hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
生後におけるラット運動ニューロンの生存因子の研究

生後約50日目に左側横隔膜神経を切断したラット横隔膜筋(除神経筋)を術後5日目に摘出し,これを24時間培養した.その培養後の液(CM)を濃縮し,シリコンチューブに充填し,生後4日目に切断した左側坐骨神経の中枢端を挿入した. 3日に1度の割合で液交換し,術後2週目にL4-L5レベルで脊髄を摘出した.摘出した脊髄を半蔵し,術側と正常側のコリンアセチルトランスフェラーゼ(ChAT)活性を比較した.その結果, CMの代りに,生理食塩水を与えた場合の術側のChAT活性は,正常側に比べ平均72%に減少していた.CMを与えた場合は, 80%と増大の傾向を示したが有意差はなかった.この傾向は,除神経しないで培養液に横隔膜筋のCMでも見られ,除神経筋に特異的ではなかった.この結果に対する一つの可能性として, CMの濃縮液に含まれる運動ニューロン生存因子がごく微量のため有意差が出ないと考えられる.この可能性の検討は,生存因子に対するアフィニティークロマトが出来れば容易となる. 1984年, Gurneyは,筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者血清が筋から放出される運動ニューロン栄養因子と抗原抗体反応すると報告している.この報告が正しければ, ALS患者のイムノグロブリンを用いて生存因子のアフィニティークロマトが可能であるので, Gurneyの追試を行った.彼は, CMを電気泳動し, Western blot後, ALS血清と反応させると56Kdaltonのタンパクと特異的な結合が見られると報告しているが,我々は, 56K以外にも, 48K,64K,76Kに著明なバンドを見た.しかも,正常人血清を用いた場合にも, 56Kにバンドが見られた.従って,我々は, ALS血清を特異的に結合するタンパクを確認する事は出来なかった.(これらの結果は,国際ALS会議において報告した).よって,現在,生存因子濃縮のために,分子量によって, CMを分画し,それらの効果について,実験中である.生後約50日目に左側横隔膜神経を切断したラット横隔膜筋(除神経筋)を術後5日目に摘出し,これを24時間培養した.その培養後の液(CM)を濃縮し,シリコンチューブに充填し,生後4日目に切断した左側坐骨神経の中枢端を挿入した. 3日に1度の割合で液交換し,術後2週目にL4-L5レベルで脊髄を摘出した.摘出した脊髄を半蔵し,術側と正常側のコリンアセチルトランスフェラーゼ(ChAT)活性を比較した.その結果, CMの代りに,生理食塩水を与えた場合の術側のChAT活性は,正常側に比べ平均72%に減少していた.CMを与えた場合は, 80%と増大の傾向を示したが有意差はなかった.この傾向は,除神経しないで培養液に横隔膜筋のCMでも見られ,除神経筋に特異的ではなかった.この結果に対する一つの可能性として, CMの濃縮液に含まれる運動ニューロン生存因子がごく微量のため有意差が出ないと考えられる.この可能性の検討は,生存因子に対するアフィニティークロマトが出来れば容易となる. 1984年, Gurneyは,筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者血清が筋から放出される運動ニューロン栄養因子と抗原抗体反応すると報告している.この報告が正しければ, ALS患者のイムノグロブリンを用いて生存因子のアフィニティークロマトが可能であるので, Gurneyの追試を行った.彼は, CMを電気泳動し, Western blot後, ALS血清と反応させると56Kdaltonのタンパクと特異的な結合が見られると報告しているが,我々は, 56K以外にも, 48K,64K,76Kに著明なバンドを見た.しかも,正常人血清を用いた場合にも, 56Kにバンドが見られた.従って,我々は, ALS血清を特異的に結合するタンパクを確認する事は出来なかった.(これらの結果は,国際ALS会議において報告した).よって,現在,生存因子濃縮のために,分子量によって, CMを分画し,それらの効果について,実験中である.
中学校におけるコミュニケーション活動を中心にした科学教育に関する実証的研究

本研究は, 1)中等科学教育でのコミュニケーション活動の課題を整理すること, 2)中学生向けのコミュニケーション活動を開発・評価すること, 3)小学校から中学校にかけてどのようにコミュニケーション活動をつなげるべきなのかについて検討することを目的にして実施された。その結果, 1)導入が難しいとされている中等学校理科教育におけるコミュニケーション活動に残された課題が整理された。2)中学生向けに開発したコミュニケーション活動では,コア知識を用いて一貫して説明するようになった生徒は, 2ヶ月後の遅延調査でもコミュニケーション活動によって理解が深まったという認識が保たれ,未習課題の正答率も保たれていた。3)粒子モデルで一貫して学ぶことにより,小学生でも発展的課題について粒子モデルを用いた一貫した説明ができるようになる効果が実証された。平成18年度は,広範に適用可能な知識を生徒に獲得させ,お互いに「その考えは筋が通っていますか?」のような質問をし合うコミュニケーション活動を通じて,様々な場面にも獲得した知識を用いて,一貫して説明させる授業モデルの有効性を検証した。研究協力者で中学校教員の西山が,公立中学校3年生3クラスを対象にして,5時間の酸化還元学習に酸素との化合のしやすさを示す「化合力」を用いて,一貫して説明することを促した授業を展開した。生徒の一貫した説明を促し,未習の課題にも「化合力」を用いて一貫した説明ができるようになったのかなどの効果を探った。グループでの発話内容や事後・遅延(2ヶ月後)調査を分析したところ,授業を通じて生徒が一貫して説明するようになり,事後調査での未習課題「たたら製鉄」の説明に「化合力」を適用し,遅延調査では「化合力」を用いた説明の割合が増加(事後44%→遅延60%)した。筋を通して説明するようになった生徒は,酸化還元現象を「化合力」を用いて一貫して説明し,遅延調査の段階でも理解が保持されやすいと考えられる。そこで,一貫して説明している群と非一貫群を比較し,一貫群のように一貫して説明するようになると,様々な事象に一貫して「化合力」を適用するようになり,2ヶ月後でも「課題に対する説明の正答率」や「理解が深化したという認識」が保たれていたことを明らかにした。そして,5時間の授業終了後も,日常の生徒同士の会話の中に「その考えは筋が通っている?」という発話を確認した。平成19年度は,(1)イギリスのEPPIが行ったシステマティックレビューを参考に,今一度国内外の中等科学教育でのコミュニケーション活動をレビューして,その意義、価値を明確にすることが目標であった。1991年から2005年までに日本国内外の代表的な理科教育誌5誌(Journal of Research in Science Teaching;Research in Science Education;Science Education;理科教育学研究;科学教育研究)に掲載された論文を分析して,中等学校理科教育における構成されたグループコミュニケーション活動の意義、価値、課題について明らかにした(雑誌論文参照)。そして,(2)中学校での長期間にわたるコミュニケーション活動をカリキュラムに位置づけた授業の分析も目標であった。残念ながら個人情報保護の観点から生徒個人の詳細なプロファイリング作成は見送らなければならなかったが,コミュニケーション活動を中心とした8件の実践事例(小学校4件、中学校4件)の詳細と評価について,大日本図書より〔深い理解をめざした理科授業づくりと評価」を出版し,その成果を広く公開することができた(図書参照)。また,小学校教員の研究協力者を得て,小学校5、6年にわたって実施したコミュニケーション活動の効果を検証中で(雑誌論文参照>,中学校にどのようにつなげていくべきなのかについて,検討を重ねている。平成20年度は,一連の中学校の実践での知見を整理するとともに,小中一貫校の教員である小野寺の協力者を得て,小学校から中学校にかけてどのようにコミュニケーション活動をつなげるべきなのかについて検討することが目標であった。3年間の研究成果については,以下の4点ついての知見を整理して,風間書房より「中学校理科教育における構成されたグループコミュニケーション」を出版して広く共有することができた(図書参照)。1)文献レビューから,グループサイズ・グループ編成・取り上げる課題・コミュニケーション活動の方法に関する課題を明らかにした2)グループ編成によるコミュニケーションの差異を実験的に確かめ,実際の中学校理科授業でのグループコミュニケーションの様子を調査することで,新たなコミュニケーション活動開発の示唆を得た3)先行研究や実験・調査から明らかになった課題を克服するために,新たなコミュニケーション活動を開発した4)コミュニケーション活動を中学生向けに改良して,実際の中学校の理科授業でその有効性を検証した小学校から中学校にかけてどのようにコミュニケーション活動をつなげるべきなのかについては,小学校5年「物のとけ方」

