hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
凝集型機能性ＲＮＡ薬剤のデザイン

RNAは一般的に分解されやすいと考えられており、RNA分解耐性かには人工核酸のしようが必須であると考えられている。本研究では、人工核酸を用いずに(天然型のヌクレオチドのみを用いて)RNAを安定化する方法について検討を行った。その結果、RNAはある決まった条件を満たすと凝集体を形成するらしいことを発見し、凝集体の形成によって熱安定性やRNA分解酵素耐性を獲得することが分かった。また、凝集体の形成条件については、転写反応時の鋳型長とRNA配列が関係することが示唆された。本成果は、RNAを作成する際に重要な知見をもたらすものとして、RNA工学分野、RNA医薬分野に貢献することが期待される。凝集型RNA配列はRNA分解酵素耐性を示すこと、また凝集型RNA配列中の一部はRNA分解酵素耐性化には不要であることが分かった。このことから、このRNA分解酵素耐性化には不要である個所をRNA分解酵素感受性であるshRNA配列を導入したところ、shRNA単独での場合と比較してヒト血清中での半減期を少なく見積もって約5倍(約80分)に延長させることに成功した。また、このshRNAを組み込んだ凝集型RNA配列は、Dicerによってプロセスされることもあきらかにすることができた。これらの成果をまとめて、特許出願を1件行うことができた(特願2013ー256425号、「RNA分子にヌクレアーゼ耐性能を付与する方法、ヌクレアーゼ耐性能を有するキメラRNA分子」梅影創、藤田隼輔、藤沼輝、菊池洋2013年12月)。また、一方で凝集型RNA配列への変異導入や欠失実験を行ったところ、凝集体を形成せずともRNA分解酵素耐性を示す新規なRNA配列の取得に成功した。当初の研究予定では、(1)RNA分解酵素抵抗性のハンマーヘッドリボザイムのRNA分解酵素耐性化に必要な部位の同定、(2)RNA分解酵素抵抗性のハンマーヘッドリボザイムのRNA分解酵素耐性かに関与する二次構造構造の解明、を予定していた。(1)に関しては、44塩基のRNA配列中の末端部分の2塩基がRNA分解酵素耐性化に重要であることを見出した。また、これに基づいて44塩基のハンマーヘッドリボザイムをRNA分解酵素抵抗性を維持しつつ23塩基長まで短縮させることに成功した。また、一部RNA分解酵素脆弱性のRNA配列を44塩基のハンマーヘッドリボザイム中に組み込むことで、この易分解性のRNA配列をRNA分解酵素に対して抵抗性を示すように改変させることにも成功した。(2)に関しては、ヒト以外の生物種由来のRNA分解酵素を用いて、本ハンマーヘッドリボザイムのRNA分解酵素抵抗性を評価したところ、ヘビ毒由来の二重鎖RNA特異的RNA分解酵素であるRNaseV1に対して分解されることを見出した。さらにRNaseV1による分解を受けた後では、RNaseAに対して分解を受けるようになることが明らかとなった。本ハンマーヘッドリボザイムのRNA分解酵素耐性化を示す凝集構造の外部構造は二重鎖を中心とした構造であり、内部はRNaseA感受性を示す一本鎖RNAが形成されていることが示唆された。つまり、凝集体の内部は機能性RNAの機能自体が維持されていることが想定された。実際に凝集性の本ハンマーヘッドリボザイムの場合、凝集構造を形成しているにもかかわらず、コントロール用(凝集しないタイプ)の通常のハンマーヘッドリボザイムと同様の活性を示すことが分かった。これらのことから、RNAを凝集させることによっても機能が損なわれる訳ではなく、凝集性RNA薬剤のデザインが有用であることが示された。RNaseAに分解されにくい配列について、NMR解析および生化学的解析によって、テトラAループを持つステム構造を形成していることが分かった。また、このRNAは試験管内転写時において、T7 RNAポリメラーゼによってRNA鋳型依存的な伸長反応を受けていることも明らかになった。したがって、RNaseAに対する分解耐性を示すRNAの一つは、構造と配列が重要であることが示された。なお、この配列については、機能性RNAの末端部分に導入することによって、機能性RNAの細胞内安定性を向上させられることが期待される。なお、RNAが凝集する現象については、RNAを試験管内転写する際の鋳型DNA配列の長さとRNAの二次構造安定性に依存するらしいというところまでは分かったが、完全に理解できたとは言い難い。この部分については、引き続き検討を実施する。特許出願を行うことができた。また新たな発見として、凝集体を形成せずともRNA分解酵素耐性能を示す新規RNA配列の取得に成功した。このRNA配列については、NMR等による構造解析に好適であるため、構造科学のスタンスからRNA分解酵素耐性化の原理に迫ることができるものと期待できる。

申請者の見出した44塩基長のRNAが凝集しRNA分解酵素耐性となる原理の理解をめざして研究を行い、44塩基長のRNAの凝集化に重要な配列部位の同定に成功した。この知見を活かして、44塩基長であったものをRNA分解酵素耐性を保持させたまま23塩基に短縮することに成功した。これにより、他のRNA分解酵素に対して脆弱な機能性RNA配列に手軽に導入する道筋をつけることができた。すでに、一部のRNA配列(機能性RNAではないが、RNA分解酵素分解性の配列)をRNA分解酵素耐性化させることに成功している。今後は、shRNAを組み込んだ凝集型RNA配列の有用性(細胞内でのshRNAによるRNA干渉能の発現)を評価するために、モデル癌細胞への導入実験、およびモデル動物(マウス)を用いた実験を行う。前年度の研究において、我々が見出したRNA分解酵素に対して抵抗性を示すRNA配列中のRNAの凝集化(RNA分解酵素耐性化)に重要な配列部位を同定することができた。今後は、この配列を他の機能性RNAに導入することで、通常はRNA分解酵素に耐性脆弱な機能性RNAを凝集化させ、RNA分解酵素耐性化する手法を開発する。具体的には、ルシフェラーゼ遺伝子、抗アポトーシス関連遺伝子をノックダウンするshRNA配列を凝集化させてRNA分解酵素耐性化する手法を確立する。培養細胞を用いて、ルシフェラーゼ遺伝子のノックダウン、抗アポトーシス関連遺伝子(例えばbcl-2)のノックダウンによるモデル癌細胞のアポトーシス誘導効果を従来の易分解性shRNAと比較し、本手法有用性を検証する。購入手続きをしていた試薬の納期が3か月程度ずれてしまい、年度内の納品が不可能となってしまったため。当初の計画とおりに次年度使用額分は試薬上記試薬購入費として使用する。RNA合成用の試薬(ポリメラーゼ、ヌクレオチド等)、及び培養細胞実験用試薬(トランスフェクション試薬、ルシフェラーゼアッセイ試薬、アポトーシス評価用試薬等)の購入費としての使用を計画している。
歯周病が血糖コントロールに及ぼす影響に関する疫学調査

