hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アルコール使用障害が併発した心的外傷後ストレス障害に対する認知処理療法の適用

アルコール使用障害(AUD)を併発した心的外傷後ストレス障害(PTSD)患者12例を対象に、PTSDに特化した心理療法である認知処理療法(CPT)を実施し、実施可能性、安全性、有効性を検討する。必要な治療要素の精査を行い治療の手続きを確定したうえで、20歳以上でPTSDとAUDを併発した者を募り、本研究の主旨を説明して協力の同意が得られた者を対象として治療を実施する。治療前(0週)と治療後(15週)のPTSD症状の重症度、AUDの重症度とアルコール摂取量、生活機能等を比較することで、治療の有効性を検討する。併せて、治療中の状態悪化の有無や自殺のリスクも調べて安全性を評価する。
魚病細菌Edwardsiella tardaの感染症に対するワクチンの基礎的研究

Edwardsiella tardaの菌種内で共通と考えられる37kDa外膜タンパク質(Omp37Et)の産生に好適な培養条件を同菌EF-1株を用いて調べた。つぎに、血清型が異なる2株EF-1株およびV-1株から精製したOmp37Etでウナギを免疫し、EF-1株生菌で感染試験を行ったところ同等の生存性を示した。さらに、EF-1株から調製したOmp37Etでヒラメを免疫したのち、EF-1株およびV-1株の生菌で感染試験を行ったところ、いずれの場合にも非免疫対照群より高い生残率を示し、血清抗体価・マクロファージの貪食活性も高い値を示したことから、本抗原がヒラメにおいても異なった血清型間で共通の感染防御抗原性を示すことが確認された。本抗原のアミノ酸シーケンスではN末端から14アミノ酸が明らかになり、今後遺伝子組換えワクチンの開発に継続できる可能性が示された。投与法では、ヒラメ由来のE.tarda HH-1株のホルマリン死菌(FKC)を用いて腹腔内注射法、経口投与法および浸漬法によりヒラメを免疫したのち感染試験を行った結果、生残率は注射法、経口投与法、浸漬法の順に高く、血清の菌体凝集価・頭腎マクロファージの貪食率など免疫応答のレベルも同順で高かった。つぎに、経口ワクチンのカプセル化の必要性について、魚の消化管内条件が本菌FKCの抗原性に及ぼす影響を調べた結果、低pH、塩酸、アミラーゼ、ペプシン、トリプシンなどの作用により、菌体表面の凝集抗原性が低下することが確認された。そこで、HH-1株のFKCをワクチン抗原とし、賦型剤に混合して酸耐性コーティング処理した試作カプセルワクチンをヒラメに経口投与して効果を調べたが、カプセル化の効果は認められず、原因としてカプセルからのワクチン抗原の遊離が十分でないことが明らかになった。このことから、本菌の経口ワクチンではやはり抗原を守るカプセルが必要であるが、その調製の条件や剤状はなお検討する必要性が示された。まず、Edwardsiella tarda EF-1株で、菌種内で共通と考えられる37kDaの外膜タンパク質(Omp37Et)の産生に好適な培養条件を求めた結果、Omp37Etの産生量は振とうの有無によらず48時間後まで増加した。その抗原性は無振とうの場合には30時間後まで維持されたが、振とう培養では対数増殖期後に低下し、また20°C以上の培養でも低下した。つぎに、血清型間におけるOmp37Etの共通感染防御抗原性について調べるため、EF-1株およびこれと血清型が異なるV-1株から精製したOmp37Etでウナギを免疫し、EF-1株生菌で感染試験を行ったところ、同等の生存性を示した。このことから、血清型間で共通に存在するOmp37Etは、血清型に影響されない感染防御抗原であることが確認された。つぎに、EF-1株と同じ血清型でヒラメ由来のHH-1株を用いた免疫実験を行った。まず、EF-1株とHH-1株の免疫原性が同等であることを感染実験で確認したのち、HH-1株のFKC用いて腹腔内注射法、経口投与法および浸漬法によりヒラメを免疫した。

そして、同株の生菌で感染試験を行った結果、攻撃後の性残率は注射法、経口投与法、浸漬法の順に高く、また免疫応答のレベルを示す血清の菌体凝集価および頭腎マクロファージの貪食率も同じ順に高かった。つぎに、HH-1株のFKCをワクチン抗原とし、賦型剤に混合したのち酸耐性コーティング処理をした試作カプセルワクチンを作製し、ヒラメに経口投与してFKCのみの投与の場合と感染試験による効果の比較を行った。その結果、カプセルワクチンのほう生残率が低くなり、その効果は認められなかった。そこで、カプセル化したワクチンの抗原含有率および中性緩衝液中での抗原遊離性を調べた結果、抗原量は十分にカプセルに含有されていたが、緩衝液中での遊離にやや時間を要し最終遊離度も低いことが明らかになった。このことから、カプセル作製の条件や剤状を検討する必要があることが分かった。なお、精製したOmp37Etを用いたヒラメの免疫と血清型との関係、経口投与後の抗原の消化管内における消長は、カプセル化の検討と合わせて次年度(継続予約)に行う予定である。Edwardsiella tardaの菌種内で共通と考えられる37kDa外膜タンパク質(Omp37Et)の産生に好適な培養条件を同菌EF-1株を用いて調べた。つぎに、血清型が異なる2株EF-1株およびV-1株から精製したOmp37Etでウナギを免疫し、EF-1株生菌で感染試験を行ったところ同等の生存性を示した。さらに、EF-1株から調製したOmp37Etでヒラメを免疫したのち、EF-1株およびV-1株の生菌で感染試験を行ったところ、いずれの場合にも非免疫対照群より高い生残率を示し、血清抗体価・マクロファージの貪食活性も高い値を示したことから、本抗原がヒラメにおいても異なった血清型間で共通の感染防御抗原性を示すことが確認された。本抗原のアミノ酸シーケンスではN末端から14アミノ酸が明らかになり、今後遺伝子組換えワクチンの開発に継続できる可能性が示された。投与法では、ヒラメ由来のE.tarda HH-1株のホルマリン死菌(FKC)を用いて腹腔内注射法、経口投与法および浸漬法によりヒラメを免疫したのち感染試験を行った結果、生残率は注射法、経口投与法、浸漬法の順に高く、血清の菌体凝集価・頭腎マクロファージの貪食率など免疫応答のレベルも同順で高かった。つぎに、経口ワクチンのカプセル化の必要性について、魚の消化管内条件が本菌FKCの抗原性に及ぼす影響を調べた結果、低pH、塩酸、アミラーゼ、ペプシン、トリプシンなどの作用により、菌体表面の凝集抗原性が低下することが確認された。そこで、HH-1株のFKCをワクチン抗原とし、賦型剤に混合して酸耐性コーティング処理した試作カプセルワクチンをヒラメに経口投与して効果を調べたが、カプセル化の効果は認められず、原因としてカプセルからのワクチン抗原の遊離が十分でないことが明らかになった。このことから、本菌の経口ワクチンではやはり抗原を守るカプセルが必要であるが、その調製の条件や剤状はなお検討する必要性が示された。
正常血液細胞=白血病細胞 融合細胞株の生物学的特性と臨床応用

