hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
雌雄ラットの社会的きずな形成における前脳性的二型核の役割の解明

我々は2015年にオキシトシンがヒトとイヌの間で種を越えて心理学で言う「愛着」あるいは「共感性」の成立に関わることをScience(doi: 10.1126/science.1261022)に報じた。同年以降雄マウスを隔離して飼育すると、血縁にない新生仔の養育行動を示すこと(2015)、雄ラットでは交尾により、射精の有無に関わりなく尾への電気ショック閾値が上昇し、痛覚が鈍麻するが、この効果は慢性留置カニューレを通じてオキシトシンアンタゴニストを側脳室に注入することで消失する(2016)。これらの観察から、本年はオキシトシンが何らかのフェロモンによる嗅覚刺激を介して、異性とその性的活動度を検出している可能性を考え、オキシトシン・リガンドノックアウトマウスを用いて検討を行い、この仮説を支持する結果を得て報告した(本報告書業績リスト1)。またオキシトシンノックアウトでは雌の性的受容開始が減弱するが、雄の性行動の開始には必要とされないという明確な性差があることを見出した。性行動の調節に関わるフェロモンの候補として、東原らが雄ラットの涙から分離した新奇の鋤鼻器受容体リガンドであるcystatin-relatedprotein 1が雌ラット受容行動の開始を起こすこと、このフェロモンがラットを天敵とするマウスには警告情報として利用されていることを明らかにした(本報告書業績リスト2)。一連の研究成果については国際行動神経科学学会(広島)におけるKeynote Lecture(招待講演)で報告し、大学共同利用機関合同企画I-URICフロンティアコロキウム(自然科学研究機構と人間文化研究機構の合同による)では二回にわたり招待講演を行い、自然科学系と人文科学系における性差の見方について討議の機会を持った。これまでに性行動・回避行動を雌雄ラット・マウスで比較してきた。本年度は(1)雌・雄のオキシトシンノックアウト(KO)マウスを用いて、嗅覚に依存する性指向性を調べた。KOマウスは嗅球でのオキシトシン作用に依存する社会的記憶を欠くとされるが、性ホルモンに左右される性的指向も、雄では発情雌と非発情雌、また雌では健常雄と精巣摘除雄の区別が再三の試行によってもできなかった。性指向はそれぞれの性に固有の性フェロモンを手がかりとして学習が起こる。(2)雄ラットの性フェロモンの一つ、涙腺から分泌されるcystatin-related protein 1(CRP-1)は雌ラットの受容行動であるロードーシス反射に先だつ静止行動を誘起した。興味深いことに、ラットを天敵とするマウスでは、CRP-1が警報フェロモンとして作用し、回避行動とうずくまりを起こした。(3)ラットではオキシトシンが母仔・同胞との触れあいにより分泌される。早期の母子分離は「愛着」や「共感性」の成立を阻害し、成熟後社会性を欠き正常に交尾・仔育て行動ができない個体を生じる。同胞との触れあい、時に乱暴な"rough and tumble"行動が個体の社会性の個体の社会性の成立に必須である。この"rough and tumble"行動をまねて、験者が手を用いて離乳後性成熟に至るまでの時期に毎日触刺激を反復すると、刺激されたラットはいわば「手乗りラット」となり、験者との接触を積極的に求めるようになる。これまで少なからぬ研究が、この現象の中枢機構の解明を目指して行われてきたが、本課題では、刺激を与える験者に生じるラットへの「愛着」に注目し、特に東京医療学院大学が作業療法士養成の責を担っていることから、動物介在療法への応用を目指して研究を進めた。「手乗りラット」を訓練・作成する過程で験者に生じた「愛着」あるいは「共感性」の分子基盤に、オキシトシンの関与が想定されるので、(1)「手乗りラット」あるいは通常に飼養したラットに30分間験者を接する間に、唾液に分泌されるオキシトシンを定量する。並行して本研究補助金で整備したインナーバランスセンサーを用い、手の動きの干渉なしに耳朶から脈波を記録する。iOS上のHeartMathプログラムでRR間隔の変動からコヒーレンスを算出し、自律神経活動を評価する。「手乗りラット」と接することにより副交感優位となり、リラックスすること、通常飼育ラットではこのような効果が得られないと予測している。(2)30分間の動物との接触の後に引き続き脈波を記録し、別離がいわゆる「ペットロス」として、自律神経機能から検出できるか否かを検討する。ヒトを含む多くの哺乳類で前脳腹側に位置する内側視索前野に、雄(男性)で雌(女性)より多数の細胞を擁し、体積も雄の方が雌より大きな「内側視索前野の性的二型核(SDN-POA)」がある。本研究代表者は(1)ラットのこの核の神経細胞が胎生18日と周辺の細胞群に遅れて発生;(2)一過性に成長ホルモンペプチドを発現;(3)マウスでカルビンジンを標識タンパクとして、これまで否定されてきたSDN-POAを世界で始めて報告;(4)エストロゲン受容体(ER)α遺伝子のプロモータ0/Bと蛍光たんぱくEGFP遺伝子を結合した人工遺伝子によるトランストランスジェニック(tg)ラットで、この核の神経細胞が特異的に標識されることを報告した。胎生18日令のtg

