hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ＥＵＶ光源、Ｘ線レーザー媒質プラズマ中の原子・輻射過程に起因する相転移現象の解明

プラズマ原子過程の研究では、高Z多価電離イオンの大規模な衝突輻射モデルを、計算機アルゴリズムを用いて構築する方法を見出し、電離、励起、発光の重要な過程を漏れなく取り込むとともに、他の計算や実験と系統的な比較を可能とし、計算の精度を向上させることができた。プラズマ相転移のモデリング、シミュレーションコードの開発のうち、レーザーアブレーションのシミュレーションにおいて、レーザー照射初期のプラズマ形成過程について、これまでの実験結果に基づき理論解析を行なった。従来のシミュレーションでは予めプラズマが生成することが前提とされていたが、レーザー照射による固体中のキャリア生成、局所的な加熱や、それに伴う衝撃波による、表面構造形成、粒子発生などの現象を取り扱うことの重要性に注目し、ラグランジ流体モデルにおいて、任意のメッシュの分割、統合によって相転移を扱う方法を考案した。放電のモデリングにおいては、放電の時間発展を計算するモデルの改良を進めた。電離のダイナミクスと、空間の静電容量を考慮するモデルにおいて、空間の要素を直列に接続された抵抗とコンデンサからなると考え、計算結果を実験と具体的に比較できるようにした。プラズマ中に相転移現象が存在するかどうかの熱力学的解析においては、当初の予想に反する結果、否定的な専門家の見解もあり、原子過程や輻射、電磁場の効果を含めたさらなる検討が必要となっている。一方、相転移モデルによる、放電の時間、空間特性の解析においては、当初の計画以上に、放電の前駆現象やステップドリーダーの進展を再現する良好な結果が得られている。25年度が最終年度であるため、記入しない。平成23年度から行なってきた、プラズマ中に相転移現象が存在するか、存在する場合、どのような構造形成等の現象が存在するか、そのモデル化にはどのような手法が適当かを明らかにする研究において、今年度は原子過程モデル、パーコレーションモデルの双方において、理論的検討や、実験、理論計算との比較による検証が進み、モデルの正当性、計算結果の精度、信頼性が確かめられた。レーザーアブレーションを解析するための、プラズマ輻射流体モデルへの相転移モデルの導入においても、ラグランジセルの任意の分割、統合を行なうなどの、新しいアイデアが得られた。研究分担者や、関連分野の研究者を交えた研究会を開催、議論、情報交換を行なうことで、研究の進捗の促進がなされた。プラズマ中に相転移現象が存在するかどうかの解析と、相転移モデルによるレーザー生成プラズマや放電の時空間分布のシミュレーションの2つの方向での研究を継続して行う。プラズマの原子過程シミュレーションによる輻射特性解析では、実験、他の理論計算との比較を行い、モデルの精度、信頼性の向上を図る。そして、従来手法では計算量が過大で困難な、輻射輸送について、現象を粗視化して適切に取り扱うモデルを新たに考案し、プラズマの熱力学的な特性を解析する。論文発表や、学会での研究発表により、成果の普及を図る。研究分担者、および関連する分野の研究者を交えた研究会を、3ヶ月に一度程度の頻度で開催し、当該研究分野での研究開発状況の調査や、進捗状況の確認を行う。
セラミックスおよび無機絶縁体の照射損傷の評価

セラミックスの照射損傷機構を統一的に解明するために、多種類のセラミックス試料に電子、イオンおよび中性子を照射し、組織観察と諸物性の変化を測定した。得られた主な結果は次の通りである。1.はじき出しのしきいエネルギー(Ed)を求める従来の方法の問題点を指摘し、新しい方法を提案した。この方法をMgOに適用しEdの値を求めた。また、高密度励起効果を示す新しい結晶が発見され、その機構の解明を前進させた。さらに、金属炭化物について中性子照射による欠陥形成率等が求められた。2.点欠陥の安定性と集合体の形成過程について調べ、不純物元素による電子遷移とその照射効果が追求された。また、電子線照射下での集合体の挙動、およびその解析による点欠陥の熱力学定数の決定、照射後の回復過程等が調べられた。特に回復過程の研究には微小体積変化測定が有効であることが示された。3.黒鉛の電子線、中性子照射による格子定数、EELSおよびX線小角度散乱等の変化が測定され、放射線の違いによる損傷量等を評価した。4.従来より高温処理したSiC繊維を中性子照射すると高密度変化が起き、引張強度が上昇することが示された。さらに、製法の異なるSiCに加え、SiC単結晶、MgAl_2O_4、AlN等の中性子照射実験が行なわれ、硬さとじん性値の増加が示され組織観察との対応がなされた。5.高温超伝導セラミックスの照射効果が調べられその機構が追求された。また、他の電気特性の照射効果の研究が開始された。6.各種セラミックス試料、および蒸着試料の作製法、およびその方法による試料の評価結果が示され、照射損傷研究に有用であることが示された。7.セラミックスの照射損傷の現状と問題点を報告書としてまとめた。
マレック病ウイルスによる免疫抑制機構の解明とその免疫増強アジュバントへの応用

