hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヨードフルオロカーボン類と硝酸ラジカルの反応過程とヨウ素置換効果の解明

一方、4種のヨードフルオロカーボン類に対して紫外可視領域の吸収スペクトル測定と吸収断面積の決定なども行うことにより、太陽光分解によるそれらヨードフルオロカーボン類の大気除去速度も求めた。結果として、これらのヨードフルオロカーボン類が大気中に放出された際,太陽光分解により数十数百時間で大気中より除去されることがわかった。一般的に地表で放出された化学物質が成層圏に到着するまでには1カ月程度かかると言われている。このことより,これら4種のヨードフルオロカーボン類は大気中に放出しても,成層圏オゾンの破壊に繋がらないことを本研究で明らかにした。ヨードフルオロカーボン類(IFCs)は,近年注目を集めている新規代替フロンであり,その大気除去過程を調べることは非常に重要である。本研究では,IFCsのうちCF2HI,CF3CH2I,CF3(CH2)2I,CF3(CH2)3Iに対して,硝酸ラジカル(NO3)との反応の測定と速度定数の決定を行った。その結果,これらのIFCsが大気中に放出された際,NO3により約数十時間で大気中より除去されることがわかった。また,これらIFCsに対して吸収スペクトル測定と吸収断面積の決定も行った。結果として,これらIFCsが大気中に放出された際,太陽光分解により数十数百時間で大気中より除去されることがわかった。本年度は,本研究の主要な目的であるNO3との反応速度定数の決定について,CF2HIとCF3(CH2)2CH2Iの2つのヨードフルオロカーボンに対して速度定数の決定を行うことができた。これらの速度定数はこれまでに報告されておらず,これらのヨードフルオロカーボンの大気へ与える影響を見積もるためには,この速度定数が必要であり,本研究により初めてCF2HIとCF3(CH2)2CH2Iが成層圏オゾン破壊に与える影響を見積もれた。この点に関して考えると研究は非常に良く進展していると考えられる。ただ,当初の計画で考えていた長光路ガスセルフーリエ変換赤外分光法装置(LP-FTIR装置)を用い反応生成物の解析・同定に関してはあまり進展していないため,上記の点の進展度合いも合わせて考えると総合的には順調に進んでいると状態であると考えられる。化学反応速度論平成27年度では,引き続き他のヨードフルオロカーボン類に対しても,TR-CRDS装置を用いてNO3との反応速度定数の測定を行う。また,LP-FTIR装置を用い反応生成物の解析・同定も行い,それらのデータからの反応機構の推定も行う。以上の結果が揃い次第,ヨードフルオロカーボン類とNO3との反応における反応性に対するヨードフルオロカーボン類へのヨウ素置換の特異的な効果のメカニズムの系統的な解明を試みる。「研究実績の概要」にも書いたが,測定目的の反応が研究計画当初で考えていた測定法では測定することが困難であることが実際に測定してみて初めてわかったため,当初の予定になかった新たな測定法の開発とその測定法の妥当性の検証を行う必要が出てきた。本年度はそれに関わる作業を主に行うこととなったため,目的の反応を測定に関しては,あまり順調な進捗したとはいえないかもしれないが,今年度に開発したLP-FTIR装置を用いた同時多成分濃度解析と化学反応シミュレーションを組み合わせた速度定数決定法は,かなりいろんな反応に対して応用が可能となるような測定法であるので,今後の研究全体を進めるにあたり非常にプラスとなる研究成果が得られたともいえる。今年度の研究費に関しては当初の計画通りに遂行できたのが,物品の価格変動の影響など次年度に使用する研究費として千円強の次年度使用額が生じた。
甲状腺ホルモン(T_3)の遺伝子調節機構についての研究

血中SHBG濃度の基準範囲は広く、性、年令によって左右されるが、今回測定した甲状腺機能亢進症患者26例、低下症患者54例、健常者53例の血中SHBG濃度も甲状腺ホルモン(FT4)値と有意の正相関を示した。さらに、血中SHBG濃度測定の臨床的意義を検討するために、Autonomous Functioning Thyroid Nodule(AFTN)を有する患者の各症例毎の手術前、手術後の血中SHBG濃度を測定すると、血中SHBG濃度測定は甲状腺ホルモン作用の末梢における鋭敏な一指標として、手術時期の考慮も含めた臨床評価の一助に活用し得ると考えられた。これら甲状腺ホルモンを含めたhSHBG遺伝子制御をより直接的に評価するため、hSHBG遺伝子のプロモーター領域のクローニングを開始した.即ち,hSHBG遺伝子のプロモーター領域のスクリーニングをヒトgDNA Cosmid Library(Lorist2)を用いて行った.hSHBG遺伝子のエクソン1および1'に相補的なプライマーP1(32mer),P2(33mer)をスクリーニングのprobeとして用い,7個のpositive cloneを得た.これらを制限酵素を用いて消化し,同probeを用いたsouthern blottingを行った結果、異なる長さのプロモーター領域を有すると考えられる2つのclone(phSHBG-2,-5)が得られた。まず、このclone(phSHBG-2,-5)について、Cosmid Mapping Kitを用いて、より詳細なvector近傍からのrestiction mapを作成した。その結果、より長い上流を有していると考えられたphSHBG-5を、pUC(Bam HI site或いはHind III siteに)にsubcloningし直した。Bam HI或いはHind IIIにてこのcloneを消化後、religationし(*)、これらcloneを以前に作成したprobe P2にてscreeningし8ケのcloneを得た。その内、最もpurityの高いと考えられたclone82(Bam HI siteにsubclone),80(Hind III siteにsubclone)をprobe P2を用いてsouthern blotting解析を行った結果、これらcloneは上流約0.5Kbしか含まれていなかった。そこで、restriction map上、近位プロモーターに最隣接する2.2Kb,4.4Kb Hind III切断fragmentを得るために、元のphSHBG-5をHind IIIで消化後、agarose gelからこのfragmentを切り出し、DNAを抽出し、subclooningした(phSHBG-HI,H2)。また、近位プロモーターに最隣接するBam HI fragment 6.5Kbを得るために、先にpUCのBam HI siteにsubcloningされ、Bam HIで消化後religationしたpUC(*)をscreeningし、6.5Kbを含むclone(phSHBG-B1)を得た。以上より、hSHBGのgDNAのプロモーター領域約7Kbのcloningが完了した。今後、このcloneの詳細な解析を行う予定である。