ラット脳の薄片を21日にわたり培養し、蛍光顕微鏡によるtime-lapse映画から、ERαの活性化がcoflinの再構成を通じて細胞移動を起こし性差を決定することを、エストラジオール(E2)、ERαantagonist (ICI 182,780)あるいは芳香化されないアンドロゲンであるジヒドロテストステロンの添加で検討し、細胞新生や選択的細胞死の関与を否定した(2017年国際行動神経科学学会、広島;第40回日本神経科学学会、千葉、で発表)。行動実験ではddN雌マウスを単離して飼育すると、未経産個体が短時間で育仔行動を示すこと(第40回日本神経科学学会で発表)、雄ラットの涙腺からテストステロン作用により分泌されるCRP-1タンパクが、鋤鼻系から内側視索前野に至る中枢嗅覚受容神経回路に作用し、雌ラットが高い血中テストステロン濃度を持つ雄を選好する手がかりとなり、雌ラットの性行動の主要要素であるロードーシス反射の開始に先だって起こる歩行の停止に関わってることを明らかにした(Current Biology, 2018)。行動学的実験では単離・群飼育という環境要因が未経産雌マウスの育仔という、社会行動の一端を決定していることが判明した。行動の発現にはストレスホルモンであるコルチコステロンや親和行動を支配するオキシトシンといった脳内ペプチドが関与すると考え発表・議論を進めてエビデンスを蒐集中である。閉経期の女性にシェーグレン症候群やsimple dry eyeが多発することから涙腺の分泌に性ホルモンが関与する可能性が推論されてきたが確証はなく、血中テストステロンによるラットCRP-1タンパクの合成促進がアンドロゲン受容体、エストロゲン受容体の何れを介するかを今後調べることとしている。内側視索前野の性的二型核(SDN-POA)の投射野については、蛍光たんぱくが発現する線維をtgラット脳で追跡し、順行性・逆行性トレーサを使用して、中脳中心灰白質、腹側被蓋野、扁桃核内側部などとの線維連絡を明らかにする作業が進行中である。我々は2015年にオキシトシンがヒトとイヌの間で種を越えて心理学で言う「愛着」あるいは「共感性」の成立に関わることをScience(doi: 10.1126/science.1261022)に報じた。同年以降雄マウスを隔離して飼育すると、血縁にない新生仔の養育行動を示すこと(2015)、雄ラットでは交尾により、射精の有無に関わりなく尾への電気ショック閾値が上昇し、痛覚が鈍麻するが、この効果は慢性留置カニューレを通じてオキシトシンアンタゴニストを側脳室に注入することで消失する(2016)。これらの観察から、本年はオキシトシンが何らかのフェロモンによる嗅覚刺激を介して、異性とその性的活動度を検出している可能性を考え、オキシトシン・リガンドノックアウトマウスを用いて検討を行い、この仮説を支持する結果を得て報告した(本報告書業績リスト1)。またオキシトシンノックアウトでは雌の性的受容開始が減弱するが、雄の性行動の開始には必要とされないという明確な性差があることを見出した。性行動の調節に関わるフェロモンの候補として、東原らが雄ラットの涙から分離した新奇の鋤鼻器受容体リガンドであるcystatin-relatedprotein 1が雌ラット受容行動の開始を起こすこと、このフェロモンがラットを天敵とするマウスには警告情報として利用されていることを明らかにした(本報告書業績リスト2)。一連の研究成果については国際行動神経科学学会(広島)におけるKeynote Lecture(招待講演)で報告し、大学共同利用機関合同企画I-URICフロンティアコロキウム
ダイズレグヘモグロビン遺伝子座における高次の遺伝子発現制御機構の解析

マメ科植物の根粒内では、根粒菌を細胞内に持つ感染細胞と、それを持たない非感染細胞とが混在しており、それらは遺伝子発現、倍数性、代謝、形態などの点で区別される。本研究では、感染細胞特異的に発現するレグヘモグロビン(Lb)遺伝子に着目し、Lb遺伝子座(約20kb)におけるクロマチン構造の変化を、根粒内の感染細胞と非感染細胞、Lbが発現していない組織由来の細胞、及び、未分化の培養細胞の間で比較し、植物の遺伝子発現における組織及び細胞特異性とクロマチン構造の動的変化との関係について理解を深めることを最終的な目的とした。以下のことが明らかとなった。1.ダイズのゲノムライブラリーからLb遺伝子座を持つゲノミッククローンを多数単離し、2ヶ所のLb遺伝子座を完全にカバーする詳細な物理地図を作成した。2.ダイズ培養細胞及び根粒からの核の単離法を確立した。3.Lb遺伝子座ほぼ全領域が核マトリックスと結合可能であることが示唆された。4.Lb遺伝子座ほぼ全領域にわたってBURが見出され、上記3.の結果を支持した。5.ダイス根粒から感染細胞と非感染細胞由来のプロトプラストを分離する技術を確立した。6.Lb遺伝子座ではメチル化レベルが極めて低いことが明らかとなった。7.Lbc3遺伝子近傍はDNaseIに対する感受性が発現に関わらず高いことが分かった。以上から、Lb遺伝子座に特有なクロマチン構造について基礎的なデータを得ることが出来た。その結果は一般に知られるMARの局在性の報告とは異なり、これがLb遺伝子に特有な発現制御機構と関連があるのか明らかにする必要がある。マメ科植物の根粒内では、遺伝子発現、倍数性、代謝、形態などの点で区別される感染細胞と非感染細胞とが混在している。本研究では、植物の遺伝子発現における組織及び細胞特異性とクロマチン構造の動的変化との関係について理解を深めることを目的とし、感染細胞特異的に発現するレグヘモグロビン(Lb)遺伝子座におけるクロマチン構造の変化を、根粒内の感染細胞と非感染細胞、Lbが発現していない組織由来の細胞、及び、未分化の培養細胞の間で比較する。本年度は材料の調整法及び実験系の確立に努めつつ研究を進め、以下のことを明らかにした。1.ダイズのゲノムライブラリーからLb遺伝子座の一部を持つλクローンを多数単離し、詳細な物理地図を作成した。その結果、単離したクローンによって2ヶ所のLb遺伝子座が完全にカバーされていることが明かとなった。3.λクローンからサブクローン化したLb遺伝子座由来のDNA断片をRI標識し、コムギ培養細胞由来の核マトリックスとの結合実験により、Lb遺伝子座におけるMAR(matrix attachment region)を同定した。その結果、Lb遺伝子座ほぼ全領域が核マトリックスと結合可能であることが示唆された。4.MARには一本鎖に解離しやすい領域(BUR)が含まれていることが報告されている。そこで、クロロアセトアルデヒド処理によってLb遺伝子座におけるBURの分布を解析したところ、Lb遺伝子座ほぼ全領域にわたってBURが見出された。この結果は、Lb遺伝子座全領域がMAR活性を持つことと矛盾しない。上記3.および4.で得られた結果は一般に知られているMARと遺伝子の関係(MARの分布)とは異なるものである。このことがLb遺伝子特有なあるいは植物に特有な遺伝子発現制御機構と関連があるのかどうかを明らかにすることは今後の重要な課題である。

本研究では、感染細胞特異的に発現するレグヘモグロビン(Lb)遺伝子に着目し、Lb遺伝子座(約20kb)におけるクロマチン構造の変化を、根粒内の感染細胞と非感染細胞、Lbが発現していない組織由来の細胞、及び、未分化の培養細胞の間で比較し、植物の遺伝子発現における組織及び細胞特異性とクロマチン構造の動的変化との関係について理解を深めることを最終的な目的とした。本年度は、以下のことを明らかにした。1.ダイズ根粒から感染細胞と非感染細胞由来のプロトプラストを分離する技術を確立した。しかし、非感染細胞は収量が低く、核を単離しゲノム解析をするには、さらに大量調整が可能な方法を講じる必要のあることが分かった。プロトプラストの調製にはテーブルトップ遠心機を用いた。2.昨年度に明らかにしたLb遺伝子座の物理地図に基づき、Lbの発現していない培養細胞におけるLb遺伝子座のメチル化のパターンを検討した。その結果、Lb遺伝子座ではメチル化レベルが極めて低いことが明らかとなった。3.Lbc3遺伝子近傍はDNaselに対する感受性が発現に関わらず高いことが分かった。2.と3.において、サザンハイブリダイゼーションにおけるフィルターの用意にUVクロスリンカーを用いた。昨年度に得られたMARの局在性の結果とあわせて、Lb遺伝子座に特有なクロマチン構造について基礎的なデータを得ることが出来た。
地質学的視点から気候変動を学ぶ教材開発とその実践

