hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ウイルス感染によるIRF-3活性化へ至るシグナル伝達機構の解明

ウイルス感染に対する生体防御において、自然免疫は感染初期の速やかなウイルス排除という重要な役割を果たしている。本研究では、ウイルス感染に応答した自然免疫誘導へ至るシグナル伝達機構の解明を目指した解析を行った。抗ウイルス自然免疫に必須であるI型インターフェロンの誘導に関与するシグナル分子の同定を行った結果、RIG-1と呼ばれるRNAヘリカーゼを発見した。RIG-Iはウイルス由来の二重鎖RNAをそのヘリカーゼドメインで検知し、CARDと呼ばれるシグナル伝達に関わるドメインを介して、転写因子IRF-3の活性化を誘導し、インターフェロン遺伝子の活性化へ至るシグナルを伝達する、いわゆる細胞内ウイルスセンサーであることが明らかになった。また、RIG-I遺伝子のノックアウトマウスの解析から、RIG-Iがウイルス感染に応答した自然免疫の誘導に必須な役割を担っていることを明らかにした。さらに、RIG-Iと高い相同性を持つMDA5とLGP2という二つのヘリカーゼ分子の機能解析を行った結果、MDA5はRIG-Iと同様に自然免疫系を誘導する機能を持つが、RIG-Iとは独立して働いていること、逆にLGP2は負の制御因子として、RIG-IとMDA5によるシグナルの調節に関与していることが明らかになった。今後、このRIG-Iファミリーの生理的な機能、RNA認識のメカニズム、シグナル伝達の詳細な解明をさらに進めると共に、RIG-Iをターゲットとした抗ウイルス薬剤の開発を目指した解析を進行させてゆく。I型インターフェロン(IFN)システムは、様々な感染に応答した自然免疫、さらにはそれに続く獲得免疫の制御においても非常に重要な役割を果たしていることが知られている。I型IFN遺伝子の転写活性化には、感染刺激による転写因子IFN regulatory factor-3(IRF-3)の活性化が必須であることから、その活性化制御機構について解析を行っている。本年度の研究では、第一にIRF-3分子の活性化制御に必須であるリン酸化に注目し、そのリン酸化部位の決定を行った。これまでの解析から385、386番のセリン残基(Ser^<385>、Ser^<386>)がリン酸化されることが予想されたことから、それぞれのリン酸化セリンを含む合成ペプチドに対する抗体を作製した。この抗体を用いた解析から、活性化されたIRF-3は特異的にSer^<386>がリン酸化されていることが明らかになった。また、最近報告されたIRF-3キナーゼであるTBK-1、IKK-iによってもSer^<386>が強くリン酸化されていたことから、Ser^<386>のリン酸化がIRF-3の活性化に必須であることが示された。第二に、ウイルス感染、特に細胞質でのウイルス複製によって生じる二重鎖RNAによるIRF-3の活性化に関与するシグナル分子の同定を目指して、発現クローニングによる新規分子の同定を試みた。IRF-3の結合配列によって制御されるレポータープラスミドと共に発現cDNAライブラリーを細胞へ導入し、二重鎖RNAによる刺激を加えたときに、レポーターの活性化を上昇させるようなcDNAの単離を行った。その結果、いくつかの候補分子が同定された。来年度以降、それらのIRF-3活性化への関与について検討を行う予定である。I型インターフェロン(IFN)システムは、ウイルス感染に応答した自然免疫、およびそれに続く獲得免疫の制御に重要な役割を果たしていることが知られている。細胞は複数の方法でウイルスの感染を認識し、IFN遺伝子などの発現誘導へ至るシグナルを伝達するが、ウイルス感染細胞内でのウイルス検知メカニズムについては、これまでほとんど明らかになっていなかった。本年度は、そこに関わる分子の同定を目指し発現クローニングを試みた。その結果、RNAヘリカーゼであるRetinoic acid-inducible gene I(RIG-I)を同定することに成功した(Nature Immunology,7,730-737,2005)。RIG-Iは、C末のヘリカーゼドメインに加えて、N末にCaaspase recruitment domain(CARD)と呼ばれるシグナル伝達に関わるドメインを二回繰り返して持つ。

解析の結果、RIG-Iはウイルス複製によって生じる細胞質二重鎖RNAをヘリカーゼドメインで認識し、ヘリカーゼのATPase活性による細胞内構造変化を介して、CARDから下流へのシグナルを伝達していることが明らかになった。また、RIG-Iの強制発現や発現抑制などの実験により、RIG-Iがウイルス感染に応答したIFN遺伝子の発現制御に必須な役割を担っていることが明らかになった。一方で、C型肝炎ウイルスなどの複数のウイルスは、RIG-Iを介したシグナル経路を特異的に阻害することで、ウイルスの増殖促進を行なっていることもわかってきた。このことは、RIG-Iを介したシグナル伝達機構の解明を通じて、種々のウイルス感染症に対する新たな治療法開発の可能性を示唆している。ウイルス感染に対する生体防御において、自然免疫は感染初期の速やかなウイルス排除という重要な役割を果たしている。本研究では、ウイルス感染を細胞内で検知し、自然免疫反応を誘導するために重要なシグナル伝達分子であるRNAヘリカーゼRIG-Iの機能に焦点を絞り、自然免疫誘導メカニズムの解明を目指した解析を行った。第一に、RIG-Iとそのファミリー分子の機能について解析を行った。RIG-Iと高い相同性を持つMDA5とLGP2という二つのヘリカーゼ分子の機能解析を行った結果、MDA5はRIG-Iと同様に自然免疫系を誘導する機能を持つが、RIG-Iとは独立して働いていること、逆にLGP2は負の制御因子として、RIG-IとMDA5によるシグナルの調節に関与していることが明らかになった。第二に、RIG-Iの生理的な役割を明らかにするために、二つの方法を用いて解析を行った。RIG-I遺伝子のノックアウトマウスの解析を大阪大学・審良静男教授らとの共同研究で行い、RIG-Iがウイルス感染に応答した自然免疫の誘導に必須な役割を担っていることを明らかにした。逆に、RIG-Iを介したシグナルを人為的に細胞内へ導入する実験系を開発し、RIG-Iシグナルによる細胞応答について詳細に解析した。現在、この実験系を用いたトランスジェニックマウスの作製を進行させており、RIG-Iシグナルの機能について動物個体での解析を進めてゆく。第三に、RIG-Iによるウイルスの検知機構を明らかにするために、組換え体RIG-Iを用いてin vitroでのRIG-I活性化の評価システムを開発した。このシステムを用いて、ウイルス由来二重鎖RNAによるRIG-Iヘリカーゼ活性化のメカニズムについて解析した。さらに、この系を用いることにより、人為的にRIG-Iを活性化できる化合物の探索を開始する。得られた化合物をもとに、将来的により特異的な作用を持ち、副作用の少ない抗ウイルス製剤の開発へと進めてゆく。
塩生植物の耐塩機構と地下水位に関する研究

