hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
腎疾患における小胞体ストレス応答の意義の解明と新規治療戦略の開発

今年度はその詳細なメカニズムに関する更なる解析を行い、小胞体ストレスによるC/EBPβの誘導には特定の小胞体ストレス応答系(UPR)が関与すること、A20の誘導には小胞体ストレスによる早期一過的なNF-κBの活性化が寄与すること、またTRAF2の減少にER stress-associated degradation(ubiquitin-proteasome系)を介したタンパク分解系が寄与することを証明した。また、TNF-αによるNF-κBの活性化にはAktのリン酸化が介在し、そのリン酸化を小胞体ストレスが抑制すること、さらにその過程にATF6経路を介したmTORC1の活性化が関与していることを明らかにした。こうした小胞体ストレス応答の“Light Side"を明らかにする一方、小胞体ストレスがPERK、IRE1経路を介して、MAPキナーゼ系のリン酸化を誘導すること、つまり組織障害における“Dark Side"の一端も明らかにすることができた。これらの研究成果は、4報の原著論文として報告を行った。(J Am Soc Nephrol 21: 73-81, 2010. Biochem Biophys Res Commun 397: 176-180, 2010. Mol Cell Biol 31: 1710-1718, 2011. Toxicol Sci 120: 79-86, 2011).平成20年度から22年度にかけて行った小胞体ストレス応答(UPR)の"Light Side"に関する検討に加え、本年度はその"Dark Side"に係る新規シグナル伝達系、特にmTORの役割に焦点を当てた検討を行うとともに、細胞障害性UPRを修飾し、小胞体ストレスによる組織細胞障害を緩和する物質に関する検討を行った。1.小胞体ストレスによる組織細胞障害、特にAkt,mTOR等の役割についての解析細胞応答に多彩な機能を有するAktとmTORが、小胞体ストレスによる細胞死に重要な役割を果たすことを明らかにした。具体的には、小胞体ストレスはmTORC1の活性化を介してAktのリン酸化を抑制し、この経路が選択的にIRE1-JNK経路を活性化することで細胞死を引き起こすことを、in vitro,in vivoの系で明らかにした。このことは、mTORC1の阻害薬が小胞体ストレス関連疾患の治療に有用であることを示唆する。以上の知見は、『Cell Death & Differentiation』(Kato etal.2012)に論文として発表した。2.細胞障害性UPRを修飾し、小胞体ストレスによる組織障害を緩和する物質に関する検討adenosine類縁体である3'-deoxyadenosine(3DA)が、小胞体ストレスによる細胞障害を抑制することを見出した。この物質は、UPR主要3経路のうちATF6経路及びIRE1経路を阻害したが、PERKの早期活性化には影響を与えず、その下流のelF2αの活性化はむしろ増強することで、翻訳抑制によるストレスの緩和を誘導した。このことは、3DAが小胞体ストレス関連疾患の治療に有用であることを示唆する。以上の知見は、『Cell Death & Differentiation』(Kitamura et al.2011)に論文として発表した。平成20年度から23年度にかけ、炎症応答における小胞体ストレスの役割、そのLight SideとDark Sideに係る新規シグナル伝達系を解明してきた。
微小重力衝突現象シミュレーターの開発

本研究では、小惑星表面を構成するレゴリス、ボルダーの粉粒体的性質を微小重力下で実験するための「微小重力衝突現象シミュレーター」の開発を検討した。そのために、1粉粒体の流動により発生する抵抗力の計測方法と2衝突振動とクレーター掘削過程の観測方法の開発を1G下で行った。その結果、1ではインパクターによる衝突加速度の計測が有効であり、2では加速度計による衝突振動の計測とイジェクタ粒子の速度分布の計測が有効であることがわかった。また、1と2の開発を通して、粉粒体の1G下での動的性質を明らかにすることができた。本研究の目的は,まず,天体表面における微小重力を再現し,その環境下で粉粒体の流動的性質とクレーター形成過程を研究するために微小重力シミュレーターを開発することである.そのために本シミュレーターでは衝突実験システムと応力計測システムを構築する.平成25年度は応力計測システムを作成し,その装置を用いた1Gでの衝突実験を行った.標的には,クレーター形成過程に対する粒子形状の影響を調べるため,粒径500μmの石英砂及び同サイズのガラスビーズを用いた.ガラス球,アルミナ球の弾丸を用いて速度2m/sから70m/sで衝突実験を行い,クレーター形成時の応力測定を行った.弾丸の運動エネギーとクレーターサイズの関係から,ガラスビーズ標的の方が系統的に大きなクレーターが形成されることが確認された.一方,観測した衝突応力履歴から求めた最高衝突応力とその持続時間の積でクレーターサイズを整理するとこの系統的な差は,ほぼ解消した.この原因を調べるため,衝突応力の発生・伝播の素過程をより詳しく調べた.まず.粒子層の厚みを変えて衝突応力の距離減衰を計測した.その結果,衝突応力は,距離の11.5乗で減衰することがわかった.また,クレーターサイズがほぼ同じ時の衝突応力のプロファイルを観測すると,砂の厚みが同じ場合,砂の種類により極端に異なる応力履歴が観察された.500μmのガラスビーズ標的では,同じ粒径の石英砂標的に比べて衝突応力の持続時間が5倍程度長く,最高応力が23倍小さくなった.次に,衝突応力の持続時間を決めるメカニズムを確定するため,それぞれの標的への弾丸貫入実験を行い,貫入距離の時間変化をレーザー変位計により調べた.その結果,衝突応力の持続時間がほぼ潜り込み時間と一致することがわかった.本研究の目的は,天体表面における微小重力を再現し,その環境下で粉粒体の流動的性質とクレーター形成過程を研究するための微小重力シミュレーターを開発することである.そのために本シミュレーターでは,まず,衝突実験システムと応力・加速度計測システムを構築する.そして,このシステムを微小重力再現装置に組み込むことにする.平成26年度は平成25年度に完成した応力計測システムを改良して,衝突励起振動を多地点で計測できるシステムを構築した.このシステムを神戸大の縦型衝突装置と宇宙科学研究所の縦型2段式軽ガス衝突装置に設置して,1Gでの衝突実験における計測データを蓄積した.標的には,昨年度と同様に粒径500μmの石英砂を主に用いたが,衝突速度を飛躍的に高速化して実験を行った.直径4.7mmのポリカーボネート弾丸を用いて衝突速度0.2-7km/sでクレーター形成実験を行い,衝突時に発生する衝突励起振動を多地点で計測し,その加速度が距離と伴に減衰する様子を調べた.この結果,当初計画していた小型チャンバーに小型衝突ユニットを組み込んだシステムを自由落下させるよりも,大型の真空チャンバー内に標的容器を落下させるシステムを組み込んだ方が現実的であり,また,衝突条件も広くとれることがわかった.本研究の目的は,天体表面における微小重力を再現し,その環境下で粉粒体の流動的性質とクレーター形成過程を研究するための微小重力シミュレーターを開発することである.平成26年度に行った実験の結果、本シミュレーターは、大型の真空チャンバー内で標的容器を落下させるシステムが現実的であることがわかった。また昨年度は、このシステムを利用した衝突励起振動の計測システムの実現性について検討を行った。平成27年度は、さらに微小重力下における本シミュレーターの応用可能性について検討を進めるために、ペネトレーターを用いたレゴリス物性計測法の開発を行った。模擬レゴリス層としては、小天体上で予想される様々な状態を仮定して、粒径(100μm1cn)、形状、構成物質(石英、ガラス、凝灰岩等)が異なる粉粒体層を準備した。この粉粒体層に加速度計を設置した円筒型ペネトレーターやMEM型三軸加速度計を内蔵した球型ペネトレーターを様々な速度で落下させ、レゴリス層に貫入する時の加速度(貫入抵抗)を計測した。その結果、取得した加速度波形の解析から、レゴリス層の力学的な特徴を抵抗則として表すことが可能であり、さらにレゴリス層種類の特定や小天体環境における微小重力の影響を調べることが可能であることがわかった。この結果、今回開発を検討した微小重力シミュレーターでは、レゴリス層の衝突励起振動と貫入抵抗の計測が可能であり、その重力加速度依存性を調べることができることがわかった。

