hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
非翻訳リピート病-ＳＣＡ１０・ＤＭ２ 異常伸長リピートＲＮＡの代謝制御

脊髄小脳英調10型(SCA10)の原因遺伝子変異はchr. 22q13.3上のATXN10イントロン9にするATTCT 5塩リピートの不安定異常伸長である(2804500リピート)。この非翻訳領域リピート伸長が、何故どのように優性遺伝様式で病気を発症させるのかは十分に解明されていない。近年、同じく非翻訳領域にCTGリピート異常伸長をもつ筋強直性ジストロフィー(DM)のRNA病態が明らかになってきた。すなわち、伸長CTGリピートがRNAに転写され、CUG転写物がその凝集体(foci)と核内蛋白が複合体を形成することがトリガーとなり、核内RNA蛋白制御不全をもたらすというものである。イントロンに存在するリピート異常伸長により発症するSCA10において、同様の分子病態が関与しているものと考え、検討を行った。SCA10患者由来リンパ芽球を用いて伸長AUUCUリピートの核内凝集体(AUUCU foci)を確認し、さらにAUUCU fociの核内局在について解析を加え、傍核小体/エクソソームとの共局在を認めた。また、伸長AUUCUリピート結合タンパクの検索を行い、4種の核タンパクを同定した。これらのタンパクはいずれもAUUCU fociとの共局在を認め、その中の1つであるPTBP1においては、その転写調節因子としての機能に障害が生じていることを示す結果を得て、SCA10における神経細胞変性との関連が示唆された。脊髄小脳失調症10型(SCA10)の原因遺伝子変異はchr.22q13.3上のATXN10イントロン9に存在するATTCT 5塩基リピートの不安定異常伸長である(2804500リピート)。更に、これらの核タンパクの詳細な発現解析と共に、AAV(アデノ随伴ウイルス)ベクターを用いてマウス小脳内に強発現またはノックダウンさせ、病態を再現またはレスキューできるか検討している。脊髄小脳失調症10型(SCA10)・筋強直性ジストロフィー2型(DM2)の、AUUCU・CCUGリピートRNA結合タンパクをイオントラップ型質量分析装置(LC9 Advantage)を用いたLC/MS/MS解析により同定し、現在機能解析中である。既知のものは、その抗体を入手し、未知のタンパクであったり、良い抗体が得られない場合は独自に抗体を作成した。ペプチドは、構造上露出が予想され抗原性のあるタンパク部位からマウス・ヒトに共通するものを選び、抗体が作製されたら、gel supershift assayでRNA-protein complexのepitopeを認識できるかどうか確認した。また、蛍光insituハイブリダイゼーション-蛍光免疫染色(IF)を施行し、RNA結合タンパクとAUUCU/CCUG RNA fociとの共局在を検討した。コントロール細胞との比較IFでその局在差を検討すると同時に、ウエスタン法やreal-time RT-PCRで定量化を試みた。また、中国地方にしばしば認める小脳失調症と運動ニューロン徴候を併発した原因遺伝子未同定の常染色体優性遺伝性疾患を集積し、ゲノムワイド連鎖解析を行い、多点連鎖解析の結果、20番染色体短腕20p13領域に4.6のロッド値を認め、さらにfine mappingと共通ハプロタイプを認めたことで候補領域を1.8MBに絞り込んだ。この領域にNOP56遺伝子の第1イントロン内のGGCCTGリピート数が、全患者において、15002500リピートに異常伸長しており、脊髄小脳失調症36型(SCA36)と命名された。他の非翻訳リピート病(SCA10とDM2)と同じようにGGCCUG RNA fociを核内に認め、同様のRNA病態が考えられた。GGCCUG結合タンパクの同定を皮切りに、その詳細な分子病態メカニズムの解明とモデル動物開発に向けて鋭意努力中である。
初年度となる2018年度は、研究代表者・分担者それぞれのフィールドでの調査の進展、および本研究課題にかかわる海外の研究者との交流に注力した。分担者の狐崎はエルサルバドルにおいて恩赦法の撤回問題と移行期正義をテーマとする研究機関と人権団体からのヒアリングを行うとともに、東部地域では紛争後帰還難民の日常的位相について生活改善アプローチからの実証評価に必要な情報収集を行った。細谷はペルー調査において、紛争をテーマに作品制作を行なう先住民民俗芸術家にインタビューし、先住民のコスモロジーと紛争経験の関係、また紛争後の平和構築のプロセスを通じた作品の変化を分析した。内藤はチリの人びとが軍政後に展開している社会運動的な大小さまざまな実践に焦点を絞り、意識的・無意識的な日常の取り戻し方あるいは人権保障やトラウマ解消などの追求の様子を調査・考察した。柴田はコロンビアにおけるポスト紛争期の日常的位相に関して文献収集および聞き取り調査(トゥマコ市)を行ない、紛争後に新たに誕生した元FARC構成員によるグループの動向について情報を得た。近藤は、コロンビア・キブド県での調査で、現地先住民組織を介して20名以上の強制移住被害者のライフヒストリーの聞き取りを行なった。渡部はアルゼンチン・ブエノスアイレスで調査を行ない、民政移管後の宗教の変容に関する文献収集、現地研究者との面談交流、強制拉致被害者の聞き取り調査、デモ参与観察などを実施した。石田(代表者)はブエノスアイレスでの調査で、軍政期の暴力の記憶に関して近年特に注目されている性暴力に関する人権組織の取り組みについて、活動家・被害者らに聞き取りを実施した。3月には、ペルー内戦後の秘密墓地発掘の政治性と、先住民系の行方不明者家族の諸実践の関わりを調査研究する文化人類学者イサイアス・ロハス-ペレス氏(米ラトガーズ大学)を招聘し、公開講演会を開催した。メンバーによる個々の現地調査は予定どおり進んでいる。