hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
好酸球性中耳炎における炎症因子の網羅的解析および新規治療戦略の確立

ヒト好酸球性中耳炎において中耳腔における炎症性タンパクを網羅的に解析した。その結果、好酸球性中耳炎症例の中耳腔においては多数の炎症性因子が存在していることが明らかとなった。我々は好酸球性炎症に関与するとされているプロスタグランディンD2の受容体に着目し、この受容体のノックアウトマウスを用いてその機能解析を行った。この結果、プロスタグランディンD2受容体を介して炎症を制御できる可能性が明らかとなった。また、好酸球性中耳炎モデルマウスの作製を試み、中耳腔に好酸球の誘導を認めるモデルマウスを確立することに成功した。プロスタグランジンD2はアラキドン酸代謝経路の主要代謝産物で好酸球性炎症において重要な因子のひとつであると報告されている。実験的中耳炎モデルマウスを用いて中耳腔におけるプロスタグランジンD2の誘導やその影響を解析した。マウスの中耳腔に中耳炎の主要起炎菌であるグラム陰性菌の構成成分のひとつであるエンドトキシンを注入したところ、注入後24時間から72時間にかけてマウスの中耳腔においてプロスタグランジンD2の強い発現を認めた。また、中耳腔や中耳粘膜に浸潤した顆粒球にプロスタグランジンD2の受容体の強い発現を認めた。マウスの中耳腔にプロスタグランジンD2を注入したところ、注入後24時間の時点においてマウスの中耳腔に灸症性サイトカインであるインターロイキン1β、インターロイキン6、およびmacrophage inflammatory protein 2の誘導を認めた。プロスタグランジンD2受容体は主要なものが2つ存在し、それぞれD prostanoid receptor (DP)、the chemoattractant receptor-homologous molecule expressed on T helpertype 2 (Th2)cells (CRTH2)とよばれている。DPおよびCRTH2ノックアウトマウス、DP/CRTH2ダブルノックスとマウスを用いて、中耳におけるブロスタグランジンD2の作用経路を解析したところ、CRTH2ノックアウトマウス、DP/CRTH2ダブルノックスではエンドトキシンによる炎症誘導が有意に抑制された。その一方で、DPノックアウトマウスでは野生型マウスと同等の炎症誘導を認めた。以上の結果から、ブロスタグランジンD2の中耳腔における作用はCRTH2レセプターを介して行われていることが示された。また、in vitroの系でマウス多核白血球と単球/マクロファージに対してブロスタグランジンD2を作用させた場合、炎症性サイトカインの誘導は主に多核白血球に起因することが示された。プロスタノイドは炎症因子として重要であり、とくに好酸球性炎症で重要な役割をはたしていると考えられているブロスタグランジンD2の中耳腔における作用経路が判明したことは意義深い事であると思われる。
糖尿病性腎症と食塩感受性高血圧の共通基盤におけるエピジェネティク制御機構

糖尿病には高血圧を合併することが多いがその分子基盤は不明な部分が多い。糖尿病と血圧異常を呈するモデルで腎臓内エピジェネティック状態に不具合が生じていないかどうか検討した。正常マウスの腎臓を近位尿細管とそれ以外の分画にわけて解析し、腎臓内の部位特異的にDNAメチル化状態が異なる血圧調節因子を複数見出した。つぎに食塩負荷で高血圧を呈する糖尿病マウスdb/dbを用いて高血圧原因候補遺伝子のメチル化解析を行った。正常マウスと比べ、複数の血圧関連分子にDNAメチル化異常が認められた。mRNAレベルでもそれに並行して発現が変化しており、エピジェネティック異常が発現異常の元にあることが示唆された。本研究ではエピゲノム制御の異常同定と、それに基づく遺伝子発現の異常を同定し、生活習慣病および生活習慣病に起因する臓器障害の早期診断から治療までの包括的治療のための新たな技術基盤の確立を目指している。本研究で、腎臓内で血圧制御にかかわる分子のエピジェネティック状態の正常での状態をまず解明し、糖尿病と血圧異常を呈するモデルで不具合が生じていないかどうか検討を進めた。正常マウスの腎臓内での食塩感受性高血圧に関わる遺伝子のDNAメチル化の分布解明を進めた。近位尿細管とそれ以外の分画にわけて解析したところ、腎臓内の部位特異的発現に並行して多くの分子がDNAメチル化状態が異なっていることがわかった。近位尿細管特異的に発現しているトランスポーターや転写因子は脱メチル化しており、一方そのほかの部位で発現し近位ではメチル化しているものがみられた。血圧調節にかかわる分子でメチル化の組織内分布が異なるものが複数得られた。正常マウスでの所見をもとに、モデル動物での検討を進めた。糖尿病マウスdb/dbの血圧をテレメトリー法で計測したところ、8%食塩食下では高血圧を呈するため、食塩感受性高血圧の原因となる遺伝子に注目して検討を進めた。糖尿病マウスdb/dbと正常マウスの比較し、複数の血圧変化に関わると思われる分子にDNAメチル化異常が認められた。本年度は、糖尿病腎症モデルマウスとしてdb/dbを用い、腎症初期に発現変化する遺伝子を対象に腎臓全体とともにソーティングによって分取した腎臓構成細胞についてmRNAならびにDNAメチル化の変化をスクリーニングした。その結果、トランスポーターおよび転写因子について、尿細管特異的に脱メチル化している遺伝子を複数明らかにすることができた。さらに、糖尿病によってmRNA発現が変化する高血圧発症にかかわる塩分関連遺伝子を複数抽出した。腎臓のエピジェネティック解析には構成細胞ごとの解析が必須である。本年度は、尿細管を分画する手法を確立することができた。腎臓の中でも、臓器間でもみられるように特異的なDNAメチル化プロフィールが存在することは概念的には予想されていてもこれまで報告はされていなかった。本年度の研究でトランスポーターおよび転写因子でDNAメチル化レベルで制御されている可能性のある候補遺伝子を複数抽出できた。また、今年度明らかになった糖尿病によって変化する高血圧発症にかかわる遺伝子は、次年度にエピジェネティック異常を解析する候補遺伝子となる。次年度は、得られた候補遺伝子についてDNAメチル化異常を明らかにし、さらにその成立機序とヒストンレベルでの解析を進める予定である。また、明らかになるエピジェネティック異常がどの程度回復可能であるか、薬物による治療効果を調べる予定にしている。平成24年度予算から、次年度にむけて15,689円を平成25年度分の予算に加え、DNAメチル化解析ならびにヒストン解析のための抗体など消耗品の購入に使用する。
実験的キネティクス解析および第一原理分子動力学法による触媒反応過程の解明

