hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
動的共創型デジタルアーカイブズ構築－梅棹忠夫資料に基づいて

これを基に次のステップでは、あるKWを共有する論文間に相関関係が存在すると仮定して論文間にリンクを自動作成し、研究者による妥当性検討の段階を経て、研究者自身によるリンク形成機能を持つ共創型アーカイブズの完成を目指す。梅棹忠夫アーカイブズの資料間には相関関係がある。フィールドノート、メモ、原稿、著作の間に素材と製品という関係があるためだ。本研究では、利用者が自ら相関関係を発見して書込み、共同してアーカイブズを形成するモデル構築を目的とする。資料の整理、基礎データ作成を行うと同時に、『梅棹忠夫著作集』別巻収録の論文タイトル索引および総索引の全内容をデジタル化し、4万8千件のKW(キーワード)からそれが含まれる論文と出現ページ、1,500件弱の論文タイトルに含まれるKW総覧、が検索可能なデータベースを構築した。これに基づきKWを共有する論文間にリンクを自動作成しそれを基礎に共創型アーカイブズの完成を目指す。上述した様に、既に刊行されている『梅棹忠夫著作集年譜・総索引』の索引が、関連するテーマの専門家によって作成されていることに鑑み、当初から計画している「時間値・空間値・主題値(キーワード)群」三つ組によるアーカイブズ内容索引のうちの主題値に著作集の索引全点を付加すること、かつ、この索引を梅棹忠夫アーカイブズ資料間の相互リンク形成に活用することを立案した。しかし、著作集・索引のデジタル化について、出版元との連絡・調整を進めたものの、著作権・使用権の帰属について検討に時間を要することが判明し、当初の計画年度内での内容索引完成には至っていない。他方、リンクに付与するためのタグについての設計はほぼ完了しており、そのシステム構造の設計もほぼ完了しているが、肝心の主題値の完成を未だ見ていない点で、やや遅れた状況にある。人文学主題値のデジタル化を完了させて内容索引の充実を図り、それに基づくシステムを試作して、関連研究者の意見を聴取しつつ、書き込み型アーカイブズ・システムの設計を進める。ただし、当初は、書き込み後即時検索可能な動的システムを計画していたものの、連携研究者を交えての検討の結果、システム構造が複雑化する点、書き込み結果の検証体制が煩雑で実用的ではない点、を考慮し、書き込み結果は一旦仮の編集用バッファに記憶して校閲・修正を施した後に検索用に提供するシステム形態の方が運用上実際的であることを確認し、その方向での設計を進めている。実際のシステム構築については、国立民族学博物館で別途計画中の資料管理システムと連携して実現を図る予定である。当初の予定ではタグ付きリンクを導入したシステムを試作する予定であったが、梅棹忠夫資料のカバーする範囲が多岐にわたっており、内容索引の設計に時間を要した。そのため、それに基づく基礎データ作成に重点をおくこととなった。『梅棹忠夫著作集別巻年譜・総索引』のデジタル化は、新たな展開への切り口となることを期待している。平成26年度中に、別途作成中の梅棹アーカイブズ資料中の一次資料の項目と、そこから生成された梅棹忠夫の著作物との間に、相互リンクを作成する計画を立てていた。そこで、梅棹忠夫著作集『年譜・総索引』に記載の項目すべてをデジタル化する予定であったが、デジタル化の許諾を得るために同書の出版元と連絡・調整を進めたものの、それに時間を要し、デジタル化を進める事ができなかったため、未使用額が生じた。
微小磁性体におけるスピンの量子ダイナミクスと電気伝導

メゾスコピックスケールの金属強磁性細線で、磁壁の生成や運動による電気抵抗への寄与を解析的に調べた。その結果、伝導電子間に量子干渉効果がきいている場合には、磁壁が入ると干渉を乱すことで局在を抑制し電気抵抗が減るという興味深い効果が現れることがわかった。この効果は古典的な電気伝導で期待される抵抗の増大と逆である。特にサブミクロンスケールの細線などの場合は磁壁の効果が強く現れる。磁壁がピン止めから外れて動いた場合や、あるいはそのカイラリティの変化も、電子の干渉パターンが変え量子起源の抵抗の変化につながる。これらのことは金属あるいは半導体で量子干渉効果がはたらいている状況では磁性の微小な変化を電気的に検出できる可能性を示唆しており、さまざまな応用が期待される。また非対称なポテンシャル中にある量子的粒子の流れを、散逸がありまた交流外場のような外力のもとで半古典近似の範囲および数値計算により調べ、これらの条件下では非対称な流れが起きラチェットとしてはたらきうることを示した。
肝細胞癌の発癌に関与する癌遺伝子と肝炎ウイルス遺伝子

ヒトがんの多段階発生,進展過程には発癌遺伝子や細胞の増殖分化に関与する遺伝子群の発現の質的変化が重要な役割をはたしている。慢性肝炎や肝硬変を背景とした腺腫瘍形成や早期肝細胞癌の中に多段階的に増殖性の高いサブクーロンが出現する。組織学的異型度の段階的こう進として捉えられている。肝細胞癌(HCC)では染色体にB型肝炎ウイルス(HBVと略す)のゲノムの組み込みがしばしば見られるほか、HBVの発癌のメカニズムとしてHBVのX遺伝子のトランス作用による発癌及び細胞側遺伝子活性化も報告された。患者血清のHCV抗体の測定を行うretrospective studyで、106例の肝硬変(LC)が6年間に37.5%頻度でHCCへとなり、HCV,HBV関与のLC症例の43%、ウイルス性LCの23%がHCCへと移行した。HBs抗原とHCV抗体の両者陽性の肝細胞癌が20%高頻度に検出されたことは注目すべきことである。HCC患者血清の60-70%にHCV抗体が陽性に検出されるとともに、HCVゲノタイプのII型が慢性肝炎、肝硬変に比較して肝細胞癌の血清で高率に検出された。さらにHCCの組織の中にHCV-RNAを25%に検出したことなどから、HCCとHCVの間にも極めて密接な関係があることが推定される。我々は手術及び剖検による肝細胞癌34例(小肝癌(sHCC)3例、進行癌(aHCC)31例)および同一患者の担癌肝からDNAを抽出して、分化度の低い進行癌31例中8例でPCR-SSCP法によりp53遺伝子のエキソン4-9の領域の変異を25.8%の頻度に見いだしたのに対して早期の小肝癌や、高分化型進行癌に於いては変異を認め得なかった。p53遺伝子の変異は肝癌の後期に出現する事を示した。各染色体上のマーカーのloss of heterocigocity(LOH)を検出するためにRFLP解析を行ったところaHCCではLOHの頻度の最も高いものはpYN22(54.8%)であり、比較的頻度の高いもののLOHの陽性率はcMC5.61(41.9%),cC111-237(45.1%),MCT35.1(45.1%),p79-2-23(41.9%),EFD139(38.7%)などであった。進行癌では高頻度にヘテロ接合体の消失を認めたのに対して、小肝癌においてはp53の変異が認められなかったことに加えて、LOHの発現頻度が少なかったことはヒト肝細胞癌の多段階発癌を示唆しているものと考える。

