hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Dahl食塩感受性ラットの脳室内への高張食塩水持続投与時の腎交感神経活動の変化

我々は食塩感受性高血圧モデルとして知られるDahl食塩感受性(DS)ラットの脳室内へ高張食塩水を投与した時の1)腎交感神経活動(RSNA)の応答、2)飲水行動、さらにアンギオテンシンII(A II)を脳室内へ投与した時の3)飲水行動、4)RSNAの応答をDahl食塩非感受性(DR)ラットと比較した。0.3Mの高張食塩水を側脳室内へ1μl/minで20分間投与した時の心拍数(HR)、平均血圧(MBP)、パーセント変化に換算したRSNAを生食を投与したコントロール群と比較すると、それぞれの群でMBPとΔRSNAにおいて有意な変化がみられた。しかしながら、2群間でのRSNAの抑制度には差がみられなかった。中枢内へ0.3Mの高張食塩水投与後60分間の飲水量を両群間で比較するとDS群が有意に飲水量が少なかった。これは、DSラットがDRラットに比較して、腎臓の排泄能力が低下しているとの報告があることより、体液貯留を抑制するための代償機転の可能性がある。中枢内へ100ngのA II投与後60分間の飲水量を両群間で比較するとDS群が有意に飲水量が少なかった。中枢アンギオテンシン系による心血管反応やRSNA抑制反応を両群で比較すると、昇圧反応に関しては、DSラットがDRラットに比較して有意に大きかった。しかし、RSNAの抑制反応に関しては、両群間で差がみられなかった。飲水が血圧の上昇に左右されるとの報告があることから、DS群でのより大きな昇圧反応のために飲水が減少した可能性は否定できない。逆に、同程度の昇圧反応であったならば、RSNAの抑制度の差が顕在化する可能性があったと考えられた。脳室内に高張食塩水を投与すると、昇圧反応以外に末梢血中へのバゾプレッシン分泌が増加する。また、中枢内にアンギオテンシンIIを投与すると、飲水行動と共に昇圧反応やRSNAの抑制反応がおきる。そこで我々は、覚醒、非拘束下のSprague-Dawley系(SD)ラットを用い、高張食塩水の中枢内投与時のRSNAの抑制に対する、5)末梢のバソプレッシン系、6)中枢内のアンギオテンシン系の関与をみるために、それぞれの拮抗薬を用いて検討した。側脳室内に1μl/minで20分間投与された0.67Mの高張食塩水によるRSNAの抑制反応(-81.5±5.5%)が、バゾプレッシンV_1 an-tagonistであるOPC-21268(大塚製薬、5mg/kg、i、v.)の前投与後に、同様に高張食塩水を投与すると有意に減弱(-55.8±5.7%)した。しかし、V_2 antagonistであるOPC-31260(大塚製薬、1mg/kg、i.v.)前投与後に、同様に高張食塩水を投与してもRSNAの抑制反応は有意に減弱しなかった。これより高張食塩水によるRSNAの抑制反応の少なくとも一部には、末梢のバソプレッシンがV_1レセプターを介して関わっていることが示唆された。さらに、中枢内高張食塩水投与時のRSNAの抑制反応に中枢内のアンギオテンシン系がAT1リセプターを介して関与しているかどうかをそのantagonistであるL-158,809(メルク社、1μg/1μl、i.c.v.)前投与後に、高張食塩水を投与して検討した。しかし、RSNAの抑制反応には有意な変化はみられなかった。短期的な血圧の調節に神経系が関与することはよく知られているが、長期的な調節に関しては異論が多い。我々は食塩負荷に対する交感神経系の応答の差異をみるため、Dahl食塩感受性(Dahl-S)とDahl食塩非感受性(Dahl-R)ラットを用い、普通食飼育、非拘束覚醒下に脳室内に短期的に、高張NaCl液の持続投与を行った際の腎交感神経活動(RSNA)の応答の差異を調べている。両群において、高張NaCl液投与中の一過性のRSNAの抑制と投与終了後のrebound様のRSNAの興奮がみられたが、明らかな差異はなかった。交感神経系を腎交感神経で代用しているという制限はあるものの短期的な実験系では、交感神経系がどの時点で高血圧発症に関連しているのかを判断するのは難しい考えられた。その解決法の一つとして、高張NaCl液をosmotic minipumpを用い長期間投与し、循環動態やRSNAに与える影響を評価する。短期的な高張NaCl液投与で認められたRSNAの抑制が、長期的な高張NaCl液投与下においても永続的であるのか、あるいは、投与濃度や投与量によって抑制から興奮に変化するのか否かを明らかにし、食塩摂取と高血圧発症の因果関係の解明の手だてとするためである。現在、Dahlラットでは若干の手技的な困難さを伴うため、Sprague-Dawleyラットの側脳室内に体外的に微量注入ポンプを用いて、投与食塩水濃度と投与速度を検討中である。0.3Mの高張

食塩水を側脳室内へ1μl/minで20分間投与した時の心拍数(HR)、平均血圧(MBP)、パーセント変化に換算したRSNAを生食を投与したコントロール群と比較すると、それぞれの群でMBPとΔRSNAにおいて有意な変化がみられた。しかしながら、2群間でのRSNAの抑制度には差がみられなかった。中枢内へ0.3Mの高張食塩水投与後60分間の飲水量を両群間で比較するとDS群が有意に飲水量が少なかった。これは、DSラットがDRラットに比較して、腎臓の排泄能力が低下しているとの報告があることより、体液貯留を抑制するための代償機転の可能性がある。中枢内へ100ngのA II投与後60分間の飲水量を両群間で比較するとDS群が有意に飲水量が少なかった。中枢アンギオテンシン系による心血管反応やRSNA抑制反応を両群で比較すると、昇圧反応に関しては、DSラットがDRラットに比較して有意に大きかった。しかし、RSNAの抑制反応に関しては、両群間で差がみられなかった。飲水が血圧の上昇に左右されるとの報告があることから、DS群でのより大きな昇圧反応のために飲水が減少した可能性は否定できない。逆に、同程度の昇圧反応であったならば、RSNAの抑制度の差が顕在化する可能性があったと考えられた。脳室内に高張食塩水を投与すると、昇圧反応以外に末梢血中へのバゾプレッシン分泌が増加する。また、中枢内にアンギオテンシンIIを投与すると、飲水行動と共に昇圧反応やRSNAの抑制反応がおきる。そこで我々は、覚醒、非拘束下のSprague-Dawley系(SD)ラットを用い、高張食塩水の中枢内投与時のRSNAの抑制に対する、5)末梢のバソプレッシン系、6)中枢内のアンギオテンシン系の関与をみるために、それぞれの拮抗薬を用いて検討した。側脳室内に1μl/minで20分間投与された0.67Mの高張食塩水によるRSNAの抑制反応(-81.5±5.5%)が、バゾプレッシンV_1 an-tagonistであるOPC-21268(大塚製薬、5mg/kg、i、v.)の前投与後に、同様に高張食塩水を投与すると有意に減弱(-55.8±5.7%)した。しかし、V_2 antagonistであるOPC-31260(大塚製薬、1mg/kg、i.v.)前投与後に、同様に高張食塩水を投与してもRSNAの抑制反応は有意に減弱しなかった。これより高張食塩水によるRSNAの抑制反応の少なくとも一部には、末梢のバソプレッシンがV_1レセプターを介して関わっていることが示唆された。さらに、中枢内高張食塩水投与時のRSNAの抑制反応に中枢内のアンギオテンシン系がAT1リセプターを介して関与しているかどうかをそのantagonistであるL-158,809(メルク社、1μg/1μl、i.c.v.)前投与後に、高張食塩水を投与して検討した。しかし、RSNAの抑制反応には有意な変化はみられなかった。
生涯学習社会スウェーデンにおける高校教育カリキュラムの教育方法学的検討

