hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
肥満脂肪組織におけるメタボリックマップの構築～尿酸代謝と脂肪細胞機能異常～

我々はヒト高尿酸血症が内臓脂肪蓄積と強く連関していることを報告してきたが、本研究ではマウスモデルを用いて脂肪組織の意義について検討した。マウス肥満脂肪組織では尿酸産生酵素XORの活性が亢進していた。またマウス脂肪細胞から尿酸が産生・分泌されることを初めて見出し、肥満脂肪組織で尿酸産生・分泌亢進することを論文報告した。またアミノ酸含め、多くの代謝物が肥満脂肪組織で変動していることを見出し、脂肪細胞機能異常と関わっている可能性がある。平成25年度の研究において、1)肥満モデルマウスの血清尿酸値が高値であり、XOR阻害剤投与で低下すること、2)脂肪組織が非常に高いXOR活性を有する臓器であること、そして肥満に伴いその活性がさらに亢進すること、3)成熟脂肪細胞が尿酸を産生・分泌すること、4)脂肪組織を実験的に虚血状態にしたときに脂肪組織局所での尿酸分泌が亢進し、それは血中濃度に影響しうるポテンシャルがあること、5)器官培養実験で、肥満モデルマウス由来の脂肪組織が対象マウスの脂肪組織より高い尿酸分泌能を有すること、6)低酸素状態により、脂肪細胞よりの尿酸分泌が亢進すること、を明らかにした。以上のデータを投稿し、J.Biol.Chem.に投稿し、revise実験を経て、受理されpublishされた(Tsushima Y, Nishizawa H, et al. J.Biol.Chem. 2013)。これらのデータは、肥満脂肪組織で核酸・尿酸代謝が亢進していることを示唆している。肥満脂肪組織で活発となっている尿酸産生の意義と、糖代謝、脂質代謝、アミノ酸代謝との関連を明らかにするため、肥満モデルマウスとコントロールマウスの脂肪組織のメタボローム解析を実施した。肥満に伴い多くの代謝物(メタボローム)が変化していることが明らかとなり、変化が顕著であった代謝物を直接定量し検証した。これらの肥満脂肪組織で変動が顕著であった代謝物の脂肪組織での意義を代謝異常のみならず脂肪組織機能異常(アディポサイトカイン産生異常など)との関連を明らかにするため実験を開始した。平成24年度の研究において、1)脂肪組織がXOR活性が非常に高い臓器であること、そして肥満に伴いその活性がさらに亢進すること、2)XORのみならず核酸尿酸代謝にかかわる酵素群の遺伝子発現が肥満に伴い上昇すること、3)脂肪細胞が尿酸を産生し、分泌する能力があること、を見出した。現在上記データを第46回日本痛風・核酸代謝学会総会にて口演で報告し、現在論文にまとめて投稿予定である。また肥満モデルマウスとコントロールマウスの脂肪組織のメタボローム解析を実施した。肥満に伴い多くの代謝物(メタボローム)が変化していることが明らかとなり、変化が顕著であった代謝物を直接定量し、検証を開始した。現在、肥満脂肪組織で活発となっている尿酸産生の意義と、糖代謝、脂質代謝、アミノ酸代謝との関連、また脂肪組織機能異常(アディポサイトカイン産生異常、慢性炎症、酸化ストレスなど)との関連を明らかにするため実験を開始した。昨年度、マウス脂肪組織、成熟脂肪細胞で尿酸が産生・分泌され、それらが肥満モデルマウスで亢進していることを報告した(Tsushima Y, Nishizawa H et al. J.Biol.Chem. 2013)。このことは、肥満時の高尿酸血症に対して、直接脂肪組織が関与する可能性をマウスモデルで示したものである。本年度は、本研究で得られた上記知見をヒトで検証するため、肥満外科手術例、肥満および普通体重者に対する腹部手術例由来の内蔵脂肪および皮下脂肪の検体採取につき、当院倫理審査委員会で承認を得、検体採取および、パイロットスタディを開始し、ヒト脂肪組織器官培養由来の培養液からプリン代謝物が検出されることを確認した。今後症例数を積み重ね再現性含め検証予定である。また、上記研究は、肥満脂肪組織でプリン代謝が亢進していることを示すもので、これまで脂肪細胞でされてきた糖・脂質代謝よりもっと広く肥満脂肪組織では代謝異常が惹起されている可能性が考えられる。そこで網羅的に代謝物含量の肥満脂肪組織での変動をメタボローム解析により検討したところ、TCAサイクル周辺の代謝物やグルタミン酸をはじめ各種アミノ酸含量が大きく変動していることを見出だした(2015年5月学術集会にて発表予定)。これらのアミノ酸を脂肪細胞に添加するとアディポネクチンの分泌に影響を与えることがわかり現在検証中である。さらにこれらの代謝物の変動が、1)脂肪組織内部で積極的に起こって血中に影響を及ぼしているのか、または、2)消化管→血液から脂肪組織への流入によって起こっているのかを検討する目的で、安定同位体を用いた代謝動態解析と、各種代謝物のトランスポーターの変動に着目しての検討を開始した。本研究課題は本年度で終了するが、引き続き平成27年度より基盤C(課題番号:15K09412)で検討をさらに進めて行く予定である。

医歯薬学本研究の目的は肥満脂肪組織の代謝異常を明らかにすることだが、初年度は、これまで全く明らかとなっていない脂肪組織の核酸・尿酸代謝に焦点を絞って研究を開始し、上記のように新規の知見が明らかとなり、昨年度論文報告できた。さらに最近進歩が目覚ましいメタボローム解析の手法を脂肪組織に応用できるか検討を行い、脂肪組織でメタボローム解析が可能であること、また肥満マウス脂肪組織とコントロールマウスとの間の比較で代謝物の変化をとらえられることがわかった。以上のことから当初の計画通りおおむね順調に経過していると判断している。本研究の目的は肥満脂肪組織の代謝異常を明らかにすることだが、初年度は、これまで全く明らかとなっていない脂肪組織の核酸・尿酸代謝に焦点を絞って研究を開始し、上記のように新規の知見が明らかとなり、論文報告するため準備中の段階まで来ている。さらに最近進歩が目覚ましいメタボローム解析の手法を脂肪組織に応用できるか基礎検討を行い、脂肪組織でメタボローム解析が可能であること、またpreliminaryではあるが、肥満マウス脂肪組織とコントロールマウスとの間の比較で代謝物の変化をとらえられることがわかった。次年度は、核酸尿酸代謝と糖・脂質・アミノ酸代謝との関連や、脂肪組織機能異常との関連について検証していく準備が整った。以上のことから当初の計画通りおおむね順調に進展していると判断している。最終年度は、上記変動の大きい候補代謝物の脂肪組織での意義(脂肪細胞機能異常との関連)を明らかとすること、および核酸尿酸代謝と糖・脂質・アミノ酸代謝との関連をメタボローム解析スナップショットのみならず安定同位体を用いた動態解析を行い、代謝の流れを検討し、その代謝経路が活性化しているのか検討することを目指す。本年度は、全く明らかとなっていなかった脂肪組織の核酸・尿酸代謝を検討し、肥満脂肪組織で尿酸が産生・分泌されることを明らかにしたが、それが肥満に伴いどう変化するのか、さらには、メタボローム解析の手法を用いて、核酸尿酸代謝と糖・脂質・アミノ酸代謝との関連を明らかにしていき、代謝異常全般をとらえれるように発展させていく。またその代謝異常とアディポサイトカイン産生異常、脂肪組織慢性炎症、脂肪組織酸化ストレスなどの脂肪組織機能異常との関連について検証していく。該当なし
ヒト肝細胞におけるC型肝炎ウイルスレセプターの同定と感染制御

