hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細胞老化における核・クロマチン機能

我々は、これまでに老化細胞では、ヒストンH1が完全に消失することを明らかにしてきた。本研究では、老化細胞核の機能・構造に焦点をあてて、その分子機構の解析を試みた。その結果、1)老化細胞では、おそらくユビキチン・プロテアソーム系によってヒストンH1が消失すること、2)炎症反応を惹起するNF-kB経路が活性化されて、特徴的な遺伝子発現をもたらすこと、3)核膜構造と機能に異常があることを見いだした。これらの老化細胞特異的な分子機構を標的として老化・発がん過程を制御する方法が開発されることが期待される。これまでに、活性化Ras遺伝子の構成的発現により、正常線維芽細胞を細胞老化誘導した場合、リンカーヒストンH1の消失とHMGA2蛋白質の増加を伴うヘテロクロマチン(SAHF,Senescence-associated heterochromatin focus)形成がおこることを報告してきた。今回、このようなSAHF陽性細胞においては、G蛋白質Ranが、正常であるべき核内ではなく細胞質に局在異常を示していることが明らかになった。特に、正常線維芽細胞に種々の容量の過酸化水素処理を行うと、容量の増大に伴って、Ranの局在異常の程度、持続が亢進し、それは細胞老化誘導の程度と相関した。これらのRanの局在異常は、核内DNAのヘテロクロマチン化により、Ran GEF(guanine nucleotide exchange factor)であるRCC1の機能、局在が異常になるためであると考えられた。一方、東京大学先端科学技術研究センターの油谷教授との共同研究で、マイクロアレイを用いて細胞老化誘導時の遺伝子発現プロファイルの変化を解析した。その結果、細胞老化誘導に、NF-kappaB経路の活性が重要である可能性が示唆され、実際に、老化細胞における同経路の活性化を証明した。今後、いかに同経路が活性化されるのかを明らかにする予定である。さらに、既に報告した老化細胞におけるリンカーヒストンH1の消失の分子機構をさぐるため、プロテアソーム阻害剤であるMG132で処理すると、H1の消失が有意に阻害されたことから、プロテアソームが関わることが示唆された。我々は、テロメアの短小化や、低容量ストレスによって誘導される老化細胞において、ピストンH1が消失していることを見いだした。ピストンH1は、リンカーヒストンとしてほとんどの真核生物体細胞に保存して存在するものであり、それを完全に消失した体細胞の報告はこれまでにない。本研究は、老化細胞クロマチンが、ピストンH1の消失によってどのような構造的・機能的変化をとげ、それが翻って、細胞老化の成立にどのように寄与するのかを明らかにしようとするものである。まず、RNA干渉法を用いて、ピストンH1の発現を抑制したところ、細胞老化は誘導されなかった。ピストンH1は、クロマチンリンカー部分に、HMGA(high mobility group A)蛋白質と競合して結合することが知られており、我々および他のグループは、老化細胞において、HMGAの発現量が亢進していることを見いだしている。そこで、ヒストンH1の発現抑制とともに、HMGAの過剰発現を行ったところ、核クロマチン構造の凝縮をはじめとして、細胞老化表現型が誘導された。以上の結果は、クロマチンリンカー部分に結合するヒストンH1とHMGAの相対的量比が、細胞老化表現型の発現に重要であることを示している。次に、これらの老化細胞の遺伝子発現プロファイルをマイクロアレイにより解析したところ(東大・油谷博士との共同研究)、老化細胞では、NFkappaB経路が活性化されていることを見いだした。
飲食物類似溶液中に長期浸漬したコンポジットレジンの性質の変化

飲食物類似溶液中として、20%アルコール水溶液、クエン酸水溶液、サラダ油および蒸留水を選択し、3種類のコンポジットレジンをこれらの溶液に浸漬してその性質の変化について調べた。これらの溶液に浸漬しすると、溶液の吸収率は、100日以内に吸収飽和に達する。20%アルコール水溶液、クエン酸水溶液、および蒸留水では供試したコンポジットレジン3種類いずれも、500日浸漬まではほぼ吸水飽和の値を示したが、1000日迄浸漬すると、浸漬溶液間に有意な差がみられた。20%アルコール溶液浸漬では、どのコンポジットレジンにおいてもその吸収率は浸漬期間の増加にともない、増加傾向にあった。クエン酸溶液浸漬では、浸漬期間の増加にともない、吸収率が減少する傾向があった。特にフィラー量の多い臼歯部用コンポジットレジンでは顕著であった。この原因はフィラーにバリウムガラスが含まれているものと考えられた。蒸留水浸漬では、吸水飽和に達した後、その吸収率は試験期間中ほぼ一定であった。サラダ油浸漬では上述の水溶液の吸収率の1/3-1/4を示した。その機械的性質は溶液吸収により、初期には可塑化するので、曲げ強さは向上する傾向があった。1、000日浸漬では、曲げ強さは低下する傾向がみられた。各種溶液浸漬による色調の変化は、溶液の色調が濃い溶液を吸収すると色調の変化が大きくなり、また溶液浸漬期間が長くなると色調の変化が大きくなったが、連続的に変化するのではなかった。そこで浸漬試料を乾燥した後、その色調変化を測定すると、浸漬前と明らかに異なっていた。これはフィラー・マトリクス界面の結合を低下の原因と考えられるマイクロクラックの発生が長期浸漬で生じたものと考えられた。歯科用コンポジットレジンの口腔環境下での諸性質の変化について総合的に調べる目的で、飲食物類似溶液に最大1,000日まで浸漬してその経時的変化について測定し、その変化の要因を特定しようとするものである。現在、研究継続中である。飲食物類似溶液中として、20%アルコール水溶液、クエン酸水溶液、サラダ油および蒸留水を選択し、これらの溶液に浸漬してコンポジットレジンの経時的諸性質の変化を500日にわたり調べた結果については発表した。その結果、以下のことが明らかになった。溶液の吸収率は、アルコール水溶液、クエン酸水溶液、および蒸留水では供試したコンポジットレジンでほぼ同様の値を示したが、サラダ油はこれらの溶液の吸収率の1/3-1/4であった。これらの溶液浸漬によって、マトリクスレジンは、初期には溶液を吸収して可塑化するため、100日後には曲げ強さは上昇する傾向にあった。とくにサラダ油はその効果が著しかった。500日後にはアルコールと、クエン酸水溶液ならびに蒸留水ではフィラー・マトリクス界面の結合を低下させ、機械的性質の低下原因となることが示された。またコンポジットレジンの口腔内環境下での色調の経時的変化についての基礎的データを得るため、上述の4種の溶液に浸漬し、その経時的色調変化についても測定した。その結果、レジンの割合の多い材料ほど溶液吸収の影響が大きく、色調変化が大きかった。しかし浸漬後乾燥した試料は全て浸漬前に比較して明度が暗くなり、彩度は濃くなる傾向があり、大きな色調変化が認められた。この原因もコンポジットレジンのフィラー・マトリクス界面の結合力の低下(界面の剥離)に関係があると考えられた。

