hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
損傷後の中枢神経系におけるＴＧＦ－βの機能解析

以上の結果から、DSは線維性瘢痕の形成に関与し、CSは再生軸索の伸長を抑制すると考えられた。われわれは最近、髄膜線維芽細胞とアストロサイトの共培養系にTGF-β1を添加すると、線維性瘢痕に良く似た細胞構築、遺伝子発現、神経突起伸長抑制作用を示す細胞凝集塊が形成することを報告したが、このTGF-β1による細胞凝集作用は培養系にChABCやChBを添加すると抑制された。さらに細胞凝集塊にChABCあるいはChACを添加すると、その神経突起伸長抑制作用は消失した。この培養系の実験結果は損傷脳で示されたDSとCSの機能的意義を支持している(論文投稿中)。中枢神経系では神経再生が起こりにくく、そのために脊髄損傷後の機能回復が困難である。これまで我々は損傷部に形成される線維性瘢痕が神経再生を阻害し、線維性瘢痕の形成には損傷後に増加するサイトカインであるtransforming growthfactor-β1(TGF-β1)が重要な役割を果たすことを明らかにしてきた。一方、コンドロイチン硫酸もまた中枢神経系における再生阻害因子と一般に考えられているが、線維性瘢痕との関連については不明な点が多い。われわれは、マウスの脳損傷部に各種の糖鎖分解酵素を投与した結果、コンドロイチン硫酸が神経再生の阻害に働き、コンドロイチン硫酸の異性体であるデルマタン硫酸が線維性瘢痕の形成に関与することを見出した(Li et al., 2013)。損傷部におけるデルマタン硫酸の発現はTGF-β1により誘導されることから、線維性瘢痕の形成に対するTGF-β1の作用はデルマタン硫酸を介すると考えられた。末梢組織における種々の組織の線維化においては、血小板由来成長因子(PDGF)が関与する。そこで培養系を用いて線維芽細胞の増殖、移動、凝集、細胞外マトリックス(ECM)の発現の各過程に対するPDGFとTGF-β1の作用を調べた。すると、PDGFは繊維芽細胞の増殖と移動に、TGF-β1は凝集とECMの発現を促進することが分かった。以上の結果はPDGFは瘢痕形成の初期の段階に、TGF-β1は後期の段階に関与することを示唆している。今年度はPDGFの生理作用を明らかにする目的で、マウスの脳損傷部へPDGFの機能阻害剤を投与する実験をおこなった。100 nMの阻害剤の投与により、線維性瘢痕の形成は完全に抑制され、切断されたドーパミン線維の再生が見られた。PDGFもTGF-β1と同様に線維性瘢痕の形成に関与することが初めて示された。神経再生当初の計画では、脳損傷後の線維性瘢痕の形成に対するTGF-βの機能を特異的阻害剤の投与実験で調べること、そして脳損傷後に増加するコンドロイチン硫酸およびデルマタン流酸の線維性瘢痕と神経再生に対する作用を明らかにすることを目的としていた。すでに前者の研究についてはは2012年(吉岡ら)、後者については2013年(李ら)に原著論文として発表した。現在はさらに最近、線維性瘢痕の形成に関与することを見出した血小板由来成長因子(PDGF)の作用を詳しく調べる実験を行っている。当初の計画では、脳損傷の線維性瘢痕の形成に対するTGF-βの機能を明らかにする目的で本研究を開始したが、すでに当初の目的は達成し、論文として発表した(吉岡ら、2012;李ら、2013)。その後、TGF-βの他にPDGFが線維性瘢痕の形成に関与する可能性を新たに見出し、培養系と脳損傷モデルマウスを用いて現在さらに研究を発展させて行っている。
スポーツおけるイップスとジストニアの関係

イップスとは、無意識的な筋活動の乱れにより、随意運動に障がいをきたす症状をいう。スポーツ選手のイップス症状として、ゴルフのパッティング、ドライバー、アイアンショット。野球での投球や打撃時、テニスのサーブトス、ストロークに多くみられる。本研究では、スポーツにおけるYIPS症状と神経内科学で扱われるジストニア症状との関係着目して、イップスの診断・治療およびリハビリテーション法を構築することを目的とした。その結果、「イップス症状」は、ジストニアの特徴である、巧緻運動障害、活動特異性、状況特異性、予期不安性との関連が認められ、「ジストニア」の治療法および対処法がイップスにも応用できることが示唆された。1.アンケート調査の経過スポーツ選手(野球、ゴルフ、テニス)におけるイップスの実態を調査するために、イップスチェックリスト(関西大学佐藤作成)、心理的競技能力検査(DIPCA3)および自己成長エゴグラム(SGE)を用いて集合調査法にて実施した。今回用いた「イップスチェックリスト」は、これまで実施してきたチェックリストを改良し、野球における心因性投球動作の失調に限定せず、打撃、走塁、捕球、送球に関しても測定できる自己判定尺度である。現状としては、大学体育会野球選手120名に対する調査が終了し、データーの入力が完了し、統計処理を実施している。2.イップス事例の調査イップス症状と思われる、アスリート(野球、ゴルフ、テニス)を対象として、面談を実施し、成育歴、競技歴およびイップス発症までの経過を調査した。これまでのところ、野球では、投球イップスとみられるプロ野球選手(3名)と面談し、聴き取り調査が完了した。また、ゴルフでは、ドライバーイップスとみられる、全日本大学学生レベルの選手(2名)と面談し、聴き取り調査が完了した。さらにテニスでは、フォアハンドイップス、トスイップスとみられる、プロテニス選手2名、全日本学生テニスレベルの学生(2名)の聴き取り調査が完了した。3.研究機材の整備イップス症状の生理心理的なメカニズムを解明するためには、高速度カメラおよび三次元動作解析ソフトを用いて実験する事が必要不可欠である。また、加速度計や筋電計を併せて使用することで、神経-筋の協調動作なども明らかになる。しかしながら、これらを操作するためには、実験機材を操作する方法などのトレーニング期間が必要と判断し、機材を購入し環境を整備した。<研究実績の概要>野球、ゴルフ、テニス選手の内、野球選手120名の実態調査および統計処理がほぼ完了した。また、イップス症状呈している、選手(野球、ゴルフ、テニス)に対して、面談を実施し成育歴、競技歴およびイップス発症までのプロセスから原因と思われる事項を推察した。ケーススタディーとして、プロテニス選手Aのサービスにおけるトスイップスに関する研究について、第26回日本テニス学会で発表した。<研究機材の整備>イップス症状の生理心理的なメカニズムを解明する目的で、高速度カメラおよび三次元動作解析ソフトの使用スキルを向上させるための予備実験を実施した。既に熟練したスキルを獲得しているスポーツ選手において、突然発症する無意識的な筋活動の乱れに「イップス(YIPS)」という症状がある。イップスは、無意識的な筋活動の乱れでスポーツのプレー中に起こるものであり、熟練し自動化された運動スキルが、自己制御できなくなる状態を呼ぶ。本研究では、イップス(YIPS)の実態調査を実施し、スポーツ心理学、神経内科学およびスポーツ医学の領域から調査・分析することによって、スポーツにおけるイップス(YIPS)の診断法、治療法、リハビリテーション法を構築することを目的とした。平成27年度は、筋電計の購入が認められ、イップス症状を呈している被験者Aの筋電波形を測定することができた。しかしながら、被験者Bに関しては、世界を転戦しているプロアスリートであり、被験者と実験のスケジュール調整ができず、平成28年度に本実験をすることにした。研究成果は、「日本テニス学会」において発表した。理由としては、被験者がプロアスリートであり、年間6カ月以上の海外遠征を含む長期遠征でスケジュール調整が難しかった事。また筋電測定に必要な実験機器の購入・納入が遅れたために当初の実験計画よりやや遅れてしまった。更に、研究責任者の実母が重篤な病気(急性骨髄性白血病)となり、介護しなければならなかったため。熟練した運動スキルを獲得しているトップアスリートにおいて、突然発症する神経・筋活動の乱れをイップス(YIPS)またはクランプ(CLAMP)と呼んでいる。一方、音楽家(ピアニストやギタリストなど)に発症する「指の絡まり」などといった症状を神経内科領域では局所性ジストニア(FOCAL DYSTONIA)と呼んでいる。本研究では、局所性ジストニアとスポーツにおけるイップス(YIPS)の関連に着目し、イップス(YIPS)の診断法、治療法およびリハビリテーション法を構築することを目的とした。平成27年度では、イップス(YIPS)症状を測定・分析するための筋電計の購入が認められたが国際大会に出場する被験者(プロアスリート)のスケジューリング調整ができなかったために、平成28年度に延期し実施することができた。研究成果は、「日本テニス学会」「国際テニス連盟ITFコーチングサイエンスレビュー」などに投稿する予定である。

