hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ケミカルプロテインノックダウン技術の開発と細胞制御

我々は標的タンパク質を特異的にユビキチン化する各種化合物を開発し、その各種活性を調べてきた。本年度は各種IAPに対する結合親和性の高いIAPアンタゴニストを導入したSNIPER化合物を新たに合成し、従来のSNIPER(ER)-87より優れたエストロゲン受容体分解活性及び抗がん活性を示すSNIPER(ER)を新たに開発した。また疎水性タグとして認知されているアダマンチル基と神経変性疾患診断薬を連結したSNIPER化合物を設計・化学合成し、本化合物が生細胞において、神経変性疾患の1種であるハンチントン病やパーキンソン病の原因タンパク質である変異ハンチンチンやαシヌクレインを、それぞれ減少させることを見出した。BCR-ABLを分解するSNIPER(ABL)の抗がん活性をABL阻害剤Dasatinibと比較した結果、短時間薬剤処理ではSNIPER(ABL)はDasatinibよりも優れた抗がん活性を示す事を明らかにした。ペプチド二次構造制御技術をケミカルプロテインノックダウンに応用することで中分子ペプチドによる細胞内タンパク質の精密制御を目指して研究を行い、ヘリカル構造を制御できる非天然型アミノ酸を利用することで細胞内へ高親水性分子を導入できるキャリアペプチド、並びに広いスペクトルを持つ抗菌ペプチドを開発した。新規サリドマイド誘導体(セレブロンモジュレーター)CC-122によって特異的にセレブロン(CRBN)により分解誘導されるネオ基質を探索し、急性白血病などの発症に関わることが知られている新たな基質タンパク質を同定した。また以前に明らかにしていたサリドマイド催奇性に関わるネオ基質について、ゼブラフィッシュにおける胸びれ(四肢に相当)など発生における役割を明らかにした。従来よりも結合親和性の高いIAPアンタゴニストを導入する事によって、分解活性の強いSNIPERを開発する事ができ、プラットフォーム技術として改良されたと考えられる。また疎水性タグ(アダマンチル基)と神経変性疾患診断薬を連結した化合物は、過去に創出した化合物と比較して分子量が小さく、また水素結合の受容体や供与体の総数も少ない特徴を有する。このことから、より中枢薬らしい構造と言え、高次モデルにおける評価に向けて一歩前進したと考えている。ペプチドに関しては、非天然型アミノ酸のひとつであるα,α-ジ置換アミノ酸やアミノ酸側鎖架橋を利用することで、安定な二次構造を形成できるペプチドの合理的設計が可能であることを明らかとした。また本手法により、細胞内タンパク質の精密制御を行うための高親水性分子(pDNA、siRNA等)を細胞内へ輸送できるDDSキャリアペプチドの開発に成功したことから、研究は順調に進展していると考えている。CC-122特異的なネオ基質についても、生化学的なCRBNとの関係性がおおよそ明らかになった。またAMLの発祥に関わるチロシンキナーゼとの融合タンパク質が分解されることも示すことに成功し、CC-122の新たな効用を見いだすに至った。またサリドマイド催奇性に関係するネオ基質の解析は、生化学からモデル動物(ゼブラフィッシュ)の解析まで至っており、順調である。ケミカルプロテインノックダウン技術を、各種標的タンパク質の特異的分解技術として展開する。またSNIPERによるユビキチン化が誘導する分解以外の細胞応答についても検討する。タンパク質間相互作用に基づいて安定な二次構造を形成できる高親和性ペプチドを設計し、ペプチド型SNIPERの開発を行う。また、転写因子に結合する核酸配列をリガンドとして利用したデコイ核酸型SNIPERを開発する。本手法により、低分子化合物やペプチドでは標的にすることが困難なタンパク質をノックダウンすることを目指す。CC-122によるセレブロンのネオ基質の分解が、関係する血液がんへの治療効果としてどのくらい有用なのかについて検証を細胞生物学・薬理学実験によって行う。またサリドマイドや他の関連化合物による誘導ネオ基質の探索も行う。また特定の条件下におけるCRBNやネオ基質のユビキチン化の詳細を質量分析で解析することを新たに計画している。

また以前に明らかにしていたサリドマイド催奇性に関わるネオ基質について、ゼブラフィッシュにおける胸びれ(四肢に相当)など発生における役割を明らかにした。従来よりも結合親和性の高いIAPアンタゴニストを導入する事によって、分解活性の強いSNIPERを開発する事ができ、プラットフォーム技術として改良されたと考えられる。また疎水性タグ(アダマンチル基)と神経変性疾患診断薬を連結した化合物は、過去に創出した化合物と比較して分子量が小さく、また水素結合の受容体や供与体の総数も少ない特徴を有する。このことから、より中枢薬らしい構造と言え、高次モデルにおける評価に向けて一歩前進したと考えている。ペプチドに関しては、非天然型アミノ酸のひとつであるα,α-ジ置換アミノ酸やアミノ酸側鎖架橋を利用することで、安定な二次構造を形成できるペプチドの合理的設計が可能であることを明らかとした。また本手法により、細胞内タンパク質の精密制御を行うための高親水性分子(pDNA、siRNA等)を細胞内へ輸送できるDDSキャリアペプチドの開発に成功したことから、研究は順調に進展していると考えている。CC-122特異的なネオ基質についても、生化学的なCRBNとの関係性がおおよそ明らかになった。またAMLの発祥に関わるチロシンキナーゼとの融合タンパク質が分解されることも示すことに成功し、CC-122の新たな効用を見いだすに至った。またサリドマイド催奇性に関係するネオ基質の解析は、生化学からモデル動物(ゼブラフィッシュ)の解析まで至っており、順調である。ケミカルプロテインノックダウン技術を、各種標的タンパク質の特異的分解技術として展開する。またSNIPERによるユビキチン化が誘導する分解以外の細胞応答についても検討する。タンパク質間相互作用に基づいて安定な二次構造を形成できる高親和性ペプチドを設計し、ペプチド型SNIPERの開発を行う。また、転写因子に結合する核酸配列をリガンドとして利用したデコイ核酸型SNIPERを開発する。本手法により、低分子化合物やペプチドでは標的にすることが困難なタンパク質をノックダウンすることを目指す。CC-122によるセレブロンのネオ基質の分解が、関係する血液がんへの治療効果としてどのくらい有用なのかについて検証を細胞生物学・薬理学実験によって行う。またサリドマイドや他の関連化合物による誘導ネオ基質の探索も行う。また特定の条件下におけるCRBNやネオ基質のユビキチン化の詳細を質量分析で解析することを新たに計画している。
細胞分化におけるhairy関連因子HES遺伝子群の役割に関する研究

