hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
血栓症発現における抗多糖鎖自己抗体の役割

本研究では、臨床上有効な抗ヘパリン多糖鎖(HPS)自己抗体の測定法を確立し、本抗体が免疫異常による血栓症診断の指標となりうるか追究した。1.血栓症および反復流産例を含む294例の血清スクリーニングでは、抗HPS抗体は既知の血栓性疾患である抗リン脂質抗体(APA)症候群33例中10例(36.3%)、APA陰性血栓症22例中6例(27.2%)、APA陰性反復流産26例中14例(53.8%)、その他の疾患164例中3例(1.8%)、正常人61例中0例(0%)に陽性であり、APA陰性の血栓症あるいは流産例においてもしばしば検出されることが明らかとなった。2.さらに本抗体の臨床的意義を明らかとするため、血栓症あるいは連続流産の既往を有する症例を抗HPS抗体及びAPAの有無により、(I)両者陽性群(n=10)、(II)両者陰性群(n=25)、(III)抗VPS単独陽性群(n=22)、(IV)APA単独陽性群(n=20)、に分け、III-IV群間の臨床像を比較した。その結果、脳梗塞(III:3/22例;IV:11/20例)及び腎梗塞(III:0/22例;IV:6/20例)はIV群において、反復流産(III14/22例;IV:5/20例)はIII群において高頻度に認めた。また、IV群では、III群に比して有意の血小板低下(III:23.1±4.5万;B:16.5±7.4万)とAPTT延長(III:33.0±6.3秒;B:61.6±34.7秒)が認められ,抗VPS抗体単独陽性群の臨床像は、抗リン脂質抗体症候群に特異的な臨床所見と共通する部分は乏しいことが判明した。以上により、抗VPS抗体は抗リン脂質抗体陰性例においても検出可能な、新たな血栓症の標識抗体となり得ると推定される。1)血清中の抗ヘパリン多糖鎖(HPS)自己抗体を検出するELISA法を確立し、これを用いて血栓症を有する自己免疫疾患症例には抗HPS抗体が高頻度に出現することを証明した。2)抗HPS抗体の結合特異性を分析するため、細胞融合法を用いて、a)ヘパリン-蛋白複合体を免疫したマウスよりマウスモノクローナル抗HPS抗体を、また、b)EBウイルスにてトランスフォームした血栓症症例末梢血リンパ球よりヒトモノクローナル抗HPS抗体を採取し、これらと血管内皮細胞表面HPS及びHPS上のATIII結合部位との結合性をより詳細に検討した。いずれのモノクローナル抗体もヘパリンおよびヘパリン硫酸にのみ特異的に結合し、DNA・カルジオリピンあるいはβ2-glycoproteinへの結合は認めなかった。またcell ELISA法にてヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)にも結合性を有していた。HUVECへの結合は、ヘパリンあるいはATIIIのみによって特異的に抑制され、これらの抗体が認識する内皮細胞上の抗原がHPSのATIII結合部位であることが示された。自己免疫性血栓症症例では、in vivoにおいてもこの部位を抗原とした自己抗体が内皮細胞表面HPSのATIII結合部位に結合し、血管内皮細胞の抗凝固活性を障害することにより、血栓症発現に直接関与している可能性が示唆される。
ドイツの政治教育における経済問題の学習

本研究は、ドイツの政治教育の中でも経済問題の扱いに焦点を合わせ、生徒が将来、経済政策や社会状況を主体的に判断し、望ましい職業・社会生活を送ることができるために欠かせない教育内容・教育方法を体系的に追究する。その主要課題は、次の3つである。第1に、1990年代以降のドイツの経済問題・貧困問題を整理し、その実態を批判的に分析した諸研究を検討する。第2に、ドイツの政治科における経済問題の教育内容、および政治教育論・経済教育論を検討する。第3に、政治教育に関わる研究者・教員へインタビューを実施し、教材の展開方法、協同学習の手法、論争的テーマの扱い方、生徒の反応等、政治教育の実態を追究する。
動物固定標本から核酸抽出を効率的に行うための技術開発研究

<背景・目的>核酸を対象とする研究が普及する以前より、博物館や臨床等、ホルマリン固定した標本は膨大に存在する。これまで核酸を用いた研究におけるホルマリン固定試料の利用は、ホルムアルデヒドによる断片化、塩基の化学修飾、RNAやタンパクとのクロスリンクによる逆転写・PCR阻害等により敬遠されてきた。次世代シーケンサーは数百塩基長の核酸をターゲットとしており、長期固定試料からもデータの獲得が可能であることが分かってきた。この手法を応用すれば、過去にサンプリングされた、希少な生物標本からの遺伝的データを得ることが可能となる。本申請では、既に取り組みが開始されている、臨床分野でのホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)試料からの抽出法を応用し、主としてホルマリン固定試料からのRNA抽出法を検討する。<方法>魚類(メダカ,サケ,ドチザメ等)の組織を用い、液体窒素による凍結組織をポジティブコントロールとし、ホルマリン固定組織からの抽出物との比較を行った。固定期間の影響を評価するため、組織固定で用いられる24時間、個体の液浸標本として想定される1週間1年程度ホルマリン固定を行い、通常のフェノール系抽出および、市販のFFPE試料からの核酸抽出キットを用い、抽出した核酸の比較を行った。抽出した核酸の品質評価は、Agilent社のBioanalyzerを用い泳動パターンの比較により行なった。<結果・考察>24時間数日程度の固定であれば、100200塩基長程度のRNA断片を比較的多量得ることができ、次世代シーケンシング等への有効性はあると考えられた。一方、長期間(半年1年)固定を行った試料においても200塩基長程度のRNAは得られたものの分解が進行し、収率も低かった。また、FFPE精製キットをアレンジした精製は、大量の組織に対応しておらず、安定した抽出のためには操作のさらなる見直しが必要であった。また、ホルマリンによる抽出物への化学修飾の解消、断片化に伴うPolyA末端を用いた精製法が使用できなくなるため、今後はそれらに関しても検討する必要があると考えられる。
Zicファミリー蛋白質の分子作用機序の解明

