hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
人生後期における自伝的記憶の機能－他者に語る記憶と自己を振り返る記憶－

多くのエンディングノートには自分の過去の思い出(自伝的記憶)の記入欄がある。しかし,申請者が50,60,70代男女450名に実施した調査では,エンディングノートに思い出が必要だと答えたのは約1/3のみであった。そこで平成30年度はインターネット調査会社に登録したモニター600名(50,60,70代男女各100名)を対象に,(1)エンディングノートに必要な項目,(2)自伝的記憶の想起とその記憶特性,(3)ジンバルドー時間的展望尺度に関する調査を実施し,時間的展望の個人差と自伝的記憶の機能の関係について検討した。調査項目TALE尺度(落合・小口, 2013),ジンバルドー時間的展望尺度(下島・佐藤・越智,2012),自分がエンディングノートを書く時に必要だと思う項目(健康情報,介護・看護の希望・終末期治療の希望,臓器提供の意思表示,財産一覧,遺言・相続,葬儀の希望,遺影の写真,墓・供養の希望,自分の好きなこと・やってほしいこと,家系図,連絡先,ペットの管理,携帯電話やインターネット情報の管理,その他),家族や知人がエンディングノートを書くときに必要だと思う項目(同上),自伝的記憶の想起とその記憶特性,自分の思い出を他者と共有したいかどうか,他者の思い出を共有したいかどうか,死後に他者に自分を思い出してほしいかどうか,思い出が持つ意味(自由記述),人生満足度尺度(角野, 1994),現在楽しんでいることと将来楽しみにしていること,ホーディング尺度(池内, 2014)。調査結果は分析中である。調査の実施が遅れている。H30年度に実施予定だった調査はH31年度に実施する。H30年度実施済の調査の分析を進めて新たな質問項目を検討し,調査を実施する。自分に関する過去の記憶を自伝的記憶という。自伝的記憶には自己・方向づけ・社会という3つの機能がある。また,自分にもしものことがあった場合に備えて自分に関する情報を記しておく冊子は「エンディングノート」として知られている。多くのエンディングノートには「自分史」あるいは「過去の思い出」,つまり自伝的記憶を書く欄が設けられている。エンディングノートは死後に家族が読むことを前提としているため,エンディングノートに記入される自伝的記憶は「死後に家族に思い出してもらいたい自分」を象徴したものだと思われる。一方で,自分自身が最も印象に残っている自伝的記憶は他者に思い出してもらいたい記憶とは異なる可能性がある。本研究では申請者の専門分野である自伝的記憶という視点からエンディングノートの自分史について分析する。インターネット調査と面接調査により,人生後半の自伝的記憶の機能について,他者に語る記憶と自分で想起する記憶という側面から検討する。近年,エンディングノートを作成,配布する葬儀会社が多数みられる。そこでH28年度は,エンディングノートを希望する人はどのような目的でエンディングノートを必要としているのか,その理由と使用方法について葬儀会社職員を対象に面接調査を行った。また,上記の面接調査および地域住民対象のセミナー参加者の意見に基づき,エンディングノートと自伝的記憶の機能に関するインターネット調査の質問項目を作成した。H29年度にインターネット調査を実施予定である。ほぼ予定通りに進んでいるが,H28年度に実施予定であったインターネット調査をH29年度に実施することになったため。多くのエンディングノートには自分の過去の思い出(自伝的記憶)の記入欄があるが,実際に中高年の人々に話を聞いてみると思い出の記入欄は必要ないと答える人が多い。そこで本研究では,インターネット調査会社に登録したモニター450名(50代・60代・70代男女各75名)を対象に,(1)エンディングノートに自伝的記憶の記入欄は必要か,(2)自伝的記憶の必要性と自伝的記憶の機能(TALE尺度)との関係,について検討した。