hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
成人スチル病の高フェリチン血症に関する研究:産生機序および病態への関与

以上より活動期成人スチル病では高サイトカイン血症を呈しており、高フェリチン血症の発生、誘導へこれらサイトカインが関与している可能性が示唆された。一方著増血清フェリチンが本症の病態に何らかの関与があるかという点に関して我々は血清フェリチン中の鉄を介したHO発生による組織障害機序を考えてきたが活動期血清フェリチン分子内の鉄含有量はむしろ低いとする結果を得た。この結果の解釈として(1)血清フェリチンは組織で産生され、そこでHO発生に関与した後のフェリチンをみているために鉄含有量が低い(2)フェリチンの異常産生時では鉄がフェリチン分子内に十分とり込めないため鉄含有量が低いの2点が考えられ、さらに検討を要する。昨年度の研究を踏まえ、本年度は以下の知見を得た。1)成人スチル病ではその活動期にみられる著増血清フェリチン(1,000ng/ml以上)の85-95%がCon-Aとは結合しないフェリチン(Con-A非結合フェリチン)であり、50-90%がCon-A結合フェリチンである健常人の血清フェリチンとは異なっていた。しかもこのCon-A非結合フェリチンの比率は、治療により血清フェリチンが正常となっても変化しなかった。このように成人スチル病では非活動期においてもフェリチンのCon-A結合性において健常人とは異なっており、今後何故Con-A非結合フェリチンが生成され・血中へ出現するのか(粗面小胞体での糖鎖の合成異常?)さらに研究が必要である。2)近年種々の培養細胞を用いた研究によって種々のサイトカンが細胞内フェリチンの合成を増加させることが明らかになってきた。昨年度,患者血清IL-1β,TNF-α,IL-8が活動期は非活動期に比して有意に高値(p<0.01)であることを報告したが、今年度はIL-6、IFN-γをELISAにて測定したIL-6は活動期の血清において有意に高値であった(p<0.01)。一方、IFN-γは活動期、非活動期とも血清中に検出されたが両者間で有意差を認めなかった。3)血清フェリチン分子中の鉄含有率(鉄濃度/フェリチン濃度)は成人スチル病患者では2.6-6.3%であり健常人血清フェリチンの鉄含有率との間に有意差を認めなかった。さらに、活動期の鉄含有率が非活動期に比して低下する事もなかった。最近入手した重症肝不全患者の血清フェリチン(23,000ng/ml)の鉄含有率は10%、精製ヒト脾フェリチンの鉄含有率は平均24.4%であった。以上成人スチル病の活動期は種々の高サイトカン血症がみられ、これらによって高フェリチン血症が惹起される可能性がある。一方、フェリチン分子中の鉄が病態に関与する可能性については、血清フェリチンの鉄含有率があまりにも低く、血清フェリチンが直接関与する可能性は低いと思われる。しかし組織(網内系?)の鉄含有率の高いフェリチンが炎症のため細胞内から逸脱するとき鉄が放出されるため低くなる可能性は否定できない(その時、ヒドロキシラジカルの産生がおこりさらに強い組織障害を惹起する)。
未成熟ミエロイド系細胞を標的とした口腔癌に対する新たな免疫療法の開発

口腔癌マウスモデルを用いた解析により、腫瘍局所においてミエロイド系抑制性細胞が増加していることが確認された。それらは、化学療法剤である低用量のゲムシタビンを使用することにより抑制することが確認された。本研究は、癌組織で著しく増殖することが報告されている未成熟なミエロイド系抑制性細胞(Myeloid derived suppressor ce11: MDSC)を標的とした口腔癌に対する新たな免疫療法の開発を目的としたものである。これまでの研究成果では、マウス口腔癌モデルを用いた免疫学的解析により、このCD11bおよびGr-1陽性のMDSCが口腔癌担癌マウスの腫瘍局所および所属リンパ節内で増加していることが確認された。しかしながら、同時にCD4、CD25、Fox p 3陽性のRegulatory T ce11(Treg)も著しく増加していることが確認され、さらにこの腫瘍内のTregが、MDSCなどのCD11b陽性細胞を制御していることを示唆する結果も得られた。具体的には、腫瘍内のTregは、細胞表面上にdeath ligandとして有名なFasLやTRAILの発現を増強させることが確認された。一方で、腫瘍内のCD11b陽性細胞は、death ligandの受容体となるdeath receptorを細胞表面上に発現増強することも確認された。すなわち、口腔癌の腫瘍組織内では、TregがTRAIL/TRAIL-receptorやFasL/Fasを介したCD11b陽性細胞におけるアポトーシスの誘導で、MDSCなどの数を制御していることが示唆された。これらの結果は、Tregが腫瘍局所内でMDSCをターゲットとした免疫反応に寄与していることを示唆するものであり、腫瘍組織内での免疫抑制性細胞集団の相互作用の解明が、今後の同分野の研究にとって重要となりうることが示された。本研究では、免疫抑制性細胞集団として知られ、担癌状態などで著しく増加することが知られているミエロイド系抑制性細胞(Myeloid derived suppressor cell;以下MDSC)の形質変化を誘導し、口腔扁平上皮癌に対する新たな免疫学的アプローチによる治療法の開発を目的として、シンジェニックのマウス口腔扁平上皮癌モデルを用いて、口腔癌組織におけるMDSCの分布および機能解析と、このMDSCを効果的な抗原提示細胞へと形質変化させる手法の検討を行い、口腔癌に対する新たな免疫ワクチン療法のために応用することが可能かどうか解析を行った。その結果、1.腫瘍組織内のMDSCを含めたCD11b陽性細胞の細胞表面上では、death receptorであるDR5(TRAIL-R2)やFas(CD95)の発現が増強していること。2.腫瘍組織内のTregの細胞表面は、これらのdeath receptorに対するligandであるTRAILやFasLの発現が上昇していること。3.中和抗体を用いた解析で、腫瘍細胞から分離しらTregは、Fas/FasLを介してCD11b陽性細胞のアポトーシスを誘導すること。4.SCCVII担癌マウスに低用量のゲムシタビンを投与した場合、腫瘍組織内では、樹状細胞上のCD80,CD83,CD86,CD40,MHC-classI,MHC-classIIの発現が増強していたこと。5.SCCVII担癌マウスに低用量のゲムシタビンを投与した場合、腫瘍細胞上のT細胞補助的刺激分子や免疫細胞の接着等に係る分子群が増強していたことが確認された。すなわち、口腔癌組織内では、免疫細胞や癌細胞とともにMDSCは、低用量の化学療法剤で形質変化が誘導されることが確認された。これまでの研究成果として、マウスモデルを用いた解析で口腔癌局所におけるMDSCの存在が確認され、またTregとの相互作用が示唆された。治療戦略として、MDSCの制御には、Tregの解析が同時に必要であるという課題が明確化されたものと考えられる。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後の推進方策としては、TregによるMDSCを含めたCD11b陽性細胞のアポトーシスの誘導機構における、death ligand/death receptorを介したメカニズムに注目する。具体的には、in vitroおよびin vivoでの解析において、それぞれの中和抗体を用いた解析を行い、その制御メカニズムを解明するとともに、それらの中和抗体の治療効果を解明する。
中国諸民族集団におけるGc型、Pi型およびα_2HS型遺伝子の分布

