hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
SEREX法による頭頚部癌特異的抗原の検索

1.材料の採取岡山大学医学部耳鼻咽喉科学教室で治療したの頭頚部癌の男性患者(舌扁平上皮癌T4N2bM0:Stage IV)に対しインフォームドコンセントを取得し手術時に採取した腫瘍組織の一部を液体窒素で即時凍結した後マイナス80度で保存した。同時期に同患者の末梢血も採取し遠心分離した血清をマイナス20度にて保存した。2.cDNAライブラリーの作製凍結した腫瘍組織よりトータルRNAの抽出を行い、ポリAセレクションによりmRNAを得た。このmRNAを用いて作製したcDNAを大腸菌発現λ(ラムダ)ファージに組み込んだ8.1×10^5のcDNAライブラリーの作製に成功した。3.陽性クローンの同定とサブクローニングcDNAライブラリーラムダファージを大腸菌にトランスフェクトし腫瘍細胞由来タンパクを発現させこのタンパクをニトロセルロースメンブレンにトランスファーした。メンブレン上のタンパクと凍結保存していた癌患者希釈血清とのブロッティングを行い、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトIgG抗体を用いて発色させ、陽性クローンの同定を行った。腫瘍組織へinfiltratingしているB細胞由来のIgGクローンは患者血清との反応の前にペルオキシダーゼ標識抗ヒトIgG抗体とメンブレンをあらかじめ反応させ発色させることにより除外した。本法をもちいて1stスクリーニング、2ndスクリーニング、3rdスクリーニングと行い最終的に5個の陽性クローンを得ることができた。舌癌患者(47才男性中等度分化型扁平上皮癌T4N2bM0 Stage 4)の原発部位より採取した癌組織よりtotal RNAを抽出しこのtotal RNAよりm RNAを分離した。このm RNAより8.1×10^5のDNAファージライブラリー(λZAP Express Vector)を作製した。同患者より手術時(担癌状態時)に採取した血清を200倍に希釈したものを用いてc DNAファージライブラリーの発現スクリーニングを繰り返し行なった。現在までに約40000クローンのスクリーニングを終了し陽性と考えられるクローンを複数個単離する事ができた。現在この陽性クローンのインサートDNAをin vivoエキシジョン法2本鎖プラスミド(pBK-CMV)に変換後シーケンサーで塩基配列を決定し各クローンについて塩基配列を解析中する予定である。残りのc DNAファージライブラリーのスクリーニングも同時に進めている。遺伝子が同定されれば各腫瘍、正常組織についてRT-PCR法を用いてこれらの遺伝子の発現の状況をしらべ、また担癌患者の各時期についての各遺伝子産物に対する抗体の発現の有無などのについての検討を加える。さらに、同患者は生存中であり患者のリンパ球を採取し得られた遺伝子産物と患者リンパ球との反応を見ることもでき将来的にはSEREX法で得られた抗原がT細胞認識抗原となりうるかどうかの検討ができる可能性がある。
電極酸化による有機イオウ活性種の生成と反応制御

選択性の高い活性種を生成させ、この反応性を制御することは、現代の有機合成の課題である。この為の有力な方法に、電極酸化による活性種の生成がある。本研究では、各種のスルフィド類を一電子酸化してカチオンラジカルを発生させ、反応を制御しようとするものである。スルフィド類をメタノ-ル中で電極酸化すると、α-プロトンの脱離によるα-メトキシ化反応と、C-S結合の開裂反応が競争的に進行することが判明した。その割合は置換基によって異なる。電子吸引性の置換基により酸性度が高くなればα-プロトンの脱離が主反応となり、α-官能基化が出来る。このα-プロトンの脱離過程は、スルフィドカチオンラジカルの酸性度と相関するはずである。この酸性度を求めるため、α-カルバニオン種の酸化電位の測定を試みたが、カルバニオンが不安定のため測定できなかった。今後、メデエ-タ-を用いる間接電解還元の方法により試みる予定である。他方、C-S開裂反応は、安定なカルベニウムイオンを生成する場合に主反応となる。例えば、p-メトキシベンジル基の場合である。また、α-水素をもたない三級炭素では、C-S結合が開裂し、メトキシ置換反応が起こる。以上の知見に基き、合成的に有用な反応系に適用する予定である。
腸管神経による免疫系・上皮系バリアおよび腸内フローラ制御機構解析

腸管神経細胞の増加しているNcx KOマウスを用いて腸管バリア機構・腸管免疫・腸内細菌叢について解析した。Ncx KOマウスは一酸化窒素(NO)を産生する腸管神経が増加している。上皮細胞のE-カドヘリンの発現を調べたところKOマウスでは減少しておりまた、透過性も亢進していた。また、ニトロチロシン抗体により染色される上皮細胞が増加していた。nNOSの阻害剤を投与したところカドヘリンの発現は正常に回復したことより腸管神経より出るNOにより上皮細胞障害が起きていることが示唆された。次に腸内細菌叢について糞便培養、16SrRNA解析およびメタゲノム解析を行った。培養法では通性嫌気性菌がKOマウスで野生型の10100倍に増加、16SrRNAおよびメタゲノム解析で腸内細菌科の細菌が増加していることが明らかになった。さらにKOマウスでは一酸化窒素還元酵素であるNitric oxide reductase (NORV)遺伝子を持つ菌が増加していた。NORV陽性細菌はNOによる殺菌作用から逃れるため病原性が高いと言われている。そこで野生型マウスに野生型およびKOマウスの糞便をそれぞれ移植しDSS腸炎を誘導したところKOマウス糞便を移植したマウスにおいてより悪化する傾向にあった。これらの結果より腸内において高濃度のNOに暴露されることによりNORV陽性の腸内細菌が選択的に増加しより病原性の高いものとなったことが示唆される。また、腸管免疫系について解析した結果、KOマウスlamina propriaにおいて好酸球が増加していることが明らかとなった。好酸球をリクルートするケモカイン・サイトカインを調べたところKO腸管においてeotaxinおよびIL-5が増加していることが明らかとなった。これら因子を産生する細胞および好酸球増加の生理的意義について検討している。28年度が最終年度であるため、記入しない。腸管においては腸内細菌叢が上皮バリア、免疫系バリアにより相互作用を保ちながら共存している。さらに腸管神経系は腸管の運動・分泌・吸収などを制御しているが腸管神経の増加しているNcx KOマウスにおける上皮バリア機構、腸内細菌叢および腸管免疫系についての解析を行った。その結果以下のことを明らかにした。(1)Ncx KOマウス腸管における免疫細胞の分画について解析したところ粘膜固有層において好酸球の増加を認め週齢が増加するに従い顕著となった。またDCサブセットで減少しているものが認められた。(2)腸内細菌叢について16SRNAおよびメタゲノム解析を行ったところNcx KOマウスにおいてEnterobacteriaceaeが増加していた。またbacteroidetes門のS24-7 familyがKOマウスにおいて減少、firmicutes門のPeptostreptococcaceae, Eubacteriaceaeなどが増加していた。一方KOマウスの糞便を野生型マウスに移植したところDSS腸炎がコントロール群(野生型糞便移植)に比べて増悪した。以上よりNcx KOマウス腸管においてはDysbiosisをきたしており、より病原性の高い細菌が増加していることが示唆された。(3)NcxKOマウスにおいて一酸化窒素産生ニューロンの増加が認められる。腸内細菌についてNO還元酵素の1つであるNorV陽性細菌について調べたところKOマウスにおいて有意に増加していた。腸管内において一酸化窒素のストレスにより増加したことが示唆された。腸管神経増加をきたすNcx KOマウスにおける腸内細菌叢の変化および上皮バリアの以上について明らかにすることができた。現在この部分については論文投稿準備中である。また免疫学的解析については粘膜固有層の好酸球増加について見出しており、その他にもDCの異常、IgA産生の異常を見出しており、おおむね予定通りに進んでいると評価した。

