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アンジオテンシノーゲン遺伝子による高血圧発症の機構解明に関する研究

1)in vivoにおいて,AGT(アンジオテンシノーゲン)遺伝子のalleleによるmRNA発現量の差を検討した.ヒト臓器として心臓および肝臓を検討した.心臓組織は冠動脈バイパス形成術時,得られる右心耳組織を,肝臓組織は肝臓疾患診断を目的とした肝生検時の検査済み検体の残りを使用した.検体からtotal RNAを抽出後,RT-PCR法によりM235T多型領域のDNA断片を得た.これをテンプレートとし,塩基置換部分を境にして,コモンプライマーおよび長さの異なるallele特異的プライマーとTaq DNA ligaseを使って解析した.その結果,心臓組織64例のうち,M235T多型のヘテロは11例あり,それぞれの235T alleleと235M alleleの発現比を測定したところ,1.001.23といずれの検体でも235T alleleの発現が多かった.さらにSSCP法を応用し,発現量を定量する方法で確認をおこなった.235T alleleからの発現量が多いことが,TT遺伝子型を持つヒトの高血圧易羅患性の原因となっていることが示唆された.肝臓組織に関しては10例の検体で解析したが,ヘテロは1例のみであり,意味のある結果は現時点では導き出せなかった.2)AGTコピー数の異なるマウスにおいて,塩分摂取などの環境要因とAGTコピー数の違いによる遺伝要因との交互作用を検討する.マウスはAGTコピー数が1,2,3,4のオスを数匹ずつ,塩分摂取の多いグループと通常食に分けた.血圧は,tail-cuff method測定した.マウスの開発者が報告しているように,AGTコピー数により,血圧の平均が上昇する事を確認した.しかし,塩分摂取による,血圧の有意な差異はいずれのコピー数の群でもみられなかった.原因として血圧測定自体が不安定であること,この実験に使用したマウスでは塩分感受性が低いこと等が考えられる.1)in vivoにおいて,AGT(アンジオテンシノーゲン)遺伝子のalleleによるmRNA発現量の差を検討した.ヒト臓器として心臓および肝臓を検討した.心臓組織は冠動脈バイパス形成術時,得られる右心耳組織を,肝臓組織は肝臓疾患診断を目的とした肝生検時の検査済み検体の残りを使用した.検体からtotal RNAを抽出後,RT-PCR法によりM235T多型領域のDNA断片を得た.これをテンプレートとし,塩基置換部分を境にして,コモンプライマーおよび長さの異なるallele特異的プライマーとTaq DNA ligaseを使って解析した.その結果,心臓組織64例のうち,M235T多型のヘテロは11例あり,それぞれの235T alleleと235M alleleの発現比を測定したところ,1.001.23といずれの検体でも235T alleleの発現が多かった.さらにSSCP法を応用し,発現量を定量する方法で確認をおこなった.235T alleleからの発現量が多いことが,TT遺伝子型を持つヒトの高血圧易羅患性の原因となっていることが示唆された.肝臓組織に関しては10例の検体で解析したが,ヘテロは1例のみであり,意味のある結果は現時点では導き出せなかった.2)AGTコピー数の異なるマウスにおいて,塩分摂取などの環境要因とAGTコピー数の違いによる遺伝要因との交互作用を検討する.マウスはAGTコピー数が1,2,3,4のオスを数匹ずつ,塩分摂取の多いグループと通常食に分けた.血圧は,tail-cuff method測定した.マウスの開発者が報告しているように,AGTコピー数により,血圧の平均が上昇する事を確認した.しかし,塩分摂取による,血圧の有意な差異はいずれのコピー数の群でもみられなかった.原因として血圧測定自体が不安定であること,この実験に使用したマウスでは塩分感受性が低いこと等が考えられる.本研究の計画を要約すると次の3点である.1) in vivoにおいて,AGT(アンジオテンシノーゲン)遺伝子のalleleによるmRNA発現量の差を検討する.2) AGTコピー数の異なる近位尿細管細胞株を樹立する.3) AGTコピー数の異なるマウスにおいて,塩分摂取,ストレスなどの環境要因とAGTコピー数の違いによる遺伝要因との交互作用を検討する.このうち1)に関してこれまで,ヒト臓器として心臓および肝臓を検討した.心臓組織は冠動脈バイパス形成術時,得られる右心耳組織を,肝臓組織は肝臓疾患の肝生検時の検査済み検体の残りを使用した.検体からtotalRNAを抽出後,RT-PCR法によりM235T多型領域のDNA断片を得た.これを鋳型とし,塩基置換部分を境にして,コモンプライマーと長さの異なるallele特異的プライマーをTaq DNA ligaseを使って解析した.その結果,心臓組織64例のうち,M235T多型のへテロは11例あり,それぞれの235T aneleと235Malleleの発現比を測定したところ,1.001.23といずれの検体でも235T alleleの発現が多く,in vitroと同様の結果となった。このことは,235Tのalleleからの発現量が小児期から多いことが,中年期以降の本態性高血圧発症の危険要因となっているという仮説を支持するものである.

肝臓組織に関しては10例の検体で解析したが,ヘテロは1例のみで,今後本態性高血圧の責任臓器であると思われる腎臓と共に症例数を増やして検討したい.2)に関しては,マウスの繁殖が順調にすすみ,細胞培養の設備も整ったことから,現在,基礎実験を行っている.3)に関しては,AGTコピー数が1,2,3,4のオスを数匹ずつ,塩分摂取の多いグループと通常食に分け,tail-cuff methodにより血圧のモニターを始めた.本研究でおこなった実験は,以下の2点である.1)in vivoにおいて,AGT(アンジオテンシノーゲン)遺伝子のalleleによるmRNA発現量の差を検討する.2)AGTコピー数の異なるマウスにおいて,塩分摂取などの環境要因とAGTコピー数の違いによる遺伝要因との交互作用を検討する.1)ヒト臓器として心臓および肝臓を検討した.心臓組織は冠動脈バイパス形成術時,得られる右心耳組織を,肝臓組織は肝臓疾患診断を目的とした肝生検時の検査済み検体の残りを使用した.検体からtotal RNAを抽出後,RT-PCR法によりM235T多型領域のDNA断片を得た.これを鋳型とし,塩基置換部分を境にして,コモンプライマーと長さの異なるallele特異的プライマーをTaq DNA ligaseを使って解析した.その結果,心臓組織64例のうち,M235T多型のヘテロは11例あり,それぞれの235T alleleと235M alleleの発現比を測定したところ,1.001.23といずれの検体でも235T alleleの発現が多く, in vitroと同様の結果となった.このことは,235Tのalleleからの発現量が小児期から多いことが,中年期以降の本態性高血圧発症の危険要因となっているという仮説を支持するものである.肝臓組織に関しては10例の検体で解析したが,ヘテロは1例のみであった.2)マウスの繁殖が順調にすすみ,AGTコピー数が1,2,3,4のオスを数匹ずつ,塩分摂取の多いグループと通常食に分けた.血圧は,tail-cuff method測定した.マウスの開発者が報告しているように,AGTコピー数により,血圧の平均が上昇する事を確認した.しかし,塩分摂取による,血圧の有意な差異はいずれのコピー数の群でもみられなかった.
データ解析の手法による排尿障害発生機序の解明

