hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
鳥類の発生,組織修復およひ癌転移における細胞接着分子ギセリンの関与とその発現調節

細胞接着は単に細胞と細胞もしくは細胞と細胞外基質を接着させ組織構築の維持を行っているのみではなく、発生期の組織形成さらに癌化、炎症反応、組織再生といったダイナミックな変動にも深く関与している。細胞接着分子は直接的に細胞が外界を認識するアンテナとなり、さらにはその手足となって細胞運動を制御している。このことより、正常組織だけではなく病理組織形成を理解する上で細胞接着分子を研究することは重要であると考えられる。本研究では、鳥類の発生、再生、癌転移における新しい細胞接着分子ギセリンの役割を解析し、次の成果を得た。1)ギセリンは鳥類においてギセリン同士の同種分子間結合能の他にラミニンに属する神経突起伸展因子(neurite outgrowth factor:NOF)との異種分子間結合能も有し、それらが組織形成に重要であることが証明出来た。また、2)ギセリンの発現はNGF,EGF,estrogenを含む外的因子により増強することが明らかとなった。さらに3)ギセリンは再生組織や悪性腫瘍細胞とその転移部位にも強発現することを明らかにした。また、抗ギセリン抗体は卵管癌細胞の腸間膜転移を抑制することが証明された。これらの成果はギセリンが発生だけではなく再生や腫瘍などの病的組織の形成にも関与することを示唆しており、今後、損傷部位にNGF,EGF,estrogenを添加することで、ギセリン発現を増強させ創傷治癒の促進に応用出来るかもしれない。また、抗ギセリン抗体の癌治療への応用も期待できる。さらに、鳥類だけではなく、マウス、ラットを含めた哺乳類におけギセリンの同定も求められる。鳥類の発生期および組織修復過程におけるギセリンの役割を解明するため、以下の項目を検討し、新たなる知見(未発表データを含む)を得た。a)鶏筋胃由来のcDNAを用い、ギセリン遺伝子の上流の同定を試みた。現在、partial cloningを終了しており、今後、想定されるプロモーター部位の機能的領域を解析する予定である。b)神経組織の発生と修復におけるギセリンの役割を検討した。ウズラの網膜発生時に抗ギセリン抗体を注入すると、網膜剥離を引き起こすことが判明した。さらに、先天的網膜剥離ウズラのミュータントでは色素上皮のギセリンが欠損していた。このことより、ギセリンは網膜の発生に不可欠であることが証明された(Neuroscience Lettersに発表した)。また、座骨神経の再生にもギセリンが関与することが判明した(投稿準備中)。今後、様々な増殖因子とギセリンの発現の関係を検討する予定である。また、鶏繊維芽細胞由来の合胞体の形成には核分裂と細胞膜融合が関与することが判明し(Can J Vet Resに発表)、細胞接着と細胞融合に関するギセリンの役割を解析するための基礎データとなった。c)腫瘍におけるギセリンの役割を検討した。様々な腫瘍細胞株におけるギセリンの発現を検討した結果、癌細胞(卵管癌、腎芽腫)に強く発現し、良性の腫瘍や肉腫には発現しないことがわかった(投稿準備中)。今後、転移におけるギセリンの役割を解析する予定である。
既存薬剤の持つ抗血管新生作用による非小細胞肺癌術後化学療法のモデル作成

血管新生抑制活性を示す新規分子Vasohibinの非小細胞肺癌症例における臨床病理学的検討を44例の肺癌手術例に対して施行した.血漿中濃度をWesternblotting法により半定量的に測定し,摘出した肺癌組織の免疫染色(Vasohibin, VEGF, HIF1α)との関係について検討した.Vasohibinは免疫組織学的にCD31陽性細胞に染まり,リンパ管マーカーのPodoplanin陽性細胞に染色されないことからVasohibinは血管内皮細胞に発現していると考えられた.腫瘍中心部と辺縁部のCD31陽性部位の陽性率とVEGF及びHIF1α検出との関連性を検討したところ,VEGF陰性例では陽性率が平均0.44に対し,陽性率では平均0.61と2群間に有意差を認めた.HIF1αについても同様に陰性症例では陽性率は平均0.37に対し,陽性例では平均0.58と2群間に有意差を認めた.組織におけるVEGFとHIF1αの発現の関係をみるとVEGFとHIF1αは44例中30例で一致していた.次に免疫組織内における1mm^2中の平均血管数と陽性率の関係について検討したが,Vasohibinは血管新生のバイオマーカーとして正の相関だけではなく,血管新生のnegative feedback作用があるため1mm^2中の血管数と陽性率には相関は認められなかった.血漿中Vasohibin蛋白の測定で37/44(84%)でVasohibinが検出された.また検出の有無と免疫組織における陽性率との検討では,血漿中検出例では切除肺癌組織中の陽性率0.56に対して,非検出例では0.36と両者に有意差が認められた.以上より,血漿中Vasohibinh量は肺癌組織の発現を反映していることが示唆された.これらの結果から,Vasohibinは非小細胞肺癌の診断マーカーとしての臨床応用が期待される.血管新生抑制活性を示す新規分子Vasohibinの非小細胞肺癌症例における臨床病理学的検討を44例の肺癌手術例に対して施行した.血漿中濃度をWesternblotting法により半定量的に測定し,摘出した肺癌組織の免疫染色(Vasohibin, VEGF, HIF1α)との関係について検討した.Vasohibinは免疫組織学的にCD31陽性細胞に染まり,リンパ管マーカーのPodoplanin陽性細胞に染色されないことからVasohibinは血管内皮細胞に発現していると考えられた.腫瘍中心部と辺縁部のCD31陽性部位の陽性率とVEGF及びHIF1α検出との関連性を検討したところ,VEGF陰性例では陽性率が平均0.44に対し,陽性率では平均0.61と2群間に有意差を認めた.HIF1αについても同様に陰性症例では陽性率は平均0.37に対し,陽性例では平均0.58と2群間に有意差を認めた.組織におけるVEGFとHIF1αの発現の関係をみるとVEGFとHIF1αは44例中30例で一致していた.次に免疫組織内における1mm^2中の平均血管数と陽性率の関係について検討したが,Vasohibinは血管新生のバイオマーカーとして正の相関だけではなく,血管新生のnegative feedback作用があるため1mm^2中の血管数と陽性率には相関は認められなかった.血漿中Vasohibin蛋白の測定で37/44(84%)でVasohibinが検出された.また検出の有無と免疫組織における陽性率との検討では,血漿中検出例では切除肺癌組織中の陽性率0.56に対して,非検出例では0.36と両者に有意差が認められた.以上より,血漿中Vasohibinh量は肺癌組織の発現を反映していることが示唆された.これらの結果から,Vasohibinは非小細胞肺癌の診断マーカーとしての臨床応用が期待される.近年,癌や虚血、炎症などさまざまな病態において血管新生を標的とした治療法の導入に期待が高まってきている。癌や炎症などの病的血管新生では促進、抑制シグナルのバランス異常をきたしていると考えられる。血管新生の制御系としてネガティブフィードバックシステムの存在を推定、血管内皮細胞におけるVEGF標的遺伝子の解析よりその候補遺伝子を見いだし、それをVasohibinと命名した。そのVasohibinの発現は血管内皮細胞に特異的であり、またVEGFの刺激は二型受容体、およびその下流のPKCシグナルを介しVasohibinの発現を誘導することがこれまでの研究で判明している。またVasohibinをLewis肺癌細胞に強制発現させると、肺転移巣が著しく減少したという結果より抗腫癌効果があることが推測されている。以上の結果をもとに非小細胞肺癌組織の病理標本を用いて、血管やリンパ管内皮に対するマーカー、および最近明らかにされた新しい蛋白も含めて、血管新生に関連するとされる種々のマーカーに対して、免疫組織学的検討を進めており,その結果を種々の臨床病理学的因子とも比較する予定である。肺癌の局所進展における栄養血管増生の特徴や、転移に関わる血管新生のメカニズムを明らかすることにより、予後推定や治療選択に関わる血管新生関連因子を見つけ出すことができるものと期待している。血管新生抑制活性を示す新規分子Vasohibinの非小細胞肺癌症例における臨床病理学的検討を44例の肺癌手術例に対して施行した.血漿中濃度をWesternblotting法により半定量的に測定し,摘出した肺癌組織の免疫染色(Vasohibin, VEGF, HIF1α)との関係について検討した.