まず1998年に福岡県久山町にて1111人に対して実施した歯周病および全身の健診結果について分析を行った。歯周病の者は心電図に虚血性の変化が多いことが分かった。さらに過去10年前に遡って糖負荷試験の結果の変化と歯周病との関連性を分析したところ、歯周ポケットの深い者ほど糖負荷試験の結果が過去10年間の間に悪化していることが分かり、歯周ポケットが耐糖能に異常をきたし、ひいては糖尿病へとつながる可能性が推測された。同様の分析を自衛隊定年退職時の健診結果についておこなったところ、断面調査ではあるが歯槽骨吸収の大きい者ほど耐糖能異常が多く久山の分析結果をサポートするものであった。歯周病の危険因子の分析を久山町の女性において行ったところ肥満は糖負荷試験の結果に独立して歯周病は関連しており、肥満が糖尿病とは別の機序で歯周病の危険因子である可能性が指摘された。さらにメタボリックシンドロームの5項目のうち当てはまる数が多いほど歯周病のリスクが高いことが明らかとなった。また過度の飲酒が比較的重症な歯周病の危険因子であること、喫煙は歯周病の危険因子であり、現在のみならず過去の喫煙がプロービング時の出血の抑制的に働くことが分かった。2003-2006年に毎年約800人に歯周病検診を実施しデータベースを構築中であるが、2004年の受診者743人のうち、50歳代の女性から歯周病を有する者と有しない者併せて約80人を選択し、肥満に関連したアディポサイトカインのうち、レジスチン、アディポネクチン、TNF-α、IL-6について測定を行った。結果を分析したところ、歯周病を有する者ではBMIなどの肥満指標で調整後も血清中のレジスチン濃度が有意に上昇していた。本研究は長期にわたる追跡調査である。本年度は最終年度であったが、19年度以降も新たに計画を見直し、継続して疫学調査を実施する必要がある。1998年に福岡県久山町にて実施した歯周病の健診結果を歯科疾患実態調査やは米国国民栄養調査(NHANES III)の結果と比較したところ、同程度であることが分かった。歯周病は年齢と関連するが、特にアタッチメントロスが年齢と強く関連していた。また、1998年の心電図検査の結果と歯周病健診の結果について分析したところ、歯周組織の状態が悪い者ほど、虚血性の変化に関連する心電図の異常(左心室肥大とST抑制)がある者が多いことが分かった。この関連性は年齢、性別、収縮期血圧、喫煙習慣、飲酒量、運動習慣などの影響を考慮して調整した上でも有意に関連していた。これらのことから、歯周病が虚血性心疾患と関連しているというこれまでの報告を支持する結果が得られた。一方、1988年の住民健診において経口糖負荷試験の結果が正常であった者を抽出し、1998年における歯周病健診の結果と経口糖負荷試験の結果について分析したところ、平均歯周ポケットの深い者ほど糖負荷試験の結果が過去10年間の間に悪化していることが分かった。このことから、歯周ポケットの存在が耐糖能に異常をきたし、ひいては糖媒病へとつながる可能性が推測された。2003年78月に福岡県久山町にて住民健診および歯周病健診を実施した。

健診結果はコンピュータ処理を行う目的で現在入力中である。1998年に福岡県久山町にて実施した歯周病の健診結果について引き続き分析を行っている。心電図検査の結果と歯周病健診の結果について分析したところ、歯周組織の状態が悪い者ほど、虚血性の変化に関連する心電図の異常(左心室肥大とST抑制)がある者が多いことが分かり、歯周病が虚血性心疾患と関連しているというこれまでの報告を支持する結果が得られ、Journal of Periodontologyに発表した。また、1988年の住民健診において経口糖負荷試験の結果が正常であった者を抽出し、1998年における歯周病健診の結果と経口糖負荷試験の結果について分析したところ、平均歯周ポケットの深い者ほど糖負荷試験の結果が過去10年間の間に悪化していることが分かった。このことから、歯周ポケットの存在が耐糖能に異常をきたし、ひいては糖尿病へとつながる可能性が推測され、Journal of Dental Researchに報告した。また、女性について、糖負荷試験の結果で調整したうえで、肥満と歯周病は関連しており、Journal of Periodontal Researchに報告した。2004年7-8月に福岡県久山町にて住民健診を受けた者のうち、743人を対象に歯周病健診を実施した。1998年に福岡県久山町にて1111人に対して実施した歯周病の健診結果について引き続き分析を行っている。肥満と歯周病について肥満と関連の強い耐糖能に着目し分析した。二変量解析では肥満も耐糖能も歯周病と有意に関連していたが、多変量解析を行い他のリスク因子とともに肥満と耐糖能を同時に分析したところ、女性では肥満に関する各指標(BMI、体脂肪率、ウエストヒップ比)は深い歯周ポケットと有意に関連していたが、耐糖能は有意な関連性を認めなかった。このことから少なくとも女性において、肥満は耐糖能に独立して深い歯周ポケットのリスク因子である可能性ことが分かった。本結果はJournal of Periodontal Researchに発表した。また、中等度異常の飲酒(100%アルコールに換算で、1日15g以上)が重度の歯周ポケット(35%以上が4mm以上、上位10パーセンタイル)と有意に関連しており、飲酒が深い歯周ポケットのリスク因子である可能性が分かり、Journal of Periodontologyに発表した。2005年78月に福岡県久山町にて住民健診を受けた者のうち、732人を対象に歯周病健診を実施した。健診結果は現在入力中である。また、2004年78月に福岡県久山町にて歯周病検診を受けた743人のうち、50歳代の女性から歯周病を有する者と歯周組織が健康な者をピックアップしアディポサイトカインの測定を行ったところ、歯周病を有する者では血清中のレジスチン濃度が上昇していた。作年度は肥満と歯周病について肥満と関連の強い耐糖能に着目し、肥満が耐糖能に独立して、深い歯周ポケットのリスク因子である可能性を発表したが、本年はさらにメタボリックシンドロームの各項目について分析を行ったところ、当てはまる項目の数が多いほど歯周病のリスクが高いことが明らかとなりJournal of Dental Researchに発表した。また、喫煙と歯周病との関連性について詳細に分析したところ、現在のみならず過去の喫煙がプロービング時の出血の程度に影響することが明らかとなりJournal of Periodontologyに発表した。
ナノ結晶組織のマニュプレーションによる超軟磁性・超磁歪材料の創製

