hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
被差別地区出身者と在日コリアンのひとり親家族の複合差別と排除に関する実証研究

被差別部落のひとり親家族に焦点をあて、アンケート調査とインタビュー調査によって、被差別部落のひとり親と子どもが被ってきた複合差別と社会的排除の実態を明らかにするとともに、複合差別や社会的排除による日常生活へのダメージについて考察した。本研究の目的は、被差別地区出身者や在日コリアンでひとり親家族になっている親と子どもに焦点をあて、わが国の社会においてマイノリティであることによる差別や排除が離婚や非婚によるひとり親家族となったことにどのような影響を及ぼしてきたのか、さらに、マイノリティのひとり親家族であることが、彼ら・彼女たちの生活の営みにどのような影響をもたらしているのかという、マイノリティであることの差別や排除とひとり親家族であることの差別や排除との相互の関連を明らかにし、差別や排除が複合化するメカニズムの解明と、そのことが、当事者の日常生活にどのようなダメージをもたらしているのか、生活者の視点から解明することにある。平成22年度は、本研究をすすめるうえで、以下のような準備と調査を行った。(1)ひとり親家族を取り上げた国内外の現状について学び合う機会として、共同研究者とともに、研究会を発足させて、情報交換を行った。(2)被差別地区、および在日韓国・朝鮮人の人びとの差別や排除に関する文献を調べた。(3)社会的差別と排除に関する、国内外の文献を調べた。(4)インタビュー調査の準備を行い、実施した。(1)大阪府内のNPO法人や福祉団体、被差別地区の関係者、人権団体等に協力依頼し、インタビューに協力してもらえるひとり親家族を紹介してもらった。(2)ひとり親家族の親を対象にするインタビュー項目を検討した。(3)ひとり親家族の子どもを対象とするインタビュー項目を検討した。(4)被差別地区出身者のひとり親家庭の親や子どもたち、総勢23名のインタビューを行った。(5)インタビュー記録の録音について、文字起こし作業を行った。ことの差別や排除、女性であることの差別や排除が、離婚や非婚によるひとり親家族となったこととどのように関連しているのか、さらに、離婚や非婚によるひとり親家族となったことが、当事者の日常生活にどのような影響をもたらしているのかという点について、生活者の視点から解明することを目的として、アンケート調査とインタビュー調査を実施した。(1)大阪、福岡、徳島において、被差別部落出身のシングルマザーを対象に、アンケート調査を行った。・部落解放同盟女性部の協力を得て、4月から6月にかけて、アンケート調査項目の検討を行った・7月から8月にかけて大阪でアンケート調査を実施し、有効回収数255名。9月から10月にかけては福岡で実施し、有効回収数200名。2月に徳島で実施し、有効回収数22名であった。・アンケート調査票が回収された後、大阪と福岡については、12月末までに学生のバイト等によりデータ入力作業を行い、基礎分析を行い、3月10日に福岡で、3月26日に大阪で中間報告会を催した。(2)アンケート調査のなかで、より詳細なインタビューに協力してくださるという方々を対象に、インタビュー調査を実施した。・2月3月にかけて、福岡6名、大阪4名にインタビュー調査を実施した。・これから文字起こしを行う。文字起こしをした第一次データは個人情報が含まれるため、その扱いには特別に注意を払う。・22年度中に実施したインタビューデータと合わせて、分析作業を行う。本研究は、被差別地区出身で離婚によってひとり親家族になった女性、あるいは、非婚で出産し、ひとり親家族になった女性と、その子どもたちに焦点をあて、わが国の社会においてマイノリティであることによる差別や排除が、離婚や非婚によってひとり親家族となったことに、また、女性であることにどのような影響を及ぼしてきたのか、さらに、マイノリティのひとり親家族であることが、彼女たちの生活の営みにどのような影響をもたらしているのかという、マイノリティであることの差別や排除とひとり親家族であること、さらに、女性であることの差別や排除との相互の関連を明らかにし、差別や排除が複合化するメカニズムの解明と、そのことが、当事者の日常生活にどのようなダメージをもたらしているのかという点について、生活者の視点から解明することにある。2012年度においては、以下の研究を行った。(1)2011年度に、大阪、福岡、鳥取、徳島において、被差別部落出身のシングルマザーを対象に実施したアンケート調査データを集計・分析し、基本的属性にみられる特徴、就労状況、子育ての状況、生活上の悩み、被差別地区出身であることの被差別体験、女性であることの被差別体験、シングルマザーとしての被差別体験などについて実態を明らかにするとともに、複合差別の実態を検討し、全国人権教育研究集会で報告した。(2)被差別地区出身のひとり親家族の親と子どもたち12名にインタビュー調査を実施した。これまでのインタビュー記録はひとり親34名、子ども11名である。これらのインタビュー記録をもとに、研究代表者、研究分担者、研究協力者それぞれで分析を行っている。2012年度中に、分析を終えることができなかったが、できるだけ早い時期に、報告書にまとめる予定である。複合差別論の実証研究として多大な意義があると言える。(1)当初の計画にもとづき、大阪、福岡、兵庫の代わりに徳島、鳥取で、被差別部落出身のシングルマザーを対象にアンケート調査を実施し、約500名の協力を得て、データ入力まで終えることができた。

(2)被差別地区出身のひとり親家族の親と子どもたちを対象に20名分のインタビュー調査を実施することができた。24年度が最終年度であるため、記入しない。(1)アンケート調査の集計・分析作業を行うとともに、既存の被差別部落の女性調査の結果と比較し、特徴を明らかにする。(2)インタビュー調査のデータを読み込み、アンケート調査結果と関連づけるのみならず、アンケート調査では捉えきれない当事者の声を拾いあげる作業を行う。(3)被差別部落のシングルマザーと子どもたちが被ってきた複合差別について特徴を捉えたうえで、一般化を図ることが本研究の目指す方向である。
新規な糖・脂質・コレステロール・胆汁酸代謝調節因子としてのSIKの機能解析

