hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
3D屋内空間へのセンサ最適設置を支援するセンサネットワークシミュレータ

平成24年度は,提案するセンサネットワークシミュレータの有用性を評価することを目的に,(1)無線センサネットワークのテストベッドの構築,(2)無線センサネットワークのアプリケーションの開発を行った.(1)に関して,前年度までに開発した屋内WSNシミュレータを用いて,対象空間(研究室内の部屋を使用)に設定した監視対象領域を被覆するセンサノード群の位置を決定し,実際にZigBeeや赤外線,温湿・照度センサ等を搭載したセンサノード群を複数設置することで,テストベッドを構築した.(2)に関して,テストベッド上に,(a)位置推定システム,(b)家電の遠隔制御,センサ値の遠隔からのモニタリングを行うアプリケーションを開発した.開発したアプリケーションを用いて,センシングの精度,センサの設置コストなどを評価し,本シミュレータ上でのシミュレーション結果と比較することで,提案手法の有効性を評価した.研究成果の一部は,国際会議IEEE WoWMoM 2012,国際会議IEEE PerCom 2013(WiPセッション),情報処理学会DPS研究会などで発表を行った.交付申請に記述した目的である,(1)3D-WSN被覆問題の定義とアルゴリズム(準最適なセンサ設置位置決定機能)の設計,(2)アルゴリズムおよび専用GUIの実装を,平成23年度内に達成できたため.24年度が最終年度であるため、記入しない。今後も,計画通りに進めていく予定である.研究は順調に進んでおり,遂行する上での問題点は今のところ発生していない.24年度が最終年度であるため、記入しない。
ヌクレオフォスミン変異が腫瘍にもたらす分子病態の解明

Aurora-Bはin vitroにおいて、NPM1のS293およびS143をリン酸化した。しかしながら、細胞内においてS143のリン酸化を検出することはできなかった。S293のリン酸化はNPM1の細胞内局在、オリゴマー形成能およびp19ARF、Nucleolinなどの既知のNPM1結合タンパク質との相互作用のいずれにも影響を及ぼさないことが明らかとなった。1オーロラによるヌクレオフォスミンのリン酸化部位を検討した。ヌクレオフォスミンを3つの断片に分割し、それぞれ大腸菌より精製し、試験管内においてオーロラBによるリン酸化反応をおこなった。その結果、すでに同定した293番目のセリン残基の他に、143番目のセリン残基が弱いながらもリン酸化を受けることが明らかとなった。そこで、143番目のセリン残基のリン酸化ペプチドを合成し、特異的リン酸化抗体の作製を試みた。6匹のマウスに免疫をおこなったが、抗体の力価は上昇が認められたものの、オーロラが活性化する分裂期に同調培養した細胞抽出液には反応が見られなかった。この結果から、143番目のセリン残基のリン酸化は試験管内反応におけるアーチファクトであることが示唆された。したがって、現在までに明らかになっているヌクレオフォスミンのアーロラによるリン酸化部位は293番目のセリン残基のみである。2そこで、293番目のセリン残基のリン酸化がヌクレオフォスミンの機能に及ぼす効果を検討した。293番目のセリン残基に点変異を導入したヌクレオフォスミンを用いた結果、293番目のリン酸化は、ヌクレオフォスミンのオリゴマー形成能および細胞内局在には影響を及ぼさないことが明らかとなった。ヌクレオフォスミン変異が腫瘍にもたらす分子病態の解明に向けて、野生型、S293A、S293Dおよびフレームシフト型NPM遺伝子にFLAG-HA-EGFPタグを付加した。これらをレトロウイルスベクターに組み込み、セルソーティングにより安定発現細胞株を樹立した。得られたNPM1の安定発現細胞株を用いて、タイムラプス蛍光観察をおこなった。間期および分裂期を通して、野生型およびS293の変異型NPM1の時間的および空間的な挙動に差異は認められなかった。また、フレームシフト型NPMはこれまでの報告通り、細胞質に局在していた。次に、NPM1と既知のNPM1結合タンパク質であるp19ARF、Nucleolinとの結合を検討した。p19ARFに関しては、大腸菌より精製したNPM1とin vitro translationにより合成したp19ARFを用いた。p19ARFは野生型およびS293の変異型NPM1のいずれとも結合することが明らかとなった。NucleolinとNPM1との結合は、NPM1の安定発現株を用いて検討した。抗FLAG抗体により遺伝子導入したNPM1を免疫沈降し、共沈する内在性のNucleolinを検討した。その結果、野生型およびS293の変異型NPM1のいずれともNucleolinが共沈することが明らかとなった。以上の結果から、ヌクレオフォスミンのC末端S293変異は野生型とこれまでの分子生物学的特性においては差が認められなかった。
潜在自然気候評価に基づく現存都市のコンパクト・エコシティ・モデルの研究

