hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
２１世紀英文学における「翻訳論」の現代的課題：理論的展開及び相互関係性の考察

(2)については、従来から研究の射程においてきたホロコースト文学の領域から、ポーランド出身の作家Eva Hoffmanの二つの自伝をめぐるテクストの考察を行い、「他者を語る試みーエヴァ・ホフマンにみる翻訳の可能性と不可能性」(『終わりへの遡行』英宝社、2012年3月10日刊行、所収)にまとめた。また、一方でオランダ生まれで南アフリカで少女期を過ごし、現在英国に帰化してOxford大学の世界文学の教授として活躍するElleke Boehmerより自伝的要素をもとにした作品の提供を受け、そのテクストの分析を「自己と世界の境界:Elleke Boehmerの場合」(『津田塾大学紀要』2012年3月刊)にまとめた。この二つのアプローチによる研究から、他言語の経験と自伝的要素が言説化される過程に、翻訳理論とリンクする「他者性」の表象、歴史との関連性などの問題が関与してくることが知見として得られた。上記のように、今年度は得られた知見をもとに翻訳論の体系的な統括を行い、出版物としてまとめることができたことにより、さらに国内外の研究者や学際的な領域からのフィードバックも得ることができた。最終年度に向けてのテーマの絞り込みができたことは、翻訳論をさらに自己と他者性への言語的アプローチの一形態でもある伝記・自伝研究との関係性から展開する可能性をもたらしたといえる。上記のように、二つのアプローチによる研究をリンクさせることにおいて、次段階への進展が一応の目的のところまで達成できている。課題としては、文学テクストの分析の射程をさらに広げること、そしてホロコーストやポストコロニアルという視点から透視されてくる「トラウマの文学」と翻訳理論をどうリンクさせるかということがある。翻訳理論の中で「トラウマの文学」をテーマに据えたものについては、もう少し資料があることが望ましいと考えている。具体的には、上記Boehmerのテクストの背景にも透視されている南アフリカのアパルトヘイトの問題、植民地主義への現地の抵抗などが文学として表現されているものにも言及する必要があるだろう。日本での資料収集には限界があるので、この点については2012年夏の海外での学会発表時に研究協力者らの情報もふくめて進めたいと考えている。3年間の研究の統括を行う頃が2013年度の重要な目標である。翻訳論の体系化が基軸としてあるところまで到達できたところから、その射程の中で、「自伝・伝記」批評をどのように翻訳論とリンクさせられるかが課題である。その具体的な分析対象として、リンドール・ゴードンが2013年5月に刊行予定である「母親の回想記」を取り上げ、母親の伝記を通して自身の半生を語る自伝的言説を、自己翻訳ならびに時代の再読という観点からの「再記述としての翻訳」という視点で分析を行う。さらにテクスト分析と同時進行で、同テクストの翻訳も、可能な限り進めたいと考えている。また、翻訳論でもたびたび取り上げられるホロコースト第二世代の作家であるエヴァ・ホフマンの来日が秋に予定されていることから、ホフマンの日本での講演や知見を通して、記憶の言説というテーマを深化させたいと考えている。2012年度の目標地点として、近年Oxford大学の研究者らも注目して理論化をすすめている伝記・自伝文学の検証と理論をとりこむ。Laura MarcusやHermione Leeらの、ポストモダン以降の理論を追う。
サーモダイナミクスを用いた口腔乾燥症治療戦略イノベーション

サーモダイナミクスを用いた治療は整形外科領域では盛んに用いられているものの、歯科領域においては十分に用いられているとは言い難い。本研究ではサーモダイナミクスの唾液腺機能への影響を検討することにより臨床応用に有用な知見を得ることを目的とした。その結果、マウス顎下腺において唾液分泌量は温度に影響を受け、またその温度感受性は同じムスカリン性刺激でも刺激薬によって異なった。さらに、ヒトにおいて超短波によるサーモダイナミクスによって唾液分泌量が増加するが、その効果は口腔内の金属修復物によって減弱することが明らかになった。超高齢社会にある我が国において,口腔機能を維持あるいは改善することは国民健康に寄与するが,複雑な治療方法を開発したとしてもそれが全国民に流布されるまでには多大な時間を要するため,より簡便な方法により口腔環境を改善する方法が望まれる.整形外科領域ではサーモダイナミクス(温熱・冷却)を応用した治療が盛んに行われ,免疫学的な観点からはとくに加温によるポジティブな効果が着目されているにも関わらず,歯科領域においてはエビデンスが不十分で浸透しているとは言い難い.そこで本研究ではサーモダイナミクスによる交感神経と副交感神経の活動割合変化に着目し,口腔領域の機能的・器質的変化について,唾液,口腔粘膜,口腔周囲筋,歯および歯周組織を中心に解析し,治療応用の可能性にいて検討することを目的として研究を実施した.初年度は加温による生体反応の変化の一つとして唾液腺に着目し,温度変化に伴う分泌量の動態について把握することを試みた.灌流顎下腺を用いて22°Cと37°Cにおける分泌をさまざまな神経伝達物質で比較したところ,ムスカリン性刺激薬であるカルバコールは2.5倍(37°C分泌量:22°C分泌量)であり,既報とほぼ一致していた.一方でαアドレナリン性刺激薬であるフェニレフリンでは加温により2倍程度分泌上昇し,βアドレナリン性刺激薬であるイソプロテレノールでは8倍程度であった.すなわち加温により一様に分泌上昇するのではなく,分泌を引き起こすレセプターごとに温度による反応性も大きく異なることが明らかとなった.サーモダイナミクス(温熱・冷却)を応用した治療は整形外科領域など医科においては盛んに行われ,免疫学的な観点からはとくに加温によるポジティブな効果が着目されているにも関わらず,歯科領域においてはエビデンスが不十分で浸透しているとは言い難い.そこで本研究ではサーモダイナミックスによる交感神経と副交感神経の活動割合変化に着目し,口腔領域の機能的・器質的変化について,唾液,口腔粘膜,口腔周囲筋,歯および歯周組織を中心に解析し,治療応用の可能性について検討することを目的とした.昨年度,マウス顎下腺を用いて唾液腺からの唾液分泌速度は温度によって影響を受けること、さらにその温度感受性は交感神経刺激と副交感神経刺激で異なることを明らかにした.平成26年度は被験者を対象に、超音波照射によるサーモダイナミクスの影響を検討した.被験者は口腔内に金属修復物のない者(MF群)と有する者(MR群)それぞれ10名で、左右下顎角部より20分間超音波照射し、照射前後の安静時唾液分泌量と唾液中の精神的ストレスマーカーであるクロモグラニンAを測定した.その結果,安静時唾液量はMF群でのみ超音波照射後に有意に上昇した.クロモグラニンA濃度は変化しなかった.以上の結果から,超音波によるサーモダイナミクスにより唾液腺機能は上昇するものの,口腔内に金属修復物を有する者では効果が減弱すること,また唾液中の精神的ストレスマーカーは変化しないことが明らかになった.26年度が最終年度であるため、記入しない。歯科補綴学26年度が最終年度であるため、記入しない。膨大な時間を要する顎下腺灌流実験のトレーニングを完了し,予備実験として既報とほぼ同様の結果を得ることができるまでに至り,サーモダイナミクスについて当該方法にて今まで試されていない分泌刺激薬についてもデータを蓄積することができたため上記のように評価する.初年度のデータだけでは誌面報告するにはサンプル数が足りず,まずは必要サンプル数を十分に確保する.さらに,さまざまな分泌刺激薬の組み合わせについてもサーモダイナミクスによる影響を評価する.動物実験の結果を踏まえてヒトサンプルの実験に早期に移行する.唾液中のイオン濃度,タンパク量,糖濃度,などの基礎的データに加えて,唾液中のストレスタンパクであるクロモグラニンAについても,ヒトの加温により影響があるかどうか検証する.
手指感覚識別に伴う自律神経性手指循環制御の加齢性変化;客観的感覚機能評価への応用