哺乳動物のヘリックス・ループ・ヘリックス型転写因子HES-1は、ショウジョウバエhairyと高い相同性をもち、未分化な神経・筋細胞で高レベルに発現しているが、分化とともにそのレベルは低下する。更に、HES-1はMyoDによる筋分化を抑制する。今回、神経分化におけるHES-1の役割について解析を行ったので以下に報告する。神経前駆細胞にHES-1を強制発現させて、神経分化に与える影響を解析するために、HES-1及びlacZを発現するレトロウイルス(SG-HES1ウイルス)及びlacZのみを発現するコントロール・レトロウイルス(SGウイルス)を作製した。いずれのウイルスが感染してもlacZが発現するのでX-gal染色により感染細胞は青く染まる。これらのウイルスをマウス胎児の脳室に注入することにより神経前駆細胞に感染させた。生後、脳切片を作製しX-gal染色を行い、ウイルス感染細胞の分化パターンを調べた。SGウイルスに感染した細胞は上衣層から皮質へと遊走し、また、突起をのばしており、正常な神経分化をたどっていると考えられた。しかし、SG-HES1ウイルスに感染した細胞は、すべて上衣層にとどまっており、また、突起ものばしておらず、神経分化が抑制されていた。以上から、HES-1は筋分化と同様、神経分化も負に制御する因子であり、HES-1の発現レベルが低下することが分化の進行に重要であることが明らかになった。今後、HES-1により負に制御されている細胞分化因子の同定を試みる予定にしている。
圧電アクチュエータの界面剥離発生機構の解明

ユニモルフ型圧電アクチュエータは,機能・コスト両面で優れており,多方面で使用されているが、圧電材料と金属平板間の界面剥離が問題となっている。圧電アクチュエータは、微小変位制御において,空気圧式,油圧式,電気式などに比べて変位精度および応答速度に優位性を有しているが,変位レンジおよび発生力に関しては,十分と言い難い.このため,屈曲型や積層型が開発されているが,変位レンジおよびコストの両面から屈曲型が比較的多く使用されている.屈曲型の場合,一枚の金属板に一枚の圧電材料を張付けたユニモルフ型や二枚の圧電材料を用いて構成されるバイモルフ型が一般的であるが,金属板との接着層や金属電極層などの接合界面から剥離が発生することが知られている.このため,傾斜機能圧電材料が開発され,ユニモルフ型やバイモルフ型圧電アクチュエータシステムの応力低減のために用いられている.材料の物性値が連続的に変化するように制御された傾斜機能材料は,スペースプレーンの外壁材として航空宇宙産業での実用化を目的に1980年代半ば頃から開発が始まっている.最近は,屈曲型アクチュエータの信頼性向上を目的として傾斜機能圧電材料の開発が進められており,傾斜機能材料単体の強度評価は精力的に行われているが,上記のような接合界面が存在する傾斜機能圧電アクチュエータの破壊力学的挙動を詳細に調査した研究は数少ないのが現状である.本研究では,微小き裂を有する圧電アクチュエータシステムをモデル化した傾斜機能圧電平板(FGPM)と金属平板から成る二層平板を対象に,一般の使用形態を模擬した機械的・熱衝撃負荷が作用する場合を考え,微小き裂に起因する電気熱弾性破壊力学的挙動を解明し,微小き裂が界面まで進展した場合のき裂先端近傍の特異応力場・電気場を特定することに成功している.1.内部き裂および縁き裂を有する傾斜機能圧電積層板が熱衝撃負荷を受ける場合の破壊力学的挙動を二重積分変換法に基づく厳密な数理解析手法を用いて解明することに成功した。2.き裂間相互干渉問題に着手しているが、一部の析上の問題点の解決に時間を要しており、多少の遅れが発生している。3.力学的衝撃負荷が作用する場合についても問題の設定および解析の準備を進めている。1.き裂間相互干渉問題の解析方法を全面的に見直し、破壊力学的挙動に及ぼす多数き裂の影響を解明する。2.動的慣性効果を考慮して衝撃応答解析を進め、破壊力学的挙動の時間的変動を解明する。諸事情により、国内学会への出席を見送ったため、残余金が生じた。本年度はこの残余金も含め、日本機械学会年次大会2019、M&M2019および中国で開催予定のThe 12th International Congress on Thermal Stressesに出席し、成果発表および情報収集のために有効使用することを予定している。
イオン・電子移動ナノ経路構造制御による高速インターカレーション電極の開発

メゾ・マクロ細孔を有するナノ多孔カーボンを合成し,同構造が電解質イオンの高速移動に有効であることを明らかにした。また,グラファイトやTiO_2/カーボンナノチューブ複合系の規則ナノ多孔体を新規に合成し,優れた高速充放電特性を示すことを明らかにした。また, V_2O_5/多孔カーボン複合系において, 3次元に連続した規則多孔構造の高速充放電特性をシミュレーションするとともに,そのモデル構造体を実際に合成し,超高速充放電特性の発現を実証した。燃料電池を駆動電源とする電気自動車の普及が強く望まれているが,自動車は走行負荷変動がきわめて大きいため,一般に瞬発力が比較的小さい燃料電池のみでは不十分であり,高出力・高エネルギー密度の補助電源が必要とされる。本研究では,比較的エネルギー密度の高いインターカレーション系二次電池に超高速充放電特性を付与して高出力特性を引き出し,かつ充放電の可逆性に優れた電極材料の創製を目指すものである。本年度は,高速イオン移動が可能な細孔構造を有するナノ多孔カーボンを合成し,さらにそのカーボン表面をV_2O_5でナノコーティングした複合材料の合成を行った。主な成果を以下に示す。1.ナノ多孔カーボンの合成と電気二重層キャパシタ特性シリカコロイド粒子から形成されるオパール結晶の間隙にフェノール樹脂を充填し,カーボン化,シリカ除去(コロイド結晶テンプレート法)により,規則的な細孔構造を有するナノ多孔カーボンを得た。得られた試料について電気化学測定を行ない,ナノ多孔化による電気二重層容量が大幅に増大し,その特性は高速充放電時も維持されることを確認した。すなわち,本ナノ多孔化が高速イオン移動に有効であることがわかった。2.カーボン多孔体/V_2O_5ナノ複合体の作製とLiインターカレーション特性1で得たナノ多孔カーボンをV_2O_5ゾル溶液と混合し,乾燥,熱処理することにより,ナノ複合体を作製した。低濃度のV_2O_5ゾル溶液で多段階に混合処理をした場合は,V_2O_5がナノ多孔カーボン表面に高分散担持され,高速でのLiインターカレーションが可能であることを見出した。高濃度溶液では,細孔を閉塞し,むしろ高い充放電レートでのLiインターカレーション容量は低下した。本研究では、エネルギー密度に優れるLiイオン二次電池材料に超高速充放電特性を付与して高出力特性を引き出し、かつ充放電の可逆性に優れた高性能電極材料の創製を目指すものである。本年度は、前年度に合成法を確立し、また高速イオン移動が可能であることを明らかにしたナノ多孔カーボンの細孔壁のグラファイト化を行い、Liイオン二次電池負極としての特性評価を行った。さらに、V_2O_5とナノ多孔カーボンの複合構造制御およびLiFePO_4多孔体の合成を行い、Liイオン二次電池正極材料としての特性評価を行った。1.コロイド結晶テンプレート法により得た規則的な細孔構造を有するナノ多孔カーボンを、さらに高温(15002500°C)で熱処理することにより、カーボン細孔壁中にグラファイト層が生成・成長した多孔体が得られることを明らかにした。小さい細孔サイズおよび低いグラファイト化率の多孔体では、Li挿入・脱離のヒステリシスが大きいことがわかった。2.ナノ多孔カーボンに大量にV_2O_5ゾルを担持すると、細孔を閉塞し、高い充放電レートでのLiインターカレーション容量は低下する問題があった。そこで、複合体を溶媒あるいはH_2O_2水溶液で洗浄して余分なV_2O_5ゾルを除去することにより、高出力特性を引き出せることを明らかにした。3.ポリスチレンオパールを鋳型にして、隙間に無機原料溶液を充填し、焼成することによりオリビン型LiFePO_4ナノ多孔体を、さらに原料溶液にスクロースを添加することで、LiFePO_4/カーボン複合ナノ多孔体を合成することに成功した。特に後者は、優れた高速充放電特性を有することも明らかにした。本研究では,エネルギー密度に優れるLiイオン二次電池材料に超高速充放電特性を付与して高出力特性を引き出し,かつ充放電の可逆性に優れた高性能電極材料の創製を目指すものである。本年度は,新規にLiMnPO_4ナノ多孔体を合成し,さらにカーボンとのナノ複合化を検討した。またLiMnPO_4系多孔体やナノ多孔グラファイトの充放電特性評価を行った。主な成果を以下に示す1.既にポリスチレンオパールを鋳型に用いてオリビン型LiFePO_4ナノ多孔体を合成する手法を開発しているが,同手法をLiMnPO_4にも適用し,LiMnPO_4およびLiFePO_4/カーボン複合ナノ多孔体を合成することに成功した。LiFePO_4系と比べてLiMnPO_4系は,充放電容量が小さく,レート特性に劣るものの,ナノ多孔化やカーボンナノ複合化により充放電特性が向上することを見出した。