第2世代のHCV抗体検出kitを使用して患者血清のHCV抗体ので測定を行うretrospective studyで,106例の肝硬変(LC)が6年間に37.5%頻度で肝癌(HCC)へと移行した。HCV,HBV関与のLC症例の43%,非ウイルス性LCの23%がHCCへと移行した。HBs抗原とHCV抗体の両者陽性の肝細胞癌が20%高頻度に検出されたことは注目すべきことである。切除された3例(早期癌2例,進行癌2例)および同一患者の非肝癌部からDNAを抽出し下記の実験を行った。a)RFLP解析にてヘテロ接合性の消失に関して検索した。4q11ー13,5q(CL11ー237),10q,11p,13q14,16q(P79ー2ー23),17pをもちいて早期癌3例と進行癌6例についてけんさくをおこない4q,5q,13q14,16q,17pとP53にヘテロ接合性の消失をみとめた.b)PCRによりP53のエクソン領域とこれに隣接するイントロンの一部を増幅させた。SSCR法でDNA断片の構造異常を検出した。進行HCC2例中1例にP53遺伝子の一方のアレルの欠失を認めた,この1例についてはアミノ酸置換を伴う突然変異を検出した。またこれ以外に,p53遺伝子の2箇所に別々の突然変異を検出した。RB遺伝子のイントロン25に存在する塩基配列をもちいて,PCRーSSCP法によりRB遺伝子のヘテロ接合性の消失の有無を検討した結果,2例でRB遺伝子もヘテロ接合性の消失していることが明かとなった。b)肝癌組織よりRNAを抽出し、HCVの非蛋白部分をコ-ドする遺伝子断片プロ-ブにしてslot blot hyblidizationを,行ったところ,陽性のシグナルを得ることができた。即ち肝癌組織中にHCVが存在する可能性が極めて高いと考えられる。c)血清中HBsAg陽性,HBeAg陽性の肝細胞癌の肝細胞の核のDNAに組み込まれたHBVのX遺伝子の検索しHBVのXいでん遺伝子の組み込みを検出した。現在その突然変異の有無についても検討中である。1)肝硬変より肝細胞癌(HCC)への移行に関する臨床的検討HCV抗体第2世代陽性の106例の肝硬変(LC)が6年間に37.5%の頻度でHCCへと移行した。HCVとHBVの両者陽性のLC症例の43%,非ウィルス性LCの23%がHCCへ移行した。そしてHBs抗原とHVD抗体の両者陽性のHCCが20%の高頻度に検出された。2)HCCの多段階発癌に関する検討組織学的に診断を確定し得た早期HCC3例と進行HCC26例及び同一患者の非癌部より全DNAを抽出してPCR-SSCR法によってP53遺伝子のエキソン4,5-6,7,8-9に存在する変異を検出した。同一材料を用いて下記のgenetc8種のfragmentをProbeとしてRFLP法によりヘテロ接合体の消失(LCH)の有無を検討した.26例の進行癌DNAに対する下記のPrcbeの陽性率はそれぞれのProbeにつきLOH陽率を示すとEFD(4g11)12%,cMc5.61(5g)42%,EFD75.1(10g)21%,dCI11-273(11p)41%,p79-2-23(16g)32%,yNZ22(17p)50%,MCT35.1(17p)34%,CBHP(17p)41%であった。P53の変異は26例中7例(26.9%)に検出され,変異の部位はエキソン5-6,7に集中した。一方3例の早期HCCではRFLP法による各probeによる検出率は進行HCCに比較して低率であり,P53遺伝子の異常は認められなかった。他方肝内転移を有する進行HCC2例の5個の肝内娘結節にP53遺伝子の変異を認めた。早期HCCでCMC5.6Lが3例中1例に陽性となった。早期HCCは進行HCCに比較してRFLP法によるヘテロ接合体の消失率が少なく,且つP53
2月6日事件と「途方に暮れる」作家たち

フランス第三共和政が経験した、ドレフュス事件以来の内政危機である「2月6日事件」は、作家たちにどのような反応を引き起こしたのか。本研究はまず、事件が文学者全般に「政治回帰」を強いた事実を明らかにし、その後、ジョルジュ・バタイユ、アンドレ・シャンソン、ピエール・ドリュ・ラ・ロシェルらが、それぞれどのように事件を受け止め、いかなる政治的選択を行い、またそれが彼らの作家活動にどのような形で反映されているか考察した。1934年2月6日の極右グループの暴動(通称「2月6日事件」)は、イタリア、ドイツにつづくフランスのファシズム化を予感させる衝撃的な出来事であった。作家たちはこの事件を機に何を思い、いかなる態度を選び取ったのか。また、そうした選択は彼らの文学活動にどのような変化を強いることになったのか。作家たちの一般的な傾向を概観した後、数人の作家を個別に取り上げ、その動向を詳しく検討する。1934年の2月6日事件は人民戦線内閣誕生の契機となった政治的大事件であったばかりでなく、作家たちの急速な「政治化」を促した文学的大事件でもあった。これまでこの事実は、事件を機に決然と政治参加の道に踏み込んだブラジヤックやドリュ・ラ・ロシェル、アンドレ・シャンソンらの例を引き合いにして語られることが多かった。だが2月6日事件が大事件であった証左は、政治闘争から徹底して距離を取ろうとした作家たちの微妙な態度変更の中にも見て取ることができる。モンテルランやロジェ・マルタン・デュ・ガールは、文学者の独立(非介入主義)に飽くまでも拘り続ける一方、将来的な政治参加の可能性に含みを持たせるようになるのである。文学史における2月6日事件の重要性を確認する以上の基礎的研究内容は、平成21年度発表の仏語論文(執筆済み)で公けにする。本年度はまた、先に挙げたシャンソンの政治参加の決断と、その決断が引き起こした精神的危機について分析を進めた。2月6日事件後に反ファシズム闘争に加わり、また作家の政治参加を当然の義務と説くシャンソンではあったが、その一方、行動が作家のあるべき姿と背反するという意識を捨て去ることはなかった。そうした内的分裂がはからずも露呈しているのが、2月6目事件を機に政治活動に身を投じる人物たちを描いた小説『懲役船』(1938)である。この作品の分析を軸に文士シャンソンと闘士シャンソンの葛藤を浮き彫りにする論考の執筆は、平成21年度の課題としたい。なお本年度は当初、2月6日事件がアンドレ・ブルトンおよびシュルレアリスム・グループに与えた衝撃を集中的に分析し、その成果をまとめる予定であった。ただし発表する論考間の順序と連携を考慮し、以上の研究を先行させることとした。本年度は、平成20年度中に執筆した仏語論文(Le 6 fevrier 1934 et les ecrivains(I):《Hors de la tour》)を大幅に修正して公にしたほか、2月6日事件を機としたジョルジュ・バタイユの政治的動向を明らかにすることを目的とした論文(「二,月六日事件とバタイユ」)を執筆・発表した。また現在は、2月6日事件の衝撃の下に執筆されたバタイユの『空の青』(1935)の序に関する論文(仏語)、同事件を機に政治活動に身を投じる人物たちを描いたアンドレ・シャンソンの小説『懲役船』(1938)を考察する論文(仏語)の執筆を進めている(いずれも、平成22年度内に発表予定)。平成22年度に在外研究員としてパリで研究を進めることとなったため、本年度は当初予定していたフランスへの渡航を取りやめ、上記論考の執筆、ならびにドリュ・ラ・ロシェルのテクストの分析を進めた。第一次世界大戦中戦闘に参加し、戦闘のなかに生を肯定する契機を見出していたドリュにとって、2,月6日の「戦闘」は、他の作家たちがそこに認めた意味とは異なる意味をもつ。だがだからこそ、2月6日の騒擾が束の間の幸福でしかなかったと悟った際のドリュの落胆は大きく、それが戦闘を回復するための戦闘としての政治闘争へと彼を導いていったのである(とはいえ、それは飽くまで戦闘のための戦闘であって、それ自体としては価値がない。小説『ジル』(1939)の主人公が2月6日事件ののち、政治闘争よりもスペインでの戦闘を選択しているのは、この点で示唆的である)。こうした観点を裏づけするための資料(ドリュが寄稿していた難誌等)の収集・分析は、フランスに滞在する平成22年度の課題としたい。所属機関である青山学院大学の在外研究制度を利用してフランス・パリに滞在した本年度は、昨年度末に着手したジョルジュ・バタイユ論(仏語)とアンドレ・シャンソン論(仏語)をそれぞれ完成させて公表したほか、昨年度に引き続き、ピエール・ドリュ・ラ・ロシェルの作品の読解を進めた。