Programmed death 1 (PD-1)レセプターとProgrammed death ligands (PD-L1およびPD-L2)は、難治性感染症や腫瘍において、病原体や腫瘍細胞の免疫抑制機構に役割を果たすことが知られている。本研究により、鶏においても、他の動物と同様に、PD-1およびPD-L1およびPD-L2が免疫抑制能を有することが示された。そしてマレック病ウイルス感染鶏では、PD-1およびPD-L1およびPD-L2が発現しており、特に腫瘍病変部でPD-1およびPD-L2が腫瘍の免疫回避に関与して、マレック病の病態進行に重要な役割を果たすことが示唆された。本研究では、マレック病など鶏免疫抑制性感染症において、各種免疫抑制因子(PD-1/PD-L1など)の発現動態を解析して、それら因子の機能・役割を解明することを目的として実施する。そして、さらに免疫増強アジュバント開発への応用を目的として、これらの免疫抑制因子を阻害することで鶏に免疫抑制からの回復および免疫増強を賦与できるかどうかを、感染実験や病原体攻撃試験により検討する。鶏PD-1およびPD-L1遺伝子情報を基に樹立した定量的Real-time PCR法により、マレック病ウイルス(MDV)実験感染鶏におけるPD-1およびPD-L1遺伝子発現の経時的変化を解析した。その結果、強毒型MDV感染鶏において、感染初期では、末梢血単核球においてPD-1の発現が上昇し、潜伏感染期以降ではPD-L1の発現が上昇することが示された。さらに感染後期において、感染鶏に観察された腫瘍病変部におけるPD-1およびPD-L1の発現をレーザーマクロダイセクション法により解析したところ、腫瘍においてPD-L1が優位に発現していることが示された。このことは、マレック病においても腫瘍がPD-L1を介して宿主の免疫機構(抗腫瘍免疫)を抑制している可能性を示唆している(論文投稿中)。同様に、他の免疫抑制因子(CTLA-4)についても解析を行った。CTLA-4もPD-1同様に、MDVの感染により、発現が上昇することが示されたが、感染個体間で大きな格差がみられ、今後より詳細に解析する必要があり、次年度に解析を計画している。鶏PD-1およびPD-L1の生物学的機能の解析は、未だ報告がほとんどない。そこで、その機能を解析するために、これら因子を安定発現する細胞株の樹立を行った。次年度はこれらの細胞を用いて鶏PD-1およびPD-L1の機能(ザイトカイン産生能への影響など)を解析する。本研究において、昨年度までに、マレック病(MD)の病態形成・進行には、免疫抑制に関わるニワトリPD-1/ PD-L経路が寄与していること、さらにMDワクチンによる抗腫瘍効果にもこの経路が関与していることを示してきた。そこで本年度は、さらに詳細にMDの病態形成におけるPD-1/ PD-L経路の役割を明らかにするために、ニワトリPD-1のリガンドのひとつであるPD-L2について、その機能やMDウイルス(MDV)感染鶏における発現を解析した。組換えPD-L2発現株化細胞を作出し、ニワトリの末梢血単核球(PBMC)や脾臓細胞とin vitroにおいて共培養したところ、Th1サイトカインであるインターフェロン・ガンマ(IFNg)の発現量が、対照に比べて低下することが示された。このことは、ニワトリにおいても他の動物で報告されているものと同様に、PD-L2が免疫抑制の誘導に関与していることを示している。そこで、次にMDV実験感染鶏あるいはMD野外発症鶏におけるPD-L2の発現をreal-time RT-PCRで解析した。MDV実験感染鶏では、潜伏感染期において脾臓で対照に比べて、PD-L2の発現が上昇していることが示された。さらにMD発症鶏由来の腫瘍材料を用いて、PD-L2の発現を解析した結果、PD-L2は、腫瘍病変中の腫瘍細胞において強く発現していることが示された。以上の結果より、ニワトリPD-L2は、PD-1/ PD-L経路を介して免疫抑制を引き起こすことが示唆され、MDにおいても、腫瘍細胞に発現したPD-L2が腫瘍の免疫回避に関与しており、MDの病態進行に重要な役割を果たすことが示唆された。今後、もう一方のリガンドであるPD-L1の機能解析や、PD-L2の発現上昇に係る分子機構の解明が必要であると考えられる。本年度は、ニワトリPD-1/ PD-L分子の発現をタンパクレベルで解析し、さらにPD-1/ PD-L経路による免疫抑制能を解析した。

ニワトリPD-1、PD-L1、PD-L2をFc融合タンパク質として調製して(それぞれPD-1-Ig、PD-L1-Ig、PD-L2-Ig)、フローサイトメトリー法にてそれらの発現を解析した結果、マイトジェン刺激により活性化したニワトリ脾細胞でPD-1、PD-L1、PD-L2と結合する分子の発現が上昇することが示され、ニワトリにおいても炎症反応の収束にPD-1/ PD-L経路が関与する可能性が示唆された。さらにMD腫瘍由来細胞株に対してもPD-1-Igの結合が認められ、MD腫瘍がPD-Lを表出することで宿主免疫応答を回避することが予想された。またPD-L1-IgおよびPD-L2-Igにも結合したことからPD-1やその他免疫抑制因子を発現している可能性も示唆された。そこでPD-1-Ig存在下でMD腫瘍病変部由来細胞を培養し、PD-Lからのシグナルを阻害したところ、細胞増殖の促進とMDVゲノム量の増加が認められた。PD-L1が活性化CD8+T細胞の存続に必要であるという報告もあり、今回確認された現象はPD-1-IgがPD-L1発現細胞へ活性化シグナルをもたらしたことによる可能性もある。MDVの感染や腫瘍化T細胞に関連する免疫因子は他にも多数あり、今後の検討が必要である。MDV強毒株感染鶏ではPD-1およびPD-Lの発現動態が、非感染鶏と比較して変化する。一方、本研究においてMDワクチン株(CVI988)接種後に強毒株で攻撃した鶏群では、PD-1やPD-Lの発現上昇やその持続がほとんど認められなかった。以上より、MDの病態形成・進行およびワクチンによる抗腫瘍効果に、PD-1/PD-L経路が寄与していることが示唆された。当初目的としていたマレック病ウイルス感染鶏における免疫抑制因子の発現解析を終了しており、PD-1,PD-L1,およびCTLA-4などの経時的な発現の変化をreal-time PCR法にて解析することができた。さらに機能が不明である鶏PD-1の免疫抑制作用を解析するための安定発現細胞株の樹立もできた。25年度が最終年度であるため、記入しない。平成23年度は、主に遺伝子レベルでのPD-1/PD-Lの発現解析を行ってきたが、本年度は、より詳細な解析を実施するために、組換えPD-1/PD-L分子を調製して、タンパクレベルでのPD-1/PD-L経路の解析を行った。その結果、遺伝子レベルでの解析結果とよく一致した成果が得られ、概ね今年度達成を目指していた研究成果を得た。また今年度調製した組換えPD-1/PD-L分子は、次年度に予定している実験感染鶏を用いた感染防御試験に用いる予定であり、次年度の研究計画への準備も予定通り進行した。このように本年度の研究計画は目的通り概ね達成されたと考える。平成24年度は、前年度の結果から、ワクチン接種鶏における免疫抑制因子の発現解析を行うと同時に、今年度作製する組み換えFc-PD-L1などを用いて、遺伝子レベルの解析に加えて、タンパク質レベルでの発現解析を行う。また、組み換えFc-PD-L1などを用いたPD-1ブロック試験を行い、免疫抑制状態にある感染鶏由来リンパ球の機能回復試験を実施して、アジュバントへの応用を試みる。本年度調製した組換えPD-1/PD-L分子を用いてより詳細な免疫抑制経路の解析が次年度必要である。
高熱流束による核融合炉第一壁の亀裂伝播