昨年度の研究において、材料を構成する結晶粒の磁化容易軸が等方的に分布したTerfenol-D[(Tb_<0.3>Dy_<0.7>)Fe_2]について、マイクロマグネティクス理論に基づく計算機シミュレーションにより、その結晶粒径と磁歪及び軟磁気特性を計算し、結晶粒径が限界値より小さくなると,軟磁性が著しく改善され、低磁界で大きな磁歪変化が生じることを明らかにした。この原因を明らかにするために、等方性磁歪を有する結晶からなる磁歪材料を仮定し、磁気ひずみエネルギーと磁歪定数、軟磁性の関係を解析的に検討した。この結果、以下の軟磁性発現のメカニズムが明らかになった。磁歪材料を構成する結晶粒ごとの磁化方向に分散が生じると磁歪エネルギーが増加する。このため、磁歪エネルギーの増加を抑制するため、各結晶粒の磁化方向が特定の方向に揃う効果が発生する。磁歪値の増加と共にこの効果が顕著になり、磁気異方性に打ち勝って各結晶粒の磁化が一方向に揃う。磁化方向が揃うことにより磁気異方性の平均化現象が生じ、結晶粒径の減少と同様に、超軟磁性が実現される。各結晶が異方的な磁歪特性を有する材料においても同様な現象が起こることを確認するために、Terfenol-Dの物性定数を仮定して、磁気異方性エネルギー及び磁歪エネルギーの大きさと軟磁性の関係を数値解析した。この結果、各結晶粒の磁歪特性が異方的な材料においても、磁歪エネルギーが磁気異方性エネルギーを上回る条件が達成されたときに、軟磁性の著しい改善が達成されることが確認された。上記の結果を実験的に確認するために、超急冷Fe-Ga薄帯について、熱処理条件を変化させて磁歪特性を調べて。その結果、λs=1000ppm、Hc=2kA/mが得られた。磁化容易軸が等方的に分布したTerfenol-D[(Tb_<0.3>Dy_<0.7>)Fe_2]について,マイクロマグネティクス理論に基づく計算機シミュレーションにより,その結晶粒径と磁歪及び軟磁気特性を計算し,結晶粒径が限界値より小さくなると,軟磁性が著しく改善され,低磁界で大きな磁歪変化が生じることを明らかにした。Terfenol-Dに対して報告されている物性定数を用いて計算された限界結晶粒径は,約20nmであった。また,磁気異方性定数と飽和磁気歪みを変化させて計算した結果から,磁気異方性エネルギーに比べて磁気歪エネルギーが支配的になった時に,軟磁性が著しく改善されることを見いだした。クリティカルな軟磁性化の原因について,理論式及び数値解析により研究した結果,磁気歪みを有する材料では,磁気弾性エネルギーの抑制のために,各結晶粒の磁化が平行あるいは反平行に揃う傾向があることが明らかとなった。ナノ結晶材料においては,結晶粒間の交換相互作用により各結晶粒の磁化方向の整列し,その結果等価磁気異方性が減少して軟磁性が改善されることが広く知られており,磁気歪みでも同様な効果を有することを見いだした。さらに,Terfenol-Dとa-Feから構成される等方性複合超磁歪材料について,磁歪特性及び軟磁性を計算機シミュレーションし,a-Feを30vol.%程度まで増加させても,単結晶Terfenol-Dを超える(dλ/dH)max(dλ/dHの最大値,λ:磁気歪み,H:印加磁界)が得られることを明らかにした。このことは,磁歪材料の複合化により,希土類量の低減及び耐酸化性の改善が達成されることを示唆している。
ゼブラフィッシュ突然変異体を用いた脊椎動物体幹部形成機構の解析

脊椎骨などに見られる脊椎動物体幹部の形態的特徴である分節性は、胚発生時に形成される体節に由来する。体節は、胚の後方に位置する未分節中胚葉が頭部側から一定の間隔でくびれ切れることによって生じる。この分節化を制御する分子機構は脊椎動物で普遍的であると考えられている。これまでの研究によって、体節形成に先立って起こる未分節中胚葉の分化過程については、Delta/NotchとFGFのシグナルが境界形成のタイミングと位置の決定に関与することが知られている。しかし、それに引き続いて起こる形態的に明瞭な体節境界の形成を制御している分子機構についてはまだ十分に理解されていない。我々は、独自に単離した頭部側数個の体節の分節化に特異的に異常をもつゼブラフィッシュ突然変異体の解析を行ない、細胞外マトリックスであるFibronectinがその受容体サブユニットのIntegrin-α5依存的に体節境界部へ集合することによって体節境界に接する細胞の極性が制御され、形態的に明瞭な体節境界が維持されることを明らかにし、論文発表した。さらに、細胞外マトリックスの体節境界への集合と体節境界部の細胞極性制御による体節境界維持の分子機構を詳細に明らかにするために、fibronectin/integrin-α5変異体に加えて、あと2種類の体節境界を維持できないゼブラフィッシュ突然変異体(kt443とkt561)の解析を行った。これらの変異体の原因遺伝子を同定するために、遺伝学的マッピングを行い、変異部位を1数cMの染色体領域に絞り込んだ。これによって、この領域に存在することが明らかとなっている遺伝子について変異体の原因遺伝子の候補として検討することが可能となった。脊椎動物の体幹部の形態的特徴である分節性は、胚発生時に形成される体節に由来する。体節形成に先立って起こる未分節中胚葉の分化過程については、Delta/NotchとFGFのシグナルが境界形成のタイミングと位置の決定に関与することが知られている。本研究では、体節形成の分子機構についてより詳細に明らかにするために、我々が単離した体節形成に異常を示すゼブラフィッシュ突然変異体の解析を行った。はじめに、我々は頭部側の数個の体節境界が不明瞭な2つの変異体の原因遺伝子がそれぞれ細胞外マトリックスであるfibronectin(fn)とその受容体のサブユニットであるintegrinα5(itga5)であることを明らかにした。次にfnとitga5の体節形成における機能を明らかにするために表現型の詳細な解析を行ったところ、未分節中胚葉における分節形成過程には異常はみられず、体節境界は一旦形成された後に消失していることが明らかになった。また、Fnタンパク質の局在を観察したところ、正常胚では体節境界への集合が見られたが、fn変異体のみならずitga5変異体でもその局在は消失していた。この時、体節境界部の細胞の極性が異常であった。以上のことから、体節形成は境界の形成と維持の2つの過程に分けることができ、Itga5依存的なFnの集合が細胞極性の制御および体節境界の維持に必要であることが示された。更に、これらの変異体でEphrinB2aの機能を阻害すると体節の形態異常が重篤になることから、Integrin-FibronectinがEph-Ephrinと協調的に働いていることも明らかになった。
始新世/漸新世境界における沿岸海洋域での一次生産者交代事変と表層流変動の解明