また、近位プロモーターに最隣接するBam HI fragment 6.5Kbを得るために、先にpUCのBam HI siteにsubcloningされ、Bam HIで消化後religationしたpUC(*)をscreeningし、6.5Kbを含むclone(phSHBG-B1)を得た。以上より、hSHBGのgDNAのプロモーター領域約7Kbのcloningが完了した。今後、このcloneの詳細な解析を行う予定である。1) Wistar rat testisより、グアニジウムチオシアネートを用い、total RNAを抽出した。Rat ABP cDNAに相補的に合成オリゴヌクレオチド(PA:5'-GACACATTGACCCTATCCAG-3',PB:5'-GTGGGAGGTGTGGGTATCATT-3')をDNA synthesizer(Model 380B: applied biosystem,USA)を用いて作成した。ラットtestis total RNAから、ABPに特異的な最も3'側のプライマーPBを用い、M-MLV reverse transcriptaseにてRT-PCRを行い、ABP single strand cDNAを作成後、対プライマー(PA&PB)を使用し、2本鎖ABP cDNA(1221bp)を作成した。このcDNAをTA cloning kitを用い、pGEM vectorのPst I cloning siteに挿入しsubcloningを行い、約0.7mgのrat ABP cDNAを得た。2)ラット肝に対する甲状腺ホルモン、副腎ホルモンの影響を検討するため、male wistar rat 9匹を、副腎摘出群、副腎摘出+甲状腺ホルモン添加群、副腎摘出+甲状腺ホルモン+デキサメサゾン投与群の三群に分け、摘出ラット肝より上記同様の方法でtotal RNAを抽出した。さらに、ラットtestis,brainから抽出したtotal RNAをコントロールとして、glyoxal法にて電気泳動後、Northernblotting解析にて検討中である。直接的にヒトSHBG遺伝子制御を評価するため,ヒトSHBG遺伝子のプロモーター領域のクローニングを開始した.即ち,hSHBG遺伝子のプロモーター領域のスクリーニングをヒトgDNA Cosmid Library(Lorist 2)を用いて行った.
スポーツ外傷・障害に対する多血小板血漿療法の治療効果規定因子の解析

スポーツ選手が多血小板血漿(PRP)療法をうけたとの報道をよく耳にする。PRPは、自分の血液を遠心分離し調製した血小板を多く含む血漿を患部に注射する低侵襲新規治療で、PRPに含まれる成長因子などが組織修復や除痛効果をもたらし傷んだ組織の修復を促進する。PRPは自己由来のため副作用がほとんどないが、その質は個人ごとに異なり治療効果も個人により異なる。本研究では、運動器外傷・障害に対するPRP療法の有効性を左右する因子を明らかにするために、PRPの質の評価を行うとともに効果の判定を主観的な評価だけでなく客観的評価も加えて行い、より奏効率の高いPRP療法を確立することを目標とする。
単一方向光ビーム走査器によるピコ秒光信号処理

高速で光ビームを掃引することは,光制御のうちでも最も基本的なものの一つである.数十ギガヘルツ以上の周波数で光ビームを制御できる光偏向器が実現できれば,さまざまな超高速光制御が可能と考えられるが,そのような偏向器について従来はほとんど研究がなされていない.本研究者らは,電気光学効果によるマイクロ波空間変調を利用することによって超高速の光偏向を実現するという方法を提案した.この光空間変調器は十数GHzの高繰り返しで,光ビームを一方向にのみ走査できるという特長がある.そこで,以下のように研究を進めた.1)進行波位相格子形光変調器の試作位相格子変調器をLiTaO_3を用いて設計・試作した.幅広のストリップラインを用いたマイクロ波共振器構成とした.2)単一方向光ビーム走査実験試作変調器を用いて実験を行った.変調周波数は16GHzである.周波数成分を分離した面上で振幅調整を行い,単一方向に光ビームが走査されていることをストリークカメラを用いて確認した.3)分極反転を用いた光偏向器の検討マイクロ波による進行波位相格子を用いた偏向器では,動作周波数が10GHzよりも低いものを実現することは困難であることが判明した.そこで電気光学結晶の分極反転技術を利用することによって光偏向器を実現するという方法を新たに考案し,予備実験を行った.4)新しい光空間制御方式の検討電気光学結晶中の任意部分の結晶軸を反転させ,さまざまな形状に加工できることがわかった.この技術と進行波位相格子を組み合わせると,従来にない超高速光空間制御が実現できるものと考えられ,今後の発展が期待される.高速で光ビームを掃引することは,光制御のうちでも最も基本的なものの一つである.数十ギガヘルツ以上の周波数で光ビームを制御できる光偏向器が実現できれば,さまざまな超高速光制御が可能と考えられるが,そのような偏向器について従来はほとんど研究がなされていない.本研究者らは,電気光学効果によるマイクロ波空間変調を利用することによって超高速の光偏向を実現するという方法を提案した.この光空間変調器は十数GHzの高繰り返しで,光ビームを一方向にのみ走査できるという特長がある.そこで,以下のように研究を進めた.1)進行波位相格子形光変調器の試作位相格子変調器をLiTaO_3を用いて設計・試作した.幅広のストリップラインを用いたマイクロ波共振器構成とした.2)単一方向光ビーム走査実験試作変調器を用いて実験を行った.変調周波数は16GHzである.周波数成分を分離した面上で振幅調整を行い,単一方向に光ビームが走査されていることをストリークカメラを用いて確認した.3)分極反転を用いた光偏向器の検討マイクロ波による進行波位相格子を用いた偏向器では,動作周波数が10GHzよりも低いものを実現することは困難であることが判明した.そこで電気光学結晶の分極反転技術を利用することによって光偏向器を実現するという方法を新たに考案し,予備実験を行った.4)新しい光空間制御方式の検討電気光学結晶中の任意部分の結晶軸を反転させ,さまざまな形状に加工できることがわかった.この技術と進行波位相格子を組み合わせると,従来にない超高速光空間制御が実現できるものと考えられ,今後の発展が期待される.
日中双方の留学生における異文化適応に関する通時的研究

