hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
特別支援教育における食育の役割に関する研究

佐賀県立盲学校や佐賀県O中学の生徒にアンケート調査や聞き取りを行った。結果、生活スタイルや食習慣と自己管理スキル尺度の関連を調べたところ、朝食を食べる頻度が多いほど、計画性因子が高いことがわかった。佐賀県内幼稚園におけるアンケート調査の結果に基づき、食育の観点からみた幼児の生活習慣と親の知識・意識の関連を報告した。指導スキルは保育者の経験年数とともに上昇していた。また、視覚障害児や聴覚障害児の食育についても考察し、視覚障害、聴覚障害に関する基本的意見、特に調理や味覚、食卓のあり方をレビューした。病弱児の食育についても検討を進め、特に1型糖尿病の教育ニードについて報文としてまとめ、発表した。知的障害の予防について、先天性甲状腺機能低下症メススクリーニングについて報告した。母体ヨード摂取の点が食育と関連を持っていた。病弱教育に関する研究として、ornithine transcarbamylase deficiencyのたんぱく質摂取の問題を報告した。改正された学校教育法、教育職員免許法における5領域の障害カテゴリーに基づいて、それぞれのカテゴリーごとの食育のあり方について先行研究を収集した。また、改正法に対応した教員養成カリキュラムのあり方を検討し、報告した。障害児医療保障について、児童福祉法における小児慢性特定疾患治療研究事業の位置づけを報告した。特別支援教育のニードを持つ疾患に関する検討を行った。その結果、現在のDSM-IV-TRに関して問題定義を行った。仙台における学会発表では、基本的な高血糖対策が十分習得できている患者に対し、それ以上の低血糖対処スキル教育を行うには、個別に要因を分析し、対応策を検討する必要があることを述べた。本年度は次の手順で研究を進めた。1.特殊教育から特別学校教育への移行にともなう学校制度や教員免許制度の変革について、文献およびweb情報を調査し、その中でどのような形式の食育が必要なのか考察した。中央教育審議会初等中等教育分科会の答申「特別支援教育を推進するための制度の在り方について」と、同教員養成部会の報告「特殊教育免許の総合化について」が重要なものであり、その内容は学校教育法、教育職員免許法の一部改正に結実しつつある。細分化、専門化が進んできた特殊教育分野が、転換点を迎えていることが理解された。2.盲・ろう・養護学校一体化に代表される、細分化専門化を、総合化一般化に置き換える方向性に基づいて、視覚障害児、聴覚障害児の食育も他領域から分離せず考えることとした。視覚障害、聴覚障害に関する基本的知見、特に調理や味覚、食卓のあり方に関する先行研究、最近の進歩をレビューした。視覚障害者のための調理器具、食器などのさまざまな工夫、拡大ビューア、諸種のIT機器の利用や、新生児聴覚スクリーニングやデジタル補聴器、人工内耳による聴覚障害の予防・治療によるQOL向上が生活全般に与える影響を調べた。3.佐賀県立盲学校を訪問し、視覚障害者の調理実習を見学し、アンケート、聞き取り等の調査に着手した。4.一方で、病弱児の食育についての検討をすすめ、特に1型糖尿病の教育ニードについて調査、考察をすすめ、報文として発表した。「糖尿病にともなう特別ニードを支援するカリキュラムの策定に関する研究III糖尿病性ケトアシドーシスの対応に関する教育担当者向け教材について」では、糖尿病性ケトアシドーシスにおける疾病教育、食育について述べ、「同研究IV低血糖予防ガイドラインについて」では、低血糖予防における食育の重要性を述べた。「高齢入院患者の栄養状態とそれに影響を及ぼす因子」では、生涯にわたる食事教育の重要性を述べた。1.佐賀県O中学の生徒651名を対象にアンケート調査を行った。(自記式無記名の集合調査法)生活スタイル、食習慣、自己管理スキル尺度を調査項目とし、調査結果を因子分析等の方法で解析した。

自己管理スキル尺度の下位項目については、不注意因子(α=.65)、計画性因子(α=.62)、マイナス思考因子(α=.57)、の3因子から構成されていることが分かった。次におやつの内容について分析した。第1因子:ジャンクフード系(α=.70)、第2因子:主食系(α=.67)、第3因子:健康志向系(α=.45)の3因子が抽出された。さらにどんなときにおやつを食べるかを分析した。第1因子:直接誘因(α=.77)、第2因子:状況誘因(α=.65)の2因子が抽出された。生活スタイル、食習慣と自己管理スキル尺度の関連を調べたところ、朝食を食べる頻度が多いほど、計画性因子が高かった(p=0.03)。2.佐賀県S幼稚園の保育者25名を対象に、特別支援を要する児に対する指導スキルについて、食育を中心に調査した。指導スキルは、保育者の経験年数とともに上昇していた。3.改正された学校教育法、教育職員免許法における5領域の障害カテゴリーに基づいて、それぞれのカテゴリーごとの食育のあり方について先行研究を収集した。4.・知的障害の予防について、先天性甲状腺機能低下症マススクリーニングについて報告した。母体ヨード摂取の点が食育と関連をもっていた。・病弱教育に関する研究として、ornithine transcarbamylase deficiencyのたんぱく質摂取の問題を報告した。・障害児医療保障について、児童福祉法における小児慢性特定疾患治療研究事業の位置づけを報告した。・佐賀県内幼稚園におけるアンケート調査の結果に基づき、食育の観点からみた幼児の生活習慣と親の知識・意識の関連を報告した。・改正された学校教育法、教育職員免許法に対応した教員養成カリキュラムのあり方を検討し、報告した。本年度は次のように研究を進めた。1.「劇症型で発症し、不幸な転帰をとった遅発型OTC欠損症の1例」を報告した。本疾患は発症頻度が比較的高く、すべての年齢層で発症し、高アンモニア血症の鑑別として重要である。予後改善のためには早期診断・早期治療および発症予防が大切であると考察した。2.糖尿病特別ニードの支援カリキュラム策定の一環として、「強化インスリン療法支援を目的とした学校との連絡会議」の実施に関する検討及び、米国糖尿病協会診療ガイドライン「学校、幼稚園、保育園での糖尿病の子どものケア」の翻訳を示した。3.特別支援教育のニードを持つ疾患に関する検討を行った。「軽度発達障害」の3類型・・・学習障害・ADHD圏・自閉症圏・・・の疾患概念がそれらの名称と分類上の位置において、どのような変遷をたどったか、調査した。その結果、現在のDSM-IV-TRに関して疾患名や分類基準の観点から見ても、適切ではない部分もあると問題提起を行った。
ゲノム編集ツールを用いたオンデマンド変異動物作製法の開発