飲食物類似溶液中として、20%アルコール水溶液、クエン酸水溶液、サラダ油および蒸留水を選択し、3種類のコンポジットレジンをこれらの溶液に浸漬してその性質の変化について調べた。これらの溶液に浸漬しすると、溶液の呼吸率は、100日以内に呼吸飽和に達する。20%アルコール水溶液、クエン酸水溶液、および蒸留水では供試したコンポジットレジン3種類いずれも、500日浸漬まではほぼ吸水飽和の値を示したが、1000日迄浸漬すると、浸漬溶液間に有意な差がみられた。20%アルコール溶液浸漬では、どのコンポジットレジンにおいてもその吸収率は浸漬期間の増加にともない、増加傾向にあった。クエン酸溶液浸漬では、浸漬期間の増加にともない、吸収率が減少する傾向があった。特にフィラー量の多い臼歯部用コンポジットレジンでは顕著であった。この原因はフィラーにバリウムガラスが含まれているものと考えられた。蒸留水浸漬では、吸水飽和に達した後、その吸収率は試験期間中ほぼ一定であった。サラダ油浸漬では上述の水溶液の吸収率の1/3-1/4を示した。これらの溶液浸漬によって、マトリクスレジンは、初期には溶液を吸収して可塑化するため、100日後には曲げ強さは上昇する傾向にあった。とくにサラダ油はその効果が著しかった。500日以降はアルコールと、クエン酸水溶液ならびに蒸留水ではフィラー・マトリクス界面の結合を低下させ、コンポジットレジンの機械的性質の低下原因となることが示唆された。各種溶液浸漬による色調の変化は、当然のことながら溶液の色調が濃い溶液を吸収すると色調の変化が大きくなった。浸漬試料を乾燥した後、その色調変化を測定すると、浸漬前と明らかに異なっていて、フィラー・マトリクス界面の結合を低下の原因と考えられるマイクロクラックの発生を色調変化測定からも示唆していた。
軸索型Guillain-Barre症候群の動物モデル作成

ウシ脳ガングリオシド注射後軸索型Guillain-Barre症候群のモデル動物の樹立を試みた.(1)ウサギ13羽にイタリアで実際に使用されていたウシ脳ガングリオシド2.5mg,keyhole limpet hemocyanin(KLH)1mg,Freund完全アジュバント(FCA)を皮下注射もしくは腹腔内注射を3週に1回感作を繰り返した.初回感作後5-11週で13羽全例に運動麻痺が生じた.発症からピークに達するまでの期間は4日から13日であり,Guillain-Barre症候群同様急性発症の様式をとった.末梢神経の大径有髄線維は著しく脱落し,ワーラー様の変性を呈していた.リンパ球の浸潤や脱髄像は見られなかった.軸索型Guillain-Barre症候群と同様の病理組織学的所見を呈していた.これに対して,アジュバント対照群10羽では24週まで全例発症しなかった.(2)ウシ脳ガングリオシド感作ウサギでは,初回感作後2週ないし3週でIgMクラスの抗GM1抗体が誘導され,3週ないし4週でIgGヘクラススイッチし,クラススイッチ後3週程度でIgG抗GM1抗体はピークに達した.IgG抗GM1抗体がピークに達してから1週以内に運動麻痺が発症する傾向がみられた.(3)ウサギ末梢神経よりFolch分配によりガングリオシド画分を抽出した.薄層クロマトグラム免疫染色にて,発症ウサギの血漿IgGが認識するバンドは標準GM1と同様の移動度を示した.さらに,発症ウサギの血漿IgGが認識するバンドを薄層クロマトグラム-blotting後に質量分析を行い,GM1に由来するシグナルが検出された.以上より,発症ウサギの血漿IgGが認識する分子がウサギ末梢神経に発現するGM1であることを確認した.ウシ脳ガングリオシドを感作して発症したウサギの末梢神経病変は脱髄ではなく軸索変性を主体とした.ウシ脳ガングリオシド注射後軸索型Guillain-Barre症候群のモデル動物の樹立を試みた.(1)ウサギ13羽にイタリアで実際に使用されていたウシ脳ガングリオシド2.5mg,keyhole limpet hemocyanin(KLH)1mg,Freund完全アジュバント(FCA)を皮下注射もしくは腹腔内注射を3週に1回感作を繰り返した.初回感作後5-11週で13羽全例に運動麻痺が生じた.発症からピークに達するまでの期間は4日から13日であり,Guillain-Barre症候群同様急性発症の様式をとった.末梢神経の大径有髄線維は著しく脱落し,ワーラー様の変性を呈していた.リンパ球の浸潤や脱髄像は見られなかった.軸索型Guillain-Barre症候群と同様の病理組織学的所見を呈していた.これに対して,アジュバント対照群10羽では24週まで全例発症しなかった.(2)ウシ脳ガングリオシド感作ウサギでは,初回感作後2週ないし3週でIgMクラスの抗GM1抗体が誘導され,3週ないし4週でIgGヘクラススイッチし,クラススイッチ後3週程度でIgG抗GM1抗体はピークに達した.IgG抗GM1抗体がピークに達してから1週以内に運動麻痺が発症する傾向がみられた.(3)ウサギ末梢神経よりFolch分配によりガングリオシド画分を抽出した.薄層クロマトグラム免疫染色にて,発症ウサギの血漿IgGが認識するバンドは標準GM1と同様の移動度を示した.さらに,発症ウサギの血漿IgGが認識するバンドを薄層クロマトグラム-blotting後に質量分析を行い,GM1に由来するシグナルが検出された.以上より,発症ウサギの血漿IgGが認識する分子がウサギ末梢神経に発現するGM1であることを確認した.ウシ脳ガングリオシドを感作して発症したウサギの末梢神経病変は脱髄ではなく軸索変性を主体とした.
うつ病に対する薬物感受性遺伝子を考慮したSSRIとSNRIの無作為比較試験研究

関西医科大学精神神経科に通院・入院中でDSM-IVでうつ病と診断された未治療93名をparoxetine(PX)かmilnacipran(ML)に無作為に割り当て、薬物投与前と投与2週間ごとにハミルトンうつ病評価尺度(HAM-D)で評価し6週間治療した。アドレナリンα2A受容体(ADRA2A)は、自己受容体として全身交感神経活動調節の中心的役割を果たす。近年ADRA2Aの機能不全がうつ病、注意欠陥多動障害の原因として関係するとの報告がある。今回我々は、ADRA2A遺伝子多型の影響が、SSRIs/SNRIsの抗うつ反応における予測因子となりえるか日本人うつ病患者で調査した。特にプロモータ部位に位置するADRA2AC-1297G遺伝子多型を抗うつ反応の相関解析で考慮した。同意取得者93例から副作用、自己中断による脱落36例を除いた57例(PX群27例、ML群30例)について解析を行った。臨床改善では、両群とも著明に改善したが、両群間に有意差はなかった。57名をADRA2AC-1297G遺伝子多型C/C、CIG、GIGに分類し、3遺伝子型間でHAM-D変化率over time(P=0.019)に有意差を認めた。またML群でCアレル保有者がG/G被験者より、HAM-D変化率over time(P=0.037)で著明な改善を示したが、PX群では有意差を認めなかった。また93例で副作用において両群間に有意差はなかった。我々の研究結果はADRA2Aがうつ病治療で重要な役割を果すことを示唆した。この研究では、PXとMLは同等の臨床効果と副作用を持つことを証明した。またADRA2A遺伝子多型がSSRIs/SNRIs、特にMLの抗うつ反応に関連している可能性を示した。
ニューロメジンBはクッシング病の新規治療薬となるか