好酸球をリクルートするケモカイン・サイトカインを調べたところKO腸管においてeotaxinおよびIL-5が増加していることが明らかとなった。これら因子を産生する細胞および好酸球増加の生理的意義について検討している。27年度に見出している免疫学的異常についての解析を進めるとともに本課題の大きなテーマである4次元空間における神経・免疫・上皮・腸内細菌のクロストークについて分子レベルで解明する。これらのイメージングについては腸管透明化法を開発して進めているが、野生型を用いて抗体による染色まで可能になった。今後KOマウスを用いて神経・免疫系の相互作用現場をさらにイメージングで明らかにする。28年度が最終年度であるため、記入しない。
チオヒダントインの機能性と構造の関連および調理・加工への応用に関する基礎的研究

本研究は,食品成分であるチオヒダントインの機能性と化学構造との関連,調理加工への応用をふまえたチオヒダントインの安定性を解明することを目的とした。チオヒダントインは,薬物代謝酵素活性阻害,リパーゼ活性阻害,血圧降下作用を有し,アミノ酸の側鎖構造に由来する部分構造により活性に違いがあることが明らかになった。また,アミノ酸の側鎖構造に由来する部分構造が同じであるとき,イソチオシアナート由来の部分構造の疎水性が活性の強さに影響を与えることが示された。各種pH条件下での安定性を検討した結果,チオヒダントインはpH35の酸性領域において安定であることが示された。本研究は,申請者がこれまでに行ってきた研究をもとに,食品成分であるチオヒダントインの生理活性と化学構造との関連を明らかにし,チオヒダントインの持つ機能性を食品の調理や加工に応用するための基礎的データを得ることを目的としている。前年度に引き続き,食品中に見いだされるイソチオシアナート(アリルイソチオシアナート,3-ブテニルイソチオシアナート,4-メチルチオ-3-ブテニルイソチオシアナート)と各種アミノ酸から調製したチオヒダントイン(ATH-a.a,3BTH-a.a,MTBTH-a.a)を用いて,抗変異原性,血圧降下作用,血中トリグリセライドの上昇抑制作用,抗酸化作用の面から検討を行っている。現在までに確認されたことは以下の通りである。1)これまでの研究で,チオヒダントインの抗変異原性作用機構が変異原の代謝活性化酵素(CYPIA)の阻害であることが明らかになっていることから,この酵素反応に特異的な基質を用いて抗変異原作用機構を検討した。その結果,チオヒダントインはCYPIAの活性を阻害することが確認され,同じアミノ酸由来の3種のチオヒダントインを比較すると,阻害活性はATH-a.a<3BTH-a.a<MTBTH-a.aとなり,イソチオシアナートの側鎖構造に由来する部分の疎水性が酵素阻害活性に影響することが示された。2)血圧降下作用を検討するためACE活性阻害試験を行った。前年度に行った吸光度変化を観察する方法では結果の分かりづらいものがあったことから,今回HPLC分析による検討を試みた。現在も引き続き検討を行っているが,ATH-Hisに阻害活性が認められている。これらの生理活性と化学構造との関連について,引き続き検討していく予定である。本研究は,これまでに得た知見をもとに,チオヒダントインの機能性を化学構造の面から明らかにすることに加え,調理・加工への応用をふまえた各種条件下での安定性に関する基礎的データを得ることを目的としている。前年度に引き続き,食品中に見いだされるイソチオシアナート(アリルイソチオシアナート,3-ブテニルイソチオシアナート,4-メチルチオ-3-ブテニルイソチオシアナート)と各種アミノ酸から調製したチオヒダントイン(ATH-a.a,3BTH-a.a,MTBTH-a.a)を用いて,以下の結果を得た。1)チオヒダントインの抗変異原性作用機構が変異原の代謝活性化酵素(CYP1A)の阻害であることが明らかになっていることから,この酵素反応に特異的な基質を用いて検討した。その結果,中性アミノ酸,芳香族アミノ酸に由来するチオヒダントインにCYP1Aの活性阻害が確認された。同じアミノ酸由来の3種のチオヒダントインを比較すると,阻害活性はATH-a.a<3BTH-a.a<MTBTH-a.aとなり,イソチオシアナートの側鎖構造に由来する部分の疎水性が酵素阻害活性に影響することが示された。一方,酸性アミノ酸や塩基性アミノ酸に由来するチオヒダントインは阻害活性を示さなかった。HPLC分析により検討したところ,ATH-Hisに阻害活性が認められた。これ以外のチオヒダントインには活性が認められなかった。3)各種pH条件下におけるチオヒダントインの安定性について検討するため,DMSOに溶解したチオヒダントインを各種pHの緩衝液と混合して4°Cで静置し,経時的にHPLC分析を行って残存量を調べた(240時間)。その結果,pH35の酸性領域においては240時間後でも90%以上の残存率を示し,pH69では時間経過とともに残存率が低下する傾向が見られた。特にGlu由来のチオヒダントインではその傾向が顕著であった。残存率はアミノ酸の側鎖構造に由来する部分によって異なることが示された。イソチオシアナートに由来する部分構造のちがいによる安定性の比較,各種温度条件下での安定性の解明は今後の課題として残された。
アジア諸国の災害管理・復興に資する法制度構築の提言型学術調査