個別に若干の予定変更はあったが、調査地の現状に即して対応し調査を進め、それぞれに進捗が見られる。また、各自がそれぞれの調査地にて、本研究プロジェクトと関係する現地研究者と交流を進めている。たとえば石田は、ブエノスアイレス大学社会科学部との共同研究を仲介に、民政移管後の記憶の構築における「ユダヤ性」の位置を論じてきた歴史学者A・Kahn氏とコンタクトをとるほか、失踪者家族会の活動を調査しつつ記憶のプロセスの議論を展開してきた文化人類学者への面会の準備をしている。狐崎は、紛争難民を起源のひとつとするギャング集団で現代エルサルバドルにおける深刻な社会問題のひとつと見なされる「マラス」の重要な研究者であるJ・Aguilar氏(エルサルバドル中米大学)との交流、研究協力を深めている。近藤は、コロンビアの太平洋岸で起きた左派ゲリラによる住民虐殺(左派ゲリラの社会的イメージを大きく変えたとされる出来事でもある)の被害を受けたコミュニティで調査を進める人類学者とコンタクトを取っている。他のメンバーも初年度の調査で現地研究者との交流を深めており、各自が現地でのアクチュアルな研究動向を踏まえて次年度以降の調査・成果発表に結実させるべく研究を進める条件を整えている。2018年度中、メンバー向けの研究会を3回行なった。2回目には同年度に調査を実施したメンバーの報告のほか、それぞれの調査地でどのようなことに目が向けられるか意見交換を行った。また3月に開催した公開研究会に招聘した人類学者のイサイアス・ロハスーペレス氏とはさまざまな観点から意見交換をしただけでなく、今後も本プロジェクトとの協力関係を維持することについて了解を得た。初年度のため研究成果の数は少ないが、今後も調査を継続することで、有意義な成果が得られると思われる。本研究プロジェクトの研究期間は残り4年間であり、その全体的成果については論文集のかたちで発表することを計画している、そのために、二つの方針を立ててプロジェクトを進めている。ひとつは、先にも記したように、現地調査の際に現地の研究者と積極的に交流をすることである。これによって、各自の研究が現地でのアクチュアルな研究動向を踏まえたものになることが期待される。さらに、成果発表論文集などへの寄稿・貢献の可能性も含めて相談を進めている。2年度目、3年度目は、初年度同様、各自のフィールドワークにも引き続き注力する。同時に、研究成果発表に向けて、定期的にプロジェクトメンバーによる研究会を開催し議論を深めるほか、学会でのパネル発表に向けた準備を進めている。とりわけ3年目に、パネル発表ができるように、2年度目となる今年度には、これまでの調査成果に関する議論のみならず、調査をふまえて重要になる論点を整理するためのディスカッションを研究会で行なうようにする。
柴田はコロンビアにおけるポスト紛争期の日常的位相に関して文献収集および聞き取り調査(トゥマコ市)を行ない、紛争後に新たに誕生した元FARC構成員によるグループの動向について情報を得た。近藤は、コロンビア・キブド県での調査で、現地先住民組織を介して20名以上の強制移住被害者のライフヒストリーの聞き取りを行なった。渡部はアルゼンチン・ブエノスアイレスで調査を行ない、民政移管後の宗教の変容に関する文献収集、現地研究者との面談交流、強制拉致被害者の聞き取り調査、デモ参与観察などを実施した。石田(代表者)はブエノスアイレスでの調査で、軍政期の暴力の記憶に関して近年特に注目されている性暴力に関する人権組織の取り組みについて、活動家・被害者らに聞き取りを実施した。3月には、ペルー内戦後の秘密墓地発掘の政治性と、先住民系の行方不明者家族の諸実践の関わりを調査研究する文化人類学者イサイアス・ロハス-ペレス氏(米ラトガーズ大学)を招聘し、公開講演会を開催した。メンバーによる個々の現地調査は予定どおり進んでいる。個別に若干の予定変更はあったが、調査地の現状に即して対応し調査を進め、それぞれに進捗が見られる。また、各自がそれぞれの調査地にて、本研究プロジェクトと関係する現地研究者と交流を進めている。たとえば石田は、ブエノスアイレス大学社会科学部との共同研究を仲介に、民政移管後の記憶の構築における「ユダヤ性」の位置を論じてきた歴史学者A・Kahn氏とコンタクトをとるほか、失踪者家族会の活動を調査しつつ記憶のプロセスの議論を展開してきた文化人類学者への面会の準備をしている。狐崎は、紛争難民を起源のひとつとするギャング集団で現代エルサルバドルにおける深刻な社会問題のひとつと見なされる「マラス」の重要な研究者であるJ・Aguilar氏(エルサルバドル中米大学)との交流、研究協力を深めている。近藤は、コロンビアの太平洋岸で起きた左派ゲリラによる住民虐殺(左派ゲリラの社会的イメージを大きく変えたとされる出来事でもある)の被害を受けたコミュニティで調査を進める人類学者とコンタクトを取っている。他のメンバーも初年度の調査で現地研究者との交流を深めており、各自が現地でのアクチュアルな研究動向を踏まえて次年度以降の調査・成果発表に結実させるべく研究を進める条件を整えている。2018年度中、メンバー向けの研究会を3回行なった。2回目には同年度に調査を実施したメンバーの報告のほか、それぞれの調査地でどのようなことに目が向けられるか意見交換を行った。また3月に開催した公開研究会に招聘した人類学者のイサイアス・ロハスーペレス氏とはさまざまな観点から意見交換をしただけでなく、今後も本プロジェクトとの協力関係を維持することについて了解を得た。初年度のため研究成果の数は少ないが、今後も調査を継続することで、有意義な成果が得られると思われる。本研究プロジェクトの研究期間は残り4年間であり、その全体的成果については論文集のかたちで発表することを計画している、そのために、二つの方針を立ててプロジェクトを進めている。ひとつは、先にも記したように、現地調査の際に現地の研究者と積極的に交流をすることである。
Lean Mass Indexと月経異常の関連について