本研究の目的は、持続可能社会への移行期に当たりその目標となる自然改変の極力少ない都市形態のあり方を追及することである。はじめにコンピュータによる数値計算モデルを使用して潜在自然気候と現存気候の計算及び気候改変レベルの考察を行った。数値計算結果によると夏季の晴天日で最高気温時には大阪都心部で2.53.0°C程度のヒートアイランド現象が見られた。また、都市形態のあり方をコンパクト・エコシティ・モデルとして構想し、大阪都心部をモデルとして緑地面積比率が30%占めるとすれば都市化による気温上昇の緩和や風通しの促進にはかなりの効果が予測されることを明らかにした。1)自然地域と居住地域の適正規模の考察を近畿圏を対象に事例分析を行った。2)CFDモデルによる市街地空間の上空風による3D市街地の換気効果の評価を前年度から継続して行った。3)WRFモデルを使用した潜在自然気候の計算では、既に計算を終えた結果の分析を行った。4)魅力的な市街地開発について、国内外事例の実地調査、文献調査を行った。本年度に行った研究実績は以下の通りである。1)関西圏スケールでの気候特性の把握として、ヒートアイランド対策の一つである都市域の街区形状(建蔽率・建物高さ)を変更することによる都市環境(熱・風環境)への影響を分析し、街区形状の変更による熱環境緩和効果の大きい地域の考察を行った。2)関西圏スケールでの現存都市から100年後を目標としたコンパクト・エコシティ化について考察し、シナリオ作成を試みた。3)先のシナリオを元にWRFモデルを用いてシミュレーションを行い、熱・風環境のような都市環境工学的な要素に関する現存都市との比較評価を行った。1)都市における自然地域と居住地域の適正な規模と配置及び質の関係、その考え方の整理について考察を行った。地域100km圏、都市10km圏、市街地1km圏、街区100m圏、建築10m圏の各空間スケールと、現在の以前と以後について、10年、25年、50年、100年、200年と言った時間スケールによる区分において、自然環境と居住環境の変遷、人口の変遷などを踏まえて、都市における自然地域と居住地域の適正な規模と配置の関係を考察した。また、建築構造工学が専門の長尾直治氏から「エコロジカルな高層建築及びその超長寿命化」に関する知見を頂き、考え方の整理に加えた。2)大阪の市街地のGIS・CADデータ等による市街地の全体的な3次元空間特徴量の統計解析、及び市街地空間の換気効果の評価方法の検討を行った。スタディの対象地域として選定した大阪の市街地の一部における地形、幾何学的な特徴、土地利用、建物用途等の詳細をDSM等のGIS・CADデータを利用して統計的に分析した。そして、典型的な市街地空間の上空風による換気効果の評価をCFDソフトウエアSTREAMによる計算を行った。対象は測定による検証の容易さから、摂南大学キャンパスとして計算を行い、建築物との関係などからその気流場の特性を考察した。測定との検証は次年度に計画する。3) WRFモデルを使用した潜在自然気候の計算と、その結果を用いた都市化による気候改変レベルの考察について行った。8月1ヶ月間の計算においてアメダスデータを使用して精度の検証を行い、特に降水量の考察などを行った。平成26年度は、25年度までの成果をまとめ、その一部を国際会議で発表した。また、2015年3月には、元シュツットガルト市環境局に所属され現在シュツットガルト大学のProf. Juergen Baumuellerを摂南大学に招き、研究成果と今後の共同研究について意見交換を行った。都市・建築環境工学1)自然地域と居住地域の適正規模の考察については近畿圏の事例分析の概略を行った。2)CFDモデルによる市街地空間の上空風による3D市街地の換気効果の評価については概ね結論を得た。4)魅力的な市街地開発について、スウェーデンにおける実地調査、文献調査を行った。以上のように概ね順調に進展している。1)関西圏スケールでの気候特性の把握として、都市域の街区形状(建蔽率・建物高さ)を変更することによる都市環境(熱・風環境)への影響を分析し、ヒートアイランド対策による熱環境緩和効果の大きい地域の特定を行った。2)関西圏スケールでの現存都市から100年後を目標としたコンパクト・エコシティ化についてのシナリオ作成を行った。以上のように概ね順調に進展した。23年度計画の1)考え方の整理については、建築構造分野の長尾直治氏に参加頂いた研究会で充実した成果を得た。

2)市街地の3次元特徴量の統計解析及び市街地空間の換気効果の評価については、その方法論を確認した。3)WRFモデルを使用した計算は見通しをつけた。コンパクト・エコシティ・モデルの構築と、現存都市からコンパクト・エコシティに変化するプロセスの考察を行う。これまでの考察から、市街地データベースを使用して、大阪地域における200年後(超長期)を想定したコンパクト・エコシティの完成形、すなわち、理想的な姿(モデル)を構築する。自然地域と居住環境の規模と比率、関係性などを世界の諸都市の優れた市街地再開発事例を参考として大阪地域に相応しいモデルを構築する。さらに研究の最終段階として、10年、25年、50年、100年、200年後の都市を想定してコンパクト・エコシティへの変化プロセスを構築する。現在、使用されている区画整理事業などの都市計画の行政手法を主に用いることとし、最終形に想定しているコンパクト・エコシティに至るまでの論理的な変遷プロセスを構築し提案する。平成25年度の研究結果をまとめ、主に海外における国際会議において研究成果を発表する予定である。1)自然地域と居住地域の適正規模の考察は近畿圏を対象に事例分析を進める。2)CFDモデルによる市街地空間の上空風による3D市街地の換気効果の評価は引き続き行う。3)WRFモデルを使用した潜在自然気候の計算では、すでに計算を終えた結果の分析を行い、必要に応じて新たな計算を行う。4)魅力的な市街地開発について、国内外事例の実地調査、文献調査を行い、本研究で想定しているコンパクト・エコシティのモデル構築の根拠資料を作成する。魅力的な市街地開発に関する実地調査、資料収集に必要な旅費及び資料購入費などに使用する。また、成果発表のための旅費にも使用する。主に、平成26年10月にハノーファーにて開催予定の「7th Japnese German Meeting in Urban Climatology」において発表するための旅費などに使用する。魅力的な市街地開発に関する実地調査、資料収集、打ち合わせなどに必要な旅費、及び資料の購入費などに使用する。
難治性ぶどう膜炎の発症機序の解明および治療法の確立に関する研究

1.原田病の炎症担当細胞におけるアポトーシスの解析原田病新鮮例の髄液細胞はFas・FasLigandともに高率に発現しており消炎にむけて炎症細胞のアポトーシスによる消失が準備されていると考えられる.一方末梢血リンパ球はOKT-3刺激するとFas・Fas Ligandは対照に比べ有意に高率に発現した.しかし,ここに抗Fas抗体を添加してアポトーシスを誘導すると,原田病では早期アポトーシスマーカーであるannexinVの発現が対照に比べ低下していた.この結果から,原田病新鮮例の末梢血リンパ球でアポトーシス抑制の存在が示唆された.さらに細胞内のアポトーシスシグナルの変化をみるためアポトーシス関連蛋白のmRNA発現をRT-PCRにて検討した.そのうち抑制蛋白であるbcl-2のmRNA発現は100%に見られたが,誘導蛋白であるcaspase8のmRNAの発現が正常対照に比べ低下していた.ステロイド投与3週後の治癒過程にある患者ではcaspase8のmRNAの発現率はやや増加してくるが発現の見られない例もあり,この中に治療に対する反応不良例や遷延例がみられた.この結果からcaspase8の発現低下が原田病の局所に浸潤してしる炎症細胞の細胞寿命を延長させ炎症を遷延しているものと考えられた.2.原田病に対するステロイド治療の検討本病の治療にはステロイドのパルス療法が有用であるが,重篤な副作用を軽減するためにステロイドの投与量を減らし,メチルプレドニゾロン500mgを3日間点滴するステロイドセミパルス療法を導入して治療を試みた。従来のメチルプレドニゾロン1000mgを投与した例との明らかな差はみられず十分な効果が得られている。さらに症例を増やし詳細に検討する予定である。
2次元プラズモン・フォトン結合型光検出素子に関する基礎研究

