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東日本大震災を契機とした震災復興学の確立

科研Sプロジェクトの分担研究者は、2015年度,2016年度においては、国内外での地震・津波の被害・復興調査、放射能汚染の測定、放射線教育、避難者ヒヤリングと「2000人インタビュー」テキスト化、防災教育支援や避難所運営教材の開発、コミュニティ再生支援や復興過程モデル化、災害記録アーカイブ化や復興祈念公園コンセプトづくり支援、水産業・商工業・建設業の復興調査、原子力復興政策や再エネ事業の経済分析、地区都市マスタープラン作成と公設民営型商業施設整備への支援、避難生活と地域公共交通のあり方調査への支援、災害・戦災・大事故のコメモラティブイベント、被災地の景観変化調査、避難指示解除後の農業の復興など多岐に及びそれぞれ個別研究の調査にもとづく精緻化とともにモデル化などが進められた。研究成果としては、国内外の学会での研究報告や学術論文、シンポジウムにおける報告として公表しており、また隔月でビジネスミーティングを兼ねた定例研究会でその到達点を確認しつつ、研究成果をとりまとめている。共同による研究成果は、2014年度に参加したアメリカ地理学会での研究報告を基軸としながら、科研Sメンバー以外の執筆者の参加も得て、コルゲート大学の山本大策准教授を共編著者に迎え、英文出版という形でとりまとめの作業を鋭意行った。出版は2017年にずれ込んだが、英Routledge社からUnravelling the Fukushima Disasterが2016年10月に刊行され、またRebuilding Fukushimaが2017年1月に刊行された。国内外での地震・津波の被害・復興調査、放射能汚染の測定、放射線教育、避難者ヒヤリングと「2000人インタビュー」テキスト化、防災教育支援や避難所運営教材の開発、コミュニティ再生支援や復興過程モデル化、災害記録アーカイブ化や復興祈念公園コンセプトづくり支援、水産業・商工業・建設業の復興調査、原子力復興政策や再エネ事業の経済分析、地区都市マスタープラン作成と公設民営型商業施設整備への支援、避難生活と地域公共交通のあり方調査への支援、災害・戦災・大事故のコメモラティブイベント、被災地の景観変化調査、避難指示解除後の農業の復興など多岐に及びそれぞれ個別研究の調査にもとづく精緻化とともにモデル化を中心とする各調査チームの研究は順調に進捗し、英文出版に代表されるようにその成果の公表も進んでいる。このため、本研究プロジェクトは概ね順調に進展していると判断する。科研Sプロジェクトの分担研究者は、2016年度においては、国内外での地震・津波の被害・復興調査、放射能汚染やセシウム吸収リスクの測定、自主避難者ヒヤリングと「2000人インタビュー」映像のテキスト化、防災教育支援や避難所運営教材の開発、コミュニティ再生支援や復興過程モデル化、災害記録アーカイブ化や復興祈念公園コンセプトづくり支援、水産業・商工業・建設業の復興調査、原子力復興政策や再エネ事業の経済分析、地区都市マスタープラン作成と公設民営型商業施設整備への支援、避難生活と地域公共交通のあり方調査への支援、災害・戦災・大事故のコメモラティブイベントなど、それぞれ個別研究の調査にもとづく精緻化とともにモデル化などが進められた。研究成果としては、諸学会での研究報告や研究論文、公開シンポジウムにおける報告として公表しており、また隔月でビジネスミーティングを兼ねた定例研究会でその到達点を確認しつつ、研究成果をとりまとめている。
幼児の思いやり行動の発達過程-思いやりの発達の基盤として-

思いやりとは、"相手の立場に立って考え、相手の気持ちを汲む"ことと定義し、思いやりの精神構造に基づいて、36歳の幼児の思いやり観察行動項目10項目、(1)相手の気持ちをくもうとする、(2)相手に気持ちを汲んでもらおうとする、(3)相手を援助しようとする、(4)みんなと協力する、(5)情報をすなおに表現する、(6)アイディアを豊かに表現する、(7)相手の気持ちを共有する、(8)相手との関係を深めようとする、(9)相手の心に積極的に関心を持つ、(10)人や場の雰囲気に気付き判断しようとする、からなる50の観察行動項目を作成した。これらの観察行動項目をうけて、あらたに3歳未満児の項目を考えたとき、"受容される体験""情緒の安定""自己受容""自己実現""感性としての気付き"が主要な要素となると考え、生後57日より行った追跡行動観察、及びビデオ録画の資料(男女字名ずつ)を分析・整理した。その結果、(1)0歳児クラス・1歳児クラスにおいては、保育者との関係を求め、応答を求める要求表出の頻度が高く、保育者のその気持ちを汲んでもらうことにより、"自己受容"自己実現""受容される体験"につながっていくこと、(2)2歳児クラス・3歳児クラスにおいては保育者に受容され、安定できた体験が、他児と積極的にかかわる友達関係へと発展すること、しかも、子供-子供関係における"受容""協力""援助"の体験は、思いやりを支える必要な要素であることを見い出した。(3)4歳児クラスの年令においては、葛藤体験を多くもつ時期であること、大人あるいは友達との関係をもつなかで、一緒に活動することの喜び、協力する体験をつんでいる時期であることを確認した。「他者受容(思いやり)」が育つ前提として「自己受容」すなわち自分の欲求が必要に応じて満たされる環境の中で,自分の感情を素直に表出し,ありのままの自己を受け入れてもらうことを体験することが必要条件となるのではないか,しかもその体験は乳児期および幼児前期が大切な時期となるのではないか-との仮説のもとに,2名の個体追跡を行っている。すでに作製した幼稚園1園,年長児男児30名,女児33名,計63名を対象に思いやりの仮行動項目大項目10((1)相手の気持ちを汲もうとする,(2)相手の気持を汲んでもらおうとする,(3)相手を援助しようとする,(4)みんなと協力しようとする,(5)情緒を素直に表出する,(6)アイディアを豊かに表現する),(7)相手と気持ちを共有する,(8)相手との関係を深めようとする,(9)相手の心に積極的に関心をもつ,(10)人や場の雰囲気に気づき,判断しようとする,小項目50項目を考慮したとき,0歳児群,12歳児群において,以下の項目が主要項目になるのではないかと考えている。0歳児の場合受容される体験...泣きへの対応,快感情への対応,養護への期待((2),(7))情緒の安定...愛着行動((2))自己受容...情緒表出((5))要求表出((2))自己実現(充実活動)...自己活動((5),(6),応答を求める,喃語の発声((8))感性...気づく((9),(10))1歳児の場合・2歳児の場合受容される体験...葛藤克服過程,承認受容を求める((2),(7))