本研究の目的は、生涯学習社会を前提として描かれるスウェーデン公教育のグランドデザインの中での高校教育の位置づけと役割を明らかにすることである。本年度は、学校での教育実践、とりわけ教育評価に焦点を当てて研究を進めた。まず、ナショナル・テストの歴史と現在の動向を明らかにし、その変遷に教育方法学研究がどう関わったかを検討した。現在は政治的議論と連動してテストの拡大が図られており、とくに2006年の右派への政権交代以降、テストや成績による評価・管理が強化されている傾向があった。また、ナショナル・テストがない職業教科についてもテスト開発が進められており、それを検討し、その基盤にある理論を明らかにした。そこでは、多様な専門分野に共通する汎用的なコンピテンスが設定されるとともに、国際化の影響を受けて国際資格への対応が広まっていた。とくに、国際化の影響については、成人教育において国際共通枠組みに則った評価・認証が進んでいることに連動して、高校においても同様の評価が行われていた。これらの実情について、ストックホルム近郊の工業高校でインタビューや見学調査を行った。カリキュラムに関しては、これまでの議論や動向を踏まえて、2011年秋に始まった新しい課程分岐と選択制のシステムに関して整理した。進学系と職業系を明確に分けるという改革は大きな動揺をもって受け入れられたが、学校現場では、専門分野の教育が十分にできると肯定的に受け止める専門教科の教師の声もきかれた。一方、学習内容が偏る恐れがあるという声も聞かれた。その他、国際的な資格認定を見据えたカリキュラムの調整が広がっていることが明らかになった。計画通り、今年度は職業教科の評価課題について、そこで図ろうとされている能力や、外国からの影響を明らかにした。とくに、スウェーデンのみではなくヨーロッパや国際的な動向から理解することができた。同時にそれを、実際の学校現場へのインタビューや見学から知ることができた。2011年度のカリキュラム改訂についても、現場教師たちから賛否両論の意見を聞くことができた。現在これらの成果を論文として執筆中である。また、今年度はスウェーデンとの比較として日本の高等学校を見学・調査・アウトリーチ活動を行うことができた。次年度はまず、スウェーデンの現状とその背景を発表することに重点をおく。これまでにフィールド調査で収集した実際の評価活動の事例やインタビューデータを、歴史的・制度的文脈、理論的文脈に位置づけてまとめる。その際、高校と他教育機関との関連を吟味しながら高校の役割を考察していく。また、今までに増して国際的な視野から、スウェーデンの文化的・社会的特質に配慮するとともに、国外からの影響、共通の課題などに目を向ける。日本国内の若者問題を考える視点をもって、スウェーデンの検討を行い、そこから示唆を得ていきたい。そのために、後期中等教育のカリキュラムに存在する、「普通教育/専門教育」、「平等主義/能力主義」、「共通履修/選択履修」といった対立軸が、スウェーデンの総合制高等学校においてはどのような構造で存在しているのかを整理する。本年度は、スウェーデン国内で行われている先行研究を収集し、整理することを中心に行った。とくに、カリキュラム改革の歴史と教育評価に重点をおき、以下のように研究を進めた。(A)教育評価成績や評価についての歴史的展開と議論に関する文献を収集した。数学のナショナルテストを作成しているストックホルム大学のPRIM研究所を訪問し、彼らが基盤とする評価理論の理解を深めると同時に、新たな展開について把握した。学校での評価活動に関しては、実際の学校現場を訪問すると同時に、教員に関わって活動をしているスウェーデンの研究者にインタビュー調査を行った。(B)カリキュラム編成課程分岐と選択制のシステムが出来上がってきた過程で行われた議論や研究を検討した。生徒による履修科目や進路の選択に関する議論については、現在のシステムの背景にある議論を明らかにした。(C)教育目標・教育内容2011年に高校の課程分岐システムや、各教科目の教育目標・内容を定めるカリキュラムが改訂される。これに関する資料を収集した。また、学校現場を訪問し、この改革に関するインタビュー調査を行った。

一方、学習内容が偏る恐れがあるという声も聞かれた。その他、国際的な資格認定を見据えたカリキュラムの調整が広がっていることが明らかになった。計画通り、今年度は職業教科の評価課題について、そこで図ろうとされている能力や、外国からの影響を明らかにした。とくに、スウェーデンのみではなくヨーロッパや国際的な動向から理解することができた。同時にそれを、実際の学校現場へのインタビューや見学から知ることができた。2011年度のカリキュラム改訂についても、現場教師たちから賛否両論の意見を聞くことができた。現在これらの成果を論文として執筆中である。また、今年度はスウェーデンとの比較として日本の高等学校を見学・調査・アウトリーチ活動を行うことができた。次年度はまず、スウェーデンの現状とその背景を発表することに重点をおく。これまでにフィールド調査で収集した実際の評価活動の事例やインタビューデータを、歴史的・制度的文脈、理論的文脈に位置づけてまとめる。その際、高校と他教育機関との関連を吟味しながら高校の役割を考察していく。また、今までに増して国際的な視野から、スウェーデンの文化的・社会的特質に配慮するとともに、国外からの影響、共通の課題などに目を向ける。日本国内の若者問題を考える視点をもって、スウェーデンの検討を行い、そこから示唆を得ていきたい。
プロフェン類の立体選択的皮膚透過挙動に関する研究

