hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
知の実践性と道徳性に基づく幸福論の研究

プラトン『テアイテトス』の「神の似像」の議論を解釈し、前後の文脈から、未来に向けて知識と善の絶対的価値が主張できるという全体的主張を取り出した。これはプラトンが知識を道徳的で実践的価値を持つものとみなしていたという帰結を持つ。この結果を『テアイテトス』の熱心な読者であったアリストテレスの『ニコマコス倫理学』解釈に結び付け、アリストテレスが知の道徳性と実践性のプラトン的論点を彼流に応用していたこと、および人柄の徳とその教育から説き起こした点など、新たな教育的視点も付け加えたことを論じた。プラトン『テアイテトス』がアリストテレス『ニコマコス倫理学』の実践性と道徳性の強い知識把握に影響を与えたという仮説を実証する、四年間の研究である。第一に加藤尚武氏と関根清三氏主宰の共同研究に「ヌスバウム「相対的ではない徳-アリストテレス的アプローチ」の要点と批評」を寄稿した。一般財団法人ホモコントリビューエンス研究所「貢献する気持ち」共同研究ホームページで内部閲覧が可能になっているが、さらに『アリストテレス哲学における人間理解の研究』と題する私のアリストテレス解釈研究書が平成23年度科学研究費補助金(研究成果公開促進費)に採択され23年度中に刊行の見通しであり、共同研究の許可のもと、その第一章後半部として同論文の主要部分を加える。アリストテレス倫理の現代的意義を、ヌスバウムの反相対主義とドナルド・デイヴィドソンの概念枠批判の論点を使用しながら、とくに個別の場面で実践性と道徳性が問われる知識と知性の重視の問題として論じた。なお同書序文でも、プラトン『メノン』とアリストテレス『ニコマコス倫理学』の関連を検討している。第二に、『法制史研究』60号に「吉沢一也「渡辺邦夫「アテナイの法廷とソクラテス」書評への反論」を書き、不当判決に対する、知性化した怒りの感情にあらわれたソクラテス的な高い道徳性が、量刑を裁判の場でおこなうアテナイ法手続きの不備に対しても、最も効果的な人間的反応であったと論じた。議論の過程で、間接的にギリシア倫理における知識の性格をも解明でき、プラトン『クリトン』および『ソクラテスの弁明』を『ニコマコス倫理学』的な感情理解にも沿う方向で解釈できたと考える。本年度目標とした『テアイテトス』「神の似像」の有益性概念については、マーク・マックフェラン氏他の内外研究者との討論の上で、解釈を作っているところである。同様に目標とした「知識の問題の始まりについて」の英語論文及び『ニコマコス倫理学』第10巻7,8章解釈作成も、現在、途上である。研究実施計画1(『メノン』『テアイテトス』における有益性概念の研究)に関して言えば、2月に光文社古典新訳文庫『メノン』を上梓し、その例外的に長大な「解説」において、ソクラテス・プラトン的な有益性概念(ほぼ善の概念に重なる)の特徴付けを行い、『メノン』におけるソクラテス的対話が対話者メノンを試みつつ読者に参加を促すものであったとの議論仮説の提示に至った。知識は理解として押さえられ、そのゆえに主体性と倫理性を知の担い手に要求するものであったことを示した。また『テアイテトス』の「神の似像」の議論の解釈論文はやや遅れたが現在執筆中である。その内容は『メノン』における知の実践性と倫理性の性格の再確認と発展を『テアイテトス』が行ったというものである。実施計画2(アリストテレスのプラトン知識論解読過程を研究書中で詳述すること)に関しては、『アリストテレス哲学における人間理解の研究』序論及び各章の論述(とくに第一章の徳論と第七章の実体論及び第八章の理性論は大幅に論述を増やした)において予想以上の大きな成果となり、同一指定能力の発展というアリストテレスによる人間の見方を、プラトン『テアイテトス』及び『ソフィスト』からの発展として体系的に記述できた。このような両哲学者の緊密な関連を捉えた研究は海外でも珍しい。実施計画3(アリストテレス『ニコマコス倫理学』第10巻7・8章の逐語的解釈完成)は現時点で中途段階であり、平成24年度に解釈論文化する。このほかソクラテス裁判に関するソクラテスの哲学的な立場と行動の一貫性について英文論文を発表できた。これは実施計画1の『メノン』解釈に『ソクラテスの弁明』の側から照明を与えるとともに、本研究課題の主題である知の実践性と倫理性はソクラテス的幸福観にもともとの基礎を持っていたことを示す研究である。1.アリストテレス『ニコマコス倫理学』第10巻の、観想の生活が第一次的な幸福であるという主張は解釈論争のもととなったが、第8・9巻のフィリア(愛・友愛)論から第10巻への接続の意味を考え全巻の構成仮説を作ることによって、倫理的実践の意義をアリストテレスが認めつつ、その上に立つ理論活動が幸福の理想を与えると考えたと解釈し、「アリストテレス倫理学における「共同性」と「観想の優位」の関連について」で発表した。

またプラトン『テアイテトス』が『二コマコス倫理学』第5巻以後の後半部の構成に与えた影響について論じた。正義論を詳しく解釈し、フロネーシス論へ、さらにはフィリア論への展開を跡づけ、アリストテレスは『テアイテトス』の「神の似像」の議論から善への全面荷担と幸福の関係に関する洞察を学びつつ、「人柄の徳」を立てることによる教育上の新提言方法を開拓したと論じた。論文「『ニコマコス倫理学』における正義と「知」の関係」を2014年秋紀要に掲載する。2.アリストテレス徳倫理学関連業績である現代徳倫理学論文「倫理、身体、教育」を2013年6月に提出した。また現代徳倫理学の翻訳論文集が2014年秋に出版予定であり、マーサ・ヌスバウムのNon-relative Virtuesの翻訳を掲載する。原稿は編者に提出済であり、これから編集・校正になる。その後上記論文も出版される予定である。3.同一指定論に関する英文論文は完成していない。近日中に完成する予定である。4.2013年哲学会シンポジウム「真理の再生」提題者として発表した。2014年の『哲学雑誌』に「真理の議論の重層化の必要性について」という論文を掲載する。現代真理論は自然言語の意味論との関係が固定的だが、古代では人間の存在を解明する議論としての真理論も重要であり、再評価する必要があるという趣旨である。なおこの内容は上記3の同定論を含む。1.プラトン『テアイテトス』神の似像の議論の解釈を「『テアイテトス』の「脱線議論」(172C-177C)の意義と内容について」(茨城大学人文学部紀要『人文コミュニケーション学科論集』13号)として発表した。神の似像の議論を前後の文脈と結びつけ、「有益さ」に関するプロタゴラス流の相対主義的で実利主義的な発想に対する道徳主義的で学問知識の社会的意義を捉えるための議論として解釈した。本解釈は本研究課題全体の到達目標である、アリストテレス『ニコマコス倫理学』後半部の議論、とくに観想の実践に対する優位の議論への『テアイテトス』の影響関係の実証という目標に、直接関係するものである。2.1の作業と並んで今年度目標にしたアリストテレス『ニコマコス倫理学』第810巻解釈の方は、現在(2013年4月)次の紀要(5月原稿提出、9月発行予定)に執筆中である。幸福論の最終結論としてアリストテレスが観想の「知恵の活動」を挙げたことが、道徳主義的な第10巻第5章までの人柄の徳と思慮深さなどに関する叙述と矛盾せず、人間の道徳的完成の理想の上に観想活動による「神に似た完成」が可能であるという論点であったことを、解釈として示す。この2と上記1の点を踏まえて、来年度最終年度に、アリストテレスの『テアイテトス』読解の証拠として1本の解釈論文を書く。3.アリストテレスの心の哲学、とくに視覚論と触覚論に関する英語論文は、2012年6月にオックスフォード大学で権威のリチャード・ソラブジ教授に内容を説明し、同教授から懇切なコメントをいただくことができた。修正に時間がかかっているが、2013年度には完成させたい。プラトン『テアイテトス』の「神の似像」の議論の解釈論文は年度をまたいだ執筆になり次年度発表となり『ニコマコス倫理学』解釈専攻論文も完成にやや時間がかかっている。
ポジトロニウムを用いた量子電磁力学(QED)高次補正の実験的検証

