hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
成熟哺乳動物の網膜神経節細胞の軸索再生と機能再建に関する研究

神経栄養因子であるBDNF (brain-derived neurotrophic factor)以外に、GDNF (glial cell-derived neurotrophic factor)、CNTF (cilially neurotrophic factor)をもちい、生体系にてその効果を検証した。実験動物ラットの網膜神経節細胞はあらかじめDiIにて蛍光標識して検討に用いた。麻酔下で眼窩内で片側の視神経を完全に切断し、眼球側の視神経切断端をcollagen gelと共に再生促進因子、培養したグリア細胞等を封入した人工血管内に留置、他端を四丘体上丘に留置した。硝子体注入:30G歯科用注射針をもちいて硝子体腔に再生促進因子を注入。眼球を摘出後、網膜を単離し、標識された神経節細胞を蛍光顕微鏡にて観察、その生存数を計測した。さらに動物を潅流固定後、視神経-視神経接合部の組織標本を作成し、再生神経束を観察し、さらに変性・神経再生に係わる種々の物質(c-jun, c-fos, GAP-43,L1,etc.)の局在を免疫組織染色にて検証した。再生軸索が人工血管内の視神経の接合部位を越えて上丘に向かうかどうかを検討するために、蛍光色素fast blueを接合部より遠位側(末梢側)の視神経または上丘に直接注入し、軸索再生した神経節細胞を再標識し、蛍光顕微鏡下で二重染色された神経節細胞数を観察、細胞数を計測した。その結果、いずれのfactorも以前われわれの培養系での検証と同様に、生体系においても網膜神経節細胞の細胞死抑止、軸索再生促進因子として作用することが確かめられた。また、choleratoxin Bを眼球内に直接注入し、人工血管内の再生軸索を通って上丘に達していることを確認した。今後は、さらにこれら人工血管をもちいた視神経移植動物を長期飼育し、視機能の再建がみられたかを健側視神経切断後に、電気生理学的および行動実験にて検証する予定である。神経栄養因子であるBDNF(brain-derived neurotrophic factor)、CNTF(cilially neurotrophic factor)をもちい、生体系にてその効果を検証した。麻酔下で眼窩内で片側の視神経を完全に切断し、それぞれの切断端をcollagen gelを封入した人工血管内に留置し約2週問飼育した。視神経移植:移植された人工血管内にcollagen gelと共に再生促進因子、培養したグリア細胞等を注入した。さらに動物を潅流固定後、視神経-視神経接合部の組織標本を作成し、再生神経束を観察し、さらに変性・神経再生に係わる種々の物質(c-jun, c-fos, GAP-43, L1,etc.)の局在を免疫組織染色にて検証した。再生軸索が人工血管内の視神経の接合部位を越えて上丘に向かうかどうかを検討するために蛍光色素fast blueを接合部より遠位側(末梢側)の視神経または上丘に直接注入し、軸索再生した神経節細胞を再標識し、蛍光顕微鏡下で二重染色された神経節細胞数を観察、細胞数を計測した。

また、われわれが新たに見いだした肝由来神経活性化因子や他の神経再生促進因子が同様に神経節細胞の軸索再生を促進するか否かを探求する。今後さらに、これら人工血管をもちいた視神経移植動物を長期飼育し、視覚機能再建がみられたかを健側視神経切断後に行動実験にて検証する予定である。神経栄養因子であるBDNF(brain-derived neurotrophic factor)以外に、GDNF(glial cell-derived neurotrophic factor)、CNTF(cilially neurotrophic factor)をもちい、生体系にてその効果を検証した。実験動物ラットの網膜神経節細胞はあらかじめDiIにて蛍光標識して検討に用いた。麻酔下で眼窩内で片側の視神経を完全に切断し、眼球側の視神経切断端をcollagen gelと共に再生促進因子、培養したグリア細胞等を封入した人工血管内に留置、他端を四丘体上丘に留置した。硝子体注入:30G歯科用注射針をもちいて硝子体腔に再生促進因子を注入。眼球を摘出後、網膜を単離し、標識された神経節細胞を蛍光顕微鏡にて観察、その生存数を計測した。さらに動物を潅流固定後、視神経-視神経接合部の組織標本を作成し、再生神経束を観察し、さらに変性・神経再生に関わる種々の物質(C-jun, c-fos, GAP-43, L1, etc.)の局在を免疫組織染色にて検証した。再生軸索が人工血管内の視神経の結合部位を越えて上丘に向かうかどうかを検討するために、蛍光色素fast blueを接合部より遠位側(末梢側)の視神経または上丘に直接注入し、軸索再生した神経節細胞を再認識し、蛍光顕微鏡下で二重染色された神経節細胞数を観察、細胞数を計測した。その結果、いずれのfactorも以前われわれの培養系での検証と同様に、生体系においても網膜神経節細胞の細胞死抑止、軸索再生促進因子として作用することが確かめられた。また、choleratoxin Bを眼球内に直接注入し、人工血管内の再生軸索を通って上丘に達していることを確認した。今後は、さらにこれら人工血管をもちいた視神経移植動物を長期飼育し、視機能の再建がみられたかを健側視神経切断後に、電気生理学的および行動実験にて検層する予定である。
におい刺激による嗅覚系ニューロン再生の検証、分子機構の解明と認知症治療への応用

におい刺激により嗅覚系ニューロンの再生が亢進するのか、さらに、におい刺激により神経性嗅覚障害の有意な回復が得られるとすれば、どのようなメカニズムで回復するのかを実験動物(マウス)を用いて組織化学的ならびに遺伝子発現の視点から解析する。また、アルツハイマー病では嗅覚が低下することが知られており、アルツハイマー病の責任病巣である海馬も、嗅球から繋がる嗅覚経路の一つであり、海馬の病巣が本疾患の嗅覚低下の一因とも考えられる。本研究では、海馬における再生も同時に観察することができ、将来的ににおい刺激が嗅覚の改善、ひいてはアルツハイマー病の治療にもなる可能性を探る。
がん組織で見出されるEBVは未知のがんサブタイプ形成に関与するか

