hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
寒冷地の農業流域河川における自然浄化作用に関する研究

(1)昨年と同じ地区で調査をおこなった。パンケウレトイ川流域の土地利用は、上流部に農地(改修河川区間)、下流部に林地(自然河川区間)が展開している。この河川で定期的に採水(自然河川区間:500m間隔,改修河川区間:約1km間隔)し,水質分析をおこなった。その結果,T-N,NO_3-Nでは改修・自然河川に関わらず,流下にともない濃度低下する傾向にあった。しかしNO_2-N,NH_4-N,リン,SSでは改修河川区間で濃度が上昇し,自然河川区間で濃度が低下する傾向がみられた。とくに56月にその傾向は顕著であった。(2)同様に負荷についてみると,すべての項目で濃度ほど明確な傾向はないが,56月に改修河川区間で増加し,自然河川区間で減少する傾向があった。このことかち自然河川区間おける浄化作用の効果には,日射や植生の活性状況,気温,水温などの季節的な影響が関係していることが推察された。(3)自然河川区間からの流入負荷の影響を考慮した低減負荷量推定式を用いて自然浄化作用の定量化をおこなった。その結果,負荷についてみると自然河川区間であっても浄化作用効果が十分に発現しているとはいえないことが認められた。またタイルを敷設し,有機物付着量から自然浄化作用について検討をおこなったが,明確な傾向はみられなかった。以上が今年度の研究概要である。これまでのところ,湖沼と違って水の滞留が少ない河川では,自然浄化作用がそれほど大きくないという結果が得られた。また課題としていた水質変動のモデル化に関する検討は,現在進行中であり結果を示すには至らなかった。今後もこの件については継続する予定である。(1)北海道十勝管内音更町に位置する家畜改良センター十勝牧場周辺の5つの農業流域河川を研究対象として設定した。そのなかでもとくにパンケウレトイ川を重点的に調査することとした。この流域の土地利用は、上流部に農地、下流部に林地が展開している。また、連続観測点を河川が林地に流入する直前(上流観測点=農業流域)と林地を貫流した最下流点(下流観測点=農業流域+林地流域)に設けた。土地利用状況ならびに営農状況の把握については、牧場などの関連機関の協力のもとおおむね必要なデータが得られた。(2)上流観測点と下流観測点で水位の連続観測と定期的な採水をおこない、負荷量を算出した。その結果、自然河川区間を流下しても全窒素や硝酸態窒素の負荷は減少しない傾向がうかがえた。一方で亜硝酸態窒素やアンモニア態窒素では減少傾向にある。これら項目による変化傾向の違いは、各物質の安定性の違いと自然浄化作用の発現効果による影響と推察される。また自然河川区間からの流入負荷の影響を考慮した低減負荷量推定式を用いて自然浄化作用の定量化をおこなった。(3)対象とする河川を踏査し、100m間隔で採水をおこなった。その結果、富栄養化に関わる水質項目の濃度は流下にともない、おおむね減少する傾向にあるとわかった。さらに500m間隔でタイルを敷設し、有機物付着量から自然浄化作用の定量化をおこなった。来年度は今年度の調査を継続し、データの蓄積をはかり、そのうえで自然浄化作用の要因解析をおこなう方針である。
乾癬におけるγδ　Ｔ細胞の働き

乾癬病変部皮膚組織をホルマリン固定、パラフィン包埋後、組織切片を作成、抗γδTCR抗体で免疫化学染色を行い、γδT細胞の発現、分布、そのサブセットの検討を試みたが、明確な染色像を得られなかった。乾癬病変部皮膚組織をトリプトシンを用いて表皮と真皮を剥離、表皮細胞と真皮細胞、および乾癬患者の末梢血リンパ球を採取し、各細胞を抗γδTCR抗体およびVγ鎖、Vδ鎖の異なるγδT細胞のサブセットに対する抗体で染色、フローサイトメトリーを行い、γδT細胞の発現、分布、そのサブセットの検討を試みたが、健常対象皮膚組織と比較して、有意な差が認められなかった。乾癬病変部皮膚組織を、ホルマリン固定、パラフィン包埋後、組織切片を作成、抗γδTCR抗体で免疫化学染色を行い、γδT細胞の発現、分布、そのサブセットの検討を試みたが、明瞭な染色像が得られなかった。乾癬病変部皮膚組織をトリプシンを用いて表皮と真皮を剥離、表皮細胞と真皮細胞をそれぞれ採取し、各細胞を抗γδTCR抗体およびVγ鎖、Vδ鎖の異なるγδT細胞のサブセットに対する抗体で染色、フローサイトメトリーを行い、γδT細胞の発現、分布、そのサブセットの検討を試みたが、健常対象皮膚組織と比較して、有意な差が認められなかった。また、乾癬患者の末梢血リンパ球を採取し、同様の染色を試みたが、健常対象と比較して、有意な差が認められなかった。γδT細胞は、乾癬発症の初期に関与していることが推測される。そこで今後は、完成した乾癬病変ではなく出現初期の乾癬病変を対象に、上述の研究を試みる予定である。乾癬は、慢性かつ難治性の経過をたどる皮膚疾患である。乾癬の病変部ではその病態形成、維持において、IL-17、IL-22が重要な役割を担っているが、ヒトの乾癬病変部におけるγδT細胞の働きはほとんど解明いない。乾癬モデルマウスのひとつに、IL-23をマウスの耳に皮内注射することで、病理組織学的に乾癬に類似した炎症反応を再現した実験系がある。研究代表者らはこの実験系を用いて、IL-23刺激の反応のごく初期の段階で、CCR6を発現し、IL-17、IL-22を産生、分泌するγδT細胞が増加し、IL-23による乾癬様の炎症反応誘発において重要な役割を担っていることを報告した(Mabuchi et al. J Immunol. 187: 5026-5031, 2011)。CCR6はケモカインレセプターの1つであるが、そのリガンドはCCL20のみであること、そしてIL-22によって刺激された角化細胞は異常分化するとともに、早期からCCL20を産生、発現することが知られている(Hedrick et al. J Clin Invest 119: 2317-2329, 2009.)。研究代表者らは上記の実験系に抗CCL20抗体を加えることで乾癬様の炎症反応を有意に抑制することに成功し、新たに報告した(Mabuchi et al. J Invest Dermatol. 133: 164-171, 2013)。この結果から、いまだ根治療法が存在しない乾癬治療において、新規の治療薬、治療法の発見が期待できる。マウスとヒトではγδT細胞のサブセットが大きく異なっており、当初の予想通り、サブセットの同定に難渋している。また、研究代表者らのマウスを用いた実験系では、γδT細胞はIL-23刺激の反応のごく初期の段階で発現しているため、病期の選択に苦慮している。東海大学医学部付属病院皮膚科外来に通院している乾癬患者から、乾癬病変部皮膚組織を採取する。組織の一部は、ホルマリン固定、パラフィン包埋後、組織切片を作成、抗γδTCR抗体で免疫化学染色を行い、γδT細胞の発現、分布、そのサブセットを検討する。同時に、IL-22、IL-17などのサイトカイン、CCR6やCCL20などのケモカインやケモカインレセプターに対する抗体による免疫化学染色を行い、γδT細胞の乾癬の病態形成、維持における働きを検討する。染色された細胞の観察は、光学顕微鏡のほかコンフォーカル顕微鏡を用いて観察、顕微鏡に接続してあるカメラを用いて撮影する。その後、写真・画像解析ファイルを用いて解析する。また、組織の一部は、トリプシンやジスパーゼなどの酵素を用いて表皮と真皮を剥離、表皮細胞と真皮細胞をそれぞれ採取する。各細胞を抗γδTCR抗体およびVγ鎖、Vδ鎖の異なるγδT細胞のサブセットに対する抗体で染色、フローサイトメトリーを行い、γδT細胞の発現、分布、そのサブセットを検討する。

