測し、以下の知見を得た。1,正常顎関節:開口角0度から9度までは、関節反力はほぼ0で、反力作用点は0度と3度では円板後方部で、開口角9度以降は関節円板中央部に移動する。そして9度を超えると反力が生じ、開口に伴ってなめらかに増大し、最大開口位で最大となる。このときの反力の値は約18Nであった。閉口に移った直後、反力作用点は関節円板中央部に保ったまま関節反力は一気に低下しその後9度前後まで緩やかに低下し、9度以下では反力はほぼ0となり反力作用点は円板後方部へ移動していく。2,急速顎運動に近似させたシミュレーション:開口が始まると3度で反力作用点が関節円板中央部へ移動し、6度で反力が生じ始める。その後なめらかに増加し、開口角27度で最大となりそのときの反力は19.5Nであった。閉口時には18度付近まで反力作用点は関節円板中央部にあるが、さらに閉口すると反力が掛かったままで反力作用点は関節円板後方部へと移動していく。この結果から、速い開閉口運動では、開口時と閉口時では下顎頭の滑走が先行することにより反力作用点の移動の仕方が異なり、開口時には反力作用点が早期に関節円板中央部に移動し安定状態となるのに対し、閉口時は、滑走が先行することにより、開口に伴って伸展した関節包が急速に弛緩する結果下顎窩下顎頭間隙が拡大するため、下顎頭は関節円板中央部から離れて、関節円板後方部に対して反力を保ちながら後方へ滑走し、閉口する事になるものと考えれれた。
プロセスベースの河川侵食速度の解明：地形ダイナミクスの階層構造の理解に向けて

山岳河川と山地の起伏の景観は、河川による岩盤侵食と地殻変動による隆起とのせめぎ合いの結果であり、未来への途中経過である。山岳を流れる岩盤河川の発達・変遷は、平野の沖積河川と異なり、千年数十万年以上の長期の現象で不明な点が多い。特に、河川による岩盤侵食速度の理解が遅れている。主要な素過程のうち、研究が進んでいないプラッキング(岩塊剥離)についての定量的理解に向け、室内実験を行う。また、隆起の様式(均一or傾動など)と河川網パターンの時間発達との関係についてさらなる研究が必要であり、これについても室内モデル実験による検討を継続する。
入院患者の睡眠衛生を改善するためのリラクセーション法(呼吸法)の効果に関する研究

リラクセーション法(呼吸法)による睡眠改善効果を検証することを目的に基礎研究を実施した。健常成人を対象に腹式呼吸法を実施する対象者(実験群)と実施しない対象者(対照群)を無作為に振り分け、腹式呼吸法の有用性について検討した。その結果、5日間の腹式呼吸法の練習を実施した後、就寝直前に腹式呼吸法を実施した場合には入眠潜時(就床から入眠までの時間)が短縮されることが示唆された。平成19年度は、睡眠改善効果を検証することを目的に、リラクセーション法(腹式呼吸法)の有用性について基礎研究を行った。健常成人を対象に、腹式呼吸法を実施する対象者(実験群)と腹式呼吸法を実施しない対象者(対照群)を無作為に振り分け、腹式呼吸法の有用性について検討した。対象者全員に連続10日間睡眠目誌の自己記入を求め、実験開始1.2日目および8.9日目の夜間は温度と湿度を一定に保った人工気候室に通常の就寝時刻±1.5時間に入室させ、通常の起床時刻±1.5時間まで過ごさせた。人工気候室では、客観的指標としてアクティブトレーサー(心拍変動)、BISモニタ(催眠深度評価)、アクチグラフ(活動計)による睡眠評価と、主観的指標として起床時にOSA睡眠調査票(MA版)への回答を求めた。人工気候室で過ごす日は、禁酒及び就寝時刻4時間以降のカフェイン摂取を避けることを指示し、それ以外は普段通りに過ごしてもらった。また、実験群には、実験開始3日目に腹式呼吸法の指導を行い、実験終了日まで1日3回腹式呼吸法を実施してもらった。8.9日目は実施後の感想等聴取した。入院患者の睡眠トラブルは,入院前(疾病への罹患と治療方針が説明された時点)から発生していることが,筆者らの先行研究で把握されており,今年度の研究結果を基に,平成20年度は睡眠の改善プログラムを策定し,臨床における腹式呼吸法の効果を検証する予定である。平成20年度は、前年度に引き続き睡眠改善効果を検証することを目的に、リラクセーション法く腹式呼吸法)の有用性について基礎研究を行った。健康成人10名を対象に腹式呼吸法を実施する対象者5名(実験群)と腹式呼吸法を実施しない対象者5名(対照群)を無作為に振り分け、腹式呼吸法の効果を検証した。対象者全員に連続10日間睡眠日誌の自己記入とアクチグラフの装着を求めた。実験開始1.2日目と8.9日目は、対象者に禁酒及び就寝予定時刻4時間前からカフェイン摂取を禁じ、通常就床時刻±1.52時間前から通常起床時刻±0.51時間まで人工気候室で過ごさせた。人工気候室の環境設定は、室温26度、湿度60%、照度201x以下(就床中は41x以下)、騒音40dB以下とし、対象者全員に31Sモニター、アクチグラフ、アクティブトレーサーを装着した状聾で就寝させ、起床直後にOSA睡眠調査票(MA版)に回答させた。実験群には実験開始3日目に腹式呼吸法の指導を行い、以後実験9日目まで1日3回腹式呼吸法を練習することを課し、実験開始8.9日月の就寝前に腹式呼吸法を実施させた。本実験は群馬大学の倫理審査委員会の承認を得てから実施した。両群の比較から、就寝前に腹式呼吸法を実施した場合には、睡眠潜時の短縮乱夜間睡眠前半期の覚醒度の低下、中途覚醒回数の低下、起床時の疲労回復が増加する傾向が示唆されたo
マグネシウム合金へのアルミニウム被覆と被覆材の超塑性発現の研究

