hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
網膜介在ニューロン:細胞生理素子および階層回路素子としての解析とシンセシス

本年度の主な成果を以下に概説する。(1)色と明暗順応に依存する受容野サイズの可塑性制御ギャップ結合を介して互いにカップルする鯉網膜の水平細胞は広い受容野をもつが、上記の機構をH1型水平細胞がもつことを今回明らかにした。これは本報告者らがこれまで数年にわたって蓄積した研究結果のひとつの帰結といえる。ここで主役を演じるのは短波長感受性の錐体視細胞からH1細胞への特異型のシナプスである。すなわち、これは符号反転性ではあるが通常の抑制性ではなく伝達物質が後膜gmの減少をもたらすタイプであり、長波長錐体からの通常の興奮性(non-MNDA)シナプスと対比される。さらに、問題のシナプスはAPB(2-amino-4-phosphonobutyrate)および暗順応により阻害される。以上から次頁の図に示すようなケーブルモデルを得る。光は視細胞を過分極し伝達物質放出量の減少を起こすことを考え合わせれば、明順応時における短波長刺激の受容野は長波長に比べて狭いはずである。この予測は今回実証された。水平細胞シンシチアムの空間定数はギャップ結合抵抗Rgと膜抵抗Rmで決まるが、本モデルではRmが可変となる。これは、ドーパミンによるRgの修飾による周知の機構とは異なる新しい横方向の信号伝達路といえる。(2)ニューラルネット不要経路の自律淘汰に関する新しいアルゴリズムの開発ニューラルネットワークの応用に際して、個々のタスクに対して最小規模の回路構造を事前に知ることは、経済性、ローカルミニマムの回避、タスク自体の理解と洞察、モジュール化、計算論的脳研究などの観点から重要である。この問題についてシナプス荷重の相互抑制に基づく原理を考案し、例題に対して良好なテスト成績を得た。一方、本研究では双極細胞受容野の可塑性、とくにその明暗順応あるいはSN比に依存する側面を実験および計算論に基づいて究明してきた。双極細胞受容野の周辺部は水平細胞に由来するので(1)の成果とも関連し、本アルゴリズムの応用も導入した今後の進展が期待される。
知的障害児・者のスポーツ活動と生体反応に関する研究

近年,障害者スポーツはリハビリテーション分野のみならず学校教育やスポーツ現場において広がっており,様々な環境下で運動活動を行う機会が増えてきている.我々は,過去においてダウン症や自閉症などを有する知的障害児・者の運動様相の違いに関してバイオメカニクス的な手法を用いて科学的にとらえて検証を行ってきた.従来行われてきた知的障害児・者に対する研究は,研究室内で環境を一定にした状態で行われた研究や対象数の少ない事例報告が多かった.今回の研究では,軽量化で携帯が可能となった無線の測定器を対象者に装備させて,様々な環境下で行われる実際の集団スポーツ活動中の生体変化について測定を行うものである.本年度は知的障害児における夏期の体育活動時の心拍数について検討した.対象は,知的障害をもつ児童4名(男性2名、女1生2名:平均年齢9.0歳)であった.夏期(気温31.2°C、湿度68%)の屋内体育館で体育活動(約30分間)を行い,その間の心拍数(Polar社RS400)を経時的に計測した.体育活動の内容はウォーミングアップ(ストレッチ、ジャンプ、ランニング)3分,休憩1分,なわとび2分,休憩6分,バレーボール10分,クールダウン(ジョギンク)2分であった.運動指導は経験の多い指導者1名が,集団指導(7名)の形で行った.その結果,4名の平均心拍数は安静時では99.8±142bpmであったが,運動中ではそれぞれ準備運動147.3±8.8bpm,なわとび161.5±9.9bpm,バレーボール137.0±21.3bpm,ジョギング164.5±22.9bpmであった.また,最高心拍数4名ともにランニングおよびなわとびの際に187-205bpmの高値を示した.体育運動中に元気な活動をしているようにみえても,比較的高い心拍数を示していた.特に夏期の暑い時期には、休憩を多く取るなど十分な配慮を行いながら行うべきであると考えられた.近年,障害者スポーツはリハビリテーション分野のみならず学校教育やスポーツ現場において広がっており,様々な環境下で運動活動を行う機会が増えてきている.我々は,過去においてダウン症や自閉症などを有する知的障害児・者の運動様相の違いに関してバイオメカニクス的な手法を用いて科学的にとらえて検証を行ってきた.従来行われてきた知的障害児・者に対する研究は,研究室内で環境を一定にした状態で行われた研究や対象数の少ない事例報告が多かった.今回の研究では,軽量化で携帯が可能となった無線の測定器を対象者に装備させて,様々な環境下で行われる実際の集団スポーツ活動中の生体変化について測定を行うものである.本年度は知的障害児における夏期の体育活動時の心拍数について検討した.対象は,知的障害をもつ児童4名(男性2名、女1生2名:平均年齢9.0歳)であった.夏期(気温31.2°C、湿度68%)の屋内体育館で体育活動(約30分間)を行い,その間の心拍数(Polar社RS400)を経時的に計測した.体育活動の内容はウォーミングアップ(ストレッチ、ジャンプ、ランニング)3分,休憩1分,なわとび2分,休憩6分,バレーボール10分,クールダウン(ジョギンク)2分であった.運動指導は経験の多い指導者1名が,集団指導(7名)の形で行った.その結果,4名の平均心拍数は安静時では99.8±142bpmであったが,運動中ではそれぞれ準備運動147.3±8.8bpm,なわとび161.5±9.9bpm,バレーボール137.0±21.3bpm,ジョギング164.5±22.9bpmであった.また,最高心拍数4名ともにランニングおよびなわとびの際に187-205bpmの高値を示した.体育運動中に元気な活動をしているようにみえても,比較的高い心拍数を示していた.特に夏期の暑い時期には、休憩を多く取るなど十分な配慮を行いながら行うべきであると考えられた.
リーマン面間の正則写像の研究

