hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
点滴静脈内注射の実践的技術習得のための教育プログラムの開発

平成22年度に実施した学部生への自己学習教材(CAI)を含んだ点滴静脈内注射の教育の効果について学会発表(日本看護学教育学会)を行った。また、平成23年度に点滴静脈内注射の卒業前の技術トレーニングのための自己学習教材(CAI)を作成し、その卒業前教育自己学習教材を5人の対象者に試してもらい、1)自己学習教材(CAI)の評価、2)技術トレーニングの評価、3)技術テストにおける教員による手技のチェックと学生の自己評価の3点から教育評価のデータを収集し当該年度い分析予定であった。詳細については分析途中であるが、自己学習教材の学生の評価は、自分で学習でき、動画で手技を確認することができることにより、評価が高かった。また、手技においても、自己学習教材(CAI)受講前は忘れてできない内容が多くあったが、自己学習教材(CAI)による卒業前トレーニングにより、5人とも記憶の想起ができ、ほぼ実施できるようになっていた。点滴静脈内注射において卒業前の自己学習教材(CAI)による卒業前トレーニングの有効性が示唆された。24年度が最終年度であるため、記入しない。教育プログラムの改善点として、1.授業(1)では、デモンストレーションでの細かい手技の教授方法としてズームでビデオ撮影するとともに、授業後の練習の際担当教員が細かい手技を再度指導するようにした。2.自習練習と自己学習(1)では、CAI教材を使用する共に、動画を作成し練習時も自由に見ることができるように環境設定した。練習には担当教員が立ち会い細かい手技は指導するようにした。3.授業(2)では、教員指導のもとで一連の手技を実施しフィードバックを行った。4.自習練習と自己学習(2)では、授業(2)での課題を明確にした練習を行った。5。技術テストでは、確認が形だけにならないよう複数の輸液剤を準備するとともに、観察やアセスメントも形式的にならないよう基礎疾患のある事例とし事前に課題を提示し学習して臨ませた。教育プログラムの評価として、1.授業(2)と技術テストでの技術の習得状況の変化を、学生の自己評価と教員評価に基づき比較し評価した。演習時と実技テストでの自己評価・教員評価を比較すると、両評価とも実技テストでは25項目中14項目でできた比率が上昇した。演習時・実技テスト時のどちらも比率が低かった項目は、<実施前の患者の準備と物品配置><刺入直後の観察>であった。練習時のフィードバックにより自分なりの課題を明確にして練習すること、リスク管理の重要性を認識できる学習上の工夫が課題である。2.技術テストでの実施の際のポイントについての学生の気づきの記載内容を分析した結果、<確認><観察><患者への説明><アセスメント><清潔操作><確実な刺入><使用物品の取扱い><物品準備の不備><ラインの確実な固定><動作の経済性><標準予防策><介助者への適切な指示><滴下の調節>の13のまとまりに分類できた。いずれも実施する上で重要と捉えた内容、習得が困難と捉えた内容が抽出されており、このことをふまえた教育プログラムを作成することが課題である。点滴静脈内注射の技術を習得するための教育プログラムの改善を行うことを第1の目的として取り組んだ。今年度の主な改善点として、授業後の自主練習時に、練習場面の振り返りをグループ単位で行う時間を確保するとともに、練習場面のビデオ映像を用いた振り返りを行ってもらった。練習場面での振り返りによる気づきは、振り返りの際何を重要視しているかによって(1)手順重視型、(2)根拠重視型、(3)経験重視型、(4)学習方法の工夫提案型の4つの視点から分類した。その結果、手順重視型の記載が最も多く、手順として抜けなく行うことを重要視していることがわかる。経験重視型の記載は手順重視型に続いて多く、物品配置、刺入に伴う手技で多かった。実際の体験から効率的な物品配置や刺入のコツに気づけていることがわかった。根拠重視型と学習方法の工夫提案型の記載は4つの型の中では少なかった。学習方法の工夫提案型の記載の中で、根拠にもとづいた練習の必要性を実感している記載も多くみられたことから、根拠にもとづいた学習ができるような工夫をすることが課題である。練習場面のビデオ映像を用いた振り返りを分析した結果、<自分の行動の傾向に気づく><刺入に伴う手技><実施時の患者への説明><タイミングがつかみにくい手技>をはじめとする11のまとまりに分類できた。<刺入に伴う手技>についての記載は全記載中最も多く、細部の手技の中でも客観的に観察することで改善点に気づきやすいことが示唆された。次いで多かった<自分の行動の傾向に気づく>についての記載は練習時の気づきにはみられなかった。話し方や癖など無意識のうちに行っていることは自分では気づきにくい点であることから客観的な視点からのフィードバックが重要であることが示唆された。昨年度、点滴静脈内注射の技術習得のための教育プログラムを実施した4年生を対象に、動画教材の視聴とeラーニングを中心にした自己学習を卒前トレーニングとして行うことで一度修得したレベルまで技術の修得レベルを引き上げる効果があるかどうかを検証することを第2の目的として取り組んだ。

実施場面をビデオに撮影し、それをもとにトレーニング前後での変化を分析中である。平成22年度に実施した学部生への自己学習教材(CAI)を含んだ点滴静脈内注射の教育の効果について学会発表(日本看護学教育学会)を行った。また、平成23年度に点滴静脈内注射の卒業前の技術トレーニングのための自己学習教材(CAI)を作成し、その卒業前教育自己学習教材を5人の対象者に試してもらい、1)自己学習教材(CAI)の評価、2)技術トレーニングの評価、3)技術テストにおける教員による手技のチェックと学生の自己評価の3点から教育評価のデータを収集し当該年度い分析予定であった。詳細については分析途中であるが、自己学習教材の学生の評価は、自分で学習でき、動画で手技を確認することができることにより、評価が高かった。また、手技においても、自己学習教材(CAI)受講前は忘れてできない内容が多くあったが、自己学習教材(CAI)による卒業前トレーニングにより、5人とも記憶の想起ができ、ほぼ実施できるようになっていた。