同時に、免疫化学染色と同様に各種のサイトカイン、ケモカイン、ケモカインレセプターの発現を観察する。細胞の染色結果は解析ソフトを用いて解析する。さらに、別の組織の一部は、同様の手法で表皮細胞と真皮細胞を採取、RNA抽出キットを用いてRNAを抽出する。RT-PCRシステムにより、γδTCRのほか、上記のサイトカイン、ケモカイン、ケモカインレセプターに対応するプライマーセットと反応させ、その産生物を検討する。これらのプライマーセットは設計ソフトウェアを使用して設計後、試薬会社に委託して作成されたものを購入する。病理組織の作成、免疫化学染色、写真撮影、フローサイトメトリー、Real-Time PCRシステムは、東海大学医学部の共同利用研究施設で既に保有している設備、機器を有料で使用する。必要な試薬の購入費。研究成果を英文学術雑誌に投稿する際の校閲料。
虚血性脳障害におけるβアドレナリン受容体遮断薬の保護効果に関する研究

背景:短時間作用型のβアドレナリン受容体遮断薬(βプロッカー)の脳保護作用を実験的に検討することによって、その機序を解明し、今後の急性脳虚血障害の予防薬の一つの手がかりになることが期待できる。目的:ラット局所脳虚血モデルを用い、短時間作用性β遮断薬であるエスモロールおよびランジオロールの虚血後持続投与による脳保護効果を検討した。対象と方法:ハロタン麻酔・自発呼吸下、雄SDラットを用いた。中大脳動脈閉塞モデルにて脳虚血を作製し、2時間の虚血後に22時間の再灌流を行った。薬物を経静脈的に投与開始し22時間持続投与した。虚血再灌流後に神経学的欠損スコアを評価し、脳はTTC(2.3.5 - triphenyltetrazolium chloride)で染色し、脳梗塞の体積を算出した。1)各薬物を虚血前より投与し7日後に評価した。2)線状体のグルタミン酸濃度を測定した。3)虚血後4日目にTUNEL染色をした。4)各薬物を虚血後より投与して、7日後に評価した。5) 10倍量の量を投与して、7日後に評価した。結果:β-ブロッカーにより1)神経学的欠損スコアと梗塞巣が減少した。2)虚血中のグルタミン酸濃度が減少した。3) TUNEL陽性細胞が減少した。4)虚血後投与でも神経学的欠損スコアと梗塞巣が減少した。5) 10倍量では増強効果が見られなかった。結論:ラット局所脳虚血モデルにおいて、短時間作用性β遮断薬の持続投与は脳虚血保護効果を示し、10倍量では増強効果はなかった。その機序としてグルタミン酸濃度の抑制やアポトーシスの抑制の関与が考えられる。この脳保護効果は虚血後の薬物投与でもみられた。背景:短時間作用型のβアドレナリン受容体遮断薬(βブロッカー)の脳保護作用を実験的に検討することによって、その機序を解明し、今後の急性脳虚血障害の予防薬の一つの手がかりになることが期待できる。方法:雄のS-Dラットを用いて、ハロセン麻酔下に行う。虚血開始約30分前に各薬剤の静脈内投与を開始し、24時間後まで継続する。側頭筋の温度を37.5°Cに保ち、先端を丸く細工した3.0ナイロンを内頚動脈へ進め、レーザ血流計により血流の低下を確認しながら選択的に中大脳動脈領域を虚血にする。虚血2時間後、ナイロンを引き抜き再灌流させ麻酔より覚醒させる。再灌流後22時間後に、神経学的検査を行い、再びハロセン麻酔下に、脳を取り出す。脳を冠状断に7つの切片に切りTTC(2.3.5-triphenyltetrazolium choloride)で染色する。梗塞巣をコンピュータを用いて数字化して各群を比較する。1)グループを対照群(生食)、エスモロールiv (200μg/kg/min)、ランジオロールiv(40μg/kg/min)、を再灌流22時間後まで投与し、7日後まで生存させ、7日後に脳を取り出した。2)虚血前に線状体にマイクロダイアリシスプローブを挿入固定し、生食投与、エスモロールiv、ランジオロールivのラットで虚血前後のグルタミン酸濃度を測定した。結果:1)薬物投与により1日後、4日後、7日後の神経学的所見は有意に改善した。再灌流7日後の梗塞巣では、生食投与のラットに比較して、エスモロールiv、ランジオロールivの群のラットでは有意に減少した。

2)虚血前後の線状体のグルタミン酸濃度は、虚血後に有意に上昇し、薬物の投与により上昇が抑制された。結論:βブロッカーによりラットの脳梗塞モデルにて1週間後の梗塞巣の減少がみられ、保護効果が示唆されたが、その機序として虚血中の線状体のグルタミン酸濃度の関与が示唆された。背景:短時間作用型のβアドレナリン受容体遮断薬(βブロッカー)の脳保護作用を実験的に検討することによって、その機序を解明し、今後の急性脳虚血障害の予防薬の一つの手がかりになることが期待できる。方法:雄のS-Dラットを用いて、ハロセン麻酔下に行う。虚血開始約30分前に各薬剤の静脈内投与を開始し、24時間後まで継続する。側頭筋の温度を37.5°Cに保ち、先端を丸く細工した3.0ナイロンを内頚動脈へ進め、レーザ血流計により血流の低下を確認しながら選択的に中大脳動脈領域を虚血にする。虚血2時間後、ナイロンを引き抜き再灌流させ麻酔より覚醒させる。再灌流後22時間後に、神経学的検査を行い、再びハロセン麻酔下に、7日後に脳を取り出す。脳を冠状断に7つの切片に切りTTC(2.3.5-triphenyltetrazolium chloride)で染色する。梗塞巣をコンピュータを用いて数字化して各群を比較する。1)グループを対照群(生食)、エスモロールiv(200μg/kg/min)、ランジオロールiv(40μg/kg/min)、を再灌流22時間後まで投与し、4日後の脳の線状体でTUNNEL染色を行った。2)虚血・再灌流30分後に薬物の投与を開始し、再灌流22時間後まで継続投与し、7日後に脳を取り出し梗塞巣を比較した。結果:1)線状体のTUNNEL陽性細胞数は、薬物投与により有意に抑制された。2)薬物投与により1日後、4日後、7日後の神経学的所見は有意に改善した。さらに再灌流7日後の梗塞巣では、生食投与のラットに比較して、エスモロールiv、ランジオロールivの群のラットでは有意に減少した。結論:ラットの脳梗塞モデルにてβブロッカーの投与により、アポトーシスに陥る細胞数の減少がみられ、この保護効果は虚血再灌流後の薬物投与によっても、1週間後の梗塞巣の減少がみられ、保護効果が示唆された。目的:ラット局所脳虚血モデルを用い、以前より10倍量の短時間作用性β遮断薬であるエスモロールおよびランジオロールの投与による脳保護効果を検討した。対象と方法:ハロタン麻酔・自発呼吸下、雄SDラット(260-305g)を用いた。薬物により5群(生食群:生食1ml/時、エスモロール群:200μg/kg/分、エスモロール10倍群:2000μg/kg/分、ランジオロール群:50μg/kg/分、ランジオロール10倍群:500μg/kg/分、各群n=6)に分けた。各薬物投与開始30分後に、中大脳動脈閉塞モデルにて脳虚血を作製し、2時間の虚血後に再灌流を行った。薬物は経静脈的に投与開始し24時間持続投与した。虚血1日後、4日後、7日後に神経学的欠損スコアを評価し、7日後に、脳をTTC(2.3.5-triphenyltetrazolium chloride)で染色し、脳梗塞の体積を算出した。数値は平均±標準偏差で示した。統計処理は分散分析にて行い、P値0.05未満を有意差ありとした。結果:神経学的欠損スコアは、生食群では、虚血後1日目にのみ、他の群に比較して高値であったが、4,7日後では差がなかった。
管フランジの力学的特性の体系的評価手法に関する研究