SUS316板試験片に深さ1mmの表面予亀裂を導入し、電子ビームを繰り返し照射(電子ビーム照射0.5sec冷却29.5sec)して、照射による亀裂の伝播量Δaを計測している。試験片の拘束条件による違いを検討するために、平均応力で50MPa,100MPa,150MPaとなる引張り荷重を負荷している。これと昨年度の曲げ拘束条件、すなわち平均応力の負荷されていない条件、とを加えて引張り負荷の影響を評価できる。一方汎用数値解析コードABAQUSを使い、非定常熱伝導解析および熱弾塑性応力解析を行い、亀裂先端近傍における応力の時間変化からΔJ(J積分の1サイクルの間の変化幅)を求めている。以上からΔa/ΔN(N:繰り返し数)とΔJとの関係が試験片厚み方向に伝播する亀裂にたいして得られた。実験結果は平均応力で0MPa,50MPa,100MPaの条件では高熱流束の照射時に圧縮で降伏しており、この降伏域が冷却時に引張りで再び降伏するという高熱流束負荷実験特有のパターンを示すのにたいして,平均応力が150MPaになると照射時にも圧縮で降伏せず、いわゆる高温疲労亀裂進展のパターンを示す。ただし、通常の高温疲労では温度は一定であるが、ここでは照射時と冷却時とで300度程度の温度差があり、材料定数の評価が難しい。したがって平均応力で100MPa以下では、昨年度から行っている数値解析でほぼ亀裂の進展の評価ができると考えている。しかし、150MPa以上では亀裂進展のパターンが異なり、解析モデルの検討が必要であると考えている。厚さ3mmのSUS316板試験片に深さ1mmの表面予き裂を導入し、曲げ拘束の条件のもとで電子ビーム(EB)の繰り返し照射(EB照射0.5sec冷却29.5sec)を行ない、照射によるき裂の伝播量Δaと試験片側面での温度変化ΔTを計測している。同時にEB照射面の温度を直接測定すべく放射温度計による計測を試みている。放射温度計の応答特性は良く、0.5secの照射時間中の温度上昇を時間遅れなしで測定できる。しかし、測定誤差が相当に大きくて、10°C程度あると思われ、温度の正確な値の決定に使うのは難しいようだ。一方数値計算は汎用計算機コードABQUSを使い、非定常熱伝導解析を行って温度変化の分布を求め、この結果を使って熱弾塑性応力解析により応力分布の時間変化を決定する。き裂先端近傍における応力の時間変化からJ積分の1サイクルの間の変化幅ΔJを求めることができる。以上からΔa/ΔN(N:繰り返し数)とΔJとの関係が試験片厚さ方向に伝播するき裂にたいして得られた。この結果は、ステンレスの疲労き裂伝播実験から得られているデータに上で求めたΔJを代入して推定されたΔa/ΔNとき裂長さが1mm-1.5mmの範囲で非常に良い一致をみた。すなわちこのき裂長さの範囲内ではEBの繰り返し照射による亀裂の伝播は数値計算によってほぼ正確に予測できる。しかしき裂長さがこれ以上に大きくなると数値計算の結果はより大きなき裂伝播量を与え、安全側の予測となる。これは亀裂が深くなると試験片厚さ方向よりも試験片表面に沿っての方向にき裂が伝播しやすくなるためである。現在試験片表面に沿ってのΔJをどう評価するか検討中である。また、き裂の浅い場合のき裂伝播挙動も興味あるところであり、実験したいと考えている。SUS316板試験片に深さ1mmの表面予亀裂を導入し、電子ビームを繰り返し照射(電子ビーム照射0.5sec冷却29.5sec)して、照射による亀裂の伝播量△aを計測している。一方汎用数値解析コード

ABAQUSを使い、非定常熱伝導解析および熱弾塑性応力解析を行い、亀裂先端近傍における応力の時間変化から△J(J積分の1サイクルの間の変化幅)を求めている。以上から△a/△N(N:繰り返し数)と△Jとの関係が試験片厚み方向に伝播する亀裂にたいして得られた。実験結果は平均応力で0MPa,50MPa,100MPaの条件では高熱流束の照射時に圧縮で降伏しており、この降伏域が冷却時に引張りで再び降伏するという高熱流束負荷実験特有のパターンを示すのにたいして、平均応力が150MPaになると照射時にも圧縮で降伏せず、いわゆる高温疲労亀裂進展のパターンを示す。ただし、通常の高温疲労では温度は一定であるが、ここでは照射時と冷却時とで300度程度の温度差があり、材料定数の評価が難しい。したがって平均応力で100MPa以下では、これまでの数値解析でほぼ亀裂の進展の評価ができると考えている。しかし、150MPa以上では亀裂進展のパターンが異なり、照射時の高温、低応力と冷却時の低温、高応力という繰り返しパターンをモデル化できる解析方法の検討が必要であると考えている。
注視方向を指標として用いた空間的他視点取得能力測定法の確立

3歳前後の子どもが持つ基礎的な空間的他視点取得能力を測定することを目的とした。新たな課題("顔回転課題"と名付けた)を考案し、2つの実験(I, II)を行った。実験Iの目的は、課題に正答する年齢を明らかにすること、実験IIの目的は、顔回転課題の解決において用いられた方略が、心的回転や知覚的更新でないことを実証することであった。実験Iに60名の24歳児が、実験IIには実験Iで課題に正解した38名の子ども達が参加を依頼された。課題の概要は次の通り。直径80cmの円盤上に顔の絵を描き、円の中心から20cmずつのところに直径10cmの穴を開けた。穴は目とみなされた。顔は実験IとIIで異なり、実験Iは女児の顔、実験IIでは、一方からは笑い顔、反対からは困っている顔に見える物であった。顔刺激は、縦横55cm高さ15cmの台座上に据えられた。実験Iでは、子どもに対して90,180,270度のいずれかの方向に顔を回転し、左右の目のどちらかを点灯すると同時に2種のブザ-のうち一つを鳴らした。続いて顔の向きを子どもの側に戻し、先のブザ-音のみが再提示された。音に対応する目がどちら側であるのかを子ども達は問われた。基礎的な他視点取得ができる子どもは、課題の正しい答えを容易に知ることができると予想され、約3歳半過ぎよりその種の能力が獲得されていることが示された。実験IIでは、笑い顔か困っている顔のどちらかを、まず子どもに提示した。子どもにとって90度か270度の位置に顔を回転子、光と音を提示した。最後に、子どもに対して0度かまたは180度の方向に顔を回転し、音に対応する目がどちらであるかを実験Iと同様にたずねた。0度と180度方向に対する正答率に違いがみられれば、他視点取得が用いられていたと考えられた。結果は、有意に0度方向からの正答率が高く、この年齢の子どもたちは、他視点取得によって課題を解決していたのだと結論された。穴は目とみなされた。
発生学的視点からの関節リウマチ病態の理解

