hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
妊娠時の睡眠障害に関与する母体の免疫システムについての基礎的研究

今年度の研究ではラットを用いた実験系において、1)妊娠初期に特有な生殖器官由来の催眠性サイトカインに着目し、そのサイトカインの中枢性作用を阻害したときに生じる睡眠変動について解析を深めるためのさらなる追試を行った。また、2)高齢雌ラットにおいてエストロゲン補填の処置を行い、睡眠一覚醒パターンを記録するのと同時に血中サイトカイン量ならびに脳内アセチルコリン(ChAT)活性を測定し、女性特有な睡眠パターンに対するエストロゲンの総合的な作用に検討を加えた。1)研究代表者による先行研究で、ラットにおいてもヒトと同様、妊娠のきわめて初期に過剰睡眠が誘発されることがこれまでに確かめられている。この時期、着床に重要な役割を担う顆粒球・マクロファージ・コロニー刺激因子(GM-CSF)の中和抗体をラットの脳室内に連続投与すると、対照IgGを投与された妊娠ラットにおける増加した睡眠パターンと比較して、ノンレム睡眠の約25%、レム睡眠の約60%が有意に減少し、最終的な出産を迎えられない母親ラットも数匹確認された。2)高齢雌ラットにおいては、細菌毒の一種であるリポポリサッカライド(LPS)に対する弱まった感受性が、エストロゲン補填処置(ERT)によって回復することが、これまでの研究で示唆されている。追究の結果、SD系雌ラットでは、明期のノンレム睡眠量が明らかに減少する一方、暗期のレム睡眠が増加するという、睡眠-覚醒パターンにおける日内リズムの狂いが著しく観察され、それが一週間のERTで若齢レベルに若返ることが示唆された。その際、E_2処理された群でLPS刺激後の血中TNFα量が有意に増え、IL-1量には変化は見られなかった。脳内ChAT活性は特定の部位でE_2による上昇効果がみられており、この作用がレム睡眠リズムの回復に関係していると考えられる。今年度の研究ではラットを用いた実験系において、1)妊娠初期に特有な生殖器官由来の催眠性サイトカインに着目し、そのサイトカインの中枢性作用を阻害したときに生じる睡眠変動について解析を深めるための追試を行った。また、妊娠を維持するために重要なホルモンであるエストロゲンの免疫システムとの関与について調べるため、2)卵巣除去した若齢雌ラットを用意し、エストロゲンを枯渇させた状態での免疫活性および睡眠・発熱反応について対照群と比較し、エストロゲンの有無と免疫システムとの関係を検討した。1)先に補助金を受けた先行研究によって、ラットにおいてもヒトと同様、妊娠のきわめて初期に過剰睡眠が誘発されることが確かめられている。この時期、妊娠ラットの脳室内に顆粒球・マクロファージ・コロニー刺激因子(GM-CSF)の中和抗体を連続投与すると、対照IgGを投与された妊娠ラットにおける増加した睡眠パターンと比べて、ノンレム睡眠の約25%、レム睡眠の約50%が有意に減少した。これにより、GM-CSFは妊婦過眠を誘引する睡眠因子の一つとして提言したい。2)高齢雌ラットにおいては、細菌毒の一種であるリポポリサッカライド(LPS)に対する弱まった感受性が、エストロゲン補填処置(ERT)によって回復することが示唆されている。したがって、体内のエストロゲンが低レペルに達した場合、若齢でも免疫活性が弱まると思われた。しかしながら本実験では、卵巣除去した雌ラットのほうが低用量のLPSに反応したことから、エストロゲンの免疫システムに対する作用は加齢によって変化するとの考察を得た。
カタストロフィと日常の中の政治～原発避難者の地域市民性

2018年度の学期中は、ほぼ月例で研究会を開催。他大学所属の研究者や大学院生とも情報共有しつつ、先行文献の検討や調査などを開始。代表者の鄭は、「福島原発おかやま損害賠償請求事件」にまつわる裁判や報告会、移住者のサポートグループの会合や勉強会を中心に参加。原発移住者を考える上で、「半難民」という概念(徐京植)で語られる移住者やその子孫との比較対照を行うことが、本課題に新たな視点を提供することになるのではという気づきが本年度の実績の一つである。以下、分担者の進捗状況である。上杉は本研究会でのコメントを生かしながら関連するトピックで英語論文を発表。科学技術研究と科学と法に関する先行研究を英語と日本語を中心に収集し、分析も開始した。大澤貴美子は、岡山において東日本大震災関連の避難者・移住者がどのように政治的に語られ、また代表されているのかを分析するために、岡山県議会・市議会における避難者・移住者に関する発言を検索しリストアップ。資料の整理にも着手した。宮川は本研究会での構想をもとに、これまでの移住研究との対話をベースにした報告書論文を学内研究会雑誌に日本語で発表。研究協力者の大澤誠は、岡山県内の避難者・移住者支援団体の会合に参加し、福島県から岡山県へ避難し農業をしている方に会い、その方の農場を訪問するなどラポール形成を試みた。以上のように、初年度に密に研究会で情報共有を行うことにより各自分担した研究内容の理解を深めることができたので、2019年度以降も、各自で調査に取り組むことを確認した。概ね順調に進んでいる自の状況で以下に記す。2018年度は情報と資料収集を開始し、文献調査からは比較対象の枠組みを作ることができた(鄭)。科学技術研究と科学と法に関する先行研究を収集・精読したが、放射線リスク関係の科学誌の収集などに関しては遅れが出ている(上杉)。2019年度に予定している「岡山の議会における原発関連移住者・避難者の政治代表」をテーマとする論文執筆のためのデータ収集が順調に進んだ(大澤貴美子)。当初予定していた移住説明会(首都圏で開催)への参加はできなかったが、岡山県内で開催される移住誘致イベントに参加し、主催者や参加者に対して聞き取りが進んだ(宮川)。岡山県内への避難民の方との交流を通して得られた結果から、避難先としての岡山への定住を選ぶのではなく、一ヶ所に定住せずに移動をしながら生活をする人たちに研究対象とすることでより興味深い発見ができるのではと気づいた(大澤誠)。以上の結果から、国内外の研究者や当事者に連絡を取って研究期間内に岡山でシンポジウムの開催する可能性の検討も始まった。グループ全体としては、論文や口頭発表、社会貢献についての検討が始まった。個人単位では以下のような予定を立てている。フィールドワークを開始し参考文献リストの作成にも着手したので、2019年度は参考文献の収集と読み込みをを継続し、必要に応じてフィールドワークも行う(鄭)。文献を基に放射線リスクに関する先行研究をまとめる(上杉)。収集したデータを分析し、先行文献の検討も行いながら、論文を執筆する(大澤貴美子)。地方への移住に関する先行研究を読み込み、震災に伴う移住の特殊性を検討する(宮川)。福島原発事故の結果、定住をすることを選択しないような生活をしているインフォーマントを探すことを一からしたいと考えている(大澤誠)。