管フランジの力学的特性の体系的な評価手法について検討し,以下に示す結果を得た.1ガスケットの非線形挙動の定式化渦巻き形ガスケットおよびジョイントシートガスケットの変位-荷重関係を精度よく評価できる構成式を提案した.2管フランジの最適なボルト締付け手順について金属ガスケット,渦巻き形ガスケットおよびジョイントシートガスケットを使用した場合について,あらゆる順序でボルトを締め付けた時に発生するボルト軸力のばらつきを精度よく評価し,さらにボルト軸力をできる限り一様とする最適な締付け手順を求めることができる三次元有限要素コードを開発した.また,呼び径の大きな管フランジについては,管フランジに対するボルトの剛性比が大きくなるため,ボルト軸力を一様とするための手順を求めることが困難となる.そこで,弾性相互作用係数法を適用することにより,管フランジの呼びに関係なく,最適なボルト手順を精度よく評価できる手法を提案した.3管フランジが外力を受けた場合の力学的特性の評価金属ガスケット,ジョイントシートガスケットを使用した管フランジが,「引張り」,「曲げ」及び「内圧」を受けた場合について解析し,ボルト軸力の変化,ガスケット座面面圧分布特性の変化を明らかにした.4現行のJIS規格に対するコメント管フランジの呼びが異なると,各ボルトとそれに関連するフランジ部分の剛性比の違いから,ボルトの締付け特性とガスケット座面の面圧分布特性が大きく異なる.したがって,規格の変更は困難であるとしても,使用にあたって留意すべきコメントを付記する必要があると考えられる.管フランジの力学的特性の体系的な評価手法について検討し,以下に示す結果を得た.1ガスケットの非線形挙動の定式化渦巻き形ガスケットおよびジョイントシートガスケットの変位-荷重関係を精度よく評価できる構成式を提案した.2管フランジの最適なボルト締付け手順について金属ガスケット,渦巻き形ガスケットおよびジョイントシートガスケットを使用した場合について,あらゆる順序でボルトを締め付けた時に発生するボルト軸力のばらつきを精度よく評価し,さらにボルト軸力をできる限り一様とする最適な締付け手順を求めることができる三次元有限要素コードを開発した.また,呼び径の大きな管フランジについては,管フランジに対するボルトの剛性比が大きくなるため,ボルト軸力を一様とするための手順を求めることが困難となる.そこで,弾性相互作用係数法を適用することにより,管フランジの呼びに関係なく,最適なボルト手順を精度よく評価できる手法を提案した.3管フランジが外力を受けた場合の力学的特性の評価金属ガスケット,ジョイントシートガスケットを使用した管フランジが,「引張り」,「曲げ」及び「内圧」を受けた場合について解析し,ボルト軸力の変化,ガスケット座面面圧分布特性の変化を明らかにした.4現行のJIS規格に対するコメント管フランジの呼びが異なると,各ボルトとそれに関連するフランジ部分の剛性比の違いから,ボルトの締付け特性とガスケット座面の面圧分布特性が大きく異なる.したがって,規格の変更は困難であるとしても,使用にあたって留意すべきコメントを付記する必要があると考えられる.1.管フランジの最適なボルト締め付け手順について金属平板ガスケットを使用して,一般に採用されている順序でボルトを締め付けた場合の軸力のばらつきを評価した結果,最大30%程度規定値より低下することを明らかにした.また,最終的にボルト軸力を一様にするために,各ボルトに必要な初期軸力の大きさを数値解折により求め.その手順に従って実際に締め付けた結果,ばらつきは最大3%程度であった.以上の結果から,金属ガスケットを使用した場合については,ボルト軸力のばらつきと最終的にボルト軸力を一様にするための締め付け手順を数値解析から求めることが可能となったといえる.2.管フランジが外力を受けた場合の力学的特性の評価管フランジのシール性能評価を目的として,管フランジ締結体が長手方向に引張り荷重を受けた場合,内圧を受けた場合,両者を同時に受けた場合について数値解析と実験を実施した.その結果,引張り力を受けるとボルト軸力は単純に増加するが,内圧を受けるとボルト軸カは一度低下した後再び増加し,その後漏れ始めることを明らかにした.3.ボルト締め付け時の弾塑性拳動近年管フランジに限らず,小型軽量化の目的からボルト締結体は高強度ボルトを使用して高い軸力で締め付けられる傾向にある.ここでは,ボルト締め付け時にねじ谷底を中心として塑性変形がどのように進展し,さらに締桔体の力学的特性にどのように影響するかを体系的に明らかにした.4.接触熱抵抗の評価式の確立管フランジが高温あるいは低温環境で使用される場合,あるいは内部流体から熱負荷を受ける場合のシール性能を評価するためには,管フランジまわりの温度場を正確に求める必要がある.その基礎データを提供することを目的として,サーモグラフィーを用いた実験装置により一般的な工業材料に対して有効な接触熱伝達率の評価式を提案した.1.金属平板ガスケットを用いた管フランジの力学的特性金属平板ガスケットを用いた管フランジが,内圧,曲げモーメントを受けた場合,ボルトの締付け軸力ならびにガスケットのシール特性を左右するガスケット座面の面圧分布がどのように変化するかについて,三次元有限要素法により弾性接触問題として体系的に評価した.その結果,ガスケットの剛性が低いほど面圧が一様に近づき,内圧に対するボルト軸力の変化率が小さくなることを示した.2.うず巻き形ガスケットを用いた管フランジのボルト締付け手順の評価うず巻き

