hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ハロゲン結合を介した野生及び多剤耐性HIV-1株を強力に阻害する抗HIV剤の開発

化合物のハロゲン化による脂溶性の向上やハロゲン結合の形成といった効果は、細胞内移行性や標的タンパク質との結合などの相互作用の増強などに寄与する。本研究では、良好な薬物動態を示しハロゲン結合を形成する事でHIV-1野生株及び多剤耐性HIV-1変異株に対して極めて高い阻害活性を有する新規抗HIV-1阻害剤の開発を目的とする。平成30年度までに、HIV-1プロテアーゼ阻害剤にハロゲン元素を導入する部位および数の最適化を行った。過去に同定したGRL-015-16A、KU-241と類似する基本骨格を有し、ハロゲン化された誘導体を複数合成、ハロゲン元素が抗ウイルス活性等に及ぼす影響を詳細に解析した。ハロゲン元素を導入する位置及び数の違いは、野生株HIV-1に対する活性以上に多剤耐性HIV-1変異株に対する抗ウイルス活性に顕著な影響を与えた。結晶構造解析を用いて、HIV-1由来プロテアーゼとハロゲン化された化合物の間で形成されるハロゲン結合の数との相関を検討した。この結果、形成されるハロゲン結合数が多いほど活性が高くなる傾向を示し、更にHIV-1のフラップ領域に存在するアミノ酸の主鎖との間に形成されるハロゲン結合が多剤耐性HIV-1変異株に対する抗ウイルス活性の向上に重要な役割を果たしていることを明らかにした。本成果は、国際雑誌に投稿、平成31年4月の時点で既にacceptされている[S. Hattori etal. AAC , April 3rd, 2019 (in press)]。これらの結果から、平成30年度は、プロテアーゼ阻害剤の化学構造内でハロゲン元素の修飾部位として最適な箇所の特定に成功、今後の新規化合物開発に資する成果を得ることができた。また、本研究成果を基にKU-241に匹敵する抗ウイルス効果を発揮、KU-241のバックアップ化合物として有望な合成された新規化合物の開発に成功した。平成30年度以降の研究計画では、(1)ハロゲン化部位の最適化、(2)ハロゲン化による細胞内又は生体内での薬物動態の変化、(3) KU-241に匹敵又は凌駕する新規化合物の同定を行う予定としていた。上述の様に、平成30年度の研究成果により、項目(1)に関しては目標を100%達成した。また(3)に関しても、KU-241に匹敵する化合物の同定に成功しており達成度は6070%程度と考えている。今後、本化合物とHIV-1由来プロテアーゼの構造解析や質量分析を用いた作用機序の解明、in vitro耐性誘導による耐性化機序の解析等により化合物を更に最適化する事でKU-241を凌駕する化合物を開発できる可能性が高く、平成31年度に項目(3)は100%達成される可能性が高い。(2)に関しても、新規化合物の細胞内における活性保持時間等の予備的な検討が既に進行中である。また、平成30年度中に雑誌掲載とはならなかったが、平成31年度4月の時点で薬剤耐性HIV-1変異株に対する新規抗HIV-1剤におけるハロゲン結合の重要性をまとめた論文がacceptされており、研究成果を社会に還元できている点も高く評価できる[S. Hattori et al. AAC , April 3rd, 2019 (in press)]。学会発表等も含め社会に対する情報の発信と研究成果の還元に関しても平成30年度は100%以上達成できたと言える。以上を考慮すると、平成30年度の本研究課題の進度は、少なく見積もっても当初の計画以上であると考えている。令和元年度(平成31年度)は、(1)プロテアーゼ阻害剤(PIs)のハロゲン化部位を固定して基本骨格を変化させた際の化合物の抗ウイルス効果の違いを検討、(2)ハロゲン化による化合物の細胞内又は生体内での薬物動態変化を解析する予定とする。各項目の詳細を下記に示す。(1)プロテアーゼ阻害剤のハロゲン化部位を固定して基本骨格を変化させた際の化合物の抗ウイルス効果の違いを検討:上述の様に、平成30年度の研究により、PIsをハロゲン化する際の最適部位を決定した。平成31年度は、PIsのP2及びP2'領域の基本骨格を変化させ多種多様な基本骨格から成る化合物を新たに合成し、その抗HIV-1活性の測定を行う。(2)ハロゲン化による化合物の細胞内又は生体内での薬物動態変化の解析:過去に申請者(満屋)のグループがヤマサ醤油と共同で開発、Merck社に導出した新規HIV-1逆転写酵素阻害剤4'-ethynyl-2-fluoro-2'-deoxyadenosine (EFdA/MK-8591)は、Merck社による第I相臨床試験(Phase Ia)の結果で、1週間に1回の投与(QW)又は10日に1回の投与で十分な抗HIV効果を発揮する事が示唆されている。今後、HIV-1に対する化学療法(ART)は1日1回(QD)からQW又は1月1回(QM)という投与レジメンへシフトする事が予想されている。HIV-1の抗ウイルス療法は複数の薬剤を組み合わせて用いる多剤併用療法であるため、QM投与により十分な抗HIV-1活性を発揮、EFdAと併用可能なPIsの開発が急務である。そこで、平成31年度は、高い抗HIV-1活性を発揮したPIsに関して細胞内で薬効を維持できる時間の検討を試みる。