クッシング病は下垂体腫瘍からの副腎皮質刺激ホルモンが過剰に分泌されることで、糖尿病、高血圧などの代謝異常を呈する疾患であり、下垂体手術や現在使用されている薬物でも寛解率は十分でなく、新規薬剤が望まれている。本研究ではニューロメジンBの受容体拮抗薬がクッシング病の新たな治療薬となりうるかどうかを、細胞株、疾患モデルマウス、手術の際に摘出された腫瘍細胞にそれぞれ薬剤を投与し、その効果を調べる。本研究により得られた結果はクッシング病の新たな治療薬の発見につながり、クッシング病の患者の生活の質の向上につながると考えられる。本研究ではニューロメジンB(NMB)受容体拮抗薬のクッシング病(ヒト下垂体ACTH産生腺腫)への治療薬としての可能性を追求するとともに、その作用機序を検討することを目的として実験を行っている。クッシング病は外科的下垂体腺腫摘除が第一選択として行われるが、寛解率は高くなく、有効な治療薬が望まれている。平成30年度は細胞を用いた実験を主に行い、ニューロメジンB受容体拮抗薬であるPD168368がマウス下垂体癌由来のAtT-20細胞でCREBとERK1/2のリン酸化を抑制し、下流に存在する転写因子であるcFosやNur77の発現を抑制することで、最終的にPOMC遺伝子の発現を低下させ、ACTH分泌を抑制することを発見した。以上から我々はNMB受容体拮抗薬PD168368が細胞内でどのような経路に作用してACTH分泌を抑制するかを明らかにした。ホルモン分泌だけでなく、細胞増殖に関わる細胞周期関連蛋白の発現量、リン酸化の程度についても今後検討を進めていく予定である。動物実験についてはクッシング病のモデルマウスであるCorti-EGFR-Tgマウスを米国Cedars-Sinai Medical Centerより移送し、研究に使用する体制を整えることができた。計画通り次年度から薬物投与実験を開始できるよう準備を進めている。疾患モデルマウスへの薬剤投与実験により、薬剤の効果や副作用について生体で検討することで、臨床応用に向けて重要な知見が得られると考えられる。ヒト下垂体腺腫の検討は臨床研究計画書を作成している段階であり、来年度に計画の申請・許可を受け研究を進める予定である。手術により摘出されたヒト下垂体腺腫細胞にNMB受容体拮抗薬を投与することでヒトの下垂体腺腫細胞に対する効果を確認することができ、マウスの実験で得られた結果がヒトに応用可能かどうかを評価することができると考えられる。細胞実験については計画通りNMB受容体拮抗薬を投与した際の細胞内のPomcならびにその転写に関与する転写因子や細胞周期に関与する遺伝子・蛋白の発現をリアルタイムPCR法やウェスタンブロット法で評価した。NMB受容体拮抗薬PD168368はCREBとERK1/2のリン酸化を抑制し、下流に存在する転写因子であるcFosやNur77の発現を抑制することで、最終的にPOMC遺伝子の発現を低下させ、ACTH分泌を抑制することを発見した。細胞周期関連蛋白の解析については現在検討中である。マウス実験については遺伝子組み換えマウスの輸送に関する法的な手続きを進め、米国Cedars-SinaiMedical CenterからCorti-EGFR-Tgマウスを我々の研究施設に輸送した。今後実験に必要な数を得るために交配し、平成31年度中に薬物投与実験を開始する予定である。ヒト下垂体腺腫検体を用いた薬剤投与実験については研究計画書を作成中であり、平成31年度に承認を受け研究を開始する予定である。細胞実験については平成30年度に得られたホルモン産生に関わる因子に加え細胞周期関連蛋白の検討を進め、NMB受容体拮抗薬のACTH産生腺腫細胞の増殖抑制作用の機序を明らかとする。マウス実験については交配により実験に必要な匹数を確保したのち、NMB受容体拮抗薬PD168368の投与実験を行う。ヒト下垂体腺腫細胞を用いる研究については研究計画書の承認を受けたのち、下垂体腺腫の患者から同意を得た上で下垂体腺腫検体に対する薬物投与実験を開始し、結果を内分泌検査の結果と関連を調べる。平成30年度は細胞を用いた実験を主に行い、ニューロメジンB受容体拮抗薬であるPD168368がマウス下垂体癌

由来のAtT-20細胞でCREBとERK1/2のリン酸化を抑制し、下流に存在する転写因子であるcFosやNur77の発現を抑制することで、最終的にPOMC遺伝子の発現を低下させ、ACTH分泌を抑制することを発見した。以上から我々はNMB受容体拮抗薬PD168368が細胞内でどのような経路に作用してACTH分泌を抑制するかを明らかにした。ホルモン分泌だけでなく、細胞増殖に関わる細胞周期関連蛋白の発現量、リン酸化の程度についても今後検討を進めていく予定である。動物実験についてはクッシング病のモデルマウスであるCorti-EGFR-Tgマウスを米国Cedars-Sinai Medical Centerより移送し、研究に使用する体制を整えることができた。計画通り次年度から薬物投与実験を開始できるよう準備を進めている。疾患モデルマウスへの薬剤投与実験により、薬剤の効果や副作用について生体で検討することで、臨床応用に向けて重要な知見が得られると考えられる。ヒト下垂体腺腫の検討は臨床研究計画書を作成している段階であり、来年度に計画の申請・許可を受け研究を進める予定である。手術により摘出されたヒト下垂体腺腫細胞にNMB受容体拮抗薬を投与することでヒトの下垂体腺腫細胞に対する効果を確認することができ、マウスの実験で得られた結果がヒトに応用可能かどうかを評価することができると考えられる。細胞実験については計画通りNMB受容体拮抗薬を投与した際の細胞内のPomcならびにその転写に関与する転写因子や細胞周期に関与する遺伝子・蛋白の発現をリアルタイムPCR法やウェスタンブロット法で評価した。NMB受容体拮抗薬PD168368はCREBとERK1/2のリン酸化を抑制し、下流に存在する転写因子であるcFosやNur77の発現を抑制することで、最終的にPOMC遺伝子の発現を低下させ、ACTH分泌を抑制することを発見した。細胞周期関連蛋白の解析については現在検討中である。マウス実験については遺伝子組み換えマウスの輸送に関する法的な手続きを進め、米国Cedars-SinaiMedical CenterからCorti-EGFR-Tgマウスを我々の研究施設に輸送した。今後実験に必要な数を得るために交配し、平成31年度中に薬物投与実験を開始する予定である。ヒト下垂体腺腫検体を用いた薬剤投与実験については研究計画書を作成中であり、平成31年度に承認を受け研究を開始する予定である。細胞実験については平成30年度に得られたホルモン産生に関わる因子に加え細胞周期関連蛋白の検討を進め、NMB受容体拮抗薬のACTH産生腺腫細胞の増殖抑制作用の機序を明らかとする。マウス実験については交配により実験に必要な匹数を確保したのち、NMB受容体拮抗薬PD168368の投与実験を行う。ヒト下垂体腺腫細胞を用いる研究については研究計画書の承認を受けたのち、下垂体腺腫の患者から同意を得た上で下垂体腺腫検体に対する薬物投与実験を開始し、結果を内分泌検査の結果と関連を調べる。
近代における日本経済の循環的成長と製糸業の発展