ギンドロ(ウラジロバコヤナギ、Populus alba)を用いて塩水灌漑、塩水灌漑乾燥およびコントロールの淡水処理区で塩水灌漑が植物の成長に与える影響を烏取大学乾燥地研究センターハウス内で調べた。成長量、現存量とも塩水灌漑区では他の処理区に比べ増加し塩水灌漑乾燥区では最も低い値を示していたが、根量は変わらず塩水灌漑は地上部の現存量を制御しエネルギー消費を押さえ個体維持をしていると推察された。さらに異なった3種類の塩分濃度で灌漑実験を行った結果、塩水灌漑により土壌中塩分濃度が上がり塩水区で土壌含水率が増加した。塩水処理後ギンドロの水ポテンシャルは光合成、蒸散量とも低下、更に肥大生長量も有意に低下し、水利用効率は増加した。これらからギンドロの高塩分濃度下での耐塩方法が分かった。植物体を養分分析した結果、ナトリウムイオンは根に集中しギンドロの耐塩性は根における塩分地上部移行制御機構によると考えられる。ギンドロは中国原産であるが日本でも長らく栽培されている。栽培地の環境によるギンドロの生理特性の違いの有無を鳥取、北海道、中国で調べた結果、蒸散速度は測定時の気候、土壌水分条件に左右されたが、光合成速度は3カ所で差が認められなかった。即ちギンドロは異なる環境下で長らく成育していても生育地間で生理的能力自体に大きな差なく遺伝的適応性を維持していた。塩類集積は地下水位とその高さの変動により植物の成長は影響を受ける。地下水位固定・変動区を設定しこれに中国原産で耐塩性の非常に高いケイリュウ(Tamarix chinensis)を植栽し地下水位が植物の成長に与える影響を調べた。根はいずれの処理区でも冠水により下層への伸長を抑制されていた。変動区は固定区に比べ植物体内Na+の含有率は高く、Ca2+は低かった。高耐塩性をもったケイリュウは2000ppm程度の塩分濃度では塩分の影響より土壌水分条件が成長により強く作用していることが分かった。塩生植物が生育している塩類集積地の多くは、地下水位が高くその変動が大きい。そこで塩生植物ギョリュウを地下水位の異なる4処理を大型ポットを用いて成長実験を行い、高塩分濃度・高含水率土壌下で生育できるこの種の戦略を明らかにすることを試みた。本年は、植栽木が小さく成長に関する結果は得られていないが土壌水分と塩分濃度の垂直的変化が把握できた。中国内蒙古では、海外共同研究者と現地のギョリュウの成長量・形態と土壌の物理・化学的特性、特に地下水位に注目して調査を行った。経時的に地下水位、塩分濃度は土壌の浅い部分で激変しこれに適応した生育形態をケイリュウは持っていた。塩分、水分共に含有率の高いところでは根の発達は悪いが、個体の非同化部分の割合を小さくし生育限界を維持し個体を保っていた。また土壌塩分濃度は、比較的深いところでは低下するが一方、気相の比率が小さくなり耐塩ともに塩類集積地域で生育する植物にとっては滞水に対する耐性には必要であることが分かった。乾燥地や塩類集積地の植物が自生地以外で栽培されているが、現在生育している環境に遺伝的に適応しているかを生理・生態学的にウラジルコネヤナギで中国、北海道、鳥取の3カ所において調べた結果、この種ではまだ自生地の特性を保持しており各々の環境に順応している段階であった。

これら3カ所の生育地に微気象的差異はあったが、いずれも適潤性の土壌であったことが原因と思われ、乾燥地においては葉など地上部の生理特性だけでなく地下部のその特性と取り巻く微環境を精査する必要がある。しかし遺伝特性に差異が未だ現れていないのは多分、種および経過時間により異なることが推測され更に検証する必要性を感じた。次年度以降更にポットによる地下水位実験と中国現地で実験・調査を行い地下水位変動が塩生植物の生育に与える影響・メカニズムを明らかにする。塩生植物は塩分濃度が高い環境下に生育しているが同時に地下水位の高いところをハビタートとしている。従来塩生植物は耐塩特性を主に研究されてきたが塩類集積地は一般に地下水位が高く、またその変動も大きい。今回は、地下水位の高さ・変動が土壌環境と塩生植物の成長に与える影響をポット実験で調べた。実験は、鹿沼土、砂を等量混合したものにギョリュウを植栽して行った。水位の変動幅10cmの処理区では土壌含水率に大きな変化が認められなかったが20cmになると認められた。地下水位を固定した場合、地下水位より10cm高まで高い土壌含水率を保持していた。この土壌含水率の垂直的、時間的変化が土壌中の塩分濃度(EC)を増減させ、乾燥期に入り土壌中層付近で塩類集積が始まり実験終了時には地下水位変動区の表層で高い塩分濃度を示した。地下水位変動区の土壌中下層は、水位変動により塩分が溶解され比較的低い塩分濃度を示した。肥大成長は、水位変動・固定区を通して地下水位が高い処理区が大きい値を示していた。逆に成長の悪い処理区は、根の垂直分布が地表から10-20cm付近で少なくこれが成長に影響を与えていたと考えられる。Tamarix属の多くは、葉の先端に塩を分泌する塩腺を持っているが分泌塩分量を見ると、塩分集積が認められた水位変動区で高い値を示していた。垂直的土壌含水率を反映している根の垂直分布は、低水位区では地表近くと底面に多く、表面の気相の高さと底面の土壌水分の高さによると思われる。他の処理区はいずれも表層に大部分の根が分布していた。生長量の積算値である植物の現存量は、いずれも地下水位の高い処理区で大きい値を示し、本実験程度の土壌塩分濃度と実験期間では、塩分濃度は成長に著しい影響を与えず、むしろ水分条件によっていた。次年度は、根を中心に耐塩・耐滞水に関する特性を解明する。ギンドロ(Populus alba)を用いて塩水灌漑(5000ppm,6mm/day)、塩水灌漑乾燥(5000ppm,3mm/day)およびコントロールの淡水処理区で植物の成長に与える影響を鳥取大学乾燥地研究センターハウス内で調べた。成長量、現存量とも塩水灌漑区では他の処理区に比べ増加していたし塩水灌漑乾燥区では最も低い値を示していたが、根量は変わらず塩水灌漑は地上部の現存量を制御しエネルギー消費を押さえ個体維持をしていると推察された。さらに塩分濃度0,2000,5000ppmの灌漑実験を行った結果、塩水灌漑により土壌中塩分濃度が上がり塩水区で土壌含水率が増加した。塩水処理後ギンドロの水ポテンシャルは低下し光合成、蒸散量とも低下したが、水利用効率は増加した。塩水処理により肥大生長量は有意に低下した。植物体を養分分析した結果、ナトリウムイオンは根に集中しギンドロの耐塩性は根における塩分地上部移行制御機構によると考えられる。ギンドロは中国原産であるが日本でも長らく栽培されている。
生体微量金属の作用に着目した脳機能解析と脳疾患の予防

