hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
質量顕微鏡を用いた中枢神経系での内因性ジギタリスの産生分泌機構の解明

内因性ジギタリス(EDLF)の定性的解析は免疫組織染色や液体クロマトグラフィー/質量分析(LC/MS)を用い行われきた. LC/MSは液体サンプルの解析のため,細胞,組織内のEDLFの解析を直接行うことは困難である.しかし質量顕微鏡は細胞,組織を直接サンプルにして質量分析することが可能となった.今回、質量顕微鏡を用いて,EDLFの候補物質であるマリノブフォトキシンとマリノブファゲニンにおいてピコグラム濃度までLC/MSと同じマススペクトルを確認することができた.質量顕微鏡で標品のEDLFのマススペクトルパターンが得られたことはEDLFの研究に質量顕微鏡が有用な手法となることが示唆された。従来内因性ジギタリス(EDLF)の定性的解析は免疫組織染色や液体クロマトグラフィー/質量分析(LC/MS)を用い行われきたが,EDLFの候補物質は非常に構造式が似ており,免疫組織染色でそれそれの物質の存在を同定するのは困難であった.従来我々の研究で用いていたLC/MSは液体サンプルの解析のため,細胞,組織内のEDLFの解析を直接行うことは困難である.しかし近年,質量顕微鏡が発達してきており,細胞,組織を直接サンプルにして従来解析が難しかった低分子化合物や脂質成分の存在を質量分析することが可能となってきている.本研究では,質量顕微鏡を用いて,われわれがすでにLC/MSを用いてマススペクトルを得ているEDLFの候補物質であるマリノブフォトキシンとマリノブファゲニンにおいて,質量顕微鏡での質量分析を行った.保持剤として用いるマトリックスの調節と標品の濃度を検討しマススペクトルを確認したところピコグラム濃度までLC/MSと同じマススペクトルを確認することができた。そこですでに我々がLC/MSでマリノブフォトキシンとマリノブファゲニンの分泌が確認されている副腎皮質の培養細胞株やであるY-1細胞を用いて質量顕微鏡を用いて細胞内分布の検討を行った。数種類の保持剤として用いるマトリックスを用いて検討をおこなったが十分マリノブフォトキシンとマリノブファゲニンに特異的なマススペクトルパターンを得られることはできなかった。原因として、細胞内のEDLF濃度が低いためと思われる。しかし今回の検討において、質量顕微鏡で標品のEDLFのマススペクトルパターンが得られたことはEDLFの研究に質量顕微鏡が有用な手法となることが示唆された。従来内因性ジギタリス(EDLF)の定性的解析は免疫組織染色や液体クロマトグラフィー/質量分析(LC/MS)を用い行われきたが,EDLFの候補物質は非常に構造式が似ており,免疫組織染色でそれそれの物質の存在を同定するのは困難であった.従来我々の研究で用いていたLC/MSは液体サンプルの解析のため,細胞,組織内のEDLFの解析を直接行うことは困難である.しかし近年,質量顕微鏡が発達してきており,細胞,組織を直接サンプルにして従来解析が難しかった低分子化合物や脂質成分の存在を質量分析することが可能となってきている.しかしいまだ質量顕微鏡を用いたEDLFの研究は報告がない.本研究では,質量顕微鏡を用いて,われわれがすでにLC/MSを用いてマススペクトルを得ているEDLFの候補物質であるマリノブフォトキシンとマリノブファゲニンにおいて,質量顕微鏡での質量分析を行った.保持剤として用いるマトリックスの調節と標品の濃度を検討しマススペクトルを確認したところピコグラム濃度までLC/MSと同じマススペクトルを確認したことからEDLFの研究に質量顕微鏡が有用な手法となることが示唆された.質量分析においては標品の分析がもっとも重要となるため今回の標品のマススペクトルの検出は質量顕微鏡を用いた細胞,組織を対象とした研究の重要な一歩となる.今後,EDLFの分泌組織と考えられている,副腎,視床下部の培養細胞株やラットの組織をサンプルに用いてEDLFの組織および細胞内分布の検討を行い,さらにEDLF分泌にともなう細胞膜変化を検討する予定である.現在,質量顕微鏡を用いて,われわれがすでにLC/MSを用いてマススペクトルを得ているEDLFの候補物質であるマリノブフォトキシンとマリノブファゲニンにおいて,質量顕微鏡での質量分析を行った.マトリックスの調節と標品の濃度を検討しマススペクトルを確認したところピコグラム濃度までLC/MSと同じマススペクトルを確認した.しかし質量顕微鏡は大学所有の機器を使用しているが学舎の移転にともない学内の質量顕微鏡が使用できなかった時期があり,当初の計画と比べて細胞,組織を対象とした研究への応用が遅れている.現在,副腎皮質のモデル細胞であるY-1細胞のサンプルに用いて検討をおこなっているが,現時点ではマススペクトルの検出に至っていない.現在,標品においてピコグラム濃度までの検出が可能であるが,Y-1細胞の結果から,質量顕微鏡での検出感度を上げる必要があると思われる.そのため保持剤として用いるマトリックスの検討が必要と思われる.

最終的には標品のフェントグラム濃度でのマススペクトルの検出を目標して検討する.さらにEDLFの候補物質としてウアバインの標品のマススペクトルの検出を行う.次に, EDLFの分泌組織と考えられている,副腎,視床下部の培養細胞株やラットの組織をサンプルに用いて,マリノブフォトキシン,マリノブファゲニンやウアバインの組織分布の検討を行う予定である.さらに分泌調節因子の解明の一環としてEDLF分泌にともなう細胞膜変化を質量顕微鏡を用い検討する.質量顕微鏡には伝導性素材でコーティングされた特殊なスライドガラスや,保持剤として用いるマトリックスが消耗品として必要である.副腎,視床下部のモデル細胞株はすでに所有しているが,培養にともなう培地等の消耗品が必要である.アンジオテンシンやアルドステロンがEDLFの分泌増強因子として確認されている.これを用いてEDLFの分泌機構の解明を行う予定である.そのためこれらに薬品の購入が消耗品として必要である.
広域赤外線掃天観測による星の質量の起源の解明:星形成領域におけるIMF