排尿障害を解明するため、終日ウロフローメトリを行った。日内変動について集中的に解析した。従来前立腺肥大症での夜間頻尿は、肥大腺腫の膀胱刺激症状とされてきた。この夜間頻尿の原因は、肥大腺腫によるというより、むしろ一般的な夜間尿量の増加によるものと考えられた。1日24時間をを8等分した。0:00-6:00をN2、N3、6:00-21:00をD1-D5、21:00-24:00をN1とした。中年、老年とも回数のピークはD3-D5にあった。24時間で老年は中年より回数が多かった。特にN2-D1で老年が多かった。老年では尿量のピークが24時間で2回(D4、N2)あったが、中年では1回のみであった。24時間の尿量合計は中年、老年で差がなかった。老年の夜間のピークが中年では認められなかったためである。一回排尿量は機能的な膀胱容量を示すが、中年、老年ともN2にピークがあった。24時間の平均で膀胱容量は老年は中年より有意に小さかった。回数、尿量、膀胱容量の3つのパラメータの相関を検討した。回数と尿量、尿量と膀胱容量の間で高い相関が認められた。回数と膀胱容量は昼間は負の相関で、夜間はほとんど相関がなかった。上記したごとく老年では夜間の回数が中年に比し増加している。一方、夜間では、回数と尿量が相関し、回数と膀胱容量の相関がない。従って、夜間の老年の回数の増加は、尿量の増加によってもたらされていると考えられる。前立腺肥大症の夜間頻尿も老年全体の夜間頻尿と同じく夜間多尿によってもたらされるものと考えられた。排尿障害を解明するため、終日ウロフローメトリを54人で行った。この夜間頻尿の原因は肥大腺腫によるというより、むしろ一般的な夜間尿量の増加によるものと考えられた。54人は、他疾患で入院した排尿障害の訴えのない患者、前立腺肥大症患者、前立腺癌の3群からなる。年齢で中年、高年、老年の3群に分けた。前立腺肥大症、癌では前立腺の大きさを鶏卵大、同以上、同以下の3群に分けた。1日の尿量の合計は、各年代で差がなかった。1日の排尿回数は加齢とともに増加した。すなわち1回排尿量は、加齢で減少した。夜間では昼間に比し、すべての年代で一回排尿量が増加していた。昼間と夜間の1回排尿量の比では、むしろ加齢とともに増加傾向があった。夜間の尿の産生は、夜間に排尿された尿量で代用したが、これは、加齢とともに増加が著しかった。夜間排尿回数は、夜間尿量と相関した。夜間一回排尿量と負の相関を示した。夜間排尿回数は前立腺の大きさとの関係を認めなかった。前立腺肥大症の程度は最大尿流量率の低下や手術の有無でも推定できるが、このような指標とも関係がなかった。ただし、無関係であることを明確にするにはさらに多くの症例数が必要であると考えられた。αブロッカー投与により、最大尿流量率の増加などを確認したが、MFRや一回排尿量の日内変動にも変化がみられた。手術、肥大症や癌に対する薬物療法での変化の詳細は継続して解析中である。

本研究の目的の一つは、侵襲的な検査法を終日ウロフローメトリなどの非侵襲的な方法で代用する可能性をさぐることにもある。同一患者の残尿期と非残尿期の尿量MFR曲線を比較するとパターンの違いが認められ、残尿状態が否か判断ができる可能性も示された。排尿の日内変動を検討した。50人の男性で、2703回の排尿を解析した。患者-日は345である。患者当たり平均排尿回数は47.6回、平均6.6日間であった。25例が前立腺肥大症、8例が前立腺癌、残り17例は排尿に関係のない疾患で入院した。50人を中年群(24例、平均54.7歳)、老年群(26例、平均71.6歳)に分けた。平均年齢1日24時間をを8等分した。0 : 00-6 : 00をN2、N3、6 : 00-21 : 00をD1-D5、21 : 00-24 : 00をN1とした。中年、老年とも回数のピークはD3-D5にあった。24時間で老年は中年より回数が多かった。特にN2-C1で老年が多かった。尿量は、排尿量と排尿回数の積で計算した。老年では尿量のピークが24時間で2回(D4、N2)あったが、中年では1回のみであった。24時間の尿量合計は中年、老年で差がなかった。老年の夜間のピークが中年では認められなかったためである。一回排尿量は機能的な膀胱容量を示すが、中年、老年ともN2にピークがあった。24時間の平均で膀胱容量は老年は中年より有意に小さかった。前立腺肥大症で前立腺重量が35mlより大きい症例15例(A群)、MFR(最大尿流量率)が10ml以下の症例17例(B群)て前立腺癌8例の3群(C群)の3群で機能的膀胱容量の日内変動を検討した。3群の平均年齢(68.6-69.1)は、老年全体の平均年齢に近かった。この3群での日内変動を老年全体と比較した。A群は老年全体に近い日内変動を示した。B群は夜間膀胱容量が減少していた。C群では昼間で膀胱容量が老年全体より減少していた。回数、尿量、膀胱容量の3つのパラメータの相関を検討した。回数と尿量、尿量と膀胱容量の間で高い相関が認められた。回数と膀胱容量は昼間は負の相関で、夜間はほとんど相関がなかった。上記したごとく老年では夜間の回数が中年に比し増加している。一方、夜間では、回数と尿量が相関し、回数と膀胱容量の相関がない。従って、夜間の老年の回数の増加は、尿量の増加によってもたらされていると考えられる。上記A、B、C群別での相関の検討も同様で、前立腺肥大症の夜間頻尿も老年全体の夜間頻尿と同じく夜間多尿によってもたらされるものと考えられた。
昭和モダニズム期以降の日本近代文学が描き出す都市像と感性

