hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
パーキンソン病危険因子の抑制と発症予防に働く栄養成分の網羅的探索

神経毒性物質MPTP(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine)を用いて、症状の重度が異なるパーキンソン病モデルマウスを作製し、脳内の病態変化に対して、各種栄養成分(α-tocophero1,ascorbicacid, carnosine, lycopine astaxanthin)のをHPLCによる線条体dopamineおよびの代謝物の濃度測定や行動薬理学的試験を行い検討した。各物質の投与は経口投与とし、投与量や投与期間の検討及び有効性のみられた物質については、再現性の確認を行った。上記の各栄養成分の本疾患に対する影響は、有効なものとそうでないものがあり、本疾患の発症に関与する因子である老化に伴う神経細胞の減弱に対する効果がみられた物質もあった。有効性のみられた栄養成分については、脳内各部位(線条体、黒質、大脳皮質、海馬)における機能性タンパク(Tyrosine-hydroxylase,GFAP,Isolectin,S100β,NGF,nNOS,eNOS,iNOS,Cu/Zn-SQD,Mn-SOD等)発現を免疫組織化学的に検討し、定量化した。また、ESRを用いた脳内酸化ストレスの測定では、その測定方法を確立し、再現性を確認することができた.ESR法を用いた測定により、本疾患の重症度とパラレルに酸化ストレスの度合が増加することを確認し、症状の著しい重度の疾患モデルマウスでは、その脳内酸化ストレスを軽減あるいは抑制できる栄養成分の探索が難しいことが示唆された。各種栄養成分の効果は、症状の進行段階や急性期のモデルに対して有効である可能性が考えられた。パーキンソン病への抗酸化物質やACE阻害作用を有するペプチドの効果を検討する目的で、本疾患モデルを用い、生化学的、行動薬理学的、免疫組織化学的に検討を行った。本疾患モデル動物の作製には、神経毒性物質MPTP(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine)を用い、本疾患における脳内の病態変化に対して、各栄養成分(α-tocopherol, ascorbic acid, carnosine)の効果を、HPLCによる線条体dopamineおよびその濃度測定により検討した。各栄養成分の投与方法は経口または腹腔内投与とし、病態発症前の2-4週間および発症直後に行った。結果、上記3種類の抗酸化物質の効果は観察されなかった。今後は、その他の抗酸化物質の検討や、投与方法の検討など、さらに詳細に検討したいと考える。さらに、パーキンソン病発症の危険因子の一つである老化に対する各種栄養成分の効果も合わせて検討したいと考えている。また、われわれはこれまでに本疾患に対するACE阻害物質の有効性を報告してきた。その作用機序の解明やその他各種栄養成分の効果を検討する目的で、ESR(electron spin resonance)を用い、脳内酸化ストレスの測定方法を検討した。結果、生体ESR法を用いた測定により、本モデルにおける酸化ストレスの増大が観察され、症状の重症度の増加とパラレルに脳内酸化ストレスの増大が確認された。今後はさらに、ESRを用いて、本モデルにおける各種有効物質の評価を行う予定である。昨年度に引き続き、パーキンソン病への抗酸化物質やACE阻害作用を有するペプチドの効果を検討する目的で、本疾患モデルを用い、生化学的、行動薬理学的、免疫組織化学的に検討を行った。本疾患モデルマウスの作製には、神経毒性物質MPTPを用い、その投与量や投与回数の違いにより、症状の重度が異なる病態モデルを作製した。本疾患モデルマウスにおける脳内の病態変化に対して、各種栄養成分(α-tocopherol, ascorbic acid, carnosine, lycopine)の効果を、HPLCによる線条体dopamineおよびその代謝物の濃度測定により検討し、学会や学術論文での発表を行った。各栄養成分の投与方法は経口投与とし、病態発症前の2-4週間および発症直後に行った。上記の各栄養成分の本疾患に対する影響は、必ずしも有効ではなかったが、本疾患の発症に関与する因子である老化に伴う神経細胞の減弱に対する効果がみられた物質もあった。老化に伴う神経細胞の減弱へ有効性を示す栄養成分については、その投与方法や投与量によって本疾患に対する効果も期待できることから、今後も検討を続ける予定である。さらにその他の栄養成分(astaxanthin, folate, peptide[VPP])を用いての検討や、免疫組織化学的手法を用いての機能性蛋白発現変動の観察、神経栄養因子関与の検討も引き続き行う予定である。また、ESRを用いた脳内酸化ストレスの測定では、その測定方法を確立し、再現性を確認することができた。ESR法を用いた測定により、本疾患の重症度とパラレルに酸化ストレスの度合が増加することを確認し、症状の著しい重度の疾患モデルマウスでは、その脳内酸化ストレスを軽減あるいは抑制できる栄養成分の探索が難しいことが示唆された。

上記の各栄養成分の本疾患に対する影響は、有効なものとそうでないものがあり、本疾患の発症に関与する因子である老化に伴う神経細胞の減弱に対する効果がみられた物質もあった。有効性のみられた栄養成分については、脳内各部位(線条体、黒質、大脳皮質、海馬)における機能性タンパク(Tyrosine-hydroxylase,GFAP,Isolectin,S100β,NGF,nNOS,eNOS,iNOS,Cu/Zn-SQD,Mn-SOD等)発現を免疫組織化学的に検討し、定量化した。また、ESRを用いた脳内酸化ストレスの測定では、その測定方法を確立し、再現性を確認することができた.ESR法を用いた測定により、本疾患の重症度とパラレルに酸化ストレスの度合が増加することを確認し、症状の著しい重度の疾患モデルマウスでは、その脳内酸化ストレスを軽減あるいは抑制できる栄養成分の探索が難しいことが示唆された。各種栄養成分の効果は、症状の進行段階や急性期のモデルに対して有効である可能性が考えられた。
痙攣性神経疾患関連遺伝子PRRT2のシナプスにおける病態生理学的役割の解明