新たなゲノム編集技術であるCRISPR/Cas9システムは、簡便かつ高効率に遺伝子改変動物を作製することができる。本課題では、単純な遺伝子破壊ではなく、点変異やノックインなどのより高度なゲノム編集を試みた。まず、受精卵注入法で試みたところ、0.1kb以下のノックインは効率良く導入できたが、それ以上のノックインはうまくいかなかった。つまり、受精卵注入法でのノックイン効率は、導入カセットの大きさに依存して低下することが分かった。次に、相同組換え効率が高いマウスES細胞を用いたところ、一本鎖オリゴDNAよりも二本鎖DNAの方がはるかに効率良く、そして両アリルへ目的変異を導入できた。生命科学研究の発展において、個体レベルでの遺伝子機能解析が果たしてきた役割は大きい。近年報告された次世代のゲノム編集技術であるCRISPR/Cas9システムは、従来法に比べて、非常に簡便かつ高効率に遺伝子改変動物を作製することができる。本課題では、単純な遺伝子破壊(KO)ではなく、点変異やノックインなどのより高度なゲノム編集を試み、CRISPR/Cas9システムを使ったオンデマンド変異動物作製法の構築を目指した。われわれは以前に、sgRNA/CAS9共発現プラスミドDNAを環状のまま受精卵へ注入することで、効率良くKOマウスを作製できることを報告した(Sci Rep. 2013, Dev Growth Differ. 2014)。まず始めに、同様の方法で点変異およびノックインマウスの作製を試みた。その結果、点変異(一本鎖オリゴDNA導入)やタグ(二本鎖DNA導入)などの0.1kb以下のノックインは効率良く導入できたが、GFPなどの1kb程度の発現カセットのノックインは、ほとんどのケースでうまくいかなかった。そこで、ゲノム編集効率が高いと報告されているマウスES細胞を使って、点変異やノックインを試みたところ、受精卵注入法とは異なる結果が得られた。つまり、一本鎖オリゴDNAよりも二本鎖DNAの方が、はるかに効率良く目的変異を導入することができた。さらに、従来のターゲティングベクターの相同領域は、両腕とも5kb程度必要であったが、CRISPR/Cas9システムを使ってES細胞へ変異導入する際はそれぞれ0.51.0kbで十分であることも分かった。実験動物学、発生工学
染色体活性化ダイナミクスの制御によるストレス耐性細胞の分子育種

酵母のGTS1遺伝子を過剰発現させた際に細胞の凝集・熱耐性が見られるが、この際にクロマチンの構造変化が示唆されている。Gts1タンパク質と相互作用するタンパク質の精製・同定を試みたところ、Ssa1が相互作用タンパク質であることを明らかにした。また、Ssa1と相同性の高いSsa2も相互作用することが分かった。二重破壊株ssa1Δssa2Δを作製し、GTS1を過剰発現させると、細胞の熱耐性がより向上した。以上のようにGTS1過剰発現による細胞の熱耐性誘導機構に関して興味深い知見が得られた。真核生物においてクロマチンリモデリングは、転写・複製・修復などのゲノム機能において重要な役割を果たしていることが明らかになりつつあるが、その動作原理や制御機構についての詳細は分かっていない。酵母のGTS1遺伝子を過剰発現させると細胞凝集、熱耐性、薬剤耐性などの多面的な表現型の変化を示すが、これまでの遺伝子破壊による解析結果から、GTS1過剰発現の際にクロマチンリモデリングが誘起されていることが示唆されたため、GTS1過剰発現細胞をモデル系としクロマチンリモデリング制御機構の解明とストレス耐性の分子育種を目指して研究を行い、以下のような成果を得た。まず、MNase assayによって実際にクロマチンリモデリングが誘起されていることを確認した。すなわち、細胞から核画分を抽出し、酵素処理によるクロマチン構造の断片化を行った後、DNAを抽出して電気泳動しヌクレオソームマッピングを行った。その結果、遺伝子破壊による解析結果と一致して実際にクロマチンリモデリングを確認することができた。また、tandem affinity purification法により、Gts1タンパク質と相互作用する因子の同定を行った。Gts1タンパク質をタグ付きのタンパク質として過剰発現した細胞を破砕したのち、細胞抽出液からタグを介してGts1タンパク質とこれに結合しているタンパク質を複合体として精製し、相互作用タンパク質の同定を行った。その結果、新規な相互作用因子としてSsa1タンパク質を同定することができた。さらに、過剰発現したGts1タンパク質が核内において凝集体を形成し、このことが情報伝達において重要であることも明らかにした。これらの結果からクロマチンリモデリング制御機構に関する興味深い知見が得られた。真核生物においてクロマチンリモデリングは、転写・複製・修復などのゲノム機能において重要な役割を果たしていることが明らかになりつつあるが、その動作原理や制御機構について詳細には分かっていない。酵母のGTS1遺伝子を過剰発現させると細胞凝集、熱耐性、薬剤耐性など多面的な表現型の変化を示すが、これまでに行った遺伝子破壊による解析結果から、GTS1過剰発現の際にクロマチンリキデリングの誘起が示唆されたため、GTS1過剰発現細胞をモデル系とし、クロマチンリモデリング制御機構の解明と熱などのストレス耐性の分子育種を目的として研究を行い、以下のような成果を得た。Tandem affinity purtfication法により、Gts1タンパク質と相互作用するタンパク質の精製・同定を試み、Ssa1を同定した。免疫沈降法により相互作用を確認するとともに、Ssa1と相同性の高いSsa2もまたGts1と相互作用することを明らかにした。定量RT-PCRによりSSA1とSSA2の転写量を測定したところ、定常期においてGTS1過剰発現により転写量の増加が見られた。これらは定常期の熱ストレスによって誘導される遺伝子であるため、GTS1の過剰発現が細胞の熱ストレス応答系を誘起している可能性が考えられた。また、GTS1の過剰発現により熱耐性の向上が見られるが、破壊株(ssa1Δ, ssa2Δ, ssa1Δssa2Δ)においてGTS1を過剰発現させたところ、ssa1Δssa2Δでは熱耐性がより向上した。そのため、Ssa1,とSsa2は相互作用を介してGts1による熱耐性の誘導を阻害していることが示唆され、GTS1過剰発現による細胞の熱耐性誘導機構に関して興味深い知見が得られた。
トウモロコシC_4型PEPカルボキシラーゼ遺伝子のタバコへの形質転換とその発現解析

