hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
魚類の摂餌行動解発の神経機構に関する研究

夜行性魚の摂餌行動は、味覚ばかりでなく嗅覚、側線・内耳感覚、内臓感覚に誘起されたり影響を受ける。この研究では、味覚以外のこれらの感覚の受容器の形状、末梢から脳への経路、中枢内での投射経路を明らかにした。味覚については、ゴンズイは餌の刺激情報として僅かなpH変化(0.1-0.2)を味覚神経が捉えて、摂餌行動を解発していることを電気生理学と行動学的に実証した。ゴンズイは頭部ばかりでなく胴体部全体に味蕾を持ち、そのニューロンの形状、神経節と第一次味覚中枢での構築様式を明らかにした。又、味蕾の起源をATP分解酵素を指標にして系統発生的に解析し、ヤツメウナギまで遡ることを明らかにした。1)ゴンズイとアフリカナマズの嗅覚上皮を走査型電子顕微鏡で観察し、微絨毛型と繊毛型の受容器細胞を確認したが、第3の嗅覚受容細胞タイプであるクリプト型細胞は発見できなかった。又、嗅神経の末梢側切断面に蛍光物質(DiI)を投与して嗅細胞を逆行性標識し、この二つの受容器細胞を確認した。線毛型細胞は樹状突起の長い細胞で、微絨毛型細胞は樹状突起が短いことが分かった。2)両魚種の嗅覚一次中枢に大小2種類の出力ニューロンを同定した。大型の細胞体は嗅覚高次中枢へ軸索を送る僧帽細胞である。小型の細胞体は反対側の嗅球へ情報を送る介在ニューロンもしくは僧帽細胞と同様に高次嗅覚中枢へ情報を送る房飾細胞である。3)両魚種の嗅覚第二次線維の終脳と間脳への投射経路を明らかにした。線維は内側嗅索と外側嗅索の2つの分かれ終脳へ入る。内側嗅索は終脳腹側野腹側部、腹側野背側部へ終末し、外側嗅索は終脳背側野外側部、背側野後部へ投射する。内側嗅索の一部は前交連を経て反対側の終脳腹側野背側部、間脳の後隆起核、手綱核、後結節核にも投射する。3)ゴンズイに水中音を流した後にオキアミを与えることを1日3回で7日間続けた後、音だけを与えた場合に摂餌探索行動を行うことを確認した。この効果は少なくとも7日間は維持され、この魚の記憶能力を確認した。4)アフリカナマズには、機械受容器の管器感丘と遊離感丘、及び電気受容器であるアンプラ器の存在を確認し、2つの側線系の存在を明らかにした。ゴンズイの内側か外側の嗅索の投射領域及び嗅索に線維を送る細胞体の終脳での存在部位を解析した。内側嗅索は同側の終脳の腹側野内側部、腹側野腹側部、背側野中央、背側野後部、視索前核、及び手綱核と間脳の腹内側部に投射する。一部は反対側の終脳にも進み、終脳腹側野内側部と終脳背側野後部に終末する。また、終脳腹側野、背側野において多逆行性標識された細胞体が確認された。一方、外側嗅索は終脳(腹側野内側部、背側野後部)、手綱核、間脳内側部、反対側の終脳腹側野内側部に終末する。また、終脳腹側野腹側部において逆行性標識された細胞体が観察された。逆行性標識の細胞体は、終脳から嗅球に遠心性線維を送り、二次出力ニューロンあるいは嗅球内の介在ニューロンにシナプスしていると思われる。以上の結果から、終脳における嗅覚系の機能局在的な構築は、嗅索での内側と外側の線維グループに単純に対応していないと考えられる。3種の内耳神経の投射域を解析した。投射域はすべて同側で、卵形嚢神経は内耳前方核、内耳下行路核の腹側領域、勾耳巨大細胞核、内耳接線核への投射が確認できた。隣接して存在する球形嚢と壺嚢を支配する神経の中枢における没射領域は非常に似ていて、内耳前方核、内耳下行路核の背側・背内側領域、内耳巨大細胞核、内耳側線内側核に終末する。後方側線神経は延髄背側の2つの部位終末し、一部は小脳の顆粒隆起に達することが分かった。この2つの部位は勾耳側線内側核と電気感覚葉と同定し、前者には感丘、後者にはアンプラ器からの情報が入ると推察される。側線系の一次中枢からの上行性経路を追跡した結果、中脳の半円堤に両側性の投射がみられ、この部位が側線系の主要な二次中枢であることが分かった。

嗅索切除を行った魚でも、正常魚と同じようにベタインやプロリンで覚醒され、探索行動の誘発が観察され、味覚が摂餌行動の最初の段階から関与していることが分かった。1ゴンズイの触鬚神経線維には1)プロリンとベタインに応答するもの、2)グリシンとアラニンに応答するもの、3)0.1-0.2のpH減少に応答するもの、4)機械刺激に応答する4種類が存在することが分かった。アミノ酸感受性線維は刺激に対しては相的に応答し直ぐに順応するが、pH感受性線維は相的とそれに続く定常的に応答して順応が遅いことが分かった。このpH感受性は、現在まで調べられているpH受容器の中で最も鋭敏である点で注目される。2前方複合神経節において、三叉ニューロンはより中枢側に、顔面ニューロンはより末梢側に存在することが分かった。3三叉ニュロン、顔面ニューロン、前方側線ニューロンは全て両極細胞であることが分かった。三叉と顔面ニューロンの細胞体から中枢側に出る中枢線維は末梢線維に比べて直径が半減し、線維を取り囲む髄鞘も薄いことが分かった。4三叉神経節に相当する部位では細胞体の体部位局在構築がみられたが、顔面神経節中では明瞭な構築はみられなかった。顔面味覚ニューロンの存在は頭部と胴体部では神経節レベルで異なるが、個々の神経節中では体部位局在構築はみられないことが分かった。5ゴンズイは夜間において、水槽の底に埋め込んだu字管に入れたゴカイを感知して食べることが出来ることを観察した。この摂餌行動が、ベタイン刺激ばかりでなく僅か0.1-0.2のpH減少の刺激でも誘起できることを明らかにした。6三叉神経の中脳路核ニューロンが視蓋の下に存在し、このニューロンは末梢の下顎枝に線維を送ることを明らかにした。嗅覚,側線、内耳感覚の中枢への投射経路等の形態学的解析はおおむね順調に進展している。しかし、これらの感覚の摂餌行動への関与の解析が遅れている。実験途中で、ゴンズイが味覚系を使い海水pHが8.20から8.00に減少するだけで顕著に応答することがわかり、この感受性を使いゴカイなどの底性生物を補食していることが考えられる。その摂餌行動解析の実験を開始したため、当初予定した行動実験が遅れている。24年度が最終年度であるため、記入しない。ゴンズイのpH変化やアミノ酸で誘起される摂餌行動に嗅覚、味覚,体性感覚がどのように関与するかに焦点をあてて実験を展開してきているので、内耳と側線感覚の摂餌行動への関与の行動解析が十分できていない。特にpH感受性は驚く程鋭敏であり、ゴンズイはこの感受性を利用して底性生物の呼吸活動に連動して起こる環境海水のpHの僅かな減少を感知し、摂餌行動を行っている可能性がある。このため、最終年ども味覚嗅覚系と摂餌行動との関係を解析したい。
労働分配率と研究開発投資の関係についての理論研究