現在は長大な地球史におけるの時間断面のひとつである.地質学の研究によって,地球は過去に何度も温暖化や寒冷化を経験したことやCO_2濃度と気候の関係が解明されつつある.これらの知見は現在の気候システムやCO_2濃度が地球本来のしくみから逸脱しているかを評価することや,将来温暖化が進んだ場合に参考となる先例を提示することに繋がる.本研究では,まず小学生から大学生の1519名に対して気候変動の基本的知識の理解度を調査した.その中で「人類は現在よりも温暖な時期を経験したことがあると思うか」と質問した.60004500年前のプシサーマル期(日本では縄文時代)はヨーロッパや東アジアなどで現在よりも13°C温暖であったとされる.千葉県館山市の沼サンゴなどはその証である.よって期待する回答は"ある"である.ところが,いずれの世代においても大多数が"ない"と答えた.地球環境を歴史科学的視点で考える姿勢は浸透していないことが明らかとなった.本内容は日本地学教育学会(三重大学)で発表した.上記の結果を踏まえて以下をテーマにした気候変動史に関する教育普及プログラムを開発するとともに,勤務先科学館の体験教室などで実践した(小学生対象2回,中学生対象3回,高校生以上対象4回).(1)都圏でも実施可能な野外体験プログラムの開発.関東地方南部に広がる第四系更新統を教材とし地層の観察,貝化石・有孔虫化石の解析に基づいて過去40万年間の自然由来の気候変動,すなわち氷期-間氷期の繰り返しを体験的に理解するプログラムを開発した.千葉県君津市の地蔵堂層,木更津市の藪層,印旛村の木下層を教材とした.(2)恐竜,アンモナイトの人気を利用した教育プログラムの開発.恐竜やアンモナイトが繁栄していた約1億年前の白亜紀中期,CO_2による温室効果が極度に進行し,北海道までサンゴ礁が広がっていた.もし,このまま化石燃料の消費がつづくと22世紀末にはCO_2濃度が白亜紀中期の温室地球に匹敵する1000ppm(現在380ppm)に達するという予測がある.「温暖化すると地球はどうなるのか,生命圏はどうなるのか」という命題を人気の古生物(化石試料)を媒体として学ぶプログラムを開発した.これに関連して,白亜紀の地層分布域(群馬県神流町,千葉県銚子市,茨城県那珂湊市,三重県鳥羽市,兵庫県淡路島)で地質資料の収集を行なった.現在は長大な地球史におけるの時間断面のひとつである.地質学の研究によって,地球は過去に何度も温暖化や寒冷化を経験したことやCO_2濃度と気候の関係が解明されつつある.これらの知見は現在の気候システムやCO_2濃度が地球本来のしくみから逸脱しているかを評価することや,将来温暖化が進んだ場合に参考となる先例を提示することに繋がる.本研究では,まず小学生から大学生の1519名に対して気候変動の基本的知識の理解度を調査した.その中で「人類は現在よりも温暖な時期を経験したことがあると思うか」と質問した.60004500年前のプシサーマル期(日本では縄文時代)はヨーロッパや東アジアなどで現在よりも13°C温暖であったとされる.千葉県館山市の沼サンゴなどはその証である.よって期待する回答は"ある"である.ところが,いずれの世代においても大多数が"ない"と答えた.地球環境を歴史科学的視点で考える姿勢は浸透していないことが明らかとなった.本内容は日本地学教育学会(三重大学)で発表した.上記の結果を踏まえて以下をテーマにした気候変動史に関する教育普及プログラムを開発するとともに,勤務先科学館の体験教室などで実践した(小学生対象2回,中学生対象3回,高校生以上対象4回).(1)都圏でも実施可能な野外体験プログラムの開発.関東地方南部に広がる第四系更新統を教材とし地層の観察,貝化石・有孔虫化石の解析に基づいて過去40万年間の自然由来の気候変動,すなわち氷期-間氷期の繰り返しを体験的に理解するプログラムを開発した.千葉県君津市の地蔵堂層,木更津市の藪層,印旛村の木下層を教材とした.(2)恐竜,アンモナイトの人気を利用した教育プログラムの開発.恐竜やアンモナイトが繁栄していた約1億年前の白亜紀中期,CO_2による温室効果が極度に進行し,北海道までサンゴ礁が広がっていた.もし,このまま化石燃料の消費がつづくと22世紀末にはCO_2濃度が白亜紀中期の温室地球に匹敵する1000ppm(現在380ppm)に達するという予測がある.「温暖化すると地球はどうなるのか,生命圏はどうなるのか」という命題を人気の古生物(化石試料)を媒体として学ぶプログラムを開発した.これに関連して,白亜紀の地層分布域(群馬県神流町,千葉県銚子市,茨城県那珂湊市,三重県鳥羽市,兵庫県淡路島)で地質資料の収集を行なった.
現生人類頭蓋形態の地理的変異・多様性とその進化的背景