【研究の意義】当研究者が樹立した白血病細胞株は白血病細胞の増殖分化機構の解析に大きく貢献してきた.白血病細胞の特性を解明する過程で白血病細胞の分化誘導現象に着目し,臨床応用を計るため有用物質産生性ハイブリッド細胞樹立に関して基礎的検討を実施した.【細胞融合法の確立】新たな細胞融合法である高電圧パルス法を導入した.融合装置は島津SSHー1,電極間隔1mm融合チャンバ-を用いた.融合条件を決めるため8ーアザグアニン耐性U937細胞を用い,融合効率に影響を与える,細胞濃度,細胞泳動時間(IT),印加パルス電圧(VDC),パルス回数(n),融合後細胞静置時間(RT),融合行程数(PN)などの条件を検討した.細胞融合効率の最適条件である融合操作後の生細胞率50%付近を得るためには,細胞濃度2.5ー3.0x10^7/ml,IT20sec,VDC250ー300V,n3,RT10min,PN3,が最適であった.【ハイブリッド細胞の樹立】上記の設定条件を用い,U937および当研究者が樹立した単球性白血病細胞株JOSKーKの8ーアザグアニン耐性株と正常ヒト末梢血単球あるいはリンパ球とを細胞融合させた.融合操作後の生細胞率は,42から60%であった.融合操作後の細胞1x10^4個をヒポキサンチンーアミノプテリンーサイミジン(HAT)を含むメチルセルロ-ス半固形培土に播種し選別したところ,培養開始後14日で,JOSKーKと単球の組み合わせから平均17個,JOSKーKxリンパ球20固,U937x単球5個,U937xリンパ球8個のコロニ-形成が観察された.【樹立細胞株の特微】形成された個々のコロニ-を液体培養系に移し細胞株を分離した.多くはリンパ球系マ-カ-を有するものであり生理活性物質の産生能を検討中である.一方単球との融合細胞と考えられる細胞は増殖速度が非常に遅く,何らかの細胞増殖抑制機序が存在するものと考えられ,現在癌抑制遺伝子の発現状態,造血抑制因子TGFーβファミリ-の関与について詳細に検索中である.【研究の意義】当研究者が樹立した白血病細胞株は白血病細胞の増殖分化機構の解析に大きく貢献してきた.白血病細胞の特性を解明する過程で白血病細胞の分化誘導現象に着目し,臨床応用を計るため有用物質産生性ハイブリッド細胞樹立に関して基礎的検討を実施した.【細胞融合法の確立】新たな細胞融合法である高電圧パルス法を導入した.融合装置は島津SSHー1,電極間隔1mm融合チャンバ-を用いた.融合条件を決めるため8ーアザグアニン耐性U937細胞を用い,融合効率に影響を与える,細胞濃度,細胞泳動時間(IT),印加パルス電圧(VDC),パルス回数(n),融合後細胞静置時間(RT),融合行程数(PN)などの条件を検討した.細胞融合効率の最適条件である融合操作後の生細胞率50%付近を得るためには,細胞濃度2.5ー3.0x10^7/ml,IT20sec,VDC250ー300V,n3,RT10min,PN3,が最適であった.【ハイブリッド細胞の樹立】上記の設定条件を用い,U937および当研究者が樹立した単球性白血病細胞株JOSKーKの8ーアザグアニン耐性株と正常ヒト末梢血単球あるいはリンパ球とを細胞融合させた.融合操作後の生細胞率は,42から60%であった.融合操作後の細胞1x10^4個をヒポキサンチンーアミノプテリンーサイミジン(HAT)を含むメチルセルロ-ス半固形培土に播種し選別したところ,培養開始後14日で,JOSKーKと単球の組み合わせから平均17個,JOSKーKxリンパ球20固,U937x単球5個,U937xリンパ球8個のコロニ-形成が観察された.【樹立細胞株の特微】形成された個々のコロニ-を液体培養系に移し細胞株を分離した.多くはリンパ球系マ-カ-を有するものであり生理活性物質の産生能を検討中である.一方単球との融合細胞と考えられる細胞は増殖速度が非常に遅く,何らかの細胞増殖抑制機序が存在するものと考えられ,現在癌抑制遺伝子の発現状態,造血抑制因子TGFーβファミリ-の関与について詳細に検索中である.
二次口蓋突起癒合過程におけるTGF-βとHGF/SFの相互関係

本研究では、胎生期の細胞増殖を制御するTGF-βと上皮細胞と間葉細胞相互の関係に種々の作用を有するHGF/SFが、二次口蓋突起癒合過程においてどの様に関与するかを、器官培養の系を用いて検討した。方法1,母マウスに膣栓を確認した時点を妊娠0日とし、妊娠12日より15日にかけて胎児を摘出してパラフィン切片を作製し、或いは全胎仔in situ hybridizationにて、二次口蓋突起におけるHGF/SFとTGF-β3のm-RNAの発現を経時的に検討した。2,摘出した胎児より一対の二次口蓋突起含む上顎組織を器官培養の系に移し培養を開始し、培養液にHGF/SFあるいはTGF-β3を添加、又はそれぞれのantisenseを添加してmRNAの発現を阻止し、他方の増殖因子の発現動態並びに癒合完了に至るか否かを検討した。結果TGF-β3 mRNAの発現は12日から二次口蓋突起の上皮層・間葉層に認められ、12.5日にピークに達し、13.5日以降には消失した。HGF/SFもほぼ同時期に主として間葉層に認められ、13.5日以降には消失した。二次口蓋突起の器官培養では、対照群では約半数が癒合の完了が認められた。HGF/SFおよびTGF-β3を過剰添加した群では、癒合状態に対照群との差を認めなかった。HGF/SFのantisense処理では、二次口蓋突起が肥厚して増殖したが、癒合には至らなかった。HGF/SFの受容体であるC-Metに対する抗体を添加した群では、二次口蓋突起の増殖は抑制され上皮の肥厚が見られた。TGF-β3のantisenseを添加した群では、正中方向への増殖が抑制され癒合には至らなかった。HGF/SF及びTGF-β3のanti senseを共に添加した群では、二次口蓋突起の発育は著明に抑制された。以上の結果より、(1)HGF/SFは12日の二次口蓋突起の間葉層に発現を認め、13.5日には消失する。(2)TGF-β3はHGF/SFと同時期に上皮層・間葉層に見られ、13.5日には消失する。(3)HGF/SFを阻害することにより、二次口蓋突起は肥厚するが癒合に至らない。(4)HGF/SFの受容体を阻害すると上皮層の肥厚が見られる。(5)TGF-β3を阻害すると、二次口蓋突起の増殖が抑制され癒合に至らない。結論TGF-β3とHGF/SFは同時期に発現し、HGF/SFは水平位への転換に必要な垂直位でのアポトーシスを誘導し、TGF-β3は水平方向への増殖に関与する可能性が示唆された。