Prrt2 KIマウスの脳内において各種シナプスタンパク量が主に大脳基底核で変動しているというデータは本研究の着想に至る重要な根拠であるが、その変動がセントラルドグマのどこで生じるかを明らかにすることはPRRT2の機能を解析する上で必要不可欠である。Prrt2 KIマウスの大脳基底核で減少した10種類のシナプスタンパクについてmRNAの発現変動をリアルタイムPCRで解析したところ、何れのmRNAにも変化は見られなかった。従って、これらのシナプスタンパク量の変動は、タンパクレベルでの相互作用の消失によるタンパク質の不安定化等に起因すると考えられた。また、Prrt2 KIによる変動が顕著だったsyntaxin 1 (Stx1)及びsynaptogyrin 3 (Syngr3)について、Prrt2との二重染色脳切片を超解像度顕微鏡で撮像し、大脳基底核におけるそれらの共局在性を解析したところ、Stx1、Syngr3ともにPrrt2との共局在が確認された。この結果は、Prrt2がStx1、Syngr3と大脳基底核で生理的に相互作用しうることを示唆しており、それらの分子との機能的協調性が推察される。Syngr3は大脳基底核選択的に発現するドパミントランスポーター(DAT)の活性化に関わることから、上記の結果よりPRRT2がSyngr3と同様にDAT機能に影響を与えるかを調べた。DATを安定発現するNeuro2A細胞にPRRT2を一過性発現させ、蛍光ドパミン誘導体FFN102の細胞内取り込みを測定したところ、対照群のmockに比較してその取り込み量が有意に減少した。これは、PRRT2がDAT機能を抑制的に制御するという全く新しい知見であり、大脳基底核選択的なPRRT2機能を裏付けるものである。項目1 (Prrt2 KIにより大脳基底核で発現量が減少したシナプス分子に関して、大脳基底核におけるPRRT2との共局在性を免疫組織化学で調べる)に関して、Syngr3及びStx1がPrrt2と共局在することを免疫組織化学で示すことに成功した。同様の手法を用いて、残りのシナプス分子についても順次、解析を進めていく予定である。項目2 (野生型およびPrrt2 KIマウスの大脳基底核プライマリーニューロンにおいて、FM dye、またはSypHluorinを用いて、シナプス小胞の放出やリサイクリングを解析する。)に関しては平成31年度までに行う項目であるが、現在、SypHluorinをCAGプロモーター下で発現するベクターの作製を完了し、マウス大脳基底核プライマリーニューロンにおいて発現することを確認した。Prrt2 KIマウスの大脳基底核における各種シナプス分子の減少がタンパク発現に至るまでのどの段階で生じているかについては、研究を進める中で新たに解析の必要性が生じた内容であり、リアルタイムPCRで、いずれのmRNAもPrrt2 KIによる変動が確認されなかったことから、これらのシナプスタンパク量の変動は、タンパクレベルで生じていることが示された。また、大脳基底核におけるPRRT2の機能を模索する中で、大脳基底核特異的に発現するドパミントランポーター(DAT)の活性がSyngr3によって調節されるという報告に着目し、PRRT2とDAT活性の関連を調べたところ、PRRT2がDAT機能を抑制的に制御することを見出した。以上の理由により、本研究課題が概ね順調に進行していると判断し、(2)を選択した。計画書に沿って本研究課題を進める。項目2:Prrt2 KIによって発現量が変動したタンパク質についてPRRT2との相互作用の解析を続ける。また、超遠心法により脳組織を細胞内分画し、Prrt2 KIによって、シナプス膜やシナプス小胞膜の何れでこれらのタンパク質の発現量が変化するかを明らかにする。項目3:昨年度から準備を進めてきたSypHluorinやFM dyeを用いた実験系において、野生型及びPrrt2 KIマウスの大脳基底核プライマリーニューロンにおけるシナプス小胞の放出やリサイクリングを解析する。項目4:野生型及びPrrt2 KIマウスの大脳基底核において、マイクロダイアリシスを行い、HPLCでGlu量、GABA量、ドパミン量を測定することで、グルタミン酸作動性神経とGABA作動性神経、ドパミン作動性神経を区別してシナプス放出を解析する。さらに、ドパミンと同時にHPLCで測定可能なセロトニンについても新たに解析対象に加える予定である。項目5:電子顕微鏡を用いて、Prrt2 KIマウス大脳基底核(線条体、淡蒼球、視床下核、黒質)神経終末部位におけるシナプス小胞の数、サイズ及び局在の変化を野生型マウスと比較する。また、神経サブタイプ(グルタミン酸作動性、GABA作動性、ドパミン作動性神経等)の種類によって、Prrt2及びその相互作用タンパク質の発現量やシナプス機能への寄与度が異なることを想定し、それぞれのサブタイプマーカータンパク質を標識しながら、上記の解析を行う。この項目については当初、本学共同実験施設の中央電子顕微鏡室の設備を用いて進める予定であったが、シナプスを撮像するための技術的なサポートが必要であることから、科研費・新学術領域研究『学術研究支援基盤形成』生命科学4プラットフォームの研究支援を得て進めていく方針に変更した。

Prrt2 KIマウスの大脳基底核で減少した10種類のシナプスタンパクについてmRNAの発現変動をリアルタイムPCRで解析したところ、何れのmRNAにも変化は見られなかった。従って、これらのシナプスタンパク量の変動は、タンパクレベルでの相互作用の消失によるタンパク質の不安定化等に起因すると考えられた。また、Prrt2 KIによる変動が顕著だったsyntaxin 1 (Stx1)及びsynaptogyrin 3 (Syngr3)について、Prrt2との二重染色脳切片を超解像度顕微鏡で撮像し、大脳基底核におけるそれらの共局在性を解析したところ、Stx1、Syngr3ともにPrrt2との共局在が確認された。この結果は、Prrt2がStx1、Syngr3と大脳基底核で生理的に相互作用しうることを示唆しており、それらの分子との機能的協調性が推察される。Syngr3は大脳基底核選択的に発現するドパミントランスポーター(DAT)の活性化に関わることから、上記の結果よりPRRT2がSyngr3と同様にDAT機能に影響を与えるかを調べた。DATを安定発現するNeuro2A細胞にPRRT2を一過性発現させ、蛍光ドパミン誘導体FFN102の細胞内取り込みを測定したところ、対照群のmockに比較してその取り込み量が有意に減少した。これは、PRRT2がDAT機能を抑制的に制御するという全く新しい知見であり、大脳基底核選択的なPRRT2機能を裏付けるものである。項目1 (Prrt2 KIにより大脳基底核で発現量が減少したシナプス分子に関して、大脳基底核におけるPRRT2との共局在性を免疫組織化学で調べる)に関して、Syngr3及びStx1がPrrt2と共局在することを免疫組織化学で示すことに成功した。同様の手法を用いて、残りのシナプス分子についても順次、解析を進めていく予定である。項目2 (野生型およびPrrt2 KIマウスの大脳基底核プライマリーニューロンにおいて、FM dye、またはSypHluorinを用いて、シナプス小胞の放出やリサイクリングを解析する。)に関しては平成31年度までに行う項目であるが、現在、SypHluorinをCAGプロモーター下で発現するベクターの作製を完了し、マウス大脳基底核プライマリーニューロンにおいて発現することを確認した。Prrt2 KIマウスの大脳基底核における各種シナプス分子の減少がタンパク発現に至るまでのどの段階で生じているかについては、研究を進める中で新たに解析の必要性が生じた内容であり、リアルタイムPCRで、いずれのmRNAもPrrt2 KIによる変動が確認されなかったことから、これらのシナプスタンパク量の変動は、タンパクレベルで生じていることが示された。また、大脳基底核におけるPRRT2の機能を模索する中で、大脳基底核特異的に発現するドパミントランポーター(DAT)の活性がSyngr3によって調節されるという報告に着目し、PRRT2とDAT活性の関連を調べたところ、PRRT2がDAT機能を抑制的に制御することを見出した。以上の理由により、本研究課題が概ね順調に進行していると判断し、(2)を選択した。計画書に沿って本研究課題を進める。
有価証券の時価情報が株価形成に及ぼす影響に関する実証研究