3.80450nmのシリカオパールを鋳型に用いてナノ多孔カーボンを合成した後,さらに高温(15002500°C)で熱処理することにより,種々の細孔サイズを有するグラファイトナノ多孔体を合成した。細孔サイズが大きくなるにつれ,また熱処理温度が高くなるにつれ,グラファイト化が進行し,これに伴い比表面積が減少した。一方,定電流充放電測定においては,高温熱処理したものほどグラファイト相へのLi挿入脱離による0.2V vs. Li/Li^+以下の電位での充放電容量が増加した。また,低比表面積にもかかわらず細孔サイズが多いナノ多孔グラファイトの方が容量およびレート特性に優れることがわかった。
自衛隊PKO派遣の定着―細川・羽田・村山政権期における試行錯誤

1992年9月、宮澤政権の下、自衛隊のPKO派遣がカンボジアで実現した。かかる人的貢献の形は、宮澤退陣後も実現され続けた。だが、直後に連立政権を率いた細川護熙、羽田孜、村山富市は、かねてより自衛隊PKO派遣に異を唱えてきた人物である。それでは、この三人の意に反するにもかかわらず、なぜ、彼らの政権下で自衛隊のPKO派遣が実現・定着したのか。そこで本研究は、細川政権から村山政権までのPKO派遣の実像を、国内外の一次史料、ならびに政府関係者へのインタビューを通じて明らかにする。とりわけ、外務省を中心とする国内政治過程に着目し、当該期におけるPKO派遣の全体像を浮かび上がらせる。
ヨウ素触媒サイクルを含む化学気候モデルの開発

前年度までに開発したモデルを用いて、現在の観測で知られているオゾン破壊物質や温室効果ガス濃度を入力した実験(現在気候実験)、及び、それに対して将来シナリオの濃度を入力した実験(将来気候実験)を行った。現在気候、将来気候実験でヨウ素化合物の放出を行い、オゾンに対するヨウ素化合物の影響を推定した。ヨウ素化合物の放出量は観測値に幅があるため、これら現在気候、将来気候実験のいずれにおいても、ヨウ素化合物の入力量は観測値の幅を考慮し、海面上のヨウ化メチル(CH3I)濃度で0.2 pptvから2.0 pptvになっているものと仮定した。オゾン破壊物質や温室効果ガス濃度が同じ条件でCH3I濃度を徐々に変えた複数の実験を行なうことで、観測値の幅による不確実性を考慮してヨウ素化合物の影響を推定することが可能である。現在気候実験でCH3Iの入力量を徐々に増加させていくと、無機ヨウ素(Iy)濃度が追随して増加した。成層圏におけるオゾン個数密度の最大値はIy濃度増加に伴い徐々に低下するが、2.0 pptvの入力値付近では必ずしもIy濃度に追従しない。将来シナリオ実験でCH3Iの入力量を変えた場合には、0.2 pptv程度の入力量では現在気候実験との差が不明瞭だが、1 pptv以上の入力がある実験では現在気候実験よりもIy濃度が低下した。またオゾン個数密度の最大値の高度は将来シナリオ実験で高くなったが、CH3Iの入力値依存性は変化しない。オゾン個数密度の最大値の高度の違いは、残差平均子午面循環の鉛直成分の違いと整合的であった。本年度は、化学気候モデルの相互比較に関する共著論文や、年々変動のプロセスに関する主著論文、日本語の解説を発表し、国内学会、国際会議における発表も行なった。これまでの知見では、ヨウ素触媒サイクルによる下部成層圏のオゾン消失は無視できるほど小さいとされてきた。しかし近年の研究で、ヨウ素触媒サイクルによるオゾン消失が、熱帯域の対流圏界面付近の下部成層圏では無視できないという推定結果が提示された。大気中のヨウ素化合物は海洋から放出される自然起源のもので、光化学反応や氷雲・海塩エアロゾル上における不均一反応により変化し、大気中の循環によって成層圏にまで到達してヨウ素ラジカルを供給し、ヨウ素触媒サイクルによりオゾン消失に働くと考えられている。本研究では、全球化学気候モデルに対してヨウ素化合物の放出・輸送プロセスやヨウ素化合物の反応式などを導入し、成層圏・対流圏におけるヨウ素の化学と輸送の役割を調べることを目的としている。化学気候モデルは大きな計算資源を必要とするため、あらかじめヨウ素触媒サイクルに関連する主要な反応を特定し、それらの反応に絞って導入する必要がある。そのため今年度はまず、化学種濃度の時間発展を計算するboxモデルを用いてヨウ素触媒サイクルに関連する主要な反応式の特定を行った。一定のヨウ素ラジカル濃度を与えヨウ素ラジカルとオゾンとの反応を調べると、観測されている全無機ヨウ素濃度に相当する1pptv程度の入力でオゾン消失量が過大評価されることが分かった。そこで、ヨウ素ラジカルとリザーバーとの相互変換反応や、ヨウ化メチルからヨウ素ラジカルを生成する反応等を組み込むことで現実的な消失量を再現した。その成果は、2016年10月に札幌で行われた大気化学討論会で発表した。さらに、boxモデルで特定した主要な反応によるオゾン消失や光解離反応速度定数計算などを化学気候モデルに組み込む作業を行い、オゾン量などがヨウ素触媒サイクルの有無でどのように変化するのかを調べた。また化学気候モデルの相互比較に関し、共著で論文発表を行った。本年度は、boxモデルを用いて大気中のヨウ素に関係する主要な気相反応を特定し、それを基に全球化学気候モデルに気相におけるヨウ素化合物の化学反応を取り込むことを計画していた。boxモデルによる反応式の推定で、ヨウ素ラジカルによるオゾン消失反応に加え、ヨウ素ラジカルとリザーバーとの相互変換反応や、ヨウ化メチルからヨウ素ラジカルを生成する反応等を組み込むことで現実的な消失量を再現できることが分かった。そこで、これらの反応式を全球化学気候モデルに導入した。全球化学気候モデルでは化学モデルで360sの時間ステップを用いており、計算上の制約からboxモデルの時間ステップである10μsのように短く取ることができないため、導入の際には、あらかじめboxモデルで時間ステップを複数設定した実験を行い、オゾン消失の律速となるような反応や、ヨウ素ラジカルを構成する化学種同士の比などの近似計算の妥当性を調べている。boxモデルによる検証の結果、導入した近似計算では60sの時間ステップが妥当であることが分かったため、全球化学気候モデルの化学モデルの時間ステップを60sに変更した。ヨウ素化合物は光解離反応も起こすことが知られており、光解離反応速度の推定には吸収断面積データと放射フラックスが必要である。ヨウ素化合物の吸収断面積データは実験室での推定値が公開されており、放射フラックスは化学気候モデルの放射伝達モデルを利用して推定した。これらの作業により、化学気候モデルに気相におけるヨウ素化合物の化学反応を取り込んだ。ヨウ素化合物の化学反応の有無で2種類のモデルができたので、それぞれのモデルで2000年条件に設定した気候固定実験を行った。結果を比較すると、赤道付近で1年を通してヨウ素化合物の化学反応によるオゾン量の減少が確認された。