情緒の安定...愛着行動((2),(8))自己受容...情緒表出((5))要求表出((2))自己実現...充実活動,模倣行動,援助葛藤,けんか((6),(7)(3)(8)(9)(1)(2)感性...気づく((9)(10))乳幼児期における思いやりの発達過程を明らかにするために,生後57日目から産休明け保育所に入園し,以後,保育所保育の委託を受けている男女児1名ずつの個体追跡を行い,現在,両名ともに4歳児クラスに在籍している。今回の整理においては,毎月1回の観察記録及びビデオ録画の資料のうち,0歳児,1歳児クラス,すなわち2歳9カ月までの資料を分析した。その結果を以下に示す.1)前年度においては,0歳児は保育者に「受容される体験」が基盤となり,「情緒の安定」を得ることによる自己受容(情緒を素直に表現する)の重要性を確認した。引き続き,本年度では情緒の安定をはかる保育者の働きかけを,(1)子どもの快感情を受容し,喜びを共有する,(2)保育者が快的状態を作って乳児とそれを共有することから整理したとき,これらの働きかけは約2歳頃を契機として働きかけに質的変化がみられた.2)快感情や不快感情を保育者によって「受容される体験」は,子どもの自発活動を促し,「自己活動」や「愛着行動」といて発現する.保育者への愛着行動は,特定の保育者に認められて欲しいという表現を通して求められるが,対象児両名の発達過程は,それぞれの特徴と発達速度を示しており,そこには対象児たちのもつ背景要因が大きく関与している。しかし両名ともに,愛着関係の成立は,「居場所の確立」「活動の集中性」に有効に作用した.3)さらに,保育者との愛着が成立することと並行して,「子ども-子ども関係」が広がっていくことが明らかとなり,今後の方向性が示唆された.0・1・2歳児では、保育者との関係で実現される受容体験を主軸とし、加えて、子ども自身も充実活動を充足させることが思いやりの発達過程の基盤に置かれるのではないかとの仮説をたてた。0歳児2名の要求内容が、1歳、2歳と年月齢を経るにつれて変化する過程に着目し、そこに関わる子どもの要求を保育者はどの程度まで受容しているか、また、その受容体験は、やがて保育者との関係において、「相手の気持ちを汲む」ことを生起させていくのではないかとの想定のもとに、まず要求の受容についてまとめた。産休明けクラス(生後3ヵ月から9ヵ月)までの要求内容は、「生理的要求」、「物を取って欲しい」「保育者を求める」とし、0歳児クラス(生後10ヵ月から1歳9ヵ月まで)、1歳児クラス(1歳10ヵ月から2歳9ヵ月まで)は、さらに「自分を求める」、「他児を求める」を加えた。その結果、(1)「保育者を求める」、「自己活動を求める」、「他児を求める」に共通して認められる自己主張は、1歳3ヵ月以降から現われ、自我の芽生えも要素として考える必要があること、(2)3歳以降、思いやり行動へとつながっていくと考えられる自己主張から誘発される「葛藤体験」が遊びにみられる「養護行動」が1歳代から出現していること-を明らかにした。対象児2名の生後3ヵ月から毎月1回の観察記録及びビデオ録画の収録は、1998年3月保育所卆園時まで行い、今年度をもって、終了した。乳幼児期の貴重な固体追跡の資料を得ることができた。
ホイスラー型新機能スピントロニクス材料の薄膜実証とその応用

研究代表者と分担者らが開発してきた低温分子線エピタキしー技術による半導体スピントロニクス用規則合金材料の結晶合成技術を高度化し、近年理論提案されたスピンギャップレス半導体やトポロジカル半金属といった特徴的な電子構造を有する新機能スピントロニクス材料を『薄膜』として実証することで、新しい超高速・低消費電力スピントロニクス素子応用への道を開拓する。今年度は、スピンギャップレス半導体と予想されているMn2CoAl、CoFeVSiの薄膜合成とそれらの電気・磁気伝導特性について検討した。研究代表者らが開発した非化学量論組成蒸着法用いることで、精密に化学量論組成比に制御されたMn2CoAlおよびCoFeVSiの薄膜合成に成功した。また、協力研究をさせていただいている研究機関の分析により、Mn2CoAlにおいては世界最高レベルの規則構造を実現していることが判明しつつある。さらに、磁気伝導特性からは、Mn2CoAlのバンド構造に起因した特徴的な物性変化を観測した。さらに、薄膜の作製条件を突き詰めていき、これまで報告事例のない低温で単結晶成長することに最近成功し始めている。一方、CoFeVSiにおいては、これまでバルク材料の合成例すらなかったが、今回、世界で初めての材料合成に成功し、その物性(電気・磁気伝導特性など)を詳細に明らかにした。非常に興味深いことに、磁性体であるにもかかわらず正の線形磁気抵抗が観測され、磁気伝導特性・理論計算からその起源を考察し、スピンギャップ半導体の薄膜実証を証明する上で重要な知見を得た。スピンギャップレス半導体と予測されているMn2CoAl、CoFeVSiの薄膜合成法を確立し、構造評価・磁気伝導特性評価・理論計算による考察から、スピンギャップ半導体の薄膜実証を証明する方法論に関して重要なポイントを明らかにすることができた。したがって、おおむね順調に進展していると判断した。実際に国際共同として英国ヨーク大学に大学院生を派遣して、我々が作製した薄膜を詳細に構造評価する。その解析結果を薄膜作製条件にフィードバックし、薄膜の結晶品質を理想系へと高めていく。同時に、薄膜の磁気伝導特性などを詳細に調べ、結晶構造中の原子配列の精密制御と電気・磁気伝導特性の相関を明確にしていく。また、トポロジカル半金属と予想されているホイスラー合金(Ti2MnAlなど)の薄膜合成にも着手する。学内の低温センターの保守点検により寒剤の供給が一定期間停止したため、寒剤費が当初の予定よりもわずかに少なかった。次年度に停止期間分の実験を補うために使用する。
人工制限酵素とウイルスベクターとを利用した高効率遺伝子修復治療法の開発

