hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細胞内アクチン繊維及び再構成アクチン繊維の動的構造変化の検出

細胞内及び再構成アクチン繊維を対象として、細胞運動に関わるその構造変化を捉える事を目的とるいして研究を進めた。フィロポディアは細胞運動の中で、細胞の運動の方向性を決定づける細胞内装置のひとつである。そこで、クライオ電子線トモグラフィー法を使い、神経細胞のフィロポディア(糸状仮足)の内部のアクチン繊維束の動態を、三次元構造としてナノメータ分解能で明らかにした。その結果、約30本のアクチン繊維を単位としてフィロポディアが出来上がっていること、その束化因子であるファシンはアクチン繊維に周期的に、かつ、協働的に結合していることが分かった。更に、三次元構造の平均化を行い、架橋しているファシンの3ー4ナノメータの分解能での構造を解き、三種類の結合部位を2:1の組とし、それぞれが隣り合ったアクチン繊維い結合し、架橋していることが分かった。そのうち、アクチン繊維束周辺では、隣にアクチン繊維がない場合でも、2つの結合部位側を利用して、アクチン繊維から周期正しく結合していることが観察された。このことは、アクチン繊維束を超えた協働的なアクチンの構造変化を示唆している。これらの結果から、フィロポディア内部におけるアクチン繊維束の形成メカニズムについて新たに提案する事ができた。現在、更に、アクチン繊維の形成が誘導されているフィロポディア先端の構造解析を進め、その形状の違いを確認したところである。上記以外に、継続中の研究として、第一に、査型電子顕微鏡を使い、毛乳頭細胞の三次元培養状態における細胞動態の観察手法を確立した。第二に、再構成アクチンフィラメントについて、ミオシンの結合有無、リガンドであるヌクレオチドによるアクチンフィラメントの構造変化を捉えることに成功している。これらは、更に、確度と精度を上げるべく継続的に研究を進めている。28年度が最終年度であるため、記入しない。神経細胞の糸状仮足を構成するアクチン繊維束は、仮足の伸張と形態維持のために重要な役割を担っている。しかし、その束化形成のメカニズムは構造学的に明らかにはなっていない。培養した神経細胞をそのまま急速凍結し、今回、クライオ電子線トモグラフィー法を使いて、その3次元構造を解明し、その後、画像処理法を通して、束化因子であるファシンの結合様式を明らかにした。神経細胞の糸状仮足の中では、約30本程度のアクチン繊維が束化し、その束が複数結合していた。安定した束化には30本程度が単位となるという物理的モデルと一致するものであり、再構成束で20本程度が限界と言われたものとは異なる結果となった。このことは、糸状仮足内では、タンパク質密度、修飾タンパク質に加え、流れ、外力などにより安定した束を形成することができることを示唆している。次に、アクチン繊維の構造を調査したところ、六法格子をつくっていると共に、決まったらせん対称性を持つと共に、隣のアクチン繊維とモノマー分のズレを生じていた。また、隣り合ったアクチン繊維間は、6つのうち4つと決まった周期で結合している密度があり、ファシンの密度に対応する事が分かった。このファシンノ結合は、それぞれ半周期の2/3ずれていた。このファシンに対応する密度に、X線結晶解析で示された原子モデルをフィットしたところ、アクチン/ファシンの結合部位と示されたファシン上の部位がちょうど、電気的に反対の荷電をもつアクチン上の部位と結合するモデルを構築する事が出来た。このモデルは、電子顕微鏡法で解かれた密度と原子モデルを相関法によりフィットしたものと一致するモデルであった。ファシンとアクチンは、2つの結合部位をもつサイトと1つの結合部位をもつサイトがそれぞれ隣り合ったアクチン繊維を繋ぐ。これらの事実と原子モデルから、我々は、アクチン繊維束の形成メカニズムを提案した。神経細胞の細胞内のアクチンフィラメントに関しては、ファシンとの結合様式に関する新しいモデルを構築できるまでの分解能のある三次元構造を得ることに成功している。毛乳頭細胞の細胞動態に関しては、イオン液体による細胞観察法を試行し、乾燥するよりはよい観察法であることを示すことが出来ている。イオン液体そのものではまだ撮影ができず、固定と蒸着が必要である点においては、今後、検討が必要である。これまでの結果から、動的な状態をそのまま、低温SEMを用いて観察できる可能性は十分にある。再構成系アクチン繊維に関しては、画像処理法の更なる開発を進め、かつ、電子顕微鏡自身の整備も行ってきた。来年度に向け、撮影・解析が出来る状況が整った。

そのうち、アクチン繊維束周辺では、隣にアクチン繊維がない場合でも、2つの結合部位側を利用して、アクチン繊維から周期正しく結合していることが観察された。このことは、アクチン繊維束を超えた協働的なアクチンの構造変化を示唆している。これらの結果から、フィロポディア内部におけるアクチン繊維束の形成メカニズムについて新たに提案する事ができた。現在、更に、アクチン繊維の形成が誘導されているフィロポディア先端の構造解析を進め、その形状の違いを確認したところである。上記以外に、継続中の研究として、第一に、査型電子顕微鏡を使い、毛乳頭細胞の三次元培養状態における細胞動態の観察手法を確立した。第二に、再構成アクチンフィラメントについて、ミオシンの結合有無、リガンドであるヌクレオチドによるアクチンフィラメントの構造変化を捉えることに成功している。これらは、更に、確度と精度を上げるべく継続的に研究を進めている。細胞内でのアクチン繊維の動的構造に関しては、糸状仮足の根元や先端などを効率良く観察するクライオCLEM法などの方法を開発し、その結果として、糸状仮足におけるアクチン繊維束の伸張及び短縮のメカニズムについても明らかにしていきたい。毛乳頭細胞の動態に関わるSEM観察については、イオン液体による手法をより具体化し、動的構造を固定し、観察できる手法を開発し、糸状仮足、葉上仮足を通して細胞及び細胞塊が動く姿を捉えていきたい。再構成アクチン繊維においては、ミオシン分子との結合によるアクチン繊維の構造変化について、アクチン繊維を単粒子として取り扱い、更に、分子数を増やすことにより構造を解明し、アクチン繊維のもつ協同性の由来について明らかにしていく。28年度が最終年度であるため、記入しない。
p53誘導性蛋白質Mieapによる消化器がん抑制のメカニズムに関する研究

p53誘導性タンパク質Mieapは不良なミトコンドリアを修復あるいは排除することによりミトコンドリアの品質を制御する。大腸がんモデルマウスApcMin/+のMieap欠損マウスを開発したところ、小腸及び大腸の腫瘍発生数が増大し、腫瘍の著しい悪性化・がん化が引き起こされた。そこで本申請課題では、Mieap欠損ApcMin/+マウス・胃がんモデルマウス・膵がんモデルマウスの腫瘍組織に対するトランスクリプトーム解析及びプロテオーム解析を行い、本機能の有する消化器がん抑制機序の解明とその破綻によって活性化する消化器がん促進因子の同定を試みる。
物質循環における水の乾燥による影響の解明-液滴のサイズによる反応経路の変化-