調査項目自分がエンディングノートを書く時に必要だと思う項目(健康情報,介護・看護の希望・終末期治療の希望,臓器提供の意思表示,財産一覧,遺言・相続,葬儀の希望,遺影の写真,墓・供養の希望,自分の好きなこと,特技等,これからの夢や目標,生まれかわったらどうしたいか,自分の経歴,残された人へのメッセージ・感謝,自分の過去の思い出,死後気がかりなこと・やってほしいこと,家系図,連絡先,ペットの管理,携帯電話やインターネット情報の管理,その他),家族や知人がエンディングノートを書く時に必要だと思う項目,家族や知人に読んでもらうためのエンディングノートに書くあなたの過去の思い出と記憶特性,思い出を書きたくない場合はその理由,誰にも見せない自分だけのエンディングノートに書くあなたの過去の思い出と記憶特性あるいは書きたくない理由,日本版TALE尺度(落合・小口, 2013)。結果と考察エンディングノートに思い出が必要だと回答したのは20%40%であり,70代で多かった。思い出が必要だと答えた群は必要ない群よりもTALE尺度の得点が有意に高かった。思い出が必要ない理由として「過去は人それぞれの心にとどめておけばよいと思うから」「過去は過去で残しておく必要はない」「たいした思い出がない」などであり,不必要群は自伝的記憶の機能を必要とせず過去肯定が低い傾向が示唆された。調査の実施が1年遅れている。H29年度に実施予定だった調査はH30年度に実施するが,研究計画の変更は必要ない。

しかし,申請者が50,60,70代男女450名に実施した調査では,エンディングノートに思い出が必要だと答えたのは約1/3のみであった。そこで平成30年度はインターネット調査会社に登録したモニター600名(50,60,70代男女各100名)を対象に,(1)エンディングノートに必要な項目,(2)自伝的記憶の想起とその記憶特性,(3)ジンバルドー時間的展望尺度に関する調査を実施し,時間的展望の個人差と自伝的記憶の機能の関係について検討した。調査項目TALE尺度(落合・小口, 2013),ジンバルドー時間的展望尺度(下島・佐藤・越智,2012),自分がエンディングノートを書く時に必要だと思う項目(健康情報,介護・看護の希望・終末期治療の希望,臓器提供の意思表示,財産一覧,遺言・相続,葬儀の希望,遺影の写真,墓・供養の希望,自分の好きなこと・やってほしいこと,家系図,連絡先,ペットの管理,携帯電話やインターネット情報の管理,その他),家族や知人がエンディングノートを書くときに必要だと思う項目(同上),自伝的記憶の想起とその記憶特性,自分の思い出を他者と共有したいかどうか,他者の思い出を共有したいかどうか,死後に他者に自分を思い出してほしいかどうか,思い出が持つ意味(自由記述),人生満足度尺度(角野, 1994),現在楽しんでいることと将来楽しみにしていること,ホーディング尺度(池内, 2014)。調査結果は分析中である。調査の実施が遅れている。H30年度に実施予定だった調査はH31年度に実施する。平成29年度以降は,当初の予定通り,下記の研究を実施する予定である。(1)中高年を対象としたインターネット調査を実施する。(2)高齢者施設職員を対象に半構造化面接を実施する。(3)公開セミナーの開催と面接調査を実施する。H29年度の研究結果より,エンディングノートにおける自伝的記憶の必要性の有無が時間的展望と関連する可能性が示唆された。そこでH30年度はインターネット調査により,ジンバルドー時間的展望質問紙(下島・越智・佐藤, 2012)と,エンディングノートに必要な項目,エンディングノートに記入する思い出との関係を検討する。また,H29年度実施調査における,他者に残すエンディングノートに書く思い出と他者には見せない自分だけのエンディングノートに書く思い出の内容分析を行い,他者に語る記憶と自己を振り返る記憶の違いを検討する。H30年度実施済の調査の分析を進めて新たな質問項目を検討し,調査を実施する。インターネット調査費用を計上していたが,調査実施がH29年度になったため。インターネット調査の実施が1年遅れているため,調査実施費用と学会発表旅費が次年度に繰り越しとなっている。繰越金はH30年度に実施するインターネット調査と学会発表,論文発表費用に使用する。調査実施が1年遅れているため,調査実施費用と学会発表費が次年度に繰り越しになっている。繰越金はH31年度に実施する調査と学会発表に使用する。H29年度にインターネット調査を実施する。
