hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高齢者使用に関する医薬品情報収集・提供の現状分析と今後のあり方に関する研究

近年医療でも様々な分野で人工知能(AI)の応用が盛んになっているが,医薬品の文書解析に十分な性能を持ったAIはいまだに存在しない.大量の医薬品文書を効率的に解析する人工知能(AI)の開発のために,英国の抗菌薬の添付文書を対象に,先発品と後発品で自然言語処理(NLP)により比較した.その結果,NLPにより比較した時の合致率の指標RATEのAUC(area under the curve)は,医師の判断をgold standardとした時,0.903 (標準偏差0.02)であり,特異度を100%とした時の感度は61%であった.以上の結果より,規制当局は後発品の添付文書は先発品と同一となるように要求しているが,実際には異なる物が相当数存在すること,NLPはその相違をスクリーニングするのに実用的な性能を持っていることが証明された.1.人員を含めた研究体制の整備が十分であったこと。2.独創的な研究手法が確立していたこと。3.研究対象が公開資料であるため、資料入手に時間を必要としなかったこと。4.本研究開始以前に構築してきた医薬品ナレッジベースが研究手法として大いに役立ったこと。次年度も研究を進め、得られた結果を取りまとめることに加え、高齢者向け医薬品情報提供について、自然言語処理(NLP)の手法を用いて日米欧の三極の差を検討する。また、高齢者にも頻度が高い糖尿病を始めとする生活習慣病のガイドラインと当該疾患に対する医薬品の情報提供状況を比較検討する予定である。1.人員を含めた研究体制の整備が十分であったこと。次年度も研究を進め、得られた結果を取りまとめることに加え、高齢者向け医薬品情報提供について、テキストマイニングの手法を用いて日米欧の三極の差を検討する。また、高齢者に頻度が高いにもかかわらず、臨床試験における高齢者の組み入れ率が低い悪性腫瘍に対する医薬品の情報提供状況を把握するために、米欧規制当局の薬事情報データベースを購入する予定である。電子会議・メール・電話連絡などの手段による短時間の打ち合わせを繰り返すことにより,当初予定していた実際に顔を合わせての研究打ち合わせをしなくても済むようになったため.電子会議・メール・電話連絡などの手段による短時間の打ち合わせを繰り返すことにより、当初予定していた実際に顔を合わせての研究打ち合わせをしなくても済むようになったため。翌年度は研究の進行により、実際に顔を合わせて綿密な打ち合わせを繰り返すことが予想されるので、その費用に充当する予定である。
ｃ－Ｍｙｂ　ＤＮＡ結合ドメインの機能に着目した生物学的揺らぎの多角的解析

2016年度は、前年度にNMRや熱測定で得られたc-Myb DNA結合ドメインに関する知見をさらに多角的に評価するべく、1分子解析や高圧下での研究を進めた。1分子解析は、SPring-8の高輝度X線を用いた時分割測定(DXT)を適用し、DNA結合に伴う運動性変化をミリ秒マイクロ秒で追跡した。測定にあたり、変異体の作製やプローブのラベル部位などの検討も進め、1分子系のアンサンブル量の運動性変化と多分子系での揺らぎの情報がよく相関することを明らかにした。加えて、DNA結合状態での揺らぎの減少が認められ、これはITCやDSCで得られたエントロピー変化量の結果と相関することも明らかとなった。高圧解析では、ダイアモンドアンビルセルを用いて、1 GPaを超える圧力まで測定することで、圧力軸での安定性の差異を明らかにすることに成功した。対象タンパク質の変性圧力中間点は約800 MPaであり、蛍光やNMR測定条件下においてはフォールド構造内の揺らぎを検出可能であることも示した。また、変異体を用いた実験により、タンパク質内部のキャビティと部分モル体積変化(ΔV)との間に良い相関を見出した。これらの結果は、これまでの温度変化やpH変化により得られた揺らぎの情報とも一致する。現在、双方ともに論文執筆中である。さらに、リピート間の構造安定性に着目した研究も進め、c-MybがDNA結合に2つのリピートが必須である裏付けをフォールディングに関わる熱力学量により実証した。28年度が最終年度であるため、記入しない。2015年度は主に、対象タンパク質c-Myb DNA結合ドメイン(R2R3)の基礎物性解析を中心に進めた。まず、生理的条件下における構造特性を明らかにすべく、異なる温度条件、およびpH条件下での構造安定解析を行った。異なる温度条件下における二次元NMR測定を行った結果、顕著な信号強度の減少が観測された。そこで、より詳細な特性を明らかにすべく、シグナル帰属に必要な各種三次元スペクトル測定、主鎖シグナルの帰属を行った。また、キャビティ(揺らぎ)を小さくしたV103Lを作製し、同様の解析を行ったところ、野生型の顕著な構造揺らぎはキャビティ周囲で顕著あること、さらに生体内環境に近い温度でも、特徴的な揺らぎが起こることを明らかにした。この他、側鎖の多次元測定や横緩和測定、緩和分散測定を行い、部位特異的な詳細な構造揺らぎの情報を取得し、そのユニークな構造特性を明らかにした。次に、異なるpH条件下での熱力学特性を明らかにすべく、pH 4.0から7.5におけるR2R3の構造安定性解析を行った。遠紫外CDスペクトル測定では、α-ヘリックスリッチな構造がpH低下とともに崩壊した一方で、近紫外CDスペクトルではある一定の構造を保持することが判明した。また、α-ヘリックス含量は、pH 6.5で最大となり、pH 7.5にかけて徐々に減少して行った。一方、DSCにより得られた熱安定性は、pH 5.0において最も高く、pH上昇とともにΔH依存的に減少していた。さらに興味深いことに、構造形成を示すα-ヘリックス含量と熱安定性の指標であるΔGとの間に特徴的な相関が見られなかったものの、ΔHとの間では直線的な相関があることを明らかにした。以上より、生理的条件下に近いpH 7.5においては、ΔG、ΔH、ΔSいずれも熱力学的に最も有利とはならず、ある一定の柔らかさを持つ状態で存在することを明らかにした。年次計画として、生理的条件下での動態を明らかとすることを目標として研究を進めた。温度・pH特性ともに、一定の成果が得られ、原著論文にも掲載済みである(Inaba et al., FEBS J., 282, 4497-4514, 2015; Inaba et al., Int. J. Biol. Macromol., 82, 725-732, 2016)。また、リピート間のリンカー領域の柔軟性を変化させることで、構造揺らぎが変化し、これらが構造安定性のエントロピー項として反映すること明らかにした。これらの結果も、原著論文に掲載済みあり(Inaba et al., J. Therm. Anal. Calorim., 123, 1763-1767, 2016)、さらに次年度の研究計画として予定していた、一分子測定(DXT)や高圧測定の条件検討も進めることができた。

