hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
心筋L型Caチャネル制御機構ミッシングリンクを補う再構成系

心筋L型CaチャネルはAキナーゼを介するリン酸化機構がCaチャネル遺伝子を異細胞に導入するだけではよく再現されない。異細胞で調節が再現できない理由として心筋細胞にはもともと存在しているL型Caチャネル調節因子が異細胞には存在しないことが考えられる。したがって本研究はリン酸化制御の再現を可能にさせるために心筋そのものにCaチャネル遺伝子を導入し機能発現させること目的とした。そのためには1)本来心筋に備わっているCaチャネルと遺伝子導入したCaチャネルを区別、2)ウィルスベクターを用いた生体への遺伝子導入の二つの課題を克服する必要があった。1)においてはラット心筋Caチャネルのイオン選択性フィルター部位をEEEE型からEEKA型およびDEKA型へ変異を行い、イオン透過性とLa^<3+>-ブロックに対する感受性を検討した。EEKA,DEKAのNa^+イオン透過性はCsイオンに比し約10倍となった。またBa^<2+>イオン透過性(Ca^<2+>透過性の目安)はDEKAにおいてまったく消失したのに対し、EEKAにおいてはCs^+に比し56倍の透過性を保っていた。La^<3+>(10μM)に対する感受性はDEKAにおいてはまったく失われていた。その結果我々はNaチャネルと同様のNa^+イオン透過性およびLa^<3+>ブロック抵抗性のCaチャネルを作成することに成功し、心筋細胞に本来備わっているCaチャネルの機能と遺伝子導入したCaチャネル機能を区別する技術を確立した。2)においてはアデノウィルスのE1/E3欠損株にCa_v1.2遺伝子を組み込んだ。ただしウィルス粒子の増幅はならなかった。おそらく導入遺伝子のサイズ(8kb超)が大きすぎることが問題だと考えられる。最近アデノウイルスのE1/E3部に加えfiber gene部分の削除を行いCa_v1.2の遺伝子導入を可能とした報告があった(Ganesan AN et al., BBRC 749-754, 2005)。彼らの方法を十分検討し、今後の研究の参考としたい。L型Caチャネルのリン酸化による制御は単にチャネル遺伝子およびそのサブユニット群を再構成系に発現させてもその機能の再現は見られない。おそらく未だに同定されていない重要な蛋白、因子が欠損しているものと思われる。我々はその問題を克服するために、目的のCaチャネル遺伝子をすでに機能している成熟心筋細胞に発現させて、リン酸化の制御を明らかにすることを目指している。その第一歩として、まず元々成熟心筋細胞に備わっているL型Caチャネルを通る電流と、目的の遺伝子を発現させたL型Caチャネルを通る電流を区別するために、再構成されるCaチャネルの性質をNa選択型イオン透過性に変換し、かつ二価イオンのブロッカーであるCd^<2+>やLa^<3+>に抵抗性にすることを目的とした。Caチャネルのイオン選択性は各ドメイン(IIV)の膜貫通領域のS5-S6ループのSS領域にそれぞれ存在するひとつのアミノ酸によって構成されるイオンフィルターによって決定されていると言われている。Caチャネルについてはすべてのドメインにおいてこの部がグルタミン酸であるので1文字アミノ酸表記を用いEEEE locusと呼ばれる。Naチャネルにおいてはこの部がDEKAという構成になっている。我々はこのCaチャネルのEEEEをEEKAおよびDEKAになるように点変異を行いそのイオン透過性とLa^<3+>-ブロックに対する感受性を検討した。

ただしDEKAにおいても平衡電位がE_<Na>と完全には一致せず、Na^+選択性はNaチャネルに比し劣ると考えられた。Ba^<2+>イオン透過性はDEKAにおいてまったく消失したのに対し、EEKAにおいてはCs^+に比し56倍の透過性を保っていた。La^<3+>(10μM)に対する感受性はDEKAにおいてはまったく失われていたが、EEKA mutantにおいては減弱するものの50%程度ブロックされ未だ感受性を有していた。以上の結果我々はほぼNaチャネルと同様のNa^+イオン透過性およびLa^<3+>ブロック抵抗性のCaチャネルを作成することに成功した。心筋L型CaチャネルはAキナーゼを介するリン酸化により、細胞外より電位依存性にCa^<2+>流入を増大させ、心筋収縮力の増強につながる調節をうける。この調節は非常に大きく、生体の心筋より単離した心筋細胞に最大のリン酸化刺激を与えると元の電流の数倍5-6倍までの電流増大が見られる。またL型Caチャネルのαサブユニットの遺伝子配列は明らかになっており、αサブユニット単体のみでCaチャネルの機能を果たすことが同遺伝子を異細胞に発現機能させる事により判明した。ただし、その機能発現はCa流入という部分のみであり、リン酸化制御においてははなはだ不完全であり、リン酸化機構の解明において重大な障害となっている。本研究は、その障害を取り除くことを目的とするものである。Caチャネル遺伝子を異細胞に発現させる場合、導入したチャネルの機能を測定するために元来細胞はCaチャネルを有さないものを利用してきた。ところが、このようなシステムにおいてリン酸化制御機能が再現せず、心筋細胞には存在する何らかの因子がその異細胞には欠損しているのではないかと推測されるに至った。そこで我々は心筋そのものにCaチャネル遺伝子を発現させることに思い至った。そのことを実現させるためには1)本来心筋に備わっているCaチャネルと導入したCaチャネルの機能の区別、2)確率の低い生体の心筋への遺伝子の導入の二つの問題を解決する必要がある。第一点においては本年度我々はラット心筋Caチャネルのイオン選択性フィルター部位の変異を行い、Na透過性にすることを可能にした(もともと存在するチャネルはCa電流、導入したチャネルはNa電流を流す)。したがって、今後培養技術の確定しているラット心筋にNaイオンを選択的に通すラットL型Caチャネルを導入する準備が出来た。第2点において、遺伝子導入時のベクターをアデノウィルス由来とすることによって導入効率をあげる事とし、同ラット遺伝子を当該ベクターに組み込むところまでに至った。今後心筋に導入可能なウィルス粒子の増幅、さらに実際に心筋に発現可能かを確認する工程が残されることとなった。L型Caチャネルは心筋において複数のサブユニットで構成され、筋の収縮のトリガーとして、あるいは活動電位を形成するなどの機能を果たしている。
日本の住まい方特性に関する研究ー日仏比較から明らかにする混乱の背景と解決の方策

生活様式は西洋化し部屋数や床面積がある程度確保されているにもかかわらず、兎小屋と称される住まいの状況は日本の多くの家庭に見られる。子供部屋状態の住まい、主寝室のプライバシーの欠如、布団就寝とベッド就寝の混在、雑多なモノによる不調和なインテリアなどである。これらを解決するために、先進国の中でも子どもが多くインテリアが美しいことで定評のあるフランスと比較調査を行い、問題点の背景を探り、解決方法を考える。
小論文テストによるデータの解析

