hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
プロリン特異性エンドペプチターゼ・インヒビターが示す抗健忘機構解明

本研究は近年,社会の高齢化に伴い大きな問題となてっている老人性痴呆症の予防と治療薬の開発を目的とし,プロリン特異性エンドペプチダーゼに特異的なインヒビターが示す抗健忘作用の研究をおこなった.1.インヒビター誘導体の開発:Z-Pro-prolinalのproを種々のアミノ酸に変え,阻害力を検討した.その結果, Z-Thiopro-thiazolidine, Z-Thiopro-thiprolinalは牛脳由来酵素に強い阻害活性を示し,それらのKi値は4.6nM, 2pMと最も低い値を示した.2.種々の行動薬理学的方法によるに抗健忘作用の評価:記憶の評価のための実験法として,マウスを用い,電撃ショッや蛋白合成阻害剤などにより記憶喪失し,レバー押しオペラント学習法,迷路法,ステップスルー法を組み合わせ,実験を行った.殆どの行動理学的試験に於て,プロリン特異性エンドペプチダーゼインヒビターは抗健忘作用を示し,再現性が確かめられた.3.マウス脳酵素の精製:マウス脳400個より高度に精製した酵素標品を得た.酵素の分子量は76,000, DFPとPCMBにより阻害され,バンプレシンやアンジオテンシンのプロリンのカルボキシル基側を得意的に切断しその生理活性を消失させた.これ等の性質はこれまで報告してきたプロリン得異性エンドペプチダーゼとよく類似するものである.4.インヒビーター投与後の脳内プロリン得異性エンドペプチダーゼ活性の変動:Z-Thiopro-thiazolidineの腹腔内および経口投与後,経時的に脳内活性を測定した結果,投与1時間後に酵素活性は元の30%にも低下し,徐々に回復し24時間後には80%近く回復した.5.バソプレシンのRIAによる脳内の定量:市販のラジオイムノアッセイキトを用い脳の各部位でのペプチドの存在量を測定した.インヒビーター投与後,有意にバンプレシン量が増加した.本研究は近年,社会の高齢化に伴い大きな問題となてっている老人性痴呆症の予防と治療薬の開発を目的とし,プロリン特異性エンドペプチダーゼに特異的なインヒビターが示す抗健忘作用の研究をおこなった.1.インヒビター誘導体の開発:Z-Pro-prolinalのproを種々のアミノ酸に変え,阻害力を検討した.その結果, Z-Thiopro-thiazolidine, Z-Thiopro-thiprolinalは牛脳由来酵素に強い阻害活性を示し,それらのKi値は4.6nM, 2pMと最も低い値を示した.2.種々の行動薬理学的方法によるに抗健忘作用の評価:記憶の評価のための実験法として,マウスを用い,電撃ショッや蛋白合成阻害剤などにより記憶喪失し,レバー押しオペラント学習法,迷路法,ステップスルー法を組み合わせ,実験を行った.殆どの行動理学的試験に於て,プロリン特異性エンドペプチダーゼインヒビターは抗健忘作用を示し,再現性が確かめられた.3.マウス脳酵素の精製:マウス脳400個より高度に精製した酵素標品を得た.酵素の分子量は76,000, DFPとPCMBにより阻害され,バンプレシンやアンジオテンシンのプロリンのカルボキシル基側を得意的に切断しその生理活性を消失させた.これ等の性質はこれまで報告してきたプロリン得異性エンドペプチダーゼとよく類似するものである.4.インヒビーター投与後の脳内プロリン得異性エンドペプチダーゼ活性の変動:Z-Thiopro-thiazolidineの腹腔内および経口投与後,経時的に脳内活性を測定した結果,投与1時間後に酵素活性は元の30%にも低下し,徐々に回復し24時間後には80%近く回復した.5.バソプレシンのRIAによる脳内の定量:市販のラジオイムノアッセイキトを用い脳の各部位でのペプチドの存在量を測定した.インヒビーター投与後,有意にバンプレシン量が増加した.1.プロリン特異性エンドペプチダーゼの精製とアミノ酸配列決定・ウシ脳より酵素を均一に精製し、N末端より20のアミノ酸配列を明らかにした。この配列はこれまで報告のあるペプチダーゼ,プロテアーゼとは全く異なる配列であった。2.インヒビター誘導体の開発と酵素阻害活性:アルデヒド誘導体インヒビターとしてZ-prolinal,Suc-Pyr-prolinal,Suc-Pro-prolinal Z-Pro-prolinalを合成した。それらについて、ウシ脳から精製したプロリン特異性エンドペプチダーゼに対する阻害活性について調べた結果、Z-Pro-prolinal,Suc-Pro-prolinal,Suc-Pyr-prolinal,Z-Prolinalの順となった。3.インヒビター投与による脳内酵素活性の変動:Z-Pro-prolinalとZ-Gly-Pro-【CH_2】clの両インヒビターについてマウス腹腔内に投与(3mg/マウス)後、脳内での酵素活性の変動を調べた結果、1時間後に脳内各部位の活性が20%まで低下し、24時間後50%まで回復した。4.インヒビターの抗健忘作用:マウスを用いたStep down法,Step through法,レバー押し法などの記憶実験法を確立し、この方法を用い抗健忘作用を調べた。まず、DeWiedらの言うバソプレシンについてその抗健忘作用を調べたところ、再現性が確認できた。

そこで、スコポラミンを記憶喪失剤として用い、上記3で合成した化合物について抗健忘作用を調べた結果、どの方法を用いてもZ-Pro-prolinal,Suc-Pro-Prolinal,Suc-Pyr-prolinal,Z-prolinalの順に効果が得られた。これらの結果は、阻害力と抗健忘作用に良い相関が見られ、これまで我々が認めてきたデーターがさらに裏づけられた。
痴呆症ケアにおける美容の効果に関する研究