本研究課題ではヒトの全前脳症(左右の大脳半球の不分離)、Dandy-Walker奇形(小脳形成不全)、ヘテロタキシー(左右軸に沿った内蔵の形態形成異常)の原因遺伝子Zicファミリーについて、(1)蛋白質問相互作用を持つ新規分子の探索、(2)蛋白質問相互作用を持つ蛋白質との蛋白質結合の調節機構ならびにその意義の検討、(3)Zic蛋白質の分子修飾の実態の解明、(4)Zic蛋白質の機能に関わる細胞内シグナルカスケードの同定、の諸点について研究を推し進め、その結果、以下の成果をあげることができた。(1)Zic2を含む分子複合体を精製し、その構成要素を明らかにした(Ishiguro eta1.,2007)。酵母2ハイブリッド法により、同定したZic結合タンパク質I-mfaついて、この因子がZicタンパク質の細胞内局在を調節する可能性を示した(Mizugishietal.,2004)。そのほかに見いだされた新たなZic結合蛋白質についても、生物学的意義の追求がモデル動物の作製により、続けられている(Ogawa et al.,in preparation ; Tohmonda et al.,in preparation)。(2,3)Zic2と共に分子複合体を形成する分子群は二種類存在し、片方の複合体はタンパク質リン酸化酵素を含み、この酵素がZic2の特定のアミノ酸残基をリン酸化すること、このリン酸化により、新たな酵素がZic2に結合できるようになること、これら複合体の構成因子の変化がZic2による転写制御に関わることを示した。(3)その他に質量分析により、新たなリン酸化部位が同定され、これらのタンパク質修飾の持つ生物学的意義を明らかにする試みが続けられている(Hatayama et al.,in preparation)。(4)細胞内シグナルカスケードとの接点の解明を念頭においたZic変異マウスの表現型解析は、Zic1/Zic3,Zic2/Zic3複合変異マウスを対象として進められ、Zic1,Zic3が前脳の神経前駆細胞の増殖を促進する上で不可欠の役割を持つこと、Zic2,Zic3が体節形成において重要な役割を果たすことを明らかにした(Inoue et al.,2007a;2007b)。特に前者の解析においては前脳正中部の形態形成シグナルとして重要なWntシグナルとの接点を解明できた。一方、ツメガエルZicについて新たなメンバーの同定、解析が行われ(:Fujimi eta1.,2006)、マウスパラログ間での分子機能比較(Ishiguro et al.,2004)とともにパラログ間での分子機能・生物学的役割の違いについても解析が進展した。マウスZicファミリーのうち、いちばん強い転写活性化

能を持つZic2蛋白質を選び、様々な欠失変異体を作製して転写活性化に必要なドメインのマッピングを行った。その結果、zincフィンガーよりN末端、N末側の進化的に保存された領域(ZOC)とC末側の3個のzincフィンガーモチーフが転写活性化に重要であることが明らかになった。このうち、Z末側の領域については結合蛋白質がいままでに報告されていないので、酵母2ハイブリッド法を用いて、結合蛋白質の探索を行った。いくつかの候補結合蛋白質のうち、発現プロファイル、結合の再現性の観点から、I-mfa蛋白質を選び、解析を進めた。I-mfaはMyoDなどの筋発生に関わるbHLH型転写因子の機能抑制蛋白質として見いだされたC末側にシステインに富む領域を有する蛋白質である。結合ドメインのマッピングから、Zic2-I-mfaの蛋白質間結合はZic2のzincフィンガーよりN末側の領域とI-mfaのシステインに富む領域を介することが明らかになった。また、I-mfaとZic2を共発現させると、通常は核に局在するZic2蛋白質がI-mfaの存在する細胞質領域に位置するようになることが分かった。同時に共発現させたI-mfaはZic2による転写活性化を阻害することが明らかになった。これらの事実はI-mfaが蛋白質-蛋白質間相互作用により、Zic2蛋白質の機能抑制に働く可能性を示唆している。マウス発生過程では両者の発現は椎骨などを形成する硬節で部分的に重なり、Zic2は内側領域でより強く、またI-mfaは外側領域でより強く発現する傾向がある。また、Zic2変異マウスでも、I-mfa変異マウスでも椎骨の形成異常が認められることから、両者の相互作用は椎骨の形態形成に関与するものと予想される。Zicファミリーのzincフィンガータンパク質は、神経・神経堤・脊索・筋・骨格系を形作る細胞の分化・増殖制御、神経軸索の走向制御、内蔵の左右軸の決定など、前口動物では分節構造の形成、外胚葉組織の細胞運命決定など、広範な発生過程に役割を持つことが知られている。また、ZIC1,ZIC2,ZIC3,ZIC5はヒトの先天性奇形の原因遺伝子であり、その分子作用機序の解明が奇形発症の予防、対処の観点から重要である。Zicタンパク質の分子作用機序を明らかにするために、酵母2ハイブリッド法、免疫沈降法、マススペクトロメトリーなどの手法を用いて、Zic結合タンパク質を見出してきた。これまでに、10種類以上の生物学的に意義のあると考えられるZic結合タンパク質が同定されてきており、これらのタンパク質間結合の詳細を検討するために、一部のものについては結合部位に変異の入った変異タンパク質を作製した。これらを培養細胞、モデル動物に発現させることにより、各Zic結合タンパク質のZicタンパク質機能制御における役割を明らかにする試みを続けている。また、患者で認められたヒトZIC3の突然変異体の機能解析から、ZICタンパク質の細胞内局在決定の分子機構に関する重要な知見が得られた。同時に旋光性、NMRなどの構造生物学的な解析を進め、構造機能相関に関する理解を深めた。これらの成果は現在、専門誌に投稿中ないし、投稿準備中である。
半導体ナノコラム結晶の電気伝導と光散乱

柱状ナノ構造持つGaNナノコラム結晶の電気伝導と光散乱の研究より、次の基礎物性を明らかにした。(1)フレーリッヒ・モードをラマン散乱で観測し、コラム密度の関係を明らかにした。(2)AlNを挿んだ多重量子ディスク・ナノコラム結晶の(擬)閉じ込め及び界面フォノンモードを研究した。(3)キャリヤの集団励起のプラズモンの振舞を研究した。(4)電気伝導より低温での不純物伝導、非線形伝導、磁気抵抗を研究した。1.GaNナノコラム結晶の電気伝導GaNナノコラム結晶の電気伝導を測定し、不純物伝導や非線形伝導の伝導機構を観測した。パルス電流測定より、低温で静電容量が発生することを突き止めた。また、強磁場下で負の磁気抵抗を観測し、サイクロトロン半径がナノコラム半径に一致する磁場で抵抗が最少になることを観測した。これらの実験事実はナノコラム特有の現象であり、今後の発展が期待できる。2.高濃度にキャリヤードープしたGaNナノコラム結晶の光散乱高濃度のキャリヤをドープしたGaNナノコラム結晶のラマン散乱を研究した。キャリヤ電子の集団励起であるプラズモンとLOフォノンの結合モードをナノコラム結晶で初めて観測し、キャリヤ濃度を測定する方法を確立した。ナノコラム結晶ではホール効果測定等が困難なため、このラマン散乱測定はGaNナノコラム結晶のキャリヤ測定方法として重要である。3.GaN/AIN多重量子ディスクナノコラム結晶の光散乱GaN/AIN多重量子ディスクナノコラム結晶の光散乱よりフォノン物性を研究した。超格子に閉じ込められた閉じ込めモードや、界面に局在した界面モードがナノコラムの動径方向にも閉じ込められて量子化することより、これらのフォノンモードが観測されることが分かった。また、1本のナノコラムの電気伝導の測定を試み、今後の測定の可能性を示した。高圧下でのラマン散乱の研究を行い、フォノンやプラズモンへの圧力効果を研究した。GaN/AlN多重量子ディスクナノコラム結晶の光散乱よりフォノン物性を研究した。
沖縄における近代法の形成と現代における法的諸問題