「旅」という表題のもとで185編、「貧しさと豊かさ」という表題のもとで144編の小論文をそれぞれ異なった被験者に書かせ、前者については11名の評定者、後者については別の7名の評定者にそれぞれ評定させた。その結果として次のような結論を得た。1.総合評価の評定者間の一貫性は極めて低い。2.総合評価の安定性は評定者によってかなり異なり、評定者内一貫性は高いとはいえない。3.分析的評価のための諸観点は、少なくとも内容に関するものと言語力に関するものとに分類できる。4.分析的評価の第1主成分は、総合評価と同じ程度の信頼性をもつ。5.文字の丁寧さに関する評価は評定者間一貫性が高い。6.総合評価は論文を読んだときの印象と深い関連がある。
グローバル・ガバナンスにおけるマルチ・ステイクホルダー・アプローチの有効性

17年度には、「人間の安全保障」をめぐるグローバル・ガバナンスに関する文献サーベイおよび、環境保護と開発援助が交錯する「持続可能な開発」の領域におけるマルチ・ステイクホルダー・アプローチ(MSA)の事例に関するサーベイを実施し、分析すべき事例を特定化した。その上で、MSAの典型的な事例として世界ダム委員会(WCD)を取り上げ、WCDプロセスの目的、WCDと各国政府ならびに世界銀行との関係、そしてWCDプロセスの正統性などに関して、世界銀行の担当者から聴き取り調査を実施した。さらに、18年度には、前年度に引き続き、「持続可能な開発」に関してMSAが使われた事例として国連環境計画(UNEP)のダム開発プロジェクト(DDP)を取り上げ、DDPの目的と成果に関して、これまで世界銀行の代表としてDDPプロセスに参加してきた担当者から聴き取り調査を実施した。本研究からは、以下の点が明らかになった。第1に、グローバル・ガバナンスの実践の様々な場面において、MSAを採用するマルチセクトラルなネットワークが存在することを確認できた。代表的なものとしては、採掘産業に関するものと、大型ダムに関するものがあった。第2に、MSAは国際組織の組織変化のプロセスの中で採用される傾向が見られた。とりわけ世界銀行は、国境を超えて連携する市民社会組織から成る「下からのトランスナショナリズム」に応えようとして、MSAを採用した。第3に、この実証分析から世界銀行の二面性も明らかにされた。世界銀行は、一方において、環境規範および人権規範を自己の政策に反映させ、ガイドラインの作成、インスペクション・パネルの設置および社会・環境政策の「主流化」に力を入れたが、他方では、企業や各国政府による自主的な規制を重視する立場を貫いた。以上の点から、MSAの強みは、知識や規範を異なるステイクホルダーに共有させることにあり、拘束力を持つ実効的なルールを形成することにはないことが明らかとなった。本年度の研究の実績としては、第1に、「人間の安全保障」に関わる問題のうち「持続可能な開発」に関して詳細な先行研究のサーベイを実施し、それに基づいて現地調査のための暫定的な枠組みを設定できたこと、第2に、グローバル・ガバナンスの専門家から、その枠組みに関して意見を聴取し、それを洗練することができたこと、第3に、マルチ・ステイクホルダー・アプローチ(MSA)を採用した事例として世界銀行の「水資源戦略」、「採掘産業イニシアティブ」および欧州委員会のCSR(企業の社会的責任)政策を選定できたこと、および第4に、選定した事例の中から、世界銀行の「水資源戦略」に関して担当者に聴き取り調査を実施できたことが挙げられる。最後の点について補足すると、世界銀行において「持続可能な開発」を促進する任にあるQuality Assurance and Compliance Unit(品質保証・遵守ユニット)の責任者のリントナー氏とダムの安全性を担当するパルミエリ氏に対して2日間にわたってインタビュー調査を実施することができたことは有意義であった。この聴き取り調査を通して、世界銀行が何故2000年以降再び灌漑やダムなどのインフラ融資を重視するようになったのか、そして世界銀行がそのようなインフラ融資と「持続可能な開発」をどのような形で調和させようとしているのか、について詳細な情報を入手することができた。この聴き取り調査で世界銀行が市民社会団体などのステイクホルダーと公的な協議の場を設け、これらの行為主体に対してインスペクション・パネルなどを通して「外部的な」責任説明を果たそうとしている点などが確認できた。現在、日本国際政治学会から依頼を受け、この研究成果を同学会機関誌『国際政治』に掲載される論文として執筆中である。今後は、他の事例についても実証的な研究を進めるとともに、異なる知識間あるいは利益間の融合を可能にする組織論的なメカニズムに関する理論的な考察も実施する予定である。

17年度には、「人間の安全保障」をめぐるグローバル・ガバナンスに関する文献サーベイおよび、環境保護と開発援助が交錯する「持続可能な開発」の領域におけるマルチ・ステイクホルダー・アプローチ(MSA)の事例に関するサーベイを実施し、分析すべき事例を特定化した。その上で、MSAの典型的な事例として世界ダム委員会(WCD)を取り上げ、WCDプロセスの目的、WCDと各国政府ならびに世界銀行との関係、そしてWCDプロセスの正統性などに関して、世界銀行の担当者から聴き取り調査を実施した。さらに、18年度には、前年度に引き続き、「持続可能な開発」に関してMSAが使われた事例として国連環境計画(UNEP)のダム開発プロジェクト(DDP)を取り上げ、DDPの目的と成果に関して、これまで世界銀行の代表としてDDPプロセスに参加してきた担当者から聴き取り調査を実施した。本研究からは、以下の点が明らかになった。第1に、グローバル・ガバナンスの実践の様々な場面において、MSAを採用するマルチセクトラルなネットワークが存在することを確認できた。代表的なものとしては、採掘産業に関するものと、大型ダムに関するものがあった。第2に、MSAは国際組織の組織変化のプロセスの中で採用される傾向が見られた。とりわけ世界銀行は、国境を超えて連携する市民社会組織から成る「下からのトランスナショナリズム」に応えようとして、MSAを採用した。第3に、この実証分析から世界銀行の二面性も明らかにされた。世界銀行は、一方において、環境規範および人権規範を自己の政策に反映させ、ガイドラインの作成、インスペクション・パネルの設置および社会・環境政策の「主流化」に力を入れたが、他方では、企業や各国政府による自主的な規制を重視する立場を貫いた。以上の点から、MSAの強みは、知識や規範を異なるステイクホルダーに共有させることにあり、拘束力を持つ実効的なルールを形成することにはないことが明らかとなった。
重症筋無力症の胸腺におけるレトロウイルスの探索とその発症機構の解明に関する研究