露には亜硝酸イオンやアンモニウムイオンが多く含まれている.露が生成すると,大気中にある亜硝酸ガスやアンモニアガスが露に取り込まれ,これらの気体の大気中の濃度が下がる.亜硝酸は早朝のOHラジカルの主発生源として知られており,従って,亜硝酸濃度が下がることは大気光化学活性が落ちること,つまりオゾン濃度が下がることになる.我々は,本研究により大気中の亜硝酸ガスが露の生成により下がること,露中に高濃度で存在すること,乾燥により,その多くがアンモニアと反応して窒素になることを見出した.また,早朝の亜硝酸濃度の減少が,オゾン濃度の減少に関与することを,実際の測定データより示し,また,計算機シミュレーションによってもその減少が起こることを確認した.亜硝酸アンモニムは,迅速に乾燥させ高濃度にすると窒素になる反応が支配的になり,ほとんどの亜硝酸が窒素となることがわかった.一方,低濃度の試料をゆっくり乾燥させると,亜硝酸ガスとして気体となることがわかった.実際の露は小さいため,日出後迅速に乾燥するため,その多くが窒素となる.その結果,露が生成・消滅すると,大気中の亜硝酸が吸収・分解されることになり,早朝のOHラジカル源である亜硝酸が減少する.その結果,午前中のオゾン濃度が低くなると予想される.実際,過去に露が出た時のオゾン濃度を調べたところ,露が出ていない日よりもオゾンの生成が抑えられていることがわかった.露が生成する日は,雲もなく,風も弱いため,オゾン濃度が増加しやすい気象条件であるにもかかわらず,オゾン濃度が抑制されたことは,亜硝酸の減少によるものである可能性が非常に高い.また,亜硝酸野濃度以外の条件を同じにしてシミュレーションを行ったところ,午前中のオゾン濃度が10%程度抑えられる結果となった.本研究により,露の生成がオゾン濃度を抑える働きがある可能性が高いことが明らかとなった.露には亜硝酸イオンやアンモニウムイオンが多く含まれている.露が生成すると,大気中にある亜硝酸ガスやアンモニアガスが露に取り込まれ,これらの気体の大気中の濃度が下がる.亜硝酸は早朝のOHラジカルの主発生源として知られており,従って,亜硝酸濃度が下がることは大気光化学活性が落ちること,つまりオゾン濃度が下がることになる.我々は,本研究により大気中の亜硝酸ガスが露の生成により下がること,露中に高濃度で存在すること,乾燥により,その多くがアンモニアと反応して窒素になることを見出した.また,早朝の亜硝酸濃度の減少が,オゾン濃度の減少に関与することを,実際の測定データより示し,また,計算機シミュレーションによってもその減少が起こることを確認した.亜硝酸アンモニムは,迅速に乾燥させ高濃度にすると窒素になる反応が支配的になり,ほとんどの亜硝酸が窒素となることがわかった.一方,低濃度の試料をゆっくり乾燥させると,亜硝酸ガスとして気体となることがわかった.実際の露は小さいため,日出後迅速に乾燥するため,その多くが窒素となる.その結果,露が生成・消滅すると,大気中の亜硝酸が吸収・分解されることになり,早朝のOHラジカル源である亜硝酸が減少する.その結果,午前中のオゾン濃度が低くなると予想される.実際,過去に露が出た時のオゾン濃度を調べたところ,露が出ていない日よりもオゾンの生成が抑えられていることがわかった.露が生成する日は,雲もなく,風も弱いため,オゾン濃度が増加しやすい気象条件であるにもかかわらず,オゾン濃度が抑制されたことは,亜硝酸の減少によるものである可能性が非常に高い.また,亜硝酸野濃度以外の条件を同じにしてシミュレーションを行ったところ,午前中のオゾン濃度が10%程度抑えられる結果となった.本研究により,露の生成がオゾン濃度を抑える働きがある可能性が高いことが明らかとなった.今年度は,露の乾燥に伴う溶存物質の変化の研究で,まず,発生するアンモニアガスの測定法の確立を目指した。平成17年度に研究分担者として新規に加わった定永の協力を得て研究を行ない,その結果,0.1ppbのアンモニアを連続して測定できる方法を確立することができた。現在論文の作成中である。また,露の乾燥実験では,発生する窒素の定量を試みた。しかし,アルゴン気流中で乾燥を行なったにも関わらず,バックグランドとして比較的高濃度の窒素が検出され,露の乾燥から発生する微量の窒素の定量には至らなかった。また,NOやNO_2は市販の質素酸化物測定装置でも十分測定することができることがわかった。発生するHONOに関しては,従来開発した方法により容易に測定を行なうことができ,さらに平成18年度はアンモニアの測定も行なう予定である。また,今年度は,自然に生成した露を乾燥させて,その結果発生する気体や残存する塩が,人工的に作製した水滴と同じ傾向にあるかどうかを調べた。その結果,大体の傾向は人工露と同じであるが,全く異なった傾向を示す場合もあることがわかった。平成18年度も同様の実験を行なう予定で,どのような場合に違った結果となるか,その原因について明らかにしていきたい。研究分担者の坂東は,露の乾燥が実環境にどのように影響を与えるかの評価をCBM-IVというボックスモデルを使ったシミュレーションにより行なった。その結果,露が生成した場合は生成しない場合に比べ日中のオゾン濃度が約10ppb低くなることがわかった。また,露が生成した場合でも,露の成分や乾燥速度により,窒素になったり,HONOを放出したりするが,HONOを生成する場合は,窒素を生成する場合に比べ,数ppb高くなることも明らかとなった。今後もさらに詳細な検討を行なう予定である。

