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「満洲国」におけるロシア人コサック社会の構造：農村部と中央組織の相互作用

本研究ではロシア帝国で特殊な軍事身分を形成していたコサック(カザーク)住民が、日本の傀儡国家「満洲国」の統治下で築き上げた社会関係を調査した。特に注目したのは、コサック最大の集住地だった三河地方の農村社会である。当時の日本語メディアに表れる三河コサックのイメージ、ロシア語史料に記された日本人とコサックとの関係の分析から、日本人とコサックたちとの相互関係ならびに齟齬を、当時の権力関係に留意しながら解読した。また当時日本の研究機関が行ったコサック農業に関する研究報告書をロシア語に翻訳することで、関係者への情報の還元を実施するとともに、今後研究ネットワークを拡大していくための基盤を形成した。平成22(2010)年度は三河地方コサック農村に関する日本語資料の収集と分析・発表を行うとともに、コサック系ディアスポラに関するロシア語資料の収集を行った。三河地方コサック農村については、日本語資料に現れる日本人の三河コサック観、および日本人とコサックの関係を中心に考察した。これにより三河地方コサックに関する日本語刊行資料の全体的傾向を把握することができた。その結果は2010年7月にストックホルムで開催された国際中東欧研究学会において、パネル「Cultural Heritage of Russian Emigres in Asia」のなかで口頭報告した(報告言語はロシア語)。また研究代表者が編集協力している雑誌『セーヴェル』(ハルビン・ウラジオストクを語る会)にも論文(資料一覧を含む)を掲載した。ロシア語資料の収集はプラハの国立図書館附属スラヴ図書館、およびロシアのハバロフスク地方国立文書館、同ハバロフスク地方図書館で実施した。文書館では同館保存の白系露人事務局資料を閲覧した。またスラヴ図書館では『極東のコサック』『東方の光』『協和会報』など、満洲国内外で発行された当時の雑誌や新聞から関連記事を収集した。ロシア語刊行物からは、日本語刊行資料にほとんど登場しないコサックの政治組織、および外国組織との関係を知ることができた。現在はロシア語資料を分析することで、協和会、特務機関に代表される日本とコサック中央組織との関係、およびコサック中央組織と三河地方に代表される地方組織の関係を調査中である。平成23(2011)年度は三河地方コサック農村に関する日本語・ロシア語資料の収集と分析を行うとともに、三河地方コサックに関する旧「満洲国」時代の日本人の研究を海外に紹介するための準備を行なった。前者については特に、三河地方コサックの一部が信仰していた古儀式派ベロクリニーツァ派の分析に力を入れた。特に、ハルビン・三河地方・ソ連国内およびルーマニアにおける同派の連関を、ブリヤート共和国文書館資料およびハルビン教会司祭の手記に基づいて調査した(同テーマに関する論文は、現在刊行準備中)。また同派の現状を示すものとして、アラスカのロシア人古儀式派教徒の現状に関する論文を執筆・発表した。後者の研究紹介に関しては、『三河露人農家の農業経営調査報告』(満鉄調査部、1943年)を選択し、そのロシア語翻訳と統計資料の整理を進めている。翻訳についてはロシア人研究者の助言も受けながら、現在3分の1ほどの作業を終了したところであるが、統計資料に関してはその精度について検討を加えているところである。本作業は来年度以降も継続し、最終的には刊行物あるいはウェブ上での公開を行なう予定である。このほか、旧満洲におけるロシア系ディアスポラ全体に関する調査として、大連における日本人とロシア人の関係に関する聞き取り調査を実施し、その資料整理と分析を進めている。またロシア人フォークロアに現れる他民族(日本人、中国人等)との関係についても調査し、小文を著わした。1.旧「満洲国」時代に日本人が三河地方で行った研究内容を海外に紹介するために、『三河露人農家の農業経営調査報告』(満鉄調査部、1943年)の翻訳作業を進め、成果報告書として印刷・製本し、日本、ロシアなどの研究者と図書館に送付した。2.阪本秀昭編著『満洲におけるロシア人の社会と生活』(ミネルヴァ書房)の刊行に共著者として参加した。三河コサックおよびロマノフカ村に関して、「日本人が描いたロマノフカ村」「日本人が見た三河コサック村」と題した2編の論文を執筆した。また同テーマに関するYu.アルグジャーエヴァのロシア語論文、「旧住民が語る満洲古儀式派村の暮らし」と「ロシア側資料に見る三河コサック村の生活」を翻訳した。3.ロシア・ハバロフスク市から古儀式派研究者のイヴァン・シェヴニン氏を招聘し、三河地方の古儀式派教徒に関する情報交換を行うとともに、1の報告書翻訳に関して内容の確認を依頼した。また第5回東アジアスラヴユーラシア研究会議(2013年8月910日、大阪経済法科大学)に参加し、同氏が報告者となるパネル「Old Believers in Manchuria」の司会を担当した。

4. 9月3日から9月10日まで、哈爾浜を中心とする中国東北部において、亡命ロシア人研究者との共同現地調査を実施した。また本調査を踏まえて共著書『満洲の女たち』(大阪大学出版会)の内容が議論された。研究代表者は「表象としての農村ロシア人女性:日本人作家の眼を通して」と題する一章を執筆し、その中でコサック女性の表象を論じた(2014年度中の刊行をめざして編集中)。平成24(2012)年度7月に研究中断から復帰し、前年度からの研究計画を継続して実施した。その主な内容は以下の3点である。第一に、旧「満洲国」時代に日本人が三河地方で行った研究内容を海外に紹介するために、『三河露人農家の農業経営調査報告』(満鉄調査部、1943年)の翻訳作業を進めた。ロシア人研究者の助言も受けながら、90%程度の翻訳が終了した。今後は訳語(特に固有名詞)のチェック、全体構成の検討、および校正作業を行なう予定である。このほか、本翻訳の解説論文の一部として、日本人による三河研究に関して論文を執筆中である。第二に、旧満洲における古儀式派容僧派(ベロクリニーツァ派)集団の動向について、「ロシア正教古儀式派教会における本国と亡命者社会の連関ーソ連・旧『満洲』往復書簡よりー」と題する論文を執筆した。これは論文集『満洲の中のロシア』(成文社)に収録されて、単行本として刊行された。第三に、旧満洲におけるロシア人と日本人の接触をテーマとした論文集のために、日本人と三河地方コサックの関係に関する論文を執筆した。またロシア人研究者が三河コサックについて執筆した論文を和訳した。論文集は来年度に刊行予定であり、現在校正作業を進めている。12月末から育児休業等の取得により研究を中断した。またその関係で、海外・国内調査(出張)を中止した。25年度が最終年度であるため、記入しない。本年度途中に育児休暇から復帰したが、保育事情により海外・国内調査(出張)が大幅に制限された。そのため、海外や国内での資料調査や情報収集が研究課題申請時の予定ほど進展していない。年度当初の研究実施計画については、翻訳作業、三河コサックに関する日本語論文の執筆は、おおむね順調に進展している。来年度に研究中断から回復する予定であるが、国内、海外を含めた移動が困難となり、海外での資料収集や発表が困難になると考える。そのため当面は、翻訳作業および資料の分析と論文執筆を中心に研究を進める予定である。来年度も個人的事情によって海外での調査活動が不可能である。そのため今後も、国内での研究報告、翻訳作業、取得資料の分析、そして論文執筆を中心に研究を推進する。資料の翻訳・紹介については、年度末までの公開に向けて準備を重ねる。またロシアの研究協力者(イヴァン・シェヴニン氏)を日本に招聘し、学術シンポジウムのパネルでの研究報告を担当してもらうとともに、情報交換や翻訳への助言を要請する。
人為起源物質の制御にはたす動的リスク管理手法の開発