重症筋無力症はアセチルコリン受容体を自己抗原とする自己免疫疾患の一つであり、胸腺腫などの胸腺異常が高率に証明されるがその原因は不明である。申請者らはこれまで主に電顕の成績より重症筋無力症の培養胸腺細胞にレトロウイルス粒子が検出されることを報告してきた。今回、本ウイルスの実体を明らかにすべく、ヒトT細胞株への感染実験にて樹立したウイルス産生株を用いてウイルス遺伝子のフローニングを行ない、平成3年度に引き続き、得られたcDNAの解析を行なった。精製したウイルス粒子よりcDNAを合成し、クローニングを行ない、500-2.5kbのcDNAクローン(20数個)を得た。これらをプローブとして様々な細胞DNAとの間でSouthern分析を行ない、その特異性を詳細に検討した。dideoxy法にて400-1.2kbの塩基配列を決定し、その構造を分析するとともにEMBLデータベースへの照合によりホモロジーの探索を行なった。25kbのcDNAクローン(PHT142)はウイルス産生細胞DNAとともにヒト胸腺腫細胞DNAとの間で13例中5例にハイグリダイゼーションが観察された。対照細胞やヒト胎盤DNAとの間ではハイブリダイゼーションが認められなかった。EMBLデータベースに照合させたところ、7つのcDNAクローンのいずれもがHIV-1やEIAV(equine infectious anamia virus)と比較的高いホモロジーを示した。以上より、得られたcDNAクローンは細胞由来でなくヒト胸腺腫に存在する遺伝子であることが判明した。今後、全構造の解明とともに他のヒトウイルスと比較を行ない、重症筋無力症の胸腺異常へのレトロウイルスの役割について研究をすすめていく予定である。1.ヒト胸腺に検出されるレトロウイルス遺伝子のcDNAクロ-ニング:KKー11細胞(ヒト胸腺に検出されるレトロウイルス粒子を用いてヒトT細胞株への感染実験を行い得られたウイルス産生株)の培養上清よりウイルス粒子を精製した。逆転写酵素活性が認められた分画を用いてendogenous polymerasereactionにてcDNAを合成した。二本鎖DNA作製後入gt10ベクタ-に組込みcDNAクロ-ニングを行った。その結果、(1)cDNAクロ-ニングにて10数個の挿入cDNAが得られた。(2)これらのcDNAを探索子としたSouthern分析にてKKー11細胞DNAとの間にハイブリダイゼ-ションが認められた。手術で得られた重症筋無力症の胸腺腫DNAとのSouthern分析では高率にバンドが検出された。ヒト胎盤DNAとの間にハイブリダイゼ-ションは観察されなかった。2.cDNAクロ-ンの構造決定7つのcDNAクロ-ンについてジデオキシ法にて一部(400bp1200bp)の塩基配列を決定した。ホモロジ-の検討ではGen Bank,EMBLに登録された既知のウイルス遺伝子とは一致せず、新しいウイルス遺伝子と判明した。HIVなどレトロウイルス遺伝子と比較的高いホモロジ-を示した。今後、さらに多数例の重症筋無力症胸腺DNAとの間でSouthern分析を行う。クロ-ニングで得られたcDNA(ウイルス遺伝子の断片)を探索子としてgenomicクロ-ニングを行う。1.ヒト胸腺由来レトロウイルスのcDNAクロ-ニング(1)ウイルス遺伝子断片のクロ-ニング:ヒトT細胞への感染実験にて樹立されたウイルス産生株よりウイルス粒子を精製した。レトロウイルス個有のendogenouspolymerasereactionを用いてcDNAを作成、二本鎖DNAにした後、λgt10ベクトルに挿入しクロ-ニングを行った。^<32>Pをラベルした上記endogenous palymerase reactionで作製したcDNAを探索子としてスクリ-ニングを行ったところ、500-2.5kbの挿入cDNAクロ-ニングが得られた。

(2)cDNAクロ-ンの特異性の検討:上記のcDNAクロ-ンを探索子として各種細胞DNAとの間でSouthern分析を施行したところ、ウイルス産生株やヒト胸腺腫DNAとの間でハイブリダイゼ-ションが観察された。(3)cDNAクロ-ンの構造決定:一つのcDNAについては約1300bp,他の6つのcDNAについては約400bpずつdideoxy法にて塩基配列を決定した。EMBLデ-タベ-スに登録された全ての遺伝子との対比を行ったところ、新しい遺伝子であることが判明した。HIVなどレトロウイルス遺伝子と比較的高い相同性を示した。2.ヒト胸腺由来レトロウイルスのゲノミッククロ-ニング上記ウイルス遺伝子断片cDNAを探索子として、ウイルス産生株DNAよりゲノミッククロ-ニングを行った。約30万個のクロ-ンより1つのゲノミッククロ-ンが得られた。現在、制限酵素地図の作成を行い、LTR構造について検討中である。重症筋無力症はアセチルコリン受容体を自己抗原とする自己免疫疾患の一つであり、胸腺腫などの胸腺異常が高率に証明されるがその原因は不明である。申請者らはこれまで主に電顕の成績より重症筋無力症の培養胸腺細胞にレトロウイルス粒子が検出されることを報告してきた。今回、本ウイルスの実体を明らかにすべく、ヒトT細胞株への感染実験にて樹立したウイルス産生株を用いてウイルス遺伝子のクローニングを行ない、平成3年度に引き続き、得られたcDNAの解析を行なった。精製したウイルス粒子よりcDNAを合成し、クローニングを行ない、500-2.5kbのcDNAクローン(20数個)を得た。これらを探索子として様々な細胞DNAとの間でSouthern分析を行ない、その特異性を詳細に検討した。dideoxy法にて400-1.2kbの塩基配列を決定し、その構造を分析するとともに、EMBLデータベースへの照合よりホモロジーの探索を行なった。2.5kbのcDNAクローンpHT142はウイルス産生細胞DNAとともに、ヒト胸腺腫細胞DNAとの間で13例中5例にハイブリダイゼーションが観察された。対照細胞やヒト胎盤DNAとの間ではハイブリダイゼーションが認められなかった。EMBLウイルスデータベースに照合させたところ、7つのcDNAクローンのいずれもが、HIV-1やEIAV(equine infectious anemia virus)と比較的高いホモロジーを示した。以上より、得られたcDNAクローンは細胞由来でなくヒト胸腺腫に存在する遺伝子であることが判明した。今後、全構造の解明とともに他のヒトウイルスと比較を行ない、重症筋無力症の胸腺異常へのレトロウイルスの役割について研究をすすめていく予定である。
有機ｐｎ二成分薄膜の電子構造と電荷分離プロセス

