hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
研究動向調査を支援する学習環境SNSearchの構築

本研究の目的は、検索履歴を分析・利用し、お互いにシェアすることで、学生が検索スキルを勉強することを支援することです。昨年度に構築したシステムは単なる検索エンジンでしたが、本研究はSNSを用いた研究であるため、ユーザーアカウントなどの機能を追加する必要があります。今年度は以下の機能を追加したデモシステムを構築しました。ユーザーが自分でアカウントを作ることができる、ユーザー登録機能を追加。2)自分の検索履歴もサーバーに残す機能を追加。3)2013、2014の最新の論文データを収集し、データベースに更新。4)検索ログを分析できるようにするため、必要なログのみを取得できるプログラムを作成。また、検索行為を記録しログとして残して、そのログを利用し分析を行いました。ログの内容は以下のとおりです。a.入力したキーワード(Query)b.ログイン時間、ログアウト時間c.使った検索パラメタd.閲覧した論文、閲覧した時間、閲覧した回数今年8月に日本の学生に本システムを用いて評価し、分析を行いました。今回は学生の数が少ないため、今後、台湾の学生にも適用し、学生の検索履歴を用いて検索行為や学習行為を分析する予定でした。尚、今年度の補助金はシステム評価するための打ち合わせや学会発表の旅費、評価用のデバイスの購入に当てられました。今後も計画書の通りデモシステムを作成し、システムの評価・分析を行い、その成果をジャナール論文に投稿する予定でしたが、転職に伴い特定の研究に専念する必要が生じたため応募資格を失いました事をご報告いたします。今年はシステム構築に関する研究を中心に行った。その成果を論文として発表した。今年度の補助金は、主に上記の研究を遂行するための技術調査、システム全体設計の打ち合わせ、論文の発表の旅費に当てられた。本研究では58件の教育工学に関する有名な英語ジャーナル(合計27122件の論文)の概要を収取し、SNSを利用して、研究チームを対象にし、調査の結果を基に、テキストマイニング技術を応用し、自力で文献調査を行うことを支援するCross Tabulation検索エンジンを構築した。本システムは論文の質の判断要素で論文をランキングし、その結果をユーザーに提示できる。システムを構築するための調査を行った。研究指導を行っている専門家に対して、「研究を始めたばかり学生に対して、研究テーマをきめるために、どのような文献調査に関する指導を行っているか」というアンケート調査を行った。本システムを利用するユーザーは4種類に分け、熟練者、初心者、積極的な参加者、他のユーザーである。それを基にして、ユーザーモデルを構築した。おおむね順調に進んでおります。1)システムの仕様も設計していた。2)プロトタイプを開発し、検索を行うことができるようになっている。3)検索結果を可視化した。4)論文は4本発表した。5) Keynote Speakerとして下記の国際会議に招待され、研究内容の一部を発表した。継続的にシステムを開発し、ユーザーのアカウント、検索履歴の保存などの機能を追加し、ユーザーの学習行為を分析する予定である。それから、実際に学生に使ってもらって、評価する。さらに、国内外の国際会議に投稿し、発表する。次年度の科研補助金は下記に活動に当てられる。1)評価実験を行うため、iPod touch/iPadなどの購入費2)論文発表の旅費3)研究・評価の打ち合わせなどの旅費4)論文の発表費5)統計解析ソフトの購入費
宮古・八重山諸島における無土器時代からグスク時代への展開

本研究では、これまで宮古・八重山諸島の考古学的な研究課題とされる無土器時代からグスク時代への移り変わりについて、出土遺物の点から再整理を行い、各時代の関係性についえアプローチを行うことを研究目的とした。そのために、まずこれまでに発掘調査の実施された遺跡について、報告書をもとに遺物の集成を行った。また、宮古諸島のグスク時代の遺跡においては、八重山諸島と比べて発掘調査件数も少なく、各遺跡の様相も不明確な点が多いという観念から、宮古諸島内のグスク時代の初期もしくは前半に位置づけられる遺跡の踏査・表面採集を行った。これらの資料については本研究内で資料整理・図化作業を行った。併せて、文化財資料室内で未実測の資料についても図化を行った。本研究の結果、宮古・八重山諸島の無土器時代の遺跡を大きく3つの段階に分ける編年案について出土遺物の組成という点から、より詳細な情況を確認することができた。また、グスク時代への展開については、宮古諸島の遺跡を中心に考察を行った。その結果、従来の発掘調査出土遺物や、表面採集資料、文化財資料室収蔵資料をもとに13世紀後半から15世紀前半にかけて、同様の遺物組成や遺構、遺跡の立地に共通性をもった遺跡群の設定を行った。この遺跡群は、〓〓遺構や、丘陵上の立地という点で防御的な意味合いをおもっている。また、遺物組成についても白磁ビロークスII、III、白磁今〓仁タイプ、中国〓褐〓陶器、野城式土器を主体とする、これらの遺跡群は、15世紀前半で終焉をむかえる。これらの遺跡群が出現・消滅する社会的背景性を明らかにすることができた。
円偏光磁気力顕微鏡による局所磁場観測と局所磁場による磁性ナノ粒子制御

円偏光によってナノ構造体に誘起される局在磁場の利用が可能になれば、今まで実現しなかったレーザー誘起の磁性ナノ粒子トラッピング等、新たな応用が期待される。しかし、どういった形状や、材質のナノ構造体が磁性体ナノ粒子のトラッピングに適しているか、定量的に評価する手法は確立されていない。本研究では、円偏光によって誘起される磁場を探針に働く磁気力として観測する円偏光磁気力顕微鏡の技術的確立を行う。それによって、どういったナノ構造体が磁性粒子トラッピングに適している誘起磁場を作り出すか評価を行う。その後、十分な強さの磁場が誘起されたナノ構造体を用いて磁性ナノ粒子のトラッピングを実現する。
患者由来iPS細胞を用いたEYA4遺伝子変異難聴の病態の解明

EYA4遺伝子は常染色体優性非症候性難聴(DFNA10)の原因遺伝子であり、20代以降の進行性感音難聴を特徴とする。動物モデル不在の非致死性疾患であり、疾患iPS創薬研究の良いターゲットである。本研究ではEYA4遺伝子変異患者4例から疾患特異的hiPS細胞を樹立、内耳細胞へ誘導し、細胞レベルでEYA4遺伝子変異難聴の病態生理・治療標的を直接的に検討する。難聴の進行抑制を目標に研究を展開する。
CLC-K1クロライドチャネル欠損マウスを用いた尿濃縮機構の解明