形ガスケットは,作動流体の圧力が比較的高い場合の管フランジ締結体に広く使用されている.しかしながら,うず巻き形ガスケットの荷重-変位関係はヒステリシスを伴った強い非線形性を示す.ここでは,まず実験に基づいて応力-ひずみ関係を表す簡易式を提案し,その結果を用いてボルトを逐次締め付けた場合の軸力のばらつき,ならびに締付け完了時にすべてのボルト軸力が均一になるような締付け手順を三次元有限要素法により解析する手法を提案した.その結果,ボルトを逐次締め付けた場合の軸力のばらつきを高い精度で評価し,さらに数%程度の軸力のばらつきでボルトを締結できる締付け手順を提案した.3.ボルト締結体が非定常熱負荷を受ける場合の力学的挙動管フランジは,作動状態において高温あるいは低温の内部流体が流れることが多い.その際,締結部の温度変化によってボルト軸力が変化し,漏れの発生あるいは過大なボルト軸力によるトラブルがしばしば報告されている.ここでは,以上の問題に対処するための基礎的研究として,ボルト締結体が熱負荷を受けた場合の軸力変化を,接触熱抵抗の影響を含めて体系的に解析する手法を提案しており,その妥当性を実験により確認した.管フランジの力学的特性の体系的な評価手法について検討し,以下に示す結果を得た.1ガスケットの非線形挙動の定式化渦巻き形ガスケットおよびジョイントシートガスケットの変位-荷重関係を精度よく評価できる構成式を提案した.2管フランジの最適なボルト締付け手順について金属ガスケット,渦巻き形ガスケットおよびジョイントシートガスケットを使用した場合について,あらゆる順序でボルトを締め付けた時に発生するボルト軸力のばらつきを精度よく評価し,さらにボルト軸力をできる限り一様とする最適な締付け手順を求めることができる三次元有限要素コードを開発した.また,呼び径の大きな管フランジについては,管フランジに対するボルトの剛性比が大きくなるため,ボルト軸力を一様とするための手順を求めることが困難となる.そこで,弾性相互作用係数法を適用することにより,管フランジの呼びに関係なく,最適なボルト手順を精度よく評価できる手法を提案した.3管フランジが外力を受けた場合の力学的特性の評価金属ガスケット,ジョイントシートガスケットを使用した管フランジが,「引張り」,「曲げ」及び「内圧」を受けた場合について解析し,ボルト軸力の変化,ガスケット座面面圧分布特性の変化を明らかにした.4現行のJIS規格に対するコメント管フランジの呼びが異なると,各ボルトとそれに関連するフランジ部分の剛性比の違いから,ボルトの締付け特性とガスケット座面の面圧分布特性が大きく異なる.したがって,規格の変更は困難であるとしても,使用にあたって留意すべきコメントを付記する必要があると考えられる.
グリコシルホスファチジルイノシトールアンカー蛋白質の細胞増殖及び分化における役割

(1)TBR 31-2細胞の持つ分化能TBR 31-2細胞について骨芽細胞としての性質を確認する目的で、骨芽細胞への転写因子Cbfa1及び表現形質である骨型アルカリ性ホスファターゼ、I型コラーゲン、オステオカルシン、オステオポンチン、PTHレセプター、ビタミンDレセプターの発現をRT-PCR法により解析した結果、増殖時期に比較して分化時期にはm-RNAレベルが有為に増加していることが確認された。すなわちTBR 31-2細胞は骨芽細胞であると判断できる。また、脂肪細胞への分化を行なう転写因子PPARγや分化マーカーのリポプロテインリパーゼとアジプシンのm-RNAレベルの増加も観察された。以上の結果よりTBR 31-2は骨芽細胞と脂肪細胞の2方向へと分化する可能性があることを遺伝子レベルで確認した。(2)GPI-アンカー蛋白質の分離精製とその同定TBR 31-2細胞のGPI-アンカー蛋白質をはじめとする膜表在性蛋白質をビオチン化後PI-PLC処理する。遊離したGPI-アンカー蛋白質をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離しニトロセルロース膜にブロッティング後アビジンーペルオキシダーゼを用いた化学発光反応により解析した。その結果、TBR 31-2細胞からPI-PLC処理により特異的に可溶化されるGPI-アンカー蛋白質の分子量は120kDa、112kDa、96kDa、60kDaであることが確認された。次にこの蛋白質についてFPLC装置を用いて分離精製後、TOFMSによる質量分析、蛋白質のアミノ酸組成やペプチド断片の配列の決定を行っている。今年度に行った研究によって得られた新たな知見等の成果は以下に示す通りである。1.骨芽細胞は分化に伴い骨形成のマーカーである骨型アルカリ性ホスファターゼ(ALP)の生成や石灰化を起こす。マウスより分離されたTBR312細胞についてALP、I型コラーゲン、オステオカルシン、ビタミンDレセプターおよびオステオポンチンなどの分化マーカーの発現は確認されていない。そこでTBR312細胞の骨芽細胞としての性質を確認する目的で、分化マーカーの生成をラジオイムノアッセイ方法で調べようとしたが、適切な抗体が入手できなかった。次にRTPCR法により発現量の解析を試みた結果、増殖時期に比較して分化時期には5種の分化マーカーのmRNAレベルがいずれの場合においても有為に増加していることが確認された。特にALPに関しては約3倍の発現量の増加が認められた。すなわちTBR312細胞は分化時に骨芽細胞としての分化マーカーを発現していることが判明した。2. TBR312細胞の増殖をアラマブルーを用いて測定した結果、細菌由来のホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼC(PIPLC)の共存下ではその増殖が阻害されることが判明した。また分化過程で認められる石灰化が起こる時期にPIPLC共存下および非共存下でのカルシウム量を測定すると、PIPLCを共存させた場合には有為なカルシウム量の減少が確認された。すなわちPIPLCにより可溶化されるグリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)アンカータンパク質が骨芽細胞の増殖および分化において重要な役割を果たしていることが判明した。今後は増殖及び分化時に特異的に発現してPIPLC処理で遊離してくるGPIアンカータンパク質を分離精製し、そのアミノ酸組成や、ペプチド断片の配列を決定する予定であるが、このために化学発光を用いたGPIアンカータンパク質の特異的検出法を現在検討中である。(1)TBR 31-2細胞の持つ分化能TBR 31-2細胞について骨芽細胞としての性質を確認する目的で、骨芽細胞への分化の鍵となる転写因子Cbfa1の発現をRT-PCR法により解析した結果、増殖時期に比較して分化時期にはm-RNAレベルが有為に増加していることが確認された。

