hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
実用色彩調和論を応用したカラーマッチングの色彩学的研究

1.実験に使用する非接触型分光測色器「SOCK II」の測色精度の検証と、安定した再現性のある測色データを得るための最適測定条件について検討したところ、機器の測色精度には問題はないが、試料に対する測定条件が変化すると誤差が大きくなるため、測定時には試料の位置を正確に固定する必要があることがわかった。2.前述の測色器により19歳-21歳の男女100名を被験者として、皮膚色・歯冠色の顔面各部の測色と、顔写真の撮影を行った。測色データから皮膚色・歯冠色の波長成分を解析し、顔面皮膚色および歯冠色の代表的な色調を暖色系・寒色系で各5パターン設定した。また、得られたデータをより汎用性の高いデータとして臨床に活用できるように互換性を考慮し、もっとも臨床で利用されているVITAのClassical Shade Guideについても測色をし、キャリブレーション動作のための分光反射率データを採取した。3.ホワイトニング施術後の漂白効果シミュレート画像として、画像編集ソフト「adobe Photoshop」の色調補正機能を用いて歯冠色のみ明度を10ずつ50まで、寒色系(80)および暖色系(81)のレンズフィルタを10%ずつ30%まで適用させた画像を作成し、色覚正常な男女10名に提示して似合いの評定をさせ、これにより各顔面皮膚色にどのパターンの歯冠色が調和するのか、その限界値を調査した。今後はこれらのデータを応用して、既存の一般的な表色系や評価式でなく、各皮膚色にはどの歯冠色が調和するかが容易に判断できる独自の評価式を設定し、汎用性の高いデンタルカラーコーディネート用のシェードガイドを製作する予定である。(日本色彩学会第33回全国大会にて口演発表)パーソナルカラー分析や色彩計画のための実用的なカラーファンとして,現在様々な製品が存在するが,米国のRobert door氏により1928年に開発された実用色彩調和論「Blue Base/Yellow Base color system^<【○!R】>」はアメリカおよび日本の市場に導入・活用されて以来,かなりの成果を挙げている。本研究では,米国RENAE KNAPP school of color認定マスターカラープロデューサー^<TM>高松智子氏の判定による被験者のベースカラーの分析,分光測色計での肌色の測色を行い,この理論による分析方法の有効性を検討した。その結果,カラー・パーソナリティ・テストおよび肌測色値などのデータと相関が認められ,本分析法の有意性が示された。しかし,Blueの要素が80%未満の被験者については,カラー・パーソナリティ・テストの結果がYellowの要素が強かったにもかかわらず,判定者が毛髪色・顔面色(特に頬部の血色)などの色素を考慮した結果,主観的にBlue Baseと判定されたケースが多かった事より,色彩学的訓練が十分になされ,かつ本実用色彩調和論に基づき青と黄色の色素の物理的比重を見極めることが出来る人間でなければベースカラー判定は困難であるという結論に至った。今後は,「ムーン・スペンサーの色彩調和論」と「ジャッドの原理」などの理論が,顔貌の色彩調和感を説明できるか否かを検討する。また,非接触分光測色器により改めて顔面各部の測色を行い,画像シミュレーションを用いた評価実験を行う予定である。
双極性障害の病態に関する分子生物学的研究

DSM-IVに基づく双極性障害、大うつ病性障害患者と、健常対照者を対象として、血小板内カルシウム(Ca)貯蔵部位である小胞体膜に存在するCa-ATPaseポンプ(SERCA)機能を検討し、プロテインキナーゼC(PKC)系やカルモジュリン(CaM)系調節機構との関連を検討した。SERCA機能の検討では、thapsigargin(TG)添加で出現する一過性細胞質内Ca増加(TCI)と容量依存性Ca流入(CCE)を計測した。結果は、TGによる小胞体からのTCI、CCEとも3群間で有意差はみられなかった。双極性障害のCCEについては、PKC刺激による抑制効果が亢進し、PKC阻害による増強効果が減弱していた。CaM阻害では、3群間に有意差は認められなかった。従って、双極性障害では細胞内Ca環境の恒常性を保つために、PKC系が代償性に亢進し、その結果、PKC系によるCCIの抑制効果が亢進した可能性が考えられる。双極性障害とダリエ病を合併した女性例の血液からRNAを抽出し、SERCAをコードするATP2A2遺伝子を検出してクローニングを行った。得られたATP2A2遺伝子を双方向からdirect sequenceし、変異を検索したが、明らかな変異は見いだせなかった。これまでの報告と併せると、ATP2A2遺伝子変異自体が双極性障害の病態に直接関係している可能性は低いと考えられる。双極性障害で疾患特異的にアゴニスト刺激性血小板内Ca濃度増加反応の亢進所見が認められることから、小胞体ストレス反応に関係し、最近、双極性障害発症の危険因子となりうることで注目されていてるXBP1遺伝子多型について、まずは健常者(男性117例、女性56例、年齢32.3±8.1歳)を対象にCa反応どの関連を検討したが、有意な関連は認められなかった。DSM-IVに基づく双極性障害、大うつ病性障害患者と、年齢・性別を一致させた健常対照者を対象として、血小板内Ca貯蔵部位である小胞体膜に存在するCa-ATPaseポンプ(SERCA)機能を検討し、プロテインキナーゼC(PKC)系やカルモジュリン(CaM)系調節機構との関連を検討した。SERCA機能の検討では、細胞内Ca濃度をフリーにして、thapsigargin(TG)添加で出現する一過性細胞質内Ca増加(TCI)とその後細胞外に1mMのCaを添加して得られる容量依存性Ca流入(CCE)を計測した。さらに、PKC刺激薬、PKC阻害薬、またはCaM阻害薬を添加した際の2つのCa反応に対する影響についても検討した。双極性障害とダリエ病を合併した女性例の血液からRNAを抽出し、RT-PCR法で、SERCAをコードするATP2A2遺伝子を検出してクローニングを行った。プライマーを設計して、得られたATP2A2遺伝子を双方向からdirect sequenceし、変異を検索したが、明らかな変異は見いだせなかった。