当該年度は、マグネシウム合金上へアルミニウム被覆を形成し、圧延加工による薄板の作製を行った。当初予定していた高ひずみ速度鍛造は装置の設計に難航したため、室温のロールを用いた圧延加工を行った。室温のロールを用いることで、加工中の金属間化合物層および結晶粒の成長を抑制し、従来法である熱間鍛造よりも大きなひずみを与えることができると期待した。その結果、圧延により作製した薄板は熱間鍛造で作製した薄板よりも、より大きな伸びを伴う超塑性特性を示した。圧延加工によって作製した薄板は圧延方向に対して45度方向での引張試験において300°C、1.0×10-3 s-1の条件下で約850 %もの大きな伸びを示した。また、その際Al被覆は伸び後もMg合金上に健全に接合されたままであった。Mg合金部を光学顕微鏡および透過型顕微鏡により観察したところ、圧延材は10ミクロン程度の粗大な結晶粒と200ナノメートル程度の微細結晶粒で構成されていることが明らかとなった。この結果から、高温での引張試験中に動的再結晶が起こったことにより、高温でも微細組織を維持することが可能であったと推察される。また、圧延薄板材において金属間化合物層は断片的に存在していたが、高温での引張試験後には鍛造材と同様薄板全体にわたって均一厚さの金属間化合物層が連続的に形成していた。金属間化合物層の高温引張変形中の変形メカニズムを推察するため、熱間鍛造材において引張試験を超塑性変形中に数回中断し、金属間化合物層の観察を行った。その結果、引張試験前には金属間化合物層が存在しなかった界面から金属間化合物層が生成し、その後引張変形中に引張方向垂直に割れが生じるが、その亀裂は進展せずに引張方向に引き伸ばされている様子が観察された。これは、金属間化合物層の成長により割れの進展が抑制されたことによると考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。当該年度は、アルミニウム被覆付きマグネシウム合金薄板の引張特性の調査およびその変形メカニズムの調査を目的とした。アルミニウム部およびマグネシウム合金部について電子後方散乱回折法(EBSD)を用いて観察・解析を行った。その結果、マグネシウム合金部においては、超塑性変形材料によくみられる、粒界すべりによる集合組織のランダム化が見られた。このことからマグネシウム合金部は引張変形中に粒界すべりによって変形した、と考えられる。アルミニウム部においては複合材の応力ひずみ曲線におけるピーク応力時を境に、(111)極点図において{111}から{101}へ集合組織の変化が見られた。この集合組織の変化は、変形機構の変化または再結晶集合組織の発達および粒の粗大化による結晶方向の淘汰によるものであると考えられる。また、マグネシウム合金上へのアルミニウム被覆形成のための熱間押出の構造解析シミュレーションを行った。この解析により、押出後のアルミニウム被覆層厚さを均一に制御するための最適な押出条件を導くことができ、さらに感度解析を行うことで、それぞれの押出条件が被覆層厚さの均一性に及ぼす影響を調査することができると考えた。まず、芯材であるマグネシウム合金に対して圧縮試験および逆解析を行い、材料特性を表すモデルを作成した。作成したモデルを用いて実験と同条件で構造解析を行い、被覆層厚さ変化を計算結果と実験結果を比較することで、モデルの有効性を検討した。この結果、実験結果とほぼ近い結果を計算によって得ることができ、今回作成したモデルで実験を模擬することができるということが実証された。当該年度は、マグネシウム合金上へアルミニウム被覆を形成するための熱間押出加工プロセスの構造解析シミュレーションを行い、均一厚さの被覆が得られる条件でのコンテナ内部での金属流動を調査した。その結果、均一厚さの被覆層を得るためには、ダイス表面に沿った方向への流れは抑制されるべきであるということを明らかにした。また、様々な押出条件下での被覆層厚さを調査し、感度解析を行うことで押出パラメータがアルミニウム平均被覆層厚さおよび被覆層厚さの均一性に及ぼす影響を調査した。本研究では、影響を調査する押出パラメータとして、皮材の初期板厚、押出温度、ラム速度、ダイス角度、芯材と皮材の強度比の5つを選択した。感度解析の結果から、皮材の初期板厚が平均被覆層厚さに対して最も支配的であり、一方ダイス角度が被覆層厚さの均一性に対して最も支配的なパラメータであることを明らかにした。また、平均被覆層厚さと被覆層厚さの均一性両方に対して、被覆材の初期板厚およびダイス角度の2つのパラメータが支配的であり、残りの押出パラメータである押出温度、ラム速度、芯材と被覆材の強度比はあまり大きな影響を被覆層厚さの性質に及ぼさないということがわかった。そこで、皮材の初期板厚およびダイス角度の2つの押出パラメータにのみ着目し、それらが被覆層厚さの性質に及ぼす複合的な影響を空間的補間手法であるクリギングを行い、調査した。平均被覆層厚さに対しては、初期板厚さが薄いほど、またダイス角度が大きいほど、被覆層厚さは薄くなり、初期板厚さが大きいほど、ダイス角度が小さいほどその傾向が大きいということが明らかとなった。一方、被覆層厚さの均一性に対しては、ダイス角度が大きいほど、初期板厚が薄いほど、被覆層厚さは均一になるという結果が得られた。

また、その傾向は初期板厚さが大きいほど、ダイス角度が小さいほど大きいということが明らかとなった。当該年度は、マグネシウム合金上へアルミニウム被覆を形成し、圧延加工による薄板の作製を行った。当初予定していた高ひずみ速度鍛造は装置の設計に難航したため、室温のロールを用いた圧延加工を行った。室温のロールを用いることで、加工中の金属間化合物層および結晶粒の成長を抑制し、従来法である熱間鍛造よりも大きなひずみを与えることができると期待した。その結果、圧延により作製した薄板は熱間鍛造で作製した薄板よりも、より大きな伸びを伴う超塑性特性を示した。圧延加工によって作製した薄板は圧延方向に対して45度方向での引張試験において300°C、1.0×10-3 s-1の条件下で約850 %もの大きな伸びを示した。また、その際Al被覆は伸び後もMg合金上に健全に接合されたままであった。Mg合金部を光学顕微鏡および透過型顕微鏡により観察したところ、圧延材は10ミクロン程度の粗大な結晶粒と200ナノメートル程度の微細結晶粒で構成されていることが明らかとなった。この結果から、高温での引張試験中に動的再結晶が起こったことにより、高温でも微細組織を維持することが可能であったと推察される。また、圧延薄板材において金属間化合物層は断片的に存在していたが、高温での引張試験後には鍛造材と同様薄板全体にわたって均一厚さの金属間化合物層が連続的に形成していた。金属間化合物層の高温引張変形中の変形メカニズムを推察するため、熱間鍛造材において引張試験を超塑性変形中に数回中断し、金属間化合物層の観察を行った。その結果、引張試験前には金属間化合物層が存在しなかった界面から金属間化合物層が生成し、その後引張変形中に引張方向垂直に割れが生じるが、その亀裂は進展せずに引張方向に引き伸ばされている様子が観察された。これは、金属間化合物層の成長により割れの進展が抑制されたことによると考えられる。本研究の目的は、「熱間押出法による被覆形成の汎用性の向上」および「金属間化合物層の生成および成長の抑制」である。本年度において、熱間押出の構造解析および感度解析を研究計画通りに実施し、熱間押出法による被覆形成の過程において重要な条件パラメータを特定した。また、金属間化合物層に関しても、来年度EBSD解析のためのマテリアルファイルが完成すれば、この金属間化合物層に関する研究は速やかに進展すると考えている。以上のことより、本研究は現段階でおおむね順調に進展していると評価した。27年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、構造解析シミュレーションにおいて、想定していた以上の成果が得られたため、シミュレーションに加え、感度解析およびクリギングによるデータの整理を優先させて研究を行った。したがって、当初予定していた高ひずみ速度鍛造による薄板の作製は達成されておらず、現在装置の設計を行っている段階である。来年度に高ひずみ速度鍛造を実施し、薄板を作製する予定である。また、来年度は現在作成中であるEBSD解析のためのマテリアルファイルを完成させ、金属間化合物層に対して解析を行うことで高温中での詳細な変形挙動を明らかにする。
天然分子の最先端構造解析

