hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
難治性薬剤抵抗性高血圧に対する革新的な腎動脈交感神経アブレーション法の開発

高血圧自然発症ラットに対する腎デナベーション(RDN)により、3か月後の血圧がおよび腎組織ノルエピネフリン濃度も有意に低下した。慢性房室ブロック犬モデルに対して腎動脈内へのアデノシン持続注によって収縮期血圧が20ー30mmHgの上昇がみられ、RDNによりこの血圧反応が減弱し、除神経の達成度が腎組織ノルエピネフリン量と相関した。慢性房室ブロック犬モデルを用いて外科的にRDNを施行すると収縮期血圧の低下、心室自動能の抑制、心拍出量の減少、QT間隔と心室有効不応期の延長、血漿レニン活性の低下を認めた。RDNはアミオダロンより心室自動能の抑制、心室有効不応期の延長させ、類似の臨床的有効性を示した。平成25年度の目的は、1開発した2Fの高周波アブレーションカテーテル装置の安全性及び有効性を検証、2高血圧・心不全犬モデルにおける外科的な交感神経の除神経を施行し、その病態を明らかにすることである。1経皮的に腎動脈内に挿入可能な2Fサイズのペーシング機能を備えた高周波アブレーションカテーテルを作成した。3.5kgのウサギ10羽を用いて、右大腿動脈より4Frシースを留置し、2Frのアブレーションカテーテルを腎動脈に挿入し、左右腎動脈の遠位部より2mm間隔で高頻度ペーシング刺激を行い、脈拍及び血圧が前値より10%以上低下する部位(自律神経叢)を同定した。また、同部位に8W/2分間のアブレーションを行い、通電後に高頻度ペーシング刺激により血圧と脈拍の変化が消失するのを確認した。現在、腎動脈周囲の自律神経叢、腎動脈周囲神経及び血管の焼灼状態をHE染色、tyrosine hydroxylase免疫染色を用いて、神経再生の程度について、GAP-43免疫染色にて評価している。2慢性房室ブロック犬モデルを用いて腎動脈周囲の交感神経を外科的に除去し(腎デナベーション)、処置前と処置開始4週後に心臓電気薬理学的作用(血行動態、電気生理、神経体液性因子)を評価した。処置前と比較して収縮期血圧の低下、心室自動能の抑制、心拍出量の減少、QT間隔と心室有効不応期の延長、および血漿レニン活性の低下を認めた。1腎動脈内へのアデノシン持続注により、容量依存性に腎交感神経活性亢進による血圧上昇反応が生じることが報告されている(J Hypertension 1984)。交感神経活性化高血圧・心不全犬モデルに対して、ケタミン/キシラジンによる静脈麻酔の後に、腎動脈内へのアデノシン持続注によって収縮期血圧が20-30mmHgくらい上昇する反応がみられた。腎交感神経アブレーションを施行すると、この血圧上昇反応が減弱し、除神経の達成度が腎組織ノルエピネフリン量と相関することが判明した。2慢性房室ブロック犬モデルを用いて腎動脈周囲の交感神経を外科的に除去した(腎ディナベーション)5頭とアミオダロン投与した群6頭(200mg/日×7日間+100mg/日×21日間)に分けて、処置前と処置開始4週後に心臓電気薬理学的作用(血行動態、電気生理、神経体液因子)を評価した。腎ディナベーション処置前と比較して収縮期血圧の低下、心室自動能の抑制、心拍出量の減少、QT間隔と心房及び心室有効不応期の延長、及び血漿レニン活性の低下を認めた。アミオダロン群では、心房有効不応期の延長以外は、血行動態および電気生理学的変化は見られなかった。アンギオテンシンII、アルドステロン、カテコラミンは両群とも減少傾向であった。以上から、腎ディナベーションはアミオダロンよりも心室自動能の抑制、心室有効不応期の延長させるが、心房有効不応期の延長は同等であり、アミオダロンと類似性が示唆された。1高血圧自然発症ラットに対する血管外からの腎デナベーションを施行し、コントロールに比べて3か月後に収縮期血圧および拡張期血圧ともに有意に低下し、腎組織ノルエピネフリン(NE)濃度も有意に低下することを報告した。(Life Sci. 110:86-92, 2014)2慢性房室ブロック犬に対して、腎動脈内へのアデノシン持続注によって収縮期血圧が20-30mmHgの上昇がみられ、腎デナベーションを施行すると、この血圧反応が減弱し除神経の達成度が腎組織ノルエピネフリン量と相関することが判明した。3慢性房室ブロック犬モデルを用いて腎デナベーションの心臓電気薬理学的作用(血行動態、電気生理、神経体液性因子)を評価し、アミオダロン慢性投与による結果と比較検討した。除神経群では腎動脈周囲の交感神経を外科的に除去し、アミオダロン群ではアミオダロン200 mg/日を7日間経口投与後に引き続き100 mg/日を21日間経口投与した。両群それぞれ処置前と処置開始4週後に心臓電気薬理学的作用を評価した。除神経群では、処置前と比較して収縮期血圧の低下、心室自動能の抑制、心拍出量の減少、QT間隔と心室有効不応期の延長、および血漿レニン活性の低下を認めた。アミオダロン群における心臓電気薬理学的作用は除神経群に類似していた。以上より、腎デナベーションはアミオダロンよりも心室自動能の抑制、心室有効不応期の延長させるが、心房有効不応期の延長は同等であり、アミオダロンと類似の臨床的有効性を有することを報告した。(Circ J. 2016 in press)

高血圧自然発症ラットに対する腎デナベーション(RDN)により、3か月後の血圧がおよび腎組織ノルエピネフリン濃度も有意に低下した。慢性房室ブロック犬モデルに対して腎動脈内へのアデノシン持続注によって収縮期血圧が20ー30mmHgの上昇がみられ、RDNによりこの血圧反応が減弱し、除神経の達成度が腎組織ノルエピネフリン量と相関した。慢性房室ブロック犬モデルを用いて外科的にRDNを施行すると収縮期血圧の低下、心室自動能の抑制、心拍出量の減少、QT間隔と心室有効不応期の延長、血漿レニン活性の低下を認めた。RDNはアミオダロンより心室自動能の抑制、心室有効不応期の延長させ、類似の臨床的有効性を示した。1腎交感神経アブレーションを施行すると、アデノシンによる血圧上昇反応が減弱し、除神経の達成度が腎組織ノルエピネフリン量と相関することが判明した。2腎ディナベーションはアミオダロンよりも心室自動能の抑制、心室有効不応期の延長させるが、心房有効不応期の延長は同等であり、アミオダロンと類似性を見いだすことが出来た。循環器内科腎交感神経アブレーションによる除神経達成度を示す指標を確立して、病態に応じた腎交感神経アブレーション法の確立をめざす。高頻度ペーシング刺激により腎動脈周囲の自律神経叢の同定が可能であった。慢性房室ブロック犬モデルを用いて腎デナベーションにより、心臓電気薬理学的作用(血行動態、電気生理、神経体液性因子)を明らかにした。正常犬、高血圧・心不全犬モデルにおいて、経カテーテル的腎デナベーションによる自律神経叢の同定及び心臓電気薬理学的作用を明らかにする。年度内に使いきれなかった物品費物品購入に使用予定
森林の持続可能な管理とその環境保全機能に関する研究―「環日本海地域」を中心に―