アデノウイルスベクターを用いた鋳型DNAの導入ならびに人工制限酵素による標的染色体遺伝子のDNA二本鎖切断との組み合わせによって、ヒトiPS細胞におけるゲノム編集(遺伝子ターゲッティング)効率の改善を試みた。2つの遺伝子座において、アデノウイルスベクターと人工制限酵素の組み合わせは、どちらか一つだけに比べると約2倍の促進効果が観察された。また、人工制限酵素CRISPRを鋳型DNAと同一のアデノウイルスベクター(all-in-oneベクター)から発現することによって、さらに約2倍の効率上昇が得られた。all-in-oneベクターにより様々な細胞での高効率なゲノム編集が可能になることが期待される。ヒトiPS細胞を用いて、これまでのHPRT遺伝子座に加えてIL2RG遺伝子座を標的として、ヘルパー依存型アデノウイルスベクター(HDAdV)でドナーDNAを導入する場合の遺伝子ターゲッティング(GT)効率と、人工制限酵素(TALENもしくはCRISPR)によって染色体上の標的IL2RG遺伝子座を切断した場合のGT効率とを比較検討した。このベクターのみ、もしくはこのベクターとIL2RG遺伝子座のエクソン1を認識するTALEN(Stanford大学のMatt Perteus博士より供与)を同時にヒトiPS細胞株TIG3/KOSM(産総研の中西真人博士より分与)へ導入し、IL2RG遺伝子座でGTが得られる頻度を測定した。その結果、HDAdVのみの時に比べ、TALENを発現することによって、GT効率は約3倍上昇した。一方、今年になって注目されている、CRISPR/Cas9と呼ばれるguide RNAによって標的DNAを認識する新たな人工制限酵素法を利用し、CRISPRの有無でHDAdVを用いた場合のGT効率を測定した。その結果、HDAdVのみを用いた場合に比べ、IL2RGイントロン4を標的とするCRISPRを発現する事で約10倍上昇した。しかし、CRISPRのみを用いる場合(ドナーはプラスミドDNA)でも100%に近い効率でGTが得られた。HPRT遺伝子座を標的とするHDAdVの感染と、人工制限酵素(TALEN)によるHPRT遺伝子座の切断とを単独ならびに組み合わせた場合の遺伝子ターゲッティング効率を検討した。1) HPRT遺伝子座を標的とするHDAdVの構築・産生:HPRT遺伝子座のエクソン6をPGK-neoカセットで置き換える形のターゲッティングベクターをデザインした。5'と3'の相同領域の長さはそれぞれ15.3 kbと6.5 kbで、また、相同領域の末端を切り離せるように、酵母由来ホーミングヌクレアーゼI-SceI認識部位を導入した。このカセットを含むアデノウイルスベクタープラスミドは作製済みで、ウイルスの産生を始める段階である。また、HPRT遺伝子座を標的とするTALEN (TALEN-HPRT)は、連携研究者のCathomen博士により構築された物の分与を受けた。2)ヒトiPS細胞を用いた遺伝子ターゲッティング実験:ヒト男性由来iPS細胞を用いてHPRT標的TALENのみ、HPRT標的HDAdVのみ、TALEN + HDAdVの組み合わせ、によるターゲッティングの頻度を検討した。ベクターが染色体に組込まれた細胞はネオマイシンで選択した。X染色体上のHPRT遺伝子座は男性由来細胞には1つしかなく、それが欠損すると細胞は6TG耐性になるので、GTの頻度はネオ耐性/6TG耐性の二重耐性コロニー数で計測可能である。独立した実験を2回行い、いずれにおいてもターゲッティング効率は(HDAdV+TALEN)>(HDADVのみ)>(TALENのみ)であり、HDAdV + TALENはHDAdVのみより約2倍高い効率を示した。ただし、この実験ではTALENの切断部位がHDAdV上のHPRT相同配列の末端と一致しておらずデザインとして至適ではないため、ベクターを作製し直して更なる解析を行う予定である。ヒトiPS細胞株TIG3/KOSMを用いて、IL2RG遺伝子座を標的として遺伝子ターゲッティング(GT)効率をさらに改善するための方法の検討を行った。今年度は、人工制限酵素の発現レベルを上げる目的で、IL2RGを標的としたCRISPRとIL2RGドナーDNAの両方をコードしたall-in-oneベクターであるHDAd-hIL2RG-CRISPRを新たに構築した。得られた結果(独立に3回に行った実験の平均)は以下の通りである。1)5'と3'の相同領域をそれぞれ8.7 kbと11.1 kbカバーするGT用ドナーDNAをコードしたヘルパー依存型アデノウイルスベクターHDAd-hIL2RG-neoを感染させた際のGT頻度は、3.5 x 10-6(遺伝子導入細胞290,000個当り1個)であった。

一方、IL2RGを標的としたCRISPR発現プラスミド(pCRISPR-IL2RG)と5'と3'の相同領域をそれぞれ1 kbずつコードしたドナープラスミドDNAをトランスフェクションした際に得られるGT頻度は、1.4 x 10-4(遺伝子導入細胞7,100個当り1個)であった。3)all-in-oneベクターHDAd-hIL2RG-CRISPRの感染によるドナーDNAの導入と標的DNA切断によるGT頻度は、2)と同様に高く、2.7 x 10-4(遺伝子導入細胞3,700個当り1個)であった。以上の結果から、HDAdVによるドナーDNAとCRISPRの発現(プラスミドもしくはHDAdVの形で)が、効率の高い遺伝子修復法の確立に向けて非常に有効であることが明らかとなった。ヒトiPS細胞へは通常のトランスフェクション法を用いても効率よくDNA導入が可能であるが、all-in-oneベクターにドナーDNAとCRISPRを搭載したことにより、DNA導入が困難な様々細胞・組織における高効率なin vitroならびにin vivoの遺伝子修復が可能になることが期待される。遺伝子治療学前年度の、HPRT遺伝子座を標的としたHDAdVとTALENを同時に用いた場合のGTの促進効果を、IL2RG遺伝子座で再現することが出来た。両方とも、HDAdVとTALENの組み合わせのGT効率がHDAdVのみよりも23倍高く、「HDAdVを用いた場合と人工制限酵素を用いた場合のGT促進のメカニズムは異なる」という、本研究開始時の仮説を支持する結果が得られた。ただし、23倍という上昇率は再現性があるにせよ予想されたほどは高くなく、それがベクターのデザインによるものかそれとも他に原因があるのか、検討する必要がある。また同時に、昨年より急速に注目されているCRISPRの技術も研究室に導入することが出来た。その結果判明したことは、同じIL2RG遺伝子座を標的とした場合のGT効率を比較しても、CRISPRによる二本鎖切断の効率はTALENと比べてそれのみでおそらく10倍以上高いために、HDAdVと組み合わせた場合の結果の評価が難しい。単独で比較した場合の効率はCRISPR > HDAdV >TALENとなった。この比較はこれまでに報告されておらず、興味深い知見である。ヒトiPS細胞を用いた遺伝子ターゲッティング実験を既に行った。ヒト男性由来iPS細胞を用いて、HPRT標的TALENのみ、HPRT標的HDAdVのみ、TALEN + HDAdV、の3通りによる遺伝子ターゲッティングの頻度を、ネオマイシン耐性・6TG耐性の頻度により決定した。2回の実験の結果、両方とも、HDAdVとTAKLENの組み合わせの結果が一番高く、本研究の仮説を支持する結果が得られた。しかしその後、欧米のTALENの専門家と話す機会があり、私達のベクターのデザインが最善ではないことが判明した。従って、ベクターの再デザイン・再構築を進めている。現在、新しいベクターはウイルスの産生の直前まで来ているので、これを用いた実験を繰り返すことによって、最初の実験で得た結果よりさらの良い結果が得られることが期待される。
慢性GVH反応(移植片対宿主反応)における自己抗体産生過程の解析