2019年度に予定している「岡山の議会における原発関連移住者・避難者の政治代表」をテーマとする論文執筆のためのデータ収集が順調に進んだ(大澤貴美子)。当初予定していた移住説明会(首都圏で開催)への参加はできなかったが、岡山県内で開催される移住誘致イベントに参加し、主催者や参加者に対して聞き取りが進んだ(宮川)。岡山県内への避難民の方との交流を通して得られた結果から、避難先としての岡山への定住を選ぶのではなく、一ヶ所に定住せずに移動をしながら生活をする人たちに研究対象とすることでより興味深い発見ができるのではと気づいた(大澤誠)。以上の結果から、国内外の研究者や当事者に連絡を取って研究期間内に岡山でシンポジウムの開催する可能性の検討も始まった。グループ全体としては、論文や口頭発表、社会貢献についての検討が始まった。個人単位では以下のような予定を立てている。フィールドワークを開始し参考文献リストの作成にも着手したので、2019年度は参考文献の収集と読み込みをを継続し、必要に応じてフィールドワークも行う(鄭)。文献を基に放射線リスクに関する先行研究をまとめる(上杉)。収集したデータを分析し、先行文献の検討も行いながら、論文を執筆する(大澤貴美子)。地方への移住に関する先行研究を読み込み、震災に伴う移住の特殊性を検討する(宮川)。福島原発事故の結果、定住をすることを選択しないような生活をしているインフォーマントを探すことを一からしたいと考えている(大澤誠)。地元周辺でのフィールドワークに時間により多くの時間を費やしたことによる生じた予算は、2019年度以降、遠隔地での調査や研究会に回せる(鄭)。別の科研費で書籍を購入することができたため、予算に残余が出た(上杉)。(予算執行率89.9%、残額16,124円)研究補助員にデータ収集作業を依頼していたのだが、予想していたよりも短期間で作業が終了したため、人件費に残余が生じた(大澤貴美子)首都圏への研究出張が見送られたため、予算に残余が出た(宮川)。2018年度は予算執行の手続きについて理解が足りず執行できなかったが、来年度以降は事前に計画を大学学務部に提出し執行できるようにする(大澤誠)。
磁性・非磁性半導体へテロ構造の作製と半導体スピンデバイスへの応用

本研究では、強磁性半導体を用いた半導体中へのスピン注入を実現するため、分子線エピタキシ再成長法により強磁性/非磁性半導体へテロ構造を作製し、その電流・電圧特性や発光の偏光特性を調べた。本研究で得られた成果を記す。・非磁性半導体へのスピン偏極電流注入を初めて確認した。InGaAs歪量子井戸を活性層とするpn接合発光ダイオードのp型層としてMnを5%含む強磁性半導体GaMnAsを用いた。GaMnAsの強磁性転移温度以下で、面と平行に数10ガウスの磁場を印加したところ、発光の偏光度に約±1%程度の差が生じ、GaMnAsの磁化曲線と同様なヒステリシスが見られた。・n型の厚いIn_xGa_<1-x>AS(χ=0.150.18)をバッファ層とし、格子緩和した基板上にIn_yGa_<1-y>As(y0.2)歪量子井戸を形成し、さらにその上に引っ張り歪が加わった強磁性半導体(Ga,Mn)Asを再成長したp.n接合発光ダイオード構造を作製し、磁化容易軸が面と垂直方向にある強磁性半導体発光ダイオードを作製した。この発光ダイオードからの発光の、量子井戸の面と垂直方向の偏光にヒステリシスを観測し、スピン注入を確認した。本年度は、半導体中のキャリアのスピン自由度を活用するために必要な基盤技術の一つであるスピン注入を実現することを目的とし、良質の強磁性半導体GaMnAs/非磁性半導体(In、Ga)Asへテロ接合からなるpn接合構造を形成するために、分子線エピタキシ再成長法を確立した。また、そのデバイスからの発光の偏光度を新規に購入した光電子増倍管を用いて低温・磁場中にて測定することにより、非磁性半導体へのスピン偏極電流注入を初めて確認した。スピン注入を観測したデバイスは、InGaAs歪量子井戸を活性層とするpn接合発光ダイオードで、Mnを5%含有する強磁性半導体GaMnAsをp型層として用いている。高い発光効率と高純度を得るため、活性層とその上のキャップ層までを高純度の分子線エピタキシ装置で形成したのち、表面の酸化・汚染を防ぐために砒素で覆った後、一旦大気に試料を出す。その後、磁性イオン(Mn)を有する別の分子線エピタキシ装置に試料を導入し、砒素キャップ層を蒸発させた後低温(250°C)にてGaMnAsを成長した。(磁性/非磁性半導体界面が形成される)再成長前の表面は高エネルギ電子線回折によりその場観察し、その回折像から再成長表面において原子層オーダーの平坦性が維持され、またGaMnAsがエピタキシャル成長する様子を確認した。このデバイスをGaMnAsの強磁性転移温度以下に冷却し、光の進行方向と平行に数10ガウスの磁場を印加したところ、発光iの偏光度に約±1%程度の差が生じ、さらに磁場を変化させ極性を変えたときに、GaMnAsの磁化曲線と同様なヒステリシスが見られた。これは、GaMnAs中でスピン偏極した正孔が、非磁性半導体にその極性を失わずに運び入れた直接的な証拠といえる。本年度は、強磁性半導体(Ga,Mn)As/非磁性半導体(In、Ga)Asヘテロ接合を介したキャリア及びスピン輸送機構を明らかにするため、昨年度確立した分子線エピタキシ再成長法を用いて強磁性/非磁性半導体p(i)n接合やpip構造を作製し、その電流電圧(IV)特性、発光・偏光特性を調べた。また、時間分解偏光フォトルミネッセンス法により、バルク半導体におけるスピン偏極電子、正孔の輸送について調べた。得られた成果を以下に記す。・n型の厚いIn_xGa_<1-x>As(x=0.150.18)をバッファ層とし、格子緩和した基板上にIn_yGa_<1-y>As(y0.2)