点滴静脈内注射において卒業前の自己学習教材(CAI)による卒業前トレーニングの有効性が示唆された。H23年度の計画に記載している教育プログラムの評価に必要なデータの収集は行っているが、その分析が練習場面の振り返りの気づきからの分析にとどまっているため24年度が最終年度であるため、記入しない。1.収集したデータの分析を進め、H23年度に実施した教育プログラムの評価を行う。2.卒業前の技術トレーニングのプログラムの実施をH24年3月に行いその結果を現在分析中である。対象者が5名と少なかったため、プログラムの有効性を5名の結果から検証することは難しいと考えているが、今後一人一人のトレーニング前後での変化を分析することで、1度習得した技術のうち1年以上経過した時点でも定着しているもの、低下しているものを明らかにし、その背景についても考察する予定である。その結果をふまえ卒業前の技術トレーニングでどこを強化すればよいかを検討する。24年度が最終年度であるため、記入しない。
2次元ヘリウム4固体における零点空格子とその超流動状態

グラファイト表面に形成された2次元4^He整合固体相に現れる特異な超流動的振る舞いと,量子固体中に存在する零点空格子との相関を調べるため,ねじれ振り子法によりグラファイト表面上の4^He薄膜の非古典的回転慣性を測定し,その面密度依存性,臨界速度を測定した.2次元4^Heの相図を作成し,非古典的回転慣性は整合固体相近傍にのみ現れることを明らかにした.グラファイト表面に形成された2次元4^He整合固体相に現れる特異な超流動的振る舞いと,量子固体中に存在する零点空格子との相関を調べるため,ねじれ振り子法によりグラファイト表面上の4^He薄膜の非古典的回転慣性を測定し,その面密度依存性,臨界速度を測定した.2次元4^Heの相図を作成し,非古典的回転慣性は整合固体相近傍にのみ現れることを明らかにした.グラファイト上に2次元4^He固体(面密度n_<4He>)を作成し,ねじれ振子法でその非古典的回転慣性(NCRI)を測定した.NCRIのn_<4He>依存性,ねじれ振動速度V_<osc>依存性から2次元4^He固体の相図を作成し,NCRIの起源,固体の超流動的振舞いの起源を探った.18.19 atoms/nm^2以上で初めて有限のNCRIが観測され,n_<4He>の増加に伴いNCRIは増加してゆくが,18.67atoms/nm^2程度で山を持ち,それ以上では減少に転ずる.さらに,n_<4He>が19 atoms/nm^2を越えたあたりから超流動薄膜によるNCRIが観測された.また,このn_<4He>が18-19 atoms/nm^2の試料では,V_<osc>の増加に伴いのNCRIが減少するという,バルク固体4^Heで見られる『個体の超流動的』な振舞いと一致する挙動が見られた.このことは面密度18-19 atoms/nm^2付近において,2次元^4He固体における固体の超流動が実現していることを示唆している.液体ヘリウム4(^4He)は非常に量子性の強い物質であり,極低温において超流動を示すことが良く知られている.このような強い量子性は固体^4Heでも観測され,しばしば量子固体と呼ばれる.1969年,その強い量子性のため固体^4Heに零点空格子が生成し,それが極低温でBose凝縮(BEC)を起こすという『固体の超流動』の可能性が理論的に指摘されたが,これまで実験的には観測されてこなかった.2004年に初めて固体の超流動の存在を強く示唆する実験結果が報告されたが,その後の研究から,この現象は零点空格子のBECではなく,固体^4He結晶の格子欠陥等に起因するものと解釈されている.一方2005年,グラファイト表面上の2次元^3He固体において,ある特定の面密度(17-19atoms/nm^2)で零点空格子の運動に起因する特異な量子相が発見された.同様の系を^4Heで構築することでこの零点空格子がBECを起こし2次元^4He固体において固体の超流動が実現すると期待される.これまでねじれ振り子法を用いた測定で,2次元^4He固体においても固体の超流動に起因すると考えられる有限の非古典的回転慣性(NCRI)を観測した.本研究では,NCRIの面密度依存性,NCRIの振動速度依存性の測定からグラファイト表面上の2次元^4He薄膜の相図を作成し,2次元Bose粒子系における固体の超流動について調べることを目的とした.ねじれ振子法による^4He薄膜の非古典的回転慢性(Non-Classical Rotational Inertia;NCRI)の測定から,面密度18-19atoms/nm^2,及び20atoms/nm^2以上の2つ領域において有限のNCRIが観測された.この内,18-19atoms/nm^2の面密度領域においてのみ,バルク固体ヘリウム4における固体の超流動と同様なNCRIの振動速度依存性が観測され,それぞれの領域におけるNCRIの起源が異なることを示している.過去に行われた量子モンテカルロシミュレーションでは16atoms/nm^2付近で超流動相が出現するが,これは本研究結果と一致しない.ねじれ振子法による結果をもとに,グラファイト表面の^4He薄膜の新しい相図を提案した.液体ヘリウム4(^4He)は非常に量子性の強い物質であり,極低温において超流動を示すことが良く知られている.このような強い量子性は固体^4Heでも観測され,しばしば量子固体と呼ばれる.1969年,その強い量子性のため固体^4Heに零点空格子が生成し,それが極低温でBose凝縮(BEC)を起こすという『固体の超流動』の可能性が理論的に指摘されたが,これまで実験的には観測されてこなかった.2004年に初めて固体の超流動の存在を強く示唆する実験結果が報告されたが,その後の研究から,この現象は零点空格子のBECではなく,固体4^He結晶の格子欠陥等に起因するものと解釈されている.一方2005年,グラファイト表面上の2次元^3He固体において,ある特定の面密度(17-19atoms/nm^2)で零点空格子の運動に起因する特異な量子相が発見された.同様の系を^4Heで構築することでこの零点空格子がBECを起こし2次元^4He固体において固体の超流動が実現すると期待される.

