hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
各種フェリチンに対するモノクロ-ナル抗体使用によるフェリチン抗原決定基の研究

昭和62年、63年の2年間にわたる研究成績から特筆されるものに乏しい感をもった。そこで平成元年度はHeLa細胞フェリチンに対するモノクロ-ナル抗体(MoAb)の作製を開始した。HeLa細胞フェリチン、(HeLa.F)に対するMoAbを産生するHybridamaについて、正常ヒト肝フェリチン(HLF)、正常ヒト心臓フェリチン(HHF)、正常ヒト脾フェリチン(Hsp.F)、HeLa.Fを用いてELISA法でassayを試み、HeLa.Fに特異的に反応する抗体を産生するものを得た。同hybridomaのクロ-ニングにより、9種類のHybridamaを得た。それらのうち、HeLa.Fとよく反応し、HLF、Hsp.F、HHFとは余り反応しない3種類のHybridomaの産生するMoAbについてその性状を検討した。それらをそれぞれMoAb04225、04229、04231と名付けた。免疫化学組織染色法で肝癌組織と正常肝組織をABC法で染色したところ、MoAbの400倍希釈で04231のみが肝細胞組織のみを染め分けることができた。そこで04225、04229、04231のMoAbについて阻止試験を試みたところ、04231はその10倍の抗体濃度、すなわち10moDの04231で88%阻止されたのに対して、04231と04225は同じ濃度で70%の阻止率、04231と04229は同じ濃度で3%の阻止率を示した。即ち、MoAb04231は04225、04229とは明らかにことなるHeLa.Fのエピト-プを認識することを窮わせる成績であった。現在それらフェリチンを用い、これらMoAbを使用してペプタイドマップの違いについて検討している。さらにMoAbによる血清フェリチンのAssay系の確立、MoAbを用い、免疫沈降法を行い、H.Lそれぞれのサブユニットのc-DNAを用いて、HeLa.Fおよびその他の腫瘍フェリチンのサブユニットの検討を試みたい。ヒト正常肝組織フェリケン(HLF)とヒト肝細胞癌組織フェリケン(HpF)における抗原決定基の相違について, HpFに対するモノクローナル抗体(MonAb)の作成をこころみた. BALB/Cマウスを用い, HpF溶液をFreunds complete adjuvantととも腹腟内に注射し免疫した.このマウス脾細胞とマウスミエローマ細胞(P3-×63-Ag8-UI)のhybridomaを作製した. ELA法によるスクリーニングで抗体を産生していることを確認した後,限界希釈法でクローニングを1回行い,目的のhybridomaを得た.hybridomaを産生する培地について培養液を検討した結果, 10%FCS添加RPUI1640培地よりも,無血清培地(HyMedium-606,コージン株式会社)を用いた方がよい結果が得られた.ハイブリドーマとしてH64, 68, 70の3種類のものを得た.それぞれのハイブリドーマの産生する抗体についての性状を検討した.それぞれのハイブリドーマの産生する免疫ブロフィンのうち, H64は1gM免疫グロブリン, H68-1は1gG3, H68-2は1gG26, H70はいずれも1gMであった.さらにLaemrliおよびTowbinらの方法でHop, HLFのサブユニットの染色態度を検討したところ, H64はH, L2つのサブユニットに同様に染色されたのに, H68はLサブユニットのみ, H70はH, Lいずれのサブユニットにも染色されなかった.しかし組織免疫化学法で肝細胞癌組織切片をDAPで染色したところ, H70を1次抗体に用いたときだけ,肝細胞癌組織の細胞質が弱いながら染色された.またそれぞれのMonAbを用いて,結合阻害実験をGLISA法で行ったところ, H68とH70とでは明らかに阻害率の相違が認められたが, H70の阻害率は50%以下であり,両者の認識するHLFの抗原決定基には明らかな相違がある所見を得た.ヒト肝細胞癌組織フェリチン(HpF)に特異性の高いモノクローナル抗体(MoAb)の作製を試み、昨年H64、H68、H70の3種のハイブリドーマを得、各々の培養上清について性状の比較検討を行った。今年度はさらに詳細な性状検討を行うことを目的として、まずハイブリドーマをBALB/cマウスの腹腔に移植して大量培養した。採取した腹水に飽和硫安を加えて40%濃度とし、生じた沈澱を溶解し、さらに0.05Mリン酸緩衝液pH7.2を用い、DEAE-セルロースクロマトにより精製した。次に精製抗体をビオチンNHSを含むジメチルスルフォキシド中で2時間インキュベートンエタノールアミンで反応を停止したのちPBSで十分透析して、ビオケン標識MoAb H64、H68、H70を得た。それぞれについて、HpFとヒト正常肝組織フェリチン(HLF)を固相化したプレートを用い、アビゲン・ビオチン法によるELISAを行った。その結果、H64とH68では両フェリチンとの反応性に差が認められなかったが、H68はHLFに対してより強い反応性を示した。HLFに対する免疫反応性はH68>H64>H70、HpFに対してはH64>H68>H70の順であった。

昨年の培養上清を用いた実験でH70はHpFにより強く反応するという結果が得られており、今年の結果と矛盾した。この点についてはさらに検討したいと思う。3種のビオケン標識MoAbとHLFを固相化したマイクロプレートを用いて、結合阻害実験を行った。その結果、H64とH68の認識するエピトーブは明らかに異なるが、H68とH70では類似していると推定した。さらに詳細に検討中である。また、新たに精製したHpFを用いてハイブリドーマを作製中である。現在、HpFにより強く反応した7つのウエルについて、限界希釈法によるクローニングを行っている。昭和62年、63年の2年間にわたる研究成績から特筆されるものに乏しい感をもった。そこで平成元年度はHeLa細胞フェリチンに対するモノクロ-ナル抗体(MoAb)の作製を開始した。HeLa細胞フェリチン、(HeLa.F)に対するMoAbを産生するHybridamaについて、正常ヒト肝フェリチン(HLF)、正常ヒト心臓フェリチン(HHF)、正常ヒト脾フェリチン(Hsp.F)、HeLa.Fを用いてELISA法でassayを試み、HeLa.Fに特異的に反応する抗体を産生するものを得た。同hybridomaのクロ-ニングにより、9種類のHybridamaを得た。それらのうち、HeLa.Fとよく反応し、HLF、Hsp.F、HHFとは余り反応しない3種類のHybridomaの産生するMoAbについてその性状を検討した。それらをそれぞれMoAb04225、04229、04231と名付けた。免疫化学組織染色法で肝癌組織と正常肝組織をABC法で染色したところ、MoAbの400倍希釈で04231のみが肝細胞組織のみを染め分けることができた。そこで04225、04229、04231のMoAbについて阻止試験を試みたところ、04231はその10倍の抗体濃度、すなわち10moDの04231で88%阻止されたのに対して、04231と04225は同じ濃度で70%の阻止率、04231と04229は同じ濃度で3%の阻止率を示した。即ち、MoAb04231は04225、04229とは明らかにことなるHeLa.Fのエピト-プを認識することを窮わせる成績であった。現在それらフェリチンを用い、これらMoAbを使用してペプタイドマップの違いについて検討している。さらにMoAbによる血清フェリチンのAssay系の確立、MoAbを用い、免疫沈降法を行い、H.Lそれぞれのサブユニットのc-DNAを用いて、HeLa.Fおよびその他の腫瘍フェリチンのサブユニットの検討を試みたい。
イオノマー膜のモルフォロジー制御に基づく固定キャリヤ-膜の高機能化

