hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
低分子量G蛋白質による細胞増殖の制御機構

1 ras癌遺伝子依存性の発癌におけるRas/Rap1標的蛋白質ホスホリパーゼCε(PLCε)の機能解析のため、遺伝子ノックアウトマウスを作製しDMBAをイニシエータ、TPAをプロモータとした二段階皮膚化学発癌実験を行なった。ノックアウトマウスでは、野生型マウスに比べパピローマの発生時期が遅延し発生個数が約4分の1に減少した。更に、扁平上皮癌へのプログレッションが全く起こらなかった。発生した全腫瘍において、H-ras遺伝子の61番コドンに活性型変異が見られた。この結果は、PLCεがras癌遺伝子依存性の個体レベルでの発癌に重要な役割を持つことを示した。また、ノックアウトマウスでは、TPA処理により誘導される皮膚基底層細胞の増殖と肥厚が起こらず、PLCεがホルボールエステル下流のシグナル伝達に重要な役割を持つ事を示した。これらの結果は、PLCεが抗癌剤開発の新しい分子標的になることを示唆した。2 PLCεノックアウトマウスは、先天性心臓半月弁膜症に起因する心室拡張を示した。半月弁の弁葉の肥厚と形態異常を引き起こす分子機構としては、PLCεが上皮増殖因子(EGF)受容体-Ras経路の下流で、骨形成因子受容体下流でのSmad1/5/8の活性化の抑制に関わると推測した。3 Ras類似蛋白質M-Rasの高次構造解析を通じて、GTP結合型Rasの中に標的蛋白質との結合能力を有する型(state2)と有しない型(state1)が相互変換が可能な状態で存在する事を見いだし、state1の高次構造の決定に世界で初めて成功した。State1は、GTPのγ-リン酸基とRasのセリン-35残基側鎖との結合が解離しており、その結果生じたポケットに嵌入することによりstate1を安定化する物質がRasの機能阻害を通して新しい抗癌剤として使える可能性を示唆した。1.昨年度発見したRas/Rap1結合能力を有するヒトホスホリパーゼC,PLCεについて、Ras,Rap1との共発現による細胞質から各々細胞膜およびゴルジ装置への移送とホスホリパーゼC活性の活性化を示し、Ras/Rap1の標的蛋白質である事を証明した。PLCεは、CDC25類似ドメインにてRap1グアニンヌクレオチド交換促進活性を持ち、Rap1活性化を通じてシグナルを自己増幅する事を示した。PLCεは、マウス胎生期において神経系前駆(幹)細胞に特異的に発現されていた。2.昨年度発見したヒト新規Rap1,2特異的グアニンヌクレオチド交換促進蛋白質(GEF)RA-GEF-1,2のうち、RA-GEF-1は、そのRAドメインにてRap1・GTPと結合してゴルジ装置へ移送され、そこに存在するRap1をそのGEFドメインにて活性化する自己活性化型のGEFである事を示した。一方、RA-GEF-2はRAドメインにてM-Ras・GTPと結合しRas/Rap1-GEF活性を有した。3.Ras/Rap1の第二の結合部位であるRafシステインリッチ領域がRaf第二保存領域CR2によってマスクされており、CR2内Ser-259の燐酸化によって開放され、Ras/Rap1結合能力を獲得するという燐酸化による調節機構を示した。これに基づき、Raf活性制御の新しい分子機構を提唱した。4.出芽酵母アデニル酸シクラーゼC末端領域とその結合蛋白質CAPとの複合体がファルネシル化されたRasの第二の結合部位であり、この第二の結合がRasによるアデニル酸シクラーゼの活性化に必須である事を遺伝学的・生化学的に証明した。標的蛋白質の活性化に於てRasの翻訳後修飾(ファルネシル化)が必須である分子機構が解明され、第二の結合の存在とその重要性が標的蛋白質の種類によらず普遍的である事が示唆された。1,低分子量G蛋白質RasとRap1のヒト新規標的蛋白質(エフェクター)であるホスホリパーゼC, PLCε,がRas, Rap1との結合によって各々細胞膜とゴルジ装置に移送されて活性化を受ける事と、ゴルジ装置において、Rap1に対してグアニンヌクレオチド交換促進活性を持つ自らのCDC25類似ドメインを介してRap1を活性化することによりシグナルを自己増幅する機能を有する事を証明した。血小板由来細胞増殖因子(PDGF)による刺激が、RasとRap1の活性化を介して各々即時的と持続的の二相性のPLCε活性化を引き起こす事を示した。マウスでの組織特異的発現パターンの解析などから、PLCεが神経系前駆(幹)細胞の発生・分化に関与する可能性が示唆された。PLCε遺伝子ノックアウトマウスの作製に成功した。2,ヒト新規Rap1,Rap2特異的グアニンヌクレオチド交換促進蛋白質(GEF)であるRA-GEF-1,2のうち、RA-GEF-1は、GTP結合型Rap1との結合によりゴルジ装置に移行してRap1に対するGEF活性が自己増幅される新しいタイプのGEFである事を示した。RA-GEF-2は、GTP結合型M-Ras(R-Ras3)との結合によって細胞膜に移行して、細胞膜に存在するRap1のみを選択的に活性化する事を示し、Rap1の活性が複数のGEFにより細胞内で空間特異的に制御されている事を証明した。3,Ras/Rap1のエフェクターの中で、唯一RA(Ras-associating)