これまでねじれ振り子法を用いた測定で,2次元4^He固体においても固体の超流動に起因すると考えられる有限の非古典的回転慣性(NCRI)を観測した.本研究では,このNCRIの臨界速度の測定,ヒステリシス現象の測定を行いバルク固体4^Heと比較することで,2次元Bose粒子系における固体の超流動について調べることを目的とした.面密度18.39atoms/nm^2の試料に対し,有限のNCRIが出現する65mKとNCRIの現れない700mKにおいて,ねじれ振子の共振周波数の振動速度v_<osc>依存性及びその履歴に対する効果を調べた.振動速度を5000μm/s以上まで増加させた後減少させたところ,65mKでの測定では1100μm/s以下で共振周波数にヒステリシスが現れ,v_<osc>の増加時よりも0,060.08mHz低い値をとる.このヒステリシスの大きさは,この試料のNCRIの50%にあたる.一方NCRIの現れない700mKでは,v_<osc>の増減に対し共振周波数には有意なヒステリシスは観測されなかった.このことは,65mKで観測された<osc>に対するfのヒステリシスは,低温で現れるNCRIの振動速度依存性を反映していると考えられる.液体ヘリウム4 (4He)は量子液体としてよく知られているが.固体4Heも強い量子性を示し,しばしば量子固体と呼ばれる.理論的には1969年,その量子性のため固体4He中に零点空格子が生じ,低温でそれがBose凝縮(BEC)を起こすという『固体の超流動』の可能性が指摘されたが,実験的には長い間観測されてこなかった.2004年に初めて固体の超流動の可能性を強く示唆する実験が報告されたが,固体4He中に存在する転位の運動による可能性も否定できず,まだはっきりとした解釈はなされていない.一方2005年,グラファイト表面の2次元3He固体において,ある特定の面密度(17 - 19 atoms / nm2)で零点空格子の運動に起因する特異な量子相が発見された.同様の系を4Heで構築することでこの零点空格子がBECを起こし,2次元4He固体で固体の超流動が実現すると期待される.これまでの研究で,2次元4He固体においても固体の超流動に起因すると思われる有限の非古典的回転慣性(NCRI)を見出しており,本年度は,NCRIの臨界速度,ヒステリシス現象の測定を行い,バルク固体4Heと比較するとともに,昨年度から開始された福山グループによる2次元4He固体の熱容量測定の結果と比較することで,2次元Bose粒子系における零点空格子,及びその零点空格子の極低温における秩序状態を調べることを目的とした.零点空格子が存在するであろうと考えられる面密度18.39atoms/nm2の試料において,65 mKで現れるNCRIの50%にヒステリシス現象が観測され,低温で現れるNCRIが2つの成分からなることが明らかとなった.また,本研究でNCRIの異常が現れる面密度が,熱容量に異常の現れる面密度と10%程度食い違っていることが明らかとなり,試料の面密度の校正を行う必要があることが明らかとなった.2011年10月頃から実験装置(希釈冷凍機)が不調になり,必要な測定の一部を行えなかったため.24年度が最終年度であるため、記入しない。まだ実験装置(希釈冷凍機)が本調子ではないので原因を解明し,改善を行う.また,論文化に際しグラファイト基板の表面積に見積り不確かさがあることが判明したので,上記の改善と平行で基板表面積の測定を行う.24年度が最終年度であるため、記入しない。
増殖因子と自己組織化ペプチドを併用したインプラント周囲炎の新規治療法の開発

本研究では、脳由来神経栄養因子(BDNF)をインプラント周囲炎の治療に応用することを目的とし、キャリアーとして自己組織化ペプチド(RADA16)を用いることが有効性をラット歯周組織欠損モデルを用い検討した。4週では、BDNF+RADA16併用群では、露出した根表面に歯根膜線維の再生と欠損を満たす骨の再生を認めた。この結果から、BDNFのキャリアーとしてRADA16を用いることで骨再生を促進することが示唆された。本研究は失われたインプラント周囲骨の新規治療として、骨再生における自己組織化ペプチドゲルと吸収性膜および脳由来神経栄養因子(BDNF)を応用する有効性を検索することを目的としている。本年度はBDNFのscaffoldとして自己組織化ペプチドゲルが有効であるかを検索するのにラットの骨欠損モデルを用いて評価を行った。群分けは実験群をBDNFと自己組織化ペプチドゲルの併用、対照群を自己組織化ペプチドゲル単独、Unfilled群とし骨再生量をマイクロCTを用いて評価した。観察期間は2週とした。対照群と比較し、実験群において有意な骨再生を認めた。本実験の結果から、骨再生においてBDNFのスキャフォールドとして自己組織化ペプチドが有用であることが示唆された。骨再生に自己組織化ペプチドと脳由来神経栄養因子(BDNF)を応用する有効性を検索するために、ラットを用いた骨欠損モデルを作成し応用した。ラットの上顎M1を抜去、4週の治癒期間後にM2近心に骨欠損を作成し、BDNFと自己組織化ペプチドを応用した。観察期間は2週・4週とした。2週・4週ともにBDNFと自己組織化ペプチドの併用群が自己組織化ペプチド単独群、Unfilled群と比較し有意な骨の再生を認めた。併用群ではセメント質、歯根膜の再生も認められた。マイクロCTによる検索においても、併用群は自己組織化ペプチド単独群、Unfilled群より有意な骨再生を認め、併用群においては2週と比較し4週では欠損を満たすほどの有意な骨再生を認めた。In vitroにおいて、自己組織化ペプチドからのBDNFの徐放についてELISAを用いて検索したが、徐放は認められなかった。In vivoにおける骨再生は組織学的検索、マイクロCTを用いた骨再生量の測定は行ったが、in vitroにおける歯根膜細胞へのBDNFの作用を検索が行えなかった。歯周病学26年度の結果から、BDNFと自己組織化ペプチドの併用が有効であることが示唆されたので、インプラント周囲骨欠損モデルに応用して有効性を評価する。計画していたin vitroでの歯根膜細胞へのBDNFの作用を検討する実験を行えなかったためである。前年度に行えなかったin vitroの実験を27年度に行っていく予定である。
消火管ホルモン、胃運動、胃分泌動態からみた胃手術々式の検討