イオン液体などの電解質溶液がゲート誘電体として用いられている電気二重層トランジスタは、電気二重層形成によって高効率かつ高濃度のキャリア注入が可能であるため、近年注目を集めている。このような系で重要となるのが自然電位である。これは参照電極と作用電極の電位差であり、作用電極のポテンシャルを反映している。自然電位は、電解質溶液の濃度や、電解質の種類によって変化する。これまでの研究では、様々なイオン液体を用いて、自然電位と電気二重層トランジスタの閾値電圧の相関が調べられており、自然電位と閾値電圧には直線的な関係があることが明らかになっている。このことは、自然電位を変化させることにより、電気二重層トランジスタの閾値電圧を制御することができることを示唆している。しかし、単一成分のイオン液体では離散的にしか閾値電圧を制御できず、また、そもそも何がイオン液体の自然電位を決定するかについての議論はなされていなかった。そこで、本研究では、何が電解質溶液の自然電位を決めているのか明らかにすること、電解質溶液を用いてトランジスタの閾値電圧を連続的に制御することを目的とした。電解質溶液の濃度や、2成分系の混合比率は連続的に変化させることが可能であることから、塩化リチウムのポリエチレングリコール(PEG)溶液と、二種類のイオン液体を混合した溶液に着目し、これらの自然電位と電気二重層トランジスタ特性について調べた。PEG溶液と二種類を混合したイオン液体の自然電位はそれぞれ濃度と混合比率の対数に比例したことから、自然電位と化学ポテンシャルの相関が示唆された。また、自然電位と電気二重層トランジスタの閾値電圧には直線的な相関がみられた。濃度や混合比率を変化させることによって、閾値電圧の連続的な制御が可能であることが分かった。イオン液体を用いた場合では最大0.4 Vの範囲で制御が可能であった。28年度が最終年度であるため、記入しない。p及びn型フタロシアニン類縁体であるMPcとMTTDPz(M:Metal, H2)の共蒸着膜を用いて、電気化学測定、光電子分光測定、過渡光電流測定を行った。また、MPcとMTTDPz薄膜への電気化学ドーピングによる光物性制御を目的とし、薄膜の酸化還元前後の過渡光電流を測定した。いずれも、再現性の取りにくさや、過渡光電流発生メカニズムの複雑さから詳細な考察には至らなかったが、実験を通して、PtPcが様々な電解質溶液や、電気化学的酸化に対して高い安定性を有することが明らかとなり、電解質溶液の自然電位によってデバイス特性が変化する可能性が示唆された。以上をふまえて、電解質溶液の自然電位を連続的に変化させることによる電気二重層トランジスタの閾値電圧の連続的な制御と、自然電位を決めるパラメータを明らかにすることを目的とし、自然電位が大きく異なる二種類のイオン液体を混合した溶液と、ポリエチレングリコール(PEG)に様々な電解質を溶解させた溶液をゲート誘電体として、PtPcの電気二重層トランジスタの作製と評価を行うこととした。二種類を混合したイオン液体の自然電位は濃度に対して非線形に変化し、自然電位と電気二重層トランジスタの閾値電圧には直線的な相関がみられた。また、PEG溶液の電解質の濃度依存性ついて調べたところ、PEG溶液の自然電位は電解質の濃度のlogに比例し、二種類を混合したイオン液体と同様に、自然電位と電気二重層トランジスタの閾値電圧には直線的な相関がみられた。電解質溶液の混合比率や濃度を変化させることで、閾値電圧の連続的な制御が可能であることが分かった。現在考察中であるが、二種類を混合したイオン液体の自然電位が濃度に対して非線形に変化すること、PEG溶液の自然電位が濃度のlogに比例することから、化学ポテンシャルと自然電位の相関が示唆される。「pn二成分薄膜の電子構造と光励起および電荷分離プロセスの相関の解明」及び「電気化学ドーピングによる光物性制御」に取り組み、予定していたすべての実験を終了した。再現性の取りにくさや、過渡光電流のメカニズムの複雑さから、いずれも詳細な考察には至らなかったが、これらの研究を通して、「電解質溶液の自然電位と電気二重層トランジスタ特性の相関の解明」という興味深いテーマを設定することができた。以上から、おおむね順調に進展していると言える。

電解質溶液の濃度や、2成分系の混合比率は連続的に変化させることが可能であることから、塩化リチウムのポリエチレングリコール(PEG)溶液と、二種類のイオン液体を混合した溶液に着目し、これらの自然電位と電気二重層トランジスタ特性について調べた。PEG溶液と二種類を混合したイオン液体の自然電位はそれぞれ濃度と混合比率の対数に比例したことから、自然電位と化学ポテンシャルの相関が示唆された。また、自然電位と電気二重層トランジスタの閾値電圧には直線的な相関がみられた。濃度や混合比率を変化させることによって、閾値電圧の連続的な制御が可能であることが分かった。イオン液体を用いた場合では最大0.4 Vの範囲で制御が可能であった。電解質溶液の自然電位と電気二重層トランジスタ特性の相関の解明に取り組む。これまでの研究で、電解質溶液の化学ポテンシャルと自然電位の相関が示唆された。温度変化測定を行い、化学ポテンシャルと自然電位の相関を裏付ける。また、電解室溶液の化学ポテンシャルを決めるパラメータについて考察を行う。さらに、イオン液体を固体化したイオン液体ゲルについても興味が持たれる。イオン液体ゲルを用いて、自然電位測定、電気化学測定、電気二重層トランジスタの作成および評価を行う予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。
網膜・視蓋投射パターンの機構解明

網膜・視蓋の投射パターン形成には膜糖タンパク質が重要な役割を果していると考えられており,このことを確かめるため以下の実験をおこなった.コバルト・ツニカマイシン・モネンシン等は神経細胞のゴルジ体に作用しゴルジ体を経由した糖タンパク質の神経軸策内輸送を特異的に阻害する.孵卵5日目のニワトリ胚の片眼にこれらの阻害剤を注入し,視神経および視交叉の形成に及ぼす影響を調べた.視神経のトレーシングには螢光色素のDiIもしくはビオチン・スクシイミドを阻害剤注入の眼に投与し孵卵89日目で断頭後固定をおこなった.液体窒素により凍結し,凍結切片を作製し螢光顕微鏡下もしくはストレプトアビジン・HRP-DABで発色の後,光学顕微鏡下で観察し視神経の形成にどのような影響が生じたか調べた.これら阻害剤を注入したニワトリ胚では,正常時とは異なり視神経の成長方向に誤りが多く見られ,特に眼一眼の投射が著しく観察された.正常なニワトリおよびウズラにおいても同側の視蓋や反対側の眼への視神経の誤った投射が観察されてはいるが,阻害剤投与により膜糖タンパク質の輸送が阻害され,糖タンパク質によって保たれていた視神経の秩序が消失したために視交叉が正常に形成されなかったと結論づけられた.どのような糖タンパク質が変化すると成長方向に異常が生じるかを明らかにするため,神経軸策内輸送の阻害剤と同時に放射性同位元素で標識したアミノ酸および単糖をニワトリ胚の眼に注入し,視神経の糖タンパク質が正常時と比べどのように変化するかSDSゲル電気泳動,オートラジオグラフィ等で検討をすすめている.網膜・視蓋の投射パターン形成には膜糖タンパク質が重要な役割を果していると考えられており,このことを確かめるため以下の実験をおこなった.コバルト・ツニカマイシン・モネンシン等は神経細胞のゴルジ体に作用しゴルジ体を経由した糖タンパク質の神経軸策内輸送を特異的に阻害する.孵卵5日目のニワトリ胚の片眼にこれらの阻害剤を注入し,視神経および視交叉の形成に及ぼす影響を調べた.視神経のトレーシングには螢光色素のDiIもしくはビオチン・スクシイミドを阻害剤注入の眼に投与し孵卵89日目で断頭後固定をおこなった.液体窒素により凍結し,凍結切片を作製し螢光顕微鏡下もしくはストレプトアビジン・HRP-DABで発色の後,光学顕微鏡下で観察し視神経の形成にどのような影響が生じたか調べた.これら阻害剤を注入したニワトリ胚では,正常時とは異なり視神経の成長方向に誤りが多く見られ,特に眼一眼の投射が著しく観察された.正常なニワトリおよびウズラにおいても同側の視蓋や反対側の眼への視神経の誤った投射が観察されてはいるが,阻害剤投与により膜糖タンパク質の輸送が阻害され,糖タンパク質によって保たれていた視神経の秩序が消失したために視交叉が正常に形成されなかったと結論づけられた.どのような糖タンパク質が変化すると成長方向に異常が生じるかを明らかにするため,神経軸策内輸送の阻害剤と同時に放射性同位元素で標識したアミノ酸および単糖をニワトリ胚の眼に注入し,視神経の糖タンパク質が正常時と比べどのように変化するかSDSゲル電気泳動,オートラジオグラフィ等で検討をすすめている.
液晶摩擦材料の表面物性管理による摩擦力制御の試み