近年の企業活動において、研究開発やソフトウェア、データなどの無形資産への投資が重要性を増している。無形資産投資は、生産量が増えてもコストが比例的に増えないことや、費用を負担していない者にも便益をもたらすことなど、従来の有形資産投資とは異なる特徴を持つ。本研究では、無形資産投資の重要性の増加が、所得格差や労働分配率(付加価値のうち労働へ分配される割合)、実質利子率などのマクロ経済変数に与える影響を統一的に分析できる理論モデルの構築を目指す。また、構築した理論モデルを用いて政策効果のシミュレーションを行い、望ましい経済政策を検討する。
固形癌組織のclonal evolution, heterogeneityの解析

これまでの多くの研究で、正常大腸組織から大腸癌がどのような遺伝子変異等を受けて発生、成長するかはAdenoma-carcinoma sequenceをはじめとして様々な提言がなされ検証されてきた。また近年、TCGA等による大規模症例へのシークエンス研究により大腸癌の症例間における不均一性が明らかにされた。しかし一つの大腸癌の中での詳細な変異の広がりを見た研究はなく、実際に癌がどのような遺伝子変異を起こしながら進化し広がっていくかの詳細については謎が多い。本研究では3症例の大腸癌に対して、それぞれ原発巣10か所、原発巣10か所と転移巣3か所(1つの転移巣より)、原発巣20か所と転移巣1か所に分割し、エキソームシークエンスを行った。また転移巣の存在する2症例についてはSNP arrayを用いたcopy数解析、methylation arrayを用いたメチル化解析、expression arrayを用いた発現解析も行い、各データの統合解析も行った。この統合解析によって1症例内の癌の不均一性の詳細が明らかにした。各々のsampleの多数に病変について全エキソームシークエンスを行い、突然変異の同定をおこなった。多数の病変についての共起性を見ることで、全病変に共通する遺伝子を同定することができる。この遺伝子変異は癌発生初期から腫瘍全体に広がる前の親クローンになるまでの間に起こっており、腫瘍発生初期に重要な役割を担っている可能性が比較的高いと考えられるfounder変異はそれぞれ41個、48個、48個認め、全変異におけるfounder変異の割合はそれぞれ20.4%、28.6%、6.0%であった。1例はshared変異190個(19.7%)、unique変異718個(74.3%)という非常に多くのprogressor変異を持っており、20か所の原発巣それぞれで独自の深い進化を遂げていることがわかる。また他の2例についてもprogressor変異が78割を占めており、同じ腫瘍内でも多様な不均一性が存在することが明らかになった。
タンデムミラ-プラズマの低mモ-ド安定性解析

タンデムミラ-プラズマの低mモ-ド安定性について次のことを解析した。1.ガンマ10のMHD安定性を解析するための磁場計算を取り入れた安定性解析数値計算コ-ドを開発した。またそれを用いてICRF加熱によって中央部にミラ-捕捉された高温イオンが存在する場合のガンマ10のフル-ト交換不安定性の安定化条件を求めた。結果、この中央部ミラ-捕捉の高温イオンは比較的小さなアンカ-部のベ-タ値で安定化されることが分かった。2.ガンマ10のように極小磁場配位を持つ一般系の低mモ-ド安定性について解析した。これまで良く用いられてきたアイコナル近似は低mモ-ドに大しては一般に正しくない。低mモ-ドに対しては極小磁場の4重極成分によって起こるモ-ド数mに関するモ-ド間結合が重要で、安定性解析は一般的に3次元問題になることを示した。即ち、モ-ド数mのモ-ドは4重極磁場成分によってm±2のモ-ドと結合し、m±2のモ-ドは更に高次のモ-ドと結合して、モ-ド数に関する方程式のハイアラルキ-を作る。このモ-ド間結合の効果は磁力線方向に変位を持つバル-ニングモ-ドに対して重要となるが、フル-トモ-ドに対してはこの効果は場合によって無視できることを示した。3.極小磁場配位を持つ系のRF安定化の問題について解析した。この時不安定モ-ドに加えて印刷されるRF波も極小磁場の4重極成分によってのモ-ド間結合を起こし、結果RF波のモ-ド変換が起こることを明らかにした。即ち、m=1の速波からm=-1の遅波へのモ-ド変換、またはこれの逆の過程が4重極磁場によって成されることを示した。またRF波のモ-ド変換の起こる条件、モ-ド変換の効率と4重極磁場の大きさとの関係等についても明らかにした。RF安定化はか励起される波のモ-ドに強く依存しているので、このモ-ド変換の問題はRF安定化の解析において特に重要となる。
NAD glycohydrolase (CD38)の生理的役割に関する研究

我々は先に、NAD^+を基質とした細菌毒素の触媒するG蛋白質のADPリボシル化の研究を背景に、レチノイン酸(RA)によるHL-60細胞の好中球への分化過程にNAD^+分解酵素が誘導され、その酵素がヒトリンパ球表面抗原のCD38分子によることを明らかにした。CD38はアメフラシの卵精巣より単離されたADPリボース環化酵素と構造上類似し、さらに生成物である環状ADPリボースは、IP_3と同様にある細胞内プールからCa^<2+>を放出させる作用をもつことから、この新規環上ヌクレオチドは細胞内で新たなシグナル分子として機能することが期待された。本研究では、細胞内外でNAD^+を基質とする代謝酵素が情報伝達系において果たす生理的役割、また哺乳動物における環状ADPリボースの産生機構、並びにNAD^+分解酵素とADPリボース環化酵素との触媒活性の差異を生じさせる機構の解明を目的とし、以下の知見を得た。1. RA-分化HL-60細胞を抗CD38単クローン体抗体で刺激すると、いくつかの細胞内蛋白質がチロシンリン酸化されたが、その一つを120kDaのc-cbl遺伝子産物と同定した。2.この抗CD38単クローン性抗体刺激によって、化学遊走因子の受容体を介するHL-60細胞の活性酸素産生が増強された。3. Zn^<2+>がCD38に作用すると、そのNAD^+分解活性が抑制され、ASPリボース環化活性は逆に促進された。すなわち、Zn^<2+>によるCD38の酵素特性の転換が認められた。4. CD38遺伝子の第1イントロン内には、RAによってその抑制が解除されるnegative regulatoryelement (NRE)が存在し、RA(受容体)を介する新しい転写調節機構の存在が推定された。
川崎病における冠動脈病変の発症機序と治療