原索動物・ホヤは近年新しい実験動物として注目されており、またその発生過程で脊索を形成するため、脊椎動物の進化の側面からも生物学的に興味ある生物群である。ホヤの精子は、受精のときに卵が放出する化学物質を感受することによって、運動が活発になり、さらに卵に近づいてゆくことが知られていた。ホヤ以外でも、卵が精子を活性化し、あるいは誘引する事実が数多く知られており、生物界では極一般的な現象である。これらの化学物質や活性、種の保存に重大な役割を有しており、生物の進化や多様性の観点からも大変興味が持たれる。しかし、それらの多くは極微量物質であるために、構造が解明されたのはわずか数例にすぎない。われわれは、カタユウレイポヤ(Ciona intestinalis)の卵から発せられる精子の誘引物質の化学構造の解明を目指して研究を行った。まず、高速度ビデオ撮影によって精子運動を記録することにより走化性を定量化し、それを指標として誘引物質の精製を進めた。得られたホヤ精子に対する誘引物質は非常に強い活性を示し、かつ、この物質単独で走化性以外に精子運動を活性化する作用を示した。純粋に得られたSAAFは微量であり重量を求めることはできなかったが、合成品のNMRデータなどから4マイクログラム、モル量では約6ナノモルと推定された。微量試料の2次元スペクトル測定およびMS/MSスペクトルによって新奇の硫酸化ステロールであると推定された。得られた推定構造を化学合成することによって、生物活性と立体化学を確認することができた。本研究では、天然物の構造決定の微量化という点でも画期的な成果を挙げることができたと考える。本特定領域研究では、微量天然分子の構造決定を以下の2課題を中心に行った。ホヤ卵由来の精子活性化物質の化学構造:共同研究において、ホヤ卵由来の、ホヤの精子を活性化し誘引する物質の構造解析を行った。その試料重量は数g(数ナノモル)と推定されたが、NMRの微量用プローブを用いて良好な二次元スペクトルの測定に成功し、その化学構造を新奇硫酸化ポリヒドロキシステロイドであると推定した。現在化学合成によって構造の確認を行っている。タンパク質の糖化によって生成する修飾アミノ酸の化学構造:コラーゲンは寿命の長い細胞間マトリックス蛋白質であり、糖尿病などで血糖値が上昇した折には、糖化を受けやすい蛋白質でもある。この蛋白質の糖化が失明や関節炎などのいわゆる糖尿病合併症の原因となっている。コラーゲンの糖化アミン酸の構造解析を行い、約10μgの試料量で良好な1次元および二次元NMRを測定して構造をN^ω-carboxymelhyl-arginineと決定することができた。抗生物質・アンフォテリシンB(AmB)は、現在でも感染症治療に広く使われている。その抗真菌作用は主に細胞膜におけるイオンチャネルの形成により発現するとされており、選択毒性は膜含有ステロールの分子認識の違いによって説明されている。本特定領域研究では、AmBによって形成されるイオンチャネル複合体の構造解明を目的とし、AmB同士、AmBと脂質分子間の連結分子を調製することによって分子会合体を再現し、主にNMRを用いて構造を詳細に解析することを目的とした。AmBのイオンチャネルを安定化する目的で、二量体を合成して生理活性や会合状態を調べた。その結果、AmBのアミノ基をアミノアルキル化した後に連結した化合物は非常に強い溶血活性を示した。また、なかにははリン脂質リポソームを用いたカリウムイオン流入実験において、AmBと同様のエルゴステロール依存性を示したものもあったので、脂質膜中でAmBと類似したチャネルを形成していると考えられる。

また、二量体のCDスペクトルでは、リン脂質膜に結合することによって、水中より顕著に大きな分裂型Cotton効果が見られ、また、この分裂幅はエルゴステロール膜中において、コレステロール膜中よりも顕著に大きくなった。この結果は、エルゴステロール膜中でヘプタエン部分が近接した分子会合構造を取っていることを示している。AmB-テロール間の分子認識機構を調べる目的で、各種AmB-ステロール連結分子を調製した。エルゴステロール連結体の化合物は最も強い活性を示した。その活性は、コレステロール連結体より顕著に高いことから、連結体においてもエルゴステロールに対して特異的な分子認識が保持されているものと考えられる。現在、二量体あるいはステロール連結体の^<13>Cもしくは^<19>F標識体を調製しており、固体NMRによる距離測定によって、会合体の構造解析を進めて行く予定である。アンフォテリシンB(AmB,1)は、真菌による感染症治療に広く使われている重要な医薬である。その抗真菌作用は主に真菌細胞膜に存在するエルゴステロールを認識してイオンチャネル複合体を形成することによって発現されるとされているが、複合体の機構はほとんど分かっていない。AmBとエルゴステロールで形成される分子会合体の構造を解明するためには、会合体を安定化しなければならない。そこで、AmB同士の連結体(二量体)の例にならって、ステロールとAmBの連結分子を化学的に調製した。連結分子の調製には、AmB分子中最も反応性の高いアミノ基を利用することとし、ステロールの3位ヒドロキシル基との間をカルバメートで結合することによって、エルゴステロール連結体(AmB-Erg)とコレステロール連結体(AmB-Cho)を調整した。両者のリン脂質二重膜に対するイオン透過性を測定したところ、AmB-ErgはAmB-Choに比べて顕著に強い活性を示した。また、AmBの標識体の固体NMRの測定によって、AmBメチルエステル(AME)の標識13Cとリン脂質のリン原子の平均距離が比較的短いことが判明し、高濃度でもAmBがリン脂質に分散していることが示唆された。
「文革期文学」の基礎的研究

