hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
看護師の問題解決力向上支援システムの完成と普及－自律的な問題解決の推進－

今年度は、スタッフ看護師が活用できる「問題解決のための改善ガイド」を作成するために必要な知識として「問題を解決・改善するための具体的な克服方法」を見いだす研究、すなわち、全国のスタッフ看護師が直面している問題に対し、どのような克服方法を用いたのかを明らかにすることを目標としていた。しかし、それには至らなかった。その理由は、次の通りである。収集したデータを分析した際、スタッフ看護師が、生じている問題に対し用いた克服方法が様々であることを確認した。また、例えば、同じ問題が発生していてもスタッフ看護師によって、用いた克服方法が異なったり、同じ克服方法を用いても、一方は有効であったが、他方は無効であったという状況が発生した。そこで、当初、行っていた分析方法を変更することとした。具体的には、当初、克服方法の分析は、問題との関係とその有効性を踏まえ行っていた。しかし、思うように分析を進めることができなかった。その理由は、分析視点のブレである。これにより、意味内容の類似性を見抜いたり、記述を忠実に反映したカテゴリを命名したりできなかった。Berelson,B.の方法論を参考にした看護教育学における内容分析は、研究目的に応じて、「研究のための問い」と「問いへの回答文」を作成する。これは、分析中に一貫して用いることにより視点を固定することができ、妥当性の高い結果の産出を可能とする。すなわち、この研究方法論を適用し、正確に分析の過程を踏むことで、問題全般に対する克服方法を明らかにできる。また、上記分析を通し明らかになった克服方法を、再度、問題と照合することにより、「問題解決のための改善ガイド」に一例として掲載できる。計画通りに分析を進めていたが、データの特徴を見抜くことができずに、分析をやり直す必要が生じた。具体的には次の通りである。これにとらわれ、どのように分析を進めたら良いのか迷走することとなった。そこで、Berelson,B.の方法論を参考にした看護教育学における内容分析を再度学習し、当初行っていた分析の不適切な部分を発見することができた。そのため、再度、本方法論の手順に則り、正確に分析することに挑戦している。Berelson,B.の方法論を参考にした看護教育学における内容分析を用い、スタッフ看護師が直面している問題に対する克服方法を明らかにする。また、研究分担者にその結果を提示し、分析の適切性やカテゴリ名について、意見をもらい、精度を高める。本事業「看護師の問題解決力向上支援システム」は、4段階を経て完成する。今年度は、4段階のうち、第1段階に位置付き、スタッフ看護師が職業上直面している問題の現状把握と問題に対する克服法の全容解明を行った。スタッフ看護師が職業上直面している問題のうち最も頻度が高かった問題とは「時間内に業務を終えられず、帰宅時間が遅くなる」であり、次いで「自己学習に取り組む時間を確保することが難しい」「仕事か家庭のいずれかを優先せざるをえず、もう一方がおろそかになる」であった。これらは、いずれも時間に関係するという共通点がある。次いで頻度が高かった問題は、「必要とされる最新の知識や技術をなかなか修得できない」であった。これらはいずれも、スタッフ看護師個々の努力を要するが、それにより解決可能という共通点を持つ問題であった。これらは、看護師個々にとって解決可能な問題とすべく「改善ガイド」を作成し、提示することにより発生頻度を減少できる可能性を示唆する。また、現在、スタッフ看護師が職業上直面する問題に対する克服法の解明に向け、郵送法による全国調査を実施している。具体的には看護管理責任者から研究協力への承諾の得られた46施設に就業するスタッフ看護師1129名に質問紙を配布し、職業上直面する問題とその克服法に関する自由回答を求めた。問題に対する克服法を記述した者は、213名であり、具体的な記述について、Berelson,B.の方法論を参考にした看護教育学における内容分析を用い、分析を行っている。現在、スタッフ看護師が職業上直面する問題に対する克服法の解明に向け、Berelson,B.の方法論を参考にした看護教育学における内容分析を用い、分析を行っている。しかし、具体的な記述が少なく、更なるデータ収集が必要であると考えている。そのため、計画よりもやや遅れている。

具体的には、当初、克服方法の分析は、問題との関係とその有効性を踏まえ行っていた。しかし、思うように分析を進めることができなかった。その理由は、分析視点のブレである。これにより、意味内容の類似性を見抜いたり、記述を忠実に反映したカテゴリを命名したりできなかった。Berelson,B.の方法論を参考にした看護教育学における内容分析は、研究目的に応じて、「研究のための問い」と「問いへの回答文」を作成する。これは、分析中に一貫して用いることにより視点を固定することができ、妥当性の高い結果の産出を可能とする。すなわち、この研究方法論を適用し、正確に分析の過程を踏むことで、問題全般に対する克服方法を明らかにできる。また、上記分析を通し明らかになった克服方法を、再度、問題と照合することにより、「問題解決のための改善ガイド」に一例として掲載できる。計画通りに分析を進めていたが、データの特徴を見抜くことができずに、分析をやり直す必要が生じた。具体的には次の通りである。収集したデータを分析した際、スタッフ看護師が、生じている問題に対し用いた克服方法が様々であることを確認した。また、例えば、同じ問題が発生していてもスタッフ看護師によって、用いた克服方法が異なったり、同じ克服方法を用いても、一方は有効であったが、他方は無効であったという状況が発生した。これにとらわれ、どのように分析を進めたら良いのか迷走することとなった。そこで、Berelson,B.の方法論を参考にした看護教育学における内容分析を再度学習し、当初行っていた分析の不適切な部分を発見することができた。そのため、再度、本方法論の手順に則り、正確に分析することに挑戦している。月に1回必ず研究分担者と検討会議を開催し、着実かつ、正確に研究を進めていく。Berelson,B.の方法論を参考にした看護教育学における内容分析を用い、スタッフ看護師が直面している問題に対する克服方法を明らかにする。また、研究分担者にその結果を提示し、分析の適切性やカテゴリ名について、意見をもらい、精度を高める。当該助成金が生じた理由は、研究の遅れが原因と考えられる。それは、分析を進めながら追加のデータ収集の必要性を見極めていたためである。本研究は、郵送法による質問紙調査を行っている上、その対象を無作為に抽出しており、研究協力の依頼から郵送費や印刷費が発生する。また、全員が承諾して下さる訳ではないため、複数発送する必要がある。さらに、返送されたデータを入力する必要もあり、これらを行うために使用する。次年度使用が生じた理由は、再分析が必要となったことによる研究の遅れである。現在、再分析を進めており、それに必要な消耗品費が必要である。また、分析結果を研究分担者と確認し、精度の向上を目指した検討を行うため、旅費が必要となる。
脂質平面膜法による視細胞光情報変換イオンチャネルの再構成