これまでの報告と併せると、ATP2A2遺伝子変異自体が双極性障害の病態に直接関係している可能性は低いと考えられる。双極性障害で疾患特異的にアゴニスト刺激性血小板内カルシウム(Ca)濃度増加反応の亢進所見が認められることから、小胞体ストレス反応に関係し、最近、双極性障害発症の危険因子となりうることで注目されていてるXBP1遺伝子多型について、まずは健常者を対象にCa反応との関連あるいは人格特性との関連を検討した。対象は、健常成人173例(男性117例、女性56例、年齢32.3±8.1歳)であり、血液採取に当たっては研究の趣旨を十分に説明し、文書による同意を得た。本研究は、北海道大学大学院医学研究科倫理委員会の承認を受けている。Ca反応の測定では、10μMセロトニン刺激による最大ピーク濃度から静止時濃度の差を反応の大きさとした。XBP1遺伝子多型のタイピングには、Taq Man法を用い、Hashimotoらの方法により行った。人格特性の測定には自己記入式質問紙法人格検査(TCI 125項目短縮版ならびにNEO-FFI)を用いた。セロトニン刺激性Ca反応は健常者群内でもかなりばらつきが大きく、双極性障害群とのオーバーラップもみられることから、今回、健常者におけるCa反応とXBP1遺伝子多型との関連を検討したが、有意な関連は認められなかった。また、循環気質などの人格特性と双極性障害発症との関連も古くから指摘されているが、今回の健常者を対象とした検討では、二つの代表的な人格検査であるTCI、NEO-FFIを用いても、XBP1多型と各下位尺度得点との間に有意な関連はみられなかった。今後は、双極性障害を含めた気分障害患者を対象としたXBP1遺伝子多型とCa反応、あるいは人格特性との関連の検討が必要である。また、双極性障害における治療反応性との関連についても併せて、検討を進めていく予定である。
新規樹立したSnail高発現OSCC細胞株を用いた間葉上皮転換機構の解明

口腔癌は稀少がんであるが、進展症例では整容的問題、摂食会話などの機能に大きな影響を及ぼし、肺など遠隔臓器への転移を起こすものも少なくない。特に最も症例数の多い舌癌では頸部リンパ節転移、肺転移などを起こすもの多く、不幸な経過を辿ることもある。このように予後を規定するのは転移を制御できるかどうかにかかっている。他の多くの動物実験で癌の転移メカニズム解明のためにさまざまな実験が行われているが、それぞれの段階で未だコンセンサスを得ている因子を発見できていない。癌細胞が移動を開始する際には上皮間葉転換(EMT)を起こすと言われており、その中心となる因子は転写因子Snailの関与が報告されている。そこで本研究ではSnailを導入し、安定的にSnail発現しているHSC-4口腔癌細胞株(Snail/HSC-4細胞)をヌードマウスの舌に移植して、腫瘍形成、頸部リンパ節、遠隔臓器への転移過程の中でそれぞれの原発巣、所属リンパ節、遠隔臓器からそれぞれ細胞を採取して、新たに細胞株を樹立してマイクロアレイを用いて網羅的に遺伝子解析を勧めていくことを計画した。Snail/HSC-4細胞10×105個をヌードマウス舌に移植し34週間程度で腫瘍形成を認め、2ヶ月程度でかなりの腫瘍増大が見られた。しかしながら原発巣の形成、増大は認めるものの、頸部リンパ節や他の臓器への転移巣形成は現在のところ認められていない。Snailの高発現だけでは転移を促進しない結果が得られたが、その他の因子について現在検索中である。現在大学院時代に作成した口腔癌細胞株HSC-4細胞にSnail遺伝子を導入したSnail/HSC-4細胞株を用いて、ヌードマウス舌に移植を行っている。マウスにはなるべく苦痛を軽減できるようにケタミンを使用した上で移植実験を行っている。転移を起こす上皮系の癌細胞が、間葉系癌細胞と形を変え原発巣を離れて血管やリンパ管へ侵入する。この時の変化をepitherial mesenchymal transition(EMT)といい、血管内から新たな遠隔臓器へ転移を起こす過程をmesenchymal epitheilai transition(MET)の2つの過程を経ることが考えられている。EMTを起こすときには多くの実験で働くタンパクについてはわかってきているが、METを起こす際にどのような遺伝子やタンパク質が発現しているのかについては詳細な検討はなされておらず、今回の実験でそれらが分子状的治療薬の対象となりえるかを調べることにある。舌にSnail/HSC-4細胞による腫瘍を形成させ、転移巣として頸部リンパ節へ転移が見られた場合に、両者を取り出し培養、それぞれの細胞を増やしたのちに、DNAマイクロアレイを用いて比較する。この時に大きな変化の見られる発現遺伝子、発現タンパクがMETに関与している可能性が非常に高い。現在、ヌードマウス舌にSnail/HSC-4細胞を移植し、舌への腫瘍形成を見ている段階であり、頸部へのリンパ節転移が認められればこれらのマイクロアレイの検査や免疫染色による実験を行う予定である。ヌードマウスを用いる際になるべく実験動物への苦痛を減らすために、麻薬を用いた実験が推奨されており、その実験用麻薬を取り扱うための免許が必要となる。この免許は各県の知事により許可されるが、この申請にかなりの時間を費やしてしまったため当初の計画よりやや遅れている状況にある舌扁平上皮癌細胞株であるHSCー4細胞にSnail遺伝子を導入し、Snailを高発現している口腔癌細胞株Snail/HSCー4を作成、ヌードマウスの舌に移植し、腫瘍形成したのちに頸部リンパ節転移をさせ、原発部と転移部に形成された腫瘍を取り出し、それぞれ培養して新たに細胞株を樹立させ、それぞれ発現遺伝子を比較して、それらの発現に差がある分子についてDNAマイクロアレイを用いて検索し、分子標的薬の開発を目的としていた。しかしながら、Snail/HSCー4細胞の舌への腫瘍形成能は認めるものの、頸部リンパ節や遠隔臓器への転移は認められなかった。以前われわれの書いた論文を含め、基礎研究において、Snailを発現している細胞ではinvasion asseyなどを行ったもので細胞遊走能、転移能の上昇が認められる報告が多いが、今回の実験から実際の生体内ではSnailが高発現しているのみでは転移が認められないため、腫瘍形成後に外部からの刺激(例として腫瘍を注射針で突くなど)を与えて転移させやすい状況を作る予定である。これは実際の口腔癌患者では、義歯による創の形成が契機となって腫瘍を形成したのちに、くり返し同部分に外的な機械的刺激が加わることで、より悪性化が見られやすいという経験に基づく。このように新たな実験手順を追加することで、より実際の腫瘍が悪性形質を獲得していく過程に近いモデルを新たに作ることができると考えられる。Snail高発現HSC-4細胞株をヌードマウス舌に移植したが、舌への腫瘍形成は認めるが、遠隔臓器への転移は認められなかった。そこで導入した遺伝子がきちんと働いているかを検証する必要があるため、これらの検索を行い、現在導入遺伝子については問題ないことを確認している悪性腫瘍に罹患した患者の生存を大きく左右するのは遠隔臓器への転移の有無である。

