hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
格子QCDによる核子のフレーバー構造の研究

核子のフレーバー構造の解明に必要な遷移行列の格子QCD計算において、紫外発散による演算子混合があるため正しい評価が困難である。そこで格子上の演算子の繰り込みの新しい手法の開発が必要となっている。我々はフロー方程式の解が有限という性質に着目して新しい演算子の繰り込みを研究することを目標とした。我々は3次元O(N)スカラー理論において1/Nのnext-to-leadingオーダーでフローされた場が有限であることを示した。また誘導計量によって定義された時空が固定点近傍でAdS時空に近づくというAdS/CFT対応と密接な関係がある結果が得られた。平成26年度は核子のフレーバー構造を格子QCD理論を用いて計算するための技術的問題の解決方法の検討を理おこなった。核子の遷移行列の計算において特に重要なの1)複合演算子の紫外発散の制御と2)大きな統計誤差の抑制である。近年注目されているグラディエント・フローはこの2点において大いに有用であると期待されている。グラディエントフローは発散のある場の理論の裸の場から仮想的な時間を導入し、場を拡散方程式による時間発展させるものである。非可換ゲージ理論の場合には発展させた場で作られるの任意の物理量が有限であるという非自明な事実がLuscherとWeiszによって発見された。この性質をもちいて、格子ゲージ理論における演算子の繰り込みについての新しい手法の開発などさまざまな応用が進んでいる。共同研究者の菊地氏とともにグラディエントフローN=1の超対称ゲージ理論に対して超対称性と整合性のある拡張を求めた。特に、ゲージ理論において自然に導入されるフロー方程式の補生項をうまく選ぶ事で実際の計算で有用性の高いと思われるWess-Zuminoゲージの中で閉じた方程式が得られることも示した。次に共同研究者の青木氏、菊地氏とともに2次元のO(N)非線形シグマ模型においてラージN極限でグラディエントフロー方程式を厳密にとき、フロー時刻有限での場を用いた任意の物理量がラージN極限で有限であることを示した。これらのトイ模型をヒントに一般に複合演算子の紫外発散の制御や統計誤差の制御についての理解がより深まると期待される。格子ゲージ理論において演算子の繰り込みは重要な問題である。とくに核子の電気双極子能率の評価には次元4、次元5、次元6の演算子が寄与しうることが知られており、それぞれの寄与を区別することは新しい物理の検証に極めて本質的である。格子上では紫外発散のハードカットオフにともなう演算子混合が生じるため、上記の作業は極めて困難である。非可換ゲージ理論の場合には発展させた場で作られる任意の物理量が有限であるという非自明な事実がLuscherとWeiszによって発見された。この性質をもちいてゲージ理論の演算子の繰り込みについての新しい手法の開発などさまざまな応用が進んでいる。近年の研究でグラディエントフローで発展させた場を用いて発散を上手く制御し、例えばこれまで困難であった格子上でのエネルギー運動量テンソルという複合演算子の定義とそれを用いた数値計算に成功している。グラディエントフローの理論的研究を進めることは複合演算子の発散の制御に極めて有望で更なる理論的研究が望まれている。大野木は青木慎也、菊地健吾とともにグラディエントフローを2次元のO(N)非線形シグマ模型に適用しラージN極限での厳密解を構成した。これによりゲージ理論と同様にグラディエントフロー方程式で発展させた場で作られる2点関数については非摂動的に有限であることを示した。さらに大野木は青木、菊地とともに2+1次元空間の計量を発展させた場による誘導計量として定義される計量を厳密にもとめた。その結果、β関数の固定点にあたる紫外極限と赤外極限で漸近的にAdS時空が現れることを明らかにした。これはAdS/CFT対応との関係を示唆する興味深い結果である。2次元のO(N)非線形シグマ模型におけるグラディエントフローはラージN極限で解析的に解けるモデルである。そのため、さまざまなアイディアを試すことができる。今年度はこの模型におけるinduced metricを用いて2+1次元時空の計量を定義する提案を行った。その結果、場の理論の固定点に対応する紫外極限および赤外極限において時空がAdS空間になることを発見した。これは研究計画、当初予期しなかった興味深い進展である。核子の電気双極子能率の決定において次元4、5、6の演算子の寄与を区別することが新しい物理の探求に欠かせないが格子上での紫外発散による演算子混合のためこの作業は極めて困難である。グラディエントフローは場の理論において仮想時間を導入し、裸の場を拡散方程式により時間発展させる手法である。LuscherとWeiszはゲージ理論のグラディエントフローによって発展した場で構成される任意の演算子が有限であることを証明した。この性質からこれまで困難であった格子上のエネルギー運動量テンソルの構成がなされ数値的な応用も進められている。そこでグラディエント・フローを用いて演算子の繰り込みを研究することは核子の性質の研究を探る上で重要な課題である。申請者はその第一歩としてラージN極限で解析的に解くことができるO(N)スカラー場の理論について研究を行った。まず青木慎也、菊地健吾とともにグラディエントフローを2次元の非線形O(N)シグマ模型に拡張しフローされた場がラージN極限で有限であることを示した。

さらに青木、Balog、Weiszとともに3次元のO(N)スカラー場理論へも拡張しフローされた場が1)1/N展開のNext-to-Leadingオーダーまで有限であること2)フローされた場による4点結合を用いて繰り込まれた結合定数が定義でき、繰り込み群のUV固定点とIR固定点(Wilson-Fischer固定点)の両方の性質を正しく再現することも示した。3)さらにフローされた場を用いて3+1次元の誘導計量による時空定義すると紫外固定点、赤外固定点付近で時空は漸近的にAdS時空に近づくことも示した。これはAdS/CFT対応から得られる結果と極めて密接な関係がある示唆に富む発見である。核子のフレーバー構造の解明に必要な遷移行列の格子QCD計算において、紫外発散による演算子混合があるため正しい評価が困難である。そこで格子上の演算子の繰り込みの新しい手法の開発が必要となっている。我々はフロー方程式の解が有限という性質に着目して新しい演算子の繰り込みを研究することを目標とした。我々は3次元O(N)スカラー理論において1/Nのnext-to-leadingオーダーでフローされた場が有限であることを示した。