C型肝炎ウィルス(HCV)の外側のエンベロープ蛋白(E1、E2)の培養細胞での発現系を構築し、部分精製を試みた。まずジェノタイプ1b型でウイルス量の多い患者血清よりC型肝炎ウイルスのRNAを抽出した。そのRNAより、逆転写酵素を用いてcDNAを合成し、特異的プライマーを用いてPCRをおこなうことでE1、E2遺伝子を増幅し、発現ベクターに組み込んだ。シークエンスを確かめた後、6xHisTagをつけたエンベロープ蛋白(E1、E2)をCOS7細胞に導入して、抗体でその発現を確認した。E2蛋白のうちC末を削ったアミノ酸661までのもののみが分泌型であり、6His-TagによりNiカラムとのaffinityで部分精製できた。現在ヒト肝ライブラリーを使い、結合蛋白の発現スクリーニングをおこなっている。またHCVのレセプターの候補分子として報告されたCD81に関しては、ヒト遺伝子をlibraryよりPCRでクローニングし、発現ベクターに組み込んだ。COS7細胞に導入した後、細胞表面への発現をFACscanと免疫染色により確認した。このヒトCD81発現COS7細胞に、ウイルスの存在する血清を加えて培養した。時間経過を追って細胞とその上清についてRT-PCRを用いでHCVのマイナス鎖の検出を試みたが、現在のところ再現性のある有意な所見は得られていない。HIVと同様なco-receptorが存在する可能性等があるものと思われる。C型肝炎ウイルスの外側のエンベロープ蛋白(E1、E2)の培養細胞での発現系を構築し、どの部分がヒト細胞膜上のレセプターとの結合に関与するかを検討する。まずセロタイプ1型でウイルス量の多い数人の患者血清よりC型肝炎ウイルスのmRNAを抽出した。そのmRNAより、逆転写酵素を用いてcDNAを合成し、遺伝子型に応じたプライマーを用いてPCRをおこなうことでE1、E2遺伝子を増幅した。PCR産物を発現ベクターに組み込んでクローニングし、シークエンスを確認した。6xHisTagをつけたエンベロープ蛋白(E1、E2)をCOS7細胞に導入して、抗6xHis抗体でその発現を確認することができた。また発現蛋白を6HisTagによりNiカラムとのaffinityで部分精製した。現在蛋白の収量を増やすべく検討している。ヒトリンパ球系の細胞であるMolt4は、C型肝炎ウイルスが感染する可能性が報告されており、レセプターを細胞表面にもつと考えられている。この細胞と精製したエンベロープ蛋白(E1、E2)を混合し、6xHisTagに対する抗体を用いFACscanにより、結合性を確認する予定。また最近レセプターの候補分子として報告されたCD81に関しては、ヒト遺伝子をlibraryよりPCRでクローニングし、発現ベクターに組み込んだ。これをCOS7細胞に導入してFACscanにより細胞表面に発現していることを確認した。時間経過を追って細胞とその上清についてRT-PCRを用いてHCvirusのnegative strandの検出を試みたが、現在のところ有意な所見は得られていない。HIVと同様なco-receptorが存在する可能性もあるものと思われる。まずセロタイブ1型でウイルス量の多い数人の患者血清よりC型肝炎ウイルスのmRNAを抽出した。そのmRNAより、逆転写酵素を用いてcDNAを合成し、遺伝子型に応じたブライマーを用いてPCRをおこなうことでE1、E2遺伝子を増幅した。現在蛋白の収量を増やす検討をおこなっている。

ヒトリンパ球系の細胞であるMolt4は、C型肝炎ウイルスが感染する可能性が報告されており、レセプターを細胞表面にもつと考えられている。この細胞と精製したエンベロープ蛋白(E1、E2)を混合し、6xHisTagに対する抗体を用いFACscanにより、結合性を確認しつつある。レセプターの候補分子としてscienceに報告されたCDB1に関しては、ヒト遺伝子をlibraryよりPCRでクローニングし、発現ベクターに組み込んだ。これをCOS7細胞に導入してFACscanにより細胞表面に発現していることを確認した。このヒトCDB1発現COS7細胞に、ウイルスの存在する血清を加えて培養した。時間経過を追って細胞とその上清についてRT-PCRを用いてHCvirusのnegative strandの検出を試みたが、有意な所見は得られなかった。全く別のreceptorが存在する可能性やHIVと同様なco-receptorが存在する可能性が高いものと思われる。
中世初期ポー河デルタ近隣における集落間の社会経済的関係の解明

イタリア半島東部アドリア海沿岸北部のポー河デルタとその近隣地帯は、ポー河およびその支流、またレノ川の河川航行が、海路および陸路と接続する地域である。本研究は、文献史料に基づく従来の研究に加え、中世古学研究の新しい成果を取り入れて、10世紀までのヴェネツィア、コマッキオ、ラヴェンナといった在地の中心的集落のそれぞれの特徴と、河川航行による商業および相互の政治関係、製塩業をめぐる競合関係を明らかにする。ヴェネツィアについては、在地集落が抜きんでる際の、貨幣製造のもつ経済的求心性と政治的威信の効果を検出する。
喉頭における自律神経系受容体の時間特異的発現と時計遺伝子による制御機構の解明