現在、転移を起こすメカニズムはEMT(epithelial-mesenchymal transition:上皮間葉転換)を起こした腫瘍細胞が原発巣から離れ、血管やリンパ管を通路として離れた臓器に辿り着いたのちに、MET(mesenchymal-epithelial transition:間葉上皮転換)を起こして再度定着し、腫瘍塊を形成すると考えられている。しかしながら、実際の生体内において腫瘍細胞が血管やリンパ管内に進入し、METを起こして定着する詳細なメカニズムや中心となる因子についての解明はほとんど進んでいない。腫瘍細胞が転移を起こす為には転写因子Snailの発現が必須であるという報告が多いが、Snail蛋白の働きのみで管内への侵入と管外への遊走、遠隔臓器への定着という一連の過程を説明するのは困難と思われる。本申請では実験動物を用いて、これらの詳細なメカニズムや発現因子を解明し新規の分子標的治療への応用を目的とする。口腔癌細胞株であるHSC-4細胞株に、転写因子Snailを導入して、細胞間接着機能を弱めたSnail-HSC-4細胞株を作成し、ヌードマウスの舌に移植した。舌での腫瘍形成は良好であったが、現在のところ、頸部リンパ節やその他遠隔臓器への転移は認められていない。当初の予定より研究代表者に他業務が予想以上に入り、結果として課題が遅れてしまっている。口腔癌は稀少がんであるが、進展症例では整容的問題、摂食会話などの機能に大きな影響を及ぼし、肺など遠隔臓器への転移を起こすものも少なくない。特に最も症例数の多い舌癌では頸部リンパ節転移、肺転移などを起こすもの多く、不幸な経過を辿ることもある。このように予後を規定するのは転移を制御できるかどうかにかかっている。他の多くの動物実験で癌の転移メカニズム解明のためにさまざまな実験が行われているが、それぞれの段階で未だコンセンサスを得ている因子を発見できていない。癌細胞が移動を開始する際には上皮間葉転換(EMT)を起こすと言われており、その中心となる因子は転写因子Snailの関与が報告されている。そこで本研究ではSnailを導入し、安定的にSnail発現しているHSC-4口腔癌細胞株(Snail/HSC-4細胞)をヌードマウスの舌に移植して、腫瘍形成、頸部リンパ節、遠隔臓器への転移過程の中でそれぞれの原発巣、所属リンパ節、遠隔臓器からそれぞれ細胞を採取して、新たに細胞株を樹立してマイクロアレイを用いて網羅的に遺伝子解析を勧めていくことを計画した。Snail/HSC-4細胞10×105個をヌードマウス舌に移植し34週間程度で腫瘍形成を認め、2ヶ月程度でかなりの腫瘍増大が見られた。しかしながら原発巣の形成、増大は認めるものの、頸部リンパ節や他の臓器への転移巣形成は現在のところ認められていない。Snailの高発現だけでは転移を促進しない結果が得られたが、その他の因子について現在検索中である。現在のところ、ヌードマウスの舌に腫瘍形成ができることまでは確認ができており、進行状況の遅れがある以外は、上記の概要に沿って進めていくだけと思われる。基礎研究においては、Snailが細胞接着因子であるE-カドヘリンの発現を低下させ、migration assey,invasion asseyにて遊走能、浸潤能の上昇が認められる報告が多い。しかし、より実際の生体では癌細胞が転移を起こす際に、Snailとは別に新たな因子が必要であることが予想される。
全国出土和鏡集成

本研究は、わが国における遺跡出土の和鏡(9世紀以降古代から中世に亙り国内で製作された鏡)を集成し、和鏡の型式変遷および精神文化における和鏡の位置付けを、総合的かつ詳細に分析することを目的とする。資料化した出土和鏡は約1000遺跡1700余面に至り、その情報はデータベースを構築し管理・活用に備えた。近年の埋蔵文化財調査の増加に伴い、各地から和鏡が検出されているが、それらを集成した研究は未だなく、以下に示した観点から本集成的研究を完成させる意義は大きい。第一に、紀年銘を有する和鏡以外に土器等の遺物と供伴する和鏡を加える点である。供伴遺物からの年代推定によって、和鏡の編年(型式変遷)および地域性に関する研究の充実を図ることができ、本資料集成は和鏡の成立・発展・変容を解明するための基礎的研究となる。また、その地域的相違や年代的差異のみならず、入手経路をはじめとする当時の政治・経済状況、あるいは各地域の社会状況を考察できる点を特質とする。第二に、出土和鏡の遺存・出土状況等の分析から、古代・中世の精神文化における「鏡」の位相を明確にできる点である。和鏡は深い精神性を包含する遺物であり、日本人の宗教・信仰史を繙く重要資料である。その詳細な研究は学際的視点を特色とする祭祀考古学の立場からの充分な解明が必要で、山岳信仰・修験道等の関連遺跡、神道・仏教・陰陽道での受容・展開を考慮した研究の推進が求められる。その課程かで、周知の現象の歴史的背景についても究明できるだろう。また和鏡は、わが国金属工芸の中でも刀剣と双璧をなす質量を誇るにも関わらず、依然として充分に研究されていない。今回の集成から明らかにされる鏡背の文様構成、鏡制の型式変化等に関する情報は、宗教信仰史・金属工芸史など学際的研究を駆使する祭祀考古学にとっても重要な資料となろう。平成16年度は、北海道・東北・関東・甲信越・東海地方の出土和鏡についての資料収集を行った。特に既存の報告書・県誌・市町村誌・月刊文化財情報等による情報収集と並行して各地に出向き、熟覧観察・写真撮影・採拓・断面実測を行った。調査で重きを置いているのは、特に時代判定の基準である形状変化を示す断面実測であり、既存の報告に無いものが多いこともあって入念に実施した。北海道地方では、出土和鏡群の中で特異な位置を占める余市町大川遺跡の資料、アイヌ墓より検出され、これまで資料化されたことのない寿都町太川左岸1号墳の資料化も実施した。東北地方では特に山形県出羽三山神社所蔵の御手洗池検出和鏡190面(重要文化財)の再資料化を行うことができた。これと合わせて神社が仙台市博物館に寄託している資料についても資料化を行った。所謂羽黒鏡の詳細について写真・拓本に合わせて断面実測図を加味できたことは、極めて意義深い学術情報を提供することとなった。その他、東北地方については各地の研究者の協力を得て資料収集を行った。北関東・関東・甲信越地方については概に資料化している部分もあり、特に報告書等の書籍からのデータ化を中心に作業を行った。東海地方では、静岡県については研究者の協力を仰ぎ、県内の情報を収集できた。海洋信仰との関連性が強い伊勢湾入り口に浮かぶ三重県鳥羽市神島に所在する八代神社収蔵の64面について資料化を実施。詳細な情報を入手し、データ化することができた。