『カイエ・バタイユ』誌創刊号に寄稿した論考では、小説『空の青み』(1935)冒頭の数ページを取り上げて分析を試み、一読した限りでは1930年代の政治的状況と無関係に思われるこの「序論」部分に、政治的意味を読み取ろうとした。20年代中頃にその原形が執筆されたこのテクストも、1934年のヨーロッパを舞台とする『空の青み』に組み込まれることで、政治性を帯びる結果となっているのだ。他方、『ステラ』誌に掲載したシャンソン論では、作家が2月6日事件を題材にして執筆した小説『懲役船』(1938)を分析し、主人公の抱えるジレンマのうちに、文学活動と政治活動のあいだで引き裂かれた当時の作家たち(シャンソンはそのひとりに過ぎない)のジレンマを読み取った。また、このシャンソン論執筆にあたっては、新聞『ヴァンドルディ』(シャンソンが創刊者の一人)や1938年7月の作家会議記録(シャンソンの発言を収録)などの資料をフランス国立図書館で閲覧したが、その過程において、既存のシャンソン研究の書誌からは漏れたテクストを複数「発見」する幸運にも恵まれた。なお、以上のシャンソン論執筆に予定していた以上の時間を要したため、ドリュ・ラ・ロシェルの読解作業から具体的な成果を挙げることはできなかった。来年度以降の課題としたい。本年度の目標は、1)ピエール・ドリュ・ラ・ロシェル研究に一定の見通しをつけて論文の準備・執筆に取り掛かること、2)ジョルジュ・バタイユについて(特に、2月6日事件と深い関係にある小説『空の青み』について)短い論考を執筆することの二つであった。まず「2月6日事件とドリュ・ラ・ロシェル」については、シュルレアリスム関連のテクスト等にみられるアンガージュマン批判を念頭に置き、事件を契機とする作家自身のアンガージュマンを再考する論文の執筆を始めた。ただし平成24年4月には、ドリュの文学作品をまとめたプレイヤッド版の出版が予告されているため、当論文の執筆は一時的に中断している。プレイヤッド版に収録される新資料を踏まえ、分析を深化、ないし刷新させる必要が生じるはずだからである。バタイユについても、今年度論文を発表することはできなかった(ただし、昨年度の「研究発表」の欄に記載したバタイユ論《L'Introduction du Bleu du ciel》は、掲載誌の都合で大幅な修正を余儀なくされ、平成23年10月になってようやく発表の運びとなった)が、30年代の政治不安を色濃く反映した同時代の文学作品(マルローの『人間の条件』やセリーヌの『夜の果てへの旅』、また『空の青み』執筆当時、バタイユがそう言及しないまでも強く意識していたと思われるアンドレ・ブルトンの『通底器』)や、バタイユ自身の手になる他の文学作品(特に『眼球譚』、『ジュリー』、『不可能なもの』)との関係性のなかで『空の青み』を読み直す作業を進めた。作家の死後50周年にあたる平成24年度中に、その成果の一端を発表したい。
運動学習記憶過程における情動の役割に関するシステム神経科学的研究

