hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
微生物酵素の耐圧性に関わる構造的因子の解明

マリアナ海溝(水深10,898m)より分離された絶対好圧菌シェワネラベンティカDB21MT-2株の作るアミノ酸生合成系の必須酵素、イソプロピルリンゴ酸脱水素酵素を材料に、変異酵素を作成してそれらの活性発現の耐圧性と高圧力下での構造相関性について解析した。その結果、絶対好圧菌酵素の活性中心の裏側くぼみ部分に位置する266番目のアミノ酸、アラニンが、酵素の耐圧性に重要な寄与をなしていることが示された。高圧下の立体構造を調べた結果、このくぼみ部分への加圧による水分子の侵入のしにくさが、この1個のアミノ酸の性質で影響を受け、深海由来絶対好圧菌酵素の活性発現の耐圧性を規定していることを明らかとした。マリアナ海溝,深度約11,000mの海底サンプルから分離された絶対好圧性細菌、Shewanella benthica DB21MT-2の生産する、イソプロピルリンゴ酸脱水素酵素(IPMDH、ロイシン生合成系の必須酵素)を精製し、陸上環境由来の近縁菌である、Shewanella oneidensis MR-1のIPMDHと比較した。その結果、好圧菌酵素は、常圧菌酵素と比較して、顕著に高い耐圧性があることが明らかとなった。そこで、こうした、好圧菌酵素の高い圧力耐性は、いかなる構造に起因するのか検討を行った。好圧菌IPMDHと常圧菌IPMDHは、それぞれ精製後結晶化し、新規に開発された高圧X線結晶構造解析装置により、大気圧下と加圧下との構造の変化を解析した。その結果、IPMDHの活性中心の裏側に位置する部分に、常圧菌酵素では、加圧条件下で3つの水分子が入り込むのに対し、好圧菌酵素ではそうしたことがなかった。このことから、加圧による水分子のこの部位への挿入の有無が、本酵素の耐圧性に密接に関わっていると推定された。ちなみにこの部位のアミノ酸は常圧菌酵素が親水性アミノ酸のSer266であるのに対し、好圧菌酵素ではこれが疎水性アミノ酸のAla266であった。そこで、常圧菌酵素のこの部位のアミノ酸をSer266→Ala266へと変換した変異酵素(S266A)を作り、その加圧下での活性を測定したところ、この1アミノ酸変異で常圧菌酵素が好圧菌酵素と変わらない耐圧性を持つことが示された。以上の結果から、好圧菌酵素は常圧菌酵素と比較して、わずか1アミノ酸の違いで加圧下に適応する構造を取り得ることが示された。これまでの研究結果から、常圧菌Shewanella oneidensisのイソプロピルリンゴ酸脱水素酵素(以下IPMDH)において、その活性中心の裏側に存在する266番目のアミノ酸、セリンを絶対好圧菌Shewanella benthica DB21MT-2由来のIPMDHの266番目のアミノ酸、アラニンに変換したところ、顕著にその耐圧性が向上し、深海酵素型と同様となったことが示された。そこで、今度は、逆に絶対好圧菌IPMDHにおいて、266番目のアミノ酸を常圧菌由来酵素と同じセリンに変換した。その結果、その変異酵素活性の耐圧性が減少し、ほぼ常圧性酵素と同じレベルとなった。これらの実験から、活性中心の裏側に存在する266番目のアミノ酸の性質が、これらの酵素の耐圧性に極めて深く関与していることが明らかとなった。ダイアモンドアンビルセルを用いた高圧X線結晶解析の結果、IPMDHの266番目のアミノ酸がセリンの場合には、加圧によりこの部分に3つの水分子の挿入が見られたが、アラニンの場合にはそうした加圧による水分子の挿入は確認されなかった。これらの結果から、深海酵素の耐圧性は、この部分への水分子の挿入のしやすさが関与している可能性が示唆された。以上の結果から、常圧菌酵素における圧力感受性活性モデルを提唱した。すなわち、酵素と基質の複合体が形成され活性中心が開く"オープン構造"から、反応が終了して基質から生産物になった化合物を排出するために活性中心が閉じる"クローズ構造"となるときに、加圧により挿入された水分子がスタックして、生成物の排出が阻害されるというモデルである。深海性酵素の場合は、水分子のスタックがないため、加圧状態でも問題なく生産物が排出される。これらの成果は、ロシアで行われた第10回極限環境生物国際会議、フランスで開催された第4回国際深海微生物シンポジウム等で発表した。これまでの結果から、絶対好圧菌シェワネラベンティカのイソプロピルリンゴ酸脱水素酵素(以下、深海酵素)の耐圧性には、活性中心構造を含む中央部のドメインが重要であるということがわかった。この中央部のアミノ酸配列を陸上菌シェワネラオネイデンシス由来相同酵素(陸上酵素)と比較して、それぞれの異なったアミノ酸を深海酵素のアミノ酸と陸上酵素のアミノ酸との全ての組み合わせで交換していき、高圧分光光度計を用いて、精製した全ての変異酵素の加圧条件下の活性を比較した。その結果、活性中心の裏側のくぼみ部分に相当する266番目のアミノ酸を陸上酵素型のセリン(S)と深海酵素型のアラニン(A)とで交換したとき、陸上酵素S266A型は耐圧酵素となり、逆に深海酵素A266S型では圧力感受性となった。これらの変異酵素間において他の活性パラメーターや熱安定性等に有意な差異が見られなかったので、この1アミノ酸変異による活性の違いは圧力条件のみによるものであった。