中国人が日本留学を目指して、1978年の改革開放政策以来、30年近くたった。日本政府の10万人留学生受け入れ政策と相まって、中国人留学生は外国人留学生の中の最大ループにまで成長した。一方、日中関係の緊密化につれて、日本人の中国留学も盛んになり、中国で学習する留学生の中で、2番目に大きいグループになっている。人数のみならず、留学生を取巻く環境、留学生のニーズも多様化してきた。留学生の多様化と共に、彼らが直面している異文化適応の問題も複雑になり、多岐にわたっている。新時代における日中双方留学生の異文化適応の実態解明が、本研究の目的である。本研究の特色は以下の3点である。先ずは、双方向性である。日中双方の留学生に同時に調査を行い、その留学実践を相対化したため、より客観的な評価が出来た。2つ目は縦断的調査を3年間継続したため、異文化適応の過程を日々の変化としてとらえることができた。3番目は参加型の研究である。研究グループの全員が留学生教育や留学業務の担当者であり、留学生の受入れと送り出し双方の仕事に携わっている。また、調査対象も、ただ受動的な被験者だけではない。データを提供すると同時に、留学政策の提言者にもなっている。調査側と調査される側の協働的作用により、信頼関係が生まれ、データに信憑性をもたらした。本研究の主な成果は以下の3点である。まずは、3年間の調査を通じて、アンケート、留学日記、インタビュー及び国際学生座談会記録など膨大な基礎資料を蓄積してきた。そして、初期の留学第1世代と比較しながら、今の留学第2世代が直面している問題点と彼らの適応戦略を分析し、その実態を解明した。さらに、日中大学間のダブルディグリープログラムの実践に焦点を当て、日中留学の新しい試みをリアルタイムで検証した。これらの成果は今後の留学生研究に大いに活用されることが期待できる。今年度は研究初年度のため、研究組織の強化、データの収集やデータベースの構築に重点を置いた。(1)研究組織の拡大日中双方の留学生文化適応の実態をより確実に把握するために、北京大学国際関係学院と早稲田大学北京事務所スタッフの協力を得られ、研究組織を現在の3人から5人に拡大、国際共同研究の体制を整えた。(2)ネットワークの形成留学生自身が研究対象のみならず研究の主体でもある。そのために日中留学生のネットワーク作りが必須条件である。2005年春学期に遠隔授業などを通して双方の留学予定者の連帯をつくり、秋学期留学実施後もこのネットワークを活用し、次年度の留学予定者との交流を始めた。(3)データの収集留学前研修や留学中の成績及び生活実態の把握など客観的数値(A)と留学生自身の目で見た異文化や自分自身に起きた文化変容に対する自省など主観的数値(B)を収集始めた。前者は主に担当教職員から得たもので総じて把握しやすい。後者は留学生のインタビューや日記・旅行記及び取材ビデオなどから整理されたもので、資料が膨大のため、数値化するには工夫が必要である。現時点では、約40名計40万字の文字資料を蓄積している。(4)データベースの構築収集したデータを留学時期、形態、場所別に整理し、グループ別に検索可能なデータベースを構築している。将来には約100人計1000万字のデータを瞬時に検索可能なものにする予定である。学会発表予備調査で得られた資料を利用して、日本華僑・華人学会の全国大会で研究発表し、留学生と在日華人コミュニティとの相関について論じた。

その内容は当学会誌『華僑・華人研究』に投稿中。平成18年度は本研究の中間年度にあたり、新たな資料の収集と平行して、資料データの整理、研究発表の準備に重点を置き、以下(1)(5)を実施し、研究をすすめてきた。(2)留学生日記の収集と整理これまで収集した40名ほどの留学生日記500篇ほどを留学コース別、個人別に整理を行った。北京大学・上海の復旦大学と早稲田大学の双学位コースの交換留学生の目記については、類型化分析に着手した。(2)インタビューの実施双学位コースの第1期中国人留学生、および新たに来目した第2期生に、アンケートおよびインタビューを行った。特に留学キャリアの形成と留学後の進路との相関分析を行っている。(3)追跡調査の実施(1)中国入留学生の留学後の状況を把握するため、上海の復旦大学などに研究出張し、彼らの帰国後の生活や将来の進路について調査を行った。また中国から帰国した目本人学生にも、同様のインタビューを行い、比較研究のデータとして蓄積した。日中双方の留学生における異文化適応の相違が、留学後の進路決走に影響する傾向が確認されつつある。(4)追跡調査の実施(2)日本に留学したものの、そこから欧米諸国に「再留学」する中国人留学生が多い。この「再留学」の動機と現状を調査するため、カナダの大学を訪問調査した。日本とは異なる、カナダの自治体や大学の留学生受け入れ体制について考察を行った。(5)シンポジウムでの研究発表昨年早稲田大学で開催された第8回日本言語政策学会で「留学と言語政策-早稲田大学国際教養学部での試み-」と題して、収集したデータの一部を紹介した。以上の研究過程を踏まえ、最終年度である19年度では、国際シンポジウムでの研究発表を計画している.データ分析を進め、研究報告書の作成に向けて準備をすすめていく。さらに、データ公開に際して、個人情報保護の視点に基づきながら慎重にデータチェックを心掛ける。本研究では、日中双方の留学生における異文化適応プロセスを三年間縦断的に調査した。留学日記、インタビューなどの基礎資料から日常生活、学業、就職、社会適応などの側面に関る重要なキーワードを抽出し、データーベースを構築した。それに基づき類型化分析を行い、主に以下の成果を得られた:(1)初年度は主に早大国際教養学部の中国人留学生を対象とし、英語の授業を中心とした当学部の留学生と従来型の留学生を比較研究した。異なるタイプの留学生の生活適応、学業遂行における特徴を分析し、その結果を「日中留学生の文化変容における言語環境の要因」としてまとめ、日本言語政策学会第8回大会(早稲田大学)で報告した。(3)最終年度は国際教養学部設立4年目にあたり、これまでの4年間は日中両国の教育環境の変換期にも重なった。目中間の留学もまた国際教育システムの一環として新たな局面に向かっている現状を踏まえ、卒業を控えた留学生のキャリヤ志向をまとめ、国際シンポジウムで発表した。本研究で蓄積した基礎資料は、今年度採択された基盤研究c「中国人留学生の言語応用能力と社会適応に関する実証的研究」でも引き続き活用したい。
Annexin Vによる細胞膜表面酸性リン脂質の定量