中国本土在住の漢民族(8集団)及び少数民族(12集団)について、ビタミンD結合タンパクとして知られるGc (DBP)、タンパク分解酵素の働きを抑えるPi及びα2HSなどの血清タンパクの遺伝多型を検索した。Gc型遺伝子については1F遺伝子はオロチョン族で最高値を示す(0.634)、最低値(0.294)はチベット族(合作)でみられ、漢民族で西安の0.453と、成都の0.376の間でみられる。1S遺伝子ではウイグル族の0.394で最高値を、長春の漢民族で0.202の最低値を示す。2遺伝子は昆山の漢民族で0.388を最高としてオロチョンで0.149の最低となる。以上のようにGc遺伝子の分布は民族毎にも、また地理的にも明らかな変異を示さない。因に、日本人の平均的な値は1Fで0.421、1Sで0.301、2でも0.258であり、中国の諸民族に比べると、それぞれが一般的に中間的な値を示す。又フィリピンのネグリト族で見出された1A3変異遺伝子はチベット、蒙古、ウイグル族、ハルビン、長春、大連、昆山、西安、成都、貴陽など広く中国全土でも見出された。Tf型についてはTfC1、C2、C3およびB、D遺伝子が、Pi型についてはM1、M2、M3、および変異遺伝子が、α2HS型については1、2および変異遺伝子が見出された。TfC1遺伝子を主として述べると、検査の可能な範囲ではツングース族の0.883を最高に、回族の0.670を最低とするが、漢民族および少数民族を通じて全般に高い値を示す。変異型ではD遺伝子は低い値ながら殆ど全集団にみられるが、B遺伝子は更に低い頻度でウイグル族、チワン族、チベット族で見出されている。Pi型ではM1遺伝子についてオロチョンの0.819を最高とし、チワン族の0.680を最低としての範囲内にある。この遺伝子についても際立った差異を示さない。殆ど全集団に少数ながら変異型が認められた。α2HS型についても同様に、漢民族と少数民族との間には明らかな差異は認められない。血液多型性形質の特徴は,親から子に規則正しく遺伝することと,遺伝子の頻度に関して民族ごとに変異が見られ,遺伝子勾配を示すことである.このような意味で血液多型性形質は民族の特徴づけや移動の跡づけに有用な遺伝標識として用いられている.昭和62年度においては,我々は中国諸地域在住の漢民族について,血清型の中,ビタミンD結合タンパクとして知られるGC型遺伝子の分布について調査研究を行ってきた.昭和63年度においてはこれを更に中国在住の少数民族についてその調査研究を拡げることを企てている.検査を行った漢民族ではハルビン,長春,大連,昆山,西安,成都,長沙,貴陽など計1494名の血清資料について次の成績を得た.1F遺伝子ではその頻度は0.4531(西安)

0.3757(成都)の間に, IS遺伝子ではその頻度は0.3054(貴陽)0.2024(長春)の間に, 2遺伝子ではその頻度は0.3879(昆山)0.2483(貴陽)の間にある.変異型はハルビン0.0232,長春0.0417,大連0.0287,昆山0.0111,西安0.0125,成都0.0169,長沙0.0269,貴陽0.0101の頻度でみられる.その中で多くみられるのは1A3と1A2である.日本人集団では1F型0.4209, IS型0.3006, 2型0.2579,変異型0.0206であって,今回検査した漢民族の値の中におさまる.ネグリトや日本人集団で見い出された変異型:1A2型はハルビン,昆山,長沙などの集団でも見い出されている.中国本土在住の漢民族(8集団)および少数民族(12集団)について、ビタミンD結合タンパクとして知られるGc(BDP)、タンパク分解酵素の働きを抑えるPiおよびα2HSなどの血清タンパクの遺伝多型を検索するのが本研究の主題である。今年度はTf型、Pi型およびα2HS型を、漢民族および少数民族の血清資料について検索を行い次の成果を得た。Tf型についてはTfC1,C2,C3およびB,D遺伝子が、Pi型についてはM1,M2,M3および変異遺伝子が、α2HS型については1,2および変異遺伝子が、見出された。TfC1遺伝子を主として述べると、検査の可能な範囲ではツングース族の0.883を最高に、回族の0.670を最低とするが、漢民族および少数民族を通じて全般に高い値を示す。変異型ではD遺伝子は低い値ながら殆ど全集団にみられるが、B遺伝子は更に低い頻度でウイグル族、チワン族、チベット族で見出されている。Pi型ではM1遺伝子についてオロチョンの0.819を最高とし、チワン族の0.680を最低としての範囲内にある。この遺伝子についても際立った差異を示さない。殆ど全集団に少数ながら変異型が認められた。α2HS型では1遺伝子はメオ族の0.835を最高に、オロチョン族の0.523を最低として全ての集団はこの範囲におさまる。漢民族と少数民族との間には遺伝子頻度について明らかな差異は認められない。
ラセミ体アミノ酸N-カルボキシ無水物の結晶構造と固相重合性との関連