結論TGF-β3とHGF/SFは同時期に発現し、HGF/SFは水平位への転換に必要な垂直位でのアポトーシスを誘導し、TGF-β3は水平方向への増殖に関与する可能性が示唆された。本研究では、胎生期の細胞増殖を制御するTGF-βと上皮細胞と間葉細胞相互の関係に種々の作用を有するHGF/SFが、二次口蓋突起癒合過程においてどの様に関与するかを、器官培養の系を用い培養液にHGF/SFやTGF-βの過剰添加或いはこれらのanti-senseを添加することにより遺伝子発現を抑制し、これら増殖因子の相互作用を明らかにする。1,母マウスに膣栓を確認した時点を妊娠0日とし、妊娠11日より15日にかけて0.25日毎に麻酔下で母獣より胎児を摘出し、凍結切片或いはパラフィン切片を作製し、二次口蓋突起におけるHGF/SFとTGF-β3のm-RNAの発現を経時的に検討する。2,摘出した胎児より一対の二次口蓋突起を実体顕微鏡下で無菌的に切り出して、軟寒天培地上の器官培養の系に移し培養を開始する。培養液にHGF/SFあるいはTGF-β3を添加、又はそれぞれのanti-senseを添加してm-RNAの発現を阻止し、他方の増殖因子の発現動態並びに癒合完了に至るか否かを検討する。今年度の研究実績。HGF/SF m-RNAの発現は12日から二次口蓋突起の上皮層、間葉層のいずれにも認められ、13.5日にピークに達した。TGF-β3もほぼ同時期に主として間葉層に認められた。しかし、胎児組織の切片でのin situ hybridizationは組織が軟らかいため非特異的呈色反応が多いことが分かり、ホールマウントで現在進めている。in vitroでの一対の二次口蓋突起の器官培養は24時間の培養が可能で、これを更に延長して36時間以上培養できる条件を検討している。器官培養の系においても、上皮細胞のマーカーであるサイトケラチン、間葉細胞のマーカーであるビメンチンの動態は、in vivoと殆ど変わらず、癒合の進行につれサイトケラチンが間葉層に拡散し、上皮-間葉変換が起こることが認められた。本研究では、胎生期の細胞増殖を制御するTGF-βと上皮細胞と間葉細胞相互の関係に種々の作用を有するHGF/SFが、二次口蓋突起癒合過程においてどの様に関与するかを、器官培養の系を用いて検討した。方法1,母マウスに膣栓を確認した時点を妊娠0日とし、妊娠12日より15日にかけて胎児を摘出してパラフィン切片を作製し、或いは全胎仔in situ hybridizationにて、二次口蓋突起におけるHGF/SFとTGF-β3のm-RNAの発現を経時的に検討した。2,摘出した胎児より一対の二次口蓋突起含む上顎組織を器官培養の系に移し培養を開始し、培養液にHGF/SFあるいはTGF-β3を添加、又はそれぞれのantisenseを添加してmRNAの発現を阻止し、他方の増殖因子の発現動態並びに癒合完了に至るか否かを検討した。結果TGF-β3 mRNAの発現は12日から二次口蓋突起の上皮層・間葉層に認められ、12.5日にピークに達し、13-5日以降には消失した。HGF/SFもほぼ同時期に主として間葉層に認められ、13.5日以降には消失した。二次口蓋突起の器官培養では、対照群では約半数が癒合の完了が認められた。HGF/SFおよびTGF-β3を過剰添加した群では、癒合状態に対照群との差を認めなかった。HGF/SFのantisense処理では、二次口蓋突起が肥厚して増殖したが、癒合には至らなかった。HGF/SFの受容体であるC-Metに対する抗体を添加した群では、二次口蓋突起の増殖は抑制され上皮の肥厚が見られた。TGF-β3のantisenseを添加した群では、正中方向への増殖が抑制され癒合には至らなかった。HGF/SF及びTGF-β3のantisenseを共に添加した群では、二次口蓋突起の発育は著明に抑制された。以上の結果より、
犬の肥満細胞腫におけるイマチニブ耐性化の分子病態の解明と耐性克服戦略の構築

本年度は、犬の肥満細胞腫株化細胞CoMSから作製したイマチニブ耐性株rCoMS1で認められたKITの過剰発現が、イマチニブ耐性に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした。KIT分解能の解析により、rCoMS1で見られたKITの過剰発現はKITの分解遅延よってKITが蓄積した結果であることが明らかとなった。さらに、この反応はイマチニブの有無に伴って可逆性に起こることから、rCoMS1におけるKITの過剰発現は、イマチニブに対する反応性の変化であり、KITの細胞内動態の変化により生じると考えられた。rCoMS1におけるKITのユビキチン化の解析において、KITの発現が少ない細胞ではKITがユビキチン化しているのに対して、KITが過剰に発現している細胞ではKITのユビキチン化が明らかに減少していた。さらに、KITの過剰発現は細胞表面で認められたことから、rCoMS1で認められたKITの可逆性の過剰発現はイマチニブによりKITユビキチン化を可逆的に抑制し、その結果、細胞膜上でKITが増加したと考えられた。rCoMS1におけるKITリン酸化の解析とイマチニブの細胞増殖抑制試験により、KIT発現がわずかである細胞ではイマチニブによる明らかなKITリン酸化の抑制と細胞増殖の抑制が見られたが、KIT発現が過剰に増加した細胞ではいずれの抑制も見られなかった。このことから、KITの過剰発現は、CoMSのイマチニブ耐性化において中心的な役割を果たすことが明らかとなった。27年度が最終年度であるため、記入しない。これまでの研究で、犬の肥満細胞腫におけるイマチニブ耐性化にはKIT遺伝子の二次変異が重要であることを報告した。一方、二次変異に依存しないイマチニブ耐性機構の存在も示唆されてきたが、そのメカニズムについては不明であった。そこで今回、犬の肥満細胞腫におけるKIT遺伝子の二次変異非依存性のイマチニブ耐性機構の解明を目的とした。KIT遺伝子のエクソン11に変異を有するイマチニブ感受性の犬の肥満細胞腫細胞株CoMSにイマチニブを段階的に暴露することでイマチニブ耐性株rCoMS1を作製した。rCoMS1を用いてイマチニブ耐性にかかわる分子機構を解析した結果、KIT遺伝子の二次変異は認められなかった。しかしながら、rCoMS1ではKITが過剰に発現しており、この過剰発現したKITのリン酸化はイマチニブでは完全には抑制できないことが明らかになった。このことから、rCoMS1においてKITの過剰発現がイマチニブ耐性化に重要な役割を果たしていると考えられた。さらに、この過剰発現のメカニズムを検討したところ、rCoMS1ではKITのユビキチン化が減少していることが明らかになった。ユビキチン化蛋白はリソソームやプロテアソームで認識され分解される。そのため、ユビキチンは蛋白分解を制御する重要な蛋白と考えられている。したがって、rCoMS1におけるKITの過剰発現はKITユビキチン化の減少によりKITの分解が抑制された結果と考えられた。今後は、KITユビキチン化を制御する分子機構を明らかにし、イマチニブ耐性の克服法の確立を目指す。平成25年度は、犬の肥満細胞腫におけるイマチニブ耐性化機構を解明するため、犬の肥満細胞腫株化細胞VIMCからイマチニブ1μMに耐性を示す細胞株rVIMC1およびイマチニブ10μMに耐性を示す細胞株rVIMC10をそれぞれ作製した。VIMCはイマチニブに感受性を示す変異c. 1523A>Tを有しているが、作製した耐性株において新たにc. 2443G>Cの二次変異が同定された。この二次変異を有するKITはSCF非依存性に自己リン酸化し、イマチニブ1μMではこのリン酸化を抑制することが出来なかった。以上のことから発見された二次変異はイマチニブ耐性に関与することが示された。一方、10μMのイマチニブでは変異型KITのリン酸化を抑制するが、rVIMC10は抵抗性を示す。従って、rVIMC10には二次変異以外の他の耐性機構が存在する可能性が示唆された。そこでVIMC、rVIMC1およびrVIMC10を用いてKITおよびそのシグナル伝達分子のリン酸化をウエスタンブロット法で検討したところ、rVIMC10においてKITのリン酸化に依存しないERKのリン酸化の亢進が確認された。さらにこのERKのリン酸化はSRC family kinases(SFK)inhibitorであるダサチニブでは抑制されなかったことから、ERKの異常なリン酸化はSFK非依存性であることが示された。以上の結果から、犬の肥満細胞腫におけるイマチニブ耐性化にはKITの二次変異が関連していると考えられ、さらに高濃度のイマチニブ暴露された場合にはKITおよびSFK非依存性のERKの活性化が耐性に関与する可能性が示唆された。イマチニブ耐性化機構の解明として耐性株の作製とその耐性機構を解明することが出来た。また研究発表として国際雑誌の掲載と国内での口頭発表を行うことが出来た。