多元合金の多相凝固の成長調節機構とミクロ偏析

T.Himemiyaによって提唱されていた、鉄-炭素-金属元素の3元系合金で共晶反応線に沿ったミクロ偏析のモデルの妥当性をFe-C-Cr3元系合金という実在の合金系で検証することができた。実験結果はモデルによる予測とよい一致を示し、このミクロ偏析モデルが炭素を格子間原子として溶質に含む固溶体と金属間化合物のセル/デンドライト状共晶凝固に伴うミクロ偏析の予測に使うことができることを示唆した。この成果は、裏面に掲げたレフリー・ペーパーとして発表した。液相内の拡散と界面の曲がりによるGibbs-Thomson効果を考慮した、共晶凝固(現在のところは液相全体の過冷を与え、理想化された2元状態図を前提とする)のセル・オートマトンモデルの開発を手がけ端緒的ながら今後の拡張にむけた手がかりを得た。界面の曲がりの見積もりはフロント・トラッキング法によった。Al-Cu-Ag3元合金について、一方向凝固実験を行い、今後精密に3相共晶の組織の特性寸法と凝固条件(特に、凝固速度)を検討するノウハウを得た。特に、成分の正しい3相凝固組織の実験では、水冷チルー加熱鋳型によるマクロ鋳塊で実験が可能であることが予想できたことは、今後の実験にとって有用である。線形的でない状態図を線分の長さをパラメータとして表示するプログラムを開発し、ミクロ偏析モデル等を複雑な状態図に拡張する足がかりを得た。付随的な事項になるが、この間、ヨーロッパで、ESAをスポンサーとしてAl-Cu-Ag合金の状態図と熱物性値の行う研究が進んでいることはモデルと実験の比較を進める上で、大きな助けとなるだろう。平成16年6月11日と12月2日に研究会をもち、研究実施計画の分担を具体化し、進捗状況を確認しあった。本年度の進行状況は以下の通り。1)姫宮は鉄-炭素-クロム合金の共晶反応線に沿った一方向凝固の実験を松浦の協力を得て行っており、高クロム成分の凝固でのミクロ偏析を測定している。2)3相共晶や2相デンドライト状共晶の凝固条件による成長温度と組織の特性寸法の測定の実験では、人体に対する安全性と環境に対する配慮から、アルミニウム-銅-銀系で実験することにし、地金を手配した。松浦は3相共晶の凝固実験の予備実験としてマクロ鋳塊を鋳込み一方向凝固炉での実験の準備をした。3)大笹は共晶凝固の数値シミュレーションを分担することになり、準備を始めた。4)佐賀はミクロ偏析モデルを拡張してプログラム化することに取り組んだ。鉄-炭素-クロム合金について共晶反応線に沿った成分での実験を進め、低クロム成分の合金での凝固実験も行った。その結果、モデルによる予測は、(1)エッチングによる金属組織学的な炭化物の同定、(2)2相共晶領域での最低のクロム濃度の計算による予測とEPMAによる測定の比較、(3)XRDによる直接的な炭化物の同定、の3つにおいて実験結果とよく一致した。低クロム成分の合金で(1)のエッチングによる同定で微細な(Fe, Cr)3C炭化物を見逃したのではないかという疑惑を否定したこととあわせ、これらの結果は提唱されたミクロ偏析モデルの妥当性を指し示すものになった。この成果は、日本鉄鋼協会第150回秋季講演大会・第9回アジア鋳物会議で発表した。現在、論文をISIJ Inter.(日本鉄鋼協会)に投稿中である。鉄-炭素-クロム合金におけるオーステナイト・デンドライトと2相共晶の成長温度を見積もり、実験結果の相選択が成長モデルで説明できるかということについて検討を進めた。種々の「平衡」温度を測定する実験を行った。この問題は平成18年度に引き続き検討する。