2000(平成12)年度においては,まず,1900年代以降における近代製糸業の発達を先導した製糸企業を素材とした分析を完成させた.近代製糸業の発達を主導した諏訪郡の製糸業は,1890年代半ばまでにおいては,共同再繰およぼ共同出荷によって製品の均一性を高め,対アメリカ輸出を拡大してきた.しかし,力織機の高速化を中心に,アメリカの絹織物業における技術革新が進行した結果,1890年代後半には,従来よりさらに均一性の高い生糸が原料として求められるようになり,アメリカ市場における日本糸占有率の伸びは停滞した.こうした変化に対して,諏訪郡の主要な製糸家は,繰糸から再繰までを単独の大規模製糸工場において一貫して行う生産組織に移行し,また,情報の非対称性を克服すべく,独自の商標によるブランドの確立,品質プレミアムの獲得に努めた.その結果,日本糸占有率は1900年代に入ると拡大し,日本の近代製糸業とアメリカの絹織物業とは再び,補完的な発達を加速した.こうした近代製糸業の再編過程を,代表的な製糸会社である合資岡谷製糸会社の経営を素材として解明した.また,研究計画に従い,日本およびアメリカの価格データを整備し,産業の再編が景気循環と密接に関わっていたことも明らかにした.また,研究計画にしたがい,中小規模の製糸家についても分析を進めた.中小規模の製糸家から成る共同再繰結社の多くは,1890年代半ば以降における再編に対応することができなかった.その原因は,再繰結社としての発展じたいに包含されていた.中小製糸家から成る再繰結社の場合,技術水準が低く,しかも短期間に組織から離脱する製糸家の製品が出荷量の相当程度を占めており,そのために,商標の信認を確立することができず,発達が遅れたのである.さらに,労働市場における取引制度として,製糸家間の工女取引を統治した諏訪製糸同盟の工女登録制度についても,分析を完成させた.本研究の一環として,本年度には長野県諏訪郡の製糸家が1900年に設立した「諏訪製糸同盟」の機能を分析した.その最大の特徴は「工女登録制度」にあった.諏訪製糸同盟事務所に加盟製糸家の使用する工男女の全てを登録することが定められ,工女は正当な使用権を有する製糸家の「権利工女」として同定されたのである.従来の研究は,諏訪製糸同盟の主な目的と効果は工女の工場移動の抑止にあると考えてきた.しかし,本研究によって,その最も重要な機能は,製糸家の雇用する工女が工場を移動する際の製糸家間における取引費用を縮小する,取引制度としてのそれにあったことが解明された.従来の見解が依拠する伝統的な経済史学に立脚する産業革命研究は経済発展と制度の効率性との関係を自覚的に考察してはこなかった.これに対して,新制度学派の経済史学は司法制度による所有権の保護と経済発展との関係を分析し,あるいは取引費用の経済学は取引費用の観点から主に私的な制度の分析に成果をあげてきた.また,制度を経済主体が自律執行的(self-enforcing)に従う行動制約として捉える歴史制度分析も主に私的な制度の形成過程の分析に成果をあげてきた.本研究もそれらを前提として諏訪製糸同盟のの分析を行ったが,その際,私的な制度と公的な制度との関わりに注目したことが,それらの諸学派に対する本研究の重要な独自性を構成している.司法制度の確立した近代以降の経済史を分析する際には,司法や行政が執行を担保する公的な制度と,自律執行的な私的制度との関係を考察することが重要であろう.新制度学派の経済史学が明らかにしてきたように,近代以降の経済発展が司法制度による所有権保護を前提とすることに議論の余地はない.しかし,近代以降においても私的な取引制度がしばしば重要な意味を持ったことも否定できない.それゆえ,工女の取引という特定の取引が私的な制度によって統治された理由を公的な司法制度の限界との関わりにおいて分析したのである.2000(平成12)年度においては,まず,1900年代以降における近代製糸業の発達を先導した製糸企業を素材とした分析を完成させた.近代製糸業の発達を主導した諏訪郡の製糸業は,1890年代半ばまでにおいては,共同再繰およぼ共同出荷によって製品の均一性を高め,対アメリカ輸出を拡大してきた.しかし,力織機の高速化を中心に,アメリカの絹織物業における技術革新が進行した結果,1890年代後半には,従来よりさらに均一性の高い生糸が原料として求められるようになり,アメリカ市場における日本糸占有率の伸びは停滞した.こうした変化に対して,諏訪郡の主要な製糸家は,繰糸から再繰までを単独の大規模製糸工場において一貫して行う生産組織に移行し,また,情報の非対称性を克服すべく,独自の商標によるブランドの確立,品質プレミアムの獲得に努めた.その結果,日本糸占有率は1900年代に入ると拡大し,日本の近代製糸業とアメリカの絹織物業とは再び,補完的な発達を加速した.こうした近代製糸業の再編過程を,代表的な製糸会社である合資岡谷製糸会社の経営を素材として解明した.また,研究計画に従い,日本およびアメリカの価格データを整備し,産業の再編が景気循環と密接に関わっていたことも明らかにした.また,研究計画にしたがい,中小規模の製糸家についても分析を進めた.中小規模の製糸家から成る共同再繰結社の多くは,1890年代半ば以降における再編に対応することができなかった.