魚油中に含まれるDHA(ドコサヘキサエン酸)などの高度不飽和脂肪酸を有効に分離するためにはAg^+をキャリヤ-とする促進輸送膜による分離が有効であることを、我々は既に一連の研究により明らかとしている。この場合、Ag^+はナフィオン膜のような市販のイオン交換膜中に静電相互作用により保持される。ここでは、DHAの透過速度を高める目的で、膜の薄膜化をおこなうためち、ナフィオン溶液から直接イオン交換膜の作製を行った。ナフィオン溶液からのイオン交換膜の作製は、以下の手順により行った。まずナフィオン溶液にDMSO等の可塑剤を添加し、シャーレ上にキャスト後、乾燥を行った。さらに熱処理を行うことで膜中に結晶構造を形成させ、溶液に不溶性のイオン交換膜を作製した。熱処理温度200°C、処理時間3時間の場合に、約30μmの厚みをもつ有効なイオン交換膜を作製することができた。この膜によりDHA/OLA(オレイン酸)の透過・分離挙動を検討した結果、市販のナフィオン膜を用いた場合に比べ、透過速度は約20倍増加し、また分離性についても3倍程度増加した。膜性能は熱処理時間にほとんど影響されなかったが、処理温度には大きく依存し、低い温度で製膜した膜は透過性は高いものの選択性は低く、逆に高い温度での膜は高い選択性を示した。得られたイオン交換膜の構造を検討するために、小角x線散乱(SAXS)実験を行った。市販のナフィオン膜に比べ、キャスト膜では、ラメラ結晶間の距離が小さく、結晶性が小さいことが示唆された。また、熱処理温度が低い場合にも、結晶性が低下することがわかった。上記の膜性能は、このような膜のモルフォロジーに直接関係しているものと思われる。天然油脂中に含まれるEPA(エイコサペンタエン酸)やDHA(ドコサヘキサエン酸)などの高度不飽和脂肪酸を高純度に精製分離するための高機能化固定キャリヤ-膜の開発を目的に研究を行い次の結果を得た。イオン交換膜として実績のあるナフィオン膜を,硝酸銀で処理し銀イオン置換した固定キャリヤ-膜を作製し透過実験を行った。膜の選択性能の評価はDHAエチルとオレイン酸エチルの混合物からDHAの分離実験で行った。すなわち,供給相にDHAとオレイン酸の2成分溶液を,また受容相に同じ溶媒を入れ,膜を透過して受容相中へ移動した成分をガスクロで分析して得た透過流束から促進係数と分離係数をもとめ,種種の溶媒が分離特性に及ぼす影響を検討した。原料相と受容相ならびに膜相ともに同じ溶媒を用いる方が,通常の液膜法よりも有効であった。各種の溶媒を用いて検討した結果,溶媒としては,エタノール特に10%程度の水分を含む場合が促進係数,分離係数ともに大きくできることを明らかにした。各種溶媒による膜の膨潤度を検討した結果,透過係数は,膜の含溶媒率で相関できることが明らかになった。また含溶媒率は溶媒のドナー数に大きく依存されることが明らかになった。含水エタノールの分離特性が優れているのはこの膜の膨潤以外に,銀イオンとオレフィンの錯形成反応が影響することを,硝酸銀溶液による抽出実験により確かめた。すなわち銀イオンとオレフィンの錯形成能が溶媒中の水分により増加し,これと膨潤度との相乗効果で含水エタノールの促進係数と分離係数が極大になることを明らかにした。また長期間の耐久実験をした結果,この膜を繰り返し使用して,現在まで100日間以上安定した性能を示すこと確認した。魚油中に含まれるDHA(ドコサヘキサエン酸)などの高度不飽和脂肪酸を有効に分離するためにはAg^+をキャリヤ-とする促進

輸送膜による分離が有効であることを、我々は既に一連の研究により明らかとしている。この場合、Ag^+はナフィオン膜のような市販のイオン交換膜中に静電相互作用により保持される。ここでは、DHAの透過速度を高める目的で、膜の薄膜化をおこなうために、ナフィオン溶液から直接イオン交換膜の作製を行った。ナフィオン溶液からのイオン交換膜の作製は、以下の手順により行った。まずナフィオン溶液にDMS0等の可塑剤を添加し、シャーレ上にキャスト後、乾燥を行った。さらに熱処理を行うことで膜中に結晶構造を形成させ、溶液に不溶性のイオン交換膜を作製した。熱処理温度200°C、処理時間3時間の場合に、約30μmの厚みをもつ有効なイオン交換膜を作製することができた。この膜によりDHA/OLA(オレイン酸)の透過・分離挙動を検討した結果、市販のナフィオン膜を用いた場合に比べ、透過速度は約20倍増加し、また分離性についても3倍程度増加した。膜性能は熱処理時間にほとんど影響されなかったが、処理温度には大きく依存し、低い温度で製膜した膜は透過性は高いものの選択性は低く、逆に高い温度での膜は高い選択性を示した。得られたイオン交換膜の構造を検討するために、小角×線散乱(SAXS)実験を行った。市販のナフィオン膜に比べ、キャスト膜では、ラメラ結晶間の距離が小さく、結晶性が小さいことが示唆された。また、熱処理温度が低い場合にも、結晶性が低下することがわかった。上記の膜性能は、このような膜のモルフォロジーに直接関係していると思われる。
生体膜蛋白質の細胞膜上の局在化に関与する新規システムの解明

