hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マクロファージ分化機構におけるマクロファージコロニー刺激因子の役割の解析

本年度はマクロファージ枯渇マウスモデルやマクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)活性欠損op/opマウスの検討を重点的に行い、マクロファージの組織での分化機構における局所産生M-CSFの役割を検討した。M-CSF活性欠損osteopetrotic mouse(op/opマウス)は大理石病を発症する。この進行過程の観察とM-CSF投与実験から、本マウスのマクロファージ、破骨細胞の分化障害はM-CSF欠損が主因であることが明らかにされた。一方、老化によって骨髄のマクロファージと破骨細胞は徐々に回復する。他の臓器ではマクロファージは増加しないが、骨髄にはM-CSFを介しないマクロファージ分化経路が存在することが証明された。このマクロファージ分化経路の解明は今後の課題である。dichloromethylenediphosphonate封入りボソームはマクロファージに取り込まれるとマクロファージにアボトーシスを誘導することを発見した。本法によるマクロファージ除去マウスでは肝や大網乳班にマクロファージの前駆細胞が増生し、組織マクロファージに分化することが明らかにされた。この際、各組織ではM-CSFが増産され、この前駆細胞はM-CSF反応性の細胞であることも確認された。さらに、M-CSF投与によってこれら前駆細胞の分化が促進され、マクロファージの分化におけるM-CSFの重要性が示唆された。炎症におけるM-CSFの役割についても上記の方法で検討した。マウスにザイモサンを投与すると肝に肉芽腫が形成されるが、マクロファージ除去マウスでは肉芽腫の形成は顕著に抑制され、肉芽腫性炎症における組織マクロファージの重要性が示された。また、肉芽腫性炎症においてマクロファージはM-CSFをはじめとする種々のサイトカインを産生し、かつM-CSF受容体を発現する。マクロファージ除去により、血中のM-CSF濃度は上昇することから、マクロファージはM-CSFをオートクライン機構で利用し、マクロファージの分化と機能発現に重要な役割を果たしていることが明らかにされた。本研究においてわれわれはマクロファージの個体発生、マクロファージ枯渇マウスやマクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)活性欠損op/opマウスの検討から、マクロファージの組織での分化機構における局所産生M-CSFの役割を検討した。マウス、ヒトの個体発生の検討からM-CSFが妊娠子宮内膜から多量に産生されねM-CSF受容体(c-fms)発現マクロファージが内膜下に集積することを観察した。さらに、胎盤絨毛細胞にもc-fmsが発言する事から、妊娠の維持にM-CSFが必須の物質であることが強く示唆された。胎児においても卵黄嚢上皮からM-CSFが産生され、マクロファージが卵黄嚢造血巣に初発することを観察し、胎生マクロファージの発生におけるM-CSFの重要性が考慮された。M-CSF活性欠損osteopetrotic mouse(op/opマウス)は生後母体からのM-CSFの影響を受けなくんると大理石病を発症する。

一方、水溶性のM-CSF投与によっても滑膜や子宮のマクロファージは回復しないことから、局所細胞の細胞膜に結合するタイプのM-CSFの重要性も示唆された。dichloromethylene diphosphonate封入リボソーム投与によるマクロファージ除去マウスでは肝や大網乳班にマクロファージの前駆細胞が増生し、組織マクロファージに分化することを明らかにした。この際、各組織ではM-CSFが増産され、この前駆細胞はM-CSF反応性の細胞であることも確認された。さらに、M-CSF投与によってこれら前駆細胞の分化が促進された。以上、本研究の成績から局所産生M-CSFがマクロファージの分化、機能発現に重要な分子であることが明らかにされた。本年度はマクロファージ枯渇マウスモデルやマクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)活性欠損op/opマウスの検討を重点的に行い、マクロファージの組織での分化機構における局所産生M-CSFの役割を検討した。M-CSF活性欠損osteopetrotic mouse(op/opマウス)は大理石病を発症する。この進行過程の観察とM-CSF投与実験から、本マウスのマクロファージ、破骨細胞の分化障害はM-CSF欠損が主因であることが明らかにされた。一方、老化によって骨髄のマクロファージと破骨細胞は徐々に回復する。他の臓器ではマクロファージは増加しないが、骨髄にはM-CSFを介しないマクロファージ分化経路が存在することが証明された。このマクロファージ分化経路の解明は今後の課題である。dichloromethylenediphosphonate封入リポソームはマクロファージに取り込まれるとマクロファージにアポトーシスを誘導することを発見した。本法によるマクロファージ除去マウスでは肝や大網乳班にマクロファージの前駆細胞が増生し、組織マクロファージに分化することが明らかにされた。さらに、M-CSF投与によってこれら前駆細胞の分化が促進され、マクロファージの分化におけるM-CSFの重要性が示唆された。炎症におけるM-CSFの役割についても上記の方法で検討した。マウスにザイモサンを投与すると肝に肉芽腫が形成されるが、マクロファージ除去マウスでは肉芽腫の形成は顕著に抑制され、肉芽腫性炎症における組織マクロファージの重要性が示された。また、肉芽腫性炎症においてマクロファージはM-CSFをはじめとする種々のサイトカインを産生し、かつM-CSF受容体を発現する。マクロファージ除去により、血中のM-CSF濃度は上昇することから、マクロファージはM-CSFをオートクライン機構で利用し、マクロファージの分化と機能発現に重要な役割を果たしていることが明らかにされた。
FESによる四肢動作再建のシミュレーションシステムに関する研究開発