抗肥満薬の開発を目指しSIK3-KOマウスが太らないが肝機能が悪化する原因を調べた。SIK3-KOマウスは胆汁酸耐性がなく、より肝機能を悪化させるが、遺伝子発現量解析の結果からコレステロール・胆汁酸関連遺伝子の発現に広く異常をきたしていたのでSIK3はそれらの上位制御因子だと示唆された。またその標的蛋白質を探索したところ2種の標的候補タンパク質が見いだされた。脂肪を蓄積できない原因としてエネルギー漏出を想定しているが、その経路は脂肪酸ではなかった。SIK3は栄養代謝に関連することが知られているAMPKファミリーに属するタンパク質であり、そのKOマウスは高脂肪食摂食時でさえ脂肪を蓄積できないという顕著な表現形を持っていた。また血液生化学的な分析により、SIK3KOマウスは脂質、コレステロール、胆汁酸濃度に異常が存在していた。そこでマウスの肥満耐性にかかわるメカニズムを解明するため研究を行った。KOマウス肝臓での遺伝子発現量について解析したところそれら物質の代謝関連遺伝子の発現量が大きく変化していた。それらの変化を起こすシグナルカスケードを特定するためにSIK3の標的蛋白質を同定することを試みた。SIK3KOマウスから作成した初代培養細胞にSIK3を導入し、そこからリン酸化タンパク質を精製した。それを未導入の物、また野生型からのものと比較し、10個のリン酸化状態の異なるタンパク質を見出した。それらのうち2つのタンパク質を質量分析によって解析したところ、myristoylated alanine-rich C-kinase substrate、また機能未知のタンパク質として登録済みのものと推定された。しかしこれらがSIK3の直接の標的であるかは解析することはできなかった。また脂肪組織に脂肪がまったく蓄積されないことから脂質代謝の変化により、生体内の脂質組成に何らかの変化が生じている可能性を想定し、脂肪細胞および血液の抽出物について脂肪酸組成をGCにより分析した。その結果、野生型とKOマウスとで特に変化は見られず、摂取された脂質がどのように排出されているかはわからなかった。本研究では高脂肪食下での脂肪蓄積低下につながるSIK3下流のシグナルのシグナルを同定することはできなかったが、見いだされた二種のタンパク質,特に機能未知のものについて解析を進めることで、抗肥満的な表現形を引き起こす原因を解明できるのではないかと考えている。SIK3が関与するシグナルカスケードについて同定するため、野生型、KOマウスの肝臓での単車関連遺伝子群の発現量をリアルタイムPCRにより測定した。その結果、KOマウスでは糖新生経路の遺伝子発現量が上昇、脂質合成経路が減少していた。その一方血中コレステロール濃度にも異常が生じているにも関わらずコレステロール代謝関連遺伝子の発現量には大きな変化は見られなかった。また餌による影響を特定するため、普通食、高脂肪食、高コレステロール食、高胆汁酸食を与えた場合の遺伝子発現量も同様に測定したところ、高脂肪食では発現量に大きな差は見られず、高コレステロール、高胆汁酸食を与えた場合、コレステロール代謝関連遺伝子が野生型と同等の反応を示さずKO側で発現量が低くなる傾向が見られた。ここからSIKKOマウスではコレステロールシグナルに対する応答に異常が生じている可能性が示唆された。またSIK標的蛋白質を同定するため二次元電気泳動による解析を行った。野生型マウスおよびSIK-KOマウスより初代培養したマウス胎児繊維芽細胞のタンパク質のリン酸化パターンを解析したところ野生型とKOマウスではリン酸化されたタンパク質のパターンが異なっていた。またそこに活性型、不活性型のSIK3を導入したとき、活性型を導入した場合のみ野生型のリン酸化パターンに戻っていたことから、この解析でリン酸化に差がついたタンパク質がSIK3の直接、間接の標的であることが強く示唆された。また胆汁中の胆汁酸についてHPLCにて分析を行ったところ、野生型とKOマウスと分離パターンが異なっており、組成が変化していると推定された。その結果胆汁酸合成系に変化が生じており、胆汁酸代謝異常が引き起こされている可能性が示唆された。当初の計画では標的蛋白質の同定には肝臓からの初代培養細胞を用いて実験を行うことになっていたが、実際には肝細胞はKOマウスから培養することが困難であったため解析を開始することができなかった。そこで肝臓ではなくKOマウスからでも容易に培養することができた胎児繊維芽細胞を用いて解析を行い、候補タンパク質を見出すことができた。またSIK-KOマウスの繁殖成功率の低さからサンプルの調整に難航してしまい代謝産物の解析も遅れている傾向にある。また所属の変更に伴うトラブルなどもあったため実験遂行に支障が生じてしまった。所属の移動に伴い、提出した計画のうち遺伝子発現制御の解析に関しては難しくなってきている。そこで今後の遂行計画としては標的蛋白質および蓄積物質の同定に重点を置いて行くことを考えている。そのうち標的蛋白質の同定に関しては前年度にすでに候補タンパク質はいくつか見いだされているため、それらタンパク質を同定可能な量まで精製し解析を行うことを予定している。

また、血液などに蓄積した代謝産物の解析に関しては、分析に用いるサンプルの収集、および分析に必要な機材の手配は終了しており、すぐに解析に入る予定である。今年度の研究費も備品には用いず、タンパク質精製、代謝産物の解析に必要とされる消耗品費として主に使用する予定である。そしてタンパク質の同定に関しては質量分析等の外注による解析が必要になる可能性があるためその費用に充てることを考えている。
アフリカ・タンガニイカ湖産カワスズメ科魚類における適応放散メカニズムの解明

アフリカ・タンガニイカ湖には200種ものカワスズメ科魚類が生息しており、そのほとんどがこの湖に固有な種類である。このことからこれらの魚類の多くは、湖内で種分化したと考えられる。またこの湖の成立年代は1千万年程度であり、進化的時間軸で考えると、極めて短い時間に種分化したことが予想される。よってこの特徴的な現象は、ときに爆発的種分化と呼ばれることもある。本研究ではこの現象を引き起こしたメカニズムを解明しようとするものである。最近の知見では、これらの魚類は種類によって進化メカニズムが異なることが示唆されている。つまり、多様な進化メカニズムによって出現した種が混ざってしまったのである。このため進化メカニズムを解明するのには、その一つ一つを紐解いていく必要がある。そこで本研究では多くいる種類のうち、巻き貝の殻に住み、産卵もそこで行う珍しい生態をもつ種類について研究している。この種類は体サイズが小さく、最大の個体でも貝殻にすっぽりと入ってしまうほどである。また成熟サイズも小さいため、貝の中で繁殖するのにも適している。この種類の近縁種は隣接する岩場に住んでいて、大型になる。両者は遺伝的に有意に異なるものの、その距離は極めて近く、僅か数千1万年前に分化したばかりであることが分かってきた。しかし、今のところ岩に住むタイプと貝に住むタイプのどちらが元になったのかすら分かっていない。16年度の調査ではこの種類と近縁種を多くの場所から採集した。これからその系統類縁関係をDNAから調べるつもりである。岩場に住むタイプから複数の貝に住むタイプが並行して進化したとなれば、体サイズを小さくすることと種分化が直接関係した可能性がある。タンガニイカ湖産カワスズメ科魚類は、形態・生態が多様であることや複数の系統を内在することから、様々な進化様式を経た種類が混在していると考えられる。しかしこれらは、高次分類群(族)のレベルで形態と分子データの間に矛盾が指摘されており、進化様式を解明するための基礎となる分類が混乱した状態にあった。このことから、まずこれら魚類を比較形態学的に調査し、族の整理を行った。この研究は原著論文として発表された(Takahashi,2003)。さらに新種の発表(Takahashi & Nakaya,2003)や属の整理(Takahashi,2004)も行い、本魚類の基礎知見を蓄積した。これにより、本魚類の適応放散メカニズムを解明する基礎が着実に固まってきたと言える。一方、本研究の主題であるタンガニイカ湖産カワスズメ科魚類の適応放散も、種によって異なる要因に起因すると考えられる。その一つの例として、昨年から引き続きTelmatochromis temporalisの岩住型と貝住型の遺伝的・形態的違いを解析した。その結果、両者に明瞭な違いがあることが判明し、現在Journal of Fish Biology誌(英国)に投稿中である。遺伝的データによりこれらの型は非常に近縁であることが明らかとなり、通常では同種レベルの差しかない。これら二型は分布域が重なり、基質の違いだけが二型を維持させていると考えられる。これは、基質に対する側所的種分化を介した適応放散の一例と考えられ、このことが明らかとなれば、タンガニイカ湖産カワスズメ科魚類に於いて初めてのこととなる。他にも本種に於いて同様の二型が存在する場所が数カ所知られており、それぞれの関係を解明することは今後の課題と考えられる。
Ni基マルチインターメタリックスin-situ複合材料の合金設計と組織制御