最近Annxin Vを利用してapoptosisを検出する技術が一般的となってきたのはAnnexin Vのphosphatidylserineに対するaffinityの高さを利用したものである。しかし単球などの細胞は可逆的に酸性リン臆質をその細胞膜表面に発現しており、凝固という観点からはprocoagulant activityの検出にもっとも良いprobeである。本研究において、病態学的には血管内凝固で主役とも言える単球のprocoagulant activityを簡便に測定できる技術を開発した。この技術はendotoxmや多くの単球活性"物質の生体に対する影響のモニタリングに適し、近年問題になっている環境ホルモンの単球、ひいては血管内凝固への影響を検討することも可能になると考える。現在、この慢性的単球活性化は血管脆弱化の一因子ではないかとの見地より因果関係を検討中である。結果:6時間のLPS刺激により63.3%の単球表面にannexin V-FITCが結合し、有意な酸性リン脂質の出現を認めたが、viabilityは保たれていた。10%エタノール刺激では52.6%の単球に酸性リン脂質の出現を認めた。また単球全体の13.9%を占めるsubpopulationが出現し、その83.9%はPI陽性であった(細胞死に相当)。結論:単球ではLPSやエタノール刺激により細胞表面にprocoagulant activityに相当する酸性リン脂質が出現した。またエタノール刺激により細胞死をきたし、その大部分の細胞に酸性リン脂質の出現をみた。LPSとエタノールによる酸性リン脂質の出現は異なった機序が想定された。本方法は個々の細胞のviabilityとprocoagulant activityの検討に有用である。その結果、単球ではLPSやエタノール刺激により細胞表面にprocoagulant activityに相当する酸性リン脂質が出現した。またエタノール刺激により細胞死を来たし、その大部分の細胞に酸性リン脂質の出現をみた。LPSとエタノールによる酸性リン脂質の出現は異なった機序が推定された。ヒト培養子宮筋腫細胞に対するGnRHaの細胞増殖抑制作用とannexin Vの関連について検討した。GnRHa添加後96時間の細胞数は、対照群に比べ有意に増殖が抑制された。細胞内annexin V濃度は、GnRHa添加後72時間で対照群に比べ有意に増加した。細胞内annexin V濃度は、PKC活性化剤であるTPA単独の添加により増加した。一方、GnRHa添加前にPKC阻害剤であるcalphostin Cで処理しておくと、細胞内annexin V濃度の増加は完全に抑制された。ヒト培養子宮筋腫細胞内において、GnRHaはPKCを介して細胞内のannexin Vを増加させることにより細胞増殖を抑制することが明らかとなった。
大動脈瘤に対する幹細胞静脈投与療法の可能性

大動脈瘤に対する治療の基本は、破裂を予防するための人工血管置換術である。しかし、時にこの治療法は侵襲が大きく、臨床現場においてリスクの高い患者への手術を躊躇する場合がある。我々は治療の低侵襲化を期待して、大動脈瘤に対する幹細胞療法(大動脈リーバースリモデリング療法)の開発を行ってきた。本研究では、この治療法の最適化を試みた。骨髄由来間葉系幹細胞の静脈内投与は大動脈瘤発症を予防した。また、大動脈瘤の治療効果も発揮したが2週間でその効力が減退した。細胞源は脂肪由来幹細胞や,皮膚線維芽細胞より、骨髄由来間葉系幹細胞の方が効果的であった。同種間葉系幹細胞を用いた治療でも、一定の効果を発揮した。1.大動脈瘤に対する骨髄由来間葉系幹細胞(BM-MSC)の静脈内投与の細胞投与量(投与回数)および投与時期による効果の差異を検討した。(1)大動脈瘤発症予防モデルによる検討:大動脈瘤誘導時にBM-MSCを投与し発症を予防した。1回投与群では大動脈瘤の発症率を抑制することができず、4回投与群では有意に発症率を抑制し、エラスチン量も多く維持され、マクロファージの発現量も少なく、マトリクスメタロプロテアーゼ(MMP)-2および9の発現も低下していた。さらに炎症性サイトカイン(IL-1b, IL-6, MCP-1)は低下し、TIMP-2やIGF-1は増加していた。4回の投与によって炎症が制御され、大動脈瘤発症予防効果が示唆された。(2)大動脈瘤治療モデルによる検討:大動脈瘤を発症したマウスに対してBM-MSCを投与した。投与2週間目で瘤発症率および瘤径の低下、炎症性のマクロファージ(M1)の減少、抗炎症性マクロファージ(M2)は増加した。しかし、4週8週となると、その効果は減弱した。同様に、MMP-2, 9の発現も2週では低下し、4週8週ではコントロールの生食投与群と差がなかった。また、2週の時点では、炎症性サイトカイン(IL-6, MCP-1)は低下し、IGF-1, TIMP-2は増加していたが、同様に4週8週ではそれぞれ、コントロールの生食投与群と差がなかった。従って、大動脈瘤に対する細胞治療は2週間程度効果が維持されることが示唆された。2.他組織由来細胞の効果と骨髄由来細胞との差異についての検討では、脂肪由来間葉系幹細胞の培養を確立し、皮下由来線維芽細胞も含めた三者での大動脈瘤治療効果を判定する研究を進めた。本研究は大動脈瘤に対する幹細胞療法の効果についての解析を行う研究であるが、以下の研究を行ったので概述する。自家移植と他家移植での治療効果の差異について:大動脈瘤モデルマウスと同系統のC57BL6マウスの大腿骨骨髄から培養した骨髄由来間葉系幹細胞(BM-MSC)をisogenic BM-MSC (以下iso-MSC)とし、同様に培養した他系統のBALB/CマウスのBM-MSCをallogenic BM-MSC(以下allo-MSC)とし、それぞれのcharacterizationをフローサイトメトリーで行ったところ、どちらもSca-1, CD29, CD44, CD90, CD106陽性、CD11b, CD34, CD45, CD80, CD86, c-kit陰性で差はなかった。また、増殖能においても両群間に差はなく、安定した細胞数を確保できた。次にin vivoで各細胞を大動脈瘤モデルマウスに尾静脈投与し2週間後に評価したところ、瘤径は生食群に比べてiso-MSC群およびallo-MSC群で有意に縮小し、iso-MSC群とallo-MSC群間で差はなかった。また、瘤形成率においても同様の結果が得られた。MMPザイモグラフィーでは、MMP-2, MMP-9活性が生食群に比べてiso-MSC群およびallo-MSC群で有意に低下した。このことから、自己のMSCだけでなく、他家のMSCでも大動脈瘤の細胞療法が可能であることが示唆された。心臓外科学(1)骨髄由来間葉系幹細胞療法による大動脈発症予防の研究成果は、多くの学会報告を行い、論文報告も行った。(2)骨髄由来間葉系幹細胞療法による大動脈治療の研究成果は、日本胸部外科学会やヨーロッパ心臓胸部外科学会で発表し、論文報告も行った。上記より、ほぼ研究は計画通り達成でき、成果発表は計画以上に達成できたと考えている。次年度以降も計画通り、多組織由来幹細胞や免疫抑制効果のある細胞を用いた大動脈瘤治療を試み、骨髄由来間葉系幹細胞との差異を検討する。

さらには、現在大動脈瘤モデルはアポリポプロテインE欠損マウスに、アンギオテンシンIIを負荷して作成しているが、他のマウスモデル(塩化カルシウムやエラスターゼを用いた)大動脈瘤モデルを用いて同様の効果が得られるかどうか検証する。最終的には大動物モデルでの検証を検討する。当初予定した、物品費用(消耗品費用)が若干安価で計上できたため次年度に繰り越しすることにした。次年度以降は、大動物実験にも移行していくため、実験動物購入費用に計上しておく。
閉経後のメタボリック症候群病態形成におけるアディポネクチンとレジスチンの役割