1.消火性潰瘍の病態;潰瘍症例に対し24時間PHモニタリングを行った結果、胃内はPHは個体差が大きく、その日内変動にも大きな違いを認めた。また、インストリン、アドレナリンテストの結果、潰瘍発生に及ぼす迷走神経、幽門洞ガストリンの関与も動揺に個体差が大きかった。従って、画一的な治療法ではなく個々の症例における病体分析を行った上で適切な治療法を選択する必要がある。2.本邦における手術治療の現況:(1)近年における、H_2-受容体拮抗剤などの使用による保存的治療の進歩により手術症例が約半数に激減している。しかし出血、窩孔など緊急手術を必要とする症例数に変化はなく、相対的に緊急手術率が上昇している。(2)手術術々は、欧米の傾向と異なり、わが国では迷走神経切離術の減少が見られる。これは、緊急手術率が上昇したため手慣れた手術を行うためと、迷走神経切離術後の再発が高いためと推察された。3.胃手術後潰瘍再発と術後障害:(1)雑種成犬を用いた胃運動の検討から、各種迷走神経切離術の中で選択的近位迷走神経切離術(選近迷切術)は、胃内容排出が正常に保たれた。(2)ラットに協力な酸分泌抑制作用を持つH_2-受容体拮抗剤を投与すると投与後13ケ月て高がストリン血症と幽門洞G細胞過形成を認め、選近迷切術後再発に体液性因子であるがストリンが関与する可能性が示唆された。(3)648例の潰瘍手術後症例にアンケート調査を行った結果、胃切除術後は迷切術後に比し、体重減少、食事摂取量減少を多く認めた。4.手術術式選択:ガストリンによる酸分泌を促えるにはアドレナリンテストが有用であり、術前におけるアドレナリン刺激による酸・ガストリン反応より独自の選択基準を設けた。その結果十二指腸潰瘍に対する選近迷切術の再発は9.9%であったが、術式選択を行い1.4%と満足する結果を得た。今後も合併症潰瘍の術式につき検討が必要である。1.臨床的研究;(1)これまでの研究成果から、消化性潰瘍の病因・病態は多因子依存性であることを報告してきた。とくに十二指腸潰瘍の病態に関して従来の副交感神経(迷走神経)依存度の高い過酸分泌病態とZollinger-Ellison症候群を他方の極とする体液性因子(ガストリン)依存性の高い過酸分泌病態が連続的あるいは進行性に関連していることが想定された。以上の病態は、インスリンあるいはアドレナリン負荷試験による酸分泌とガストリン分泌の同時測定により分類判定可能である。これらの病態の差が手術的治療方針決定に及ほす影響は明白であり、全胃保存迷走神経切離術、迷走神経切離術+幽門洞切除術、広範囲胃切除術などの術式選択が個々の症例において考慮されねばならない。1980年度より本年度までに58例の十二指腸潰瘍患者に対し、prospectiveな術式適応を行い、現在酸・ガストリン分泌などをはじめ術後病態を追跡検討中であるが、ほぼ満足すべき成績である。

(2)酸分泌に関与する夜間副交感神経緊張と、覚醒時の食後期ガストリン遊離の関与度を含めた日内変動を、より正確に把握し分析するために、微小胃内電極を用いた24時間PHモニタリングと上記刺激剤による酸分泌パターンの比較検討を7例の十二指腸潰瘍患者に対し施行した。しかし、現在までのところ、PHという質的(酸濃度)変動と刺激剤による酸分泌・ガストリン分泌などの量的(1時間あたり)変動パターンとの間に有意の相関は見出せず、今後継続的研究が必要である。2.基礎的研究:Ratを用いた長期的酸分泌抑制モデル(【H_2】-blocker)において有意の幽門洞G細胞過形成を認めた(機能的・形態的)。臨床症例でもすでに2例のantralG-Cell hyperplasia(AGH)を経験しており病態論治療学上今後の重要課題のひとつである臨床面において,十二指腸潰瘍患者における24時間pHモニタリングを行い検討した結果,従来より我々が主張していたように,同一の十二指腸潰瘍患者でもpHの変動が大きく,さらに大きな個体差が認められた.また夜間におけるpHの変動は,むしろ高く維持されており,従来より考えられていた『潰瘍は夜作られる』という概念と異なる知見を得た.さらに,近年潰瘍治療薬の中心であるH_2^-受容体拮抗剤投与での酸分泌抑制をpHモニタリングで観察した結果,これら強力な薬剤に抵抗する潰瘍の存在が明らかとなり,抵抗性潰瘍における消化管ホルモン(特にガストリン)の関与が示唆された.動物実験では,現在,全胃癌を作成し,外図性にアドレナリンを投与し,酸分泌,ガストリン分泌を測定した結果,ガストリン分泌には, 80ng/Kg.hr投与で最大反応を得た.今後,各種迷切術を加え,ガストリン分泌の変動に関して検討したい.最後に,近年H_2^-容体拮抗剤の使用により,外科手術症例の変動が生じており,日本外科学園認定施設における全国アンケート調査を行い,潰瘍に対する手術症例が減少したいるにもかかわらず,緊急手術を必要とする出血,穿孔例の総数に変化がなく,相対的に頻度が増加し,そのため手術死亡率の上昇が確認され,今後,穿孔例における病態の解明と術式の選択が重要であろうと推察された.1.基礎的研究;(1)雑種成犬を用い、選択的近位迷走神経切離術(選近迷切術)を施行し、ひずみゲージによる胃運動を見た結果、幽門部の運動はコントロール群と差異はなく、正常に保たれていることがわかり、さらに幽門形成術を付加することで胃内容排出が促進することが判明した。(2)胃分泌面の検討では、幽門形成術を行うことで、選近迷切術後の高ガストリン血症が軽減できた。2.臨床的研究;(1)過去16年間に、消化性潰瘍を施行した648例のアンケート調査を行った結果、胃切除術、迷走神経切離術とも比較良好な成績であったが、胃切除術後では迷走神経切離術に比し、食事摂取量の減少と体重の減少が有意に多く見られた。しかし、他の術後障害である、下痢、嘔気、腹痛ダンピング症候群、骨障害などに関しては差異を認めなかった。さらに、8年以上経過した選近迷切術後症例171例のうち17例(9.9%)に再発を認めた。(2)日本外科学会認定452施設に対するアンケート調査を行った結果、強力な抗潰瘍剤であるH_2-受容体拮抗剤が使用されるようになった1982年以降、消化性潰瘍に対する手術例はほぼ半数に激減しており、そのため相対的に緊急症例の頻度が増加していた。施行術式は、欧米の傾向とは著しく異なり迷走神経切離術が減少し胃切除術が増加していた。その原因としては、緊急症例の増加と迷走神経切離術後の再発が高いためと推察された。(3)アドレナリンテストによる、十二指腸潰瘍に対する手術術式の選択を行った結果、再発率は71例中1例(1.4%)と満足すべき結果を得た。
遊離移植骨に対するビスフォスフォネートの吸収抑制効果の検討