本研究の目的は,「温室地球」から「氷室地球」への転換点である始新世/漸新世(Eocene/Oligocene)境界(約3,300万年前;以降E/O境界)付近で,珪藻Chaetoceros属が渦鞭毛藻類に替わって沿岸生態系の主要な一次生産者と進化していった過程を解明することである.申請者の研究により,ノルウェー海から得られたボーリングコアDSDP Site 338サンプル中のE/O境界付近で,Chaetoceros属休眠胞子の多様性と産出頻度が激増する「Chaetoceros爆発」イベントが起きたことが解明された.一方,世界中の渦鞭毛藻類の休眠シストは,逆に多様性と産出量が急減しており,沿岸域における主要一次生産者が渦鞭毛藻類からChaetoceros属に急激に交代した可能性が示唆された.また,申請者が参加した北極掘削航海(IODP302)における成果より,始新世後期に,これまで知られていなかった北極海にも氷が存在していたことが明らかになった(Moran, et. al.2006).さらに,Chaetoceros属休眠胞子以外の珪藻休眠胞子グループが渦鞭毛藻シストと同様に,この時代に世界的に急減(絶滅)している事象を明らかにした(Suto, et al.,印刷中).これらのことから,E/O境界付近で海洋海流構造と熱循環構造が季節ごとに安定的に変動する環境から,現在のペルー沖で見られるエルニーニョ・ラニーニャ変動のような数年数十年レベルで変化する環壌が作られていったことが示唆された.また,現在アフリカ西沖のE/O境界を含み,珪藻化石を豊富に含有するコアサンプル(DSDP Sites 366&369)を高時間分解能で分析することによって,本イベントの正確な年代と各タクサ間および酸素同位体イベントとの対応関係,さらにこれらのイベントが全世界的に同時に起きていたのかを明らかにするため研究を進めている.本研究の目的は,「温室地球」から「氷室地球」への転換点である始新世/漸新世(Eocene/Oligocene)境界(約3,300万年前;以降E/O境界)付近で,珪藻Chaetoceros属が渦鞭毛藻類に替わって沿岸生態系の主要な一次生産者と進化していった過程を解明することである.申請者の研究により,ノルウェー海から得られたボーリングコアDSDP Site 338サンプル中のE/O境界付近で,Chaetoceros属休眠胞子の多様性と産出頻度が激増する「Chaetoceros爆発」イベントが起きたことが解明された.一方,世界中の渦鞭毛藻類の休眠シストは,逆に多様性と産出量が急減しており,沿岸域における主要一次生産者が渦鞭毛藻類からChaetoceros属に急激に交代した可能性が示唆された.また,申請者が参加した北極掘削航海(IODP302)における成果より,この時代まで,これまで知られていなかった北極海にも氷が存在していたことが明らかになった(Moran et al. 2006).さらに,Chaetoceros属休眠胞子以外の珪藻休眠胞子グループが渦鞭毛藻シストと同様に,この時代に世界的に急減(絶滅)している事象を明らかにした(Suto et al, in review).これらのことから,E/O境界付近で海洋海流構造と熱循環構造が季節ごとに安定的に変動する環境から,現在のペルー沖で見られるエルニーニョ・ラニーニャ変動のような数年数十年レベルで変化する環境が作られていったことが示唆された.また,現在アフリカ西沖とノルウェー海のE/O境界を含み,珪藻化石を豊富に含有するコアサンプル(DSDP Sites 366&369およびODP Site 908&913)を高時間分解能で分析することによって,本イベントの正確な年代と各タクサ間および酸素同位体イベントとの対応関係,さらにこれらのイベントが全世界的に同時に起きていたのかを明らかにするため研究を進めている.本研究の目的は,「温室地球」から「氷室地球」への転換点である始新世/漸新世(Eocene/Oligocene)境界(約3,300万年前;以降E/O境界)付近で,珪藻Chaetoceros属が渦鞭毛藻類に替わって沿岸生態系の主要な一次生産者と進化していった過程を解明することである.申請者の研究により,ノルウェー海から得られたボーリングコアDSDP Site 338サンプル中のE/O境界付近で,Chaetoceros属休眠胞子の多様性と産出頻度が激増する「Chaetoceros爆発」イベントが起きたことが解明された.一方,世界中の渦鞭毛藻類の休眠シストは,逆に多様性と産出量が急減しており,沿岸域における主要一次生産者が渦鞭毛藻類からChaetoceros属に急激に交代した可能性が示唆された.また,申請者が参加した北極掘削航海(IODP302)における成果より,始新世後期に,これまで知られていなかった北極海にも氷が存在していたことが明らかになった(Moran, et. al.2006).さらに,Chaetoceros属休眠胞子以外の珪藻休眠胞子グループが渦鞭毛藻シストと同様に,この時代に世界的に急減(絶滅)している事象を明らかにした(Suto, et al.,印刷中)

.これらのことから,E/O境界付近で海洋海流構造と熱循環構造が季節ごとに安定的に変動する環境から,現在のペルー沖で見られるエルニーニョ・ラニーニャ変動のような数年数十年レベルで変化する環壌が作られていったことが示唆された.また,現在アフリカ西沖のE/O境界を含み,珪藻化石を豊富に含有するコアサンプル(DSDP Sites 366&369)を高時間分解能で分析することによって,本イベントの正確な年代と各タクサ間および酸素同位体イベントとの対応関係,さらにこれらのイベントが全世界的に同時に起きていたのかを明らかにするため研究を進めている.
医療事故体験看護師への当事者サポートとその効果測定尺度の開発研究