これらの酵素を結晶化し、高圧下における立体構造変化を調べたところ、266番目のアミノ酸が陸上酵素型のSの場合、活性中心の裏側に存在するくぼみ部分に3つの水分子が留まるのに対し、深海酵素型のAの場合、これらの水分子が留まらないことが観測された。すなわち、陸上酵素が圧力に対して感受性であるのは、加圧条件下においてこのくぼみ部分に余分な水分子が侵入し、親水性アミノ酸のSと水素結合することによって、酵素分子の動きが抑制され活性発現も同時に抑制されるという現象が起こったと推定された。それに対して深海酵素ではこの部分が疎水性アミノ酸のAであるため、加圧下でも水分子が結合出来ず留まらないため、活性発現に重要な分子の柔軟性が補償されているということがわかった。これらの成果をとりまとめて、論文を投稿し、Extremophiles誌に掲載された。論文投稿して、種々のコメントをいただき追実験、再実験を行ったため、論文採択に時間がかかってしまったが、科研費の期間内に最終的にExtremophiles誌に採択され公表することができたので、ほぼ順調に進展してきているといえる。昨年度までに、深海高水圧下環境に適応した絶対好圧菌、シェワネラベンティカDB21MT-5株(マリアナ海溝底より分離)のイソプロピルリンゴ酸脱水素酵素の圧力耐性は、266番目のアミノ酸の疎水性アラニンの性質に帰着することを明らかとした。すなわち、陸上環境より分離されたシェワネラオネイデンシスMR-1株(圧力感受性)の同酵素の266番目のアミノ酸が親水性セリンで、本酵素の高圧下における結晶構造解析の結果から、このセリンに加圧により押し込まれた水分子とが結合している状況が観察され、その結果、加圧により活性中心の柔軟性が阻害されて活性の阻害を受けると推定された。そこで、圧力感受性のMR-1株の酵素の266番目のアミノ酸「セリン」を、好圧菌型のアミノ酸「アラニン」に変換したところ、圧力感受性型の酵素が圧力耐性型酵素に変化したことが確認された。逆に、圧力耐性型酵素の266番目のアミノ酸「アラニン」を圧力感受性型のアミノ酸「セリン」に変換したところ、圧力耐性型が圧力感受性型に変化したことも確認された。高圧結晶構造解析の結果から、このアミノ酸分は、活性中心の裏側のフランジ部分に相当し、圧力によりこの部分に水分子が結合するか否かの違いで、同酵素の圧力特性が規定されることが分かった。絶対好圧菌の酵素が、わづか1アミノ酸の性質によって圧力耐性が保持されていることは非常に興味深い結果で、その活性構造相関をまとめて、Extremophiles誌に報告をおこなった。そして、今年度は、これらの成果を国際学会等で発表するために、研究期間を1年間継続し、国際極限環境生物学会等で報告をおこない、さらに、総説論文を高圧力学会誌に発表した。マリアナ海溝(水深10,898m)より分離された絶対好圧菌シェワネラベンティカDB21MT-2株の作るアミノ酸生合成系の必須酵素、イソプロピルリンゴ酸脱水素酵素を材料に、変異酵素を作成してそれらの活性発現の耐圧性と高圧力下での構造相関性について解析した。その結果、絶対好圧菌酵素の活性中心の裏側くぼみ部分に位置する266番目のアミノ酸、アラニンが、酵素の耐圧性に重要な寄与をなしていることが示された。高圧下の立体構造を調べた結果、このくぼみ部分への加圧による水分子の侵入のしにくさが、この1個のアミノ酸の性質で影響を受け、深海由来絶対好圧菌酵素の活性発現の耐圧性を規定していることを明らかとした。
Small RNAを利用した次世代順遺伝学スクリーニング系の開発とその応用

植物での既存の順遺伝学スクリーニングでは、発生に必須な遺伝子や機能重複遺伝子を同定できない。本研究では、植物の内在性small RNA経路の一つであるtasiRNA経路を改変し、これらの弱点を克服した新奇順遺伝学スクリーニング法を確立した。このスクリーニング系を用いて植物ウイルスの新奇宿主因子の同定を試みた。まず、既存の宿主因子を用いたモデル実験を行い、人工tasiRNAの発現によって、植物ウイルスの宿主因子の同定が可能なことを明らかにした。その後、液胞膜局在タンパク質群とリン脂質代謝関連遺伝子群を標的として、キュウリモザイクウイルスの複製に必要な新奇宿主因子を探索するための基盤を確立した。本年度は、ランダムtasiRNAライブラリーの構築を行った。はじめに、Arabidopsis thalianaのTAS1c遺伝子のD3(+)、D4(+)の二ヶ所から二種類のランダムtasiRNAを発現させるためのTAS1c-D34ベクターを構築した。このTAS1c-D34ベクターにランダムなtasiRNAを挿入することに成功した。30コロニーの大腸菌よりプラスミドを抽出し、挿入された60種類の人工tasiRNA配列の標的mRNAを予測した。その結果、得られた人工tasiRNAの約半分には標的mRNAが無いことが判明した。この結果を受けて、当初の計画を変更し、TAS1cのD2(+)、D3(+)、D4(+)の三ヶ所から三種類の人工ランダムtasiRNAを発現させるように改変したTAS1c-D234ベクターを構築した。このベクターにも人工ランダムtasiRNAを挿入することに成功した。30コロニーの大腸菌よりプラスミドを抽出し、挿入された90種類の人工tasiRNAの標的mRNAを予測した、その結果、各コンストラクトあたり少なくとも一つのmRNAを標的とする人工tasiRNAをもつ集団が構築できたことが明らかとなった。これらの結果より、改変TAS1c-D234ベクターを用いてランダムtasiRNAベクターを作成することにした。次に、ランダムな人工tasiRNAをもつプラスミドをエレクトロポレーション法によってアグロバクテリウムに形質転換し、選択培地上で生育させたアグロバクテリウムの各コロニーがランダムなtasiRNAを含むかどうかを評価した。30コロニーのアグロバクテリウムより人工tasiRNA領域を増幅し、シークエンス解析を行った。その結果、ランダムな外来tasiRNAをもつアグロバクテリウムライブラリーの構築に成功したことが明らかとなった。本年度は、人工ランダムtasiRNAを発現する植物ライブラリーの構築を行った。はじめに、前年度にTAS1cのD2(+)、D3(+)、D4(+)の三ヶ所から三種類の人工ランダムtasiRNAを発現させるように改変したTAS1c-D234ベクターをアグロバクテリウムに形質転換した。このアグロバクテリウムライブラリーを用いて、Floral dip法によってArabidopsis thaliana Col-0を形質転換した。選抜した複数ラインの形質転換植物よりゲノムDNAを抽出し、挿入した外来TAS1c遺伝子のD2(+)、D3(+)、D4(+)部位のシークエンス解析を行った。その結果、個体ごとに異なる人工tasiRNA配列が挿入されており、1植物あたり約5遺伝子の発現が抑制されることが示された。並行して、形質転換植物の選抜を容易に行うために、種子貯蔵タンパク質OLEO1にGFPを融合させたマーカーの導入を行った。Golden gate cloningによって人工ランダムtasiRNAを挿入するために、OLEO1プロモーター上よりBsaIおよびBsmBIの認識部位を除いたベクターを構築した。Col-0の形質転換、および実体蛍光顕微鏡観察を行い、改変OLEO1-GFPマーカーを用いて形質転換種子の選抜が可能であることを確認した。このベクターを用いて、人工ランダムtasiRNA発現植物ライブラリーの構築を開始した。また、CMVの感染性を容易に検証するために、2b遺伝子のC末端側にGFPを融合させた組換えCMVを作出した。この組換えCMVを用いて、細胞間移行能を指標に宿主因子の探索を行っている。初年度のアザミウマ発生による進行の遅れを取り戻せなかったため。本年度は、昨年度までに確立した人工ランダムtasiRNA発現植物ライブラリー作出法を利用して、植物ライブラリーの構築を進めた。昨年度までの解析から、一植物あたり約5遺伝子の発現抑制が起こることが予想されたため、ウイルス宿主因子同定に向けてライブラリーサイズの増加に努めた。この植物ライブラリー作成の過程で、発現抑制されると予想される遺伝子群が、そもそもウイルス感染を評価する葉組織で発現しているのかどうかを調べるべきであるという考えに至った。そもそも、ウイルスは葉で発現していない遺伝子産物を宿主因子として利用できないはずである。そこで、約100ラインのT2植物において、組み込まれた人工tasiRNA配列を決定し、標的と予測された遺伝子群がそもそも野生型植物の葉で発現しているかどうかを調べた。その結果、各ラインあたり約1遺伝子の発現しか抑制されないことが判明した。つまり、現状のままライブラリーサイズを大きくして順遺伝学スクリーニングを行なっても、本研究の強みとして想定していた重複遺伝子の同定にはまず至らないであろうと予測された。そこで方針を変更し、完全にランダムなtasiRNAのライブラリーではなく、葉で発現している遺伝子のみを標的にした人工tasiRNAのプールを利用することで、標的遺伝子が少なすぎる問題を解決する試みを開始した。

