hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
白血病幹細胞生成過程の統合オミクス解析

我々が独自に開発したMLL-ENL誘導発現型トランスジェニックマウスを用いた実験により、予後不良型の急性前骨髄球性白血病において見られるPLZF-RAR alpha融合遺伝子の前半部分であるPLZF遺伝子が白血病幹細胞生成において重要な役割を担うことがわかったが、今年度はPLZF下流遺伝子として新たに同定した遺伝子Xの詳細な解析を行った。遺伝子Xは遺伝子ファミリーを形成し、細胞質から核に移行して機能を発揮する転写活性化分子で、蛋白修飾に関わる酵素活性も有し、下等動物では形態発生学的に重要な働きを持つことが知られている。遺伝子XはPLZFの強制発現によって発現が誘導された。そして遺伝子Xの強制発現は造血細胞を不死化したので、がん遺伝子のひとつと考えられる。遺伝子Xによって活性化される遺伝子のひとつに、c-mycが知られており、MLLキメラ-PLZF-遺伝子X-c-mycというがん化の枢軸が想定される。さらに興味深いことに、がん化機構があまり分かっていないE2A-HLFキメラ遺伝子によっても遺伝子Xは強力に活性化された。また、遺伝子Xはヒト肺腺がん、子宮頸がん、乳がん、卵巣がんなどにおいて高発現していることが報告されている。これらのことから、遺伝子XはMLLキメラのみならず、特定のタイプのがんやがん幹細胞の発生において重要な役割を担っている可能性が示唆された。今後はPLZFによる遺伝子Xの発現調節の分子機構、遺伝子Xによるがん化の分子機構、遺伝子Xに対する分子標的療法に対する研究が必要であろう。26年度が最終年度であるため、記入しない。そこで、レトロウイルスベクターpMYs-PLZF-IRES-EGFPによってトランスフォームしたHSCとコントロールとしてpMYs-IRES-EGFPを感染させたHSCに関して、各々のEGFP陽性分画を採取し、cDNAマイクロアレイ解析を行ったところ、PLZF発現HSCにおいて特異的に発現が上昇している遺伝子Xを同定した。遺伝子Xはハエの眼の発生に関与する転写因子で、正常HSCにおいても発現しており、数種のファミリー遺伝子が存在する。固形癌における関与が示唆されているので、遺伝子Xをレトロウイルスベクターを用いてマウス骨髄細胞に導入したところ、HSCのみならず、骨髄前駆細胞も不死化した。遺伝子XはHSCの癌化に関与する分子の中で、自己複製において重要な役割を担っている可能性もあり、今後の詳細な解析が望まれる。白血病幹細胞の生成において重要な役割を担っている遺伝子PLZFの下流を明らかにすることは重要な課題であると考えられた。網羅的解析から得られた候補遺伝子Xが、その機能解析において、実際に造血細胞の癌化作用を持っていることを明らかにすることができたことは大きな前進と考えられる。研究室ホームページURL遺伝子Xの生物学的機能の詳細な解析、遺伝子Xと相互作用する分子Y(その存在はすでに知られている)の機能解析から、癌幹細胞生成過程におけるPLZFからのシグナル経路を統合的に明らかにしていく。遺伝子Xや遺伝子Yのノックアウトマウスも積極的に活用していく。
情報システムの教育体系の確立に関する総合的研究

本研究の目的は、情報システム学の概念を確立することと、それに基づいた教育カリキュラムを構築することである。本年度は、前年度にまとめた、情報システムの定義・目的・特徴・機能・性格,情報システムの問題を考える際の留意事項、情報システム教育の方向などに関する基本的な考え方に基づいて、情報システム学の体系、情報システム教育のカリキュラム、当該カリキュラムに含まれる各科目の内容を検討し最終案をまとめた。まず情報システム学の体系は、情報システムの「企画」、「開発」、「運営」、「概念」、「社会的影響」の5つの側面から構成されるとし、それぞれの特徴と相互関連を明らかにした。このうち最初の3つは、情報システムの構築・活用に直接結びつくことが多い側面であり、後の2つは情報システムの基本概念およびそれと社会との関わりを扱い、それぞれ前の3つの要素とは異なった側面(次元)をもつものである。この体系に基づいて、情報システム教育の中心となるコア領域と参照学問領域の2つの領域から構成される教育カリキュラムを構築した。このうち参照学問領域は、情報システムの人間・社会的側面に接近するために既存の学問領域に属する知識・技術を情報システム学の視点から捉えた科目群と、情報システムの構築・把握などに関わる各種の自然科学・工学的な知識・技術を扱う科目群とに大別した。カリキュラムを構成する科的としては、コア領域に属するもの29科目、参照学問領域に属するもの32科目の合計61科目を設定した。さらに、情報システム教育の実学的特徴に配慮して、上述の領域を横断的に捉える「事例調査」と「プロジェクト研究」の2つを設けた。これらの科目は、動機付けのための基礎科目(19科目)と専門科目(43科目)とに分けられている。また、各科目の概要を、位置付け、狙い、アプロ-チ、内容、レベルの観点から記述し、さらに具体的なコ-ス例を複数個作成した。(1)情報システムに関連する開講科目の種類およびその内容を調査し、特徴を明らかにする目的で,研究代表者・分担者が所属する大学を対象に講義要綱、パンフレットの収集を行い,慶應義塾大学文学部図書館・情報学科,理工学部管理工学科,帝京技術科学大学,文教大学情報学部、多摩大学経営情報学部,中部大学経営情報学部,北海道大学経済学部,静岡県立大学経営情報学部,電気通信大学,神戸商科大学商経学部などにおける情報システム関連科目の特徴,開講目的などを調査した。(2)企業における情報システムの設計,構築,運用,経営に関する特徴,発展経緯を明らかにする目的で,新日本製鉄,日産自動車,東芝,太陽神戸三井銀行の情報システム部責任者,および情報システムの研究者・教育者を対象に、情報システムの事例,情報システムに関する考え方,教育内容のヒアリングとそれに基づく討論を行った。(3)コンピュ-タおよびビジネス分野を対象に本研究と合致した側面から情報システムを扱った各種の報告書,図書,学術論文を収集して,情報システムの教育に関する最近の動向を一部明らかにした。(4)以上の結果から明らかになった事項、たとえば教育機関と企業とでは情報システム教育で重視すべき科目内容に顕著な違いがあること、情報システムのとらえ方やそれに対する認識、および現実の情報システムの形態や特色は、関連分野によって大きく異なりきわめて多様であることなどをふまえて、情報システムに関する論議を必要とする背景,情報システムの定義・目的・特徴・機能・性格、情報システムの問題を考える際の留意事項、情報システム教育の方向などに関する基本的な考え方をまとめた。以上の活動は、10回を越える全体会議・幹事会,および合宿を通じて行った。本年度は、前年度にまとめた、情報システムの定義・目的・特微・技能・性格、情報システムの問題を考える際の留意事項,情報システム教育の方向などに関する基本的な考え方に基づいて、情報システム学の体系,情報システム教育のカリキュラム、当該カリキュラムに含まれる各科目の内容を検討し最終案をまとめた。このうち最初の3つは、情報システムの構築・活用に直接結びつくことが多い側面であり、後の2つは情報システムの基本概念およびそれと社会との関わりを扱い、それぞれ前の3つの要素とは異なった側面(次元)を持つものである。カリキュラムを構成する科目としてはコア領域に属するもの29科目、参照学問領域に属するもの32科目の合計61科目を設定した。さらに情報システム教育の実学的特徴に配慮して、上述の領域を横断的に捉える「事例調査」と「プロジェクト研究」の2つを設けた。また、各科目の概要を、位置付け、狙い,アプロ-チ、内容,レベルの観点から記述し、さらに具体的なコ-ス例を複数個作成した。