歪量子井戸を形成し、さらにその上に引っ張り歪が加わった強磁性半導体(Ga,Mn)Asを再成長したpn接合発光ダイオード構造を作製し、磁化容易軸が面と垂直方向にある強磁性半導体発光ダイオードを作製した。この発光ダイオードからの発光の、量子井戸の面と垂直方向の偏光にヒステリシスを観測し、スピン注入を確認した。
ヘムオキシゲナーゼアイソザイムの細胞内局在の同定と生理機構の解明

ストレス応答により誘導されるHeme oxygenase(HO)-1による臓器機能の修飾を検討する目的でラットにheminを腹腔内投与し経時的に肝臓でのHO-1誘導とCO、bilirubin-IX alphaの生成をそれぞれ潅流臓器肝の静脈潅流液と胆汁での流量を定量的に解析するとともに、血管収縮物質に対する血管抵抗の反応性を検証した。Hemin投与後経時的にHO-1蛋白の誘導が上昇し12時間でピークに達したが、生成物はこれに遅れて増加し、18時間で正常の4倍程度の上昇を示した。正常肝および12、18時間での血管抵抗は18時間で有意に低値を示した。またendothelin-1に対する血管反応性も18時間で最低値を示した。これらの変化はHO-1活性が前値に復する24時間では正常化した。18時間群の肝臓における基礎血管抵抗の低下およびendothelin-1への反応性低下はHO阻害剤であるzinc protoporphyrinによりキャンセルされ、COの添加にzinc protoporphyrinの効果は減弱したことから、内因性に過剰生成されたCOがこれらの変化に関与したものと考えられた。またHO-1の主な誘導部位は肝細胞であり、内皮細胞のfenestrationを通過してDisse腔のCOを消去できるoxyhemoglobinによりZnPPの効果が再現できる一方、oxyhemoglobinを250nm程度のliposomeに封入するとその効果が消失することから、類洞外でのCO生成がこの現象に関与することが示唆された。またこの現象はCOを消去できないmethemoglobinの投与では抑制しないこと、NO synthaseの阻害剤であるL-NAMEでも変化しないことも明らかになった。以上のことからストレスにより臓器内に誘導されたHO-1を介してCOが過剰生成して血管反応性を低下させることが明らかになった。平成8年度奨励研究Aにより作成したラットHO-1, -2に対する単クローン抗体のスクリーニングを行い、HO-1酵素活性を特異的に阻害する抗体を新たに作成した。本抗体はHO-2活性は全く阻害しないことから総HO活性におけるHO-1活性の割合を検証することが可能となった。そこで、HO活性が高いラット肝臓、脾臓の各細胞分画におけるHO-1,-2の発現について酵素活性測定およびウエスタンブロッティングにより検証を行った結果、HO-1が核およびミクロソーム分画に、HO-2がミクロソーム分画に存在することを明らかになった。これら結果は免疫組織染色によって既に得られている結果と矛盾しなかったことから、従来の報告で知られていた小胞体以外に、HO-1は核膜上にも発現していることが明らかになった。次に、HO-1が核膜上に発現していることに着目し、NIH3T3cellおよびヒト角膜上皮細胞のHO-1,-2の高発現細胞株を用いて、HO-1が産生するビリベルジン、ビリルビンのラジカル消去作用を介して紫外線または過酸化物により生じるDNA傷害の防御機転となる可能性について検証を行った。DNA酸化修飾度をELISAを用いて測定することにより検証を行ったが、HO-1高発現細胞株において著名な防御効果は認められなかった。ところで、今年度の研究過程においてHO-1の生理機能に関する興味深い現象が偶然観察された。HO-1の高発現細胞株は、コントロールの細胞と比較して基質に対する接着性が著しく亢進しており、これら現象が酵素活性に依存せずに生じている再能性が平成10年度の研究結果から予想された。そこで平成11年度は、HO-1およびHO-2の生理機能の相違を明らかにすることに重点をおき研究を行う予定である。
ＤＮＡクランプを用いた新規結晶化シャペロンの開発

本研究は、クランプ分子を結晶化シャペロンとして利用したタンパク質の新規結晶化技術の開発である。PCNAなどのクランプは一般に3量体のリング構造を形成する。クランプは、分子の対称性が高いこと、それ自身が比較的容易に結晶化することから結晶化シャペロンとして有用であると考えた。本研究が開発する結晶化技術は、タンパク質の結晶化における有効な選択肢の1つになると期待できる。いくつかのタンパク質で結晶化を検討したところ、本研究で開発した結晶化シャペロンベクターの有効性が確認できた。本研究は,クランプ分子を結晶化シャペロンとして利用したタンパク質の新規結晶化技術の開発である. PCNAなどのクランプは一般に3量体のリング構造を形成する.クランプは,分子の対称性が高いこと,それ自身が比較的容易に結晶化することから結晶化シャペロンとして有用であると考えた.本研究計画では,部位特異的変異導入によって会合状態の異なるDNAクランプを作成し,それらを結晶化したい目的タンパク質に融合させ,クランプを結晶化シャペロンとして利用できる系を確立する.本研究が開発する結晶化技術は,タンパク質の結晶化における有効な選択肢の1つになると期待できる.クランプを結晶化シャペロンとして,目的タンパク質をクランプ分子のC末端に融合させ,さらにアフィニティー精製用のHISタグを付加できるベクタ-,クランプ分子のN末端にHISタグを付加させたベクター,クランプ分子のN末端にHISタグを付加させ,タグを切断させるためにHRV3Cプロテアーゼの認識サイトを挿入したベクター,さらに部位特異的変異を導入してクランプ分子の会合状態を変えたベクター,これらの作製を完了した. Protein-XとProtein-Yをモデルたんぱく質として,結晶化シャペロン融合タンパク質の調製・結晶化・X線実験を行った.Protein-Xについては3.0オングストローム分解能程度の回折を示す結晶を得ることに成功した. Protein-Yについては,様々な系を検討し,最終的に2.6オングストローム分解能の回折強度データを得ることに成功した.本研究で開発した結晶化シャペロンベクターの有効性が確認でき,様々なタンパク質への応用が期待できる.今後はリンカーの長さやアフィニティータグの種類と位置,プロテアーゼサイトの検討によってベクターのヴァージョンアップを図る.本研究は、クランプ分子を結晶化シャペロンとして利用したタンパク質の新規結晶化技術の開発である。本研究は, DNAクランプ分子を結晶化シャペロンとして利用したタンパク質の新規結晶化技術の開発である. PCNAなどのDNAクランプは一般に3量体のリング構造を形成する. DNAクランプは,分子の対称性が高いこと,それ自身が比較的容易に結晶化することから結晶化シャペロンとして有用であると考えた.本研究計画では,部位特異的変異導入によって会合状態の異なるDNAクランプを作成し,それらを結晶化したい目的タンパク質に融合させ, DNAクランプを結晶化シャペロンとして利用できる系を確立する.本研究が開発する結晶化技術は,タンパク質の結晶化における有効な選択肢の1つになると期待できる.当該年度は, Protein-XとProtein-Yをモデルたんぱく質として, PCNA融合たんぱく質の調製・結晶化・X線実験を行った. Protein-Xについてはヒスタグの無い系を検討し, Protein-Xについてはヒスタグの無い系とN末端あるいはC末端にヒスタグを付加した系を検討した. Protein-Xに関しては, 3.0Å分解能程度の回折を示す結晶を得ることに成功し,データセットを収集した. PCNAをモデル分子として,分子置換法による構造解析を検討したところ, Protein-Xについては有意な解を得ることが出来た.しかしながら, PCNA部分の構造は決定できたものの, Protein-Xの電子密度は曖昧であり, Protein-Xが結晶中で揺らいでいると考えられた.Protein-Yについては, N末端にヒスタグを付加した系では,凝集する傾向を示し, C末端に付加した系では,精製過程での分解が見られた.ヒスタグのない系では3.0Å分解能程度の回折強度データを得ることに成功し,現在,分子置換法による構造解析を試みている.Protein-Xに関して,構造解析可能な分解能のX線回折強度データを収集することに成功したが, Protein-Xが揺らいでおり,構造を決定することが出来なかった.PCNAとProtein-Xとの間のリンカーを工夫する必要があるかもしれない.また,ヘテロなDNAクランプを用いたベクターの構築が遅れている.Protein-XはZnフィンガータンパク質で,分子量が10kDa以下の比較的小型のタンパク質である.そのため, Protein-Xは結晶中で揺らいでしまっていると考えられる.したがって,テストサンプルとして他のタンパク質を検討する必要がある.すでに,新たにProtein-Zの発現系の構築を進めている.発現系が完成次第,試料調製・結晶化・構造解析を勧めていく.また,ヘテロDNAクランプを利用した結晶化シャペロンベクターの構築を進め,複合体の結晶化への利用を図る.ベクター系の構築のため,オリゴDNA, PCR酵素,制限酵素などの消耗品,結晶化スクリーニングを実施するための結晶化試薬類を購入する.また,これらの実験に必要な少額備品を購入する予定である.
成熟個体における記憶過程の操作-特定のシナプス分子を変化させるウイルスベクター