本研究は、法学・経済学・防災工学他の文理協同型研究連携により、東日本大震災を初め日本の制度課題を軸に、アジアの巨大災害被災地における現地機関との共同で、災害復興の共通課題を抽出する国際的学術調査の取組みであった。インドネシア2004年津波、中国2008年四川地震、ミャンマー2008年サイクロン、ニュージーランド2011年地震、タイ2011年洪水、フィリピン2013年台風ヨランダ、ネパール2015年地震、バングラデシュ2015年サイクロン他の現地調査により、未登記の私権保障等の共通課題を抽出した。成果としてAsian Law in Disaster (Routledge, 2016)他を刊行。本研究は「災害と開発」の問題領域への学際的貢献として、東日本大震災の応急・復興過程の制度的教訓を踏まえ、アジアの減災と被災者保護に資する制度構築の提言を目的とする。とくに被災者の居住・生業の早期再建の基盤をなす私権の保全と公助の関係、災害復興の住民参加手続、司法過疎地における災害紛争の解決制度、国際援助の受入れ基盤の各制度に着眼し、日本とアジアの災害被災地の法学研究者の連携を軸に、国際比較を通じて制度の現状を解明し、解決策を提言する。平成25年度は「早期生活再建(Early Recovery)」を共通テーマとして、主に以下の研究活動を実施した:1平成25年度当初:日本側作業部会が作成した調査項目に対し海外研究協力者の回答;2平成25年5月6月:国内学会・国際学会における海外研究協力者との共同報告・討論(5月法社会学会ミニシンポジウムにて日本・韓国合同報告、6月Law & Society Associationボストン会議にて日本・タイ・インドネシア・フィリピンの合同報告、他);3同8月初旬:神戸大学・岩手大学合同による岩手沿岸被災地調査および研究フォーラム;4同8月:日本・タイ(チュラロンコン大学)合同によるタイ南部パンナー県・プーケット県での2004年インド洋津波被災村落調査および研究会;5同12月:日本・インドネシア(シャクアラ大学)・中国(中国政法大学)合同によるインドネシア・アチェ州での2004年インド洋津波被災村落調査および研究会;6平成26年3月:日本・フィリピン(フィリピン大学)合同によるレイテ島・サマール島での2013年11月台風ヨランダ被災村落調査および研究会;7平成25年12月26年3月:上記の調査成果を踏まえ、国連の国際復興支援機関(IRP)からの依頼により、国連防災会議へ向けたGAR評価報告書を海外研究協力者と共同執筆。本研究は、アジア地域で新たに浮上する「災害と開発」の問題領域において、日本の災害対応で蓄積された経験と教訓を踏まえた国際制度比較を通じ、減災と被災者保護に資する制度構築の選択肢を考察し提言を行うことを目的とし、日本とアジアの災害被災地の法学研究者の連携を軸に、アジア防災論、防災工学、行政専門家等を交えた学際的研究グループを組織し国際研究連携を推進中である。阪神淡路大震災復興20年に当たる平成26年度はとくに「復興計画における被災者コミュニティの参加型手続保障」をテーマとして、東日本大震災被災地における復興調査、および海外被災地の大学と連携した共同調査の継続に力点を置きつつ、国際シンポジウムの開催や学会報告を積極的に実施した。とくに平成26年5月法社会学会におけるミニシンポジウム、同年7月神戸ワークショップにおけるフィリピン大学・中国政法大学の研究者招聘、同年8月に神戸大学・岩手大学合同による東北被災地合同調査・岩手大学地域防災フォーラムの開催、同年8月の中国四川大学との2008年四川大地震被災地共同調査、同年10月日本災害復興学会研究大会におけるセッション報告、同10月のインドネシア・シャクアラ大学におけるアチェ復興10年セミナー参加、同年11月国際開発学会研究大会におけるセッション報告、同年11月平成27年1月にかけての神戸大学・岩手大学・東北大学連携による東北被災地アンケート調査(3千通配布)、平成27年1月の阪神淡路大震災20年記念国際シンポジウムおよび徳島大学南海トラフ地震対策事業との連携にてインドネシア・ニュージーランド・トルコの研究者招聘、平成27年3月の国連世界防災会議(仙台)における被災大学連携パブリック・フォーラムの共同開催、などの研究調査・報告機会を積極的に展開した。また以上の学会報告・シンポジウム等における報告論文をもとに洋書刊行へ向け準備中である。本研究はアジア地域で浮上する「災害と開発」の問題領域において、日本の制度経験を踏まえた国際比較の見地から、減災・被災者支援に資する制度構築の選択肢を提言する目的を有する。平成25年度から開始した4年間の研究計画において、第三年度に当たる平成27年度の研究実績としては、第一に、前年までに海外研究協力者との合同で実施してきた海外現地調査(スマトラ津波のアチェ、フィリピン台風ヨランダのタクロバン、四川地震の北川他)の継続展開の趣旨で、ミャンマー調査(2008年サイクロン・ナルギス)を実施し、ミャンマー内務省・社会福祉災害救助省・エラワディ州政府の協力のもと、エラワディ州の被災村落4地域における復興状況の聴取り調査を実施し、とくに安全対策面で住民が今なお抱える問題処理をめぐる行政ガバナンス構造・紛争処理制度に関し成果を得た。第二に、当面の研究成果を国際学会に還元する趣旨で、米国法社会学会シアトル会議(2015年5月)、東アジア法社会学会(2015年8月)において、本科研関係者主催のセッションを企画・実施した。