対象タンパク質の変性圧力中間点は約800 MPaであり、蛍光やNMR測定条件下においてはフォールド構造内の揺らぎを検出可能であることも示した。また、変異体を用いた実験により、タンパク質内部のキャビティと部分モル体積変化(ΔV)との間に良い相関を見出した。これらの結果は、これまでの温度変化やpH変化により得られた揺らぎの情報とも一致する。現在、双方ともに論文執筆中である。さらに、リピート間の構造安定性に着目した研究も進め、c-MybがDNA結合に2つのリピートが必須である裏付けをフォールディングに関わる熱力学量により実証した。対象タンパク質のシグナル帰属を終えたので、次は高圧蛍光およびNMRにより、高圧下で検出されうる準安定構造の詳細な解析を進める。加えて、1 GPaまで加圧可能な高圧IRも適用し、対象タンパク質の持つ圧力転移点なども決定する。これまでの予備実験から、高圧蛍光やNMRで測定可能な圧力範囲(概ね700 MPa)においても変性構造や転移点は観測されていない。それぞれの測定で得られる情報を相互に評価しながら、準安定構造の特性を探る。一分子観測に関しては、測定に必要な変異体の取得は既に成功しており、高輝度X線照射による金ナノの回折点も確認済みである。今年度は、複数条件下での測定を進め、特に熱測定やNMR等から得られる他分子系での結果が、一分子測定で得られるアンサンブル量と如何に相関するかを評価する。さらにSAXSにより、動径分布を評価し、分子全体あるいは一分子レベルでの挙動、さらにDNA結合(機能)に関わる熱力学量等を多角的に評価する。28年度が最終年度であるため、記入しない。
親子関係を軸とした高齢者住生活のサポート構造の動向に関する研究

高齢化社会の進行に伴い社会的あるいは行政による公的な支援や助成策が充実していく中にあっても、当の高齢者は依然として親子関係を軸とした肉親のサポートにより老後を送りたいとの要求が根強くあり、今後もその形態はともあれ子供世帯が老親の住生活を支援していくという構図は続いてゆくものと予想される。一方、子供の側から見ると、老親を物質的および精神的に支える義務への自覚はあっても、できるだけ干渉を受けずに独立した生活を営みたいとの要求は社会が近代化するほど強まり、かつてのように同居という居住形態よって親の住生活を支えることへの抵抗感は強まっているものと推察される。このような親世代と子世代間の意識のずれは、当然のことながら親子両世帯の居住関係に大きな影響と変化をもたらしている。本研究では、高齢者住生活のサポートを意図した親子2世帯居住を、同居、隣居、近居、準近居に分類し、西日本地域(中国、四国、九州地方)における全市町村へのアンケートを通して、各々の居住形態の地域的出現分布傾向とその要因を解明した。調査の結果、以下の諸点が明らかになった。【encircled 1】西日本全域において従来の同居型居住から、隣居、近居、準近居などの親子の独立性を企図した居住関係への移行が顕著である。【encircled 2】隣居、近居、準近居の出現比率は地域によって異なるが、DID都市周辺において近居が多く出現し、DID都市から離れるに従って準近居が増加する。また、隣居は地域特性にかかわらず、一様に出現する傾向がみられる。【encircled 3】準近居の出現比率は、当該自治体の就業者中に占める他自治体への通勤者の比率に比例する。すなわち、DID都市への就業率に比例する。高齢化社会の進行に伴い社会的あるいは行政による公的な支援や助成策が充実していく中にあっても、当の高齢者は依然として親子関係を軸とした肉親のサポートにより老後を送りたいとの要求がある一方、子供の側も、親と独立した生活を送りたいとの指向を持ちつつも、高齢の親の生活を何らかの形でサポートしたいとの要求も根強くみられる。本研究は、このようなゆれ動く親子関係のもとで展開される高齢者の住生活のサポート構造の様相と動向を探ることにより、今後の高齢者の住生活支援の方向を追究することを目的として、中国地方、四国地方、九州地方の全域の市町村を対象に、親子の居住生活関係の傾向を把握した。調査の結果、いずれの地域においても、従来の主流であった同居から、隣居あるいは近居など親世帯とある程度の距離を保ちつつも、火急の際にはすぐにかけつけることが可能な居住関係に移行する比率が高いことが確認された。さらに、中心都市から1時間圏あるいはそれを越える地域の出身子世帯においては、当該都市への通勤と高齢の親の介護や支援といった両者の利便性を考慮して、出身地と中心都市の中間地に居を構える準近居あるいは様子見圏居住といった新しい居住関係が増加する傾向があることを明らかにした。そのような居住形態は、中心都市の周辺において住宅地の開発が活発に行われている場合に特に促進されるが、このような子世帯自らの住生活を保持しつつも、一方で老親の世話のしやすさを考慮し、居住地を選択する傾向は今後ますます顕著になることが推察される。次年度においては、このような傾向が際立っている幾つかの地域において、現地調査を行い、さらにその実態を詳細に解明する予定である。高齢化社会の進行に伴い社会的あるいは行政による公的な支援や助政策が充実していく中にあっても、当の高齢者は依然として親子関係を軸とした肉親のサポートにより老後を送りたいとの要求が根強くあり、今後もその形態はともあれ子供世帯が老親の住生活を支援していくという構図は続いてゆくものと予想される。

一方、子供の側から見ると、老親を物質的および精神的に支える義務への自覚はあっても、できるだけ干渉を受けずに独立した生活を営みたいとの要求は社会が近代化するほど強まり、かつてのように同居という居住形態によって親の住生活を支えることへの抵抗感は強まっているものと推察される。このような親世代と子世代間の意識のずれは、当然のことながら親子両世帯の居住関係に大きな影響と変化をもたらしている。本研究は、高齢者住生活のサポートを意図した親子2世帯居住を、同居、隣居、近居、準近居に分類し、西日本地域(中国、四国、九州地方)における全市町村へのアンケートを通して、各々の居住形態の地域的出現分布傾向とその要因を解明した。調査の結果、以下の諸点が明らかになった。、(1)西日本全域において従来の同居型居住から、隣居、近居、準近居などの親子の独立性を企図した居住関係への移行が顕著である。(2)隣居、近居、準近居の出現比率は地域によって異なるが、DID都市周辺において近居が多く出現し、DID都市から離れるに従って準近居が増加する。また、隣居は地域特性にかかわらず、一様に出現する傾向がみられる。(3)準近居の出現比率は、当該自治体の就業者中に占める他自治体への通勤者の比率に比例する。すなわち、DID都市への就業率に比例する。
ストレス負荷時の視床下部室傍核・前頭前野における一酸化窒素とGABAの機能解明