本研究の目的は、森林の持続可能な管理に資する林業経営のあり方、森林資源を活用した農山村の地域振興、森林の有する公益的機能及びとりわけその環境保全機能を社会科学の立場から総合的・実証的に明らかにすることにある。本研究は、3年間にわたる8名の共同研究で実施された。国内の共同調査としては、いずれも森林資源・生態が豊かで林業が盛んな以下の地域が選定され、実施された。(1)長野県木曽福島町及びその周辺、(2)広島県庄原市及び岡山県勝山町等の中国山地、(3)北海道下川町及び網走市・斜里町・知床半島、(4)青森県下北半島及び弘前市・西目屋村・白神山地、(5)宮崎県宮崎市・綾町である。さらに、研究代表者単独では、FSC(「森林管理協議会」)の森林認証を取得した以下の地域を視察し、比較検討を行った。(1)三重県速水林業、(2)アサヒビール広島県庄原林業所、(3)高知県梼原町森林組合、(4)東京農工大学栃木県演習林、(5)岐阜県白川村森林組合。以上の地域ではぐ国有林、民有林ともに、スギ、ヒノキなどの国産材の需要低迷と労働力不足等の要因で、森林の持続可能な管理が困難な事情が見出された。しかし、FSCの認証を得た森林等では、間伐を積極的に進めたり、森林の有する生態学的・環境保全的機能を維持・発揮させるために、モニタリングシステムを構築するなどの真摯な努力が払われていることが明らかになった。国外の調査としては、極東ロシア沿海州のウラジオストク・ナホトカ市などを訪問し、シベリアタイガの「違法伐採」、北洋材の中国、日本等への輸出状況を調査した。また、韓国の慶尚道三市(釜山、大邱、慶州)などを訪問し、都市緑地の創出活動とか当地の環境NGOの活動全般を調査し、大いに見聞を広げることができた。本研究の目的は、森林の持続的な管理に資する林業経営のあり方と森林の持つ環境保全機能を十全に発揮させるための諸方策を社会科学の立場から総合的・実証的に明らかにすることにある。平成13年度では、以下のように、ほぼ当初の計画に沿った研究を遂行することができた。(1)学術文献等の収集では、研究代表者富井をはじめ、研究分担者各自の専門に係わる関係図書の購入に努めた。(2)文献研究と国内外の調査研究をつなぐため、関係行政機関・団体における聞き取り調査・原資料収集を次のような所で行った。広島県林務総室森林保全室、林野庁木材貿易対策室、FoE(地球の友)ジャパン東京事務所等々。(3)本共同研究のため、「研究打合会」を重ねたほか、林政学の専門学者大学教授を招いて「森林の持続可能性・環境保全機能・環日本海地域の森林について-若干の見聞にもとづいて-」との講演をしていただき、研究を深めることができた。(4)国内の現地実態調査では、長野県方面の木曽福島町役場、中部森林管理局支所、長野県林務部等々を訪問し、とくに「民有林と国有林の施業連携の促進事業」、「みどりのダム構想事業」等の実状把握を行った。さらに、広島県三次市、庄原市、岡山県勝山町の中国山地の調査では、アサヒビール庄原林業所のFSC森林認証を取得した森林を視察したほか、国産材の集積地勝山町にて木材取引市場等を視察し、見聞を深めた。

(5)ロシア極東地方沿海州のウラジオストク・ナホトカ市での調査旅行では、ロシア極東国立大学の専門学者と交流するとともに、当地の環境NGO「ブローク」等を訪問し、シベリアタイガの「違法伐採」、北洋材の日本、中国、韓国等への輸出状況等の聞き取り調査を行った。また、中国への木材の鉄道輸送、木材埠頭・木材野積場、「ヤーセニ」(トネリコ)の生育現場なども視察できた。以上の研究活動で、今後の個別・具体的な研究課題の重要な示唆が得られた。本研究の目的は、森林の持続的な管理に資する林業経営のあり方と森林の持つ環境保全機能を十全に発揮させるための諸方策を杜会科学の立場から総合的・実証的に明らかにすることにある。平成14年度では、以下の研究を遂行した。(1)国内の共同調査研究としては、(1)北海道上川郡下川町の森林組合並びに同町ふるさと開発振興公社クラスター推進部で、町と森林組合が協力して林業・林産クラスターを地域経済発展の要として活発に事業展開を行っている現状を調査し、同時に北大北方圏フィールド科学センターの専門家と研究交流を行った。(2)北海道網走市・斜里町・知床を訪問し、網走市所在の東京農業大学の地域経済の研究者と現地打合せ会を行った上で、斜里町で「ナショナル・トラスト知床100平方メートル買い取り運動」、「知床原生林伐採問題」等のヒアリングを行い、林野庁指定の「知床森林生態系保護地域」の現地踏査を実施した。(2)国外の共同調査研究では、森林生態が豊富な韓国慶尚道三市(釜山・大邸・慶州)の予備・本調査を実施した。この調査では、韓国の環境NGOと研究交流し、森林・都市緑地の保全の取組のほか、韓国環境問題全般についても新たな知見を得た。(3)以上のほかに、研究代表者富井は、(1)わが国でFSC(森林管理協議会)の認証を取得した四つの地域(広島県庄原市アサヒビール林業所、東京農工大学演習林、三重県海山町速水林業所、高知県檮原町森林組合)での現地調査と比較研究を行った。また、(2)「森林法上の林地開発許可制度と『環境アセスメント』」と題する報告を日本環境学会第28回研究発表会で行ったほか、東京都国立市の「大学通り」街路樹景観破壊紛争の現地調査等も行った。本研究の目的は、森林の持続的な管理に資する林業経営のあり方と森林が有する環境保全機能を十全に発揮させるための諸方策を社会科学の立場から総合的・実証的に明らかにすることにある。平成15年度(最終年度)では、以下の研究を遂行した。(1)国内の共同調査研究としては、(1)青森県下北森林管理署を訪問し、薬研渓流のヒバの保護林及び付近の森林生態系保護地域を視察した。次いで、津軽森林管理署を訪問し、世界遺産・森林生態系保護地域の白神山地のブナ林を踏査し、多くの知識を得た。(2)宮崎県綾町を訪問し、有数の照葉樹林を視察するとともに、地元の自然保護団体と交流した。さらに、宮崎県庁林務部、緑資源機構宮崎地方建設部、宮崎森林管理署を訪問し、名産飫肥スギ林業の現況、大規模林道宇目・須木線西米良・須木区間の環境保全調査の状況、一ツ葉浜リゾート開発の現状等につき調査を行った。(2)国外調査については、中国の森林資源とその管理につき研究分担者片岡が調査研究を進めたほか、専門学者を招いて「中国陜西省における森林と植樹協力」と題する講演をして頂き、新たな知見を深めた。(3)以上のほか、研究代表者富井は、FSC(森林管理協議会)の認証を取得した山梨県県有林、岐阜県東白川村森林組合の現地調査をするとともに、IS014001の認証を得た東京都の水源林につき聴き取り調査を行い、その研究成果を「FSC森林認証と環境の保全-国内認証取得地の検討を通じて-」と題して環境法政策学会2003年度学術大会で発表した。
主観的不確実性下の辞書式期待効用理論の研究

