hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
癌細胞のアポトーシス誘導性から評価した癌患者に最適な麻酔薬の探索

プロポフォールの抗癌作用機序を検証した。Hela細胞を検体とした。アポトーシス、ミトコンドリア電位、ミトコンドリアpHを検証した。結果:プロポフォールは、癌細胞の増殖を濃度依存性に抑制した。プロポフォールは、ミトコンドリア電位を脱分極し、ミトコンドリアpH勾配を消失させた。そして、ミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導した。これらの結果は、プロトノフォアCCCPと一致した。結語:プロポフォールは、プロトノフォアとして作用し、ミトコンドリアの水素イオン濃度勾配を消失することで、ミトコンドリア電位を消失、癌細胞にミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導することが証明された。プロポフォールの副作用として、プロポフォール症候群が問題視されるが、その機序は解明されていない。そこで、プロポフォールのミトコンドリアへの影響を中心とした細胞毒性機序を検証した。方法:Hela細胞を検体とした。プロポフォールのミトコンドリアへの影響を検証すべく、ミトコンドリア電位、ミトコンドリア電位を形成する細胞内およびミトコンドリアそれぞれのpH、カルシウムイオン濃度を細胞内イメージング法で測定した。アポトーシスについて、DNAフラグメンテーションを電気泳動法で、カスパーゼ活性を合成基質法で測定した。結果:プロポフォールは、合成基質法にてカスパーゼ9およびカスパーゼ8、そしてカスパーゼ3を濃度依存性に活性化した。プロポフォールは、ミトコンドリア電位を脱分極するとともに、細胞内pH,ミトコンドリアpHを著明にアルカリ化し、カルシウム濃度を増加させ、ミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導した。これらの結果は、同じフェノール類に属しプロポフォールと構造式が類似するアセチルサリチル酸と酷似していた。結語:プロポフォールは、弱酸としてイオントラッピングにより細胞内およびミトコンドリアの水素イオン濃度(pH)を枯渇することで、ミトコンドリア経路のアポトーシスによる細胞毒性を誘発しうる可能性が示唆された。他方、興味深いことは、プロポフォールがカスパーゼ8も活性化することすなわち、デスレセプター経路も活性化しうることで、2つの経路でアポトーシスを起こしうることである。このことは、ワーンブルク効果すなわち、アポトーシスを起こさないようにミトコンドリア活性を抑制しているのではないかとされる癌細胞に有効かもしれない。プロポフォールの持つアポトーシス誘導作用機序を解明したとともに、これにより、プロポフォールを用いた抗がん作用の証明等新しいテーマを得ることが出来たため。近年プロポフォールが抗癌作用を有するという文献が散見されるようになったが、その機序は不明である。そこで、プロポフォールのミトコンドリアへの影響を中心とした抗癌作用機序を検証した。プロポフォールのミトコンドリアへの影響を検証すべく、ミトコンドリア電位、ミトコンドリア電位を形成する細胞内およびミトコンドリアそして、細胞膜内外それぞれのpH、ミトコンドリアカルシウムイオン濃度を細胞内イメージング法で検証した。プロポフォールは、ミトコンドリア電位を有意に脱分極するとともに(JCー1蛍光比Control 0.3+-0.18, 0.001%: 0.84+-0.52, 0.01%: 2.17+-0.62)、ミトコンドリアpH勾配(pH;control: matrix: 8.4+-0.35, inter membrane: 7.9+-1.0, propofol 10uM: matrix: 7.9+-0.3, inter membrane: 8.1+-0.4)および細胞膜内外のpH勾配を消失させた。そしてミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導した。結語:プロポフォールは、プロトノフォアとして作用し、プロトントラッピングにより細胞内およびミトコンドリアの水素イオン濃度(pH)勾配を消失することで、ミトコンドリア電位を消失させるといった脱共役作用により、癌細胞にミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導し、これがプロポフォール注入症候群の原因だけでなく、プロポフォールによる抗癌作用の一機序なる可能性が示唆された。本研究課題である麻酔薬(プロポフォール)の抗癌作用について、プロポフォールがプロトノフォアとして作用し、ミトコンドリアにおける脱共役作用により、癌細胞においてミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導するという機序まで解明し得た。本研究結果は、ミトコンドリアが癌細胞の弱点の一つであり、プロポフォールを含むプロトノフォアなどの脱共役剤が抗癌作用を有する可能性もあり、ミトコンドリアをターゲットとした抗癌作用という本研究結果を踏まえた今後の新たな研究課題も見いだせた。これらの研究結果は、2017年度日本麻酔科学会(神戸市)にて発表予定である。以上の結果を踏まえ、本研究は順調に推移しているといえる。癌患者にどのような麻酔法、麻酔薬が最適なのかを検索すべく、リドカイン等の局所麻酔薬、プロポフォール等の静脈麻酔薬、そして、セボフルラン等吸入麻酔薬の培養腫瘍細胞に対する影響を検証した。リドカイン等の局所麻酔薬あるいはプロポフォールでミトコンドリアが脱分極することを報告した。そこで、今回はプロポフォールのミトコンドリアへの影響を中心とした抗癌作用機序を検証した。

プロポフォールのミトコンドリアへの影響を検証すべく、ミトコンドリア電位、ミトコンドリア電位を形成する細胞内およびミトコンドリアそれぞれのpH、カルシウムイオン濃度を細胞内蛍光イメージング法でリアルタイムに測定した。アポトーシスについて、DNAフラグメンテーションを電気泳動法で、チトクロームCのミトコンドリアからの漏出をウェスタンブロット法で、カスパーゼ活性を合成基質法で測定した。結果:プロポフォールは、プロトノフォアとして作用し、培養腫瘍細胞においてミトコンドリアにおけるプロトン濃度勾配を消失させることでミトコンドリア電位を脱分極し、ミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導しうることを。これらの結果は、同じフェノール類に属しプロポフォールと構造式が類似するアセチルサリチル酸と酷似していた。結語:プロポフォールは、プロトノフォアとしてミトコンドリアのプロトン濃度勾配を消失することで、アスピリンに類似したミトコンドリア経路のアポトーシスによる抗癌作用を発揮しうる可能性が示唆された。プロポフォールの抗癌作用機序を検証した。Hela細胞を検体とした。アポトーシス、ミトコンドリア電位、ミトコンドリアpHを検証した。結果:プロポフォールは、癌細胞の増殖を濃度依存性に抑制した。プロポフォールは、ミトコンドリア電位を脱分極し、ミトコンドリアpH勾配を消失させた。そして、ミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導した。これらの結果は、プロトノフォアCCCPと一致した。結語:プロポフォールは、プロトノフォアとして作用し、ミトコンドリアの水素イオン濃度勾配を消失することで、ミトコンドリア電位を消失、癌細胞にミトコンドリア経路のアポトーシスを誘導することが証明された。今後は、果たしてミトコンドリア経路あるいはデスレセプター経路が抗癌作用として有効なのか、どちらの経路がプロポフォールの持続投与で癌細胞の転移を低下しうるのかを解明したい。さらに、他の局所麻酔薬や揮発性麻酔についても比較検討する予定である。本研究結果は、ミトコンドリアが癌細胞の弱点の一つであり、プロポフォールを含むプロトノフォアなどの脱共役剤が抗癌作用を有する可能性を見いだした。はたして、正常細胞と癌細胞との間で、こうしたミトコンドリアによる抗癌作用に、腫瘍特異性があるのかを現在、正常細胞(正常ヒト血管内皮細胞)および癌細胞を用いて、比較検討中である。癌細胞はミトコンドリア機能は抑制されているという説がある(ワーンブルグ効果)が、この一因として、アポトーシスが誘導されないためと仮設する。そこで、このワーンブルグ効果との関連も含めて、今後の課題としては、なぜ、癌細胞はミトコンドリアの脱分極などミトコンドリアストレスによって、アポトーシスが誘導されやすいのかを検証したい。麻酔・蘇生学科研費に申請したとうりの機器を購入したが、購入した機器が、科研費に申請した定価よりも、安かったため。研究機器を考究する際、カタログ上の定価よりも安価に購入できた為、その差額が余剰となった。次年度の消耗品代に繰り越す計画である。研究に必要な美品は、この科研費でおおむね調達できた、残金は、次年度において、薬剤購入に使用する。
A.actinomycetecomcomitansの熱ショック蛋白質の研究