エプスタイン-バーウイルス(EBV)/ヒトヘルペスウイルス4型関連胃癌(EBVaGC)は、通常in situハイブリダイゼーション(ISH)法によって診断される。The Cancer Genome Atlas(TCGA)-胃がん(STAD)プロジェクトにおけるEBV分子サブタイプは、ISH法ではなく複数の次世代シークエンシング(NGS)法の組み合わせによって決定され、TCGA-STAD研究では、EBV分子サブタイプと他のサブタイプ間で予後に差がないことも示された。最近、TCGA臨床リソースデータセットの生存データの有用性が報告され、STADデータセットの使用も推奨された。さらに、TCGA臨床データの病理組織情報は、WHO国際腫瘍学分類第3版(ICD-O-3)用語に統一された。そこで、我々はTCGA-STADのRNA-seqデータの再分析を実施した。我々は広範囲かつ信頼できるEBV由来のNGSリードを過去の報告と比較して大量に得ることができた。再分析データに基づいたEBV陽性症例では、EBV陰性症例と比較して、adenocarcinoma NOSで統計学的有意に長い全生存期間(OS)、tubular adenocarcinomaで統計学的有意に短いOSが示された。我々の結果は、EBV由来のリードがこれまで考えられているよりも多く胃がんで検出されること、および、EBVは少なくとも2種の胃がん病理組織型の予後にそれぞれ異なる影響を与えることを示唆した。TCGAの制限公開データの取得が順調に進み、土台としてのRNA-SeqデータからのEBウイルス検出解析パイプラインを構築することができた。さらに、TCGA胃がんデータを用いたEBV関連胃がんについての新しい知見を得ることが出来、当初の計画どおりに進んでいると思われる。今後は、取得したTCGAの制限公開データを用いて、pan-cancerレベルでのウイルス検出をがん種横断的に実施し、主要ながんウイルスがどの程度検出されるのか、そしてがんウイルス陽性例と予後との関連があるかどうか等について、探索を行っていく予定である。本年度はTCGA胃がんデータのdry解析を集中的に実施し、wet解析は実施できなかったため、使用予定であった物品費の執行がなく次年度使用額が生じた。次年度使用額については、物品としては、DNA、RNA等の検出によるバリデーションの実施、ハードディスク等の購入のほか、バイオインフォマティクス人件費等に振り替えて使用する計画である。
超伝導または強磁性を示す新規C_<60>錯体の探索

新規なC_<60>系超伝導体であるアルカリドープOMTTF・C_<60>・PhHに関して得られた知見を中心に述べる。1作製と物性測定:グローブボックスとガラス製高真空ラインを用いて、K、RbをC_<60>と共に石英管に挿入・封入する作業を厳密かつ効率的に行なった。超伝導発現の確認はLFMA、SQUIDなど磁気測定で行ない、シールディングdc磁化の値から10%程度の体積分率を示すバルクの超伝導体であることがわかった(T_cはKで17-18.8K、Rbで23-26K)。ガラス製真空セルとコンピュータ制御式抵抗測定機器を用いて、ド-ピング過程中における抵抗変化を調べる試みは、結晶へ端子装着が困難なため現在までのところ成功しておらず、作業方法を工夫するなどして、ここに述べないその他のドナーによる新規イオン性錯体作製と共に、引き続き検討する計画である。2組成:K_x・OMTTF・C_<60>・PhHに関して、LFMA及びSQUID測定にて超伝導を確認した試料について、EPMA/SEMによる組成分析・表面観察を行なった。中性錯体に対するKの含量xがx≦1.8であったことから、K_3C_<60>の生成による超伝導ではないことが支持された。また、個々の結晶表面の荒れ具合にバラツキが見られたことから、Kの含量は結晶ごとに、また、個々の結晶内においても場所ごとに、分布を持つことが示された。3結晶構造:K_x・OMTTF・C_<60>・PhHおよびRb_x・OMTTF・C_<60>・PhHに関して、単結晶四軸X線回折による構造解析を行なった。Rbドープの試料については酸素・水分を除去したグローブボックス内でX線用キャピラリーに封入し、結晶劣化を抑えて測定した。K、Rbどちらの場合も基本的な構成成分分子の充填様式はドープ前の結晶から変化は認められなかったが、Kドープでは単位格子体積の膨張および次元性の低下が見られた。体積の増分からKの平均含量を見積もるとx=0.6程度であった。
酸分泌刺激による胃底腺壁細胞プロトンポンプ動員のメカニズム

胃壁細胞H^+-ポンプの細胞膜への選別輸送機構を,同じP型ATPase族に属するNa^+-ポンプを対照として調べた。輸送にはβ鎖が関与する可能性が指摘されており,β鎖の具体的役割を検証した。1.α鎖の細胞膜への輸送にはβ鎖と複合体を形成することが必須である。複合体の形成にはβ鎖の細胞外(-S-S-)loopやα鎖のN末端領域が関与する。2.両ポンプβ鎖は複合体形成については互換性があるが,機能的発現(ATPase活性の発現)については互換性が無く,それぞれに特異的領域が存在する。両β鎖間で各種キメラ体を構築し,特異的領域の抽出を実行した。細胞内側に位置するN末端領域は両β鎖間で機能的互換性があり,特異的領域は細胞外側領域に存在する。3.細胞外側に位置する最もN末端側(-S-S-)loop(L_1)は,これを切断すると機能が消失し,且つL_1は両β鎖で互換性が無く,従ってこの領域は機能に関与する特異的領域の1つである。特に148位の残基が特異性の決定に重要である。4.これらの成績を総説として報告した。ブタ壁細胞プロトンポンプβ鎖とシビレエイのナトリウムポンプβ鎖との間で、キメラ体を構築するため、それぞれのcDNAにそれらの間で等価な部位に5種の制限酵素部位を導入し、それら部位をキメラ体構築の接続点とした。理論的には64種のキメラ体を構築できるが、本年度はプロトンポンプβ鎖のN末端から順次ナトリウムポンプβ鎖で置換したキメラ体5種とその相補的キメラ体5種を構築し、Xenopus卵母細胞で発現させた。どのキメラβ鎖もα鎖と会合体を形成したが、α鎖をきちんとした構造(トリプシン抵抗性)に安定化させるにはそれぞれのβ鎖のN結合型糖鎖が一揃い揃っていることが必要であることが示唆された。また安定した構造を形成したα、βキメラ体複合体のうち機能的(ATPase活性)であったのはN-末端細胞内領域置換キメラ体との複合体のみであった。これらの結果は、β鎖の細胞外領域は両ポンプ間で互換性が無く、したがってそれらのポンプ特異性の決定に関与する領域であると結論した。プロトンポンプが頂端膜に、ナトリウムポンプが側底膜に分布するための仕分けにこうした特異的領域が関与すると推定し、そのことを検証するためそれらキメラβ鎖を極性細胞(CaCo2)で発現させ、キメラ体の細胞内移行を共焦点レーザー顕微鏡を用いて追跡したが、本年度は未だ結論を導くまでには達していない。シビレエイのナトリウムポンプβ鎖とブタのプロトンポンプβ鎖との間でキメラ体を構築し、これらをアフリカツメガエル卵母細胞中で発現させた。平成7年度は、キメラβ鎖とα鎖との会合体形成能や、できた会合体のATP分解能以外に、イオン電流の膜電位依存性を分析した。その結果、1,β鎖の細胞質側に依存するN末端領域は、ATP分解活性に関する限り両ポンプ間で互換性があるが、イオン電流の膜電位依存性に差があり、β鎖N末端領域がイオン特異性に関与する可能性が生じたこと。2,細胞外側に存在する最もN末端側の-S-S-ループ(L1)は両ポンプ間で互換性が低く、機能上特異的領域であることが示唆された。特にこのループ内の148位のアミノ酸残基が重要であり、ナトリウムポンプでは塩基性アミノ酸(Lys, Arg)、プロトンポンプでは疎水性アミノ酸(Phe, Leu)であること。3,プロトンポンプβ鎖がα鎖と安定複合体を形成するには、糖鎖が全て揃っている必要があること。などが新たに明らかになった。なお、機能的ポロトンポンプが細胞膜へ選別輸送される機構については、これを培養細胞発現系を用いて組織化学的に追跡している過程で、さらにプロトンポンプβ鎖に特異性の高い抗血清が必要なことが判明し、新たに数種の部位特異的抗血清を作成した。これにより共焦点レーザー顕微鏡等による構造的解析が進展することが期待される。