また,この研究と平行して露に亜硝酸やアンモニアがどのようにとけ込むのかを調べた。その結果,大気中のHONOやNH_3が,露の生成とともに減少し,乾燥とともに増加する傾向があることがわかった。露には亜硝酸イオンやアンモニウムイオンが多く含まれている。露が生成すると,大気中にある亜硝酸ガスやアンモニアガスが露に取り込まれ,これらの気体の大気中の濃度が下がる。亜硝酸は早朝のOHラジカルの主発生源として知られており,したっがて,亜硝酸濃度が下がることは大気光化学活性が落ちること,つまりオゾン濃度が下がることになる。我々は,本研究により大気中の亜硝酸ガスが露の生成により下がること,露中に高濃度で存在すること,乾燥により,その多くがアンモニアと反応して窒素になることを見出した。また,早朝の亜硝酸濃度の減少が,オゾン濃度の減少に関与することを,実際の測定データより示し,また,計算機シミュレーションによってもその減少が起こることを確認した。亜硝酸アンモニムは,迅速に乾燥させ高濃度にすると窒素になる反応が支配的になり,ほとんどの亜亜硝酸が窒素となることがわかった。一方,低濃度の試料をゆっくり乾燥させると,亜硝酸ガスとして気体となることがわかった。実際の露は小さいため,日出後迅速に乾燥するため,その多くが窒素となる。その結果,露が生成・消滅すると,大気中の亜硝酸が吸収・分解されることになり,早朝のOHラジカル源である亜硝酸が減少する。その結果,午前中のオゾン濃度が低くなると予想される。実際,過去に露が出た時のオゾン濃度を調べたところ,露が出ていない日よりもオゾンの生成が抑えられていることがわかった。露が生成する日は,雲もなく,風も弱いため,オゾン濃度が増加しやすい気象条件であるにもかかわらず,オゾン濃度が抑制されたことは,亜硝酸の減少によるものである可能性が非常に高い。また,亜硝酸野濃度以外の条件を同じにしてシミュレーションを行ったところ,午前中のオゾン濃度が10%程度抑えられる結果となった。本研究により,露の生成がオゾン濃度を抑える働きがある可能性が高いことが明らかとなった。
エクトイン遺伝子の導入によるメラルーカ・アカジアの塩ストレス耐性の強化

海水に生息する好塩性微生物よりクローニングした塩ストレス耐性遺伝子、エクトイン合成遺伝子による形質転換によって高等植物の塩ストレス、耐性が強化されることを我々はタバコで初めて証明した(Moghaiebら、2005)。そこで、本研究は、この遺伝子の導入によって、メコンデルタの重要な植物種であるメラルーカ及びアカシアの塩ストレス耐性の強化を図ることを主目的として実施した。具体的には、(1)エクトイン合成遺伝子によってメラルーカ、アカシアの形質転換を図った。(2)この形質転換によって、塩ストレス耐性が強化されたか否かについて、相対生長率、光合成能、などから評価している。(3)塩ストレス耐性機構におけるエクトインの役割について、遺伝子発現・その生成・集積状態などから解析している。さらに、特にソース葉からの炭素及び窒素化合物の転流・シンクでの集積などに与える影響などからも解析を進めている。主な実験手法は次の通りである。塩ストレス耐性におけるエクトインの役割については、(1)塩ストレスを浸透調節およびナトリウムイオンなどによる阻害の両面に分けて、光合成および光合成産物の葉から他部位への転流への影響を調査する。さらに、(2)根からの^<15>Nの吸収、各器官への転流などに与える影響も調査する。(3)茎の水分状態を把握するため、茎の径変化を歪ゲージ式変位計で連続的にモニタリングする。以上の結果より、塩ストレス耐性機構におけるエクトインの役割について、理解を深める。海水に生息する好塩性微生物よりクローニングした塩ストレス耐性遺伝子、エクトイン合成遺伝子による形質転換によって高等植物の塩ストレス耐性が強化されることを我々はタバコで初めて証明した(Moghaiebら、2005)。主要な実験方法を述べると、海水及び塩田より採取した好塩性微生物(Halomonas elegata)からクローニングした塩ストレス耐性遺伝子(エクトイン合成遺伝子で3種の酵素遺伝子より構成:ジアミノ酪酸トランスアミナーゼ(L-diaminobutylic acid transaminase : ectA)-ジアミノ酪酸アセチルトランスフェラーゼ(L-diaminobutylic acid acetyltransferase : ectB)-エクトインシンターゼ(ectoine synthase : ectC)遺伝子)を用い、アグロバクテリウム法によって、メラルーカ、アカシアの形質転換を行った。(1)各樹種の培養細胞を用いて、形質転換体を取得し、この転換体について遺伝子の導入・発現状態を調査している。
海馬における興奮性アミノ酸受容体に関する神経薬理学的研究

1.興奮性アミノ酸の受容体結合:海馬,大脳皮質神経膜において,興奮性アミノ酸のグルタミン酸(glu)とシステインスルフィン酸(CSA)は異なる結合部位を有することを明らかにした.gluの特異的結合部位のうちCl^-依存性結合部位はgluの取込み部位であること,又,このCl^-依存性結合部位が神経細胞を脱分極することにより著明に増加することを明らかにし,膜電位によるCl^-依存性のglu取込み系の調節機構を証明した.更に,興奮性含硫アミノ酸のシステイン酸がこの結合部位の特異的リガンドであることを明らかにした.2.海馬切片における興奮性アミノ酸のcyclic AMP産生促進作用:従来,共通の機構と考えられていた興奮性アミノ酸による脳切片cyclic AMP産生促進に異なった受容体が関与していることを明らかにした.更に,その受容体機構として,興奮性アミノ酸受容体がCl^-の輸送を介してアデニレートシクラーゼを活性化することを証明した.3.アミノ酸伝達物質の遊離:海馬切片における興奮性アミノ酸受容体を介するGABA遊離促進作用について,その受容体の類別,更にインシュリン, Zn^<++>の特異的拮抗作用を明らかにした.又,海馬切片からのgluの遊離に対するZn^<++>の特異的抑制作用を見い出した.このZn^<++>とgluの関連については,海馬の上清中にZn^<++>の結合蛋白が存在すること, gluをはじめとする興奮性アミノ酸が結合蛋白からのZn^<++>の解離を著明に促進することを明らかにした.1.興奮性アミノ酸の受容体結合:海馬,大脳皮質神経膜において,興奮性アミノ酸のグルタミン酸(glu)とシステインスルフィン酸(CSA)は異なる結合部位を有することを明らかにした.gluの特異的結合部位のうちCl^-依存性結合部位はgluの取込み部位であること,又,このCl^-依存性結合部位が神経細胞を脱分極することにより著明に増加することを明らかにし,膜電位によるCl^-依存性のglu取込み系の調節機構を証明した.更に,興奮性含硫アミノ酸のシステイン酸がこの結合部位の特異的リガンドであることを明らかにした.2.海馬切片における興奮性アミノ酸のcyclic AMP産生促進作用:従来,共通の機構と考えられていた興奮性アミノ酸による脳切片cyclic AMP産生促進に異なった受容体が関与していることを明らかにした.更に,その受容体機構として,興奮性アミノ酸受容体がCl^-の輸送を介してアデニレートシクラーゼを活性化することを証明した.3.アミノ酸伝達物質の遊離:海馬切片における興奮性アミノ酸受容体を介するGABA遊離促進作用について,その受容体の類別,更にインシュリン, Zn^<++>の特異的拮抗作用を明らかにした.又,海馬切片からのgluの遊離に対するZn^<++>の特異的抑制作用を見い出した.このZn^<++>とgluの関連については,海馬の上清中にZn^<++>の結合蛋白が存在すること, gluをはじめとする興奮性アミノ酸が結合蛋白からのZn^<++>の解離を著明に促進することを明らかにした.1.海馬シナプス膜における受容体結合:興奮性アミノ酸であるグルタミン酸(Glu)とシステインスルフィン酸(CSA)の受容体の相違と結合実験により求めた。CSA結合部位のリガンドとしてシステイン酸(【^(35)S】-CA)を合成使用した。CA結合部位は、【Cl^-】に完全に依存しており、それがGluの結合部位の【Cl^-】依存性部位の良いリガンドであることを明らかにした。Glu及びCAの結合部位について種々のアニオン交換阻害剤の作用の検討からその【Cl^-】依存性の性質を明らかにした。更に、高濃度のリガンド前処置による【Gl^-】依存性Clu結合及びCA結合の著明な増加を明らかにした。この増加機作について【Na^+】、【Ca^++】との関連、その可逆性など種々のことを明らかにした。2.海馬切片における興奮性アミノ酸のcyclic AMP産生従進作用:興奮性アミノ酸による切片cyclicAMP蓄積作用について、アニオン依存性特に【Cl^-】依存性をもつことを見い出した。このアニオン選択性はクロライドチャンネルの選択性、【Cl^-】依存性Glu結合と同等のものであった。この作用についてアニオン交換阻害剤、【Cl^-】依存性Glu結合部位の阻害剤などの作用を明らかにした。3.海馬切片におけるアミノ酸伝達物質の遊離:海馬切片からの〔【^3H】〕GABA遊離に対するGlu、CSA受容体機構を明らかにし、両者が異なった受容体を介して作用することをみとめた。
糸状菌の第一次病原性決定因子:宿主特異的毒素の生合成,識別,及び解毒の分子機構

