hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
酵母における活性イオウ分子：システインパースルフィドの生理的役割の解明

29年度では、出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)における活性イオウ分子:システインパースルフィド(CysSSH)産生系が哺乳類や細菌類と同様であり、cysteinyl-tRNAsynthetase(CARS)によってピリドキサールリン酸(PLP)依存的に産生させることを見いだした。本年度は、まずCRISPR/Cas9システムを用いて、CARSに変異(PLP結合部位のリジンをアラニンに置換)を導入し、細胞内CysSSH含量が低下した変異株を作製した。この株の表現型を解析したところ、経時寿命が顕著に減少していることを見いだした。また、低下した寿命は活性イオウドナー(Na2S2、酸化型システインパースルフィド、酸化型グルタチオンパースルフィド)の添加によりほぼ完全に回復することも見出した。変異体の短寿命の原因を解析したところ、変異体において、ミトコンドリアのエネルギー代謝や小胞体ストレスに異常が起こっていることが判明した。加えて、多細胞生物のモデルである線虫(Caenorhabditis elegans)のCARS変異体においても野生株に比べて寿命の短縮が観察された。これらの結果から、CARSによって産生されるCysSSHは内因性の寿命制御因子であることが考えられた。今後、CysSSHによる寿命制御機構を解明することで、ヒトの抗老化戦略の構築のみならず、エネルギー代謝異常が関わる各種疾患(ミトコンドリア病、生活習慣病、がん等)の発症機構の理解と予防・治療法の開発に大きく寄与することが期待される。システインにイオウが過剰に結合したシステインパースルフィド(CysSSH)は高い求核性・還元性を有しており、生命活動に極めて重要だと考えられている。これまでに我々は、CysSSHが翻訳関連酵素cysteinylーtRNA synthetase (CARS)によってシステインから生合成されることを見出している。本研究では、出芽酵母をモデル生物として活用することで、CysSSHの生理機能の解明を目指した。平成29年度では、先ずゲノム情報から酵母CARS遺伝子の同定を試みたところ、酵母CARS遺伝子(CRS1)は他の生物種で認められるようなサイトゾル型やミトコンドリア型の区別がないことが示唆された。GFP-tagによる細胞内局在解析においても、CRS1翻訳産物はサイトゾルとミトコンドリアに両局在していることが確認された。両局在化のメカニズムを解析した結果、CRS1は複数の転写開始点を持つことで、1つの遺伝子から2つのタンパク質(サイトゾル型とミトコンドリア型)を発現していることを見出した。次に、CysSSH合成活性に必要なピリドキサルリン酸結合部位に変異を導入し、CysSSH量が減少した株(一倍体)の作製に成功した。この株は野生株に比べて経時寿命の大幅な低下が認められ、減少した寿命が活性硫黄ドナーや硫化水素ドナーでほぼ完全に回復することを発見した。以上より、出芽酵母もCARSによるCysSSH合成経路が保存されていることが明らかとなった。また、CysSSH合成経路が真菌類である酵母細胞にとって極めて重要なシステムであることから、この経路の阻害剤は抗真菌剤の候補になると考えられた。本年度は、当初計画していた酵母CARS遺伝子(CRS1)の局在および転写機構の解析を行い、CRS1はミトコンドリア形成に関与するHap複合体転写因子依存的に転写開始点を調節することで、一つの遺伝子からサイトゾル型とミトコンドリア型を発現していることを発見した。また、大腸菌から調製した組換えCrs1がCysSSH合成活性を有していることも確認できた。さらに、CysSSH合成活性に必要なピリドキサルリン酸結合部位に変異を導入し、CysSSH量が減少した株の作製に成功した。この株は野生株に比べて経時寿命の大幅な低下が認められ、減少した寿命が活性硫黄のドナーで回復することを発見した。このように、研究目的である酵母CARSの局在化機構を解明した、また、CysSSH機能解析のための変異株の作製に成功し、この株を用いてCysSSHが寿命の制御因子であることを発見した。以上より、研究は計画通り進んでおり、おおむね順調に研究が進展していると考えられる。

今後、CysSSHによる寿命制御機構を解明することで、ヒトの抗老化戦略の構築のみならず、エネルギー代謝異常が関わる各種疾患(ミトコンドリア病、生活習慣病、がん等)の発症機構の理解と予防・治療法の開発に大きく寄与することが期待される。今後は今年度作製した変異株を用いて、CysSSHの寿命制御機構を詳細に解析する予定である。先ずは、寿命過程における経時的な細胞内CysSSH量やポリスルフィドタンパク質の変動を解析する。さらに、これまでの文献で寿命に関与すると知られているERストレスおよび、タンパク質酸化障害、マイトファジーに注目し解析を進め、CysSSHの寿命制御機構を解明する。また、CysSSHの制御機構の生物種普遍性を明確にするために、線虫を用いた実験も行う。本年度は、実験に使用する試薬、消耗品などの物品費が当初の予定よりも少ない額で目的を達成することができたため。ERストレスおよび、タンパク質酸化障害、マイトファジーの検出のために、質量分析用消耗品および、蛍光プローブ、各種抗体の購入に使用する。また、研究成果を論文にまとめ投稿するための英文校正、論文投稿費用として使用する。
高分子電解質ナノ架橋体に見られる粒子内・粒子間相互作用に関する分子論的研究