(1)運動学習中の瞳孔径変動を説明する計算モデルの検討:前年度に得られた実験データ(28人分)の解析から、運動中の瞳孔径の変動パターンは複数の成分によって表現される可能性を示す結果を得た。計算モデルによる検討から、この複数の成分がそれぞれ異なった情報(外乱の大きさ、環境の変わりやすさ等)を表現する可能性を示唆する結果を得た。これを検証するために、様々な条件でシミュレーションを行い、予想される瞳孔径の振る舞いを検討し、複数の成分を最もよく分離可能な課題を探索的に検討した。(2)運動学習中の瞳孔径測定実験:モデルから予測された瞳孔径の振る舞いについて、同一の課題条件で検証を行った。現在までに30人分のデータを取得しており、予備解析の結果、前年度に得られていた主要な結果が再現されていることを確認した。さらなるデータ取得およびモデル予測との整合性の検討に関しては今後の課題となる。(3)運動課題遂行中の脳機能画像計測および多変量fMRI解析手法の開発:前年度に引き続き共同で開発を行っていた多変量fMRI解析手法を、MATLABツールボックスとして一般に公開した他、解説論文を出版した。また同手法を用いた研究論文が出版された。(4)まとめおよび今後の展望:本研究計画の遂行を通して、「運動制御・学習におけるノルアドレナリンの役割」を明らかにする上で重要な基礎的知見を得ることができた。得られた知見は速やかに論文としてまとめる予定である。尚、取得したデータの取り扱いについては、個人情報・プライバシーへの配慮のもとに適切な管理・運用に努めた。今後もこの課題に対して可能な限り継続した研究を続けていく予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。平成27年度は海外渡航先である英国ユニヴァーシティ・カレッジ・ロンドン(2015年4月8月)およびカナダ西オンタリオ大学(2015年9月現在)において以下の研究課題を実施した。1.運動課題中の脳機能画像計測および多変量解析を用いた脳機能画像解析手法の開発:3Dプリント技術を用いて高磁場環境下で使用可能な手首用マニピュランダム(2自由度:伸展・屈曲および橈屈・尺屈)を左右の手にそれぞれ一つずつ作成した。これらを用いて7名の被験者で片手および両手を用いた異なる方向へのポインティング動作課題を遂行中の脳活動を機能的磁気共鳴画像法(fMRI)を用いて測定した。得られた脳活動データから各脳部位における運動情報表現を抽出するため、多変量解析を用いた解析手法の開発を行った。2.運動課題中における瞳孔系の測定システムの構築および情動刺激と瞳孔径応答の基礎的データの取得:眼球運動測定装置と到達運動課題用のロボットアームの同期および必要な制御プログラムの作成が完了し、実験が可能な状況にある。西オンタリオ大学研究倫理委員会に対して倫理申請を行い、3月に受理されたので、被験者を募集して本格的にデータ取得を開始する準備が整っている。3.高磁場fMRIを用いた運動課題中の脳機能画像計測:西オンタリオ大学Center for Functional and Metabolic Mappingの保有する高磁場(7T)MRIを用いて、高空間解像度・高時間解像度の脳機能画像計測を行った。また、生理学的ノイズ(呼吸や心拍変動による血流変動など)の補正を行うために呼吸および心拍時系列の同時測定を行った。1.「運動課題中の脳機能画像計測および多変量解析を用いた脳機能画像解析手法の開発」は、本研究課題においてfMRIを用いた運動課題中の青斑核の活動の計測および得られる脳機能画像データの解析に必須となる。現在までにまとまった成果が得られており、成果をまとめたものを平成28年度の国際学会にて発表する予定である。2.「運動課題中における瞳孔系の測定システムの構築および情動刺激と瞳孔径応答の基礎的データの取得」に関しても、渡航先の受入れ研究室が英国からカナダに移動したことにより各装置の再セットアップおよび再校正を行う必要があったが、現在までに完了している。倫理申請の受理と合わせて、今年度から本格的な実験が可能な状況にある。3.「高磁場fMRIを用いた運動課題遂行中の脳機能画像計測」では脳機能画像データ中の生理学的ノイズ(呼吸や心拍変動による血流変動など)の補正を行うために呼吸および心拍時系列の同時測定を行っている。本研究課題の注目する脳部位である青斑核は脳幹に位置しており、fMRI画像において脳幹はこれらの生理学的ノイズの影響を最も受けやすい領域の一つである。したがって同研究プロジェクトで得られる知見は本研究課題の遂行にとって極めて有益である。(1)運動課題遂行中の脳機能画像計測および多変量fMRI解析手法の開発前年度から継続中の課題で、高磁場(3T)MRI中での手首動作を用いた運動課題中の脳活動データを取得し、得られた脳活動データに対して西オンタリオ大学のDiedrichsen教授と共同開発中の解析手法を適用した。その結果、1)運動を行っている手首と同側の運動関連領野(第一次運動野、背側運動前野など)においても運動方向などの情報が表現されていること、2)両手首を同時に動かす際にはそれぞれの手首の運動方向などの情報が非線形に統合されていることが行動実験によって知られているがそれは背側運動前野や後頭頂皮質などの領域で行われている可能性があること、などが明らかになった。

(2)運動学習中の瞳孔径測定実験前年度から継続中の課題で、平成28年度においては、運動学習課題として確立された実験系である腕到達運動中の力場外乱に対する適応課題を用い、この課題中に同時に瞳孔径の測定を行った。同西オンタリオ大学のJeffrey Weiler博士の協力も得て、現在までに共同で28人分のデータを取得した。解析の結果、a)瞳孔径は運動の開始から終点に向かって特徴的な時間的パターンで拡張すること、b)その拡張量は外乱への適応過程で運動誤差の推移と相似した時間的発展を示すこと、c)運動開始前の瞳孔径と運動の終点誤差との間に関連が存在する、という興味深い結果を得た。(3)運動学習中の瞳孔径変動を説明する計算モデルの検討(2)で得られた外乱適応過程における瞳孔径の変動は、運動の誤差(=surprise)を表現しているのか、もしくは外乱による環境の不確実性(=uncertainty)の変動を表現しているのか、という2通りの可能性が考えられる。これを切り分けるために、階層ベイズモデルを用いたシミュレーションおよびモデルフィッティングを試みている。前年度より進めている「運動課題中の脳機能計測」と「多変量解析を用いた脳機能画像解析手法の開発」は順調に進んでおり、渡航先からの帰国後に行われた国内学会でも高く評価された。さらに、同手法を用いた研究論文に関して現在少なくとも2本の論文を準備中であり、早ければ平成29年度中に科学雑誌に出版される見込みである。また、平成28年度における特に重要な研究成果として「運動学習課題中の瞳孔径の測定」において「運動学習の瞳孔径の詳細な時間変化パターン」を世界で初めて明らかにしたことが挙げられる。加えて、数理モデルを用いたシミュレーションでも興味深い結果を得ており、「運動学習におけるノルアドレナリンの役割」の解明に対して重要な示唆を与える知見を着実に得ていると言える。(1)運動学習中の瞳孔径変動を説明する計算モデルの検討:前年度に得られた実験データ(28人分)の解析から、運動中の瞳孔径の変動パターンは複数の成分によって表現される可能性を示す結果を得た。計算モデルによる検討から、この複数の成分がそれぞれ異なった情報(外乱の大きさ、環境の変わりやすさ等)を表現する可能性を示唆する結果を得た。これを検証するために、様々な条件でシミュレーションを行い、予想される瞳孔径の振る舞いを検討し、複数の成分を最もよく分離可能な課題を探索的に検討した。(2)運動学習中の瞳孔径測定実験:モデルから予測された瞳孔径の振る舞いについて、同一の課題条件で検証を行った。現在までに30人分のデータを取得しており、予備解析の結果、前年度に得られていた主要な結果が再現されていることを確認した。さらなるデータ取得およびモデル予測との整合性の検討に関しては今後の課題となる。(3)運動課題遂行中の脳機能画像計測および多変量fMRI解析手法の開発:前年度に引き続き共同で開発を行っていた多変量fMRI解析手法を、MATLABツールボックスとして一般に公開した他、解説論文を出版した。また同手法を用いた研究論文が出版された。(4)まとめおよび今後の展望:本研究計画の遂行を通して、「運動制御・学習におけるノルアドレナリンの役割」を明らかにする上で重要な基礎的知見を得ることができた。得られた知見は速やかに論文としてまとめる予定である。
社会の多様性を前提とした循環型社会形成のためのシステム選択支援に関する研究