以上2つの問題において、いずれも計算による予測の際に3次元の平衡状態図で本来曲面や曲線で表されるものを平面や直線で近似する問題の限界が明らかになった。3次元の幾何学の処理は引き続き課題である。平成17年度に包晶凝固のセルラー・オートマトン・モデルが開発され、Fe-C系の凝固の特徴を再現することができた。共晶凝固へのセルラー・オートマトン・モデルの拡張は平成18年度の課題となる。アルミ-銅-銀合金については、実験は前進しなかったが、鉄-炭素-クロム合金については実験はほぼ終了したので、平成18年度は集中してとりくむことができよう。過年度に、鉄-炭素-クロム合金で、デンドライト状共晶で共晶反応線に沿った凝固で第1固相が固相内での炭素の拡散を考慮したミクロ偏析モデルの妥当性を実験的に検証したので、ISIJ Inter.に論文を投稿し、掲載された。アルミニウム-銅-銀合金で3相共晶の凝固組織の特性寸法と凝固条件の関係を調べることを目的とした実験を一方向凝固炉を使って行った。しかしながら、十分に定量的名測定の対象となるきれいな3相凝固組織は観察されなかった。この原因は、のちに、目標とするアルミニウム-銅-銀合金の成分を間違って秤量していたことが原因であることが分かった。しかしながら、正しい3相共晶の成分で定量的な測定を行うためのノウハウは得られた。共晶凝固のセル・オートマトンモデルが開発された。このモデルは液相内の拡散と凝固界面での溶質と溶媒の排出を考慮し、さらに界面の曲がりによるGibbs-Thomson効果を取り入れたものである。現在のところ、理想化された2元状態図を持つ合金で、液相全体が過冷状態におかれた場合に限られているが、液相内でマクロな温度勾配を有する場合、また、3元合金で共晶凝固がある温度範囲を持つ場合への拡張も容易であると考えられる。線形的でない3元状態図を線分・曲線の長さをパラメータとして表すプログラムを開発した。この段階では既存の技術の応用に過ぎないが、ミクロ偏析の計算で共晶反応線が明らかな曲線である場合への適用を進めている。European Space Agencyを後援者とするAl-Cu-Ag3元系状態図の研究(V.T.Witusiewiczら)、Al-Cu-Ag3元ごウ金における2相平滑共晶凝固の研究(J.De Wildeら)が発表されているので、文献調査をおこなった。その結果、従来研究代表者がモデルでの計算に使っていた状態図データの一部と熱物性値データの一部は修正した方がよいことが分かった。これは、今後、アルミニウム-銅-銀合金で3相共晶凝固の実験結果や2相デンドライト状凝固の実験結果をモデルでの計算結果と比較する際に、有益な知見となるだろう。
渦鞭毛藻の眼点の研究〜構造・分裂機構・起源の解析〜

本研究は渦鞭毛藻類における眼点の多様性の実体を把握しようとするものである。また,分子系統学的な解析により,渦鞭毛藻類において眼点がどの系統で獲得され,あるいは二次的に消失したのかといった問に対する答えを見いだすことも目標とした。さらに特殊な眼点をもつDinothrix paradoxaについては,その眼点の分裂機構を明らかにつることに努めた。各地から採集した渦鞭毛藻類の眼点の有無を調査した結果,タイドプールに生育するGymnodinium pyrenoidosum,Scrippsiella hexapraecingula,Scrippsiella sp.の3種で眼点の存在が確認された。これらの眼点の微細構造を調べたところ,3種とも葉緑体中に脂質顆粒が並ぶタイプの眼点で,しかも脂質顆粒が2列に並ぶ構造をもっていた。このように脂質顆粒が2列に並ぶタイプの眼点は今まで知られていない。18SrRNA遺伝子の塩基配列を9種類の渦鞭毛藻類について決定し,DDBJのデータベースから取得した25種のデータを加えて分子系統解析をおこなった。その結果,同じタイプの眼点をもつG.pyrenoidosumとS.hexapraecingulaが単系統となり,D.paradoxaも上記2種と同じクレードに含まれることが明らかとなった。このことは特殊であるとされるD.paradoxaの眼点も通常の眼点の変形である可能性を示唆するものである。D.paradoxaの眼点の分裂については光学顕微鏡レベルで連続観察をおこなった。その結果,元の眼点は分裂することなく,細胞質内でde novoに眼点が形成されるらしいことが明らかになった。この点については,眼点を包む膜の由来などの問題もありさらなる検討が必要である。渦鞭毛藻類に見られる眼点の多様性が,申請者が仮定するように本当に細胞内共生の多様性と関係があるのか否か,また,いろいろなタイプの眼点どのはそれぞれ微細構造的にはどのような特徴をもつのか,異なったタイプの眼点の分裂の機構はどのようになっているのか,などを明らかにするために本研究を進めている。