本研究課題は,バルクゲルと同じ化学組成を持つナノ架橋体(マイクロゲル又はナノゲル)を合成し、バルクゲルの体積相転移(膨潤・収縮)を,(1)ナノ架橋体の粒径変化および(2)直鎖状高分子電解質のコンホメーション変化と比較しながら,架橋高分子(ゲル)の体積相転移の分子論的本質を見極めることを目的とした。具体的には、N-isopropylacrylamide(NIPA)系高分子網目に酸、塩基および酸・塩基両者からなるイオン基を導入した電解質ナノ架橋体を供試料として,動的光散乱・静的光散乱・電気泳動光散乱実験を行い、pH、温度,イオン強度を変化させた場合の粒径(流体力学半径と慣性半径)を詳細に調べ、架橋体の荷電状態(電気泳動移動度)と比較した。さらに,その結果をナノ架橋体の構成員である鎖状高分子電解質の結果と比較した。一方で,ナノ架橋体と反対符号の電荷を持つポリイオンとの複合体形成(架橋分子・鎖状分子間相互作用),異符号電荷を持つナノ架橋体間の複合体形成(粒子間相互作用)に関する研究を行った。また,中性高分子網目中に球状荷電を閉じ込めた新たな高分子電解質ナノ架橋体の合成法を確立するための基礎研究として,中性高分子/タンパク質(球状荷電)系の複合体形成に付いても予備的な実験を開始している。以上の結果は,我々が提案した分子論的な仮説『ゲルの体積相転移は,架橋高分子鎖間の斥力(同符号電荷間のCoulomb力)と引力のバランスが崩れた場合に起こり、引力としては疎水性相互作用、水素結合、van der Waals力、異符号電荷間のCoulomb力に分類できる:(a)Ilmain,F. ; Tanaka, T. ; Kokufuta, E.Nature 1991,349,400;(b)Kokufuta, E.In : Physical Chemistry of Polyelectrolytes ; Radeva, T., Ed. ; Marcel Dekker, Inc., New York, Basel,2000;Chapter 17』を用いて明確に説明できることが分かった。なお、これらの結果を応用して、高分子電解質系グラフト共重合と等価な物性を有するイオン性ナノ架橋体の合成法を考案し、本研究分野の新たな展開を試みつつある。本研究は、バルクゲルと同じ化学組成を持つナノ架橋体(マイクロゲル)の合成方法を確立し、バルクゲル及び直鎖状高分子電解質と比較しながら、ナノ架橋体の粒子内・粒子間相互作用の本質を明らかにすることを通して、ナノ架橋体の分子設計概念を提案することを目的とする。そこで、最初に、温度、pHおよび塩濃度の変化で顕著な粒径変化を示す両性高分子電解質ナノ架橋体を合成し、その水分散系に対して動的光散乱と静的光散乱実験を行うと、ナノゲル微粒子の分子量は数百万で、膨潤半径が100nm程度の球状構造をとり、膨潤状態での高分子密度は約1%程度であることが明らかとなった。また、電気泳動光散乱実験データ解析から、この架橋体微粒子は、電場下で"素抜け粒子"として挙動することがわかった。従って、粒子の構造は、ヒゲ状高分子鎖(dangling hair chain)に覆われた"

ソフトな界面をもつ高分子コロイド"と考えられる。これは、ゲル微粒子を"ハードな界面を持つ高分子コロイド"と考えてきた従来の概念と異なるもので、ポリイオン包括型架橋高分子網目の合成やキャラクタリゼーションを行うための重要な基礎情報となる。以上の実験結果と比較するために、次に、ナノ架橋体と類似した化学組成を持つ高分子電解質バルクゲルの合成を行い、その膨潤特性を調べた。その結果、ナノゲル微粒子と同じpH領域で収縮し、明らかに当電点の存在が認められた。さらに、膨潤度の塩濃度及び温度依存性を調べた実験からも、ナノゲル微粒子とバルクゲルの類似性が認められた。従って、ナノ架橋体の粒子内での高分子網目間の相互作用は、バルクゲルの場合と同じであると考えられる。他方、高い濃度のゲル微粒子分散系を用いた濁度測定実験を行うと、ナノ架橋体及びバルクゲルが収縮する条件で凝集が起こり、粒子間相互作用と粒子間相互作用には高い相関が認められた。本研究の目的は、高分子電解質ナノ架橋体の粒子内相互作用及び粒子間相互作用を、バルクゲルの体積変化とポリイオン鎖のconformation変化に対比させながら、分子間の斥力と引力に基づく"バランスモデル"を用いて議論しようとするものである。そのための有効な手段の一つとして、架橋高分子網目(ゲル)の電荷分布の不均一性の効果を調べる方法が考えられる。そこで、(1)N-イソプロピルアクリルアミド(NIPA)を主要構成成分とする高分子電解質網目内に酵素を固定し、固定化酵素反応によりゲル相内にpH勾配を形成させる方法と、(2)NIPA系両性高分子電解質網目にポリアニオンを包括させて局所的に電荷密度を高める方法を用いて、バルクゲルの膨潤・収縮特性を調べた。その結果、(1)及び(2)何れの系でも、架橋高分子網目の電荷がランダムに分布する系とは明らかに異なる膨潤・収縮挙動が観察された。これらの結果は、ゲル相とバルク相の間にDonnan膜平衡を仮定し、膨潤力をゲル相内の対イオンの浸透圧に帰着されるFlory'モデルでは説明できない。他方、架橋高分子網目の固定電荷間の静電相互作用を考慮するKatchalsky'モデルを基本とする"バランスモデル"は、引力として(a)異符号電荷間のクーロン力および(b)疎水性相互作用と(c)水素結合を考慮し、同符号電荷間斥力とのバランスを考えるとで(1)と(2)の実験結果を良く説明できることが明らかとなった。さらに、高分子電解質ナノ架橋体(ナノゲル)と鎖状高分子イオンの複合体形成に伴う粒子間と粒子内相互作用に関する実験結果も、"バランスモデル"を用いることで、十分に理解できることが分かった。なお、これらの結果を応用して、新たなタイプのグルコースセンサの開発を行った。
Q熱による呼吸器感染症の診断精度向上と簡略化に関する研究

急性Q熱による呼吸器感染症の診断上の問題点を分析し、検査方法の精度向上をはかることに主眼をおいて一連の検討を施行した。コクシエラ抗体価の測定方法に関する検討現時点の日本でも入手可能な5種類のコクシエラ感染症診断用ELISAキットを入手して、急性Q熱診断のためのスクリーニング法としての評価を試みた。一部のキットは急性Q熱のスクリーニング法としての有効性が示唆されたが、導入にあたってはIFA法と組み合わせてスクリーニングのためのカットオフ値を再評価すること、またスクリーニング陽性例の最終判定としては必ずIFA陽性を確認することが必要と考えられた。またいずれの方法で抗体価を測定するにしても、急性Q熱の診断に際してはその抗体価を急性期以降も出来る限り長期間(2ヶ月程度)にわたって追いかけることが検出効率の向上のためにはきわめて重要と考えられた。PCR法の精度向上に関する検討コクシエラを対象としたPCR法に関しての精度向上、安定化および簡略化を目標として一連の検討を施行した。まずDNA抽出法に関しては市販の4キットと簡易抽出法との比較検討を試みたところ、血液検体では市販キットのほうが簡易抽出法より明らかに高い検出感度を示したが、気道検体に関してはいずれの抽出法であっても検出感度はほぼ同等と判断された。また喀痰に関してはDNA抽出以前の喀痰溶解過程を十分に施行することが重要と考えられた。プライマー設定に関しては既存に報告されているcom1遺伝子領域、IS1111a領域、および16srRNA領域のプライマーの検出感度を評価したところ、前2者の増幅効率および特異性はいずれも良好であった。また気道検体に関しては良質な検体の採取努力が最終的な検出効率にかなり大きな影響を及ぼす可能性が高いものと考えられた。1)PCR法に関してはまず各種DNA抽出法に関する比較検討を試みた。QLAamp DNA mini KITとDNAextractor WB mini KIT、およびCHELEX100を用いた簡易抽出法との3者に関して、各種検体を用いた場合の検出感度の比較を試みた。新鮮な喀痰にコクシエラ加熱死菌を添加して処理した擬似陽性サンプル、および新鮮な全血に同様にコクシエラ加熱死菌を添加してから遠心して得られた血清、血漿および白血球分画をサンプルとして各々の検出感度を比較したところ、まず気道サンプルに関しては3法の検出感度はほぼ同等と判断された。続く血液系サンプルに関しては、既存のキットを用いた抽出法のほうが簡易抽出法より明らかに感度は優れており(10倍程度高感度)、また既存キット両者のなかではQLAamp DNA mini KITのほうがより再現性の良い安定した結果を示していた。したがって以後の検討では気道サンプルは簡易抽出法、血液サンプルはQLAamp DNA mini KITを標準法として比較解析を進めていくものとした。2)PCR法のプライマーに関しては、平井らの報告したcom1の検出系を標準として検討しているが、その後の予備実験ではIS1111aという別領域を増幅する検出系のほうがより高感度な結果が得られてきており、両者の比較検討をいくつかの臨床サンプルを用いて翌年度も続行する。3)抗体検出系に関しては、CHECKT-Q-FEVER ELISA KITを輸入のうえ本来のターゲットであるウシ血清約200件を用いたIFA法との比較検討を試みたところ一定の相関(若干不安定)は確認できた。その後スペインで作成されたヒトのQ熱診断用ELISAKITが商業ベースで入手可能となったため、第二年度に関してはこちらのキットも交えて多数のヒト検体でのIFA法との比較検討をすすめていく方針とする。1)コクシエラ抗体価の測定方法に関する検討5種のコクシエラ検索用ELISA KITを用いて一連の検討を試みた。