1.筋骨格モデルを計算機上に構築し、起立動作の計算機シミュレーションを可能にした。これに動的最適化手法を組み合わせて、起立動作の刺激データを自動生成することに成功した。この刺激データと健常者の起立時の動作筋電図との比較から、本手法が標準刺激データの生成法として有効であることが示された。2.特定の患者を表現する筋骨格モデルの構築を目指して、筋張力を発生するモデルをトルク発生モデルに変更し、そのパラメータ同定法を提案した。膝関節を対象に、1関節、1筋で構成したモデルについて、健常被験者での電気刺激応答とモデル予測が良く一致することを確認した。また、非線形特性や骨格構造を考慮した筋・骨格モデルについても検討し、試行錯誤的なパラメータ調整を伴っているが、健常者での刺激実験での応答の一部を推定可能であった。3.筋の非線形、時変特性の計測とモデル化に関して、(1)臨床で使われている刺激周波数(20Hz)でも筋の強化現象が生じることを明らかにした。(2)電気刺激中の筋疲労情報の計測方法として、誘発筋電図(M波)や近赤外光の利用可能性を示した。(3)生理学的知見に基づく筋の活性化モデルを構築し、強化現象やキャッチプロパティ等を表現できることを確認した。4.運動機能障害者がシステムを操作するために、特徴的動作をニューラルネットにより認識して制御命令とする手法を提案した。3次元位置測定装置や加速度センサを用いて計測した動作を認識できることが、健常者やC5-6四肢麻痺者で確認され、本手法の実現可能性が示された。5.任意の場所へのリーチングをFESにより再建するために、リーチング目標位置の検出手法を提案した。車椅子の使用者を想定し、レーザポインタと3次元位置角度センサを用いて目標位置検出装置を構成した。机上目標位置の検出精度を調べた結果、実用的に利用可能であることが示唆された。1.対麻痺者の起立動作再建を想定し、臨床での実用性を考慮して、簡略化した筋・腱系、3リンクの骨格系のモデルを計算機上に構築し、起立動作の計算機シミュレーションを可能にした。また、筋・骨格系の非線形特性や骨格構造上の特性を考慮したモデルの実現を目指して、肘関節の屈曲・伸展動作のための筋・骨格モデルを検討し、試行錯誤的手法をともなっているが、モデルによる予測と実験結果とが比較的良い一致を示すようにモデルパラメータを調整することに成功した。さらに、膝関節について、非線形特性を考慮したモデルのパラメータ同定手法の基本的指針を検討した。2.上記の対麻痺者の起立動作再建用の簡略化した筋・骨格モデルに動的最適化手法を組み合わせて起立動作の刺激パターンを自動生成し、健常者の起立時の動作筋電図と比較検討した。その結果から、ここでの簡略化した筋・骨格モデルと動的最適化手法が、標準刺激パターンを生成する方法として有効であることを確認した。3.システムの操作を障害者自身が行えるように、複雑な命令を入力可能なインターフェイスを検討した。システム操作の命令としては、パラメータ設定やリアルタイムの位置制御に利用可能なアナログ入力、システムに何らかの命令を与えるコマンド入力が必要であり、コマンド入力には、コマンドの選択と確定といった2つの操作が必要になる。

ここでは、アナログ入力やコマンド選択に対して、残存する随意動作を利用し身体部位の位置や軌跡を直接的に計測して利用すること、そして、コマンド確定に対しては、ニューラルネットにより何らかの特徴的な動作を認識することによって実現することを考え、3次元位置測定装置を用いて、動作の計測とニューラルネットによる特徴的な動作の認識を行い、十分利用可能であることを確認した。4.筋疲労をモデルに含めるために、電気刺激中の筋疲労計測法について検討を行い、誘発筋電図(M波)や近赤外光による筋疲労検出の可能性を示唆した。臨床の場でFESによる再建動作のより正確な予測を実現することを目的として、特定の患者にモデルを適合するために、筋骨格モデル及びパラメータ同定法を検討し、また、電気刺激による筋の時変的、非線形的応答のモデル表現について検討した。これらについて、本年度は、以下の成果を得た。1.特定の患者にモデルを適合するために、筋張力を発生するモデルからトルク発生モデルに変更し、そのモデルのパラメータ同定法を提案した。膝関節を対象に、1関節、1筋の電気刺激応答について、提案したモデル及びパラメータ同定法を健常被験者で実験的に検討し、電気刺激による応答を精度良く予測することが可能であることを確認した。2.上記1で構築した筋骨格モデルを基礎とし、筋張力の収縮速度依存性を省略して、上肢の3自由度運動(肘関節の屈曲・伸展、前腕の回内・回外、肩関節の屈曲・伸展)を表現する筋骨格モデルを構築した。そして、受動的あるいは電気刺激による運動(関節角度)を計測して、運動方程式からパラメータを決定する方法を検討した。姿勢の影響を受けることが明らかになったが、原理的には実現可能であり、受動要素のパラメータを決定する際に有効になることが期待された。3.筋の電気刺激応答の時変的、非線形的な性質の一つである筋の強化現象について、健常被験者での基礎的な実験を通して知見を得た。臨床で使われている刺激周波数(20Hz)でも強化現象が生じることが明らかになり、臨床でも強化現象が生じている可能性が高いことが予想された。4.刺激周波数を可変にした場合の筋の応答を正確に予測するために、生理学的知見に基づく筋の活性化モデルを構築した。短時間の高周波数刺激によるpotentiation、ダブルパルスによるcatch propertyといった現象を表現できることが確認された。これまでに構築してきた筋・骨格モデルの改良と、運動機能障害者がシステムを操作するためのインターフェイスの開発に関して研究を行い、以下の成果を得た。1.簡略化した筋・骨格モデルを用いて作成した刺激データでは、足関節動作に関与する前脛骨筋の活動パターンが過去の筋電図解析結果と異なっていた。これに対し、健常者の起立に関する動作解析を様々な足関節角度の初期条件で行い、前脛骨筋の筋電図活動パターンと比較した。その結果、初期姿勢が異なる場合には前脛骨筋の活動も異なり、ある条件ではモデルにより作成した刺激データと同様の結果になることが確認された。2.ニューラルネットによる特徴的動作の認識手法を、加速度センサを用いて下肢動作を認識する場合に適用した。健常者で、踵部に3軸加速度計を装着し、膝関節の屈曲、膝部を上方に大きく動かす動作、つま先接地のまま下腿の外旋、つま先接地のまま足関節の底屈の4種類の識別を行い、3回程度まで動作の繰り返しを許容すれば十分に実用的な識別が可能であった。左片麻痺者でも同様の識別を行ったが、動作の安定性に課題があったため、動作の種類を工夫する必要があることがわかった。
ADAM/ADAMTSプロテアーゼによる基質認識と制御機構の構造生物学的研究