循環型の都市形成に向けてのシステム選択と評価のあり方を,社会の多様性を踏まえて検討するために,廃棄物のリサイクルについて,選択の前提となる情報(リスク情報を含む)のあり方を明らかにした。次にこれらの情報を合意形成につなげるために,複数の基準によって代替案を評価する手法である多基準分析について検討し,その応用であり,異なる立場の人々の選好をマッピングすることによって評価対象の抱える論点を明らかにする手法として「可視化のための多基準分析」を活用することによって,システム選択における合意形成支援の可能性を探った。循環型社会の構築に向けて,事業活動におけるリサイクル過程に注目し,様々な主体が環境コミュニケーションをはかるツールとどのように係わり,活用していくのが望ましいのかについて,環境報告書およびCSR報告書をもとに事業活動の各過程におけるリサイクル事例を検討した。企業がCSR報告書を作成する第一の理由は「リスクマネジメント」とされ,様々なステークホルダーとのコミュニケーションにより説明責任を果たそうとする姿勢が示されている。次に,「可視化」に焦点を当て,可視化研究のレビューを行ったうえで,評価と意思決定における「可視化」の構造について,「可視化」に対する立場と目的,「可視化」の段階,「可視化」の対象と手法,のそれぞれの観点から整理を試み,課題について考察した。様々な分野で「可視化」が求められ,その解釈と判断,それにもとづいた行動が「可視化」の受け手に求められることになるだろう。この流れ自体は望ましい方向であると言えるだろうが,可視化しようとする部分に光をあてることで,不可視化されてしまう影の部分ができてしまう懸念を忘れるわけにはいかない。社会の多様性を踏まえたシステム選択と評価のあり方を検討するために、システム選択の前提となる情報のあり方を明らかにし、かつ、その情報を合意形成につなげる方法として、多基準分析を活用することによって、システム選択における合意形成支援を検討した。平成17年度においては、多視点・多基準・多主体を考慮した評価と意思決定の枠組みを明らかにするための予備的調査として、環境分野のうち特に人々の生活と密接な関係にある廃棄物である家庭生ゴミの処理方法に関する選択問題を設定し、一般の市民から行政や専門家の立場にある人まで異なる背景をもつ人々を対象に評価の試行実験を行った。家庭生ゴミの扱いのように多くの人々の生活に影響を与えるようなシステムを考えるにあたっては、より多くの人々の納得と協力が得られるよう、様々な観点から代替案を評価することが求められる。この実験は廃棄物のリサイクルにおける私的意思決定と公的意思決定のそれぞれにおいて、多基準分析及び多基準マッピング手法活用の実効性検討を目的したシステム選択の試行実験である。人々の日常の暮らしに特に密接な家庭生ゴミの堆肥化システムに関しては、家庭で発生した生ゴミを、どの段階で、誰が、どこで、どのように行うかによって様々な問題が生じうる。システム選択支援手法については、問題の捉え方は人それぞれ違うことから、評価スコアに従って代替案を選択した場合に、トレードオフが受け入れられない人々の選好や、選択の結果として想定される事態への対応を視野に入れたルールと支援手法が必要であると考えられる。今回の試みのように代替案評価において問題領域を最大限に確保しつつ評価のプロセスを可視化したうえで、さらに共有し、フィードバックしていくことができれば、各人の参加意識を維持しつつ評価の収斂を促し、何らかの合意形成へとつなげていくことが可能になるものと考えられる。

平成17年度に実施した、複数の評価主体による判断の差異に焦点を当てた予備実験を踏まえ、平成18年度は評価の主体の観点から、身近な環境問題の狭いレベルから、地球環境の広範なレベルにまで、評価の対象を変えると評価の枠組みはどのようになるのかを把握することを目的として試行実験を行った。佛教大学社会学部公共政策学科の学生のうち「環境アセスメント論」または「循環社会システム論」を受講する学生を対象として、環境にかかわる様々な選択問題において、(1)考慮するのはどのような環境問題であるか、(2)評価する際にはどのような評価基準を重視するのかを尋ね、297名から回答を得た。得られた結果のうち、生活に身近なレベル(自分にのみ影響があり、主に自分で選択できる)として「自宅の冷暖房」、次のレベル(自分にも影響があるが自分では直接に選択できない)として「大学の冷暖房」、やや抽象的なレベルとして「原子力発電所の建設」をとりあげて分析した。同じ学部生で環境問題に関する同じ講座を受講しているといった、同じような属性を持つと想定される集団に対する試行実験であったが、個々人の内部でも、また、同じ本質を持つような選択問題であるはずであっても、判断(スコアリング)はもちろん、枠組み(考慮する項目)に関しても一致しない場合のほうが多いことがあらためて確認された。「自宅の冷暖房」のように身近な選択問題では、一部の環境問題に意識が集中しやすく、「原子力発電所の建設」のような建設地周辺の住民以外にはどちらかというと抽象的な選択問題では、身近な問題の場合に比べてより包括的に考えられるようにも受け取れる。循環型の都市形成に向けてのシステム選択と評価のあり方を,社会の多様性を踏まえて検討するために,廃棄物のリサイクルについて,システム選択の前提となる情報(リスク情報を含む)のあり方を明らかにした。次にこれらの情報を合意形成につなげる方法として,複数の基準によって代替案を評価する手法である多基準分析と,その応用であり,異なる立場の人々の選好をマッピングすることによって評価対象の抱える論点を明らかにする手法である多基準マッピング手法を活用することによって,システム選択における合意形成支援を検討した。循環型社会の構築に向けては,事業活動におけるリサイクル過程に注目し,様々な主体が環境コミュニケーションをはかるツールとどのように係わり,活用していくのが望ましいのかについて,環境報告書およびCSR報告書をもとに事業活動の各過程におけるリサイクル事例を検討した。企業がCSR報告書を作成する第一の理由は「リスクマネジメント」とされ,様々なステークホルダーとのコミュニケーションにより説明責任を果たそうとする姿勢が示されているといえよう。次に,「可視化」に焦点を当て,可視化研究のレビューを行ったうえで,評価と意思決定における「可視化」の構造について,「可視化」に対する立場と目的,「可視化」の段階,「可視化」の対象と手法,のそれぞれの観点から整理を試み,課題について考察した。様々な分野で「可視化」が求められ,その解釈と判断,それにもとづいた行動が「可視化」の受け手に求められることになるだろう。この流れ自体は望ましい方向であると言えるだろうが,可視化しようとする部分に光をあてることで,不可視化されてしまう影の部分ができてしまう懸念を忘れるわけにはいかない。
誘電エラストマーを用いた振動センサ機能付き発電デバイスの開発