その結果、「イップス症状」は、ジストニアの特徴である、巧緻運動障害、活動特異性、状況特異性、予期不安性との関連が認められ、「ジストニア」の治療法および対処法がイップスにも応用できることが示唆された。アンケート調査および個別面談に関しては、予定通り完了することができたが、イップス症状を呈している選手の動作分および筋電図測定などが遅れてしまった。その理由としては、被験者の多くは、プロ選手であり、国内外への遠征などでスケジューリング調整に手間取ってしまった。平成27年度の研究計画に従って、スポーツにおけるイップス症状の動作分析と筋電図波形の分析を実施すると同時に、ジストニア症状の動作分析と筋電図波形を比較して相関が認められるか否かを分析する。またイップス症状に対する対処法および治療法について検討する。スポーツ心理学最終年度であることをしっかり意識して、イップス症状を呈している選手の動作分析および筋電図測定を実施し、イップスのメカニズムを明らかにする。また、実験結果からイップスとジストニアの共通性を見出だし、イップスの対処法および治療法を見つけ出す事を目的に研究を推進していく。実験計画によれば初年度において、野球、ゴルフ、テニスにおけるイップスの実態調査が終了する予定であった。しかしながら、野球においてはプレシーズン中にほぼ調査が完了する事が出来たが、テニス、ゴルフに関してはスケジュール調整が難しく、個別事例の調査に変更せざるを得なかった。一方、次年度に計画されていた、生理心理的な実験のための機材ならびに動作分析装置を前倒しをして購入し、機器の操作法などのトレーニングを開始することができた。以上の事から、本研究は総合的に概ね順調に進展しているものと判断した。平成27年度末に実験装置の準備が整い本実験を実施することができたが、被験者数を増やる必要性があり、研究期間の延長を申請した。平成26年度では、主にアンケート調査の分析と動作分析の予備実験を実施するにとどまった事で本実験に必要な実験機器購入分を次年度に繰り越したため。繰越金に関しては、平成28年度活動費(被験者謝金、専門的知識の提供者への謝金、消耗品費、交通費など)に充当する予定である。平成25年度において完了予定であった、野球以外の種目(ゴルフ、テニス)においてのアンケート調査(イップスチェックリストなど)を実施し、統計処理および得られた結果の検討を行う。アンケート調査からイップス症状を呈した、野球、ゴルフ、テニスの選手をピックアップし個別面談実施する。その後、イップス症状の特徴について個別に動作分析および筋電図による評価を行い、得たデータからそのメカニズムについて検証する。より研究を発展させるための課題としては、研究メンバーによる情報交換ならびに海外研究者とのディスカッションを積極的に進めていきたい。
230kDa類天疱瘡抗原１の接着因子としての機能解析と免疫原性獲得機序の究明

BP230欠損による表皮の構造変化の解析、随伴する炎症発現のメカニズムを解明すること、後天性自己免疫性疾患であるBP発症に抗BP230抗体がどのように関与するのか明らかにすることを目的として以下の研究を行った。1.BP230タンパク欠損による表皮水疱症発症の疾患モデルマウスの確立1表皮基底細胞でのみCreを発現するK5-CreマウスとBP230conditionalマウスと交配を繰り返し、表皮基底細胞でのみBP230をKOするマウス(BP230-KO)を作成、系統維持した。2BP230-KOマウス背部皮膚を採取、蛍光直接法で基底膜部のBP230タンパク欠損を確認した。また、皮膚から表皮のみを回収、ウエスタンブロット法でもBP230タンパク欠損を証明した。3BP230-KOマウスを経時的に観察、びらん、紅斑発症時期を統計学的に集計した。4紅斑、びらん面を皮膚生検、光学顕微鏡下で表皮水疱症と同様の所見の有無を確認した。2. BP230タンパク欠損のよるヘミデスモゾーム、デスモゾームの構造上の変化1BP230-KOマウス背部皮膚を採取、電子顕微鏡でヘミデスモゾーム、デスモゾームの構造変化を確認した。2直接蛍光抗体法にて、細胞接着タンパクの発現ならびにその局在の変化を解明した。3採取した皮膚よりRNAを回収、BP230タンパク欠損に伴う代償的なタンパク発現の変化をreal-time PCRで量的に確認した。4外用剤塗擦による炎症予防効果を、経時的に確認した。おおむね研究実施計画に沿って研究行い、計画通り進展している。1.表皮細胞遊走能の変化ならびに創傷治癒への影響1BP230-KOマウス由来表皮細胞を培養し、その遊走能をタイムラプスで撮影、正常表皮細胞と比較、検討する。2直接蛍光抗体法で、BP180などHD構成タンパクの発現ならびにその局在を確認。3BP230-KOマウス背部皮膚に人工的に6mmの皮膚欠損を作成、上皮化までの過程を経時的に観察。4適宜皮膚生検を行い、潰瘍底の伸長する表皮細胞のHD構成タンパクの発現を免疫組織化学染色で確認する。2. BP230タンパクを標的としたBP発症モデルマウスの作成1BP230のエクソン23、24をクローニング、約30個のアミノ酸からなるタンパクを発現するベクターを作成、大腸菌に形質転換させ、そのタンパクを回収。2BP230-KOマウス皮内に2週に1回投与、8週後に抗血清を回収。3ELISA法でそのタンパクに対する抗体産生を確認。4C57BL/6マウス背部皮膚に抗血清を投与、後日皮膚生検を施行、直接蛍光抗体法で表皮基底膜に抗体、補体の沈着を確認する。5抗BP180抗体、抗血清を皮内もしくは尾静脈から投与、BPで見られる紅斑、水疱形成など経時的に観察、適宜生検し表皮下水疱、炎症細胞浸潤など評価する。2. BP230タンパクを標的としたBP発症モデルマウスの作成1BP230のエクソン

