hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
突然死の原因となり得る口腔病態の評価ーAutopsy imagingをもとにして

CT撮像・画像処理条件をファントムを用いて以下のように決定した.1)死亡例では,CT(16列MDCT : Supria,日立製作所)を用いて,管電圧120kV,管電流215mA,ビームピッチ0.625,コリメーション1.25×16,スライス幅0.5mmとした.撮像時に,咬合平面がCTのガントリーと平行になるよう頭位を設定した.2)臨床例では,CT (320列MDCT : Aquilion ONE ViSION,東芝メディカルシステムズ)を用いた.撮像条件は,管電圧135kV,管電流20mA,ビームピッチ0.625,コリメーション1.25×40,スライス幅0.5mmとした.頭位を死亡例と同様に設定し,軟口蓋・硬口蓋から舌骨までの範囲と設定した.死亡例ならびに臨床例共に画像ワークステーションにて画像再構成を行い水平断像,冠状断像、矢状断像を作成した.画像計測について.口腔の計測項目の設定については、計測した口腔領域は,固有口腔,軟口蓋および舌全体を含む領域と定義した.背側の境界は軟口蓋後方端から舌根部にかけて移行的な線で結び,外側の境界は歯槽堤・歯槽頂とした. OAVは,OCVからOSVを除いた固有口腔および気道領域と定義した.本年度は臨床例と死亡症例の撮像方法と計測項目の決定、ならびに評価方法の決定であったが、順調にパラメーターの設定ができ、ワークステーションでの作業方法・取り扱いも順調に進んでおり、研究は順調に推移していると考えられる。閉塞性睡眠時無呼吸患者の臨床例とautopsy imagingデーターの蓄積に関して、死亡例は順調にデーターの収集ができているが、臨床例のデーター蓄積に難渋している。今後、各診療科と関連病院への研究協力を依頼していきたいと考えている。データーおよび資料収集費、学会参加旅費が予定より、少なかったことが次年度使用額が生じた理由と考えられます。翌年度には成果報告を学会で行うための旅費ならびに英語論文作成の校正費に充てたいと考えている。
多言語学習者の発話と知覚による破裂音の有声性と韻律の関係に関する研究

本研究は日本語における破裂音の「有声/無声」の対立と韻律の関係を、多言語学習者の発話及び知覚を利用して明らかにすること、有声性を捉え直すことを目的に行ったものである。本研究で対象とした話者は、いずれも母語の他に、(レベルの差はあるが)日本語、英語などの多言語の学習歴を持つ。多言語を学んだ、有声性について多様な母語(有声/無声の二項対立、有気/無気の二項対立、有声音、無声音に加え、有気音を持つ言語)の話者たちが、どのような知覚、発話を行うかの観察を通して、有声性の持つ多面性を検討した。本研究は日本語における破裂音の「有声/無声」の対立を、多言語学習者の発話及び知覚を利用して明らかにすること、通言語的視点を取り入れ、日本語においても方言差を視野に入れながら、有声性を捉え直すことを目的にしている。平成26年度は、本課題研究のスタートの年として、研究代表者、研究分担者二人による検討会議を持ち、課題遂行に向けての計画を再検討した。新たにpre-aspirationを検討すべき現象として加えた。pre-aspirationについては、既に様々な研究があるが、必ずしも一致した見解に到達しているとはいえない研究対象であり、特に本課題研究との関連で言えば、有声性(無声性)との関係は、明らかにすべき点として残っている。また、日本語の方言についても具体的な調査地の決定や手法など,準備段階の検討を終えた。研究代表者は、引き続き、北京語、広東語、中国朝鮮語、タイ語、インドネシア語、スンダ語を母語とする日本語学習者の音声の観察を続けた。特に声調(北京語、広東語、タイ語)、ピッチアクセント(中国朝鮮語)、ストレスアクセント(インドネシア語、スンダ語)といったアクセント体系の相違と有声性/無声性の関係を中心に発話音声を観察するとともに、知覚実験に向けての準備を行った。本年度は本課題研究遂行のために一部、研究計画を修正(新たな現象を研究対象として追加)を行ったが、有声性をより的確に捉えるための修正であり、研究の意義や進展を損なうものではない。本研究は日本語における破裂音の「有声/無声」の対立を、多言語学習者の発話および知覚を利用して明らかにすること、通言語的視点を取り入れ、日本語においても方言差を視野に入れながら、有声性を捉え直すことを目的にしている。平成27度については、研究代表者は昨年度おこなった対象言語の再検討を行い、声調言語である北京語、広東語、タイ語、ストレスアクセント言語であるインドネシア語、スンダ語、ピッチアクセント言語である中国朝鮮語、無アクセントであるソウル韓国語の話者に加え、声調言語であるベトナム語(ダナン方言)話者を観察対象に加え、観察調査を継続した。有声/無声または有気/無気の2項対立を持つ言語、有気/無気と同時に有声音をも併せ持つ3項対立の言語、同じ3項対立でも中国朝鮮語、韓国語のように無声音の系列で有気(激音)/無気(平音)に加え濃音を持つ言語など、アクセント体系と有声性の対立の多様性を確保する対象言語としている。なお、北京語話者、広東語話者と韓国語話者の有声性に対する意識とその発音の日本語母語話者による捉え方については、研究協力者とともに論文として公開した。研究分担者(角道)は、他の言語についての通言語的考察を進めた。また研究分担者(村田)は、日本語の方言について、近畿周辺部、つまり京阪式アクセントと異体系アクセントが接触する地域の方言として徳島と三重の方言を取り上げ、同一類内でのアクセントの分裂において、母音の広狭に加え、有声性の有無が要因となっていることを示した。なお、研究成果は国際学会等で発表するとともに現在印刷中の論考(2論文)において公開する予定である。平成27年度は、研究代表者、研究分担者とも、研究成果の一部を論文、国際学会等で公開するなど、進捗状況としては概ね当初計画の到達点に達している。平成28年度については、研究代表者は、引き続き北京語、広東語、中国朝鮮語、タイ語、ベトナム語(ダナン方言)、インドネシア語、スンダ語を母語とする日本語学習者の音声の観察を行った。研究分担者(角道)は、通言語的観点から多様な音韻現象を観察するため、アイヌ語、モンゴル語ハルハ方言などを対象に分析を行った。研究分担者(村田)は、引き続き日本語の方言について、近畿周辺部、即ち京阪式アクセントと異体系アクセントが接触する地域の方言についての調査を行った。研究代表者ならびに研究分担者は、それぞれの研究成果を論文、研究発表などを通して公開した。本研究で対象とした話者は、いずれも母語、(レベルの差はあるが)日本語、英語などの多言語の学習歴を持つ。第二言語の習得が母語の音声に影響を与えることは、既に知られているが、有声性について多様な母語(有声/無声の二項対立、有気/無気の二項対立、有声音、無声音に加え、有気音を持つ言語)の話者たちがどのような知覚、発話を行うかを観察してきた。また、日本語の方言においても、(特にアクセントとの関係において)有声性がどのような影響を与えるかを検討してきた。