本年は最初の年度であるが,珪藻類を共生体として細胞内に取り込んでいるDinothrix paradoxaについて眼点の微細構造ならびに分裂の様式を調べた。眼点はいわゆるBタイプの眼点であり,3重の包膜に囲まれ共生藻に由来する葉緑体とは独立に渦鞭毛藻の細胞質に存在する。眼点は多層(3-4重)になった脂質顆粒によって構成される。眼点の分裂の様式は光学顕微鏡の下で連続観察によりおこなった。それによると,もとの眼点は分裂はおこなわず,新しい眼点はde novoに脂質顆粒が集合することによって形成されることが明らかとなった。この結果,新たに3重膜の起源は何か?脂質顆粒の起源は?といった疑問が湧いてくることになった。これらの点については電子顕微鏡を用いた解析により明らかにしていく予定である。また,3重膜に囲まれる眼点が葉緑体の退化したものだという仮説を確かめるために葉緑体DNAの痕跡が眼点細胞中にあるか否かをDAPI染色によって確かめた。しかしながら,この方法で検出できるオルガネラDNAは眼点中には見い出せなかった。本年度は渦鞭毛藻類に見られる眼点の多様性の実体を把握し,あわせて分子系統学的研究を用いることによりその起源に迫ることを目的として研究をおこなった。微細構造学的な研究の結果,タイドプールに生育する渦鞭毛藻3種,Gymnodinium pyrenoidosum,Scrippsiella hexparaecingula,Scrippsiella sp.において眼点の構造が確認された。

これら3種の眼点は葉緑体の中に脂質顆粒が並ぶタイプであったが,脂質顆粒が1重ではなく,2重または3重に並ぶ点が既知のタイプとは異なっていた。前2者が2重のタイプ,後者が3重のタイプであった。脂質顆粒の配列状態からこの眼点は1/4波長干渉型アンテナとして,光を反射する役割をもつものであることが推測された。本研究により渦鞭毛藻の眼点の多様性の幅がさらに広がったことになる。また,18SrDNAを用いて渦鞭毛藻類の系統解析(36種を解析に用いた,そのうち9種がオリジナルデータ)をおこなった。得られた系統樹は,ヤコウチュウがもっとも根元に位置し,ゴニオラックス目クレードとペリディニウム目・プロロケントルム目・ギムノディニウム目クレード(PPGクレード)の大きく2つのクレードに分かれることが明らかとなった。この系統樹に眼点の分布を重ね合わせると,PPGクレードの方に含まれることが明らかとなった。現状では眼点保有種のデータが少なく,渦鞭毛藻における眼点の起源を特定するにいたっていない。今後,より多くの眼点保有種の解析が必要である。
カリキュラム評価に関する比較教育史的研究

今日の学校には、「評価」を導入することにより、カリキュラム改善を図っていくことが求められている。本研究では、こうした教育の現代的課題に歴史的示唆を提示するために、19世紀末から20世紀にかけて生起した国際的な教育運動である新教育運動に着目し、その中で取り組まれたカリキュラム評価の実態と特質を解明することを課題としている。本年度は、米国で展開された進歩主義教育とわが国で展開された大正新教育におけるカリキュラム評価について、以下の調査・分析を進めた。まず、カリキュラム評価の歴史に関する先行研究を収集し、その知見について整理した。先行研究では、わが国における「教育評価」の概念が、1930年代の生活綴方の中から生まれてきたと指摘されてきたが、本研究では大正新教育の事例に関する調査・分析を通して、この指摘の再検討が必要であることを提起した。また、進歩主義教育と大正新教育におけるカリキュラム開発事例について、国内に所蔵されている教育雑誌等を調査し、史料収集を行った。本研究では、それぞれの事例における1)研究態勢と教育測定研究の実態の解明、2)評価の枠組みの作成と教師による評価の実践の具体相の解明、3)評価の導入がもたらしたカリキュラム開発への影響を考察することを課題としており、収集した史料をもとに、これらの観点に基づく分析を進めた。なお、これらの作業を通じて、明らかになった知見については、国際学会で報告を行ったほか、国内の学会誌に投稿して、研究成果を公表した。本年度に予定していた調査を概ね遂行することができ、研究成果の一部についても学会誌に掲載される運びとなったため。来年度は未だ着手できていない調査を遂行するとともに、学会発表や論文の投稿を通じて研究成果の公表を進める。また、アルバイトを活用することにより、円滑な調査や史料収集が図れるようにしていきたい。