本研究は、遺伝子産物の機能をin vivoの神経回路において効率よく検討する新しい方法として、ウイルスベクターを用い、単一の種類の神経細胞の大多数に安定して遺伝子を発現させる方法を確立し、そのモデルケースとして、これまで機能がよく分かっていない小脳プルキンエ細胞に特異的に発現しているδ2グルタミン酸受容体(δ2受容体)の信号伝達機構を、in vfvoの小脳において解明することを目指している。δ2受容体はいくつかの機能ドメインによって構成されている。細胞内のC末端のPDZ領域を欠損する変異δ2受容体をシンドビスウイルスベクターによって、δ2受容体欠損マウスの小脳プルキンエ細胞に導入しても、運動学習の基礎過程と考えられる小脳プルキンエ細胞での長期抑圧(LTD)の回復はみられず、LTDの誘導のためにはδ2受容体のC末端のPDZ領域を介した他のPDZ結合タンパクとの相互作用が必要であることを報告した(Eur J Neurosci,2007)。さらにδ2受容体のチャネルとしての機能を解析した。チャンネル・ボア内に点変異を持つδ2取変異体は、チャネルが恒常的に開放状態になることが知られているラーチャー変異を導入しても、チャネル活性を示さない。そこで、このδ2^<V/R>取変異体をシンドビスウイルスベクターによってδ2容体欠損マウスの小脳プルキンエ細胞に導入したところ、驚くべきことに、LTDの回復が見られた。δ2受容体はシークエンスの相同性からイオン透過型グルタミン酸受容体に分類されているが、実際にはチャネルとしては機能していないことを初めて明確に示した(JPhysiol,2007)。本研究はδ2受容体の機能の解明に加え、ウイルスベクターを用いた変異遺伝子の導入による異常表現型の回復というストラテジーが有効であることを示している。本研究は、遺伝子産物の機能をin vivoの神経回路において効率よく検討する新しい方法として、ウイルスベクターを用い、単一の種類の神経細胞の大多数に安定して遺伝子を発現させる方法を確立し、そのモデルケースとして、これまで機能がよく分かっていない小脳プルキンエ細胞に特異的に発現しているδ2グルタミン酸受容体(δ2受容体)の信号伝達機構を、in vivoの小脳において解明することを目指している。δ2受容体はいくつかの機能ドメインによって構成されているが、細胞内のC末端のPDZ領域を欠損する変異δ2受容体をシンドビスウイルスベクターによって、δ2受容体欠損マウスの小脳プルキンエ細胞に導入しても、運動学習の基礎過程と考えられる小脳プルキンエ細胞での長期抑圧(LTD)の回復はみられなかった。このことは、LTDの誘導のためにはδ2受容体のC末端のPDZ領域を介した他のPDZ結合タンパクとの相互作用が必要であることを示唆しており、さらにプルキンエ細胞の優性阻害ペプチドの灌流実験によっても同様の結果が得られた。本研究はδ2受容体の機能の解明に加え、ウイルスベクターを用いた変異遺伝子の導入による異常表現型の回復というストラテジーが有効であることを示している(Eur J Neurosci)。さらに、チャンネル・ボア内に点変異を持つδ2V/R変異体は、チャネルが恒常的に開放状態になることが知られているラーチャー変異を導入しても、チャネル活性を示さない。そこで、このδ2V/R変異体をシンドビスウイルスベクターによって、δ2受容体欠損マウスの小脳プルキンエ細胞に導入したところ、驚くべきことに、LTDの回復が見られた。この知見は、δ2受容体はシークエンスの相同性からイオン透過型グルタミン酸受容体に分類されているが、実際にはチャネルとしては機能していないことを初めて明確にしたことになる(論文投稿中)。
ド-パは神経伝達物質たりうるか?ーその競合的拮抗薬並びに高親和性結合部位の探究