研究実績の概要の項目に書いた通り、当初想定したいた効率で遺伝子の発現を抑制できないことが判明したため。キュウリモザイクウイルス(CMV)は、様々な農作物に被害を及ぼす多犯性の植物ウイルスである。CMV抵抗性育種に利用可能な親品種が無い作物が多く、CMV抵抗性を付与するための基礎研究が望まれている。植物ウイルスは、感染時に植物の遺伝子産物(宿主因子)を利用している。宿主因子の同定は、Cas9を用いたゲノム編集などによる劣勢抵抗性の付与への基盤となる重要な基礎研究である。平成29年度には、CMVの複製に関与する宿主因子の単離を試みた。年度当初には、葉で発現している遺伝子を標的としてCMV感染に必要な宿主因子のRNAiスクリーニングを行う予定であったが、発現している遺伝子数が多かったことから、より絞り込んだ遺伝子群を標的にしてRNAiスクリーニングを行った。CMVは、液胞膜上で複製することが知られている。また、いくつかの植物ウイルスの複製には膜上のリン脂質が重要な役割を果たしていることが明らかにされてきた。そこで、シロイヌナズナの液胞膜局在タンパク質のプロテオミクス解析と、リン脂質代謝関連遺伝子のデータベースの情報を参考にして、CMVの宿主因子候補を含むと思われる標的遺伝子群を絞り込んだ。その後、in silicoで各標的遺伝子に対する人工tasiRNAをデザインした。遺伝子ファミリーごとに様々な順序と組み合わせで人工tasiRNAを3種類連結させたオリゴDNAライブラリーをデザインし、CustomArray社のOligo poolsを利用して、ライブラリー作成用のオリゴDNAを合成した。Golden gateクローニングによって、RNAiスクリーニング用の人工tasiRNA発現ライブラリーを作成し、シロイヌナズナを形質転換して宿主因子スクリーニングを開始した。残念ながら、研究期間内にCMVの新規宿主因子の同定には至らなかったが、今後もスクリーニングを継続し、CMVの宿主因子を同定するつもりである。植物での既存の順遺伝学スクリーニングでは、発生に必須な遺伝子や機能重複遺伝子を同定できない。本研究では、植物の内在性small RNA経路の一つであるtasiRNA経路を改変し、これらの弱点を克服した新奇順遺伝学スクリーニング法を確立した。このスクリーニング系を用いて植物ウイルスの新奇宿主因子の同定を試みた。まず、既存の宿主因子を用いたモデル実験を行い、人工tasiRNAの発現によって、植物ウイルスの宿主因子の同定が可能なことを明らかにした。その後、液胞膜局在タンパク質群とリン脂質代謝関連遺伝子群を標的として、キュウリモザイクウイルスの複製に必要な新奇宿主因子を探索するための基盤を確立した。植物育成室にアザミウマが大量発生し、一旦すべての植物を廃棄することになったため。二種類の農薬を利用するなど、防虫対策を施した。引き続きCol-0の形質転換を行い、CMVの宿主因子を遺伝学的に探索する。
キャリアドープされたモット絶縁体の電子状態に関する理論的研究

モット絶縁体へのキャリアドープは、スピンと電荷の自由度に起因した多彩な現象を生み出す。本研究の目的は、銅酸化物絶縁体にドープされたキャリアがもたらす多彩な電子状態を、キャリアとスピン自由度との相互作用という観点から理論的に解明することにある。このときキャリアはホールドーピングや電子ドーピングの他に、光励起によっても導入される。本研究の特色は、これら三種類のキャリアドープに関するこれまでの研究成果を統合・発展させることにより、ホールドーピング、電子ドーピング、光ドーピングで得られる異なる種類のキャリアに起因する電子状態の特徴を調べ、銅酸化物における電荷とスピンの相互作用についての統一的な知見を得ることにある。このような観点から本年度は、まずホールドーピングと電子ドーピングに関するモット絶縁体の電子状態を調べた。t-J模型やハバード模型に対して計算物理学的な手法を用いることにより、化学ポテンシャルやエントロピーなどの熱力学量のドーピング依存性を調べ、電子ドープ型とホールドープ型の電子状態の類似点・相違点を明らかにした。さらに、ホールドーピングに関して、スピン・電荷ストライプ秩序とその揺らぎが様々な物理量に及ぼす効果を明らかにするため、ストライプ秩序の形成に伴うゼーベック係数の特異な振る舞いの起源を解明した。この成果は現在、Physical Review Letters誌に投稿中である。次いで、光ドーピングによる電子状態の変化を明らかにするため、2マグノンラマン散乱の入射光エネルギー依存性を調べた。その結果、この依存性の特異な振る舞いが、強相関効果によること、とりわけキャリアの周りに存在している局在スピンとの相互作用によることを明らかにした。
タンデムミラー非軸対称極小磁場部における中性粒子の挙動研究