現生人類の起源、拡散過程と形態学的多様性の進化を明らかにする目的で、米国の博物館に保管されている人骨の頭蓋・歯冠形態の計測的、非計測的データと画像データを収集し、世界主要10集団約1000個体からなる完成度の高いデータベースを構築した。これらのデータをマルコフ連鎖モンテカルロ法および多変量正規分布のプロビット解析法にもとづき解析し、現生人類がアフリカから外の地域へ拡散する過程について詳細な推定を行った。本研究の目的は、現生人類の起源、拡散過程と形態学的多様性の進化を明らかにするため、世界各地域の集団に関する頭蓋、歯冠形態のデータ収集と、画像データの収集、分析を実施することである。本年度は、アメリカ・ケンタッキー州のケンタッキー大学人類学博物館に保管されている、約4,0005,000年前のパレオインディアン(Indian Knoll遺跡出土)の調査を実施した。個体数は約300個体であり、頭蓋、歯冠それぞれの計測的、非計測的形態データと画像データを収集し、データベース化した。この調査により、新大陸の完新世中期集団のかなりまとまったデータがそろい、ヒト集団の北東アジア新世界への進出とその適応戦略の過程がより具体的に解明できるものと考えられる。予備的な分析の結果、このパレオインディアン集団は北東アジア集団と最も類似性を示し、また、日本の同時期の集団=縄文時代人ともある程度の類似性を示した。さらにこれら北東アジア集団とその派生グループは、カザフやタガールといった中央アジア集団ともやや類似しており、このことは東アジアへのヒトの進出について、単純な東南アジア起源説では説明しきれないことを示唆しているとも解釈できる。また、日本の縄文時代人についても、彼らの起源を北東アジアに求めうる可能性を示唆する結果として、大変重要であろう。今日、東/北東アジア集団の起源については、東南アジア集団の北上説が有力である。本研究結果はこのことを否定するものではないが、アフリカを出て東進を続けたヒト集団は、東アジアまで達した段階で、二系統の集団に分化していた可能性、あるいは北東アジア集団が東南アジアを起源とする一系統のみの集団ではない可能性は除外できないであろう。本研究の口的は、現生人類の起源、拡散過程と形態学的多様性の進化を明らかにするため、世界各地域の集団に関する頭蓋、歯冠形態のデータ収集と、画像データの収集、分析を実施することである。本年度は、アメリカ・ニューヨーク市のアメリカ自然史博物館(American Museum of Natural History)に保管されている人骨のうちヨーロッパと北アフリカの7集団、約670個体の調査を実施した。調査項目は頭蓋、歯冠それぞれの計測的、非計測的形態データであり、同時に画像データも収集し、それぞれデータベース化した。この調査により、ユーラシア大陸西部(ヨーロッパ、北アフリカ)がほぼそろい、ヒト集団の出アフリカ後のヨーロッパ、北アフリカへの進出とその適応戦略の過程がより具体的に解明できるものと考えられる。予備的な分析の結果、現生人類の出アフリカは、従来主張されていたような、レバント地方を通ったいわゆる北ルートと考えるよりも、むしろパブ・エル・マンデブ海峡からアラビア半島南端に抜ける南ルートを通ってなされた可能性が考えられた。またヨーロッパへのヒトの進出は西アジアから西進した一部がさらにヨーロッパへと広がっていった可能性が考えられる。一方、北アフリカの人々は、一度アフリカを出た集団が、その後レバント地方に達し、さらにその一部が再びアフリカ大陸に戻っていった可能性が考えられた。次年度は最後の研究年として、世界への新人の拡散過程を分析する。本研究の目的は、現生人類の起源、拡散過程と形態学的多様性の進化を明らかにするために、世界各地域の集団に関する頭蓋、歯冠形態のデータ収集と、画像データの収集、分析を実施することである。本年度は、平成21年度にアメリカ合衆国ケンタッキー州・ケンタッキー大学人類学博物館で、平成22年度にアメリカ合衆国ニューヨーク州ニューヨーク市・アメリカ自然史博物館において実施した調査により得られた、9集団約1000個体からの頭蓋・歯冠の計測的および非計測的データの解析を行い、同時に収集した画像データとあわせて、データベースの構築をおこなった。また、こうして得られたデータをもとにオーストラリア原住民の人骨の形態的特徴を分析し、100年前のオーストラリア原住民の毛髪からのゲノム全配列解析のreference dataとして提供した。この成果はScience誌に掲載された(Rasmussen et al. 2011)。今後、データベース化した形態データをより汎用性の高い形式(WEB等で公開可能な形式)ものにする等、さらなる研究発展を図る。生物学
分泌性形態形成因子Wntファミリーのアシル化とその機能の解析

Wgにおいてパルミチン酸が付加されるアミノ酸残基の同定PorcはWgの83-106番アミノ酸から成るドメインに結合する。ショウジョウバエHedgehogのパルミチル化に働くSkinny hedgehogとの類似性、およびwg変異株の存在から、94番目のシステインがパルミチル化されると予想でき、このシステインをグリシンに置換したWg変異体(C94G)を作製した。野性型とC94G変異型WgをS2細胞で発現させ、^<35>S-メチオニシと^3H-パルミチン酸でラベルし、Wgタンパク質への取り込みを測定した。その結果、C94G変異体は^3H-パルミチン酸によってラベルされず、94番目のシスティンがパルミチル化されることが明らかとなった。このシステイン残基はWntファミリーメンバー内で良く保存されているので、この位置におけるパルミチル化の普遍性が推定される。Wntタンパク質の無細胞パルミチル化系の確立生細胞を^3H-パルミチン酸でラベルする方法では、Wntタンパク質への^3Hの取り込み効率が極めて低く、Porcの構造と機能の詳細な解析は困難である。そこで、無細胞パルミチル化系の確立を行なっている。内在性または細胞内で発現させたWntタンパク質は既にパルミチル化されていると考えられるので、mRNAを鋳型にした無細胞翻訳系によりWntタンパク質を合成する。翻訳と同時、または後にミクロソーム画分を添加し、Wntタンパク質への^3H-パルミチン酸の取り込みを測定する。現在までに、イヌ膵臓、マウス脳、肝臓、精巣、およびショウジョウバエ胚由来のミクロソーム画分を用いて実験を行なったが成功していない。パルミチル化され得るWntタンパク質の調製法等について、さらに検討を行なう予定である。ショウジョウバエWingless(Wg)はタンパク質翻訳と同時に分子内ジスルフィド結合を形成するために糖鎖修飾が阻害され、Porcupine(Porc)はWgのタンパク質翻訳後の糖鎖修飾を促進する。タンパク質翻訳後の糖鎖修飾過程では、アスパラギン結合型糖鎖修飾部位(NXS/T)のOST複合体(小胞体膜に存在する)による認識が律速段階となる。したがって、PorcはWgのアミノ末端ドメインに結合し、さらにWgを小胞体膜にアンカーすることによりNXS/T部位のOST複合体による認識を促進させる機能を持つと推定された。そこで、PorcがWgをアシル化する可能性をショウジョウバエ原虫基を用いて解析を行った。先ず、Skinny hedgehogがHedgehogのパルミチル化を行うことから、PorcによるWgのパルミチル化を検討した。野性型とporc変異型の3令幼虫から原虫基を分離し、^<35>S-methionineと^3H-palmitateでラベル後、内在的に発現するWgを免疫沈降により解析した。その結果、Wgは野性型原虫基では、^<35>S-methionineと^3H-palmitateの両方によりラベルされるが、porc変異型原虫基では^<35>S-methionineでのみラベルされることが明らかとなった。したがって、ショウジョウバエの内在性WgはPorcに依存してパルミチル化されることを示している。現在、Wgのパルミチル化されるアミノ酸残基の同定と、Wgの成熟過程における脱パルミチル化の可能性を検討している。
『羅葡日辞書』を中心としたキリシタン辞書編纂の研究