家畜用の1相菌+2相菌抗体価測定キットであり、宮城県内のウシ200頭の血清を用いた検討においてはIFA法での測定結果と比較的良好な相関を示しており、特にスクリーニング検査法としての有用性が示唆された。IgGキットに関してはIFAと比較した場合は検出感度が低めであり、良好な相関は認められなかった。IgMキットに関してはIgGよりはよい相関が認められたが、実際の患者血清での検定を進めていったところ、オリジナルの陽性基準値を甘め(Low positive)に設定すると陽性例を拾いすぎる傾向がみられ、国内症例のスクリーニングに使用する場合には基準値の設定に注意する必要があるものと思われた。やはりIgGよりはIgMキットのほうがIFA法と比較した場合は良好な成績を示しており、カットオフ値の設定に注意しつつスクリーニング検査として使用できる可能性が示唆された。2)PCR法の条件設定、感度向上に関する検討
人体の構造と細胞の生物活動を基軸としたIT理科学習システム

人体と細胞、いろいろな生物の構造と機能について、ITを利用して学習する、生き物探検センター(http://adam.med.gunma-u.ac.jp/rika/)を制作し、インターネットに公開した。このホームページは、生物に強い興味と関心のある小学校56年生を対象とし、主体的に知的好奇心を深めながら生物について学習することを主眼として制作した。動画、あるいは複数の写真の組み合わせによって、視覚的に変化のある教材を制作することに重点を置いた。「細ぼう」「生き物のたん生」「ミクロの世界」「ひとの体のつくり」の4つの部屋を構築した。1.「細ぼう」は、細胞の構造と細胞の活動を学習する部屋で、培養細胞の細胞分裂、繊毛運動を動画撮影し、細胞内小器官について、顕微鏡写真をもちいて解説した。2.「生き物のたん生」は、胚の一個の細胞から魚としての形になるまでを学習する部屋で、モデルとしてゼブラフイツシュを利用した。胚の経時変化を34時間写真撮影して体ができるまでの過程を理解できるようにした。胚と胚の心臓の動きを動画撮影して「動き出すぞ」を作成し、動物の発生を実感できるようにした。3.「ミクロの世界」は、昆虫のミクロ画像(電子顕微鏡画像)の部屋で、身近な昆虫を走査型電子顕微鏡により観察、撮影し、9種類の昆虫についての「どんどん大きく」と、22問のクイズ形式のコンテンツの「チョー拡大」の2つの項目を作成した。4.「ひとの体のつくり」は、人体のからだの不思議さを学習する部屋で、「消化器」と「知ってる」の2項目を作成した。ヒトの消化管のX線透視によって撮影したムービーを用い、「消化かんを見る」を制作した。消化管のなかでの摂食物の変化について、「消化と吸収」というアニメーションを制作した。
高脂肪食摂取による食後高血糖に及ぼす運動の影響

短期間の高脂肪食摂取が食後血糖値に及ぼす影響および高脂肪食により生じる食後高血糖に及ぼす運動の影響を検討した。その結果,短期間の高脂肪食は食後血糖値の上昇を助長した。また、急性の運動は、短期間の高脂肪食摂取により生じた食後血糖値の上昇を抑制する効果は小さかった。現在,糖代謝の指標として空腹時血糖値が広く用いられているが,近年,心血管疾患リスクをより予測できるとして,食後血糖値が注目されている.食後血糖値上昇は,空腹時血糖値上昇よりも前段階に生じるとされ,早期の糖代謝異常を反映するものである.そのため,食後血糖値上昇を引き起こす要因を解明することは,心血管疾患予防につながると考えられる.そこで,食後血糖値上昇を引き起こす要因を探るため,本研究では食後血糖値に及ぼす短期間の高脂肪食摂取の影響を検討した.対象者は,若年成人男性9名(年齢2430歳)であった.対象者に普通食ならびに高脂肪食を3日間摂取させた.それぞれの摂取期間後に120分間の経口糖負荷試験を実施し,試験中に経時的に血液を採取した.採取した血液から,グルコース(糖),インスリン,C-peptide,遊離脂肪酸,およびアディポカイン(インターロイキン6,TNFα)濃度を測定し,それらの動態を普通食後と高脂肪食後で比較した.経口糖負荷試験中のグルコース濃度は,普通食摂取後に比べ,高脂肪食摂取後において有意に高値で推移した.また,グルコース濃度曲線下面積は,普通食摂取後に比べ,高脂肪食摂取後で有意に高値であった.インスリン濃度の推移は,普通食摂取後と高脂肪食摂取後で違いは認められなかった.C-peptide濃度は,普通食摂取後に比べ,高脂肪食摂取後に高値で推移し,曲線下面積にも違いが認められた.遊離脂肪酸,インターロイキン6およびTNFα濃度の動態には,普通食摂取後と高脂肪食摂取後で大きな違いはなかった.これらの結果は,短期間の高脂肪食摂取が食後血糖値上昇を引き起こす要因であることを示している.高脂肪食摂取による食後血糖値の上昇は,末梢組織の糖取り込みの減少,もしくは肝臓の糖放出の増加が関与していると考えられる.現在,糖代謝の指標として空腹時血糖値が広く用いられているが,近年,心血管疾患リスクをより予測できるとして,食後血糖値が注目されている.急激な食後血糠値上昇は,血管障害を惹起するため,その予防が重要となる.食後血糖値上昇を引き起こす要因として,短期間の高脂肪食摂取があげられる.一方,一過性の有酸素性運動は,運動後,数日間にわたり末梢の糖取り込みを増加させることから,食後血糖値上昇を抑制すると考えられる.そこで,本研究では一過性の有酸素性運動が短期間の高脂肪食摂取により引き起こされる食後血糖値上昇に及ぼす影響を検討した.対象者は,若年成人男性11名であった.対象者に普通食(普通食試行)ならびに高脂肪食(高脂肪食試行)を3日間摂取させた.加えて,高脂肪食を3日間摂取させ,摂取期間に中強度有酸素性運動(高脂肪食+運動試行)を実地させた.それぞれの試行後に120分間の経口糖負荷試験を実施し,試験中に経時的に血液を採取した.採取した血液から,主にグルコース,インスリンおよびC-peptide濃度を測定し,それらの動態を3試行間で比較した.経口糖負荷試験中のグルコース濃度は,普通食試行後に比べ,高脂肪食試行および高脂肪食+運動試行後で有意に高値であった.また,グルコース濃度曲線下面積は,普通食試行後に比べ,高脂肪食試行および高脂肪食+運動試行後で有意に高値であった.しかしながら,インスリン濃度の推移および曲線下面積には3試行間で違いは認められなかった.また,C-peptide濃度推移および曲線下面積にも3試行間で違いはなかった.これらの結果から,一過性の中強度有酸素性運動では短期間の高脂肪食摂取により引き起こされる食後血糖値上昇を抑制する効果が小さいことが明らかとなった.
βラクタム剤の抗MRSA活性を復活させるトリプロペプチンCの機序解明