経済主体が直面する不確実性の表現として、状態空間は仮定される。しかしながら、心の中にある状態空間は直接観察できないものであり、外生的に仮定されるべきではない。本研究においては、主観的状態空間の下での期待効用モデルであるDekel, Lipman, and Rustichini (Econometirca, 2001)を拡張し、「無限に重要ではないが無視できない主観的状態」を含むような主観的状態空間の下での期待効用モデルを構築した。状態空間は意思決定者が心の中で直面する不確実性の表現であり、主観的なものである。Dekel,Lipman,and Rustichini(Econometirca,2001)はSavageにおいては外生的に仮定されている状態空間を内生化し、主観的状態空間を許容する期待効用モデルを構築した。現実の意思決定問題においては、起こる可能性は無限に低いが、必ずしも無視できない状態を考慮に入れて選択を行うことがしばしばある。しかしながら、通常の期待効用モデルでは、このような意思決定者は排除されている。Blume,Brandenburger,and Dekel(Econometrica,1991)は必ずしも連続性を要求しない主観的確率のモデルを構築し、Savageよりも一般的な信念の主観的確率による表現を可能にした。本研究ではDekel, Lipman, and Rustichini (Econometirca, 2001)による主観的状態空間を許容する期待効用モデルを拡張し、起こる可能性は無限に低いが必ずしも無視できない状態を考慮に入れて選択を行う経済主体の公理的モデルを与えた。具体的にはDekel, Lipman, and Rustichiniにおいて仮定されている連続性を弱めて、無差別集合においてのみ連続性が満たされるという無差別連続性という公理に置き換えることで、主観的状態空間を許容する辞書式期待効用モデルを導いた。平成20年度の主たる成果は各所での発表を通じてモデルの経済学含意を明らかにした。特に、本モデルの核心とも言える無差別連続性の妥当性および含意、また、現実のどのような状況において連続性は満たされないが無差別連続性は満たされるような状況が起こりうるのかということを検討した。これらは前年度の成果としてまとめた論文"Lexicographic Expected Utility witha Subjective State Space"にさらに加筆修正をし、富山大学、大阪大学、早稲田大学、信州大学、横浜国立大学のセミナーおよび京都大学数理解析研究所研究集会「経済の数理解析」において研究報告を行い、現在海外学術雑誌に投稿中である。また『経済の数理解析』での発表内容である不確実性下の意思決定と辞書式期待効用理論に関してまとめたものを"A Survey on Axiomatic Develpment of Lexicographic Expected Utility"として京都大学数理解析研究所講究録に発表予定である。
口唇裂口蓋裂患者の口唇閉鎖機能と咀嚼能力および構音機能との関連についての研究

口唇閉鎖機能は、正常な摂食嚥下を行う際に口腔内の陰圧を保つ上で重要な要因となっているだけでなく、構音や歯列形態にも影響を与えると考えられている。そこで本研究では、口唇裂口蓋裂患者の口唇閉鎖機能と咀嚼能力および構音機能との関連について明らかにすることを目的とした。その目的を達成するために、バルーン式口唇圧測定器、口唇運動解析装置を新しく開発し、加えて、口唇閉鎖機能に特化した筋電測定条件の最適化を行った。さらに、チューイングガム法による咀嚼能力評価、および言語聴覚士による構音評価を併せて行うことで、患者全体に共通して認められる機能的問題点の特徴を明らかにすることができた。一方、口唇裂口蓋裂患者は、口唇に裂を有するため口輪筋の連続性が損なわれてしまっている場合も多く、口唇閉鎖機能に問題を有する患者も少なくないといわれている。そこで本研究では、まず第一に、口唇裂口蓋裂患者の口唇閉鎖機能をより詳細に評価するため、バルーン式口唇圧測定器、口唇運動解析装置を新しく開発し、加えて、口唇閉鎖機能に特化した筋電測定条件の最適化を行う。次に、これらの装置を利用して口唇裂口蓋裂患者の口唇閉鎖機能を統合的に評価するとともに、チュ-イングガム法による咀嚼能力評価、および言語聴覚士による構音評価を併せて行うことで、患者全体に共通して認められる機能的問題点の特徴を明らかにすることを目的とする。昨年度には、既に臨床で利用されているバルーン式圧力計を応用し口唇裂口蓋裂患者に対して口唇圧測定を行った。さらに、光学式モーションキャプチャシステムを改良し、新しい口唇運動解析装置の開発を行い正常動作を確認した。また、筋電計を用い口唇閉鎖機能に特化した筋電測定条件の最適化を行った。当該年度には、本学病院顎口腔機能治療部に通院する口唇裂口蓋裂患者に対し、口唇圧、口唇運動および口唇周囲筋電図により口腔閉鎖機能を測定するとともに、チュ-イングガム法による咀嚼能力および構音検査を併せて行い、相互の関連性について検討を行った。当該年度には、既に臨床で利用されているバルーン式圧力計を応用し口唇裂口蓋裂患者に対して口唇圧測定を行った。さらに、光学式モーションキャプチャシステムを改良し、直径3mmの小型赤外線反射マーカを20点同時計測可能な新しい口唇運動解析装置の開発を行い、正常動作を確認した。また、筋電計を用いた口唇閉鎖機能評価に特化した筋電測定条件については、最適化の検討を行っているところである。加えて、次年度に向けた準備として、健常者を用いて、新しい機能評価方法による予備実験を開始し、新しい評価方法の問題点を抽出し、測定器の設計段階まで結果をフィードバックした改善を行った。一方、口唇裂口蓋裂患者は口唇に裂を有するため口輪筋の連続性が損なわれてしまっている場合も多く、口唇閉鎖機能に問題を有する患者も少なくないといわれている。