S体のみに抗炎症活性が認められているにも関わらず、ラセミ体として広く経皮適用されているプロフェン類の光学異性体の皮膚透過挙動を明らかにすることを目的に、フルルビプロフェン(FP)およびイブプロフェン(IP)のラセミ体水溶液とラット摘出皮膚を用いて透過実験を行った。両薬物共に溶液適用直後のS体の皮膚透過量はR体より高く、その後徐々に透過量が等しくなった。適用濃度が高いほど、適用直後の異性体間の透過量の差は小さく、短時間で等しい透過量に達した。また、透過量が等しくなるのに要する時間はIPよりFPの方が短かった。皮膚の角質層をテープストリッピングすることでこれらの傾向は弱まったものの、立体選択性は維持された。プロフェン類の皮膚透過に立体選択性が存在することが明らかとなったので、さらにその原因について検討した。まず、異性体間の皮膚代謝の差に起因する可能性を考慮して、皮膚ホモジネート中での代謝挙動を肝ホモジネートの場合と比較した。肝ホモジネート中にIPのラセミ体を添加するとR体からS体への一方向性の異性体転換が観察された。しかし、FPには変化が認められず、また皮膚ホモジネートは両薬物に対する代謝活性を示さなかった。次に、異性体の皮膚成分との結合挙動に着目し、透過実験の際の皮膚中総薬物濃度と遊離形薬物濃度を測定した。適用濃度が高く適用時間が長いほど総濃度は高かったが、遊離形薬物分率は低下し、透過過程で皮膚結合が飽和することが確認された。また、S体の解離定数はR体より低く、皮膚に対して高い親和性を示した。これらのことから、プロフェン類の立体選択的皮膚透過挙動の原因は光学異性体間の皮膚結合の差とその飽和に起因することが示唆された。
放射線抵抗性細菌を用いた耐熱性タンパク質生産系の開発

従来法で生産が困難な高度好熱菌のタンパク質を放射線抵抗性細菌内で生産することのできる有用タンパク質生産系を開発するために、遺伝子発現に有用なプロモーター配列を探索し、発現プラスミドを作製した後、遺伝子発現解析を行った。その結果、従来の大腸菌を宿主とした発現系では、高度好熱菌タンパク質が不溶化するが、放射線抵抗性細菌を宿主として用いることで、不溶化することなくタンパク質の生産を確認することができた。従来法で生産が困難な高度好熱菌のタンパク質を放射線抵抗性細菌内で大量に生産することのできる有用タンパク質生産系開発のために、放射線抵抗性細菌内で高次に機能するプロモーター配列を探索した。具体的には、放射線抵抗性細菌内で安定的に複製可能な放射線抵抗性細菌/大腸菌シャトルベクターpZT29とプロモーター配列を含まないホタル由来ルシフェラーゼ遺伝子(luc+)を組み合わせて構築したプロモーター活性解析用プラスミド(pZSL1)に、プロモーター配列をルシフェラーゼ遺伝子の開始コドンの上流に挿入することで、ルシフェラーゼ遺伝子の発現活性を指標にタンパク質生産に有用なプロモーター配列を探索した。その結果、放射線抵抗性細菌のトランスクリプトーム解析及びゲノム情報を基に設計した7種のプロモーター配列から、放射線抵抗性細菌内で高次に遺伝子発現を誘導することのできる2種のプロモーター配列(groES_P ; 136 bp、及びEF-Tu_P ; 204 bp)を同定した。さらに、groES_P配列の最小領域を同定するために、RNAポリメラーゼ結合領域、転写開始点及びリボソーム結合領域を除く部位を欠失させた変異プロモーター配列(groES_P75 ; 75 bp)を作製し、プロモーター活性の解析を試みたが、プロモーター活性の低下が見られ、欠失させた領域がプロモーター活性に重要な領域であることが明らかになった。今回構築したプロモーター活性解析用プラスミド及び同定したプロモーター配列をベースに、ルシフェラーゼ遺伝子を高度好熱菌の遺伝子にすげ替えることで、高発現プラスミドを構築することが可能であるので、これを用いて高度好熱菌recJ及びruvA遺伝子の発現系の構築に着手した。平成21年度は、この発現系を用いて、効率的な有用タンパク質生産を検証する予定である。放射線抵抗性細菌を宿主として、従来法で生産が困難な高度好熱菌のタンパク質を生産することのできる有用タンパク質生産系開発のため、発現プラスミドを作製し発現解析を行った。まず、独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンターより提供を受けた高度好熱菌の遺伝子群からrecJ遺伝子を単離し、放射性抵抗性細菌/大腸菌シャトルベクターをべ一スとして構築したタンパク質生産用プラスミド(pgroP_His ; 4.5kbおよびpgeoFF_His ; 4.6kb)のプロモーター配列の下流に、目的遺伝子を挿入することで発現プラスミド(pgroP_His_ttrecJ ; 6.1 kbおよびpgeoFF_His_ttrecJ ; 4.6kb)を作製した。次に、この発現プラスミドを放射線抵抗性細菌に導入し、高度好熱菌RecJタンパク質の生産を試みた。その結果、従来の大腸菌を宿主とした発現系では、RecJタンパク質が不溶化するが、放射線抵抗性細菌を宿主として用いることで、不溶化することなくRecJタンパク質の生産を確認することができた。さらに、放射線抵抗性細菌内でのタンパク質生産量を増加させるために、宿主の改変に着手した。内在性プロテアーゼによる目的タンパク質の分解を抑制するために、抗生物質耐性遺伝子挿入法を用いて、放射線抵抗性細菌のATP依存性プロテアーゼをコードするlon遺伝子の破壊株(XDGLN1)を作製した。この遺伝子破壊株を用いて、RecJタンパク質の生産を確認したところ、RecJタンパク質の分解の低減が見られ、宿主としての有用性を明らかにすることができた。今後は、さらなる高次のタンパク質生産に向けて、プロモーター配列の改変および新規探索、あるいは発現誘導条件の検討が課題である。
痛みによる情動生成における側坐核内領域特異的ドパミン神経伝達の生理的役割の解析