1.Ni_3Al-Ni_3Ti-Ni_3VならびにNi_3Al-Ni_3Nb-Ni_3Vでは、2重複相組織を形成することを見出した。すなわち、L1_2とDO_<22>相を構成相として、ミクロンメータ尺度からなる上部複相組織として、ナノオーダーからなる下部複相組織が形成されることを見出した。2重複相組織は上部ならびに下部組織共に整合性に優れ、高温長時間の熱処理によっても微細組織を保つことが可能であることを見出した。2.Ni_3Si-Ni_3Nb-Ni_3Ti合金系では、構成相間の固溶限の温度変化を利用しての組織制御により、析出強化機構が発現することを見出した。3.Ni_3Al-Ni_3Nb-Ni_3TiならびにNi_3Al-Ni_3Ti-Ni_3Vマルチ・インターメタリックス合金は強度の逆温度依存性と塑性変形能を示し、長時間保持によっても高温強度の劣化(低下)がないことを観察した。また、従来合金にはない、高い高温クリープ強度と延性さらには永いクリープ破断寿命を示すことを発見した。4.Ni_3Al-Ni_3Ti-Ni_3Vマルチ・インターメタリックス合金について、溶解法、鍛造法、単結晶法による製造プロセスが可能であることが示され、安価で大量かつ信頼性の高い製造法の道を拓いた。5.溶解法、鍛造法、単結晶法による材料について、クリープ速度、クリープ破断寿命等を測定した。得られたデータは現用最強のNi基超合金に匹敵あるいは上回る特性を示していることを明らかにした。2.Ni_3Al-Ni_3Ti-Ni_3Vでは、2重複相組織を形成することを見出した。すなわち、上部複相組織として、L1_2+DO_<22>+DO_<24>が、下部複相組織としてL1_2+D_<22>が形成されることを見出した。3.2重複相組織は上部ならびに下部組織共に整合性に優れ、高温の熱処理によっても微細組織を保つことが可能であることを見出した。4.高温圧縮試験により、Ni_3Al-Ni_3Nb-Ni_3TiならびにNi_3Al-Ni_3Ti-Ni_3Vマルチ・インターメタリックス合金は強度の逆温度依存性と塑性変形能を示し、長時間保持によっても組織安定性に優れているために高温強度も劣化(低下)することがないことを観察した。1.これらの擬3元合金系の等温状態図を構築した結果、いずれの合金系でも3つの構成相が直接平衡することを見出した。また、それらの相領域が荷電子濃度に依存することを明らかにした。2.Ni_3Al-Ni_3Ti-Ni_3VならびにNi_3Al-Ni_3Nb-Ni_3Vでは、2重複相組織を形成することを見出した。すなわち、上部複相組織として、L1_2+DO_<22>+DO_<24>が、下部複相組織としてL1_2+D_<22>形成されることを見出した。3.Ni_3Si-Ni_3Nb-Ni_3Ti合金系では、構成相間の固溶限の温度変化を利用しての組織制御により、析出強化機構が発現することを見出した。4.高温圧縮試験により、Ni_3Al-Ni_3Nb-Ni_3TiならびにNi_3Al-Ni_3Ti-Ni_3Vマルチ・インターメタリックス合金は強度の逆温度依存性と塑性変形能を示し、長時間保持によっても高温強度の劣化(低下)がないことを観察した。また、従来合金にはない、高い高温強度と延性能さらには優れたクリープ・レートを示すことを発見した。すなわち、

上部複相組織として、L1_2+DO_<22>+DO_<24>が、下部複相組織としてL1_2+D_<22>が形成されることを見出した。2重複相組織は上部ならびに下部組織共に整合性に優れ、高温長時間の熱処理によっても微細組織を保つことが可能であることを見出した。2.Ni_3Si-Ni_3Nb-Ni_3Ti合金系では、構成相間の固溶限の温度変化を利用しての組織制御により、析出強化機構が発現することを見出した。3.高温圧縮試験により、Ni_3Al-Ni_3Nb-Ni_3TiならびにNi_3Al-Ni_3Ti-Ni_3Vマルチ・インターメタリックス合金は強度の逆温度依存性と塑性変形能を示し、長時間保持によっても高温強度の劣化(低下)がないことを観察した。また、従来合金にはない、高い高温強度と延性能を示すことを発見した。4.Ni_3Al-Ni_3Ti-Ni_3Vマルチ・インターメタリックス合金について、溶解法、鍛造法、単結晶法による製造プロセスが可能であることが示され、安価で大量かつ信頼性の高い製造の道を開いた。5.溶解法、鍛造法、単結晶法による製造プロセスによる材料について、クリープ速度、クリープ破談寿命等を測定した。得られたデータは現用最強のNi基超合金に匹敵あるいは上回る特性を示していることを明らかにした。
シナプス前終末からの直接記録による、麻酔薬のシナプス伝達抑制作用の研究-哺乳類中枢神経シナプス前終末のパッチクランプによる電気生理学的研究-