脊椎動物の視細胞は光刺激に対して過分極性の受容器電位を発生する。これは外節膜上に分布するcGMP依存性カチオンチャネルが閉じるためである。ロドプシンの光吸収に始まり細胞内cGMP減少に至る分子径路が明らかになっている現在、このカチオンチャネル蛋白を同定単離しその分子的性質を明らかにすることは焦眉の課題である。本研究計画はこのcGMP依存性チャネル蛋白の同定と単離を目指して出発した。62年度はチャネル蛋白の同定とチャネル活性の再現に重点を置いた。カエル桿体外節から内在性膜蛋白を調整し、光親和性ラベルにより66Kと250Kの二つの未知のcGMP結合性蛋白を同定した。また内在性膜蛋白を脂質平面膜に再構成することにより2種類のcGMP依存性チャネル活性を再現できたので、上記二つの蛋白が目指すチャネル蛋白であることが強く示唆された。63年度はこれらの蛋白を精製するとともにそれらの抗体を作製することに主眼を置いた。主として250K蛋白を中心に部分精製を行い、リポソーム再構成によるチャネル活性の再現に成功した。また250Kと66Kのバンドから抽出した蛋白を抗原として各々のポリクロナル抗体を得ることができた。250K抗体を用いて免疫電顕法により外節膜上の分布を検討した結果、むしろ円板膜上に強い標識が認められた。これはcGMP依存性チャネルが円板膜上に多量に分布するという最近の知見と一致する。更に興味深いことに250K抗体と66K抗体が交叉することが判明し、250Kが66Kの前駆体かもしくは両者がそれぞれ違うタイプのcGMP依存性チャネルとして振舞う可能性が示唆された。最近ウシ桿体では63K蛋白がチャネル蛋白であるとの報告が出されたが、これはカエルの66Kに相当するものと思われる。今後250Kと66Kの完全精製と再構成を続行し、これらの疑問に答えていきたいと考えている。脊椎動物視細胞は光刺激によって過分極応答を示す.これは光刺激によって細胞内cGMPが減少し,細胞膜上のcGMP依存性Naチャネルが閉じるためであることが確実になってきた.最近の興味の中心はこのcGMP依存性Naチャネルに移りつつあり,その分子の同定,分離,精製が世界中で急ピッチで進行している.本研究計画では, (1)cGMPの光親和性ラベルを指標にその蛋白を同定し, (2)遠心分離とクロマトグラフィーによりこれを精製し, (3)精製蛋白を平面膜上に再構成して電気生理学的にチャネル蛋白を確定することが目標である.さらに,(4)精製蛋白の抗体(IgG)を調製し,(5)これを用いた免疫電顕法により,その蛋白の視細胞内分布を調べる.また多量の精製蛋白が得られるようになれば,その一次構造を決定することが最終目標である.62年度では上記の(1)(2)(4)を達成することが主な目標であり,これらはほぼ完了した.すなわち,蛙視細胞をまず膜内在性蛋白,表在性蛋白,可溶性蛋白に分け, cGMPの光親和性ラベルを行い,膜内在性分画の250KDa, 100KDa, 92KDa,のバンドに標識を認めた.このうち100KDaと92KDaはcGMP分解酵素であることが判明し, 250KDaがcGMP依存性Naチャネルであることが示唆された.

また内在性蛋白を平面膜に再構成することにより, 3種類のNaチャネルを同定することができ,このうちの一つがcGMP依存性,もう一つがcGMPおよび, Ca^<++>依存性であることが分かった.光親和性標識時にCa^<++>を増量させると新たに66KDaに標識が認められることから66KDaが2番目のチャネルに対応する可能性もある.本年度はまず250KDa蛋白の精製に主力を注ぎ,ほぼその精製に成功するとともに,それに対する抗体(IgG)の精製も完了した. 63年度は250KDaの平面膜への再構成と抗体を用いた免疫電顕を行うと共に,新たに興味の対象となった66KDa蛋白の精製と再構成に着手し, 250KDaとの比較を行うつもりである.我々は前年度において、カエル桿体外節から調整した内在性膜蛋白を用いて66Kと250Kの二つのcGMP結合蛋白を同定するとともに、脂質平面膜法によりcGMP依存性カチオンチャネル活性の再構成に成功した。本年度はこれらの蛋白を精製するとともにその抗体を作製することに主眼を置いた。主として250K蛋白に注目し、庶糖密度勾配遠心法によるこれの部分精製と、リポソーム再構成法によるチャネル活性の再現に成功した。250Kと66Kの完全精製は現在続行中である。SDSゲル上の250Kと66Kのバンドから抽出した蛋白を抗原として各々のポリクロナル抗体を得ることができた。250Kに対する抗体を用いて免疫電顕法により外節上での分布を調べたところ、外節膜よりもむしろ円板膜上に強い標識が認められた。この結果はcGMP依存性チャネルが円板膜上にも多量に存在するという最近の知見と一致する。一時250Kはスペクトリンではないかとの疑いがもたれたが、その可能性はこの結果により否定された。今後66K抗体を用いて同様の試みを行う予定である。興味深いことに250K抗体と66K抗体が互いに交叉することが判明した。250Kは熱処理により分解することはないので66Kが250Kのサブユニットである可能性は少なく、むしろ250Kが66Kの前駆体であるのかもしれない。あるいはこの両者が違うタイプのcGMP依存性カチオンチャネルとして機能している可能性もある。最近ウシ桿体外節において63Kと39Kの二つの蛋白がチャネル候補蛋白であると示唆されているが、上記の66Kはおそらくウシの63Kに対応するものと思われる。近い将来、250Kと66Kの完全精製とその再構成によりこれらの疑問に答えていきたい。
動原体に普遍的なタンパク質Mis12の均等染色体分配における必須機能の解明