本研究では、痛みによる情動変化に対する側坐核内領域特異的ドパミン神経情報伝達の生理的役割を明らかにすることを目的とした検討を行った。痛み刺激負荷後の側坐核内ドパミン遊離は、側坐核Shell吻側領域で引き起こされ、痛み刺激負荷により当該領域の神経細胞が活性化することが確認された。また、条件付け場所嫌悪性試験法を用いた解析により、ドパミントランスポーター欠損マウスにおいては、痛みによる負情動生起が阻害されていることを見出した。さらに、抑うつ状態を併発していると考えられる慢性疼痛モデル動物においては、報酬刺激によるドパミン遊離亢進が抑制されていることを明らかとした。痛みにより引き起こされる不安、嫌悪、抑うつなどの不快情動は、生活の質(QOL: Quality of life)を低下させ、精神疾患・情動障害の引き金ともなるため、情動的側面をも考慮した疼痛治療が求められている。本研究では、痛みによる情動生成における側坐核内領域特異的ドパミン神経伝達の役割を明らかにすることを目的とし、快・不快といった情動の両方向性に深く関与すると考えられる側坐核に着目し、痛みの情動的側面に対する役割について詳細な解析を行う。本年度は、側坐核shellの吻側領域に焦点をあて、痛みによる不快情動生成に与える影響を、条件付け場所嫌悪性試験を用いて検討し、ドパミンD2受容体拮抗薬Raclopride投与により痛みによる不快情動生成が有意に抑制され、ドパミンD1受容体拮抗薬SCH23390投与ではCPAが抑制される傾向を確認した。また、酢酸ライジング試験を用いた検討においては、痛みの感覚的側面に対する影響は見られなかった。現在、免疫組織化学的解析において、側坐核shellの吻側と尾側領域において、痛みにより興奮する神経の分布の相違に関する検討を進めている。また、慢性疼痛下での報酬刺激誘発側坐核内ドパミン遊離変化に関する検討を進め、神経因性疼痛モデルラットにおいては、スクロース水処置によるドパミン遊離増加が抑制されることを明らかとした。本年度は、ドパミントランスポーターノックアウト(DAT-KO)マウスを用い、痛みによる不快情動生成におけるドパミン神経路の役割を、条件付け場所嫌悪性試験を用いて検討し、ホモ型のDAT-KOマウスにおいては、酢酸腹腔内投与による痛み刺激誘発嫌悪反応が消失している傾向を確認すると共に、同マウスにおけるc-fos発現変化を指標とした神経興奮の側坐核内領域特異性の解析を進めている。2015年6月より、現所属である東京都総合医学研究所へ異動し、異動に伴う研究環境のセットアップ、ならびに実験種をラットからマウスへシフトさせるための予備検討などを行ったため、当初予定よりも若干遅れが出ている。一方、異動により新たな遺伝子改変マウスの使用が可能となり、新規性のあるデータを得つつある。本研究では、痛みによる情動生成における側坐核内領域特異的ドパミン神経伝達の役割を明らかにすることを目的とし、快・不快といった情動の両方向性に深く関与すると考えられる側坐核に着目し、痛みの情動的側面に対する役割について検討した。ラットに痛み刺激を負荷すると、側坐核shell吻側領域ではドパミン遊離量が増加するが、尾側領域では遊離量減少傾向が見られることを示し、痛みによる側坐核内ドパミン遊離変化に領域特異性が存在することを示す結果を得た。一方、マウスに対する報酬刺激誘発の神経細胞の活性化を検討したところ、側坐核shell尾側領域で顕著に活性化しているものの、吻側では活性化はあまり見られないことも示され、快・不快の情動の両方向性において、側坐核の機能に領域特異性が見られることが示唆された。また、ドパミントランスポーターノックアウト(DAT-KO)マウスを用い、痛みによる不快情動生成におけるドパミン神経路の役割を、条件付け場所嫌悪性試験を用いて検討し、ホモ型のDAT-KOマウスにおいては、酢酸腹腔内投与による痛み刺激誘発嫌悪反応が消失していることを明らかとした。本研究成果は、痛みや依存症など、快・不快情動生成を伴う疾患のメカニズムにおいて、側坐核内の領域特異的役割が重要である可能性を示している。

また、条件付け場所嫌悪性試験法を用いた解析により、ドパミントランスポーター欠損マウスにおいては、痛みによる負情動生起が阻害されていることを見出した。さらに、抑うつ状態を併発していると考えられる慢性疼痛モデル動物においては、報酬刺激によるドパミン遊離亢進が抑制されていることを明らかとした。行動薬理学的解析は順調に進んでいる。一方、神経逆行性トレーサーを用いた免疫組織化学的検討において3重免疫組織化学的解析の実験系に不具合があり、まずc-fos発現変化を指標とした神経興奮の領域特異性の解析を先に進めているため、全体としては、おおむね順調に進展していると評価した。DAT-KOマウスを用いて、嫌悪情動生成におけるドパミン神経路の役割を明らかにすると共に、それらマウスと神経トレーサーを組み合わせて免疫組織化学的検討を行うことで、痛み刺激負荷時に興奮する神経の側坐核内領域特異性を明らかにしていく。精神薬理学側坐核shellの吻側ならびに尾側領域にそれぞれ逆行性神経トレーサーを投与したラットを用い、調製した側坐核矢状脳切片における免疫組織学的検討を行うことで、痛み刺激負荷時に各領域に対して選択的に興奮して投射している神経路を見出すことを優先して進めていく。年度途中に所属研究機関の変更があり、手続きや実験系の再セットアップなどで一時的に研究のペースが落ち、使用予定であった抗体・動物の購入を次年度に使用するよう計画を変更したため。3月に購入予定であった抗体試薬が在庫切れのため、4月以降まで入荷が遅れてしまったため。中心として使用する動物種をラットからマウスへと変更したため、最終年度前半にマウス用の研究試薬(1次抗体等)を購入、研究に用いる予定である。4月に速やかに該当の抗体試薬を購入し、免疫組織化学的検討を進める。
CO2とCO2資化菌を併用した新規EORの開発-CO2-MEORのフィールド試験

CO_2を石油貯留層に圧入して採油増進を図る技術において、CO_2とともにCO2を資化して増殖する微生物も油層に圧入し、採油増進に対するCO_2と微生物の相乗効果を期待する採油増進技術を目的とした研究を行なった。CO_2存在下において石油の粘度を半減させる微生物を国内の油田から分離し、この微生物を用いた採油増進技術を目的とした培養実験、室内採油増進実験ならびにフィールドスケールのシミュレーション研究の結果、同技術によって取り残し原油の約10%を増進回収可能であることが示された。CO_2を油層に圧入して採油増進を図るCO_2 Enhanced Oil Recovery (CO_2-EOR)においては、油層に圧入されたCO_2の掃攻効率を高めることが重要である。本研究では、CO_2とともに微生物を油層に圧入し、微生物による高浸透率領域の閉塞や石油の低粘度化によりCO_2の掃攻効率を高めてさらなる採油増進を図るCO_2-Microbial EOR (CO2-MEOR)を提案して、その研究を進めている。平成21年度の研究では、油田で採取した油層水をCO_2存在下(CO_2濃度10%および100%)で集積培養し、CO_2資化性もしくはCO_2の存在によって代謝が活性化する微生物のスクリーニングを行なった。その結果、CO_2存在下において石油中の炭素数30超の比較的重質なアルカン成分を選択的に分解して石油の粘度低下をもたらす微生物を分離することに成功した。間微生物を石油を重層した油層水中で培養すると、最高で石油粘度を初期粘度の約半分にまで低減させる機能性を有することを明らかにした。同微生物のCO_2-MER適用性を評価するために、温度、塩濃度ならびに圧力などの油層条件の影響を検討した結果、濃度は最高80°Cまで、塩濃度は最高9%まで、圧力は最高7MPaまでにおいて増殖と石油の粘度低減が認められ、多くの油田に適用できる可能性が示された。さらに、日本、中国、オマーンならびにインドネシァの油田で採取された独層水中の微生物を遺伝子工学的手法を用いて調査した結果、複数の油田から同種の微生物が優勢種として検出され、同微生物が世界中の多くの油層内に棲息していることが示唆された。とりわけ、高温低塩濃度油層からは普遍的にPetrotoga属の微生物が検出され、同微生物を用いたCO_2-MEORの適用にあたって必要な油層条件を明らかにした。本研究ではCO_2とともに微生物を油層内に圧入して採油増進を図るEOR (CO_2-Microbial EOR、CO_2-MEOR)のフィールドテストを目的としている。前年度は油層から産出する油層水から、CO_2が存在する環境下において活発に増殖して石油の一部を嫌気的に分解し、石油の粘度を初期粘度の約半分程度にまで低減させるPetrotoga属の微生物を分離することに成功した。当該年度においては、同微生物をCO_2-MEORに適用することを目的として、とりわけ同EORのフィールドテストを想定している中国・吉林油田の油層内環境(高温、高圧、多孔質内、油層微生物との共存、など)を考慮した各種培養実験を行ない、同微生物の同EORへの適用性を検討した。その結果、同微生物は高温(80°C)、高塩濃度(9%)、高圧(6MPa)においても良好な増殖と石油成分の分解に伴う粘度低減機能を発揮し、吉林油田以外の石油についても同様の粘度低減効果が認められ、吉林油田のみならず多くの油田におけるCO_2-MEORに適用可能であることを明らかにした。また、同微生物による嫌気的石油成分分解のメカニズムについて検討するため、炭素数636の各飽和炭化水素成分やベンゼンやナフタレン等の各芳香族炭化水素成分を唯一の炭素源として加えた培地で同微生物を嫌気培養した結果、同微生物は炭素数30以上の飽和炭化水素についても分解性を示し、比較的重質な石油成分を分解してその粘度を低減させていることを明らかにした。一方、同微生物を用いたCO_2-MEORを実施するのに適した油層の条件について、吉林油田をはじめ、国内外の温度や塩濃度などの油層条件が異なる油田に棲息している微生物について遺伝子工学的手法を用いて調査した結果、とりわけ温度が7080°Cであって塩濃度が1%程度の油田においてPetrotoga属の微生物が比較的優勢種として検出されたことから、吉林油田を含め、同様な条件の油層への適用可能性が高いことを示した。CO_2を油層に圧入して採油増進を図るCO_2 Enhanced Oil Recovery (CO_2-EOR)においては、油層に圧入されたCO_2の掃攻効率を高めることが重要てある。