ラセミ体アミノ酸N-カルボキシ無水物(NCA)のうち、DL-バリンNCAとDL-フェニルアラニンNCAの単結晶の構造解析に成功した。DL-バリンNCA結晶は、斜方晶系で、空間群=Pca21、a=8.938(1),b=10.207(2),c=7.788(1)Aであった。水素結合は、L体のカルボニル基((C(1)=O(1))とD体のイミノ基間、およびD体のカルボニル基とL体のイミノ基間に形成され、L-体とD-体がc軸方向に連なっていた。DL-フェニルアラニンNCA結晶は斜方晶系で、空間群=Pna21、a=9.606(2),b=6.378(2),c=30.077(5)Aであった。水素結合は、一個のイミノ基と別のL体のカルボニル基((C(1)=O(1))とD体のカルボニル基((C(2)=O(3))の二個の結合の間に形成されていた。またD体のイミノ基は、D体とL体のカルボニル基との間に同様の水素結合を形成していた。この結果、DL-バリンNCAに対してDL-フェニルアラニンNCAの方が固相反応性が低い理由は水素結合の違いによる分子運動の阻害効果のためと思われた。一方、DL-バリンNCAおよびL-バリンNCAの固相重合をアニソール溶液中の重合と比較し、以下のようなことがわかった。(1)溶液・固相ともL-体の方がDL-体よりも反応性が高い。(2)L-体は溶液の方が固相より、やや反応速度が大きい。反応は、結晶内の1軸に垂直な層内でランダムな方向に起こり、生成ポリペプチドはβ-構造である。(3)DL-体は溶液の方が固相より反応速度はずっと大きい。生成ポリマーの分子量は固相で経時的増大が起こる。生成ポリマーは、ランダムコイル型の形態と見られる。なお、反応およびグルタミン酸エステルの結晶作成については引き続き検討中である。本年度は、ラセミ体バリンN-カルボキシ無水物(NCA)の単結晶の構造決定と、その固相反応性の特徴を検討した。構造解析については、前年度に、ほぼ成功し、本年度は、結晶内の構造の細部をみた。ラセミ体バリンNCAは、L-体とD-体が、それぞれ、別々に水素結合で連なった構造をしていることがわかった。ラセミ体バリンNCAの固相重合の特徴を、溶液重合およびL-体の固相重合と比較した結果、次のような特徴が挙げられた。1)ラセミ体の固相重合の速度は、溶液よりも少し遅い。2)ラセミ体固相重合で得られるポリマーの分子量は、溶液中での生成物よりも大きい。3)生成物の分子形態は、L-バリンNCAの固相重合で得られるポリマーとは異なる。以上のような結果は、ラセミ体バリンNCAの結晶中での反応は、L-体とD-体の混在の為に、進行が、遅いが、それでも、結晶内の分子配列には、高分子量の生成物を与える要素があると解釈される。今後、反応の方向の存否を確認してから、まとめる予定である。第二のラセミ体として、フェニルアラニンNCAの単結晶の作成に取り組んだ。数十回の試みの末、現在、望ましい結晶が、容器の中で成長している段階である。このまま、重合による破壊がなければ、X線結晶構造解析に取り組めることが期待出来る。なお、ラセミ体アミノ酸との比較の為に、従来から行ってきた、L-体アミノ酸NCAについても、実験を続けており、本年度は、総説的な論文3報を仕上げることが出来た。

(1)溶液・固相ともL-体の方がDL-体よりも反応性が高い。(2)L-体は溶液の方が固相より、やや反応速度が大きい。反応は、結晶内の1軸に垂直な層内でランダムな方向に起こり、生成ポリペプチドはβ-構造である。(3)DL-体は溶液の方が固相より反応速度はずっと大きい。生成ポリマーの分子量は固相で経時的増大が起こる。生成ポリマーは、ランダムコイル型の形態と見られる。なお、反応およびグルタミン酸エステルの結晶作成については引き続き検討中である。
太平洋およびメキシコ湾の洋上を含めた現代の米国メキシコ境界地域に関する包括的研究

本研究では、現代の米国メキシコ間の文化や社会のつながりについて、地上に引かれた国境線を挟んだ地域ではなく、海域に着目して調査を行う。具体的には、太平洋地域(米国島嶼部を含む)およびメキシコ湾地域の境界を調査対象とし、学際的に考察する。研究の目的は、(1)文献調査や文化人類学的な手法を取り入れた現地調査を通じ、領海や排他的経済水域等の設定によって生じた海上の地理的境界線が、海を超えて広がる文化や社会のつながり、そして物資や資本、人の移動や地域の相互協力にいかに影響しているかを明らかにすること、(2)地上の国境のみに着目して議論されがちな現代の米国メキシコ境界地域の全体像を明らかにすることである。
クロザピン誘発性無顆粒球症の発症機序解明と発症予測バイオマーカーの探索

クロザピンの副作用であるクロザピン誘発性無顆粒球症の発症には、免疫学的機序が関与している可能性がある。しかし、未だにその機序は明らかになっておらず、発症を予測する方法もない。本研究の目的は、クロザピン誘発性無顆粒球症の発症機序解明や発症を予測するバイオマーカーの同定である。本年度は免疫学的機序の関与の検証を目的として、リンパ球刺激試験を進めた。またクロザピン誘発性無顆粒球症・顆粒球減少症の遺伝的リスクであるHLA-B*59:01の関連の追試のため、新規の無顆粒球症症例を用いてHLA関連解析を行った。リンパ球刺激試験:副作用発症群としてクロザピン誘発性無顆粒球症を発症した患者4名とトレラントコントロール群として副作用を発症しなかった4名から血液検体を採取した。リンパ球増殖においてトレラントコントロール群との差を明確にするため、副作用発症群は軽症な表現型である顆粒球減少症群を含めず、重篤な表現型である無顆粒球症群のみを用いた。次に血液検体より末梢血単核細胞(PBMC)の単離を行った。本検討では遺伝的リスクであるHLA-B*59:01の保有の有無によるリンパ球増殖の差も見るため、各症例のHLA-B*59:01の保有の有無を確認した。クロザピン誘発性無顆粒球症群の1例のみがHLA-B*59:01を保有していた。今後、PBMCにクロザピンあるいはクロザピン代謝物を添加し、さらに3H-thymidineを加え培養した上で、その取り込みを測定し、クロザピン誘発性無顆粒球症群とトレラントコントロール群におけるリンパ球増殖の差を確認する。現在実験を遂行中である。2)HLA関連解析によるHLA-B*59:01の追試新規の無顆粒球症6例とコントロール群198例を用いてHLA関連解析を行い、HLA-B*59:01に有意な関連を見出し追試に成功した(P =2.8E-4)。リンパ球刺激試験の最適化の予備実験に手間取ったことなどから、実験に遅れがでてしまい、全体として当初の計画よりも進捗状況はやや遅れている。リンパ球刺激試験の実験をこのまま遂行し完了させる。またHLA関連解析によるHLA-B*59:01の追試において、順次サンプル数を拡大し解析を行っていく。クロザピン誘発性無顆粒球・顆粒球減少症発症時の血清中サイトカイン測定による免疫学的機序の検証、メタボローム解析を用いたバイオマーカーの検索のため、クロザピン誘発性無顆粒球・顆粒球減少症症例とtolerant control症例の血液検体を順次収集し研究を推進する。実験の遅れ等から計画にやや遅れが出ている。

次年度は今年度に遂行できなかった実験を順次行っていく予定であり、その際に実験に必要な試薬等を購入する。また今年度、サンプリングにおいて遂行できていない分を次年度に行うこととする。その際には全国の協力施設に出向きサンプリングを行う必要がある。このためその分の出張費及び人件費が必要となることから、その費用に資金を使用する。
心不全患者における教育効果とegoの関連の検討：効率的患者教育実施に向けて