1.亜鉛摂取不足による海馬でのグルタミン酸神経毒性の増大亜鉛充足率が100%でない人口の割合は世界全体で約50%と報告されており、健康面での亜鉛不足は深刻な問題である。亜鉛摂取不足により学習能が低下し、攻撃性が増大する一方、てんかん発作に対する感受性も増大する。亜鉛摂取不足により海馬ではグルタミン酸神経毒性発現が促進され、神経細胞死が増加することを明らかにした。2.海馬シナプス神経伝達における亜鉛の役割記憶・学習を司る海馬に亜鉛が高濃度に存在することから、グルタミン酸シグナルを介した興奮性シナプス神経伝達におけるシナプス小胞亜鉛の役割を検討した。神経終末から放出される亜鉛が同終末に対して負のフィードバックファクターとして働くことにより、シナプス伝達効率を調節し、記憶・学習に関与することを示唆した。3.新規環境ストレスに対する海馬亜鉛のユニークな応答生体にストレスが負荷されると、視床下部-脳下垂体-副腎皮質系(HPA系)の活動が亢進するが、海馬はHPA系の負のフィードバック機構に関与する。新規環境下にラットを置いた場合にHPA系が活性化されるとの報告に基づき、新規環境下でのラットの探索行動と海馬亜鉛の役割を検討した。新規環境下における精神的ストレスによって、海馬細胞外でグルタミン酸と亜鉛が相反する動態を示すことがはじめて明らかとなった。海馬神経細胞による亜鉛の取込がグルタミン酸作動性神経の活性化、ならびにラットの探索行動と関係することを示した。亜鉛充足率が100%でない人口の割合は世界全体で約50%と報告されており、健康面での亜鉛不足は深刻な問題である。亜鉛不足による脳機能障害のメカニズムを明らかにするために、てんかん発作時におけるラット海馬細胞外液中の神経伝達物質濃度を測定したところ、亜鉛不足により細胞外グルタミン酸濃度が過剰に増加し、グルタミン酸神経毒性が増大することが示唆された。細胞外グルタミン酸濃度の増加はニューロンならびにアストロサイトに起因すると考えられる。刺激に対する歯状回顆粒細胞の応答性を調べたところ、亜鉛不足により歯状回顆粒細胞の興奮性が増大した。この興奮性増大がシナプス後ニューロンであるCA3錐体細胞を過剰興奮させる可能性がある。そこで、低亜鉛食で飼育したマウスにカイニン酸を投与し、海馬錐体細胞死を観察した。海馬をNissl染色したところ、カイニン酸投与により海馬CA1及びCA3領域で錐体細胞が脱落し、その脱落は低亜鉛食群で顕著であった。また、TUNEL法によりアポトーシスを検出してみると、CA1及びCA3領域の錐体細胞層でTUNEL陽性細胞が観察され、陽性細胞数は低亜鉛食群で有意に多かった。以上から、亜鉛摂取不足により海馬ではグルタミン酸神経毒性発現が促進され、神経細胞死が増加することが明らかとなった。一方、高カリウム刺激で誘発した海馬細胞外グルタミン酸濃度の増加は柴胡加竜骨牡蛎湯をあらかじめ経口投与することによって抑制されることが明らかとなった。グルタミン酸神経毒性がこの漢方薬で予防できる可能性がある。グルタミン酸神経毒性は様々な脳疾患における神経細胞死の共通メカニズムの一つであり、その予防法を今後さらに検討するとともに、学習能低下、攻撃性増大のメカニズムを検討し、その予防法を明らかにする。重金属の生理作用に着目して脳機能を理解し、脳疾患の予防法を明らかにするために、亜鉛、マンガン、鉄等の重金属が神経伝達に不可欠であり、高次脳機能を巧妙に調節する一方で、脳内局所における重金属のホメオスタシス変化が脳の機能変化、病態と密接に関係するとの独自のコンセプトで研究を展開してきた。

本研究では、記憶・学習を司る一方でグルタミン酸神経毒性に脆弱な海馬に亜鉛が高濃度に存在することから、グルタミン酸シグナルを介した興奮性シナプス神経伝達におけるシナプス小胞亜鉛の役割を検討した。海馬細胞外液に膜不透過型亜鉛キレート剤であるCaEDTAを添加すると、細胞外グルタミン酸濃度が低下する。そこで、神経活動に伴いシナプス間隙に放出される亜鉛がシナプス前ニューロンに対して負のフィードバックファクターとして働く可能性を、ラット海馬スライスを用いて調べた。その結果、海馬スライス外液にCaEDTAを添加してテタヌス刺激を与えると、神経終末(グルタミン酸作動生でシナプス小胞に亜鉛を含む歯状回顆粒細胞由来苔状線維終末)において、カルシウムシグナルが増加した一方、亜鉛添加では減少した。亜鉛が神経終末でのカルシウム流入を抑制し、グルタミン酸の開口放出を抑制することが考えられる。開口放出を観察するFM4-64蛍光プローブを用いて同様に検討したところ、テタヌス刺激時において亜鉛は神経終末における開口放出を抑制することが明らかとなった。また、今回用いたテタヌス刺激により記憶のメカニズムと考えられている長期増強(LTP)が誘導された。したがって、神経終末から放出される亜鉛が同終末に対して負のフィードバックファクターとして働くことにより、シナプス伝達効率を調節し、記憶・学習に関与することが示唆される。海馬歯状回穎粒細胞由来の苔状線維のシナプス小胞に亜鉛が高濃度で含まれる。この亜鉛は神経活動に伴いグルタミン酸とともにシナプス間隙に放出され、苔状線維のシナプス可塑性に関与することを報告してきた。一方、生体にストレスが負荷されると、視床下部-脳下垂体-副腎皮質系(HPA系)の活動が亢進するが、海馬はHPA系の負のフィードバック機構に関与する。新規環境下にラットを置いた場合にHPA系が活性化されるとの報告に基づき、今回、新規環境下でのラットの探索行動と海馬亜鉛の役割を検討した。新規環境下にラットを50分間置き、海馬CA3領域をin vivoマイクロダイアリシス法を用いて人工脳脊髄液で灌流し、探索行動時の細胞外の亜鉛とグルタミン酸の動態をリアルタイムで測定した。探索行動1日目では、細胞外グルタミン酸濃度が増加し、亜鉛濃度が減少した。2日目でも同様に変化したが、8日目には亜鉛濃度が探索行動前のベースレベルまで上昇した。また、8日目には探索行動と関連する移動時間が顕著に減少した。次に、細胞外亜鉛濃度減少の意義を検討するために、膜不透過型亜鉛キレーターであるCaEDTA灌流下でラットを新規環境に置いたところ、細胞外グルタミン酸濃度は増加せず、亜鉛濃度も減少しなかった。またラットの移動時間が減少した。以上より、新規環境下における精神的ストレスによって、海馬細胞外でグルタミン酸と亜鉛が相反する動態を示すことがはじめて明らかとなった。今回の結果は、海馬神経細胞による亜鉛の取込がグルタミン酸作動性神経の活性化、ならびにラットの探索行動と関係することを示唆する。海馬神経細胞による亜鉛の取込は精神的なストレス応答ならびに空間認知に関与しているものと考えられる。
日本における近代看護の定着過程に関する歴史的検証