近年計算された束縛系QED2次補正項を実験的に検証するため、オルソポジトロニウムの崩壊率の精密測定を行った。まず、従来の測定でボトルネックであった統計を改善するために、セットアップを抜本的に見直し、YAPシンチレータに基づく高速なシステムを構築した。このセットアップを用いて実際に2回の測定を行った。これらの測定では、物質の効果の系統的なテストのため、以下のように異なる減速材を使用した。*RUN I減速材:シリカエアロジェルデータ収集期間:2.3ヶ月*RUN II減速材:シリカパウダーデータ収集期間:3.1ヶ月収集されたデータは、それぞれの測定で統計誤差にして約130ppmである。物質の効果を直接測定し補正する実験手法を用いた。測定されたpick-off ratio(物質との相互作用による対消滅の割合)は、RUN I(シリカエアロジェル)約3%、RUN II(シリカパウダー)約1%と大きく異なった。これは、シリカ粒子間距離といった物質の内部構造の違いによるものと考えられる。2回の測定で得られた崩壊率は、それぞれであり、2つの測定値は1.6σで一致する。また、これらを合わせた結果は以下のようになる。実験誤差は約150ppmであり、既存の実験で最も精度が高い。本実験の測定値は1995年以降の3つの実験とコンシステントであり、2000年に計算された束縛系QEDの2次補正項を含む計算値と一致する。一方、1次補正までの計算値と本実験の測定値との差は1.7σであり、過去4実験の世界平均値とは2.6σの差となる。従って、測定された崩壊率は計算された2次補正項を支持していると結論される。1.オルソポジトロニウムの寿命を高精度で測定するセットアップを構築した。従来の実験では統計誤差(約170ppm)が主要な実験誤差であり、特に高統計なシステムが必要であった。シミュレーション(Geant4)と予備実験により最適なシステムを設計し、開発を行った。主な改良点を以下に挙げる。*時定数の短いYAPシンチレータを基にセットアップを構築した。この結果、時間分解能(400ns)の大幅な向上を達成した。また、パイルアップ事象が削減されることで線源強度を強くすることが可能になった。*陽電子エネルギーが比較的高いGe-Ga線源を用いることで、従来ポジトロニウムの生成効率を低下させていたトリガー用プラスチックシンチレータ中での対消滅を抑制した。逆に、減速材(SiO2)からエスケープする陽電子が無視できなくなり、プラスチックシンチレータにより捕捉し抑制する機構を導入した。*高速なADCとクレートコントローラによりデータ収集速度を約4倍に引き上げた。2.実際に構築したシステムを2ヶ月間運用し、従来のシステムと比較して約10倍の統計量になることを確認した。これは、4ヶ月で約100ppmの統計量に相当する。3.新しいセットアップによりオルソポジトロニウムの長期寿命測定を開始した。また、系統誤差の研究を開始した。主要な系統誤差として、半導体検出器特有の緩やかな立ち上がりの信号がある。これは電荷を集める電界が一様でないために生じるものであり、この為検出された位置により時間立ち上がりが異なる現象である。現在位置依存性を考慮してこの効果を取り込む研究を進めている。この方法は一般出来れば、従来時間分解が悪いと思われていた半導体検出器の性能向上に役立つものある。1.前年度に構築したオルソポジトロニウム寿命測定のセットアップを用いて2回の測定を行った。

これらの測定では、物質の効果の系統的なテストのため、以下のように異なる減速材を使用した。*RUN I減速材:シリカエアロジェルデータ収集期間:2.3ヶ月*RUN II減速材:シリカパウダーデータ収集期間:3.1ヶ月収集されたデータは、それぞれの測定で統計誤差にして約130ppmである。2.物質の効果を直接測定し補正する実験手法を用いた。測定されたpick-off ratio(物質との相互作用による対消滅の割合)は、RUN I(シリカエアロジェル)約3%、RUN II(シリカパウダー)約1%と大きく異なった。これは、シリカ粒子間距離といった物質の内部構造の違いによるものと考えられる。3.2回の測定で得られた崩壊率は、それぞれであり、2つの測定値は1.6σで一致する。また、これらを合わせた結果は以下のようになる。実験誤差は約150ppmであり、既存の実験で最も精度が高い。4.本実験の測定値は1995年以降の3つの実験とコンシステントであり、2000年に計算された束縛系QEDの2次補正項を含む計算値と一致する。一方、1次補正までの計算値と本実験の測定値との差は1.7σであり、過去4実験の世界平均値とは2.6σの差となる。従って、測定された崩壊率は計算された2次補正項を支持していると結論される。
オキナワトゲネズミのneo-X、neo-Yにおける哺乳類特有の分子進化機構の解明