本研究では、CO_2とともに微生物を油層に圧入し、微生物による高浸透率領域の閉塞や石油の低粘度化によりCO_2の掃攻効率を高めてさらなる採油増進を図るCO_2-Microbial EOR (CO_2-MEOR)を提案して、その研究を実施した。平成23年度の研究ては、過去2年間にわたる本研究によって油田から分離され、その最適な培養条件等を検討してきた、CO_2存在下において石油中の比較的重質なアルカン成分を選択的に分解して石油の粘度低下をもたらすPetrotoga sp.AR80を用いたフィールド試験を想定して、室内コア掃攻実験によるEOR効果の検討と、その数値シミュレーションのための数学モデルの構築とCO_2-MEORシミュレータの開発を行ない、これを用いた数値実験によりAR80を用いたCO_2-MEORの採油増進メカニズムを検討した。また、油層条件や微生物・CO_2の圧入条件を変化させ、CO_2-MEORにおけるAR80の適用可能油層条件や最適な実施条件を検討した。AR80を用いた室内コア掃攻実験によれば、同微生物の油層内への圧入・培養による残留油が分解され粘度が低下し、残留油の約6%が増回収されることが示された。Monodの式を用いたAR80の増殖モデルの数式化や、室内コア掃攻実験結果とのヒストリ・マッチングを経て構築されたCO_2-MEORシミュレータ上で、50m×50m×1mの水平二次元油層の対角ブロックに圧入井と生産井を設けた油層モデルを用いてAR80を用いたCO_2-MEORの数値実験を行ない、その採油増進メカニズムを検討した。水攻法を実施した後の油層に対してAR80とCO_2を1.0 Pore Volum (PV)圧入し、10日間坑井をシィットインして油層内培養を行なった後、後押し水を30PV圧入して増回収を行なった。その結果、AR80の油層内培養により低粘度化した油が後押し水の前面に集積し、これが生産井に到達することによって油が増産されるCO_2-MEORにおける増回収のメカニズムが明らかになった。圧入するCO_2の濃度を変化させて数値実験を行なった結果、AR80による増回収効果を引き出す最適なCO_2圧入量も明らかになった。また、油層温度や塩濃度によってAR80の増殖挙動が異なるため、AR80を用いたCO_2-MEORの適用可能油層条件として、温度5065°C、塩濃度3%以下が最もEOR効果を得られる油層条件であることを明らかにした。以上の結果から、AR80を用いたCO_2-MEORはフィールドレベルでも効果をもたらす可能性が示された。
海馬の広域情報処理機構の解明と脳深部刺激法への応用