1.AM毒素生合成に関与する酵素とその遺伝子:(1)環状ペプチド生合成に特徴的なATP/PPi交換反応を指標として、リンゴ斑点落葉病菌の発芽胞子および培養菌糸体から、AM毒素の構成アミノ酸に依存する活性を見いだし、その部分純化を行なった。(2)環状ペプチドであるHC毒素の生合成遺伝子のアミノ酸活性化ドメインDNA保存配列をプライマーとしてPCR法でAM毒素生合成遺伝子の探索を行なった。リンゴ斑点落葉病菌による増幅活性が見られたが、特異性の点で問題を今後に残した。2.AK毒素生合成遺伝子:ナシ黒斑病菌からAK毒素欠損株2株を分離し、野生株DNAによる変異相補法による毒素生産遺伝子クローニングを試みた。3000株以上の形質転換体の毒素生産能を検定したが、毒素回復株は得られていない。つぎに遺伝子タギング法を試みた。ハイグロマイシンB抵抗性遺伝子をマーカーとするベクターpSH75をAK毒素生産株に導入し、得られた形質転換体約2000株から1株の毒素欠損株を得た。pSH75は複数の染色体領域にタンデムに反復挿入されていた。ベクターDNA挿入領域の同定と近傍配列を回収中。3.HMT毒素生合成遺伝子(TOX1): TOX1にポリケタイド合成酵素(PKS)のacyltransferase保存領域DNAを挿入し、毒素生産能喪失変異株(C4.PKS13)を得、野生株と比較して染色体の540kb断片の欠損に伴う440kb断片の置換が起きていて、この部分がHMT毒素生合成に必須であることが明らかとなった。また、REMI法でタギング後、1300の形質転換体から毒素生産能喪失変異株2株(R.C4.186 & R.C4.350L)を得た。これらの株に挿入された塩基配列の分析結果はPKSのアシルキャリヤ-蛋白質の領域にプラスミドが挿入されていることを示し、TOX1ローカスがHMT毒素生合成に必須なPKSをコードしていることを確実にした。さらに、TOX1は単一のローカスではなく、2つの染色体の相互転座の切断部位あるいはそのごく近傍に座乗している2つのローカスであり、これら通常の遺伝学的分析では分離不能で、今回初めて分子遺伝学的手法の利用でこれが発見された。4.HC毒素生合成遺伝子HTS1の構造と機能: 22kbHTS1にコードされている570kDのHC毒素生合成酵素は、純化の過程でHTS-1及びHTS-2とよばれる異なる活性を持つ2つの酵素断片に分離する。HTS-1はL-プロリンを活性化しチオアシル化するとともにD-プロリンに光学異性化し、HTS-2はL-及びD-アラニンを活性化しL-アラニンをD-アラニンに異性化する。本酵素は他の環状ペプチド生合成酵素と類似のドメイン4つ(AD)を持つ。これらのドメインをコードしている遺伝子領域をpETベクターにそれぞれサブクローンし大腸菌を用いて発現させた。各ドメイン遺伝子産物ペプチドはSDS-PAGEで分離後、HTS抗体で調べた結果、BはHTS-1の、CはHTS-2の一部であった。バキュロウイルス系を用いて発現させるとドメインBからL-プロリン依存の高い酵素活性を得た。一方、HC毒素生成に必要な他の遺伝子の存在が明らかとなった。HTS1の5′隣接領域に存在する2.1kbのTOXAはHC毒素の排出に、TOXCは毒素構成員の2-アミノエポキシデカン酸の生合成に関与するらしい。5.非特異的侵略力の分子生物学的解析:メラニン合成能欠損のアルターナリア病原菌、多糖分解酵素欠損のコクリオボーラス病原菌、およびクチン分解酵素導入のコクリオボーラス病原菌が研究された。6.毒素レセプター:AK毒素感受性のナシ培養細胞に特異的に存在する蛋白質を検出した。HV毒素の結合蛋白質の細胞内局在性とその役割を免疫学的手法で明らかにした。7.HC毒素抵抗性遺伝子の構造と機能:病害抵抗性遺伝子Hm1がHC毒素の還元解毒酵素をコードしていることを確定した。8.なお、研究成果の一部は第2回鳥取大学HST国際シンポジウム記録集(1994)として刊行した。