現代では看護の対象を生活者として捉え、病院看護と家庭看護の連携が求められている。本研究は日本の医療史の中に病院看護と家庭看護の源流を探ることを目的とする。1874年、医学雑誌の付録として掲載された『看病心得草』は、わが国最初の近代翻訳看護書とされている。入手した原著との比較を行った。翻訳書は原著に忠実かつ平易な表現で翻訳され、医師だけでなく一般の女性に対しても理解を促すための工夫がみられた。また、1832年出版の近世看護書との比較を行った。漢方医による往診が行われていた江戸後期には、既に看護の必要性の認識があり、その後の近代看護の受容・発展の一要素となっていたことが考えられた。本研究は日本の医療史の中に近代看護の源流を探ることを目的とする。平成25年度は、江戸後期に出版された日本古来の看護法をまとめた最初の書『病家須知』(1832年)と、明治期最初に出版された翻訳看護書『看病心得草』(1874年)との比較を行い、近代看護の定着過程におけるこれらの看護書の意義を検討した。江戸後期『病家須知』の特徴としては以下の通りであった。町医(漢方医)による執筆であった。読者対象は一家の主人であり、実際に看病にあたる使用人への読み聞かせによるものも想定していた。内容は江戸後期の文化に基づきアレンジされた、漢方医学や在宅医療から生じた日本的看護法であった。従来の自己のためだけではなく、他者への援助のための養生法、看護法として記述されていた。明治初期『看病心得草』の特徴としては以下の通りであった。原著は1850年代のアメリカのベストセラーである解剖生理衛生学書の一部であった。蘭方医による翻訳、校閲であった。医療の成功には医術、良薬と合わせて適切な看護が不可欠であるとしていた。読者対象である婦女子に向け、女性の教養としての看護法を教授することを刊行目的としていた。西洋式の具体的な看護手順と留意点を、一部日本文化に合わせて簡潔に記述していた。方法は現在にも通じる点があるが、この時点では科学的根拠の提示はなかった。漢方医による往診が行われていた江戸後期には、既に医療者・有識者の中には看護領域の重要性への気付きがあった。そのような背景が、明治の大転換期に輸入された近代的な西洋式看護のスムーズな受容と定着、発展に繋がったと考える。また、2書籍とも平易な表現かつ実践的な内容であり、看護に必要な知識を普及させることで日本の医療全体の質の向上を図り、国民生活の利益に結び付けたいという、時代は違えども医療者や有識者の共通する思いがあることがわかった。本研究は日本の医療史の中に近代看護の源流を探ることを目的としている。平成26年度は一次史料である翻訳書と原著との比較調査を行った。明治7(1874)年に医学雑誌の付録として世に出た『看病心得草』は現時点ではわが国最初の翻訳看護書である。その原著はアメリカの医師Calvin Cutter著"First book on analytic anatomy, physiologyand hygiene"であった。翻訳に携わった田代基徳は天保10(1839)年に出生、緒方洪庵に師事した医師で、『看病心得草』を収録した「文園雑誌」の創刊者であった。また、今年度の活動として、主に学術集会等への参加を通して幅広く情報・資料の収集を行った。国内においては日本医史学会学術大会、日本看護歴史学会学術集会に参加し、近代看護成立過程に関する最新の知見を得た。また、国外においては日本における医療の近代化と深い関連があるオランダを訪問した。ライデン大学、シーボルトハウス、オランダ国立博物館を視察し、関連資料の収集と分析を行い、近代における日蘭関係の状況と意義について検討した。本研究は、日本の医療史の中に病院看護と家庭看護の源流を探ることを目的としている。平成27年度は、明治7(1874)年に出版された、わが国で最初の翻訳看護書とされる『看病心得草』の原著、Culvin Cutter“First Book on Analytic Anatomy, Physiology and Hygiene"の出版状況について調査した。著者のCulvin Cutter(1807-1873?)は、米国の外科医かつ陸軍将校であった。多くの解剖学関連の書籍を出版しており、その内容は初等教育用から大学教育用まで、様々なレベルでの解剖・生理・衛生学書であった。今回の調査対象とした“First Book on Analytic Anatomy, Physiology and Hygiene"は、1840年の初版以降、非常に多くの版を重ねており、今回把握しただけでも、1857年から1873年にかけて、タミル語、ロシア語、ブルガリア語、トルコ語、アラビア語、カレン語、日本語に翻訳されていることがわかった。また、最近では米国において、2007年ごろより復刻版も出版されている。日本で最初の翻訳看護書『看病心得草』の原著は、当時の米国におけるベストセラーで、多言語に翻訳された解剖・生理・衛生学書であることがわかった。平成27年度は、これまでの調査結果を分析考察・集約し、学術集会での発表と論文による公表を行う計画であったが、希少で入手困難な史料があったこと、翻訳作業に想定以上に時間を要したこと等により、研究の遂行が当初の計画より遅延した。

本研究は、日本の医療史の中に近代看護の源流を探ることを目的としている。平成28年度は、明治初期に出版された原著が異なる翻訳看護書2冊を比較し、その特徴を検討した。扱った史料は以下の通りである。1田代基徳閲、岡田宗訳『看病心得草』1875(明治8)年、2太田雄寧訳纂『看護心得』1877(明治10)年。まず『看病心得草』について、原著はアメリカ人医師Calvin Cutterの“A treatise on Anatomy, Physiology, and Hygiene"(1852年)の最後の章`Direction for Nurses'とされている。読者対象は家庭で看病を担う女性、刊行目的としては、名医妙薬でも看病法が良くなければ効果は少ない、養生学(Hygiene)の法則に従い患者への接し方について記述するとしていた。内容は、総論、湯浴、食物、空気、病室温度、静謐、代人心得という項目ごとに記述されていた。無駄な表現がなく、平易かつ簡潔に書かれていた。次に『看護心得』について、原著はアメリカ人医師Robert. E. Griffithの“A Universal Formulary"第3版(1873年)の序章の一部`Observations on the Management of the Sick Room'であることがわかっている。読者対象は病院で看護を担う男性看病人で、刊行目的は病室の管理に関して情報提供をすることであった。内容は、総論、換気、温度、清潔、静けさ、排泄、飲食・薬、家具、器物の項目に分けられ、当時まだ西洋文化に疎かった日本人看病人にもわかりやすい表現を工夫しながら記述されていた。これら2冊の書籍は異なる原著の一部を翻訳した看護書であるが、家庭・病院における看護の重要性に注目し、極めて実用的な内容で出版されていたことがわかった。現代では看護の対象を生活者として捉え、病院看護と家庭看護の連携が求められている。本研究は日本の医療史の中に病院看護と家庭看護の源流を探ることを目的とする。1874年、医学雑誌の付録として掲載された『看病心得草』は、わが国最初の近代翻訳看護書とされている。入手した原著との比較を行った。翻訳書は原著に忠実かつ平易な表現で翻訳され、医師だけでなく一般の女性に対しても理解を促すための工夫がみられた。また、1832年出版の近世看護書との比較を行った。漢方医による往診が行われていた江戸後期には、既に看護の必要性の認識があり、その後の近代看護の受容・発展の一要素となっていたことが考えられた。研究はおおむね順調に進展している。平成26年度は対象としている一次史料である翻訳看護書とその原著の比較を行い、特徴を検討した。また、予定していたオランダへの訪問を果たし、資料館や博物館の展示品等の見学・分析を通して日本における近代医療・看護との関連の深さを理解することができた。平成2527年度の研究成果をふまえ、日本における近代看護がどのように移入・定着・分化していったのか、その歴史的過程を看護系学術集会等において発表する。また、研究成果を論文としてまとめ、日本医史学雑誌、日本看護歴史学会誌等に投稿する。看護学平成27年度は本研究計画の最終年度である。
含高周期14族元素スピロ共役多重結合化合物の合成と性質の解明