エストロゲン欠乏モデルとして、両側卵巣摘出術を施行したラットを用いてインスリン感受性を検討した。その結果、エストロゲン欠乏により、体重増加、インスリン抵抗性を引き起こした。しかし、アディポネクチンにより、そのインスリン抵抗性は改善した。しかし、レジスチンによりインスリン抵抗性はさらに増悪した。その機序として、肝臓や筋肉でのAMPKが関与している事を明らかにした。以上の結果は、閉経期以降に増加する糖尿病の発症にインスリン抵抗性が深く関与している事が示唆された。閉経期以降における動脈硬化性疾患の発症進展には、インスリン抵抗性という病態が深く関連していると考えられる。そこで、今後ますます重要と考えられるインスリン抵抗性の治療薬の開発において、閉経によるインスリン抵抗性の発症機序を解明し、レジスチンやアディポネクチンとの関連を解明することは重要と考えられる。まず、閉経後における肥満・インスリン抵抗性の病態生理を明らかにするために、卵巣摘出ラットを用いて、インスリン抵抗性の評価法としてGolden standardである正常血糖・高インスリン・クランプ検査法によりインスリン抵抗性の有無を検討した。4週齢の雌性Wistarラットにsham手術及び卵巣摘出術を施行し、手術9週後に正常血糖・高インスリン・クランプ検査法において、卵巣摘出ラットでは、glucose disposal rate (GDR)が、Sham手術ラットに比して約30%減少し、インスリン抵抗性が認められ、エストロゲン欠乏によるインスリン抵抗性モデルを確立した。また、アディポネクチン蛋白及びレジスチン蛋白を過剰発現させるアディノウイルスを作製した。卵巣摘出インスリン抵抗性モデルを用いて、アディポネクチンとレジスチンがこのインスリン感受性に及ぼす影響について正常血糖・高インスリン・クランプ検査法において検討中である。さらに、糖代謝におけるインスリン標的臓器である肝臓・骨格筋・脂肪組織におけるインスリンの細胞内情報伝達系を検討し、さらにこれら各臓器における多岐に渡る因子に関して組織学的、分子学的に検討することにより、閉経後によるインスリン抵抗性の分子機序を解明する。閉経期以降における動脈硬化疾患の発症進展には、インスリン抵抗性という病態が深く関連していると考えられる。4週齢の雌性Wistarラットにsham手術及び卵巣摘出術を施行し、手術9週後に正常血糖・高インスリン・クランプ検査法において、卵巣摘出ラットでは、glucose dispiosal rate (GDR)が、Sham手術ラットに比して約30%減少し、インスリン抵抗性が認められ、エストロゲン欠乏によるインスリン抵抗性モデルを確立した。さらに、アディポネクチン蛋白を過剰発現させた卵巣摘出インスリン抵抗性モデルでは、GDRが約20%増加し、インスリン感受性の増強が認められた。この結果は、アディポネクチンは、エストロゲン不足によるインスリン抵抗性を改善することが示唆された。今後、糖代謝におけるインスリン標的臓器である肝臓・骨格筋・脂肪組織におけるインスリンの細胞内情報伝達系を検討し、さらにこれら各臓器における多岐にわたる因子に関して組織学的、分子学的に検討することにより、閉経後によるインスリン抵抗性の分子機序を解明する。閉経期以降における動脈硬化性疾患の発症進展には、インスリン抗性という病態が深く関連していると考えられる。これまで、卵巣摘出によりインスリン抵抗性が惹起されること,アディポネクチン蛋白を過剰発現させることにより、このインスリン抵抗性が改善することを明らかにした。さらに、レジスチン蛋白を過剰発現させた卵巣非摘出雌ラットにおいて、インスリン抵抗性の評価法としてGolden standardである正常血糖・高インスリン・クランプ検査法によりインスリン抵抗性を評価したが、インスリン抵抗性は認められなかった。しかし、卵巣摘出した雌ラットにレジスチン蛋白を過剰発現させると、肝臓や筋肉でのインスリン抵抗性の増悪が認められた。さらに、肝臓、筋肉組織で、インスリン・シグナル伝達の重要な因子であるAktのリン酸化は、レジスチン蛋白過剰発現により、減弱した。さらにAMPKのリン酸化もレジスチン蛋白過剰発現により減弱した。以上の結果は、エストロゲン欠乏によりインスリン抵抗性が惹起されるが、アディポネクチシによりインスリン抵抗性が改善すること、一方、レジスチンは、エストロゲン存在下では、インスリン抵抗性を惹起しないが、エストロゲン欠乏によるインスリン抵抗性状態では、インスリン抵抗性を増悪させることを新たに確認し、その機序の解明を行った。
無脊椎動物におけるトロポニン及びトロポニンCスーパーファミリー分子種の分子進化