フット視床下部切片潅流標本において、Lード-パがドパミンへの酵素的変換を介さずに内在性ノルアドレナリン遊離を促進することを既に報告している。同系において、まずレ-ド-パアナログである,Lード-パ,Dード-パ,Lーフェニルアラニン,3ー0ー4チルド-パ,ドパック,カルビド-パ,Lード-パフォスフェイト,Lースレオドプス及びLード-パメチルエステル単独作用を検討した。その結果,Lード-パ類似のノルアドレナリン遊離効果を示すものとして,Lースレオドプス,抑制効果を示すものとしてLード-パメチルエステルを見い出した。次に,Lード-パアナログ存在下にLード-パの作用を検討した。Lード-パメチルエステルは,Lード-パの用量遊離曲線を右方に平行移動した。シルドプロットにより、スロ-プファクタ-=1,pACC2DD値=8.9となり,Lード-パメチルエステルは,Lード-パの比較的強力な競合的拮抗薬であることが明らかとなった。Lード-パフォスフェイト,カルビド-バはLード-パの作用を阻害する傾向を示したが、Lード-パメチルエステルの場合に比し、明確な競合関係を見い出し得なかった。またLード-パの作用は、Lード-パメチルエステルに比し,Lード-パのより強力な取り込み阻害能を示すフェニルアラニン等によっては拮抗されなかった。以上の結果を踏まえ、新たにAA3BBHーLード-パメチルエステルを合成し、Lード-パの薬理活性に関与し得るLート-パ受容部位の検索を試みた。ラット股膜標本において、AA3BBHーLード-パメチルエステルは一定の膜結合能を示したが、同結合の特性は、低親和性、高結合能、温度並びにナトリウムイオン依有性を示し、その結合部位が、Lード-パのノルアドレナリン遊離促進作用とは無関係な、Lード-パのキャリア蛋白であることが示唆された。
siRNAや短鎖RNAが塩基配列特異的に誘導するI型IFNを利用した新規癌治療法

RNA干渉は標的遺伝子配列に相補的な短い2本鎖RNA(short interfering RNA, siRNA)による遺伝子発現抑制法である。近年、このsiRNA分子がある特別な塩基配列を持つときに限り、I型インターフェロン(=IFN)を誘導する能力があることが論文発表されている。本研究課題では、siRNA分子のIFN誘導能力に着目し、誘導したIFNを利用して癌細胞を殺す所(細胞、及び動物実験)までの成果を得た。【語句説明】RNA干渉:短い2本鎖RNAが伝令RNAに結合することを介して標的遺伝子が蛋白質に翻訳されることを抑える手法。発見者は2006年のノーベル生理学・医学賞を受賞している。インターフェロン:動物体内で病原体(特にウイルス)や腫瘍細胞などの異物の侵入に反応して細胞が分泌するタンパク質である。癌細胞を殺す作用がある。RNA干渉は標的遺伝子配列に対応した短い2本鎖RNA(short interfering RNA,siRNA)による遺伝子発現抑制法である。近年、siRNAは標的遺伝子の発現抑制効果の他に、免疫賦活効果(I型インターフェロン=IFNや炎症性サイトカインの誘導)を示すことが報告された。この免疫賦活活性は『特別な塩基配列=IFN inducible sequence(IIS)』を有するsiRNAのみが持つ。以下、これをsiRNA(IIS)と略す。本siRNA(IIS)を利用した癌治療法に関して、本年度の成果を下記に示す。免疫賦活siRNAをトリガーとしたI型IFNの誘導(in vitro実験)ヒト全血から、Leucosep遠沈管とFicoll-Paque Plus比重液を用いて末梢血単核球(PBMC)を分離し、続いてCD304(BDCA-4)発現を指標として形質細胞様樹状細胞(pDC)をポジティブ単離することに成功した。単離したpDCの純度は82%であった。このpDCに対して、IIS配列を有する4種のsiRNA(siRNA A-D)をリポフェクション法で導入すると、細胞培養上清中にIFN-αが分泌された。pDCによるIFN-α誘導にGM-CSFの添加はそれほど奏功しなかった。また、リポフェクション法を電気導入法にかえると、同IFN-α誘導作用が消失した。ヒト前立腺癌細胞PC-3をIFN-α誘導済pDCと共培養することによって、癌細胞PC-3の増殖が抑制されることを証明した。細胞融合装置を用いて、IFN-α誘導済pDCとPC-3を融合する実験を検討中である。(1)樹状細胞を使った癌治療(細胞療法)ヌードマウス鼠径部皮下に移植して作成した腫瘍(=ヒト前立腺癌由来PC-3腫瘍)に対して、IFN誘導済み樹状細胞(pDC)を注入した。その結果、腫瘍のアポトーシス誘導(TUNEL法による)に成功し、有意な抗腫瘍効果を得た。(2)非免疫細胞(線維芽細胞)に対する癌治療ヒト癌細胞3種(腎癌ACHN、結腸癌COLO201、皮膚黒色腫COLO800:いずれも線維芽細胞由来の癌)を各々ヌードマウス皮下に移植し、腫瘍を作成した。これらの腫瘍に対して、治療実験を試行した。即ち、IFN誘導を起こすsiRNA(siRNA-IIS)を腫瘍に直接注入することにより、有意な抗腫瘍効果を得た。抗腫瘍効果の作用機序が、これらの癌細胞において誘導されたIFN-βによるアポトーシスを介したものであることを証明した。
配位結合で連結する機能性高分子組織体の設計と機能

光合成アンテナ錯体は、クロロフィル集合体を組織化し、成分間の速やかなエネルギー移動により、補足した光エネルギーをリンク構造内に非局在化させ、空間の全ゆる方向へのエネルギー移動を可能にする合目的性を提供している。このような光合成反応に関わる色素を、タンパク質を使わずに組織化する試みとして、ポルフィリンのメソ位置に複数のN-メチルイミダゾールを取り付けた新規化合物を合成した。またキレート配位子として優れた特性を有するヒドロキシキノリンで置換したポルフィリンを合成し、そのGa錯体を調製したところ、その錯体は3量体でmeridional構造を有していることを明らかにした。この錯体についてベンゾキノンを用いてエネルギー移動効率を評価した。Stern-Volmerプロットからエネルギー移動消光を評価すると、Ga錯体は単量体に比べ2.3倍の消光効率を示した。しかし蛍光寿命は両者殆ど同じであり、錯体成分のポルフィリン間で速やかなエネルギー移動が行われ、励起エネルギーの非局在化が起こっていることが示唆された。このエネルギー移動速度を直接評価するため、偏光励起による蛍光アップコンバージョン法を用いて、蛍光異方性の緩和測定を行ったところ、ポルフィリン単量体の異方性の減衰曲線は110psの単一成分を用いて解析されたが、Ga錯体は長寿命成分が170psと長くなると共に、もう1つの12.5psの短寿命成分が存在することが分かった。従って長寿命成分は回転緩和に帰属され、一方短寿命成分は近接するポルフィリン間のエネルギー移動に基づく緩和過程に帰属される。以上の結果から天然と同様なエネルギーの非局在化機構に縦って、光エネルギーの効率的な集光・伝達能を有するアンテナ機能体が組織化されたと結論できた。
マイクロマシーニングによる強力骨組織アンカー型ポーラス インプラントの開発