ADAM/ADAMTSファミリータンパク質は切断活性を担うMドメイン以外に複数の機能ドメインを持つ細胞外モジュラープロテアーゼであり、発生分化や形態形成、様々な病態にも関わる。ADAMは主に一回膜貫通型タンパク質であるのに対して、ADAMTSは可溶性であり、Mドメイン以外にも共通した複数の機能ドメインを有している。本研究はADAM/ADAMTSファミリープロテアーゼについて主にX線結晶構造解析により、その構造ー機能相関を明らかにすることを目的として進めた。成熟の過程で除かれるプロ・ドメインについて初めて結晶構造を解明し、ADAM/ADAMTSプロテアーゼに共通した構造基盤を明らかにした。主にI型膜タンパク質のADAMおよび可溶型のADAMTSのいずれも触媒ドメイン以外に複数の機能ドメインを持つマルチドメインプロテアーゼである。マルチドメイン構造が機能発現に重要と考えられるが、部分ドメインではなくマルチドメイン全体の立体構造が明らかになっているのはそれぞれのファミリータンパク質のごく一部に限られる。本研究では複数のADAMおよびADAMTSを対象に、昆虫細胞あるいは哺乳動物細胞を用いた大量発現系の構築を進め、マルチドメインを保持した状態で結晶構造を解明し、立体構造に基づく機能解析を行うことによりこれらプロテアーゼの基質認識機構とその調節メカニズムを明らかにすることを目指す。本年度はまず、ヒトADAM28、ADAM17、ADAMTS5およびマウスADAM17の複数の機能ドメインからなる様々なコンストラクトを作成し、バキュロウィルス・昆虫細胞(Sf9)の系で発現するかどうかの確認を行った。いくつかの候補となるコンストラクトについて大量発現、精製、結晶化を進めているが、いずれも発現量が少なく、十分な結晶化スクリーニングのためには今後さらなる条件検討が必要である。一方で、ヒトADAM17について、プロドメイン(P)+メタロプロテアーゼ(M)ドメインが大腸菌で発現できたとの他グループからの報告があり、追試を行った。ヒトADAM17、ADAM28およびマウスADAM17のPMドメインについては、可溶性各分への発現は確認することはできなかったが、新たに封入体に発現したタンパク質のリフォールディング条件を見出すことが出来た。現在リフォールディング条件の最適化を進め、結晶化純度の試料が得られるか、検討を進めている。本研究では主にI型膜タンパク質として膜タンパク質のシェディングに関わるADAMプロテアーゼおよびその類縁で可溶型のADAMTSプロテアーゼの基質認識機構と活性調節機構の構造生物学的研究を進めている。前年度に引き続きプロドメインによる活性化調節機構の解明を目的にPMドメインのヒトADAM17, 28およびマウスADAM17、ヒトADAMTS5の昆虫細胞による発現および大腸菌封入体からのリフォールディングによる試料調製進めたが、残念ながら結晶を得るのに十分のクオリティーのタンパク質試料を得ることが出来なかった。一方、基質認識機構についてADAMTS13のエキソサイト3を含むSドメインと基質であるVWFのエキソサイト結合領域の融合タンパク質を設計し、リンカー部の長さを4アミノ酸から12アミノ酸まで変えた複数のコンストラクトを作成し、大腸菌封入体からのリフォールディングを行って結晶化試料を調製し、結晶化を行った。様々な条件での結晶化スクリーニングにより、主に、三つの異なる条件で再現よく結晶を得ることに成功した。これらの結晶を用い、2016A期のSPring8でのマシンタイムで回折データを収集し構造解析に進む予定。これにより、ADAMTS13によるVWFのエキソサイト認識機構の解明を進める。当初より膜型ADAMのエクトドメイン全体の結晶構造の解明を目標としていたが、いまだ結晶構造解析に進むだけの発現量が得られず、進展できていない。プロドメインによるプロテアーゼ活性調節機構の理解のためにプロドメインとプロテアーゼドメインを含むコンストラクトを多数作成したが、いまだ結晶が得られていない。大腸菌発現、封入体からのリフォールディングによる試料調製を行ったが、可溶化は十分なされたもののジスルフィド結合の均一な試料の調製が困難であり、システイン残基の変異導入も行ったが、結晶化する試料の調製には至らなかった。本研究は各種増殖因子やサイトカインの放出に関わる主要なシェディング酵素であるADAMプロテアーゼと進化的に類縁のADAMTSファミリープロテアーゼに着目し、その基質認識機構と活性調節機構を構造生物学的に明らかにすることを目的とする。1活性調節機構については未だ立体構造が不明なプロドメインと触媒ドメインとの結合構造を明らかにすること、2基質認識機構については基質と酵素が一対一に対応するフォンビルブランド因子(VWF)とADAMTS13とのエキソサイト認識機構を明らかにすること、に着目して研究を進めている。1について、様々なADAMについてプロドメインと触媒ドメインのみに着目して、大腸菌発現+リフォールディング、昆虫細胞による発現を試みた。大腸菌発現タンパク質はリフォールディング条件の最適化により高収量で可溶性画分に回収され、それらを用いて結晶化スクリーニングを行ったが、残念ながら良好な結果は得られなかった。一方、昆虫細胞Sf9を用いたプロドメインを含む全長分子の発現では、我々が以前に結晶構造を報告した蛇毒ADAMのひとつVAP2について高収量に発現精製することに成功した。現在、精製標品を用いた結晶化スクリーニングを進め、得られた結晶について条件の最適化を進めている。この過程で、プロドメインと触媒ドメインの境界部において混入プロテアーゼで切断を受けること、切断を受けた後もプロドメインは触媒ドメインから乖離せず、強く結合していることが明らかになった。

2については、前年度に結晶が得られたADAMTS13のSドメインとVWFの結合領域のペプチドとの融合タンパク質について、6月にSPring8において2.9Å分解能の回折データを得て、構造解析を行った。しかし残念ながら、明瞭な電子密度はADAMTS13のみにしか観察されず、結合しているはずのVWFは観察することが出来なかった。ADAMTS13/VWF融合タンパク質について、結晶構造解析を行ったものの、VWF由来の電子密度を観測することが出来ず、基質認識機構について情報を得ることが出来なかった。原因としては、回折データセットを取得した結晶ではVWF結合領域と想定される部位が結晶のパッキングに使われてしまい、VWFが外れてしまったと考えられる。結晶中の分子パッキングが異なると考えられる他の2つの結晶についても回折実験を行ったが、残念ながら解析に十分な分解能の回折データが得られず、ADAMTS13/VWF融合タンパク質についてはコンストラクトの再検討および結晶スクリーニングのやり直しが必要となった。プロドメインによる制御機構の理解については、大腸菌発現+リフォールディングにより、複数種のADAMについてプロドメインと触媒ドメインとを含むコンストラクトを用い、ゲル濾過で単分散を示す可溶性標品を得ることに成功した。これらを用いて結晶化に進んだが、残念ながら結晶は得られなかった。昆虫細胞を用いた発現系の作製は昨年度まではヒトおよびマウス由来の膜型ADAMの細胞外部に着目して進めてきたが、良好な結果が得られなかった。このため、今年度途中より、蛇毒ADAMのVAP2について試みたところ、Sf9で発現出来ることが分かり、条件を最適化し、年度後半にようやく結晶化スクリーニングを開始するに至った。Sf9での大量発現系の構築と並行して、蛇毒から精製した活性化型のVAP2と大腸菌で発現したVAP2のプロドメインとの結合を検討したところ、大腸菌発現のプロドメインは見かけ上区別できない、VAP2に結合する成分としない成分の混在物であることが判明した。この結果を受け、大腸菌発現・リフォールディングタンパク質の品質に疑いを持ち、それらの結晶化を断念した。全体としては、当初計画よりやや遅れていると評価せざるを得ない。本研究は細胞膜上の主要なシェディング酵素であるADAMファミリープロテアーゼとその類縁の可溶性プロテアーゼであるADAMTSファミリーを対象に、それらプロテアーゼの基質認識と活性制御のメカニズムを明らかにすることを目的とする。本研究では、課題の一つとして、前駆体ADAMが持つ構造未知のプロドメインに着目し、その立体構造を明らかにすることで、酵素の不活化機構を明らかにすることを進めている。これまでプロドメインを含むヒト膜型ADAMプロテアーゼ前駆体の細胞外ドメインの大量発現系の構築を進めてきたが、残念ながら結晶化に供する量の発現タンパク質を得ることに成功していない。
磁性ナノ微粒子を用いた細胞シート移植による虚血性心疾患に対する治療効果の検討