細胞膜に存在するイオン輸送蛋白質や種々の刺激受容蛋白質の機能には、それらの細胞膜上の特定の部位への局在化や、細胞内骨格との相互作用が関与する事が、次第に明らかにされつつある。しかし、局在化を可能とする細胞膜への、あるいは細胞膜上での蛋白質の移動の分子機構については、ほとんど明らかになっていない。本研究では、高等真核生物の膜に存在するNa+/H+交換輸送蛋白質に注目し、本輸送蛋白質の細胞質ドメインに結合する3種の新しい蛋白質遺伝子をクローン化した。この内の一種は、Ca2+を結合し、また、Na+/H+交換輸送たんぱく質に直接結合し既知のカルシニューリンに相同性がある(CHPと呼ぶ)。また、このCHPに結合する蛋白質を検索したところ、既知のキネシンと全く同じ配列と有しさらにそのなかに新規の配列をもつモーター蛋白質の遺伝子(新規キネシン,KIF1α)と、アポトーシス関連蛋白キナーゼドメインと相同な配列を有する新規遺伝子(Cbk,とよぶ)の2種のクローンをえた。これら蛋白質の細胞膜上への局在化への関与を明らかにする目的で,それぞれを大腸菌で大量発現させ精製後ウサギに免役し抗体を作成した。また、それぞれにGFP(green fluorescence protein)との融合蛋白質を作成し細胞に導入した。このようなアプローチから、新規キネシンが脳内で発現が高いこと、CbkとCHPは、細胞核および粗面小胞体領域に存在し、細胞の増殖条件によって核や細胞膜へ一部が移動することが明らかとなった。また、これらの蛋白質を大量に生産、精製し試験管内での機能発現を観察する実験系の基盤造りにも成功している。これらの成果を、日本生化学会や分子生物学会の年会で報告し、論文を投稿中である。
B7を用いたウイルス感染症の治療モデルの研究

ウイルス感染症の免疫学的なモデルを構築して、B7を用いてウイルス特異的なT細胞を附活し、感染細胞の除去にT細胞が果たす役割を探求することを目的とする。後天性免疫不全症候群とウイルス肝癌のモデル化を試みた。1。HIV:HIVの膜蛋白であるgp120のV3領域は抗原エピトープ部位であることがすでに知られている。この抗原エピトープの両端に、抗原提示の際に蛋白分解酵素により部分分解をうけるアミノ酸配列をとりつけた。これに相当するDNA塩基配列を合成し、サイトメガロウイルスプロモーターに連結した。このHIV抗原エピトープにベータガラクトシダーゼがキメラ蛋白として発現するように遺伝子組み換えを行った。B7発現ベクターはB7のcDNAをASV-LTRを持ったpiLNベクターに組込んで作成した。マウスBalb3T3細胞にHIVエピトープ発現ベクターを組込んでHIVウイルスの擬似感染細胞とした。この細胞にB7遺伝子を導入した細胞をクローン化した。これらの擬似感染細胞をマウス個体に注入した場合に、B7の発現の有無がHIV特異的T細胞の附活にどのように影響するか検討している。また、近年遺伝子を直接利用する遺伝子ワクチンの有効性が報告されているので、Balb/cマウスの大腿筋にHIVエピトープ発現ベクターを直接注入して、免疫附活を試みた。ベータガラクトシダーゼの活性を測定することで発現を確認した後に、HIV特異的なT細胞が附活されるか検討を行っている。2。肝癌:ヒト肝炎ウイルスのx遺伝子を発現しているマウス肝癌細胞にB7遺伝子を導入して得られた癌細胞を同系のマウスに注入し、肝癌細胞特異的なT細胞の附活化について検討している。1。2。
多彩な数学的構造に基づく長期的安全性を保証可能な軽量公開鍵暗号の研究

本年度の研究は大きく分けて二つに分けられる。一つ目の研究は、自己双線形写像と呼ばれる暗号要素技術に関するものである。本研究では自己双線形写像の定義を弱めた補助情報付き自己双線形写像を定義し、それを素因数分解仮定と識別不可性難読化を用いて構成した。本成果は論文誌Algorithmicaにおいて発表を行った。また、その構成について、Multilinear Generalized Diffie-Hellman with Auxiliary Information (AI-MGDH)仮定を定義し、それが成り立つための十分条件を示した。その結果、新たな応用としてセキュリティパラメータに対して対数深さの回路が評価可能な準同形署名方式を構成した。本成果は国際会議ACISP2016において発表を行った。二つ目の研究は、損失落とし戸関数に関するものである。本研究ではまず損失落とし戸関数の可用性を損なわない範囲で定義を弱めた攻撃者依存損失落とし戸関数を定義し、それをセミスムーズRSA部分群数と呼ばれる特殊な形の合成数に関する素因数分解仮定のもとで構成した。その結果、Boldyrevaらにより定義された安全性を満たす決定的公開鍵暗号方式を素因数分解仮定のもとで初めて提案した。また、類似の手法を用いることで、素因数分解仮定に基づく選択暗号文攻撃に対して安全な公開鍵暗号方式のなかで、暗号文長が最短である方式を構成した。特に、これは素因数分解仮定に基づく方式のうちで、暗号文サイズが群の元2個を下回る初めての方式である。本成果は国際会議CRYPTO 2016において発表を行った。28年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は主に素因数分解問題の困難性に関連した暗号方式に関する研究を行い、3件の国際会議発表を行った。一つ目は素因数分解問題の困難性と難読化技術を組み合わせることにより自己双線形写像を構成したものである。自己双線形写像はある条件下では存在しないことが既存研究により示されていたが、本研究はその条件を回避することによって自己双線形写像を初めて構成したものである。これにより、より良い性質を持った多者間鍵共有や放送暗号を構成した。本研究は暗号理論分野のトップカンファレンスであるCRYPTOにおいて発表を行った。二つ目は、既存の素因数分解問題の困難性に基づく選択暗号文攻撃(CCA)に対して安全な公開鍵暗号方式の安全性証明の不備を指摘し、それを補完したものである。本研究が不備を指摘した方式は、既存の素因数分解問題に基づくCCA安全な公開鍵暗号方式のうちで最も効率的なものである。したがってその安全性証明の不備を指摘したことの意義は大きい。本成果は国際会議SCNにおいて発表を行った。三つ目は、素因数分解問題の困難性に基づくFail-stop署名に関するものである。Fail-stop署名とは、ディジタル署名の一種であるが、通常のディジタル署名は計算量的な安全性に依存しているため、時間の経過によって安全性が劣化するのに対して、Fail-stop署名では情報理論的安全性を用いているのでそのようなことが起こらず、長期的な利用に適している。既存研究で素因数分解問題に関連したFail-stop署名方式はいくつか知られていたが、それらには署名長が長いという問題点があった。本研究では、その点に着目し、既存方式よりも短い署名長を持つFail-stop署名方式を提案した。本成果は国際会議ProvSecで発表を行った。以上のように、本年度はより高機能で長期的に安全な暗号方式についての研究を行い一定の成果を得た。本年度は主に素因数分解問題の困難性に基づく暗号方式の構成に関して研究を行った。本年度の研究は大きく分けて3つにわけられる。一つ目の研究は難読化およびそれに基づく自己双線形写像に関してである。昨年度の研究において、難読化と素因数分解の困難性を用いた新たな自己双線形写像を構成したが、本年度はその構成をさらに吟味することにより、既存研究では知られていなかった新たな性質を満たすことを発見した。具体的には、既存研究においては、構成された自己双線形写像が補助情報付き多重線形計算Diffie-Hellman仮定(AI-MCDH仮定)と呼ばれる計算量的仮定を満たすことのみしか示されていなかったのに対して、本研究ではより一般化された計算量的仮定である、補助情報付き一般化多重線形Diffie-Hellman仮定(AI-GMDH仮定)が満たされるためのパラメータの必要条件を明らかにした。二つ目の研究は、スタンダードモデルとランダムオラクルモデルの両方において緊密な安全性証明が可能なCCA安全な公開鍵暗号方式に関してである。緊密な安全性証明は実用上高い安全性を持った暗号を得るためには必須の概念であるが、既存研究においてはスタンダードモデルかランダムオラクルモデルのどちらかでのみ緊密な安全性証明が得られる方式がほとんどであった。本研究は、DDH問題、ペアリング問題、素因数分解問題などの様々な計算量的困難性の仮定をおくことによりこれを実現した。本研究においては特に素因数分解問題に基づく部分に関して担当した。三つ目の研究として、素因数分解問題に基づく損失落し戸関数の構成に関する研究を行った。本研究ではまず損失落し戸関数の定義をその可用性を損なわない範囲で緩和した。これを一般化損失落し戸関数と呼ぶ。素因数分解問題の困難性のみを用いて一般化損失落し戸関数を構成できることを初めて示した。昨年度に引き続き、新たな成果を得ることができた。