次式で表されるCu表面でのフォーメートの生成と分解はメタノール合成反応の素過程である。この反応について表面科学実験による研究を行った。主要な研究成果は、i)フォーメートの生成がstructure insensitiveであるにもかかわらず、分解はstructure sensitiveである。ii)フォーメートはギ酸の吸着によっても作れるが、そのフォーメートのCu(111)での分解速度は、CO_2の水素化で合成したフォーメートの分解速度より著しく大きい。iii)CO_2から合成したフォーメートのCu(111)での配列構造は、ギ酸からのフォーメートのものとは異なる。iv)CO_2からフォーメートが生成する機構はEley-Rideal機構である。さらにZn/Cu(111)モデル触媒におけるZnの役割を理論計算によって調べた。実験で予想されたZnがCuの第一表面層に埋まっているモデルで構造最適化および振動モードの計算を行った結果、IRAS実験で得られているOCO非対称伸縮モードの強度は弱く実験値よりも小さかった。次に、フォーメートがCuの表面に乗ったZn原子に結合すると仮定して計算したところ、OCO非対称伸縮モードの強度が大きくなり実験結果と良く一致した。また、OlsおよびClsのコアレベルシフトについても実験結果を良く再現する。さらに、Znが抜き出されたモデルではフォーメートの吸着エネルギーおよびフォーメートからジオキシメチレンヘの水素化の活性化障壁が大きく減じられ実験結果を良く説明した。このように理論計算から新たな活性点モデルが予想された。
ゾル・ゲル法によるFRAM用強誘電性ビスマス系薄膜の合成と誘電的特性

強誘電体であるSrBi_2Ta_2O_9薄膜は、分極反転による疲労が少ないため、不揮発性メモリへの応用が期待されている。本研究では、Sr,BiおよびTaのアルコキシドを出発原料に用いたゾル・ゲル法により、SrBi_2Ta_2O_9薄膜を作製し,結晶化温度の低温化とその微構造および結晶性および配向性が強誘電特性に及ぼす影響について調べた。また、ゲル膜の仮焼初期段階での水蒸気の導入、Biシード層の導入による結晶性、配向性および強誘電特性に及ぼす影響についても検討した。Srアルコキシド、Biアルコキシド、Taアルコキシドを2-MeEtOH溶液に溶解し、SBT前駆体溶液を調製した。成膜は、スピンコーティング法によりPt/Ti/SiO_2/Si基板上に行った。ゲル膜の熱処理は、600850°Cで結晶化させてSBT薄膜を得た。以下に本研究の成果を述べる。1)ゾル・ゲル法においてアセチルアセトンを添加することにより前駆体溶液中の金属アルコキシドへの配位状態に大きく影響を及ぼし(00l)面に優先配向することがわかった。また、前駆体溶液から作製した薄膜は600°Cで結晶化した。2) SBTはC軸方向に分極軸をもたないため、C軸への配向度の増加にともない強誘電特性は低下した。3)適度な水蒸気の導入は結晶性の向上させる効果があるが、過度の導入は結晶性の低下、C軸配向および膜質の劣化などの原因となった。4) Biシード層はC軸に配向を促進させるが、強誘電特性の改善に有効であった。今後、更なる結晶化温度の低温化、初期段階での核生成の促進、配向制御および微構造制御のために前駆体溶液の調製を含めたプロセスの改善が必要である。SrBi_2Ta_2O_9(SBT)薄膜は、分極反転に伴う特性劣化が少ないことから、特に、不揮発生メモリへの応用が期待されている。本研究では、Sr、Bi、Taの金属アルコキシドを用いたゾル・ゲル法によりSBT薄膜を作製し、その結晶性、微構造及び誘電特性を評価した。薄膜の組成として、Sr_<0.7>Bi_<2.2>.Ta_2O_9を用いた。前駆体溶液は2通りの方法で作製した。1つは、SrアルコキシドとTaアルコキシドを混合溶解した後に、Biアルコキシドを加える方法であり、他方は、SrアルコキシドとBiアルコキシドを混合溶解した後にTaアルコキシドを加える方法である。また前駆体溶液にアルコキシド溶液の安定性および膜配向性制御のために、アセチルアセントを添加した。SBT前駆体溶液をPt/Ti/SiO_2/Si基板上にスピンコーティングし、室温乾燥後、500°Cで仮焼し、800°C、1h酸素雰囲気中で熱処理を行い、SBT薄膜を作製した。SBT前駆体溶液の調製方法の違いにより、生成膜の配向性が異なることがわかった。Sr-Ta複合アルコキシドとBiアルコキシドの混合溶液からは、(00l)面に配向した薄膜と無配向を示した薄膜が作製され、一方、Sr-Bi複合アリコキシドとTaアルコキシドの混合溶液からはランダム配向した薄膜が得られた。薄膜の微構造は、(00l)面に配向した薄膜では石垣状、ランダムに配向したでは米粒状であり、その微構造は異なった。

強誘電特性は、SBTはc軸方向に分極軸をもたないため、(00l)面に配向した薄膜では、残留分極値は低い値を示した。これに対し、(105)面の強い回折ピークを持つ無配向膜では、比較的良く飽和したヒステリシス曲線が得られ、Pr=4.8μC/cm^2,Ec=60kV/cmを示した。また、急速昇温加熱(RTA)処理により強誘電特性は、さらに改善された。近年、強誘電体薄膜を用いた不揮発性メモリ(FRAM)の研究が盛んに行われている。その中でBi層状構造強誘電体薄膜は繰り返しの分極反転による疲労がほとんど生じないという特徴を有し、種々の方法で作製されている。我々は今までにSrBi_2Ta_2O_9(SBT)薄膜をゾル・ゲル法により作製し、前駆体溶液の混合方法の違いやアセチルアセトンの添加が配向性に大きく影響を及ぼすことを報告した。本研究では金属アルコキシドを混合することによりSBT前駆体溶液を調製し、ゲル膜の初期焼成段階での水蒸気の導入が薄膜の微構造および誘電特性に及ぼす影響について検討した。出発原料となる金属アルコキシドはSr(OBu)_2,Bi(OiPr)_3,Ta(OEt)_5をそれぞれ用いた。組成はSr_<0.7>Bi_<2.2>Ta_2O_9とし、濃度は10wt%となるようにSr(OBu)_2とBi(OiPr)_3を2-メトキシエタノール中に溶解し、2h攪拌した。その後Ta(OEt)_5を所定量添加し、さらに2h攪拌しSBT前駆体溶液とした。また、アセチルアセトンの添加、無添加での比較も行った。得られた前駆体溶液をスピンコーティングし、550°C750°Cで1時間RTAにより本焼成しSBT薄膜を得た。水蒸気はスピンコーティング後、150°Cで1060分間流した。得られた薄膜の結晶性、配向性をXRD、微構造をFE-SEM、強誘電特性をRT-66Aにより調べた。600°Cで焼成した薄膜は(115)面を最強線とする回折ピークが確認され、SBT単相となった。また、前駆体溶液にアセチルアセトンを添加することにより(00l)の回折ピークが強く確認され、c軸に強い配向性を示した。このことから、アセチルアセトンが前駆体溶液中の構造に非常に影響を与え、薄膜の配向性の変化が生じたと考えられる。150°C、10分間の水蒸気の導入は焼成後の結晶性への影響はほとんど確認できなかった。しかし、水蒸気を長時間導入するとc軸に優先配向したSBT薄膜となり、前駆体溶液中にアセチルアセトンを添加した場合と類似した回折図形を示した。また、水蒸気の導入量の増加に伴い板状の粒が成長する傾向にあった。一方、アセチルアセトンを添加したときの微構造は200300nmの粒と約50nm程度の微小な粒からなるパイモーダル構造となり、板状の粒は確認されなかった。このことよりどちらもc軸に優先配向した薄膜であるが前駆体溶液の調製プロセスや焼成プロセスの違いが焼成後の微構造に大きく影響を及ぼすと考えられる。アセチルアセトン添加して作製した薄膜の強誘電特性は2Pr=14.1μC/cm^2,2Ec=91.1kV/cmと比較的良好な値を示した。
徳認識論と徳倫理学：「徳（virtue）」概念のヒューム的再構成