女性アスリートは、利用できるエネルギーの不足・無月経・骨粗しょう症といったFemale Athlete Triad(FAT)を発症することが多い。FATは、無理な食事制限や過度な運動により、摂取エネルギーを消費エネルギーが上回ることで起こる。これまでは、低体脂肪率が月経異常を引き起こすとされていたが、サッカー選手を対象にした我々の研究から、アスリートでは筋肉量の低下でも月経異常を引き起こす可能性が示唆された。しかし、全ての競技で同様の結果が得られるかは不明である。そこで本研究では、月経異常を起こさない体脂肪率と筋肉量の比を検討し、女性アスリートの健康管理と競技力向上に貢献することを目指す。
早産の予防戦略―歯周病原細菌および歯周病由来自己抗体の妊婦子宮への影響―

47名の切迫早産妊婦、48名の正常妊娠妊婦を被験者とした。早産であった妊婦からは、口腔内からP. gingivalisが高頻度で検出された。また、出産後の胎盤を解析し、歯周病原細菌が胎盤から検出されるかどうかを検討した。その結果、切迫早産であった妊婦の胎盤からは、正常妊娠の妊婦の胎盤と比較してF. nucleatumが有意に多く検出された。Slc:ICR雌マウスの妊娠1日目からP. gingivalisを静脈注射にて毎日投与した菌血症モデル群および妊娠15日目に1回のみ投与した群では、妊娠1日目から毎日生理食塩水を静脈注射した対照群と比較して有意に低い仔の出生体重となった。歯周病が早産・低体重児出産に影響を及ぼすことが報告されているが、そのメカニズムに関しては不明な点が多い。近年、早産・低体重児出産を引き起こす疾患として、抗リン脂質抗体症候群が注目されている。私たちは、抗リン脂質抗体症候群に関連するβ-2 glycoprotein-I上のTLRVYKペプチドに対してA. actinomycetencomitans leukotoxin C上のSIRVYK配列に対する抗体が交差反応を示すこと、早産の妊婦では血清中の抗SIRVYK抗体価および抗P. gingivalis抗体価が上昇していることを報告した。本年度では、マウス(BALB/c)を用いて歯周病原細菌が出産にどのように影響するかを検討した。妊娠プラグの確認された日を妊娠0日とし、歯周病原細菌を感染させて出産結果を評価した。P. gingivalisを感染させたマウスではPBSを用いたコントロール郡と比較して、マウスの出生率の低下および仔マウスの出生時体重の低下が観察された。妊娠と歯周病に関しては多くの報告があるが、ほとんどはヒトを対象にした疫学研究、もしくは短期間での介入研究であり、動物モデルを用いて直接的に歯周病と出産の関連を評価した報告はまだない。本動物実験モデルにて、炎症と免疫応答をより詳細に分析し、歯周病がどのように出産へ影響するかのメカニズムを解明できれば、より安全な出産を目指すことが可能となる。歯周炎は切迫早産や早産のリスクファクターと考えられている。しかしながら、その発症メカニズムには不明な点が多い。我々は、歯周病原細菌が抗リン脂質抗体症候群の標的分子であるβ-2糖蛋白質上のTLRVYKへの交差反応による血栓症が悪化しているという仮説を立て研究を行った。細菌相同性のある蛋白に対するウサギ特異抗体の実験の結果、anti-SIRVYK IgG抗体のみがTLRVYK蛋白に反応した。多変量解析の結果、抗SIRVYK IgG抗体は切迫早産の診断と有意な関連があった。95名の被験者のうち、14名(14.7%)が早産であった。早産は抗SIRVYK IgG抗体価が平均より高い群において、低い群よりも高い割合を示した。47名の切迫早産のうち13名が早産となった。回帰分析から過去喫煙、P.gingivalisの存在、抗SIRVYK IgG抗体が早産と有意に相関していた。これらのことから、P.gingivalisの感染とSIRVYKへの抗体反応が切迫早産と早産に関連している可能性が示唆された。本年度は、ヒトの疫学研究の結果に基づいて、P.gingivalisの感染と出産についてマウスモデルでの検討を行っている。一定の濃度でのP.gingivalusの感染により、胎仔が低体重となることを明らかにした。47名の切迫早産妊婦、48名の通常妊娠の妊婦、計95名の妊婦を被験者とした臨床研究を行った。早産であった妊婦からは、口腔内のPorphyromonas gingivalisが有意に高頻度で検出された。加えて、習慣的流産、血栓を引き起こす抗リン脂質交代症候群(APS)における歯周病の関与に関する研究を行った。APSはβ2グリコプロテインI(β2GPI)依存性の抗カルジオリピン抗体が、β2GPI上の結合エピトープと結合することによって引き起こされる。歯周病原細菌に対する抗体がβ2GPI上の結合エピトープと相同性の高い配列を持つことに着目し、歯周病原細菌の感染によって上昇する抗SIRVYK IgG抗体がβ2GPIと交差反応することを示した。抗SIRVYK IgG抗体が切迫早産および早産に関連していることを報告した。その結果、切迫早産の妊婦の胎盤からは、正常な妊婦の胎盤と比較してFusobacterium nucleatumが有意に多く検出されることを報告した。Fusobacterium nucleatumは口腔内の清掃状態を反映すると考えられており、口腔内の状態が、胎盤に反映されている可能性が示唆された。動物モデルを用いた研究では、マウスにPorphyromonas gingivalisを静脈注射することにより、低体重出産が引き起こされることを報告した。

Slc:ICR雌マウスの妊娠1日目からP. gingivalisを静脈注射にて毎日投与した菌血症モデル群および妊娠15日目に1回のみ投与した群では、妊娠1日目から毎日生理食塩水を静脈注射した対照群と比較して有意に低い仔の出生体重となった。本年度はマウスモデルを作成し、歯周病原細菌の感染によって出産異常が引き起こされることを観察した。おおむね実験計画のとおりに進展している。P.gingivalisの感染がどのように影響して低体重となるかを明らかにするために、マウスモデルを用いて、臓器毎のmRNAの変動についてDNA microarray法を用いて網羅的に検討する。歯周病学分野マウスモデルにて、メカニズムの解明を目指していく予定である。動物サンプルの調整が間に合わず、解析が行えなかったため次年度に試薬を購入し、解析する
抗ＴＮＮＩ３Ｋモノクローナル抗体を用いた虚血性心疾患の新型診断薬の開発