本年度は、前年度にまとめた、情報システムの定義・目的・特徴・機能・性格,情報システムの問題を考える際の留意事項、情報システム教育の方向などに関する基本的な考え方に基づいて、情報システム学の体系、情報システム教育のカリキュラム、当該カリキュラムに含まれる各科目の内容を検討し最終案をまとめた。まず情報システム学の体系は、情報システムの「企画」、「開発」、「運営」、「概念」、「社会的影響」の5つの側面から構成されるとし、それぞれの特徴と相互関連を明らかにした。このうち最初の3つは、情報システムの構築・活用に直接結びつくことが多い側面であり、後の2つは情報システムの基本概念およびそれと社会との関わりを扱い、それぞれ前の3つの要素とは異なった側面(次元)をもつものである。この体系に基づいて、情報システム教育の中心となるコア領域と参照学問領域の2つの領域から構成される教育カリキュラムを構築した。このうち参照学問領域は、情報システムの人間・社会的側面に接近するために既存の学問領域に属する知識・技術を情報システム学の視点から捉えた科目群と、情報システムの構築・把握などに関わる各種の自然科学・工学的な知識・技術を扱う科目群とに大別した。カリキュラムを構成する科的としては、コア領域に属するもの29科目、参照学問領域に属するもの32科目の合計61科目を設定した。さらに、情報システム教育の実学的特徴に配慮して、上述の領域を横断的に捉える「事例調査」と「プロジェクト研究」の2つを設けた。これらの科目は、動機付けのための基礎科目(19科目)と専門科目(43科目)とに分けられている。また、各科目の概要を、位置付け、狙い、アプロ-チ、内容、レベルの観点から記述し、さらに具体的なコ-ス例を複数個作成した。
金属アーチファクトの無い医用立体モデル作成法の探求；低コスト高精度モデルの具現化

プロフェッショナル3Dプリンタによる造形コストは概して高額であり、経済的な観点から全てのニーズに呼応出来ているとは言い難い。パーソナル3Dプリンタはこの問題を解決できる可能性がある。3Dプリンタを臨床応用するためには作製したモデルの精度や造形特性を知ることを目的として3種の造形素材の歯・顎骨立体造形モデルを作製し、その寸法精度を評価するとともに、3Dプリンタを歯科口腔外科領域に活用するための課題について検討した。その結果、3種のモデルの寸法精度に有意な差は認められず、パーソナル3Dプリンタによる経済的なシステムで造形を行いうる可能性が示唆された。平成25年度は、X線CT(MDCT、CBCT)-顎口腔三次元データと石膏模型-歯列口腔三次元データの重ね合わせ手法構築を主目的に以下1.および2.について検討した。また歯列口腔三次元データの取得をするため石膏模型のデジタルスキャンを行ったが、石膏模型上に歯槽粘膜を詳細に再現する必要があるため印象採得時の配慮が必要となることが判明している。2.顎口腔三次元データおよび歯列口腔三次元データの重ね合わせ;「Volume Extractor 3.0」での汎用三次元フォーマットへの変換を経て、「spGauge」による分析を行った。現時点では、二種のモダリティデータの重ね合わせは徒手的に行っている。その重ね合わせ基準面は、上顎では口蓋粘膜、下顎では頬舌側歯槽粘膜を基準面とする方法が適当と考える。これは金属アーチファクトや体位(顎位、舌位)の影響を比較的受けにくいためと考えた。本操作においても臨床上は問題ない、実用的なレベルまでの位置合わせが可能であると思われるが、更なる精度向上および再現性向上を目指し、撮像時における工夫、CT撮影時の配慮(例;舌と口蓋粘膜との境界を描出しうる撮影用ステントの応用)の必要性が生じた。これらステントの作成手技の確立も次年度の課題としている。[目的・方法]歯・顎骨立体造形モデル(以下、3D model)の寸法精度および造形コストを評価することを目的にφ10mmアルミニウム製検査用標準球を下顎頭外側、下顎正中、下顎角部に設置したヒト成人乾燥下顎骨のMDCT撮影を行った。DICOM画像データから、歯・顎骨三次元CADデータを構築し3D CAD model(以下、3D CAD model)を作成した。この3D CAD modelを元に3機種の3Dプリンタ、3種の異なる造形素材の各3D modelのリバースエンジニアリングを経て各々の形状誤差を測定した。同時に各3Dプリンタの造形方向異方性の有無について評価した。[結語]金属アーチファクトに対して歯列石膏模型CADデータを併用し、上記の手法で重ね合わせし補完する手法を採用した。視認上はほぼ満足するレベルの一致率(98.2%)であった。以上よりプロフェッショナル、パーソナル3Dプリンタによる各造形素材の3D modelを作製し寸法精度を評価した結果、寸法精度に有意差は認めず、極めて経済的なシステム構成での作製が可能となった。一連の造形経験を通じ、より有効活用するためには適切かつ簡便なCADデータ構築手法の確立、解剖学などの医学的知識を持ったCAD技術の理解を深める必要がある。医用画像工学当初計画した使用予定アプリケーションに大幅な変更がある。しかし研究の進捗に遅滞はないものと考える。以下1)、2)に理由を記す。1)DICOM画像の三次元データ変換、いわゆるSTL変換には「OsiriX」の使用を予定していた。このOsiriXはオープンソースながら断層画像の三次元再構成に特化したDICOM医用画像ビューアでる。しかし「三次元構築時にデータが一部欠落する」「高精細にすればするほど演算に長時間を要し、PCへの負荷が想定を超え、その利用は非実用的である」との結論に達し使用を断念した。そこで3次元画像構成を行うためのツールとして新たに「Volume Extractor 3.0」を導入した。このツールは主に医用画像を主なターゲットとしたWindowsベースの3次元画像再構成アプリケーションである。本アプリケーションを用いMDCTデータから汎用三次元フォーマットデータへの変換を行っている。2)得られたSTLデータのリバースエンジニアリングには東京歯科大学口腔科学研究センター所有の「Imageware13.1」を使用していた。しかし2014年4月、MicrosoftのOS(Windows XP)サポート終了および「Imageware13.1」の保守メインテナンス契約期限終了とが重なり、事実上その使用は困難となったため、新たにアプリケーション「spGauge」を導入した。この「spGauge」は工業製品形状検査支援システムで、非接触測定機から出力される点群と3次元CADデータとの誤差を定量的に確認することで形状検査を行うことが可能である。