本研究の目的は、βラクタム剤のMRSAに対する抗菌力を復活させ、相乗的に強い抗菌力を示すtripropeptin C (TPPC)の作用機序を明らかにすることである。過去2年度で下記について明らかにした。すなわち、MRSAは、βラクタム剤による刺激で外来遺伝子のβラクタム耐性遺伝子のベータラクタム分解酵素(BlaZ)及びベータラクタムに低親和性の細胞壁重合酵素であるmecA (Pbp2A)の発現が誘導されβラクタム剤に耐性を示す。一方、TPPCをβラクタム剤と併用してMRSAに処理するとβラクタム耐性遺伝子のBlaZならびにPbp2Aの発現誘導を選択的に非誘導時レベルにまで低下させることを見いだし、耐性遺伝子の発現抑制がβラクタム剤のMRSAに対する抗菌力を復活させた要因であることを明らかにした。さらに我々の動物施設の協力を得て、MRSA全身感染マウスモデルを構築し感染治療試験を行ったところ、単剤で治療効果を示さない投与量のTPPC/βラクタムの併用で非常に高い治療効果を示し、これらを論文発表した。最終年度は如何にしてTPPCがMRSAのβラクタム剤による耐性誘導を阻害するかを明らかにするため、TPPC/βラクタム併用で相乗的な抗菌活性を示さなくなった株をcheckerborad法を繰り返すことで選択作製し、得られた株群を解析することでその機序の解明を試みた。得られた株5株の全ゲノムを次世代シーケンサーで解読し、親株と比較し変異点を探索した。その結果、細胞壁合成を調節する2成分制御系のvicK, RNA polymeraseサブユニットrpoB, rpoC,環境ストレス応答シグマ因子のsigB,排出タンパクのvraEに共通して変異が見られた。現在これら候補遺伝子群の発現解析などを進めβラクタム耐性克服に関する知見の収集を進めている。そこでまずはTPPCが臨床分離MRSAのBlaZ分解活性を阻害するか検討を行ったが、TPPCはこれを阻害しなかった。一方で、MRSAはベータラクタムを検知してベータラクタマーゼを発現誘導することが知られているが、TPPCをMRSAに処理するとベータラクタムによる誘導の有無にかかわらずBlaZの発現誘導を阻害した。前述した2種の外来耐性遺伝子BlaZ, Pbp2Aは構造類似性の非常に高い感知器、シグナル伝達酵素によって相互に制御され、一方の経路が活性化されることで双方の耐性遺伝子発現が誘導される。そこでblaZ, pbp2Aシグナル伝達経路及びその他の薬剤耐性に関わる因子の発現量を検討したところ、TPPCはベータラクタムによる耐性遺伝子発現を選択的に非誘導時レベルにまで低下させることを見いだし、耐性遺伝子の発現抑制がβラクタム剤のMRSAに対する抗菌力を復活させた要因であることを明らかにした。さらに我々の動物施設の協力を得て、MRSA全身感染マウスモデルを構築し、感染治療試験を行ったところ、単剤で治療効果を示さない投与量の併用で非常に高い治療効果を示した。以上の機序解析ならびに動物実験における併用治療効果に関して論文発表した。申請段階で計画していた内容についてほぼ予定通りに進んでいると考えている。すなわち、今年度は、昨年度構築したマウスのMRSA全身感染治療モデル系を利用してTPPCとベータラクタムのin vivoにおける併用効果について検討できた。これに加えて、TPPCがベータラクタム剤のMRSAに対する抗菌力を復活させる機序についても知見を得、論文することができた。興味深いことにTPPCとβラクタム併用での相乗的抗菌活性は耐性菌であるMRSAでは認められるが感受性菌であるMSSAでは認められなかった。