23、24をクローニング、約30個のアミノ酸からなるタンパクを発現するベクターを作成、大腸菌に形質転換させ、そのタンパクを回収。2BP230-KOマウス皮内に2週に1回投与、8週後に抗血清を回収。3ELISA法でそのタンパクに対する抗体産生を確認。4C57BL/6マウス背部皮膚に抗血清を投与、後日皮膚生検を施行、直接蛍光抗体法で表皮基底膜に抗体、補体の沈着を確認する。5抗BP180抗体、抗血清を皮内もしくは尾静脈から投与、BPで見られる紅斑、水疱形成など経時的に観察、適宜生検し表皮下水疱、炎症細胞浸潤など評価する。
硫化水素はＥＤＲＦか？：モデル動物としての深海性海洋動物の可能性を探る

狭心症や心筋梗塞の発症と治療に重要な内皮細胞性血管弛緩因子とされる硫化水素の作用を研究するために、深海性二枚貝の実験モデル動物としての可能性を検討した。まず、ムラサキイガイを用い、MRIによる循環機能測定法を開発した。シンカイヒバリガイとヘイトウシンカイヒバリガイを用い、硫化水素のパルス投与の循環器系への効果を確認した。その結果、ムラサキイガイよりも高い硫化水素耐性を確認することができ、実験動物としての有用性を確認できた。内皮細胞性血管弛緩因子(EDRF)として、一酸化窒素(NO)に続き硫化水素(H2S)が提案されている。しかし、H2Sの高い毒性から、その生理的意義については確定していない。申請者は、熱水域や湧水域に生息しH2Sを主たるエネルギー源とする化学合成共生動物では「H2Sが主たるEDRFとして働いている」という作業仮説をたて、有用な実験モデル動物となると考えた。平成24年度は、シンカイヒバリガイのコントロール動物として、同じイガイ類のムラサキイガイを用い、1)温度制御可能(10°C-25°C)な二枚貝MRI測定システムを構築した。2)連続組織標本と対照させて、空間分解能35-100ミクロンの循環器系構造MRIマップを作成した。3)海洋生物の心拍数、血流速度、心拍動のMRI測定法を世界で初めて確立した。平成25年度には、4)シンカイヒバリガイなどの深海生物固定標本を用い、その3次元構造データ収集を更に進めた。また、5)鰓の水流計測法についても開発をおこなった。そして、5)シンカイヒバリガイとヘイトウシンカイヒバリガイを用い、硫化水素のパルス投与の循環器系への効果を確認した。その結果、ムラサキイガイよりも高い硫化水素耐性を確認することができた。以上の結果を、ブルーアース2014シンポジウム(JAMSTEC主催、2014年2月、東京)や日本生理学会(鹿児島、2014年3月)などの学会で発表するとともに、Journal of Experimental Biologyに2本の論文が受理された。海洋生物の新しい研究方法として注目を集めており、海洋性軟体動物の研究者から様々な共同研究の提案があり、順次取り進めている。平成24年度は、シンカイヒバリガイのコントロール動物として、同じイガイ類のムラサキイガイを用い、1)内径20 mmの生体測定用MRプローブとイガイ固定システムを構築した。また、10°Cから25°Cの範囲での温度制御も可能とした。2)イガイの循環器系の構造について、空間分解能35-100ミクロンで測定し、10ミクロンの連続組織標本と対照させて、MRIマップを完成させた。3)位相情報を用いたMRI法により、海洋生物の心拍数、血流速度、心拍動の測定法を世界で初めて確立した。4)シンカイヒバリガイやシロウリガイなどの深海生物の固定標本を用い、その3次元構造データを収集した。以上の結果を、第16回NMRマイクロイメージング研究会(2012年8月、大津)、およびブルーアース2013シンポジウム(JAMSTEC主催、2013年3月、東京)で発表し、海洋生物の新しい研究方法として注目を集めた。1)から3)の結果について、論文準備中である。また、海洋性軟体動物の研究者から様々な共同研究の提案があり、順次取り進めている。平成24年度実施計画には、1)環形動物や二枚貝の生体測定用のMRプローブと灌流システムを構築する。2) 7 T MRマイクロイメージング装置を用い、脈管系の三次元構築を確認し、3)モデル系を用いて位相エンコードMRI法による血流速度測定法を確立し、生体で測定精度を確認する、の3点を掲げた。1)二枚貝や環形動物の生体測定用のMRプローブと灌流システムの構築:海洋生物測定用の内径20 mm H-1測定用RFコイルは12月に納品され(設備費)、非磁性部品などを用い現有のプローブを改造し、人工海水環境用のMRプローブを完成することができた。灌流システムの構築には、温度管理が困難であり、また、非灌流システムでも温度管理が十分であれば12時間以上安定に測定できることが確認できたので、経費節減のために非灌流系で10°Cから25°Cの範囲で温度調節可能な測定システムを構築した。