若年者と高齢者の手指感覚識別時の手指循環動態,および手指感覚閾値を測定し,加齢による手指循環調節能と手指感覚機能変化について検討した.その結果,手指の感覚情報処理にともなう手指血流量変動量が加齢により減少することを明らかにした.さらに,この手指血流変動の応答は感覚機能減弱にも関連していた.また,手指体積変動により手指感覚閾値が影響を受けることが判明したことから,感覚識別時の手指循環変動は手指体積変化に反映し,皮膚物性値に作用して体性感覚感度を変調させていることが示唆された.若年者と高齢者の手指感覚識別時の手指循環動態,および手指感覚閾値を測定し,加齢による手指循環調節能と手指感覚機能変化について検討した.その結果,手指の感覚情報処理にともなう手指血流量変動量が加齢により減少することを明らかにした.さらに,この手指血流変動の応答は感覚機能減弱にも関連していた.また,手指体積変動により手指感覚閾値が影響を受けることが判明したことから,感覚識別時の手指循環変動は手指体積変化に反映し,皮膚物性値に作用して体性感覚感度を変調させていることが示唆された.本研究は,若年者と高齢者の手指感覚識別時の手指循環動態,および手指感覚閾値を測定し,加齢による手指循環調節能と手指感覚機能変化について検討した.対象は女性高齢者20名(78±8歳),および若年者23名(23±6歳)であった.手指感覚識別課題として,右手示指を使用して机の裏面に設置した点字プレートを解読する課題を実施した.この課題施行時にみられる手指皮膚血流量(レーザー血流計)および心拍数,血圧の変動を測定した.また,手指感覚閾値の測定にはSemmesタッチテストを実施し,高齢者と若年者のデータを比較した.その結果,高齢者群の手指感覚閾値圧覚閾値(1og_10force)は平均で3.3±0.6であり,若年者群の2.5±0.2よりも高い値を示した.手指感覚識別時の手指皮膚血流変動は,高齢者群で平均-6±6%であったのに対して,若年者群では識別中に平均で-15±13%程度まで減少した.また手指血流量の経時的変動は,若年者群において血流変動が速く起こるのに対して,高齢者群ではゆっくりと変動した.この影響は,両群における最大変動値到達時間の差にも表れた.さらに,高齢者群における手指血流応答と感覚閾値との相関係数はr=0.582(P<0.05)であった.本研究結果より,手指圧覚閾値が若年者よりも高齢者で高い値を示したことから,手指感覚においても,他の感覚同様に加齢により低下すると考えられる.一方で,感覚識別時の手指血流量は,若年者において著しく減少するのに対して,高齢者では少ない反応しか起こらず,また両群の感覚識別時の血流調節応答速度に違いがあった.これらの結果から,加齢による自律神経機能の低下が感覚識別時の手指血流量変動を減少させと考えられた.さらに,高齢者の手指血流変動量と手指感覚閾値との関係には相関関係がみられたことから,手指循環調節能の低下と感覚機能の減弱との関連が示唆された.平成21年度の研究では、手指の感覚情報処理にともなう手指血流量変動量が加齢により減少することを明らかにした。さらに、この手指血流変動の応答は感覚機能減弱にも関連していた。一方で、この手指循環調節能の加齢性変化は手指体積変化に反映し、皮膚物性値に作用して体性感覚感度を変調させていたのかもしれない。そこで本年度は、手指容積変化の感覚感度に対する効果を明らかにすることを目的とした。血液分布への静水圧の作用を利用して、手の位置を心臓の高さを基準とし上下に設置することで血液分布量を変化させられる。これらのポジショニング条件下で感覚機能がどのように影響受けるのかを調査した。方法は、手部を心臓の高さから25cm、0cm、-25cmの位置にそれぞれ5分間設置した場合の手指容積の変化とSemmesタッチテスト法による感覚閾値検査を行った。容積変動はラバーストレンゲージ法にて測定した。実験は健常高齢者23名を対象として実施した(23名の内4名はMMSEにおいて24点以下であったため解析データから削除した)。その結果、手の位置が心臓の高さよりも上方に設定した場合は手指容積が徐々に減少したが、低い場合には徐々に増加することを確認した。またそれぞれの手の位置における感覚閾値は0cmで3.52±0.59log_<10>0.1mg、25cmでは3.36±0.58log_<10>0.1mgと低下傾向にあった。一方で、-25cmの場合には3.77±0.73log_<10>0.1mgと閾値は有意に上昇した(P<0.01)。これらの結果は、手部の血液に負荷される静水圧の影響が手指容積を変化させ、皮膚物性値に影響して感覚感度を減弱させていることを示唆する。
エンドトキシン認識機構におけるMDタンパクの役割についての研究

