hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
薬用ニンジンサポニンの生合成の研究

(1)マロニル体を含むジンセノサイド関連サポニンの逆相系HPCLによる分析条件を確立した。また、薬用ニンジン由来オキシドスクワレン閉環酵素の予想される閉環産物である、シクアルテノール、ダンンマレンジオール、β-アリミンを分離するHPLC条件、および真正サポニンのアグリコンであるプロトパナキサジオール、プロトパナキサトリオールの分析条件も同時に確立することができた。(2)オタネニンジン毛状根液体培養系を誘導し、生長およびサポニン生産を(1)の条件で経済的に測定し、サポニン生産が通常の二次代謝産物生産とは異なりほぼ生長と平行して上昇していることを見出した。(3)液体培養約30日目の毛状根より調整した蛋白中にオキシドスクワレン閉環酵素活性を検索し、シクロアルテノール、β-アミリンへの閉環活性のほか、ダンンマレンジオールへの閉環活性を見出だした。これらの活性はいづれも超遠心により沈殿するミクロソーム画分に局在することが判明した。ダンンマレンジオールへの閉環については、生成物に非放射性の標品を加え再結晶する稀釈分析により20Rの配置をもつダンンマレンジオール-IIであることを確証した。なお、この活性は他の植物閉環酵素とは異なり、界面活性剤により著しい不活化を受け、可溶化には成功していない。(4)毛状根の脂溶性画分を(1)の条件で検索し、微量のプロトパナキサジオールを検出したが、ダンンマレンジオールおよびプロトパナキサトリオールは検出されず、アグリコン生成以降の配糖化は高発現していることを確認した。
糖尿病網膜症におけるαークリスタリンのリン酸化機序

STZ誘導糖尿病マウスでは、誘導後8週をピークに脈絡膜厚が有意に肥厚することが示唆された。病理組織所見としては、STZ誘導8週では、脈絡膜に間質成分の増加、色素沈着の増加と微小血管の増加もみられた。脈絡膜組織におけるVEGF、αBークリスタリン濃度は、STZ誘導4ー8週にかけて、有意に低下していることが判明した。同様の結果は、網膜組織においてもみられた。今後は糖尿病モデルマウスの進行におけるVEGF、αBークリスタリンの発現低下の意義について検討を行う予定である。増殖糖尿病網膜症は進行すると、虚血による網膜血管新生を原因とする線維血管組織の増殖・進展が生じ、vascular endothelial growth factor-A (VEGF-A)がその病態責任分子である。低酸素条件下では、ストレス等によってセリン残基(Ser59、Ser45、Ser19)がリン酸化されて生理活性を獲得したαB-クリスタリン(αBC)が分子シャペロンとして血管新生を誘導することが知られ、中でもSer59リン酸化αBC(pSer59αBC)が重要とされる。そこで、線維血管組織におけるリン酸化αBC(pαBC)の局在やその関連分子の局在を検討した。硝子体手術によって得られた増殖糖尿病網膜症患者の線維血管組織と正常網膜(悪性黒色腫患者の非腫瘍部位)のパラフィン切片を用いて、免疫染色法によってpαBC、VEGF-A、p-p38 MAPKの局在を検討した。線維血管組織ではpSer59αBC,pSer45αBC,pSer19αBCが血管内皮細胞に発現し、pSer59αBCはVEGF-Aとも共局在していた。また線維血管組織ではpSer59αBCとp-p38 MAPKが共局在していたが、正常網膜ではその発現が確認できなかった。さらに我々は培養網膜血管内皮細胞において、ウエスタンブロットでpSer59αBCを検討したところ、無血清刺激でその発現が誘導されることを示唆した。以上より、網膜糖尿病網膜症の血管新生では、p-p38 MAPKを介してリン酸化されたpSer59αBCが増殖組織の血管新生にVEGF-Aの分子シャペロンとして関与する可能性が示された。ヒト増殖糖尿病網膜症の増殖膜組織の収集は、H27年度の目標としていた10例に到達できた。αBークリスタリンのリン酸化は、無血清刺激を行った培養網膜血管内皮細胞を用いたウエスタンブロット法においても確認することができた。増殖糖尿病網膜症(PDR)では網膜の虚血、炎症などにより、眼内に著明な新生血管、リンパ球浸潤を伴う増殖組織が形成される。PDRの増殖、進展に、血管内皮増殖因子(VEGF)が重要な役割を果たし、私はこれまでsmall hieat shock proteinの1つであるαB-クリスタリンがVEGFの分子シャペロンとして働くことを示してきた。シャペロン能はそのリン酸化と相関することも知られている。本研究ではPDRにて硝子体手術を施行し、病理学的な解析が可能であった増殖組織を10例収集し、αBークリスタリンとそのリン酸化について解析した。増殖組織の新生血管にはVEGFとαBークリスタリンの共発現がみられた。加えてαBークリスタリンの3つのリン酸化部位(Ser59, 45, 19)において、VEGFとの関連を検討した。結果的にSer 59リン酸化とVEGFの発現が最も相関していることが示唆された。αBークリスタリンSer 59リン酸化は、p38のリン酸化により誘導されることが知られている。本研究では、PDR増殖組織にSer 59リン酸化とp38の共発現も確認された。一方、脈絡膜悪性黒色腫の摘出眼球における正常網膜での発現を検討したところ、正常網膜血管にαB-クリスタリンのリン酸化はみられず、p38の発現もなかった。最後に、このリン酸化は術前に抗VEGF薬治療に関わらず、VEGFの分子シャペロン能に関与していることも示し、αB-クリスタリンリン酸化は抗VEGF薬治療の無効例においても、治療標的となり得る(Int J Ophthalmol 2016)。併せて、ヒトPDRでは、特に糖尿病無治療の患者において網膜の異常だけでなく、脈絡膜も肥厚していることを示した(Eur J Ophthalmol 2016)。ヒトの糖尿病網膜症の増殖組織を用いた解析は順調に進めることができた。他方、ストレプトゾトシン誘導糖尿病モデルマウスの作成においては、現在誘導1ー2か月の血糖値、体重測定などを行い、VEGF、αB-クリスタリンのリン酸化について発現解析を準備している状況である。我々はこれまで、small heat shock proteinの1つであるαBークリスタリンが、増殖糖尿病網膜症の線維血管増殖膜の微小血管に発現していることを見いだし、さらにそのセリン59リン酸化がVEGFの分子シャペロンと関連することを報告してきた。本年度では、糖尿病モデルマウスを用いて、αBークリスタリンとVEGFの発現解析を行ってきた。ストレプトゾトシン(STZ)の腹腔内投与を行い、STZ誘導糖尿病網膜症マウスモデルを作製した。STZ誘導8週間にかけて、血糖値の上昇と体重の増加がみられた。STZ誘導12週では、むしろ血糖および体重の下降傾向がみられた。STZ誘導8週において眼球を摘出し、αBークリスタリンとVEGFの免疫組織