1周期中にZnSeが多くZnTeが少ない超格子で青色から緑色の発光が見られた。これは界面近傍におけるZnSe中のSe原子とZnTe中のTe原子が置換して等電子トラップが生じ、これに束縛された励起子が発光することが確かめられた。この時の青色と緑色のバンドはそれぞれ58meVと170meVの活性化エネルギーをもち、後者は特に200K付近まで視認出来た。ZnSeを数原子層およびZnTeを1原子層以下を1周期とした超薄膜超格子を作製し、界面での混晶効果から超格子性の出現による発光過程を明らかにし、配意座標で記述出来ることを示した。2.2次元プラズモン素子による赤外発光の測定ZnSe-ZnTe超格子の2次元電子ガスと質量差で生ずるL0フォノンの閉じ込めによる2次元フォノンとの相互作用で生ずる2次元プラズモン・フォノン結合スペクトルをラマン散乱法で測定し、その結合メカニズムを明らかにしようとしたが、ヘテロ・エピタキシー界面で生ずる歪が大きく、超格子による膜厚と積層比でも良質な界面を作製できなかった。このためヘテロ界面に生ずる2次元電子系をホットエレクトロン状態にし、その緩和過程から2次元プラズモンの励起を促し、これを金属格子を通した赤外発光として検出を試みることは出来なかった。3.まとめZnSe-ZnTe超格子作製のための育成条件および界面での歪構造を明かにし、超格子の基本物性を説明した。以上の結果から、束縛励起子による室温青緑色発光素子の可能性を示した。しかしプラズモン・フォノン結合による赤外線の発生と検出は良質の界面制御が困難のため達成できなかった。今後の課題である。今後の課題である。1)ZnTe膜の成長GaAs基板にZnSeをMBE成長させ、この上にZnTeを成長させた。フォトルミネッセンス(PL)の側定からZnTeの発光ピ-クはバルクの値と一致した。またZn空孔に関連した励起子発光強度の測定結果からZnとTeの蒸気圧比は2:1付近が適当であることがわかった。ラマン散乱のLOフォノン波数の測定結果からZnTe膜のフォノン波数はほぼバルク値と一致し、PLの結果と同様に格子不整合による歪の影響を受けていないことが確認された。一方、ZnSeのLOフォノン波数はバルク値よりもかなり大きく、見かけ上格子が相当圧縮されていると思われる。両者の結果から基板温度は340°Cから360°Cが適当であることがわかった。2)エピタキシ-界面の歪ZnSeとGaAsの界面付近の格子歪をラザフォ-ド後方散乱で測定したところ、Znse格子が変形しているばかりでなく、GaAsも平行方向にわずかに延びていることも確認された。しかし両者の歪の変化量は予想値とは異なり、界面付近には複雑な格子欠陥機構が存在することがわかった。3)超格子の作製ZnSeーZnTe超格子の膜厚を変化させた試料のPLの強度を測定した。積層膜厚が30A程度で良質の超格子構造ができること、またトンネル確率のモデル計算から、発光強度は軽いホ-ルに依存することが明らかになった。1)ZnSeーZnTe超格子の製作ZnSeーZnTe超格子はGaAs(001)に1周期の合計膜厚20A以内で500周期、膜厚1μmにMBE成長させた。従来バッファ-層なしでは発光しないとされていたが,臨界膜厚以内では良質の超格子が育成できることが明らかとなった。

特に両物質とも10Aが結晶性が最も良かった。2)フォトルミネッセンスの膜厚比特性ZnSeとZnTeの膜厚比によって青色から赤色まで発光させることが出来ることを示した。特に青色発光の原因が界面でのSeへのTeの原子とクラスタ-による等電子トラップに強く束縛された励起子発光によることがわかった。3)ラマン散乱による膜厚比特性ラマン散乱からは、膜厚比に応じてZnSe様とZnTe様のLOフォノン振動数の変化が見られた。また歪によるTOフォノンの出現とその振動数の膜厚比特性も得られた。一方、圧力下でのフォノン振動数の弾性体モデルを用いた計算値はほぼ実験値と一致した。しかしZnTeの結果には不一致が見られたが、これはZnTeの物理定数の不足によるものと考えられた。4)フォノン・フォ-ルデイングによるLAフォノンの測定膜厚を6Aから70Aまで変化させたものを1周期とし、合計膜厚を1μmとした試料におけるラマン散乱スペクトルから、LAフォノンの折り返しによるピ-クが低波数側に見られた。分散関係から音速を見積ると、ZnSeの音速はバルク値より数%小さく、ZnTeの音速は数%大きい。これはZnSeは柔らかく、ZnTeは硬くなることを意味し、他のラマン散乱やRBSの報告とも一致した。1周期中にZnSeが多くZnTeが少ない超格子で青色から緑色の発光が見られた。これは界面近傍におけるZnSe中のSe原子とZnTe中のTe原子が置換して等電子トラップが生じ、これに束縛された励起子が発光することが確かめられた。この時の青色と緑色のバンドはそれぞれ58meVと170meVの活性化エネルギーをもち、後者は特に200k付近まで視認出来た。ZnSeを数原子層およびZnTeを1原子層以下を1周期として超薄膜超格子を作製し、界面での混晶効果から超格子性の出現による発光過程を明らかにし、配意座標で記述出来ることを示した。2.2次元プラズモン素子による赤外発光の測定ZnSe-ZnTe超格子の2次元電子ガスと質量差で生ずるLOフォノンの閉じ込めによる2次元フォノンとの相互作用で生ずる2次元プラズモン・フォノン結合スペクトルをラマン散乱法で測定し、その結合メカニズムを明らかにしようとしたが、ヘテロ・エピタキシー界面で生ずる歪が大きく、超格子による膜厚と積層比でも良質な界面を作製できなかった。このためヘテロ界面に生ずる2次元電子系をホットエレクトロン状態にし、その緩和過程から2次元プラズモンの励起を促し、これを金属格子を通した赤外発光として検出を試みることは出来なかった。3.まとめZnSe-ZnTe超格子作製のための育成条件および界面での歪構造を明かにし、超格子の基本物性を説明した。以上の結果から、束縛励起子による室温青緑色発光素子の可能性を示した。しかしプラズモン・フォトン結合による赤外線の発生と検出は良質の界面制御が困難のため達成できなかった。今後の課題である。
財政運営の経済分析-財政赤字・社会資本と財政政策に関する理論・実証分析-

16年度は、財政運営の経済分析に関わる実証分析のうち、以下の二つの研究を完成させた。次に、日本の社会資本の生産性に関する実証分析である。同研究では、日本の地域経済データを用いて、道路資本ストックの各地域の生産への影響を探った。実証分析の結果、道路資本は東京都については生産に対して有意に正の影響を与えている一方、ほかの地域では生産への有意な効果が必ずしも見られないとの結果を得た。言い換えれば、道路投資は東京一極集中を促してきた一方、地方活性化には必ずしもつながらないとの結果が得られたのである。同研究は、「道路資本の生産力効果-地域間格差に着目した分析-」という論文にまとめられ、同論文は『応用地域学研究』に査読の後掲載された。
レプリカ組織化学による視細胞外節円板膜上の蛋白分子の同定と分布様式の解析