化合物のフッ素化は(1)代謝による薬剤の不活性化を遅延させる(2)化合物の脂溶性を向上、細胞膜透過性を増大させ良好な経口吸収率が得られる傾向があるといった利点の他に(3)フッ素が標的タンパク質とハロゲン結合を形成する事で化合物と標的タンパクの結合力・親和性を向上させるとされる。本研究では上述の特性を有するハロゲン元素の導入を主軸とした合成展開を行い、より良好な薬物動態を示しハロゲン結合を介してHIV野生株及び多剤耐性HIV変異株を強力に阻害する新規抗HIV阻害剤の開発を目的とする。本年度は過去に我々が同定・開発したHIVプロテアーゼ阻害剤であるGRL-085及びKU-241を基にハロゲン元素を有する新規化合物群の合成・開発を行い、得られた化合物群の抗HIV活性の測定、結晶構造解析を用いた作用機序の解明を行った。野生株及び多剤耐性変異株に対する抗HIV活性を測定した結果、GRL-085を基本骨格とした場合一定の修飾を付したTp-THF構造及びCp-Abt構造を有する化合物(GRL-079)が野生株及び多剤耐性変異株に対して高い阻害効果を発揮し、更にこれらの部分構造を持つ化合物にフッ素を修飾した化合物(GRL-01516A)は多剤耐性変異株に対する活性が更に向上する事が明らかとなった。GRL-079及びGRL-01516Aの結晶構造解析の結果、Tp-THFに修飾されたグループがHIVプロテアーゼ(PR)のGly48と水素結合を、フッ素原子がGly49とハロゲン結合を形成している事が明らかとなった。Gly48又はGly49と相互作用する化合物は多剤耐性HIV変異株に高い阻害活性を有する事から、GRL-079及びGRL-01516Aに関してもこれら2つの相互作用(水素結合及びハロゲン結合)が重要な役割を果たしていると考えられる。本研究では、化合物のハロゲン化を主軸とした合成展開を行い、より良好な薬物動態を示し、ハロゲン結合を介してHIV-1野生株及び多剤耐性HIV-1変異株を強力に阻害する新規抗HIV-1阻害剤の開発を目的としている。平成29年度における当初の研究計画は、(1) KU-241の基本骨格を用いた新規ハロゲン化プロテアーゼ阻害剤の設計・合成、(2)新規化合物のHIV-1野生株及び多剤耐性HIV-1変異株に対する抗HIV-1活性の測定、(3)両方に高い活性を有する化合物が得られた場合、その化合物とPRの相互作用様式の解析を行う(4)また、高い活性を有する化合物が得られなかった場合、KU-241以外の基本骨格を用いて誘導体を作成、その活性を評価する予定であった。KU-241を基に米国Purdue大学のGhosh教授と共同でフッ素化を中心とした新規化合物のデザイン・合成・開発を行った化合物に関しては、目的の化合物は得られなかったが、GRL-085を基本骨格とする事で、結晶構造解析を用いてHIV-1野生株及び多剤耐性HIV-1変異株に高い活性を有する新規化合物(GRL-079及びGRL-01516A)の同定に成功、結晶構造解析を用いてその作用機序を解析した。解析結果から、化学構造中にフッ素原子を含むGRL-01516Aが、フッ素化された化合物の特徴の一つであるハロゲン結合を形成している事が明らかとなった。一方で、GRL-079及びGRL-01516Aの抗HIV-1活性は、KU-241よりも弱く、更なる改良もしくは、全く別の基本骨格を有する新規化合物の開発の必要性が生じた。この問題に関しては、平成30年度の解決課題となるが、少なくとも当初計画していた4項目に関しては全て成果を挙げている事から、研究進度は100%であり概ね順調に進行していると判断した。
肝細胞の微小管と細胞内膜系の機能病理学

1.微小管の構成成分であるチュブリンに対する抗体と小胞体内のみに局在するカルシウム貯蔵蛋白のカルレチクリンに対する抗体を用い、肝癌細胞(PLC/PRF/5)の二重染色を行った。小胞体の分布は微小管の分布と一致しており、微小管の脱重合により小胞体の細胞内配列が変化した。微小管モーター蛋白のひとつである細胞質ダイニンを染色したところ細胞室が瀰漫性に染色され、小胞体を溶解する界面活性剤処理を行ったところ染色は消失した。ウエスタンブロット法により、細胞ホモジネートを分画し、その小胞体分画に多量の細胞質ダイニンが存在することを確認した。さらに、培養肝細胞のホモジネートをタクソ-ルで処理し、微小管と小胞体の再構成複合体を形成させた。小胞体、細胞質ダイニンともATP処理により、微小管から遊離することが確認された。以上より、細胞質ダイニンは小胞体に結合し、微小管を介して小胞体の細胞内局在決定に関与していると考えられる。2.MAP・4蛋白の細胞内機能を知るために、細胞内ウシ副腎由来のMAP・4および細菌で発現させたMAP・4の末端側とN末端側の断片を細胞内に顕微注射し、細胞内の微小管の変化を観察した。肝細胞では微小管数が多く観察が困難であったため、腎上皮細胞由来のPtK2細胞を用いて検討した。MAP・4とC末端側の断片の顕微注射は、微小管の増加と一部で束状の配列を認め、これらの蛋白が微小管の制御に関連していることを明かとなった。3.位相差像の細胞形態の変化はなく、小器官の分布に変化が生じる培養条件として、細胞外pHを6.6に下げたとき、ゴルジ体の崩壊が処理16時間後に生じることを見いだした。この変化は可逆的で、pHをあげることによりもとの配置に戻った。また、このときには小胞体、微小管の配置には影響が現れなかった。さらに、細胞質ダイニンは崩壊したゴルジ体膜に結合したままで、この現象がダイニンのゴルジ膜の遊離によるものではなかった。肝細胞では微小管が細胞固有の機能に重要な役割を果たしており、肝疾患と密接な関連を持つと推測されるため、培養肝細胞で微小管モーターによる微小管を起動とする膜輸送と細胞内膜系の構造・配置の機構について研究をおこなった。1.細胞内小器官と微小管モーターとの結合を形態学的、生化学的に検討した。小胞体に局在するカルレチクリンの抗体とダイニン抗体を用いて、蛍光抗体法による形態学的研究を行なう共に生化学的に、細胞内膜分画には細胞質ダイニンが多量に結合しているという結果を得た。微小管関連蛋白であるMAP・4による微小管制御機構についても検討し、肝細胞では微小管量が多く観察に不向きなため、腎上皮細胞で行ったが、腎上皮細胞へのこの蛋白の顕微注射は微小管の増加を引き起こした。発現ブラスミドの注射では、同様の結果は得られなかった。また、膜分画にはMAP.4は存在しておらず、Anchor蛋白である可能性は少ない。2.当初、エタノールを中心に肝細胞の異常について検討したが、3%でも小胞体・微小管の変化は生じず10%では細胞死に陥るのみで、モデルとして適当ではなかった。