また誘導計量によって定義された時空が固定点近傍でAdS時空に近づくというAdS/CFT対応と密接な関係がある結果が得られた。本研究は核子に対する格子上の複合演算子の遷移行列の評価を目的とするが、その中でも一番問題となる発散の制御についての検討を行うことが重要である。本年度の研究においてグラディエントフロー方程式における発散の制御の理解が深まった。また2次元のO(N)非線形シグマ模型に対してもグラディエントフローが有効であることが分かったので、さまざまなアイディアが簡単なトイモデルで検証できると期待している。グラディエントフローを用いた場の理論の研究において、予想外の成果が得られたので、今後はさらにそれを押し進め、1/N展開の高次補正やより一般的な場の理論への拡張を試みる。これにより発散の制御のメカニズムやAdS/CFT対応のあらたな知見をえることを目指す。それと同時に当初の目的である核子の電気双極子能率の演算子の繰り込みへの応用も行う。素粒子論今後は核子のフレーバー構造において最も興味深い核子の電気双極子能率についての研究をすすめる。本年度の研究をふまえ、まず演算子の分類と発散の構造の整理を行う。特に問題となるベキ的発散にともなう演算子混合を相殺する新しいスキームの開発を行う。次にこれを用いて格子QCD計算で繰り込まれた演算子を決定する。これが達成されたのちに大規模計算によって核子の遷移行列の評価を行う。同時に有限サイズ効果を評価するため有効理論における有限体積補正の計算もすすめる。これらを組み合わせて最終結果を得る事を目標とする。招聘する予定だった、海外の共同研究者が別の予算で大阪大学に来訪したため。本年度予定していた海外研究者の招聘が延長されたため、次年度は国債会議を含む海外出張を予定している。今年度に海外研究者を招聘する予定である。
GVHDにおける炎症の慢性化と多臓器線維化の制御及び新規治療法開発の基盤研究

慢性閉塞性肺疾患は、慢性GVHDに特徴的なはい病変である。本研究において、慢性GVHDを発症するヒト免疫化マウスモデルを利用して、慢性GVHDマウスにおいて有意にコラーゲン含有量が増加していること、浸潤したヒトリンパ球はCD26発現量が著明に増加すると共に、CD4T細胞が優位であること、IL-26が高発現していることを発見し、IL-26は特異抗体およびナチュラルリガンドのcav-1によるCD26共刺激で高発現し、CD28共刺激では分泌されないことを示した。さらに、Cav-Ig投与により慢性GVHDの予防および治療が、GVL効果を阻害することな可能であるこをとin vivoモデルで示した。[1]ヒト免疫化慢性GVHDマウス及びヒトIL26TgマウスにおけるIL-26とCD26共刺激の役割を解明した。すなわち、申請者が樹立した慢性GVHDを発症するヒト免疫化マウスモデルを利用して、さらに詳しい慢性炎症の分子病態を行った。このモデルは、皮膚や肝、肺など多臓器にヒトT細胞が浸潤し、臓器の線維化を示した。浸潤したCD4T細胞を純化して炎症性サイトカインのプロファイルをマイクロアレイで解析したところ、共刺激分子CD26とともに、IL-10ファミリーに属するIL-26が高発現していることを発見し、in vitro実験では、IL-26は特異抗体及びナチュラルリガンドのcav-1によるCD26共刺激で高発現し、CD28共刺激では分泌されないことを示した。CD4T細胞を活性化するCD26共刺激シグナルの分子メカニズムと新規炎症性サイトカインIL-26の細胞生物学的な意義をin vivoで解明し、CD26+CD4T細胞の浸潤によって引き起こされる慢性炎症・臓器線維化とその臓器障害の病因病態を明らかにした。これにより、炎症の慢性化に関わる分子メカニズムが解明でき、治療標的分子を明らかにできた。[2] CD26共刺激リガンドのcav-1を標的とした慢性GVHDに対する新規分子標的療法の開発を行うため、慢性GVHDマウスを用いてCav-Ig或いはCD26抗体の投与量と投与時期、投与期間を変えて、最適の予防及び治療投与方法を明らかにした。これにより、慢性GVHDの予防的投与のプロトコールの確立とともに、発症後の投与でも慢性炎症の抑制が充分可能かどうか明らかにした。計画書年度は、当初の予定通り、モデルマウスを用いた実験成果が得られた。請者が樹立したヒト慢性炎症のモデルとなるヒト免疫化マウスを用いて、慢性移植片対宿主病(GVHD)の病因、及び、慢性GVHDによる慢性閉塞性肺疾患様の肺障害、及び、皮膚硬化等を引き起こす慢性炎症及び組織線維化の分子メカニズムを解明した。[1]慢性炎症におけるIL-26の役割を解明するため、ヒトIL-26遺伝子を導入したTgマウスを用いた。放射線照射とシクロフォスファミド投与したHLAハプロタイプの異なるレシピエントマウスにIL26Tgマウスの脾臓細胞と骨髄細胞を移植するadoptive transferの系により、皮膚、腎臓、肺の炎症、線維化を病理学的に解析した結果、CD26+IL-26+CD4T細胞の機能と慢性GVHD病態との関係、及び、慢性GVHD病態のCD4T細胞におけるCD26共刺激独自のシグナル伝達経路を明らかにした。[2]慢性GVHDの予防と治療においてはCD26抗体よりもリガンドを用いてCD26・cav-1相互作用をブロックするほうが何故効果的なのか分子細胞生物学的に解明するため、慢性GVHDマウスを用いてCav-Ig或いはCD26抗体の投与量と投与時期、投与期間を変えて、最適の予防及び治療投与方法を明らかにした。慢性GVHDに対する効果判定は、Cookeの臨床スコアー(Cooke KR et al., Blood 1996)の改善、及び、生存期間延長を指標とした。[3]慢性GVHD患者の検体(皮膚、肺組織)を用いてCD26やそのリガンドcav-1、及びIL-26の発現を解析した。さらに、慢性GVHDの治療や症状の経過との関連についても、臨床情報を分析した。その結果、GVHDの障害臓器や部位、治療経過などによるCD26陽性リンパ球プロフィールの差異を分子細胞レベルで明らかにできた。計画に準じた成果が得られている。当研究室で樹立したヒト免疫化慢性炎症マウスを用いて、慢性GVHD等の慢性炎症性疾患の病態解明と分子標的療法の確立を目指し以下の研究を実施した。[1]放射線照射とシクロフォスファミド投与したHLAハプロタイプの異なるレシピエントマウスにIL26Tgマウスの脾臓細胞と骨髄細胞を移植するadoptive transferの系により、皮膚、腎臓、肺の炎症、線維化を病理学的に解析する。これにより、CD26+IL-26+CD4T細胞の機能と慢性GVHD病態との関係、及び、慢性GVHD病態のCD4T細胞におけるCD26共刺激独自のシグナル伝達経路を明らかにした。[2]上記[1]で同定した慢性GVHDの病因病態にかかわるIL-26増強シグナル分子や遺伝子について検討するため、Cav-Ig或いはCD26抗体を投与した慢性GVHDマウスの各種標的臓器からヒトCD4T細胞を精製し、コントロールIg投与群と比較しながら、タンパク質レベルで解明した。[3]慢性GVHD患者の検体を用いてCD26やそのリガンドcav-1、及びIL-26の発現をフローサイトメトリーとELISAで解析すした。

