hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
微細流路内のO/Wマイクロエマルションの熱流動特性の解明

試料には,分散相としてシリコンオイル,連続相として水を用いた.その結果,微細流路内の流入させた際の見かけの粘度は小さくなることがわかった.これらの傾向は,分散相であるシリコンオイルの割合が増えるほど,また流路高さが小さくなるほど顕著となることがわかった.これは,流路に対して,分散相の大きさが相対的に大きくなることにより,流動特性が変化したものと考えられる.さらに,平成27年度は,幅が10mm程度,高さが1mm以下の流路を持った,熱伝達測定用の装置を作成し,伝熱実験を行った.その結果,微細流路内のエマルションは,単相流と比較して,1.5倍程度の熱伝達係数が向上する傾向が見られた.また,流動特性と同様,流路幅に対する油の粒子の相対的な大きさが熱伝達挙動に大きな影響を及ぼすことを明らかとした.水と油のように混じり合わない2種類の液体の一方が,もう一方の液体中に分散しているエマルションを対象に,微細な流路内においてエマルションの組成などと関連づけて伝熱特性を把握するを試みた.直径が7.5mmの円管と,隙間厚さが1mm以下のマイクロチャネル内に様々な組成で生成されたエマルションを流動させ,熱伝達特性の把握を行った.その結果,エマルションの熱伝達特性は,層流域において理論値より高い傾向があり,油の動粘度が高く,油の含有率が高い場合により高くなることがわかった.さらに,マイクロチャネル内の伝熱実験からは,流れに対する粒子の相対的な大きさを用いることによって,伝熱特性を整理することが出来た.平成26年度は,エマルションの流動特性を把握することを目的とした.高さが1mm以下である矩形のマイクロチャネルを作成し,そこへ機械的撹拌により生成したO/Wエマルションを流入させることにより,圧力損失を測定した.これらの検討を踏まえて,平成27年度には,同じ矩形流路を用いて熱伝達係数の測定を行い,流動特性と合わせて,マイクロチャネル内でのエマルションの流動・熱伝達挙動についてその特性の把握を実施する予定である.特に27年度は,本研究の最終年度であり,平成25年度からの総括も実施する予定である.以上のように,平成27年度での総括に向けて,エマルションの安定性,エマルションの流動特性までの把握を概ね完了しており,最終年度の熱伝達特性の把握を残すのみであり,おおよそ計画通りに実施されており,概ね順調に進展しているものと判断している.熱工学平成26年度でのエマルションの流動特性の結果を踏まえて,エマルションを微細な配管内に流入させた場合の伝熱特性について実験的に検討を行う.実験装置は,幅が10mm程度,高さが1mm以下の流路を持った,熱伝達測定用の装置を作成する.測定区間では,板状の銅製伝熱面をヒーターで加熱し,伝熱面の表面温度を測定することにより,熱伝達係数の算出を行う.この際,エマルションの見かけの粘性係数,熱伝導率などの関係から,単相流の場合と比較を行い,エマルションの伝熱挙動について比較検討を行う.また,エマルションの組成や,分散相の大きさなどを変更することにより,エマルションの性状を変化させて,これらの影響についても検討を行う予定である.また,27年度は本研究の最終年度であり,これまでの検討結果を総括することにより,エマルションの微細流路内での,流動・伝熱挙動についてその特性の整理を行う.平成25年度は,エマルションの安定性や粒子径分布などの基本的な特性を把握することを目的とした.各生成方法や各オイルの割合に対して,安定性の評価および粒子径の分布などを把握することができた.
グラフェン高Q高周波空洞の原理実証

銅よりも大きな電子移動度,高い熱伝導率,高い表面強度といった優れた特徴を持つグラフェンに注目し、粒子加速器用高周波空洞の表面材料としての適用について研究をおこなった。高周波空洞成膜用の熱CVD炉を製作し、超精密旋盤で表面を加工した無酸素銅空洞の表面に熱CVD法を用いてグラフェンを成膜することにより、グラフェンの高周波空洞の製作を試みた。無酸素銅薄膜上にグラフェンを成膜できることが確認され、同じプロセス条件で無酸素銅空洞上へのグラフェンの熱CVDによる成膜を試みた。空洞の銅表面に炭素膜が成膜されたことは確認できたが、ラマン分光ではグラフェンの成膜を確認することはできなかった。この研究ではグラフェンの高い電気伝導性を利用した高周波空洞を製作し、高周波特性を評価することを最終的な目標としている。そこでグラフェンを空洞表面に製膜する方法を検討し、銅製空洞の内面にグラフェン膜を製膜するための製膜装置の設計を行った。製膜方式は空洞の銅が触媒として働きながらグラフェンが銅表面上に成長することを利用する熱CVD方式を選択した。プラズマCVDと比較すると熱CVD方式では製膜がより高温が必要で、1000°Cの高温にならないと、グラフェンは銅基盤上に製膜しない。それにもかかわらず熱CVDを選んだ理由は,熱CVDの方がプラズマCVDよりも現在のところ膜質が優れているからである。今回設計した製膜装置で直径約100mm、長さ250mmの円筒形状の空洞の内面にグラフェンを製膜できる。このくらいの大きさがあれば加速器の高周波空洞の製膜に十分使用できる。今年度はこの製膜装置のうち電気炉とヒーター制御装置を製作した。ヒーターはカンタルヒーターを用いた熱管状炉で大きさが外直径350mm、長さ350mmで、グラフェンの製膜が可能となる1100°Cの高温まで加熱可能である。ヒータの温度制御はグラフェンの良好な膜質形成に重要で、製膜実験の重要なポイントの1つである。サイリスタ位相制御方式による温度制御によりヒーターを±1°Cの精度で温度をプログラム制御することができる。またグラフェン製膜の銅基板材料についても調査、検討を進めた。この研究においてはグラフェンの高い電気伝導度を利用した高周波空洞を製作し,高周波特性を評価することを最終目的としている。これを実現するために銅表面上を約1000°Cまで加熱し,水素およびメタンガスを流すことにより銅表面上にグラフェンを製膜する熱CVD方式による製膜を計画している。平成26年度は平成25年度に設計した熱CVD炉のうち未完成であった,ガス導入装置,石英管,試料導入口等を製作した。ガスについては熱CVDで使用する水素(7N),メタン(5N),アルゴン(6N)の3種類の高純度ガスを準備した。ガスボンベから石英管までのガス配管を整備し,配管中にはガス流量を精密制御できるマスフローコントローラーを設置した。石英管は内径112mm,長さ600mmとし,円筒型の空洞にグラフェンを製膜できることが特徴である。設計上の製膜試料の最大サイズは円筒形が外径100mm,長さ200mm,角板では100mmx200mmである。真空排気系としてロータリーポンプおよびターボ分子ポンプを準備した。また低真空から高真空まで広いレンジで真空度を測定可能なクリスタルコールドカソード真空計を導入した。さらに可燃ガスの安全対策として必要な水素ガスおよびメタンガス用に対応するガス漏れ検知器等を整備した。熱CVDの製膜試験のために高品質の銅薄膜を調査し,1社からは100mmx100mm厚さ35μmの圧延薄膜,別の1社からはA4サイズの無酸素銅薄膜を2種類(通常品および高温で結晶方位が揃いやすいもの)を入手した。装置のくみ上げおよび電気配線が完了し,薄膜上にグラフェンを製膜する実験が開始できる準備が整った。本研究においてはグラフェンの高い電気伝導度を利用した高周波空洞を製作し、その高周波特性を評価することを最終目的としている。これを実現するために銅表面上を約1000°Cまで加熱し、水素及びメタンガスを流すことにより銅表面上にグラフェンを成膜する熱CVD方式を用いたグラフェン空洞の製作を計画している。平成27年度はCVD装置で真空排気系の改良を行い、CVD装置の真空試験を行った。CDVの真空度はスクロールポンプで引いた場合6.0x10-1Paに到達し、成膜に必要な真空度が得られることを確認した。次に高周波空洞の試作に関しては、グラフェン空洞のQ値を測定する最適な空洞として、TE011モードの円筒型空洞共振器を選び、3つの周波数(9.2GHz,12.2GHz,18.3GHz)の無酸素銅空洞試作を行った。TE011モードを選んだ理由は、円周に平行な電場(電場が同心円形)及び動径方向の磁場(磁場が放射形)が発生し、円筒と両側の端版間で電流が流れないため、円筒と端板の間の接触部での電気的な損失を無視することができ、このことから接触部の電気的な抵抗の大小により空洞のQ値が変化せず、材質によるQ値の違いを比較するのに有利であるからである。