平成28年度は、本課題研究の最終年度として、研究代表者、研究分担者二名によって、これまでの研究成果報告と残された課題についての検討を行った。本研究は日本語における破裂音の「有声/無声」の対立と韻律の関係を、多言語学習者の発話及び知覚を利用して明らかにすること、有声性を捉え直すことを目的に行ったものである。本研究で対象とした話者は、いずれも母語の他に、(レベルの差はあるが)日本語、英語などの多言語の学習歴を持つ。多言語を学んだ、有声性について多様な母語(有声/無声の二項対立、有気/無気の二項対立、有声音、無声音に加え、有気音を持つ言語)の話者たちが、どのような知覚、発話を行うかの観察を通して、有声性の持つ多面性を検討した。平成26年度は、研究代表者、研究分担者二人との検討により、一部研究計画の修正を行ったが、研究全体としては、当初の到達度に達している。平成28年度は、本課題研究の最終年度に当たるため、引き続き多言語学習者の発話及び知覚を利用した調査を行うとともに、日本語の方言に見られる有声性の振る舞いの調査検討やpre-aspirationなどの現象の検討結果について、一応のまとめを行い報告書を作成する。音声学・音韻論日本語における破裂音の「有声/無声」の対立を、多言語学習者の発話及び知覚を利用して明らかにすること、通言語的視点を取り入れ、日本語においても方言差を視野に入れながら、引き続き日本語学習者の破裂音の観察(生成/知覚)を続け、pre-aspirationなど検討すべき現象があれば、新たに研究対象として加え、有声性の捉え直しを行う。
Ｖｐｘ感受性を示す新規抗ＨＩＶ／ＳＩＶ細胞因子の探索と同定

これまでに我々が得ている種々のミエロイドあるいはリンパ系細胞株を用いたHIV-2の分子遺伝学的解析結果に基づき、新たに探索システムを構築し、SAMHD1以外の新しいVpx標的細胞因子の同定を目指した研究を行なった。SAMHD1が全く発現していないリンパ球でも効率的なHIV-2複製にはVpxが必要であることの遺伝学的、生化学的証明など、重要なウイルス学的知見が得られた。さらに、本研究では、Vpxの効率的翻訳に必須のPPM(Poly-Proline Motif)配列をVpx内に同定した。全てのヒト免疫不全ウイルス/サル免疫不全ウイルス(HIV/SIV)はアクセサリー蛋白質(Vif、Vpx、Vpr、Vpu及びNef)を持つ。アクセサリー蛋白質は宿主細胞に存在する様々な因子と相互作用することによりウイルスの複製・持続感染・伝播の最適化をもたらすと考えられている。ごく最近、Vpxとある種のSIV由来Vprはミエロイド細胞(樹状細胞やマクロファージなど)中のSAMHD1やAPOBEC3Aを標的としこれを分解することが報告された。しかし、これらの細胞因子はミエロイド細胞に特異的に存在するわけではなく、リンパ球ではほとんど存在しない。Vpxはミエロイド細胞とリンパ球におけるHIV-2/SIVmacの複製に重要であることが遺伝学的解析から明らかにされているので、Vpxの標的細胞因子は他にも存在する可能性が高い。昨年度に選択した15個の細胞因子について、恒常発現細胞(ネコCRFK細胞)を樹立して検討した。しかし、Vpx欠損ウイルスに対して特異的な抗ウイルス活性を示す因子の同定には至らなかった。本年度の特筆すべき成果は、Vpxの翻訳に関わるVpx内領域の同定である。プロリン残基が連続する配列(poly-proline motif; PPM)を欠損させると顕著にVpx翻訳量が減少する。原核細胞と真核細胞で同じ成績が得られることから、同等の細胞因子が関与していると推測される。現在、新しい抗HIV薬の開発を視野に、Vpxの翻訳に関与する細胞因子の探索と上記Vpx標的因子の探索とを並行して進めている。本年度は、初代ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ様細胞株THP-1(未分化及び分化細胞)、H9(ヒトリンパ球細胞株)、293T(ヒト腎臓細胞株)、HSC-F(カニクイザルリンパ球細胞株)、M1.3S(アカゲザルリンパ球細胞株)、MK.P3(F)(カニクイザル腎臓細胞株)及びLLC-MK2(アカゲザル腎臓細胞株)を用いたマイクロアレー法によりVpxの標的細胞因子の候補を選択した。選択した15個の因子はpcDNA3.1(-)-cFLAGにクローンした。一過性のトランスフェクションでは、明確な結論が得られないことが判明したため、これらを一つ一つネコCRFK細胞に導入し恒常発現細胞株を取得した。現在、これらの細胞株につき、Vpx欠損ウイルスに対する抗ウイルス活性を検討中である。Vpx欠損ウイルスが増殖できない、あるいは、野生型ウイルスと比べ欠損ウイルスの増殖能が非常に劣る細胞株があれば、全く新しい抗HIV/SIV細胞因子が同定されることになる。本研究の最終目標は、Vpxが標的とする新しい抗HIV/SIV宿主因子の同定である。本年度は、この目標に向け順調に研究が進展していると言える。HIV/SIVが感染・増殖する様々な細胞系を解析に用いたため、候補細胞標的因子を15個に絞り込むことができた。当初は、候補因子を一過性に発現させた細胞とマーカー付HIV-2クローン(野生株及び変異体)とを用いたシングルサイクル感染性アッセイで抗ウイルス活性を検証することとしていた。しかし、このシステムでは、対照として用いたTRIM5蛋白質(非常に強い抗ウイルス活性を持つ細胞因子)でも明確な結果が得られないことがわかったため、検証システムを変更した。候補因子を恒常的に発現するネコCRFK細胞を樹立し、この細胞系を用いたシングルサイクル感染性アッセイで候補因子の抗ウイルス活性を検討することとした。恒常発現細胞株は極めて迅速に樹立されたので、研究に遅れはないと考えている。今後は、候補因子の恒常

発現細胞の抗ウイルス活性の測定を継続し、有望な因子はsiRNAを用いた確認実験やバイオインフォマテックスなどによりVpxの標的細胞因子として同定する予定である。HIV-2/SIVmacとその変異体を用いたウイルス学的検証実験も当然行なわれる。さらに、Vpxとこの細胞因子の細胞内局在性も確認する。候補因子はマイクロアレー法により15に絞られたが、抗HIV/SIV因子の同定の確率を向上させるため、cDNA発現サブトラクションライブラリーやプルダウンアッセイによる候補因子の探索も並行して行うこととしている。Vpx拮抗因子が同定されれば、そのHIV-1複製に及ぼす影響も解析する。HIV-1はVpxを持たないが、構造や機能においてVpxのパラログとされるVprを持つ。ある種のSIV VprはVpxと同様に拮抗因子を分解するとの報告があるので、新しい抗ウイルス因子とHIV-1 Vprの相互作用の解析は大変重要な課題であると思われる。3月の納品を受け、4月に支払予定である。
男性骨折のリスク評価における骨質指標低カルボキシル化オステオカルシンの測定意義