化学を施行したが、網膜、網膜色素上皮、脈絡膜にαBークリスタリンの発現はみられなかった。VEGFは網膜内層と網膜色素上皮に陽性反応がみられた。STZ誘導4、8週で網膜色素上皮・脈絡膜複合組織の蛋白を抽出し、ELISA法にてVEGFタンパク濃度を測定したところ、STZ誘導4週よりも8週でむしろVEGF濃度が有意に低値を示した(P<0.05)。我々はさらに当教室で使用可能な光干渉断層計を用いて、網膜色素上皮・脈絡膜厚を計測したところ、STX誘導8週をピークに有意に肥厚することを見いだした(P<0.05)。STZ8週の網膜色素上皮・脈絡膜のメラニン消化標本を用いてヘマトキシリン・エオジン染色を行うと、STZ誘導マウスでは網膜色素上皮に有意な形態学的変化は無いが、脈絡膜には微小血管の管腔構造の増加と間質成分の肥大がみられることが判明した。以上より、STZ誘導糖尿病網膜症モデルでは、脈絡膜にも形態学的変化が起こることが判明した。αBークリスタリンのELISA法については現在、確認中である。STZ誘導糖尿病マウスでは、誘導後8週をピークに脈絡膜厚が有意に肥厚することが示唆された。病理組織所見としては、STZ誘導8週では、脈絡膜に間質成分の増加、色素沈着の増加と微小血管の増加もみられた。脈絡膜組織におけるVEGF、αBークリスタリン濃度は、STZ誘導4ー8週にかけて、有意に低下していることが判明した。同様の結果は、網膜組織においてもみられた。今後は糖尿病モデルマウスの進行におけるVEGF、αBークリスタリンの発現低下の意義について検討を行う予定である。ストレプトゾトシン誘導糖尿病モデルマウスを作成し、αB-クリスタリンとVEGFの共発現を、確認する予定である。培養網膜血管内皮細胞を用いて、無血清刺激において、αB-クリスタ陳とVEGFの共発現、結合を、ウエスタンブロットや免疫沈降で確認する予定である。αBークリスタリンのリン酸化は糖尿病網膜症の病理的新生血管の発達に重要な役割を果たしていることが示唆された。今後は、STZ誘導糖尿病マウスモデルにおいて、網膜と脈絡膜の蛋白を抽出し、VEGF、αBークリスタリンのリン酸化を検討する。病理組織学的に両者の免疫活性部位を明らかにして、共発現しているか確認する。マウス光干渉断層により網膜や脈絡膜の厚さも測定し、VEGF-αB-クリスタリンの発現と相関するか、誘導1ー2か月のマウスを使用して、評価を行う。さらに、抗αB-クリスタリン抗体やsiRNA、さらにはp38の阻害薬を眼内注射し、糖尿病モデルマウスにおけるVEGF濃度の変化について、解析を行う。以上より、αB-クリスタリンのリン酸化がPDRの治療標的になるデータを収集する予定である。眼科学抗体購入費、標本作製費に若干の相違が認められた。培養細胞実験を進めるにあたり、研究の進捗が遅延したため、次年度使用額が生じた。28年度実施の予定であったストレプトゾトシン(STZ)誘導マウスは、刺激後2週、3週では血糖値の増加がえられなかったため、さらなる長期間の経過観察が必要になった。現在、刺激後2か月まで経過観察し、眼球の実験を施行している。加えて、刺激後1か月の摘出眼球の固定が不良であったため、病理組織学による形態学的評価が困難であり、免疫組織化学が施行できなかった。
分散二相乱流における粒子間相互作用の物理モデルの構築

分散二相乱流における粒子間相互作用を明らかにするために、水の鉛直上方格子乱流中に固体粒子を中立浮遊させ、分散粒子が連続相乱流に与える影響および分散粒子間の相互作用を実験的に調べた。まず、直径1.00mmと1.25mmの球形ガラス粒子(密度2450kg/m^3)を中立浮遊させ、粒子体積割合をC=00.5%の範囲で変化させ、分散粒子群が連続相乱流に与える影響をPIV計測によって調べた。時々刻々変化する粒子体積割合を定量化するため、レーザシート光を用いた粒子カウンタを開発・使用した。その結果、どちらの粒子直径においても、粒子体積割合の増大とともに主流方向速度変動成分が増加し、C=0.5%付近では単相流における乱れ度の4倍以上に達することが明らかになった。これに対して、スパン方向成分は高々50%の増加に留まる。連続相の瞬時速度分布より、選択的増大が主流方向に細長く伸びた速度変動領域の存在と関連していることを明らかにした。そのような特性は速度変動の2点相関関数分布に顕著に表れ、主流方向速度変動の主流方向相関(いわゆる縦相関)は粒子体積割合の増大とともに増加するが、スパン方向速度変動のそれ(いわゆる横相関)は粒子体積割合には殆ど依存しない。選択的増大をもたらす粒子群挙動の時間変化を流れの可視化によって調べた。その結果、粒子群が主流方向の細長い領域に偏在する列状粒子集積(columnar particle accumulation : CPA)が観察され、体積割合0.05%程度から顕著になることを明らかにした。粒子相互位置関係を与える確率密度関数を求めたところ、粒子が主流方向に互いに並ぶ確率が高いことが判明した。粒子体積割合が低い条件において、二つの粒子の相互作用を可視化観察および三次元計測した。その結果、二つの粒子が主流方向に並ぶと下流側粒子が上流側粒子に接近すること(スリップストリーム現象)、下流側粒子がさらに接近すると上流側粒子がはじき飛ばされ、代わりに下流側粒子がその位置で中立浮遊を始めること(入れ替わり現象)が明らかになり、一連の粒子挙動を三次元的に定量化した。本研究の目的は、最も基礎的な乱流場である格子乱流を対象として、そこに分散する粒子の挙動を実験的に解明し、挙動の物理モデルを構築することにある。特に着目している点は、粒子数密度が比較的高い状態(体積比で0.1%程度以上)における粒子間相互作用である。これは、粒子群によって連続相に乱れが生成され、その影響を後続する粒子群が受ける機構である。本研究では、鉛直上昇流における粒子の中立浮遊状態を実現することによって、粒子群の平均的重力沈降をゼロにし、重力効果を最小にした状態で粒子そのものに起因する粒子間相互作用を明らかにすることを目指している。本年度は4年計画の初年度として、水を作動流体とする鉛直上昇格子乱流を設計製作し、作動流体より重い固体粒子の中立浮遊状態を実現する実験条件を調べた。粒子は直径0.12mmのガラス粒子および金属粒子である。格子乱流の断面一様性を確保するため、200×200m【m!^2】断面のテストセクションを製作し、格子乱流10000までを実現した。流量条件の再現性を確保するため、一体型電磁流量計を用いた回流ループを製作した。粒子挙動の3次元ラグラジアン計測を行うため、2台の高速度カメラを用いたステレオ撮影システムを構築し、画像データ解析に必要なシステムおよびソフトウェアを開発した。また、粒子挙動のラグラジアン数値解析を行うため、渦粒子相互作用モデルに基づく数値解析コードを開発した。それを用いて、現有の水衝突噴流乱流で得られている粒子挙動の数値解析を実施し、粒子挙動のモデリングを精緻化した。