川崎病における冠動脈病変の発症機序と予防を目的として、内皮細胞にヒト臍帯静脈由来血管内皮細胞(HUVEC)とヒト冠状動脈血管由来内皮細胞(HCAEC)を用いて、TNF刺激による接着因子の発現と、Momocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)の産生を共に、ELISAで測定した。接着因子発現の系にはintact型γ-グロブリン(γ-Glb)添加した場合の影響も検討した。結果1.接着因子発現(2) ICAM-1は非刺激時にすでに発現がみられ、TNF刺激で量依存性に、かつ24時間刺激が6時間刺激に比して吸光度の増大が認められた。刺激時吸光度は、非刺激時の最大2.7倍認められた。ICAM-1の発現もHCAECがHUVECに比して大であった。(3) TNF 100U/ml 24時間刺激によりHCAEC上のICAM-1発現は、γ-Glb 0.1100mg/ml添加で、発現の抑制がみられたが、非刺激状態でのICAM-1の発現には影響を及ぼさなかった。(1)健康小児18例の血清中MCP-1は228±84pg/ml、川崎病患児35例(発症5日以内)の血清中MCP-1は1420±914pg/mlと川崎病患児は有意に高値を示した。(2) TNF刺激によるHUVECおよびHCAECからのMCP-1産生を検討すると、TNF72時間刺激は24時間刺激に比して有意にMCP-1の産生が高値であるが、TNFが250U/ml1000U/mlの濃度でMCP-1産生はプラトーに達した。いずれの系もHCAECがHUVECに比してMCP-1産生が大であった。結論内皮細胞の種類により接着因子発現、MCP-1産生に差がみられ、HCAECがいずれも大であった。γ-GlbはTNFの接着因子発現を抑制したことから、γ-GlbはTNF中和作用があることが推測された。結果1.接着因子発現(1) E-selectin、VCAM-1共に非刺激状態ではHUVEC、HCAEC共にその発現は微小で、TNF 100U/ml 6時間刺激で吸光度は約10倍に上昇した。TNF 1000U/ml 6時間刺激では、TNF100U/ml 6時間刺激に比して、吸光度は若干上昇した。いずれの吸光度もHCAECがHUVECに比して大であった。一方、TNF 6時間刺激と、24時間刺激を比較すると、E-selectin、VCAM-1共に発現に差はみられなかった。(2) ICAM-1は非刺激時にすでに発現がみられ、TNF刺激で量依存性に、かつ24時間刺激が6時間刺激に比して吸光度の増大が認められた。川崎病における冠動脈病変の発症機序と予防を目的として、内皮細胞にヒト臍帯静脈由来血菅内皮細胞(HUVEC)とヒト冠状動脈血管由来内皮細胞(HCAEC)を用いて、TNF刺激による接着因子の発現と、Momocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)の産生を共に、ELISAで測定した。結果:1.接着因子発現

(1)E-selectin、VCAM-1共に非刺激状態ではHUVEC、HCAEC共にその発現は微小で、TNF100U/ml6時間刺激で、吸光度は約10倍に上昇した。TNF1000U/ml6時間刺激では、TNF100U/ml6時間刺激に比して、吸光度は若干上昇した。いずれの吸光度もHCAECがHUVECに比して大であった。一方、TNF6時間刺激と、24時間刺激を比較すると、E-selectin、VCAM-1共に発現に差はみられなかった。(2)ICAM-1は非刺激時にすでに発現がみられ、TNF刺激で量依存性に、かつ24時間刺激が6時間刺激に比して吸光度の増大が認められた。刺激時吸光度は、非刺激時の最大2.7倍認められた。ICAM-1の発現もHCAECがHUVECに比して大であった。(3)TNF100U/ml24時間刺激によりHCAEC上のICAM-1発現は、γ-Glb0.1100mg/ml添加で、発現の抑制がみられたが、非刺激状態でのICAM-1の発現には影響を及ぼさなかった。2.MCP-1産生(1)健康小児18例の血清中MCP-1は228±84pg/ml、川崎病患児35例(発症5日以内)の血清中MCP-1は1420±914pg/mlと川崎病患児は有意に高値を示した。(2)TNF刺激によるHUVECおよびHCAECからのMCP-1産生を検討すると、TNF72時間刺激は24時間刺激に比して有意にMCP-1の産生が高値であるが、TNFが250U/ml1000U/mlの濃度でMCP-1産生はプラトーに達した。いずれの系もHCAECがHUVECに比してMCP-1産生が大であった。結論:内皮細胞の種類により接着因子発現、MCP-1産生に差がみられ、HCAECがいずれも大であった。γ-GlbはTNFの接着因子発現を抑制したことから、γ-GlbはTNF中和作用があることが推測された。川崎病における冠動脈病変の発症機序と予防を目的として、内皮細胞にヒト臍帯静脈由来血管内皮細胞(HUVEC)とヒト冠状動脈血管由来内皮細胞(HCAEC)を用いて、TNF刺激による接着因子の発現と、Momocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)の産生を共に、ELISAで測定した。接着因子発現の系にはintact型γ-グロブリン(γ-Glb)添加した場合の影響も検討した。結果:1.接着因子発現(1) E-selectin、VCAM-1共に非刺激状態ではHUVEC、HCAEC共にその発現は微小で、TNF 100U/ml6時間刺激で、吸光度は約10倍に上昇した。TNF 1000U/ml6時間刺激では、TNF 100U/ml6時間刺激に比して、吸光度は若干上昇した。(2) ICAM-1は非刺激時にすでに発現がみられ、TNF刺激で量依存性に、かつ24時間刺激が6時間刺激に比して吸光度の増大が認められた。(3) TNF 100U/ml24時間刺激によりHCAEC上のICAM-1発現は、γ-Glb0.1100mg/ml添加で、発現の抑制がみられたが、非刺激状態でのICAM-1の発現には影響を及ぼさなかった。(1)健康小児18例の血清中MCP-1は228±84
ヒューマン・マシン相互適応を考慮した心理モデルに基づく適応支援インターフェイス

機械が複雑化し、人間の生活に深く入り込むと人間と機械の間で様々な衝突が生じ、それらが原因となって機械の誤動作や事故にいたる危険性がある。本研究ではこれらを未然に防ぐため、機械が相手(機械操作者である人間)との相互関係を認識、考慮しながら、積極的に相手に同調、適応し、仕事の目的や状況に応じて、操作者を個人別に適応的に支援する「人に優しい」適応支援システムの実現を目的とした。このとき機械が人間に適応する方向と、人間が自然に機械に適応する方向の両方向を考慮し、このような相互適応のメカニズムを操作的に解明し、教育システムのあり方についても検討した。機械が操作者に適応的に対応し、連携をとって行くためには、(1)操作者の心理・技能モデル化方法、(2)仕事の目的や状況判断方法、(3)操作者との知的コミュニケーション方法、などについて検討する必要がある。本研究では、まず操作者の行動パターン、生体信号計測データ(皮膚電気反射、脈拍数など)から、実験心理学の手法を用いる事により各操作者を分類し、操作者の心理・技能モデルの分類をファジィ推論を用いて行った。特に、操作者の時間的変化を陽に表現するため、再帰型ファジィ推論を適用した。そして、適応的なユーザー支援可能なシステムを構築し、実験によりその有効性について検討した。実験結果の統計処理により、提案した手法の有効性が確認できた。また、YG性格診断テストの結果を加味して操作者の特質と結果の関係を評価した。
凍結血清、ゲノム遺伝子を用いた萎縮性胃炎および胃癌に関する症例対照研究