さらに、この反応はイマチニブの有無に伴って可逆性に起こることから、rCoMS1におけるKITの過剰発現は、イマチニブに対する反応性の変化であり、KITの細胞内動態の変化により生じると考えられた。rCoMS1におけるKITのユビキチン化の解析において、KITの発現が少ない細胞ではKITがユビキチン化しているのに対して、KITが過剰に発現している細胞ではKITのユビキチン化が明らかに減少していた。さらに、KITの過剰発現は細胞表面で認められたことから、rCoMS1で認められたKITの可逆性の過剰発現はイマチニブによりKITユビキチン化を可逆的に抑制し、その結果、細胞膜上でKITが増加したと考えられた。rCoMS1におけるKITリン酸化の解析とイマチニブの細胞増殖抑制試験により、KIT発現がわずかである細胞ではイマチニブによる明らかなKITリン酸化の抑制と細胞増殖の抑制が見られたが、KIT発現が過剰に増加した細胞ではいずれの抑制も見られなかった。このことから、KITの過剰発現は、CoMSのイマチニブ耐性化において中心的な役割を果たすことが明らかとなった。当該年度は二次変異に依存しない全く新しいイマチニブ耐性機構を発見できた。また、研究成果として国際学会への口頭発表を行うことが出来た。本年度はイマチニブ耐性克服法の検討に重きをおいて研究を行う。また平行して論文の作成を行う。27年度が最終年度であるため、記入しない。KITユビキチン化を制御する分子機構を検索するとともに、解明したイマチニブ耐性機構に対する耐性克服法を検討する。
文化的多数派による文化防衛の政治理論研究

近年、難民や移民の急激な増加により欧州各国で多数派の文化が危機に瀕しているという意識が高まり、従来は文化的少数派がとってきた文化防衛(cultural defense)のための施策が多数派の文化に関してとられ始めている。だが、こうした多数派の文化防衛がリベラルな諸原理と整合性を持つのかについては理論的研究が進んでいない。そこで本研究は、文化的多数派の文化防衛がリベラルな諸原理に適う正当性を持つかを考察する。最終的には、この研究を通じて日本にも適用可能な多数派文化防衛のリベラルな規範的指針を示すことを目指す。
神経回路形成における低分子量G蛋白質Rhoファミリーの役割

神経回路は、特異な細胞極性を持つ神経細胞が神経突起をのばし、互いの接着により形成した複雑なネットワーク構造である。この神経回路網形成に低分子G蛋白質、Rhoファミリーが細胞骨格の制御による神経突起形成に深く関与しており、Rhoファミリーの中で、Rhoは神経突起退縮を、RacとCdc42は神経突起伸長を制御していることが知られている。しかし、それ以外のRhoファミリーの神経機能はほとんど不明であった。そこで、我々はRhoG、Rndサブファミリーの情報伝達機構を分子レベルで解析した。PC12細胞はNGFによりRasを活性化し、神経突起を伸長することが知られている。我々はRhoGがNGF-Rasの下流でRacとCdc42を活性化することにより、神経突起を伸長することを見いだした。さらに、RhoGによるRacの活性化機構を解明するため、RhoGに結合する分子を酵母のTwo-hybrid法でスクリーニングし、ElmoがRhoGの特異的なエフェクターであり、RhoGはElmoに結合し、Elmo/Dock180を介してRacを活性化し、神経突起伸長を引き起こすことを見いだした。Rnd1は中枢神経系に特異的に発現するRhoファミリーである。その神経機能を明らかにするため、Rnd1に結合する分子を酵母のtwo-hybrid法でスクリーニングし、Rnd1が神経軸索ガイダンス分子、Sema4Dの受容体、Plexin-B1の細胞内領域に結合することを見いだした。Rnd1はPlexin-B1へのPDZ-RhoGEFの結合を促進し、Rhoを活性化することにより細胞体退縮作用を引き起こし、Sema4Dの軸索ガイダンス作用に深く関わることが示唆された。一方、Rnd2に結合する分子を酵母のtwo-hybrid法でスクリーニングし、Rnd2に特異的に結合する新規のエフェクターをクローニングし、Rapostlinと命名した。RapostlinはN末端のFCHドメインを含む領域でマイクロチューブルと結合し、C末端のSH3領域でCdc42のエフェクタでありアクチン重合を促進するN-WASPと結合し、二つの異なる細胞骨格分子をつなぐ役割をたした。この作用により、Rnd2が結合したRapostlinは神経細胞の樹状突起の分枝化を促進し、この神経細胞の形態変化の調節を介して神経回路形成に深く関わることが分かった。神経回路は特異的は細胞極性を示す神経細胞が、その神経突起を介した接着により形成される複雑なネットワークシステムである。この神経突起形成に低分子量G蛋白質Rhoファミリーが深く関与しており、細胞骨格の再構築により、Rhoは突起の退縮を、RacとCdc42は突起の伸長を引き起こすことが知られている。しかし、これらのRhoファミリーが、実際の神経突起形成時にどの様な作用を発揮するのか不明である。そこで、PC12細胞でNGFによる神経突起形成における各RhoファミリーG蛋白質の活性を調べた。PC12細胞において、NGFは約3分をピークにしてRac1をPI3キナーゼ依存的に強く活性化した。また、このとき、活性化されたRac1は細胞膜上の突起形成部位に集積し、そこでF-アクチンの再構築を引き起こし、突起形成を行った。しかし、神経突起形成作用のないEGFはRac1を活性化するが、PI3キナーゼ非依存的で、突起形成部位へのRac1の集積もF-アクチンの再構築も起こらなかった。一方、NGFはRac1を活性化すると同時にRhoAの活性を著しく抑制した。常時活性型Rho、RhoA-V14を発現させてRhoの活性を高いままにしておくと、NGFによるRac1の活性化と突起形成部位へのRac1の集積、F-アクチンの再構築も起きず、神経突起形成も生じなかった。また、この作用はRhoキナーゼを介するものであることがわかった。さらに、この分子機構を調べた結果、Rhoは細胞膜周辺のcortical actinfilamentの構造の安定化をもたらし、そのために神経突起形成が阻害された。これらの結果から、NGFはRhoの活性を抑制することにより、細胞膜周辺のcortical actinfilamentの構造を崩壊させ、一方でRac1を活性化し、突起形成部位に集積させることによりそこでF-アクチンの再構築を起こし、神経突起を形成させるものと考えられる。