ドメインまたはその類似構造を有しない蛋白質と考えられてきた出芽酵母アデニル酸シクラーゼについても、RAドメインが主要Ras結合部位である事を見い出し、RAドメインが出芽酵母から哺乳動物まで保存されたRas/Rap1結合認識構造である事を確立した。1、我々が発見した新規Ras/Rap1エフェクター・ホスホリパーゼCε(PLCε)の細胞増殖因子刺激に伴う活性化機構を解明した。血小板由来細胞増殖因子(PDGF)刺激に伴い、RasとRap1の活性化を介して各々即時性と持続性の二相性のPLCεの活性化が観察された。Rap1に対するグアニンヌクレオチド交換促進活性を持つPLCεのCDC25類似ドメインを介したシグナルの自己増幅機構がRap1による持続的活性化に必要であった。Ras/Rap1によるPLCεの活性化は、BaF3細胞に対して増殖促進効果と細胞増殖因子飢餓により誘導されるアポトーシスの抑制効果を示した。マウスでの発現パターンの解析から、PLCεが胎生期に神経幹細胞の神経細胞系列への分化に際して強く発現誘導されることと、成体では心臓に良く発現されていることがわかった。この結果から、PLCεが神経細胞の発生・分化や心臓機能調節に関与する事が示唆された。実際、遺伝子ターゲッティングによりPLCε遺伝子ノックアウトマウスを作製したところ、生後4週令の早期から心臓の拡大と心不全マーカーの過剰発現の表現型が検出された。また、PLCε遺伝子ノックアウトマウスを用いて、発癌イニシエーターDMBAとプロモーターTPAによる皮膚化学発癌実験を行ない、PLCεのRas依存性発癌における機能を個体レベルで解析している。2、X線結晶解析によるエフェクターのRasファミリー低分子量G蛋白質結合認識機構の構造科学的解析を進め、RA-GEF-2のRas結合(RA)ドメインと特異的に結合するM-Ras(R-Ras3)のGDP, GTP結合型の結晶化を行ない、X線結晶解析による高次構造解明(分解能1.96オングストローム)に成功した。Ras, Rap1の高次構造と比較すると、スイッチII領域の構造が異なっていた。1 ras癌遺伝子依存性の発癌におけるRasエフェクター・ホスホリパーゼCε(PLCε)の役割を個体レベルで解析するため、PLCε遺伝子ノックアウトマウスを作製し、7,12-dimethylbenzanthracene (DMBA)をイニシエータ、12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)をプロモータとした二段階皮膚化学発癌実験を行なった。その結果、PLCεノックアウトマウスでは、野生型マウスに比べパピローマの発生時期が著明に遅延し、パピローマの発生個数が約4分の1に減少した。更に、扁平上皮癌へのプログレッションが全く起こらなかった。発生した腫瘍では全てH-ras遺伝子の61番目のコドンに活性型変異が見られた。この結果は、PLCεがras依存性の発癌に重要な役割を持つことを示し、PLCεが抗癌剤開発の新しい分子標的になりうることを示唆した。2 PLCεノックアウトマウスは、半月弁形成異常による半月弁狭窄と逆流に起因する中等度の心室拡張を示した。この表現型は、上皮細胞増殖因子(EGF)受容体の活性低下変異マウスやヘパリン結合性EGFノックアウトマウスの表現型と酷似しており、PLCεがEGF受容体下流でRasのエフェクターとして半月弁形成に関わっていることが示唆された。
次世代ＮＫＴ細胞免疫治療に向けた肺癌微小環境下の抗腫瘍エフェクター機構の解明

強力な抗腫瘍効果を有するNKT細胞の作用機序解明のため、重度複合免疫不全マウスを用いたNKT細胞免疫治療モデルを樹立し、その抗腫瘍効果発揮メカニズムを明らかにする研究を行った。その結果、本肺癌モデルに対する特異的T細胞の抗腫瘍効果は活性化NKT細胞併用により明らかに増強するとともに、腫瘍浸潤T細胞増加とインターフェロンγ産生増強を認めた。また、マイクロアレイを用いたNKT細胞免疫治療に関連する遺伝子発現解析から得られた遺伝子の発現調節により、腫瘍由来の免疫抑制因子に対する抵抗性を獲得することから、本遺伝子の発現制御によりNKT細胞免疫療法の効果を増強出来る可能性が示唆された。悪性腫瘍に対する強力な抑制効果を有するNKT細胞を用いた免疫細胞治療により、有効で侵襲性の低い肺癌の新規治療を確立することを目的として、免疫系ヒト化マウスを用いたNKT細胞免疫治療モデルにおいて、その治療効果発揮のメカニズムを明らかにするとともに、治療効果をあらかじめ予測することが出来るバイオマーカーを探索する研究を行っている。重度複合免疫不全マウスであるNOD/SCID/IL2Rγ-/-マウス(NOGマウス)は、通常困難なヒト各種細胞の移植が可能で、ヒト疾患をマウス上に再現し、腫瘍局所での解析を可能とする。昨年度このNOGマウス上に、異所性および同所性にヒト肺癌細胞株を移植するヒト肺癌モデルと、免疫細胞投与による治療効果の画像評価法を確立し、NKT細胞の示す抗腫瘍効果のメカニズム解明を行っている。治療用細胞として健常人および肺癌患者由来末梢血を用いて活性化NKT細胞を培養・誘導し、各種表面抗原を解析後に、癌抗原特異的T細胞とともに投与した。さらに腫瘍浸潤リンパ球を回収し、T細胞およびNKT細胞のインターフェンロンγを代表とした抗腫瘍サイトカインの産生能とともに、各種抑制サイトカインの解析を継続して行っている。一部のサイトカインや表面抗原については、阻害抗体などを併用した作用機序解明を行っている。更にNKT細胞投与によるマイクロアレイを用いた網羅的遺伝子発現解析も継続して進めており、候補遺伝子として得られた一部の遺伝子発現に関して、in vitroでの発現機序と抗腫瘍効果への関与を明らかとすべく解析を行っている。腫瘍に対する強力な抑制効果を有するNKT細胞を用いた肺癌に対する免疫細胞治療により、有効で侵襲性の低い肺癌の新規治療を確立することを目的として、免疫系ヒト化マウスを用いたNKT細胞免疫治療モデルにおいてその治療効果発揮のメカニズムを明らかにするとともに、治療効果をあらかじめ予測することが出来るバイオマーカーを探索する研究を行っている。重度複合免疫不全マウスであるNOD/SCID/IL2Rγ-/-マウス(NOGマウス)は、通常困難なヒト各種細胞の移植が可能で、ヒト疾患をマウス上に再現し、解析を施行することを可能とする。このNOGマウスを用い、異所性および同所性に各種がん抗原を発現するヒト肺癌細胞株を移植することでヒト肺癌モデルを構築し、腫瘍形成条件および治療至適時期を確立した。このモデルを用いてNKT細胞の抗腫瘍効果の発揮機序を解明するために、治療用細胞として健常人および肺癌患者由来末梢血から活性化NKT細胞を培養・誘導し、同様に培養・誘導した癌抗原特異的T細胞とともに投与した。マウス上での治療効果を確認するためにCTやIVISといった画像評価法を確立した。さらに腫瘍浸潤リンパ球を回収し、T細胞およびNKT細胞のインターフェンロンγを代表とした抗腫瘍サイトカインの産生能とともに、各種抑制サイトカインの解析を行っている。更に気管支鏡下サンプルを用いた網羅的解析も進めている。悪性腫瘍に対する強力な抑制効果を有するNKT細胞を用いた免疫細胞治療により、有効で侵襲性の低い肺癌の新規治療を確立することを目的として、免疫系ヒト化マウスを用いたNKT細胞免疫治療モデルにおいて、その治療効果発揮メカニズムを明らかにするとともに、治療効果予測バイオマーカーを探索する研究を行った。重度複合免疫不全マウスであるNOD/SCID/IL2Rγ-/-マウスは、通常困難なヒト各種細胞の移植が可能で、ヒト疾患をマウス上に再現し、腫瘍局所での解析を可能とする。このマウス上に、異所性および同所性にヒト悪性腫瘍細胞株を移植するヒト肺癌モデルと、免疫細胞投与による治療効果の画像評価法を確立した。このマウスモデルにおいて、ヒト肺癌のモデル抗原としてmesothelinを発現する細胞株を皮下に投与し、遺伝子導入法を用いて作成したmesothelin特異的T細胞によるin vivoでの抗腫瘍効果を検討したところ、末梢血単核球由来活性化NKT細胞の併用によって明らかに腫瘍縮小効果は増強した。増強効果のメカニズム解析のために腫瘍浸潤リンパ球を回収し、T細胞およびNKT細胞のサイトカインの産生能を検討すると、活性化NKT細胞の併用により腫瘍浸潤T細胞の増加とインターフェロンγ産生増強を認めた。