シノビオリンは、われわれが関節リウマチ(RA)滑膜細胞よりクローニングした分子で、小胞体膜上に存在しERAD(Endoplasmic reticulum associated degradation)において機i能するE3ユビキチンリガーゼである。またRAでは滑膜細胞にシノビオリンが過剰発現することによりERADを活性化させ、滑膜細胞の増生をもたらすことでその発症に関与していることをこれまでに証明した。しかしながら全身に発現しているシノビオリンがRAという局限した病体を引き起こすかは不明な点が多かった。そこでわれわれはその理由として、シノビオリンの基質の存在を考えた。この点を解明するために、まずsyno^<-/->と野生型(syno^<+/+>)の間で発現している分子の差をプロテオミクスにより検討した。その結果、syno^<+/+>と比較しsyno^<-/->で蓄積しているいくつかの分子、すなわちシノビオリン基質候補分子群の同定に成功した。その中でも特に細胞死に関連するp53が同定され、実際にp53がシノビオリンによりユビキチン化・分解されることが証明できた。MDM2に代表されるようにp53に対するユビキチン化酵素は多く報告されている。しかしながら、シノビオリンはp53が核に移行する前に細胞質でユビキチン化・分解するため、これまで報告されているものとは全く異なる経路での制御である。滑膜細胞において過剰に発現したシノビオリンがp53を代謝することは、おそらくRA発症の鍵となる事象となると考えられる。今後、シノビオリンとp53の関係が滑膜細胞増殖に対しどのような影響を及ぼすかについて検証することで、新たなRA治療標的分子の発見へと展開できることが期待される。シノビオリンは、われわれが関節リウマチ(RA)滑膜細胞よりクローニングした分子で、不良タンパク質を除去する機構の小胞体関連分解で機能するE3ユビキチンリガーゼである。実際、RA滑膜細胞ではシノビオリンが過剰発現している。さらにわれわれは、(1)シノビオリン過剰発現マウスは関節炎を発症し、(2)逆にシノビオリン遺伝子ヘテロ欠損マウスは関節炎モデルに対し抵抗性を示すことをこれまでに明らかとした(Genes Dev 2003 17:2436-2449)。シノビオリン遺伝子欠損マウス(syno^<-/->)は胎仔二次造血期に造血を行う器官である肝細胞での特異的なアポトーシスの亢進により、貧血を引き起こし胎生致死となることを証明した(J Biol Chem 2005 280:7909-7916)。syno^<-/->では、シノビオリンが欠失することでその基質となる分子が蓄積し、特に致死となる時期のsyno^<-/->の肝臓においては、その影響が顕著に現れていると予想できる。逆にRAの滑膜細胞では、過剰発現したシノビオリンが基質となる分子を過剰に分解し、その基質の減少を引き起こしていることが想定できる。すなわち、シノビオリンの抗アポトーシス作用による滑膜細胞の増殖能獲得の背景には、基質の減少がある可能性が示唆される。この点を解明するために、まずsyno^<-/->と野生型(syno^<+/+>)の間で発現している分子を比較することによりシノビオリンの基質となる分子が同定できると考え、検討を進めている。具体的には、各遺伝子型の胎仔肝を検体とし、トランスクリプトーム・プロテオミクス・Yeast two hybridの手法を用いてシノビオリンの基質を探索した。その結果、いくつかのシノビオリン基質候補分子の同定に成功した。今後、これらの基質候補分子が妥当であるかを検討し、またそれが滑膜細胞増殖に対しどのような影響を及ぼすかについて検証する。

これらの解析を通じ、新たなRA治療標的分子の発見へと展開させる予定である。シノビオリンは、われわれが関節リウマチ(RA)滑膜細胞よりクローニングした分子で、小胞体膜上に存在しERAD(Endoplasmic reticulum associated degradation)において機能するE3ユビキチンリガーゼである。またRAでは滑膜細胞にシノビオリンが過剰発現することによりERADを活性化させ、滑膜細胞の増生をもたらすことでその発症に関与していることをこれまでに証明した。しかしながら全身に発現しているシノビオリンがRAという局限した病体を引き起こすかは不明な点が多かった。そこでわれわれはその理由として、シノビオリンの基質の存在を考えた。この点を解明するために、まずsyno^<-/->と野生型(syno^<+/+>)の間で発現している分子の差をプロテオミクスにより検討した。その結果、syno^<+/+>と比較しsyno^<-/->で蓄積しているいくつかの分子、すなわちシノビオリン基質候補分子群の同定に成功した。その中でも特に細胞死に関連するp53が同定され、実際にp53がシノビオリンによりユビキチン化・分解されることが証明できた。MDM2に代表されるようにp53に対するユビキチン化酵素は多く報告されている。しかしながら、シノビオリンはp53が核に移行する前に細胞質でユビキチン化・分解するため、これまで報告されているものとは全く異なる経路での制御である。滑膜細胞において過剰に発現したシノビオリンがp53を代謝することは、おそらくRA発症の鍵となる事象となると考えられる。今後、シノビオリンとp53の関係が滑膜細胞増殖に対しどのような影響を及ぼすかについて検証することで、新たなRA治療標的分子の発見へと展開できることが期待される。
幼若ホルモンで発現される遺伝子の分子生物学、特にオオシロアリの兵隊分化と関連させて