わが国では社会の高齢化とともに心不全患者が増加の一途にあり、心不全パンデミックと呼ばれる状況に陥っている。死亡者数の増加に加え退院後の高率な再入院のため、医療経済の面でも大きな問題となっている。治療効果を高めるには、薬剤の服用や日常生活管理に対するアドヒアランスが重要な位置づけとなる。アドヒアランスの向上には患者教育が有用と推察されており、我々は多職種による患者教育が再入院を含む退院後の臨床イベント発生率低下に有用なツールであることを報告しているが、必ずしも全患者で効果が出ているわけではない。我々の少数例を用いた後ろ向き研究では患者のego(自我)が教育効果に影響することが示唆された。この我々の結果を受けて、過去の研究において患者教育効果に関して一致した結論に至っていない理由が、各研究の対象患者間のegoに相違があり、そのため教育効果に相違が生じてしまったためではないかと推察するに至った。本研究では過去の我々の研究よりも対象患者を増やし、患者のegoが教育効果に与える影響を前向きに検討する。患者のegoが教育効果に影響を与える場合は、現行の教育方法が有効な患者を選択し集中的な教育を行うとともに、現行の方法が無効な患者に対する新たなアプローチの構築に結びつける。平成30年度は、28、29年度に引き続き患者登録を継続し、現在276名の患者から研究参加の同意を得ることができている。この中の51名の患者のデータを解析したところ、全体では患者教育によりEuropean Heart Failure Self-CareBehavior Scaleの改善が得られていたが、egoの中でAdapted ChildおよびNurturing Parentが低い患者群では教育による行動変容改善が乏しことが明らかとなった。今後、全登録患者のフォローアップを行い、結果の論文化を目指す。心不全患者は社会の高齢化とともに増加の一途にあり、死亡者数の増加に加え退院後の高率な再入院が問題視されている。欧米では医療経済の面でも大きな問題となっており、心不全は最も医療費がかかる病態とされている。保険制度は異なるが、我が国にとっても心不全という病態が医療経済面でも大きな問題となってきている。心不全に対する薬物療法の新規開発が進まない中で、非薬物アプローチである患者教育の有用性が注目されているが、有効性について一致した研究結果が得られていない。平成28年度(初年度)は、本研究計画の計画書を作成の上、当院倫理審査委員会において承認を受けた。すでに50名弱の患者を登録しているが、さらに登録患者数の増加を図り研究の進行を加速させるために、病棟のメディカルスタッフにも本研究に対して興味を持ってもらうよう勉強会を開催するなどして、研究協力者の輪を拡大している。症例登録が50例弱と進み、かつメディカルスタッフがこのテーマに興味を持ち、協力体制がより強固となっていることから、このように評価している。平成29年度は、28年度に引き続き患者登録を継続し、現在162名の患者から研究参加の同意を得ることができている。また、一部のデータを用いて学会発表などの情報発信も行っている。今後、さらに登録患者数の増加を図るとともに、データの解析を逐次進め、積極的な情報発信に努める。症例登録が160例以上と進み、かつメディカルスタッフがこのテーマに興味を持ち、協力体制がより強固となっていることから、このように評価している。

治療効果を高めるには、薬剤の服用や日常生活管理に対するアドヒアランスが重要な位置づけとなる。アドヒアランスの向上には患者教育が有用と推察されており、我々は多職種による患者教育が再入院を含む退院後の臨床イベント発生率低下に有用なツールであることを報告しているが、必ずしも全患者で効果が出ているわけではない。我々の少数例を用いた後ろ向き研究では患者のego(自我)が教育効果に影響することが示唆された。この我々の結果を受けて、過去の研究において患者教育効果に関して一致した結論に至っていない理由が、各研究の対象患者間のegoに相違があり、そのため教育効果に相違が生じてしまったためではないかと推察するに至った。本研究では過去の我々の研究よりも対象患者を増やし、患者のegoが教育効果に与える影響を前向きに検討する。患者のegoが教育効果に影響を与える場合は、現行の教育方法が有効な患者を選択し集中的な教育を行うとともに、現行の方法が無効な患者に対する新たなアプローチの構築に結びつける。平成30年度は、28、29年度に引き続き患者登録を継続し、現在276名の患者から研究参加の同意を得ることができている。この中の51名の患者のデータを解析したところ、全体では患者教育によりEuropean Heart Failure Self-CareBehavior Scaleの改善が得られていたが、egoの中でAdapted ChildおよびNurturing Parentが低い患者群では教育による行動変容改善が乏しことが明らかとなった。今後、全登録患者のフォローアップを行い、結果の論文化を目指す。研究に協力してくれるスタッフ数が増えていることから、さらに症例登録を増加させるつもりである。
サルコペニアに対するＡｋｔシグナルを標的とした新しい治療法の開発

老化による骨格筋減少症(サルコペニア)に対して、骨格筋特異的にAkt1シグナルを活性化することは、加齢に伴った骨格筋減少症を改善し、内臓脂肪・皮下脂肪を減少させ、脂肪肝を改善した。それにより、糖代謝異常を改善した。以上より、サルコペニアが加齢に伴う代謝異常の重要な因子であり、速筋の量を保持もしくは改善させることは、これらの代謝異常の発症を遅らすための有効な治療法になることが示唆された。老化による骨格筋喪失(サルコペニア)により老人においては活動性や代謝能が低下する。しかしながら筋萎縮を改善するための効果的な治療法は、現時点では確立されていない。一方、Aktシグナル系は筋肉の増殖や肥大に関わっており、動物実験において、高齢動物では同化刺激に対するAktシグナル伝達経路が抑制されている事が報告されている。以上より、Aktを直接活性化することで筋萎縮を改善し、老化に伴う活動性低下や代謝異常を改善させることができるかどうか検討した。高齢マウス(12ヶ月齢)に対して4週間、骨格筋特異的にAkt1遺伝子を強発現させた。Akt1強発現により、筋力は高齢コントロール群に比較し改善していた。高齢マウスでは、若年マウス(3ヶ月齢)に比較すると、グルコース負荷試験、インスリン抵抗性試験において代謝能が低下していたが、筋肥大により糖代謝能は改善した。高齢マウスでは、脂肪肝を呈していたが、4週間の骨格筋肥大により、脂肪肝の改善が見られた。以上のデータから、高齢マウスでは、筋力低下、糖代謝低下、脂肪肝がみられたが、骨格筋肥大により、これらのデータが改善することが示唆された。今後、これらに対する、組織学的、生化学的な病態解析を検討する予定である。高齢マウスにおける遺伝子工学的Akt1活性化が、若年マウスで活性化させた場合と同等に筋肉量を増加させた。組織学的に検討したところtype I線維に変化を認めなかったが、type IIb線維を増加させていた。腓腹筋におけるAkt1下流シグナルを検討したところ、mTOR、p70S6Kのリン酸化が活性しており、これらの筋肉増殖に関するAktの下流のシグナルが活性化されることで、骨格筋肥大がおこることが示唆された。一方で、若年マウスにおいてAkt強発現をしたマウスと比較すると、骨格筋重量、骨格筋線維、及び、Akt下流シグナルの活性化は低下していたことから、Aktによる下流シグナル活性化が、老化により減弱していることが関与していると示唆され、これらのメカニズムの解明が今後必要である。老化に伴う筋萎縮に伴う活動性・代謝能低下に対する筋肉特異的Akt1活性化が及ぼす影響を生理学的に検討。a.筋力測定:コンピューター制御下筋力測定装置を用いて行い、12ヶ月齢は、12週齢に比較すると、筋力が低下しており、骨格筋特異的Akt遺伝子強発現により、12ヶ月齢においても筋力が改善していた。b.糖代謝能評価:糖負荷試験、インスリン抵抗性試験により、12ヶ月齢では、糖代謝能の低下を認めたが、骨格筋特異的Akt遺伝子強発現により、糖代謝能は改善していた。以上により、若年齢(12週齢)と高齢(12ヶ月齢)を比較し、骨格筋特異的Akt遺伝子強発現による骨格筋肥大が代謝能の改善をきたしたことを確認した。25年度が最終年度であるため、記入しない。高齢マウスでは、筋力低下、糖代謝低下、脂肪肝がみられたが、骨格筋肥大により、これらのデータが改善することが示唆された。肝臓は、肝臓オイルレッドO染色を行ない、脂肪滴の沈着を検出する。脂肪は、HE染色を行ない、脂肪滴の大きさを定量解析する。蛋白活性は蛋白を筋肉(腓腹筋)から抽出した後、ウェスタンブロットを行う。全てのリン酸化の程度は、デンシトメトリー法で数値化し、比較検討する。