平成17年度は、近畿中国、四国地方の出土和鏡についての資料収集を行った。特に既存の報告書・県誌・市町村誌・『月刊文化財情報』等からの情報収集と並行して各地に出向き、熟覧観察・写真撮影・採拓・断面実測を行った。調査で重きを置いた点は、時代判定の基準である形状変化を示す断面実測であり、既存の報告に無いものが多いこともあり入念に実施した。近畿地方では、和歌山県を中心に調査を実施した。7月は、和歌山市立博物館、紀州風土記の丘資料館において、西庄遺跡・大藪遺跡・岩黒聖社・木の本経塚・聖社出土和鏡、さらに平成10年度に発見された橋本市隅田八幡神社経塚出土和鏡20面の写真撮影、採拓、実測を実施し資料化を図った。9月には、これまで殆ど周知されていない田辺市本宮町四村神社に奉納されている出土和鏡の一括資料42面について資料化を実施した。本資料は『本宮町史』文化財編に若干記載されるのみで実態は不明であったが、今回その詳細を明らかにすることは意義深い。鏡は概ね13世紀15世紀に比定できるもので、擬漢式鏡がその主体を成す。火災による容着が著しい資料も散見された。また11月には、高知県大川村に所在する和鏡群について調査した。大川村には、旧村域が早明浦ダムの建設によって水没する際に各神社に奉納されていた鏡が約800面存在すると言われている。そのうち大川村教育委員会の保管する27面(井野川地主神社旧蔵8面、新田神社旧蔵8面、大藪白髭神社旧蔵5面、春日神社旧蔵3面、川崎地主神社旧蔵1面、朝谷地主神社旧蔵1面、中切八坂神社旧蔵1面)について資料化した。春日神社旧蔵鏡は江戸期のものであったが、全体としては1415世紀の鏡群式に倣う中世和鏡群である。更には、当該地域の鏡信仰の風土的・歴史的環境を調査する過程で、いの町に所在する若宮八幡宮蔵鏡79面についても資料化する機会を得た。多くは江戸期の柄鏡であったが、地域史にとって価値ある一群である。平成18年度は、特に九州地方の出土和鏡についての資料収集を行った。平成17年度に続き既存の報告書・県誌・市町村誌・月刊文化財情報等による情報収集と並行して各地に出向き、熟覧観察.写真撮影・採拓・断面実測を行った。調査で重きを置いているのは、特に時代判定の基準である形状変化を示す断面実測であり、既存の報告に無いものが多いこともあって入念に実施した。九州地方は、出土和鏡との情報で現地に赴いても中国鏡(湖州鏡)と近世柄鏡であることが多く、労の割には新規データの蓄積は少なかった。8月には鹿児島県島嶼部の調査を実施した。徳之島では、伊仙町歴史民俗博物館収蔵和鏡調査、喜界町中央公民館、民俗資料館収蔵和鏡調査、奄美市立奄美博物館収蔵和鏡調査を実施した。喜界町では、現地研究者の案内によって民間の和鏡保管者宅にも赴き調査を行った。近世柄鏡を中心とする本鏡群については別途報告書を作成する予定である。平成19年3月には、吐〓喇列島十島村歴史民俗資料館所蔵石切遺跡出土鏡調査を実施する予定であったが、悪天候により渡島当日のフェリーが欠航し、急遽予定を変更し鹿児島を起点に、九州各地の博物館等に収蔵されている出土和鏡調査を実施した。宮崎県南郷村神門神社蔵鏡では、運良く奈良文化財研究所調査の報告書を入手でき、実際の展示資料と比較できたが、多くは踏返し鏡であることが判明した。2面の和鏡については出土鏡と判断し、写真撮影によって記録した。都城市都城歴史資料館では、個人コレクションとして和鏡がまとまっていたが伝世資料であった。
ＳＴＥＭ－ＥＥＬＳ法によるＡｌ基準結晶の局所電子状態観察

本年度は、昨年度に引き続き、STEM像の多変量解析によるクラスター構造解析をAl-Cu-Rh準結晶に対して行った。観察された単一クラスターの準周期的な配列というこれまでの描像では解釈出来なかったが、多変量解析によって、3種類のクラスターが存在し、投影方向に様々な比率で重なっているとして解釈することができた。以下に詳細を述べる。原子番号コントラストが得られるHAADF-STEM像と軽元素敏感なABF-STEM像の両者からそれぞれ直径2 nmのクラスターをおよそ100枚ずつ切り出し、プローブを走査する際の試料ドリフトに由来する歪みを補正した後、主成分分析を実行した。ABFから再構成された基本クラスターには占有率の低いAlサイトまで明瞭に現れ、全原子サイトを含んだクラスター構造モデルを構築することに成功した。再構成された3つの基本クラスターの中心付近の組成はそれぞれ異なっており、中心がCuに占有されるクラスターでは金属結合的、Rhに専有されるクラスターは共有結合的であると解釈すると、昨年度観察されたSTEM-EELSによる電子状態観察の結果と定性的に一致する結果であった。26年度が最終年度であるため、記入しない。準結晶化合物は経験的に遷移金属の価電子チューニングによる合金設計により発見されてきた。これは準結晶合金の相安定性がフェルミ面とブリルアンゾーンの相互作用によるものであることを強く示唆するが、ほぼ自由な電子の近似による描像がなぜ幅広い系に適用できるのかは,よく理解されていない。本研究ではSTEM-EELS法による局所電子状態観察と第一原理計算を組み合わせて, Al-Cu-Ir正10角形相の電子状態を議諭し,相の安定化機構を検討した.2次元領域から取得したプラズモン損失ピークの主成分分析より,ピークは直径2 nmのクラスター中心において低エネルギー側へとおよそ0.2 eVシフトしていることが明らかとなった.内角励起スペクトルの結果と第一原理計算を組み合わせることによって,クラスター中心が金属結合的でクラスター端が共有結合的であるとして解釈することができた.また第一原理計算の結果から,準結晶中の混成軌道の大域的な分布が,波数2k_F (k_F :フェルミ波数)の正弦波を5回対称に重ね合わせたパターンに沿っていることを示唆していた.通常,共有結合が議論されるときには局所的な配位環境のみに注目されるが,共有結合の大域的な配置が重要であることを示唆している.言い換えると,ヒューム-ロザリー機構の平面波描像においてフェルミ準位に形成される電荷密度波を,局在基底である混成軌道によって構成することによって電子系のエネルギー利得が発生していると考えられる.以上,述べたように, Al-Cu-IrのSTEM-EELS観察と第一原理計算を組み合わせることによって,従来平面波描像によってのみ解釈されてきたヒューム-ロザリ一則に局在基底による描像を与えた.本年度は、昨年度に引き続き、STEM像の多変量解析によるクラスター構造解析をAl-Cu-Rh準結晶に対して行った。以下に詳細を述べる。EELSスペクトルを定性的に解釈することができ,準結晶の安定化機構に関して新しい描像を提案し,研究目的を概ね達成したため。広いエネルギー領域でのEELS観察が可能な装置が利用可能となったため,追加でSTEM-EELS観察を行う。また, disorderが存在するために,クラスター構造は明らかでない。そこで,多変量解析を用いた構造解析を行い,より現実的な構造モデルによる第一原理計算を行う。
細胞のミクロな力学作用がマクロな心臓の形態を生み出すロジック