その結果、二つの粒子が主流方向に並ぶと下流側粒子が上流側粒子に接近すること(スリップストリーム現象)、下流側粒子がさらに接近すると上流側粒子がはじき飛ばされ、代わりに下流側粒子がその位置で中立浮遊を始めること(入れ替わり現象)が明らかになり、一連の粒子挙動を三次元的に定量化した。本研究の目的は、基礎的な乱流場である格子乱流を対象として、そこに分散する粒子群の挙動を実験的に明らかにし、粒子挙動の物理モデルを構築することにある。特に着目している点は、粒子数密度が比較的高い状態(体積比で0.1%程度以上)における粒子間相互作用である。すなわち、粒子群によって連続相に乱れが生成され、その影響を後続する粒子群が受ける機構である。本研究では、鉛直上昇流における粒子の中立浮遊状態を実現することによって、粒子群の平均的重力沈降をゼロにし、重力効果を最小にした状態で粒子そのものに起因する粒子間相互作用を明らかにすることを目指している。本年度は4年計画の2年目として、前年度に設計製作した鉛直上昇格子乱流水槽の乱流特性をピトー管および粒子像流速計(PIV)を用いて測定した。その結果、格子とその上流に設置したメッシュとの組み合わせによって試験部で一様な平均速度分布が得られること、乱れ度分布も流れ方向の同一断面内ではほぼ一様になり、乱れ度の強度は下流方向に漸減することを明らかにした。文献値との比較検討により、本装置で標準的な格子乱流が実現されることを確認した。次に、格子乱流中に直径1mmのガラス粒子を多数投入し、それらの挙動を高速度カメラで撮影して調べた。慎重な流量制御を行うことによって、壁面近傍を除く多くの粒子について中立浮遊状態を実現することができた。体積比がおよそ0.0010.01%の条件で粒子挙動を可視化・観察した結果、(1)2つの粒子が接近すると、片方の粒子が強くはじきだされること、(2)粒子体積比の増大とともに流れ方向に筋状の粒子分布が生じ、粒子数密度が高い領域では下降流、低い領域では上昇流となること、を明らかにした。後者の観察結果は粒子群挙動の直接数値計算による予測と符号するもので、初めて実験的に捉えることができた。昨年度までの研究により、粒子間相互作用として(1)2つの粒子が主流方向に接近すると、片方の粒子が強くはじきだされること、(2)粒子体積比の増大とともに流れ方向に筋状の粒子分布が生じ、粒子数密度が高い領域では下降流、低い領域では上昇流となること、を明らかにした。本年度は、(1)の現象をより詳しく調べるため、ステレオ撮影法を用いた画像計測を実施した。
費用効果分析に基づく脳卒中後の集中的リハビリテーションの治療戦略

本年度は,株式会社JMDCより,レセプトデータを購入し,脳血管障害者におけるリハビリテーションの密度と退院後5年間の医療費との関連について検討した.対象者は2005年1月から2017年12月までに脳卒中の診断がある患者143203名とした.〇方法の概要:群分けとしては,1低密度群:回復期リハビリテーション病院入院時の1日あたりの平均単位数が5単位未満の者とした.2高密度群:回復期リハビリテーション病院入院時の1日あたりの平均単位数が5単位以上の者とした.リハ密度と医療費としては,レセプトデータより、高密度群と低密度群それぞれの入院日数,回復期入院医療費,総医療費(脳卒中発症年の翌年から5年間の医療費),退院後医療費を算出し,両群間で比較した.リハ密度と再入院率としては,Cox回帰分析により2群のハザード比を算出した.〇結果の概要:入院日数,回復期リハ病院の入院医療費に関しては,高密度群が有意に高値であった(P<0.01).退院後医療費は、有意差は認められないが低密度群が高値となっていた(P=0.70).総医療費に関しては,有意差は認められないが高密度群が高値となっていた(P=0.054).再入院率は,ハザード比は0.86であり,有意差は認めなかった(P=0.71).〇今年度の研究の結論:入院日数,回復期入院医療費は共に高密度群が有意に高く,退院後医療費は有意ではないが低密度群が高値となった.再入院率も発症後5年以上経過すると低密度群が高密度群を大きく上回る結果が得られた.多くの限界はあるものの,回復期リハ病院での集中的リハは退院後医療費に影響する可能性が示唆された.本年度の研究の概要としては,長期に渡り追跡可能なレセプトデータを用いて,回復期リハ密度による群分けを行い,長期的な医療費や再入院率を比較検証した.その結果,多くの限界はあるものの,回復期リハ病院での集中的リハは退院後医療費に影響する可能性が示唆された.本研究の限界として,以下の点が挙げられた.1.5年間追跡できるデータが全体で74名と少ないこと.2.重症度などの交絡因子の影響を受けていること.これらは,研究開始時に,ある程度予測はしていたものの対策が不十分であったことが挙げられる.しかしながら,操作変数法や回帰不連続デザインなど交絡因子を調整し,検討することで解決ができると考えられる.今年度は,前年度の研究結果を踏まえ,新たなデザインでの研究を開始する.特に,交絡因子の調整が必要であり,回帰不連続デザインを用いて,新たに検証していく予定である.本年度は,株式会社JMDCより,レセプトデータを購入し,脳血管障害者におけるリハビリテーションの密度と退院後5年間の医療費との関連について検討した.対象者は2005年1月から2017年12月までに脳卒中の診断がある患者143203名とした.〇方法の概要:群分けとしては,1低密度群:回復期リハビリテーション病院入院時の1日あたりの平均単位数が5単位未満の者とした.2高密度群:回復期リハビリテーション病院入院時の1日あたりの平均単位数が5単位以上の者とした.リハ密度と医療費としては,レセプトデータより、高密度群と低密度群それぞれの入院日数,回復期入院医療費,総医療費(脳卒中発症年の翌年から5年間の医療費),退院後医療費を算出し,両群間で比較した.リハ密度と再入院率としては,Cox回帰分析により2群のハザード比を算出した.〇結果の概要:入院日数,回復期リハ病院の入院医療費に関しては,高密度群が有意に高値であった(P<0.01).退院後医療費は、有意差は認められないが低密度群が高値となっていた(P=0.70).総医療費に関しては,有意差は認められないが高密度群が高値となっていた(P=0.054).再入院率は,ハザード比は0.86であり,有意差は認めなかった(P=0.71).〇今年度の研究の結論:入院日数,回復期入院医療費は共に高密度群が有意に高く,退院後医療費は有意ではないが低密度群が高値となった.再入院率も発症後5年以上経過すると低密度群が高密度群を大きく上回る結果が得られた.多くの限界はあるものの,回復期リハ病院での集中的リハは退院後医療費に影響する可能性が示唆された.本年度の研究の概要としては,長期に渡り追跡可能なレセプトデータを用いて,回復期リハ密度による群分けを行い,長期的な医療費や再入院率を比較検証した.その結果,多くの限界はあるものの,回復期リハ病院での集中的リハは退院後医療費に影響する可能性が示唆された.本研究の限界として,以下の点が挙げられた.1.5年間追跡できるデータが全体で74名と少ないこと.2.重症度などの交絡因子の影響を受けていること.これらは,研究開始時に,ある程度予測はしていたものの対策が不十分であったことが挙げられる.しかしながら,操作変数法や回帰不連続デザインなど交絡因子を調整し,検討することで解決ができると考えられる.今年度は,前年度の研究結果を踏まえ,新たなデザインでの研究を開始する.