本研究は、企業が保有する有価証券の評価に関連する次の2つの問題をとりあげて実証分析を加え、それぞれの結論を導出した。第1の問題は、取得原価主義に基づく発生主義利益で測定した企業業績と株価変動の間に実証的な関連性が存在することを所与としても、有価証券の時価情報は、株価変動との間で追加的な関連制を有するかというものである。この調査のため[(株価変化率)=a+b(原価主義利益情報)+c(時価情報)]というクロスセクション重回帰分析を行い、パラメータcが統計的に有意な値になることを明らかにし、原価主義利益情報を所与としても、時価情報が企業ごとの株価変化率との間で、追加的な関連性をもつことを証拠づけた。この結果に基づき、有価証券の時価評価情報の補足的提供が投資者の意思決定を促進するのに役立つという結論を導出した。第2の問題は、企業は有価証券の評価基準として、原価基準と低価基準のいずれかを任意に選択できるため、いずれの方法を採用したかにより、1株当り利益額が相違するが、証券市場はこのような会計方針の差異を調整したうえで株価形成を行っているかというものである。とくに低価法を強制されている銀行業界が、1992年9月中間期に関して大蔵省の特例措置により評価減を見送って1株当り利益額の水準を維持したことに対して、証券市場での株価形成はどうであったかに注目した。株価収益率を尺度として、クロスセクション重回帰を行ったところ、評価損の見送り額が相対的に大きい銀行ほど、株価もよりいっそう低く形成されていることが判明したが、これは市場が会計方法の相違に起因する報告利益の品質差を賢明に識別していることを意味するものである。
大陸地殻の塑性変形強度に対する長石の影響の解明

地殻中深部で変形した岩石中で,しばしば細粒斜長石(d<5μm)が長石ポーフィロクラストから面構造と平行に伸びている.しかし,細粒長石の塑性変形の性質については,不明な点が多い.このため本研究では,畑川破砕帯に沿った小剪断帯において,石英-長石マイロナイトのSEM-EBSPによる結晶方位解析を行った.解析を行った試料中では,変形は剪断帯中心部に向かい強くなる.変形とともに石英層の結晶定方向配列は強くなり,高歪領域で石英層は強い定方向配列を作る.一方,高歪領域で石英層は著しく引き伸ばされ,孤立した石英粒子の配列を形成する.これらの石英粒子の配向性はほとんどランダムである.細粒斜長石は低歪領域において強い結晶定方向配列を示すが,これは母晶の方位を反映したものである.一方,中高歪領域で,極点図はほぼランダムとなる.これらの細粒長石中では転位下部組織,動的再結晶組織がよく発達している.今回の結果は,上部,中深部の地殻のレオロジーを考える上で重要である.石英層は転位クリープにより変形した一方,孤立石英粒子は,周囲の細粒長石の変形に支配された回転を受けるためランダムなファブリックを作る.すなわち,石英の塑性変形強度は細粒長石よりも硬く,細粒長石の変形過程の重要性が示唆される.一方,細粒斜長石のランダムファブリックと転位下部組織について次の説明が考えられる.(1)優先滑り系を特に作らず多数の滑り系が同時に活動する転位クリープ.(2)転位クリープと粒界滑りが同時に活動する.実験などの結果からは優先滑り系を作らない転位クリープは困難である.このことが正しければ,(2)の仮説が妥当である.今回の結果は,斜長石の力学と変形機構について我々の理解が及んでいない領域の存在を示している.さらに,このような転位過程と粒界滑りの両方が起こる領域での物質のレオロジーについて今後の研究が望まれる.地殻中深部で変形した岩石中で,しばしば細粒斜長石(d<5μm)が長石ポーフィロクラストから面構造と平行に伸びている.しかし,細粒長石の塑性変形の性質については,不明な点が多い.このため本研究では,畑川破砕帯に沿った小剪断帯において,石英-長石マイロナイトのSEM-EBSPによる結晶方位解析を行った.解析を行った試料中では,変形は剪断帯中心部に向かい強くなる.変形とともに石英層の結晶定方向配列は強くなり,高歪領域で石英層は強い定方向配列を作る.一方,高歪領域で石英層は著しく引き伸ばされ,孤立した石英粒子の配列を形成する.これらの石英粒子の配向性はほとんどランダムである.細粒斜長石は低歪領域において強い結晶定方向配列を示すが,これは母晶の方位を反映したものである.一方,中高歪領域で,極点図はほぼランダムとなる.これらの細粒長石中では転位下部組織,動的再結晶組織がよく発達している.今回の結果は,上部,中深部の地殻のレオロジーを考える上で重要である.石英層は転位クリープにより変形した一方,孤立石英粒子は,周囲の細粒長石の変形に支配された回転を受けるためランダムなファブリックを作る.すなわち,石英の塑性変形強度は細粒長石よりも硬く,細粒長石の変形過程の重要性が示唆される.一方,細粒斜長石のランダムファブリックと転位下部組織について次の説明が考えられる.(1)優先滑り系を特に作らず多数の滑り系が同時に活動する転位クリープ.(2)転位クリープと粒界滑りが同時に活動する.実験などの結果からは優先滑り系を作らない転位クリープは困難である.このことが正しければ,(2)の仮説が妥当である.今回の結果は,斜長石の力学と変形機構について我々の理解が及んでいない領域の存在を示している.さらに,このような転位過程と粒界滑りの両方が起こる領域での物質のレオロジーについて今後の研究が望まれる.
アルツハイマー病において早期に変化する分子の病態分子機構の解明