本研究では、褐色倭星も含んだより広い質量スパンの星の初期質量関数(IMF)を確立するために、数多くの星形成領域に対して、これまでにない広域かつ高感度の赤外線サーベイ(掃天)観測を行う。星形成領域の近赤外線観測は、その中で生まれる星ぼし(若いクラスター)の質量分布を、そのままIMFに焼き直すことができる。生まれたばかりの星は重力収縮のエネルギーで十分明るいために、非常に軽い天体まで検出することができる。また、近赤外線のカラーや偏光を利用して、背景星と分子雲に付随した若い星を区別することができる。本研究で得られた主な成果を挙げる。(1)南アフリカにあるIRSF1.4m望遠鏡、ハワイにあるすばる・ジェミニ両望遠鏡を用いて、太陽近傍の星形成領域についての観測・解析を進めた。南アでの観測は、国立天文台と名古屋大学が共同で開発した近赤外波長3バンド(J, H, Ksバンド、波長それぞれ1.25,1.63,2.14ミクロン)同時観測カメラを用いて行った。具体的な観測領域は、へびつかい座・カメレオン座・みなみのかんむり座・オリオン座・ほ座等の分子雲である。その結果、これらの分子雲において、そのTタウリ型星から木星質量程度の惑星質量天体に至るまでの質量関数について差異を議論することが可能になった。オリオン・S106・ほ座分子雲等についての初期質量関数に関する成果を学術論文として出版した。その結果、これらの分子雲において、若い褐色倭星の普遍性を確認し、中質量星から木星質量程度の惑星質量天体に至るまでの質量関数について差異を議論した。(2)マゼラン星雲ブリッジにおける中質量の若い星の探査を行い、その結果を出版した。(3)IRSF望遠鏡用の赤外線カメラIRSFに偏光装置を搭載し、偏光サーベイ観測を推進した。これにより、星周構造を伴う若い星を多数検出した。(4)すばる望遠鏡を用いた撮像・分光観測によって、へびつかい座分子雲において複数の低温・低質量天体を発見した。本研究では、褐色矮星も含んだより広い質量スパンの星の初期質量関数(IMF)を確立するために、数多くの星形成領域に対して、これまでにない広域かつ高感度の赤外線サーベイ(掃天)観測を行う。また、近赤外線のカラーを利用して、背景星と分子雲に付随した若い星を区別することができる。今年度は、もっぱら南アフリカに有るIRSF1.4m望遠鏡を用いて、太陽近傍の星形成領域についての観測を集中的に進めた。観測は、国立天文台と名古屋大学が共同で開発した近赤外波長3バンド(J,H,Ksバンド、波長それぞれ1.25,1.63,2.14ミクロン)同時観測カメラを用いて行った。具体的な観測領域は、へびつかい座・カメレオン座・みなみのかんむり座・オリオン座・いっかくじゅう座の分子雲である。その結果、これらの分子雲において、若い褐色矮星の普遍性を確認し、そのTタウリ型星から木星の10倍程度の惑星質量天体に至るまでの質量関数について差異を議論することが可能になった。

また、従来の近赤外線カラーに基づくメンバーシップの確定だけでなく、オリオン座・いっかくじゅう座の星形成領域においては、変光星探査に基づくメンバーシップの同定も行い、近赤外カラーとの良い相関が有ることを発見した。これらの結果は、来年度以降の遠方の星形成領域における観測との比較を進める上でも重要である。本研究では、褐色矮星も含んだより広い質量スパンの星の初期質量関数(IMF)を確立するために、数多くの星形成領域に対して、これまでにない広域かつ高感度の赤外線サーベイ(掃天)観測を行う。星形成領域の近赤外線観測は、その中で生まれる星ぼし(若いクラスター)の質量分布を、そのままIMFに焼き直すことができる。生まれたばかりの星は重力収縮のエネルギーで十分明るいために、非常に軽い天体まで検出することができる。また、近赤外線のカラーや偏光を利用して、背景星と分子雲に付随した若い星を区別することができる。今年度に得られた成果のうち主なものを挙げる。(1)南アフリカに有るIRSF1.4m望遠鏡、ハワイにあるすばる・ジェミニ両望遠鏡を用いて、太陽近傍の星形成領域についての観測を進めた。南アでの観測は、国立天文台と名古屋大学が共同で開発した近赤外波長3バンド(J, H, Ksバンド、波長それぞれ1.25,1.63,2.14ミクロン)同時観測カメラを用いて行った。具体的な観測領域は、へびつかい座・カメレオン座・みなみのかんむり座・オリオン座・いっかくじゅう座等の分子雲である。その結果、これらの分子雲において、若い褐色矮星の普遍性を確認し、そのTタウリ型星から木星質量程度の惑星質量天体に至るまでの質量関数について差異を議論することが可能になった。オリオン・S106についての初期質量関数に関する成果を学術論文として出版した。(2)いっかくじゅう座星形成領域にある変光星KH15Dについて、詳細な赤外変光観測を行い、その結果をアストロフィジカルジャーナルに出版した。(3)IRSF望遠鏡用の赤外線カメラIRSFに偏光装置を搭載し、偏光サーベイ観測を開始した。これは星周構造を伴う若い星の検出に非常に役立つことが解った。(4)すばる望遠鏡を用いた分光観測によって、へびつかい座分子雲において最も低温・低質量天体を発見し、学会等で発表した。(1)昨年度に引き続き、南アフリカにあるIRSF1.4m望遠鏡、ハワイにあるすばる・ジェミニ両望遠鏡を用いて、太陽近傍の星形成領域についての観測・解析を進めた。南アでの観測は、国立天文台と名古屋大学が共同で開発した近赤外波長3バンド(J,H,Ksバンド、波長それぞれ1.25,1.63,2.14ミクロン)同時観測カメラを用いて行った。具体的な観測領域は、へびつかい座・カメレオン座・みなみのかんむり座・オリオン座・ほ座等の分子雲である。
アルツハイマー病における異常リン酸化タンパク生成のメカニズムの解明