トルエンを含むスピロペンタシラジエン1の単結晶のX線結晶構造解析に成功し、ヘキサンを含む1の単結晶中の構造とは異なり、1の2つのケイ素-ケイ素二重結合回りの構造が顕著に異なることを見出し、スピロペンタシラジエンの骨格が比較的柔軟であることを明らかにした。またスピロペンタシラジエン1の光反応により生成したヘキサシリルビシクロ[1.1.0]テトラシラン2の別途合成を検討した。化合物2の前駆体である対応する1,3-ジブロモシクロテトラシランのKC_8を用いた還元縮合により2を黄色結晶として単離することに成功し、その分子構造をX線結晶構造解析で決定した。溶液中化合物2の4員環は速やかに反転しており、温度可変NMRを用いて環反転の活性化エネルギーが6kcal/mol程度であることを明らかにした。化合物2の環反転の活性化エネルギーは橋頭位に芳香族置換基を持つビシクロテトラシランのもの(15kcal/mol)に比べて小さく、これは2の橋頭位に導入されているシリル置換基の電子的効果により環反転の遷移状態が安定化されているためであると推定した。本研究に関連して、累積したケイ素-ゲルマニウム二重結合を持つ2-ゲルマジシラアレンの合成、ケイ素表面のモデルとなる二環式ジシレンの合成に成功した。また種々の配位子をもつジシレン-パラジウム錯体の合成およびX線結晶構造解析に成功し、パラジウム上の配位子がより電子求引性のものほど、構造がよりπ錯体的になることを見出し、配位子の電子的効果によりジシレン錯体の電子状態を制御できることを明らかにした。申請らが合成したケイ素-ケイ素二重結合がスピロ共役した初めての化合物であるスピロペンタシラジエン1は収率3.5%であり非常に低く、これまで1の反応性の解明は困難であった。今回1の前駆体として嵩高いトリス(トリアルキルシリル)シリル基を1,2位に持つテトラブロモジシランを用いることで、1の収率を35%まで向上させることに成功し、1の種々の反応性の解明を可能にした。1のヘキサン溶液に440nmより長波長の光を超高圧水銀灯で照射すると徐々に反応が進行し、シクロプロペンのケイ素類縁体(シクロトリシレン)2、トリス(トリアルキルシリル)シリルラジカル3および構造不明の化合物が主に得られた。2の生成は光照射により1の環内ケイ素-ケイ素結合の切断、3の生成は1の環外ケイ素ケイ素結合の切断が起きていることを示している。特に2は安定化合物の報告例のないケイ素-ケイ素三重結合化合物を経由して生成している可能性があり興味深い。スピロペンタシラジエン1は四塩化炭素と速やかに反応し、濃橙色結晶を単一生成物として与えた。この生成物の構造はまだ明確ではないが、1の2つのケイ素ケイ素二重結合に塩素が付加したスピロペンタシランであると考えられる。興味深いことに1は四臭化炭素とも反応し、四塩化炭素とは異なり、1の片方のケイ素ケイ素二重結合にのみ臭素が付加したスピロペンタシレンと考えられる生成物を与えた。この生成物は1のスピロ共役をより詳細に理解する上で鍵となる化合物であり、現在単離および紫外可視吸収スペクトル測定などを検討中である。またこれに関連して、安定な3員環ジシレン2の特異な光反応、シリル置換ジシレンのシリル置換基の転位反応を明らかにした。我々が合成に成功した2つの直交したケイ素-ケイ素二重結合がスピロ共役した初めての化合物であるスピロペンタシラジエン1の反応性解明を検討した。NMRスペクトルおよびエックス線結晶構造解析により、この生成物が1の2つケイ素-ケイ素二重結合の片方が塩素化された、ジクロロスピロペンタシレン2であることを明らかにした。これはスピロペンタシレンを安定に合成単離した初めての例となる。単結晶中で2の2つの塩素は互いにトランスの位置にあった。スピロペンタシラジエン1に対して過剰量の四塩化炭素を作用させた場合には1の二重結合を形成する4つの不飽和ケイ素がすべて塩素化されたテトラクロロスピロペンタシラン3が得られた。これまでにスピロペンタシランについては溶液中での生成が1例報告されているのみである。この結果はスピロペンタシランを安定化合物として単離した始めての例である。また化合物1は四臭化炭素や1,2-ジブロモエタンと反応し1の三員環が開裂した結果生成したと考えられる複雑な生成物を与え、四塩化炭素との反応とは異なる結果を与えることを見出した。またケイ素-ケイ素二重結合間のスピロ共役と比較する目的で、累積したゲルマニウム間二重結合、およびゲルマニウム-ケイ素間二重結合をもつアレン類縁体の合成単離に成功し、それらの分子構造を明らかにした。そして累積したこれらの二重結合間に顕著な共役があり、その程度は1のものに比べて大きいことを見出した。本研究に関連して、ケイ素-ケイ素二重結合にパラジウムが配位した14電子ジシレン錯体の合成にも成功し、これまでに報告されているジシレン錯体に比べてπ錯体的性質の強い構造を持つことを見出した。