医療安全学習の効果を測定する尺度の信頼性・妥当性を検証した。同意の得られた22施設の看護師801名を対象に郵送調査し、最尤法-プロマックス回転による探索的因子分析等により「看護価値の獲得」「看護判断力の獲得」「安全態度の学習」「組織安全の学習」「事故防止スキルの学習」「自己モニタリングの習得」の6因子22項目で構成された尺度を開発した。19年度は、事故当事者体験を持つ看護師へのサポート効果測定尺度を開発するための、項目の検討を目標とした。検討には、2006年9月に実施したフォーカスグループ調査結果の解析と、事故当事者の面接データ(20047年調査)を分析検討した。前者からは、医療組織として現状ではサポート体制が整っていないとはいえ、各管理病棟での職位に伴う役割と非公式なサポートの存在が見出きれる「現状と課題」、事故体験に伴う当事者ダメージの経時的組織的「ダメージの構造」、医療現場で組織化可能な「当事者サポートの構造化」が明らかになり、日本看護学会(看護管理)に発表した。これらを報告書にまとめ対象施設にフィードバックする予定としている。後者からはダメージ体験の深化と学習深化がトレードオフの関係構造にあるという理論仮説を生成し、医療の質・安全学会に発表した。以上の成果を基盤にして、調査項目としては、基本属性及び当該事故に関する基礎事項に加えて、事故の動揺(ダメージ)体験8項、サポート体験9項目、体験からの学習13項目を作成した。予備調査は本学卒業生330名を対象に実施し、現在、事故体験を持つ有効回答103件中96件を分析している。記載された事故の約40%は1年目に体験していた。障害あるいは死に至る重大事故の体験は7件であった。無記名としていることからその実態は不明であるが、本学卒業(11期)者の事故体験の実態としてこの結果は基礎教育改革に重要であり、これは他校出身者の実態と大きな違いはないと予測される。回答者のダメージ体験は9割以上にみられ、体系的なサポートを受けておらず、学習につながるポジティブな認識は低いことから卒後の支援体制に課題が提示された。20年度はこの予備調査で明らかになった項目上の不備を解消し、さらにエキスパートの意見を取り入れた当事者サポートの効果測定にかかわる調査を予定している。当事者サポートの有効性を評価するための測定尺度開発を目的に、20年度は、研究全体の概念枠組みを再検討した。前年度予備調査で得た結果では、事故当事者のダメージが対象の属性と体験事故の特性から影響を受けており、ダメージはサポート(外的刺激)と振り返り(内的作業)を媒介して、事故からの学習となる構造が明らかになった。そこで、事故経験によるダメージ20項目、サポート11項目、振り返りの機会9項目、アウトカムとしての事故からの学習項目57を設定して調査項目とした。尚、妥当性検証のために看護師自律性尺度47項目を加えた。実施に当たっては、試行的に、連携している大学病院看護部に依頼したところ、調査の受け手による心理的ダメージの再燃が懸念されると指摘を受け、再検討して調査項目を刷新した。さらに、指摘のあった日本版GHQ精神健康調査、SAITII (X-II)を削除し、文献研究の結果、一般に適用されている出来事インパクト尺度を用いた調査票に改良した。本調査は、3県19医療施設の協力を得て、現在480余票を回収と同時にデータ入力しており、解析にあたって途中入力データ結果をもとに統計学上のコンサルテーションを受けて、尺度の妥当性及び事故当事者サポートの理論モデルを構築する見通しを立てた。さらに、調査回収終了段階で、尺度項目を出来るだけ簡便で有効な項目にして完成版尺度を作成し、その妥当性検証のための新たな調査対象を開発するため、複数施設に研究の趣旨を説明して協力の依頼をしている。当事者サボートの有効性を評価する測定尺度を開発するために平成21年度は合計23医療施設の1051票配布して得た有効回答439(41.8%)票を分析した。その結果、事故当時PTSDハイリスク状態が40.1%の回答で、現在も同状態が8.0%と、事故の経験が多くの看護職者に心理的ダメージを与え、それを抱えながら業務についていることが伺えた。この心理的ダメージは事故直後や対処中に自覚されるさまざまな「動揺体験」と強い相関があり、事故による「患者影響度」と有意差を認めたものの経験年数や年齢、事故時経験年からの影響は少なかった。「動揺体験」には、軽重の患者影響度による避けがたい「事故直面動揺」と、「事故報告時動揺」「周囲の反応動揺」があるが、後者の動揺軽減は組織的方略が可能と考えられた。また、事故後の影響を予測することで抱く動揺は、適切な情報提供など当事者に対する教育的介入によりダメージを深めない対策が可能と考察された。さらに、心理的ダメージは時間経過が軽減をもたらすとは限らず、年齢や経験年数、患者影響度など、明らかな要因とは言えないことから、個々の有効なコーピングスタイルや何らかの外的な事故後支援が影響するものと結論された。

この結果は第4回医療の質・安全学会学術集会で報告してベストポスター賞を受賞した。さらに、調査により開発した安全学習尺度は、6因子22項目で構成され統計学的に信頼性妥当性を得て、現在論文投稿中である。同時に研究を重ねてきた研究協力病院看護部の事故報告書による薬物関連28例を事例分析して、「5段階事故回避分析」方法により、個人と環境システムに視点を持っことで、事故体験から学習する支援となる可能性を明らかにして、同様に第4回医療の質・安全学会学術集会で報告した。今後、上記の安全学習尺度と5段階事故回避分析方法の有効性を検証する介入研究を予定している。
ＤＴＴおよびＡＳＬを用いた摂食時における脳内活動ネットワークシステムの探索

血液スピンラベリング(ASL)法は、造影剤を使用する代わりに脳内へ流れ込む動脈中のプロトンをMRIの磁場を用いて電磁気的にラベリングする手法で、非侵襲的に脳血流量(CBF)を算出することが可能である。本研究では、この手法を応用して、11名の健康なボランティアと、14名のシェーグレン症候群と診断された参加者の耳下腺内灌流(SBF)を測定し、比較・検討した。その結果、シェーグレン症候群は健康なボランティアと比較して、平常時のSBFが大きいこと、味覚刺激後のSBF増加のピークが遅く、増加率が大きいことが明らかになった。本年度はこの手法を応用して、味覚刺激前後で耳下腺部の血流動態を測定し、唾液腺の機能と血流動態との関連性を見いだすことで、非侵襲的に唾液腺の機能評価をするための準備・実験を行った。まず、ボランティア2名で、Salivary blood flow (SBF)を測定するためのMRI撮像シーケンスを検討・調整した。唾液腺機能に問題がないサンプルとして、健康な成人ボランティア21名に対し、酸刺激前後で耳下腺部のpCASLデータを取得した。唾液腺機能が正常であることを客観的に検証するため、各ボランティアに対してサクソンテストを行った。さらに、唾液腺機能が低下しているサンプルとして、シェーグレン症候群と診断された16名のボランティアに対し、同様のデータを取得した。得られたデータを解析してSBF mapを取得し、相対的な評価を行った。その結果、唾液腺機能に問題のないサンプルとシェーグレン症候群のサンプルでは、平静時(酸刺激前)のSBFに有意な差が認められた。また、酸刺激後の血流動態のパターンにも有意な差が認められた。これまで、シェーグレン症候群などの唾液腺機能低下を有する患者に対し、MRIは質的変化の評価には有用であったが、機能評価を行うためには唾液腺造影検査や唾液腺シンチグラフィーなどの侵襲的な検査が主であった。本研究により唾液腺機能が非侵襲的に評価できるようになれば、今後、唾液腺の病態解明や検査に大きく貢献すると思われる。本年度は、まず、Arterial Spin Labeling (ASL)の撮像シーケンスを検討し、SNRの改善、定量性の向上など、ラベリング方法やラベリングと撮像開始までのdelay timeなどの最適化を行った。ASLの撮像法はpseudo-continuous ASL (pCASL)法を用いた。ボランティア13名に対し、ガム咀嚼前後のpCASLデータを取得した。ASLの解析にはフリーソフトであるSPM8およびASLtbxを用いた。まず、control画像とlabel画像の位置を合わせ、次にPCASL画像と解剖画像の位置合わせを行った。さらに、pCASL画像からCBF mapを作成し、その後、集団解析のために、CBF mapに対してNormalize、Smoothingを行った。最後に、各個人のCerebral blood (CBF) mapを用いてpaired t検定を行い、集団解析を行った。これらの結果から、ガム咀嚼後には、前頭葉、側頭葉、辺縁系などに有意な血流増加が認められた。CBFの測定には、これまで、造影剤や放射性核種を使用する必要があったが、ASLを用いることで、非侵襲的にCBFを測定することができた。また、ASLの代表的な撮像法には、Continuous ASL (CASL)とPulsed ASL (PASL)があり、それぞれ、CASLの方がSNRはよいが、ラベル効果はPASLの方がよい、というように、長所・短所があった。今回、それらの利点をあわせ持つ、pCASLという新しい手法を用いてデータ取得、解析を行うことができた。本年度は、さらにデータサンプル数を増やし、合計で健康な成人ボランティア21名とシェーグレン症候群(SS)と診断されたボランティア20名のSBFを測定し、解析をすすめた。加えて、健康なボランティア5名とSSのボランティア7名の唾液腺T1値を測定し、その値を利用して解析データの補正を行った。その結果、健康なボランティアとSSボランティアのSBF動態には有意な差が認められた。これにより、シェーグレン症候群などの唾液腺機能低下を有する患者に対し、MRI検査により、これまで可能であった質的評価に加えて、機能的評価を行える可能性が高まった。また一方で、上記データ取得および解析と平行して、24年度に取得した、咀嚼時のCerebral blood flow (CBF)データの再解析を行い、時系列に沿ってCBF動態を観察した。その結果、咀嚼後、前頭葉を始めとして側頭葉、辺縁系などに有意な血流の増加が認められ、経時的に元のレベルに戻ることが明らかとなった。MRIを利用したArterial Spin Labeling (ASL)法の撮像シーケンスや解析法を検討し、それを用いて咀嚼や口腔内への味覚刺激による、脳や唾液腺の活動(血流)変化を定量評価した。はじめに、pseudo-continuous ASL (pCASL)のMRIシーケンスおよび解析法を検討し、これを用いて、ボランティア13名に対し、ガム咀嚼時のCerebral blood flow (CBF)データを取得・解析した。この結果、ガム咀嚼により、前頭葉、側頭葉、辺縁系などに有意な血流増加が認められた。また、この血流増加はガム咀嚼停止後にもしばらく保たれ、経時的に元のレベルに戻ることが示された。