以上により、若年齢(12週齢)と高齢(12ヶ月齢)を比較し、骨格筋特異的Akt遺伝子強発現による骨格筋肥大が代謝能の改善をきたした機序について、組織学的、生化学的評価を行う。25年度が最終年度であるため、記入しない。
再生核ヒルベルト空間における標本化定理の数理

標本化定理は、今日のデジタル信号処理の礎であることは論を俟たない。本研究では、再生核ヒルベルト空間に係る標本化定理について理論的に解析を行った。標本化定理とは、離散点の情報のみから未知関数を再構成する問題であり、すなわち関数空間の可分性と表裏一体の問題である。本研究では、所与の再生核ヒルベルト空間に一意に対応する再生核のある種の連続性が当該再生核ヒルベルト空間の可分性を担保することを理論的に解明した。また、今日注目を集めている、複数の再生核による関数再構成問題についても理論的に解析し、個々の再生核による最適推定結果の結合として得られるアンサンブルカーネル回帰の有効性を理論的に明らかにした。本研究の目的は、信号の標本化というプロセスを数学的に考察する際に非常に重要な道具立てとなる再生核ヒルベルト空間の理論を駆使することによって、標本化定理及びその周辺を網羅的に議論することにある。具体的な目標は、A)再生核ヒルベルト空間が標本化定理を有するために、対応する再生核が満たすべき条件を明らかにする、B)実際に標本化定理を有する再生核ヒルベルト空間を網羅的に調査すること、C)様々な実問題で扱う信号に適した再生核ヒルベルト空間を調査し、実際に標本化定理を構築すること、の三点である。まずは、A)に関する成果について述べる。所与の関数空間が標本化定理を有するためには、当該関数空間が可分であることが必要となる。しかるに、特に応用を想定した場合、所与の再生核ヒルベルト空間が可分となるために、当該再生核ヒルベルト空間に一意に対応する再生核が満たすべき条件が重要となる。昨年度の段階で、再生核がその対角において連続性を有することが可分性の十分条件であることを示唆する結果が得られていた。今年度は、当該知見を更に精査し学術論文としてまとめ、第28回信号処理シンポジウムにて公表した。B)及びC)に関しては、昨年度の段階で計画を前倒しし、帯域通過型の関数全体からなる再生核ヒルベルト空間における標本化定理や、必ずしも完全再構成できない標本点集合から最適な再構成を行なう枠組について理論的な成果を得ることができたため、今年度は本目的に対する主だった成果はない。一方、本研究課題における周辺理論整備の一貫として、当該課題と密接な関係を有する線形系逆問題に関する成果を得た。具体的には、1)複数観測からの推定問題に対し、最小分散凸結合推定という新たな枠組を構築、2)ウィーナー基準による復元問題において、これまでは考察されていなかった、信号に対する制約を考慮できる枠組の構築、等の成果を得た。標本化定理が、現代社会を支えるディジタル信号処理の礎となる理論であることは論を俟たない。本研究の目的は、信号の標本化という過程を数学的に考察する際に核心を担う再生核ヒルベルト空間を駆使することによって、標本化定理及びその周辺を網羅的に議論することにある。具体的な目標は、A)再生核ヒルベルト空間が標本化定理を有するために、対応する再生核が満たすべき条件を明らかにする、B)実際に標本化定理を有する再生核ヒルベルト空間を網羅的に調査する、C)様々な実問題に適した再生核ヒルベルト空間を調査し標本化定理を構築する、の三点である。所与の関数空間が標本化定理を有するためには、当該関数空間の可分性が必要となる。しかるに、応用を想定した場合、所与の再生核ヒルベルト空間が可分となるために、対応する再生核が満たすべき条件が重要となる。これに対し、本研究で、再生核に関するある種の連続性が当該可分性を担保することを解明した。現在、この結果の公表の準備を進めている。次に、B)及びC)に関する成果について述べる。実用上有用な関数空間の一つとして、帯域通過型の信号からなる関数空間がある。これについて過去様々な研究がなされているものの、間違いを含む結果や解釈が困難な結果などが散見される。これに対し、当該関数空間が再生核ヒルベルト空間をなすことを証明するとともに、当該空間に対し、非常に見通しのより標本化定理を構築することに成功した。この成果は、信号処理分野で有数の国際会議に採録された。また、必ずしも完全に信号を再構成できない場合の一般論についても考察し、不変な計量を有する部分集合を有する再生核ヒルベルト空間の族においては、より小さい空間を想定した上で信号を再構成した方が再構成誤差が小さくなることを解明した。この成果についても国際会議にて公表している。