以前より我々はCLC-K1ノックアウトマウスを用いてこのクロライドチャネルが尿濃縮に重要なチャネルであることを示していた。本研究では、なぜ尿濃縮が障害されるのかについて、詳細に検討を加えた。腎臓髄質内層には、対向流系という種々の溶質輸送系が複雑に作用しあうことで溶質を蓄積し、高張に保つ機序があるといわれてきた。今回CLC-K1はその一つのコンポーネントとして作用していると考えられ、その障害は髄質内層に溶質の蓄積不全をもたらし、その結果尿崩症になると考えられた。秋月の検討により、クロライドだけでなく、尿素、ナトリウムまで蓄積が障害されており、仮説が証明された。次に、このノックアウトマウスを用いて、CLC-K2の存在部位を明らかにした。今まで、K1とK2はそのアミノ酸の相同性の高さから、特異抗体がなくその存在部位が確定されていなかった。K1ノックアウトを用いることで、小林はK2の腎臓内存在部位を確定することができた。その他、小林は新生児の尿濃縮の未熟性をCLC-K1やその他の尿濃縮に関わる輸送体蛋白の発現の見地から検討し、CLC-K1を含む対向流系の発達が尿濃縮機構の完成に必要という結論を得た。CLC-K1ノックアウトマウスの尿濃縮障害の原因を探るためノックアウトマウスの腎機能を精査した。クリアランススタディーの結果はノックアウトマウスでみられた多尿は溶質利尿ではなく水利尿であることが判明した。クロライドチャネルノックアウトマウスではクロライド利尿が起こる可能性も考えられていたが実際には起きておらず、CLC-K1で再吸収するクロライドイオンは体液全体のクロライドイオンバランスには関与していないか、またはより遠位側のヘンレの太い上行脚でのクロライド再吸収が代償していると考えられた。尿濃縮能の低下の原因は、対向流系の破綻による髄質の高浸透圧環境維持の破綻によるものと考え、実際にノックアウトマウス腎臓髄質の組織浸透圧を測定したところ、野生型に比し低下しており、その低下は脱水環境下でも改善されず、仮説が裏付けられた。また興味深いことに、蓄積の障害されている溶質はクロライドイオンだけでなく、尿素、ナトリウムイオンの蓄積も障害されており、髄質内対向流系はそのイオン、溶質輸送に関わる輸送体が個別にその蓄積を行っているのではなく、一つのシステムとして働いて高浸透圧環境を作っているという今までの仮説がはじめてin vivoで実証された。この高浸透圧形成不全は組織の浸透圧により発現の制御されているオスモライト関連遺伝子であるアルドースレダクテースの発現状況からも裏付けられた。CLC-K1ノックアウトマウスを用いてこのクロライドチャネルが尿濃縮に重要なチャネルであることを示していた。本研究では、なぜ尿濃縮が障害されるのかについて、まず検討を加えた。腎臓髄質内層には、対向流系という種々の溶質輸送系が複雑に作用しあうことで溶質を蓄積し、高調に保つ機序があるといわれてきた。今回CLC-K1はその一つのコンポーネントとして作用していると考えられ、よって、髄質内層に溶質の蓄積障害があり、その結果尿崩症になると考えられた。その他、小林は新生児の尿濃縮の未熟性をCLC-K1やその他の尿濃縮に関わる輸送体蛋白の発現から検討し、CLC-K1を含む対向流系の発達が尿濃縮機構の完成に必要という結論を得た。
大正・昭和初期の文化住宅における室内通風環境及び採光環境に関する研究

近年の住宅設計においては、過度にエネルギーに依存した建築計画、設備計画が主体となっており、自然の恩恵を享受する新たな現代的手法を目指すことが課題となっている。本研究は、昭和戦前期における中小住宅の平面型が確立していく過程で、住宅の洋風化、独立性の確保とともに、通風環境や日照環境が置かれた状況を分析し、住宅デザインに及ぼす環境的な配慮と気候設計理論を考察し、現代的展開の可能性を探ることを目的とした。昭和戦前期に『朝日住宅図案集』及び雑誌『住宅』に掲載された文化住宅において、居間の通風環境を、住宅の規模や平面形状と関係づけて分析を行った。また、大正から現代までの住宅の通風環境の史的変容についても、住宅図案集をもとに比較分析した。調査方法として、開口部の関係により居間の通風状況を簡易に算定できる指標として「通風可能面積率」を開発し、住宅の平面形状と関係づけて居間の通風環境や通風輪道を分析した。気候風土や現代の生活様式に適応した住宅を設計する上で、この通風状況を簡易に算定する指標は有効になると考えられる。『朝日住宅図案集』に掲載された住宅を対象に、断面図と平面図に基づき、住宅の採光環境を日照到達距離という断面的な簡易指標で検討し、夏季の日射遮蔽と冬季の日照確保に最適な断面形状を得た。昭和戦前期において展開した気候設計理論についてまとめることを目的として、昭和戦前期に研究者や建築家により単行本として刊行された文献や雑誌記事を対象として、室内気候設計手法を抽出整理し、当時のパッシブ手法を分析した。また雑誌『住宅』に掲載された住宅事例を対象として、室内気候設計手法の実践及び通風環境の状況を検証した。・「朝日住宅図案集」(昭和4年)に掲載されている住宅プラン85戸、及び雑誌『住宅』(昭和69年)に掲載されているあめりか屋設計以外の住宅114戸を対象に通風環境について分析した。・共通の分析内容は、(1)平面型、(2)住宅の基本的形状(面積、外周長、開口部形状など)(3)居間の基本的形状(面積、位置、開口部形状など)、(4)通風の様相(通風可能面積率、通風輪道など)とし、図面から諸データを読み取った。各データは、単純集計、クロス集計、およびクラスター分析などにより分析を行った。・「朝日住宅図案集」の住宅通風可能面積率は、平均25.4%であった。住宅平面型と通風経路、1階床面積と通風可能面積率の関係などにおいて分析した結果、大正時代から昭和戦前期にかけて、居間の洋室化・独立性の確保が推進され、居間の閉鎖化の傾向があったが、本対象事例では日本の気候風土に適応させるよう、居間の通風環境を確保するための様々な工夫が見られた。・雑誌『住宅』の住宅通風可能面積率は、平均45.4%であった。「朝日住宅図案集」に比べると、住宅平面型では、中廊下型が多く見られ、和式の居間が多く、北側廊下や隣室との開放性がより高まっている。雑誌『住宅』にも、住宅の構造や間取りを工夫することにより、夏涼しく住むというテーマの論文も多く、それを実践した形で、通風環境を良く設計された住宅が増えている状況が見られた。昭和戦前期の単行本及び雑誌『住宅』を対象として、気候設計理論について検討した。