これにより、慢性GVHDの病因や新たな疾患活動性の臨床指標となるバイオマーカーを同定した。これらの結果により、新規炎症性サイトカインIL-26の慢性GVHDの病態における役割解明、及び、CD26とそのリガンドcav-1をターゲットとした新規分子標的療法による慢性炎症と線維化の制御メカニズムを、疾患モデルを用いて明らかにした。これにより、従来の免疫抑制療法では日和見感染や成長障害等の副作用で充分な治療が受けられなかった小児慢性GVHD患者のみならず、造血幹細胞移植を受けた成人の慢性GVHD患者、さらには、心血管疾患や腎障害等の副作用で充分な免疫制御治療が難しかった高齢者にとっても、安全で有効性の高い新規分子標的療法を開発につながる。慢性閉塞性肺疾患は、慢性GVHDに特徴的なはい病変である。本研究において、慢性GVHDを発症するヒト免疫化マウスモデルを利用して、慢性GVHDマウスにおいて有意にコラーゲン含有量が増加していること、浸潤したヒトリンパ球はCD26発現量が著明に増加すると共に、CD4T細胞が優位であること、IL-26が高発現していることを発見し、IL-26は特異抗体およびナチュラルリガンドのcav-1によるCD26共刺激で高発現し、CD28共刺激では分泌されないことを示した。さらに、Cav-Ig投与により慢性GVHDの予防および治療が、GVL効果を阻害することな可能であるこをとin vivoモデルで示した。[1]放射線照射とシクロフォスファミド投与したHLAハプロタイプの異なるレシピエントマウスにIL26Tgマウスの脾臓細胞と骨髄細胞を移植するadoptive transferの系により、皮膚、腎臓、肺の炎症、線維化を病理学的に解析する。これにより、CD26+IL-26+CD4T細胞の機能と慢性GVHD病態との関係、及び、慢性GVHD病態のCD4T細胞におけるCD26共刺激独自のシグナル伝達経路を明らかにする。また、ヒト免疫化慢性GVHD及びヒトIL26TGマウスの脾臓細胞を分離し、CD26及びIL-26による濾胞ヘルパーT細胞(Tfh)と自己反応性B細胞の活性化を実証する。これにより、CD26のシグナルによる慢性GVHD病態でのTfhと自己反応性B細胞活性化の分子メカニズムを明らかにすることができ、その結果、炎症の慢性化を制御するCD26関連治療標的分子を明らかにする。[2] cav-1ノックアウト(KO)マウス、CD26-KOマウス及びヒトCD26Tgマウスを利用したadoptive transferの系で、[1]と同様に慢性GVHDを惹起し、病理組織解析、炎症浸潤リンパ球のサブセットやサイトカイン発現解析を行う。これにより、慢性GVHDにおけるCD26、IL-26、cav-1の重要性を実証する。平成27年度に確定した至適投与量のプロトコールを適用して、慢性GVHDマウスの肺や皮膚の炎症・線維化が充分に予防及び治療できているか病理組織学的に解析する。同時に、マウス血清中のヒトIL-26の経時変化をELISAで測定して、慢性GVHDの重症度とILー26の相関を証明する。
ポドサイトの分化と機能維持を制御する新規エピジェネティック分子NSD3の役割

ネフリンの遺伝子発現の制御機構の詳細は不明である。本研究は、エピジェネティック的遺伝子制御作用が知られているNSD3-Lのネフリン発現に関わる機序の存在を証明した。NSD3-L遺伝子とその産物は、糸球体ポドサイトに発現していた。NSD3-Lは、ヒストンH3K4に結合した。また、NSD3-Lはネフリンのプロモーターと結合し、その遺伝子発現を抑制した。NSD3-Lの遺伝子破壊は、ネフリンの発現を増加させた。NSD3-Lの存在は、H3K4me3のネフリンへの結合を低下させた。以上のことから、NSD3-Lは、ネフリン遺伝子の発現のエピジェネティック的抑制因子であることが明らかになった。1. NSD3により転写促進される新規遺伝子プロモーター群の網羅的探索磁気ビーズをC57BLマウス3匹に環流させ、マグネットで糸球体を単離後、10cm dishでprimary cultureを開始した。培養5日後から半分以上の糸球体がmonolayer細胞になり、これらは糸球体上皮のマーカーであるネフリンとWT1のmRNAを維持していた。したがって、本検体を用いてクロマチン沈降を試みることも可能と考えたが、2回の検討においても、培養3日以降から細菌汚染が軽度存在し、その後の次世代シーケンスの結果に影響をきたすことも危惧されたため、一時的に本法を中止した。2. NSD3ノックアウトマウスの作成と解析C57BLマウスをバックグラウンドとしたノックアウトマウスを誕生させた。腎を材料にtotal RNAを採取し、cDNAに変換後、サンガー法による塩基配列決定を行った。目的としたNSD3のエキソン5は確かに欠失し、エキソン4以降のストップコドンが確認されたことから、DNA上での遺伝子破壊は成功したと考えた。しかし、本ノックアウトマウスは、正常に誕生し、生後5週現在、外表、成長に著変なく、タンパク尿も惹起されていない。腎切片を作成し、形態観察を行ったが、糸球体の発生に異常は見られていない。また、NSD3は脳にも強く発現することから、脳の形態観察を行った。しかし、神経細胞の数を含め、野生型との変化は観察されていない。平成26年度はゼブラフィッシュを用いたNSD3の機能発現について検討した。1)方法: NSD3のATG部位、エクソン1-3'側、エクソン3-5'側の翻訳を特異的に阻害するmorpholino antisense oligonucleotide(MO)を作成し各ノックダウンゼブラフィッシュを樹立した。受精4日後の変異体の出現率について、コントロールMOと比較した。エクソン1と3の変異については、NSD3の正常mRNAの共注入も行った。NSD3の蛋白発現とネフリンmRNAをwholebodyを材料にWestern blotとRT-PCRで検討した。