TE011モードの問題点としては共振周波数がTM111と一致し縮退していることで、縮退した状態ではQ値の測定において、TE011とTM111が混ざった状態で測定することになり、正確な評価が難しい。この縮退を分離するために、試作空洞においては縮退分離のための溝を円筒と端板の間に設けた。さらに空洞の熱CVD成膜においては、1000度の高温になるため、石英菅内で無酸素銅空洞を支持するためのモリブデン製の成膜用ジグを製作した。このジグは円筒空洞の両端に結合され、ヒーターからの熱を等方的に受けられるように円筒空洞を石英菅の中央に固定するのに用いられる。27年度までにおいては、熱CDV装置の製作、真空システムの整備、無酸素銅高周波空洞共振器の製作が完了した。しかしグラフェンの製膜試験及び空洞共振器へのクラフェンの製膜、グラフェン空洞の高周波特性の評価が完了していない。27年度より熱CVD装置の試験を開始したが、準備した真空装置の能力が不十分であったためその改修に時間を要したのが主な理由である。実施した真空システムの改修は、1.スクロールポンプのメンテナンス、2.ポンプの外部排気系への対応、3.窒素パージ系統の増設、4.真空ポンプ内臓の自動開閉バルブの整備、5. CVD装置の石英菅用ロートレット部で生じた真空リーク対策等である。現在真空装置は正常に動作しており、CDVの真空度はスクロールポンプで引いた場合6.0x10-1Paに到達し、成膜に必要な真空度が得られることを確認している。一方高周波空洞の試作に関しては、グラフェン空洞のQ値を測定するの最適な空洞として、TE011モードの円筒型空洞共振器を選び、3つの周波数(9.2GHz,12.2GHz,18.3GHz)の無酸素銅空洞の試作を行った。今後この空洞の高周波評価を行ったのちに内面にグラフェンを製膜しグラフェン空洞を製作する予定である。グラフェンは加速器用高周波空洞の材料として用いられる無酸素銅よりも電気伝導度や熱伝導度が大きく、高周波空洞用材料として優れた性質を有している。しかし高周波空洞にグラフェンをCVD成膜する研究はこれまでなかった。そこで空洞を成膜できる大型のCVD装置を開発するところから研究を始め、今回グラフェンを空洞表面に成膜することを試みた。銅箔上に熱CVDでグラフェンが成膜できることがよく知られている。これを応用して無酸素銅の空洞の内面に熱CVD法でグラフェンを成膜することを計画した。開発した熱CVD装置は石英管を備えた真空装置、電気炉およびCVD用ガス供給装置から構成され、最大外径100mmの空洞に成膜できるように設計された。まずグラフェン成膜の条件出しのため、表面状態の異なる2種類の無酸素銅薄膜に対して、H2,CH4,Arの混合ガスを用いて、CVD成膜を行った。2種類の無酸素銅薄膜のどちらにもグラフェンが成膜されたことをラマン分光測定のGバンドおよびG'バンドのピークにより確認した。また2つのピークの比から、グラフェンが単層または2層であることを確認した。同じプロセス条件で精密旋盤による鏡面仕上げの無酸素銅のピルボックス型空洞(内径20mm、全長100mm)上にグラフェンを成膜した。CVDプロセス中に1000度で空洞を1時間加熱したが、無酸素銅空洞には温度による変形等は特に見られなかった。空洞と同時に成膜した同じ鏡面仕上げの無酸素銅テストピースのラマン分光測定でGバンドにはピークは見られずG'バンドのピークが観測された。同時に欠陥を表すDバンドおよびD'バンドが観測されており、炭素原子が2次元平面に配列されずに欠陥を含んだ状態で成膜されていることを示している。今後成膜条件の改善および成膜された空洞の高周波特性の評価を進めたい。
超分子カチオン構造を利用した分子性スピンラダー構造の構築と物性評価