我々は,A.actinomycetecomcomitans(A.a.)の染色体より,大腸菌の主要な熱ショック蛋白質,Dna K及び,ヒトの70kDa熱ショック蛋白質に相同性のある蛋白質の遺伝子を含む,2696bpのDNAフラグメントをクローニングし,その全塩基配列を決定した.この,DNAフラグメントには,70kDa熱ショック蛋白質以外に,大腸菌の熱ショック蛋白質Dna Jと相同性の高い蛋白質の,アミノ末端領域の塩基配列が見つかった.それは,70kDa蛋白質遺伝子の,カルボ末端側に存在していた.dna J遺伝子の上流には,プロモーターと考えられる塩基配列がなく,この2つの遺伝子は,一つのオペロンとして転写されるものと考えられた.70kDa蛋白質の遺伝子のアミノ末端が,一部,含まれていなかったため,上流領域の遺伝子のクローニングを試み,それをコードする遺伝子断片を含む,約3kbpのDNAフラグメントをクローニングし,その塩基配列を決定した.その結果,A.a.の70kDa蛋白質は,大腸菌のDna Kとアミノ酸で,83%の相同性があることが分かった.また,大腸菌のdna K遺伝子のプロモーター配列と似た配列が,70kDa蛋白質遺伝子上流に存在し,プロモーター配列と考えられた.それは,大腸菌でも認識される可能性が考えられたため,我々は,70kDa熱ショック蛋白質をコードする遺伝子,およびそのプロモーター配列を含むと考えられるDNA断片を,大腸菌のプラスミッドに挿入し,大腸菌内で発現するかどうかを検討したが,その発現は,検出できなかった.70kDa蛋白質の,歯周疾患との関連を検討するため,70kDa蛋白質を,発現用プラスミッドを用いて,大量に発現させ,その産物をカラムを用いて精製した.現在,患者由来のTリンパ球との反応を,免疫学的手法により検討中である.我々は,A.actinomycetecomcomitans(A.a.)の染色体より,大腸菌の主要な熱ショック蛋白質,Dna K及び,ヒトの70kDa熱ショック蛋白質に相同性のある蛋白質の遺伝子を含む,2696bpのDNAフラグメントをクローニングし,その全塩基配列を決定した.この,DNAフラグメントには,70kDa熱ショック蛋白質以外に,大腸菌の熱ショック蛋白質Dna Jと相同性の高い蛋白質の,アミノ末端領域の塩基配列が見つかった.それは,70kDa蛋白質遺伝子の,カルボ末端側に存在していた.dna J遺伝子の上流には,プロモーターと考えられる塩基配列がなく,この2つの遺伝子は,一つのオペロンとして転写されるものと考えられた.70kDa蛋白質の遺伝子のアミノ末端が,一部,含まれていなかったため,上流領域の遺伝子のクローニングを試み,それをコードする遺伝子断片を含む,約3kbpのDNAフラグメントをクローニングし,その塩基配列を決定した.その結果,A.a.の70kDa蛋白質は,大腸菌のDna Kとアミノ酸で,83%の相同性があることが分かった.また,大腸菌のdna K遺伝子のプロモーター配列と似た配列が,70kDa蛋白質遺伝子上流に存在し,プロモーター配列と考えられた.それは,大腸菌でも認識される可能性が考えられたため,我々は,70kDa熱ショック蛋白質をコードする遺伝子,およびそのプロモーター配列を含むと考えられるDNA断片を,大腸菌のプラスミッドに挿入し,大腸菌内で発現するかどうかを検討したが,その発現は,検出できなかった.70kDa蛋白質の,歯周疾患との関連を検討するため,70kDa蛋白質を,発現用プラスミッドを用いて,大量に発現させ,その産物をカラムを用いて精製した.現在,患者由来のTリンパ球との反応を,免疫学的手法により検討中である.
温度可変メスバウアー分光用電子スペクトロメーターを用いた表面スピン波の研究

本研究の目的は、温度可変内部転換電子メスバウアー分光用スペクトロメーターを用いて、ウスタイト(【F_(e1-x)】O)、マグネタイト(【F_(e3)】【O_4】)の鉄酸化物や弗化鉄(Fe【F_2】)の単結晶薄膜を作製し、表面磁化とバルク磁化の温度依存性の違いを内部磁場の測定から明確にして表面スピン波の研究を行うことであった。鉄酸化物薄膜をサファイア基板上に作製し、その作製状態をスペクトロメーターよりもエネルギー分解能は悪いが高感度である内部転換電子メスバウアー分光用比例計数管で調べた。これにより、酸素分圧を調節できる、【CO_2】、【H_2】の混合系を接続した電気炉を使用した場合、酸素分圧を【10^(-16.5)】atmにして、6.5hr酸化させると【F_(e1-x)】Oが作製されることが判明した。しかし、この場合でも【F_(e1-x)】O単独の試料は得られず、常に【F_(e3)】【O_4】【F_(e1-x)】O及びα-Feから成りたっている。この鉄酸化薄膜について、温度可変内部転換電子メスバウアー分光用スペクトロメーターを用いて、エネルギー及び温度を変えながら、そのメスバウアースペクトルを測定した。購入できたメスバウアー線源が弱く、まだ統計が足りないので解析上問題点が多々残っているデーターしか得られなかったが、これらのスペクトルから次の点が明らかになった。1)試料は表面から奥へ順に【F_(e3)】【O_4】,【F_(e1-x)】O,α-【F_e】の三層構造よりできている。2)【F_(e1-x)】Oの転移点は、178Kから206Kの間にあること及び156K以下ではほとんど【F_(e3)】【O_4】とスペクトルが重なってしまうこと。3)7.3keVの表面部分では78Kにおいて【F_(e3)】【O_4】の内部磁場の大きい部分が見えている。今後は、【F_(e3)】【O_4】について、強い線源を用いて統計のよいデータを取り、表面での内部磁場の大きくなる部分を詳細に調べた後、改めて【F_(e1-x)】Oを別途作製し、測定を試みようと考えている。
化学反応性および電子構造理論から見た新規な複素環芳香族陽イオンの特徴