目的:第1に、交絡因子を調整した胃癌に対する原爆影響を調べる。第2に、新たなバイオマーカーによる高リスクグループの同定法を開発する。方法:放影研の原爆被爆者集団からなる成人健康調査コホート2万人の中で、保存血清がある一次非噴門部胃癌322症例と、被爆都市、性・診断時年齢・血清保存時期(診断前平均2.3年)・保存方法を合致させ、被曝線量に関してはカウンター・マッチングをし、症例に対して3倍数の対照者を用いたコホート内症例対照研究を実施した。172症例および1071対照者に関しては、診断前平均8.6年前の保存血清も使用した。保存血清を用いてH.pylori IgG抗体価、CagA IgG抗体価および萎縮性胃炎のマーカーとしてPGIとPGII、血清ガストリンを測定した。症例と対照者の被曝線量は、DSO2により推計した。全対象者より喫煙情報を入手した。1163症例と対照に関しては保存血球よりゲノムDNAを抽出し、LTA252G/A多型、IL1B-31C/T多型をFRET-PCR法で検討した。結果:本研究によって、喫煙、被曝線量、慢性萎縮性胃炎を調整後、H.pylori IgG陽性CagA低抗体価が最も強い非噴門部癌(RR=3.9, p<0.001)、特に腸型胃癌(RR=9.9,p<0.001)のリスク要因であることが判明した。慢性萎縮性胃炎(RR=2.4,p<0.001)、現在喫煙(RR=2.3,p<0.001)、線量(RR=2.1,p=0.002)も又有意なリスク要因であった。現在喫煙は、腸型より有意にびまん型胃癌にリスクが高かった(p=0.0372)。被ばくは、びまん型胃癌に有意なリスクを示したが、腸型には有意でなかった。最後に、被ばくの胃癌リスクは、非喫煙者にのみ存在し、喫煙者にはなかった。遺伝子多型の結果は、論文未発表のためここでは述べない。考察:診断前8.6年と2.3年の比較より、CagA低抗体価のヒトはCagA高抗体価のヒトと萎縮性胃炎の進行スピードに差はなく、CagA抵抗体価は、粘膜萎縮の結果ではなく、むしろCagA陽性ピロリ菌感染に対する何らかの遺伝的応答性の差異を反映していると考えられる。今後、ゲノムの遺伝多型との関係を調べる。健診にCagA抗体価を追加すると高リスクグループの同定に役立ち、ピロリ菌除菌の対象者絞り込みに寄与できる。

放影研の被爆者からなる成人健康調査コホート2万人の中で、保存血清がある一次非噴門部胃癌322症例と症例毎に3倍数の性、年齢、診断年齢、血清保存時期(診断前平均2.3年)、保存方法を合致させたコホート内健常対照者を使ったネスティッド症例対照研究を実施した。平成17年度は、保存血清中のH.pylori IgG抗体価、cag A IgG抗体価、ペプシノーゲンIおよびII、ガストリン、喫煙、被ばく線量を変数とした多変量コンディショナル・ロジスティック解析を行った。H.pylori IgG抗体価の分布パターンは、陽性者のそれは単峰性であり、かつ症例と対照者で差がないが、cag A IgG抗体価は、陽性者の中で明らかな二峰性を示し、かつ対照者に比して症例は強い二峰性を示す。そこで、H.pylori IgG陽性者をcag A IgG陰性、cag A IgG低抗体価、cag A IgG高抗体価に分類し、萎縮性胃炎、喫煙、被ばく線量と共にオッズ比を求めた。今回の解析で初めてcag A IgG低抗体価、cag A IgG高抗体価、萎縮性胃炎、喫煙、被ばく線量がそれぞれ独立した有意なリスク要因であることが明らかとなった。また、H.pylori IgG陽性・cag A IgG低抗体価が最も強いリスク要因であることが判明した。被ばく線量は、非喫煙者に関してのみリスク要因であった。腸型とびまん型に組織型を分類して行った解析では、びまん型に関しては上記のリスク要因が全て有意であったが、腸型に関しては萎縮性胃炎とH.pylori IgG陽性かつcag A IgG低抗体価のみが有意なリスク要因であった。H.pylori IgG陽性、萎縮性胃炎、喫煙者でCag A IgG低抗体価のヒトは、全て陰性の対照者に比してオッズ比で21倍のリスクがある。Cag A IgG低抗体価にリスクが高いという報告は、前向き研究および後ろ向き研究それぞれ1報しか報告がない。上記の結果は、欧文誌に投稿予定である。CagA遺伝子発現は、胃酸のpHにより制御されている。平成18年度は、胃酸分泌に関係するIL1B遺伝子多型およびIr遺伝子支配(KLAおよびクラスIII HLA領域のハプロタイプ)との関係を検討する予定である。目的:第1に、交絡因子を調整した胃癌に対する原爆影響を調べる。第2に、新たなバイオマーカーによる高リスクグループの同定法を開発する。方法:放影研の原爆被爆者集団からなる成人健康調査コホート2万人の中で、保存血清がある一次非噴門部胃癌322症例と、被爆都市、性・診断時年齢・血清保存時期(診断前平均2.3年)・保存方法を合致させ、被曝線量に関してはカウンター・マッチングをし、症例に対して3倍数の対照者を用いたコホート内症例対照研究を実施した。172症例および1071対照者に関しては、診断前平均8.6年前の保存血清も使用した。保存血清を用いてH.pylori IgG抗体価、CagA IgG抗体価および萎縮性胃炎のマーカーとしてPG IとPG II、血清ガストリンを測定した。症例と対照者の被曝線量は、DS02により推計した。全対象者より喫煙情報を入手した。1163症例と対照に関しては保存血球よりゲノムDNAを抽出し、LTA252G/A多型、IL1B-31C/T多型をFRET-PCR法で検討した。結果:本研究によって、喫煙、被曝線量、慢性萎縮性胃炎を調整後、H.pylori IgG陽性CagA低抗体価が最も強い非噴門部癌(RR=3.9, p<0.001)、特に腸型胃癌(RR=9.9, p<0.001)のリスク要因であることが判明した。慢性萎縮性胃炎(RR=2.4, p<0.001)、現在喫煙(RR=2.3, p<0.001)、線量(RR=2.1, p=0.002)も又有意なリスク要因であった。現在喫煙は、腸型より有意にびまん型胃癌にリスクが高かった(p=0.0372)。被ばくは、びまん型胃癌に有意なリスクを示したが、腸型には有意でなかった。
DNA維持メチル化の破綻による発ガン機構