その結果、1ではインパクターによる衝突加速度の計測が有効であり、2では加速度計による衝突振動の計測とイジェクタ粒子の速度分布の計測が有効であることがわかった。また、1と2の開発を通して、粉粒体の1G下での動的性質を明らかにすることができた。今年度は,微小重力シミュレーターの主要部分である落下制御部と小型衝突ユニットを完成させる予定であったが,昨年度から行っている1Gでの実験結果から,当初の設計では問題があることがわかった.すなわち小型衝突ユニットでは弾丸径が3mmと小さく,さらに衝突速度が1020 m/sに限られるため,衝突で形成されるクレーターは非常に小さい.そのため衝突で発生する応力や衝突励起振動を計測することが,現状のシステムでは困難であることがわかった.そこで既存の縦型衝突装置と大型真空チャンバーを利用して,実験装置を再設計することにした.この新しい設計では,真空チャンバー内に自由落下装置を設置し,既存の衝突装置と連動して標的容器を自由落下させる.神戸大にある縦型衝突装置を利用したシステムでは速度100-200m/sでの衝突が可能であり,この自由落下装置を宇宙科学研究所に持ち込めば1-7km/sでの衝突実験も可能となる.惑星科学平成27年度は、平成25-26年度に完成できなかった落下機構を再設計して完成させる.そして既存の衝突実験装置と大型真空チャンバーを利用した装置として微小重力シミュレーターを完成させる.再設計により小型衝突ユニットの製作は必要なくなったが,既存の真空チャンバーに合わせた標的容器の製作が必要となった.さらに昨年度までに準備していた自由落下装置用のフレームも使用できないので,チャンバーに合わせて再製作することになる.衝突過程を高速デジタルビデオで撮影するための光学系とトリガーシステムは,既存の装置を流用することにする.再製作する標的容器は,予測されるクレーター径より充分大きな(直径20cm以上)ものを用意する.標的容器が自由落下している間に弾丸が試料表面に着弾できるようにタイミングをとる.このタイミングは既存のレーザー速度計を弾丸が通過した信号を用いて調整する.標的容器には自由落下による重力変化をモニターするための微小重力加速度計と衝突振動を計測するための衝撃加速度計を設置する.また,チャンバー内の限られた高さ(40cm)を自由落下させるための落下装置及びフレームを製作する.本年度は完成した微小重力シミュレーターを用いて1G-0.1Gの間で衝突実験を行い,衝突励起振動の伝播過程に対する微小重力の影響を調べることにする.微小重力シミュレーターの主要部分である落下制御部を完成することはできなかったが,落下装置本体と応力計測システムを完成することができた.さらにこのシステムを用いて,1G下での衝突実験を行い,標的を構成する粒子形状が及ぼす衝突応力の発生とその伝播過程への影響を定量化することができた.これは,今後の微小重力下での実験のレファレンスとなるべき結果である.また,粉粒体への貫入抵抗を計測する方法として,新たにレーザー変位計を用いた手法が有効であることを確認した.この方法は,次年度からの装置開発に取り入れることにした.一方,最も重要な落下制御部は,支持フレームを準備したのみであるので,次年度は落下制御部の作製と試運転を行っていく予定である.自由落下機構を再設計したので,小型衝突ユニットの作製を行わなかった.一方,落下機構のフレームを再製作する必要が生じた.
藻場造成とその適種選定に関する研究