・6年「水溶液の性質」で一貫して粒子モデルを用いたコミュニケーション活動の有効性を実証し(雑誌論文・学会発表参照),粒子モデルのようにコアとなる知識を獲得させて一貫した説明を促すコミュニケーション活動を小・中学校で試行中である。
アルギナーゼ制御による喘息予防法及び治療薬の開発

我々の確立したダニ抽出物点鼻喘息モデルを用いて、気管支拡張に利用される一酸化窒素(NO)が不足している原因として、肺の慢性炎症病態におけるアルギナーゼの強発現に伴うアルギニンの消費による一酸化窒素合成酵素(NOS)からのNO産生の不足を、IL-13のモノクローナル抗体、アルギナーゼ阻害剤で証明した。さらに、ヒト喘息において、血清中にアルギナーゼが上昇し、呼気中NO及び血清中アルギニンを調整していることを証明した。ダニ蛋白質(Df)をNC/Ngaマウスに点鼻投与することにより、気管支喘息モデルを開発し、アルギナーゼの発現と一酸化窒素(NO)合成酵素の関連性を検討し、喘息病態における意義を検討した。すなわち、この喘息病態にIL-13の関与がどの程度関与しているかを証明するため、抗IL-13モノクローナル抗体をDfの最終的ブースター投与前と2日後に静脈投与した。その結果、アルギナーゼの発現が有意に抑制され、気道抵抗(AHR)の改善、肺胞洗浄液細胞分画中の好酸球の減少、肺組織のNOxの増加、組織学的炎症像の改善、気管支分泌液の減少、肺間質コラーゲン繊維の減少等が観察された。特に、アルギナーゼの発現抑制とNOxの増加、AHRの改善は、IL-13によるシグナルがIL-13受容体を介してアルギナーゼの発現を誘導することを証明するとともに、アルギナーゼの制御により一酸化窒素合成酵素(NOS)からのNO産生増加によりAHRが改善したことを証明できた。また、アルギナーゼの発現抑制により肺間質のコラーゲン繊維の有意な減少を認めたことは、アルギナーゼがremodeling病態に関与しており、アルギナーゼの発現抑制又は酵素活性抑制がremodelingを抑制できることを証明したものであり、AHRの改善と併せて、アルギナーゼの制御が喘息病態を改善する重要な因子であることが証明された。Df蛋白質をマウス由来マクロファージに添加し、アルギナーゼの発現とiNOSの発現の関係を検討しており、アルギナーゼ発現細胞とiNOS発現細胞とは異なる結果を得ているが、M1とM2の細胞マーカーを用いて現在、蛍光二重染色により識別を行っている。この喘息モデルにおける、特異的蛋白質発現を検出するために、正常NC/Ngaマウス肺のホモジネート蛋白質及び肺胞洗浄液上清の蛋白質の特異抗体を作成中である。この抗体で、喘息肺のホモジネート及び肺胞洗浄液中の蛋白質を吸収し、残った蛋白質のプロテオミクス解析を行う予定である。食品栄養因子としてのマンガン量を制御することによる喘息の発症予防の可能性について、低マンガン食をNC/Ngaマウスに与え、アルギナーゼ活性の抑制を現在検討中である。ダニ抽出蛋白質の一つであるDermatophagoides farinae(Df)をNC/Ngaマウスに点鼻することにより、肺胞洗浄液中の好酸球数、気道抵抗、PAS陽性気管支上皮細胞数、肺胞洗浄液及び肺組織中IL-4, IL-5, IL-13のTh2サイトカインの等の増加の特徴を持った実験モデルにおいて、気道抵抗と組織改築に炎症細胞より産生されるアルギナーゼが関与しており、その制御により喘息の予防・治療法を開発することを目指し、次のような研究結果を得ている。1)炎症細胞より産生されるIL-13によるアルギナーゼの誘導をIL-13の抗体で制御することにより可能かどうかを検討する実験を行った。IL-13モノクローナル抗体投与によりDF誘導喘息マウスの肺組織のアルギナーゼ発現、肺胞洗浄液の好酸球数、気道抵抗等の有意な低下と肺組織中NOxの有意な上昇を認め、アルギナーゼによるアルギニンの消費によりNO合成酵素からのNOの相対的不足が気管支拡張を妨げていることを示唆する結果として論文投稿中である。2)アルギナーゼの制御をアルギナーゼ阻害剤(nor-NOHA)を用いて行うと、肺胞洗浄液中好酸球、気道抵抗、アルギナーゼの蛋白質発現、Th2サイトカイン等の有意な低下を認め、アルギナーゼの活性制御によりアルギニン代謝が正常に修復されることによりNO合成酵素由来のNOが産生され抗炎症作用を示す可能性が示唆され、アルギナーゼ阻害剤の治療薬としての可能性が示唆され、現在論文投稿予定である。3)アルギナーゼの発現を低マンガン食の摂取により調節することによりNC/Ngaマウスの喘息を制御する実験を行ったところ、気道抵抗、肺胞洗浄液細胞数、細胞分画には影響が認められなかった。マンガン濃度を調節しながら、再実験予定である。4)喘息肺組織に発現するバイオマーカーとしての蛋白質の検討を、現在、正常肺組織の蛋白質を家兎に免疫し、抗体を作成し、喘息肺組織蛋白質から正常発現蛋白質を吸収し、喘息のみに異常発現している蛋白質をプロテオーム解析により検出する研究を行っている。5)喘息患者の血清中アルギナーゼ量の定量を行ったところ、小児喘息では有意な増加が認められた。