高価格ではあるものの、日本国内で開発され、日本人向けに作られた操作性の良いGUIに加え、申請者が目的とする医療分野、特にDICOMデータ(=「Volume Extractor 3.0」から)得られた三次元データを操作するに必要十分なアプリケーションであると考える。本研究の遂行にあたり、上記2つのアプリケーションを使用する。前述の通り、現時点では二種のモダリティデータの重ね合わせは徒手的に行っている。その重ね合わせ基準面は、上顎では口蓋粘膜、下顎では頬舌側歯槽粘膜を基準面とする方法が適当と考える。これは金属アーチファクトや体位(顎位、舌位)の影響を比較的受けにくいためと考えた。本操作においても臨床上は問題ない、実用的なレベルまでの位置合わせが可能であると思われる。更なる精度向上および再現性向上を目指し、撮像時における工夫、CT撮影時の配慮の必要性が生じたため、次年度の課題としている。また平成25年度の研究で構築したプロトコルをもとに、高精細歯列・顎骨立体モデルを具体的に作成し、臨床応用に向けた実用性の評価として、その精度検証、技工操作性およびコストに関する検討を行う。整形外科・形成外科・口腔外科領域のみならず、歯科保存補綴臨床に於ける適応症例の検索・その応用範囲の拡大を目指し、それらについても検討する。導入予定の3Dプリンタについては、本研究で必要十分な材料(弾性、色調、可塑性等)およびそのコスト、装置維持費等について検討を行っている。現在、複数の企業(販売代理店)と協議中ではあるが、近日中に機種決定の見込んでいる。申請書に記載するが、初年度の3Dプリンタ購入を計画していた。しかし購入予定の3Dプリンタは、その後、本体+オプション(付属部品や年間保守契約料)での購入が必要となることが判明し、本研究予算内での購入が不可能であり、同機種の導入は断念した。その後直ちに他の機種選定作業を開始したが、わずか数ヶ月レベルでもプリンタの低価格化や多数のメーカー参入が目覚ましく、その時点での機種選定・決定は時期尚早と考えた。また申請者所属施設が現有するソフトウェア(Imageware13.1)の使用を予定していたものの、代理店が同ソフトウェア販売およびサポートから撤退し、またMicorosoftによるWindows XPのサポート終了に伴い、今後永続的に使用することは事実上不可能となったため、3Dプリンタ導入に先行しソフトウェア(Volume Extractor 3.0およびSpGauge)の導入に至った。3Dプリンタについては、現在ほぼ同等の性能を有すると考える3Dプリンタの機種選定中である。ソフトウェア(Volume Extractor 3.0およびSpGauge)については、複数のモダリティからのデータ処理、分析処理に使用中である。
血液を利用したMolecular Biopsyによる肺癌薬剤耐性のモニタリング

肺腺癌外科切除例を対象とした手術前後の血漿解析でのデジタルPCRによるEGFR、KRAS遺伝子変異について解析を行った。5例中2例でEGFR活性型遺伝子変異を検出し、肺生検時の遺伝子型と一致していたが、症例により血漿中遊離DNA量が少ないため検出感度以下になることや、血漿への遊離がない場合も考えられた。進行期肺癌症例は74例、103検体採取した。EGFR遺伝子変異を検体、ALK融合遺伝子変異を27検体、KRAS症例を1検体、ROS1融合遺伝子を1検体解析した。肺癌患者約50例の検体採取を行い、末梢血freeDNAの抽出、Q/Cを行った。EGFR遺伝子変異陽性患者、ALK融合遺伝子陽性患者、KRAS陽性患者の検体から、組織で確認された遺伝子異常を検出可能な状態である。今後は、患者の治療経過と合わせてモニタリングの可能性についてさらに検討していく。耐性獲得患者からの細胞株樹立については、まだ数例のみの進行である。肺癌症例92症例の末梢血freeDNAの採取を行い、デジタルPCRで解析した。EGFR遺伝子変異症例では、術前・術後の検体を用い、術後早期再発の診断の可能性を研究中であるが、早期肺癌でのcfDNA濃度が低い症例が多く、症例集積に難渋している。ALK陽性肺癌では、主に耐性変異検出を行っている。ALK阻害薬耐性変異であるG1202R変異を高感度に検出する方法を確立し、臨床研究へ発展させる予定。解析系に関してはプロトコール論文を投稿中で、おおむね順調である。患者サンプルからの細胞株樹立に関しては、培養系での成功率が低く、免疫不全マウスへの接種を準備中。現在、実験計画の立案と共同研究科との調整中である。EGFR遺伝子変異解析はおおむね順調であるが、実臨床でコバス法で検出可能となってきているため、同検査法との比較を行っている。(1)肺腺癌外科切除例を対象とした手術前後の血漿解析でのデジタルPCRによるEGFR、KRAS遺伝子変異について解析を行った。5例から術前の血漿を同意を得て取得し遺伝子解析を行った。5例中2例でEGFR活性型遺伝子変異を検出し、肺生検時の遺伝子型と一致していた。腫瘍最大径2035mmと小型肺腺癌が大半を占めたため、血漿中遊離DNA量が少ないため検出感度以下になることや、血漿への遊離がない場合も考えられた。1本研究を実施中に、第3世代EGFRチロシンキナーゼ阻害薬であるオシメルチニブが承認発売され、該当患者も使用されている。そこで、オシメルチニブ耐性変異の約20%を占めるといわれている、C797S変異についても追加解析した。さらに新規耐性変異C797SはT790M変異とcis alleleかtran alleleかによって治療選択が変わってくることが予想されるため、この2つのアレルがPCRプライマーで挟まれるように再設計し、同時に測定可能でcis/transが区別できるプローブを開発した。2ALK融合遺伝子陽性肺癌においてALK阻害薬は有効な薬剤であるが耐性を獲得する。薬剤によって耐性変異の感受性が異なるために、今後耐性を確認して治療の選択をすることが必要になってくる。我々は、ALK遺伝子変異をmultiplexで解析可能な市販のデジタルPCRプローブを使用して27例の患者群で耐性変異を検討し経時的に変異を測定することの意義について検証した。さらに検体採取を進め、解析していく。細胞株樹立系は、やや遅れている。成功率を上げるために免疫不全マウスを使用予定であるが、予算の範囲内で症例を限定して、希少な遺伝子変異型の細胞株を中心に確立する予定。肺癌液体生検EGFR遺伝子変異ALK融合遺伝子患者検体拐取が遅れたため細胞株樹立の実験系を、免疫不全マウスによるPDXモデルに変更するにあたり、研究計画変更のため次年度へ繰り越すことになったため今年度の解析費用に充てるPDXモデルのためのマウス購入費にあて、次年度中に使用する
アゲハチョウ類の産卵行動制御因子に関する化学的研究