グループホームやデイサービスにおける痴呆症高齢者ケアの実態と美容を取り入れたケアの効果について、事例分析、免疫機能、動脈硬化指数、家族に及ぼす美容の効果、およびスタッフをはじめとするケア提供者へ及ぼす影響について検討した。免疫機能、動脈硬化指数では変化が明らかではなかったが、認知症高齢者の表情が豊かになり、言語も増す傾向が示され、スタッフや家族への相互作用があることが示唆された。化粧が及ぼす生理・心理的反応に関する基礎的研究(北川・人見、2006)を行い、手軽にできる口紅について、心理的変化および脳活動・自律神経機能に与える影響について検討した。口紅をつけた結果、これまでの報告にもみられるように、化粧による気分の高揚や積極性の向上などの心理的変化が認められた。しかし、このような心理的変化では、脳活動。自律神経機能には有意な影響を与えないことが示唆された。京都、イスタンブール、ベルリンにおける第20-22回アルツハイマー病協会国際会議に参加し、世界の認知症ケアに関する情報を得た。A老年性痴呆疾患治療病棟における攻撃的行動のある認知症高齢者に対するスタッフの態度とバーンアウト症候群との関係をパイロットスタデイとして調査した。攻撃的行動を否定的に捕らえるスタッフはバーンアウト傾向にあることが示唆され、認知症ケアにおける看護介入の方策、およびスタッフ教育について、検討する必要性が急務であることが示めされた(人見・中平・中村・他、2006)。そこで、大阪および山陰地方の介護施設のスタッフ約1、500人を対象に、調査研究を行った。また、代替療法を用いた介入研究を地域の病院における療養型治療病棟や特養において実施し、本人だけでなくスタッフおよび家族への波及効果がある傾向が示された。今後、全国の痴呆症ケアに関わる病院や施設および事業所等に勤務するスタッフの態度とバーンアウト症候群との関係を明らかにし、介護提供者の教育システムを構築に関する示唆を得ると共に、提言をする予定である。本年度は、痴呆性高齢者ケアにおける美容の効果に関する国内外の文献検索を行い、1.グループホームやデイサービスにおける痴呆性高齢者ケアの実態調査と美容を取り入れたケアモデルの分析を行い、学会発表の場で公表することにより、グループホームにおける個別的なケアの効果や在宅療養におけるデイサービスの意義の再確認ができた。また、美容の効果は高齢者のみでなく、家族やケア提供者に及ぼすものも大きいことが明らかになった。また、現在、美容を取り入れた痴呆症ケアの研究依頼をおこなっている。このケアモデルの分析が、参考になっている。そして、対象の同意が得られた所から、美容の導入前期のプログラムを開始している。2.全国のグループホームやデイサービスのスタッフの痴呆症ケアにおける美容に関する意識を明らかにすることを目的に、質問紙調査の準備を行った。3.諸外国、すなわち韓国とタイにおける美容に関する情報を収集する目的で、海外に出かけた。これら体験も含め、痴呆症ケアにおける美容福祉的介入方法について具体的に検討した。本年度は、痴呆性高齢者ケアにおける美容の効果に関する研究を具体的に実施した。1.グループホームやデイサービスにおける痴呆性高齢者ケアの実態と美容を取り入れたケアの効果について、事例分析、免疫機能、動脈硬化指数、家族に及ぼす美容の効果、およびスタッフをはじめとするケア提供者へ及ぼす影響についても分析検討中である。2.化粧が及ぼす生理・心理的反応に関する基礎的研究(北川・人見、2006)を行い、手軽にできる口紅について、心理的変化および脳活動・自律神経機能に与える影響について検討した。

しかし、このような心理的変化では、脳活動・自律神経機能には有意な影響を与えないことが示唆された。3.イスタンブールにおける第21回アルツハイマー病協会国際会議に参加し、演題発表するとともに痴呆症ケアに関する情報を得た。4.A老年性痴呆疾患治療病棟における攻撃的行動のある認知症高齢者に対するスタッフの態度とバーンアウト症候群との関係をパイロットスタデイとして調査した。攻撃的行動を否定的に捕らえるスタッフはバーンアウト傾向にあることが示唆され、認知症ケアにおける看護介入の方策、およびスタッフ教育について、検討する必要性が急務であることが示された(人見・中平・中村・他、2006)。今後、出雲市における認知症ケアの発展過程を生かす特定機能病院を中心とした認知症ケアを構築と、全国の痴呆症ケアに関わる病院や施設および事業所等に勤務するスタッフの態度とバーンアウト症候群との関係を明らかにし、介護提供者の教育システムを構築することを目的に、研究を進める予定である。本年度は、痴呆性高齢者ケアにおける美容の効果に関する研究を具体的に実施した。1.グループホームやデイサービスにおける痴呆性高齢者ケアの実態と美容を取り入れたケアの効果について、事例分析、免疫機能、動脈硬化指数、家族に及ぼす美容の効果、およびスタッフをはじめとするケア提供者へ及ぼす影響について分析検討した。2.化粧が及ぼす生理・心理的反応に関する基礎的研究(北川・人見、2006)を行い、手軽にできる口紅について、心理的変化および脳活動・自律神経機能に与える影響について検討した。口紅をつけた結果、これまでの報告にもみられるように、化粧による気分の高揚や積極性の向上などの心理的変化が認められた。しかし、このような心理的変化では、脳活動・白律神経機能には有意な影響を与えないことが示唆され、論文投稿中である。3.ベルリンにおける第22回アルツハイマー病協会国際会議に参加し、世界の認知症ケアに関する情報を得た。攻撃的行動を否定的に捕らえるスタッフはバーンアウト傾向にあることが示唆され、認知症ケアにおける看護介入の方策、およびスタッフ教育について、検討する必要性が急務であることが示めされた(人見・中平・中村・他、2006)。そこで、大阪および山陰地方の介護施設のスタッフ約1,500人を対象に、調査研究を行った。また、代替療法を用いた介入研究を地域の病院における療養型治療病棟や特養において実施し、本人だけでなくスタッフおよび家族への波及効果がある傾向が示された。今後、全国の痴呆症ケアに関わる病院や施設及び事務所等に勤務するスタッフの態度とバーンアウト症候群との関係を明らかにし、介護提供者の教育システムを構築に関する示唆を得ると共に、提言をする予定である。
NF2遺伝子産物(Merlin)の神経系腫瘍形成抑制機構の基礎的解析--Merlinとその会合蛋白質を介する細胞内シグナル伝達機構の解析--

神経線維腫症2型(NF2)は多発性頭蓋内良性腫瘍を伴うことを特徴とする遺伝疾患で、患者の予後は極めて悪い。その原因遺伝子(NF2遺伝子)の欠失・変異は、非NF2患者の散発性腫瘍にも高頻度で起こっており、NF2遺伝子産物merlinが細胞内で腫瘍抑制分子として重要な機能を果たしていることが示唆される。merlin分子の関わる細胞内シグナル伝達・腫瘍抑制機構を明らかにする目的で、NF2の遺伝子変異・翻訳後修飾解析、正常および変異merlinの細胞内局在機構,merlin会合蛋白質の同定・相互作用,及び結合蛋白欠損細胞におけるmerlinの動態を解析した。(1)正常merlinは、細胞質辺縁部の細胞間接着部位や細胞質突起のみならず、細胞質内全体にbleb状の凝集塊を形成して発現した。一方、NF2患者cDNAより得られたexon2,2-3,7を欠如する変異マーリンは主に核、及び核周囲に局在し、発現細胞の付着性を低下させた。(2)merlin分子の高変異部位であるN末端側に3ヵ所の核外輸送シグナル(nuclear export signal;NES)配列を検出し、NES特異的核外輸送阻害剤処理により、細胞内発現正常merlinの核蓄積現象を見出した。(3)merlinの高変異部位(294,298)に蛋白分解酵素(カルパイン)による限定分解部位を検出した。(4)merlinに特異的に結合する5種の細胞内蛋白質(p165,p145,p125,p85,p70)を検出し、p125はpoly(ADP-ribose)polymerase(PARP)、p85,p70はKu-antigen p85,p70(Ku-85,70)、であることが判明した。(5)merlinはその高変異部位であるN末端側(19-339)を介してPARP,ku-85,ku-70と結合し、PARPのpoly(ADP)ribose polymerase活性を上昇させ、merlinのN末端側にpoly(ADP)ribsyl化を誘導した。(6)PARP-/-MEF細胞で過剰発現したmerlinは細胞質にブロードに局在し、LMB処理によってもその局在の変化は認められなかった。以上の結果からmerlinは細胞膜-細胞質-核間をシャトルする分子であり、その高変異部位を介する各種膜・細胞質・核分子との相互作用によって細胞内局在・活性を制御しておりDNA損傷修復、細胞周期、細胞死の腫瘍抑制シグナルに関わっていることが考えられた。merlin分子の関わる細胞内シグナル伝達・腫瘍抑制機構を明らかにする目的で、i)