中国における公式の見解では、文化大革命期(1996-76年)は文学史上の空白期と位置付けられている。しかし事実は文革期にも当時の党の指導の下に文学活動は展開されていた。一方、文革期には文壇から追放された文学者や、党指導部に批判的な知識人・元紅衛兵による執筆活動が密かに行われ、そのあるものは手書きで広まった。これは「地下文学」として1993年から研究され始めた。つまり文革期には文革指導部による「公然文学」と「地下文学」の2種類の文学が行われていたことになる。本研究は文革期の「公然文学」文学活動の実態を明らかにし、「文革期文学研究」という新しい研究領域の確立を目指し、その前提となる資料整備をおこなうことを目的とする。そのために本研究では、文革期出版の単行本文芸資料、文革期の文芸活動の指針となった毛沢東関連資料、紅衛兵資料、最近10年間の文革期文学に関する研究論文を収集した。これらは今後の研究の基礎となるものである。次にこれらの収集資料の整理を行った。これが本研究の主要な成果である。具体的には1)「朝霞」雑誌、および「朝霞」叢刊の作品名・人名索引資料集の作成を行なったほか、2)「文革期紅衛兵詩歌集」の作成を行った。今回の研究成果報告書はこの資料を中心に作成した。本研究では、文革期文学を「萌芽・混沌期(1966-71)」「労農兵(労働者・農民・兵士)文壇建設期(72-73)」「解体期(74-76)」の3時期に区分し、文革期文学全体を考察する作業仮説をたてた。この仮説で最も困難なのは「萌芽・混沌期」の裏付けとなる文学活動の実態の解明であったが、紅衛兵詩歌資料で、この時期の活動実態の解明が可能になった。これは本研究のもう一つの成果である。1本研究は文化大革命時期(1966-76年)の文学活動の概要を明らかにし、「文革期文学」という文学概念を確立することを最終目的とし、そのための資料整備を目指すものであるが、平成9年度は、(1)基礎資料の収集・調査、(2)収集した資料の整理(=作品、作者等の情報作成)を作業の重点とした。2 (1)については紅衛兵組織の発行した新聞を調査し、その中の文学資料とみなせるものを収集したほか、東京大学等研究機関所蔵の文革期出版の雑誌の基礎調査をおこなった。また文革期出版の単行本文芸資料の収集、文革期の文芸活動の指針となった毛沢東関連資料などを集中的に収集した。今後の研究にとって初歩的な基礎を築いたと思う。3 (2)については、紅衛兵文学[詩作品]資料の入力(A4、170ページ)、文革期上海出版の雑誌『朝霞』の目録、執筆者索引の作成、上海発行の文学作品集(詩、小説)の執筆者索引の作成がすでに完了した。目下これらの資料の分析に入っており、紅衛兵文学資料は単刊体として、その他の資料は雑誌論文として平成10年度に発表できる見込みである。4以上の作業を通じて、文革期文学を初歩的に「萌芽・混沌期(1966-71)」「労農兵(労働者・農民・兵士)文壇建設期(72-73)」「解体期(74-76)」に時期区分できるのではないかという感触を得ている。

これらの点については平成11年度の研究報告でより詳細に明らかにしたい。1.平成10年度の実施目標本研究は文化大革命期(1966-76年)の文学活動の実態を明らかにし、「文革期文学研究」という新しい研究領域の確立を目指し、その前提となる資料整備をおこなうものである。平成10年度は、(1)基礎資料の調査と分析、(2)資料整理とデータ・ベース化、(3)中国出張、(4)成果の発表、を実施計画として掲げた。このうち(4)は結局実現しなかった。これは主として私が平成10年4月より言語文化部長に選任され、部局長としての仕事に忙殺されたためである。2.計画の実施状況(1)文革期の「人民日報」CD-ROM版、貴重本である「解放軍文芸」(76年度版)をはじめ文革末期の学報など雑誌16タイトル119冊を新たに収集、調査した。(2)9年度に整理した「朝霞」雑誌の作品名・人名索引入力が完了した。また上海を中心とする詩と小説の執筆者索引も現在入力中である。(3)7月末から8月初中国社会科学院文学研究所を訪問、劉福春研究員、北京大学李揚教授ら文革期文学研究者と面談・交流した。文革期文学研究の必要性と可能性について認識を共にした。劉研究員からは文革期詩歌の共同研究の申入れがあった。3.成果文革期文学(特に詩歌の方面)研究のための基礎固めができた。収集した資料を利用しての実証的文革期文学研究の展開が可能になるはずである。また中国ではこの研究はまだタブーであるが、今後共同研究を通じて研究の進展が期待できる。平成11年度は資料集(「紅衛兵詩歌集」「朝霞索引」「文革期上海文壇資料」など)を刊行し、さらに文革期文学史のまとめを報告書として刊行したい。1.平成11年度の実施目標本研究は文化大革命期(1996-76年)の文学活動の実態を明らかにし、「文革期文学研究」という新しい研究領域の確立を目指し、その前提となる資料整備をおこなうものである。平成11年度は、(1)基礎資料の調査と分析、(2)資料集の発行、(3)中国研究者招聘、(4)報告書の発行、を実施計画として掲げた。2.計画の実施状況(1)文革期の地方雑誌10タイトルの目録を収集。また最近10年間の文革期文学に関する研究論文を収集した。(2)「朝霞」雑誌、および「朝霞」叢刊の作品名・人名索引資料集を刊行(印刷中)(3)平成11年9月中国社会科学院文学研究所劉福春研究員を1週間招聘し、研究についてレビューを受けた。(4)研究成果の一部「文革期紅衛兵詩歌集」を研究報告書として刊行(印刷中)。文革期文学史の私案を序文に附した.3.成果今後(2),(4)の資料集を利用して文革期文学(特に詩歌の方面)の実証的研究の展開が可能になるはずである。中国ではこの1年で急速にこの分野の研究がはじまった。今回刊行する報告集「文革期紅衛兵詩歌集」は、わが国の研究を推進するだけでなく、中国の研究者にも裨益するところが大きいと自負している。
環境ストレス時の免疫修飾における、脳・腸・肝・免疫連関の意義

本研究では、環境ストレス時の免疫修飾における、脳・腸・肝・免疫連関の意義を明らかにするために、腸管粘膜バリアの神経性制御機構や肝門脈から脳への信号伝達経路及びその脳内機序、等の解明を目指し、ラットを使った一連の実験から以下のような点を明らかにすることができた。(1)軽度の非炎症性ストレスである単純拘束(IM)、電撃フットショック(FSS)の何れも末梢IL-6濃度が上昇する。(2)同ストレス時に、腸管由来のLPSが、速やかに体内に侵入してくる(LPS translocation)。(3)生体に侵入してきたLPSは、まず、腸管膜や腸間膜リンパ節などの腸管周辺組織のIL-6産生を賦活するが、肝門脈中に流れ出したLPSとIL-6は最終的に肝臓に到達する。(4)肝に到達したLSPは、肝の細網内皮系の細胞(Kupffer細胞や類洞内皮細胞)に貪食されると同時にこれらの細胞を賦活し、IL-6などの各種の生理活性物質を誘導する。(5)経肝門脈的に肝に到達したり肝細網内皮系で産生されたIL-6は、肝細胞が標的臓器となり各種の急性相蛋白や補体などの生理活性物質を誘導する。さらに、(6)肝は、安静時や非炎症性ストレス時に末梢に遊離してくる循IL-6の主な供給臓器となっており、全身に散在するIL-6の標的細胞に指令を送っている(ホルモン様作用)。一方、(7)生体内に侵入してきた大多数のLPSは、アポリポプロテイン、補体、LPS結合蛋白、Gelatin-binding-protein28、等によって非活化(解毒)された形で一般血中を流れている(Takaki,et al.,平成9-10年度、萌芽的研究、生体防御に果たす脂肪細胞の役割)が、これらの非活化されたLPS分子は、何れも肝臓から胆汁中に排泄されていることがわかってきている。本研究においても、生体内に侵入した腸管由来のFITC-LPSは速やかに、肝臓に集積した。(8)肝臓のバリヤーをすり抜けたLPSは、視床下部や下垂体前葉に到達し、脳内メカニズムや下垂体前葉の内分泌系の活動を修飾している。以上の結果より、(1)非炎症性ストレスによって腸管粘膜バリアーの一時的な破綻が起こり、腸管内に常在するLPSが周辺組織に移行すること、(2)特に肝臓は腸管由来のLPSを解毒排泄する主要な臓器であると同時に、LPSによってIL-6を始めとする様々な生理活性物質を酸性・遊離し、全身の生体防御系の維持に寄与している可能性が示された。