Vasohibinは免疫組織学的にCD31陽性細胞に染まり,リンパ管マーカーのPodoplanin陽性細胞に染色されないことからVasohibinは血管内皮細胞に発現していると考えられた.腫瘍中心部と辺縁部のCD31陽性部位の陽性率とVEGF及びHIF1α検出との関連性を検討したところ,VEGF陰性例では陽性率が平均0.44に対し,陽性率では平均0.61と2群間に有意差を認めた.HIF1αについても同様に陰性症例では陽性率は平均0.37に対し,陽性例では平均0.58と2群間に有意差を認めた.組織におけるVEGFとHIF1αの発現の関係をみるとVEGFとHIF1αは44例中30例で一致していた.次に免疫組織内における1mm^2中の平均血管数と陽性率の関係について検討したが,Vasohibinは血管新生のバイオマーカーとして正の相関だけではなく,血管新生のnegative feedback作用があるため1mm^2中の血管数と陽性率には相関は認められなかった.血漿中Vasohibin蛋白の測定で37/44(84%)でVasohibinが検出された.また検出の有無と免疫組織における陽性率との検討では,血漿中検出例では切除肺癌組織中の陽性率0,56に対して,非検出例では0.36と両者に有意差が認められた.以上より,血漿中Vasohibinh量は肺癌組織の発現を反映していることが示唆された。これらの結果から,Vasohibinは非小細胞肺癌の診断マーカーとしての臨床応用が期待される.
エピジェネティクス解析とその制御による多面的機能誘導的自家脂肪移植法の確立

脂肪移植治療の問題点として、生着率の低さや、血管新生能や基質分解能・脂肪分化能を十分に発揮できないことなど、即ち移植細胞の多面的機能を制御できない点が挙げられる。この問題を解決する為に、エピジェネティクス修飾制御による脂肪移植法開発と脂肪移植における質と効率の向上を目的に、皮下脂肪組織を用いた細胞機能制御における分子基盤研究とエピジェネティクス操作による最適な細胞調製技術開発を行うことで、革新的脂肪移植治療への応用を目指す。
アプタマーテクノロジーを利用した新規高感度植物ウイルス・ウイロイド診断法の開発

アプタマー選抜の中核技術となるSELEX法には様々な因子が関与するため、ランダムオリゴ配列の長さ、濃度、温度、分離方法などを最適化する必要がある。特異な高次構造を有する自己複製型RNA病原体であるウイロイドを標的とするアプタマーを選抜するためのSELEX法プロトコールの確立を目指し、以下の諸条件を最適化し、アプタマー候補配列の濃縮に成功した。まずビオチン化標的PSTVd分子に結合したssDNAはストレプトアビジンコート磁気ビーズで回収する。市販の数種類の磁気ビーズを試し、ダイナビーズM-270(インビトロジェン社)とダイナビーズC1(インビトロジェン社)を選定し、ダイナビーズT1/M280とマグネスフェアーSA-PMPs(プロメガ社)が相補鎖分離に効果的である結果を得た。次に、SELEX法の結合、洗浄、溶出緩衝液のモル濃度、処理条件、競合実験条件等を検討し、最終的に6.32ピコモルの弱結合コントロールと20塩基、30塩基、40塩基のランダムDNAライブラリーから15ラウンドのSELEX選抜で濃縮したssDNA集団と10倍段階希釈した陽性対照混合液を、62ピコモルの標的PSTVd分子が結合している磁気ビーズに加える実験条件を確立した。因みにこの時の標的分子と結合分子(アプタマー候補分子)の比率は約10:1になる。また、1、5、10ラウンド目のssDNA試料の一部をPCRークローニング後、塩基配列を分析し、さらに、10ラウンド目の試料を次世代シークエンス・アンプリコン解析にかけ、集団内の多様性を分析し、アプタマー候補となりうる配列を濃縮することに成功した。28年度が最終年度であるため、記入しない。標的ウイロイド配列の選抜とランダムオリゴヌクレオチドライブラリーの構築1標的分子の選抜(プライマー設計):30ー100塩基長の標的分子を作成:初年度はまずアプタマー選抜の基となる標的ウイロイド配列をデザインした。危険度の高いジャガイモやせいもウイロイドの種内保存配列、及びポスピウイロイド属共通配列などをバイオインフォマティクスツールを用いて分析、抽出し、ポスピウイロイド属の中央保存領域、左末端領域、及び病原性領域に由来する標的分子を作成する実験系を構築した。2ランダムな塩基配列を有するオリゴヌクレオチドライブラリー創出:ランダムな配列を有するオリゴヌクレオチド(30ー70塩基)を人工合成し、T7RNAポリメラーゼプロモーター配列の下流に連結し、T7RNAポリメラーゼでランダムオリゴヌクレオチドライブラリー(約1015分子種)を転写した。現在1と2を用いてSELEX(セレックス)法による選抜を実施中である。セレックス法によるウイロイド診断用アプタマーの選抜;平成26年に構築したランダムオリゴヌクレオチドライブラリからセレックス法により、標的ウイロイド配列と結合するDNAアプタマー選抜のための実験系を構築した。1様々なウイロイド種から最も実害の大きいジャガイモやせいもウイロイド(PSTVd)を選択し、その全長配列と病原性領域を試験管内で転写するシステムを構築した。240塩基のランダム配列の両側に20塩基ずつのPCR増幅用配列を設計した。この際に、各配列は標的とするPSTVd配列と相同性を持たないように、また、特異な高次構造をとらないように工夫した。3PSTVdの全長分子(180番179番)或いは病原性領域に由来するRNAをビオチン化し、ストレプトアビジンでコートした磁気ビーズに結合させた。4上記3にランダムオリゴヌクレオチドを混合し、室温から60°Cの条件でインキュベートし、即座に洗浄し、磁気ビーズに結合しているPSTVd分子と結合したオリゴヌクレオチドを回収した。5回収したオリゴヌクレオチド分子を上記2のプライマーを用いてPCRで増幅した。この際に、プラス鎖とマイナス鎖を分離(ストランドセパレーション)するために、一方のプライマーにはビオチン或いはジゴキシゲニンを結合させ検討した結果、ビオチンラベルがより効率よくストランドセパレーションの効果を評価できた。6この実験系を用いてセレックス法の予備試験を行い、現時点までに、PSTVd分子と結合する能力を有するオリゴヌクレオチドを効率よく分離、増幅できる実験系であることが確認できた。計画に従って実験を進め、ランダムな配列を有するオリゴヌクレオチドライブラリーから標的であるウイロイドの主要種であるジャガイモやせいもウイロイド(PSTVd)に結合する能力を有するDNAアプタマーを選抜する実験系の構築にほぼ成功した。セレックス法でランダムなオリゴヌクレオチドから標的分子と結合するものを選抜・濃縮する際に最も重要となるアプタマー候補分子の「回収ー再増幅技術」に関して、1片方のDNA鎖をビオチン化すること、2わずか数塩基のサイズの違いで識別・分離することなどの工夫を凝らして克服することができた。以上、今後のセレックス実験のプロトコールがほぼ感染した点で計画通りに進展していると考えている。