インターロイキン-1β(IL-1β)を腹腔内投与すると,視床下部室傍核(PVN)における一酸化窒素(NO)代謝物(NOx^-)濃度が増加することがわかっている(Ishizuka et al. 1998)。内側前頭前野(mPFC)に選択的GABA拮抗薬または作動薬を投与すると,PVNにおけるこのIL-1β誘発性のNOx^-濃度の増加反応にどのような効果をもたらすかを検討した。実験には,生後23ケ月のウイスター雄性ラットを用いて,まず,ペントバルビタール(50mg/kg, i.p.)麻酔下,マイクロダイアリシス用のガイドカニューレをPVN上方1mmおよびmPFC上方2mmの位置に固定した。その5日後,マイクロダイアリシス用プローブをPVNおよびmPFCに刺入し,無麻酔無拘束の条件下でマイクロインフュージョンポンプを用いて一定の流速(1μl/min)で人工リンゲル液をPVN領域に灌流した。サンプルは,10分間隔で連続的にオートインジェクターによって酸化窒素分析システムに注入し,データ処理装置にて解析し,NOx^-濃度の定量を行なった。定常状態として3時間測定後,IL-1β(4μg/kg)を腹腔内投与し,PVN領域におけるNOx^-濃度の変化を測定した。次に,1L-1βの腹腔内投与後,選択的GABA_A受容体拮抗薬であるビククリンあるいは選択的GABA_A受容体作動薬であるムシモールをmPFCに潅流投与し,PVNのNOx^-濃度の変化を測定した。また,同様にして,IL-1β(4μg/kg)の腹腔内投与後,選択的GABA_B受容体拮抗薬であるサクロフェンあるいは選択的GABA_B受容体作動薬であるバクロフェンをmPFCに灌流投与し,PVNのNOx^-濃度の変化を測定した。また,マイクロダイアリシス法と並行し,免疫組織化学法による形態学的研究を行い,IL-1β腹腔内投与後のラット脳を灌流固定し,免疫染色を施行した。摘出脳は,固定後,ミクロトームにより凍結切片とし,PVNにおけるnNOS/Fosの2重染色を行なった。切片上の免疫陽性細胞の観察・画像データ作成はCCDカメラ付光学顕微鏡により行い,画像データの定量的解析にはカメラに接続するコンピューターを用いた。IL-1βを腹腔内投与したラットにおいて,mPFCにビククリン(50μM)を灌流投与すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に増強し,また,IL-1βの腹腔内投与後,mPFCにムシモール(50μM)を灌流投与すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に減弱した。IL-1βを腹腔内投与したラットにおいて,mPFCにサクロフェン(50μM)を灌流投与すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に変化せず,また,IL-1βの腹腔内投与後,mPFCにバクロフェン(250μM)を灌流投与すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に変化しなかった。さらにIL-1βを腹腔内投与したラットにおいて,PVNにおけるnNOS/Fosの免疫染色では,nNOS陽性細胞の一部にFos蛋白発現が認められた。これらのことより,IL-1β末梢投与によるストレス負荷時,mPFCは,GABA_A神経系を介して直接または間接的にPVNのNOを抑制的に制御していることが示唆された。この実験系では,GABA_B神経系の関与は,認められなかった。

また,マイクロダイアリシス法と並行し,免疫組織化学法による形態学的研究を行い,IL-1β腹腔内投与後のラット脳を灌流固定し,免疫染色を施行した。摘出脳は,固定後,ミクロトームにより凍結切片とし,PVNにおけるnNOS/Fosの2重染色を行なった。切片上の免疫陽性細胞の観察・画像データ作成はCCDカメラ付光学顕微鏡により行い,画像データの定量的解析にはカメラに接続するコンピューターを用いた。IL-1βを腹腔内投与したラットにおいて,mPFCにビククリン(50μM)を灌流投与すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に増強し,また,IL-1βの腹腔内投与後,mPFCにムシモール(50μM)を灌流投与すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に減弱した。IL-1βを腹腔内投与したラットにおいて,mPFCにサクロフェン(50μM)を灌流投与すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に変化せず,また,IL-1βの腹腔内投与後,mPFCにバクロフェン(250μM)を灌流投与すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に変化しなかった。さらにIL-1βを腹腔内投与したラットにおいて,PVNにおけるnNOS/Fosの免疫染色では,nNOS陽性細胞の一部にFos蛋白発現が認められた。これらのことより,IL-1β末梢投与によるストレス負荷時,mPFCは,GABA_A神経系を介して直接または間接的にPVNのNOを抑制的に制御していることが示唆された。この実験系では,GABA_B神経系の関与は,認められなかった。インターロイキン-1β(IL-1β)を腹腔内投与すると,視床下部室傍核(PVN)における一酸化窒素(NO)代謝物(NOx^-)濃度が増加することがわかっている(Ishizuka et al.1998).前頭前野(mPFC)に選択的GABA拮抗薬または作動薬を投与すると,PVNにおいて,このIL-1β投与によるNOx^-濃度の増加反応にどのような効果をもたらすかを検討した.実験には,生後23ケ月のウイスター系雄性ラットを用いて,まずペントバルビタール麻酔下,マイクロダイアリシス用のガイドカニューレをPVNおよびmPFC上方2mmの位置に固定した.その5日後,マイクロダイアリシス用プローブをPVN領域およびmPFCに刺入した.無麻酔無拘束の条件下でマイクロインフュージョンポンプを用いて一定の流速(1μl/min)で人工リンゲル液をPVN領域に灌流し,サンプルは、連続的にオートインジェクター付き酸化窒素分析システムに注入し,NOx^-濃度を定量した.定常状態として3時間測定後、IL-1βを末梢投与し、PVN領域におけるNOx^-濃度の変化を測定した.IL-1β末梢投与後,選択的GABA拮抗薬をmPFCに局所灌流投与し,PVN領域におけるNOx^-濃度の変化を測定した.また,同様にしてIL-1β末梢投与後,選択的GABA作動薬を、mPFCに局所灌流投与し、PVN領域におけるNOx^-濃度の変化を測定した. IL-1βを腹腔内投与したラットにおいて,mPFCにGABA拮抗薬を灌流すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に増強した.また,IL-1βを腹腔内投与したラットにおいて,mPFCにGABA作動薬を灌流すると,PVNにおけるNOx^-濃度の増加反応は有意に減弱した.これらのことより,mPFCは,GABA神経系を介して直接または間接的にPVNを抑制的に制御していることが示唆された.インターロイキン-1β(IL-1β)を腹腔内投与すると,視床下部室傍核(PVN)における一酸化窒素(NO)代謝物(NOx^-)濃度が増加することがわかっている(Ishizuka et al.1998).内側前頭前野(mPFC)に選択的GABA
国際理解教育の理論的枠組と学習内容に関する国際的比較研究