血清低カルボキシル化オステオカルシン(ucOC)濃度が高い者は、低骨密度(若年成人平均値の1標準偏差以下)であるオッズ比が有意に高かった。症候的骨折を発生した者はベースライン時の骨密度が有意に低い値であり、低外力性骨折者はベースライン時の血清ucOC濃度が非骨折者よりも有意に高い値を示した。このように、血清ucOC濃度の上昇は骨折を予測する指標となる可能性が示唆された。平成20年度は日本人男性における骨質評価法の樹立と骨粗鬆症による骨折のリスク評価を確立するために、奈良県橿原市、奈良市、大和郡山市の65歳以上の男性を対象とし調査を実施した。1.受診者は橿原市で1213人、奈良市で304人、大和郡山市で128人であった。当初の予定地域では目標とする対象者の数に至らなかったため追加調査を奈良県香芝市で実施した。奈良県香芝市での受診者は402人で、総対象者数は2047人となった。2.骨密度測定:二重エネルギーX線吸収法Hologic社QDR4500A車載型にて第24腰椎正面、大腿骨近位部と大腿骨頸部の骨密度の測定を行った。3.胸腰椎のデジタル画像撮影:単一X線吸収法(Hologic社製QDR4500A)による胸腰椎側面のデジタル画像撮影を実施した。4.骨代謝マーカーの測定:対象者の血液を用い、低カルボキシル化オステオカルシン、オステオカルシン、高感度C反応性タンパク質、酒石酸耐性酸性フォスファターゼの測定を行った。5.既往歴、家族歴、ライフスタイルについての面接調査:骨折の既往、家族の骨折の発生状況、カルシウム食品摂取量などの項目を詳細に聴取した。以上の調査は平成21年2月に終了した。骨密度、アンケート等のデータは矛盾回答などを訂正後、電子化を完了した。平成21年度は解析用データベースの構築、ベースライン解析、ベースライン時以降の症候的骨折の郵送調査を実施する。平成21年度は、20年度以降に実施した藤原京、男性骨折スタディのベースライン調査を基に、データベースを作成し、統計解析手法を用いて低カルボキシル化オステオカルシンと骨密度との関係を評価した。解析対象は、ベースライン時に65歳以上の男性で、ステロイド療法や、骨代謝に関連のある疾患の既往者を除いた1665人であった。血清低カルボキシル化オステオカルシン濃度を四分位に分け、それぞれの分位での大腿骨近位部骨密度の平均値を比較することにより、低カルボキシル化オステオカルシンと骨密度の関連を評価した。第1四分位(最低濃度)の骨密度が0.911g/cm^2であったのに対し、第3四分位では0.883g/cm^2、第4四分位(最高濃度)では0.844g/cm^2と統計学的有意に低い骨密度を示した。さらに、血清低カルボキシル化オステオカルシン濃度の四分位と大腿骨近位部骨密度との関連について多変量ロジスティック回帰分析を行った結果、第1四分位に比べ第4四分位は2.76倍(OR=2.76)統計学的有意に骨密度が低いことを認めた。また、腰椎骨密度や大腿骨頸部骨密度に関しても大腿骨近位部骨密度と同様の結果が示された。今回はベースライン解析のため、低カルボキシル化オステオカルシンと骨密度の因果関係を明らかにすることはできなかったが、血清低カルボキシル化オステオカルシン濃度の増加により骨密度の低下が起こり、骨折を発症させる可能性が示唆された。平成22年度には追跡調査によりベースライン時以降の症候的骨折を把握し、低カルボキシル化オステオカルシンと骨折との関係を評価する予定である。平成22年度の調査目的は、骨折と低カルボキシル化オステオカルシンとの縦断的な関連を評価するために、藤原京男性骨折スタディのベースライン調査以降に発生した骨折を把握することであった。調査対象者は、平成20、21年に藤原京スタディで行われた郵送アンケート調査において(1)骨折のイベントがあった者(2)アンケートの中で骨折に関する質問に無回答であった者(3)アンケートを返却しなかった者(4)ベースライン調査以降に死亡した者、とした。藤原京スタディで行われた郵送のアンケート調査では骨折をしたかどうかについてのみの質問内容であったため、男性骨折スタディでは、調査対象者に対してさらに(1)骨折した年月日(2)骨折部位(3)骨折の原因、または状況(4)病院に行ったかどうか(5)レントゲン撮影の有無、について郵送アンケート調査を行った。死亡者については遺族に回答を求めた。アンケートの返却期限を過ぎても未返却であった者に対して督促状を送った。

さらに、アンケートに無回答であった場合、不明な点があった場合、督促状の返却期限を過ぎても未返却であった場合は直接電話をすることによりアンケートの内容を確認した。男性対象者2174名の内、骨折アンケート送付対象者は332名であった。その内、締め切りまでに返却した者は204名、督促により返却した者は40名、督促でも未返却で電話により回答した者は75名、その他が1名で回収率は96.4%であった。12名は住所や電話番号が不明のために回収できなかった。ベースライン以降に新規の骨折を発生した者は平成20年で9名、平成21年で20名の合計29名であった。新規骨折者のベースライン時の血清低カルボキシル化オステオカルシン濃度の平均値は3,48ng/ml、骨折がなかった者では2.86ng/mlであり、新規骨折者の血清低カルボキシル化オステオカルシン濃度は骨折がなかった者よりも高い傾向が示された(P=0.124)。
ヒト好塩基球におけるFcγRとFcεRとの相互作用に関する研究