アゲハチョウ類の産卵対象となる寄主植物生葉には、母蝶の産卵衝動を誘起する化学物質が含まれている。このような産卵行動制御因子の化学的基盤を明らかにし、寄主選択のメカニズムを解析ずるために数種のアゲハチョウ類を材料に研究を展開した。以下に本研究で明かになったことをまとめる。1.アゲハの産卵刺激物質:サンショウに含まれるアゲハの産卵刺激因子を追跡した結果ブタノール可溶部部よりウンシュウミカンの場合と共通のフラバノン配糖体を同定することができた。また、各種フラバノン配糖体を用いアゲハに対する産卵刺激活性を検定し、構造と活性の関係について考察した。2.ギフチョウの産卵刺激物質:ギフチョウの産卵刺激物質も複数の成分から成り立っているが、そのうち一成分をミヤコアオイ葉抽出物のブタノール可溶部より単離した。本物質は分子式C34H4602を示すフラホノイドであり、そのスペクトル分析などによりイソラムネチンの三配糖体と決定した。3.ジャコウアゲハの産卵刺激物質:ウマノスズクサに含まれるジャコウアゲハの産卵刺激物質として桂皮酸誘導体のリンゴ酸エステルを同定した。4.ジャコウアゲハ属の幼虫肉角分泌成分アリストロキア酸:東南アジアに産するジャコウアゲハ族の食草(ウマノスズクサ科)よりアリストロキア酸を同定した。同植物を摂食したキシタアゲハとベニモンアゲハの一種よりアリストロキア酸を検出した。また、ジャコウアゲハの幼虫肉角分泌液中の極性成分として、クリセロール、ミオイノシトール、ヌクレオシド類を同定することができた。アゲハチョウ科数種の産卵刺激物質の解明のため,次の分析を実施した。1.サンショウに含まれるアゲハの産卵刺激物質サンショウ生葉のメタノ-ル抽出物は,アゲハ成虫に対し強い産卵刺激作用を示す。ブタノ-ル可溶部より,活性フラボノイド配糖体である数種の化合物を検出した。2.コクサギに含まれるオナガアゲハの産卵刺激物質コクサギよりオナガアゲハの産卵刺激物質として単離した化合物は,分子式C_<17>H_<20>O_3をもつ親水性の物質であることが判明した。ジアゾメタン処理によりモノメチルエステルを与えること,加水分解によりグルコ-スを与えることなどから,芳香族カルボン酸配糖体と推定された。2次元NMRスペクトル分析(HーHCOSY)の結果より,本物質はフラノクマリン骨格を有する新規化合物であることが明らかとなった。3.ギフチョウの産卵刺激物質ミヤコアオイ,ヒメカンアオイなどギフチョウの食草に含まれる特異的な産卵刺激活性物質は複数成分が関与し,フラボノイドが重要な作用をしていることが,生物検定の結果から明らかになった。ミヤコアオイ葉抽出物のブタノ-ル可溶画分より,主活性因子を単離し,その物質の分子式をC_<34>H_<46>O_9と推定した。加水分解によりイソラムネチン,ガラクト-ス,2モルのグルコ-スを与えることから,フラボノ-ルのトリグリコシドと判明した。上記の産卵刺激因子はいずれも複合系の成分であり,他の未知活性成分と併せて単離・構造決定を進めている。アゲハチョウ類の産卵対象となる寄主植物生葉には,母蝶の産卵衝動を誘起する化学物質が含まれている。このような産卵行動制御因子の化学的基盤を明らかにし,寄主選択のメカニズムを解析するために数種のアゲハチョウ類を材料に研究を展開した。また,各種フラバノン配糖体を用いアゲハに対する産卵刺激活性を検定し,構造と活性の関係について考察した。

2.ギフチョウの産卵刺激物質:ギフチョウの産卵刺激物質も複数の成分から成り立っているが,そのうち一成分をミヤコアオイ葉抽出物のブタノール可溶部より単離した。本物質は分子式C_<34>H_<46>O_9を示すフラボノイドであり,そのスペクトル分析などによりイソラムネチンの三配糖体と決定した。3.ジャコウアゲハの産卵刺激物質:ウマノスズクサに含まれるジャコウアゲハの産卵刺激物質として桂皮酸誘導体のリンゴ酸エステルを同定した。4.ジャコウアゲハ属の幼虫肉角分泌成分アリストロキア酸:東南アジアに産するジャコウアゲハ族の食草(ウマノスズクサ科)よりアリストロキア酸を同定した。同植物を摂食したキシタアゲハとベニモンアゲハの一種よりアリストロキア酸を検出した。また,ジャコウアゲハの幼虫肉角分泌液中の極性成分として,グリセロール,ミオイノシトール,ヌクレオシド類を同定することができた。
異種抗体の術前除去による異種移植の実験的研究

平成5年度は、ブターイヌ大動物モデルを用いて、血漿交換と免疫吸着によって異種自然抗体(XNA)の除去を試みた。その結果、異種移植心は最高で10時間生着した(コントロールは515分)。平成6年度は、XNAに拮抗すると考えられる異種血球ポリクロナール抗体(PAb)をウサギで作製した。モルモット-ラット小動物モデルを用いて、PAbを異種心移植直前にレシピエントに投与したところ、著明な生着延長効果が認められた。生着時間は最高で7時間に達し(コントロールは615分)、PAb投与量と生着時間の間には強い相関関係(r>0.9)が見られた。平成7年度は、ラットをモルモット血球で感作し、抗イディオタイプ抗体ができた時点で異種心移植を施行したところ、著明な生着延長効果を認めた(最高で4時間)。以上より、異種心移植における拒絶反応は、XNAを除去すること(平成5年)、XNAと異種抗原の反応をPAbでブロックすること(平成6年)、XNAを抗イディオタイプ抗体で不活性化すること(平成7年)などの手段によって長時間抑制できることが実証された。また、異種拒絶反応のinitiationにはXNAが強く関与していることが明らかとなった。本年度は、血漿交換・免疫吸着による移植手術前の異種自然抗体除去の技術を確立させることに主眼をおいて実験を行なった。ブタをドナー、イヌをレシピエントとして用い、移植前にイヌに対して二重濾過血漿交換、体外臓器灌流を行なった。1.二重濾過血漿交換による異種自然抗体の除去:置換液量、交換回数とlgG、lgM、異種自然抗体の除去効率を検討した。置換液量を200ml×2,300ml×2,500ml×2として生着時間を比較検討した。無処置で移植した群では平均生着時間は9分であったが、200ml×2では60分、300ml×2では100分、500ml×2では平均107分と著明な生着時間の延長がみられた。lgG、lgMの除去に関しては、それぞれ74%、96%と効果的に除去されていた。またリンパ球毒性抗体は血漿交換前では432倍であったものが、後では12倍と低下し、二重濾過血漿交換により著明に除去させていることが確認された。2.体外臓器灌流による免疫吸着:ブタの脾臓あるいは肝臓を摘出し、イヌの血漿を灌流して免疫吸着を行なった後移植を行なった。脾臓を灌流したものでは90分、肝臓を灌流したものでは105分の生着時間がえられた。3.二重濾過血漿交換+体外臓器灌流:二重濾過血漿交換を行なった後、体外臓器灌流を追加して行なった。両者を組み合わせた群では、更に著明に生着時間が延長し、最長600分、平均245分であった。300分以上生着した群では、リンパ球毒性抗体価ばかりでなく、赤血球凝集抗体価も著明に低下していた昨年度は、血漿交換・免疫吸着によって異種自然抗体(XNA)除去を試み、異種移植心の生着延長に成功した。本年度は、XNAに拮抗すると考えられる異種ポリクロナール抗体(XPA)を作製し、異種心移植直前にレシピエントに投与して、生着延長効果を検討した。1.XPAの作製モルモットの赤血球と白血球を分離して、それぞれ、週一回、計10回ウサギに感作した。十分な抗体価を確認後全採血し、γ分画を分離してIgGを精製し凍結乾燥した。2.実験方法ラットにXPAを1.530mg/kg投与後、直ちにモルモットの心臓を異所性に移植した。拍動する移植心から、経時的に生検を行い、拍動停止時には全摘し、光顕用と免疫組織染色用の病理標本を作製した。また、経時的に採血し、血清補体価を測定した。3.結果XPA非投与群は、異種移植心の平均生着時間は15分であったが、XPAを投与した場合は有意に延長した。