トルエンを含むスピロペンタシラジエン1の単結晶のX線結晶構造解析に成功し、ヘキサンを含む1の単結晶中の構造とは異なり、1の2つのケイ素-ケイ素二重結合回りの構造が顕著に異なることを見出し、スピロペンタシラジエンの骨格が比較的柔軟であることを明らかにした。またスピロペンタシラジエン1の光反応により生成したヘキサシリルビシクロ[1.1.0]テトラシラン2の別途合成を検討した。化合物2の前駆体である対応する1,3-ジブロモシクロテトラシランのKC_8を用いた還元縮合により2を黄色結晶として単離することに成功し、その分子構造をX線結晶構造解析で決定した。溶液中化合物2の4員環は速やかに反転しており、温度可変NMRを用いて環反転の活性化エネルギーが6kcal/mol程度であることを明らかにした。化合物2の環反転の活性化エネルギーは橋頭位に芳香族置換基を持つビシクロテトラシランのもの(15kcal/mol)に比べて小さく、これは2の橋頭位に導入されているシリル置換基の電子的効果により環反転の遷移状態が安定化されているためであると推定した。本研究に関連して、累積したケイ素-ゲルマニウム二重結合を持つ2-ゲルマジシラアレンの合成、ケイ素表面のモデルとなる二環式ジシレンの合成に成功した。また種々の配位子をもつジシレン-パラジウム錯体の合成およびX線結晶構造解析に成功し、パラジウム上の配位子がより電子求引性のものほど、構造がよりπ錯体的になることを見出し、配位子の電子的効果によりジシレン錯体の電子状態を制御できることを明らかにした。
手指の姿勢に応じた到達把握運動生成の脳内メカニズム解明

日常生活において、ヒトは手を伸ばして物体を確実につかむことができる。一見簡単なこの運動の背景には、複雑な運動制御メカニズムが関与している。脳は、手指の姿勢や外部環境といった情報に基づいて、最適な運動制御を行っているものと考えられる。平成25年度は、前年度に設定を行った光学式動作解析装置を使用して、重力の影響が鉛直上および下方向への到達把握運動において異なるか否かを調べた。解析の結果、(重力に沿う)鉛直下方向への運動に比べて、(重力に抗する)上方向への運動において、上肢の加速時間および手指の開手時間が短いことが明らかとなった。これらの結果は、鉛直上下方向への到達把握運動において、脳が上肢に働く重力の作用を考慮して到達把握運動を制御していることを示唆する。また、このことは、重力環境におけるヒトの運動制御則の一端を明らかにしており、国内外の学会において評価を受けた。さらに、本研究成果は、国際学術雑誌であるExperimental Brain Research誌に掲載された。また、平成25年度後半から、重力(加速度)のセンサーである前庭器に着目し、到達把握運動の制御における前庭器の寄与を調査する目的で実験を行った。実験では、到達把握運動を遂行している間に経皮前庭電気刺激を加えることにより、運動に変化が生じるか否かを調べた。この実験に関しては、現在データの解析を進めており、詳細な検討の後に学会大会での発表および学術雑誌での掲載を通じて、研究成果を公表する予定である。(抄録なし)ヒトは、タイピング中などあらゆる手指の姿勢からコーヒーカップに手を伸ばし、それを適切に手に取ることができる。この日常生活で当たり前のように行われる到達把握運動から、自己の身体状態および外部の環境に応じて、脳が適切に運動を制御していることが示唆される。しかしながら、それら自己身体の状態および外部の環境といった情報を、脳がどのように到達把握運動の計画および実行に組み込んでいるのかについては十分に明らかにされておらず、この点を解明することを目的に行動学的研究を行った。平成24年度は、電磁気センサによって取得された、様々な手指姿勢から行われる到達把握運動の運動学(キネマティクス)データの解析が行われた。その結果、運動開始時の手指姿勢に応じて、それぞれ特徴的な手の指間距離プロファイルが示されることが明らかになった(国際学術雑誌への投稿準備中)。しかしながら、本研究を進めるに従って、電磁気センサによるデータの取得は、経頭蓋磁気刺激装置など他の実験機器との同時使用には適していないことが次第に明らかとなった。そこで平成24年度中頃より、電磁気センサに代わる光学式動作解析装置を追加購入し、時空間的精度の高いキネマティクス測定を可能にするための実験準備を行った。平成24年度で、上述の光学式動作解析装置を使用して座標データを取得するための準備はほとんど完了し、予備実験において精度の高い座標データを取得、その解析を行った。平成24年度は、電磁気センサによって取得した運動学(キネマティクス)データの解析を行うとともに、国際学術雑誌への投稿準備を行った。光学式動作解析装置を追加購入し、その装置を用いて時空間的精度の高い運動学データを取得するための準備・予備実験を行った。したがって、平成24年度は概ね順調な進展を示したと判断できる。平成25年度は、平成24年度に準備を行った国際学術雑誌への投稿・受理を目指すとともに、追加購入した光学式動作解析装置を用いた行動神経生理学実験を進める。その実験で得られた知見を国内学会大会で発表し、国際学術雑誌への投稿・受理を目指す。(抄録なし)
ヒストンコードにおけるアルギニン残基のメチル化修飾制御機構の解明

ヒストンのアルギニン残基メチル化酵素ファミリーの一つであるPRMT4と結合するタンパク質の一つとしてがん関連転写制御因子NAC-1を同定した。その複合体に核内受容体コアクティベータNCoA-3が含まれ、450KDa程度の分画に存在した。ヒストンのアルギニン残基メチル化酵素PRMT4はがん細胞内において、ホルモン受容体およびがん関連転写因子などの情報伝達系を調節しているという新たな知見を得た。本研究の目的は、申請者が新たに見出したヒストンキナーゼAurora-Bとアルギニン残基メチル化酵素PRMT5との相互作用を新しい切り口として、ヒストンアルギニン残基のメチル化修飾という古くから知られている現象の制御機構を解明することである。アルギニン残基のメチル化転移酵素という分子レベルでの制御機構という新しい視点から、またアルギニン残基のメチル化されたヒストンがどのようなDNA配列と結合し、どのような実働分子を標的領域に呼び込み、アルギニン残基のメチル化がリン酸化、アセチル化およびリジン残基のメチル化など他のピストン翻訳後修飾とどのように相互作用し、そしてどのように遺伝情報を制御するのか、その全貌を明らかにする。平成21年度は、1) PRMT5およびPRMT6の細胞内局在を可視化するためにレトロウイルスを用いGFP融合タンパク質として導入し、フローサイトメーターを用いたソーティング法によりクローンではなく集団として,安定細胞株を作製し、タイムラプス顕微鏡観察を行った。2) PRMT5およびPRMT6の内在性タンパク質の時空間的動態解析を行うため、免疫染色のできるモノクローナル抗体を作成中である。3) PRMT17をクローニング後Aurora-Bとの結合を検討した。4) PRMT17がAurora-Bをメチル化できるのか、逆にAurora-BがPRMT17をリン酸化できるのかについてそれぞれの相互制御について解析を行った。5) H3-R8およびH4-R3のジメチル化を認識するモノクローナル抗体を作成した。年次計画に沿って、順調に計画は進行している。本研究の目的は、申請者が新たに見出したヒストンキナーゼAurora-Bとアルギニン残基メチル化酵素PRMT5との相互作用を新しい切り口として、ヒストンアルギニン残基のメチル化修飾という古くから知られている現象の制御機構を解明することである.アルギニン残基のメチル化転移酵素という分子レベルでの制御機構という新しい視点から、またアルギニン残基のメチル化されたピストンがどのようなDNA配列と結合し、どのような実働分子を標的領域に呼び込み、アルギニン残基のメチル化がリン酸化、アセチル化およびリジン残基のメチル化など他のピストン翻訳後修飾とどのように相互作用し、そしてどのように遺伝情報を制御するのか、その全貌を明らかにする。平成22年度は、1)前年度に作成したH3-R8およびH4-R3のジメチル化を認識するモノクローナル抗体および市販のH3-R2のジメチル化を認識するポリクローナル抗体の特異性をヒストンペプチドアレイを用いて検討した。2)市販のH3-R2のジメチル化を認識するポリクローナル抗体は、H3-R2のジメチル化も認識するが、ピストン以外の他のRG配列のRのメチル化も認識した。3)PRMT17を細胞内で過剰発現させたところ、PRMT6のみがH3-R2およびH3-R8をジメチル化した。さらに、4)大腸菌で発現精製したPRMT6は、試験管内でH3-R2、H3-R8およびH4-R3をジメチル化することを確認した。アルギニン残基のメチル化転移酵素という分子レベルでの制御機構という新しい視点から、またアルギニン残基のメチル化されたヒストンがどのようなDNA配列と結合し、どのような実働分子を標的領域に呼び込み、アルギニン残基のメチル化がリン酸化、アセチル化およびリジン残基のメチル化など他のヒストン翻訳後修飾とどのように相互作用し、そしてどのように遺伝情報を制御するのか、その全貌を明らかにすることを目的とした。平成23年度は、1)アルギニン残基メチル化酵素ファミリーの一つであるPRMT4と結合するタンパク質を質量解析により同定した。2)その候補結合タンパク質の一つが関連転写制御因子NAC-1であり、細胞レベルの解析により、実際両者が細胞内で結合することを明らかにした。3)しかし、NAC-1タンパク質は、PRMT4の基質にはならなかった。4)その複合体に核内受容体コアクティベータNCoA-3が含まれることを明らかにした。