(1)従来、DBA/2細胞をBDF_1に移入して誘導するGVHにおける抗体産生細胞の活性化は自己抗体産制B細胞に限られ選択的であるとされていたが、自己抗原および外来抗原に特異的な抗体産生細胞数を経時的にELISPOT法で検討した。その結果、いずれの抗原に対する抗体産生細胞も同頻度で活性化されていることが明かとなりGVHにおける抗体産生細胞性化は非選択的な多クロ-ン性活性化に基くことが示された。(2)GVHで生じる腎病変の形成過程を蛍光抗体法におよび電顕的にて観察した。その結果、電子高密度物質の沈着が糸球体基底膜上皮下およびメサンギウムにみられ、また、メサンギウムにはMESANGIOLYSISがみられる。IgGは毛細管系蹄にIgMはメサンギウムを中心に沈着することが示された。急速凍結・ディ-プエッチング法による検索を行った。その結果、レプリカ膜に観察では、メサンギウム領域と上皮下に様々な大きさの沈着物を認めた。沈着物の周囲の細かい細腺維配列は乱れており、緻密層の一部は、破壊され不規則に拡大していた。足細胞の足突起内のマイクロフィラメントは増加し、内皮細胞は所々で糸球体基底膜より剥離していた。以上より、この実験系では、免疫複合体沈着物がメサンギウム領域や糸球体系蹄壁の網目状構造を破壊し、糸球体の荒廃に強く関与していることが示唆された。(3)様々な組み合わせ(BDF_1←DBA/2,BDF_1←B10.D2,CAF_1←BALB/c,CAF_1←A/J)でGVHを作成し各種血清抗体価と各実験群間の腎病変の程度を比較検討した。また、BDF1←DBA/2において各個体間での血清抗体価と腎病変の程度を検討した。IgGクラス自己抗体産生および病的蛋白尿はDBA/2→BDF_1、BALB/c→CAF_1でみられ、蛋白尿の頻度はそれぞれ100%、33%であった。蛋白尿のみられたマウスでは糸球体に著明な免疫複合体の沈着に加え、メザンギウム融解や半月体形成の所見がみられた。IgG抗体とGVHR腎炎の相関が示唆された。(4)BDF_1←DBA/2で誘導したGVHでmyc,raf,myb遺伝子の発現を検討したところ、B細胞の活性化に一致してmyc,raf遺伝子の発現が増強していた。これら遺伝子の発現と細胞回転との相関を検討したところG2+M期細胞の消長とよく一致し、B細胞の増殖へのこれら遺伝子の関与がin vivoで示唆された。(5)BDF_1→DBA/2 GVHにおける肺を病理組織学的に検討したところ肺胞壁間質に細胞浸潤がみられ軽度の間質性病変が認められた。BALF(Bronchioーalveolar lavage fluid)の検討では炎症の指標となるACE(angiotensin converting enzyme)活性の上昇がみられると同時にリンパ球の比率が増加することがあきらかになった。従って、このGVHによる肺病変は間質性肺炎のモデルとなりうることが示唆された。

(4)BDF_1←DBA/2で誘導したGVHでmyc,raf,myb遺伝子の発現を検討したところ、B細胞の活性化に一致してmyc,raf遺伝子の発現が増強していた。これら遺伝子の発現と細胞回転との相関を検討したところG2+M期細胞の消長とよく一致し、B細胞の増殖へのこれら遺伝子の関与がin vivoで示唆された。(5)BDF_1→DBA/2 GVHにおける肺を病理組織学的に検討したところ肺胞壁間質に細胞浸潤がみられ軽度の間質性病変が認められた。BALF(Bronchioーalveolar lavage fluid)の検討では炎症の指標となるACE(angiotensin converting enzyme)活性の上昇がみられると同時にリンパ球の比率が増加することがあきらかになった。従って、このGVHによる肺病変は間質性肺炎のモデルとなりうることが示唆された。1.従来、GVHにおける抗体産生細胞の活性化は自己抗体産生B細胞に限られ選択的であるとされていたが、自己抗原および外来抗原に特異的な抗体産生細胞数を経時的にELISPOT法で検討した結果、いずれの抗原に対する抗体産生細胞も同頻度で活性化されていることが明らかとなりGVHにおける抗体産生細胞活性化は非選択的な多クロ-ン性活性化に基づくことが示された。(青木他:第19回日本免疫学会総会.1989.11月.札幌)。2.DBA/2細胞をBDF1に移入して誘導するGVHで生じる腎病変の形成過程を蛍光抗体法および電顕的にて観察した。その結果、糸球体基底膜沈着物にはIgGのメサンギウム沈着物にはIgMの関与が示唆された。また、腎病変の主体はメサンギウム沈着物形成により引き起こされることが示された(大谷他:日本臨床電子顕微鏡学会.1989年.9月.神戸)。4.BDF1←DBA/2で誘導したGVHでmyc,raf,myb遺伝子の発現を検討したところ、B細胞の活性化に一致してmyc,raf遺伝子の発現が増強していた。現在、細胞回転との相関を検討中である。(1)DBA/2細胞をBDF_1に移入して誘導するGVH(BDF_1←DBA/2 GVH)で生じる腎病変の形成過程を蛍光抗体法および電顕的にて観察し、糸球体基底膜沈着物にはIgGのメサンギウム沈着物にはIgMの関与が示唆されることをわれわれはあきらかにしてきた。今年度、われわれは、さらに研究をすすめ免疫電顕手法を用い電子顕微鏡レベルでIgGは主として際底膜にIgMは主としてメザンギウムに沈着することを確認した。(2)また、糸球体病変の電顕的観察をさらにすすめ、メザンギウムの一次的変化がmesangiolysisであることをあきらかにした。(3)BDF_1←DBA/2 GVHにおける肺では肺胞壁間質に細胞浸潤がみられること、BALF(Bronchioーalveolar lavage fluid)の検討では炎症の指標となるACE(angiotensin converting enzyme)活性の上昇がみられると同時にリンパ球の比率が増加することがあきらかになった。(4)BDR_1←DBA/2で誘導したGVHでmyc,raf,myb遺伝子の発現を検討したところ、B細胞の活性化に一致してmyc,raf遺伝子の発現が増強していたことを昨年度われわれはあきらかにした。さらに、これら遺伝子の発現と細胞回転との相関を検討したところG2+M期細胞の消長とよく一致し、B細胞の増殖へのこれら遺伝子の関与がin vivoで示唆された。
カンキツ類の染色体及び遺伝子工学的手法による低温耐性植物の育成に関する研究