プロトンポンプの機能的発現に寄与するβ鎖の領域を,ナトリウムポンプβ鎖とのキメラ体を構築することにより調べた。1.ナトリウムポンプβ鎖自体はプロトンポンプの機能的発現(ATPase活性)に無効であること。2.プロトンポンプβ鎖のN-末端側細胞内領域をナトリウムポンプで置換したキメラ体はプロトンポンプATPase活性の発現に有効であり,従ってこの領域は両β鎖間で互換性のあること。等が新たに明らかになった。これらの結果は,昨年度までに得られたナトリウムポンプの機能的発現に関する結果と一致した。従って両β鎖のそれぞれに固有な機能に関与する特異的領域は,膜貫通領域から細胞外領域の範囲に存在すると結論した。これら特異的領域がプロトンポンプのapical側への選別的動員に関与する可能性を検証するために,β鎖やそのキメラ体の極性細胞(Caco2)での発現および発現産物の局在性の観察を試みた。3.pREP9を発現ベクターとして発現プラスミドを構築して電気穿孔法でCaco2に導入した。導入したβ鎖遺伝子の発現はノザン法で確認できたが,免疫沈降法や共焦点顕微鏡観察ではプロトンポンプβ鎖の発現は観察されたが,ナトリウムポンプβ鎖では,各種抗血清を用いたにも関わらず決定的な発現を観察することができなかった。これは,極性細胞ではナトリウムポンプやプロトンポンプの翻訳が制限されるという結果(Grindstaff et al.,J.Biol.Chem.271,23211-23221,1996)と関連しているのかもしれない。
神経細胞移動因子に関するスクリーニング法の確立

神経系幹細胞の移動に関して、以下に研究成果を報告する。(A)前脳の細胞移動路(RMS)内での神経分化について:RMS内ではたえずニューロンへの分化がおこっている。Calretinin陽性ニューロンの20.8%は幼弱なNeural markerであるNestinを発現しており、61.8%は幼弱なNeuronal markerであるPSA-NCAMを発現していることが明らかになった。(B)新生傍糸球体細胞の運命について:BrdUを用いて、生後に新生した傍糸球体細胞の多くは短い期間(2週間)で細胞死に陥ることがあきらかになった。(C)細胞移動後の嗅覚系ニューロンのターンオーバーについて:Thymidineを用いて神経系幹細胞を標識後、Calretininをニューロンマーカーにして嗅球での新生ニューロンの運命(生存・細胞死)を調べた。^3H-Thymidine投与2週後には細胞移動・ニューロン分化が完了するので、2週での計測値を100%として8週の計測値の比率を求めた結果、傍糸球体細胞の約3/4(76.8%)が細胞死をおこしていた。顆粒細胞については、約2/3(65.3%)が細胞死をおこしていた。嗅覚神経系では新生ニューロンの多く(65.3-76.8%)が比較的短期間(6週間)に細胞死をおこすことが明らかになった。(D)細胞移動傷害実験によるNeurogenesisについて:細胞移動が完全に阻止された細胞移動路(RMS)傷害側の嗅球において、BrdU陽性・NeuN陽性のニューロンの存在(Neurogenesis)を嗅球で証明することができた。局所に存在する神経系幹細胞によるNeurogenesisを示している点で意義あるものである。さらにRMSを経由するNeurogenesis(36.7%)とRMSを経由しないNeurogenesis(3.7%)の比率は大きく異なっていた。また移動する神経系幹細胞はニューロン分化能のみならずグリア細胞への分化能も有していることが明らかになった。(A)側脳室前端部には幼若な神経系前駆細胞が存在し、rostral migratory stream(RMS)を嗅球に向かって移動し神経細胞に分化する。RMS内に存在するcalretinin陽性細胞について、幼若なneuralmarkerであるnestinと幼若なneuronal markerであるとともに細胞移動に必須なポリシアル酸の結合したpolysialylated neural cell adhesionmolecule(PSA-NCAM)の発現について調べた結果、(1)RMS内のcalrtinin陽性細胞は形態学的には神経突起のよく発達した双極性の細胞である(2)RMS内のcalrtinin陽性細胞のうち20.8%の細胞がnestinを、61.8%の細胞がPSA-NCAMを発現している等を明らかにした(Neuro Report,1999)。以上の結果から、RMS内のcalrtinin陽性細胞は成熟した神経細胞への分化の途上にあること、また発現率の相違から成熟した神経細胞への分化の過程ではじめにnestinを失い、次にポリシアル酸を失うものと推定された。