3.HMT毒素生合成遺伝子(TOX1): TOX1にポリケタイド合成酵素(PKS)のacyltransferase保存領域DNAを挿入し、毒素生産能喪失変異株(C4.PKS13)を得、野生株と比較して染色体の540kb断片の欠損に伴う440kb断片の置換が起きていて、この部分がHMT毒素生合成に必須であることが明らかとなった。また、REMI法でタギング後、1300の形質転換体から毒素生産能喪失変異株2株(R.C4.186 & R.C4.350L)を得た。これらの株に挿入された塩基配列の分析結果はPKSのアシルキャリヤ-蛋白質の領域にプラスミドが挿入されていることを示し、TOX1ローカスがHMT毒素生合成に必須なPKSをコードしていることを確実にした。さらに、TOX1は単一のローカスではなく、2つの染色体の相互転座の切断部位あるいはそのごく近傍に座乗している2つのローカスであり、これら通常の遺伝学的分析では分離不能で、今回初めて分子遺伝学的手法の利用でこれが発見された。4.HC毒素生合成遺伝子HTS1の構造と機能: 22kbHTS1にコードされている570kDのHC毒素生合成酵素は、純化の過程でHTS-1及びHTS-2とよばれる異なる活性を持つ2つの酵素断片に分離する。HTS-1はL-プロリンを活性化しチオアシル化するとともにD-プロリンに光学異性化し、HTS-2はL-及びD-アラニンを活性化しL-アラニンをD-アラニンに異性化する。本酵素は他の環状ペプチド生合成酵素と類似のドメイン4つ(AD)を持つ。これらのドメインをコードしている遺伝子領域をpETベクターにそれぞれサブクローンし大腸菌を用いて発現させた。各ドメイン遺伝子産物ペプチドはSDS-PAGEで分離後、HTS抗体で調べた結果、BはHTS-1の、CはHTS-2の一部であった。バキュロウイルス系を用いて発現させるとドメインBからL-プロリン依存の高い酵素活性を得た。一方、HC毒素生成に必要な他の遺伝子の存在が明らかとなった。HTS1の5′隣接領域に存在する2.1kbのTOXAはHC毒素の排出に、TOXCは毒素構成員の2-アミノエポキシデカン酸の生合成に関与するらしい。5.非特異的侵略力の分子生物学的解析:メラニン合成能欠損のアルターナリア病原菌、多糖分解酵素欠損のコクリオボーラス病原菌、およびクチン分解酵素導入のコクリオボーラス病原菌が研究された。6.毒素レセプター:AK毒素感受性のナシ培養細胞に特異的に存在する蛋白質を検出した。HV毒素の結合蛋白質の細胞内局在性とその役割を免疫学的手法で明らかにした。7.HC毒素抵抗性遺伝子の構造と機能:病害抵抗性遺伝子Hm1がHC毒素の還元解毒酵素をコードしていることを確定した。8.なお、研究成果の一部は第2回鳥取大学HST国際シンポジウム記録集(1994)として刊行した。平成2・3年度国際学術(共同)研究及び平成24年度総合研究の研究成果を踏まえて、研究焦点の明確な日米共同研究を展開中である。平成5年9月には宿主特異的毒素に関する鳥取大学国際シンポジウムを開催し、宿主特異的毒素(HST)の生合成過程、レセプター解析を中心とした研究成果の発表、討論がなされた。本プロジェクト分担者のうちO.C.Yoder(コ-ネル大)は、
高齢者の睡眠改善を目指した身体活動に関する研究

本年度は,1日の全ての活動を含んだ身体活動に注目し,良好な睡眠とのつながりが最も強い身体活動強度や量を追究した。地域在住高齢者約3,500名を対象とした横断的疫学調査から,中強度身体活動(3-6 METs)を週300分以上実践している者は,週149分未満の者に比して不良な睡眠(短時間睡眠,入眠困難感,低い睡眠満足度)を有している可能性が低いことを明らかにした。一方で,高強度身体活動(6 METs以上)と睡眠との間には有意な関連性はみられなかった。本研究結果は,現在,学術誌へ投稿中である。また,こうした身体活動強度と睡眠との因果関係を明らかにすべく,約1,700名を対象に実施した縦断的疫学調査(平均追跡期間:3.4年)から,60歳以上の者では中強度身体活動の実践が新たな不良な睡眠の質の発生を抑制した一方で,高強度身体活動では不眠予防効果がみとめられなかった。本研究成果は,学術誌(American Journal of Preventive Medicine)への掲載が決定している。これらの知見から,高齢者が健やかな睡眠を得るには高強度のものではなく,比較的強度の低い身体活動の実践が有効であることが示唆された。また,本年度は,身体活動に他の睡眠改善因子を加えた場合の睡眠との関連性を検討し,身体活動の効果を最適化する方法を追究した。その結果,身体活動に,同じく睡眠に対して好影響を与えると考えられている牛乳・乳製品摂取を組み合わせることで,寝つきの良さとの関連性が強化されることが示唆された。睡眠をアウトカムに,二つの因子を組み合わせて関連性を調査した例は皆無であり,身体活動と牛乳・乳製品摂取という身近な生活習慣により効率的に高齢者の睡眠を改善させることができる可能性を示した本研究の意義は大きいといえる。本研究結果は学術誌(BMC Geriatrics)へ投稿し,既に掲載されている。26年度が最終年度であるため、記入しない。ヒトは加齢に伴い睡眠の量・質ともに低下し,高齢者は若年者に比して睡眠に問題を抱える者が多いことが明らかになっている。不良な睡眠は様々な不健康状態へとつながるため,現代社会において,高齢者の睡眠障害への対処は急務の課題といえる。睡眠改善方策として睡眠薬による治療が有名であるが副作用の危険性が問題視されており,必ずしも最善とはいえない。そこで,副作用の危険性が小さく,心身への恩恵が大きい身体活動に注目が集まっている。身体活動が睡眠に与える影響や関連性について検討した先行研究は散見されるが,どのような活動強度・量・様式(運動,家庭内活動,仕事関連活動)が良好な睡眠につながるのかについては不明な点が多い。そこで,まずは509名の地域在住高齢者を対象に,強度や様式ごとの身体活動と睡眠との関連性について網羅的な検討をおこなった。その結果,運動の中でも高齢者の間で人気のあるゲートボールや健康体操などの比較的強度の低い運動や,家事・雑用などの家庭内活動の実践であっても良好な睡眠と関連することを明らかにした。本研究結果は,身体的制約により高強度運動の実践が困難である高齢者にとって極めて有用な情報となることが期待される。さらに,良好な睡眠と関連する身体活動の強度や様式を明らかにした本研究は,睡眠改善に有用な身体活動(運動)処方の確立,および当該研究領域の発展に大きく貢献しているといえる。なお,本研究結果は,既に学術誌(体力科学)への掲載が完了している。今後はより大規模のデータ(対象者数: 10,000名弱)を使用して身体活動強度・量と睡眠との関連性を明らかにする。これについては,すでにデータ収集・解析が完了し,執筆段階にある。その後,これまでの研究成果を基に運動介入研究を実施することで,運動強度や量が睡眠に与える影響(因果関係)を明らかにする。

その結果,身体活動に,同じく睡眠に対して好影響を与えると考えられている牛乳・乳製品摂取を組み合わせることで,寝つきの良さとの関連性が強化されることが示唆された。睡眠をアウトカムに,二つの因子を組み合わせて関連性を調査した例は皆無であり,身体活動と牛乳・乳製品摂取という身近な生活習慣により効率的に高齢者の睡眠を改善させることができる可能性を示した本研究の意義は大きいといえる。本研究結果は学術誌(BMC Geriatrics)へ投稿し,既に掲載されている。26年度が最終年度であるため、記入しない。検討課題の一つである,高齢者の強度・種類(運動,家庭内活動,仕事関連活動)ごとの身体活動と睡眠との関連性については検討が終了しており,結果は既に学術誌(体力科学)に掲載されているため。また,その次の課題である,より大きなデータを使用した身体活動強度・量と睡眠との関連性の検討についても,すでにデータ収集と解析が終了し,執筆段階に取り掛かっているため。まずは上記の身体活動強度・量と睡眠との関連性についての分析結果を海外の学会誌へ投稿するため,論文執筆を始める。同時に,その次の課題である,身体活動が睡眠に与える影響を検討するための介入研究を執りおこなう準備を始める。具体的には,研究デザインの構築(対象者の選定方法や測定項目の決定など),および予備実験をおこなう。これに当たっては,運動介入や睡眠研究の専門家に測定機器や介入期間・頻度,介入プログラム等についてアドバイスを求め進めていく予定である。
カルシトニン受容体異常についての分子生物学的研究