現在患者数を増やし臨床疫学的解析により論文投稿予定している。6)アルギナーゼ阻害剤の開発を某メーカーとの共同研究で開始し、スクリーニングを始めている。以上、ほぼ研究計画通りに進んでいるが、アルギナーゼ阻害剤の抗炎症作用により注目すべきであることから、培養細胞を用いた抗炎症の機序の解明が必要とされている。1.ダニ蛋白質惹起喘息モデルにおけるアルギナーゼ阻害剤によるアルギナーゼ制御と病態変化アルギナーゼ阻害剤であるnor-NOHAを用いて喘息病態で、気道抵抗及び組織学的炎症所見の改善が、阻害剤の抗炎症作用によることが指摘された。この抗炎症作用が、阻害剤自体の特徴かアルギナーゼを阻害したために発生した現象かを検証する必要があり、その最初の過程として、ステロイド(プレドニゾロン)と比較した。プレドニゾロンはアルギナーゼ活性、発現を同様に抑制するが、サイトカインの抑制を認めず、窒素酸化物の増加も認めなかった。アルギナーゼ活性及びアルギナーゼ発現では、アルギナーゼ阻害剤とプレドニゾロンが作用を拮抗する所見が得られた。このことより、アルギナーゼ阻害剤の抗炎症作用は、ステロイドとは異なる機序であることが判明し、気道抵抗抑制作用から即効性の治療薬としての開発が期待される。2.アルギナーゼ阻害剤の開発某製薬会社と現在、共同研究でアルギナーゼI阻害剤のスクリーニングを行っている、約5万種の化合物をから4つの化合物が残り、そのうち1つは既存の阻害剤とほぼ同様の阻害効果を示したが、細胞毒性が強いことが判明し薬の開発には無理であることになった。現在、さらに5万種の化合物のスクリーニングを行っている。3.ヒト喘息における血清中アルギナーゼの臨床研究健常者30名、喘息患者23名の血清を採取し、血清アルギナーゼ量をELISAで測定し、臨床検査データとの相関を検討したところ、喘息患者の血清アルギナーゼは健常者より約2.6倍高値を示し、吸入ステロイドにより影響されず、健常者では、年齢と負の相関があり、喘息患者では、呼気NO、血清アルギニン、IgEと負の相関、肝機能、高感度CRPと正の相関を認めた。さらに、呼気NOと血清アルギニンは正の相関を認めた。すなわち、血清アルギナーゼは血清アルギニンを介して呼気NOを制御している可能性が指摘された。
マルチモダリティーによる情動生成のメカニズムの解明

近赤外光脳機能イメージング装置(NIRS)を用いて、ストレス負荷による意思決定のメカニズムを解明するために、前頭野領域に着目し実験を行った。その結果、速さと正確さの交換(SAT)に関連する領域である前補足運動野の賦活が観測された。また動物実験においては、拘束による慢性的ストレスに対する視床下部室傍核での転写調節性DNA結合蛋白(c-fos)および脳由来神経栄養因子(BDNF)の発現の違いに着目し、抗酸化物質の効果を明らかにした。ストレスから生じる不安・嫌悪・恐怖などの精神的な負の情動生成をどうすれば軽減あるいは抑制することができるのか、そのメカニズムについて、動物実験により、多角的な解明を試みた。具体的には、アスタキサンチンやピクノジェノールなどの抗酸化物質を用いて、ストレス中枢と言われている視床下部室傍核に着目し、その変化について免疫組織学的評価を行った。また末梢のストレスマーカーとして知られているコルチゾールについても測定キットを用いて検証を行った。すなわちストレス耐性の強い脳を作るための抗酸化物質の効果に関する検証を末梢および中枢の両面から行った。さらにストレスのない社会の実現を目指して、経済学で用いられるゲーム理論と神経生理学で用いられる脳機能測定法の一つであるfNIRSを用いて、人での検証も試みた。具体的には、囚人のジレンマ構造とそれに付随させるアプルーバルメカニズムにより、人の意思決定がどのように変化するかについて評価を行った。アプルーバルメカニズムにより、囚人のジレンマ構造で認められた背外側前頭皮質、眼窩前頭皮質、および島などの脳部位での賦活が認められなかったことから、嫌悪や不安などのストレスを感じることなく意思決定がなされた可能性を示唆しており、大変興味深い結果となった。特にストレス社会といわれる現在において、様々な精神疾患を有する患者の増加が懸念されている。このような現状に対して、医学のみならず、神経科学、栄養生理学、経済学などの様々な学問分野の融合により、より良い社会環境の実現が可能になるのではないかと考えている。本研究は個人と社会環境の両面から研究を行う上での実験デザインを提案したと考えている。今後さらに発展させていきたい。MRIデータを解析するにあたり、解析が円滑にできるように、脳機能形態解析ソフトであるStatistical Parametric Mapping (SPM8, Wellcome Department of Imaging Neuroscience)や拡散テンソル画像解析ソフトであるThe diffusion TENSOR Visualizer-II(dTV-II, ut-radiology.umin.jp)などのセットアップを行った。さらにData Acquisition Toolbox (The mathworks)やVisual Studio2008(Microsoft)を用いて、functional Near-infrared Spectroscopy(fNIRS)用提示画像や外部トリガー(DIG-100M1002-PCI装置を利用)などを作成した。また位置決め可能な3次元デジタイザーによるグループ解析も試みた。このような実験系を円滑に運用できるようにすることは、非常に重要で、今後の定量的な評価にも十分対応できると考えている。Quality of life (QOL)の一環として、ヒトがいかにストレスを感じずに快適な生活を送ることができるかという普遍的なテーマが存在する。それら不安・嫌悪・恐怖などの負の情動生成のメカニズムの解明は必要不可欠であり、現在までに提案した研究計画に基づいて実験を遂行してきた。具体的な達成度については、(1)経済ゲームを用いた行動実験を行い、健常成人(n=40)に対して、時間制約の有無での意思決定に関する行動実験(各n=20)を行った。その結果、時間制約がある場合、典型的な意思決定ができない被験者も認められた。すなわち時間制約がある場合の意思決定では、ストレスや不安を被験者に与えることから、正確な意思決定が出来なかった可能性がある。(2)実際に光脳機能イメージング装置(fNIRS)を用いて計測を行った結果、前補足運動野でのoxy-Hb量の増加が認められたことから正確な意思決定よりも時間制約による影響が強かったことが示唆された。また様々な対戦型の経済ゲームによる前頭前野のoxy-Hb変化量の同定では、背外側前頭皮質、眼窩前頭皮質、および島において有意にoxy-Hb量が増加した。これらの部位は、不安や喜怒哀楽などの情動に関与すると言われており、本研究結果からも経済ゲームの種類によってそれらの情動を惹起させることが明らかになった。(3)口腔粘膜から綿棒を使って、DNA抽出のためのサンプリングを行い、PCR解析により、セロトニントランスポーター(5-HTTLPR)の遺伝子多型(SS、SL、およびLL)を分類することができるか比較検討を行った。今後、行動実験などの結果との相関を評価し、それら負の情動生成をどうすれば軽減あるいは抑制することができるのかについて考察したい。最終年度では、前年度の結果を踏まえて、ストレスから生じる心理学的な負の情動生成のメカニズムについて多角的に解明したい。特に、抗酸化物質などによるストレス耐性の研究も行いたいと考えている。具体的にはストレスに強い脳を作るために、抗酸化物質の効果について動物実験も含めて検討を行いたい。