(1)昭和戦前期の単行本として刊行された27の文献に見られる室内環境調節法及び評価法を、1)配置計画・建物形状、2)南北の通風確保・間仕切り、3)居間等の配置・通風計画、4)縁側等の設置、5)深い軒・庇の設置、6)パーゴラの設置・植栽、7)床下・小屋裏の通風換気、8)屋根・壁の断熱性能、9)窓の工夫、10)隙間風の対策、11)冷房設備、12)暖房設備、13)室内気候の快適条件、14)和風住宅の利点、の14項目に整理した。(2)室内環境調節による方法を、1)日射(熱の遮断)、2)日射(熱の受容)、3)通風(体感温度の低下)、4)通風(排熱・防湿)、5)断熱(構造・材料)、6)断熱(気密化による保温)、7)機械設備(冷房)、8)機械設備(暖房)、9)環境条件指標、10)総論、の10項目に整理した。(3)防暑に関する記述の内容は幅広く、多くは設計計画において、日射の遮断、通風の促進、断熱工法などによるパッシブクーリング手法を勧める内容である。防寒に関する記述は、壁体の断熱や窓の気密性を高めるといった保温方法が散見されるが、多くは海外で普及していた各種暖房設備の紹介である。(4)昭和6年から16年の11年間に『住宅』に掲載された記事のうち、防暑に関する記事48編、防寒に関する記事59編、合わせて107編が室内気候設計手法に関するものである。(5)平面図で検証できる防暑に関する室内気候設計手法を7項目設定した。昭和6年から9年の4年間に『住宅』に掲載された住宅114戸の平均適用率は、4.5項目である。クラスター分析(Ward法)によると、室内環境調節は平均4.1項目と少なく、居間位置が南西及び南東にあるグループG(66%)と、居間位置が南、中廊下型で、室内環境調節が平均5.4項目と多いグループD(55%)の通風可能面積率が大きい。グループB(0%)とグループF(21%)は、室内環境調節がそれぞれ平均3.0項目と2.8項目と少なく、居間位置も南で、通風経路が確保しにくく通風可能面積率が小さい。「朝日住宅図案集」(昭和4年)掲載の住宅プラン85戸を分析対象として、平面図、立面図、断面図などの資料から、日照到達距離、南壁面の方位角などを抽出し、概ねの採光の様相を分析した。(1)対象住宅の軒の出の平均値は0.58mで、軒先高の平均値は3.47mである。また、軒先から窓上の角度(保護角1)の平均値は49.31゚で、最大値90゚(軒一窓上端が0.Om)が27.1%、最小値0゚(軒の出0.0m)が17.6%となっている。その間は幅広く平均的に分布しており、軒の出をしっかり考慮している住宅と、軒のない住宅がみられる。南壁面の方位角の平均値は-0.36゚で、0゚(真南)の住宅は40.0%を占めている。(2)採光環境を表す簡易指標として日照到達距離を定義し、夏至(6/21)、冬至(12/21)、春分・秋分(3/21、9/23)、年間最高気温日(7/22)の9時から16時までの各6時間帯の日照到達距離の経時変化を算出した。日照到達距離は、夏季において0.37m以内と日射遮蔽を考慮している様子が窺えるが、標準偏差がO.4m前後と比較的高く、住宅によって差がみられる。冬季においては2.Omとなり、日照確保が考えられており、標準偏差は0.5m前後である。春秋季は1.15m前後となり、標準偏差は0.6m前後と高い。(3)日照到達距離の経時変化から得られたデータ28項目を観測変量として、階層クラスター--分析を行い、日照の類型を5住戸グループに分類した。(4)軒の出については、日照調整に関して最も有効であると考えられるGroup Dの平均値が0.8mであり、0.9mになると過剰になり、冬季における日照確保に対して不利となる。軒先高については、平均値が3.47mであり、Group Dの平均値(3.14m)と近似した値となっており、平均値よりも高い住戸グループは夏季に日射が入り過ぎ、低い住戸グループは冬季に日照確保の妨げとなる。
ドナーソースとしての膵外分泌細胞の有用性に関する検討

Ngn 3, Maf-AおよびPDX-1の遺伝子配列を確認し、蛍光マーカーを搭載したアデノウイルスベクターを作成、AR42J細胞に感染させ、蛍光法を用いて各遺伝子が導入されたかどうかを検証した。再三にわたるウイルス感染を経た細胞は活性が弱く、長期培養には耐えられなかった。そこで3つの遺伝子を同時に導入可能なウイルスベクターを作成し、遺伝子導入を試みた。ウイルスベクター自体のサイズが若干大きくなった影響かほとんど遺伝し導入することはできなかった。同時に膵外分泌細胞の分離、および細胞単離、純化を試みたが、各段階を経るごとに細胞活性は低下し、更に内分泌細胞の混入を避けられなかった。1.昨年度に引き続き、Ngn3, Maf-AおよびPDX-1のDNA配列を再度確認し、以前使用した配列とは若干異なる、蛍光マーカーを搭載した組換えアデノウイルスベクター作成を再度業者に依頼し作成した。新たに作製したアデノウイルスベクターを濃度および細胞数更には、培地をかえて膵外分泌細胞由来のAR42J細胞に感染させ、蛍光法を用いて各遺伝子が導入されやすい適切な条件を見いだし、導入効率および死細胞数の程度を確認した。個々因子を遺伝子導入する場合は、前回と比べ若干遺伝子導入の効率は上がったものの、死細胞の数に変化は無く、死細胞割合についてはアデノウイルスベクター使用による影響と考えられた。同時に3個の遺伝子導入を試みるも、導入効率は上がらず、さらに死細胞の数が増加し、必要な遺伝子をすべて発現している細胞を得ることは残念ながらできなかった。2.マウス外分泌細胞にアデノウイルスベクターを用いた遺伝子導入を行い、同種腎皮膜下移植実験へと進むため、引き続きマウス膵臓より、膵外分泌細胞を単離、培養する方法を探っているが、膵臓をコラゲナーゼで融解した後、濃度勾配遠心にて内分泌腺を除いた後、単細胞にするためディスパーゼで処理する際に、腺管細胞の混入をさけられ無いこと、粉々に砕けた内分泌細胞の混入がさけられないこと、ディスパーゼの濃度を濃くすると、細胞の拡散は良くなるものの、死細胞の数が多くなるなど、依然として単離、均一な細胞集団を得ることが困難な状況である。コラーゲナーゼの量、Lot. No.、ディスパーゼの変更などを加え、遺伝子導入に至適な条件で最適な細胞を得る方法を探しているが、現在のところ導入に至適な条件を見つけ出すには至っていない。1.昨年度使用した、Ngn 3, Maf-AおよびPDXー1のDNA配列をもとに、3因子同時に導入可能な蛍光マーカーを搭載した組換えアデノウイルスベクターを作成し今年度の研究に用いた。再度新規に合成したアデノウイルスベクターを濃度および細胞数更には、培地、PH等変化させ膵外分泌細胞由来のAR42J細胞に感染させ、蛍光法を用いて一括に遺伝子導入されやすい条件を見いだし、導入効率およびし細胞数の程度を確認した。おのおのの因子を導入した一昨年度の条件をもとに遺伝子導入を試みたが、一昨年の結果と比べ、ベクターのサイズが若干大きくなったことが影響しているのか、導入効率は極端に低下した。しかし、導入後の死細胞の割合は何度も感染を繰り返す3因子の導入方法と比較して、少なくなくなった。その少数の蛍光マーカー陽性の細胞を培養開始するも、長期培養には耐えられなかった。遺伝子導入に若干の前進はあったものの未だ、必要な遺伝子をすべて発現し長期培養に耐えられ、遺伝子導入の効果を判定できる細胞は得られていない。2.同種腎皮膜下移植実験へと進むため引き続き膵外分泌細胞を単離、培養をする方法を模索した。現在のコラゲナーゼ、ディスパーゼ、濃度勾配遠心を用いた細胞分離条件の中で一番効率のより方法で得られた内分泌腺由来の細胞をできる限り除いた細胞集団を用い、エルトリエーターを用いて目的の外分泌細胞、腺管細胞、内分泌由来細胞を高純度に分離することが可能であるか検証した。(1)本年度当初にNgn3, MafA,およびPDX-1のDNA配列を検索確認の上、蛍光マーカー遺伝子を搭載した組換えアデノウイルスの作成をタカラバイオ(株)に依頼、作成した。膵外分泌細胞由来のAR42J細胞を購入し、単純培養に至適な条件を確認した後、アデノウイルスベクターを導入実験するための、細胞濃度に於いても一定の長期培養に耐えられることを確認した。その後、個々のNgn3, MafAおよびPDX-1を導入するアデノウイルスの濃度をかえてAR42J細胞に感染させ、蛍光法を用いて各遺伝子が導入されているかどうか蛍光法を用いて確認するも、高濃度では死細胞が多く、低濃度では低導入という結果となった。また、少ない遺伝子導入細胞にて、転写因子の発現を、RT-PCRで確認するも、確認できなかった。(2)実際のマウスの外分泌細胞に遺伝子導入をするために、まずは膵外分泌細胞の分離を行い、細胞培養の至適な条件を確認することとした。