2-アルコキシ-2H-アゼピンの脱メトキシ化によりアゼピニウムイオンを得ることがわかった。電子構造理論にもとづくB3LYP/6-31G*計算では6?電子系芳香族陽イオンであることが示唆され,溶液中でのNMRスペクトルもそれを支持した。さらに,結晶単離を試みたが現時点では単離に至っていない。2H-アゼピン誘導体の前駆体となる3H-アゼピンを与えるフェニルナイトレンの分子内環拡大反応の機構を明らかにした。2H-アゼピン類の合成シクロヘプタトリエンと臭素との反応でトロピリウムが生成するが,3H-アゼピン誘導体と臭素の反応では同様な反応は起こらないことを明らかκした。反応混合物をメタノールで処理すると,50%程度の収率で2-メトキシ-2H-アゼピン誘導体を得る。この反応を詳細に検討したところ,3H-アゼピンは臭素と位置選択的な1,4-付加反応をし,脱HBrにより2-ブロモ-2H-アゼピンを与えることがわかった。炭化水素の場合にはこのようなプロミドがイオン種として単離されるにもかかわらず,アゼピンにおいては共有結合性化合物として存在しアゼピニウムの寄与が皆無であるという興味深い結果となった。求電子試薬としてNBSを用いると1,4-付加体が定量的に生成し,2H-アゼピン誘導体を定量的に得ることがわかったので種々の2H-アゼピン誘導体の合成を行った。ここで見出された,NBSの共役ポリエン系への求電子的1,4-付加は新規反応である。NBSは主としてラジカル的臭素化試薬として広く用いられているが,NBSの新しい反応として興味深い。この合成過程を拡張し種々の置換基を持った2H-アゼピン誘導体を合成し,アザトロピリウムイオンに導いた。またアザトロピリウムイオンの電子構造を明らかにするため,非経験的分子軌道計算を行い,分子構造および共鳴エネルギーに関する知見を得た。2-アルコキシ-2H-アゼピンと四塩化チタン(ルイス酸)との反応で得られる七員環カルボカチオンは非経験的分子軌道計算,核磁気共鳴法による実測データを検討したところ,陽電価が非局在化した6π電子系芳香族陽イオンであることがわかった。このような化学種はこれまでは炭化水素であるシクロヘプタトリエンから導かれるトロピリウム陽イオンに限られており,七員環構成原子は全てが炭素原子であることから極めて効率的に非局在化が起こっているものであった。本研究におけるアザトロピリウム陽イオンは複素環骨格を有し,非局在化型陽イオンとはいえ,電気陰性度の大きい異節原子である窒素原子の存在が電子構造および反応性にあたえる影響は興味ふかい。そのため,X線結晶構造解析によりイオンの構造を確認すべく結晶誘導体の合成を試みた。現時点で得られている結果はクロロホルムあるいはジクロロメタン溶液としてアゼピニウムイオンが得られており,対イオンは[Ti(OMe)Cl_4]^-であると考えられる。さらに結晶性の良い対イオンをもつアゼピニウムイオンの合成を検討しているが未だ結晶化に成功していない。さらに検討を続ける。一方,反応性に関しては,水溶液中で2-メトキシ-2H-アゼピンがS_N1型反応を起こしヒドロキシ体となり,開環加水分解反応によりペンタジエン酸誘導体を与えるという新規反応を見出した。この反応は2位メトキシ基の求核置換反応の様相を呈するが,本非局在化陽イオン種の特徴を示す反応結果と考える。一方,炭化水素七員環陽イオンであるトロピリウムは,環構成原子は全てが炭素原子であることから極めて効率的に非局在化が起こっており,炭素陽イオンであるにもかかわらず,水溶液中ですら安定に存在することが分かっている。本研究における含窒素七員環陽イオンであるアザトロピリウムは,非局在化型陽イオンとはいえ,電気陰性度の大きい異節原子である窒素原子の存在が電子構造および反応性にあたえる影響は興味ふかい。このイオンをpH3程度の緩衝溶液中で生成したところ,水和に引き続く開環加水分解が起こり,5-ホルミル-ベンタジェン酸誘導体を効率よく生成することが分かった。このことは,アザトロピリウムは電気陰性度の大きい環内窒素原子により,π電子の非局在化が阻害され,共鳴安定化の程度が炭化水素類縁イオンにくらべて渡少していると推定される。フェニルナイトレンからアゼピン環が生成する過程において,生成機構に関する新規な知見を得た。

フェニルナイトレンが分子内挿入反応し双環性ベンゾアジリンとなり,開環してデヒドロアゼピンを生成したのち求核性溶媒に捕捉されてアゼピン誘導体を与えるという反応経路が推定されている。本研究において,0-アルキルフェニルナイトレンを出発物として用いたところ,デヒドロアゼピンが求核性溶媒をトラップして最終生成物に至る。また,生成物分布の温度依存性から,フェニルナイトレン,ベンゾアジリン,デヒドロアゼピン環に平衡が存在し高温では熱力学支配,低温では速度論支配の異なる生成物を与えることを実験的に証明した。
鍼灸効果の科学的立証に関する日中大学間協力研究