『羅葡日辞書』には典拠注記や多様な日本語訳など、原典のラテン語辞書カレピヌスに必ずしも基づかない箇所が多く、ラテン語学習・日本語学習両方に配慮した独自の方針がとられたことがわかる。『羅葡日辞書』が後続の『日葡辞書』の編纂に利用された明らかな証拠は見つかっていないが、文語が基調の『羅葡日辞書』の日本語訳において、『日葡辞書』と類似した口語的な語彙・語法も散見される。訳出上のゆれも見られることから、今後『日葡辞書』と合わせた日本語研究への活用が期待される。平成21年度は主に、日本イエズス会の編纂・印刷した『羅葡日辞書』(1595年刊)と『日葡辞書』(1603-1604年刊)との関係について考察した。編纂に同じ人物が関わったかどうかは確認できないが、『日葡』の序文からも、似通った印刷様式からも、編纂上の強い関係が類推される。しかし、二辞書の内容を比較すると以下のようなさまざまな相違が見られる。1.言語教育上の目的の相違『羅葡日』は日本人のラテン語学習とヨーロッパ人の日本語学習を目的としており、日本語の類義語を並べるなど日本語学習者への配慮は見られるが、ラテン語と比べると日本語教育が二次的な目的であることは明らかである。『日葡』では話し言葉を重視するなど、『羅葡日』に比べ外国人宣教師の日本語学習向けに特化した辞書となっている。12.対訳の相違『羅葡日』のポルトガル語・日本語対訳と、『日葡』の日本語・ポルトガル語対訳には、意味にずれが見られる見出しが少なくない。これらの例は、1.の目的の相違から生じるものもあろうが、日本語の意味や辞書編纂のありようを知る手がかりとなる。(1)「南蛮」旧本語の「南蛮」は、ヨーロッパ人来日により一般にヨーロッパを指すようになったが、キリシタン側の資料では非キリシタンの資料とはやや用法が異なり、『羅葡日』内でもゆれが認められることから、通時的な語義変化だけでなく共時的な意味・用法の違いもあったとみられる。(2)「脾臓」ヨーロッパ医学と日本医学とでは人体の捉え方が大きく隔たっていたため、相互に翻訳困難な部分があった.一例として、日本語の「脾臓」をヨーロッパ医学のどの臓器を対応させるかは『羅葡日』『日葡』で訳が異なっており、『日葡』内でもゆれが見られる。このゆれは、日本医学における多様な「脾臓」の機能を、ヨーロッパ医学のどの臓器の機能に当てはめたかによって生じたようである。平成22年度は、キリシタン版『羅葡日辞書』(以下「ラポ日」)の注記と原典であるラテン語辞書カレピヌスとの対照、ラポ日と『日葡辞書』(以下「日ポ」)との対訳部分の違いを中心に、引き続きラポ日の本文調査を進め、その成果である1)2)を発表した。さらにそれらを基づき、3)の考察を進めつつある。1)ラポ日の引用注記ラポ日では原典カレピヌスに基づく古典作家名が注記のみで記されていることがあるが、多く名前が見えるのはプラゥトゥス、ヴェルギリウスらであり、キケローのラテン語を模範文例として多数引用しているカレピヌスとは傾向が一致しない。これはラポ日がそれほどレベルの高くない日本のラテン語学習者を対象にしたために、古語・詩語などやや特殊な語に注記の必要を認め、上述のような作家名を記したのではないだろうか。2)ラポ日と日ポの対訳の違い平成21年度においてすでに、「脾臓」「南蛮」の語についてラポ日のポルトガル語・日本語対訳と日ポの日本語・ポルトガル語対訳のずれがあったことを解明したが、本年度は関連語である「腎臓」や「天竺」などについても調査を進め、やはり同一辞書内または同じ日本イエズス会の編纂物内で日本語語義の解釈にゆれや変遷が見られることが確かめられた。これらの例からも、ラポ日と日ポについて編纂上の関連性(例えば同一人物が両書に関わっているなど)は今のところほとんど認められない。3)ラポ日特有の日本語ラポ日の日本語訳中、日ポには収録されていない語や、日ポにはあってもその他ではほとんど用例の見えない語も少なくない。これらの語義の解明には、カレピヌスとの対照が有効な場合がある。『羅葡日辞書』の日本語訳について、従来全体を通しての考察は少なく、また原典対照による翻訳研究はほぼ皆無であったが、本課題の遂行により23年度、以下1・2の成果を得た。1原典対照による日本語訳の解明『羅葡日』には、『日葡辞書』も含めた同時代の資料にほとんど見えない語が用いられるなど、不明な箇所が少なくなかった。

それらのうち、原典に近いと思われる1580年リヨン版カレピヌスのとの対照により、解釈可能となる場合があることを例証した。2日本語訳の口語的要素『羅葡日』の日本語は、大塚光信(2006)などの指摘の通り、同じキリシタン版の『日葡辞書』と比べると口語よりも文語の要素が強いといえる。しかし用例数は少ないものの、以下のような口語的要素も全体を通じて散見される。方言について、『日葡辞書』においてX.あるいはXimoと注記された語は九州方言と想定されているが、このような約450語のうち、『羅葡日』にはfuxicusa(伏草)、fiyai(冷やい)など20語以上が用いられている。また語法について、同じキリシタン版の『平家物語』や『エソポのハブラス』に見られるような、例えば断定に-giaを用いるなどの際立った口語的語法は稀であるが、形容動詞の連体形に-naruでなく-na形をとるものが少なくとも70例あるなど、伝統的な文語から離れた新しい語法が見られる。しかし、これらの用例の多くは文語的日本語訳の中に混在しており、口語性が認識されていたとは考えにくい。また、1580年リヨン版カレピヌスのラテン語と対照させたとき、例えばラテン語の会話文が口語的な日本語で訳されるというような位相の対応関係は現段階では確認できていない。
リン酸化による微小管細胞骨格の制御