本研究ではマイクロマシーニングを利用して表面に均一な気孔を形成させることによって強度を有し骨侵入を促進させるインプラントを開発した。表面気孔を多数有するポーラスチタンインプラントをビーグル犬の顎骨に埋入し動物実験を行った。走査電顕で気孔内に新生骨が侵入し成長していることを見出した。表面気孔がアンカー効果として作用するかを調べるために、ポーラスチタンインプラントに樹脂を含浸させトルク試験を行った結果、ノンポーラスインプラントに比べてポーラスチタンのトルク値が3倍も高くなることが分かった。このモデル実験で作製されたポーラスチタンインプラントの固着強度が十分であることが見出された。本研究ではチタンインプラントにサイズと深さを制御した表面気孔を導入して骨組織を再生させ物理的維持を増加させ、歯根膜組織を再生させ咬合力緩衝効果を持たせた限りなく天然歯に近い革新的インプラントを開発することを目的とする。そのためにフォトレジストを用いたマイクロマシーニング法を駆使して形態制御された表面気孔を作製する。ビーグル犬に埋入するためのインプラント部材として直径3mmのチタンの棒材を用いた。このチタン材に金をスパッタ蒸着しその上にレジスト層を均一に塗布する方法を開発した。さらに、チタンロッド全体に均一に露光できる手法を開発した。その結果、チタン表面に気孔径200μm、深さ100150μmの気孔を配列させることができた。ロッド表面は曲面であるが、表面気孔形態を均一に配列させることができたのは画期的なことである。一方、共同研究者大阪歯科大学グループは、この表面気孔を有するチタンロッドをビーグル犬の歯槽骨および大腿骨にドリルで孔をあけて埋入して所定の時間飼育し、その後、歯槽骨および大腿骨に取り付けられたチタンインプラント材をとりだした。その結果、(1)フィルムを用いたチタンロッド曲面へのパターンニング技術を検討し、均一性のよい表面気孔構造を再現性よく作製できたこと、(2)気孔周囲に新生骨が形成され気孔に侵入することが分かったこと、(3)樹脂を埋入したモデル実験によりノンポーラスチタンに比べてポーラスチタンのトルク値は高いことが分かった。このことから表面気孔への新生骨の侵入は固着力を増進させることが分かった。従来のデンタルインプラント(人工歯根)は表面が無垢のため埋入したインプラントの固着が不十分であるという難点があり、インプラントの表面に凸凹をもたせるために表面処理を行っているが、剥離の問題もあり十分に解決していない。この問題を解決するために、本研究では表面に気孔を設けた表面ポーラスチタンインプラントを、フォトレジストを用いた表面パターニングと化学エッチングにより作製する技術を確立することを第1の目的としている。作製されたチタンインプラントをビーグル犬の顎骨に埋入し固着力を詳細に調べ表面ポーラス化のデンタルインプラントへの有効性を検証することを第2の目的としている。フォトレジストを用いた表面パターニングと化学エッチングにより直径200ミクロン、隣接する気孔中心間距離500ミクロンの表面ポーラスチタンを作製した。雄性の3歳のビーグル犬を抜歯、3カ月の治癒後、ノンポーラスチタン材とポーラスチタン材を埋入し、321日間の埋入期間後、取り出し切断してSEMにより断面観察を行った結果、新生骨が表面からチタンの気孔内部に成長していくことが観察された。初期の段階では気孔の底部に空隙が見られたが、時間の経過とともに新生骨に置き換えられていくことがわかった。表面気孔がアンカー効果として作用するかどうかを調べるために作製されたチタンインプラントに樹脂を含侵させトルク試験を行った。その結果、ノンポーラスチタンに比べてポーラスチタンのトルク値が3倍も高いことが判った。従来のデンタルインプラント(人工歯根)は表面が無垢のため埋入したインプラントの固着が不十分であるという欠点があった。そのため表面に凹凸を持たせたプラズマ溶射ポーラス、金属ビーズ処理、ファイバーメッシュコーティングなどが利用されているが、強度が不十分であり、気孔が不定形であるという難点があった。これらの難点を克服するために、本研究ではマイクロマシーニングによって表面に均一な気孔を形成させることによって強度を有する骨侵入の促進させるインプラントの開発を進めた。表面気孔(200ミクロン程度の直径)を多数有するポーラスインプラントをビーグル犬の顎骨に埋入した動物実験を行った。21日、84日後、それらを取り出して走査電顕で、気孔内に新生骨が侵入し成長していることを見出した。それらが新生骨であることはトルイジンブルー染色反応によって確認した。また、増殖した線維芽細胞や骨芽細胞から分泌されたと思われるヒアルロン酸およびコンドロイチン硫酸が組織化学的および免疫組織化学的に確認された。

このことから本研究でインプラント体周囲組織に形成された新生組織は、炎症細胞を含み感染に対処しつつグリコサミノグリカンと共にbarrierを形成し、コラーゲン合成により物理的抗張力を増加させ、さらに収縮することによってインプラントを保持していると期待される。さらに、表面気孔がアンカー効果として作用するかを調べるために、ポーラスチタンプラントに樹脂を含浸させトルク試験を行った結果、ノンポーラスインプラントに比べて、ポーラスチタンのトルク値が3倍も高いことがわかった。このモデル実験で作製されたポーラスチタンインプラントの固着強度が十分であることが見出された。本研究は、ポーラスチタンの作製、動物実験およびトルク試験によるアンカー効果の調査であるが、計画通り順調に進展している判断される。24年度が最終年度であるため、記入しない。研究計画通り順調に進んでいる。本研究内容のポーラスチタンの製法は確立された。また、トルク試験により気孔に充填された媒体によってアンカー効果が生じることも確認された。今後は、動物実験の試験回数を増やした追加実験を実施する計画である。動物実験は個体ごとに有意差を生じる場合があるので、複数回、同一条件下での動物実験を行い再現性あるデータであるかを確認することが必須である。そのために実験を今後行っていく。
オルトゴナルグリコシル化法を用いたブロックタイプセロオリゴ糖誘導体の精密合成