次に、これらの装置を利用して口唇裂口蓋裂患者の口唇閉鎖機能を統合的に評価するとともに、チュ-イングガム法による咀嚼能力評価、および言語聴覚士による構音評価を併せて行うことで、患者全体に共通して認められる機能的問題点の特徴を明らかにすることを目的とする。昨年度までに、バルーン式圧力計を応用し口唇裂口蓋裂患者に対して、口唇圧および舌圧の測定を行った。さらに光学式モーションキャプチャの最新技術を応用した新しい口唇運動解析装置による口唇の動きの計測、および口輪筋の筋電図計測を行った。これら口唇閉鎖機能に関連する評価に加え、咀嚼機能評価および構音検査を併せて行うことで、相互の関連性について検討を行った。当該年度には、年度内達成目標として口唇裂口蓋裂患者共通の機能的問題点を明らかにすることとし、口唇閉鎖機能を基準として、咀嚼能力および構音機能の相互関連を評価することで、患者全体に共通して認められる機能的問題点の特徴を明らかにした。矯正歯科学研究の目的を実現するために、当該年度は、本学病院顎口腔機能治療部に通院する口唇裂口蓋裂患者に対し、1バルーン式圧力計を応用した口唇圧測定2口唇運動解析3筋電計を用いた口唇閉鎖機能評価を行ったが、最適条件の設定にやや時間がかかってしまったため、データ採得数が予定より少なく推移しているため。研究の目的を実現するために、当該年度は、1バルーン式圧力計を応用した口唇圧測定2口唇運動解析装置の開発3筋電計を用いた口唇閉鎖機能評価を行う予定であった。1、2については、ほぼ目的を達成したが、3については、口腔周囲筋の筋電測定条件の最適化にやや時間がかかってしまっており、最適化条件の決定には至っていないため。当該年度には、1口唇圧測定2口唇運動解析3筋電計を用いた口唇閉鎖機能評価の方法を確立しているが、最適条件の設定にやや時間がかかってしまったため、データ採得数が予定より少なく推移した。そのため、次年度には、本学病院顎口腔機能治療部に通院する口唇裂口蓋裂患者に対して、積極的にデータ測定を行う予定である。当該年度にやり残した課題である筋電計を用いた口唇閉鎖機能評価に特化した筋電測定条件の最適化については早急に解決する予定である。口唇圧、口唇運動、口腔周囲筋筋電図測定の装置および測定条件が整い次第、今年度には、健常ボランティアを用いて新しい機能評価方法の安全性、確実性を確認した後、実際に口唇裂口蓋裂患者に対しての測定を行う予定である。本学病院顎口腔機能治療部に通院する口唇裂口蓋裂患者に対し、1バルーン式圧力計を応用した口唇圧測定2口唇運動解析3筋電計を用いた口唇閉鎖機能評価を行ったが、最適条件の設定にやや時間がかかってしまったため、データ採得数が予定より少なく推移しているため。次年度には、本学病院顎口腔機能治療部に通院する口唇裂口蓋裂患者に対して、積極的にデータ測定を行う予定である。そのため、各計測に係る消耗品として次年度使用額を適切に使用する予定である。当該年度に実験が完了予定であった、口腔周囲筋の筋電測定条件の最適化にやや時間がかかってしまっているため、年度内に最適化条件を決定することができなかった。そのため本件については、次年度にも継続して実験を行う必要があり、筋電測定に関わる消耗品(ディスポーザブル電極など)の購入に繰り越した研究費を使用する予定である。
フローサイトメトリーによるSNPs(1塩基多型)の検出法の開発

テーラーメイド医療やゲノム創薬に欠かせない情報としてSingle nucleotide polymorphisms(SNPs)が注目されており、その検出法も様々なものが考案されている。しかし、それらの多くは手技が煩雑であったり、高価であったり、特殊機器が必要であったりという問題点もある。我々は近年、注目されてきているフローアレイ技術をこのSNPs検出に応用できないかと研究を重ねてきた。本研究は複数のSNPsをhigh-throughputかつ簡便にsingle laser搭載のフローサイトメーターで解析しようとするものである。昨年度の段階で、表面に短い合成DNAを固定させた直径5μmから15μm程度のビーズを用いて、合成DNA中の1箇所のSNPsを検出することに成功していた。具体的にはビーズ上に固定したオリゴヌクレオチドプローブと蛍光標識されたサンプルDNAをハイブリダイズさせる。このときサンプルDNAがビーズ上のプローブDNAと完全に相補的であれば、両者は結合し、ビーズが蛍光を発するが、相補的でなければビーズは蛍光を発さない。この蛍光量の差をフローサイトメーターで計測し、SNPsのタイピングを行うことができた。今年度においてはさらに、ゲノムDNAでも同様のタイピングに成功した。(平成14年、第12回日本サイトメトリー学術集会シンポジウムにて発表)さらに、合成DNAにおいては同時に3種類までのSNPs箇所のタイピングを確実に行うことにも成功した。今後は引き続き、ゲノムDNAサンプルを用いて複数箇所のSNPsの同時解析を目指し研究を続け、フローサイトメトリーを利用したSNPs解析法を完成させたい。テーラーメイド医療やゲノム創薬に欠かせない情報としてSingle nucleotide polymorphisms (SNPs)が注目されており、その検出法も様々なものが考案されている。しかし、それらの多くは手技が煩雑であったり、高価であったり、高額な特殊機械を必要とするものである。我々は、SNPsが臨床応用されるためには、タイピング法が一般病院で行えなければならないと考えている。そのためには検査自体が簡便、安価でなければならないと考え、本研究は複数のSNPsをhigh-throughputかつ簡便に検出する方法として、フローサイトメトリーを用いた検出法を確立することをめざしている。現時点において表面に短い合成DNAを固定させた直径5μm15μm程度のビーズを用いて、合成DNA中のSNPsを検出することに成功した。具体的にはビーズ上に固定したオリゴヌクレオチドプローブと完全に蛍光標識したサンプルDNAをハイブリダイズさせる。このときサンプルDNAがビーズ上のプローブDNAと完全に相補的であれば、両者は結合し、ビーズが蛍光を発することになる。相補的でなければビーズは蛍光を発さない。この蛍光量の差をフローサイトメーターで計測し、サンプルDNA中のSNPsの有無を検出することができた。(平成13年度、第60回癌学会にて報告。)同様のことは臨床現場への応用を目指して健常人ボランティアのDNAを用いた検討においても、可能である。今後は複数箇所のSNPsを同時に検出できる方法を検討していく予定である。
家蚕絹タンパク質をプレンドしたポリビニルアルコールゲルの人工皮膚材料としての利用