Dnmt1に結合するユビキチン化ヒストンH3はヒストンH3K18Ub/K23Ub、K14Ub/K18Ub、あるいはK14Ub/K23Ubであることがわかった。Dnmt1とヒストンH3K18Ub/K23Ubペプチドとの結合は、全く新規の構造であった。また、Dnmt1とヒストンH3K18Ub/K23Ubとの結合は、Dnmt1構造全体の変化を誘導した。実際この結合は、Dnmt1のDNAメチル化活性を強く活性化した。一方、DNA低メチル化はDNA複製プログラムの異常を誘導し、ゲノム不安定化を引き起こしていることが強く示唆された。今年度はDnmt1がどのようなヒストンH3分子のユビキチンん化構造を認識するのか?また外的刺激がこの修飾をどのように制御するのかについて詳細に検討した。その結果、Dnmt1はヒストンH3分子の2つのタンデムなモノユビキチン化を認識してクロマチンに結合することが分かった。また興味深いことに、Dnmt1は脱ユビキチン化酵素Usp7と安定的な複合体を形成しており、Usp7によるヒストンH3分子の脱ユビキチン化反応がDnmt1によるヘミメチル化DNAからフルメチル化DNAへの変換に必須の機能を果たしていることが分かった。さらに、このUsp7によるヒストンH3分子の脱メチル化は2つのタンデムなユビキチン化の片方のみに誘導されることも分かった。これらの結果は、ヒストンH3分子のユビキチン化されるリジン残基のアセチル化、メチル化制御がDNAメチル化程度の変動に重要な役割を果たしていることを示唆しており、現在外的刺激がいかなる分子機構でヒストンH3分子のユビキチン化部位修飾を制御しているか解析中である。一方、DNA低メチル化がどのようにしてゲノム不安定化を惹起するのかについては、DNA低メチル化がDNA複製起点からのDNA複製開始異常をきたすのではないかとの仮説から、Dnmt1条件的欠損細胞を用いてDNA複製変化の詳細な解析をMoleculr Combing法を用いて解析した。その結果、DNA低メチル化はDNA複製起点からの複製開始の頻度を高め、複製フォークの進行を遅くすることが分かった。またDNA複製起点の時空的制御について、S期早期での後期複製起点からの複製開始パターンが観察されるなど、DNA低メチル化がDNA複製開始制御異常を誘導していることが分かった。今後この制御異常がどのようにゲノム不安定性を惹起するのかについて解析を進めていく予定である。今年度は、Dnmt1のユビキチン化ヒストンH3の認識機構についてさらに詳細な解析を行った。東京都立臨床医学総合研究所の佐伯博士との共同研究で、Dnmt1と複合体を形成しているユビキチン化ヒストンH3の質量分析を行い、実際どの部位がユビキチン化されていると、Dnmt1と結合するのかを明らかにした。その結果、Dnmt1と結合するユビキチン化ヒストンH3は、K18-K23のダイユビキチン化ヒストンか、K14-K18ダイユビキチン化ヒストンであった。また後者の場合、K23のアセチル化およびK9のメチル化を伴っていた。これらの知見は、通常K23のユビキチン化がDnmt1との結合に利用されているが、この部位がアセチル化されている場合、代わりにK14を利用するものと考えられる。また、K18のアセチル化やメチル化、あるいはK14およびK23の両部位のアセチル化、メチル化がDNA維持メチル化異常を誘導する可能性が示唆された。Dnmt1はモノユビキチン化ヒストンH3には結合できないことも確認され、この結果はUsp7によるヒストンH3分子上の一箇所の脱ユビキチン化のみで、Dnmt1とヒストンH3との結合能が低下し、DNAメチル化触媒活性が活性化されるのに十分であると考えられた。DNA維持メチル化異常によるDNA低メチル化がどのように染色体不安定性を誘導するのかについては、EdU,CIdUを用いた免疫細胞染色解析から、DNA低メチル化により後期複製起点からの複製開始が、DNA複製期初期に誘導されることが明らかとなった。またDNA低メチル化がセントロメア領域のクロマチン構造変化をもたらし、正常な染色体分配が阻害される可能性が考えられる。これについて、フランスキュリー研究所のFachinetti博士と共同での解析を開始した。Dnmt1との結合に必要なヒストンH3分子のユビキチン化部位が同定できたことは、同じ部位の他の修飾、例えばアセチル化、メチル化がDnmt1とヒストンH3との結合、すなわちDNA維持メチル化を阻害すると考えられる。従って、これらの修飾異常がDNA維持メチル化異常による、低DNAメチル化状態を生み出し染色体不安定性を惹起するものと考えれる。従って、本成果により、ヒストンH3分子のユビキチン化部位をアセチル化する酵素、およびメチル化する酵素の同定につながると考えられる。これら酵素の解析を進めることで、DNA低メチル化誘導の分子基盤が明らかになり、がん化の初期過程の理解につながるものと予想できる。脱ユビキチン化酵素Usp7の役割については、一方、DNA低メチル化による染色体不安定性誘導機構については、これまでの解析からDNA複製プログラムの異常を誘導することが原因の一端であることが明らかとなった。すなわち、DNA低メチル化により後期複製開始点からの複製が、複製前期に誘導されることが観察された。

このことは、本研究の目的であるDNAメチル化異常による発がんを考える上で、非常に重要な知見であると考えられる。またその他の原因として、DNA低メチル化がセントメア領域のクロマチン構造を変化させて、正常な染色体分配を阻害する可能性を考えてその解析を開始した。以上、これらの成果から、本研究は概ね順調、あるいは期待以上の成果が出ていると評価した。Dnmt1に結合するユビキチン化ヒストンH3はヒストンH3K18Ub/K23Ub、K14Ub/K18Ub、あるいはK14Ub/K23Ubであることがわかった。Dnmt1とヒストンH3K18Ub/K23Ubペプチドとの結合は、全く新規の構造であった。また、Dnmt1とヒストンH3K18Ub/K23Ubとの結合は、Dnmt1構造全体の変化を誘導した。実際この結合は、Dnmt1のDNAメチル化活性を強く活性化した。一方、DNA低メチル化はDNA複製プログラムの異常を誘導し、ゲノム不安定化を引き起こしていることが強く示唆された。DNAメチル化は、比較的安定な細胞記憶として機能し、分化した細胞の形質維持に必須の役割を果たしている。細胞増殖に伴いDNAメチル化パターンが正確に娘細胞に伝播されないと、未分化性の獲得等の形質変化につながりガン発症や悪性化の原因となる。申請者は、これまでDNAメチル化の伝播にUhrf1依存的なヒストンH3のユビキチン化が重要であることを見いだした。すなわち、DNA維持メチル化を司るDnmt1がヒストンH3ユビキチン化を認識してDNAメチル化部位に集積するものと考えられた。この知見は、ヒストンH3のアセチル化・メチル化修飾が、DNAメチル化制御に大きく関わっていることを示唆している。本年は、Dnmt1によるユビキチン化ヒストンH3の認識を結晶構造科学的に解析し、ヒストンH3のどの部位がDnmt1との結合に関わっているかを同定し、またその部位のアセチル化・メチル化修飾と、発がんとの関連について検討した。その結果、1)Dnmt1のRFTS部位が、ヒストンH3のK18およびK23の2ヶ所の2つのモノユビキチン化を認識してDNA複製部位に集積すること、2)RFTSとH3K18Ub/K23Ubとの結合様式は全く新規のもので、2つのユビキチン分子およびヒストンH3のアミノ末端テールを同時に、かつ異なる様式で認識すること、3)これら3ヶ所の認識により、RFTSとH3K18Ub/K23Ubとの結合は数ナノモル程度の非常に強いものであることが分かった。4)RFTSとH3K18Ub/K23Ubとの結合によりDnmt1分子の構造変化を引き起こし、不活性型Dnmt1が活性化型に変換することが分かった。現在、ヒストンH3分子のK18およびK23のアセチル化・メチル化と発がんについて解析を進めている。今年度までの研究において、Dnmt1がどのようなヒストンH3分子のユビキチンん化構造を認識するのか?また外的刺激がこの修飾をどのように制御するのかについて、Dnmt1はヒストンH3分子の2つのタンデムなモノユビキチン化を認識してクロマチンに結合すること、またDnmt1は脱ユビキチン化酵素Usp7と安定的な複合体を形成しており、Usp7によるヒストンH3分子の脱ユビキチン化反応がDnmt1によるヘミメチル化DNAからフルメチル化DNAへの変換に必須の機能を果たしていることを明らかにしている。
新規ＧＰＣＲシグナル検出系ＴＧＦα切断アッセイを用いたＧＰＣＲのリガンド探索