1.種数gの閉リーマン面に把手を標準的に切り開くような2g個の曲線核を指定したものが,種数gのタイヒミュラー空間Tgを構成している。さて,種数gの開リーマン面に把手を標準的に切り開くような2g個の曲線核を定め、固定する。タイヒミュラー空間Tgの点で,指定された曲線同士を自然に対応させるようなRからの正則写像が存在するようなもの全体をH(R)と表す。このとき,次の結果を得た。(1)g≦1のとき,H(R)=Tgである。(2)g>1のとき,H(R)はTgのコンパクト部分集合である。2.等角写像は正則写像の重要な例である。H(R)の元のうち,特にRからの等角写像が存在するようなもの全体をC(R)と表わす。Rが円環領域のとき,C(R)=H(R)であることは古くから知られていた。しかし,g≧1のとき,Rが境界付きリーマン面の内部になっていれば、C(R)はH(R)の真部分集合であることを証明した。3.Rは境界付きリーマン面の内部で,g≧1とする。このとき,Rと同相なリーマン面Sと同相写像時j:R→Sで,jとホモトピックな正則写像R→Sは存在するが,jとホモトピックな等角的埋め込みR→Sが存在しないようなものが存在することを示した。4.RからSの中への等角的埋め込みがあれば,RとSの曲線の双曲的長さの間にある簡単な不等式が成立するが、その不等式が等角的埋め込みを必ずしも保証しないことを示した。
BachファミリーとAP-1のクロストークによる細胞増殖・分化の調節機構

細胞の分化と癌化を理解するためには、遺伝子発現の調節機構とその異常を分子レベルで明らかにすることが必須となる。本研究は、Maf因子群とBach因子群による遺伝子発現と細胞分化の制御機構、およびその失調と癌化の関連を解明することを目的とした。Bachファミリーは、CNC因子群に特徴的なbZipを有し、さらに、リンパ腫や前骨髄性白血病に伴う染色体転座部位に存在するLAZ3/BCL6、PLZF転写因子とホモロジーを示す領域(BTBドメイン)を有する。そこで、特にBachの分子レベルでの機能とその制御機構に関して研究を進め、以下の興味深い知見を得ることができた。(1)Bach2の細胞内局在が、核移行シグナルならびに核くみ出しシグナルにより制御されること、そしてこの核からのくみ出しは酸化ストレスなどにより特異的に制御されることを見いだした。(2)エンハンサーやサイレンサーとプロモータとが相互作用する過程では、DNAのループ構造が形成されると考えられる。原子間力顕微鏡を用いた解析から、Bach1はそのBTBドメインの作用によりDNAループを形成する転写因子であることを明らかにした。BTBドメインを有する癌関連転写因子はDNAループ形成を担う因子として作用すること、そしてこのようなDNAループ形成反応の異常が癌化に関わることが考えられる。(3)Bach1やBach2のBTB領域に特異的に結合する新規BTBドメイン転写囚子FOBを発見し、この因子がc-mycプロモーターの強い活性化因子として作用することを見いだした。
対人相互作用における内受容ー外受容感覚の統合とその発達機序の解明

深層学習に基づく人工知能(AI)の急激な発展は,実世界と仮想世界とが交錯する新たな時空間を生みだしつつある.しかし,身体をもつ生物は,臓器や自律神経系など身体内部の状態を知覚(内受容感覚)し,それを安定・維持させる処理を外受容感覚と統合することで環境適応している.特にヒトにとっての内受容感覚と外受容感覚の統合は,主観的な感情の気づきをもたらす点できわめて重要である.本研究では,ヒト乳児を対象に,対人相互作用時の身体接触を実験的に操作し,外受容ー内受容感覚統合の発達機序を解明する.本研究は,ヒトが真に信頼でき,ヒトと共生可能なロボット開発には何が必要かを再考する上で重要な役割を担うものである.深層学習に基づく人工知能(AI)の急激な発展は,実世界と仮想世界とが交錯する新たな時空間を生みだしつつある.しかし,身体をもつ生物は,臓器や自律神経系など身体内部の状態を知覚(内受容感覚)し,それを安定・維持させる処理を外受容感覚と統合することで環境適応している.特にヒトにとっての内受容感覚と外受容感覚の統合は,主観的な感情の気づきをもたらす点できわめて重要である.本研究では,ヒト乳児を対象に,対人相互作用時の身体接触を実験的に操作し,外受容ー内受容感覚統合の発達機序を解明する.本研究は,ヒトが真に信頼でき,ヒトと共生可能なロボット開発には何が必要かを再考する上で重要な役割を担うものである.
口蓋裂発症モデルマウスを用いた口蓋裂重症化抑制を標的とする予防的薬物療法の開発

ヒトにおける口蓋裂表現型はさまざまであることはよく知られており、ヒトの口蓋裂の発症原因は多因子説で説明されている。しかし、実験動物を用いた口蓋裂モデルの口蓋裂表現型のほとんどすべてが完全口蓋裂のみを呈する結果、どのような種類の因子がヒトの口蓋裂表現型の多型性を生み出しているのか謎のままであり、そのメカニズムの解明が待たれている。当該研究はエピジェネティックな修飾因子が口蓋裂表現型の多型性を生み出していることを完全口蓋裂のみを発症するC57BL/6J系統TGFβ3遺伝子欠損マウスを用いて証明することを目的とした。さらに、当該研究はDNAメチル化酵素阻害剤の1つであるRG108を用いて口蓋裂重症度の改善を標的とする予防的胎児薬物療法の開発に挑戦した。新規に開発したインビトロ解析システムを用いて、C57BL/6J系統TGFβ3遺伝子欠損マウス胎児の口蓋突起内側縁上皮(MEE)細胞は上皮.間葉分化転換と口蓋突起の癒合を引き起こす能力を持っていないが、DNAメチル化酵素阻害剤RG108のインビトロ投与によって部位特異的なMEE細胞の上皮.間葉分化転換と口蓋突起の癒合を引き起こすことを見いだした。そして、TGFβ3遺伝子欠損マウス胎児にRG108を子宮内で暴露させた場合、さまざまな程度の不完全口蓋裂を呈する胎児が得られた。この実験モデルにおいて、Igf2rのセンスプロモーター領域のCG配列はIgf2rのアンチセンスプロモーター領域のCG配列よりも著しく脱メチル化されており、対照群に比べて口蓋組織におけるIGF2Rの発現が著しく増加していた。それらの実験結果を統合し、当該研究は口蓋裂表現型の多型性を生み出す原因がエピジェネティックなメカニズムにあることを新たに洞察して、(世界で)初めて口蓋裂表現型の重症度を改善することを標的とする予防的胎児薬物療法の可能性を示唆した。当該研究の初年度にあたる平成21年度は、完全口蓋裂のみを発症するC57BL/6J系統のTGFβ3ノックアウトマウスのホモ胎児の口蓋裂を不完全口蓋裂へ軽症化させるため、妊娠母獣へのより効果的なDNAメチル化酵素阻害剤の投与方法、投与量などの投与条件の探索を行った.投与する薬剤は口蓋突起の器官培養法を用いた予備実験で効果が認められたRG108をin vivo投与実験に使用して、TGFβ3ノックアウトマウスの口蓋裂軽症化効果を検討した。RG108は母獣および野生型、ヘテロ胎児への副作用がまったく認められない低濃度単回投与(腹腔内投与)で口蓋裂軽症化の奏功率が約18%であった。一方、同量の経口投与や体内留置型浸透圧ポンプによる持続投与ではいずれも無効であることが確認された。そのため、現在は腹腔内投与法に焦点を絞って投与量は増やさないで2回投与法で投与時期をすこしずつ変えて、奏功率のさらなる向上を目指してin vivo投与実験を継続している.また、並行してDNAメチル化酵素阻害剤の投与が口蓋突起の癒合に必要な口蓋突起内側上皮細胞(MEE細胞)の最終分化能力、特に上皮-間葉形質転換能力にあたえる影響を独自開発したin vitro解析システムを用いて解析した。その結果、DNAメチル化酵素阻害剤はMEE細胞の上皮-間葉形質転換能力を劇的ではないものの若干、向上させることが判明した。