当初の予定であったビスフォスフォネートに先駆け、コンパクチンを用いての実験を行った。実験動物には、近交系マウスMRL/MpJを使用し、現在までにドナーとレシピエントとを合わせて約100匹のマウスを使用した。投与期間は14週間とし、投与濃度は10μMとした。実験終了後に摘出した脛骨は、燐酸緩衝ホルマリン固定液にく固定、脱灰後、パラフィン包埋し、HE染色、TRAP染色、アザン変法染色等により組織学的観察を施行した。その結果、コンパクチンを投与した骨では外骨膜側に著しい骨添加が認められ、皮質骨の厚さと骨の外径は投与後4週で対照骨に比べて有意に増加していた。一方、添加された骨の内側と既存骨との間には、骨芽細胞の増加と共に破骨細胞の著しい数の増加が認められ、骨吸収も亢進している像が観察された。この破骨細胞数の増加はコンパクチン投与後2週目においてすでに有意であった。これらのことから、コンパクチンの投与により,移植骨の骨膜性骨形成が促進され,添加骨内部に広範囲の骨吸収が見られるにもかかわらず,骨全体は増加することが示された。このことは,移植した骨のモデリング、ないしは、リモデリングの過程において,骨吸収を上回る骨形成が引き起こされたことを意味しており,コンパクチンの投与により、骨吸収と骨形成のバランスが、正に転化したことを意味している。以上より、コンパクチンの局所投与は、骨の形成と吸収を共に亢進させ、高回転型の骨代謝を生ずる可能性が示唆された。今後、これらの結果をもとにPCR法を用いて、BMP-2やRANKL等の遺伝子発現についても研究していく予定である。BMP-2は、骨芽細胞の分化と骨形成に対して重要な役割を演じていることが知られているが、最近、このBMP-2の促進を活性化させる物質を検索したところ、コンパクチンが分離されており、その骨に対する同化作用の可能性という利点が注目されてきている。そこで今回、当初の予定であったBMPに先駆け、コンパクチンを用いて実験を行った。実験動物には近交系マウス(C3H/HeJ)を用い、移植骨としてドナーマウスから脛骨を摘出し、これを整形して大きさの均一化を図った後、レシピエントマウス背部皮下組織中に移植した。この際、浸透圧ポンプを移植骨に接続させ一緒に皮下組織に埋入させることにより、薬物の持続投与が可能な状態をつくった。薬物投与に関しては、コンパクチンの投与を行う群と行わない群(対照群)とに分け、投与群の中にはさらに投与量、投与期間の異なる数種の群を設けた。現在までにドナーとレシピエントとを合わせて60匹のマウスを用いて予備実験を行った。コンパクチン投与は5μM,2週間投与群、10μM,2週間投与群、10μM,1週間投与群とした。投与後摘出した脛骨は、燐酸緩衝ホルマリン固定液にて固定し、実体顕微鏡によるマクロ観察と軟X線画像解析による骨塩量の測定を施行した。また、HE染色、アルカリ性ホスファターゼ染色、酸性ホスファターゼ染色等により組織学的観察を施行した。これまでのところ1週間投与群では大きな変化は認められないものの、2週間投与群では骨芽細胞の増加及び骨小柱の増加等が観察された。今後、これらの結果をもとに4週間投与群等個体数を増やし、またBMP-2誘導を遺伝子的に解析するなどして、骨に及ぼすコンパクチンの効果を検討、ビスフォスフォネートの骨吸収抑制効果等も併せて実験し、遊離骨移植に対する有用性について検討する予定である。現在。当初の予定であったビスフォスフォネートに先駆け、コンパクチンを用いての実験を行っている最中である。実験動物に用いた近交系マウスには、当初C3H/HeJを用いる予定であったが、浸透圧ポンプを埋入させた際に、体が小さすぎることが原因と考えられる術後経過不良例が多発したため、これよりも大きいマウスであり近交系マウスでもあるMRL/M p J・+/+を用いて実験することとした。現在までにドナーとレシピエントとを合わせて48匹のマウスを用いて実験を行った。コンパクチン投与は10μMで2週間投与群、3週間投与群、4週間投与群とした。投与後摘出した脛骨は、燐酸緩衝ホルマリン固定液にて固定後、実態顕微鏡によるマクロ観察と軟X線画像解析による骨塩量の測定を施行した。また、パラフィン包埋を施行し、HE染色、TRAP染色、アザン染色等により組織学的観察を施行した。これまでのところ2週間投与群では大きな変化は認められないものの、3週間投与群、4週間投与群では骨量の増加等が観察された。今後、これら結果をもとに個体数を増やし、さらに新鮮凍結切片や、レジン包埋による非脱灰切片等を用いて、アルカリフォスファターゼ活性の検出や、テトラサイクリンを用いた骨標識による骨形態計測等を行う予定である。またコンパクチンのかわりにBMPを投与する群をもうけ、BMPの骨に及ぼす効果とコンパクチンの効果とを比較検討し、ビスフォスフォネートの骨吸収抑制効果等も併せて、骨移植に対する有用性について検討する予定である。

実験動物には、近交系マウスMRL/MpJを使用し、現在までにドナーとレシピエントとを合わせて約100匹のマウスを使用した。投与期間は14週間とし、投与濃度は10μMとした。実験終了後に摘出した脛骨は、燐酸緩衝ホルマリン固定液にく固定、脱灰後、パラフィン包埋し、HE染色、TRAP染色、アザン変法染色等により組織学的観察を施行した。その結果、コンパクチンを投与した骨では外骨膜側に著しい骨添加が認められ、皮質骨の厚さと骨の外径は投与後4週で対照骨に比べて有意に増加していた。一方、添加された骨の内側と既存骨との間には、骨芽細胞の増加と共に破骨細胞の著しい数の増加が認められ、骨吸収も亢進している像が観察された。この破骨細胞数の増加はコンパクチン投与後2週目においてすでに有意であった。これらのことから、コンパクチンの投与により,移植骨の骨膜性骨形成が促進され,添加骨内部に広範囲の骨吸収が見られるにもかかわらず,骨全体は増加することが示された。このことは,移植した骨のモデリング、ないしは、リモデリングの過程において,骨吸収を上回る骨形成が引き起こされたことを意味しており,コンパクチンの投与により、骨吸収と骨形成のバランスが、正に転化したことを意味している。以上より、コンパクチンの局所投与は、骨の形成と吸収を共に亢進させ、高回転型の骨代謝を生ずる可能性が示唆された。今後、これらの結果をもとにPCR法を用いて、BMP-2やRANKL等の遺伝子発現についても研究していく予定である。
前立腺癌に対する高精度放射線治療における体動の監視および補正に関する研究