アルツハイマー病(AD)の分子病理学的な特徴のひとつにアミロイドβ(Aβ)の蓄積がある。アミロイド仮説に基づきAβ抗体治療法やβ、γ-セクレターゼインヒビターの開発が進められてきたが、これまでに認知症状は改善されていない。アミロイドの蓄積前の超早期におこるADの分子病態に介入する治療法の開発を目指して、申請者らはADモデルマウスとヒト死後脳を用いたリン酸化プロテオーム解析を行い、リン酸化に変化のあった17個のAD病態タンパク質を同定した(Tagawa et al, Hum Mol Genet 2015)。本申請では、AD病態タンパク質であるGAPDHに注目したが、同様にAD病態タンパク質であるSRRM2について進展があったのでそちらを合わせて報告する。計画通りにGAPDHをリン酸化するキナーゼの解析を進めたが、キナーゼおよびシグナルパスウエイの同定には至っていない。また、GAPDHリン酸化変異体発現系を作製したがモデルマウスにおけるAD病態変化、過食飼育ADモデルマウスのリン酸化プロテオーム解析については、再現性のある結果が得られていない。一方で進展があったAD病態タンパク質SRRM2について報告する。超早期にSer1068のリン酸化が異常に亢進したSRRM2は核移行が妨げられ、神経細胞においてRNAスプライシング関連タンパク質が減少していた。SRRM2とのタンパク質ータンパク質相互作用があり、RNAスプライシング関連タンパク質でもある発達障害原因遺伝子PQBP1は、その減少がシナプス関連分子の発現量の大幅な変動を引き起こした。また、AAV-PQBP1によるPQBP1の補充によりADモデルマウスの認知機能やスパイン病態は回復され、遺伝子治療の可能性を示した(Tanaka, Tagawa et al., Mol. Psy. 2018)。申請者グループはアルツハイマー病(AD)モデルマウス大脳のリン酸化プロテオーム解析より17個をADコア病態タンパク質として抽出した。次に、システムバイオロジー解析よりAD病態ネットワークを構築すると、驚くべきことに12個が直接的に相互作用し、AD患者死後脳で8個、タウ病態モデルマウスで10個に共通のリン酸化変化が認められた。これより、超早期から発症後の晩期までに持続される異常シグナルであること、モデルマウスのみならずヒトにも共通性を持つトランスレータブルな変化であること、Aβのアミロイド病態からタウ病態までをつなぐ変化であることなど、複数の可能性が示唆された。(Tagawa etal, Hum Mol Genet 2015)本研究計画は早期に変化が確認されたGAPDHに注目する。その理由はエネルギー代謝に関わるGAPDHは、肥満・糖尿病がADのリスクファクターであること、肥満・糖尿病モデルマウスとの掛け合わせより痴呆の表現型がより早期に観察されることである。加えて、ADコア病態タンパク質であるMARCKSの46番目セリンのリン酸化が細胞外HMGB1の作用により亢進され、超早期アルツハイマー病態に関連する知見が得られ、抗HMGB1抗体投与により認知機能の改善された(Fujita, Tagawa et al, Sci Rep 2016)。このことより同じくADコア病態タンパク質であるGAPDHの重要性はさらに増したと考えている。本計画を進める上の重要事項は以下の3点となる。(1)GAPDHの特異的部位をリン酸化するキナーゼの同定、(2)リン酸化部位変異体(恒常的活性あるいは不活性型)によるAD病態変化の検討、(3)過食飼育したADモデルマウスのリン酸化プロテオーム解析。28年には(1)の解析と(2)と(3)の準備を進めた。「(1) GAPDHの特異的部位をリン酸化するキナーゼの同定」については、データベース検索より選び出した候補キナーゼによるin vitrokination assayより再現性のある明瞭な結果が得られいない。また、GAPDHと相互作用するキナーゼあるいはキナーゼ結合タンパク質の同定については、免疫沈降後のサンプルのショットガンプロテオーム解析の準備を進めている。「(2)リン酸化部位変異体(恒常的活性あるいは不活性型)によるAD病態様変化の検討」はそれぞれの変異体cDNAは作製済みである。「(3)過食飼育したADモデルマウスのリン酸化プロテオーム解析」は過食飼育したADモデルマウスを3, 6, 12ヶ月齢で大脳のサンプリングを進めている。計画書では可能であればと記載した12ヶ月齢も進めており、29年度中には全て完了する予定である。また、該当マウスにおいてAD表現型の指標としているY迷路をサンプリング直前に試行することを加えている。データベース検索による候補キナーゼの解析結果が得られていないが、この解析が上手くいかない場合に申請書で想定しているGAPDHに相互作用する分子の検索の準備を進めている。当初計画よりマウス実験に研究エフォートが若干シフトしていることより、総合的には概ね順調に進んでいる。

本申請では、AD病態タンパク質であるGAPDHに注目したが、同様にAD病態タンパク質であるSRRM2について進展があったのでそちらを合わせて報告する。計画通りにGAPDHをリン酸化するキナーゼの解析を進めたが、キナーゼおよびシグナルパスウエイの同定には至っていない。また、GAPDHリン酸化変異体発現系を作製したがモデルマウスにおけるAD病態変化、過食飼育ADモデルマウスのリン酸化プロテオーム解析については、再現性のある結果が得られていない。一方で進展があったAD病態タンパク質SRRM2について報告する。超早期にSer1068のリン酸化が異常に亢進したSRRM2は核移行が妨げられ、神経細胞においてRNAスプライシング関連タンパク質が減少していた。SRRM2とのタンパク質ータンパク質相互作用があり、RNAスプライシング関連タンパク質でもある発達障害原因遺伝子PQBP1は、その減少がシナプス関連分子の発現量の大幅な変動を引き起こした。また、AAV-PQBP1によるPQBP1の補充によりADモデルマウスの認知機能やスパイン病態は回復され、遺伝子治療の可能性を示した(Tanaka, Tagawa et al., Mol. Psy. 2018)。引き続き、(1)GAPDHの特異的部位をリン酸化するキナーゼの同定、(2)リン酸化部位変異体(恒常的活性あるいは不活性型)によるAD病態様変化の検討、(3)過食飼育したADモデルマウスのリン酸化プロテオーム解析を行い、29年度は以下について進める。(1)において、データベース検索されたキナーゼによるin vitrokination assayについては引き続き解析条件の至適化を進め、一方でデータベースに依存せずにGAPDHに相互作用するキナーゼおよびその関連タンパク質の同定を行い、in vitrokination assayを行う。(2)は計画通りに、リン酸化変異体のAAV作製を進める。(3)については、29年度後半にはサンプルが揃うので過食ADモデルマウスのリン酸化プロテーム解析を開始する。発注が必要となった時点で28年度内に納品可能が不確定であった物品の購入(納品が29年度)と、当該する申請により必要な物品を購入するために残額と次年度予算を合わせて次年度の購入を行うためである。当初申請予定に消耗品として加える。
オリゴデンドロサイト分化時期特異的ｍｉＲＮＡの探索と髄鞘形成不全への治療応用