自然免疫機構において、病原体認識のメカニズムは明らかではない。Toll-like receptors (TLRs)が病原体を認識してシグナルを伝達するが、その認識機構は分子レベルでの理解には至っていない。本研究ではグラム陰性菌の膜糖脂質であるエンドトキシン(LPS, Lipopolysaccharide)の認識に焦点を絞り、その認識機構の分子レベルでの解明を目的とする。我々はTLR4の細胞外ドメインに会合する分子MD-2を発見し、この分子がLPS認識に必須であることを明らかにし、さらにLPSとTLR4/MD-2との結合を昨年までに示してきた。本年度はLPS結合後のTLR4/MD-2によるLPS認識を、明らかにするために、リガンド結合後のTLR4のOligomerizationを調べた。さらに、拮抗剤として作用するlipid IVaはlipid AとTLR4/MD-2との結合は変わらないが、その後TLR4がOligomerizationしないことも示した。したがって、TLR4によるlipid Aとlipid IVaの識別はTLR4/MD-2との結合ではなく、その後のTLR4-oligomerizationで決定されることが明らかになった。またその識別にMD-2が重要であることも示した。サイトカインレセプターのような単一のリガンドと異なり、TLR4/MD-2のリガンドは、構造が病原体によって微妙に異なる。その違いをTLR4/MD-2は識別し、ある種の細菌のLPSはlipid IVaのように拮抗作用を持つことが報告されている。したがって、そのような細菌間でのLPSの細かい識別はTLR4-oligomerizationでなされており、MD-2が制御していることが予想される。LPSの認識にTLR4が必須であることはTLR4ミュータントマウスのLPS低応答性から明らかである。しかしながらTLR4は単独ではLPSを認識できない。我々はTLR4の細胞外ドメインに会合する分子MD-2を発見し、この分子がLPS認識に重要な役割を果たしていることを細胞株で示してきた。本年度は、個体レベルでのLPS応答におけるMD-2の役割を明らかにするために、MD-2ノックアウトマウスを作成し、そのLPS応答性を検討した。その結果、MD-2を欠損したB細胞、マクロファージ、樹状細胞などの免疫担当細胞はLPSにまったく反応せず、LPS投与による血中のサイトカイン産生はまったく認められなかった。MD-2欠損マウスはグラム陰性菌であるネズミチフス菌の感染に高い感受性を示し、またエンドトキシンショックには逆に抵抗性であった。これらの表現系はTLR4ミュータントマウスに類似しており、個体レベルにおいてもTLR4-MD-2複合体がLPSを認識していることが明らかになった。さらに我々はTLR4に対するMD-2の役割についても検討した。MD-2の欠損した線維芽細胞ではTLR4はゴルジ体に停滞しており、MD-2と会合してはじめて細胞表面に出られることを明らかにした。つまりMD-2がTLR4の細胞内での分布を制御していることを明らかにした。今後はMD-2のLPS認識における役割を明らかにする必要がある。Toll-like receptors(TLRs)が病原体を認識してシグナルを伝達するが、その認識機構は分子レベルでの理解には至っていない。

本研究ではグラム陰性菌の膜糖脂質であるエンドトキシン(LPS, Lipopolysaccharide)の認識に焦点を絞り、その認識機構の分子レベルでの解明を目的とする。LPSの認識にTLR4が必須である。我々はTLR4の細胞外ドメインに会合する分子MD-2を発見し、この分子がLPS認識に重要な役割を果たしていることを、MD-2ノックアウトマウスがLPSに応答しないことを示すことで証明した。したがって、LPSはTLR4-MD-2という複合体によって認識されることが明らかになった。本年度はTLR4-MD-2によるLPS応答性を明らかにするために、TLR4-MD-2とLPSとの結合を調べた。細胞をLPS刺激した後に、TLR4-MD-2を免疫沈降し、その沈降物におけるLPSを検出すると、LPSが共沈することが明らかになった。LPSに結合するCD14の共沈は認められなかった。この結果は、少なくともCD14が関与しないTLR4-MD-2とLPSとの結合を示している。そこで、放射性同位元素で標識したLPSの活性部位であるLipid Aを用いて、結合を定量的に調べたところ、Lipid Aの量依存性にしかも飽和状態に達しうるような特異的な結合を示した。その解離定数は約3x10^<-8>Mであった。これらの結果はLPSあるいはLipid AがTLR4-MD-2に特異的に結合していることを細胞を用いて、定量的に解析した初めての報告である。今後は結合後のTLR4-MD-2の変化を調べてゆく計画である。自然免疫機構において、病原体認識のメカニズムは明らかではない。Toll-like receptors (TLRs)が病原体を認識してシグナルを伝達するが、その認識機構は分子レベルでの理解には至っていない。我々はTLR4の細胞外ドメインに会合する分子MD-2を発見し、この分子がLPS認識に必須であることを明らかにし、さらにLPSとTLR4/MD-2との結合を昨年までに示してきた。本年度はLPS結合後のTLR4/MD-2によるLPS認識を、明らかにするために、リガンド結合後のTLR4のOligomerizationを調べた。さらに、拮抗剤として作用するlipid IVaはlipidAとTLR4/MD-2との結合は変わらないが、その後TLR4がOligomerizationしないことも示した。したがって、TLR4によるlipidAと1ipid IVaの識別はTLR4/MD-2との結合ではなく、その後のTLR4-oligomerizationで決定されることが明らかになった。またその識別にMD-2が重要であることも示した。サイトカインレセプターのような単一のリガンドと異なり、TLR4/MD-2のリガンドは、構造が病原体によって微妙に異なる。
ＰＴ調査データに基づく新型インフルエンザ時空間伝染リスク評価モデルの構築