(1)Williams症候群患者血液に、SV40を感染させ、Williams症候群の細胞株を確立した。確立した細胞株をfluorescent in situ hybridazationで検討した所、染色体の異常が認められた。(2)Williams症候群患者血液中の白血球、及びその細胞株から、RNAを抽出し、カルシトニンのプライマーを用いて、RT-PCR-ダイレクトシークエンスを試みたが、欠損部が存在する為か、全塩基配列の確認には至らなかった。(3)そこで、ダイレクトシークエンスが可能であった部位の内、もっとも下流域に相当する部位から、5′Rapid Amplification of cDNA Endsを行い、cDNAクローンを得る事に成功した。(4)このクローンから、ダイレクトシークエンスを行った所、遺伝子バンクに存在しない塩基配列であった。(5)但し、RACE法は、PCR反応を基本とするので(PCR反応に付き物のア-ティファクトが起こり得るので)、念の為、現在、このクローンをサブクローニングし、塩基配列の同定中である。(6)さらに、cDNAライブラリーを作成する事で、配列を確定する予定である。
照明による光刺激が海鳥の生理状態や行動に及ぼす影響の解明

本研究では、実験的アプローチや野外観測を通じて、海鳥が照明に誘引される直接的なメカニズムを明らかにすることを目的としている。照明に誘引されることが知られているオオミズナギドリの巣立ち雛と、誘引されないオオミズナギドリの親鳥およびウミネコを対象に、本年度は野外観測を行い、対象種の行動・形態データの取得を行った。2年目である本年は、昨年度調査した新潟県粟島、村上沿岸のほか、オオミズナギドリが繁殖する有人島である伊豆諸島の利島も調査地に加え、観測を行った。新潟県の村上沿岸では、ウミネコの親鳥4個体にGPSデータロガーを装着し、そのうち3個体から移動軌跡を取得した。ウミネコは、海上での採餌を行うほか、三面川上流の水田など内陸も日中の採餌場所として利用していた。10月下旬には粟島にて、11月上旬には利島にて、それぞれ集落内のオオミズナギドリ巣立ち雛の落鳥調査を行ったところ、巣立ち雛の回収数は粟島で54個体、利島で27個体であった。それぞれの巣立ち雛の回収地点で最も近い照明を確認したところ、相対的に蛍光ランプが多かった。島内の街灯の光スペクトルを計測して比較すると、蛍光ランプは他の照明より紫外領域を多く含んでおり、オオミズナギドリの巣立ち雛は紫外線を含む光源に誘引されやすいことが考えられた。また、粟島のオオミズナギドリの巣立ち雛について、翼面計測と性判別を行った。その結果、雌雄ともに親鳥に比べて翼面荷重が大きく、飛行性能が低いことが示唆された。昨年度は粟島の落鳥数が著しく少なかったため、今年度は粟島に加えて伊豆諸島の利島も調査地に加えた。その結果、両方の島で落鳥に関するデータが得られたことから、当初予定していなかった繁殖地間の比較も含めた解析が可能となった。以上のことから、落鳥観測が行えなかった初年度の遅れを取り戻したと考えられ、研究全体としては概ね順調に進行していると言える。次年度は、オオミズナギドリ繁殖地および集落で実験的に照明を設置し、紫外線を含む光源による誘引への影響を評価する。また、照明の存在下でのオオミズナギドリの雛の体内リズムの発達と乱れについて計測する。得られたデータの解析を進め、オオミズナギドリの巣立ち雛に光誘引が生じる生理的なメカニズムの解明を目指す。本研究の目的は、実験的アプローチや野外観測技術を用いることにより、海鳥が照明に誘引される直接的なメカニズムを明らかにすることである。照明に誘引されることが知られているオオミズナギドリの巣立ち雛と誘引されないオオミズナギドリの親鳥とウミネコを対象に、本年度は観測・実験用のシステム構築および対象種の行動・形態データの取得を行った。サーモグラフィカメラ、高感度カメラ、暗視スコープを用いて、繁殖地で帰巣するオオミズナギドリを観測し、映像を比較した結果、飛翔するオオミズナギドリの夜間観測に適した機器としてサーモグラフィカメラを選定した。また、小型のサーモグラフィカメラを応用し、熱映像を取得して連続的に生理状態を観測しながら、対象個体の光刺激に対する反応を評価する実験迷路を作成した。野外調査としては4月に新潟県村上市を、6月に新潟県粟島を訪れ、それぞれウミネコとオオミズナギドリの繁殖状況を確認した。5月から7月まで村上市沿岸で継続的にセンサスを行い、ウミネコによる沿岸の利用状況を調べた。その結果、夕方以降に沿岸を利用する個体が増加することを明らかにした。また、照明に誘引され落下したオオミズナギドリの巣立ち雛の死体を計測した結果、親鳥に比べて体サイズが小さいことを確認した。今後、巣立ち直前の雛の体サイズと比較することで、照明に誘引される個体の形態的特徴を明らかにする予定である。本研究ではオオミズナギドリの巣立ち雛の照明による誘引が例年100個体以上観測される新潟県粟島で飛翔観測および誘引個体を用いた実験を行う予定であった。観測・実験用の計測システムの構築は計画通りに実施されたが、当該年度はオオミズナギドリの誘引および落下がほとんど観測されなかった。これは風況等の影響によるものと考えられるが、これにより解析にのための十分なデータを確保することができなかった。