マウス喉頭におけるコリン作動性ムスカリンレセプターおよびアドレナリンレセプターの発現について、免疫組織化学法、realtime PCRを用いて検討を行った。ムスカリンレセプターの5つのサブタイプ(Chrm15)のうちChrm2,Chrm3が喉頭腺細胞に、アドレナリンレセプターの9つのサブタイプ(Adra1a,a1b,a1d,a2a,a2b,Adra2c,b1,b2,b3)のうちAdra2aが上頸神経節に発現していた。発現をみとめたレセプターについて、real-time PCRを用いて時間特異的発現の有無につき解析を行ったが、その発現に有意な概日リズム(日内変動)は確認できなかった。喉頭の重要な機能として、発声、呼吸、嚥下などが挙げられるが、これらの機能を保持するためには喉頭粘膜が湿潤に保たれている必要がある。喉頭腺による粘液分泌はこのために重要な役割を担っている。喉頭の腺分泌は自律神経によって支配されており、交感神経系においてはアドレナリン、副交感神経系においてはアセチルコリンが神経伝達物質として主要な役割を担っている。しかし神経伝達物質の受容体の分布については詳細な報告はなされていない。マウス喉頭におけるコリン作動性ムスカリンレセプターおよびアドレナリンレセプターの発現について、免疫組織化学法を用いて検討を行った。ムスカリンレセプターの5つのサブタイプ(Chrm15)のうちChrm2,Chrm3が喉頭腺細胞に発現していた。アドレナリンレセプターの9つのサブタイプ(Adra1a,Adra1b,Adra1d,Adra2a,Adra2b,Adra2c,Adrb1,Adrb2,Adrb3)は、いずれも喉頭内神経節および喉頭腺細胞に陽性細胞を認めなかった。交感神経系の節後神経である上頸神経節にAdra2a陽性細胞を認めた。喉頭腺細胞に発現をみとめたムスカリンレセプターChrm2、Chrm3について、realtime PCRを用いて時間特異的発現の有無につき解析を行ったが、その発現に有意な概日リズム(日内変動)は確認できなかった。本研究は、喉頭における自律神経系受容体の時間特異的発現(リズム)の有無を検討し、またリズム伝達機構が神経性によるものか否かを明らかとし、視交叉上核に存在する中枢時計と喉頭末梢時計の同調物質の解明を目的として喉頭腺分泌を対象とした研究を行うものである。マウス喉頭における自律神経系レセプター(コリン作動性ムスカリン受容体およびアドレナリン受容体)の発現パターンについて、免疫組織化学法を用いて検討を行った。コリン作動性ムスカリン受容体にはサブタイプが5つ(Chrm15)、アドレナリン受容体にはサブタイプが9つ(Adra1a,Adra1b,Adra1d,Adra2a,Adra2b,Adra2c,Adrb1,Adrb2,Adrb3)存在することが知られている。交感神経系、副交感神経系それぞれの節後神経である上頚神経節細胞、喉頭内神経節細胞におけるこれらの受容体の発現を、免疫組織化学法を用いて検討したところ、上頚神経節にAdra2a陽性細胞を認めた。喉頭内神経節には陽性細胞を認めなかった。上頚神経節でのAdra2a受容体陽性細胞の発現について概日リズムの有無を検討したが、明確なリズムはみられなかった。マウス肺において時計遺伝子が発現し、ムスカリン受容体(Chrm2,Chrm3受容体)遺伝子の発現にリズムが存在することが判明している。免疫組織化学法では確認できなかったムスカリン受容体の、マウス喉頭での発現と概日リズムの有無につきrealtime PCRを用いて解析を行っている。現在のところ、喉頭における自律神経系受容体の発現は認めたものの、想定していた概日リズムは確認できていない。また、迷走神経背側核(副交感神経系の節前神経)における受容体の発現についても検討項目の一つとして予定していたが、未施行である。コリン作動性ムスカリン受容体およびアドレナリン受容体の遺伝子レベルでの発現と概日リズムの検討方法としてnorthern blotting法を予定していたが、マウス喉頭粘膜から抽出可能なtotal RNAが極微量であるため同法での解析は困難であることが判明した。そのため、realtime PCRを用いた解析方法に変更して研究を行っている。時間特異的発現が確認できた受容体について、下記の研究を行う予定である。<自律神経傷害モデルマウスでの気道分泌量及び受容体発現の経時的な変化について>ラット気道分泌の定量を行うため、麻酔下に気管切開術を施し、マイクロピペットにて分泌液を採取する。さらに迷走神経切断を行い分泌量の変化を経時的に測定する。

また喉頭腺内のムチンをAlcianblue-PAS染色にて観察し神経切断後の変化を調べる。喉頭腺、喉頭上皮、喉頭内神経節、上頚神経節、迷走神経背側核における受容体の発現が自律神経傷害後にどのように変化するか経時的に調べる。実験動物購入費・飼育費、抗体購入費用、mRNA抽出キット購入費用、プローブ作成費用等
自伝的記憶の想起体験における主観的側面の探索的研究