本研究の目的は、タンデムミラー方プラズマ閉じ込め装置「ガンマ10」の極小磁場部であるアンカー部及びそこから単純ミラー磁場へつながる変換部(トランジション部)における水素バルマーα線(Hα線)の輻射測定、および中性粒子輸送シミュレーションを行ない、同部に閉じ込められている非軸対称構造をもつプラズマ中の中性粒子の密度・温度プロファイルを求めることにより、この複雑な磁場構造を持つプラズマにおける粒子輸送のメカニズムについての知見を得ることである。本研究課題がスタートした昨年度において、新たに2次元Hα計測システムを設計・構築し標準光源を用いた絶対感度較正実験を行い、性能評価を行った。また、これと並行して3次元化したモンテカルロ輸送シミュレーションコード(DEGAS Ver.63)をガンマ10アンカー部へ適用し、同部における中性粒子輸送解析を開始した。まず初期的なメッシュモデルを構築し3次元モンテカルロ計算を進めた結果、ミラースロート部とアンカー外側変換部における粒子源が、実験で得られたHα線測定結果を上手く説明出来ることが判った。今年度、この新計測器をガンマ10東アンカー外側変換部に設置し、同部における楕円形に引き延ばされた非軸対称プラズマからのHα発光の詳細計測に初めて成功した。その結果、楕円状プラズマの短軸方向のHα線強度分布は極めてピーキングした形状を呈するのに対し、磁力線に沿った方向の強度分布は、非常に平坦なプロファイルを示した。このことを解釈するために、アンカー部からその外側のプラグバリア部にわたるDEGASメッシュモデルを新たに構築し、近傍にある可動リミターからのリサイクリング粒子源を考慮したシミュレーションを行った。その結果、実測で得られた空間分布は、DEGASによるシミュレーションで、上手く再現することが出来た。また、昨年度作成したアンカー部単独のメッシュモデルをセントラル部と統合するようにモデルを改良することによって、より効率的な計算を可能とし、両部の結合領域における詳細な解析に成功した。以上の結果から、同部における複雑なプラズマ及び真空容器壁の3次元構造が、中性粒子輸送に強く影響を及ぼしていることが明らかになった。本年度では、これまでに整備したアンカー/トランジション部におけるHα線輻射計測器に加えて、同部における2次元計測器システムを設計し、標準光源による絶対感度較正実験を行った。較正実験の結果から、新計測器システムはアンカー部のHα線強度分布を詳細に測定することが出来る性能を有していることを確認することが出来た。一方、中性粒子輸送シミュレーションでは、新たにPCベースのワークステーションを整備し、それを用いて、3次元化したモンテカルロ中性粒子輸送シミュレーションコード(DEGAS Ver.63)のガンマ10アンカー部への適用を行った。その結果、中性粒子生成源として従来より見積もられているセントラル部ミラースロートに設置されているガスパフからの粒子源に加えて、アンカー部外側変換部に設置している可動リミターからの水素リサイクリングによる粒子源を考慮することによって、実験結果すなわちアンカー部中央部および内側と外側変換部で測定したHα線強度の空間分布をうまく説明することができた。

また、セントラル部ミラースロートからアンカー部にかけてのプラズマ電子密度の空間分布を、セントラル部からのプラズマが磁力線に沿って流出するモデルと局所ミラー部に捕捉されるモデルで計算を行った結果、前者がより実験結果との良い一致を見出した。本研究の目的は、タンデムミラー方プラズマ閉じ込め装置「ガンマ10」の極小磁場部であるアンカー部及びそこから単純ミラー磁場へつながる変換部(トランジション部)における水素バルマーα線(Hα線)の輻射測定、および中性粒子輸送シミュレーションを行ない、同部に閉じ込められている非軸対称構造をもつプラズマ中の中性粒子の密度・温度プロファイルを求めることにより、この複雑な磁場構造を持つプラズマにおける粒子輸送のメカニズムについての知見を得ることである。本研究課題がスタートした昨年度において、新たに2次元Hα計測システムを設計・構築し標準光源を用いた絶対感度較正実験を行い、性能評価を行った。また、これと並行して3次元化したモンテカルロ輸送シミュレーションコード(DEGAS Ver.63)をガンマ10アンカー部へ適用し、同部における中性粒子輸送解析を開始した。今年度、この新計測器をガンマ10東アンカー外側変換部に設置し、同部における楕円形に引き延ばされた非軸対称プラズマからのHα発光の詳細計測に初めて成功した。その結果、楕円状プラズマの短軸方向のHα線強度分布は極めてピーキングした形状を呈するのに対し、磁力線に沿った方向の強度分布は、非常に平坦なプロファイルを示した。このことを解釈するために、アンカー部からその外側のプラグバリア部にわたるDEGASメッシュモデルを新たに構築し、近傍にある可動リミターからのリサイクリング粒子源を考慮したシミュレーションを行った。その結果から、実測で得られた空間分布は、DEGASによるシミュレーションで、上手く再現することが出来、同部における複雑なプラズマ及び真空容器壁の3次元構造が、中性粒子輸送に強く影響を及ぼしていることを明らかにした。
アーキアの転写装置を利用した多段階転写反応の動的メカニズムの解明

本年度は、極低温電子顕微鏡による単粒子解析を行うために、アーキアRNAポリメラーゼ(RNAP)とRNAPを含む転写活性化型開始前複合体の調製を行なった。アーキアの基本転写因子TBPとTFB、転写促進因子TFEおよび転写活性化因子Tarの4種類のタンパク質を大腸菌発現系を用いて大量に発現させ、カラムクロマトグラフィーにより精製した。アーキアRNAPは、Thermococcus kodakarensisの培養菌体から抽出・精製した。各タンパク質をTar認識配列およびプロモーター領域を含む二本鎖合成DNAに加え、70°Cでインキュベート後、混合溶液をゲル濾過クロマトグラフィーにより、転写活性化型開始前複合体を調製した。アーキアRNAP単独のネガティブステイン解析では、外形構造が電子顕微鏡により明らかになっているが、現在、複合体は解析中である。一方、TarとDNA複合体の共結晶を調製するために、結晶化ロボットを用いて、結晶化条件を検討した。その結果、一塩基突出した二本鎖DNAを用いた場合、Tar-DNA複合体の良質な結晶を得ることに成功し、ある有機溶媒系の沈澱化剤が結晶化に最適であることも分かった。Tar-DNA複合体結晶のX線回折を実験室レベルで確認したところ、2.5オングストローム分解能であった。今後は、放射光施設で高分解能のTar-DNA複合体のX線結晶構造を決定し、Tarの転写活性化機構を解明する。もう一つの転写活性化因子である原核生物RcdAのDNA認識機構について解明することに成功し、DNA認識に重要なアミノ酸を同定することができた。RcdAの研究成果を国際的な学術雑誌に投稿中である。さらに、計画斑である大阪大学の中村先生らとMD解析により、アーキアRNAPのクランプとストークの連動に二つのサブユニットRpb3とRpb11が重要な構造変化をしていることを見出した。28年度が最終年度であるため、記入しない。本年度はアーキアRNAポリメラーゼ(RNAP)の改良型転写開始前複合体(PIC)の調製と結晶化を重点的に行った。アーキアの基本転写因子TBP、TFBおよび転写活性化因子Tarを大腸菌発現系を用いて大量に調製し、RNAPは超好熱性アーキアThermococcus kadakarensisから単離・精製した。これら調製した4種類のタンパク質を転写活性化領域およびプロモーター領域を含む2本鎖DNAに混合し結晶化を行った。しかし、現在のところPICの結晶は得られていない。一方、Tar単独の結晶化に成功し、大型放射光施設(SPring-8)のX線源を利用して、Tar結晶のX線回折データの収集を行った。その結果、1.5 A程度のX線回折点が見られる高分解能のX線回折データを得ることができた。また、Tarのセレノメチオニン置換体結晶(Se-Met)も作成し、Se-Metのセレン原子の異常分散項を含むX線回折データも1.8 A程度で収集することができた。Tar単独とSe-Metの2つのデータをX線結晶構造解析用のプログラムを用いて解析した結果、Tar単独の良好な電子密度図と初期構造が得られた。初期構造を基に、Tar全長の分子モデルを構築して精密化した結果、1.58 A分解能のTarのX線結晶構造を決定することができた。Tarは結晶中でダイマーを形成しており、ダイマー形成に重要なα-ヘリックス構造が見られた。また、DNA認識に重要なHTHモチーフが存在しており、2つの対称性を持つHTHモチーフを通じて、TarがDNA上の回文配列を認識していることが示唆された。現在、アーキアの改良型転写開始前複合体(PIC)およびSpt4/5を含む転写伸長促進複合体の結晶化には至っていない。しかしながら、転写活性化因子Tar単独のX線結晶構造を決定することができ、その構造情報を基盤にTarのDNA認識メカニズムをさらに解明すれば、PICの結晶化に有益な知見を得ることができると考えている。したがって、TarとDNA複合体の構造情報を得る研究も進めていく予定である。Tar-