以下の論文にまとめた。一、牧田勲「沖縄県における明治期林政と『琉球新報』--杣山開墾その後--」二、矢野達雄「沖縄近代史における「旧慣」認識の諸相--琉球処分から土地整理まで--」三、青嶋敏「浮掛地報償廃止運動と二つの沖縄県土地整理法改正(法)案--その相互関連性をめぐる一考察」四、竹内康博「沖縄における墓地の移転と補償那覇新都心・浦添南第一区画整理事業を手がかりとして」五、竹内康博「泊外人墓地の歴史とその将来」六、江渕武彦「沖縄における軍用地内の入会」七、小川竹一「沖縄における入会権の諸問題」八、小川竹一「黙認耕作地と「耕作権」補償問題--読谷補助飛行場の事例--」九、小川竹一「宮古島の地下水管理と条例」十、平松紘「沖縄における沿岸環境問題と地域社会コモンズ論の視点から」十一、鈴木龍也「沖縄における農地法適用の意義(覚書)」十二、伊藤裕「沖縄における高齢者介護と家族関係について」十三、林研三「来間島の家族と親族」十四、大城道子「金武町金武区における軍用地料配分の慣行と入会権をめぐるジェンダー」十五、森謙二「来間社会の二元的構造とブナカ-村落祭祀とヤーマス御願-」十六、金城善「八重山石垣間切石垣村の頭数帳について」十七、田里雅湖「沖縄の家族法先例--外岡茂十郎編『明治期家族法資料』から--」十八、田里修「乾隆大御支配と杣山処分」十九、渡口真清「麻姓墳墓史」以下の論文にまとめた。一、牧田勲「沖縄県における明治期林政と『琉球新報』--杣山開墾その後--」二、矢野達雄「沖縄近代史における「旧慣」認識の諸相--琉球処分から土地整理まで--」三、青嶋敏「浮掛地報償廃止運動と二つの沖縄県土地整理法改正(法)案--その相互関連性をめぐる一考察」四、竹内康博「沖縄における墓地の移転と補償那覇新都心・浦添南第一区画整理事業を手がかりとして」五、竹内康博「泊外人墓地の歴史とその将来」六、江渕武彦「沖縄における軍用地内の入会」七、小川竹一「沖縄における入会権の諸問題」八、小川竹一「黙認耕作地と「耕作権」補償問題--読谷補助飛行場の事例--」九、小川竹一「宮古島の地下水管理と条例」十、平松紘「沖縄における沿岸環境問題と地域社会コモンズ論の視点から」十一、鈴木龍也「沖縄における農地法適用の意義(覚書)」十二、伊藤裕「沖縄における高齢者介護と家族関係について」十三、林研三「来間島の家族と親族」十四、大城道子「金武町金武区における軍用地料配分の慣行と入会権をめぐるジェンダー」十五、森謙二「来間社会の二元的構造とブナカ-村落祭祀とヤーマス御願-」十六、金城善「八重山石垣間切石垣村の頭数帳について」十七、田里雅湖「沖縄の家族法先例--外岡茂十郎編『明治期家族法資料』から--」十八、田里修「乾隆大御支配と杣山処分」十九、渡口真清「麻姓墳墓史」今年度は5月の法社会学会の際に東京において研究代表者を中心に研究分担者ほぼ全員、合計14名が集まり、夏の調査日程を打ち合わせた。8月23日に県内の沖縄県立図書館、沖縄県立博物館、沖縄県公文書館、那覇市歴史資料室、浦添市沖縄学研究室など地域史関係機関を訪問し、資料の確認をおこなった。8月24日には沖縄大学において、研究代表者田里修による沖縄の法社会史に関する報告と、分担者の森謙二による沖縄の墓地行政に関する報告に関する研究会ならびに各自の研究計画についてのスカッションをおこなった。前後2週間にわたり各自調査、資料収集をおこなった。各人は8月20日から9月1日まで図書館での資料の確認や調査を行った。また家族調査グループおよび墓地調査グループは宮古島にも調査をおこなった。その予備調査を基に11月には宮古島・下地町のK島の、島全全体の土地台帳を写真撮影し、CD-ROMにおさめた。これらは必要な研究分担者に配布されるとともに分析される予定である。2月27日から3月2日にかけて再調査を行い来年以降の本調査に備えるとともに住民台帳の作成もおこなった。コレによって個別の訪問による悉皆調査は必要がないものと思われる。また3月19日から23日には分担者の森他3名が、沖縄からの分家の移民の、家族調査のためハワイに行った。2002年6月8日福岡・九州大学で行なわれた法社会学会にあわせて研究分担者のほとんどのメンバーが集まり今後の研究・調査の予定を打ち合わせた。8月24日に全員が沖縄県那覇市・沖縄大学に集合し、調査・研究の内容についての報告・打ち合わせを行なった。研究分担者の林・伊藤、研究協力者の前川のグループは宮古島に移動し来間島の家族調査、介護問題などについての聞き取りなどを行った。また、分担者の奥山・牧田・矢野らは県立図書館・市立図書館などを中心に文献資料の調査を行なった。