本研究は我国と中国鍼灸高等教育機関(関西鍼灸短期大学・上海中医薬大学)の鍼灸教育研究者が互いに協力し「鍼灸効果の科学的立証に関する」共同研究を進め両国の鍼灸研究に関する実験の方法論や概念の違いを明かにし、その成果を我国鍼灸学研究に反映させ、鍼灸医学の国際化に資する事を目標に平成46年の3カ年プロジェクト実施されてきたものである。共同研究に取り組む上海中医薬大学は北京中医薬大学と並んで大学院博士課程を持つ中国鍼灸の中枢に位置し、WHO国際鍼灸研究センターとして広く海外からの留学生を受け入れ世界の鍼灸研究でも中心的役割を担っている。本学とは1985年に姉妹校締結を行い以来、本研究組織の中国側研究分担者の趙教授と交流を持ってきた。中国古来の伝承医療である鍼灸は近年、世界的規模で身近な医療として普及し、欧米社会にも愛好者が増加している。しかしながら、それら鍼灸作用機序に関する科学的根拠となると西洋医学のそれらに比べ、不明瞭な点が多く、実験データーに乏しい点否めない。この様な点に鑑みWHOでは「鍼灸の科学化」、即ち西洋医学的評価に取り組んでいる。本研究課題でも両大学の第一線の研究者が年2回それぞれの大学を訪れ、各1回ずつ班会議を持ち、豊富な臨床例数を有うする上海中医薬大学研究分担者と本学の西洋医学的教育を受けた研究者が一同に会し研究の方法論や概念の違いについて話し会いながら、両大学それぞれの立場で実験的研究に取り組み、3カ年、計6回の班会議にて互いに研究成果の評価を行う事ができた事は、これからの鍼灸教育研究に有益な成果を納める事ができた。これら一連の班会議にて痛感した事は、現在、中国鍼灸医学は中西結合(中国伝統医療と西洋医学のドッキング)を旗印に推進されているけれども、中国の西洋医学研究のレベルは、我国や欧米諸国のそれらに比べ、研究者の質、研究質材とも乏しい事等から極めて低い。従って、中国で鍼灸効果の科学的立証を具現化するには我国や欧米諸国の進んだ研究方法論に基ずく協力研究が極めて大切である。また、反対に鍼灸医学を西洋医学の研究者が理解するには中国古来の東洋思想や、その豊富な臨床例数を無視しては行い得ない事が解った。第1回班会議(上海中医薬大学、1992年10月31日11月4日)は本学研究代表者(木村)、研究分担者(三国、戸田)、研究協力者(黒岩)が訪中し、それぞれ「鍼灸効果に関する実験医学的研究-木村;東洋医学療法に関する内科学的評価;生薬に関する東洋医学的評価-戸田;硬結に関する実験医学的解析-黒岩」を口演発表し、上海中医薬大学側研究分担者は「鍼灸治療の抗老化作用-趙;糖尿病性白内障の鍼灸治療効果-張」を発表、それら研究の方法論や解釈の概念の相違などを協議した。第2回班会議(関西鍼灸短期大学、1993年2月27日3月3日)は同組織メンバーで実施し、中国側研究分担者が「経穴・経絡に関する中医薬的解析-趙;精神病患者に対する鍼灸治療効果-張」口演発表し、研究組織で討議した。同班会議では本学附属鍼灸治療所で鍼治療手技の類似点や違いについても実際の場で検討する事ができた。第3回班会議(上海中医薬大学、1993年10月9日10月22日)では本学鍼灸学担当教授を研究分担者に加え「サーモグラフィーによる鍼灸効果の評価-藤川;鍼灸効果の神経生理学的検索、特に筋電図に現れるユラギ現象について-上田;生薬ヨモギの抗酸化作用-戸田」などの同年度の日本東洋医学会や全日本鍼灸学会に報告した演題を口演発表し、上海中医薬大学側は「中薬・環精煎に関する研究」を報告互いに意見交換した。第4回班会議(関西鍼灸短期大学、1994年3月20日3月24日)は上海中医薬大学側研究分担者が来学「中薬・調心方の抗老化作用-趙;白内障ラットに対する鍼灸治療効果-張」発表し、本学研究組織構成者は「筋不動化時にみる脊髄神経細胞でのc-fos核内癌遺伝子発現-木村」を発表し、学外講師などを交え研究討議会を持ち意見交換を行った。第5回班会議(上海中医薬大学、1994年11月8日11月11日)では本年度研究組織構成者が一同に会し、これまでの鍼灸作用機序解明を対象とした実験医学的研究を発表相互意見交換を行った。第6回班会議(関西鍼灸短期大学、1995年3月5日3月8日)は最終班会議として上海中医薬大学側研究分担者の趙・張・劉の3教授を迎え本学研究組織構成メンバーとこれまでの共同研究の成果をまとめ、互いの今後の共同研究の基本方針について検討し、一部は英文論文形式でまとめた。

本学とは1985年に姉妹校締結を行い以来、本研究組織の中国側研究分担者の趙教授と交流を持ってきた。中国古来の伝承医療である鍼灸は近年、世界的規模で身近な医療として普及し、欧米社会にも愛好者が増加している。しかしながら、それら鍼灸作用機序に関する科学的根拠となると西洋医学のそれらに比べ、不明瞭な点が多く、実験データーに乏しい点否めない。この様な点に鑑みWHOでは「鍼灸の科学化」、即ち西洋医学的評価に取り組んでいる。本研究課題でも両大学の第一線の研究者が年2回それぞれの大学を訪れ、各1回ずつ班会議を持ち、豊富な臨床例数を有うする上海中医薬大学研究分担者と本学の西洋医学的教育を受けた研究者が一同に会し研究の方法論や概念の違いについて話し会いながら、両大学それぞれの立場で実験的研究に取り組み、3カ年、計6回の班会議にて互いに研究成果の評価を行う事ができた事は、これからの鍼灸教育研究に有益な成果を納める事ができた。これら一連の班会議にて痛感した事は、現在、中国鍼灸医学は中西結合(中国伝統医療と西洋医学のドッキング)を旗印に推進されているけれども、中国の西洋医学研究のレベルは、我国や欧米諸国のそれらに比べ、研究者の質、研究質材とも乏しい事等から極めて低い。従って、中国で鍼灸効果の科学的立証を具現化するには我国や欧米諸国の進んだ研究方法論に基ずく協力研究が極めて大切である。また、反対に鍼灸医学を西洋医学の研究者が理解するには中国古来の東洋思想や、その豊富な臨床例数を無視しては行い得ない事が解った。第1回班会議(上海中医薬大学、1992年10月31日11月4日)は本学研究代表者(木村)、研究分担者(三国、戸田)、研究協力者(黒岩)が訪中し、それぞれ「鍼灸効果に関する実験医学的研究-木村;東洋医学療法に関する内科学的評価;生薬に関する東洋医学的評価-戸田;硬結に関する実験医学的解析-黒岩」を口演発表し、上海中医薬大学側研究分担者は「鍼灸治療の抗老化作用-趙;糖尿病性白内障の鍼灸治療効果-張」を発表、それら研究の方法論や解釈の概念の相違などを協議した。第2回班会議(関西鍼灸短期大学、1993年2月27日3月3日)は同組織メンバーで実施し、中国側研究分担者が「経穴・経絡に関する中医薬的解析-趙;精神病患者に対する鍼灸治療効果-張」口演発表し、研究組織で討議した。同班会議では本学附属鍼灸治療所で鍼治療手技の類似点や違いについても実際の場で検討する事ができた。第3回班会議(上海中医薬大学、1993年10月9日10月22日)では本学鍼灸学担当教授を研究分担者に加え「サーモグラフィーによる鍼灸効果の評価-藤川;鍼灸効果の神経生理学的検索、特に筋電図に現れるユラギ現象について-上田;生薬ヨモギの抗酸化作用-戸田」などの同年度の日本東洋医学会や全日本鍼灸学会に報告した演題を口演発表し、上海中医薬大学側は「中薬・環精煎に関する研究」を報告互いに意見交換した。第4回班会議(関西鍼灸短期大学、1994年3月20日3月24日)は上海中医薬大学側研究分担者が来学「中薬・調心方の抗老化作用-趙;白内障ラットに対する鍼灸治療効果-張」発表し、本学研究組織構成者は「筋不動化時にみる脊髄神経細胞でのc-fos核内癌遺伝子発現-木村」を発表し、学外講師などを交え研究討議会を持ち意見交換を行った。第5回班会議(上海中医薬大学、1994年11月8日11月11日)では本年度研究組織構成者が一同に会し、これまでの鍼灸作用機序解明を対象とした実験医学的研究を発表相互意見交換を行った。第6回班会議(関西鍼灸短期大学、1995年3月5日3月8日)は最終班会議として上海中医薬大学側研究分担者の趙・張・劉の3教授を迎え本学研究組織構成メンバーとこれまでの共同研究の成果をまとめ、互いの今後の共同研究の基本方針について検討し、一部は英文論文形式でまとめた。
核膜孔複合体タンパク質の発現異常による白血病の分子機構の解析