しかし近年の研究で、ヨウ素触媒サイクルによるオゾン消失が、熱帯域の対流圏界面付近の下部成層圏では無視できないという推定結果が提示された。大気中のヨウ素化合物は海洋から放出される自然起源のもので、光化学反応や大気エアロゾル上における不均一反応により変化し、大気中の循環によって成層圏にまで到達してヨウ素ラジカルを供給し、ヨウ素触媒サイクルによりオゾン消失に働くと考えられている。本研究では、全球化学気候モデルに対してヨウ素化合物の放出・輸送・沈着プロセスやヨウ素化合物の反応式などを導入することで、成層圏・対流圏におけるヨウ素の化学と輸送の役割を調べることを目的としている。本年度は、昨年組み込んだヨウ素化合物の気相反応に加えて、気相、固相間の分離、エアロゾル上における不均一反応、及び、沈着過程の組み込みを行った。まずはヨウ化メチル(CH3I)、次亜ヨウ素酸(HOI)の気相・固相間の分離を、これまでの研究で推定されている分配係数を仮定して行った。これにより成層圏の無機ヨウ素濃度が1割程度減少した。次に、対流圏の化学輸送モデルで使われている不均一反応のスキームを移植し、これまでの研究で推定されているヨウ素化合物の反応パラメータを入力して実験を行った。その結果、不均一反応による成層圏の無機ヨウ素濃度の増加は気相・固相間の分離により減少する分を相殺する程度であることが解析された。またヨウ化メチルは雲水に溶解して湿性沈着される。既に化学気候モデルには湿性沈着のプロセスが組み込まれているので、そのスキームにヨウ化メチルも追加した。本研究の成果は第23回大気化学討論会で発表し、また化学気候モデルの相互比較に関し共著論文で発表した。本年度は、エアロゾル上における不均一反応、及び、沈着過程の組み込みを行うことを予定していた。昨年度組み込んだヨウ素化合物の気相反応では、海面上から放出されたヨウ化メチルの光解離、および、OHラジカルとの反応により無機ヨウ素を生成することを仮定している。このため無機ヨウ素濃度の推定には、対流圏におけるOHラジカル濃度が重要となる。そこで昨年度のモデルで組み込まれていなかった非メタン炭化水素の反応を組み込むことにより、これまでのシミュレーションで過大評価されていたOHラジカル濃度が観測に近い値になり、再現性が向上した。このモデルにヨウ化メチル、次亜ヨウ素酸の気相・固相間の分離を組み込んだ。さらに大気エアロゾル上における不均一反応の導入を行った。海洋上で1pptvのヨウ化メチルを入力した実験では、元のモデルの赤道成層圏で0.6pptv程度の無機ヨウ素を生じる。元のモデルで行った実験に対して、気相・固相間の分離が無機ヨウ素濃度を減らし不均一反応が増やすため、この時点のモデルでは赤道成層圏で0.6pptv程度の無機ヨウ素濃度となった。さらにヨウ素化合物の湿性沈着のプロセスを組み込んだ。このモデルでは、対流圏のヨウ化メチルが沈着されるため、無機ヨウ素濃度が0.6pptvから0.1pptv程度まで大きく減少した。現在のスキームでは湿性沈着を過大評価している可能性があり、今後、湿性沈着のパラメータの再検討を行う必要があると考えられる。
心不全の代償機序における神経体液性因子の役割