(B)神経細胞移動因子(chemotaxic and/or repellent factors)を産生する脳領域をスクリーニングする目的で、細胞移動のpathwayであるRMS周囲の脳領域(中隔野、線条体、側座核、前嗅核、嗅球)をそれぞれイボテン酸で損傷した動物を作成し、経時的にRMSの幅が拡大(細胞移動の停止がおこればRMS内に細胞が蓄積しRMSが拡大することが知られている)するかどうかについて検討した。その結果、いずれの損傷動物においてもRMSの拡大は認められなかった。次年度は(1)損傷領域をさらに広げる(2)グリア細胞も障害する(イボテン酸は神経細胞のみを障害するため)実験を試みる計画である。以下に研究成果を報告する。(A)新生傍糸球体細胞の運命について:BrdUを用いて、生後に新生した傍糸球体細胞の多くは短い期間(2週間)で細胞死に陥ることが明らかになった。(B)細胞移動後嗅覚系ニューロンのターンオーバーについて:Thymidineを用いて神経系幹細胞を標識後、Calretininをニューロンマーカーにして嗅球での新生ニューロンの運命(生存・細胞死)を調べた。^3H-Thymidine投与2週後には細胞移動・ニューロン分化が完了するので、2週での計測値を100%として8週の計測値の比率を求めた結果、傍糸球体細胞の約3/4(76.8%)が細胞死をおこしていた。顆粒細胞については、約2/3(65.3%)が細胞死をおこしていた。(C)神経細胞の移動に関与する因子を生成する細胞の同定について:新生児ラットの各組織由来の細胞を対象として、成熟ラットの嗅球に移植し、神経系幹細胞の移動(遅延・停止)への影響を調べた。移植実験では、BrdU陽性の神経系幹細胞の移動は正常におこっており、細胞移動が停止した際の形態学的特徴であるRMS拡大像は認められなかった。(D)細胞移動傷害実験によるNeurogenesisについて:細胞移動が完全に阻止された細胞移動路(RMS)傷害側の嗅球において、BrdU陽性・NeuN陽性のニューロンの存在(Neurogenesis)を嗅球で証明することができた。局所に存在する神経系幹細胞によるNeurogenesisを示している点で意義あるものである。さらにRMSを経由するNeurogenesis(36.7%)とRMSを経由しないNeurogenesis(3.7%)の比率は大きく異なっていた。また移動する神経系幹細胞はニューロン分化能のみならずグリア細胞への分化能も有していることが明らかになった。
第二次世界大戦への道程をめぐる戦間期国際政治史

今回の奨励研究(A)の研究費補助金により、第二次世界大戦への道程をめぐる戦間期国際政治史の分野で、以下の成果が見られた。第一に、ヨーロッパとりわけファシスト・イタリアから見た地中海の国際政治史に関する基本的史料の収集が進展した。これは、ともすれば東京に集中しがちな史料状況の中で研究を続ける際、最低限必要な作業であった。地中海が、当時世界帝国であったイギリスのアジアへ向かう最短路として機能していたことを考慮すれば、伊英関係の文脈のみに限らず、今後もこの地域の実証研究が大きな意味を有することになる。第二に、1930年代の中国関連史料について多くの情報が入手された。これは各国の研究者との交流により実現された重要な到達点の一つである。これにより、従来は個別の研究対象とされてきたヨーロッパとアジアを、相互関連性を持った歴史的文脈の中で捉えることも可能となろう。第三に、これまでの研究蓄積をふまえ、国際政治史の成果を日本から逆に世界へ発信することが試みられた。この具体的研究実績としては、英語によるファシズム期イタリア外交に関する論文が、新年度早々に出版される予定である。世界に広がる多くの研究者との交流をこれからも進めていくためには、外国語による発表の必要性が更に高まると予想される。特に国際政治史の分野においては、こうした機会がますます重視されよう。こうした中で、歴史研究の場合、長期間の情報蓄積が不可欠であるが、今年度に一応の成果が得られたことは、本研究費補助金に拠るところが大きかった。
B細胞抗原レセプター結合分子α4分子の蛋白フォスファターゼ制御シグナル経路の解析

Igbpl/α4の解析を行ない、以下のことを明らかにした。(1) alpha4は細胞の維持、増殖において蛋白質合成系を制御するラパマイシン感受性シグナルを伝達する。(2)蛋白質脱リン酸化酵素protein serine/threonine phosphatase2Aの触媒サブユニットと特異的に結合する。(3)その結合によって脱リン酸化酵素の活性を制御する。(4) Igbp1(α4)分子のゲノム遺伝子解析を行ない、さらにIgbp1(α4)に関連した分子が存在することを見いだした。この分子は脳神経系細胞での選択的な発現が見られることからα4-bと名付けた。α4-bはほぼ同じサイズの分子として細胞質内に発現し、その発現はIgbp1(α4)とはまったく異なり、神経細胞であるPC12,において選択的であり、選択的プロモーター領域で制御されていることをしめした。神経細胞は元来、蛋白質脱リン酸化酵素の発現が高く、PP2Acも脳神経細胞でフォスファターゼ結合蛋白ファミリーであることがわかった。このIgbp1(α4)分子がB細胞抗原レセプターから細胞内、核内で蛋白質の脱リン酸化を促すPP2Aの制御に及ぶ一連のシグナル伝達経路を明らかにする鍵となる機能分子であることが明らかになった。
レーザー切削面における接着性レジンシステムの象牙質接着機構に関する研究

現在まで遂行してきたレーザー処理象牙質表層の形態学的分析は,正常象牙質を用い一定の出力下に方ける変化の分析であった。そこで本年は,齲蝕象牙質に照射したときの構造変化の検討,および照射出力の違いによる形態学的変化の比較検討を行った。すなわち,新鮮抜去ヒト第3大臼歯における象牙質齢蝕をCO2レーザー(1w,0.3sec),あるいは低速のラウンドバーにより除去し,当該表層の超微細構造をTEM(脱灰染色)により検討した。両者とも切削面に大きな差異は認められず切削界面は明瞭であり,また,レーザー処理正常象牙質の表層には高次構造の破壊された象牙質が一層観察されたが,齲蝕象牙質においては認められなかった。レーザーにより影響を被った齲蝕象牙質内層がもともと軟化しているため,エアージェットスケーラーにより除去されたものと推察された。一方,正常象牙質においてCO2レーザー,あるいはEr : YAGレーザーの出力を変化させて照射し,その表層の超微細構造をTEM(脱灰染色)により比較検討した。CO2レーザーの低出力(1w,0.3sec)および高出力(3w,0.3sec)照射象牙質の表層は,前者では外形不明瞭で横紋構造が消失し変性したコラーゲン線維を有する無定形の一層(12μm)が観察されたが,後者では認められず横紋構造の観察されるコラーゲン線維が引きちぎられた様な像が観察された。また,Er : YAGレーザーの低出力(60mj,1pps)および高出力(250mj,1pps)照射象牙質表層では,前者はコラーゲン線維の高次構造が破壊された無定形の一層(34μm)が観察されたが,後者では全く観察されなかった。レーザーの照射エネルギーが大きいとその影響は表層に限局されることが判明し,したがって高出力レーザー処理象牙質におけるレジンの接着性があまり低下しなかったものと推察された。新鮮抜去牛前歯に形成されたクサビ状欠損窩洞表面を,Er:YAG(アーウィン^<【○!R】>,60mJ,10pps)及びCO_2レーザー(トパル^<【○!R】>,1W,0.3s)を照射し,Clearfil Mega Bond/AP-XあるいはSingle Bond/Z100を修復後,37°C水中に24時間保存した。それらについて微小引張り試験法により接着性の検討を行うと共に,光学,走査電子,透過電子顕微鏡やサーモグラフを用いてレーザー処理象牙質表面の性状を解析した。また,レーザー処理象牙質平坦面におけるレジンの接着強さも測定し,C-factorが接着強さに及ぼす影響も検討した。さらに,レーザー処理象牙質における齲蝕検知液の染色性についても検討した。レーザーによる象牙質蒸散により構造欠陥や熱変性層が生じ,レジンの接着性は有意に低下した。いわゆる「レーザーエッチング」による接着促進効果は認められなかった。また,平坦面に比しクサビ状欠損窩洞では,レジンの初期接着性は低下し有意差が認められた(p<0.01)。一方,齲蝕検知液はレーザー処理健全象牙質を染色することも明らかとなった。Er:YAGまたはCO_2レーザー照射は,レジンの象牙質接着性を阻害することが判明した。レーザー処理象牙質におけるレジンの接着性の評価時には,平坦面のみならずC-factor値の大きい窩洞においても検討する必要があり,さらにサーモストレスや繰り返し負荷を与えるなどの接着耐久性を含め総合的に考察を加える必要性があると考えられた。また,レーザー処理象牙質面に対し安定したレジンの接着を獲得するには,現段階ではこれらの構造欠陥や熱変性層を除去する必要があると思われた。さらに,現時点では,レーザーによる象牙質齲蝕治療のガイドライン確立に先立って,種々の問題を解決しなければならないことが明らかとなった。CO2レーザーの低出力(1w,0.3sec)および高出力(3w,0.3sec)