具体的には下記のような手順で遂行する予定である。(1)拡散テンソル画像法(DTI)による神経繊維の描出:脳賦活領域間での神経線維走行や繊維束の描出を行い、その連結性を評価する。特に大脳皮質-大脳辺縁系ループにおける神経繊維走行の同定を行う。さらに、DTI研究での定量評価で一般に用いられるFractional Anisotropy (FA)やApparent Diffusion Coefficient (ADC)などを利用して、負の情動生成を生じやすい人、あるいは逆に全く生じにくい人での神経繊維の連続性に関する定量的評価も行う。また主観的な指標として、ストレステスト(GHQ28、STAIあるいは簡易型TCI)を用いた分類も行う。(2)MRS(Magnetic Resonance Spectroscopy)による脳内での代謝評価:スペクトル解析としては、視床下部室傍核に着目し、NAA(N-アセチルアスパラギン酸)、Cho(コリン含有物質)、Cr(クレアチン)などの代謝変化について行う。特にNAAは神経細胞内に特異的に存在することから、その代謝変化については十分な検討を行う。また生体指標として、唾液中のコルチゾールやクロモグラニンAなど、尿中および血中のコルチゾールなどの変化を、測定キットを用いて同時に計測する。前年度に物品購入費用として計上していた唾液中のコルチゾールやクロモグラニンAなどの測定のための測定キットなどの試薬の購入や抗酸化物質の影響を調べるための実験用マウスやラットの購入などを行い、研究の遂行の若干の遅れにより購入できなかった物品購入を行う。また当該助成金が生じた最も大きな原因は、当初計画していなかったfNIRSの使用によるMRI実験回数の減少である。最終年度は、MRI実験を多く組み込む予定であり、それに伴うMRI使用料、実験被験者への謝金の支払い、実験補助者の人件費、画像データ保存用MRI光ディスクなどの購入を予定している。当初の計画通りに実験を遂行し、円滑な研究費の使用を行いたい。また最終年度ということもあり、国内外の学会発表や国際雑誌への投稿など、調査研究旅費(学会出張費および学会参加費)、英文論文校閲費あるいは英文投稿料などに研究費の使用を考えている。
滑膜肉腫関連SYT/SSX遺伝子のオーロラ遺伝子に対する作用と分子標的治療の探究

悪性骨軟部腫瘍は小児に高頻度で見られ、現在でもなお生命予後不良で治療へむけた研究は大きく遅れている。一方、オーロラキナーゼは細胞分裂の多くの過程に関与し癌組織でも観察されるため、オーロラキナーゼと腫瘍関連遺伝子、特にSXT/SSXとの関連を追及することが本研究の目的である。まずは骨肉腫、滑膜肉腫などの骨軟部腫瘍培養細胞のオーロラの過剰発現の検証、オーロラA、Bプロモーター部分を、滑膜肉腫細胞(Cell line Fuji)に導入した際のオーロラの相対的活性化度の検証を行い、オーロラの過剰発現を証明した。次いで線維芽細胞腫細胞(Cell line HT1080)にSYT/SSX+93(SYT部分が通常より+93の塩基配列を有する滑膜肉腫細胞)とSYT/SSX-93(通常の滑膜肉腫細胞)、SYT+93、SYT-93の4種類のプラスミドを用いてルシフェラーゼアッセイを行い、オーロラA、Bともに、すべてのプラスミドにおいて(特にSYT/SSX1+93が)有意な相対的活性上昇を認めた。またdeletion studyにおいて、オーロラA、Bプロモーターともに一定の場所で有意な活性低下を認め、そこに何らかの転写因子の結合部位があることが示唆された。さらにSYTSSX-93をもつ滑膜肉腫細胞(Fuji)に対してSiRNAを作成して導入したところ、STY/SSXの発現減少を認めた。一方、マウスに導入すべく、SYT/SSX+93をテトラサイクリンで発現コントロールが可能なベクター(pTREhyg2)に組み込んでプラスミドを作成している。悪性骨軟部腫瘍は小児に高頻度で見られ、現在でもなお生命予後不良な疾患であるが、治療へむけた研究は大きく遅れているのが現状である。一方、オーロラキナーゼは細胞分裂における多くの過程に関与し、その過剰発現が、種々のヒトがん組織で観察され、様々な転写活性因子との関与などが報告されている。そのため、オーロラキナーゼとこれら腫瘍関連遺伝子特にSXTSSXとの関連を追及することが本研究の目的である。まずは、ヒト骨軟部腫瘍におけるオーロラ遺伝子の発現を検証すべく、骨肉腫、滑膜肉腫、ユーイング肉腫などの骨軟部腫瘍の培養細胞、および我々がかねてより採取保管しているヒト骨軟部腫瘍細胞の臨床材料組織切片より、ISOGEN((株)ニッポンジーン)を用いてRNAを抽出し、RT-PCRによりオーロラ遺伝子の発現を確認した。このとき、線維芽細胞(NIH3T3)をコントロールとして用いたが、オーロラの過剰発現は、腫瘍細胞にのみ認められた。よって今後、腫瘍細胞より蛋白を抽出し、ウエスタンブロットで蛋白レベルでの確認を行う予定である。また、滑膜肉腫発現関連遺伝子SYT/SSXとオーロラキナーゼAおよびBとの関連を、ルシフェラーゼアッセイを用いて解析した。具体的には、オーロラプロモータ部分をPGL3ベクター(Promega:ルシフェラーゼをレポータ遺伝子としてもつベクター)に組み込み、オーロラプロモータの活性化をルシフェラーゼで検出できるプラスミドを作成した。これをCell line Fuji(SYT/SSXをもつ滑膜肉腫細胞)に導入して、ルミノメータにてオーロラの相対的活性化度を測定したところ、上昇を認めた。さらにCell line HT1080(線維芽細胞腫細胞)にSYT/SSXプラスミドとともに導入したところ、empty vectorだけを導入した細胞と比較したところ、有意に活性化の上昇を認めた。今後さらなる解析を進める予定である。昨年度は骨肉腫、滑膜肉腫などの骨軟部腫瘍培養細胞のオーロラの過剰発現の検証や、オーロラA、Bプロモータ部分を、滑膜肉腫細胞(Cell line Fuji)に導入した際のオーロラの相対的活性化度の検証を行い、オーロラの過剰発現を証明した。