外分泌細胞は、腺管細胞、外分泌細胞と混在した状態で分離されるため、個々の分離、サンプル採取時で、混在度合いが違うため、まずはできる限り腺管細胞を選り分けたものを使い培養を試みるも、培養早期の死滅細胞が多くそのため、凝集を起こし、遺伝子導入に至適な細胞培養の条件を見つけ出すまでに至たっていない。大震災の影響で、実験環境が整うまでに時間がかかった。そのため、遺伝子導入効率が悪く、再度アデノウイルスベクターを作製し直し、再度至適条件の確認作業となったため、実験が大幅に遅れることとなった。また、3つの因子の発現を同時に行うため何度も導入を繰り返すと、導入細胞が弱ってしまうことも遅ている要因の一つとなっている。マウスよりの膵外分泌細胞の単離については、研究の正確性を確保するためなるべく、純粋な細胞で遺伝子導入を試みるべきであると考え、その細胞集団を得る方法を試行錯誤して繰り返している状態で、遺伝子導入実験まで至っていない。大震災の影響で、動物実験施設の使用が制限されたり、冷蔵庫や各種測定機器等ほとんどの実験機器が破損したため、代替の機器を導入したり、実験環境が整うまでに時間がかかり、実験が大幅に遅れた。また、実験過程においても、少ない遺伝子導入細胞で、転写因子の発現をRT-PCRで確認しようとしたが、確認できなかったことや、遺伝子導入に至適な細胞培養の条件をいろいろと試みたが、最適な条件を見つけ出すまでに至らなかったことが遅れている理由である。13つの因子を一度に導入、発現できるベクターの作成を試み、導入細胞に負担の少ない遺伝子導入、効率的な遺伝子発現を探る。2継続して膵臓外分泌細胞の効率的で、純粋な分離を行えるような条件や、薬剤(蛋白分解酵素阻害剤等の使用)を試しながら、遺伝子導入に耐えうる細胞の分離、培養を目指す。(1)最初に作製したアデノウイルスベクターを用いて、もう一度導入条件(培地、細胞数、ウイルス数)を変え、死細胞の減少、導入効率の上昇を模索する。その上で、転写因子の発現を再度RT-PCRで確認、さらに可能であればWestern Blotにて確認する。どうしても死細胞が多い場合は、遺伝子導入用の個々のプラスミドを作成した上、他の遺伝子導入法にても同様の実験を行ってみる。遺伝子導入良好でも、転写因子の蛋白の発現が思わしくない場合には再度、遺伝子導入用のベクターの再設計、作成を依頼、新たなベクターを用いて同様の実験を行う。(2)継続して、膵外分泌細胞の至適な細胞条件(細胞培養液、添加する酵素阻害剤等)を模索する。腺管細胞と外分泌細胞の簡単な分離方法を見つけ出し、可能であれば個々に培養、遺伝子導入可能な至適培養条件にての一定期間の培養を可能とする方法を検討する。(1)にて、遺伝子導入条件が確定できた場合にはこれら細胞を用いて遺伝子導入実験を行い。遺伝子導入の有無、可能であれば転写因子の蛋白の発現の有無を確認する。次年度使用額は、当初の計画の遅れにより、遺伝子導入実験に至らなかったため生じたものであり、次年度以降に実施する遺伝子導入実験に必要な消耗品費(ARJ細胞及び細胞培地、PCRプライマー等)として、平成25年度請求額と合わせて使用する予定である。
日本手話の文法概説とその映像ドキュメンテーションの作成

本研究では、消滅危機言語としての日本手話の記述および記録・保存のための基本となる辞書・文法・談話作成のモデルケースを創出する。手話言語では、手指だけでなく顔の表情や姿勢を含む非手指要素が意味や文法を示すが、直感的な記号化の方法が確立していないため、顔を含む映像データを言語資料として付与することが不可欠である。手話話者は多様な言語発達の経緯を持つが、できる限り均質なデータを得るため、手話母語話者12名を中心に調査を行う。倫理的問題を、本研究に参加する話者と協議し、手話話者に合った方法を模索し、解決し、映像データにアノテーションを施したものをアーカイビングセンターに保存し、Web上でも公開する。
除草剤の「無散布」水準策定のための埋土種子動態研究