以前報告した骨型アルカリ性ホスファターゼ、I型コラーゲン、オステオカルシンなどの分化マーカーのm-RNAレベルがそれぞれ有為に増加していることを考慮すると、TBR 31-2細胞は骨芽細胞であると判断できる。また、脂肪細胞への分化を行なう転写因子PPARγや分化マーカーのリポプロテインリパーゼとアジプシンのm-RNAレベルの増加が観察された。以上の結果よりTBR 31-2は骨芽細胞へも脂肪細胞へも分化しうる可能性があるバイポテントな細胞であることが判明した。(2)GPI-アンカー蛋白質の分離精製とその同定GPI-アンカー蛋白質の全細胞蛋白質に占める割合は少なく、通常の方法では検出するのが困難である。そこで、蛋白質の構造解析のため分化時期のTBR 31-2細胞を大量に培養し、GPI-アンカー蛋白質をはじめとする膜表在性蛋白質をビオチン化後PI-PLC処理する。遊離したGPI-アンカー蛋白質をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離しニトロセルロース膜にブロッティング後アビジンーペルオキシダーゼを用いた化学発光反応により解析した。その結果、TBR 31-2細胞からPI-PLC処理により特異的に可溶化されるGPI-アンカー蛋白質が少なくとも4種類存在することが確認された。次にこの蛋白質についてFPLC装置を用いて分離精製後、TOFMSによる質量分析、蛋白質のアミノ酸組成やペプチド断片の配列の決定を行っている。
塩素イオンポンプ55kDaサブユニットの機能解析

1.塩素イオンポンプ55kDaサブユニット(ClP55)の局在:GST-ClP55融合蛋白質特異抗体は、大脳皮質および海馬の大型神経細胞膜およびその樹状突起の細胞膜に強く反応し、小脳のプルキンエ細胞でも同様に反応した。また。免疫電子顕微鏡法でも海馬の神経細胞膜上に金粒子が確認され、ClP55は、膜貫通領域をもたないが細胞膜にアンカーした状態で細胞膜に存在することを明らかにした。2.アンチセンスオリゴヌクレオチド導入実験:ラット胎児脳初代海馬神経細胞にClP55cDNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを2日間導入後、細胞膜ClP55蛋白質の発現量は、アンチセンスオリゴヌクレオチドにより有意に(34%)抑制された。塩素イオン感受性蛍光色素により測定した、アンチセンスオリゴヌクレオチド導入細胞の細胞内塩素イオン濃度は、センス導入細胞(56mM)と比較して、約4倍高い濃度(1824mM)を示した。また、アンチセンス導入細胞膜分画のCl^--ATPase活性は、センス導入細胞(9.93μmol Pi/mg protein/hr)と比較して、約31%(6.84μmol Pi/mg protein/hr)の抑制を示した。このことより、ClP55は、塩素イオンポンプのサブユニットとして細胞内塩素イオン濃度調節に重要な役割を果たしていると考えられた。3.55kDa(ClP55)以外の塩素イオンポンプサブユニットcDNAのクローニング:ラット脳より細胞膜画分を可溶化し、CMセファロース、MonoQカラムによるHPLC分離後、塩素イオンポンプ/ATPase活性を保持する分画を用いて、以下の方法によるClP55以外の塩素イオンポンプサブユニットを検索した。抗体結合法によりClP55以外の蛋白質は、5種類(72,62,51,49,46kDa)存在し、蛋白結合法:によりClP55以外の蛋白質は3種類(62,51,49kDa)存在することが明らかになった。4.ClP55とATPase蛋白との結合性の確認:上記の塩素イオンポンプ粗抽出分画をATP結合カラムに吸着し、ATP溶液で溶出した。得られたサンプルのウエスタンブロッティングを行なった結果、抗ClP55抗体によって検出したところ、ATPase蛋白とともにClP55が存在することが明らかになった。以上に結果から、塩素イオンポンプは、ClP55とATP結合蛋白質を含めて少なくとも4種類の異なった蛋白質より成ることが明らかとなった。また。1.塩素イオンポンプ55kDaサブユニット(CIP55)の局在の解析GST-ClP55融合蛋白質特異抗体を用いた脳における発現局在の解析により、本抗体は、大脳皮質および海馬の大型神経細胞膜およびその樹状突起の細胞膜に強く反応し、小脳のプルキンエ細胞でも同様に反応した。

また、免疫電子顕微鏡法でも海馬の神経細胞膜上に金粒子が確認され、ClP55は、膜貫通領域をもたないが細胞膜にアンカーした状態で細胞膜に存在することを明らかにした。2.アンチセンスオリゴヌクレオチド導入実験ラット胎児脳初代海馬神経細胞にClP55cDNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを2日間導入し以下の結果を得た。ClP55蛋白質の発現量は、アンチセンスオリゴヌクレオチド導入により有意に(34%)抑制されることを確認した。塩素イオン感受性蛍光色素により測定した、アンチセンスオリゴヌクレオチド導入細胞の細胞内塩素イオン濃度は、センス導入細胞(56mM)と比較して、約4倍高い濃度(1824mM)を示すことを明らかにした。また、アンチセンス導入細胞膜分画のCl^--ATPase活性は、センス導入細胞(9.93μmol Pi/mg protein/hr)と比較して、約31%(6.84μmol Pi/mg protein/hr)の抑制を示すことを明らかにした。このことよりClP55は、塩素イオンポンプのサブユニットとして細胞内塩素イオン濃度調節に重要な役割を果たしていると考えられ、以上の結果は、Biochemical and Biophysical Research Communicationsに掲載した。1.55kDa(ClP55)以外の塩素イオンポンプサブユニットcDNAのクローニングラット脳より細胞膜面分を可溶化し、CMセファロース、MonoQカラムによるHPLC分離後、塩素イオンポンプ/ATPasc活性を保持する分画を用いて、以下の方法によるClP55以外の塩素イオンポンプサブユニットを検索した。(1)抗体結合による方法抗GST-ClP55組換え蛋白質に対する特異抗体を結合した親和性カラムを作成し、上記の塩素イオンポンプ粗抽出分画を吸着後、溶出した。得られたサンプルをSDS-PAGEにより分離し、PVDF膜に転写後、膜のCBB染色を行なった結果、ClP55以外の蛋白質は、5種類(72,62,51,49,46kDa)存在することが明らかになった。(2)蛋白結合による方法GST-ClP55組換え蛋白質をGSTrap FFカラムに結合した親和性カラムを作成し、上記の塩素イオンポンプ粗抽出分画を吸着後、溶出した。得られたサンプルをSDS-PAGEにより分離し、PVDF膜に転写後、膜のCBB染色によって、ClP55以外の蛋白質は3種類(62,51,49kDa)存在することが明らかになった。2.ClP55とATPase蛋白との結合性の確認上記の塩素イオンポンプ粗抽出分画をATP結合カラムに吸着させ、ATP溶液で溶出した。得られたサンプルをSDS-PAGEにより分離し、PVDF膜に転写後、抗ClP55抗体によって検出したところ、ATPasc蛋白とともにClP55が存在することが明らかになった。以上に結果から、塩素イオンポンプは、ClP55を含めて少なくとも4種類の異なった蛋白質より成ることが明らかとなった。
反強磁性Ce化合物における圧力誘超