我々はマウス抗ヒトTNNI3Kモノクローナル抗体を用いた、虚血性心疾患の病態診断薬のELISA法と金コロイド-銀増幅法を開発した。その結果より、血中TNNI3Kレベルの測定は急性心筋虚血や心筋梗塞など急性心筋損傷の早期診断に有用と考えられた。特に、TNNI3K-金コロイド銀増幅型検査チップの作製を開発成功ことは、方法簡単,経時短い、感度高いの心筋虚血疾患の診断チップを使用可能になります。これらの結果より、血中TNNI3Kレベルは、急性心筋損傷の診断に効果的な診断マーカーであり、本診断試薬を用いた血中TNNI3Kレベル測定は急性心筋虚血や心筋梗塞など急性心筋損傷の早期診断に有用と考えられた。TNNI3Kは心筋特異的に発現するMAPキナーゼである。本研究は、抗ヒトTNNI3Kモノクローナル抗体を用い通常のELISA法及び金コロイド銀増幅法を駆使して、虚血性心疾患に対する特異性の高い診断薬開発を行い、心筋虚血疾患の予防と治療に資することを目的とする。本年度には、主にTNNI3Kリコンビナント蛋白を用いて抗TNNI3Kモノクローナル抗体を作製した。いままでは10個免疫グロブリンクラスを決定したが、これらの免疫グロブリンクラスを利用して、高親和性のTNNI3K特異的モノクローン抗体を作製し、臨床的に応用できる高感度の確定診断システムを開発する可能性を見えられる。さらに、得られた抗ヒトTNNI3Kモノクローナル抗体を用いて、ELISA法によるTNNI3K診断キットを作成し、ELISA方法で異なる濃度のTNNI3K抗原の存在下に抗TNNI3Kモノクローナル抗体の反応を測定し、その抗体の反応曲線を測定した。一方、共同研究者の関連病院で、その病院を訪問し、我々が作った抗TNNI3Kモノクローン抗体を持って行って、ELISA法で健常者、急性心筋虚血患者(急性心筋梗塞、急性冠状動脈症状群)の血液サンプルをELISA法で検査と解析した。その結果、健康対照群と比べると、急性心筋虚血患者の血中TNNI3K濃度は有意に上昇したことが示唆された。抗TNNI3Kモノクローナル抗体を作成する目的は、特異性、感受性の高い心筋梗塞疾患などの早期診断キットを作成し、その早期診断薬を開発することである。我々で開発した抗TNNI3Kモノクローン抗体は、心筋虚血や心筋梗塞など虚血性心疾患の診断に対して、その感受性も、特異性も高いですが、今後の新規心疾患診断薬を開発する道へ行うと考えられた。我々は感受性が高い、特異性も高い虚血性心疾患病態の診断薬を開発するため、TNNI3K遺伝子の全長アミノ酸配列をコードするcDNAより作製したリコンビナント蛋白をマウス膵臓に免疫し、マウスの抗ヒトTNNI3Kのモノクローナル抗体を作成と精製した。さらに、各種濃度のリコンビナント蛋白を用いて作製したモノクローナル抗体の検量線を作成し蛍光ELISA法の性能を評価し、抗ヒトTNNI3Kモノクローナル抗体を用いたマウス心筋梗塞モデルを用いて血中TNNI3Kレベルを48時間で追跡した。その結果、マウス心筋梗塞モデルの血中TNNI3K濃度は虚血開始2時間後から上昇、12時間後にはピーク、48時間後にも同様な高いレベルを維持し、血中TNNI3K濃度の変化は早期診断薬として利用可能ことを示唆した。一方、我々は中国幹南医学院へ訪問し、該医学院付属病院の王伯群院長及び心内科王小萍教授の研究チームの協力で、抗ヒトTNNI3Kモノクローナル抗体を用いた、健常者及び急性心筋梗塞(AMI)患者の血中TNNI3K濃度の変化を共同研究することを合意した。その研究必要なすべての倫理学審査書類を準備した後に、健常者の健康診断時に廃棄された血液サンプル(n=211,血清)及び入院されたAMI患者(n=173)のサンプルの使用などの同意をすべて揃って頂き、血液サンプルの血清を検体としてTNNI3Kの血中レベルを測定した。その結果:抗ヒトTNNI3Kモノクローナル抗体を用いた健常者およびAMI患者の血中TNNI3Kレベル測定のためのELISA法を確立したが、AMI患者の血中TNNI3Kレベルは健常者より有意的に高かったことを示唆した(P<0.001)。抗TNNI3Kモノクローン抗体は、心筋虚血や心筋梗塞など虚血性心疾患の診断に、感受性も、特異性も高いですが、今後の新規心疾患診断薬を開発する道へ行うと考えられた。我々は、健常者血清と急性心筋梗塞患者血清を検体を用いた、ヒトTNNI3Kの血中レベルをELISA法と金コロイドー銀増幅法で測定し、両者の効果を比較評価した。その結果:1) TNNI3K血中レベル測定の特異性を確認するために、健常者血清と急性心筋梗塞患者血清を検体として比較し、通常のELISA法を測定した(図1);急性心筋梗塞患者では血中TNNI3Kレベルは健常者より十倍以上高かったことを示唆した。2)我々はTNNI3K-金コロイド銀増幅型検査チップを開発したがそのTNNI3K-金コロイド銀増幅型検査チップを用いて虚血性心疾患患者の血中TNNI3K濃度を測定した。その結果より、TNNI3K-金コロイドー銀増幅法は操作簡単、経時短い(15分ぐらい)、特異性が高い、急性心筋損傷の診断に効果的な診断マーカーであり、本診断

試薬を用いた血中TNNI3Kレベル測定は急性心筋虚血や心筋梗塞など急性心筋損傷の早期診断に有用と考えられた。我々はマウス抗ヒトTNNI3Kモノクローナル抗体を用いた、虚血性心疾患の病態診断薬のELISA法と金コロイド-銀増幅法を開発した。その結果より、血中TNNI3Kレベルの測定は急性心筋虚血や心筋梗塞など急性心筋損傷の早期診断に有用と考えられた。特に、TNNI3K-金コロイド銀増幅型検査チップの作製を開発成功ことは、方法簡単,経時短い、感度高いの心筋虚血疾患の診断チップを使用可能になります。これらの結果より、血中TNNI3Kレベルは、急性心筋損傷の診断に効果的な診断マーカーであり、本診断試薬を用いた血中TNNI3Kレベル測定は急性心筋虚血や心筋梗塞など急性心筋損傷の早期診断に有用と考えられた。申請当時の研究計画方法は平成25年度と26年度以後二つ段階を別れて行った。その中、26年度以後の研究内容について、9部分を含有していた。その中、4から9段階は、主に金コロイド銀増幅チップの作成と性能分析であった。当日の計画についてはフナシコ社へ少数量の空チップを外注し、我々の一次抗体と二次抗体をセットアップして、ELISA法と金コロイド銀増幅法の血中TNNI3Kへの反応効果と速度を比較したい。しかし、フナシコ社は最小限が100個であり、その総額が税金別計210万円であった。さらに、フナシコ社は他の可能性を拒否するので、金額も予想外が高かったが、現在の基盤研究Cの余額では足りないですが不可能であった。従って、我々は、化学が専門である、いつも共同研究に協力をして頂きました上海応用技術学院の劉小珍先生にお願い、彼の研究チームから支援を頂き、TNNI3Kの金コロイド銀増幅型検査チップの作製を行なった。薬理学、創薬ゲノム薬理学、循環器薬理学我々が開発したMAPキナーゼTNNI3Kを用いた新しい心疾患診断薬の特徴として、その一、感受性が高い、血中TNNI3K濃度は急性心筋梗塞患者の方が健常者の方より十倍以上高かった;その二、特異性が高い:血中TNNI3K濃度の変化とcTnI濃度の変化を比べると、TNNI3Kは、AMI患者の血清のみ上昇するが、cTnIの場合ではAMI患者のみならず、急性腎不全患者の血液サンプルにも見られた。その三、早期確診薬として利用可能:血中TNNI3K濃度は虚血開始2時間後から上昇、12時間後にピークを迎え、48時間後でも同様な高いレベルに維持している。即ち、我々が樹立しており抗TNNI3Kポリクローナル及びモノクローナル抗体を用いで心筋虚血や心筋梗塞の早期診断を行うことが可能である。そこで、診断薬開発メーカーなどと連携し診断キットが開発できれば、心疾患の迅速な診断が可能になるものと期待できる。また、創薬メーカーと提携することですれば、この抗体を用いた新規ターゲットの治療剤の開発につなげたいと考えられた。最初の実験計画中に、一つ達成目標が「:中国協力研究者の中国医学科学院医学生物研究所CHU Jiayou教授のチームと共同研究を行い、ELISA法によるTNNI3K診断キットを用いた、急性心筋梗塞を含む心筋虚血患者300例の血中TNNI3K濃度を調べる。(研究代表者、研究分担者、研究協力者、中国の研究協力者担当)」。
交通情報提供による経路誘導を目的とした動的交通行動の実験分析に関する研究