本研究では、屋久島産のオオシロアリを用いて、兵蟻分化を幼若ホルモン類似体(JHA)で誘導し、その際の遺伝子発現をディフェレンシャルディスプレイ法(DD法)で解析した。擬職蟻から前兵蟻への文化は、70%の効率で誘導する事に成功した。また、DD法でJHA処理直後(1h)から一週間の間に特異的発現を調べ、総ての転写物のわずか1%以下に相当するものであった。その中には24時間から3日間に抑制される遺伝子は最も多かった。得られた特異的なcDNAをシークエンシングし、P450と配列相同性を示す遺伝子の場合だけはノーザンブロットで発現パターンを確認できた。新しいSubfamilyのメンバーであり、CYP6AM1と名付けられた。CYP6AM1の発現は腹部に局在し、4齢幼虫から擬職蟻まであり、JHA誘導24時間後に消え,また兵蟻に現れる。生殖カーストでは発現しない。したがって、CYP6AM1は幼若ホルモンに抑制される生理的に重要な酵素であると示唆される。In situ HybridizationでCYP6AM1の発現の局在は調べつつあり、その結果を論文にする予定である。なお本年度は、6月27日-7月4日にパリ(フランス)で開催された『Aphid Genomic International Network』シンポジウムに出席した。8月1日-8月4日に福岡で開催された『日本進化学会第5回大会』へ出席・発表を行った。発表テーマは「オオシロアリの兵隊分化に伴う形態形成と遺伝子発現の分析」である。真社会性昆虫のシロアリは、コロニー内に多型カーストを生じるがその機構についてはわかっていないことが多い。本研究では、屋久島産のオオシロアリ及び川西市産のネバダオオシロアリを用いて、兵蟻分化を幼若ホルモン類似体(JHA)で誘導し、その際の遺伝子発現をディフェレンシャルディズプレイ法(DD法)で解析した。擬職蟻から兵蟻への分化は、70%の効率で誘導することに成功した。また、DD法でJHA処理直後(1h)から一週間後の間に発現が特異的に変化するmRNAを28個同定したが、これは総ての転写産物のわずか1%以下に相当するものであった。その中には24時間後に発現が停止するものが最も多く、一番早い発現の差異は6時間後に見られた。得られた特異的なcDNAをシークエンシングし、既知の配列との相同性を現在確認しつつある。なお、本年度は、7月28日-8月3日に札幌で開催された国際社会性昆虫学会議へ出席・発表を行った。発表テーマはマデイラゴキブリにおける体表タンパク質の特性研究に関してである。11月15/16日に神戸で開催された日本学術振興会未来開拓学術研究推進事業の「昆虫特異機能の解明と開発」公開シンポジウムにも研究連絡のため出席した。11月1/2日には川西市にネバダオオシロアリの採集調査のため出張を行った。1月27-30日に沖縄県那覇市へ発、大学院生3人とともに社会性昆虫類の採集調査のため出張した。
海洋環境における微量生元素の動態と生態系への影響

1.キレート吸着体カラム濃縮-ICP質量分析法による多元素同時分析法の改良を進めた.溶存態と酸可溶態の化学種別分析法を確立した.北太平洋におけるFe, Co, Ni, Cu, Zn, Cd, Pbの分布を求めた.Feは溶存態に比べて酸可溶態濃度が高く,反応活性な粒子態として多く存在することがわかった.表層水の溶存Fe, Znは,亜寒帯北太平洋では枯渇しているが,亜熱帯北太平洋では高濃度で存在することを見出した.2.1999年夏期の北太平洋亜寒帯域において,植物プランクトンの光合成潜在能力および増殖速度に東西差があり,その違いは海水中の鉄濃度に支配されていたことを明らかにした.また,この時の植物プランクトン群集組成を高速液体クロマトグラフィーおよびフローサイトメトリーから評価した.3.2001年の西部北太平洋亜寒帯域の現場鉄散布実験において,植物プランクトンの光合成潜在能力を評価し,現場海域の植物プランクトンが鉄制限環境下で生長していたこと,および鉄散布により生理状態が顕著に改善したことがわかった.実験海域では鉄散布前の粒子態鉄濃度は約5nMであった.この粒子態鉄はおそらく大気から塵として供給されたものであるが,植物プランクトンにとって利用しにくい化学形であったと考えられる.また,溶存Co, Ni, Cu, Zn, Cd濃度の減少を見いだした.4.キレート配位子交換/吸着カソーディックストリッピングボルタンメトリーを用いた高感度定量法を確立し,真核植物プランクトン由来の鉄結合配位子を見出した.5.鉄欠乏状態における植物プランクトンからRNAを分離精製する手法を確立した.鉄欠乏下において,細胞膜で生じる外膜タンパク質の組成変化を見出した.6.有機鉄化学種存在下の培養実験により,植物プランクトンの増殖は,有機配位子の種類と濃度により規則的な影響を受けることが分かった.1.キレート吸着体カラム濃縮-ICP質量分析法による多元素同時分析法の改良を進めた.溶存態と酸可溶態の化学種別分析法を確立した.北太平洋におけるFe, Co, Ni, Cu, Zn, Cd, Pbの分布を求めた.Feは溶存態に比べて酸可溶態濃度が高く,反応活性な粒子態として多く存在することがわかった.表層水の溶存Fe, Znは,亜寒帯北太平洋では枯渇しているが,亜熱帯北太平洋では高濃度で存在することを見出した.2.1999年夏期の北太平洋亜寒帯域において,植物プランクトンの光合成潜在能力および増殖速度に東西差があり,その違いは海水中の鉄濃度に支配されていたことを明らかにした.また,この時の植物プランクトン群集組成を高速液体クロマトグラフィーおよびフローサイトメトリーから評価した.3.2001年の西部北太平洋亜寒帯域の現場鉄散布実験において,植物プランクトンの光合成潜在能力を評価し,現場海域の植物プランクトンが鉄制限環境下で生長していたこと,および鉄散布により生理状態が顕著に改善したことがわかった.実験海域では鉄散布前の粒子態鉄濃度は約5nMであった.この粒子態鉄はおそらく大気から塵として供給されたものであるが,植物プランクトンにとって利用しにくい化学形であったと考えられる.また,溶存Co, Ni, Cu, Zn, Cd濃度の減少を見いだした.4.キレート配位子交換/吸着カソーディックストリッピングボルタンメトリーを用いた高感度定量法を確立し,真核植物プランクトン由来の鉄結合配位子を見出した.5.鉄欠乏状態における植物プランクトンからRNAを分離精製する手法を確立した.鉄欠乏下において,細胞膜で生じる外膜タンパク質の組成変化を見出した.6.有機鉄化学種存在下の培養実験により,植物プランクトンの増殖は,有機配位子の種類と濃度により規則的な影響を受けることが分かった.1微量生元素の多元素同時分析法の改良を進めた。ブランク値と検出限界を海水濃度の20分の1以下に低減した。本法を西部北太平洋亜熱帯域で採取した海水試料に適用し、溶存態Fe,Co,Ni,Cu,Znの分布を求めた。表層水のFe,Znは、亜寒帯北太平洋では枯渇しているが、亜熱帯北太平洋では高濃度で存在することを見出した。2 6-8月に亜寒帯北太平洋で初めて行われた鉄散布実験に参加した。350kgのFeを80km^2の海域に散布したところ、珪藻が著しく増殖した。クロロフィルの増加は20μm、二酸化炭素分圧の減少は140ppmに達した。太平洋赤道域や南極海と比べて、この海域の生態系が、Feに対してきわめて敏感に反応することが明らかになった。この航海において、微量金属濃度、植物プランクトンの群集構造、光合成に関する生理状態、植物プランクトンの成長速度、微小動物プランクトンの摂餌速度、およびバクテリア数の観測を行った。3生態系と物質循環の季節変動を調べるために、南極海及び北西北太平洋で実施された研究航海に参加し、2項と同様な観測を実施した。4 EDTA類縁体を添加した培地中において、Fe濃度が低い培養条件では、培地中のキレート配位子の種類と濃度が対数増殖期の増殖速度に顕著に影響することを見出した。放射性トレーサー55Feを用いたFe取り込み実験より、キレート配位子の影響は植物プランクトンの鉄の取り込み量と相関があることを確認した。1 2001年6-8月に西部亜寒帯北太平洋で初めて行われた鉄散布実験の試料の分析を進めた.