DNA複合体結晶のX線回折を実験室レベルで確認したところ、2.5オングストローム分解能であった。今後は、放射光施設で高分解能のTar-DNA複合体のX線結晶構造を決定し、Tarの転写活性化機構を解明する。もう一つの転写活性化因子である原核生物RcdAのDNA認識機構について解明することに成功し、DNA認識に重要なアミノ酸を同定することができた。RcdAの研究成果を国際的な学術雑誌に投稿中である。さらに、計画斑である大阪大学の中村先生らとMD解析により、アーキアRNAPのクランプとストークの連動に二つのサブユニットRpb3とRpb11が重要な構造変化をしていることを見出した。平成28年度は、アーキア改良型転写開始前複合体(PIC)のX線結晶構造解析に焦点を絞って研究を進めていく予定である。現在の最大の問題点であるPICの結晶化には、Tar-DNA複合体の構造情報を利用して、PICの結晶化に重要なDNAの長さや配列の種類を最適化する必要がある。そのため、Tar-DNA複合体のX線結晶構造解析も遂行する。一方、安定なPICを調製するために転写促進因子TFEも加えることにする。しかし、PIC調製に用いたThermococcus kadakarensis (Tko) RNAポリメラーゼ(RNAP)は、TFEとの相互作用が弱いため、PIC調製の際、TFEがTkoRNAPから解離し、均一なPICを調製することができない。この問題点を解決するために、Tkoの遺伝子組換えシステムを用いて、TFEとTkoRNAPのサブユニットRpoFを融合させたTFE-TkoRNAPを構築する。TFEのC末端側ドメインはTkoRNAPのストークを司るRpoE/Fヘテロ二量体と相互作用することが知られている。よって、TFEのC末端側ドメインのリンカー領域をバイパスにしてRpoFのN末端側を結合した遺伝子をTko内で発現可能なTko変異株を構築する。最終的に、TFEのN末端側のHis×6タグ配列を利用して、Ni-NTAカラムクロマトグラフィでTFE-TkoRNAPをTko変異株から容易にTFE-TkoRNAPを精製する。28年度が最終年度であるため、記入しない。
第二言語における発音習得プロセスの実証的研究

臨界期を過ぎてから外国語学習を開始した場合、ネイティブレベルの発音習得は不可能で、母語のアクセントが残ってしまうという定説、いわゆる「臨界期仮説」は言語習得関係者間において、よく知られている。本研究では、まず、この臨界期仮説を検証した。2004年度に作成した日本語(101名)・英語学習者(99名)による発音タスク(単語・文・会話)の録音データを用いて、2005年度に評価用CD・ROMを作成し、日本語・英語母語話者による評価(各5名、各15時間)を行った。評価用CD・ROMには、学習者と母語話者の音声ファイルをランダムに配置した。本調査の結果、確かに年齢要因は発音の習得度に影響を与えるが、臨界期を過ぎてから学習を開始したにも関わらず、ネイティブレベルの発音習得を達成した学習者が複数存在することが、日英両言語において確認された。たとえば、学習開始年齢が18歳、到着年齢が22歳というように、完全に成人してから学習を開始したにも関わらず、ネイティブレベルの発音習得を達成した学習者も2名存在することがわかった。本調査は、実際に大人になってから学習を開始した場合でも習得は可能であり、年齢が若くなければネイティブレベルの発音習得は不可能で母語のアクセントが残ってしまうという定説を否定する結果となった。次に、これらのGood learnersへのフォローアップ・インタビューを行った結果、発音習得度の高い学習者の共通性が明らかになった。それは、1)学習初期にインプット洪水を経験していること、2)1音声的側面に焦点を当てた学習経験があること、3)豊富な0リソースを活用していること、4)シャドーイング等の発音学習方法を用いて独自の学習を行っていること、5)教室環境と自然環境からなる混合環境の利点を活用していることなどである。このようなストラテジーは、教育活動においても言語教育の現場に取り入れることができると考えられる。しかし、時間の関係上、当初予定していた教育効果検証までは行うことができなかった。本研究の成果は国内外の学会・研究会で発表した。現在、研究成果報告書を作成中であり、6月までに印刷し、言語教育関係者に配布する予定である。2004年度はまず、単語、文、パラグラフ、自由会話によってなる発音タスクを作成し、PC上で発音タスクを実行することを可能にした。次に、韓国語・中国語・英語を母語とする日本語学習者を中心とする日本語学習者群と、日本語を母語とする英語学習者群に発音タスクを行い、DAT録音機で録音した。調査協力者数は、初年度の計画を上回る約100名である。録音の後、目標言語を話す国に着いた年齢、学習期間、学習開始年齢、発音学習の有無、どのように発音を習得したか、発音に対する意識などを問うアンケートも実施した。また、上の母語以外にも、ポルトガル語・ベトナム語を母語とする日本語学習者に対する調査も行った。現在、母語話者による評価用CD-ROMを作成中である。今後の予定は、評価シートを配布し、「母語話者か否か」を7段階のリカート法を用いて評価してもらい、更に非母語話者と評価された対象者の発音を初級・中級・上級の5段階のリカート法で評価してもらうことを計画している。