このin vitro解析システムにより、同時にDNAメチル化酵素阻害剤に併用して口蓋裂軽症化作用がある候補薬剤の探索を行った結果、EGFR(上皮成長因子受容体)特異的チロシンキナーゼ阻害剤(化合物名:ゲフィチニブ)が有効であることが判明した。そこで、現在、妊娠母獣にDNAメチル化酵素阻害剤と併用投与を行ってTGFβ3ノックアウトマウスの口蓋裂軽症化効果がさらに向上するかどうかの検証実験を進めている.平成22年度の研究では、完全口蓋裂のみを発症するC57BL/6J系統のTGFβ3ノックアウトマウスのホモ胎児の口蓋裂表現型を不完全口蓋裂へより効果的に軽症化させることを目的として、ヘテロ個体の雌雄を交配して妊娠13日から同15日の母獣へDNAメチル化酵素阻害剤に加えてEGFR(上皮成長因子受容体)特異的チロシンキナーゼ阻害剤(化合物名:ゲフィチニブ)を腹腔内へ併用投与し、その相加または相乗効果の有無の探索を行った.その結果、それぞれの薬物は胎児死亡を起こさない投与量と投与回数で単独で投与した場合、DNAメチル化酵素阻害剤(RG108)投与群で不完全口蓋裂(軽症化)が18.1%(n=17/94)の頻度でみられたのに対して、ゲフィチニブ投与群では不完全口蓋裂は21.6%(n=11/51)であった。しかし、RG108とゲフィチニブとの併用投与群ではこれまでに口蓋裂表現型の軽症化率の向上は認められておらず、それぞれの薬剤は互いに独立した機序でTGFβ3ノックアウトマウスの完全口蓋裂を軽症化させている可能性が示唆された。また、RG108投与群とゲフィニチブ投与群の胎齢15日同16日のホモ胎児について口蓋突起の癒合状況を調べたところ、胎齢18日とほぼ同程度の頻度で不完全口蓋裂(軽症化例)が認められたため、口蓋突起の癒合後破裂が起こっている可能性はなく、不完全口蓋裂への軽症化はhit and miss fashionであることが判明した。同調査で得られたホモ胎児の癒合途上の口蓋突起についてTUNEL法でアポトーシスを起こしている細胞の検出を行ったところ、消失しつつある口蓋突起内側縁上皮細胞(MEE細胞)にアポトーシスはほとんど認められず、上皮細胞の移動および上皮-間葉分化転換によりMEE細胞が消失して口蓋突起が癒合することが示唆された。本年度は、妊娠母獣への腹腔内投与を介した胎児へのDNAメチル化酵素阻害剤の暴露が次世代に影響を及ぼす可能性の有無について、下記の2項目に焦点を当てて調査した。1)胎児へのDNAメチル化酵素阻害剤の暴露が次世代の口蓋突起内側縁上皮(MEE)細胞の最終分化能力に与える影響の調査妊娠母獣の妊娠13日15日にDNAメチル化酵素阻害剤を投与(RG1085mg/Kg/day、3日間投与)し、出産させた仔を810週齢まで育てたC57BL/6J系統Tgfb3+/-(ヘテロ接合体)の雌雄を交配して、DNAメチル化酵素阻害剤を投与せずに妊娠14日で胎児を取り出し、単一口蓋突起回転浮遊培養法でMEE細胞の最終分化能力(MEE細胞の消失能力)を組織学的に解析した。その結果、野生型(Tgfb3+/+)胎児の口蓋突起の最終分化能力は、無処理群の野生型胎児と比べて特に変化が認められなかった(n=12)。本研究で用いたDNAメチル化酵素阻害剤RG108の投与は次世代のMEE細胞の最終分化能力に何ら影響を与えないことが判明した。2)胎児へのDNAメチル化酵素阻害剤の暴露が次世代胎児への口蓋裂表現型に与える影響の調査
高度ネットワーク情報フィルタリングのための情報処理技術に関する研究