スピンラダー構造を有する(1)塩の圧力下磁化率測定を行った。その結果,4kBar以下の低圧下では[Ni(dmit)_2]^-分子間相互作用の変化に伴うスピンギャップの減少が観測されたのに対し、4kBar以上の高圧下では磁気的な相転移を示唆する磁化率の劇的な変化が観測された。相転移の機構を解明するために高エネルギー加速器研究機構(KEK)で圧力下X線結晶構造解析を行った。その結果、超分子カチオンの配列変化に伴う構造相転移が観測された。2.分子性スピンラダーのキャリアドーピング昨年度、(1)塩中の{[Ph(NH_3)](18-crown-6)}^+の一部を中性の{[Ph(NH_2)](18-crown-6)}に置換することで分子性スピンラダーへのキャリアドーピングに成功している。本年度は、キャリアドーピングを施した試料を用いて高圧下の伝導度測定を行った。測定はラダー構造の桁・足方向への一軸圧(<15kBar)、及び静水圧(<4kBar)を印加して実験を行った。全ての圧力において比抵抗の温度依存性を調査したが、今のところ金属的な伝道挙動の出現には至っていない。3.分子性スピンラダーの不純物効果の検証(1)塩中の一部の[Ni(dmit)_2]^-(S=1/2)を非磁性の[Au(dmit)_2]^-(S=0)で置換し、その物性を調べた。特に、[Au(dmit)_2]^-分子が低濃度でドープされた試料を作製し、その磁化率の温度依存性を検討した。さらに、磁気構造の詳細を検討するためにイギリスの理研RALでμSR測定を行った。得られた結果から、無機物で観測された反強磁性オーダーは観測されなかったが、非磁性分子の精密なドーピングと磁気構造の解明に成功した。これまでに作製した分子性スピンラダー[Ph(NH_3)]([18]-crown-6)[Ni(dmit)_2]の詳細な物性測定を行うとともに、超分子構造を利用した分子性スピンラダーへのホールドーピングや磁気希釈についても検討した。1.分子性スピンラダーの物性評価中村敏和助教授(分子科学研究所)と共同で固体^1H-NMR測定を行い、低温での磁気構造を明らかにした。また、大平聖子博士(理化学研究所)と共同で、イギリスにおいてμSR測定を実施し、これらの結果を複合して有機物スピンラダーのスピン状態を明らかにした。2.分子性スピンラダーのキャリアドーピング[Ph(NH_3)](18-crown-6)[Ni(dmit)_2]中の{[Ph(NH_3)](18-crown-6)}^+の一部を中性の{[Ph(NH_2)](18-crown-6)}に置換することでこの結晶のキャリアドーピングを行った。X線構造解析からドープされた結晶はもとの結晶と同形の構造を有しているが、伝導度はドープ前の塩と比較して最高で約10万倍高く観測された。結晶内のキャリア濃度の測定は、現在、ラマン測定等を用いて検討している。3.分子性スピンラダーの磁気希釈[Ph(NH_3)](18-crown-6)[Ni(dmit)_2]中の一部の[Ni(dmit)_2]^-(S=1/2)を非磁性の[Au(dmit)_2]^-で置換することに成功した。その結果、混晶中の[Au(dmit)_2]^-分子の濃度は試料作製時に制御可能であり、その濃度はラマン・IR測定より見積もることが可能であった。得られた混晶の磁化率の温度依存性は[Au(dmit)_2]^-濃度によって異なる振る舞いを示した。また、これら塩は全て良質な単結晶であるため、今後、様々な物性評価を行う上で適していると考えられる。3.分子性スピンラダーの不純物効果の検証

(1)塩中の一部の[Ni(dmit)_2]^-(S=1/2)を非磁性の[Au(dmit)_2]^-(S=0)で置換し、その物性を調べた。特に、[Au(dmit)_2]^-分子が低濃度でドープされた試料を作製し、その磁化率の温度依存性を検討した。さらに、磁気構造の詳細を検討するためにイギリスの理研RALでμSR測定を行った。得られた結果から、無機物で観測された反強磁性オーダーは観測されなかったが、非磁性分子の精密なドーピングと磁気構造の解明に成功した。
軟骨膜の機能解明　ーiPS細胞由来軟骨を用いてー

軟骨は自己修復能が乏しい組織であるため、有用な軟骨再生治療法の開発が切に望まれている。われわれはヒトiPS細胞から分化誘導して作製した軟骨を限局した関節軟骨損傷部に移植する治療法を開発することを目指している。われわれが作製したヒトiPS細胞由来軟骨は、軟骨基質を取り囲む様に軟骨周膜が存在する。移植後にヒトiPS細胞由来軟骨はそれ同士、およびホストの軟骨と融合して修復組織を構成することができる。この過程で軟骨周膜が重要な役割を果たしている可能性が高い。しかし、その詳細については明らかになっていない。そこで本研究ではヒトiPS細胞由来軟骨が融合するin vitroモデルを確立し、融合の過程を検討した。さらに軟骨周膜に高く発現している遺伝子について調べた。経時的に融合過程を観察した結果、ヒトiPS細胞由来軟骨は、それ同士の接触後1週において周膜部分から融合が始まった。そして4ー8週後に中心部の軟骨が融合した。次にRNAseqを用いて軟骨周膜と軟骨基質に発現する遺伝子について網羅的に解析を行った。その結果、周膜に高発現している遺伝子の一つとしてFGF18を同定した。FGF18をin vitroモデルに投与したところ、周膜の融合が促進した。一方、FGFR阻害剤を投与した場合は、2週においても融合が認められなかった。以上の結果から周膜を起源とするFGFシグナルは、iPS細胞由来軟骨が融合する初期過程を促進することを明らかとした。本研究の成果は、iPS細胞由来軟骨を用いた再生治療の治癒メカニズムの一端を解明するものであり、関節軟骨損傷に対する新たな治療方法の開発に貢献できると考えられる。今年度はヒトiPS細胞由来軟骨の融合する過程を検討するため、in vitroモデル系の確立を行った。さらに軟骨周膜に高発現している遺伝子について調べるため、軟骨基質と軟骨周膜とを単離しRNAseqを用いて網羅的に遺伝子を探索した。その結果、軟骨周膜に高発現している遺伝子としてFGF18を同定した。そして融合におけるFGF18の機能をin vitroモデルを用いて解明した。以上のように、今年度は軟骨膜の機能を解明するために、in vitroモデル系の構築と網羅的遺伝子解析による特異的遺伝子の同定およびその機能の一部を解明することができたため、本研究は計画通りおおむね順調に進捗していると考えられる。本研究により、ヒトiPS細胞由来軟骨の周膜を起源とするFGFシグナルが軟骨同士の融合促進に効果があることが明らかとなった。この成果をもとに、in vitroにて軟骨同士の融合促進させる方法を検討する。さらに、移植後の融合には軟骨周膜が重要な役割を果たしていることを明らかにする。そのための動物モデルの確立を行う。
A corpus-based multi-level analysis of spoken French produced by pre-advanced Japanese learners of French