[方法](1)台形体内側核(NMTB)スライス実験生後10日-2週間のラット脳をセボフルレン麻酔下に摘出し、台形体内側核(NMTB)細胞を含む橋部のスライス切片(300μ)を作成し、95%O2+5%CO2を通気したリンゲル液中で37°C・1時間インキュベートした。次にノマルスキー検鏡下、台形体内側核細胞周囲のシナプス前終末を直視下に同定し、ホールセルパッチクランプし、current clamp下に静止膜電位・活動電位を記録した。また-70mVに電位固定下にNa,K,Ca電流を記録した。(2)ラット脊髄スライス実験生後2週ほどのラット脊髄をエーテル麻酔下に摘出し、スライス切片(400μ)を作成、電位感受性色素(RH482)で20分間染色した後、95%O2+5%CO2を通気したリンゲル液を灌流した。脊髄後根を吸引電極に固定し、電気刺激を与えた。光吸収量の変化を高速カメラシステムで記録した。AP5,CNQX存在下にpresynapse応答のみを記録した。さらにハロセンを含んだリンゲル灌流下でも同様の実験を行った。潅流液中のハロセン濃度はガスクロにより測定した。[結果・経過](1)台形体内側核(NMTB)スライス実験1-5%の全身麻酔薬ハロセンがepscを用量依存性に30-90%抑制した。2-3%ハロセンはpre-synaseのCa電流を抑制しなかった。2-3%ハロセンはpre-synaseのNa電流を抑制しなかった。2-3%ハロセンはpre-synaseの活動電位を抑制しなかったが、5-6mV過分極させた。(2)ラット脊髄スライス実験[方法](1)台形体内側核(NMTB)スライス実験生後10日-2週間のラット脳をセボフルレン麻酔下に摘出し、台形体内側核(NMTB)細胞を含む橋部のスライス切片(300μ)を作成し、95%O2+5%CO2を通気したリンゲル液中で37°C・1時間インキュベートした。(2)ラット脊髄スライス実験3年計画の第1年目であるが、presynapseに対する抑制効果を究明する前に、まずシナプス伝達が抑制されていることを示すべく、目下以下の研究を進行中であり、以下のpreliminaryな結果を得た。[方法]生後10日-2週間のラット脳をセボフルレン麻酔下に摘出し、台形体内側核(NMTB)細胞を含む橋部のスライス切片(300μ)を作成し、95%02+5%CO2を通気したリンゲル液中で37^○C・1時間インキュベートした。次にノマルスキー検鏡下、台形体内側核細胞を直視下に同定し、ホールセルパッチクランプし、-70mVに電位固定した。シナプス前線維束を双極白金電極で刺激し、興奮性後シナプス電流(EPSC)を記録した。ハロセンは気化器を通じてバブリングしたリンゲル液を潅流してスライスに投与した。潅流液には0.5μM strychnine,10μMbicuculline,1mM Ca ion,2mM Mg ionを含んだ。ピペット内液には5mM QX314を含んだ。[結果]EPSC振幅の抑制:1-5%ハロセンは用量依存性に台形体内側核細胞から記録されるEPSC振幅を約20%-90%抑制した。またこの抑制は1mM Baにより影響をうけなかった。3年計画の第2年目である。前回までに、1-5%の全身麻酔薬ハロセンがシナプス伝達の内の後シナプス事象を示すepscを用量依存性に30-90%抑制することを示した。このシナプス伝達抑制が、pre-synapseの要因によるのか、あるいはpost-synapseの要因によるのかを確認するため、今年度はpre-synaseからのカルシウム電流、ナトリウム電流の記録を試みている。

現在までの所、シナプス前終末のパッチクランプに未だ成功していない。[方法]生後10日-2週間のラット脳をセボフルレン麻酔下に摘出し、台形体内側核(NMTB)細胞を含む橋部のスライス切片(300μ)を作成し、95%O2千5%CO2を通気したリンゲル液中で37°C1時間インキユベートした。次にノマルスキー検鏡下、台形体内側核細胞周囲のシナプス前終末を直視下に同定し、ホールセルパッチクランプし、-70mVに電位固定した。ピペット内液には5mMQX314を含んだ。[結果]台形体内側核細胞周囲のシナプス前終末のホールセルパッチクランプを試みているが、未だ安定的な記録には成功していない。技術的な面も含め、目下検討中である。[結果・経過]3年計画の3年目が終了した。1-5%の全身麻酔薬ハロセンがシナプス伝達の内の後シナプス事象を示すepscを用量依存性に30-90%抑制することを既に報告したが、現在シナプス前終末のパッチクランプに難渋している。東京大学学の高橋教授の教室で手技を習得しつつある。現在までに予備的な結果として、2-3%ハロセンがpre-synaseのカルシウム・ナトリウム電流を抑制せず、5-6mV過分極させることを見いだした。また、福井大工学部の村瀬・浅井両氏との共同研究でハロセンのpresynapse抑制作用を電位色素を用いて検討し、1999末の国際麻酔メカニズムワークショップで発表した。[方法](1)台形体内側核(NMTB)スライス実験生後10日-2週間のラット脳をセボフルレン麻酔下に摘出し、台形体内側核(NMTB)細胞を含む橋部のスライス切片(300μ)を作成し、95%O2+5%CO2を通気したリンゲル液中で37°C・1時間インキュベートした。(2)ラット脊髄スライス実験生後2週ほどのラット脊髄をエーテル麻酔下に摘出し、スライス切片(400μ)を作成、電位感受性色素(RH482)で20分間染色した後、95%O2+5%CO2を通気したリンゲル液を灌流した。脊髄後根を吸引電極に固定し、電気刺激を与えた。光吸収量の変化を高速カメラシステムで記録した。さらにハロセンを含んだリンゲル灌流下でも同様の実験を行った。
熱処理によるナノチューブの合成とボロンネットワーク固体の開発