merlin会合蛋白質の同定・相互作用,ii)merlinの細胞内局在機構を主に解析した。i)GST-mcr11n固相化カラムを用い、牛脳可溶化物よりmcrhnに特異的に結合する5種の蛋白質(pl65p145,p125,p85,p70)を検出した。これらの単離・酵素消化・RP-HPLC・各ペプチドのアミノ酸配列解析の結果、p125はpoly(ADP-ribose)polymerase(PARP)、p85はKu-antigen p85(Ku-85)であることが判明した。細胞可溶化蛋白質の抗PARP抗体による免疫沈降物中にmerlinとKuが、又HA-merlinを過剰発現させたCOS細胞の抗HA抗体沈降物からPARPとKuが検出され、細胞内でmerlinとPARPとKuの3者相互会合性が確認された。各種GST-merlin結合実験から、PARPとMerlinの結合は、NF2高変異部位である19339番目、Kuとは19400番目のアミノ酸配列が重要であること、更にPARP分子上では337から580番までの自己修飾部位が重要であり、これらの相互作用によってPARP活性が上昇し、merlioN末端部がpoly ADP-ribosylationされることが判明した。ii)哺乳類発現ベクターに正常NF2cDNA、及患者腫瘍サンプルから得られた変異NF2cDNAを組み込み、ヒト培養細胞にこれらを発現させ、その動態を共焦点レーザー走査顕微鏡で解析した結果、正常merlinは、細胞質辺縁部の細胞間接着部位や細胞質突起のみならず、細胞質内全体にbleb状の凝集塊を形成して発現することが判った。一方、exon2,2-3,7を欠如する変異マーリンは主に核、及び核周囲に局在し、発現細胞の付着性を低下させていることが判った。又、merlin分子のN末端側に3カ所の核外輸送シグナル(nuclear export signal;NES)配列を検出し、NES特異的核外輸送阻害剤処理により、細胞内発現正常merlinの核蓄積現象を見出した。以上の結果からmerlinは細胞膜-細胞質-核間をシャトルする分子であり、これが関わるシグナルにその高変異部位を介する各種膜・細胞質・核分子との相互作用が関与し、その複合体の細胞内局在、及び各々の活性の制御によって、腫瘍抑制に関わっていることが考えられた。神経線維腫症2型(NF2)は多発性頭蓋内良性腫瘍を伴うことを特徴とする遺伝疾患で、患者の予後は極めて悪い。その原因遺伝子(NF2遺伝子)の欠失・変異は、非NF2患者の散発性腫瘍にも高頻度で起こっており、NF2遺伝子産物merlinが細胞内で腫瘍抑制分子として重要な機能を果たしていることが示唆される。merlin分子の関わる細胞内シグナル伝達・腫瘍抑制機構を明らかにする目的で、merlin会合蛋白質の同定・相互作用、merlinの細胞内局在機構、及び結合蛋白欠損細胞におけるmerlinの動態を解析した。(1)牛脳・培養細胞可溶化物よりmerlinに特異的に結合する5種の蛋白質(p165,p145,p125,p85,p70)を検出し、p125はpoly(ADP-ribose)polymerase(PARP)、p85,p70はKu-antigen p85,p70(Ku-85,70)、であることが判明した。
安全な自宅出産に向けた助産師のケア