本研究では、振動エネルギーを電気エネルギーに変換するエネルギーハーベスト技術として誘電エラストマーの応用を検討し、誘電エラストマーを用いた振動センサ機能付き発電デバイスを創出するために必要な発電回路および振動検出回路を構築した。さらに代表者がこれまでに構築してきた静電容量測定装置を組み合わせ、誘電エラストマーが伸張変形した時の静電容量変化を測定する装置を構築し、誘電エラストマーのコンポジット化による発電出力向上の指針を得た。平成28年度の研究成果を以下に示す.1)誘電エラストマーの作製:0.5 mm厚のアクリル系エラストマーシートの両面に伸縮性電極を塗布し,誘電エラストマーを作製した.誘電エラストマーの伸張試験を実施した結果,エラストマーを破断させずに伸縮性電極の導電性を確保し,エラストマーの面積を5倍に広げることができた.2)静電容量変化の計測とセンサ電極の設計:誘電エラストマーの伸縮変形に伴う静電容量変化を計測する電極系(主電極直径5 mm)を構築した.エラストマーの厚さが0.1 mm0.5 mmの間で変化した場合に,少なくとも5 pCの静電容量が変化することを明らかにし,これを基にセンサ電極サイズを設計した.2)発電回路の構築と発電動作の確認:密閉容器内の圧力変化により誘電エラストマーを伸縮変形させる振動試験装置を構築した.さらに,誘電エラストマーに小型直流電源,抵抗素子と接点スイッチを接続した発電回路を作製し,発電実験を実施した.その結果,誘電エラストマーの出力電圧を,伸縮変形しない場合に比べて約2倍に増加できた.これは,誘電エラストマーの充電電荷量を保持した状態で静電容量が減少したことにより,出力電圧が増加したためである.誘電エラストマーの持つ電気エネルギーは電荷量と電圧の積であり,電荷量が一定の場合に電圧はエネルギーの指標となる.この出力電圧の増加を測定できたことから,誘電エラストマーの発電動作を確認できた.次年度に発電量を定量的に評価する.伸縮性電極の導電性を保ちながらエラストマーを破断せずに伸張できる誘電エラストマーを実現し,その静電容量変化を測定し,センサ電極を設計した.さらに,誘電エラストマーの出力電圧の増加から,発電動作を確認したため,おおむね計画通りに進んでいる.本研究では、振動エネルギーを電気エネルギーに変換するエネルギーハーベスト技術として誘電エラストマーの応用を検討し、誘電エラストマーを用いた振動センサ機能付き発電デバイスを創出するために必要な基礎技術を構築することを本研究全体の目的とする。特に、振動検出回路の構築および発電出力特性向上の指針を得るための検討を行っており、平成29年度は次に示す実験項目を実施した。(1)振動検出回路の構築と評価振動に応じた誘電エラストマーの変形を電圧変化から検出する方法を検討し、ヒステリシスコンパレータとトランジスタスイッチを用いた振動検出回路を構築した。誘電エラストマーの変形と電圧変化の同時観測により、振動を検出できることを明らかにした。さらに、電圧変化が基準値に達した時に誘電エラストマーが所定の電圧まで放電し、発電出力を取り出せることを明らかにした。(2)発電出力の評価と出力向上指針の検討昨年度に構築した発電出力評価回路と振動変形試験装置を用いて、誘電エラストマーの発電量を評価した。直径70 mmの電極を塗布した厚さ0.5 mmの誘電エラストマーを用いて、初期充電電圧14 V条件の下で電極面積が2.2倍となる変形を付与した場合に、1度の変形で1.5 μJの発電出力が得られることを確かめた。さらに、発電出力向上の指針を得るため、誘電エラストマーのバルク部分の誘電率の観点から発電出力向上の可能性を検討した。誘電エラストマーの発電出力を、振動変形に伴う静電容量変化量をもとにエラストマーの体積を一定として定式化し、出力向上にはエラストマーの誘電率向上が有効であることを示した。また、これを実験的に確かめるために、高誘電率セラミックス粒子を充填した誘電エラストマーを作製し、電極面積が23倍の伸張変形においても誘電率向上が可能であることを確かめた。1)センサ電極付誘電エラストマーの振動検出性能評価:昨年度に設計したセンサ電極を塗布した誘電エラストマーを作製し,その伸張変形に伴う静電容量変化から振動を検出する性能を評価する.2)振動センサ機能付き発電デバイスの基本回路設計:センサ電極の電圧変化を例えばコンパレータで読み取り,誘電エラストマーの充放電を制御する接点スイッチを切り替える回路を設計し,実装する.2)発電量と効率の評価:誘電エラストマーを用いた振動センサ機能付き発電デバイスを用いて,その発電量と効率を評価する.工学
吸入ガス麻酔薬の脊髄における鎮痛および不動化作用機序の解明

全身麻酔薬は催眠、健忘、鎮痛、不動化などの作用を有している。電気生理学的手法を用いた本研究により、脊髄後角で亜酸化窒素は抑制性応答には影響を及ぼさないことが明らかとなった。さらに、キセノンは脊髄後角における興奮性応答を抑制することで、痛覚刺激に対する応答を抑制することがわかった。全身麻酔薬は意識消失、不動化および自律神経抑制などの作用を有している。近年、麻酔薬の不動化を示す指標としての最小肺胞濃度(minimum alveolar concentration:MAC)が脳ではなく脊髄レベルで決定されるという報告がある。そこで、痛みの伝達に重要な部位である脊髄後角におけるガス麻酔薬、亜酸化窒素の作用機序をラット脊髄スライス標本を用いて、後角II層細胞からホールセルパッチクランプ法により電気生理学的に解析した。0.3MAC亜酸化窒素はグルタミン酸NMDA受容体アゴニスト投与による電流および一次求心性線維Aδ・C線維刺激によるNMDA受容体興奮性シナプス後電流(EPSC)の振幅を抑制した。さらに、AMPA受容体アゴニスト投与による電流およびAδ・C線維刺激によるAMPA受容体EPSCの振幅もNMDA受容体と同様に抑制した。それに対して、亜酸化窒素はGABA_Aおよびグリシン投与による電流および局所刺激によるそれらの受容体を介する抑制性シナプス後電流(inhibitory postsynaptic current:IPSC)および微小IPSCにはほとんど影響を及ぼさなかった。以上の結果、下行性抑制系以外にも脊髄後角での興奮性伝達を抑制することが、亜酸化窒素の脊髄レベルでの鎮痛作用機序の一つであることが明らかになった。そこで、痛みの伝達に重要な部位である脊髄後角におけるガス麻酔薬、キセノンの作用機序をラット脊髄スライス標本を用いて、後角II層細胞からホールセルパッチクランプ法により電気生理学的に解析した。キセノン50%はグルタミン酸NMDAとAMPA受容体を抑制することで、興奮性シナプス伝達を抑制することが明らかになった。しかし、抑制性GABA_Aおよびグリシン受容体を介するシナプス伝達に対してキセノンの作用は認められなかった。In vivoの実験より、キセノンは触覚と痛覚刺激に対する応答を抑制することがわかった。以上のことからキセノンは脊髄後角における侵害・非侵害情報の伝達を抑制することで鎮痛作用を示すと考えられる。近年、麻酔薬の不動化を示す指標としての最小肺胞濃度(minimum alveolar concentration : MAC)が脳ではなく脊髄レベルで決定されるという報告がある。
リンフォカインとその受容体の遺伝子構造と発現及び調節機構の解析