チューブリンのリン酸化と脱リン酸化酵素に着目して微小管のリン酸化反応を調べたところ、mitogen-activated protein kinase phosphataseに分類されるアラビドプシスのPropyzamide-Hypersensitive 1がatypical protein kinaseのキナーゼドメインを併せ持つことが判明した。このリン酸化活性は分子内のフォスファターゼ活性により不活性化されているが、活性化されるとチューブリンをリン酸化し、間期細胞の表層微小管を速やかに脱重合することを明らかにした。アラビドプシス培養細胞抽出液から各種CDK抗体を用いてCDK-cyclin複合体を免疫沈降し、アラビドプシス培養細胞から精製したチューブリンを基質としてリン酸化反応を行ったところ、リン酸化反応が見られたが、反応の特異性に問題があった。また、大腸菌で発現・精製した組換えチューブリンを用いて、同様の反応を行ったところ、βチューブリンの予想されるセリン残基のみが特異的にリン酸化されることが確認できなかった。TON2フォスファターゼ変異株においてSer172がリン酸化されているという予備実験結果を得ていたが、さらなる実験を行ったところ、結果の再現性に問題があり、現在この実験は中止している。一方、C792S不活性型PHS1が標的タンパク質を安定にトラップする可能性を調べる目的で、GFP融合した野生型または不活性型を発現させたアラビドプシス植物体からGFP抗体を用いて、相互作用タンパク質群を単離した。磁気ビーズを用いる精製方法により、バックグラウンドを低く抑えて、特異的な相互作用タンパク質を回収する実験条件を確立した。いくつかの不活性型特異的バンドが検出され、現在質量分析機による解析を行っている。この実験と平行して、TAP融合型PHS1(野生型または不活性型)を誘導系プロモーターを用いてアラビドプシス植物体または培養細胞で発現させた系統を作成中であり、実験材料が揃い次第、同様の実験を行って相互作用タンパク質を同定する。Mitogen-activated protein kinase phosphatase様のアラビドプシス脱リン酸化酵素PHS1のC792S不活性型変異を植物細胞で発現させると、表層微小管が速やかに脱重合されることを見出した。この変異型タンパク質が標的タンパク質を不可逆的にトラップすることにより、微小管が不安定化される可能性を調べる目的で、GFP融合した野生型または不活性型を誘導化合物の添加により誘導的に発現させるアラビドプシス植物体を作出した。これらの誘導発現系統で導入遺伝子を発現させると、野生型系統では変化がないが、不活性型系統では表層微小管が脱重合し、細胞の肥大が観察された。現在、不活性型系統の後代を増殖させ、生化学的実験に必要な植物量を確保しようとしている。予備実験では、GFP抗体と磁気ビーズを用いる精製方法により、バックグラウンドを低く抑えて、特異的な相互作用タンパク質を回収する実験条件を確立している。また、微小管脱重合作用に必要なPHS1領域を特定するために、不活性型PHS1をN末端およびC末端から欠失させたタンパク質を微小管標識アラビドプシス植物体系統で一過的に発現させる実験を行っている。現在、実験進行中であるが、phsl-1変異によりアミノ酸置換が起こっているN末端領域は不活性型PHS1の微小管脱重合作用には必要でないことが判明している。植物において、微小管は細胞の形の決定や増殖といった細胞の基本的性質に重要な役割を果たす。そのため、微小管ネットワークの形成・維持機構を明らかにすることは植物の基本的な形作りや環境応答など、植物の生存戦略を理解する上で重要である。本研究室では、特に微小管ネットワークの維持機構を明らかにするため、微小管脱重合剤propyzamideに高感受性を示す変異体であるphs1-1(propyzamide hypersensitive 1)を単離している(Naoi and Hashimoto.2004)。本研究はPHS1と微小管の関係を生化学的・細胞生物学的手法により明らかにすることが目的である。今年度は、植物細胞における一過的発現系および、放射性同位体を用いたin vitroの実験系により、以下の3点を明らかにした。1)PHS1がphosphatasedomainだけでなく、自己リン酸化活性をもったkinase domainも持つこと、2)kinase domainは間期微小管を不安定化し、この効果にはkinase活性が必要であること、3)phosphatasedomainはkinase domainの効果を抑えること、を明らかにした。これらの結果からPHS1は微小管を不安定化する活性を有するが、通常その活性は細胞内では抑制されていることが示唆された。これまでに、細胞全体で微小管を不安定化する分子機構・生理的意義については知られていない。今後は、どのような状況においてPHS1が微小管を不安定化する活性を発揮するのか、さらにその時の分子的な調節機構およびPHS1の下流分子を明らかにする。本研究により、間期微小管ネットワークの維持の意義および分子機構に関するさらなる研究を進める大きなきっかけが得られた。
絹構造の改変・構造制御・大量生産技術の確立と歯・骨再生医療材料の開発

歯・骨の再生医療材料として要求される機能を付与した15種類の高機能化絹を分子設計、トランスジェニックカイコで大量に生産することに成功した。また、生分解性を制御したスポンジ状ならびに不織布状絹多孔質体を開発するとともに骨芽細胞培養系での評価技術を開発した。さらに、動物移植評価実験ならびに歯科領域骨欠損への埋植評価実験を行い、それらの結果を総合して、歯・骨再生のための優れた材料を絹をベースに開発することができた。高機能化絹を開発する技術を基盤とし、生分解性を制御した加工法を開発、細胞培養ならびにマウスによる動物移植実験での評価を経て、歯・骨の再生医療の基盤となる高機能化絹材料を開発することを目的とする。そのために、以下の内容で開発研究を進めた。(1)各種絹の精密構造解析の結果を基盤とする、歯・骨の再生医療材料に適した新しい高機能化絹の一次構造の分子設計。(2)遺伝子組換え法を用いた大腸菌ならびにトランスジェニックカイコによる高機能化絹の生産。(3)歯・骨素材として用いるための高機能化絹のスポンジおよび不織布状へのプロセッシング加工。(4)スポンジ状や不織布状の高機能化絹の構造と物性ならびに生分解性の評価。(5)骨芽細胞等を用いたIn vitroでの高機能化絹の細胞接着性、石灰化の評価と遺伝子解析。(6)マウス皮下移植によるスポンジ状ならびに不織布状絹の生体適合性と安全性評価。(7)マウス筋膜下移植による絹スポンジの異所性石灰化評価。(8)マウス歯周病モデルを用いた歯科領域骨欠損への埋植。歯・骨の再生医療用の新規材料として、カルシウム結合性、細胞接着性、生分解性等の向上を目的とした各種遺伝子組換え絹を創出するために、以下の開発研究を行った。2.本試料について、固体NMR構造解析を含むキャラクタリゼーションを行った。3.絹に細胞接着性タンパク質を混合させたフィルムまたは不織布は、細胞接着特性がかなり向上することがわかった。その際、不織布を多量に生産できるようにエレクトロスピニング装置を購入した。4.絹ならびにカルシュウム結合部位を導入した絹フィルムを培養シャーレに装着、骨芽細胞の培養を行った。骨芽細胞マーカーのアルカリフォスファターゼと石灰化の検出のためのアリザリン染色を行った。シート上で骨芽細胞が安定して培養され、また、石灰化が十分になされたことが分かった。5.絹に細胞接着性タンパク質を混合させた試料を、フィルム、再生繊維、スポンジ状とし、マウス背部の皮下に移植した。現在、経日的に摘出して生体適合性と分解性ならびに安全性を調べる実験を行っている。これらの成果は、関連学会で発表するとともに、国際関連誌に投稿予定である。また、平成19年5月本学繊維博物館で再生医療を担うシルクと題して、本研究内容に関する特別展を主催する予定である。歯・骨の再生医療のための要請を満たす材料を、絹ならびに新規絹様タンパク質を用いて開発するために、以下の研究を行った。1.カルシウム結合性、細胞接着性ならびに親水性の増加を目指した10種類以上の新規絹様タンパク質の大腸菌による生産を行った。また、細胞接着性の高い新規タンパク質のトランシジェニックカイコでの生産を行った。2.絹と新規絹様タンパク質を用いて、絹フィルム、絹不織布ならびに絹スポンジを作成、マウスを用いた評価実験に用いた。3.骨芽細胞培養系を用い、新規絹様タンパク質について、細胞接着性・細胞増殖性の評価を行った所、特に、絹様タンパク質は良好な成績を示した。4.In vitroでの骨形成を評価する骨芽細胞培養系における石灰化結節の形成の観察を新規絹様タンパク質との共培養試験にて検討した。絹様タンパク質は骨芽細胞分化を促進し、アルカリフォスファターゼ活性の上昇を伴って石灰化結節を形成した。また、高次構造の改変によりラメラ構造を導入した絹様タンパク質では、カルシウムの沈着促進が観察された。5.骨形成の亢進を示した培養群について、絹上で培養した骨芽細胞由来のmRNAを採取した。対照群として、絹の無いシャーレ上で培養した骨芽細胞由来のmRNAを採取し、遺伝子の比較解析をおこなった。骨形成の亢進に関与する遺伝子群を中心に調べた結果、骨芽細胞の分化に関わる数種の転写調節因子の発現上昇が認められ、さらに、骨形成の指標であるオステオカルシン遺伝子の発現ヒ昇が観察された。6.骨移植材に適する数種に絞られた材料に対する生体適合性試験をマウス皮下移植法により検討した。経時間的な解析による移植絹のサイズ変化計測による吸収度の判定、組織切片の解析による生体適合性を評価した。2種の移植材について検討したところ、移植初期に炎症反応を認めたが、長期的には良好な生体適合性を示し、これら移植材は経日的に吸収されることを認めた。