本研究では、『オリゴデンドロサイト前駆細胞(OPC)の分化過程における時期特異的マイクロRNA(miRNA)の発現プロファイリングと、それらの髄鞘形成不全疾患への治療応用』を目的とする。具体的には、オリゴデンドロサイトの分化制御因子として働くmiRNAの機能に着目し、初代培養OPCを用い、OPC分化時に誘導されるmiRNAが、髄鞘形成不全に伴うオリゴデンドロサイトの分化異常OPC分化ステージ特異的miRNAの解析を試みた。特にオリゴデンドロサイト分化特異的miRNA(miR-219,-138,-338)を中心に解析をを行った。具体的には髄鞘形成不全を特徴とする、ニーマンピック病C型(NPC)モデルマウスであるNPC1ノックアウトマウスから得られた、脳梁サンプルを用い、オリゴデンドロサイト分化特異的miRNAの発現変化を調べ、miR-219、-338の発現低下を同定した。また、NPCは後期エンドソーム/リソゾームを介した細胞内コレステロール輸送の異常によって生じる劣性遺伝子疾患である。コレステロールの取込み・細胞内輸送は発達期の髄鞘形成に重要な役割を果たすと考えられており、このコレステロール輸送異常とmiRNAの関係を調べるために、細胞内コレステロール輸送阻害剤であるU18666Aを用いて、初代培養OPC分化とmiRNA発現への影響を調べた。その結果、細胞内コレステロール輸送異常によってOPCからオリゴデンドロサイトへの分化は著しく阻害され、この時、OPC分化関連miRNAの発現量が顕著に低下することが分かった。さらに、オリゴデンドロサイト分化特異的miRNAを強制発現させることにより、オリゴデンドロサイト分化異常が回復することを見出した。以上の結果は、NPCの治療法開発・創薬にmiRNAが有効な標的分子となる可能性を示唆している。初予定していた研究計画に概ね沿った順調な進展である。オリゴデンドロサイト分化特異的miRNAに標的を絞ることで、一部研究実施計画を前倒しに行っている。他のmiRNAに関しては、平成28年度に跨って行う方針である。今後は髄鞘形成不全疾患に対するmiRNAの治療応用を検討する。すなわち、オリゴデンドロサイト特異的miRNAの強制発現ウイルスの作成し、これを用いたNPC1ノックアウトマウスで見られる髄鞘形成不全への治療応用を目指す。現在論文執筆中であり、本年度中に論文投稿を行う予定のため、論文投稿料として使用する予定である。本年度は論文投稿料としてその他に計上していたが、年度内の論文投稿ができなかったため。
国内航空線におけるハブアンドスポークシステムの構築に関する研究

「航空会社の適正利益を確保するための効率的な就航スケジュールの構築」を目的とし,最適就航スケジュール作成シミュレーターを構築した。その際に前年度に課題とした「より現実的な条件(帰着空港条件等々)の追加によるシミュレーション時間の増加」に対し,最適化技法の更なる効率化およびシミュレーションロジック自体の見直しを行った。また,航空会社および商社に対する調査を行ったが,企業秘密の粋に属するデータであるため,得ることができなかった「顧客数データ」および「費用原価データ」に代替するデータの収集・推計を行った推計に使用したデータは,各航空会社が提供しているweb上での予約システムから離発直前の空席状況から搭乗顧客数を逆算した.また,費用原価データは文献調査により一般値を使用した.その結果,本研究で対象とした東京(羽田)・北海道内空港においては新千歳空港を利用した直行便と経由便が混在する,準ハブ・アンド・スポークシステムが,就航ネットワーク全体の乗客率等の全指標値に対し有効であることが明らかとなった.特に,函館・稚内・女満別・釧路・中標津空港への飛行に対し新千歳空港を経由とした路線が最適となり,従来値に対し乗客率が15.2%向上した.「乗り継ぎ時間等の利便性の欠如と運賃に関する使用者の意識調査」として,アンケートサーバーシステムを構築した.平成17年初旬から同2月末までのデータに基づき,乗継便選定モデルを集計ロジットモデルにより構築したが,サンプル数の不足から十分な検定結果を得るに至らなかったため,事前調査により構築した乗継便選定モデルを上記シミュレーションモデルと統合した.その結果,東京(羽田)・北海道内空港においては新千歳空港を利用した直行便と経由便が混在する,準ハブ・アンド・スポークシステムが,利用者,航空会社両者にとっても有効であるとの結論を得た.1.スケジュール作成シミュレーターの構築「航空会社の適正利益を確保するための効率的な就航スケジュールの構築」を目的とし,最適就航スケジュール作成シミュレーターを構築した.中規模程度の規模になるものと予想されたシミュレーションは,最適化技法の適用により,当初想定していた約1ヶ月程度処理時間を大幅に削減することができた。2.アンケートフォーマットの作成とアンケート用サーバーシステムの構築「乗り継ぎ時間等の利便性の欠如と運賃に関する利用者の意識調査」の準備として,帳票を作成した帳票は予備調査時の項目に加え,シミュレーションにより得られた具体的な就航スケジュール,運用費用,旅客運賃を加味している.また,インターネットを介したアンケートの実施により,より多くの回答収集を狙う必要となるアンケート用サーバーシステムの構築を行った.3.課題シミュレーションに用いるより高精度なデータを確保する為に航空会社に対する調査を行ったが,企業秘密の粋に属するデータであるため,協力を得ることができなかった.これに対し,2003年度には国土交通省等へのアプローチを予定している.1.スケジュール作成シミュレーターの構築平成14年度に引き続き「航空会社の適正利益を確保するための効率的な就航スケジュールの構築」を目的とし,最適就航スケジュール作成シミュレーターの構築進めた.前年度成果への「より現実的な条件(帰着空港条件等々)の追加により,組み合わせが増加し,シミュレーションに要する時間が当初想定していた処理時間を大幅に超えるものとなってしまった.今後,最適化技法の更なる効率化または,ロジック自体の見直しが必要と思われる。2.アンケートフォーマットの作成とアンケート用サーバーシステムの構築「乗り継ぎ時間等の利便性の欠如と運賃に関する使用者の意識調査」の準備として,帳票の改良を行なった.しかしながら,帳票は予備調査時の項目に加え,シミュレーションにより得られた具体的な就航スケジュール,運用費用,旅客運賃を必要とするため,シミュレーションモデルが不完全な現段階においては,完成していない.また,イシターネットを介したアンケートの実施を目途としたサーバーシステムの構築を進めた.3.課題(1)シミュレーションモデルにおける課題:上記1.のように現実再現性と計算コストのトレードオフから,適用する条件の再整理または最適化手法についての再考が必要と判断される.(2)乗客データについて:シミュレーションに用いるより高精度な乗客データを確保する為に航空会社および商社に対する調査を行ったが,企業秘密の粋に属するデータであるため,協力を得ることができなかった.16年度では,現実のデータ収集から推計方法によるデータ作成に方針を転換する必要があると判断している.「航空会社の適正利益を確保するための効率的な就航スケジュールの構築」を目的とし,最適就航スケジュール作成シミュレーターを構築した。また,航空会社および商社に対する調査を行ったが,企業秘密の粋に属するデータであるため,得ることができなかった「顧客数データ」および「費用原価データ」に代替するデータの収集・推計を行った推計に使用したデータは,各航空会社が提供しているweb上での予約システムから離発直前の空席状況から搭乗顧客数を逆算した.また,費用原価データは文献調査により一般値を使用した.その結果,本研究で対象とした東京(羽田)・北海道内空港においては新千歳空港を利用した直行便と経由便が混在する,準ハブ・アンド・スポークシステムが,就航ネットワーク全体の乗客率等の全指標値に対し有効であることが明らかとなった.特に,函館・稚内・女満別・釧路・中標津空港への飛行に対し新千歳空港を経由とした路線が最適となり,従来値に対し乗客率が15.2%向上した.「乗り継ぎ時間等の利便性の欠如と運賃に関する使用者の意識調査」として,アンケートサーバーシステムを構築した.