これまでのfMRI等による研究ではガム咀嚼中の脳血流の増加は示されていたが、本研究では、咀嚼停止後にもしばらく血流増加が保たれていることが非侵襲的に示された。次に、口腔内の味覚刺激による耳下腺の血流変化(Salivary blood flow (SBF))を測定するためのMRIシーケンスを検討した。解析においては、ASLは元来脳血流を定量化するための手法であるため、耳下腺のT1値測定を行い、解析データの補正をおこなった。最終的に、条件を満たした、シェーグレン症候群と診断されたボランティア16名と、唾液腺の形態・機能にに異常を認めない健康なボランティア13名に対し、ASLデータおよびT1値データを取得し、解析をおこなった。その結果、シェーグレン症候群と健康なボランティアでは、SBFは異なるプロファイルを示すことが明らかになった。本研究により、非侵襲的な血流の定量化の可能性が広がった。今後、唾液腺を始め様々な病態の解明や検査方法に貢献すると思われる。血液スピンラベリング(ASL)法は、造影剤を使用する代わりに脳内へ流れ込む動脈中のプロトンをMRIの磁場を用いて電磁気的にラベリングする手法で、非侵襲的に脳血流量(CBF)を算出することが可能である。本研究では、この手法を応用して、11名の健康なボランティアと、14名のシェーグレン症候群と診断された参加者の耳下腺内灌流(SBF)を測定し、比較・検討した。その結果、シェーグレン症候群は健康なボランティアと比較して、平常時のSBFが大きいこと、味覚刺激後のSBF増加のピークが遅く、増加率が大きいことが明らかになった。前年度までに確立したASLの手法を用いてさらにサンプル数を増やし、解析法をさらに改良して解析値を補正することができた。歯科放射線学これまでに取得・解析したデータをまとめ、再解析が必要である部分は再解析を行う。最終的に、得られた結果を論文化する。初年度に確立したASLの手法や解析法を応用して、40名程度の被験者のデータを取得・解析することができた。ASLの撮像シーケンスや解析方法を検討し、実際に被験者を対象としてデータ取得・解析を行うことができた。本研究の大きな目標である、ASLのデータ取得および解析を行うことができたという点において、この研究は順調に進展していると考える。海外学会に参加予定だったが、予定が合わず参加できなかった。本年度は、一般的に公表されている頭部の血流を測定するためのモデル計算式を利用して相対的な評価を行ったが、これを耳下腺に利用するためには補正に使用する耳下腺のT1値が必要となる。今後は、この耳下腺T1値のデータを取得し、これまでに算出したSBF値を補正する。なお、これらの結果および初年度に行った実験結果をまとめ、論文作成の準備を行う。本年度、ASLのデータ取得方法や解析方法をある程度確立することができたため、次年度は、これらの方法を詳細に検証するとともに、今回取得したデータの定量解析を進める。また、本年度は、ASLを用いて咀嚼に対する脳活動を調べたが、次年度はさらに摂食に関わる他の運動(刺激)に対する機能評価を進める予定である。海外学会での成果発表を行う。また、蓄積されたデータの再解析のため、解析装置の不足が生じた場合には購入を検討する。
シナプス結合と神経回路の形成機構

以下の成果を得た。1.カドヘリンとその結合因子αN-カテニンのシナプス形成における役割を研究した。培養海馬神経細胞でドミナントネガティブカドヘリンを発現させ、カドヘリン機能を阻害すると、シナプスの形成に著しい障害が生じた。また、αN-カテニンのノックアウトマウスを作製し、その海馬神経細胞を調べると、スパインの形態異常が観察された。さらに、ショウジョウバエの神経系で発現するDN-カドヘリンの突然変異個体の視覚系を解析したところ、軸索末端のパターン、シナプスの形成等に異常が見いだされた。以上の結果から、カードヘリン/カテニンが、シナプス形成のために重要な役割を果たすことが初めて明らかにされた。2.αN-カテニンのノックアウトマウスの小脳では、プルキンエ細胞の移動が正常に起きなかった。よって、αN-カテニンは細胞移動にも関与することが明らかになった。3.カドヘリン11およびカドヘリン8のノックアウトマウスは、情動その他の行動異常を示すことが明らかになり、これらの分子が神経生理機能にも関与することが示唆された。4.カドヘリン結合因子p120-カテニンの役割を研究した。その結果、この分子は微小管に結合し、その構築制御に関与することが明らかになった。5.7回膜貫通型カドヘリンFlamingoの機能についてショウジョウバエを使って研究し、平面内細胞極性を制御することを明らかにした。6.脊椎動物・無脊椎動物門に共通して存在する特殊なカドヘリンを発見した。以下の成果を得た。(1)脳の辺縁系で特に強く発現されるcadherin-11(cad11)ノックアウトマウスの表現系を解析した結果、海馬CAl領域における長期増強(LTP)およびその飽和レベルが、有為に上昇していることが明かになった。神経細胞で発現される細胞接着分予め阻害は、一般にLTPを阻害するので、cad11がシナプスの機能にユニークな役割を果たしていることが示唆された。さらに、このノックアウトマウスの行動を解析した結果、驚愕反射の低下、高架十字迷路テストにおけるopen arm activityの上昇など、恐怖や不安の程度が抑制されていることが明かになった。以上の結果から、cad11がシナプスの可塑性を制御し、ひいては、脳の高次機能を制御していることが、初めて示唆された。(2)ショウジョウバエの脳で発現するDN-cadherin欠失個体の解析の結果、網膜軸索とその標的細胞の空間的関係に著しい撹乱があることが明らかになった。(3)ショウジョウバエ7回膜貫通型カドヘリンFlamingo変異の解析や結果,細胞のplaner polarityの決定にも関与していることがわかり、この分子の機能解析に新しい局面を迎えた。(4)カドヘリンのシナプスにおける機能を分子細胞生物学レベルで研究するために、培養海馬ニューロンを用いてカドヘリンを阻害するシステムを開発し、カドヘリンのドミナントネガティブ分子を組み込んだ発現ベクターを感染させると、樹上突起のパターンが変化することを発見した。(5)カドヘリン制御因子p120の軸索伸張における役割を研究するため、その変異分子を作製し、神経細胞に導入したところ、軸索伸長に影響を及ぼすという予備的結果が得られ、今後の展開の基礎作りができた。(1)カドヘリンのシナプス形成における役割を細胞レベルで解析するため、神経細胞培養系の導入を試みた。ニワトリ網膜の一部のアマクリン細胞等では、cadherin-6Bが発現しており、後シナプス膜裏打ちタンパク質PSD95と重なり合っている。培養にその阻害抗体を加え、PSD95の分布に対する効果を検討した結果、PSD95の分布が撹乱され、シナプス構造に異常がおきることが示唆された。(2)ショウジョウバエ脳で発現されるDN-