本研究の目的は、信号の標本化というプロセスを数学的に考察する際に非常に重要な道具立てとなる再生核ヒルベルト空間の理論を駆使することによって、標本化定理及びその周辺(主に機械学習理論)を網羅的に議論することにある。昨年度までの研究期間において、再生核ヒルベルト空間が標本化定理を有するための条件という本研究における最も重要な点について解明したため、本年度は、その発展形として、主に複数の再生核を用いた標本化定理、及び、その機械学習理論への応用に関して追求した。複数の再生核を用いた関数推定手法として、個々の再生核による最適推定結果を結合する「アンサンブルカーネル回帰」と呼ばれる手法や、所与の複数の再生核を予め結合することで得られた再生核を利用して推定結果を得る「マルチカーネル回帰」と呼ばれる手法が広く認知されている。一方、それらの手法の正当性や性能の優劣について、理論的な解析が十分されているとは言えない状況であった。この問題に対し、1)アンサンブルカーネル回帰により得られる推定結果の汎化誤差が、個々の再生核により得られる推定結果汎化誤差の期待値よりも小さくなることを理論的に解明するとともに、2)所与の再生核の族に対応する再生核ヒルベルト空間の族が、不変な計量を有する線形族を有する場合、未知の真関数が当該線形族に属するならば、アンサンブルカーネル回帰による推定結果の汎化誤差がマルチカーネル回帰による推定結果の汎化誤差よりも小さくなることを理論的に解明した。また、3)より柔軟性の高いマルチカーネル回帰法のモデルについても調査し、一般に用いられる経験誤差最少化の枠組では、当該モデルの潜在能力を引き出すことができないことも併せて解明した。標本化定理本研究課題の目標のうち最も重要なものは「再生核ヒルベルト空間が標本化定理を有するために、当該再生核ヒルベルト空間に一意に対応する再生核が満たすべき条件を解明する」ことである。研究実績の概要の項目で述べた通り、当該問題において最低限考慮すべき、再生核ヒルベルト空間の可分性について解明し、成果発表も終えている。一方、理想的には、当該問題に対する「必要十分条件」を解明することが望まれるが、理論解析の過程において、未だ解明されていない深遠な数学的問題の解決が必要であることが判明したため、本研究期間中に完全に解明することは困難であるとの認識に至った。また、研究実績の概要で述べたとおり、種々の具体的な再生核ヒルベルト空間に対する標本化定理についても先行して成果が得られているため、総合的に、概ね順調に推移していると考える。本研究課題の目標のうち最も重要なものは「再生核ヒルベルト空間が標本化定理を有するために、当該再生核ヒルベルト空間に一意に対応する再生核が満たすべき条件を解明する」ことである。本課題は非常にチャンレンジグなものであり、研究開始当初から、場合によっては二年を費やす計画であった。現状、この課題の完遂には至っていないが、研究実績の項目で述べた通り、最低限考慮すべき、再生核ヒルベルト空間の可分性については概ね解明され、また、そこで得た様々な知見が、本課題の完遂に有用なものであると確信している。また、当初は後半に取り組む予定であった、具体的な再生核ヒルベルト空間の標本化定理、あるいはその周辺に関する理論的結果も得ていることから、総合的に見て、概ね順調に推移していると考えている。
大腸陰窩の分裂に関与する幹細胞の同定と大腸発がん機構の解析

1.Minマウスは、生後1012日齢頃にX線を照射すると小腸・大腸腫瘍発生数が増加するが、40日齢以降の照射では促進しない。大腸分離腺管を解析すると、前者では、陰窩底部の分裂を示すbifurcating cryptが50%程度存在したが、後者では95%程度が陰窩底部の分裂を示さないsingle cryptであった。一方で、1012日齢よりも5060日齢のマウスの陰窩の方が1陰窩当たりのbromodeoxyuridine(BrdU)でラベルされる細胞が多く、陰窩の分裂の方が発がん感受性と相関することを明らかにした。この結果から、60日齢のマウスを対照として12日齢マウス大腸分離腺管で5倍以上発現が強い遺伝子をマイクロアレイ法により比較し、幹細胞のマーカーであるLgr5を含む90個の候補遺伝子を選別した。2.Dextran sulfatesodium(DSS)投与によって誘発される炎症をプロモーターとして、X線照射による潜在的な発がんイニシエーションを検討すると、Min mouseのみならず野生型においても腫瘍発生が増強した。C3Hキゴウ〓Green mouseキメラマウスを用いて、DSS誘発大腸潰瘍の修復過程を検討した結果、大腸潰瘍部の粘膜欠損部分に一致して、間質組織にCox-2が発現し、上皮の欠損の大きさとCox-2発現領域の大きさには強い相関が見られた。潰瘍に隣接する陰窩では、陰窩底部に多数の分裂(fission)と細胞増殖が出現し、潰瘍底に最も近い陰窩で最も高度であった。びらん部を修復する上皮は、隣接する陰窩上皮と同系統の上皮が伸展することにより修復され、その後一層の修復上皮の一部にBrdU陽性の増殖単位が出現した。異なる系統由来の上皮の境界部(patch boundary)は修復先進部と考えられたが、びらん修復上皮内の細胞増殖はランダムに発生した。(1)大腸分離脱管を用いた3次元的な細胞動態の解析Minマウスは、生後10日齢をピークに放射線感受性が高く、40日齢以降の照射では感受性が増加しない。分離腺管を解析すると、前者では、陰窩底部の分裂を示すbifurcating type cryptが50%程度存在したが、後者ではほとんどが陰窩底部の分裂を示さないsingle type cryptであり、発がん感受性と陰窩の対照分裂が相関した。一方で、10日齢よりも50日齢のマウスの陰窩の方が細胞分裂が多く、陰窩の分裂の方が発がん感受性と相関した。さらに、増殖細胞の経時的に観察するため、マウスを2種類のハロゲン化チミジンアナログ[chlorodeoxyuridine(CldU)とiododeoxyuridine(IdU)]でラベルし経時的に同定する方法を確立した。(2)キメラマウスをいたintercrypt hierarchyの解析Min mouse[Adenomatouspolyposis coli(Apc)(+/-)]は、生後1218週程で小腸・大腸に多数の腫瘍を発生する。約12日齢のMin mouseにX線照射すると、小腸・大腸の腫瘍発生が増強し、dextran sulfatesodium(DSS)投与によって誘発される炎症をプロモーターとして、X線照射にるよる潜在的な発がんイニシエーションの有無を検討すると、Min mouseのみならず野生型においても腫瘍発生が増強した。そのメカニズムの解明のため、C3H⇔Green mouseキメラマウスを用いて、DSS誘発大腸漬瘍の修復過程を検討した。

56週齢のキメラマウス2%DSSを7日間飲水投与し、実験第8日、10日、14日、21日にbromodeoxyuridine(BrdU)で1時間ラベル後、屠殺した。DSS投与により、大腸に多数の潰瘍が発生した。潰瘍部の粘膜欠損部分に一致して、間質組織にCox-2が陽性となり、上皮の欠損の大きさとCox-2発現領域の大きさには強い相関が見られた。潰瘍に隣接する陰窩では、腺底部に多数のくびれ(fission)が出現し、細胞分裂と共に陰窩の分裂を示し、潰瘍に最も近い陰窩で最も高度であった。びらん部を修復する上皮は、隣接する陰窩上皮と同系統の上皮が伸展することにより修復され、その後、一層の修復上皮の一部に徐々に陰窩の形態を形成すると共にBrdU陽性の増殖単位が出現した。異なる系統由来の上皮の境界部(patch boundary)に細胞増殖がおこる確率は低く、びらん修復上皮の増殖はランダムな事象であると結論づけた。以上より、胃あるいは大腸等の消化管潰瘍修復過程における、潰瘍に隣接する陰窩の強いfissioningと細胞増殖が発がんプロモーションに何らかの役割を果たしている可能性が示唆された。
一橋大学社会科学古典資料センター所蔵の旅行記についての研究