心臓は拍動し、内部に正常な血液の流れが無いと正常に発生しない。事実、心拍に異常をもつゼブラフィッシュやマウスでは多彩な心奇形が生じ、ヒト先天性心疾患に類似した形態異常が見られる。これが遺伝子異常が無くても先天性心疾患が発症する原因のひとつと考えられている。拍動や血流に起因する機械的刺激が重要な意味を持つと考えられているが、その分子機構は未解明で、力と心臓発生を結びつけるロジックはわかっていない。本研究では、力刺激がどのように心臓発生、特に弁形成をコントロールするか、その詳細な分子基盤、遺伝子基盤を解き明かした。この研究は、先天性心疾患の理解に大きく役立つと予想される。発生過程で、薬剤を加えて心拍を止めると心臓発生が正常に進まなくなり、弁形成の不全など、ヒトの先天性心疾患と似た異常が見られるようになる。このことは、心拍/血流が作り出す機械的力刺激が、遺伝子発現などの生物学的反応に大きく影響することを示唆している。本研究では、力刺激によって発現誘導する遺伝子を同定する試みを開始し、弁特異的に発現するmiRNAのひとつ、miR-21を見いだした。miR-21は心臓の房室弁に限局して発現する。薬剤で心拍/血流を止めるとその発現が消失し、薬剤を洗い流して心拍/血流を再開させると速やかに発現が復元する。この現象は房室弁に限らず、再生誘導を目的とした心筋切除、尾びれ切除でも断端に発現誘導されることから、再生の初期には組織の挫滅という力刺激自体が遺伝子発現に影響して再生を引き起こす可能性を指摘できる。また、レーザーを使って血栓を大動脈内に作って部分的に勇断応力がかかる部分を作ると、その部位の血管内皮細胞にも強く発現するようになる。miR-21の標的としてSprouty、Pten、ptcd4を同定したが、このことは、力刺激がmiR-21の発現を介して細胞増殖を促進して弁形成を行うことを意味している。miR-21のノックダウンを行うと、弁形成がほぼ完全に抑制されることから、miR-21、力刺激の重要性が理解できる。力刺激がどのようにmiR-21の発現を誘導するかを調べる目的で、そのプロモーターを同定した。そして、幾つかの興味深いモチーフを見いだした。また、このプロモーターは力刺激に反応して活性化されることもわかり、力刺激とmiR-21発現を結びつける糸口となって次年度への展開の元となった。核内に移行する因子MKL2を恒常的に発現するトランスジェニックゼブラフィッシュの樹立を目指したが、発生の初期に異常を来し、成魚を得ることができなかった。これは、MKL2は中胚葉の組織の発生にも関与する転写因子SRFの転写活性も制御することによると考えられる。MKL2はTbx5も活性化することがわかっているが、心臓特異的なプロモーターを用いた核移行型MKL2の強制発現も、心臓発生初期に異常を来した。この結果を受け、このアプローチを断念することにした。その変わり、2012年度に新しく得られたmiR-21の知見を発展させる研究を開始した。これまでに結果から、ヒレ、心臓の組織を一部切除することで再生を誘導できるが、この時、力学刺激が強く入ると思われる切除部位にmiR-21が強く、しかも迅速に誘導されることを見いだした。この結果は、切除による組織座滅という力学刺激がmiR-21を誘導し、誘導されたmiR-21がspry2、pdcd4、ptenbなどの細胞増殖抑制因子の発現を抑えて細胞増殖を正に制御して再生を起こすシグナル経路があることを示唆している。従って、miR-21を過剰発現するトランスジェニック魚は、過剰再生を起こす可能性がある。これを確認する目的で、miR-21のトランスジェニック魚を作製することとし、複数のF0個体を得た。また、miR-21ノックアウトマウスが使用可能となったので、この解析をwound healing、muscle stem cell regenerationの視点から進めることとした。力学刺激が発現制御する遺伝子培養細胞にせん断応力を印加することによって発現誘導が起こる遺伝子(miRNAを含む)としてmiR-143、miR-21、egr1の3つを同定しているが、本年度は、miR-21の弁形成心内膜の発現が血流(せん断応力)依存的に維持されること、血流依存的なmiR-21が弁形成に必須で、mi-21の機能阻害が完全な弁欠損を生むことを明らかにした。このデータは、Nature Communications誌に発表した(doi: 10.1038/ncomms2978)。本年度は、マウスにおけるmiR-21の機能を解析する目的で、昨年度より製作していたmiR-21ノックアウトマウスの表現型を分析した。

その結果、残念ながらmiR-21 KOマウスでは、心臓、血管系に異常は見られず、正常に発生してきた。しかしながら、マウスにおいても、miR-21の発現が血流に起因するせん断応力によって誘導されることから、血圧上昇、血管閉塞による局所的せん断応力増加、循環血液量増加をマウスに起こさせることで、表現型が得られる可能性がある。そのため、動脈硬化による血管閉塞を頻繁に起こす脂質代謝異常マウスと交配することを開始した。循環器系以外の表現型を解析する目的で、皮膚損傷を起こした。驚いたことに、miR-21 KOマウスでは、損傷皮膚の治癒(wound healing)が速やかに、しかも瘢痕を残さず進行することが明らかとなった。1cm程度の皮膚欠損を起こしても、最短3日で損傷部が上皮化する。この進行の早さは、正常マウスに比較しても極めて早い。現在、損傷皮膚でのmiR-21の標的遺伝子の探索を行っている。1)せん断応力よって発現誘導が起こる遺伝子としてmiR-143、miR-21、egr1の3つを同定しているが、miR-21のノックアウト(KO)マウスの作製が終了し、その表現型を解析した。その結果、マウスでは心臓の形態に異常は見られず、ゼブラフィッシュとは、その機能に差があることが判明した。しかし、マウスでも力刺激がmiR-21発現の主因であることから、外傷に対する反応を見た所、miR-21 KOマウスでは創傷治癒が速やかに進展し、瘢痕形成も抑制されることがわかった。この表現型はこれまでに報告されていない新しいものであり、miR-21を抑制する核酸医薬が外傷や手術後の切開部位の速やかな治癒を誘導する可能性があるため、今後、詳細に解析する必要がある。2)メカノトランスダクション因子としてHippo経路が重要であることが指摘されているが、Hippo経路の主役YAPの転写活性化能に関する解析はあまり進んでいない。本研究の過程で、YPAによる転写活性化に大きく寄与するHelicase因子を新規に同定した。この因子はショウジョウバエにも高度に保存され、FACTなどのHistone chaperone因子とも共同することが確認された。また、Wnt、Notchなどのシグナル経路とのsynergismも確認できた。この因子を端緒に、Hippo/YAP経路の転写活性化機構の詳細な分子メカニズムが解明できる。3)力刺激によって細胞質から核内に移行して転写制御する因子MKL2が、その転写活性化能を発揮するために必要なco-factorを新規に同定した。この因子はcut-like homeodomainをDNA結合ドメインに保持し、A/T-rich配列に結合する。この因子の同定によって、MKL2/Tbx5の力刺激依存的な転写制御機構が解明に向かうと期待できる。1)力学刺激が発現制御する遺伝子培養細胞にせん断応力を印加することによって発現誘導が起こる遺伝子(miRNAを含む)としてmiR-143、miR-21、egr1の3つを同定しているが、本年度は、miR-21とegr1を中心に研究を進めた。この2つはゼブラフィッシュ心臓をモデルにした発現部位検索で、両者とも房室弁とOFT弁(大動脈弁)に特異的に発現することを明らかにした。
東京府(都)下における私立青年学校の教育実態に関する基礎的研究