磁力とECMを組み合わせた新規細胞シート作成法を用いて脂肪由来幹細胞(ADRC)シートを作成し、マウス心筋梗塞モデルへ移植を行った結果、コントロール群に比べ梗塞サイズの縮小、線維化を抑制した。ADRCシート移植群においては有意な心機能改善効果が認められた。また、虚血心筋内においてVEGF、bFGF遺伝子発現の増加が認められた。以上の結果から、ADRCシート移植は虚血心筋内への血管新生を誘導することにより、心筋リモデリングを抑制することが示唆された。本研究により、ADRCシート移植は虚血性心疾患に対する新規の治療法となり得ることが示された。これまで我々はマグネタイト(Fe3O4)をリポソームで包埋した磁性ナノ微粒子(Magnetic Cationic Liposome:MCL)と磁場を用いた三次元細胞シート技術(Mag-TE法)を確立し、マウス重症下肢虚血モデルへの間葉系幹細胞シート移植が、従来の細胞浮遊液注入法に比べ有意に血流回復効果を有することを明らかとした。Mag-TE法とECMを組み合わせたADRCシートは約300μm(1015層)の厚さを有し、ECMを包埋することによって従来の細胞シートよりも強固で移植操作性の向上した細胞シートの作成に成功した。マウス心筋梗塞モデルへ移植したADRCシートは移植2週間後においてもホスト心筋への生着が確認され、コントロール群に比べ有意な梗塞サイズの縮小、線維化の抑制が認められた。また、ADRCシート移植群においては有意な心機能改善効果が認められ、虚血心筋内の毛細血管密度の増加、アポトーシス細胞の減少が確認された。また、虚血心筋内において血管新生因子であるVEGF、bFGF遺伝子発現の増加が認められた。以上の結果から、ADSCシート移植は虚血心筋内への血管新生を誘導することにより、心筋リモデリングを抑制することが示唆された。本研究により、Mag-TE法と細胞外マトリックス(ECM)を組み合わせた細胞シート作成法によって作成されたADRCシート移植は虚血性心疾患に対する新規の治療法となり得ることが示された。Mag-TE法とECMを組み合わせたADRCシートは約300μm(1015層)の厚みを有し、ECMを包埋することによって、従来の細胞シートよりも強固で、移植操作性の向上した細胞シートの作成に成功した。マウス心筋梗塞モデルへ移植したADRCシートは、移植2週間後においてもホスト心筋への生着が確認され、コントロール群に比べ有意な梗塞サイズの縮小、線維化の抑制が認められた。また虚血心筋内において血管新生因子であるVEGF、bFGF遺伝子発現の増加が認められた。一方で、移植されたADRCシートの血管、心筋への分化は確認できなかった。本研究により、Mag-TE法と細胞外マトリックス(ECM)を組み合わせた細胞シート作成法によって作成されたADRCシート移植は虚血性心疾患に対する新規の治療法となり得ることが示唆された。医学細胞シート作成技術の改良により細胞シートの操作性が向上し、移植効率が格段に上昇したため、小動物への移植実験に関しては当初の計画通りに進んでいる。細胞シートの大型化については、最適な磁性体の選定にさらなる検討が必要と考えられる。ADRCシートを移植後、36ヶ月程度の長期予後について心機能および生存率等の検討を行う。また、移植されたADRCシートの心筋細胞、血管系(内皮細胞、平滑筋細胞)への分化に関する検討を行なう。細胞シートの大型化に関しては、最適な磁石の選定と播種細胞数について詳細な検討を行なう。平成25年度内に大型細胞シートの作成および、大型動物(ブタ)への細胞シート移植実験の予定であったが、計画を変更し平成25年度は小動物への移植治療効果判定に重点を置いたため、未使用額が生じた。細胞シートの大型化に必要な磁性体および培養に係る消耗品、さらにはブタへの移植実験を予定しており、未使用額はその経費に充てる。
ネットニュースにおける話題分析アルゴリズムの開発と自然災害風評被害への適用