研究目的:脳と免疫系は相互連関しながらも、一つの個体として合目的な方向(個体保存や種の保存)に機能している。我々はこれまでに、侵害ストレス時の脾臓交感神経系を介した免疫抑制メカニズムを明らかにしてきたが、最近、同様のストレス時に朝刊や肝臓で免疫応答が促進することを見出した。そこで本研究では、(1)腸管粘膜バリアの神経性制御機構や、(2)腸交感神経を介した免疫応答の促進機序、(3)肝門脈から脳への信号伝達経路及びその脳内機序、等の解明を目指す。研究成果:本年度は、以下の5点を明らかにした。(1)軽度の非炎症性ストレスであるフットショックストレスによっても、炎症性サイトカインであるIL-6の末梢循環血中濃度が一過性に増加する。(2)IL-6の濃度増加は、一般末梢血中よりも肝門脈中の方が早い。(3)腸管にFITCラベルしたLPSを持続投与すると、FITC-LPSは一般静脈血、肝臓、脾臓、その他腸管周辺組織中で検出されるが、これらの取り込み量もフットショックストレス負荷で増加する。(4)循環血中のLPSを中和してやると、フットショックによる血中IL-6増加が減弱する。(5)肝臓でFITC-LPSを取り込んだクッパー細胞で同時にIL-6の産生増加が観察される。以上の結果より、非炎症性ストレスによっても腸管粘膜バリアーの一時的な破綻が起こり、腸管内に常在するLPSが血中さらに周辺組織、特に肝臓に移行することにより、IL-6の産生及び遊離の増加が起こり、ひいては生体の抵抗性を高めている可能性が示唆された.環境ストレス時の免疫修飾における、脳・腸・肝・免疫連関の意義を明らかにするために、本年度はラットを使った実験から以下の点が明らかとなった。(1)肝門脈(PV)、下大静脈肝静脈合流部下部(IVCーLow)、同合流部(IVCーHV)、右房近傍静脈血(JV)の電撃フットショックストレス(FSS)誘導性のIL-6濃度変化を観察したところ、安静時のIL-6濃度はIVC-HVが最も高く、FSS誘導性のIL-6濃度の上昇も最も顕著だった。しかしながら、PVにおいても、他の部位(60min)よりも早い時間帯(30min)で一過性にIL-6濃度が上昇し、この上昇反応は一般静脈血の上昇反応と同様に循環血中のLPSの中和(PMBの持続投与)で消失させることが出来た。(2)下部回腸内腔にFITC-LPS(1mg/ml)を注入したラットにFSSを付加したところ、15分と60分の2峰性に一般静脈血中にFITCーLPS(40ー60ng/ml)が検出され、30分後の全肝臓組識から腸管内投与量の約5%のFITC-LPSを回収することが出来た。(3)FSS付加15分以内に、腸管膜、腸管膜リンパ節、肝臓の何れの臓器も組織LPS含量が増加したが、脾臓では増加しなかった。(4)IMストレス時に、肝臓の組識IL-6mRNA発現量は有意に増加したが脾臓では増加しなかった。(5)IMストレス時に、脳内の視床下部では有意にIL-6mRNAが増加したが、海馬や皮質では変化しなかった。(6)下垂体前葉の非内分泌産生細胞である濾胞星状(FS)細胞およびACTH細胞、TSH細胞にIL-6が発現し、IL-6受容体はLH細胞で優位に発現していた。(7)FS細胞の培養系であるGF細胞を使った実験から、FS細胞が肝臓のkupffer細胞と同様に末消LPSの濃度変化を高感度に認識しIL-6を発現していることが示唆された。以上の結果から、(1)安静時や非炎症性ストレス時に末消に遊離してくるIL-6の主な産生臓器として肝臓が考えられ、少なくとも腸管由来のLPSがその誘導因子の一つとして作用している。(2)FSS時に腸管膜周辺臓器から肝門脈へのIL-6の遊離が起こるが、これも、腸管由来のLPSによって引き起こされている。
トランスポゾン様遺伝子の進化的多様化と機能性非翻訳RNA解析