本件研究は、次の点を明らかにした。1.府(都)は、就業青年の就学率をあげるため、私企業に私立青年学校の創設を積極的に働きかけていたことを明らかにした。また、文部省に対し私立青年学校の増加を阻んでいた設置規則の変更を求め、法令を変更させた経緯を明らかにした。2.『東京府(都)・警視庁公報』の告示を調査することにより、府(都)下に創設された私立青年学校631校の、名称、開校年月日、設置者、所在地、設置母体の業種及び生産品、廃校年月日、各種変更(名称、所在地等)を明らかにした。これらデータの調査から以下に点が明らかになった。(1)私立青年学校にあっては、統制経済の発動とともに技術系高級軍人(将校)が学校長として就任するケースが激増した。(2)軍人を校長として迎え、軍需品の生産を行っていた企業が設置する私立青年学校は、行政ルートで多くの学生(工員)を確保し学校規模を増大させた。(3)軍需品や統制品を扱わない企業が設置した私立青年学校は、生徒(工員)を確保出来ず次々と廃校していった。3.公立青年学校が「教練」など軍事訓練を中心に据えた教育を展開していたのに対して、私立青年学校は、職業訓練や一般教養的学習を中心に教育を展開していたことを明らかにした。年度当初に計画した研究目的のうち、私立青年学校の運営実態や教育実態を明らかにする基礎史料の蒐集という第一の目的については、ほぼ当初の計画通りの成果がえられたと考える(今後もこの作業は継続される)。その結果、以下のことが明らかになった。まず、青年学校義務化の閣議決定を機に増加した私立青年学校は、実際に義務化が実施されるやその統廃合が始まった。その背景には、強大な権限を国家に与えてしまう委任立法である国家総動員法の影響があった。国家総動員法第6条関係の勅令の発動により、軍需関連業種以外の「不急」産業へは従業員の「供給」が制限され、そのため設置母体自体が経営危機に陥り、あるいは生徒数の減少からその学校を廃校にしていた。その一方で軍需関連業種に変更した企業は、同法13条の規定により多数の青年学校就学対象年齢の従業員が供給され、事業規模、学校規模を拡大していた。いわば生徒の入学は同法により統制されていたのであり、この点が公立青年学校と異なる点である。また、こうした軍需関連業種の企業が設置する私立青年学校の校長には、予備役や現役の高級軍人が採用されていく傾向が認められた。本年度計画の第二の目的「産業政策との関連で私立青年学校を位置づける」という目的については、当初、校長に採用された技術系の軍人の専門とその学校の設置母体企業の生産品との関連を分析することを通して明らかにする計画であった。しかし、履歴書には各人の「兵科」が記されているのみであり、詳細な検討のためには各人のより詳しい経歴を明らかにする必要がある。このため平成8年度以降の研究計画に校長の軍人としての経歴を調査する作業を加える。1.平成7年度に引き続き、東京都公文書館に所蔵されている東京府(都)下の私立青年学校の開学関係書類をはじめとする校舎設備、カリキュラム、教員履歴などの資料の蒐集を行った。2.上記の前年度の継続作業の他に、今年度はとくに戦時統制経済発動後に急増する技術系高級軍人が校長に就任するケースについての調査を行った。具体的には、就任した現役退役軍人の「専門」と就任校の設置母体企業の職種(生産品)との関連を調査した。軍人が校長に迎えられたケースの約半数の関連を明らかにした。これについては、来年度も継続して調査を実施する。3.東京府(都)、東京市、区町村など行政側がどのような私立青年学校設置奨励の活動を展開したかを調査した。その結果、とくに府は青年学校制度創設直後から、常用工200名以上の工場を調査し、その時点では認められていなかった「営利法人」を設置者とする私立青年学校の創設を企画した準備活動を展開するとともに、一方で、文部省へ「営利法人」を設置者として認めるよう法改正を求めるなど積極的に働きかけていたことなどを明らかにした。

これについては、『東京都教育史通史編4』(1997.3東京都立教育研究所)の「青年学校」において詳述した。1.平成8年度に引き続き、東京都公文書館に所蔵されいてる東京府(都)下の私立青年学校の開学関係書類をはじめとする校舎設備、カリキュラム、教員履歴などの資料の蒐集を行った。2.私立青年学校の設備母体だった企業の中には、現在も存続している企業が数多くある。本年度は、これら企業の発行している社史の中から、私立青年学校の資料を蒐集した。3.東京府(都)下の私立青年学校は、戦時下、とくに「決戦下」と言われた時期から、他県へ移転するものが増加する。これは、私立青年学校の設備母体である工場・事業所が空襲を避けるために疎開するのに伴う措置である。移転した私立青年学校については、その学校数や移転先を既に明らかにしたが、本年度は、その移転先の状況にいての調査を行った。しかし、移転先の県には、関係の資料が保存されておらず、移転先での教育カリキュラムの変更、教員の変更など学校経営の状況を知ることはできなかった。4.本年度は、本研究の最終年度である。これまでに蒐集した各種の資料をデータ・ベース化する作業を行い、現在も継続中である。
穂発芽耐性白粒コムギの作出