真獣類の性染色体の初期分化過程を解明するために、進化の初期段階にあるオキナワトゲネズミの性染色体に転座した常染色体(ネオ性染色体)を用いてそのゲノム進化を明らかにした。その結果、ほとんど未分化なネオ性染色体において動原体側で組換えが抑制され、末端側で活性化されることが示された。このことから、性染色体の初期進化において組換え抑制領域の拡大とは独立に偽常染色体領域(PAR)が形成されるという新たな説が提唱された。さらに、フイリマングースのネオ性染色体において減数分裂時の対合像を観察し、元のY染色体と隣接するネオ性染色体の動原体側で遺伝的分化が開始されることを明らかにした。真獣類のY染色体は矮小化しすでに多くの遺伝子を失っている。そのため性染色体の初期分化の過程については未解明な点が多く残されている。そこでその有用なモデルとなるのが性染色体に最近新たに常染色体ペア(ネオX、ネオY)が転座したオキナワトゲネズミである。本研究では本種におけるネオX連鎖遺伝子群の遺伝子量補償機構への適応過程、ネオXとネオY間の組換え抑制領域および活性領域(PAR)の形成過程を解明することを目的として研究を推進し、平成26年度は以下の結果を得た。ネオ性染色体にXist RNAによる不活性化は起きておらず、メス3個体の繊維芽細胞のRNA-seq解析の結果、動原体から末端までの広い領域でネオX連鎖遺伝子群の両アリルからの発現を確認した。次に雌雄のRNA-seqデータの比較解析により、ネオ性染色体の動原体側に位置する約18Mbの領域内にオス特異的な塩基置換が蓄積していることを明らかにした。その領域に連鎖する18遺伝子のネオX、ネオY配列を比較し、1遺伝子においてはネオY配列に中途停止コドンが出現していることを明らかにした。残りの17遺伝子についてはORFが保存されているが、ネオXに比べてネオYの塩基置換速度とdN/dSは有意に増加し、遺伝子にかかる機能的制約が緩和されていることがわかった。さらに精巣、脳、肝臓のRNA-seqおよびPyroMark解析により、ネオXとネオYアリル間の発現量が2倍以上異なる遺伝子を5つ同定し、精巣と他の組織の間で発現変化パターンが異なる傾向にあることを示した。本研究では、本種のネオXにXist RNAによる不活性化は起きていないが、一部のネオY遺伝子についてはアミノ酸配列や発現量のレベルでネオXとの遺伝的分化が進行していることを明らかにした点で、性染色体の初期分化に関する重要な成果を得たといえる。真獣類のY染色体は矮小化し、すでに多くの遺伝子を失っている。そのため性染色体進化の初期段階にみられる性染色体間の遺伝的分化やX連鎖遺伝子の遺伝子量補償機構への適応過程については未解明な点が多い。そこで真獣類の性染色体の初期進化過程を解明するために、性染色体に常染色体(ネオX、ネオY)が転座した真獣類において、進化の初期段階にあるネオXとネオY間の遺伝的分化とネオX連鎖遺伝子の遺伝子量補償機構への適応過程を明らかにすることを目的として研究を推進し、平成27年度は以下の結果を得た。ネオXとネオY間の遺伝的分化過程を明らかにするために、Y染色体に常染色体(ネオY)が転座したフイリマングースにおいて、蛍光免疫染色法を用いて精巣の減数分裂像を観察した。その結果、Y染色体が転座したネオYにX染色体とネオXがそれぞれ対合した3価染色体が同定された。さらに、ネオXの短腕とY染色体に隣接するネオY領域の間に低頻度ではあるが不対合が生じていることが明らかになった。このことから、祖先的な性染色体に隣接する領域からネオ性染色体間の遺伝的分化が開始されることが示唆された。次に、ネオX連鎖遺伝子の遺伝子量補償機構への適応過程を解明するために、性染色体に一対の常染色体(ネオX、ネオY)が転座したオキナワトゲネズミのオス4個体、メス3個体の繊維芽細胞のRNA-seqデータを用いて、ネオYとの組換えが抑制されているネオX領域に連鎖する56の遺伝子の発現量を雌雄間で比較した。その結果、オス(1×ネオX)/メス(2×ネオX)のネオX連鎖遺伝子の発現比は0.5に近い値を示した(平均値:0.53、中央値:0.52)。このことから、ネオYの矮小化が進行している一方で、ネオXはX染色体の不活性化による哺乳類特有の遺伝子量補償機構に組み込まれていないことが明らかになった。

初年度(平成26年度)に予定していた研究計画のほとんどは予定通りもしくは期待以上に進展したが、研究計画IIIのネオYにおける遺伝子発現変化の検出については、解析対象とした遺伝子数が少なかったため、さらなる解析を進めている。分子細胞遺伝学ネオ性染色体における組換え活性領域(新たなPAR)を同定するために、研究計画VIIのBACクローンの配列決定に加えて、RNA-seq解析で得られる遺伝子配列データを用いることで、より網羅的な解析を行うことを予定している。また、その他の研究計画に変更はないため、当初の予定通りに推進する。当初計画していた学会に参加しなかったため。平成27年度は、当初予定していなかった国際学会への参加が確定しているため、繰越分は旅費として使用する。
鼻過敏症の発症機序に関する研究

1.鼻粘膜の知覚受容と鼻粘膜反応1)鼻粘膜上皮層および上皮下層にSP、CGRP陽性神経繊維の密なネットワークが観察された。2)鼻粘膜への知覚刺激は延髄の三又神経脊髄で中断され、A noradrenergiccell group、青斑核、parabrachial nucleus、中核中心灰白質などへ伝達されている可能性が示唆された。3)鼻粘膜の知覚刺激に応じて、くしゃみ反射と同時に上唾液核の興奮を起こす副交感神経反射のプログラムが中枢に存在することを電気生理学的に示した。4)鼻粘膜を支配する副交感神経中枢である上唾液核の電気刺激は鼻粘膜抵抗血管、交換血管の血流増加、容積血管拡張、血漿蛋白血管外漏出、鼻汁分泌増加をおこした。上唾液核電気刺激による容積血管拡張はNOS阻害薬であるL-NAMEで完全に抑えることができた。副交感神経中枢興奮時にみられる鼻粘膜血流増加、容積血管拡張はNOを介するものと考えられる。2.鼻粘膜過敏症亢進の機序と病態1)鼻過敏症の病態・・・好酸球増多性鼻炎の背景には、不明の抗原に対するアレルギー反応または抗原-IgE以外の因子による好塩基性細胞の脱顆粒があるものと考えられた。血管運動性鼻炎では炎症細胞の関与はなく、鼻アレルギー、好酸球増多性鼻炎とは全く病因の異なる疾患と考えられる。背景には、知覚系の過敏性と同時に血管運動中枢から鼻粘膜における交感神経系の抑制と鼻粘膜副交感神経系の過反応がある。2)鼻粘膜過敏性と自律神経・・・アレルギーモルモットの鼻粘膜を用いたbioassay法により、鼻アレルギー鼻粘膜容積血管におけるNANC神経、特にNO作動性神経による弛緩反応の亢進を確認した。アレルギー反応は、求心系自体の過敏性を増強するのと同時に、鼻粘膜血管拡張反射の遠心路の過敏性をも亢進させることを示唆する。3)鼻粘膜におけるアレルギー性炎症の成立機序・・・(1)TNF-αとIFN-γの刺激により鼻粘膜培養上皮細胞、血管内皮細胞ともに多量のRANNTESを産生した。IL-1β刺激によっても同様にRANTES産生が観察された。TNF-αとIFN-γの刺激によって生じるRANTES産生量を鼻アレルギー症例と慢性副鼻腔炎症例で比較すると、鼻アレルギー症例において有意な高値を示した。(2)培養ヒト鼻粘膜内皮細胞を10^<-5>M以上のヒスタミンで刺激することによって、血管内皮細胞と好酸球との接着能の亢進を認める。抗ICAM-1、抗VCAM-1抗体の前処置は、ヒスタミンによる好酸球接着能に有意の変化を与えなかったが、抗ELAM-1抗体の前処置により、ヒスタミンによる接着能亢進作用はほぼ完全に抑制された。(3)抗VLA-4モノクローナ抗体の前処置により、抗原誘発後のアレルギーモルモット鼻粘膜にみられる好酸球浸潤、ロイコトリエン産生、さらには好酸球の活性化が抑制された。