トロポニンC(TnC)やカルモジュリン(CaM)を含むTnCスーパーファミリー遺伝子群は、基本的に5つのイントロンを持ち、内4つの挿入位置は分子種間でも保存されている。一方で第4イントロンのみは分子種間・内で挿入位置の相違が頻繁に観察され、また原始的な海綿動物や刺胞動物のCaM遺伝子ではこれに相当するイントロンが見出されない事から、筆者は「ファミリーの共通祖先遺伝子には第4イントロンは存在せず、各分子種の進化過程で独立に獲得されてきた」との仮説を提唱してきた。今回、CaM遺伝子の進化をより詳細に探る為、棘皮動物(ウニ)CaMの遺伝子構造の解析を行った。ウニCaMは選択的スプライシングにより長さの異なる2種のCaMを発現し、これは他の後生動物においては見出されていない珍しい例である。また第4イントロンが存在したが、脊索動物CaMとは異なる位置に挿入されており、これは棘皮/脊索が分岐した後、各々の系統で独立に第4イントロンが獲得された為であると考えられる。以上の結果に関しては現在投稿準備中である。また海綿動物CaMのクローニングの際に副産物として新規Ca結合タンパク質を同定・II型カルシフォシンと命名した。分子系統樹及び遺伝子構造の比較などから、これは従来哺乳類のみで見出されたいたカルシフォシン(I型カルシフォシン)と近縁ではあるが、より保存性が高く(海綿動物と脊椎動物の間でアミノ酸レベルで60%もの相同性を示す)、また後生動物に広く分布している可能性が示唆された。以上の結果はGene誌に発表済みである。トロポニンC(TnC)スーパーファミリー遺伝子は、基本的に5つのイントロンを持ち、内4つの挿入位置は分子種間でも保存されている。一方で第4イントロンのみは、分子種間・内で挿入位置の相違が頻繁に観察される。これに対し湯浅は、これまで主にTnCの遺伝子構造の比較から「ファミリーの共通祖先遺伝子には第4イントロンは存在せず、各分子種の進化過程で独立に獲得されてきた為」との仮説を提唱してきた。この仮説が正しいとすれば、ファミリーに属するTnC以外の分子種においても系統樹の根に近い位置で第4イントロンの不在が認められる事が予想される。そこで本研究では海綿動物(クロイソカイメン)及び刺胞動物(ヒダベリイソギンチャク)からカルモジュリン(CaM)遺伝子を単離、その遺伝子構造を決定した。カイメン、イソギンチャクのCaM共に、脊索動物CaMの第4イントロンに相当するイントロンが見出されず、この事は第4イントロンは後生動物の祖先のCaMには存在せず、無脊椎動物と脊索動物の分岐後に脊索動物の系統でのみ獲得された事を示唆する。これは上記のTnCスーパーファミリー遺伝子の進化仮説に合致する。以上の結果はGene誌に発表された。この他に棘皮動物(エゾバフンウニ)において、選択的スプライシングを行う特殊なCaM遺伝子を同定、現在その遺伝子構造の決定に着手している。またカイメンにおいて、哺乳類カルシフォシン・ホモログと考えられる遺伝子を単離、その遺伝子解析も行っている。
フランスにおけるキャリア教育を通した市民性育成の理論と実践に関する比較研究

本研究は、キャリア教育を通した社会形成能力の育成に力を注いでいるフランスの取り組みを比較分析し、公正で持続可能な社会の創造を目指して、役割を選択し行動できる市民を育てるための理論と実践を解明することを目的としている。今年度は、「市民行程」に関する実地調査の結果を検討することで、道徳・公民科や多様な課外活動が市民性の発達においていかなる役割を果たしているかを明らかにし、さらにそれらがどのように連結されているか考察した。公的文書と教科書の分析、研究指定を受けたコート・ドール県での調査の分析を行った結果、カリキュラム・マネジメント(教員レベル)とキャリア・ポートフォリオの活用(生徒レベル)という2つの方法で、市民行程の収束性・継続性・漸進性を保障していることが明らかになった。これらは、両輪が揃ってこそ相乗効果を発揮する。というのも、キャリア・ポートフォリオを学校全体で活用するには、それが学校教育計画に明記されている必要があるし、一方でポートフォリオをプラットフォームにして多様なアクターが活動に参画することで、カリキュラム・マネジメントが実質化される。ただし、いずれも先進的な事例に限定されることであり、一般的な状況ではない。「教授の自由」をもつ教員の多くは、依然として学校教育計画に無関心であり、協働して活動する習慣にない。その点では、市民行程はまさに「個人主義的な教員の文化をチームで働く文化に変える挑戦」である。以上の研究より得られた日本への示唆は、以下の3点である。第1に、キャリア形成を個人の職業的自立に矮小化せず、市民性の発達を個人のキャリア発達の一環として認識することである。第2に、カリキュラム・マネジメントによって、市民育成に関わる多様な学びを道徳科に収束させることである。第3に、キャリア・ポートフォリオを有効活用し、市民性の可視化と資本化を実現することである。今年度は、2016年度からフランスで開始された「市民行程」の構造を分析することで、市民性教育としてのキャリア教育の可能性と課題を考察した。その具体的内容は、次の通りである。1市民行程の制度的枠組(教育行程の導入とその意義、カリキュラム基準、教育共同体の役割)。2カリキュラム・マネジメント:学校レベルでの収束性・継続性・漸進性(学習指導要領にみる道徳・公民科の構造、教科書にみる道徳・公民科の構造、アラン・サヴァリ中学校における市民行程の特色、コートドール県における市民行程の特色)。3キャリア・ポートフォリオ:生徒レベルでの収束性・継続性・漸進性(eポートフォリオによる可視化と資本化、市民行程におけるeポートフォリオの機能、パーマネント・ポートフォリオとしての市民性手帳)さらに、3月にはディジョン大学区のマルロー中学校(市民行程の研究指定校)を訪問し、道徳・公民科、学級活動、教科横断実践活動、中学生生活委員会などの授業・活動を参観するとともに、教員と生徒指導専門員に対してインタビューを行った。また、リヨンのフランス教育研究所を訪問し、カトリーヌ・ロワジ准教授とeポートフォリオを活用した市民性教育・キャリア教育について情報交換した。次いで、パリ郊外にある国立教育・職業情報局を訪問し、ジル・フベール地方職業情報部門長らと各学校の実践を支える中央政府の役割について議論した。さらに、トゥール市内の中学校と情報・進路センターを訪問し、ICTを活用した特別支援学級におけるキャリア教育・市民性教育を参観するとともに、関係者にインタビューした。これらの実地調査の結果は、次年度に詳細な分析を行う。以上のことから、研究課題は当初の研究計画に沿って、概ね順調に進んでいると判断できる。1.ディジョン大学区とトゥール大学区における調査結果の分析道徳・公民科の授業と担当教員へのインタビュー、教科横断実践活動の授業、中学生生活委員会の活動計画と成果、生徒代表制度に関する生徒指導専門員に対するインタビューなどを分析し、日本と比較した市民行程の特徴を抽出する。その上で、特別活動における社会形成能力の育成、18歳選挙権に対応した主権者教育の在り方、「公民科」(特に新科目「公共」)を通じたキャリア教育の方法、特別な教科「道徳」を通じたキャリア教育の充実についての示唆を獲得する。2.キャリア教育を通した市民性育成のモデル化これまでの分析結果をまとめ、公民教育、学級生活の時間、生徒代表制のそれぞれについて、市民性教育としてのキャリア教育のねらい、内容、方法、期待される成果を提示する。さらに、日本の公民科、学級活動、生徒会活動、道徳教育の理念・理論をふまえて、構造化された包括的実践モデルを開発する。3.開発したモデルの実践・評価と成果発表東京都および愛知県の中学校・高等学校と協力して、モデルを基にした授業計画を作成し、実践する。その上で、生き方尺度等を用いて効果測定を行い、成果を検証する。また、一連の成果について、日本キャリア教育学会などの国内外の関連学会で発表を行い論文投稿する。今年度は、フランスの中学校の「学級生活の時間」(HVC)について分析し、カリキュラムの面から日本の学級活動との比較を行った。第1に、HVCには学級活動(2)「適当と成長及び健康安全」に相当する内容が見当たらず、個人の問題を学級での活動を通して解決することは、進路関係を除き実践されていない。第2に、HVCではディベートの手法が用いられており、形式的陶冶の側面が強いが、学級活動では話合いを通して、自分も良くみんなも良いと思えることを、折り合いをつけて決めることを目指している。