本研究の目的は、視細胞外節円板膜上のcGMP代謝酵素分子を酵素細胞化学の手法を用いて標識し、レプリカ法で観察することにより、酵素分子の同定と分布様式を明らかにすることである。このためには、レプリカ膜上に酵素活性を検出する新しい方法の確立が前提となった。予備実験の結果から、我々は先ず“酵素活性を検出した後、樹脂包埋した試料の超薄切片による観察では電子密度の高い反応産物として酵素活性が観察されるにも拘わらず、その活性がレプリカ膜上に観察できないのは何故か"という問題を解決する必要に迫られた。そこで、酵素活性をレプリカ膜上に検出するための詳細な条件を検討した。【材料と方法】ラット腎臓でacid phosphatase(ACPase)活性を検出し、次にその試料を凍結割断し、白金/カーボン蒸着をおこないレプリカ膜を作製した。レプリカ膜をクリーニング液で洗浄した後、グリッドに回収して、電顕で観察・検討しった。【結果と今後の展開】ACPaseはよく知られいるライソゾームの標識酵素であり、腎臓の近位尿細管上皮には多くのライソゾームが存在している。まず鉛法を用いてACPase活性検出を試みたが、レプリカ膜上に検出することはできなかった。一方、セリウム法を用いることによって近位曲尿細管上皮内のライソゾームのレプリカ膜上にACPOase活性が検出できることを明らかにした。鉛法による反応産物は、レプリカ膜の洗浄中に組織と共に溶解したものと推定される。セリウム法による反応産物は、レプリカ膜の洗浄液にも安定であり、レプリカ酵素細胞化学に適している。これによって、レプリカ膜上での酵素活性の可視化の問題が解決され、計画より少々遅れたものの、現在この新しい手法を用いて視細胞外節円板膜上におけるcGMP代謝酵素分子の同定を精力的に進めている段階である。
形質細胞分化運命決定におけるMAPKシグナルの役割とその破綻によるリンパ腫発症

B細胞の終末分化である形質細胞分化は、胚中心B細胞において抗原とB cell receptor (BCR)の遭遇を契機として、そこまでのB細胞分化を牽引してきたPAX5とその後の形質細胞分化を担うBLIMP1が入れ替わる事により開始される。本研究はこの分子的な機序を明らかにすることで、成熟B細胞から形質細胞への分化という運命決定におけるBCRシグナルの役割を明らかにする事を目的として行われた。BCRシグナルの重要な構成キナーゼであるSyk, Btk, Akt,によるPAX5のリン酸化をin vitroで検討しSykがPAX5をチロシンリン酸化する事を発見し、そのリン酸化部位を同定した。293T細胞内でSykとPAX5の共発現はPAX5チロシンリン酸化を誘導した。PAX5はNFκBによるBLIMP1発現誘導を抑制する作用があるが、レポータージーンアッセイではSyk共発現によりPAX5によるBLIMP1発現抑制が解除され、リン酸化チロシン変異PAX5を用いるとこの解除が起こらなかった。更に胚中心B細胞細胞株であるRamos細胞ではBCR刺激がPAX5チロシンリン酸化を介してBLIMP1の発現を上昇させていた。我々は以前にMAPキナーゼによるPAX5のセリンリン酸化が同様の効果を示すことを報告しているが、今回発見したチロシンリン酸化とセリンリン酸化は協調的に作用してPAX5によるBLIMP1発現抑制の解除に作用していることをレポータージーンアッセイとRamos細胞のBCRを刺激することの両方のシステムで確認した。これらのことから、BCRシグナルにおいてSykとMAPキナーゼが協調的に働き、PAX5の機能を抑制する事でBLIMP1の発現を誘導し、形質細胞分化の契機となっている事が示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は成熟B細胞から形質細胞への分化という運命決定におけるB cell receptor (BCR)シグナルの役割を明らかにする事にある。B細胞の終末分化である形質細胞分化は胚中心B細胞において、そこまでのB細胞分化を牽引してきたPAX5とその後の形質細胞分化を担うBLIMP1が入れ替わる事により開始される。形質細胞分化の契機である抗原とBCRの遭遇から始まるBCRシグナルからPAX5とBLIMP1の入れ替わりまでのメカニズムを明らかにしていく。293T細胞内でもSykとPAX5を共発現する事でPAX5チロシンリン酸化が起こる事を確認した。PAX5はNFκBによるBLIMP1発現誘導を抑制する作用があるが、Sykを共発現するとPAX5によるBLIMP1発現抑制が解除される事をレポータージーンアッセイで確認した。これらのデータは我々が先に報告したMAPキナーゼによるPAX5のリン酸化と同様の効果であり、BCRシグナルにおいてSykとMAPキナーゼが協調的に働き、PAX5の機能を抑制する事でBLIMP1の発現、すなわち形質細胞分化の契機となっている事を示唆している。本研究の目的は成熟B細胞から形質細胞への分化という運命決定におけるBCRシグナルの役割を明らかにする事を目的に研究を開始し、BCRシグナルによりPAX5がリン酸化を受け、その機能が修飾されるという重要な現象を発見できた。

これがPAX5の機能に与える影響を解析する手法は既に経験があるものばかりであり、残り期間でそれを終える事は十分可能と考えられる。SykによるPAX5リン酸化が形質細胞分化にどのような影響を与えているのかを以下の方法で更に解明していく。1PAX5リン酸化がDNA結合能に与える影響をEMSAにより明らかにする。2PAX5リン酸化がPAX5によるBLIMP1発現抑制に与える影響をPAX5リン酸化変異体を用いたレポータージーンアッセイで更に解析する。3PAX5のチロシンリン酸化がBCRシグナルによって起こる事をRamos細胞のBCRを刺激する事により検討する。4BCRシグナルによるBLIMP1発現上昇におけるPAX5チロシンリン酸化の重要性をRamos細胞にPAX5リン酸化変異体を導入した細胞を用いて検討する。
現地調査の手法と文献による中世庄園・村落の開発・居住・支配形態の景観復元的研究