藻場の造成を図るにはまず種苗を入手する必要があるが、本研究では自然状態での卵放出がどのように行われているかを福岡県産の11種について観察した。また幼胚以外の栄養繁殖の可能性についても検討した。アカモクは重要な構成種であるが、従来稀産種とされてきたシダモクと交替しているように思われたので、シダモクの分布を調べるとともに、両種の交配実験を行った。1.福岡県での11種における卵放出は、大潮周期とは無関係であること、各種類は比較的固定した順序で成熟していることなどが明かとなった。2.瀬戸内海におけるシダモクは、大阪府岬から山口県八代島までの間に、場所によってはアカモクを排除し、遷移がおこったとも思われるほどに繁殖していることが分った。3.アカモクトシダモクの差は、気胞の外形及び雌雄性の2点である。しかしどちらの点でも両者の中間的な個体が採集された。雌雄同株のアカモクは従来珍品であるにもかかわらず、比較的多量に生育する場所のあることが分かった。広島県向島のある地点では、アカモクとシダモクの群落のうち24%がアカモクの雌雄同株個体であった。4.アカモクの卵とシダモクの精子との交配実験を行ったところ、両種でそれぞれ報告されているものと同じ経過をとって幼胚が形成された。現在気胞の形成が始まったところである。5.秋に成熟するアカモクは、岡山県牛窓から山口県佐波島までの範囲で生育を確かめた。しかし牛窓も佐波島も、生殖器床の形成が確認できなかったので、この点は今後の調査が必要である。6.この種の4種(ヤツマタモク、ヨレモク、アカモク(春型及び秋型)、ジョロモク)における藻体付着器の断片を用いた再生実験では、出現率に差はみられたけれどもすべての種類で再生直立体が生じた。本研究は当初大別して次の3つの事項を内容として設定した。すなわち、採苗の立場からのナラサモ、エゾノネジモクにおける卵放出の周期性の検討、秋に成熟するアカモク個体群の生育地ー分布範囲の確認、栄養繁殖による個体維持の可能性である。また研究の途上で明らかとなった雌雄同株のアカモク個体及びその群落についても調査を進めた。1、ナラサモ、エゾノネジモクの両種は外海に面した波浪の影響を著しく受ける場所に生育するため従来全く対象にされなかったものであるが、福岡県津屋崎では5月から6月にかけて卵を放出すること、放出に周期性はないこと等が明らかとなった。また未受精卵が非常に多い結果が得られたが、今年度の特徴か、例年の現象かについては次年度も観察を続ける予定である。2、秋に成熟するアカモクの分布については、西部では山口県竹島で生育を確認した。東部では岡山県牛窓で、その間に広島県呉市、厳島、香川県庵治で新たに確認した。大阪湾岸ではまだである。牛窓が東の限果か否かについては次年度も調査を続ける予定である。3、栄養繁殖については、秋成熟型のアカモクを用い、付着器及び茎を種々の大きさ、位置で切出し、試験管で培養して再生枝が生ずるか否かを調べた。その結果、切断しても再生枝は生ずることがわかった。このことは断片を種苗として用いることの可能性を示すものである。4、アカモクは春季の藻場の構成種として大きな役割を果たしている。

シダモクとは完全な別種であるが、1991年の調査中、広島県向島で、外形も雌雄性も両種の中間型を示す個体が多量に生育しているのが明らかとなった。シダモクは従来稀産種と考えられていたが、10数年前より繁殖が目立ってきた種類なので、この種についても分布、雌雄性の観点から研究を行う。褐藻ホンダワラ類のアカモクは、藻場構成種として重要な種類であるが、従来稀産とされていたシダモクと競合する様相を示している。今回の研究ではシダモクの分布範囲を調べ、かつ両種の交配実験を行うとともに、種苗として藻体断片を用いる方法について検討を行った。1)瀬戸内海におけるシダモクの分布は従来5ケ所しか報告がなかったが、今回の調査により予想以上に多く生育していることが分った。大阪府岬から山口県八代島までの間に、場所によってはアカモクを排除し、遷移がおこったとも思われるほどに繁殖していた。特に大阪府岬、岡山県牛窓、香川県小豆島、広島県竹原ではいちじるしく、アカモクに替って純群落を形成している場所もあった。2)アカモクとシダモクの差は、気胞の外形及び雌雄性の2点である。しかしどちらの点でも両者の中間的な個体が採集された。雌雄同株のアカモクは従来珍品であったにもかかわらず、比較的多量に生育する場所のあることが分った。広島県向島のある地点では、アカモクとシダモクの群落のうち24%がアカモクの雌雄同株個体であった。3)アカモクの卵とシダモクの精子との交配実験を行ったところ、両種でそれぞれ報告されているものと同じ経過をとって幼胚が形成された。現在気胞の形成が始まったところである。4)秋に成熟するアカモクは、岡山県牛窓から山口県佐波島までの範囲で生育を確かめた。しかし牛窓も佐波島も、生殖器床の形成が確認できなかったので、この点は今後の調査が必要である。5)この類の4種(ヤツマタモク、ヨレモク、アカモク(春型及び秋型)、ジョロモク)における藻体付着器の断片を用いた再生実験では、出現率に差はみられたけれどもすべての種類で再生直立体が生じた。
ペスチウイルスの持続感染及び病態形成メカニズムの解明