その原因は,再繰結社としての発展じたいに包含されていた.中小製糸家から成る再繰結社の場合,技術水準が低く,しかも短期間に組織から離脱する製糸家の製品が出荷量の相当程度を占めており,そのために,商標の信認を確立することができず,発達が遅れたのである.さらに,労働市場における取引制度として,製糸家間の工女取引を統治した諏訪製糸同盟の工女登録制度についても,分析を完成させた.
単光子による量子ドットのエネルギー制御

CuC1ナノクリスタル中に閉じこめられた励起子・励起子分子のダイナミクスを研究するため、フェムト秒パルスを用いたポンプープローブ測定に加えて、ピコ秒のポンプープローブ測定を行なった。この方法によって観測する対象に応じて最適な時間分解能とスペクトル分解能を選んで実験することができる。量子点の場合、時間変化を追うことに加え、特定の粒径の量子点のみを選択的に励起することが出来、励起子ダイナミクスの粒径に対する依存性が顕著に見られる。フェムト秒のスペクトルの広い励起光を使った場合には、吸収スペクトル全体が影響を受け、ピークエネルギーが高エネルギーシフトを示すのが見られるだけだが、ピコ秒ポンプープローブ法ではポンプ光のエネルギー位置に幅の狭いスペクトルホールが掘れ、ポンプ光エネルギーに共鳴する特定の粒径の量子点のみが選択的に励起される。励起子状態から励起子分子の基底状態への遷移に伴う誘導吸収、励起エネルギーに対応する最も高いピークのスペクトルホール、その両側にピークとディップの構造が見られた。これらの構造はポンプ光エネルギーの変化に追随するが、ポンプ光エネルギーとの差は一定ではない。バルクのZ_3励起子のエネルギーを基準にとった時に、メインホールの観測されるエネルギー位置は励起エネルギーに対して傾きが1の直線になるが、観測された低エネルギー側の構造は傾きが約0.4の直線に、高エネルギー側の構造は約2.0の直線にのっていることが分かった。この様な傾向から、それぞれの構造の起源として"量子点の閉じ込めの励起状態"と"励起子分子の励起状態"が考えられる。即ち、高エネルギー側のディップは、励起子から励起子の励起状態への遷移に伴う誘導吸収による。量子点では空間的な閉じ込め効果によって励起子が2つゆるく結合した励起子分子の励起状態が考えられるということが理論的に予想されてきたが、それが実験的に確認出来た。この様な解釈は各構造の時間変化のデータとも矛盾しない。
最新のものづくりにおける異種材の共削り加工の最適条件を導き出す工作実習の検討

(目的)近年、IT産業や航空宇宙産業の発展にともない、いくつかの異なる材料を組み合わせた製品が多くなってきた。その加工手段のひとつである共削り加工の場合は、単一なものと比較して良好な仕上げ面を得るのは非常に困難である。今回マシニングセンタのエンドミルを用いた共削りの輪郭加工を行い、加工条件と加工面品位との関係について検討した。そして、この成果についてのプレゼンテーションを行い、学生が自ら最適な加工条件を導き出せるような工作実習の内容について検討することを目的とする。(方法)金属と非金属の組み合わせの被削材として、1mmの銅板の両側面を2mmのアクリル板で挟んだものを治具に取り付け、マシニングセンタのエンドミルを用いた輪郭加工を行った。切削終了後、加工段差について2つの接合部を含む3枚連続して粗さ測定機にて最大高さRyを測定した。それぞれ同じ条件につき実験を3回行い、1つの試料について測定を5回行い、最大と最小を除いた平均値をデータとして取り扱った。これらの成果について工作実習の中で「最新の加工」というテーマのプレゼンテーションを行った。(結果)銅とアクリルの組み合わせた被削材の輪郭加工を行い、共削り加工における加工面品位について実験的に検討した。その結果、銅とアクリルの双方に良好な仕上げ面を得るための加工条件を導き出すのは困難であったが、アクリルの欠けが発生しない条件で加工すればいくぶん良好な仕上げ面を得ることが明らかになった。これらの一連の加工法や結果などについて工作実習の中で学生に紹介した。(考察)これらの一連の加工方法や測定方法など成果について「最新の加工」というテーマで工作実習の中で学生に紹介した。この内容について興味を示した学生が多かったが、理解度について難しいと答えた学生が見られた。座学が不得意な学生がいることを踏まえた上でのプレゼンテーションの方法についても改良や工夫を行いたい。今後は他の加工法についても検討し、最近のものづくりに対応できる技術者育成のために学生に紹介していきたい。
ヘマトコッカスを核とした非滅菌下水処理水からのアスタキサンチン生産技術の開発

本研究では、高価に取引されるアスタキサンチン(AX)を蓄積するヘマトコッカスに代表される特定微細藻類種(AX蓄積藻類)に着目し、非滅菌の下水処理水を用いたAX蓄積藻類の優占培養によるAX生産を目指す。まず、長期間のヘマトコッカス連続培養を行う。平行して、下水処理水に含まれる新規のAX蓄積藻類の探索を行う。次に、AX蓄積の誘導ならびに藻類回収を同時に達成し得る、物理化学処理条件を検討する。さらに、構築したAX生産技術の異なる下水処理場処理水への適用性を確認する。
高濃度局所麻酔薬を用いた難治性疼痛の治療法に関する研究

三叉神経痛、がん性疼痛などの治療に、100%エタノールまたはフェノールグリセリンを用いた神経破壊術が行われてきたが、その合併症としてneuropathic painの発生が問題となる。我々が提唱した、高濃度テトラカインを用いた神経ブロックでは副作用が少なく、比較的長期間の鎮痛が得られることから(Pain 79:101,1999)、今年度は、培養細胞を用いてテトラカインの神経毒性を検索するとともに、神経ブロック後の感覚閾値を測定して鎮痛作用との関連を検討した。臨床研究:手術を受けられない高齢患者を対象とし、4%テトラカインを用いて神経ブロックを行い、その鎮痛効果と感覚障害の程度、並びに末梢神経検査装置(ニューロメータ)を用いて電流知覚閾値(CPT)を測定した。神経ブロックにより激痛は消失し、効果は3ヶ月以上持続した。冷覚は一過性に低下するが、1ヶ月以内に回復した。CPTは一時的に延長するが、1ヶ月以内に健側の値に戻り、感覚の回復に一致する変化を認めた。一方、他院でアルコールブロックを受けた患者では、1年以上経過してもCPTの値は異常に遷延していた。基礎研究:テトラカインの神経組織(E7Chickembrio)初代培養系への影響を検討した。同じ個体より摘出した、網膜、背側神経核、交感神経核を24時間培養し,その後各種濃度のテトラカインに培養組織を曝露した.各神経の突起先端部(成長円錐)は濃度依存的に形態変化を来し、その変化は10分程度で完成し,一部は不可逆的であった.神経突起も結節状の部位を形成する形態変化を来した.また,長時間の暴露後には細胞体にも変化が及び,アポトーシスと思われる形態を示した.現在,アポトーシス関連酵素の生化学的解析を進めるとともに、神経の再生とアポトーシス機構を、形態学的にはTunel法を用い、生化学的にはDNAラダー解析によって検索している。「臨床研究」:高齢者三叉神経痛のうち、合併症を持つため脳外科手術の対象とならない症例に神経ブロックを行った。なお、半数の患者は,過去にアルコール(100%エタノール)を用いた神経ブロックを受け、その部位に感覚障害を認めた。今回の治療では、0.5%ブピバカインで眼窩上または眼窩下神経ブロックを行い、その効果を認める有効期間が短い場合、1週間以上の間隔をおいて4%テトラカインを用いて神経ブロックを行った。神経ブロックの鎮痛効果と感覚障害程度とともに、末梢神経検査装置(ニューロメータ)を用いて損傷神経の種類を鑑別した。過去にアルコールブロックを受けた部位は1年以上を経過しても感覚は低下しているのに対して、今回行った4%テトラカインのブロックでは、1月以内に感覚を正常化した。ニューロメータの閾値を比較すると、アルコールブロックを受けた部位の250Hzと5Hzの閾値は有意に高く、不可逆性の神経損傷が生じていることが確認された。4%テトラカインでは非ブロック側と差がなく、鎮痛効果は3ヶ月以上持続した。「基礎研究」:高濃度局所麻酔薬(テトラカイン)の再生神経組織への影響を、E7 Chick embirio神経組織の初代培養系を用いて検討した。同じ個体より摘出した、網膜、背側神経核、交感神経核を24時間培養し,その後各種濃度のテトラカインに培養組織を曝露した.各神経の突起先端部(成長円錐)は濃度依存症に形態変化を来し,一部は不可逆的であった.神経突起も結節状の部位を形成する形態変化を来し,長時間の暴露後では細胞体にも及び、アポトーシスと思われる形態を示した.三叉神経痛、がん性疼痛などの治療に、100%エタノールまたはフェノールグリセリンを用いた神経破壊術が行われてきたが、その合併症としてneuropathic painの発生が問題となる。同じ個体より摘出した、網膜、背側神経核、交感神経核を24時間培養し,その後各種濃度のテトラカインに培養組織を曝露した.各神経の突起先端部(成長円錐)は濃度依存的に形態変化を来し、その変化は10分程度で完成し,一部は不可逆的であった.神経突起も結節状の部位を形成する形態変化を来した.また,長時間の暴露後には細胞体にも変化が及び,アポトーシスと思われる形態を示した.