更にマイクロアレイを用いた網羅的遺伝子発現解析にてNKT細胞免疫治療後に発現上昇を認めた遺伝子の一つの作用機序を解析したところ、発現上昇した遺伝子の強制発現によりTh1サイトカインの産生増強とTh2サイトカインの産生抑制を認め、腫瘍から産生されるProstaglandin E2による免疫抑制効果をキャンセル出来ることが明らかとなった。この遺伝子の発現状態を人為的に操作することで、NKT細胞免疫療法の効果を増強出来る可能性が示唆され、更なるメカニズム解析を実施している。NKT細胞による抗腫瘍効果発揮機序の解明およびNKT細胞を利用した免疫細胞療法の開発研究昨年度確立したNOGマウスの肺癌モデルと治療効果の画像評価法を用いて、実際に治療実験を行い、得られた作用機序解明の結果の一部に関しては、現在投稿準備中のところまで研究が進捗している。NKT細胞免疫治療に関わる遺伝子発現の網羅的解析の結果は、多くの候補遺伝子の中で機能解析まで進んでいるものもあり、来年度まで継続して解析を進めることで、結果が得られると考えている。ヒト免疫細胞やヒトがん細胞を移植し、マウス上で再現することが可能なNOGマウスの肺癌モデルに関しては、特に肺癌同所性モデルの適切な条件設定が困難であったものの、治療効果を確認できるモデルが確立できた。またこのモデルを用いてヒトNKT細胞の抗腫瘍効果を、CTやIVISといった非侵襲的画像検査によって確認する方法も確立することができた。このモデルを用いて実際に実施した治療実験では、モデルがん抗原を特異的に認識するがん抗原特異的T細胞の示す抗腫瘍効果に対するNKT細胞の増強作用も確認できており、作用機序解明が進むものと考えている。NKT細胞の抗腫瘍効果の作用機序解明に向けて、確立したヒト肺癌移植マウスモデルを用いてCTやIVISといった画像評価法を併用し、現在進めているサイトカイン産生能の解析などをさらに進める。最終的な課題である次世代NKT細胞免疫治療の開発研究として、現在までに候補として挙げられている抗腫瘍効果増強や免疫抑制状態解除に有効と考えられる表面分子や発現遺伝子のNKT細胞療法への相乗効果を来年度に検討していく。これらの基礎検討を行うにあたっては臨床応用を絶えず視野に入れ、臨床研究として実施するために必須となる動物モデルによる基礎データを確実に集積していき、早期に臨床応用できるよう開発を進めていく。NKT細胞の抗腫瘍効果の作用機序解明に向けて、確立したヒト肺癌移植マウスモデルを用いてCTやIVISといった画像評価法を併用しつつ、現在進めているサイトカイン産生能の解析などをさらに進める。最終的な課題である次世代NKT細胞免疫治療の開発研究として、より抗腫瘍効果の高いNKT細胞サブセットの追求や抗腫瘍効果を高めた遺伝子改変NKT細胞の開発研究、免疫抑制状態を解除するための他の治療法との相乗効果を今年度以降検討していく。
Alport症候群の治療法開発に向けた基礎的検討

1)Alport症候群モデルマウスにおける薬物療法の有効性の検討病理組織学では、CyA投与群およびenalapril投与群では、半月体形成は有意に抑制された。生存期間は、CyA投与群、MZR投与群では無治療群と比べて有意差は認められなかったが、enarapril投与群では生存期間も有意に延長した。enalapril投与群では、細胞外基質TNCの発現量増加のみが有意に抑制された。TGF-β1が細胞外基質の発現増加に関与していることが示唆された。enalaprilは、TGF-β1を介さずに、TNCの発現増加を抑制することが考えられた。アンジオテンシン変換酵素阻害薬は、Alport症候群の薬物治療として有効であると考えられた。Col4a4・tenascin Cダブルノックアウトマウスでは、尿タンパクが8週齢で有意に抑制され、生存期間も有意に延長した。GBMにおけるTNCの発現増加は、Alport症候群においては腎障害の増悪因子になることが考えられた。3)IV型コラーゲンα4鎖を産生するトランスジェニックマウスによるAlport症候群モデルマウス表現型の救済実験CAGプロモーターにCol4A4遺伝子をつなぎ、レポーター遺伝子としてLacZ遺伝子を用いたトランスジェニックマウスを作成した。Col4a4ノックアウトマウスと交配し、救済実験を行っている段階である。4)eledroporation法によるAlport症候群の遺伝子治療の検討プラスミドpCAGGS/Col4a4/LacZを、マウスの腹部大動脈あるいは腎被膜下に注入後、electroporationを行った。腎被膜下投与のelectroporation法は、腎皮質に比較的高率に遺伝子導入でき、本疾患の遺伝子治療に有用である可能性が考えられた。1)Alport症候群に対する薬物療法の有効性の検討免疫抑制剤サイクロスポリンA(CyA)およびミゾリビン、ACE阻害薬エナラプリルについて検討した。CyAとエナラプリルは蛋白尿を抑制できたが、ミゾリビンは蛋白尿を抑制できなかった。エナラプリルは生存期間も延長でき、有効と判定されたが、CyAとミゾリビンは生命予後を改善できなかった。CyAの蛋白尿抑制効果は免疫抑制作用によるものではなく、糸球体血管内圧低下作用によることが考えられた。2)Alport症候群の腎障害の進展機序におけるtenascin Cの役割の検討細胞外基質のtenascin CのGBMでの増加が本症の腎障害の進展に関与していることが考えられたので、tenascin Cノックアウトマウスとの交配により、tenascin C, Col4a4ダブルノックアウトマウスを作成した。このマウスでは、Col4a4ノックアウトマウスと比較して、生後8週では蛋白尿および糸球体上皮細胞のGBMからの剥離が有意に抑制された。しかしながら、生後12週での尿・血液、病理組織学的所見および生命予後についてはCol4aノックアウトマウスとの差は認められなかった。この結果より、本症におけるtenascin増加は腎障害の増悪因子として働くことが考えられた。3)トランスジェニックマウスを用いたAlport症候群の遺伝子治療の有効性の検討Col4a4遺伝子のプロモーターに正常なCol4a4 cDNAをつないだトランスジェニックマウスを作成した。現在,Col4a4ノックアウトマウスと交配中であり、正常なIV型コラーゲンα4鎖を産生できるCol4a4ノックアウトマウスを作成し、腎障害がどの程度抑制されるか明らかにする。1)Alport症候群モデルマウスにおける薬物療法の有効性の検討病理組織学では、CyA投与群およびenarapril投与群では、半月体形成は有意に抑制された。生存期問は、CyA投与群、MZR投与群では無治療群と比べて有意差は認められなかったが、enarapril投与群では生存期間も有意に延長した。