島内の街灯の光スペクトルを計測して比較すると、蛍光ランプは他の照明より紫外領域を多く含んでおり、オオミズナギドリの巣立ち雛は紫外線を含む光源に誘引されやすいことが考えられた。また、粟島のオオミズナギドリの巣立ち雛について、翼面計測と性判別を行った。その結果、雌雄ともに親鳥に比べて翼面荷重が大きく、飛行性能が低いことが示唆された。昨年度は粟島の落鳥数が著しく少なかったため、今年度は粟島に加えて伊豆諸島の利島も調査地に加えた。その結果、両方の島で落鳥に関するデータが得られたことから、当初予定していなかった繁殖地間の比較も含めた解析が可能となった。以上のことから、落鳥観測が行えなかった初年度の遅れを取り戻したと考えられ、研究全体としては概ね順調に進行していると言える。野外における観測・実験用の計測システムは既に構築済みであり、今後はこれらのシステムを用いた野外調査を進めていく。また、来年度以降十分なサンプルサイズを確保するために、照明に誘引された巣立ち雛だけでなく、繁殖地の巣立ち直前の雛も光刺激実験の対象に加える。次年度は、オオミズナギドリ繁殖地および集落で実験的に照明を設置し、紫外線を含む光源による誘引への影響を評価する。また、照明の存在下でのオオミズナギドリの雛の体内リズムの発達と乱れについて計測する。得られたデータの解析を進め、オオミズナギドリの巣立ち雛に光誘引が生じる生理的なメカニズムの解明を目指す。当該年度は照明によるオオミズナギドリの誘引がほとんど発生せず、野外での観測および実験のための旅費と人件費が計画より減額となり、当該助成金が生じた。来年度は翌年度の研究費と合わせ、観測・実験期間を延長して調査を行う予定である。現地調査が予定よりも少ない回数で実施でき、旅費、滞在費が想定を下回ったため。次年度使用額は、オオミズナギドリ繁殖地で行う実験的な光照射のために必要な、照明機材の購入予算として使用する。
難病患者生活の質向上のための眼電位を用いたマウスカーソル制御システムの開発

本申請研究は、ALS患者や四肢麻痺患者を対象とし、眼電位を用いた自由度の高いパーソナルコンピュータのマウスカーソル制御システムの開発を行った。本申請研究で開発した装置は、顔に電極を4つ固定するゴーグルと腕に1つ電極を用いて、従来の方法より目から遠い位置に安全に電極を固定して眼電位を計測することを可能にし、瞬き等の動きを除去することで確実に眼球変化を推定することを可能にした。本申請研究で開発したシステムにより、目線の左右の識別は99%、目線の上下の識別率は80%以上を実現し、文字入力操作やブラウザ操作を行うことを実現しており、実用レベルの眼電位を用いたマウスカーソル制御システムであるといえる。現在、日本には2万1千人を超える筋委縮性側策硬化症(ALS)患者がいる。ALS症は自律神経や知覚神経は侵されないので、患者の意思は病状末期でも明確である。しかし、ALS症は、体を動かすための神経系が侵されるため言語、非言語コミュニケーションが非常に困難である。そこで病状末期においても比較的最後まで随意運動が残る眼球運動を応用したコミュニケーションツールの開発が求められている。本研究は、ALS患者や四肢麻痺患者を対象とし、眼電位を用いた自由度の高いパーソナルコンピュータのマウスカーソル制御装置の開発を行う。申請者の調査した範囲では、マウスを用いたマウスカーソル制御と同じレベルでの眼電位を用いたマウスカーソル制御システムは存在しない。開発したマウスカーソル制御装置でブラウザや市販されている文章作成ソフトをスムーズに、かつなるべくストレスなく制御できるようになることを本申請研究の最終目的としている。本年度は、新たな眼電位計測装置の製作、マウスカーソル制御の脳波での判定アルゴリズムの開発及びカメラと眼電位計測装置を組合せたシステム開発を行った。眼電位計測装置は、昨年度製作した装置を拡張し、無線で信号を送信でき、かつ小型化を行った。また、眼電位信号による制御が正しいかどうかを判定するため、脳波を用いて、眼電位の判定を行う実験を行い、有効な情報を得ることができた。さらに、ユーザーが特定の方向を向いているときにだけマウスカーソル制御を行うことで、少しでもストレスを生じさせないように、カメラでの顔の向き判定と組み合わせたシステムの開発を行い、その評価実験を行っている。本研究で製作したシステムは、ALS患者や四肢麻痺患者などの難病患者のためのコミュニケーションツールになるものと期待している。本申請研究は、ALS患者や四肢麻痺患者を対象とし、眼電位を用いた自由度の高いパーソナルコンピュータのマウスカーソル制御装置の開発を行った。本申請研究で開発した装置は、顔に電極を4つ固定するゴーグルと腕に1つ電極を用いて、従来の方法より目から遠い位置に安全に電極を固定して眼電位を計測することを可能にし、瞬き等の筋電位を除去することで確実に眼球変化を推定することを可能にした。また、眼電位の直流成分と交流成分の両方を扱うことで、眼電位の問題点であったドリフト現象の問題を低減し、長時間連続使用を可能にした。本申請研究で開発したアルゴリズムにより、目線の左右識別率は99%、目線の上下識別率は80%以上を実現し、その他はほぼリジェクト率であることより、実用レベルの性能を得ていると考えている。本申請研究で開発したマウスカーソル制御装置を用いて、ブラウザや文章作成ソフトを制御することに成功している。また、開発した装置を使用した際の操作性・ストレスを定量的に健康ボランティアを被験者として評価実験を行い、使用するための条件を明確にした。本申請研究のシステムでは、対象となるモニターのサイズには大きく制御性能は依存しなく、個人差はあるが3日間の練習で熟練者と同様の制御が可能であることがわかった。また、筋電位信号のみで制御をするよりかはストレスが高いものの、眼電位信号を用いた場合でもほとんどストレスを被験者は感じていないことがわかった。

本研究は、ALS患者や四肢麻痺患者を対象とし、眼電位を用いた自由度の高いパーソナルコンピュータのマウスカーソル制御装置の開発を行う。申請者の調査した範囲では、マウスを用いたマウスカーソル制御と同じレベルでの眼電位を用いたマウスカーソル制御システムは存在しない。開発したマウスカーソル制御装置でブラウザや市販されている文章作成ソフトをスムーズに、かつなるべくストレスなく制御できるようになることを本申請研究の最終目的としている。本年度は、眼電位計測装置の製作、信号解析アルゴリズムの開発、マウスカーソル制御ソフトウェアのアルゴリズム開発を行った。眼電位計測装置は、フィルタとアンプと電子パーツで回路を作り、基板加工機を用いて製作した。また、眼電位の問題点である基準電位が時間とともに少しずつ変化するドリフト現象に対し、その変化に時間とともに対応する信号解析アルゴリズムを実装した。これにより、長時間、連続的に信号解析が可能になった。製作した眼電位計測装置と信号解析アルゴリズムを用いてマウスカーソル制御ソフトウェアを開発し、眼電位を用いたマウスカーソル制御システムを実現した。製作したシステムを用いて、眼電位でマウスカーソルを動かし、文章を作成することに成功している。本研究で製作したシステムは、ALS患者や四肢麻痺患者などの難病患者のためのコミュニケーションツールになるものと期待している。本年度は、新たな眼電位計測装置の製作、マウスカーソル制御の脳波での判定アルゴリズムの開発及びカメラと眼電位計測装置を組合せたシステム開発を行った。昨年度までで眼電位計測によるマウスカーソル制御システムは完成しており、本年度はさらにユーザの利便性を向上させるための改善を行った。その1つが、脳波での判定アルゴリズムの導入である。脳性まひなどの患者は、実際にマウスカーソルの制御が正しかったかどうかの判定を他人に伝えることができない。そこで、眼電位計測と同時に脳波を計測し、その制御がうまくいっているのかどうかを判定するアルゴリズムを導入し、その評価実験を行った。その結果、87%の精度で判定できることが分かった。そのことより、マウスカーソルの制御が正しい制御であるかどうかが分かり、正しいコミュニケーションが取れるようになると期待している。もう1つは、カメラによる顔の向きを判定するシステムと組み合わせるシステムを開発したことである。ユーザは眼電位計測中は常にマウスカーソル制御状態になるので、操作中は常に緊張している状態になる。そこで、顔の向きを少し対象モニターから外すことで、操作をOFF状態にし、緊張をほぐしたり、休むことができるようになると考えて、本システムを構築した。本システムでの実験により、ユーザは緊張することなく、比較的短時間(3日計6時間の訓練)で本システムの操作に慣れることを検証実験より判明した。このように当初の計画通り、眼電位でマウスカーソル制御を実現し、よりユーザの利便性を向上させるためのシステムの導入と評価実験を行うことができた。これらのことより、本研究はおおむね順調に進展していると自己評価した。
労働者の職能・職歴と職業移動に関する研究：副業やパートタイム歴の転職への影響