市販の数種類の磁気ビーズを試し、ダイナビーズM-270(インビトロジェン社)とダイナビーズC1(インビトロジェン社)を選定し、ダイナビーズT1/M280とマグネスフェアーSA-PMPs(プロメガ社)が相補鎖分離に効果的である結果を得た。次に、SELEX法の結合、洗浄、溶出緩衝液のモル濃度、処理条件、競合実験条件等を検討し、最終的に6.32ピコモルの弱結合コントロールと20塩基、30塩基、40塩基のランダムDNAライブラリーから15ラウンドのSELEX選抜で濃縮したssDNA集団と10倍段階希釈した陽性対照混合液を、62ピコモルの標的PSTVd分子が結合している磁気ビーズに加える実験条件を確立した。因みにこの時の標的分子と結合分子(アプタマー候補分子)の比率は約10:1になる。また、1、5、10ラウンド目のssDNA試料の一部をPCRークローニング後、塩基配列を分析し、さらに、10ラウンド目の試料を次世代シークエンス・アンプリコン解析にかけ、集団内の多様性を分析し、アプタマー候補となりうる配列を濃縮することに成功した。当初の計画通り、ウイロイドを標的とした特異性の高い核酸アプタマーを選抜する研究を開始し、まず、標的となるウイロイドRNAの保存配列と種特異的配列を設計し、人工合成したDNAから試験管内で標的RNAを転写し、純度の高い標的RNAを調製する実験系を確立できた。また、アプタマー選抜の元になる30ー40塩基の合成DNAライブラリーを設計し、それからDNA或いはRNAを調製する実験系を構築することが出来た。現在、ライブラリーと標的分子を用いて、セレックス法による選抜を始めている。すなわち、当初の計画で予定した目標を達成できたため。平成27年度までの研究によって、ウイロイドRNAに結合するDNAアプタマーを選抜するためのセレックス法の実験プロトコールが一定の完成をみた。そこでこれからは、この実験系に基づいて、PSTVdの全長RNA或いは病原性領域に由来するRNAを標的にしてランダムDNAライブラリーからセレックス法によりPSTVd結合能を有するオリゴDNAアプタマーを選抜する実験を本格化させる。セレックス法は「ランダムDNAライブラリーと標的分子の結合ー洗浄(非特異的に結合していDるDNAの除去)ー再増幅による濃縮」の一連の過程を220サイクル繰り返し、数サイクル毎に増幅されたオリゴDNA集団の塩基配列を分析し、どのような配列がどの程度濃縮されてくるかを吟味して、よりPSTVd結合能の高いオリゴDNA分子を選抜する。最終的に得られた分子のPSTVd結合力の強さをランダムなオリゴDNAと競合検定により分析し、PSTVd検出用アプタマー候補分子の特性を論文等にまとめて公表する。28年度が最終年度であるため、記入しない。セレックス法を用いた核酸アプタマーの選抜のための実験系を構築できたので、今後、セレックス法による選抜実験を出来る限り多く繰り返し、標的とするウイロイドと特異的に結合できるDNA及びRNAアプタマーを選抜する予定である。選抜実験の成否は偶然による要素も多少含まれているので、成功の確率を上げるためには、出来るだけ実験回数を多くこなすことが求められる。
ヒアルロン酸を用いた食品の開発と脂質代謝への影響に関する研究

ヒトはヒアルロン酸を動物性食品から微量であるが摂取しているにもかかわらず、経口摂敢した場合の生体への影響を中心に検討した。調理素材として用いるために、ヒアルロン酸の物理的・化学的性質を従来の食物繊維と比較すると、非常に高い粘度を有し、また、食品に添加した場合のテクスチャー特性は優れたものであり、とくに、高齢者に対する"とろみ"材料として有効であった。ヒアルロン酸の小腸における消化性、糖質代謝・脂質代謝に及ぼす影響を調べた。小腸内に存在する消化酵素では、ヒアルロン酸は分解されず、また、糞への排泄もされないことから、腸内細菌が利用した。糖質代謝へのヒアルロン酸の影響は、糖付加試験の結果からヒアルロン酸同時摂取が血糖の上昇を抑制した。脂質代謝への影響については、高コレステロール食にヒアルロン酸を0.5%と2.0%添加し、その有効性を従来の食物繊維と比較した。いずれも血清総コレステロール濃度の上昇を抑制し、しかも、従来の食物繊維よりも少量の添加量で有効性が認められた。この作用はヒアルロン酸添加により、腸内細菌の有用菌であるLactobacillusやBifidovacteriumが増加したことによると推察した。本研究は、ヒアルロン酸がラットの血清脂質レベル・肝臓脂質レベルおよび盲腸内フローラに及ぼす影響について検討した。ウイスターラットにコレステロールとセルロースを添加もの(対照群)、対照群に2%及び0.5%ヒアルロン酸を添加した試験群で60日間飼育した。血清の総コレステロール、遊離コレステロール濃度は、2%と0.5%ヒアルロン酸を添加した飼料の方が、対照群よりも著しく低い濃度であったが、HDL-コレステロール、トリグリセライド濃度は、対照食と比べ変化はなかった。肝臓の総コレステロール、トリグリセライドと総脂質濃度は、2%ヒアルロン酸添加食の方が、対照食と比較して著しく低下したが、0.5%ヒアルロン酸添加食は肝臓の脂質レベルに変化はなかった。糞中排泄胆汁酸量は対照食に比べヒアルロン酸添加食で多く排泄されたが、中性ステロールの排泄量は対照食と比べ変化はなかった。盲腸内フローラは、ヒアルロン酸添加食で盲腸内LactobacillusとBifidobacteriumの増加が観察された。2%ヒアルロン酸添加食の盲腸内LactobacillusとBifidobacteriumが0.5%ヒアルロン酸添加食よりも増加した。以上のことから、ヒアルロン酸の少量の添加食で血清脂質レベルおよび腸内フローラに対して有益であると示唆された。ヒトはヒアルロン酸を動物性食品から微量であるが摂取しているにもかかわらず、経口摂取した場合の生体への影響を中心に検討した。この作用はヒアルロン酸添加により、腸内細菌の有用菌であるLactobacillusやBifidobacteriumが増加したことによると推察した。
疑似乱数の多次元での独立性について