enalapril投与群では、細胞外基質TNCの発現量増加のみが有意に抑制された。TGF-β1が細胞外基質の発現増加に関与していることが示唆された。enalaprilは、TGF-β1を介さずに、TNCの発現増加を抑制することが考えられた。アンジオテンシン変換酵素阻害薬は、Alport症候群の薬物治療として有効であると考えられた。Col4a4・tenascin Cダブルノックアウトマウスでは、尿タンパクが8週齢で有意に抑制され、生存期間も有意に延長した。GBMにおけるTNCの発現増加は、Alport症候群においては腎障害の増悪因子になることが考えられた。3)IV型コラーゲンα4鎖を産生するトランスジェニックマウスによるAlporl症候群モデルマウス表現型の救済実験CAGプロモーターにCol4A4遺伝子をつなぎ、レポーター遺伝子としてLacZ遺伝子を用いたトランスジェニックマウスを作成した。COl4A4ノックアウトマウスと交配し、救済実験を行つている段階である。4)eledroporation法によるAlport症候群の遺伝子治療の検討プラスミドpCAGGS/Col4a4/LacZを、マウスの腹部大動脈あるいは腎被膜下に注入後、electroporationを行つた。腎被膜下投与のelectroporation法は、腎皮質に比較的高率に遺伝子導入でき、本疾患の遺伝子治療に有用である可能性が考えられた。
包括的な細胞性免疫応答を利用したEBウイルス陽性癌の治療研究

【材料と方法】EBNA1のC末端側の約200アミノ酸をカバーするオーバーラッピングベプチドを用いてEBV既感染成人末梢血単核球を繰り返し刺激した後、限界希釈法にてCD4^+T細胞クローンを樹立した。抗HLA抗体によるブロッキング実験と既知のHLAを保有するLCLパネルに対する反応性から拘束分子を決定した。エピトープと推定される配列を含む、11ないし13アミノ酸から成るペプチドを合成し、エピトープを決定した。【結果と考察】4株のCD4^+T細胞クローンを樹立し、いずれも異なるエピトープを認識していた。そのうちの1つはDR*0401によって提示される新規エピトープであった。他の3株のクローンは既知のエピトープ領域を認識していたが、拘束分子は報告されているHLAと異なり、DR51、DP2、DQ6であった。これらHLAの日本人における保有率は、DR*0401が10%、DR51が20%、DPaが30%、DQ6が20%であり、EBV陽性癌に対する免疫応答解析と治療応用に有用なものであると考えられる。DR51拘束性クローンは、EBV陽性T/NICリンパ腫から樹立された細胞株に対して傷害活性を示した。CD4^+T細胞をヘルパーとしてのみならずエフェクターとして利用できる可能性が示唆された。
会話の理解における韻律情報の利用とそれに基づく指導法の研究

1.話者の口形の弁別力と個人差について3音節単語の最小対立音節対の読唇弁別実験の結果、話者の口形には個人差があり、しかも連続した会話の中では最適条件を保持することは困難であることから、口形カテゴリーを設定し初期学習に用いることは効果的であるが、より細かな特徴を追求することは限界があり、より高いレベルでの読唇上達を考えるには、口形以外の手がかりの要因となる特徴やタイプを検討する必要があること、また他の手段との併用や組み合わせ方法の工夫が必要とされることが示された。2.会話理解における非音声要素の機能的役割りの分析健聴青年二人が過去の共通した経験について話し合っている会話場面で見られる、会話に随伴する身振りや顔の動きなどの非音声的要素について、形態的に分類し、それの意味的機能の分析から、それの会話の進展や理解への貢献度を検討した。会話に随伴する動きが、会話でやりとりされることばの意味を明確にし、意味にアクセントを与え理解に貢献することは示されたが、意味的機能の分析は十分には行えなかった。3.会話理解における不完全な聴覚情報と読唇の相補効果歪み音による不完全な聴覚情報と、発話者の顔を見る読唇情報との相補効果を分析した。どちらの情報も不完全で了解率は単独では25%程度であるが、両者が共に提示されるとその了解率は80%以上に上昇する。また併用条件での了解率は聞き手の聴取力よりも読唇力に依存することが示され、中途失聴者や人口内耳施術者は基礎的な訓練によって得られる聴取と読唇の併用効果の伸びはかなり期待できることが示唆された。1.会話理解における超分節的要素の機能的役割りの分析発達遅滞児の自由遊びによる言語指導セッションでのセラピストと対象児の会話音調の変化とポ-ズの長さと位置,及び随伴するジェスチャを収録,意味的機能との関係について仮説的分類を行っている。まだ意味的機能との関連を示す的確な分類原理が発見できていないが,その可能性は見出している。語用論的分析と意味構造との関連分析から分類原理の検討を続ける。2.発話における音声言語と手指言語の同期関係の分析聴覚障害者と健聴者の会話場面の録画資料の分析から,音声と手指の同期関係を分析し,語彙レベルでの対応関係よりも意味レベルでの対応関係ができている話者の場合音声の韻律の変化が少なく,被読唇率が上昇する傾向が示された。3.音声情報と非音声情報の変化と会話文の理解度の分析音響フィルターにより音声情報の明瞭度を段階的に変化させた会話文による読唇テストを作成,読唇テストの誤答分析からテストの採点基準の作成と訓練効果の評価のためのパラレルリストの編集を行った。またポ-ズの位置と種類が読唇に及ぼす効果を分析,分節毎の1秒以内のポ-ズが読唇に有効に働くことが確かめられた。また聴覚障害児の発話明瞭度に関して教師と学生との相違を分析,教師による明瞭度がかなり高いことを示した。1.会話理解における超分節的要素の機能的役割りの分析発達遅滞児の自由遊びによる言語指導セッションでのセラピストと対象児の会話音調の変化と随伴する行為の持つ意味的機能について、語用論的分析を行っているが、まだ資料分析が不足している。2.聴覚障害児の発話明瞭度に及ぼす視覚情報の結果韻律情報に欠けている聴覚障害児の発話明瞭度について、発話者の顔を見る読唇情報の付加による変化を分析した。重度の聴覚障害児の不安定な口形からの読唇情報であっても、不完全な韻律情報を補い、明瞭度がかなり上昇することが示された。読唇情報と韻律情報との交互作用について、細部にわたる分析が必要である。3.会話文の明瞭度の評価方について読唇テストのパラレルリストの検討を行い、使用に耐えられるテスト項目の選定と、信頼性の検討を行った。