初年度は、核四重極共鳴用に使えるような高圧セルの開発と反強磁性体(常圧)である対象物質の核四重極共鳴の測定とを並行して研究をおこなった。まず、第一の対象試料CeIn_3,CePd_2Si_2(ともに10K近くにネール点をもつ)では、SiのNMRをはじめ、In,PdのNQR信号が観測でき、結果の一部を'98秋の物理学会、ならびにSCES'98で発表した。特にCeIn_3では「45kOeの内部磁場が電場勾配の主軸に垂直な面に生じていることが明らかになり、電気四重極パラメタも決定」できた。核スピン一格子緩和率の温度変化からは、ネール点以上でCeの磁気モーメントの低周波ゆらぎにより温度によらず一定であり、十分低温では温度に比例することがわかった。このことは磁気的秩序した低温では強く相関している伝導電子による核磁気緩和が支配的であることを意味する。また、この系では2.5GPa以上の圧力下で超伝導転移があるが1.7GPaまでの圧力領域でのNQR予備実験では、「圧力による内部磁場値の大きな変化は観測できなかったが、前記の磁気的ゆらぎが大きく抑えられていること」が明確になった。2年度には、さらに高圧下での実験が進み、2.8GPaまでInのNQR測定が出来た。そしてそのまま0.25K以下に温度を下げれば超伝導転移が観測できるが、現行の高圧セルでは最大冷却能力での希薄冷凍機でもセル内では0.5Kまでしか下がらず高圧セルのさらなる改良ならびに試作が必要である。一方、CePd_2Si_2中でのPdNQRについては結晶学的に対称性がよいPd位置での内部磁場の相殺がおこり、PcNQRスペクトラムはネール点前後で変化はなかったが、核磁気緩和率については定性的にCeIn_3の場合と同様な結果となった。また、同種の圧力誘起超伝導体であるCeNi_2Ge_3中のNiNQR、ごく最近発見されたCeRhIn_5のInNQR測定も今後の研究対象にしていく予定である。初年度は、核四重極共鳴用に使えるような高圧セルの開発と常圧では反強磁性体である対象物質の核四重極共鳴の測定とを並行して研究をおこなった。

この系では2.5GPa以上の圧力下で超伝導転移があるが1.7GPaまでの圧力領域でのNQR予備実験では、「圧力による内部磁場値の大きな変化は観測できなかったが、前記の磁気的ゆらぎが大きく抑えられていること」が明確になった。現在さらに高圧でNMR,NQRに使える高圧セルの改良ならびに試作をおこなっている。またCePd_2Si_2のPdNQRでは結晶学的に対称性がよいPd位置のために内部磁場の相殺がおこり、PdNQRスペクトラムにはネール点前後で変化はなく、定性的には核磁気緩和率のみCeIn_3の場合と同様な結果となった。さらに、圧力のNQR実験として非常に興味ある物質であるCe_7Ni_3の^<61>NiNMR,NQR信号の観測のためアメリカ・オークリッジ研より高濃縮^<61>Niを購入し、その後試料の作成に成功した。また、同種の圧力誘起超伝導体であるCeNi_2Ge_2中の^<61>NiNQR測定も次年度の対象物質に入れて研究を進めていく予定である。初年度は、核四重極共鳴用に使えるような高圧セルの開発と反強磁性体(常圧)である対象物質の核四重極共鳴の測定とを並行して研究をおこなった。まず、第一の対象試料CeIn_3,CePd_2Si_2(ともに10K近くにネール点をもつ)では、SiのNMRをはじめ、In,PdのNQP信号が観測でき、結果の一部を'98秋の物理学会、ならびにSCES'98で発表した。特にCeIn_3では「45kOeの内部磁場が電場勾配の主軸に垂直な面に生じていることが明らかになり、電気四重極パラメタも決定」できた。核スピンー格子緩和率の温度変化からは、ネール点以上でCeの磁気モーメントの低周波ゆらぎにより温度によらず一定であり、十分低温では温度に比例することがわかった。このことは磁気的秩序した低温では強く相関している伝導電子による核磁気緩和が支配的であることを意味する。また、この系では2.5GPa以上の圧力下で超伝導転移があるが1.7GPaまでの圧力領域でのNQR予備実験では、「圧力による内部磁場値の大きな変化は観測できなかったが、前記の磁気的ゆらぎが大きく抑えられていること」が明確になった。2年度には、さらに高圧下での実験が進み、2.8GPaまでInのNQR測定が出来た。そしてそのまま0.25K以下に温度を下げれば超伝導転移が観測できるが、現行の高圧セルでは最大冷却能力での希薄冷凍機でもセル内では0.5Kまでしか下がらず高圧セルのさらなる改良ならびに試作が必要である。一方、CePd_2Si_2中でのPd NQRについては結晶学的に対称性がよいPd位置での内部磁場の相殺がおこり、Pd NQRスペクトラムはネール点前後で変化はなかったが、核磁気緩和率については定性的にCeIn_3の場合と同様な結果となった。また、同種の圧力誘起超伝導体であるCeNi_2Ge_2中のNi NQR、ごく最近発見されたCeRhIn_5のIn NQR測定も今後の研究対象にしていく予定である。
地方都市部の住宅需給関係における借家需要の構造的変化に関する研究

本研究の主な成果の概要は次のようにまとめられる。まず借家の居住水準にみる地域差について,地域別の居住水準に注目して分析したところ,いずれの地域も平均的な居住水準は上昇しているものの,その標準偏差には大きな格差が発生しつつあることが明らかとなった。この現象は特に大都市など都市化地域における世帯の分解過程が作用していると考えられ,居住水準の分布において新しい傾向が発生してきていることを示すものと思われる。また住宅の規模に関して,持ち家においては非居住室面積が従来の地域差を維持する一方で,借家においては地域差が縮小する傾向にあるものと考えられる。次に地方都市部における住宅事情の変化について,世帯の小規模化は全国的にみられる現象であるが,その変化には大きな地域差のあることがわかった。これは一方で世帯小規模化の全国的進展を示し,他方で各地の世帯規模構成にもともと地域的特徴があったことの結果でもある。また,民借世帯の移動率には地域差がみられ,民営借家世帯の移動率は大都市部よりも地方都市部において比較的高い。また,世帯主の年齢階級に注目したところ,そうした地域差を生み出す要因としては40歳以上の中高齢階級における移動率の違いが強く作用していると考えられる。バブル経済期以降の借家供給拡大を背景とした借家フローの急増は,地方都市部において新たな借家ストックを形成している。これが需要構造の変化と互いに原因となり結果となって,今日の地方都市部における居住を形成している。しかしながら地方都市部では「良質な借家」に関する議論が積極的に行われていない。分析により明らかとなった活発な移動,地方都市部における借家ストックの増大あるいは全国的傾向としての住まい方の変化を考慮した場合,地方都市部における借家について,より豊かな像を描く必要があるように思われる。研究計画では,12年度の研究課題として「地方都市部における住宅ストックの推移と変容」及び「地方都市部における借家の変容」を挙げた。ここではその2項目について,現在までに得られた知見を要約する。1.「地方都市部における住宅ストックの推移と変容」について世帯規模と住宅規模の関係を分析すると,居住室の余剰が増加しつつあることがわかる。特に伝統的に同居率の高い地域では大規模住宅ストックが多く,世帯の小規模化・高齢化による「ミスマッチ」状態を窺わせる。また,地方都市部の貸家供給量は増加しているが,その一方で,民営借家居住世帯の移動率は東京,大阪等の大都市県よりも,東北,北陸,九州地方等の諸県において比較的高い。こうした現象の要因として,借家ストック増加に伴い借家間の住み替えが増加していること,あるいは伝統的に同居世帯率の高い地方において,若年世帯による独立・結婚等の新規世帯形成が主な需要となっていること等が考えられる。2.「地方都市部における借家の変容」について福井市市街化区域を対象に調査した結果,民営借家の主な住棟形態は戸建て(木造・低層),共同住宅(木造・低層),共同住宅(RC造・中層),共同住宅(S造・低層)の4形態にまとめられる。このうち,現在の主流と考えられる2形態の概略は次のようである。(1)共同住宅(RC造・中層):昭和40年代に増加し,当初は階段室式と片廊下式が混在していたが,次第に片廊下式が多くなる。外壁は石綿吹き付けから外壁パネルヘと変化している。水平性を強調した外観は現在における主流の一つである。(2)共同住宅(S造・低層):昭和40年代には片廊下式が多く外観上の特徴も似通っていたが,量的には昭和60年代以降急激に増加しており,この時期以降は階段室式の4戸1棟を基本ユニットとした住棟がほとんどである。外観は屋根を黒色,外壁を白色・グレー系でまとめる例が多い。