現在,アポトーシス関連酵素の生化学的解析を進めるとともに、神経の再生とアポトーシス機構を、形態学的にはTunel法を用い、生化学的にはDNAラダー解析によって検索している。
仮想服飾環境における空間操作法

(1)布モデル,人体モデル,衝突モデルなどに対する数値計算手法を検討し,アルゴリズムの計算量の削減,及びアルゴリズムの並列化を実現する方式について研究し,高速グラフィックスマシン上に実現した.これにより、計算がこれまでの2倍程度に高速化できた。(2)衣服設計のための空間操作機能について,パタンナの操作を録画し、その映像から空間操作における代表的な手の形状調査を行なった.その結果、5種類の手形状を抽出した。(3)データグローブを用いて、抽出した手形状を認識するシステムをニューラルネットワークを用いて実現した。被験者はデータグローブを装着して様々な手形状をつくり、それをシステムが認識する実験を行った。認識率は80%程度であり、空間操作に対するコマンドとして利用できる。(4)動作している人体モデルに衣服を着せて,布の動的特性をシミュレーションする手法を実現した。計算のために、幾何学的手法と力学的手法を併用する新しい計算法を考案した。その特徴は、速い動きの時に幾何学的手法を用いて高速に衣服を動かしたのちに、力学的手法を用いて衣服形状を変形させる点である。この手法により、自然な形で衣服の動きがシミュレーションできた。
脳の発生発達過程における神経幹細胞の増殖と分化を制御する分子メカニズムの解明

脳が発生・発達する過程において、「神経幹細胞」というタネのような細胞が分裂して数を増やし(増殖)、神経機能を営むのに特殊化した細胞に変化する(分化)することが必要である。本研究では神経幹細胞の増殖と分化において重要な働きをする分子であるPax6の下で働く分子群を同定し、その機能について解析した。また、神経幹細胞を維持する機構として、細胞周期を制御するCyclin D2という因子の細胞内局在が重要であることを明らかにした。【神経上皮細胞の動態のタイムラプス解析】胎生期における神経幹細胞である神経上皮細胞は、基底膜側と脳室側を結ぶ細長い突起を有し、その中を細胞周期に従って細胞核がエレベーターのように往復し、先端側すなわち神経管の内側に到達したときに分裂期に入り、そこで2つの娘細胞に分裂する。このエレベーター運動のメカニズムを解明するために、終脳のスライス培養系において、エレベーター運動をタイムラプス解析したところ、Pax6変異ラットではエレベーター運動に異常が生じ、S期において核の位置が不安定であり、また脳室面より若干離れた位置で分裂する像が多数見られた。さらに、核の移動に重要と考えられる中心体を可視化してタイムラプス解析したところ、本来S期からG2期において脳室面近くに局在する中心体も、Pax6変異ラットにおいて不安定な様相を示した。現在、転写因子Pax6の下流で中心体の位置の安定化に関わりうる因子を探索している。【神経管細胞の増殖と分化を統合する分子機構の網羅的解析】発生過程における神経新生に関して、神経上皮細胞で特異的に発現する転写因子の下流で神経上皮細胞の増殖や分化を制御する因子に関する知見を得るために、野生型脳とPax6遺伝子変異ラット脳で発現する遺伝子のプロファイルをマイクロアレイ法により比較したところ、発現に変化の見られる興味深い遺伝子が約20個浮かび上がってきた。そのうちの1つであるFABP7は、脂肪酸結合タンパクをコードし、定量RT-PCRおよびin situハイブリダイゼーション法によってもPax6遺伝子変異ラット脳で劇的な発現現象が再現された。RNA干渉法によりFABP7の機能を阻害したところ、神経上皮細胞の増殖が低下し、ニューロンへの分化が亢進した。したがって、FABP7はPax6の下流で神経上皮細胞の増殖を維持するのに必須であることが示された。【神経上皮細胞の細胞周期依存的核移動の解析】胎生期における神経幹細胞である神経上皮細胞は、基底膜側と脳室側を結ぶ細長い突起を有し、その中を細胞周期に従って細胞核がエレベーターのように往復し、先端側すなわち神経管の内側に到達したときに分裂期に入り、そこで2つの娘細胞に分裂する。この細胞周期依存的核移動のメカニズムを解明するために、核の移動に重要と考えられる中心体を可視化してタイムラプス解析したところ、本来S期からG2期において脳室面近くに局在する中心体も、Pax6変異ラットにおいて不安定な様相を示した。Pax6変異ラットにおいて転写因子Pax6の下流因子と考えられるFEZ1およびdelta-cateninの局在を調べたところ、先端側における発現低下が認められた。今後、これらの分子の機能について解析を進める予定である。そのうちの1つであるDmrt4は転写因子をコードし、定量RTPCRおよびin situハイブリダイゼーション法によってもPax6遺伝子変異ラット脳で劇的な発現減少が再現され、Pax6の強制発現により発現が誘導された。現在、Dmrt4の下流で発現が制御される因子について探索を進めている。さらに、中心体に局在し、微小管と結合するneneinの発現もPax6変異ラットにおいて低下していることを見出した。【神経上皮細胞基底側におけるCyclinD2の局在に関する解析】細胞周期調節因子CyclinD2のmRNAおよびタンパク質が神経上皮細胞基底膜側末端への局在することを見いだした。