第三に、当面の研究成果を被災地・被災者に還元する試みとして、岩手大学との連携による市民フォーラム(2015年8月)、岩手県・宮城県沿岸被災地における一連の被災住民向けセミナー(2015年78月、9月、11月)を実施した。第四に、研究成果を踏まえた図書(和書2件・洋書1件)の発刊準備を進めた。当面の研究成果の学会報告・出版準備・住民還元セミナー等の面は予定以上に順調に進んだ。しかしミャンマーにおける海外合同調査は同国の政治情勢の関係から当初予定よりも遅れ(年度半ばの実施予定であったが年度末に実施)、その成果とりまとめが若干後ろ倒しになっている。本研究は、文理融合型の国際比較アプローチにより、新たに勃興する「災害と開発」の問題領域への貢献として、東日本大震災の応急・復興過程の制度面の教訓に基づき、アジアにおける減災と被災者保護に資する制度構築の提言を目的とする。2016年度は、法学・経済学・工学系の文理融合チームにより、6月に米国ニューオーリンズ・カトリーナ復興調査、8月にネパール地震調査、2017年3月にバングラデシュ南部サイクロン被災地調査を実施し、現地の研究協力機関(チュレーン大学法学部、トリブバン大学工学部、ダッカ大学災害管理・脆弱性研究所他)との連携を深め共同調査や研究交流を深めた。研究成果として、アジア諸国の災害復興における公助・国際的支援の実務が住宅現物支給から現金支給・生活再建へと射程を広げる傾向が明らかにされた反面、安全と生活再建のトレードオフ、支援の偏在・公平性の問題が解決を見ず、公助の射程をめぐる理論化が一層の課題であることが浮上した。本研究は、法学・経済学・防災工学他の文理協同型研究連携により、東日本大震災を初め日本の制度課題を軸に、アジアの巨大災害被災地における現地機関との共同で、災害復興の共通課題を抽出する国際的学術調査の取組みであった。インドネシア2004年津波、中国2008年四川地震、ミャンマー2008年サイクロン、ニュージーランド2011年地震、タイ2011年洪水、フィリピン2013年台風ヨランダ、ネパール2015年地震、バングラデシュ2015年サイクロン他の現地調査により、未登記の私権保障等の共通課題を抽出した。成果としてAsian Law in Disaster (Routledge, 2016)他を刊行。阪神淡路大震災20年、国連世界防災会議の一大イベントが重なった平成26年度は、海外研究協力者との連携が当初想定以上に深化し、平成26年7月神戸ワークショップにおけるフィリピン大学・中国政法大学の研究者招聘、同年8月の中国四川大学との2008年四川大地震被災地共同調査、同10月のインドネシア・シャクアラ大学におけるアチェ復興10年セミナー、平成27年1月の阪神淡路大震災20年記念国際シンポジウムにおけるインドネシア・ニュージーランド・トルコの研究者招聘、平成27年3月の国連世界防災会議(仙台)における被災大学連携パブリック・フォーラムの共同開催時におけるインドネシア・シャクアラ大学、ニュージーランド・カンタベリー大学、英国コベントリー大学の研究者招聘などの交流実績を蓄積し、その成果として洋書の刊行計画を進めることができた。平成28年度は4年間の研究計画の最終年度であり、一連の海外合同調査を完結するとともに、国際学会(米国ニューオーリンズ)で報告を行うとともに、比較研究の成果をとりまとめ、年度中の洋書出版(Routledge社)とシンポジウム実施を目標としている。
POMCの細胞内プロセッシングと輸送系に関する免疫電子顕微鏡的研究

下垂体前葉のACTH細胞で合成されるペプチドは中間部のMSH細胞と同様に、プロオピオメラノコルチン(POMC)と呼ばれる共通の前駆体ホルモンの細胞内プロセッシングにより形成される。前駆体POMCが細胞内のどの部位でプロセッシングを受け、いかなる機序で細胞表面へ輸送されるかを、前葉のACTH細胞と中間部のMSH細胞を比較しつつ、凍結超薄切片を用いた免疫電顕法により解明した。1.前駆体POMCの細胞内局在を明らかにするために、ACTH-βLPH間の切断部位のペプチドを合成し、これに対する抗体を作製した。この抗体(ST-1)はImmunoprecipitation法や抗体の吸収実験によりPOMCに特異的な抗体であることが証明された。2.ラット下垂体をST-1抗体で免疫染色すると、中間部のMSH細胞では、細胞質のゴルジ装置のゴルジ野のみが特異的に染色された。一方、前葉ではこの抗体で染色される細胞は抗ACTH血清で免疫染色されるACTH細胞と全て一致した。しかし染色される細胞の数は全ACTH細胞よりも少なく、しかも細胞質全体が均一に染色された。この染色性は明らかに中間部のそれと異なっていた。3.凍結超薄切片の金コロイド法による免疫電顕の結果は、MSH細胞では粗面小胞体内腔やゴルジ装置の槽内に抗ST-1に対する免疫陽性反応が見られ、またゴルジ装置附近の未熟果粒に強い反応が見られた。しかし成熟果粒は反応しなかった。抗ACTHで反応させると、成熟果粒が強く反応するが、未熟果粒の反応は弱かった。抗α-MSHは未熟果粒には全く反応せず、成熟果粒のみ反応した。POMCのプロセッシングはゴルジ装置から未熟果粒へ転送される過程で行われていることが示された。また前葉のACTH細胞では、抗ST-1は成熟果粒にも強く反応し、POMCにおけるACTH-βLPH間の切断の起こる場はACTH細胞とMSH細胞で異なることが示唆された。ゴルジ装置の膜タンパク質に対する抗体が得られたが、抗体の特異性,免疫細胞化学への応用は今後の課題である。下垂体前葉のACTH細胞で生成されるペプチドは中間部のMSH細胞と同様に、プロオピオメラノコルチン(POMC)と呼ばれている共通な前駆体ホルモンの細胞内プロセッシングにより形成される。生化学的な研究によれば、この切断は細胞内プロテアーゼの働きにより、POMC内の2個の塩基性のアミノ酸から成る部位(Lys-Arg、Arg-Lys、Arg-Arg)で行われる。光顕免疫組織化学的に抗ST-1血清は中間部のMSH細胞ではゴルジ装置の領域のみを染めるが、前葉のACTH細胞に対しては、その一部の細胞のみを染め、しかも細胞質周辺あるいは全体を染める。一方、ACTH、α-MSH、β-LPH、β-endorphinに対する抗血清はMSH細胞では細胞質全体を染め、ACTH細胞では細胞質周辺あるいは全体を染める。凍結超薄切片の金コロイド法による免疫電顕所見では、MSH細胞では粗面小胞体内腔やゴルジ装置の槽内に抗ST-1に対する反応が見られ、またゴルジ装置付近の未熟な分泌果粒に強い反応が見られた。