タウタンパクの異常リン酸化の原因を調べ、アルツハイマー病の病因を明かにするための基礎として、タンパク質リン酸化と神経分化を中心として以下の研究を行なった。(1)タウcDNAを胚性がん細胞由来のP19細胞に導入し、タウを安定に発現する細胞を作製することに成功した。P19細胞は、未分化の細胞であるが、培養条件を選ぶことにより神経に分化させることができる。神経分化したP19細胞では、CaM kinaseIIが誘導されることを見い出したことから、タウ導入細胞の分化誘導とタウのリン酸化の関係を解析し、タウ発現細胞では神経分化が正常に起こらないことが見い出された。このことは、タウが神経細胞の形態形成に重要な役割を果たすことを示唆している。(2)P19細胞では神経分化にともない、CaM kinase IIが誘導されるとともに、スプライシングの異なる産物が生成することが明かになり、神経分化におけるCaM kinaseII役割が注目された。(3)中枢神経由来のCAD細胞も神経分化にともないCaM kinaseIIが誘導され、分化に伴いスプライシングの異なる産物が産生することが明らかとなった。(4)神経芽細胞にタウcDNAを導入し、タウタンパクを安定に発現する細胞を作製した。この細胞は神経分化が抑制されることが見い出された。現在タウのリン酸化との関係を解析している。(5)タウタンパクを大量に精製するため大腸菌にける発現ベクターを構築し、タウの精製に成功した。現在大量に調製している。大量精製ができると、種々のプロテインキナーゼを作用させリン酸化をタンパクレベルで解析し、タウタンパクが不溶性になる条件を明かにする。(6)アルツハイマー病に特異的なタウのリン酸化サイトをリン酸化する酵素を、特異的な基質を用いて解析している。さらに、タウ発現細胞を用いて異常なリン酸化が起こる条件を解析し、その条件下でリン酸化を抑制する薬剤の開発し、アルツハイマー病の薬剤の開発を目指していきたい。タウ-タンパクの異常リン酸化の原因を調べ、アルツハイマー病の病因を明かにするための基礎として以下の研究を行なった。(1)タウcDNAをP19細胞に導入し、タウを安定に発現する細胞を作製することに成功した。神経分化したP19細胞では、CaM kinaseIIが誘導されることを見い出したことから、タウ導入細胞の分化誘導とタウのリン酸化の関係を解析している。(2)タウ導入P19細胞では神経分化の条件により、細胞の形態変化が起こることを見い出したので、詳細に解析している。(3)P19細胞では神経分化にともない、CaM kinaseIIが誘導されるとともに、スプライシングの異なる産物が生成することが明かになり、神経分化におけるCaM kinaseII役割が注目された。(4)P19細胞以外の神経芽細胞にタウcDNAを導入し、タウタンパクを安定に発現する細胞を作製している。現在のところ成功していないが、タイタンパクの発現と細胞の形態形成に対する効果を調べる。(5)タウcDNAとCaM kinaseIIcDNAを同時に培養神経芽細胞に導入し、両者同時に過剰発現する細胞を単離するために、タウcDNAの発現ベクターを構築した。(6)タウタンパクを大量に精製するための発現ベクターの構築を行なっている。タウタンパクを大量に調製し、種々のプロテインキナーゼを作用させリン酸化をタンパクレベルで解析し、タウタンパクが不溶性になる条件を明かにする。

タウタンパクの異常リン酸化の原因を調べ、アルツハイマー病の病因を明かにするための基礎として、タンパク質リン酸化と神経分化を中心として以下の研究を行なった。(1)タウcDNAを胚性がん細胞由来のP19細胞に導入し、タウを安定に発現する細胞を作製することに成功した。P19細胞は、未分化の細胞であるが、培養条件を選ぶことにより神経に分化させることができる。神経分化したP19細胞では、CaM kinase IIが誘導されることを見い出したことから、タウ導入細胞の分化誘導とタウのリン酸化の関係を解析し、タウ発現細胞では神経分化が正常に起こらないことが見い出された。このことは、タウが神経細胞の形態形成に重要な役割を果たすことを示唆している。(2)P19細胞では神経分化にともない、CaM kinase IIが誘導されるとともに、スプライシングの異なる産物が生成することが明かになり、神経分化におけるCaM kinase II役割が注目された。(3)中枢神経由来のCAD細胞も神経分化にともないCaM kinase IIが誘導され、分化に伴いスプライシングの異なる産物が産生することが明らかとなった。(4)神経芽細胞にタウcDNAを導入し、タウタンパクを安定に発現する細胞を作製した。この細胞は神経分化が抑制されることが見い出された。現在タウのリン酸化との関係を解析している。(5)タウタンパクを大量に精製するため大腸菌にける発現ベクターを構築し、タウの精製に成功した。現在大量に調製している。大量精製ができると、種々のプロテインキナーゼを作用させリン酸化をタンパクレベルで解析し、タウタンパクが不溶性になる条件を明かにする。(6)アルツハイマー病に特異的なタウのリン酸化サイトをリン酸化する酵素を、特異的な基質を用いて解析している。
行政サービスの向上を促す看護の機能拡大に関する基礎的研究

行政の看護専門職の活動としては保健所及び市町村に所属する保健婦の活動を日本の保健婦によって記述された文献から整理した。その結果保健婦の活動体制としては,大正,昭和初期までは,自然発生的に社会事業の1つとして民間団体が看護婦を採用する形で発生してきたが保健所法と国民健康保険法の成立をきっかけに大枠が整理され行政組織に組み込まれ発展してきた。長年,我が国の保健衛生行政施策の重点課題となっていた結核対策における保健婦活動をとりあげ,活動実績を分析した結果,結核の罹患率を低下されることにつながる患者の早期発見,完全治療に導く適正医療の確保と的確な受療指導,患者管理の実施等で保健婦の役割を確認した。母子保健対策における保健婦の活動実績から,全乳幼児への保健サービスの浸透,保健サービスの質の維持向上,看護専門技術サービスの充実,制度の創設,社会資源の開発において保健婦の役割を認められた。市町村の福祉分野における保健婦の業務実態分析からは保健衛生分野での経験豊富な保健婦が介護保険制度導入を契機に配置されていた。最も多くのものが担当していたのは相談業務であった。まず役割としては,医療機関や老人保健施設,特別養護老人ホームなどとの連絡がとりやすくなりサービス利用者の家族の様子や思いを代弁できることは住民のニードに合わせた行政サービス提供を促進していることである。つぎに,保健婦による医療面の判断が加わり福祉サービスの利用拡大を図ること,介護サービスの質の確保や介護サービスの有効活用を図ることなどが重要な役割と考えられる。つまり、市町村の福祉分野の保健婦は,保健分野で培われた看護専門職としての知識や技術を駆使して住民の福祉ニーズにこたえようとしており,保健・福祉政策を国民個々に浸透させていくことや,国民の健康問題の解決に向けた新たな施策を発信させていくという看護の機能を確認した。行政の看護専門職の活動としては保健所および市町村に所属する保健婦の活動を日本の保健婦によって記述された文献から整理した。その結果保健婦の活動体制としては、大正、昭和初期までは、自然発生的に社会事業の1つとして民間団体が看護婦を採用する形で発生してきたが、保健所法と国民健康保険法の成立をきっかけに大枠が整理され行政組織に組み込まれて発展してきた。保健所は国の保健衛生施策の第一線の実施機関として発達し、保健婦は保健所管轄下の全住民を対象として母子衛生、結核対策、寄生虫病対策、栄養指導で活動していた。保健婦活動を量的にとらえる資料には、昭和30年から年報形式で発行されている保健所運営報告を収集した。保健婦活動を方法別に区分すると「家庭訪問」「健康相談」「健康診査」「健康教育」などであるが、当初報告書には家庭訪問活動にかぎられていたが、昭和38年から家庭訪問以外の活動も報告されるようになった。この資料によって保健婦の業務実績を保健所と市町村に区別して対象種別に時期別に分析した。時期毎に家庭訪問に投入される稼動量は異なるが、対象種別の割合の変化はその時期の保健衛生行政施策の影響を強く受けていることが示唆された。家庭訪問以外の活動では昭和38年頃は予防接種をとおして住民と接点をもつことが多かったが、それが次第に減少し衛生教育活動が増加していることが明らかになった。長年、我が国の保健衛生行政施策の重点課題となっていた結核対策における保健婦活動をとりあげ、結核患者管理の方法の開発に取り組んだ神戸市の保健婦活動の情報を収集し、その成果を分析中である。1,y県福祉分野に働く保健婦業務実態調査y県(人口889千人、64市町村)で、1999年10月現在、福祉分野に所属する市町村保健婦28名のうち13市町村14人の業務内容を面接調査できた。