(1)リスク問題を生成する現象系・情報を入手・利用する観測系、人間による人為起源物質利用の制御を試みる系の三系の動的整合性を担保しうるようなリスク管理手法の開発をした。次の諸点が特に強調される。(2)リスクの可観測性にはたす情報と経済的費用の役割に留意した動的な意思決定手法を開発した。(3)環境資源を含む希少資源の効率的利用という経済目的と動的リスク管理手法との関わりについて検討した。(4)生態系内部の階層構造に配慮して、人為起源物質の自然生態系へのリスクを評価する(5)遺伝環境や栄養などの生物学的・医学的要因によって生態系及び個体に対するリスクがどのように影響を受けるかを疫学的・実験的・文献的に調査した。(6)リスク管理とリスクコミュニケーション支援システムの中に、リスク情報の体系化を支援する手法のプロトタイプをて実現した。(7)リスク研究で多少進んでいるアメリカを参照し、また各論的に水廃棄物・大気などの分野におけるリスクへの対応の仕方を研究することでリスクとつきあう具体例・適切な法的手法の一般理論導入を検討した。(8)情報に基づくリスク選択のモデルの法制度化について調査した。(9)人間の物質排泄による自然環境影響の因果関係を把握し、その評価を行なった。(10)上水飲用による発癌およびウイルス・リスクの評価を行なった。
L型カルシウムチャネル阻害薬の開口状態親和性の定量的解析と阻害薬作用のモデル化

高血圧症の治療などに広く用いられるニフェジピンという薬が、致死的不整脈を予防する効果も有することを見出した。ニフェジピンは、L型カルシウムチャネルという細胞外カルシウムを細胞内に運搬する蛋白質を阻害する。本研究では、心臓のL型カルシウムチャネルを構成する遺伝子を培養細胞に導入し、その機能を解析することで、ニフェジピンがどのような機序で致死的不整脈を予防する効果を発揮するかを明らかにした。研究者らは、外向きK^+チャネルの障害で延長した心室筋細胞の活動電位をL型カルシウムチャネル(LTCC)阻害薬が効率的に補正することを見出した。そして、LTCC阻害薬が興奮収縮連関に対する作用を最低限に留めながら、活動電位短縮をきたすためには、LTCC阻害薬が活動電位中のLTCCの不活性化を促進することが重要であること、さらにこのためにはLTCC阻害薬がLTCCの開口状態に好んで結合することであることを予測した。そこで本年度は、不活性化状態を障害する変異LTCCを用いて、LTCC阻害薬であるニフェジピンの開口状態親和性を検討しようとした。実験では、β_2およびα_2δサブユニットを恒常的に発現するHEK293細胞に、野生型α_1サブユニットまたは変異α_1サブユニット(G436R)を急性に発現させ、発現したLTCC電流をBa^<2+>をcharge carrierとしてパッチクランプ法のホールセルモードで測定した。LTCC(G436R)は野生型LTCC(LTCC(Wt))と比較して、速い膜電位依存性不活性化(VDI)を失っていたが、ほぼ同等の遅いVDIを示した。また両者のニフェジピン感受性はほぼ同等であった。したがって、ニフェジピンは遅いVDIを安定化してLTCCを抑制すると考えられた。即ち、G436R変異を用いた検討では、LTCCの遅いVDIを阻害できないため、ニフェジピンの開口状態親和性を抽出し解析することができなかった。この結果を踏まえ、来年度は遅いVDIの障害を有するLTCCに対するニフェジピンの効果を検討し、この阻害薬の開口状態親和性を判定する必要があると考えられた。研究者らは、外向きK^+チャネルの障害で延長した心室筋細胞の活動電位をL型カルシウムチャネル(LTCC)阻害薬が効率的に短縮することを見出した。そして、LTCC阻害薬がLTCCの興奮収縮連関に対する作用を最低限に留めながら、活動電位短縮をきたすためには、LTCC阻害薬が活動電位中のLTCCの不活性化を促進することが重要であると考えた。平成22年度の研究の目的は、LTCC阻害薬がLTCCの不活性化を加速する機序を明らかにすることである。LTCCの膜電位依存性不活性化(VDI)には、速い成分と遅い成分が存在する。そこで研究者らは、ジヒドロピリジン系LTCC阻害薬ニフェジピンが、速いVDIを障害する変異を有するLTCC(LTCC(G436R))のVDIに与える効果を検討した。その結果、ニフェジピンはLTCC(G436R)の障害された速いVDIを復活させ、遅いVDIには影響を与えずに、VDIを加速することが分った。次に、ニフェジピンが遅いVDIを障害するLTCC(LTCC(S4051,A752T,V1165T,I1475T))に対する効果を検討したが、HEK293細胞におけるこの変異体の発現が非常に悪く、現時点ではまだ信頼性のあるデータは得られていない。したがって平成22年度の研究からは少なくとも、ニフェジピンはLTCCの速いVDIの背景にあるLTCCのconformation変化を促進することにより、LTCCのVDIを加速することが分った。ジヒドロピリジン系(DHP)L型カルシウムチャネル(LTCC)阻害薬ニフェジピンは、延長した心室筋細胞の活動電位をポテントに短縮する。このためには、ニフェジピンが活動電位中のLTCCの不活性化を加速することが重要である。そこで、脱分極電位でニフェジピンがLTCCの不活性化を加速する機序を解析した。DHPはCa_v1.2 LTCCの膜電位依存性不活性化(VDI)を安定化してLTCCを抑制する。Ca_v1.2 LTCCは、少なくとも2つの(fast&slow)VDIを有する。Timothy症候群を生じる点変異(G436R)は、Ca_v1.2サブユニットのI-IIリンカー(L_<I-II>)に存在しVDIを障害する。そこで、野生型とこの変異を有するLTCCを介するホールセルBa^<2+>電流に対するニフェジピンの効果を比較した。ニフェジピン非存在下では、同変異は-40及び0mVで、fast closed-及びopen-sate VDI(CSI&OSI)を障害したが、-100mVでのキネティックスに影響を与えなかった。野生型LTCCで、ニフェジピンは、-40及び0mVでそれぞれfast CSIとOSIを促進し、-40及び-100mVでそれぞれslowCSIを促進または安定化した。