カリフラワーモザイクウィルス(CaMV)35Sプロモーターの制御下にトウモロコシ由来のC_4型PEPC遺伝子cDNAが発現するように構築したキメラ遺伝子を作製した。これをアグロバクテリウムを介したリーフディスク法によりタバコに導入し、形質転換タバコを5系統育成した。これらの植物体を用いて以下の解析を行なった。(1)ノーザン法による転写産物の確認:C_4型PEPCのコーディング部分をプローブとした解析により、形質転換植物において外来遺伝子由来の転写産物が確認された。(2)後代への遺伝:形質転換植物の後代の解析により導入遺伝子が安定に遺伝していることが確認された。(3)PEPCの発現量及び酵素活性:抗C_4型PEPC抗体を用いたウエスタンブロッティングの結果、形質転換体におけるPEPCの発現量は非形質転換体の約2倍に上昇していた。また酵素活性は1.5倍から2倍に上昇し、反応速度論的解析からも基質であるPEP(ホスホエノールピルビン酸)に対するκmの低いタバコPEPC由来(内生)の活性とκmの高いトウモロコシPEPC由来(外生)の活性が見いだされた。(4)生理学的特徴:形質転換植物と非形質転換植物を種々の温度、二酸化炭素濃度条件下で育てたところ、いずれの条件下においても形質転換体の方が生育速度が遅かった。またクロロフィル含量も形質転換体において低下していた。(5)光合成特性:単位面積当たりの光合成速度、光補償点、光飽和点、二酸化炭素補償点に関しては、形質転換体と非形質転換体の間で顕著な差異は見いだされなかった。しかしながら、光合成における光量子収率の葉温の上昇に伴う低下が、形質転換体において緩和される傾向が示された。上記の結果より、トランスジェニック植物においては活性のある外生のC_4型PEPCが発現している事、またこれによって光合成特性も変化している事が示唆された。
高齢者の大脳白質にMRI T_2強調画像にて高頻度に認められる高信号域の解明

老年病研究所附属病院において剖検された症例の中で,死亡前のMRI(0.2T)検査で大脳白質にT2強調画像(TR2000/TE110)にて散在性に高信号域がみられた症例を対象に検索した.症例は6例(5388歳,MRI撮像から死亡までの期間は16日以内が4例,他の2例は41日と4カ月.1例は固定後にもMRIを撮像)で,約2週間ホリマリンに固定後,MRIの断面にできるだけ沿うように5mm間隔で水平断し,写真撮影をした後,型の如くパラフィン包埋大切片を作成した。HE,HE+LFB,Mallory染色,Bielshowsky染色,抗GFAPと抗neurofilament抗体を用いた免疫染色などを施し,MRI画像所見,肉眼所見,組織所見を対比検討した.結果:(1)大脳白質にみられたT2強調画像での高信号域の中で,67mm大以上で比較的強い信号強度で不規則な形態を示すものの大半は陳旧性の小梗塞であった。(2)MRI上約25mm大で脳室と同程度の高信号を示す部位に相当するところには肉眼的に明らかな梗塞巣はなく,対応すると考えられる部位には血管を中心に髄鞘の淡明化がみられた.髄鞘・軸索の断裂や星膠細胞の増生はみられなかった.これらの近傍の大脳白質の血管には広汎に動脈壁の肥厚や小血管周囲の海綿状変化もみられた.(3)被殻などにみられような大きな血管周囲腔(Virchow-Robin腔)の拡大はこのような部位にはみられなかった.考察と結論:高齢者で高頻度にみられる大脳白質のT2強調画像上の微細な高信号域は,主として小梗塞と血管周囲の淡明化よりなっており,両者はMRI上,大きさ・形態・信号強度などよりほぼ区別できた.血管周囲の髄鞘の淡明化は,単なる加齢的変化ではなく,病理学的には動脈壁の肥厚を基盤とした循環不全に起因した病変を反映しているものと考えられた.追記:研究発表覧には補助金にて購入した機器を利用して行った研究業績も記入した.老年病研究所附属病院において剖検された症例の中で,死亡前のMRI(0.2T)検査で大脳白質にT2強調画像(TR2000/TE110)にて散在性に高信号域がみられた症例を対象に検索した.症例は6例(5388歳,MRI撮像から死亡までの期間は16日以内が4例,他の2例は41日と4カ月.1例は固定後にもMRIを撮像)で,約2週間ホリマリンに固定後,MRIの断面にできるだけ沿うように5mm間隔で水平断し,写真撮影をした後,型の如くパラフィン包埋大切片を作成した。(2)MRI上約25mm大で脳室と同程度の高信号を示す部位に相当するところには肉眼的に明らかな梗塞巣はなく,対応すると考えられる部位には血管を中心に髄鞘の淡明化がみられた.髄鞘・軸索の断裂や星膠細胞の増生はみられなかった.これらの近傍の大脳白質の血管には広汎に動脈壁の肥厚や小血管周囲の海綿状変化もみられた.(3)被殻などにみられような大きな血管周囲腔(Virchow-Robin腔)の拡大はこのような部位にはみられなかった.考察と結論:高齢者で高頻度にみられる大脳白質のT2強調画像上の微細な高信号域は,主として小梗塞と血管周囲の淡明化よりなっており,両者はMRI上,大きさ・形態・信号強度などよりほぼ区別できた.血管周囲の髄鞘の淡明化は,単なる加齢的変化ではなく,病理学的には動脈壁の肥厚を基盤とした循環不全に起因した病変を反映しているものと考えられた.追記:研究発表覧には補助金にて購入した機器を利用して行った研究業績も記入した.
気道で発見した2種のトリプターゼの遺伝子工学的合成と、疾患の診断と治療への応用