会話明瞭度について読唇情報の分析がかなり可能になった。聴覚障害児の会話明瞭度の改善への手だて聴覚障害児の単音節から文章までの明瞭度の変化を分析し、文章明瞭度の上昇率の大きな発話の韻律的特徴を抽出、明瞭度の高くなる発話の導き方についていくつかの仮説を導いた。次年度検討する。1.話者の口形の弁別力と個人差について3音節単語の最小対立音節対の読唇弁別実験の結果、話者の口形には個人差があり、しかも連続した会話の中では最適条件を保持することは困難であることから、口形カテゴリーを設定し初期学習に用いることは効果的であるが、より細かな特徴を追求することは限界があり、より高いレベルでの読唇上達を考えるには、口形以外の手がかりの要因となる特徴やタイプを検討する必要があること、また他の手段との併用や組み合わせ方法の工夫が必要とされることが示された。2.会話理解における非音声要素の機能的役割りの分析健聴青年二人が過去の共通した経験について話し合っている会話場面で見られる、会話に随伴する身振りや顔の動きなどの非音声的要素について、形態的に分類し、それの意味的機能の分析から、それの会話の進展や理解への貢献度を検討した。会話に随伴する動きが、会話でやりとりされることばの意味を明確にし、意味にアクセントを与え理解に貢献することは示されたが、意味的機能の分析は十分には行えなかった。3.会話理解における不完全な聴覚情報と読唇の相補効果歪み音による不完全な聴覚情報と、発話者の顔を見る読唇情報との相補効果を分析した。どちらの情報も不完全で了解率は単独では25%程度であるが、両者が共に提示されるとその了解率は80%以上に上昇する。また併用条件での了解率は聞き手の聴取力よりも読唇力に依存することが示され、中途失聴者や人口内耳施術者は基礎的な訓練によって得られる聴取と読唇の併用効果の伸びはかなり期待できることが示唆された。
固体高分子電解質/電極界面における分子運動ダイナミクスのその場赤外吸収分析

固体高分子電解質は、燃料電池やリチウム電池あるいはセンサーなどの実用的な電解質として非常に重要な材料となっている。そこで、本研究では固体高分子電解質を実際に試用する場合にも最も重要となる固体電極との接合界面について研究を行った。固体/固体の界面を直接観察するためのいくつかの方法がこれまでに開発されてきているが、本研究では"その場"赤外吸収分光法を用いた研究を行った。研究の初期には内部反射型の測光システムを完成するための研究を行い、その測定装置を用いて固体高分子電解質Nafionと白金電極との界面の状態変化に関する測定を行った。以下に得られた結果をまとめる。(1)測光システムの開発リチウム金属表面の状態に関するダイナミックな化学組成の変化を"その場"赤外吸収分光法を用いて測定することができ、本測光システムが十分に機能していることが分かった。(2)CF_3(CF_2)_7SO_3Hモデル化合物のPt電極上への吸着現象について調べ、電極電位により吸着状態が影響されることを見い出した。Nafion溶液からPt電極上へNafion膜を形成させる時の状態変化について動的な変化を観察することができた。さらに、電解液を加えた場合のNafion/Pt界面の状態変化を観察し、電解液の浸透により電極と固体高分子電界室の接合状態が変化することを見い出した。また、電極電位の変化によるPt/Nafion界面の接合状態の変化について動的な観察に成功した。(4)Nafionのミクロ相分離構造に関する知見を原子間力顕微鏡および表面電位測定装置により可視化するすることに成功した。高分子固体電解質型燃料電池や電気化学的酸素センサーの電解質として用いられる高分子電解質は、骨格構造としての疎水性の長鎖フルオロカーボン基と親水性のスルホン酸基から構成さる。電極に固体高分子電解質が接合している場合に、これらの疎水性基や親水性基が電極に接触している。このような状況下で、酸素還元や水素酸化いった反応を生じさせた場合に、これらの官能基がどのような運動あるいは変化を起こしているのかについて"その場"赤外吸収分光法を用いて研究を行った。本年度は、測定系の構築を目的として、これまでに経験のある金属電解液界面の測定を行った。この結果、新たに設計したセルおよび購入した赤外吸収分光器が我々の測定に十分対応する性能を有していることがわかった。次に内部反射型セル用の白金電極をスパッタリングにより作製した。特に、十分に薄く、かつ十分な電気伝導性を有する薄膜を作製するための条件を確定した。さらに、より測定の簡単な、電解液系におけるパ-フルオロスルホ酸の白金電極上への吸着を測定の対照とした予備実験を行った。その結果、内部反射型のセルを用いて高速に測定を行える"その場"赤外吸収分光測定システムが十分良好に機能することが分かった。また、電解液中に存在するパ-フルオロスルホン酸の白金電極への吸着現象を電極電位を変化させて調べた結果、電位に応答して吸収位置が変化したり、ピークの形状が変化することが確認できた。次年度は、本測定装置を用いて高分子固体電界質と電極界面における高分子鎖の運動の測定を行う。前年度までに、その場赤外吸収分光測定のための光軸および測定系の設計および設置を完了した。また、非水電解液を用いたリチウム金属の表面の動的変化について測定を行った結果、この測定装置で十分に目的とする固体高分子電解質の電極界面における動的な挙動を観察することができることが分かった。そこで、本年度はKRS-5あるいはZnSeのプリズム型の窓材にPt電極を直流スパッタリングにより取り付け、その上に高分子固体電解質の一つであるNafion膜を形成し、Pt/Nafion界面を作製した。この電極系を用いてNafionのPtへの接合について検討を行った。