染色体工学的育種技術を利用した低温耐性レモンの育成ユズ四倍体を種子親としてマイヤーレモンを交配した.その結果,果実重は放任受粉区と比較して半分程度となったが,40%の着果率であった.1果あたりの種子数は11個であり,放任受粉区とほとんど変わらず,84.6%の高い完全種子形成率であった.それらの実生を育成し,フローサイトメトリーにより倍数性を解析したところ,四倍体の珠心胚実生に混じって5個体の三倍体が得られた,RAPD法により雑種性が確認され,ガスクロマトグラフィーにより不飽和脂肪酸含量を調査した結果,系統間で差異が認められ,トリエン脂肪酸(18:3)含量が高いものも得られた.これらの三倍体雑種実生は,レモンの種なし化と耐寒性の向上が期待された.遺伝子工学的育種技術を利用した低温耐性カンキツの育成充分な生長が認められた3個体のFAD3形質転換体と対照区の不飽和脂肪酸含量を調査した.すべての形質転換体でトリエン脂肪酸(18:3)含量の増加が認められた.特に,形質転換体No.7-2は,リノール酸(18:2)の有意な減少が示され,トリエン脂肪酸は対照区より約10mol%の増加が認められ,48mol%となった.これらの個体を低温にさらしたところ対照区よりも黄化や落葉等の現象が抑えられた.以上のように,不飽和脂肪酸含量の増加が認められたFAD3形質転換体は低温耐性の向上が確認された.さらに,これらの低温耐性能力を詳細に検討する必要がある.染色体工学的育種技術を利用した低温耐性レモンの育成マイヤーレモン(Citrus lemon)を種子親にして二倍体と四倍体ユズを交配した.その結果,両組合せとも高い着果率が認められ,それぞれ91個と11個の通常種子が得られた.完全種子の出現率は二倍体ユズを交配した方が高く(96.9%),四倍体ユズを交配すると低かった(36.4%).2x×4x由来の種子の発芽は悪く,3個体のみ発芽した.次に,効率的に実生の倍数性を判定するためのフローサイトメトリー(FCM)条件について検討した.1cm角程度の葉を細断し,プロピジウムアイオダイドで蛍光染色することにより容易に倍数性を推測することが可能であった.既知のカンキツの半数体から五倍体までの倍数体の蛍光強度は倍数性に比例する関係で増加した.また,葉,果皮,果肉及びカルス等の組織や器官でも測定することが可能であった.(春崎ら2000).よって,本手法によりマイヤーレモン×四倍体ユズで得られた3実生の倍数性について検討したところ,2個体は2倍体であり,1個体は四倍体であった.遺伝子工学的種技術を利用した低温耐性カンキツの育成カラタチ(Poncirus trifoliata)の胚軸にω-デサチュラーゼ遺伝子を導入した形質転換体は,炭酸ガス施用したインキュベーター内で2ヶ月間育成することにより,順化可能な葉が展開し,素焼き鉢に移植することができた.その形質転換体はRAPD解析により遺伝子が導入されていることが再度確認できた.現在,閉鎖系温度内で育成中である.染色体工学的育種技術を利用した低温耐性レモンの育成ユズ四倍体を種子親としてマイヤーレモンを交配した.その結果,果実重は放任受粉区と比較して半分程度となったが,40%の着果率であった.1果あたりの種子数は11個であり,放任受粉区とほとんど変わらず,84.6%の高い完全種子形成率であった.それらの実生を育成し,フローサイトメトリーにより倍数性を解析したところ,四倍体の珠心胚実生に混じって5個体の三倍体が得られた,RAPD法により雑種性が確認され,ガスクロマトグラフィーにより不飽和脂肪酸含量を調査した結果,系統間で差異が認められ,トリエン脂肪酸(18:3)含量が高いものも得られた.これらの三倍体雑種実生は,レモンの種なし化と耐寒性の向上が期待された.遺伝子工学的育種技術を利用した低温耐性カンキツの育成充分な生長が認められた3個体のFAD3形質転換体と対照区の不飽和脂肪酸含量を調査した.すべての形質転換体でトリエン脂肪酸(18:3)含量の増加が認められた.特に,形質転換体No.7-2は,リノール酸(18:2)の有意な減少が示され,トリエン脂肪酸は対照区より約10mol%の増加が認められ,48mol%となった.これらの個体を低温にさらしたところ対照区よりも黄化や落葉等の現象が抑えられた.以上のように,不飽和脂肪酸含量の増加が認められたFAD3形質転換体は低温耐性の向上が確認された.さらに,これらの低温耐性能力を詳細に検討する必要がある.
肥満症とメタボリック症候群における新規ストレス関連脳内因子の解析