変異LTCCでは、ニフェジピンは、-40及び0mVでそれぞれ障害されたfast CSIとOSIを回復し、slow CSIに対しては野生型と同じ効果を示した。したがってニフェジピンは、閾値以上の電位でL_<I-II>によりもたらされるfast CSI/OSIを促進する効果と、閾値以下の電位でslow CSI/OSIを促進または安定化する効果を有する。ニフェジピンによる活動電位短縮には、前者の作用が重要であると考えられた。
DNA多型を用いたギンブナの進化と多様化に関する研究

ギンブナ集団構造を解析するために高感度DNA多型マーカーを用いてクローン構成の解明を試みた。日本の6地点、琵琶湖、高知、鳥取県湖山池、新潟県福島潟、千葉県印旛沼、茨城県霞ヶ浦より採集したギンブナのクローン構成について調査した。ギンブナはすべての地点で複数のクローンからなる混合クローン集団を構成していた。それらの中にそれぞれの地点で特異的なクローンと、2地点以上の地域に認められる共通クローンが存在していた。総クローン数は61系統であり、そのうち14系統が共通クローンであった。共通クローンの多く(13/14)が琵琶湖で確認されたことから、共通クローンは琵琶湖を中心として分布していることが示された。琵琶湖水系のトウヨシノボリRhinogobius sp.ORとビワヨシノボリRhinogobius sp.BWの遺伝的変異を,D-loop領域を含むミトコンドリアDNAの制限酵素断片長多型(RFLP)法により調査した。ビワヨシノボリは2沿岸域から採集された。両型は同一のハプロタイプを全く共有していなかったことから,RFLP法は両型を区別するめに効果的であることが示唆された。トウヨシノボリのハプロタイプ多様度(0.214-0.543)はビワヨシノボリ(0.543-0.682)よりも低かった。ビワヨシノボリおよびトウヨシノボリにおいて地域間のハプロタイプ頻度に違いは見られなかった。この結果から,トウヨシノボリではこれらの地点間に頻繁な遺伝子流動が存在しており,そして琵琶湖水系のトウヨシノボリは1つの個体群から構成されていることが示唆される。トウヨシノボリ(R.sp OR)は極めて多くの色彩変異を含んでいるが、それらの遺伝的な関係は不明のままである。トウヨシノボリから13個のマイクロサテライトプライマーを設計した。それらすべてに高い変異性が認められ、217個のalleleが検出された。ヘテロ接合体率は、0.10.9であった。1つを除いて、すべてのマーカー座でHardy-Weinberg equilibriumからの有意なずれは検出されなかった。近年,ヒナモロコは日本での天然水域からの採集記録がほとんどないことから,絶滅危惧種に指定されている.日本の5機関で継代されているヒナモロコ系統の遺伝的多様性と分化についてアロザイム分析による評価を行った.8つの酵素から12の遺伝子座が推定され,遺伝子座ごとの対立遺伝子数は11.250,多型的遺伝子座率は00.250,ヘテロ接合体率は00.128であった.3機関の系統では遺伝的変異が求められたが,2機関では変異が全く認められなかった.5機関の中でヒナモロコ里親会が保持する系統の遺伝的多様性が最も高く,他の淡水魚と比較しても,顕著に低くはなかった.マイクロサテライト遺伝子座における遺伝子-動原体間の組み換え率を第2極対体放出阻止により作出したオオキンブナの雌性発生2倍体と天然雌性発生倍体のギンブナの間で比較した。組み換え率を推定するために21のマイクロサテライト遺伝子座を用いた。オオキンブナの雌性発生2倍体では11遺伝子座において雌親魚から異型接合の遺伝子型が検出され,これらの遺伝子座において動原体-遺伝子座間の距離を推定した。オオキンブナの遺伝子-動原体間の距離は0cMから1cMまで分布し,平均13.4cMであった。ギンブナでは雌親魚とその一腹仔の遺伝子型は全く同一であり、雄親由来の対立遺伝子は全く認められなかった。ギンブナの一尾の雌親からの一腹仔は遺伝的に同一なクローンであった。ギンブナの減数分裂時の組み換えは,少なくともここで調べたマーカー座では皆無で,組み換えがギンブナのクローンの多様化に貢献していないことが示唆された。

この結果から,トウヨシノボリではこれらの地点間に頻繁な遺伝子流動が存在しており,そして琵琶湖水系のトウヨシノボリは1つの個体群から構成されていることが示唆される。トウヨシノボリ(R.sp OR)は極めて多くの色彩変異を含んでいるが、それらの遺伝的な関係は不明のままである。トウヨシノボリから13個のマイクロサテライトプライマーを設計した。それらすべてに高い変異性が認められ、217個のalleleが検出された。ヘテロ接合体率は、0.10.9であった。1つを除いて、すべてのマーカー座でHardy-Weinberg equilibriumからの有意なずれは検出されなかった。
鳥居龍蔵博士撮影の日本周辺諸民族写真・乾板の(緊急を要する)再生・保存・照合

今年度は、昭和63年度に引き続いて、鳥居龍蔵博士撮影の総計約3千点の写真・乾板資料の再生・複製を完了させ、全資料に関してネガ・フィルムの作成、永久保存のための処置を当初の計画通りに終わらせた。鮮明な画像に再生されたそれらの写真資料について、旧満州、千島アイヌ、朝鮮半島、台湾(主に原住民族)、沖縄西南中国、ミクロネシア、日本の各地域・各民族別に、専門研究者が分担して照合・分析にあたり、また一部の資料(台湾等)に関連しては戦前に活躍した長老の研究者の助言をあおぐ、日本国内(沖縄等)の資料は確認のための調査を行うなど、可能な範囲内で実施計画に記載した研究方法をとることができた。その結果、台湾、旧満州、千島、西南中国の写真資料は、すべて照合・分析および解題の執筆作業が完了し、鳥居龍蔵博士の地域別の年譜、調査足跡図、関連文献目録、民族分布図等と合わせて、今年度中に東京大学総合研究資料館から大部の写真資料カタログ(全4冊を予定)として出版する計画である。残りの地域の写真についても近々同じ作業を完成させる目処が立っている。また、写真カタログの出版と並行して、各写真資料の属性デ-タを抽出・記録する作業を行ってきたので、それらに基づいて画像デ-タベ-スを構築することも可能な段階まで来ている。2年間にわたる本研究で、撮影後8090年を経て劣化の著しかった鳥居博士の貴重な学術写真資料を再生・保存し、撮影された画像の照合・分析を通して博士の記録した日本周辺諸民族の古い姿を現在に蘇らせるという所期の研究目的は、ほぼ達成されたことになる。民族学・人類学的調査における写真撮影による記録は、本邦では鳥居龍蔵博士をもって嚆矢とする。これら写真記録よりみた今世紀初頭前後の旧満州、アイヌ、朝鮮半島、沖縄、苗族・ロロ、そして日本各地の農山村の情景、風俗、人物のあり方は今日のそれと比べて隔世の感がある。東京大学綜合研究資料館に保存された写真および乾板は3000点にも及ぶが、その中には劣化・損傷の程度のいちじるしいものがある。このたび専門技術者の手によってこれらを再生・処理したが、その結果、鮮明な影像の写真として数多くのものが復刻された。当初の予定にしたがって、全資料を分類の上、ナンバーリングし、損傷程度を調べ、故博士によるメモ、解説を整理するかたわら、地域別・民族別の分担体制を編成し、検索のフォーマットを作製し、資料の照合、分析の手順等を検討した。このため、研究会をしばしば開催した。研究者の一部は徳島県鳴戸市にある鳥居龍蔵記念博物館を訪問し、同館所蔵の資料を閲覧、検索するとともに、同博物館をまもる故博士の御子息より数多くの情報、知見を得た。これらにより次年度における個々の記録の照合の手筈がととのえられた。さらに一般的なデータ・ベースのみならず、画像データ・ベースを作製する見通しもついた。それは画像を通しての綜合人類学の発足であるとともに、人類学的調査の先駆者鳥居龍蔵の再評価といえよう。なお、ミクロネシア(旧南洋群島)の記録の一部に故博士意外によるものが含まれていることが判明したが、それは良質な記録であるだけに、故博士のものと同様に扱い、処理を進めていく。
水痘帯状疱疹ウイルスpOka株ORF0とvOka株ORF0の機能比較