本研究は、日本、米国、英国、オーストラリア、フランス、ドイツの6か国とユネスコの国際教育を研究対象にして、国際理解教育の現状と傾向について比較研究を行なった.その結果、いくつかの研究対象国では、国際理解教育という定型の学習領域は存在しないことが判明した。人権教育、多文化教育、グローバル教育など様々な名称のもとに個別の学習プログラムが組まれており、それらが部分的に国際理解教育を取り扱っていることが多い。したがって、わが国にある既成の概念や範囲にとらわれずに、それぞれの国が最も力を入れて研究・開発している具体的なプログラムや、世界の動向のなかで最も先端的な動きに注目する必要を感じた。それ故、本研究では、「国際理解教育」という傘概念の中で、どのように異なる形態の教育プログラムが開発実施されているのか、世界的な新しい動向に焦点をあてて研究を進めた。その結果、この報告書では、ユネスコとオーストラリアの最近の動向に加えて、米国のグローバル教育、ドイツの外国人問題とそれに対応する人権教育、フランス国民教育の国際化(ヨーロッパ化)の動き、イギリスの多文化教育、わが国における国際理解教育の新しい動向、について研究がまとめられた。最後に、地球的な課題に対して教育がどのように対応しようとしているのか、グローバル教育、開発教育、多文化教育を取り上げて比較研究が試みられている。中間報告として三つの点を指摘しておきたい。第一に、多くの国で国際理解教育の教育方針が、学校教育の基本的な教育目的と合致していることである。例えば、オーストラリアにおける多文化教育の学習目標は、「オーストラリアの多文化社会に参加する良き市民を育成する」学校の教育目標と深くかかわっている。第二に、国際化が進行する中で、多くの国では国内問題と国際問題が表裏一体の関係となり、国際理解教育の視点が必要不可欠なものとなりつつある。たとえば、オーストラリアの「多民族の共生」という国内政策は、オーストラリアの相対的な英米離れと、アジア・太平洋地域の経済圏のメンバーになろうとする「脱欧入亜」という対外政策と無関係ではない。いわば、オーストラリアの「外なる国際化」が「内なる国際化」を呼び覚ましたのである。このような「外」と「内」の一体化は、多くの国で同時進行の形で起りつつある。第三に、国際理解教育は、世界的な展望の中で自国のイメージについて再解釈する道を開き、将来へ向けて新しい国家観を構築する役割を果たしつつある。例えば、オーストラリアの多文化主義では、白豪主義の衰退から多文化主義が起る社会的な変化は、オーストラリアの自己イメージが、「古いオーストラリア」から「新しいオーストラリア(60年代後期以後)」へと変化した。このように、近年の国際理解教育は、多くの国で「自国イメージや自己アイデンティティについて変革」をもたらす役割を担いつつあり、新しい国家観について、その方向や内容を提示することが求められている。本研究は、日本、米国、英国、オーストラリア、フランス、ドイツの6か国とユネスコの国際教育を研究対象にして、国際理解教育の現状と傾向について比較研究を行った。その結果、いくつかの研究対象国では、国際理解教育という定型の学習領域は存在しないことが判明した。人権教育・多文化教育、グローバル教育など様々な名称のもとに個別の学習プログラムが組まれており、それらが部分的に国際理解教育を取り扱っていることが多い。したがって、わが国にある既成に概念や範囲にとらわれずに、それぞれの国が最も力を入れていれて研究・開発している具体的なプログラムや、世界の動向のなかで最も先端的な動きに注目する必要を感じたそれ故、本研究では、「国際理解教育」という傘概念の中で、どのように異なる形態の教育プログラムが開発実施されているのか、世界的な新しい動向に焦点をあてて研究を進めた。
サンゴ-褐虫藻共生体の分子メカニズム～白化現象解明を目指して～

サンゴと褐虫藻の共生システムの分子メカニズムを、次世代シークエンサーを用いて網羅的・ゲノム科学的に明らかにすることを目的とする。トランスクリプトームとゲノムの情報を用いて、サンゴ(コユビミドリイシAcropora digitifera)の全遺伝子を網羅したcDNAマイクロアレイを作成し、ストレス下での遺伝子発現変化を解析した。さらにサンゴのゲノム情報から、ストレス応答に関わっているとされる遺伝子について、ゲノム科学的な解析を行った。サンゴは「褐虫藻」と呼ばれる植物プランクトンと共生している。わずかなストレスでサンゴから褐虫藻が抜け出し、白化現象と呼ばれるサンゴ-褐虫藻共生システムが崩壊し、最終的にサンゴが死滅する。しかし、これまでのサンゴの生物学的研究においては、分子レベルでの知見はほとんど無いのが現状である。サンゴが直面する危機、「白化現象」を生物学的に深く理解するためには、サンゴ-褐虫藻の共生機構とストレス応答メカニズムの分子レベルでの知見は欠かせない。本研究では「サンゴ-褐虫藻共生体」を一つの「生命体」として考え、「次世代シークエンサー」を用いて、サンゴのストレス時の遺伝子発現応答を、これまでに無いレベルで網羅的に解析する。そして(1)ホスト(サンゴ)の分子レベルでの温度ストレス応答機構の種間での違い、と(2)サンゴ-褐虫藻生命体の共生メカニズムの分子機構、を明らかにする事を目的としている。21年度はコユビミドリイシ、Acrioira digitiferaの遺伝子データベースの構築を行った。様々な発生ステージと成体から単離したmRNA(遺伝子)を、二種類の次世代シークエンサー(454,illumina)により解読した。その結果、約55,000のユニークな配列を取得した(N50size:794bp,最長11,151bp)。これらのデータは、コユビミドリイシのゲノム配列からの遺伝子予測にも用いられ、現在約33,000の遺伝子が予測されている。これらはゲノムワイドなサンゴ(コユビミドリイシ)のストレス応答解析の基盤データとして十分活用出来る。これまでに次世代シークエンサーによるトランスクリプトームの解析はあまり報告されてなかったが、当年度に解析手法の確立も行った。そのため、今後ストレスに強い別のサンゴや褐虫藻のトランスクリプトーム解析がスムーズに進む事が期待される。わずかなストレスでサンゴから褐虫藻が抜け出し、白化現象と呼ばれるサンゴー褐虫藻共生システムが崩壊し、最終的にサンゴが死滅する。22年度にコユビミドリイシの遺伝子情報からcDNAマイクロアレイを設計し、温度ストレスを与えたサンゴの網羅的遺伝子発現解析を行った。現在データの解析中である。さらにコユビミドリイシ・ゲノムプロジェクトの進展により、コユビミドリイシのほぼ全ての遺伝子の情報が高品質で明らかになった。このデータを元に、新たにcDNAマイクロアレイの設計を行った。これにより、真の「ゲノムワイド」なサンゴの遺伝子発現解析が可能となり、マイクロアレイ解析にかかるコストを半分に減らす事が出来た。さらに単離培養している褐虫藻のトランスクリプトーム解析も開始しており、「サンゴ-褐虫藻共生体」の分子レベルでの研究が軌道に乗りつつある。サンゴは「褐虫藻」と呼ばれる微細藻類と共生している。わずかなストレスにより共生システムが崩壊し、サンゴから褐虫藻が抜け出す「白化現象」が起こる。最悪の場合サンゴの死に繋がる。これまでのサンゴの生物学的研究においては分子レベルでの知見は少ないのが現状である。サンゴが直面する危機、「白化現象」を生物学的に深く理解するためには、サンゴ掲虫藻の共生機構とストレス応答メカニズムの、分子レベルでの詳細な知見は欠かせない。本研究では「サンゴ掲虫藻共生体」を一つの「生命体」として考え、「次世代シークエンサー」を用いて、サンゴのストレス時の遺伝子発現応答を、これまでに無いレベルで網羅的に解析する。そして(1)ホスト(サンゴ)の分子レベルでのストレス応答、と(2)サンゴ-褐虫藻生命体の共生メカニズムの分子機構、を明らかにする事を目的としている。