本課題の目標は,海馬の神経回路網の解析によって,精神疾患の新たな治療法である脳深部刺激法を導入するための基盤を確立することである.このために,電気痙攣刺激(ECS)を用いてうつ病治療モデルマウスを作成し,うつ病治療機序における海馬の神経回路網の構造と機能の変化について解析を行った.一連の研究から,ECSによって,海馬のミクログリアの突起密度が減少すること,GABA合成酵素であるGAD65とGAD67の発現様式が神経回路特異的に変化することを見出した.また,ECSによって,ミクログリアやアストロサイト,GABAニューロンの空間分布密度は変化しないことを明らかにした.これらの結果は,うつ病の治療機序において,組織学的細胞構築の変化を伴わない海馬の神経回路機能の可塑的な変化が主座にあることを示唆している.本課題の目標は,海馬の神経回路網の解析によって,精神疾患の新たな治療法である脳深部刺激法を導入するための基盤を確立することである.このために,電気痙攣刺激(ECS)を用いてうつ病治療モデルマウスを作成し,うつ病治療機序における海馬の神経回路網の構造と機能の変化について解析を行った.一連の研究から,ECSによって,海馬のミクログリアの突起密度が減少すること,GABA合成酵素であるGAD65とGAD67の発現様式が神経回路特異的に変化することを見出した.また,ECSによって,ミクログリアやアストロサイト,GABAニューロンの空間分布密度は変化しないことを明らかにした.これらの結果は,うつ病の治療機序において,組織学的細胞構築の変化を伴わない海馬の神経回路機能の可塑的な変化が主座にあることを示唆している.1.海馬の広域神経回路網についてのトレーサー実験マウスの海馬、そして海馬の投射路に関係していると想定される領域について、定位脳手術により、トレーサーを注入し、未同定の投射型GABAニューロンによる広域神経回路網の検索を行った。結果の一部はJournal of Neuroscience誌に発表し、現在も解析は継続中である。2.海馬のGLIA細胞の三次元分布様式に関する解析近年の研究により、グリア細胞がニューロンの活動性の制御に大きな役割を果たしていることが明らかになっている。このため、海馬のミクログリアとアストロサイトの分布様式について、三次元点過程解析を行い、新たな知見を得た。また本結果はGLIA誌に発表した。3.本研究課題の目的の一つは、精神疾患の新たな治療法の構造的基盤を確立することである。その一環として、うつ病の治療に現在用いられている電気痙攣療法によるグリア細胞の形態学的変化についての解析を行った。実験にはマウスを使用し、急性刺激(1回の電気痙攣刺激)もしくは慢性刺激(1日1回の電気痙攣刺激、連続8日間)を与えた後に、IbalとSIOOβにより、それぞれミクログリアとアストロサイトを同定し、突起の長さ、細胞体の空間分布密度の定量を行った。これにより、急性刺激では、24時間後にミクログリアの突起の有意な退縮が生じるが、1カ月後には回復すること、慢性刺激では、突起の退縮が1カ月後にも持続することを明らかにした。ミクログリアの空間分布密度は電気痙攣刺激による変化は認められなかった。アストロサイトについては、突起の長さ、空間分布密度のいずれにも変化は認められなかった。これらから、電気痙攣療法によるミクログリアの形態学的変化が海馬のニューロンの活動性を調節し、抗うつ作用に関係している可能性が示唆された。本結果はExperimental Neurology誌に投稿中である。本課題の目標は、海馬の広域神経回路の解析によって,脳深部刺激法など精神疾患の新たな治療法を導入するための基盤を確立することである.本年度は電気痙攣刺激を用いたうつ病治療モデルマウスを使用し,以下の研究を行った. (実験内容)マウスに単回電気痙攣刺激,もしくは反復電気痙攣刺激(1日1回,連続8日間)を与え,それぞれ22時間, 1週間の生存期間の後に灌流固定した.免疫蛍光染色法により,海馬でGABA合成酵素isofbrm(GAD65 and/or GAD67)を発現しているGABAニューロンを同定し,オプティカルダイセクター法を用いて空間分布密度の解析を行った.(結果)1. GABAニューロン全体(GAD65, GAD67のいずれか,もしくは両方を発現しているニューロン)の海馬における空間分布密度は,単回,反復いずれの電気痙攣刺激を与えた場合でも,ほとんど変化しなかった.2. GAD67を発現しているGABAニューロンの密度は,歯状回門で単回刺激と反復刺激によって有意に減少した.3. GAD65を発現しているGABAニューロンの密度は, CA1の網状分子・放線層では反復刺激によって有意に増加した.一方で, CA3の網状分子・放線層では単回刺激によって有意に減少した.4.これらの結果から,海馬のGABAニューロンにおけるGAD65, GAD67の発現率を計算した.反復刺激を与えた場合, CA1の網状分子・放線層や歯状回の分子層におけるGAD65の発現率は有意に増加していた.これらの層は嗅内皮質から海馬への主要な興奮性入力を受けることが知られている.その一方で, GAD67の発現率は単回刺激によって, CA3の網状分子・放線層で有意に減少していた.この層は,青斑核からノルアドレナリン性の入力を受けている.(考察と意義)GADの発現率の増減はGABA

ニューロンの機能を変化させると考えられる.本研究の結果は,海馬の広域神経回路特異的に生じるGABAニューロンの機能的な変化が,うつ病の治療基盤に関与している可能性を示唆している.
グリーン関数の零点が引き起こす非フェルミ液体の性質の解明

銅酸化物高温超伝導体の擬ギャップ状態の特徴の一つは、電子の自己エネルギーが強い波数依存性を持つことである。その結果として、フェルミアークのような異常なスペクトル構造が現れると考えられている。自己エネルギーの強い波数依存性を理論に取り入れるには、一般に大自由度を扱う必要がある。しかし、自由度が増すほど計算は困難になる。そこで、昨年度までのクラスター動的平均場法による計算では最小限の自由度(4サイト)の系から、熱力学極限の結果を上手く抽出するような方法を取っていた。しかし、その近似の妥当性は、それより大きな系の比較対象となる結果がないために不明確であった。今年度は、連続時間量子モンテカルロ法を用いた大規模並列計算により、上記の方法を拡張し16サイトまでの計算を行った。その結果は、4サイトで得られた結果を支持するものであった。また、熱力学極限の結果を推定するのに最も効率の良い方法を、詳細な解析により結論付けた。この結果は、今後のクラスター動的平均場法による電子相関効果の研究の土台となる成果である。更に、16サイトクラスターの結果から、ラマン分光スペクトルや光学伝導度を計算するプログラムの開発を行った。これらは銅酸化物について実験的に詳しく調べられており、擬ギャップ状態において特徴的な振る舞いを示すことが知られている。これらの実験結果は、(これまでの研究で理論との比較対象として注目してきた)角度分解光電子法では捉えられないエネルギー領域のスペクトル構造及び電子グリーン関数の零点構造を反映しており、興味深い。また、現実物質の原子配置から出発して、上記のような理論計算が適用可能な有効模型を導出する試みの一環として、制限乱雑位相近似の適用範囲についての考察及び高エネルギーバンドからの自己エネルギー効果の計算を行った。これは、実験結果と上記の理論計算を比較するうえでの基礎的土台となる。今後クラスター動的平均場法による計算を展開していく上での土台となる結果が得られ、それを論文にまとめられた。また、銅酸化物の様々な物理量を計算するプログラムの開発が終わり、結果が出始めている。2次元ハバード模型の異常金属状態においてラマン分光スペクトルや光学伝導度の計算を行い、銅酸化物の擬ギャップ状態の実験結果と比較する。その比較を通して擬ギャップの形成機構について考察する。クラスター動的平均場+連続時間量子モンテカルロ法を周期アンダーソン模型に拡張し、f電子系の非フェルミ液体状態についての計算を行う。また、制限乱雑位相近似の適用範囲及び、高エネルギーバンドが生む自己エネルギー効果について、系統的な計算を行い、成果を論文にまとめる。銅酸化物高温超伝導体の超伝導機構解明の重要な手掛かりの一つとなりうるのは、超伝導臨界温度よりも高温でみられる異常な金属状態について理解することである。この領域において、様々な実験手法が、低エネルギー一粒子スペクトルの減少を示唆しており、それは擬ギャップと呼ばれている。特に、角度分解光電子分光法は、擬ギャップが強い波数依存性を持つことを明らかにした。この擬ギャップ状態について、これまで様々な仮定に基づく現象論が提案されている。一方で、我々は、銅酸化物の最も単純な微視的模型の一つである2次元ハバード模型を、動的平均場理論をクラスターへ拡張した方法によって、特定の仮定を置かずに数都的に調べている。我々は、以前、モット絶縁体に少量の正孔を導入した領域を絶対零度で調べ、低エネルギーに一粒子グリーン関数Gの極と零点が共存するという結果を得た。本年度は、この領域で、有限温度の量子モンテカルロシミュレーションを行った。その結果、絶対零度で存在する極と零点が有限温度で互いに干渉することで、角度分解光電子分光法で見つかっている様々なスペクトル異常が再現されることが分かった。ここで注目すべきは、絶対零度での擬ギャップ構造が、従来の多くの理論とは根本的に異なるs波の構造をしていることである。つまり、s波擬ギャップ構造が多くの実験結果を再現したことは、擬ギャップの生成機構が従来の現象論とは異なるものであることを強く示唆している。我々は、この成果を下記論文にまとめた。更に、量子モンテカルロ法のサンプル更新アルゴリズムの高速化により、より大きなクラスターサイズを低温まで調べられるようなプログラムコードの開発を行った。