XPA投与量と生着時間の間には強い相関関係(相関係数>0.9)が見られ、XPAを15mg/kg投与した場合の平均生着時間は4時間、XPAを30mg/kg投与した場合の生着時間は7時間を超えた。拍動良好時には血清補体価は正常範囲内であり、病理所見でも、拒絶反応は見られなかった。血管内皮細胞にはXPAの付着を認め、XNA、補体、フィブリンなどの付着はほとんど認めらなかった。一方、拍動の停止時には血清補体価は低下し、拒絶反応の所見が見られ、XNA、補体、フィブリンなどの付着が広範囲に認められた。4.考察大量に投与されたXPAは、内皮細胞クラスI抗原と速やかに反応し、XNAと同抗原との反応をブロックし、その結果として補体の活性化、フィブリンの付着など、一連の反応が抑制されていると考えられる。また、内皮細胞クラスI抗原と結合したXPAは、時間の経過とともに内皮細胞から離脱して行く可能性が示唆された。一昨年度は、血漿交換・免疫吸着によって異種自然抗体(XNA)除去を試み、異種移植心の生着延長に成功した。昨年度は、XNAに拮抗すると考えられる異種ポリクロナール抗体(XPA)を作製し、異種心移植直前にレシピエントに投与したところ著名な生着延長効果が得られた。本年度は、レシピエントを異種血球で感作し、抗イディオタイプ抗体ができた時点で異種心移植を施行して生着延長効果を検討した。1.抗イディオタイプ抗体の作製モルモットの赤血球と白血球を分離して、それぞれ、週一回、計十回ラットに感作した。十分な抗体価をin vitroで確認後レシピエントとして準備した。2.実験方法抗イディオタイプ抗体ができたラットにモルモット心を異所性に移植した。拍動する移植心から、経時的に生検を行い、拍動停止時には全摘し、光顕用と免疫組織染色用の病理標本を作製した。また、経時的に採血し、血清補体価を測定した。3.結果コントロールでは、異種移植心の平均生着時間は15分であったが、抗イディオタイプ抗体ができたラットでは有意に延長し、最長生着時間は4時間であった。血管内皮細胞にXNA、補体、フィブンなどの付着はほとんど認められなかった。一方、拍動の停止時には血清補体価は低下し、拒絶反応の所見が見られ、XNA、補体、フィブンなどの付着が広範囲に認められた。4.考案抗イディオタイプ抗体はXNAと反応し、XNAと内皮細胞クラス。抗原との反応をブロックし、その結果として補体の活性化、フィブンの付着など、一連の反応が抑制されていると考えられる。また、抗イディオタイプ抗体は、B細胞に働いてXNAの産生を抑制している可能性が示唆された。
SCIDマウスを用いた抗ヒト型モノクローナル抗体の作製

SCIDマウス(severe combined immunodeficient mouse)にヒトリンパ球を移植することにより,ヒト免疫系のマウスでの再構築の可能性が既に報告されている.本研究ではヒト脾組織をSCIDマウスに移植した後,ヒト癌で免疫し癌に特異的なヒト免疫グロブリンの産生の有無を検討した.ヒト脾組織をSCIDマウスの背部皮下に移植した後,ヒト大腸癌株COLO205を移植しCOLO205に反応するヒトIgGをELISA法で検出した.その結果,COLO205に反応するIgGは,総IgG量の増加に伴って,免疫1週間後より増加し34週間後にはdonnorの血清に比し101000倍の高い反応性を示した.一方,異なる大腸癌株C-1に対するIgGの反応性は免疫マウスと非免疫マウスの間で差を認めなかった.このようにヒト脾組織をSCIDマウスに移植しヒト癌で免疫することによってその癌に特異的なヒトIgGが当該マウス血清に検出されることが明らかになった.次に,癌患者が既にある種の癌抗原に感作されているか否かについて検討した.胃癌患者(22例)と特発性血小板減少性紫斑病(ITP,8例)から脾組織を採取しSCIDマウスに移植後,前述と同様の検討をCOLO205を用いて行なった.その結果,癌患者の脾組織を移植されたマウスのCOLO205反応性IgG量は,ITP患者の脾組織を移植されたマウスに比し明らかに高い値を示した.さらにCOLO205反応性IgGの産生が高いマウスの腫瘍は低いマウスに比べ,有為に高い増殖速度を示した.このように癌患者は既に担癌状態によってなんらかの抗原刺激を受けており,特異抗原が癌の増殖に関与していると推察された.以上より,SCIDマウスにヒト脾組織を移植することによって当該マウスにヒト免疫系を再構築し得る可能性が示され,本実験系は新しい癌抗原の同定やヒトモノクローナル抗体の作製,さらには癌免疫学の基礎的研究などに有用と考えられた.SCIDマウス(severe combined immunodeficient mouse)にヒトリンパ球を移植することにより,ヒト免疫系のマウスでの再構築の可能性が既に報告されている.本研究ではヒト脾組織をSCIDマウスに移植した後,ヒト癌で免疫し癌に特異的なヒト免疫グロブリンの産生の有無を検討した.ヒト脾組織をSCIDマウスの背部皮下に移植した後,ヒト大腸癌株COLO205を移植しCOLO205に反応するヒトIgGをELISA法で検出した.その結果,COLO205に反応するIgGは,総IgG量の増加に伴って,免疫1週間後より増加し34週間後にはdonnorの血清に比し101000倍の高い反応性を示した.一方,異なる大腸癌株C-1に対するIgGの反応性は免疫マウスと非免疫マウスの間で差を認めなかった.このようにヒト脾組織をSCIDマウスに移植しヒト癌で免疫することによってその癌に特異的なヒトIgGが当該マウス血清に検出されることが明らかになった.次に,癌患者が既にある種の癌抗原に感作されているか否かについて検討した.胃癌患者(22例)と特発性血小板減少性紫斑病(ITP,8例)から脾組織を採取しSCIDマウスに移植後,前述と同様の検討をCOLO205を用いて行なった.その結果,癌患者の脾組織を移植されたマウスのCOLO205反応性IgG量は,ITP患者の脾組織を移植されたマウスに比し明らかに高い値を示した.さらにCOLO205反応性IgGの産生が高いマウスの腫瘍は低いマウスに比べ,有為に高い増殖速度を示した.このように癌患者は既に担癌状態によってなんらかの抗原刺激を受けており,特異抗原が癌の増殖に関与していると推察された.以上より,SCIDマウスにヒト脾組織を移植することによって当該マウスにヒト免疫系を再構築し得る可能性が示され,本実験系は新しい癌抗原の同定やヒトモノクローナル抗体の作製,さらには癌免疫学の基礎的研究などに有用と考えられた.
熱力学的平衡を考慮した土-水-空気・三相混合体の動力学特性