平成17年初旬から同2月末までのデータに基づき,乗継便選定モデルを集計ロジットモデルにより構築したが,サンプル数の不足から十分な検定結果を得るに至らなかったため,事前調査により構築した乗継便選定モデルを上記シミュレーションモデルと統合した.その結果,東京(羽田)・北海道内空港においては新千歳空港を利用した直行便と経由便が混在する,準ハブ・アンド・スポークシステムが,利用者,航空会社両者にとっても有効であるとの結論を得た.
西欧における現代神秘主義哲学の歴史的背景

西欧における現代神秘主義哲学という表現で私が念頭においているものは、ハイデガ-とレヴィナスである。この両哲学の真価を理解するためには、その根源を明らかにせねばならないが、ハイデガ-の場合、それは古代ギリシア哲学とキリスト教神秘主義であり、レヴィナスの場合、それはヘブライの宗教思想である。本研究は、このような視点の下に、先ず、ヨーロッパ神秘主義哲学の元祖としてソクラテスに注目し、かれの「ダイモニオン」とハイデガ-の「無」との関連を第三論文「内在と超越」で考究した。また、ハイデガ-の存在思想の背後にはヘブライの「絶対に姿を現さない超越神」の観念があるのではないか、との想定の下に、両者の関係を考究したのが第二論文「ハイデガ-の『最後の神』に関する覚書」である。第四論文「レヴィナスにおける死と時間-ハイデガ-との対比において-」は、死と時間というテーマがハイデガ-とレヴィナスの両者に共通のもっとも重要な問題であるところから、両者の本質を照らし出すであろう、との予想の下に考察された。この考察により、ハイデガ-の時間が人間の存在構造の言い換えであるのに対し、レヴィナスの時間は神の力の現れであることがはっきりと取り出された。第五論文は、レヴィナスの思想とユダヤ教信仰との関連を主題にしたものである。レヴィナスの神は対象的な存在着ではなく、人間の倫理的行為を通してのみその栄光を現すなにものかであるが、この神観念は律法の遵守こそ信仰の実現であるとするユダヤ教の立場と完全に整合的である。本研究はなお深く進められなければならず、ハイデガ-についてはエックハルトとの関連が、レヴィナスについてはタルム-ド解釈との関連が今後の課題として残されている。しかし、総じて、ハイデガ-についてもレヴィナスについても、本研究はもっとも重要な問題点の解明に端緒をつけえた、と考えている。平成6年度は、ハイデガ-哲学の歴史的背景の探索に集中した。先ず、ハイデガ-哲学とソクラテス以前の諸哲学、とりわけヘラクレイトスとパルメニデスの思想との関連は、ハイデガ-自身が己の著作のうちで言及しているとうり、極めて深いものがあり、したがって、まず、これらの諸思想の根底にある世界観を明らかにし、それとハイデガ-哲学の構造がいかに必然的な連関のうちにあるかを、確認することに努めた。さらに、アリストテレスの『形而上学』における存在の思索との対決がハイデガ-自身の存在思想の形成にどにような影響を与えたか、を、ハイデガ-の『アリストテレス〔形而上学〕講義』を研究しながら究明し、アリストテレスのデュナミス・エネルゲイア論がハイデガ-の後期思想の形成にいかに大きな影響を与えたか、を確かめることができた。そして、第三には、マイスター・エックハルトの神秘主義思想、および、その背景にあると思われるキリスト教に流入した新プラトン派とハイデガ-思想との関係の解明を目指し、学術振興会の招請で来日した新プラトン派の世界的専門家Denis O'Brien教授との共同演習なども行いながら、この方面の探究に糸口をつけた。さらに、来年度への研究の継続を考慮しつつ、現在は、ハイデガ-とレヴィナスにおける死、時間、神の思想を比較しながら、その問題点を思索中である。平成7年度は、レヴィナス哲学の研究に集中した。とくに、レヴィナス哲学においては、死と時間がその中核をなしているので、この両概念の解明に力を注いだ。

レヴィナスの死は、他者としての超越者が人間に関わる様式であり、人間の究極の可能性として捉えられたハイデガ-の死とは、際立った対照をなしている。ここには、ハイデガ-があくまでも人間の能動性に定位する哲学であるのに対し、レヴィナスが人間の受動性に定位していることが、現れている。時間の概念においても、この対照は平行的に現れくるのだが、ここで問題として残されたことは、、死も時間もともに他者と自己との関係として思索するレヴィナスの理論の構造が整合的なのかどうか、という点である。このことは、しかし、レヴィナスの思想の歴史的背景から究明されなければならないだろう。以上の研究の結果、「レヴィナスにおける死と時間」(『思想』第861号、1996年3月)が成果として得られた。この論文において、筆者は、ハイデガ-とレヴィナスとを対比しつつ、両者の死と時間の概念を究明したが、ハイデガ-に比べレヴィナスの時間概念にはなお不明の点が多く、これの追求が課題として残された。しかし、この両義性は単に理論の整合不整合の問題を超えていて、恐らくはユダヤ教の信仰に由来するなにごとかを指し示している、と思われる。それを旧約聖書の歴史的背景から解明することが、ハイデガ-とエックハルトとの関係の解明とともに、研究の最終年である次年度の課題である。西欧における現代神秘主義哲学という表現で私が念頭に置いているものは、ハイデガ-とレヴィナスである。この両哲学の真価を理解するためには、その根源を明らかにせねばならないが、ハイデガ-の場合、それは古代ギリシア哲学とキリスト教神秘主義であり、レヴィナスの場合、それはヘブライの宗教思想である。本研究は、このような視点の下に、先ず、ヨーロッパ神秘主義哲学の元祖としてソクラテスに注目し、かれの「ダイモニオン」とハイデガ-の「無」との関連を第三論文「内在と超越」で考究した。また、ハイデガ-の存在思想の背後にはヘブライの「絶対に姿を現さない超越神」の観念があるのではないか、との想定の下に、両者の関係を考究したのが第二論文「ハイデガ-の『最後の神』に関する覚書」である。第四論文「レヴィナスにおける死と時間-ハイデガ-との対比において-]は、死と時間というテーマがハイデガ-とレヴィナスの両者に共通のもっとも重要な問題であるところから、両者の本質を照らし出すであろう、との予想の下に考察された。この考察により、ハイデガ-の時間が人間の存在構造の言い換えであるのに対し、レヴィナスの時間は神の力の現れであることがはっきりと取り出された。第五論文は、レヴィナスの思想とユダヤ教信仰との関連を主題にしたものである。レヴィナスの神は対象的な存在者ではなく、人間の倫理的行為を通してのみその栄光を現すなにものかであるが、この神観念は律法の遵守こそ信仰の実現であるとするユダヤ教の立場と完全に整合的である。本研究はなお深く進められなければならず、ハイデガ-についてはエックハルトとの関連が、レヴィナスについてはタルム-ド解釈との関連が今後の課題として残されている。しかし、総じて、ハイデガ-についてもレヴィナスについても、本研究はもっとも重要な問題点の解明に端緒をつけえた、と考えている。
MMP-3を標的とした糖尿病患者における歯周病悪化メカニズムの分子生物学的解明