特に,交絡因子の調整が必要であり,回帰不連続デザインを用いて,新たに検証していく予定である.本年度は,レセプトデータ並びに統計処理用のパソコン,統計ソフトを購入した.データ購入において,予定額よりやや安く購入できたため,次年度使用額が生じた.
ナノチップテクノロジーを指向したペプチドマイクロアレイの構築

ポストゲノム関連研究が急速に進展している。ゲノムの解析が進むにつれ、ゲノミックス、プロテオミクス、SNP(遺伝子多型)や糖鎖のグライコミクス等の新領域が開拓されつつある。各領域において、最も必要とされる革新技術は、多様な生体物質ライブラリを解析し、有用な情報を引きだすナノチップデバイスシステム&テクノロジーである。「ナノチップデバイス」の開発は、生体分子の個々の「機能に基づいたハイスループット解析」を可能とする。本研究では、当該革新技術として必須のプロテインや糖鎖、細胞検出用ナノチップデバイス開発を指向し、種々のペプチド配列を同時合成し、独自の最新技術であるペプチドライブラリを利用した「マイクロアレイ」を構築することを目的とした研究を行い、成果を得た。平成15年度の成果として、立体構造制御ペプチドの設計を行った。またナノチップテクノロジー適合型立体構造制御ペプチドライブラリの構築としてリン酸基、糖鎖、核酸塩基をアミノ酸以外の因子として含む多様なペプチド群の構築を行った。平成16年度は、前年度の成果を発展展開させた。機能性基を有する種々のペプチドライブラリの増大のために、さらにペプチドの設計と合成を行った(約100種)。合成したペプチドライブラリをナノチップテクノロジーを指向したペプチドマイクロアレイに発展させるために、ガラス基板への合成ペプチドのマイクロ・ナノリッターアレイ化を実施した。これらのアレイを用いて簡便であるドライな条件で高感度・高効率にペプチド・タンパク質相互作用を蛍光検出するペプチドマイクロアレイを構築した。本研究では、当該革新技術として必須のプロテインや糖鎖、細胞検出用ナノチップデバイス開発を指向し、種々のペプチド配列を同時合成し、独自の最新技術であるペプチドライブラリを利用した「マイクロアレイ」を構築することを目的としている。本年度の成果として、1.立体構造制御ペプチドの設計:コンビナトリアル化学研究に最適のテンプレート(スカフォード)となるαヘリックス、βシートやループ機能構造等の化学選択を行った。2.ナノチップテクノロジー適合型立体構造制御ペプチドライブラリの構築:上記により選択された機能ドメイン構造ペプチドの分子情報(アミノ酸配列・立体構造モデリング)に基づき、種々のペプチドモデルライブラリを研究代表者が開発・発展させてきた多彩な構造を有するペプチドの合成法により、高効率に合成した。具体的には、単純ペプチドからなるモデルライブラリやリン酸基、糖鎖、核酸塩基をアミノ酸以外の因子として含む多様なペプチド群の構築を行った。
真核光合成微生物クラミドモナスを用いた実験系とゲノム解析の現状調査

クラミドモナス研究の各領域(光合成・生殖・遺伝・光応答・行動)について,班会議(函館にて2000年7月30日31日,木更津市にて2001年3月10日)とワークショップ(2001年3月9日10日,木更津市にて)を開催して,研究動向を把握した。また,平行して,国際協力体制で真核光合成微生物クラミドモナスのゲノム解析計画を推進する前段階として、クラミドモナスの実験系としての特徴とゲノム解析を進める上での問題点を明らかにした。調査の結果,以下の点を特に今後重点的に推進する必要性が明らかになった。1)ESTの大量解析とゲノムライブラリーのDNAアレイあるいはDNAチップ2)細胞培養時における環境条件の標準化3)染色体の構造と遺伝マーカーの整備4)遺伝子タギングによる変異株の取得方法とその解析手法5)オルガネラ並びに核ゲノム形質転換6)遺伝子コード領域の予測手法7)交配による遺伝子同定の簡便化と遺伝マーカーの利用8)タンパク質精製法とプロテオームのデーターベース化9)遺伝子のマッピングとポジショナルクローニング10)実験室株(標準株)の系統保存と分譲システムの整備さらに,国際協力体制でのグノム研究を推進するには,来年度にも企画研究を継続するとともに,2004年に日本で国際会議を開催する準備を始める必要があることが共通認識となった。
変形性膝関節症患者に対する足部振動刺激の提示が歩行修正に及ぼす効果の検証

膝OA患者に対する歩き方の修正は、膝関節内反モーメントの低減に有効であることが明らかとなっている。しかし、先行研究で用いられた手法は、視覚や聴覚などを用いて常に歩き方を意識しながら歩行する必要があり、日常生活場面での修正に汎化されるまでに時間が必要である。本研究では、ウエアラブルなデバイスを用いて足部に振動刺激を与えることで、膝OA患者の歩行を無意識に修正し、膝関節の力学的負荷を減らすことができるか検証する。それにより、膝OA患者における歩き方の修正を、様々な場面で行えるようにし、日常生活場面における膝関節の力学的負荷の減少につなげる。
固体電解質/電極界面の構築によるリチウム二次電池高容量正極反応の制御