また線維芽細胞腫細胞(Cell line HT1080)にSYT/SSX1を導入したところ、同様に有意に活性化の上昇を認めた。そのため今年度は、SYT/SSXとオーロラキナーゼAおよびBとの関連をさらに検証すべく、SYT/SSX1+93(SYT部分が通常より+93の塩基配列を有する滑膜肉腫細胞)とSYT/SSX1-93(通常の滑膜肉腫細胞)、SYT1、SYT2の4種類におけるオーロラA、Bプロモーターによる転写活性を検証した。その結果、4種類すべてにおいて、A、Bともにコントロールと比較して、有意な活性上昇を認め、特にSYT/SSX1+93が高い活性度を示した。次いでSYT/SSX1蛋白がどこに結合、活性化をするのかを検証すべく、さまざまな長さのオーロラA、Bプロモータープラスミドを作成し、同様の検証を行った(deletion study)。結果、オーロラAでは、-124と-75の間で、オーロラBでは-104から-74で有意な活性の低下を認め、ここに何らかの転写因子の結合物質があることが判明した。今後、オーロラA、Bともにこの部分にmutantをかけたプラスミドを作成し、活性化が消失することを確認する予定である。また、SYTSSX2をもつ滑膜肉腫細胞(Fuji)に対してSiRNAを作成して導入したところ、STY/SSXの発現減少を認めた。今後は、SYTSSX1を持つ滑膜肉腫細胞(HSSY II)に対するSiRNAを用いて発現の検証、濃度を変えて同様の実験を行うDensity gradientstudyなどを行っていく予定である。またマウスに導入すべくSYT/SSX1のサブクローニングも進めていく予定である。
骨芽細胞と軟骨細胞の分化と副甲状腺ホルモン関連ペプチドに関する研究

副甲状腺ホルモン関連ペプチド(PTHRP)は悪性腫瘍に併発する高カルシウム血症の起因物質として発見された。PTHRPは病理的には腫瘍細胞から産生される副甲状腺ホルモン(PTH)様の物質であり、そのアミノ酸配列においてはN末端13個のアミノ酸がPTHと高い相同性を示している。1991年にクローニングされたPTHレセプターはPTHRPとも結合し(PTH/PTHRPレセプター)、PTH様の生物学的活性を示すことが明らかにされている。ところが、PTHRPは正常組織、特に胎生期に多く産生されていることから、PTHRPは単に血清カルシウム調節因子ではなく、個体発生に重要な役割を果たす因子であることが考えられる。近年、gene targeting法によりPTHRP遺伝子欠損マウスが作製された。我々はこれらPTHRP遺伝子欠損homozygousマウスの骨端軟骨を形態学的に検索してきた(Amizuka et al.,J.Cell Biol.,1994)。これらマウスでは軟骨細胞の増殖と分化の抑制が認められる他、早期に細胞死に移行する軟骨細胞が存在することが明らかにされた。このことから、軟骨細胞の細胞死とPTHRPとの関係を明らかにする目的で、培養軟骨細胞にPTHRPcDNAをtransfectionして無血清培地で培養したところ、正常細胞に比べてPTHRPを過剰発現する軟骨細胞が長期間生き延びることが明らかにされた(Henderson,Amizuka,et al.,Mol.Cell Biol.,1995)。さらに我々は、PTHRPが成獣期においても同様な生物学的作用を有するか否かを解明する目的で、single geneを有する3カ月齢のheterozygousマウス(+/-)を用いて検索した。heterozygousマウスは血清カルシウムやPTH濃度は正常であるが、骨端軟骨における軟骨細胞の細胞増殖とカラム形成が悪く、それに続く骨組織の骨梁の形成もわずかに抑制されていた(Amizuka et al.,Dev.Biol.,1996)。このことから、PTHRPは成獣期においても同様に軟骨細胞の増殖および分化を調節する因子であることが推測される。
形状記憶合金を用いた医療検査用極細管の製造技術