液晶(4,4'-Dihexylazoxybenzene(DAN))をポリマー(Polystyrene(PS))に含浸させたフィルムを作製した.このフィルムにプローブを接触させて摺動したときの摩擦力を,カンチレバー式の高精度摩擦力測定装置で測定し,温度(温度によりDANが相転移する),速度及び電場強度を変えた場合の摩擦特性を明らかにした.また,このフィルムに電場を印加した際の摩擦特性を明らかにした.フィルムに含浸されているDANがスメクチック相のおよび結晶相の状態では,DANの流体としての性質は極めて小さい.よって,フィルムとカンチレバー先端との潤滑形態は,流体潤滑とはならず境界潤滑となることを明らかにした.また,これらの相においては,電場を印加した場合に,ER効果が得られないことを明らかにした.DANがネマチック相の状態では,摩擦力は流体潤滑にも境界潤滑にも属さない摩擦特性を示すことが明らかになった.この相では,液晶構造を持ったDANをせん断しながらプローブが摺動する.よって,そのせん断力が摩擦力発生要因の一つであることが明らかになった.また,この相に電場を印加した場合,摩擦力が増加することが明らかになった.DANが等方相に相変化する温度では,摺動速度が速くなると摩擦力が大きくなった.これは,一般的な流体潤滑と同様に,等方相の液晶分子のせん断抵抗が,摩擦力発生に大きく関与したためと考えられる.また,この相に電場を印加した場合,面圧が高く摺動速度が遅い状態では,潤滑膜の生成により摩擦力が減少し摺動速度が速くなるとDANの粘性抵抗により摩擦力が増加すること,他の相と比べて最も大きなER効果を発生させることが明らかになった.電場印加の結果より,等方相のDANに電場を印加した場合と,ネマチック相のDANに電場を印加した場合の,DANの分子挙動は同等である可能性を示唆できた.ポリマー(Polystyrene(PS))に液晶(4,4'-Dihexylazoxybenzene(DAN))を含浸させたフィルムを作製した.このフィルムの摩擦力をカンチレバー式の高精度摩擦力測定装置で測定し,温度(DNAの各相),速度及び電場を変えた場合の摩擦特性を明らかにした.フィルムに含浸されているDANがスメクチック相の状態では,流体潤滑にはならないために液晶特有の摩擦特性は見られずに,摺動速度が0.7〔mm/s〕付近から摩擦力する傾向を示した.DANがネマチック相へと変化したフィルムは,極めて大きな摩擦力を発生させた.これは,フィルム内にブレンドしてある液晶が相変化して摩擦力発生主要因が,PS-プローブ間の摩擦から,PS-DAN-プローブ間の摩擦へと変化したためと考えられる.この相での低い摺動速度においては,液晶が結晶あるいはスメクチック相のような状態で作用するため,摩擦力が低いと考えられる.摺動速度0.5〔mm/s〕付近では,プローブ先端が結晶化したDANに食い込み,液晶の結晶をせん断しながら摺動するため,大きな摩擦力が発生すると考えられる.DANが等方相に相変化する温度では,摺動速度が速くなると摩擦力が大きくなった.これは,一般的な流体潤滑と同様に,等方相の液晶分子のせん断抵抗が,摩擦力発生に大きく関与したためと考えられる.次に,フィルムに200〔V/mm〕の電界を印加した場合の摩擦力変化を測定した.DANが結晶相,スメクチック相及びネマチック相の時,摩擦力変化は極めて小さいことが確認できた.フィルム温度を上昇させDANが等方相の状態で電界を印加した場合,摺動速度が低速の時摩擦力が減少し,摺動速度が大きくなると摩擦力が増加することが明らかになった.液晶(4,4'-Dihexylazoxybenzene(DAN))をポリマー(Polystyrene(PS))に含浸させたフィルムを作製した.このフィルムにプローブを接触させて摺動したときの摩擦力を,カンチレバー式の高精度摩擦力測定装置で測定し,温度(温度によりDANが相転移する),速度及び電場強度を変えた場合の摩擦特性を明らかにした.また,このフィルムに電場を印加した際の摩擦特性を明らかにした.フィルムに含浸されているDANがスメクチック相のおよび結晶相の状態では,DANの流体としての性質は極めて小さい.よって,フィルムとカンチレバー先端との潤滑形態は,流体潤滑とはならず境界潤滑となることを明らかにした.また,これらの相においては,電場を印加した場合に,ER効果が得られないことを明らかにした.DANがネマチック相の状態では,摩擦力は流体潤滑にも境界潤滑にも属さない摩擦特性を示すことが明らかになった.この相では,液晶構造を持ったDANをせん断しながらプローブが摺動する.よって,そのせん断力が摩擦力発生要因の一つであることが明らかになった.また,この相に電場を印加した場合,摩擦力が増加することが明らかになった.DANが等方相に相変化する温度では,摺動速度が速くなると摩擦力が大きくなった.これは,一般的な流体潤滑と同様に,等方相の液晶分子のせん断抵抗が,摩擦力発生に大きく関与したためと考えられる.また,この相に電場を印加した場合,面圧が高く摺動速度が遅い状態では,潤滑膜の生成により摩擦力が減少し摺動速度が速くなるとDANの粘性抵抗により摩擦力が増加すること,他の相と比べて最も大きなER効果を発生させることが明らかになった.
環境ストレス応答MAPキナーゼ経路活性化機構の研究