Rnd1は中枢神経系に特異的に発現するRhoファミリーである。その神経機能を明らかにするため、Rnd1に結合する分子を酵母のtwo-hybrid法でスクリーニングし、Rnd1が神経軸索ガイダンス分子、Sema4Dの受容体、Plexin-B1の細胞内領域に結合することを見いだした。Rnd1はPlexin-B1へのPDZ-RhoGEFの結合を促進し、Rhoを活性化することにより細胞体退縮作用を引き起こし、Sema4Dの軸索ガイダンス作用に深く関わることが示唆された。一方、Rnd2に結合する分子を酵母のtwo-hybrid法でスクリーニングし、Rnd2に特異的に結合する新規のエフェクターをクローニングし、Rapostlinと命名した。RapostlinはN末端のFCHドメインを含む領域でマイクロチューブルと結合し、C末端のSH3領域でCdc42のエフェクタでありアクチン重合を促進するN-WASPと結合し、二つの異なる細胞骨格分子をつなぐ役割をたした。この作用により、Rnd2が結合したRapostlinは神経細胞の樹状突起の分枝化を促進し、この神経細胞の形態変化の調節を介して神経回路形成に深く関わることが分かった。神経回路は、特異的な細胞極性を示す神経細胞がその神経突起を介した接着により形成する複雑なネットワークシステムである。この神経突起形成に低分子量G蛋白質、Rhoファミリーが深く関与しており、細胞骨格の再構築により、RhoAは神経突起の退縮を、Rac1とCdc42は突起の伸長を引き起こすことが知られている。しかし、Rhoファミリーにはこれらのメンバー以外に多数のG蛋白質が存在するが、それらの神経機能はほとんど不明である。そこで、その神経機能が不明であるRnd2とRhoGの情報伝達機構を調べた。Rnd2の下流のエフェクター分子を明らかにするため、酵母のtwo-hybrid法を用いてRnd2に結合する分子をスクリーニングし、新規のエフェクターをクローニングし、Rapostlinと命名した。RapostlinはN末端のFCH領域を含めた部位で微小管に結合し、C末端のSH3領域を介してアクチン骨格を制御した。神経細胞において、RapostlinはRnd2が結合することにより、神経突起や樹状突起の分枝化を引き起こし、この作用にはN末端の微小管結合領域が必須であった。このことから、RapostlinはRnd2の特異的エフェクター分子であり、神経突起の分枝化を制御することがわかった。一方、我々はPC12細胞において、NGFによる神経突起伸長作用にRhoGが重要な役割をしており、Rasの下流で働き、Rac1とCdc42を活性化して神経突起伸長を引き起こすことを明らかにしてきた。そこで、RhoGによるRac1、Cdc42の活性化機構を解明するため、RhoGのエフェクター分子を酵母のtwo-hybrid法でスクリーニングし、そのエフェクターをクローニングした。RhoGはそのエフェクターに特異的に結合し、Rac1を活性化し、神経突起伸長を引き起こした。神経回路は、特異な細胞極性を示す神経細胞がその神経突起を介した接着により形成する複雑なネットワークシステムである。
B細胞免疫寛容とメモリーB細胞分化の分子機構の解析

本研究は、メモリーB細胞の分化機構をc-fos遺伝子のレベルで解明することを目的とする。そのためc-fos遺伝子を恒常的に発現するトランスジェニックマウス(H2-c-fos)や遺伝子誘導型のトランスジェニックマウス(Mx-c-fos)を用いた。H2-c-fosマウスは抗原で刺激してもIgGクラスの抗体産生が見られない。そこでG2-c-fosマウスを抗原で刺激した後の脾臓におけるIgG^+B細胞の分化能を病理学的にまた蛍光抗体とFACSを用いて解析した。その結果、胚中心の形成がほとんど見られずIgG^+B細胞が検出出来なかったことから、IgGクラススイッチ過程を含むメモリーB細胞の分化段階が障害されていることが明らかになった。つぎにIgGクラススイッチ過程の異常かどうかを調べる目的で、H2-c-fosマウス由来のB細胞をLPSとIL-4とともに培養した時のIgG1陽性B細胞を蛍光抗IgG1抗体とFACSを用いてまたIgG1抗体産生量をELISA法で解析した。その結果、IgG1クラススイッチが見られず、IgG1抗体産生も見られなかった。そこで、Mx-c-fosB細胞をLPSとIL-4とともに培養した時のIgG1抗体生産量をELISA法で解析した。そのとき、培養系に経時的に誘導剤を添加してc-Fosの発現を誘導することにより、IgG1クラススイッチ過程の異常を解析した。その結果、c-fos発現誘導を培養後2-4日目に行うとIgG1へクラススイッチしつつあるB細胞がアポトーシスで死滅した。ところが発現誘導を培養の4日目以降におこなってもIgG1へクラススイッチしたB細胞は抗体産生細胞へ分化できた。培養後2-4日目にB細胞内でIgG1へのクラススイッチ(遺伝子組み換え)が起きることから、過剰のc-fosはB細胞のクラススイッチ過程において細胞死を誘導することが明らかになった。
内因性-酸化窒素の高感度検出法の開発と動脈硬化症への応用に関する研究