悪性リンパ腫や小細胞肺癌などの悪性腫瘍患者の化学療法後の造血回復期に、G-CSF投与により末梢血に動員された造血幹細胞を豊富に含む単核球(CD34+細胞0.54%)をIL-3(5ng/ml)の存在下で3週間培養し、大量かつ高純度の好塩基球を得る方法を確立した。最終的に1x10^8個の単核球から1x10^7個以上の好塩基球(純度95%以上)を容易に得ることが可能であった。この培養好塩基球は形態学的には比較的成熟した好塩基球で、ヒスタミン含量は末梢血好塩基球に匹敵し、FcεRIとFcγRIIが豊富に発現していることを確認した。一方、FcεRIIやFcγRI、FcγRIIIの発現はみられなかった。そこで、FcεRI架橋による細胞内カルシウム濃度の上昇やヒスタミン遊離をFcγRIIが抑制するか否か検討した。抗FcγRII抗体である2E1を用いたFcγRIIの架橋では比較的速やかな細胞内カルシウム濃度の上昇が惹起された。別の抗FcγRII抗体であるIV.3による架橋でも細胞内カルシウム濃度の上昇がみられた。FcεRIα鎖に対する抗体であるCRA-1と2E1あるいはIV.3を用いたFcεRIとFcγRIIの共架橋では、FcγRIIはFcεRI架橋による細胞内カルシウム濃度の上昇を抑制しなかった。また、FcγRIIの単独架橋では有意なヒスタミン遊離はみられず、細胞内カルシウム濃度変化と同様にFcγRIIはFcεRI架橋によるヒスタミン遊離を抑制し得なかった。ヒト好塩基球上のFcγRIIを刺激した際には、FcγRIIbしか発現していないマウスの細胞と違って、FcγRIIbによる抑制性シグナルとFcγRIIaあるいはFcγRIIcによる活性化シグナルの総和として現れるものと理解される。培養好塩基球に関してはFcγRIIaが優位に発現しているものと考えられ、今後解析の予定である。以上より、FcγRIIはヒト好塩基球上ではFcεRIを介するアレルギー反応の重要な抑制機構としては作動していない可能性が示唆された。平成11年度は、末梢血幹細胞を用いてヒト好塩基球上のFcεRやFcγRの機能解析を可能にするようなヒト好塩基球の大量高純度培養・分離法の確立を目指した。悪性リンパ腫や肺癌患者から末梢血幹細胞移植の目的で採取された単核球(CD34_+ cell; 0.85%)を種々の濃度のIL-3存在下に培養した。5ng/mlのIL-3では培養3週後に3580%の細胞が好塩基性細胞となり、特にCD34_+ cellの比率の高い単核球からは多数の好塩基性細胞が培養された。10ng/ml以上のIL-3では好塩基性細胞の比率・細胞数ともに増加はみられず、510ng/mlが至適濃度と考えられた。平均1.83pg/cellのヒスタミンを含有し、電子顕微鏡所見から好塩基球と考えられた。一方、臍帯血単核球からの培養とは異なり、好酸球の混在は殆どみられなかった。

flow cytometryによる免疫グロブリンレセプターの検討ではFcεRIおよびFcγRIIが豊富に発現していた。このFcεRIの架橋により速やかな細胞内Ca濃度の上昇とヒスタミン遊離が認められた。immunomagnetic beadsを用いたnegative selectionにより好塩基球の純度は95%以上となり、10^8個の単核球から最終的に10^7個以上の好塩基球を得ることが可能であった。以上より、我々の方法で得られた末梢血幹細胞培養好塩基球は形態学的にも機能的にも成熟した好塩基球であり、FcεRやFcγRの機能解析に有用と考えられた。平成12年度は、平成11年度に確立した末梢血幹細胞培養法で得られたヒト好塩基球を用いて、好塩基球上のFcγRとFcεRとの相互作用について解析した。培養好塩基球上のFcR発現についてはflow cytometryを用いてFcεRIとFcγRIIが豊富に発現していることを確認した。また、FcεRIIやFcγRI、FcγRIIIの発現はみられなかった。そこで、培養好塩基球を用いてFcεRI架橋による細胞内カルシウム濃度の上昇やヒスタミン遊離をFcγRIIが抑制するか否か検討した。抗FcγRII抗体である2E1を用いたFcγRIIの架橋では比較的速やかな細胞内カルシウム濃度の上昇が惹起された。別の抗FcγRII抗体であるIV.3による架橋でも細胞内カルシウム濃度の上昇がみられた。FcεRIα鎖に対する抗体であるCRA-1と2E1あるいはIV.3を用いたFcεRIとFcγRIIの共架橋では、FcγRIIはFcεRI架橋による細胞内カルシウム濃度の上昇を抑制しなかった。さらにヒスタミン遊離についても同様の検討を行ったところ、FcγRIIの単独架橋では有意なヒスタミン遊離はみられず、細胞内カルシウム濃度変化と同様にFcγRIIはFcεRI架橋によるヒスタミン遊離を抑制し得なかった。ヒト好塩基球上のFcγRIIを刺激した際には、FcγRIIbしか発現していないマウスの細胞と違って、FcγRIIbによる抑制性シグナルとFcγRIIaあるいはFcγRIIcによる活性化シグナルの総和として現れるものと理解される。培養好塩基球に関してはFcγRIIaが優位に発現しているものと考えられ、今後解析の予定である。以上より、FcγRIIはヒト好塩基球上ではFcεRIを介するアレルギー反応の重要な抑制機構としては作動していない可能性が示唆された。
保護観察中の性犯罪者の性的認知の特徴を踏まえた処遇方法の発展

本研究は、保護観察中の性犯罪者の性的認知のゆがみを分析するために、日本の保護観察所が実施している質問紙を用いた調査と事例研究を行った。保護観察中の性犯罪者と犯罪歴のない一般成人の質問紙への回答結果の分析の結果、性犯罪者群のほうが、合理化やわい小化などの性的認知のゆがみが大きいことが明らかとなった。また、財産犯との比較から、性犯罪者のほうが性的認知のゆがみが大きいことが示された。以上から、本研究は、それぞれの性犯罪者が有する性的認知のゆがみの種類や特徴を踏まえた保護観察処遇の重要性を指摘した。本年度の研究結果は、以下の4点にまとめられる。1.法務省保護観察所長の許可を受け平成24年度に収集した、同所長の保護観察下にある性犯罪者(刑事処分としての保護観察を受けている成人)が処遇過程で回答する性犯罪質問紙のデータ約260件(被害者が大人である者、子どもである者からなる)を、平成25年度に、罪種別、被害者の年齢などによってサブグループに分けて比較した。その結果、性犯罪者群には性的認知のゆがみがあり、性犯罪の罪種による相違があることを見出した。この研究成果の一部を学会発表した。2.法務省保護観察所長の許可ならびに千葉大学教育学部生命倫理審査委員会による承認を受け、平成24年度において、同保護観察所長の保護観察下にあり、インフォームド・コンセントが得られた財産犯を対象に、性犯罪を含む犯罪一般についての質問紙調査を行い、60件のデータを収集した。平成25年度に、この結果と、上記1の性犯罪者群との比較分析を行った結果、性犯罪者群の性的認知のゆがみの存在と、性犯罪の罪種別の特徴の具体が明らかになった。3.法務省は、本研究の対象となる性犯罪者には、認知行動療法を基盤とした専門的処遇プログラムを実施している。本研究では、同プログラムをはじめとする保護観察処遇の効果検証のあり方について、理論的検討を行い、論文化した。加えて、性犯罪者の認知的構造や認知的プロセスに関する先行研究を調査し、論文化した。4.本研究の成果が認められ、法務省保護局から、保護観察の対象となった性犯罪者約6200人について、罪種、静的リスクと動的リスクの調査結果の得点、保護観察開始後3年間の再犯の情報の提供を受けることができた。分析の結果、静的リスク得点と動的リスク得点には、再犯者と非再犯者とで相違しており、罪種による違いもあることを見出し、論文化した。本研究の、本年度の研究結果は、以下の3点にまとめられる。1.法務省保護観察所長の許可を受けて、同所長の保護観察下にある性犯罪者(刑事処分としての保護観察を受けている成人)が処遇過程で回答する性犯罪質問紙のデータ約260件(被害者が大人である者、子どもである者からなる)を収集した。これらのデータを、インフォームド・コンセントが得られた犯罪歴のない一般成人(以下、コントロール群)の性犯罪質問紙回答結果64件と比較したところ、欧米諸国における先行研究結果と同様、性犯罪者群は、コントロール群に比し、性的認知のゆがみが有意に認められることが明らかとなった。これらの成果の一部を、学会発表した。2.法務省保護観察所長の許可ならびに千葉大学教育学部生命倫理審査委員会による承認受けて、同保護観察所長の保護観察下にあり、インフォームド・コンセントが得られた財産犯を対象に、性犯罪を含む犯罪一般についての質問紙調査を行い、60件のデータを収集した。現在、解析を行っている。3.本研究の対象となる性犯罪者は、刑事施設仮釈放者(以下、仮釈放者)と保護観察付執行猶予者からなる。これまでほとんど論じられてこなかった仮釈放と保護観察付執行猶予制度の相違を、刑罰の基本原理である応報的原理と教育的原理に基づいて考察した上で、それぞれに対する保護観察処遇のあり方を明らかにし、論文化した。この研究は、保護観察処遇論を展開するための理論的基盤として位置づけられる。欧米諸国では、子どもや性的行動に関する性的認知のゆがみが性犯罪の発生や反復を促進するとの仮説のもと、多くの研究がなされ、性犯罪者処遇が実施されてきた。日本の法務省は、海外の先行研究と同様に、この仮説を採用し、認知行動療法の考え方に基づいて、性犯罪に関する“否認・わい小化・合理化・正当化"(法務省、2006)などの性的認知のゆがみを修正するため、性犯罪者の処遇プログラムを開発した。全国の保護観察所では、2006年から性犯罪者処遇プログラムが実施されている。欧米諸国の先行研究では、強姦犯罪者の認知のゆがみの調査結果は一定していないが、子どもを被害者とする性犯罪者は、非犯罪者群や他の罪種の犯罪者群より、性的認知のゆがみが大きいことが示されてきた。