固体界面を利用して複数当量のLi+を可逆的に脱挿入させるLi二次電池正極反応を見出し,高容量を安定に取り出すことで高エネルギー密度化に繋げる.本研究では,従来正極に無い4当量以上のLi脱離反応を示すが,反応性の高い有機電解液との副反応で分解するため,放電時のLi挿入量が少ないLi5FeO4正極に着目した.パルスレーザー堆積法を用いた薄膜合成により,電位窓が広く,化学的安定性が高い酸化物固体電解質と正極との固体界面を構築し,電気化学特性と反応前後の構造を評価することで,不可逆反応が抑制され,放電時も可逆的にLiを挿入できる正極反応を明らかにする.固体界面を利用して複数当量のLi+を可逆的に脱挿入させるLi二次電池正極反応を見出し,高容量を安定に取り出すことで高エネルギー密度化に繋げる.本研究では,従来正極に無い4当量以上のLi脱離反応を示すが,反応性の高い有機電解液との副反応で分解するため,放電時のLi挿入量が少ないLi5FeO4正極に着目した.パルスレーザー堆積法を用いた薄膜合成により,電位窓が広く,化学的安定性が高い酸化物固体電解質と正極との固体界面を構築し,電気化学特性と反応前後の構造を評価することで,不可逆反応が抑制され,放電時も可逆的にLiを挿入できる正極反応を明らかにする.
ヒト胎児制癌(EC)細胞の分化と細胞死の分子細胞学的機序

われわれは,ヒト初期胚の分化成熟機構を明らかできる唯一の実験系である多分化能ヒト胎児性癌(EC)細胞(NCR-G3細胞,以下G3細胞)を独自に樹立し,同細胞を用いて分化形質発現の分子機序,分化初期係わる遺伝子の単離およびその機能をin vitro, in vivo実験計で明らかにした.G3細胞のレチノール酸(RA)による初期分化に関連する遺伝子の単離を試みた結果,HSP90, line-1および新たな遺伝子EATの3種の遺伝子を得た.G3細胞は42°C24時間の刺激で,多種の細胞系列に分化することが判明した.特に,栄養膜細胞系への分化が顕著に認められ,形態学的にも合胞体栄養細胞様巨細胞を呈した.同時に,その特異的産生物質であるhCGの産生能がRA添加時に匹敵する程度高いことがRNAおよび蛋白レベルで照明し得た.また,栄養膜細胞への分化に先立ってケラチン8分子がRNA,蛋白レベルで発現亢進していることが明らかとなった.新たな遺伝子EATは染色体上1q21にマップされ,Bc1-2ドメインを有しており,のちにmcl1と相同性が高いことが明らかとなった.また,その構造から細胞死関連遺伝子であることが示唆された.EAT遺伝子のヒト胎児での分布をin situ hybridizationで検索した結果,胎盤,中枢神経辺縁部,腎などで発現していることが明らかとなった.この結果はRNAレベルの発現と一致した.現在,ヒト胎児・成人組織での分布を詳細にしている.さらに,本遺伝子の個体レベルの機能を明らかにするためトランスジェニックニックマウスの作成を試み,2系統を樹立した.遺伝子導入が認められたマウスについて腫瘍発生,形成異常の有無について解析中である.以上の結果,体細胞の発生・分化と腫瘍化の接点に存在するヒトEC細胞の分化機構の分子的機序を明らかにすることができた.われわれは,ヒト初期胚の分化成熟機構を明らかできる唯一の実験系である多分化能ヒト胎児性癌(EC)細胞(NCR-G3細胞,以下G3細胞)を独自に樹立し,同細胞を用いて分化形質発現の分子機序,分化初期係わる遺伝子の単離およびその機能をin vitro, in vivo実験計で明らかにした.G3細胞のレチノール酸(RA)による初期分化に関連する遺伝子の単離を試みた結果,HSP90, line-1および新たな遺伝子EATの3種の遺伝子を得た.G3細胞は42°C24時間の刺激で,多種の細胞系列に分化することが判明した.特に,栄養膜細胞系への分化が顕著に認められ,形態学的にも合胞体栄養細胞様巨細胞を呈した.同時に,その特異的産生物質であるhCGの産生能がRA添加時に匹敵する程度高いことがRNAおよび蛋白レベルで照明し得た.また,栄養膜細胞への分化に先立ってケラチン8分子がRNA,蛋白レベルで発現亢進していることが明らかとなった.新たな遺伝子EATは染色体上1q21にマップされ,Bc1-2ドメインを有しており,のちにmcl1と相同性が高いことが明らかとなった.また,その構造から細胞死関連遺伝子であることが示唆された.EAT遺伝子のヒト胎児での分布をin situ hybridizationで検索した結果,胎盤,中枢神経辺縁部,腎などで発現していることが明らかとなった.この結果はRNAレベルの発現と一致した.現在,ヒト胎児・成人組織での分布を詳細にしている.さらに,本遺伝子の個体レベルの機能を明らかにするためトランスジェニックニックマウスの作成を試み,2系統を樹立した.遺伝子導入が認められたマウスについて腫瘍発生,形成異常の有無について解析中である.以上の結果,体細胞の発生・分化と腫瘍化の接点に存在するヒトEC細胞の分化機構の分子的機序を明らかにすることができた.
在宅緩和ケア質向上のための地域連携パス普及促進に関する研究