環境の変化の観点から細胞外のpHを変えたところ、ゴルジ装置の崩壊・分散が観察された。以上より、肝細胞の膜系に多量のダイニンが存在することが明かとなり、小胞体、ゴルジ装置にもダイニンが局在することが明かとなり、肝細胞の膜系の維持に微小管モーターが重要な役割をはたしていることが判明した。また、これらの機構は細胞内pH低下により阻害され、ゴルジ崩壊を引き起こすと考えられた。1.微小管の構成成分であるチュブリンに対する抗体と小胞体内のみに局在するカルシウム貯蔵蛋白のカルレチクリンに対する抗体を用い、肝癌細胞(PLC/PRF/5)の二重染色を行った。小胞体の分布は微小管の分布と一致しており、微小管の脱重合により小胞体の細胞内配列が変化した。微小管モーター蛋白のひとつである細胞質ダイニンを染色したところ細胞質が瀰慢性に染色され、小胞体を溶解する界面活性剤処理を行ったところ染色は消失した。ウエスタンブロット法により、細胞ホモジネートを分画し、その小胞体分画に多量の細胞質ダイニンが存在することを確認した。さらに、培養肝細胞のホモジネートをタクソ-ルで処理し、微小管と小胞体の再構成複合体を形成させた。小胞体、細胞質ダイニンともATP処理により、微小管から遊離することが確認された。以上より、細胞質ダイニンは小胞体に結合し、微小管を介して小胞体の細胞内局在決定に関与していると考えられる。2.MAP-4蛋白の細胞内機能を知るために、細胞内にウシ副腎由来のMAP-4および細菌で発現させたMAP-4のC末端側とN末端側の断片を細胞内に顕微注射し、細胞内の微小管の変化を観察した。肝細胞では微小管数が多く観察が困難であったため、腎上皮細胞由来のPtK2細胞を用いて検討した。MAP-4とC末端側の断片の顕微注射は、微小管の増加と一部で束状の配列を認め、これらの蛋白が微小管の制御に関連していることを明かとなった。3.位相差像の細胞形態の変化はなく、小器官の分布に変化が生じる培養条件として、細胞外pHを6.6に下げたとき、ゴルジ体の崩壊が処理16時間後に生じることを見いだした。この変化は可逆的で、pHをあげることによりもとの配置に戻った。また、このときには小胞体、微小管の配置には影響が現れなかった。さらに、細胞質ダイニンは崩壊したゴルジ体膜に結合したままで、この現象がダイニンのゴルジ膜の遊離によるものではなかった。
二重課題が視覚機能に及ぼす影響

健康状態が比較的維持されている高齢者であっても,複数の作業を同時に行わなければならない日常生活環境では,歩行の安定性が低下しやすことが示された。また,高齢者の歩行安定性の低下には,歩行リズムおよび足部への衝撃の変動の大きさが強く影響していることが示された。本研究では、歩行解析装置として3軸小型加速度センサを使用予定である。3軸小型加速度センサは、小型で信頼性が高く、さらに長時間の測定が可能であることから、従来の歩行解析装置に替わる機器として注目を集めている。近年、3軸加速度センサの歩行中の加速度信号に対する様々な解析方法が報告されている。しかし、その方法および適用について標準化された報告はなく、歩行解析装置としての3軸加速度センサの使用は注意を要する。加速度信号解析に対する理解は歩容変化を詳細に検討する上で欠かせないと考えられることから、平成19年度は歩行中の加速度信号の解析およびその適用について論文検討を行い、そのまとめを行った(歩行分析における加速度センサの適用:神戸学院総合リハビリテーション研究)。本研究は二重課題歩行が視覚に及ぼす影響を検討することを目的としている。この目的を達成するためには、歩行条件である二重課題歩行に対する理解が必要不可欠である。二重課題歩行に関する報告は健常者を対象としたものが中心で、特定の疾患を有する対象に対して検討を行ったものは少ない。典型的な歩容異常を示す疾患に変形性膝関節症(以下Knee OA)があり、疾患由来の疼痛や関節の変形によって特徴的な歩容異常を示す。しかし、この歩容異常が二重課題下でどう変化するのかは不明で、運動器疾患と二重課題歩行の関連性は不明である。そこで、平成19年度の歩行測定では、Knee OA患者を対象に二重課題歩行を行い、運動器疾患によって歩行中の加速度信号波形にどのような変化が生じるのか検討を行った(変形性膝関節症がDual task歩行中の姿勢制御におよぼす影響:第43回日本理学療法学術大会)。本研究は, Dual task下における視覚情報の変化と歩容変化に関する研究である。平成19年度は,歩行分析に関する文献検討を行い,歩行動作の加速度波形に対する歩行分析プログラムの開発を行った。文献検討の結果,視覚情報の変化を含めた歩容変化の検討(アイマークレコーダを使用した歩行分析)に先立って,視覚を固定した歩行分析が必要であると考え,本研究ではアイマークを使用しないDual task下での歩行分析を行うこととした。平成20年度は,作成した歩行分析プログラムを用い,健常若年者(36名,年齢: 22.4±3.7歳)および健常高齢者(35名,年齢: 70,1±5.9歳)の歩行分析を行った。歩行動作の測定には3軸小型加速度センサ(MVPR-RFA3シリーズ: Micro Stone社製)を用い,歩行中に生じた身体の各部位の加速度を計測,解析を行った。加速度センサの取り付け位置は踵骨隆起部(背面),体幹下部(腰椎第3棘突起),体幹よ部(頚椎第7棘突起)とした。得られた歩行加速度波形から定常状態にあった歩行周期を抽出し,歩容指標としてStride time Coefficient Variability(CV :時間的ばらつきの指標), Gait Impact Variability(GIV :力学的ばらつきの指標)などを求めた。歩行条件は自由歩行とDual task歩行の二条件とし, Dual taskには遂行機能(Executive Function以下EF)を反映するとされるStroop testの一種を用いた。その結果,健常若年者は,自由歩行と比較して, Dual task歩行でCVが有意に増加していたが, GIVには有意な増加は認められなかった。一方,高齢者ではDual task歩行でCV, GIVともに有意な増加が認められた。また,高齢者ではGIVとその他の歩容指標との間に有意な相関関係が認められた。本研究の結果から,若年者と同等の歩行能力を有する健常な高齢者であっても,複数課題の同時処理が必要となる条件下では歩行動作の定常性が低下し,その結果生じた力学的ばらつきによって,歩行安定性は低下していると考えられた。
運動視差の奥行視発現機構の解明

奥行知覚を可能にさせるものは、視覚性フィールドバックによって生起する網膜流動パターンの中から不変項を抽出するしくみ,運動視差であることが明らかにされつつある。そこで、運動視差の成立に関与する要因、すなわち自己生産的運動の効果、運動の相対的方向、運動の相対的角速度について実験的に吟味した。実験は、運動視差を2次元上にシミュレートするために、CRT、パーソナルコンピュータ、ポテンショメータからなる装置を開発して行われた。観察者(被験者)は、正常視力を有する成人5名で、単眼視条件で観察、報告させた。実験条件には、観察者がその頭部を固定したままで刺激を観察する静止条件と観察者が頭部をシフトさせることによってCRT上のパターンが運動する条件とを設定した。実験の結果、(1)観察者静止と観察者運動の両条件において、CRT上のパターンがシフトを開始すると、画面上のパターンの間に視かけの奥行が出現するが、しかし、視之の奥行の出現程度およびその方向について両条件間に差は見い出されなかった。。(2)相対的角速度要因については、相対的角速度が大きい場合に、その速度の速い領域パターンが後方向に奥行出現する傾向が示された。(3)相対的方向条件については、パターン間の相対的運動方向が等方向条件に較べ逆方向条件において、視之の奥行出現が幾分大きいことが示された。これらの結果から、運動視差を生起させるものは観察者の自己生産的運動に限らなく対象側の相対運動でもかまわないこと、また、運動視差の成立には、相対的速度要因と相対的方向要因とが関与することが明らかにされている。。
鉄が制御する卵胞発育期の体細胞依存的な卵の代謝調節とエピゲノム制御の解明と応用