本研究では,ネットニュースから中心的に扱っている話題を語の共起情報や出現頻度に基づいて抽出し,その時系列的な変化を提示するアルゴリズムの提案した.また,提案したアルゴリズムを2007年に発生した新潟県中越沖地震発生時のネットニュースに適用し,当時のネットニュースでの報道状況を解析した.これにより,提案アルゴリズムの検証を行うと共に,ネット上の情報にバイアスがかかり歪められていく過程を明らかにした.本研究では,ネットニュースから中心的に扱っている話題を語の共起情報や出現頻度に基づいて抽出し,その時系列的な変化を提示するアルゴリズムの提案した.また,提案したアルゴリズムを2007年に発生した新潟県中越沖地震発生時のネットニュースに適用し,当時のネットニュースでの報道状況を解析した.これにより,提案アルゴリズムの検証を行うと共に,ネット上の情報にバイアスがかかり歪められていく過程を明らかにした.ある事象が発生した際,その事象に対するWeb上の情報は様々なバイアスがかかっており,Webの情報が必ずしも現実の正しい姿を反映しているとは限らない.時には誇張された情報や事実無根の流言飛語が流れ,関係者に多大な不利益を生じさせる深刻な社会問題を発生させる.このような現象の典型的例として,自然災害による風評被害の発生が挙げられる.本研究では情報にバイアスがかかる過程を解明することを目的とし,本年度は,生起事象として,平成19年3月に発生した能登半島地震及び平成19年7月に発生した新潟県中越沖地震の二つの自然災害を事例として取り上げ,これら地震災害における報道状況をネットニュース及び新聞の2つの媒体において解析した.ここでは,報道における情報の量・質・寿命の三つの観点からの解析を実施した.情報の量としてはネットニュースにおける記事数及び文字数,新聞における記事数及び記事面積を分析し,ネットニュースと新聞報道における報道量の差異を明らかにした.また,質の観点からは,ネットニュース及び新聞において記事内容に基づき分類を行い,災害発生時にどのような種類の情報が発信されているかを分析した.分析結果から各メディアにおいて発信される情報には偏りが存在し,また,その特性はネットニュースと新聞では異なることを明らかにした.更に,情報収集を事象発生後長期間実施することによって,情報の寿命の観点からの考察を行い,災害規模や災害の特徴によって情報の寿命が異なること明らかにした.以上の結果に基づき話題変遷を分析するためのアルゴリズムについての検討を実施した.ある事象が発生した際,その事象に対するWeb上の情報は様々なバイアスがかかっており, Webの情報が必ずしも現実の正しい姿を反映しているとは限らない.時には誇張された情報や事実無根の流言飛語が流れ,関係者に多大な不利益を生じさせる深刻な社会問題を発生させる.このような現象の典型的事例として,自然災害による近隣観光地における風評被害の発生が挙げられる.本研究では,自然災害を生起事実として,ネットニュースの話題変遷を分析し,現実の災害状況と,ネットニュースで提供される情報との乖離を時間的推移で比較することによって,情報にバイアスがかかる過程を解明することを目的とする.本年度は,第一に,生起事象として,平成19年3月に発生した能登半島地震,平成19年7月に発生した新潟県中越沖地震,平成20年6月に発生した岩手・宮城内陸地震の三地震を取り上げ,これらの地震災害における報道内容の分析を行った.ここでは,三地震における災害及び被害特性を比較分析し,それら特性と報道内容の関係性を分析した.続いて,ニュースが中心的に扱っている話題の変遷を分析するためのアルゴリズムの実装を行った.実装アルゴリズムは,語の共起情報および出現頻度情報を抽出し,これらに対して統計情報処理を適用することによって,中心的な話題内容を推定し,この話題の時系列的変化を提示することが可能なものである.この実装したアルゴリズムを新潟県中越沖地震が発生した際の二ヶ月間のネットニュースでの報道に適用した.算出された話題変遷情報から災害に関する報道がどのように変化していったのかを分析し,この分析結果に基づき情報のバイアス過程についての考察を行った.また,これらの結果に基づき実装アルゴリズムの妥当性の検証を行った.
自己免疫寛容の誘導を目的としたmTOR阻害剤によるTregワクチン療法の開発

関節炎マウスにおいて、SLX-Lipo(Eve)→IL-2/IL-2Ab complexを(IL2cx)投与することで、制御性T細胞の増加は認めるが、関節炎は改善しなかった。全身の炎症が効果を阻害していると考え、(a)マウスTNFα抗体b)CTLA4-Ig c)マウスILー6受容体抗体)を前投与後、全身Everolimus→IIL2cx投与を行い、同様の実験を行なったが、十分な関節炎抑制効果を認めなかった。慢性炎症病態によりTregに抵抗性の炎症細胞が存在しh-IL2cxの効果を減弱、もしくは、h-IL2cx投与によりこれらの炎症細胞を活性化させる可能性を考えた。そこで、ヒト化NOGマウスのh-IL2cx投与群で、CD4+T細胞中の炎症性T細胞(Th1,Th2,Th17,Th117)の解析をおこなった。コントロール群との比較で、割合・細胞数ともに、Th1/17が著明に増加し、Th1/17細胞が、抵抗因子の第一候補と考えられた。また、このモデルは、1)制御性T細胞が増加しつつ2)x-GVHDのdiseaseがより進行する、という点で、ヒト免疫細胞の制御性T細胞抵抗性炎症病態の有用なモデルと考え、制御性T細胞抵抗性のT細胞の探索研究へとつなげている。関節炎モデルマウス(SKGマウス)を用いた「関節炎を惹起→Tregのコンバージョン誘導実験」には、mTOR阻害剤(everolimus)を関節炎局所部位へ投与(リポソーム、SLX-Lipo(Eve)による)することと、IL-2/IL-2抗体複合体の全身投与を行った。現在それぞれの群の関節スコア、所属リンパ節におけるTregの割合などを比較検討するため、実験数を増加し検討中である。また、ヒト化マウス(NOGマウス)を用い、ヒトT細胞移入によるGVHDモデルを作成した。無処置において、このxeno-GVHDモデルは、day30-40あたりで死亡する。このモデルに、本年度は、まずIL-2/IL-2Ab(clone 5344) complex投与(腹腔内)を単独で行うことで、ヒトTregを誘導できるか検討した。IL-2/IL-2Ab(clone 5344) complex投与により、xeno-GVHDモデルマウス(NOG, human PBMC)において一過性にCD4+CD25high+Foxp3+のTreg上昇を確認した。また、このxeno-GVHDにおいてはGVHD症状(体重減少)がおよそ3週後(day21)に発症してくる。IL-2/IL-2Ab(clone 5344) complex投与時期の検討をしたところ、早期(day10)投与の方が、遅い時期(day20)に投与した群よりGVHDが軽微となる傾向が認められた。次年度において、ヒトリンパ球でより効率的にTregを誘導するため、こられのxeno-GVHDモデルにおいて、より早期(human PBMC移入と同時)にIL-2/IL-2Ab(clone 5344)を投与し、Tregの誘導などが効率的に行えないかなど検討を重ね、Tregワクチン療法の方法論を精力的に進めていくH27年度に予定していたSKGマウスの関節炎モデルにおいて、mTOR阻害剤(everolimus)を関節炎局所部位へ投与(リポソーム、SLX-Lipo(Eve)による)と、IL-2/IL-2抗体複合体の全身投与は、順調に進んでいる。しかし予定にあったリンパ球解析結果は、解析する表面マーカーなどの検討の予備実験などに時間が費やされたため、まだ十分にでておらず、やや遅れている。しかしその分、H29年度に予定していた、「ヒト化マウスにおけるEverolimus→IL-2/IL-2Ab complexによるヒトナイーブT細胞からTregへの誘導と、GVHD発症抑制の有無の検討」、について行えるところから開始し、まずIL-2/IL-2Ab complex投与への反応などを検討できている。総合的にみて、順調に進展している。1)関節炎モデルマウス(SKGマウス)を用いた「関節炎を惹起→Tregコンバージョン誘導実験」。mTOR阻害剤(everolimus)を関節局所(リポソーム使用)、全身投与(腹腔内)を行ったのちにmIL-2/IL-2Ab complex(以下mIL2cx)を投与し、関節炎の改善の有無を検討した。Tregは著増したが、関節炎の改善は認めなかった。一方、非炎症病態(非関節炎時)に投与したmIL2cxは、関節炎発症の予防効果を認めた。背景にある炎症病態が、mIL2cxによるTreg増加のみならず非TregのCD25陽性活性化T細胞を活性化させる可能性が示され、現在、炎症病態を直接阻害する薬剤の併用を行うことで、自己免疫寛容を再誘導する方法を検討している。現在、IL-6受容体抗体、TNFα阻害剤、CTLA-4-Ig(Abatacept)、JAK1/2阻害剤(Balicitinib)の併用を行うことで、CD25陽性のTreg、非Treg(活性化T細胞)のバランスの変化を行い、最適の組み合わせを検討している。関節炎モデルマウス、およびヒトPBMCを用いたxeno-GVHDモデル、の両方において、IL-2/IL-2Ab complex(以下IL2cx)はTregの増加は認めるものの、関節炎およびGVHDの十分改善を認めなかった。このため、さらに追加研究として炎症病態を抑制する薬剤(JAK阻害剤、TNFα阻害剤など)を併用し、炎症病態を抑制しつつTregを誘導する方法の探索を行っている。