本研究は、安全な自宅出産に向けた助産師のケアを明らかにするために、8名の助産所管理者へ面接調査を実施した。助産師は、母子に医療処置が必要となった際に受診する医療機関との連携に努めていた。助産師は、妊娠・出産・産後・新生児の経過を詳細に妊婦に説明し、医療介入が必要になる可能性や医療処置を受けることについての考えが一致するまで話し合っていた。助産師は、妊娠32週以降に妊婦と安全に出産するために、自宅と医療機関のどちらで出産するのか話し合っていた。助産師は、医療機関のカンファレンスや助産師同士でリフレクションを行い、さらなる安全への取り組みを行っていた。本研究の目的である助産師が安全な自宅出産に向けてどのような準備をしているのか明らかにするために、インタビュー調査を実施した。インタビュー調査に先立ち、研究代表者が所属する大学の研究倫理審査委員会の承認を受けた。データ収集にあたり、研究参加者を選定した。研究参加者は公益社団法人日本助産師会の会員で、自宅出産の取り扱いをしている助産師に研究協力を依頼した。今年度は4名の助産師から研究参加の同意が得られた。4名のうち3名は比較的近い地域で助産師として活動し、他1名は別の地域で活動をしていたため、まず活動地域が近い3名のデータの分析を行った。3名の助産師のうち2名は、安全に自宅出産をするためには、医療機関との連携が不可欠であることを明言した。3名の助産師ともに、依頼してくる妊婦がなぜ自宅で出産を希望するのか、その理由について丁寧に話を聞き、自宅で出産する必然性について検討してた。また、周産期に起こりうるリスクについては、妊婦が依頼してきた初回の面接で、妊婦が十分に理解し、納得するまで説明し、話し合っていた。助産師自身の不測の事態に備えて、近隣の助産師と連携し、必要時連絡をとっていた。本調査の結果は、日本の全出産のなかで非常に少数である自宅出産を安全に介助しようとしている助産師の様相を明らかするものであり、極少数であるが助産師の業務として今後も継続して安全に実施するための指針の基礎データとなる。調査結果の一部を、学術集会で発表し、学会参加者からの意見を求めた。本研究の目的である助産師が安全な自宅出産に向けてどのような準備をしているか明らかにするためにインタビュー調査を実施している。平成26年度に引き続きデータ収集を実施した。平成26年度は関東近県の助産師にインタビュー調査を実施した。医療機関や緊急時の搬送システム等、地域により差異があると考えらえるため、関東近県以外の助産師へのインタビューを実施した。データ収集と並行し、データ分析を行った。有床助産所内でも分娩を取り扱う助産師が自宅出産を取り扱う際の安全への取り組みについて分析した。有床助産所内で分娩を取り扱うことと比較して自宅出産における安全への取り組みについては、該当する3名の助産師のデータについて分析した。有床助産所内でも分娩を取り扱う助産師の自宅出産の安全への取り組みは、以下の通りであった。助産師は産婦の望む出産の本質が自宅であるのか話し合いを重ねて確認し、不必要な出張分娩を取り扱わない。助産師は「一点の曇りなく産婦と向き合い」、「助産師と産婦が人として同じ土俵に立ち」、妊婦が助産師のみならず医療を受けることや広く人を信頼し出産し、育児をしていくことを期待して話し合う。助産師は、妊産婦が自ら判断でき、助産師と経過を共有できるようにするために経過を詳細に説明する。助産師は、妊娠32週以降に分娩に向けて妊婦と経過やリスク、リスクを予防する対応や医療処置について具体的に認識を摺合せし、自宅で出産するかどうか見極める。助産師は、産婦が自分で判断しながら電話をかけてくることを前提に、分娩経過を予測し、産婦のところにいつ出向くか、あるいは自宅外で待機するか検討する。助産師は、サポート助産師の体制、連携する医療機関の距離や状況を妊産婦にも説明し、自宅出産をするかどうか判断し、妊産婦からの理解を得ていた。研究最終年度は、有床助産所の管理者のインタビューを1件実施し、データ収集を終了した。研究期間内に実施した8名全てのデータを分析した。研究参加者は有床助産所の管理者4名および出張専門の助産所の管理者4名であった。研究最終年度では、研究参加者である助産師が自宅出産を選択する女性をどのように捉えているか明らかにした。研究期間全体の結果として、助産師からみた自宅出産に関する安全への取り組みは、【医療機関との顔の見える連携をする】【自宅出産を引き受けるときには妊婦と助産師の考えが一致するまで話し合う】【妊婦の自宅に近い距離にいる助産師にサポートを依頼する】【助産師同志でリフレクションと自らの不測の事態に備える】ことが明らかになった。特に、有床助産所の管理者は、助産所の出産と自宅出産の2か所の出産を取り扱う可能性があることに備えていた。有床助産所の管理者は、【産婦の希望の本質を確認する】ことで不必要な自宅での分娩の取り扱いを避けていた。また、【妊婦に人や医療を信頼することを伝え】【妊娠・出産・産後・新生児の経過を詳細に説明し】【妊娠32週以降に出産について認識をすり合わせ】妊娠・出産に伴うリスクを予防したり、自宅で出産することが安全であるかどうか見極めていた。

自宅出産では【分娩経過は電話の頻度や内容から産婦との間合いをとり】、産婦のところへ出向くのか、産婦の自宅の近くに待機するのか検討していた。さらに、分娩の経過中は【サポート助産師と医療機関との距離や状況を勘案】して、産婦に説明し、安全な出産のために自宅で出産するか医療機関で出産するか判断するとともに産婦からの理解を得ていた。本研究は、安全な自宅出産に向けた助産師のケアを明らかにするために、8名の助産所管理者へ面接調査を実施した。助産師は、母子に医療処置が必要となった際に受診する医療機関との連携に努めていた。助産師は、妊娠・出産・産後・新生児の経過を詳細に妊婦に説明し、医療介入が必要になる可能性や医療処置を受けることについての考えが一致するまで話し合っていた。助産師は、妊娠32週以降に妊婦と安全に出産するために、自宅と医療機関のどちらで出産するのか話し合っていた。助産師は、医療機関のカンファレンスや助産師同士でリフレクションを行い、さらなる安全への取り組みを行っていた。データ収集にあわせて、データ分析にとりかかり、成果を学術集会で公表することができたため。助産学データ分析をさらにすすめ、分析結果を研究参加者である助産師に提示し、フィードバックを受ける。また、必要時、専門家からのフィードバックを受ける。研究の開始の年度であったが、7月中旬には研究倫理委員会からの承認を受けることができたため、計画通りデータ収集をすることができた。インタビュー調査をあと1名予定していたが、研究参加者からの同意が得られず実施できなかった。旅費、謝品、インタビューデータのテープ起こしの代金が執行できなかったため。所属大学が変更になったため、改めて所属大学の研究倫理委員会に申請し、承認を得たのちに、データ収集を再開する。研究倫理委員会からの承認を得られるまでの期間は、文献検討、研究参加者を依頼する助産師を探し、データ収集が中断している期間に実施可能な事柄を進める。今年度、実施できなったインタビュー調査を次年度新たに研究参加者を募り、実施する予定である。
スキルス型癌の間質浸潤におけるリン酸化蛋白質の解析