平成30年度が最終年度であるため、記入しない。2015年度は、本プロジェクトにおける研究手法をさらに洗練させた。また、分析に使用するコーパス構築に向けてデータを収集した。以下に詳細を挙げる。-2015年春:IPFCプロトコルに基づいた手法(PFCの文章の読み取り、ネイティブとの会話、学習者同士の会話)を用いて、B1-C2レベルの46人の日本語話者を対象に録音を行った。大学別の内訳としては、早稲田大学の学生16人、東京外国語大学の学生12人、西南学院大学の学生10人、福岡大学の学生8人である。続いて、データ処理(音声のトリミング、データクレンジング、タグ付け、メタデータの付加、匿名化など)を行った。そして、2つの会話タスクについてはTranscriberを使用し、読み取りタスクについてはPraatを使用して文字化に取り掛かった。IPFCのコードに従って、リエゾンのコード化も始めている。-研究を進捗させるため、早稲田大学と西南学院大学にて2つのワークショップを開催した。学会や論文で発表した研究について報告した。2015年度は、コーパス構築に向けての録音作業を中心に行った。なお、録音作業は終了している。2016年度は、本プロジェクトにおける研究手法をさらに洗練させた。また、2015年度に収集したコーパスについて、データの大半の転写を終え、第二回目の録音を行った。以下、詳細を挙げる:-一年間かけて、2015年度に録音したデータの転写とアノテーションを進めた。そのうち、音読テキストデータについては、Praat上でIPFCの規定にしたがってリエゾンのコード化を行い、会話データについてはTranscriber上で語彙・文法的アノテーションを含む規定にしたがって文字化を行った。-2016年の秋には、PFCテクストの音読、ネイティブとの会話、学習者同士の会話の録音調査をIPFCのプロトコルにしたがって行った。今年度はB1-C2レベルの学習者30名が参加した。各大学の内訳は、早稲田大学4名、東京外国語大学14名、西南学院大学12名であった。被験者のうちの一部は2015年度に録音を行った被験者と同じであった。その後、音声のトリミング、データクレンジング、タグ付け、メタデータの付加、匿名化などのデータ処理を行い、文字化やアノテーション作業を始めた。-Labguisticのプラットフォームを用いた知覚テストの試作版を作成し、Archean Technologyの研究者であるLionel Fontan博士と連携協力して、データの自動評価の可能性を探った。また、2016年5月にはLionel Fontan博士の講演会を行った。非規範的言語の評価については、2016年1月に東京で行ったワークショップにJean-Luc Nespoulous教授を招待し、研究への一助を得た。2016年度は、2015年度に行った録音データの転写や、第二回録音調査に専念した。目的を達成することができたといえる2017年度は、コーパスの仕上げとデータ分析を行った。以下、詳細を挙げる。Transcriberを使用し、語彙・文法アノテーション付きの転写をほぼ完成させた。2017年度は2015年度と2016年度に行われた録音の転写作業に専念するとともに、これまで行われてきた分析を精緻化した。2016年度は、録音の転写作業やアノテーションが作業の中心となる。より詳細には以下に挙げた作業を行う。2015年度録音データの文字化。読み取りタスクで見られたリエゾンへのIPFCのコードを用いたコード化。学習者が行ったタスクに対する知覚評価方法の考案、母語話者による評価の実施。データや、アノテーションの分析。第1回目の調査に参加した学生のうち、第2回目の調査に参加可能な学生の録音。一部のデータの音響分析。学会や論文を通した研究成果の報告。CLIJAFのサイト上へのプロジェクト内容の統合2017年度は主に、データの転写やアノテーション作業を中心に行う。具体的には以下の作業を行う。2015年度に録音したデータの転写とアノテーションを終える。2016年度に録音したデータの転写とアノテーションを続ける。Lionel Fontan博士のチームと連携してデータの自動評価を進める。転写データの分析を始める。場合によっては、アノテーションを含むデータの分析を行う。学会で研究結果を発表し、論文を出版する。2018年度は、アノテーションが付与されたデータの分析を進め、その結果を発表することを中心に行う。具体的には、以下の通りに進める。Corentin Barcat氏(東京外国語大学、指導教官:川口裕司)は博士論文執筆に向け、中上級学習者によるフランス語の使用の相違点に関するアノテーションを精緻化する。また、データベースの設置、及びアノテーションにむけた構文分析プログラムの開発については、Archean Technologyの研究者であるLionel Fontan博士、Maxime Le Coz博士と連携協力する。流暢さに関する自動評価について、英語学習者の自動評価の手法(近藤眞理子)と比較しながら、Lionel Fontan博士、Maxime Le Coz博士と連携協力して調査を進める。ジュネーヴ大学のRacine博士と共同でシュワの分析を行う。

語彙・文法面については、談話連結に関する日仏対照研究、学習者の談話連結の使用の分析(秋廣尚恵)、定冠詞と指示形容詞の違いに関する研究、および複合過去と半過去の違いに関する研究(川島浩一郎)、提示詞; "c'est";のディスコースマーカー的用法に関する研究、および発話副詞の分析(杉山香織)を進める。研究結果を学会や論文で発表する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
歴史時代の気候変動に関する「気候環境基盤GIS」による分析