2005年度は、まず、2004年度に作成した発音タスクの録音データを用いて、評価用CR-ROMを作成し、PC上で日本語母語話者による評価(本調査)を行った。臨界期を過ぎてから外国語学習を開始した場合、発音の習得は大変困難で母語のアクセントが残ってしまうと考えられているが、本調査の結果、確かに年齢要因は発音の習得度に影響を与えるが、臨界期を過ぎてから学習を開始したにも関わらず、ネイティブレベルの発音習得を達成した学習者が複数存在することが確認された。アンケートの分析結果により、発音習得度の高い学習者の共通性(例:モデル聴取型ストラテジーの使用)が明らかになった。さらに、戸田がネイティブレベルの発音習得を達成した学習者に個別インタビューを行ったところ、彼らが積極的にシャドウイング等の発音学習方法を用いて学習を行っていることがわかった。このようなストラテジーは、教育活動においても取り入れることができると考えられる。しかし、時間の関係上、当初予定していた学習スタイル調査および教育効果検証を行うことができなかった。本研究の成果は国内外の学会・研究会で発表した。現在、研究成果報告書を作成中であり、6月までに印刷し、言語教育関係者に配布する予定である。
認知症ケアのための男性用介護レディネス尺度の開発と実証的研究

2018-2019年度は、認知症家族を介護する男性用の介護レディネス尺度を開発する予定である。そのため、2018年度は、介護未経験男性に必要な介護の事前準備の内容を明らかにする目的で、2018年1011月に、A県B市・C市在住の認知症家族の介護経験のある男性16名に、「介護未経験男性に必要な認知症家族の介護に必要な事前準備は何か」のテーマで、フォーカスグループインタビュー(2グループ:9名、7名)を行った。分析は、共同分担者とともに質的記述的に行った。当大学の健康科学部の倫理委員会の承認を得て行っった。研究協力者の男性介護者は、3年以上の経験者が13名、年齢は60歳以上が15名であった。介護未経験男性に必要な介護の事前準備の内容は、【認知症の疾病理解】や【要介護者や介護者になる可能性の認識】の必要性、日常からの【知人や隣近所との相互交流】や【公的な社会資源の知識】を持つこと、普段からの【家族間の交流】や【日常からの家事の慣れ】の必要性、介護から気を紛らわすための【自己の感情コントロールの工夫】の必要性、の7カテゴリーが抽出された。男性介護者の介護生活に伴う困難として、家事への負担や戸惑い・弱音を吐かず介護を一人で抱え込み易いこと、社会からの孤立感、認知症患者の介護ではやり場のない徒労感等の報告があり、今回の結果と関連した。またさらに、家族の望みを知る必要性や、認知症の罹患や介護を身近なこととして捉える必要性を含めた事前準備をすることで、いざという時にも戸惑いが少なく介護できると考えられた。現在は、今回の研究結果および先行文献をもとに、尺度開発のための質問紙を作成している段階である。申請時の計画では、2018年度はプレテスト迄実施する予定であった。フォーカスグループインタビュー実施後、データの分析をしつつ質問項目を作成した。また、研究分担者以外の専門家等の意見も聞きながら尺度のベースとなる質問紙を作成したが、プレテストまでには至らなかった。5月中旬にプレテストを行い、質問紙の精度を高め、8月9月頃本調査の予定である。その後因子分析を行い、尺度開発をする予定である。2018年度に行う予定のプレテストが2019年度となったため、返信用郵送料は今年度使用する。フォーカスグループインタビューを3グループ行う予定であったが、諸事情で2グループとなったため、テープおこしも3回の予定が2回となった。協力者の人数は、15名の予定であったが、16名の協力が得られた。しかし謝金は、当大学の相場は3000円とのことであったため、予定よりも定額となった。2019年度は本調査を行う。データ打ち込みを学生アルバイトに依頼するつもりであったが、データの打ち込み・処理等も含め、業者に依頼する予定である。
タンキラーゼによるテロメア長制御機構とテロメラーゼ阻害剤による制癌

染色体の末端構造であるテロメアはゲノムの複製・安定化に不可欠であり、ヒト正常体細胞におけるテロメアの短縮は"分裂時計"として癌抑制機構の一翼を担う。テロメア合成酵素であるテロメラーゼの活性化は癌細胞の無限増殖能の根拠となる。テロメラーゼ阻害剤は、癌細胞のテロメアを徐々に短縮させ、細胞の老化と死(アポトーシス)を誘導することから、新たな癌分子標的薬剤としての応用性が期待されている。但し、この手法ではテロメア短縮が限界に達するまで阻害剤を継続処理する必要がある。我々はテロメラーゼ阻害剤の効果増強を目指し、テロメラーゼのテロメア会合制御因子であるポリ(ADP-リボシル)化酵素(PARP)、タンキラーゼ1に着目した。今回、我々はタンキラーゼ1の機能亢進もしくはテロメア短縮そのものが、MST-312やエピガロカテキンガレートといったテロメラーゼ阻害剤の耐性因子となることを見出した。そこで更に、タンキラーゼ1の機能を強力に抑制するPARP阻害剤を同定し、同薬剤が上記テロメラーゼ阻害剤耐性を克服することを実証した。また、これらのPARP阻害剤はテロメラーゼ阻害剤のテロメア短縮効果を増強することにより、テロメラーゼ阻害剤による癌細胞の老化・アポトーシスをより早期に誘導した。一方、タンキラーゼ1の構造解析から得た知見をもとに、細胞内で優性不活性(ドミナントネガティブ)に機能すると考えられる変異型タンキラーゼ1遺伝子FN-tank-ARC Vを構築した。以上の知見および手法は、テロメラーゼ阻害剤には即効性がない、という従来の問題点を大きく改善する方策を提供すると期待される。
何が魚類を陸上へ進出させたか