土中の間隙空気や間隙水は熱力学的な相互作用を受け,その平衡状態は,間隙空気中の水蒸気圧や気体の間隙水への溶解量,温度,液相と気相の割合に影響される。このため,温度や圧力といった状態量の変化は不飽和土の動力学特性に少なからず影響を与えると考えられる。中でも,間隙水や間隙空気が土粒子骨格の外へ出ないような急速な載荷(例えば,地震動)を受ける場合には,熱力学的平衡が瞬時に達成されるわけではないため,土の有効応力状態は時間に依存してより複雑になると考えられる。このような力学特性は,特に拘束圧が低く、大気温度の影響を受けやすい表層の不飽和領域の斜面崩壊機構と密接な関係があることが予想される。平成21年度には、間隙中の水と間隙期待の相互作用である気液平衡(温度や気体種の違いによる気体の液相への溶解量の変化など)が、砂質土の単調および繰返しせん断特性に及ぼす影響についての二酸化炭素および空気を間隙気体とした要素試験を数多く実施した。研究では、気体の溶解量の多い間隙気体を持つ不飽和土が非排気・非排水条件下で温度上昇変化を受けるとき、有効応力状態の変化を理論的に考察するとともに、実験的に雄幸応力が減少することを示し、その結果せん断強度が低下することを明らかにした。このような初期圧密時の有効応力が低下することによって、繰り返し強度も低下することを明らかにした。研究成果は、地盤工学会および土木学会において口頭発表した。国際会議などにも投稿中である。本研究では,熱力学的平衡,すなわち温度・飽和度・土中の気相の挙動に着目して,土粒子-間隙水-間隙空気の三相から構成される土の動力学特性に対する影響を明らかにすることを目的としている。平成19年度には,1)新たに温度制御可能な不飽和土用断熱セルを製作し,間隙空気の体積・圧力・温度の変化を計測しながらの繰返しせん断試験を開発した。2)非排気非排水条件下で温度変化を受ける不飽和土の有効応力状態(サクション)を検討した。3)土粒子-間隙水-間隙空気三相系の熱力学的平衡を考慮した有限変形・動的・不飽和の変形問題を理論的に定式化するための文献整理,研究状況を整理した。このような力学特性は、特に拘束圧が低く、大気温度の影響を受けやすい表層の不飽和領域の斜面崩壊機構と密接な関係があることが予想される。平成20年度には、間隙中の水と間隙期待の相互作用である気液平衡(温度や気体種の違いによる気体の液相への溶解量の変化など)が、砂質土の単調および繰返しせん断特性に及ぼす影響についての二酸化炭素および空気を間隙期待とした基礎的な要素試験を実施した。研究では、気体の溶解量の多い間隙気体を持つ不飽和土が非排気・非排水条件下で温度変化を受けるときの有効応力状態の変化を理論的に考察するとともに、実験を行って、実験技術を吟味しながら、その特性について検討した。研究成果は、地盤工学会および土木学会において高等発表した。

研究では、気体の溶解量の多い間隙気体を持つ不飽和土が非排気・非排水条件下で温度上昇変化を受けるとき、有効応力状態の変化を理論的に考察するとともに、実験的に雄幸応力が減少することを示し、その結果せん断強度が低下することを明らかにした。このような初期圧密時の有効応力が低下することによって、繰り返し強度も低下することを明らかにした。研究成果は、地盤工学会および土木学会において口頭発表した。国際会議などにも投稿中である。
膜結合型トランスフェリン様蛋白質を介する軟骨分化促進機構の解明

コンカナバリンA(ConA)は軟骨分化を強力に促進する。膜結合型トランスフェリン様蛋白(MTf)はConA結合蛋白として軟骨細胞から精製されてきた蛋白で、正常成体組織ではほぼ軟骨に特異的に高発現していることからMTfはConAの軟膏分化促進作用を仲介する蛋白の1つと考えられる。〔研究結果〕1.軟骨分化能をもつATDC5細胞にMTfを強制発現させ、軟骨分化に与える影響について解析した。MTfを高発現させた細胞ではマトリックスの合成が増加し、軟骨分化が促進していた。2.酵母のtwo-hybrid systemを用いて、MTfと相互作用する蛋白質の遺伝子のクローニングを試みた。ヒト軟骨細胞のcDNA library約2×10^6個から、5個の陽性クローンが得られ、その全ては242アミノ酸からなる同じ蛋白質をコードしていた。この蛋白質は機能的には全く未知であるが、C端附近にC-type lectin domain様の構造を有していた。膜結合型トランスフェリン様蛋白(MTf)はコンカナバリンA(ConA)結合蛋白として軟骨細胞から精製されてきた蛋白で、正常成体組織ではほぼ軟骨特異的に高発現している。MTfはトランスフェリンと類似の構造を有するが、C末端部分でグリコシルホスファチジルイノシトールアンカー(GPIアンカー)を介して細胞形質膜と結合している。ConAは軟骨分化を強力に促進することが知られており、MTfはConAの作用を仲介する蛋白の一つと考えられる。そこで、軟骨分化に対するMTfの作用を明らかにするために、以下の実験を行った。軟骨分化能をもつATDC細胞に全長のMTfおよびGPIアンカー結合領域を欠くMTf(MTf-GPI)を強制発現し、軟骨分化に与える影響について解析した。その結果、全長のMTfを発現した細胞ではコントロールの細胞と比較して、noduleの形成が早く、マトリックスの合成が促進していた。一方、MTf-GPIを高発現した細胞では軟骨分化が抑制されていた。また、MTfに対するアンチセンスS-オリゴマーを用いた実験では、ウサギ肋軟骨初代培養細胞の軟骨への分化が抑制され、マトリックスの構成分子であるウロン酸量が約30%低下していた。これらの結果から、MTfは軟骨細胞のマトリックスの蓄積を増強し、軟骨の分化に関与していると考えられる。また、GPIアンカーを介したMTfの細胞膜上への局在がMTfの軟骨分化促進機能に必須であると考えられる。
ボーダーランド表象の複合的編成―コーマック・マッカーシーの作品を中心に