アプリケーションレベルでHTTPメッセージを中継するプロキシサーバは,広域ネットワーク上で効率的に情報を伝達するために重要な役割を果たす.本研究では,プロキシサーバの高度な中継/変換技術を,「高度ネットワーク情報フィルタリング」と呼び,その高度化に必要な要素技術を検討した.平成9年度では主に,メッセージ中継時に既存のプロキシサーバと連携してコンテンツ変換を行う「共通フィルタサーバ」の設計および試作を行った.プロキシサーバ上でのHTTPメッセージのコンテンツ変換は,HTTPによる情報流通の高度化に向けての多様な可能性を持つ.共通フィルタサーバの設計では,汎用のアプリケーションプロトコル中継サーバであるDeleGateの利用を前提として,DeleGateが持つCFI(Common Filter Interface)と呼ばれるコンテンツ変換機能を,HTTPメッセージヘッダのテンプレートを登録したデータベースを用いて拡張し,一般的なクライアントとの間で動作確認を行った.平成10年度では主に,プロキシーサーバのアクセスログに焦点をあてて,その統計情報を利用して中継サーバの最適配置や類似クライアントの自動抽出を行うための分析手法を検討した.ここで,大規模サイトにおいては短期間であってもログファイルの量は膨大なものになることから,あらかじめ定めた数学的な情報基準にしたがってログデータを要約することを試み,さらに,要約したデータに対して文献検索の分野で近年注目されている自動索引づけ手法LSI(Latent Semantic Indexing)を適用することで,クライアント間の類似度を求める手法を提案した.また,提案手法を用いて,実際に大規模プロキシーサイトで観察されたログデータを分析し,単純な頻度に基づく方法よりも,クライアント間の類似関係を有効に抽出できることを示した.アプリケーションレベルでHTTPメッセージを中継するプロキシサーバは,広域ネットワーク上で効率的に情報を伝達するために重要な役割を果たす.本研究では,プロキシサーバの高度な中継/変換技術を,「高度ネットワーク情報フィルタリング」と呼び,その高度化に必要な要素技術を検討した.平成9年度では主に,メッセージ中継時に既存のプロキシサーバと連携してコンテンツ変換を行う「共通フィルタサーバ」の設計および試作を行った.プロキシサーバ上でのHTTPメッセージのコンテンツ変換は,HTTPによる情報流通の高度化に向けての多様な可能性を持つ.共通フィルタサーバの設計では,汎用のアプリケーションプロトコル中継サーバであるDeleGateの利用を前提として,DeleGateが持つCFI(Common Filter Interface)と呼ばれるコンテンツ変換機能を,HTTPメッセージヘッダのテンプレートを登録したデータベースを用いて拡張し,一般的なクライアントとの間で動作確認を行った.平成10年度では主に,プロキシーサーバのアクセスログに焦点をあてて,その統計情報を利用して中継サーバの最適配置や類似クライアントの自動抽出を行うための分析手法を検討した.ここで,大規模サイトにおいては短期間であってもログファイルの量は膨大なものになることから,あらかじめ定めた数学的な情報基準にしたがってログデータを要約することを試み,さらに,要約したデータに対して文献検索の分野で近年注目されている自動索引づけ手法LSI(Latent Semantic Indexing)を適用することで,クライアント間の類似度を求める手法を提案した.また,提案手法を用いて,実際に大規模プロキシーサイトで観察されたログデータを分析し,単純な頻度に基づく方法よりも,クライアント間の類似関係を有効に抽出できることを示した.アプリケーションレベルでHTTPメッセージを中継するプロキシサーバは,広域ネットワーク上で効率的に情報を伝達するために重要な役割を果たす.このことから現在,プロキシサーバの高度運用のために必要な要素技術の開発を目的として研究を行っている.本年度はまず,メッセージ中継時に既存のプロキシサーバと連携してコンテンツ変換を行う「共通フィルタサーバ」(Common Filter Server)の実現に向けて,設計および試作を行った.プロキシサーバ上でのHTTPメッセージのコンテンツ変換は,HTTPによる情報流通の高度化に向けての多様な可能性を持つ.共通フィルタサーバの設計では,汎用のアプリケーションプロトコル中継サーバであるDeleGateの利用を前提として,DeleGateが持つCFI(Common Filter Interface)と呼ばれるコンテンツ変換機能を,HTTPメッセージヘッダのテンプレートを登録したデータベースを用いて拡張した.また試作はスクリプト言語であるPerlを用いて行い,一般的なクライアントとの間で動作確認を行った.上記で提案した共通フィルタサーバは,複数のプロキシサーバからの統計情報を一括して管理する統計サーバとしても利用できる.そこで本研究では,このようなログファイルの有効利用についても検討を開始している.具体的には,文献検索の分野で近年利用されている自動索引づけ手法LSI(Latent Semantic Indexing)をHTTPアクセスログに対して適用し,クライアントホスト間の類似度を求めることによって,プロキシサーバの最適配置や効率的な連携に役立てる手法を開発している.ネットワークの相互接続点において,両者の違いを吸収して円滑に通信を行うために,高度な情報の中継/変換技術が必要になっている.本研究では,このような機能を「高度ネットワーク情報フィルタリング」と呼び,平成9年度から本年度にかけての2年間を用いて,その高度化に必要な要素技術を検討した.本年度では特に,HTTPのプロキシーサーバに焦点をあてて,そのアクセス統計を利用して中継サーバの最適配置や類似クライアントの自動抽出を行うための分析手法を検討した.ここで,大規模サイトにおいては短期間であってもログファイルの量は膨大なものになることから,あらかじめ定めた数学的な情報基準にしたがってログデータを要約することを試み,さらに,要約したデータに対して文献検索の分野で近年注目されている自動索引づけ手法LSI(Latent Semantic Indexing)を適用することで,クライアント間の類似度を求める手法を提案した.また,提案手法を用いて,実際に大規模プロキシーサイトで観察されたログデータを分析し,単純な頻度に基づく方法よりも,クライアント間の類似関係を有効に抽出できることを示した.

本研究で提案した手法は,大量のデータから有用な情報を抽出するデータ発掘の前処理として用いることもできる.そこで,大量の単語を含む全文テキスト(論文)の類似度計算問題に対しても同様のデータ集約を適用して,有効性を調べた.
非造影ＭＲＩによるステントグラフト内挿術後のエンドリーク検出法の確立