本研究では、天候記録・気候災害記録から歴史時代の気候変動を、広域的にまた長期間について復元することを目標に、「気候環境基盤GIS」を構築し、それに格納された祈雨や風鎮などの防災祈願行事や霊場巡拝における祈願などから、歴史時代の災害記録内容の分析を行った。そのため、全国各地での防災祈願行事にかんする現地調査と資料収集を行った。それにもとづいて、歴史時代の気候、祭祀や神社、霊場や寺院、また霊山などのデータベースを作成した。さらに、これらの新たに得られた地域の情報をもとにして、地理情報システム上でさまざまな分析を行えるようにした。とくに地域の気候や地形などの自然的基盤と、そこにみられる信仰施設や祭祀などの行事、また霊場の巡拝等とのかかわりを対象として、変動とさまざまな影響のかかわりなどの分析を行った。とくに風神が祀られて風鎮の祈願行事が行われてきた不吹堂に関して、また同様に信仰の対象とされて修行や登拝されてきた霊山に関して、そこにおいて人々の行いの中に含まれる意味について、分析を行った。また人々の災害の認知の空間的・時間的変動とかかわる、地域的な自然的基盤の成因を明らかにするために、北陸地域を対象にして降水の出現についても分析を行った。上記のような風鎮などの防災祈願行事や、霊場巡拝における祈願などの示す意味の分析の成果は、さらに天候記録・気候災害記録から、歴史時代の気候復元が容易とするものである。これらの成果は以下のように、学会での発表、また雑誌論文としても発表した。さらにこれらの成果の一部は、インターネットにより公開して、自由に閲覧することができるようにした。本研究では、天候記録・気候災害記録から歴史時代の気候変動を、広域的にまた長期間について復元することを目標に、「気候環境基盤GIS」を構築し、それに格納された祈雨や風鎮などの防災祈願行事や霊場巡拝における祈願などから、歴史時代の災害記録内容の分析を開始するものである。平成17年度はとくに本研究計画の第1年度であるので、1)現地調査と資料収集、2)データベース構築、を中心に行った。現地調査は、東京、長野、大阪、奈良方面の、御府内、鹿沢、葛城、西国、吉野、洛陽等々の霊場や霊山などにおいて、地域特有の民間行事の伝承などについて実態調査を行った。それぞれの地方霊場などはいずれも時代による盛衰を経ているが、現在もなお存続している。また平野部を中心とした霊場と、山地を中心にした回峰などの修行地などとの間の密接な関係が認められた。これら各地ではまた、図書館・文書館などで、歴史時代の気候災害や防災祈願行事を含めた記録を収集した。収集した資料を入力して,「歴史気候データベース」、「祭祀・神社データベース」、「霊場寺院データベース」を作成・充実をはかり,さらにこれらを統合した「気候環境基盤GIS」の構築を試みた。また主として来年度以降に実施する地理情報システムでの分析に関して、システム上の準備を進めた。すなわちデータベース作成のためのパソコンや、新たな衛星画像のための解析ソフトなどを導入して、「気候環境基盤GIS」に必要な環境整備を試行的に進めた。平成18年度には、前年度からの防災祈願行事にかんする現地調査を継続したほか、データベース構築と、地理情報システムでの分析を行った。現地調査は台風や局地風などの強風災害の顕著な地域において実施し、その影響が認められる資料を収集した。また防災祈願行事や霊場・寺院などのデータベースの作成を重点的に実施した上で、それらを地理情報システムとして構築し、統計解析や空間解析などを行なって歴史時代の気候災害記録に含まれる意味の解析を進めた。また気候災害にかかわる神社などにおける祭祀や民間の巡拝行事などについて、広域における分布と地域間での差異の特色を明らかにし、またそれらの歴史時代を通しての変容から、気候変動が人々や社会におよぼした影響についても分析を進めた。

上記のように今年度における成果は、より広範な内容をもつ「気候環境基盤GIS」と、それにもとづく歴史時代の気候の実態とその影響解明の研究の一部をなすものである。同システムは次年度において公開しネットワークシステムを介して利用できるよう、検討を進めている。また今年度における成果は日本地理学会、日本気象学会などで発表したほか、後述のように論文として報告した。従来より歴史時代の気候のデータベースの構築を継続しているが、さらに祭祀や神社、霊場や寺院、また霊山などのデータの収集を行ない、データベースの充実をはかった。これらの新たに得られた地域の環境情報をもとにして、地理情報システム上でさまざまな分析を行えるようにした。とくに地域の気候や地形などの自然的基盤と、そこにみられる信仰施設や祭祀などの行事、また霊場の巡拝等とのかかわりを対象として、変動とさまざまな影響のかかわりなどの分析を行った。こうした歴史時代の気候の実態とその影響について、とくに近世より風の神が祀られて風鎮の祈願行事が行われてきた不吹堂に関して、同様にして信仰の対象とされて修行や登拝されてきた霊山に関して、などを主な対象として、そこにおいて人々が行う祈願などの中に含まれる意味について分析を行った。また災害やその人々の認知の空間的・時間的変動とかかわる、地域的な自然的基盤の成因を明らかにするために、北陸地域を対象にして降水の出現に関して分析を行った。上記のような、祈雨や風鎮などの防災祈願行事や、霊場巡拝における祈願などの示す意味の分析にもとづくことで、さらに天候記録・気候災害記録から、歴史時代の気候変動が、広域的にまた長期間について復元できるようになる。これらの成果は以下のように、学会での発表を行った。また雑誌論文としても発表した。また、これらの成果はインターネットにより公開して、自由に閲覧することができる。
ケイ素およびゲルマニウムクラスター化合物の創製

ヘテロ元素クラスター化学は炭素クラスターに比較して全く未開拓の分野であった.特に,テトラヘドラン,プリズマン,キュバンなどのカゴ型炭化水素は,高い歪みエネルギーと美しい骨格を持つために,長年,化学者の夢をかきたててきた化合物群である.「化学の細工物」と呼ばれるこれらの骨格を,炭素と同族のケイ素やゲルマニウム,スズなどの重元素で構成することは極めて興味深い研究であり,ヘテロ元素クラスターの合成と構造の解明は極めてチャレンジングな研究テーマである.本研究は,ケイ素やゲルマニウムなどの第3周期以降の元素からなるプリズマン,キュバンなど高い対称性を持つクラスター化合物を合成する方法論の開発と構造の解明を明らかにすることができた.本研究によって得られた研究成果は次の通りである.1)高周期元素キュバンクラスターとしてシラキュバンおよびゲルマキュバンの合成法の確立.2)シラキュバンおよびゲルマキュバンのX線結晶構造解析による分子構造の確定.3)高周期元素プリズマンクラスターとしてシラプリズマンおよびゲルマプリズマンの合成法の確立.4)シラプリズマンおよびゲルマプリズマンのX線結晶構造解析による分子構造の確定.5)高周期元素クラスター化合物の電子スペクトルや固体NMRによる物性の解明.尚,世界に先駆けて初めてヘキサゲルマプリズマンを合成し,Angewandte Chemieや現代化学の表紙を飾るなど国内外に大きなインパクトを与えることができた.また,ヘキサシラプリズマンやヘキサゲルマプリズマンは高周期元素を骨格としたベンゼン,デュワ-ベンゼン,ベンズバレンなどの原子価異性体でもあり,全く未知分野のこれら原子価異性体へ変換可能であることを実験化学的に実証することもできた.ヘテロ元素クラスター化学は炭素クラスターに比較して全く未開拓の分野であった.特に,テトラヘドラン,プリズマン,キュバンなどのカゴ型炭化水素は,高い歪みエネルギーと美しい骨格を持つために,長年,化学者の夢をかきたててきた化合物群である.「化学の細工物」と呼ばれるこれらの骨格を,炭素と同族のケイ素やゲルマニウム,スズなどの重元素で構成することは極めて興味深い研究であり,ヘテロ元素クラスターの合成と構造の解明は極めてチャレンジングな研究テーマである.本研究は,ケイ素やゲルマニウムなどの第3周期以降の元素からなるプリズマン,キュバンなど高い対称性を持つクラスター化合物を合成する方法論の開発と構造の解明を明らかにすることができた.本研究によって得られた研究成果は次の通りである.1)高周期元素キュバンクラスターとしてシラキュバンおよびゲルマキュバンの合成法の確立.2)シラキュバンおよびゲルマキュバンのX線結晶構造解析による分子構造の確定.3)高周期元素プリズマンクラスターとしてシラプリズマンおよびゲルマプリズマンの合成法の確立.4)シラプリズマンおよびゲルマプリズマンのX線結晶構造解析による分子構造の確定.5)高周期元素クラスター化合物の電子スペクトルや固体NMRによる物性の解明.尚,世界に先駆けて初めてヘキサゲルマプリズマンを合成し,Angewandte Chemieや現代化学の表紙を飾るなど国内外に大きなインパクトを与えることができた.また,ヘキサシラプリズマンやヘキサゲルマプリズマンは高周期元素を骨格としたベンゼン,デュワ-ベンゼン,ベンズバレンなどの原子価異性体でもあり,全く未知分野のこれら原子価異性体へ変換可能であることを実験化学的に実証することもできた.ケイ素およびゲルマニウムクラスター化合物の合成と物性として以下の研究成果を得た。1.1,2-ジメチルテトラクロロジシランをMg/MgBr_2で縮合することにより、メシチル基で置換したオクタシラキュバン1をオレンジ色の結晶として新たに合成・単離することができた。オクタシラキュバン1の構造はX線結晶構造解析で確定したが、その分子構造を十分に精密化することができなかった。2.2,6-ジエチルフェニル基が置換したオクタシラキュバン2の固体^<29>SiNMRを検討した。静止状態の^<29>SiNMRスペクトルによって化学シフトテンソルをδ_<11>=80ppm、δ_<22>=27ppm、δ_<33>=54ppmと決定できた。また、化学シフトの異方性の広がりは134ppmであった。主値の平均値は-0.3ppmであり、溶液中の化学シフト値(0.36ppm)に一致した。オクタシラキュバン2の^<29>SiNMRの低磁場シフトの原因として常磁性項が大きく寄与していることを明らかにした。3.ヘキサシラプリズマンの光反応を検討した。ヘキサシラプリズマンを380nmより長波長の光を照射すると、ヘキサシラデュワ-ベンゼンに帰属できる吸収帯をUVスペクトルで観測できた。定常状態に達した後、460nmより長波長の光を照射するとヘキサシラデュワ-ベンゼンの吸収帯は瞬時に消失し、ヘキサシラプリズマンを再生した。差スペクトルより、この反応は完全な可逆反応であることを明らかにした。また、ab initio計算によってヘキサシラデュワ-ベンゼンの吸収帯を帰属した。ヘキサシラデュワ-ベンゼンの2つのケイ素-ケイ素二重結合の空間経由および結合経由相互作用により、結合性、反結合性π軌道の縮退が解けることを明らかにした。ケイ素およびゲルマニウムクラスター化合物の合成と物性として以下の研究成果を得た。