このため、当初の予定よりやや遅れている。1)関節炎モデルマウス(SKGマウス)を用いた「関節炎を惹起→Tregコンバージョン誘導実験」。mTOR阻害剤(everolimus)を関節局所(リポソーム使用)、全身投与(腹腔内)を行ったのちにmIL-2/IL-2Ab complex(以下mIL2cx)を投与し、関節炎の改善の有無を検討した。Tregは著増したが、関節炎の改善は認めなかった。一方、非炎症病態(非関節炎時)に投与したmIL2cxは、関節炎発症の予防効果を認めた。背景にある炎症病態が、mIL2cxによるTreg増加のみならず非TregのCD25陽性活性化T細胞を活性化させる可能性が示された。そこで、炎症病態を直接阻害する薬剤の併用を行うことで、自己免疫寛容を再誘導する方法を検討した。IL-6受容体抗体、TNFα阻害剤、CTLA-4-Ig(Abatacept)、JAK1/2阻害剤(Balicitinib)を関節炎モデルの疾患抑制に効果があるかを検討した。しかし、TNFα阻害剤、CTLA-4-Ig(Abatacept)においては、関節炎の予防効果は期待できるものの、発症後の疾患抑制は認められなかった。JAK1/2阻害剤(Balicitinib)の使用は、早期に関節炎モデルも疾患活動性の抑制が確認された。本課題の最終目標は、IL-2/IL2Ab complexにより制御性T細胞を増強し、自己免疫疾患を改善させヒトに応用することであるが、ヒト化マウスを用いたその後の詳細な解析により、当初の予想に反し、ヒト免疫細胞へは、炎症を逆に惹起する作用があることが確認された。これを解決し本課題の最終目標に近づくため、炎症を増悪させる因子を詳細に解析する必要が新たに生じ、これを遂行するため、研究に遅れが生じている。次年度も継続して未使用額をその経費に充てることとし、研究の延長申請とした。関節炎マウスにおいて、SLX-Lipo(Eve)→IL-2/IL-2Ab complexを(IL2cx)投与することで、制御性T細胞の増加は認めるが、関節炎は改善しなかった。全身の炎症が効果を阻害していると考え、(a)マウスTNFα抗体b)CTLA4-Ig c)マウスILー6受容体抗体)を前投与後、全身Everolimus→IIL2cx投与を行い、同様の実験を行なったが、十分な関節炎抑制効果を認めなかった。慢性炎症病態によりTregに抵抗性の炎症細胞が存在しh-IL2cxの効果を減弱、もしくは、h-IL2cx投与によりこれらの炎症細胞を活性化させる可能性を考えた。そこで、ヒト化NOGマウスのh-IL2cx投与群で、CD4+T細胞中の炎症性T細胞(Th1,Th2,Th17,Th117)の解析をおこなった。コントロール群との比較で、割合・細胞数ともに、Th1/17が著明に増加し、Th1/17細胞が、抵抗因子の第一候補と考えられた。また、このモデルは、1)制御性T細胞が増加しつつ2)x-GVHDのdiseaseがより進行する、という点で、ヒト免疫細胞の制御性T細胞抵抗性炎症病態の有用なモデルと考え、制御性T細胞抵抗性のT細胞の探索研究へとつなげている。
頸椎椎間孔、同部位神経根の解剖学的特徴ならびに神経根障害の病態解明