本年度は当研究課題の終了年度にあたるが、当初予定していた『ナップ』『日本浪漫派』は人手できなかったため、分析対象雑誌を『文芸通信』『文学界』とし、ほかに叢書の「新鋭文学叢書」(昭和5年7月6年3月、改造社)全28冊を分析対象として取り上げた。「新鋭文学叢書」は龍膽寺雄、堀辰雄、片岡鉄兵、中野重治、林房雄、藤沢桓夫など、昭和モダニズム文学を支えた作家・作品を数多く含む叢書で、データとしては多くの事例を収集できた。個々の作家によって都市空間と感性表現の関係は異なるが、全体的な傾向としては都市社会の発展の中で都市化現象を単に皮相な風俗現象として促えるのではなく、そこに生きる人間の根本的な感情を生み出し、突き動かしていくものとして択えようとしている。しかし一方で中野重治や窪川いね子、黒島伝治らの作品では資本主義社会の歪みをそこに見ることが出来るものとして都市化に批判的である。そうした傾向はモダニズム期以降の反動的な日本文化への賛美の傾向とストレートに繋がるものではなくても、一脈通じるものを示している。『文学界』は当時は同人誌に過ぎなかったが、その文壇的な位置はむしろ中心をなしており、都市空間表現は多種多様な形で頻出している。それに伴う感性表現も昭和初期の享楽的なものから比較するとかなり屈折したものが多く見られる。『文芸通信』は文壇ゴシップ記事や随筆を中心とした小雑誌であるために当時の作家の生の声を聞き取ることが出来、とくに当時の芥川賞受賞作に対するアンケートや評判、あるいは日本浪漫派、純粋小説論、行動主義文学などの文芸思潮に対する評価などを通して、作家たちが昭和十年代というものをどのように受け止めようとしていたかが概観でき、それは次第に都市空間に対して人々の視点のあり方が変容していくこととパラレルな関係にあるものとして受け止めることが出来る。本研究は平成8年度に行った研究(奨励研究)の延長線上に位置づけることができる。本課題において対象とした文芸雑誌は『文章倶楽部』(大正5年5月昭和4年4月)、『マヴォ』(大正13年7月同14年8月)、『行動』(昭和8年10月同10年9月)の三誌である。この三誌は各年代の特色を示していて興味深い結果が得られた。『文章倶楽部』の場合は啓蒙的投書雑誌ということから文壇事情を解説したものや作家の生活ぶりを戯画化した漫画などが多く登場し、「作家」という存在を通して都市生活の一面を読者に提示してくる。それは同時にこの時代の文芸メディアにおける言説空間の変容を如実に示しており、当時の人々が都市や文芸に抱いていた欲望や憧憬が「生活」という形で明確に表現を獲得していくことを表していた。『マヴォ』はダダイズムや構成主義を標榜しているだけに描出される空間は非常に断片化されており、それらの表現によって既成の価値観を否定して流動化を現出している。その感性のあり方の特色は機械主義への肯定と暴力的なまでのエネルギーの放出を美化する傾向が強い。空間表現としては都市的なものと農村的なものが併存し、感性的には断片化された空間に対する虚無感・不安感といった側面を指摘できる。『行動』の場合は都市像としての明確な空間表現は急速に減少している。それがモダニズムの終息を意味するのか、あるいは都市生活が自明なものとして後景化していく現れと見るかは現段階では判断しがたい。しかし、大陸への日本の植民地化の動きが明確になってくる時代にあって、「都市」のイメージに非西欧的な要素を見ようとする姿勢が現れてくることを予想させるものがある。今後は来年度に取り上げる予定の昭和十年代の雑誌の分析を通して、本課題の総合的な成果を結実させる必要がある。

『文芸通信』は文壇ゴシップ記事や随筆を中心とした小雑誌であるために当時の作家の生の声を聞き取ることが出来、とくに当時の芥川賞受賞作に対するアンケートや評判、あるいは日本浪漫派、純粋小説論、行動主義文学などの文芸思潮に対する評価などを通して、作家たちが昭和十年代というものをどのように受け止めようとしていたかが概観でき、それは次第に都市空間に対して人々の視点のあり方が変容していくこととパラレルな関係にあるものとして受け止めることが出来る。
琉球の家礼に関する書誌学的・文献学的研究

琉球王国時代、久米村の蔡家(具志家)における冠婚葬祭等に関する家のしきたりを、1736年に11世の蔡文溥がまとめたものが『四本堂家礼』である。原本は失われているが、各地に全文および一部が写本として残っている。本研究ではそうした『四本堂家礼』の写本間の文字の異同を確認しながら、研究テキスト化を図った。『四本堂家礼』の写本は現在までに、(1)沖縄県立博物館所蔵本、(2)石垣家本(石垣市)、(3)竹原家本(八重山博物館蔵)、(4)喜舎場英勝旧蔵本(八重山博物館蔵)、(5)識名信升家旧蔵本(八重山博物館蔵)、(6)大田静男旧蔵本(八重山博物館蔵)、(7)竹原家本(「雑録」のみ、八重山博物館蔵)、(8)上江洲家本(久米島自然文化センター蔵)、(9)崎浜秀明氏翻刻本(法政大学沖縄文化研究センター)、(10)京都大学文学部博物館所蔵本(「雑録」欠)、(11)ハワイ大学東西文化センター蔵マイクロ本、が確認されている。このうち(11)は琉球大学図書館にも複製本が収められているが、内容は(4)と(8)と同一である。したがって10冊のうち7冊が八重山に残っていることになる。これ以外には今回の調査では発見できなかった。特に八重山と対照的なのが宮古で、そこには『四本堂家礼』は全く伝わっていない。現存の写本では(1)が最も良好でほぼ原本に近いと思われるが、他の写本との校合によれば、いくつかの異同が確認でき、また虫喰いによる欠字が補える。久米島や八重山の写本は、恐らく蔵元の役人が首里上りの際に、当時、流布していたと思われる『四本堂家礼』の写本の一つから書き写し持ち帰ったもので、八重山ではそれがさらに書写されたと見られる。但しそうした写本のうち、(8)の上江洲家本や(2)の石垣家本には校訂の跡も見られるが、これによれば、複数の写本が持ち込まれた可能性もある。ということは沖縄本島でもいくつかの写本が流布していたことになる。奥野彦三郎所蔵本を翻刻した(9)の崎浜秀明氏翻刻本は、誤読や不明文字も多く、校合の際には不確実さが残るが、どちらかといえば(8)の上江洲家本が校訂に利用した写本に近い。写真またはマイクロフィルムのコピーによる校合では限界があった写本のうち、沖縄県立博物館本について閲覧およびデジカメ撮影を行った。また長らくある個人の手元にあった八重山の喜舎場英勝家本が、平成20年夏に八重山博物館に寄託されたため、実物による校合およびデジカメ撮影を行った。さらに久米島には、上江洲家本と西銘殿内本があるかのような巷間の説は全くの誤りであり、久米島自然文化センター所蔵の上江洲家本が唯一であることの確証も得た。以上の懸案がすべてクリアーできたため、あらためて現在残っている『四本堂家礼』の全写本を校合した結果、以下のような三つの系統に分類されることがわかった。(1)沖縄県立博物館本・上江洲家本(2)石垣家本・崎浜秀明氏翻刻本・京都大学文学部博物館本(3)仲本家本・喜舎場英勝家本・竹原家本・識名信升家本なお作成意図・年月日・作者を記した次の記事は、形式上、末尾に相当するものである。「右之通家規相定置申候間、子々孫々迄無相違永代可相守者也乾隆元年正月吉日前祝嶺親方」これを末尾に置いているのは(1)の沖縄県立博物館本と上江洲家本だけで、(2)(3)の写本はこの項目の後に後ろから四番目の項目を持ってきていて、いかにも不自然さは免れない。その意味で(1)の写本が原本に近い。さらに言えば、県博本・仲本家本・京都大学博物館本以外は、序文(候文)の前に漢文で書かれた文章があり、本来そうした前文が存在したと見られる.以上のことから、形式的に最も原本に近いのは上江洲家本ということになる。ただし上江洲家本にも校合の跡が随所に見えるが、それがどの本に拠ったのかは課題として残る。『四本堂家礼』が初めて公刊されたのは崎浜秀明編『沖縄法制史料集成』第5巻に所収された油印本であった。これは奥野彦六郎氏が収集した『蔡家家憲』を沖縄県立図書館に寄贈された桑江本によって校合したものであった。その崎浜翻字本は、文字の異同があるもについて「」で傍書されてはいるが、凡例がなく、それがどの程度の範囲で行われたのか、助詞の万葉仮名表記についても統一的に平仮名に直したかが不明であること、また判読できない文字はそのまま字形をなぞったままとなっていることなど、校合する写本としては不正確な点が多かった。