1.浸透圧センサー(Sln1およびSho1)による浸透圧感知の分子機構の解明。(1)酵母浸透圧センサ-Sln1の温度感受性変異株(Sln1-ts4)は高温ではHog1MAPキナーゼ経路を過剰に活性化し、その結果致死的である。この致死性は、Hog1経路の活性を阻害することによって抑制できることを利用し、Hog1経路の活性化を抑制する新たな遺伝子を発見した。(2)Pbs2 MAPKKはそのN末端の制御領域で複数の蛋白質と結合することにより、足場蛋白質として働く。Pbs2の変異株を系統的に探索しSsk2/Ssk22およびSho1に結合する部位をそれぞれ特定した。これらの変異株はSho1からの信号あるいはSln1からの信号の一方のみしか受け付けない。このことは足場機能が信号伝達の特異性決定に重要であることを示している。2.ヒトストレス応答MAPKKK, MTK1活性化及び不活性下の分子機構。(1)の活性化因子を探索する目的で、酵母細胞内に全長MTK1を発現し、cDNAライブラリーによる機能的相補法でGADD45蛋白質がMTK1の特異的活性化因子であることを見いだした。(2)TGF-βによるヒトp38MAPKの活性化機構を解明した。膵細胞にTGF-βが作用するとSmad2/3の活性化を介して、GADD45βの転写が誘導され、MTK1の活性化を引き起こすことがわかった。Smad変異細胞ではGADD45βの転写誘導もp38MAPKの活性化も共に観察されなかった。また、アンチセンス法によりGADD45βの転写を抑制するとp38MAPKの活性化が阻害された。これらの結果より、TGF-βによるp38MAPKの活性化には、従来知られていたTAK1の活性化による経路とは別に、GADD45とMTK1を介する経路が存在することが解った。
新規癌幹細胞マーカーPDPN 上の腫瘍特異的糖鎖構造の生合成機構の解明

ポドプラニン(PDPN)は、種々の腫瘍に高発現している糖タンパク質で、癌幹細胞群のマーカーとしても使用され始めている。最近、申請者らはPDPNの腫瘍特異的糖鎖修飾の存在を確実に示唆するデータを得た。そこで、この腫瘍特異的糖鎖修飾を担う糖転移酵素遺伝子群を特定し、これらの遺伝子発現制御機をmicro RNA等のnoncoding RNAによる転写後制御という観点から解析し、腫瘍特異的糖鎖構造の生合成制御機構を解明することを目的として研究を遂行した。平成23年度は、腫瘍特異的糖鎖構造の生合成を担う糖転移酵素遺伝子特定のため、当該構造を発現している細胞株と発現していない細胞株の選定に取り組んだ。次に、細胞株の候補糖転移酵素遺伝子の発現量をリアルタイムPCR法で定量解析を行い、抗原発現パターンと遺伝子発現パターンからどの遺伝子がどのように鍵となっているかを推定した。最終年度(平成24年度)、推定した糖転移酵素遺伝子を標的とするmiRNA候補分子を選定した。候補となるmiRNA分子を脳腫瘍細胞株にて定量、抗原の有無との相関から転写後制御に関与している分子を特定を試みた。今後の研究の展開として、特定された分子について、発現実験、阻害実験により検定を行う。そこで、この腫瘍特異的糖鎖修飾を担う糖転移酵素遺伝子群を特定し、これらの遺伝子発現制御機をmicro RNA等のnoncoding RNAによる転写後制御という観点から解析し、腫瘍特異的糖鎖構造の生合成制御機構を解明することを目的とした。【新規癌幹細胞マーカーPDPN上の腫瘍特異的糖鎖構造の生合成機構の解明】という研究題目のとおり、がん幹細胞マーカーPDPNに付加した腫瘍特異的糖鎖構造の構造解析、付加部位の同定を行う計画とした。また、この腫瘍特異的糖鎖構造の生合成に関与する糖転移酵素遺伝子群をリアルタイムPCR法にて定量し、抗原パターンと遺伝子発現パターンから生合成を担う糖転移酵素遺伝子を特定すること、特定した糖転移酵素遺伝子に対するmiRNA分子を特定し転写後制御機構を解析することを計画した。本年度の研究実績としては、(1)糖鎖構造決定の為の材料を作製した。種々の腫瘍細胞に安定的にポドプラニンを発現させ、大量培養により材料となる腫瘍特異的糖鎖構造付加ポドプラニンの大量精製に成功した。(2)リアルタイムPCR法による糖転移酵素遺伝子の発現量と抗原量の相関を確認した。(3)特定した糖転移酵素遺伝子に対するmiRNA分子の定量解析を遂行した。申請者らがこれまでの研究で見いだした、がん幹細胞マーカーポドプラニン上に付加されていることが示唆されている腫瘍特異的糖鎖構造解析のため、種々の腫瘍細胞株にポドプラニン遺伝子を形質導入し、ポドプラニン発現細胞株の作製、安定的な発現細胞株の樹立を行った。糖鎖構造解析の材料として、樹立したポドプラニン発現株の大量培養を行い、腫瘍特異的糖鎖構造が付加されたポドプラニンタンパク質を大量に精製した。また、これらの種々のポドプラニン発現細胞株を利用して、これまでに樹立した腫瘍特異的糖鎖構造認識抗体の抗原結合能の測定、抗体認識部位の特定などの研究を現在遂行している。また、腫瘍特異的糖鎖構造の生合成に関与することが考えられる糖転移酵素遺伝子に関して、種々の腫瘍細胞株における遺伝子発現量を、リアルタイムPCR法を用いて測定した。プレリミナリーなデータではあるが、抗原量と遺伝子発現量の相関をSAS Enterprise Guideを用いて検定し、併せてクラスタリングツールを用いて有為に相関のある遺伝子を抽出・特定することができることを確認した。現在、リアルタイムPCRを遂行する対象となる腫瘍細胞株の種類を増加、また、再現性確認実験を複数回遂行するなどして、データの質と量を向上させている。上記のプレリミナリーな結果を踏まえた段階ではあるが、特定の糖転移酵素遺伝子を標的とするmiRNA候補分子をデータベース上で選定し、いくつかの腫瘍細胞株においてmiRNAの定量解析を行った。通常の遺伝子の定量解析に比べ、non-coding RNAの定量解析はデータのばらつきが非常に多く、現在、実験の最適化を検討している状態である。以上のように、概ね順調に進行している。

当初の予定通り、糖鎖構造解析実験と腫瘍特異的糖鎖構造の生合成を担う糖転移酵素遺伝子の特定、これらの遺伝子発現制御機構の解明をnon-coding RNAによる転写制御という観点から解析する。腫瘍特異的糖鎖構造の解析として、初年度に材料の調整は完了したので、具体的に構造解析実験に着手する。初年度中に構造解析実験に着手する予定であったが次年度に持ち越したので、予算も次年度に持ち越した。一方、糖転移酵素遺伝子の発現実験、阻害実験、それらの実験に伴うリアルタイムPCR実験による糖転移酵素遺伝子の発現量測定、また、non-coding RNAの定量解析等も引き続き実施する。当初の予定通り、大部分が各種実験を遂行するための試薬購入等の消耗品費として使用する計画である。他に、学会参加の為の旅費、論文投稿に係る英文校正費用、論文投稿費用、通信費、アドミニストレイティブアシスタントに対する謝金などに使用する。
加速レンズ系による負の収差の制御技術に関する研究