しかし未熟分泌果粒は反応しない。前駆体ホルモンであるPOMCは未熟分泌果粒には存在するが、果粒が成熟すると消失することを示している。抗ACTHで反応させると、成熟分泌果粒は強く反応するが、成熟分泌果粒の反応は弱い。抗α-MSHは未熟分泌果粒には全く反応せず、成熟分泌果粒のみ反応する。前葉のACTH細胞では、抗ST-1は成熟果粒にも強く反応し、POMCにおけるACTH-βLPAの切断はACTH細胞とMSH細胞で異なることを示唆している。副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)やメラニン細胞刺激ホルモン(α-MSH)は腺性下垂体の細胞内において、共通の前駆体プロオピオメラノコルチン(POMC)のプロセッシングにより生成される。下垂体前葉では、ほとんど全部のPOMCがACTHまでプロセッシングを進めるが、少数のPOMC細胞ではさらにプロセッシングが進行してα-MSHを産生する。中間部の細胞ではα-MSHが最終産物である。これらのホルモンの前駆体が細胞内のどの部位でプロセッシンを受け、いかなる機序で細胞表面へ輸送されるかを、前葉のACTH細胞と中間部のMSH細胞を比較しつつ、凍結超薄切へを用いた免疫電顕法により解明した。1.前駆体POMCの細胞内局在を明らかにするために、POMCの切断される部分のペプチドを合成し、これに対する抵抗を作製した。この抗体(ST-1)はImmunoprecipitation法や抗体の抗原による吸収実験によりPOMCに特異的な抗体であることが証明された。2.ラット下垂体をST-1抗体で免疫染色すると、中間部のMSH細胞では、細胞質のゴルジ装置のゴルジ野のみが特異的に染色されることが明らかになった。一方、前葉ではこの抗体で染色される細胞は抗ACTH血清で免疫染色されるACTH細胞と全て一致した。しかし染色される細胞の数は全ACTH細胞よりも少なく、しかも細胞質全体が均一に染色された。この染色性は明らかに中間部のそれと異なっていた。3.凍結超薄切片を用いた免疫電顕法により、ST-1抗体で認識される部位と抗ACTH血清及び抗α-MSH血清で認識される部位を比較した。ラット中間部のMSH細胞ではST-1抗体はゴルジ装置の嚢状構造及び未熟な果粒を染めた。一方抗ACTH血清及び抗α-MSH血清は成熟した果粒のみを染めた。POMCのプロセッシングはゴルジ装置から未熟な分泌果粒へ転送される過程で行われていることを示唆している。ゴルジ装置の膜タンパク質に対する抗体が得られたが、抗体の特異性、免疫細胞化学への応用は今後の課題である。
多発性嚢胞腎の分子病態の解析と治療の開発

Pkd^<-/->マウスにおいて、腎嚢胞形成に関する遺伝子群を包括的に解析する目的で腎嚢胞形成前の胎生14.5日における、野生型およびPkd^<-/->マウスの胎児腎からmRNAを抽出し、約3,000の遺伝子を含むDNAチップで発現遺伝子を検討した。野生型及びPkd^<-/->マウスの胎児腎で3倍以上mRNAの発現が異なった遺伝子は23みられた。Pkd^<-/->マウスで増加していた遺伝子にはPOLD1(DNA polymerase delta catalytic subunit-1)が認められた。Pkd^<-/->マウスで減少していた遺伝子では、apoptosis driving genesとしてのcaspase 1、7、11およびIL-1β、Trancscription factorsであるGATA2、Lbx 1、cell cycle related genesであるjun D1が認められた。以上の結果から腎嚢胞形成には、適切なアポトーシス装置が作動していないこと、細胞周期回転の亢進が関与していることが示唆された。マウスPkd1遺伝子ホモ欠損マウスは心臓の総動脈管形成異常および腎嚢胞の形成を認め、著しい浮腫、出血、羊水過多を生じ、胎生致死であった。心臓ではc-MYC, beta-cateninの蛋白量の低下が見られ、心臓神経堤細胞機能にpolycystin1がWnt情報伝達系を介し関与していることが示唆された。腎においては、嚢胞は成熟尿細管に発生し、それに伴いE-cadherin, PECAM-1の細胞膜局在異常と蛋白量の低下が見られた。またチロシンリン酸化受容体に関与する分子であるGab1の恒常的なチロシンリン酸化の亢進が生じていた。ヘテロマウスでは血管内皮機能異常が30週齢から見られNOx産生量が低下していた。以上の結果からPKD1は発生においては標的臓器においてWntおよびadherens junsctionの形成に関与し、またヘテロ欠失は動脈の脆弱性に関与することが示唆された。Pkd1ノックアウトマウスはADPKDの病態の解析と治療創薬に重要なモデルであることが認識された。常染色体侵性遺伝嚢胞腎(ADPKD)は腎嚢胞に加え、肝嚢胞、動脈瘤、心弁膜異常、大腸憩室、高血圧など多臓器に病変が出現する。また血管内皮機能異常も指摘されている。ADPKD症例の85%はPKD1の異常により発症することがあきらかになっている。PKD1遺伝子産物polycystin1の機能を解析するために、われわれはマウスPkd1遺伝子を129/svマウスゲノムDNAライブラリーよりクローニングし、エクソン2_<-σ>を欠失するターゲッティングベクターを作成、ES細胞に導入、選択し、キメラマウスを作成した。キメラマウスの交配により得られた遺伝子ホモ欠損マウスは心臓の総動脈管形成異常および腎嚢胞の形成を認め、著しい浮腫、出血、羊水過多を生じ、胎生致死であった。
トルコ人移民と出身国とのネットワーク構築に関する文化人類学的研究

本研究は、ヨーロッパ、おもにドイツにおけるトルコ人移民労働者を対象とし、彼らの出身地であるトルコの農村とのネットワーク構築に関する考察を通して、トルコ移民たちと出身国の農村に残った者たち相互の生活戦略を文化人類学的に探究することを目的とした。移民労働者の出身地の村とのネットワークは、家族・親族関係を通して出身地の村から結婚相手を見つけることによってより堅固な絆を構築し、ネットワーク構築は移民先と村側両方から働きかけが行なわれる双方向的な営みである。今後は社会変化のなかで移民や村人の生活戦略がどのような影響を受けるかに注目していきたい。本研究は、ヨーロッパ、おもにドイツにおけるトルコ人移民労働者を対象とし、彼らの出身地であるトルコの農村とのネットワーク構築に関する考察を通して、トルコ移民たちと出身国の農村に残った者たち相互の生活戦略を文化人類学的に探究することを目的とする。本研究の特徴は、すでに文化人類学的調査を行なったトルコ共和国西黒海地方M村を基点に、ドイツへの移民労働をめぐる諸現象を動態的に検討することにある。ネットワークの担い手として、ドイツへの移民のみならずトルコのM村に残った人々にも注目することによって総体的(ホリスティック)な視点をもった文化人類学的調査となる。初年度である21年度には、トルコ側の調査地であるM村を再訪し、M村に住む元ドイツへの移民やM村に残った親族に対する聞き取り調査を行なった。M村自体は過疎化が進んでいるが、ドイツへの移民は退職後M村に新たに家屋を建築し、村における生活を復活させている。しかし彼らは村に完全に定住したわけではなく、ドイツとの往復生活も続けていることが分かり、ドイツでの調査の必要性を再認識した。また、本研究にとって重要なドイツ語文献2冊を全文日本語訳して、研究報告書第1集・第2集としてまとめた。これらの文献は、トルコの農村誌と、その農村からドイツへの移民となった5人の人物を追った移民誌である。筆者の研究方法論に重なる貴重な資料であり、移民状況を比較した論考を次年度執筆する予定である。初年度の昨年21年度にトルコ側の調査地であるM村を再訪して得た情報から、今年度22年度にはM村出身者の住むドイツ、エッセンにおいてネットワーク構築に関する聞き取り調査を行なった。調査を断食月に遂行したので、ドイツにおける断食月の状況を同時に調査することができた。ネットワーク構築に関する成果として、ドイツへの移民に対するM村在住者の眼差しとドイツへの移民であるM村出身者のドイツへの眼差しの差異に注目した「トルコ人のドイツへの移民」(『中東・北アフリカのディアスポラ』明石書店)を2010年5月に、村とドイツの中間地点である町に焦点をあてた「トルコ-村と町とドイツと」(『西アジア』朝倉書店)を同年9月に、ドイツ、ドルトムント市のM村出身者について行なった調査報告「ドイツに再現されるトルコの村-ドイツ、ドルトムント市におけるトルコ人移民調査に関するフィールド日記」(『貿易風』印刷中)をそれぞれ出版した。またこれまでの代表者の研究で重要な視点であったジェンダー研究の成果として、2010年10月にトルコ、チャナッカレ・オンセキズ大学で開催された国際シンポジウムにおいて、トルコと日本の女性教育と社会発展に関する発表を招待講師としてトルコ語で行なった。最終年度である23年度にはトルコ側の調査地であるM村を再訪した。23年度の8月30日から9月1日までがイスラームの大祭である断食祭にあたっており、ドイツに住む移民たちの多くが夏季休暇を利用してトルコのM村に戻ってきていた。また9月2日には第2年度である22年度にドイツで調査したM村出身者の弟の婚約式が行われ、参加することができた。中心的な情報提供者の親族関係、ドイツと出身村のネットワークに関して、重要な情報が得られた。今年度の業績として、第2年度に行なったドイツでの調査において明らかになった、ドイツで再現されるトルコの村の状況を描いた論文を出版した。また第2年度に招待講演において発表したトルコの女性と教育に関する日本との比較分析を収録した著書が出版された。
マイクロサテライト不安定性を惹起する環境・遺伝要因の探索