本研究では,以下の平成31年(令和元年)から令和2年に1の検討を行い,令和2年から令和3年に2の研究を実施する。1Tfr1cKOマウスを用いて顆粒層細胞や卵丘細胞から流入する鉄と代謝物が卵の代謝とde novoメチル化を向上させるかを解析する。2鉄により体細胞依存的な卵の代謝能とde novoメチル化を促した新規IVM法を開発する。これら1および2の検討により鉄が制御する体細胞依存的な卵の代謝向上とde novoメチル化の制御機構を明確にし,基礎研究をIVM開発に応用するトランスレーショナルリサーチを実施する。
ゾラの小説・美術批評と1860-80年代のフランス絵画の相関研究-近代都市パリと芸術のモダニズム

本研究の目的は、ゾラの小説および美術批評と、同時代の絵画の動向との相関関係を調査・分析することによって、小説家と画家たちが共有した関心はいかなるものであったかを、近代都市パリの歴史的・社会的・文化的な文脈の中で検討することである。本研究の成果は、次の3点にまとめられる。1.アカデミズム絵画とその表層の美学について、『獲物の分け前』における第二帝政期のパリ・モードと女性の身体の問題の視点から考察した。虚飾に満ちた第2帝政期を批判する内容を持つこの小説は、絵画との関連から見て、なめらかな表層と物語主題を追い求めるアカデミズム絵画に対する批判と解釈できる。2.第3共和政成立期の都市パリと新しい絵画の関係について、『パリの胃袋』と都市風景画の問題を、二つの観点から分析した。ひとつは、パリ・コミューンによって多くの建物が廃墟と化した都市パリの再構築と産業化の問題である。鉄とガラスの近代建築の賛美、光を浴びた鮮やかな色彩による都市の装飾は、モネや印象派の絵画と共通する。もう一つは「共和主義」と絵画の問題であり、ゾラの小説と、モネおよびマネによる都市風景画の関連を指摘した。3.商品経済の発達と絵画の関連について、とりわけ近代絵画における物質主義や、商品と女性へ注がれるまなざしの問題を、二つの観点から考察した。ひとつは、『パリの胃袋』における食料品の描写と静物画の問題である。ゾラにおける中央市場の食品の描写とマネの描く静物画には、物質主義的側面が顕著であると同時に、それらの食材や花には商品性が刻印されている。もうひとつは近代商業の象徴としてのショーウインドーの問題である。商店や売り子を扱ったゾラの小説や同時代の絵画には、女性の身体の断片化や商品化が頻繁に見られるが、彼らはまた、近代の商業社会において、自分たちの芸術もまた商品であるという意識をもっていたことが指摘できる。本年度はまず基礎的作業として、ゾラの美術批評の精読と、その中で言及されている画家、作品、出来事等に関する調査をおこなった。批評中で言及されている作品の同定については、まだ不完全であるため、来年度も継続して調査を進める予定である。またゾラの小説作品および書簡に関する再読・分析の作業は、順調に進行しているが、やはり来年度以降も継続する。本年度の研究成果は次の2点にまとめられる。(1)ゾラの小説『パリの胃袋』と同時代の絵画に関する研究--ゾラの芸術小説としては、第14巻の『作品』が有名であるが、画家であるその主人公クロード・ランチエは、すでに第3巻『パリの胃袋』(1873)に初めて登場し、作品の美学的側面を支えている。クロードの主張する「現代芸術」は、鉄とガラスの建築物と静物画に代表される。とりわけクロードの理想は、中央市場の食物を「巨大な静物画」に描くことであったが、この問題に関しては、物質主義(マテリアリスム)および商品性の観点から、マネの静物画との関連が指摘できる。これについては2004年11月の日仏美術学会例会で報告し、次号の会報に論文が掲載される予定である。(2)近代商業の表象としての「ショーウインドー」に関する研究--ゾラは芸術と商業の関わりに敏感であった作家である。ゾラの2つの商業小説

『パリの胃袋』と『ボヌール・デ・ダム百貨店』は、いずれもディスプレー小説であり、「ショーウインドー」が重要なモチーフになっているが、同時代の絵画にも商店や売り子を扱った作品がある。代表的な絵画としては、マネの『フォリ=ベルジェールの酒場』、ティソの『女店員』そしてドガの『婦人帽子店』シリーズが挙げられる。ゾラや画家たちにおける近代商業の表象においては、女性の身体の断片化や商品化が頻繁に見られるが、彼らはまた近代の商業社会において、自分たち自身の芸術もまた商品であるという意識を持たざるを得なかったことがわかる。本研究の2年目に当たる本年度は、昨年度からの基礎的作業の継続として、ゾラの美術批評の精読と、その中で言及されている画家、作品、出来事等に関する調査、および、ゾラの小説作品と書簡の再読・分析の作業をおこなった。また美術社会史や歴史学、ジェンダー論等に関する文献を調査収集し、研究に利用した。本年度の研究成果は次の通りである。1.ゾラと画家たちの目指した「新しい芸術」と「共和主義」の関係、および「都市風景画」についてー1878年6月30日、第3共和制下のフランスで制定された初めての国民の祝日にあたって、マネとモネは、三色旗で飾り立てられたパリの街路を、それぞれ2枚ずつ描いている。マネの2つの「旗で飾られたモニエ通り」及びモネの「モントルグイユ通り」と「サン=ドニ通り」である。われわれは、二人の画家の作品がいずれもゾラの小説『パリの胃袋』と関連をもっていることを指摘した(マネの場合は、小説の主人公である共和派青年フロランの部屋の「革命的装飾」との類似において、またモネの場合は、中央市場近辺という場所の共通性によって)。そしてこれら絵画と小説の分析、および1878年当時の政治状況の検討を通じて、ゾラとマネ、モネそれぞれの政治的立場と芸術との関わりについて考察した。また近代都市パリを描く都市風景画という観点において、マネとモネはいずれも、ゾラから示唆を受けていることを明らかにした。2.都市風景の中の「裸体画」についてー絵画ジャンルとして『パリの胃袋』が都市風景画と静物画、『愛の一ページ』が都市風景画と風俗画を扱っているとすれば、『作品』は都市風景画と裸体画を結びつける試みであると考えることができる。『作品』について、「風景の中の裸婦」の観点からマネ、セザンヌとの関係を考察した。本研究の3年目に当たる本年度は、テーマ全般にわたって不十分な点を補足・強化することを目的として、以下のような成果を得た。(1)1860年代に関する新たな知見としては、ゾラがその美術批評や創作活動において、ボードレールから、かなりの影響を受けているのではないかということが指摘できる。実際、これまでゾラにおけるボードレールの影響を論じた研究はほとんどない。しかしゾラはその美術批評において、ボードレールの「現代生活の画家」などからかなりの示唆を受けていると考えられ、またパリを舞台にしたゾラの短編にはボードレールの散文詩の影響が顕著である。そして彼らが都市生活に注いだ眼差しは、画家たちと共通点を持つ。一例として、ボードレールの散文詩草案「帽子のエレジー」は、ゾラの『テレーズ・ラカン』を経て、ドガの《婦人帽子店》シリーズにつながる。(2)1870年代に関しては、ゾラの『パリの胃袋』(1873)と絵画作品との相関研究が1つの柱となるが、昨年度扱った都市風最画の問題は、さらに発展させられることがわかった。
RTIモデルによる読字指導法における反応不良例の脳機能・認知行動特性の解明