軽量、超弾性、生体適合性などの機能面から形状記憶合金を用いた医療検査用細管が注目されている。しかし、加工性が非常に悪く問題となっている。本研究では細管の引抜き加工を取り上げ、1)素管の熱処理条件、2)従来法による引抜き方の改善、3)潤滑剤の選定、4)FEMによる変形加工解析、5)最適な工具形式、6)引抜き中の破断防止の項目について検討した。平成1011年の研究から得られた事柄を以下に示す(1)引抜き加工に対する素線の最適熱処理条件および最適な潤滑剤を明らかにした。(2)空引き加工後及び心金引き加工後の形状回復率を実験から明らかにした。(3)提案したローラダイス引抜き加工では、焼きなまし無しで外径を約30%減少させることが可能となった。(4)心金引き加工は内面のあらさを平均あらさRaで0.2μm程度に良くする事ができ、製品性能を向上させることができる。(5)FEM(有限要素法)による変形・加工解析を行い、ダイス、心金の最適工具形状、引抜き限界、引抜き間の肉厚変化、均一加工性などの検討に有効であることを明らかにした。(6)加工の操業安定化のキーとなる割れによる引抜き中断防止策として、心金形状を従来の円筒形から球状したものを使用し有効であることを示した。また、得られた成果の公表として、国内の専門学会のほか新材料と新加工法の国際会議(AMPT99,Dublin)で発表し、世界の第一線の研究者と討論できた。以上のように形状記憶合金間の細径化への加工技術の基礎データが得られた。軽量,剛性、超弾性と生体適合性があるNi-Ti形状記憶合金管が医療の分野で注目されている.医療検査用細管の製造の可能性を確認するため、管の引抜き加工の研究を行った.本研究では,測定しやすい面から大きい素管(φ8.0mm,t=0.5mm)を用い,次々と空引きと心金引きを行い,加工性改善のための条件を見いだすことを目的とした.具体的には,1)素管の熱処理条件,2)従来法による引抜き法の改善,3)潤滑剤の選定,4)FEMによる変形解析,5)最適な工具形状とその材料について検討した.平成10年度研究から得られた事柄を以下に示す.(1)本材料では他の実用金属と異なり,熱処理による線材表面の薄い酸化スケールの存在が加工に好影響を及ぼすことが判明した.その加工に対する最適熱処理条件が真空度の少し悪い状態で700750°C、30分保持後空冷であることを明らかにした.(2)潤滑剤してフッ素系樹脂とステアリン酸ナトリリウム石けんを用いることにより,22%までの空引きと20%までの心金引き加工が可能であることを示した.特に心金引きは,細径化と薄肉化の管の製造ができる上,管内面の表面粗さも向上した.(3)空引き及び心金引き加工による加工後ならびに熱処理後に形状回復することを明らかにし,その割合を示し製品寸法の予測に役立てた.(4) FEM(有限要素法)による変形機構の解析と実験結果の比較検討を行い,良い一致が得られ均一加工や引抜き限界などを推測することができた.以上のように細径化への加工技術の基礎データが得られた.平成11年度はこれらの知見を基に,より細径化への加工技術の確立をめざす.具体的にはφ0.5程度の極細管製造技術の確立を目標にしている.軽量,超弾性,生体適合性などの機能面から形状記憶合金を用いた医療検査用細管か注目されている.しかし,加工性が非常に悪く問題となっている.

本研究では細管の引抜き加工を取り上げ,1)素管の熱処理条件,2)従来方による引抜き法の改善,3)潤滑材の選定,4)FEMによる変形加工解析,5)最適な工具形状,6)引抜き中の破断防止の項目について検討した.特に平成11年度は前年度の研究成果を踏まえ,主として操業ベースで細管製造技術の確立を目標に研究を行った.平成11年度の研究から得られた事柄を以下に示す.(1)提案したローラダイス引抜き加工では,焼きなまし無しで外径を約30%減少させることが可能となった.(2)心金引き加工は内面のあらさを平均あらさRaで0.2μm程度に良くする事ができ,製品性能を向上させることができる.(3)FEM(有限要素法)による変形・加工解析を行い,ダイス、心金の最適工具形状,引抜き限界,引抜き管の肉厚変化,均一加工性などの検討に有効であることを明らかにした.(4)加工の操業安定化のキーとなる割れによる引抜き中断防止策として,心金形状を従来の円筒形から球状したものを使用し有効であることを示した.また,得られた成果の公表として,新材料と新加工法の国際会議(AMPT99,Dublin)で発表し,世界の第一線の研究者と討論できた.以上のように形状記億合金管の細径化への加工技術の基礎データが得られた.
生態学的システム論からみた養育スキルの発達 -ソーシャルリソースとしての育児サークルに注目して-

1.研究目的育児サークルに所属している母親を対象に、育児スキルや親意識に関する調査と、母子間の行動観察を継続的に実施し、ソーシャルリソースとしての育児サークルの機能とそれによる母親の養育スキルや親意識の発達について検討した。2.研究結果ソーシャルリソースとしての育児サークルの主な機能としては、(1)育児に従事している仲間とのつながりの意識化(2)育児スキルの獲得や、困りごと・悩み事の相談先(3)(1)(2)によって生じる安心感とストレスの軽減(4)その一方で、育児サークルの人間関係に悩む母親も存在があげられる。育児サークルに所属していない母親との比較では、育児サークルへの所属と、親役割の肯定的受容や親になることによる自らの成長観の促進との間に意味のある関連がみられた。平成10年度の研究実施計画は次の通りである。(1) 3歳未満の第1子を持つ親に対する育児スキルおよび親意識に関する質問紙調査(2)育児場面における親子間の相互作用の行動観察これに対応する研究遂行状況は次の通りである。(1)育児サークルに加入している親の特徴を浮き彫りにするため、育児サークル未加入の親に対する質問紙調査も実施した。データは現在分析中である。(2) (1)と同様に、育児サークル未加入の親に対する行動観察も実施した。母親が持つ養育スキルは子どもの成長・発達と共に変化していくようである。これは日本発達心理学会第10回大会で研究発表した。未発表の研究成果は、平成11年度に順次発表する予定である。
生体ガス・皮膚滲出液を用いる新規サンプリング手法と診断分析法の開発