我々がヒト気道で新しく見出したヒト気道トリプシプシン様プロテアーゼ(HAT)の気道におけ生理的意義と気道炎症における病態的意義を解明するために、以下の研究を行った。1.HATの局在部位:クローニングに成功したHAT遺伝子をvaculovirusをベクターとして昆虫細胞に導入し、組換えHAT(r-HAT)を生合成した。このrHATに対する抗体を4種類作成した。その内のマウスモノクロナル抗体を用い、肺手術時に得られた気管支組織を対象に超感度免疫組織染色法で、HATの局在部位を検索した。この方法で、HAT陽性反応は線毛上皮細胞に限局してみられた。さらに気管支鏡で採取したヒト気管支上皮細胞にもHAT陽性反応がみられた。HATの遺伝子構造に基づき、そのprobeを作成し、種々の細胞を対象にHATのmessenger RNAの存在を検索すると、培養ヒト気管支上皮細胞で陽性であった。以上の成績から、気道系において、HATは腺毛上皮細胞で合成され、この領域で生理的な役割を発揮していると考えられた。2.HATの内因性タンパク分解能:HATにはプロウロキナーゼを限定分解してウロキナーゼに活性化する作用と、fibrinogenの特にα鎖を分解してトロンビンによるフィブリンクロット形成を抑制する作用、があることが明らかになった。しかし、HATにはあプラスミノーゲンを直接活性化する作用はなかった。3.正常ヒト気道上皮細胞(NHBEC)に対するHATの影響:喀痰中の濃度のHATはNHBECによるInterleukin-8やGM-CSFなどのサイトカインの合成・放出を促進することがELISAによるIL-8の測定、Northan blotによるIL-8のmRNAの検出、により確認された。この作用はプロテアーゼ活性化リセプター2(PAR2)を介するものであることが示唆された。4.線維芽細胞に対するHATの影響:喀痰中の濃度のHATは、ヒトの肺および気管支線維芽細胞の増殖促進作用と、これら細胞によるTGF-産生促進作用を、もつことが明らかになった。5.HAT遺伝子多型の分析:HATの遺伝子多型をヒト末梢血多核白血球を対象に分析した。HATの遺伝子には3つのイントロンがあり、これをそれぞれA、B、Cと命名した。制限酵素処理によりイントロンCに遺伝子多型が存在することが明らかになった。正常者を対照に、種々の慢性気道疾患と肺気腫患者のHATの遺伝子多型を分析した。そのびまん性汎細気管支炎と肺気腫で、遺伝子多型の分布の以上がみられた。6.まとめ:HATは主に気道上皮細胞で合成され、気道粘膜側で広義の気道の生体防御機能に関与していると推定される。たとえば、HATがウロキナーゼによるプラスミノーゲンの活性化、プラスミンによるコラゲナーゼなどの金属酵素の活性化、らの一連の過程を介して気道粘膜側の組織の分解、再生、修復に関与している可能性が高いと推定される。しかし、慢性炎症性疾患においては、HATの過剰産生が起こり、気道上皮細胞による炎症性サイトカインの合成促進、線維芽細胞の増殖やTFG-β1産生の促進、などの作用で、病態を増幅したり、リモデリングを促進している可能性が推定される。

HATの遺伝子には3つのイントロンがあり、これをそれぞれA、B、Cと命名した。制限酵素処理によりイントロンCに遺伝子多型が存在することが明らかになった。正常者を対照に、種々の慢性気道疾患と肺気腫患者のHATの遺伝子多型を分析した。そのびまん性汎細気管支炎と肺気腫で、遺伝子多型の分布の以上がみられた。6.まとめ:HATは主に気道上皮細胞で合成され、気道粘膜側で広義の気道の生体防御機能に関与していると推定される。たとえば、HATがウロキナーゼによるプラスミノーゲンの活性化、プラスミンによるコラゲナーゼなどの金属酵素の活性化、らの一連の過程を介して気道粘膜側の組織の分解、再生、修復に関与している可能性が高いと推定される。しかし、慢性炎症性疾患においては、HATの過剰産生が起こり、気道上皮細胞による炎症性サイトカインの合成促進、線維芽細胞の増殖やTFG-β1産生の促進、などの作用で、病態を増幅したり、リモデリングを促進している可能性が推定される。1.ヒト気道トリプシン様プロテアーゼ(HAT)の遺伝子のクローニングと組換え標品の生合成の問題:HATの遺伝子をクローニングし、これをバキュロウイルスをベクターとし昆虫細胞に組み込み、成熟型HATを生合成する系を構築した。この系で、成熟型HATにまで転換する標品より、前駆体HATの状態に止まっている標品の割合が多いことが判明した。この前駆体を成熟型に活性化する方法を種々検討した。2. HATの気道における局在部位の検索:バキュロウイルス/昆虫細胞系で組換えHATを生合成し、これに対するマウスモノクロナール抗体を作成した。この抗体を一次抗体とし、肺手術時に採取した気管支を対象とし、超感度免疫組織染色法でHATの局在部位を検索した。その結果、HATが気道上皮細胞で生合成されることを示唆する成績が得られた。3. HATの内因性タンパク分解能の検索:HATの血清および気道液中の主要タンパク分解能を電気泳動法で検索した結果、HATはプロウロキナーゼを特異的に限定分解してウロキナーゼに転換(活性化)することと、フィブリノーゲンを分解してそのフィブリンへの転換を抑制することが明らかになった。プラスミンが結合組織成分を分解するコラゲナーゼやストロメライシンなどの金属プロテアーゼを活性化することから、HATが線溶系を活性化することは、HATの生理的機能や病態的意義を解明する上で重要と考えている。4. HATの遺伝子多型の診断的意義に関する基礎的研究:HATのcDNA構造と、既知のトリプシンファミリーのプロテアーゼの遺伝子構造とを比較することによって、成熟型HATの遺伝子構造を推定した。これをもとにヒト白血球ゲノムを増幅し、検討した結果、HATには3つのイントロンが存在することが明らかになり、N末側よりA、B、Cと命名した。このイントロン部分を種々の制限酵素で分解した結果、Mbo1およびBstU1によって遺伝子多型が存在することが明らかになった。我々がヒト気道で新しく見出したヒト気道トリプシプシン様プロテアーゼ(HAT)の気道におけ生理的意義と気道炎症における病態的意義を解明するために、以下の研究を行なった。
不飽和脂肪酸経口投与による統合失調症予防法の開発とその分子基盤の解析