cadherin欠失変異株の視覚系における異常を調べた。網膜視細胞の軸索は、脳視覚葉に投射してシナプスを形成する。DN-cadherin欠失個体では、視神経軸索の終末パターンが異常となり、同時に、リボンシナプスの構造に異常が生じた。以上の結果により、正常なシナプス形成のためにはカドヘリンが必須であることが初めて遺伝学的に示された。(3)p120^<ctn>はカドヘリンに結合するタンパク質であるが、発見以来その機能は明らかにされていなかった。その機構を詳しく分析した結果、p120^<ctn>分子が、カドヘリンの抑制因子としてはたらいていること、この抑制は多分過剰リン酸化によって引き起こされていることなどを明らかにした。(4)7回膜貫通ドメインを有する特殊なカドヘリンFlamingoの欠失個体では、幼虫の中枢神経の軸索が各所で切断されるという異常が観察される。この分子の機能を探るため、この欠失個体の翅における表現型をモデルとして解析した。翅を構成する上皮細胞には、翅の遠近軸に添った平面内極性が存在する。Flamingo欠失個体の翅では、この極性が異常であった。平面内極性を決定する既知の遺伝子としてfrizzledがあるが、Flamingoとの機能的関係を調べた結果、Frizzledの濃度勾配が、Flamingoの局在位置を決め、それが平面極性を決めると結論された。カドヘリン接着分子群の神経回路形成における役割を研究し、以下の成果を得た。(1)カドヘリン結合因子αN-カテニンのノックアウトを作製・解析し、以下の表現型を発見した。このマウスは生後1日目にほとんどの個体が死亡する。脳の解剖学的検査によりいくつかの異常が検出されたが、その最も顕著なものは、小脳においてプルキンエ細胞の遊走に異常があることで、これに対応して小脳機能の欠陥に関連すると思われる行動上の異常も観察された。次年度には、これらの表現型をより詳しく調べ、αN-カテニンの欠失が、なぜそのような異常を引き起こすのかについての理解を深める。(2)カドヘリン-8のノックアウトマウスの表現型の解析に着手した。とりあえず網膜を詳しく調べた結果、この分子を発現する錐体双極細胞の軸索終末パターンに異常が発見された。現在、電子顕微鏡によりシナプス形成に異常があるかどうか検討中である。(3)海馬神経細胞を培養し、これにdominant-negative効果を有するカドヘリン変異分子を発現させカドヘリン機能を阻害して、シナプス形成に及ぼす効果を観察した。その結果、シナプス小胞タンパク質シナプシンの集積が阻害され、また、シナプス小胞のリサイクルか抑えられていた。これらの結果から、カドヘリンがシナプス形成に重要であることが示唆された。現在、これらの異常を電気生理および電子顕微鏡により確認している。引き続き、カドヘリン接着分子群の神経回路形成における役割を研究した。1)カドヘリン-8のノックアウトマウスの行動を観察した。このマウスは、モルヒネ投与マウスに見られるStraub tail反応様の行動異常を示すことが判明した。次年度は、この反応に関与すると想定される脊髄のシナプスを中心にその形成異常を調べる予定である。また、このマウスの海馬神経細胞を培養して、シナプス形成を調べた。
法務と訟務の乖離－中世後期イングランドにおける"rape" 民事侵害訴訟－