水痘帯状庖疹ウイルスはヒトに病気を引き起こすヘルペスウイルスの中で、唯一、効果的な生ワクチンが開発されている。ワクチン株(vOka株)は野生株(pOka株)と比較し弱毒化しているが、その分子生物学的裏付けはなされていない。本研究では、pOka株vOka株間で分子量に大きな違いのあるORF0について、弱毒化の原因の一つではないかと考え、以下の解析を行った。ORF0欠損株の作出と増殖能の検討1. ORF0の感染細胞内における機能を明らかにするために、VZV-BACを用いORF0の欠損株を作出した。pOka株ORF0の一部のみを欠損させた組換えウイルス(rpOka-ORF0△TMD)を作出した。rpOka-ORF0△TMD感染細胞中において、ORF0の発現は確認できなかったが、rpOka-ORF0△TMDの培養細胞中における増殖能は野生株と同程度であった。2.水痘生ワクチンの本体であるvOka株は、その親株であるpOka株と比較して増殖能が減弱している。pOka株とvOka株間で大きな違いのあるORF0について、弱毒化の原因であるか否かについて検討を行った。これらの変異株を用いて、それぞれの親株と培養細胞における増殖能を比較したところ、両者とも大きな変化は確認できなかった。これらの結果をまとめ、現在論文投稿中である。
H3K9メチル化・脱メチル化酵素による哺乳類の性決定制御

ヒストンH3K9脱メチル化酵素・メチル化酵素群のマウス性決定機構への関与を包括的に解明する目的で、それぞれの酵素の遺伝子欠損マウスを用いて性転換表現型の有無を調べた。その結果、メチル化酵素GLPのヘテロ欠損は、脱メチル化酵素Jmjd1a欠損による性決定遺伝子Sryの発現低下・性転換表現型を回復させた。一方で、脱メチル化酵素Jmjd1bのヘテロ欠損は、Jmjd1a欠損の性転換表現型を亢進させた。これらの結果は、H3K9メチル化制御酵素群によるメチル化レベルの調節が、性決定遺伝子Sryの発現制御と性決定に重要であることを示している。我々は、ヒストンH3K9脱メチル化酵素のひとつJmjd1aがマウスの性決定に機能し、Jmjd1の欠損マウスはXY型の性転換を引き起こすことを以前報告した。本研究では、Jmjd1a以外のH3K9メチル化を制御する酵素が性決定に果たす役割を明らかにすることを目的とした。Jmjd1aとH3K9メチル化酵素Glp遺伝子二重欠損マウス(Jmjd1a-/-;Glp+/-)マウスを樹立し、性転換の割合をJmjd1a単独欠損マウスと比較した。Jmjd1a-/-;Glp+/-マウスではJmjd1a欠損による性転換表現型がレスキューされたことから、Glpは性決定においてJmjd1aと拮抗した作用をもつことが示された。現在、Jmjd1a-/-;Jmjd1b+/-マウスに観察された性転換の亢進および、Jmjd1a-/-;Glp+/-マウスにおける性転換のレスキューについて、作用機序を明らかにするために、性決定遺伝子Sryを頂点とする性決定のシグナルカスケードの解析を行っている。ヒストンH3K9脱メチル化酵素のひとつJmjd1aの遺伝子欠損マウスはXY型性転換を引き起こす。本研究では、Jmjd1a以外のH3K9メチル化制御酵素の性決定への関与を解明することを目的とした。昨年度は、Jmjd1aとH3K9メチル化酵素Glpの二重欠損マウス(Jmjd1a-/-; Glp+/-)を樹立し、Glp+/-の導入によってJmjd1a-/-マウスの性転換表現型がレスキューされることを見いだした。本年度はこの性転換レスキューの作用機序を明らかにする目的で、性決定期(胎生11.5日)の生殖腺体細胞における性決定遺伝子Sryの発現とヒストンH3K9メチル化レベルの定量(組織免疫染色とFACS解析)行った。その結果、Jmjd1a-/-;Glp+/-の生殖腺体細胞はJmjd1a-/-と比較して、Sry発現の増加およびH3K9メチル化レベルの低下が観察された。よって、生殖腺体細胞のSry発現制御においてJmjd1aとGlpは拮抗した機能をもつことが示唆された。予定の通りに遺伝子改変マウスを樹立し、Jmjd1a以外のH3K9メチル化制御酵素群が性決定に関与することを示唆するデータを得た。27年度が最終年度であるため、記入しない。分子生物学引き続き遺伝子改変マウスを用いた解析を進める。Jmjd1a-/-;Jmjd1b+/-マウスに観察された性転換の亢進および、Jmjd1a-/-;Glp+/-マウスにおける性転換のレスキューについて、作用機序を明らかにする。
植物生理活性脂質メディエーターのメタボロミクス-その代謝工学への応用を目指して-