CENP-Aのセントロメア局在に必須な分裂酵母セントロメアタンパク質Mis18のヒトホモログhMis18の細胞内局在および、CENP-Aとの局在依存性を調べた。hMis18は分裂酵母同様、M期中期に動原体に局在せず、M期終期以降にセントロメア領域に局在することを見いだした。また、CENP-A RNAiではhMis18はセントロメアに局在したことから、ヒトhMis18がCENP-Aには依存せず局在することを示した。以上の内容はDevelopmental Cell誌に公表した。RNAi法により、ヒトhMis12がスピンドルチェックポイントタンパク質Bub1,Bub3,BubR1の動原体局在に必要であることを明らかにした。また免疫沈降法により、これらのタンパク質がM期特異的に物理的相互作用していることも見いだした。RNAi法によりBub1,Bub3,BubR1を欠失させてもhMis12は動原体に局在すること、またBub1,BubR1の局在はCENP-Aには依存しないことから、CENP-Aとは独立にhMis12がこれらスピンドルチェックポイントタンパク質の足場となる動原体構造を形成していることが示唆された。さらに分裂酵母においてもBub1,Bub3の動原体局在がMis12に依存することを見いだした。Mis12がBub1,Bub3を動原体に局在化させる機能は、進化的に保存されていることが示唆された。次にヒトhMis12のM期における動原体構築機能を調べるために、ノコダゾール停止した細胞抽出液を用いてFLAG-hMis12を免疫沈降し、共沈タンパク質をマススペクトロメトリーを用いて同定した。hMis12以外に、c20orf172,DC8,PMF1,AF15q14,HEC1,Nuf2,Spc24,Spc25,Zwint-1,Bub3の部分ペプチドが検出された。CBB染色の濃さ、および検出されたペプチド断片の数からhMis12は特にc20orf172,DC8,PMF1,AF15q14,HEC1,Nuf2,Spc24,Spc25,Zwint-1と強く結合していることが示唆された。c20orf172,DC8,PMF1は主に間期の細胞抽出液を用いても検出されており、細胞周期を通じてhMis12と複合体を形成していることが示唆された。質量分析により同定されたhMis12複合体の細胞内局在を調べた。hMis12,c20orf172,DC8,PMF1は細胞周期を通じてほぼ同様の挙動を示し、HEC1はM期特異的にhMis12と挙動をともにした。M期中期細胞においてhMis12はHEC1よりもやや内側に局在したことから、hMis12はc20orf172,DC8,PMF1と共に内部動原体プレートを形成することが示唆された。次にRNAi法によりhMis12,c20orf172,DC8,PMF1,HEC1を欠失させて各々の表現型を解析した。hMis12,c20orf172,DC8,PMF1のどれかを欠失させるとその他のタンパク質量も減少し、どれも似たM期欠損表現型を示した。これら4つのタンパク質がよりコアな複合体を形成して、共通の働きをしていることが示唆された。またRNAi後、染色体とスピンドルを生細胞で観察すると、スピンドルが安定な位置を保てず回転していた。この回転運動はhMis12複合体に含まれないCENP-A RNAiではほとんど観察されなかったので、hMis12複合体の欠損により特異的に起こることが示唆された。hMis12 RNAi後、アクチン重合阻害剤cytochalasinD、低濃度の微小管重合阻害剤ノコダゾールを添加すると、スピンドルの回転運動は抑制された。スピンドルの回転運動はcell cortexを構成するアクチンと、aster微小管に依存することが示唆された。またGFP-hMis12のM期局在を生細胞で観察すると、動原体のみならずcell cortexにもわずかながら観察された。hMis12複合体は、動原体と動原体微小管のプラス端との結合を安定化するのみならず、cell cortexとaster微小管のプラス端との結合も安定化していることが示唆された。
全方向型大強度パルスイオンビームを用いた立体形状物の表面改質

本研究の目的は、プラズマで満たされた真空容器に試料を置き、パルス高電圧を印加することで多量のイオンを注入し、材料改質を行うことである。一度に多量のイオンを注入するには、高密度のプラズマの生成が不可欠となる。また、1回に多数の試料にイオン注入を行うには、一定密度の大きなプラズマが必要である。そこで、6相交流電源を用いて、大面積の均一プラズマの生成を試みた。また、イオン注入用電源の電圧およびパルス幅を変化させ場合の、試料へのイオン注入深さと注入量について数値計算で評価した。真空容器は、ステンレス製で、内径680mm、長さ1200mmの円筒型とした。真空容器は油回転ポンプとターボ分子ポンプで10^<-4>Pa以上まで排気した。プラズマ生成には、6相交流電源(2kV、12kVA、60Hz)を用いた。電極は、直径10mm、長さ800mmのステンレス棒を円筒かご型(直径400mm)に配置した。生成したプラズマの密度測定には、電極端より約150mm内側に取り付けたシングルプローブ(タングステン製,φ0.5mm、5mm)を用いた。電源の出力電圧、放電電流および、プローブ電流は、計測ステーションを用いて計測し、パーソナルコンピュータでデータ処理した。作動ガスを窒素として、圧力28Paで真空容器に導入し、プラズマ生成を行った。その結果、作動ガス圧力を6Pa、電源電圧を1kVとしたとき、生成したプラズマ密度は、2×10^9cm^<-3>、電子温度は0.50.6eVであった。また、プラズマ密度は、中心から半径約40cm、軸方向に80cmの領域で、ほぼ一定であることがわかった。次に、イオン注入用電源の電源を10100kVで変化させた場合、金属の材料改質に必要な厚さまでイオン注入することは不可能で、熱拡散等と併用しなければならないことが数値計算によりわかった。そこで、6相交流電源を用いて、プラズマの生成を試みた。真空容器は油回転ポンプ(島津製作所GDH-1300)とターボ分子ポンプ(島津製作所TMP-1000L)で10^<-4>Pa以上まで排気した。電源の出力電圧、放電電流および、プローブ電流は、計測ステーション(横河電機WE7000)を用いて計測し、パーソナルコンピュータでデータ処理した。作動ガスをアルゴンとして、圧力28Paで真空容器に導入し、プラズマ生成を行った。その結果、作動ガス圧力を6Pa、電源電圧を400Vとしたとき、放電電流の最大値は110mA、生成したプラズマ密度は、3×10^9cm^<-3>、電子温度は0.5eVであった。プラズマ密度は、入力電力に比例して、時間的に7%程度変化した。また、プラズマ密度は、中心から半径約16cmの領域で、ほぼ一定であることがわかった。次に、作動ガス圧力を28Paの範囲で変化させたとき、プラズマ密度はガス圧力に比例して増加することがわかった。

次に、イオン注入用電源の電源を10100kVで変化させた場合、金属の材料改質に必要な厚さまでイオン注入することは不可能で、熱拡散等と併用しなければならないことが数値計算によりわかった。
鉱物・岩石中の軽元素の存在状態とその挙動の研究