23年度には追加の環境ストレスとして、共生の有無を実験的に操作出来るコユビミドリイシ(Acropora digitifera)の稚サンゴ(初期ポリプ)を用いて、褐虫藻が共生しているもの、していないものに紫外線(UV)ストレスを与え、サンプリングを行った。現在網羅的な遺伝子発現解析を進めている。本研究でこれまでに得られたコユビミドリイシのトランスクリプトームのデータも用いてコユビミドリイシのゲノム解析に貢献し、世界で初めてサンゴの全ゲノム解読を発表することが出来た。これらゲノムとトランスクリプトームのデータを用いて、サンゴの蛍光タンパク質(GFP)の解析も行った。そして、これまでに動物で細胞レベルでのストレス応答に関わっているとされる遺伝子群(defensome)について、解読されたゲノム情報からこれら遺伝子の解析・同定を行った。
超短パルスX線のパルス幅のシングルショット計測

SASE型のX線自由電子レーザー(SASE-XFEL)の建設が.SLAC(アメリカ)とSPring-8(日本)で,開始されている.これらは,パルス幅が100フェムト秒を切るような超短パルスかつ超高輝度のX線光源と目され,原子オーダー分解能のシングルショット生体イメージングや,構造変化の超高速時分割計測といった,未踏の研究領域の飛躍的な発展が期待されている.このX線のパルス幅のシングルショット計測は,光源・光学系の性能計測のために必須であり,運転条件の最適化を図るためにも不可欠である.また,短パルス照射実験において,特に非線形現象が関わる場合は,精確なパルス幅の情報が必要となるのは当然である.本研究では,パルス幅計測のために,高分解能かつシングルショット計測を可能とする,波長分散型のスペクトロメータの開発を行った.本年度は,前年度に行われた高精度ミラーと波長分散用完全結晶を組み合わせたスペクトロメータの実験の追試を行い,その結果を詳細に解析した.また,光子統計の見地から,実際のXFELの光パラメータを用いた場合に,パルス幅のシングルショット計測が可能であることを示した.特に,ノイズの原因となるスペックルを除去するためには,高精度ミラーの形状誤差が重要であることを明らかにした.この結果は,"Physical Review Letters"誌に掲載され,さらに,海外を含む多数の招待講演の中で紹介を行った.現在,SASE型のX線自由電子レーザー(SASE-XFEL)の開発がSLAC(アメリカ),DESY(ドイツ),SCSS(日本)等で競って開発されている.これらにより,原子オーダー分解能のシングルショット生体イメージングや,構造変化の超高速時分割計測といった,未踏の研究領域の飛躍的な発展が期待されている.SASE-XFELは,線形加速器ベースのシンクロトロン光源であるが,X線のパルス幅のシングルショット計測は,光源・光学系の性能計測のために必須であり,運転条件の最適化を図るためにも不可欠である.また,短パルス照射実験において,特に非線形現象が関わる場合は,精確なパルス幅の情報が必要となるのは当然である.本研究では,パルス幅計測のために,高分解能かつシングルショット計測を可能とする,波長分散型のスペクトロメータの開発を行う.本年度は,2つの異なった光学系について検討を行い,次のような結果を得た.1.高精度ミラーと波長分散用完全結晶を組み合わせたスペクトロメータを構築し,放射光を用いた評価実験を行った.この結果,理論通りの良好な性能が得られることを確認した.さらに,SASE-XFELに適用した場合の理論的な考察を行い,シングルショットパルス幅計測の目的が達成できることを明らかにした.2.高精度湾曲結晶の開発を行った.歪みとスロープエラーを十分低減させる目的で,従来とは異なった新たな溝形状をもつテストピースの製作を行った.SASE型のX線自由電子レーザー(SASE-XFEL)の建設が.SLAC(アメリカ)とSPring-8(日本)で,開始されている.これらは,パルス幅が100フェムト秒を切るような超短パルスかつ超高輝度のX線光源と目され,原子オーダー分解能のシングルショット生体イメージングや,構造変化の超高速時分割計測といった,未踏の研究領域の飛躍的な発展が期待されている.このX線のパルス幅のシングルショット計測は,光源・光学系の性能計測のために必須であり,運転条件の最適化を図るためにも不可欠である.また,短パルス照射実験において,特に非線形現象が関わる場合は,精確なパルス幅の情報が必要となるのは当然である.本研究では,パルス幅計測のために,高分解能かつシングルショット計測を可能とする,波長分散型のスペクトロメータの開発を行った.本年度は,前年度に行われた高精度ミラーと波長分散用完全結晶を組み合わせたスペクトロメータの実験の追試を行い,その結果を詳細に解析した.また,光子統計の見地から,実際のXFELの光パラメータを用いた場合に,パルス幅のシングルショット計測が可能であることを示した.特に,ノイズの原因となるスペックルを除去するためには,高精度ミラーの形状誤差が重要であることを明らかにした.この結果は,"Physical Review Letters"誌に掲載され,さらに,海外を含む多数の招待講演の中で紹介を行った.
ゼータ関数の非収束領域における性質を決定する要因