350kgの鉄を80Km^2の海域に散布したところ,植物プランクトンが著しく増殖した.鉄散布パッチ内では光合成系IIの光化学反応量子効率(F_V/F_m)が増加し,有効光吸収断面積(σ_<PSII>)は減少した.これらの事実は,鉄散布によって植物プランクトンの生理状態が改善され,光合成潜在能力が増加したことを示す.植物プランクトン色素の分析により,珪藻類と渦鞭毛藻類が顕著に増加したが,通常この海域で優先する緑藻類とプラシノ藻類は生長を抑制されたことがわかった.溶存微量金属Fe, Co, Ni, Cu, Zn, Cdの分析の結果,FeとともにCo, Cu, Zn, Cdの濃度が有意に減少した.減少比が植物プランクトンの元素組成に近いことから,これらの元素は植物プランクトンに取り込まれたと推定された.2 2002年6-8月に東部亜寒帯北太平洋で行われた鉄散布実験に参加した.1と同様の解析を行い,北太平洋の東西で鉄散布が物質循環と生態系に及ぼす影響を比較する,2002年10-11月と2003年2-3月には北西北太平洋で,2003年2-3月には南極海オーストラリアセクターで海水試料を採取した.これらの試料の分析は現在進行中である.これらの海域における微量金属の時空間変動が初めて明らかになると期待される.3植物プランクトン培養液中に現れるFe配位子を濃縮し,CAS法と配位子交換-ACSV法により,その濃度と錯生成定数を評価した.平成15年度に得られた主な成果は以下の通りである.i.2001年78月に西部北太平洋亜寒帯域において行われた,北太平洋で初めての鉄散布実験(SEEDS2001)に参加し,植物プランクトンの光合成活性,群集組成ならびに微量金属元素濃度の観測を行った.この試料の分析と結果の解析を完了し,論文を作成した.実験海域では鉄散布前の溶存鉄濃度は0.1nM以下であったが,反応性粒子態鉄濃度は約5nMであった.この粒子態鉄はおそらく大気から塵として供給されたものであるが,植物プランクトンにとって利用しにくい化学形であったと考えられる.すなわち,植物プランクトンへの効果は,鉄の濃度だけでなく化学形に強く依存することがわかった.また,溶存Co,Ni,Cu,Zn,Cd濃度の減少を見いだした.外洋において植物プランクトンの増殖時にこれらの濃度が変化することが見いだされたのは,これが最初である.金属元素の減少量比は植物プランクトンの組成比とほぼ一致していることから,これらの金属は植物プランクトンに取り込まれたと推定される.ii.2003年度独立行政法人水産総合研究センター若鷹丸第一次航海WK0304(2003年4月11日4月25日)に参加し,親潮域および黒潮・親潮混合域における珪藻類による春季ブルーム期の植物プランクトンの光合成に関する生理状態を観測した.iii.その他,東部北太平洋亜寒帯域における鉄濃度調節実験の試料分析を行った.海洋科学技術センター研究船みらいの西部北太平洋亜寒帯域航海,東京大学海洋研究所研究船白鳳丸の東部南太平洋航海に参加し,海水試料の採取,前処理と観測を実施した.iv.培養植物プランクトンを用いて,鉄欠乏状態における植物プランクトンからRNAを分離精製する手法を確立した.また,鉄欠乏下において,細胞膜で生じる外膜タンパク質の組成変化を見い出した.
神経伝達物質受容体NMDARの機能解析を目指したリガンド指向性化学の開拓

外国人特別研究員として申請しているHauser君が提案した研究は、グルタミン酸受容体の中でも特に重要で、記憶や学習において中心的な役割を果たしていると考えられているNMDA受容体の局在や機能に焦点を当て、ケミカルラベルによってその詳細を解明しようとするものであり、神経ケミカルバイオロジーへの展開においても我々の戦略の一般化を実証する上でも重要な意義がある。
不斉配位子のコンビナトリアル最適化を可能にする新しい光学活性オリゴマー骨格の開拓

(1)オリゴ(キノキサリン-2,3-ジイル)の不斉合成における新規不斉重合開始剤の開発オリゴマー構造を有する不斉配位子の開発においては、オリゴマーらせん状骨格のらせん不斉を高度に制御しうる骨格形成法の開発が不可欠である。従来用いていたビナフチルパラジウム開始剤は、高い立体制御能力を有してはいたものの、その合成に数段階を要する点で必ずしも実用的とは言えなかった。本研究において、市販の出発原料から3段階で合成される光学活性(S, S)-及び(R, R)-4,5-ジフェニルィミダゾリン-2-イルパラジウム錯体が極めて高いらせん不斉誘起能力を有していることを明らかにした。この開始剤を用いて合成した(3量化キノキサリニル)ジフェニルホスフィンは、パラジウム触媒によるスチレンのヒドロシリル化において従来のビナフチル体と同等のエナンチオ選択性を示し、より実践的な不斉配位子合成が可能となった。(2)コンビナトリアル法による新規不斉配位子の構造最適化様々な置換基を有するキノキサリンユニットの組み合わせからなる(3量化キノキサリニル)ジフェニルホスフィンを配位子とする、スチレンのパラジウム触媒不斉ヒドロシリル化を行った。その結果、3つのユニットのうち2番目のユニット上の5,8-置換基のかさ高さが最も大きくエナンチオ選択性に影響することを見出した。これらの知見から、第一ユニットの5,8置換基としてp-トリル基、第2,第3ユニットの5,8置換基としてp-t-ブチルフェニル基を有する(3量化キノキサリニル)ジフェニルホスフィンを合成し、同反応に用いたところ82%eeのエナンチオ選択性が得られた。
有茎腸管グラフト内肝組織片・肝幹細胞共充填による体内型補助肝臓の作成