新規な医用材料(特に人工皮膚)の開発を念頭にポリビニルアルコール(PVA)に絹タンパク質であるセリシンをブレンドしたゲルフィルムを作製し,その構造・物性について検討することによって以下の知見を得た。従来,セリシン単体であれば,硬くてもろい膜試料しか得られず,力学的強度は不十分であり,実用に供するには全く不適当なものであるが,セリシンにPVAとのブレンド(ブレンド中のセリシンの含率5-40wt%)によって,高い含水率を有しながらも力学的性質の優れたゲルフィルムが得られた。このブレンド試料に,さらに架橋剤としてN-メチロール尿素やクエン酸を加えて熱処理すると,セリシンやPVA等のポリマー成分の有する水酸基と架橋剤が化学反応し,架橋点が形成された。この架橋試料の水中での力学的性質は,架橋剤を添加していない系と比較して,より一層優れたものとなった。またN-メチロール尿素を架橋剤に用いると,セリシンの割合が90wt%(残り10wt%はPVA)と非常に高い場合においても,水中でかなり強靭なフィルムが得られた。この結果は,水中でセリシン主体のポリマーフィルムが利用可能であることを意味しており,今後バイオマスとして未利用率(廃棄率)の高いセリシンの有効利用につながる結果として期待される。セリシンを5-40wt%含んだ試料は,いずれも酸素透過性に優れたPVAゲルに匹敵する酸素透過係数を示し,医用材料としての高い有用性が認められた。さらに医用材料として利用する場合に非常に重要となるフィルム表面の状態を,接触角の測定を行った結果,いずれの試料もほぼ60-80゚であった。一般に医用材料に用いられているものは,接触角が60゚付近が良いとされており,本試料はその値に非常に近かったことからも,高い細胞増殖性を有する人工被覆材となりうる可能性が示唆された。本研究では,セリシンの機能性を生かした医用材料を開発する目的で,力学的,生体的特性をより良く兼ね備えた試料の作製を模索するため,セリシンをポリビニルアルコール((PVA)に固定したゲル膜の作製を試みた。本年度PVAの重合度を300,500,1000と変えた試料を作製し,以前,重合度1700のPVAを用いた検討を行った{日蚕雑,67,295(1998)}結果と比較検討した。(1)重合度300,500のPVAを用いた試料は,乾燥試料を蒸留水に浸漬・膨潤させる過程において溶解してしまい,含水ゲル膜試料として使用不可能であることが明らかとなった。そこで実験はすべて重合度1000のPVAを用いた試料にて行い以下のような結果を得た。(2)PVA結晶の融解温度である220°C付近以上の分解吸熱ピークが全てのブレンド試料で見られず,セリシンの240°C付近の分解に関するブロードな吸熱ピークも観察されなかった。従って,セリシンのブレンドにより,PVA非晶鎖とセリシンが強い相互作用を持ち,PVA非晶鎖の分解を妨げることが明らかになった。(3)含水率はセリシンのブレンド率が20wt%までは僅かに減少する傾向示しPVA非晶鎖とセリシンとのコンプレックスの形成を示唆する結果を得た。セリシン分率20wt%付近以上では,含水率は増加した。これは相分離の進行により,親水性の大きいセリシン相の増加を意味すると考えられた。(4)切断強度及び切断伸度はセリシン分率210wt%の範囲でPVA100%試料の値より大きな値を示した。また全てのセリシン分率でヤング率はPVA100%より高い値を示した。以上の傾向は,PVAが適度な重合度を有する時,セリシンとPVAとの相溶性が良好なことを示唆している。

さらに医用材料として利用する場合に非常に重要となるフィルム表面の状態を,接触角の測定を行った結果,いずれの試料もほぼ60-80゚であった。一般に医用材料に用いられているものは,接触角が60゚付近が良いとされており,本試料はその値に非常に近かったことからも,高い細胞増殖性を有する人工被覆材となりうる可能性が示唆された。
MHC固定ブタ造血幹細胞の同定と性状解析:ヒト免疫モデル動物としての有用性の検討