心不全で血漿エンドセリン(ET)-1濃度が上昇し,血管収縮,心筋肥大と心不全増悪因子と考えられるが,ヒトで血漿ET-1上昇の由来として肺血管床が主であり,肺結果抵抗と密接に関係があることを示した.さらに血漿ET-1濃度高値患者で予後が悪いことを証明した(Am J Cardiol 1995 ; 76 : 803-808).これらの事実は内因性ETが,心不全の病態生理に深く関与していることを示唆している.犬心不全モデルでは,心不全で同時に上昇する内因性ANPによりET-1産生が抑制されることをANP特異的拮抗薬(HS142-1)を用いて証明した(Am J Physiol 1996 ; 270: H1819-1824).さらに急性心不全治療薬として用いられているニトログリセリンとニコランジル(ニトロ作用+K channel開口作用)の血行動態に対する耐性出現とその機序について臨床的に検討,その結果血漿cGMP濃度からみるとニコランジルで耐性をきたしにくい原因としてニコランジルのK channel開口作用が重要と示唆された(Am J Cardiol 1995 ; 76 :803-808).心不全で血漿エンドセリン(ET)-1濃度が上昇し,血管収縮,心筋肥大と心不全増悪因子と考えられるが,ヒトで血漿ET-1上昇の由来として肺血管床が主であり,肺結果抵抗と密接に関係があることを示した.さらに血漿ET-1濃度高値患者で予後が悪いことを証明した(Am J Cardiol 1995 ; 76 : 803-808).これらの事実は内因性ETが,心不全の病態生理に深く関与していることを示唆している.犬心不全モデルでは,心不全で同時に上昇する内因性ANPによりET-1産生が抑制されることをANP特異的拮抗薬(HS142-1)を用いて証明した(Am J Physiol 1996 ; 270: H1819-1824).さらに急性心不全治療薬として用いられているニトログリセリンとニコランジル(ニトロ作用+K channel開口作用)の血行動態に対する耐性出現とその機序について臨床的に検討,その結果血漿cGMP濃度からみるとニコランジルで耐性をきたしにくい原因としてニコランジルのK channel開口作用が重要と示唆された(Am J Cardiol 1995 ; 76 :803-808).心不全で血漿エンドセリン(ET)-1濃度が上昇し、血管収縮、心筋肥大と心不全憎悪因子と考えられるが、ヒトで血漿ET-1上昇の由来として肺血管床が主であり、肺血管抵抗と密接に関係があることを示した(Am J Cardiol 1995;75:1162-1165)。さらに血漿ET-1濃度高値患者で予後が悪いことを証明した(Am J Cardiol 1995;76:803-808)。これらの事実は内因性ETが、心不全の病態生理に深く関与していることを示唆している。犬心不全モデルでは、心不全で同時に上昇する内因性ANPによりET-1産生が抑制されることをANP特異的拮抗薬(HS142-1)を用いて証明した(Am J Physiol,in press)。さらに急性心不全治療薬として用いられているニトログリセリンとニコランジル(ニトロ作用+K channel開口作用)の血行動態に対する耐性出現とその機序について臨床的に検討、その結果血漿cGMP濃度からみるとニコランジルで耐性をきたしにくい原因としてニコランジルのK channel開口作用が重要と示唆された(Am J Cardiol 1995;76:803-808)。慢性心不全では血漿エンドセリン(ET)-1濃度が上昇し,血管収縮,心筋肥大と心不全増悪因子と考えられるが,ヒトで血漿ET-1上昇由来として肺血管床が主であり,肺血管抵抗と密接に関係があることを示した.さらに血漿ET-1濃度高値患者で予後が悪いことを証明した(Am J Cardiol 1995;76:803-808).これらの事実は内因性ETが,心不全の病態生理に深く関与していることを示唆している.本年度は高頻度ペーシングにより作製した心不全犬を用いて心不全で上昇するANPとET-1の相互作用を検討した.その結果,犬心不全モデルでは,心不全で同時に上昇する内因性ANPによりET-1産生が抑制されることをANP特異的拮抗薬(HS142-1)を用いて証明した(Am J Physiol 1996;270:H1819-1824).これらの事実はANPの心不全代償機序としてET-1産生の抑制も重要であることを示唆している.
フレッシュコンクリートの材料分離抵抗特性に関する研究

6種類の配合のコンクリートに対し、スランプフロー試験および2種類のロ-ト流下試験を実施するとともに、これを昨年度定式化した個別要素法で解析することを試みた結果、以下の諸点が明らかにされた。(1)スランプフロー値とロ-ト流下時間は独立であり、前者がフレッシュコンクリートの変形ポテンシャルに関係し、後者が変形速度に関するという従来の知見が確認された。(2)個別要素法解析を上質工学分野に適用する場合に用いられる要素間バネ定数および要素間ダッシュポット定数に加えて、モルタルの粘性を表現するバネの引張許容百分率および粗骨材の表面の凹凸を表現するための要素間摩擦定数ならびに必要に応じて要素と底面との摩擦定数を導入し、これらを適切に設定すれば、フレッシュコンクリートの挙動を個別要素法で解析できることが示された。(3)個別要素法によってランプフロー試験およびロ-ト流下試験を解析する場合、バネの引張許容百分率はいずれの場合にも支配的影響を及ぼすことが明らかにされた。このことは、モルタルの粘性が変形したポテンシャルと変形速度に影響することと対応している。(4)要素間摩擦定数はスランプフロー値と直線的関係があることおよびこれがある値以下で変化しても流下時間は変化しないが、この値を超えると流下時間は直線的に増大することが示された。このことより、要素間摩擦定数を適切に選定することにより粗骨材相互の干渉を正しく表現できると言える。(5)ダッシュポット定数により、同一の変形ポテンシャルを持ちながら変形速度の異なるフレッシュコンクリートの挙動が表現できることが示された。実験的手法によりフレッシュコンクリートの材料分離抵抗特性を明らかにするには相当な困難が伴うが、個別要素法による解析精度を上げれば、以上のように、これを解析的に解明する道が拓かれたといえる。フレッシュコンクリートの流動特性を解析する個別要素法プログラムを作成し、これによってスランプ試験および新たに考案した箱形フロー試験におけるコンクリートの流動状況を解析して検討を重ねた。作成した個別要素法プログラムは、コンクリートをモルタルと粗骨材よりなる2相系とし、モルタルの特性を要素間に配したバネおよびダッシュポットならびに要素間摩擦によって表現したものである。実験および解析結果より、以下の諸点が明らかにされた。(1)コンクリートの流動特性解析結果に支配的影響を及ぼすのは、要素間の距離が増加するときの抵抗を表すバネの引張許容百分率(バネの作用がおよぶと考える要素相互の最大純間隔/2つの要素の直径の和×100)および粗骨材が平行方向に相対移動するときの距離に関係しない抵抗を表す要素間摩擦定数である。これらを適切に設定すれば、作成した個別要素法によって、スランプフロー値および箱形フロー値を精度よく解析することができる。(2)ダッシュポット定数は、最終の変形状態には関係しないが、最終に至る前の変形状態に支配的影響を及ぼし、これを適切に設定することによって、時々刻々の変形状態を精度よく解析することができる。(3)バネの引張許容百分率および要素間摩擦定数は、いずれも、他の条件が同じ時、単位水量あるいは増粘剤使用量と直接的関係があることが明らかとなった。モルタルの特性とダッシュポット定数との関係を明らかにするとともに、鉄筋その他の障害物が存在するときのコンクリートの流動特性に関する実験および解析を繰り返すことにより、コンクリートの材料分離特性の解明につなげることが今後の課題である。6種類の配合のコンクリートに対し、スランプフロー試験および2種類のロ-ト流下試験を実施するとともに、これは昨年度定式化した個別要素法で解析することを試みた結果、以下の諸点が明らかにされた。(1)スランプフロー値とロ-ト流下時間は独立であり、前者がフレッシュコンクリートの変形ポテンシャルに関係し、後者が変形速度に関係するという従来の知見が確認された。