研究成果の概要(和文)本研究は有茎腸管グラフト内の充填肝組織片の急速な増殖環境下に肝幹様細胞を置くことで様々な増殖因子の影響によりこれが機能肝細胞に分化誘導され、それが体内型補助肝臓として機能することを期待して行われた。肝組織片と共充填した肝幹様細胞は60日後でも遺残肝組織の間に浸潤し、分裂、増殖、融合して肝細胞索類似の形態を形成し、各細胞間には類洞類似の細胞間隙も認められた。PAS染色でも陽性に染まり、ブドウ糖の代謝能を有していることが示唆された。本法により肝幹様細胞の肝細胞類似細胞への分化誘導が惹起され肝組織類似の組織構築がなされることが確認され、体内型補助肝臓作成への展望が示された。本研究は肝の体性幹様細胞を機能肝細胞に効率よく分化誘導する方法の開発を目指している。そのために体内型補助肝臓(有茎腸管グラフト内肝組織片充填移植術)を用いる。ここではグラフト内に充填されたミンチされた肝組織片はグラフト腸管内で急速に再癒合し増殖する。体積で元の大きさより8ー10倍の大きさに急速に増殖肥大することを確認している。この充填肝組織の急速な増殖環境下に肝の幹様細胞を置くことで様々な増殖因子の影響により肝の幹様細胞が機能肝細胞に分化誘導してゆくことが期待される。我々はこれまでに腸管グラフト内肝組織片充填術の基本術式に様々な改良(グラフを大網で包んで後腹膜に固定しグラフトの捻転を防止すると共に血流を付加する、大網と肝組織片をグラフト内に共充填し大網血流を利用して血流付加をはかる、部分肝切後の肝離断端に小孔を開けた腸管グラフトを逢着し充填肝組織内に門脈血流を導く)を加えることにより従来法(単純な有茎腸管グラフトのみ)では完全に壊死に陥ってしまった90日後まで充填肝組織の一部を遺残させることが出来た。一方、肝の幹細胞システムが解明されたなら肝の幹細胞から機能肝細胞を大量に増殖させ肝臓を再構築することも可能になる。100年以上前から齧歯類の肝臓には長期生存する上皮性細胞の存在が知られていた。その代表例が肝の幹様細胞と言われるWB-F344細胞である。この幹様細胞は様々な細胞に分化誘導出来ることが知られている。我々はWistar rat肝から独自にこの幹様細胞を単離しクローン化している。本研究では有茎腸管グラフト内にこの幹様細胞をミンチした肝組織片ともに共充填し、肝組織片が急速に癒合し増殖する環境下でこの幹様細胞を機能肝細胞に分化誘導させることで、効率的な体内型人工肝臓の作成を目指す。ここではグラフト内に充填されたミンチされた肝組織片は急速に再癒合し増殖する。体積で元より8ー10倍に急速に増殖肥大することを確認している。この充填肝組織の急速な増殖環境下に肝の幹様細胞を置くことで様々な増殖因子の影響により肝の幹様細胞が機能肝細胞に分化誘導してゆくことを期待している。本研究では有茎腸管グラフト内にこの幹様細胞をミンチした肝組織片ともに共充填し、肝組織片が急速に癒合し増殖する環境下でこの幹様細胞を機能肝細胞に分化誘導することで、効率的な体内型人工肝臓の作成を目指す。平成26年度には肝組織と共充填した肝幹様細胞が壊死することなく60日間グラフト内に生着し増殖していることを確認できている。(研究目的)本研究は肝組織片充填有茎腸管グラフト内に肝の体性幹様細胞を共充填しこれを機能肝細胞に分化誘導させることで体内型補助肝臓の開発を目指す。充填された肝組織片は急速に増殖し体積で8ー10倍に増大する。

この肝組織片の急速な増殖環境下に肝幹様細胞を置くことで予想される様々な増殖因子の影響により肝幹様細胞が機能肝細胞に分化誘導され、それが補助肝臓として機能することを期待している。(研究方法)Wistar ratを用い、肝左葉切除後、空腸の分節腸管グラフトを作成し、粘膜を削除した後、これに切除した肝をミンチしたものを我々が独自にWistar rat肝から採取しクローナル化した肝幹様細胞30000と混合しグラフト内に充填し、このグラフトを部分肝切後の肝離断端に逢着した。対照として肝幹様細胞30000を鼠径部皮下に移植した。(結果)肝組織片と共充填した肝幹様細胞は60日後でも遺残肝組織の間や腸管グラフト壁近傍に生着し増殖していた。これらは好酸性の大きな胞体を有し、共充填した遺残肝組織の間に浸潤し、分裂、増殖、融合して肝細胞索類似の形態を形成し、各細胞間には類洞類似の細胞間隙も認められた。一方、グラフト壁に接する部位では同様の細胞が本来の充填肝組織が壊死した中にcell nestsを形成し、それを取り巻くように赤血球の充満した血液路の様なものも認められた。PAS染色でもこれらの細胞の殆どが陽性に染まり、ブドウ糖の代謝産物であるグリコーゲンの貯蔵能を有していることが示唆された。対照として同量の肝幹様細胞を鼠径部脂肪織内に移植したが赤血球の集積と褐色脂肪組織の増生は認めたものの、肝幹様細胞は全く消失し、その痕跡も認められなかった。(結語)有茎腸管グラフト内肝組織片との共充填により肝幹様細胞の肝細胞類似細胞への分化誘導が惹起され肝組織類似の組織構築がなされることが確認され、体内型補助肝臓作成への展望が示された。研究成果の概要(和文)本研究は有茎腸管グラフト内の充填肝組織片の急速な増殖環境下に肝幹様細胞を置くことで様々な増殖因子の影響によりこれが機能肝細胞に分化誘導され、それが体内型補助肝臓として機能することを期待して行われた。肝組織片と共充填した肝幹様細胞は60日後でも遺残肝組織の間に浸潤し、分裂、増殖、融合して肝細胞索類似の形態を形成し、各細胞間には類洞類似の細胞間隙も認められた。PAS染色でも陽性に染まり、ブドウ糖の代謝能を有していることが示唆された。本法により肝幹様細胞の肝細胞類似細胞への分化誘導が惹起され肝組織類似の組織構築がなされることが確認され、体内型補助肝臓作成への展望が示された。1.有茎腸管グラフトにミンチした肝組織を充填すると充填肝組織は再癒合し急速に増殖増大する。研究実績の概要で述べたように様々な工夫を行い、充填肝組織の長期生着と母体側の肝組織との癒合をはかり、本来の肝の血流システムとの結合を図ってきた。2.我々はこれまでに、独自に、肝の幹様細胞を単離しクローン化してきている。この幹様細胞に対して幹細胞に特異的なマーカーといわれている(C-Met, c-Kit, CS45R, CD34, Thy1)に関して免疫組織学的に検討した。その結果はC-Met+, c-Kit-, CD45R+, CD34-, Thy1+であった。なかでも幹細胞に特異的と言われるC-Met+, c-Kit-の組み合わせが認められたことは、我々が単離したこの細胞が幹細胞の性格を有していることを意味する。3.この腸管グラフトにミンチした肝組織とともに肝の幹様細胞を共充填することは肝幹様細胞が、肝組織が再癒合し急速に増殖増大する環境下に門脈血の影響を受けながら置かれることを意味する。このような環境下では肝の幹様細胞が機能肝細胞に分化誘導してゆくことが期待される。4.上記目的を果たすために凍結保存しておいた肝幹様細胞を解凍し、これを増殖させた後、分散し、その全量をミンチした肝組織と混和し、グラフト内に充填した。その結果、肝組織と共充填した肝幹様細胞は60日後でも遺残肝組織の間や腸管グラフトの壁近傍に生着し増殖していることが確認できた。対照として同量の肝幹様細胞を鼠径部脂肪
受精卵移植法による口唇口蓋裂発生の母体環境因子の解析