一つ目の研究は、自己双線形写像と呼ばれる暗号要素技術に関するものである。本研究では自己双線形写像の定義を弱めた補助情報付き自己双線形写像を定義し、それを素因数分解仮定と識別不可性難読化を用いて構成した。本成果は論文誌Algorithmicaにおいて発表を行った。また、その構成について、Multilinear Generalized Diffie-Hellman with Auxiliary Information (AI-MGDH)仮定を定義し、それが成り立つための十分条件を示した。その結果、新たな応用としてセキュリティパラメータに対して対数深さの回路が評価可能な準同形署名方式を構成した。本成果は国際会議ACISP2016において発表を行った。二つ目の研究は、損失落とし戸関数に関するものである。本研究ではまず損失落とし戸関数の可用性を損なわない範囲で定義を弱めた攻撃者依存損失落とし戸関数を定義し、それをセミスムーズRSA部分群数と呼ばれる特殊な形の合成数に関する素因数分解仮定のもとで構成した。その結果、Boldyrevaらにより定義された安全性を満たす決定的公開鍵暗号方式を素因数分解仮定のもとで初めて提案した。また、類似の手法を用いることで、素因数分解仮定に基づく選択暗号文攻撃に対して安全な公開鍵暗号方式のなかで、暗号文長が最短である方式を構成した。特に、これは素因数分解仮定に基づく方式のうちで、暗号文サイズが群の元2個を下回る初めての方式である。本成果は国際会議CRYPTO 2016において発表を行った。本年度は来年度以降の暗号方式の構成に向けて予備調査を行うことを主とする予定であったが、既に有用な知見がいくつか得られた。本年度までの研究は主に素因数分解問題に基づく公開鍵暗号方式であった。今後は格子問題などの、耐量子計算機問題に基づく暗号方式の構成にも取り組む予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。初年度は主に素因数分解問題に基づく方式に関する研究を行ってきた。しかし、素因数分解問題は量子計算機が実現した場合容易に解かれることが知られているため、長期的な安全性に関して疑問もある。そこで、次年度以降は格子問題等の量子計算機を用いても解くのが難しいとされている問題に基づいた暗号について研究を進めていく予定である。
新自由主義的時空間と認識論的布置としての文学・映画・現代アート