本研究では、従来定量分析が困難であった鉱物・岩石及び無機化合物中における水素、ほう素等の軽元素の定量分析と酸素同位体比分析、及び稀土類元素を含んだ微量元素の定量分析を二次イオン質量分析計を用いて行なった。これまで鉱物試料にSIMSの適用が遅れ、成果が少ない最大の理由は、(1)絶縁体である、(2)組成が複雑である、という鉱物のもつ二つの性質に起因する。(1)は帯電による二次イオンの安定性を抑制、(2)は質量スペクトルを複雑にする原因となる。本研究では(1)は金の薄膜の蒸着と^<16>O^-を一次ビームに用いる事で解決し、(2)は設備備品として購入した一次イオンを精製するマスフィルターを用いる事とスペクトルを高分解能で分解する事で解決した。本研究における始めの数年間は以上の手法の開発のために基礎研究を行なった。そして完成された測定手法は深さ方向分析能を組合せることで、以下の様な成果を挙げる事ができた。期間中になされた主要な課題と内容の概略を下に示す。【○!1】マグマ結晶間(輝石、斜長石、クロムスピネル)における陰・陽イオンの挙動の研究を行ない、イオンの元素分配は結晶構造によって制御される事を陰イオンについても確認した。【○!2】標準岩石をガラス化させた試料について軽重元素に至る微量元素をSIMSにより検量線法を用いて定量的に分析する方法を開発した。【○!3】各種のメリライト鉱物中に^<18>O^-を1000ー1300°Cで拡散させ、拡散プロファイルを測定し、酸素自己拡散での格子拡散と転位拡散速度を精密に解析した。【○!4】パリクレース(MgO)など無機物質中における微量元素の拡散速度の測定を行ない、一つの拡散プロファイルから格子拡散と転位拡散速度を解析する事に成功した。【○!5】気相合成されたダイヤモンド膜中の微量ほう素の深さ方向プロファイルを測定した。以上の成果の外にX線結晶構造解析により、酸化物超伝導体その他の酸化物中の酸素含有量と構造の解明も行なった。本年度は、本課題第一年度にあたるため、特に課題遂行のための設備開発及びシステム設計に力を注いだ。筑波大・分析センターの2次イオン質量分析計は世界最高水準の性能を有しているが、1次イオンビームに微量に混入しているH,C,N,O等の不純物とサンプルチャンバー内の残留ガスが軽元素分析の妨害要素として働いていた。本補助金により購入した1次イオンビーム質量フィルター(カンカ社純製オプションを本課題用に改良したもの)を取り付けた結果、純粋な【Ar^+】,【O(^+_2)】,【O^-】の各一次イオンビームが使用可能となり、同時に、サンプルチャンバー中の真空度が【10^(-8)】ton台から【10^(-9)】ton台に良くなった。この基本性能の向上は、軽元素分析の妨害レベルを大巾に減少させていることが期待されるが、納入・取付完成時期が1986年2月であったため、定量的なデータは得られていない。

この1次イオンビーム質量フィルターの開発・改良と平行して、微量元素の拡散試量作成法・測定法・解析法の研究を行なった。拡散試料の作成は定方位の単結晶上に多成分薄膜を形成する方法を開発し、その試料をアニールすることにより、複数の元素を同時に結晶中に拡散させることに成功した。拡散プロファイルは2次イオン質量分析計(改造前)により測定された。その測定のために、深さ方向多元素同時分析用プログラムを新しく作成し、自動的にデータ収集を可能にした。この新測定法の開発により、従来の方法では拡散係数を求めるために少なくとも数0μmの拡散プロファイルが必要であったが、数百nmの拡散プロファイルにおいても拡散係数の算出が可能になった。その拡散係数算出のために、種々の拡散理論式を最小二乗法によりあてはめることができる拡散解析用プログラムを作成した。このプログラム作成にあたり、本補助金により購入したBASIC・FORTRANコンパイラを使用した。本年度は、本課題第二年目にあたる。昨年度末に納入された「2次イオン質量分析装置用1次イオンビーム質量分析装置」を利用して、以下に箇条書する新たな知見・成果が得られた。1.従来、我々の実験室で使用していた酸素の1次イオンには、【^(16)O】,【^(17)O】,【^(18)O】の同位体の他に、【O_2】,【H_2】O,【N_1】,【N_2】,【CO_2】,CN,Ar,Cl等の妨害イオンが存在していたことが判明した。これらの妨害イオンは1次イオンビーム質量分析装置を使用することにより完全に除去可能となり、現在では同位体的にも純粋な【^(16)O】の1次イオンビームを使用可能となった。2.その結果、鉱物中に含まれる酸素の分析・酸素同位体の分析が始めて可能になった。何故なら、酸素には質量数16,17,18の3つの同位体があるが、この内、160の2次イオンは1次イオンビームから30%程度の混入がある。しかし、17,18の酸素は鉱物を構成する酸素のみから発生するからである。3.1次イオンビーム中から極微量含有していたFe,Niのイオンも除去可能になったため、FeとNiの分析限界が4桁下がった。このことより、1次イオンビームの純化は軽元素のみならず、重元素の分析に対しても重要であることが判明した。4.新しく開発した酸素分析技術を、メリライト中の酸素の自己拡散の研究に適用した。得られた拡散プロファイルは、従来知られていた体積拡散によるものに加えて、転位を利用した高速路拡散のプロファイルが存在することを示した。これは、酸素の自己拡散が、酸化物中で、転位により従進されることを示す初めての証拠である。今年度に行なった研究によって得られた新らたな知見・成果.1.2次イオン質量分析装置に取り付けた1次イオンビーム質量分析装置の調整が完了し,ビームの安定性(1%/分),分解能(M/ΔM=100300),収束性(最小1um)を達成した.2.鉱物・岩石中の全元素の存在状態とその挙動の過程を分析するために開発した二次イオン質量分析法の新らしい分析法の総説を発表した.3.マントルの加水溶融により形成されるマグマから固体が晶出するとき,元素が如何に分別されるかを研究し発表した,それによると全ての元素は固体の結晶構造に支配されて個体とマグク間で分配される.4.石英中の水素の挙動は,変成作用時の岩石の流動を支配するといわれている.この命題を分析化学的に明らかにするため,本課題で改良された2次イオン質量分析装置を使用して,石英中の水素の分析法の確立を試みた.結果は,直径1umの領域において,0.5ppm以上存在する水素の定量分析が可能になった.
口腔癌先制医療への唾液 microRNA の応用