ミスマッチ修復(MMR)遺伝子の欠損は大腸がんが多発する遺伝性疾患リンチ症候群の原因となり、患者ではマイクロサテライト配列の不安定性(MSI)が観察される。ヒト腫瘍で検出されるMSIには、1ないし数個のリピート単位の欠失・挿入が見られるAタイプと、新しいアリルが出現したかのような大きな変化を伴うBタイプの質的に異なる2つのモードが存在する。AcGFPのORFとmCherryのORFをD13S175のCAリピート・停止コドンカセットを挿入し、BタイプのMSIが生じるとAcGFP-mCherry融合タンパク質が発現するベクターの構築を行い、MMR欠損ヒト細胞を用いてその有用性の検討を進めている。ヒトゲノム全体に多数散在しているマイクロサテライト配列は、多くのがん細胞で不安定化していることが報告されている。家族性大腸がんの解析からマイクロサテライト配列の不安定性(MSI)にはミスマッチ修復異常が関連していることが明らかにされたが、それ以外の要因も関わっていると考えられるデータがあるにもかかわらず、他の要因は明らかにはされていない。平成28年度は、MSIが発生する要因を解明するために、MSIを簡便に検出する新しい実験系の構築のためにベクターの作製を行った。AcGFPのORFとmCherryのORFをD13S175のCAリピートでつなぎ、Type A MSIが生じるとAcGFP-mCherry融合タンパク質が発現するTypeAベクターを作製した。また、AcGFPのORFとmCherryのORFを繋ぐスペーサー領域に、D13S175のCAリピートに停止コドンを挿入して作製したCAリピート・停止コドンカセットを挿入し、停止コドンがなくなるようなType BMSIが生じるとAcGFP-mCherry融合タンパク質が発現でき、Type A MSIが生じた場合はAcGFPが発現してもmCherryは発現しないTypeBベクターの作製を行っている。MSIはDNAポリメラーゼの複製エラーで生じたマイクロサテライト配列内での欠失・挿入がミスマッチ修復系の欠損により修復されないで残り、次の複製でリピート数の変化が固定されて生じるとされている。そこで、校正機能を失ったDNAポリメラーゼを持つ細胞を作製して複製エラーを亢進させ、Type A MSIとType B MSIの発生頻度を検討するために、CRISPR/Cas9を用いたゲノム編集により3'-5'エキソヌクレアーゼ・ドメインにアミノ酸置換変異を導入したHeLa細胞を作製した。蛍光タンパク質の種類は変えたが、当初の計画通りMSIを簡便に検出する新しい実験系の構築のためにベクターの作製を行った。Type AMSIが生じるとAcGFP-mCherry融合タンパク質が発現するTypeAベクターを作製し、HeLaMSH2欠損細胞を用いて有用性の確認を行っている。また、AcGFPのORFとmCherryのORFをつなぐスペーサー領域に、CAリピート・停止コドンカセットを挿入し、Type B MSIが生じるとAcGFP-mCherry融合タンパク質の発現が期待できるTypeBベクターの作製を進めている。MSH2完全欠損細胞だけでなく、MSIが診断基準となっているリンチ症候群で認められている変異を導入したヒト細胞株を樹立し、解析を進めている。さらに、複製エラーの亢進とType A、Type B MSIの発生との関連を検討するために、CRISPR/Cas9を用いたゲノム編集によりDNAポリメラーゼδの3'-5'エキソヌクレアーゼ・ドメインにアミノ酸置換変異を導入したHeLa細胞を作製している。ミスマッチ修復(MMR)遺伝子の欠損は大腸がんや子宮体がんが多発する遺伝性疾患リンチ症候群の原因となり、患者の大腸がんではマイクロサテライト配列の不安定性(MSI)が観察される。ヒト腫瘍で検出されるMSIには、1ないし数個のリピート単位の欠失・挿入が見られるタイプ(A型という)と、新しいアリルが出現したかのような大きな変化を伴う(B型という)、質的に異なる2つのモードが存在する。MMR遺伝子KOマウス細胞ではA型のみが検出されることから、B型MSIにはMMR以外に未同定の遺伝因子/環境要因が関わっていると考えられる。本研究では、B型MSIの要因を簡便に検出する新しい実験系の構築のために、AcGFPのORFとmCherryのORFをD13S175のCAリピート・停止コドンカセットを挿入し、B型MSIが生じるとAcGFP-mCherry融合タンパク質が発現するベクターの構築を行ったが、現在もMMR欠損ヒト細胞を用いてその有用性の検討を継続している最中である。従って、本研究ではMSI解析法として従来の方法を使用した。CRISPR/Cas9を用いて樹立したMSH2欠損ヒト細胞はMsh2遺伝子KOマウス細胞同様に、A型のみが検出された。従って、ヒト細胞でもB型MSIにはMMR以外に未同定の遺伝因子/環境要因が関わっていることが確認できた。自然突然変異の主因である酸化ストレスを長期間付与したMSH2欠損ヒト細胞でも、これまでのところB型MSIは観察されていない。さらに、リンチ症候群で検出される変異を導入したヒト細胞株を樹立し、MSI解析を進めているが、現時点ではB型MSIは観察されていない。本研究遂行中に、Msh2遺伝子KOマウス細胞の高頻度突然変異生成とMSIの出現には、二本鎖DNA切断の修復にも関与しているDNAポリメラーゼが関わっていることを見出した(現在、投稿中)。ミスマッチ修復(MMR)遺伝子の