脂質は多彩な代謝系を経て脂質メディエーターとなり、種々の生理現象を司る。植物においても動物に匹敵する種類の脂質メディエーターが生成され、そのそれぞれが独自の機能を果たしている。これらはその特異的な生理活性から必要な時期に必要な量を最適な組み合わせで生成される必要がある。こうした代謝調節は個々の代謝系のクロストークを交えた複雑なネットワーク構造に依存している。本研究ではメタボロミクス的手法を用いて、シロイヌナズナ脂質メディエーター生成に関連する遺伝子群の発現解析と脂質メディエーター類の一斉解析を融合し、脂質メディエーター生成制御ネットワークの全容を明らかにすることを目的とする。15年度は以下の成果を得た。RT-PCRによる脂質メディエーター生合成関連遺伝子、特に脂質加水分解酵素遺伝子発現の網羅的解析を進めた。その結果、DLL1が傷害や、サリチル酸処理により顕著に誘導されることが明らかとなった。また、DLL2とDLL7が比較的恒常的に発現しており、しかも傷害処理等で誘導されることが明らかとなった。そこで、それぞれの遣伝子に関するノックアウト体を単離した。各ノックアウト体を通常の条件下で生育させた場合、その表現型は野生株と大きな差がなかった。しかし、DLL1ノックアウト体を乾燥条件に曝すとその生育が顕著に抑制された。そこで、このものについてオキシリピンプロファイリングを行ったところ、以外にもジャスモン酸関連化合物が野生株よりも多い傾向が得られた。一方、DLL2とDLL7は千束帯の重複領域にあるため互いに相補的であると考えられた。そこで、重ノックアウトの作出を試みた。しかし、交雑では重ノックアウト体が得られず、またその遺伝型の分離パターンが偏っていた。種々検討の結果、DLL7、DLL2両方を欠いた配偶子の生殖能力が失われていることが明らかとなった。これは配偶子の生殖能力に脂質メディエーターが関与していることを示唆する初めての知見である。脂質メデイエーターは種々の生理現象を司るがその代謝系の代謝調節はそれぞれの代謝系に与る遺伝子産物の適切な発現調節を介して達成されており、その制御システムは複雑なネットワーク構造を成している本研究ではシロイヌナズナゲノム情報に基づくメタボロミクス的手法を用いて、脂質メデイエーター生成制御ネットワークの全容を明らかにすることを目的とする。14年度は以下の成果を得た。(1)脂質メディエーター生成系に関連すると思われる63個の遺伝子の一部についてRT-PCRによる発現解析を実施したが、定量性と網羅性に欠けたため、相当する遺伝子を増幅し、カスタムメイドマイクロアレイの作成を進めている。(2)脂質メデイエーターの中でも特に短鎖アルデヒドについて検討を進め、これらが病傷害曝露時に一過的に誘導されることを見出した。そこでこの生合成代謝系を制御する遺伝子群の発見を目途してシロイヌナズナマクロアレイを用いて遺伝子発現様式の網羅的解析を行った。現在までにレセプター型タンパク質キナーゼ・ジアシルグリセロールキナーゼ等信号伝達に関与していると考えられる遺伝子を十数個挙げ、解析を進めている。(3)遊離カルポキシル基を有する脂質メディエーターについてADAM誘導体とし、定量分析した。他の化合物は脂質画分からエステル交換トリメチルシリル化後、GC-MS分析により定性・定量した。その結果、酸化脂肪酸の生成・蓄積が種々の生理現象と密接に関連していることを見出した。(4)DAD1-like lipase (DLL)遺伝子のT-DNA挿入変異体を8種単離した。各変異体は通常の栽培条件では野生株と見分けがつかないが、塩ストレス、糖ストレス等のストレス下では明らかに生育状況が異なっていた。

現在、その原因を調査中である。また、相同性が高い遺伝子についてはダブルノックアウトを作成し、その表現型の解析を進めている。脂質は多彩な代謝系を経て脂質メディエーターとなり、種々の生理現象を司る。棺物においても動物に匹敵する種類の脂質メディエーターが生成され、そのそれぞれが独自の機能を果たしている。これらはその特異な生理活性から必要な時期に必要な量を最適な組み合わせで生成される必要がある。こうした代謝調節は個々の代謝系のクロストークを交えた複雑なネットワーク構造に依存している。本研究ではメタボロミクス的手法を用いて、シロイヌナズナ脂質メディエーター生成に関連する遺伝子群の発現解析と脂質メディエーター類の一斉解析を融合し、脂質メディエーター生成制御ネットワークの全容を明らかにすることを目的とする。15年度は以下の成果を得た。RT-PCRによる脂質メディエーター生合成関連遺伝子、特に脂質加水分解酵素遺伝子発現の網羅的解析を進めた。その結果、DLL1が傷害や、サリチル酸処理により顕著に誘導されることが明らかとなった。また、DLL2とDLL7が比較的恒常的に発現しており、しかも傷害処理等で誘導されることが明らかとなった。そこで、それぞれの遺伝子に関するノックアウト体を単離した。各ノックアウト体を通常の条件下で生育させた場合、その表現型は野生株と大きな差がなかった。しかし、DLL1ノックアウト体を乾燥条件に曝すとその生育が顕著に抑制された。そこで、このものについてオキシリピンプロファイリングを行ったところ、意外にもジャスモン酸関連化合物が野生株よりも多い傾向が得られた。一方、DLL2とDLL7は染色体の重複領域にあるため互いに相補的であると考えられた。そこで、重ノックアウトの作出を試みた。しかし、交雑では重ノックアウト体がえられず、またその遺伝型の分離パターンが偏っていた。種々検討の結果、DLL7,DLL2両方を欠いた配偶子の生殖能力が失われていることが明らかとなった。これは配偶子の生殖能力に脂質メディエーターが関与していることを示唆する初めての知見である。
在日コリアンの社会・経済・健康問題と支援モデルの構築

先行研究から、在日コリアン高齢者は日本人高齢者と比べ、ハイリスク高齢者となりやすい傾向にあることが明らかとなっている。しかし、集住地区以外では在日コリアン高齢者の健康問題は不明な点が多く残されおり、学術レベルでの検討が必要とされている。今回の研究期間で集住地区以外での在日コリアン高齢者の社会的因子、心理的因子と身体的な健康問題を明らかにし、地域の看護、福祉職がその対策を地域で行うための看護支援モデルを策定することを目的として調査に着手した。現在、そのデータのクリーニングが終了し、分析を進めている。近年、中国、ブラジル、韓国などの外国人住民が我が国に移住を始めている。現在は生産年齢人口である外国人住民は少なくとも20年から30年後には、移住した先である日本国内で高齢期を迎える事が予測される。長期における外国生活により、母国の基盤をなくした外国人住民が、外国である日本で老後を迎えることも、すでに非現実的な話ではないと思われる。その中で、先住外国人である在日コリアン高齢者は、日本社会の中で長期間定住し、高齢期を迎えている。在日コリアン高齢者は、日本人と比較し、家族への介護負担が大きい、言語、文化背景の違いによる保健指導の困難、低い識字率のため保健サービスへのアクセスが困難であるなどの問題があり、これらを検討することは今後増加が予想される外国人高齢者問題を考察する上で、重大な示唆を与えると考えられる。そこで、本研究では、在日コリアン高齢者の社会的機会(社会保障の給付及び過去の就職の機会)、経済、生活習慣、生活の質と余暇活動、家族関係の実態を明らかにし、在日コリアン高齢者への看護支援モデルの構築を行うことを目的とした。そのため、通所介護施設で介護サービスを受けている在日コリアン高齢者に対し、社会保障の有無、経済的基盤、居住環境、生活習慣、生活状況と健康との関連を検討し、データベースを作成した。今年度は、社会的機会(社会保障の給付及び過去の就職の機会)、経済、生活習慣、生活の質と余暇活動、家族関係に加え、ソーシャルサポートの享受とその種類、家族サポートとその状況、および社会的・身体的健康と生活の質の関連を加え検討した。本研究では、在日コリアン高齢者の社会的機会(社会保障の給付及び過去の就職の機会)、経済状況、生活の質と余暇の活動状況などを明らかにし、在日コリアン高齢者への看護支援の方法を検討するものである。1年目は、通所介護施設で介護サービスを受けている在日コリアン高齢者に対し、社会保障の有無、経済的基盤状況、居住環境、生活習慣、生活状況と健康との関連を検討し、データベースを作成した。2年目は、データーベースをもとに、社会的機会(社会保障の給付及び過去の就職の機会)、経済、生活習慣、生活の質と余暇活動、家族関係に加え、ソーシャルサポートの享受とその種類、家族サポートとその状況、および社会的・身体的健康と生活の質の関連を加え、調査票の作成を行った。本研究は中部地区を対象としているため、第1次調査として中部地区に在住している、65歳以上の在宅の在日コリアン高齢者を対象として調査をおこない、対象者はスノーボール抽出法(snow-ball method)を使用し抽出した。抽出した対象者に対し、調査方法のトレーニングを受けたバイリンガルの調査員による個別訪問調査を行った。結果は、現在入力作業を進めており、記入もれや論理エラーを含むケースを除いた有効回答率を計算中である。これら回答者の中から、データについてはクリーニングを終了次第、パネルデータとしての分析を進める予定である。また、健康上に問題のあるケースと健康上の問題のないケースとに層化した上で、質的なインタビューを検討しているところである。
18世紀末革命期ナポリの女性作家デ・フォンセカ・ピーメンタルの文学と思想