わが国の水稲作においては一年生雑草に有効な除草剤が30年近く連用されている。除草剤の性能が十分に発揮できる水田は、埋土種子も減少している水田が認められている。1998年は25水田の埋土種子量を発芽法により推定し、その動態を調査した。埋土種子の動態を明らかにする方法として、耕起前に表土から採取した一定土壌中に存在する種子量と耕土中下層に存在する埋土種子量を比較した。また、埋土種子の増減率は埋土種子量30,000粒が分岐点となり、30,000粒以上では1116%、30,00010,000粒では116%の減少率であった。1999年は無防除可能な埋土種子量を検討した。その結果、埋土種子量34,000粒以下では雑草による水稲収量に対する影響は10%以下であった。このような埋土種子量の動態把握の成果より、雑草発生予測を行い、次年度以降の経済的な防除対策プログラムを策定することが可能になった。本研究は水田雑草の埋土種子量と雑草診断による防除のlogical stepsを構築するため、防除効率の違いによる埋土種子量への影響調査とlogical stepに基づく防除に対する評価研究を実施する。平成10年度は茨城県南の牛久市、阿見町、竜ケ崎市において、発生雑草量の異なる6水田を選定して、残存雑草量調査と埋土雑草種子量を調査した。調査水田の埋土種子量はm^2あたり4,400から87,600の間にあった。発生雑草はアゼナ類、カヤツリグサ類、コナギ、キカシグサ、ミゾハコベなどであった。さらに埋土種子量の少ない水田(美浦村)を現在検討中である。また、無防除区における雑草発生量(y)はいずれも埋土種子量(x)と相関性(r=0.96)があること、回帰直線はy=0.065x+107.0で推定できることが明らかとなった。平成11年度は埋土種子量調査にもとづく雑草発生診断(予測)によるlogical stepを策定し、防除体系の検証を行う予定である。この2ケ年の結果から本研究をまとめ、国内の雑草学会および国際学会(APWSS)に発表する予定である。除草剤の性能が十分に発揮できる水田では、埋土種子も減少している水田が認められている。このような埋土種子量の動態把握の成果により、雑草発生予測を行い、次年度以降の経済的な防除対策プログラムを策定することが可能になった。
珪酸塩の準安定相転移に基づく隕石の衝撃履歴の解明

激しい衝撃変成を受けた石賀陽石中では,その主要構成鉱物である斜長石の一部が固相のまま非晶質化していることがあり,衝撃スケールの重要な一指標となっている.従来は,衝撃回収実験のみ基づき非晶質化の圧力が見損もられてきた.しかし,衝撃実験における圧力保持時間は10^<-6>secオーダーであり,天然の隕石母天体(10^0 secオーダー)と比較すると極めて短い.したがって,相転移に必要な時間が十分与えられず,非晶質化圧力が過剰に評価されている可能性がある.本研究課題では,圧力保持時間をより長くとることのできるダイヤモンドアンビルセル(DAC)を用い,これまで行ったNa: Ca=99:1,89:11に加え,Na: Ca=0:100の斜長石粉末の,室温・20-49GPaの条件下での圧縮実験を行った.試料は加圧後30分保持して減圧し,DACから回収してラマン分光装置で構造を同定,非晶質化メカニズムと非晶質の割合を調べるため,一部の試料は透過電子顕微鏡でも解析した.その結果,静的圧縮により斜長石が完全に非晶質化する圧力は,1)衝撃実験に対してわずかに低圧(4GPa以下)であり,時間依存性はさほど大きくないこと,2)衝撃実験同様Na/Ca比が増加するほど高いこと,3)粒径が小さいほど非晶質化圧力は小さいこと,が明らかになった.しかし,本研究は室温での高圧実験であるため,高温下での原子拡散の活性化も考慮すると,非晶質化圧力はさらに低下する可能性が高い.現在,抵抗加熱による高温DACシステムの立ち上げを進めている.激しい衝撃変成を受けた石質隕石中では,その主要構成鉱物である斜長石の一部が固相のまま非晶質化していることがあり,衝撃スケールの重要な一指標となっている.これまでは,衝撃回収実験のみ基づき非晶質化の圧力が見積もられてきた.しかし,衝撃実験における圧力保持時間は10^<-6>secオーダーであり,天然の隕石母天体(10^0secオーダー)と比較すると極めて短い.したがって,相転移に必要な時間が十分与えられず,非晶質化圧力が過剰に評価されている可能性がある.本研究課題では,圧力保持時間をより長くとることのできるダイヤモンドアンビルセルを用いて,Na:Ca=99:1及び89:11の斜長石粉末を,室温,20-49GPaの条件下で圧縮実験を行った.試料は加圧後30分保持して減圧し,DACから回収してラマン分光装置で構造を同定,非晶質化の割合を調べるため,一部の試料はTEMによる電子線回折でも構造を検討した.その結果,静的圧縮により斜長石が完全に非晶質化する圧力は,衝撃実験に対してわずかに低圧(4GPa以下)であり,時間依存性はさほど大きくないこと,衝撃実験同様Na/Ca比が増加するほど高いこと,が明らかになった.しかし,本研究は室温での高圧実験であるため,高温下での相転移の活性化も考慮すると,非晶質化圧力はさらに低下する可能性が高い.非晶質化が始まる圧力にも制約を与えるべく,TEMによる解析を進めると同時に,高温下での圧縮実験の立ち上げを進めている.激しい衝撃変成を受けた石賀陽石中では,その主要構成鉱物である斜長石の一部が固相のまま非晶質化していることがあり,衝撃スケールの重要な一指標となっている.従来は,衝撃回収実験のみ基づき非晶質化の圧力が見損もられてきた.しかし,衝撃実験における圧力保持時間は10^<-6>secオーダーであり,天然の隕石母天体(10^0 secオーダー)と比較すると極めて短い.したがって,相転移に必要な時間が十分与えられず,非晶質化圧力が過剰に評価されている可能性がある.本研究課題では,圧力保持時間をより長くとることのできるダイヤモンドアンビルセル(DAC)を用い,これまで行ったNa: Ca=99:1,89:11に加え,Na: Ca=0:100の斜長石粉末の,室温・20-49GPaの条件下での圧縮実験を行った.試料は加圧後30分保持して減圧し,DACから回収してラマン分光装置で構造を同定,非晶質化メカニズムと非晶質の割合を調べるため,一部の試料は透過電子顕微鏡でも解析した.その結果,静的圧縮により斜長石が完全に非晶質化する圧力は,1)衝撃実験に対してわずかに低圧(4GPa以下)であり,時間依存性はさほど大きくないこと,2)衝撃実験同様Na/Ca比が増加するほど高いこと,3)粒径が小さいほど非晶質化圧力は小さいこと,が明らかになった.しかし,本研究は室温での高圧実験であるため,高温下での原子拡散の活性化も考慮すると,非晶質化圧力はさらに低下する可能性が高い.現在,抵抗加熱による高温DACシステムの立ち上げを進めている.
ガス透過膜デバイスによる亜酸化窒素還元細菌の集積化・単離