現代の文学や映画、アートが新自由主義的時空間を具体的にどのように概念化し、知覚の対象として提示し、さらに身体的に経験可能なものとして構築しているかを、表象イメージの役割の再定義化、および新自由主義的時空間の多面的分析を通じて明らかにした。また新自由主義的グローバリゼーションの限界を明確化するために、惑星的という概念の可能性を検討した。現在までのところおおむね順調に進んでいる。文学研究や映画・視覚文化研究それぞれに備わった長所を最大限生かしながら、変化の到達点が見えにくい混沌とした状況にある人文学の刷新へとつながる可能性のある新しい研究領域を生みだそうとする、ある意味無謀とも言える本研究は、既存のディシプリンの枠組みに容易に収まりきらない問題を扱っている。そのため、研究遂行に必要な先行研究の広く共有されたリストがすでに存在しているわけではなく、課題に関連した研究書や論文、資料などを根気よく一から探し出す必要がある。この点に関して、研究一年目である平成27年度に大きな成果を挙げることができた。さらに研究初期の段階でプリンストン大学およびハーバード大学で講演・発表をおこない、アメリカを拠点に活動する関連分野の研究者から様々なフィードバックを得たことも、今後研究を進める上で貴重な経験であった。ただし、当初予定していた研究実施計画から少し逸れてしまったことを記しておかなければならない。まず国内の美術館のフィールドワークを実施することができなかった。これは時間不足や予算のせいではなく、美術館と新自由主義的時空間について理論的考察を深めることができず、フィールドワークの目的を明確化することが困難であったことに起因する。海外からの研究者招聘に関しては、残念ながら招聘予定者とスケジュールの調整をつけることができず、見送らざるを得なかった。平成27年度に引き続き、現代の芸術や文化と新自由主義的時空間の関係性について多面的な分析を行った。(1)新自由主義的時空間と映画・視覚文化・文学の関係の理論的分析を進め、(2)現代アートと美術館が新自由主義的時空間とどう関わっているかについての考察を開始し、(3)これらの研究に基づいた論文の執筆し講演・学会発表を行うことが平成28年度の主な活動目標であった。平成28年5月に香港大学(University of Hong Kong)で開催された国際シンポジウム“Contextualizing Asian Ecocinema"での発表、7月のシンガポール国立大学(National University of Singapore)での講演、9月にペンシルベニア州立大学(Pennsylvania State University)で行われたアメリカ比較文学会“Globe, Planet, World: Comparison and the Problem of Disciplinary Scale"での発表、11月の慶応大学で開催されたシンポジウムでの発表など、研究成果を公にし関連分野の専門家から貴重なフィードバックを受け取る多くの機会に恵まれた。シンガポールでは映画と都市空間の研究者であるG・シム教授とともにフィールドワークを行い、シンガポールのグローバリゼーションと美術館・博物館の関係について意見交換を行った。また平成28年9月から平成29年1月まで米国プリンストン大学に客員教授(visiting professor)として滞在し、現地の研究者や博士課程の学生と、特に映画と文学について議論や意見交換を行った。また12月にはアメリカ各地の大学や日本の大学の研究者を招き、新自由主義的言説空間における文学・映画研究の可能性についてのシンポジウムを開催した。しかし同時に研究の全体的な方向性を転換する必要があることが明らかになってきた。先ず第一に、新自由主義という概念そのものの限界である。必ずしも誤った概念ではないものの、現在グローバルな規模で起きている大きな変化を説明するには新自由主義という概念の有効性は限定的であり、かつその歴史的射程も短すぎる。新自由主義という概念を保持しつつ、今後は資本主義というより大きな文脈のなかで、時空間の知覚や表象の問題を考えていく必要がある。さらに新自由主義という概念の相対化にともなって、グローバリゼーションの重要性も再検討されなければならない。つまり新自由主義と密接につながったグローバリゼーションという考え方の限界を乗り越えるためには惑星的な視点が必要不可欠であり、エコロジーの問題を避けて通ることはできない。第二に、理論的言説と文学や映画を含めた芸術のあいだに具体的な関連性を見つけることは容易ではないことが、2年間の研究を通じて明らかになってきた。これまで精読してきた重要文献から多くのことを学んできたが、しかしこの課題を完全に克服している著作には残念ながらまだ出会っていない。自分自身も簡単には克服できないだろうが、研究期間終了までに何らかの仮説を立てるところまでは辿り着きたいと考えている。最後に平成28年度も、予定していたほど美術館へのフィールドワークを行うことができなかった。プリンストン大学での活動で時間をとられたことが大きな原因の一つである。ただシンガーポールで複数の美術館を専門家と議論しながら見学したことは大きな収穫であり、今後の研究にも影響を与えるはずである。本研究最終年度の平成29年度も、現代の芸術や文化と新自由主義的時空間の関係性について多面的な分析を行った。昨年度の研究活動の結果、新自由主義がグローバルに支配的な文化状況をより深く理解するためには、当初設定したよりも研究範囲を拡大する必要性が明らかになったわけだが、本年度はその結果に基づき、新自由主義的時空間と映画・視覚文化・文学の関係を理論的に分析した文献に加えて、エコロジーや惑星的視点に問題関心の射程を広げて研究書や論文を集中的に読み進め、「挑戦的」という本研究のカテゴリーにふさわしい新しいアイデアや研究の種を多数見つけることができた。

さらにポストモダン建築としての美術館と伝統的都市空間の相互関係性を調査するフィールドワークを、平成29年8月に金沢、11月にヘルシンキ、平成30年2月にスペインのビルバオで行った。一方こうしたフィールドワークと並行して、これまでの研究の部分的成果や仮説の有効性を確かめるために、さまざまな場所で口頭発表や講演を行った。平成29年6月に韓国の高麗大学で開催されたアジア学会AAS-in-Asiaにおいて、おもに伊藤計劃の小説の分析を通じて、新自由主義的状況におけるSF小説とユートピア/ディストピア・イメージについて考える論文を発表した。11月にはベルギー自由大学で、新自由主義とデジタルメディアが生み出す仮想空間における民主主義の可能性について講演を行い、また平成30年3月にワシントンで開催されたアメリカ・アジア学会AASの年次大会では、Japanese StudiesとPlanetaryの概念に焦点を合わせたパネルに参加し、日本の現代史と新自由主義の関係を惑星的観点から見直す必要性についての発表を行った。現代の文学や映画、アートが新自由主義的時空間を具体的にどのように概念化し、知覚の対象として提示し、さらに身体的に経験可能なものとして構築しているかを、表象イメージの役割の再定義化、および新自由主義的時空間の多面的分析を通じて明らかにした。また新自由主義的グローバリゼーションの限界を明確化するために、惑星的という概念の可能性を検討した。(1)新自由主義的時空間と映画・視覚文化・文学の関係を理論的に分析する作業をさらに進めること、(2)現代アートと美術館が新自由主義的時空間とどう関わっているかについての考察を本格的に始動すること、さらに(3)研究の成果をまとめて論文や講演のかたちで発表することが、平成28年度の主な活動目標である。(3)に関しては、すでに5月に香港大学(University of Hong Kong)のシンポジウム"Contextualizing Asian Ecocinema"での発表が決定しており、7月にはシンガポール国立大学(National University of Singapore)での講演も計画されている。また9月以降、複数のアメリカの大学から講演を依頼されており、(1)に関連した研究成果を発表する予定である。申請者は平成28年9月から平成29年1月まで客員教授(visiting professor)としてプリンストン大学に滞在することが決まっているため、当初の研究計画通りに海外から日本へ研究者を招聘しワークショップを開催することが本年度も日程的に難しい。そのため代替案として、プリンストン大学あるいはアメリカ東海岸にある別の大学でワークショップをおこなうことを現在検討中である。
表皮細胞のリプログラミングと腫瘍化プロセス