5)さらに、細胞溶解液を用いたサイズ分画法によりこれらの複合体は450KDa程度の同じ分画に存在することが判明した。アルギニン残基メチル化酵素PRMT4はがん細胞内において、ホルモン受容体およびがん関連転写因子などの情報伝達系を調節しているという新たな知見を得た。年次計画に沿って、順調に計画は進行した。
血小板活性化からみた血管内皮損傷の状態と脳梗塞再発の予測の研究

運動療法やリハビリテーションが動脈硬化の予防や脳卒中の二次予防に関与できるかを研究する目的で、リハビリにより脳卒中の血管内皮、血小板、単球の機能と動脈硬化や運動機能回復との関係を解析した。私達はすでに動脈硬化の程度に応じて血小板活性化が増大してくること、また脳卒中や動脈硬化でインスリン抵抗性が改善することは既に報告した。また、高温負荷にて血小板が活性化してくることや血管内皮からの線溶活性が低下することを報告した。これらの先行研究の結果をふまえて、運動療法が血管内皮機能、血小板活性化、単球活性化に及ぼす影響について研究を進めた。その結果、脳卒中後の血管内皮機能は強く障害され血小板は活性化されていること、そして血管内皮機能や血小板活性化はリハビリの経過中に徐々に軽減してくる傾向がみられことが判明した。一方、動脈硬化を基盤としていない脳梗塞では、内皮機能の障害は軽度で脳病巣の発現は遅延することも判明した。インスリン抵抗性やメタボリックシンドロームを有する症例では内皮機能の障害や単球機能の変化がみられる傾向が判明した。即ち、脳卒中では動脈硬化により血小板が活性化し、血管内皮機能が高度に傷害されていることが判明し、運動療法により動脈硬化進展を抑制し脳卒中の二次予防に寄与できる可能性が示唆された。脳卒中の自律神経機能の指標として皮膚角質水分量や角質層厚さを測定した。麻痺側では自律神経も障害され経皮酸素分圧、皮膚表面pH、角質水分量などの皮膚機能も低下していた。運動療法により皮膚表面pH、角質水分量の改善がみられた。リハビリが運動機能、血小板・凝固・線溶系、動脈硬化の改善に関与しているだけでなく、自律神経や皮膚機能の障害の改善にも関与する可能生があることが示唆された。運動療法や温熱療法における血管内皮機能や血小板活性化と動脈硬化や血栓症との関係を解析して、リハビリテーションや運動療法、温熱療法が脳硬塞等の血栓性疾患の二次予防に寄与する可能性を探求する目的で、以下のような研究を報告または施行、準備している。健康成人よりも高血圧症患者のほうが、高血圧症患者より脳硬塞患者のほうが血小板は活性化している、すなわち動脈硬化の程度に応じて血小板活性化が増大してくることを報告した。血管内皮機能と血小板活性化との関連については研究中である。血管内皮機能は動脈硬化と強い相関があり、インスリン抵抗性にも関与しているらしいことを解析中である。また脳卒中や動脈硬化でのインスリン抵抗性の発現因子については既に報告した。一方、温熱負荷により血管内皮機能が障害されたり血小板活性化が引き起こされる可能性があり、高温負荷にて血小板が活性化してくることや血管内皮からの線溶活性が低下する、すなわち血栓が形成されやすくなることは既に報告した。現在、温熱による血管内皮機能の変動を研究中である。温熱や運動という安価なモダリティーで脳卒中の予防ができれば医療費の削減にも寄与できるであろう。さらに運動療法やリハビリテーションにより血管内皮機能が改善することが判明すれば、運動療法によっても脳硬塞の二次予防が期待できる。なお運動療法により呼吸機能や免疫機能の改善することはすでに報告しているが、リハビリテーションが単に運動機能回復だけにとどまらず、呼吸、循環、免疫、内分泌等の機能改善にも関与していることも報告してきた。さらに研究を発展させて運動療法を含めたリハビリテーションが脳硬塞だけでなく血栓性疾患や生活習慣病などの各種疾患の予防に寄与する可能性を模索している。