18年度は17年度に引き続き、ナポリでの資料収集と研究交流を行った。特にナポリ革命の中心的研究拠点である「イタリア哲学研究所」を訪ね、ガルガーノ教授はじめ、研究員との交流を深めたり、図書館所蔵書を閲覧したほか、当研究所の刊行した過去の研究書を入手することができたのは、大きな成果だった。一般書店からの入手困難な図書としては、当研究所が主体となった研究学会の成果をまとめたNapoli 1799fra storia e storiografia(Anna Maria Rao監修)および、当研究所が刊行したデ・フォンセカのモノグラフとしてはじめて残存するテクストをまとめたLa vitaletteraria e politica di Eleonora De Fonseca Pimentel(Elena Urgnani監修)が特に重要で、今後日本のイタリア学の学会等にも紹介されるべきものであり、現在これらの著作を参照しながら当該分野の近年の研究紹介を主とする学会誌への投稿論文を執筆中である。18年度はこのほか、デ・フォンセカが実質的な主幹として発行した革命政府の新聞Il Monitore Napoletanoに関し、Benedetto Croceの古典的研究と、近年のMario Battagliniの研究(1999年)をめぐって、当時の背景と新聞本文の分析を中心とする、デ・フォンセカと当時のナポリ知識人層の言語論・大衆観についての研究に着手した。今後は、本科学研究費補助金によって収集した資料や研究交流の成果をもとに、イタリアでの研究動向や研究機関の日本での紹介とともに、イタリア・ヨーロッパの近代史研究に欠かせぬ視点を提供するナポリの1799年革命とそれにいたる18世紀の文化・思想史の研究として発展させ、従来のテーマであるイタリアにおける言語論、テクスト論につなげていきたい。イタリアへの調査旅行を行った。重要な研究拠点であるナポリにあるイタリア哲学研究所Instituto Italiano per gliStudi FIlosoficiの研究者との交流の機会を得て、現地における最新の成果の一部である出版物、論文集、シンポジウムの講演録や研究所の公刊物等を収集することができた。当研究対象であるエレオノーラ・デ・フォンセカの近年刊行されたテクスト集やモノグラフィーをはじめとするいくつかの基本的な文献・研究書(A.M.Rao, Napoli 1799.Fra storia e storiografia ; E.Uragnani, La vicenda letteraria e politica di Eleonora De Fonseca Pimentalなど)を入手することができた。また研究動向についての研究所に関わる研究者と意見交換を行い、最近の研究所のシンポジウム等の活動やこれからの活動についての情報を得たことは大変有益であった。ナポリ以外のイタリアのいくつかの図書館においても、ナポリ革命や啓蒙思想関連の雑誌等の一時資料(Monitore napoletanoやミラノ、ローマ、ナポリ等の各都市で発行されていたGazzetta等の新聞雑誌)や近年の研究書に直接あたることができた。それらの資料・文献を整理・分析し、今後日本の学会等にむけての紹介と独自の視点での研究を進めていくための基礎的作業を行っているところである。また、日本にはまだ翻訳が刊行されていないエレオノーラ自身のテクストや、最重要の基礎文献であるB.クローチェによる伝記の翻訳やテクスト分析にも着手した。
骨形成因子結合多糖の空間分布が異なるリン酸八カルシウム表面での骨形成挙動解明

これまでにリン酸カルシウム(CaP)系骨修復材料の骨再生能を向上させるため,骨形成タンパク質(BMP)の生体への徐放による骨芽細胞の活性化が検討されてきた。一方で,生体内においては,骨組織を構成するアパタイトに親和性を示す多糖であるグリコサミノグリカン(GAG)がBMPの保持を担うことが示唆されている。しかし,GAG結合BMP(GAG-BMP)のうち,骨組織に固定化されたものと放出されるもののどちらが,骨形成に寄与しているかは不明である。本研究は,CaP表面に固定したGAG-BMPと表面から徐放されるGAG-BMPモデルを構築し,どちらが骨芽細胞の活性化(分化)に有効か解明するものである。本年度は,グリコサミノグリカン(GAG)とリン酸カルシウムとの結合形成の起点となるアミノ基の表面修飾方法について検討した。アミノ基を有する分子として,11-aminoundecylphosphonic acid (11-AUPA)または3-aminopropyltrimethoxysilane (3-APTS)を選択し,基材となるリン八酸カルシウム(OCP)表面へのアミノ基修飾を試みた。具体的には,11-AUPAもしくは3-APTSを溶解させた有機溶媒中でOCPを処理することで,表面修飾処理を施した。X線光電子分光やラマン分光分析により,OCP表面にそれぞれのアミノ基含有分子が修飾されたことが認められた。加えて,表面に修飾したアミノ基とGAGとの静電的相互作用による結合もしくは共有結合の形成に先立ち,修飾したアミノ基のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中における安定性を評価した。その結果,OCPの溶解もしくは修飾分子-基材間の結合の弱さに起因し,修飾した分子の安定性が乏しいことが示唆された。このことから,修飾したアミノ基の安定性を向上させるため,化学修飾処理後のOCPの加熱処理もしくは,OCPよりも溶解度の低い基材への修飾を試みた。その結果,加熱処理によって,OCPに修飾した11-AUPAおよび3-APTSの安定性が改善することが示唆された。また,基材の溶解度によっても安定性が向上する傾向にあった。加えて,PBS中でのゼータ電位測定により,アミノ基の修飾量は,選択した修飾試薬の種類によって異なることも示唆された。これら本年度に実施した検討により,基材固定型もしくは徐放型骨形成タンパク質結合GAGモデルの設計指針を見出すことができた。本年度は,リン酸八カルシウム表面に修飾したアミノ基含有分子を基に,基材との結合強度の異なる骨形成タンパク質-グリコサミノグリカン(GAG)固定化モデルを構築する予定であった。しかし,OCP表面に修飾したアミノ基含有分子のリン酸緩衝食塩水中での安定性が乏しく,グリコサミノグリカンとの結合形成が困難であった。そのため,より安定的に修飾したアミノ基を固定化できるリン酸カルシウム基材の処理方法や,基材の選択についてさらなる検討が必要となった。化学修飾処理後の加熱処理や基材の選択が,アミノ基の安定性に重要な因子であることが判明したことから,その点を踏まえて,OCPよりも溶解性の低い加水分解型リン酸八カルシウム(OCP)を基材として選択する。加水分解型OCPについてもOCPと同様,骨伝導性を示すことがこれまでに報告されている。加水分解型OCPへの安定的かつ高密度なアミノ基修飾が可能であることを確認し,その表面でのグリコサミノグリカン(GAG)との結合形成について検討する。これにより,リン酸カルシウム固定型GAG-BMP(骨形成タンパク質)モデルと徐放型GAG-BPMモデルを構築し,GAG-BMPの空間分布が間葉系幹細胞の骨芽細胞分化に与える影響について評価する予定である。