本プロジェクトは一橋大学社会科学古典資料センターに所蔵されている18-19世紀における西欧人のアジア旅行記について調査を行い、該当する旅行記の一冊一冊について、その書名、著者名、出版年、旅行者、経路、訪問地、旅行目的、旅行時期、地図・挿絵の有無などを明らかにした。研究期間内に120件(155冊)の資料の調査を完了した。調査対象となった資料のなかには、例えば、英国が中国に派遣したマカートニー、アマースト使節に随行したトーマス・スタウトンの著作・訳書などが含まれており、これらは今後の東西交渉史研究の貴重な資料となると考える。一橋大学社会科学古典資料センターに所蔵されている文献のなかに、18-19世紀の西欧人等によって記されたロシア・アジア旅行記がかなりの冊数で残されていることを確認できた。英語、ドイツ語、フランス語で記された旅行記については、大学院生を雇用することにより、一冊一冊について確認作業を行い、その書名、著者名、出版年、旅行者、経路・訪問地、旅行目的、地図・挿絵等の有無などについて概要をまとめた。これら旅行記(59冊)の概要は、『一橋大学社会科学古典資料センター年報34』に公表した。興味深い文献の例として、ヴァシーリィ・ゴロヴニンの日本滞在記録である『日本幽囚記』(1816)、ベニョフスキーのアジア・太平洋航海記(1790)、英国のジョージ・マカートニーの使節に同行したジョージ・スタウトンの残した中国に関する記録(1797)、清朝時代の満洲人官僚であったトゥリシェンのシベリア紀行である『夷域録』の英訳(1821)などについて、上記『古典資料センター年報34』で紹介した。近現代東北アジア地域史研究会(平成25年12月14日、日本大学文理学部)の大会において、江夏由樹(研究代表者)、福島知己(研究分担者)、床井啓太郎(研究分担者)は本プロジェクトのこれまでの研究成果について講演した。江夏由樹、床井啓太郎(研究分担者)は、それぞれ、近畿大学図書館、静岡県立図書館などにおいて、ヨーロッパ人の手によるアジア古地図、上記のゴローヴニンが幕府役人に残した『露仏辞書』などについての調査を行った。毎月、研究会を開催し、プロジェクトの進捗状況を確認、代表者・分担者が進めている研究の成果について相互に報告し、意見交換を行った。(1)旅行記の目録作成一橋大学社会科学古典資料センター所蔵の西欧人によるロシア・アジア旅行記の目録作成を進めた。平成24年度はメンガー文庫、フランクリン文庫、一般貴重書に含まれる当該地域の旅行記のうち、英語、フランス語、イタリア語で記された資料の一部について調査を行った。いずれも稀覯資料であり、資料保存状態の良くないものも含まれていることから、その保存状況の確認から着手した。調査の具体的な項目は以下の通りである。旅行記の著者(旅行者)、旅行の年代、旅行目的、経路・訪問地の詳細、同行者、使用言語、挿絵・地図の有無、内容の要約である。平成24年度の調査件数は44件(うち、英語22件、フランス語19件、イタリア語3件)であった。同一タイトルの翻訳書が含まれていたので、その異同についても調査した。(2)国内における訪問調査床井啓太郎(研究分担者)は京都大学附属図書館、京都外国語大学附属図書館、立命館大学アートリサーチセンターにおいて、アーカイビングおよび電子化の手法について聞き取り調査を行った。この調査で、立命館大学アートリサーチセンターのARCモデルに代表される、集中的・網羅的なアーカイビング手法、メタデータ、検索機能、インターフェイスの作成、データベースの運用等について知見が得られた。また、江夏由樹(研究代表者)は山口県立公文書館の資料電子化の手法について訪問調査を行った。(3)江夏、床井、福島知己(研究分担者)は毎月開催される研究会において、目録作成とは別に、各自が分担して読み進めた旅行記の内容紹介を行った。また、床井、江夏は上記の訪問調査の成果についても研究会で報告、意見交換を進めた。江夏は旅行記の研究という視点から、20世紀前期、中国東北部(満洲)の羊毛の問題について調査旅行した井島重保の調査記録の内容を、復旦大学で開催された学会で講演した。平成25年度と同様、一橋大学社会科学古典資料センターに所蔵されている文献のなかに、18ー19世紀の西欧人によって記されたロシア・アジア旅行記がかなりの冊数で残されていることを確認できた。英語、ドイツ語、フランス語、イタリア語で記された旅行記について、大学院生を雇用することにより、一冊一冊について確認作業を行い、その書名、著者名、出版年、旅行者、経路、訪問地、旅行目的、地図・挿絵等の有無などについて概要をまとめた。平成26年度に調査した旅行記は31冊(26件)である。そのなかで、興味深い文献の例として、トーマス・スタウントンの残した14冊の著作・訳書を挙げることができる。