最終年度にあたる本年度は、研究のまとめを前提とする作業を行った。研究対象とする中世庄園故地・大田庄(広島県世羅郡甲山町一帯)の現地調査を、前年度に引続き遂行した。とくに、現在まで鎌倉時代の村落景観をよく伝える東上原、西上原地区の地名・水利・民俗・慣行などを古老から採集し、記録化作業を行った。同地区に残存する膨大な近世・近現代古文書(上原八幡宮文書や門原粂夫家文書など)を整理・解析し、古老からの情報を補完させた。それらの膨大な成果は、『大田庄上原村調査報告書』としてまとめるべく執筆を継続中である。大部な内容となる予定だが、そこには調査の過程で発見された、明治初年生の農民が歌った労働歌の音源も多数含む予定である。一方、従来から取り組んできた大田庄の根本史料である高野山文書の校訂は進んだ。東京大学・京都大学・高野山大学などへの出張を通じて、校訂作業は行われ、大幅な訂正をし、それらの成果の一部は『甲山町史資料編』(日付は2003年3月刊行だが実際の刊行はそれより後)に反映させた。詳細は上記の『報告書』のなかに記述するべく準備している。テーマのうち、開発・居住については、飲料水や灌漑の水源となる湧水所在地付近を基点として居住地が定められ、徐々に山林・耕地開発が進展していったことが判明した。近世文書や聞取り調査の成果として、近世以降の開発は極端な斜面や氾濫原にあたる河川周辺に限定されることを証明し、「中世『村』領域の形成過程」の論稿にまとめ、投稿中である。また支配形態については、農村の核となる灌漑水源近くに領主関連の地名が集中し、一方の結合論理として宗教的編成を採用したことなどを証明し、「鎌倉南北朝期の預所と在地社会」の論文にまとめ、同じく投稿中である。3年間の成果は「労多くして功少なし」だが、今後も私的に調査活動を継続して、古老たちに報いたいと考えている。本年度は前年度に引続き、研究対象とする中世庄園故地・大田庄(広島県世羅郡甲山町一帯)の現地調査を遂行した。前年度から継続して、中世村落の様態をよく残す東上原地区の地名・水利・民俗慣行などを古老から採集し、東上原地区についてはそのほとんどの区域を調査し終わった。また、同地区に残存する近世・近現代古文書の整理と解析を進めた。その調査の過程で、集落構成員が精神的な紐帯としている宗教施設の境内にある湧水が、一方で灌漑用水など農業生産上での紐帯としても機能兼帯していることを解明した。中世村落の結合原理の解析の基礎となる。同時に近世文書にみえる地名や屋号の解析と古老からの聞取りにより、近世初頭の屋敷位置をほぼ解明でき、中世集落復元の大きな足がかりにできた。これらの分析は「鎌倉期村落の生活空間」「鎌倉期村落の領域と『場』の支配」として口頭発表し、整理後、投稿予定である。一方で、中世庄園研究の根本資料である和歌山・高野山文書の資料分析も進めた。従来刊行されている資料集の内容を、高野山大学に出張し、同大学が所蔵する写真帳により厳密に校訂し、根本史料としての確定性を増した。また、庄園故地・大田庄に関する研究状況や問題点を指摘した論考「備後国大田庄故地の研究環境」を発表した。前年度から継続して調査を進めている年貢輸送路に関する古道調査も現地踏査を繰り返し確定作業を完了しつつある。2年めにあたる本年度は、長期滞在型の現地調査を継続して行い、古老からの貴重な情報を蓄積していく一方、現地・大学諸機関での文献調査を重視した。また、進展する庄園・村落研究に関する文献を収集し、多様な分析視角を習得した。最終年にあたる来年度は、研究のまとめとして、村落調査をもとに居住、結合原理や支配諸機関との相関関係を総体的に論じる予定である。また、調査成果を報告書の形で集成することを予定している。

近世文書や聞取り調査の成果として、近世以降の開発は極端な斜面や氾濫原にあたる河川周辺に限定されることを証明し、「中世『村』領域の形成過程」の論稿にまとめ、投稿中である。また支配形態については、農村の核となる灌漑水源近くに領主関連の地名が集中し、一方の結合論理として宗教的編成を採用したことなどを証明し、「鎌倉南北朝期の預所と在地社会」の論文にまとめ、同じく投稿中である。3年間の成果は「労多くして功少なし」だが、今後も私的に調査活動を継続して、古老たちに報いたいと考えている。
リース総和法に関する凸型定理について

リース総和法に関する凸型定理は1923年にActa deszegedに出たM.Rieszの論文が出発点になっており、アメリカ、イギリス、ドイツ、インド、日本等の多くの研究者によって研究されてきた。
γ-グルタミルトランスペプチダーゼ特異的分子プローブの合成とがん免疫療法への応用

γ-グルタミルトランスペプチダーゼ(GGT)特異的阻害剤GGsTopをリードとして設計した4種類の新規ホスホン酸ヘテロジエステル型分子プローブを合成した。その性能を酵素試験により評価した結果、高いGGT阻害活性を有する分子プローブを見出すことができた。このプローブの構造を拡張することで、がん細胞表層のGGTを標的とした、抗体依存性細胞傷害を引き起こすことのできる新規化合物の創製が期待される。γ-グルタミルトランスペプチダーゼ(GGT)の過剰発現は、心臓疾患やパーキンソン病、糖尿病といった様々な疾患に関与している。中でも、本来GGTを持たない卵巣や肺、膵臓の細胞が癌化することでGGTを高発現し、細胞増殖や転移活性を活発化させ、抗癌剤や放射線に対する耐性を獲得して治療を困難にしていると考えられている。我々はこれまでに、ホスホン酸ジエステル型GGT阻害剤(GGsTop)を開発している。GGsTopはヒトGGTの活性残基であるスレオニン381と共有結合することで、GGTを特異的かつ不可逆的に失活させる。本研究の最終目的は、GGsTopをリードとし、その分子上に様々なハプテンをリンカーを介して結合した、抗体依存性細胞傷害(ADCC)を引き起こすことのできる分子プローブの開発である。ADCCとは、標的細胞を抗体でラベルし、免疫細胞による攻撃を誘導する手法である。ADCCを引き起こすためには、GGTおよび抗体の両方と結合することのできる分子プローブの開発が必須であり、GGsTopのGGT阻害活性を保持したまま分子内にハプテンを導入する必要がある。今年度の研究では、GGsTopのハプテン導入可能位置を明らかにすることを目的とし、これまでに得られたホスホン酸ジエステル型GGT阻害剤の構造活性相関情報に基づき、GGsTopのメチルエステル部位にポリオキシエチレン型のリンカーを介してハプテンを導入した分子プローブの分子設計および合成を行った。GGTを用いた酵素試験の結果、合成した分子プローブのGGT阻害活性はほぼ消失したことから、GGsTopのメチルエステル部分はハプテン導入部位として不適切であることを明らかとした。今後は、GGsTopのメチルエステル部分以外の部位にハプテンを導入し、GGT阻害活性を保持した分子プローブの開発を目指す。目標とする分子プローブの骨格構築法を確立することができた。昨年度の研究では、GGsTopのハプテン導入可能位置を明らかにすることを目的とし、これまでに得られたホスホン酸ジエステル型GGT阻害剤の構造活性相関情報に基づき、GGsTopのメチルエステル部位にポリオキシエチレン型のリンカーを介してハプテンを導入した分子プローブの分子設計および合成を行った。GGTを用いた酵素試験の結果、合成した分子プローブのGGT阻害活性はほぼ消失したことから、GGsTopのメチルエステル部分はハプテン導入部位として不適切であることを明らかにすることができた。本年度はこの結果を踏まえ、新たなハプテン導入部位の探索を行った。これまでの研究で、GGsTopのメチルエステルを3-(カルボキシメチル)フェニルエステルに変換してもGGsTopの80%程度の酵素阻害活性を示すことを確認しているため、3-(カルボキシメチル)フェニル基のカルボキシ基へのハプテン導入について検討することにした。具体的には、4,7,10-トリオキサ-1,13-トリデカンジアミンの一方のアミノ基をアセチル化した後、3-ヒドロキシフェニル酢酸と縮合した。次に、得られたフェノールを用いて、従来法によりホスホン酸ヘテロジアリールエステルを合成した。さらに保護基を除去することで、目的とする分子プローブを合成した。GGTを用いた酵素試験の結果、合成した分子プローブはGGsTopの40%程度の高い酵素阻害活性を保持しており、2個の3-(カルボキシメチル)フェニル基を有する阻害剤においては、その片方のカルボキシ基がハプテン導入部位として適切であることを明らかにすることができた。GGsTopのメチルエステル部分以外の部位にハプテンを導入し、GGT阻害活性を保持した分子プローブの開発を目指す。有機合成化学、生物有機化学交付決定額の都合上、初年度に購入予定であったFT-IR(予定額1,900千円)の購入を断念せざるを得なかったため。次年度は化学合成実験をさらに進めるとともに、合成した分子プローブを用いた生化学的実験を実施する予定である。
代数多様体の力学系の幾何学的側面と数論的側面