森・竹内の墓地調査グループは沖縄県などの関係機関の訪問、県内墓地公園などの現地調査を行なった。青嶋・江渕らの入会グループは、浦添市や沖縄市の部落有地と部落への聞き取り調査などを行った。平松・塩谷・東郷らの環境グループ沖縄市・国頭村の現地調査と宮古島への調査を行った。夏の調査を受けて12月26日全員が東京・学士会館に集まり調査研究の進捗状況の報告会を行った。2月から3月にかけて森・林・伊藤らのメンバーはそれぞれ1週間程度の宮古島補足調査を行い、鈴木は総合事務局をはじめとする関係機関の調査を行った。林・森は2003年5月24日に沖縄大学で開催予定の比較家族史学会において来間島調査の報告を行う予定である。栗間島の土地台帳は写真撮影をすべて取り終えてCD・ROM一枚に収録することが出来た。また、近世の戸籍関連の資料の修復も本年度中に完了した。5月17日、青山学院大学における法社会学会に合わせて同大学内の会議室において今年度の調査研究のスケジュールの確認を行った。5月24日、25白に比較家族史学会が「沖縄とジェンダー」「沖縄とアジール」をテーマに研究代表者の所属する沖縄大学で開催されたが、そこで各自が報告を行った。一日目に森、林は「ブナカとサニ・門中の基礎構造」大城道子は「沖縄におけるジェンダー研究」を、田里は2日目午前中に「沖縄にアジールは存在したか」の報告を行った。8月29日には沖縄大学に全員集合し夏の調査に入った。江渕は入会・山林関係について、県立図書館、県立公文書館などで文献調査を行い、沖縄市泡瀬や浦添市などの現地調査を行った。伊藤、牧田、鈴木、矢野、竹内は県内の墓地の状況を県庁、関係市町村で聞き取りを行った。小川は、読谷村の黙認耕作地の調査などを行った。森、林、田里は9月17日、宮古・来間島の祭りに合わせて二度目の調査を行った。平松は9月に泡瀬の干潟の調査などを行った。今年度新たに、研究協力者の金城善を中心に八重山・石垣市の『石垣村頭数帳』を修復しパソコンで整理を行った。また、宮古・来間島の土地台帳の不鮮明な箇所の再撮影も行った。12月13日に青山学院大学において、研究会を開催し金城善による沖縄の五人組に関する研究報告、平良勝保の人頭税に関する報告などの後、各自の研究の進捗状況を報告した。3月13日に青嶋、平松、鈴木は沖縄本島を中心に文献、現地調査を、伊藤、森、林は宮古島を中心再調査を行った。平成16年8月林、森両氏は宮古島来間島の民俗行事の調査を行った。金城善氏(研究協力者)は石垣島頭数帳の翻刻とともに表計算ソフトによる整理を行ない報告書に掲載する予定である。牧田(摂南大学教授)は山林関係の法制資料収集を行った。奥山は県立図書館などで戸籍関係資料の収集を行った。矢野も県立図書館、公文書館で、地方制度関係の法制関係資料の収集を行った。青嶋は土地整理関係資料の収集を行った。鈴木(龍谷大学教授)は農地関連の資料収集を行った。伊藤(鈴鹿国際大学教授)は家族関係の資料収集を行った。竹内(愛媛大学教授)は墓地関連史料の収集と現地調査を行った。平松(青山学院大学教授)は10月に環境関連の資料収集と泡瀬埋め立て予定地などを視察した。平成17年2月から3月にかけて森、林が再度宮古・来間島年中行事関連の民族調査を行った。青嶋は土地整理関係の資料収集を行った。田里は報告書に掲載予定の「麻氏墓碑」の翻刻のチェックを行った。奥山は戸籍関係、移民関係の資料収集を行った。小川(島根大学教授)は金武町の入会紛争地などの聞き取り調査などを行った。
ガングリオシドラクトンの受容体機能の定量的解析

ガングリオシドラクトンの受容体としての機能は全く知られておらずその生物的存在意義については糖鎖生命科学において重要な未開の分野である。本研究ではガングリオシドラクトンの認識おける機能を知ることを目的として研究を行った。ガングリオシドラクトンのひとつであるGM3がラクトン化されることでシアリダーゼのような酵素により加水分解されないこと、さらにシアル酸特異レクチンとの結合親和性が顕著に増大することなどを見出した。また、インフルエンザウイルスとの結合性を有していることも明らかになった。さらに、GM4ラクトン誘導体を用いることで、ラクトンの結合位置により、その受容体機能が異なることが見いだされた。ラクトン環を形成することで、シアル酸とガラクトース間の運動性が押さえられることから、膜界面での糖鎖密度依存性が、元のガングリオシドラクトンと異なることも示された。これより、ガングリオシドラクトンは細胞膜表層においても重要な受容体として機能していることが期待される。シアル酸を含んだスフィンゴ糖脂質であるガングリオシドは、種々の細胞表面に存在し、抗体、ウイルスあるいは毒素のレセプターとして働いたり、様々な細胞の生物学的機能に関与している事が知られている。ガングリオシド糖鎖部分にシアル酸を持っているため、シアル酸のカルボキシル基と隣接する糖の水酸基とで分子内でエステル結合を形成し、ラクトン構造をとることが考えられる。本研究では細胞膜モデルとして水面単分子膜を用いて、GM3ラクトンの糖鎖の認識性について検討した。まず、GM3の末端の糖鎖であるシアル酸に結合するレクチン(小麦胚芽レクチン、WGA)の結合について検討した。この結果、GM3ラクトンはGM3に比べWGAの結合性が高くなった。これはオリゴ糖鎖の立体構造の違いによるためであると思われた。インフルエンザウイルスは、宿主の細胞表層に存在するシアル酸含有糖鎖に結合し、感染を起こすことが知られている。インフルエンザウイルスは、ヘマグルチニン(HA)とシアリダーゼ(NA)という二種類の糖鎖認識を行う膜タンパク質を有している。HAタンパク質の糖鎖認識性について調べることは、ウイルス感染防御や、抗ウイルスの薬の開発にとって重要である。インフルエンザHAタンパク質としては、ウイルス膜タンパク質をエーテル抽出したものを用いた。GM3ラクトンは、GM3と同様、非特異膜であるGlcCerに比べて大きなHAの結合を示した。GM3では、HAによる結合が見られた後に、NAによりGM3が加水分解されることによりHAが解離する挙動が観察された。一方、GM3ラクトンではHAの結合過程のみが観察された。この結果はGM3ラクトンがシアリダーゼに対して耐性であることを示唆していた。事実、TLCによる結果から、GM3ラクトンはシアリダーゼ耐性であることが示された。ガングリオシドは糖鎖部分にシアル酸を持っているため、シアル酸のカルボキシル基と隣接する糖の水酸基とで分子内でエステル結合を形成し、ラクトン構造をとることが考えられる。前年度は、インフルエンザウイルスに含まれるヘマグルチニン(HA)とGM3ラクトンとの相互作用について観察した。本年度はインフルエンザウイルスとGM3ラクトンとの相互作用について水面単分子膜を用いて観察した。GlcCer中に再構成したGM3Lactoneに対してもSM中に組み込まれたGM3 Lactoneに対しても同等なウイルスの結合が見られた。これまで、GM3に対する認識性はSM中で低く、GlcCer中で高いことが明らかになっている。これはSMのカチオンとGM3のアニオンとの静電相互作用によりインフルエンザウィルスによって認識されにくい状態をとっているからであると考えられていた。このことは本研究でラクトン化して電荷が無くなることによって、マトリックス脂質による影響が無くなったことでも裏付けられた。また低含量域ではGlcCer中でGM3 Lactoneの認識性はGM3に比較して低かった。これは三次元的な立体構造の違いによるものだと考えられる。

GM3 Lactoneは低含量域にくらべて高含量域で認識性が高いことから、GM3 Lactoneは混合膜として組み込むとインフルエンザウィルスの認識性が低下し、インフルエンザウィルスはGM3 Lactoneのドメインを強く認識していると考えられた。ガングリオシドラクトンの受容体としての機能は全く知られておらずその生物学的存在意義については糖鎖生命科学において重要な未開の分野である。本研究ではガングリオシドラクトンの認識における機能を知ることを目的として研究を行った。ガングリオシドのひとつであるGM3がラクトン化されることでシアリダーゼのような酵素により加水分解されないこと、さらにシアル酸特異レクチンとの結合親和性が顕著に増大することなどを見出した。また、インフルエンザウイルスとの結合性を有していることも明らかになった。さらに、GM4ラクトン誘導体を用いることで、ラクトンの結合位置により、その受容体機能が異なることが見いだされた。ラクトン環を形成することで、シアル酸とガラクトース間の運動性が押さえられることから、膜界面での糖鎖密度依存性が、元のガングリオシドと異なることも示された。これより、ガングリオシドラクトンは細胞膜表層においても重要な受容体として機能していることが期待される。
単層2次元トポロジカル結晶絶縁体の開発と、超伝導体との接合による協奏現象の探求