本研究ではデイヴィッド・ヒュームの「徳」概念を再検討し、その内実と意義を解明した。成果は次の三点に要約できる。(1)懐疑論の破壊的帰結を認めつつその後もなお学問的探求を継続していくという『人間本性論』のいっけん不可思議な構成は、探求者・認識主体の性格特性としての「知的徳」にかんするヒュームの見解を踏まえることで初めて理解可能になる。この知的徳に訴えた懐疑論からの「恢復」というフェーズにおいては、(2)「好奇心」ならびに「野心」の情念が本質的な役割を果たしており、(3)「共感」を介した他者の評価の内面化というヒュームの道徳論のロジックが機能している。近年の(おもに英米の分析的伝統に属する)認識論および倫理学に見られる興味深い特徴のひとつとして、「徳(virtue)」という古典的概念への再注目、すなわち徳認識論と徳倫理学の興隆が挙げられる。本研究の目的は、18世紀のデイヴィッド・ヒュームの哲学に見られる徳認識論的・徳倫理的発想を詳細に検討することを通して、人間の認識と道徳の両分野に跨がる概念としての「徳」概念を現代の議論にも資するかたちで再構築することである。二年間のプロジェクトの一年目となる本年度は、本研究の基幹部分となるヒュームのテクスト解釈を徹底して行ない、その成果を4件の学会発表と1件の書評論文としてまとめた。以下に具体的な研究内容について述べる。主著『人間本性論』の第一巻すなわち知性論の末尾においてヒュームは、徹底的な懐疑論の破壊的帰結を少なくとも理屈の上では受け入れているように思われる。しかしもしそうであるなら、その後に続く第二巻(情念論)・第三巻(道徳論)で行なわれる学問的探究とそこでのヒューム自身の見解は、いったいいかなる意味で説得力をもちうるといえるのだろうか。本研究では、ヒュームの懐疑論は(それが紛うかたなき懐疑論でありながら)その後の探求を不可能にするようなものではないとするケヴィン・ミーカーの解釈を踏襲しつつ、ヒュームが懐疑論の後にもなお意味をなすと考えていた「判断の良し悪しの区別」の内実を探った。そして、ヒュームが道徳論で考察する、判断する個人の性格に対する「有徳/悪徳である(virtuous/vicious)」という区別こそがそのような「良し悪し」の基礎となり、それは道徳的判断だけでなく事実的判断についても当てはまるという解釈を提示した。近年のとくに英語圏における哲学と倫理学の潮流を見渡すと、認識および道徳の分野における「徳(virtue)」概念の重要性を再検討しようとする試みが推進され、「徳認識論」および「徳倫理学」と呼ばれる分野が著しい発展を遂げていることがわかる。本研究は、このような文脈において18世紀スコットランドの哲学者デイヴィッド・ヒュームの徳概念に注目し、その思想史的および現代的意義を検討することを目的としている。二ケ年の研究計画の最終年度となる本年度は、昨年度の研究結果をさらに次のように深化・展開した。すなわち昨年度の研究によれば、ヒュームにおいて事実的判断の評価(良し悪し)の規準(つまり認識のレベルにおける規範性)は、道徳的判断のそれと同じく、判断主体がその性格特性としてもつ「徳」に対して周囲から与えられる賞賛や非難に求められるのであった。こうした解釈にもとづき本年度は、ヒュームにおいて事実的探求を動機づけるために本質的な情念である「好奇心(curiosity)」と「名声への愛(love of fame)」に着目し、それらが共感をとおしてどのようにわれわれの知的探求を方向づけるのか、という点をヒュームのテクストに即しつつ、また前述したような現代における徳の哲学的分析も参照することで、具体的に検討した。こうした本年度の研究は計7件の学会発表としてまとめられ、今後順次論文としても公表していく予定である。これらに加え本年度の特筆すべき成果としては、「ヒュームにおける信念の倫理(Hume on the Ethics of Belief)」をテーマとした国際シンポジウムを企画・開催した点である。事前の在外研究も含め、これらの活動をつうじて得た研究ネットワークを最大限に活用し、今後も国際的な水準で研究を展開していきたい。当初の予定では二カ年のうち一年目は認識の分野、そして二年目は道徳の分野に重点を置いて研究を進める予定であったが、在外研究を二年目にまとめておこなうことに変更したため、国内でも問題なく遂行可能なヒュームのテクスト解釈作業を本年度に両分野まとめて行なうことにした。その結果、課題全体の解決方針が明確になり、次年度に行なうこととなった「ヒューム的観点から現代の徳認識論・徳倫理学にとっても示唆に富む「徳」概念を再構築する」という課題に対しても良い見通しが得られた。それゆえ全体として本研究は順調に進んでいると言える。

人文学研究計画の変更としては、本年度予定していた在外研究を(相手方とのスケジュール調整の結果)来年度に行なうことにした。これに伴い来年度は、本年度の研究結果を踏まえて、現代の徳認識論・徳倫理学の議論状況にも生産的な貢献をなしうるような「徳」概念の再構築という作業に取り組む。当初本年度に行なおうと考えていた在外研究を、先方とのスケジュール調整の結果、来年度に行なう方がよいと判断したため。増額分はそのまま、(今年度分の延期によって)来年度に新たに行うことになった在外研究のために使用する。それ以外のもともと予定されていた額は、おもに書籍を中心とした物品購入、国内・国外出張、もともと来年度に行う予定であった在外研究に使用する。
日本人英語学習者の学習・使用実態を反映した重要句動詞リストの作成