代数体上定義された代数多様体の自己射の研究を行った.このような自己射の軌道に沿ったWeil高さ関数の増大度を測る量である算術次数と,自己射の幾何的な不変量との関係を調べた.例えば,セミアーベル多様体の自己射に対しては,軌道の算術次数が取りうる値を自己射の群準同型パートの最小多項式から決定した.また,自己射が自明なパートを持たないとき(自明なパートを持つとは,例えばセミアーベル多様体がいくつかのセミアーベル多様体の直積に分かれていて,自己射が各ファクターの自己射の積になっており,そのいくつかの力学次数が1になっている場合など),算術次数が1であることと軌道が有限であることが同値であることを示した.一般的な多様体の自己射に対する川口Silverman予想の研究も進めた.川口Silverman予想とはZariski稠密な軌道の算術次数は力学次数に一致するというものである.小平次元が正の多様体はZariski稠密軌道を持たないので,考えるべき対象は小平次元が0以下の多様体である.小平次元が0の場合は本質的にCalabi-Yauの場合だけが残っており,小平次元が-∞の場合は広いクラスの多様体に対して川口Silverman予想は証明されていない.そこで,Meng-Zhangによる同変MMPを用いて,int-amplified endomorphismと呼ばれる特殊な自己射を持つ多様体に対して川口Silverman予想を次元についての帰納法で証明するストラテジーを構築した.また,この研究の過程で,特異点のある正規曲面上のint-amplified endomorphismの分類を行った.これはそれ自身としても興味深い問題であると同時に,同変MMPによる証明をする上で必須のことであった.MMPの過程で特異点のある多様体が必ず出てきてしまうからである.int-amplified endomorphismを持つ多様体に対する同変MMPが,川口Silverman予想の証明に非常に有効に使えそうなことが判明したことは大きな進捗だったが,完全な証明にはまだ本質的に新しいアイデアが欠如しているように感じている.この研究の過程で,(正規)曲面上のint-amplified endomorphismの分類を行ったが,これは予期せぬ副産物だった.int-amplified endomorphismを持つ多様体の対極にある多様体として,力学次数が1より大きい自己同型を持つ多様体がある.そこで,自己同型に対する川口Silverman予想にも取り組みたい.また,自己有理写像に対する川口Silvarman予想へ向けた研究を進めたい.有理写像に対するこのような研究は非常に難しいと同時に数論力学系の他の問題との関連も緊密になってくるので,広がりのある研究になると考えられる.int-amplified endomorphismはZariski稠密な軌道を持つと予想されているが,この予想に取り組みたい.この問題は川口Silverman予想が意味を持つかのも関係するだけでなく,代数多様体の有理点の稠密性問題にも関連する重要な予想だからである.代数体上定義された代数多様体の自己射の研究を行った.このような自己射の軌道に沿ったWeil高さ関数の増大度を測る量である算術次数と,自己射の幾何的な不変量との関係を調べた.例えば,セミアーベル多様体の自己射に対しては,軌道の算術次数が取りうる値を自己射の群準同型パートの最小多項式から決定した.また,自己射が自明なパートを持たないとき(自明なパートを持つとは,例えばセミアーベル多様体がいくつかのセミアーベル多様体の直積に分かれていて,自己射が各ファクターの自己射の積になっており,そのいくつかの力学次数が1になっている場合など),算術次数が1であることと軌道が有限であることが同値であることを示した.一般的な多様体の自己射に対する川口Silverman予想の研究も進めた.川口Silverman予想とはZariski稠密な軌道の算術次数は力学次数に一致するというものである.小平次元が正の多様体はZariski稠密軌道を持たないので,考えるべき対象は小平次元が0以下の多様体である.小平次元が0の場合は本質的にCalabi-Yauの場合だけが残っており,小平次元が-∞の場合は広いクラスの多様体に対して川口Silverman予想は証明されていない.そこで,Meng-Zhangによる同変MMPを用いて,int-amplified endomorphismと呼ばれる特殊な自己射を持つ多様体に対して川口Silverman予想を次元についての帰納法で証明するストラテジーを構築した.また,この研究の過程で,特異点のある正規曲面上のint-amplified endomorphismの分類を行った.これはそれ自身としても興味深い問題であると同時に,同変MMPによる証明をする上で必須のことであった.MMPの過程で特異点のある多様体が必ず出てきてしまうからである.int-amplified endomorphismを持つ多様体に対する同変MMPが,川口Silverman予想の証明に非常に有効に使えそうなことが判明したことは大きな進捗だったが,完全な証明にはまだ本質的に新しいアイデアが欠如しているように感じている.この研究の過程で,(正規)曲面上のint-amplified endomorphismの分類を行ったが,これは予期せぬ副産物だった.int-amplified endomorphismを持つ多様体の対極にある多様体として,力学次数が1より大きい自己同型を持つ多様体がある.

そこで,自己同型に対する川口Silverman予想にも取り組みたい.また,自己有理写像に対する川口Silvarman予想へ向けた研究を進めたい.有理写像に対するこのような研究は非常に難しいと同時に数論力学系の他の問題との関連も緊密になってくるので,広がりのある研究になると考えられる.int-amplified endomorphismはZariski稠密な軌道を持つと予想されているが,この予想に取り組みたい.この問題は川口Silverman予想が意味を持つかのも関係するだけでなく,代数多様体の有理点の稠密性問題にも関連する重要な予想だからである.
転写制御による尾索動物胚始原生殖細胞産生システムの制御