1)アモルファス・ボロン(a-B)と六方晶窒化ホウ素(h-BN)の混合粉末を出発原料としたLi蒸気下での熱処理によるBNナノチューブ生成条件を調査した。BNナノチューブや周囲のh-BN層が絡まった組織は、a-Bの窒素ガス中での窒化やh-BNのLi蒸気下での熱処理では生成しないが、h-BNの代わりにh-AlNを用いても生成した。これらは、Li蒸気下でa-Bが窒化することにより生成すると考えられる。出発原料としてa-Bの代わりにβ菱面体晶ボロン(β-B)を用いた場合に、2つの新奇構造を発見した。h-BN粒子の<10-10>方向にジグザグ型のBNチューブが密集して覆っているものと、h-BNシートに300°の回位を導入してできる円錐(BNコーン)を入れ子状に重ねたものである。2)α菱面体晶ボロン(α-B)へのLiドープによる金属転移や超伝導転移を探索した。Liドープしたα-BのRietveld解析の結果、格子定数の変化は0.1%以下であり、試料全体としてはLiはほとんどドープされなかった。しかし、試料の一部に金属光沢のある部分があり、EELS測定によるとLiドープによるフェルミ・エッジとケミカル・シフトの存在が示唆され、金属転移が示唆された。また、SQUIDによる磁化率の測定から、強磁性成分に超伝導成分が重畳したと考えられる結果を得た。ただし、超伝導相の体積分率は約0.02%である。3)a-BにVを添加すると、B-1at.%V程度で金属への転移が起こるが、数at.%までは正20面体クラスター(B_<12>)を基本構造とした局所構造を保ったままだった。β-BのA_1サイト的なa-B中のサイトをVが占めることにより、周囲4つのB_<12>の結合が共有結合から金属結合に転換したためと考えられる。a-Siにおいて10at.%以上で4面体配位が壊れて金属間化合物的構造になることによって金属結合に転換し、金属転移することと対照的である。本年度は、我々が発見し他のグループのBNナノチューブ作製法と本質的に異なるLi蒸気下での熱処理(1200°C、約10時間)を用いて、アモルファス・ボロンとBNの混合粉末を出発原料としたBNナノチューブ生成条件を探索した。原料粉末のアモルファス・ボロンとBNを混合しないで、隔てた状態でステンレス容器内に置いた場合、BNレイヤーが絡まった組織やBNナノチューブが、アモルファス・ボロン側に生成した。さらに、BNの代わりにAINを用いても同様の結果となった。これらのことから、BNレイヤーが絡まった組織やBNナノチューブは、Li蒸気下でアモルファス・ボロンが窒化することにより生成すると考えられる。この方法を用いることにより、BNの生成物を原料BNから分離して収集することも可能となった。出発原料としてアモルファス・ボロンの代わりにβ菱面体晶ボロンを用いた場合に、2つの新奇構造を発見した。一つは、h-BN粒子の[1010]方向にアームチェア型のBNチューブが密集して覆っているものである。

この結果は、アームチェア型のBNチューブがその先端にB原子とN原子が交互に配置しているため極めて安定に成長するというモデルと一致している。二つ目は、h-BNシートに300°の回位を導入してできる円錐(BNコーン)を入れ子状に重ねたものである。アモルファスSiにVを添加した場合、局所構造が約15at.%Vで4面体配位のネットワークから金属間化合物的なものに変化した後で金属一非金属転移が生じるという報告がある。一方、アモルファスB(a-B)の場合は、B-3.5at%V以下で金属への転移が起こるが、この組成では構造変化は起きておらず正20面体クラスター(B_<12>)を基本構造としたa-B的な局所構造を保ったまま金属一非金属転移が生じていることが明らかになった。これは、β菱面体晶ボロン(β一B)のA_1サイト的なa-B中のサイトをVが占めることにより、周囲の4つのB_<12>の結合が共有結合から金属結合に転換したためと考えられる。β-BのA_1サイトを占有しないZrの場合は、その電気伝導率は同じ組成のB-V系試料に比べて大きな温度係数を示した。Zrはa-B中でVとは異なるサイトを占有し、B_<12>の金属結合一共有結合転換を引き起こさないと考えられる。1)我々が見つけたLi蒸気下での熱処理によるBNナノチューブの生成と同じ方法で、Nの供給源を用いず行ったが、理論計算から予測されているボロン三角格子ナノチューブは確認されていない。2)III族元素の中で唯一の元素半導体であるボロンが形成するB_<12>クラスターは超伝導が確認されたC_<60>,Si_<20>クラスターと同じ正二十面体対称性を持つ。そのB_<12>クラスターを構成要素とするβ菱面体晶ボロンでは十分なLiドープが可能だが、金属転移すら起きないことが報告されている。一方、同じB_<12>クラスター固体であるα菱面体晶ボロン(α-rh.B)においては理論的に超伝導が予測されている。そこで、α-rh.BへのLiドープによる金属転移や超伝導転移の有無の確認を行った。Liドープしたα-rh.BのRietveld解析の結果、Liの占有率は菱面体の八面体サイトに15(2)%、四面体サイトに19(4)%(R_<WP>=13.83%)、つまりLi_XB_<12>でx=0.53程度となる。格子定数の変化は0.1%以下であった。Liドープ前後のα-rh.BのEELS測定によるとLiドープによるフェルミ・エッジとケミカル・シフトの存在が示唆され、金属転移が確認された。また、ドープ前後の試料のSQUIDによる磁化率の温度依存性を測定した。Liドープにより無磁場冷却(ZFC)では磁化率が36K付近で急激に落ち込み、磁場中冷却(FC)との差が出ている。これは超伝導を示唆する。ただし、強磁性成分のゲタをはいている。この強磁性成分は温度に依存しないようにみえるので、各温度の磁化から100Kの磁化を引いて磁化曲線を解析したところ、常磁性と超伝導で説明できる曲線が得られた。超伝導相の体積分率は約0.02%である。3)β菱面体晶ボロンに、VやZrより原子半径が大きく、Eサイトのみ占有する可能性のあるSrドープを試みた。Srは1at.%以下でもドープされず、βボロンとSrB_2の混相となった。4)2元電子ビーム蒸着によるB-Zr系アモルファス薄膜の作製と、Mo管球にZrフィルターを用いた動径分布関数の測定を試みた。
AODアイソザイムを用いた新規異種発現系の開発と発現タンパク質の細胞内局在の制御

本研究課題は、メチロトローフ酵母Pichia methanolicaの2種のアルコールオキシダーゼ(AOD)遺伝子プロモータを利用した新規異種遺伝子発現系の確立を目的としている。昨年度、申請者は同一細胞内で複数の有用タンパク質の発現量比・発現時期をメタノールおよび酸素濃度により自在にコントロールできる2種のAOD遺伝子プロモータを利用した異種遺伝子発現系を開発した。本年度は発現タンパク質の細胞内局在の制御の可能性について検討した。AODアイソザイムがペルオキシソーム(Ps)局在であることから、AODの細胞内輸送機構を応用して発現タンパク質をPsに集積させることが可能であると考えられる。そこでAODアイソザイムの細胞内輸送制御機構の解明、さらには発現タンパク質のPs選択的輸送について検討した。まず、AODアイソザイムのPs輸送体と考えられるPex5pの一次構造とその欠損株の表現型について解析を行った。Pex5欠損株ではAODなどPs局在型メタノール代謝酵素がPsには輸送されていなかった。つまり、Ps局在型メタノール代謝酵素はPex5pを介して輸送されており、Pex5pが認識するシグナル配列PTS1が異種発現タンパク質のPs輸送に最適であると結論付けた。そこで、PTS1を付与したGFPをAODプロモータにて発現させ、その細胞内局在を観察した。その結果、GFPは効率的にPsへ輸送され、Pex5欠損株ではPs輸送は観察されなかった。また、ミトコンドリアのタンパク質内膜輸送に関与するTim9の構造についても明らかにした。これらの結果は、2種のAODプロモータを利用した異種遺伝子発現系において発現タンパク質をPsに特異的に蓄積できることを示しており、P.methanolicaの新規異種遺伝子発現系を確立することができたものと考えている。メタノールは安価でかつCO_2まで簡単に酸化されるクリーンな炭素源であることから、次世代のエネルギー源として期待されているC1化合物である。メチロトローフ酵母はメタノールを誘導炭素源にすることで、アルコールオキシダーゼ(AOD)を菌体内タンパク質の数十%に達するほど強力に誘導する能力を有している。本申請者は、メチロトローフ酵母Pichia methanolicaの2つのメタノール誘導性AOD遺伝子プロモータが、同一細胞内で複数の有用タンパク質の発現を行え、その発現量比・発現時期をメタノールおよび酸素濃度により自在にコントロールできる新たな分子生物学の研究ツールとして利用できる可能性を秘めているものと考えている。本研究では、2つのAODプロモータ、MOD1およびMOD1プロモータをそれぞれ用いた異種発現系を開発した。また、出芽酵母由来酸性フォスファターゼ遺伝子PHO5をレポーター遺伝子として両プロモータの発現力を比較したところ、両プロモータともメタノールで強力に発現されるが、グリセロールによる発現はMOD1プロモータでのみ見られた。さらには低メタノールおよび低酸素濃度下ではMOD1プロモータが、高メタノールおよび高酸素濃度下ではMOD2プロモータが優位に発現することを明らかにした。これらの結果から、P.methanolicaの2つのAODプロモータを組み合わせることで、複数の有用タンパク質の発現をそれぞれ制御できる新規異種遺伝子発現系の構築の可能性を示した。
成人の注意欠陥多動性障害とアスペルガー障害の行動特性チェックリストの作成