糖尿病患者の歯周病が重篤化することが知られる。本研究において,高血糖状態で培養した歯肉線維芽細胞のMMP-3産生量は有意に増加した。しかし,sIL-6Rの産生性は著明に亢進しなかった。さらにTHP-1細胞において,MMP-3阻害剤の添加によってsIL-6Rの産生量が有意に抑制された。以上の事から,MMP-3産生の亢進が糖尿病患者における歯周病悪化を誘導する可能性が示唆された。さらにMMP-3がTHP-1細胞のsIL-6R産生性を亢進させることを考え合わせて,糖尿病患者における歯周病の悪化メカニズムには,歯肉線維芽細胞とマクロファージの相互作用にIL-6シグナル伝達系が関与する可能性が示唆された。本研究は,糖尿病患者の歯周組織におけるMMP-3の産生亢進が歯周病悪化メカニズムに関わる可能性を検証するものである。今年度は,糖尿病由来歯周病悪化メカニズムを明らかにするための第一段階として,まず,通常血糖レベル下で培養された細胞を用いて,歯周病悪化を誘導し得る仮説をたて,検証することとした。すなわち,(1)炎症性サイトカイン,とりわけ代表的な炎症性サイトカインであるIL-6誘導性の歯肉線維芽細胞のカテプシン酵素活性の充進メカニズム,(2)歯周病原細菌Porphyromonas gingivalis(Pg)由来因子による血管内皮細胞の反応,とりわけIL-6産生性およびそのシグナル経路の活性化,の2項目について検討することとした。得られた結果を以下に示す。1.歯肉線維芽細胞のカテプシンBおよびLの産生はIL-6によって亢進し,とりわけ細胞膜蛋白のカベオリン-1がそのシグナル経路の一翼を担うことが判明した。2.歯周病原細菌PgのFimbriaeは,HUVEC細胞のMAPK系を活性化することで,IL-6産生およびIL-6シグナル伝達分子gpl30の発現を亢進することが判明した。以上のことから,歯周病悪化メカニズムは,Pgによる血管内皮細胞由来のIL-6産生の亢進,およびパラクライン的に歯肉線維芽細胞に作用するIL-6によるカテプシン酵素活性の亢進によるものと考えられた。この結果を踏まえて,次年度は,高血糖状態において,上記の細胞反応がどのように変化するのか,そして一連の反応がMMP-3の過剰産生によって,どのように修飾されるのかを検討する予定である。インターロイキン6(IL-6)は様々な細胞に作用して,歯周病の病態形成に関与する炎症性サイトカインである。IL-6が標的細胞の膜型IL-6受容体(IL-6R)と結合した後,そのシグナル伝達分子gp130の下流域の細胞内シグナル伝達系が活性化する(IL-6 classical-signaling)。一方,可溶型IL-6RはIL-6シグナルのアゴニスト作用を有することが知られ,細胞外領域においてIL-6と二量体を形成した後にgp130と結合する(IL-6 trans-signaling)。すなわち,可溶型IL-6RはIL-6によって惹起される様々な炎症反応を増強する。したがって歯周炎組織における可溶型IL-6Rの産生を制御できれば,歯周炎症制御の新たな治療戦略の確立に繋がる可能性がある。MMP-3は,MMP-1を前駆型から活性型に変換する作用を持つプロテアーゼとして,歯周病悪化の一翼を担うことが知られている。しかしながら,MMP-3が炎症性細胞の膜型IL-6Rのシェディングを誘導して,可溶型IL-6Rの産生を促進するかどうかは不明である。今回,我々は可溶型IL-6Rの産生機序を調べるために,MMP-3のシェディング機能に着目し,ヒト単球系細胞株THP-1による可溶型IL-6Rの産生性を検討した。その結果,マクロファージ様THP-1細胞において,以上のことから,マクロファージ様THP-1細胞からの可溶型IL-6Rの産生機序として,選択的スプライシングおよびMMP-3による膜型IL-6Rのシェディング機構の関与が示唆された。すなわち,MMP-3は,内因性の切断酵素TACEとともに,外因性の切断酵素として可溶型IL-6Rの産生亢進作用を有すると考えられる。このことは,歯周炎症の増悪を制御し得る新たな標的カスケードになるものと期待される。

また,次年度は,本実験系に高グルコース(25mM)入りの培地を用いた系を加えて,可溶型IL-6R産生性の高グルコースの影響を調べる予定にしている。糖尿病患者において,しばしば歯周病が重篤化する傾向があることが臨床的に知られている。この歯周病の悪化は,従来,我々が知り得なかった不特定の因子が原因となる可能性がある。これらの因子を把握するために,我々は歯周組織の主細胞である歯肉線維芽細胞において,高血糖によって変動する遺伝子群を遺伝子マイクロアレイ法によって網羅的に解析した結果,MMP-3の産生性が亢進することを見出した。そこで,高血糖による歯肉線維芽細胞の作用をさらに検討することとした。細胞はヒトの歯肉から分離した歯肉線維芽細胞を用いた。培地中のグルコース濃度は,25mM(高血糖)あるいは5.5mM(健常血糖)に設定した。なお,5.5mMグルコース含有DMEMに19.5mMマンニトールを加えた実験系を高血糖状態の浸透圧対照として用いた。細胞のMMP-3産生およびsIL-6R産生量は,市販のELISAキット(R&D)を用いて定量した。その結果,高血糖状態で培養した歯肉線維芽細胞のMMP-3産生量は,その遺伝子マイクロアレイ解析の結果に相応して有意に増加した(Student's t-test, P<0.05)。一方,sIL-6Rの産生性に著明な亢進は見られなかった。このことは,高血糖によって歯肉線維芽細胞の複数の遺伝子発現の様態が変動し,とりわけMMP-3の発現が亢進したことは,MMP-3産生の亢進が糖尿病患者に見られる歯周病悪化を誘導する可能性が示唆される。さらにsIL-6R産生性は変化しなかったので,歯肉線維芽細胞の機能として,高血糖とIL-6シグナル伝達系の相互作用は生じ得ないことも併せて示唆された。
薬物トランスポーターの細胞内局在を制御する因子群の網羅的解析