(2)培養ヒト鼻粘膜内皮細胞を10^<-5>M以上のヒスタミンで刺激することによって、血管内皮細胞と好酸球との接着能の亢進を認める。抗ICAM-1、抗VCAM-1抗体の前処置は、ヒスタミンによる好酸球接着能に有意の変化を与えなかったが、抗ELAM-1抗体の前処置により、ヒスタミンによる接着能亢進作用はほぼ完全に抑制された。(3)抗VLA-4モノクローナ抗体の前処置により、抗原誘発後のアレルギーモルモット鼻粘膜にみられる好酸球浸潤、ロイコトリエン産生、さらには好酸球の活性化が抑制された。1.鼻粘膜の知覚受容と中枢投射に関する研究1)鼻粘膜への知覚刺激は延髄の三叉神経脊髄路核で中継され、A5.non-adrenergic cell group,青斑核、parabrachial nucleus、中脳中心灰白質などへ伝達されている可能性が示唆された。これらの部位からは上唾液核、脊髄中間外側核への投射が証明されており、上気道防御反射への深い関与が考えれた。2)上唾液核ニューロンの機能は種々のアミノ酸、アミン、神経ペプチドによって調節されていることが形態学的に証明された。3)鼻粘膜知覚を求心性入力とする副交感神経反射と、くしゃみ発作時のVidian神経活動の動員を電気生理学的に証明した。モルモット鼻粘膜のbioassay法により鼻粘膜血管反応におけるNANC神経伝達物質は、CGRP>SP>VIP>>Achの順で強い弛緩反応を示し、それぞれの血管弛緩反応はMO系を介さないことを確認した。一方、NANC状態の鼻粘膜をフィールド電気刺激した際に出現する鼻粘膜血管弛緩反応は、NO合成酵素阻害薬によりほぼ完全に抑制されることから、鼻粘膜においてもNO作動性神経が存在し、血管拡張反応に関与していることが確認できた。また、化学伝達物質であるヒスタミン、ロイコトリエンD4およびブラジキニンによる鼻粘膜血管拡張反応にも血管内皮が関与していることが確認できた。3.鼻粘膜における好酸球浸潤、活性化機序とその制御1)血管内皮細胞と好酸球との接着機構とこれに対するヒスタミンの作用ヒト鼻粘膜から分離した血管内皮細胞をヒスタミンで刺激すると好酸球に対する接着能は増加した。抗ELAM-1抗体の前処置により、ヒスタミンによる接着能亢進作用はほぼ完全に抑制された。ヒスタミンは、血管への接着の初期段階で重要なELAM-1やP-selectinの発現を増強させ好酸球の浸潤を助長させている可能性が示唆された。2)上皮細胞および血管内皮細胞からのサイトカイン産生と好酸球による影響好酸球extractは上皮細胞からのRANTES遊離を促進した。上皮細胞を好酸球との共存下で刺激するとIMF-γとTNF-αのcostimulationによるRANTES遊離は好酸球数依存的に抑制された。RANTES産生抑制には好酸球接着という条件が必要であり、共存下でも非接着時にはRANTES産生抑制は観察されなかった。好酸球は上皮細胞からのRANTES産生を促し、好酸球浸潤をさらに助長するが、上皮細胞に接着した後はRANTES遊離を抑制するシグナル伝達をおこないこれ以上の好酸球浸潤を抑制するものと思われる。4.鼻粘膜
多因子疾患発現機構解明のための混合遺伝モデルによる複数QTL解析法の開発

<背景と目的>医学の分野において,糖尿病や高血圧など,多因子疾患の発現機構の解明が重要な課題となっている.多因子疾患に関与する多数の遺伝子座(QTL)および環境因子は相互に影響し合っていると予想され,従来の1つのQTLのみを取り上げたQTL解析法ではその全容の解明は難しい.そこで,a)複数のQTL,b)QTL間の交互作用(エピスタシス),c)ポリジーン効果並びにd)環境効果を取り上げた混合遺伝モデル(Mixed Inheritance Model)による多因子疾患発現機構解明のための新たなQTL解析法を開発する.a)およびb)については実験家系をもとに,c)およびd)については外交配家系をもとに理論的検討を行い,最終的に両者を結合する.<検討結果>まず,第一段階として,a)およびb)のトピックスについてモンテカルロ法に基づく数理解析アルゴリズムの観点から理論・方法論的検討を行い,新たな複数のQTL解析法であるMonte Carlo-Interaction Mapping法(MC-IM法)を開発した.本法の特徴として,1)エピスタシス効果の検出を主効果の検出とは独立に行うこと,2)Greedyサンプリングによるエピスタシス効果の高速探索,3)主効果は持たないが交互作用効果のみを持っているQTLの検出,4)Permutation testによるエピスタシス効果の有意性検定が可能であることなどが挙げられる.図に,Q_1とQ_3が主効果を持っており,Q_2とQ_3の間にエピスタシスが存在する場合でのMC-IM法によるQTL解析の結果を示す.Q_2のようにエピスタシス効果のみを持つQTLも検出できている.また,すべてのQTLの分散成分を正しく推定することができた.<考察>新たに開発したMC-IM法により,主効果を持つQTLのみならず,従来検出が困難とされた主効果は持たないがエピスタシス効果だけを持っているQTLをも同時に速やかに複数検出することが可能となった.本MC-IM法の確立によって,これまでに提示されている他の複数QTL解析法(e.g.Kaoら(1999)によるMIM法など)以上に,集団内で互いに様々な形で関与しあっている複数のQTLを確実に検出する道が開かれたと結論付けられる.<背景と目的>医学の分野において,糖尿病や高血圧など,多因子疾患の発現機構の解明が重要な課題となっている.多因子疾患に関与する多数の遺伝子座(QTL)および環境因子は相互に影響し合っていると予想され,従来の1つのQTLのみを取り上げたQTL解析法ではその全容の解明は難しい.そこで,a)複数のQTL,b)QTL間の交互作用(エピスタシス),c)ポリジーン効果並びにd)環境効果を取り上げた混合遺伝モデル(Mixed Inheritance Model)による多因子疾患発現機構解明のための新たなQTL解析法を開発する.a)およびb)については実験家系をもとに,c)およびd)については外交配家系をもとに理論的検討を行い,最終的に両者を結合する.<検討結果>まず,第一段階として,a)およびb)のトピックスについてモンテカルロ法に基づく数理解析アルゴリズムの観点から理論・方法論的検討を行い,新たな複数のQTL解析法であるMonte Carlo-Interaction Mapping法(MC-IM法)を開発した.本法の特徴として,1)エピスタシス効果の検出を主効果の検出とは独立に行うこと,2)Greedyサンプリングによるエピスタシス効果の高速探索,3)主効果は持たないが交互作用効果のみを持っているQTLの検出,4)Permutation testによるエピスタシス効果の有意性検定が可能であることなどが挙げられる.図に,Q_1とQ_3が主効果を持っており,Q_2とQ_3の間にエピスタシスが存在する場合でのMC-IM法によるQTL解析の結果を示す.Q_2のようにエピスタシス効果のみを持つQTLも検出できている.また,すべてのQTLの分散成分を正しく推定することができた.<考察>新たに開発したMC-IM法により,主効果を持つQTLのみならず,従来検出が困難とされた主効果は持たないがエピスタシス効果だけを持っているQTLをも同時に速やかに複数検出することが可能となった.本MC-IM法の確立によって,これまでに提示されている他の複数QTL解析法(e.g.Kaoら(1999)によるMIM法など)以上に,集団内で互いに様々な形で関与しあっている複数のQTLを確実に検出する道が開かれたと結論付けられる.
コカインによる高体温に対するリスペリドンの有効性の検討