現代アメリカ文学における「ボーダーランド」表象や言説の複合的編成について、コーマック・マッカーシーの小説のアーカイヴ資料の分析を中心に据え、追究した。とりわけ、人種的・階級的・性差的・宗教的・言語的・地理的・生物学的な「越境」を鍵概念にみると、そこには西洋白人男性中心主義的な幻想に支えられた「西部」起源のアメリカ性が転覆され、冷戦期アメリカにおけるアメリカ的自己と多文化共生主義との関係性が問い直されるなど、高度かつ複雑な「倫理」性が認められることを明らかにした。本研究は、現代アメリカ小説を代表する作家コーマック・マッカーシーの作品を中心に据え、アメリカ文学における「ボーダーランド(アメリカ-メキシコ国境地帯)」表象の複合的編成について考察するものである。平成25年度においては、入手可能な先行研究を可能な限り入手すると同時に、テキサス州立大学サン・マルコス校のアルケク図書館所有のウィットリフ・コレクション(the Southwestern Wr iters Collection and the Southwestern & Mexican Photography Collection)のアーカイブ資料の文献学的分析を中心に行った。とりわけ、「越境」を鍵概念に、冷戦期アメリカにおける「ボーダーランド」表象の成り立ちと系譜を追究するよう努めた。冷戦期アメリカにおいて、ナショナルアイデンティティの構築・強化のために「西部」や「フロンティア」という概念がどのように呼び戻され、ステレオタイプを超えて再創造されたのかを考察することにより、「西部」起源のアメリカ性、および今日にまで至るアメリカの多文化共生主義、さらには広義のアメリカニズムの成り立ちを問い直すことを目指した。この文脈において、具体的な成果としては、マッカーシーの代表作のひとつ『すべての美しい馬』(All the Pretty Horses)』を論じた論文「冷戦カウボーイの行方」を、東京学芸大学英語合同教室の紀要『英學論考』に発表した。本研究は、現代アメリカ文学を代表する作家のひとりであるコーマック・マッカーシーの作品を中心に据え、アメリカ文学における「ボーダーランド(アメリカ-メキシコ国境地帯)の複合的編成について考察するものである。平成26年度においては、平成25年度に引き続き、関連文献・資料等を可能な限り入手すると同時に、テキサス州立大学サン・マーコス校のアルケク図書館所有のコレクション(the Southwestern Writers Collection and the Southwestern & Mexican Photgraphy collection)のアーカイブ資料の文献学的分析を中心に行った。今年度は数か月間の滞在が可能となり、『ブラッド・メリディアン(Blood Meridian』、『すべての美しい馬(All the Pretty Horses』『越境(The Crossing)』『平原の町(Cities of the Plain』を含む国境三部作、『血と暴力の国(No Country for Old Men)』、『ザ・ロード(The Road)』といった、広い意味での「ボーダーランド」を舞台とする作品の初期原稿のほとんどを調査することができた。ひとつの作品が完成するまでの流れをつぶさに観察することにより、ストーリーの背後にある作者の意図を浮かびあがらせつつ、重要モチーフを読み取る作業が中心となったが、とりわけ、『越境』と『平原の町』については、「越境」「イニシエーション」「狼表象」「証人」「供儀」「他者」などを鍵概念に、文化相対主義の時代における倫理表象の問題系について考察する二つの論文に結実した。本研究は現代アメリカ文学を代表する作家のひとりであるコーマック・マッカーシーの作品を中心に据え、アメリカ文学における「ボーダーランド(アメリカ-メキシコ国境地帯)」言説の複合的編成について考察するものである。平成27年度においては、過去2年同様、関連文献・資料を広範に収集すると同時に、テキサス州立大学サンマーコス校のアルケク図書館所有のコレクション(The Southwestern Writers Collection and the Southwestern & Mexican Photography Collection)のアーカイヴ資料の文献学的分析を中心に研究を行った。ひとつの作品が完成するまでの草稿の諸段階をつぶさに観察することにより作者の創作の意図を浮き彫りにするという基本作業を経て、「戦争」「暴力」「崇高」といったマッカーシー作品における重要テーマにかかわる表象の複層性・多義性をあきらかにした。とりわけ、『ブラッド・メリディアン(Blood Meridian)』『血と暴力の国(No Country for Old Men)』『ザ・ロード(The Road)』といった、アメリカ南西部を舞台にしながらキリスト教的「終末論(Apocalypse)」のモチーフを携える点で共通する3作品のテクスト分析をとおして、マッカーシー作品が紡ぎだす独自の倫理性について考察したが、その倫理性とはアメリカ南西部というトポスにおいて形成される独特のアメリカニズムの成立と結びついている。その意味で、マッカーシー作品は「ボーダーランド」文学・文化の新たな展開を予兆すると同時にその中心に据えることができるだろう。渡米による調査の時間確保はある程度はできたが、現地でのみ閲覧可能なアーカイブ資料は厖大で、アメリカ南部文学に分類されるコーマック・マッカーシーの初期作品については時間的余裕がなかった。アメリカ文学平成27年度は、25-26年度同様にテキサス州立大学のアーカイヴ資料の調査分析を継続しつつ、学会誌論文、書籍論文として本年度の成果としてまとめる。また、国際学会(Cormac McCarthy Society)での研究発表も行いたい。

アーカイブ資料は基本的に現地での閲覧のみが可能な貴重な資料であり、現地に赴いた上で研究を進める必要があるのだが、その数量は予想よりはるかに厖大で調査の時間的余裕がなかった。他方、渡米の際にあわせて行った資料収集は一定の成果をみた。ただし、それらを本研究の研究目的に沿って戦略的に整理し、分析するという作業については時間的余裕があまりなかった。平成26年度以降は、引き続き、アメリカにおける現地調査と国内外における資料収集・整理に基づき、第一次資料と先行研究の分析を主に進める。アーカイブ資料の調査については、現地滞在期間を長くすると同時に、さらに集中的に行う。また、研究の中間的成果を、国内外の学会での研究発表、学会誌論文あるいは紀要論文としてまとめる準備を行う。とりわけ、アメリカのコーマック・マッカーシー学会での研究論文発表を目標としたい。
ゼブラフィッシュ胚発現系を用いた軸索誘導制御機構の解析