これまでに、ボランティアの被験者によりファイバークレーディンクデバイスの効性の検討をおこなった。また試行的に3方向から同時観察可能な小型ITVカメラを装備した監視システムを試作し、ITVカメラから画像を取得し、パソコンとデータ転送を行った。解析ソフトウェアを試作して、ファントムおよびボランティアに協力を得て、実際の放射線治療に近い状態での実験を行った。頭頚部用患者固定具の周囲にカメラを設置し治療環境において精度を調査した。前年度は、ファントムを用いた基礎実験の結果をもとにして、臨床応用実験を行った。慶應義塾大学病院放射線治療核医学科にて、放射線治療を受ける患者数名を選び、ITVカメラを装備した監視システムを用いて、放射線照射実施時に体動監視を行った。ITVカメラからは30 frames/secで画像を取得し、コンピュータにデータを転送した。身体に投影したレーザ格子点の位置ずれはコンピュータで計算される。得られたデータを解析して、患者の体動を数値化した。今年度はさらにファイバークレーディンクシステムを発展させ、数値化した患者の体動データをリアルタイムに放射線治療装置にデータ転送し、患者の体動に合わせて照射の調節が可能かどうかについて臨床実験を行った。今年度は、ボランティアの被験者によりファイバーグレーティングデバイスの有効性の検討をおこなった。また試行的に3方向から同時観察可能な小型ITVカメラを装備した監視システムを試作し、ITVカメラから画像を取得し、USB接続にてパソコンとデータ転送をおこなった。解析ソフトウェアを試作して、ファントムおよびボランティアに協力を得て、実際の放射線治療の臨床環境に近い状態での実験を行った。実際の放射線治療で用いられている、頭頚部用患者固定具の周囲にカメラを設置し、治療環境において精度を調査した。この実験において評価は定量的には行えないため、視覚的に評価した。カメラは頭の側面と、上側に配置した。それぞれの撮影距離は10cmとし、画像サイス160×120pixel、フレームレートは10fpsである。側面のカメラにおいては良好な結果を得られている。しかし上部に配置したカメラにおいては、誤検出を起こし安定した検出を行えていなかった。理由として、側面のカメラはテンプレートとする対象に十分な特徴があるので、テンプレート照合が行いやすく、また光の影響を受けづらいことが考えられる。上部のカメラはパターン認識法がヒストグラムを用い照合を行っているため側面より、上部の方が光の影響による変化に敏感に反応してしまっていることが考えられる。この現象は光の影響を極力小さくすることで改善が可能と考えられる。このように、患者の体動を非接触かつリアルタイムに把握出来ることを確認出来た。システムをさらに発展させ、将来的により体幹部においても精密な照射野での放射線治療が可能となるものと思われる。今年度は、ファイバーグレーティングデバイスの検討行い、その有効性について検討を行った。また、多方向から同時観察可能な小型ITVカメラを装備した監視システム環境を設定して、カメラ画像の取得を行った。監視システムにて得られたデータをUSB接続にてパソコンへ転送した。照射データを収集するにあたり、放射線治療装置の基本技術や放射線防護について専門家による技術指導・講習を受け、高精度放射線治療技術を十分習得した。今回の実験において評価は定量的には行えないため、視覚的に評価を行った。それぞれの撮影距離は10cmとし、画像サイス160×120pixel、フレームレートは10fpsとした。各カメラにおいて良好な精度結果が得られた。ファイバーグレーティングデバイスの手法により、実際の患者の体動を非接触かつリアルタイムに把握出来ることが予想された。ファイバーグレーティングデバイスの臨床的有用性が示唆された。今後、システムをさらに発展させ、将来的にどの体幹部においても精密な照射野での高精度放射線治療が可能となることが期待される。それによって、良好な治療成績が期待できるのみならず、有害事象の発生が最小限に抑えられることが期待できる。研究結果は国内学会発表のみならず、英文誌に投稿する予定である。
ミトコンドリア依存性抗がん剤耐性機構におけるグルココルチコイドの役割

がんに伴う痛みに加え抗がん剤治療の副作用による激しいストレスも、がんの治療効果に大きく影響することが臨床上知られている。しかしながらその作用機序については不明な点が多い。本研究では、ストレス関連ホルモンであるグルココルチコイドが、抗がん剤の作用へ及ぼす影響について検討した。その結果、グルココルチコイドが細胞の小器官であるミトコンドリアの呼吸機能を抑制して、ミトコンドリア依存性抗がん剤の感受性を低下させることが明らかとなった。また、これらグルココルチコイドによるシスプラチンに対する耐性は、グルココルチコイド受容体を介する作用であることが示唆された。悪性中皮腫は極めて予後不良の悪性腫瘍であり、薬剤反応性における個体差や耐性獲得が臨床上問題となっている。胸膜中皮腫においては、胸膜の肥厚と癒着による痛み及び呼吸苦を伴う場合が多く、精神的および肉体的ストレスが抗がん剤の作用を左右する可能性が考えられる。昨年度までの研究成果より、シスプラチンに対する薬剤感受性においては癌細胞のミトコンドリア代謝が関与していること、およびストレス環境下において上昇するホルモンであるグルココルチコイドは、ミトコンドリア代謝を制御して抗がん剤耐性を引き起こす可能性が考えられた。本年度は、マウス中皮腫細胞をマウスに播種して中皮腫モデルマウスを確立した。数種類の中皮腫株化細胞をマウスの皮下および腹腔に播種してその増殖率と生存率について検討を行った。更に、シスプラチンをマウスに投与した後に腎障害をはじめとする様々な副作用についての分子生物学的な解析を行い、マウスがストレス環境下におかれた際の薬剤作用の違いについて比較検討した。その結果、1ストレス負荷によりミトコンドリア酸化的リン酸化機能が著明に抑制され、活性酸素を上昇させる事、2ストレスにより分泌が促進されるグルココルチコイドがミトコンドリア呼吸活性能を低下させることが明らかとなった。今後更に、ストレス負荷とそれによるグルココルチコイド分泌が薬剤耐性に及ぼす影響について詳細なメカニズムを明らかにし、ストレス軽減による抗がん剤の効果上昇の可能性について検討していきたい。がん細胞では解糖系が亢進している事が古くから知られている。我々は、ミトコンドリアDNAを欠損したヒトがん細胞を確立して種々の抗がん剤感受性を検討し、この古典的現象が『ミトコンドリアを放棄する事により悪性化と多剤耐性が増強の一翼を担う事』を明らかにしてきた。本研究ではストレス応答において重要な因子であるグルココルチコイドが、ミトコンドリア代謝を制御して抗がん剤作用機構へ及ぼす影響を検討した。悪性中皮腫は、未だ標準的治療法が確立されていない極めて予後不良の悪性腫瘍である。薬剤反応性における個体差や耐性獲得がしばしばみられるが、その作用機序は不明な点が多い。in vitroにおいてヒト中皮腫がん細胞株に、低濃度グルココルチコイド(ストレスにより上昇してくる濃度と同程度)を処理すると、シスプラチンによるミトコンドリア傷害が抑制され、殺細胞作用が著明に低下した。