日本人英語学習者にとって重要な句動詞を特定するために、各種言語資源データにおける句動詞の頻度を明らかにした。この結果に基づき、学習者のモデル・インプット・アウトプットを基にし、母語話者の使用頻度と認知度が高い項目と、頻度にかかわらず学習者が習得すべき項目を含む、特に初中級の日本人英語学習者向け重要句動詞リストを作成した。学習者がうまく使えていない句動詞を明らかにするという教育上の配慮を含む点がこの句動詞リストの大きな特徴である。この情報をうまく利用することで、学習者のコミュニケーション力向上に資することが期待される。1.データ整備検定教科書については、中学校の教科書全点、高校のコミュニケーション英語I・IIの全点、英語表現I・IIのシェアが高いものの電子データを整備した。英語表現I・IIについては、多様なタイプの英文が含まれているため、技能別のタグを付けて電子化した。英英辞書の定義・用例テキストデータについては、既に過去の研究において整備済みであったが、Cambridgeの最新第4版のデータを新たに整備した。さらに、タガーによる処理の精度を上げるために必要な前処理を特定し、実際にスクリプトを作成した。また、データからレマ・語形・品詞タグのパターンを利用した正規表現で句動詞候補を抽出・集計するが、その前提となるテキストデータの処理方法についても再検討した。品詞とレマの出力をするタガー・レマタイザー・パーザー、そしてレマと屈折形を対応づけるデータを精度と効率の観点から比較検討し、採用手法を定めた。実際に教科書データと学習者の作文データをタガーで処理し、well-formed XMLデータに変換するスクリプトも完成させた。2.データ分析データの分析については、XMLデータから句動詞候補を抽出し、その頻度を集計する手法を検討した。その上で、少数のデータ・項目によるパイロット調査を行った。品詞タグ付与の誤りやレマ・語形・品詞タグのパターンによる句動詞の特定自体に精度の限界もあるため、100%の抽出が不可能であるのは当然であるが、再現率(recall)よりも適合率(precision)を重視してパターンを見直すこととした。1.データの整備学習者のインプットに相当する検定教科書のデータ整備については、本年度より使用が開始された高等学校用のコミュニケーション英語IIIの検定教科書を入手し、主要な教科書の電子データを整備した。コミュニケーション英語I・IIと英語表現I・IIに関してもデータの整備を継続して行った。句動詞の正規表現による定義については、品詞タグ付与の誤りやレマ・語形・品詞タグのパターンによる句動詞の特定自体に精度の限界もあるため100%の精度での抽出は不可能であるということは当然であるが、再現率(recall)よりも適合率(precision)を重視してパターン定義を見直した。2.データの分析コーパス・言語資源における句動詞使用頻度の調査としては、BNCのWritten part、BNCのSpoken part、Googleの1兆語のデータに基づくn-gramデータ(Web 1T 5-gram, Version 1)、学習者向け英英辞書の用例を対象とした、句動詞の頻度データ取得を行った。検定教科書のデータについては、整備が完了したデータでのパイロット調査を行い、前処理・タガーとレマタイザーによる処理・well-formed XMLデータへの変換・XMLデータからの句動詞頻度の取得という一連の手法が一定の精度でうまく機能するということを確認した。調査対象である検定教科書が約130点あり、各教科書の構成・フォーマットが多様である中、電子化対象部分を見極めながら作業する必要があったため、当初の想定よりも時間を要している。しかしながら、分析手法は確立しているため、データ整備が完了すれば集計作業は短期間で行うことができる。平成27年度は、本年度より使用が開始された高等学校用のコミュニケーション英語IIIの主要なものを電子化した。学習者コーパスとしては、ICNALE(書き言葉)とNICT JLE Corpus(話し言葉)を対象とし、前処理を含めてデータの整備を概ね完了した。平成28年度は、各種言語資源データにおける句動詞の頻度集計を行い、各データにおける句動詞の頻度を明らかにした。今後の研究の展開としては、本研究で英語表現の教科書の電子化に際して行った技能タグ付与を、コミュニケーション英語の教科書においても行い、他のコーパスもタイプ別により詳細に検討することで、技能別の必須句動詞リスト(例えば読んで意味が分かればよい句動詞や使いこなせるようになるべき句動詞など)が得られる可能性がある。また、単語や文法項目に加えて句動詞も考慮することで、テキストの難易度をより高い精度で測定することが可能になると考えられる。

この情報をうまく利用することで、学習者のコミュニケーション力向上に資することが期待される。データの整備、特に教科書データの整備に予想以上の時間がかかり、分析はパイロット調査の段階までしか行うことができなかった。しかしながら、データの種類が違っても句動詞のパターン(作成済み)を利用して、テキストデータに対して集計を行うという手法は共通であるため、テキストデータのフォーマットの違いに対応する部分の微修正をするだけで、集計作業は一気に行うことができるため、この遅れは大きな問題にはならない。平成28年度の前半にデータ整備を完了し、既に完成している句動詞のパターン情報を利用して、各種コーパスにおける頻度集計を終える予定である。これで必要なデータが全て揃うため、全てのコーパス・言語資源データを対象として、句動詞候補の項目と頻度を調査する。最終的には、分析結果を統合し、他のコーパス・言語資源データも参照しながら、日本人英語学習者のための重要句動詞項目を特定し、教育に直接活用できる句動詞リストを作成することを目指す。この句動詞リストは学習者のモデル・インプット・アウトプットを基にしながらも、母語話者の使用頻度と認知度が高い項目と、頻度にかかわらず学習者が習得すべき項目を含むことから、教育上の配慮も反映したものとなるため、学習者のコミュニケーション力向上に資することが期待される。コーパス言語学・認知言語学・辞書学本年度より使用が開始された高等学校用のコミュニケーション英語IIIの検定教科書を入手し、テキストデータを整備する。また、Oxfordの辞書の最新版が発行されたため、このデータが利用可能であるかどうかを調査し、可能な場合にはこのデータを整備する。これでデータが全て揃うため、全てのコーパス・テキストデータを対象として、句動詞候補の項目と頻度を調査する。最終的には、分析結果を統合し、他の言語資源データ(コーパス・語彙頻度データなど)も参照しながら、日本人英語学習者のための重要句動詞項目を特定し、教育に直接活用できる句動詞リストを作成することを目指す。この句動詞リストは学習者のモデル・インプット・アウトプットのデータを基にしながらも、母語話者の使用頻度と認知度が高い項目と、頻度に関わらず学習者が習得すべき項目を含むことから、教育上の配慮も反映したものとなるため、学習者のコミュニケーション力向上に資することが期待される。データ整備の段階が予想以上に困難で時間がかかり、研究成果発表・情報収集のための学会出張が予定通りできなかったため。データ整備に時間がかかり、研究成果発表・情報収集のための学会出張ができなかったため。データ整備を速やかに完了し、平成28年度は最新の研究情報収集・研究成果発表のために学会出張・論文投稿を行う予定である。今年度は研究成果発表・情報収集のための学会出張を予定している。
抗癌剤増感作用をもたらす腫瘍内血管再構築機構の解明