変異体の糸球体の形態変化を、PAS染色と電顕により観察した。FITC-dextranを用いた糸球体濾過アッセイにより糸球体濾過障壁の異常の有無を観察した。2)結果:各変異体のcDNAの塩基配列の解析とWestern blotにより、MOによる各エクソンの変異の誘導とNSD3蛋白の合成阻害を確認した。浮腫などの変形率は、コントロール5.3%、ATG部位が89.9%、エクソン1が59.2%、エクソン3が65.5%であり、正常mRNAの共注入によりエクソン1と3の変形率は21.9%と23.6%に各々軽減した。各変異体の糸球体はいずれも矮小化が著明であり、電顕では著明な足突起形成とスリット膜の形成障害が観察された。また、各変異体のネフリンmRNAの有意な減少がみられ、FITC-dextranの尿細管への漏れが観察されたことから、糸球体濾過障壁の破綻が明らかになった。1. NSD3ノックアウトマウスの表現系観察:Genomic DNAを用いた検索から、確かにNSD3遺伝子の欠失は確認された。しかし、出生時以降、外表や脳、腎、肝、肺、心などの腹腔内および胸腔内臓器に異常はなかった。また、腎については、PAS染色による光顕所見でも、糸球体、血管、尿細管に形態異常は観察されなかった。2. NSD3ノックアウトマウスの糸球体負荷実験:牛血清アルブミン腹腔内注射とアドリアマイシン静注の系は、いずれも、糸球体タンパク尿を惹起することが知られている。NSD3ノックアウトマウスと野生型マウスに、両方法による糸球体負荷を行った。その結果、いずれの負荷においても、NSD3ノックアウトマウスでは、野生型に対する有意な糸球体タンパク尿の増加は観察されなかった。3. NSD3の標的プロモーター探索:前年度、マウス糸球体からのprimary culture podocyteの培養系での感染の問題があったが、本年度は順調に遂行できた。このprimary culture podocyteを用いて、改めて、クロマチン免疫沈降を行い、NSD3の標的プロモーターを探索した。その結果、HEK-293細胞を用いたNSD3強制発現系と同様に、ネフリンプロモーターに特異的にNSD3は結合した。CD2APやpodocin、WT-1のプロモーターとの結合性は同定されなかった。

NSD3-L遺伝子とその産物は、糸球体ポドサイトに発現していた。NSD3-Lは、ヒストンH3K4に結合した。また、NSD3-Lはネフリンのプロモーターと結合し、その遺伝子発現を抑制した。NSD3-Lの遺伝子破壊は、ネフリンの発現を増加させた。NSD3-Lの存在は、H3K4me3のネフリンへの結合を低下させた。以上のことから、NSD3-Lは、ネフリン遺伝子の発現のエピジェネティック的抑制因子であることが明らかになった。C57BLマウスをバックグラウンドとしたノックアウトマウスを誕生させた。目的としたNSD3のエキソン5は確かに欠失し、エキソン4以降のストップコドンが確認されたことから、DNA上での遺伝子破壊は成功したと考えた。しかし、本ノックアウトマウスは、正常に誕生し、生後5週現在、外表、成長に著変なく、タンパク尿も惹起されていない。しかし、ゼブラフィッシュを用いた結果との整合性の説明が、科学的には強く要求されると考える。これを解決せずには、本研究の達成度は高くないと考える。腎臓病学NSD3ノックアウトマウスに蛋白尿を惹起させる負荷をかけることで、NSD3の糸球体上皮における存在の意義を確かなものにする。具体的には、牛血清アルブミンを腹腔内注射、アドリアマイシン静注という、従来から採用されている蛋白尿惹起物質を、ノックアウトおよび野生型に負荷し、蛋白尿の有無、腎形態の比較を行う。さらに、野生型に上記の蛋白尿惹起物質を負荷し、正常のNSD3の発現を比較することで、環境の変化による糸球体ポドサイト内のNSD3の振る舞いを検討する。1. NSD3により転写促進される新規遺伝子プロモーター群の網羅的探索これについては、細菌汚染のクリアーが必須であるが、全ての無菌操作は実質的に困難であることが判明した。2.NSD3ノックアウトマウスの作成と解析これについては、方法論的には順調に遂行できたと考える。しかし、予想と異なり、表現系の明かな異常は観察されていない。ゼブラフィッシュに関する実験についての材料費が、予想より安価であったため。さらに、ゼブラフィッシュ特異的NSD3についての抗体が、すでに作成していた抗マウスNSD3抗体で代用できたため、新たに取得する必要がなかったため。1. NSD3により転写促進される新規遺伝子プロモーター群の網羅的探索これについては、すでに保持している不死化糸球体上皮細胞株を材料に、速やかにクロマチン沈降を開始し、産物のDNA解析を行う。2.NSD3ノックアウトマウスについては、標的としたエキソンの下流にATG配列が存在し、そのタンパク産物が代償している可能性もある。タンパクレベルでのノックアウト証明を行うために、エキソン5以降を認識する新たな抗NSD3特異抗体を作成し、検討を行う。3.申請書の記載通りに、平成26年度はzebrafishを用いたノックダウンモデルの樹立を行う。本年度は、最終年度であり、後天的NSD3異常のモデルを、多くのマウスを用いて検討することから、マウス購入および飼育に助成金を使用する。
新規HDL自己形成型蛍光ペプチドの開発と早期動脈硬化バイオマーカーの確立

私たちの研究室で開発に成功している、大動脈プラークを描出・イメージング出来るペプチド;FAMPのターゲット分子、作用メカニズムの詳細を明らかにするため、通常FAMPと比較しても機能性の変わらないFITC-FAMPの合成に成功した。FAMPが炎症部位やプラーク局所に集積することからFAMPが単球に吸着し動脈硬化巣まで輸送されると考えていたが、FACSシステムにおいてFITC-FAMPは好中球とポジティブを示した。これにより血中で好中球に吸着したFAMPは全身に輸送され、炎症部位や動脈硬化巣に集積することが示唆される。現在、心臓・血管疾患の一次予防および二次予防における治療の原則は、スタチンによる低比重リポ蛋白コレステロール(LDL-C)の低下療法である。これまでの多くの大規模臨床試験の結果から、LDL-C低下療法は3040%程度の血管イベント発症を抑制できるが、更なる予防としての次世代の脂質治療の1つである高比重リポ蛋白(HDL)をターゲットとする治療が注目されている。1999年ABCA1脂質膜輸送体が家族性HDL欠損症の原因遺伝子として同定され、これがHDLを新生し、また細胞内余剰コレステロールを排出していることが判明した。