大動脈瘤に対するステントグラフト施行後のエンドリークの検出は晩期破裂を予防するために重要とされ、造影CTを用いた経過観察が広く行われている。しかし、腎機能低下のため造影剤を使用できないことも多い。2012年9月より2014年3月までの間に26症例の蓄積ができ、この時点での統計学的解析を行ったところ、この新しい撮像法を含む非造影MRIは造影CTをreference standardとした場合に良好な感度と特異度を有しており、将来的に造影CTの代替法となりうる方法と考えられた。2014年4月に現時点での研究成果を2014年12月の北米放射線学会で発表すべく、演題抄録を提出している。採否は2014年7月中に判明する予定である。2013年度中は蓄積された症例数が少ないため、学会・論文発表を行うことができなかったが、類似の研究に関する情報を収集するため、2013年5月の日本インターベンショナル・ラジオロジー学会、9月の日本核磁気共鳴医学会、12月の北米放射線学会に出席した。いずれの学会でもステントグラフト施行後の腎機能低下は臨床的に問題となっており、「造影剤を用いずにステントグラフト内挿術後のエンドリークを画像化する」という発表は現時点で認められず、我々の研究の新規性と臨床上の有用性を再確認できた。非造影MRIによるステントグラフト内挿後のエンドリークの検出法の確立に向けて、平成24年度はファントム実験の成果をまとめ、12月に米国シカゴで行われた北米放射線学会において研究成果を発表し、国際核磁気共鳴学会の発行するJournal of Magnetic Resonance Imaging誌に投稿して、これが受理され、以下のごとく25年1月号の同誌の電子版に掲載された。この実験結果により、MSDE法を併用したbTFE法によりエンドリークの検出が可能であることが確認され、撮像法の最適化に寄与するデータも得られた。また、ボランティアを対象とする人体での撮影の最適化を行い、倫理委員会の承認を経て、現在臨床例での症例の蓄積中である。大動脈瘤に対するステントグラフト内挿術後の経過観察には広く造影CTが行われている。経過観察の最大の目的は瘤内への血流の残存(エンドリーク)の検出である。しかし、高齢で腎機能が低下した患者が多いため、造影剤を使用できない症例にしばしば遭遇する。本研究の目的は造影剤を使わない非造影MRIでエンドリークを検出する手法を開発することである。平成24年9月よりステントグラフト内挿術後の患者を対象とする臨床研究を開始し、平成26年8月までの2年間に46例の症例の蓄積ができた。解析の結果、造影CTをreferencestandardとした場合、エンドリークの感度、特異度は第1読影者で91%、86%、第2読影者で91%、89%といずれも高値であり、読影者間の一致度もカッパ値0.849と高かった。本研究成果を平成26年12月の北米放射線学会で発表し、現在英文誌に投稿すべく論文を執筆中である。大動脈瘤に対するステントグラフト治療に特有の合併症として瘤内への血流が残存するエンドリークがあり、造影CTによる術後の経過観察が重要である。しかし、大動脈瘤の患者では腎機能の悪いことがしばしばあり、造影CTが施行できず臨床的に問題となっている。本研究の目的は造影剤を用いず、MRIによりエンドリークを描出する画像診断法を開発することである。2012年度後半から2014年度にかけて、胸部または腹部のステントグラフトを施行した症例のうち、非造影MRIと造影CTの両方が施行可能であった46名の患者を対象とする臨床研究を行った。造影CTをreferencestandardとして、2名の放射線科医による独立した読影実験を行った。造影CTでは10例の患者にエンドリークが認められ、そのうち9例のエンドリークをMRIで2名の放射線科医が正しく診断した。また、3名の患者にアーチファクトによる偽陽性病変を認めた。非造影MRIのエンドリーク検出における感度は91%、特異度は91%、正確度は91%、陽性的中率は77%、陰性的中率は97%であり、おおむね良好な診断能を示した。研究成果は2014年12月にシカゴで開催された第100回北米放射線学会と2015年9月に東京で行われた第43回日本磁気共鳴医学会総会で発表し、論文が2016年に3月にEuropean Radiology誌の電子版に掲載された。最終年度は主に同論文の執筆と投稿を行った。当初の予定通りファントム実験にてmotion-sensitized driven equilibrium法(MSDE)をbalancedturbo field法(BTFE)に組み合わせた非造影MRIによるエンドリークの検出法を開発し、その後の臨床研究でその臨床的実用性について実証できた。2度の北米放射線学会での発表、ファントム実験の英文誌への掲載も達成できた。放射線診断・IVR現在、臨床研究の研究成果を英文誌に投稿すべく論文を執筆中であり、本年度内に論文の受理が得られるよう尽力する。

2012年度でのファントム実験およびその学会・論文発表ができ、そのあとに開始した臨床研究では2013年度までの症例集積が目標の30症例に対して26症例までできている。また、2014年12月の北米放射線学会でも発表に向けて抄録の提出も済んでいる。採否は7月に判明する予定である。予測通りのファントム実験での結果が得られ、その学会・論文発表を行うことができた。臨床例への応用では、ファントム実験と必ずしも同じ条件での撮像はできず、最適化に3か月ほど時間を要したが、現在は撮像法を固定して症例を蓄積している。臨床研究の研究成果を平成26年12月の北米放射線学会で発表後、年度内に論文を執筆しようと尽力したが、定量的解析を追加する必要があるなどし、年度内に完成することができなかった。臨床研究の症例蓄積を進めて、本年度の北米放射線学会、来年度の日本IVR学会などで学会発表、さらに英文誌での論文発表を目指していく。臨床例での撮像件数を増やし、本年度中に30例の集積を目指す。集積が達成できた時点で画像の解析を行い、学会・論文発表につなげていく。論文作成のための物品費、英文校正費、情報収集のための旅費等として使用する。2013年度は臨床研究のための症例の蓄積のみを行ったため、旅費以外の経費をほとんど使用しなかったため。現在、2014年12月の北米放射線学会での発表と論文発表の準備中であり、これらにかかわる旅費・英文校正費等の諸費用に使用する。また、情報収集目的に9月の欧州IVR学会にも出席予定であり、この旅費も申請予定である。また、症例集積が完了した時点で放射線技師に対する謝金を支払う予定である。撮影は診療時間外で実施されるため、それにかかわる臨床放射線技師への謝金が必要であり、症例集積後の画像解析、統計解析用のソフトウェアの購入も予定している。また、国内、海外での研究成果の発表の旅費や論文発表時の英文校正などに使用する予定である。
副甲状腺と骨におけるカルシウム感知受容体の役割に関する研究

1.原発性及び続発性副甲状腺機能亢進症(pHPTとsHPT)の病態重症度や進展度には大きなheterogeneityが存在し、遺伝要因の関与が示唆される。私共はpHPT、sHPTともにCa感知受容体(CaSR)のcodon990とintoron5の遺伝子型の違いにより血中副甲状腺ホルモン(PTH)値に差があることを見い出し、遺伝要因としてCaSR遺伝子多型の関与を示唆するものであった。2.ヒト副甲状腺の初代培養系を用いた検討より、細胞外Ca濃度上昇により増殖が抑制されること、さらにCaSR作動薬の検討よりこの増殖の調節はCaSRを介していることを見い出した。3.明らかな副甲状腺腫大を認める家族性低Ca尿性高Ca血症2例のCaSR塩基配列と機能解析より、CaSRの不活性型変異(R220W, R648stop)に起因することを示した。4.sHPT群の副甲状腺では正常群に比しCaSR及びビタミンD受容体(VDR)の著明な発現低下と増殖能の指標であるKi67陽性数(KN)の増加が認められた。次にKNとCaSR及びVDRの相関を検討した結果、両者ともに有意の負相関を認めた。さらに重回帰分析を行った結果、副甲状腺増殖亢進にVDRよりCaSR発現低下がより強く関与することを見い出した。またpHPTの検討でも同様の結果が得られた以上、2、3、4の結果より、CaSRは副甲状腺細胞増殖の調節に重要な役割を担っていることが示された。5.CaSR作動薬等の検討より、細胞外Ca濃度上昇による骨芽細胞増殖促進機序にp42/44とp38 MAP kinase活性化を介する細胞内情報伝達機構が関わっていることを見い出した。一方、CaSR antisenseを導入した骨芽細胞株MC3T3-E1の検討等より、骨芽細胞に発現するCaSRは増殖のみならず機能の調節にも重要な役割を担っていることを明らかにした。(1)原発性及び続発性副甲状腺機能亢進症(1゚と2゚HPT)の病態の重症度や進展度におけるgenetic factorとしてのCa感知受容体(CaSR)の役割:1°及び2°HPTの病態の重症度には大きなheterogeneityが存在し、遺伝要因の関与が示唆される。我々は1゚と2゚HPT患者とも同様にCaSRのコドン990とイントロン5の遺伝子型の違いにより血中PTH値に差があることを見い出した。今回の結果はこの遺伝要因としてCaSR遺伝子多型が関わっていることを示唆するものであった。(2)副甲状腺細胞増殖の調節におけるCaSRの役割:2゚HPTのため副甲状腺摘除術にて切除されたヒト副甲状腺の初代培養系を用いた検討より細胞外Ca^<2+>濃度上昇により副甲状腺細胞増殖が抑制されること、さらにCaSR作動薬の検討によりこの増殖の調節はCaSRを介していることを見い出した。(3)1゚及び2°HPTにおける副甲状腺のCaSR及びビタミンD受容体(VDR)発現量と増殖能との比較解析:2゚HPT群の副甲状腺では正常群に比しCaSRおよびVDRの著明な発現低下と増殖能の指標であるKi67陽性数(KN)の増加が認められた。次にKNとCaSR及びVDRの相関を検討したところ両者ともに有意の負相関を認めた。さらに、重回帰分析を行った結果、副甲状腺細胞増殖亢進に対してVDRよりCaSR発現低下がより強く関与することを見い出した。