本研究では、パーソントリップ調査データを用いた、新型インフルエンザの時空間伝染リスク評価の枠組みを提示した。具体的には、家庭内、学校施設内の感染過程を明示化する形で時空間の伝染過程をモデル化し,リスク評価指標として1)感染者数分布,2)終息時点分布,3)感染地区の空間分布、4)感染者の居住地区分布の4つを提案した。さらに、熊本都市圏のパーソントリップ調査データを用いて、実際のリスクを評価し、その有効性を示した。こうした成果に基づいて、国内・海外の関連学会にて研究発表を実施した。本研究では,パーソントリップ調査データを活用し,新型インフルエンザを対象とした都市内伝染リスク評価モデルを開発する.なお,人々が近接する空間としては,家庭,学校,事務所,商業施設,工場に焦点をあて,それぞれの施設内の感染モデルを統合する形で都市内の時空間伝染モデルを構築する.また,感染症リスクの軽減策として,学校閉鎖と職場閉鎖に焦点をあて,そのリスク軽減効果について定量的に把握することを目的とする.今年度は,家庭及び学校施設に着目した新型インフルエンザの時空間リスク評価モデルの開発を行った.具体的には,熊本都市圏で実施したパーソントリップ調査を用いて,(1)時点別・家庭別の人口粗密データの作成,(2)時点別・学校施設別の人口粗密データの作成,を行った.また,(3)基本再生産数を用いた感染パラメータのキャリブレーション方法を提案し,作成した種々のデータに基づいて感染パラメータが導出可能であることを確認した.さらに,この導出したパラメータを用いて,新型インフルエンザの時空間伝染過程のシミュレーションを実施し,その感染過程を再現可能であることを確認した.さらに,4.時空間リスク評価指標の提案を開発した.具体的には,1)感染者数の分布,2)終息時間の分布,3)被感染ゾーンの空間分布, 4)居住ゾーンの空間分布,の四つの評価指標を定式化し,シミュレーションの結果からこの四つの評価指標によって都市内における感染症リスクの潜在的な脅威を表現可能であることを確認した.今年度は,家庭及び学校施設に着目した新型インフルエンザの時空間リスク評価モデル,を開発し,1)時点別・家庭別の人口粗密データの作成,2.時点別・学校施設別の人口粗密データの作成,3.感染パラメータのキャリブレーション,4.時空間リスク評価指標の提案,および学校閉鎖措置の定量的リスク評価,の手順で進める計画であった.その手順の中で,1,2,3は今年度無事終えることが出来たが,手順4については,リスク評価指標の提案は行えたが,学校閉鎖措置の定量的リスク評価についてシミュレーション分析を終えることが出来なかった.リスク評価指標を計算するプログラムは既に開発しており,残りは数値計算を複数回繰り返すのみの状況である.そのため、若干の遅れはあるものの,おおむね順調に進展していると判断した.本年度は,前年度までに実施した学校施設に着目した新型インフルエンザの時空間伝染モデルに、商業施設、工場、事務所といった施設を加える形でシミュレーションモデルの拡張を行った。具体的には、施設ポイントデータからパーソントリップ調査のゾーン単位で施設建物と種類を集計することによって,ゾーン別、施設種別(商業施設、工場、事務所)の施設数のデータを作成した。その上で,前年度にパーソントリップ調査に基づいて作成した時間別,ゾーン別の住民の施設滞在-移動データを用いて,住民がゾーン内のどの施設に滞在しているかを割り当て,時間別,ゾーン別,施設別の住民の施設滞在-移動データを作成した。さらに,前年度までに作成した、学校施設のみを考慮していた新型インフルエンザの時空間感染モデルに、施設の種類を考慮する形でモデルの拡張を図ってシミュレーション計算を実施した。なお,実際の計算結果については、国内の関連学会にて発表した。全体を通じて、本研究では、PT調査データを利用した新型インフルエンザシミュレーションの枠組みを提示し、その実施可能性は示すことができた。それに加えて、新型インフルエンザの時空間の伝染過程を前提としたリスク評価指標を提案し、実際の感染症リスクを定量化することができた。これらは関連する国際・国内の学会にて研究発表を行った。ただし、施設閉鎖措置等の政策評価のシミュレーション計算に課題が残っており,今後の課題としたい。平成28年度は,施設滞在に着目した新型インフルエンザの時空間リスク評価モデルの開発を行う.具体的には,(1)時点別・PT調査ゾーン別の商業施設,工場,事務所の人口粗密データの作成,(2)感染パラメータのキャリブレーション,(3)商業施設,工場,事務所の閉鎖措置の定量的リスク評価,を行う.なお,平成27年度に実施予定であった学校閉鎖措置の定量的リスク評価について,商業施設,工場,事務所のデータを考慮したパラメータの導出を行い,そのパラメータに基づいて学校閉鎖措置の定量的リスク評価もあわせて実施する.社会安全システム
血栓症の成因と病態,とくに血液凝固とその制御機構障害への分子生物学的アプローチ

1.2年に亘る本研究補助金を受けて、国内外から構造解析を依頼された異常フィブリノゲン(Fbg)10余家系について検索を進めた。この中Kurashikil(γGly-268→Glu,ホモ接合体,Blood印刷中)とKamogawa(γArg-275→Ser,国際血栓止皿学会で報告後,投稿準備中)では全く新しい変異型が同定され,共に最近提唱されたD:D self-association siteの異常が判明した.Dドメインのフィブリン(Fbn)重合反応基に少なくとも2種であることを明らかにした点で重要な情報と考える.又,血栓症を伴うKumamotoではA αArg-19→Glyが同定され,Fbg→Fbn転換後に新たに露呈される所謂Asiteの異常によりFbn重合障害がある.またFbnへのトロンビン結合能も低下しており,形成されたFbn血栓にトロンビンを局在化して血栓形成を自己制御する機構の障害から血栓症に結びついたものと考えられた.Aα鎖150アミノ酸残基を欠くMarburg lではXIIIa因子による架橋形成の異常が認められ出血,血栓,創傷治癒障害との関係の検索を続けている(第3回国際XIII因子カンファランスで報告).Fbg/Fbnの特異な構造を認識するモノクロナル抗体:3種類の抗体が得られた.(1)DドメインのCa^<++>依存性構造を認識する抗体で,単にFbg/Fbnの構造機能関係の解析だけでなく,これを担体とする免疫親和性クロマトグラフィーにより高純度のFbgを単一の操作で精製できた.実際,試料の限られた患者検体からの精製に応用した.1.2年に亘る本研究補助金を受けて、国内外から構造解析を依頼された異常フィブリノゲン(Fbg)10余家系について検索を進めた。この中Kurashikil(γGly-268→Glu,ホモ接合体,Blood印刷中)とKamogawa(γArg-275→Ser,国際血栓止皿学会で報告後,投稿準備中)では全く新しい変異型が同定され,共に最近提唱されたD:D self-association siteの異常が判明した.Dドメインのフィブリン(Fbn)重合反応基に少なくとも2種であることを明らかにした点で重要な情報と考える.又,血栓症を伴うKumamotoではA αArg-19→Glyが同定され,Fbg→Fbn転換後に新たに露呈される所謂Asiteの異常によりFbn重合障害がある.またFbnへのトロンビン結合能も低下しており,形成されたFbn血栓にトロンビンを局在化して血栓形成を自己制御する機構の障害から血栓症に結びついたものと考えられた.Aα鎖150アミノ酸残基を欠くMarburg lではXIIIa因子による架橋形成の異常が認められ出血,血栓,創傷治癒障害との関係の検索を続けている(第3回国際XIII因子カンファランスで報告).Fbg/Fbnの特異な構造を認識するモノクロナル抗体:3種類の抗体が得られた.(1)DドメインのCa^<++>依存性構造を認識する抗体で,単にFbg/Fbnの構造機能関係の解析だけでなく,これを担体とする免疫親和性クロマトグラフィーにより高純度のFbgを単一の操作で精製できた.実際,試料の限られた患者検体からの精製に応用した.1.Fibrinogen(Fbg)遺伝性異常分子の解析:科研費補助金を受けて従来より継続して来ていたものを本研究で更に発展させることができた.その1つにドイツで発見されたFbg Marburg Iがある.本分子異常は臨床的に出血,血栓症,創傷治癒不全とFbgが関与する3つの症状を呈している所から,分子レベルで得られる情報のもつ意義は大きい.遺伝子解析から本異常分子はAα鎖C末150残基を欠失するホモ接合体と判明しているが,その精製は困難な為,ドイツから精製と分析を依頼されたものである.我々はCa^<2+>依存性抗Fbgモノクロナル抗体の作製に成功し,これを応用する親和性クロマトグラフィーにより異常Fbgを高収率で精製することが出来た(Thromb.Haemostas.,印刷中).精製異常分子の約30%は遊離SH基をもつAαCys442が血漿中のalbumin(Alb)とS-S結合し,このAlbが活性型VIII因子(VIIIa)の基質となって他のFbg分子に架橋することが判明した.血漿AlbがVIIIaによってfibrin(Fbn)に架橋結合することはこれまでに報告を見ない新知見である.本異常分子は,Fbnへの転換が遅い為出血傾向を招来し,架橋Albを介して線溶酵素plasminに抵抗して血栓症に関連し,AαC末領域の接着蛋白活性中心となるRGD配列を失なって創傷治癒不全に結びつくと考えられ,重要な知見と考えられる.内外の学会報告を終え,論文化を進めている.これとは別にFbg Kurashiki I(γGly 268→Glu)およびKamogawa(γArg275→Ser)で新しい変異型を遺伝子・分子レベルで同定したので,論文を作成中である.2.細胞接着に関する研究:ヒト・グリオーマ由来の培養細胞を用い,種々の接着分子上で培養した際のfibronectin(FN)とvitronectin(VN)およびこれらのレセプター(FNR,VNR)の発現と分布・局在を検討した.