牛ウイルス性下痢ウイルス(BVDV)による持続感染は発育遅延や免疫抑制を引き起こし、養牛農家の経営上大きな問題となっている。これまでの研究により、持続感染牛の臨床徴候や先天性免疫反応レベルはウイルスRNAの蓄積量と正の相関関係にあることが判明し(Yamane et al.,2008,Vet.Microbiol.)、また、マイクロアレイを用いた解析により、ウイルス複製によって誘導されるアポトーシスは細胞型によって異なる経路を介していることが明らかとなった。線維芽細胞は細胞病原性BVDV感染によりインターフェロン依存経路が顕著に誘導されるが、上皮系細胞においては小胞体ストレス経路が強く誘導されていることを報告した(Yamane et al.,Virus Res.in press)。このように、これまでウイルス複製によって誘導される細胞応答をin vitro及びin vivoにおいて明らかとしてきたが、効率的なウイルス複製に必要な宿主-ウイルス間相互作用を解明するため、昨年度同定したスフィンゴシンキナーゼ1(SphK1)とウイルス非構造タンパクNS3との相互作用の複製における意義について解析を進めた。NS3はSphK1活性を抑制し、それがウイルス複製の増強につながることまで昨年度報告したが、更なる解析により、SphK1活性抑制によってもたらされるスフィンゴ脂質組成の変化がウイルス複製の足場形成を促進することに繋がることが示された。また、生存因子であるSphK1の抑制はアポトーシス誘導の増強にも深く関与していることが明らかとなった。以上の結果から、NS3はセリンプロテアーゼやRNAヘリガーゼとしての機能のみならず、SphK活性の抑制を介してスフィンゴ脂質組成を制御し、ウイルス複製及び細胞病原性発現に深く関与していることが示された(Yamane et al.,J.Biol.Chem.in press)。牛ウイルス性下痢ウイルス(BVDV)は、持続感染することで養牛農家の経営上、大きな問題となっている病原体である。持続感染状態の末、やがて致死的な粘膜病を発症するが、病態形成に至るメカニズムは不明である。BVDVの病原性や持続感染に関わる要因として、アポトーシスを介した細胞病原性があげられる。これまでに、初代培養細胞においてはウイルスRNA複製がアポトーシス誘導に深く関与しており、RNA複製に伴う2本鎖RNAの蓄積がアポトーシスの引き金であることを明らかにした。このin vitroで得られた結果を元に、BVDV持続感染牛におけるアポトーシス関連宿主因子の発現解析を試みた。免疫機構の恒常性維持に重要な器官である脾臓に着目し、宿主因子の転写量をリアルタイムPCRにより定量した結果、in vitroにおいて誘導が見られた5つの因子の内、1つを除く全ての因子が有意に誘導されていた。回帰分析の結果、ウイルスRNAの蓄積量がそれらの宿主因子の転写量と正の相関関係にあったことから、ウイルスRNA複製に伴う2本鎖RNAの蓄積がin vivoにおいても先天性免疫反応の誘導に関与している可能性が強く示唆された。更に、効率的なウイルスRNA複製に関わる宿主因子を網羅的に探索するため、酵母2ハイブリッド法を用いてRNA複製に関与する非構造タンパクと会合する宿主因子を牛腎臓由来株化細胞(MDBK細胞)由来のcDNAライブラリからスクリーニングを試みた。その結果、腫瘍遺伝子の1つが見出され、共免疫沈降により両者の特異的な結合が明らかとなった。現在、MDBK細胞においてBVDV感染によって誘導される宿主因子をDNAマイクロアレイ解析により網羅的に探索中であるのと同時に、この新たに見出されたウイルスー宿主間相互作用がウイルスRNA複製に与える影響の解析を進行中である。牛ウイルス性下痢ウイルスによる持続感染は発育遅延や免疫抑制を引き起こし、養牛農家の経営上大きな問題となっている。これまでの研究により、持続感染牛の臨床徴候や先天性免疫反応レベルはウイルスRNAの蓄積量と正の相関関係にあることが判明した(Yamane, et. al., 2007,Vet.Microbiol.)。アポトーシス誘導は感染牛の病態形成に深く関わっていることが考えられることから、ウイルス感染細胞のアポトーシス経路の解析を2種類の細胞を用いて行った。細胞病原性(cp)株と非細胞病原性(ncp)株どちらの感染によっても細胞死を誘導する特殊な性質を持つMDBK細胞とncp株が細胞病原性を示さない初代培養細胞(BFM細胞)におけるシグナル伝達の違いをマイクロアレイ解析によって調べた結果、MDBK細胞では小胞体ストレス経路が、BFM細胞ではインターフェロン経路が強く誘導されていた。このことは、ウイルス感染によって誘導されるアポトーシスは細胞集団によって異なる経路を介すことを示すものであり、ncp株感染に対する両細胞の振る舞いの違いを明らかとする重要な手掛かりとなると考えられた。ウイルス非構造(NS)タンパクによる宿主因子制御機構の解析については、これまでイースト2-ハイブリッド法によりNS3と結合する因子を探索し、細胞の生存や増殖、癌化に関わるスフィンゴシンキナーゼ1(SphK1)を同定した。組換え精製NS3タンパクを作出し、in vitroキナーゼアッセイを行った結果、NS3は濃度依存的にSphK1活性を抑制することが判明し、更に、SphK阻害剤やドミナントネガティブ変異体によるSphK活性の抑制はウイルス複製の増強に繋がることが明らかとなり、NS3はセリンプロテアーゼやRNAヘリカーゼとしての機能のみならず、SphK活性の制御によってもウイルス複製に貢献していることが示唆された。

これまでの研究により、持続感染牛の臨床徴候や先天性免疫反応レベルはウイルスRNAの蓄積量と正の相関関係にあることが判明し(Yamane et al.,2008,Vet.Microbiol.)、また、マイクロアレイを用いた解析により、ウイルス複製によって誘導されるアポトーシスは細胞型によって異なる経路を介していることが明らかとなった。線維芽細胞は細胞病原性BVDV感染によりインターフェロン依存経路が顕著に誘導されるが、上皮系細胞においては小胞体ストレス経路が強く誘導されていることを報告した(Yamane et al.,Virus Res.in press)。このように、これまでウイルス複製によって誘導される細胞応答をin vitro及びin vivoにおいて明らかとしてきたが、効率的なウイルス複製に必要な宿主-ウイルス間相互作用を解明するため、昨年度同定したスフィンゴシンキナーゼ1(SphK1)とウイルス非構造タンパクNS3との相互作用の複製における意義について解析を進めた。NS3はSphK1活性を抑制し、それがウイルス複製の増強につながることまで昨年度報告したが、更なる解析により、SphK1活性抑制によってもたらされるスフィンゴ脂質組成の変化がウイルス複製の足場形成を促進することに繋がることが示された。また、生存因子であるSphK1の抑制はアポトーシス誘導の増強にも深く関与していることが明らかとなった。以上の結果から、NS3はセリンプロテアーゼやRNAヘリガーゼとしての機能のみならず、SphK活性の抑制を介してスフィンゴ脂質組成を制御し、ウイルス複製及び細胞病原性発現に深く関与していることが示された(Yamane et al.,J.Biol.Chem.in press)。
Program design and social insurance in dynamic models of labor supply, saving and human capital formation

このプロジェクトでは、認知功績生産機能と共同して、母性労働供給と育児利用の動的で離散的な選択モデルを開発し、推定しました。推定モデルは、将来の政策について政策立案者に通知するという目標を掲げて、反発的な育児政策をシミュレートするために使用された。ヘッドスタートの実験的なインパクト推定値を再現するために、非実験的推定量の能力を調べた。結果は、推定量の選択よりも、推定量が結果変数の領域に対してより敏感であることを示唆した。しかし、一般的に、観察されない異質性に対処した推定値はよりよく実行され、結果は回帰対傾向スコア推定値に対してあまり敏感ではなかった。2017年度において、研究資金は、フィラデルフィア、ペンシルバニア、オスロの共同研究者の訪問、書籍などの必要な資料の購入、RAの雇用、そして、学会・ワークショップ参加のための渡航に使用される予定である。特に今年度は、2本の論文の修正および再提出を完了させる必要があり、重要な年である。。また、2017年より論文投稿を開始できるよう、最適な保険政策に関する研究も大幅な進捗が見られることが期待される。社会科学
分泌型14-3-3sigmaの生物活性解明と臨床応用