また1゚HPTの検討でも同様の結果が得られた。以上(2)と(3)の結果よりCaSRは副甲状腺細胞増殖の調節に重要な役割を担っていることが示された。(4)骨芽細胞増殖の調節におけるCaSRの役割とその機序:CaSR活性化に伴う骨芽細胞増殖の促進において、その細胞内情報伝達系としてP42/44とP38mitogen-activated protein kinaseの双方が関与していることを見い出した。1.骨芽細胞増殖と機能の調節におけるCa感知受容体(CaSR)の役割;CaSR作動薬等の検討より、細胞外Ca濃度上昇による増殖促進機序にP42/44とP38MAPkinase活性化を介する細胞内情報伝達機構が関わっていることを見い出した。一方、CaSRantisenseを導入した骨芽細胞株MC3T3-E1の検討等より、骨芽細胞に発現するCaSRは増殖のみならず機能の調節にも重要な役割を担っていることを明らかにした。2.原発性副甲状腺機能亢進症(pHPT)における副甲状腺のCaSR発現量と増殖能及び病態との関係:pHPT群の副甲状腺では正常群に比しCaSR発現の著明な低下と増殖能の指標であるKi67陽性数(KN)の増加が認められた。そしてKNとCaSR及び病態重症度にはそれぞれ高い負と正の相関が認められた。これらの相関関係は慢性腎不全に起因した二次性副甲状腺機能亢進症でみられた関係と同様であった。3.家族性低Ca尿性高Ca血症(FHH)例の検討:画像診断で明らかな副甲状腺腫大を呈したFHH2例を経験したDNA塩基配列とHEK細胞への導入による機能解析の結果、CaSRのヘテロの不活性型変異(R220WとR648stop)に起因するFHHであることを示した。一例は細胞内領域の変異であることより、この領域もCaSR活性化の情報伝達に重要な役割を担っていること、2と3の結果より副甲状腺に発現するCaSRは副甲状腺ホルモン(PTH)分泌のみならず副甲状腺細胞増殖の調節にも関わっていることが示された。
日本における外国人留学生の進学と労働市場への参入

2018年度は次の4つの研究調査を遂行した。第1に、日本の高等教育機関を卒業した外国人留学生の国別進路パターンの分析である。この調査のため、日本学生支援機構に対し、同機構が毎年発表する留学生の進路状況に関するデータについて、国別集計の作成を依頼して、提供を受けた。このデータを用いて、留学生の主要な送り出し国別に、卒業する高等教育機関のタイプの分布、就職や進学などを含む進路パターンの状況ならびに国別・高等教育機関別の進路状況の考察を行った。同調査は昨年度から継続している調査であるが、2018年度は同年中に新たに公表されたデータを用いた分析を実施することで、情報をアップデートした。第2に、日本の高等教育機関に現在在籍する外国人留学生のキャリアに関するインタビュー調査である。南・東南アジア出身の留学生を主たる対象として、計28名の回答者から、来日の理由、学習状況、アルバイト状況および将来のキャリア目標などについての回答を得た。大学、大学院、専門学校を含む多様な教育機関に在籍する留学生を対象とした。また、うち数名の回答者に対しては、複数回のインタビューを行った。第3に、日本に留学し、現在日本で就労する元留学生8名を対象に、現在の就労状況および将来のキャリア目標に関するインタビューを行った。上の調査と同様、この調査においても、多様な教育機関に在籍する留学生に聞き取りを実施した。第4に、日本で就労する元留学生だけではなく、留学後に帰国した者のキャリアを明らかにするため、日本への主要な留学生の送り出し国の一つであるネパールにおいて、日本留学経験者を対象にインタビュー調査を行った。聞き取りを通じて、日本での学習・生活経験に加えて、現在の生活状況、帰国を決意した経緯ならびに今後のキャリアに関する聞き取りを行った。2018年度の調査はおおむね順調に進展している。同年度は、統計資料の分析にもとづく調査とインタビュー調査の双方を実施することで、留学生のキャリア経路に関する洞察を相互補完的に獲得した。第1に、統計データを用いた留学生の国別進路パターンの分析では次の点を明らかにした。1つ目に、現在日本で急増している南・東南アジア出身の留学生の卒業後の経路について、数的に最大の国籍集団である中国人留学生とくらべて、日本語能力の差異などを反映して、日本での就職割合は相対的に低い水準に留まること。2つ目に、その一方で、南・東南アジア人留学生の日本での就職割合は近年、上昇傾向にあることである。第2に、留学生に対するインタビュー調査においては、学習と留学諸費用を捻出するための就労を両立しなければならない留学生もいることから、そのタイトなスケジュールが一部要因となって、コンタクトを取った留学生全員に対して聞き取りを実施することはできなかったが、最終的に30名近い留学生の協力を得ることができた。インタビュー調査においては、(1)在籍する学校の違いに沿って、奨学金など金銭的支援の受給状況が大きく異なっており、そのため学習・アルバイト状況にも大きな違いがあること、(2)他方、多くの留学生が卒業後、日本での就職を希望していること、(3)またなかには就職が決定した留学生もおり、幾つかの特定業種で留学生の就職が進行していること、などの諸点を把握することができた。また、現在日本に滞在する留学生だけでなく、日本で就業している元留学生、ならびにすでに母国に帰国した元留学生に対してもインタビューを行った。現在のところ、このインタビューの回答者の数は限定されているものの、聞き取りを通じて、留学後の就職状況や転職を含む留学生のキャリアの発展過程について重要な洞察を得た。主として次の課題の遂行を目指す。第1に、留学生の卒業後の就職状況に関するインタビュー調査を行う。これまでのインタビュー調査では、現在高等教育機関に在籍する留学生を対象に、彼/彼女らの生活状況のみならず将来的キャリア目標の聞き取りを行った。このインタビューの回答者には、今年度に卒業を迎えた者も含まれ、また来年度以降に卒業する者も多く存在する。さらには卒業見込みを待たずして就職が内定した者も存在する。そうした回答者に対して、就職状況について再度、聞き取り調査を行う。それを通じて、就職に対する意識、実際の就職の可否と就職活動の方法、また(就職が決定した場合)就業参照・職種と雇用条件などを調査する。そして、この調査結果と以前に得た調査結果を統合して考察することで、学生時代の経験や意識が、実際の就職状況とどのように関連しているのか(またはいないのか)を検討する。第2に、留学生の進路パターンに関する統計データ(日本学生支援機構)を用いた調査を継続的に行う。先に言及したように、南・東南アジア人留学生の日本での就職割合は、近年急速に上昇している。来年度に公表される最新年度のデータを入手し、新たな動向を把握する。そして、ここで得られた結果を、インタビュー調査の結果を関わらせながら考察する。第3に、元留学生に対するインタビュー調査も継続的に行う。彼/彼女らに対するインタビューの実施数はいまだ限られている。より多くの回答者にアクセスすることで、留学生の留学後の就職状況やキャリアの発展過程について、より幅広い知見を得ることを目指す。また、ここで得られたデータを上述の2つの課題から獲得された洞察を組み合わせることで、より多角的な視野から留学生の労働市場への参入過程について理解する。本研究は、日本の外国人留学生とくに近年その増加が著しい非漢字圏アジア人留学生に着目して、留学から卒業後の労働市場への参入へといたるキャリア・パスの把握を目指している。この目的を念頭に、2017年度は次の3つの課題を遂行した。