本研究においては、MHC固定ブタを用いた再生医療の研究に必須であるブタ造血幹細胞の同定と分化過程を明らかにするため、造血幹細胞マーカー候補であるc-kitのマウスモノクローナル抗体を作製し、ブタ造血幹細胞の同定およびMHC固定ブタ骨髄及び臍帯血リンパ球解析を試みた。その結果、c-kit陽性細胞は新生仔骨髄に豊富に存在し、高い赤芽球系・単球系への分化能を示し、重度免疫不全NOGマウスへの移植により、ブタCD45陽性細胞の分化を誘導する事が確認された。ブタ造血幹細胞を「主要組織適合性抗原複合体(MHC)が固定された近交系ブタ」において同定し、その多分化能と自己複製能を解析することにより、ヒトにおける移植と臓器再生の動物モデルとして利用することを目的として、まず造血幹細胞と関連するモノクローナル抗体の作製を開始した。MHC固定デュロック種ブタの分娩時に臍帯血を採取し、比重分離法で分離した単核球をBALB/cマウスに免疫し、更にこれらで追加免疫を行った。スクリーニングには、ブタCD34またはc-kit遺伝子を導入したトランスフェクタントを用いた。トランスフェクタントとしては、CD34またはc-kit遺伝子の開始から終始コドンまでのcDNA配列をPCR法にて増幅後、pCGベクターのCMV enhancer/promoterと蛍光タンパク質mVenus配列間に挿入したコンストラクトを作製した。これらの遺伝子をHEK293あるいはMMC処理したマウスリンフォーマ細胞株A20細胞(BALB/c背景)に導入し、スクリーニングに用いた。また、挿入遺伝子の長期発現を目的として構築したエピゾーマルベクターを用いたコンストラクトについては、HEK293細胞に導入し、G418耐性細胞を選択した。2回の追加免疫の後、血漿中の抗体価としてはHEK293トランスフェクタントとブタ臍帯血単核球に対する反応性をフローサイトメトリーにて測定した。その結果、約50%のマウスで両者に反応する抗体を産生するという結果が得られた。これらのマウス脾臓細胞をマウスミエローマ細胞株P3U1とPEGにて融合し、ハイブリドーマを得た。細胞のスクリーニング法としては、HEK293など接着性の高い細胞を用いるため、フローサイトメトリーとイメージングアナライザーを組み合わせて用いる解析法を確立した。現在細胞融合後のハイブリドーマについてスクリーニングを行う準備中である。本年度の本研究実施計画は、(1)MHC固定ブタ骨髄細胞のマウスモノクローナル抗体作成(2)MHC固定ブタ造血幹細胞の同定(3)MHC固定ブタ末梢血及び臍帯血リンパ球解析、の3点である。(1)に関しては、本年度もHEK293およびA20を親株としたトランスフェクタントを免疫及びスクリーニングに用いて、CD34,CD117に対するモノクローナル抗体の作成を試みた。現在、CD117特異的ハイブリドーマについてはクローニングが終了しており、大量培養を行っている。CD117モノクローナル抗体については、現在イムノブロッティングに使用可能かどうかを確認中であり、今後、造血幹細胞同定に用いる予定である。CD34に対するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマは、現在クローニング中である。(2)得られたCD117モノクローナル抗体を用いたブタ臍帯血単核球の染色とフローサイトメトリー解析を行い、僅かな陽性画分の存在を再現的に確認した。今後、磁気ビーズ法あるいはソーティングにより造血幹細胞の単離を試みると共に、NOGへの移植と免疫系再構築能を解訴する。(3)CD25陽性T細胞については解析が進んでおり、ブタ末梢血単核球のスーパー抗原刺激およびIFN-γ刺激によるCD4+T細胞上に72時間まで持続的なCD25、SLA class I各タンパク質分子の発現亢進を確認した。一方、各SLA class I、IRF-1のmRNA発現は一過性の発現上昇の後、発現の低下が観察され、タンパク質発現との間に相違が有ることが明らかとなった。本結果については、現在、論文投稿中である。ブタCD117モノクローナル抗体は今まで作製された実績はなく、世界で初のモノクローナル抗体であり、今後有用なツールとなることが期待される。造血幹細胞の同定は予定より遅れているが、次年度に達成される見通しである。本研究の目的は、再生医療の研究に必須の造血幹細胞マーカーをブタでも明らかにし、造血幹細胞の同定と分化過程を明らかにすることである。本研究実施計画は、(1)MHC固定ブタ骨髄細胞のマウスモノクローナル抗体作成(2)MHC固定ブタ造血幹細胞の同定(3)MHC固定ブタ末梢血及び臍帯血リンパ球解析、の3点である。(1)に関しては、本年度CD117に対するモノクローナル抗体を3回の限界希釈の後、確立することができた。

本抗体はIgG1kであり、フローサイトメトリー及び免疫組織染色の一部に使用可能である。現在、本CD117特異的ハイブリドーマについては多量培養が終了しており、抗体については腹水化が終了している。(2、3)本年度は、得られたCD117モノクローナル抗体を用いたブタ臍帯血単核球の染色とフローサイトメトリー解析およびセルソーティングを行い、得られたCD117陽性細胞を用いたコロニーアッセイ及び重度免疫不全マウス(NOG)へのCD117陽性骨髄細胞移植を行った。その結果、CD117陽性細胞は陰性細胞と比較して高い赤芽球系・単球系への分化能を示し、NOG移植により、ブタCD45陽性細胞の分化が確認された。この結果、CD117陽性細胞が造血幹細胞を含むことが明らかになった。ブタ臍帯血及び新生仔、成体の骨髄の単核球それぞれに含まれるCD117陽性細胞の割合を解析したところ、新生仔骨髄に最も多くのCD117陽性細胞が存在することが明らかになった。以上の結果、本研究の目的である造血幹細胞マーカーを特定し、骨髄や臍帯における幹細胞の存在を確認することができたと考えられる。本研究の大きな目的である造血幹細胞の抗体作成が計画通りに達成されている一方、造血幹細胞の同定に時間がかかっているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、ミニブタ造血幹細胞特異的抗体の作成とそれを用いた造血幹細胞の同定が達成される予定である。ブタ造血幹細胞の同定の後、ブタの血液細胞、特にリンパ球の分化過程が免疫不全マウスへの移植や、SLA固定ブタの特性を活かしたマーカー遺伝子導入造血幹細胞の同種移植などで、更に明らかとし、血液系・免疫系の進化過程を明らかにすると共に、ブタへのワクチンの方法論の開発やヒトモデル動物としその前臨床試験に用いる為の情報を発信する。
同種無細胞真皮を担体とした上皮と結合組織のTissue Engineering