欠損は大腸がんが多発する遺伝性疾患リンチ症候群の原因となり、患者ではマイクロサテライト配列の不安定性(MSI)が観察される。ヒト腫瘍で検出されるMSIには、1ないし数個のリピート単位の欠失・挿入が見られるAタイプと、新しいアリルが出現したかのような大きな変化を伴うBタイプの質的に異なる2つのモードが存在する。AcGFPのORFとmCherryのORFをD13S175のCAリピート・停止コドンカセットを挿入し、BタイプのMSIが生じるとAcGFP-mCherry融合タンパク質が発現するベクターの構築を行い、MMR欠損ヒト細胞を用いてその有用性の検討を進めている。当初の計画通り、(1)新規検出系を導入した細胞株を樹立し、安定性に関しての検討を行う。(2)新規検出系を導入した細胞を化学物質などで処理してMSIを誘導するものの検索を行う。(3)siRNAライブラリーを用いて、その欠損がMSIを誘導する遺伝子の網羅的検索を行う。分子遺伝学・放射線生物学物品費に関しては、研究室でストックしていた消耗品を使用することで、年度内での購入分の節約ができた。また、旅費に関しては、他の資金で学術集会での発表ができたので、当初予算のほぼ半額ですんだ。繰越した59万円を人件費・謝金として活用し、変異解析を担当する研究補助員を雇用して集中して効率的に解析を進める予定。
アンギオテンシンⅡの味覚修飾における分子基盤の解明

野生型(C57BL6J;B6)マウスを用い、アンギオテンシンII(AngII)腹腔内単独投与、あるいはAngIIとエンドカンナビノイド(eCBs)受容体阻害薬AM251の腹腔内投与下における単一味溶液による繰り返し刺激の鼓索神経応答に対する影響を調べた。結果、AngIIを単独投与した群では甘味応答の経時的な増強効果が生じるが、AM251を追加投与した群ではこの増強作用が消失した。またこのAngIIによる効果は、AngIIの受容体(AngII type1受容体;AT1)阻害薬であるCV11974の前処理により消失することがわかった。さらに人口甘味料、二糖類では2時間以上にわたりこのAngIIによる増強作用が認められたが、単糖類では一時間程度で応答がベースレベルに回復することがわかった。生理食塩水腹腔内投与下での単一味溶液を用いた繰り返し刺激では、AngII投与群に較べれば弱いものも、人口甘味料などでは経時的な甘味応答の増強が生じた。一方、単糖類や他の味溶液(塩味、苦味、酸味、旨味)ではこの効果は認められなかった。甘味受容体構成分子であるT1R3をノックアウトしたマウスや、AM251投与B6マウスではこの甘味増強作用は消失した。過去の報告から、甘味受容経路には甘味受容体T1R2+T1R3(主に人口甘味料、二糖類を受容)と、T1R非依存性の受容経路(グルコーストランスポーターなど;単糖類を受容)が存在する可能性が示唆されている。G蛋白質共役型受容体の活性化によりその下流でeCBsの合成が生じること、そして甘味受容細胞にこのeCBs合成に必要な酵素が発現していることなどから、T1R2+T1R3やAT1の活性化によりeCBsの生合成が生じる可能性が考えられる。そのため人口甘味料や二糖類に対し、単糖類では繰り返し刺激やAngIIの投与で効果の違いが生じた可能性が示唆された。27年度が最終年度であるため、記入しない。近年の研究で、我々は体内のNaバランス維持に働くアンギオテンシンIIが神経応答レベルでアミロライド感受性NaチャネルであるENaCに作用し塩味感受性を抑制、甘味感受性を促進するというデータを得ている。当研究室ではアンギオテンシンII腹腔内投与による塩味応答変化の解析はある程度進んでいる。その一方で甘味応答のメカニズムは不明であることから、その候補としてエンドカンナビノイドのレセプターであるCB1を介した作用に注目し実験を行った。CB1ノックアウトマウス(CB1-KOマウス)を用いた鼓索神経応答解析の結果より、野生型マウス(C57BL6Jマウス: B6マウス)でアンギォテンシンIIの腹腔内投与により認められた甘味増強効果が、CB1-KOマウスでは消失することが認められた。次に薬理学的にアンギオテンシンIIによる甘味増強効果へのCB1レセプターの関与を確かめるために、B6マウスを用い、アンギオテンシンII腹腔内投与後20分でCB1アンタゴニストであるAM251を腹腔内投与した群と、アンギオテンシンII投与20分後に生理食塩水を投与した群、生理食塩水投与20分後に再度生理食塩水を投与したコントロール群とで鼓索神経応答解析を行った。その結果、コントロール群に比べ、アンギオテンシンIIを投与した2群では甘味応答の増強が認められたが、AM251をアンギオテンシンII投与後20分で腹腔内投与した群では、アンギオテンシンIIによる増強作用の抑制が認められた。アンギオテンシンIIの投与で認められる塩味応答の抑制効果は、AM251による影響を受けなかった。また次に、アンギオテンシンIIの受容体であるATIRのアンタゴニストであるCV11974腹腔内投与下での、アンギオテンシンII腹腔内投与群と生理食塩水腹腔内投与群(コントロール)の鼓索神経応答の変化を比較した。現在、甘味物質であるスクロース及びSC45647で確認を行っているが、CV11974腹腔内投与群では、コントロール群で認められるアンギオテンシンIIによる甘味の増強効果の消失が認められた。近年の研究で、我々は体内のNaバランス維持に働くアンギオテンシンII(AngII)が神経応答レベルでアミロライド感受性NaチャネルであるENaCに作用し塩味感受性を抑制、甘味感受性を促進するというデータを得ている。当研究室ではAngII腹腔内投与による塩味応答変化の解析はある程度進んでいる。その一方で甘味応答のメカニズムは不明であることから、その候補としてエンドカンナビノイド(eCB)のレセプターであるCB1を介した作用に注目し実験を行った。CB1ノックアウトマウス(CB1-KOマウス)を用いた鼓索神経応答解析の結果や、野生型マウス(C57BL6Jマウス:B6マウス)を用いたAngII腹腔内投与後20分でCB1アンタゴニストであるAM251を腹腔内投与した群と、AngII投与20分後に生理食塩水を投与した群、生理食塩水投与20分後に再度生理食塩水を投与したコントロール群とで鼓索神経応答解析の結果から、AngIIによる甘味の増強にはCB1が関与していることがわかった。また、AngIIの受容体であるAT1RのアンタゴニストであるCV11974