Cocaineにより高体温を呈して死亡する例が多数報告されているが、その治療法は確立されていない。そこで非定型抗精神病薬であるrisperioneがcocaineによる高体温を抑制するか検討した。Risperidoneによりcocaineによる高体温は有意に抑制された。この作用はrisperidoneのD1及び5-HT2A受容体拮抗作用によるものと推測された。また脳内微小透析法にてcocaineはDA, NAだけでなく5-HT濃度を上昇させ,risperidoneがDA上昇を抑制した。これらの結果からrispedioneはcocaineによる高体温に有効な薬剤であることが示唆された。平成25年度は非定型抗精神病薬であるリスペリドンがコカインによる脳内細胞間隙のモノアミン濃度上昇を抑制するか検討した。実験には200250gのWiater系雄性ラットを用い、測定場所は体温中枢である視床下部前野とした。直管型透析プローブを、Paxion&Watoson(1986)のアトラスに基づいてラットの視床下部(A:-1.1, V:-9.2, L:-0.9)に埋め込み、24-48時間後に実験を開始した。リンガー液(1ul/min)でプローブを還流し30分毎に、透析液を回収し、直接透析液をエイコム社製の電気化学検出器付高速液体クロマトグラフィー(HPLC)に打ち込み、モノアミンであるDA、NA, 5-HT濃度を測定した。モノアミンの濃度が安定したところを前値とし、コカイン10mg/kgをラットに腹腔内投与したところ、DA、NA, 5-HT濃度はそれぞれ前値の約25倍、17倍、6倍まで上昇し,コカインはDAだけでなくNAや5-HT濃度も上昇させることが明らかになった。リスペリドン0.5mg/kgをコカイン投与15分前に腹腔内投与したところDA、NA, 5-HT濃度はそれぞれ前値の約15倍、12倍、6倍でありDA濃度上昇は有意に抑制されたがNA,5-HT濃度上昇は抑制されなかった。この結果からリスペリドンはコカインによる細胞間隙DA濃度上昇を抑制することが明らかにされ、リスペリドンのコカインによる高体温抑制効果の一翼を担っていると推測された。またコカインによる各種作用は主にDA濃度上昇によるものと考えられており、リスペリドンは高体温のみならずコカインの様々な有害作用を抑制する可能性が示唆された。コカインは欧米で広く使用されている依存性薬物であり、本邦でもその使用が流行の兆しを見せている。コカインの過剰摂取による死亡例も多数報告されているが、コカインの死亡例はほぼ例外なく高体温を呈し、高体温が生命予後に深く関わっていると考えられている。そのためコカイン大量摂取時にはいかに高体温を抑制するかが治療上大変重要である。しかしコカインの高体温に関して臨床上確立された薬物治療は存在せず、対症療法が実施されるのみである。このためコカインの高体温に対する薬物治療の確立が切望されている。今回申請者は体温実験及び脳内微小透析法を用いてコカインによる高体温の機序の解明とその治療法の確立を目指す。申請者はコカインと同様に脳内DA,5-HT濃度を上昇させる違法薬物であるMDMA,METHにおいてDA1受容体だけでなく5-HT2A受容体が高体温に重要な役割を渡していることを明らかにしている。そこですでに臨床で使用されている抗精神病薬であり、DA1および5-HT2A受容体拮抗作用をもつリスペリドンがコカインの高体温を抑制するか検討した。リスペリドンはコカインの高体温を有意に抑制した。またリスペリドンのコカインの高体温を抑制する作用機序を明らかにするため、コカインによる高体温をD1, D2, 5-HT1A, 5-HT2A, 5-2B/2C各受容体拮抗薬が抑制するか検討したところ、D1,5-HT2A受容体拮抗薬は有意に抑制したが他の受容体拮抗薬は抑制しなかった。このことからリスペリドンのコカインによる高体温はD1受容体拮抗作用のみでなく5-HT2A受容体拮抗作用も関与していることが明らかとなった。またコカインによる高体温もMDMAやMETHと同様に5-HT神経系の活性亢進が関与してることが証明された。平成24年度において体温測定実験は予定通り実施完了し、脳内微小透析法についてもおおむね予定に沿って実験が遂行できているため。今後は脳内微小透析法を中心に研究を行う。脳内5-HT,DA,NA測定は同一のラットを用いて行う。測定はHTEC-500マイクロダイアリシスシステム(エイコム社)を用いてラットは無麻酔、無拘束下で行う。