その結果,培養の経過と共にこれらの分子は接着分子の存在に呼応して発現と分布の様相を変化させ,細胞の接着と伸展および形態の変化や維持を司どっていることが判明したので報告した(Brain Res.,659:23-32,1994).1.遺伝性異常フィブリノゲン(以下Gbg)の構造解析:これまでに報告のない新変異2型が同定され,Fbgの構造-機能関係に新知見が得られた.Fbg KurashikiIのγ268 Gly→Glu (Blood印刷中), Kamogawaのγ275 Arg→Ser(投稿準備中)で,共に最近提唱されているD : D self-association sitesの機能障害に結びつくことが判明した.この反応部位の障害は代表者が1983年に報告したFbg Tokyo IIで初めて見出され,海外の共同研究者により報告されたものである(J. Clin. Invest.に掲載).別の異常分子FbgKumamotoではAα19 Arg→Glyが同定された.本異常分子はフィブリン(以下Fbn)へのトロンビン吸着が障害されていることから血栓症に結びついており,血栓形成の自己制御機能に関する貴重な情報と思われる(投稿準備中).これらの他,国内外から依頼された8家系(旭川II,倉敷II,盛岡II,新潟II,名古屋II, Gerris, Guarenas,Marburg I)の解析を続けて来ている.2.抗Fbgモノクローナル抗体(mAb)の作成と応用: Fbgの特異構造を認識する3種類のmAbの解析を終了し,その応用を検討した.(1)Dドメインのカルシウム依存性構造を認識するmAbが得られ,これを担体として親和性クロマトグラフィーによるFbg精製に応用してその有用性を確認した(Thromb. Haemostas.に掲載).(2)活性型XIII因子による架橋形成とFbn重合とを特異的に阻害するユニークなmAbが得られ,これらの反応の分子機作解明に利用している(日本血栓止血誌に投稿中).(3)Fbg→Fbn転換に伴なって生ずるEドメインの特異構造を認識するmAbが得られ,可溶性Fbnの形成機序の分析と血栓症の診断に応用し得ることが判明した(Bloodに印刷中)
ニューロメジンＵ関連ペプチドの生体内機能および関連疾患に関する研究。

本研究ではニューロメジンU(NMU)の生理機能に関して、肥満関連疾患である非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)/非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)に着目して解析を行った。食事誘導性NASHモデルマウスの肝臓組織においては、正常肝臓組織にて検出する事ができないNMUならびにNMUR1 mRNA発現量の増加が認められ、ヒトNASH患者の肝臓においても抗NMU抗体陽性細胞が認められた。さらに野生型マウスの肝臓においてNMUを過剰発現させたところ、NASH病態が増悪することが判明した。以上から、NASH病態時の肝臓におけるNMUシステムはNASH病態の増悪作用を有することが示された。本研究では一連のニューロメジンU関連因子(ニューロメジンU、ニューロメジンS、ペプチドX)の新規生理機能解析を野生型マウスならびにそれぞれの分子の遺伝子改変マウスを用いて進めている。現時点では以前に発表されていたニューロメジンUシステムと炎症という観点から、肥満・代謝疾患疾患に注目し、中でも慢性炎症作用が強く関与していると報告されているNASH/NAFLD (nonalcoholic steatohepatitis / nonalcoholicfatty liver disease)に着目してニューロメジンU作用の検討を行っている。本研究にてこれまでに得られたデータから、食事誘導性NASHモデルマウスの肝臓組織においては非NASHモデルマウスの肝臓組織にて通常殆ど検出する事ができないニューロメジンUならびにニューロメジンU受容体1のmRNA発現量の増加が認められた。さらに、マウスのみならず、ヒトNASH患者さんの肝臓組織においても、通常、非NASH患者さんの肝臓組織では認められないNMU陽性細胞が認められた。一方で、ニューロメジンU遺伝子欠損マウスを用いてNASHモデルを作製したが、病態の進展に関してはコントロールマウスとの間に有意差は認められなかった。以上より、本年度はNASH病態におけるニューロメジンU発現系の増強の意義の解明をニューロメジンU遺伝子の過剰発現系を用いた解析により検討する予定である。本研究では一連のニューロメジンU関連ペプチド(ニューロメジンU、ニューロメジンSならびにペプチドX)の新規生理機能解析を野生型マウスやそれぞれの遺伝子改変マウスを用いて解析を行っている。平成24年度は、新規生理活性ペプチドXに関して、Cre-LoxPシステムを用いた条件つき遺伝子欠損マウスの作出に成功し、その「flox/floxマウス」と「β-actin Creトランスジェニックマウス」との交配により、ペプチドXの全身性遺伝子欠損マウスの作出が完了した。現在、このマウスを用いて、代謝・肥満関連の解析(通常食時や高脂肪食時での表現型の解析)ならびに神経系の解析(報酬系や記憶・学習に関与する表現型の解析)を行っている。次に、従来から解析しているニューロメジンUの生理機能に関しては、末梢組織における炎症作用との機能関連から、肥満・代謝疾患の中でも慢性炎症作用が強く関与しているといわれているNASH/NAFLD(nonalcoholic steatohepatitis / nonalcoholicfatty liver disease)に着目してNMU作用の検討を行っている。その結果、食事誘導性NASHモデルマウスの肝臓組織においては、非NASHモデルマウスの肝臓組織にて通常殆ど検出する事ができないNMUならびにNMUR1 mRNAsの発現量の増加が認められた。NASHの病態においては、炎症性サイトカインや肝臓組織へのマクロファージの浸潤が認められるが、今回申請者らの用いた食事誘導性NASHモデルマウスの肝臓組織においても同様の所見が認められ、更に、興味深い事に、NASHモデルマウスの肝臓の免疫組織染色にて、NMU抗体とマクロファージのマーカーであるF4/80抗体との共染色が認められた。以上から、NASHの病態におけるNMU/NMUR1経路の関連が示唆された。我々は神経ペプチド・ニューロメジンU(NMU)の末梢での生理機能に関して、既報のNMUシステムと炎症作用との相互関連を基に、肥満関連疾患の中でも慢性炎症作用が強く関与しているといわれている非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)/非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)に着目して解析を行った。野生型マウスを用いたコリン・メチオニン欠乏食による食事誘導性NASHモデルマウスの肝臓組織においては、非NASHモデルマウスの肝臓組織にて殆ど検出する事ができないNMUならびにNMU受容体1(NMUR1 ) mRNAの発現量の増加が認められた。また、NASH病態時に認められる炎症性サイトカイン(TNF-α、IL-6、IL-1β) mRNAの増加や肝臓組織へのマクロファージの浸潤に関しては、今回我々の用いた食事誘導性NASHモデルマウスの肝臓組織においても同様の所見が認められた。さらにNASHモデルマウスの肝臓の免疫組織染色にて、抗NMU抗体とマクロファージのマーカーである抗F4/80抗体の染色を行ったところ両者の共染色が認められた。