ただし、わが国では、性犯罪者の性的認知に関する実証研究自体がほとんどみられない。本研究は、(1)日本の保護観察所が実施している性的認知のゆがみに関する質問紙を用い、保護観察中の性犯罪者(仮釈放者及び保護観察付執行猶予者)と非犯罪者の回答結果を比較分析し、性犯罪者の性的認知のゆがみの有無を明らかにすること、(2)上記(1)の結果と事例研究を踏まえ、保護観察処遇の方法の発展を図ることを目的とした。子どもや性的行動に関する質問紙への保護観察対象者と非犯罪者の回答結果を分析した結果、性犯罪者群は、非犯罪者群に比し、性的認知のゆがみが大きいことが明らかとなった。罪種別の分析により、性犯罪者群のうち、下着窃盗犯の性的認知のゆがみが大きいことを見出した。また、性犯罪を含めた犯罪一般に関する質問紙を財産犯に行った結果、性犯罪者に比べ、財産犯の性的認知のゆがみが小さいことを明らかにした。本研究は、それぞれの性犯罪者が有する、合理化やわい小化などの性的認知のゆがみの種類や、罪種によるゆがみの特徴などを踏まえた保護観察処遇を行う重要性を指摘した。臨床心理学本研究は、(1)欧米諸国の先行研究において性犯罪の発生や反復の重要な要因とされている性的認知のゆがみが、わが国の性犯罪者においても認められるかを明らかにし、(2)その結果と事例研究を踏まえ、再犯防止のための、より実効性ある保護観察処遇論を展開することを目的とする。当初の研究計画では、平成24年度に保護観察所長の許可を受け、刑事処分としての保護観察を受けている成人の性犯罪者(以下、性犯罪者群)が、保護観察の処遇過程で回答する性犯罪質問紙回答結果を収集し、平成25年度に、性犯罪歴を有しない犯罪者(以下、一般犯罪群)を対象とした性犯罪を含む犯罪一般についての質問紙調査を行い、これらの結果と、我々がすでに有している犯罪歴のない一般成人(以下、対照群)の性犯罪質問紙回答結果を比較分析し、性犯罪者群を罪種別、被害者の年齢などによってサブグループに分けて比較検討をした上で、平成26年度に実務家との事例研究を行うこととした。研究実施の結果、平成24年度に、性犯罪者群と対照群の比較検討を終了し、性犯罪者群は、対照群に比し、性的認知のゆがみが有意に認められることを明らかにした。平成25年度においては、性犯罪者群を罪種別、被害者の年齢などによってサブグループに分けて比較検討し、性犯罪者群の性的認知のゆがみには罪種による相違があることを見出し、研究成果の一部を学会発表した。加えて、性犯罪者群と一般犯罪者群との比較検討を実施し、一般犯罪者に比べ、性犯罪者群には性的認知のゆがみがあることを明らかにした。また、性犯罪者群の静的リスク得点と動的リスク得点には、再犯者と非再犯者とで相違しており、罪種による違いもあることを見出し、論文化した。平成26年度に実施予定の事例研究のための事例の収集にもすでに着手している。したがって、現在までの達成度は、「1当初の計画以上に進展している。」と言うことができる。本研究は、(1)欧米諸国の先行研究において性犯罪の発生や反復の重要な要因とされている性的認知のゆがみが、わが国の性犯罪者においても認められるかを明らかにし、(2)その結果と事例研究を踏まえ、再犯防止のための、より実効性ある保護観察処遇論を展開することを目的としている。
中国江蘇省通州方言における入声舒声化傾向の調査研究―入声消滅原理の解明を目指して

1研究の目的中国語諸方言は、中国の北部全体および西南部にかけての広大な地域に分布する北方方言と長江以南の東南部に分布する南方方言の二群に大別され、その差異はきわめて著しい。よって、この二群の接する地域においては、言語接触による興味深い現象を観察することができる。本研究は、南方方言の一種である呉語と北方方言の江淮官話とが接しあう長江河口北岸に位置する南通市通州区における方言を対象とし、その地で観察される入声舒声化と呼ばれる声調変化に着目し、言語接触によって中国語の声調が如何に変化していくかを追究するものである。特に入声と呼ばれる声調は、現代中国語(普通話)ではすでに失われているため、その入声に変化が生じ始めている通州方言の実態は、中国北方方言における入声消滅の原理を解明する上で、有力な手がかりを与えてくれると考える。2研究実績概要通州での方言調査は、金沙と四甲の2地点において、2018年8月12日から15日の間に行った。現地では、老中若の異なる年齢層から、男女1ペアずつ各地8名の発話者を選抜し、二百字あまりの字音を録音した。今年度は、金沙での録音データを主に分析し、発話者間のデータを平均化し、金沙方言における声調の持続時間と調値を算出した。また過去に調査したことのある二甲という地点における調査結果と金沙との分析結果を対比させながら、通州方言にみられる入声舒声化の地域差や年齢差について考察し、周辺方言との比較も行いながら、両地点における入声舒声化の発生原理についても分析した。1方言調査について当初の計画通り、新たに2地点における方言調査が行えた。当初の計画では、方言調査を夏と春の年2回実施することを予定していたが、夏の1回で予定していた2地点における調査が完了したため、春に行う調査は取りやめた。取りやめた分の予算は、国内における音声学セミナー研修や資料収集費用に充てることができた。2研究発表について当初の計画通り、当該年度に実施した方言調査の分析結果を、国際呉方言学会において発表することができた。また、過去に調査した地点と新たに調査した地点における比較分析を通して、通州方言における実態をより多角的に観察することができ、新たな知見を増やすことができた。14月から8月までの予定2018年度に実施した方言調査において、まだ報告ができていない地点(四甲)における音声分析をすませる。分析結果は、2019年8月27日に予定されている漢語方言研究会にて発表する。29月から12月までの予定通州地区において、新たに2地点における方言調査を行う。調査方法は従来と同じく、異なる年齢層から男女1ペアずつを選抜する。調査地点は、入声舒声化がより盛んに観察される江淮官話地域において行う。31月から3月までの予定方言調査の分析結果をまとめる。