肥満症の発症に関してはイライラ食いなど精神的なストレスは重要な因子と考えられる。今回の研究ではストレスと肥満との関係について検討した。ストレスモデルとして、マウスへ高脂肪食を食べるストレスをかけない通常モデル群、マウスに一定時間足を寒冷水へつけるストレスの群を用いて解析した。マウスの足を一定時間寒冷水へつけるストレス群が有意に通常モデルに比較して過食と内臓脂肪量の増加所見を認めた。また血中インスリン値や中性脂肪値、視床下部NPYの上昇所見を認めた。これらの結果よりマウスに高脂肪食下でストレスを与えると視床下部NPYと関連して肥満や糖脂質の代謝異常を助長することが示唆された。メタボリックシンドロームの発症の原因は様々であるが、一般には過食や間食など食事量の増加が原因になることが多い。また食事量の増加は通常の空腹感と併せて、ストレス社会等も反映しイライラ食いなど精神的なストレスが誘因で起こることもしばしば見られる。しかしなぜストレスが加わることで食事量が変化するのか、さらに肥満症やメタボリックシンドロームにつながるのかの解析、特に末梢や脳内関連因子の解析は未だである。そこで今回の実験目的は各ストレス誘導肥満モデルを用いて、ストレス関連の末梢と脳内因子の解析を行いストレスが過食や肥満症またメタボリックシンドロームを引き起こす機序について解明することである。今年度はマウスをストレスの種類により、通常モデル群、物理的なストレスである寒令水足ストレス負荷、精神的なストレスである攻撃ストレス負荷の3群に分けまた15%脂肪量の餌60%脂肪量の餌を用いて解析した。15%脂肪量の餌では3群ともに著変は認めなかったが、60%高脂肪食を摂取したときは、寒令水足ストレス負荷と攻撃ストレス負荷の2群で摂食量の増加とストレス性の過食になる知見を得た。またストレス負荷の2群では、血液中の中性脂肪濃度とインスリン濃度の上昇、肝臓および骨格筋内の中性脂肪含量と白色脂肪内のレプチンの増加所見を認めた。以上より高脂肪食とストレス負荷が、肥満や糖脂質異常につながりその関連因子としてレプチンが関与している可能性が示唆された。メタボリックシンドロームの発症の原因としては過食など食事量の増加が原因になることが多い。また食事量の増加にイライラ食いなど精神的なストレスが誘因で起こることも見られる。そこで今回の実験目的はストレス関連の末梢と脳内因子の解析を行いストレスと過食、メタボリックシンドロームの関係について解明することである。今年度も昨年に準じてマウスをストレスの種類により通常モデル群、物理的なストレスである寒令水足ストレス負荷、精神的なストレスである攻撃ストレス負荷の3群を用いて解析した。60%高脂肪食を摂取したときは、寒令水足ストレス負荷と攻撃ストレス負荷の2群で摂食量の増加とストレス性の過食になる知見とまたストレス負荷の2群では、血液中の中性脂肪濃度とインスリン濃度の上昇、肝臓および骨格筋内の中性脂肪含量の増加所見を認めた。今年度は、以上の所見と併せて血中インターロイキン6の上昇と脳内ヒスタミン合成酵素の上昇所見を認めた。脳内のヒスタミンH1受容体の発現の変化は認めなかった。肝臓および骨格筋内の中性脂肪含量の増加との脳内ヒスタミン合成酵素の解析を行うと有意な相関関係を認めた。研究目的の達成度の区分としてはおおむね順調に進展している。平成27年度の計画ではストレス誘導性の肥満メタボリックシンドロームモデル動物の末梢性因子の更なる解析と、脳内のストレス関連分子の解析を行うことであった。血中、末梢組織の糖脂質代謝因子の解析では追加項目として白色脂肪、血中内のインターロイキン6のサイトカイン測定を行った。また脳内ではヒスタミン合成酵素、ヒスタミンH1受容体、ヒスタミンH2受容体の変化の解析を進めた。ストレス誘導性の肥満メタボリックシンドロームモデルの、血液中の中性脂肪濃度とインスリン濃度の上昇と肝臓および骨格筋内の中性脂肪含量の増加が、血中インターロイキン6と脳内ヒスタミン合成酵素と関係している知見が得られており全体としてはおおむね順調に進んでいる。肥満症に食事量の増加と併せてイライラ食いなど精神的なストレスが誘因で起こることが臨床的に見られる。ストレスが加わることで食事量や内容が変化するのか、さらにストレスが肥満症につながるのかの詳細な解析は未だである。そこで今回の目的はストレス関連の末梢と脳内と因子の解析を行いストレスと肥満症の関係について解析することである。通常モデルマウス群、寒令水足ストレス負荷マウス群、攻撃ストレス負荷マウス群を用いて解析した。当初より高脂肪食を摂取したときは、寒令水足ストレス負荷と攻撃ストレス負荷の2群で摂食量の増加とストレス性の過食と肥満症になる所見とまた寒令水足ストレス負荷の群では、血液中の肝臓中性脂肪含量の増加、中性脂肪濃度増加などメタボリック症候群様の所見を認めた。今年度は、以上の所見と併せて肥満、脂質代謝に関与すると考えられる脳内と肝臓内のヒスタミンH1受容体とH2受容体の発現の状況を解析した。

研究現況としてはストレス誘導肥満症モデルにおける、各脳内領域における凍結サンプルを抽出し、当該モデル神経核内で発現する蛋白の発現量をウエスタンブロッティング法で検討した。ストレス誘導肥満症モデルにおける脳内での各因子の遺伝子の発現量の解析の一部がうまく検出できず予想より時間を要しており、未使用額が発生している。また補助事業の目的をより精緻に達成するために学会での研修や発表などへ結び付けたく研究を進めている。研究目的の達成度の区分としてはやや遅れている。平成28年度の計画ではストレス誘導性の肥満メタボリックシンドロームモデル動物の更なる脳内のストレス関連分子の解析を行うことであった。特に脳内と肝臓でのヒスタミン合成酵素、ヒスタミンH1受容体、ヒスタミンH2受容体の変化の解析を進めた。ストレス誘導性の肥満メタボリックシンドロームモデルでは脳内ヒスタミン合成酵素の上昇を認めたが明らかなヒスタミンH1、H2受容体の変化は認めなかった。しかし一部がサンプル不良でうまく解析できす全体としてはやや遅れている。肥満症の発症の原因としては過食など食事量の増加が原因になることが多い。また食事量の増加に衝動食いなど精神的なストレスが誘因で起こることも見られる。しかしなぜストレスが加わることで食事の量が変化するのか、さらに肥満症や糖尿病、脂質異常症につながるのかの解析、特に末梢や視床下部内の因子の解析は未だである。そこで今回の実験目的はストレス関連の末梢と視床下部内因子の解析を行いストレスと過食、肥満症との関係について解明することである。昨年度に準じてマウスをストレスの種類により通常モデル群と物理的なストレスである寒令水足ストレス負荷群に分けて解析した。60%高脂肪食を摂取したときは、寒令水足ストレス負荷群で摂食量の増加とストレス性の過食になる知見を得た。また各因子のサイトカイン測定は、ウエスタンブロッテイング法やエライザ法で実施した。視床下部内での因子の変動は抽出した凍結サンプルを用いたウエスタンブロッテイング法などを用いて解析を進めた。ストレス負荷の2群では血液中の中性脂肪濃度とインスリン濃度の上昇、肝臓および骨格筋内の中性脂肪含量の増加所見を認めた。今年度は、以上の所見と併せて視床下部内の因子を解析した。寒令水足ストレス負荷群において視床下部内のneuropeptide Yの上昇する所見を認めた。肝臓および骨格筋内の中性脂肪含量の増加との脳内neuropeptide Yの相関解析を行うと有意な相関関係を認めた。これらの結果よりマウスに高脂肪食下でストレスを与えると視床下部内のneuropeptide Yが肥満や糖脂質の代謝異常に関係することが示唆された。肥満症の発症に関してはイライラ食いなど精神的なストレスは重要な因子と考えられる。今回の研究ではストレスと肥満との関係について検討した。ストレスモデルとして、マウスへ高脂肪食を食べるストレスをかけない通常モデル群、マウスに一定時間足を寒冷水へつけるストレスの群を用いて解析した。マウスの足を一定時間寒冷水へつけるストレス群が有意に通常モデルに比較して過食と内臓脂肪量の増加所見を認めた。また血中インスリン値や中性脂肪値、視床下部NPYの上昇所見を認めた。
極微量放射性核種シリコン32の加速器質量分析による超高感度検出法の開発