2)環形動物や二枚貝の脈管系の三次元構築の測定:固定標本を用い、空間分解能35-100 μmで、二枚貝や環形動物の脈管系の三次元構造を測定した。脈管系の構築を確認し、ムラサキイガイについては全身の連続組織切片を作成し、MRI画像のマップを作成した。また、シンカイヒバリガイやシロウリガイについても、組織切片との比較検討を進めている。3)位相エンコードMRI法による血流速測定法の確立:位相エンコードMRI法により血流の方向と速度を画像化した。ムラサキイガイでは流速2 mm/secから50 mm/secまでの範囲で再現性良く測定が行えることを確認した。また、心拍動に伴う位相変化を利用して、心拍数の連続測定が可能となった。さらに、IntraGate法と呼ばれる位相情報を用いた心拍動の測定にも成功し、心拍動時の心室・心耳の容積変化を測定することができた。以上のように、実施計画は、ほぼ順当に達成することができた。平成24年度に得られた結果を基にして、深海性二枚貝や環形動物の測定を進める。幸いにも平成25年3月末から4月に3回の研究船利用航海研究が行われ、シンカイヒバリガイとヘイトウシンカイヒバリガイの生体標本が採取された。この標本を用い、4月初めから、正常個体の構造と循環機能の測定を行っており、心拍数、血流、および心拍動について基礎データの収集を行うことができた。ムラサキイガイと異なる部分も明らかとなったので、早急に差違を踏まえてデータをまとめる。コントロールとしてのムラサキイガイについては、硫化ナトリウム添加による循環器系への影響について実験を進める。同時に、軟体動物一般への麻酔薬として用いられている高濃度Mgイオンの効果を測定し、positive controlとして用いる。今年度も研究船利用航海研究は震災対応が中心となるので、次回のサンプル採取がいつになるかは不明であるが、万全の準備をしておく。また、実験室での飼育が可能な、ハオリムシについて、海洋研究開発機構の丸山正プロジェクトリーダー(連携研究者)のサポートを得て、実験の準備を行う。初回実験は6月末から7月を予定している。できれば、シンカイヒバリガイで、採取できなければ、ハオリムシを用い、H2S濃度を変えて循環動態を測定し、その循環制御機構において、「H2Sが主たるEDRFとして働いている」という作業仮説を実証しすることを目指す。本研究で、唯一の誤算は、平成24年6月に生理学研究所4.7 T MRI装置の超伝導磁石がクエンチし、使用できなくなったことである。このため、少し大きな個体の測定が不可能となった。このため、4.7 T MRI用の実験経費が未使用となった。獨協医大の7 Tマイクロイメージング装置で、大きめの個体が測定可能なRFコイルの調達を先行させることも考えたが、まずは20 mm径のRFコイルの調整を行い,性能を評価することを優先した。幸い、予想以上の性能が確認された。3ー4月に採取された生体で、20 mm径RFコイルにはいらないものは、当座の対応として、25 mm径RFコイルを用いて測定を行った。しかし、このRFコイルは、人工海水環境下で、なんとか調整が可能であったが、元々Na-23測定用のRFコイルであり測定感度が低く、最高レベルの画像データは得られなかった。以上の結果、測定可能な個体を増やし、測定精度を上げるために、計画を変更し、平成25年度研究経費で、海洋生物測定用の内径25 mmH-1 RFコイルを調達することとした。
卵巣表層上皮の超微細構造に関する研究

卵巣腫瘍の組織発生に関連して,婦人科開腹手術時冠者の同意のもとに採取された卵巣表層組織の超微細構造を観察した。手術時開腹後直ちに卵巣表層組織を薄くスライスするように採取し,Karnovsky固定液(+マイクロウェーブ)+オスミウム酸の二重固定後Spurr樹脂に包埋し,透過型電子顕微鏡にて観察した。光顕レベルでは,標本採取時の注意深い操作(標本採取時卵巣表面をできるだけ触らない)により従来観察が困難であった卵巣表層上皮細胞の観察が高い確率で可能であった。(観察症例34例中28例(82.4%),作成ブロック339個中184個(54.3%)で卵巣表層上皮細胞が観察可能。)また卵巣表層上皮の重層化が比較的多くの症例で見られた。(観察症例34例中15例(44.0%)作成ブロック339個中27個(8.0%)に卵巣表層上皮の重層化)また卵巣表面の陥凹(いわゆる「切れ込み像」),封入嚢胞,乳頭状増殖などが観察された。電顕レベルでの観察では,嚢胞化を思わせる所見も認められ,肉眼的に正常卵巣であってもミクロのレベルでは本来単層であるはずの卵巣表層上皮に陥凹化や重層化(そして嚢胞化)が起こっていることが観察された。しかしその他の微細な変化は,電子顕微鏡検鏡時には,直観的にはとらえ難く,コンピューターによる画像解析の手法(具体的にはイメージスキャナーにより,画像を取り込み画像解析ソフトNIH Imageを用いて細胞内小器官についての形態計測を行う。)などを用いてその詳細を検討中である。卵巣腫瘍の組織発生に関連して、婦人科開腹手術時患者の同意のもとに採取された卵巣表層組織の超微細構造を観察した。光顕レべルでは,卵巣表層上皮細胞が観察症例28例中23例(82.1%),作成ブロック193個中97個(50.3%)で観察可能であった。また観察される上皮の多くは単層であったが観察症例28例中9例(32.1%)作成ブロック193個中13個(6.7%)に卵巣表層上皮の重層化が見られた。また卵巣表面の陥凹(いわゆる「切れ込み像」)が観察症例28例中9例(32.1%),作成ブロック193個中16個(8.3%)で認められた。他に封入嚢胞,乳頭状増殖などが観察された。標本採取時の注意深い操作(標本採取時卵巣表面をできるだけ触らない)により従来観察が困難であった卵巣表層上皮細胞の観察が高い確率で可能であった。卵巣表層上皮の重層化が比較的多くの症例で見られた。電顕レベルでは重層化が認められる部分の一部において上皮細胞間にextracellular spaceが出現,これを数個の細胞が取り巻き,嚢胞様形態を示していた。これらは細胞接着装置で相互に結合しており,space内は均一なdensityの物質で満たされていた。これらの所見と初期腺腫形成との間に何らかの関連がある可能性が示唆された。光顕・電顕レベルでの所見より肉眼的に正常卵巣であってもミクロのレベルでは本来単層であるはずの卵巣表層上皮に陥凹化や重層化(そして嚢胞化)が起こっていることが観察された。
界面不均一相を横切るイオン透過動特性の電位変調フルオロメトリーによる研究

本研究では、電位規制フルオロメトリー法(VF)を用いてエオシンYジアニオン(EY^<2->)の1,2-dichloroethane-水界面を横切るイオン移動を調べ、(1)その温度効果から得たみかけの活性化エネルギーがバルク相の拡散の活性化エネルギーと区別されるか否か、(2)遅い過程に対する吸着の寄与はどう考慮すべきか、を明らかにすることを目的とした。VF法のひとつであるポテンシャルステップクロノフルオロメトリー法を用いて、EY^<2->移動速度を温度を変えて測定した。(1)CV測定から得たW相、DCE相中でのEYの拡散にたいするアレニウスプロットから得たみかけの活性化エネルギーは、W相、DCE相中の拡散についてそれぞれ17.8,13.8kJ mol^<-1>であるのに対し、VF測定から得たEYの界面を横切るイオン移動のみかけの標準速度定数についてのアレニウスプロットから得た界面イオン移動ではその中間の16.6kJ mol^<-1>であった。このことは、界面にはイオン移動にたいするとくに高い活性化障壁が存在しないことを示唆する。(2)EY^<2->の吸着の電位依存性を考慮した理論と実験との比較から、以下のことを明らかにした。E>E_<pzc>の水相側過剰電荷密度が正の領域では、イオン移動がわずかにしか起きず、キサンテン色素ジアニオンの吸着は弱い。より電位が負になると、水相から油相への移動が生じ、同時に吸着係数も大きくなり吸着量が増大する。より電位が負になり限界電流域になると吸着係数はさらに大きくなるが、界面濃度が零近くにまで低下するので、吸着量はかえって減少する。エオシンY移動の電位掃引ボルトフルオログラムを時間微分して得した微分フルオログラムと理論曲線との比較から、吸着状態にある10^<-14>mol cm^<-2>程度の微量のキサンテン色素の蛍光が検出できる。
琉球舞踊における動きの分節と呼吸との関係に関する研究