本研究では、食物から摂取可能な不飽和脂肪酸を用いて、神経発達期の不飽和脂肪酸摂取の不足が統合失調症発症脆弱性形成につながるかどうかの検討を行った。その結果、不飽和脂肪酸欠乏群では、遺伝子発現変化において既報統合失調症分子病理との関連を認めたが、著名な行動異常は認めなかった。しかし、幻覚剤に対する感受性の亢進を不飽和脂肪酸欠乏群で認めた。従って、脳発達期の不飽和脂肪酸欠乏はヒトに置き換えるとARMS(At Risk Mental State)のモデルになる可能性が考えられた。統合失調症は一旦発症すると完治が困難であるため、「発症予防」を行うことが疾患研究のアプローチにとって重要な目標と言える。申請者はこれまでに不飽和脂肪酸(PUFA)の一部に神経新生促進効果があることを見いだしているが、今回新たにその結果を応用して、PUFA投与により健全な脳発達を促進させることが出来れば、精神疾患(主対象は統合失調症)の根本的な発症予防の開発につながるのではないかとの作業仮説を考えた。そこで本研究では、食物から摂取可能なPUFAを用いて、1.神経発達期のPUFA摂取が統合失調症発症予防の可能性を示すかの検討、2.神経発達期の栄養状態が成長後の脳の遺伝子発現の変化に与える影響の検討、を行った。まず、PUFAが脳発達に関わる可能性を検討するため、野生型ラットに生後2日目から4週間にわたってPUFA(特にアラキドン酸,arachidonic acid : ARA)を多く含む餌を経口投与したところ、母親の母乳を介してARAを摂取した仔ラットの海馬ではBrdU標識細胞数(分裂する細胞DNAを標識する)が約1.3倍に増加するとともに、神経系前駆細胞のマーカーであるGFAP(glial fibrillary acidic protein:グリア細胞線維性酸性タンパク質)やPSA-NCAM(polysialic acid-neural cell adhesion molecule:ポリシアル化神経細胞接着分子)の発現が増加することを見いだした。次に、遺伝的にPPIが低下しているラット(Pax6変異ヘテロラット)に対して、発達期にARA投与を行ったところ、発達期において神経新生が促進されることを確認した。さらに、この動物(発達期にARA投与を行ったPax6変異ヘテロラット)が成体になった後にPPIテストを行うと、PPIの低下が部分的に改善することがわかった。また、野生型マウスに対して胎生期から生後発達期にかけてPUFA投与を行い、成長後の大脳皮質の遺伝子発現変化を解析したところ、統合失調症死後脳で認められるのと同様の遺伝子発現変化が認められた。今後、これらの結果をヒトに応用し、統合失調症の予防法が確立されれば、患者本人の負担が減ると同時に、社会的経済損失の大幅な改善も期待されるため、社会的な意義が非常に大きいと考えられる。申請者はこれまでに不飽和脂肪酸の一部に神経新生促進効果があることを見いだしているが、今回新たにその結果を応用して、不飽和脂肪酸投与により健全な脳発達を促進させることが出来れば、精神疾患(主対象は統合失調症)の根本的な発症予防の開発につながるのではないかとの作業仮説を考えた。そこで本研究では、食物から摂取可能な不飽和脂肪酸を用いて、神経発達期の不飽和脂肪酸摂取が統合失調症発症予防の可能性を示すかの検討を行った。野生型マウスに対して不飽和脂肪酸含有餌または非含有餌を投与し、不飽和脂肪酸投与群および非投与群における脳内における遺伝子発現の変化を解析した。脳組織からRNAを抽出して統合失調症と関係が深いオリゴデンドロサイト系遺伝子およびGABA系遺伝子の発現解析を行ったところ、既報統合失調症分子病理との関連が認められた。また、不飽和脂肪酸投与群および非投与群に対してマンガン投与後にMRI撮影を行ったところ、投与群と非投与群の間で脳内の神経活動領域に違いがあることがわかった。行動実験では、諸種バッテリーで明らかな有意差を認めなかったが、幻覚剤に対する感受性が不飽和脂肪酸非含有餌群で高く、脳発達期の不飽和脂肪酸欠乏は、ヒトに置き換えるとARMS (At Rrisk Mental State)のモデルになる可能性が考えられた。
視覚的意識の生成過程の解明

本研究では,視覚的意識のあり方を知るべく,逆に視対象が意識から消失する状況を特定し,その原因を明らかにするアプローチをとってきた.特に,視対象が意識から消失する現象として「オブジェクト置き換えマスキング」と「注意の瞬き」を取り上げた.イメージレベルの効果を統制したうえで主観的輪郭線から構成される主観的図形をマスク刺激としてもオブジェクト置き換えマスキングが生じることから,高次のオブジェクトレベルの干渉が実際に作用している証拠を示した.この成果については国際誌に投稿し,査読を経て改稿ののち,再投稿中である.二つ目のターゲットを正答した場合の一つ目のターゲットのパフォーマンスを分析することで,注意の瞬きに同期する形で一つ目のターゲットのパフォーマンスが低下することを明らかにした.この成果についてはannual OPAMmeetingで発表した.視覚的意識のあり方を知るには,逆に,視対象が意識から消失する状況を特定し,その原因を明らかにすることが効果的である.本研究では,視対象が意識から消失する現象として「オブジェクト置き換えマスキング」と「注意の瞬き」を取り上げた.オブジェクト置き換えマスキングの脳内機序を調べた研究では,視覚運動処理に重要なV5/MT+あるいはV5/MT+と相互投射を有するV1に低頻度の反復経頭蓋磁気刺激を施行し,その機能を一時的に抑制すると,マスキングからの回復が生じることを明らかにした.この成果は日本心理学会で発表し,国際誌に投稿し,現在査読中である.また,これに関連して,V5/MT+に対して低頻度の反復経頭蓋磁気刺激を施行すると,ロングレンジ仮現運動の知覚が低下することを明らかにした.この成果は日本基礎心理学会で発表し,国際誌に投稿し,査読を経て改稿ののち,再投稿中である.オブジェクト置き換えマスキングの生起段階を調べた研究では,イメージレベルの効果を統制したうえで主観的輪郭から構成される主観的図形をマスク刺激として用いる新たな手法により,主観的図形がターゲット刺激の近傍にその消失後も残存するとマスキングを生じることを明らかにした.この成果は日本基礎心理学会およびPsychonomic Society annual meetingで発表し,国際誌への投稿準備中である.注意の瞬きの脳内機序を調べた研究では,一つ目のターゲット刺激の処理に従事していると想定されるタイミングで左半球あるいは右半球の頭頂間溝に対して単発の経頭蓋磁気刺激を施行すると,注意の瞬きからの回復(すなわち二つ目のターゲット刺激の視認性向上)が生じることを明らかにした.本研究では,視覚的意識のあり方を知るべく,逆に視対象が意識から消失する状況を特定し,その原因を明らかにするアプローチをとってきた.特に,視対象が意識から消失する現象として「オブジェクト置き換えマスキング」と「注意の瞬き」を取り上げた.イメージレベルの効果を統制したうえで主観的輪郭線から構成される主観的図形をマスク刺激としてもオブジェクト置き換えマスキングが生じることから,高次のオブジェクトレベルの干渉が実際に作用している証拠を示した.この成果については国際誌に投稿し,査読を経て改稿ののち,再投稿中である.二つ目のターゲットを正答した場合の一つ目のターゲットのパフォーマンスを分析することで,注意の瞬きに同期する形で一つ目のターゲットのパフォーマンスが低下することを明らかにした.この成果についてはannual OPAMmeetingで発表した.
ゼブラフィッシュを用いた先天性貧血発症の分子メカニズムの解明