次にNASH病態時におけるNMUの病態生理的意義を検討するため、我々はhydrodynamic tail injection法を用いてNMU発現ベクターを野生型マウスの尾静脈から急速静注し肝臓にNMUを発現させるモデルを作製し(Sleeping Beauty transposon system)、そのマウスを用いて食事誘導性NASHモデルを作製した。NMUを発現しているマウス(SB-NMU)においては、GFPを発現しているコントロールマウス(GFP)に比べNASH病態の増悪が認められ、その指標となる肝臓における炎症性サイトカインのmRNA発現レベルならびに線維化のマーカーであるα-SMA mRNAレベルはSB-NMU群にて著しく増加している事が判明した。以上から、NASH病態時における肝臓のNMUシステムは病態を増悪させることが明らかとなった。(現在、論文投稿準備中である。)内分泌学野生型マウスを用いた食事誘導性NASHモデルの肝臓組織においてニューロメジンU(NMU)、NMUR1遺伝子発現の上昇を確認し、免疫組織染色にてNMU抗体とマクロファージのマーカーであるF4/80抗体との共染色が認められた。しかし、NMU遺伝子欠損マウスを用いて食事誘導性NASHモデルを作製し解析した際には、コントロールマウスに比べてNASH病態の進展に有意な差は認められなかった。一方で、昨年度はマウスモデルのみならず、ヒトNASH患者さんの肝臓組織にてNMU陽性細胞の検出を認め、さらにマウスモデル同様、正常ヒト肝臓組織においては、NMU陽性細胞の検出は認められなかった。以上の結果から、平成26年度はNASH病態におけるNMU/NMUR1系路の発現増強の意義をSleeping Beauty systemを用いて解析し、一連の研究計画を完遂させる予定である。現時点でペプチドXの全身欠損マウスの作出に成功し、次段階である表現型の解析に進んでいる。NMUの新規生理機能の解析に関しては、平成24年度の研究結果から食事誘導性NASH病態モデルにおけるNMU/NMUR1経路の関与の可能性が示唆され、次年度のNMU遺伝子欠損マウスにおける解析に向けて順調に実験計画を進めて行く予定である。昨年度までの研究結果から、野生型マウスのNASH病態の肝臓組織において、NMU/NMUR1系路の遺伝子発現が増強していることが明らかとなっている。一方でNMU遺伝子欠損マウスを用いた解析では、コントロールマウスに比べ、NASH病態の進展に有意な差は認められなかったため、本年度は、NMU遺伝子の過剰発現モデルを野生型マウスにSleeping Beauty systemを用いて作製の上、NASH食の負荷を行ない、NASH病態の肝臓組織におけるNMU/NMUR1系路の生理的意義を明らかにする予定である。ペプチドXの生理機能解析については、作出したペプチドX全身性遺伝子欠損マウスを用いて現在解析中の肥満・代謝関連の表現型ならびに記憶・嗜好性に関与する中枢性の表現型の詳細な解析をおこなう計画である。
文化財の復元材料としての絹糸の調査

文化財の復元に相応しい絹糸を製作し実験的な復元をするために、現在日本で管理されている蚕から作られる絹糸の具体的な特徴について調査を行った。原材料の標本として原種とされる蚕品種(中国種:紹興、緋紅、漢口赫繭、諸桂、山東三眠、朝陽、日本種:桜姫、又昔、青熟、鬼縮)の飼育を行い、この繭から馬の尾の輪を取り付けた座繰り器を用い絹糸を製作した。繊度、硬質セリシン量の測定、精練抵抗の大小について調査を行ったほか、糸繰りや精練に関する材料や技術についても考察を重ねた。また実際の資料の質、質感にこうした技術の結果がどのように反映されているのかを理解することを試みた。(結果は文化財保存修復学会第2629回大会で発表を行った。「文化財の復元材料としての絹糸の調査・その1その8」他)。日本では明治初期を画期として製糸技術が変化するが、それ以前の資料に見られる糸の形状について興味深い観察結果が得られた。江戸時代の熨斗目小袖の裂や天保年間の黄八丈について言えば「熨斗目」は一般に生経練緯の組織で、従来文献資料の分析から舶載の絹糸を使用していることが指摘される。今回、それぞれ使用された糸の特徴を拡大して観察したところ、「熨斗目」には同時代の黄八丈にはあまり見られない抱合性のよい糸を引き揃えている状況が確認でき、製糸技術の異なることが観察結果からも裏付けられるのではないかと思われた。復元についてはセリシンの量や性質を経験からだけでなく、適切な分析によって把握できるのであれば、事前に蚕品種を特定して必要な性質を有した絹糸を選択することが可能であることが理解された。同試料について、藁灰による精練と日本茜による染色を行い、発色や質感に違いが見られるかを確認した。この工程に関しては中世の鎧の威糸の復元を目指し、古代日本茜染研究所代表宮崎明子氏の協力を得た。特に質感と光沢の点で精練、染色による特徴が現れることが判明した。また、日本の組紐技法の源流と発展を知る上で、不可欠な存在である中国戦国時代の出土組紐(江陵馬山一号楚墓他)の組織「〓」を実見し材料、技法発展の状況を観察した。文化財の復元材料として、現在日本で管理されている蚕種から文化財の復元に相応しいと考えられた原種を選択し、養蚕、繰糸を行なった。また、これらの絹糸についてマイクロスコープや電子顕微鏡を用いて観察を行なった。絹糸の作製にあたり、日本や中国古来の製糸、織成技術に関心を持って研鑽を積んでこられた志村明氏(絹織製作研究所長野県)に、原種とされる繭(中国種6種類:紹興・緋紅・漢口赫繭・諸桂・山東三眠、朝陽、日本種4種類:桜姫、又昔、青熟、鬼縮)の選択と繰糸、検位衡による繊度の計測を依頼した(結果は第26回文化財保存修復学会で発表の予定「文化財の復元材料としての絹糸の調査その1」)。