既視体験とプルースト現象についての質問紙調査と半構造面接調査を実施し、自伝的記憶の想起体験について探究した。既視体験の分析より、自伝的記憶の確信度と精神病理に対する「守り」の機能の関連が示唆された。また、プルースト現象の分析より、臨床場面で生じる記憶想起体験は不完全な想起が生じやすいことが明らかになった。それはこころに未だ統合されていない部分の「私」の記憶が訪れた瞬間であると考えられ、治療的契機として重要であることが示唆された。臨床場面において、来談者が自伝的記憶を想起し追体験する現象について、認知的側面および主観的側面の二側面から明らかにすることを目的とした調査研究を実施した。当該年度はその二年目であり最終年度であった。当初の計画通り、第二調査を一年間かけて実施することができた(12名中、1名だけ都合により調査を辞退したため、調査対象者は11名分のデータとなった)。そして、量的データ(質問紙調査データ)は統計的分析を行い、質的データ(インタビューデータ)はテキスト化し、臨床心理的観点からの読解を試み、その成果は論文としてまとめられた。今年度の調査では、月に1回の半構造化面接調査を1年間継続して実施し、既視体験(デジャヴュ体験)やプルースト現象など、自伝的記憶の想起にまつわる多様な体験について聴取することができた。この方法により、1か月以内に体験した新鮮な素材を扱うことができ、想起した瞬間の心身の状態および主観的側面について詳細に聴取することができ、貴重な資料となった。一方で、体験直後にはその体験の意味が明らかになるのではなく、数か月後にやっとその意味が浮かび上がってくるという興味深いデータも得られており、臨床場面における自伝的記憶想起の特徴を考えるうえで示唆的な結果が得られた。また、プルースト現象の語りを分析したところ、先行研究と同様に、人生早期の記憶を想起する人が約半数いた一方で、時期を特定できない記憶を想起する人もまた約半数おり、その自伝的記憶は、その人のファンタジー(幻想・空想)を含む可塑的なものである可能性も示唆された。しかしこの結果は11名というごく少数のデータからの結果であり、今後はより多数のデータ収集によって精査する必要があると考えられた。総括として、これまであまり注目されてこなかった「曖昧な自伝的記憶」の想起の特徴について、一定程度明らかにすることができたと考えられる。臨床場面における、来談者が自伝的記憶を想起し追体験する現象について、認知的側面および主観的側面の二側面から明らかにすることを目的とした調査研究を実施している。当該年度はその一年目にあたり、予備調査、第一調査の実施と分析、および第二調査の実施を行なう計画となっており、計画通りに実施することができた。予備調査においては、大学生および大学院生20名に質問紙調査を実施し、第一調査で使用する「記憶の想起体験に関する調査票」を作成した。分析の結果、外傷的記憶を想起させる可能性がある項目を削除するなど、調査協力者の心理的負担にならないよう工夫を行なうことができ、有意義な予備調査となった。第一調査においては、大学生176名(男性64名、女性111名、性別無記入1名;平均年齢19.3歳)に質問紙調査を実施した。分析の結果、1)プルースト現象と既視体験の頻度には弱い正の相関が見られること、2)離人感をしばしば体験する人ほど、プルースト現象の頻度が高いこと、3)離人感の一部が既視体験の頻度に関連することが明らかになった。これらの結果は調査協力者に文書にてフィードバックを行なった。第二調査においては、大学生12名に面接調査を実施した。2012年6月までの継続実施であるため、結果は未分析であるが、中間報告として日本心理臨床学会での口頭発表を1回行ない、紀要論文1本の執筆を行なった。この調査により、質問紙調査だけでは明らかにならなかった、記憶想起体験の主観的側面について聴取することができている。臨床心理学の立場による自伝的記憶研究を行なうことにより、これまでは認知科学による枠組みの中で扱われることが多かった自伝的記憶研究に対し、臨床心理学的な視点を提供すること、そしてその視点をもとに、臨床場面における来談者の自伝的記憶想起体験の諸相を明らかにすることが本研究の大きな目的である。その目的に照らすと、まず本研究は実施計画どおりに予備調査、第一調査の実施と分析を行ない、第二調査を実施できていることから、おおむね順調に進展しているといえる。そして、調査の分析を通して、プルースト現象や既視体験などの記憶に関連する体験が、離人感と関連することを新たに見出した。さらに、面接調査における調査協力者の語りデータからは、「自伝的記憶についての確信度」が記憶に関する体験の頻度に影響を与えていることが示唆されている。例えば、既視体験を体験したことがあると言う人は、自伝的記憶についての確信度が低い一方で、既視体験を体験したことがないと言う人は、自伝的記憶についての確信度が高いという結果が示唆されている。

次年度も調査を継続し、既視体験以外の記憶現象についても、この傾向が見られるかどうかを精査する必要があるが、ここにおいて「自伝的記憶についての確信度」という新たな指標が得られたことは今年度の大きい成果であると考えられる。「自伝的記憶についての確信度」という指標は、臨床心理学的な視点として重要であると考えられる。現在おおむね順調に進展しているため、次年度も研究実施計画どおりに進展させる予定である。具体的には、第二調査(個別面接調査)を2012年6月まで実施し、同年7月に量的データの統計的分析、8月から9月にかけて質的データの分析を実施する。2012年9月に、第三調査として、個別面接調査を実施し、第一調査と第二調査のフィードバックを行ない、一年間の振り返り面接を実施する。そして、第一調査時と同様の調査票を実施し、調査協力者のコンディションの変化を測定する。その変化の程度と、1年間の体験の変化とが対応しているかを検討する。これらの調査結果をまとめ、成果発表を行なう。具体的には、出版予定の著書の一部として公表することを予定している。次年度は、二年計画の最終年度にあたる。調査終了にあたっての調査協力者への謝礼や、調査結果をまとめるための人件費・謝金が多くかかることになる。また、成果発表および情報収集のための若干の旅費と、成果をまとめるための図書費用として若干の物品費が必要になる。
グッピーにおける雌配偶者選好性の個体間変異と可塑性の進化機構の解明

グッピーを用いて、成育時の光環境とカロテノイドの影響に焦点を当て、遺伝子型の変異とDNAメチル化によるエピジェネティックな変異が雄の体色に対する雌の配偶者選好性の個体間変異に与える影響を調べた。オプシン遺伝子の発現量は、光感受性と雄体色に対する雌の選好性に影響し、その発現量は、成育時の光環境とオプシン遺伝子LWS-1の遺伝子型との交互作用によって影響されることがわかった。またオプシン遺伝子の発現量の遺伝子と環境との交互作用は、DNAメチル化率によるものと示唆された。βカロテン高摂取により、目では、光順応に関する遺伝子が、脳では、神経伝達に関係する遺伝子においてDNAメチル化が増加した。(1)色覚が雌選好性に与える影響:LWS-1の180番目のアミノ酸変異により吸収波長が長波長にシフトしているアレルをホモ接合でもつ個体(SS)と短波長にシフトしているアレルをホモで持つ個体(AA)を、異なる光環境(緑、オレンジ、白色)で育て、オプシンの発現量と光感受性および雌の雄のオレンジスポットに対する選好性の影響を調べた。その結果、オレンジおよび白色光でそだったLWS-1の遺伝子型SS型の個体は、600nmの光感受性が高かったが、逆に緑色光で育ったs型個体の感受生は下がった。光環境によって、特にLWS-1および3の発現量が変化し、その発現量が、光感受性に影響していることがわかった。また、オレンジスポットの大きい雄と小さい雄の画像をみせ、オレンジスポットに対する雌の選好性を調べた。その結果、LWSおよびSWSの発現量と雌の選好性の関係に有意な関係が視られた。このことか、LWS-1および3の発現量およびそれによって影響される雌の選好性は、生育時の光環境とLWS-1の遺伝子型の交互作用によって影響されることがわかった。(2)雄のオレンジ体色と雌の選好性に関わる遺伝子を検出するために、オレンジスポットの大きい雄とオレンジスポットを選好する雌を交配させる系統と、オレンジスポットの小さい雄とオレンジスポットに対する選好性の小さい雌を交配させた系統を5世代まで作成してきた。その系統間で交配を行いF1世代の個体を作成した。さらに、F1世代をランダムに交配させ、オレンジスポットの大きい個体20-30匹と小さい個体20-30匹、また、同様に、オレンジスポットに対する選好性の強い雌20-30匹と弱い雌20-30匹を選抜するためのF2個体を作成した。色覚が雌選好性に与える影響については順調に進み、重要な結果が得られた。選好性に関するゲノム領域特定のためのQTL-seqを行うための個体サンプル数が足らなかったため、追加の交配を行なったために、予定より遅れた。しかし、その後は順調に経過している。性選択形質である雄のオレンジスポットに含まれるβカロテンが選好性を変化させる作用に注目し、その摂取量がDNAメチル化を介して雌の眼と脳にもたらすエピジェネティックな影響を検出するための実験を継続した。高βカロテン条件、低βカロテン条件(βカロテンなし)で雌を飼育した。稚魚は産まれたその日から高βカロテン条件(エサ中のβカロテン0.6%)、低βカロテン条件(エサ中のβカロテンなし)の2条件に分け、性成熟するまで約7か月間飼育した。最終的に高βカロテン条件でメス31個体、オス21個体、低βカロテン条件でメス45個体、オス48個体を得た。DNAメチル化の検出にはメスのみを用いた。2つのカロテノイド条件で飼育したメスの右眼(高βカロテン条件:23個体、低βカロテン条件:25個体)と全脳(高βカロテン条件:24個体、低βカロテン条件:23個体)からDNAを抽出しバルク化し、バイサルファイト処理後、次世代シークエンサーで配列を解読した。また、メスのオレンジスポットへの選好性の強さを測定するため、十分に性成熟した月齢7ヶ月の処女メスで映像を用いた二者択一形式の配偶者選好性実験を行った。水槽の一側面に設置したモニタに、オレンジスポットの彩度と面積が大きな派手オスと彩度と面積が小さい地味オスの動画を横に並べて映し、メスの選好行動を観察した。メスは実験前24時間以上個別飼育をし、実験の30分前に餌を与えた。実験水槽に個別飼育の水ごと移動させ、5分間順応させた。その後、オスの動画をモニタに表示しメスが動き出してから5分間行動を観察した。映像の前3cm以内を選好エリアとし、5分間でメスがそれぞれの映像の選好エリアにいた時間を測定した。メチル化解析をするため個体が成熟するまでに必要な時間が想定以上にかかったため、餌条件飼育実験に7ヶ月を要し、若干予定が遅れた。本年度は、性選択形質である雄のオレンジスポットに含まれるβカロテンが選好性を変化させる作用に注目し、その摂取量が(1) DNAメチル化を介して雌の眼と脳にもたらすエピジェネティックな影響と(2)雌の色覚関連遺伝子の発現に与える影響を検出した。高βカロテン条件、低βカロテン条件(βカロテンなし)で飼育した雌個体を実験に用いた。雌の眼と脳のエピジェネティックな変化を比較するため、全ゲノムバイサルファイトシーケンスを行い、DNAメチル化状態が異なる遺伝子を検出した。