1.骨・歯の再生期間を制御した絹骨欠損移植材の開発一次構造の分子設計とトランスジェニック(TG)カイコによる生産:機能部位の繰り返し構造を含む新規絹様タンパク質(10種類以上)の生産を、主に、トランスジェニックカイコを用いて行った。プロセッシングによる高次構造制御:TGカイコを用いて生産した新規絹様タンパク質について、フィルム、不織布ならびにスポンジを作成した。これらの試料について構造、物性、細胞接着性ならびに生分解性等の評価実験を行い、骨欠損部位の大きさに対応した絹移植材を開発した。2.再生医療材料評価システムの開発絹移植材による骨形成の促進:絹コート上で骨芽細胞を培養すると、コラーゲンの場合より骨芽細胞の成熟・分化が亢進し、早期の石灰化が認められた。さらに、分化を誘導する遺伝子Runx2およびI型コラーゲンα鎖遺伝子の発現も認められ、絹の移植を骨組織に適用する場合、良好な骨形成と骨欠損の治癒・改善が期待できることが示唆された。In vivo骨形成と骨リモデリングの解析:TGカイコで生産した絹スポンジを新規に開発したマウス大腿骨を用いた骨移植評価系において比較・評価した。軟X線撮影によって、絹移植材は大腿骨皮質骨および海綿骨部への定着が観察され、生体拒絶反応は認められなかった。さらに、蛍光二重ラベル法を用いた骨形成の評価法を構築した。骨リモデリングは骨形成と骨吸収のバランスが重要であり、絹移植材の骨吸収への影響も検討した。また、移植による全身への影響についてマウス血液サンプルを用い、生化学的マーカーにより比較した。I.歯・骨の再生医療材料に適した新しい高機能化絹の分子設計と生産絹中の機能部の含量の増加させた高機能化絹を追加作製した。異なる染色体上に遺伝子を持つカイコの系統を交配し、遺伝子のコピー数を増加させ達成した。また、物性を制御した高機能化絹を作製するため、RGD含有高機能化絹について、RGD部位両隣の絹連鎖部分のアラニンとグリシンの組み合わせを変化させた絹様タンパク質の発現コンストラクトを作製した。II.歯・骨の素材として用いるための高機能化絹のスポンジおよび不織布への加工分解性のより一層制御をれた高機能化絹のスポンジならびに不織布の作製を行った。スポンジについては、孔径および材料の配合を検討した結果、塩化カルシウムの添加により分解性が向上することを見出した。不織布はこれらのスポンジよりさらに高い分解性を示した。III.骨芽細胞培養系を用いた絹足場材料のin vitro評価絹スポンジを足場材料とした3次元培養系における培養条件の検検討をおこなった。DNAマイクロアレイ法による網羅的な遺伝子発現の評価を行い、絹材料上で培養した細胞の分化の様子を観測した。IV.マウス等を用いた絹足場材料のin vivoでの評価動物を用いたin vivo実験により、絹スポンジ等の骨欠損移植材としての適合性を評価した。移植する部位の骨欠損の大きさにより、大腿骨の大きな欠損と小さな欠損について、いずれの材料が適合するかを評価した。これにより、歯槽骨をターゲットとした移植材の最適化への評価系を確立し、歯槽骨に最適な絹移植材料を選定する上で必要な知見を得るための基盤が整った。
分子間錯体のイオン化と解離

本研究で主な対象とした系は2種類で、第一はピリミジンを母体とするVan der【Waal_5】錯体、第2はフェノールを母体とする水素結合体である。それらの分子間錯体のイオン化と解離過程に注目して以下の研究を行った。1ピリミジン・アルゴン錯体の電子励起状態においてイオン化と解離が競合することを2波長光イオン化法を用いて見出し、分子内振動緩和よりも早い速度定数で解離がおきる場合があることを示した。(印刷発表済)2ピリミジン及びそのアルゴン錯体について電子励起に伴なう回転構造を高分解能レーザー励起蛍光法によって観測し、ピリミジンの第一電子励起伏態の分子構造を決定し、またアルゴン錯体の基底及び励起状態におけるVander【Waal_5】結合距離を決定した。(印刷発表済)3フェノールN【(CH-3)-3】水素結合体について蛍光法により基底及び励起状態における解離エネルギーを決定し、2波長光イオン化法によりイオン状態での水素結合解離エネルギーを決定した。その結果に基づいて水素結合体イオンの解離過程を研究し、水素結合体内でフェノールからアミンへのプロトン移動後にのみ生成するHN【(CH-3)(^+-3)】イオンが解離することを見出した。その生成機構を考察し水素結合体イオンの第一電子励起状態がプロトン移動を伴なう解離に重要な役割を果すことを示した。(口頭発表済、印刷発表予定)4フェノール【NH_3】水素結合体について同様の研究を行ない、基底,励起及びイオン状態での解離エネルギーを決定し、それに基づいて水素結合体イオンの解離過程を研究した。その結果、イオン基底状態での解離はプロトン移動を伴なわないことを見出し、解離機構を考察した。(発表準備中)5本研究は他の方法では得難い分子間錯体及びそのイオンの光物性,光化学に重要な知見をもたらすので今後更に強力に発展させたい。
多関節ロボットを用いた靱帯損傷診断-膝関節動揺性検査法の開発-