平成29年度の研究実施計画は、1.これまでに得られた母性局在因子Popk-1およびZf-1の機能に関わる結果について、データの再現性確認と試行回数増加を行い、論文を作成する。2.生殖細胞関連遺伝子の胚性遺伝子発現後も生殖細胞系列で体細胞遺伝子の発現が抑制される仕組みを、エピジェネティック制御に着目して解析する。3.マボヤとユウレイボヤでのPemの機能の比較、ワカレオタマボヤ胚における生殖細胞系列の転写状態の記載を行う。このうち、ユウレイボヤPemに対するMOの効果が認められなかったため、機能の比較をすることが叶わなかったが、以下のことを達成することができた。まず、Popk-1とZf-1の機能を確認することができ、現在リバイス投稿中である。また、エピジェネティック制御については、生殖細胞系列において胚性遺伝子発現開始直前から、H3K27me3のレベルが上昇することを見出した。この時期、生殖細胞系列ではH3K4me3のレベルも高く、このような抑制と活性マーカーが同在するPoised chromatin状態が生殖細胞系列と体細胞系列の分離に関わる可能性が示唆された。実際、まだプレリミナリーではあるが、H3K27me3の阻害剤処理胚において、生殖細胞系列で筋肉分化マーカーのアクチンが異所的に発現することを見出した。さらに、ワカレオタマボヤ胚の各ステージのRNAポリメラーゼIIのリン酸化状態の観察により、生殖細胞系列が完全に生殖細胞のみを作るようになる32細胞期で、転写抑制を示唆するリン酸化の消失が観察されたが、それ以前の生殖細胞系列ではリン酸化が検出された。したがって、実際の遺伝子発現を確かめるためにRNA-seqの情報(大阪大学小沼健助教)を基にして、in situ hybridizationによる卵割期の網羅的な遺伝子発現の解析を開始した。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、尾索動物胚を用いた生殖細胞系列での転写制御機構に焦点を当てた発生学的および比較発生学的解析を通して、発生初期における生殖細胞系列形成機構とその進化について明らかにすることを目的とする。28年度は、近年申請者らが同定したマボヤの母性局在転写抑制因子PEMを足掛かりに、他の尾索動物における生殖細胞系列での転写制御機構を解析した。まず、マボヤと同じホヤ綱に属するユウレイボヤにおいて、PEMの機能を解析したところ、マボヤPEMと同様に体細胞遺伝子に対して転写抑制活性を持つが、この活性に必要なドメインはマボヤPEM内で既に同定されている同等のドメインとは別領域に存在することを示唆する結果を得た。これは、ホヤ綱の動物種間でさえも、転写抑制機構に多能性を示すことを示唆する大変興味深い結果となった。さらに、同じ尾索動物でありながら、PEMをそのゲノム上に持たないオタマボヤ(オタマボヤ綱に属す)の転写抑制機構を明らかにするために解析を行った。まず初期段階として、オタマボヤ胚における始原生殖細胞マーカーVasaの抗体染色を行い、4細胞期以降の卵割期で、生殖細胞系列の細胞に染色が観察されることを明らかにし、オタマボヤが生殖質局在型による始原生殖細胞の形成を行うこと、生殖細胞系列に局在する母性因子の存在を示唆するに至った。また、これらの系列細胞で転写抑制が起こっているのか否かを、転写が起こっている指標となるRNA polymerase IIのリン酸化を認識する抗体により抗体染色を行った。その結果、少なくとも8、16細胞期では、リン酸化が観察され、ホヤでのリン酸化状態とは異なることを明らかにした。この結果もまた、転写抑制機構の多様性を示唆するのかもしれない。本研究における2本柱のうちの1つ、すなわち生殖細胞系列形成機構の進化、については、上記に述べたように興味深い結果が得られつつあり、順調に進んでいると言える。しかしながら、もう1つの柱である、マボヤ初期胚生殖細胞系列における転写制御機構を体系的に理解しようとする試みについては、論文作成のためのデータの再現性をとる実験に終始してしまい、28年度は新しい知見を得ることができなかった。したがって、2つをトータルで考えると、やや遅れていると言わざるを得ない。

さらに、ワカレオタマボヤ胚の各ステージのRNAポリメラーゼIIのリン酸化状態の観察により、生殖細胞系列が完全に生殖細胞のみを作るようになる32細胞期で、転写抑制を示唆するリン酸化の消失が観察されたが、それ以前の生殖細胞系列ではリン酸化が検出された。したがって、実際の遺伝子発現を確かめるためにRNA-seqの情報(大阪大学小沼健助教)を基にして、in situ hybridizationによる卵割期の網羅的な遺伝子発現の解析を開始した。マボヤ初期胚生殖細胞系列における転写抑制機構の体系的理解については、まずは論文を仕上げるつもりであるが、その後は、一番の謎である、PEMによる転写抑制が終わったと考えられる時期以降においても、生殖細胞遺伝子の胚性遺伝子発現が抑制されている仕組みを明らかにしたいと考えている。エピジェネティックな制御を考えているが、同時に、胚性遺伝子発現の際に、どうして体細胞遺伝子の発現は抑制され続けているのか、2つを区別する機構についても迫っていきたい。また、転写抑制機構の進化については、引き続きユウレイボヤとオタマボヤでの解析を行い、ユウレイボヤについては、PEMが異なる領域を介してどのような分子機構で転写抑制をしているのかを明らかにし、オタマボヤについては、まずは転写が本当に抑制されているのかの確認を行い、生殖細胞系列での転写制御に関する基本的な情報を集めたいと考えている。29年度が最終年度であるため、記入しない。
B前駆細胞におけるGPI結合蛋白を介するシグナル回路の解析