そこでMSSAに、MRSAの定義となる耐性遺伝子mecA geneを導入して人工MRSAを作成した。導入株はβラクタムに耐性を獲得し、TPPCとβラクタム併用での相乗的抗菌活性を示したため詳細に併用効果、併用処理時の耐性遺伝子の発現に関して解析を開始した。また、構造ならびに抗菌活性に多様性のあるTPPCの各種半合成誘導体のβラクタム賦活化効果を検討した。当初の想定よりも多くの半合成誘導体で賦活化効果が見られ、今後詳細な検討を継続して相乗性に必要な構造部位の特定につなげたい。さらに我々の動物施設の協力を得て、MRSA全身感染マウスモデルを構築し、TPPCとβラクタム併用での治療効果を検討した。本申請課題では、in vitroでのTPPCとβラクタム併用での相乗的抗菌活性が、マウス体内においても同様に働き、マウスのMRSA全身感染モデルにおける治療効果の改善が認められるかを明らかにすることも重要な課題である。なお、TPPCと併用するβラクタムにはin vitroのチェッカーボード法において相乗効果の高い化合物を選定した。予備的な感染治療試験を行ったところ、単剤で治療効果を示さない投与量の併用で治療効果が改善した。今後詳細な検討を進めたい。なお、βラクタム剤のMRSAに対する抗菌力を復活させ、相乗的に強い抗菌力を示すTPPCの知見に関して国際学会にて報告した(2016年3月28日、国際創薬シンポジウム、横浜)。申請段階で計画していた内容についてほぼ予定通りに進んでいると考えている。人為的に耐性遺伝子を導入した人工MRSAを構築し、その感受性変化及び併用効果について検討したところ、臨床のMRSAと同様の挙動を示した。現在、この株の遺伝子解析などを開始しており、結果が揃い次第、これまでの成果を論文化する予定である。動物実験に関しては、本年度は併用するβラクタム剤の選定ならびにモデル系の構築を予定していたが、連携研究者の協力により評価系の構築が完了し、当初よりも迅速に進展している。TPPCがベータラクタム剤のMRSAに対する抗菌力を復活させる機序について、ベータラクタムの耐性遺伝子の選択的な発現抑制が要因であることを見いだしたが、標的分子やそこに至る経路については未解明のままである。未検討の関連遺伝子の発現パターンの解析や遺伝学を駆使してこれらを明らかにしたい。また、各種半合成TPPC誘導体を用いてβラクタムとの併用効果を検討しているが、本年度はさらに対象化合物を増やし、相乗効果に必要な構造特定につながるようさらに実験を行う。MSSAにMRSAの定義かつ特長である耐性遺伝子mecA geneを導入した人工MRSAを構築できたので、本年度はこの株を用いて、併用効果や遺伝子発現などを詳細に調べ、TPPCによるMRSAのβラクタム耐性克服の機序を明らかにしたい。また、臨床分離株ならびに上記人工MRSAに対して、TPPCとβラクタムの単剤ならびに併用時の相乗効果と関連する遺伝子発現を解析し、その関連性について明らかにしていく。
無整流子電動機の補償巻線方式による瞬時磁束一定速度制御に関する研究

本研究は、無整流子電動機に補償巻線を設けて、電機子反作用を相殺し、さらに電機子電流正相分の大きさと位相を制御することにより、電機子鎖交磁束の大きさを常に一定に保って、速応性の良い、しかも力率を1とする運転ができる速度制御系を構成することを実証しようとするものである。本年度配分を受けた研究費により、次の諸項目の研究を実施した。1.供試電動機の負荷用電動発電機(ミナーシャモータ)を購入し、両者を直結する電動機台を外注して、過度特性の精密測定に備えた。2.電力可逆方式直流電源部を設計し、製作した。3.電圧型9相GTOインバータなどの主回路を設計し製作した。4.上記各部の制御回路を設計し、製作した。5.各部の動作試験と、それらを結合した総合実験を行った。直流電源は12パルス位相制御整流電源とし、常用されている6パルス方式のものより速い応答を得るものとなり、ほぼ2msecの時定数で応答し、入力周波数100Hzの正弦波にも良く応答した。これは本方式の目的に充分適応できるものである。GTOサイリスタ18個を使用する9相電圧型インバータは、三相三重巻線同期電動機に波形改善用リアクトルを介して給電するためにほとんど完全な正弦波の出力電流を発生し、瞬時磁束の大きさを制御するのに有用な方式であることが確認できた。制御部では、電機子磁束鎖交数を一定に保つように演算制御し、速度および電流制御系は、いずれもPI制御を行った。速度の過度応答は、立ち上がり時間約20msecで、直流機と同等の良好な特性を得た。なお、更に良い制御特性を得るために、また、特性限界を明確にするために、引き続き研究中である。
レーザー細隙灯と温度感受性リポソームによる脈絡膜循環の新しい観察法の開発

近年高齢化社会を迎え、加齢黄斑変性症に代表される脈絡膜疾患は臨床的に高頻度となり、その病態生理学の研究は非常に重要なものとなっている。しかしながら網膜血管と比較して脈絡膜血管は生体下で特異的に造影することが難しいことにより、脈絡膜循環については未だに解明されてない部分が少なくない。本研究は,持続的局所レーザー照射と温度感受性リポソームを用いた脈絡膜血管造影を行うことにより,脈絡膜循環パターンとその領域別支配についての詳細を明らかにした.本研究の意義のひとつは脈絡膜循環を評価する方法として新しい造影方法を開発した点にある.すなわち,蛍光色素を内包した温度感受性リボソームを静注後,眼底局所に温熱用レーザーを照射し,相転移温度(内包物を放出する温度)に達したリポソームから蛍光色素を放出させる一方,アルゴンレーザーを照射し,その蛍光像を観察するというものである.この造影方法では網膜血管蛍光像は観察されず,網膜循環を除いた選択的な脈絡膜循環の観察が可能となった.そしてこの方法を用いることにより脈絡膜毛細血管が領域別支配を受けていることが生体内で示された.また部位により脈絡膜毛細血管の循環像は異なり,周辺部に比べ後極部の脈絡膜毛細血管の方がより効率の良い循環システムを持つことが示唆された.本研究ではサルが用いられているが,この造影法は低侵襲であり改良を加えることによって将来的にはヒトへの応用が可能であると考えられる.蛍光色素であるカルボキシフルオレセインを内包した温度感受性リポソームを、freeze&thaw法で作成した。リポソーム作成に用いるリン脂質の主成分は相転移温度41度のDPPCを用い、エクストルーダーでリポソームの粒径を200nmに揃えた。トプコン社の協力を得て、眼底を暖めて温度感受性リポソームを放出させる温熱用ダイオードレーザーと放出された蛍光色素を観察するための励起用アルゴンレーザーを現有する光凝固用の細隙灯に組み込んだ。レーザー細隙灯にCCDカメラおよび画像エンハンサーを接続して、得られた画像をデジタル化して録画し、デジタル画像をその後コンピューターで解析できるシステムを作成した。温度感受性リポソームをサルに静注後、改良型レーザー細隙灯を用いて選択的脈絡膜血管造影を行うことに成功した。ダイオードレーザーの持続照射により3相(Filling, Ploteau, Draining)の脈絡膜毛細血管像が観察された。Ploteau相においては脈絡膜毛細血管の葉(lobe)が造影され、レーザーが同じ部位に照射されている間その領域は拡大も縮小もしなかった。このことから脈絡膜毛細血管が葉(lobe)という独立した機能的領域に分割され、それぞれの葉が正常下では互いに交通がないことが分かった。またサルの脈絡膜毛細血管の部位による循環像の違いを示すことができた。後極部においてのみ、FiUing相とPlateau相で多数の小葉(lobule)構造が葉(lobe)内に見られ、各小葉は中心部から充填され周辺部から流出するパターンが見られた。周辺部においては、脈絡膜毛細血管だけでなく脈絡膜の大血管像が見られた。これらの結果から周辺部に比べ後極部の脈絡毛細血管の方がより効率の良い循環システムを持つことが示唆された。本造影法は脈絡膜循環のin vivo評価に有用と考えられる。本研究は,持続的局所レーザー照射と温度感受性リポソームを用いた脈絡膜血管造影を行うことにより,脈絡膜循環パターンとその領域別支配についての詳細を明らかにした.本研究の意義のひとつは脈絡膜循環を評価する方法として新しい造影方法を開発した点にある.すなわち,蛍光色素を内包した温度感受性リボソームを静注後,眼底局所に温熱用レーザーを照射し,相転移温度(内包物を放出する温度)に達したリポソームから蛍光色素を放出させる一方,アルゴンレーザーを照射し,その蛍光像を観察するというものである.この造影方法では網膜血管蛍光像は観察されず,網膜循環を除いた選択的な脈絡膜循環の観察が可能となった.そしてこの方法を用いることにより脈絡膜毛細血管が領域別支配を受けていることが生体内で示された.また部位により脈絡膜毛細血管の循環像は異なり,周辺部に比べ後極部の脈絡膜毛細血管の方がより効率の良い循環システムを持つことが示唆された.本研究ではサルが用いられているが,この造影法は低侵襲であり改良を加えることによって将来的にはヒトへの応用が可能であると考えられる.
胸腺内アロ胸腺支質細胞移入による免疫学的寛容誘導の試み