(1)無細胞真皮マトリックスの作製:a培養担体に適した基底膜を温存した同種無細胞真皮マトリックスの作成:杏林大学スキンバンクに寄贈された死体皮膚の処理過程での余剰皮膚(同種皮膚)を洗浄後、PBS溶液中で-20°Cまで急速に凍結し、凍結後37°Cまで緩徐に融解した。この同種皮膚をさらに1mol NaCl溶液内で12時間インキュベートして表皮層を剥離した。こうして得た真皮層をさらにEDTA-PBS溶液中で数日間振盪洗浄し、基底膜を温存した無細胞真皮マトリックスを作成した。b結合組織(代用硬膜および代用腱)の鋳型に適した同種無細胞真皮マトリックスの作製:硬膜や腱の鋳型となる無細胞真皮マトリックスとして、トリプシンにて基底膜を除去した無細胞真皮マトリックスを作成した。このマトリックスをラットのアキレス腱欠損部に移植したところ、4週間後に腱用組織が再生された。すなわち無細胞真皮マトリックスを、Tissue Engineered Connective Tissueの担体あるいは鋳型として使用しうることが示された。c同種無細胞真皮マトリックスの滅菌処理:グリセロール処理により真皮マトリックスの滅菌度を向上させ、処理後の無細胞真皮マトリックスの移植特性をラットモデルで評価した。その結果グリセロール処理による真皮マトリックスの移植特性の変化はみられなかった。(2)同種無細胞真皮マトリックスを担体としたTissue Engineered Epithelium(複合型培養皮膚、複合型培養口腔粘膜)の作製と性状の検討:手術時に得られた皮膚、口腔粘膜の余剰組織から、酵素処理により上皮細胞と線維芽細胞を分離培養し、無細胞真皮マトリックス担体に組み込むことで、複合型培養上皮を作製した。また熱傷患者自身の細胞を組み込んだ自家複合型培養上皮を臨床応用(移植)し、良好な生着を認めた。これらの研究は、杏林大学倫理委員会の承認のもと、ヘルシンキ宣言、日本組織移植学会によるヒト組織を利用する医療行為に関するガイドライン等に則って行った。
動画像処理による非剛体の挙動解析の研究

近年、動画像処理の研究が様々な応用への適用を目指して活発に行われている。本研究では、(1)動的動画像中の動物体の抽出・追跡、および(2)動画像処理に基づく手術の状況解析、に焦点をあてた。(1)については、剛体が移動するシーンを動いているRGBDカメラにより動画像で撮像し、特徴点のクラスタリングに基づき各剛体を抽出・追跡する方法を提案した。(2)については、手術者の手の動作を認識する方法として、Bag-of-Wordsに基づく特徴と学習に基づく方法、早期認識する方法として、サブ動作を導入し、SVMや確率計算に基づく方法を提案した。実験により提案手法の有効性を検証した。本年度は以下の2つの検討を行った。(1)動的動画像中の動物体の抽出・追跡動的RGBD(色彩と距離)動画像から、移動物体を検出する方法の研究を進めた.Temporal Modified RANSACという手法を利用してRGBD動画像から検出される3次元特徴点を、複数の移動物体と背景に分類する.次に,時系列のカラー画像に対して,類似した色彩をもつ画素を時間軸に沿って一定の大きさごとに統合するSuperVoxel(SV)処理を施し,時間的な連続性に基づくグループ化を行う.しかし,SV処理を適用した結果は過分割になるため,複数ラベルのグラフカットを行う事で過分割のデータを移動物体単位に統合する.ここで,各SVにおける前述の特徴点の多寡を,統合に反映する.実験の結果,対象が剛体の場合や,人物等の非剛体の場合でも,身体全体の動きに対して,個々の関節の動きが小さい場合には,正しく物体領域の抽出が行えた.(2)動画像処理に基づく手術の状況解析看護師ロボットの視覚機能の実現を目指し、カメラにより手術野を撮像して得られる画像から手術者の手の動作を解析することにより、手術の状況を認識する方法の検討を進めた。具体的には、傷の縫合手術における「縫合」と「結紮」を認識対象とした。特定動作パターンが無いこれらの動作に有効な画像特徴を提案するとともに、ニューラルネットワークを用いて動作認識する方法を検討した。実験者9人の36本の連続動画系列で91.7%の認識率を得た。さらに、実際の手術では、現状の動作が完了する前に次の動作を予測する必要があるため、本研究では、確率計算を含む動画系列の動的マッチング法を利用する方法を提案した。動作の切り出したデータによる予測実験では、動作が40%完成した時点の平均予測正解率が90%を超えた。一方、連続動画系列の場合、70%完成した時点の平均予測正解率が80%を超えた。1.動物体の抽出・追跡移動ロボットは、必要に応じて静止し、必要な行動を行う必要がある。特に、人間と対話的な作業を行うためには、静止カメラから人間の行動を予測する必要がある。本年度はRGBD(色彩と距離)動画像から、ロボットと対面する人間の行動を予測する方法について検討を行った。RGBD動画像の各フレームにおいて人物の骨格構造を得て特徴抽出する際、従来は用いられていなかった手と首の位置情報を追加した。机上の物体に人間が手を伸ばし、異なる3種類の掴む動作を行う場合の認識率を実験により求めた。その結果、認識率は80%を超えるとともに、従来法よりも認識率が向上することが確認された。2.動画像処理に基づく手術の状況解析本年度は、既に提案した縫合手術動作認識手法の機能拡張法を検討した。即ち、従来は、傷の縫合手術における2つの動作(手術の段階)が認識対象であったのを、5つの動作に拡張するとともに、動作が完了する前の極力早い時点でその動作を予測可能な手法を検討した。本予測手法において、まずsliding window(複数フレームから構成される)を、手術者の手の動きを含む手術野を撮像した動動画像において移動させて、予測対象の手の動き動作の開始候補点を検出し、開始候補点から対象動画像を複数フレームから構成されるセグメントに分割し、Ryooらの方法および教師データとの動的計画法等に基づくマッチングを行い、教師データとの類似度を求める。このマッチングには、教師データの特徴量のヒストグラムを計算し、類似度を求める。この類似度をベイズ推定に基づく予測対象動作の事後確率を求める計算式に代入し、事後確率が最大となる動作を予測結果として出力する。実験の結果、対象動作が70%以上完了した場合、平均予測率は77.2%であり、90%以上の場合、80.4%であった。1.動的動画像中の動物体の抽出・追跡当初の計画通り、関節構造をもつ非剛体物体である人体の動作の認識法の検討を開始できたので、おおむね順調に進展していると言える。2.動画像処理に基づく手術の状況解析当初の計画では、開腹手術を対象とした検討を行うことにしていたが、平成26年度中に明らかになってきた重要な方向性である手術状況の予測法については、妥当な進展があったと考えられる。以上を総合すると、おおむね順調に進展していると判断できる。手術における看護師不足への対策として看護師ロボットの実現が望まれている。我々は手術者を支援する看護師ロボットの実現を目指し、手術野の動画像を分析し、人間の看護師と同様に、自動的に手術の進行や状況を把握する方法の研究を行っている。