まず、乗算合同法による乗数、法、定数(m=2^<35>,a=31,4159,2221,c=a)を1つ固定し、その性質を調べた。調べたのは、一様分布検定、系列検定、間隔検定、ポーカー検定、札集め検定、最大値検定に合格するかどうかである。なお、比較にためにPC9801のBASICのRND(1)の乱数も同様の調査を行った。具体的には、一様分布検定では、n=1000個の乱数をd=100個の区間に分割しその区間にはいる個数を数え、それについてx^2検定を行い、これを100回繰り返して、100個のx^2統計量が、どの様に分布しているかを調べた。他の検定も上の一様分布検定と同様に、100個のx^2統計量を計算し、それらがどの様に分布しているかを調べた。疑似乱数の検定には、上記以外に、順列検定、連の検定、衝突検定などがあるので、結果はあくまで中間報告であるが、今のところ、最初に述べた乱数の発生アルゴリズムは悪くはない。RND(1)のBASCOM版は、なんとも言えないが、コンパイルしないときは、はっきり悪かった。ここまでの研究内容は、次の報告集に掲載されている。稲葉太一「乱数発生のアルゴリズムについて」科研費総合研究(A)「統計的推測の数学的基礎とその応用に関する研究」シンポジュウム報告書『統計的推測理論とその最適性』(1994年p.63-66)まず、乗算合同法による乗数、法、定数(m=2^<35>,a=31,4159,2221,c=a)を1つ固定し、その性質を調べた。稲葉太一「乱数発生のアルゴリズムについて」科研費総合研究(A)「統計的推測の数学的基礎とその応用に関する研究」シンポジュウム報告書『統計的推測理論とその最適性』(1994年p.63-66)
日本における属性間・属性内賃金格差の要因ータスク・アプローチによる検証ー

本研究では,労働者が行う仕事の職務(タスク)に注目し個人間の賃金格差を検証する。先行研究では,職業別タスクに着目し,職業レベルの労働需要変化や,それに伴うグループ間賃金格差変化の理解を可能としてきたが,個人レベルの格差検証には課題が残されている。それは,同じ職業の雇用形態,性別,学歴に基づくタスク割当が変わらないという仮定である。しかし,同じ職業でも,雇用形態が非正規の人は,正規の人より重要なタスクへの割当が少ないことが考えられる。本研究では,個人レベルのタスク指標を用い,労働者属性ごとに同一職業内での実行タスク差異が存在するか検証し,その後,タスク割当の差異が賃金格差につながるかを検証する。
地震時の地表面電位変化計測システムの構築と評価

地球と電離層の間が、巨視的にはコンデンサとして働くため、地震等の自然災害が発生する前には先行現象として大気から大地に流れる電流(空地電流)や大気電界変化が起こることが知られており、安価で簡易的な地表面電位計測装置である程度のデータが収集できる。本申請では、この装置を全国51の国立高専のできるだけ多くの高専に設置し、全国における各地域の地表面電位変化計測データを収集する。さらに各高専が提携している海外の教育機関に依頼し、海外のデータも収集する。これらの結果を元に、地震のメカニズム等を総合的に学習する教育システムを開発し、電気的な観点から見た日本や地球をモデル化して地震の先行現象として利用する。
大規模・高次元データを用いた計量経済分析における統計的推測法の開発

第一に、セミパラメトリック・モーメント条件モデルのJackknife Empirical Likelihoodによる統計的推測法を提案する論文を執筆・改訂した。本論文では、一般のセミパラメトリック・モーメント条件モデルにおいてJackknife法と経験尤度を用いた統計的推測法(Jackknife empirical likelihood法)を提案した後、いくつかのモデルにおいてnonstandard asymptoticsにおける理論的性質を導出し、またその修正法も提案した。具体例として、加重平均限界効果の推定、多操作変数の場合の操作変数モデル、多説明変数の場合の線形回帰モデルを扱い、提案した手法の有用性を示した。この結果は、最終的な確認と修正を行った後、学術誌に投稿予定である。第二に、「生成された独立変数」を含むセミパラメトリックモデルの統計的推測法を提案した論文を改訂した。具体的な改訂内容は、(i)推定法をより一般的なクラスに拡張したこと、(ii)提案した手法が部分パラメータの統計的推測にまで適用可能であることを示したこと、(iii)その有限標本性質を数値実験によって検討したことである。この結果は、学会誌に再投稿中である。第三に、高頻度データの経験尤度法による統計的推測法を提案した論文を改訂した。本改訂では、論文の構成を大幅に見直し、数値実験によってより広範囲の手法との有限標本性質の比較を行った。この結果は、Journal of Business and Economic Statisticsに掲載決定した。第四に、日本の戦前期の水道普及が致死率にもたらした影響をセミパラメトリックモデルを用いて分析した。この結果は、Economics and Human Biologyに掲載された。セミパラメトリックモデルにおける統計的推測法の一般化に向けて一定の成果を挙げることができた。いくつかのセミパラメトリックモデルにおいて、より有用な推測法を開発し、その理論的正当化を行った。同時に数値実験によって有限標本における性質も検討し、従来の手法に対する優越性を示した。これらの結果は、次年度以降、大規模・高次元計量モデルの統計的推測法を開発する際に、重要な一部分となると考えている。第一に、現在投稿中および投稿予定の論文がそれぞれ学術誌に受理されるように改訂を進める。学会誌の審査結果による部分も大きいが、具体的には、(i)「生成された独立変数」を含むセミパラメトリックモデルの統計的推測法の論文、(ii)Jackknife Empirical Likelihoodによる統計的推測法の論文の両方について、提案した手法の理論的・実用的有用性の議論をできるかぎり精緻化させたいと考えている。第二に、これまでに得られた結果を拡張し、大規模・高次元計量モデルの統計的推測法の開発を行う。これまでセミ・ノンパラメトリックモデルにおいて得られた結果は、大規模・高次元計量モデルの統計的推測と密接に関係している。具体的には、セミパラメトリックモデルに含まれているノンパラトリックな部分を高次元データに適した手法で推定する手法を提案し、その理論的正当性を議論する予定である。