また、マウスにグルココルチコイドを投与するとシスプラチンの薬剤感受性が有意に低下するが、グルココルチコイド分泌不全のマウスでは感受性が上昇することが明らかになった。以上のことより、生体のストレス応答時に産生されるグルココルチコイドが、ミトコンドリア依存性の抗がん剤の感受性を著しく低下させる可能性が示唆された。がんに伴う痛みに加え抗がん剤治療の副作用による激しいストレスも、がんの治療効果に大きく影響することが臨床上よく知られている。しかしながら生体のストレス応答時において、薬剤感受性への影響や、その作用機序については不明な点が多い。本研究では、ストレス関連ホルモンであるグルココルチコイド(GCs)に焦点を当て、ストレス負荷におけるGCsの分泌上昇が、抗がん剤の作用へ及ぼす影響を検討した。GCsは、ストレス応答時に活性化される視床下部ー下垂体ー副腎(HPA)軸の終末生理活性物質として血中に分泌される。ストレス負荷により上昇するレベルと同程度のGCsを、マウス中皮腫の培養細胞に添加すると、シスプラチンによる殺細胞効果が有意に減弱した。中皮腫細胞のミトコンドリアをエチジウムブロマイドの添加により低下させた細胞(中皮腫ρ0細胞)では、GCs添加によるシスプラチンの薬剤耐性が解除されることより、GCsによるシスプラチン耐性はミトコンドリアを介していることが示唆された。シスプラチンによる殺細胞作用はミトコンドリアからの活性酸素の産生上昇が重要な役割を担っている。GCsをin vitroにおいて中皮腫細胞に添加するとミトコンドリアからの活性酸素を抑制することが明らかとなった。更に、マウスへのストレス負荷時にHPA軸の活性化により血中GCs濃度が上昇するが、これらストレス負荷マウスにおいてもミトコンドリアの呼吸活性と活性酸素産生が抑制された。GCsの分泌不全(MC2R KO)マウスにおいては、ストレス負荷によるミトコンドリアへの作用が解除された。

また、MC2RマウスにおいてはWTマウスと比較してシスプラチンの副作用である腎毒性が顕著であった。以上のことより、ストレス関連ホルモンであるGCsは、ミトコンドリアからの活性酸素を負に制御して抗がん剤の感受性を低下させることが明らかとなった。生化学本研究では、ミトコンドリア代謝を制御するストレス関連ホルモンであるグルココルチコイドに焦点を当て、生体のストレス応答時に産生されるグルココルチコイドが抗がん剤感受性に及ぼす影響を明らかにすることを目的としている。昨年度までの研究成果より、in vitroにおいてヒト中皮腫細胞株の抗がん剤(シスプラチン;DNA標的型抗がん剤)感受性にグルココルチコイドが影響を及ぼす事、およびマウスを用いたin vivo実験においても同様にグルココルチコイドによる影響を示す実験結果が得られた。今年度は昨年度の研究成果から得られた知見をもとに、マウスの中皮腫細胞播種モデルを確立してグルココルチコイドの作用を検討した。更に、グルココルチコイドがミトコンドリアに及ぼす影響について分子生物学的な解析を行っており、当初の計画通り今年度の研究はおおむね順調に進展していると思われる。本研究では、ミトコンドリア代謝を制御するストレス関連ホルモンであるグルココルチコイドに焦点を当て、生体のストレス応答時に産生されるグルココルチコイドが抗がん剤感受性に及ぼす影響を明らかにすることを目的としている。本年度は、in vitroにおいてヒト中皮腫細胞株の抗がん剤(シスプラチン;DNA標的型抗がん剤)感受性にグルココルチコイドが影響を及ぼす事、およびマウスを用いたin vivo実験においても同様にグルココルチコイドによる影響を示す実験結果が得られ、当初の計画通り今年度の研究はおおむね順調に進展していると思われる。昨年度および今年度の研究成果より得られた知見をもとに、in vitroにおける実験に加えてマウスを用いたin vivo試験を精力的に行う予定である。中皮腫を皮下に播種したモデルを用いて、ストレス負荷が薬剤耐性に及ぼす影響について更に詳細なメカニズムを解析する予定である。昨年度に得られた結果より、in vitroにおける実験に加えてマウスを用いたin vivo試験も精力的に行う予定である。昨年度の研究により、ストレス時に血中へ分泌される濃度のグルココルチコイドにより抗がん剤(シスプラチン)の薬剤感受性が低下することが明らかとなったので、今年度は生体(マウス)に播種した癌細胞への抗がん剤感受性の検討とその作用機序を明らかにする予定である。調達方法の工夫などにより当初の計画より研究費の使用の節約ができたことにより生じた未使用分本研究においてはストレス環境における生体への作用を検討するために、実験動物(マウス)を使用する。細胞培養のメインテナンスに必要な培地や血清などを購入(約10万円)する。マウスの使用予定数はコントロール群とストレス負荷群、および抗がん剤投与による作用の検討等を考慮に入れる。飼育にかかる経費(餌代、ケージ代など)や維持費と合わせると、約30万円を見込んでいる。
転写および蛋白質レベルでのアンドロゲンによるp53機能制御機構の解明

本研究では前立腺癌において重要なアンドロゲン受容体(AR)の標的遺伝子を解析し、p53の翻訳後の機能制御に重要な遺伝子について解析した。その結果,G3BP2がp53に結合しp53の核外輸送を促すことを発見した。その分子機構としてRanBP2を介したSUMO化がアンドロゲン処理、G3BP2依存的に起きていること、SUMO化を促す複合体形成に新たな因子TRIM25が必要であることを見出した。またG3BP2は脱ユビキチン化酵素USP10により蛋白レベルで正に制御されることも観察した。以上、p53のアンドロゲンによる翻訳後制御がG3BP2を中心に引き起こされる新たな癌の悪性化メカニズムを見出した。本年度は前立腺癌細胞を用いてPSFを介した転写レベルでのp53抑制メカニズムについてPSF結合や各種ヒストン修飾に関するChIP-seqを用いた解析を行った。まずホルモン療法耐性前立腺癌モデル細胞においてPSFのプロモーター領域への結合、さらにHDAC1の結合、ヒストンの脱アセチル化を確認した。またPSFの結合部位はホルモン療法耐性モデル細胞において結合分布が変化しており、興味深いことに結合部位は以前報告したCTBP1-ASの発現抑制によってその数、分布が変化することからnon-coding RNAを介したエピゲノム制御によりホルモン療法耐性化の過程においてp53の発現抑制がエピゲノムを介したメカニズムで起きていることが考えられた。さらにPSFのRIP-seqを行い結合するnon-coding RNA群を同定した。さらにアンドロゲン依存的な翻訳後修飾メカニズムの解析のためsiRNAを用いたアンドロゲン応答遺伝子の系統的ノックダウンの実験を行った。