1.2,6-ジイソプロピル基が置換したヘキサシラプリズマンの固体状態の^<29>Si NMRを検討し、構造に関する新たな知見を得た。静止状態の^<29>Si NMRスペクトルによって化学シフトテンソルをσ_<11>=98ppm、σ_<22>=18ppm、σ_<33>=-182ppmと決定できた。また、化学シフトの異方性の広がりは280ppmと極めて大きい値であった。主値の平均値は-22ppmであり、溶液中の化学シフト値の-22.3ppmに一致した。また、メチル置換のヘキサシラプリズマンのGIAO理論計算を行い、計算値と傾向が一致した。化学シフトテンソルの一つの成分が大きく高磁場シフトしている原因はヘキサシラプリズマンの三員環構造によることを明らかにした。2.2,6-ジイソプロピル基が置換したヘキサゲルマプリズマンの光反応を検討した。ヘキサゲルマプリズマンを280nmより長波長の光を照射すると、ヘキサゲルマデュワ-ベンゼンに帰属できる吸収帯をUVスペクトルで342nm、446nmおよび560nmに観測できた。定常状態に達した後、520nmより長波長の光を照射するとヘキサゲルマデュワ-ベンゼンの吸収帯は瞬時に消失し、ヘキサゲルマプリズマンを再生した。差スペクトルより、この反応は完全な可逆反応であることを明らかにした。また、ヘキサゲルマデュワ-ベンゼンは熱的にもヘキサゲルマプリズマンを生成することを明らかにした。しかし、低温下でのみヘキサゲルマデュワ-ベンゼンは安定に存在し、120Kでその半減期は約3分であった。三員環ゲルマニウム化合物のトリゲルマシクロプロペンの合成にも成功し、これを原料にして芳香族性2π電子系のシクロプロペニウムイオンのゲルマニウム類縁体の合成に初めて成功した。X線結晶構造解析による分子構造から完全に遊離なゲルミルカチオンであることを明らかにした。ゲルマニウムおよびケイ素キュバンクラスター化合物の合成法を新規に開発することに成功した。4官能性4員環化合物である1,2,3,4-テトラハロゲノシクロテトラゲルマンおよび1,2,3,4-テトラハロゲノシクロテトラシランはそれぞれオクタゲルマキュバン、オクタシラキュバンの重要な合成中間体であり、これらの合成法と縮合反応に関して以下の研究成果を得た。1.(1-エチル-1-メチルプロピル)ジクロロ(フェニル)ゲルマンをTHF中でMg/MgBr_2試剤と反応させることによってテトラフェニルシクロテトラゲルマンを合成した。このシクロテトラゲルマンは立体異性体の混合物として得られたが、主生成物の立体配置はcis-cis-transであった。ゲルマニウム上のフェニル基はシクロテトラゲルマンのGe-Ge結合を切断することなく、塩素に置換できた。フェニル置換シクロテトラゲルマンをベンゼン中、触媒量のAlCl_3存在下、塩化水素を作用すると4官能性4員環ゲルマニウム化合物である1,2,3,4-テトラクロロ-1,2,3,4-テトラ(1-エチル-1-メチルプロビル)シクロテトラゲルマンに変換できた。尚、塩素化したシクロテトラゲルマンはtrans-trans-transの立体配置を有していた。
RNAシーケンスによる大腸鋸歯状腺腫の発癌機構の解明と分子標的治療の基盤確立

本研究では、RNAシーケンスを用いた発現プロファイルの解析と融合遺伝子の探索により、大腸鋸歯状腺腫(Traditional serrated adenoma, TSA)を前癌病変とする発癌経路の分子機構の解明を行う。具体的には、TSAの遺伝子発現プロファイルを、従来報告されている予後不良の高悪性度進行癌の発現プロファイルと比較、また鋸歯状病変同士で比較することにより、TSAの発癌経路を確立する。
リーシュマニア症に対する治療薬の検討