極微量放射性核種シリコン32を高感度で検出できる、大型タンデム加速器を用いた加速器質量分析法(AMS)を開発した。シリコン32の同重体である^(16)O_2分子を用いたパイロット分子ビーム法により、大型タンデム加速器の電圧安定制御を実施した。測定試料はSiO_2として、^(28)Si^-では430nAのビーム電流値を得た。測定対象核種の^(32)Si^(8+)について加速電圧9MVで、加速エネルギー81MeVによりAMS測定を実施した。新たに開発したガスΔE-半導体検出器を用いて、シリコン32と妨害となる硫黄32の分離識別を実施し、シリコン32のAMSを用いた高感度検出に成功した。本研究の目的は、自然界にわずかに存在する長寿命放射性核種シリコン32(^<32>Si)を1個単位で計測できる新分析手法の加速器質量分析法(AMS)を開発することである。^<32>Siの半減期は140年程度と考えられており、氷床や地下水また海洋循環などの比較的近年の環境動態調査に応用可能である。タンデム加速器を用いた加速器質量分析法では、目的核種を適当な化学形の試料にして、Csスパッター型イオン源により1価の負イオンを生成し、加速器で高エネルギーに加速して目的核種を測定する。本年度は、地下水などの水試料からSiO_2化学形の試料を作成する為の準備検討をおこなった。また、富士山南麓地域の地下水の年代測定を目的として、試料探索及び湧水試料の採取を実施した。試料処理では、^<32>Siの妨害核種となる硫黄32(^<32>S)の除去を目的として、イオン交換前処理法及びBaSO_4沈殿によるSiO_2試料調整方法の検討をおこなった。これらの目的のために、試料定量分析装置の導入と8台の送液ポンプからなる試料処理装置の開発をおこなった。本研究開発による^<32>Si用加速器質量分析システムでは、加速器電圧制御とその光学要素設定に^<32>Siの同重分子となる^<16>O_2^-ビームをパイロット分子ビームとして使用する独創的手法をとる。これらの目的の為に、イオン源の質量分析電磁石の交換、新アイオナイザーの導入をおこなった。^<16>O_2^-パイロット分子ビーム法による加速電圧の安定制御を試みる為、CsスパッタリングによるSiO_2試料からのSi^-とO_2^-の大電流負イオン生成試験を実施した。Csスパッター型イオン源からの、Si^-ビーム生成試験では電流値としてμAオーダーの負イオン引き出しを確認した。またO_2^-の負イオン生成の確認もおこなった。今後、加速器による高エネルギー加速と質量分析試験を実施する。本研究では、筑波大学大型タンデム静電加速器を利用して、長寿命放射性核種シリコン32(^<32>Si)の加速器質量分析(AMS)による試験測定を実施している。^<32>Siの半減期は140年程度であり、氷床や地下水また海洋循環などの比較的近年の環境動態調査に応用可能である。1.^<32>Si用AMSシステムの開発加速電圧制御とその光学要素設定に^<32>Siの同重体^<16>O_2をパイロット分子ビームとして利用する。AMS試験測定では、SiO_2試料から^<16>O_2^-分子を引き出し、加速圧の安定制御を試みた。加速器パラメータは、^<28>Si^<8+>に対して加速電圧10.29MVとして、加速エネルギー92.6MeVで設定をおこなった。^<32>Si^<8+>については加速電圧9MVとして、加速器パラメータ設定に利用した^<28>Si^<8+>に対してmE/q^2を揃えて加速エネルギーを81.OMeVとした。なおパイロットに利用した^<16>O^<4+>は40.5MeVとなる。^<28>Si^-の低エネルギー側での最大計測電流値は400nA、AMSシステム全体の透過効率は約5%であった。試験測定により、質量分析ラインの静電、磁場分析器等の最適値を設定した。ガス△E-半導体検出器により^<32>Siの粒子識別を試み、加速器設定パラメータの有効性を確認した。現在、測定データについて解析をおこなっている。また中国原子能科学研究院より姜博士と何博士を招聘し、共同研究をおこなった。2.Si試料調整法の検討妨害となる硫黄32(^<32>S)の除去を目的として、BaSO_4沈殿による硫黄除去方法の検討をおこなった。

帯電防止用添加物としてSiO_2試料にNbを添加する手法を考案し、硫黄除去効果について良好な結果を得た。3.年代及び環境動態調査用試料準備富士山周辺域の現地調査を実施し、地下水及び湧水等のサンプリングをおこなった。また環境モニタリング調査の一環として、柏崎刈羽原子力発電所周辺土壌の試料採取を実施した。事前検証の為に^<36>ClのAMS測定による年代推定と放射性核種濃度分析をおこなった。本研究の目的は、極微量放射性核種シリコン32(32Si)を高感度で検出できる、大型タンデム静電加速器を用いた加速器質量分析法(AMS)を開発することである。32Siの半減期は140年程度であり、氷床や地下水、海洋循環などの環境動態研究への応用が期待できる。1.32Si用AMSシステムの開発32Siの同重体である1602分子を用いたパイロット分子ビーム法により、加速器電圧の安定制御に成功した。AMS用の32Si標準試料は、NH4Clに中性子を照射して作成し、試料処理によりSiO2の化学形とした。安定同位体イオンの28Si-は、430 nAのビーム電流値を得た。加速器設定パラメータは、32Si8+について加速電圧9MVとして、加速エネルギー81MeVによりAMS測定を実施した。第2荷電変換膜により検出イオンとして32Si11+に変換した後、8度静電偏向器と45度分析電磁石により粒子識別を行った。ガス△E一半導体検出器により物質中のエネルギー損失差を利用して、妨害となる硫黄32(32S)との分離識別を試みた。開発したAMS測定方法により、32Siと妨害となる32Sを明確に分離識別し、32Si11+の粒子検出に成功した。2.Si試料調整方法の検討妨害となる硫黄32(32S)のBaSO4沈殿による除去方法を開発した。測定用試料として、SiO2試料の作成方法を開発した。また、イオン源装填時の試料支持材及び帯電防止用添加物として、SiO2試料、にNbを添加する手法を開発した。本研究成果は「第11回加速器質量分析法に関する国際会議」において報告を行った。
エゾシカの個体数変動に与える生活史形質の変異