照射象牙質の表層は,前者では外形不明瞭で横紋構造が消失し変性したコラーゲン線維を有する無定形の一層(12μm)が観察されたが,後者では認められず横紋構造の観察されるコラーゲン線維が引きちぎられた様な像が観察された。また,Er : YAGレーザーの低出力(60mj,1pps)および高出力(250mj,1pps)照射象牙質表層では,前者はコラーゲン線維の高次構造が破壊された無定形の一層(34μm)が観察されたが,後者では全く観察されなかった。レーザーの照射エネルギーが大きいとその影響は表層に限局されることが判明し,したがって高出力レーザー処理象牙質におけるレジンの接着性があまり低下しなかったものと推察された。
アメリカ文学と視覚芸術の交差：20世紀中葉の文学と写真

平成30年度前半は、トルーマン・カポーティの文学作品と、フォト・ジャーナリズム、写真との関係を中心に研究を行なった。まず、写真家アンリ・カルティエーブレッソンやリチャード・アヴェドンとの関わりを整理し、その上で、新たな文学ジャンルとして彼が構想したノンフィクション・ノベル『冷血』(In Cold Blood, 1966)の分析に取り組んだ。本作品を、同時代に台頭したフォト・ジャーナリズムとの関係の中で再考する試みだ。その成果の一部は、米国雑誌Arizona Quarterly 75.2( 2019年夏)に掲載されることが決定した。アメリカ文学・文化研究の国際的学術雑誌として権威ある本雑誌への掲載は、本研究の大きな成果といえる。また、当初の計画通り、ガートルード・スタイン、フィッツジェラルド、ヘミングウェイなどの作家を取り上げ、写真と文学の関係を包括的に把握するための作業にも着手した。様々な作家作品を視覚芸術という視点から再検討する作業を行なう過程で浮上してきたのが、ウラジミール・ナボコフと視覚芸術という着眼点であった。そこで、平成30年度後半は、ナボコフのロシア時代の作品を中心に、写真という視点から精読する作業を進めた。平成31年2月には米国、ニューヨーク公立図書館貴重書部門、バーグ・コレクションでの調査を行なった。その際には、カポーティに関する資料だけでなく、ナボコフの手書き資料などにも調査の範囲を広げ、貴重な資料を数多く収集することができた。構想中の論文をさらに多角的に深める上でのヒントを多く得ることができた。研究計画よりも早い段階で、カポーティの論文をまとめることができ、その成果として論文の掲載が決定した。さらに、ナボコフを視覚芸術の視点から読み解くという切り口を渡米前に見いだすことができたため、アメリカでの資料調査が非常に効率的に進んだ。これまではカメラを用いての資料収集が許可されていなかった資料館において、資料の写真撮影が許されたため、限られた時間を有効活用し効率的に資料収集することができた。ナボコフと視覚芸術という新しいテーマが具体化し、次年度に取り込む研究内容を明確に設定できたという点においても、平成30年度の進展は計画以上に大きかった。以上の点から、計画以上に進展しているを選択した。次年度は、米国調査で得た資料の分析を進めながら、ナボコフに関する分析を論文としてまとめる計画である。まずは、小説『絶望』(Despair)など1930年代のナボコフの作品を中心に、視覚芸術と小説、異なる表現形態が作品の中で互いに補完し合う様を検証する。これまでの研究で、視覚芸術と文学の連動性に着目してきたデリダ、リカルドゥー、メルロ・ポンティなどの議論を理解する必要を感じた。これらの哲学的分析を踏まえる作業にも、次年度から本格的に着手する。

これらの哲学的分析を踏まえる作業にも、次年度から本格的に着手する。当初計画では平成30年8月にニューヨーク公立図書館Stephen A. Schwarzman Building貴重書部門での調査を予定していたが、夏季は日本での資料分析と論文執筆を優先したため、渡米調査を平成31年2月に変更した。夏季と冬季の航空チケット代の違いで、旅費が計画よりも減少したことが、次年度使用額が生じた大きな理由である。また英語論文のネイティブ・チェックを人件費・謝金として予定していたが、渡米時期の変更に伴って、論文の完成時期が後ろにずれることになったのも原因である。次年度には、英語論文を完成させ英語論文のネイティブ・チェック費用分の人件費・謝金として執行する計画である。
試験管内ネフロン誘導法に基づくヒト腎臓の病態解明と再構築