Paxinos & Watsonのアトラスに基づいて体温中枢である視床下部に透析プローブを植え込み、24-48時間後に実験を開始する。リンゲル液を1μl/分で灌流し、30分毎に透析液を回収し、直接透析液をHPLCに打ち込み、それぞれの濃度を測定する。ベースラインが安定してきたところで、コカインを腹腔内投与し、それぞれの脳内濃度の上昇率を測定する。またこれらの濃度上昇がリスペリドンにより抑制されるか検討するリンゲル液を2μl/分で灌流し、15分毎または30分毎に透析液を回収し、直接透析液をマイクロダイリシスシステムHPLC(エイコム社)に打ち込み、それぞれの濃度を測定する。GlutamteはHTEC-500システムの構成を変更することで測定可能であり、NOはエイコム社のENO-20システムに打ち込み測定する。さらにリスペリドンの前投与がこれらの上昇を抑制するか検討する。次年度は脳内微小透析法を中心に行うためマイクロダイアリシスの消耗品代が研究費の中心を占める予定である。主に以下のものを予定している。3種モノアミン用カラムCAX(90×6本)分離カラムNOx用NO-PAK (98×5本)還元カラムNOx用NO-RED(35×5本) EICOMPAK分析カラムグルタメート用(GU-GEL)(220×5本)酵素カラムグルタメート用E-ENZYPAK(100×5本)なお不足研究費は講座研究費または自費を使用する予定である。
ヒト以外の高等霊長類における周思春期発育に関する形態学・生理学的比較研究

周思春期における著しい身体発育の解発要因として、身体充実をあげる仮説がある。そういった仮説を検討すべく、本研究ではニホンザルとチンパンジーの身体充実度の年齢変化を縦断的・横断的に分析考察した。まずニホンザルの身体充実年齢変化に関して、皮厚(皮下脂肪蓄積の尺度)と体格指数とを指標として検討した。横断的資料分析からは、皮厚に顕著な変化は見られなかったが、体重と前胴長より求められる体格指数では、周思春期に大きく変化することが確認された。指数は出生時100、成体時には110程度でこの間、指数は思春期開始直前に生涯最低値9095に低下し、思春期に45才まで急速に増加する。このような変化は長さ次元の成長が体重よりいく分早くスパートを開始するためだと考察された(ANTHROPOLOGICAL誌掲載予定論文)。ニホンザルの周思春期短期インターバル縦断的研究から、発育は季節性パターンが重なって複雑な様相を呈するが、性成熟に先立って身体充実度が増加することを見出した。メスでは3.5才、オスでは4.5才で性成熟を迎え、それに先立つ半年前から体格指数と皮厚はともに急速に増大する。また、このような年齢変化パターンがIGF-1といった内分泌系にも見られることは、興味深い。さらに性差はオスの方でスパート的急速な発育の期間が長いことによって形成されることも明らかにした(第16回国際霊長類学会大会で発表)。チンパンジーに関しては、縦断的資料を現在も収集中であるが、予備的分析では性成熟に先行して身体充実が進むことが認められている。このほか、TW2法に準拠して骨格発達標準を分析し、そのパターンがヒトのそれに似ているが、ヒトのコドモ期の長い抑制された発達期間が見られないこと、逆に思春期以降の発達完了までの期間が相対的にも、絶対的にも長いことを明らかにした(PRIMATES誌投稿中)。ニホンザルとチンパンジーの発育を横断的に分析した論文も23印刷公表した。今年度、周思春期霊長類個体に関する縦断的形態学的・生理学的同時研究システムの確立を重点的に行い、資料収集を開始した。さらに縦断的研究では個体数が限定されるので、横断的資料を追加した。対象としたのは霊長類研究所飼育群と野生辛島群(宮城県)で、発育に関して前者はニホンザルの標準に近く、後者は非常に遅滞しており、それらの間での周思春期発育パターンの比較は興味深い。体サイズ、生殖器管の発達、皮厚計測値や体充実度(BMI、相対的立方根体重)の年齢変化パターンを予備的に検討したところ、思春期ごろに著しい変曲点を持つことが明らかとなった。思春期解発に関連するとされる体組成・体脂肪蓄積は個体差が大きいため、資料を相当蓄積する必要があり、本年度はその収集に努めた。本年度末までに蓄積したチンパンジー手掌部X線写真を観察し、骨発達に関して予備的分析を行い、骨発達が体サイズ成長と同様、思春期ごろに加速することを明らかにした。内分泌生理学的研究では、ニホンザル前思春期年齢個体で集中的にGH分泌動態を調べた。その分析から、日内変動パターンや年齢変化の基礎的知見が得られ、季節変化などの長期的変化を検討するには、かなりの例数を蓄積する必要のあることを確認した。また、この年齢区間ではGHは著しい年齢変化を示さないため、来年度以降に急激な変化が期待できる。

性ホルモンについては縦断的に1月に1回の割合で血液を採取し、定量データを蓄積している。以上のような研究システムにより、形態学的資料と生理学的資料が同時に収集され、データを分析することで思春期解発の詳細なメカニズムが明らかになり、ヒトの特徴的な発育パターン進化の解明も可能になると期待される。霊長類研究所(京都大)、霊長類パーク((株)三和化学研究所)飼育のチンパンジー、それぞれ3頭、8頭、及び霊長類研究所飼育のニホンザル5頭について、縦断的発育研究の一環として生体計測、手掌部X線写真撮影を行い、これまでに得られているデータと併せて発育曲線分析を行った。チンパンジーの周思春期の発育速度の増減が以前、横断的研究で得られたものより約2倍程度の著しさであったこと等の注目される結果が得られた。例えば横断的研究で得られたピーク速度はオスで6kg/年であったが、1頭のオス個体の縦断的分析による速度は約11kg/年であった。さらに重要な知見として胴長の成長に思春期成長加速がみられた。この知見は従来のヒト以外の霊長類発育に関する常識を覆すものであり、縦断的手法の有効性を示すものである。ニホンザルの追跡個体のうち、メス個体は本年度の秋から冬にかけて、性皮腫脹とメンスを示し、それとほぼ同時期に体重の著しい加速的増加を示した。このことはSomaticsystemと生殖Systemの間に同期的発育の存在を示し、これら2System間の時系列解析により、身体の充実(脂肪蓄積)と思春期開始の間機序があきらかになると思われる。この点については、計測と同時に採血も行っているので、ホルモン定量による生殖系成熟過程の詳細な定量的追跡も今後に期待できる。オス個体については、4歳以前の段階ではSomatic systemと生殖Systemの両方ともに、ゆるやかな増加を示しており、今後のスパート的成長の開始が待たれる。両種について、前述の計測に基づく発育研究とは別に、手掌部骨格の発達(化骨化/骨端閉塞)過程についても分析を進めており、成熟度スコアの増減パターンがチンパンジーとヒトの間で著しく類似していること、コドモ期に見られる低増加期間の長さがヒトの特徴であること等の知見が得られた。高等霊長類にみられる周思春期における著しい身体発育の解発要因として、蓄積脂肪率などの尺度ではかられる身体充実をあげる仮説がある。そういった関係を明らかにすべく、本研究ではまずニホンザルとチンパンジーの身体発育の概要を横断的に検討した。骨格発達をTW2法でチンパンジーの発達標準を分析し、ヒトのパターンに似ているが、ヒトの特に男性に見られる長い、抑制された発達がチンパンジーには見られないこと、逆に思春期の速度曲線ピークから発達完了までの期間が絶対的にも長いことを示すことができた。ニホンザルの身体充実年齢変化に関して、体格指数と皮厚(皮下脂肪蓄積の尺度)とを指標として検討した。体格指数は体重と前胴長より計算され、出産時100成体時110程度である。この間、指数は思春期開始直前に最低値9095に低下し、思春期に45才まで急速に増加する。このように体格指数が周思春期に大きく変化することが確認された。この変化は体重と長さ次元の成長パターンが微妙に異なるためであろうと考えられる。横断的資料分析からは、周思春期の皮下脂肪蓄積量変化は明らかとならなかった。
ルイス酸の電子移動触媒作用に関する研究