亜酸化窒素(N2O)を窒素ガスに変換可能な高効率N2O還元細菌の獲得を目指し、ガス透過膜を用いた集積培養デバイスを開発した。このデバイスを用いた長期培養により、近年新たに報告されたnosZclade II型のN2O還元細菌の優占を確認した。特に、Rhodocyclaceae科に属するDechloromonas属が優占種であることを明らかにした。集積したバイオマスからこの優占種と相同性の高い細菌種Dechloromonassp.の単離に成功した。この細菌種は従来のnosZ clade I型のN2O還元細菌よりN2Oを効率的に窒素ガスに変換可能であることを示した。実験1:N2Oの供給を精密に制御可能なガス透過膜in situ集積化デバイスの確立培養環境下を嫌気的に維持し、長期間安定的にN2Oを供給することが可能なガス透過膜型バイオフィルムリアクター(GPMBfR)を開発した。このリアクターのガス透過膜から供給されるN2Oの分圧に対するN2O透過量を明らかにし、安定的にN2Oの供給が可能であることを示した。実験2: N2O還元細菌の集積化N2Oを唯一の電子受容体として用いるGPMBfRと、比較系として硝酸イオンを電子受容体として用いるバイオリアクターを運転させたところ、GPMBfRでは近年存在が報告されたClade IIに属するN2O還元細菌が優占した一方、比較系のバイオリアクターでは従来から報告されているClade Iに属するN2O還元細菌が優占した。本研究で開発したGPMBfRは近年新たに報告されたCladeに属する種を選択的に優占させることが可能であることを示した。このGPMBfRで集積されたN2O還元細菌はRhodocyclaceae科に属することが同定された。集積汚泥から単離したN2O還元細菌も同様にこの科に属する種であることが明らかになり、GPMBfRによる集積化はRhodocyclaceae科の細菌の単離に効果を示した。実験3:単離された細菌の生理活性解析実験2で単離されたN2O還元細菌は、N2O還元酵素をコードする遺伝子を有することを確認した。単離されたN2O還元細菌が実際に高いN2O還元活性を有しているかを明らかにするため、N2Oマイクロセンサーを用いた呼吸活性法により1細胞当たりのN2O還元速度を定量した。このN2O還元細菌の還元速度は、これまでに報告されたN2O還元細菌よりも高いことが明らかになった。また、単離されたN2O還元細菌は酸素存在下ではN2O還元活性を有さず、通性嫌気性生物の挙動を示した。1.N2O還元細菌の獲得:前年度の集積培養により、装置内で優占化していたRhodocyclaceae科のAzospira sp.およびDechloromonas sp.の単離に成功した。また、これらの細菌群はnosZ clade IIに属するN2O還元細菌であることを明らかにした。2.生理活性の評価:単離されたAzospira sp.およびDechloromonas sp.の生理活性を、レスピロメータにより行った。これらの細菌の最大N2O還元速度は従来から報告されているN2O還元細菌よりも数倍高い値を示した。また、低い溶存N2O濃度においても、高い活性を示すことが明らかになった。さらに、これらの単離された種類の中には、亜硝酸イオンとN2Oの共存した際に、有機炭素から供給される電子の競合により、N2O還元が抑制される種、ほとんど抑制されない種が存在することが明らかになった。4.メタン資化性のN2O還元細菌の探索:メタンとN2Oを供給した集積培養装置によるメタン資化性のN2O還元細菌の探索を行った。長期間の集積培養を行い、バイオマスの集積は行えたものの、細菌の単離や同定までには至らなかった。これまで申請者が開発してきたバイオリアクター装置のノウハウを応用することにより、新規装置であるGPMBfRの開発を遅延なく進めることができた。これにより、活性の高いN2O還元細菌の優占化・単離に成功することが出来た。環境バイオテクノロジー単離菌株をハイスループットに活性評価が可能な手法を確立する。一方で、複数の温室効果ガスで構成される混合ガスを供給する改良型GPMBfRの開発を行い、これまでに無い新規反応経路を有するN2O還元細菌の獲得を目指す。
アレヴィー諸集団の境界と認識のコンフリクト及びエスニシティの変容ー中東と欧米

イスラームの異端とも異教とも言われるアレヴィー関連諸集団は、現在、その集団の内外に「境界」が生じ、そこにコンフリクト(軋轢、排除、対立など)が生じている。そしてその境界は、エスニシティに内容や方向性を与えている。しかもその集団に関する認識も多様であり、通時的にも変化することがある。そこでエスニシティの構成や変容について、その社会的文化的宗教的政治的な関連や文脈を明らかにし、歴史学者と共同研究をし、エスニシティやその認識の変化や文化の持続と変容を明らかにすることが本研究の目的である。その目的を明らかにするために今年度は、イラン、トルコなどを中心に実態調査をした。イランについてはアフル・ハックなどの諸集団の実態調査に着手し、本格的な調査にとりかかっているところである。人数が多いとされるトルコ共和国においても、実態調査や文献収集調査を行なっている。またクルド関係の調査もすすめ、(実態調査の困難さもあることから)特に文献からの調査研究をすすめている。トルコ人やクルド人関係の社会的政治的動向を考慮しながら進めていきたいと考えている。また欧米等のトランスナショナル空間においてアレヴィー関連諸集団派、マイノリティとして動態的生存戦略をもちながらも、それらの境界やエスニシティに生じるコンフリクトやアレヴィー等集団性の認識の多様性と変容について明らかにしたいと考えている。これについては、今年度は文献を通して研究を通して研究をすすめ、歴史学と共働し、「境界とコンフリクト」の理解、そしてその解決策に結びつけるように考慮しながら、研究を実施する。アレヴィー関連諸集団はイランにおける「ヤーレサーン」や「アフレ=ハック」などの集団と類似しているといわれることがある。ヤーレサーンについては文献からの研究をすすめている。アフレ=ハックについての文献も現地調査報告も少ない。イランのケルマンシャー州などイランの西、西北部に居住している人々が多いので、そこで現地調査をし資料化をしている。イランに関してはイラン・イスラム共和国とアメリカ合衆国との間で、国際社会を巻き込んだ政治的問題があるので、情勢を見ながら現地調査を進めた。これまで調査は不可能ではなかった。観察として現地調査をしてきた。今年度はまとめを中心にして、できれば補充調査も考えたい。民族として、クルド人、ザザ人、トルコ人、そしてムスリム、アレヴィー、アラウィー、ベクターシュ(ベクタシ)、さらに欧州の移民などの集団についても調査を進めた。その中では様々な諸問題が関連しており、呪術、願かけ、民間信仰、ジェンダー、水の信仰、聖地・聖所など特別な場所への参詣、巡礼、信仰ツーリズムなどについても調査を進め、資料化をしてきた。トルコについては調査が可能ではあるが、政治的な問題については関連を最小限にとどめながら進めた。クーデターや国政選挙などがあったので、変化や様々な動きがあると考えられる。しかしそれらについては現代の諸問題の一つとして客観視し、様々な文脈でもって考慮できるようにし、研究をすすた。そして、現地での聞き取りばかりではなく、また歴史学からの解釈ばかりでもなく、現象を社会や文化や宗教的な関連・文脈の中でも研究分析することにもつなげたい。さらにベクターシュ教団の実態調査のためにアルバニアで調査研究を行なった。ヨーロッパにおけるベクターシュ教団の中心地の調査、およびこの地域の中心的な聖者「サル・サルトゥク」の「聖地・聖所」の調査を行なった。今年度の調査は、トルコ、イラン、欧州に調査旅行をし、資料を収集し、分析を進め、さらに、まとめの年でもあるので、まとめの報告書を作成する。当該地域の関連諸集団の調査をし、関連資料の収集をするのであるが、本研究メンバーの所属機関との都合に合わせて、夏期、冬期・春期などに調査旅行を実施する。そして、まとめとして報告書を作成するのであるが、現地調査の報告と関連論文、論考から成るものを作成したいと考えている。イランに関する調査方向として、従来ほとんど知られていないアフル=ハックの現地調査報告をまとめたいと考えている。平成29年度、平成30年度と現地調査をしてきており、さらに令和元年度にも補充調査をすることができれば、現地調査をしたいと考えている。アレヴィー諸集団と関連が深いと考えられるベクターシュ教団、ハジ・ベクタシ・ヴェリの「チェレビーレル」集団、それ以外のベクタシ集団が観察されるが、そのうちベクターシュ教団の中心的なセンターがアルバニアにあることから、平成30年度にその調査を始めた。2019(令和元)年にもアルバニアおよびその周辺の有力な関連施設の調査を実施したいと考えている。トランスカルチュラルな空間における「アレヴィー的なもの」としては、ヨーロッパやトルコ共和国を移動しているアレヴィー共同体の指導者的な人物について調査を続けている。これについても報告したい。ヨーロッパについては移民に対する施政が大きく変動する現在に置いて、今後のアレヴィー/アレヴィーリキ、あるいは関連諸集団がどのようになりうるのか、考察しながら調査分析を進めていきたい。イスラームの異端とも異教とも言われるアレヴィー関連諸集団は、現在、その諸集団の内外に「境界」が生じ、そこにコンフリクト(軋轢、排除、対立等)が生じている。