1.頸椎椎間孔と神経根の解剖学的特徴人頸椎骨標本146体の骨性椎間孔の測定と屍体標本30体の頸神経根の観察おとび前根糸の脊髄起始部の形態計測を行った。結果、骨性椎間孔はC4、C5、C6、C3、C7の順で狭い。C5、C6神経根前根糸は縦幅、横幅共に他髄節に比較し有意に広く脊髄より起始していた。また、椎間孔入口部付近では、前根と後根は位置関係を異にしていた。2.頸部神経根症の臨床的特徴1976年から当院で保存的治療を行ったKeegan型近位上肢運動麻痺120例(男性97例、女性23例、平均年齢56歳)の形態学的特徴と観血的治療を行った頸椎症性神経根症40例(男性28例、女性12例、平均年齢47歳、平均経過観察期間、3年2ヵ月)の術後成績を検討した。Keegan型近位上皮運動麻痺は、障害される神経根がC5およびC6であることより頸椎の形態学的特徴があると考え調査した。CTによると患側のC5あるいはC6上関節突起が健側に比べ5mm以上前方に位置し、椎間孔狭小を伴っている例が多かった。このことより、本症の発生機序はC5あるいはC6椎間孔周囲の先天的あるいは退行性の形態異常を基盤とし、これに動的あるいは静的要因が加わった神経根障害であると推察した。次に、観血的治療として、前方除圧固定術36例、脊柱管拡大術3例、後方進入椎間板摘出術1例を行い、術後成績は、優19例、良13例、可2例、不変・悪化6例で、良以上は、32例(80%)であった。障害神経根は、C6、C5、C7の順で、知覚障害を認める例が多く、運動麻痺は少ない。これは、後根と前根の椎間入口部での走行状態の違いが関与していると考えられた。頚椎椎間孔や神経根の解剖学的特徴や両者の相互関係が頚椎症性神経根症にどのように関与しているかを明らかにすることを目的とした.骨標本146体の第3頚椎より第7頚椎を対象とし,骨性椎間孔の形態の指標となる部位(上関節突起と椎体の位置関係,上関節突起と鈎状突起間の幅,上椎切痕の深さ)と椎体横径,前後径および椎孔横径,前後径を計測した.また,屍体標本30体より得た頸部を前方から筋,椎体,硬膜,軟膜を除去し,C4からC8神経根前根系の脊髄起始部を明らかにし前根糸の脊髄起始部の形態計測を行なった.結果として,上関節突起と椎体の位置関係は,C4の上関節突起が最も前方に位置しており以下C5,C6,C3,C7の順序で有意差を認めた.上関節突起と鈎状突起間の幅もC4が最も狭く以下C5,C6,C3,C7の順序で有意差を認めた.上椎切痕の深さには高位別有意差は認められなかった.尚,上関節突起と椎体の位置関係および上関節突起と鈎状突起間の幅と,椎体および椎孔の大きさの間には相関は認められなかった.C5,C6

神経根前根糸は他に比べて縦幅,横幅共に有意に広く脊髄より起始していた.くわえ,C8神経根前根糸は他に比べて縦幅,横幅共に有意に狭く脊髄より起始していた.以上の結果より,頸部の骨性椎間孔においてその横幅が最も狭く全長が長い骨性椎間孔はC3/C4間の椎間孔であり,以下C4/C5,C5/C6,C2/C3,C6/C7の順位であり神経根に圧迫を与え易い椎間孔も同順位と考えられ,C5,C6神経根前根糸の脊髄起始部での圧迫の機会は他の部位に比べて多くなると考えられる.今回の観察の結果と臨床的に頚椎症性神経根症の責任病変が頚髄神経根の第4,第5,第6神経根に多い事実から頸椎の解剖学的形態が頚椎症性神経根症発症に関与することが示唆された.平成6年度までに得られた基礎的研究では、頚椎晒骨標本計測で、骨性椎間孔はC4が最も狭く、以下C5、C6、C3、C7の順に加齢により骨性椎間孔は狭小化し、また、神経根の解剖学的形態は、その高位別に違いが認められ、さらに椎間孔部では前根,後根の走行状態が異なり神経根障害が生じやすい解剖形態が存在する結果であった。今回、頚部神経根症の診断でその責任高位が明確にされた40症例の臨床症状やMRI、CTなどの画像所見と術後成績を評価することで、頚部神経根症の病態発現と神経根の背柱管および椎間孔の解剖学的状態がどのように関与しているか検討を行った。対象は、1984年4月1993年10月までに久留米大学整形外科にて頚部神経根症の診断で観血的治療を行った、男性28例,女性12例で、平均年齢47歳(19-72歳)、平均罹病期間11ケ月(1か月-9年3か月)で、術後経過観察期間は、1年以上で平均3年2ケ月であった。臨床症状では、全例頚部に疼痛いを認めるほか、上肢に知覚障害を認める例が多く、運動麻痺を認める例は少なく、神経根の後根での障害が前根の障害に比べて多く認められ、後根と前根の椎間孔入口部での走行状態の違いが関与していると考えられた。また、頚部神経根圧迫試験は、ほとんど陽性であり、症状発現の一つに動的因子か関与していると考えられた。術中所見より神経根障害を来した原因は椎間板ヘルニアと椎体後方の骨棘であり、責任高位について、第6、第5、第7神経根の障害が多く認められた。これは、頚部神経根症椎間孔測定での、3/4、4/5、5/6レベルでの骨性狭窄部位とは一致しなかったが、障害された神経根が脊柱管内での根糸の基部や椎間孔入口部と圧迫を受けた場所が異なることで責任高位に差異を生じたと考えられた。前年度までに得られた基礎的研究により骨性椎間孔はC4が最も狭く、以下C5、C6、C3、C7の順で狭小化し、椎間孔部では頚椎神経根の前根と後根の走行状態が異なり神経根障害が生じやすい解剖形態が存在した。次に、頚部神経根症の診断でその責任高位が明確にされ、観血的治療を行った40症例の臨床症状や画像所見および術後成績を評価した。症例は、男性28例、女性12例で、年齢は19歳から72歳平均47歳で、平均経過観察期間は、3年2ヵ月であった。術中所見より神経根圧迫の病因は、椎間板ヘルニアと後方の骨棘であり、障害神経根は、C6、C5、C7の順で多かった。術後成績は、優19例、良13例、可2例、不変・悪化6例であり、症状は、知覚障害を認める例が多く、運動麻痺を認める例は少なく、後根の障害が前根の障害に比べて多いことが示唆され、これは、後根と前根の椎間入口部での走行状態の違いが関与していると考えられた。さらに、頚部神経根症の一疾患であるKeegan型近位上肢運動麻痺は、三角筋の運動麻痺を主訴とし、障害される神経根がC5およびC6であることより頚椎の形態学的特徴があるとされている。今回、1976年から1994年まで保存的治療を行ったKeegan型近位上肢運動麻痺120例を対象に症状および画像所見を調査した。症例は、男性97例、女性23例で、年齢は17歳から88歳平均56歳であった。CTによる上関節突起の位置と椎間孔狭小化の有無を観察し、患側のC5あるいはC6上関節突起が健側に比べ5mm以上前方に位置し、さらにLuschka関節や椎間関節の関節症変化や先天的椎間孔狭小を伴っている例が多かった。このことより、Keegan型近位上肢運動麻痺の発生機序はC5あるいはC6
非ベンゼン系芳香族化合物錯体の合成と反応