第3に、学級活動では構成員が互いの個性を尊重しながら協力し合うことになっており、集団の目的性、組織性、凝集性が高いレベルで想定されているが、HVCでは日常での役割分担がなく、比較的緩やかな個人の連帯が前提とされている。第4に、HVCが生徒の「自治活動」としての要素を備えており、学校システムへの参画によって市民性を獲得するのに対して、学級活動が接続する生徒会活動は、学校経営の概念とは切り離された「自治的活動」である。第5に、HVCには「認知的領域」が存在しており、教科とのつながりがカリキュラムとして顕在化されているが、学級活動では「自由研究」の廃止以降、教科との関連が不明確になっている。日本の特別活動は社会性・感情面の育成や非認知能力の発達に有効であるとして、世界的に注目を集めており、上記の比較検討でもその独自性が確認できた。一方で、社会形成能力の育成のためには、「学校づくり」への参画を強化していくこと、カリキュラム・マネジメントにより教科とのつながりを担保していく必要があることが示唆された。今年度は、フランスにおける市民性教育の3つの柱の1つである「学級生活の時間」について分析し、カリキュラムの面から日本の学級活動との比較を行った。その結果、次のような日本の学級活動の特徴が抽出された。第1に、生徒の役割分担と協同によって成立する凝集性の高い集団において、自己決定と個人決定を繰り返すことで、実質的陶冶として市民を育成している。第2に、生徒の教育参加が認められておらず、自治の範囲は限定されるが、「遊び」を中心に子どもの発達に関わる教育的価値を追求している。第3に、カリキュラムの内容面において、教科との関連が明確に担保されてない。さらに、第2の柱である「道徳・公民科」に関する調査にも着手した。フランスでは、新たに「市民行程」という取組が開始された。これは、小学校から高等学校に至るまで、道徳・公民科を中核に教育課程内外のあらゆる市民性教育に関する活動をマネジメントして1つの「行程」(プログラム)に仕立てるとともに、その経験をポートフォリオとして蓄積することで、市民として成長する「行程」(キャリア)として可視化し、市民性の認証を行う取組である。2018年3月に、市民行程の研究指定地域であるコート・ドール県を訪問し、国民教育局でインタビュー調査を行うとともに、中学校・小学校各1校で授業を観察した。さらに、パリにある国民教育省学校教育総局を訪問し、市民行程およびeポートフォリオの活用に関して、資料収集とインタビューを実施した。これらの実地調査の結果は、次年度に詳細な分析を行う。以上のことから、研究課題は当初の研究計画に沿って、概ね順調に進んでいると判断できる。本研究は、キャリア教育を通した社会形成能力の育成に力を注いでいるフランスの取り組みを比較分析し、公正で持続可能な社会の創造を目指して、役割を選択し行動できる市民を育てるための理論と実践を解明することを目的としている。
Streptococcus mutansのグルカン合成酵素遺伝子のクローニング

齲食の主病原因子はmutans streptococcusが細胞外に産生するグルカン合成酵素群である。この酵素群は蔗糖からフラクトースを遊離すると共にグルコースを重合して不溶性粘着性グルカンを合成する。この様な不溶性粘着性を示すグルカン合成は、α-1,6結合を主鎖とする水溶性グルカンを合成する酵素(GTF-S)とα-1,3結合を主鎖とする不溶性グルカンを合成する酵素(GTF-I)との共同作用に起因することが知られている。遺伝子組み換え技術は酵素タンパク質の構造と機能を解明するのに有力な技術である。今日までにmutans streptococciの不溶性および水溶性グルカン合成酵素遺伝子の全塩基配列を決定した報告がある。しかし、組換え大腸菌の発現蛋白の収率が良くないためか、発現蛋白の酵素反応機構に関する詳細な報告はない。本研究では、Streptococcus sobrinusのGTF-I酵素遺伝子をクローニングし、このリコンビナントGTF酵素を用いて、GTF-I酵素の構造と機能を検討した。ベクターpUC18で作成したS.sobrinusジーンバンクを抗GTF-I血清でスクリーニングしたところ、免疫反応が陽性を示す5クローン(AB1-5)を得た。そのうち2クローン(AB1とAB2)の発現蛋白は非水溶性グルカン合成能とデキストラン結合能を有しているが、他の3クローン(AB3,4,5)はグルカン合成能を欠くが、デキストラン結合能を持っていた。これらの結果はS.sobrinusのGTF-I酵素には2つの機能領域があることを示唆した。Streptococcus mutans6715株のDNAを制限酵素Sau3Aで部分消化して得られた3-5Kb断片をベクタープラスミドpUC18のBamH1部位に挿入し、この組換えDNAを大腸菌JM109株に導入した。約5000コロニーを不溶性グルカン合成酵素(GTF-I)を抗原として作ったウサギ血清を用いてコロニーイムノアッセイによって調べた結果、6株の陽性クローンを得た。これらクローンの菌体超音波破壊標品の不溶性グルカン合成活性を調べたところ、2株が合成活性を示した。このキメラプラスミドをpABO1と2となずけ、両クローンの諸生状を検討した。pABO1には3.9kbのDNAが挿入されていた。この組換え体大腸菌(ABO1)には160kDのGTF-Iが発現していることがPAGFの活性染色とウエスタンプロット法により分かった。この酵素活性はIPTG添加により20倍増大した。一方,pABO2に挿入されているDNAは7.0kbで、このプラスミドを持つ大腸菌(ABO2)のGTF-Iの分子量167kDであったが、このGTF-Iの産生はIPTG添加によって誘導されなかった。S.mutans 6715株のGTF-1の分子量が180kDであることから、本酵素の遺伝子サイズは4.9kbと計算される。従って、pABO1にはGTF-I遺伝子より小さいが、活性部位を占めるDNA断片が挿入されている、一方pABO2には全GTF-I遺伝子領域を含むに十分なDNA断片が挿入されている。このことは両キメラプラスミドの制限酵素地図の比較によって確認した。大腸菌は蔗糖を代謝できないが、GTF-I遺伝子が挿入された大腸菌は蔗糖から不溶性グルカンを生成すると同時に果糖を遊離し、この果糖を代謝して有機酸を生じ、増殖できるようになると考えられる。蔗糖含有培地に分離クローンを接種したところ、AB01株は増殖したが、ABO2株は増殖しなかった。