RTI(指導に対する反応)モデルにおける平仮名音読指導法において、第3段階の指導の対象となった2年生38人について縦断調査を行った。対象児の大部分が発達性ディスレクシアに該当したが、他の発達障害が合併するものや知的障害によるものも認められた。第3段階の指導により「改善」と判断された児童は7人(18%)であった。第3段階の指導は認知特性、行動特性に関わらず有効であり、改善が見込めるかどうかは診断と指導開始時点の音読能力から予測できる可能性が示唆された。注視点計測の結果から、2年時の指導だけでは改善は不十分であり、3年生以降も指導の継続が必要と考えられた。<先行群:2年生>2013年度の参加児318人のうち、第2段階の指導(解読指導)によっても十分な改善が得られなかった児は12人(3.7%)であった。このうち、8名から保護者の同意が得られ、個別もしくは2人組で語彙指導を行った。語彙指導にはデジタル音読指導教材を用いた。指導開始前(5月),10月, 3月に音読能力,語彙力,認知能力の評価を行った。全例で音読速度(特に単語,単文,長文)の改善,語彙力の向上を認めたが,3月の時点で全例が2項目以上において音読時間が平均+2SD以上であった。個別評価の結果,5名が発達性ディスレクシア(参加者の1.6%に該当),1名が軽度知的障害,1名がADHD+言語発達の遅れ,1名が反応性愛着障害と判断した。発達性ディスレクシアと判断した児のうち1名は発達性構音障害の合併を認めた。全例に一定の指導効果は認められ,明らかな反応不良例は同定できなかったが,他の疾患・状態像の合併例にやや指導効果が乏しい傾向が認められた。サンプル数が少なく現時点での評価は困難であるため,反応不良例の認知特性・行動特性については当初の予定どおり次年度のデータと合わせて検討をする。<後行群:1年生>鳥取大学と鳥取市教育センターが連携して行った支援事業と連携して研究を行うことが可能となった。このため,鳥取市内の全小学校45校の1年生約1700人が,第1・第2段階の指導に参加し,この中から研究協力者を募集することとなった。第2段階の指導によっても十分な改善が得られない児は42名のうち,知的障害が疑われる13名(9名は2年時より支援学級に入級)を除く23名(参加者の1.6%)を第3段階の指導対象とした。このうち保護者の同意が得られた児を対象として昨年と同様の評価と個別指導(語彙指導)を行うよう準備中である。2014年度より研究に参加した後行群(鳥取市の全小学校45校約1700名)のうち、第3段階の指導が必要と判断された児に対して指導と評価を行った。第2段階までの指導によって十分な改善が得られなかった42名のうち、知的障害支援学級に入級した9名を除く33名を第3段階の指導対象とした。(昨年度の実績報告書では4名の知的障害が疑われる児も除いたが、判断根拠が不明であったため指導対象に含めることとした。)このうち、語彙指導への参加者は30名、保護者からの研究参加への同意が得られたのは27名であった。第3段階の語彙指導は、各小学校教員または教育センター教員、大学スタッフにより、5月から1月までの間(学校休業期間を除く)、週1回40分、デジタル語彙指導教材を用いて個別で行った。指導開始前(5月)、9月、1月に、音読能力、語彙能力、認知能力の評価、および、視線計測装置を用いた音読時の注視回数・注視時間の評価を行った。1月時点の検査では、語彙指導を受けた児の約20%がひらがな音読能力が基準内に改善しており、3年生以降の指導は不要と判断された。先行群(2014年度に語彙指導を実施した8名)の結果と合わせ、指導による音読能力の改善と認知行動特性の関連について解析中である。支援および認知機能評価については、当初計画以上の研究協力者が得られており、反応不良例の認知行動特性について十分な検討を行うことができる。当初計画していた機能的MRIについては、鳥取大学側のMRI機器更新作業の遅れ、および研究代表者の所属変更のため、現在の研究参加者を用いての実施は困難と判断した。研究代表者の現所属地である北海道大学で新たな研究協力者を対象として実施できるよう、実験環境の整備と研究協力校の確保を行ったが、当初計画どおり進めることは困難な状況である。2013年度に研究から参加した先行群(4小学校、約400人)および2014年度から研究に参加した後行群(鳥取市の全小学校、約1700名)のうち、第3段階の語彙指導に参加した児童について、2学年末に行った評価に基づき、認知・行動特性の分析を行った。研究計画では先行群と後行群を合わせて解析を行うこととしていたが、指導開始時期の違いの影響が大きいことが判明したため、それぞれ別に解析を行った。後行群の第3層の指導対象児では、約7ヶ月間の語彙指導により20%が平仮名音読課題の成績が基準内に改善した。指導前後の視線計測により有意な停留時間の短縮を認めた。