私たちはこれまでHDLの機能を増強させる合成HDLの開発を進め、ABCA1輸送体依存的に作用し、生体内にてHDLを自己形成する実用化に適した新規アポ蛋白A-I類似ペプチドの開発に成功した(FAMP=Fukuoka University ApoA-I Mimetic Peptide)。このペプチドは、ABCA1依存性コレステロール引抜き能を増加し、小粒子HDLの新生を増加させることによりHDLの機能活性を亢進しマウスにおける大動脈プラークを抑制することが明らかとなっている。この放射線標識された68Ga-DOTA-FAMPは、動脈硬化ウサギにおける大動脈プラークを描出・イメージング出来ることから、本ペプチドはプラーク局所に留まり抗動脈硬化作用を発揮している事が確認できている。そこで、本ペプチドの多種蛍光標識トレーサーを作製、開発することによって主に次の2点、1,そのターゲット分子、作用メカニズムの詳細を明らかとする。2,本ペプチドはHDL様分子特性をもつことから、プラークを形成する早期段階の動脈硬化においても相互作用することが推察される。そのため、この新規ペプチドを用いたヒト早期動脈硬化の血中バイオマーカーとしての有用性について明らにすることが本研究の主目的である。放射線標識した68Ga-DOTA-FAMPは、動脈硬化ウサギにおける大動脈プラークを描出・イメージング出来るということから、本ペプチドはプラーク局所に留まり抗動脈硬化作用を発揮している事が確認できている。そこで、本ペプチドの多種蛍光標識トレーサーを作製、開発することによって、そのターゲット分子、作用メカニズムの詳細を明らかにすることが、本研究の目的である。まず蛍光分子としてFITCを選択し、脱離を防ぐために通常FAMPのN末端にβ-Alaを追加した。結果、通常FAMPと比較しても機能性の変わらないFITC-FAMPの合成に成功した。私たちはFAMPが炎症部位やプラーク局所に集積することからFAMPが単球に吸着し動脈硬化巣まで輸送されると考えていた。しかしながら、FACSシステムにおいてFITC-FAMPは好中球とポジティブを示した。FITC-FAMPは今後の様々な実験に応用できることが期待される。当施設に設置済みの全自動ペプチド固相合成装置を用いて既開発のiCEペプチド(FAMP)の合成を行った。脱保護の際、FITCの脱離を防ぐためN-末端にβ-Alaを追加したあとFITCを結合させたFITC-FAMPを大量合成し、Sephadex Gel25を用いて精製を行った。質量分析装置MALDI-TOF-MASSを用いて測定し、目的物を同定した。作製したFITC-FAMPを蛍光リガンドとして、A172細胞、RAW264細胞、COS-7細胞、CHO(ldlA7)細胞へインキュベーションしその局在を共焦点レーザー走査顕微鏡を用いて検討した。また、血液中でのFAMPの局在分画を明らかにするため、native-PAGEを用いて検討した。さらにin vivoについても検討した。C57BL6マウスを用いて、FITC-FAMPを静脈投与24時間後にsacrificeを行った。

採血後、心臓、腎臓、大動脈、脾臓を摘出し、パラフィン包埋を行った。それぞれの切片を用いて蛍光同定、免疫組織二重染色にて各組織の標的細胞を同定した。バイオマーカー探索とペプチド合成FITC-FAMPを蛍光トレーサーとして免疫組織学的検討にて標的細胞を明らかとする。また、FITC-FAMPと各ABCA1, ABCG1, ABCG4, SR-BIの遺伝子導入細胞を用いて、それぞれの受容体・輸送体との相互作用を検討し、FITC-FAMPの標的分子まで明らかとする。FACSシステムにおいても、FITC-FAMPを用いて末梢血白血球の中で単球の他、どの細胞において相互作用をしているかを明らかとし、更に単球のなかでもどのような細胞表面マーカーを持つ細胞と作用するかを検討する。この事より動脈硬化のどのステージでFAMPが特異的にイメージングしているかが明らかとなる。
メチル化DNAを指標とした体液特異的ジェノタイピング法の開発

昨年度同定した、一塩基多型部位(SNP)と精液特異的メチル化(または脱メチル化)CpG部位が近接する5領域のうち3領域を用いて、混合体液試料からの精液特異的SNPタイピング法の確立を試みた。始めに、メチル化特異的PCRにより、それぞれの領域について、SNP部位を含め精液特異的に増幅する条件を確立した。さらに、これらのPCR産物中のSNP部位について、パイロシーケンスにより型判定する条件を確立した。この方法を用いて、精液DNA及び血液DNAの混合液、並びに精液・唾液混合斑痕から抽出したDNAから検査を行ったところ、いずれも精液由来のSNPの検出が可能であることを確認した(Forensic ScienceInternational:Genetics,37:227-234,2018)。また、昨年度に行ったHuman Methylation EPICBeadChipの解析結果を元に、血液特異的SNPタイピングの候補領域としてスクリーニングした、5つのCpGサイトついて、各種体液試料を用いて血液特異性の検証を行った。5つのCpGサイト及びそれぞれの周辺の複数のCpG部位のメチル化率について、次世代シーケンサー(Miseq)によるバイサルファイトシーケンスを行ったところ、近接した全てのCpGで血液特異的なメチル化が見られるわけではないものの、いずれの領域においても、血液特異的メチル化傾向を示すCpGサイトが観察された。上記の血液特異的メチル化領域の検証の過程で、当初予定していたパイロシーケンスでの検証が難航し、次世代シーケンスでのメチル化定量系に移行する際に、かなりの時間を要してしまった。そのため、唾液及び膣液マーカーの候補領域についても検証予定であったものの、本年度は実施することができなかった。5つの血液特異的SNPタイピングの候補領域を用いて、混合体液試料からの血液特異的SNPタイピング法が可能か検証する。各領域におけるCpGの不均一なメチル化様態から、精液の場合と異なりメチル化特異的PCRの適用が困難と予想されることから、今回特異性の検証に用いた次世代シーケンサーによる検出系で、混合試料における解析を試みる予定である。また、唾液及び膣液特異的SNPタイピングについても同様に、Human Methylation EPIC BeadChipの結果を元に、候補領域の選定、特異性の検証等を行う。メチル化を指標とした混合体液試料からの体液種特異的ジェノタイピング法を確立するため、体液特異的なメチル化パターンを示し、かつ近傍に遺伝的多型部位が存在する領域の探索を行った。