まずp53の細胞内局在について検討するためアンドロゲン受容体(AR)のChIP-seqにより同定した直接的な応答遺伝子のなかから、遺伝子の機能について解析を行い細胞内蛋白移動に関わるpathwayに合致した計10個のアンドロゲン応答遺伝子の中でp53の細胞内局在に影響を与える遺伝子があるかを検索した。その結果、2つの遺伝子においてp53の細胞内局在(核局在もしくは細胞質局在)に関連すると思われることが示唆された。その中の一つはp53と結合することが報告されており、今後アンドロゲン依存的な細胞内局在について解析予定である。またp53の局在制御に関わる翻訳後修飾メカニズムを検討するため質量分析を用いた結合因子の同定を予定している。本年度は転写レベルでのp53の制御メカニズムについて解析を行い、ChIP-seqなどの次世代シークエンサー解析によりPSFによるp53の制御メカニズムについて明らかとした。翻訳後修飾については細胞内局在を中心に解析を行いアンドロゲン応答遺伝子によるp53の局在について新たなシグナル経路を同定しており概ね順調に進行している。前立腺癌細胞におけるアンドロゲン作用の一つとしてp53の細胞内局在について新たな制御メカニズムの研究を行った。まず質量分析器を用いてアンドロゲン応答遺伝子であるG3BP2に結合するタンパク質を網羅的に同定した。同定されたタンパク質にはRNA結合タンパク質が多数濃縮しておりRNAの制御に関与する可能性が示唆された。過去の報告ではG3BP2はRNA結合部位を有しており過去の報告とも合致する。また興味深いことに我々はSUMO化を媒介する酵素を一つG3BP2結合タンパク質として同定した。この酵素によりp53をSUMO化することで核外へ輸送するシグナルとしていることを見出した。この知見をもとにLNCaP細胞において内在性のp53タンパク質がアンドロゲン依存的にSUMO化を受けることを見出した。G3BP2の発現低下はこのSUMO化反応を抑制することが観察され、p53を核外へ輸送することでp53シグナルを抑制していることが考えられた。また過剰発現系を用いた実験によりG3BP2とSUMO化酵素の共発現は相乗的にp53のSUMO化反応とそれによる核外輸送を促進することが見出された。またホルモン療法不応性の前立腺癌細胞を用いた移植実験においてG3BP2の発現低下は腫瘍増殖を抑制すること、それにより核内のp53のアセチル化の促進、下流シグナルの活性化を促していることが見出された。さらに臨床サンプルを用いた免疫組織学的な解析を追加し、これらの発見に合致する臨床的なデータも得ることができた。当プロジェクトは最終的な論文投稿の段階である。現在論文の審査中であり、追加実験を行う必要がある。前立腺癌におけるアンドロゲン依存的なp53の新たな翻訳後修飾について解析を行った。新たなアンドロゲン受容体(AR)応答遺伝子G3BP2が前立腺癌細胞におけるp53の細胞内局在を制御することをsiRNAによるスクリーニングにより同定した。次に質量分析器を用いてG3BP2の結合タンパク質の同定を行った。その結果、SUMO E3リガーゼであるRanBP2および乳がんの転移で重要なRNA結合タンパク質TRIM25を新たな結合パートナーとして同定した。RanBP2はTRIM25を介してp53/G3BP2と複合体を形成しp53のスモ化を通して核外への輸送を促進することを見出した。これによりTRIM25/G3BP2はp53のシグナルを抑制し、抗がん剤によるアポトーシスへの耐性や細胞増殖、遊走能の亢進を示すことを見出した。さらにG3BP2と結合する脱ユビキチン化

酵素であるUSP10はG3BP2と結合することでG3BP2の蛋白レベルでの発現を正に制御すること、その機序としてポリユビキチン化を抑制することを見出した。G3BP2の安定化はp53シグナルの抑制につながりUSP10はp53のシグナル抑制にも作用する新たな機序を見出した。また併せてUSP10は前立腺癌における予後不良因子であることも新たに見出した。最終年度においては動物実験も行いin vivoでの腫瘍増殖をTRIM25の発現抑制により抑えることを見出した。その際にp53シグナルの亢進、アポトーシスマーカーの亢進を観察した。臨床サンプルの解析では核外でのp53の発現とTRIM25, USP10発現との相関を見出した。以上、p53の新たな制御メカニズムとしてSUMO化を介した細胞内局在の変化のシステムを提唱しRanBP2/G3BP2/TRIM25による複合体形成およびUSP10の新たな役割を見出した。本研究では前立腺癌において重要なアンドロゲン受容体(AR)の標的遺伝子を解析し、p53の翻訳後の機能制御に重要な遺伝子について解析した。その結果,G3BP2がp53に結合しp53の核外輸送を促すことを発見した。その分子機構としてRanBP2を介したSUMO化がアンドロゲン処理、G3BP2依存的に起きていること、SUMO化を促す複合体形成に新たな因子TRIM25が必要であることを見出した。またG3BP2は脱ユビキチン化酵素USP10により蛋白レベルで正に制御されることも観察した。以上、p53のアンドロゲンによる翻訳後制御がG3BP2を中心に引き起こされる新たな癌の悪性化メカニズムを見出した。今後の研究については質量分析によるp53と結合し得る遺伝子やその結合パートナーによるユビキチン化などの修飾へ関与する因子の同定を目指す。さらにそれらの結合パートナーによる制御がアンドロゲン処理によるp53の機能の変化に関与するかどうか機能解析を通じて確認していく予定である。細胞内局在以外にp53の転写機能を制御し得る因子の同定も同様にsiRNAを用いて検討する。さらに臨床サンプルや動物実験を通してin vivoや臨床での前立腺癌の進展との関わりを解析していく。網羅的な結合タンパク質の同定の中でG3BP2と結合するE3 ligaseや脱ユビキチン化酵素を同定した。それらの中にはp53との結合が報告されているものも含まれており、G3BP2を中心とする複合体形成がp53の翻訳後修飾に大きな役割を果たしていることが考えられる。本研究ではその他のE3 ligaseについても前立腺癌の臨床サンプルを用いた解析を予定しており、G3BP2を介した新たな視点でのp53の翻訳後修飾や細胞周期、アポトーシスへの役割を同定することが今後の解析テーマとして考えている。内分泌前立腺癌アンドロゲン研究当初に平成27年に予定していたChIRP-seqは今後施行予定であり、翻訳後修飾の蛋白質レベルでの実験が先行している。このため平成28年度に次世代シークエンサーを用いた解析を追加で施行予定であり試薬の購入などで費用が必要なため繰り越した。