指導対象児の約80%が発達性ディスレクシアと診断されたが、その約40%に注意欠如多動性障害(ADHD)、約10%に自閉症スペクトラム障害の合併を認めた。ADHD合併群と非合併群の指導効果の比較により、ADHD合併群では指導開始時の音読課題成績が低い児が多いものの、語彙指導による改善は同程度であることが確認された。認知特性による指導効果の違いについては解析中である。脳機能検査については機能的MRIの実施が困難となったため、研究方法を事象関連電位に変更し、語彙指導による読字能力の質的変化を計測するための課題および評価指標の開発を行った。平仮名文字に対するN170の出現と、その左側性化をそれぞれ評価することで、平仮名文字の視覚情報処理の習熟度と、文字ー音韻変換の自動化の程度を別に評価できる可能性があることが明らかとなった。成果還元として、成育医療センターこころの診療部のホームページに、本研究で用いた「T式ひらがな音読支援」についての解説、指導に用いたアプリに関する情報提供、研究成果・関連論文の掲載を行った。指導に用いたアプリは公開しており無償で使用可能である。また、教員等を対象とする研修会でも本研究の成果を踏まえた指導法の提案を行った。RTI(指導に対する反応)モデルにおける平仮名音読指導法において、第3段階の指導の対象となった2年生38人について縦断調査を行った。対象児の大部分が発達性ディスレクシアに該当したが、他の発達障害が合併するものや知的障害によるものも認められた。第3段階の指導により「改善」と判断された児童は7人(18%)であった。第3段階の指導は認知特性、行動特性に関わらず有効であり、改善が見込めるかどうかは診断と指導開始時点の音読能力から予測できる可能性が示唆された。注視点計測の結果から、2年時の指導だけでは改善は不十分であり、3年生以降も指導の継続が必要と考えられた。支援、認知機能評価については当初の予定どおり進展しているが、使用を予定していたMRIの機器更新が急遽決定したため、平成26年度中は機能的MRI研究が行えなかった。平成27年度より研究代表者が所属変更となるため、機能的MRI実験のための環境整備や倫理審査申請に時間を要すると思われ、平成27年度前半は機能的MRI実験が開始できない可能性がある。先行群(2014年度指導実施)と後行群(2015年度指導実施)を合わせて、指導による音読能力の改善と認知行動特性の関連について解析をすすめる。また、教員を対象とするシンポジウムを行い研究成果の還元を行う予定である。当初予定していた機能的MRIでの検討については、今後、北海道大学において新たな研究協力者を対象として実施する必要があるため、今年度から新たな研究協力校での指導を開始する。年度内に十分な数の被験者は得られないと予測されるため、機能的MRIによる検討は補足的研究となるが、今後の展開を考え、ERP等を含めた多面的検討を行える実験デザインに変更する。特別支援教育機能的MRI研究については、後行群(平成27年度の2年生)のみを対象として行う予定である。実験開始が遅れることが予測されるため、データ取得は今年度から来年度にかけて行うこととする。また、平成27年度から研究代表者の所属変更のため、研究実施体制についての変更が必要となる。参加者に対する個別評価や保護者との面談は代表者が訪問して鳥取大学の共同研究者とともに実施する予定であるが、実際に指導を行う担当者への助言が難しくなる可能性がある。このため、指導教材の管理、指導方法に関する情報提供をインターネットを用いて行うこととし、サーバーの管理を共同研究者に依頼する。機能的MRIによる研究が実施できなかったため、それに関連する人件費・謝金が今年度は必要なかったためである。
イヌ尿細管上皮細胞のStat1による三次元管腔形成の制御

イヌ腎尿細管上皮由来MDCK細胞を用い、転写因子Stat1の三次元培養下での管腔形成に及ぼす作用について、野生型(wt)並びにドミナントネガティブ型(dn)Stat1を安定発現するMDCK株を用いて検討したところ、wt型並びにdn型Stat1安定発現MDCK株の管腔形成について検討したところ、wt-MDCKでは、腎特異的カドヘリン16の発現を上昇させた細い管腔の形成が促進されたが、dn-MDCKでは拡張型の異常管腔が観察された。【はじめに】イヌ腎尿細管上皮細胞由来細胞株MDCKはコラーゲンゲル内で培養を行うことにより管腔構造が形成され,Hepatocyte growthfactor(HGF)存在下でその管腔形成はStat1依存的に促進されることが報告されている.本研究では,MDCK株の管腔形成と腎特異的カドヘリン16(CDH16)発現に対するStat1の関与について検討した.【材料と方法】理研より分与されたMDCK細胞株は20%FBS/DMEMにて増殖させ,野生型(wt)および変異型(dn)Stat1安定発現MDCK株は700 μg/ml G418を含む同培地にて維持した.Stat1安定発現MDCK株はコラーゲンゲル内培養を行い,HGF添加による管腔形成並びに細胞外マトリックスおよび細胞接着装置の発現について,免疫組織化学染色および定量的PCRにより検討した.また,CDH16の転写開始点の上流1600塩基からその下流300塩基までの1900bpの遺伝子断片をPCRにより増幅し,pGL3-basicルシフェラーゼベクターにサブクローニングした後にwt/dn Stat1と共に一過性トランスフェクションを行い,ルシフェラーゼアッセイを行った.【結果および考察】野生型Stat1の強制発現によりCDH16の高い発現が誘導され,その発現はHGFによりさらに増強されるとともにカドヘリン明瞭な管腔構造を形成した.一方,変異型Stat1強制発現株ではHGF添加の有無に関わらずCDH16発現上昇は抑制された.また,ルシフェラーゼアッセイによっても,CDH16遺伝子上における上記1900 bp遺伝子断片内にStat1制御領域が含まれていることが明らかになった.以上の結果より,CDH16はStat1依存性に制御されており,コラーゲンゲル内における管腔形成を増強させることが示唆された.今後は,CDH16遺伝子上におけるStat1制御領域を同定する予定である.CDH16の転写開始点の上流1600塩基からその下流300塩基までの1900bpの遺伝子断片をPCRにより増幅し,ルシフェラーゼベクターにサブクローニングした後にwt/dn Stat1と共に一過性トランスフェクションを行い,ルシフェラーゼアッセイを行ったところ,CDH16遺伝子上における上記1900bp遺伝子断片内にStat1制御領域が含まれていることが明らかになった.【はじめに】イヌ尿細管上皮細胞由来MDCKはコラーゲンゲル内で培養を行うことにより管腔構造が形成され、Hepatocyte growthfactor(HGF)存在下でその管腔形成はStat1依存的に促進されることが報告されている。本研究では、MDCK株の管腔形成と腎特異的カドヘリン16(CDH16)発現に対するStat1の関与について検討しているが、本年度は特にCDH16遺伝子上におけるStat1制御領域の同定を試みた。【材料と方法】理研より分与されたMDCK細胞株は20% FBS/DMEMにて増殖させた。CDH16の転写開始点の上流489塩基からその下流1416塩基までの1905bpの遺伝子断片を含むpGL3-basicルシフェラーゼベクターを元に4種類のdeletion mutantを作製し、野生型Stat1と共に一過性トランスフェクションを行い、ルシフェラーゼアッセイを行った。さらに、これらの遺伝子断片内で予想されるStat1結合領域について点突然変異を導入し、同様にルシフェラーゼアッセイを行うと共にウサギ網状赤血球無細胞系により合成したStat1蛋白質を用いたゲルシフトアッセイを行った。【結果および考察】Deletion mutantを用いたルシフェラーゼアッセイにより、CDH16遺伝子の転写開始点の上流489塩基から110塩基までの379塩基内にStat1結合領域が含まれていた。この379塩基内に3ヶ所のStat1結合領域が予想されたため、各結合部位に対し点突然変異を導入したところ、そのうちの1ヶ所の点突然変異が野生型Stat1に対する反応性が消失し、さらにゲルシフトアッセイによっても明瞭な結合シグナルを得た。以上、本年度はCDH16遺伝子上におけるStat1結合領域の同定に成功した。昨年度はHGFによるCDH16発現について検討し、本年度はそれに関わる転写因子であるStat1のCDH16遺伝子上にける結合領域を同定できた。培養上清中に分泌されるMMP-9発現をゼラチンザイモグラフィーにて、mRNAレベルでのMMP-9の発現について定量的PCRにて検討した結果、単層培養同様に、コントロール、野生型STAT1発現株ではTNFαによってMMP-9発現が上昇し、ドミナントネガティブ型STAT1発現株では抑制されていた.さらに、単層培養時に比べ平均値が上昇していた.