第二に、これまでに得られた結果を拡張し、大規模・高次元計量モデルの統計的推測法の開発を行う。これまでセミ・ノンパラメトリックモデルにおいて得られた結果は、大規模・高次元計量モデルの統計的推測と密接に関係している。具体的には、セミパラメトリックモデルに含まれているノンパラトリックな部分を高次元データに適した手法で推定する手法を提案し、その理論的正当性を議論する予定である。(理由)今年度は統計的推測法の開発と理論的性質の研究に予定よりも多くの時間がかかり、新たな研究成果の発表にまで至らなかった。そのため数値実験については予定よりも計算負荷が軽くなったため、新たな計算機の購入の必要がなかった。(使用計画)現在新たに着手している研究において、数値実験が必要であり、その費用に充てたい。また、共同研究者との研究打ち合わせ及び海外学会における研究発表のための費用に充てたい。
核酸の自発的連鎖反応を利用した高感度腫瘍細胞検出法の開発

がんが進行すると、一部の腫瘍細胞が原発腫瘍細胞組織から剥離し、血液やリンパ液の流れに乗り、体内の別の臓器に移動することで癌の転移が起こる。このように血流に乗って体内を循環している腫瘍細胞は、血中循環腫瘍細胞(Circulating Tumor Cell: CTC)と呼ばれている。単位血液量中に含まれるCTC数は、がんの悪性度や術後の生存期間に強い相関が認められており、近年、新たながん診断マーカとして注目されている。本研究では、多くの固形癌種の細胞膜上に過剰発現している膜タンパク(EpCAM)に対するアプタマーを金基板表面に修飾し、これを用いてCTC等のがん細胞の特異的捕捉及び高感度検出を目的とした。本研究における腫瘍細胞検出システムの概要は以下のとおりである。1EpCAMアプタマーを金基板上に修飾した後に残余面を細胞の非特異的な吸着を抑制するためにSAM膜で覆う。2サンプル溶液(例えば腫瘍細胞を含む血液)を修飾基板上に滴下し、腫瘍細胞を選択的に捕捉する。3洗浄後、タグ付けしたアプタマーを、捕捉した細胞に結合させる。再度洗浄後、シグナル増幅のトリガーとなる一本鎖(トリガーDNA)とその相補鎖(マスクDNA)から成る二本鎖(ケージドトリガー。タグに応答して解離し、トリガーDNAを放出する)とプローブの混合溶液を滴下する。4放出されたトリガーDNAがプローブに作用し、シグナルが増幅される。今年度は、がん細胞上に結合したタグ付きアプタマーのタグを用いて鎖交換反応にてトリガーの放出ならびにその放出されたトリガーを用いたシグナル増幅反応を試みた。結果、がん細胞おいてのみ特異的なトリガーの放出が確認された。しかしながら、がん細胞懸濁液から得られた発光強度は正常細胞の懸濁液から得られた発光強度よりわずかに大きい程度であったため、シグナル増幅反応の最適化がまだ必要である。アプタマー修飾金基板上でがん細胞(MDA-MB-453、MCF-7:ヒト乳癌細胞、KATOIII:ヒト胃癌細胞)と正常細胞(HEK293T:ヒト胎児腎細胞)の捕捉数を比較し、特異的にがん細胞を捕捉可能な基板修飾法の検討を行った。金基板表面に末端チオール化アプタマーを金ーチオール結合にて修飾した。その後、基板への非特異的な吸着を抑制するために、残余表面を6-メルカプト-1-ヘキサノールで修飾し、SAM膜を形成した。修飾基板上に染色したがん細胞(核をDAPIで、膜をDiOで染色)、正常細胞(核をDAPIで、膜をDiDで染色)を加え、一定時間インキュベートした。洗浄後、顕微鏡で観察し、細胞数を比較した。結果、がん細胞が選択的に捕捉されることがわかった(MDA-MB-453: 43 cell/mm2、MCF-7: 54cell/mm2、KATOIII: 22cell/mm2、HEK293T: 6cell/mm2)。細胞捕捉基板の最適化が順調に進行した。昨年に引き続き、特異的にがん細胞を捕捉可能な基板修飾条件の最適化を行なった。金基板表面に末端チオール化アプタマーを金-チオール結合にて修飾した。修飾基板上に核をHoechst33342で染色したがん細胞(MDA-MB-453:ヒト乳癌細胞)、正常細胞(HEK293T:ヒト胎児腎細胞)を加え、一定時間インキュベートした。結果、MDA-MB-453が選択的に捕捉されることがわかった(MDA-MB-453: 168 cell/mm 2、HEK293T: 2cell/mm2)。また、蛍光色素修飾アプタマーによって、がん細胞が特異的に染色されることも確認した。

細胞捕捉基板の最適化は順調に進行しているが、DNAサーキットを用いた細胞検出シグナル増幅への着手が遅れている。がんが進行すると、一部の腫瘍細胞が原発腫瘍細胞組織から剥離し、血液やリンパ液の流れに乗り、体内の別の臓器に移動することで癌の転移が起こる。このように血流に乗って体内を循環している腫瘍細胞は、血中循環腫瘍細胞(Circulating Tumor Cell: CTC)と呼ばれている。単位血液量中に含まれるCTC数は、がんの悪性度や術後の生存期間に強い相関が認められており、近年、新たながん診断マーカとして注目されている。本研究では、多くの固形癌種の細胞膜上に過剰発現している膜タンパク(EpCAM)に対するアプタマーを金基板表面に修飾し、これを用いてCTC等のがん細胞の特異的捕捉及び高感度検出を目的とした。本研究における腫瘍細胞検出システムの概要は以下のとおりである。1EpCAMアプタマーを金基板上に修飾した後に残余面を細胞の非特異的な吸着を抑制するためにSAM膜で覆う。2サンプル溶液(例えば腫瘍細胞を含む血液)を修飾基板上に滴下し、腫瘍細胞を選択的に捕捉する。3洗浄後、タグ付けしたアプタマーを、捕捉した細胞に結合させる。再度洗浄後、シグナル増幅のトリガーとなる一本鎖(トリガーDNA)とその相補鎖(マスクDNA)から成る二本鎖(ケージドトリガー。タグに応答して解離し、トリガーDNAを放出する)とプローブの混合溶液を滴下する。4放出されたトリガーDNAがプローブに作用し、シグナルが増幅される。今年度は、がん細胞上に結合したタグ付きアプタマーのタグを用いて鎖交換反応にてトリガーの放出ならびにその放出されたトリガーを用いたシグナル増幅反応を試みた。結果、がん細胞おいてのみ特異的なトリガーの放出が確認された。しかしながら、がん細胞懸濁液から得られた発光強度は正常細胞の懸濁液から得られた発光強度よりわずかに大きい程度であったため、シグナル増幅反応の最適化がまだ必要である。1、細胞の非特異的な吸着を抑制するために、まず、金基板上にポリエチレングリコール誘導体SAM膜を形成させた後、その上にEpCAMアプタマーを修飾する。2、サンプル溶液(例えば腫瘍細胞を含む血液)を修飾基板上に滴下し、腫瘍細胞を選択的に捕捉する。3、洗浄後、タグ付けしたアプタマーを、捕捉した細胞に結合させる。4、放出されたトリガーDNAがプローブに作用し、シグナルが増幅される。トリガーDNAとマスクDNA二本鎖が形成する二本鎖は突出した一本鎖領域(toehold)を有しており、これをきっかけとし、鎖交換反応が起こり、タグ付きアプタマーのタグの部分とマスクDNAがより、安定な二本鎖を形成し、結果、トリガーDNAが放出される。放出効率の最適化時には、まずは細胞を用いず、蛍光色素ラベル化トリガーDNAと消光剤修飾マスクDNAから形成される二本鎖に対してタグ付きアプタマーを添加し、蛍光回復量、速度からトリガーDNAの放出効率を評価した。
Lim1転写因子の制御下で頭部形成に関わる遺伝子群の単離と機能解析