分析結果は、2019年8月27日に予定されている漢語方言研究会にて発表する。29月から12月までの予定通州地区において、新たに2地点における方言調査を行う。調査方法は従来と同じく、異なる年齢層から男女1ペアずつを選抜する。調査地点は、入声舒声化がより盛んに観察される江淮官話地域において行う。31月から3月までの予定方言調査の分析結果をまとめる。
高齢者のメタ記憶と自己高揚的認知に関する研究

これまで,高齢者を対象として,自己の記憶能力を評価するメタ記憶を検討してきた.その結果,ほとんどの高齢者において「同じ年の人よりは自分の記憶能力が優れている」という評価を行う"自己高揚的認知"が見られてきた.このような認知の要因として「老人サークル活動(ダンス,カラオケ)をしているから」「認知症ではないから」など,高齢社会特有のものが見受けられている.本研究では,他国の高齢社会に生活する高齢者も自分の記憶能力などに対して,日本の高齢者と同様の評価をするのかの検討を行った.調査は,カナダ人の高齢者(男性12名,女性21名,平均年齢74.8歳)に対して,質問紙を実施した.その結果,カナダ人の高齢者においても,ほとんどの者が「同じ年の人よりは自分の記憶能力が優れている」と評価をしていた.すなわち,カナダ人の高齢者においても,他者と比較した場合に記憶評価では自己高揚的認知が生じることが明らかになった.その一方,日本人と同様に「過去と比較した場合」には,そのような認知は見られなかった.そのような評価を行う理由の回答において「同じ年の人よりも,活動的であるから」「毎日,楽しく過ごしているから」など,ポジティブな側面を重視していることが伺えた.日本では「同じ年の人では寝たきりの人や認知症の人がいるが私は違う」という回答が多く見られたのだが,そのような回答は少数であった.本研究において,環境や文化が異なる高齢者も,記憶に対する自尊心や自己効力感を維持していることを明らかにされた.このような研究は,高齢者の人権や尊厳を踏まえたうえでの,個性豊かな老年期の生活や活動を支援する際の一助となりえると考えられる.従来の高齢者のメタ記憶研究では,ほとんどの高齢者が「同じ年の人よりは自分の記憶能力が優れている」と評価する"自己高揚的認知"が確認されている。本研究では,このような高齢者のメタ記憶に対する自己高揚的認知の再確認を行うと伴に,どのような理由によりその評価が生じているのかを明らかにすることを目的とした.調査は65歳から84歳までの高齢者109名(男性43名,女性66名,平均年齢73.1歳)に対して実施した。その結果,従来の研究結果と同様に,30代の若い頃に比べて自分の記憶能力の低下を感じているものが感じていないものよりも有意に多かった.その一方,同じ年の他者と比べて自分の記億能力が優れていると感じているものは感じていないものよりも有意に多かった.すなわち,自己の記憶能力に対する自己高揚的認知が確認されたと言えよう.また,そのような評価を行う理由を自由記述で求めたところ「役員・役職をしているから」という社会的活動や「他の人が忘れることを覚えている,他人は忘れやすい」といった他者との比較,「ダンスをしている,運動をしている」などの身体的活動をあげる高齢者が多かった.まとめると,会議・会合などでリーダシップをとっている高齢者はその役割と合わせて自分の記憶評価をしているようであった.しかし,リーダシップをとっていない多くの高齢者でも,何気ない他人との会話において,日常的に自分の記憶評価を行っていると言え,その場合"他人の忘れやすさ(自分のもの覚えのよさ)"を日々確認していることが推察された.また,高齢者の多くが身体を動かすことは記憶能力の維持に重要だと考えているようであった.このように高齢者のメタ記憶を詳細に理解していくことは,老年期の生涯学習や知的活動を進めていく上で不可欠なものであり,高齢者との円滑なコミュニケーションに貢献するものと考える.本研究は,高齢者のメタ記憶における「同じ年の人よりは自分の記憶能力が優れている」という自己高揚的認知に着目するものである.はじめに昨年度に引き続き,高齢者の記憶に対する高揚的認知に影響を与えていると考えられる要因を検討するため,高齢者と接触の多い大学生の言動(大学生の敬老意識と敬老行動)についての調査を実施した.調査対象者は福祉を専攻する大学生127名(男性50名,女性77名,平均年齢18. 4歳)であった.その結果,福祉を専攻する大学生は高齢者に対して「高齢者の知恵を授かる」「高齢者の持っている能力を引き出す」などを意識して実践していた.また,ほとんどの大学生が高齢者と接する際には,高齢者への敬意,尊敬の念を常に念頭においていると回答していた.この結果から,高齢者はボランティアなどで関与する大学生から,高齢者の現在の能力を評価する敬老の態度を示されていることが多く,このことが高齢者が自分の能力に自身をもつ要因の1つになっているのではないかと推測される.次に,この高齢者の記憶に対する自己高揚的認知が精神的健康とどのように関係しているのかの検討を行うため,高齢者5名(男性2名,女性3名,平均年齢74. 4歳)に面接調査を実施した.その結果「同じ年の人で認知症などに罹患している人がいる.認知症ではない自分は幸せだ」などの意見が得られた.今回の面接から,自分の記憶をポジティブに評価することが日常生活の精神的安定につながっているのではないかと推察される.このように高齢者のメタ記憶を詳細に把握することは,高齢者に対する理解を深め,彼らに尊厳ある生活を提供するために重要であると考える.これまで,高齢者を対象として,自己の記憶能力を評価するメタ記憶を検討してきた.その結果,ほとんどの高齢者において「同じ年の人よりは自分の記憶能力が優れている」という評価を行う"自己高揚的認知"が見られてきた.