これまでの研究から、体液種の中で精液DNAでは、極めて特異的にメチル化及び脱メチル化されている領域が多く報告されていたことから、始めに、精液特異的なメチル化状態を示し、かつ一塩基多型部位が近接した領域の探索を行った。既報のHumanMethylation450KBeadChipによる各種体液DNAの網羅的メチル化解析データ(Lee et al, Forensic Sci Int Genet 2015)を比較解析することにより、候補となるCpG部位を5つ同定した。これらのCpG部位の近傍について、血液、精液、唾液、膣液試料を用いて、パイロシークエンスによるメチル化定量解析を行ったところ、いずれの領域とも極めて高い精液特異性を示した。上記の解析と平行して、精液以外の体液におけるマーカー領域を同定するため、血液、精液、唾液、膣液試料を用いて、HumanMethylation450Kより多くのCpGサイトが網羅されたHuman Methylation EPICBeadChipによる解析を新たに行った。それぞれの体液種間で各CpGサイトのメチル化率を比較解析した結果、各体液種に特異的なメチル化及び脱メチル化を示すCpG部位が複数同定された。計画通り、各体液特異的メチル化パターンを示す領域の探索のため、網羅的メチル化解析を行った。

そのため、唾液及び膣液マーカーの候補領域についても検証予定であったものの、本年度は実施することができなかった。5つの血液特異的SNPタイピングの候補領域を用いて、混合体液試料からの血液特異的SNPタイピング法が可能か検証する。各領域におけるCpGの不均一なメチル化様態から、精液の場合と異なりメチル化特異的PCRの適用が困難と予想されることから、今回特異性の検証に用いた次世代シーケンサーによる検出系で、混合試料における解析を試みる予定である。また、唾液及び膣液特異的SNPタイピングについても同様に、Human Methylation EPIC BeadChipの結果を元に、候補領域の選定、特異性の検証等を行う。網羅的解析の手法を当初計画より変更し、予定額よりも少ない額で執行できたため、若干の残額が生じた。残額分により、次年度以降の特異性検証において使用する検体数を当初計画より増加させる予定である。予定していた唾液及び膣液マーカー候補の解析を行わなかったため。次年度において、これらの解析費用として使用予定である。
心血管系の発生・形態形成に働くシグナル伝達機構の研究

心血管発生・形態形成は多様な細胞間・細胞内情報伝達系・遺伝子発現調節機構によって制御され、ヒト先天性心疾患の病因として転写調節因子やシグナル伝達因子の変異・機能異常が重要である。本研究では心血管発生・形態形成に重要な情報伝達系において重要な遺伝子群の欠損によるマウスモデルにおける異常を詳細に解析するとともに、それら遺伝子の発現制御機構の解明につながる知見を得た。本研究の成果は心血管発生・形態形成の分子メカニズム解明に役立つことが期待される。心血管発生は多様な情報伝達系・遺伝子発現調節機構によって制御されており、多くの転写因子やシグナル伝達因子の変異や機能異常がヒト心血管奇形の原因となる。これまでに私達は、Notch情報伝達系の下流ターゲット因子であるHrt/Hey転写因子ファミリーを同定し、Hrt/Heyが心血管系の分化・形態形成に必須の役割を有することを報告してきた。今回の研究では、特にHrt1/Hey1転写調節遺伝子に注目し、conditionalノックアウトマウス、CRISPR/Cas9遺伝子編集を用いて作成するエピトープタグ標識型Hrt1/Hey1発現マウスと新しい分子生物学的手法を組み合わせ、心血管発生におけるHrt1/Hey1機能の細胞特異性、下流遺伝子群を介した心血管細胞機能制御メカニズムを明らかにすることを目的としている。平成27年度において、Hrt1/Hey1ノックアウトマウスにおいて大動脈弓離断症などの大血管形成異常が生ずることを報告する論文発表を行った。Hrt1/Hey1ノックアウトマウスに認められる大血管形成異常は胎生期の第4咽頭弓動脈の欠失によって生じことが示された。一方私達は近年新しい胎生期血管内皮遺伝子であるTmem100の心血管発生における意義の研究を行っているが、今回の研究ではTmem100の分子機能、特に細胞内カルシウムイオン制御分子の関連や、Tmem100の心臓形態形成における必要性を検討する計画である。平成27年度において、胎生期血管内皮細胞に発現するTRPカルシウムチャネルの同定を試み、多数存在するチャネルファミリーのうち限られたチャネル遺伝子が胎生期血管内皮に発現することを明らかにした。今後も研究を進めることによって、Hrt1/Hey1やTmem100の心血管系の発生・形態形成を制御する情報伝達ネットワークにおける意義を明らかにすることが期待される。平成27年度において、Hrt1/Hey1の新しいノックアウト表現型の報告、Hrt1/Hey1 conditionalノックアウトマウス作成、Tmem100との機能連関が示唆されるTRPチャネルの発現様式解析を行っており、概ね計画通り研究が進行していると考える。心血管発生・形態形成は多様な情報伝達系・遺伝子発現調節機構によって制御されており、ヒト先天性心疾患の病因として転写調節因子やシグナル伝達因子の変異や機能異常が重要である。これまでに私達は、Notch情報伝達系およびALK1情報伝達系の下流ターゲット因子であるHrt/Hey転写調節因子ファミリーを同定し、Hrt/Heyが心血管系の分化・形態形成に必須の役割を有することを報告してきた。これらの情報伝達系は複数のヒト心血管疾患の病因・病態に深く関与しており、Hrt/Heyファミリーの病態生理的意義についても注目されている。今回の研究では、3種類のファミリー遺伝子のうち、特にHrt1/Hey1に注目し、conditionalノックアウトマウスなどの新しいモデルマウスと新しい分子生物学的手法を組み合わせ、心血管発生におけるHrt1/Hey1機能の細胞特異性、下流遺伝子群を介した心血管細胞機能制御メカニズムを明らかにすることを目的としている。平成28年度までにHrt1/Hey1ノックアウトマウスにおいて大動脈弓離断症などの大血管形成異常が生ずることを報告する論文発表を行い、Hrt1/Hey1欠損による異常を引き起こす組織・細胞特異的分子機構を明らかにするためにconditionalノックアウトマウス作出などを行っている。一方、私達は近年ALK1情報伝達系下流の新しい胎生期血管内皮遺伝子Tmem100に関する研究を行っているが、今回の研究ではTmem100の心臓形態形成における必要性を検討する計画である。