トランスポゾンRevolverの進化的な動きを、イスラエルのエボリューション・キャニオンの温暖乾燥斜面、冷涼湿潤斜面に自生するオオムギ野生種で調べた。温暖乾燥斜面では一定の0.7 kb RNAの強い発現、冷涼湿潤斜面では1 2 kbの多様なRNAが弱い発現が見られ、環境による劇的変異と最近の増幅活性が示唆された。第1エキソンの長短や第2イントロン欠失など多様なノンコーディングRNAの単離、転写開始点決定、大腸菌でのタンパク質合成、染色体クラスターの検出を行った。トランスポゾン様遺伝子RevolverはA、S(B)、DおよびABゲノムを持つコムギの祖先種やライムギその他の近縁野生種には存在しているが、パンコムギのABDゲノムでは約1万年の進化の過程で消失している。パンコムギの祖先種やライムギ、オオムギ、チノパイラム、ダシパイラムなどのムギ類の植物種について、Revolver遺伝子座の構造と塩基配列を解析して、これら種属の進化的関係を分析するために、Revolverトランスポゾンの内部配列をプライマーとするI-PCR法により、トランスポゾンに隣接するDNA断片を増幅した。引き続いて、各トランスポゾン遺伝子座の隣接領域の塩基配列を決定し、ライムギ染色体(Secale cereale)、オオムギ染色体(Hordeum vulgare、H.spontaneum)を添加したコムギ系統を鋳型にして隣接配列をプライマーとするPCRによってRevolverトランスポゾンが挿入された同祖染色体を決定した。さらに、ライムギやオオムギの染色体に位置づけられたRevolver遺伝子座のプライマーセットを利用して、ハイファ大学進化研究所との海外共同研究により、ムギ類の起源地イスラエルの多様な20の生態系に由来し、遺伝的変異に富む多様なエンメルコムギTriticum dicoccoides、野生オオムギHordeum spontaneumのコレクション約220系統について、Revolverの消長を解析し、トランスポゾンの動態を生態ストレスの面から考察した。エンメルコムギは、現代の4倍体、6倍体の栽培コムギやライコムギが持つAABBゲノムの祖先種であり、乾燥地、湿地などの多様な生態系に適応し、コムギ、救荒作物ライコムギ育種の遺伝子給源となる野生資源植物である。新規のトランスポゾン様遺伝子Revolverはライムギ属、Dasypyrum属などパンコムギの改良に有用な資源植物には多数存在する一方、栽培種パンコムギには極めて少なく、種間で量的に大きく変動している。Revolverがどのような環境条件で増幅してきたのかを検討するため、イスラエルのエボリューション・キャニオンにおける、温暖で乾燥したアフリカ型斜面、冷涼で湿潤したヨーロッパ型斜面にそれぞれ自生し、劇的に異なる環境に曝されているオオムギ野生種Hordeum spontaneumのアフリカ型斜面の46系統、ヨーロッパ型斜面の51系統を供試し、Revolverの構造と発現を調べた。まず、RevolverのTIRをプライマーにしてH. spontaneumのゲノムDNAでPCRを行った結果、0.24kbにわたる11個の多様なRevolverが検出された。次に、H. spontaneum各系統の根からRNAを供抽出し、RevolverのcDNAの両末端をプライマーにしてRT-PCRを行った結果、ヨーロッパ型斜面の系統ではRevolverの標準的な0.7kbの転写産物が一定に検出されたが、アフリカ型斜面の系統では通常存在しないないRevolverの12kbの複数の転写産物が検出されたうえ、系統間で大きさが変異していた。さらに、リアルタイムPCRでRevolverの発現量を比較した結果、ヨーロッパ型斜面のH. spontaneum系統はアフリカ型斜面の系統に対して1.7倍強く発現しており、H. spontaneum種内で環境によるRevolverの遺伝的変異が示唆された。また、ライムギから第2イントロン以降が共通するRevolverの多様な5'側構造変異体が検出され、エンメルコムギでは湿潤温暖地域でRevolverのコピー数が多く、乾燥地域では少ないなど、最近の増幅活性が示唆された。RevolverトランスポゾンのcDNAライブラリーの塩基配列を決定した結果、5クラスに分類され、第1エキソンの構造が全く異なる完全長cDNAが見いだされた。cDNAの5'末端から約100 nt下流にプライマーを合成して全RNAとアニーリングさせた後,逆転写酵素でプライマー伸長反応を行った結果、転写開始点はcDNAの5'末端に対応していた。5個のcDNAは、全長1597 bpで第2イントロン(1210 bp)、第3エキソン(301 bp)を持つが、その5'側に通常ない86 bpの配列を持っている。他方、4個のcDNAも、全長380 bpで上記の1597 bpのcDNAに対して第2イントロンを欠くものであり、多様なノンコーディングRNAが転写されていた。

一方、保存性の高い翻訳領域を持つcDNAをベクターpET32a(+)にSal I、Nco I消化で連結させて発現ベクターを作製し、大腸菌BL21(DE3)、BL21(DE3)PLysSに形質転換した。これを、シングルコロニーからA600=0.6になるまで培養し、1 mM IPTGを加えて融合タンパク質の発現を誘導した。LB培地ではBL21(DE3)PlysS菌の沈殿上に発現タンパク質が不溶化したゾル状物質が観察され、BL21(DE3)菌をTB培地で培養した場合に約20 kDaのタンパク質が10%SDS-PAGEで検出された。このcDNAプローブの染色体FISH法により、ドット状で点在するクラスターが1R短腕の中央介在部, 2R短腕の末端近傍の介在部と動原体付近の2箇所, 5R短腕の中央介在部と長腕動原体付近と中央介在部の3箇所に再現性高く検出された。この他, 6R短腕の中央介在部と長腕動原体付近の2箇所, 3R長腕動原体付近, 4R短腕中央介在部のシグナルも特徴的であり、Revolverコア遺伝子はクラスター状に存在していた。コムギの起源地イスラエルの多様な生態系に由来し、遺伝的変異に富む野生オオムギHordeum spontaneumとエンメルコムギのコレクションにおいて、トランスポゾン遺伝子の消長と構造の差異が見出された。ライムギで発現しているトランスポゾン遺伝子のmRNA構造を解析し、5'側に特に大きい構造変異が見出された。24年度が最終年度であるため、記入しない。完全長を持つcDNAライブラリーを作成し、発現しているトランスポゾン遺伝子のmRNA構造を決定する。さらに、イネゲノムには存在しないトランスポゾン遺伝子をアグロバクテリウム法でイネゲノムに形質転換し、その動態と形質発現効果を解明する。また、トランスポゾンに由来し、遺伝子の転写産物に作用して翻訳を制御しうるヘアピン型のマイクロRNAのクローニングを試みる。
統合失調症の人の訪問看護へのアドヒアランス影響要因に関する研究

訪問看護に対するアドヒアランス影響要因を明らかにすることを目的とし、地域で生活する統合失調症をもつ人に関わる看護師に半構造面接を実施した。看護師は納得のいく合意を交わすために、方略【脆さと固さへの徹底的な寄り添い】【内に潜む可能性と本音の追究】【方向づけ】【巧みな押し引き】【自己決定による合意への導き】を用い、その際【脆弱な自尊心】【不得手な親密さ】【現実認識の不調和】【固く譲れない意志】【表現されない文脈】【生活全般に影響する精神症状】【変化する生活能力】に考慮していた。これらの考慮により自己決定による合意を促していることから、これらをアドヒアランスへの影響要因と捉えることができた。本研究の目的は、利用者が主体的に訪問看護に取り組むことができるような看護援助を考えるために、統合失調症をもつ人の訪問看護アドヒアランスに影響する要因を明らかにすることである。概念「アドヒアランス」を定義するために文献検討を行ったところ、コンプライアンスと明確な区別がされないままに用いられていることが明らかになった。また、対象者の状態によって、アドヒアランスの関連概念であるコンプライアンスやコンコーダンスと使い分けていく必要があることも分かった。そこで、対象者の状態に左右されず対象者と納得のいく合意を交わすことに注目し、再度文献検討を行った結果、「交渉」が重要な概念であることが分かった。次に、Walker & Avantの手法を用いて「交渉」の概念分析を行った。分析の結果、属性に≪継続的プロセス≫≪方略≫≪関係性≫、先行要件に≪特定の相手の存在≫≪要望・希望≫≪コンフリクト≫、帰結に≪納得のいく合意≫≪新たな価値観・方法≫≪協働関係≫が抽出された。そして、交渉を「双方の要望にコンフリクトがある状況において、関係性を基盤とし、様々な方略を駆使しながら、納得のいく合意に導くための継続したプロセスである」と定義した。また、対象となる統合失調症をもつ人には、認知機能障害や病気になってから自分の意見が重要視されない経験などがあり、アドヒアランスに影響を与えていることが分かっている。そこで、統合失調症をもつ人と看護師の交渉を明らかにするために、看護師を対象としたインタビューガイドを作成した。次年度はプレテスト、本調査を行う。本研究の目的は、訪問看護において利用者が主体的に取り組むことができるような看護援助を考えるために、統合失調症をもつ人の訪問看護アドヒアランスに影響する要因を明らかにすることである。現在はその前段階として、地域で生活する統合失調症をもつ人が看護師との間でどのように交渉し、納得して治療や看護を受けているのか、あるいは受けていないのかについて、質的記述的研究を行っている。当該年度は、前年度に実施した「交渉」の概念分析をまとめ、高知女子大学看護学会誌に投稿した。次に、概念分析を元に、交渉の≪継続的プロセス≫≪方略≫≪関係性≫について問いかける半構造インタビューガイドを作成した。そして、交渉がうまくできたケースとうまくできなかったケースについてプレテストを実施し、インタビューガイドを修正した。プレテスト後は、本調査を行い、26年度中に10名の対象者から19ケース分のインタビューが終了した。インタビューは、一対象者に12回であり、1回当たりのインタビュー時間は2070分であった。分析は、グラウンデッドセオリーを参考に、データ収集と平行して行っている。個別分析では、まず切片化、コード化した。そして、コードを<対象者が行った交渉><ケースが行った交渉><家族が行った交渉><医療チーム内で行われた交渉>の4つのグループに分け、カテゴリー化した。当該年度は、研究協力者とともに、8名の対象者に語られた15ケース分の個別分析を終了している。現在は15ケースのカテゴリーを集め、前述した4つのグループごとにカテゴリー化を行っている。現在はその前段階として、看護師が地域で生活する統合失調症をもつ人とどのように交渉して合意を形成しているのか質的記述的に研究を行っている。研究参加者である15名の看護師から、合計29ケースとの交渉場面について、半構造面接によりデータを収集した。語られた交渉が実施された場は、病棟11ケース、訪問看護8ケース、デイケア7ケース、包括型地域生活支援1ケース、外来1ケース、生活保護相談1ケースであった。インタビューは1ケースにつき1回実施し、1ケースあたりのインタビュー時間は平均42.9分(17分75分)であった。分析の結果、5つの局面【合意形成への導き】【巧みな押し引き】【方向を整える】【可能性と本音の追究】【徹底的に添う】と、方略を示す14カテゴリー〔自己決定を促す〕〔共に決める〕〔変化を捉えて迫る〕〔巧みに乗せる〕〔いったん添う〕〔対峙する〕〔体験からの動機づけ〕〔先回りする〕〔自分自身を転換する〕〔全体をつなげる〕〔可能性を見立てる〕〔本音を汲み取る〕〔寄り添う〕