表皮細胞の腫瘍化には一般の癌と同様に多段階発癌機構が関与していると考えられるが、1つの腫瘍において個々の細胞クローンは決して単一ではなく、腫瘍内不均一性があることがわかってきた。腫瘍内不均一性は、外科的に切除不能な癌の根治が困難な主要因であり、その機構の1つとして表皮細胞のリプログラミングが考えられる。また、表皮細胞の腫瘍化プロセスにおいて、腫瘍の起源となる細胞は幹細胞である可能性が高いと考えられるが、幹細胞と完全に分化した細胞の中間の、単分化能を持つ前駆細胞(committed progenitor cell; CP細胞)がリプログラミングしている可能性もある。本研究では病理組織学的見地から、日光角化症(AK)を幹細胞由来の表皮内癌、ボーエン病(BD)をCP細胞由来の表皮内癌と仮定し、表皮細胞のリプログラミングに関与する分子の同定を試みる。AK/BDの凍結各2サンプルを選び、調整後計4サンプルを化学物質評価研究機構へ提出した。サンプルからタンパク質を抽出、酵素消化を行った後、液体クロマトグラフィー質量分析を用いた解析によって、計701個のタンパク質を同定した。AK/BD 2サンプル間でタンパク質の定量比較解析を行い、AKで高発現する12個のタンパク質とBDで高発現する12個のタンパク質を同定した。各12個のタンパク質について現在までに知られている情報を詳細に検討し、表皮細胞のリプログラミングや腫瘍化に重要と考えられるタンパク質を探索した。AKで高発現するタンパク質としてRCE1、CDC42、14-3-3 beta、14-3-3 zetaの4つと、BDで高発現するタンパク質としてDUSP1、PEDF、PTRFの3つに注目し、各抗体を入手した。一部の抗体を用いた免疫染色ではタンパク質の発現を確認済みである。平成30年度産休・育休などにより実働教室員が減ったことから、研究代表者・研究分担者は診療や教育などその他の業務で多忙となり、研究遂行に要する十分な時間と労力を確保できなかった。また、研究の過程で購入したいくつかの抗体の質が悪くタンパク発現をうまく検出できなかったことや研究の結果判定の困難な事例などにより、想定以上に研究遂行に時間を要した。新たに注文・入手する抗体を含め、7つのタンパク質(AKで高発現する4つとBDで高発現する3つ)の各抗体を用いて、質量分析に用いたAK/BD各2サンプルを含め、AK/BDサンプルにおいて免疫染色を行い、タンパク質発現の程度や発現細胞・部位などを詳細に検討する。質量分析の結果を確認するとともに、免疫染色でAK/BDサンプル内での腫瘍内不均一性の有無を検討する。また、AK/BD病変周囲の正常皮膚で主に表皮基底層での細胞間発現量の差を検討し、幹細胞/CP細胞の鑑別を試み、新規のAK/BD鑑別マーカー・幹細胞/CP細胞鑑別マーカー・AK/BDの治療標的分子などを見出したい。AK/BDの凍結各2サンプルを選び、角化傾向の強い部分や厚い痂皮を付着する部分を避けて、ほぼ同じ厚さとなるように真皮下層や脂肪組織を取り除き、計4サンプルを化学物質評価研究機構へ提出した。サンプルからタンパク質を抽出、酵素消化を行った後、液体クロマトグラフィー質量分析(LC/MS: liquid chromatography/mass spectrometry)を用いた解析によって、計701個のタンパク質を同定した。解析にふさわしいサンプルの準備に時間がかかり、現在、AK/BDサンプル間でのタンパク質定量比較解析で、AK、またはBDで高発現する各12個のタンパク質を同定したところである。今後、その中で注目するタンパク質を選出し、AKとBD組織においてタンパク質の発現を検討する予定である。

サンプルからタンパク質を抽出、酵素消化を行った後、液体クロマトグラフィー質量分析を用いた解析によって、計701個のタンパク質を同定した。AK/BD 2サンプル間でタンパク質の定量比較解析を行い、AKで高発現する12個のタンパク質とBDで高発現する12個のタンパク質を同定した。各12個のタンパク質について現在までに知られている情報を詳細に検討し、表皮細胞のリプログラミングや腫瘍化に重要と考えられるタンパク質を探索した。AKで高発現するタンパク質としてRCE1、CDC42、14-3-3 beta、14-3-3 zetaの4つと、BDで高発現するタンパク質としてDUSP1、PEDF、PTRFの3つに注目し、各抗体を入手・注文した。現在、まず一部の抗体につき免疫染色を進めているところである。合計24個のタンパク質についての情報の検討、表皮細胞のリプログラミングや腫瘍化に重要と考えられるタンパク質の探索、および各抗体の選定に時間がかかった。AKで高発現するタンパク質としてRCE1、CDC42、14-3-3 beta、14-3-3 zetaの4つと、BDで高発現するタンパク質としてDUSP1、PEDF、PTRFの3つに注目し、合計7つのタンパク質の各抗体を入手・注文した。表皮細胞の腫瘍化には一般の癌と同様に多段階発癌機構が関与していると考えられるが、1つの腫瘍において個々の細胞クローンは決して単一ではなく、腫瘍内不均一性があることがわかってきた。腫瘍内不均一性は、外科的に切除不能な癌の根治が困難な主要因であり、その機構の1つとして表皮細胞のリプログラミングが考えられる。また、表皮細胞の腫瘍化プロセスにおいて、腫瘍の起源となる細胞は幹細胞である可能性が高いと考えられるが、幹細胞と完全に分化した細胞の中間の、単分化能を持つ前駆細胞(committed progenitor cell; CP細胞)がリプログラミングしている可能性もある。本研究では病理組織学的見地から、日光角化症(AK)を幹細胞由来の表皮内癌、ボーエン病(BD)をCP細胞由来の表皮内癌と仮定し、表皮細胞のリプログラミングに関与する分子の同定を試みる。AK/BDの凍結各2サンプルを選び、調整後計4サンプルを化学物質評価研究機構へ提出した。AKで高発現するタンパク質としてRCE1、CDC42、14-3-3 beta、14-3-3 zetaの4つと、BDで高発現するタンパク質としてDUSP1、PEDF、PTRFの3つに注目し、各抗体を入手した。
カーボンナノホーンを用いた新しいホウ素キャリアーの検討

カーボンナノホーン(CNH)は、直径2-5 nm、長さ40-50 nmのグラファイト1枚でできた擬円筒状物質である。ホウ素ーカーボンナノホーン(BN-CNH)は、CNHの中にホウ素を内包、かつ外壁にも担持できるため、大量のホウ素を含有できる新しいホウ素化合物である。U87, GL26, CT26等の培養細胞にBN-CNHを投与し、取り込みを確認した。BN-CNHは、アグリケーションを起こしやすく、フィルターにトラップされてしまう傾向があり、ICPによる測定はさらなる検討が必要であった。カーボンの色による光学的吸収を見る方法では、BPAやBSHなどの従来の試薬より少ない投与量で同程度の取り込みが期待できることがわかった。また、マウス下肢にCT26細胞を接種して腫瘍を作成し、尾静脈および局所にBN-CNHを投与してホウ素分布の検討を行っている。カーボンを含むため目視が可能であり、尾静脈投与では投与後1時間ではBN-CNHは肺や肝臓にはトラップされず、脾臓に多くとどまることがわかった。さらに精密な分析、投与時間による変化の検討を行う予定である。BN-CNHは直径が100-200 nmであるため、EPR効果による腫瘍蓄積も期待できると考えられる。また局所投与では、腫瘍全体に拡散しないため投与方法に検討が必要であると考えられる。PIXE/PIGEによるホウ素分布の測定は、マシンタイムに限りがあるためサンプルを作成した段階で測定には至っていない。東海J-パークにおける加速器中性子源を用いた照射実験は、故障のため実行できなかった。東海村に建設した加速器による中性子源を用いて照射実験を行う予定であったが、加速器が原因不明の故障中であるため使用できず、計画が遅れている。担癌マウスへBN-CNHを投与し、ホウ素分布の検討を引き続き行う。また、加速器照射源が使え次第、照射実験を行う予定である。またICPによるホウ素濃度測定条件の検討も引き続き行う。加速器中性子源による照射実験を行う予定だったが、故障のため実行できず、そのための予算が執行できなかった。今年度、故障が治り次第実行する予定である。
刺激誘導型因子群による多段階転写制御機構の解析