スキルス型胃癌に対する治療標的分子を選別するため、癌細胞が腹膜播種してゆく過程でチロシンリン酸化が亢進している蛋白質を精製し、Ossa/C9orf10、CDCP1、ARAP3などの分子を同定した。そのなかでOssaは癌細胞が酸化ストレスを受けた際に誘導されるSrcファミリーキナーゼの新規活性化因子で、活性酸素の産生に応じてSrc/PI3-キナーゼ経路を活性化し、抗アポトーシスシグナルを誘導する事を示し、癌細胞がストレスに抵抗して生存する機構のひとつを解明した。またスキルス胃癌のヌードマウスにおける腹膜播種を抑制する効果が、Ossa、CDCP1の発現抑制、およびephrin-B1の合成ペプチドにより確認された。非常に高い浸潤能を特徴に持ち、悪性度の高いスキルス型胃癌に対する治療標的分子を同定するため、特に癌細胞が腹膜播種してゆく過程で実際にチロシンリン酸化が亢進している蛋白質を同定する試みを行ってきた。そのなかでOssa/C9orf10はスキルス型胃癌細胞において、通常培養状態に比較してヌードマウスの播種組織でより強くリン酸化されている蛋白質として精製・同定されたが、それまで機能解析がほとんどされておらず、データベース上で相同性のある遺伝子が存在していることのみ報告されていた分子である。生体内で癌細胞は血流の変化や放射線、光線療法、化学療法など多くの場面で酸化ストレスに曝されているが、それに抵抗して生存する機構を備えている。解析の結果、同分子は細胞が酸化ストレスを受けた際に誘導されるSrcファミリーキナーゼの新規活性化因子で、活性酸素の産生に応じてSrc/PI3-キナーゼ経路を活性化し、抗アポトーシスシグナルを誘導していたため、Ossa(Oxidative-stress associated Src activator)と名付けた。また一方でOssaはC末部分にRNA結合能を有し、IGF-IImRNAとの結合依存性に細胞増殖因子であるIGF-II蛋白質の分泌を促進する機構によっても癌細胞の生存を促進していた。Ossaはヒトスキルス胃癌手術症例でも癌部で高い発現がみとめられ、その発現抑制はヌードマウスにおけるスキルス胃癌細胞株の腹膜播種に対して阻止効果がみられたため、分子標的治療の対象候補になるのではないかと考えている。スキルス型胃癌に対する治療標的分子を同定するため、癌細胞が腹膜播種してゆく過程でチロシンリン酸化が亢進している蛋白質を同定してきた。そのなかでOssa/C9orf10は、癌細胞が血流の変化や放射線、化学療法などによる酸化ストレスに曝された際に、それに抵抗して生存する機構に関っている事が解明できた。同分子は細胞が酸化ストレスを受けた際に誘導されるSrcファミリーキナーゼの新規活性化因子で、活性酸素の産生に応じてSrc/PI3-キナーゼ経路を活性化し、抗アポトーシスシグナルを誘導した。またOssaのC末部分はIGF-II mRNAと結合し、IGF-II蛋白質の分泌を促進する機構も有していた。さらにOssaに結合する蛋白質として、PDCD2Lを得た。Ossa/PDCD2Lは協調してシスプラチンなどによる酸化ストレスに対して抵抗性を示し、癌細胞の抗アポトーシス作用を増強した。Ossaはヒトスキルス胃癌手術症例でも、正常胃粘膜に比較し癌部で高い発現がみとめられ、その発現抑制はヌードマウスでのスキルス胃癌細胞株の腹膜播種に対して阻止効果がみられた。一方、ephrin-B1はこれまでの解析でスキルス癌の進展に寄与する事をみてきたが、そのC末部位のペプチドによる癌の腹膜播種に対する治療効果を検討した。細胞膜透過シグナルを付加したephrin-B1のC末ペプチドを培養細胞に添加する事で、メタロプロテアーゼの分泌促進やArfの活性化など、これまでに報告したephrin-B1に基づく細胞内シグナル経路がブロックされた。またヌードマウス腹腔内に同ペプチドを投与した結果、ephrin-B1を発現しているスキルス胃癌細胞の腹膜播種をin vivoで抑制することができた。同ペプチド構造を基盤に、ephrin-B1を標的とした低分子化合物の取得を試みている。
日本人2型糖尿病原因遺伝子の全ゲノム解析結果に基づいた2型糖尿病候補遺伝子の検討

罹患同胞対法を用いた日本人2型糖尿病の全ゲノム解析を行った。2名以上の同胞に2型糖尿病を認めた164家系368名(256同胞対)を対象とした。このサンプルセットでは2型糖尿病のλs>1.6である場合に有意の連鎖を有する領域を見出す確率が80%以上となることが示されている。常染色体上の414種類のマイクロサテライトマーカーをタイピングした(平均マーカー間距離8.6±5.2cM)。解析に先立って、家系矛盾チェック、タイピングエラーチェック施行後に、SPLINKおよびGENEHUNTER PLUSを用いて連鎖解析を施行した。その結果、単点解析では19箇所、また多点解析では連鎖の可能性が示唆される領域を12箇所特定した(LOD>0.59,P<0.05)。最も連鎖の可能性が高かったのは、染色体9q(140.0cM, LOD=1.40,P=0.006)および21q(48.0cM, LOD=1.92,P=0.001)であった。既に報告された日本人2型糖尿病ゲノム解析の結果と一致する領域は上記以外の2箇所であったが、8箇所において他の民族で報告された領域と一致していた。さらに、糖尿病診断時年齢と現在のBMIによりサブ解析を行ったところ、次の3領域でLOD>2.32(nominal P<0.001)が得られた;15q(45.8cM、BMI<22)、21q(48.0cM、BMI<24)および9q(140cM、BMI>21)。一方、現在BMIの対数を用いたQTL解析では12箇所で連鎖の可能性が示唆され、うち8箇所は他の研究グループで報告されている領域と合致していた。今回の結果やその他の報告を総合的に考慮すると2型糖尿病の原因遺伝子あるいは原因SNPはかなり多数存在すると予想される。今後は、複数の報告で連鎖の可能性が否定できないとされている領域を中心にcase-control解析を進める。
切削音や振動が骨伝導により脳内精神活動に与える影響に関する研究

一般のヒトが歯科受診をしぶる原因として、歯の切削によって生じる末梢神経性の痛みが主たる要因ではあるが、切削に用いるタービンやエンジンによって生じる「音」や「振動」も大きな要因と考えられる。そこで、本研究では切削音や振動が患者の精神活動に与える影響を明らかにすることを目的とし、骨導音の影響とストレスという面から研究をすすめた。また、最近は心臓や呼吸器系に障害を持った高齢者の受診が多くなってきている。そこで、歯科治療中の患者の脳内精神活動観測だけでなく全身状態管理法を確立して、医療事故の発生を防止する目的で研究を行なった。被験者は実験の目的を理解して協力を申し出た12名を対象とし、ヘルシンキ宣言に基づいて実験を行なった。生体刺激条件としては超音波スケーラーで最大出力を100%とし、他に70%、50%の三段階を実験条件とした。観察記録装置として、治療状況はUSBカメラで記録し、判定の参考にした。1、確立された方法による生体情報採取:患者がストレスや痛みを感じた際に生じる変化が自律神経系により発現されることから、脳波、心電図、心拍・SpO2、発汗について採取しLabVIEWで解析した。2、空気センサーによる生体情報採取:空気センサーをユニット背部と座面にセットして心音と呼吸変化を採取した。その結果、1、従来、生体情報記録のために用いられてきた方法により、心拍(容積脈波)や呼吸波のピーク間の距離がストレスや疼痛により、変化することが明らかになった。2、このことを、無拘束での生体情報記録を目的とした空気センサーでも記録可能であった。この結果、歯科治療中の患者の脳内精神活動を含む全身状態管理法を確立して、医療事故の発生を防止することが、無拘束で測定する装置で行なえる可能性が見出された。歯科を受診する大多数の患者は歯科治療を好んでいないのが現状である。その原因として歯の切削によって生じる末梢神経性の痛みが主たる要因ではあるが、切削に用いるタービンやエンジンによって生じる「音」や「振動」も大きな要因と考えられる。そこで、本研究では切削音や振動が患者の精神活動に与える影響を明らかにすることを目的とし、特に、音では二つの伝導経路(気導音、骨導音)の影響とストレスという面から研究を進めた。現在、頭蓋骨を通して聴覚器官に働きかける骨伝導音は、鼓膜を通した気導音が聞き取りにくい高齢者向けの電話機や補聴器に応用されてはいる。しかし、市販の骨伝導マイクは、単に音声信号を通信機に伝導するのみで、今回の測定で目的とした周波数解析には不適であった。そこで、市販の咽頭マイクロフォンTVM-1((株)三協特殊無線)を改造して測定に用いることとした。ただ、市販のアンプでは改造マイクロフォンとの周波数の同調が困難であったため、アンプの改造を行った。また最近、奈良先端技術大学院大学鹿野研究室より筋肉伝導マイクの有用性が報告された。そこで、聴診器での音採取に用いられているサスペンデッド・ダイアラームモード方式のマイクロフォンを改造して、筋肉伝導マイクロフォンとアンプを作成した。この結果、骨伝導音や筋肉伝導音を採取・増幅し記録できるシステムの構築を行った結果、今回購入した携帯型多用途生体アンプとの併用による脳波と伝導音の解析が可能になった。歯科を受診する大多数の患者は、歯科治療を好んでいないのが現状である。その原因として、歯の切削によって生じる末梢神経性の痛みが主たる要因ではあるが、切削に用いるタービンやエンジンによって生じる「音」や「振動」も大きな要因と考えられる。本研究では、切削音や振動が患者の精神活動に与える影響を明らかにすることを目的として研究を進めた。