(2)個別要素法解析を土質工学分野に適用する場合に用いられる要素間バネ定数および要素間ダッシュポット定数に加えて、モルタルの粘性を表現するバネの引張許容百分率および粗骨材の表面の凹凸を表現するめための要素間摩擦定数ならびに必要に応じて要素と底面との摩擦定数を導入し、これらを適切に設定すれば、フレッシュコンクリートの挙動を個別要素法で解析できることが示された。(3)個別要素法によってランプフロー試験およびロ-ト流下試験を解析する場合、バネの引張許容百分率はいずれの場合にも支配的影響を及ぼすことが明らかにされた。このことは、モルタルの粘性が変形ポテンシャルと変形速度に影響することと対応している。(4)要素間摩擦定数はスランプフロー値と直線的関係があることおよびこれがある値以下で変化しても流下時間は変化しないが、この値を超えると流下時間は直線的に増大することが示された。このことより、要素間摩擦定数を適切に選定することにより粗骨材相互の干渉を正しく表現できると言える。(5)ダッシュポット定数により、同一の変形ポテンシャルを持ちながら変形速度の異なるフレッシュコンクリートの挙動が表現できることが示された。実験的手法によりフレッシュコンクリートの材料分離抵抗特性を明らかにするのは相当な困難が伴うが、個別要素法による解析精度を上げれば、以上のように、これを解析的に解明する道が拓かれたと言える。
フッ化物イオンとカルベン配位子によるクロスカップリング反応の協奏制御

有機ハロゲン化物と有機金属化合物とのクロスカップリング反応は,近代化学を支える鍵反応の一つとして知られる.しかしながら,工業的に利用されている反応の多くはパラジウムやニッケルなどの希少遷移金属が触媒として用いられており,将来的な供給に課題を抱える.これに対し我々は,資源性に優れる鉄を触媒としたクロスカップリング反応の開発とプロセス化を目指して研究を行う.今年度は,これまでに開発したフッ化鉄-NHCカルベン触媒によるビアリールカップリング反応と塩化鉄-TMEDA触媒によるアリールーアルキルカップリング反応に関し,錯体化学,計算化学,および分光化学的手法を用いて反応機構解析を行った.その結果,各々,2価のアリール鉄を活性種とした2価-3価あるいは2価-4価の触媒サイクルを経由して反応が進行していることが明らかとなった.前者では,NHCカルベンが鉄中心の配位数を,フッ化物イオンが価数を制御していることが選択性発現の鍵となっている.一方後者では,共触媒としてマグネシウム塩が必須であり,協奏的な触媒作用が明らかとなった.更に,一連の反応機構解析を通じて得られた知見を基に塩化鉄-フェニレンジホスフィン錯体を合成し,これを用いた鉄触媒根岸カップリングおよび鈴木-宮浦カップリング反応の開発に成功した.更に,鉄触媒根岸カップリングを用いてパーフルオロアリール基をメソゲンとして有する液晶分子の短段階合成に成功した.有機ハロゲン化物と有機金属試薬とのクロスカップリング反応は,近代化学を支える鍵反応の一つとして知られる.しかしながら,工業的に利用されているそれらの反応の多くはパラジウムなどの希少遷移金属が触媒として用いられており,将来的な供給,環境調和性に課題を抱える.これに対し我々は,資源性および安全性に優れる鉄族元素とフッ化物イオンとを触媒とする芳香族ハロゲン化物と芳香族グリニャール試薬のクロスカップリング反応の開発に成功した.本課題研究では,更なる触媒の高活性化と選択性の向上を念頭に,計算化学と実験化学的手法により反応機構の解明を目指した.まず,量論量の触媒前駆体を用いた対照実験により,本反応が従来のクロスカップリング反応のように触媒前駆体である2価金属塩が0価へと還元されてから触媒活性を示しているわけではなく, 2価のままで触媒として働いている事が示唆された。そこで密度汎関数計算により反応機構解析を行った結果,フッ素の強い金属架橋能により金属交換反応が抑制され, 2価ジフェニル金属が生成しないために還元的脱離による触媒活性種の0価への還元が進行しないこと,アート型の2価中間体が酸化的付加を受け4価の中間体が生成し,速やかなビアリールの還元的脱離によりを2価中間体が再生するという触媒サイクルを経由していることが明らかとなった.有機ハロゲン化物と有機金属化合物とのクロスカップリング反応は,近代化学を支える鍵反応の一つとして知られる.しかしながら,工業的に利用されている反応の多くはパラジウムやニッケルなどの希少遷移金属が触媒として用いられており,将来的な供給に課題を抱える.これに対し我々は,資源性に優れる鉄を触媒としたクロスカップリング反応の開発とプロセス化を目指して研究を行う.今年度は,これまでに開発したフッ化鉄-NHCカルベン触媒によるビアリールカップリング反応と塩化鉄-TMEDA触媒によるアリールーアルキルカップリング反応に関し,錯体化学,計算化学,および分光化学的手法を用いて反応機構解析を行った.その結果,各々,2価のアリール鉄を活性種とした2価-3価あるいは2価-4価の触媒サイクルを経由して反応が進行していることが明らかとなった.前者では,NHCカルベンが鉄中心の配位数を,フッ化物イオンが価数を制御していることが選択性発現の鍵となっている.一方後者では,共触媒としてマグネシウム塩が必須であり,協奏的な触媒作用が明らかとなった.更に,一連の反応機構解析を通じて得られた知見を基に塩化鉄-フェニレンジホスフィン錯体を合成し,これを用いた鉄触媒根岸カップリングおよび鈴木-宮浦カップリング反応の開発に成功した.更に,鉄触媒根岸カップリングを用いてパーフルオロアリール基をメソゲンとして有する液晶分子の短段階合成に成功した.
高精度・多検体同時解析可能な巨大ＤＮＡコーミング法の開発