高度に極性を有する神経上皮細胞におけるこのような分子の偏在は、神経上皮細胞の増殖や分化運命の決定に重要な働きをすることが予測される。そこで、CyclinD2のmRNAの基底膜側への局在機構を明らかにするために、各種CyclinD2 3'UTR領域の断片をEGFP遺伝子につないだ融合タンパク質発現ベクターをマウス大脳の神経上皮細胞に電気穿孔法により導入することにより、基底膜側への局在に関わるcis配列を明らかにした。【神経上皮細胞の細胞周期依存的核移動の解析】Pax6変異胚大脳原基の神経上皮細胞における中心体の不安定化を説明し得る分子を探索し、Pax6変異体において顕著に発現が減少している分子Nineinを同定した。予備的な実験ではあるが、Nineinに対するSiRNAを野生型ラット大脳皮質原基へ導入することで、Nineinの中心体での局在は見られなくなり、SiRNAの効果が確かめられた。リン酸化ヒストン陽性のM期細胞は神経上皮脳室面より離れたところで異所的に存在しており、Pax6変異体で見られたM期細胞の分散パターンに類似していた。さらに表現型が強いものは、上皮構造が維持されず、脳室面において神経分化が認められた。以上の結果より、NineinはPax6によりその発現または局在が制御され、中心体と微小管との結合を安定化することにより、正常なエレベーター運動に寄与する可能性が考えられた。今後さらに詳細な解析を行う予定である。【神経上皮細胞基底側におけるCyclhD2の局在に関する解析】電気穿孔法と哺乳類全胚培養法を組み合わせて、非常に簡便なRNA輸送配cis配列アッセイ法を確立した。この新しい方法により、細胞周期調節因子CyclinD2のmRNAの神経上皮細胞基底膜末端輸送cis配列を同定した。この配列は50bpの配列からなり、既に報告されているRNA結合蛋白質結合配列のどれとも類似しない新規の配列であった。また、CyclinD2タンパク質の基底膜末端での局在様式と細胞周期との関連性を調べるために、M期の神経上皮細胞基底膜末端を染色することが知られている、リン酸化ビメンチン抗体とMPM2抗体を用いて、CyclinD2抗体との2重免疫染色を行った。CyclinD2タンパク質はこれらのマーカータンパク質と共局在を示し、M期特異的に、基底膜末端で局所的翻訳される可能性を見出した。1)神経幹細胞の中心体維持に関わる因子および神経分化調節における細胞周期調節因子の機能解析Pax6変異ラット終脳におけるエレベーター運動の異常および中心体の挙動異常の原因に関して、発現量低下が見られた3つの因子(細胞極性制御分子Fez1、接着装置構成因子delta-cateninおよび中心体蛋白質Ninein)のうち、Nineinに対するsiRNAを野生型ラット大脳原基に導入し免疫染色やタイムラプス観察を行ったところ、細胞周期およびエレベーター運動が乱れ、Pax6変異ラットで見られたものと類似した表現型が誘導された。また、細胞周期調節因子CyclinD2 mRNAの神経上皮細胞基底膜側局在化
テルペンの利用を目指したアリル―パラジウム錯体を経由する新しい高分子合成

Z)-1,4-ジアセトキシ-2-ブテン(1)とジエチルマロナート(2)との重合反応機構を詳細に検討した。その結果、この重合反応は一般的な重縮合とは異なり、重合反応経路が制御されて進行していることを見出した。つまり、化合物1は2分子の化合物2と連続して反応することにより重合が進行している。この重合経路が高度に制御できれば、二成分重縮合で本質的な欠点とされていた「分子量の化学量論比依存性」が克服できることになる。つまり、二成分重縮合において、化学量論比を厳密に1対1に合わせなくても、重合が進行する反応系を確立できることになる。そこで、意図的に二成分の量論比を1対1.5で重合反応を行ったところ、重合反応は進行し、高分子量ポリマーを得た。反応経路を制御できない場合、反応によりオリゴマーしかえられない。本結果は、炭素-炭素結合を形成する二成分重縮合で、化学量論比の制約を受けない初めての重合系である。この重合反応は2つの反応点が完全に分離したアリル型モノマーにも適用でき、様々なモノマーの組み合わせにおいて、化学量論比の異なる条件下高分子量ポリマーの合成が可能であった(論文準備中)。さらに高度な反応経路の制御を目指し、低分子反応系において、触媒配位子を詳細に検討した。これにより、2つのリン原子を4つのメチレンさで連結した二座配位子で、パラジウムと7員環状錯体を形成する配位子が反応経路の制御に極めて有効であることが分かった(研究発表論文No.1)。これらの最適重合条件下、天然資源である、ゲラニオールやシトロネロールといったテルペンアルコールを用い、新規ポリマーを合成した(論文投稿中)。また、主鎖にエステル結合を導入した分子設計を行うことで生分解性ポリマーとなる可能性が高いことから、これらのポリマーを合成し、現在はその生分解性を調べている。
イネの縦方向の伸長を制御する3量体Gタンパク質の機能解明