腫瘍組織内は脆弱な血管が不規則に走行しており血流に乏しい。そのため、抗癌剤の組織分布も悪く、抗癌剤が効きにくい組織環境となっている。これまでにマウス腫瘍移植モデルにおいてプロリル水酸化酵素(PHD)阻害薬を投与すると腫瘍内血管の新生・再構築が生じ、抗癌剤感受性が増強されることを見出している。しかしながら、この現象の細胞・分子機構の詳細については不明である。本研究は、PHD阻害薬による抗癌剤感受性を増強する腫瘍血管の新生・再構築機構を明らかにすること目的に行った。平成29年度には、PHD阻害薬による血管新生・再構築に寄与する細胞について解析・検討を行った。PHD阻害薬投与により変化する細胞集団の一つとして、血管新生にも関与していると考えられている免疫系の細胞であるマクロファージを見出した。平成30年度は前年度に得られた結果からPHD阻害薬投与後の腫瘍内マクロファージの詳細解析を行った。またPHD阻害薬の投与量を増量することでより強力な血管再構築が誘導されるとことも明らかとなったことからPHD阻害薬を増量し検討を行った。PHD阻害薬投与後の腫瘍内マクロファージ集団を解析することで血管構築に関与しているマクロファージ分画を同定した。また、PHD阻害薬投与前に腫瘍内マクロファージを低下させるとPHD阻害薬による血管再構築が阻害されることが示唆された。同定したマクロファージ分画を単離し、マウス移植腫瘍へ投与することで血管再構築が生じることが示唆された。これらの結果からPHD阻害薬による腫瘍内血管構築には同定したマクロファージ分画が関わっていることが示唆された。腫瘍血管を機能的に再構築するには同定した細胞分画が必要因子と考えられる。本研究結果は腫瘍内血管を再構築し、効率的な抗癌剤治療を行うための治療法の開発に繋がることを期待する。平成29年度は、まず、PHD阻害薬による血管新生・再構築に寄与する細胞について解析・検討を行った。これまでの組織解析の結果よりPHD阻害薬投与により変化する組織である血管に着目し血管新生・再構築に寄与する細胞の検討を行った。その中から候補細胞として血管内皮細胞に注目し、腫瘍内の血管内皮細胞についてPHD阻害薬投与群と非投与群での違いについて検討を行った。また、解析時に血管新生に関与していると考えられる免疫系の細胞であるマクロファージにおいてもPHD阻害薬投与した群で変化する傾向があったため、詳細な解析を進めている。本現象に寄与していると考えられるこれらの候補細胞について、さらに詳細な解析を行っているところである。また同時に、腫瘍組織内からこの候補細胞の単離を試み、候補細胞を担癌マウスに投与することで血管新生・再構築が生じるか否か検証を行っている。当初の計画どおり腫瘍組織内の細胞解析より腫瘍血管新生・再構築に関わっていると考えられる細胞の同定を行い。これら、同定した細胞が腫瘍血管再構築に寄与している検証を行っている。概ね当初計画どおり研究がすすんでいるため、今後も当初計画通り研究を遂行する。
自然災害激烈下における契約産地のレジリエンスと産直の再定義

本研究の目的は,産直や加工・業務用青果物の契約産地の自然災害からのレジリエンス(回復力)の現状を明らかにしながら、新たな産直の再定義を行うことである。近年,自然災害が激烈化し,契約産地はしなやかに適応して生き延びるレジリエンスが求められている。本研究の課題は,これまでの産直研究では省みられなかったレジリエンスに着目し,1契約産地と買い手(生協や食品企業)はどのような相互調和を実現しているのか,2災害発生による供給不足や品質低下に対して,契約の公平性をどのように保つのか,等の視点から分析,研究を目指すものである。そして,産直の定義を再構築し,契約取引や契約栽培の普遍的なルールの構築を目指す。
近代期イスタンブル火災保険地図でみる社交空間の立地と形態変容に関する研究

研究計画で予定していたイスタンブル旧市街3地区,新市街3地区のカフェ(社交空間・施設)の現地調査について,一部変更はあったが概ね完了した。地図史料(火災保険地図)におけるカフェ分布と,現在のカフェ分布が把握できたことで,社交空間や歓楽街の変容過程を明らかにすることが可能となる。伝統的歓楽街や近代化の過程で形成された新たな歓楽街の他,消失した歓楽街,グランドバザール内のカフェ分布,特定の商業エリアのカフェ分布についても調査し地図上にプロットを行なった。これらの情報はカフェなどの社交施設に限らず,街路や広場など公共空間の実態把握や変容についても検討することが可能である。本研究はイスタンブルを対象としたものであったが,クーデター等の情勢不安が続いたため,カイロ(エジプト)を対象とした調査・研究に軸足を移した経緯がある。カイロの火災保険地図(20世紀初頭)を入手しカフェを抽出・分類するとともに,対象範囲(ダウンタウン地区)の現況調査を実施した。カイロの火災保険地図もイスタンブルと同じ仕様・作成時期のものであるため,当時の分布や建築類型の分析,イスラム地域における近代期の公共空間やカフェ施設の形態把握が可能となった。また,カイロの地図史料として,ナポレオン地図(Description de l'Egypte掲載地図1809-29出版),1930年代調査地図,現代地図(1997-2000)を入手し,旧市街地区の伝統的空間構成の継承・変容過程を明らかにする史料が整った。これら地図史料には歴史的建築物や多様な施設情報が記載されており,今後も引き続き解読・分析に重宝される史料である。カイロ旧市街地区に位置するダルブアフマル地区を集中的に現地調査し,今日のカフェが立地する地点をプロットし,伝統的広場・街路空間とどのような関係性にあるのかを検討した。平成27年度はまず,20世紀初頭のイスタンブル火災保険地図(Jacques Pervitich, Charles Edouard Goad)から社交空間(喫茶施設・酒場・娯楽施設・浴場・歓楽街等)を抽出する作業に着手した。喫茶施設については,その位置情報をweb地図上にプロットし,現存状況調査用の資料作性を行った。社交空間の抽出データは立地や建築形態属性を付して一覧化する作業を進めている。平成28年3月にはイスタンブルのカラキョイ地区,ガラタ地区,ファティフ地区,アクサライ地区,クムカプ地区を対象として,現存する喫茶施設の状況調査を行った。20世紀初頭以降から喫茶施設として継続されている事例は少数ながら確認された。これらの現存施設はたいへん貴重なものであると考えており,改めて詳細な調査を行う予定である。また,用途は変更されているものの,喫茶施設としての建築意匠が継承されている事例は多数確認することができ,喫茶施設の建築形態について建築歴史の観点から考察する材料となりうる。さらに,かつての非ムスリム地区や工房地区には,喫茶施設が集中する固有の分布形態が継承されていることが明らかとなった。特に,非ムスリム地区に歓楽街が形成される様相は,イスタンブル固有の空間特性であるといえる。なお,調査で得られた位置情報,建築形態,用途,機能,周辺環境等は実証的データとして整理し,データベース化を進めている。平成27年度は,地図史料からの施設抽出作業を重点的に行った。史料からの位置情報をweb地図上にプロットすることにより,現地調査において効率的に物件確認を行うことができた。また,20世紀初頭と現在の街区形態の変容・継承についても把握可能となり,たいへん貴重な資料となった。平成28年3月にイスタンブル調査を行ったが,治安情勢悪化の影響を受け,行動範囲を制限せざるを得なかった。大規模な商業エリアは避け,周縁部の居住地区に点在する小規模な商業エリアを重点的に調査した。本研究は,トルコ・イスタンブルの現地調査及び地図史料分析が主な研究活動となっている。しかし研究対象地であるトルコ情勢はクーデターやテロのような不安要素が多く,2016年度はイスタンブル調査を断念し,小都市サフランボルの社交空間調査を行なった。サフランボルでは,伝統的な社交空間としてカフェが多数現存しており,今尚重要な都市施設として機能している。特に「ロンジャ」と呼ばれる職人集団が集うカフェが複数残されており,カフェの社会的機能と形態を確認することができた。また,モスク(宗教施設)に併設された多目的空間がカフェとして機能している事例も確認できた。サフランボルの事例は伝統的で純粋な形態で残っており,都市化が進んだイスタンブルと比較する際には重要である。本研究の主要史料である火災保険地図について,エジプト・カイロにも同様の史料が存在しており,研究計画とは地域が異なるものの,同様の研究が可能と考えている。実際,簡易的な現地調査をカイロで行ったところ,地図史料が貴重であることと,本研究と同種の研究が可能であることがわかった。簡易調査の結果は2016年9月8日JSPSカイロ研究連絡センターにて発表(カイロのカフェ文化)した。2016年のトルコはクーデターやテロの発生により現地での調査が困難であった。本研究では現地調査が欠かせず,調査地域の変更を検討し,エジプト・カイロで同様の手法による研究が可能と考える。まずは史料調査のみでの成果発表を目指す。本研究は,近現代イスタンブルの多様な都市文化を担う「社交空間」に着目し,その分布と建築形態の変容過程について,イスタンブル火災保険地図(20世紀初頭作成)の分析と現地調査を踏まえながら明らかにすることを目的としている。