今年度、元の奥野彦六郎氏の収集本が普天間宮に所蔵されていることを発見した。そこで、あらためて崎浜翻字本に替えて校合作業を行った。その結果、奥野収集本は石垣家本と筆写元が同じか、石垣家本を再筆写したかのいずれかであることがわかった。そのことを踏まえ、現存する『四本堂家礼』の全写本を通覧すると、写本は、大きく(1)博物館本・上江洲家本・京大本と、(2)八重山の写本(石垣家本・仲里家本・竹原家本・喜舎場家本・識名家本)と奥野本のグループに分けられること、その中で上江洲家本が最も原本に近いことを指摘した。現在の写本には『四本堂家礼』『四本堂規模帳』『蔡家家憲』の3つの名称が見えるが、上江洲家本が原本に近いと考えると、その表紙に書かれている『四本堂家礼』が原本の名称であった可能性が高くなる。上江洲家本の筆写年は1860年(万延1)で年紀が知られるものの中では最も古く、他はすべて明治以降の写本であることも傍証となろう。『四本堂家礼』は東アジアへの伝播を考える上でも、また琉球社会に於ける儀礼や習俗を考える上でも重要な資料であるが、原本が失われており、影印本や写本や翻字本はあってもテキストとしては不十分であった。そこで現存するすべての写本間の校合を行い、校勘本『四本堂家礼』を作成し、より正確なテキスト情報を提供した意義は大きいと考える。
佐賀県における地域密着型の科学情報教育

本プロジェクトの研究経過は二つの流れにまとめられる。一つは、平成10年度と11年度に開催した「科学・情報教育シンポジウム」を核とした活動である。佐賀県において科学・情報教育の第一線で活躍する5人の講演者を中心として、科学(特に環境)・情報関連の諸問題を素材として、これを教材化する際の課題やインターネットを用いた情報収集、およびその過程で接する可能性のある有害情報への対応の苦慮、さらに、実際にコンピューターで生徒に何を伝えることができのるかなどの具体的かつ緊急的問題について活発な意見交換が行われた。佐賀県ではハード面は極めて充実し、そのレベルは全国的にも高いが、ソフト面の対応は比較的弱いと思われる。本シンポジウムでは、教育現場に対する現状のアンケートや訪問活動を通じて佐賀県における、科学・情報教育の実情と対応策などを取りまとめ、ソフト面を強力にサポートしながら教育活動へ貢献した。参加者は、佐賀県における、教育行政担当者、中学校教諭、一般市民および大学教官で、お互いに意見交換を行い、特に一般市民からも有意義であったとの意見を頂いた。二つめは、環境問題、リサイクル問題の各県の対応を視察し、情報収集し、佐賀県における初等・中等教育における科学・情報教育の場で生かすことであった。「環境科学学習会」を平成10年度と11年度の2回(それぞれ夏休みの2日間)、小・中学生およびその保護者を対象に行った。大学教官【double arrow】小・中学校および高校教諭、大学生【double arrow】小・中学生および高校生の相互やり取りを行い、お互いの情報共有と提供を積み重ね、連携して科学・情報教育を行う双方向教育体制を構築した。現状では、この体制は短い研究期間内では十分機能しはじめたとは言えず、体制を活かして継続させる方策も十分検討されたと言いがたいが、今後も継続して高校、科学・情報教育に対する有効な教育体制を充実する活動を行うつもりである。(1)科学・情報教育に関する諸問題の討議の場として、第1回科学・情報教育懇談会を開催した。15件の研究発表等が、大学教官、教育センターおよび中学校あるいは高等学校教員により行われ、活発な質議が行われ、教育現場における、素材研究を教材化するさいの諸問題、あるいはインターネットにより情報収集を行う際の問題などについて活発な質議応等が行われた。また、大学における研究活動を広く教育担当者に理解していただく機会となった。本懇談会の要旨は、図書として出版予定である。(2)高等学校の科学・情報担当教員を招待して、環境問題、リサイクルの問題など社会的な問題について大学生に対する授業を行っていただいた。また、高校生と大学生との討論の場を設定したところ、活発な議論となった。効果は絶大であり、双方に多大な収穫があったようで、高校と大学との間に共同的な教育方法を検討する場が設定できた。(3)中学校・高等学校の教員との意見交換において、大学と中学校・高等学校との間の双方向の討論が活発でないことが浮きぼりになった。今後の検討課題として懇談会を発展させていくことで一致した。近年エネルギー問題・情報教育の諸問題がクローズアップされている。環境問題に対応する太陽光発電など様々な技術開発の実用化を視野に入れた最新の研究・開発状況、JCO東海事業所の事故に関する資料収集、東京都清掃センター(夢の島など)の取り組みなど他数件の環境問題対応プロジェクトを視察し、科学・環境教育の教育素材として用いている。また、火山の噴煙を例とした大気循環に関して、また、ダイオキシン類を例として微生物による環境浄化に関する講演等が行われ、最新の研究成果の情報を提供いただくと共に、各々の機関で行われている教育の現状に関しても多くの情報を得た。プロジェクト期間内に、科学・情報教育シンポジウムを2回開催して一般市民、行政担当者、中学校、高等学校教諭の間で討論を行った。

本シンポジウムの結果は図書として出版される。また、2回目のシンポジウムについては、新聞において2面分が割かれて講演者の発表概要が紹介されるなど社会的に大きな反響があった。シンポジウムの開催の前後、科学・情報処理教育の中核として位置付けられている数校(中学校、高等学校)の担当教員との意見交換が行われ、地域(佐賀県)における科学・情報教育に関する問題点などをまとめた。その結果を視野に入れながら、佐賀大学文化教育学部と中高等学校間双方向情報通信、情報の共有などの新しい科学情報教育システムの確立にむけた体制が始動しつつある。
花粉管伸長過程の分子解析