*前年度に8名の舞踊家を対象として行った呼吸測定の実験結果を検討の上、呼吸と動作の相関が最も明瞭に示される玉城節子(玉城流翔節会)の事例を主に取り上げて呼吸曲線と舞踊譜を併記した資料を作成し、他の事例を参照しながら呼吸と動きの分節の相関について検討を加えた。*琉球舞踊における呼吸は、等拍な呼吸の部分とタメ、アテなどの技法に伴って顕著な変化が見られる部分とに区別され、それは琉球舞踊の技法あるいは表現の持つ踊り的な部分と舞的な部分とに対応していることが確認された。また、舞的な部分においては呼吸が動きの分節を明確に形成している重要な要素となっていることがわかった。*動きの分節は組み合わされてさらに大きな分節を形成するが、その流れは舞踊表現において極めて重要なものであり、ここには地謡の呼吸が大きく関与していることがわかった。すなわち琉球音楽の楽譜である工工四に記載されている声出、声切の指定を動きの分節を記入した舞踊譜と対照させると、両者がほぼ一致していることが確かめられた。*今後の課題としては、呼吸と芸質との関係についての検討が必要となろう。1.女踊り「瓦屋筋」の代表として、学生を含む8名の舞踊家に踊ってもらい、呼吸流量計とヴィデオ・プリンターによって音楽・舞踊と呼吸との相関を示すヴィデオテープ及びスチール写真を作成した。また、舞踊と音楽との関係を把握するため、舞踊の手の分節化を行って、これを舞踊譜として作成した。2.上の資料について呼吸と音楽・舞踊の動きとの関係について考察を加え、次のような特徴が認められた。(1)呼吸については音楽の影響が大きく、奇数拍・偶数拍が交互に現れる沖縄音楽の特徴が呼吸に現れ、基本的には規則的な波となって現れる。(2)感情を込める思入れや、回るあるいは重要な手の始動に当たるところで力の撓め(タメ)がみられる。(3)ガマクを使うことは琉球舞踊の特色であるが、大きくガマクを使うときは、撓めの場合と同じく息を止めていることが判明した。(4)呼吸の深浅については個人差があり、流儀によっても異なるが、一般に初心者は深いといえる。3.来年度についてはさらにその詳細について検討する予定である。
顎関節症の発現に性ホルモンが及ぼす影響について

顎関節症との関連が指摘されている、咬合の変化に関する実験を行った。これまでの研究において、対合歯の存在しない歯の挺出は若年者と成人とでその程度が異なると指摘されている。今回の研究では、若年期および成長終了ラットにおいて、対合歯のない歯の挺出様相を比較検討した。今回の結果から、対合歯のない歯の挺出は、成長終了後よりも成長期のほうが著しく、それに伴う歯槽骨の増加も成長期にのみ認められる現象であることが示唆された。今年度は、顎関節症との関連が指摘されている、咬合の変化に伴う歯の移動に関する実験を行った。今回の研究では、若年期および成長終了ラットにおいて、対合歯のない歯の挺出様相を比較検討することである。また、併せて歯の移動に伴う歯槽骨レベルの変化も検討することとした。実験では、成長期(Young, 4週齢)および成長終了(Adult, 26週齢)雄性ラットにおいて、咬合の変化を実験的に惹起するために、実験群のラットにおいては、上顎右側臼歯歯冠を歯科用バーにて削除した。そして、次の4群に分けた。Young対合歯削除群(YU)、Young対照群(YC)、Adult対合歯削除群(AU)、Adult対照群(AC)。なお今回の研究は、広島大学動物実験委員会審査会による審査、承認を受けている実験開始から4週間後、マイクロCTにて頭部をスキャンし、3次元画像を構築後、第一臼歯の規定された部位にて歯の挺出量および頬舌側歯槽骨レベルをそれぞれ計測した。成長期ラットの対合歯を失った歯は、対照である反対側の歯と比較して、平均262μm挺出していた一方で、成長終了ラットでは、平均125μmの挺出であった。また、成長期ラットでは、歯の挺出に伴い、歯槽骨の増加が舌側および頬側の両方で認められたが、成長終了ラットでは認められなかった。今回の結果から、対合歯のない歯の挺出は、成長期および成長終了後の両方で認められたが、成長終了後よりも成長期のほうがその挺出量は大きく、それに伴う歯槽骨の増加も成長期にのみ認められる現象であることが示唆された。顎関節症との関連が指摘されている、咬合の変化に伴う歯の移動と歯周病に関する実験を行った。これまでの研究において、対合歯の存在しない歯の挺出と歯周病との関連が指摘されている。今回の研究の目的は、成長終了ラットにおいて実験的に歯周病を誘発し、対合歯のない歯の挺出様相を比較検討することである。実験では、26週齢雄性ラットにおいて、咬合の変化および歯周病を実験的に惹起するために、実験群のラットにおいては、上顎右側臼歯歯冠を歯科用バーにて削除および歯冠歯頚部周囲に絹糸を巻いた。対合歯削除群(HU)、対照群(HO)、対合歯削除歯周病群(PU)、歯周病群(PO)。なお今回の研究は、広島大学動物実験委員会審査会による審査、承認を受けている。実験開始から4週間後、マイクロCTにて頭部をスキャンし、3次元画像を構築後、第一臼歯の規定された部位にて歯の挺出量および頬舌側歯槽骨レベルをそれぞれ計測した。対合歯を失った群の臼歯は、対照である反対側の歯と比較して、より挺出していた。さらに、歯周病群ラットでは、より大きな挺出が認められた。また、非歯周病群では、歯の挺出に伴い、歯槽骨の増加が舌側および頬側の両方で認められたが、歯周病群では歯槽骨は逆に低下した。今回の結果から、対合歯のない歯の挺出が認められたが、前周病に罹患することにより挺出量はさらに大きくなり、またそれに伴う歯槽骨の増減も歯周病に罹患しているか否かによって大きく影響されることが示唆された。
スーパー抗原関連腎炎の研究-TCRα/β陽性double negative cellの役割-