既に我々は、傷の縫合手術を構成する6つの段階のうち2つの段階(手術者の手の動きに対応)を早期認識(early-recognition)する手法を提案し、有効性の見通しを得ている。本期間は、早期認識の対象を、傷の縫合手術における6つの動作に拡張する検討を行った。まずsliding window(複数フレームから構成される)を、傷の縫合手術を撮像した動画像において移動させて、早期認識対象動作の開始候補点を検出する。対象動画像を複数フレームから構成されるセグメントに分割しておき、検出された開始候補点から、Ryooらが提案した早期認識法に基づき、教師データと動的計画法によりマッチングを行う。ここで、このマッチングには、教師データの3D-SIFTとBag-of-Wordsに基づくヒストグラムをセグメントごとに計算して接続したものを特徴量とし、教師データと動画像との類似度を求める。この類似度は開始候補点以降の各時点において計算する。この類似度をベイズ推定による各早期認識対象動作の事後確率の計算式に代入し、事後確率を最大にする動作を見出す。各時点における最大事後確率の最大値を与える動作を早期認識結果として出力する。2016年度は、前述の早期認識法を、単純に傷の縫合術を構成する6段階に適用する場合と、段階の順序関係を利用する場合とを比較した。50本の手術の動画像を用いる実験の結果、対象動作が開始時点から終了時点までの70%進捗した時点で、順序情報を用いない場合、6つの動作の早期認識率の平均値は82%であった。一方、順序を考慮にいれると平均値は90%に改善された。近年、動画像処理の研究が様々な応用への適用を目指して活発に行われている。本研究では、(1)動的動画像中の動物体の抽出・追跡、および(2)動画像処理に基づく手術の状況解析、に焦点をあてた。(1)については、剛体が移動するシーンを動いているRGBDカメラにより動画像で撮像し、特徴点のクラスタリングに基づき各剛体を抽出・追跡する方法を提案した。(2)については、手術者の手の動作を認識する方法として、Bag-of-Wordsに基づく特徴と学習に基づく方法、早期認識する方法として、サブ動作を導入し、SVMや確率計算に基づく方法を提案した。実験により提案手法の有効性を検証した。申請時の研究目的と計画に照らし合わせてみると、2014年度中の進捗は以下のとおりである。(1)動的動画像中の動物体の抽出・追跡平成26年度中に行う予定としていた検討に加えて、当初27年度に行う予定としていた人体等の関節物体の検討まで行えたので、本検討課題項目については、当初の計画以上に進んでいると言える。(2)動画像処理に基づく手術の状況解析平成26年度中に開始する予定だった開腹手術を対象とした検討は、実験の困難さ等諸般の事情により行えていないものの、傷の縫合手術を対象とした検討は、縫合と結紮の認識については既に満足の結果が得られている。また、平成26年度中には、新たな方向性として、手術動作の予測が重要な課題として浮き上がってきたため、検討を開始し、既にかなり重要かつ有効な実験結果を得ている。以上を総合すると、おおむね順調に進展していると判断できる。1.動的動画像中の動物体の抽出・追跡平成27年度に行った関節構造物体である人体の動作の認識法の検討を、動的動画像からの認識法に拡張することを目指す。2.動画像処理に基づく手術の状況解析
マクロサイクリックTTF系の開発と機能開拓

TTF誘導体がフレキシブルなアルキル基等で結合した環状物質に注目して研究を進めている。このような系に期待されることは、(1")"結合部位のフレキシビリティに由来した、TTF部位の空間的な位置制御とそれに伴う新奇物性の発現、(2")"環状部分への金属イオンの包接によるTTF部位の物性制御、あるいは、TTF部位のレドックス制御による金属イオンの包接挙動の制御である。1.単結晶系におけるTTFの空間位置制御24員環および30員環を有するマクロサイクリックTTFを合成し、TCNQ系アクセプターとの錯体を作製した。結晶中でドナー分子は2価、すなわちTTF分子は完全電荷移動状態になっていた。TTFが+1価であるため、結晶中ではポリエーテル部分が折れたたまり、いずれの場合もZ型のコンフォメーションを有している。しかしながら、分子内のTTFオーバーラップ形式は異なり、結合部分のフレキシビリティを利用して、TTF部位の重なり制御ができた。2.マクロサイクリックTTF誘導体単分子膜のイオン認識単結晶と比較してイオンの出し入れがより容易であると考えられる起薄膜系を、マクロサイクリックTTF誘導体を用いて構築し、膜のイオン認識と構造物性相関について検討した。成膜物質としては2および4鎖型マクロサイクリックTTF誘導体を用いた。いずれの場合も良好なπ-A曲線を与えた。また、下層水のアルカリ金属イオンを添加したところ、イオン濃度に対応したπ-A曲線の変化が観測された。π-A曲線の挙動変化の原因を探索するために、水面上でのBAM(Brustar Angle Microscope)観測および単分子膜をマイカ基板上に写し取ってAFM測定を行った。
酵母を用いた基本転写因子TFIIDサブユニット(TAFs)の機能解析

ショウジョウバエdTAF230/出芽酵母yTAF145はそのN末端側約70アミノ酸残基から成る領域にTBP機能阻害活性を有する。またこの活性領域(TAND;TAF N-terminal domain)は機能的に異なる二個の小サブドメイン(TANDI,TANDII)に分割されるが、TANDIと酸性型の転写活性化ドメイン(AD)はいくつかのアッセイ系において互いに交換可能(機能的に等価)である。一方、転写活性化において重要な役割を果たすとされる基本転写因子TFIIAは、TBPとの結合においてTANDIIに対して競合的に作用する。他のグループによるこれまでの知見も考え合わせて、新たにTFIIDの異性化モデル(ハンドオフモデル)を提唱した。yTAF145のTANDI,II(yTANDI,II)をdTANDI,IIで置換したキメラ型TAF蛋白質は、出芽酵母細胞内において選択的な蛋白質分解を受ける。今回HA tagをN,C末端に付加することによって、この蛋白質分解がN末端側のキメラ型TANDを除去するために働いていることを明らかにした。さらに点変異体あるいはTAND重複型変異体を用いた実験から、AD,TFIIAによるTANDI,IIの逐次的な置換の阻害が蛋白質分解を誘起することが示唆された。また興味深いことにTANDはyTAF145分子のC末端側に移してもautonomousに機能するが、キメラ型TANDをC末端側に移した場合には蛋白質分解は起こらなかった。すなわちTANDの除去は特異的なプロテアーゼによる生理的な反応が顕在化したものと考えられる。またTAND欠失型yTAF_<II>145遺伝子に対して合成致死性を示す遺伝子のスクリーニングを行ったところ、TFIID,SAGAの構成成分であるTBP,TAF61及び機能未知のORFの点変異体が単離された。