史料分析は概ね計画通りではあるが,近年までのトルコ情勢の影響により,現地調査による現状把握作業が遅れている。研究計画ではイスタンブルの旧市街の5地区,新市街の4地区を対象としていたが,中心部から離れた3地区(フェネル,バラト,カラキョイ)の調査を優先して実施してきた。また,内陸の小都市サフランボルの伝統的カフェ施設についても調査を行った。想定外の事態に備え代替研究として位置付けていたカイロ(エジプト)については,別資金による研究(トヨタ財団「歴史的カイロにおいて歴史的建造物と伝統的居住様式を軸として持続的コミュニティを考える」本人共同研究者)機会を得たことから,本研究予算からの執行はなかった。よって研究計画を一年延長し,改めて情勢の安定したイスタンブル調査・研究を継続することとした。課題目標として,1近現代の地図史料から「社交施設」の抽出と分類,2近現代の地図史料から「歓楽街」の抽出と分類,3社交空間の現代的分類・形態の解明,4近現代を通じた空間変容過程の解明,の4項目を設定していた。1と2については概ね計画通りの進捗であるが,現地調査が計画通り実施できなかった影響により3と4については遅れている。一方,代替研究と位置付けていたカイロについては,別資金による研究となったものの進捗があった。カイロ旧市街全域を悉皆的に調査し,カフェ施設の立地・形態の確認作業完了することができた。また,カイロのダウンタウン地区火災保険地図を入手し,部分的な現地調査を実施した。研究計画で予定していたイスタンブル旧市街3地区,新市街3地区のカフェ(社交空間・施設)の現地調査について,一部変更はあったが概ね完了した。地図史料(火災保険地図)におけるカフェ分布と,現在のカフェ分布が把握できたことで,社交空間や歓楽街の変容過程を明らかにすることが可能となる。伝統的歓楽街や近代化の過程で形成された新たな歓楽街の他,消失した歓楽街,グランドバザール内のカフェ分布,特定の商業エリアのカフェ分布についても調査し地図上にプロットを行なった。これらの情報はカフェなどの社交施設に限らず,街路や広場など公共空間の実態把握や変容についても検討することが可能である。本研究はイスタンブルを対象としたものであったが,クーデター等の情勢不安が続いたため,カイロ(エジプト)を対象とした調査・研究に軸足を移した経緯がある。カイロの火災保険地図(20世紀初頭)を入手しカフェを抽出・分類するとともに,対象範囲(ダウンタウン地区)の現況調査を実施した。カイロの火災保険地図もイスタンブルと同じ仕様・作成時期のものであるため,当時の分布や建築類型の分析,イスラム地域における近代期の公共空間やカフェ施設の形態把握が可能となった。また,カイロの地図史料として,ナポレオン地図(Description de l'Egypte掲載地図1809-29出版),1930年代調査地図,現代地図(1997-2000)を入手し,旧市街地区の伝統的空間構成の継承・変容過程を明らかにする史料が整った。これら地図史料には歴史的建築物や多様な施設情報が記載されており,今後も引き続き解読・分析に重宝される史料である。
新規作用機作を有する免疫抑制剤の開発

免疫抑制剤は、臓器移植の際に起こる拒絶反応の抑制や自己免疫患者など、いわゆる難病に必要な医薬品である。サイクロスポリン(CsA)とFK506の出現により臓器移植の成功率は格段に上昇した。しかしながら、両薬剤は、ほぼ同一作用機作に基づいて薬効を示すことから、副作用も類似している。それゆえ、新規作用機作を有する免疫抑制剤の開発が求められている。本研究は、冬虫夏草菌類の一種ツクツクボウシタケの培養液から発現ISP-Iをリ-ド化合物として新規作用機作を有する免疫抑制剤を開発した。1.IPSP-Iから新規免疫抑制剤への展開:IPSP-Iの誘導体は免疫抑制活性を示すと共に毒性の低下を示した。そのアルキル鎖長と活性との相関からtetradecyl体が医薬開発の基本構造として選択された。ついでアルキル側鎖にベンゼン核を導入したところ、FTY720:(2-amino-2-[2-(4-octylphnethyl)ethyl]-1,3-propanedionに到達した。本物質は新規免疫抑制剤として期待される。2.ISP-Iの合成;2-aminomalonic esterとD-Valineからなる誘導体に選択的不斉アルドール反応を用いてISP-Iを合成した。3.Mycestericin類の構造決定と合成:ISP-I生産菌Mycerian steriliaから分離された。MycerianDGの構成を解明すると共にそれらの合成を完成した。4.ISP-Iの作用機構:ISP-Iはスフィンゴ脂質生合成の初期段階であるserine-palmytoyl transferase作用を阻害することが判明した。5.FTY720の作用機構:FTY720は上記transferase作用の阻害を示さなくなった。末梢血中のCD3陽性T細胞にアボトーシスを誘発した。6.作用効果:皮膚移植実験において、サイクロスポリンとFTY720の作用は大変有効であった。免疫抑制剤は、臓器移植の際に起こる拒絶反応の抑制や自己免疫疾患など、いわゆる難病に必要な医薬品である。本研究は、冬虫夏草菌類の一種ツクツクボウシタケの培養液から発見されたISP-Iをリ-ド化合物として新規作用機作を有する免疫抑制剤を開発した。すなわち、ISP-IはIL-2に対する応答性を抑制することによりCTLの増殖を阻害することから,CsAやFK506と異なる作用機作を有することが判っている。本研究において、下記に示す結果を得た。1.ISP-Iから新規免疫抑制剤への展開:ISP-Iのカルボン酸部分の還元体に活性を認め、さらに毒性の顕著な低下を認めた。本誘導体は2-amino-1,3-propanediol構造を有することから、2-alkyl-2-aminopropanediol誘導体を多数合成し、構造活性相関について調べた。その結果、活性が強くて、毒性の低い化合物としてpentadecyl体を選択した。これを基本構造として、アルキル側鎖にベンゼン核を導入したところ、FTY720:(2-amino-2-[2-(4-octylpheny)ethyl-1,3-propanediolに到達した。