雌のDNAメチル化状態が変化は、眼の高βカロテン条件でDNAメチル化が増加していた遺伝子(45遺伝子)には色覚関連遺伝子が多く(14遺伝子)、脳の高βカロテン条件でDNAメチル化が増加していた遺伝子(43遺伝子)には神経伝達に関係する遺伝子が多い傾向があった(13遺伝子)。遺伝子発現量においては、高βカロテン条件でオプシン遺伝子RH2ー2の発現量が低く、イオンチャネル遺伝子CNGB3の発現量が高い傾向にあった。また、βカロテン条件と遺伝子発現が雌のオレンジ雄選好性に与える効果について検定した。その結果、オプシン遺伝子LWS-1において、全体では発現量が高いほど選好性が高くなり、低カロテノイド条件では発現量が高いほど選好性が低くなる傾向がみられ、βカロテン条件によって発現量の効果が選好性に与える影響に異なる傾向があった。錐体ロドプシンキナーゼ遺伝子GRK7Aにおいては、全体では発現量が高いほど選好性が低くなるが、低カロテノイド条件では発現量が高いほど発現量は選好性が高くなる傾向がみられ、βカロテン条件によって発現量の効果が選好性に与える影響に異なる傾向があった。グッピーを用いて、成育時の光環境とカロテノイドの影響に焦点を当て、遺伝子型の変異とDNAメチル化によるエピジェネティックな変異が雄の体色に対する雌の配偶者選好性の個体間変異に与える影響を調べた。オプシン遺伝子の発現量は、光感受性と雄体色に対する雌の選好性に影響し、その発現量は、成育時の光環境とオプシン遺伝子LWS-1の遺伝子型との交互作用によって影響されることがわかった。またオプシン遺伝子の発現量の遺伝子と環境との交互作用は、DNAメチル化率によるものと示唆された。βカロテン高摂取により、目では、光順応に関する遺伝子が、脳では、神経伝達に関係する遺伝子においてDNAメチル化が増加した。予定より遅れたが、雄のゲノムDNAが採取でき、次世代シークエンサーで解読し、雄のオレンジスポットと雌の選好に関わる遺伝子を特定する。さらに、カロテノイド欠乏食と高カロテノイド食がオプシン遺伝子の発現量と雌の選好性に与える影響についての実験を行う予定が3ヶ月遅れたが、その後は、順調に実験が実施できたてため、最終的には予定どおりデータがとれる見通しである。29年度が最終年度であるため、記入しない。進化生態学29年度が最終年度であるため、記入しない。
経皮経肝門脈肝静脈シャント術(TIPS)における生体適合ステントの作成

臨床経験よりえられたステントの最適径は10mmである。雑種成犬を実験対象とした場合、この径のステントを留置することは不可能である。このため、体重、体表面積などを勘案し、径4mmのステントを作成し、留置した。ステントおよび人工血管の材料はともに高価であるため、本年度は1)ステントのみ、2)ステントをポリエステルで被覆したもの、3)ステントに人工血管を縫つけたもの、の3群を設定し、犬の血管のうち大静脈に留置した。結果、1)では、ステント表面に約2週間で内皮化がみられ、2週間後の開存もほぼ50%でえられた。しかし、2)3)では、被覆によって血管の内腔が狭小化し、全例で閉塞をきたした。当初の予想では、3)で1)を上回る開存率が期待されたのでかなり意外な結果であった。これは、血管径が狭すぎ、血液の絶対的な流量が不足したためであろうと推論した。今後、さらに人間に近い血管径をもつ動物(豚など)を対象に、径6mm以上のステントでの実験を予定し、その後被覆材料の組織学的検討に入る予定である。
都市域の水・熱収支推定のための高精度蒸発散量算定手法の開発