(1)日本の留学生政策の歴史的変遷、(2)留学生の進学と卒業後の進路パターンの統計的把握、(3)現在大学、大学院または専門学校に在籍する留学生の生活実態ならびにキャリア目標の予備的解明である。課題1については、主として公官庁が刊行する資料ならびに2次文献に依拠しつつ、2008年に策定された「留学生30万計画」の政策的背景を考察するとともに、同計画の策定を境とする留学生政策ならびに政府の取り組みに関する変化について整理を行った。課題2については、日本学生支援機構が保有する留学生データを参照しながら、分析を試みた。より具体的には、留学生の在籍学校種や卒業後の進路パターンについて、留学生の主要国籍別にまとめたデータを同機構より入手した。同データにもとづき、留学生の進学ならびに卒業の進路経路について検討を行うことで、労働市場の参入の有無それ自体も含めて、国籍別に重要な差異が存在することを発見した。課題3については、東北および関東圏に位置する大学・大学院・専門学校に通う留学生ならびに社会人元留学生に対して、各1時間ー1時間半ほどの予備的インタビュー調査を行った。この調査をとおして、質問票にある質問項目の確認・再検討を行うと同時に、留学生の学習・就労実態、留学経験の主観的評価、キャリアに関する見通しなどについて、準備的知識を獲得した。また関連フィールド調査として、大学主催の留学生就職支援シンポジウムへ参加、また大学で留学生教育を担当する教員に対するインタビューを行い、多面的な情報収集を行った。2017年度の途中、研究代表者に勤務先の変更が生じた。これによって留学生に対するインタビュー調査の実施に遅れが生じる結果となった。勤務先の変更によって、同調査の実施前に必要である研究調査の倫理審査の承認が現勤務校へと持ち越しとなったためである。また、現勤務校の所属部署において審査委員会の立ち上げに要した時間も加わり、結果的に今年度の本調査の実施には至らなかった。とはいえ、その他の課題の遂行においては、順調に進んだといえる。今日の留学生の増加とその実態を十分に理解するための前提であり、かつそのために不可欠な作業を遂行することができたからである。第1が、日本政府による留学生政策の変遷、ならびに同政策の今日的特徴とその課題の整理・分析であり、第2が、現在の留学生の在籍と進路パターンについて、利用可能な最新のデータを用いての統計的観点からの把握である。現在、これらの分析をとおして得られた知見にもとづく論考をまとめている。またさらに、留学生に対して実際に試験的インタビューを実施することができた。インフォーマントから質問項目などについてフィードバックを得ることで、質問テーマの並び替え、質問文言の変更、また質問項目の追加と削除など、質問票の改善のために有益な情報を入手することができた。これら一連の作業は、本調査の遂行に向けて不可欠である。今年度に課題は残ったものの、上述のタスクの実施を踏まえ、総合的な観点から調査は順調に進展していると判断する。2018年度は次の4つの研究調査を遂行した。
日本人特異的致死性びまん性肺胞障害の原因となるMUC4遺伝子変異の研究