注意欠陥/多動性障害(以下AD/HD)、アスペルガー障害(以下AS)、統合失調症(以下S)のそれぞれの行動特性を含む独自の質問紙を作成し、一般対象者、AD/HD患者、ASを含む広汎性発達障害(以下PDD)患者、S患者に施行した。PDDについてはPDD with AD/HDとPDD without AD/HDに分類した。AD/HDに関する質問項目についての検討の結果、男性PDD with AD/HDと男性PDD without AD/HD間で回答に有意差を認めた5個の質問項目を用いると感度80.0%、特異度72.7%で両者の判別が可能であった。本研究では、成人の注意欠陥/多動性障害とアスペルガー障害をスクリーニング及び鑑別できるようなチェックリストの作成を目標としている。注意欠陥/多動性障害やアスペルガー障害を含むいわゆる軽度発達障害は、成人期になっても持続して、気分障害や不安性障害、および、行為障害、人格障害などを合併しやすいことなどから、精神医学において重要な意味を持っている。これら軽度発達障害に関連して生じる生活の中での様々な問題や困難は、成長に伴ってその表現型を変えていく。加えて、成人期以降になると幼少期の客観的情報が得られにくくなるため診断と鑑別に困難を伴うことも多い。そのため、成人の注意欠陥/多動性障害とアスペルガー障害のスクリーニング及び鑑別を適切に行えるような診断ツールの一つとして活用できるようなチェックリストの開発に取り組んでいる。初年度であった今年度は、注意欠陥/多動性障害とアスペルガー障害のそれぞれの認知行動特性を各種資料を基に検討してピックアップした。また、しばしばこれらの軽度発達障害と統合失調症との鑑別困難例や、加療経過の中で診断が再検討されて変更された症例の報告がなされ、その診断に困難をきたす症例があることが指摘されているため、統合失調症についても認知行動特性を同様にピックアップした。最終的に注意欠陥/多動性障害項目、アスペルガー障害項目、統合失調症項目の計73項目からなる患者群用の質問紙と、現在の精神状態や精神科関連医療機関への通院の有無などの質問項目を加えた健常対象群用の質問紙を作成した。現在、健常対象群1000人を目指してデータを回収中である。本研究では,成人の注意欠陥/多動性障害(以下AD/HD)とアスペルガー障害(以下AS)をスクリーニングできるようなチェックリストの作成を目標としている。AD/HDやASを含むいわゆる軽度発達障害は,成人期になっても持続して,気分障害や不安性障害,および,行為障害,人格障害などを合併しやすいことなどから,精神医学において重要な意味を持っている。これら軽度発達障害に関連して生じる生活の中での様々な問題や困難は,成長に伴ってその表現型を変えていく。加えて,成人期以降になると幼少期の客観的情報が得られにくくなるため診断と鑑別に困難を伴うことも多い。また,AD/HDとAS,ASと統合失調症(以下SZ)との関係について現在様々な議論がなされている。そうした状況を踏まえ,あえてSZの行動特性項目も加えた質問紙を作成し,成人の注意欠陥/多動性障害とアスペルガー障害のスクリーニング及び鑑別に役立つ診断ツールの一つとして活用できるようなチェックリストの開発に取り組んでいる。今年度は,昨年度作成したAD/HD項目,AS項目,SZ項目の計73項目からなる患者群用の質問紙と,現在の精神状態や精神科関連医療機関への通院の有無などの質問項目を加えた健常対象群用の質問紙を用いて,引き続き対象者を増やした。一般対象者への施行は目標人数の1000人に達したため修了した。一般対象者1067名に施行し,788名(73.9%)が有効であった。患者群では,現在までにAD/HD:30名,AS:48名,SZ:27名より回答を得ている。現在,患者群の人数を増やしている。本研究は、成人の注意欠陥/多動性障害(以下AD/HD)とアスペルガー障害(以下AS)をスクリーニングできるようなチェックリストの作成を目標として開始した。AD/HDやASを含むいわゆる軽度発達障害は、成人期になっても持続して、気分障害や不安性障害、および、行為障害、人格障害などを合併しやすいことなどから、精神医学において重要な意味を持っている。また、AD/HDとAS、ASと統合失調症(以下SZ)との関係について現在様々な議論がなされている。

そうした状況を踏まえ、あえてSZの行動特性項目も加えた質問紙を作成し、成人の注意欠陥/多動性障害とアスペルガー障害のスクリーニング及び鑑別に役立つ診断ツールの一つとして活用できるようなチェックリストの開発に取り組んでいる。今年度は、主に、一般対象群(1067名に施行し、788名(73.9%)が有効であった)のデータ解析及び、患者群での施行の継続を行った。今後段階的にデータの解析を進めていく予定である。現在、第一段階の検討として、一般対象群、AD/HD群、ASを含む広汎性発達障害群について、AD/HD項目をピックアップして、それぞれの群における特徴の検討及び群間での比較検討を行っている。
複数の細胞外シグナル因子による遺伝子発現制御の解析