平成28年度までに心内膜内皮細胞特異的なTmem100欠損モデルマウスを作成し、心臓形態異常が生ずるか解析を進めている。今後もこれらの研究を進めることによって、Hrt1/Hey1やTmem100の心血管系の発生・形態形成における意義を明らかにすることが期待される。平成28年度において、Hrt1/Hey1遺伝子のconditionalノックアウトマウス解析のために新しいfloxed遺伝子座を有するマウス系統の作成に成功した。その後様々なCre酵素発現マウス系統との交配を行っており、平成29年度中には組織特異的Hrt1/Hey1欠損マウスの表現型解析を行うことができると考えている。また、CRISPR/Cas9遺伝子編集法などを用いて、マウス胎仔心血管系において発現するHrt/Heyファミリー分子のタグ検出系の作成を試みている。一方、Tmem100遺伝子に関して、心内膜内皮細胞特異的欠損マウスを作成し、胎生期の心臓形態異常が生ずるか解析を進めている。これらの実験はいずれも長期間にわたるものであるが、概ね計画通り研究が進行していると考える。心血管発生・形態形成は多様なシグナル伝達系・遺伝子発現調節機構によって制御され、ヒト先天性心疾患の病因として転写調節因子やシグナル伝達因子の変異・機能異常が重要である。これまでに私達は、NotchおよびALK1シグナル伝達系の下流転写因子としてHeyファミリーを同定し、Heyファミリーが心血管系の発生・形態形成に必須の役割を有することを報告してきた。

今回の研究では、Hey1ノックアウトマウス・組織特異的conditionalノックアウトマウスと新しい分子生物学的手法を組み合わせ、Hey1機能の細胞特異性を明らかにすることを目的とした。Hey1ノックアウトマウスにおいて大動脈弓離断症などの大血管形成異常が生ずることを報告する論文発表を行い、引き続きHey1欠損による異常を引き起こす組織・細胞特異的分子機構を明らかにするためにconditionalノックアウトマウス作出などを行った。その結果、Hey1欠損により、これまでの大動脈弓離断症の原因として広く知られているTbx1-FGFシグナル系と異なる細胞特異性を示す異常が生じていることが示された。大動脈弓離断症はヒトにおいても認められる先天構造異常であり、Hey2欠損によって生ずる心室中隔欠損症・三尖弁閉鎖などと合わせて、Heyファミリーの病態生理的意義が注目された。一方、ALK1シグナル伝達系の新しい下流遺伝子として同定したTmem100について、ノックアウトマウスには明らかな心内皮・間葉細胞転換異常が認められたが、その心内膜内皮細胞特異的欠損マウスには検出可能な心臓構造異常を認めなかった。今後、Tmem100の発現制御機構の解析、複合体構成因子を介した分子機能の解析を通じ、Tmem100が心血管発生・形態形成に働く機序を明らかにして行きたいと考えている。心血管発生・形態形成は多様な細胞間・細胞内情報伝達系・遺伝子発現調節機構によって制御され、ヒト先天性心疾患の病因として転写調節因子やシグナル伝達因子の変異・機能異常が重要である。本研究では心血管発生・形態形成に重要な情報伝達系において重要な遺伝子群の欠損によるマウスモデルにおける異常を詳細に解析するとともに、それら遺伝子の発現制御機構の解明につながる知見を得た。本研究の成果は心血管発生・形態形成の分子メカニズム解明に役立つことが期待される。新年度において、Hrt1/Hey1のconditionalノックアウトマウス実験に用いるFloxedマウス系統の樹立を完成させることを目指す。その後、細胞特異的なCre発現マウスとの交配により、Hrt1/Hey1が血管形成期において果たす機能の細胞特異性を明らかにして行きたい。また、Hrt1/Hey1のエピトープタグ標識型への遺伝子編集を進め、マウス系統の樹立を試みる。Tmem100に関する研究について、細胞内カルシウムシグナリングとの機能的連関について明らかにするため、TRPチャネルとの相互作用の可能性を検証する。さらに、胎生後期の心血管形成形成におけるTmem100の意義も検討してゆく計画である。これまでに作成したHrt1/Hey1 floxedマウスと組織特異的Cre酵素発現マウスの交配により、平成29年度中には組織特異的Hrt1/Hey1欠損マウスの表現型解析を行うことを試みる。特に、血管内皮細胞におけるHrt1/Hey1の意義と機能メカニズムに注目している。
認知症の摂食嚥下障害の多様性に配慮した経口摂取支援の検討

本研究では,原因疾患を踏まえた実態調査に加え,認知症の摂食嚥下障害の多様性や認知症の原因疾患の特徴を踏まえた介入案の提示を行ったうえで,効果検証を行った.(1)食の多様性支援マニュアル:アルツハイマー病(AD)以外のレビー小体型認知症(DLB)や前頭側頭型認知症(FTD)などについて、認知症の摂食嚥下障害の多様性に配慮した支援案を作成した.マニュアルは、支援の方法のみならず複数の専門職がそれぞれの専門分野を生かした連携をして活用できるような配慮をした。(2)AD以外の認知症原因疾患と診断された認知症高齢者の実態調査:認知症高齢者のAD以外の神経心理学的特徴を有する者の抽出を主眼とした実態調査を行った.本調査結果では, DLB167名、FTD37名、脳血管障害とADの合併例(AD with CVD)196名、正常圧水頭症とADの合併例(AD with NPH)11名の調査を行った。食行動ではFTDとAD withNPHの異食・盗食が有意に多く、目の前に食べ物があるとき、好きな食べ物や気分の高揚した時は多めに食べてしまう、固形スープや冷凍食材など調理前のものを食べるなどの例が多く上がった。一方DLBではお手拭きをちくわと間違える、机の上をつまむ行動があった。食べるペースの速さ、詰め込み、DLBでの食具使用困難は振戦によってこぼす、食品の物性の判断と適切な食具の判断・適用が難しい(箸置きで食べる、ヨーグルトを箸で食べる)、パックの開封困難など疾患特性の影響がある特徴的なケースがあった。DLBのむせは65-74,75-84,85-94歳の各年齢層でも3045%の割合でみられ、65歳未満では60%と有意にAD,FTDより頻度が高かったが、ADwithCVDはDLBと同程度であった。ADwithNPHはDLB同様に上肢のスムーズな協調動作が困難で、握力低下している特徴があった。近年,高齢者の食・栄養に関する関心の高まりとともに,認知症に関連した食事に関する行動障害等への関心も少なからず高まっている.アルツハイマー以外のレビー小体型認知症や前頭側頭型認知症などの認知症の原因疾患について,比較的早期の鑑別診断が可能になった現状であるが,診断された認知症高齢者や家族,ケア提供者にとって,診断後の支援が求められている.