現在するリーシュマニア症の治療薬としては、アンチモン剤が世界的に第一選択肢とされているが、本剤は副作用が強い上に実際の使用に当たっては筋注や静注を必要とするため、医療施設が不備な流行地での使用には適さず供給面でも不十分である。そこで、本研究は、簡便で副作用の少ないリーシュマニア症の治療薬(法)を開発し、熱帯や亜熱帯地域(発展途上国)で広く蔓延している本症患者の苦痛を軽減することを目的として計画されたものである。このため、皮膚リーシュマニア症患者の治療薬として現在使用されている治療薬も含めて、パ-モマイシンの塗布剤やグルカンタイムとマ-キュロクロームのローションを作成し、その効果を検討したところきわめて有効で流行地での使用にも絶えうることが判明した。また抗マラリヤ剤のメファキンやアルテスネートは簡便な経口剤としてリーシュマニア症の治療に適していることが明らかになり、その作用機序については電顕病理学的にも検討できた。一方、診断や治癒判定に応用するための手技として従来のAP-PCRに加えて独自にPS-PCR(Polymorphism Specific-Polymerase Chain Reaction)や、ミニエクソン遺伝子を標的としたPCR法などを開発した。また、薬剤耐性の分子機構解析のためLamdr2遺伝子導入による実験系の確立、Lamdr1遺伝子の312bpの塩基配列を決定した。さらに動物実験においてリポ多糖類で抗腫瘍剤のONO4007がリーシュマニア症の治療に有効であり、本剤と他剤との併用など今後に興味ある課題を提供できた。リーシュマニア症の治療に関連した事項について検討し,以下のような成績を得た.1.皮膚リーシュマニア症患者に対し,抗マラリア剤のメファキンとプラスモトリムを経口投与したところ,両剤とも治癒率,速効性の点で勝れていることが判明した.2.Leishmaniaamazonensiaの薬剤耐性に関与するP-糖タンパク質遺伝子を単離し,その全塩基配列を決定した.3.種々の条件下で抗マラリア剤(メファキン)の内臓型リーシュマニア症に対する効果を動物実験により検討した.5.AP-PCRやELISAによる原虫株の分析ならびにNested PCRによる組織切片内原虫の検出に成功した.現在するリーシュマニア症の治療薬としては、アンチモン剤が世界的に第一選択肢とされているが、本剤は副作用が強い上に実際の使用に当たっては筋注や静注を必要とするため、医療施設が不備な流行地での使用には適さず供給面でも不十分である。前年度のデータをベースにして、リーシュマニア症の治療薬に関する事項について検討し、以下のような成績を得た.1.抗マラリア剤の抗リーシュマニア効果を検討するため、Mefloquine(Mephaquin^<【encircledR】>)やArtesunate(Plasmotrim^<【encircledR】>)による皮膚リーシュマニア症患者の治療を試みたところ、今回の追加症例においてもこれらの経口剤が極めて有効であることが判明した.2.Mephaquin^<【encircledR】>やPlasmotrim^<【encircledR】>による治療を開始する前後の患者についてパンチによるskin biopsyを実施した.また、これらの生検材料を用いたPCRの結果や電顕病理学的知見に基づき、抗マラリア剤の殺リーシュマニア原虫過程を検討したところ、PCR法は診断(原虫検出)だけでなく、薬剤の効果判定にも応用できることが判明した.3.In vitroやin vivo(マウス、ハムスターなど)における実験結果から、リーシュマニア原虫に対するMephaquin^<【encircledR】>の作用機序はヒト(患者)と実験動物の間で大きく異なることが判明した.また同剤は直接の殺リーシュマニア原虫作用がないことも明らかになった.これらの成績は生物種による生体内での薬物動態の違いが想像以上に大きいことや、薬剤検定の在り方などを示唆する重要な知見である.4.非特異的および特異的プライマーの塩基配列を決定し、これらのプライマーを用いてPCRによる皮膚リーシュマニア症患者の組織切片における原虫検出法を開発した.

また、本法が薬剤の効果判定に応用できることを明らかにした.本研究では、皮膚リーシュマニア症の治療薬として簡便かつ副作用の少ない薬剤を開発する目的で種々の研究を進め、薬剤効果判定法も含めて多くの知見を得ることができた。その中でとくに重要な成果は以下のとおりである。1.P-糖蛋白質遺伝子としてクローニングに成功したLamdr2遺伝子の機能解析を目的として、この遺伝子をリーシュマニア細胞内で発現させるための遺伝子導入の実験系を確立した。2.既知のP-糖蛋白質遺伝子であるmdr1遺伝子の種間変異を明らかにすることを目的として、Laishmania(L.)amazonensisからLamdr1遺伝子を単離し、現在までにその約3分の2に相当する3120bpの塩基配列を決定した。3.抗マラリア剤のメフロキンの殺リーシュマニア効果をマウスの系で検討したところ、ヒトの場合とは異なる成績が得られた。この成績は動物と人での薬物動態を解析する上で極めて興味ある知見として注目される。4.Leishmania種特異的サイズのDNA断片が高感度で増幅でき、これを用いたPCR法はリーシュマニア症の治癒判定や原虫検出に有用であった。5.抗腫瘍剤でグラム陰性菌の外膜成分であるLPSの局注がL.(L.)amazonensis感染マウスの治療に有効であることが判明した。この場合にBALB/cの方がC57BL/10を用いた場合よりも薬剤の効果は著明であり、実験動物の株間の差異が認められた。6.サイトカイン遺伝子を導入したトランスジェニックリーシュマニア原虫を作成し、弱毒病原性原虫ワクチンの開発を試みた。
顎顔面再建治療へ向けた上皮－間葉ハイブリッド型細胞シートの創製プロジェクト