2.ISP-Iの合成:2-aminomalonic esterとD-Valineからなる誘導体に選択的不斉アルドール反応を用いてISP-Iを合成した。3.Mycestericin類の構造決定と合成:ISP-I生産菌Myceria steriliaから分離されたMycestericinE, Gの構造を解明すると共にそれらの合成を完成した。1.ISP-I誘導体の合成:ISP-Iと構造的に関連する免疫抑制活性天然物mycestericinEとGを合成した。また、mycestericinDを酵素化学的手法を利用して合成した。3.免疫抑制活性発現に必須な基本構造:天然物ISP-Iの化学修飾により導かれた2-amino-1,3-propanediol誘導体とmycestericin類の構造の検討から、免疫抑制活性発現に必須な基本構造として不斉炭素を有しない2-alkyl-2-amino-1,3-propanediolと不斉炭素を有する2-aminoalcoholに到達した。4.ISP-Iの作用機作:インターロイキ2依存性のT細胞において、ISP-Iはスフインゴ脂質生合成の初期段階であるserine-palmytoyl transferase作用に阻害作用を示した。5.他剤との併用:インターロイキ2の産生を抑制するCyclosporinAとインターロイキ2の感受性を阻害するISP-Iとの併用は皮膚移植実験において著しい相乗作用を示した。
占領下における韓国制憲憲法の成立過程に関する研究

本年度の課題は、前年度に行った関連資料の収集・整理、研究報告等の成果を踏まえて、韓国制憲憲法の制定過程をめぐる諸相を明らかにすることであった。具体的な研究実績としては、関連資料の検討(翻訳を含む)及び韓国憲法研究者との意見交換をもとに、2ヵ年にわたる研究総括を取りまとめた。本研究により明らかにされた点は、次のとおりである。(1)前年度収集した関係資料から、アメリカ軍政下朝鮮(韓国)におけるドイツ系亡命法学者(エルンスト・フレンケル)の活動を振り返り、その当時の韓国制憲憲法および基本法制の成立過程に彼が果たした役割の一端を明らかにした。(2)それによって、ほとんど知られていない資料の紹介などを含め、制憲憲法成立過程の研究に新たな視点を提供することができた。制憲憲法に対する具体的なフレンケルの影響に関しては、資料的制約もあり、いまなお解明できていない部分も残されたが、関係資料を提示したことで、今後の研究への手がかりになるものと考える。(3)関連して、わが国では政治学者として知られるフレンケルであるが、従来ほとんど顧慮されなかったアメリカ亡命時代及び朝鮮時代の活動を明らかにすることで、戦後フレンケルの公法・政治理論(及び実践)の思想的背景を解明することができた。(4)最後に、フレンケルというドイツ系亡命法学者に焦点をあて、アメリカ軍政下朝鮮(韓国)の憲法制定過程を検証することを通して、韓国、日本、そしてドイツを視野に入れた占領下憲法制定過程の総合的比較研究の可能性に言及した。本年度は、これまで取り組んできた共同研究プロジェクト「韓国統治機構の研究」の成果をもとに、特に韓国制憲憲法に関する資料を中心に、あらためて関連文献の収集・整理及びその検討を行った。具体的な研究実績としては、シンポジウムや研究会での研究発表、ならびにドイツでの文献収集が挙げられる。以下、順に概観する。(1)まず、2005年7月2日に京都大学で開催された日韓国際シンポジウム「東アジア諸国の憲法と統治機構」において研究報告を行い、シンポジウム参加者と意見交換を行なった。これにより、研究課題がより一層明確化されるとともに、今後の方向性について様々な示唆を得ることができた。なお、本報告は、シンポジウム報告書として、印刷に付されている。(2)次に、夏期休暇期間を利用して、ドイツにおいて文献収集を行なった。韓国制憲憲法の制定に寄与したとされる一人のドイツ系亡命法学者、エルンスト・フレンケルの関連文書を閲覧するためである。特に、ドイツ連邦公文書館(コブレンツ)では、「フレンケル文書」を閲覧し、韓国人の実務家や研究者との交流を示す書簡など、その一部を複写することができた。(3)最後に、2006年2月18日に韓国(ソウル)で開催された日韓国際ワークショップに参加し、「制憲過程における司法制度構想」というテーマで、本研究成果の一部を発表した。そこでは、特に韓国人研究者から、資料等に関して教示を得た。これらを踏まえて、次年度の研究の方向性について再検討を行った。
機能性RNAネットワーク解析に基づく治療抵抗性小細胞肺癌の革新的治療法開発