○コホート解析の手法に関する検討・改良コホート解析は捕獲数と自然死亡率をもとに過去の生息数を復元する手法である。自然死亡率を直接推定することは困難であるため、個体数指数とコホート分析を用いて、自然死亡率を間接的に推定する手法を見つけ出し、その結果、自然死亡率は子・成獣ともゼロに近いことを示唆した(平成17年度報告)。これまでは、網羅的に仮想的自然死亡率を挿入し、もっとも個体数指数と一致するような自然死亡率の条件を視覚的に見出しただけであったが、最小二乗法を用いた推定作業によって、統計的にもこの結果を裏づけることができた。また、コホート解析の専門家と協力し、より現実的なコホート方程式を作成し、精度の高い生息数復元をすることができた。○エゾシカ捕獲数情報の個体数管理へのフィードバックニホンジカにおいて、人間による捕獲(狩猟・有害駆除)が個体数を制限する主な死因であるため、個体数管理のモニタリング情報として捕獲数が把握されてきたが、捕獲数を死亡率に読み換える、フィードバック管理は十分にされていない。そこで、捕獲によるシカの齢別死亡率の定量化し、エゾシカ保護管理計画後と比較を行い、かつ死亡パターンが齢構成に与える影響を明らかにした。管理計画が開始される以前の1990-1993年において、死亡率は0.1以下と、個体群増加率に対し小さな制限効果であり、98年以降の管理計画の効果が明らかになった。死亡パターンについては、人間の捕獲に特徴的なパターンが見られたが(平成17年度報告)、齢構成を通じて出生率に影響を与えることはなかった。齢構成を大きくゆがめるほど、全体の死亡率が大きくないことが原因と考えられる。しかし、98年以降の管理計画による積極的な捕獲事業が齢構成に与える影響は、今後明らかにしていく必要がある。エゾシカをはじめ多くの有蹄類にとって、狩猟は最も重要な死因であるといわれている。しかし、狩猟における死亡パターンの評価は非常に少なく、個体群動態への影響を評価するための基礎的情報が乏しい状況である。北欧において、ハンターが特定の齢のシカをより好んで撃っているという報告がある。より好みとはすなわち死亡パターンを意味するため、シカの個体数変動を考える上で重要な情報である。しかし、比較的急峻な地形でかつ、狩猟スタイルの違う日本において、実際にシカを選択的に捕獲しているのかは不明である。そのため、エゾシカ猟におけるハンターのより好みを定量的に評価した。調査対象は、北海道東部足寄町で1990-2002年度に捕獲された約3万頭のシカである。有害駆除で得られた約1.5万頭の齢を査定し、その齢構成に基づいて、各年度の齢構成表を性別に作成した。上記の捕獲データから、コホート分析によって、1990-1995年度の生息数を復元した(最終齢は7歳に設定した)。1990-1995年度を対象年とし、各年度の捕獲圧(捕獲数/生息数)、齢別死亡率(齢別捕獲数/齢別生息数)を算出し、ハンターのより好みを評価した。オス・メスとも、全ての年度において、ハンターのより好みが存在した。0歳はほとんど捕獲されておらず、0歳を除く全ての齢の捕獲数には、より多く捕る方向へバイアスがかかっていた。また、オスにおいて、5,6歳の死亡率は他の齢に比べて高い傾向が示された。北欧では、捕獲圧が上がるほど、ハンターは自分の好みとするシカがいなくなり、何でも獲ってしまうので、より好みが減少すると報告されていたが、本研究では特に認められなかった。捕獲圧が北欧に比べて低いため、対象期間中、常にシカを選択的に捕獲できたのではないかと考えられる。北海道足寄町の13年間(1990-2002)の狩猟データ(有害駆除を含む)を用いて、エゾシカの狩猟における齢別死亡率を推定した。子は性別を問わず低い死亡率を示した(calves : mean=0.04,SD=0.02).一方、1歳や成獣オスの死亡率は子の死亡率よりも高かった(yearlings : mean=0.34,SD=0.08;adult mean=0.38,SD=0.22;P<0.05)。また、1歳や老齢(8歳以上)メスの死亡率は壮齢(3-7years)メスの死亡率よりも高かった(yearlings and old classes mean=0.29,SD=0.21 prime classes mean=0.14,SD=0.07).子や壮齢メスの死亡率の低さは、子や子持ちのメスを撃ちたがらないと言われている狩猟者の意識に一致している。このような齢別死亡率の評価は、シカの個体群増加率を精度高く予測するために有用である。次に、成獣メスと子の自然死亡率(主に越冬期)を間接的に推定した。成獣メスと子の仮想自然死亡率を使って、コホート分析による生息数復元を行った。結果、成獣メス・子の自然死亡率はいずれもゼロに近いことが示唆された。成獣メスの自然死亡率は、ラジオテレメトリーを用いて直接的に推定された自然死亡率と一致した。一方、子の自然死亡率は、比較する自然死亡率がないものの、これまで考えられていた値よりも低かった。

本研究で得られた推定値を確証づけるためにも、さらなる裏付けと手法の洗練が必要であると思われる。このような間接的な動態パラメータの推定は、直接的な推定が困難な動物において非常に有効な手法であると考えられる。○コホート解析の手法に関する検討・改良コホート解析は捕獲数と自然死亡率をもとに過去の生息数を復元する手法である。自然死亡率を直接推定することは困難であるため、個体数指数とコホート分析を用いて、自然死亡率を間接的に推定する手法を見つけ出し、その結果、自然死亡率は子・成獣ともゼロに近いことを示唆した(平成17年度報告)。これまでは、網羅的に仮想的自然死亡率を挿入し、もっとも個体数指数と一致するような自然死亡率の条件を視覚的に見出しただけであったが、最小二乗法を用いた推定作業によって、統計的にもこの結果を裏づけることができた。また、コホート解析の専門家と協力し、より現実的なコホート方程式を作成し、精度の高い生息数復元をすることができた。○エゾシカ捕獲数情報の個体数管理へのフィードバックニホンジカにおいて、人間による捕獲(狩猟・有害駆除)が個体数を制限する主な死因であるため、個体数管理のモニタリング情報として捕獲数が把握されてきたが、捕獲数を死亡率に読み換える、フィードバック管理は十分にされていない。そこで、捕獲によるシカの齢別死亡率の定量化し、エゾシカ保護管理計画後と比較を行い、かつ死亡パターンが齢構成に与える影響を明らかにした。管理計画が開始される以前の1990-1993年において、死亡率は0.1以下と、個体群増加率に対し小さな制限効果であり、98年以降の管理計画の効果が明らかになった。死亡パターンについては、人間の捕獲に特徴的なパターンが見られたが(平成17年度報告)、齢構成を通じて出生率に影響を与えることはなかった。齢構成を大きくゆがめるほど、全体の死亡率が大きくないことが原因と考えられる。しかし、98年以降の管理計画による積極的な捕獲事業が齢構成に与える影響は、今後明らかにしていく必要がある。