真核細胞の核膜孔を形成する核膜孔複合体(NPC)は、30種類以上のNPCタンパク質で構成されており、核ー細胞質間のRNA、及びタンパク質の輸送を制御している。申請者らは、NPCタンパク質であるRae1、及びNup98が白血病発症に関与することを発見した。NPCタンパク質は重要な転写因子の輸送、及び有糸分裂期での機能を持っているため、申請者はNPCタンパク質が白血病発症の際にエピジェネティックを解析することを目的とした。申請者はNup98/JARID1Aトランスジェニックマウスの樹立に成功した。現在、引き続き白血病発症メカニズムの解析を行っている。真核細胞の核膜に存在する核膜孔複合体(NPC)は、30種類以上のNPCタンパク質で構成されており、核ー細胞質間のRNA、及びタンパク質の物質輸送を制御している。これまでにもいくつかのNPCタンパク質の異常が白血病患者で見つかっていたが、その理由は不明であった。一方、NPCタンパク質は重要な転写因子の輸送、及び、有糸分裂期での機能を持っているため、申請者はNPCタンパク質が白血病発症の際にエピジェネティックに寄与するのではないかと仮説をたてた。そこで、本研究ではNPCタンパク質ーヒストン修飾による発がんのエピジェネティックなメカニズムを解析することを目的とした。当該年度はNPCタンパク質が有糸分裂期に中心体で発現し、中心体恒常性に関与していることを示した(Hashizume et.al., Cell Cycle, 2013)。また、NPCタンパク質RanBP2の発現低下が染色体のミスアライメントとmitotic catastropheを誘導することを明らかにした(Hashizume et.al., Cell Death Dis., 2013)。さらに、NPCタンパク質Rae1にも深く関与していることが知られる核分裂装置タンパク質NuMAが、p53による転写を制御していることを示した(Endo et.al., Cell Dath Dis., 2013)。当該年度は、Nup98/JARID1Aトランスジェニックマウスの樹立に成功し、現在引き続き白血病発症メカニズムの解析を行っている。真核細胞の核膜に存在する核膜孔複合体(NPC)は、30種類以上のNPCタンパク質で構成されており、核ー細胞質間のRNA、及び、タンパク質の物質輸送を制御している。申請者らは最近、NPCタンパク質のRae1、及び、Nup98が白血病発症に関与することを発見した。これまでもいくつかのNPCタンパク質の異常が白血病患者で見つかっていたが、その理由は不明であった。そこで、本研究ではNPCタンパク質-ヒストン修飾による発がんのエピジェネティックなメカニズムを解析することを目的とした。当該年度は、Nup98がgalectin-3の核ー細胞質間輸送に深く関与していることを見出し、発表した(Funasaka et.al.,BBRC,2013)。また、急性骨髄性白血病(AML)細胞中の染色体転座に多くみられるキメラ遺伝子Nup98/JARID1Aを発現するトランスジェニックマウスの作製を試みた。Nup98/JARID1A遺伝子を白血球細胞で特異的に発現させるため、ヒトカセプシンGプロモーターの下流にNup98/JARID1A遺伝子を挿入したトランスジーンを作製した。現在、トランスジーンをマウス受精卵に導入し、トランスジェニックマウスの樹立を行っている。さらに、ヒト白血病細胞株K562へGFP-Nup98、GFP-Nup98/JARID1A、及び、DsRed-Rae1発現プラスミドを導入し、それぞれの安定発現株を樹立した。今後、これら安定発現株を用いて、抗ヒストンH3メチル化抗体で免疫沈降を行い、NPCタンパク質とエピジェネティクス、さらには白血病発症へのメカニズムを解析していく。研究計画に則り、おおむね順調に進展している。研究計画に則り、今年度に予定している実験を進める。1.トランスジェニックマウスの樹立に使用2.ヒト白血病細胞株のGFP-Nup98、GFP-Nup98/JARID1A、及び、DsRed-Rae1安定発現株を用いて、抗ヒストンH3メチル化抗体で免疫沈降を行い、NPCタンパク質とエピジェネティクス、さらには白血病発症へのメカニズムを解析していくため、細胞培養に必要な消耗品、抗体、及び泳動やウェスタンブロットに必要な消耗品に使用予定である。
6族遷移金属化合物を触媒とする開環メタセシス重合における立体制御

配位子として、二置換アセチレンと、O-S-Oの3座で中心金属に配位する2,2′-thiobis(4-me-thyl-6-tert-butylphenoxide)(TBP)を有するタングステン、モリブデン錯体を合成し、ノルボルネンの開環メタセシス重合(ROMP)を検討したところ、分子量が極めて高く、立体制御されたポリノルボルネンが得られた。触媒前駆体となるタングステンジアルキル錯体は、室温でC_s構造からC_1構造への異性化が進行する。さらに加熱するとα-H脱離が起こり重合活性種である金属カルベン種が発生することがNMRによって明らかになった。タングステンジアルキル錯体を触媒前駆体として用いベンゼン溶液中、30°Cで重合を検討したところ、bis(trimethylsilylmethyl)錯体では分子量が2.0×10^6以上と極めて高く、ポリマーの主鎖の二重結合部分のcis-contentが93%のポリノルボルネンが得られた。一方、相当するモリブデン錯体の活性は高く、得られたポリマーの分子量は2.0×10^6とタングステン錯体で得られたポリマーと同程度であるが、立体規則性は有しておらず、シス-トランス混合物であった。また、2,3-ジカルボメトキシノルボルナジエンの重合を検討したところ、タングステン錯体は全く重合活性を示さず、モリブデン錯体でもわずかに重合したのみにとどまった。タングステンジアルキル錯体と1当量のモノマーとの反応を行うとモノオキソ錯体が単離されたことより、この失活の原因はカルボニルのオレフィン化反応が進行したためであることが明らかになった。
厳冬期の耐寒促進剤コンクリートの膨張収縮およびひび割れ予測手法の開発