特に、音では二つの伝導経路(気導音、骨導音)のうち、頭蓋骨を通して聴覚器官に働きかける骨導音が脳内精神活動に影響を与える可能性が高いことが、平成16年度に作製した改造咽頭マイクロフォン・アンプを用いた研究で明らかになった。平成17年度は脳内精神活動を探るため多用途生体アンプ:ポリメイトAP1000(デジックス研究所)を用いて、今回の実験に協力してくれた被験者の脳波を単極導出モンタージュ(12ch)法で記録した。その結果、歯の治療中の姿勢での12チャンネルでの脳波記録は、頭皮への電極貼り付けが難しく、安定した結果が得られなかった。そこで、額の部分を用いて右脳・左脳活動を同時に計測できる数値積分方式:2チャンネル携帯型脳波計:ブレインモニタEMS-200(アスク社)を用いて測定した。その結果、330HzのS帯域、813Hzのα帯域そして1330Hzのβ帯域の検出が可能であった。これらの帯域での変化と、思考活動を反映するβ波をもとに、思考活動値(W=Σβ/Σα)処理データを検討することにより、前頭部左右脳波の相違と各波長S波、α波、β波およびW値が、歯科治療状況により変化することが判明した。つまり、歯科治療により左脳部の活動が活発になり、特に、電気エンジンや超音波スケーラーのような振動を与える治療で、α波およびW値の減少が見られたことにより、頭蓋骨を通しての骨伝導による影響が判明した。
頭頸部悪性黒色腫の転移に対するトラニラストの効果に関する検討

【背景】悪性黒色腫は極めて転移を生じやすく、転移した悪性黒色腫は予後不良であるため、臨床上重要な問題となっている。しかしながら、悪性黒色腫の転移の予防・治療に有効な治療薬はいまだない。悪性黒色腫の第一選択治療は手術であるが、その術式は、悪性黒色腫自体にメスをいれて転移することがないよう、悪性黒色腫周囲の正常組織の一部と一緒に摘出する方法がとられている。特に頭頸部の手術では術後のケロイド・肥厚性瘢痕が美容上の非常に大きな問題ともなっている。トラニラストは広く用いられている安全性の高い薬剤である。近年、in vitroの研究により、癌の転移を抑制する可能性が示唆されている。一方で、トラニラストはケロイド・肥厚性癒痕に対しても内服薬の中で唯一適応を有する薬剤として臨床応用されている。以上のことから、トラニラストは術後の転移予防・治療および術後のケロイド予防も期待できる副作用の少ない安全な悪性黒色腫転移治療薬となりえる可能性がある。しかしながら、悪性黒色腫の転移に対するトラニラストの効果を調べた報告はない。そこで、本研究では、トラニラストが悪性黒色腫の転移治療に応用できるか検討することを目的とする。【方法および結果】MTTアッセイ解析により、ヒト悪性黒色腫細胞株A2058細胞のviabilityに対するトラニラストの毒性について調べた。トラニラスト処理24時間後にMTTアッセイを行った結果、トラニラストの最終濃度が300μMより高濃度において、A2058細胞のviabilityが抑制された。このことから、A2058細胞に毒性のない200nMのトラニラストの濃度でA2058細胞の運動能に影響を及ぼすかスクラッチアッセイにより検討を行った。トラニラスト処理後12、18、24時間後のA2058細胞の運動能に対する影響を調べたが、いずれの時間においてもトラニラストは細胞の運動能に影響を及ぼさなかった。今後は、トラニラストが悪性黒色腫の浸潤能に及ぼす影響についても検討を行いたい。
イギリスの家族介護者の担う介護労仂の経済的価値に関する実証的研究

3年にわたる作業によって以下の知見を得た。イギリスでは、推計によると570万人(95年)の在宅介護者を数える。これは、6軒に1軒の世帯に1人の在宅介護者を擁することになる。570万のうち170万人の在宅介護者は、週に少なくとも20時間をかいごにあてる。同じく85万5000人の在宅介護者は、週50時間以上を介護にあてる。在宅介護者は、家族と地域に多大な貢献をする。これは、はかり知れない社会的かつ情緒的な貢献であるばかりでなく、およそ340億ポンドに相当する労働である。本研究は、340億ポンドを在宅介護者に支払うべきだと主張するわけでなく、介護労働の経済的な価値と政策上の評価との格差の縮小を求めるものである。障害者や高齢者の関心を承認することとあわせて、在宅介護者のニーズに正当に関心を払わなければならない。いいかえれば介護の当事者双方に関心を払う政策の立案である。在宅介護者に関心をあてた政策とはなにか。それは、サービスによる支援、雇用関係の施策及び所得給付の3つからなる。コミュニティケアに関する90年法、在宅介護者の承認とサービスに関する95年法、在宅介護者と障害児に関する2000年法は、いずれも在宅介護者の「生活の質」(QOL)の改善を目標におく立法であり、これらを根拠法にする施策の展開状況を検討するとき、在宅介護者のニーズに的を絞った施策の一定の実効性を認めることができる。本年度は、3年に及ぶ計画の初年度として2つの作業を課した。その1つは、家族介護者の規模と構成についての検討、いまひとつは、家族介護者の担う介護労働の時間分布と平均労働時間及び総労働時間の算出である。このうち前者については、中央人口統計調査局「国勢調査」85年版と90年版及び95年版を手掛かりに全国レベルの計数をはじき出した上で、これをもとに3つの自治体(ロンドン・サットン自治区、イーストサセックス州、ポーイス州)における家族介護者の規模と構成について推計し、あわせてアメリカをはじめオーストラリア、ニュージーランド等の諸国における家族介護者の規模と構成との比較をおこなった。この種の国際比較の試みは、国際的にみても数少ない作業のひとつでる。いまひとつの作業については、家族介護者の担う介護労働の経済的価値の算定方法について諸家の見解を整理しはじめている段階であり、今のところ定まった結論を得ていない。議論は、イギリスはもとよりアメリカ、オーストラリア及びニュージーランドなどの国々でもおこなわれ、これといった定説のない状況である。また、介護労働を直接の主題にしていないものの、家事労働の経済的な価値の算定になると、わが国も含めてさらに多くの議論があり、これらの整理にも取りかかりはじめたところである。今後はこれらの議論を整理した上で私見を得、介護労働の経済的な価値の算定に進みたいと考えている。本年度は、3年に及ぶ計画の第2年度として3つの作業を行った。そのひとつは、これまで収集した4600点以上の文献を一覧として整理し公表したことである。いまひとつは、介護労働の経済的価値についてイギリスのある地方自治体を事例に算定し、その結果を単著に収録し公表したことである。最後に、介護労働の経済的価値の算定作業の政策的な含意とこれをめぐるイギリス及び国際的な動向について文献を収集し、その検討に着手したことである。この種の算定作業は、もっぱら学問的な関心にとどまるわけではない。介護労働の経済的な価値の算定を通して家族介護者支援策の理論的な拠りどころを得ることこそ、見おとすことのできない意義がある。本研究では、こうした関心に沿って関係する文献の収集にのり出したところであり、収集の対象国は、イギリスにおける議論の位置を探るためにもイギリスはもとよりアメリカ、オーストラリア、フランス及びスウェーデンなどである。