免疫応答系の調節を担うリンフォカインとその受容体の構造と機能解析を行い、更にはそれらの遺伝子の発現制御機構を分子レベルで解明することを目的として、主にインターロイキン2システム(IL-2システム)について研究を行った。まずヒトIL-2とその受容体(IL-2R)の遺伝子が、活性化T細胞特異的に発現されるために必要なDNA配列を同定することに成功した。つづいて、これらの遺伝子が成人T細胞白血病の原因ウイルスであるHTLV-1の感染によってどのような影響を受けT細胞白血病化に関わっているかを調べるため、研究を行った。その結果HTLV-1の産物であるp【40^x】タンパクがヒトIL-2及びIL-2R遺伝子の発現制御領域に働いてこれらの遺伝子の転写を活性化することを明らかにした。更にIL-2遺伝子はこのp【40^x】と抗原によるT細胞の刺激によって相乗的に活性化される証拠を得た。一連の事実はウイルスの感染と抗原刺激とがT細胞におけるIL-2システムの異常作動を誘発し、細胞の悪性増殖化に深く関わっているものと考えられる。このようなIL-2システムの異常作動が実際に細胞の悪性増殖につながるかどうかを調べるために、ヒトIL-2を生産するレトロウイルスの作製に成功した。今後このようなウイルスをT細胞に感染させ、その生物学的意義を明らかにできるものと考えられる。更にIL-2Rに関しては遺伝子に様々な変異を加えることによって受容体の構造と機能の解析を行った。その結果、TAC抗原と呼ばれるIL-2Rと会合し、実際に機能的受容体として働く他の分子の存在と、実際そのような分子がIL-2のシグナル伝達に直接関わっている証拠を得た。TAC抗原はCキナーゼによるリン酸化を受けるという報告があるが、我々の一連の研究により、そのようなリン酸化が起きたとしても実際のIL-2Rの構造機能には関与しないことも判明した。
核融合における周辺プラズマ・対向壁間相互作用の総合的研究

現在の核融合研究の中で大学が果すべき最も重要な研究分野の一つである、周辺プラズマ・対向壁間の相互作用についてプラズマ研究者と炉材料研究者とで新しい研究組織体を構成し、研究課題の厳選、重点領域研究企画立案の調査と準備を行うことが本総合研究の目的である。研究代表者及び主要な研究分担者は大小含めて約10回の研究打ち合わせを持ち、最終的に平成4年度発足重点領域研究「プラズマ・対向壁複合系における粒子輸送制御」申請書(領域代表者:名古屋大学工学部教授・高村秀一)にまとめあげた。この中では次の四項目に研究分野を絞った。A.周辺プラズマにおける基礎過程B.周辺プラズマにおける複合過程C.水素リサイクリングおよび水素に起因する不純物発生の動的過程D.対向壁損耗と不純物発生の物理過程の解明と制御しかしこれら各研究グル-プは各々独立ではなく、有機的に結びついた形で研究を進めることとした。特に項目Bは、共同計画研究としても位置付け、主要研究装置であるダイバ-タプラズマ対向壁間相互作用模擬試験装置を中心にし、計算機模擬実験のグル-プと協力して周辺プラズマ中での粒子輸送過程の解明を担当する。さて、この分野の最近の盛り上がりを受け、また研究領域の学際性に鑑み、日本原子力学会、プラズマ・核融合学会、日本物理学会、電気学会、応用物理学会、日本真空協会の協賛を得て、「核融合における周辺プラズマ・対向壁間相互作用」研究会を平成2年11月46日に東伊豆熱川ハイツで開催することができた。当初の予想を上回り、材料・プラズマ双方から計70名近くの研究者(大学、核融合科学研、原研、電総研、理研、民間)の参加を得た。基調講演、各研究項目に関する個別講演及びコメントが行われ、研究課題に関する共通認識の育成、重点領域研究のための組織化、重点領域課題の設定について徹底的な討論を行った。これらは500頁の報告書にまとめられ、公表されている。
女子大学生のライフデザイン構築課程における不安構造の研究

【研究目的】女子大学生のライフデザイン構築過程に内在している不安を構造的に解明すること。【研究方法】(1)質問紙調査(早稲田大学女子大学生127名、選択・自由記述)を実施。質問項目は家庭観・就業観に関する内容、および個人的な側面(状況、感情、行動)、社会的な側面(状況、他者の反応)について設定した。(2)質問紙調査結果の分析をもとにインタビュー調査(4名)、10年後の生活に関する質問紙調査(早稲田大学女子大学生150名、日記形式・自由記述)実施。(3)家庭観・就業観、個人的側面、社会的な側面をクロスさせながら、女子大学生のライフデザイン構築課程における不安構造の解明に努めた。【研究成果】研究の結果以下の点が明らかとなった。(1)労働市場と家庭観の矛盾...現代社会で働く際にはどうしても「孤立した個人」であることが求められる。高い就業意欲を持ちながらも家庭での役割分業を潜在的に肯定している女子学生は将来直面する矛盾を無意識のうちに感じている。(2)フレキシブルな働き方・短期化する職務内容が与える心理的影響...短期間で成果をあげる職務内容が増えた結果、長期的に成果を蓄積できないことによる不安感が生まれている。(3)長期的関係への希求...短期的な人間関係が企業社会の中心となっていくことによって、逆に長期的関係を築く家庭への憧れが増大している。(4)個人の意欲と結婚相手への過剰な期待...上記の問題は基本的に個人的な問題とされるため、女子学生はライフデザインを実現できるかどうかは、「自分の意思の強さ」と「結婚相手次第」にかかっていると考えるようになる。これらは大学生段階で将来を考えるには、あまりに不確実な内容と言える。こうしたことから女子大学生の不安感は増大する。
プリオン病早期診断のためのプロテオーム解析

1.目的プリオン病の早期診断法確立のために、感染から発症に伴うマーカー分子を同定する。2.方法正常型プリオンを大量発現するように操作したマウス神経培養細胞株(N2a58)とそれに変異型プリオンを感染させた細胞(N2a/Fukuoka-1)の無血清培地24時間培養上清をTCA沈殿法で濃縮した試料、および変異型プリオン(Fukuoka-1株)を脳室内注入したddYマウスから経時的に採取した血清サンプル等を2次元電気泳動で分析し、画像解析によりプリオン感染で変動するタンパク質スポットの同定を行った。候補となるスポットからトリプシン消化したペプチド断片を溶出して質量分析計にかけ、得られたスペクトル情報と合致するタンパク質をデータベースの中から同定した。3.結果と考察2次元電気泳動ゲルの比較により、分子量60,000前後の領域にpH4-5の範囲に渡って連続したスポットを与えるタンパク質集団、およびpH7付近の分子量14,000のタンパク質がN2a/Fukuoka-1の培養上清で特異的に増大していることが判った。質量分析の結果、これらはいずれもウシ血清タンパク質であることが判明した。培養液の交換に際しては十分な洗浄操作を施したことから考えると、感染によって細胞膜に何らかの変化が起こり、血清タンパク質を保持しやすくなった可能性が挙げられる。血清サンプルにおいては、変異型プリオンに非感染のマウスから得たコントロールに見いだされる単一のスポットが、感染後4週から2つに分かれ、週齢が進むにつれて消失していく傾向が観察された。質量分析計による解析から、これらのスポットには血液凝固系の調節因子が含まれていることが示唆された。この生理的意義については今後の解析を待たなければいけない。2.方法正常型プリオン(PrP^C)を大量発現するように操作したマウス神経培養細胞株(N2a58)とそれに変異型プリオン(PrP^<SC>)を感染させた細胞(N2a/Fukuoka-1)を、それぞれサブコンフルエントになるまで培養した後、無血清培地に交換した24時間後の培養上清をTCA沈殿法にて濃縮し、2次元電気泳動を行った。1次元目にpH4-7の等電点ゲル、2次元目に12.5%ポリアクリルアミドゲルを用い、Sypro Ruby染色した後、画像解析を行った。質量分析用のサンプル調製には、クマシーブル-染色したゲルから目的とするスポットを切り出した。トリプシン消化したペプチド断片をゲルスポットから溶出し、C-18カラムで脱塩・濃縮した後、質量分析計で得られたマスフィンガープリントと合致するタンパク質をデータベースの中から同定した。3.結果と考察2次元電気泳動ゲルの比較分析により、分子量60,000前後の領域にpH4-5の範囲に渡って連続したスポットを与えるタンパク質集団、およびpH7付近の分子量14,000のタンパク質がN2a/Fukuoka-1の培養上清で特異的に増大していることが判った。質量分析の結果、これらはいずれも交換前の培地に含まれていたウシ血清タンパク質であることが判明した。血清含有培地から無血清培地への交換は十分に細胞を洗浄してから行っており、かつ別々に調製した複数のサンプルで再現性良くタンパク質スポットの増大が認められたことから、PrP^<SC>の感染によって細胞膜に何らかの変化が起こり、血清タンパク質を保持しやすくなった可能性が考えられる。今後はプリオン感染マウスの血管内皮やリンパ球における膜タンパク質の構成を調べるとともに、血中タンパク質成分の変動を解析していく。