これらは銅酸化物について実験的に詳しく調べられており、擬ギャップ状態において特徴的な振る舞いを示すことが知られている。これらの実験結果は、(これまでの研究で理論との比較対象として注目してきた)角度分解光電子法では捉えられないエネルギー領域のスペクトル構造及び電子グリーン関数の零点構造を反映しており、興味深い。また、現実物質の原子配置から出発して、上記のような理論計算が適用可能な有効模型を導出する試みの一環として、制限乱雑位相近似の適用範囲についての考察及び高エネルギーバンドからの自己エネルギー効果の計算を行った。これは、実験結果と上記の理論計算を比較するうえでの基礎的土台となる。今後クラスター動的平均場法による計算を展開していく上での土台となる結果が得られ、それを論文にまとめられた。また、銅酸化物の様々な物理量を計算するプログラムの開発が終わり、結果が出始めている。2次元ハバード模型の異常金属状態においてラマン分光スペクトルや光学伝導度の計算を行い、銅酸化物の擬ギャップ状態の実験結果と比較する。その比較を通して擬ギャップの形成機構について考察する。クラスター動的平均場+連続時間量子モンテカルロ法を周期アンダーソン模型に拡張し、f電子系の非フェルミ液体状態についての計算を行う。また、制限乱雑位相近似の適用範囲及び、高エネルギーバンドが生む自己エネルギー効果について、系統的な計算を行い、成果を論文にまとめる。
p53欠損白血病細胞株の異常部位の解析とp53導入により誘導される遺伝子の単離

造血器腫瘍の発生における癌抑制遺伝子p53の役割につき、当教室にて樹立した白血病細胞株JOSK-Mを用いて検討した。予備的実験においてJOSK-Mではp53のmRNA発現がみられないことがわかったため、以下のような検討を行った。(1)p53異常部位についての検討:p53mRNA欠損の原因につき検索した。Southern blotでは異常は認められず、DNA再構成が原因とは考えられなかった。次に点突然変異の有無につきPCR-SSCP法を用いて解析した。Exon5から6にかけて増幅した断片で泳動度の異常が認められたため、同部位をSanger法による直接塩基配列決定にかけたところ、exon5/intron5のsplice junctionにおける突然変異(C to T)が検出された。この異常によりSplicingに欠陥が生じ、mRNAの欠損がおこると考えられた。しかし株化以前の新鮮細胞においてはこの異常は認められず、p53の欠損が細胞の株化に何らかの役割を果している可能性が推定された。(2)正常p53遺伝子導入による細胞の形質変化:正常p53遺伝子を発現promoter(hMT-II)と共にplasmid(pcDNA3)に組込んでJOSK-M細胞に導入、正常p53を発現させた時の細胞の増殖動態の変化につき検討する予定で、現在発現vectorの作成を行なっている。
赤血球膜流動性におよぼす高度不飽和脂肪酸含有複合脂質の影響に関する研究

1.ブタ膵臓ホスホリパーゼA_2によるsn-2位にEPA,DHAを含むホスファチジルコリンの合成、LipozymeIM60によるsn-1位にEPAを含むホスファチジルコリンの合成、Streptomyces sp.由来のホスホリパーゼDによるこれらのホスファチジルコリンのホスファチジル基転移を行うことができきた。これによりホスファチジルコリンと同一の脂肪酸残基をもつ高度不飽和脂肪酸含有ホスファチジルエタノールアミンとホスファチジルセリンの合成物を得ることができた。2.コリン結合リン脂質に比べアミノ基結合リン脂質のほうが赤血球により導入されやすいことを明らかにできた。3.TNBSクエンチング法により、赤血球にとり込まれたリン脂質の4050%は膜タンパク質近傍に存在することを示すことができた。4.高度不飽和脂肪酸含有ホスファチジルエタノールアミンはほとんど溶血性を示さないことがわかった。5.水素添加したリン脂質は赤血球膜の流動性を明らかに低下させることを確認できた。6.大豆リン脂質は赤血球膜の流動性を改善できないことがわかった。8.コリン結合リン脂質、アミノ基結合リン脂質はいずれもEPA,DHAをsn-2位に含む混合形態の場合に最も高い赤血球膜流動性改善効果を示すことがわかった。9.同一の脂肪酸残基の場合、コリン結合リン脂質はアミノ基結合リン脂質よりも赤血球膜の流動性改善効果が低いことをみとめた。以上の結果より判断し、高度不飽和脂肪酸含有リン脂質は赤血球膜の流動性を高めて赤血球の変形能を向上させ、ひいては高血圧症や血栓症の予防や治療に役立つことも期待できることが明かとなった。
ヒトT細胞白血病ウイルスのレセプターの同定とcDNAクローニング