膵ラ氏島・皮膚移植において、胸腺内に胸腺上皮・ナ-ス細胞をALS投与下で移入することによって、胸腺キメラの成立と移植免疫寛容誘導が認められた。免疫寛容誘導はALS投与下胸腺上皮・ナ-ス細胞の胸腺内同時移入したAdultマウスすべてに認められ、膵ラ氏島・皮膚移植片の長期生着が得られた。ALS投与下、胸腺上皮単独では65%のマウスに寛容が誘導されたが、ナ-ス単独ではその効果が認められなかった。誘導された免疫寛容はドナー特異的であった。細胞性免疫能の検討では、target cellをBALB/c由来fibroblastを用い行った。その結果、胸腺キメラマウスと無処置マウスとのCTLのactibityと発生頻度に有意差は認められなかった。本実験系でclonal eliminationの有無を調べるため、マウスのTCRのタイプ毎のcDNA sequencingを行い、V領域のサブファミリーを既知のものとそのhomologyをもつものを調べ、これらの各サブファミリーに相当するオリゴマーを準備した。今後、TCRの解析を行う予定である。ブタを用いた腎と肝の移植実験系は既に確立しているので、今回、膵の自家移植を行い手術手技の確立を行った。その結果、術後安定したブタの生存を確認できた。純系とはいえないが3つの系とされているミニブタより胸腺上皮・ナ-ス細胞の分離培養を試みているが、細胞樹立にいたっていないが、これらを継続する。BALB/cマウス胸腺より樹立した上皮細胞・ナ-ス細胞クローンをC3Hマウスの胸腺内に移入し、胸腺キメラを成立させることができた。同時にこのキメラマウスにおいて、BALB/cマウスの膵ラ氏島は400日を越える永久生着、皮膚移植でも100日を越える強い免疫寛容状態が誘導された。Aj・B6マウスなどのthird partyの移植片は拒絶され、この免疫寛容がドナー特異的であることが示された。細胞性免疫の検討をMixed lymphocyte reaction(MTR)やCTL assayを用い行った。その結果、キメラマウス対ドナーマウスとキマラマウス対third partyマウスとの反応性に相違は認められなかった。すなわち、免疫寛容誘導の成立とin vitroにおける主要組織抗原に対する細胞性免疫能とに相関が認められないことが判明した。キメラマウスの末梢リンパ節の全リンパ球に対するCD4 T cellやCD8 T cellの比率は、同週令の無処理C3Hマウスと比較して有意差は認められなかった。これらの実験結果から、移植片が長期生着する免疫寛容誘導の成立にはin vivoにおいてドナー特異的な抑制因子が存在する可能性が示唆された。T cell receptorの欠失をもってclonal eliminationの有無を調べるため、オリゴマーの作成を検討してきたが、平成7年度末までに完成させることができ、今後reverse dot blot hybrizadationを行う見込みがついた。最近報告されたneonatal nude mouseに胸腺原基を移植し、免疫寛容を得た実験系でも、MLR・CTL assayの結果と免疫寛容状態と相関は認められないとしている。

本実験系でclonal eliminationの有無を調べるため、マウスのTCRのタイプ毎のcDNA sequencingを行い、V領域のサブファミリーを既知のものとそのhomologyをもつものを調べ、これらの各サブファミリーに相当するオリゴマーを準備した。大動物の腎、肝、膵移植における免疫寛容誘導実験を行うため予備実験を行った。ブタを用いた腎と肝の移植実験系は既に確立しているので、今回、膵の自家移植を行い手術手技の確立を行った。その結果、術後安定したブタの生存を確認できた。純系とはいえないが3つの糸とされているミニブタより胸腺上皮・ナ-ス細胞の分離培養を試みているが、細胞樹立にいたっていない。
脂質平面膜法をアッセイ系としたイオンチャネル分子の単離と構造機能連関の研究

脂質平面膜法を検定系として、ウサギ骨格筋筋が胞体チャネルタンパクの生化学的精製を行った。その結果、分子量138K及び100Kのタンパクのみを含む分画にClチャネル活性があることを見い出した。138Kタンパクの部分アミノ酸配列を決定し、相同性の検索を行ったところ、先に筋小胞体膜タンパクでありカルシウム結合能を持つと報告されている160Kタンパクに、全く同一の配列であることが分った。分子量の違いは、前に160Kタンパクの報告を行ったグループの算定ミスであった。この138Kタンパクと他の筋小胞体タンパクとの相互作用をしらべたところ、100Kタンパクと結合することが分った。その100Kタンパクを平面膜に再構成するとチャネル活性が見られたことから、138Kと100Kタンパクは複合体をなしてチャネルを形成している可能性が示された。次に、138Kタンパクの特異的抗体を作成して、筋小胞体ベシクルのイオン透過性に及ぼす効果を先散乱法でしらべたところ、KCL透過性の比較的遅い成分を阻害することが分かった。脂質平面膜法を用いて、ウサギ骨格筋横行細管(T-tubule)に存在するClチャネルの電気生理学的解析を行った。その結果、T-tubule膜には単一チャネルコンダクタンス40pSのバックグランドタイプの静止状態でも高い開確率を示すClチャネルが存在することが分った。このチャネルは電位依存性陰イオンチャネルのブロッカーとして知られる9-AC、DIDS、SITS、EAで阻害された。さらに、筋管上皮細胞のclチャネル阻害剤として開発された1AA-94によってもブロックされるこおとが分った。さらにこのチャネルを阻害する抗体を作成し、その結合タンパクを調べたところ、分子量90Kのタンパクであることが分った。生体内には様々なイオンチャネルが存在し、情報伝達において中心的役割を果している。それらチャネル分子の構造と機能がいかに結びついているかは、物理学的にも生理学的にも非常に興味深いことである。これまでにも、いくつかのイオンチャネルが単離され、そのアミノ酸配列が遺伝子配列から推定されてきた。しかし、その構造と機能の関連性については不明な点が多く、この点を克服するためには、多数のチャネル分子の単離・同定と結晶化のための大量精製法の確立が必須である。チャネル分子の単離には特異的なリガンドが用いられてきたが、現時点では、すべてのチャネルに対してそのような分子が存在するとは限らない。我々は最近、脂質平面膜法をアッセイ系としてチャネル分子の精製を成功させたが、この方法をさらに発展させ、多種の分子を解析し、大量精製法を確立することを本研究の目的とした。初年度にあたる本年度においては、シビレエイ電気器官に存在する180Kタンパク質に対する抗体を作成し、平面膜法で観察されるCl電流に対する影響から、このタンパク質がClチャネル分子本体であることをつきとめた。さらに、電気器官とは発生学的に近縁な関係にある骨格筋の横行小管にも、これまでに知られていないClチャネルが存在することを見出だした。さらに興味深いことに、このClチャネル活性も、180Kタンパク質に対する抗体で阻害された。この抗体を用いて、イムノブロットを伴なうと、還元状態で90Kと60K、非還元状態で140Kの蛋白質が認識された。この分子が筋のClチャネルである可能性が強い。さらにこれまでに我々の手で精製の進んでいる筋小胞体中のK、Clチャネルについても精製法の改良を行ない、よりCaATPaseタンパク分子の混入の少ない精製分画が得られるようになった。生体内にはさまざまなイオンチャネルが存在し、生体内の情報伝達において中心的役割を果たしている。