外傷による靱帯損傷の整形外科的診断法のひとつに動揺性検査法がある。関節に徒手による外力を与えてその関節本来の運動域をはずれてどれ程の動揺性が患者の膝関節に生じているかを検査する方法である。動揺性の程度と方向性が損傷の部位と程度に相関することから、この検査法は有用なものとなっている。しかし、術者の主観が診断基準に反映するため医者の熟練を要する。また、定量的な診断は困難である。本研究課題においては、こうした従来の動揺性検査法の曖昧さをなくして、客観的、定量的な診断を可能とするため、診断装置として多関節ロボットを導入することを目的とした。はじめに、イヌ膝関節を試験片とし、一般に市販されている多関節ロボット(RM-501)を用いて動揺性検査を試み、ロボットの位置精度が荷重やモーメントによってどの程度の影響を受けるかを調べた。その結果、内外反方向の試験では十分な位置精度を保つことができること。および前後方向の動揺性試験では保つことができないことを明らかにした。この結果をもとに、より大きな荷重を支えられる(担荷能力の大きな)ロボットを設計した。全体のサイズもヒトの膝に合致する大きさとした。荷重のセンシングは、ロボットのハンド部と患者の下腿部の間に6軸力センサを挟んで電機的に行った。得られたデータをAD変換して、制御指令としてロボットに与えた変位のデータとともにマイクロコンピュータによってフロッピィディスクに格納した。試作したロボットを用いたヒト膝関節の靱おび損傷診断を試行した。専用の治具を用いて被験者の大腿部を固定台に、下腿部をロボットのハンド部に固定した。その結果、先のイヌ膝関節を用いた予備実験で問題となった前後方向の動揺性試験での位置精度の不足は見られなかった。本研究課題のもとでの研究により、膝関節靱帯損傷診断装置として用いることのできる垂直多関節ロボットの作製を完了できた。イヌ膝関節を試験片とし、一般に市販されている多関節ロボットを用いて動揺性測定の予備実験を行い、ロボットの位置精度が荷重やモーメントにどのように影響されるかを調べた。また、動物膝関節に前十字靱帯の損傷を作成し、前方後方引き出し試験による動揺性測定を試みた。その結果、内外反方向の試験では、十分な位置精度が保たれること、および、前後方向の引き出し試験では変位が大きくなるに従い、位置精度が維持できなくなることを明かにした。また、位置精度の低下の理由は、前後方向では直達力によって変位を与えねばならず、使用したロボットの担荷能力が不足したためと考えられた。この結果をもとに、ヒトのスケールに一致した市販の産業用ロボットをプロトタイプモデルとした垂直多関節ロボットの設計製作を行った。主な改良点は、動作速度の低減と担荷能力の増加、動作自由度を1増やして6とする点であった。荷重のセンシングは、ロボットのハンド部と患者の下腿部の間に6軸力センサを挟んで電気的に行った。得られたデータは、AD変換して制御指令をロボットに与えたコンピュータに同時に格納し、ロボットに与えた変位のデータとともにフロッピーディスクに保存した。被験者を乗せ、膝関節を固定するための専用の固定台を新規設計製作し、試作した垂直多関節ロボットを用いたヒト膝関節の靱帯損傷診断を試行した。

すなわち、試作したロボットの担荷能力は、ヒト膝関節動揺性試験に用いるのに十分な大きさであることが明かとなった。本研究課題のもとでの研究により、膝関節靱帯損傷診断装置として用いることのできる垂直多関節ロボットの設計製作が完了できた。
同族中小企業における経営の移転と財務パフォーマンスの関係性

本研究は、中小企業の中でも所有と経営が一致するような同族企業に焦点を当て、「財産および経営の承継」である事業承継の中でも特に「経営の承継」、つまり経営権と実務執行の移転問題を考察の対象とする。その上で、従来関心が寄せられてこなかった、経営の移転と企業業績をはじめとする様々な財務パフォーマンスとの関係性を明らかにしようとするものである。これにより、わが国の中小企業の多くを占める同族企業の事業承継における財務管理機能の役割と課題を抽出し、企業を継続的に発展させるための要因と望ましい姿を明らかにすることを目的としている。補助事業期間延長申請を行って承認いただいた平成30年度は、これまで行ってきた欧米を中心とする先行研究のレビュー、国内外の研究者との意見交換を引き続き行いながら、それらを集約してまとめの作業を実施した。また、平成29年度に着手したM&A(企業の合併・買収)における企業価値評価が「財産の承継」および「経営の承継」に与える影響についてもこれまでの知見を集約する作業を行った。加えて、本研究の到達点である経営の移転と企業業績をはじめとする様々な財務パフォーマンスとの関係性を明らかにするために、「経営の承継」を行った複数の中小企業経営者からヒアリングを行って実態の把握に努めた。ただし、こうしたテキストデータについては個別のテーマそれぞれで蓄積はされつつあるものの、十分な分析ができておらず、今後の課題となっている。これにより、わが国中小企業の多くを占める同族企業の事業承継における財務管理機能の役割と課題を抽出し、企業を継続的に発展させるための要因と望ましい姿を明らかにすることを目的としている。本年度においては、所有と経営が一致する同族企業の経営権および実務執行の移転と、それにともなう財務パフォーマンスとの関係性について、理論的側面からの検討を加えることに注力した。具体的にはわが国および欧米の先行研究をレビューする中で、事業承継と企業業績の関係性を説明するための方法論として相応しいモデルの抽出を試みてきた。「同族企業」(Family Business)の範疇に比較的大規模で財務内容を公開している企業が含まれる欧米に比べて、わが国の場合は小規模で非公開の企業が多いことは周知の事実であるが、それゆえに研究実績が豊富な欧米の既存研究を丹念にレビューすることでわが国企業への応用可能性を探ってきたのである。本来ならこうした作業を通して理論的枠組みの構築を行い、事業の継続性や同族企業特有の財務管理の諸問題について仮説を設定する予定であった。さらに、その検証を目的としたインタビューを計画していた。本年度については、学会において研究成果の一部を発表して関心領域が近い研究者との議論を行ってきたものの、本年度前半以降の体調不良により計画通りの研究が行えず、当初予定していたインタビュー調査が実施できていない。平成24年度26年度の研究課題「中小企業の継続性とオーナーシップマネジメントに関する財務論的研究」(基盤研究(C)24530430)の研究成果として平成27年度中に論文「Corporate Succession and Performance in Japanese Small and Medium Enterprises」を発表し、この内容についての意見交換を通して本研究の問題意識の更なる精緻化を行ってきた。また、並行する形で、所有と経営が一致する同族企業の経営権および実務執行の移転と、それにともなう財務パフォーマンスとの関係性について、わが国および欧米の先行研究をレビューする中で、事業承継と企業業績の関係性を説明するための方法論として相応しいモデルの抽出を試みてきた。しかしながら、当初予定していた仮設構築と検証のためのインタビュー調査、中小企業支援団体との交流を深めた上での実態把握などについては、十分に実施できていない。本年度においても引き続き、所有と経営が一致する同族企業の経営権および実務執行の移転と、それにともなう財務パフォーマンスとの関係性について、理論的側面からの検討を加えてきた。具体的にはわが国および欧米の先行研究をレビューするとともに、スタンフォード大学及びサンタクララ大学を訪問して資料の収集に努めるとともに、それぞれの大学関係者と経営の移転や事業承継について意見交換を行った。特にサンタクララ大学においては同校経営大学院マネジメント部門のM.L. Correia氏とシリコンバレー地区のスタートアップ企業に関する経営の移転問題について意見交換を行い、同族企業を考察する上で有意義な示唆を得ることができた。こうした作業を通じて情報の収集は進んできているものの、本来これらの過程を通じて行うべき理論的枠組みの構築や仮説の設定などが十分に行えておらず、29年度において集中的に実施しなければならない課題となっている。平成24年度26年度の研究課題