社会経済活動の高度化に伴う移動時間の正確性と安定性に対する高水準の要求に応えるため情報提供による交通管制手法が着目されている。路車間通信を介しリアルタイムな旅行時間情報をドライバーに提供し、利用経路を分散誘導して渋滞の緩和解消を図る高度交通情報システムはその中心的方策である。ただし、実効性の高いシステムの構築には、情報と交通行動の関係法則の把握及び情報提供効果の評価を行い、その結果をシステムの設計、特にソフト面の設計に反映させる必要がある。そこで本研究では、提供情報の適否を検討可能なシミュレーションシステムの構築を試みた。このシステムでは、情報提供時の利用者行動、フローの時々刻々の変動、交通状態に応じた情報提供を、各々経路選択モデル、交通流モデル、情報提供モデルにより記述する。各モデル間の相互関係を明示的に取り扱うことで、動的情報提供時のフローの変動を予測し、情報提供効果の定量的評価を試みる。非集計レベルの経路選択行動を明示した点、意志決定における走行経験の影響を考慮した点、モデルを動学化した点が本研究の特徴である。平成5年度は、前年度に開発した経路選択モデルと、本研究グループが開発を進めてきた動的交通流モデルを融合し、上記のシミュレーションシステムを構築した。数ケースの数値実験の結果、このシステムは多様な経路選択原則に則り行動するドライバーの存在を想定した上で、旅行時間の点から情報堤供の影響を評価可能であることを確認した。情報の質等を体系的に変化させたシミュレーション実験を行い、情報提供の影響の把握を試みた。その結果、次の様な知見を得た。(1)情報利用可能なドライバーの増加とともに、旅行時間は全体的に減少するが、情報利用の直接的メリットは減る。(2)質の低い情報の提供は、交通状態の悪化を招く危検性が高い。経済活動の高度化に伴う移動時間の正確性と安定性に対する要求の高まりに応えるため、管制手法としての交通情報提供が着目されている。経路の交通状態を旅行時間情報としてドライバーに伝達することで、渋滞経路から代替経路に交通を分散誘導し、既存道路網の効率的利用を図る方策である。ただし現状では、情報と交通行動の関係法則の把握及び情報提供効果の評価に関しては、今後の研究に依るところが大きい。本研究では、提供情報の適否を検討可能なシミュレーションシステムの構築を試みた。このシステムでは、即時的な旅行時間情報提供時の利用者行動、道路網上のフローの時々刻々の変動、交通状態に応じた情報提供を、各々、経路選択モデル、交通流モデル、情報提供モデルにより記述する。各モデル間の相互関係を明示することで、リアルタイム情報提供時のフローを記述し、情報提供効果の定量的評価の可能性を探る。非集計レベルの交通行動を明示した点、意志決定における走行経験の影響を考慮した点、モデルの動学化を図った点が本研究の特徴である。本年度は、システムの根幹である経路選択モデルの構築を試みた。経路選択ルールの抽出のため、アンケート調査を行った。走行経験の蓄積や交通状態の推移が、ドライバーの意志決定に及ぼす影響を考慮するため、経路選択に関する選好意識を繰り返し回答してもらい、複数被験者の時系列データを収集した。データ信頼性の向上、実験時間の短縮及び回答回数の確保のため、走行結果の提示及び回答の収集にはパーソナルコンピュータを利用した。ドライバーは走行経験及び情報に基づき、代替経路の旅行時間を予測し、予測値最小の経路を選択するとの行動原理を仮定し、旅行時間予測機構を内包した経路選択モデルを推定した。このモデルを基本とし、ドライバーの情報利用可能性、情報依存度を考慮した経路選択シミュレーションモデルを構築し、その挙動を確認した。社会経済活動の高度化に伴う移動時間の正確性と安定性に対する高水準の要求に応えるため、動的情報提供による交通管制手法が着目されている。

路車間通信を介して、リアルタイムな旅行時間情報をドライバーに提供し、利用経路を分散誘導し、渋滞の緩和解消を図る高度交通情報システムは、その中心的方策である。ただし、実効性の高いシステムの構築には、情報と交通行動の関係法則の把握及び情報提供効果の評価を行い、その結果をシステムの設計、特にソフトウェア面の設計に反映させる必要がある。そこで本研究では、提供情報の適否を検討可能なシミュレーションシステムの構築を試みた。このシステムでは、情報提供時の利用者行動、フローの時々刻々の変動、交通状態に応じた情報提供を、各々経路選択モデル、交通流モデル、情報提供モデルにより記述する。各モデル間の相互関係を明示的に取り扱うことで、動的情報提供時のフローの変動を予測し、情報提供効果の定量的評価を試みる。非集計レベルの経路選択行動を明示した点、意思決定における走行経験の影響を考慮した点、モデルを動学化した点が本研究の特徴である。平成5年度は、前年度に開発した経路選択モデルと、本研究グループが開発を進めてきた動的交通流モデルを融合し、上記のシミュレーションシステムを構築した。数ケースの数値実験の結果、このシステムは多様な経路選択原則に則り行動するドライバーの存在を想定した上で、旅行時間の点から情報提供の影響を評価可能であることを確認した。情報の質等を体系的に変化させたシミュレーション実験を行い、情報提供の影響の把握を試みた。その結果、次の様な知見を得た。(1)情報利用可能なドライバーの増加とともに、旅行時間は全体的に減少するが、情報利用の直接的メリットは減る。(2)質の低い情報の提供は、交通状態の悪化を招く危険性が高い。
目の動きと補綴物の完成度について(効率的な実習をめざして)