それらチャネル分子の構造と機能が如何に結びついているかは、物理学的にも、生理学的にも非常に興味深いことである。今までいくらかのイオンチャネルが単離されそのアミノ酸配列が遺伝子配列から推定されてきた。しかし、その構造と機能の関連性については不明な点が多い。この点を克服するためには生体内に多数存在する未知のチャネル分子の同定と単離が不可欠である。今までのチャネル分子の単離にはそれに結合する特異的なリガンドが用いられてきた。しかし、全てのチャネルに対して、適当なリガンドが存在するとは限らない。我々は最近、脂質平面膜法をアッセイ系として、チャネルタンパク質の精製に成功したが、本研究ではこの方法を更に発展させ未知のチャネル分子の同定・単離を行い、それらの構造と機能の連関を明らかにすることを目的とした。前年度までに、同定・精製法を確立した、筋小胞体Clチャネル蛋白に対するポリクローナル抗体を作成した。また、このチャネル蛋白の、アミノ末端から数残基の配列を、エドマン法により決定した。このアミノ酸配列は、既に知られている筋小胞体蛋白の何れとも相同性がなく、また、他の器官の既知のチャネル蛋白との一致も全く見られなかった。これは、未知の蛋白の精製に成功した事を示している。現在、この配列から、プローブを作成し、上記の抗体による方法と併せて、cDNAのスクリーニングを行う予定で準備中である。一方、生化学的な分離精製と並行して、カエルの卵母細胞を用いた分子生物学的手法による、筋小胞体チャネル蛋白の一次構造決定も試みている。現在までのところ、骨格筋のmRNAを注入する事によって、卵母細胞の表面膜に、neomycin-Bによって抑制される陽イオン性電流を発生させる事に成功している。脂質平面膜法を検定系として、ウサギ骨格筋筋小胞体チャネルタンパクの生化学的精製に取り組んできたが、その結果、分子量138k及び100kのタンパクのみを含む分画にC1チャネル活性があることを見い出した。138kタンパクの部分アミノ酸配列を数カ所について決定し、相同性の検索を行ったところ、筋小胞体膜タンパクでありカルシウム結合機能を持つと報告される160kタンパクに、全く同一の配列があることが分かった。当初、共通の遺伝子から異なるスプライシング制御を受けて作られたものと思われたが、さらに、生化学的解析を行ったところこれら2つのタンパクは全く同一のものと判明した。分子量の違いは、前に160kタンパクの報告を行ったグループの算定ミスである可能性が高い。この138kタンパクと他の筋小胞体タンパクとの相互作用を見るため、138kタンパクを高度に精製し、他のタンパクとの結合を調べたところ、100kタンパクと結合した。さらに、その100kタンパクを平面膜に再構成するとチャネル活性が見られることから、当初の予想通り138kと100kタンパクは複合体をなしてチャネルを形成している可能性が高い。次に、138kタンパクの特異的抗体を作成して、筋小胞体ベシクルのイオン透過性に及ぼす効果を調べたところ(光散乱法による)、KCI透過の比較的遅い成分を阻害することが分かった。
行動認識センサを用いた体調推定自動化に関する研究

人がある程度の強度の運動を行い,その運動前後での加速度センサのデータの差をよく表す特徴量を抽出した.人に加速度センサを装着して歩行してもらい,運動前後の加速度データの差を疲れの度合いとみなして,疲れをよく表現できる特徴量を特定した.具体的には,両足首の上下方向の加速度データからわかる,歩行周期時間や踵接地間隔比率などが疲労度合いの推定に役立つことが分かった.また,行動の切替り時刻の効率的な推定手法も開発した.人がある程度の強度の運動を行い,その運動前後での加速度センサのデータの差をよく表す特徴量を抽出した.人に加速度センサを装着して歩行してもらい,運動前後の加速度データの差を疲れの度合いとみなして,疲れをよく表現できる特徴量を特定した.具体的には,両足首の上下方向の加速度データからわかる,歩行周期時間や踵接地間隔比率などが疲労度合いの推定に役立つことが分かった.また,行動の切替り時刻の効率的な推定手法も開発した.被験者がある程度の強度の運動を行い,その運動前後での加速度センサのデータの差を良く表す特徴量を抽出した.被験者に加速度センサを装着して歩行してもらい,運動前後でのデータの差を疲れの度合いとみなし,各特徴量を独立してデータとしてみた時の疲れの度合いを比較的良く表現できる特徴量を特定した.具体的には,疲労が歩行動作に及ぼず影響に関して,既存研究から得られた知見をもとに,両足首の上下方向の加速度データから得られる特徴量を検討した.被験者の運動前後の加速度データを測定して,疲労が九つの特徴量に及ぼす影響を確認した.これにより,歩行周期時間や踵接地間隔比率,踵接地時のピーク値,1歩行周期の平均加速度,接地後波形収束までの平均加速度の五つの特徴量の平均と標準偏差で知見に沿う結果が得られ,運動による疲労の影響を確認した.これにより,歩行動作を加速度センサで捉え,加速度のどのよろな特徴量が疲労度合の推定に有用かを明らかにした.また,行動の種別を事前学習することなく,行動の切替り時刻を推定する手法を検討した.ます,加速度センサから取得したシーケンスデータの断片ごとにDTW法を適用してシーケンスデータ中の行動の類似度をDTW距離として算出する.次に,時系列に並べたDTW距離の特徴量行列から,ジグマチューブと呼ぶ閾値を設定し,それを用いて行動の変化点を求め,変化点の出現頻度を用いて行動が切り替わる時刻を推定する手法を検討した.実験により,この手法は平均して80%程度の適合率・再現率を達成できることを示した.この手法を用いると,例えば行動認識システムと組み合わせることで,行動の認識率を向上できると期待できる.脳波センサを用いて利用者の気分の推定についての検討を行った.被験者に脳波センサを装着して歩行してもらい,運動前後でのデータを取得して検討した.しかし,これまで利用してきた加速度センサに比較して脳波センサはきわめて大量のデータを取得することになり,解析も複雑になってしまうことが容易に想像された.今年度が研究の最終年度であることを考慮し,脳波センサデータの解析ではなく,前年度から実施している加速度センサにより取得されたデータのさらなる解析に注力することとした.前年度においては,複数の被験者による加速度センサデータによる解析を行い,共通して変化する特徴量を検討した.この検討をさらに進めたところ,歩行という行為に対して身長や体重,履いている靴の違いなどによる個人差が,データの解析に影響しているのではないか,という課題を発見した.これに基づき,被験者間の差を排除するために同一の被験者において繰り返し疲労時における歩行データの収集を行い,その分析を行った.具体的には,歩行時加速度データとVASによる自覚疲労感を記録した.結果として,運動前後および休憩後での歩行速度,パワースペクトルの加速度振幅で有意差は認められなかったが,それらの変化の仕方は被験者が感じる疲労感と連動して増減する傾向が確認できた.また被験者が最も疲労を自覚した運動時にそれらの値は減少し,休憩後に再び増加する傾向が確認できた.実験の結果より,歩行時の足首の上下方向の加速度データから疲労度合いを推定しうることが示された.
第一次世界大戦のイギリス資本主義と帝国主義世界