寒中コンクリート施工では,凝結硬化の初期にコンクリート中で水分が凍結することにより生じる初期凍害と低温による強度発現の遅れが問題となる。そのため,寒中コンクリート(日平均気温4°C以下)の施工にあたっては,打設後のコンクリート強度が5N/mm2となるまでは,コンクリートを凍結させないように初期養生を行うこと,その後の強度発現に対しては保温養生や給熱養生等の対策を行うことが推奨されている。しかし,寒中コンクリート工事の施工条件によっては,急傾斜,狭隘,強風,吹雪など仮囲いの設置が困難なケースもある。このような場合には簡易なシート養生などで初期凍害を防止し,セメントの水和反応を促進させることのできる「耐寒促進剤」が使用されている。しかし,日平均気温が-10°C以下になる地域では,給熱養生のための養生仮囲いや打設後の品質管理が困難な場合における寒中コンクリート工事への対応が現状では困難である。このような場合にコンクリート自体の凝結・硬化を促進するには,耐寒促進剤の添加量を増量する必要がある。一方,耐寒促進剤の添加量が多くなるほど,コンクリートの膨張量および収縮量が増大し,ひび割れの発生進展の懸念が高まると予想されるが,この点に着眼して耐寒促進剤がコンクリートに及ぼす物理・化学的な影響を定量的に評価した研究は極めて少ないのが現状である。平成30年度では、耐寒促進剤を多量添加した場合の強度発現特性と水和生成物との相関関係を明らかにすることを目的として,各種の物理化学的検討を行った。具体的には,耐寒促進剤の添加量をパラメータとした配合を対象に,圧縮強度や水和熱の経時変化などの各物性試験を行うとともに,Ca(NO2)2を主成分とする耐寒促進剤に含有する亜硝酸イオン(NO2ー)および硝酸イオン(NO3ー)とC3Aの反応物質の比較評価と水和生成物の同定を行った。力学的特性のモデルとして圧縮強度については,セメント硬化体中の粒子間連結における最弱点の存在確率に依存する空間的確率分布として空隙率が表されるのに対して,弾性係数は破壊にまで至らない状態での応力をどのように伝達するかという空間構成を表すことと仮定し,強度発現のメカニズムを究明した。一方,耐寒促進剤を多量添加した場合の体積増加率は,初期材齢からエーライト(C3S)とアルミネート(C3A)の反応を促進し,水酸化カルシウムやモノサルフェートの生成量が多くなることから耐寒促進剤の水和反応による毛細管空隙の増加率を考慮し、水和過程の初期領域における空間拡大と水和生成物の密度の差により,徐々に緻密化になることが確認できた。以上は当初評価どおりであることから概ね順調に進展していると考えられる。平成30年度の実験結果に基づき、実構造物レベルにおける耐寒促進剤の多量添加による現象の定量的評価を目的として検討を行う。実部材の非構造物を対象とし,実部材に発生する応力-ひずみを予測するため,初期および中長期長期材齢におけるひび割れ調査などを複合的に行う。一方,モデルの適用を実部材へ拡張し,本研究で提案するモデルによって実部材に発生するひずみを予測を試みる。また、実験およびモデル化を通して得られた結果をもとにFEM解析シミュレーションによって,予測モデルの検証を継続的に実施し,耐寒促進剤の添加量の変化によるコンクリートの挙動に関する定量的・理論的な解明を行う。また,それぞれの段階で目標を設定し,予測モデルについて検証を行い,各レベルで設定された目標を順次満足するように進め,最終的には,耐寒促進剤を多量添加したコンクリートの膨張・収縮およびひび割れ挙動の予測手法を提案する。しかし,北海道をはじめとする積雪寒冷地域,特に内陸部では日平均気温が-10°C以下になる地域では,給熱養生のための養生仮囲いや打設後の品質管理が困難な場合における寒中コンクリート工事への対応が現状では困難である。平成29年度では、耐寒促進剤を多量添加したコンクリートの水和による膨張と収縮機構を明らかにし,その膨張と収縮現象に対する理論的な解明を行った。ミクロレベルでは,耐寒促進剤の添加率の変化によるセメント硬化体の膨張と収縮ひずみを対象として水和反応などの理論的究明を目的として、各種拘束条件下での耐寒促進剤の膨張収縮効果およびひび割れの発生および進展の挙動について定量的評価を行った。

各種拘束条件下での耐寒促進剤の膨張収縮効果およびひび割れの発生および進展の挙動について定量的評価を目的とし,1軸拘束実験により添加量による耐寒促進剤の効果を実験的に検討した。セメントペーストおよびモルタルを対象にし,1軸拘束実験により多様な低温環境条件下で耐寒促進剤の添加量によるコンクリートの初期圧縮応力およびひび割れの挙動について検討を行った。同時に同一断面と露出条件を有する試験体の自由収縮実験および引張強度実験を行い,拘束度および応力弛緩,収縮ひび割れの発生可能性などを複合的に評価した。さらに,セメントペーストおよびモルタルの拘束実験結果に基づき,耐寒促進剤を多量添加したコンクリートを対象として,外気温が-10°C以下での若材齢の発生応力の評価および強度をベースとしたひび割れの発生可能性の検討を行い,コンクリートの変形挙動について評価した。以上は当初評価どおりであることから概ね順調に進展していると考えられる。寒中コンクリート施工では,凝結硬化の初期にコンクリート中で水分が凍結することにより生じる初期凍害と低温による強度発現の遅れが問題となる。そのため,寒中コンクリート(日平均気温4°C以下)の施工にあたっては,打設後のコンクリート強度が5N/mm2となるまでは,コンクリートを凍結させないように初期養生を行うこと,その後の強度発現に対しては保温養生や給熱養生等の対策を行うことが推奨されている。しかし,寒中コンクリート工事の施工条件によっては,急傾斜,狭隘,強風,吹雪など仮囲いの設置が困難なケースもある。このような場合には簡易なシート養生などで初期凍害を防止し,セメントの水和反応を促進させることのできる「耐寒促進剤」が使用されている。しかし,日平均気温が-10°C以下になる地域では,給熱養生のための養生仮囲いや打設後の品質管理が困難な場合における寒中コンクリート工事への対応が現状では困難である。このような場合にコンクリート自体の凝結・硬化を促進するには,耐寒促進剤の添加量を増量する必要がある。一方,耐寒促進剤の添加量が多くなるほど,コンクリートの膨張量および収縮量が増大し,ひび割れの発生進展の懸念が高まると予想されるが,この点に着眼して耐寒促進剤がコンクリートに及ぼす物理・化学的な影響を定量的に評価した研究は極めて少ないのが現状である。平成30年度では、耐寒促進剤を多量添加した場合の強度発現特性と水和生成物との相関関係を明らかにすることを目的として,各種の物理化学的検討を行った。具体的には,耐寒促進剤の添加量をパラメータとした配合を対象に,圧縮強度や水和熱の経時変化などの各物性試験を行うとともに,Ca(NO2)2を主成分とする耐寒促進剤に含有する亜硝酸イオン(NO2ー)および硝酸イオン(NO3ー)とC3Aの反応物質の比較評価と水和生成物の同定を行った。力学的特性のモデルとして圧縮強度については,セメント硬化体中の粒子間連結における最弱点の存在確率に依存する空間的確率分布として空隙率が表されるのに対して,弾性係数は破壊にまで至らない状態での応力をどのように伝達するかという空間構成を表すことと仮定し,強度発現のメカニズムを究明した。
ヘリコバクター・ピロリ感染による実験胃がんとその発症因子の解析