動脈硬化の予防や脳卒中の二次予防に運動療法やリハビリテーションがどこまで関与できるかを研究する目的で、血管内皮機能や血小板活性化、単球活性化と動脈硬化や血栓症との関係を解析した。健康成人よりも高血圧症患者のほうが、高血圧症患者より脳硬塞患者のほうが血小板は活性化している、すなわち動脈硬化の程度に応じて血小板活性化が増大してくることを報告した。また脳卒中や動脈硬化でのインスリン抵抗性の発現因子については既に報告した。一方、温熱負荷により血管内皮機能が障害されたり血小板活性化が引き起こされる可能性があり、高温負荷にて血小板が活性化してくることや血管内皮からの線溶活性が低下する、すなわち血栓が形成されやすくなることは既に報告した。これらの私達の先行研究の結果をふまえて、運動療法が血管内皮機能、血小板活性化、単球活性化に及ぼす影響について研究を進めた。その結果、脳卒中後の血管内皮機能は強く障害されていて、リハビリテーションの経過中に徐々に軽減してくる傾向がみられことが判明した。一方、動脈硬化を基盤としていない脳梗塞では、内皮機能の障害は軽度で脳病巣の発現は遅延することも判明した。インスリン抵抗性やメタボリックシンドロームを有する症例では内皮機能の障害や単球機能の変化がみられる傾向が判明した。即ち、脳卒中では動脈硬化により血小板が活性化し、血管内皮機能が高度に傷害されていることが判明し、運動療法により動脈硬化進展を抑制し脳卒中の二次予防に寄与できる可能性が示唆された。運動療法により片麻痺や運動機能だけではなく呼吸機能や免疫機能も改善することはすでに報告しているが、本研究によりリハビリテーションが運動機能、呼吸、循環、免疫、内分泌等の機能改善にも関与しているだけでなく、動脈硬化の予防や脳卒中の二次予防にも関与する可能生があることが示唆された。
植物の新しい分解コンパートメント「リソソーム」の形態学的解析

1.リソソームをパーコール密度勾配遠心法を用いて単離し,リソソームに存在するタンパク質を電気泳動で分離しウェスタンブロット法により解析した。その結果,リソソームは液胞型ATPaseのAサブユニット・Bサブユニット,酸性ホスファターゼが存在することがわかった。2.計画していた蛍光抗体法,免役電子顕微鏡法によるリソソームと液胞の比較は行わなかった。3.タバコ培養細胞を用いた実験系において,ショ糖飢餓処理に伴って活性化されるシステインプロテアーゼのPCRによるクローニングを試みたが,有意義な結果は得られなかった。4.細胞の形態を光学顕微鏡を用いて詳しく観察し,リソソームが形成されるタイミングを調べた。その結果,リソソームを介した自食作用は一過的にしか起こらないこと,そして,この自食作用が終了した後も細胞内タンパク質分解は進行することを明らかにした。さらに,リソソームを介した自食作用が終了した後に起こるタンパク質分解は,液胞が直接関与する自食作用に依ることを示唆する結果を得た。5.リソソームの形成を阻害する薬剤のスクリーニングを行った。その結果,動物細胞の自食作用の阻害剤である3-メチルアデニンが,リソソームの形成を阻害することを明らかにした。1.リソソームを蓄積したタバコ培養細胞を,オオムギのシステインプロテアーゼに対する抗体を用いた蛍光抗体法で染色して観察したが,このオルガネラにシステインプロテアーゼが局在することを示すシグナルは得られなかった。そこで,蛍光抗体法でプロテアーゼの局在を示すことをあきらめ,細胞分画を行った。リソソームを蓄積したタバコ細胞を破砕し,パーコール平衡密度勾配遠心によりリソソームの単離を行った。単離したリソソームより抽出したタンパク質を電気泳動で分離し,プロテアーゼの活性染色を行った結果,オルガネラ内にシステインプロテアーゼが存在することが証明できた。2.ミトコンドリアを特異的に染色するMitotracker(Molecular probe)を用いて,タバコ培養細胞のミトコンドリアを染色した後に,自食作用を誘導し,リソソーム内にMitotarackerがi移動することを示した。この結果は,自食作用によってミトコンドリアがリソソームに取り込まれることを示唆していると考えられるが,まだ不明の点も残った。3.ミトコンドリア移行シグナルを持つレポーター蛋白質(Green fluorescent protein)を,タバコ培養細胞で発現させ,自食作用を誘導した。その後,このレポータータンパク質がリソソームに取り込まれるかどうかを蛍光顕微鏡で解析しているが,再現性のある結果はまだ得られていない。
EC諸国における農産物生産費・価格形成要因に関する実証的・政策的研究

EC諸国の農業経営における生産費水準と生産費形成要因および農産物の生産者価格及び消費者価格の形成要因を調べて,日本のそれを比較分析し,今後のわが国の農産物価格・市場・消費政策,農業生産政策及び農業構造政策の展開方向に対して重要な知見を得る.1, EC農業政策の中心は価格支持政策である.生産費を節減するための農業構造改善政策には, EC共同予算はわずかしか使われていない.青壮年場業就業者の経営規模拡大のための融資政策,老令者引退促進のための農業年金制度などである.2,農業の社会経済的役割として,雇用拡大効果が強く意識されているので,農業経営規模を拡大するために離農を促進することを抑制している.また治山・治水国土保全土保全効果及び農村のレジャー保養サービス供給効果を高く評価しているので,農業生産立地条件の不良地域では,様々な助成政策を講じている.3,農産物の価格支持水準は,国際価格の2倍程度である.長期的にみて,国際価格は,農産物に関して国際競争力が強いとみられている米国・カナダなどの平均的農家の平均生産費をも償わないような低い水準に低迷しているので,やがては,国際価格が上昇するものとみられている.したがって,内外価格差を余り問題としていない,ただし短期的には,農産物の支持価格水準を下げることなしに,供給過剰を制限することを最大限に優先させている.それでもって,輸出奨励金及び過剰在庫の処理費用を最小限に抑制しようとしている.4,わが国の農業は自由化を迫られ,さらにECのように高関税または高い輸入課徴金でもって,国内農業を保護する対策をとることも制約されている.日本独自の国内農業保護措置を検討しなければならない.EC諸国の農業経営における生産費水準と生産費形成要因および農産物の生産者価格及び消費者価格の形成要因を調べて,日本のそれを比較分析し,今後のわが国の農産物価格・市場・消費政策,農業生産政策及び農業構造政策の展開方向に対して重要な知見を得る.1, EC農業政策の中心は価格支持政策である.生産費を節減するための農業構造改善政策には, EC共同予算はわずかしか使われていない.青壮年場業就業者の経営規模拡大のための融資政策,老令者引退促進のための農業年金制度などである.2,農業の社会経済的役割として,雇用拡大効果が強く意識されているので,農業経営規模を拡大するために離農を促進することを抑制している.また治山・治水国土保全土保全効果及び農村のレジャー保養サービス供給効果を高く評価しているので,農業生産立地条件の不良地域では,様々な助成政策を講じている.3,農産物の価格支持水準は,国際価格の2倍程度である.長期的にみて,国際価格は,農産物に関して国際競争力が強いとみられている米国・カナダなどの平均的農家の平均生産費をも償わないような低い水準に低迷しているので,やがては,国際価格が上昇するものとみられている.したがって,内外価格差を余り問題としていない,ただし短期的には,農産物の支持価格水準を下げることなしに,供給過剰を制限することを最大限に優先させている.それでもって,輸出奨励金及び過剰在庫の処理費用を最小限に抑制しようとしている.4,わが国の農業は自由化を迫られ,さらにECのように高関税または高い輸入課徴金でもって,国内農業を保護する対策をとることも制約されている.日本独自の国内農業保護措置を検討しなければならない.