口唇口蓋裂発生の原因について、遺伝的要因、環境要因のふたつの立場から、研究がなされてきたが、本研究においては、受精卵移植法により得られた胎仔の次世代を、通常のごとく育種し、口唇口蓋裂の発現率および他の外表奇形をみることにより、母体要因と遺伝的要因の関連性について検討した。その結果、これまでに口唇口蓋裂非発生マウスのC57BL/6系マウスを母体に用い、口唇口蓋裂自然発生マウスのA/J系マウスの受精卵を移植したところ、得られた総ての胎仔において、口唇口蓋裂が発生しなかったという結果を得た。このことは、第一世代においては、母体環境要因が作用する可能性を強く示唆した。この実験をさらに進め、A/J系マウスを母体に用い、C57BL/6系マウスの受精卵を移植し、得られた胎仔の口唇口蓋裂発現について観察をおこなった。得られた胎仔は90頭、その内、顔面領域に奇形の発生した胎仔が1頭確認された。その後、受精卵移植により得られたマウスを通常交配させ、口唇口蓋裂発現率を見る実験を行ったが下記の如く、問題点がでた。1)受精卵のドナーとしてA/J系マウスは弱く、交配および受精卵の採取が困難、2)受精卵移植を行っても着床率が低い。3)着床し、胎仔がえれれたとしても、他の母獣マウスによる授乳の際に喰殺、また育仔の放棄がある。4)育った胎仔(第一世代)において交配が通常のA/J系マウス同様悪いなどである。これらの困難を克服し、第二世代の口唇口蓋裂発生の検討を行った結果、第二世代の口唇、口蓋裂発原理をA/J系マウスと比較すると、唇顎口蓋裂は同じように発現し、口蓋裂の単独発現は、A/Jマウスの5.6%に対し、皆無であった。第1、第2世代とともに唇顎口蓋裂は発生しなかったことから、唇顎口蓋裂は遺伝的要因が強く次世代へ継代され、口蓋裂単独は、母体環境要因が強く関与することが推測された。受精卵法を経ても次世代の口唇、口蓋裂発生に影響が及ぶ可能性が示唆された。我々はこれまでに口唇口蓋裂を発生する原因は,環境要因,つまり母体にあるのか,それとも遺伝要因,つまり卵自体にあるのかを検討するため、受精卵移植をおこなった結果、口唇口蓋裂,口蓋裂は認められず、環境要因の強い関与を示唆した。本研究において,受精卵移植法により得られた胎仔の次世代を,通常のごとく育種し,口唇口蓋裂の発現率および他の外表奇形をみることにより,母体要因と遺伝的要因の関連性を検討した。その結果,これまでに口唇口蓋裂非発生マウスのC57BL/6系マウスを母体に用い,口唇口蓋裂自然発生マウスのA/J系マウスの受精卵を移植したところ得られた全ての胎仔において口唇口蓋裂が発生しなかったという結果を報告したが本年はこの実験をさらにすすめ

この結果を受けて現在のA/J系マウスを母体に用いC57BL/6系マウスの受精卵を移植し,得られた胎仔の口唇口蓋裂発現について観察を行っており、得られた胎仔は9頭,その内顔面領域に奇形の発生した胎児が1頭確認されている。また成果を以下の如く学会発表した。口唇口蓋裂発生に関する実験的研究第81報受精卵移植における次世代の口唇口蓋裂発現率について(1994年6月第18回日本口蓋裂学会)口唇口蓋裂発生に関する実験的研究第85報受精卵移植を行った口唇口蓋裂発生マウスにおける第2世代の発現率(1994年7月第34回日本先天異常学会)現在、受精卵移植により得られたマウスを通常交配させ、口唇口蓋裂発現率をみる実験を行っているが、以下の問題により遅れている。1受精卵のドナーとしてA/J系マウスは弱く、交配および受精卵の採取が困難2受精卵移植を行っても着床率が低い。3着床し、胎仔が得られたとしても、他の母獣マウスによる授乳の際に喰殺、また育仔の放棄がある。4育った胎仔(第一世代)において交配が通常のA/J系マウス同様悪い。現在、実験に遅れがあるが、これまでの経過について平成8年7月に開催される日本先天異常学会において発表を予定している。昨年度指摘していた、1)受精卵のドナーとしてA/J系マウスは弱く、交配および受精卵の採取が困難、2)受精卵移植を行っても着床率が低い。3)着床し、胎仔がえれれたとしても、他の母獣マウスによる授乳の際に喰殺、また育仔の放棄がある。4)育った胎仔(第一世代)において交配が通常のA/J系マウス同様悪いのため、実験が遅れていたが、これらの困難を克服し、第二世代の口唇口蓋裂発生の検討を行った結果、第2世代の口唇、口蓋裂発原理をA/J系マウスと比較すると、唇顎口蓋裂は同じように発現し、口蓋裂の単独発現は、A/J系マウスの5.6%に対し、皆無であった。第1、第2世代ともに唇顎口蓋裂は発生しなかったことから、唇顎口蓋裂は遺伝的要因が強く次世代へ継代され、口蓋裂単独は、母体環境要因が強く関与することが推測された。受精卵法を経ても次世代の口唇、口蓋裂発生に影響が及ぶ可能性が示唆された。