イランについてはアフル・ハックなどの諸集団の実態調査に着手し、今後の本格的な調査をしたいと考えている。イランにはこのような類似した集団が複数存在していることから、さらに実態調査と文献からの調査研究を実施したいと考えている。トルコについても実態調査をし、文献からの調査研究をも加えている。また、クルド関係の調査も進めており、特に文献からの研究を中心にすすめている。トルコ人やクルド人関係の社会的政治的動向を考慮しながら進めていきたいと考えている。また欧米等のトランスナショナル空間においてアレヴィー関連諸集団は、マイノリティとして動態的生存戦略を持ちながらも、それらの境界やエスニシティに生じるコンフリクトやアレヴィー等集団性の認識の多様性と変容について明らかにしたいと考えている。これについて、今年度は文献を通して研究をすすめ、歴史学と共働し、「境界とコンフリクト」の理解と解決策に結びつけるように研究を実施する。アレヴィー関連諸集団は、イランにおいては、「ヤーレサーン」や「アフレ=ハック」などと類似していると言われることがある。ヤーレサーンについては一、二の文献があるので、文献資料から研究を進めている。アフレ=ハックについては、文献が少ないので、現地調査を進めている。その集団はイランのケルマンシャー州などイランの西部や西北部に居住している。そこで現地調査に着手し、資料化をしている。イランに関しては、イラン・イスラム共和国とアメリカ合衆国との間で、国際社会を巻き込んだ形で政治的に問題があることから、それらの情勢を見ながら、現地調査を進めていきたい。現地調査ができない場合には、昨年度調査したことと文献などの分析をしたい。現在の状況からすると、調査は可能であり、現地の人々とつないでくれる人々との関係も良好である。(言語を中心にした)民族のクルド人、ザザ人、トルコ人、あるいは文化的宗教的な、ムスリム、アレヴィー、アラウィー、ベクタシそして欧州の移民などの集団についても調査を進めている。その中でも様々な諸問題が関連しており、呪術、願かけ、民間信仰、ジェンダー、女神信仰、聖地・聖所など特別な場所への参詣、巡礼、ツーリズムなどについても調査を進め、資料化をし、分析につなげている。トルコにおいては、調査は可能であるが、政治的な問題については関連を最小限に留めて、進めていきたい。今回の国政選挙などによっては、様々な動きがあると考えられるからである。しかし、それらは、本研究テーマからすると、大きな問題にはならないと考えられる。ヨーロッパに関する現地調査に関して、問題はほとんどないように考えられる。ただし、「巻き込まれ」などについては、十分な注意をしていきたいと考えている。イスラームの異端とも異教とも言われるアレヴィー関連諸集団は、現在、その集団の内外に「境界」が生じ、そこにコンフリクト(軋轢、排除、対立など)が生じている。そしてその境界は、エスニシティに内容や方向性を与えている。
ヒト免疫不全ウイルスの眼内への侵襲に関する研究

1.ヒトCD_4陽性リンパ球にて培養したヒト免疫不全ウイルス(HIV)よりGP41およびGP120を精製し、ウサギ、マウスに免疫して型のごとく、抗体(ポリクローナル,モノクローナル)を作製した。2.南カルフォルニア大学眼科のRao教授より供与された後天性免疫不全症候群(AIDS)患者の眼球切片10検体について、病理学的、免疫組織学的検討を行なった。3.HIV抗体陽性者で虹彩毛様体炎がみられた2症例より、前房水をtap(採取)し、浮遊細胞について免疫病理学的に検討を行なった。以上の実験より以下の結果を得た。1.HE染色を施した眼球切片において、ウイルスに起因すると思われる網脈絡膜病変、網膜血管炎が認められた。2.抗サイトメガロウイルス抗体を用いた免疫酵素抗体法で、サイトメガロウイルス抗原陽性細胞が、網膜、血管内皮細胞に認められた。3.作製した抗HIVポリクローナルおよびモノクローナル抗体を用いた免疫酵素抗体法および蛍光抗体法では、AIDS患者の眼球切片からはHIV陽性細胞は検出されなかった。4.HIV抗体陽性者における前房水中の浮遊細胞はGP120のポリクローナル抗体で陽性を示す細胞が認められたが、GP120およびGP41のモノクローナル抗体では陰性であった。抗サイトメガロウイルス抗体による検索でも陰性であった。以上の結果より、AIDS患者におけるウイルス性網膜ぶどう膜病変の起因ウイルスは、サイトメガロウイルスが主であると考えられ、HIVとの複合感染はないと思われた。しかし、虹彩毛様体炎の細胞がポリクローナルの抗HIV抗体と反応を示したことから、今後抗HIV抗体の特異性の再検討をする予定である。
海藻製品中のHUFAはなぜ酸化されにくいのか?