数列a(n)を係数とするディリクレ級数で定義されたゼータ関数をF(s)とする。またx以下の自然数n全てにわたってのa(n)の和をA(x)とする。本研究ではF(s)の解析的性質を決める要因をA(x)の誤差項の振動状況の観点から論じた。A(x)の誤差項のm階不定積分に対するxについての評価がxの多項式オーダーで評価されている時に、そのべき指数をα(m)とする。F(s)が複素平面Cまで有理型関数に解析接続でき、かつ|F(s)|の上からの多項式オーダーのある評価を仮定した場合、α(m)/mの上極限が1より小さいという条件が必要十分であることを証明した。また、A(x)の誤差項のm階不定積分を周期的ベルヌーイ多項式の一般化と解釈した場合に、どのようなディリクレ級数の特殊値と対応しているのかについての結果も得た。ディリクレ級数で定義されたゼータ関数をF(s)とし、ディリクレ級数を定義する係数の平均をA(x)とする。ゼータ関数F(s)に関数等式のような強い条件は仮定せず、より弱い解析的条件のみ与えた場合にA(x)の挙動の観点からどのような同値命題が得られるかを考察することが、本計画の目的である。関数等式をもたないゼータ関数のクラスを系統的に分類していくことを想定している。本年度は、(1)F(s)が収束軸を超えて複素平面全体に解析接続でき、その極はs=1にのみ高々一個,(2)F(s)の非収束領域において、変数sの虚部tを変化させたときの|F(s)|の変化状況をtの多項式オーダーで評価できる,という二つの条件を設定した。一方、A(x)からx(log x)^kの定数倍のkについての有限和を引いたものをg_0(x)とし、関数列{g_m(x)}^∞_<m=0>(ここで関数g_<m+1>(x)はg_m(x)の不定積分、mは非負整数)を考える。そして、g_m(x)に対し、変数xに関しての上からの評価式を考えた際のxのべき指数α_mに注目する。このとき、α_mとmの比の上極限がある範囲におさまることが(1)+(2)と同値な条件であると予想した。本年度は、これが、(1)+(2)が成立するための必要条件であることを証明した。十分条件であることの証明にはまだ成功していないが、証明過程に現れる残余項の評価が議論の核心部分であり、凸性原理にもとづき評価を行うことで証明は可能であろうとの感触は得ている。十分条件の証明は次年度以降の課題として残った。数列a(n)を考え、x以下のすべての自然数nについてのa(n)の和をA(x)とする。一方a(n)を係数にもつディリクレ級数をF(s)とする。本研究ではF(s)に関数等式を仮定せず、それよりも弱い条件を与える。F(s)に与える条件を様々に変えた時、対応するA(x)の必要十分条件がどのように変わるのか調べ、F(s)の非収束領域での性質を決める要因をA(x)の観点から明らかにしていくことが本計画の目的である。関数g(x,m)の不定積分をg(x,m+1)とする。ここでmは非負整数。このとき関数列g(x,m)m=0,1,2,3,.....を考え、各g(x,m)のxについての評価を考えたとき|g(x,m)|がxのべき乗の定数倍以下になる事がいえたとする。この時のべき指数をα(m)とする。計画立案の当初は「A(x)から主要項を引いた誤差項をg(x,0)としたときに、m+1-α(m)→∞(m→∞)、ならばF(s)は全平面に解析接続できる」と「全平面に解析接続でき、加えて|F(s)|のある評価を仮定するならば、m+1-α(m)→∞(m→∞)」について証明ができていた。23年度は、この結果についてさらに精査し、そのような関数列g(x,m)の存在が言えた場合。一意に確定することを証明できだ。これは当初予想していなかった事柄であり、大変興味深い現象に思える。これらの成果は論文として、雑誌Publications del'Institut Mathematiqueに掲載予定である。

また計画当初はm+1-α(m)に注目していたが、考察の過程で次第に分かってきたことはα(m)/mの上極限の観点から論じるほうが、本質をより鮮明に記述するのではないかという点である。23年度はα(m)/mの上極限に注目した命題を設定し、十分条件は証明できた。しかし必要条件のほうが証明できていない。次年度以降への課題である。数列a(n)を考え、x以下のすべての自然数nについてのa(n)の和をA(x)とする。その一方でa(n)を係数にもつディリクレ級数をF(s)とする。F(s)の非収束領域での性質を決める要因をA(x)の観点から明らかにしていくことが本計画の目的である。xの関数g(x,m)の不定積分をg(x,m+1)とする。ここでmは非負整数である。このとき関数列g(x,m) m=0,1,2,3,...を考え、各g(x,m)のxについての評価を考えたとき|g(x,m)|がxのべき乗の定数倍以下になる事がいえたとする。この時のべき乗指数をα(m)とする。計画当初は「A(x)から主要項を引いた誤差関数をg(x,0)としたときに、m+1ーα(m) →∞(m→∞)ならばF(s)は複素平面Cに有理型関数に解析接続できる」と「複素平面Cに解析接続でき、加えて|F(s)|のある評価を仮定するならば、m+1ーα(m) →∞(m→∞)」について証明ができていた。計画当初に注目していたm+1ーα(m)→∞(m→∞)という条件はディリクレ級数が複素平面Cまで有理型関数に解析接続できるための基準となるものである。平成24年度は、これよりも少し強い条件としてα(m)/mの上極限が1より小さいという条件を設定し、その必要十分条件をF(s)の非収束領域での解析的性質の観点から記述することができた。必要十分条件で記述できたことで、その解析的性質を満たすF(s)の属するクラスを特徴づけることができたといえる。この他には、A(x)の誤差関数の不定積分の値をベルヌーイ数の類似ととらえた場合に、あるゼータ関数の非負整数値での特殊値と関連付けることができるという結果も得た。これらの成果を、平成24年秋に行われた京都大学数理解析研究所での研究集会で発表した。また現在、論文投稿作業の準備にも入っている。計画書では23年度にはF(s)に指数関数オーダー評価を仮定した場合の命題の設定を予定していた。しかし、前年度までに予定していたα(m)/mの上極限に注目した命題の証明が完成しておらず、予定通りには進んでいない。計画の遅れの大きな理由は、実績の概要に書いたように「関数列の一意性」という興味深い現象に気がつき、その証明に時間を割いたことである。計画は遅れているが、研究成果自体は豊かになったと前向きにとらえている。24年度が最終年度であるため、記入しない。α(m)/mの上極限の観点から設定した命題の証明は24年度中には完成する感触はある。またF(s)に指数関数オーダー評価を仮定した場合の命題についてもなんらかの新しい結果は得られそうである。23年度以降に予定していたF(-n)(ここでnは非負整数)の線形和の問題については、基礎的事実の確認をしている段階である。研究協力者との活発な意見交換などを通し、計画達成に向けて努力していく。
血管内皮細胞の老化に伴う刺激応答の変化と動脈硬化に関する研究