近年、microRNA (miRNA)が体液中に安定な状態で存在し、その検出が可能であることから種々の悪性腫瘍において有用なバイオマーカーとなることが報告されている。本研究では、口腔癌患者の唾液あるいは血清において特異的に存在量が変動するmiRNAを探索した。その結果、miR-26a、miR-191など10種類のmiRNAの存在量が口腔癌患者の血清において有意に低下していた。さらに、その中のmiR-26aはヒト口腔癌細胞に対して増殖抑制効果を示した。以上の結果より、口腔癌において特定のmiRNAがバイオマーカーや先制医療のツールとして有用となる可能性が示唆された。口腔扁平上皮癌の診断や予後予測に有用なバイオマーカーは現在までに報告されていない。MicroRNA (miRNA)は約22塩基対の2本鎖のRNAであり、蛋白質へ翻訳されないノンコーディングRNAの一種である。MiRNAは標的mRNAの3'-非翻訳領域に結合することによりその蛋白翻訳を阻害することが知られている。癌においてmiRNAは癌遺伝子様あるいは癌抑制遺伝子様の機能を有することが広く知られている。さらに、miRNAは体液中に安定な状態で存在し、検出可能であることが報告されている。そこで、本研究では口腔扁平上皮癌患者の体液中において特異的に存在量が変動するmiRNAの同定を試みた。口腔扁平上皮癌患者と健常者の唾液および血清よりmiRNAを抽出精製し、マイクロアレイを用いた網羅的発現解析を行った。つづいて、有意に発現変動のあったmiRNAについてRT-PCR法で発現定量解析を行った。網羅的発現解析の結果、健常者と比較して口腔扁平上皮癌患者の唾液では、20種類のmiRNAの存在量が減少していた。一方、血清では、12種類のmiRNAの存在量が減少し、2種類の存在量が増加していた。その中でも、miR-191は唾液および血清に共通して存在量が減少していた。さらに、RT-PCR法では血清中のmiR-26aとmiR-191の存在量が口腔扁平上皮癌患者において有意に減少していた。また、miR-26aはヒト口腔扁平上皮癌細胞に対して増殖抑制効果を有していた。以上の結果より、口腔扁平上皮癌患者において血清中のmiR-26aとmiR-191は有用なバイオマーカーとなり、miR-26aは先制医療のツールとなる可能性が示唆された。口腔扁平上皮癌の早期発見や再発のモニタリングに有用なバイオマーカーは未だ同定には至っていない。microRNA (miRNA)は約22塩基対の2本鎖RNAであり、標的mRNAに結合することによりその蛋白翻訳を阻害する。近年、miRNAは体液中に安定な状態で存在し、その検出が可能であることから、種々の悪性腫瘍において有用なバイオマーカーとなることが報告されている。口腔扁平上皮癌患者と健常者の唾液および血清0.2 mlよりmiRNAを抽出精製し、マイクロアレイを用いた網羅的発現解析を行った。次に、有意な発現変動を認めたmiRNAについてリアルタイム定量化RT-PCR (qRT-PCR)法による発現定量解析を行った。さらに、上記両法において明らかな発現変動が認められたmiRNAについては、ヒト口腔癌細胞の増殖に対する効果をWST-8 assayにて評価した。マイクロアレイ解析の結果、健常者と比較して口腔扁平上皮癌患者の唾液では、20種類のmiRNAの存在量が低下していた。一方、血清では2種類の存在量が上昇し、12種類の存在量が低下していた。つづいて、qRT-PCR法では血清中のlet-7b/c、miR-17、miR-23a/b、miR-24、miR-25、miR-26a、miR-122a、miR-191の存在量が口腔扁平上皮癌患者において有意に低下していた。その中でもmiR-26aはヒト口腔癌細胞に対して増殖抑制効果を有していた。以上の結果より、口腔扁平上皮癌患者において血清中の特定のmiRNAがバイオマーカーおよび先制医療のツールとして有用である可能性が示唆された。口腔外科学口腔癌患者体液中で特異的に存在量が変動するmicroRNAを同定できた。生体内へのmicroRNAの補充方法について検討する。送達媒体としてアテロコラーゲンと核酸結合ペプチドの有用性を検討する。RT-PCR法による十分な発現定量解析が行えなかったため。RT-PCR法による発現定量解析と生体への合成核酸の投与方法について検討する予定である。
サブ分子スケールでの新たな分類体系に基づく層状液晶相の分子充填様式と物性の相関

「分子がどのように充填しているか」は,分子集合体の物性の理解には不可欠な情報である.単純な剛体分子モデルで凝集構造が表現されてきた液晶も同様であり,その代表である層状液晶相の凝集構造や物性は,アルキル鎖部分の形状が異なる二通りの分子充填様式を考慮した新しい枠組みで見直される必要がある.本研究では,その二つの分子充填様式の間を変化する層状液晶系を用いた物性測定を行い,層状液晶相の新しい枠組みに基づいた分子充填様式と物性の相関の包括的理解を目指した研究を行う.「分子がどのように充填しているか」は,分子集合体の物性の理解には不可欠な情報である.単純な剛体分子モデルで凝集構造が表現されてきた液晶も同様であり,その代表である層状液晶相の凝集構造や物性は,アルキル鎖部分の形状が異なる二通りの分子充填様式を考慮した新しい枠組みで見直される必要がある.本研究では,その二つの分子充填様式の間を変化する層状液晶系を用いた物性測定を行い,層状液晶相の新しい枠組みに基づいた分子充填様式と物性の相関の包括的理解を目指した研究を行う.
「21世紀型環境教育:観る・知る・作る・体験する・考える」の開発

我々は、「環境を通じて理科を学ぶ」という考えに基づいて新しい理科教育法の開発をおこなっている。「実行可能な経済性を持ちかつ生徒に能力・技能・行動力などを効果的に修得させることの出来るような教材の開発」を念頭に「ものづくり」「自然体験」が出来るような教材および教育プログラムの見直しおよび新規創出をしている。平成16年度までの途中成果としては「学校ビオトープの理科教材としての検討」「小中学校でも導入容易な簡便かつ正確な環境測定教材の開発」「分子模型の作成法の確立および分子模型の環境教育導入の試み」をおこなった。これらは主として中学校レベルのものとなっているが、小学校から高等学校までカバーできるものであると考えている。実際には「観る・知る・作る」教育としての環境測定法に関してより現場で採り入れやすくなることを想定して小スケールで測定がおこなえるような改良を考えた。また、「観る・作る・体験する」教育として分子模型作製を生徒が作製する実験としてとらえ、その手法について詳細に検討し、実験として創出した。さらに、「作る・知る・体験する」教育として学校ビオトープに着目した。従来「ビオトープ」は生物の分野に属するものがほとんどであったが今回の研究においてはそれ以外の要素も採り入れることを検討した。まず、人工河川をビオトープ内に導入し水質や土の堆積作用などを学ぶことを盛り込んだ。また、ビオトープ内に理科の授業において取り上げるような木や草花を植えることでビオトープがより身近になり、その結果として自然にも身近にふれあうことが出来ると考えた。その発展として河川から花崗岩・砂岩・安山岩などの岩石を採取し、それもビオトープ内に配置して岩石についても学ぶことが可能にもした。このビオトープの有効性については今後さらに検討していく予定である。使える時間数や授業の種類により選べる、またその学校にあった教材が選べる、環境教育の授業プログラムをつくることを行う。学年は、A「小学1・2年生用」、B「小学3・4年生用」、C「小学5・6年生用」、D「中学生用」の4つをつくる。教育内容は、「みる」「つくる」「しる」「する」「考える」の側面から解析してプログラムづくりを試みる。学習年齢が進むにつれ主に関わる側面を変えていく。このことが、児童や生徒の何らかの発達に裏付けられないか検討する。「みる」には、見る・観る・診るが、「つくる」には作る・造る・創るが、「しる」には、知る・理解するが、「する」には、経験する・体験する・行動するが含まれているであろう。そしてどの側面においても幾つかの「考える」事柄が見出せる。教科書の教材や報告されている教材を、「みる」「つくる」「しる」「する」のどの側面が主要に関わるか、適当な学習学年は何年か、分野は「水と土・植物と動物・資源とエネルギー」のどれか、で分類する。学年で4つに、分野で3つに分けるので、12の表にまとめて行く。この表は各校に適したプログラムを考えるための資料集なので、すでに報告されているもの、本特定研究で発表されたもの、自分達で進めているものをなかに入れていく。沢山の教材が書き込まれた12の表をつくることを進めている。次年度には、これらの表から教育内容を選びそれをつなげて、その学校に適したプログラムをくみ上げることを行う。地域・規模・学習時間帯を変えてのプログラム例を示して行く。
セリンプロテアーゼ阻害剤による海馬神経細胞保護効果の検討