本研究は、頭部形成に関わる遺伝子カスケードを明らかにすることを目的とする。このために、頭部形成を制御するLim1転写因子の直接、又は間接の下流遺伝子を単離し、機能の解析を行う。マウスにおいて原腸陥入の開始前後の頭側に位置するvisceral endoderm(AVE)は、これより以前に胚体中央部(着床部位に体して遠位部)に位置し、頭側へと移動したものである。さらに、AVEは胚体外組織へと移動し、原索より形成されたmesendodermと入れ代わる。これら移動する組織と予定頭部神経組織との相互作用により頭部誘導が進行する。Stoma遺伝子は、Lim1変異体と野生型胚を用いたディフィレンシャル・スクリーニングによって、Lim1変異体で発現量が低下する新規遺伝子として単離された。本年度は、これまでに作成したStoma遺伝子のマウス変異体の解析に重点を置いた。その結果、原腸陥入期においては、変異個体すべてが胚体外組織の形態異常を示すことが明らかとなった。形態異常は、主に頭側の胚体と胚体外組織の境界部に観察され、この領域における細胞の過度の蓄積と推定された。これらの細胞は、組織学的特徴、およびマーカー遺伝子の解析から、visceral endoderm(VE)の性質を示した。また、変異個体で細胞増殖率の著しい上昇は認められなかった。最近、Stoma遺伝子は、ヒトAngiomotin遺伝子と相同であることが示された。Angiomotinは、Angiostatinの相互作用因子として同定され、血管内皮細胞の移動を制御することがin vitroの解析から確認されている。これらのことから、変異個体の形態異常は、(頭側に顕著な)VEの移動能力の低下によると推定した。一方、Stoma変異体においては、VEの胚体中央部から頭側の移動とAVEの機能は正常であった。これらから、Stomaは胚体から胚体外組織へのVEの移動を制御すること、VEの頭側から胚体外への移動が、胚体中央部から頭側への移動とは異なる分子機構により制御されることを予想している。さらに、StomaによるVEの移動制御の分子機構を明らかにするために、Two-hybrid screen法により相互作用因子の同定を進めている。
C型肝炎においてウイルス排除後に発癌した肝細胞癌の分子病理学的解析

直接作用型抗ウイルス剤の開発により,慢性C型肝炎/肝硬変ではC型肝炎ウイルス(HCV)を100%近い確率で排除(SVR)することが可能になった.ただし, SVR後でも種々の確率で肝発癌がみられており,現在, C型肝炎SVR達成後の症例に対する適切な診療アルゴリズムの構築が議論されている.本研究は, C型肝炎SVR達成後に肝細胞癌(HCC)の発癌を認めた症例について, (1)臨床病理所見および免疫組織化学による予後不良因子の検索, (2)脈管侵襲に関わる分子の遺伝子解析を行うことでC型肝炎SVR後に発癌したHCCの予後予測,高悪性度HCCの絞り込みへ応用するための研究基盤の確立を目的とした.研究実施計画では, C型肝炎SVR後にHCCで肝切除された症例49例の肝組織に対して,平成30年度から平成31年度にかけて臨床病理学的検討及び免疫組織化学,遺伝子解析を計画し,現在までに, (1)臨床病理学的検討及びサイトケラチン19 (CK19),上皮細胞接着因子(EpCAM), G蛋白質シグナル調節蛋白質5 (RGS5)の免疫組織化学を行った.これまでに,臨床病理学的な核異形度,核分裂像の評価と免疫組織化学によるRGS5発現の評価を組み合わせることで,術後再発を伴いやすい高悪性度HCCのスクリーニングが期待できることを見いだした.また,免疫組織化学によるCK19及びEpCAMの発現の評価を,高悪性度HCCのスクリーニングとして単独で用いるのは感度が低い可能性が示唆された.これらの結果は,国内及び国際学会で報告した.(2) RGS5はHCCで門脈侵襲を促進する分子として報告されており,肝細胞癌組織中のRGS5遺伝子をreal-time PCR法で定量し,検討を進めている.対象症例の(1)臨床病理所見および免疫組織化学による予後不良因子の検索,が完了し研究が順調に進展している.引き続き,(2)脈管侵襲に関わる分子の遺伝子解析を進めているところである.(1)臨床病理所見および免疫組織化学による予後不良因子の検索は,得られた結果の論文発表を行う予定である.(2)脈管侵襲に関わる分子の遺伝子解析は, RGS5はHCCで門脈侵襲を促進する分子として報告されており,肝細胞癌組織中のRGS5遺伝子をreal-time PCR法で定量し解析を進める.ただし,研究代表者が平成31年4月1日より研究留学のため米国に出向することから,平成31年度の研究計画は中止に変更となる.直接作用型抗ウイルス剤の開発により,慢性C型肝炎/肝硬変ではC型肝炎ウイルス(HCV)を100%近い確率で排除(SVR)することが可能になった.ただし, SVR後でも種々の確率で肝発癌がみられており,現在, C型肝炎SVR達成後の症例に対する適切な診療アルゴリズムの構築が議論されている.本研究は, C型肝炎SVR達成後に肝細胞癌(HCC)の発癌を認めた症例について, (1)臨床病理所見および免疫組織化学による予後不良因子の検索, (2)脈管侵襲に関わる分子の遺伝子解析を行うことでC型肝炎SVR後に発癌したHCCの予後予測,高悪性度HCCの絞り込みへ応用するための研究基盤の確立を目的とした.研究実施計画では, C型肝炎SVR後にHCCで肝切除された症例49例の肝組織に対して,平成30年度から平成31年度にかけて臨床病理学的検討及び免疫組織化学,遺伝子解析を計画し,現在までに, (1)臨床病理学的検討及びサイトケラチン19 (CK19),上皮細胞接着因子(EpCAM), G蛋白質シグナル調節蛋白質5 (RGS5)の免疫組織化学を行った.これまでに,臨床病理学的な核異形度,核分裂像の評価と免疫組織化学によるRGS5発現の評価を組み合わせることで,術後再発を伴いやすい高悪性度HCCのスクリーニングが期待できることを見いだした.また,免疫組織化学によるCK19及びEpCAMの発現の評価を,高悪性度HCCのスクリーニングとして単独で用いるのは感度が低い可能性が示唆された.これらの結果は,国内及び国際学会で報告した.(2) RGS5はHCCで門脈侵襲を促進する分子として報告されており,肝細胞癌組織中のRGS5遺伝子をreal-time PCR法で定量し,検討を進めている.対象症例の(1)臨床病理所見および免疫組織化学による予後不良因子の検索,が完了し研究が順調に進展している.引き続き,(2)脈管侵襲に関わる分子の遺伝子解析を進めているところである.(1)臨床病理所見および免疫組織化学による予後不良因子の検索は,得られた結果の論文発表を行う予定である.(2)脈管侵襲に関わる分子の遺伝子解析は, RGS5はHCCで門脈侵襲を促進する分子として報告されており,肝細胞癌組織中のRGS5遺伝子をreal-time PCR法で定量し解析を進める.ただし,研究代表者が平成31年4月1日より研究留学のため米国に出向することから,平成31年度の研究計画は中止に変更となる.
糖尿病性腎症の糸球体上皮細胞(足細胞)障害におけるGSK-3Βの役割の検討