2.方法ddYマウスに変異型プリオン(Fukuoka-1株)を脳室に注入すると、約16週間後に発病し種々の運動失調をきたす。このモデルシステムを用いて、プリオン感染から4週、8週、10週、12週、14週、および16週ごとに心臓採血を行い、低速遠心で血餅を除去して血清サンプルを得た。さらにスピンカラムを用いて血清アルブミンと免疫グロブリンを除去してタンパク定量を行った後、一定量のサンプルを2次元電気泳動法により分析した。1次元目にpH4-7の等電点ゲル、7次元目に12.5%ポリアクリルアミドゲルを用い、Sypro Ruby染色した後、画像解析を行った。質量分析用のサンプル調製のために、クマシーブルー染色したゲルから目的とするスポットを切り出し、トリプシン消化したペプチド断片をゲルスポットから溶出した。3.結果と考察プリオン感染から経時的に採取した血清タンパクサンプルを2次元電気泳動で比較分析することにより、感染後8週から出現するpH5付近の分子量約90,000にあたるタンパクスポットを同定した。このスポットは、週齢が進むにつれてより酸性側、高分子量側にシフトしていくことから、感染に伴ってリン酸化などの化学修飾が亢進するような性質を持つと類推された。この他、分子量25,000、pH4付近の領域に出現するスポットも見出した。これら感染から発症に至るまでに新たに現れたスポットに含まれるタンパク質を同定するために、さらに大量の血清サンプルを調製し、より大型のゲルを用いて2次元展開を行った。引き続き、質量分析計にかけてde novoシークエンス情報を収集し、得られたスペクトルデータと合致するタンパク質をデータベース検索により同定する。
臓器特異的シンタキシン3欠損マウスを用いたサイトカイン分泌機構の解析とその応用

マクロファージ特異的シンタキシン3ノックアウトマウスを作成し、TNFαの分泌に関係しているかどうかを、ELISA、染色により評価した。当初の見込みと異なりシンタキシン3はTNFαの分泌には関与していないことが明らかとなった。しかし、ゴルジ体から細胞辺縁にシンタキシン3は移動することから、他のサイトカインの分泌に関与していることが考えられた。Syntaxin3 floxedマウスとMxl Creマウスを交配さることによりコンディショナルノックアウトマウスを作成する。交配したマウスをPCRでgenotypingし(使用するプライマーはsyntaxin3についてはGACCCTGCTGCTTGTGCCTTCTTTATTC、TGGGCAGCCCTCCTGCAACCTTACACTG、Cre recombinaseについてはAGGTTCGTTCTCTCATGGAとTCGACCAGTTTAGTTACCCを使用)Mxl Cre syntaxin3 floxed/floxedマウスを得る(図はsyntaxin3 floxed/floxedマウスのgenotypingの結果)。Mxl CreマウスのCre recolnbinaseはpolyinosinic-polycytidyhc acid(pI-pC)により誘導され発現するので生後3週のマウスの腹腔内にpI-pC 250μgを隔日3回腹腔内投与し完全なコンディショナルノックアウトマウスを作成した。マウスの腹腔内に2mlのthioglycolateを投与する。5日後に腹水を採取しHBSSで洗浄後遠心分離しマクロファージを採取する。これをRPMIと10%FCSと5%ペニシリンを含む培養液の中で初代培養をした。培養細胞からmRNAを取り出しRT-PCRをかけてcDNAの量を調べたところコンディショナルノックアウトのマクロファージのシンタキシン3の発現量は非常に低下していた。また、マクロファージはシンタキシン3を発現している場合1日後には樹状細胞のようになっていたが、シンタキシン3のコンディショナルノックアウトのマクロファージは樹状を示す細胞の数は少なく円形のままの細胞が多数みられ、また死んでしまったのまだ分からないが浮遊している細胞が非常に多いことが分かった。Syntaxin3 floxedマウスとMxl Creマウスを交配さることによりコンディショナルノックアウトマウスを作成した。交配したマウスをPCRでgenotypingし(使用するプライマーはsyntaxin3についてはGACCCTGCTGCTTGTGCCTTCTTTATTC、TGGGCAGCCCTCCTGCAACCTTACACTG、Cre recombinaseについてはAGGTTCGTTCTCTCATGGAとTCGACCAGTTTAGTTACCCを使用)Mxl Cre syntaxin3 floxed/floxedマウスを得た。。Mxl CreマウスのCre recombinaseはpolyinosinic-polycytidylic acid(pI-pC)により誘導されるので生後3週のマウスの腹腔内にpI-pC 250μgを隔日3回腹腔内投与し完全なコンディショナルノックアウトマウスを作成した。4日後に腹水を採取しPBSで洗浄後遠心分離しマクロファージを採取した。また、syntaxin3をノックアウトしたマクロファージではLPS投与後のTNF分泌量が減少している傾向にあった。Syntaxin3 floxedマウスとMx1 Creマウスを交配さることによりコンディショナルノックアウトマウスを作成した。polyinosinic-polycytidylic acid(pI-pC)により誘導されるので生後3週のマウスの腹腔内にpI-pC 250μgを隔日3回腹腔内投与し完全なコンディショナルノックアウトマウスを作成した。syntaxin3をノックアウトしたマクロファージではLPS投与後のTNF分泌量が減少しているかどうか、ELISAを用いて調べたが、一定ではなかった。そこでマクロファージにsyntaxin3-GFPのcDNAを導入し、次の日にLPSで刺激してTNFαとsyntaxin3の局在を調べた。LPS刺激前はゴルジに局在していたが、LPS刺激後は局在は一致しなかった。しかし、syntaxin3もゴルジから細胞表面に移動していることからLPS刺激により何らかの免疫の役割をしている可能性があることが示唆された。