我々はMRSA感染後、T細胞の広範な活性化とlgG,lgAのpolyclonal activationを来し、糸球体にlgA,lgG,C3の沈着を伴う、急速進行性糸球体腎炎にネフローゼ症候群を伴う新しい腎疾患を報告した。この糸球体腎炎の発症機序はMRSA由来エンテロトキシン(SE)がスーパー抗原として作用し、MHCクラスIIの非多形成領域に結合して、特定のTCRVβ領域の相補的決定部位以外の領域を介して認識され、それにより広範なT細胞の活性化、サイトカインの過剰な放出、B細胞の活性化が生ずるものと考えられた。本腎炎で出現するTCRVβ陽性細胞のサブセットを検討したところ、スーパー抗原が通常結合するとされているTCRVβ+CD4+細胞のみではなく、むしろTCRVβ+CD4-CD8-(double negative:DN)細胞の増加が顕著であり、また病勢とこのTCRVβ+DN細胞の推移が相関することから、本T細胞サブセットが腎や血管障害性の免疫複合体やあるいは自己抗体(現在のところ検出されていない)産生になんらかの役割を果たしているものと想像される。このTCR+DN細胞は、近年自己免疫疾患の障害された組織中やSLEで末梢血に出現することが報告されている。スーパー抗原もまた自己免疫疾患の発症機序に関与する可能性が指摘されており、このTCRVβ+DN細胞とスーパー抗原は自己免疫疾患解明の一つの鍵となる可能性がある。しかしながら、自己免疫疾患においても、このDN細胞がどの様な機序で組織障害性の免疫複合体や自己抗体が産生されるかについては不明である。本疾患は明らかにその発症がMRSAに関与しており、そのエンテロトキシンによると考えられる免疫異常が基本に糸球体腎炎・血管炎を生ずると考えられ、エンテロトキシンとTCR+DN細胞とサイトカイン、B細胞活性化が深く関連していることが明らかになっている。
海洋酸性化・温暖化がウニ類の再生産に及ぼす影響

アカウニを2000および10000 ppmのCO2に平衡させた海水中で48日間飼育したところ、管足の収縮力が有意に低下した。管足から抽出したタンパク質を二次元電気泳動で解析した結果、タンパク質の翻訳後プロセシングと分解に関連したプロテオームの変化によりウニの管足筋に障害を与えている可能性がある。バフンウニを1000ppmのCO2と水温上昇を組み合わせた条件で9ヶ月間飼育したところ、対照区および高水温区では産卵が確認されたものの、高CO2および高水温・高CO2区では実験終了時まで産卵が起こらなかった。将来の海洋酸性化および温暖化はバフンウニの再生産を強く抑制する可能性があることを示唆している。ムラサキウニを用いてCO2濃度3000および10000ppmの条件で46日間の曝露実験を行った。この間、海水のpHは対照区8.1、3000ppm区で7.5、10000ppm区で6.9に維持された。水温は24°Cであった。摂餌率は10000ppm区で大きく減少したものの、対照区と3000ppm区の間には有意差は見られなかった。ウニが基盤面に接着する力を測定したところ、対照区と3000ppm区はいずれも約40Nであったが、10000ppm区では測定不能であった。これは10000ppm区の個体では管足の先端の吸盤がCO2曝露によって消失していたためである。管足の収縮力は、CO2濃度依存的に減少し、各区の間にはいずれも有意差が認められた。10000ppm区の値は、対照区の約4分の1であった。口器の後引筋の収縮力は各区間に優位さは認められなかった。この実験に用いたムラサキウニの前引筋を冷凍保存し、現在プロテオーム解析を継続している。また、前引筋の組織的検索も継続的に実施している。平成26年度に行ったムラサキウニを用いたCO2曝露実験で得られたサンプルについて、プロテオーム解析および組織学的検討を実施した。対照区、2000ppm区および10000ppm区より得られた管足を試料として2次元電気泳動を行った結果、6個のスポットでアップレギュレーション、2個のスポットでダウンレギュレーションが確認された。マトリクス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析法を用いてこれらのスポットの解析を行った結果、アップレギュレーションが見られた4個のスポットのうち、3個はチューブリンベータ鎖、トロポミオシン断片、およびアクチンN末端断片であることが確認された。また、ダウンレギュレーションが見られた2個のスポットは、アクチンC末端断片およびミオシン軽鎖であることが確認された。現在これらの結果について、論文投稿準備中である。プロテオーム解析が順調に進行し、組織学的検索も予定通り終了した。論文投稿も順調に準備が進んでいる。本研究では、大気中二酸化炭素濃度の上昇による海洋酸性化と温暖化が海産無脊椎動物、特にウニ類の生理に与える影響について検討する。平成27年度および28年度は、筋機能に着目し、行動解析およびin vitroでの張力測定、さらにはタンパク質組成解析による検討を行った。アカウニを2000および10000ppmのCO2濃度に平衡させた海水中で48日間飼育したところ、管足の収縮力が有意に低下した。管足から抽出したタンパク質を二次元電気泳動で解析した結果、6種のタンパク質量が上昇(アップレギュレート)され、2種が低下(ダウンレギュレート)されていることが判明した。さらにこれら8種のタンパク質について解析を進めたところ、アップレギュレートされた6種のうち、3つのスポットが同定できた(チューブリンβ鎖、トロポミオシン断片、アクチンN末端断片)。またダウンレギュレートされたスポットはアクチンC末端断片とミオシン軽鎖であることも判明した。管足に対する影響とは対照的に、アカウニの咀嚼器官の主要な筋である前引筋の張力はCO2による影響が有意ではなかった。また、摂餌量は10000ppmの条件では有意に低下したが、2000ppm条件では影響は見られなかった。これらの結果は、CO2濃度上昇が、主に筋肉関連のタンパク質の翻訳後プロセシングとタンパク質分解に関連したプロテオームの変化によりウニの管足筋に障害を与える可能性があることを示唆している。この発見は二酸化炭素濃度上昇によるウニの筋肉機能障害の仕組みを理解するための手がかりとなる可能性がある。各種解析が順調に進行し、昨年度は論文1編が科学雑誌に受理された。また、担当した大学院生の学位も取得できた。バフンウニを自然水温/低CO2濃度(380 ppm、対照区)、自然水温/高CO2濃度(1000 ppm、高CO2区)、自然水温+2°C/低CO2濃度(高水温区)および自然水温+2°C/高CO2濃度(高水温・高CO2区)の4条件で9ヶ月間飼育した。生残率は高水温・高CO2区で85%、他の3区では100%であった。殻径を指標としたウニの成長は、4区で有意差がなかった。