14-3-3sigmaは細胞外に分泌され,CLSPに結合し、その機能を抑制する。本研究では、まず、14-3-3sigmaのdeletion analysisを行ない、N末82アミノ酸がCLSPとの結合に重要であることを見出した。次に、細胞外分泌のメカニズムの検討を行い、その分泌メカニズムはunconventional pathwayであることを確定させた。Unconventional pathwayのうち、CUPS経路を構成するGRASP1および2が分泌に関係するか否かの検討を行ったが、アッセイ系に問題があり、現在のところ結論が出ていない。まず、14-3-3sigmaのdeletion analysisを行い、CLSPとの結合に必要な領域を同定する作業を行なった。その結果、N末82アミノ酸を欠失させるとCLSPと結合しなくなった。そして、細胞外分泌能力はN末82アミノ酸を欠失により、著明に減弱した。従って、N末82アミノ酸が細胞外分泌に重要であると結論された。現在,さらにどの部分が分泌に必須か検討中である。また、分泌14-3-3sigmaのCLSP以外の標的の探索のため、glutathione beadsに固相化されたGS-14-3-3sigmaを作成したが、特異的に結合する分泌蛋白質はCLSP以外には得られなかった。さらに、驚くべきことに。本年中の検討により新たに、14-3-3sigma以外の他の14-3-3分子種も分泌される可能性を見いだした。このことを確認する研究とその生理学的意義を検討する基礎的研究の前半を中心的に行なった。現在まで知られているUncoventinal secretion pathway経路に関する知見は限定的であるため、主に分泌に必要な14-3-3sigmaの領域を明らかにし、その情報をもとに経路を推測するという手法を中心として検討した。transfectionで遺伝子を発現させるとartificialな細胞死が起こり、その結果、細胞外に分泌される様に見える場合があり、一部の実験ではtransfectionではなくstable transformantにする必要性が生じたため、その作成に時間を要している。また、本年度中の実験により、14-3-3sigma以外の14-3-3分子種も分泌されることを見いだしたため、sigmaのみならず、betaその他の分子種の情報などをも検討する必要性が生じた。このため、実際の分子機序解明研究が遅れている。Transient tansfectionにより生じる細胞毒性により死滅した細胞から細胞外に放出された14-3-3タンパク質が、14-3-3の細胞外分泌アッセイ結果に多大な影響をあたえるため、Transient transfectionの系を断念した。代わりに、F11神経細胞を用いて、14-3-3遺伝子を継続的に発現するstable transformantを樹立した。このアッセイ系を駆使して、本年度はまず14-3-3sigmaに加えて、14-4-4 beta, etaなどの14-3-3分子種はすべて分泌されるタンパク質であることを確認した。次に、これら他の14-3-3分子が14-3-3sigmaと同様な機能を持つかどうか検討した。その結果、CLSPの細胞死抑制活性を抑制する分子であることが判明した。さらに、上記のアッセイ系を用いて、代表的な分子14-3-3sigmaの細胞外分泌のメカニズムの解析を開始した。まずこのタンパク質の分泌がconventional pathwayあるいはunconventional pathwayかどうかを検討するため、conventional pathway経路を抑制するBrefendinを作用させたところ抑制しなかった。この結果は14-3-3sigmaの分泌はuncoventional secretion pathwayがメインの分泌経路であることを支持する。現在、uncoventional secretion pathwayの代表であるCUPSの中心的な構成分子であるGraspをノックダウンするための有効なsIRNAを作製し、14-3-3sigmaの細胞外分泌に対するGRASPノックダウンの影響を検討中である。第三に、初年度の検討により、14-3-3sigma以外の14-3-3分子種も分泌されることを見いだしたため、sigma以外のbetaその他の14-3-3分子種も同時に解析する必要が生じた。このため、これら分子のstable transformantも同時に作製し生物学的性質を解析する必要性が生じた。14-3-3sigmaあるいはepsilonあるいはgammaの分泌のアッセイ系として、前年度に問題の生じたtransient transfecstionによるモデル系のかわりに、同タンパク質を恒常的に高発現するF11細胞のstable transformantを作製した。まず、これら分子の分泌経路がconventional pathwayでないことを確認するため、Brefendinを作用させたところまったく抑制できなかった。従って14-3-3タンパク質の分泌経路はunconventional secretion pathwayがメインの経路であると結論した。次に、14-3-3sigmaのC末にNanolucタグをfusionさせ、細胞外に分泌された14-3-3sigma-nanolucの量を測定する系を作製して、unconventional secretion pathwayのひとつであるCUPSを構成するGRASP1およびGRASP2をHela細胞、HEK293細胞に高発現させ、14-3-3sigmaの分泌にいかなる変化が生じるか検討した。その結果、一定した結果が得られず、結論がでなかった。また、逆に内在性のGRASP1およびGRASP2の発現をsiRNAによりノックダウンし、引き起こされる変化をHela細胞、HEK293細胞、U2OS細胞で観察したところ、やはり細胞によって引き起こされる変化は一定していなかった。

分泌アッセイに関して、高発現実験やsiRNAを用いたloss-of-functionの試験は細胞によって出る影響が異なる可能性が高い。今後更なる検討を加え、最適のアッセイ系を構築して、更なる検討を行う。14-3-3sigmaは細胞外に分泌され,CLSPに結合し、その機能を抑制する。本研究では、まず、14-3-3sigmaのdeletion analysisを行ない、N末82アミノ酸がCLSPとの結合に重要であることを見出した。次に、細胞外分泌のメカニズムの検討を行い、その分泌メカニズムはunconventional pathwayであることを確定させた。Unconventional pathwayのうち、CUPS経路を構成するGRASP1および2が分泌に関係するか否かの検討を行ったが、アッセイ系に問題があり、現在のところ結論が出ていない。14-3-3sigmaの分泌に必須なアミノ酸領域を同定する作業を優先させ、領域が同定されれば、その情報に基づいて、経路を推測しさらに検討を進める。また、14-3-3sigma以外の14-3-3分子種がsigmaと同様に分泌されることを見いだした。sigmaと同時並行で分泌機序を検討する。現在までに報告されているUnconventinal secretion pathwayを個別に検討する。今後、14-3-3sigmaあるいはその他のいくつかの14-3-3分子種のstable transformantを用いて、現在までに報告されているUnconventinal secretion pathwayのうち、CUPSの径路を中心として検討する。薬理学一部の実験では遺伝子発現実験をtransfectionではなくstable transformantで行なう必要性が生じ、その作成に時間を要している。また、14-3-3sigma以外の14-3-3分子種も分泌されることを見いだしたため、sigmaのみならず、etaその他の分子種の情報などをも参考とする必要性が生じた。このため、実際の分子機序解明研究が遅れている。これらの理由などにより、実験の進捗が遅れた。研究実績で述べたように、14-3-3タンパク質stable transformantの作成、Grasp siRNA作成、14-3-3sigma以外の14-3-3分子種のstable transformantの作成、に時間がかかったため実験が遅れた。小額であり、今後遅れて実施する実験に使用する。現在までの研究成果として整った実験系を駆使して、今後、当初予定していたメカニズム解析を行なう。
能の比較文学的研究 -主に外国文学及び現代演劇への影響について