1.イネ3量体Gタンパク質サブユニットの生化学的解析(1)イネ3量体Gタンパク質は、αβγサブユニットを含む400kDa複合体と、大量のβγ2量体で存在することを明らかにした。(2)GTPγSの存在下では、αサブユニットは400kDa複合体から解離し、Free form (60kDa)を示した。(3)Gαの恒常的活性型サブユニット(QL)を発現する形質転換体から細胞膜画分を調製した。QLは細胞膜画分に蓄積し、かつ、Free formで存在していた(Plant J.38,320-331,2004)(Plant Cell Physiol.,46,381-386,2005)。2.イネ短粒変異体d11の変異原因遺伝子の同定イネ優性変異体d1と類似の表現型を示す短粒変異体、d11の変異原因遺伝子を同定した。この遺伝子はCYP724B1と命名され、これまでに見出されているブラシノステロイド生合成に関与するP450(CYP90A, CYP90B, CYP90C, CYP90DおよびCYP85)のうち、CYP90Bに相同性を示した。相補テストにより、野生型D11遺伝子は、d11を相補した。内在性のブラシノステロイド中間体を定量した結果、顕著に減少あるいは増加している中間体は検出されなかった。そこで、各種中間体を用いたラミナジョイントテストを試みた。6-DeoxoDTと3DTより上流の中間体ではd11のラミナ屈曲が見られなかったが、6-DeoxoTYとTY以降の中間体では、d11と野生型において同程度のラミナ部位の屈曲が観察された。この結果は、新規P450(CYP724B1)は、6-DeoxoTYとTYの供給に関与することを示唆した。以上の結果、イネ矮性変異体d1はブラシノステロイド生合成変異体であり、イネ種子の縦方向の伸長には、ブラシノステロイド情報伝達系が重要であることを明らかにした(Plant Cell,17,778-790,2005)本年度の研究実績を、以下に記す。1.3量体Gタンパク質共役受容体候補(OsGPCR)の構造・機能解析:7回膜貫通ドメインを有する3量体Gタンパク質共役受容体候補遺伝子(OsGPCR1)を単離したが、Two-hybrid法の結果、αサブユニットとは相互作用しなかった。2.3量体Gタンパク質αサブユニットを含む巨大複合体のサブユニット構造の解析:細胞膜画分を可溶化したところ、αサブユニットは巨大複合体(400kDa)に存在した。この画分の精製を進めている。この画分には、受容体や効果器が含まれる可能性がある。3.αサブユニットを誘導したときに変動する遺伝子群の網羅的解析:αサブユニット遺伝子変異体d1をバックグラウンドに、デキサメタゾン誘導系を利用してαサブユニット遺伝子を誘導し、誘導後に変動する遺伝子群の解析を行い、数百の候補遺伝子を検出した。4.野生型とd1の種種の組織におけるタンパク質群の比較検討:野生型とd1の種種の組織から調製したタンパク質を2次元電気泳動法にて比較したが、顕著な差は認められなかった。5.3量体Gタンパク質βサブユニット遺伝子の発現抑制個体の解析:野生型とd1、おのおのに、RNAi法を用いてβサブユニット遺伝子の発現抑制を行った。野生型に抑制を行った場合、形質転換体は矮性・開茎を示し、d1に抑制を行った場合は、d1よりさらに矮性・開茎を示した。これは、βサブユニットはαサブユニットと異なる機能を有することを示唆した。6.イネ短粒変異体の変異原因遺伝子の解析:現在までに、d1様の短粒形質を示すイネ変異体を約20種類収集した。このうち、d11と系統番号3220の2種類の変異体の変異原因遺伝子の同定を行い、候補遺伝子を1つに絞り込んだ。

相補テストにより、野生型D11遺伝子は、d11を相補した。内在性のブラシノステロイド中間体を定量した結果、顕著に減少あるいは増加している中間体は検出されなかった。そこで、各種中間体を用いたラミナジョイントテストを試みた。6-DeoxoDTと3DTより上流の中間体ではd11のラミナ屈曲が見られなかったが、6-DeoxoTYとTY以降の中間体では、d11と野生型において同程度のラミナ部位の屈曲が観察された。この結果は、新規P450(CYP724B1)は、6-DeoxoTYとTYの供給に関与することを示唆した。以上の結果、イネ矮性変異体d1はブラシノステロイド生合成変異体であり、イネ種子の縦方向の伸長には、ブラシノステロイド情報伝達系が重要であることを明らかにした(Plant Cell,17,778-790,2005)
視・聴・嗅覚受容器における脂質の役割を、脂肪酸結合蛋白の機能解析を通して追究する

成熟マウスの網膜では脳型FABPが錐状体視細胞に、心臓型FABPがアマクリン・双極・水平細胞に、そして表皮型FABPが神経節細胞に局在した。非神経性細胞については、脂肪型FABPが正常時には内在性ミクログリアに局在したが、光照射後の変性過程の網膜では侵入する多数のマクロファージに表皮型FABPが強く局在発現したので、これら2種のFABP分子の免疫組織化学的反応により傷害時神経系における両細胞の分別同定が可能だと示唆された。内耳では、音受容の有毛細胞にはいずれのFABPも発現局在しなかったが、それを囲む支持細胞に多様な発現が認められた:心臓型FABPが内外柱細胞と外指節細胞に、脳型FABPが境界細胞とヘンセン細胞と線維芽細胞に局在。神経系での非神経細胞の機能が最近注目されているが、これら2種のFABPの遺伝子ノックアウトマウスの聴覚に異常は検出されなかった。これらの感覚器に加えて、腸パイエル板の樹状細胞とパイエル板を覆う上皮内のM細胞に表皮型FABPが局在することを明らかにし、FABPsの腸免疫反応での役割が強く示唆された。マウス網膜における脂肪酸結合蛋白(FABP)の発現局在を免疫組織化学により解析した結果、以下の新所見を得た。成熟網膜においては、脳型FABPは錐体型視細胞に、心臓型FABPは網膜介在細胞(アマクリン、双極、水平細胞)に、表皮型FABPは神経節細胞に、脂肪型FABPは内在性ミクログリアに局在した。FABPの分子多様性が網膜光受容機能において細胞多様性に関与することが示唆された。光照射刺激後の網膜変性過程で網膜外層に出現するマクロファージは表皮型FABPを発現し、内在性ミクログリアと分別同定が免疫組織化学的に可能なことが判明した。このことから、網膜ばかりでなく脳においても病的神経細胞死に引き続くグリア細胞反応過程における内在性ミクログリアと反応性外来性マクロファージとの分別同定がこれらの抗体を用いた免疫組織化学的解析で可能かどうかを精査する必要性が起こった。胎生期網膜においては、脳型FABPが網膜外層の多くの細胞に強く局在し、網膜最内層の神経節芽細胞の表皮型FABP発現は強かった。このことから、FABPさらには脂肪酸が成熟期よりも胎生期により重要な機能を担うことが推測される。一方、これまで我々が精査発表してきた免疫系におけるFABPの局在解析の延長として腸パイエル板におけるFABPの局在解析においても新所見を得た。即ち、表皮型FABPが上皮下ドームと濾胞および濾胞間領域の全てではなく多くの樹状細胞、更に芽中心内のマクロファージに発現局在した。加えてパイエル板を覆う上皮の主たる細胞であるM細胞にも特異的に表皮型FABPが発現局在することを見出した。脂肪酸結合蛋白(FABP)には脳(B),表皮(E),心臓(H),脂肪(A)型などの分子多様性があり、各種細胞特異的に細胞内脂肪酸機能発現調節の鍵となると考えられる。そこで本年度はマウスの腸パイエル板と網膜に置けるFABPsの発現局在の詳細を免疫組織化学的に解析した。パイエル板では、そこでの殆どの樹状細胞(抗原提示細胞)と胚中心のマクロファージに加えて被覆上皮のM-細胞も各々明確にE-FABPを発現局在していることを見出した。この所見から、M-細胞と樹状細胞/マクロファージとの密接な空間的相互関係が明確となり、加えて、腸上皮の免疫反応にE-FABPおよびそのligandである脂肪酸が重要な役を担うことが強く示唆された。網膜においては、B-FABPが錐体視細胞に、H-FABPが一部の介在ニューロン(アマクリン細胞と水平細胞と双極細胞)に、E-FABPが神経節細胞に、A-FABPが網膜内ミクログリアに局在することを見出し、FABPsが網膜構成細胞の各々に分子多様性も持って機能関与することが判明した。光照射後の経時的な視細胞変性過程では、網膜外から侵入して活発な貪食に関与するマクロファージがE-FABPを発現するので、同刺激下で活性化する内在性ミクログリアと外来性マクロファージの区別がA-