糸繰り法は、殺蛹を行わず、糸の質感を最も良く保つとされる「生繰」(蛹が蛾になる前に糸を採る方法)とし、手回し座繰器で繰糸を行った。比較のために現代の蚕(あけぼの)の繭を用いて殺蛹方法(通常の熱風乾燥と塩蔵)や繰糸方法(通常の器械と座繰器)を変えて糸繰りを行なった。その結果、現在行なわれている熱風乾燥や機械繰糸による生糸とは色みや光沢、張り等において違いが認められることを確認した。来年度は精練法についても検討し、方法の違いが絹糸に及ぼす影響について検討していく予定である。組紐と絹糸の調査では、元興寺所蔵袈裟、四天王寺所蔵品(懸守・舞楽装束)、興福寺所蔵成唯識論、根津美術館所蔵根本百一羯磨巻第六、甘南備寺所蔵黄櫨匂威大鎧残闕、神護寺経・経帙などを実見した。平安時代後期に比定される鎧の威糸、経巻の懸け緒、懸守の緒にごく細い撚り糸が組み込まれていることを確認した(第26回文化財保存修復学会で発表の予定「古代から中世の組紐の糸に関する調査」)。昨年来、文化財の復元に相応しい絹糸を製作し実験的な復元をするために、現在日本で管理されている蚕から作られる絹糸の具体的な特徴について調査を続けている。原材料の標本として製作した、原種とされる繭(中国種6種類:紹興、緋紅、漢口赫繭、諸桂、山東三眠、朝陽、日本種4種類:桜姫、又昔、青熟、鬼縮)の精練を行い、練減率を確認した(結果は文化財保存修復学会第27回大会で発表の予定「文化財の復元材料としての絹糸の調査・その2」)。史料の実見を通して、ほとんどの組紐の組糸には生糸ではなく、精練や染色を経た絹糸が用いられている事が理解される。これを確認するために、今日生糸を精練するために通常行われる、藁灰を用いて加温する方法で精練を行った標本と史料の比較を行ったところ、糸の光沢について違いが認められた。鎧の威糸を見る限りは艶がそれほどあるとは感じられず、艶の目立つ標本では復元は困難かと思われた。この光沢の違いが何に由来するのか検討を行っている(結果は文化財保存修復学会第27回大会で発表の予定「文化財の復元材料としての絹糸の調査・その4-絹糸の光沢に関する調査-」)。また、組紐に用いられる糸の作り方が特殊であるかどうか、例えば同じ絹糸を材料とする織物とどのように違うのか理解するために、布地の作り方を観察した。対象としたのは江戸時代に武家の男性が裃の下に着用した熨斗目小袖の裂である(結果は文化財保存修復学会第27回大会で発表の予定「文化財の復元材料としての絹糸の調査・その3-熨斗目の法量測定と質感評価の試み-」)。また、「熨斗目」は一般に生経練緯とされる組織だが経緯とも練糸を使用している例が確認できた。組紐の復元技術については絹糸の撚り方の解明が大きな課題であったが、近世の組紐では、栃木県大田原市芭蕉の館所蔵の『止戈枢要』中に記載のある「手世良(テセラ)糸」の捻方を参考にすることができる。これには、回転する道具を使用する例と、竹を鳥居のように組んで地面に数箇所設置し、柊またはチサで作ったコマを樫の拍子木で廻す例等が示されている。水に十分湿らせた糸を撚るのには乾燥した時期を避け、4,5,6,7月が適していることなど、具体的な情報が得られ貴重である(実験の予定)。精練技術については、延喜式で述べられる「藁」を材料とした灰汁をもちいて、竈で実験を行った。当時、安定した温度を保って合理的な精練を行った状況が理解できる結果であった。この精練液については、奈良県工業技術センターにて成分分析を行った。含まれる微量の金属元素の働きが精練の結果を左右するとの説があり、これを理解することが目的である。分析結果からは、灰の浸潰時間によって、灰汁の成分が異なることも確認された。
AFM等によるコロイド粒子間の相互作用力の測定とクラスター形成及びOrdering

AFMによる表面間力の測定に先駆けて、先ずAFMで雲母壁開面上のコロイド粒子を観察することにより両者の相互作用について考察した。コロイド試料にはシリカ粒子、合成ラテックス及びリン脂質ベシクルを用いた。各粒子が示す興味あるフイルム構造の中で、雲母基盤上に凸凹があると、雲母の段さに平行に一定の空地ができその遠方に規則性の高いオーダー構造が形成されるという興味ある相互作用の存在が確認された。次に、液膜中に封じ込められた二次元系粒子の相互作用、水銀表面上に展開されたラテックス粒子間に働く力、及び各種コロイド粒子と気-液及び油-水界面との相互作用について興味ある新事実を見いだした。本プロジェクトの最終目的であるAFMを用いた表面力測定については、まず空気中で雲母基盤と探針間、及びlatex粒子層で覆われた雲母表面と探針間のフォースカーブを描いていた。その結果サンプル表面と接触後のカーブの傾きに両糸で差異が見い出された。これは、雲母とラテックス粒子を比べるとラッテックス粒子の方が柔らかく非弾性的であり、探針との接触で粒子が変形したことを示唆する。次に、雲母と探針間の相互作用を各種塩濃度溶液中で測定した。いずれの場合においても、探針と雲母基盤の接触以前にカンチレバ-の反りがみられ、さらにNaCl濃度が濃くなるにつれて、反りの起こる起点が接触点に近づく事がわかった。これは、NaCl濃度の増大に伴い雲母表面の電気二重層の圧縮効果が生じ、両者間の静電反発力の到達距離が減少したことを示すものである。続いて、直径20μmのシリカ粒子をカンチレバ-の先端に接着し、雲母基盤表面との相互作用を測定した。測定値はDLVO理論による推定値と良好な一致を示し、本実験が適切な条件下で行われていることが分かった。AFMによるコロイド粒子間の相互作用力の測定に先がけて、ラッテクス粒子やベシクル粒子を含む分散液から薄膜の薄化プロセスの観察法を確立し、膜厚のジャンピング現象の解析から粒子間相互作用力と分散粒子の結晶化機構についてに次の様な知見を得た。1)ラッテクス粒子の分散液を試料に用いると液膜の段階的薄化が明瞭に観察され、膜内粒子の相互作用力と膜の安定性の相関より粒子間力に関する知見をうることができる。2)ベシクル分散液を用いた場合は粒子間相互作用と膜の薄化プロセスとの相関は無く、黒膜のみが安定に存在した。これは膜の薄化に伴ってベシクルが崩壊することを意味する。この現象は実験試料にphodphatidyl cholineとlysophsphatidyl cholineの混合ベシクルを用いると顕著となり黒膜中にベシクル粒子のチャンネルの形成や新しい核の発生が認められた。これらの現象は分子の集合化や新しい相の核形成について重要な知見を提供する。AFMを用いた粒子間相互作用力の測定についてはカチレバーの先端に大型ラテックス(20μm)を付着させたものを用いて雲母表面間との塩水溶液中での相互作用曲線を作成すべく現在検討中である。カンチレバー変位の分解能やチップ先端と粒子の付着などに問題があり、測定技術を完成させるまでにはもうしばらく検討時間が必要である。1)三次元系での粒子間力の測定に先駆けて、液膜に封じ込められた二次元的粒子層を作成し、この粒子間に働く力を直接測定する装置と技術の開発を検討し、完成させた。