白粒コムギの栽培上問題となる「穂発芽」を回避するため、種子休眠試験の結果で選抜を行い種子休眠極強系統1-117-7を見いだした。この系統はGI(Germination Index:数字が大きいと発芽しやすい)が0.04と穂発芽性極難赤粒品種であるゼンコウジコムギ(GI0.04)並の種子休眠能力を有していた。この系統を育種に利用することで白粒コムギの穂発芽耐性育種が進むと期待される。白粒コムギを栽培する上で問題となる「穂発芽」を回避するため、所有コムギ系統中、発芽抑制効果の高い植物ホルモンアブシジン酸の感受性が最も高いOW104と所有白粒コムギ系統の中で最も種子休眠能力の高いAUS1408の後代を種子休眠能力とアブジシン酸感受性で選抜することにより穂発芽耐性白粒コムギの作出を試みた。平成19年度は、圃場にて栽培したOW104×AUS1408のF_<2系統>301系統と両親2系統、穂発芽耐性評価基準品種5品種、合計約3800穂の開花日の調査を行った。その後、含水率が20%を切った開花後45日でF_2系統に稔実したF_3種子301系統の種子色を評価した結果、赤粒285系統と白粒16系統であった。さらに301系統中65系統(白粒16系統と赤粒49系統を含む)で種子の含水率が20%を切った開花後日数の穂から種子を採種し合計200シャーレ(コムギ種子は1シャーレ当たり1020粒供試)で種子休眠性の評価を行った。同時に両親2系統と穂発芽耐性評価基準品種5品種合計約350シャーレ(コムギ種子は1シャーレ当たり1020粒供試)で種子の含水率が20%を切った開花後日数の穂から種子を採種し発芽抑制植物ホルモンであるアブシジン酸や発芽促進植物ホルモンであるジベレリン酸の感受性を調査した。その結果、白粒16系統すべての系統で白粒親のAUS1408より高い種子休眠能力を示した。種子休眠能力の高いコムギ系統の多くが穂発芽耐性も高いことから、これら白粒系統は従来の白粒系統より強い穂発芽耐性を示すと考えられる。次年度以降これら白粒系統からより種子休眠能力の高い系統を選抜することで穂発芽耐性白粒コムギを作出可能と考えられる。白粒コムギを栽培する上で問題となる「穂発芽」を回避するため、所有コムギ系統中、発芽抑制効果の高い植物ホルモンアブシジン酸の感受性が最も高いOW104と所有白粒コムギ系統の中で最も種子休眠能力の高いAUS1408の交配後代から種子休眠能力とアブジシン酸感受性で選抜することにより穂発芽耐性白粒コムギの作出を試みた。平成20年度は、前年度のF2系統の選抜により得られた白粒コムギ16系統の中で、白粒コムギ系統の供試親であるAUS1408より種子休眠能力が強い7系統140個体をF_3系統として圃場にて栽培した。同時にOW104×AUS1408のF_2系統189系統と両親2系統、穂発芽耐性評価基準品種10品種を栽培し、合計約5000穂の開花日の調査した。コムギ種子の含水率が20%を切った開花後45日で種子を採種し約1000シャーレ(コムギ種子は1シャーレ当たり1020粒供試)に脱塩水をシャーレ1枚当たり6ml入れ、発芽数を調査することで種子休眠能力を評価した。両親2系統と穂発芽耐性評価基準品種5品種は、発芽抑制植物ホルモンであるアブシジン酸や発芽促進植物ホルモンであるジベレリン酸の感受性も同時に調査した。その結果、F_3系統では、穂発芽耐性強品種である北系1354を上回る種子休眠能力を示す個体が分離する3系統を得ることができた。この中の1-117系統は、18個体中15個体が北系1354より種子休眠能力の高い有望系統であった。種子休眠能力の高いコムギ系統の多くが穂発芽耐性も高いことから、これら白粒系統は従来の白粒系統より強い穂発芽耐性を示す可能性が高い。次年度は、得られた種子休眠能力の高い白粒系統の植物ホルモン感受性を詳細に調査する予定である。白粒コムギの栽培上問題となる「穂発芽」を回避するため、所有コムギ系統中、発芽抑制効果の高い植物ホルモンアブシジン酸(以下ABA)の感受性が最も高いOW104と所有白粒コムギ系統の中で最も種子休眠能力の高いAUS1408の交配後代から種子休眠能力とABA感受性で選抜することで穂発芽耐性白粒コムギの作出を試みた。白粒コムギを利用した研究の多くが雨の当たらない温室で行われているが、本研究課題では実際の栽培における穂発芽耐性材料の育成を目指しているため圃場栽培で試験を行った。

平成21年度は、前年度の選抜により得られた白粒コムギ系統の自植後代、16系統341個体と交配親のOW104、AUS1408の2系統、穂発芽耐性評価基準品種4品種を栽培し、合計約4000穂の開花日の調査,含水率が20%を切る開花後45日の種子を採取し、種子休眠能力、ABA感受性を調査した。有望白粒系統1-117-7の種子休眠試験では、GI (Germination Index:数字が大きいと発芽しやすい)が0.04と穂発芽性難赤粒品種である北系1354(実験を行った岡山地方ではほとんど穂発芽しない)のGI0.25を上回り穂発芽性極難赤粒品種であるゼンコウジコムギ(岡山地方では穂発芽しない)のGI0.04並の種子休眠能力を示した。この系統を含め選抜を行った白粒系統は、種子休眠能力が高いとされる白粒コムギAUS1408 (GI0.36)、タマイズミ(GI0.22)を大きく上回っており、種子胚のABAに対する感受性も同様に上回っていた。種子休眠能力の高いコムギ系統は穂発芽耐性も高い。穂発芽性極難品種並みの種子休眠能力を示す白粒系統1-117-7を育成できたことから、本課題の目標である穂発芽耐性白粒コムギ作出は概ね達成できた。得られた成果を北海道で2010年1月に開催された穂発芽研究会にて報告した。
アニサキスアレルゲンの探索および一括検出システムの構築

アニサキスアレルゲンの探索および一括出システムの構築アニサキスアレルゲンの探索および一括出システムの構築現在、アニサキスアレルゲンとしてAni s 112の12種がアレルゲンのデータベースに登録されている他、分子量20.0k、25.7k、30.8kおよび40.0kのタンパク質などの存在を突き止めている。このうちのAni s 1、Ani s 5、Ani s 9、20.0k、25.7、30.8kおよび40.0kタンパク質については、大腸菌によって発現させたリコンビナントタンパク質をマウスに投与してポリクローナル抗体を得た。各リコンビナントタンパク質を二次元電気泳動(2D-PAGE)に供してポリクローナル抗体との反応性を確認することにより、これら7種のアレルゲンのバンドをグル上で帰属させた。リン酸緩衝液を用いた虫体抽出液を加熱処理せずに2D-PAGEに供し、これまでに16名のアニサキス特異IgE保有者の血清を用いて2D-PAGE後のイムノブロッティングを行った。このうち11名は40.0kアレルゲン、3名はAni s 5および40.0kアレルゲン、1名はAni s 5、Ani s 9および40.0kアレルゲンにIgE陽性反応を認めた。また、16名中の約半数においてはこれらの他にも未帰属のバンドに対するIgE陽性反応を認めた。アニサキスアレルゲンの中には筋原線維タンパク質も含まれるため、リン酸緩衝液ではすべてのアレルゲンを網羅的に抽出できていない可能性があるため、抽出条件については今後検討の余地があると考える。しかし、供試した87.5%の患者血清が40.0kアレルゲンにIgE陽性反応が認められたことから、本アレルゲンが我が国のアニサキスアレルギー患者において最も重要であることが示唆された。一方、リコンビナント40.0kアレルゲンについては、これらの16名の患者血中IgEに対し、ELISAにおいて陽性反応を示すことも確認した。アニサキスアレルゲンはAnis1から12、演繹アミノ酸配列からの算出分子量20.0kおよび25.7kのタンパク質(後者はAnis11のアイソフォーム)、トロポニン様タンパク質およびキモトリプシンインヒビターなどが知られている。このうち、Anis1、5、9、11、12、20.0k、25.7kアレルゲンの7種については、発現品を用いて二次元電気泳動後のスポットを帰属済みである。前年度に引き続き、全アミノ酸配列から得られる等電点および分子量からAnis6およびAnis8のバンドを帰属した。また、Anis1およびAnis8については天然品も得られたので、各々の発現品の挙動と比較した。Anis8については両者の挙動がよく一致したが、Anis1については発現の分子量が若干大きかった。後者は分泌タンパク質であることが知られているが、今回用いたrAnis1はシグナルペプチドを含めて発現させたものであるため、本検討結果と合致すると判断された。一方、研究遂行中に新たに3名の患者血清を得ることができたので、それぞれの患者血清についても二次元電気泳動後のイムノブロッティングを行った。3名ともにAnis11に陽性を示したほか、そのうちの1名はpI7、M.W.25k付近のスポットに強陽性を示した。このスポットは既知のアレルゲンとは一致しないため、未帰属または新規アレルゲンであることが示唆された。しかし、本患者のみに陽性を示したスポットであるので、マイナーアレルゲンの可能性が考えられた。これまでのスクリーニング結果から、患者の70%以上(14/19名)がAnis11に対して陽性を示すため、本アレルゲンは日本のアニサキスアレルギー患者にとって主要アレルゲンであると考えられた。アニサキスアレルゲンはAni s 1から12に加え、演繹アミノ酸配列からの算出分子量20.0kおよび25.7kのタンパク質(後者はAni s 11のアイソフォーム)、トロポニン様タンパク質およびキモトリプシンインヒビターなどが知られている。このうち、Ani s 1、5、6、8、9、11、12、20.0k、25.7kアレルゲンの7種については、発現品を用いて二次元電気泳動後のスポットを帰属させることができた。また、Ani s 1およびAni s 8については天然品(nAni s 1、nAni s 8)も得られたので、各々の発現品(rAni s 1、rAni s 8)の挙動と比較した。Ani s 8についてはnAnis 8とrAni s 8の挙動がよく一致したが、Ani s 1についてはrAni s 1の分子量が若干大きかった。Ani s 1における差異については、Ani s 1は分泌タンパク質であることが知られているが、今回用いたrAni s 1はシグナルペプチドを含めて発現させたためと判断された。3名ともにAni s 11に陽性を示したほか、そのうちの1名はpI 7、M.W. 25k付近のスポットに強陽性を示した。