我々は、反応性電極としてマグネシウム電極を用いる電極還元系が極めて強い還元力を有し、かつ、興味深い反応性を有することを既に見い出し、この反応系を用いた広範な有機合成反応を既に開拓している。本重点領域研究では、トロポン、アズレン等の非ベンゼン系芳香族化合物を、反応性電極にマグネシウムを用いて電極還元するという新しい手法により、種々の金属と非ベンゼン系芳香族化合物との安定な錯体の合成とその有機反応への応用を行うことを目的として研究を行った結果、種々のアルキル置換基を有するアズレン誘導体を反応性電極としてマグネシウムを用いて電極還元することにより、アズレン誘導体2分子が7一位で位置選択的にカップリングした層状マグネシウム-錯体が高収率で生成することを見い出した。また、これらの層状マグネシウム-錯体とサマリウム、ユーロピウム等のランタノイド類の金属塩を反応させることにより、対応するランタノイド金属錯体が効率良く生成することを明かにした。さらに、上述のマグネシウムおよびランタノイド錯体と種々の親電子剤との反応を検討した結果、これらの錯体が高い求核性を有しており、ハロゲン化ルキル、アルデヒドおよびケトン等の種々の親電子剤と位置選択的に反応することをも見い出した。これらの生成物が容易に酸化されてアズレン誘導体を再生することを明かにし、この反応を用いてアズレン類の2一位に位置選択的に置換基を導入する有効な方法を開拓することにも成功した。
NK細胞レセプターのシグナル伝達機構の解明

NKR-P1分子は、ある種の糖鎖に結合しNK細胞の抗原認識に関与したレセプターの一つと考えられている。実際、NKR-P1分子をNKR-P1陰性細胞に導入するとある種の細胞に対して細胞障害性を示すことが知られているが、そのシグナル伝達機構は、ほとんどわかっていない。そこで、我々は、NKR-P1分子を発現しているCTLL-2細胞を用いてNKR-P1分子を免疫沈降し、2次元電気泳動にて解析したところ、いままで、Fcレセプターのシグナル伝達のみに重要な役割を担っていると考えられてきたFcRγ鎖が、NKR-P1分子に会合していることが明らかになった。同様に、脾臓から採取したNK細胞においてもNKR-P1分子とFcRγ鎖の会合が認められた。そこで、FcRγ鎖欠損マウスよりNK細胞を採取してその機能解析を行った。その結果、通常マウスのNK細胞は固相化抗NKR-P1抗体刺激に対してIFN-γを産生するがFcRγ鎖欠損マウスのNK細胞は、全くIFN-γを産生しないことが明らかになった。さらに、NKR-P1分子を介した細胞障害性を解析したところ、通常マウスのNK細胞はNKR-P1分子を介した細胞障害性を示すのに対して、FcRγ鎖欠損マウスのNK細胞は全く細胞障害性を示さなかった。以上のように、本研究によりNKR-P1分子のシグナル伝達に関与した分子として、新たにFcRγ鎖が重要な役割を担っていることが明らかになった。
リアリティのある高等教育のためのシナリオベースeラーニングコンテンツの試作

本研究の目的は、大学院で扱うような、リアルで複雑な問題解決を事例的に扱ってゆく教育をeラーニング上でどのように実現することができるかを、コンテンツをプロトタイプ開発することによって明らかにすることであった。3年間の研究によって、eラーニングを実際に行っているケースを対象として予備的な調査を行い、どのような点がうまくいっているか、あるいはどのような点が不十分であるかを明らかにした。その結果、リアリティのあるeラーニングのためには、以下の3点:(1)シナリオやケースが十分に練られ、迫真性があること(2)シナリオの背景となるデータやビデオのリソースが豊富なこと(3)メンター/コーチが適切なサポートをすることが重要であることが明らかになった。その中から、次の2点について重点的に研究を進めた結果、かなりのデータを得ることができた。(1)卒業研究が具体的にどのように進められ、途中でどのような成果を出していくかについてのビデオデータを蓄積した(2)シナリオベースeラーニングを成功させるための、メンタリング/コーチングの具体的なスキルを明らかにするべく観察をした特に、本研究が目的としたような、迫真性のある大学教育のためには、教材とともにメンター/コーチが学習者の活動をいかに促進するかが重要であることが明らかになった。今後は、これを実証レベルで明らかにするためにさらに研究を進めていきたい。本研究は、モジュール型あるいは自己ペースで進めていく方式のeラーニングではなく、卒業研究や大学院教育(あるいは専門職大学院の教育)におけるeラーニングをどのようにデザインするかということをターゲットにしている。モジュール型自己ペースによるeラーニングは、対象とする内容が適切であれば、十分に効果的であることが確かめられているが、ケース研究のようなリアリティのある実習をeラーニングに乗せるためには、研究が必要である。3年計画の1年目の研究として、eラーニングを実際に行っているケースを対象として予備的な調査を行い、どのような点がうまくいっているか、あるいはどのような点が不十分であるかを明らかにした。その結果、リアリティのあるeラーニングのためには、以下の3点:(1)シナリオやケースが十分に練られ、迫真性があること(2)シナリオの背景となるデータやビデオのリソースが豊富なこと(3)メンター・コーチが適切なサポートをすることが重要であることが明らかになった。以上のことから、2年目の研究に向けて次の3点について重点的に研究を進めていく方針を立てた:(1)卒業研究のeラーニングをターゲットとしてシナリオを作ること(2)卒業研究が具体的にどのように進められ、途中でどのような成果を出していくかについてのビデオ素材を撮りだめていくこと(3)シナリオベースeラーニングを成功させるための、メンタリング・コーチングの具体的なスキルを明らかにすること大学では、eラーニングシステムを導入する箇所が急速に増えている。eラーニングシステムは基礎知識や基礎技能の習得には着実な効果をあげられることが実践レベルで報告されているが、こうした知見は、さまざまな要因が絡み合った複雑な状況下での問題解決を要請されるような大学院における教育にそのまま適用できるわけではない。本研究は、大学院で扱うような、リアルで複雑な問題解決を事例的に扱ってゆく教育をeラーニング上でどのように実現することができるかを、コンテンツをプロトタイプ開発することによって明らかにすることである。これまでに、eラーニングを実際に行っているケースを対象として予備的な調査を行い、どのような点がうまくいっているか、あるいはどのような点が不十分であるかを明らかにした。本年度(2006年度)の研究に向けて次の3点について重点的に研究を進めた。(1)卒業研究のeラーニングをターゲットとしてシナリオを作ること(2)卒業研究が具体的にどのように進められ、途中でどのような成果を出していくかについてのビデオ素材を撮りだめていくこと(3)シナリオベースeラーニングを成功させるための、メンタリング・コーチングの具体的なスキルを明らかにすることその結果、十分とはいえないが、かなりの研究材料を集めることができた。