本研究は、口腔粘膜上皮、口腔粘膜上皮下組織、筋組織から抽出された細胞を用いてそれぞれの細胞シートを作製し、それらを積層したハイブリッド型細胞シートの創製を目指した。その結果、創製した積層シートには、粘膜上皮、結合組織層、筋層とそれぞれ特有のタンパクが、重層化にともなって継日的に増加していた。すなわち、今回の研究によって創製された積層シートには、生体と類似した構造タンパクが発現していることが明らかとなった。本研究は、口腔、咽頭粘膜実質再生を実現するために、口腔粘膜上皮、口腔粘膜上皮下組織、筋組織から抽出された細胞を用いてそれぞれの細胞シートを作製し、それらを積層したハイブリッド型細胞シートの創製を目的としている。昨年度積層シート作製には成功しているため、今年度は積層シートの構造維持に必須な細胞骨格である中間径フィラメント、接着タンパクの局在について検証を行った。粘膜上皮特有の細胞骨格タンパクであるケラチン4と13を、免疫組織化学的染色にて検索すると、ともに、上皮組織全体にまんべんなく観察された。実際のタンパク量の変化を確認するために、Western blotを行ったところ、βアクチンに対するケラチン13のタンパク量の継日的な変化は増加傾向にあったものの、有意な差は観察されなかった。筋特有の構造タンパクであるデスミンは、経日的に継続して観察することができ、重層化にともなって継日的に増加していた。ウェスタンブロット法により、デスミンの継日的なタンパク量の変化を観察したところ、βアクチンに対するデスミンの量は5日目、7日目において1日目に比べ有意に増加が認められた。免疫組織化学的染色において、基底膜接着タンパクであるコラーゲンタイプIVは上皮基底層、コラーゲンゲル層ならびに筋層でも発現が認められ、ラミニンは上皮基底層でのみ発現が認められた。ウェスタンブロット法にて、コラーゲンタイプIVの継日的なタンパク量の変化を検索したところ、βアクチンに対するコラーゲンタイプIVの量に、有意な差は見られなかった。以上のように作製した積層シートには、生体と類似した構造タンパクが発現していることが明らかとなった。頬粘膜癌などによって広範な粘膜摘出後に、自己細胞による口腔粘膜細胞シートの応用が試みられているが、直下の筋層の再構築までは困難なことから治癒後の咀嚼・嚥下機能障害という問題点が指摘されている。そこで、上皮、結合組織、筋肉の細胞シートをハイブリットさせた3層積層シートを開発し、生体におけるこれらの3層構造をin vitroで再現し、これらの構造維持に重要な細胞骨格、接着タンパクの局在を比較、検討した。上皮シート作製のため、日本家兎口腔粘膜から細胞を採取した。同時に酵素処理により分離した結合組織由来の細胞をゲル状のコラーゲンと混和し、インサート上に播種した。この結合組織ゲルをfeader細胞とし、上皮細胞と共培養を行った。筋シートは日本家兎の筋芽細胞を用いて作製した。両シートを積層し、通法に従い凍結切片を作製し、細胞骨格タンパク、接着タンパクの局在観察のため、免疫組織化学的染色を行った。上皮シートが結合組織ゲルを介して、筋肉シートと密接な状態であることがわかった。また、それぞれのシートに生体と同様な中間径フィラメントの発現が確認された。上皮基底層、結合組織にコラーゲンや接着関連タンパクも観察されたことから、良好な積層シートが作製可能となった。次年度以降、さらに詳細に積層シートの発現タンパクを同定し、生体の口腔粘膜との構造を比較検討したいと考えている。本申請期間において、目標とした積層シートの創製には成功し、積層シートの構造維持に必須な細胞骨格である中間径フィラメント、接着タンパクの局在について検証を行った。すなわち、マウス頰粘膜上皮から細胞を採取し作製した口腔粘膜上皮シート、頬粘膜下組織から細胞を採取し作製した結合組織細胞シート、胎生期マウスより採取した筋芽細胞を利用し作製した骨格筋細胞シートを積層後、24時間までの経過を観察し良好な結果を得た。特に積層後、それぞれの細胞シートが良好に接着すると上皮シート直下に細胞基質間の接着タンパクであるIntegrinが一層発現することをこれまで明らかにした。次に、粘膜上皮特有の細胞骨格タンパクであるケラチン4と13を、免疫組織化学的染色にて検索すると、ともに、上皮組織全体にまんべんなく観察された。さらに最終年度では、免疫組織化学的染色において、基底膜接着タンパクであるコラーゲンタイプIVは上皮基底層、コラーゲンゲル層ならびに筋層でも発現が認められ、ラミニンは上皮基底層でのみ発現が認められた。

以上のように作製した積層シートには、生体と類似した構造タンパクが発現していることが本申請期間の検証で明らかとなった。口腔解剖研究目的に沿って作製した積層シートに、生体と類似する構造タンパクが発現していることを確認できたため、おおむね順調に進展していると判断した。特に上皮シート内には、粘膜上皮特有の細胞骨格タンパクであるケラチン4と13が上皮組織全体にまんべんなく観察された。そして筋シートには、筋特有の構造タンパクであるデスミンは、経日的に継続して観察することができ、重層化にともなって継日的に増加していた。また細胞間接着タンパクとして、基底膜接着タンパクであるコラーゲンタイプIVは上皮基底層、コラーゲンゲル層ならびに筋層でも発現が認められ、ラミニンは上皮基底層でのみ発現が認められた。これらは我々が研究を始めた当初から目指している、生体にできる限り近い構造を持った積層シートの開発という目的を達成しつつあることを示唆している。研究目的に沿って積層細胞シートを作成した。その結果、筋芽細胞シート上に上皮細胞シートが緊密に接着していることが確認された。免疫組織化学的染色の結果から、上皮細胞シートでは抗ケラチン抗体に対し、表層から中間層で強い発現がみられることが明らかとなった。また、筋芽細胞シートではシート全体に初期には抗ビメンチン抗体に強く反応し、その後、抗デスミン抗体陽性領域も全体に拡がっていった。以上の結果から、上皮細胞ー筋芽細胞積層シートの構造維持には中間径フィラメントが重要な役割を担う可能性が示唆された。以上初年度での研究成果はほぼ予定通りであり、次年度上皮細胞シートの基底層部分と筋芽細胞シートの接着部位の発現タンパク、及び中間径フィラメントとの関係などに関する問題点も抽出できた。次年度は、これまで開発した細胞積層シートの特に筋シート部分の細胞生物学的特性を明らかにする。すなわち、その先に計画している動物実験へ向け、どのような筋特性を持ったシート部分が、移植後生体を馴染んでいくのかについて最終的な課題を克服する必要があるためと考えている。今後、実際にマウスの生体からそれぞれの細胞を採取し、細胞シート作製に用いたい。マウス口腔粘膜採取には、マウスを東京歯科大学動物実験指針に基づき深麻酔にて無痛屠殺後頬部より粘膜を5mm程度深部まで摘出する。その後、酵素処理により上皮と上皮下組織に分離する。ここで使用するデイスパーゼは、基底膜部分に作用し、間葉系組織から上皮をきれいに剥離可能である。次にトリプシン処理により、それぞれの細胞を培養する。培養液には増殖因子、10%FBSを含んだDMEM12(SHEM)を使用する。上皮細胞はフィブリンをコートしたインサート上に播種し、MMC処理済み3T3フィーダー細胞と2週間共培養を行う。さらに、Air-lift cultureを1週間行う。同条件で作製した細胞シートについて、表面構造が敷石状であること、HE染色像から層構造が形成されていることを必ず確認し、目的である口腔粘膜上皮細胞シートとする。口腔粘膜