本研究では、在宅療養を希望する終末期がん患者に、北陸三県統一パスを利用し、1在宅看取り率が向上するか、2患者のQOLが向上するかをプロスペクティブに多施設合同研究で明らかにすることを目的とした。また、さらなるパス普及促進のために、医療福祉従事者向け勉強会や市民公開講座等でパスや在宅緩和ケアに関する教育を行い、効果的な普及促進方法に関して調査した。福井県:全拠点病院(4件)中小病院(1件)地域診療所(1件)訪問看護ステーション(11件)富山県:拠点病院(1件)石川県:拠点病院(2件)、地域診療所(3件)それぞれ個別訪問を行い、パス使用法の説明やメリットデメリットに関して聴取した。多職種連携研修会を年2回開催し、顔の見える関係性構築とともに、パス使用法や実例に関する発表を行なった。拠点病院と地域医療介護従事者の連携を深めるため、在宅緩和ケア推進会議を年2回開催し、地域緩和ケアにおける問題点を抽出、課題に関して話し合いを行なった。パス普及促進のため、ホームページを作成し、臨床研究の趣旨や必要時パス入手できるよう整備した。平成28年4月1日から平成30年3月31日までにおいて、パス使用群200例、パス非使用群49例登録された。両群において、年齢、登録時PS、罹患期間、患者家族の自宅看取りを希望する割合、主介護者の代替者の有無、在宅緩和ケアを担う医療機関が在宅療養支援診療所・病院である割合、原発巣に有意差はなかったが、性別は非使用群で有意に男性が多く、配偶者有の割合が多かった。(各P=0.004, P=0.04)自宅看取り率に関しては、使用群59.2%、非使用群60%で有意差なく(P=0.54)、死亡前QOLも使用群、非使用群で有意差なしとの結果だった。非使用群で4割近くがパス以外の情報共有ツールを利用しており、そのことが結果に影響している可能性が考えられた。本研究は、北陸三県統一在宅緩和ケア地域連携パスの有用性に関する研究であり、パス使用群と非使用群の在宅看取り率と死亡前の患者のQOLを比較する研究である。まだパスに関する認知度が低いことが課題の一つであり、そのためパス普及促進に向けて、当該年度は、北陸三県のがん診療拠点病院や訪問看護ステーション等を訪問し、パス運用や研究内容に関する説明・周知を行った。(福井県;がん診療連携拠点病院4箇所、個人病院1箇所、在宅療養支援診療所1箇所、僻地診療所1箇所、訪問看護ステーション11箇所、石川県;在宅療養支援診療所3箇所、富山県;がん診療連携拠点病院2箇所)また福井県と富山県において、病院医療者と在宅医療者向けにパス説明会を開催した。福井県においては、パスワーキンググループを立ち上げ、今後パス運用状況や問題点等を定期的に討議できるようにした。昨年度はパス使用群18名、パス非使用群17名登録した。追跡終了後担当した訪問看護師にアンケート送付を行い、30件回収した。緩和医療学会、在宅医学会、プライマリケア学会、研究会等において、本臨床研究の概要に関して発表を行った。パス普及促進の一環として、患者会等で説明を行い、また患者家族向けのパンフレットを作成して誰でも容易に説明が行えるようにした。当初の予定では、初年度と次年度でパス普及促進等、臨床研究の体制を整え、パス使用群と非使用群を登録、追跡開始を行う予定であった。概ね予定通りに進行している。28年度から29年度でパス使用群116症例、非使用群34症例登録した。患者の死亡前QOLアンケート回収は使用群61例、非使用群27例であり、目標症例数(各50例ずつ)に非使用群が到達していない。他医療期間へのさらなる臨床研究への協力呼びかけや。パスに関する認知度向上のため、北陸三県合同在宅緩和ケア地域連携パスのホームページを開設した。また初年度に引き続き、北陸三県のがん診療拠点病院や訪問看護ステーション等を訪問し、パス運用や研究内容に関する説明・周知を行った。また福井県と富山県において、病院医療者と在宅医療者向けにパス説明会を開催した。福井県においては、パスワーキンググループを立ち上げ、今後パス運用状況や問題点等を定期的に討議できるようにしたとともに、今後の在宅緩和ケアに関して拠点病院、医師会、訪問看護ステーション、県健康福祉課等が一堂に会して協議できる場(在宅緩和ケア推進会議)を2017年3月10日、2017年9月22日の2回開催した。福井県において、専門職連携教育(InterProfessionalEducation; IPE)セミナーを合計2回開催し、そこでパスの紹介を行った。緩和医療学会、在宅医学会、プライマリケア学会、研究会等において、本臨床研究の概要と中間結果に関して発表を行った。中間結果に関しては、パス使用群と非使用群で自宅看取りが非使用群の方が高いという結果だったが、患者の死亡前QOLは有意にパス使用群で高い結果となった。パス普及促進の一環として、医療介護福祉従事者向けパンフレットを作成し、県内主要医療期間に交付した。パスホームページを作成し、使用や臨床研究への協力を促した。患者の死亡前QOL評価指標としてgood death scale日本語版を作成し、緩和医療学会誌に採用された。パス使用群は症例数が目標症例数に到達しており、あとは非使用群の症例収集が課題であるが、30年度中に回収、分析は可能と思われ、概ね順調に進展していると思われる。

本研究では、在宅療養を希望する終末期がん患者に、北陸三県統一パスを利用し、1在宅看取り率が向上するか、2患者のQOLが向上するかをプロスペクティブに多施設合同研究で明らかにすることを目的とした。また、さらなるパス普及促進のために、医療福祉従事者向け勉強会や市民公開講座等でパスや在宅緩和ケアに関する教育を行い、効果的な普及促進方法に関して調査した。福井県:全拠点病院(4件)中小病院(1件)地域診療所(1件)訪問看護ステーション(11件)富山県:拠点病院(1件)石川県:拠点病院(2件)、地域診療所(3件)それぞれ個別訪問を行い、パス使用法の説明やメリットデメリットに関して聴取した。多職種連携研修会を年2回開催し、顔の見える関係性構築とともに、パス使用法や実例に関する発表を行なった。拠点病院と地域医療介護従事者の連携を深めるため、在宅緩和ケア推進会議を年2回開催し、地域緩和ケアにおける問題点を抽出、課題に関して話し合いを行なった。パス普及促進のため、ホームページを作成し、臨床研究の趣旨や必要時パス入手できるよう整備した。平成28年4月1日から平成30年3月31日までにおいて、パス使用群200例、パス非使用群49例登録された。両群において、年齢、登録時PS、罹患期間、患者家族の自宅看取りを希望する割合、主介護者の代替者の有無、在宅緩和ケアを担う医療機関が在宅療養支援診療所・病院である割合、原発巣に有意差はなかったが、性別は非使用群で有意に男性が多く、配偶者有の割合が多かった。(各P=0.004, P=0.04)自宅看取り率に関しては、使用群59.2%、非使用群60%で有意差なく(P=0.54)、死亡前QOLも使用群、非使用群で有意差なしとの結果だった。非使用群で4割近くがパス以外の情報共有ツールを利用しており、そのことが結果に影響している可能性が考えられた。次年度以降は、パス使用群と非使用群の登録・追跡をさらに進めるため、引き続き医療機関を個別訪問してパス使用状況確認や各施設担当者からの質疑応答に答えるとともに、多職種連携セミナー等でパス普及促進を行う。中間報告に関して各学会等で発表する。非使用群の症例収集、結果の詳細な分析、最終結果を報告予定である。パスの印刷費や各施設からパス回収、遺族へ返却の際の郵送費、アンケート郵送費等が必要である。また、パス普及促進目的の専門職連携セミナーや招待する講師への謝礼金等も発生する。30年度でデータ解析に使用する統計ソフトや、パソコン、また印刷代、郵送費等が発生するため生じた。既述のことに関して30年度に使用予定である。上記に加えて、パス普及促進目的のホームページ作成も行う予定である。
文学表現と<記憶>-ドイツ文学の場合