今年度の研究内容は以下のようにまとめられる。1住み替えと住宅水準との対応性に関する分析住宅の居住水準の変化と地域差を明らかにするとともに,住み替えによる住居規模の変化を分析した。具体的には,住宅の居住水準を示す指標として居室数および居室畳数を用い,これと世帯人員との対応関係に注目した。そして,借家を介する住み替えによる規模の変化を検証した。分析により得られた知見を要約すると次のようになる。(1)規模の面での居住水準は経年的に上昇しており,持ち家の地域内格差は減少しつつある。その一方で,地域間格差はさほど変化しておらず,とくに借家において比較的顕著である。なお借家については,地域内格差も持ち家ほどの減少を示さない。(2)世帯との対応関係からみた場合,借家への一次入居と考えられるのは若年小規模が圧倒的に多い。しかし,二次入居すなわち借家間の住み替えに注目すると,若年層だけでなく中高年層の移動も定量が認められ,借家入居世帯の二極分化とも言うべき現象が定量的に示された。2借家の回転性と世帯構成との関係に関する分析地方都市部における借家の利用状況を示す指標として「回転」に注目した。借家での居住期間から移動率(住み替え行為の発生率)を産出し,これを基に借家の回転率を算出した。(1)借家世帯の移動率は大都市部よりも地方都市部のほうが比較的高く,その多くは若年層の別居住形態からの住み替えである。しかしながら,移動率の補正計算により中高齢層の移動は地方部のほうが比較的高いことが明らかとなった。(2)借家の新規供給量は大都市部と地方都市部でさほど差がないものの,借家間移動(二次入居)量が地方都市部で比較的少なく,したがって地方都市部においては借家の中古ストックの利用が活発でないことが推察された。
IIIVヘテロ構造のバンド端近傍における複素屈折率変化量の高感度測定法の研究

キャリヤ注入に伴うIIIVヘテロ構造の複素屈折率変化量を、吸収端波長lambdag近傍、特に大きな吸収のためにこれまで測定が困難であったlambda<lambdagの波長域において知ることは、光スイッチ等のキャリヤ注入型光デバイスの設計上、極めて重要である。この研究ではキャリヤ注入によるGaInAsPのlambdag近傍における複素屈折率変化量を高精度に測定する方法を提案し、その結果を示した。また既存の理論モデルによる計算値との比較を行った。1.測定方法(1)2つの偏光分離素子により構成されるマイクロブリッジを用いて、偏光解析により複素屈折率変化量を求めた。この時サンプルの膜面に垂直方向に光を通過させることによって、大きな吸収損失の影響を低減させることができる。(2)測定誤差の抑制と、光源の波長分解能の向上そして使用波長範囲の拡大を目的として、測定系の改良を行い、測定精度の向上を図った。2.測定結果(1)複素屈折率の変化は、屈折率・吸収係数いずれもlambdagよりもやや短波長域において大きく変化し、負の変化量を示した。また、注入キャリヤ濃度の増加に伴い、全体的に絶対値が増加することがわかった。(2)既存の理論モデルと比較ところ、バンドフィリング効果を示す傾向は類似していた。また、オーダーの差異が見られ、測定に用いた注入キャリヤ濃度ではバンドギャップシュリンケージ効果を示す特性は観測されないことがわかった。
グラミシジンＡの大規模構造活性相関による新規生物活性分子の創出

グラミシジンAは、15個のD,L-アミノ酸が交互に配列する抗菌ペプチド天然物である。グラミシジンAは、強力な抗菌活性を示す一方で、顕著な哺乳細胞毒性を示すため、抗菌薬としての適用は著しく限られている。本研究では、グラミシジンAを構造基盤とし、多様な側鎖構造パターンを持つ数千種類のグラミシジンA類縁体を合成・評価することで、グラミシジンAの持つ抗菌活性・細胞毒性を分離し、選択的な活性を示す新規類縁体の創出を目指す。本年度は、抗菌ペプチドであるグラミシジンAのone-bead-one-compound (OBOC)ライブラリー構築およびスクリーニング法を確立・実施し、研究を展開した。第4, 6, 8, 10, 12, 14残基に、バリン、ロイシンに加え、側鎖間で水素結合形成可能なモノマーとしてスレオニン、N-メチルアスパラギンをsplit-and-mix法によりランダムに導入した4096種類の類縁体群で構成されるOBOCライブラリーを構築した。続いて、リポソームを用いたイオン透過活性試験と、P388マウス白血病細胞を用いた細胞毒性試験、化膿レンサ球菌に対する抗菌活性試験の3種のスクリーニングにより、ライブラリーを統一的に評価した。その結果、グラミシジンAと同様の高いイオン透過活性と細胞毒性を示す類縁体のほかに、高いイオン透過活性と減弱した細胞毒性を示す類縁体等、グラミシジンAと特性の異なる類縁体を複数得ることに成功した。さらに、グラミシジンAと同程度以上の抗菌活性を示す化合物を見出した。また、MS/MS解析により、全ヒット化合物の構造を決定し、その中から選定した20種類の化合物の詳細な機能評価を行った。天然物に比して優れた活性を有する新規類縁体および高度に細菌選択的な毒性を示す新規類縁体の創出を実現した。これらの化合物は、有用な新規抗菌薬シーズとなることが期待される。グラミシジンAを構造基盤とした多様な側鎖構造パターンを持つ数千種類のグラミシジンA類縁体群で構成されるライブラリーの構築および3種のスクリーニングを完了し、天然物とは異なる活性特性を示す化合物を複数得ることに成功した。また、これらの化合物について構造決定を完了し、スケールアップ合成と精製により純粋な類縁体を調製した。これらの哺乳細胞毒性の容量作用関係とイオン透過活性、グラム陽性菌に対する抗菌スペクトルの詳細な生物活性評価を実施したところ、選定した全化合物がグラミシジンAと同等もしくはそれ以上のイオン透過活性を示した。さらに、これらの中から強力な抗菌活性を示すものも多数見出した。中でも、試験に付した全ての菌株に対して天然物よりも2-4倍抗菌活性が増強した化合物や、哺乳細胞に対する細胞毒性が著しく減弱したにも関わらず、抗菌活性が増強した化合物が得られた。以上のように、天然物に比して優れた活性を有する新規グラミシジンA類縁体および高度に細菌選択的な毒性を示す新規グラミシジンA類縁体の創出を実現した。哺乳細胞に対する細胞毒性が著しく減弱したにも関わらず、抗菌活性が増強した化合物については、有用な新規抗菌薬シーズとなることが期待されるため、共同研究者と連携して哺乳動物に対する毒性、治癒効果の評価を試みる。また、これらの化合物について、三次元構造情報の取得や、細胞内局在を評価することで、グラミシジンAの示す多様な生物活性に対する寄与を明らかにする。