その結果、保健婦14人の所属は、福祉事務所3人、在宅介護支援センター7人福祉課3人、社会福祉協議会1人であった。保健婦の職歴が5年未満2人、6年以上15年未満6人、15年以上6人であった。福祉分野での勤務年数は、1年未満7人、1年以上3年未満3人、3年以上6年未満4人である。調査日1ヶ月以内の3日間の業務内容を記述してもらい集計した。これによって把握できた業務内容は(1)相談(2)家庭訪問(3)連絡・調整(4)ヘルパー援助(5)会議(6)事務(7)事業(8)介護保険に関わる業務(9)その他に大別できた。介護保険に関わる業務が最も多く12市町村13人がおこなっており、11人は訪問調査に携わっていた。ついで、相談、連絡調整、会議であった。相談の内容は在宅介護や介護保険、福祉サービスなどについてであった。連絡調整は、他機関、庁舎内のケース連絡や調整である。家庭訪問は高齢者を対象とした療養指導やケアの実施を目的としたものが多い。ヘルパー援助は、同行訪問やヘルパー会議への参加などであった。2,全国調査の実施y県の福祉分野に所属する保健婦の業務実態調査結果を基にして保健婦の業務内容を捉える調査項目の枠組みを設計し、福祉分野に所属する保健婦33都道府県1区45市15町3村152人を対象に郵送調査をした。その結果22都道府県1区27市12町88人から回答を得た。回収率57.9%で集計・分析中である。3,事例調査の分析神戸市兵庫区保健所保健婦、横浜市福祉サービス協会介護支援事業担当保健婦、島根県益田健康福祉センター保健婦らのインタビュー記録および活動実績資料を整理し分析中である。1.福祉分野に所属する保健婦の業務実態に関する全国調査Y県の福祉分野に所属する保健婦の業務実態調査結果をもとにして、保健婦の業務内容を捉える調査項目の枠組みを設定し、全国の福祉分野に所属する保健婦33都道府県1区45市15町3村の152人を対象に郵送調査を実施し、22都道府県1区27誌12町90人から回答を得た(回答率59.2%)。その結果、福祉分野に所属する保健婦の自治体での勤務年数は、平均13.5年で、福祉分野での勤務年数は、平均2.6年であった。従事した業務として、90%以上の実施率だったのは、電話及び所内相談、会議で、家庭訪問の実施率は、53.3%、ヘルパー援助の実施率は、35.6%であった。保健婦が成果としていたのは、他機関との連携がとりやすくなった、サービス利用者の様子や思いを代弁できる、保健分野との連携が取りやすくなったなどであった。ヘルパー援助を実施している群(32人)としていない群(57人)とで、業務の実施率を比較すると、ヘルパー援助群ではすべての項目で実施率が有意に高かった。これらから、福祉分野には、経験豊かな保健婦が配置され、その役割として、住民のニードにあった行政サービスの提供促進、保健婦の医療面の判断による福祉サービスの利用拡大、介護サービスの質の維持が抽出された。2.事例調査優れた保健婦活動を実施してきた3人に対し、その活動実践についてインタビュー調査を実施し、それらの活動の基盤となった保健婦の考え方、活動の意図などについて分析した。
馬のアレルギー性疾患におけるアレルゲン解析と減感作療法の臨床応用

日本の中心的な馬産地である北海道においては、夏季に皮膚の炎症と痒みを発症するいわゆる「夏癬」が多発している。本疾患に関してはその症状と季節性からアレルギー性疾患であることが示唆されているが、本疾患に関与するアレルゲンに関してはほとんど不明のままである。そこで本研究においては、皮内反応および血清中抗原特異的IgE測定によって「夏癬」に関与するアレルゲンの同定を行った。夏季にたてがみから亀甲部の皮膚および尾根部皮膚に丘疹、鱗屑、痒感が認められ、臨床的に夏癬と診断した29頭の馬において、草木の花粉、昆虫、食物、ハウスダストマイト、および真菌の各アレルゲングループに属する72種類の候補アレルゲンを用いて皮内反応を行った。初年度の検査においては昆虫およびハウスダストマイトの混合抗原に対して陽性反応が認められた。第2年度において個別の抗原を用いて皮内反応を行ったところ、サシバエ、アブ、ヌカカ、アリといった昆虫抗原に対する陽性反応が高頻度に認められることが示された。次に馬の血清中抗原特異的IgEの測定系を確立するため、馬の高親和性IgE受容体のcDNAクローニングおよび組み換え蛋白の作成を行った。サシバエ抗原と血清を反応させ、馬の高親和性IgE受容体蛋白を用いたサンドイッチELISAを行ったところ、サシバエ抗原による皮内反応陽性を示した馬においてサシバエ特異的なIgEを検出することが可能となった。本研究より、日本における馬の「夏癬」においては、夏季に環境中に増える昆虫に対するI型過敏症が存在することが明らかとなった。本研究で確立したアレルゲン検査は今後の馬における「夏癬」の診断・治療においてきわめて有用であるものと考えられる。欧米においてSweet itch/Queens land itchと呼ばれている馬のアレルギー性疾患と類似した疾患が日本において認められ、馬の「夏癬」として臨床的に問題となっている。本研究においては、夏癬におけるアレルゲンを同定するために以下の研究を行った。(1)夏癬罹患馬における皮内試験を用いたアレルゲンの同定:夏季にたてがみから亀甲部および尾根部に丘疹、落屑、痒感が認められ、臨床的に夏癬と診断した29頭の馬において、草木の花粉、昆虫、食物、および真菌の候補アレルゲン72種類を用い、皮内反応を行った。その結果、サシバエ(20頭、69%)、アリ(20頭、69%)、アブ(12頭、41%)、チリダニ(12頭、41%)、カ(8頭、28%)、ヌカカ(4頭、14%)、アカザ(2頭、7%)、ライムギ(1頭、3%)、穀物ダスト(1頭、3%)が陽性反応を示した。29頭の夏癬罹患馬のうち、22頭が昆虫抗原を中心とする2種類以上の抗原に対して陽性反応を示したことから、日本の夏癬においては初夏から秋にかけて暴露されるサシバエ、アリ、アブ等の多様な昆虫抗原が夏癬発症の要因になり得ることが示唆された。(2)馬の高親和性IgE受容体組み換えタンパクの精製とそれを用いた馬IgE測定系の検討:馬血清中の抗原特異的IgEを検出することによりアレルゲンを同定するため、馬の高親和性IgE受容体組み換えタンパクの精製を行った。クローニングしたcDNAを大腸菌で発現させ、本タンパクの精製をSDS-PAGEおよびImmunoblotにより確認した。馬の高親和性IgE受容体組み換えタンパクを用いたELISA系を作製したが、現在のところ、その感度および特異性ともまだ低いため、来年度、その改良を進め、血清中抗原特異的IgE測定による馬におけるアレルゲン同定システムを開発する予定である。
１９世紀アメリカ文学にみる「島」の表象ー孤立と共存の思想・文化研究