本研究において、研究代表者が独自に開発したトランスフォーミング増殖因子アルファ(TGFα)切断アッセイを用い、Gタンパク質共役型受容体(GPCR)のリガンド探索を行った。並行して共役する三量体Gタンパク質の評価系を構築した。リゾホスファチジルセリンにより特異的に活性化される3種類の受容体(P2Y10, GPR174, A630033H20)、リゾホスファチジルグルコースにより活性化される1種類の受容体、酸化リン脂質に応答する2種類の受容体を同定した。CRISPR-Cas9システムを用いてGタンパク質欠損HEK293細胞を作製し、Gタンパク質の共役活性を定量的に評価できる手法を確立した。Gタンパク質共役型受容体(GPCR)は、ヒトゲノムにおいて最大の遺伝子ファミリーを形成し、様々な生理的・病理的現象に関与する。リガンド未知(オーファン)GPCRのリガンドを同定することやGPCRの共役する三量体Gタンパク質(Gs, Gi, Gq, G12)を解析することは、GPCRの機能解明や創薬に密接に関わる重要な研究である。研究代表者はこれまでに、トランスフォーミング増殖因子アルファ(TGFα)のエクトドメイン切断を指標としたGPCR活性化検出系(TGFα切断アッセイ)を確立した。本研究ではTGFα切断アッセイを用いてオーファンGPCRのリガンドを探索するとともに、共役するGタンパク質を評価するアッセイ系を開発した。種々の生理活性に対するオーファンGPCRのスクリーニングの結果、リゾホスファチジルセリン(LysoPS)に特異的に応答する3種類のGPCR(P2Y10, GPR174, A630033H20)、リゾホスファチジルグルコースにより活性化される1種類の受容体、酸化リン脂質に応答する2種類の受容体、酸化脂肪酸により活性化される2種類の受容体を同定した。TGFα切断に関与するシグナルを解析したところ、GqシグナルとG12シグナルがTGFα切断応答を引き起こすことがわかった。特に既存のGPCRアッセイよりもG12シグナルの高感度・高精度検出として優れていた。そこで、G12シグナルのみを選択的に検出する目的でGqを欠損させたHEK293細胞(GNAQ,GNA11遺伝子ノックアウト)とGqとG12を欠損させたHEK293細胞(GNAQ,GNA11,GNA12,GNA13遺伝子ノックアウト)をCRISPR-Cas9システムを用い作製した。これらのGタンパク質欠損細胞を用いたTGFα切断アッセイを行うことで、G12シグナルを選択的かつ高精度に評価することが可能であった。また、GPCRは重要な創薬標的である。ロドプシンファミリーには、いまだリガンドが同定されていないGPCRが約65種類存在する。これらオーファンGPCRのリガンドを同定することは、GPCRの生理・病理機能の解明や創薬に密接に関わる重要な研究である。研究代表者はこれまでに、トランスフォーミング増殖因子アルファ(TGFα)のエクトドメイン切断を指標とした新規のGPCR活性化検出系(TGFα切断アッセイ)を確立した。本研究ではこのTGFα切断アッセイを用いてオーファンGPCRのリガンド同定を目指すとともに、TGFαエクトドメイン切断に関与するシグナルを解析した。種々の生理活性に対するオーファンGPCRのスクリーニングの結果、リゾホスファチジルセリン(LysoPS)により活性化される3種類のGPCR(P2Y10, GPR174, A630033H20)を見出した(Inoue et al. Nat Methods 9, 1021 2012)。これら3種類のGPCRはLysoPS特異的に応答し、構造の類似した他のリゾリン脂質には全く反応しなかった。また、マスト細胞上の脱顆粒反応を誘導するLysoPSアナログのリゾホスファチジルスレオニンに対しては全く応答しなかったことから、マスト細胞で脱顆粒応答を担うLysoPS受容体はこれら3種類のGPCRとは異なるものと考えられる。一方、GsシグナルやGiシグナルはTGFα切断応答を引き起こさなかった。既存のGPCR活性化検出法と比べて、TGFα切断アッセイは特にG12シグナルの効率的な検出に優れていた。オーファンGPCRのリガンド同定には多くの研究者が取り組んできており、汎用されているアッセイ系では限り新たなリガンド同定は困難と考えられる。