本研究の目的は腎不全や各種糸球体腎炎モデルおよび培養細胞を用いて,GSK-3の糸球体腎炎の発症・進展に演じる役割を明らかにし、GSK-3の特異的抑制薬の治療への応用を検討することにある。腎臓内におけるGSK-3の局在を検討したところ,微小単離法によって得られたラット腎臓糸球体を初めとする各ネフロンセグメントを用いたRT-PCR法によって,糸球体および近位尿細管をはじめとする尿細管に広く存在していることを確認した。また,GSK-3βに対する特異的な抗体を用いたwestern blotting法にて腎臓にもGSK-3β蛋白が存在し,免疫組織化学的検討では、糸球体での発現が認められ、足細胞のマーカーであるpodocinおよびsynaptopodinを用いた二重染色によって、GSK-3βの足細胞での存在を確認した。また、Ser-9がリン酸化された不活性なGSK-3βを特異的に認識する抗体を用いた検討では,活性型のGSK-3βと同じ細胞に存在することが明らかとなり,GSK-3βが細胞機能に何らかの作用をおよぼしていることが示唆された。I型糖尿病モデルであるストレプトゾトシン(STZ)糖尿病ラットを用いた検討によって、STZ投与後一週間の糸球体におけるGSK-3β蛋白がコントロールラットに比べて優位に増加する一方、不活性なGSK-3β蛋白の発現に差は見られなかったことから、リン酸化されていない活性型のGSK-3β蛋白が増加していることを確認した。これらの結果は糖尿病性腎症における足細胞の障害にGSK-3βが重要な役割を演じている可能性を強く示唆するものである本研究の目的は腎不全や各種糸球体腎炎モデルおよび培養細胞を用いて,GSK-3の糸球体腎炎の発症・進展に演じる役割を明らかにし、GSK-3の特異的抑制薬の治療への応用を検討することにある。これらの結果は糖尿病性腎症における足細胞の障害にGSK-3βが重要な役割を演じている可能性を強く示唆するものである
溶液の非平衝過程の分子論的アプローチ・反応活性種の構造

本研究では、計画班員5名が分担・協力して反応活性種の構造に関して研究するとともに、公募班員とも積極的に協同研究を展開し、数々の大きな成果を得た。以下に主な成果を要約する。1.大瀧・舟橋は、実験室スケールのエネルギー分散型迅速EXAFS測定装置を開発し、メタロポルフィリンの金属イオンの置換反応時に存在すると推定されていたヘテロ二核中間体の構造を直接決定することに成功した。2.舟橋は世界で初の高圧ストップト・フローNMR測定装置の開発に成功し、高圧下で種々の溶媒交換反応や錯形成反応を追跡し、圧力効果から遷移状態の構造を推定した。たとえば、ポルフィリン錯体の生成反応においては、ポルフィリン環の変形した活性種が存在することや、金属(II)イオンのエチレンジアミン溶媒交換反応では、エチレンジアミンが単座で配位した中間体が存在することを示した。3.山口はイメージング・プレート検出器を用いた迅速時間分解X線回折装置の開発に成功した。結晶成長の動的過程を解明するため、室温から過冷却状態にいたる溶液中のイオンや水分子の静的・動的構造をラマン分光法、X線・中性子回折法等により種々の反応過程について研究した。たとえば、ジおよびトリプロモ亜鉛(II)錯体の第一配位圏から解離した溶媒分子が水素結合により系内で安定化するため、低温でテトラプロモ亜鉛(II)錯体の生成が有利になることを示した。4.佐々木は複雑な金属クラスター錯体の生成や電子移動過程中に存在する中間体の役割を解明するため、オキソ-アセタト袈橋型のルテニウムクラスター錯体を対象として合成的研究を遂行し、種々の反応中間体の構造に関する知見を得た。そして個々の知見を再構築することによって、錯体の系統的合成経路を明らかにした。5.大野は高分子溶液中における各種無機塩の溶解過程を解明した。大瀧は本研究の目的に沿った総括を行い、本研究は、当初の計画通り遂行できた。
筆記表現法の応用可能性：退職勧奨者の再就職支援プログラムの開発