ゼブラフィッシュ胚発現系による逆遺伝学的アプローチに加えて、trimethylproralen(TMP)変異法による順遺伝学的アプローチにより神経発達の分子メカニズムの解明を行った。ゼブラフィッシュ精子へのTMP処理によりランダム変異を起こさせ、2世代スクリーニングにより確立したnotectal neuron(ntn)変異体は、眼と視蓋におこる神経変性が特徴である。TMPが欠失変異を誘発する可能性が高いことから、変異体ゲノム中の欠失を直接同定することを目指し、全ゲノムサブトラクションrepresentational difference analysis(RDA)法を用いて変異体ゲノムからの原因遺伝子の単離を試みた。5種類の制限酵素を用いてRDAを行ったところ、19のRDA産物を得た。この産物を用いて、ntn領域の遺伝地図、物理地図を作成した。ntn領域を含むYACクローンから約300のcDNAを単離し、RT-PCRによりchaperonin containing TCP-1(CCT)γサブユニット遺伝子に143bpの小欠失を同定した。CCTγ遺伝子を変異体に微量注入することにより、形質が野生型に回復し、原因遺伝子であることを明らかにした。これらの結果は、TMP変異法が実際に欠失変異を誘発したこと、RDAクローニング法が極めて有効なクローニング法であることを意味し、ゼブラフィッシュの遺伝学の新規方法論の開発に成功したことを示す。網膜神経節細胞の初期分化マーカーニコチン性アセチルコリン受容体β3サブユニット遺伝子プロモーター制御下に発現させたgreenfluorescent protein(GFP)による解析で、ntn変異体は網膜神経節細胞の分化障害が明らかとなった。同様に、抗アセチル化チューブリン抗体染色では、中脳視蓋神経細胞のニューロピルが欠損し、分化障害が示唆された。CCTγ蛋白は全身に発現しているが、CCTγ蛋白の変異体は網膜と視蓋特異的に表現型を認めたことは、CCTγがアクチンやチューブリンだけでなく未知の基質を持つ可能性を示唆する。シナプスは軸索誘導、シナプス前部・後部の接触、成熟を経て形成される。この分子機構を明らかにするために、ゼブラフィッシュ卵で神経特異的プロモーター下に蛍光蛋白と機能分子を同一細胞で発現させるダブルカセットベクター法を開発した。この独自の系を用いて、嗅覚神経軸索誘導におけるAキナーゼ(PKA)の役割を解析した。嗅神経細胞特異的なolfactory markerprotein遺伝子プロモーター下に、微小管結合蛋白tauとGFPの融合蛋白と優性変異型PKAを発現させた。恒常活性型による機能亢進は、嗅球内で軸索が迷走したのに対して、ドミナントネガティブ変異体による機能抑制は、嗅上皮内で迷走し、一部の軸索を嗅上皮嗅球境界部を越えて嗅球側へ伸長することができなかった。誘引因子に対して反応性を持ちながら嗅上皮内を伸長する嗅神経軸索が、嗅上皮嗅球境界部を通過する際に誘引因子に対して反応性を失うためには、軸索内PKAシグナルの抑制が必要であることを明らかにした。次に、軸索分枝の広がりとシナプス前部の成熟にglycogen synthase kinase-3β(GSK-3β)が果たす役割を、ニコチン性アセチルコリン受容体β3サブユニット遺伝子プロモーターを用いて視神経軸索で解析した。GSK-3βドミナントネガティブ変異体を発現させた軸索では、軸索分枝の発達が対照群と比較して発生のより早い時期に停止した。また、シナプス小胞蛋白vesicle-associated membrane protein(VAMP2/synaptobrevin)とGFPの融合蛋白の集積度を検討したところ、軸索終末の成熟が促進していた。標的細胞からの分泌性シグナルを受容したシナプス前部でGSK-3βの活性が抑制され、シナプス形成準備状態にする分子機構を明らかにした。

CCTγ蛋白は全身に発現しているが、CCTγ蛋白の変異体は網膜と視蓋特異的に表現型を認めたことは、CCTγがアクチンやチューブリンだけでなく未知の基質を持つ可能性を示唆する。
想起における判断基準のシフトの個人差の検討

本研究の目的は,想起における判断基準のシフトであるリベレーション効果について,その個人差に着目して現象を検討することである。平成30年度は,前年度に行った実験のデータ分析を遂行した。実験では,48名(20代50代の男女24名ずつ)の一般成人の実験参加者が,学習フェイズで単語を記銘し,テストフェイズで再認判断を行った。その際半数の試行では再認の直前に計算問題が挿入された(計算あり条件)が,もう半数では挿入されなかった(計算なし条件)。計算あり条件のold判断率がなし条件のそれより高ければ,判断基準の緩い方向へのシフト,つまりリベレーション効果が生起したといえる。本研究では,上述の課題を同一の実験参加者に対して期間をおいて3回行った。その結果,リベレーション効果が同一参加者に複数回生起することが示された。さらに,本効果は40代・50代でも生起するが,若年者の方が効果が大きいことが示された。この結果はリベレーション効果における個人差の存在を示唆するものである。また,リベレーション効果が生起する個人は他の基準シフトも生起するのか・メタ認知能力が高いのかを検討するため,56名の大学生を対象とした実験を新たに行った。その結果,他の基準シフトとリベレーション効果の関連を示すには至らなかったが,リベレーション効果とメタ認知能力を測定する質問紙との関連が示された。メタ認知能力の高い個人はリベレーション効果が生起しやすいことが示唆され,本効果の生起メカニズムにメタ認知の介在を仮定することの妥当性が示された。国際学会であるThe 30th Association for Psychological Science Annual Conventionにおいて,リベレーション効果と個人特性に関する研究成果を発表した。また,リベレーション効果の生起メカニズムを検討した諸研究結果をまとめ,第一著者として国際ジャーナルに投稿し,現在査読中である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成29年度は,リベレーション効果が同じ個人に繰り返し生起するのかを検討するため,一般成人を対象とした実験を行った。48名(20代50代の男女24名ずつ)の一般成人の実験参加者は,学習フェイズで単語を記銘し,テストフェイズで再認判断を行った。本研究では,上述の課題を同一の実験参加者に対して期間をおいて3回行い(1,2回目は同日,3回目は2回目の約3ヶ月後),リベレーション効果の大きさについて1,2,3回目の関連を検討することで,本効果に個人差が存在するのか,および個人差は個人内で安定して生起するのかを検証した。現在3回目の実験を終え,データ分析を遂行中である。また,第29回日本発達心理学会において,リベレーション効果の生起因として考えられているメタ認知に関連する自主企画シンポジウムに指定討論者として参加した。メタ認知・注意・実行機能に関する専門家の示唆を得て,研究の基盤を構築した。さらに,リベレーション効果と個人特性に着目した研究成果をまとめ,第一著者として国際ジャーナルであるPsychologyに投稿し,採択された。2カ年計画で2つの実験を計画していた。現在,当初の計画通り第1実験を終えているため,おおむね順調に進展していると考えられる。

国際学会であるThe 30th Association for Psychological Science Annual Conventionにおいて,リベレーション効果と個人特性に関する研究成果を発表した。また,リベレーション効果の生起メカニズムを検討した諸研究結果をまとめ,第一著者として国際ジャーナルに投稿し,現在査読中である。第1実験のデータを分析した後,48名の実験参加者を対象とした第2実験を実施する予定である。第2実験の終了後,すべてのデータを総合的に勘案した上で,リベレーション効果の安定性・一貫性・妥当性について検証し,判断基準の歪みという側面から想起プロセスについて考察する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。