ベトナム、Soc Trang省の干潟で5種のマッドスキッパーを確認した。Boleophthalmus boddartiとPeriophthalmus chrysospilosは行動観察期間中90%の時間を干潟上で過ごしていたのに対し、Scartelaos histophorusは16%、Oxuderces nexipinnisは1%であった。Periophthalmodon schlosseriについては、観察例が少なく信頼性の高いデータを得ることができなかった。メコン河の上流150km付近までPeriophthalmodon septemradiatusが生息し、産卵していることを確認した。2015年6月21日から28日、および2016年3月5日から14日の2回にわたって、ベトナムSoc Trang省、MoOの干潟で調査を行った。2回の調査ともに、以下の5種類のマッドスキッパーの生息を確認し、Periophthalmodon schlosseriを除いた4種について行動記録を行った。P. schlosseriは生息個体数が少なく、行動記録ができなかった。また、5種について、少数個体を採集し、消化管内容の分析を行った。Pn. schlosseri以外の4種の水中と陸上での行動時間の分配を分析したところ、B. boddartiとPs. chrysosiplosは記録時間中約90%干潟上で行動していたのに対し、S. histophorusは16%、O. dentatusは1%と陸上での行動時間に大きな種間差が見られた。5種のうち、B. boddartiとO. dentatusは植物食性、Ps. chrysospilosとPn. schlosseriは動物食性、S. histophorusは雑食性であることが判明した。消化管長の標準体長に対する比は植物食性の2種で1.3-1.8、Pn. schlosseriが1.1、S. histophorusが0.8、Ps. chrysospilosが0.7であった。事前調査では、調査地に4種が生息する情報を得ていたが、今年度の調査により5種の生息が確認され、その意味では予想以上に研究が進んだ。27年度に計画した行動解析、形態比較については、ほぼ計画どおり順調に進展している。2016年9月23日30日、および12月1日8日にベトナムSoc Trang省のMoO干潟で調査を行うとともに、6月3日9日および上記の2回の調査時にはメコン河をカンボジア国境近くまで遡って、淡水域のマッドスキッパー調査を実施した。MoOでは2015年の調査時と同じく、次の5種についてビデオ撮影と採集を行った。Boleophthalmus boddarti, Oxuderces nexipinnis (O. dentatusが2016年の論文で新学名に変更された)Periophthalmodonschlosseri, Periophthalmus chrysospilos, Scartelaos histophorus沿岸から直線距離で約150キロのメコン河上流域までにPeriophthalmodon septemradiatusの生息を確認した。生息域の表層水塩分はゼロであり、調査日には約2mの潮汐の影響によると思われる水位変動を確認した。マッドスキッパーがこのように沿岸から遠く離れた地点にまで生息することを確認したのは、本研究が初めてである。前年度の観察・計測を継続するとともに,以下を行う.(1)代謝測定5種のmudskipperをカントー大に持ち帰り,酸素消費量の測定を行う.溶存酸素を現場の干潟海水と同じレベルに調整した海水中に,これら4種を一定時間おき,その後陸上へ移行させた際の酸素消費量の経時変化を測定する.(2)2年間の研究を通してヒレから四肢への変化やエラの退縮などよりも微細なレベルで,陸上への移行に伴う形態・機能的変化を,現生のmudskipper類の形態・生理・生態から特定し,関連する学会・専門誌等で公表する.環境生理学
現代フランス思想における宗教哲学の諸可能性の研究-悪の問題を導さとして-

本研究が目的としたのは、悪の問題を導きとして、ニヒリズム以後の宗教哲学の可能性を現代フランス思想の中に探究することである。この宗教哲学は、現代において哲学と宗教が共有せざるをえないと思われる自己審問からしか捉えられないものであるが、昨年度の研究では,言葉の問題がそのような自己審問への通路として確定された。今年度の研究はこの洞察の延長線上にあるものであるが、その成果は以下の二点に纏められる。第一の点は,最近のリクール哲学の新展開から、本研究にとって本質的な幾つかの洞察を取り出してきたことである。なかでも重要なのは、昨年出版された『記憶・歴史・忘却』で本格的に展開された「記憶」と「証言」に関する考察である。全てを説明し基礎づける哲学が挫折した後も、「行為し受苦する人間」として自己を問う主体はなお残っている。それが「自己の解釈学」を標榜する近年のリクールの基本的立場であり、そこから繰り出される思索は、悪の問題との連関で現代の宗教哲学を考究しようという本研究の発想源であった。記憶と証言に関するリクールの新たな考察は,上記の言葉の問題とも結びついて、言葉と「信」の繋がりの在処を探る上で多大な示唆を与えてくれた。第二の点は、本研究の問題に対して「フランス反省哲学」の伝統がもつ重要な意味を指摘しえたことである。本研究の関心にもっとも近い現代フランスの思想動向は、いわゆる「フランス現象学の神学的転回」であり、昨年度はレヴィナスやデリダの思索を手掛かりにこの動向の意味を問う研究も行った。しかし、そこで問われている諸問題は、フランス反省哲学の担い手を自任するラニョーやナペールの晦渋な思索を通して、別の光源から照射されうるものであると思われる。そのことを理解したことによって、本研究の問題への複層的なアプローチが可能になった。これは今後の研究の新展開に繋がる大きな成果であると言える。今年度の研究は、以下の二点を軸にして遂行された。(1)言葉と超越の問題「神の死」と絶対的な悪の露呈という状況に面して、哲学と宗教の双方が問い質されるなかで、その問いの次元で浮かび上がる宗教哲学の可能性を探ることが、本研究の基本的問題関心であるが、本年度はとくに、それを「言葉」の問題との結びつきにおいて追求した。具体的には、デリダの「エクリチュールの思想」、レヴィナスの「原言述」としての倫理、ブランショの「文学空間」論などを手掛かりにし、その背後に透かし見られる特異な宗教的思索にも迫った。こうした作業のために、かれらの著作、二次文献はもちろんのこと、現代における宗教と哲学の状況を全体的に捉えるための文献が多数必要になり、設備費の大半はそれに充てた。(2)ナベールの遺稿研究上述した問題関心と密接に結びつく知られざる思想家として、ナベールの思想の研究も、本研究の柱の一つになっている。その点で、パリカトリック学院哲学部で現在設備中の「ナベール文庫」と連繁して研究を進めている。今年度は、2000年3月に当地に赴き、文庫の整備状況を聞いたり、手紙や貴重な二次文献を閲覧したりした。ナベールは神論を完成しないまま世を去ったので、その全貌は晩年の遺稿の一部から出版された『神の欲望』を通して垣間見られるのみであり、本研究にとっては、パリのナベール文庫と連繁した作業が、今後もいっそう必要になるであろう。
レーザー励起低速光電子と表面素励起の相互作用

Csの吸着時間(露出量)の関数としてTDS分光とHe-Neレーザー光源による光電子放出電流の測定を行った。TDSの結果からCsは0.5モノレイヤー以下の被覆率では選択的にvalley bridge siteのみに吸着することがわかった。一方、He-Neレーザー光源(波長638nm)による光電子放出は1/3モノレイヤー以上のCs被覆領域でのみ観測された。文献によれば1/3モノレイヤーの吸着ではCsはvalley bridge siteの列に沿って二つ入って一つ抜けるように吸着している。この状態にさらにCsが吸着して三つ以上のCsが並ぶようになるとHe-Neレーザー光による光電子放出が起こるようになる。光電子放出強度は0.5モノレイヤーまで単調に増加するが、これはCsの吸着による仕事関数の低下によるものではないことが、波長820nmの光を用いたTOF光電子分光でわかった。すなわち、光電子スペクトルを観測すると、低エネルギー側のカットオフエネルギーおよびスペクトル形状はCsの被覆量にたいして変化しない。以上のことから、1/3モノレイヤー以下と以上では仕事関数はディジタルに変化している(連続的には変化していない)ことがわかる。Csの吸着量が0.5モノレイヤー以上になるとpedestal siteへの吸着が始まり光電子放出電流は低下するが、光電子スペクトルの低エネルギー側のカットオフエネルギーは変化しない。この結果から、Csがpedestal siteへ吸着するとその周りの仕事関数が局所的に増加することがわかった。清浄Cu(110)面Cu(110)面は4.82eVの仕事関数を有し、これはチタンサファイアレーザーの3倍の高調波の同調範囲のほぼ中央に位置する。この系にたいするTOF光電子分光を行うためにレーザーから試料までの紫外光に対応する光学系を構築し、終了した。
高校の数学教師が「生徒による授業評価」を授業改善に活用する際の行動様式の分析