ナノテク分野での微細加工ツールとして切望されているガスイオンナノビームの普及に不可欠な装置の小型化を実現すべく、加速レンズ系内に減速レンズを挿入することによってビーム径の縮小化に有効である収差を制御する技術を開発した。ガスイオンナノビームはナノテクへの応用が切望されているが普及には装置の小型化が不可欠である。研究の全体構想は、ビームの加速・集束を同時に行う加速レンズ系で大きな縮小率を達成し、その後段に配置する加速管との一体型加速集束レンズ系とすることによりビーム径10mのMeV級小型装置を開発することであるが、この場合、加速管で生じる収差がビーム径の縮小を妨げる。平成21年度は、後段の加速管で生じる収差を前段の加速レンズ系で負の収差を制御することによって打ち消すことができる条件をイオン光学シミュレーションによって追究した。まず、効率的に条件追究を進めるべく計算時間の短縮のため、計算コードを本研究で開発している加速レンズ系に最適化した。加速レンズ系は円柱対称系であること、イオンが中心軸の近傍を進行すること、磁場が存在しないこと、以上の3点を考慮することによって、計算コードの簡略化と計算時間の短縮化に成功した。次に、その計算コードを用いて負の収差による全体系の収差の打ち消し条件を追究した結果、加速レンズ系出口で形成される46keV水素分子イオンビームに対して新たに付加する減速電圧が15kVの時に、負の収差によって加速レンズ系の収差が最大26%低減し、ビーム径を最大17%縮小できることがわかった。以上の成果により、加速レンズ系と加速管との一体型装置において、減速電圧による負の収差を制御することによって収差が打ち消され、ビーム径をより小さく集束できる見通しが得られた。研究の全体構想は、ビームの加速・集束を同時に行う加速レンズ系で大きな縮小率を達成し、その後段に配置する加速管との一体型加速集束レンズ系とすることによりビーム径10nmのMeV級小型装置を開発することであるが、この場合、加速管で生じる収差がビーム径の縮小を妨げる。平成22年度は、前年度に行ったイオン光学シミュレーションによって得られた成果である収差の制御によるビーム径の縮小化の見通しを実験によって実証するべく、新たな加速レンズ実験体系の構築に努めた。収差制御を行う第二加速レンズには減速電圧印加用に新たな電極を配置した。また、後段に配置する加速管に印加する電圧として300kVを想定しているが、電圧勾配が非常に大きいために放電が頻繁に発生することがわかった。そこで、加速管を含む加速レンズ系および周辺環境の放電対策に努めた。現在、220kV程度までの安定的な電圧印加に成功しており、次年度もさらなる放電対策を進めていく必要がある。なお、加速レンズ系の収差を制御するために用いる高電圧高安定電源を本研究費で購入した。イオン光学シミュレーションによって得られた収差制御によるビーム径縮小化に関する成果について、国際会議CAARI2010で口頭発表を行った。また、本会議に提出した論文は査読され既にアクセプトされている。本研究の最終目標は、ナノテクへの応用が切望されているガスイオンナノビームの普及に不可欠な装置の小型化を実現すべく、加速レンズ系内に減速レンズを挿入することによってビーム径の縮小化に有効である収差を制御する技術を開発することである。研究実施計画に基づいてて最終年度にあたる平成23年度は、新たな加速レンズ実験体系の構築を前年度に引き続き行い、特に前年度に判明した電圧印加における様々な不安定性を解決すべく周辺環境の放電対策を進めた。その結果、レンズ系全体に対して150kV以上印加すると、加速レンズ装置と周辺の間の絶縁破壊やコロナ放電、周辺物品のチャージアップや高圧電場による計測機器へのノイズ混入など、ビーム形成及びその計測における不安定性が複数生じることがわかった。そこで、例えば装置周辺のチャージアップに起因するノイズ電場から電流測定用端子をシールドする等、不安定性の原因を一つ一つ特定して解消したことによって、200kVでのビーム電流計測が可能になり、ビーム電流10pA程度、ビーム径20μm程度への集束に成功した。研究実施計画では、収差制御の有効範囲であるビーム径サプミクロンまでの集束を行うことになっていたが、そのためには今後さらに加速レンズ系内のコンディショニング(クリーニング)を継続しながらビーム形成及びビーム径計測の安定性を高める必要があることがわかった。しかしながら、現段階において減速レンズ部には最大で40kV程度を安定に負印加できることを確認しており、前年度までにイオン光学シミュレーションによって得られた収差制御によるビーム径縮小化の最適条件である減速電圧12kVを負印加することは十分に可能であると結論付けられる。以上、3年間の研究目標であった減速レンズによる収差制御技術をほぼ確立した。
現代中国における「諷刺芸術」の研究-中国漫才(相声)とロック(揺滾音楽)-における諷刺の諸相

相声(中国漫才)は中国において最も人気のある芸能であり、また揺滾楽(ロック)も「若者文化の頂点」に君臨すると言われるほどの支持を得ている。これらの芸能はその「大衆性」ゆえに、小説や詩などの「正統」文学では見えにくい中国人の本音が表現されている場合も少なくない。本研究は、(1)「諷刺」という明確なテーマのもとに二つの芸能を統括し、中国社会で果たしてきた役割を総合的、歴史的に整理分析する、(2)必要な目録等を作成して、いまだ充分でない基礎研究の充実を図る、という二点を目的にしている。『研究成果報告書』(1996.3,A-4版、58頁)はその成果をまとめたものである。まず相声に関しては、1950年代から1980年代にいたる論争や作品を取り上げて、作家何遅(He-Chi)など関係者たちの理論的貢献と、実際の作品のなかで展開される諷刺を検証し、厳しい環境のなかで継承されてきた相声の「戦闘的伝統」を明らかにした。(『研究成果報告書』第一部)続いて揺滾楽については、1989年の天安門事件を境にして体制讃美から反体制へと意味を逆転させていく歌、題名に「紅(赤)」のつく歌などをとりあげ、巧みな表現とパフォーマンスを駆使して、辛らつで巧妙な諷刺を行う崔健(Cui-Jian)の音楽世界の特徴を明らかにした。(『研究成果報告書』第二部)最後に、基礎研究充実という課題の面では、芸能専門誌『曲芸(Qu-Yi)』に掲載された相声作品・評論・記事の題目総覧を完成させることができた。(『研究成果報告書』第三部)なお本研究には、新たな作家や作品の発掘と分析、中国における諷刺概念の再検討などの課題が残されており、引き続き研究に取り組んでいく必要がある。中国漫才「相声」は、中国において最も人気のある芸能であり、また崔健に代表される「揺滾音楽(ロック)」も、「若者文化の頂点」に君臨すると言われるほどの支持を得ている。こうした芸能はその「大衆性」ゆえに、小説や詩など「正統」文学では見えにくい中国人の本音が表現されている場合が少なくなく、これらの作品の分析を通じて、中国人の精神的特質も、より具体的に明らかにすることができる。しかしその一方で、相声や揺滾音楽に関する研究はなお不十分であり、資料的な整備すら満足に行われていない、というのが現状であった。こうした状況を踏まえ、平成6年度はまず相声と揺滾音楽に関する以下のような基礎的作業を行った。(1)相声に関しては、中華人民共和国建国後に出版された関係文献名、専門雑誌『曲芸』掲載の台本・評論等の題目、及び実演のテープ・ビデオ名のコンピュータ入力を進め、日本の研究機関に未収の資料を除き、ほぼ入力を終了した。(2)揺滾音楽に関しては、この一年特に日本で多くの資料(CDや雑誌・新聞記事)が発行されたという条件も活用しながら、崔健・何勇・唐朝楽隊などの資料の収集とコンピュータ入力を行うと共に、昨年度に公表した「崔健年譜」「崔健作品目録」の補正を行った。