研究代表者は、独自に構築したTGFα切断アッセイを用いて、オーファンGPCRのリガンドスクリーニングを行い、3種類のGPCR(P2Y10, GPR174, A630033H20)が生理活性脂質のリゾホスファチジルセリン(LysoPS)により活性化されることを見出した。興味深いことに、これらLysoPS受容体は、G12と共役することがわかった。既存のGPCR活性化検出法ではG12シグナルを検出することは難しい。G12シグナルを高感度・高精度に検出することのできるTGFα切断アッセイを用いることで初めて同定が可能となったと考えられる。TGFα切断応答には、G12シグナルに加えてGqシグナルも関与していた。一方、GsシグナルやGiシグナルはTGFα切断応答を引き起こさなかった。そこで、キメラGαサブユニット(C末6アミノ酸の配列をGαsやGαiと置換)やGα15サブユニットを用いることで、GsやGiと共役するGPCRの活性化を検出することができた。この結果、約9割ものGPCRの活性化を単一のアッセイ系条件で検出することに成功した。この割合は既存のどのGPCR検出系よりも高かった。以上より、オーファンGPCRのリガンド同定と適用可能なGPCRの拡張に成功していることから、当初の計画以上に進展していると評価している。前年度に引き続き、TGFα切断アッセイを用いて、オーファンGPCRのリガンド同定を目指す。候補化合物として、特に生理活性を示す脂質であるリゾホスファチジルスレオニン、リゾホスファチジルグルコース、酸化リン脂質に着目する。TGFα切断アッセイは既存のGPCR活性化検出法に比べて、高精度・高感度であることとキメラGαサブユニットを利用可能であることから、TGFα切断アッセイを拡張してGPCRと三量体Gタンパク質との共役活性を評価する手法を構築することを目指す。具体的には、アッセイに用いる細胞(HEK293細胞)に内在に発現するGqとG12を阻害し、キメラGαサブユニットを共発現させた時のTGFα切断応答の回復を評価する。すなわち、GαサブユニットのC末との共役活性を指標に、GPCRの三量体Gタンパク質と共役活性を評価する。研究費は主に細胞培養の消耗品試薬を購入するのに使用する。また、成果発表として、学会参加の旅費と論文投稿料も計上する。
ミクロ,メソ多孔体複合機能場のナノ空間制御(電子顕微鏡を用いた3次元構造の研究)

今回の研究は、合成時間の増加に伴って二次元hexagonal相からcubic相へ「構造転移」するシリカメソ多孔体SBA-1について、その転移の様子を多数の合成時間で「凍結」した試料を通じて明らかにすることである。試料の合成は、界面活性剤にCTEABr、シリカ源にTEOSを用い、「構造転移」がゆっくり進行するようにHClを加え、反応時間を変えて取り出し実験試料とした。粉末X線回折パターンから、合成時間の短い試料は平面群,p6mm,長い試料は空間群Pm3nであることが予測される。TEM像の観察から、その結論を確認し、さらに二次元hexagonal相の(10)面とcubic相の(211)面が、面間隔・方位ともに一致させながら構造相転移していることが判った。この実験結果は、二次元hexagonal相の等価なチャンネルが、(1)約65Å周期で配列した内径約40ÅのケージA,(2)約90Å周期の3回右螺旋状に配列した内径約33ÅのケージB,(3)約90Å周期の3回左螺旋状に配列した内径約33ÅのケージCの三種類のチャンネルに分かれて、最終的に細孔がA_3B型に配列したPm3nの構造を形成すると考えるとよく説明できる。
脳内ドパミン神経系における転写調節因子の機能解析を目的とした行動薬理学的研究

ヘミ・パーキンソン病モデルラット(6-OHDAラット)の破壊側線条体に胎仔中脳腹側部細胞を移植し,L-DOPA反復投与による行動変化,FosBその他の転写調節因子の脳内分布を免疫組織学的手法を用いて観察した。移植部線条体その他のFosBとc-Fosでは発現様式に違いがみられた。6-OHDAラットの破壊側線条体に胎仔中脳腹側部細胞を移植し,その後の疼痛関連行動の変化を,対照群(非移植群)と比較した。移植群では,破壊側後肢の痛覚過敏が改善していた。1)ペントバルビタール麻酔下,脳定位的に6-hydroxydopamine(6-OHDA)を一側の内側前脳束へ微量注入することにより,中脳ドパミン(DA)神経を化学破壊した6-OHDAラット(ヘミ・パーキンソン病モデルラット)を作製した。2)ラット胎仔中脳DA細胞移植による行動及び転写調節因子(c-Fos,FosB)発現の観察:6-OHDAラットの中から移植群を選び,破壊側線条体に胎仔中脳DA細胞の移植を行った。その後,破壊群・移植群について前記した回転運動の観察を行い,移植による代償および機能的亢進を調べた。Methamphetamine誘起回転運動観察後,ペントバルビタールによる深麻酔下,ラット脳を灌流固定した。取り出された脳は,後固定後,ミクロトームにより凍結切片とし,その後は浮遊法で免疫組織化学法(ABC法)を施行した(Ishida et al, Synapse, 2002)。3)L-DOPA単回及び反復投与に伴う転写調節因子発現の観察:前記2)の破壊群・移植群のなかからL-DOPA単回投与群と反復投与群を抽出した。単回投与群の動物には1回のみのL-DOPA投与,反復投与群の動物には3週間連日のL-DOPA投与を行い,いずれの群もL-DOPA最終投与2時間後に,ペントバルビタールによる深麻酔下,ラット脳を灌流固定し免疫染色に供した。なお,この実験では,L-DOPA反復投与に伴う回転運動・不随意運動を観察する目的で,L-DOPA投与初日,1週後,2週後,最終日に,各ラットのL-DOPA投与後1時間の行動観察を施行した。以上の手法により,ラット大脳基底核その他の脳部位に関してc-Fos,及びFosB陽性細胞の分布を調べ,それぞれについて発現の部位特異性,L-DOPA反復投与に伴う免疫陽性細胞数の変化を観察した(論文作成中)。4)上記1)3)の研究と関連して,胎仔中脳DA細胞の線条体への移植により,6-OHDAラットに生じた痛覚過敏が改善することを明らかにした(論文印刷中)。1)ペントバルビタール麻酔下,脳定位的に6-hydroxydopamine(6-OHDA)を一側の内側前脳束へ微量注入することにより,中脳ドパミン(DA)神経を化学破壊した6 -OHDAラット(ヘミ・パーキンソン病モデルラット)を作製した。以上の手法により,ラット大脳基底核その他の脳部位に関してc-Fos,FosB及びZif268陽性細胞の分布を調べ,それぞれについて発現の部位特異性,L-DOPA反復投与に伴う免疫陽性細胞数の変化を観察した。