本研究ではIkB-ζによる転写制御について検討し、ヒトβ-defensin2及びneutrophil gelatinase-associated lipocalin遺伝子のいずれにおいても、そのプロモーターのNF-kB結合部位とC/EBP結合部位の双方が、IkB-ζを介した転写亢進に必須であることを見出した。一方、典型的なNF-kB結合配列をもつプロモーターの転写に対して、IkB-ζは抑制的に働いた。刺激に伴い誘導されたIkB-ζは、NF-kBと複合体を形成し、NF-kB及びC/EBP結合部位をもつプロモーターへ結合し、転写の充進に機能することが明らかになった。また、IkB-ζの発現はLPS等と同様にIL-1β刺激によって誘導されるが、炎症性サイトカインであるTNF-αでは誘導されない。研究代表者らは、IkB-ζの誘導機構について解析を進め、LPS/IL-1β刺激特異的にIkB-ζmRNAの安定化が起きることを示していた。本研究では、この転写後制御に必要なIkB-ζmRNA内のエレメントを検索し、3'非翻訳領域内の165ヌクレオチドの領域が必要かつ十分であることを証明した。さらに、B細胞でのIkB-ζの発現誘導について検討し、B細胞の抗原受容体を刺激に伴いIkB-ζが発現誘導され、その誘導は抑制性Fc受容体の共刺激によって阻害されることを見出した。従って、IkB-ζは、獲得免疫系でも機能している可能性が強く示唆された。本研究では、IκB-ζによる転写制御について検討し、ヒトβ-defensin 2及びneutrophil gelatinase lipocalin遺伝子のいずれにおいても、そのプロモーターのNF-κB結合部位とC/EBP結合部位の双方が、IκB-ζを介した転写亢進に必須であることを見出した。一方、典型的なNF-κB結合配列をもつプロモーターの転写に対して、IκB-ζは抑制的に働いた。刺激に伴い誘導されたIκB-ζは、NF-κBと複合体を形成し、NF-κB及びC/EBP結合部位をもつプロモーターへ結合し、転写の亢進に機能することが明らかになった。また、IκB-ζの発現は、LPS等と同様にIL-1β刺激によって誘導されるが、炎症性サイトカインであるTNF-αでは誘導されない。研究代表者らは、IκB-ζの誘導機構について解析を進め、IκB-ζ誘導における転写後制御の重要性を指摘した。さらに、LPS/IL-1β刺激特異的にIκB-ζmRNAの安定化が起きること、この転写後制御には3'非翻訳領域内の165ヌクレオチドの領域が必要かつ十分であることを証明した。さらに、B細胞でのIκB-ζの発現誘導について検討し、B細胞の抗原受容体を刺激に伴いIκB-ζが発現誘導され、その誘導は抑制性Fc受容体の共刺激によって阻害されることを見出した。従って、IκB-ζは、獲得免疫系でも機能している可能性が強く示唆された。
癌抑制遺伝子型miRNAの網羅的DNAメチル化スクリーニングと核酸医薬への応用

CpG islandの3'側500bp以内に座位する遺伝子を対象とし、一次スクリーニングである網羅的DNAメチル化解析を施行した。DNA過剰メチル化を正常口腔粘膜上皮由来不死化細胞株で認めず、18株のOSCC細胞株で高頻度に認めるmiRNAを候補として選出した。さらに、定量的発現解析を施行し、DNA過剰メチル化と発現抑制が完全に一致するmiRNAを絞り込んだ。癌抑制遺伝子活性については、合成二本鎖RNAを用いてin vitro細胞増殖抑制活性を検討している。本研究では口腔扁平上皮癌(OSCC)の発症・進展過程における分子機序の解明を目指して、癌特異的エピゲノム異常によるmicroRNA (miRNA)の発現異常に着目し、癌抑制遺伝子型miRNAの「合成二本鎖miRNA (ds-miRNA)」を用いた「miRNA補充療法(miRNA replacement therapy)」の確立に資するべく、独自のDNAメチル化スクリーニングによる癌抑制遺伝子型miRNAの同定とその詳細な分子機序の解明を試みる。さらに、新規診断法や予後予測法による個別診断法の開発、癌治療体系における新規RNA創薬、新規ドラッグデリバリーシステム(DDS)、さらには癌個別化医療の実現へ貢献することを目指すことを目的とする。本研究では、口腔扁平上皮癌(OSCC)の発症・進展過程における分子機序の解明を目指して、癌特異的エピゲノム異常によるmicroRNA (miRNA)の発現異常に着目し、癌抑制遺伝子型miRNAの「合成二本鎖miRNA (ds-miRNA)」を用いた「miRNA補充療法(miRNA replacement therapy)」の確立に資するべく、独自のDNAメチル化スクリーニングによる癌抑制遺伝子型miRNAの同定とその詳細な分子機序の解明を試みている。さらに、新規診断法や予後予測法による個別診断法の開発、癌治療体系における新規RNA創薬、新規ドラッグデリバリーシステム(DDS)、さらには癌個別化医療の実現へ貢献することを目的とする。27年度が最終年度であるため、記入しない。外科系歯学TaqMan MicroRNA Assays (ABI社)を用いた定量的発現解析を施行し、DNA過剰メチル化と発現抑制が完全に一致するmiRNAを数種に絞り込む。そして、癌抑制遺伝子活性については、合成二本鎖RNAを用いてin vitro細胞増殖抑制活性を検討する。同定した癌抑制遺伝子型miRNAに対する標的分子に関しては、公的に公開されている標的予測データベースにて標的分子の候補を選出する。そして、TS-miRNA遺伝子導入株と非導入株での発現アレイによる網羅的発現解析を組み合わせた絞り込みを行い、その後で特異抗体が市販されている候補のみをds-miRNA導入前後の細胞株におけるウエスタン法とルシフェレース・レポーター解析を試み、直接的な標的分子の同定を試みる。
d0電子金属酸化物多孔結晶触媒の開発