歯学教育における実技実習をより効率的に行うために、その技術の習得過程の様子を科学的に分析することを目的とし、我々は歯学教育へのアイマ-クレコ-ダシステムの応用を試みた。本物究ではまず最初の試みとして、歯冠修復学の基礎となる歯のスケッチを例にとり、教育をすでに受けた者(経験者)と教育を受けていない者(初心者)の眼の動きを分析し、比較検討した。その結果、初心者の眼の動きは、経験者に比べ複雑な軌跡を示しており、両者の間には明らかな相違が認められた。また、停留状態においても、初心者は経験者より多くの時間と回数を費やすことが明らかになった。これらのことより、我々は初心者がスケッチに慣れる従い対象物を認識する過程が進歩していく様子を客観的に評価できるものと考えている。本研究では、アイマ-クレコ-ダシステムを導入することにより、被験者の眼の動きを定量的に解析することができ、なおかつどの部分を見ているかを簡単に把握できるなどの有効性が明らかになったので、今後さらに歯学教育への応用について検討を重ねたいと考える。また、歯科補綴学領域における審美的側面に評価するにあたっても有効と考え、その方面に対しても現在応用を進めている。研究方法としては、歯科医と歯科関者以外の人との、審美性に関与すると思われる因子についての比較をはじめ、審美性に関する項目および順位、また歯科医と一般の人との眼の動きから印象の相違などについて検討を行っている。歯学教育において,実技実習は重要な分野であり,従来からマンツーマンで行なうのが最良とされている.しかし効果的な教育を行なうためには今までの教育方法をより科学的に解析することが必要と考える.そこで補綴物製作の際,どのポイントをみたら正しい情報を得られるか,目の動きをアイマークレコーダーで追い補綴物製作にどのように関わっているかを検索した.アイマークレコーダーシステムは近赤外線を角膜反射させ,視点を被験者の見ている被写体全像の中にマークさせることができる.まず手始めに補綴物製作丸経験者と初心者との差を大臼歯の咬合面を書き写すことで判定をした.すなわち約5倍大の下顎第一大臼歯咬合面観を原図として左側におき,右側にそれと同じ図を書かせた.その結果,初心者はスケッチをする際,経験者の約28%増の時間を必要とした.ところで眼球運動の分析では,ある点をある時間以上注目していると停留点とするが,本実験では停留時間は経験者87.3%,初心者82.4%となり初心者は目を動かす時間が多い.また,停留する状態も原図側に2回以上停留してから図を書くことや,停留頻度,移動ベクトルの違いなどからも初心者と経験者の差を見出すことが可能であった.これらの結果より経験者の見ているところと初心者の見ているところとの違いが明らかになり,その点を重点的に教えることで学生,指導者ともに時間や労力を減じて,なお一定の効果が期待できるものと思われる.今後は例数を増し,その重点項目の拾い出しを行なう予定である.また,アイマークレコーダーを用い,近年特に盛んになった補綴物に対する審美性をどこに重点を置いて改善すればよいか見出す研究も進めている.なお,本研究の一部は昭和62年度日本補綴歯科学会関東支部学術大会で発表した.我々はアイマークレコーダの歯科的応用の一つとして、目の動きによって修熟度を判定する試みを行ない一応の結果を得た。またその結果を踏えて補綴物模型実習の効果的な教育方法を探っている。一方、歯科診療で最近特に重視されてきた審美性の評価に応用することを試みている。歯科医と歯科関係者でない人との、審美性を阻害する因子へ解明のためアイマークを用いてみた。また同時に、歯科医とそれ以外の人100名を対象に口腔内のカラースライドを呈示し、両者の相違点について明らかにしつつある。方法はまず、本学の補綴科歯科医60名に審美性を阻害すると感じている項目を3つ挙げてもらった。

その結果により、高順位に位置する項目を取出し、それにより口腔内写真3枚を選びアンケート用紙を作成した。これにより、歯科医及び一般の人に対して何が一番審美性を阻害しているかのアンケートを行なった。またこれに使用した口腔内写真を、ナック社製アイマークレコーダを装着した被験者に観察させ、目の動きをビデオレコーダに記録した。またその結果を、パーソナルコンピュータ-PC-9801VXにて分析した。そしてアイマーク使用時とスライドに審美性を阻害する部位を記入する方法に大きな相違があるかを探ってみた。その結果によると、歯科医が審美的に障害があると思われるの因子も、一般の人にとっては差程気にならぬ様である。これらの結果については、5月22日長野県で行なわれる第81回日本補綴歯科学会学術大会で発表する予定でる。これら以外の結果については、第27回鶴見歯学会において、また第80回日本補綴歯科学会学術大会(於岐阜市)において発表した。
岩手県矢巾町および滝沢村における常時微動のH/Vスペクトル比を利用した地盤調査

研究目的本研究は、2003年5月26日に発生した宮城県沖の地震に対してアンケート震度調査を行った岩手県矢巾町および滝沢市(H26.1.1滝沢村が市政執行)において常時微動を観測し、基盤深度の変化を推定して地震による揺れと地盤との関係性について明らかにすることを目的とする。研究方法微動観測はアンケート震度データが多い地区にて行った。観測点間隔は約200mである。矢巾町では高田地区、国道4号から東北本線矢幅駅にかけての県道207号沿いの地区および矢幅駅西側の地区にて微動観測を実施した。観測点は102点である。滝沢市では滝沢ニュータウン周辺、土沢から室小路にかけての諸葛川沿いの地区および巣子地区にて微動観測を実施した。観測点は104点である。各観測点にて約15分間微動を測定した。研究結果観測された微動のH/Vスペクトル比を計算しピーク周波数から基盤深度を推定した。矢巾町では基盤深度が高田地区は比較的浅く、国道4号から矢幅駅までは矢幅駅に向かって徐々に深くなり、矢幅駅西側は深いと推定された。2003年に実施したアンケート震度調査では、高田地区や国道4号付近は震度4が多く、国道4号から矢幅駅へ近付くに従って震度5弱が多くなり、矢幅駅西側は震度5強が多いとの結果を得ている。アンケート震度との比較より、矢巾町では基盤が深くなるに従って地震時の揺れが大きくなっているのではないかと推定される。滝沢市では滝沢ニュータウンは観測範囲の西側の一部がやや基盤が深いと推定された。土沢から室小路にかけての地区は、調査範囲の北側の一部の基盤がやや深いと推定された。巣子地区は基盤震度が疎らであった。アンケート震度との比較は、相関性が低い結果となった。滝沢市は岩手山からの噴出物が堆積した地盤であるため、地下構造が複雑になっていると推定される。地震による揺れの違いは、より浅い地盤構造の違いが影響しているのではないかと考えられる。
住宅における通風環境評価および通風計画に関する研究