本研究の主目的は都市域からの蒸発散推定手法の改良である。このために二つの手法での研究を行った。一つ目の研究手法は、現地観測である。二本の微気象観測タワーを都市域内に設置し、詳細な蒸発散機構の観測を行った。続いて蒸発散のシミュレーションを水文モデルおよびエネルギーバランスモデルの両方で行った。シミュレーションの際に最も重要な植生パラメータは、葉面積指数、根の深さ、根の分布などであった。一つ以上の土壌および植生タイプのパラメータ設定の下で、土壌水分などの水文量の変動は精度良く再現されたが、蒸発散の推定値はバラバラとなった。しかし、解法の中で水収支およびエネルギー収支の両方を取り入れると、その土地を代表する単一のパラメータセットによって、蒸発散を含めた当該土地の水文およびエネルギー特性を妥当に再現することが可能になった。二つ目の研究手法はリモートセンシングを用いたものであり、大領域における蒸発散量推測の向上のために土地被覆情報を正確に把握する技術の開発である。ここではSPOT、Landsat, IKONOSの画像を用いた。階層的な統計分類手法を景観の幾何学的な形状と組み合わせて用いることによって、都市域の土地利用分類の精度が向上することを示した。千葉の気象観測所タワー2地点の対象とし、水・エネルギー結合モデルによって算定された蒸発散量と、土壌水分と植生に関するパラメータを用いて可能蒸発散量から実際の蒸発散量を算定したものとを比較した。土壌熱フラックス、土壌温度及び土壌水分観測値を検証データとして比較した結果、水とエネルギーを同時に解く結合モデルは蒸発散量を妥当に算定することができることが判明した。一方、Richards式を用いて蒸発散量を算定する前者の手法は土壌の圧力データでしか検証を行うことができなかったが、この手法では蒸発散量の解が1つ以上存在することが判明した。つまり、Richards式を支配方程式として蒸発散量を計算する手法を用いると、いくつかの異なる結果がでてきてしまうこととなる。この問題を解決するために支配方程式を解く際に陸面モデルを用いた結果、観測結果に近い蒸発散量の算定を行うことができた。一方、本研究では異なる植生や異なる土壌幅のスペクトル特性を調べるために多スペクトル画像を用いた室内実験も行ったこれらの実験結果は、現在リモートセンシング情報から適切な土地情報を分類する手法を開発するために用いられている。本年度は、都市の蒸発散算定のために必要な土地利用分布図作成に着目し、河川水位および水文・気象観測を実施し、気象データに基づく蒸発散の推定の検証、リモートセンシングによる蒸発散推定の検証実験を行った。Ikonos衛生データを融合させ開発した土地利用分類のための有効なアルゴリズムと、Aster衛星データを用い開発した高精度、高解像度の都市域土地利用分類のための適切なアルゴリズムのリモートセンシングデータから、土地利用分布図作成のためのいくつかの手法を試行した。eCognition画像処理ソフトを利用してスペクトル特性のみでなく、都市の空間情報の特徴も利用できる手法を実施した。それらの手法により構築されたデータから、信頼性の高い都市の土地利用を得られる手法も開発した。現在、葉と根の特徴が規定されている植生の区分と、上記の手法から得られた植生区分を比較し、連携させた。本研究の目的は、蒸発散を高性能で得ることであり、そのために異なる植生のパラメータを選出した。そのパラメータを得るために、必要な植生の特性と関連した算定モデルパラメータを得られる手法を作成した。これらにより、都市の水循環を高い精度で得られ、より信頼性のある将来予測の基盤とすることができた。
キャクストン版『黄金伝説』の校訂版作成：第1巻および第2巻

校訂本は、I.本文解題、II.校訂した本文、III.注釈、IV.語彙解説などで構成される。平成30年度末には再度英国ケンブリッジを訪れて最終的な一次資料(Cambridge大学図書館所蔵Inc.2.J.1.1[3781] )確認を済ませ、原稿準備がほぼ整ったところである。【継続的研究連携】1本研究は、John Scahill博士(シドニー工科大学)との共同研究である。頻繁にメールによる研究方針・方法についての意見交換、原稿交換を重ねることにより仕事を進めてきた。9月には招聘して研究会議を行った。210月には、キャクストンを含む広い領域の中世文学研究における第一人者であるA.S.G Edwards教授を招聘し、本企画について貴重な専門的知識の提供を受けた。Edwards教授には、若手研究者を対象とするワークショップおよび研究者向けの講演も行っていただいた。本研究課題であるW. Caxton版『黄金伝説』第1巻と第2巻の校訂の原稿をほぼ完成させることができた。3月には原本の再確認を直接行うことができた。共同研究者間で綿密な連絡を維持している。本研究課題の第一次最終原稿をこの夏に予定し、準備を進めている。そのために5月に海外共同研究者であるJohn Scahill博士を招聘し、最終調整のための会議を実施する。【口頭発表・シンポジウム】7月:アイルランド・ダブリン大学で開催される初期刊行本協会の国際学会において、田口(研究代表者)が課題に係る口頭発表を行う。11月末12月10日:国際シンポジウム「Editing and the Interpretation of Texts: Past, Present, and Future Practices」を開催する。<第一部>日本中世英語英文学会全国大会(東京未来大学)で、企画シンポジウム(plenary)を依頼され、海外研究者4名、国内研究者34名を招聘し、大型パネルディスカッションを開催することになった。<第二部>海外招聘者3名による講演会を京都大学で開催する。この間に、研究者懇談会、学生向けセミナーなども行う。ヤコブス・デ・ウォラギネの著書『黄金伝説』(Legenda aurea)のウィリアム・キャクストンによる翻訳(The Golden Legend)のうち第1巻「キリストの生涯と期節(Temporale)」および第2巻「旧約聖書物語」の校訂テキストをEarly English Text Society(EETS)のシリーズ(Oxford University Pressが出版)として刊行するための準備を進めている。EETSは1864年に設立されて以来、古英語、中英語の作品の校訂本を英文学研究者に広く提供してきた。本『黄金伝説』はEETS念願の企画であり、大きな期待を寄せられている。なお日本人研究者のEETSシリーズ参加は本企画が初めてである。準備作業は大きく1本文批評(転写と校訂)2ラテン語、フランス語、中英語による翻訳原典との比較3作品・ジャンル研究に分類できるが、1の作業は1巻2巻ともに全容の6割以上の初稿を完了し、2は1巻の8割以上、2巻は6割方が明らかになった。研究代表者と分担者および海外共同研究者は常に密な連携を保って作業を進めており、当初の計画をはるかに上回る順調な展開と言える。研究成果は逐次国際学会で発信し、高く評価された。関連論文の海外出版も決定している。引き続き口頭発表、海外研究者を招へいしたシンポジウムを複数企画し、国の内外で校訂出版企画と研究成果を発信する準備も進めてきた。また、研究代表者と分担者徳永聡子は2016年1月末に1次資料調査のためにロンドン、ケンブリッジ、オックスフォードの図書館で研究活動を行い、オックスフォードではEETSの監修者の一人であり『黄金伝説』研究の権威であるRichard Hamer氏(Oxford Univeristy)と面談し、研究上の貴重な助言を受けることができた。上記のようにキャクストン版『黄金伝説』第1巻・第2巻の校訂テキストの準備作業は予想以上に順調に進んでおり、基本作業の6割以上を終えることができた。2016年度における研究への継続性も保っており、4月以降も高ピッチで作業が進んでいる。研究成果の発信も行い、好評を得ている。2016年度、2017年度における発表計画もたてている。国際学会での活動を通し海外の研究者との交流を深め、研究上の協力も受けやすい環境整備も進んだ。様々な面で最終成果の質の向上に向け、時間の余裕も生まれていると言える。中世の文学作品の校定本準備作業の工程は大きく1本文校訂と本(写本・印刷本)の形態描写、2原典との比較考察、3作品・ジャンル研究から成るが、本科研企画2年目に当たる平成28年度末までに1の作業が一巡し、その見直しも半分以上の工程を終えた。2については、新たな発見がいくつかあり、平成29年に刊行予定の出版物の原稿の書き換えなどによって発信の準備も進めた。研究代表者と分担者徳永聡子は海外共同研究者との綿密な連絡を保ちつつ、順調に作業を進め、その成果を国際学会や国際的シンポジウムの企画により順次発表してきたが、平成29年度の発表計画として2件の国際シンポジウムを企画した。そのうち一件は招聘であり、もう一件は国際学会に応募し、これが受理された。EETSの本企画担当エディターであるオックスフォード大学リチャード・ヘイマー氏、および書記長ヘレン・スペンサー博士との連絡も継続的にとり、研究の遂行に支障が出ないように配慮している。ヘイマー氏とは、平成29年度にロンドンで面会する約束も取り付けた。