本研究課題では分子生物学・ナノエレクトロニクスなど広範囲での応用が期待される巨大DNA分子伸張固定および多検体同時解析を可能にする新規分子コーミング技術の開発を目的とした。従来の分子コーミング法では気-液界面の移動の際に分子が基板に伸張固定されていたが、本研究課題では油-液界面を用いることで周辺雰囲気に依存しない分子コーミングが可能であるかどうか検討した。その結果、これまでほとんど調べられていなかった現象である油-液界面移動に伴うDNA伸張固定の可能性が見出された。微細流路を組み合わせることで集積化は原理的に可能であり、本研究で提案する手法の実現可能性が示されたと考えられる。本研究では分子生物学・ナノエレクトロニクスなど広範囲に応用可能なゲノムサイズDNA伸張固定・多検体同時解析・集積化を可能にする新規分子コーミング技術の開発を目的としている。前年度の研究では、微細流路内部に単一の油-液界面を形成し、ポンプを用いてその界面移動を制御してDNAを伸張固定できることを示した。今年度はこの方法についてDNA伸張固定の基礎的検討を行った。界面移動速度、DNA溶液特性(DNA濃度、pH、塩濃度)、油-液界面特性(界面活性剤、界面へのDNAの吸着)、オイル特性(粘度、比重)およびガラス表面特性(親水・疎水)をパラメータとして分子コーミングを行い、蛍光顕微鏡観察によりDNA観察を行った。その結果、既往のコーミング法と同様にDNAの伸張固定化には添加するNaCl濃度が伸張度と固定化密度に大きく影響することが示された。また断面のアスペクト比が異なる微細流路を用いると流路上面から見た界面形状が変化する。DNAは界面に対して垂直に伸張固定されるため、界面を湾曲させずに流れ方向にDNAを伸張固定するには断面のアスペクト比が小さい流路が適していた。また安定した流れ・界面の形成に水溶液とオイルの比重の関係が重要であった。この方法の応用例として、長鎖DNAを酸化ストレスに晒し、それによるDNAの切断を定量的に解析した。さらに反応時に抗酸化剤を添加した場合にはDNA切断が抑制され、抗酸化効果も定量化できた。分子コーミング(Molecular combing)は、溶液中のDNA分子を均一に固体表面に伸張固定する手法である。分子コーミングにおいて、多検体同時解析・集積化のほか、再現性の低さが従来法の問題となっている。これらを解決するため、従来は気-液界面の移動に伴うDNAの伸張固定であったが、本研究では油-液界面の移動に伴う分子コーミング法を提案している。H24年度は、これまでにほとんど調べられていないこの現象について重点的に調べ、実現可能性を検証した。具体的には、まず試料・試薬使用量の低減・多検体同時解析の観点で有効な油中微小液滴に着目し、長鎖DNAを内包した油中液滴を用いた。DNAを内包した液滴を分散させたオイルをガラス斜面で滑降させて分子コーミングできるか検討したが、液滴とガラス表面の接触面積が非常に小さく、本研究で検討した範囲では長鎖DNAの伸張固定に適さないことが示された。そこで、基礎的な特性が解析しやすいように微細流路内部に単一の油-液界面を形成し、ポンプを用いてその界面移動速度を制御しつつDNAを伸張固定できるかどうか検討した。その結果、ある条件下で伸張固定可能であることが示された。また、微細流路中では界面形状がDNAの伸張方向に顕著な影響を及ぼすことが示された。当初計画では、油中に分散させたDNA溶液を用いて油-液界面移動による分子コーミングが可能であるか基礎的検討を進めることとしていたが、検討した範囲では困難であることが示された。しかし、油中液滴で形成される油-液界面を微細流路中に形成した単一油-液界面に置き換えて検討した結果、DNAを伸張固定できることが示された。従ってこれまでほとんど調べられていなかった現象である油-液界面移動に伴うDNA伸張固定の可能性が見出されたことになる。また、集積化の観点で油中微小液滴の利用を考えていたが、微細流路を用いることでも集積化は原理的に可能であり、本研究で提案する手法の実現可能性が示されたと考えている。H24年度に引き続き微細流路中の油-液界面移動によるDNA伸張固定の基礎的検討を行う。界面移動速度、DNA溶液特性(DNA濃度、pH、塩濃度)、油-液界面特性(界面活性剤、界面へのDNAの吸着)、オイル特性(粘度、比重)およびガラス表面特性(親水・疎水)をパラメータとして分子コーミングを行い、蛍光顕微鏡観察によりDNA観察を行う。

伸張固定された視野あたりの平均分子数・平均DNA鎖長を基に固定化効率や伸張の度合い(理論物理鎖長との比)・断片化の有無を中心に評価し、最適条件を決定する。また、微細流路中では水相と油相を区画化でき、かつ油相中でDNAに生化学的な変化が生じる可能性は極めて低い。最終目標である細胞からの巨大DNA引出と伸張固定を考えたときに、細胞の破壊・タンパク質およびRNAの分解・蛍光染色といった単位操作をワンポットで実現できる可能性が高い。その実現に向けて実験的な検討を進めていく。25年度は当初計画通り、観察対象となるDNA試料調製のための生物試料・酵素・高純度試薬、ガラス表面処理で使用する高純度試薬、観察時に使用するカバーガラスなどガラス製品、オイル類など、消耗費に多くを充てる。ほか、学会発表旅費など成果発表に充てる。
ドイツ文学研究とカルチュラル・スタディーズ

1.本研究は、ドイツにおける「文化」概念の特殊性を、18世紀啓蒙主義から第一次世界大戦終了直後あたりまでを射程として、時系列にそって整理した上で、「文化」がドイツでは、19世紀から20世紀の世紀転換期をのぞいて、「教養(Bildung)」や「文明(Zivilisation)」と差異化したり協働したりしながら、一貫してイデオロギー化していたことを明らかにした。2.イギリス産のカルチュラル・スタディーズからドイツ産の「文化学」が作り上げられる過程を、20世紀初頭の文化哲学から20世紀末の「文化学」の誕生までを射程として、時系列にそってたどった。その結果、ドイツの「文化学」がカルチュラル・スタディーズから継承したのは、(1)「文化」概念の拡張、(2)大文字の「文化」の相対化、(3)テクスト主義、(4)反本質主義、(5)理論のブリコラージュ、(6)対象の複数性であり、継承しなかったのは、(1)労働者階級の文化的所産の評価、(2)政治性、(3)実践への通路、(4)社会からの規定、(5)テクスト主義批判、(6)主体としての人間という表象であるということがわかった。3.これらをふまえた上で最終的に、ドイツの「文化学」およびメディア論から、日本における外国文学研究が何を学びとることができるかを考察し、日本版の「文化学」を構築するための前提を、以下の六点にまとめた。(1)対象は事後的に構築される。(2)「文化」はテクストとして読むことができる。(3)歴史モデルは脱線条化され空間化される。(4)記憶と記録からハイパーテクストをつくる。(5)メディアが経験をフォーマットする。(6)「文化」とは星座を見いだすことである。本年度は、カルチュラル・スタディーズ(以下CS)の受容における特殊ドイツ的な性格とはいかなるものかを考察した。ドイツの大学はCSの受容に関してかなり慎重だった。アングロサクソン系のCSが主としてマルクス主義と構造主義を応用し、ポップ・カルチャーにまで考察対象を広げたのに対し、ドイツの大学は、研究方法としてのマルクス主義を脱イデオロギー化することができず、アドルノ以来、いわゆるロー・カルチャーを対象として取り込むことができなかったからだ。しかしながら、90年代、ドイツの大学で「文化学」が一種の流行現象になったのは、それが、CS特有のイデオロギー批判から、かなり自由であったことに起因する。ただし、「文化学」はCSと相容れないのではなく、CSは「文化学」に包括される一つの方法として位置づけられる。その点で、英米のCSが対象領域の選択において自由だとすれば、ドイツの「文化学」はその方法論の多様性において自由だということができるだろう。しかしながら、この方法論の多様性は、ドイツの伝統的な学問が通有する厳密な方法と体系への志向とは、本来矛盾する。この二つの方向性が矛盾にとどまるのか、それとも新しい知へと総合されるのかを考察することも、本研究の今後三年間の課題になるだろう。なお、本研究が開始する直前の平成14年3月に、日本独文学会が主催する蓼科文化ゼミナールにおいて、「Neun Thesen zur Moeglichkeit einer kulturwisse nschaftlich orientierten Literaturwissenschaft im Kontext der gegenwaertigen japanischen Germanistik」というタイトルの講演を行い、招待講師であったベルリン・フンボルト大学のH.ベーメ教授と意見を交換することができた。