1)ペントバルビタール麻酔下,6-hydroxydopamine(6-OHDA)を一側の内側前脳束へ微量注入することにより,中脳ドパミン(DA)神経を化学破壊した6-OHDAラット(ヘミ・パーキンソン病モデルラット)を作製した。2)ラット胎仔中脳DA細胞移植による行動及び転写調節因子(FosB, c-Fos)発現の観察:6-OHDAラットの中から移植群を選び,破壊側線条体に胎仔中脳DA細胞の移植を行った。その後,破壊群・移植群について前記した回転運動の観察を行い,移植による代償および機能的亢進を調べた。3) L-DOPA単回及び反復投与に伴う転写調節因子発現の観察:前記2)の破壊群・移植群のなかからL-DOPA単回投与群と反復投与群を抽出した。単回投与群の動物には1回のみのL-DOPA投与,反復投与群の動物には3週間連日のL-DOPA投与を行い,いずれの群もL-DOPA最終投与2時間後に,ペントバルビタールによる深麻酔下,ラット脳を免疫染色に供した。なお,この実験では,L-DOPA反復投与に伴う回転運動・不随意運動を観察する目的で,L-DOPA投与初日と最終日に,各ラットのL-DOPA投与後の行動観察を施行した。以上の手法により,ラット大脳基底核その他の脳部位に関してFosB及びc-Fos陽性細胞の分布を調べ,それぞれについて発現の部位特異性,L-DOPA反復投与に伴う免疫陽性細胞数の変化を観察した(論文作成中)。精神医学当初予定していなかった,当モデル動物(6-OHDAラット)を対象とした疼痛関連行動に関した研究その他,実験メニューが増えてしまったこともあり,siRNAを用いた転写調節因子発現抑制と行動観察実験は手つかずの状態である。平成26年度以降に実施予定である。当初計画していた転写調節因子のひとつであるZif268の解析は,必要ないと判断し,実施しなかった。ただし,このことで,本研究の本来の目的達成は損なわれるものではないと考えている。平成25年度までに行った破壊・移植実験,行動観察及び免疫組織化学法を用いた形態学的研究に加え,以下の薬理学的実験を行う。siRNAによる転写調節因子発現抑制の確認と行動観察:近年,研究分担者の西森らが確立した手法(Kaneda et al, Mol Ther, 2002; Naono-Nakayama et al, Eur J Pharmacol, 2011)を用い,in vivoにおいて転写調節因子発現が抑制されることを確認する。まず,外注して作成した3種類の転写調節因子遺伝子(c-fos,fosB)の何れかに対するsiRNAをHVJ-Eに封入しsiRNA溶液とし,ラットの片側の線条体に注入する。siRNA溶液注入は,ハロセン麻酔下,マイクロインフュージョンポンプを用いて施行する。反対側の線条体には,同時に溶媒のみ注入する。siRNA溶液注入後,一定時間の後,ラット腹腔内にmethamphetamine(3 mg/kg)を投与し,その後12時間,回転運動その他の不随意運動を観察する。行動観察後,ラット脳を採取し,ウエスタンブロットあるいは免疫組織化学法を用い,methamphetamine投与により発現する転写調節因子が,線条体内のsiRNA注入部位で抑制されることを確認する。本実験により,各転写調節因子発現の抑制と回転運動その他の行動との関連性を検討することが可能となる。ウエスタンブロット及び免疫組織化学法の結果の解析(免疫反応性の定量化)には,画像解析ソフトを搭載したパソコンを用いる。平成24年度に行った破壊・移植実験,行動観察及び免疫組織化学法を用いた形態学的研究に加え,以下の薬理学的実験を行う。
社会福祉学生の実習ストレス対処能力と入学後からの生活習慣との関連についての研究

社会福祉士・精神保健福祉士(ソーシャルワーカー)を目指す社会福祉学生の実習ストレスと、メンタルヘルスに関係する生活習慣(食行動を含む)について探索した。2010年度入学の1年次生を対象にアンケート調査を実施し、2年間追跡した。2010年の生活習慣が3年間のSOC(ストレス対処力)の変化にどう関連するのかを見た結果、「睡眠時間による違い」が一因であることが示された(p=0.3)。学生が実習前、実習中のストレスを軽減しドロップアウト予防の一助となると考える。実習期間中のストレス暴露について検討した結果、唾液中のコルチゾルを測定した。実習前、実習後と統計的に有意な差を認めた。精神保健福祉士コース(p=0.02)、社会福祉士コース(p=0.61)社会福祉士・精神保健福祉士(ソーシャルワーカー)を目指す社会福祉学生の実習ストレスと、メンタルヘルスに関係する生活習慣(食行動を含む)について探索した。精神保健福祉士コース(p=0.02)、社会福祉士コース(p=0.61)ソーシャルワーカー(社会福祉士・精神保健福祉士)は、心理社会的・経済的に問題を抱えている対象者および社会的排除状態に置かれている対象者を援助するという業務内容や、虐待(児童・高齢者)問題への緊急対応を迫られるなど、勤務環境要因が複雑である職場に身を置いている。対人援助専門職として,自身の適切なストレスコーピング(ストレス対処)の必要性を知り、学生時分からメンタルヘルス管理およびストレスについて相応の対応能力を有する必要がある。メンタルヘルスのセルフケアにおいて、職場ストレスが高血圧など循環器疾患のリスクを上昇させる可能性と、適切なストレス対処行動が心身への悪影響を減少させる可能性を申請者らは報告してきた。しかしながら学生のストレス対応能力の向上にどのような因子が関連しているかについての報告はこれまでほとんどない。近年、食事・運動を始めとする生活習慣が将来のうつを予防する可能性や、朝食を規則正しく摂る等の食行動と週1回以上の運動が自覚的ストレスやうつ症状の減少と強く関連する可能性を報告した。そこで申請者らは、学生の生活習慣の質および食行動を含む生活習慣が、ストレス対応能力の高低と関連があるという仮説を立てた。本研究は2つの研究から成る。(1) H22年度入学生を対象に、食行動を含む生活習慣アンケート調査とSOC(ストレス対処力)・UPI.POMSといった心身状態を評価する質問票調査を実施した。ストレス対処力と生活習慣との関連を探索した。(2) H22年度ソーシャルワーク実習におけるストレス暴露とその要因の検討:3年次夏季(社会福祉士)3年次春および4年次夏季(精神保健福祉士)での4週間に亘る学外実習期間前後のストレスを測定し程度を把握した。実習前後には(1)と同様の生活習慣アンケート調査および心理評価質問票調査を実施した。(1)H22年度入学生(H23年度2回生)150名を対象に、H22年度施行の食行動を含む生活習慣アンケート(独自に作成したもの)と同様の質問紙調査を実施した。(2)H23年度ソーシャルワーク実習におけるストレス暴露とその要因の検討:3年次夏季(社会福祉士)、3年次春および4年次夏季(精神保健福祉士)に4週間に亘って実施される学外実習の、実習前と実習後に食行動を含む生活習慣アンケート調査およびSOC(ストレス対処力)・UPIを実施した。対象数は125名。この内、精神保健福祉士実習を行った学生を対象に、質問紙調査に加えて、生理状態を反映する指標として唾液中のコルチゾールを採取し、実習前と実習後における変化を見た。H23年度は研究(2)において、社会福祉士実習・精神保健福祉士実習の実習前と実習後のUPI(Uniaersity Personarity Inventory)における心身の健康状態の変化と特徴について分析を試みた。実習前と実習後において、得点項目順位、得点数、疾病のUPI項目等の男女差は大きくないが、実習前・実習後の時期においても男子は、心配性・脅迫因子が、また女子は、疲労感・威容減退因子が高い傾向が見られた。この点については、H24年度の3回生の調査結果を合わせて精査する。社会福祉士・精神保健福祉士を目指す社会福祉学生は、対人援助職としての適切なストレスコーピングの必要性が課題としてあげられる。そのために、1「メンタルヘルス」に関連する「生活習慣」の探索、2心身のストレスの程度と生活習慣や業務内容との関連を明確化することを目標とした。本研究は、研究1アンケート調査によるメンタルヘルスに関わる生活習慣の探索、研究2学外実習におけるストレス暴露とその要因の検討、の二つの研究から成る。