小細胞肺癌は、肺癌全体の15%20%を占める癌であるが、癌細胞の増殖能と転移能は驚くほど高く、初診時に外科的な治療を行える症例は稀である。切除不能症例については、化学療法・化学放射線療法を施すが、初回の治療反応性は良い。しかしながら、多くの症例で、再発や遠隔転移を認める。近年開発が相次いでいる分子標的薬の適応もない。この様な背景の中、治療抵抗性に至った小細胞肺癌に対する、新規治療法の開発は急務である。ヒトゲノム中には蛋白をコードしないRNA分子が多数存在し、実際に転写されている事が判明した。その中で、僅か19塩基22塩基の1本鎖RNA分子は、マイクロRNAと呼ばれる。1種類のマイクロRNAは、配列依存的に数百数千種の機能性RNA(蛋白コード遺伝子・蛋白非コード遺伝子)の発現を制御している事から、細胞内ではマイクロRNA-機能性RNAの極めて複雑な分子ネットワークが形成されている。ヒトゲノム中の60%のタンパクコード遺伝子は、マイクロRNAによる発現制御を受けている。そのため、マイクロRNAの発現異常が細胞内の機能性RNA分子ネットワークの破綻を引き起こし、癌を含むヒト疾患の発症・進展に関わる事が明らかとなってきた。本疾患の新規治療法の開発には、治療抵抗に至った癌細胞内で起こっている変化を、最新のゲノム科学的手法で解析する必要がある。しかしながら、小細胞肺癌の再発部位や遠隔転移部位を得る事は臨床上困難であり、本疾患のゲノム解析は十分に行われていない現状がある。この様な背景の中、申請者は、小細胞肺癌の再発症例の原発巣、転移巣からRNAを抽出し、RNA-シークエンスにより、「治療抵抗性・小細胞肺癌マイクロRNA発現プロファイル」を作成した。治療抵抗性に至った小細胞肺癌患者・剖検検体のRNAシークエンスにより「治療抵抗性・小細胞肺癌マイクロRNA発現プロファイル」を作成した。小細胞肺癌・癌組織でmiR-30a-5p/-3p、miR-34b-5p/-3p、miR-223-5p/-3pなどの発現が低下している事が明らかとなった。これまでの概念では、マイクロRNAの生合成においてpre-miRNAから2本鎖のmiRNA duplexが形成され、guide strandがRISCタンパクに取り込まれ標的遺伝子の制御を行う。これに対して、反対鎖のpassenger strandは分解され機能を有しないとされていた。現在、小細胞肺癌組織で発現が抑制されているpassenger strandマイクロRNA (miR-30a-3p、miR-34b-5p、miR-223-5p)に着目し、その機能解析を継続している。癌抑制機能が証明されたマイクロRNAについては、マイクロRNAが制御する小細胞肺癌・癌促進経分子経路を探索する。本研究で作成した、「治療抵抗性・小細胞肺癌マイクロRNA発現プロファイル」には、これまでに解析が全く行われていない、マイクロRNAが多数存在しており(次世代シークエンサーを用いた解析のため)、本研究を推進する上で大きなアドバンテージである。これまでは、小細胞肺癌組織で発現が抑制されているマイクロRNA(癌抑制型マイクロRNA候補)について、機能解析を施行してきたが、今後の展開として、小細胞肺癌組織で発現が亢進しているマイクロRNA(癌促進型マイクロRNA候補)について検討を行う予定である。最近の機能性RNA研究から、ヒト血液や体液中には、エクソソームと呼ばれる、直径50nm150nmほどの細胞外小胞が存在しており、エクソソーム内には、マイクロRNAを含む核酸物質が内包されている事が明らかとなった。癌細胞が放出エクソソームは(エクソソーム中の核酸は)、周辺環境に影響を与え、癌細胞の転移や治療抵抗性に重要な役割を担っている事が明らかとなってきた。今後の展開として、小細胞肺癌患者のエクソソームを分離し、その中に包埋されているエクソソーム由来マイクロRNAを探索する。小細胞肺癌組織で発現が亢進しているマイクロRNAと比較し、小細胞肺癌・癌促進型マイクロRNA選択する。癌促進型マイクロRNAを起点として、小細胞肺癌において活性化している分子経路を見出す。分子経路の遮断には、siRNA、inhibitor(低分子化合物)、中和抗体を用いて、癌細胞の、増殖能、浸潤能、遊走能、アポトーシス誘導能等を指標にして検証する。有効性が確認できた分子経路については、既存の「薬」で、分子経路の遮断が可能か、ドラッグ・リポジションの戦略を考案し検証を進める。申請者は、肺扁平上皮癌で発現が低下しているmicroRNA-218に着目し、microRNA-218が肺扁平上皮癌細胞の遊走および浸潤を抑制している「腫瘍抑制型マイクロRNA」である事を報告している。microR-218はTumor Protein D52 (TPD52)を直接制御し、TPD52は、肺扁平上皮癌臨床検体で高発現しており、TPD52のノックダウンにより癌細胞の遊走および浸潤を顕著に抑制した。更に、TPD52が制御する機能性RNAネットワークの探索を行い、TPD52が、細胞周期や細胞分裂に関わる遺伝子を多数制御している事を見出した。これらの事から、機能が明らかとなったマイクロRNAを起点として、マイクロRNAが制御する癌細胞内のRNAネットワークを描写できる事を見出した。

同様の方法を用いて、難治性の疾患である小細胞肺癌についてもマイクロRNAを用いて腫瘍促進に関わる分子ネットワークの解析を行うことを本研究の主目的とした。現在、治療抵抗性・小細胞肺癌マイクロRNA発現プロファイルを作成中である。化学療法後に治療抵抗性となり、腫瘍の進展により死亡し、平成29年度に病理解剖を行った進行期小細胞肺癌3症例についてサンプル採取を行った。原発巣および各転移巣について正常部および癌部のサンプルを採取し、各検体からRNA抽出を行い、次世代シークエンサーを用いてそれぞれの検体由来のRNAの網羅的解析を行った。現在、癌部と非癌部におけるマイクロRNAの発現の比較検討を行い、「治療抵抗性・小細胞肺癌マイクロRNA発現プロファイル」を作成中である。腫瘍の進展により死亡した小細胞肺癌患者の病理解剖検体を用いて、網羅的解析を行い、「治療抵抗性・小細胞肺癌マイクロRNA発現プロファイル」を作成中であるため、当初の予定に近い形で進行している。今後も計画に沿って進めていく。小細胞肺癌は、肺癌全体の15%20%を占める癌であるが、癌細胞の増殖能と転移能は驚くほど高く、初診時に外科的な治療を行える症例は稀である。切除不能症例については、化学療法・化学放射線療法を施すが、初回の治療反応性は良い。しかしながら、多くの症例で、再発や遠隔転移を認める。近年開発が相次いでいる分子標的薬の適応もない。この様な背景の中、治療抵抗性に至った小細胞肺癌に対する、新規治療法の開発は急務である。ヒトゲノム中には蛋白をコードしないRNA分子が多数存在し、実際に転写されている事が判明した。その中で、僅か19塩基22塩基の1本鎖RNA分子は、マイクロRNAと呼ばれる。1種類のマイクロRNAは、配列依存的に数百数千種の機能性RNA(蛋白コード遺伝子・蛋白非コード遺伝子)の発現を制御している事から、細胞内ではマイクロRNA-機能性RNAの極めて複雑な分子ネットワークが形成されている。ヒトゲノム中の60%のタンパクコード遺伝子は、マイクロRNAによる発現制御を受けている。そのため、マイクロRNAの発現異常が細胞内の機能性RNA分子ネットワークの破綻を引き起こし、癌を含むヒト疾患の発症・進展に関わる事が明らかとなってきた。本疾患の新規治療法の開発には、治療抵抗に至った癌細胞内で起こっている変化を、最新のゲノム科学的手法で解析する必要がある。しかしながら、小細胞肺癌の再発部位や遠隔転移部位を得る事は臨床上困難であり、本疾患のゲノム解析は十分に行われていない現状がある。この様な背景の中、申請者は、小細胞肺癌の再発症例の原発巣、転移巣からRNAを抽出し、RNA-シークエンスにより、「治療抵抗性・小細胞肺癌マイクロRNA発現プロファイル」を作成した。治療抵抗性に至った小細胞肺癌患者・剖検検体のRNAシークエンスにより「治療抵抗性・小細胞肺癌マイクロRNA発現プロファイル」を作成した。小細胞肺癌・癌組織でmiR-30a-5p/-3p、miR-34b-5p/-3p、miR-223-5p/-3pなどの発現が低下している事が明らかとなった。これまでの概念では、マイクロRNAの生合成においてpre-miRNAから2本鎖のmiRNA duplexが形成され、guide strandがRISCタンパクに取り込まれ標的遺伝子の制御を行う。