腎臓はネフロン前駆細胞、尿管芽、間質前駆細胞という3つの前駆組織の相互作用によって形成される。我々は以前に多能性幹細胞からネフロン前駆細胞の試験管内誘導を報告した。そこで本計画は、遺伝性腎疾患の初期病態を解明するとともに、マウスES細胞及びヒトiPS細胞から尿管芽の誘導法を開発し、間質前駆細胞も誘導して3次元腎臓組織を再構築することを目的とする。ヒト糸球体の成熟機構解明と病態解析:iPS細胞から誘導した糸球体ポドサイトを用いて網羅的遺伝子解析を行い、スリット膜関連遺伝子の多くが成体から単離したポドサイトに近い発現量であることを確認した。一方で発現量が低い遺伝子群も存在し、依然未熟であることも判明した。平行してスリット膜構成遺伝子に変異をもつiPS細胞から腎臓組織を誘導し、スリット膜の形成過程を再現することによって、その異常を同定した。尿管芽の誘導法の確立:マウス尿管芽の発生過程を解析することによって、マウスES細胞及びヒトiPS細胞から尿管芽を誘導する方法を開発した。この方法はネフロン前駆細胞の誘導法と第一ステップから異なっており、この2つの系譜が発生の初期段階で分離していることを示唆した。さらにマウスES細胞由来のネフロン前駆細胞と尿管芽に、胎仔由来の間質細胞を混ぜて培養すると、腎臓の高次構造が作製できること、間質細胞なしにはそれが形成されないことを証明した。間質前駆細胞の誘導:マウス間質細胞の網羅的遺伝子発現解析を行った。腎臓の分岐構造を司る尿管芽を多能性幹細胞から誘導する方法を樹立できた。尿管芽誘導法を用いた病態再現を試みるとともに、間質細胞の誘導法を確立して多能性幹細胞由来の腎臓高次構造の構築を目指す。
若年者に発生する甲状腺癌の生物学的特性とその背景因子に関する分子病理学的研究

研究成果の概要若年者に発生する甲状腺癌は、より高齢者の患者から発生する甲状腺癌に比較して、増殖性や浸潤傾向がより強く、また転移や再発をきたす率も高いことが報告されている。我々は、若年発生の甲状腺癌の生物学的な特性を把握し、その背景となる遺伝子変異(RET/PTC1,RET/PTC3)について、分子病理学的立場から検討した。1.RET遺伝子の再構成は、甲状腺腫瘍の中で、乳頭癌症例にのみ認められ、本腫瘍の特徴的な遺伝子変異であることが示唆された。2.169例の乳頭癌では、RET遺伝子再構成は48例(28.4%)に見出された。従来日本人の乳頭癌ではRET/PTCの頻度は低いことが指摘されていたが、本件球の結果では、欧米人での頻度と大きな差が無いことが示唆された。3.年齢別に見ると、20歳以下の患者から発生した乳頭癌例でRET遺伝子再構成の頻度が最も高く、31例中13例(41.9%)で陽性となった。とくにRET/PTC3の頻度が、若年者で高いことが示唆された。4.組織学的には、RET/PTC3は若年発生乳頭癌の中でも、充実亜型で高頻度に見出された。以上より、高ヨード摂取が特徴とされる日本人の甲状腺乳頭癌の発生に、RET遺伝子再構成は重要な役割を果たすことが推察され、とくに若年発生の乳頭癌で強い関連性があることを証明した。現在までの甲状腺癌に対する基礎的データを踏まえて、小児および若年者(19歳以下)に発生する甲状腺癌の臨床病理学的特徴とその発生、進展における背景因子について解析することとした。平成15年度の実績について以下のように箇条書きにする。1)若年者に発生する甲状腺癌の遺伝子異常の背景を検討するために、本学および本学以外の施設(東京女子医科大学、伊藤病院など)から19歳以下の患者に発生した甲状腺癌を30例程度の集積した。さらに、対照群として、30歳以上の患者に発生した甲状腺癌200例を集めた。2)集めた若年発生甲状腺癌について、組織形態学的なReviewを行った。その結果、若年発生の甲状腺癌において、充実性構造の出現が特徴とみなされた。また、臨床病理学的に悪性度が成人例に比較して高いことが判明した(腺内転移や甲状腺以外の臓器とくにリンパ節が高頻度でかつ広範に認められる)3)パラフィン切片を用いて、甲状腺転写因子(TTF-1)をはじめとする、ホルモン関連蛋白の抗体を入手し、一部の症例では免疫組織学的検討を行った。4)検討は、RET遺伝子の再構築(Rearrangement)の解析には、RT-PCR法を用いることとし、そのためのプライマーの作製とその条件設定を行った。6)パラフィン切片からのRNA抽出法を検討した。以上、平成15年度は、材料の収集とともに、解析法の決定とその条件設定を行った。引き続きこれらのことを検討するつもりである。平成16年度の実績について以下のように箇条書きにする。1)集めた若年発生甲状腺癌について、組織形態学的なReviewを行った。また、臨床病理学的に悪性度が成人例に比較して高いことが判明した(腺内転移や甲状腺以外の臓器とくにリンパ節が高頻度でかつ広範に認められる)(平成15年度)2)パラフィン切片を用いて、甲状腺転写因子(TTF-1)をはじめとする、ホルモン関連蛋白の抗体を入手し、一部の症例では免疫組織学的検討を行った(平成15年度)。3)検討は、RET遺伝子の再構築(Rearrangement)の解析には、RT-PCR法を用いることとし、そのためのプライマーの作製とその条件設定を行った(平成16年度)。

4)RT-PCRのための陽性コントロールを入手した(平成16年度)。5)パラフィン切片からのRNA抽出法を検討した(平成16年度)。6)抽出したRNAをDNAに変換し、PCRを行った(平成16年度)。7)PCR産物のダイレクトシークエンスを行った(平成16年度)。8)データのまとめを行った(平成16年度)。以上、平成16年度は、解析法の決定と実際の検討を行い、データの集計解析を施行した。現在までの甲状腺癌に対する基礎的データを踏まえて、小児および若年者(19歳以下)に発生する甲状腺癌の臨床病理学的特徴とその発生、進展における背景因子について解析することとした。平成17年度の実績について以下のように箇条書きにする。1)若年者に発生する甲状腺癌の遺伝子異常の背景を検討するために、本学および本学以外の施設(東京女子医大、伊藤病院など)から19歳以下の患者に発生した甲状腺癌30例を収集した。さらに対照群として、30歳以上の患者に発生した甲状腺癌約200例を集めた。2)収集した甲状腺癌についての組織学的レビューを行い、若年者に発生する甲状腺癌に充実性の腫瘍が多いことを明らかにした。3)パラフィン切片を用いて、甲状腺転写因子(TTF-1)をはじめとするホルモン関連蛋白の免疫組織化学的検討を行った。4)パラフィン切片からのRNA抽出法を検討した。以上の結果を踏まえて、17年度はデータの整理と分析を行った。
バソプレシンニューロン細胞内塩化物イオンの高濃度維持機構とその生理学的意義の解明