近年,欧米における帝国主義研究は著しい進展を示しつつあるが,とりわけ,帝国主義の社会的・政治的側面の研究についてそう言えるのであろう.これに対して,「経済的帝国主義」,ないし帝国主義のマルクスを主義的分析については,批判が山積している.このような研究史の状況を踏まえ,本総合研究は第一次大戦に先立つ時期の帝国主義-それは,「古典的帝国主義」(19001914年)と呼ばれる-を,世界経済的側面から解明することを企図した.本研究は,ごく大掴みに言って一つのセクションから成っているが,若干の結論を以下に要約しよう.第一に,第一次世界大戦前の時期に至り,世界経済(=世界市場)は相互に密接に連関する国際的分常構造に総合され,その上に,「多角的貿易=経済構造」が成立していた.この"multi-lateralism"は,大不況期,とりわけ1890年代に確立し, 1900年代に入りスムーズに機能したが, 1907年恐慌化降構造変化を開始する.但し,この変化の立入った検討は今後の課題である.第二に,大戦前の世界経済を特徴づける多角的貿易構造は,イギリスを「中心国」として構築されており,イギリス資本主義は「ポンド体制」=国際全本位制によりつつ世界の諸国を支配した.このため,イギリスでも世紀交〓〓に至り保護主義運動が高揚したにもかかわらず,「自由貿易体制」が維持された.第三に,ポンド体制下におけるイギリスと後発資本主義国,並びに徒層諸地域との相互関連である.イギリスはインド支配を通じて国際収支黒字を獲得し,これを自治領諸国に資本輸出した.こうすることにより,「工策的」後発資本主義国との直接的摩擦を回避した.大戦前の帝国主義世界について,列強の対立だけでなく,こうした相互依存の関係が十分に注目さるべきである.近年,欧米における帝国主義研究は著しい進展を示しつつあるが,とりわけ,帝国主義の社会的・政治的側面の研究についてそう言えるのであろう.これに対して,「経済的帝国主義」,ないし帝国主義のマルクスを主義的分析については,批判が山積している.このような研究史の状況を踏まえ,本総合研究は第一次大戦に先立つ時期の帝国主義-それは,「古典的帝国主義」(19001914年)と呼ばれる-を,世界経済的側面から解明することを企図した.本研究は,ごく大掴みに言って一つのセクションから成っているが,若干の結論を以下に要約しよう.第一に,第一次世界大戦前の時期に至り,世界経済(=世界市場)は相互に密接に連関する国際的分常構造に総合され,その上に,「多角的貿易=経済構造」が成立していた.この"multi-lateralism"は,大不況期,とりわけ1890年代に確立し, 1900年代に入りスムーズに機能したが, 1907年恐慌化降構造変化を開始する.但し,この変化の立入った検討は今後の課題である.第二に,大戦前の世界経済を特徴づける多角的貿易構造は,イギリスを「中心国」として構築されており,イギリス資本主義は「ポンド体制」=国際全本位制によりつつ世界の諸国を支配した.このため,イギリスでも世紀交〓〓に至り保護主義運動が高揚したにもかかわらず,「自由貿易体制」が維持された.第三に,ポンド体制下におけるイギリスと後発資本主義国,並びに徒層諸地域との相互関連である.イギリスはインド支配を通じて国際収支黒字を獲得し,これを自治領諸国に資本輸出した.こうすることにより,「工策的」後発資本主義国との直接的摩擦を回避した.大戦前の帝国主義世界について,列強の対立だけでなく,こうした相互依存の関係が十分に注目さるべきである.本総合研究は第一次大戦前の「古典的帝国主義」期(19001914年)の全体像を主として経済的側面から解明しようとするものである。第一のテーマは、帝国主義世界の全体像把握にかかわる方法的枠組を如何に設定するか、という問題である。結論として、世紀交替期にイギリスを中心国として確立する「多角的貿易決済機構」(いわゆる"multilateralism")こそ、この段階を把握するために不可欠のキー概念であることを再確認した。第二のテーマは多角的貿易決済機構の中心国たるイギリス帝国主義の構造的特質を析出することにある。これについてはイギリス資本主義の「再生産=信用構造」(さらに、媒介環として財政・政治権力構造)を前提として、「関税=貿易政策」論争、「資本輸出政策」論争の分析に関心が集中されている。しかし、帝国主義世界における諸列強の対抗を具体的に促えるには、なお、軍事(=防衛)政策・外交政策の領域を射程に入れる必要がある。第三のテーマは、「ポンド体制」下におけるイギリスと諸列強、並びに従属諸地域の構造的関連の解明である。前者についてはドイツ・オーストアニハンガリー・ロシアおよびアメリカが取り上げられているが、現時点で分析は各国の再生産構造の把握に止まっており、イギリス帝国主義との相互連間を文体的に促えるに至っていない。また、後者についてはインドとカナダが対象として指定されているが、研究は「大不況」段階を脱していない。以上の諸個別研究を一つの全体像にまとめるには、今後、論点の意織的統一が一層必要と考えている。