1.ペチュニア花粉および花粉管の発現遺伝子の解析ペチュニア花粉・花粉管由来の732個のcDNAクローンを用いたマイクロアレイを作製した。これを用いて、花粉・花粉管における遺伝子発現解析を行い、主なものについては定量PCRを行った。これらのうち、花粉管で遺伝子発現量が大きく増大した遺伝子はなく、「花粉管では新たに遺伝子発現は起こらない」という1970年代の仮説を支持する結果となった。2.花粉管伸長時に盛んに合成されるペクチンの生合成機構花粉管伸長時に盛んに合成される、細胞壁成分ペクチンの主鎖を合成するポリガラクツロン酸合成酵素の精製を試みている。この酵素は膜タンパク質で、精製するには植物材料から可溶化できる酵素量が少ないため、精製が達成されていない。リボヌクレアーゼ存在下で植物材料からタンパク質を抽出すると2.1倍量の本酵素を可溶化できることを見いだした。また、界面活性剤を含む可溶化緩衝液にポリアミン、アルキルアミン、あるいは塩基性アミノ酸を添加すると、従来法の45倍の本酵素を可溶化することができた。これらの方法は膜タンパク質効率的調製法として一般的に使えることを報告した。次いで、アルギニン存在下でイオン交換クロマトグラフィーおよび限外ろ過を行うと、膜タンパク質の収率が向上した。膜タンパク質の凝集を抑えることで、収率が改善されたと考えられる。これらの膜タンパク質の可溶化・精製法の条件を生かして、本酵素の精製を試みた。本酵素活性に対応するタンパク質バンドを見いだした。花粉管を比較的調製しやすいペチュニアを材料とした。花粉および花粉管から、ランダムに選んだ732個のcDNA独立クローンを用いたマイクロアレイを作製した。これらのうち、花粉・花粉管で大きく遺伝子発現変動した遺伝子はなく、大まかには「花粉管では新たに遺伝子発現は起こらない」という1970年代の仮説を支持する結果となった。細胞壁成分ペクチンの主鎖を合成するポリガラクツロン酸合成酵素の精製を試みている。この酵素は膜タンパク質で、精製するには植物材料から可溶化できる酵素量が少ないため、酵素の抽出・可溶化条件の検討を行ってきている。リボヌクレアーゼ存在下で酵素を抽出すると2.1倍量の酵素を最終的に可溶化できることを見いだした。また、可溶化緩衝液にポリアミン、アルキルアミン、あるいはアルギニンを存在させると、従来法の最大9.9倍の酵素を可溶化することができた。これらの方法は効率的な膜タンパク質調製法として一般的に使えることを報告した。これらの条件下で従来法の10倍以上の酵素を調製することができ、酵素精製に道を開いた。次いで、タンパク質精製に有効なイオン交換クロマトグラフィーの分画条件をようやく見いだした。これらの条件を生かして、さらにゲルろ過、金属キレートクロマトグラフィーなどを用いて精製を進めていく。
脂質メディエーター解析のための新技術の創出

本研究では、平成23-24年度新学術領域研究公募研究のテーマであったマニピュレーターシステムと質量分析計を組み合わせた“単一細胞ダイレクトMS法"をより発展させ、微細組織領域や特定の細胞種群の脂質メディエーターを簡便な手法で解析できる高感度分析法の確立を目指す。そして、種々の組織や細胞において脂質メディエーター産生量がどのように変化し、そこにどのような脂質代謝酵素が関与するのかを明らかにすることを目的としている。本年度は昨年度までに構築した高感度分析法を用いて脂質メディエーター産生酵素である分泌型ホスホリパーゼA2(sPLA2)欠損マウスにおける網膜細胞の脂質分析を行った。網膜を4層に大別し脂質プロファイルの変動を詳細に解析した結果、sPLA2のタイプ別で変動する脂質分子ならびに網膜層が異なることを見出した。また、一部のsPLA2欠損マウスにおいては視覚機能の低下が観察された。今後、視覚機能と脂質プロファイルとの関連について解析を進める。26年度が最終年度であるため、記入しない。そして、種々の組織や細胞において脂質メディエーター産生量がどのように変化し、そこにどのような脂質代謝酵素が関与するのかを明らかにする。当初の研究計画にのっとり、実験を進め、以下の成果が上がった。1.再現性に優れた脂質メディエーター解析のための迅速・簡便前処理法の改良非特異的な分解や器具への吸着対策として吸着保護材(天然に存在しない同系統の脂質分子)を用いることで回収率の向上を図った。さらに固層抽出法により最小限のロスで短時間かつ簡便な調整法を確立した。2.超高感度LC-MS法を用いた脂質メディエーター分析系の確立流速、カラム、注入量などのLCシステムの最適化ならびに、夾雑物を取り除く(上述)ことで、1細胞レベルから脂質メディエーターならびにその前駆体のグリセロリン脂質を安定的に分析できる新技術を確立した。当初の計画通り、1細胞レベルでグリセロリン脂質ならびに脂質メディエーターを分析できる高感度分析法を確立し、さらにこの高感度分析法を用いてマウス、ヒト試料での解析を進めている。確立した高感度分析法を用いた応用研究はまだ始まったばかりであり、特にヒト試料の解析にあたっては試料調整法など細かいところを微調整する必要性がある。特定の微細組織領域ならびに細胞種群での脂質メディエーターのフロー(産生・代謝・受容)解析を可能とするため、種、部位ごとの調製・分析方法を再検討する。
地方創生・分権改革期の地方教育行政機構の在り方

本研究は、分権的教育改革の新たな展開期に入ったアメリカ教育改革政策からケンタッキー州の教育改革政策であるKERAを取り上げ3つの視点から分析することを通して、分権改革期における首長と教育委員会の関係構造の在り方を中心として、分権的教育改革を効果的に推進するための改革戦略を解明することを目的とする。3つの視点は、1.教育改革政策の立案・実施における首長(部局)と教育委員会(教育長)との関係構造の解明、2.米国教育行政機構の再編と役割の再定義や効果的な学区論研究に見られる教育委員会の新たな役割の発見、3.米国システミック・リフォーム・コンセプトの改革戦略の特質である。
多様なアフォーダンスの発見としての子どもの描画過程の研究