このような認知の要因として「老人サークル活動(ダンス,カラオケ)をしているから」「認知症ではないから」など,高齢社会特有のものが見受けられている.本研究では,他国の高齢社会に生活する高齢者も自分の記憶能力などに対して,日本の高齢者と同様の評価をするのかの検討を行った.調査は,カナダ人の高齢者(男性12名,女性21名,平均年齢74.8歳)に対して,質問紙を実施した.その結果,カナダ人の高齢者においても,ほとんどの者が「同じ年の人よりは自分の記憶能力が優れている」と評価をしていた.すなわち,カナダ人の高齢者においても,他者と比較した場合に記憶評価では自己高揚的認知が生じることが明らかになった.その一方,日本人と同様に「過去と比較した場合」には,そのような認知は見られなかった.そのような評価を行う理由の回答において「同じ年の人よりも,活動的であるから」「毎日,楽しく過ごしているから」など,ポジティブな側面を重視していることが伺えた.日本では「同じ年の人では寝たきりの人や認知症の人がいるが私は違う」という回答が多く見られたのだが,そのような回答は少数であった.本研究において,環境や文化が異なる高齢者も,記憶に対する自尊心や自己効力感を維持していることを明らかにされた.このような研究は,高齢者の人権や尊厳を踏まえたうえでの,個性豊かな老年期の生活や活動を支援する際の一助となりえると考えられる.
NK細胞/樹状細胞ハイブリドによる新規癌免疫細胞療法の開発

A.NK細胞と樹状細胞(DC)の融合細胞の作成A/J(H-2^k)マウス皮膚由来の成熟DC株XS106とA/Jマウス由来脾臓NK細胞をPolyethylene glycol (PEG)法にて癒合させる。我々はすでに、HAT感受性、ネオマイシン耐性のXS106由来の細胞クローン(V2 DC)を樹立している。NK細胞はマウス脾臓細胞からマグネットビーズ(StemStep社)を用いて分離する。NK細胞はHAT耐性、neomycin感受性である。MK-DC Hybridsの選択には我々が開発したdouble selection (HAT+Neomycin)法を用いた。抗原提示機能:NK-DC Hybridsは抗原特異的抗原提示能とNK活性がなく、その原因とクローンのスクリーニングをしている。C.Gap juntion(Gj)を介した細胞間相互作用の解析:DCが抗原提示する際に、DC間のGjを介した情報伝達が重要であることを明らかにした。DC-NK Hybridが所属リンパ節内でのDCに抗原を渡し、活性化するのに重要なメカニズムと考え、解析中である。
外部エネルギーと分子標的を認識する磁性ナノ粒子を用いた新たな低侵襲癌治療法の開発

ヒト乳がん細胞(BT474, SKBr3)をヌードマスス大腿筋膜下に移植し腫瘍モデルとした。リポソームは100nm以下に安定して調整でき、表面にHerceptin(whole antibody)を結合させ、内部に抗癌剤(疎水性)を安定して封入でき、発熱磁性体(FeFe204)を脂質二重膜間に封入することができた。温熱・化学・抗体同時療法を行った群では、腫瘍縮小効果のみならず生存率にも有意差を認め、転移リンパ節への治療効果も認められた。以上より、予定した研究目的は達成できたと判断した。初年度の実験として、発熱磁性体マグネタイトとドセタキセル(DOC)をリポソームに動じ包埋したDMLを新規に作成した。まず、ヒト胃癌腫瘍モデルに対して、DMLの抗腫瘍効果を検討するため、誘導加熱を付加した。【結果】DOC濃度が56.4μg/ml以上では、DML群で著明な抗腫瘍効果を認めたが、マグネタイトを含まないDL群ではDOCは564μg/ml必要であった。DML群で治療後28日の時点で有意な腫瘍縮小効果を認め、更に2ヶ月後の生存率でも有意差を認めた。治療後1週間の時点でのHE染色、TUNEL染色でDML群では経時的に腫瘍変得んにも細胞死が認められ、しっかりとマージンが確保されていた。それ以外の群では、腫瘍辺縁にもviableな細胞を認めた。Berlin blue染色でも腫瘍細胞死領域にマグネタイトの広がりを認めた。更に、所属リンパ節内にもマグネタイトの進展を認め、原発巣と同時に転移巣にも抗腫瘍効果を認めた。腫瘍移植周囲の皮膚には、火傷は認めなかった。【考察】DML群のみで有意な抗腫瘍効果が認められたことから、温熱療法と化学療法か動じに腫瘍局所で行われた結果、43°Cという低温度帯においても、低濃度の抗癌剤の効果を増強し、更に温熱による火傷等の局所合併症も認めなかったため、安全かつ有効な抗腫瘍効果が期待できる。更に、腫瘍縮小の奏効率が高いと同時に、生存率も向上しており、その理由として転移巣に対する抗腫瘍効果も影響しているものと思われた。リポソームというリンパ流に流れ込み易い素材を用いて、その内部に温熱と化学療法という異なる抗腫瘍効果を発揮する素材を同時包埋する本法は非常に有用であり、臨床応用可能なものと考えられた。今後、リポソーム表面に抗腫瘍モノクロナール抗体を付加し、さらに選択性を高め、抗体そのものによる抗腫瘍効果も加味した新たな研究を行う予定である。以上の内容は、Int J Cancerに掲載される予定である。外部エネルギーと分子標的を認識する磁性ナノ粒子を用いた新たな低侵襲癌治療法の開発のテーマで研究を行った。我々は、磁性ナノ粒子(マグネタイト)に対する誘導加熱(470kHz, 1KW)を利用し在局所加熱による癌治療を検討してきた。今回、これは更に発展させ、直径100nm程度のリポソーム内に抗癌剤を封入し、同時に磁性ナノ粒子を包埋することで局所温熱化学療法が可能かどうかを検討することを第一の目的とした。更に、抗腫瘍モノクロナール抗体を前記リポソーム表面に結合させることで、腫瘍選択性と同時に抗体による抗腫瘍効果も期待するという複合治療の有用性を検討することを目的とした。初年度には、リポソーム内に疎水性抗癌剤であるドセタキセルを封入することに成功し、ヒト胃癌細胞株を用いた抗腫瘍効果を検討し有用性を認めた。また、局所温を42-43°Cにコントロールし、局所火傷も認めず安全性の高さを証明した(Int J Cancer 2009掲載)。次年度には、リポソーム表面に抗HER2モノクロナール抗体を結合させ、HER2強発現胃癌細胞株を用いてマウスに移植し、磁性体と抗癌剤同時包埋しモノクロナール抗体を表面に付加したリポソームの局所投与による有効性と安全性を検討した。治療後1ヶ月で、腫瘍消失例を含めた極めて高い抗腫瘍効果を認めた。生存期間の有意な延長と、局所の火傷等の合併症も認めず極めて安全性と有効性が高いことが証明された。更に、組織の免疫染色やフローサイトメトリーによる検討では、Her2/neu強発現細胞の1週目の有意を減少とアポトーシスの広がりが認められており、治療後1週目でのGo/G1期細胞の減少も認められた。(Int J Oncol 2011掲載)。他に、論文には掲載しなかったが、リンパ行性のリポソームの広がりも認め、温熱化学療法による転移リンパ節への治療効果も認められた。今回の研究期間中に有用な結果を得ることが出来たため、今後更に転移リンパ節や癌転移病巣への治療にも研究を広げて行く方針である。生体適合性の高い発熱磁性体と抗癌剤を抗腫瘍