次に、「特大新聞」「虎口遐想」などの「諷刺相声」を新たに発掘して分析を進めた結果、「荒唐無稽」「魔術的リアリズム」などの中国での評価が不十分かつ不適切であり、実は共産党政権への辛辣な諷刺という点から高く評価すべき作品であることが明確になった。(なおこの研究成果は平成7年度に公表される。)さらに、崔健の最新作品集『紅旗下的蛋』及び何勇や唐朝楽隊の作品の分析を行った結果、ロックという音楽を通じて諷刺を試みる関係者の数が想定していた以上に多く、揺滾音楽が諷刺の重要な武器となっていることが改めて確認され、さらにそれは「ワールドミュージック」として注目されている非欧米音楽の有力な一翼を担っていることが明確になった。(この点についての研究成果も平成7年度に公表される。)1994年から2年間にわたって継続してきた本研究においては、(1)「諷刺」という明確なテーマのもとに、相声と揺滾音楽の二つの芸能を統括し、中国社会で果たしてきた役割を総合的、歴史的に整理分析する、(2)必要な目録等を作成して、いまだ充分でない基礎研究の充実を図る、という二点を目的にして研究を進めてきた。本年度はその成果を「研究成果報告書」(1996.3,A-4版、58頁)にまとめた。まず相声に関しては、1950年代から1980年代にいたる論爭や作品を取り上げて、作家何遅(He-Chi)など関係者たちの理論的貢献と、実際の作品のなかで展開される諷刺を検証し、厳しい環境のなかで継承されてきた相声の「戦闘的伝統」を明らかにした。(『研究成果報告書』第一部)続いて揺滾楽については、1989年の天安門事件を境にして体制讃美から反体制へと意味を逆転させていく歌、題名に「紅(赤)」のつく歌などをとりあげ、巧みな表現とパフォーマンスを駆使して、辛らつで巧妙な諷刺を行う崔健(Cui-Jian)の音楽世界の特徴を明らかにした。(『研究成果報告書』第二部)最後に、基礎研究充実という課題の面では、芸能専門誌『曲芸(Qu-Yi)』に掲載された相声作品・評論・記事の題目総覧を完成させることができた。(『研究成果報告書』第三部)なお本研究には、新たな作家や作品の発掘と分析、中国における諷刺概念の再検討などの課題が残されており、引き続き研究に取り組んで行く必要がある。
哺乳類受精の分子機構の解明とその外来遺伝子導入技法開発への応用

1)リモノクローナルテクノロジーによって、ブタ透明帯に反応するモノクローナル拡体産生6株を樹立した。そのうちの2株はブタとヒトの透明帯に共通な拡原を認識する拡体を産生した。これらのモノクローナル拡体の認識する拡原エピトープはブタ透明帯とヒト透明帯に共通なペプチドの立体構造であることを明らかにした。2)ぶタ透明帯の糖鎖の全構造解析を了している。そのうちとくに中性糖鎖のかなりの部分(30%)で、オリゴ糖の非還元末端にN-アセチルグルコサミンを有していることが特徴的であった。これはブタ精子上にも発現しているガラクトース転移酵素のアクセプターにもなり得る基値である。実際、ガラクトース転移酵素のインヒビターであるα-ラクトアルブミンはブタ精子の卵子透明帯への結合を強く阻害した。これらの結果からブタ透明帯糖鎖末端に露出したN-アセチルグルコサミン残基は精子上に発現したガラクトース転移酵素のレクチン様作用と対応して、精子結合基の一つであると考えられた。3)マウスの系で、精子の伎頭部膜上にMHCクラスII分子が発現し、存在していることを明確に示した。そしてこの分子のポリモルフィック部位に外来性DNAを結合しうる能力があり、この分子に結合した外来性DNAは両配偶子間の細胞融合の段階までもち込まれ、受精卵の細胞膜上に拡散することを観察している。4)精子のMHCクラスII分子のモノモルフィック部位に対応して、卵子卵黄膜上邦CD_4分子が発現し、この両分子間のホモフィリックな相互作用を介して両配偶子間の接着、細胞融合が推進され、CD_4に介在したP56^<lcr>によって精子の卵子への接着情報の伝達の可能性を示してきた。ブタ卵透明帯の糖鎖の構造解析を進めてきたが中性糖鎖の解析が終了し,その結果をとりまとめて論文に発表した(Biochemisty,in press 1991)。またこの構造解析を行う過程で卵透明帯糖鎖のNーacetyl glucosawine末端を有する糖鎖が中性糖のうちで32%も占めていることを見い出した。一方ブタ精子細胞膜上にもPーgalactosyl transferaseが発現している所見とあいまって両配偶子間の結合がこの両者の分子によって推進されうることも可能であると考えられた。さらに精子由来のアクロシンやレクチン原分子の卵透明帯への結合の活性分子の存在も確認しているのでこれら分子の単離・精製も進めている。次にマウスの系で精巣上体精子上にMHCクラスII分子の発現を確認し,この分子が受精の段階で両偶子の細胞触会に関与している可能性を明らかにし,論文に発表した(Am.J.Reprod.Immunol.24,9,1990)。またこのクラスII分子が外来遺伝子を結合し受精の細胞融合の段階までもち込まれ,卵黄膜上に拡散するところまでを追跡,観察し論文に発表した(Am.J.Reprod.Immunol 24,120,1990)。さらにこの精子上のクラスII分子に対応して卵黄膜上にL_3T_4原分子(CD_4)が存在し,この両者の相互作用によって両配偶子間の細胞融合が推進され,さらにこのL_3T_4原分子にP56^<lck>がassociateしているという事実の発見ともあいなって,卵の活性化機構(つまり情報伝達機構)の解明にせまりつつある。これらの研究をとりまとめ論文投稿中である(J.Immunol.)。これまでにTSKーHPLC用カラム(DEAE5PW,phenylー5pwなど)を購入し、これを使用して透明帯糖蛋白質アスパラギン結合型中性糖鎖、酸性糖鎖の構造解析を終え、非還元末端に露出したNー