本研究ではトポロジカル(結晶)絶縁体を物質として用い、その性質解明、およびそれを用いた新しい系における現象の観測に力点をおいた。具体的に得られた研究実績は以下の通りである。1.SnTe/Bi界面においてトポロジカル超伝導である可能性がある二次元超伝導の実現ミスフィット転位によってSnTeとBiの界面に超伝導を誘起し、トポロジカル超伝導候補物質を発見した。2.√3×√3-Bi上における平坦SnTe薄膜の作製絶縁体であるSi(111)√上の3×√3-Bi上にSnTeを成長したところ、RMS0.36nmという原子ステップに近い非常に平坦な膜が作製できた。3.トポロジカル結晶絶縁体Pb1-xSnxTe(111)薄膜における表面状態の観測。Pb1-xSnxTe:SbにおいてARPESで入射光子エネルギーに依存しない2次元バンドを観測した。また、PbTeにおいては初めて大きな2次元Rashba分裂バンドを観測した。4.トポロジカル絶縁体と強磁性体MnTeのヘテロ接合の作製とその評価トポロジカル絶縁体(BixSb1-x)2Te3と強磁性体のMnTeのヘテロ接合を作製した。磁化測定によって試料は室温以上の強磁性転移温度を持つことが分かり、低温では異常ホール効果も観測され、量子異常ホール効果に対して有望な系であることが分かった。5.Fe/SnTeに対するスピンポンピング法によるスピン注入SnTeとFeのヘテロ構造に対してマイクロ波を照射し、Fe層で磁化が歳差運動し、スピン流が誘起されてSnTe層へと注入されたことが実証された。6.Fe/SnTeにおける偏極中性子反射法による強磁性proximity効果の検証偏極中性子反射率法によってFeの強磁性のSnTeへのproximity効果について測定を行った。結果、SnTe表面から深さ3nm程度まで強磁性秩序が生じていることが分かった。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究ではトポロジカル結晶絶縁体SnTeの単層単結晶薄膜の作製を狙い、更にそれと超伝導体との接合を作製し、界面で生じる新奇物理現象を観測することを目標としている。従来、SnTe単結晶薄膜は絶縁体上へのラフネスの少ない単結晶薄膜作製が極めて難しく、10nm程度以下の薄さにすることが困難であった。またSn欠陥誘起のホールが著しく生じ、自然とヘビーなp型になるため、フェルミ準位がバルクバンドと重なり、電気伝導や角度分解光電子分光(ARPES)による表面状態観測が困難であった。単層SnTeについては理論計算から2次元トポロジカル結晶絶縁体になることが予想されているが、それらの結晶成長上の理由から実現が難しいとされていた。我々はまず、SnTe下地層のダングリングボンドをなくすため、用いる基板・下地層をSi(111)上の√3×√3-Bi構造にした。その結果、面方位が(001)のSnTe単結晶が成長した。そして従来多く用いられている基板であるBaF2に比べて表面ラフネスは1/10程度に減少した。また、リチウムのドーピングによってホールキャリアの補償にも成功し、SnTeでは報告されていない、抵抗の半導体的な温度依存性を実現した。そして、低温ではシュブニコフドハース振動も観測できたため、弱反局在効果と併せて今後より一層物性を解明することができると期待される。また、SnとPbの組成比を動かすことでPbSnTeにおいて電気的特性を変化させることにも成功した。またこの試料にSbをドープすると、有意にバルクキャリアが低減し、やがてn型になった。ARPESによってそれらの試料を観測したところ、入射フォトンエネルギーに依存しない2次元バンドの観測に成功した。これはトポロジカル表面バンドと考えられ、p型のために従来困難だった表面バンドの観測に成功したといえる。本来は√3×√3-Bi上にSnTe単層の成長を目指したが、単層が簡単にはできないため、表面ラフネスの改善の観点から研究に取り組んだ。ただそれでも、従来よりも大幅に薄い膜の作製に成功した。そしてそれらの試料において表面状態を電気伝導測定で弱反局在効果の観測を通じて確認した。また成長条件最適化に加え、電気特性の詳細な調査、ARPES観測など多岐にわたってSnTe中心物質の物性解明を着実に進めている。

3.トポロジカル結晶絶縁体Pb1-xSnxTe(111)薄膜における表面状態の観測。Pb1-xSnxTe:SbにおいてARPESで入射光子エネルギーに依存しない2次元バンドを観測した。また、PbTeにおいては初めて大きな2次元Rashba分裂バンドを観測した。4.トポロジカル絶縁体と強磁性体MnTeのヘテロ接合の作製とその評価トポロジカル絶縁体(BixSb1-x)2Te3と強磁性体のMnTeのヘテロ接合を作製した。磁化測定によって試料は室温以上の強磁性転移温度を持つことが分かり、低温では異常ホール効果も観測され、量子異常ホール効果に対して有望な系であることが分かった。5.Fe/SnTeに対するスピンポンピング法によるスピン注入SnTeとFeのヘテロ構造に対してマイクロ波を照射し、Fe層で磁化が歳差運動し、スピン流が誘起されてSnTe層へと注入されたことが実証された。6.Fe/SnTeにおける偏極中性子反射法による強磁性proximity効果の検証偏極中性子反射率法によってFeの強磁性のSnTeへのproximity効果について測定を行った。結果、SnTe表面から深さ3nm程度まで強磁性秩序が生じていることが分かった。SnTeの良質な単結晶薄膜作製には成功したので、今後はその上に様々な物質を積層して、トポロジカル(結晶)絶縁体/超伝導体などの作製に取り掛かる。トポロジカル(結晶)絶縁体と超伝導体の接合面付近にはマヨラナ粒子が出現することも理論的に予想されている。また、超伝導ギャップ中に有限の状態密度をもつような非従来型の超伝導、トポロジカル超伝導状態も実現できれば、まだ未解明な点の多い同物質群についてトポロジカル結晶絶縁体を用いることによって新たな観点を得られると期待される。トポロジカル超伝導体としては接合作製のほかに、他族元素のドーピングも視野に入れている。29年度が最終年度であるため、記入しない。
去勢抵抗性前立腺癌におけるWnt signalの生物学的意義