GPI結合蛋白はC末端の脂質の修飾により細胞二重膜の外葉に結合している蛋白の総称で、それ自身何ら細胞質内構造を持たないが、糖脂質豊富膜ドメイン/ラフトの構成成分として細胞内への刺激伝達に関与する。本研究では、B前駆細胞におけるGPI結合蛋白を介した細胞内刺激伝達回路について明らかにし、そのB細胞の初期分化機構における機能的役割についての検討することを目的とした。ヒト骨髄CD34+細胞をマウス骨髄間質細胞株と共培養してPro-B細胞を分化誘導し、GPI結合蛋白CD24を特異的単クローン抗体添加によって架橋刺激したところ、アポトーシスが誘導され、正常のB前駆細胞でもGPI結合蛋白を介してアポトーシス誘導刺激が伝達されることが明らかになった。BLNKはB細胞のラフト刺激伝達において重要な役割を担っている。複数のB-precurosor ALL細胞株におけるBLNKの発現を検討した結果、強発現している株から、ほとんど発現していない株まで様々な発現状況が明らかになった。pre-BCRを発現するpre-B ALL株のうち、BLNK強発現株NALM-17と同欠損株HPB-NULLを用いて、pre-BCR刺激伝達系におけるBLNKの役割について検討した。この結果、抗μ鎖抗体によるpre-BCR架橋刺激により、細胞内蛋白のチロシンリン酸化やMAPキナーゼ系の活性化は同等に起こるものの、PLC-γ2および細胞質内Ca++の濃度の上昇はBLNK発現株のみで認められた。以上の結果は、BLNKがpre-BCR刺激伝達系においてPLC-γ2を介するCa++の濃度の上昇に重要な役割を担っていることを示している。現在、GPI結合蛋白を介するアポトーシス誘導刺激におけるBLNKの機能につきさらに検討中である。GPI結合蛋白はC末端の脂質の修飾により細胞二重膜の外葉に結合している蛋白の総称で、それ自身何ら細胞質内構造を持たないが、糖脂質豊富膜ドメインの構成成分として細胞内への刺激伝達に関与する。本研究では、B前駆細胞におけるGPI結合蛋白を介した細胞内刺激伝達回路について明らかにし、そのB細胞の初期分化機構における機能的役割についての検討することを目的とし、B前駆細胞に由来する白血病細胞株を用いて、同細胞に特徴的に発現するGPI結合蛋白CD24による刺激伝達について検討した。種々の特異抗体を用いてCD24を架橋刺激した結果、B前駆細胞株にカスパーゼの活性化を伴ったアポトーシスが誘導されることが明らかになった。特にpre-B細胞ではpre-B細胞抗原受容体(pre-BCR)を同時に架橋することにより、このアポトーシス誘導は抑制されたが、その調節にはMAPキナーゼ(MAPK)ファミリー群の活性のバランスが関与しており、ERKの活性の上昇は細胞生存に、逆にp38 MAPKの活性の上昇は細胞死に作用することが示唆された。Pre-BCRはB前駆細胞の分化の調節にかかわる分子であり、その刺激伝達には糖脂質豊富膜ドメインが関与していることが報告されており、以上の結果から、ラフトを介する刺激伝達がB細胞の初期分化に重要な役割をになっており、その機能調節にGPI結合蛋白がかかわっていることが示唆される。一方、従来報告されていた方法に改良を加えた結果、ヒト骨髄CD34+細胞をマウス骨髄間質細胞株と共培養することによってPro-B細胞を非常に効率良く分化誘導する培養系を確立した。次年度はこの系を用いて、正常B前駆細胞におけるGPI結合を介した刺激伝達について検討を行う予定である。

本研究では、B前駆細胞におけるGPI結合蛋白を介した細胞内刺激伝達回路について明らかにし、そのB細胞の初期分化機構における機能的役割についての検討することを目的とした。ヒト骨髄CD34+細胞をマウス骨髄間質細胞株と共培養してPro-B細胞を分化誘導し、GPI結合蛋白CD24を特異的単クローン抗体添加によって架橋刺激したところ、アポトーシスが誘導され、正常のB前駆細胞でもGPI結合蛋白を介してアポトーシス誘導刺激が伝達されることが明らかになった。BLNKはB細胞のラフト刺激伝達において重要な役割を担っている。複数のB-precurosor ALL細胞株におけるBLNKの発現を検討した結果、強発現している株から、ほとんど発現していない株まで様々な発現状況が明らかになった。pre-BCRを発現するpre-B ALL株のうち、BLNK強発現株NALM-17と同欠損株HPB-NULLを用いて、pre-BCR刺激伝達系におけるBLNKの役割について検討した。この結果、抗μ鎖抗体によるpre-BCR架橋刺激により、細胞内蛋白のチロシンリン酸化やMAPキナーゼ系の活性化は同等に起こるものの、PLC-γ2および細胞質内Ca++の濃度の上昇はBLNK発現株のみで認められた。以上の結果は、BLNKがpre-BCR刺激伝達系においてPLC-γ2を介するCa++の濃度の上昇に重要な役割を担っていることを示している。現在、GPI結合蛋白を介するアポトーシス誘導刺激におけるBLNKの機能につきさらに検討中である。
植物RNAウイルスのゲノム複製の正確性に関する研究

Potexvirus属のasparagus virus X、Carlavirus属のフキモザイクウイルス、Comovirus属のダイコンひだ葉モザイクウイルスのカリフォルニア系統のゲノム塩基配列を決定した。これらの植物RNAウイルスのゲノム配列とデータベース上の既知配列とを比較することにより、ゲノム配列の多様性の一端を明らかにすることができた。植物ウイルスの80%以上を占めるRNAウイルスは、その複製酵素にエラー修正能を持っておらず、複製の精度が低いため、ゲノムの変異出現率が非常に高い。植物RNAウイルスは、その高いゲノム変異出現頻度により、多くの宿主植物や媒介昆虫に適応し、その結果として多様な病原性と宿主域を確保し、その多様性を確立してきたと考えられている。本研究では植物ウイルスのゲノム複製の正確性に関した研究を行うことにより、様々な宿主への適応や病原性の獲得についての知見を得るとともに、安定した弱毒ウイルスを開発する技術の確立に向けて研究を行うこととした。本年はまず、種々の植物RNAウイルスを収集し、そのゲノム塩基配列を決定した。その中で、asparagus virus Xはポテックスウイルス属のウイルスであり、アスパラガスに感染して軽微な病徴を示すとともに、他のウイルスと共感染して激しい病徴を引き起こす。このウイルスの塩基配列を決定したところ、ポテックスウイルスに特徴的なゲノム構造を持ち、既知のラッキョウに感染するscallion virus Xと外被タンパク質の塩基配列で81%もの高い相同性を示し、互いに同種であることが明らかとなった。このことは、本ウイルスが異なった植物を宿主とし、互いにそのゲノムに変異を蓄積させてきたことを示唆するものである。今後はこれらのウイルスを用いて様々な宿主での病原性および、ゲノム複製に関する解析を行うものとする。本年はいくつかの植物RNAウイルスを収集し、そのゲノム塩基配列を決定した。フキモザイク病の病原ウイルスの一種であるフキモザイクウイルスのゲノム塩基配列はpolyA tailを除き8662塩基であり、Carlavirus属ウイルスに特徴的な6つのORFがコードされていた。複製酵素および外被タンパク質がコードされるORFについて、他のCarlavirus属ウイルスのORFと比較解析を行ったところ、塩基配列でそれぞれ46.4-54.9%,43.2-62.1%,アミノ酸配列でそれぞれ38.6-46.6%,31.3-65%の相同性を示した。また、アミノ酸配列に基づく系統解析により、このウイルスは複製酵素ではcoleus vein necrosis virusと、外被タンパク質ではcarnation latent virusと最も近縁であることが示唆された。今回、Carlavirus属の暫定種であったフキモザイクウイルスのゲノム塩基配列を初めて明らかにし、Carlavirus属ウイルスであることが確認できた。また、Carlavirus属に属し、多くの同属ウイルスと異なりアブラナ科植物を宿主とするダイコンひだ葉モザイクウイルスのカリフォルニア系統のゲノム塩基配列を決定した。先に塩基配列が決定されている日本系統と比較したところ、RNA1の塩基配列で94.1%,ORFのアミノ酸配列で98.7%、またRNA2の塩基配列で85.7%,ORFのアミノ酸配列で94.9%の相同性を示すことが明らかとなり、外被タンパク質や移行タンパク質の遺伝子を含むRNA2よりも複製酵素の遺伝子を含むRNA1の方が比較的相同性が高く、変異が蓄積しにくいことが示唆された。