本研究では、退職勧奨者の再就職支援に対する筆記表現法の応用可能性の検証を目的とした。筆記表現法の効果については、大学新入生を対象に大学への不適応に対する予防的効果を検証した。退職勧奨者に関する研究会を定期的に行い、失業状態の人々の実態把握が必須であることが明らかになった。失業状態の人々を対象に、失業に対する態度や求職行動、精神的健康の実態把握の調査を行った。大半の対象者が、過去3ヶ月間に求職を行っておらず、心身の健康や失業へのスティグマが、職業意欲や求職サポートと負の相関を示すことが明らかになった。退職勧奨者の再就職支援のためには、実態や求職活動についてさらに検証を進める必要がある。筆記表現法(Expressive Writing)は、Pennebaker(1989)により開発された介入方法である。ストレスフルな出来事についての考えや感情を2030分程度、数回にわたり筆記する方法で、身体的健康や情動愁訴の減少、喘息患者やリューマチ性関節炎患者の症状の緩和、対人関係の向上への効果が明らかにされている。本研究は、予期せず退職勧奨を受けた者を対象とした再就職支援のあり方や筆記表現法の応用可能性を検証することを目的として行われるものである。平成25年度は、a)退職勧奨を受けた者のメンタルヘルスと再就職支援の実態についての文献研究およびフィールド調査、b)筆記表現法の効果の検証および有効性の検討を行った。a)退職勧奨を受けた者のメンタルヘルスと再就職支援の実態についての文献研究およびフィールド調査:再就職支援を実施する事業会社の担当者と、4回にわたる勉強会を開催した。また、b)筆記表現法の効果の検証として、大学新入生の適応に対する、筆記表現法の実証実験を行った。進学というライフイベントを経験した直後の、大学新入生24名を対象に筆記表現法を実施した。筆記表現法の効果性の測定とともに、現実世界の潜在的な利用者にどの程度浸透し効果が得られるかという有効性の考察を行った。文献研究と効果検証の研究結果の一部を、経済研究所のディスカッションペーパーとしてまとめた。なお、筆記表現法の実証実験については、平成25年度中に収集したデータが十分とはいえず、平成26年度にひきつづきデータ収集を進める予定である。本研究は、予期せず退職勧奨を受けた者を対象とした再就職支援に対する筆記表現法の応用可能性を検証することを目的としている。我が国においても退職勧奨や大量リストラが一般的になり久しい。中高年の再就職支援の方法の確立は、個人の心身の健康および労働市場の安定のためにも重要な課題であるが、退職勧奨など予期しない失職に対応する心理的援助の方法はまだ確立されていない。以上の理由から、本研究では以下について明らかにすることを目的とした。1)筆記表現法が感情制御にどのような影響があるのか、2)筆記表現法が再就職支援にどのように活用できるのか、3)ネガティブな出来事の経験に対し、筆記表現法がどのような応用可能性があるのか。平成24年度は、a)退職勧奨の心理的健康との関連を明らかにするための調査準備、b)テキスト診断システムの応用可能性の検討、c)筆記表現法に関する文献研究を行った。a), b)については、研究協力者ら(再就職支援の現場に関わる方々)と4回の研究会を行い、我が国の民間企業における退職勧奨および最新のテキスト診断システム応用の動向について検討した。ストレスフルな出来事についての考えや感情を2030分程度、数回にわたり筆記する方法で、身体的健康や情動愁訴の減少(Greenberg et al., 1992; Pennebaker et al., 1990)、喘息患者やリューマチ性関節炎患者の症状の緩和(Smyth et al., 1990)、対人関係の向上(Lepore et al)への効果が明らかにされている。本研究では、予期せず退職勧奨を受けた者を対象とした再就職支援に対する筆記表現法の応用可能性を検証することを目的として行われるものである。平成26年度は、筆記表現法の応用可能性の実査として、大学新入学生の適応に対する筆記表現法の実証実験を行った。平成25年度に実施した実験を平成26年度年度当初に実施し、最終的に61名の参加者を得た。さらに、退職勧奨などにより失業状態にある個人の失業に対する態度や求職行動、メンタルヘルスの実態を把握するため、400名の失業状態にある方々を対象にオンライン調査を行った。調査対象者の約7割は、過去3ヶ月間に求職を行っていないことが明らかになった。これら求職行動を行っていない個人の心身の健康および失業に対するスティグマが、職業意欲や求職に関するサポートと負の相関を示すことが明らかになった。この調査結果の詳細を、2015年に開催されるヨーロッパ健康心理学会にて発表の予定である。

ストレスフルな出来事についての考えや感情を2030分程度、数回にわたり筆記する方法で、身体的健康や情動愁訴の減少(Greenberg et al., 1992; Pennebaker et al., 1990)、喘息患者やリューマチ性関節炎患者の症状の緩和(Smyth et al., 1990)、対人関係の向上(Lepore et al)への効果が明らかにされている。Leporeは、これらの筆記表現法のポジティブな効果について、筆記表現のもつ1)注意を導く、2)馴化を容易にする、3)認知の再体制化の手助けをするなどの情動調整機能が、心身の健康や社会的機能の向上につながると説明している。平成24年度から26年度までの目的は、以下の点を明らかにすることであった。a)筆記表現法が心身の健康に及ぼす影響に関する国内外の研究の動向、b)筆記表現法が、感情制御にポジティブな影響をもたらすのか、c)退職勧奨を受けた者の再就職支援に、筆記表現法を応用できるのか。平成24年度から25年度にかけて、再就職支援を実施する人材会社の研究協力者らとともに、再就職支援に関する研究会を定期的に開催し、失業者の再就職活動に関するエビデンスが不足していることが明らかになった。したがって、最終年度には、400名の一般成人を対象にオンライン調査を実施し、求職行動と支援、メンタルヘルスの関連を明らかにすることとした。約70%の参加者は求職活動を行っておらず、求職準備が必ずしも求職支援に関連していないことが明らかになった。ヨーロッパ健康心理学会で調査の成果を報告した。本研究では、退職勧奨者の再就職支援に対する筆記表現法の応用可能性の検証を目的とした。筆記表現法の効果については、大学新入生を対象に大学への不適応に対する予防的効果を検証した。退職勧奨者に関する研究会を定期的に行い、失業状態の人々の実態把握が必須であることが明らかになった。失業状態の人々を対象に、失業に対する態度や求職行動、精神的健康の実態把握の調査を行った。大半の対象者が、過去3ヶ月間に求職を行っておらず、心身の健康や失業へのスティグマが、職業意欲や求職サポートと負の相関を示すことが明らかになった。退職勧奨者の再就職支援のためには、実態や求職活動についてさらに検証を進める必要がある。本研究の当初の目的は、退職勧奨を受けた人々に対し筆記表現法を試み、自助的にネガティブな経験を解決する方法を開発することにあった。平成25年度までに、研究協力者らとともに人材開発事業を行う民間企業と勉強会の機会をもち、退職勧奨を受けた人々やその再就職支援の実態について検討を重ねた。その結果、退職勧奨など非自発的失業状態にある人々の求職活動についての実態が十分に明らかになっておらず、その実態の解明が優先されるべきであるとのことから、平成26年度には調査を行い、その実態の一部を明らかにすることができた。健康心理学平成27年度は、平成26年度までの成果をヨーロッパ健康心理学会において発表する予定である。本研究の当初の目的は、退職勧奨を受けた人々に対して、筆記表現法を実施することであった。わが国の退職勧奨および再就職事情について、関連する事業会社担当者と勉強会を進め、退職勧奨の実態について予備的な情報が共有できたこと、退職勧奨など非自発的失業を経験した人々の精神的健康の実態についての研究蓄積が不十分であることが明らかになった。したがって、非自発的失業者の精神的健康や就職活動の規定因の検証が先決と考えられ、平成25年度はその文献研究と調査準備を行った。さらに、本研究は、臨床心理学におけるメンタルヘルスの問題を人的資源という社会経済的文脈でとらえようとするものでもある。