ヒトT細胞白血病ウイルスI型(HTLV-1)は、ヒトに感染して成人T細胞白血病(ATL)を引き起こすレトロウイルスの一種である。動物ウイルスの宿主への感染は、宿主細胞膜蛋白質のレセプターとウイルスの構造蛋白質が相互作用し、ウイルスが宿主に取り込まれるところから始まる。本研究では、HTLV-1のレセプター検索を目的として、蛋白質-蛋白質間相互作用を解析した。HTLV-1の被膜蛋白質(Env)はgp46とp20から構成されるが、gp46のAsp-166からGlu-201までの領域(AX)は感染中和抗体のエピトープを含むものである。このAX領域と相互作用する宿主蛋白質のcDNAクローニングを行うために、酵母ツーハイブリッド系を利用した。DNA結合ドメインにAXを融合させたプラスミドを酵母細胞に導入したところ、転写活性化ドメインを持つプラスミドを導入しなくともβ-ガラクトシターゼが誘導された。この結果はAX領域に転写活性化能があることを示している。次に、AX領域のサブ領域A(Asp-166Ser-182)、M(ile-174Pro-190)、X(Pro-185からLeu-200)について同様の活性化能を調べた結果、A領域が蛋白質-蛋白質相互作用能を有することが示されたと同時に、酵母の系でのスクリーニングが困難になったので、次に哺乳類細胞のツーハイブリッドベクターを利用して、同様の実験を行った。転写活性化の指標としてはルシフェラーゼ測定によりアッセイを行った。Jurkat培養細胞株ではAX領域は転写活性化能を示さなかったので、この細胞株を用いてのツーハイブリッド系によりAXと相互作用をする宿主蛋白質(レセプター)のcDNAスクリーニングが可能となった。ヒトT細胞白血病ウイルス(HTLV-I)は成人T細胞白血病(ATL)の原因となるレトロウイルスである。HTLV-Iはin vivoではT細胞の腫瘍化を引き起こすが,in vitroではヒト由来の多くの培養細胞種に感染することが知られている。近縁のHIVではCD4分子や他の補足レセプターが同定され感染機構の研究が進んだが,HTLV-Iのレセプターはまだ同定されていない。本研究において,エンベロープ蛋白質をコードするenv遺伝子の各領域をグルタチオントランスフェラーゼ(GST)融合型の組換え蛋白質として大腸菌で発現させた。ウイルス感染に対する中和抗体のエピトープ配列となるgp46の部分コード領域を含む組換え蛋白質(GST-AX)は可溶性で発現量が多く,これをグルタチオンセファロースカラムでアフィニティ精製した。一方,ヒト培養細胞のJurkat株から膜画分を精製し,蛋白質のビオチン化を行った。グルタチオンセファロース樹脂に固定したGST-AXとビオチン化細胞膜蛋白質を混合し,バッファーで洗浄後SDS-ポリアクリルアミド電気泳動を行い,GST-AXと特異的に結合する蛋白質を検出した。対照として用いたGSTと非特異的に結合する蛋白質を除き比較検討した。その結果,従来検出されていたp35/p31以外に分子量60および40kDa付近に複数の蛋白質が検出された。これらをエンベロープ結合蛋白質の候補と考え,そのcDNAクローニングのためにアミノ酸配列決定のための大スケールでの精製を進めた。また,酵母のツ-ハイブリッド系を利用して,gp46の部分コード領域と結合する蛋白質のcDNAをスクリーニングしている。ヒトT細胞白血病ウイルスI型(HTLV-I)は、ヒトに感染して成人T細胞白血病(ATL)を引き起こすレトロウイルスの一種である。

本研究では、HTLV-Iのレセプター検索を目的として、蛋白質-蛋白質間相互作用を解析した。HTLV-Iの被膜蛋白質(Env)はgp46とp20から構成されるが、gp46のAsp-166Glu-201までの領域(AX)は感染中和抗体のエピトープを含むものである。このAX領域と相互作用する宿主蛋白質のcDNAクローニングを行うために、酵母ツーハイブリッド系を利用した。DNA結合ドメインにAXを融合させたプラスミドを酵母細胞に導入したところ、転写活性化ドメインを持つプラスミドを導入しなくともβ-ガラクトシダーゼが誘導された。この結果はAX領域に転写活性化能があることを示している。次に、AX領域のサブ領域A(Asp-166Ser-182)、M(Ile-174からPro-190)、X(Pro-185からLeu-200)について同様の活性化能を調べた結果、A領域に顕著な活性が認められた。A領域が蛋白質-蛋白質相互作用能を有することが示されたと同時に、酵母の系でのスクリーニングが困難になったので、次に哺乳類細胞のツーハイブリッドベクターを利用して、同様の実験を行った。転写活性化の指標としてはルシフェラーゼ測定によりアッセイを行った。Jurkat培養細胞株ではAX領域は転写活性化能を示さなかったので、この細胞株を用いてのツーハイブリッド系によりAXと相互作用をする宿主蛋白質(レセプター)のcDNAスクリーニングが可能となった。
14世紀における近世哲学の基礎づけ

本研究は、本年度前半は1330年代から始まり、近世思想の基礎となる諸思潮の発展を解明することに努めた。つまり1.北イタリアに存続したラテン・アヴェロエス主義と、2.特にアウグスティヌス隠修士会によって育まれるアウグスティヌス主義という両極の間に、フランシスコ会学派とドミニコ会学派が主流として哲学思想を形成し続けたが、両方ともいくつかの対立し合う枝に分かれた。3.フランシスコ会学派においては(1)ボナヴェントゥラの思想は一般市民の信心の源泉の一つとなったのに対し、(2)スコトゥス学派がその教壇的・論理的性格のゆえ諸大学において論理的分析と合理論的形而上学の基礎を形成したが、(3)それに対しウィリアム・オッカムとその周辺による唯名論的な形而上学批判は科学的思想の先駆となった。4.他方、ドミニコ会学派において、(1)トマス・アクィナスの神学を体系化しようとする正統的と思われたトマス主義は支配的ではあったが、(2)ドイツ・ドミニコ会員によるドイツ神秘思想へと連続する学派では、アルベルドゥス・マグヌスと彼と通して受け継がれたアラブ哲学者の新プラトン主義的知性論を魂の自己認識と神直観へと深めようとする傾向が見られた。本年度後半ではこれらの諸思想に共通な根本的な問題提起やモティーフを探究した。まず合理論的傾向、経験論的傾向、神秘思想的傾向といる主な傾向を区別することができ、またそれらにとって共通な基本的モティーフを、理性の経験的対象に対する分裂において発見することができた。この分裂の結果として主体と客体が分かれ、一方で対象認識に立脚点を置いた経験主義、他方で理性に重点を置いた知性論の流れに分かれたが、両方とも知性論的な意味で方法・言語・論理学・分析・学知つまり正確性を理念として動いたのに対し、合理論と同様に知性の経験的対象に対する独立を強調した神秘思想は、方法と正確性という理念を法規することによって、中世の根本的宗教的モティーフを持ち続けたことを確認した。準備研究からすでに明らかなように、13世紀末から14世紀の最初の30年の間、哲学思想において根本的な転換が起こり、それによる思想の方向づけが後の14・15世紀哲学の発展に決定的な影響を及ぼしたので、平成5年度はこの30年間における盛期スコラ学から後期スコラ学への移行を中心に研究を進めてきた。(1)まず4月から6月までの共同研究で研究課題を分節・分配し、特に1280年代から1310年頃にかけての13世紀に由来する諸学派(ボナヴェントゥラ学派、アルベルトゥス学派、トマス学派、アウグスティヌス学派)の形成と主張点、またスコトゥス哲学の登場を吟味した。(2)7月から11月まで各研究者の個別研究に重点を置き、特に以下の問題の解明に努めた。1.アリストテレス哲学に対する批判における新方法と唯名論的認識・存在観、2.新プラトン主義の新たな流入による神秘思想の思弁的展開、3.新しい自然哲学とスコラ学の形而上学の間の緊張による自然観の分裂と自然学的方法の基礎づけ、4.スコラ的学問論をめぐる論争と初期ルネサンスによる古典文献の研究との関係、5.知性論の変遷と、認識論の経験論へ、また超越論哲学への分割。(3)12月から3月まで集中した共同研究を通して14世紀の最初の30年間の哲学的発展の全貌を特に認識論と存在論の相互影響関係という観点から検討し、次年度に向かってその発展の問題点を明確化した。