モノクロナール抗体結合リポソームに包埋し、誘導加熱印加による温熱化学療法の可能性をin vivoにて検討した。ヒト乳がん細胞(BT474,SKBr3)をヌードマスス大腿筋膜下に移植し、10mm径を超えた時点で実験を開始した。リポソームは100nm以下に安定して調整でき、表面にHerceptin (whole antibody)を結合させ、内部に抗癌剤(疎水性)を安定して封入でき、発熱磁性体(FeFe204)を脂質二重膜間に封入することができた。まずは、備品購入した蛍光顕微鏡により、蛍光標識リホソームがリンパ行性に移動することが経時的に観察できた。つぎに、蛍光観察したリンパ節を摘出し、腫瘍細胞がリンパ行性に移行していることを確認し、同リンパ節の鉄染色にて磁性体が確実に移行していることから、本研究手法は確立されたと判断した。組織内ドセタキセル濃度を測定し、十分量がデリバリーされていることも確認した。誘導加熱および化学療法によりアポトーシスに至った腫瘍からは蛍光色素の排出が遅れることが確認されたが、蛍光顕微鏡下では健常組織と腫瘍組織の境界が明瞭に描出され、治療効果判定に本法が適していることも確認された。尚、既に確認されていたことではあるが、腫瘍表面温度は42.5°Cで推移し、マウス直腸温は37°C程度で推移し、腫瘍選択的に温熱療法が安全に行われていることを、サーモグラフィーおよび光ファイバー温度計で確認した。温熱・化学・抗体同時療法を行った群では、腫瘍縮小効果のみならず生存率にも有意差を認め、原発巣と考えられる移植腫瘍から転移したリンパ節への治療効果が全身治療に繋がったと推測され、本法の局所治療としての意義に加え、全身治療の可能性も示唆された。以上より、予定した研究目的は達成できたと判断した。
漢方薬のアルツハイマー病に関する治療メカニズムの解析

グリア細胞由来神経栄養因子(GDNF)は神経保護を有することが知られており、海馬ではカイニン酸処理により遺伝子が誘導されることから、アルツハイマー病などの治療薬としても期待されている。これまでに、認知症の治療によく使用されている漢方薬のなかで、地黄がC6 glioma細胞にてGDNF遺伝子の発現を上昇させることを見出した。すなわち、C6 glioma細胞を地黄1mg/mlの存在下で培養すると、GDNF mRNAの発現量は24時間で最大となり、この効果はGo6976(cPKC阻害剤)、Ro318220(汎PKC阻害剤)およびU0126(MEK阻害剤)により抑制されることを明らかにした。そこで本年度は、その発現誘導に係わる細胞内シグナル伝達経路をWestern blot法を用いて解析するとともに、地黄の細胞増殖に及ぼす影響について検討を加えた。地黄1mg/mlの条件下でC6 glioma細胞を刺激し、ERK(extracellular signal-regulated kinases)1/2の発現量およびリン酸化について解析したところ、ERK1/2のリン酸化は刺激後3時間でピーク(対照群の6倍)となり、6時間目では対照群の4倍、12時間後には刺激前のレベルまで戻った。このERK1/2リン酸化の上昇はU0126にてほぼ完全に阻害されたのに対し、Ro318220では若干抑制されるものの有意差は認められなかった。また、Go6976ではERK1/2リン酸化は抑制されず、逆に上昇する傾向がみられた。従って、cPKCを介するリン酸化経路はMEK-ERK1/2の経路の上流にないことが示唆された。cPKC経路については現在検討中である。一方、地黄のC6 glioma細胞の増殖速度に及ぼす影響について検討を加えた。地黄は0.25mg/mlの濃度では細胞増殖速度は24時間で対照群の約2倍、48時間で約1.5倍あることが明らかとなった。しかし、1mg/mlの濃度では細胞増殖速度は対照群の7090パーセントであり、ERK1/2の活性化と細胞増殖とは関連していないことが示唆された。今後、地黄による誘導に係わるGDNF遺伝子のプロモーター領域を明らかにしたい。
癌細胞運動促進因子の精製と機能の解析

1.ボイデンチェンバを改良したtranswellを用いることにより、細胞のin vitroでの運動性を調べる方法を確立した。これによって、運動促進因子に応答して移動した細胞を定量的に測定する事が可能になった。2.この方法を用いて各種ヒト癌細胞の培養上清に分泌される因子の腫瘍細胞運動促進効果について調べたところ、A549(ヒト肺癌細胞株)とStー4(ヒト胃癌細胞株)に強い腫瘍細胞運動促進効果が認められた。3.得られた腫瘍細胞運動促進活性因子(モティリティファクター以下MFと略す)について、その生化学的性状と細胞生物学的機能を調べ、さらにMFタンパクの精製を試みた。(2)このAMFはchemotactic活性とchemokinetic活性の両方の作用を示した(checker board解析の結果から)。(3)ゲル濾過をはじめとする各種クロマトグラフィーの組合せにより、A549、Stー4それぞれの培養上清からAMFタンパクを部分精製する事に成功した。このAMFは複数の分子種から成り、既存の接着因子や成長因子、Liottaらの報告したMFなどとは明らかに異なった性質を示した。(4)AMF活性は、pertussis toxin等により特異的な阻害を受けた。4.部分精製したAMFを抗原としてAMFに対するポリクローナル抗体(兎)並びにモノクローナル抗体(マウス)を作製した。ポリクローナル抗体は、AMF活性の阻害効果を有した。モノクローナル抗体については、その抗原タンパクの決定、細胞生物学的活性の測定等につき現在検討中である。考察・展望:癌の転移は原発巣から細胞が遊離して、血管あるいはリンパ管の外へ出てゆき、新たな腫瘍巣をつくる過程である。転移の過程は、癌細胞の運動・移動が主体の現象であり、転移に関与する色々な因子は、結局はこの細胞の運動と移動に影響する因子であると考えられる。私達がテーマとしたautocrine motility factor(AMF)は、癌細胞から分泌され、自分自身の運動性を促進する因子であることから、癌細胞の浸潤や転移に重要な役割を果たしているだろうと推測される。本年度の我々の研究成果によって、AMFのアッセイ系が確立され、AMFタンパクの生化学的・細胞生物学的性状が明らかとなった。また、AMFを多量に産生する細胞株を見出し、その培養上清から、生化学的手法により、AMFの部分精製を行うことに成功した。今後はAMFをさらに精製して、部分構造の決定、遺伝子のクローニングによる全構造決定へと進めて行く予定である。また、AMFをターゲットとした癌の治療法として、AMFに対するモノクローナル抗体の開発、AMF系の阻害に働く薬剤の開発・スクリーニングなど、多方面での応用を計画している。