心停止などの短時間脳虚血のあとに一時的に回復をみた患者の脳では、しばしば海馬CA1領域の錐体細胞の崩壊をきたす。この現象はスナネズミ両側頚動脈閉塞による一過性前脳虚血モデルにより再現され、海馬CA1領域に、数分間の前脳虚血後約72時間より錐体細胞死をきたしdelayed neuronal death(DND)と呼ばれている。我々はこれまでDNDがアポトーシスによることを明らかにし(Brain Res 806:274-277,1998)、低体温(Neurol Res 17:461-464,1995)あるいは薬剤によるDNDの抑制効果について、これまでのわれわれのスナネズミ一過性脳虚血モデルにおける海馬CA1領域の遅発性神経細胞死の研究をもとに、当大学薬理学教室の協力を得て、アポトーシス抑制物質、蛋白質分解酵素阻害剤(N-tosyl-L-phenylalanyl chloromethyl ketone;TPCK)の投与量、投与条件を模索しながら、スナネズミ一過性脳虚血モデルにおいて、遅発性神経細胞死をTPCKにより防御することの有効性を証明した(J Cereb Blood Flow Metab 18:819-823,1998)。今年度の研究実績としてさらにブドウ糖代謝阻害剤である2-deoxy-D-glucose投与によるDNDの抑制(Life Sci.64,193-198,1999)。および高体温による抑制効果の阻害作用を検討した(Brain Res 840:167-170,1999)。さらに最近、DNDがアポトーシスであることに対する反対意見が出てきているため、DNDがアポトーシスであることを神経線維内を移動する断片化DNAを証明することによりこれを明かとした(Brain Res Prot 4,140-146,1999,Stroke 31:231-239,2000)。遅発性神経細胞死の成因を解明することは、老人性痴呆の原因の解明にもつながると考えられ、最近の我々の研究も含めて明かとなった遅発性神経細胞死の本質すなわちアポトーシスをコントロールすることにより、老人性痴呆の防御の手がかりともなりうると考えられる。
隔膜自動制御培養による造血前駆細胞の低コスト増幅システム

隔膜培養器としてポリカーボネート多孔性膜(膜厚約10μm、細孔径0.4、3、12μm、膜面積0.6cm^2)を備えたミリポア社ミリセル-PCFの他、ファルコン社セルカルチャーインサートのハウジングにミリポア社ポリカーボネート多孔性膜(膜厚10μm、細孔径0.4、0.2、0.1、0.05μm、膜面積1.3cm^2)を装着した隔膜培養器も用いた。いずれも多孔性膜の下面にストローマ細胞株ST2の接着細胞層を形成させた後、上面にマウス骨髄初代造血細胞1.3×10^6cells/mlを播種し5%CO_2雰囲気下33°Cで共培養した。その結果、孔径0.4μmの多孔性膜を装着したミリセル-PCFを用いた隔膜培養、同培養器の多孔性膜の上面に接着したストローマ細胞の上で共培養する膜上培養及びディッシュ底面に接着したストローマ細胞の上で共培養する通常のDexter培養を各々行った結果、造血細胞濃度及び前駆細胞の割合の点で隔膜培養が他の2者に比べて明らかに優れていた。多孔性膜を介したグルコース、乳酸の濃度勾配はなく、またこれら3者の間にサイトカイン産生量の顕著な差も認められなかった。なお、隔膜培養器でストローマ細胞層のない場合、造血を支持できなかった。次に孔径0.4、3、12μmの3種類の多孔性膜を用い隔膜培養を行ったところ、孔径0.4μmの場合にのみDexter培養に比べて優れた結果が得られた。さらに0.4μm以下の孔径の多孔性膜を用いた場合、造血細胞濃度及び前駆細胞の割合の両者共、孔径による差は特に認められなかった。以上の結果、0.4μm以下の小さな細孔を有する多孔性膜が、ストローマ細胞と造血細胞との共培養に適していると考えられた。多孔性膜の下側にストローマ細胞を接着し、上側に造血細胞を播種して共培養できる隔膜培養器を想定し、種々の細孔径を有する多孔性膜をもった隔膜培養器を製作、準備した。さらに、細胞培養を無菌的に自動的に行える児童培養装置の試作も行った。さらに、前年度までに我々がマウス骨髄細胞を用いた系で開発した三次元共培養法、すなわち多孔性不織布担体の内部にストローマ細胞を三次元的に増殖させ、その中で造血細胞を共培養する方法を、ヒト骨髄ストローマ細胞とヒト臍帯血単核細胞との共培養に応用し、サイトカインを一切添加せずとも造血前駆細胞が1週間の培養で数倍に増幅されることを明らかにした。一方、増幅後の造血細胞の移植後の生着速度の評価系として、NOD/SCIDマウスへの移植系を構築し、生着に必要な移植細胞数を求めた。平成15年度研究実績多孔性膜の下側にストローマ細胞を接着し、上側に造血細胞を播種して共培養できる隔膜培養器を想定し、種々の細孔径を有する多孔性膜をもった隔膜培養器を製作、準備し、これを用いてマウス骨髄細胞の培養を行った。その結果、細孔径は細胞密度にはほとんど影響しないが、0.4、3、12μmの細孔径の中では、細孔径が小さいほど造血前駆細胞の増幅に有利に作用する傾向があることが判明した。