本研究は、日本の古典芸能である能の比較文学的広がり、特に海外における能の翻訳・紹介及び受容の様相を調べる一方、近年の能を踏まえた実験劇を検討することによって、現代演劇と能との接点を探ろうとしたものである。当初能の英訳に関する基礎的な文献の収集を計画していたが入手できないものが多かったため専ら文献複写による資料収集が多くなった。今後これらの資料に基づき、能の翻訳の際、どのような作品に関心が集中していたか、また能のどういう側面がとりわけ浮き彫りにされていたがなどといった問題を分析し、海外における能理解の諸様相を探りたいと思う。もう一つの研究課題である能と現代演劇に関しては、実際劇場にしばしば足を運び、観劇体験を通して、能の様式及び主題が現代演劇に依然として大きな影響を及ぼしていることを確認することができた。一例として、戦時下の強制連行という現代のテーマを能の様式で表現した新作能『望恨歌』(多田富雄作)は、比較文学比較文化的に多くの問題を投げかけた作品である。かつてアイルランドの詩人・劇作家イェイツが能の形式を借りて書いた『鷹の井戸』(一九一六年)は、その後日本人の手によって『鷹姫』(横道萬里雄作)というすぐれた新作能となったが、今後このような、いわゆる「国際的」な実験はさらに続くものと思われる。一九世紀末から二十世紀にかけてなされた、イェイツやパウンドによる「能劇」Noh Playについての研究を専ら進めてきたが、今後それをさらに現代にまで広げていきたいと思っている。
合成遺伝子を用いる腫瘍遺伝子産物の機能の研究

アミノ酸配列にしたがって遺伝子を設計するために、いくつかの条件の検討を行った。アミノ酸コドンのうち大腸菌において高頻度に発現している遺伝子とその産物である蛋白質のアミノ酸配列を比較すると使用コドンに対応する転移RNAの量と相関があることがわかっている。したがって高頻に使用されているコドンを用いることは宿主にとって負担が少いと考えられる。しかしヒトの遺伝子において使用されているコドンからなる相補的DNAを用いても大腸菌において効率よく発現される例がいくつか知られるようになった。発現効率にはmRNAの高次構造がより大きく関与すると推定されるので、調節遺伝子とくにリボソーム結合部位(shine-Dalgarno配列、S.D.)をコードする部位と構造遺伝子のN末端領域が高次構造をとらないことが重要であると考えられる。設計した遺伝子について構造遺伝子部位ばかりではなく、上流調節部位とのインバートリピートを検出するようにプログラムを設定した。遺伝子産物の変異体を得るために遺伝子の改変を行う必要があるので制限酵素切断配列をアミノ酸コドンを変換することによって設定した。6塩基認識の制限酵素の切断配列を設ける場合には2個のアミノ酸のコドンまたは3個のアミノ酸コドンに亘って可能となる場合がある。これらの可能なアミノ酸配列を検索するプログラムを使用可能な制限酵素について作成した。とくに使用ベクター中に対応する切断配列が存在しないことを確めた。また酵素の入手が容易であるものを選択した。次にDNAリガーゼによる合成遺伝子切断の結合の際に副産物の生成を防ぐために繰返し配列が100塩基以内に存在しないようにコドンの選択を行った。とくに自己相補的配列が合成フラグメントの末端にないように区切った。
歯科用CAD/CAM・ネットワークシステム対応の小型歯列計測装置の開発

初年度は,計測システムと加工システムの分離を目指し,当教室で開発した歯科用CAD/CAMシステムを用いて,臨床系講座において収集されたクラウンのケースを元にレーザ計測を行い,計測データをネットワーク経由で汎用の加工機に送信するシステムの検討を行った.本システムの計測データは両隣在歯のデータも含め平均で1.2MBあったが,ネットワークを介して授受するには無駄が多すぎるため,いったん計測器側のコンピュータで,この点群のデータをスプライン曲線のデータとして再構築処理を行うことで平均349.9KBとなり,元データの1/3程度まで減らすことができた.また,ネットワークには,設置場所に制限の少ないPHS回線を用いたが,計測後,データの送受信を経てコンピュータ画面上での確認が出来るまでに,約5分必要となってしまうことが分かった.それと共に,CCDカメラを用いた小型の歯列計測装置を試作した.これまでに我々が開発してきたCAD/CAMシステムでは,支台歯の三次元座標データを,ポイントレーザ変位計を用いて一点毎に収集する計測システムであった.そのため,高精度な計測ができる反面,作業模型全体を計測するには15分程の時間が必要であった.そこで,計測時間の短縮と形状再現性の向上を目的として,一度に沢山の情報を得られるラインレーザとCCDカメラを組み合わせた計測システムを試作し,レーザ変位計を用いた計測システムとの比較を行った.その結果,3分程でクラウン製作に必要なデータ収集を行うことが可能となった.また,計測可能な範囲が片顎模型全体となり,さらに大きな補綴物製作の可能性が見出された.次年度には,新たに開発した計測器を用いて,歯科で日常的に行われている記録模型の採取と手作業による寸法測定しかなかった,歯列の三次元的な評価を行うソフトウェアの開発を行った.その結果,歯肉辺縁や咬頭頂などの部位で,画像表示に伴う最適化処理の工程で形状が不鮮明になってしまい,正確な座標測定ができない場合があり,今後,この最適化処理のアルゴリズムを検討しなおす必要があった.初年度は,計測システムと加工システムの分離を目指し,当教室で開発した歯科用CAD/CAMシステムを用いて,臨床系講座において収集されたクラウンのケースを元にレーザ計測を行い,計測データをネットワーク経由で汎用の加工機に送信するシステムの検討を行った.本システムの計測データは両隣在歯のデータも含め平均で1.2MBあったが,ネットワークを介して授受するには無駄が多すぎるため,いったん計測器側のコンピュータで,この点群のデータをスプライン曲線のデータとして再構築処理を行うことで平均349.9KBとなり,元データの1/3程度まで減らすことができた.また,ネットワークには,設置場所に制限の少ないPHS回線を用いたが,計測後,データの送受信を経てコンピュータ画面上での確認が出来るまでに,約5分必要となってしまうことが分かった.それと共に,CCDカメラを用いた小型の歯列計測装置を試作した.これまでに我々が開発してきたCAD/CAMシステムでは,支台歯の三次元座標データを,ポイントレーザ変位計を用いて一点毎に収集する計測システムであった.そのため,高精度な計測ができる反面,作業模型全体を計測するには15分程の時間が必要であった.そこで,計測時間の短縮と形状再現性の向上を目的として,一度に沢山の情報を得られるラインレーザとCCDカメラを組み合わせた計測システムを試作し,レーザ変位計を用いた計測システムとの比較を行った.その結果,3分程でクラウン製作に必要なデータ収集を行うことが可能となった.また,計測可能な範囲が片顎模型全体となり,さらに大きな補綴物製作の可能性が見出された.次年度には,新たに開発した計測器を用いて,歯科で日常的に行われている記録模型の採取と手作業による寸法測定しかなかった,歯列の三次元的な評価を行うソフトウェアの開発を行った.その結果,歯肉辺縁や咬頭頂などの部位で,画像表示に伴う最適化処理の工程で形状が不鮮明になってしまい,正確な座標測定ができない場合があり,今後,この最適化処理のアルゴリズムを検討しなおす必要があった.データ収集のために歯科用CAD/CAMシステムを用いて,臨床系講座において収集されたクラウンのケースを元にレーザ計測する.計測に用いる模型は,支台歯と両隣在歯を含む3歯を分割し,可撤式のチャネルトレーに固定したものを用いた.また,対合歯との咬合状態を専用のオクルーザルレコードを用いて,口腔内で採取したものを計測模型に被せた状態で計測を行った.計測データはネットワークを通じて当教室のCAD/CAMシステム(加工機)に,既存のメールソフトを用いたデータの添付という形で送信する.使用するネットワークは,システムの設置場所に制限の少ないPHS回線による無線ネットワークを用いた.本システムにおける計測データは両隣在歯のデータも含め平均で1.2MBとなった.この計測生データは,模型上の計測範囲すべての座標データを保持しているため,ネットワークを介して授受するには無駄が多すぎる.そこで,いったん計測器側のコンピュータで,この点群のデータの中から,必要とされる両隣在歯や支台歯のデータだけを抽出し,更にスプライン曲線のデータとして再構築処理を行うことで平均349.9kBとなり,元データの1/3程度まで減らすことができた.このデータを転送した場合,平均109.4秒で送信が完了する.更に,受け取ったデータを既存のCAD/CAMシステム上で設計し,返信が完了するまでに要する時間は,平均して180.0秒であった.