前年度にドキシサイクリン誘導性にβ-catenin shRNAが発現されるTR-βi細胞を用いたDNA microarray解析により、β-cateninノックダウンによる遺伝子発現低下を認めた分子Aに着目して解析を進めた。まず分子Aがβ-cateninの直接の標的遺伝子であることを確認するために、分子Aのpromotor領域を含むluciferaseコンストラクトをβ-catenin発現ベクターとともに293細胞に導入してレポーターアッセイを行なったが、レポーター活性の上昇を認めなかった。理由として、β-catenin/TCF複合体が結合部位がコンストラクトに用いたpromotor配列の外側に存在することが考えられた。また、β-catenin-shRNA発現ベクターと分子A発現ベクターを種々の組み合わせでLNCaP細胞に導入し、colony formation assayを行なった。β-catenin-shRNA発現ベクターによりcolony formationの抑制を認めたが、分子A発現ベクターの共発現によるcolony formation抑制の回復を認める結果には至らなかった。去勢抵抗性前立腺癌(CRPC)におけるWntシグナルの異常活性化は重要な細胞内イベントであると考えられ、同シグナルのkey mediatorでありCRPCで実際に異常貯留しているβ-cateninを標的とすることで、CRPCに対する新たな治療戦略が構築できることが期待される。β-cateninはTCF/LEFを始めとする転写因子を活性化させるため、ヒト去勢抵抗性前立腺癌細胞株PC-3及びDU145に対するsiRNAによるβ-cateninノックダウンを行い、DNAマイクロアレイ解析(Agilent社SurePrint G3 Human GE Microarray 8x60K v3.)を施行、β-cateninノックダウンにより発現低下する遺伝子に注目した。この解析によって、1細胞増殖・細胞周期、2抗アポトーシス・薬剤耐性などを制御する遺伝子群の発現低下を認めた。またヒト前立腺癌細胞株であるLNCaP由来のTR-βi細胞を使用し、ドキシサイクリン処理下(β-cateninノックダウン)と無処理(ノックダウン無し)サンプルより抽出したmRNAを用いて、同様にアレイ解析を行い、同様の遺伝子発現低下を認めた。この中で、細胞周期と抗アポトーシスの双方を制御する分子Aに着目し、そのsiRNAノックダウンを行なったところ、β-cateninノックダウンと同様に上記前立腺癌細胞株の増殖を著明に抑制することを既に見出した。さらに、これらのノックダウン処理は、ドセタキセルによる前立腺癌細胞株の殺細胞効果を増強させた。前立腺癌細胞株を用いたDNAマイクロアレイ解析により1細胞増殖・細胞周期、2抗アポトーシス・薬剤耐性などを制御する遺伝子群の発現低下を認めており、これらが前立腺癌細胞におけるβ-cateninの標的遺伝子である可能性が示唆された。これは今まで論文等で報告されていない新しい知見を含んでいる。さらに、その中の分子Aについては、前立腺癌細胞における生物学的役割の一端を明らかに出来ており、本研究課題は概ね順調に進行していると考えられる。上記分子Aの前立腺癌細胞における細胞増殖・細胞周期・抗アポトーシス・薬剤耐性の制御機序について、詳細な分子メカニズムを解析していく。またβ-cateninノックダウンによって発現低下を認めた他の分子についても、分子Aと同様に解析を進めていく予定である。マイクロアレイ解析の外注や試薬購入が当初の予定よりも低コストで可能であったため。導入効率の高いトランスフェクション用試薬や各種実験系に必要な抗体の購入に使用する予定である。
新規遺伝子編集ツールを用いた癌細胞の作製

本研究では高発癌を特徴としPTCH1を疾患責任遺伝子とする優性遺伝病である母斑基底細胞癌症候群(NBCCS)患者由来細胞に対して、残存しているPTCH1正常アレルに遺伝子編集ツールであるCRISPR/Cas9システムを利用してセカンドヒットに相当する変異を導入したiPS細胞を作製し、マウスに移植後腫瘍形成能を解析することを目的とした。これまでの予備実験等を踏まえて、当研究室に蓄積されたNBCCS症例のうち比較的単純な遺伝子変異を持ついくつかの症例を対象として患者由来細胞に対して遺伝子編集を行い、最終的にPTCH1遺伝子2アレルに変異を持つiPS細胞を複数クローン樹立した。またこれと並行して、同症例を用いて変異PTCH1アレルを正常配列に修復したiPS細胞を複数クローン樹立した。PTCH1遺伝子の2アレルに変異を持つiPS細胞と親株である患者由来iPS細胞を用いて生化学的解析を行ったところ、PTCH1(-/-) iPS細胞は細胞増殖能が亢進しており、ソニックヘッジホッグ(SHH)シグナル伝達系標的遺伝子の発現量も上昇していることが、それぞれMTSアッセイおよびRT-qPCRの結果明らかとなった。NBCCS患者由来iPS細胞は正常人由来iPS細胞と比べ、増殖能およびSHHシグナル伝達系標的遺伝子の発現量に有意差がないことが明らかとなっているが、本研究の結果から、PTHC1の機能が完全に失われることで細胞増殖能とSHHシグナル伝達系標的遺伝子の発現量が共に亢進することが明らかとなった。これはがん発生の2 hit仮説に矛盾しない結果である。現在これらのiPS細胞株をマウスの皮下に移植して腫瘍形成能を解析中である。本研究課題の大きな山の一つが遺伝子編集済みiPS細胞クローンの樹立である。この点に関して、当研究室に蓄積されたNBCCS症例のうち複数で実行可能であったことから、研究計画はおおむね順調に進展していると考える。近年iPS細胞を様々な組織の細胞に分化誘導する方法が確立されつつあり、その一つにケラチノサイトへの分化誘導を経た皮膚の3次元培養法がある。本研究課題の対象であるNBCCS症候群では髄芽腫および基底細胞癌の好発が特徴であり、それらの癌を患者由来iPS細胞を用いて再現することが研究目的である。そこで追加の研究計画として、遺伝子編集を行ったiPS細胞に対してケラチノサイトへの分化誘導を行い、皮膚3次元培養を経て基底細胞癌の再現が可能であるかを並行して進行中である。本研究計画は順調に進展中であり、当初予定研究費をおおむね使用した(99.3%)。本研究で使用しているiPS細胞の継代・維持に使用する培地・試薬類は比較的高額なものが多く、次年度は研究計画書に記載したiPS細胞のマウスへの移植実験に加えて、in vitro分化誘導法による皮膚の3次元培養を行うことから、購入するに足らない残額は次年度使用額としてそれらの培地・試薬類の購入に充てたほうが良いと判断した。
閉塞監視機能を備えたマイクロ流体分配デバイスの設計