また、MDCK細胞による管腔形成実験において管腔の形成を促進される因子としてよく用いられるHGFを添加したコラーゲンゲルではすべての細胞株においてMMP-9発現レベルの変化は見られなかった.1週間コラーゲンゲル内で培養した細胞についてホールマウント免疫染色によって形態を観察した.コントロール細胞株ではHGF添加により管腔の伸長が観察され、野生型STAT1発現株ではコントロールより管の直径が細く、さらに細胞間接着因子であるカドヘリンの発現がHGFによって、より明瞭になっている様子が観察された.ドミナントネガティブ型STAT1発現株では管腔の直径が大きく、HGFの添加により管の分岐や上皮の重層化などの形態異常が確認された.なお、いずれの細胞株においてもTNFαによる形態形成への影響は見られなかった.コラーゲンゲル内で形成された管腔について、接着結合の因子である腎特異的カドヘリン/カドヘリン16、密着結合の因子であるオクルディン、そして管周囲にあるコラーゲンとの相互作用に関わる因子の4型コラーゲンのmRNA発現を検討した.腎特異的カドヘリンは野生型STAT1発現MDCK細胞株において高い値を示した.この結果は、形態学的解析においてカドヘリン免疫染色の結果と一致した.イヌ腎尿細管上皮由来MDCK細胞を用い、転写因子Stat1の三次元培養下での管腔形成に及ぼす作用について、野生型(wt)並びにドミナントネガティブ型(dn)Stat1を安定発現するMDCK株を用いて検討したところ、wt型並びにdn型Stat1安定発現MDCK株の管腔形成について検討したところ、wt-MDCKでは、腎特異的カドヘリン16の発現を上昇させた細い管腔の形成が促進されたが、dn-MDCKでは拡張型の異常管腔が観察された。テトラサイクリン調節ベクター(pTet-On或いはpTet-Off)をMDCK細胞にトランスフェクションし,G418により選択し,Stat1-Tet-OnおよびTet-Off MDCK安定発現株の樹立する.次に,これらの細胞株を用いて,コラーゲンゲル内における管腔形成およびカドヘリン16発現様式について,レーザー顕微鏡により観察する.今後は、Stat1の量的制御によるCDH16発現の制御システムを構築する。獣医生化学当初計画より安価な物品が調達できたため。消耗品費の一部として使用する。
スペ-スプレ-ンの飛行ディスプレイに関する研究

本年度は当研究の最終年度である。本年度の成果は、スペ-スプレ-ンの飛行監視装置としてのディスプレイ表示方法を明らかにし、当研究のまとめを行なった事である。スペ-スプレ-ンの飛行は完全に自動化される可能性が大きく、飛行ディスプレイは飛行監視装置としての機能も有することが重要である。本研究では三次元コンピュ-タグラフィックスを利用した三次元ディスプレイ表示を行い、その有効性を検討した。三次元デ-タの表示内容は機体モデルの三次元表示と地形情報のス-パ-インポ-ズである。前者は機体の姿勢を、後者は飛行経路を表示する目的を持つ。これらの表示方法は、飛行情報を瞬間的にパイロットに定性的に提示なるに適しており、飛行監視装置の表示部として使用するのに適している。ただし定量的にデ-タを示す能力には欠け、従来型の計器盤と併用する必要がある。本研究は初めにスペ-スプレ-ンの運動方程式を求め、空気力のモデル化手法を確立し、飛行力学的モデルを作成した。またそのモデルにより飛行特性を解析し、超高層を極超音速で飛行する際に従来の機体とは異なる独特の運動モ-ドを有する点を示した。次に、スペ-スプレ-ンの飛行経路を最適化問題として解くことにより、最適な上昇経路、巡航経路、軌道面変更方法、帰還経路を明らかにした。最後に、リアルタイム三次元カラ-・グラフィック装置を備えた模擬飛行装置を試作し、この装置を利用してスペ-スプレ-ンの飛行ディスプレイ方式を明らかにした。本年度よりスペースプレーンの飛行ディスプレイの研究を開始した。主な成果は、スペースプレーン上昇飛行経路、帰還経路の最適解を求めた点と、模擬飛行装置の予備検討を実施した点にある。軌道解析は上昇飛行経路と帰還経路の両者について検討した。上昇経路に関しては、ターボラムジェットエンジンを有する機体を燃料消費最小で指定された高度、速度へ打ち上げる問題を最適制御理論によって解析した。得られた軌道は、打ち上げ初期の低速時には推力を得るために一旦ダイブして速度を増し、その後所定の高度、速度に到達するものであった。ロケットエンジンの場合は、初期の段階に最高高度へ上昇する軌道が最適解として得られ、エンジンの差異による最適経路の違いが明確になった。帰還経路に関しては、赤道上の周回軌道からクロスレンジを最大にする軌道を最適制御理論を用いて解析した。得られた解は、地球大気の密度差を利用して振動的に高度を変化させて飛行するものであった。両解析に於いて、空力加熱、荷重倍数の制限を拘束条件として与えており、これらの制限が飛行軌道を決定する際に重要である点を指摘した。模擬飛行装置の中心となる計算機の納入が遅れたため、装置の完成は64年度にずれこんだ。本年度は、ジョイスティックによる操縦部を作成し、パソコンを用いた模擬飛行試作装置と結合させた。パソコンではグラッフィック能力に限界があるが、操縦部とのインターフェースは確認できた。スペースプレーンは重量特性、空力特性、飛行環境等が大きく変化することが従来型航空機との大きな差であり、飛行監視装置としてのディスプレイにこの点をどの様に反映させるかが今後の課題である。本年度は、当研究の2年目である。本年度の主な成果は、模擬飛行装置の作成と、スペ-スプレ-ンの基礎的な飛行特性を明確にした点にある。模擬飛行装置は、ジョイスティックからの操舵入力をパソコンによりAD変換し、グラフィックワ-クステ-ションにデ-タを受け渡し、スペ-スプレ-ンの運動方程式を実時間で解きながら飛行状況をコンピュ-タグラフィックスでアニメ-ション表示する。操縦部、パソコン、ワ-クステ-ション間の各インタ-フェンス部が難関であったが装置の概要は完成した。今後は、飛行ディスプレイ方式を検討する。スペ-スプレ-ンの超高層、極超音速での飛行解析のために、ニュ-トン流近似による空気力計算プログラムを開発し、極超音速飛行時の動安定微係数の推定を可能とした。