このスポットは既知のアレルゲンとは一致しないため、未帰属または新規アレルゲンであることが示唆された。しかし、本患者のみに陽性を示したスポットであるので、マイナーアレルゲンの可能性が考えられた。これまでのスクリーニング結果から、患者の70%以上(14/19名)がAni s 11に対して陽性を示すため、本アレルゲンは日本のアニサキスアレルギー患者にとって主要アレルゲンであると考えられた。16種類のアニサキスアレルゲン中9種類のアレルゲンについては帰属済みである。未帰属のアレルゲンについては日本の患者血中IgEとの反応性が認められないため、ひとまず帰属作業は後回しでよいと考えている。天然品との挙動の比較は本年4月から続行しており、主要なものについて近々結果が出る。一方、各種魚介類または加工品中のアレルゲンの検出システムとしての有効性についても、研究準備中である。24年度が最終年度であるため、記入しない。日本のアニサキスアレルギー患者の多くが、Anis11を認識するIgEを保有していることがわかったので、既に得られている抗rAnis11抗体を用いてnAnis11の精製を行い、二次元電気泳動上の挙動を比較するほか、患者に対する反応性をELISAで数値化する。その他天然品を用いて帰属できていないものについては優先順位を考えた上で、できる限り多くのものについて帰属の確認を行う。また、アレルゲンの一部には筋原線維タンパク質が含まれるので、通常のリン酸緩衝液では抽出できない可能性があるので、界面活性剤などを利用して複数種の抽出液を調製して比較する必要もあると思われる。一方、魚肉ホモジネートに生きた虫体を入れてインキュベートし、ホモジネートの抽出液中の分泌タンパク質性のアレルゲンを本システムで検出、同定できるか否かについて検討する。
レプチン受容体異常マウスを用いた大腸発がんにおける肥満起因性危険因子の同定

肥満は大腸発がんの危険因子であるが,そのメカニズム解析に関しては現状では知見に極めて乏しい。肥満マウスであるレプチン受容体異常マウス(dbマウス,C57BL/KsJ-db/db)およびレプチン異常マウス(obマウス,C57BL/6J-ob/ob)を用いて,化学発がん物質誘発大腸発がんの感受性及びその修飾メカニズムを検索し,肥満起因性危険因子の同定に迫るために以下の実験を行った。食事制限下(3gMF/mouse/day)の4週齢のホモ接合体マウス(dbマウスとobマウス)及びそれぞれのヘテロ接合体マウス,野生型マウスに大腸発がん物質であるazoxymethaneあるいはdimethylhydrazineを週1回5週連続皮下投与した。投与終了後5週(13週齢)で前がん性性格を持つとされる大腸粘膜におけるaberrant crypt foci数及びdysplastic crypt数を検索した結果,野生型マウス,ヘテロマウスに比べ,いずれのホモマウスでも有意な病変の発現増加が見られた。これらの結果から,ヘテロあるいは野生型マウスに比べてこれらの肥満ホモマウスでは化学発がん物質誘発大腸早期病変発現が促進されることが示唆された。高レプチン血症の関与を除外したob/obホモマウスにおいても発がん促進が見られることより,レプチンを介した大腸発がん促進はpredominantではないことが示唆された。また,これらのホモマウスでは,食餌制限条件下にも関わらず膵ラ氏島の過形成及び高インスリン血症が特異的に見られた。従って,高インスリン血症などが大腸発がんの肥満起因性危険因子としてより可能性があることが考えられた。最近得られた知見より,レプチンによるBody Mass Indexの長期的制御やインスリン抵抗性が分子レベルで明らかになりつつあり,肥満発症の多因子性病因の一端がわかってきた。今年度は,レプチン受容体異常マウスにおけるazoxymethane(AOM)誘発大腸発がん感受性を検討することで,レプチン抵抗性という肥満起因性因子の大腸発がんにおける役割を探ることを目的とした。研究方法としては,食事制限下(3gMF/mouse/day)の4週齢の野生型マウス(C57BL/KsJ-+/+),ヘテロ接合体マウス(C57BL/KsJ-db/+)及びホモ接合体マウス(C57BL/KsJ-db/db)にAOM(15mg/kg体重)を週1回5週連続皮下投与した。全マウスの体重は毎週,食事量は毎日それぞれ個体ごとにモニターした。AOM投与終了後5週(13週齢)で全マウスを屠殺し、摘出した大腸粘膜におけるdysplastic lesion(DL)数及びearly neoplastic lesion(ENL)数を検索した。その結果,実験期間における全マウスの体重のコントロールは良好で群間に有意差はなかったが,脂肪沈着量はホモマウスにおいて増加していた。大腸粘膜における総病変(DL+ENL)数は,野生型マウスでそれぞれ15.9±9.5/cm^2 colon,ヘテロマウスで13.8±3.6/cm^2 colonであったのに対し,ホモマウスでは29.3±14.1/cm^2 colonと有意な増加が見られた(P<0.04)。血液生化学検査では,ホモマウスでhyperleptinemia及びhyperinsulinemiaが特異的に見られた。これらの結果から,ヘテロあるいは野生型マウスに比べてdb/dbホモマウスではAOM誘発大腸早期病変発現が促進されることが示唆された。次年度は,hyperleptinemia及びhyperinsulinemiaのどちらがより重要な因子であるのか,あるいはその他に重要となる因子はないのかについて,動物実験を使ったアプローチにより検索を進める予定である。