(1)Helicobacterlori感染COX-2/mPGES-1トランスジェニックマスにおけるCOX-2阻割剤etodolacの胃発がん抑制効果慢性胃炎において誘導される骨髄由来幹細胞が胃腫瘍の起源になりうると報告されたが,がん化に如何に関わるか明らかではない。そこで,雄Green mouseの骨髄をX線を照射した雌C57BL/6Jマウスに移植し,HpとMNUを投与した。今後,発生したがんの細胞系譜を検討する予定である。我々は、食塩がHelicobacter pylori(Hp)感染スナネズミ腺胃で、用量依存性に胃がん発生を促進することを明らかにしてきたが、食塩の胃発がん促進作用のメカニズムについては不明な点が多い。今回、食塩の胃表層粘液層(surface mucous gel layer,SMGL)に及ぼす影響をスナネズミモデルで解析した。スナネズミ腺胃において、SMGLはヒトと同様にSMCMとGMCMが重層構造を形成していた。10%食塩食群では、SMCM層が厚くなり、逆に、Hp+通常食群ではGMCM層が厚くなった。Hp+10%食塩食群では、これらの中間型を呈した。スロットブロット法によるSMCM/GMCMの定量的解析では、Hp感染によりGMCMが増加したが、10%食塩食投与によりSMCMの増加とGMCMの減少が見られた。また、Hp感染によりGMCMのmucin core proteinであるMUC6 mRNAが増加したが、SMCMのmucin core proteinであるMUC5AC mRNAでは各群間で差はなかった。以上のスナネズミモデルでの結果より、食塩は、スナネズミ腺胃粘膜において、Hpが好んで生息するSMCMの増加と抗Hp作用があるGMCMの減少を来すことにより、Hp感染とそれによる炎症の増悪と胃発がんを促進する可能性が示唆された。(1)スナネズミ腺胃がんの形質発現に対するピロリ菌の影響(2)ピロリ菌感染によるスナネズミ腺胃の腸上皮化生における腸型内分泌細胞の発現H.pylori感染初期では胃型の上皮が再生し、胃腸混合型から腸単独型の腸上皮化生へと変化する事が観察されているが、スナネズミモデルを用いて内分泌細胞の腸型化が上皮変化と連動しているかどうか検討した。免疫組織化学的検索では、正常幽門腺ではchromogranin A (CgA)、gastrinが陽性で、十二指腸、小腸ではCgAとgastric inhibitory polypeptide (GIP)が陽性で、mRNA発現の程度とも一致した。H.pylori感染後、CgA、gastrin、GIP陽性腺管ともに50週まで増加し、50週以後CgAとgastrin陽性腺管は減少し、GIP陽性腺管が増加した。胃腸混合型腸上皮化生ではgastrinとGIP陽性細胞が共存する腺管が見いだされ、腸上皮化生は幹細胞の腸型化が胃腸混合型を経て完成すると考えられた。
在宅認知症高齢者を介護する家族のソーシャルサポートを活用した支援モデルの構築

【目的】在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポートを測定する尺度を開発する.【デザイン】在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポート尺度の開発のための量的横断的質問紙調査.【方法】調査表を留め置き法で配布した.【結果】314名(82.8%)より回収し探索的因子分析にて[情緒的支援][実用的家事介護支援][適切な情報提供][介護への意味づけへの支援][レスパイトのための調整]の下位概念で構成された.【結論】「在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポート尺度」の信頼性と妥当性が確認され,在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポートの有無とサポート源を測定することが可能となった.本年度の研究の目的は、在宅認知症高齢者を介護する家族のソーシャルサポートを測定する尺度の開発である。研究責任者が質的記述的研究方法により明らかにした「在宅認知症高齢者を介護する家族のソーシャルサポートの具体的な内容」の結果から、在宅認知症高齢者を介護する家族のソーシャルサポートの概念枠組みを明らかにし、質問項目を作成し予備調査を実施した。予備調査は,(1)全国の通所介護事業所に登録されている認知症高齢者を主に介護している家族,(2)病院の物忘れ外来を受診する認知症高齢者を主に介護している家族,(3)国内の家族会を利用している家族を対象に実施した。予備調査実施に関する協力を依頼した総計382名の対象者のうち、127名から回答が得られた(回収率33%)。予備調査の結果から、質問項目を精選した後、(1)全国の通所介護事業所に登録されている認知症高齢者を主に介護している家族,(2)病院の物忘れ外来を受診する認知症高齢者を主に介護している家族,(3)国内の家族会を利用している家族を対象に、本調査を実施した。なお、本調査の在宅認知症高齢者を介護する家族のソーシャルサポートの関連要因としては、著作者から使用許諾を得ることができた、1.QOL(SF-8スタンダード版1ヶ月),2.介護負担感(Zarit介護負担尺度日本語版短縮版(J-ZBI_8))を用い実施した。現在,本調査の質問紙調査結果のデータ入力段階である。【目的】在宅認知症高齢者の家族のソーシャルサポートと介護負担感の関連を明らかにすることを目的とし調査を実施した。【方法】調査対象者は、物忘れ外来、通所介護事業書、家族会のいずれかを利用している在宅で認知症高齢者を主に介護している家族に無記名自記式質問紙を作成し留め置き法による調査を実施した。調査期間は2014年12月から2015年3月であった。【結果】有効回答数は314名であった(回収率82%)。認知症高齢者の疾患名はアルツハイマー病が最も多く48.1%であった。つづいて、脳血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、不明の順に多かった。介護負担感が高値群と低値群において、配偶者のソーシャルサポート得点に有意な差は認められなかったが、家族・友人のソーシャルサポート得点は有意な差が認められた(p<.05)。特に配偶者以外の家族と友人の「情報的サポート」「手段的サポート」はすべての項目で有意な差が認められた。【考察】在宅認知症高齢者家族介護者のソーシャルサポートと介護負担感の関連が明らかとなった。特に配偶者以外の家族と友人の「情報的サポート」「手段的サポート」が在宅認知症高齢者の家族介護者の介護負担感と関連があることが明らかになり、家族支援を行っていく際の示唆をえることができた。平成27年度は、通所介護事業所に通い在宅で認知症高齢者を主に介護している家族にソーシャルサポートに関する調査を実施でき、分析結果をまとめることがでたためおおむね順調に進展している。【研究目的】本研究では,在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポートを測定する尺度を開発し,その信頼性と妥当性を検討することを目的とする.【研究デザイン】在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポート尺度の開発のための量的横断的質問紙調査を実施した.【研究方法】予備研究より導かれた在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポートの構成概念に沿って本調査は,35項目の「在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポート尺度」を留め置き法で384名の対象に配布した.データの分析は,記述統計,探索的因子分析,確認的因子分析の算出,モデル適合度,ソーシャルサポート得点とアウトカムとの関連の確認を行った.【結果】本調査では,314名(82.8%)より回収した.在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポート尺度は,探索的因子分析にて,【情緒的支援】【実用的家事介護支援】【適切な情報提供】【介護への意味づけへの支援】【レスパイトのための調整】の5つの下位概念から構成された.尺度全体のCronbachα係数は,0.880であり信頼性は検証された.確認的因子分析によるモデル適合度において, GFIは0.865,AGFIは0.854,CFIは0.854,RMSEAは0.083でありモデルの適合度は高く構成概念妥当性は確保された.