子どもの描画における創造的なるものとは何か、また創造的な描画の特徴とそれがどのようにして生まれて来るかの解明を行った。具体的には、ギブソン、ドゥルーズ、クリシュナムルティの著作から創造性の理解のための理論を得た。そして、調査では出来上がった結果としての絵だけではなく、子どもの描画プロセスそのものを、注意深く観察、記録、分析、考察するという方法をとった。成果として得たことを3つの観点で示す。1.【描画】描画は環境を知覚するための一つの手だてである。線を現実の知覚に役立てることが出来るということである。対象の意味や価値(アフォーダンス)は、線のアフォーダンスを掴もうとすることを通して知覚され、その知覚が線を確定していく。創造的な描画では、次第に生命が吹き込まれ、生きて機能するものへと変化する。すなわち、絵と自分との現実的な関わり合いが構築される。描画とは,環境の中を動き回りながら,それと一体化されつつ描き出される一種の探検地図である。2.【創造性】一般的な創造力なるものは無く、創造性は主体と環境との接触の多様な可能性の中にある。接触とは知覚と行動のことである。そして、創造は、結果ではなく過程の中にある。従来、子どもの絵の創造性は、想像力や構想力、思考力などと結びつけて理解されてきたが、絵の創造性の中心は知覚に存する。3.【絵画教育】世界をありのままに知覚することのすばらしさは、生きることそのものであり、絵画の存在理由である。描画の教育が、線描によって世界を見ることだとして、その見方を教えることはできない。それ自体が直接知覚を阻害する。したがって、絵画教育は、子どもが自分で世界を見ることを励まし助けるということに尽きる。そうした体験を持っ機会が増えるように、子どもにとって意味のある環境世界、興味深いモチーフの提示、注意のきっかけとなる声がけなど、出来るだけの工夫と準備をすることが重要である。子どもの描画プロセスを注意深く観察、記録、分析、考察することによって、そこに含まれる創造的なるものを解明することを目的とずる本研究では、以下の2点の仮説の検証を目指し成果を得た。1.子どもは、線を引きつつ様々な知覚や、多様なアフォーダンスを探り当てている。そして新しく発見したものを利用することで、描画活動行為を駆動していっている。2.抽象的一般的な創造力なるものは無く、創造性は主体と環境との接触の多様な可能性の中にある。以下、当初提出した本年度計画の順番にそって、具体的な実績の概要、研究の達成度を報告する。1.学術書や文献により、研究、調査のための理論的な枠組みの構築を行い、調査のための方法の検討を行った。2.創造的な描画の特質を調査するために、オーストラリアのアボリジニなどの現代美術を美術展などを利用して調査した。3.研究に協力してもらう学校として、新潟市立小針小学校の2年3組の小泉慎子教諭と新潟大学附属新潟小学校低学年複式学級の石塚崇教諭との打ち合わせを行い、具体的な日時と対象学級、方法の決定した。4.3匹の犬が仲良く野原で駆け回る様子をビデオカメラで撮影編集して、描画の興味が湧くことが期待できそうな映像を制作した。5.計4回(小針小学校2年生児童対象2回、附属新潟小学校1,2年生児童対象2回)、映像と実物を用いた描画プロセスの調査を実施。観察と記録によるデータを得た。

6.調査の後、記録を整理し、調査した描画プロセスにおける創造的な知覚の発動を分析し、論文「小針小学校2年生児童の描画と描画過程の調査」としてまとめ発表した。7.3月26日に、途中経過をまとめたものを美術科教育学会(金沢大学)で発表し、研究内容についての意見をもらい、次年度研究の進め方の調整材料とした。発表題目「アフォーダンスの知覚としての描画の創造性-小学校低学年児童の調査より-」。子どもの描画プロセスを調べ、そこに含まれる創造的なるものを解明することを目的とする本研究では、平成18年度の研究成果を踏まえ、引き続き以下の仮説の検証を行い成果を得た。1.子どもは、線を引きつつ様々な知覚や、多様なアフォーダンスを探り当てている。そして新しく発見したものを利用することで、描画活動行為を駆動していっている。2.抽象的一般的な創造力なるものは無く、創造性は主体と環境との接触の多様な可能性の中にある。以下、当初提出した本年度計画の順番にそって、実績の概要を報告する。1.18年度に実施した調査から、主に、描画モチーフの選定と調査実施手順について問題点を洗い直し、必要な調整と変更を行った。2.研究に協力してもらう学校を新潟大学教育附属新潟小学校とし、石塚崇教諭と打ち合わせ、対象のクラスを選び、具体的な時期、内容、方法を決定した。3.18年度の研究成果を元に、ドゥルニズの創造性に関する理論を中心に、理論的な枠組みの再検討を行った。4.世界の民族美術を収集しているケ・ブランリー美術館、それらとの比較の意味で伊丹市立美術館での「三沢厚彦ANIMALS+展」、新潟県ジュニア美術展等、県内の児童美術展に子どもの絵を取材し、造形における知覚の在り方と創造的な描画の特質を調査した。5.小学校の中学年、高学年の児童を対象に、実材(ぬいぐるみ、建機のおもちゃ(3,4年生)、チョコレート(5年生)を用いた描画プロセスの調査を実施。観察と記録によるデータを得た。6.調査の後、記録を整理し、調査した児童の描画におけるアフォーダンスの知覚と創造的なプロセスの発動を分析した。7.研究成果を大学美術教育学会兵庫大会において発表した。また美術科教育学会誌に論文を発表した。8.2年間の研究成果と今後の課題をまとめ、報告書を作成した。
介護予防事業への継続参加を支援するための看護介入のあり方に関する研究