本年度日本独文学会春季大会において、「日本の視点からゲルマニスティクの新しいパラダイムを探る」と題されたシンポジウムに参加し、文化学(Kulturwissenschaft)の観点から日本におけるドイツ文学研究の展望を語る機会を得たので、来年度に予定していた「ドイツにおけるカルチュラル・スタディーズ受容の在り方から、日本のドイツ文学研究は何を学び取ることができるか?」という課題を先に扱うことにした。<構築主義>は概念に負荷されているイデオロギーを摘出するための理論素であるが、構築を排除してニュートラルな言説を作ろうとするのではなく、むしろ構築することを積極的に推し進めるべきである。その際、特定の文学テクストを特権化するのではなく、<新歴史主義>と同じように、周辺部の他のテクスト群もそれと同一平面に並置しなければならない。E.カッシーラーやM.ウェーバーが文化を<ネット>として表象していたことも重要である。これら三つの理論素から得られる日本の文化学の戦略は、星座のイメージに凝縮される。文化学の課題は、複数のテクスト・作者・事件・問題・シンボルなどの星の間にあらかじめ差異を設けないことで、星座を構築し、それを相互主観的な水準で確認できるものにすることである。なお、「ゲーテ時代の身体:切断されていた親指P、あるいはマイスターを迂回する身体」(5月:日本ゲーテ協会・シンポジウム)と「Bild und Schrift auf der Haut」(7月:立教大学文学部国際会議Schrift und Bild-Visuelle Kulturen in Europa und Japan)という二つの講演を行ったが、これらは、Kulturwissenschaftを文化学として輸入するという問題意識から発したケーススタディである。2003年度に開催されたシンポジウムにおける口頭発表に基づき、「真理ではない星座の構築に向けて」というタイトルの下、「ドイツにおけるCS受容の在り方から、日本のドイツ文学研究は何を学び取ることができるか?」という問題を扱った論文を発表した。またKulturwissenschaftを特集した日本独文学会の機関誌では、編集長として巻頭論文を執筆し、上記の問題の考察を続けるとともに、「ドイツにおける<文化>概念を他の欧米諸国のそれと区別するものは何か?」という問題を扱ったいくつかの論文を編集した。さらに本研究課題を構成する最後の(つまり第四の)問題である「CSをドイツ文学研究再活性化のための方法として位置づける際に、メディア論を両者を結ぶ媒介項とすることができるか?」に一定の答を出すための準備作業として、Zentrum fuer Literaturforschung, Berlinで開催されたシンポジウム(Uebertragungssysteme : Literaturen-Medien-Wissen)において、"Das Ich als Medium fuer drahtlose Uebertagung, oder Menschen ohne Firewall"という講演を行った。"Auslassungen, Leerstellen als Movens der Kulturwissenschaft"に掲載した"Subject Subjekt"という論考でも、この問題を考察した。『ゲーテ年鑑』に掲載した「主体と死体-マイスターをめぐる身体性-」は、Kulturwissenschaftの立場からゲーテのテクスト群を読み直す試みである。
蛋白分解による細胞機能制御

プロテアーゼの生体機能を主体に解析し以下の研究成果を得た。(1)リソソーム/液胞系:自食作用は細胞が飢餓などのストレス環境下に自己の細胞成分を分解する生理機能であり、真核細胞に普遍的に存在する。大隅は酵母においてクローニングした16個のAPG遺伝子間の相互関係を明らかにし、自食作用を分子レベルで理解する上で画期的な成果を得た。木南はとくにオートファジーに必須な二つのタンパク結合反応に中心な役割をもつApg7pについて解析した。これらの研究によってオートファジーにおける中心課題であるオートファゴソーム形成の分子機構に関して明確なイメージが得られ始めている。世界的に注目されたのは、ユビキチン経路と同様な二つのタンパク質結合反応がオートファジーの進行に必須であることがわかったことである。Apgシステムは高等動植物に至るまで広く保存されていることが確認され、さらに他の膜動態にも関与している可能性が考えられており、先進的な研究として広く国際的に注目されている。TPP-IあるいはカテプシンDというリソソームプロテアーゼの欠損により神経症状を伴うリソソーム蛋白蓄積症を呈することが解析された(木南、内山)。また、昆虫(センチニクバエ)の蛹から成虫に分化する過程にカテプシンLとBが関与することが明らかになった(名取)。(2)カスパーゼ:アポトーシスには一群のカスパーゼが働くが、カスパーゼ-1,3,7,9のノックアウトマウスが杭田により、カスパーゼ-11のノックアウトマウスが三浦によって作製され、それらの生体機能と活性化カスケードの解析が行われた。一方、アポトーシスにおけるカスパーゼ以外の蛋白分解系であるユビキチン-プロテアソーム系(川島)、カルパイン系(大海、川島)やリソソーム系(内山)の関与についても解析が進み、その実体が明らかになりつつある。(1)細胞周期制御:横沢はカエル卵での細胞周期の遅れとマルチユビキチン化蛋白質の蓄積の関係を明らかにし、そのマルチユビキチン化蛋白質を単離した。さらに、マルチユビキチン化蛋白質を分解する26Sプロテアーム構築に関与する因子を推定できた。岸本はサイクリンBの蛋白質分解はM期の終了に必須であるが、第1減数分裂終了時に限ってそのパターンが緩やかなものとなる点について解析した結果、サイクリンB蛋白質分解の緩やかさは、MosからのMAPキナーゼを介さない経路によりもたらされると判明した。(2)細胞増殖・分化の制御:名取はエクダイソンによってセンチニクバエの成虫原基細胞から分秘されるカテプシンLが成虫原基表面のどのような蛋白を分解するか同定を試みた。その結果、二つの蛋白を同定し、いずれも成虫原基の基底膜の構成蛋白であることを明らかにした。川島は試験官内実験でも培養細胞レベル実験でも、カルパインは三量体GTP結合タンパク質のGs(α)サブユニットを限定分解するという結果を得た。カルパインは限定分解を介して、Gタンパクの活性化を持続させることが強く示唆された。(3)細胞死制御:三浦は新規のICE/CED-3ファミリーICH-3をクローニングした。ICH-3はLPS刺激によってその発現が顕著に上昇し、ICEの活性化を促すことが示唆された。内山は、PC12細胞や後根神経節細胞(DRG)を無血清あるいはNGFを除去した条件で誘導されるアポトーシスの研究から、ICE/CPP32系とは別に、リソゾームのカテプシン群で制御される新たなアポトーシスの経路を見いだした。