発生や再生といった生命現象において、細胞の増殖や運命決定に細胞外からシグナルによる制御は重要な役割を果たしている。我々は、細胞運命に関わる遺伝子の発現が複数の細胞外シグナルによって制御されている系として、ショウジョウバエの翅・脚が形成される過程に着目して研究を進めている。ショウジョウバエの翅・脚は、TGF-beta superfamilyに属するDPPとWNT familyに属するWG、Drosophila EGF ReceptorのリガンドであるSPITZといった複数の細胞外シグナルによって胚期に誘導される。その際、それぞれのシグナル因子の発現が時間的空間的に異なったパターンで正しく制御されている。我々は、それぞれのシグナル因子の役割を調べるために、突然変異体や強制発現系を用いて解析し、さらにそれぞれのシグナル伝達経路においてクロストークの可能性を検討した。また、翅・脚形成過程において時間的空間的に発現が制御されている遺伝子を網羅的に検索するために、Gal4を用いたエンハンサートラップ系統を作成し、胚期と幼虫期に翅・脚原基で発現している系統、および成虫の脚の形態の異常を示す系統をスクリーニングしている。
胆道系悪性腫瘍のリンパ節転移における各種インテグリンタイプレセプターの発現およびその活性化機構に関する研究

多段階を経る癌の転移浸潤の成立過程においては、細胞接着因子を介した細胞・細胞外基質間接着が重要なカスケードの1つを担うと考えられ、癌細胞膜上に発現するインテグリン蛋白と転移、予後との関係が注目されている。今年度は更に胆管癌(34例)、胆嚢癌(27例)切除症例数を増やし、昨年の結果を踏まえ、癌原発巣およびその浸潤先でのインテグリン蛋白の発現と癌の転移浸潤及び予後との関係を詳細に検討を加え、更にインテグリンのmRNAの発現(RT-PCR法)を、またその局在をin-situ hybridization法にて検討した。加えて、αvβ3インテグリンのリガンドであるビトロネクチン蛋白の発現(ABC法)を検索した。その結果、(1)胆管癌、胆嚢癌いずれにおいてもn(-)症例に比べてn(+)症例で癌原発巣におけるαvおよびαvβ3インテグリンの発現亢進を認めた。またαv強発現群中において、αvとのヘテロダイマー形成体のうちβ3の発現は亢進を示したが、β5の強発現は認められなかった。また、リンパ節転移部、癌先進部では原発巣に比較して、いずれのインテグリンの染色性も低下する傾向が認められた。ly,v,pnとインテグリン発現との間には明らかな関係は認められず、独立したリンパ節転移関連因子の可能性が示唆された。(2)RT-PCR法、in-situ hybridization法において、胆管癌、胆嚢癌原発巣でのインテグリンαvβ3 mRNAの発現亢進を確認した。(3)癌転移、非転移リンパ節ともに、細胞外基質上にαvβ3インテグリンのリガンドであるビトロネクチン蛋白の同等の発現を認めた。αvおよびαvβ3強発現群で予後不良であった。【結語】胆管癌、胆嚢癌原発巣におけるインテグリン蛋白、中でもαvβ3の発現亢進がリンパ節転移の成立に強く関与し、予後を左右している可能性が示唆された。癌の転移浸潤には細胞接着因子を介した細胞-細胞及び細胞-細胞外基質間の接着が重要であり,癌細胞膜上に発現するインテグリン蛋白と転移,予後との関連が報告されている。今年度の研究は,胆管癌(32例),胆嚢癌(23例)切除症例における各種インテグリン蛋白(αV,α2,α3)の発現と癌の転移浸潤,特にリンパ節転移との関連について臨床病理学的検討を加えた。免疫組織学的手技により,染色濃度を同一切片上の正常胆道上皮の染色濃度とほぼ同等な物を弱陽性(1)とし,陰性(0),陽性(2),強陽性(3)を含む03までの4段階に分け数値化した。その結果,胆管癌原発巣においてはリンパ節転移陽性症例ではαV:2.27±0.78,α2:2.18±0.87,α3:2.18±0.40であり,リンパ節転移陰性症例ではαV:1.57±0.54,α2:1.43±0.54,α:1.57±0.54であった。胆嚢癌原発巣では,リンパ節転移陽性症例がαV:2.33±0.81,α2:2.17±0.75,α3:2.50±0.55で,リンパ節転移陰性症例がαV:1.33±0.57,α2:1.46±0.47,α3:1.33±0.58であり,リンパ節転移陰性症例に比して陽性症例ではαV,α2,α3インテグリンの発現が有意に亢進していた(p<0.05)。また,リンパ節転移部,癌先進部では原発巣に比較していずれのインテグリンの染色性も低下する傾向が認められた。ly,v,pnとインテグリン発現との間には明らかな関係は認められなかった。RT-PCR法においても,胆管癌,胆嚢癌原発巣でのインテグリンαV mRNAの発現亢進が確認された。【結語】胆管癌,胆嚢癌では,αV,α2,α3インテグリンの発現が亢進している症例にリンパ節転移を起こしやすい性質があることが示唆された。今後,これらインテグリンの発現が他の予後規定因子と併せて,独立した予後規定因子であるかを多変量解析を用いて検索を進行中である。

またαv強発現群中において、αvとのヘテロダイマー形成体のうちβ3の発現は亢進を示したが、β5の強発現は認められなかった。また、リンパ節転移部、癌先進部では原発巣に比較して、いずれのインテグリンの染色性も低下する傾向が認められた。ly,v,pnとインテグリン発現との間には明らかな関係は認められず、独立したリンパ節転移関連因子の可能性が示唆された。(2)RT-PCR法、in-situ hybridization法において、胆管癌、胆嚢癌原発巣でのインテグリンαvβ3 mRNAの発現亢進を確認した。(3)癌転移、非転移リンパ節ともに、細胞外基質上にαvβ3インテグリンのリガンドであるビトロネクチン蛋白の同等の発現を認めた。αvおよびαvβ3強発現群で予後不良であった。【結語】胆管癌、胆嚢癌原発巣におけるインテグリン蛋白、中でもαvβ3の発現亢進がリンパ節転移の成立に強く関与し、予後を左右している可能性が示唆された。
有機農業支援用稲作除草小型ロボットの開発