さらに、我々がマウス骨髄細胞を用いた系で開発した三次元共培養法、すなわち多孔性不織布担体の内部にストローマ細胞を三次元的に増殖させ、その中で造血細胞を共培養する方法を、ヒト骨髄ストローマ細胞とヒト臍帯血からフィコール密度勾配遠心分離により分離したヒト臍帯血単核細胞との共培養に応用し、サイトカインを一切添加せずとも、造血前駆細胞が1週間の培養で数倍に増幅されることをCFUアッセイの結果から明らかにした。この三次元共培養系が有利である原因を解析した結果、サイトカイン等の液性因子の蓄積量にはほとんど変化が無いが、三次元培養系のほうが細胞外の不溶性タンパク質量が多く、幹細胞に親和性が高いと考えられているラミニンα5の発現量も高いことから、三次元培養することにより細胞外マトリックスが多く蓄積することが原因である可能性が示唆された。多孔性膜の下側にストローマ細胞を接着し、上側に造血細胞を播種して共培養できる隔膜培養器を想定し、種々の細孔径を有する多孔性膜をもった隔膜培養器を製作、準備し、これを用いてマウス骨髄細胞の培養を行った。その結果、細孔径は細胞密度にはほとんど影響しないが、細孔径が小さいほど造血前駆細胞の増幅に有利に作用する傾向があるが細孔径が0.4μm以下に細孔径が小さくなっても培養成績に影響しないことが判明した。共焦点顕微鏡による観察の結果、0.4μmに比べて細孔径3μmの膜では、膜の片側に配置されたストローマ細胞が細孔を通じて膜の反対側に達しており造血細胞と直接に接触していることが明らかとなり、この直接接触が前駆細胞数に悪影響を与えたことが考えられた。さらに、我々がマウス骨髄細胞を用いた系で開発した三次元共培養法、すなわち多孔性不織布担体の内部にストローマ細胞を三次元的に増殖させ、その中で造血細胞を共培養する方法を、ヒト骨髄ストローマ細胞とヒト臍帯血単核細胞との共培養に応用し、サイトカインを一切添加せずとも造血前駆細胞が1週間の培養で数倍に増幅されることを明らかにした。この三次元共培養系にヘパリンを添加することにより前駆細胞の増幅率が改善することが明らかとなった。
生態と進化から解明する深海性多毛類の硫化水素適応戦略

熱水噴出域は硫化水素が多量に含まれる有毒環境である。本研究では、深海性多毛類(マリアナイトエラゴカイ、ウロコムシ類)に着目し、環境中の硫化水素無毒化戦略を明らかにするため、ヒポタウリン・タウリン合成経路を明らかにした。さらに、硫化物濃度によってタウリン合成に関与する酵素遺伝子の発現量が増減することを見出した。したがって、環境中の硫化物濃度によってタウリン・ヒポタウリンの合成量を変えていることが示唆された。種間比較では、タウリン合成に関与する酵素遺伝子の数やそれらが増減する硫化物濃度が異なっており、同所的に生息しているにも関わらず硫化水素への適応戦略が異なっている可能性が示唆された。調査航海(『かいよう』KY15-07)において伊豆小笠原海域明神海丘、ベヨネース海丘より無人探査機“ハイパードルフィン"を用いて熱水噴出孔周辺に生息するマリアナイトエラゴカイを含む多毛類を複数種採集した。多毛類は浅海から深海まで形態・分子いずれも系統関係が明らかでないため、まずミトコンドリアDNACOI配列による系統解析を試みた。その結果、採集した多毛類はウロコムシ科、ゴカイ科、カザリゴカイ科、エラゴカイ科、ミズヒキゴカイ科に属することが明らかとなった。しかし、イトエラゴカイおよび形態的に類似しているものの別種と考えられる3種の塩基配列が同一であったため、これらについて28S rRNAおよびミトコンドリアDNA 16S rRNA、Cyt b、ND4領域の塩基配列解読を実施したがどの領域も同一の配列であったため、コンタミネーションの可能性が考えられた。発現している遺伝子を網羅的に解析する目的でマリアナイトエラゴカイおよび深海性のウロコムシから全RNAを抽出し、次世代シーケンサを用いたRNA-Seqを実施した。各々1個体を解析し、RNA-Seqをアセンブルしたところそれぞれで約10万コンティグを得た。タウリン合成酵素(CDO1、CSAD、ADO、GAD1)や硫黄代謝(SDO、ST、SQR)に関与する遺伝子の類似配列をGenBankより引用し、コンティグをデータベースにしたlocal blastで検索したところ、類似配列が検出された。また、他の代謝系についてもマッピングを行ない、アミノ酸代謝等の経路を調べたところ、以前実施したアミノ酸分析で得られた結果と矛盾しなかった。これらの結果から、深海性多毛類はこれまで他の生物で報告されてきた既存の機構で深海の極限環境に適応している可能性が示唆された。平成27年度はサンプリングの機会を得たが、潮流の関係で無人探査機の海底作業時間が短く、さらに深海性多毛類が多量に生息するポイントで作業ができなかったため、硫化物曝露実験等に用いるほどの個体数を確保できなかった。したがって、アミノ酸分析を実施することができなかった。しかし、多毛類が生息している水温および硫化水素濃度を取得した。また、深海性多毛類のゲノム情報は乏しいが、次世代シーケンサによるRNA-Seqを実施したことにより、アミノ酸合成や硫黄代謝に関与する遺伝子の発現の有無を網羅的に解析することが可能となった。GenBankで検索した結果、タウリン合成酵素4種、硫黄酸化酵素(SDO)に類似した配列が存在しているため、クローニングによりcDNAの単離を行なっている。深海熱水噴出域では数百°Cに熱せられた海水が硫化水素や重金属とともに噴出している。しかしながら、この有毒な環境でも化学合成生物群集とよばれる無脊椎動物を中心とした豊かな生物群集が存在する。近年ではチオタウリン合成が硫化水素の無毒化に寄与していると考えられている。チオタウリンは含硫アミノ酸とよばれる無毒な物質で、前駆体のヒポタウリンよりも硫黄原子が1つ多い構造である。そこで、環境中の硫化水素とヒポタウリンを反応させ、チオタウリンを合成することで無毒化していると考えられてきた。このことから、体内のチオタウリン量は環境中の硫化水素濃度に相関することが示唆されてきた。これまで、熱水噴出域の近傍に生息する2種の深海性多毛類(マリアナイトエラゴカイ、ウロコムシ類)を用いて異なる濃度の硫化物に短期暴露し、アミノ酸分析を行なったところ、種や硫化物濃度によってチオタウリン・ヒポタウリン量が異なることがわかった。この2種の多毛類はマリアナイトエラゴカイが基質に固着し、ウロコムシ類がいぼ足による移動を行うという生態をもつ。そこで、前述の硫化物応答の相違は生態の違いによるものであるという仮説を立てた。本研究では、マリアナイトエラゴカイを用いて短時間の硫化物曝露を行ない、ヒポタウリン合成を含むタウリン合成経路に関与する遺伝子の探索をおこなったところ、タウリン合成に関与する4つの酵素遺伝子の存在を確認した。このことから、マリアナイトエラゴカイはシステインスルフィン酸経路によってタウリン合成をしている可能性が示唆された。また、4つの酵素遺伝子の単離および遺伝子発現定量を試みたところ硫化物濃度に対して顕著な増減はみられなかった。したがって、硫化物の濃淡に関わらず恒常的に酵素遺伝子を発現させることで環境に適応している可能性が示唆された。平成27年5月実施の『かいよう』研究航海KY15-07および平成28年5月実施の『新青丸』研究航海KS-16-5において、伊豆小笠原明神海丘の熱水噴出孔からマリアナイトエラゴカイとウロコムシ類を採集した。