この研究では、4年間で計9回の研究会を開催し、のべ63名から研究成果の報告を受け、討論を行った。トピックは次のようなものであった。・記憶と身体に関する研究・記憶のメディア、メディアと記憶に関する研究・集合的記憶と文化的アイデンティティーに関する研究・記憶と意識、記憶と無意識、記憶と忘却に関する研究・記憶と痛みに関する研究これらのトピックに関して、具体的な分析対象として取り上げられたのは、ヘルダーリン・ニーチェ・リルケ・カフカ・ベンヤミン・フロイト・レッシング・マン・ゲーテ・グリルパルツァーなどの作家・批評家たちである。これまでの研究から、広義の「記憶」にあたるドイツ語の類義語はさまざまあり、ドイツ文学に表現された記憶の系列は多岐にわたっていることが明らかになった。記憶とはもともと過去に由来するものだが、文学テクストにおける記憶は、過去・現在・未来という直線的な時間観念とは異なった時間を内包している。また記憶とは元来は個人の機能であるはずだが、その記憶を保ち続けることにより、記憶が集合的な歴史へと拡大されるシステムを持つことも明らかになった。特に「痛み」の記憶は、個人にとっても社会にとっても忘れがたいものであり、文学テクストにおいても痛みの聖化・神秘化・倒錯など、さまざまな表現形式が存在する。これまでに明らかになった上記のような研究成果をまとめ、さらに今後研究を進めることが必要だと思われる点を検討した。特に「痛み」という文化ファクターの視点からドイツ文学における表現形式を検討することは、この研究では十分にはできなかったので、今後の重要な課題として残ることになった。本研究は,東京大学大学院人文社会系研究科ドイツ文学専攻が中心となって行った従来の科研研究「文学表現と<メディア>-ドイツ文学の場合」(平成7-9年度)および「文学表現と<身体>-ドイツ文学の場合」(平成11-14年度)の成果を引き継ぎ,記憶の問題を身体ならびにメディアとの密接な関係において考察しようとするものである。初年度にあたる今年度は3回の研究会を開催して合計21名から研究成果の報告を受け,討論を行った。主たるトピックは以下のようなものであった。記憶と身体,記憶と無意識:・聴覚や触覚を中心に組織された記憶から視覚的記憶への歴史的変遷。その転回点にたつ記憶の施設としての「テアトロ・オリンピコ」について。・1990年代の旧東ドイツ出身作家たちのテクストにおいて,抑圧された歴史の記憶が嘔吐として回帰すること。・無意識,抑圧,想起といったフロイトのタームについての文献学的考察。記憶のメディア,メディアと記憶・記憶の集積場もしくは想起の媒介としての空間について。アイヒェンドルフにおける庭園,シュティフターにおける森,バッハマンやハントケにおける東欧など。・セリフ中心の19世紀西洋演劇が,蓄音機,映画などの記録メディアの登場により役者の身体を中心としたものへと変貌を遂げる。その過程において川上音二郎,貞奴一座の欧米公演が与えた衝撃について。集合的記憶と文化的アイデンティティ:・ナチスが民族的記憶の再生・形成の手段としようとしたThing-Theaterについて。・集合的記憶の深層にある秩序について。カール・シュミットの「具体的秩序」の概念を手がかりとした考察。・文化的記憶についての構築主義的理解と,それについての批判的考察。とくに強制収容所体験について虚偽の回想録を出版したヴィルコミルスキーの事件をめぐって。昨年度に引き続き、今年度も9月・12月・3月の計3回研究会を開催し、合計21名から研究成果の報告を受け、討論を行った。記憶と意識,記憶と無意識:・フロイトの精神分析における記憶と自伝について。・ワイマール共和国時代における「大衆」をめぐる言説と記憶について。・近代日本文学におけるトーマス・マン文学の影響について。・戦後ドイツ文学における記憶の役割について。特にヘルタ・ミュラーにおけるルーマニア・ドイツ人の記憶と、ハイナー・ミュラーの『マウザー・プロジェクト』における「未来」の記憶について。

記憶のメディア,メディアと記憶:・記憶の保存メディアとしての象形文字と妄想について。・大地の記憶としての地質学に対するゲーテの立場について。・歴史の記憶としての庭園と博物館について。・北園克衛のプラスティック・ポエムを中心に、記憶のメディアとしてのカメラについて。・映画に残された歴史の記憶について。記憶と痛みについて:・中世における痛みの記憶について。・ベンヤミンの文化論における痛みの考察について。・ツェラーンなどの詩人における痛みの記述。前年度および今年度の研究により、ドイツ文学における<記憶>表現の輪郭がある程度明らかになってきた。今後の研究の進め方として、引き続きさまざまな<記憶>表現についての分析を進める必要があるが、特にメディアとの関係、および「痛み」として表現されている<記憶>のありかたについて、より詳細な研究が有望と思われる。昨年度に引き続き、今年度は12月・3月の計2回研究会を開催し、合計14名から研究成果の報告を受け、討論を行った。トピックは以下のようなものであった。記憶と忘却:・「忘却と想起の物語」としての『魔の山』・『シュレーバー回想録』におけるペルシャの神々について...記憶と想起の相克...・死せる花婿-翻訳について・HonigmannとBiller記憶の形式とメディア:・忘れえぬ絵の記憶-バールのクリムト評・実験詩としての『歓喜に寄せて』・現代ドイツ語文学における「記憶」・ベンヤミンにおける子ども-言語と物・演劇史研究における比喩形象(figura)の概念について・ヘルダーリンにおける最上級と形式について・自伝理論における人生史の規範記憶と痛みについて:・ツェラーンの詩における痛み・HeideggerのSein zum Todeと記憶今年度も、ドイツ文学における<記憶>表現と忘却との関係、さまざまな<記憶>表現の形式などについて分析を進めることができた。特に<記憶>とメディアとのさまざまな関係、および「痛み」として表現されている<記憶>のありかたについて、分析を進めることができた。今年度の研究により、ドイツ文学における<記憶>表現にとっては、「痛み」が重要な概念であることを確認することができた。しかしこの<記憶>と「痛み」の関係については、今年度の研究でまだ十分分析できたとは言えないので、2006年度(最終年度)にさらに詳細に分析を進める予定である。昨年度に引き続き、今年度は9月に研究会を開催し、7名から研究成果の報告を受け、討論を行った。トピックは次のようなものであった。
動脈硬化に関連した動脈壁平滑筋炎症制御因子のゲノム網羅的探索