提出されている論点は、収集した文献を見る限り家族介護者の年金受給権と介護期間の算定、介護費用の補填と介護期間の所得補償、休憩請求権の制度化と休憩の享受による介護時間の短縮におよぶ。これらの論点の立ち入った検討は、文献の一層の収集とあわせて13年度の課題である。3年にわたる作業によって以下の知見を得た。イギリスでは、推計によると570万人(95年)の在宅介護者を数える。これは、6軒に1軒の世帯に1人の在宅介護者を擁することになる。570万のうち170万人の在宅介護者は、週に少なくとも20時間をかいごにあてる。同じく85万5000人の在宅介護者は、週50時間以上を介護にあてる。在宅介護者は、家族と地域に多大な貢献をする。これは、はかり知れない社会的かつ情緒的な貢献であるばかりでなく、およそ340億ポンドに相当する労働である。本研究は、340億ポンドを在宅介護者に支払うべきだと主張するわけでなく、介護労働の経済的な価値と政策上の評価との格差の縮小を求めるものである。障害者や高齢者の関心を承認することとあわせて、在宅介護者のニーズに正当に関心を払わなければならない。いいかえれば介護の当事者双方に関心を払う政策の立案である。在宅介護者に関心をあてた政策とはなにか。それは、サービスによる支援、雇用関係の施策及び所得給付の3つからなる。コミュニティケアに関する90年法、在宅介護者の承認とサービスに関する95年法、在宅介護者と障害児に関する2000年法は、いずれも在宅介護者の「生活の質」(QOL)の改善を目標におく立法であり、これらを根拠法にする施策の展開状況を検討するとき、在宅介護者のニーズに的を絞った施策の一定の実効性を認めることができる。
エネルギー循環利用を考慮した冷暖房のための中・長期蓄熱システムに関する研究

年間サイクルのエネルギー循環を考慮した冷暖房のための中・長期蓄熱の効果に関する実験と解析を行った。実験は土壌に埋設する形態によって垂直U字管方式と水平管方式の2種類について行った。また、解析については実験のシミュレーションと線源理論による相互干渉を考慮した解析法の2種類の分野について検討した。その主な内容と成果は次のとおりである。冬期における土壌熱源ヒートポンプによる実大規模の暖房実験と夏期における土壌内のコイルにブラインを循環させた循環自然冷房に関する実験結果から、土壌冷・温蓄熱の有効性と省エネルギー性を明らかにすることができた。特に、夏期の循環冷房の可能性が明らかになった。さらに、水平埋設管によるヒートポンプ暖房実験については、3種類の形状について中・長期蓄熱としての省エネルギー性を検討した。単位長さ当たりの採熱率は、垂直U字管方式に劣らない値を示し、土の温度回復も次の実験に影響を与えない程度に回復することがわかった。シミュレーション解析については土壌の伝熱機構を表わす数式モデルを作成し、数値計算を行った。計算結果は実験結果と必ずしも一致しなかったが、その特性の傾向は同じであった。さらに、数値シミュレーション法は単管には適用できてもいろいろな配列の複数管に対しては殆ど適用不可能であることから、線源理論を用いた伝熱解析を行った。すなわち、複数管を線源に置き換えて重ね合わせの原理を用いて、土と埋設管の伝熱現象を解明しようとするものである。今回の解析によって一般性のある実用的な解法を提案することができた。中・長期蓄熱システムとして地中方式と帯水層方式を取り上げ、温熱利用と冷熱利用の蓄熱効果に関する解析を行った。地中方式は深さ30mの埋設管に冬季間冷水を循環させて冷熱貯蔵を行い、夏季に温熱貯蔵を行う年間サイクルの蓄熱を想定した。シミュレーションの結果、年間の循環蓄熱が有効であることが分かった。その効果は熱負荷の状況、土壌の温熱特性、冷暖房の温度条件よって著しく異なることが判明した。給湯と冷暖房の全熱負荷がほぼ等しく、土壌の年平均温度が冷暖房の設定温度の平均値に近ければ近いほど効果的である。帯水層方式については、温熱貯蔵のシミュレーションを行った。北海道リハビリーの実在の施設を模擬し、100mの深さに帯水層が存在するものとして計算を行った。夏季に低温水を注入し、冬季に汲み上げることによって、自然温度基準の熱回収率を求めた。熱回収率は注入水量、帯水層の厚さ、相当熱伝導率などに左右されるが、注入温度には影響されないことが分かった。実存の施設と同じ条件を設定した場合、熱回収率はおよそ60%となり、その有効性が示された。8年間の実測では熱回収率は約50%であるので計算値は若干高いが、傾向は相似しているものと言える。実験は地中方式の蓄熱特性について行った。埋設管の形態は3種類の30m深さの垂直管である。U字管、2対U字管および井戸型であり、110mmのボアホールに設置して埋め戻した。U字管などの口径、間隔などは両者をパラメーターとした解析結果から適当な寸法を設定した。平成5年12月からの実験の結果、冷蓄熱量は埋設管の形状にあまり影響されず、ボアホールの大きさで決まることが判明した。蓄熱量(採熱量)はボアホール1m当たり30-40Wであり、計算の値よりも大きめにでている。中・長期蓄熱として地中埋設管方式と帯水層方式を取り上げている。本年度は平成5年度に建設した施設を用いて実験を行い、埋設管方式については夏と冬のエネルギー循環を考慮した冷暖房サイクルの可能性を実験的に明らかにした。