腹腔内投与下での、AngII腹腔内投与群と生理食塩水腹腔内投与群(コントロール)の鼓索神経応答の変化を比較では、CV11974腹腔内投与群でAngIIによる甘味の増強効果の消失が認められた。過去の報告からAT1Rの活性化により、その下流でeCBが合成され、CB1のトランス活性化が生じていることが予想される。また鼓索神経応答解析において繰り返しの甘味刺激を行うと経時的な甘味応答の増大が生じることが確認された。甘味受容体T1R2/T1R3もAT1同様、G蛋白質共役型受容体であり、受容体の活性化によりその下流でeCBの合成が進むことにより、CB1のトランス活性化を介した甘味応答の増強が生じていることが考えられる。野生型(C57BL6J;B6)マウスを用い、アンギオテンシンII(AngII)腹腔内単独投与、あるいはAngIIとエンドカンナビノイド(eCBs)受容体阻害薬AM251の腹腔内投与下における単一味溶液による繰り返し刺激の鼓索神経応答に対する影響を調べた。結果、AngIIを単独投与した群では甘味応答の経時的な増強効果が生じるが、AM251を追加投与した群ではこの増強作用が消失した。またこのAngIIによる効果は、AngIIの受容体(AngII type1受容体;AT1)阻害薬であるCV11974の前処理により消失することがわかった。さらに人口甘味料、二糖類では2時間以上にわたりこのAngIIによる増強作用が認められたが、単糖類では一時間程度で応答がベースレベルに回復することがわかった。生理食塩水腹腔内投与下での単一味溶液を用いた繰り返し刺激では、AngII投与群に較べれば弱いものも、人口甘味料などでは経時的な甘味応答の増強が生じた。一方、単糖類や他の味溶液(塩味、苦味、酸味、旨味)ではこの効果は認められなかった。甘味受容体構成分子であるT1R3をノックアウトしたマウスや、AM251投与B6マウスではこの甘味増強作用は消失した。過去の報告から、甘味受容経路には甘味受容体T1R2+T1R3(主に人口甘味料、二糖類を受容)と、T1R非依存性の受容経路(グルコーストランスポーターなど;単糖類を受容)が存在する可能性が示唆されている。G蛋白質共役型受容体の活性化によりその下流でeCBsの合成が生じること、そして甘味受容細胞にこのeCBs合成に必要な酵素が発現していることなどから、T1R2+T1R3やAT1の活性化によりeCBsの生合成が生じる可能性が考えられる。そのため人口甘味料や二糖類に対し、単糖類では繰り返し刺激やAngIIの投与で効果の違いが生じた可能性が示唆された。当初報告した年次計画にあわせ、順調に実験が進んでいるため。27年度が最終年度であるため、記入しない。免疫組織化学的手法を用い、味蕾内でのAT1RとCB1Rの共発現の確認を行う。また甘味の繰り返し刺激による経時的な甘味応答の増大がCB1を介し生じているか確認を行う為、鼓索神経応答解析を用いB6マウスにおけるAM251投与群と生理食塩水投与群、またCB1-KOマウスとB6マウスでの繰り返し刺激による応答変化の比較・検討を行う。アンギオテンシンIIの受容体であるAT1RのアンタゴニストであるCV11974腹腔内投与下での、アンギオテンシンII腹腔内投与群と生理食塩水腹腔内投与群(コントロール)の鼓索神経応答の変化の比較を行う。
ナノ多層膜-ヘテロ磁区誘起構造を用いた極低磁場駆動磁歪素子の開発

1. Fe-Pd,Fe-Ga磁歪超合金と軟磁性Fe-Coのナノ構造多層膜を作製し、その特性を調べた。その結果、10nm/10nmの積層膜の磁歪が100ppmとなり、最もよい結果を示した。磁気弾性力の強い多層の基礎研究として超磁歪Fe-Pd(240nm)と軟磁性Fe-Ga磁歪合金(240nm)を5層重ねた多層膜は、弱磁場200Oeで飽和する軟磁性を示し、Fe-Ga単層膜のより変位が大きく、磁気弾性力の強い磁歪素子となった2.正磁歪Fe-Pd,Fe-Ga(3μm)/基盤Al(50μm)/負磁歪Ni(3μm)のバイモルフ磁歪膜を作製し、交番弱磁場中での振動特性を測定した結果、共振点で長さ20mmの先端は1.4mmに達する大変位を示した。3.磁気弾性力の強いセンサ・アクチュエータ素子、正磁歪を示すFe-GaおよびFe-Pd合金の急冷凝固薄帯(120μm)に負磁歪金属Ni(50μm)をシーム溶接したバイモルフ磁歪複合膜を改良し、500Oe以下の低磁場で遠隔操作するマイクロガスバルブに応用した。試作したマイクロガスバルブのサイズは幅40mm、長さ70mm、厚さ25mmである。直径1mmの穴を通過したArガスは、長さ20mmバイモルフ磁歪素子の先端が磁場により変位し、気道を開閉することにより制御される。4種類の素子設定方法を用いることにより、ガスの差圧下518kPaで50cc/minの流量を、500Oe以下の弱磁場で閉鎖することができた。逆に、磁場により気道を開けることにより、0から16cc/minまでガス量が増加し、微小な流量制御が可能となった。気道の開閉は、磁場印加時から0.2sec以内の短時間に行われ、応答性は速い。結果は、Bremenで開催されるACTUATOR2008で発表予定である。1.本年度は、現有のマグネトロン・スッパター装置を用いて、Fe-30at%PdおよびFe-19at%G磁歪合金と軟磁性合金FeCoのナノ構造多層膜作製の最適条件を見つけた。Fe-30at%Pd(7,10,15nm)/FeCo(10nm)×40層/(ガラス基盤)多層膜は、基盤温度200°C、40Oeの磁場中で蒸着後、300°C、600Oe下で1時間熱処理により磁区が制御され、磁化容易方向が形成された。この多層膜は低磁場100Oeで飽和する軟磁性多層膜であることが判った。しかし、TEM観察の結果、積層された各層の膜厚はほぼ設計通りであるが、基盤上10層以上では、FeCoの結晶化が起こり、Fe-Pd層もその上に結晶化が進行しながら多層膜を形成している様子が観察された。このような結晶化を防ぐためには、より低いAr圧で蒸着を試みる必要がある。