ファイバー固相マイクロ抽出(SPME)法またはインチューブSPME法を用いて皮膚ガス及び皮膚滲出液中の揮発成分や唾液成分を非侵襲的かつ簡便迅速にサンプリング、抽出濃縮した後、ガスクロマトグラフ-質量分析(GC-MS)法または液体クロマトグラフィー-質量分析(LC-MS)法との連結により高感度分析する方法を開発した。ファイバーSPME/GC-MS法を用いて、揮発性アルデヒド類や含硫化合物などの体臭成分の分析法を確立し、喫煙や食品摂取の影響を解析した。また、インチューブSPME/GC-MS法を用いて、コルチゾールやテストステロンなどのストレス・疲労関連ホルモン類や8-イソプロスタン及び8-OHdGなどの酸化ストレス関連化合物の自動分析法を確立し、喫煙による酸化ストレスの影響を解析した。これらの方法は、口臭や体臭の診断、疾病診断への応用が期待される。22年度は、実施計画に基づき、生体ガスや皮膚滲出液のサンプリング・前処理法について検討した。特に、ヒトの表皮から放出されるアセトアルデヒド、エタノール及びアセトンなどを対象として、ファイバーSPME法に基づくサンプリング法や分析条件を検討し、アルコール摂取による影響を調べた。また、体臭原因物質として加齢臭に関連するノネナールやがん臭に関連する含硫化合物、口臭原因物質などを対象として、サンプリング分析法を検討した。さらに、現在ストレスや疲労関連ホルモンを対象として、インチューブSPME法に基づく皮膚滲出液や唾液の非侵襲的サンプリング法や分析条件を検討している。その他、インチューブSPME法を様々な化合物の分析へ適用した。1.吸引気密捕集法及びカップ液抽出法により、アセトアルデヒド、エタノール及びアセトンをSPMEファイバーに直接抽出でき、GC-MSにより高感度分析できた。また、飲酒後のこれらの化合物の変化を簡単に測定できた。2.体臭関連の不飽和アルデヒド類のサンプリング法として、カップ液抽出法、脱脂綿ふき取り法、ガーゼ貼付法を検討した結果、脱脂綿ふき取り法が最も効率よくこれらの化合物を回収でき、ファイバーSPME/GC-MS法により高感度分析できた。本法により、不飽和アルデヒド類は、鼻や足、腋などから多く放出されていることがわかった。3.体臭・口臭関連の揮発性含硫化合物のファイバーSPME/GC-MS法を最適化して、皮膚及び口腔内よりサンプリング分析する方法を開発し、ジメチルスルフィド、ジメチルトリスルフィドなどが生体から検出された。4.カップ液抽出法でサンプリングした皮膚滲出液や唾液をインチューブSPME法により効率よく抽出濃縮する方法を開発し、LC-MS法との連結により、ストレスや疲労関連ホルモン類の分析に適用できることがわかった。本法を用いれば、非侵襲的かつ簡単に生体成分をサンプリング可能で、SPME法により効率よく抽出濃縮でき、MS法との連携で選択的かつ高感度に分析できることから、口臭や体臭の診断、疾病診断への応用が期待される。23年度は、実施計画に基づき、生体ガスや皮膚滲出液のサンプリング・前処理法について検討した。特に、体臭原因物質として、がん臭関連の含硫化合物や加齢臭関連の高級脂肪酸類などを対象として、固相マイクロ抽出(SPME)法に基づくサンプリング法や分析条件を検討した。さらに、ストレスや疲労関連ホルモン類をバイオマーカーとして、インチューブSPME法に基づく唾液を用いた非侵襲的サンプリング法や分析条件を検討した。1.ヒトの表皮から放出される体臭原因物質のヂメチルスルフィドやヂメチルトリスルフィドなどの含硫揮発性化合物や3-ペンタン-2-オンをファイバーSPME/GC-MS法により簡便迅速かつ高感度に測定する方法を確立した。2.加齢臭の原因となっている皮脂成分の高級脂肪酸(特にノナン酸)をインチューブSPME法により効率よく抽出濃縮する方法を開発し、LC-MS法との連結により、選択的勝高感度に測定する方法を確立した。サンプリング法として、カップ液抽出法、脱脂綿ふき取り法、ガーゼ貼付法を検討した結果、脱脂綿ふき取り法が最も効率よく回収でき、現在体臭の日内変動や加齢など生理的影響について解析している。3.様々な疾患の引き金となるストレスや疲労のバイオマーカーとして、唾液中コルチゾールや男性ホルモンのテストステロンやデヒドロエピアンドロステロンを、インチューブSPME法により効率よく抽出濃縮し、LC-MS/MS法との連結により選択的かつ高感度分析する方法を開発した。精神的及び肉体的ストレス負荷によるこれらのホルモンレベルの変動を解析し、ストレスや疲労の客観的評価法として有用な方法になることがわかった。本研究は、非侵襲的かつ簡便な生体成分のサンプリング、SPME法による効率的な抽出濃縮、MS法との連携による選択的かつ高感度な分析を可能とし、口臭や体臭の診断、疾病診断への応用が期待される。

24年度は、実施計画に基づき、生体ガスや皮膚滲出液のサンプリング・前処理法について検討した。特に、体臭原因物質として、2-ノネナールなどのアルデヒド類を対象として、固相マイクロ抽出(SPME)法に基づくサンプリング分析法を確立し、喫煙による影響や、食品摂取による体臭変化のモデル実験として食品成分と2-ノネナールとの相互作用による消臭効果を検討した。さらに、ストレスや疲労関連ホルモン類や酸化ストレス関連化合物をバイオマーカーとして、インチューブSPME法に基づく健康および病態診断のための簡便迅速な高感度分析法を検討した。1.本研究により、喫煙によりタバコ成分が皮膚ガスとして体表から放出されて体臭に影響することがわかった。また、2-ノネナールと抗酸化物質を含む食品との相互作用により消臭効果が得られることから、食品摂取は体臭変化に影響を与え、ポリフェノールなどの機能性食品によるデオドラント効果が期待された。2.様々な疾患の引き金となるストレスや疲労のバイオマーカーとして唾液中コルチゾールや男性ホルモンのテストステロンやデヒドロエピアンドロステロンを、また糖尿病、がん、循環器疾患、呼吸器疾患、肝疾患、神経疾患など様々な疾患発症に関与する酸化ストレスバイオマーカーとして、尿中8-isoprostane及び8-OHdGをインチューブSPME法により効率よく抽出濃縮し、LC-MS/MS法との連結により選択的かつ高感度分析する方法を開発した。本法を用いて、喫煙による酸化ストレスの影響を解析し、評価法として有用であることがわかった。本研究は、非侵襲的かつ簡便な生体成分のサンプリング、SPME法による効率的な抽出濃縮、MS法との連携による選択的かつ高感度な分析を可能とし、口臭や体臭の診断や消臭効果の解析、疾病診断などへの応用が期待される。研究は、目的を達成すべくおおむね順調に進行しているものの、研究計画の項目がやや多すぎたために、結果の解析や論文公表までには至っていないものがある。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、研究計画の最終年度であり、目標達成に向けて、研究推進する予定であり、さらに研究を総括して、研究成果を論文としてまとめるとともに、今後も実用化を目指して新しい研究の展開・発展に繋がるよう鋭意努力する。
機能的MRI及びMRIを用いた音楽の大脳メカニズムの研究