マイクロリアクタによる物質生産の実現に向けて,“処理量増大のための装置並列化法"や“安定運転のためのモニタリング手法"の開発が重要である。本研究では「閉塞監視機能を備えたマイクロ流体分配デバイスの設計」を目的とした。昨年度までは単相流を対象とした。直管路の完全発達層流を仮定した単位モデルを結合して構築した流動モデルを用い,流体分配装置の設計手法を開発した。リアクタ並列数,閉塞数(単一or複数),流体分配構造,処理量,(圧力or流量)センサ数が与えられたとき,正常時に等流量分配を達成し,閉塞時に閉塞検出性能を最大化するように,流体分配装置の流路抵抗およびセンサ位置を導出する問題を組合せ最適化問題として定式化した。その応用として5並列カップリング反応プロセスを設計・構築し,正常時の等流量分配性(誤差5%以下)と90分の安定した連続運転を確認し,閉塞検出性と反応成績の関係を定量的に評価し,開発した手法の有用性・必要性を実証した。最終年度は系を単相流から多相流に拡張した。流体圧縮性などに由来する不安定流動が正常時に観察されたため,その解決に取り組んだ。構築した流動モデルとスラグ生成モデルを組合せてシミュレーションを行い,実験で観測された不安定流動を再現した。次に,設計・操作条件と流動安定性の関係を整理し,それに基づいて安定操作を実現する流体分配部の設計指針を提示した。以上の成果をもとに並列リアクタシステムの設計論と操作論の体系化に展開していく。マイクロ化学プロセスの重要課題である閉塞を検出・診断できる機能を備えた装置並列化による生産量増大いう考え方は他に類を見ない本研究の特色である。その実用に向け,流体分配構造・流路抵抗・センサ位置の最適化を図るアルゴリズムを開発し,計測・制御のし易さを評価に加えた装置設計に取り組んだ本研究は極めて独創的であり意義深い。初年度(H27年度)は,均一相の流体分配を例にとり,モデルの構築,構築したモデルに基づく最適設計手法を開発した。それらの有効性を実験とシミュレーションの両面から検証した。<1.流体分配部の流動モデルの開発>流体分配部の流動パターンは圧力バランスによって支配される。直管路の完全発達層流を仮定し,設計・操作条件(流路幅・深さ・長さ,流速,物性)と圧力損失の関係を表す単位モデルを作成した。そして,単位モデル同士を結合して流体分配部の流動パターンを表現する全体モデルを構築した。数値流体力学シミュレーション結果と照らし合わせて,開発したモデルの妥当性を確認した。<2.最適化問題の定式化>リアクタの並列化数,流体分配構造,処理量,利用可能な流量/圧力センサ数が与えられたとき,正常運転時に等流量分配を達成し,かつ,閉塞診断性能を最大化するように,流体分配部の流路サイズおよび流量/圧力センサ位置を最適化する問題を組み合わせ最適化問題として定式化した。定式化の後,multistart scatter search付き非線形ソルバを活用し,効率的に最適解を導出した。<3.実験検証用プラントの作製と提案法の有効性評価>設計結果を反映したデバイスを作製し,流量/圧力センサ・配管・継手・バルブを用いて実験検証用プロセスを作製した。定常特性(例えば,流体均等分配性)および閉塞診断特性(バルブの開閉により閉塞を摸擬)を評価した。研究目的の達成に向け,初年度(H27年度)に掲げた研究実施計画通り,順調に進展している。研究実績欄に記載したことに加えて,「流体分配部の流動モデルの開発」においては,並列数を与えれば流体分配部の流動モデルを自動生成できるように工夫を図った。さらに,「最適化問題の定式化」においては,リアクタの単一閉塞,さらには複数閉塞に対する診断手法について検討し,物理的考察を加える(測定値の変化量ベクトルの向きを考慮する)ことで閉塞リアクタ群の候補を効率的に絞り,診断成功率を向上させることに成功した。また,「実験検証用プラントの作製と提案法の有効性評価」において,鈴木カップリング反応を対象とした5並列プロセスを構築し,90分の連続運転,閉塞診断手法の有効性を確認した。このように,研究実施計画の項目をクリアし,次年度の計画に踏み込んだ成果も出すことができている。以上より,区分(2)を選択した。H27年度に得られた結果を基にして,H28年度(2年目)は,液系/固液系のリアクタを並列化したモデルプラントを対象に,単一/複数のリアクタ閉塞を検出・診断可能な並列化構造における流体分配部の流路抵抗とセンサ位置の最適設計を行った。また,プロセス全体の圧力損失に対してリアクタ並列部の差圧が支配的である場合,連続運転を停止することなく閉塞状態から正常状態へ回復する操作が可能であるという既往の成果を踏まえて,圧力損失制約を考慮した最適設計アルゴリズムを開発した。何れにおいても実験検証用プロセスを製作し,開発した手法の有効性を確認した。さらに,複数リアクタの閉塞検出・診断において,流体分配部の流路構造やセンサの違いが,診断性能に与える影響をケーススタディにより検討した結果,分合式流体分配構造と流量センサを用いたときに測定誤差に対するロバスト性が最も高くなることを明らかにした。開発した手法の適用対象を並列気液スラグ流プロセスへ拡張することを目指し,矩形流路からなるT字混合器を用いた気液スラグ流生成プロセスのスラグ長さ予測モデルを構築した。混合器内の気液界面挙動をマイクロスコープで観察すると共に,設計・操作変数がスラグ長さに及ぼす影響を定量的に評価した。

その結果に基づき,流路サイズと流量を入力とし,スラグ長さを出力とするモデルを開発した。同モデルは,モデルパラメータを少数の実験データから同定し,装置設計に利用可能である。構築したスラグ長さ予測モデルとH27年度に開発した流体分配器の流動モデルを組み合わせることにより,運転状態監視機能を備えた並列気液スラグ流プロセスの設計論と操作論の体系化に展開していくことが可能になった。研究目的の達成に向け,H28年度(2年目)に掲げた研究実施計画通り,順調に進展している。昨年度構築したカップリング反応を対象とした5並列プロセスにおいて,正常時の流体均等分配性(平均流量からの誤差10%)を改善すべく,リアクタとして用いた触媒固定化モノリス充填カラムを再生し,プロセスの再設計を行い,正常時の流体均等分配性の向上(誤差5%に改善),連続運転の安定性を確認すると共に,昨年度実施できていなかった各リアクタ閉塞時の閉塞検出・診断性と反応成績の関係を定量的に評価し,提案手法の有用性・必要性を実証した。そして,リアクタ閉塞時,プロセス全体のシャットダウン・スタートアップといった複雑な操作を行うことなく,プロセス全体の連続運転を継続したまま,閉塞の検出・診断・回復の一連の操作を実現できる操作法の有用性も実証した。また,複数リアクタの閉塞検出・診断手法において,流体分配構造(分合式,マニホールド式),利用可能なセンサ(圧力センサ,流量センサ)のどの組み合わせが閉塞リアクタ特定に有利であるかについて検討し,測定値に,平均が0,標準偏差が正常値の1 %程度の正規分布に従う誤差があるとき,分合式と流量センサを用いた場合は閉塞リアクタ特定成功率が99 %以上となったのに対し,その他の組み合わせを用いた場合の閉塞リアクタ特定成功率はいずれも90 %を下回ることを示した。さらに,並列気液スラグ流プロセスの混相系を対象とした検討では,気液スラグ長さ予測モデルを物理モデルベースで構築し,モデルパラメータを実験データから決定することでモデルの精度を向上させることに成功した。このように,研究実施計画の項目をクリアし,最終年度の計画に踏み込んだ成果も出すことができている。以上より,区分(2)を選択した。[1]複数リアクタ閉塞診断において,リアクタ並列数を5から10に増やし,昨年度までに構築した設計法および診断法の有用性を検証した。検証用ケーススタディでは3リアクタが閉塞するシナリオを複数用意し,従来法より構築した手法の方が高い閉塞箇所特定成功率を示したことから,その有用性を確認することができた。[2]並列リアクタの閉塞を診断の対象としていた昨年度までの手法を拡張すべく,閉塞が並列リアクタと分合式流体分配装置(SRFD)のどちらで生じているのかを区別可能な方法を開発した。開発した方法では,SRFD内圧力計(P0)とSRFD入口圧力計(P1)を用いる。リアクタ閉塞の場合はP0とP1の両方が大きな影響を受け,SRFD内流路閉塞の場合はP0の方がより大きな影響を受ける。この影響の違いを利用して閉塞箇所を区別する方法の有用性をケーススタディにより確認した。[3]並列化された多段混合反応系を対象とし,流体等量分配と計測・制御のし易さを考慮した流体分配装置を設計した。
末梢血線維細胞の機能解析による気道リモデリングの危険因子の同定と予防法の検討