Nafion溶液から膜が形成されていく時の動的な挙動のその場観察を行い、フルオロカーボン直鎖およびスルホン酸基に関する吸収の測定に成功し、接合状態に関する知見を得ることができた。さらに、これに電解液を加えることによってもその界面を構成するフルオロカーボン直鎖およびスルホン酸基の割合が変化することが分かった。このように、高分子固体電解質とPt電極の界面の状態は固体高分子電解質内に含まれる水分量により大きく変化することが分かった。次に,Pt/Nafion界面に電位をかけてその変化について測定を行った。水素発生の電位から酸素還元の生じる電位領域においてはPt/Nafionの界面構造は大きく変化することなく、一定であった。しかし、水素電極に対して約1.2V程度の電位を印加したときから大きく変化し、より親水的な界面が形成されることが分かった。一方、酸素還元を行った場合のPt/Nafion界面においては、電位が水素電極に対して0.8V程度しか印加されていないにもかかわらず界面での親水性基および疎水性基の状態は変化し、電極反応により界面が動的に変化していることが分かった。
屈折法におけるイメージング手法の研究

石油・天然ガスなどの地下資源の探鉱活動において、地震探査手法は地下構造を正確に知る手段として必要不可欠な技術である。屈折法は地震探査法の1つの手法であり長い歴史を持つ技術体系であるが、この手法の欠点は、地震波が保持している2つの基本的な情報(走時情報と振幅情報)に対して、走時情報のみに着目し、これらを観測データから読みとって解析を行っている点である。このため多くの場合、解析結果の精度は最初の読みとり値に大きく依存し、今まで精度の向上が難しかった。本研究が主眼としたのは、屈折波を用いた地下境界面のイメージング技術の開発研究である。近年反射境界面に対するイメージング技術は、それなりの研究が進められて来た。しかしながら屈折波に関する研究は、今のところ行われていない。その理由は、おそらく屈折法は完成された手法と考えている研究者が多いためと思われる。ただし具体的な手法の開発に際し、単に反射法で開発された手法のアナロジー的適用では、屈折境界面のイメージングは不可能である。本研究では、屈折波の伝播経路を考慮した新しいイメージング手法の理論的研究と、その最適アルゴリズムの開発、ならびに実データを用いた新手法の技術評価を行う事を目的として実施された。本研究を遂行した結果、たたみ込み積分を用いて、初動走時の読み取りを必要としない、屈折境界面のすいて手法の確立が出来た。さらにプラスマイナス法を用いることで、より正確な屈折波解析の技術が構築できた。屈折波を用いた地下構造の探査法は長い歴史を持った手法である。しかしながらこの手法の欠点は、観測された地震波が持っている2つの基本的な情報(走時情報と振幅情報)に対して、走時情報のみに着目し、これらの値を観測データから読みとって解析を行って来た点である。このため解析結果の精度は、最初のデータの読みとり値に大きく依存し、精度の向上が難しかった。本年度実施した研究の結果、以下の様なことが判明すると共に、それを元にした解析アルゴリズムの開発が行われた。まず、萩原のはぎ取り法に代表される手法によって決定されたインターセプトタイムは、屈折境界面から反射された波に対する往復走時となっていることを示すことができた。インターセプトタイムを元に、深度変化を行いその包絡線を求める過程は、反射法における震度マイグレーションと同等であることが分かった。インターセプトタイムの決定方法は、測線の左右に震源を持つ走時データの和から、両端走時を引くことであるが、これらの演算は、コンボリューションを用いて、オリジナルのデータを使って計算可能であることが分かった。上記の方法が具体的なデータに対して適用可能かどうか、差分法で計算されたテストデータに対して適用され、本アルゴリズムは充分有用であることが分かった。これらより、初動走時の読みとりを必要とせず、観測データを直接利用する手法は反射法データ処理で開発された幾つかのデータ処理手法を適用することで、データの品質が向上することが分かった。上記の考察に基づき、データ解析に必要となる処理アルゴリズムの具体的なプログラム開発を行った。

ただし具体的な手法の開発に際し、単に反射法で開発された手法のアナロジー的適用では、屈折境界面のイメージングは不可能である。本研究では、屈折波の伝播経路を考慮した新しいイメージング手法の理論的研究と、その最適アルゴリズムの開発、ならびに実データを用いた新手法の技術評価を行う事を目的として実施された。本研究を遂行した結果、たたみ込み積分を用いて、初動走時の読み取りを必要としない、屈折境界面のすいて手法の確立が出来た。さらにプラスマイナス法を用いることで、より正確な屈折波解析の技術が構築できた。
次世代型再生医療の具現化に必要な生体血管網模倣技術および重厚臓器創製技術の開発