本研究ではNOの病態生理的役割を知るために,NOの高感度測定法の開発とその基礎・臨床応用を目指した。1)NOの測定法の開発我々の開発したルミノール科学発光法を用いて、ラット腎臓からNO遊離量を連続的、かつリアルタイムに測定した.エンドセリンはサブタイプB受容体の刺激によりNOを遊離し、この反応は動脈硬化などの内皮障害により減弱していた。アドレノメディリンはcAMP以外に、NO-cGMP系を介しても血管拡張作用を発揮することを新規に明らかにした。バソプレッシンもV1受容体を介してNOを遊離させた。特に動脈硬化症においては、これらの血管作動物質の血管緊張の調節機序にNOが密接に関わっていることが明らかとなった。次いでオゾン科学発光法により呼気中NOガス分析の結果、運動時、肝硬変、腎不全などでNOの生産が増加しており、その病態における役割を知る一助となった。臨床例においてもNOの動態を追跡できる新しい検査法といえる。また新たにNO感受性傾向プローブを作成し培養細胞及び組織切片においてNOの画像化に成功した。2)治療薬としてのNONOの臨床応用としてNOガスの吸入の心不全での効果を検討した。NOは全身血行動態を変えずに肺血管床のみを拡張させ、その結果、呼吸状態を改善した。さらにはNOガスの吸入により、心不全患者の運動様態も向上し,本症におけるQuality of lifeの改善にも有効と考えられた。(1)基礎的検討luminol-H_2O_2化学発光法を用いたラット単離灌流腎におけるNO遊離速度の測定により高血圧性血管ではNO遊離能が減弱するが、その機序に高血圧の成因による差が存在することが明らかとなった。即ち食塩依存性高血圧ではNO合成酵素自体の減少によるが、食塩非依存性高血圧ではNO合成酵素の活性化に異常が存在する。従来より特に腎臓においては食塩依存性高血圧で血管障害が著明であることが知られており、両者の関連性は重要な所見と考えられる。NO感受性螢光試薬の開発については候補薬を数種合成し得た。いずれもNOと特異的に反応し、NOの代謝物とは反応しない。この試薬を血管平滑筋培養細胞液中に加えておくとサイトカインによって誘導されたNO合成酵素由来のNOを経時的に観察し得た。この結果、従来の指摘より早期からNOが遊離され始めることが明らかとなった。(2)臨床的検討呼気中NOの測定を種々の疾患例で施行した。先ず健常者では日を変えて繰り返し測定しても再現性がよく、運動により呼気中NO排出量が約4倍に増加した。次いで肝疾患例において同様の測定を行ったところ、慢性肝炎、肝硬変においてその重症度に応じて呼気中NO排出量の増加が認められた。Child B型、Child C型肝硬変では健常者の2倍に増加していた。従来より、肝硬変患者ではhyperdynamic state、すなわち心拍出量の増加、未梢血管抵抗の減少にあると考えらえており、この原因に内因性NOの増加が関与していることを示すために、同時に心拍出量を測定した。その結果、心拍出量と呼気中NO排出量とは密接な正相関を示した。1)基礎的検討luminol-H_2O_2による化学発光法を用いたNO測定法をラット単離灌流腎に応用して、各種血管作動物質によるNO遊離を検討した。その結果、アドレノメジュリンのような血管拡張性ペプチドばかりでなくエンドセリン-1とかバソソプレッシンのような強力な血管収縮性ペプチドにもNOを遊離させる作用のあることが明らかとなった。特にその責任受容体としてエンドセリン-1ではET_B受容体が、バソプレッシンではV_1受容体が考えられた。内皮障害が生じている動脈硬化モデル動物ではこれらのペプチドによるNO遊離が減弱していることから、血管緊張状態が修飾されている可能性が考えられた。新規に合成した蛍光試薬によるNO測定法に関しては培養血管内皮細胞および平滑筋細胞を用いて検討中である。

これまでDANによってもサイトカイン刺激後の蛍光強度の増強を経時的に追跡し得るようになった。今回は、細胞内にも移行させるためエステル化することによってその測定感度が増加し、その結果、蛍光顕微鏡下で、NO遊離を観察でき、画像解析により、細胞内分布、拡散速度などが検討できるようになった。2)臨床的検討オゾン化学発光法による呼気中NO排出量、血中NO代謝物および前腕動脈の内皮依存性血管拡張反応の測定により、心不全あるいは腎不全患者の内因性NO産生能を調べたところ、NO産生はむしろ健常者より増加していた。これらは誘導型NO合成酵素由来と考えられた。また心不全患者にNO吸入を試みたところ、選択的な肺動脈血管拡張とガス交換の改善を認め、本療法が軽中等症の心不全にも有効であることが明らかになった。本研究ではNOの病態生理的役割を知るために、NOの高感度測定法の開発とその基礎・臨床応用を目指した。1)NOの測定法の開発我々の開発したルミノール化学発光法を用いて、ラット腎臓からのNO遊離量を連続的、かつリアルタイムに測定した。エンドセリンはサブタイプB受容体の刺激によりNOを遊離し、この反応は動脈硬化などの内皮障害により減弱していた。アドレノメデュリンはcAMP以外に、NO-cGMP系を介しても血管拡張作用を発揮することを新規に明らかにした。バソプレッシンもV1受容体を介してNOを遊離させた。特に動脈硬化症においては、これらの血管作動物質の血管緊張の調節機序にNOが密接に関わっていることが明らかとなった。次いでオゾン化学発光法により呼気中NOガス分析の結果、運動時、肝硬変、腎不全などてNOの産生が増加しており、その病態における役割を知る一助となった。臨床例においてもNOの動態を追跡できる新しい検査法と言える。また新たにNO感受性螢光灯プローブを作成し、培養細胞および組織切片においてNOの画像化に成功した。2)治療薬としてNONOの臨床応用としてNOガスの吸入の心不全での効果を検討した。NOは全身血行動態を変えずに肺血管床のみを拡張させ、その結果、呼吸状態を改善した。さらにはNOガスの吸入により、心不全患者の運動耐容能も向上し、本症におけるquality of lifeの改善にも有用と考えられた。
環太平洋中生代付加体中の遠洋性堆積物に記録された堆積イベント