再テスト法により安定性が,「地域住民用ソーシャルサポート尺度(JMS-SSS)(堤ら, 2000)」と正の相関により並存妥当性が確保された.在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポート尺度と介護負担感とは負の相関が認められ、健康関連QOL尺度の精神的健康とは正の相関が認められた。【結論】「在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポート尺度」の信頼性と妥当性が確認され,在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポートの有無と介護負担感・精神的健康の関連が明らかとなった.【目的】在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポートを測定する尺度を開発する.【デザイン】在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポート尺度の開発のための量的横断的質問紙調査.【方法】調査表を留め置き法で配布した.【結果】314名(82.8%)より回収し探索的因子分析にて[情緒的支援][実用的家事介護支援][適切な情報提供][介護への意味づけへの支援][レスパイトのための調整]の下位概念で構成された.【結論】「在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポート尺度」の信頼性と妥当性が確認され,在宅認知症高齢者家族のソーシャルサポートの有無とサポート源を測定することが可能となった.平成26年度の研究目的であった「在宅認知症高齢者を介護する家族のソーシャルサポートを測定する尺度の開発」は、本調査の実施までは進展しているため、おおむね順調に進展しているといえる。平成27年度は、通所介護事業所に通い在宅で認知症高齢者を主に介護している家族にソーシャルサポートに関する調査を実施できたため、分析結果を学会にて発表すること、認知症になっても暮らしやすいまちづくりのためのモデル構築についてソーシャルサポートの視点から地域包括支援センター専門職との検討を行う予定である。しかし、熊本地震のため、地域包括支援センターとの連携が予定どおりに進まない可能性も高いと考えられる。公衆衛生看護学平成27年度は、1)1全国の認知症対応型通所介護事業所から無作為抽出した事業所に通所する認知症高齢者の家族(300名)2もの忘れ外来に通院する認知症高齢者の家族(30名)3認知症家族会の家族(20名)を対象に,家族介護者のQOL,介護負担感,抑うつ状態を従属変数とし,平成26年度に作成した「認知症高齢者の家族介護者のソーシャルサポート尺度」と以下の測定用具を用いて,在宅認知症高齢者を介護する家族のソーシャルサポートとの関連を明らかにする予定である。1QOL(SF-8スタンダード版1ヶ月)2介護負担感(Zarit介護負担尺度日本語版短縮版(J-ZBI_8))3抑うつ状態(GDS-15(Geriatric Depression Scale))それぞれの従属変数の測定用具は以下の尺度を用いる予定であったが、使用許諾を得られたのは12のみであったため、12のみの使用とし、1のQOL尺度を用いて、家族の健康状態を分析することで対応する。なお,質問紙調査結果は,ノートパソコンへのデータ入力の効率を上げるために,研究補助の協力を得る予定である調査用紙の郵送費用が削減できたことにより次年度使用額が生じた。質問紙調査を個別に郵送で実施する予定だったが、まとめて郵送可能な事業所があったため一部の郵送料を削除できた。次年度は、地域包括支援センター専門職とのグループインタビューの逐語録作成のための費用の一部として使用する計画である。調査用紙のデータ入力のための費用として使用する予定である。
健全な神経発達の為に新生児の血液脳関門がもつ機能性脂質供給ルート解明と投与設計

注意欠陥多動性障害の改善効果を有する機能性脂質の一つ、ドコサヘキサエン酸(DHA)の血液-組織関門を介した輸送については以前不明である。そこで、DHA輸送担体の実体を明らかにするため、神経組織の中でも特にDHA含有量が多い視細胞に着目し、視神経への栄養供給を主に担う外側血液網膜関門(oBRB)におけるDHA供給ルート解明を試みた。ヒトoBRBモデル細胞であるARPE-19細胞への[^<14>C]DHA取り込みを解析した結果、時間依存的に取り込まれ、その初期取り込み速度は17μL/(min・mg protein)であった。さらに、非標識体DHA共存下によってARPE-19細胞への[^<14>C]DHA取り込みは阻害され、そのIC_<50>値は約10-100μMと推定された。さらに、各種脂肪酸による[^<14>C]DHA取り込みに対する阻害効果を検討した結果、リノール酸、アラキドン酸及びエイコサペンタエン酸によって阻害され、オレイン酸によって阻害されなかった。従って、DHAはARPE-19細胞に何らかの脂肪酸選択的な輸送機構を介して取り込まれることが示唆された。また、前年度の研究から光反応性DHAプローブを用いてDHA結合タンパク質を精製可能である事が示唆された。oBRBの実体である網膜色素上皮細胞をサンプルとして、光反応性DHAプローブを用いて回収したタンパク質をMALDI-TOF/MS解析を行った結果、ビタミンA関連タンパク質が各種同定された。今後、同定したタンパク質がDHA輸送機能を有するか、検討を進める予定である。"授業中にじっとしていられない"などの行動異常を示す注意欠陥多動性障害(ADHD)は深刻な社会問題となっている。しかしながら、ADHDの発症メカニズムの解明や予防法の確立は著しく停滞している。ADHDの発症には、脳の発達期に供給されるべき機能性脂質を初めとした、脳内栄養因子の欠乏が原因の一つと考えられており、最近では特にドコサヘキサエン酸(DHA)のADHDに対する改善効果が新たに報告されている。本研究ではADHDに対する改善効果が認められているDHAに着目し、DHAの関門組織を介した供給ルートを明らかにすることを目的とした。この供給ルートを探る上でDHAの輸送に関与する「輸送担体」を同定することは重要であるものの、これまでDHAを輸送するタンパク質について報告はなされていない。そこでDHAを輸送するタンパク質をプロテオミクスによって同定するため、DHAのカルボキシル基に紫外線照射によってDHA結合タンパク質をラベリングするためのジアジリン基とタンパク質精製用のビオチン修飾を施した「光反応性DHAプローブ」を合成した。体内DHA含有量が多い網膜をモデルとし、この光反応性DHAプローブの特異性をstreptoavibin-HRPを用いたwestern blot法にて評価した。ブタ網膜と光反応性DHAプローブをインキュベート後western blotを行った結果、複数のバンドが検出され、それらのバンドの一部は過剰量のDHAによって消失した。よって、作成したDHAプローブはnativeなDHAとしての結合活性を有していることが示され、本プローブを用いることでプロテオミクスのアプローチからDHA輸送担体を同定することが可能であることが示唆された。