上述のようにいたって順調に研究が進んでおり、研究者間の連携も良好である。平成29年度への継続的研究発展についても配慮している。海外の専門研究者を招聘し、国際的発表の機会を通して、研究の質的向上と国際的発信を目指している。28年度は英国リーズ大学で毎年開催される中世国際学会に参加し、研究の途中経過を発信した。また、聖書物語の権威ジェームズ・モーレイ氏(米)、説教文学研究者赤江雄一氏(慶応義塾)を招き、国内学会でシンポジウムを開催した。29年度はカナダ、イギリス、オーストラリアの研究者を招聘して2件のシンポジウム(日本英文学会および初期刊行本学会・ジョン・ガウワー協会共催国際学会)の企画が受理され国際発信の準備を進めることができた。国際的な研究者間の交流を通し、健全な研究展開の地盤を築いていると言える。29年度にかけての研究の継続性も維持できている。ヤコブス・デ・ヴォラギネ作『黄金伝説』(_Legenda aurea_)を仏語訳を介してウィリアム・キャクストンが翻訳し、印刷・出版した_Golden Legend_のうち第1巻「キリストの生涯と期節(Temporale)」と第2巻「旧約聖書物語」をEarly English Text Society (EETS, Oxford University Press)から出版することを目標とする研究企画である。2017年度は、研究課題であるキャクストン版『黄金伝説』の校訂原稿作成作業を進めながら、国内外の学会で当該分野の専門研究者を招聘したシンポジウム発表を行った。これらの成果は次のようにまとめることができる。(1)原稿執筆進捗状況:研究代表者(田口)、分担者(徳永)、海外共同研究者(スカヒル)のそれぞれがすべての工程に関わり、精力的に作業を進めた。2巻とも本文、注釈、語彙一覧等について第一稿を完成することができた。(2)研究発表(学会):15月、日本英文学会全国大会シンポジウム発表(Anne Hutchison教授、向井毅教授を招聘した)27月、初期刊行本学会国際大会(Early Book Society)シンポジウム発表(John Scahill博士、Oliver Pickering博士を招聘した)(3)研究発表(論文):研究代表者(田口)は成果論文が_Editing and Interpretation_に掲載・出版された。研究分担者(徳永)は学会シンポジウム発表の成果を学術研究雑誌_Poetica_に特集執筆した。(4)研究発表の成果:1研究成果を広く内外の研究者に発信しその重要性についての認知度を高めることができた。2招聘した研究者およびその他の多くの国際的研究者から、直接様々な助言と高度に専門的な知識を得ることができた。研究ネットワークを広げることができた。上でも述べたように研究課題である校訂テキスト出版のための原稿執筆は第一稿を完成することができた。研究者間の連携は良好で、緊密な連絡を取りながら、出版社に提出するための第二稿に入っている。海外の研究者との連携も拡大することができた。
胆道癌移植モデルを用いた脱ユビキチン化酵素の機能解析と新規薬物療法の開発