これは液膜内に二次元的に封じ込められた微粒子(ラテックス及びリン脂質ベシクル)に外部から浸透圧を作用させ、膜厚のジャンピング現象及び顕微鏡的に測定される粒子間距離との関係から二次元粒子間の相互作用曲線を描く方法である。本測定技術により次のような結果がえられた。ラテックス分散液を試料に用いると液膜の段階的薄化が明瞭に観察され、液膜内粒子の相互作用力と膜の安定性の相関が定量的に検知された。しかし、ベシクル分散液を用いた場合は粒子間相互作用と膜の薄化プロセスに相関はなく、黒膜のみが安定に存在した。これは膜の薄化に伴ってベシクル粒子が崩壊することを意味する。この現象は実験試料にphosphatidyl cholineとlysophosphatidyl cholineの混合ベシクルを用いるとさらに顕著となり、黒膜中にベシクル粒子のチャンネルの形成や新しい核の発生が認められた。これらの現象は分子の集合化や新しい相の核形成について重要な知見を提供する。2)AFMを用いた粒子間相互作用力の測定については、今年度はカンチレバ-の先端に大型シリカ粒子(10ミクロン)を付着させたものをもちいて、雲母表面間との相互作用曲線を各種塩濃度溶液中で描き、D.L.V.O.理論で予測されるものとの相関を検討中である。AFMによる粒子間相互作用曲線の測定に先駆けて、AFMを用いて雲母ヘキ開面上のコロイド粒子を観察することにより両者の相互作用について考察を行った。コロイド試料にはシリカ粒子、合成ラテックス及びリン脂質ベシクルを使用し、いろいろな溶液条件(イオン強度、pH)に調節したものをヘキ開直後の雲母上に12滴滴下し、室温で乾燥させて雲母上に粒子のmonolayer filmを形成した。得られたfilmをAFM(Nanoscopell,Digitale Instrument社)により、大気中及び液中測定を行い、溶液条件とfilmの形状の相関を調べた。その結果どの様な溶液条件下においても各粒子のfilmの構造に違いはなく、filmの中央部では六方最密充填構造を取るが、周辺部では構造がくずれがちであった。また、ラテックスよりもシリカ粒子の方が六方晶形のオーダー構造を取りやすく、個々の粒子の輪郭もはっきりしていた。さらにラテックスfilmでは頂点-頂点間の距離が粒子の直径よりも減少する傾向が見られた。また、雲母基盤上に凸凹があると雲母の段差に平行な空地ができ、その先に規則性の高いオーダー構造が観察された。一方、リン脂質ベシクルは溶液中の大きさに比べかなり収縮した小胞体として観察された。AFMを用いた粒子間相互作用曲線の測定については、今年度はカンチレバ-の先端に大型シリカ粒子(1030um;polyscience社)を付着させたものを用いて、雲母表面間との相互作用曲線を各種塩濃度下で描き、DLVO理論で予測されるものとの相関を検討した。その結果、各塩濃度下(NaCl10^<-4>M10^<-2>M)で常に斥力が観察され、その斥力の減衰距離はそれぞれの塩濃度下におけるDebye長の理論値とよく一致し、これは拡散電気二重層斥力であることがわかった。
哺乳類の顎・顔面および肢芽の形態形成機構の解析

TGF-β3およびTGF-β2ノックアウトマウス(+/-)を交配により、異なる系統(C57BL/6J,129/Sv, FVB/N, SJL/J, ICR)へ移入して、ホモ接合子胎児(-/-)における口蓋裂および肢芽における指の分離の表現型を解析した結果、以下の知見を得た。1)口蓋突起の癒合についてICR系統では、TGF-β3-/-胎児はすべて口蓋の前1/2部分のみが癒合する不完全口蓋裂(100%)を呈し、一方、近交系では、C57BL/6Jで-/-はすべて完全口蓋裂(100%)を呈する他、129/Sv, FVB/N, SJL/Jでも78%86%の頻度で完全口蓋裂を呈していた。また、TGF-β2-/-は、ICRでは-/-はすべて胎齢18日まで生存し、口蓋は正常に癒合していたのに対し、近交系ではいずれの系統でも-/-はすべて、口蓋が発生する以前の胎齢12日頃までに心臓の欠陥により死亡した。ところが、これらの近交系の交雑群(F1)では、-/-はすべて胎齢18日まで生存し、口蓋は正常に癒合していた。本研究により、TGF-β2の発現は口蓋の癒合に必須ではなく、また、TGF-β3は口蓋の前1/2部分の癒合に必須ではないものの、後1/2部分では口蓋突起の成長と口蓋突起内側縁上皮の最終分化に必須であることが明らかとなった。2)肢芽における指の分離ついてTGF-β2およびTGF-β3のダブルノックアウトマウスのホモ接合子(-/-)胎児では、指の分離における指間予定域のプログラム細胞死が野生型に比べて顕著に抑制されおり、交雑系では指の分離が阻害されていたが、ICR系統では指は正常に分離していた。以上、近交系マウスでは使用したいずれの系統においても、劣性遺伝するModifier Geneが存在し、TGF-β3およびTGF-β2ノックアウトマウスにおける種々の表現型を修飾している可能性が示唆された。野生型マウス(ICR,C57BL/6J)およびTGF-β3ノックアウトマウス胎児(胎齢14.0日)の口蓋突起を用いて、我々が独自に開発した単一口蓋突起回転浮遊培養法により種々の実験を行って、組織学的、免疫組織化学的に解析した結果、口蓋突起内側縁上皮細胞の分化について以下の知見を得た。野生型マウスの口蓋突起では18時間培養後で内側縁上皮の基底細胞が間葉細胞へのトランスフォメーションを起こし始め、一部の内側縁上皮細胞はアポトーシスを起こすものの、多くははサイトケラチン陽性のまま鼻腔または口腔上皮側へ移動する像が観察された。また、既存の基底膜が分解しつつある一方で、トランスフォメーションした細胞とサイトケラチン陽性のまま鼻腔または口腔側へ移動する内側縁上皮細胞との間に新たに基底膜を形成している像が観察された。24時間培養後では、サイトケラチン陽性の内側縁上皮はすべて消失し、基底膜もほとんど分解していた。マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤により基底膜の分解を妨げると間葉細胞へのトランスフォーメーションが妨げられたが、この状態でもI型コラーゲンに接した環境にあると間葉細胞へのトランスフォーメーションを起こすことができた。