船上でマリアナイトエラゴカイを海水に溶解した硫化ナトリウム(0mol/L、0.5mmol/L、20mmol/L)に曝露し、経時的(1、4時間後)サンプリングした。各1個体を用いてRNA-Seqを行ない、得られたコンティグのGO解析により発現遺伝子を同定した。KEGGのPATHWAY解析を行なった結果、タウリン合成に関与する4つの酵素遺伝子の断片配列を確認した。そこで、マリアナイトエラゴカイについて特異的プライマーを設計し、クローニングにより完全長を単離した。単離した塩基配列からプローブを設計し、上記の硫化物曝露で使用した個体のリアルタイムPCRを行なった結果、4つの酵素遺伝子は硫化物濃度に対して顕著な増減がみられなかった。したがって、マリアナイトエラゴカイは恒常的に酵素遺伝子を発現させることにより硫化物濃度の濃淡に適応している可能性が示唆された。また、本研究より、システインスルフィン酸経路を主な合成経路としている可能性も示唆された。さらに、分子系統解析を行なうため、採集した多毛類から抽出したDNAを用いてミトコンドリアDNA COI領域を増幅した。データベースに登録されている多毛類の配列と併せて最尤法による系統樹を構築したところ、得られた系統関係は信頼性が低いクレードもあり、進化プロセスについて論じるには精査が必要であるが、同所的に複数の多毛類が生息していることが明らかとなった。研究航海では海況の影響により、曝露実験に必要な個体数を採集することができず、硫化物曝露に供した個体数が少なかったことにより、アミノ酸分析や酵素実験を実施することができず当初予定よりやや遅れている。深海熱水噴出域は、深海底の中でも多量の硫化水素を含む有毒環境である一方、多量の無脊椎動物が生息している。したがって、これらの無脊椎動物は体内に存在するヒポタウリンと環境中の硫化水素からチオタウリンを合成することで硫化水素を無毒化していることが示唆されてきた。本研究では、熱水噴出域において硫化水素に最も曝露される場所で同所的に生息する2種の多毛類(マリアナイトエラゴカイ、ウロコムシ類)に着目した。これらを低濃度(0.5mM)の硫化物に8時間まで曝露したところ、マリアナイトエラゴカイは4時間までにヒポタウリンが減少し、チオタウリンは増加する傾向がみられた。一方、ウロコムシ類はヒポタウリン、チオタウリンいずれも変化がみられなかったものの、ヒポタウリン量はイトエラゴカイの10倍量を維持していた。マリアナイトエラゴカイは棲管をつくり移動しないが、ウロコムシ類は疣足で移動するため、曝露される硫化物濃度が異なっている可能性があり、その生態の違いが硫化物応答の差異を反映していると考えた。そこで、次世代シーケンサを用いたRNA-Seqにより得た配列のパスウェイ解析を行ない、タウリン合成経路を調べた。その結果、両種ともにCDO、CSAD、GAD、ADOが発現していたことから、ヒポタウリンを生合成していることが示唆された。しかし、タウリン合成に必要なCLおよびヒポタウリンデヒドロゲナーゼの発現は認められなかった。哺乳類ではシステインからタウリンを合成する経路としてCSA経路とシステアミン経路が知られている。深海性多毛類は、これら2つの経路を用いてヒポタウリンを合成していると考えられる。
自然の文化間翻訳：明治期から現代までの『方丈記』の英訳の流通

今年度は主に様々な図書館(ケンプリッジ大学図書館、ダーハム大学図書館など)で重要な文献を収集した。特には、明治時代の鴨長明の最初の2つの英訳であるAn Account of My Hut (1893)、夏目漱石とJ.M. Dixon共訳、及び、A Japanese Thoreau of the Twelfth Century (1905)、南方熊楠とF.V. Dickins共訳についての関係文献を収集した。ケンプリッジ大学にある日本研究図書館ではディクソンやディキンズの置かれた英国の当時の学術的な文脈や日本人の翻訳協力者との関係について広く知ることができた。また、和歌山の田辺にある南方熊楠の研究をしている研究センター2か所を訪問し、熊楠の研究者としてのまた翻訳家としての重要資料を閲覧した。方丈記の最初の英訳草稿を見ることができ、彼がイギリスから持ち帰った膨大な書籍も見ることができた。学会での発表としては、パリのSorbonne Nouvelle Universityで自然の翻訳というテーマで方丈記の上述2つの英訳について2018年5月に発表した。この学会はこのような新しいテーマで実施された最初の学会で、私の研究プロジェクトについて多くの専門家から貴重なフィードバックを得ることができた。私の発表は学会主催者より、カナダの出版社のVita Traductivaより出版予定の本の一章としたいとの連絡を受けている。現在、査読者からのコメントに返答している所である。本は2019年10月に出版予定となっている。この本は自然の翻訳というテーマでの研究への大きな貢献となるだろう。主要文献のほとんどを収集でき、研究の第一段階の発表が本の一章として出版できても、私の研究には次の要因から若干の遅れが発生している。まず、現在のトランスレーション・スダディー(翻訳学)の動向に満足ができなくなってきたことがある。というのも、私が実施しようとしているエコロジカルなアプローチでは、トランスレーション・スダディーでは十分な批評的ツールを提供できないことが判明したのだ。そのため、より有用な洞察を求めて、別の分野に向かう必要を感じるようになった。それは、新しい学際領域で、「環境人文学」と呼ばれているものである。そこでは翻訳への環境学的なアプローチが少しづつではあるが、興味のある仕方で、社会的に意義のある方向に発展しつつある。また、学際的な方向だけでなく、様々なメディアの間の関係についての研究の可能性についても検討している。つまり、方丈記の自然のイメージがいかに翻訳され、他のメディア(漫画、写真、音楽など)に改作されるのかについての研究を進めるというものだ。このような研究を可能にする批評ツールを開発するため、新しい分野であるintermedial studiesに関する文献を調査中である。2年目には計画通り、モダニストであるバジル・バンティングによる方丈記の英訳Chomei at Toyama (1932)についての研究を進める。環境批評に関する英米のモダニズム関連の文献についてはすでに収集済みであるが、さらに別のメディア(特には漫画)へのアダプテーションに関する研究を進める。このため、この夏に"Translating Nature across Media: Houjokifrom Japanese Medieval Essay to Contemporary Manga from Japanese"と題した論文を、ルーマニアで8月に開催されるこの分野での最初の学会(Intermedial Ecocriticism: The Anthropocene Condition across Media and the Arts)で発表する。計画としては、その後、国際的な雑誌にて、さらにこの発表内容を拡充した論文を出版する予定である。