グラミシジンAを構造基盤とした多様な側鎖構造パターンを持つ数千種類のグラミシジンA類縁体群で構成されるライブラリーの構築および3種のスクリーニングを完了し、天然物とは異なる活性特性を示す化合物を複数得ることに成功した。また、これらの化合物について構造決定を完了し、スケールアップ合成と精製により純粋な類縁体を調製した。これらの哺乳細胞毒性の容量作用関係とイオン透過活性、グラム陽性菌に対する抗菌スペクトルの詳細な生物活性評価を実施したところ、選定した全化合物がグラミシジンAと同等もしくはそれ以上のイオン透過活性を示した。さらに、これらの中から強力な抗菌活性を示すものも多数見出した。中でも、試験に付した全ての菌株に対して天然物よりも2-4倍抗菌活性が増強した化合物や、哺乳細胞に対する細胞毒性が著しく減弱したにも関わらず、抗菌活性が増強した化合物が得られた。以上のように、天然物に比して優れた活性を有する新規グラミシジンA類縁体および高度に細菌選択的な毒性を示す新規グラミシジンA類縁体の創出を実現した。哺乳細胞に対する細胞毒性が著しく減弱したにも関わらず、抗菌活性が増強した化合物については、有用な新規抗菌薬シーズとなることが期待されるため、共同研究者と連携して哺乳動物に対する毒性、治癒効果の評価を試みる。また、これらの化合物について、三次元構造情報の取得や、細胞内局在を評価することで、グラミシジンAの示す多様な生物活性に対する寄与を明らかにする。
通貨危機不況克服可能な建設材料及び施工方法の開発

東南アジア諸国では、数年前より金融危機による経済混乱にある。これが影響して多くの建設プロジェクトが中断されたり,延期,中止されている。その一方ではこの経済混乱から立ち上がる懸命な努力がされている。この研究は,国際共同研究(大学間共同研究)として,タイ国タマサート大学シリントン国際工学部の教員と共同して,これらの通貨不況の状況を克服できる建設材料と建設施工方法を開発し,経済復活に貢献しようとするものである。1.高知側の作成したプロポーザルをタイ側が検討し、必要な修正を高知側に申し入れ、高知側が検討し結果を再度タイ側に連絡。この過程を繰り返し、ある程度計画を煮詰めた。2.上記1.によって同意された項目に就いては、項目別の実施具体案を相互で作成し、互いに交換、検討した。検討結果を交換して、調整した。3.上記1.および2.の結果を整理して、同意された事項、代案提示事項、再協義事項に分類した。4.実施計画を双方実施促進した。5.実施軌道へ乗せた場合の問題点の究明を相互に行った。その解決方法について、相互の意見、計画を交換。問題点の絞り込みと解決方法の相互提案。問題点の影響の究明。6.現地並びに、日本側の情勢変化の分析とその影響を分析した。7.以上の状況を互いに把握して、タイにおける検討会議を開催し,情報交換、路線修正のうえ,通貨不況の状況を克服できる建設材料と建設施工方法を提案した。問題点の影響の究明。現在タイは金融危機による経済混乱にある。この研究は,これらの通貨不況の状況を克服できる建設材料と建設施工方法を開発し,経済復活に貢献しようとするものである。1.高知側の作成したプロポーザルをタイ側が検討し,必要な修正を高知側に申し入れ,高知側が検討し結果を再度タイ側に連絡。この過程を繰り返し,ある程度計画を煮詰めた。2.上記1.によって同意された項目に就いては,項目別の実施具体案を相互で作成し,互いに交換,検討した。検討結果を交換して,調整した。3.上記1.および2.の結果を整理して,同意された事項,代案提示事項,再協義事項に分類した。その解決方法について,相互の意見,計画を交換。問題点の影響の究明。6.現地並びに,日本側の情勢変化の分析とその影響を分析した。7.以上の状況を互いに把握して,タイにおける検討会議を開催。情報交換,路線修正の必要性,研究計画実施開始時点の見通し等を互いに確認し,現地関係機関訪問調査のため訪タイした。現在、タイは金融危機による経済混乱にある。これが影響して多くの建設プロジェクトが中断されたり、延期、中止されている。この研究は、これらの通貨不況の状況を克服できる建設材料と建設施工方法を開発し、経済復活に貢献しようとするものである。1.高知側の作成したプロポーザルをタイ側が検討し、必要な修正を高知側に申し入れ、高知側が検討した結果を再度タイ側に連絡。この過程を繰り返し、計画を煮詰めた。2.上記1.によって同意された項目については、項目別の実施具体案を相互で作成し、互いに交換、検討した。3.上記1.及び2.の結果を整理して、同意された事項、代案提示事項、再協議事項に分類した。その解決方法について、相互の意見、計画を交換した。問題点の絞り込みと解決方法を相互提案し、問題点の影響の究明を行った。6.現地並びに日本側の情勢変化、その影響を分析した。

7.以上の状況を互いに把握して、タイにおける検討会議を開催。情報交換、路線修正の必要性、研究計画実施開始時点の見通し等を互いに確認し、現地関係機関を訪問し調査するため島、大内がタイを訪問した。現在タイは金融危機による経済混乱にある。これが影響して多くの建設プロジェクトが中断されたり,延期,中止されている。その一方ではこの経済混乱から立ち上がる懸命な努力がされている。この研究は,これらの通貨不況の状況を克服できる建設材料と建設施工方法を開発しようとするものである。1.高知側の作成したプロポーザルをタイ側が検討し、必要な修正を高知側に申し入れ、高知側が検討し結果を再度タイ側に連絡した。この過程を繰り返し、ある程度計画を煮詰めた。2.上記1.によって同意された項目に就いては、項目別の実施具体案を相互で作成し、互いに交換、検討した。検討結果を交換して、調整した。3.上記1.および2.の結果を整理して、同意された事項、代案提示事項、再協義事項に分類した。4.実施計画を双方実施促進した。5.実施軌道へ乗せた場合の問題点の究明を相互に行った。その解決方法について、相互の意見、計画を交換した。問題点の絞り込みと解決方法の相互提案した。問題点の影響を究明した。6.現地並びに、日本側の情勢変化の分析とその影響を分析した。7.以上の状況を互いに把握して、タイにおける検討会議を開催し,情報交換、路線修正のうえ,通貨不況の状況を克服できる建設材料と建設施工方法を提案した。