ダイアモンド・ブラックファン貧血(DBA)は、リボソームのタンパク質合成過程の異常に起因すると推測される。ゼブラフィッシュのDBAモデル(遺伝子の発現抑制による)を用いた解析では、造血関連遺伝子に加え、糖鎖修飾に関与する遺伝子の翻訳効率が抑制されていた。その一つの遺伝子の機能を個体レベルで解析したところ、赤血球造血に関与することが示唆された。また、ゲノム編集技術を用いたリボソームタンパク質(RP)遺伝子変異モデルの系統を確立した。DBA発症機序をより詳細に解析できるツールを得ることができたと考える。ダイアモンド・ブラックファン貧血(DBA)は、リボソームタンパク質(RP)遺伝子の変異により発症すると推測される。患者の約半数で、16種類のRP遺伝子いずれかの変異が確認されたが、発症機序の解明は進んでいない。本研究では、ゼブラフィッシュのDBAモデルを用いて発症の分子メカニズムに迫る。RP遺伝子の変異に伴って翻訳が抑制される遺伝子に着目し、リボソームがmRNA選択的に翻訳量の調節を行うメカニズムの解明を目指す。1.DBAモデルで翻訳抑制を受ける遺伝子の解析翻訳効率が50 %以下になる75個の遺伝子について、弘前大学が行った患者およびその家族のエキソーム解析を用いて変異の有無を確認した。24種類の遺伝子で、患者のみでみられる変異が検出されていることがわかった。DBAモデルで最も翻訳効率が低下するGATA1は、4人の患者で変異が検出されたため、個別に確認作業を行った。その結果、2人については変異がないことが判明した。2番目に翻訳効率が低下した糖鎖修飾に関与する遺伝子については、1塩基変異を持つ患者が1人いることが確認された。しかし、家族のデータが入手できないため、疾患との関連は今のところ未知である。2.RPS19遺伝子変異体の作製ゲノム編集技術CRISPR/Casシステムを用いて、ゼブラフィッシュのゲノムに患者型の変異を導入する手法を試みた。このシステムを用いたランダム変異導入のパイロット実験をすでに行っており、50%以上の確率で変異が導入されることを確認した。これを応用して、標的部位での特定塩基の置換をおこすためのプラスミド構築、RNA合成を行い受精卵へ注入し、条件検討を行った。DBAモデルの翻訳効率の解析と患者のエキソーム解析との比較で、有力な新規DBA候補遺伝子が抽出されることを期待していたが、そのような遺伝子の同定には至らなかった。しかし、特定の遺伝子の翻訳効率の変化が貧血の発症に関与する可能性は示唆された。また、新たなゲノム編集技術を用いたゼブラフィッシュモデルの作製も進んでいる。本研究では、ゼブラフィッシュのDBAモデルを用いて発症の分子メカニズムの解明に迫る。RP遺伝子の発現量の低下に伴って翻訳が抑制される遺伝子に着目し、リボソームがmRNA選択的に翻訳量の調節を行うと推測し、そのメカニズムの解明を目指す。rps19遺伝子の発現抑制により翻訳効率が低下する遺伝子のなかに糖鎖修飾に関与する遺伝子が複数含まれていた(前年度)。その内、特に興味深い遺伝子のmRNAをin vitro合成し、ゼブラフィッシュのDBAモデル(rps19発現抑制胚)に注入した。その結果、発生遅滞などの形態異常は回復しなかったが、赤血球数が明らかに回復した。このことから、この遺伝子が造血において重要な役割を果たしていることが示唆された。2.患者型変異をもつモデルの作製ゲノム編集技術を用いて、患者と同様のアミノ酸置換を含むRPを発現するモデルの作製を試みた。これまでの手法(gRNA、Casタンパク、一本鎖DNAを用いる)に替えて、より効率がいいとされる(gRNAに替えてcrRNAとtrcrRNAを組み合わせて用い、Casタンパクと一本鎖DNAを用いる)手法を試みた。その結果、目的の塩基置換をもつことが期待される個体(F0)を得ることができた。引き続き、飼育・観察を行っている。rps19遺伝子の発現抑制胚において翻訳効率が大きく低下した遺伝子を過剰発現させることで、赤血球造血が回復することを示すことができた。糖鎖修飾に着目した点は新規性が高く、発症機序の解明に向けて有用なデータが得られた。また、患者型変異をもつモデルの作製するために、ゼブラフィッシュのゲノム編集に関して豊富な経験をもつ研究室の協力を得て、より効果的な手技・手法を確立できた。患者の約60%で、これまでに19種類のRP遺伝子のいずれかの変異が確認されたが、発症機序の解明は進んでいない。本研究では、ゼブラフィッシュのDBAモデルを用いて、RP遺伝子の変異に伴って翻訳が抑制される遺伝子に着目し、リボソームがmRNA選択的に翻訳量の調節を行うメカニズムの解明を目指した。ゼブラフィッシュのDBAモデル(rps19遺伝子抑制胚)を用いて、網羅的に遺伝子の翻訳効率を解析した。その結果、75個の遺伝子は翻訳レベルで発現量が50%以下に抑制されることが示唆された。その中には、造血に関連する遺伝子の他に、糖鎖修飾に関与する遺伝子も複数含まれていた。その一つについて、mRNAをin vitro合成しDBAモデルに注入したところ赤血球造血が回復した。