最終的に完成した補綴物は,既存のCAD/CAMシステムと比べ,遜色のないものが出来上がった.これまでの結果より,臨床サイドでデータの計測後,データの転送,補綴物の設計,データの返送が終了して,コンピュータ画面上での確認が出来るまでに,約5分ほど必要となってしまうことが分かった.また,データの転送に関して,PHS回線の使用状態に左右され,最大で2分程度のバラツキがあった.これは,現在使用しているPHS回線のデータ転送速度,ならびに回線状況に依存しており,今後,転送速度が速くなることは,既にアナウンスされているため,あまり問題とはならないと考えられる.しかし,出来る限りリアルタイムでの処理を望むには,更に効率のよいデータの圧縮方法を検討する必要があると考えられた.また,こうした一般の公衆回線を用い,さらにインターネットのような公共のネットワークを利用する場合,セキュリティの問題についても考える必要がある.昨年度までに,新たに開発したCCDカメラを用いた計測器を用いることで,短時間のうちに歯列全体を含む片顎模型の形状の収集が可能になった.これにより従来,単冠のクラウンや三歯連結のブリッジといった限られた範囲での補綴物の製作だけでなく,今回の新たに試作した計測器により,もっと広範囲な形状の取り込みをおこない,歯科で日常的に行われている記録模型の採取と手作業による寸法測定しかなかった歯列の三次元的な評価を,試作計測装置を用いて数値化し,コンピュータを用いた定量的な解析評価を行うことができるようになる.また,こうしたデジタル化されたデータとして記録されることで,ネットワークを通じた模型のやり取りを容易に行うことができる.そこで,今回はデータの収集から,画面上での表示,任意の位置測定ができるソフト開発を行った.本計測装置を用いて片顎模型の計測を行う場合,歯列の外側方向と内側方向のそれぞれ二方向から9回ずつ角度を変えながらデータを収集している.また,各方向からの計測時には,ステージの移動により模型表面を200μmピッチでデータが収集される,そのため,18種類のお互いに重複する点群が計測されるが,最終的には,それぞれの計測方向別に重み付けをして最適化した三次元データが出力される.計測に要する時間は,約4分で18方向全てのデータ収集が終了し,その後の処理も含めて約5分で計測を終了する事ができた.計測後のデータは,模型を回転させ多方向からデータを収集していることで,死角となる部分のないデータを得ることができていた.続いて,新たに開発した計測データの三次元画像表示ソフトと,画面上で指定する2点間,或いは2面間の三次元的距離測定ソフトにより計測した模型の特徴点の測定を行った.得られたデータを,実際の手作業でマイクロメータを使って測定したデータと比較したところ,歯肉辺縁部などの凹形状では1mm以上の誤差を生じている部分があった.また,咬頭頂などの凸形状に於いても300μm程度の誤差が認められる場合があった.これは,部位によっては最適化処理による平均化の工程で形状が不鮮明になってしまい,本来の計測位置を画面上で捉えられていないことが考えられ,今後,この最適化処理のアルゴリズムを検討しなおす必要があることが分かった.
放射線誘発DNA損傷修復におけるPCNAの役割