本研究の成果として、介護予防事業への継続参加支援には、(1)介護予防に対する認識の変化を踏まえた働きかけ、(2)積極的な仲間づくり、(3)「成功体験」の積み重ねを実感できるプログラムの提供が効果的であることがわかった。また、介護予防事業不参加者への参加を促進するための看護介入は、(1)効果的な普及方法の開発、(2)広い世代に向けた情報発信、(3)グループ単位、地区単位での働きかけ、(4)身近な場所での事業展開が重要であることが示唆された。本研究の目的は、介護保険制度における『予防重視型システム』を効果的に運用するため、介護予防事業の提供方法を見直し、継続的な参加率を向上させ、さらに介護予防事業不参加者への対応を含めた取り組みについて検討することである。第1段階として今年度は、介護予防事業参加者の継続参加に至る要因および、介護予防に対する認識の変化について明らかにすることで、事業の効果的な提供方法および、継続参加支援のための看護介入のあり方について検討することを目的に、文献検討ならびに事例調査を行った。その結果、事業に参加するきっかけの段階では、これまで出来ていたことに困難感を生じ、【老いを感じる瞬間】、【将来への焦燥感】が、事業への参加を促していた。また、参加当初の段階では、羞恥心・不安感といった感情を持つ高齢者が多いが、集団での活動を進めていくことで、【孤立感からの開放】、【前向きな自分への気づき】という認識に変化した。さらに、後半の段階になると、プログラムの実践を通し、日常生活上の不具合が解消されていくといった【成功体験の積み重ね】が自信につながり、【自分自身の老化に向き合う】内省の視点から、【周囲の人々への関心の高まり】という社会への視点が拡大した。以上のことを踏まえ、介護予防事業への継続参加を支援するための看護介入のあり方として、1.事業の発達段階毎による参加者の認識の変化を踏まえた働きかけを行うこと、2.自然発生的な交友関係を期待するのではなく、参加者の仲間づくりに視点をおいた積極的な働きかけを行うこと、3.参加者が、事業への参加を通して得られる一つひとつの「成功体験」の積み重ねを、視覚的・感覚的に実感できるプログラム提供方法および、評価方法について検討することが重要であると考えられた。今年度の結果を踏まえ、次年度はさらに、事業不参加者への対応を含めた働きかけについて検討していく予定である。本研究の目的は、,介護保険制度における『予防重視型システム』を効果的に運用するために、事業への参加率を向上させ、さらに不参加者への対応を含めた取り組みについて検討することである。今年度は、介護予防事業への不参加者を対象に、不参加に至る要因を明らかにし、介護予防システムからの脱落を未然に防ぐための看護介入のあり方について示唆を得ることを目的に、文献検討および事例調査を行った。その結果、介護予防事業への不参加に至る要因として、'今の自分には関係ない''よく分からない'といった【介護予防関連情報のリテラシーの低さ】があげられ、介護予防事業が開始され5年が経過するが、高齢者に情報が行き届いておらず、理解が得られていないという現状が明らかとなった。また、'友達がいない''慣れないことをして転んだら大変'という【新しいことを始めることに対する抵抗感】、'膝が痛いから運動できない''移動手段がない''地区外の施設に行くことに壁を感じる''家族に迷惑をかけたくない'などの【身体・心理・社会的環境】、'仕事や趣味が忙しい'という【時間的制約】などがあがった。加えて、自治体のサービスに関する情報入手方法は、広報やチラシなどの文字媒体はほぼ見ることがなく、保健師が行う健康教育や民生委員からの紹介などロコミによって、サービスに関する理解・関心度が高まる高齢者が多いことがわかった。以上のことから、介護予防事業への継続参加を支援するための看護介入のあり方として、1.高齢者が介護予防を理解し、実践に至るような効果的な普及方法の開発、2.ロコミ効果を狙い広い世代に向けた情報発信、3.個人勧誘のみならず、グループ単位、地区単位での働きかけの実施、4.高齢者のより身近な場所での事業展開、が重要であることが示唆された。今後の課題は、高齢者の介護予防関連情報リテラシーを向上させる方法についての検討であると考える。
弱核子擬ベクトル流時間成分の巨大中間子効果とカイラル不変性の破れ

弱核子擬ベクトル流の時間成分は核子の移行運動浦量に依存するためにソフトパイオンの寄与が40%と巨大である。この時間成分は非対称ベ-タ崩壊のスピン整列相関項の測定から一義的に決められる事を示した。一方擬ベクトル流部分保存則(PCAC)による予言も容易であるので両者の比較は容易でありその結果β崩壊、カイラル不変性ひいてはボソンとしてのパイオンの本質を探る事が出来るという、他には例を見ない重要な量である事が分かった。このような研究を進めるために、鏡映対称をなす2つのβ崩壊核の整列相関項の、また0^-ー0^+ガモフテラ-遷移の遷移強度の精密測定を進めた。ところがこの時間成分は弱磁気項と同程度の小さな量であるので実験的な測定方法の開発がまず必要である。そこで要求される条件は、高い統計と下地計数無しの計測が不可欠である。次に、スピン制御が不可欠であり、このためにはまた研究対象核の超微細構造相互作用の研究が進められなければなならなかった。また、β線角度分布を、β線エネルギ-の関数で決定する等の方法を導入し、特に精度向上のために核反応装置、検出装置をβ線散乱の少ない原子番号の小さい材料で製作した。A=16体系の0^-ー0^+遷移のβ崩壊寿命の測定では、特に核反応槽なしの即ち散乱体最小の新機軸にもとずく測定を行ない、信頼性の向上のためにβ線エネルギ-スペクトルの高精度測定をも可能にした。この副産物として、弱磁気項が決定できて、核内核子を探索子とすることに成功した。このような「スピン偏極核分光」の研究方法の開発が最重要であった。このために、「同位元素分離器」と分離イオンの加速器としての「高周波加速器」を結合する研究方法を新たに開発した。また、高エネルギ-重イオン核反応で生成する入射核破砕片の持つ特性を利用した「破砕片分離器」を世界で初めて開発建設して、反応過程で直接スピンを偏極する方法を完成させて実用化した。弱核子擬ベクトル流の時間成分は核子の移行運動量に依存するためにソフトパイオンの寄与が40%と巨大であり、またこの時間成分は非対称ベータ崩壊のスピン整列相関項の測定から一義的に決められるようになった。一方擬ベクトル流部分保存則(PCAC)による予言も容易であるので両者の比較は容易でありその結果β崩壊、カイラル不変性ひいてはボソンとしてのパイオンの本質を探る重要な他に例を見ないものである。今年度はまず鏡映対称をなす2つのβ崩壊核の整列相関項の再測定を行って、核子流の時間成分を純粋に決定している。この時間成分は弱磁気項と同程度の小さな量であるので、(1)高い統計と下地計数無しの計測のために、A=12核の高い生成率と純粋な分離を行い、次に(2)偏極なしの純粋な大整列を生成する。また(3)β線角度分布をまた、β線エネルギーの関数で決定する等の方法を導入した。特に精度向上のために核反応装置、検出装置をβ線散乱の少ない原子番号の小さい材料で製作して、また核スピン制御の効率を上げるためにA=12核のMg結晶中の超微細構造の解明をしておく等、信頼度の向上には一段と力を入れた。