1.歌唱時の脳内活動について右利き健常人12名を対象として、歌唱時の脳内血流動態を機能的磁気共鳴画像(機能的MRI)を用いて調べた。歌唱時には、いずれも両側の、下前頭溝後部周辺、下前頭回弁蓋部、上側頭回、縁上回が賦活することがわかった。左右大脳半球差に関しては、縁上回のみが著明な右半球優位を示し、他の部位では明らかな左右半球差は観察されなかった。これらの結果により、歌唱には前頭葉の運動連合野と側頭葉の聴覚野が両側に関与し、頭頂葉の連合皮質が右半球優位で関わることが示唆された。2.作曲時の脳内活動について右利きで健常な音楽家12名を対象として、作曲活動時の脳内活動を、機能的MRIにより調べた。その結果、両側の下前頭回、中前頭回後部、帯状回、加えて左半球の上および下頭頂小葉に賦活が観察された。前頭葉および頭頂葉の賦活は左半球の賦活が右より著明に多く、作曲活動が左半球に強く関わることが示された。3.絶対音感保持者と非保持者の大脳形態学的差異について絶対音感は、基準音を参照することなしに任意の音高を同定または表出する能力である。この能力の有無と、大脳皮質の一部(側頭平面、および頭頂平面)の解剖学的左右差との関係を、磁気共鳴画像(MRI)を用いて調べた。その結果、側頭平面については、いずれの群でも左が右より同程度大きく、群間には有意差はなかった。他方、頭頂平面については、いずれの群でも右が左より大きい傾向があったが、絶対音感を保持する音楽経験者の方が、非保持の音楽経験者よりも、有意にその傾向が強かった。以上の結果から、右の頭頂平面が絶対音感に関与することが示唆された。(1)歌唱時の脳内活動について機能的核磁気共鳴画像(機能的MRI)を用いて、特殊な音楽能力を持たない右利きの通常人の歌唱時の脳内血流動態を調べた。その結果、右中前頭回後部、両側下前頭回弁蓋部(いずれも運動連合野)、および両側上側頭回後部(聴覚野)が賦活されることがわかった。これらの部位の左右大脳半球差に関しては、中前頭回後部では右半球のみに強い賦活が見られ、下前頭回弁蓋部では右半球優位、上側頭回後部の一部である側頭平面では左半球優位の賦活が見られた。したがって歌唱には、運動系と聴覚系の複数の連合野が関わっており、運動系の連合野では言語活動とは逆に右半球優位で、聴覚系の連合野では言語活動と同じく左半球優位で行われることが示唆された。(2)絶対音感保持者と非保持者の大脳形態学的差異について機能的核磁気共鳴画像(MRI)を用いて、絶対音感と呼ばれる特殊な音楽能力の保持者と非保持者との間に、大脳半球の一部(側頭平面の面積)に形態学的差異があるかどうかを調べた。絶対音感とは基準となる音高を参照せずに任意の音高を聞き分け、または歌い分ける能力である。その結果、近年なされた報告(Schlaug et al;Science 267;699-701,1995)とは異なり、絶対音感の保持者と非保持者との間に著明な差はないことが確認された。

側頭平面は左半球の方が右半球よりも大きい傾向にあるが、その左右差の程度には絶対音感の保持者と非保持者との間で有意差はなく、絶対音感の有無と側頭平面の形態学的特徴に、近年報告されたような関連はないことが示唆された。1.歌唱時の脳内活動について本年度は新たに右利き健常人を12名対象として、歌唱時の脳内血流動態を機能的核磁気共鳴画像(機能的MRI)を用いて調べた。昨年よりもスキャン枚数を増して18枚とし、さらにSPM96で処理した。その結果、両側中前頭回後部、両側上側頭回後部、両側縁上回が賦活されることがわかった。これらの部位の左右大脳半球差に関しては、中前頭回後部および縁上回では右側が左側より広く賦活されていた。したがって、歌唱には、右半球が優位に関与していることが示唆された。2.絶対音感保持者と非保持者の大脳形態学的差異について絶対音感と呼ばれる特殊な音楽能力の保持者と非保持者との間に、大脳半球の一部(側頭葉、および頭頂葉)に形態学的差異があるかどうかを、磁気共鳴画像(MRI)を用いて調べた。絶対音感とは、基準となる音高を参照せずに任意の音高を聞き分け、または歌い分ける能力である。さらに、音楽経験者と非経験者との間でも同様の差異があるかどうかを調べた。その結果、側頭葉後部については、近年なされた報告(Schlaug et al:Science267:699-701,1995)とは異なり、絶対音感の保持者と非保持者との間で、左右の面積差に有意差はないことが確認された。また、音楽経験者と非経験者との間にも有意差は観察されなかった。他方、頭頂葉前部については、絶対音感の保持者の方が非保持者よりも、左右面積差が有意に大きいことがわかった。また、音楽経験者と非経験者との間には有意差は見られなかった。以上の結果から、絶対音感の有無と頭頂葉前部の形態学的特徴に関連があることが示唆された。
特殊反応場触媒活性種モデルとなる有機ヘテロ2核/クラスター錯体の合成と反応性

遷移金属触媒において異種金属がもたらす協同効果は広く知られている。このような協同効果は異種金属界面という特殊な反応場における相乗効果であると考えられているが、これらを分子レベルで解明した例はほとんど知られていない。本研究では白金を含むヘテロバイメタリック錯体において、白金上のエチル基からのβ水素脱離反応および白金上のヒドリドとアルキンの反応において異種金属が白金に与える影響を分子レベルで解明することに成功した。エチル基を有する白金を含むヘテロバイメタリック錯体の合成は1,2-ビス(ジエチルホスフィノ)エタン(以下、dpeと記す)を持つ単核エチル白金錯体Pt(Et)(I)(dpe)とNa[CpMO(CO)_3]、Na[CpW(CO)_3]またはNa[Co(CO)_4]とのメタセシス反応により合成した[(dpe)EtPt-MoCp(CO)_3,(dpe)EtPt-WCp(CO)_3,(dpe)EtPt-Co(CO)_4]。これらの錯体の加熱によりβ水素脱離反応が進行し、エチレンとそれぞれ対応するヒドリド2核錯体を与えた。また、これらの反応はエチル2核錯体に対して1次反応であった。これらの2核錯体のβ水素脱離反応は単核のエチル白金錯体に比ベて速く進行した。ヒドリド白金モリブデン錯体(dpe)HPt-MoCp(C0)_3は、アセチレンジカルボン酸ジメチルやトランなどの2置換アセチレン誘導体と反応し、HMoCp(CO)_3と0価白金錯体Pt(RC≡CR)(dpe)を与えた。これは我々がすでに報告しているヘテロバイメタリック錯体におけるアルキル基の移動と類似した反応性であり、白金の酸化によりアルキルやヒドリドが隣接した金属に容易に移動することを示している。しかし、1置換アセチレン誘導体であるアセチレンモノカルボン酸エステルやフェニルアセチレンを用いると白金上のヒドリドがアルキンにマルコフニコフ付加しモリブデン上のカルボニルの1つが脱離し、1つが架橋配位した(dpe)Pt(m-CR=CH_2)(m-CO)MoCp(CO)が得られた。