ヒト血管内皮細胞においてNa^+-K^+ ATPase活性、エチールイソプロピルアミロライド感受性を指標としたNa^+/K^+アンチポーター活性、蛍光指示薬であるfura-2を用いた細胞質内遊離カルシウムイオン濃度、またpH蛍光指示薬である2'7'-bis(carboxyethyl)carboxyfluoresein(BCECF)による細胞内pHの測定、DNA合成量の測定系の保生条件、経時的変化などの基礎検討を行うことにより、測定系を確立することが出来た。そしてこれらの諸指標の変化を及ぼすフォルボールエステル、プロテインキナーゼCの阻害剤であるH-7、細胞内のNa^+ ionophoreであるモネンジン、細胞外Na^+濃度の除去、シクロヘキサミド、各種カルシウム拮抗薬などの影響を検討した。その結果細胞内pHは7.17であることが判明し、その維持は主としてエチールイソプロピルアミロライド感受性のNa^+/H^+交換系により、一部は細胞外Caイオンあるいは電位依存性Caチャネルに依存していることが判明した。内皮細胞増殖は主としてプロテインキナーゼCにより、一部は細胞外カルシウムイオン並びに電位依存性カルシウムチャネルが関与して維持されていることが判明した。またエンドテリンはヒト内皮細胞の細胞内pH、および高濃度を除いて細胞質内遊離カルシウムイオン濃度には影響せずに内皮細胞からのprostacyclin産生並びにEDRF産生を亢進させて血管平滑筋の収縮に拮抗することが判明した。またエンドテリンは内皮細胞の増殖抑制作用を有していることが判明しており、自己で産生したエンドテリンにより自己の増殖を抑制するという自己抑制機構が存在している可能性が示唆され、エンドテリンは血管平滑筋の収縮制御のみならず、動脈硬化に対してより促進的に作用すると可能性が考えられた。平成2年度においては、まず血管内皮細胞におけるエチ-ルイソプロピルアミロライド感受性を指標としたNa^+/H^+アンチポ-タ-活性の測定系、およびpH蛍光指示薬である2'7'ーbis(carboxyethyl)carboxyfluoresein(BCECF)による細胞内pHの測定系についての基礎検討(それぞれの測定系に用いる至適保生条件、ならびに内皮細胞の至適細胞数、またそれぞれの諸指標の経時的変化に関する検討を実施し、測定条件の決定など)を実施した。その結果、血管内皮細胞におけるエチ-ルイソプロピルアミロライド感受性^<22>Naの流入を指標としたNa^+/H^+アンチポ-タ-活性の測定系、細胞内pHの測定系を確立し、これらの測定系を用いた結果、内皮細胞の細胞内pHは7.17であり、その経時的変化は既報の他の細胞に比してより早期に反応が生じることが判明し、またエチ-ルイソプロピルアミドライド感受性のNa^+/H^+アンチポ-タ-活性が内皮細胞においても存在していることが判明した。そして細胞内pHの維持はおもにはエチ-ルイソプロピルアミドライド感受性のNa^+/H^+交換系により維持されているが、一部は細胞外のCaイオン濃度が関与して維持されていることが判明した。平成2年度においては、まず血管内皮細胞におけるエチ-ルイソプロピルアミロライド感受性を指標としたNa^+/H^+アンチポ-タ-活性の測定系、およびpH蛍光指示薬である2'7'ーbis(carboxyethyl)

carboxyfluoresein(BCECF)による細胞内pHの測定系についての基礎検討(それぞれの測定系に用いる至適保生条件、ならびに内皮細胞の至適細胞数、またそれぞれの諸指標の経時的変化に関する検討を実施し、測定条件の決定など)を実施した。その結果、血管内皮細胞におけるエチ-ルイソプロピルアミロライド感受性^<22>Naの流入を指標としたNA^+/H^+アンチポ-タ-活性の測定系、細胞内pHの測定系を確立し、これらの測定系を用いた結果、内皮細胞の細胞内pHは7.17であり、その経時的変化は既報の他の細胞に比してより早期に反応が生じることが判明し、またエチ-ルイソプロピルアミドランド感受性のNa^+/H^+アンチポ-タ-活性が内皮細胞においても存在していることが判明した。そして細胞内pHの維持はおもにはエチ-ルイソプロピアミドライド感受性のNa^+/H^+交換系により維持されているが、一部は細胞外のCaイオン濃度が関与して維持されていることが判明した。またエンドテリンはヒト内皮細胞の細胞内pH、および高濃度を除いて細胞質内遊離カルシウムイオン濃度には影響せずに内皮細胞からのprostacyclin産生並びにEDRF産生を亢進させて血管平滑筋の収縮に拮抗することが判明した。平成4年度においては、ヒト血管内皮細胞におけるDNA合成量の測定系についての基礎検討(それぞれの測定系に用いる至適保生条件、ならびに内皮細胞の至適細胞数、またそれぞれの諸指標の経時的変化に関する検討を実施し、測定条件の決定など)を実施し、この測定系を確立した。その後このDNA合成量の測定系のみならず、これまでに確立している測定系、即ちNa^+-K^+ATPase活性、エチールイソプロピルアミロライド感受性を指標としたNa^+/K^+アンチポーター活性、蛍光指示薬であるfura-2を用いた細胞質内遊離カルシウムイオン濃度、pH蛍光指示薬である2'7'-bis(carboxyethyl)carboxyfluoresein(BCECF)による細胞内pHの測定などの諸指標の変化に及ぼすフォルボールエステル、プロテインキナーゼCの阻害剤であるH-7、細胞内にNa^+ionophoreであるモネンジン、細胞外Na^+濃度の除去、シクロヘキサミド、各種カルシウム拮抗薬などの影響を検討した。内皮細胞増殖は主としてプロテインキナーゼCにより、一部は細胞外カルシウムイオン並びに電位依存性カルシウムチャネルが関与して維持されていることが判明した。またエンドテリンはヒト内皮細胞の細胞内pH、および高濃度を除いて細胞質内遊離カルシウムイオン濃度には影響せずに内皮細胞からのprostacyclin産生並びにEDRF産生を亢進させて血管平滑筋の収縮に拮抗することが判明し、またエンドテリンは内皮細胞の増殖抑制作用を有しており、自己で産生したエンドテリンにより自己の増殖を抑制するという自己制御機構が存在している可能性が示唆され、動脈硬化に対して促進的に作用すると考えられた。
マイクロサテライト不安定性大腸癌の変異ペプチドを利用した診断法と免疫療法の開発