本研究は、労働者の過去の職歴、副業経験が転職行動に与える影響を、理論的、実証的に分析し、それらの影響に関して、労働者の特性、地域、景気動向などによる相違も検証するものである。本年度は、研究実施計画に基づき、エストニアと日本の労働市場について、個票データを用いた実証研究に取り組み、研究成果をまとめた。エストニアの労働市場については、Estonian Labor Force Survey(1995年)の個票データを用い、過去の副業経験が労働者の転職行動に与える影響について実証的分析を行った。体制移行期(198995年)の労働者の転職行動を、労働者の教育と収入を基準として指標化した職業階級間の移動という観点から、労働者の特性にも注目し、統計的に考察した。転職後の職種との関係にも着目し、副業経験が職業階級間の移動を促進する効果があるか統計的検証を行った。さらに、Sabrianiva(2002)の手法に従い、副業経験が転職の意思決定に与える影響に関する実証分析を行った。これらの研究成果をまとめ、近日、学会報告、論文投稿を行う見込みである。日本の労働市場については、副業の特徴を明らかにすべく、特に景気循環との関連について、複数年の「就業構造基本調査」の個票データを用いた分析を行った。近年の日本と米国の労働市場における副業所有と景気循環の関係を考察し、副業所有の地域間格差(州間、都道府県間)についての論文を執筆した。さらに、労働者のパートタイムや副業の経験が、その後の転職行動に与える影響、副業経験をもった転職行動と景気循環の関係について、実証分析を行った。副業やパートタイムの経験の転職行動への影響の分析は、正規・非正規労働者という労働市場の構造問題、需給のミスマッチの解消方法を示唆し得るという点でも意義が大きい。実証分析結果を早期にまとめ、学会報告、論文投稿につなげるものとする。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、労働者の転職前の職歴や職能が転職行動に与える影響について、多面的な考察を行うことを目的とする。特に、労働者の過去の副業経験やパートタイムでの職歴が転職行動に与える影響を、理論的・実証的に分析するものである。平成29年度は、研究実施計画に基づき、労働者の転職行動に関する既存文献の整理、研究手法の構築、個票データの収集・整理を行った。既存文献の整理においては、日本と米国の労働市場に関する研究を中心に、転職行動に関する理論的研究、非正規雇用から正規雇用への転職行動に関する実証研究、産業間・職種間の労働力再配置に関する実証研究、複数職保持者に関する理論・実証研究など、広範囲のサーベイ研究を行った。研究手法の構築については、先行研究を基に、後述の2種類の個票データと関連付け、実証分析手法の構築・再考を行った。個票データの収集については、既に入手済みの新興国エストニアのEstonian Labor Force Surveyの個票データに加え、日本の労働市場について、4か年度の「就業構造基本調査」の個票データを申請取得した。個票データの整理については、平成29年度に、エストニアの労働市場に関する基礎統計分析において、副業の有無が転職行動に影響を与えるという結果を得ることが出来た。既にその結果を踏まえた実証分析に移行しており、平成30年度早期の研究成果発表につなげるものとする。さらに日本の労働市場に関しては、取得した個票データを用いて、転職者に関する基礎統計分析をすすめている最中である。この基礎統計分析を早期に完結させ、エストニアの労働市場に関する実証分析手法に倣い、日本の労働市場におけるパートタイムの経験を持つ労働者の転職行動に関する実証分析に移行し、今年度中の研究成果につなげるものとする。上記研究実績の通り、昨年度は、既存文献の整理、研究手法の構築、個票データの収集・整理を実施したが、実証分析への移行という点において、日本の労働市場に関する研究に遅れが生じている。遅れの要因としては、平成29年度のスタート支援交付内定後に、「就業構造基本調査」の個票データを申請取得(平成29年12月末)したことから、基礎統計分析の開始に遅れが生じたことが挙げられる。しかしながら、先行しているエストニアの労働市場に関する実証分析に倣い、日本の労働市場に関しての研究も遂行可能であるという点で、その遅れを取り戻すことが出来ると考えている。

近年の日本と米国の労働市場における副業所有と景気循環の関係を考察し、副業所有の地域間格差(州間、都道府県間)についての論文を執筆した。さらに、労働者のパートタイムや副業の経験が、その後の転職行動に与える影響、副業経験をもった転職行動と景気循環の関係について、実証分析を行った。副業やパートタイムの経験の転職行動への影響の分析は、正規・非正規労働者という労働市場の構造問題、需給のミスマッチの解消方法を示唆し得るという点でも意義が大きい。実証分析結果を早期にまとめ、学会報告、論文投稿につなげるものとする。今後の研究においては、平成29年度に取り組んだ既存文献の整理、研究手法の構築、個票データの収集・整理を基に、エストニアと日本の労働市場に関する個票データを用いた実証研究に取り組み、研究成果をまとめるものとする。まず、エストニアの労働市場においては、平成29年度に実施した基礎統計分析を基に、個票データを活用して副業が転職行動に与える影響についての実証分析をすすめ、その結果を考察し、論文執筆を完結させる。さらに、論文投稿、学会発表にもつなげるものとする。次に、日本の労働市場については、4か年の「就業構造基本調査」の個票データを用いた実証的分析を行う。平成29年度より実施してきた基礎統計分析の結果を早期にまとめ、パートタイムの経験を持つ労働者の転職行動についての実証分析を行うものとする。日本の労働市場における転職行動、特に非正規雇用から正規雇用への転換(転職)については、近年先行研究が増えており、当初予定していた研究計画に新たな視点からの分析や考察を導入する必要性が生じている。この研究方法上の課題については、先行しているエストニアの労働市場についての実証分析に倣う形をとりながら解決することとする。日本の労働市場に関する実証分析も早期に完結させ、論文執筆、論文投稿、学会発表につなげるものとする。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。