スタウントンはイギリスが中国に派遣したマカートニー、アマーストの使節に随行し、貴重な記録を残した。また彼の訳書として、清朝の時代、満洲人のトゥリシェンが記したロシア旅行記『異域録』の英訳初版本(1821)も所蔵されていることを確認した。これら著書・訳書の読解は18ー19世紀における西欧の対アジア観の研究にとって、貴重な資料となる。江夏由樹(研究代表者)、床井啓太郎(研究分担者)は、それぞれ、国立国会図書館関西館、関西学院大学図書館において、西欧人のアジア旅行記についての文献調査を行った。毎月研究会を開催し、プロジェクトの進捗状況を確認、代表者・分担者が進めている研究の成果について相互に報告し、意見交換を行った。平成26年度の研究成果を『一橋大学社会科学古典資料センター年報』No.35に公表した。東アジア史当初から想定していたように、一橋大学社会科学古典資料センターには西欧人が記したロシア・アジア旅行記が数多く所蔵されていることを確認できた。それら書籍は、メンガー文庫、フランクリン文庫だけではなはく、旧来から一橋大学が所蔵していた渋沢文庫、陸軍経理学校所蔵図書などの中にも残されていることを明らかにできた。英語、ドイツ語、フランス語を解する院生をプロジェクト協力者(7名)として順調に雇用することができた。その結果、平成25年度は59冊の書籍についてその内容確認をすることができた。平成25年度の研究成果を『一橋大学社会科学古典資料センター年報34』に公表することができた。また、近現代東北アジア地域研究会のシンポジウムにおいて本プロジェクトを紹介する機会を得、参加者から貴重な情報を得ることができた。近畿大学図書館、静岡県立図書館において、関係資料を調査できたことは大きな成果であった。計画した通り、毎月一回、プロジェクトの研究会を開催し、十分な情報交換をすることができた。以上の理由により、本プロジェクトの今年度の達成度はおおむね順調に進展していると考える。調査対象とする資料がいずれも稀覯資料であり、その取扱いには十分な配慮を必要とすることから、目録作成に従事する研究補助者の任用には慎重を期した。そうした点で適切な人材を確保できたことから、目録作成作業はおおむね順調に進めることができた。当初予定していた英語、フランス語文献だけでなく、イタリア語文献の調査・目録作成ができたことは大きな収穫であった。調査件数は44件であったが、「研究実績の概要」に記したような、各資料の内容を比較的詳細な形で目録にまとめることができたことは、大きな成果であった。京都大学附属図書館、立命館大学アートリサーチセンター、京都外国語大学附属図書館等を訪問調査し、それぞれの機関における所蔵資料の電子化の状況、その手法・問題点等について担当者の説明を聞くことができたことは、本プロジェクトの今後の展開を策定していくうえで大きな参考となった。月例研究会においては、そうした資料のインターネット上での公開に関する問題点を取り上げ、意見交換を進めた。月例研究会においては、江夏、床井、福島がそれぞれに担当した資料の内容を紹介するなかで、本センターが所蔵する資料の個々の内容についての調査を進めた。
肝疾患における遺伝子プロモーターのメチル化不安定性の解析とその臨床応用

ヒト肝癌で異常メチル化が報告されている19種類の遺伝子座位に関して、正常肝、各種の慢性肝炎組織、肝癌の前癌病変、肝癌組織のメチル化レベルを定量し、肝発癌の初期に重要と思われる7種類の遺伝子座位を選び出した。これらの遺伝子座位のメチル化は前癌病変で肝癌と同程度のレベルのメチル化が認められ、また高発癌母地であるウイルス性肝炎組織でも低レベルながらメチル化が認められたが、発癌リスクの少ないPBCの組織ではメチル化が認められなかった。またインターフェロン治療による肝炎ウイルスの消失後、数年の経過でそのメチル化も改善(消失)していた。従って、これらの遺伝子メチル化は肝発癌の初期に重要であり、その消失は発癌リスクの低下につながると考えられた。本年の検討では、計180例の肝組織(肝炎ウイルス陰性の組織学的正常肝;22例、肝癌の非癌部肝組織77例、肝癌組織81例)を用い、肝癌と非癌部肝での21座位メチル化定量値より、癌部でメチル化レベルが有意に高い19座位を抽出し、それらのメチル化レベルを正常肝、非癌部肝組織、肝癌部で比較し、また肝炎ウイルスマーカーとの関連を検討した。メチル化の定量に用いたCpG部位は、既報、あるいは肝癌細胞株を用いたスクリーニングにより、その部位でのメチル化レベルが遺伝子発現と相関することを確認した。<結果>各ステージの肝組織のメチル化の状態により、前述の19座位を3つのグループ(Group-1,-2,-3)に分類した。すなわち正常肝、非癌部肝組織、肝癌でいずれもメチル化が認められるCpG座位をGroup-1座位(7座位)、正常肝ではメチル化が認められないが、非癌部肝組織、肝癌でメチル化が認められる座位をGroup-2(5座位),肝癌で特異的にメチル化を受けている座位をGroup-3(7座位)と分類した。正常肝組織におけるGroup-1のメチル化レベルは年齢と相関した(r=0.65-0.44)。非癌部肝組織では、正常肝と比較しGroup-2のみならずGroup-1のメチル化レベルも高値であった。特に3種のGroup-1座位(SOCS1, RASSF1A, APC)と3種のGroup-2座位(CDH1, RUNX3, RIZ1)ではHCV陽性の非癌部において、正常肝より有意にメチル化レベルが高値であった。一方HBV陽性肝癌では1座位(SOCS1)のみで正常肝と比較してメチル化レベルが高く,ウイルス陰性の非癌部では正常肝と比較してメチル化が高い座位は認められなかった。肝癌部ではすべての座位において高レベルのメチル化が認められたが、HCV陽性肝癌では、陰性例と比較しGroup-3座位でのメチル化レベルが有意に高く(p<0.0001)、また肝癌における広範囲・高レベルのメチル化はβ-カテニン変異と強く相関した(p<0.0001)。この結果より、正常肝においても、一部のプロモーターで加齢に従ってメチル化が出現し、また非癌部肝組織、肝癌と進行するに従って、段階的にメチル化が進行する。またHCV感染はこのプロセスを加速させると考えられた。癌抑制遺伝子プロモーターの異常メチル化は肝発癌に重要である。一方、慢性肝疾患は発癌リスクの高い病態(ウイルス性肝炎など)と低い病態(自己免疫性肝炎など)に大別できる。本研究では、発癌リスクの高い慢肝疾患とリスクの低い病態でのメチル化プロファイリングの違いを、21種の癌抑制遺伝子プロモーターのメチル化レベルを解析することにより明らかにした。その結果、C型慢性肝炎では、肝癌で異常メチル化が報告されているp16,HIC-1, RASSF1A, APC, GSTP1, CASP8, RIZ1,SOCS1遺伝子のプロモーターが低レベルながら高率に異常メチル化を示した。一方、ウイルス陰性の慢性肝疾患では、それらの頻度が少なく、特に自己免疫性肝炎では異常メチル化は認められなかった。C型慢性肝炎組織において、上記のメチル化を示す癌抑制遺伝子数は肝細維化と比例しており、持続的なHCV感染が肝細胞の異常メチル化を進展させる可能性が示唆された。インターフェロン治療前後で慢性C型肝炎組織に認められるメチル化が改善するかどうかを検討した。治療にてウイルスが消失した例では、インターフェロン終了直後の肝組織ではメチル化の改善は認められなかったが、治療後2年目の肝組織では異常メチル化が消失している例が認められた。

癌抑制遺伝子のメチル化が癌化早期のイベントであることを証明するため、肝癌の前癌病変と考えられる、dysplastic nodule、及び径2cm以下の高分化肝癌を用いて、各遺伝子座位でのメチル化のレベルが上昇しているかどうかを検討した。これらの前癌早期の病変でも複数の癌抑制遺伝子の高レベル、高頻度のメチル化が観察された。以上の結果はC型肝炎が肝組織の異常メチル化を促進することを示唆しており、これらの異常メチル化を検出することにより、発癌リスクを推定することができる。また、発癌早期から高レベルのメチル化を示すCpG座位を同定しており、これらのメチル化は腫瘍カーカーとして有用であることを明らかにした。