オルトゴナルグリコシル化法により以下の縮合反応を行った。【フルオライドの活性化】Phenyl2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-methyl-(1),Phenyl 2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-benzyl-(2),Phenyl 2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-pivaloyl-β-D-thio-cellobioside(3)をグリコシルアクセプター、4'-0-acetyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-methyl-(4),2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-benzyl-4'-ο-levulinoyl-(5),4'-ο-levulinoyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-pivaloyl-D-cellobiosyl fluoride(6)をグリコシルドナーとして、9通り総ての組み合わせでCpHfCl_2/AgClO_4(1.1equiv./2.2equiv.)を試薬として用い、種々の条件下グリコシル化を行った。その結果、(4)+(1)の組み合わせの場合、α結合、β結合した4量体2種類が得られた。(4)+(2),(4)+(3),(5)+(1),(5)+(2)からはα結合した4量体のみが得られた。【チオフェノールの活性化】2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-methyl-(7),2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-benzyl-(8),2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-pivaloyl-D-cellobiosyl fluoride(9)をグリコシルアクセプター、Phenyl 4'-ο-acetyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-methyl-(10),Phenyl 2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-benzyl-4'-ο-levulinoyl-(11),Phenyl 4'-ο-levulinoyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-pivaloyl-β-D-thio-cellobioside(12)をグリコシルドナーとして、9通り総ての組み合わせでNIS/AgOTf(1.4equiv./cat.)を試薬として用い、種々の条件下グリコシル化を行った。その結果、(10)+(7),(10)+(8)の組み合わせで、α結合、β結合した4量体2種類がそれぞれ得られた。(10)+(9),(11)+(7)の組み合わせからはα結合した4量体のみが得られた。以上の結果から、メチル化セロビオース誘導体は合成ブロックとしてオルトゴナルグリコシル化法に適しているものの、ベンジル誘導体は立体的な要因で、ピバロイル化誘導体は電子的、立体的要因で適さないことが示唆された。4種の合成ブロックの合成、オルトゴナルグリコシル化の基礎反応を本年度行った。(1)合成ブロックとしてのセロビオース誘導体のデザインおよびその合成Phenyl 2,3,6,2',3',6'-hexa-benzyl β-D-thio-cellobioside(1)セロビオースを出発原料にして、アセチル化、チオフェニル化、脱アセチル化、ベンジリデン化、ベンジル化、6'位へのベンジリデン基の還元開裂を経てメチル基を有さない合成ブロックを合成した。Phenyl 4'-benzyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-methyl β-D-thio-cellobioside(2)化合物1と共通ルートによって、Phenyl 4'. 6'-benzylidene β-D-thio-cellobiosideを合成した。その後、ベンジリデン化、メチル化、4'位へのベンジリデン基の還元開裂、メチル化を経てメチル基を有さない合成ブロックを合成した。この合成ブロックはチオフェニル基を有した状態での接触還元によるベンジル基の除去が困難であった。Phenyl 4'-p-methoxybenzyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-methyl β-D-thio-cellobioside(3)化合物1,2と同様のルートに従って合成したPhenyl β-D-thio-cellobiosideをパラメトキシベンジリデン化、メチル化、4'位へのベンジリデン基の還元開裂、メチル化し、メチル基を有する合成ブロックを合成した。Phenyl 4'-p-methoxybenzyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-pivaloyl β-D-thio-cellobioside(4)化合物3と同様のルートに従って合成したPhenyl4'.6'-p-methoxybenzylidene β-D-thio-cellobiosideをピバロイル化、4'位へのベンジリデン基の還元開裂、ピバロイル化し、メチル基を有さない合成ブロックを合成した。この合成ブロック4は化合物1とは異なるアシル基で水酸基が保護されており、隣接基関与により立体規制が容易であることが期待される(2)チオフェニル基のフルオライド基への変換一般にチオフェニルグリコシドは可逆的にフルオライドに変換可能である。

そこで、チオフェニルグリコシドをN-ブロモスクシンイミド(NBS)・ジエチルアミノサルファートトリフルオリド(DAST)を用いてフルオライドに変換できることを確認した。オルトゴナルグリコシル化法により以下の縮合反応を行った。【フルオライドの活性化】Phenyl2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-methyl-(1),Phenyl 2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-benzyl-(2),Phenyl 2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-pivaloyl-β-D-thio-cellobioside(3)をグリコシルアクセプター、4'-0-acetyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-methyl-(4),2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-benzyl-4'-ο-levulinoyl-(5),4'-ο-levulinoyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-pivaloyl-D-cellobiosyl fluoride(6)をグリコシルドナーとして、9通り総ての組み合わせでCpHfCl_2/AgClO_4(1.1equiv./2.2equiv.)を試薬として用い、種々の条件下グリコシル化を行った。その結果、(4)+(1)の組み合わせの場合、α結合、β結合した4量体2種類が得られた。(4)+(2),(4)+(3),(5)+(1),(5)+(2)からはα結合した4量体のみが得られた。【チオフェノールの活性化】2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-methyl-(7),2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-benzyl-(8),2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-pivaloyl-D-cellobiosyl fluoride(9)をグリコシルアクセプター、Phenyl 4'-ο-acetyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-methyl-(10),Phenyl 2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-benzyl-4'-ο-levulinoyl-(11),Phenyl 4'-ο-levulinoyl-2,3,6,2',3',6'-hexa-ο-pivaloyl-β-D-thio-cellobioside(12)をグリコシルドナーとして、9通り総ての組み合わせでNIS/AgOTf(1.4equiv./cat.)を試薬として用い、種々の条件下グリコシル化を行った。その結果、(10)+(7),(10)+(8)の組み合わせで、α結合、β結合した4量体2種類がそれぞれ得られた。(10)+(9),(11)+(7)の組み合わせからはα結合した4量体のみが得られた。以上の結果から、メチル化セロビオース誘導体は合成ブロックとしてオルトゴナルグリコシル化法に適しているものの、ベンジル誘導体は立体的な要因で、ピバロイル化誘導体は電子的、立体的要因で適さないことが示唆された。
鈍い後縁を持つ翼の高亜音速流中での特性に関する研究