褐藻には酸化されやすい高度不飽和脂肪酸(HUFA)が多く(4060%)含まれているにもかかわらず、乾燥褐藻を長期間保存してもこれらのHUFAは酸化されないことを明らかにした。そこで、褐藻から各種脂質をクラス別に分離し、酸化促進物質や抗酸化物質を除去した後、その酸化安定性について詳細な検討を行った。その結果、糖脂質中のHUFAのみが極めて酸化されにくいことを見出した。この理由として糖脂質分子を構成する糖鎖の影響が推定できた。褐藻には脂質が38%含まれている。褐藻脂質中には、α-リノレン酸(18:3n-3)、ステアリドン(18:4n-3)、EPA(20:5n-3)、アラキドン酸(20:4n-6)といった機能性に優れた高度不飽和脂肪酸(HUFA)が多く(4060%)含まれている。これらのHUFAは分子構造的に酸素との反応性が高く、保存中などに容易に酸化されやすいと考えられている。しかし、褐藻類を乾燥状態あるいは塩蔵状態で長く保存しても、臭いの劣化など、脂質過酸化によって引き起こされる変化はあまり観察されない。本研究ではこの謎を解明するために、乾燥褐藻(ワカメとアカモク)の保存中での脂質酸化について検討した。その結果、含まれるHUFAはほとんど酸化されないことを明らかにした。また、脂質クラス別に詳細な検討を行ったところ、中性脂質やリン脂質中のHUFAは若干酸化されるものの、褐藻脂質の主要成分である糖脂質中のHUFAは極めて安定なことを見出した。海藻の葉緑体チラコイド膜では糖脂質が主要な脂質形態であり、酸化ストレスを受けやすいチラコイド膜を構成する糖脂質中のHUFAの高い酸化安定性は、光合成の特徴を考察する上でも極めて興味深い。そこで、糖脂質中のHUFAの酸化安定性について、改めて、他の脂質クラス(トリアシルグリセロール(TAG)とホスファチジルコリン(PC))と比較した。その結果、魚油TAGや魚卵PCではEPAやドコサヘキサエン酸(20:6n-3,DHA)などのHUFAが多く含まれていたため、比較的不飽和度の低いリノール酸(18:2n-6)を主たる不飽和脂肪酸とする大豆TAGと比べ、極めて酸化されやすかった。一方、マコンブから調製した糖脂質では、α-リノレン酸、ステアリドン酸、EPAといったHUFAを多く含んでいたが、大豆TAGとほぼ同等の高い酸化安定性を示した。以上より、ステアリドン酸やEPAといったHUFAは糖脂質として存在することにより、その酸化安定性がTAGやPCに結合している場合よりも高いことが初めて明らかにされた。
新規の致死性自己免疫性肝炎モデルを用いた肝炎劇症化に関わる腸内細菌免疫応答の解析

劇症肝炎の多くは、肝免疫制御機構の破綻から劇症化に至ると想定されるがそのメカニズムは明らかではなく、腸内細菌叢とそれに対する消化管免疫応答が、門脈血を介して肝炎劇症化に関与している可能性がある。本研究では、感染病原因子がない飼育環境下で劇症肝炎を自然発症する自己免疫性肝炎マウスモデルを用いて、肝炎劇症化にいたる分子機構の解析を行った。そして、肝炎の劇症化は、細菌由来のToll様受容体リガンドにより誘導されうるInterleukin(IL)-18によって惹起され、IL-18に依存した活性化T細胞のCXCR3発現エフェクター細胞への分化誘導と肝炎局所への移行が劇症化に必要であることを明らかにした。劇症肝炎マウスモデルを用いて、劇症肝炎の免疫学的病態形成機構の解析と新規治療法開発に向けた検討を行った。マウスモデルとして、新生児胸腺摘除を行うことで致死性の自己免疫性肝炎を発症するBALB/c系統のPD-1遺伝子欠損マウスを用いた。昨年度までの研究で、肝炎の劇症化は、細菌由来のToll様受容体リガンドなどにより誘導され、自然免疫系の活性化に関与するInterleukin(IL)-18によって惹起され、IL-18に依存した活性化T細胞のCXCR3発現エフェクター細胞への分化誘導と肝炎局所への移行が劇症化に必要であることを明らかにしている。本年度は、さらに、肝炎の病態誘導の場である脾臓において、IL-18を産生する主な細胞がT細胞活性化を担う樹状細胞であることを明らかにした。また、腸内細菌叢に起因するToll様受容体リガンドによるIL-18産生誘導を介した免疫応答が、肝炎の劇症化に関与している可能性を見いだした。さらに、劇症型自己免疫性肝炎に対する治療法を検証し、ステロイドが治療的に劇症肝炎の抑制に有効であること、ステロイド治療では肝炎の発症に関わる脾臓での胚中心を形成した濾胞と濾胞ヘルパーT細胞が遺残し、ステロイド治療中止にて劇症肝炎が再燃すること、ステロイド治療を行なったマウスの脾臓CD4+T細胞を免疫不全マウスに移入すると肝炎が誘導できること、ステロイド治療後に肝炎発症の誘導臓器である脾臓を摘出するとステロイドを中止しても劇症肝炎の再燃が抑制できること、そして、脾摘は単独でも治療的に肝炎抑制が可能であることを明らかにした。劇症肝炎マウスモデルを用いて、劇症肝炎の免疫学的病態形成機構の解析を引き続き行った。昨年度までの研究で、肝炎の劇症化は、腸内細菌叢に起因するToll様受容体リガンドによって誘導されるInterleukin (IL) -18産生誘導を介した免疫応答が関与し、IL-18を産生する主な細胞がT細胞活性化を担う樹状細胞であり、IL-18に依存して活性化T細胞がCXCR3発現エフェクターT細胞へと分化誘導されることを明らかにした。そして、肝組織では、CXCR3のリガンドの一つであるCXCL9の発現が上昇し、CXCR3発現細胞のCXCL9に依存した肝への移行が肝炎劇症化に必須であることを明らかにしている。本年度は、さらに、IL-18を産生する樹状細胞が、自らIL-18受容体を発現し、IL-18がautocrineにその産生誘導に働くことを明らかにした。一方、肝組織でのCXCL9発現細胞が、クッパー細胞/マクロファージであり、これらの細胞のCXCL9発現誘導がIFN-γではなく、TNF-αによって誘導されることを明らかにした。また、この劇症肝炎マウスモデルにおいては、血清TNF-α濃度が上昇しているが、抗TNF-α抗体による治療が有用ではなく、肝臓局所でマクロファージや活性化T細胞からautocrineあるいはparacrineで産生されるTNF-αによるCXCL9の発現誘導が、抗TNF-α抗体治療によって十分に抑制できないことがその原因として考えられた。劇症肝炎モデルとして、新生児胸腺摘除を行うことで致死性の自己免疫性肝炎を発症するBALB/c系統のPD-1遺伝子欠損マウスを用いて、劇症肝炎の免疫学的病態形成機構の解析を行った。