肺炎クラミジアの冠状動脈硬化部における感染状況を調べたところ、軽度、高度狭心症計50人の冠動脈硬化部の平滑筋細胞組織の100%で動脈壁平滑筋細胞に肺炎クラミジアの高密度感染を検出し、局所炎症の惹起に関与していた。肺炎クラミジアの約100遺伝子は真核生物の遺伝子に類似する。これら主要な病原因子と相互作用するヒト大動脈遺伝子を2ハイブリッド法を用いてcDNAライブラリーから検出した。肺炎クラミジアset遺伝子(ヒトクロマチン関連因子ホモローグ)やmpg1遺伝子は肺炎クラミジア自身か宿主のクロマチン構造に関連すると考えられ、ある種の細胞外マトリックス蛋白質(大動脈壁平滑筋層で弾性を制御している細胞外マトリックスタンパクファミリーフィブリンのEGF様Ca結合ドメイが相互作用ドメインであった)との相互作用が同定された(クラミジア感染患部で、大動脈弾性繊維の断裂病変形成に関与?)。この肺炎クラミジアのキネシン/ミオシン類似因子であるKhc蛋白質や封入体膜構成蛋白質であるIncA2をベイトにすると、それぞれミトコンドリア膜に局在する蛋白質ATP6,NADH dehydrogenaseとamine oxidaseが同定された(大動脈平滑筋細胞の増殖や脱分化制御に関与?)。この封入体膜遺伝子をHeLa細胞に導入・発現させたところ、発現タンパク質の局在はミトコンドリアに一致しており同膜電位を変化させて透過性に関与することがわかった。同遺伝子導入細胞はアポトーシスを起こしやすいことを解明した。これら相互作用因子の結合ドメインも解明した。それらの相互作用による宿主細胞変化をさらに解析中である。その他約80の全く新しい肺炎クラミジア菌?宿主間タンパク相互作用を検出している。50種程度の薬物スクリーニングの結果、アスピリンなど数種の薬物が肺炎クラミジア感染排除に働くことも判明した。肺炎クラミジア近縁種のクラミジア・フェリスの全ゲノム構造を決定したので両菌遺伝子の比較解析により動脈硬化関連因子探索の手がかりとなることが期待される。ヒト正常大動脈由来平滑筋細胞とHEp2細胞(対照)それぞれに肺炎クラミジア、クラミジア・フェリス菌を感染させて、ヒト3万遺伝子発現をマイクロアレイ解析して動脈硬化・心筋梗塞関連遺伝子データベースと比較することにより、肺炎クラミジア感染大動脈由来平滑筋にユニークな動脈硬化症関連遺伝子16コと新たな動脈硬化関連候補遺伝子合計224個を検出した)。
パーキンソン病に対する交感神経節の脳内移植に関する実験的・臨床的研究

我々はパーキンソン病に対して交感神経節の脳内移植を研究してきた。本移植法の問題点として約半数の症例で移植の効果が得られない点があげられる。本研究では、この無効例を減少させる検討を行った。本移植法が無効になる主な原因は、移植された細胞が脳内に生着しないことにあると考えられる。生着の阻害因子として我々はfree radicalに注目しfree radical阻害剤の効果を実験的に研究した。臨床的には本移植術の5-6年にわたる長期効果を検討し、その予後阻害因子を明らかにした。1.結果(1)基礎的研究6-OHDAを一側黒質線条体ドーパミン路に注入後、交感神経節や胎仔中脳背側部を線条体に移植し、生着細胞数、細胞の大きさ、機能の変化を検討した。この際free radical阻害剤を局所投与し非投与群と比較した。free radical阻害剤投与群では生着率、細胞数、細胞の大きさが非投与群に比し良好で、さらにamphetamineによる回転行動が有意に減少した。このことは神経細胞の移植に際しfree radicalが阻害因子として大いに関与していることを示している。(2)臨床的研究臨床的には移植適応患者はさらに増加し、50症例に達した。このうち50%の患者は移植で症状の改善または投薬量の減少をみた。手術成績に影響を与える因子としては、患者年齢、罹病期間、重症度、交感神経節の状態であった。このうち交感神経節内Lewy小体の有無と数は特に手術結果とよく相関した。この結果は術前患者の状態を詳細に把握し、手術適応を決定することによって手術成績を向上させうることを示唆している。今後の展望研究結果は上述のごとく神経細胞の移植に際しfree radicalが阻害因子として働いていることを示し、その阻害剤が生着率を向上させることが明らかとなった。この実験的研究をふまえ、今後freeradical阻害剤を臨床例に応用することで移植の効果が向上する可能性がある。我々はパーキンソン病に対する新しい治療法として交感神経節の脳内移植を検討してきた。現在まですでに50例に臨床応用し約5割の症例で効果を認めたが、残りの症例では効果が認められなかった。本研究プロジェクトでは、この無効例を減少させるべく基礎的・臨床的検討をすすめた。基礎的には移植片の生着阻害因子であるfree radicalの生成を抑えて生着率を高める検討を行った。臨床的には予後に影響を与える因子を分析し臨床例での術後成績の向上を図った。(1)基礎的研究培養交感神経節細胞に膜脂質の酸化阻止剤(U-74389G)をあらかじめ滴与し移植すると、移植片の生着率は著明に向上し、細胞のサイズも増大した。また、6-OHAラットモデルを用いた行動を分析でも、回転行動が有意に減少した。つまり膜脂質の酸化阻止剤で前処置した交感神経節は形態的にも機能的にも移植後宿主脳内でよく生着しその機能を発揮した。このうち50%の患者は移植で症状の改善または投薬量の減少を試みた。手術成績に影響を与える因子としては、罹病期間、術前L-dope量であった。以上の研究結果はfree radicalの生成が移植の生着を阻害していることを示唆している。また臨床面でも症例の増加にともない、手術の効果を予想することが可能となった。

我々はパーキンソン病に対する交感神経節の脳内移植を検討してきた。現在まですでに50例に臨床応用し約5割の症例で効果を認めたが、残りの症例では効果が認められなかった。本研究プロジェクトでは、この無効例を減少させるべく基礎的・臨床的検討をすすめた。基礎的には移植片の生着阻害因子であるfree radicalの生成を抑えて生着率を高める検討を行った。臨床的には予後に影響を与える因子を分析し臨床例での術後成績の向上を図った。(1)基礎的研究培養交感神経節細胞に膜脂質の酸化阻止剤(U-74389G)をあらかじめ滴与し移植すると、移植片の生着率は著明に向上し、細胞のサイズも増大した。また、6-OHDAラットモデルを用いた行動を分析でも、回転行動が有意に減少した。つまり膜脂質の酸化阻止剤で前処置した交感神経節は形態的にも機能的にも移植後宿主脳内でよく生着しその機能を発揮した。(2)臨床的研究臨床的には移植適応患者はさらに増加し、60症例に達した。術後観察期間は2年から6年で、6例は6年以上経過した。年次別効果を判定すると著効例は1年目では20%だが4年目には14%にまで減少した。手術成績に影響を与える因子としては、罹病期間、術前L-dopa量であった。以上の研究結果はfree radicalの生成が移植の生着を阻害していることを示唆している。また臨床面でも症例の増加にともない、手術の効果を予想することが可能となった。