〔枠を破っても添う〕が抽出された。さらに、その順序性を分析した結果、「看護師は【徹底的に添う】ことを常に行い、【可能性と本音の追及】と平行して、【方向を整える】と【巧みな押し引き】を繰り返し行い、【合意形成への導き】に向かっていた。合意形成は一度きりではなく、再び【方向を整える】と【巧みな押し引き】を繰り返して、異なる【合意形成への導き】を積み重ねていた。」と説明することができた。現在は、本研究を論文として公表するために考察を執筆途中である。第一段階として行っている現在の研究は、質的研究であり、分析に時間を要することを予測して計画を立てていた。順調に実施できていると判断する。本研究の目的は、訪問看護において利用者が主体的に取り組むことができるような看護援助を考えるために、統合失調症をもつ人の訪問看護アドヒアランスに影響する要因を明らかにすることである。第一段階目として実施した研究では、看護師が地域で生活する統合失調症をもつ人へどのように交渉して合意形成しているのかを明らかにするために、グラウンデッドセオリーを用いて研究を行った。15名の研究参加者から、合計29ケースとの交渉場面について、半構造面接によりデータを収集した。前回報告後、さらにカテゴリーの洗練化を行い、分析を進めた。結果、【自己決定による合意への導き】【巧みな押し引き】【方向づけ】【内に潜む可能性と本音の追究】【脆さと固さへの徹底的な寄り添い】という5方略と、それに含まれる13行動群が抽出された。【内に潜む可能性と本音の追究】【脆さと固さへの徹底的な寄り添い】方略は、交渉初期の≪熟考された基盤づくり≫段階で用いられる方略であり、【自己決定による合意への導き】【巧みな押し引き】【方向づけ】方略は、交渉後半の≪熟練した駆け引き≫段階で用いられる方略であった。考察を加えた結果、【内に潜む可能性と本音の追究】【脆さと固さへの徹底的な寄り添い】方略を含む≪熟考された基盤づくり≫段階は、他の交渉では見られない統合失調症をもつ人を対象とした交渉の特徴的な段階であることが分かった。また、これらの方略は、統合失調症をもつ人の脆弱な自我と認知機能を考慮した方略であることが考察された。次に、統合失調症をもつ人のアドヒアランスを高め、合意形成を交わすための交渉に影響する要因を明らかにするため、質的記述的研究に取り掛かっている。半構造面接によりデータを収集し、交渉に影響を及ぼしている内容を抽出し、カテゴリー化を行う予定である。一段階目の研究結果の精度を挙げるために、複数名の研究協力者と意見交換を繰り返した。このことにより、一段階目の研究を修了するまでに、予定より半年の時間を必要とした。アドヒアランスとは、患者が治療計画の決定に積極的に参加し、セルフケア行動を遂行するという意味の概念である。
糖尿病の創傷治癒におけるビタミン B6, B12 および葉酸の影響