19世紀アメリカ文学者がとりあげた島のなかで特徴的なものは、ナンタケット島に関するものである。大西洋に面したこの小さな島の歴史は、アメリカ植民と捕鯨業の歴史とともに推移した。その歴史から、この島を直接物語に使った作品、メルヴィルの『白鯨』とポーの『アーサー・ゴードン・ピムの物語』、この島を訪れたエマソンやソローの記録が生まれた。現在残虐という印象をともすればいだかせる捕鯨の基地に作家たちはある種のロマンティシズムを描いている。それはこの島の持つ孤立性に共感を抱いているからであり、島が喚起する孤立するイメージが肯定的なものとして受容され、アメリカ外交の孤立主義に影響を与える経緯を明らかにした。島の表象について、昨年度の考察に基づき、地理的な意味のみならず心理的な意味において広く考察した。本年の最大の収穫は、PAMLAのパネルで島の表象が採択されたことである。19世紀中頃アメリカは、太平洋諸島への勢力圏の拡大と、アメリカ大陸外からの大量の移民を受け入れ、地理的にも心理的にも大きな変容をした。こうした変容が文化や人々の意識にもたらした影響を捉えるのに、アメリカ自体を島と捉え、政治と文化の影響をどのように受け止めたかと考察することが可能ではないかと考えた。そこで、PAMLAのパネルで、19世紀から20世紀へのアメリカ文化の変容を島の表象に注目して考察することを提案した。シアトルで開かれたPAMLAの年次大会では、日米の著名な研究者、下河辺美知子氏(成蹊大学)、巽孝之氏(慶応大学)、メアリーK・バーコウ・エドワーズ氏(コネチカット大学)、メアリー・ナイトン氏(ウィリアムアンドメアリー大学)を招聘し、「島とアメリカ文化」のパネルを企画・司会をした。このパネルで、ハーマン・メルヴィル、ジャック・ロンドン、ウイリアム・フォークナー、バネッサ・ウオーハイトらの作品において、アメリカを島と捉える表象、アメリカが占有した島の表象に注目し、アメリカと世界の関係を考える時、アメリカ政治と文化のもつ両義性から生まれる矛盾が明らかになった。これらをもとに、アメリカとその勢力下の島の関係から、世界とアメリカの関係が考察できること、また、アメリカを島と考えることで、浮き彫りにされる、孤立性の問題が文学作品において精査が必要であることがわかった。本年はニューヨークおよび、昨年度調査に行けなかったナンタケット島とその周辺での調査ができた。ニューヨークでは、メルヴィル晩年にあたる資料を集め、またナンタケット島、ニューベッドフォードでは、捕鯨に関する資料を集めることができた。これにより1830年代ころから1890年代ころまでのメルヴィルをとりまく資料の補充ができた。これらの調査の一部を、国際メルヴィル学会、マーク・トウェイン協会の年次大会で発表した。国際メルヴィル学会では、メルヴィルとエミリィ・ディキンスンの戦争詩に注目し、中央の文壇から距離を置いていた二人の戦争詩の特徴と中央との距離の取り方について、孤立と共存をキーワードに考察し発表した。また、マーク・トウェイン協会のシンポジウムでは、メルヴィルとトウェインの戦争表象と形式へのこだわりを分析した。この発表をもとにして作成した論文はトウェイン協会の学会誌に掲載された。上記の発表から、メルヴィルが晩年になるにつれ、形式にこだわるようになったのは、アメリカという国家に対する地政学的意識の変化の表れとも連なっているという仮説をたて、メルヴィルの美学に連なるフォームに対する意識とアメリカという国を地図上で地政学的に再考する政治的無意識の関係をまとめることで、本課題のテーマ、孤立と共存の思想の具体例として説明することとした。メルヴィルの美意識と地政学的意識の関連をまとめるにあたり、テキストでの表象としてナンタケット島に対するロマンティックな記述に注目し、ナンタケット島が当時持っていた意味とメルヴィルの捉え方を比較し、本年集めたナンタケット島に関する資料を解読することで論文としてまとめる予定である。平成23年度は、計画にしたがって「島」の表象についてメルヴィルを中心に調査研究を行った。研究の第一段階として、境界意識の歴史的背景を研究した。まず、領土拡大を行った1846年から48年におこったメキシコ戦争について考察し、戦争に対するアメリカ国民の声に注目した。これを平成23年5月の「メルヴィルと戦争」の発表に生かし、さらに、戦争をキーワードとして、『白鯨』、『マーディ』、『戦争詩集』、『ビリー・バッド』を再読し、南北戦争を経験したメルヴルの意識の変化を研究した。平成23年6月にローマで開かれたメルヴィル国際学会に参加・発表し、ローマというテーマのもとで本研究を再考できる機会を得た。とりわけ『クラレル』をへて『ビリー・バッド』におけるメルヴィルの思想の成熟の経緯を音楽というテーマで考えることができた。また8月には、タヒチを中心とした南海の現地調査を行うことができた。