研究の目的本研究は有機農業支援用稲作除草小型ロボットの開発に関する研究である。日本農業の基幹作物であるお米の栽培農家では、今後、従来以上の生産の効率化や、低コスト化が求められている。一方、食品に対して消費者の安全・安心に対する関心が非常に高まっている。稲作農家では農薬の使用を減らすことや、全く使わない農法が求められている。現に少数ではあるが農薬を減らす農法に取り組まれている農家の方々もいる。稲作の農薬を減らすことや、減農薬で取り組む農法の最大の課題はいかに雑草の繁茂を防ぐことができるかである。方法はいくつかあるが手間がかかり失敗すると収穫をあきらめざるを得ないほどの、まさに農夫にとっては命がけの栽培となる。このような状況から有機農業稲作農家の方々を支援する小型除草ロボットを開発し、環境にやさしく、安全で安心のお米の栽培を支援していきたいと考えている。製作したロボットの概要ロボットの開発は10年ほど前から取り組み、今回のロボットの製作は8号機にあたり、モーターやギヤーケースなどの変更が大きな改良点である。新規にIPMモーター(250W)を組み込み、車軸によりギヤーケースに駆動力が伝達され、木製の角型ホイールにアルミ製のブレードが、対角線上に具備された車輪を回転する構成である。車輪は4組製作され、前後左右に配置し、車輪の向きは対角線上に垂直になるように配置され、推進力は対角線と平行に発生する機構である。それぞれの車輪の回転方向(推進力の方向)を組み合わせることにより、前後左右の移動が可能である。除草ロボットの概要は外形寸法縦860mm横860mm高さ785mmであり四角睡形状に構成されている。全備重量35kg、バッテリーの容量が3800mAであり、運転可能時間は負荷にもよるが30分程度である。走行実験走行実験はモータードライバーの製作が遅れていたので、仮ドライバーで確認した。実験室内や大学構内の空き地にて、前進、左右旋回走行が確認できた。今後はモータードライバーを完成させて、後進や左右移動の確認をし、水田内の走行を確認する予定である。
防腐剤に起因するハロゲン化芳香族類の水圏生態系蓄積と生体内運命の解明

防腐剤パラベンの塩素化体について、化学的な視点から代謝反応の解明と水圏生物への長期的な影響評価に取り組んだ。ラット肝S9を使った代謝系で、反応速度の解析からパラベンは塩素化に伴い、分解性が著しく低下することを明らかにした。塩素化パラベンの代謝物として3つの新規化合物を発見するとともに、合成法を確立した。このうち側鎖に水酸基をもつ化合物は、AhR活性を有することが判明した。ニセネコゼミジンコ(C.dubia)を使ったパラベン類12物質の慢性毒性試験では、化合物の疎水性が高いほど、致死率の上昇、産仔数の低下、初産日までの日数短縮が観測され、繁殖能に影響を及ぼす結果となった。はじめに前年度に発見した3物質の代謝物の標品合成に取り組んだ。まず二塩素化イソプロピルパラベンの芳香環に水酸基を導入した代謝物は、2,4-ジヒドロキシ安息香酸を原料に、塩化スルフリル/酢酸による塩素化、続く2-プロパノール中酸触媒下のエステル化による2段階で合成し、最終生成物をHPLCにて精製した(全収率7.4%)。次いで、二塩素化プロピルパラベンの側鎖2位または3位に水酸基をもつ代謝物を合成した。前者はベンゼン中DBU触媒下、塩素化ヒドロキシ安息香酸と1-ブロモ-2-プロパノールを還流した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー上でトルエン/酢酸エチル(6/4, v/v)で展開した最初の画分から目的物を得た(収率68%)。後者は酢酸亜鉛存在下、二塩素化メチルパラベンと1,3-プロパンジオールとの加熱で合成、ヘキサン/酢酸エチルから再結晶して得た(収率57%)。いずれの物質も核磁気共鳴分光法と精密質量分析から構造を確認した。合成標品を含む代謝5物質を、酵母アッセイ法にてエストロジェン(ER)と芳香族炭化水素受容体(AhR)活性を評価した結果、側鎖に水酸基をもつ2物質がAhR活性をもつことを明らかにした。また、前年度より継続している水生生物(ニセネコミジンコ)への慢性毒性試験を完結させた。パラベン類の疎水性の増加とともに、致死率増加、産仔数低下、初産日までの期間短縮が見られた。産仔数は最も低濃度で影響がでたためエンドポイントとした。その無影響濃度(NOEC)は0.04 10 mg/Lとなったが、プロピル、イソプロピルパラベンとそれらの塩素化体は濃度非依存的な毒性傾向がありNOECは決定できなかった。本データと既知急性毒性、ER活性から、主成分分析およびクラスター分析を実施した結果、4グループに分類できた。これによるとプロピルとベンジルパラベン(それら塩素化体も含む)は、メチルパラベンとは異なる毒性プロファイルを持つことがわかった。今年度は、防腐剤の塩素誘導体の水圏生物への蓄積性に関連して、はじめにインビトロ試験系における塩素化パラベンの代謝反応および代謝物の分子構造について検討した。モデル物質として、防腐剤としての使用頻度や水圏での検出事例のほか、急性毒性および内分泌かく乱作用の可能性あるプロピルパラベンの2塩素置換体(Cl2PP)を選択した。ラット肝S9mix存在下における代謝反応を一次分解反応と仮定したとき、Cl2PPの代謝速度定数(k)は0.019/min、半減期は37minと算出された。一方、親化合物(塩素を有さない)であるプロピルパラベンの(k)と半減期は、それぞれ0.97/min、0.71minであったことから、塩素化に伴う防腐剤の難代謝性が明らかとなった。主要な代謝物として、3,5-ジクロロ-4-ヒドロキシ安息香酸3-ヒドロキシプロピル(1)は、別途、ヒドロキシ安息香酸メチルから二段階の反応で得られた合成標品により、芳香環上に水酸基が置換した3,5-ジクロロ-2-ヒドロキシ安息香酸プロピル(2)は、GC-MSにより得られたマススペクトル解析により同定した。このほか、(1)の異性体と思われる化合物(3)を確認した。これらのうち生成物(1)および(2)は新物質であることが判明している。また、塩素化パラベンをヒトAhR受容体を導入した酵母アッセイ法により評価したところ、24物質中16物質が活性を示し、それらの活性能は陽性対照物質のβ-ナフトフラボン換算で0.000050.09であった。水圏生物中に蓄積する防腐剤関連物質の調査対象物質として、Cl2PPの水酸化体についても、検討する必要性が明らかになった。これは生物試料の分析の基礎的知見として有用である。

一部の物質は合成法の目処も立ったため、毒性影響も把握できるようになった。同時に塩素化パラベンが生物体内に蓄積しやすいことも速度論解析から新たに判明した。また、蓄積性を考慮した場合、長期的影響による水圏生物への有害性が課題であった。本年度は、薬物代謝や免疫機能に関与するAhR活性を評価したところ、塩素化に伴う活性の増加を明らかにした。塩素化パラベンの主要排出源である下水施設放流域から捕獲した魚類と底生生物を分析する。これらの栄養段階(食物連鎖の順位)は、δ13Cーδ15N同位体解析により決定する。また、放流域においてゲージ法による魚類および底生生物への暴露実験を実施する。これらの結果から、蓄積性の高い防腐剤関連物質を特定する。また、慢性毒性影響の更なる集積を図るため、水圏生物であるニセネコゼミジンコ(Ceriodaphnia dubia)を用いる多世代殖影響試験を実施する。該当なし