本研究によって得られた成果は、3編の論文として既に報告し、以下にその要旨を述べる。1.電離放射線によって誘導されるPCNA-DNA複合体の特徴づけを行なった。この複合体は、DNase処理によって消失するが、RNase処理では消失しないこと。ATPならびに温度依存性であること。照射後、12-15時間には、複合体が消失すること。DNAポリメラーゼσ/εの阻害剤であるアフィジコリン処理をすると、複合体形成そのものに影響はないが、消失が阻害される。すなわち、このDNA修復は、DNAポリメラーゼσ/ε依存性である。タンパク合成阻害剤であるサイクロヘキシミド処理をするとアフィジコリンと同じ結果が得られた。すなわち、この修復が進行するためには何らかのタンパク合成が必要である。ヌクレオチド除去修復を欠損するA群色素性乾皮症患者由来細胞は、UV照射の場合と異なり正常細胞と全く同じ複合体の消長を示した。以上の結果は、電離放射線によるDNA損傷の修復においても、DNA複製やヌクレオチド除去修復と類似したPCNA依存性のDNA合成が起こっているが、その開始機構において、ヌクレオチド除去修復とは異なるものであることを示している。2.ヌクレオチド除去修復過程のどのステップにおいて、PCNA-DNA複合体が形成されるのかを、2つの切断ステップに遺伝的欠陥を有する細胞を用いて検討した。その結果、DNAの3^1側、並びに5^1側いずれのDNA鎖を切断するエンドヌクレアーゼに欠陥があっても複合体は形成されないことが明かとなった。このことは、PCNAがDNA合成過程において重要な役割を果たすというこれまでのモデルをうまく説明するものである。3.最も遺伝学的解析が進んでいるA群色素性乾皮症患者由来の細胞を用いて、XPAタンパクのどのドメインがPCNA-DNA複合体形成に重要かを調べた。XPAタンパクのDNA結合能に最も重要なC4型zincfingerドメインに変異をもつ患者由来の細胞は、全く複合体形成が認められなかったのに対し、C2H2型様zincfingerドメインと相同性の高い領域に変異をもつ患者由来の細胞は正常な複合対形成を示した。こうした結果は、ヌクレオチド除去修復能とよく相関するものであり、PCNAが細胞内においてもヌクレオチド除去修復に関与することを示している。本年は最初のステップとして、X線照射後のPCNA-DNA複合体形成の動態、及び複合体の形成と消失に関与する因子について実験を行った。その結果、複合体DNaseI処理によって消失し、RNase処理では消失しないことから、DNA複製時の複合体と同様にメタノール抵抗制のDNAとの結合様式であることが確認された。さらに複合体形成はATP要求性であること、0°Cでは起こらないことが明らかにされた。複合体形成の時間経過については、37°CでX線照射すると、直後から複合体形成が見られ、数時間後に消失し、1215時間後に完全に消失した。DNAポリメラーゼα,δ,ε

特異的阻害剤であるアフィディコリン存在下では、放射線照射によって複合体形成が誘導されるが、その消失は阻害され、20時間後でも複合体形成が存続した。このことは修復DNA合成が完了するとPCNAが結合部位から遊離し、修復合成を阻害すると複合体のまま存続することを意味している。シクロヘキシミド処理による蛋白合成阻害は複合体形成には影響を及ぼさないが、消失を阻害した。修復合成の進行には新たな蛋白合成が必要であることを示唆している。XP-A細胞でも正常細胞でも、同様の複合体の動態を示すことから、X線によるDNA損傷修復の初期過程はヌクレオチド除去修復とは異なることが示された。XPA遺伝子の突然変異によるヌクレオチド除去修復に与える影響についても現在確認中である。本研究では、放射線によって誘導されるPCNA-DNA複合体形成に関与する因子、及び複合体形成の特徴を調べDNA修復機構に関与するPCNAの役割を調べることを目的としている。平成7年度には、X線照射によって形成されるPCNA複合体形成の性質について調べ、1)この複合体は、DNase Iによって消失すること、2)この形成には、ATPと温度が必要であること、3)この修復機構は、DNAポリメラーゼδまたはε依存性及びタンパク質合成依存性であること、4)X線によってできるDNA損傷のPCNA依存性修復は、ヌクレオチド除去修復とは異なることを明らかにした。平成8年ヌクレオチド除去修復過程におけるPCNA複合体形成の時期を、損傷DNAの3'側及び5'側に切断を入れる酵素XPGとXPF/ERCC1に欠陥をもつG群及びF群色素性乾皮症(XP)患者由来の細胞を用いて検討したところ、PCNA複合体の形成は、損傷の両側に切断が入ったあとに形成されることがわかった。XPGに関しては、マウスの同じ変異体についても同様の結果が得られ、さらに、xpg遺伝子を導入することで、PCNA複合体形成並びにUVに対する生存率の回復が見られた。一方、X線に対しては、PCNA複合体形成、生存率ともに両者まったく同様な結果を示し、このことは、XP-A細胞を用いて導いた上記4)の結論を支持するものであった。Wilsonらのグループは、DNAボリメラーゼβノックアウトマウス由来の細胞の放射線感受性が正常細胞と全く変わらないことを報告し、電離放射線による塩基損傷は本来DNAボリメラーゼβによって修復されるが、修復されなくとも細胞は死に至らないと結論した(Nature,379,183-186,1996)。これまでの我々の知見から、我々は、この現象を次のように考えた。電離放射線による塩基損傷は、DNAボリメラーゼβによってもまたPCNA依存性DNAポリメラーゼδ/εによっても修復可能であり、かりに前者が存在しなくとも後者によって十分修復され、そのために放射線感受性は正常である。
胆管細胞癌に有用な低酸素標的抗癌剤の開発

【目的】ジフェニレンヨードニウム(DPI)は、活性酸素の最大産生源であるNAD(P)Hオキシダーゼ発現の特異的阻害剤で、肝細胞の保護作用と線維産生担当細胞である肝星細胞の活性化を阻止して肝線維化を抑制する。本化合物は肝癌細胞に対するin vivoとin vitroの実験で制癌作用を発揮するだけでなく、ヒトがんパネル実験で大腸癌、胃癌、肺癌、メラノーマにも制癌作用を発揮する新規抗癌剤である可能性があり2007年8月国内特許出願した(特願2007-226635)。本研究では、抗癌治療に強い抵抗性を示す予後不良の胆管細胞癌に対して、低酸素誘導機序阻害を標的として本化合物の制癌効果と安全性を明らかにし、臨床応用への道を切り開く。【方法】DPI修飾化合物誘導体を無酸素環境下と常酸素環境下において胆管細胞癌細胞株に添加して、細胞増殖抑制効果(制癌感受性)をhuman tumor clonogenic assayを用いて測定し、早期アポトーシス増強効果を蛍光顕微鏡を用いて検討した。同時に、ラット正常肝細胞に対する合成DPI誘導体の細胞障害性をMTTアッセイで測定した。これらの検討の中から胆管細胞癌に最も制癌作用を発揮し、最も正常肝細胞の障害性を示さない誘導化合物を選び出した。【結語】DPI修飾化合物誘導体の中でも構造中心にヨードを持つ化合物に、胆管細胞癌に対して有効な制癌効果が期待できる可能性が示唆された。しかも、常酸素環境下よりも無酸素環境下でより強く発揮する可能性があり、その他の多くの癌に対しても有効である可能性も示唆された。