ヒト細胞においてこの遺伝子の発現を解析するために、K562細胞を用いてsiRNAによりRPS19およびRPS15A遺伝子をノックダウンした。mRNA発現レベルが低下していることを確認したが、タンパク質レベルでの発現低下は確認できなかった。今後は、RP遺伝子の発現を安定的に低下させるために、ゲノム編集による細胞モデルの作製を試みる。また、ゼブラフィッシュにおいてRPS19遺伝子の変異体の作製を試みた。gRNA/Cas9タンパク質をインジェクションした胚の10%程度で生殖細胞でのゲノム編集が起こると推測された。これまでに7種類のin/delをヘテロ変異でもつ個体が得られた。このうち1種類はF2まで継代した。ヘテロを掛け合わせて得られるホモ変異の胚では明らかな貧血を示すことを確認した。今後は、患者型変異をもつモデルを用いて遺伝子の翻訳効率を解析し、DBA発症の分子メカニズムの解明を目指す。ダイアモンド・ブラックファン貧血(DBA)は、リボソームのタンパク質合成過程の異常に起因すると推測される。ゼブラフィッシュのDBAモデル(遺伝子の発現抑制による)を用いた解析では、造血関連遺伝子に加え、糖鎖修飾に関与する遺伝子の翻訳効率が抑制されていた。その一つの遺伝子の機能を個体レベルで解析したところ、赤血球造血に関与することが示唆された。また、ゲノム編集技術を用いたリボソームタンパク質(RP)遺伝子変異モデルの系統を確立した。DBA発症機序をより詳細に解析できるツールを得ることができたと考える。rps19遺伝子の発現低下により翻訳効率が低下する遺伝子のなかに糖鎖修飾に関与する遺伝子が含まれていた。ゼブラフィッシュを用いて、血球表面に存在する糖鎖修飾を受けるタンパク質が減少しているかどうかを解析する。また、ゲノム編集技術を用いて患者型変異を導入したゼブラフィッシュモデルの系統を確立し、詳細な発症メカニズムの解明を目指す。ヒト血球細胞由来のK562においてRP遺伝子(RPS19およびRPS15a)の発現をsiRNAにより抑制し、ゼブラフィッシュのDBAモデルで得られた結果と同様に、糖鎖修飾に関与するタンパク質が減少しているかどうかをウェスタンブロッティング法で確認する。また、ゲノム編集技術を用いた患者型変異をもつDBAモデルの確立を目指、現在飼育中のF0からF1の個体を得て、解析を進める。分子遺伝学国際会議の旅費を予定していたが、主催者側が航空券、宿泊費を負担することとなり予定を下回った。また、人件費を計上していたが、先行研究の結果の確認作業を弘前大学との共同研究で行うこととなり、実験補助員が必要ではなかったため未使用分がでた。国際学会および国内学会への参加費が、学会および大学から参加費支援を受けたことで予定していた金額を下回ったため。発症機序をより詳細に解明するためには、これまでの遺伝子抑制ではなくゲノム編集技術を用いたモデルの作製が必要である。リボソーム病の疾患モデルの作製手法を確立するために、専門的知識をもつ博士研究員、または実験補助員を採用する経費およびその研究経費として未使用額を使用する。
ポピュレーションバランス方程式基盤のフロック形成流体の数値流動解析体系の構築

フロックの生成と破壊による流体内部構造変化に関する情報を保ちながら,計算負荷を抑えて,成形加工プロセスなどの工学問題で現れる複雑な流れ場の解析にも適用可能なフロック形成流体の解析手法の体系を構築する.ここでは,フロックサイズ分布の時間変化をポピュレーションバランス方程式によって計算する.そして,その結果をもとに応力テンソルを評価し,マクロ流動計算とカップリングする解析モデルを構築する.本研究では,解析モデルの開発とそのモデルを用いたレオロジー特性の予測とせん断特性,動的粘弾性などのレオロジー測定やステップせん断応答との比較をもとに,各モデルの特徴,選択指針,適用可能範囲を体系的にまとめる.フロックの生成と破壊による流体内部構造変化に関する情報を保ちながら,計算負荷を抑えて,成形加工プロセスなどの工学問題で現れる複雑な流れ場の解析にも適用可能なフロック形成流体の解析手法の体系を構築する.ここでは,フロックサイズ分布の時間変化をポピュレーションバランス方程式によって計算する.そして,その結果をもとに応力テンソルを評価し,マクロ流動計算とカップリングする解析モデルを構築する.本研究では,解析モデルの開発とそのモデルを用いたレオロジー特性の予測とせん断特性,動的粘弾性などのレオロジー測定やステップせん断応答との比較をもとに,各モデルの特徴,選択指針,適用可能範囲を体系的にまとめる.
途上国の基礎教育援助に対するセクターワイドアプローチの有効性に関する実証的研究

近年、国際援助コミュニティの教育分野の主な援助手法となっているセクターワイドアプローチについて、援助供与国(アメリカ・スウェーデン)と援助受け取り国(バングラデシュ)の実地調査(インタビュー・資料収集等)を行い、国際社会におけるセクターワイドアプローチの展開状況を分析した。援助供与国では、基礎教育開発援助の具体的事例をアメリカのUSAID(米国国債開発庁)及びSida(スウェーデン国際開発庁)から収集、まとめ、分析した。セクターワイドアプローチは重点領域のモデルとなるデモンストレーション方式で行われ、それらが基本フィールドとなって地域と国レベルでネットワークを構築するというものである。バングラデシュでは、政策支援型援助であるPrimary Education Development Programを取り上げ、バングラデシュ政府のオーナーシップについてバングラデシュ政府側と援助供与側の担当者と協議し、セクターワイドアプローチの課題を明らかにした。結果、セクターワイドアプローチは国際社会では現在共用されている援助手法ではないことが指摘され、今後のさらなる調査が必要とされた。基礎教育開発援助プロジェクトの具体的事例をアメリカのUSAID(米国国際開発庁)及びSida(スウェーデン国際開発協力庁)から収集し、まとめ、分析した。USAIDでは例えばProgram for Teacher Development Management System (Uganda)、またSidaでは例えばProgram towards Education for All in Rajastanなどのプロジェクト資料・情報の提供を受けた。収集したプロジェクトのなかでは評価報告書が刊行されてるものがあるが、多くは最近のプロジェクトのため評価はされていなかった。このため、プロジェクト評価について各機関の教育担当者(Dr.John Grayzel (USAID, Office of Education Director, Bureau for Economic Growth)など)と協議を行なった。その結果、プロジェクトは通常、重点地域にモデルとなるようデモンストレーション方式で行い、それらのプロジェクトが基本フィールドとなって地域・国レベルのネットワークの構築を図るというものである。この場合、プロジェクト終了後に受取国側がプロジェクトモデルを採用しない場合があること、たとえ採用されても途上国では円滑に運営できない場合があるということであった。バングラデシュでは政策支援型援助のセクターワイドアプローチによるプログラムであるPrimary Education Development Programを取り上げ、バングラデシュ政府のオーナシップなどについて、バングラデシュ政府側と援助供与側(Defid, ADB, Unesco, WBなど)の担当者と協議し、セクターワイドアプローチとプロジェクト援助の比較検討を行なっているところである。国際援助コミュニティは基礎教育開発援助を1990年の「万人のための教育世界会議」から重点化し、基礎教育開発援助の新たな手法として、セクターワイドアプローチを策定した。セクターワイドアプローチは途上国のオーナーシップ、途上国と供与国のパートナーシップ、参加型意思決定プロセス、結果重視、長期的視点、財源一括方式(コモンバスケット)を基本原則とした従来のプロジェクト援助とは異なる援助方式である。セクターワイドアプローチは推進派としての世界銀行、北欧諸国(スウェーデン、ノルウェー、デンマーク等)、英国等、と慎重派である日本、アメリカ、ドイツ等に分かれる。本研究はセクターワイドアプローチに異なる政策対応をするスウェーデンとアメリカを対象とし、政策対応の違いをその背景要因を確定することにより把握した。フィールドは実際にセクターワイドアプローチが実施されているバングラデシュである(初等教育開発プログラム)。スウェーデンはスウェーデン国際開発協力庁(Sida)、アメリカは米国国際開発庁(USAID)で資料収集、関係者との協議を行った。バングラデシュではセクターワイドアプローチ担当庁の初等教育大衆省初等教育局である。結果は、スウェーデンは後発途上国に対して50年以上にもわたり基礎教育援助を行ってきたにもかかわらず、効果が挙がらなかったこと、経済不況のためODA額が減少傾向にあること(財源一括方式)、途上国側に多くの障碍要因(女子規範、貧困、教育財政の逼迫、教授言語、児童労働、等)があり、これには途上国のオーナーシップによる解決が必須なこと、を事由にセクターワイドアプローチを推進していることを挙げた。アメリカはそれらを十分に認識していながら、援助政策を左右している議会・納税者に対するアメリカの援助効果を説明する責任からセクターワイドアプローチに慎重であることを説明した。
腎性貧血におけるヘモグロビンスカベンジャー受容体の動態解析