本研究では、糖尿病の創傷治癒遅延に対するビタミンB6、B12および葉酸の影響を検証した。糖尿病マウスを用い、ビタミン溶液または蒸留水の経口投与を開始し、投与2週間後、マウス背部に皮膚全層欠損創を作成し術後2週間の変化を評価した。結果、ビタミン投与糖尿病マウス群では蒸留水投与群と比較し血糖値が有意に減少し、肝臓中TNF-alphaおよびIL-6遺伝子発現にも著しい減少がみとめられ、CBS遺伝子発現は有意な増加がみとめられた。創傷面積でも有意な創傷治癒遅延の改善が観察された。以上のことから糖尿病の病態におけるビタミンB6、B12および葉酸の摂取は、創傷治癒遅延改善の一助となる可能性が考えられた。歯周病と糖尿病は相互に関連し合う疾患であり,糖尿病による持続的な高血糖状態は創傷治癒遅延をきたし,歯周病の病態悪化に繋がると考えられている。ビタミンB6および葉酸は免疫応答および組織修復に深く関与するが骨再生・創傷治癒を有意に改善するという報告は少ない。本研究では,糖尿病動物モデルにおける骨再生・創傷治癒にビタミンB6, B12および葉酸がどのように影響するかに着目し,骨欠損・創傷治癒に対する作用とメカニズムの解明を目的とし,平成25年度は,創傷治癒におよぼす影響について検証した。1実験モデルの作製:糖尿病マウス群(6週齢KKAy/Taマウス)および非糖尿病マウス群(6週齢C57BL/6マウス)を4週間予備飼育した後,ビタミンB6 (ピリドキサール1 mg/g), B12 (0.1 μg/g)および葉酸(3 μg/g)を含んだ溶液または蒸留水投与群に分け, 2週間投与後マウス背部に皮膚トレパンにて6.0 mmの皮膚全部欠損層を作製した。2創傷治癒,血液および肝臓中メディエーターの評価:創傷面積の変化は接写台に設置した固定カメラにて一定の倍率で撮影後,面積を測定することにより評価した。また,採血した血液より血糖値の測定, ELISA法による血清中TNF-alphaおよびIL-6の測定を行った。肝臓中TNF-alphaおよびIL-6遺伝子発現量はreal-time PCR法にて測定した。3組織標本の作製および組織学的分析:創傷部位の組織学的分析を行うため,パラフィン包埋による脱灰薄切標本を作製し,通法に従ってパラフィン包埋・薄切し,ヘマトキシリン・エオジン染色を施し,光学顕微鏡下で組織学的観察を行った。歯周病と糖尿病は相互に関連し合う疾患であり、糖尿病による高血糖状態は創傷治癒遅延を惹起し、歯周病の病態悪化へ繋がると考えられている。ビタミンB6および葉酸は免疫応答および組織修復に深く関与するが、骨再生・創傷治癒を有意に改善するとした報告は少ない。本研究では、糖尿病動物モデルにおける骨再生・創傷治癒にビタミンB6、B12および葉酸がどのように影響するかに着目し、骨欠損・創傷治癒に対する作用とメカニズムの解明を目的とした。平成25年度は創傷治癒におよぼす影響について検証し、論文投稿した。平成26年度はさらなる検証のため、Porphyromonas gingivalis (以下P. gingivalis)局所感染巣への影響に着目し、骨欠損に対するメカニズム解明に先立ち実験を行った。1.実験モデルの作製:糖尿病マウス群(KKAy/Taマウス)および非糖尿病マウス群(C57BL/6マウス)を1週間予備飼育の後、ビタミンB6 (ピリドキサール1 mg/g)、B12 (0.1 μg/g)および葉酸(3 μg/g)含有溶液群または蒸留水投与群を作製した。その後各群のマウス背部皮下に1%パラホルムアルデヒド液にて固定したP. gingivalisを1週間毎に計3回摂取、感作させた。摂取開始4週目にP. gingivalis生菌を両耳の間の頭頂部中央皮下に摂取し、P. gingivalis局所感染巣を作製した。2.血清および肝臓中メディエーターの評価:生菌摂取前、摂取後3および10日後に評価を行った。採血した血液より血糖値を測定し、血清中TNF-alphaおよびIL-6タンパク質濃度をELISA法にて検証した。肝臓中TNF-alphaおよびIL-6遺伝子発現はreal-time PCR法にて測定した。3.組織標本の作製および組織学的分析:局所感染巣の評価は、パラフィン包埋による脱灰薄切標本を作製し、ヘマトキシリン・エオジン染色を施し、組織額的観察を行った。歯周病と糖尿病は相互に関連し合う疾患であり、糖尿病による持続的な高血糖状態は創傷治癒遅延をきたし、歯周病の病態悪化に繋がると考えられている。ビタミンB6、B12および葉酸は免疫応答および組織修復に深く関与するが骨再生・創傷治癒を有意に改善するという報告は少ない。よって本研究では、2型糖尿病動物モデルにおける骨再生・創傷治癒にビタミンB6、B12および葉酸がどのように影響するかに着目し,骨欠損・創傷治癒に対する作用とメカニズムの解明を目的とし実験をおこなった。平成28年度は、骨欠損に対するビタミンB6、B12および葉酸の影響を検証しすることを目的とし、生後4週齢の健常ラット(Wistarラット)を用い、2週間の予備飼育後、ビタミンB6、B12および葉酸を含んだ溶液または蒸留水の経口投与を開始した。

骨再生の検討を行うため、投与4週間後、ラット頭蓋骨部に左右対称の直径2.8 mmの骨欠損を作製した。術後2ヶ月間の骨治癒の変化をマイクロCTにて観察し、解析を行った。解析の結果、ビタミン投与群においてコントロール群と比較して有意な骨再生がたみとめられた。また、ビタミン投与群における体重の減少および血糖値の上昇等はみとめられなかった。2型糖尿病ラットは高価であり、実験費の都合上、2型糖尿群での比較検討を行うことができなかったが、2型糖尿病の病態におけるビタミンB6、B12および葉酸摂取の影響を検証するには2型糖尿病ラット群での検証が必要不可欠であり、炎症性サイトカインの変化や抗酸化能の検証なども含め、今後の研究課題となる部分である。また、歯周病と糖尿病との関連性においてより深い検証を行うためにも、実験的歯周炎モデルを用いた比較検討を行う必要があると考える。本研究では、糖尿病の創傷治癒遅延に対するビタミンB6、B12および葉酸の影響を検証した。糖尿病マウスを用い、ビタミン溶液または蒸留水の経口投与を開始し、投与2週間後、マウス背部に皮膚全層欠損創を作成し術後2週間の変化を評価した。結果、ビタミン投与糖尿病マウス群では蒸留水投与群と比較し血糖値が有意に減少し、肝臓中TNF-alphaおよびIL-6遺伝子発現にも著しい減少がみとめられ、CBS遺伝子発現は有意な増加がみとめられた。創傷面積でも有意な創傷治癒遅延の改善が観察された。以上のことから糖尿病の病態におけるビタミンB6、B12および葉酸の摂取は、創傷治癒遅延改善の一助となる可能性が考えられた。平成25年度研究実施計画は終了し、同内容における論文は投稿中である。平成26年度研究実施計画も終了し、同内容における論文執筆中である。また、新たな実験プロトコールの追加や実験モデル作製の際の予備飼育の延長や検証メディエーターに多少の変更はあったものの、炎症性サイトカインの推移や局所感染巣の変化において予想されていた一定の結果が得られていると考える。歯周病学平成25年度実験計画が順調に進行し、さらなる検証が必要であったため、当初予定していた平成26年度実験計画に先立ち新たな実験プロトコールを作製し実施した。現在、同内容の論文執筆中であり今後投稿予定である。また平成27年度は当初予定していた平成26年度実験計画である糖尿病動物モデルにおける骨再生にビタミンB6、B12および葉酸がどのように影響するかに着目し、骨欠損に対する作用とメカニズムの解明を目的とし、検証を加えていくこととする。現在,平成25年度研究実施計画は終了し,同内容における論文執筆中である。また,実験モデル作製の際の予備飼育期間の延長や検証メディエーターに多少の変更はあったものの,炎症性サイトカインの推移や創傷部面積の変化において予想されていた一定の結果が得られていると考える。消耗品購入の際に値引きがあり、端数が発生したため。平成25年度実験計画が順調に進んでいるため,平成26年度は当初の計画通り,糖尿病動物モデルにおける骨再生にビタミンB6, B12および葉酸がどのように影響するかに着目し,骨欠損に対する作用とメカニズムの解明を目的とし,検証を加えていくこととする。次年度使用額の発生は、次年度使用額に影響を及ぼさない範囲であると考える。よって、実験計画に大きな変更点はなく、消耗品購入等に充当する。