マイクロサテライト不安定性陽性大腸癌(MSI+CRC)は、DNAミスマッチ修復の異常により生じるが、比較的予後が良好で腫瘍組織内のCD8+T細胞浸潤を認めることから、フレームシフト変異ペプチドに対する免疫反応が起こっている可能性がある。本研究では、MSI+CRCにおける癌抗原を同定し、臨床応用の可能性を検討した。まず、MSI+CRC株cDNAライブラリーを患者血清IgG抗体でスクリーニング(SEREX法)して、150種の癌抗原を単離し、健常人と各種癌患者の血清中のIgG抗体を検討して、MSI+CRC患者にのみ抗体を認める抗原を75個同定した。このうちCDX2は癌細胞に翻訳領域内反復配列のフレームシフト変異を認めた患者にのみ抗体が認められ、組換えタンパクを用いた抗体認識の特異性の検討の結果、フレームシフト変異で生じるC末端側変異ペプチドに対する抗体が検出された。つまり、免疫系がMSI+CRCの遺伝子異常により生じる変異ペプチドを腫瘍特異的に認識することが証明された。この抗体は根治術後に消失しており、腫瘍マーカーとして診断に使える可能性がある。この患者の腫瘍組織内CD8+T細胞浸潤がCDX2変異ペプチドにより誘導された可能性を検討するために、患者末梢血より変異CDX2特異的T細胞の誘導を試みたが、治療後7年間無再発の患者からは誘導できなかった。次に、MSI+CRCで高頻度に翻訳領域反復配列のフレームシフト変異が認められる遺伝子の組換え変異タンパクに対する患者血清中IgG抗体の解析を行ったが、抗体は検出されなかった。以上、MSI+CRC患者では、腫瘍特異的フレームシフト変異ペプチドに対して免疫応答が起こることが示され、これらは診断や免疫療法の標的抗原となる可能性が示された。今後、自家腫瘍DNAライブラリーを用いたSEREX法および患者T細胞を用いた変異ペプチドに対する解析を行うことが重要である。本研究ではマイクロサテライト不安定性(MSI)陽性大腸癌に対する免疫応答の標的抗原を解析して、診断や治療の開発に有用な分子を同定する。特にMSIにより起こるフレイムシフト変異のために産生される腫瘍特異的変異ペプチドに対する免疫応答に注目し、腫瘍特異的診断や治療に応用可能かを検討する。本年度はMSI陽性大腸癌細胞株3種からラムダファージ上にcDNAライブラリーを作製して大腸菌に発現させ、MSI陽性癌患者血清中のIgG抗体が認識する抗原蛋白をコードするcDNAの単離を行った。MSI陽性大腸癌患者6人の血清を用いて、それぞれ1.0×10^6個のプラークをスクリーニングして、合計965個の陽性プラークを得た。DNAシークエンスおよび遺伝子データベースサーチにより、147個の抗原遺伝子を同定したが、130個は既知蛋白、17個は未知蛋白をコードする遺伝子であった。そのうち57個について、各種癌患者と健常人血清中の各抗原に対するIgG抗体の存在を検討した。健常人血清には抗体を認めないが複数の癌患者血清に抗体が検出される抗原が7個同定された。そのうちの一つはMSI陽性大腸癌患者10人中4人の血清にIgG抗体が検出されたが、その他の血清には検出されず、MSI陽性大腸癌特有な反応である可能性がある。また、最初のライブラリースクリーニングに用いたMSI陽性大腸癌患者血清にのみ抗体が検出された抗原が41個同定された。そのうちの一つの抗原には、癌細胞にフレイムシフト変異を起こすマイクロサテライト異常がみつかったが、抗体はその患者だけに検出されており、MSI陽性癌細胞に産生される腫瘍特異的ペプチドに対する免疫応答が起こる可能性が示唆された。今後、これらの抗原の組織発現特異性、各種患者における抗体の存在、マイクロサテライト異常の存在と免疫反応との関係などに関して研究を継続する予定である。

本研究では、マイクロサテライト不安定性(MSI)陽性大腸癌に対する免疫応答を誘導する癌抗原を解析して、診断や免疫療法に有用な標的抗原の同定を目的とした。前年度に引き続きSEREX法を行い150種の抗原を同定した。各種癌患者や健常人血清中の各抗原に対するIgG抗体の存在を検討し、68種の抗原はMSI陽性大腸癌患者血清中にのみ抗体反応を認めた。このうち、CDX2に対する抗体は、癌細胞にCDX2の翻訳領域内マイクロサテライトにフレイムシフト変異を認めた患者にのみ検出された。組み換え蛋白を用いた解析の結果、この患者では変異型CDX2のC末端側変異ペプチドに対する抗体が検出され、腫瘍特異的フレイムシフト変異ペプチドに対する免疫応答が起こることが証明された。この患者の腫瘍内には著明なCD8+T細胞浸潤が認められており、CDX2変異ペプチドに対するT細胞応答が患者の予後をよくしている可能性もあり、患者リンパ球からのCDX2変異ペプチド特異的T細胞の誘導を試みている。血清中の変異CDX2に対するIgG抗体は外科切除後に消失したので、このような抗体は診断にも応用できる可能性がある。次に、CDX2のように翻訳領域内にマイクロサテライトが存在しMSI陽性大腸癌においてフレイムシフト変異が認められる各種分子のC末端変異ペプチドに対する免疫応答を検討するために、変異部分の組み換え蛋白に対するIgG抗体の存在をウエスターン法により調べたが検出されなかった。しかし、検出感度の問題、T細胞では認識される可能性など、今後、検討する必要がある。以上、MSI陽性大腸癌患者ではMSIにより生じる腫瘍特異的フレイムシフト変異ペプチドが免疫応答を誘導することが示され、診断や免疫療法の標的抗原として利用できる可能性が考えられた。しかし、抗体反応で検出する限りその頻度は高くなく、今後T細胞レベルでの解析が重要である。
重症心身障害児の親が代理意思決定をしたあとの経験の構造化

本研究の目的は、医療依存度が高く、自らの意思を検討し表明することが困難な子どもたちの医療を導入した後に、代理意思決定の中心的役割を担い、かつその医療を含めた子どもの世話や責任を一生背負う親たちの経験を明らかにすることにある。