その結果,OCPの溶解もしくは修飾分子-基材間の結合の弱さに起因し,修飾した分子の安定性が乏しいことが示唆された。このことから,修飾したアミノ基の安定性を向上させるため,化学修飾処理後のOCPの加熱処理もしくは,OCPよりも溶解度の低い基材への修飾を試みた。その結果,加熱処理によって,OCPに修飾した11-AUPAおよび3-APTSの安定性が改善することが示唆された。また,基材の溶解度によっても安定性が向上する傾向にあった。加えて,PBS中でのゼータ電位測定により,アミノ基の修飾量は,選択した修飾試薬の種類によって異なることも示唆された。これら本年度に実施した検討により,基材固定型もしくは徐放型骨形成タンパク質結合GAGモデルの設計指針を見出すことができた。本年度は,リン酸八カルシウム表面に修飾したアミノ基含有分子を基に,基材との結合強度の異なる骨形成タンパク質-グリコサミノグリカン(GAG)固定化モデルを構築する予定であった。しかし,OCP表面に修飾したアミノ基含有分子のリン酸緩衝食塩水中での安定性が乏しく,グリコサミノグリカンとの結合形成が困難であった。そのため,より安定的に修飾したアミノ基を固定化できるリン酸カルシウム基材の処理方法や,基材の選択についてさらなる検討が必要となった。化学修飾処理後の加熱処理や基材の選択が,アミノ基の安定性に重要な因子であることが判明したことから,その点を踏まえて,OCPよりも溶解性の低い加水分解型リン酸八カルシウム(OCP)を基材として選択する。加水分解型OCPについてもOCPと同様,骨伝導性を示すことがこれまでに報告されている。加水分解型OCPへの安定的かつ高密度なアミノ基修飾が可能であることを確認し,その表面でのグリコサミノグリカン(GAG)との結合形成について検討する。これにより,リン酸カルシウム固定型GAG-BMP(骨形成タンパク質)モデルと徐放型GAG-BPMモデルを構築し,GAG-BMPの空間分布が間葉系幹細胞の骨芽細胞分化に与える影響について評価する予定である。
広角望遠鏡を用いた南天銀河のサーベイ観測による銀河系の全体構造の研究

銀河系の全域にわたり、星が誕生する材料となる星間分子雲の分布と性質を調査するために、私たちは口径60cmのサーベイ専用広角電波望遠鏡を独自に設計・製作し、日本国内から観測を行ってきたが、観測を日本から見ることのできない南の空に広げるため、60cm広角望遠鏡を南米チリのアンデス山中にあるヨーロッパ南天天文台ラシヤ観測所に設置して観測を実行した。その結果、波長1.3mmの一酸化炭素(CO)輝線による南北対称な銀河面サーベイを、世界で初めて行うことができた。特に銀河系の中心領域については、南半球からの観測の優位性を生かして非常に良質のデータを得ることができた。その解析から、銀河系中心部の分子ガスが、銀河系円盤部に比べて1桁高い圧力を持っていることが明らかにされた。また、CO輝線と水酸基(OH)吸収線の強度を定量的に比較することにより、銀河中心領域の分子ガス雲の視線に沿った奥行きを割り出す解析手法を開発し、それによって運動学的モデルから独立の銀河系中心領域のフェース・オン地図(銀河系を上から見たならばこう見えるであろう、という地図)を世界で初めて作成して発表した南半球でしか見ることのできない銀河系の伴銀河、大マゼラン雲の観測を行い、分子ガスの性質を銀河系のそれと比較した。その結果、大マゼラン雲中の30Dorから南に連なる2キロパーセクの分子雲複合体は、星形成の条件は整っているもののまだほとんど星が誕生していない特異なものであることが明らかにされた。●ヨーロッパ南天文台に設置した60cm電波望遠鏡による観測の実施以下のように7回にわたりチリ共和国のヨーロッパ南天文台に研究者および研究協力者を派遣し、60cm電波望遠鏡による観測および装置の整備を行った。その結果、以下の研究成果を得た。平成9年5月11日- 6月22日:森野潤一平成9年6月7日- 6月28日:半田利弘平成9年6月16日- 8月9日:臼田功美子平成9年7月28日- 8月14日:長谷川哲夫平成9年7月28日- 9月27日:澤田剛士平成9年9月10日- 9月27日:長谷川哲夫平成9年10月5日-11月9日:半田利弘(銀河面サーベイ)観測の方針を共同研究グループ内での相談に基づいて決め、観測は東京大学のグループよりおよそ2カ月交代で派遣する研究者が中心になって行ってきた。必要に応じて、チリ大学、スウェーデンおよびヨーロッパ南天文台の共同研究者が補助している。銀河面第4象限の観測を進め、銀経方向の観測点を密にするとともに観測範囲を銀緯方向にも拡大した。(銀河中心領域)銀河系内でも特に星間ガスの状態が異なると予想される銀河中心領域の広域観測を行った。既存の観測に比べて観測領域を格段するとともに、南点では銀河中心の観測高度を高く取れることと、使用している分光器が広い帯域幅を持っているために、従来よりも信頼性の高いデータを得ることができた。この結果、以前の結果よりも1.3mm輝線の強度が強いことがわかり、2.6mm輝線のデータと比較した強度比が、改訂されることになった。1.昨年度に引き続き、チリのヨーロッパ南天天文台(ESO)ラシヤ天文台に設置した60cm電波望遠鏡を使用して、南天銀河のサーベイ観測を行った。銀河系中心領域、銀河系第4象限の観測を行うとともに、銀河系第1象限の一部も観測して、我々が長野県野辺山より行っている北天のサーベイときちんと接続できるようにした。また、りゅうこつ座イータ領域、みなみのかんむり座暗黒星雲の観測をすすめた。2.これまでに取得したデータを整理して、保存性が高く利用にも便利なCD-ROMに記録した。3.観測データを解析して、銀河系の全体像を構築する研究を進めた。