摂餌量は、高CO2区および高水温・高CO2区では曝露期間の延長とともに低下し、実験終了時には高CO2区では対照区の73%、高水温・高CO2区では64%となった。酸素消費量は、実験開始時に高CO2区および高水温・高CO2区でそれぞれ対照区の140%および170%に上昇したものの、その後低下し実験終了時には対照区より有意に低い値を示した。光忌避を指標として測定した移動速度は、高CO2区および高水温・高CO2区で有意に低下し、実験終了時の測定では、高CO2区では対照区の83%、高水温・高CO2区では70%となった。また、餌探索に要する時間が高CO2区および高水温・高CO2区では対照区の約2倍に延長した。対照区では2月に、高水温区では1月に産卵がそれぞれ確認された。産卵数は、対照区で137万粒、高水温区で113万粒であり、受精率はいずれの区でも95%以上であった。高CO2および高水温・高CO2区では実験終了の8月まで産卵が起こらなかった。これらの結果は、将来の海洋酸性化および温暖化はバフンウニの再生産を強く抑制する可能性があることを示唆している。アカウニを2000および10000 ppmのCO2に平衡させた海水中で48日間飼育したところ、管足の収縮力が有意に低下した。管足から抽出したタンパク質を二次元電気泳動で解析した結果、タンパク質の翻訳後プロセシングと分解に関連したプロテオームの変化によりウニの管足筋に障害を与えている可能性がある。バフンウニを1000ppmのCO2と水温上昇を組み合わせた条件で9ヶ月間飼育したところ、対照区および高水温区では産卵が確認されたものの、高CO2および高水温・高CO2区では実験終了時まで産卵が起こらなかった。将来の海洋酸性化および温暖化はバフンウニの再生産を強く抑制する可能性があることを示唆している。平成26年度の年次計画は、バフンウニからムラサキウニへの変更をしたこと、曝露実験が10ヶ月から1.5ヶ月に変更したことなどがあったが、全体としては概ね順調に進展している。変更の理由は、実験担当の大学院生がタスマニアで3ヶ月間、ナンキョクオキアミの遊泳行動に対する海洋酸性化影響実験を行うことになったためである。筋機能測定(in vitro, in vivo計測ともに)、摂餌活動の測定については計画通りに実施できた。プロテオミクスについては、上記の海外研究のため冷凍保存していたサンプルの分析を再開したところである。実験を担当する大学院生の学位取得のスケジュールとの整合性をとりながら、全体としては計画通りに研究を推進する予定である。これまでの研究期間に得られた未発表のデータをまとめ、2編の論文として投稿する。29年度が最終年度であるため、記入しない。環境生理学実験を担当する大学院生の今後の海外研究活動との整合性をとりながら、全体としては計画通りに研究を推進する予定である。小額残が出たので、次年度に繰り越すこととした。一部の消耗品を安く購入できたため。諸雑費として使用する。
造血幹細胞移植における、キメラ抗原受容体（CAR）T細胞を用いた新規前処置の開発

そこでCARをコードするRNAを細胞内に導入することで、CAR-T細胞を作成した。これによりCAR発現期間制御と、ドナー幹細胞の生着率向上を得ることを目指した。HSPCマーカーとして、c-kit、sca-1、CD34を選択した。それぞれに対する抗体を産生するハイブリドーマを入手し、抗体可変部位のDNA配列を決定した。CARの骨格構造を含む既報のプラスミドに、新たに同定したDNA配列を挿入し、各CARを発現するプラスミドを作成した。これを用いてin vitroでRNAを合成し、T細胞に注入し、CAR発現の安定性と発現期間を確認した。この結果を踏まえて、健常C57BL/6マウス(Thy1.1/CD45.2)から回収したT細胞を用いて、CAR-T細胞を作成し、健常レシピエントマウス(Thy1.2/CD45.2)に経静脈的に投与した。経時的に末梢血球数や骨髄細胞数、CAR-T細胞数を計測することで、前処置としての有効性を確認できた。続いて、骨髄ドナーマウス(Thy1.2/CD45.1)から造血幹細胞を回収し、CAR-T細胞で前処置をしたレシピエントマウスに同種移植した。移植後の血球生着を評価し、CAR-T細胞やドナー骨髄細胞の最適な投与量・タイミングについて検討できた。健常マウス間での移植方法が確立したことを踏まえて、慢性肉芽腫症疾患マウスを用いて、同様の移植を行った。この際、活性酸素産生能など機能的評価を行い、移植効果判定を行った。また、一連の実験においては、骨髄間質に豊富なケモカインに対する受容体(CXCR4)を共発現させ、CAR-T細胞の骨髄への誘導にも成功した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
知識表現を用いた経路表示に関する研究

本研究は、都市空間を移動する主体が生成する経路に着目し、経路を選択しながら目的地に到達するまでの体験を知識工学的に把握し、その過程を経路探索モデルとして構築するとともに、合理的かつ効果的な経路表示システムの作成に向けて知見を得ることを目的としている。そのためにまず、街路のネットワークやランドマークといった構築環境としての都市空間と、経路探索のプランを理解し認知地図のような記憶をもつ主体とを考え、与えられた状況下で主体がどのように経路探索を行うかについて、被験者を用いた経路探索実験を街頭で行なった。実験結果から、探索の途中で採用された構築環境の構成要素や参照された記憶などを整理し、その仕組みを認知科学でよく利用するLOGO言語を用いて直観的に理解しやすいかたちでコンピュータ上に再現した。また、街路網のパターンや街路景観といった都市空間自体が有する性質の違いや、場所に対する知識の程度や用いるストラテジーなど主体の側の差異を明確にするために、様々な条件下でのシミュレーションを行なった。その結果、経路は地点の連鎖に分節することができ、各地点ごとの探索プロセスを明らかにすればよいこと、そして、そのプロセスは主体が持っているプランに基づいて、都市空間と個人の記憶から得られる情報を利用しながら行動を決定するというかたちでモデル化できることなどが明らかにされた。また、主体のプランに関与する情報については、その種類と構造を指摘した。さらに、都市空間の構成要素が経路探索に及ぼす効果について考察するとともに、シミュレーションにより明らかになった個人差とジェネラルな知識とを総合的に評価し、適切な表示システムの作成について検討を加えた。
良好な骨質を有する骨再生の獲得　－骨細胞の重要性－