この時えられた知見をニューヨークの歴史協会にある資料で確認し、環境美学的な視点が得られた。これらのことから、島の持つ意味の地理的、戦略的、比喩的意味を時系列的に捉え直すことができ、平成24年10月にシアトルで開かれるPAMLA学会のスペシャルセッションのトピックとして応募するべくまとめることができた。これが『島とアメリカ文化』のセッションとして採択され、発表者を広く日米で依頼した。その結果、メルヴィル学者をはじめ、日米のすぐれた研究者の参加を得られることができた。このセッションでは、パネリストの発表を通して、島の持つ意味を地理的な意味から広げて、アメリカ大陸と太平洋地域の接点の持つ意味、さらにはヨーロッパ大陸との関わりなどを、脱植民地的コンテクストにとどまらない新たな視点の提供ができるよう準備を行った。PAMLAのパネルにおいて日米の学者からの発表を聞き、意見交換ができたことによって、当初考察していたメルヴィル、ソローだけでなく、時間的また地理的に多くの作家を射程にいれて考察できる問題であることが認識できた。また、政治的情勢が文化にあたえた影響として、海外進出、自然環境といった問題も、島の表象から読み解く可能性が示唆され、当初考察した以上に、波及性を持ったテーマであることがわかり、地理的、時間的にもその波及性を研究し、本課題を深く研究できる視野がひろがった。当初、メルヴィル、ソローの研究を主眼にしていたが、その射程を広げて、島を文化事象として研究することを目途にしていきたい。また、2013年度に開催されるメルヴィル国際学会での発表も採択され、この発表では、メルヴィルとディキンスンを考察対象とし、孤立主義的立場について考察を行い、さらなる意見交換が期待できる。以上、本課題の研究を発信する機会を得たことにより、より大きなコンテクストで、検討する可能性が生まれ、当初予定していた以上に拡がりを持って進展している。メルヴィル研究では、南海を中心とした作品の読解を行い、これを他の作家の南海探検記と比べてみることができた。その結果、島のもつ比喩的な意味の重要性が確認できた。そして、南海諸島への現地調査から、メルヴィル以外の作家の視点への知見が開け、島をテーマにした研究発表会の計画をたてることできた。平成23年度中には行えなかったが、平成24年にむけて、海外でのセッションの計画をたてることができた。これを平成24年にアメリカで開かれる学会で行い、広く意見交換が行えないか検討し、PAMLA学会に応募した。このプロポーザルが認められたことにより、島の意味を多角的に考える機会が得られることになった。このセッションにおいて日米の研究者から島の持つ意義の比喩的考察の意見交換ができるよう発表の依頼などを行い、刺激的なプロポーザルが集まった。これらをもとに、島の意味についてアメリカと日本という視点で相互交渉的な考察ができるものと期待される。PAMLAのパネルでえた成果を論集として発表する計画を遂行する予定である。この論集は、広く世界に発信する目的で、英語論文とし、波及効果を持ったテーマであることが確認できたので、パネルの発表者だけでなく、さらに日米から寄稿者を募っていく予定である。
希土類の波長変換効果による宇宙用高効率太陽電池の開発

希土類錯体を使って、通常の太陽電池では利用されていない太陽光の短波長の光を希土類イオンに吸収させた後、長波長で発光させ(波長変換効果)、電池への入射光をその分光感度に適合させることによって全体として従来の太陽電池の変換効率を上げる方法がこの研究の基礎概念である。この研究では、短波長領域の光が地上(300nm程度まで)よりも更に短い領域(200nm程度まで)にある宇宙での太陽光にこの太陽電池を利用して更に高い効率を得ることを目的としている。これまでの研究からCeを始めとして数種の希土類が深紫外光を吸収し、400nm以上の可視光に変換可能であることが分かっている。今年度は、トリフルオロ酢酸(TFA ; Trifluoroacetic acid)を使ったゾルゲル法によって、フッ化物CeF_3, CaF_2:Eu, SrF_2:Euナノ微粒子を生成し、その粉末,薄膜を評価した。CaF_2, SrF_2共にXRD測定結果より求めた結晶子サイズは、焼結温度の増加(300700°C)とともに35130nm以上まで線形的に増加することが分かり、このことはAFM表面観察でも確認された。SrF_2:EuにおけるPL, PLEの測定結果は、Eu^<3+>イオンの4f-f遷移に起因するシャープだが微弱な励起・蛍光のみが確認されたので加熱による酸化を防ぐため、TCRA(Thermal Carbon Reducing Atmosphere)法を施し,700°C以上で高い還元性を示すCOガスによって、Eu^<2+>イオンの4f^7-4f^65d^1遷移による強い蛍光(ピーク416nm)を得た。この新しいmodified TCRA法は、従来の高純度炭素のドープによる汚染を防ぎ、高い効率で安価な活性炭を補給するだけで還元処理が可能になるきわめて有効な方法である。現在、これらの膜を使って太陽光発電システムへの応用評価を行っている。今年度は、紫外-可視光変換層による紫外線の有効利用の観点から,トリフルオロ酢酸(TFA ; Trifluoroacetic acid)を使ったゾルゲル法で無機希土類蛍光錯体の作製を試みた。ゾルゲル法は、簡易的で安価に,しかもナノ微粒子の作製に有効な方法として広く知られている。多くの研究は酸化物作製を中心に行われているが、今回,CeF_3,CaF_2:Eu^<2+>,SrF_2:Euなどの透過度のより高いフッ化物ナノ微粒子を作製、評価した。その結果、TCRA (Thermal Carbon Reducing Atmosphere)処理によってEu^<3+>イオンからEu^<2+>イオンへの還元が可能であることが確認されEu^<2+>イオンからの強い励起・蛍光が確認され,結晶子サイズも焼結温度によって線形的に制御できることが分かった。今回、通常用いられるグラファイトだけではなく活性炭燃焼による炭素の大気中の燃焼からの高い還元性を示すCOガスによるTCRA処理でも有効であることを見出した。そして、XRD測定結果より求めた結晶子サイズとAFM表面観察で確認されたCaF_2:Eu微粒子の粒子径は約35200nm以上までの超微粒子であり、それぞれの方法で見積もった値は良く合致した。SrF_2:EuにおけるPL, PLEの測定結果は、Eu^<3+>

イオンの4f-f遷移に起因するシャープだが微弱な励起・蛍光のみが確認されたので加熱による酸化を防ぐため、TCRA(Thermal Carbon Reducing Atmosphere)法を施し,700°C以上で高い還元性を示すCOガスによって、Eu^<2+>イオンの4f^7-4f^65d^1遷移による強い蛍光(ピーク416nm)を得た。この新しいmodified TCRA法は、従来の高純度炭素のドープによる汚染を防ぎ、高い効率で安価な活性炭を補給するだけで還元処理が可能になるきわめて有効な方法である。現在、これらの膜を使って太陽光発電システムへの応用評価を行っている。
ヒトiPS細胞由来ネフロン誘導法に基づく腎細胞癌多段階発がん機構と治療開発基盤