研究はゲッチンゲン風洞(測定断面1m×1m、風速30m/sにて)とショックチュ-ブ(60mm×120mm、マツハ数0.6にて)で行った。風洞模型はNACAOO12断面、スパン0.75m、翼弦長0.15mの木製翼と後縁を翼弦長の10%だけ切断した翼、ショックチュ-ブ実験では翼弦長100mmの上記断面の翼、10%、20%切断した後縁の鈍い翼、後縁に円みを付けた翼、後縁に分割板を入れたもの、鈍い後縁に凹凸を付けたもの等を用いた。測定には6分力天びん、シェリ-レン法、マッハツェンダチ渉計、エレクトロニックカウンタ、遅延回路、動ひずみ計、ディジタルオシロスコ-プその他の電子式計測装置が用いられた。得られた結果の主なものはつぎの通りである。1.翼型後縁より下流の流れの発生の初期において、孤立した渦が発生する都度円形の音波が発生する。この渦と音波の関係が可視化された。渦の発生は後縁が厚い場合ほど顕著である。2.ショックチュ-ブの入射衝撃波が後縁に達した直後から、強い円形衝撃波の発生が認められた。その精しい挙動は今後さらに研究を進めていく予定である。3.揚力係数と揚力傾斜は後縁を切断した翼の方が大きい。その原因は翼後縁の下縁近くの点が後部岐点となり、従って、後縁の鈍い翼よりも翼周りの循環が大きくなる為であろうということがシュリ-レン写真により推測された。4.後縁より下流の流れが生じて相当時間が経過した時点で,凹凸の後縁、円い後縁、仕切板の有る後縁の翼では、後流中に孤立渦はほとんど認められず、後縁は鈍くても、このような形の後縁を持つ翼では、抗力や騒音の低下が期待されることが分かった。本研究により、鈍い後縁の翼の後流の時間的な変化が若干明らかにになり、種々新らしい知見が得られた。今後さらに研究を進め、できるだけ早く学会に報告したいと考えている。
歴史認識の形成に関する人類学的研究：南北エチオピア、ライヤにおける口承史比較分析

昨年度は、現地調査と文献研究及び、論文執筆を行った。現地調査では、エチオピア南東部において、16世紀以前に全滅したと言われているハラッラと呼ばれる民族集団がアラビア語で書き記したとされる歴史書について調査を行った。通称『ハラッラ文書』は、もともとエチオピア南東部の村落地域にあるいくつかの古いモスクに所蔵されていたものが、年月を経るうちに、個人の手に渡って密かに所有されていた。今回の調査で『ハラッラ文書』とされる皮製の文書を二点ほど発見し、記録を取った。現地のシャイフやアラビア語を専門とする文献学者とともに内容を確認したところ、古い『コラーン』とその注釈であることは分かった。文献研究においては、『皇帝年代記』やイエスズ会史料の収集とその解読作業を行った。『皇帝年代記』とは13世紀から19世紀に至るまでの間にゲエズ語で書かれた年代記であり、エチオピア北部に成立したキリスト教王国の歴代の皇帝の御世に起こった出来事を記した文書である。イエスズ会史料とは、16世紀にイエスズ会の宣教師がエチオピアを訪れた際の旅行記である。イエスズ会史料はポルトガル語、皇帝年代記はゲエズ語からドイツ語、フランス語、イタリア語等に翻訳されており、申請者は、それらの文献の中から研究対象であるオロモ語系諸集団に関する記述について調査してまとめた。これまでの成果をまとめて、二本の研究論文の執筆を行った。一つは、一昨年度から執筆してきたオロモ語系諸集団ライヤの移住史に関する論文に昨年度行った『皇帝年代記』等の文献研究の成果を反映させて完成させた論文である。二つ目は、ライヤが移住を始める16世紀以前にエチオピア北東部一帯に居住していた複数の先住民に関する歴史について考察した論文である。この二つの論文は、仕上げを行い、早晩学術雑誌に投稿する予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。昨年度は、本研究の目的の一つである18世紀にエチオピア北部と南部に分裂して居住するようになったライヤの人々がそれぞれ北部と南部でたどった約2世紀の歴史を再構成するために、南部のライヤの居住地域であるオロミア州バーレ県において口頭伝承の収集および録音を行なった。昨年度に収集した伝承に加え、さらに2012年より収集及び録音してきた同地域及び、ティグライ州南部地域に暮すライヤの口頭伝承をすべてまとめて、テープおこしを行ない、そうしてできた現地語テクストを日本語に翻訳するという作業を行った。その際、テープおこしは、オロモ語を母語とするガルガロ・ダラッチャに依頼した。出来上がったオロモ語のテクストを日本語に翻訳する際は、オロモ語を母語とするアンガース・ローバの協力を得て、わからない語彙や伝承の背景となっている文化に関してオロモ語でやりとりしながら、私自身が理解を深めつつ、邦訳をおこなった。その結果、世界で初めて同地域における移住、紛争、天災に関する歴史、法や社会組織に関する伝承、歴代のリーダーや予言者あるいは宗教的指導者たちの伝承などを収録した第一次史料の作成に成功した。その分量はワードファイルおよそ900頁に及ぶ。これにより、今後、申請者が本研究を進めていくことが可能になっただけでなく、この第一次史料そのものが人類学、歴史学、言語学などの分野において、他の研究者が研究を行っていく際の一つのデータとして寄与することができるだろう。また、20世紀から現在にいたるエチオピア全体にわたる政治的経済的変化の下で、消えゆく言語、慣習、伝承などの無形の文化財を文字化によって記録することで、同地域に暮す次世代へと伝える一つの助けになるだろう。第一に本研究の最重要データである、ティグライ州南部地域とオロミア州バーレ県に居住するライヤの人々の口頭伝承がそれぞれ収集され、現地語テクストの作成とその翻訳が完了し、ワードファイル900頁に及ぶ第一次史料を獲得することができたからである。この作業が昨年度完了したことにより、この第一次史料にもとづいて論考を展開させ、論文の執筆が可能になるとともに、本年度においてさらに発展した現地調査を進めることが可能となった。本研究の目的は、1)エチオピア北部と南部に離れて暮らすライヤの人びとの歴史を叙述すること、2)それぞれの社会で収集した口頭伝承を比較考察しながら、歴史記憶や歴史認識の形成のあり方について明らかにすることである。昨年度は、ライヤの移住伝承をもとに、これまで調査してきたティグライ州南部、バーレ県東部のみならず、シャワ県東部、アムハラ州東部においてフィールドワークを実施し、同地で暮らすライヤの人びとを新たに発見した。さらに、それらの複数地域を踏査し、移住伝承を収集しながら、ライヤの移住の時期や移住の経路を同定することができた。ライヤの人びとは、14世紀前後から18世紀までの間にエチオピア北部と南部を複数回往復する形で移住を行ってきたことがわかった。これは当初申請者が考えてきた17世紀におけるエチオピア南部から北部への一回きりの移住という仮説や、これまでのエチオピア史の中でいわれてきたような16世紀における南部から北部への突然の大移動という歴史像をぬりかえるものとなった。さらに、申請者は複数地域を踏査する過程で各地で伝承の聞き取りを行い、録音した。これらのデータは今年度において、文字おこしや翻訳を行う予定である。そして、これまでティグライ州南部やバーレ県において収集し、すでに同様の作業を経てテクスト化している口頭伝承と合わせて比較的に分析をおこなっていく。