先行研究において、d0電子系複合酸化物中の特定の金属カチオンを最小のプロトン(H+)へと置換し、結晶内部にナノ空間を創出する方法を見いだした。本研究課題では、(1)空間構造とその構成元素の内殻電子がH2-D2変換に及ぼす影響を調査し、実験化学的に反応の起源を明らかにする、(2)バンドギャップの狭窄化により光触媒性能を向上させる、(3)結晶内外を「光」触媒反応場とする、大孔径のナノ空間を創出する、ことを目的とする。本研究を通し、内部空間構造の多様性と多機能性を兼ね備えた結晶性酸化物触媒を創製する。
魚体表面のマイクロインジェリーにおける感染と防御のメカニズム

1.アユを10^7CFU/mLのPseudomonasplecoglossicida菌液に15分間浸漬し、1,3,6,12,24,48,72時間後に、皮膚、鰓、肝臓、腎臓、膵臓、血液の菌量を定量PCRによって計測した。皮膚と鰓では13時間後から、肝・腎・脾臓では6時間後から、血液では48時間後から検出された。このことから皮膚(あるいは皮膚と鰓)が感染門戸であること、また、6時間後には肝・腎・脾臓に感染病巣が形成されたこと、48時間後には敗血症になったことが推察された。2.緑色蛍光蛋白遺伝子(gfp)を組込んで蛍光標識したP.plecoglossicidaの懸濁液に1.と同じ条件でアユを浸漬して体表面の菌の付着場所を観察した。平行して、gfpによる蛍光標識Escherichia coli、蛍光ラテックスビーズ(径1μ)の付着実験を行った。一部の実験魚に対して、菌あるいはビーズの懸濁液に浸漬後、さらにトリパンブルー液(0.05%)で魚を生体染色(10分間)した。蛍光P.plecoglossicidaの付着している場所は、蛍光E.coliおよび蛍光ビーズの付着場所とほぼ一致し、トリパンブルーに染色される部位に付着した。これらのことから、P.plecoglossicidaには健全な皮膚に付着できる機能は備わっておらず、E.coliやラテックスビーズと同じく皮膚のマイクロインジェリー(水産養殖用語の"すれ"と考えられる)に専ら付着することが判明した。3.微胞子虫Glugea plecoglossiの胞子を蛍光色素Uvitex2Bにより標識してからニジマスに投与し、魚体表面の付着部位を調べた結果、胞子は体表のマイクロインジェリーに付着した。G.plecoglossiの全ステージを検出するin situ hybridization法を確立し、これによって、皮膚創傷部から偶発的に取り込まれた胞子が皮下組織内で極管を弾出し、胞子原形質を侵入させることが確認された。1.魚体表面の「マイクロインジェリー」の組織学的観察:生きたニジマスの体表面においてトリパンブルー液に染色されるマイクロインジェリーに着目し、組織切片を光顕および電顕により観察した。表皮の最外層にはトルイジンブルーで淡く染色される膨化した上皮細胞が多くみられ、水中微粒子の付着が観察された。電顕観察により膨化した上皮細胞はデスモゾームで下層の上皮細胞と付着していたが、トノフィラメント以外の細胞小器官は観察されず、クチクラ分泌が欠損していた。その後、創傷部は遊走性の上皮細胞により修復され、水中微粒子は遊走性上皮細胞やマクロファージに貪食されたり、または細胞間隙に閉じ込められた。以上より、水中微粒子が魚体表面のマイクロインジェリーから取り込まれること、およびマイクロインジェリーの組織学的特徴が明らかとなった。2.魚類病原体の魚体表面への付着とその後の動態:アユのグルゲア症原因微胞子虫Glugea plecoglossiの胞子を、微胞子虫胞子壁のキチン質と特異的に結合する蛍光色素Uvitex2Bにより標識してから魚に投与することで、魚体表面における付着部位を調べた結果、胞子は体表のマイクロインジェリー部に付着していることが観察された。皮膚の組織学的観察により、創傷部から偶発的に取り込まれた胞子が上皮細胞と接触して極管を弾出していた。G.plecoglossiのSSUrRNA

塩基配列を元に設計したオリゴヌクレオチドプローブにより特異的に検出するin situ hybridization法を確立し、胞子原形質が上皮組織内に侵入していることを確認した。以上より、G.plecoglossiが魚体表面のマイクロインジェリー部を足場として侵入し感染する過程が明らかとなった。1.実験アユ群を10^7CFU/mLのP.plecoglossicida菌液に15分間浸漬し、1,3,6,12,24,48,72時間後に、皮膚、鰓、肝臓、腎臓、膵臓、血液の菌量を定量PCRによって計測した。皮膚と鰓では13時間後から、肝・腎・脾では6時間後から、血液では48時間後から検出された。このことから皮膚と鰓が感染門戸であること、また、検出後は各臓器により多くの菌が存続することからそこに感染病巣が形成されたこと、血液に多量の菌が出現したことから48時間後には敗血症になったことが推察された。2.P.plecoglossicidaに移入できるGFP遺伝子発現ベクターとしてpSKL01,pSKT03,pSKN04の3つのプラスミッドを開発した。いずれのベクターもP.plecoglossicidaの培地上での発育速度やアユに対する病原性は損なわなかったが、pSKT03がGFP産生能および非選択培地における安定性の点で最も優れていた。浸漬感染実験において、アユの体表に付着する菌体を蛍光顕微鏡下で観察した結果、P.plecoglossicidaは皮膚や鰭の微小な損傷部、すなわちマイクロインジェリーに専ら付着することが明らかとなった。3.粘液胞子虫Thelohanellushovorkaiの放線胞子をコイに浸漬感染させ、寄生体の挙動を調べた結果、浸漬15分後には鰓弁内に胞子原形質の侵入が観察されたが、体表ではマイクロインジェリーの有無に拘わらず全く検出されなかった。一方、微胞子虫Glugea plecoglossiの胞子は、ニジマス体表のマイクロインジェリー部に特異的に付着し、上皮下に取り込まれた胞子が極管を弾出して感染を成立させることがわかった。以上の結果、病原寄生虫の感染と魚体表面の損傷度との関係は寄生虫の種類によって異なることがわかった。