今年度の第一目標であったGTF-I遺伝子のクローニングに成功したので、現在ABO1と2株からの本酵素の精製と効率の良いGTF-I発現系の確立に着手している。Streptococcus mutans6715株のDNAを制限酵素Sau3AIで部分消化してえられた3-5Kbp断片をベクタ-プラスミドpUC18のBamHI部位に連結し、大腸菌JM109株に導入した。不溶性グルカン合成酵素(GTF-I)に対するウサギ抗血清を用いて、約5000コロニ-をイムノアッセイによって調べた結果、5株の免疫学的陽性クロ-ン(AB1-5,pAB1-5と命名)を得た。これらの5クロ-ンの挿入DNAサイズ、発現タクパク質の機能など調べた結果を次表に示す。制限酵素地図と塩基配列の分析結果から、pAB1の挿入DNAには全GTF-I遺伝子(4773bp)を含む、しかし他のクロ-ンはGTF-I遺伝子の5'末端がそれぞれ順次、欠失していた(252bp/pAB2,1041bp/pAB3,2319bp/pAB4,3015bp/pAB5)。又、pAB2,3,4の挿入DNAにおいて、3'末端側も欠落(786bp)していた。以上の結果から、GTF-I遺伝子の5'末端側には、不溶性グルカン合成活性と蔗糖分解能に関与する遺伝情報が含まれていること、3'末端側には、グルカン結合に関与する遺伝情報が含まれていることを示唆している。GTF-Iが蔗糖から不溶性グルカンを合成するにはプライマ-としてα-1,6グルカンを必須とするので、現在GTF-Iタクパク質のC末端側の一次構造と機能との相関を検討中である。
ｍＲＮＡと新生ペプチドの局所構造による翻訳効率変化のゲノムワイド解析

遺伝子mRNAからタンパク質が翻訳される状況を新しい実験手法で解析し、ゲノム全体の遺伝子を見た場合、翻訳開始の構造が翻訳の効率に大きな影響を与えることを明らかにした。対して、翻訳伸長の効率にも差はあったが、遺伝子全体の翻訳効率に大きな影響は与えていなかった。また、コドン-アンチコドンの3文字目の認識や、small RNA/Hfqによる翻訳制御の実体など、ネイティブな翻訳関連因子の性質についてや、様々な抗生物質の作用機序など、これまで知られていなかった性質を示す新たな知見を得た。本研計画は、リボソームプロファイリングというしい手法を用いることにより、mRNA、生ペプチドの局所構造による翻訳効率の変化を明らかにすることで、翻訳装置の基本的性質や薬剤による翻訳阻害の実体、翻訳に関わるタンパク質性因子やsmall RNAによる翻訳の制御をゲノムワイドに明らかにすることが目標である。本年度の実績として、以下の2つを挙げる。'1.リボソームをターゲットとする抗生物質(薬剤)であるクロラムフェニコール(Cm)、テトラサイクリン(Tet)で翻訳を阻害した際のリボソームプロファイルを取得し、薬剤無しと比較して解析を行った。Cm存在下では特定の新生ペプチド配列が翻訳を阻害することが分かった。Cmはペプチドトランスファーを妨げることで翻訳を阻害すると考えられているため、新生ペプチド配列が作用に影響することは意外な結果である。一方、Tet存在下ではPサイトを開始コドンが占めているリードが極めて多いことが分かった。これは、開始コンプレックスから伸長に移行する際にTetが最も強く作用する結果と考えられる。TetはアミノアシルtRNAとリボソームの結合を阻害することにより伸長を押さえると考えられており、これもこれまでの知見からは予想できない結果であった。これらの結果はこれまで明らかになっていなかったin vivoにおける薬剤の作用を示すものと期待され、将来的に薬剤の利用法や新規薬剤の開発にも影響する重要な結果だと考えている。2.small RNAによる翻訳アレストを解析するため、多くのsmall RNAの機能に必須と考えられているhfq遺伝子の欠損株及び、協調して機能するRNaseEの変異株でリボソームプロファイルとRNAのプロファイリングを行った。small RNA発現量及び一部mRNAの翻訳効率に変化があることが確認できており、次年度より、両者の関連を明らかにするためにsmall RNAのターゲット予測及び実験による確認を行う。本研究計画は、リボソームプロファイリングという新しい手法を用い、翻訳装置の基本的性質や、薬剤による翻訳阻害の実体、翻訳関連因子などの働きをゲノムワイドに明らかにすることが目標である。本年度の実績として、以下を挙げる。コドンが認識の場であるリボソームA-siteにおいて、コドン毎のリボソーム密度の差が、同義コドン間の使用頻度の差と良く相関していることを確認した。これは、各コドンのデコーディング速度を反映したものと考えられ、以前よりよく知られているが、これまでモデル系でしか、確認されておらず、通常の生育状態で、全ゲノム的に示されたのは初めてである。また、外来遺伝子を高発現させることで、特定のコドンの使用頻度が上がると、A-siteリボソーム密度が上昇することからもこの現象を確認した。翻訳の様々な過程を阻害することが知られている7種の薬剤を作用させた状態でリボソームプロファイリングを行った。この実験は通常、大腸菌では効果の弱い薬剤を用いるためin vitro翻訳系を用いる予定であったが、薬剤感受性変異を導入してこれらの薬剤の効果を発揮させることができたので、in vivoの実験を行った。そのため、より実際の細胞中に近い効果を得ることが出来たと考えている。一方、in vitro翻訳系を用いたリボソームプロファイル系は予定通り立ち上げに成功しており、その実験と、停止したリボソームのレスキューに関与する遺伝子欠損株を用いたin vivoリボソームプロファイル実験によって、リボソームの停止する位置を従来よりも明瞭にすることができた。また、昨年度の研究で野生株とhfq欠損株を比較して発見した新規sRNAのうち2つと、既知sRNA1つをそれぞれ過剰発現し、リボソームプロファイルの変化と情報学的解析から、ターゲット遺伝子の推定を行った。本年度、以下のような実績を得た。1. A-siteにおける同義コドンのデコーディングの違い。同一tRNAによるデコーディング能力の差を明らかにするため、通常は2つまたは3つのtRNAで読まれる4コドンボックスアミノ酸7種類について、ゲノム上のtRNAの種類を減らす試みをし、4種類について、通常の株とのリボソーム密度の比較を行った。通常考えられているのとは異なり、大腸菌においても、アンチコドン一文字目にUを持つ一種類のtRNAでコドン3文字目のAUGC全ての塩基をデコードできることが分かった。