本課題では、移植医療に適用できる臓器を人工的に創製するために不可欠な毛細血管網の再現技術ならびにそれを利用した生体組織構築法の開発を目的とした。毛細血管網の鋳型としてゼラチンのマイクロファイバーを利用することで、コラーゲンゲル中に毛細血管網様流路ネットワークを作製できた。その流路内に培地を流通させることで、あらかじめゲル内に封入した臓器細胞を増殖させることができた。代謝系臓器を人工的に創製することができれば、移植医療のドナー不足の問題を解決でき、重篤な臓器疾患患者の救命に繋がる。その実現には、まず、生体の毛細血管網を再現できる技術の確立が不可欠である。本研究では、極細の中空ゲルファイバーならびに中実ファイバーを利用することで、上述の生体血管網に極めて酷似した流路ネットワークならびにそれを利用した重厚三次元組織体創製技術の確立を目指している。本年度は以下の項目について検討を行った。1.細胞接着性を有する中空ゲルファイバーの作製:中空ゲルファイバーを血管として利用する際、その中空部内表面に血管内皮細胞を固定化することが求められる。ゲルファイバー材料として用いるアルギン酸ゲルの細胞接着性は極めて低い。そこで、細胞接着性タンパク質であるゼラチンやコラーゲンをファイバー内に組み込んだ。続いて、それらをトランスグルタミナーゼ等を用いて架橋した。その結果、長期間安定的に細胞接着性を有する中空ゲルファイバーを作製できた。2.極細ゼラチンゲルファイバーの作製:wet spinning法を利用することで、直径10 μmの中実ゼラチンゲルファイバーを作製した。続いて、そのファイバーの束を乾燥し、綿飴状にした後、それをコラーゲン水溶液に加え、その溶液をゲル化させた。その後、温度を上げることによりコラーゲンゲル中のファイバーを溶解させることで、ファイバーがあった部分を毛細血管様流路にすることができた。その流路内に培地や血液を連続的に流通させることが可能であった。「研究実施計画」の内容を概ね達成できているため。本研究では、極細の中空ゲルファイバーならびに中実ゲルファイバーを利用することで、上述の生体血管網に極めて酷似した流路ネットワークならびにそれを利用した重厚三次元組織体創製技術の確立を目指している。1.昨年度は、細胞接着性を有する中空ゲルファイバーを作製した。今年度は中空ゲルファイバーのゲル部分に肝癌細胞であるHepG2細胞を包括し、それを積層することで、血管様流路であるファイバーの中空部が0.1 mm間隔で正確に配置された構造体を作製した。その中空部に培地を流通させながら培養したところHepG2細胞は増殖した。しかし、その増殖速度は極めて遅かった。そこで次にファイバーの外表面および中空部表面のみを架橋し、ゲル部分の液化によりHepG2細胞の増殖速度を上げることを試みたがファイバーの強度が大きく下がり、中空構造を保つことができなかった。2.上記1とは異なる毛細血管網再現法として、昨年度、極細ゼラチンファイバーを利用した新たな方法を提案した。その手法により三次元組織体を作るためには培地や血液の入口と出口がそれぞれ一つに集約された流路ネットワークを作る必要がある。今年度は、ポリジメチルシロキサン容器内にそのような流路ネットワークを作製した。研究開始当初は「研究実績の概要」に記載した1の方法により研究を進める予定であったが、臓器細胞の増殖が遅く、それを改善できる他の血管網再現法が必要になったため。本研究では、極細の中空または中実ファイバーを利用することで、生体毛細血管網に酷似した流路ネットワークならびにそれを利用した重厚三次元組織体創製技術の確立を目指した。中空ゲルファイバーを血管として利用する際、その中空部内表面に血管内皮細胞を固定化することが求められる。そこでまずは、細胞接着性のあるゼラチンやコラーゲンをファイバー内に組み込み、それらをトランスグルタミナーゼ等を用いて架橋することで、長期間安定的に細胞接着性を有する中空ゲルファイバーを作製した。その中空ゲルファイバーのゲル部分に肝癌細胞であるHepG2細胞を包括し、それを積層することで、毛細血管様流路であるファイバーの中空部が0.1 mm間隔で正確に配置された構造体を作製した。ファイバーのゲル部分の液化によりHepG2細胞の増殖速度を上げることを試みたがファイバーの強度が大きく下がり、中空構造を保つことができなかった。そこで次に極細中実ゼラチンファイバーを利用して毛細血管網を再現する手法に取り組んだ。具体的には、wet spinning法を利用することで、直径0.01 mmのゼラチンゲルファイバーを作製し、それを綿飴状にした後、コラーゲン水溶液に加え、その溶液をゲル化させた。その後、温度を上げることによりコラーゲンゲル中のファイバーを溶解させることで毛細血管様流路にすることができた。本年度は、その毛細血管様流路内に長期間、培地を流通させることができる培養装置を作製した。

さらに、その装置内で毛細血管様流路内に1週間培地を流通させることで、あらかじめコラーゲンゲル中に封入していたHepG2細胞が増殖することを確認できた。本課題では、移植医療に適用できる臓器を人工的に創製するために不可欠な毛細血管網の再現技術ならびにそれを利用した生体組織構築法の開発を目的とした。毛細血管網の鋳型としてゼラチンのマイクロファイバーを利用することで、コラーゲンゲル中に毛細血管網様流路ネットワークを作製できた。その流路内に培地を流通させることで、あらかじめゲル内に封入した臓器細胞を増殖させることができた。1.中空部内壁に血管内皮細胞を、ゲル部分に臓器細胞を固定化した中空ゲルファイバーを積層し、その中空部分の培地を流通させながら培養することで、臓器様構造体を作製する。2.前年度と同様の方法を用いて、臓器細胞を添加したコラーゲンゲル内に、綿飴状ゼラチンファイバーを利用して毛細血管様流路網を作製し、その流路内部に培地を流通させながら培養することで、臓器細胞を増殖させ、臓器様構造体を作製する。また、コラーゲンゲル内に血管内皮細胞を添加し、その細胞の管腔形成能によっても毛細血管様流路を作製する。今後は「研究実績の概要」に記載した2の方法により研究を進める。具体的には、コラーゲンゲル内に設置した極細ゼラチンファイバーの束を溶解することにより作製した毛細血管様流路の周囲にHepG2細胞を配置し、流路内に培地を流通させながら長期間培養する。医用化学工学当初の計画よりも、ファイバー原材料の購入費用を抑えることができたため。当初の計画よりも、物品の購入費用を抑えることができたため。培養装置の部品購入費に充てる予定である。
全身での免疫応答による口腔内真菌の選択的制御機構の解明