1.西南日本内帯(美濃帯・丹波帯・超丹波帯)や東北日本(北上帯)で野外調査を行い,これまでに発見されているチャート中のイベント堆積物につき試料採取を行うと共に,あらたなイベント堆積物の探索につとめた.成果のひとつとして,岐阜県郡上郡八幡町の長良川流域で,チャート中に砕屑岩層が挟まれていることを確認した.このチャートの年代は,伴って産する岩石の種類や産状から二畳紀のものではないかと予想される.2.チャート中の砕屑粒子のキャラクタリゼーションを行った.手法としては偏光顕微鏡観察・EPMAによる化学組成の測定・XGT元素マッピングなどを利用した.新たな発見としては,岐阜県加茂郡上麻生のチャート中に挟まれるイベント堆積物中に海緑石に似た化学組成を持つ砕屑粒子を発見したこと,岐阜県尾崎のチャート中に挟まれるイベント堆積物中にドロマイトなどの炭酸塩砕屑粒子を見いだしたこと,などがあげられる.遠洋性堆積物であるチャートの堆積場に,浅海成を示唆する砕屑粒子が見つかったことで,このイベント堆積物の起源について制約条件を与えることができた.3.極東ロシアのシホテアリン山地には西南日本内帯とよく似た中生代付加体が広く分布する.これらの付加体のうちジュラ紀に形成されたサマルカ帯の三畳紀チャート中に産するイベント堆積物を詳細に検討した.その結果,この堆積物の組成・年代・産状・運搬機構は,西南日本内帯のジュラ紀付加帯中に産するイベント堆積物とよく似ていることが判明した.1.西南日本内帯(美濃帯・丹波帯・超丹波帯)や東北日本(北上帯)で野外調査を行い,これまでに発見されているチャート中のイベント堆積物につき試料採取を行うと共に,あらたなイベント堆積物の探索につとめた.成果のひとつとして,岐阜県郡上郡八幡町の長良川流域で,チャート中に砕屑岩層が挟まれていることを確認した.このチャートの年代は,伴って産する岩石の種類や産状から二畳紀のものではないかと予想される.2.チャート中の砕屑粒子のキャラクタリゼーションを行った.手法としては偏光顕微鏡観察・EPMAによる化学組成の測定・XGT元素マッピングなどを利用した.新たな発見としては,岐阜県加茂郡上麻生のチャート中に挟まれるイベント堆積物中に海緑石に似た化学組成を持つ砕屑粒子を発見したこと,岐阜県尾崎のチャート中に挟まれるイベント堆積物中にドロマイトなどの炭酸塩砕屑粒子を見いだしたこと,などがあげられる.遠洋性堆積物であるチャートの堆積場に,浅海成を示唆する砕屑粒子が見つかったことで,このイベント堆積物の起源について制約条件を与えることができた.3.極東ロシアのシホテアリン山地には西南日本内帯とよく似た中生代付加体が広く分布する.これらの付加体のうちジュラ紀に形成されたサマルカ帯の三畳紀チャート中に産するイベント堆積物を詳細に検討した.その結果,この堆積物の組成・年代・産状・運搬機構は,西南日本内帯のジュラ紀付加帯中に産するイベント堆積物とよく似ていることが判明した.(1)西南日本内帯(美濃帯・丹波帯・超丹波帯)で野外調査を行い,これまでに発見されているイベント堆積物につき試料採取を行うと共に,あらたにイベント堆積物を発見した.具体的には,岐阜県郡上郡八幡町の長良川流域で,チャート中に砕宵岩層が挟まれていることを確認した.このチャートの年代は,現在検討中であるが,伴って産する岩石の種類や産状から,二畳紀のものではないかと予想される.(2)岐阜県加茂郡上麻生に分布するチャート中に挟まれるイベント堆積物中に海緑石に似た化学組成を持つ砕宵粒子を発見した.遠洋性堆積物であるチャートの堆積場に,浅海成を示唆する海緑石にいた砕宵粒子が見つかったことで,このイベント堆積物の起源について制約条件を与えることができた.(3)極東ロシアのシホテアリン山地には西南日本内帯とよく似た中性代付加体が広く分布する.これらの付加体のうちジュラ紀に形成されたサマルカ帯の三畳紀チャート中に産するイベント堆積物を詳細に検討した.その結果,この堆積物の組成・年代・産状・運搬機構は,西南日本内帯のジュラ紀付加帯中に産するイベント堆積物とよく似ていることが判明した.両者を比較して得られた結果は,1996年8月に中国の北京で開かれた第30回のInternational Geological Congressで発表すると共に,その会議報告集に印刷,公表する予定である.(4)現在,岐阜県各務原市尾崎に分布する三畳紀チャート中に挟まれる砕宵岩層について,その構成粒子の種類とX線分析を行っている.この成果は1997年3月に名古屋大学で開催される地球惑星科学関連学会合同大会で発表予定である.1.西南日本内帯(美濃帯・丹波帯・超丹波帯)で野外調査を行い,これまでに発見されているイベント堆積物につき試料採取を行うと共に,あらたなイベント堆積物の探索につとめた.2.調査研究地域を東北日本にまで広げ,北上山地等でイベント堆積物の探索を行った.3.岐阜県加茂郡上麻生に分布するチャート中に挟まれるイベント堆積物の構成粒子を化学分析し,その種類を同定している.4.極東ロシアのシホテアリン山地には西南日本内帯とよく似た中生代付加体が広く分布する.これらの付加体のうちジュラ紀に形成されたサマルカ帯の三畳紀チャート中に産するイベント堆積物を詳細に検討した.

その結果,この堆積物の組成・年代・産状・運搬機構は,西南日本内帯のジュラ紀付加帯中に産するイベント堆積物とよく似ていることが判明した.両者を比較して得られた結果は,1996年8月に中国の北京で開かれた第30回のInternational Geological Congressの会議報告集に印刷中である.5.三畳紀の海洋環境を考える上で,環太平洋地域の付加体に保存されている海洋性岩石群は重要な手がかりを与えるが,それらは浅海成の石灰岩石類と深海性のチャートに分けられる.これらはこれまで独立に研究されてきたが,チャート中の砕屑岩は両者をつなぐmissing linkとなりえる.こういった観点に立った検討を行い,その成果を1997年10月,九州大学で行われた地質学会において発表した.6.現在,岐阜県各務原市尾崎と岐阜県加茂郡上麻生に分布する三畳紀チャート中に挟まれる砕屑岩層について,その構成粒子の堆積岩岩石学的特徴と放散虫年代を記載した論文を執筆中である.
各種口腔内腫瘍に対する光線力学的療法の有用性とそのメカニズムに関する検討

(目的)PAD-S31は670nmに吸収波長帯を持つ新しいphotosensitizerである。我々は口腔内腫瘍に対するPAD-S31を用いたPDTの効果をin vitroおよびin vivoで検討し、さらにapoptosisを誘導するかどうかを検討した。(方法)PAD-S31とともに2時間培養した各種ヒト口腔内腫瘍細胞株(SAS,HSC-4)、浜松ホトニクス社の半導体レーザーPDT HLD-1を使用し、670nmのレーザー光線の照射を行い、WST-8assayにて細胞障害性を検討した。また、apoptosisを誘導しているかどうかを検討するためにTUNEL染色およびヒストン結合性DNA fragmentのELISA assayを行った。さらにシステインプロテアーゼの一種であるcaspaseの各種基質とtetrapeptide caspase inhibitorを用いてapoptosisのsignal pathwayの検討を行った。次にヌードマウスの皮下に各種ヒト口腔内腫瘍細胞株を植え腫瘍塊を作成し、8mg/kg PAD-S31を尾静脈投与2時間後にレーザーを照射し、腫瘍塊に対する効果を検討した。また、照射後の組織標本をTUNEL染色しapoptosisが誘導されているかどうかを確認した。(結果)PAD-S31を用いたPDTは、各種ヒト口腔内腫瘍細胞株に濃度、照射量、時間依存性に強い細胞障害効果を示し、優位にTUNEL染色陽性細胞が確認され、ヒストン結合性DNA fragmentの増加が認められた。また、HSC-4においてcaspase6,8,9の活性化は見られなかったが、caspase3の活性が上昇しcaspase inhibitorによってヒストン結合性DNA fragmentと細胞障害性の低下を認めた。さらに、腫瘍塊に対しても強い抗腫瘍効果を示し、TUNEL染色陽性細胞の有意な増加を認めた。(結論)PAD-S31を用いたPDTは、in vitroおよびin vivoにおいて口腔内腫瘍細胞に対し強い抗腫瘍効果があり、またcaspaseを介したapoptosisを誘導した。
Circadian rhythm安定化に基づく心血管バイパス術後せん妄予防の開発