すでに進行中の、民事不法侵害訴訟としての夫による妻"rape"の申立事例の収集を継続した(国王裁判所とりわけ王座裁判所裁判記録集)。ロンドン市のHasting裁判所裁判記録集の民事雑編(不動産移転関係を除く民事全般)につき、ヘンリー4,5世期の記事を閲覧して、そこに、国王裁判所裁判記録集収録事例に類似した上記のような"rape"の訴えがあるかどうかを調査した。その結果、すくなくとも残存する記録集にはこれに類する訴え事案がほぼ見当たらないことが判明した(ただし、国王裁判所記録集と異なり、Hasting裁判所記録集は提起さらに裁判された事案のすべてを記事化して収録しているわけではないから、そもそもこの種の訴えは国王裁判所しか受け付けていなかったとまで推測を推し進めることはできないと考えている)。研究者の仮説「"rape"の訴えは実質上夫婦の合意による夫婦関係解消の効果を隠喩的に確保することが目的である」を論証するためにクリアすべき視点のひとつである「そうした方策を"とりやすい"社会層と"とりにくい"社会層があったのではないか」を検討するために、社会の中層部より上の階層で頻繁に行われていたと考えられている「(子女の婚姻あるいは被相続人の死期の切迫に際しての子女あるいは係累への)家族継承財産設定行為」の事例を探すため、国王裁判所裁判記録集に同綴されている私文書搭載・効力確認記録集(=非訟事件記録)および和解譲渡証書を調査し、家族継承財産についての緻密な条件設定の例を収集した。そこでは婚姻当事者の「生離別」のみならず「死別再婚」の事態も明確に想定されてはいないものの、継承権を持つのはある者の嫡出子であることが明記されており、特定配偶者との子であることが要件となっていない例もあることを確認した。相当の財産がある社会層でも「合意による離別」は可能だったか。多角的に調査を継続する。上記実績で説明したとおり、申請時には必ずしも視野に入っていなかった新たな分析視覚からの調査を、いわば「割り込ませた」ため、単純な事例件数蓄積作業はやや遅れ気味である。しかし、新たな視点を加味した調査を実施したことで、仮説に「厚み」を加える可能性が浮上してきた。その視点を整理すると、ほぼつぎの二点となる。1.研究者が問題としたような現象は、王の裁判所でだけおきていたものだったか。2.そうした現象あるいは方策を「活用しやすい」社会層と、そうでない社会層があったと考えて良いか。これらについてはそれぞれ一定の時間を割いて調査した。とりわけ2.は、つぎのような考察に基づいている。すなわち、単なる不法侵害訴訟提起例の数量的蓄積だけでは、カトリック時代の中世イングランドに事実上の合意による離別、それも、別居にとどまるのでなく、新たな婚姻をも許容するような離別がありえたとする仮説を、理論的に補強することは困難である。正面からは離別を論じないにもせよ、これを「ありうること」として想定していると推認できる事例はないだろうか。これを暗示する傍証がみつかれば、そこから、たとえば「アーンバラー家文書」にみられるように、ジェントリ家門での遠縁の者たちの相続権主張争いで最有力候補者姉妹を別の縁者が「私生児」だと主張していることの意味を、従来の研究分析とは頃なる視覚から眺めることも可能になるだろう。従来析出してきたのと同じパターンの事例を、同系列の史料のみから抽出・蓄積する収集作業は当初の予想よりも遅れ気味だが、こうした新たな観点からの傍を探索する作業の進展を考えれば、本年度の研究作業は、本課題が目的としている最終的な成果にとってはむしろ有益な情報を付加したことになると考えている。1.調査する期間(=時期)をどこまでで区切るかの検討。ヘンリー6世期(15世紀)は、影響の発現は事柄により時期が異なるとはいえ、イングランドの社会が、政治的にのみならずおそらく社会の中下層部の「国の司法行政」に対する法的期待さらには信頼の程度が変化した時期でもあると考えられる「バラ戦争期」で終わりを迎える。この時期を越えて、結局は近世初期のテューダー朝による「行政改革」につながるような、国王の政府諸期間への姿勢の違いが見え始めるヨーク朝のエドワード4世期まで調査を進めるべきかどうか、2019年度上半期中に結論を出す。2.調査する期間(時期)をどこまで遡るかの検討。1とは反対に、現在までに調査がかなりの程度まで終わっているヘンリー4,5世期の"rape"訴訟の隆盛が、いつ頃から見られた現象であるかにつき、直前のリチャード2世期を全面的に調査するか、あるいは、リチャード2世。エドワード3世後期・中期・初期について、ピックアップ的に調査をかけて趨勢についての感触をえることを優先するか、これも、上半期中に見通しをつける。3.そのうえで、この種の訴えが最も隆盛であったと認定できる時期を中心に、カトリック時代の中世イングランドで、実質的な「生離別」がどのようになされ、どのように受け入れられていたかを確認する目的に資する他の史料群とのクロス検索の可能性について、より具体的に検討する。候補としては、教会裁判所が夫婦関係全般についてどのようなスタンスを取っていたと推定できるかの調査のための二大大司教区管区裁判記録集(カンタベリー管区およびヨーク管区)が筆頭となる(2019年度後期2020年度)。

ロンドン市のHasting裁判所裁判記録集の民事雑編(不動産移転関係を除く民事全般)につき、ヘンリー4,5世期の記事を閲覧して、そこに、国王裁判所裁判記録集収録事例に類似した上記のような"rape"の訴えがあるかどうかを調査した。その結果、すくなくとも残存する記録集にはこれに類する訴え事案がほぼ見当たらないことが判明した(ただし、国王裁判所記録集と異なり、Hasting裁判所記録集は提起さらに裁判された事案のすべてを記事化して収録しているわけではないから、そもそもこの種の訴えは国王裁判所しか受け付けていなかったとまで推測を推し進めることはできないと考えている)。研究者の仮説「"rape"の訴えは実質上夫婦の合意による夫婦関係解消の効果を隠喩的に確保することが目的である」を論証するためにクリアすべき視点のひとつである「そうした方策を"とりやすい"社会層と"とりにくい"社会層があったのではないか」を検討するために、社会の中層部より上の階層で頻繁に行われていたと考えられている「(子女の婚姻あるいは被相続人の死期の切迫に際しての子女あるいは係累への)家族継承財産設定行為」の事例を探すため、国王裁判所裁判記録集に同綴されている私文書搭載・効力確認記録集(=非訟事件記録)および和解譲渡証書を調査し、家族継承財産についての緻密な条件設定の例を収集した。そこでは婚姻当事者の「生離別」のみならず「死別再婚」の事態も明確に想定されてはいないものの、継承権を持つのはある者の嫡出子であることが明記されており、特定配偶者との子であることが要件となっていない例もあることを確認した。相当の財産がある社会層でも「合意による離別」は可能だったか。多角的に調査を継続する。上記実績で説明したとおり、申請時には必ずしも視野に入っていなかった新たな分析視覚からの調査を、いわば「割り込ませた」ため、単純な事例件数蓄積作業はやや遅れ気味である。しかし、新たな視点を加味した調査を実施したことで、仮説に「厚み」を加える可能性が浮上してきた。その視点を整理すると、ほぼつぎの二点となる。1.研究者が問題としたような現象は、王の裁判所でだけおきていたものだったか。2.そうした現象あるいは方策を「活用しやすい」社会層と、そうでない社会層があったと考えて良いか。これらについてはそれぞれ一定の時間を割いて調査した。とりわけ2.は、つぎのような考察に基づいている。すなわち、単なる不法侵害訴訟提起例の数量的蓄積だけでは、カトリック時代の中世イングランドに事実上の合意による離別、それも、別居にとどまるのでなく、新たな婚姻をも許容するような離別がありえたとする仮説を、理論的に補強することは困難である。正面からは離別を論じないにもせよ、これを「ありうること」として想定していると推認できる事例はないだろうか。これを暗示する傍証がみつかれば、そこから、たとえば「アーンバラー家文書」にみられるように、ジェントリ家門での遠縁の者たちの相続権主張争いで最有力候補者姉妹を別の縁者が「私生児」だと主張していることの意味を、従来の研究分析とは頃なる視覚から眺めることも可能になるだろう。
細胞外脂質代謝酵素による腸内細菌叢の制御

本研究では、申請者が長年研究に取り組んできた脂質代謝酵素ホスホリパーゼA2 (PLA2)を基軸に、脂質代謝の視点から腸内細菌叢の新規調節機構を解明する。すなわち、腸管限局型sPLA2 (IIA, X)の欠損マウスを用い、メタゲノム、トランスクリプトーム、メタボローム解析を駆使して腸内細菌叢の変容ならびにそれに伴う代謝物の変化を精査するとともに、その癌・アレルギー・肥満等の遠隔臓器の表現型との関連性を明らかにする。