特に食事に関する機能は機能低下後の支援よりも機能を維持する支援を予防的に開始することも重要視され,多様性のある摂食嚥下障害に対する予知性のある情報提供や支援策が求められている.これらの背景により本研究では,原因疾患を踏まえた実態調査に加え,認知症の摂食嚥下障害の多様性や認知症の原因疾患の特徴を踏まえた介入案の提示を行ったうえで,以下の研究を実施した.(1)多様性支援マニュアルのブラッシュアップと予備調査過去の研究で作成した「経口摂取支援マニュアル」をブラッシュアップして,認知症の摂食嚥下障害の多様性に配慮した支援案(「多様性支援マニュアル」)を作成した.これに対し実際に認知症高齢者の介護経験のある家族介護者,介護職,看護職等に試用依頼し意見交換を行い,問題点の抽出および改正について検討した.(2)アルツハイマー病以外の認知症原因疾患と診断された認知症高齢者の実態調査認知症高齢者のアルツハイマー病以外の神経心理学的特徴を有する者の抽出を主眼とした実態調査を行った.本調査では,介護保険施設および地域密着型施設,在宅,もの忘れ外来等の認知症高齢者を対象に,これまでの調査の中でアルツハイマー病以外の認知症と診断されている者を含む認知症高齢者約50名を対象として調査を開始した.統計学的手法を用いて,認知症原因疾患と重症度,神経心理学的特徴と食事関連BPSDの頻度と程度に関する検討を行う.また調査の進行上の問題点等についても検討する.(1)多様性支援マニュアルのブラッシュアップと予備調査これまでの蓄積データを基にした認知症の食事関連BPSDについての結果および事例から抽出した支援案をもとに作成した「経口摂取支援マニュアル」をブラッシュアップして,認知症の摂食嚥下障害の多様性に配慮した支援案(「多様性支援マニュアル」)を作成した.特に認知症や摂食嚥下分野の情報は,専門用語が複雑かつ難解であるため,本研究で作成する多様性支援マニュアルは,家族介護者や介護職が理解しやすく,参考にしやすいように平易な表現で,イラストを使用し作成した.これに対し実際に認知症高齢者の介護経験のある家族介護者,介護職,看護職等に試用依頼し意見交換を行い,問題点の抽出および改正について検討した.また同マニュアルの使用方法および経過観察方法については,対象となる認知症高齢者の個別の状況をアセスメントの上で観察の要点を指導し,説明の上試用し,指導効果の検証を開始した.(2)アルツハイマー病以外の認知症原因疾患と診断された認知症高齢者の実態調査認知症高齢者のアルツハイマー病以外の神経心理学的特徴を有する者の抽出を主眼とした実態調査を行った.

本調査では,介護保険施設および地域密着型施設,在宅等の認知症高齢者を対象に,これまでの調査の中でアルツハイマー病以外の認知症と診断されている者を含む認知症高齢者約50名を対象として,年齢,性別,基礎疾患,薬剤などの基礎情報,認知症の原因疾患と重症度,神経心理学的症状,認知機能検査,日常的ADL,日常生活自立度,要介護度,栄養状態(MNA-SF),食事に対する関心,食に関する行動変化と食事関連BPSD,摂食可能な食形態,口腔内の状態,咬合状態等の認知症高齢者本人に関する調査項目のほか,生活環境,家族環境,通所介護や訪問看護,訪問介護等の社会的インフラの活用の程度等についても調査の対象とした.診断をうけた認知症高齢者や家族,ケア提供者にとって,多様性のある摂食嚥下障害に対する予知性のある情報提供や支援策が求められている.本研究では,原因疾患を踏まえた実態調査に加え,認知症の摂食嚥下障害の多様性や認知症の原因疾患の特徴を踏まえた介入案の提示を行ったうえで,効果検証を行う.(1)食の多様性支援マニュアル:アルツハイマー病以外のレビー小体型認知症や前頭側頭型認知症などについて、海外の文献を含む広範囲なレビューを行い、食行動の支援あるいは口腔機能に対する支援や、食事時間を含む環境の支援に関しての情報収集を行った。さらに我々のこれまでの蓄積データを基にした認知症の食事関連BPSDについての支援案をもとに、認知症の摂食嚥下障害の多様性に配慮した支援案を作成した.マニュアルは、支援の方法のみならず複数の専門職がそれぞれの専門分野を生かした連携をして活用できるような配慮をした。(2)アルツハイマー病以外の認知症原因疾患と診断された認知症高齢者の実態調査:認知症高齢者のアルツハイマー病以外の神経心理学的特徴を有する者の抽出を主眼とした実態調査を行った.本調査では,介護保険施設および地域密着型施設,在宅等の認知症高齢者を対象に,これまでの調査の中でアルツハイマー病以外の認知症と診断されている者を含む認知症高齢者約100名を対象とした.本調査対象であるレビー小体型認知症に関しては統計学的解析に耐えうる範囲で統計学的解析を行い,報告を執筆中である.(1)多様性支援マニュアル:文献レビューやこれまでの蓄積データを基にした認知症の食事関連BPSDについての支援案をもとに認知症の摂食嚥下障害の多様性に配慮した支援案を作成した.マニュアルは、支援の方法のみならず複数の専門職がそれぞれの専門分野を生かした連携をして活用できるような配慮をした。認知症高齢者および家族介護者,介護職,看護職等に同マニュアルの使用方法および経過観察方法について説明の上試用を依頼した.使用した専門職からの意見交換を予定している.(2)アルツハイマー病以外の認知症原因疾患と診断された認知症高齢者の実態調査:認知症高齢者のアルツハイマー病以外の神経心理学的特徴を有する者の抽出を主眼とした実態調査を行った.本調査では,介護保険施設および地域密着型施設,在宅等の認知症高齢者を対象に,これまでの調査の中でアルツハイマー病以外の認知症と診断されている者を含む認知症高齢者約100名を対象として,年齢,性別,基礎疾患,薬剤などの基礎情報,認知症の原因疾患と重症度,神経心理学的症状,認知機能検査,日常的ADL,栄養状態(MNA-SF),食事に対する関心,食に関する行動変化と食事関連BPSD,摂食可能な食形態,口腔内の咬合状態等の認知症高齢者本人に関する調査項目のほか,生活環境,家族環境,通所介護や訪問看護,訪問介護等の社会的インフラの活用の程度等についても調査した.症例数が少ない疾患であるため統計学的解析に耐えうる疾患に関しては解析を行っている.また症例数が少ないケースは詳細な事例収集を行っている.本研究では,原因疾患を踏まえた実態調査に加え,認知症の摂食嚥下障害の多様性や認知症の原因疾患の特徴を踏まえた介入案の提示を行ったうえで,効果検証を行った.(1)食の多様性支援