近年,「生徒による授業評価」による授業改善が行われている.教師が「生徒による授業評価」に対し,どの様に向かい合っているかを把握し,課題や利点を示唆することにより自己分析力が高められると考える.そのため,本研究の目的を「教師が授業評価の結果からどの様な改善行動を行っているのか,また,その課題は何であるのかを明らかにすること.」とする.これにより,より良い授業の改善がなされ,生徒の学びに還元されることを期待している.ある高校の数学教師に対し,「生徒による授業評価」の結果を受けどの様な改善行動をとっているか等を中心としたインタビュー調査を行った.その内容を計量テキスト分析により分析を行い,階層的カテゴリー表を作成することを試みた.結果、第1回のインタビューを基にした階層的カテゴリーは,「評価への意識」,「結果の分析」,「授業改善」の3つから構成された.「生徒による授業評価」は,肯定的に受け止めているものの,自身が受けたい評価(制度)との差異が存在している.可視化できる授業技術の改善に取り組む場合が多く,他の教師の授業を観ることがなされていた.第2回のインタビュー後は,「結果の分析」,「授業改善」の2つの大カテゴリーから構成された.前回と異なる特徴として生徒の努力が大きな要素となる項目が,教師に求めるものとして評価に反映させている状況が浮かび上がった.また,改善に取り組んだが,より上手くなるためにという目標設定がなされており,他の教師の授業を観るといった取り組みが引き続きなされていた.これらの結果からは,ある問題意識を教師自身が持ち,その問題意識を解決するために参観するという主体的な参観が存在している.評価の視点に変化が見られることから,「生徒による授業評価」には,教師を成長させる動機付けも含まれていると言える.近年,「生徒による授業評価」による授業改善が行われている.教師が「生徒による授業評価」に対し,どの様に向かい合っているかを把握し,課題や利点を示唆することにより自己分析力が高められると考える.そのため,本研究の目的を「教師が授業評価の結果からどの様な改善行動を行っているのか,また,その課題は何であるのかを明らかにすること.」とする.これにより,より良い授業の改善がなされ,生徒の学びに還元されることを期待している.ある高校の数学教師に対し,「生徒による授業評価」の結果を受けどの様な改善行動をとっているか等を中心としたインタビュー調査を行った.その内容を計量テキスト分析により分析を行い,階層的カテゴリー表を作成することを試みた.結果、第1回のインタビューを基にした階層的カテゴリーは,「評価への意識」,「結果の分析」,「授業改善」の3つから構成された.「生徒による授業評価」は,肯定的に受け止めているものの,自身が受けたい評価(制度)との差異が存在している.可視化できる授業技術の改善に取り組む場合が多く,他の教師の授業を観ることがなされていた.第2回のインタビュー後は,「結果の分析」,「授業改善」の2つの大カテゴリーから構成された.前回と異なる特徴として生徒の努力が大きな要素となる項目が,教師に求めるものとして評価に反映させている状況が浮かび上がった.また,改善に取り組んだが,より上手くなるためにという目標設定がなされており,他の教師の授業を観るといった取り組みが引き続きなされていた.これらの結果からは,ある問題意識を教師自身が持ち,その問題意識を解決するために参観するという主体的な参観が存在している.評価の視点に変化が見られることから,「生徒による授業評価」には,教師を成長させる動機付けも含まれていると言える.
維持管理における橋梁の総合評価手法に関する基礎的研究

1)目的限られた予算内で多数の既存橋梁を維持管理していく中で,適時適切な補修を行うためには補修優先度の評価が重要となる.現在のところ確立した評価手法はなく,各管理者が独自に評価していることが多い.本研究では維持管理における優先度評価手法について,現在の評価手法について整理するとともに,算術積型モデルによる評価手法の検討を行うことを目的とする.2)成果都道府県が策定している橋梁長寿命化計画を中心に現状の優先度評価手法については,大きく以下の2つの評価手法に分類されていた.(1)各評価に重みをつけて総合得点化する方法(2)多様な評価尺度に基づいた評価結果をマトリクス表等に整理する方法単一の指標に数値化をする必要がない2)による評価手法が多くを占めていた. (1)による評価手法としては重みづけ算術和による評価が多くを占めるが,山梨県など独自の評価方法を採用しているところもあった.(1)の総合得点化手法の一つとして,算術積による評価手法について検討を行った.算術和の場合に項目の重み係数が小さい場合,最低値となっている場合であっても総合評価へ与える影響が限定され適切に評価できなかった点は,算術積により総合評価反映できることが分かった.しかし,重みづけ算術和による評価方法の方が適切に評価できる場合もあり,複数の評価手法を組合わせた総合評価を行う必要があるといえる.1)目的限られた予算内で多数の既存橋梁を維持管理していく中で,適時適切な補修を行うためには補修優先度の評価が重要となる.現在のところ確立した評価手法はなく,各管理者が独自に評価していることが多い.本研究では維持管理における優先度評価手法について,現在の評価手法について整理するとともに,算術積型モデルによる評価手法の検討を行うことを目的とする.2)成果都道府県が策定している橋梁長寿命化計画を中心に現状の優先度評価手法については,大きく以下の2つの評価手法に分類されていた.(1)各評価に重みをつけて総合得点化する方法(2)多様な評価尺度に基づいた評価結果をマトリクス表等に整理する方法単一の指標に数値化をする必要がない2)による評価手法が多くを占めていた. (1)による評価手法としては重みづけ算術和による評価が多くを占めるが,山梨県など独自の評価方法を採用しているところもあった.(1)の総合得点化手法の一つとして,算術積による評価手法について検討を行った.算術和の場合に項目の重み係数が小さい場合,最低値となっている場合であっても総合評価へ与える影響が限定され適切に評価できなかった点は,算術積により総合評価反映できることが分かった.しかし,重みづけ算術和による評価方法の方が適切に評価できる場合もあり,複数の評価手法を組合わせた総合評価を行う必要があるといえる.