当施設で摘出手術を施行した、胆嚢癌44例においてゲノムDNAを抽出した。ゲノムにおいて、クロマチンリモデリング遺伝子複合体であり、近年胆道癌においてその遺伝子変異が注目されている、BAP1の遺伝子の変異について、サンガーシークエンスにより、全エクソンを対照に検索を行った。胆嚢癌症例において、BAP1遺伝子の変異が高頻度に認めることを明らかにした。またホモ欠失と思われる変化も多く認めた。以上より、胆嚢癌においてBAP1遺伝子変異が多いことを示し、その頻度は、次世代シークエンサーを持ちいた海外の報告よりも高いことが明らかとなった。BAP1の臨床標本においても、タンパク質レベルの遺伝子発現を検討するため、全例免疫染色を行ない、また生命予後との比較を行なった。タンパク質におけるBAP1発現と、遺伝子変異は相関しており、遺伝子変異が発現低下の主な原因であると推測された。生命予後に関しては、BAP1発現が低下している症例において有意に予後が不良であった。胆嚢癌のBAP1発現低下および遺伝子変異が、予後不良因子となっていることは、本研究が初めての報告となる。基礎実験では、BAP1の発現低下したモデルを胆嚢癌細胞株で作成した。BAP1の発現低下は、癌細胞の増殖能には直接影響しないが、浸潤能・遊走能を亢進させ、癌の悪性度を増悪させていることを明らかとした。臨床検体より胆道癌細胞の初代培養を施行し、現在まで3株樹立している。1例は浸潤能が著明に亢進している。網羅的な遺伝子解析を施行した。<胆道癌の臨床症例の検討>胆道癌の一種である、胆嚢癌の臨床検体33例に対して、BAP1の免疫染色を行い、その臨床予後との比較を行い、BAP1発現と予後との関連を検討した。全体の症例数が少ないため、有意差はつかないもののBAP1の低発現例において、生命予後が低下する傾向を認めた。先行研究の肝内胆管癌40例の検討と、傾向としてはおおむね一致している。<胆道癌Xenograftモデルの作成>胆道癌のXenograftモデルとして胆管癌と十二指腸乳頭部癌のモデルを作成したが、胆嚢癌のモデルは未作成である。<クロマチンリモデリング遺伝子抑制株の作成>先行研究において肝内胆管癌のBAP1抑制細胞株の作成を行ったが、siRNAを用いて同様に胆嚢癌細胞株であるG415のBAP1発現抑制株を作成した。in vitroにおいてその細胞機能を検討したところ、BAP1発現抑制により細胞の増殖能は変化しないものの、遊走能、浸潤能が亢進することを明らかにした。胆嚢癌におけるBAP1の機能解析は、文献的には初めてであり、その結果は肝内胆管癌HuCCT-1を用いた実験結果と一致する傾向であった。一方、胆嚢癌のBAP1発現抑制株の抗癌剤感受性試験をin vitroで行ったところ、胆道癌の第一選択薬であるゲムシタビンの感受性にはほとんど大きな変化は認めなかった。しかしながらBAP1発現抑制株の一部では感受性が亢進している所見があり、さらに条件を検討して追加実験をする予定である。その他、5-FU、シスプラチンに対する抗癌剤感受性試験では、BAP1発現の有無による感受性の変化は認めなかった。臨床症例の検討についてはおおむね予定どおりに経過している。Xenograftモデルの作成については、胆嚢癌のXenograftモデルが症例数が限られているため、未だ作成できていない。適当な症例があり次第、作成・樹立を行う予定である。クロマチンリモデリング遺伝子抑制株の作成は、siRNAによるBAP1の発現抑制の方法はほぼ確立され、その後の細胞機能解析も、先行実験と同様の傾向であった。<胆道癌の臨床症例の検討>胆嚢癌の臨床検体47例に対して、クロマチンリモデリング複合体遺伝子のBAP1の免疫染色を行い、臨床経過との比較を行った。免疫染色による発現程度をコンピュータにて解析し、高発現群と低発現群に分類した。生命予後と比較したところ、胆嚢癌では低発現群で有意に予後不良であった。<胆道癌Xenograftモデルの作成>新たに十二指腸乳頭部癌のXenograftモデルを樹立した。肝内胆管癌、胆嚢癌は症例が少なく、生着率も高くはないため、未作成である。<クロマチンリモデリング複合体遺伝子発現抑制>胆嚢癌細胞株にsiRNAを導入することでBAP1の発現抑制を行った。細胞機能の変化を解析したところ、増殖能に差は認めなったが、遊走能・浸潤能の増強を認め、BAP1の発現低下が腫瘍の浸潤能を増加させていると思われた。また、抗癌剤感受性の変化をゲムシタビン、シスプラチン、パクリタキセルや、ヒストン脱アセチル酵素阻害薬の5アザシチジンやバルプロ酸で検討したが、感受性に変化は認めなかった。しかしながら、プロテオソーム阻害薬のボルテゾミブに対しては、BAP1発現抑制株で感受性の低下を認めた。ボルテゾミブは胆管癌に対して、治験が行われた薬物であり、遺伝子発現による症例の選択に有用である可能性がある。<胆嚢癌のBAP1ゲノム変異解析>胆嚢癌におけるBAP1発現と予後が有意に関連しているため、BAP1発現が低下する原因を検討するため、ゲノムの遺伝子変異解析を施行中である。胆嚢癌のBAP

1ゲノム解析についての報告はこれまで2報あるが、どちらも症例数は少なく、次世代シークエンスによるものであり、サンガーシークエンスを用いたものはない。また同時にエピゲノム解析も施行する。臨床症例の解析はほぼ終了した。クロマチンリモデリング複合体遺伝子のBAP1の胆嚢癌における機能解析もほぼ完了している。肝内胆管癌における先行研究と、胆管癌に対する文献的な報告を含めると、胆道癌における機能変化は解明されつつあると思われる。Xenograft作成は、生着率と症例数に限界があり、十二指腸乳頭部癌は樹立されているが、胆嚢癌は未作成である。当施設で摘出手術を施行した、胆嚢癌44例においてゲノムDNAを抽出した。ゲノムにおいて、クロマチンリモデリング遺伝子複合体であり、近年胆道癌においてその遺伝子変異が注目されている、BAP1の遺伝子の変異について、サンガーシークエンスにより、全エクソンを対照に検索を行った。胆嚢癌症例において、BAP1遺伝子の変異が高頻度に認めることを明らかにした。またホモ欠失と思われる変化も多く認めた。以上より、胆嚢癌においてBAP1遺伝子変異が多いことを示し、その頻度は、次世代シークエンサーを持ちいた海外の報告よりも高いことが明らかとなった。BAP1の臨床標本においても、タンパク質レベルの遺伝子発現を検討するため、全例免疫染色を行ない、また生命予後との比較を行なった。タンパク質におけるBAP1発現と、遺伝子変異は相関しており、遺伝子変異が発現低下の主な原因であると推測された。生命予後に関しては、BAP1発現が低下している症例において有意に予後が不良であった。胆嚢癌のBAP1発現低下および遺伝子変異が、予後不良因子となっていることは、本研究が初めての報告となる。基礎実験では、BAP1の発現低下したモデルを胆嚢癌細胞株で作成した。BAP1の発現低下は、癌細胞の増殖能には直接影響しないが、浸潤能・遊走能を亢進させ、癌の悪性度を増悪させていることを明らかとした。臨床検体より胆道癌細胞の初代培養を施行し、現在まで3株樹立している。1例は浸潤能が著明に亢進している。網羅的な遺伝子解析を施行した。<胆道癌の臨床症例の解析>胆嚢癌症例数がやや少ないため、有意差を検出できないため、さらに症例数を増やして、BAP1発現と臨床予後との関連を明らかにする予定である。追加症例数は約15例を予定している。また、BAP1、ARID1A1、PBRM1などのクロマチンリモデリング複合体遺伝子は、胆道癌の一種である肝内胆管癌で高頻度に変異が起こっていること、また胆管癌でもある程度の頻度で変異を認めることが知られているが、同じ胆道癌である胆嚢癌や十二指腸乳頭部癌での変異の頻度はあまり検索されたことがない。胆嚢癌の臨床検体においてBAP1の発現を免疫染色すると同時に、変異解析を行い、変異の有無を検討する予定である。<胆道癌Xenograftモデルの作成>現在Xenograftモデルとして胆管癌、十二指腸乳頭部癌があるが、症例数も少ないため胆嚢癌のモデルは未作成である。胆嚢癌のXenograftモデルを作成し、その浸潤能や転移能、また抗癌剤感受性について解析予定である。クロマチンリモデリング複合体