近年の大規模遺伝子変異解析から、ヒト腎細胞癌(RCC)において基本となる癌抑制遺伝子の欠損に加えて、高頻度に見られるドライバー遺伝子変異が明らかにされてきた。しかし、これらのゲノム変異が実際にRCCを引き起こす事を、ヒトの系で検証して発がん機構に迫ることは不可能である。そこで本研究では、ゲノム変異導入ヒトiPS細胞からインビトロでヒトネフロン(腎オルガノイド)を誘導し、さらにヒトRCCの段階的な発がん過程を再現することで、その多段階発癌の分子機構を解明する事を目指し、研究を推進している。平成30年度は、非淡明細胞型腎細胞癌(nonccRCC)のがん抑制遺伝子の一つであるFLCN遺伝子を欠損したヒトiPS細胞株を、CRISPR/Cas9システムにより複数株樹立するとともに、ネフロン前駆細胞への分化能の評価、さらには腎オルガノイドへの誘導を行った。並行してFLCN遺伝子がネフロン前駆細胞自体の発生や分化能に関与する可能性を検証する為、ネフロン前駆細胞特異的にFlcnを欠損した遺伝子改変マウスを作製し解析を進めている。また、淡明細胞型腎細胞癌(ccRCC)のがん抑制遺伝子であるVHL欠損ヒトiPS細胞株作製の為のターゲティングベクターを作製し、HEK293細胞を用いてCRISPR/Cas9システムによるノックアウトの条件検討を完了した。実際のヒトccRCCにおいては、VHL遺伝子変異に加えて対側アリルの染色体3番短腕欠損が極めて高頻度に認められる。さらにccRCCの主たる3つのドライバー遺伝子(PBRM1, BAP1, SETD2)がこの染色体3番短腕に位置していることから、染色体3番短腕欠損を人為的に導入する為の条件検討をHEK293細胞を用いて行った。当初の予定通り、癌抑制遺伝子FLCNノックアウトiPS細胞株を複数株樹立し、ネフロン前駆細胞へと分化させ、さらに腎オルガノイドを作製し解析中である。また、FLCNの欠損自体がネフロン前駆細胞への分化やその機能に影響を与える可能性を検討する為に、遺伝子改変マウスを作製しネフロン前駆細胞におけるFlcnの役割の解析を進めた。ccRCCにおいては、染色体3番短腕欠損によりVHLの完全欠損に加えて起こる3つのドライバー遺伝子の複合的な欠損の意義を検討する事が重要と考え、当初の予定にはなかった人為的に染色体3番短腕欠損を導入する為の条件検討を行い、ある程度の目処が立った。また、CRISPR/Cas9システムによりドライバー遺伝子に効率良く変異を導入する為の条件検討が完了しており、次年度への展開が期待される。FLCN欠損ヒトiPS細胞株の腎オルガノイドへの分化誘導実験を継続し、その特性評価を行う。加えて、FLCN欠損ヒトiPS細胞株にドライバー遺伝子変異を導入した細胞株を樹立し、さらに腎オルガノイドへと分化させ、その表現型を詳細に解析する。並行して、平成30年度に確立した染色体3番短腕欠損の人為的導入方法を用いて、片側アリルのみに染色体3番短腕欠損をもつヒトiPS細胞株を樹立する。引き続き対側アリルのVHL遺伝子をCRISPR/Cas9システムによりノックアウトしたヒトiPS細胞株を樹立するとともに、ドライバー遺伝子変異を追加で導入した細胞株の樹立を進める。変異導入iPS細胞株は樹立した時点でネフロン前駆細胞への分化効率等の特性評価をおこなう。また、腎オルガノイドから癌細胞が発生するまでにある程度の時間を要する可能性を踏まえ、腎オルガノイドの長期培養法の検討を並行して進める。導入するゲノム変異が、iPS細胞のネフロン前駆細胞への分化能や腎オルガノイドへの分化能に悪影響を及ぼす可能性も考えられる。そこでバックアップとして、ヒト近位尿細管由来細胞株HK2へのCRISPR/Cas9システムによるゲノム変異の導入も、並行して進めていく。

当初の予定通り、癌抑制遺伝子FLCNノックアウトiPS細胞株を複数株樹立し、ネフロン前駆細胞へと分化させ、さらに腎オルガノイドを作製し解析中である。また、FLCNの欠損自体がネフロン前駆細胞への分化やその機能に影響を与える可能性を検討する為に、遺伝子改変マウスを作製しネフロン前駆細胞におけるFlcnの役割の解析を進めた。ccRCCにおいては、染色体3番短腕欠損によりVHLの完全欠損に加えて起こる3つのドライバー遺伝子の複合的な欠損の意義を検討する事が重要と考え、当初の予定にはなかった人為的に染色体3番短腕欠損を導入する為の条件検討を行い、ある程度の目処が立った。また、CRISPR/Cas9システムによりドライバー遺伝子に効率良く変異を導入する為の条件検討が完了しており、次年度への展開が期待される。FLCN欠損ヒトiPS細胞株の腎オルガノイドへの分化誘導実験を継続し、その特性評価を行う。加えて、FLCN欠損ヒトiPS細胞株にドライバー遺伝子変異を導入した細胞株を樹立し、さらに腎オルガノイドへと分化させ、その表現型を詳細に解析する。並行して、平成30年度に確立した染色体3番短腕欠損の人為的導入方法を用いて、片側アリルのみに染色体3番短腕欠損をもつヒトiPS細胞株を樹立する。引き続き対側アリルのVHL遺伝子をCRISPR/Cas9システムによりノックアウトしたヒトiPS細胞株を樹立するとともに、ドライバー遺伝子変異を追加で導入した細胞株の樹立を進める。変異導入iPS細胞株は樹立した時点でネフロン前駆細胞への分化効率等の特性評価をおこなう。また、腎オルガノイドから癌細胞が発生するまでにある程度の時間を要する可能性を踏まえ、腎オルガノイドの長期培養法の検討を並行して進める。導入するゲノム変異が、iPS細胞のネフロン前駆細胞への分化能や腎オルガノイドへの分化能に悪影響を及ぼす可能性も考えられる。そこでバックアップとして、ヒト近位尿細管由来細胞株HK2へのCRISPR/Cas9システムによるゲノム変異の導入も、並行して進めていく。
悪性中皮腫に対する増殖型レトロウイルスを用いた自殺遺伝子療法の開発