本研究の基礎的データとなる各民族での多型頻度の取得,及び発現解析の基礎となる発現ベクターの作成とも順調に進行している.サザンハイブリダイゼーションは200例を終了.次世代シークエンサーで具体的な塩基配列を決定可能にするための遺伝子工学的反応手順,条件を決定し,さらに決定した分子配列をアセンブルするためのソフトウエアをプログラミング言語Rubyにて開発した.MUC4発現ベクター作成に関しては,4種の発現ベクターをBAC中に作成した.これをpUC系plasmidに移し,大量精製を可能にした.COS7細胞へ導入したところ,20%程度の細胞で発現を確認できた.今後シグナル伝達系の解析に入る.M遺伝子工学で使用される通常のベクターでは,MUC4反復配列は徐々に欠失を起こし,クローニング困難であった.そのため,反復配列が欠失しにくいと言われる直鎖状ウイルスベクターpJAZZを用いて反復配列が安定に保たれることを確認した.MUC4反復配列が含まれるMUC4 exon 2を,特発性肺線維症患者よりクローニングした.片方のアレルは反復配列を354個,もう片方のアレルは反復配列を349個含んでいた.反復配列の全塩基配列を決定した.MUC4反復配列は,長さの異なるアレルが主として3つある.それらのすべてのアレルを,一般に公開されているBACライブラリからクローニングした.cDNAでMUC4反復配列のexon 2より前,MUC4反復配列のexon 3以降をすべて人工合成した.すべての配列を連結し,CMVプロモーターを5'に付加,さらに3'にFLAG tagを付加した.MUC4と細胞膜上で会合すると推定されているERBB2,ERBB3も,同様のコンストラクトを作成し,それぞれV5,HA-tagを付加した.MUC4解析で最も難しいのは,反復配列をどのように安定にクローニングするかである.現在まで,MUC4の機能がほとんど明確にされていないのは,反復配列を適切に扱う分子生物学的手法が確立されていなかったためである.今回,我々は,MUC4反復配列を,PCRを使用せずに患者ゲノムDNAからdirect cloningする手法を案出し,様々な多型のMUC4発現プラスミドを作成できるようになった.さらに,多数の反復配列を有するDNAの全塩基配列を決定するアルゴリズムも案出した.これにより,MUC4全長cDNAを得ることができるようになった.さらに,この手法を用いて全長MUC4発現プラスミドを構築し,MUC4の機能解析が可能となった.近年,日本人肺の脆弱性が指摘されている.(1)薬剤性肺障害が他国(西洋や他のアジア人)より高頻度で見られ,高率に致死的な経過をたどること,(2)肺線維症を有する患者で他国より高頻度に急性増悪が起こり,高い致死率を示すと推定されることが典型例である.とくに,gefitinibの肺障害は,疫学データがしっかりしており,民族差が明確に示されている.上記2つの病態以外にも,何らかのきっかけでびまん性肺胞障害を特徴とする肺障害が起こり,患者が重篤な状態に陥る,または死亡する病態が医療のさまざまな分野で見られるが,それらにも日本人に高率に発症していると推定される病態がある.我々は,この病態は,「びまん性肺胞障害症候群」と呼んでも良いのではないかと考えている.薬剤性肺障害や特発性肺線維症急性増悪に関与する遺伝因子は多数あると想定されるが,その中でも特に強く関与する,すなわち,遺伝的効果の高い遺伝因子を1つ想定すると民族差を説明しやすい.この場合,遺伝因子の民族内頻度の差が,そのまま疾患頻度の民族差として現れる.「びまん性肺胞障害症候群」は民族特異的な遺伝因子により引き起こされる,というのが我々の作業仮説である.患者データおよび患者画像を検討して診断確実と考えられた症例を98名に対して施行した.対照として,コーカシアン(53名),中国漢人(68名),日本人(70名)エクソームfastqデータを,1000人ゲノムプロジェクトより取得した.全てのデータは,CLC Genomics Workbench(CLC bio)にてヒトゲノム標準配列(hg19)にmappingした.各患者で,90%以上のexon領域が10回以上読まれていることを確認したのち, Probablistic variant detectionアルゴリズムにて,ヒト標準配列と異なる塩基配列(以下,変異と記す)を取得した.日本人(患者98名+対照70名)の1名以上で検出された変異のうち,アミノ酸変化を生じる変異(non-synonymous変異)は全ゲノムで180215カ所に見いだされた.これら全てについて,イレッサ肺障害患者+タルセバ肺障害患者合計36名と一般日本人70名で関連解析を行った.関連解析では,MUC4の反復配列に有意な関連が集中していた.MUC4の反復配列内に異常配列が存在するか否か検索するため,患者MUC4をクローニングし,全塩基配列を決定した.その結果,MUC4反復配列内に3塩基対の挿入配列が存在することがわかった.この挿入配列は,肺障害患者の9割に認められた.MUC4には数種類の制限酵素長多型が存在する.MUC4の機能を検討するためには,それぞれの発現ベクターを作成し,それらの機能を比較検討しなければならない.我々は,3塩基挿入が確認されている多型,さらに4種類の制限酵素多型を持つ5種類の発現ベクターを作成した.これらの発現ベクターと,その受容体として働くERBB2,ERRB3の発現ベクターをco-transfectionする準備が整った.

本研究の基礎的データとなる各民族での多型頻度の取得,及び発現解析の基礎となる発現ベクターの作成とも順調に進行している.サザンハイブリダイゼーションは200例を終了し,ひとまず達成とする.サザンハイブリダイゼーションの結果を参考にし,次世代シークエンサーで具体的な塩基配列を最終決定する.次世代シークエンサーでのデータ取得を可能にするためには,48塩基対が350回反復する塩基配列を決定可能にするための遺伝子工学的反応手順,条件を決定し,さらに決定した分子配列をアセンブルするためのソフトウエアを開発する必要があった.遺伝子工学的反応手順は,長い反復配列であるため,独自の手法が必要であった.この反応は多数の手順を経るため,その反応条件設定には時間を要したが,設定は終了し,104検体分の次世代シークエンサー出力を得た.この配列をアセンブルするソフトウエアをプログラミング言語Rubyにて作成した.多数の類似反復配列をアセンブルするためには,通常のゲノムアセンブルプログラムでは使用していない独自のアルゴリズムを作成する必要があった.最長の反復配列が順調にアセンブルされることを確認した.MUC4発現ベクター作成に関しては,日本人200例の制限酵素断片長多型のうち,4種の発現ベクターをBAC中に作成した.これをpUC系plasmidに移し,大量精製を可能にした.ERRB2,ERBB3のstable transfectantを作成した.作成したMUC4発現ベクターにはFLAGタグがつけてあるが,COS7細胞へ導入したところ,20%程度の細胞が抗FLAGタグ抗体で染色できた.導入高率を高めるため,electroporation条件を検討している.十分な導入効率が得られたら,ERBB2,ERBB3 stable transfectantに導入し,シグナル伝達系の解析に入る.本研究の基礎的データとなる各民族での多型頻度の取得,及び発現解析の基礎となる発現ベクターの作成とも順調に進行している.サザンハイブリダイゼーションは200例を終了.次世代シークエンサーで具体的な塩基配列を決定可能にするための遺伝子工学的反応手順,条件を決定し,さらに決定した分子配列をアセンブルするためのソフトウエアをプログラミング言語Rubyにて開発した.MUC4発現ベクター作成に関しては,4種の発現ベクターをBAC中に作成した.これをpUC系plasmidに移し,大量精製を可能にした.COS7細胞へ導入したところ,20%程度の細胞で発現を確認できた.今後シグナル伝達系の解析に入る.MUC4,ERBB2,ERBB3を培養細胞にco-transfectionさせ,生存シグナル分子(AKTなど),増殖シグナル分子(ERKなど)の変化を観察する.3塩基挿入配列のあるMUC4発現ベクター,無いMUC4発現ベクターでのシグナル伝達系変化を観察する.また,3塩基挿入配列によるシグナル異常の補完を観察できるアッセイ系としても使用する予定である.29年度が最終年度であるため、記入しない。呼吸器内科学29年度が最終年度であるため、記入しない。