本研究では種々のルイス酸の電子移動触媒作用について系統的に検討を行ない、ルイス酸の電子移動触媒作用機構を一般的に明らかにした。(1)ルイス酸存在下における基質の還元電位各種金属イオン(Li^+,Mg^<2+>,など)が存在するときの種々の基質の還元電位の変化を決定し、金属イオンと種々のラジカルアニオンとの相互作用について知見を得た。(2)アクリダンダイマーから基質への電子移動反応におけるルイス酸の触媒作用アクリダンダイマーから種々の基質への電子移動反応における各種ルイス酸の触媒作用について系統的な速度論解析を行なった。特にフラビン類縁体および酸素が基質の場合、そのラジカルアニオンがマグネシウムイオンと1:2錯体を形成することにより電子移動反応の有効な触媒として機能することを見いだした。(3)ルイス酸電子移動触媒を用いた炭素-炭素結合生成反応(1),(2)の結果を基に様々な炭素-炭素結合生成反応について検討を行った。特にマグネシウムイオンをルイス酸触媒として用いると、芳香族カルボニル化合物と錯体を形成することにより、その光励起状態の酸化活性が顕著に向上し、種々の有機金属化合物およびアルキルベンゼン類からマグネシウムイオン錯体の一重項励起状態への電子移動を経て、芳香族カルボニル化合物への1,2-付加反応が効率良く進行することを見いだした。レーザーフラッシュフォトリシスにより、錯体形成によるT-T吸収スペクトルの変化および蛍光寿命の変化についても測定を行い、錯体の励起状態について明確な知見を得た。また、マイケル付加反応においても適当なルイス酸を選択することにより従来の塩基性あるいは酸性条件下での反応とは異なり、中性に近い温和な条件において炭素-炭素結合生成反応を可能にした。
インプラント周囲上皮の口腔粘膜疾患に対するリスク評価法の確立

口腔粘膜の貫通からなるインプラント周囲組織(PSIT)は、慢性的に炎症を伴っていることから、口腔粘膜疾患を発症する危険性が高いと考えられる。本研究は、口腔粘膜組織(OMT)と比較したPISTの特異的遺伝子を特定し、腫瘍発現の関連性を明らかとすることを目的とした。ラットのPISTとOMTを試料として用い、マイクロアレイ法により3個の特異的遺伝子:Ceacam1、Ifitm1、Muc4を抽出した。Ceacam1は、免疫防御機構に関与、Ifitm1やMuc4は腫瘍発現に関与することが報告されている。よって、本研究で同定された遺伝子の発現がインプラント周囲上皮の口腔粘膜疾患発症に関与する可能性がある。インプラント治療患者は、口腔癌の好発年齢層と重なり、またインプラントの粘膜貫通部は慢性的な炎症を伴う環境下であることから、インプラント周囲上皮は癌を含む粘膜疾患のリスクが高いと考えられる。インプラント周囲炎に関する研究は数多くされているが、インプラント治療に伴う口腔粘膜への影響や粘膜疾患の発症に観点をおいた研究はされていない。本研究の目的は、1インプラント周囲上皮の経時的な遺伝子発現プロファイルを作成、口腔粘膜上皮との比較検討を行ない、24-NQOを用いた口腔癌の自然発癌実験モデルを用いて、同定された腫瘍関連遺伝子の発現を比較・同定し、インプラント周囲上皮の悪性化における特異的な遺伝子を特定することで、インプラント治療に伴う口腔粘膜疾患へのリスク評価法を確立することである。平成25年度は、動物実験により得られたインプラント周囲上皮および口腔粘膜上皮の遺伝子発現解析を中心に行なった。実験群はインプラント体埋入後のインプラント周囲組織、対照群は治癒後の口腔粘膜組織としGeneChip(Rat genome 430 2.0 array)にてHybridization後に、アレイ統計解析ソフトGeneSprings GXを用いて、網羅的遺伝子発現の検索を行った。発現差の多い遺伝子を抽出し、その後発現差を定量するために定量的RT-PCRを行ない、腫瘍の形成や細胞増殖に関与しているCeacam1, Ifitm1, Muc4の3遺伝子が口腔粘膜上皮に比較してインプラント周囲上皮に多く発現していることが明らかとなった。現在、これらの遺伝子の局在性を検討するために、免疫組織化学染色法やレーザーマイクロダイセクション法によるインプラント周囲上皮のみのサンプリングを行っている。今後、上皮内において発現上昇が確認された遺伝子について、4-NQOによる自然発癌モデルによって、その発現変化と局在を検討していく予定である。インプラント治療は、口腔癌の好発年齢層に患者が多く、また慢性的炎症を伴う特殊な環境下であることから、インプラント周囲上皮は癌を含む粘膜疾患のリスクが高いと考えられる。インプラント周囲上皮は、天然歯の付着上皮と比較して細胞増殖能は低く細胞接着機構が乏しいことから、インプラント周囲炎のリスク評価については数多く研究がなされているが、インプラント治療に伴う口腔粘膜への影響や粘膜疾患の発症に観点をおいた研究はなされていない。本研究の目的は、1インプラント周囲上皮の経時的な遺伝子発現プロファイルの作成と口腔粘膜上皮との比較検討を行ない、24-NQOを用いた口腔癌の自然発癌実験モデルを用いて、同定された腫瘍関連遺伝子の発現を比較・同定し、インプラント周囲上皮の悪性化における特異的な遺伝子を特定することで、インプラント治療に伴う口腔粘膜疾患へのリスク評価法を確立することである。平成24年度は、インプラント周囲上皮と口腔粘膜上皮との比較検討を主体に行った。4週齢雄性ラットの上顎第一臼歯を抜歯し、実験群にはインプラント体埋入後のインプラント周囲組織、対照群は治癒後の口腔粘膜組織とし、GeneChipマイクロアレイ(Rat genome 430 2.0 array)にてHybridization(各群;n=2)後に、アレイ統計解析ソフトGeneSprings GXを用いて、網羅的遺伝子発現の検索を行った。これらの遺伝子群に対してGO解析をおこない、刺激応答に関連する遺伝子が主であることをインプラント関連学会にて報告した。現在、これらの遺伝子群から、発癌に関連する遺伝子を抽出し、インプラント周囲上皮における継時的な変化に対して、遺伝子の発現量の変化は定量的RT-PCR法、発現の局在性は免疫組織学的染色法などを用いて検討を行う予定である。インプラント治療患者は口腔癌の好発年齢層と重なり、またインプラントの粘膜貫通部は慢性的な炎症を伴う環境下であることから、インプラント周囲上皮は癌を含む粘膜疾患のリスクが高いと考えられる。