日本における通風の活用は気候風土に順応した必要不可欠な技術であり、その研究の歴史は古い。しかし、通風活用の前提条件である「建物周辺状況・建物外皮性能・住まい方」は近年、著しく変化しており、今一度、現状の通風気流西欧の実態を把握することが必要である。そこで、本研究では、先ず、現場で気流性状を把握するための画像解析技術を応用した簡易な粒子画像流速測定法(PIV)を開発した。また、フィールド実験により通風の冷房エネルギー消費量削減効果を把握し、その結果から、冷房エネルギー消費量削減効果を外気温から推定する方法を提案した。日本の住宅における通風の活用は気候風土に順応した必要不可欠な技術であり、その研究の歴史は古い。しかし、「建物周辺状況・建物性能・住まい方」などの通風活用における前提条件は近年、著しく変化しており、通風の効果的な活用やその計画法の整備にあたっては、今一度、現状の通風気流性状の実態を把握することが必要である。気流性状の計測方法の1つに可視化技術とデジタル画像解析技術を応用した粒子画像流速測定法がある。しかし、この測定法ではレーザーを光源とするため危険を伴い、現場(一般的な住宅)でのシステムの構築が容易ではない。また、解析可能な範囲も数十センチ四方が限界である。そこで、まず、現場における通風気流性状の実態を把握するための現場測定法の検討を実施した。このシステムに求められる要件は、「レーザー光源を使用しない(安全性)」、「光源の光量不足を補うため、低照度で撮影できるカメラであること」、「カメラの画角は45°であること(広範囲の計測)」、「可視化用にドージングするトレーサー粒子は無害かつ、居室を汚さないこと(安全性・簡易性)」、「装置一式を容易に運搬できること」である。平成22年度はこれらの要件を満たす計測システムの計画、構成機器の選定・導入を行った。風洞実験により計測精度の検証を行った。その結果、本システムにより気流性状を概ね把握できる精度が得られることを確かめた。また、計測システムの操作性や光源の設置方法・トレーサー粒子散布方法などのノウハウの蓄積を目的とした実住宅における現場実測を実施。周辺の外乱(日射や反射物)の処理などについては、改良の余地を残すが、実際の現場においても本システムを構築し計測することが可能であった。次年度以降は、気流性状の現場計測法の検討を進め、その確立を目指すとともに、現場にて通風気流性状の実態の把握を進めていく。しかし、「建物周辺状況・建物性能・住まい方」など通風活用における前提条件は近年、著しく変化しており、通風の効果的な活用やその計画法の整備にあたっては、今一度、現状の通風気流性状の実態を把握することが必要である。本研究では、先ず、現在の測定・解析技術を駆使した気流性状の現場計測法を開発する。次に、その測定法により、通風時の室内気流性状の実態を把握し、住宅の省エネかつ快適な運用を目指した通風計画を提案することを目的とする。平成23年度は、通風による冷房エネルギーの削減効果に関する実証実験を行った。実験は、建築研究所内にある実大の戸建実験住宅(つくば市)を使用し、照明や家電、カーテンの開閉、在室状況(人体からの発熱および発湿)を5分単位で制御し、実際の生活を忠実に再現した条件下で実施した。通風条件においては、快適性に配慮して、室温に閾値を設け、29°C以上になるとエアコンが稼働するように設定した。実験結果から日平均気温を変数としてエアコンの消費電力量の推定式を作成し、実験を実施したつくば市における標準年アメダス気象データを用いて、通風による冷房エネルギー(電力量)の削減効果を試算したところ、7月9月で約3割の削減効果があることを確認した。平成24年度は、前年度に引き続き、通風による冷房エネルギーの削減効果に関する実証実験を行った。

実験は、建築研究所内にある実大の戸建実験住宅(つくば市)を使用し、照明や家電、カーテンの開閉、在室状況(人体からの発熱および発湿)を5分単位で制御し、実際の生活を忠実に再現した条件下で実施した。通風条件においては、快適性に配慮して、室温に閾値を設け、29°C以上になるとエアコンが稼働するように設定した。また、建物の風圧を実測し、そのデータに基づき計算された通風量と実測による通風量を比較・検証し、両者が概ね一致することを確認した。これらの結果は、前年度検討した通風による冷房エネルギー削減効果の予測精度の向上につなげるとともに、風圧データを活用した通風期間中の排熱量(潜熱を含む)を明らかにした。当初の計画どおり、初年度に気流の計測方法に関する検討を実施し、今年度は通風による冷房エネルギー削減効果の検証実験を実施している。通風による省エネ効果の推定精度の向上に向けて、平成24年度も実証実験を継続するが、実験施設の整備は完了しており、速やかに実証実験を開始することが可能である。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は次の3点について重点的に研究を進める。1点目は通風による冷房エネルギー削減効果に関する実証実験の継続。2点目は気流性状の現場測定法に関する検討であり、実大通風実験施設を活用して計測精度の検証を実施する予定である。3点目は通風時の室内気流のシミュレーションを行い、通風計画用の事例作成に活用する。
膵疾患の診断能・予後の向上を目指した超音波内視鏡技術の開発

造影ハーモニック超音波内視鏡を用いることにより膵嚢胞性病変の良悪性鑑別および膵・胆道癌のリンパ節転移診断が向上することを報告した。膵管内乳頭粘性腫瘍例を超音波内視鏡を用いて経過観察を行うことにより併存小膵癌が7%に認められ、膵癌早期診断に繋がることを提唱した。超音波内視鏡下胆管・胆嚢ドレナージ術が、難治性の閉塞黄疸に有用であることを報告した。胆道金属ステントは、ラジアルフォース、フレアの立ち上がり角度、ステント材質がステント安定性に影響していることが判明した。癌性疼痛に対する超音波内視鏡下神経ブロック術において、広範囲、神経叢と神経節の両方へのエタノール注入が有効な治療となることを提唱した。本研究では、膵疾患に対して、超音波内視鏡を用いた診断・治療法を開発し、その有用性を検討することを目的としている。平成25年度は、ファントムモデルおよび犬を用いた前臨床研究と膵疾患症例における臨床研究を並行して行った。前臨床研究では、超音波内視鏡下胆道ドレナージに使用されるステントの安定性とステント材質・形状の関連性を検討したところ、ラジアルフォースとフレアの形状がステント移動を防ぐために重要は因子であることが証明された。臨床研究では、膵管内乳頭粘液性腫瘍(IPMN)に対して、6ヶ月間隔で超音波内視鏡による経過観察を行ったところ、経過観察中に102例中7例(7%)の膵癌が発見された。また、発見時に他の画像診断と比較すると超音波内視鏡が最も高感度に膵癌を検出していることが分かった(Endoscopy 2014;46:22-29)。胆膵領域の癌およびリンパ節転移が疑われた55例に対して、造影超音波内視鏡検査を施行したところ、不均一な染影がリンパ節転移を示唆する所見であることが判明し、その感度および特異度はそれぞれ90%および95%であった。ERCPによる治療が不能であった118例の閉塞性黄疸症例において超音波内視鏡ガイド下胆管ドレナージ術あるいは超音波内視鏡ガイド下胆嚢ドレナージ術を行ったところ、両治療による手技成功率、臨床的改善率、偶発症発生率には有意差がなく、同等であることが判明した。平成26年度は、前臨床研究として、超音波内視鏡下胆道ドレナージ術に適した金属ステントを決定するため、平成25年度に引き続きファントム実験を継続した。ファントムモデルとして、ステントの移動に対する抵抗力を測定するシステムを作成し、様々のステントの抵抗力を測定したところ、拡張していない状態ではラジアルフォース、拡張した状態ではフレア立ち上がり角度とステント材質が抵抗力に影響していることが判明した。臨床研究としては、造影ハーモニック超音波内視鏡が、膵管内乳頭粘液性腫瘍の診断、特に粘液塊と壁在結節の識別に有用であることを証明し、現在論文投稿中である。膵充実性腫瘤に対する造影ハーモニック超音波内視鏡による客観的評価法として、Time Intensity Curveを取り入れ、膵癌が特異的なパターンを呈することを証明した。超音波内視鏡下治療については、最適穿刺ルートを検討する研究、順行性ステンティングの成功率と有用性を検討する研究、ランデブー法の治療成功率を検討する研究を開始し、現在進行中である。本研究では、膵疾患に対して、超音波内視鏡を用いた診断・治療法を開発し、その有用性を検討することを目的とした。平成27年度は、造影ハーモニック超音波内視鏡が膵嚢胞性病変の良悪性鑑別診断に有用であることを報告した(Endoscopy 2015)。造影ハーモニック超音波内視鏡において壁在結節の存在が確認された場合、感度97%、特異度75%、正診率84%であり、通常の超音波内視鏡より優れていた。造影ハーモニック超音波内視鏡は、胆膵悪性腫瘍のリンパ節転移診断においても有用であり、通常の超音波内視鏡による診断よりも優れていた。(World J Gastroenterol 2016)。尚、臨床研究は、「ヘルシンキ宣言」、「人を対象とする医学系臨床研究に関する倫理指針」および「臨床研究に関する倫理指針」に従って、近畿大学医学部の倫理委員会承認後に実施した。本研究は、前臨床研究と臨床研究を並行して実施している。平成26年度は、両研究ともに成果が得られ、逐次、学会および論文にて発表を行っている。医葉薬学平成27年度も前年度と同様、前臨床研究と臨床研究を並行して行っていく。