薬物トランスポーターPGP-1のアピカル膜への局在制御に関与する因子群を明らかにする目的で、PGP-1-GFPを発現するトランスジェニック線虫を作成し、それを用いてRNAi及び突然変異誘発法による遺伝学的スクリーニングを行った。その結果、微小管に沿って小胞を輸送するモータータンパク質であるダイニン/ダイナクチン複合体の構成因子や膜融合に関与するSNAP29などがPGP-1のアピカル膜への局在制御に関与していることが明らかとなった。概略)本年度の研究成果としては、まず重要な薬物トランスポーターの一つであるPGP-1とGFPの融合蛋白質を発現するトランスジェニック線虫を作成し、PGP-1のアピカル膜への局在を、生きた個体のまま蛍光実体顕微鏡レベルで観察できる実験系を確立した。次にこのトランスジェニック線虫を出発材料として、突然変異誘発剤(EMS)およびFeeding RNAiライブラリーを用いて、PGP-1のアピカル膜への局在化に異常が観察される変異体を単離した。1)EMSによるスクリーニング線虫は雌雄同体であり、EMSで処理したトランスジェニック動物から自家受精で生まれた子供世代(F1)は、ある突然変異mのヘテロ接合体(+/m)になっている。そこでのF1を小シャーレに単離し、F1から生まれた子供世代(F2)のうち、4分の1の確率で生まれるホモ接合体(m/m)でPGP-1のアピカル膜への局在化に異常が生じているものを選別した。EMSによるスクリーニングサイズは、単離するF1の数として6000クローンであり、PGP-1の局在に異常が見られる10個以上の変異体の単離に成功した。2)RNAiによるスクリーニングFeeding RNAiライブラリーに関してはGeneservice社及びOpen Biosystems社から購入した。まず各クローンを液体培養後、Feeding RNAi用の12-wellプレートに培養した。それらを餌としてトランスジェニック動物を生育させることにより、その個体にRNAiを作用させてPGP-1-GFPの局在を観察した。Feeding RNAiライブラリーは線虫の全遺伝子(約2万個)の90%以上をカバーするものであるが、全体の約30%のクローンをスクリーニングした。その結果、細胞内輸送に重要なモーター蛋白質などを含む、多数の陽性クローンの単離に成功した。昨年度に行った突然変異誘発剤(EMS)およびFeeding RNAiライブラリーを用いた遺伝学的スクリーニングにより得られた、薬物トランスポーターPGP-1のアピカル膜への局在化に異常が観察される変異体の表現型解析およびポジショナルクローニングを行った。まずEMSによるスクリーニングで得られた変異体に関しては、最も顕著な表現型を示す変異体td52を解析した。td52ではPGP-1-GFPはアピカル膜だけでなく、細胞質中にも拡散する細胞内局在を示した。また他のアピカルマーカーであるVHA-6も同様に細胞内に拡散するパターンを示した。一方、td52変異体ではバソラテラルマーカーであるNFM-1に関しては顕著な細胞内局在の異常は観察されなかった。よって、td52変異体ではアピカル膜への局在化が特異的に異常になっている可能性が示唆された。SNPを用いてtd52のポジショナルクローニングを行ったところ、td52ではY41E3.11遺伝子に変異が生じていることが明らかとなった。Y41E3.11は、SPRYドメインを含む、hnRNPと推定されている蛋白質をコードしており、td52では92番目のロイシン残基がフェニルアラニン残基に置換されていた。92番目のロイシン残基はhnRNPで高く保存されているRNA結合モチーフの変異であり、Y41E3.11産物と標的となるRNAとの相互作用に変化が生じ、それがtd52の表現型を惹起する可能性が考えられた。一方、Feeding RNAiライブラリーを用いたスクリーニングから、ダイニン・ダイナクチン複合体を介した微小管依存的な輸送系がPGP-1のアピカル膜局在化に重要であること、及びt-SNAREであるSNAP29がRab8との相互作用を介してアピカル膜輸送に関与することを見いだした。
e-ラーニングにおけるアセスメント支援のための新しいデータ解析手法の基盤研究

本研究の目的は,e-ラーニングにおけるアセスメント支援のための新しいデータ解析手法の開発・体系化のため基盤研究を行うことである.具体的には,国内外のe-ラーニングにおけるアセスメントに関するニーズと現状,および方法論に関するトレンドを調査・整理し,将来的に新しいデータ解析手法として確立するための基盤を整備することにある.1年間の研究を通して,次の成果を得ることができた.(1)e-ラーニングの評価機構におけるデータ処理・解析手法のトレンドの調査・整理(2)学習者アセスメントのためのニーズに基づき「新しい解析手法」の目標を量的側面から設定(3)教授・学習過程における質的なアプローチによる学習アセスメントのトレンドの整理(4)システムとして支援可能な範囲および量的手法との融合範囲を明確にし「新しい解析手法」の目標を質的側面から設定(5)学習プロセスの評価手法のトレンド(情報の可視化,情報の意味の扱いの方法論を含む)の調査(6)アセスメントにおける学習プロセスの評価の効果的な支援方法の検討(7)e-ラーニングの評価機構に関するトレンドを調査・体系化し,アセスメント支援として必要な機能の整理以上により,本研究を今後発展させるの基盤はほぼ整ったと考えられる.ただし,当初の研究計画にあった「データ(アセスメントのための情報源)での意味の扱いに関する方法論と可能性を明確にする.特に,アセスメントにおいて意味的側面を扱う場合の知識表現,知識管理の手法の体系化を行う.」,「データ表現・管理手法班:効果的なアセスメントを実現するための,情報の収集・管理およびデータ構造を検討する」の2点に関しては成果を得ることができなかった.継続的な課題としたい.本研究の目的は,e-ラーニングにおけるアセスメント支援のための新しいデータ解析手法の開発・体系化のため基盤研究を行うことである.具体的には,国内外のe-ラーニングにおけるアセスメントに関するニーズと現状,および方法論に関するトレンドを調査・整理し,将来的に新しいデータ解析手法として確立するための基盤を整備することにある.1年間の研究を通して,次の成果を得ることができた.(1)e-ラーニングの評価機構におけるデータ処理・解析手法のトレンドの調査・整理(2)学習者アセスメントのためのニーズに基づき「新しい解析手法」の目標を量的側面から設定(3)教授・学習過程における質的なアプローチによる学習アセスメントのトレンドの整理(4)システムとして支援可能な範囲および量的手法との融合範囲を明確にし「新しい解析手法」の目標を質的側面から設定(5)学習プロセスの評価手法のトレンド(情報の可視化,情報の意味の扱いの方法論を含む)の調査(6)アセスメントにおける学習プロセスの評価の効果的な支援方法の検討(7)e-ラーニングの評価機構に関するトレンドを調査・体系化し,アセスメント支援として必要な機能の整理以上により,本研究を今後発展させるの基盤はほぼ整ったと考えられる.ただし,当初の研究計画にあった「データ(アセスメントのための情報源)での意味の扱いに関する方法論と可能性を明確にする.特に,アセスメントにおいて意味的側面を扱う場合の知識表現,知識管理の手法の体系化を行う.」,「データ表現・管理手法班:効果的なアセスメントを実現するための,情報の収集・管理およびデータ構造を検討する」の2点に関しては成果を得ることができなかった.継続的な課題としたい.