本研究の目的は、インプラント周囲上皮の経時的な遺伝子発現プロファイルを作成し、口腔粘膜上皮との比較検討を行ない、同定された腫瘍関連遺伝子の発現を比較・同定しインプラント周囲上皮の悪性化における特異的な遺伝子を特定することで、インプラント治療に伴う口腔粘膜疾患へのリスク評価法を確立することである。平成26年度は、上皮への特異的な遺伝子発現を検討するためのレーザーマイクロダイセクション(LMD)法によるインプラント周囲上皮のサンプリング法を確立した。同方法を用いることでマイクロアレイ法にて抽出された各遺伝子が上皮に特異的に発現しているかを確認することが可能となった。現在は、定量的RT-PCR法を行うのに必要なサンプル数を確保するため、継続して行っている。また4-NQOによる自然発癌モデルによる検討も並行して行ったが、長期飼育に伴う動物の死亡、インプラント脱落や歯肉に薬剤が停滞しにくいなどから、比較検討を行うのに必要なサンプル数の確保が困難であった。また、前年度のマイクロアレイによって同定された腫瘍の形成や細胞増殖に関与しているCeacam1, Ifitm1, Muc4の3遺伝子に対して、免疫組織化学染色法よるタンパクレベルでの発現ならびに局在の確認を行った。CECAM1、IFITM1はインプラント周囲上皮内、MUC4はインプラント周囲上皮表層に局在した傾向が認められた。これらの結果についてはThe International Journal of Oral & Maxillofacial Implantsへの投稿を行った。再生医学平成25年度は、動物実験によりえられた、インプラント周囲上皮および口腔粘膜上皮のマイクロアレイ法による遺伝子発現解析およびターゲット遺伝子の定量的RT-PCR法を中心に行なった。対象組織のサンプリングには実体顕微鏡をを用い、抽出したtotalRNAの品質評価にはキャピラリー型電気泳動法を用い確認を行った。その結果、マイクロアレイ解析に十分は量および質であることが確認できた。マイクロアレイ解析にはアフィメトリクス社のGeneChipを使用し、解析にはgenespring GXを使用した。解析結果から、口腔粘膜組織と比較しインプラント周囲組織において発現変動が認めたれた(Fold Change 2.0以上)の遺伝子を抽出し、その中には腫瘍の形成や細胞増殖に関与している遺伝子が、インプラント周囲上皮に発現していることがわかった。定量的RT-PCRでは遺伝子の詳細が不明なものや、プライマーがないものに関しては省略し、その中でも発現変度の大きかったCeacam1, Ifitm1, Muc4の3遺伝子の発現量の定量を行なった。インプラント周囲組織における遺伝子発現プロファイルの作成、定量的RT-PCR法による遺伝子発現の定量化は終えており、おおむね計画通りに進展してると思われる。現在はターゲット遺伝子の局在を検討するために免疫組織染色法を行なっているが、口腔組織における染色条件は確立しておらず、抗原賦活化、ハイブリダイゼーションの条件を模索中である。
三叉神経痛覚情報処理過程における神経ペプチドとＧＡＢＡニューロンの関係

三叉神経痛の慢性化や片頭痛の成因に脳幹の三叉神経脊髄路核(Sp5c)内におけるカルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)の関与が考えられている。GAD67-GFPノックインマウスを用いることでSp5cのGABA性ニューロンを蛍光顕微鏡で見ることができる。同時にCGRPならびにCGRP受容体(CRLR)の分布を免疫組織化学的手法により検討した。その結果、CGRPはSp5cの背外側部に存在していたが、核内には存在していなかった。CRLRはSp5c内のGABA性および非GABA性ニューロンにおいて発現していた。Sp5c内のCRLRの活性化が三叉神経痛の慢性化や片頭痛を引き起こすものと思われる。三叉神経を介する慢性的な疼痛や片頭痛は、脳幹の三叉神経脊髄路核内ニューロンの感作・脱感作が原因と考えられている。これらの疼痛の慢性化にサブスタンスP(SP)やカルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)などの神経ペプチドの関与が示唆されている。本研究では、生後1週齢のGAD67-GFPノックインマウスを用い三叉神経脊髄路核内のSPあるいはCGRPを含むニューロンあるいはそれらに対する受容体の分布とGABAニューロンの分布を比較し、三叉神経痛覚情報処理過程におけるSPおよびCGRPとGABA性ニューロンの役割を解明する。平成23年度の研究では、免疫組織化学的手法の確立とCGRPニューロンと三叉神経脊髄路核内のGABA性あるいは非GABA性ニューロンとの接続様式を明らかにすることを目的とした。GAD67-GFPノックインマウスの脳幹を単離し、固定し、厚さ20μmの脳幹の横断切片を作成し、CGRP受容体(CRLR)の標識を行ったところ、三叉神経脊髄路核にCRLRを持つニューロンが確認された。平成23年度の実験では、CRLR陽性ニューロンとGFP陽性ニューロンすなわちGABA性ニューロンとは重ならなかったが、平成24年度の追加実験においては、GABA性ニューロンにおいてもCRLRを発現していることが明らかとなった。また、非GABA性ニューロンにおいてもCGRP受容体を発現しているものと発現していないものが存在した。平成24年度の研究では、さらに三叉神経脊髄路核のSP(NK-1)受容体の免疫染色を行った。NK-1受容体は、主に非GABA性ニューロンにおいて発現していた。以上の結果から、三叉神経節のCGRPニューロンは三叉神経脊髄路核でGABA性と非GABA性ニューロンの両方に、三叉神経節のSPニューロンは三叉神経脊髄路核で非GABA性ニューロンだけに接続しているものと考えられた。GAD67-GFPノックインマウスの脳幹を単離し、固定した。ビブラトームにより厚さ20μmの脳幹の横断切片を作成し、CGRP受容体(CRLR)の標識を行ったところ、三叉神経脊髄路核にCRLRを持つニューロンが確認された。平成24年度の実験においては、GABA性ニューロンおよび非GABA性ニューロンにおいてもCGRP受容体を発現しているものと発現していないものが存在した。さらに三叉神経脊髄路核のSP(NK-1)受容体の免疫染色を行った。平成25年度の研究では、三叉神経脊髄路核内のCGRPの染色を行った。CGRPニューロンは三叉神経脊髄路核の外縁部に存在していたが、GABA性ニューロンとは重ならなかった。