多くの動物細胞において細胞内Cl濃度を調節するのに重要だとされているK-Cl共輸送体(KCC2)と、Na-K-2Cl共輸送体(NKCC1)において、まず、Clの取り込みに重要なNKCC1がバソプレッシン(AVP)ニューロンに発現しているか否かについて検討した。AVPニューロン10個からなるサンプルを用いてRT-PCRを行った結果、AVPニューロンにNKCC1が発現していることを確認した。アストロサイトから分泌されたタウリンのGABAA受容体における影響を検討するため、AVPニューロンの局在する視索上核(SON)におけるGABAA受容体の発現をRT-PCR法を用いて検討した。その結果、すべてのタイプの受容体がSONに発現していることが確認された。AVP分泌メカニズムにおいて、電位依存性Caチャネルが重要であると報告されている。そこで、AVPニューロンにおける電位依存性Caチャネルの発現についてRT-PCRを行った結果、すべてのタイプの電位依存性Caチャネルが発現していることが確認された。パッチクランプ法を用いて、どのタイプの電位依存性Caチャネルが機能的に発現しているのか否かについて検討した。その結果、T型とN型の電位依存性Caチャネルが機能的に発現していることが明らかになった。フルフェナム酸(FFA)は、L型Caチャネルを抑制する事が知られているが、他の電位依存性Caチャネルを抑制するのか否かについては不明である。そこで、電位依存性Caチャネルに対するFFAの効果をパッチクランプ法で検討した。その結果、AVPニューロンにおいて記録されるT型とN型の両方の電位依存性Caチャネルの電流がFFAによって抑制される事が明らかになった。これらの実験結果から、T型とN型の電位依存性Caチャネルは、共にAVPニューロンに機能的に発現し、FFAに抑制されることが明らかになった。昨年度は、バソプレッシン(AVP)ニューロンの細胞内塩化物イオンの高濃度維持寄稿に関与する可能性のある膜タンパク質の発現を、10個のAVPニューロンからなるサンプルを用いてPCRすることにより、網羅的に検討する事ができた。また、AVPニューロンの非常に重要な役目であるAVP分泌に関与している電位依存性Caチャネルのうち、機能的に発現しているタイプをパッチクランプ法により検討し、N型とT型の2つの電位依存性CaチャネルがAVPの分泌に重要な役割を担っていることを明らかにした。これらの結果の1部は、平成31年3月に行われた国際学会のポスター部門で発表している。以上の進捗状況から、本研究における課題は着実に遂行されており、当初の予定をおおむね順調に進展していると考えている。当初の予定通り研究を進めていく方針である。また、昨年度に明らかにした、AVP分泌メカニズムに関する研究結果について、足りないデータを追加し、論文の投稿準備を進める予定である。
デジタル・コミュニティガバナンスの形成と発展に関する研究

ローカルレベルで自治体がICTを住民の参加ツールとして活用している事例について、日本を中心に韓国の事例も交えて、比較分析した。一般的には、SNSはネット上のコミュニティを形成し、そのコミュニティは時にリアルなコミュニティとして機能することが知られている。その一方では、リアルなコミュニティは、デジタルコミュニティによってその機能を補完されるとも信じられてきた。しかしながら、本研究により、リアルなコミュニティとデジタルコミュニティとの関係は、相互補完的というよりも、リアルなコミュニティがデジタルコミュニティのガバナンスを強く規定していることが明らかとなった。本年度は、各自の役割分担に従って、「ICTと自治会との関係」、「ICTを活用した衰退コミュニティ活性化」、「ネット空間とデジタルコンテンツ」、「コミュニティガバナンスの理論的展望」、「ハーバマスの公共圏の理論とコミュニケーション論」、等についての文献調査を行った。また、ゲストスピーカーとして、札幌市立大学の武邑光教授を招聘し、「裕創造都市とソーシャルメディア-都市の創造資本をめぐって」のテーマで講演をいただいた。その中では、創造都市という観点から、「離散的公共圏」、「創造都市札幌」を推進する重点プロジェクト」、「社会資本から創造資本(Creative Capital)の焦点化」「創造都市へ-地域経営の中心的課題の抽出」といった内容が示され、メンバー間でディスカッションを行った。従来の都市のソフト生産力は、今や市民のコンテンツ生産力が都市の展開を左右し、次代の創造都市がめざすのは、市民の生み出すコンテンツを、いかに都市のあらゆる環境に実装できるかにかかっている。次に、東京大学大学院情報学環の田中秀幸教授を招聘し、「地域SNSとコミュニティガバナンス」のテーマで講演をいただいた。その中では、全国各種の地域SNSの事例が報告されるとともに、現在研究を行っている地域SNSとして「お茶っ人」を対象に、感情表現に着目したFacebookとの比較、内発的動機付け等について、テキスト分析による定量調査を行っていることが紹介された。来年度は、これらの先行分析をもとに、国内のインタビュー調査、国際比較調査を予定している。本年度は、文献調査に加えて、地域SNS「ひょこむ」の運営者、比較政治学の立場からデジタル・ガバナンスを研究する研究者を招聘して、デジタル・コミュニティ・ガバナンスについて、研究会を開催し、メンバー間でディスカッションを行った。さらに、藤沢市における電子会議室、掛川市における地域SNS、八代市における地域SNSについて、現地を訪問し、その運営関係者に対して、インタビュー調査を行った。特に、岡山市の電子町内会、藤沢市、掛川市の事例からは、狭小地域におけるネットコミュニティは、地域における実態コミュニティの影響を強く受け、また、地域におけるソーシャルキャピタルの性格も反映しているのではないかとの仮説が得られた。さらに、地域で行われている生涯学習、防災まちづくり、などの政策の影響がネット上のコミュニティのあり方にかなりの程度反映されていることがわかった。また、事業仕分けなどが進む中で、行政が地域のネットコミュニティの構築、運営にどの程度関与すべきかどうかについて、課題が発生している。以上の結果をふまえて、各自は、ガバナンス論、都市政策、電子政策、組織論の立場から、それぞれ、最終的なとりまとめに向けて研究をさらに進めていくものとする。本年度は、昨年度に引き続き、全国の自治会レベルでの活動と情報化との関係、全国自治体での地域情報化の調査、大学生に対するデジタル・コミュニティガバナンスに関する意識調査、韓国における情報化事例等を検討し、メンバー間でディスカッションを行い、以下の研究総括を行った。1全国の自治会における情報化事例が検証され、コミュニティガバナンスの質とICTとの直接の関係は限界があるのではないかという結論が得られた。2 2001年から全国のコミュニティ単位で推進されている、韓国の「情報マウル事業」を検証し、ITを活用して新しい所得をもたらしている点、そしてコミュニティの活性化に寄与したという点は評価されながらも、地方が主体になって推進すべき地域情報化事業が国主導で行われているという限界が示された。日本との違いとして、国民総背番号制との関係、政治風土、国民性との関係が論点となることが示された。3 U市における情報化実践事例を元に、地域情報化の進展は、地域社会の再構築と密接に関係しており、ICTの技術的特性だけではなく、情報化実践を通じた「意図せざる結果」を契機とした反省的実践によって促進されるという点が示された。4 ICTがソーシャル・キャピタルに与える影響については、先行研究があるが、個人ベースのものであり、集合財ととらえて地域単位で分析する研究は十分ではなく、今後、政府統計や既存の調査データが充実してくれば分析の可能性が出てくることが示された。5デジタル・コミュニティの質について、情報の量や速度よりもむしろ、物事の決め方の問題の方が大きく、デジタル化を通じて参加者の範囲や行動様式がどのように変化するのかどうかを含めてガバナンスの働き方を議論する必要があることが示された。
延命効果向上を目指した化学療法と養子免疫療法の適切な併用条件の確立に関する研究