実験は札幌の気象条件下で行ったものであるが、冬期のヒートポンプによる暖房運転の結果として得られる冷熱貯蔵が夏期の冷房熱源として十分賄い得ることがわかった。この結果は平成5年度のシミュレーション結果とも一致するものであるが、平成7年度において、さらに詳細なシミュレーションを行い、土壌の熱特性、循環温度、特に埋設間隔(相互干渉の影響)が蓄熱効果に与える影響を定量的に明らかにした。帯水層方式については本年度は帯水層厚さ、流入量、流入温度および帯水層内部と周囲の熱伝導性が熱回収率に及ぼす影響を明らかにし、最大温水到達半径が帯水層厚さ約2倍の組み合わせで最大値が得られることを明らかにした。次いで、自然の流れが存在するときの熱回収率の低減について理論的に明らかにし、年間約5m以下の移動速度であれば、長期蓄熱が可能であることを明らかにした。なお、帯水層について、温熱と冷熱の両者の循環利用に関する検討を行い、熱的にマクロな平衡を保ちながら、冷暖房に応用することの重要性を強調している。研究は3年目をむかえ、まとめの段階に入った。実験は本年度も引き続き行い、土壌蓄熱の効果について検討を行った。垂直U字管による冬期のヒートポンプ暖房に関する実験と夏期のブライン循環冷房の実験が中心の課題である。実験結果については年間サイクルのエネルギー循環利用を前提とする冬期の土壌熱源ヒートポンプによる実大規模の暖房実験結果と夏期においては長期的に冷熱貯蔵した土壌内のコイルにブラインを循環させた循環自然冷房に関する実験結果から、土壌蓄熱の有効性と省エネルギー性を明らかにすることができた。さらに、本年度は水平埋設管によるヒートポンプ暖房実験を併せて行い、中・長期蓄熱としての省エネルギー性を検討した。シミュレーション解析については土壌の伝熱機構を表わす数式モデルを作成し、数値計算を行った。計算結果は実験結果と必ずしも一致しなかったが、その特性の傾向は同じであった。さらに、数値シミュレーション法は単管には適用できてもいろいろな配列の複数管に対しては殆ど適用不可能であることから、線源理論を用いた伝熱解析を行った。すなわち、複数管を線源に置き換えて重ね合わせの原理を用いて、土と埋設管の伝熱現象を解明しようとするものである。今回の解析によって一般性のある実用的な解法が提案できたと考えている。
糖尿病性心筋症の発症における12-Lipoxygenaseのシグナル伝達機構

糖尿病患者は、冠動脈疾患を伴わず心不全に至る糖尿病性心筋症の存在が提唱されているが、病態は不明である。本研究にて、12-リポキシゲナーゼ(12-LOX)の糖尿病性心筋症への影響を検討した。糖尿病モデルマウス(db/db)と12-LOX欠損マウスを使用し、db/dbでは心機能低下と12-LOXの発現上昇、線維化、酸化ストレスの上昇を認めた。しかし、12-LOX欠損-STZマウスではそれらが抑制されていた。12-LOXは糖尿病性心筋症の発症進展に関わる炎症、線維化および酸化ストレスに関与する重要な因子であることを実証した。また、糖尿病合併心不全患者の心臓での12-LOXや線維化の上昇も認められた。db/dbマウスの心臓における心臓における12-LOXの発現を免疫染色にて検証を行った。コントロールマウスの心臓に比べて、心筋細胞特異的な12-LOXの発現亢進を確認した。今後は、高脂肪食負荷を行った12-LOXTgマウスや12-LOXKOマウスにおける心臓での12-LOXの役割りについて検証、解析を行っていきたい。1年目は、1030週齢のdb/dbマウス(2型糖尿病モデルマウス)の心臓での12-LOXの発現を、免疫染色やウェスタンブロッティング法にて確認しました。2年目は、12-LOXTgマウスとdb/dbマウス、及び12-LOXKOマウスとdb/dbマウスを交配させることで心臓特異的12-LOX強発現の2型糖尿病モデルマウス(12-LOXTg-db/db)と、12-LOXKOの2型糖尿病モデルマウス(12-LOXKO-db/db)の作成に向け実験を行いました。10週齢のdb/dbマウスに12-LOX酵素阻害薬(cinnamyl-3,4-dihydroxy-α-cyanocinnamate;CDC)を4週から最大20週間皮下投与とし、心臓超音波検査や炎症性サイトカインや線維化マーカー,酸化ストレスの検証を行い心保護の検証を経時的に行う。この実験によって12-LOX阻害薬が、糖尿病合併心不全の新たな治療薬となる可能性が期待される。12-LOXTgマウスとdb/dbマウス、及び12-LOXKOマウスとdb/dbマウスを交配させることで心臓特異的12-LOX強発現の2型糖尿病モデルマウス(12-LOXTg-db/db)と、12-LOXKOの2型糖尿病モデルマウス(12-LOXKO-db/db)を作成を試みましたが、交配がうまく進まず、断念致しました。3年目は、酸化ストレスマーカーとしてフリーラジカル解析装置のFREE Carrio Duoを購入し、酸化ストレスの検討を行いう。また、ヒトの剖検心における12-LOXの発現の検証も行った。糖尿病合併心不全患者の心臓では、12-LOXの発現は心筋細胞特異的に発現が亢進していた。また、血管周囲や間質の線維化の亢進もMasson染色にて確認された。今後、H27年度の研究計画をH28年度も同様に行っていきます。また、糖尿病性心筋症における12-LOXの役割りについて、ヒト(2型糖尿病合併心不全)での検証も行っていきたいと考えています。当院における倫理委員会への申請と受理は完了しています。ヒトの剖検心臓を使用し12-LOXの発現を検証していきます。ヒトの心臓の免疫染色にかかる費用はマウスに使用する抗体や消耗品と同じ物品が使用できます。費用は免疫染色にかかるもののみとなっております。現在、10-30週齢のコントロールマウス(野生型マウス)、高脂肪食マウス、12-LOXTg-高脂肪食、及び12-LOXKO-高脂肪食間における経時的心機能評価をVevo770 System(visual sonics)を用いて、心臓超音波検査を行っています。

現在は順調に進んでいます。また、ヒトにおける12ーLOXの研究として、糖尿病合併心不全患者の剖検心における12-LOX染色も行っており順調に検証を行っております。糖尿病H27年度に行っている研究計画が終わっていないため、引き続きH28年度も同様に行っていきます。マウスの交配に時間がかかり実験がやや遅れていたためと思われます。H27年度に行っている研究計画が終わっていないため、引き続きH28年度も同様に行っていきます。各種抗体やPCR,ウェスタンブロッティング、免疫染色等に使用していきます。現在、高脂肪食による実験を行っており今後は順調と思われます。