《背景》我々は、慢性腎不全患者におけるエリスロポエチン抵抗性貧血の一部がヘモグロビン(Hb)スカベンジャー受容体(CD163)に関連すると考え検討を行ってきた。Hbは、血管内でハプトグロビン(Hp)と結合し、Hb-Hp複合体となりCD163により認識される。さらにマクロファージ内に取りこまれHemeとなったあと、重要な抗酸化ストレス酵素であるHeme Oxygenase(HO)により分解され再利用される。H15年度までの研究にて、透析患者におけるHO-1、発現はコントロールに比べて有意に低下しており、これは2週間後でも変わらなかった。CD163に関しても同様であった。《対象と方法》対象は11名の透析患者と9名のコントロール。通常の方法で血清分離後、末梢血単核球を分離し、RNAを抽出した。新たにデザインしたプライマーを用い、スタンダードをおいて定量的PCR(ABI PRISM 7700)を施行した。また血清中のサイトカイン測定を行った。《結果と考察》定量的PCR。HO-1/GAPDH:30.63±6.62(コントロール:36.82±8.6)。CD163/GAPDH:72±11(コントロール:108±18)。サイトカイン;IL-1β:761±535(コントロール639±440)、TNFα:5.23±3.26(コントロール2.63±0.64)。CD163は低下は鉄利用障害の一つの原因として可能性が示された。HO-1はサイトカインにより発現亢進が起こるはずだが、実際には尿毒症下で、抑制されていた。今回検討した因子以外の尿毒素の関与の可能性が残された。《結語》CD163は、HO-1抑制を介した抗酸化作用の減弱によりエリスロポエチン抵抗性貧血の一部に関与している可能性が示された。《背景》慢性腎不全患者におけるエリスロポエチン抵抗性貧血の最も大きな原因は、鉄代謝の異常がエリスロポエチンの効果を阻害しているためと考えられる。近年、マクロファージの表面抗原として機能が不明であったCD163と呼ばれる細胞膜抗原が、鉄代謝の中心的物質であるヘモグロビン(Hb)を認識するスカベンジャー受容体であることが判明した。このような一連のメカニズムがヘモグロビンスカベンジャー受容体の発見により考えられている。平成14年度は対象を慢性腎不全にしぼり、透析導入期の患者より末梢血単核球を分離しHeme Oxygenase-1(HO-1)の発現解析を行った。また腎性貧血との関連を明らかにするため同時に新たに発見されたヘモグロビンスカベンジャー受容体であるCD163の解析も行った《対象と方法》対象は10名の透析患者と7名のコントロール。通常の方法で末梢血単核球を分離し、RNAを抽出した。新たにデザインしたプライマーを用い、スタンダードをおいて定量的PCR(ABI PRISM7700)を施行した。《結果と考察》透析患者におけるHO-1発現は30.63±6.62とコントロールの36.82±8.64に比し有意に低下しており、これは2週間後でも27.78±3.98と変わらなかった。CD163に関しては有意な変化は認めなかった。HO-1はIL-6などのサイトカインの影響を受けストレス下においては、産生亢進が予想されたが逆に抑制されていた。HO-1はHeme分解系の中心的役割を果たすのみならず、抗酸化作用の面から生態に有益に働くと考えられており、HO-1産生抑制は腎不全における腎性貧血の機序に何らかの影響を与えていると考えられた。《結語》本研究結果は漫性腎不全におけるエリスロポエチン抵抗性貧血の主要な原因である鉄代謝障害の一部がHO-1、CD163の発現抑制により可能性を示唆するものであると考えられた。

HO-1/GAPDH:30.63±6.62(コントロール:36.82±8.6)。CD163/GAPDH:72±11(コントロール:108±18)。サイトカイン;IL-1β:761±535(コントロール639±440)、TNFα:5.23±3.26(コントロール2.63±0.64)。CD163は低下は鉄利用障害の一つの原因として可能性が示された。HO-1はサイトカインにより発現亢進が起こるはずだが、実際には尿毒症下で、抑制されていた。今回検討した因子以外の尿毒素の関与の可能性が残された。《結語》CD163は、HO-1抑制を介した抗酸化作用の減弱によりエリスロポエチン抵抗性貧血の一部に関与している可能性が示された。
エクソソームのプロテオミクスによるサルコイドーシスの新規バイオマーカー探索

サルコイドーシス(サ症)は肉芽腫が全身に形成される原因不明の難病である。自然治癒する症例があるものの、肺、眼、心臓病変が臓器障害をきたす予後不良例も存在する。サ症の既存の血清バイオマーカー(BM)にはACEやsIL-2レセプターがあるが、感度・特異度ともに不十分であり、新たなBMの開発が急務とされる。種々の細胞が分泌する細胞外小胞エクソソームは細胞間・臓器間の情報伝達手段として脚光を浴びているが、夾雑物を含まないためプロテオミクスに適したリソースであると言われている。本研究では次世代プロテオミクスを駆使し疾患特異的、臓器特異的、治療予測可能な画期的BMの開発と病態解明に挑戦している。