研究代表者らは、悪性中皮腫に対する新規治療として、癌細胞において特異的に感染・増殖する増殖型レトロウイルスベクター(RRV)を用いた自殺遺伝子療法の開発を進めている。最終年度である平成30年度は、間葉系幹細胞(MSC)をキャリアとしてRRVを癌に効率良く到達・分配させる新手法の有用性を、in vitroにおける殺腫瘍細胞効果およびマウスモデルを用いた実験で検討した。1、RRV-CD(自殺遺伝子Cytosine deaminase)感染MSCを腫瘍細胞と様々な混合比で7日間96ウエルプレート上で培養し、その後5FCを添加し、殺細胞効果を評価した。その結果、脂肪、臍帯、骨髄由来いずれのMSCも0.25%以下の混合率で有意な殺細胞効果を示した。これは、昨年度に明らかにした接触共培養においてはTranswell plateを用いた培養(非接触共培養)に比べRRV伝達効率が格段に向上するという事実と合致した。2、蛍光標識した腫瘍細胞を用いて、皮下腫瘍モデル及び腹膜播種モデルを作製し、ルシフェラーゼ発現RRVを感染させたMSCをそれぞれ静脈内、腹腔内に投与する。その後MSCの腫瘍への集積及びRRV伝達を生体イメージング機器を用いて継時的に評価した。その結果、皮下腫瘍及び腹膜播種モデルにおいて、それぞれ静脈投与、腹腔内投与したMSCの腫瘍集積と腫瘍へのRRV伝達を認めたが、骨髄に比べて脂肪と臍帯由来のMSCの効率が優った。以上の結果より、MSCをキャリアとしてRRVを癌に効率良く到達・分配させる技術のin vitroおよびin vivoにおける原理証明ができた。本研究の進展により、RRVを用いた自殺遺伝子療法の効果増強、更には転移性癌治療に応用可能なウイルス療法の開発に繋がることが期待される。申請者らは、悪性中皮腫に対する新規治療として、癌細胞において特異的に感染・増殖する増殖型レトロウイルスベクター(RRV)を用いた自殺遺伝子療法の開発を進めている。本研究では、これまでに開発したマウス及びテナガザル由来の2種類のRRVを用いることでオーダーメイド・ウイルス療法の可能性や重感染による自殺遺伝子併用療法の有用性を検討する。1.悪性中皮腫細胞におけるRRV受容体の発現とRRV感染・増殖効率を比較検討:ヒト悪性中皮腫の市販細胞株6種、及び正常細胞2種における各RRVの細胞受容体の発現をqPCRで検討したところ、1)細胞株により発現が異なる、2)いくつかの細胞株ではAMLV受容体(PiT-2)が低発現、3)GALV受容体(PiT-1)は全ての細胞株で高発現を示すことが判明した。またGFP発現RRVを用いた検討において、PiT-2低発現株(ACC-MESO-1)では、AMLVでは感染効率が極めて低いが、GALVは高い感染・伝播効率を示した。一方、PiT-1及びPiT-2両受容体が発現している細胞株(MSTO-211H)においてはAMLV・GALV共に高い感染・伝播効率を示した。2. RRV自殺遺伝子単独及び併用療法による抗腫瘍効果の比較検討:自殺遺伝子としてCytosine deaminase及びHSV-tkをそれぞれ発現するRRVをそれぞれ作製した。各RRVの併用効果をMSTO-211H細胞において検討したところ、同じ自殺遺伝子同士より、異なる自殺遺伝子の併用により殺腫瘍細胞効果が増強され、相乗効果を認めた。以上の結果より、2種類のRRVが揃ったことによって、受容体発現に基づくオーダメイド自殺遺伝子療法、および併用療法が可能となり、RRVを用いた自殺遺伝子療法における抗腫瘍効果の増強が期待された。おおむね順調に進展している。研究代表者らは、癌細胞において特異的に感染・増殖する増殖型レトロウイルスベクター(RRV)を用いた癌自殺遺伝子療法の開発を進めている。

平成29年度は、間葉系幹細胞(MSC)をキャリアとしてRRVを癌に効率良く到達・分配させることにより高い治療効果を得る新規治療法開発を目指した実験を進めた。1. MSCにおけるRRVの感染効率、増殖効率およびRRV産生能の評価:GFP発現RRVを用いて、ヒトMSC3種について、RRVの感染効率、増殖効率及びRRV産生能を評価した。いずれのMSCにおいても中皮腫細胞株に比べ、感染効率は410倍低く、増殖効率は520倍低かった。しかし感染ウイルス量を増やす事で10cm-dish程度のスケールでも一度の感染で100%の効率を得られた。RRV産生能については、いずれのMSCにおいても中皮腫細胞株に比べ10倍以上低かった。2. MSCの腫瘍細胞株への遊走能、RRV伝達効率の評価:レンチウイルスベクターを用いてGFP標識したMSCとmCherry標識した中皮腫細胞株をTranswell plateを用いた培養系を用い、MSCの中皮腫細胞株への遊走能を検討した。いずれのMSCも足場依存性及び非依存性の腫瘍遊走能を示した。GFP発現RRVを感染させたMSCとmCherry標識ヒト中皮腫細胞株をTranswell plateを用いた培養系を用い、MSCから中皮腫細胞へのRRV伝達効率の評価を検討した。いずれのMSCも中皮腫細胞にRRVを伝達することが明らかとなった。さらに接触共培養においては、Transwell plateを用いた培養(非接触共培養)に比べ、RRV伝達効率が格段に向上することが判明した。以上の結果より、MSCをキャリアとしてRRVを癌に効率良く到達・分配させる技術のin vitroにおける原理証明ができた。概ね順調に進展している。今後は、他の種類の癌細胞株を用いた実験を進める一方で、申請計画通りに研究を進める。当初の計画通り、担癌マウスモデルを用いた実験においてMSCの腫瘍への集積、RRV伝達、腫瘍内RRV伝播の評価に加え、治療実験を行い効果増強の有無を評価する。培養用の培地、試薬を購入する予定であったが、在庫が残っていたため、購入を次年度に持ち越した。培養用の培地、試薬を購入する。
グルタミン酸受容体遺伝子の可塑的発現制御メカニズムの解明

1)上丘における可塑的発現制御機構の解析系の確立網膜視神経細胞からの入力を変化させ、投射先である上丘のGluRmRNAの変化を定性的定量的に解析する系を確立を試みた。入力を減少させたために、片側の眼球摘出をおこなった。幼若ラットの片側の眼球を摘出したのち、in situハイブリダイゼイションで上丘のGluR1,GluR2の遺伝子のmRNAを摘出したところ、摘出眼球の視神経細胞が投射する側の上丘のGluR1,GluR2mRNAの発現は低下していた。とくにGluR2は視神経層で確実に低下しており、従って網膜からの入力が消失することで、GluR2遺伝子の転写活性が低下した可塑性が示唆された。今後、症例を増やすと同時に、RT-PCRをもちいて、定量的に変化を調べる。3)組み替えアデノウイルスを用いた上丘の神経細胞へのGluR遺伝子の上流ゲノム領域の導入in vivoで遺伝子導入するために、組み替えアデノウイルスを利用した。GluR2遺伝子の上流ゲノム領域1Kbpの下流にLacZ遺伝子をもった組み替えアデノウイルスを、脳初代培養細胞に感染させると、神経細胞、グリア細胞ともに感染するが、LacZは神経細胞に特異的に発現したのでアデノウイルスベクターは転写制御研究に有用であることが確認さた。アデノウイルスをin vivoに適用する準備として、強力なプロモータの下流にLacZ遺伝子をもった組み替えアデイウイルス(陽性コントロール)をマウスの脳に注入したところ、外来遺伝子を逆行性に神経細胞に導入できることがわかった。