分担者のTom Dame博士、Leonardo Bronfman博士が堤供するCO J=1-0波長2.6mmスペクトル輝線のデータと、東大のグループがチリで取得したCO J=2-1波長1.3mmスペクトル輝線の詳細な比較を行い、その強度比から、銀河系内部の各所における分子ガスの物理状態を明らかにした。その結果をより深く検討するために、ラセレナおよびサンチアゴを訪問して関連研究者による研究打ち合わせ会議を行った。4.データを取るための観測装置の維持・改良を行った。特に、望遠鏡の駆動制御のパラメータを改良して望遠鏡を素早く天体に向けられるようにした結果、観測の能率が約50%向上した。これまでに取得した観測データの整理・解析とその発表、出版、および出版準備を行った。これまでに野辺山の60cm望遠鏡1号機およびチリの60cm望遠鏡2号機を用いて取得したデータをまとめ、分子学の物理状態の観点から見た銀河系の全体像を構築して発表した。その成果は6月に米国で行われた国際研究集会で招待講演として、また10月にインドで行われた国際研究集会では一般講演として発表した。銀河系中心部の分子ガス雲ついては、引き続きその性質の解明を進めるとともに、文献中のデータとの比較を行い、この三次元的な空間分布を世界で初めて明らかにした。銀河円盤部については、チリで観測した第4象限のデータの解析を多面的に進めて発表した。受信機の改良を引き続き行った。特にSISミクサー素子のバイアスの安定化に取り込み、ミクサーブロックの改良、バイアス回路の改良、印可磁場強度の最適化をさらに進めた。また、アンテナ駆動システムのチューニングを行い、観測効率を向上させることに成功した。観測の自動化と一部のリモート化に取り組んだ。今後はデータのさらに深い分析を行うとともに、CD-ROM形式でのデータ配布も行いたい。
タバコ培養細胞の細胞板形成に関与する多糖類

植物細胞の細胞分裂は細胞板形成によって二つの娘細胞となり、また多くの場合に細胞板は後の伸長軸と垂直方向に形成されるなどの特徴があるが、これらは細胞壁の存在と密接不可分である。そこで、これらの形態的側面を物質面からも明らかにすることを目的に、同調培養細胞の細胞分裂周期における細胞壁多糖類を調べた。(1)まず、タバコBY-2細胞でアフィディコリン処理によるG1/Sアレストを解除した同調培養では、細胞壁多糖類は細胞周期の各期を通してほぼ一定の割合で増加していた。ペクチン、ヘミセルロース、セルロースの各画分の量も細胞周期を通じて増加していたが、各期での特徴的変化は見いだせなかった。また単糖組成では細胞周期にともなう特徴的な変化はなかった。さまた、培地中に分泌される細胞外多糖類も細胞周期を通してほぼ一定の割合で増加していた。(2)次に、細胞板形成の時期に焦点を合わせ、微小管重合阻害剤プロピザミド処理を加えM期のアレストを解除して高度に同調させた。この場合にも細胞壁全体の分画、中性糖組成では目立った変化はなかったが、調製した細胞壁をラミナリアーゼで処理すると12時間後に可溶化してくるグルコースの量が増加した。また、細胞壁を24%KOHで抽出し、いわゆるマトリックス多糖類中のβ-1,3-グルカンをグルスペシ-法で定量したところ、やはり同じ時期にピークが観察された。以上は、細胞板形成にあたり細胞板に、β-1,3-グルカンが存在するという報告と対応するものと考えられ、形態学的な知見が生化学的インフォメーションに拡張されたものと評価できる。
間質性肺傷害の防御因子としての肺胞11型上皮細胞の分子生物学的検討

間質性肺疾患には,特発性間質性肺炎(IIP)を初めとする予後不良な疾患群が含まれており,それらに共通する病態は不可逆的な肺線維化形成である。間質性肺傷害を受けた組織がRemodelingへと進むことなくRepairするには,肺胞上皮が速やかに再生する必要がある。最近,Renin-Angiotensin系が肺の線維化を誘導すること,その機序に肺胞II型上皮細胞のアポトーシスが関わること等を示唆する報告がなされた。本研究では,ブレオマイシン気管内投与よる間質性肺傷害ラットモデルを用い,特に,Angiotensin II receptor 1 (AT1)を介する間質性肺傷害と肺線維化の促進機構について明らかにし,さらにAT1 selective antagonist (candesartan)が間質性肺傷害・肺線維化の治療薬として有効かについて検討した。AT1陽性細胞は,非傷害下で肺胞II型上皮細胞,肺胞マクロファージ,血管平滑筋細胞,血管内皮細胞等,細胞非特異的な発現分布を示した。AT1は,傷害早期(day7)では好中球と肺胞マクロファージに,傷害晩期(day21)では間質マクロファージと線維芽細胞に強く発現していた。AT1発現を定量化すると,BAL液沈渣では傷害早期に,肺ホモゲネート画分では傷害晩期に有意な発現増加を認めた。肺ホモゲネート画分のhydroxyprolineは,肺傷害ラットで有意に増加したが,Candesartan投与によって有意に抑制された。BAL液中の好中球と肺胞マクロファージ数増加もまたCandesartan投与によって抑制された。このように,たとえAT1が強発現していたとしても,そのantagonistを投与することによって,間質性肺傷害並びに肺線維化形成を抑制することが可能であることが示され,臨床への応用が期待できる成果が得られた。肺胞II型上皮細胞は、肺傷害に際しサーファクタントの分泌機能および上皮再生の前駆細胞としての役割を介し、傷害に対して防御的に働く。一方,アンジオテンシンII(ATII)は心線維化の増悪因子の一つとして重要視されている生理的物質であるが,肺においても,肺線維芽細胞の活性化,肺胞上皮へのアポトーシス誘導などの作用を示すことが知られており,肺線維化の促進因子である可能性が考えられている。そこで本年度は,ATIIが肺胞II型上皮細胞の増殖能に直接影響するか,in vitro下に検討した。ラット肺より肺胞II型上皮細胞を分離し,種々の濃度のATII存在下で48時間培養し,細胞内への3H-thym idine取込み量を定量した.その結果,ATIIの有無による取込み量の変化は無く,ATHは肺胞II型上皮細胞のDNA合成に影響しないことが明らかにされた。次に,プレオマイシン経気管投与によるラット肺線維症モデルを用いて、ATII受容体AT1の選択的拮抗薬であるcandesartan cilexetilに抗線維効果があるかどうかを検討した。拮抗薬非投与群では,プレオマイシン投与後14日目より肺ハイドロキシプロリンの増加を認めたが,拮抗薬投与群では肺ハイドロキシプロリン量の増加は有意に抑制された。さらに,組織形態学的検討においてもブレオマイシン投与により惹起される胞隔炎と線維化所見は,拮抗薬投与によって明らかに軽減した。以上よりcandesartan cilexetilには抗線維化作用のあることがvivo実験により示された。次年度は、AT1 receptorの肺組織内局在を明らかにし拮抗薬の標的細胞を同定する。