まず、移植実験後の細胞トレーシングを可能とするために、4週齢GFP遺伝子導入ラットから大腿骨を採取、接着培養により骨髄由間葉系幹細胞を分離、培養した。分離した培養は一部凍結保存し、順次実験に使用した。分離した骨髄間葉系幹細胞は21日間の骨分化誘導を行い、アリザリンレッドS染色による石灰化結節形成ならびにALP染色によるアルカリフォスファターゼ活性の亢進を確認することで、骨芽細胞様細胞へと分化誘導が可能であることを検証した。次に培養細胞-β-TCPブロック複合体の作製とラット頭蓋骨への移植を行った。GFP遺伝子導入ラット由来骨髄間葉系幹細胞をβ-TCPブロックに播種した後、21日間の骨分化誘導を行い培養細胞-β-TCPブロック複合体とした。作製した培養細胞-β-TCPブロック複合体は7週齢Fisher系ヌードラットの頭蓋骨に移植した。それぞれ移植後1日、1週、2週、4週、8週、12週、24週経過した時点で試料を採材し、組織切片作製後H-E染色ならびに抗GFP抗体を用いた免疫組織化学を行い、骨形成の評価ならびに移植細胞の動態を解析した。骨形成の評価では細胞移植を行っても骨形成が亢進されないという結果となり、近交系ラットを用いた先行研究とは異なる結果を得た。この原因としては用いた被移植動物が免疫不全ラットであることに起因した骨代謝調節メカニズムの差や、βーTCPブロックへの細胞播種後の骨分化誘導が不十分であった可能性が考えられ、再検証および細胞トレーシング手法を変更した解析が必要であると考えられる。一方、GFP陽性細胞の移植後生存期間に関しては術後24週と長期間経過しても生存が認められた。すなわち、移植細胞は移植後長期間にわたり生体内で機能し得る可能性があり、適切な骨形成機能を付与させることにより生体内での骨形成に大きく寄与する可能性が高いものであると考えられた。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
サッカーにおける育成年代ゴールキーパーの「コーチング能力」の形成に関する基礎研究

「サッカーにおける育成年代ゴールキーパー(以下,GK)の「コーチング能力」の形成に関する基礎研究」における研究初年度の成果では,まず,育成年代GKトレーニングプログラムの問題点を明らかとするため,U-12年代GKトレーニングプログラムの実践と検証を行った.ここでは,GK未経験群でも日常的なトレーニングの中でGK動作の導入や,GKの役割を明確化することでGK好意度の向上が見込まれることが明らかとなった.しかしながら,GKの役割の中で重要とされる「コーチング能力」について,その実態とコーチング能力が形成される育成プロセスについて検討すべき課題が残された.そこで20162018年度にかけて,GK育成導入期のU-11年代とU-12年代を対象にGKがゲーム中に展開する指示について実態調査を行った.最終年度では,特にU-12年代に焦点を当て,当該年代GKの指示能力について学年差,GK経験差,GK好意度の差を独立変数として比較検討した.GK導入期における指示能力の学年差は,U-11とU-12年代に大きな差が認められなかった.GK経験差ではGK経験群がGK未経験群と比較して指示数が多く,オンプレー中の指示が多い傾向であった.また,指示対象ポジションやエリアが多面的であった.ただし,GK経験群の指示はGK未経験群と同様にボールに直接関与した選手への指示が多い傾向であった.これらの傾向は,独立変数をGK好意度上位群,中位群,下位群に分類した分析でも同様の傾向であった.したがって,U-12年代では学年やGK経験,GK好意度の差に関わらずオンプレー中にプレーの先を予測し,ボールに間接関与した選手へ指示を出すことは難易度が高い可能性がうかがえた.これらの結果は,日本体育学会第69回大会(口頭)や日本コーチング学会第30回大会(ポスター),呉工業高等専門学校研究報告80号にて報告した.H28年度は本研究費にて購入した統計ソフトウェアを活用し、現在のサッカー育成年代ゴールキーパの戦術的思考能力やコーチング能力に形成に深く関与していると考えられる、育成年代(U-12)ゴールキーパートレーニングの問題点、改善点を明らかとした論文(査読付)を発表した。特に、広島地区の育成年代サッカー選手については、日常的に実施されている、または日本サッカー協会が推奨するトレーニングでは、フィールドプレーヤーとしてのパスやドリブルのスキル、戦術的思考能力は改善されるが、ゴールキーパー好意度の改善やゴールキーパの希望者の拡大という点で不十分である可能性が示唆された。この結果は、今後育成年代ゴールキーパーの「コーチング能力」形成過程を分析、考察する上で有用な材料になると考えられる。また、U-12年代サッカーゲーム(8人制)のゲーム映像データとゲームに出場していたゴールキーパー20人(10チーム)の音声(ゲーム中の指示)データを採取した。ゲームで採用したコートの広さは、縦68m×横46mであり、正規の8人制サッカーコーとと比較すると横幅が4m短いコートであった。映像データはコート全体を定点カメラで撮影した。音声データはミニICレコーダーをゴールキーパー選手の首元後方に取り付け音声を採取した。採取したデータは10チーム、12試合であったが、実力が拮抗したゲームのデータを採用するため、最終ゲーム結果が3点差以内のゲームを採用データとした。現在、映像データと音声データを同期し、テキストマイニング手法を主体に採取した音声データ(ゴールキーパーのコーチング)の分析を進めている。分析したデータはH29年度学会、投稿論文で発表予定である。当初のH28年度の研究実施計画では、ドイツ(ケルン)にて当地のゴールキーパー指導者を対象にゴールキーパーの戦術的思考能力やコーチング能力に関わる面接調査を実施する予定であった。また、サンフレッチェ広島(J1チーム)下部組織に所属する育成年代ゴールキーパー指導者にも同様の面接調査を実施する予定であったが、研究者本人と対象者のスケジュール調整が難航し、実現にいたらなかった。代わりに、H29年度に実施予定であったU-12年代ゴールキーパーがゲーム中に展開する指示の実態調査をH28年度に実施することができたが、対外的結果を発表できる段階に至ってはいない。2016年12月に採取したデータをもとに,山陽地区の少年サッカークラブ8チームに所属するU-11年代少年ゴールキーパー(以下GK)20名がサッカーゲーム中に展開した発語、または指示の分析を行った。分析は第一に,各チームのGKに装着したミニICレコーダーから収音したGKの音声と,定点カメラにて撮影したゲーム映像を同期させ,GKの発語音声の逐語記録を作成した。次に,調査対象者をGK経験群(11名),GK未経験群(9名)に分類し,GKの発語・指示に差異が生じているか比較検討を行った。GKの総発語数1513語をKJ法にて分類したところ,11項目に分類された。その中でも,「指示」(70.5%)が高い割合であった。平均発語数はGK経験群(108回)がGK未経験群(36回)と比較して高い値を示した(p<0.05)。GK経験の有無と指示の関係をみると,GK経験群の平均指示数(72回)はGK未経験群(22回)と比較して高い値を示した(p<0.05)。また,GK経験群と比較してGK未経験群は指示対象がディフェンダーや,ディフェンディングサードに集中した(p<0.001)。