2.LAK活性に及ぼす凍結保存の影響を末梢血リンパ球(PBMC)、あるいはInterleukinー2(ILー2)処理後のLAK細胞を用いて検討した結果、融解直後の生細胞率および回収率はそれぞれ約70%、60%で、凍結PBMCは1週間の培養により新鮮PBMCと同等のLAK活性が誘導され、融解直後のLAK細胞は新鮮LAK細胞の60%程度の活性であった。3.LAK療法施行に際しては、活性の高い大量のLAK細胞を安定して誘導する技術の確立が必要である。我々はcell separator(Hemoritics Vー50)を用い、surge法により患者末梢血よりlyinphocyte rich fractionを分離し、heparinを添加したgas Parmeable cultureーbagー(stericell)に回収するという方法を考案した。培養の初期には2%ヒトAB血清を含むILー2加無血清培地を用い、以後細胞の増殖に伴ないILー2加無血清培地を加え、2週間培養を続けた。その結果、細胞数は約10倍に増加し、培養開始3日目より2週まで高いLAK活性が維持できた。以上の様に、leukepheresisからLAK細胞回収までの一連の操作をsemiーclosed systemにて行ない、更に、血清消費の少ない無血清培地を使用することにより、簡便、無菌的かつ経済的にLAK細胞の大量培養が可能となり、現在、肺癌患者を対象に検討中である。
泌尿器科領域におけるHGFの多機能性の研究

HGFは近年多くの機能を持つサイトカインとして注目を浴びてきたが、我々は世界に先駆け下記臓器においてその機能解析を行い、平成8、9年度においてほぼ満足する結果が得られた。1.腎機能への影響我々はまず臨床的に拒絶反応においてHGFが上昇することを示し(Transpl Int)、またHGFが免疫抑制剤による腎障害を防ぐことをラットであきらかにした(Transpl Pro)。さらにその長期的効果を見るため、ラットを用いた移植モデルにHGFを4週間にわたり静注したところ、尿タンパク、長期生着率などで驚異的な改善が認められた。即ち、コントラール群では8ヶ月の長期観察で、約46%に拒絶反応による移植腎の機能廃絶が認められたのに対し、HGF投与群では100%の移植腎の生着が認められた。腎移植における慢性拒絶反応には現在全く治療薬がない状態で、今後の展開が大いに期待される(投稿中)。2.前立腺癌細胞3つの前立腺癌細胞株を用い、HGFが各々の細胞株の浸潤能に異なった影響を与えることを示した。即ち、HGFのレセプターであるc-METはホルモン非依存性の2つの細胞株にのみ発現が認められ、そのうちDU145においてのみHGFによる浸潤能の誘導が認められた(Int J Urol)。さらにDU145においては線維芽細胞の上清により同様の浸潤能が誘導され、それは抗HGF抗体にて中和された。前立腺癌は前立腺組織内に限局している間は低い転移能を示すが、被膜外に出ると骨などに移転しやすいといった特異な性質を持つことが知られている。本結果はその間質細胞と上皮細胞の間の相互作用を考えるうえで非常に興味深く、各種の間質細胞を用いて実験中である。3.男性生殖器免疫組織染色を試みたが発現レベルの問題か、詳細な解析はできなかった。1腎機能(1)腎移植慢性拒絶反応Fisher344、Lewsラット間の腎移植技術を確立した。この慢性拒絶反応モデルに免疫抑制剤とHGFを投与し、免疫学的因子以外の要因に対するHGFの効果を検討した。この動物実験には約50-60週を要し、現在進行中である。(2)急性尿細管壊死腎虚血による急性尿細管壊死後の慢性腎機能障害ラットモデルに対し、HGFの腎機能改善効果を検討した。HGFの連日皮下投与を行い、解析中である。(3)hyperfiltration腎機能障害腎実質部分阻血を施し、hyperfiltrationによる腎機構障害ラットモデルに対し、HGFの腎機能改善効果を検討した。(4)Tacrolimus(FK506)腎毒性片側腎摘除後のSHRratにTacrolimus(FK506)を投与し、腎毒性を出現させる動物モデルについては既に報告している。この動物モデルにHGF全身投与法での効果を検討した。現在のところ効果を認めていないが、投与法、期間などを変更して再度試みているところである。2前立腺HGFには細胞運動能亢進作用が知られているが、前立腺癌培養細胞株での運動能に対する影響を検討した。運動能の亢進についてはマトリゲルassay法で定量的に亢進されることを確認した。上皮間質相互作用の視点から、癌細胞側のHGF受容体(c-Met)の解析では、Western Blot法でその発現存在を確認した。1.腎機能への影響

我々はまず臨床的に拒絶反応においてHGFが上昇することを示し(Transpl Int)、またHGFが免疫抑制剤による腎障害を防ぐことをラットであきらかにした(Transpl Pro)。さらにその長期的効果を見るため、ラットを用いた移植モデルにHGFを4週間にわたり静注したところ、尿タンパク、長期生着率などで驚異的な改善が認められた。即ち、コントロール群では8ヶ月の長期観察で、約46%に拒絶反応による移植腎の機能廃絶が認められたのに対し、HGF投与群では100%の移植腎の生着が認められた。腎移植における慢性拒絶反応には現在全く治療薬がない状態で、今後の展開が大いに期待される(投稿中)。2.前立腺癌細胞3つの前立腺癌細胞株を用い、HGFが各々の細胞株の浸潤能に異なった影響を与えることを示した。即ち、HGFのレセプターであるc-METはホルモン非依存性の2つの細胞株にのみ発現が認められ、そのうちDU145においてのみHGFによる浸潤能の誘導が認められた(Int J Urol)。さらにDU145においては線維芽細胞の上清により同様の浸潤能が誘導され、それは抗HGF抗体にて中和された。前立腺癌は前立腺組織内に限局している間は低い転移能を示すが、被膜外に出ると骨などに転移しやすいといった特異な性質を持つことが知られている。本結果はその間質細胞と上皮細胞の間の相互作用を考えるうえで非常に興味深く、各種の間質細胞を用いて実験中である。3.男性生殖器免疫組織染色を試みたが発現レベルの問題か、詳細な解析はできなかった。