モデル機体の解析の結果、迎角、横滑り角に関する安定微係数には大きな非線形性があることが明確になった。また、地球の曲率、自転を考慮した剛体の運動方程式を誘導した。超高層、極超音速での飛行時には、空気力よりも遠心力、コリオリ力等の慣性力が大きいことが明らかになった。また、こうした運動方程式の線形化方程式を誘導し、機体の飛行モ-ド特性を解析した。その結果、通常の航空機とのモ-ド特性の差は、縦の運動に緩やかな発散項が現われることと、高度の差による密度差に超因する長周期モ-ドが現われることを明らかにした。また、スペ-スプレ-ンの上昇飛行経路の最適化を昨年に引続き実施し、タ-ボラムジェット、スクラムジェット、ロケットエンジンの組合せによる最適経路を求めた。本年度は当研究の最終年度である。本年度の成果は、スペ-スプレ-ンの飛行監視装置としてのディスプレイ表示方法を明らかにし、当研究のまとめを行なった事である。スペ-スプレ-ンの飛行は完全に自動化される可能性が大きく、飛行ディスプレイは飛行監視装置としての機能も有することが重要である。本研究では三次元コンピュ-タグラフィックスを利用した三次元ディスプレイ表示を行い、その有効性を検討した。三次元デ-タの表示内容は機体モデルの三次元表示と地形情報のス-パ-インポ-ズである。前者は機体の姿勢を、後者は飛行経路を表示する目的を持つ。これらの表示方法は、飛行情報を瞬間的にパイロットに定性的に提示するに適しており、飛行監視装置の表示部として使用するのに適している。ただし、定量的にデ-タを示す能力には欠け、従来型の計器盤と併用する必要がある。本研究は初めにスペ-スプレ-ンの運動方程式を求め、空気力のモデル化手法を確立し、飛行力学的モデルを作成した。またそのモデルにより飛行特性を解析し、超高層を極超音速で飛行する際に従来の機体とは異なる独特の運動モ-ドを有する点を示した。次に、スペ-スプレ-ンの飛行経路を最適化問題として解くことにより、最適な上昇経路、巡航経路、軌道面変更方法、帰還経路を明らかにした。最後に、リアルタイム三次元カラ-・グラフィック装置を備えた模擬飛行装置を試作し、この装置を利用してスペ-スプレ-ンの飛行ディスプレイ方式を明らかにした。
１細胞Hi-Cを用いた、G2期姉妹染色分体間の立体的関係の探索

細胞周期S期にDNA複製により作られた1対の姉妹染色分体は、互いに接着されていると同時に混ざり合わぬよう離されてもいることが知られているが、どのような立体的関係でこの接着と解離のバランスを保っているのかは分かっていない。その点について、Hi-C法を用いてDNA解像度での知見を得ることが本研究の目的である。1対の染色分体は塩基配列の違いなど通常の方法では鑑別不可能であるが、本研究ではBrdU標識された新生DNA鎖が紫外線照射によりニック導入を受けることを利用し、BrdU標識細胞からHi-C法により作られる異所間結合DNAパターンの紫外線照射による変化を指標として、見かけ上は同じ染色体内で形成されたように見えるHi-Cデータを染色分体内(cis-chromatid)のデータと1対の染色分体間をつなぐ(trans-chromatid)データに分類することが可能なのではないか、というアイデアに基づくものである。昨年度(初年度)の研究により、BrdUにて適切に標識されたゲノム領域については上記のアイデア通りにcis-およびtrans-chromatidのHi-Cデータを区別できることを示すデータが得られた。更に、cis-chromatidとtrans-chromatidのHi-Cデータのバランスはゲノム領域により一様ではないことも示唆され、冒頭に記した「どのような立体的関係でこの接着と解離のバランスを保っているのか」という点の解明に向けて有意義な一歩を踏み出すことができた。しかし同時に、ゲノム領域によってはBrdU標識効率が不十分なため、上記のアイデアに基づく解析ができない領域が少なからず存在することも判明した。今後はcis-およびtrans-chromatidデータのバランスと相関する局所要因を探索すると共に、全ゲノム領域に対して本手法が使えるようBrdU標識効率の改善を目指す。昨年度(初年度)の研究により、BrdUにて適切に標識されたゲノム領域は上記のアイデア通りにcis-およびtrans-chromatidのHi-Cデータを区別できることを示すデータが得られた。昨年度の結果を踏まえ、今年度は主に以下の2点に注力して研究を進める計画である。1. BrdUにて期待通りに標識されcis-chromatidとtrans-chromatidのHi-Cデータの鑑別が可能であった領域に関しては、cis-chromatidデータとtrans-chromatidデータのバランスがどのような局所要因と相関しているのかを調べる。これにより、「1対の染色分体がどのような立体的関係で接着と解離のバランスを保っているのか」という点の更なる詳細に迫ることができると考えている。2.これまで試みた方法ではBrdU標識効率が不十分であった領域(cis-chromatidとtrans-chromatidのHi-Cデータの鑑別ができていない領域)に関しては、標識効率を改善する方法を模索する。これらの取り組みを通じ、全ゲノム領域を対象として1対の染色分体の立体的関係を明らかにできる手法の完成を目指して引き続き研究を進める。

1. BrdUにて期待通りに標識されcis-chromatidとtrans-chromatidのHi-Cデータの鑑別が可能であった領域に関しては、cis-chromatidデータとtrans-chromatidデータのバランスがどのような局所要因と相関しているのかを調べる。これにより、「1対の染色分体がどのような立体的関係で接着と解離のバランスを保っているのか」という点の更なる詳細に迫ることができると考えている。2.これまで試みた方法ではBrdU標識効率が不十分であった領域(cis-chromatidとtrans-chromatidのHi-Cデータの鑑別ができていない領域)に関しては、標識効率を改善する方法を模索する。これらの取り組みを通じ、全ゲノム領域を対象として1対の染色分体の立体的関係を明らかにできる手法の完成を目指して引き続き研究を進める。