病原真菌Candidaalbicansに対する生体防御機構としてIL-17産生を特徴とするTh17細胞による獲得免疫応答が重要な役割を果たすことが分かっているが、そのメカニズムは不明な点が多い。Th17細胞への分化を司るT細胞エピトープを探索した結果、C. albicans菌糸形細胞膜成分に高いTh17分化誘導活性を見出した。さらにC. albicans抗原特異的Th17細胞をマウスに移入することで、口腔カンジダ症が効果的に抑制されることが明らかとなった。また、C. albicansに対するTh17細胞による免疫応答は消化管を介して全身性に応答することを明らかとした。口腔カンジダ症は、病原真菌Candida albicansが原因となる口腔疾患で、高齢化が進む我が国において患者数が増加している。C. albicansに対する生体防御機構としてIL-17産生を特徴とするTh17細胞による獲得免疫応答が重要な役割を果たすことが分かっているが、そのメカニズムは不明である。今年度は、ヘルパーT細胞をTh17細胞に分化させるC. albicans由来のエピトープを同定することを目的とした。全ゲノムシーケンスが判明しているC. albicans SC5314株を用い、In vitroにおいて、SC5314株由来のタンパク質を抗原として骨髄由来樹状細胞に抗原提示させ、CD4+ T細胞の分化をIL-17産生を指標にFlowcytometryにより評価した。C. albicansは酵母形と菌糸形の2つの形態を示す二形性真菌であるため、両形態の細胞から抗原を探索した。その結果、両形態の細胞からそれぞれTh17分化誘導能がある菌体構成成分を見出した。候補となる菌体構成成分のTh17分化誘導能は、プロテアーゼ処理や熱処理により消失したことからタンパク質性であることが分かった。さらにRP-HPLC、二次元電気泳動による分画により抗原タンパク質を絞り込み、プロテオミクス解析により同定を進めている。またC. albicansを胃ゾンデで経口投与することにより、末梢リンパ節T細胞のC. albicans抗原に対するTh17細胞への分化能が上昇することが明らかとなった。これにより、C. albicansに対する免疫応答は消化管を介して全身性に応答することが示唆された。計画通りにTh17細胞への分化を誘導するC. albicansの抗原の同定を進めることができている。酵母形と菌糸形から候補となる画分を見出し、RP-HPLCや二次元電気泳動により、抗原を絞り込むことが出来た。現在、九州大学生体医学研究所プロテオーム研究センターの協力を得て解析中である。また、今年度はマウスを用いた感染実験を立ち上げることができ、C. albicansの経口投与により全身性にT細胞の免疫応答が起こることが明らかとなり、次年度に繋がる系を構築することが出来た。Candida albicansは口腔カンジダ症の原因となる。C. albicansに対する生体防御機構として、Th17細胞による獲得免疫応答が重要な役割を果たすことが分かっているが、そのメカニズムは不明な点が多く残されている。本研究では、C. albicansに対する宿主免疫制御機構の解明のために以下の3点の解析を行った。1昨年度に引き続き、ヘルパーT細胞をTh17細胞に分化させるC. albicans由来のエピトープの同定を進めた。応答が高かった細胞成分を逆相HPLC、二次元電気泳動により抗原タンパク質を絞り込み、プロテオミクス解析によりタンパク質を同定した。スコアが高かったタンパク質に関して、大腸菌において大量発現させ、精製タンパク質を調製した。2GFP発現ベクターをC. albicansに導入したGFP発現C. albicans株を構築した。GFP発現C. albicansは胃ゾンデ投与により、腸管に定着することが分かった。また、ペニシリンを飲料水として投与することで、菌の腸管への定着が高くなった。C. albicansを胃ゾンデにより口腔を介さずに経口投与することにより、末梢リンパ節T細胞のC. albicans抗原に対するT細胞の応答が変化することが明らかとなった。3口腔カンジダ症の病態と腸管を介した全身での免疫応答の関連性を解析するために、マウス口腔カンジダ症モデルを構築した。既知のマウス口腔カンジダ症モデルとは異なり、免疫抑制剤を使用しないモデルの構築を試みた。舌に塗布する菌量の検討と鎮静剤の使用により、免疫抑制剤を使用せずに、口腔カンジダ症を発症させるモデルを構築することができた。計画通りにTh17細胞への分化を誘導するC. albicansのT細胞エピトープの同定を進めることができている。九州大学生体防御医学研究所プロテオミクス分野の協力を得て候補タンパク質を同定した。スコアが高かった上位7種類のタンパク質に関して、大腸菌において大量発現させ、既に精製タンパク質の調製を終えている。現在、精製タンパク質を用いてTh17細胞への分化誘導を評価している段階である。また、C. albicansに対する免疫応答が腸管を介して全身性に応答するという知見を得ることができた。さらに、免疫抑制剤を投与することなく、マウス口腔カンジダ症モデルを構築することができた。現在、これまでに構築したモデルを用いて、口腔カンジダ症の病態形成と腸管を介した全身での免疫応答の関連性を解析している。

口腔カンジダ症の原因となるCandida albicansに対する生体防御機構として、Th17細胞による獲得免疫応答が重要な役割を果たすことが分かっているが、そのメカニズムは不明な点が多く残されている。本年度は以下の解析を行った。1前年度から進めているヘルパーT細胞をTh17細胞に分化させるC. albicans由来のT細胞エピトープの同定を試みた。Th17分化誘導能がある菌体構成成分として見出した菌糸形の細胞膜成分に関して、RP-HPLCと二次元電気泳動による分画により抗原タンパク質を絞り込み、プロテオミクス解析によりタンパク質を同定した。スコアが高かったタンパク質に関して、大腸菌において大量発現させ、精製タンパク質を調製した。精製タンパク質からTh17分化を誘導するものが見出されており、現在オーバーラップペプチドを用いてT細胞エピトープの同定を進めている。2同定した菌糸形の細胞膜成分で分化させたTh17細胞を尾静脈より養子移入したマウスに口腔カンジダ症を発症させ、病態抑制効果を検証した。その結果、Candida抗原特異的なTh17を移入したマウスでは比較群と比べ口腔カンジダの臨床スコアを優位に低下させ、組織学的評価においても多核白血球の浸潤の減少が認められた。研究期間全体を通して得られた結果として、C. albicansに対するTh17細胞による免疫応答は消化管を介して全身性に応答することを明らかとした。さらに、菌糸形の細胞膜成分中のタンパク質は、抗原特異的にTh17細胞を誘導することで口腔カンジダ症を抑制することが示された。本研究で絞り込んだ菌糸形の細胞膜成分中の候補タンパク質は、口腔カンジダ症のワクチン開発に発展すると期待される。病原真菌Candidaalbicansに対する生体防御機構としてIL-17産生を特徴とするTh17細胞による獲得免疫応答が重要な役割を果たすことが分かっているが、そのメカニズムは不明な点が多い。Th17細胞への分化を司るT細胞エピトープを探索した結果、C. albicans菌糸形細胞膜成分に高いTh17分化誘導活性を見出した。さらにC. albicans抗原特異的Th17細胞をマウスに移入することで、口腔カンジダ症が効果的に抑制されることが明らかとなった。また、C. albicansに対するTh17細胞による免疫応答は消化管を介して全身性に応答することを明らかとした。研究計画に従って、今後の研究を推進していく。1現在解析中のT細胞エピトープの同定を進める。プロテオーム解析により同定されたタンパク質を大腸菌で発現させ、精製後にTh17分化誘導能を評価する。同定したタンパク質は、さらにオーバーラッピングペプチドを作成し、抗原部位を同定する。また、同定されたタンパク質をコードする遺伝子を破壊したC. albicans株を構築し検証する。2C. albicansに対する免疫応答を全身、特に口腔と腸管に着目して解析する。現在構築中の口腔カンジダ症発症マウスを用いて、C. albicans反応性T細胞の分化の場と全身における細胞遊走を解析する。