次にA=8、20の系についても、既存の加速器と測定器を用いて、そしてすでに開発した方法での偏極核の生成とスピン制御の試験を進めた。また100Kev/核子に不安定核を加速して、ビーム・フォイル相互作用や超微細相互作用を用いる研究に新しい方法を与えるべき後段加速器の一部分の設計を行い、これを発注した。現在はこのための、不安定核用イオン源の開発を進め設計も行っている。最近β線の計測定においては、β線の散乱が誤差として大きな部分を担っていることを明らかにしたので、A=16体系のO^-ーO^+遷移のβ崩壊寿命の測定を始めた。特に核反応槽なしの即ち散乱体最小の新機軸にもとずく測定である。弱核子擬ベクトル流の時間成分は核子の移行運動量に依存するためにソフトパイオンの寄与が40%と巨大であり、またこの時間成分は非対称ベ-タ崩壊のスピン整列相関項の測定から一義的に決められるようになった。一方擬ベクトル流部分保存則(PCAC)による予言も容易であるので両者の比較は容易でありその結果β崩壊、カイラル不変性ひいてはボソンとしてのパイオンの本質を探る重要な他に例を見ないものである。今年度はまず鏡映対称をなす2つのβ崩壊核の整列相関項の再測定を行って、核子流の時間成分を純粋に決定した。この時間成分は弱磁気項と同程度の小さな量であるので、(1)高い統計と下地計数無しの計測のために、A=12核の高い生成率と純粋な分離を行い、次に(2)偏極なしの純粋な大整列を生成した。また(3)β線角度分布を、β線エネルギ-の関数で決定する等の方法を導入し、特に精度向上のために核反応装置、検出装置をβ線散乱の少ない原子番号の小さい材料で製作して、また核スピン制御の効率を上げるためにA=12核のMg結晶中の超微細構造の解明をしておく等、信頼度の向上には一段と力を入れた。また100keV/核子に不安定核を加速して、ビ-ム・フォイル相互作用や超微細相互作用を用いる研究に新しい方法を与えるべき後段加速器を設置して試験中である。現在不安定核用イオン源の設計を行っている。また入射核破砕片のβ放射核を反応過程で直接スピン偏極する方法を完成させて実用化した。最近A=16体系の0^--0^+遷移のβ崩壊寿命の測定を始めた。弱核子擬ベクトル流の時間成分は核子の移行運動量に依存するためにソフトパイオンの寄与が40%と巨大である。この時間成分は非対称ベ-タ崩壊のスピン整列相関項の測定から一義的に決められる事を示した。一方擬ベクトル流部分保存則(PCAC)による予言も容易であるので両者の比較は容易でありその結果β崩壊、カイラル不変性ひいてはボソンとしてのパイオンの本質を探る他に例を見ない重要な量である事が分かった。今年度は引続き鏡映対称をなす2つのβ崩壊核の整列相関項の再測定を行って、核子流の時間成分を純粋に決定した。また(3)β線角度分布を、β線エネルギ-の関数で決定する等の方法を導入し、特に精度向上のために核反応装置、検出装置をβ線散乱の少ない原子番号の小さい材料で製作した。また核スピン制御の効率を上げるためにA=12核のMg結晶中の超微細構造の解明をする等、信頼度の向上には一段と力を入れた。また100KeV/核子に不安定核を加速して、ビ-ム・薄膜相互作用や超微細相互作用を用いる研究に新しい方法を与えるべき後段加速器を設置して試験中である。
リン酸化非依存性トリパノソーマ14-3-3分子の新規脂質代謝調節機構の解明と応用

ブルーストリパノソーマ(T. brucei)はアフリカ睡眠病を起こす原虫で、年間3万人が感染により死亡している。当初の目的は、ブルーストリパノソーマTb14-3-3が脂質代謝を調節しているという新発見を利用し、Tb14-3-3がブルーストリパノソーマの運動性、サイトキネーシス、細胞周期にあたえる分子メカニズムを探索することであった。その解析過程で、糖代謝、脂質代謝酵素、蛋白リン酸化化酵素などとTb14-3-3が結合することを発見した。そのうちの1つの蛋白リン酸化酵素がT. bruceiの運動性、サイトキネーシス、細胞周期の重要な調節因子であることを明らかにした。これまでの研究で、アフリカトリパノソーマ原虫の14-3-3(Tb14-3-3)分子の研究で、Tb14-3-3のIおよびIIは、酵母、植物、哺乳類まで、よく保存されているリン酸化ペプチドに結合しない点で、薬剤のターゲットとなり得る可能性がでてきた。ところが、リン酸化依存性の結合がTb14-3-3にほとんど認められないため、結合蛋白を探すのに困難を極めた。この様な状況のなかで、私は、Tb14-3-3II分子が脂質代謝に影響をあたえることを発見した。すなわち、Free Fatty Acid (FFA)とTriglyceride (TG)の蓄積が、Tb14-3-3IIの過剰発現で、またノックダウンの際、逆に減少がおこることである(実験にはすべて昆虫型細胞株を用いた)。この脂質代謝の劇的な変化をマーカーとして、Tb14-3-3の機能を明らかにするため、まず、FFA, TG合成に重要である3つの酵素についてTb14-3-3IIとの結合を調べた。具体的には、acetyl-CoA carboxylase (Tb927. 8. 7100), biotin-acetyl-CoA ligase (Tb11. 01. 1820), acetyl-CoA synthetase (Tb08. 26A17. 430)をSanger InsitituteのGene Data baseを参考に、PCRにて、これらの遺伝子を哺乳類発現vectorにクローニングした。問題なのは、これらの遺伝子が、機能的に働いているか否か不明である点であるが、TG合成の律速酵素であるacetyl-CoAcarboxylaseに関しては、S.pombe(酵母)と45%の相同性があり,機能的にも働いている可能性が高い。ヒトHEK293細胞を用い、これらの遺伝子がコードする蛋白と、Tb14-3-3の結合を調べた。これらすべての蛋白とTb14-3-3IIは、NP-40を用いた免疫沈降法で示される強い結合を示さないことが判明した。そこで、私は、次に、Tb14-3-3IあるいはIIノックダウン細胞及びノックダウンしていない細胞を用い、acetyl-CoA carboxylaseのbiotin化をstreptavidine-HRPを用いたwestern blot法にて検討した。その結果として、Tb14-3-3IでなくIIノックダウンの時のみ若干のacetyl-CoA carboxylaseのbiotin化の低下が認められた。すなわち、これは、acetyl-CoA carboxylaseの活性の低下、TG合成の低下を意味するが、解析したクローン間の差で無いことなど、詳細な検討を必要とする。14-3-3タンパク機能における新展開-これまでの研究で私はトリパノソーマ14-3-3タンパクがヒト植物、酵母で一般化されている14-3-3結合モチーフに結合しないことを示してきた。昨年ペプチドタグ付き14-3-3 IおよびIIをテトラサイクリン依存性に過剰発現する昆虫型ブルーストリパノソーマ細胞株の樹立に成功した。この細胞株を用い非常に弱い界面活性剤の使用により、結合タンパクのプロテオミックスを行った結果、新規キナーゼおよび、6-フォスフォー2フルクトキナーゼおよびアセチルCoAカルボキシラーゼを得ることができた。6-フォスフォー2フルクトキナーゼは解糖系の重要な酵素であり、2,6-フルクトース2リン酸の分解、合成を司る重要な酵素である。よって、解答系と密にリンクする脂質代謝に非常に大きな役割を示す可能性が高い。さらにアセチルCoAカルボキシラーゼは、アセチルCoAからマロニルCoAを合成する酵素で、パルミチン酸およびトリアシルグリセロールの合成に多大な影響を与える。また、この酵素はcAMP依存性リン酸化キナーゼによりリン酸化され阻害される。今後これらの酵素と1)トリパノソーマ14-3-3タンパクの結合様式および、2)この結合による酵素活性の変化を解明することを2つの柱として研究を進める。