気道の慢性炎症ではリモデリングによる構造変化を伴うことが多い。気管支喘息では気管支に生じるリモデリングが遷延する呼吸機能低下の一因になると考えらており、リモデリング発症の危険因子を同定することは、喘息重症化の対策を講じる上で重要となる。気道リモデリングには様々なサイトカインや成長因子が関与することが報告されている。喘息患者の気道で増加しているロイコトリエン(LT)やエンドセリン-1(ET-1)もリモデリングに関与することが示唆されているが、その相互作用については明らかになっていない。そこで、ヒト肺正常線維芽細胞を用いてその相互作用の解析を行った。その結果、エンドセリン-1で線維芽細胞を刺激するとシステイニルロイコトリエンレセプター(CysLTR)のmRNA、蛋白の発現増強が認められた。10^<-7>MのLTD4はET-1で刺激された線維芽細胞のα-平滑筋アクチン、カルポニンの発現を増強し筋線維芽細胞への分化を促進したが、ET-1刺激を受けていない線維芽細胞の分化には影響を与えなかった。ET-1刺激は内因性のTGF-β1産生を増強したが、内因性のTGF-b1はET-1による分化誘導には関与していないと考えられた。LTD4はET-1刺激を受けた線維芽細胞のマトリックスメタロプロテナーゼ2産生とI型コラーゲン産生を増強した。CysLTR1の選択的阻害剤はLTD4の効果を抑制した。これらの結果から、LTD4はET-1により惹起される気道リモデリングをさらに増悪すること、CysLTR1の選択的阻害剤は細胞外基質の過剰な分解を抑制するのに有用であることが示唆された。また、CysLTRの発現誘導とLTD4に対する反応性は、気道リモデリングに関与する因子の役割を解析する上で有用なマーカーと考えられ、末梢血線維細胞を用いてのハイリスク患者の同定への応用が期待された。アレルギー性気道炎症における気道リモデリングへの関与が報告されている線維細胞の性状を解析するためのin vitroの測定系の樹立を行った。その結果、従来報告されていたヒト末梢血単核球から線維細胞を培養する方法では、回収可能な線維細胞数が極めてすくないこと、さらに線維細胞のなかに血管内皮細胞へと分化した細胞が混入することが明らかとなった。そこで培養条件を検討し、フィブロネクチンをコートした培養プレート上で単核細胞を培養することが細胞の回収率を上げる上で重要であり、PDGFを培養開始早期から添加することが有用であることが明らかとなった。また、IL-1の添加では細胞回収率は増加するものの線維細胞への分化が抑制され単球が多くなること、VEGFの添加では線維細胞の回収量が増加するが血管内皮細胞の形質を示す細胞の割合も増加することが明らかとなった。PDGF存在下で誘導される線維細胞は、無添加の培養条件下で誘導される線維細胞よりα-smooth muscle actinの発現量が強く、さらにTGF-βの添加によりその発現が増強することが確認された。また、アレルギー性気道炎症でリモデリングに関わるサイトカインと考えられているIL-13によりα-smooth muscle actinの発現が増強することが確認された。これらの結果から気管支生検を実施することが困難な小児でも、末梢血から線維細胞を回収しその機能を解析することが可能となった。

気管支喘息では気管支に生じるリモデリングが遷延する呼吸機能低下の一因になると考えらており、リモデリング発症の危険因子を同定することが、喘息重症化の予防となる。気道リモデリングには様々なサイトカインや成長因子が関与することが報告されている。喘息患者の気道で増加しているロイコトリエン(LT)やエンドセリン-1(ET-1)もリモデリングに関与することが示唆されているが、その相互作用については明らかになっていない。そこで、ヒト肺正常線維芽細胞を用いてその相互作用の解析を行った。その結果、エンドセリン-1で線維芽細胞を刺激するとシステイニルロイコトリエンレセプター(CysLTR)のmRNA、蛋白の発現増強が認められた。10^<-7>MのLTD4はET-1で刺激された線維芽細胞のα-平滑筋アクチン、カルポニンの発現を増強し筋線維芽細胞への分化を促進したが、ET-1刺激を受けていない線維芽細胞の分化には影響を与えなかった。ET-1刺激は内因性のTGF-b1産生を増強したが、内因性のTGF-b1はET-1による分化誘導には関与していないと考えられた。LTD4はET-1刺激を受けた線維芽細胞のマトリックスメタロプロテナーゼ2産生とI型コラーゲン産生を増強した。CysLTR1の選択的阻害剤はLTD4の効果を抑制した。これらの結果から、LTD4はET-1により惹起される気道リモデリングをさらに増悪すること、CysLTR1の選択的阻害剤は細胞外基質の過剰な分解を抑制するのに有用であることが示唆された。また、CysLTRの発現誘導とLTD4に対する反応性は、気道リモデリングに関与する因子の役割を解析する上で有用なマーカーと考えられ、末梢血線維細胞を用いてのハイリスク患者の同定への応用が期待された。
「ペルシア語化」の諸相に関する類型論的研究―ワヒー語とクルド語の事例を中心に

1)ゴジャール・ワヒー語を中心とした,ワヒー語下位変種間の文法形態上の差異を詳細に記録した上で,格標示システムを中心とした形態上の相違の実態を明らかにする。2)同じく下位変種間で異なる文法形態を示すクルド語について,特に格標示を中心に,その中間形も含めて精緻に記録する。3)上の事例から,両言語の変種間に認められる形態・構造上の差異についての類似点を抽出し,「ペルシア語化」との関連性より考察する。4)イラン諸語における言語構造上の通時的変化について,上の考察結果を援用して考究を続け,5)可能であれば,一連の成果を,類型論的視座に立った,アラインメントに見られる変化モデルの一事例として提供する。