[目的]術後せん妄が最も多く出現する代表的な心血管バイパス術において、ラメルテオンのせん妄予防に関する有効性と安全性を検討した。[方法]ラメルテオンは手術当日を含めた術後3日間、21時に経口より連続投与した。主要評価項目はせん妄の発生頻度、副次的評価項目はICU滞在日数、総入院日数とした。[結果]せん妄の発生頻度とICU滞在日数は、ラメルテオン投与群が非投与群と比較し減少傾向にあったが、有意差は認めなかった。総入院日数はラメルテオン投与群で有意差をもって減少していた。ラメルテオンによる副作用は認めなかった。[結論]術後せん妄を予防する可能性があることが示唆されたが、症例数を増やす必要がある。術後せん妄を含めた、せん妄に対するラメルテオンの有効性はすでに国内・海外の医学雑誌に掲載されている。また同内容は国内・国外の学会にも、それぞれ報告している。上記の報告は、活動型せん妄に関するものであったが、最近、治療法が確立されていない低活動型せん妄に対する有効例を経験したので、このケースに関する海外の医学雑誌への投稿論文を現在執筆中である。現在、精神科・心臓血管外科・麻酔科と密に連絡をとりあい、ラメルテオンの投与が、心血管バイパス手術後せん妄を予防する研究を慎重に推進している。各診療科の研究分担や評価もスムーズである。精神科は簡易認知機能試験であるMMSE・せん妄の有無など、心臓血管外科は合併症リスク予測であるEuroscoreや身体機能的評価であるBarthel Indexなど、麻酔科は輸血・輸液量やICUでの鎮静剤の使用量など、各診療科の専門性を重要視した評価項目を割り当て、定期的に研究の進捗具合などを確認している。これまでの実績は、術後ラメルテオン投与群は、非投与群に比して、プライマリーエンドポイントである術後せん妄の頻度が少ない傾向となっている。今後、症例数を増やして統計的な解析を行うが、この傾向が続けば十分に有意差が出るものと思われる。また、術後せん妄に付随した重要な問題である、せん妄の重症度、ICU滞在日数、総入院日数、せん妄の治療に有した薬剤量なども、術後ラメルテオン投与群は非投与群よりも良好な傾向を有している。現在、症例数も順調に集まっており、かつ上記のように現在までの研究成績は極めて良好なので、近いうちに国内学会の発表と国内の医学雑誌に掲載を予定としている。術後せん妄を含めた、せん妄に対するラメルテオンの有効性はすでに国内・海外の医学雑誌に掲載され、本年ももう一報in pressとなっている。上記の報告は、活動型せん妄に関するものであったが、最近、治療法が確立されていない低活動型せん妄に対する有効例を経験したので、このケースに関する海外の医学雑誌への投稿論文を現在投稿中である。精神科・心臓血管外科・麻酔科と密に連絡をとりあい、ラメルテオンの投与が、心血管バイパス手術後せん妄を予防する研究を慎重に推進していたが、当初よりも少なかったが症例の集積がほぼ終わり、集積完了をもって速やかに解析する。また、術後せん妄に付随した重要な問題である、ICU滞在日数、総入院日数、せん妄の治療に有した薬剤量なども、術後ラメルテオン投与群は非投与群よりも有意差を持って少ない結果が出ると思われる。近いうちに国際学会の発表と海外の医学雑誌に掲載を予定としている。[方法]ラメルテオン(8mg)は手術当日を含めた術後3日間、ICUにて21時に経口より連続投与した。せん妄の評価は術後7日間、評価尺度はDSM-IV-TRを用いた。除外診断は中等度以上の肝機能異常を有する患者、フルボキサミンを服薬している患者、精神疾患を有する患者、プロトコール以外にラメルテオンを使用した患者、BZ系薬剤などせん妄を惹起する薬物を使用した患者とした。[結果]2011年11月2015年3月までに心臓血管外科に入院した心血管バイバス術予定患者37名をエントリーし、プロトコール違反など除外した、ラメルテオン投与群10名と非投与群11名を解析した。術後せん妄は、ラメルテオン投与群では発生せず、非投与群は3回発生した。術後せん妄発生頻度は減少傾向にあったが、サンプル数が少なく有意差はなかった(P = 0.214)。ICU滞在日数は減少傾向(3.5 ±1.4 vs 5.3 ±2.5, p = 0.051)がみられ、総入院日数は有意差をもって減少していた(15.9 ±7.1 vs 23.3 ±12.0, p = 0.036)。ラメルテオン投与に関連した副作用は認めなかった。[結論]本研究の目的であるせん妄予防については、症例数が少なかったこともあり、その可能性を示唆するに留まった。一方、総入院日数の減少と副作用がなかったことから、本プロトコールは医療コストの減少とともに高い安全性が期待できることが示唆された。

今後は、症例数を増やすと同時に多施設二重盲検試験など、信頼性の高い研究をする必要があると思われた。[目的]術後せん妄が最も多く出現する代表的な心血管バイパス術において、ラメルテオンのせん妄予防に関する有効性と安全性を検討した。[方法]ラメルテオンは手術当日を含めた術後3日間、21時に経口より連続投与した。主要評価項目はせん妄の発生頻度、副次的評価項目はICU滞在日数、総入院日数とした。[結果]せん妄の発生頻度とICU滞在日数は、ラメルテオン投与群が非投与群と比較し減少傾向にあったが、有意差は認めなかった。総入院日数はラメルテオン投与群で有意差をもって減少していた。ラメルテオンによる副作用は認めなかった。[結論]術後せん妄を予防する可能性があることが示唆されたが、症例数を増やす必要がある。症例数の集積に、めどがたちそうな状況である。まだ症例が完全に集まっていないものの、精神科、循環器外科、麻酔科に割りつけた該当項目の結果についても、少しずつではあるがまとめながら、解析する準備もしている。精神医学症例の集積が終了して、統計処理による結果と解釈を十分に検討したのちに、複数の国内学会と海外学会を予定している。また海外医学論文に投稿する予定である。加えて臨床試験後に、どうしてもヒト対象では不可能なもの、例えば、今回の「せん妄」研究に関連した脳の松果体の機能的・形態学的変化などはマウスなどで検討する予定である。ラメルテオン投与群・非投与群をそれぞれ40名予定している。これまでに投与群と非投与群がそれぞれ約半数弱ずつ集まっており、せん妄発症頻度・せん妄重症度・入院日数などを解析し、順調に進んでいる。症例数が相当数、集まらなかった為、被験者への謝礼金や血液検査の費用が予定していた金額を下回ったため。また当初予定していた、国内の学会発表が出来なかったため、その為の旅費や参加費がなかった。当初の予定通りに、目標まで症例数を増やし研究を進めていく。目標症例数に達ししだい、統計処理を遂行し、速やかに海外学会発表と海外医学論文に投稿する。被験者への謝礼金と血液検査、国内学会発表の為の旅費や参加費に使用する。