前臨床研究では、ファントム実験で得られた結果を基にして動物実験を行っていく予定である。また、すでに開始している臨床研究を継続し、研究成果を発表していく予定である。本研究は、前臨床研究と臨床研究を並行して実施している。平成25年度は、両研究ともに成果が得られ、逐次、学会および論文にて発表を行っている。3月下旬に英文校正を依頼したが、残額が不足していたため、次年度分と合わせて、支払うこととなった。平成26年度も前年度と同様、前臨床研究と臨床研究を並行して行っていく。前臨床研究では新規治療法をさらに開発することを目的とする。また、前臨床研究で確立された検査および治療法を臨床応用し、その成績を評価していく。英文校正費を次年度予算と合わせて支払う予定3月下旬に論文別刷費の請求があったが、不足していたため、次年度分と合わせて、支払うこととなった。論文別刷り代を次年度予算と合わせて支払う予定
MHCクラスII分子変異細胞株を用いた自己抗原処理・提供機構の解析

抗原提供細胞(APC)変異株の機能的スクリーニング法を確立し,種々の変異株の機能的・構造的解析を行なった.APC株は我々が以前作成したB/WF1マウス自己免疫疾患発症に関与すると推定されているAbetaz/Aalphadハプロタイプ混合クラスII分子のみを発現するトランスフェクタント細胞を用い,それに拘束されるB/WF1マウス由来の自己反応性および外来抗原反応性T細胞クローンにより解析を行なった.(1)クローン化T細胞との反応性の消失を指標としてAPC変異株作成の条件を検討した.当初,T細胞クローンと野生型APC凝集塊を磁気ビーズを用いて分離する方法を検討したが,その後の研究で,凝集塊を作成した野生型APCは増殖が抑制され死滅することがわかった.従って,自己反応性T細胞クローンと変異誘導剤(EMS)で処理されたAPC株を混合培養し,生き残った変異APC株をクローニングすることにより,効率良く変異株を作成できることがわかった.(2)クラスI分子発現欠損株や接着分子発現欠損株以外に,以下のような特性を有する変異株が得られた.(2a)外来抗原(KLH)の処理提示機構に異常を伴わないが,自己抗原反応性T細胞クローンに対する刺激能力を消失した変異株.この変異株のクラスII分子のペプチド結合部位に1-2箇所のアミノ酸変異があることがDNAシークエンスにより推定された.(2b)ある特定の自己反応性T細胞クローンに対して反応性が低下しているが,他の自己抗原反応性T細胞クローンには正常に反応する変異株.これらの変異株にはそのT細胞クローンが認識する自己抗原ペプチドが発現していないと考えられるので,野生APC株の自己抗原ペプチドと比較し,自己反応性T細胞クローン(特に,疾患発症に関与するクローン)が認識する自己抗原ペプチドの解析を行なっている.(3)自己反応性T細胞クローンに対する刺激能力は保持されているが,クラスII分子の発現が消失し,同時に外来抗原処理提示機構に欠陥を伴った変異株.外来抗原と自己抗原の処理提示機構が異なった経路により行われている可能性を示す変異株である.クラスII分子のシークエンスでは,ペプチド結合部以外の場所に変異が認められた.この部位の分子構造が外来抗原処理提示に関与している可能性を示唆している.抗原提供細胞(APC)変異株の機能的スクリーニング法を確立し,種々の変異株の機能的・構造的解析を行なった.APC株は我々が以前作成したB/WF1マウス自己免疫疾患発症に関与すると推定されているAbetaz/Aalphadハプロタイプ混合クラスII分子のみを発現するトランスフェクタント細胞を用い,それに拘束されるB/WF1マウス由来の自己反応性および外来抗原反応性T細胞クローンにより解析を行なった.(1)クローン化T細胞との反応性の消失を指標としてAPC変異株作成の条件を検討した.当初,T細胞クローンと野生型APC凝集塊を磁気ビーズを用いて分離する方法を検討したが,その後の研究で,凝集塊を作成した野生型APCは増殖が抑制され死滅することがわかった.従って,自己反応性T細胞クローンと変異誘導剤(EMS)で処理されたAPC株を混合培養し,生き残った変異APC株をクローニングすることにより,効率良く変異株を作成できることがわかった.(2)クラスI分子発現欠損株や接着分子発現欠損株以外に,以下のような特性を有する変異株が得られた.(2a)外来抗原(KLH)の処理提示機構に異常を伴わないが,自己抗原反応性T細胞クローンに対する刺激能力を消失した変異株.この変異株のクラスII分子のペプチド結合部位に1-2箇所のアミノ酸変異があることがDNAシークエンスにより推定された.(2b)ある特定の自己反応性T細胞クローンに対して反応性が低下しているが,他の自己抗原反応性T細胞クローンには正常に反応する変異株.これらの変異株にはそのT細胞クローンが認識する自己抗原ペプチドが発現していないと考えられるので,野生APC株の自己抗原ペプチドと比較し,自己反応性T細胞クローン(特に,疾患発症に関与するクローン)が認識する自己抗原ペプチドの解析を行なっている.(3)自己反応性T細胞クローンに対する刺激能力は保持されているが,クラスII分子の発現が消失し,同時に外来抗原処理提示機構に欠陥を伴った変異株.外来抗原と自己抗原の処理提示機構が異なった経路により行われている可能性を示す変異株である.クラスII分子のシークエンスでは,ペプチド結合部以外の場所に変異が認められた.この部位の分子構造が外来抗原処理提示に関与している可能性を示唆している.