胚中心B細胞におけるA:T変異導入機構の解明

AID(activation-induced cytidine deaminase)はシトシン(C)をウラシル(U)に変換することにより、DNA上にU:G損傷を誘導する。通常なら、損傷を受けたC:G塩基対にのみ変異が誘発される。しかし、胚中心B細胞では、約半数の変異が損傷のないA:T塩基に生じる。本研究の結果、A:T変異の誘発は胚中心B細胞に特異的な現象で、ターゲット遺伝子の局在部位に依存せず、胚中心B細胞の環境及び急速な細胞分裂に依存することが明らかになった。胚中心B細胞における抗体遺伝子の体細胞変異(SHM)はAIDにより誘導され、高親和性抗体の産生に必須である。AIDはシトシン(C)をウラシル(U)に変換し、その結果誘導されるU:G損傷を修復する過程で、C:G塩基対に変異が導入されると考えられている。事実、AIDを強制発現したNIH3T3細胞では、AIDの酵素活性と一致して、ほぼ100%の変異がC:G塩基対に誘導される。しかし、胚中心B細胞の抗体遺伝子変異はC:G塩基対に加え、半数の変異が損傷を受けていないA:T塩基対に生じる。我々はLacZ-トランスジェニックマウスおよび胚中心B由来のRamos細胞を用いて解析した結果、胚中心B細胞にはA:T変異を誘発するための特異的な機構が存在することを示唆した。A:T変異誘発機構を解明するために、今年度は以下の実験を行った。1、胚中心B細胞に存在するPOLH結合因子を同定するために、FLAG-HA-POLHの発現ベクターをRamosに導入し、安定形質転換株を樹立した。2、胚中心B細胞および繊維芽細胞において、AIDによって誘発されるU:G損傷がどのように認識・修復されるのかを解析するために、RamosおよびNIH3T3にそれぞれTamoxifenにより活性化されるAIDERを導入した。Tamoxifen添加により、ターゲット遺伝子に高頻度の体細胞変異が誘導されることを確認した。3、Ramosの内在性POLHの発現をノックダウンするために、POLHのshRNA発現ベクターを導入した安定形質転換株を樹立した。本年度は以下の研究成果を挙げた。1、速い細胞増殖速度が胚中心B細胞における抗体遺伝子のA:T変異の誘発に重要であることを示した。抗体遺伝子の体細胞変異は、AIDによって誘発されることが知られている。AIDはシトシン(C)を脱アミノ化し、ウラシル(U)に変換し、その結果誘導されるU:Gミスマッチや脱塩基部位を複製する過程で、C:G塩基対に変異が導入されると考えられている。一方、C:G塩基対に加え、半数の変異がA:T塩基対に生じるが、C:G塩基対に誘導されたU:Gミスマッチが、どのようにA:T塩基対にまで変異を誘発するか不明である。我々の研究成果から、DNA複製は、単にC:G塩基対の変異を誘発するのみならず、A:T塩基対の変異誘発にも重要であることが示唆された。2、抗体遺伝子の体細胞変異の一端を担うPOLQの機能ドメインについて詳細な解析を行った。その結果、POLQのN末端のヘリカーゼドメインとC末端のポリメラーゼドメインが、放射線照射などにより誘導されるDNA二重鎖切断の修復にそれぞれ重要な働きをしていることが明らかになった。一方、POLQはDNA二重鎖切断の修復を伴う抗体遺伝子のクラス変換には必要ないことを示した。3、REV1の酵素活性を特異的に失活させたマウス(REV1AA)とPOLH欠損マウスの掛け合わせマウスにおける抗体遺伝子の体細胞変異について調べた。その結果、ダブルノックアウトマウスでは、それぞれの単独ノックアウトマウスに比べ、変異頻度がさらに低下し、しかもCからGおよびGからCの変異もほぼ消失した。この結果から、複数のポリメラーゼが相互作用しながら、さまざまな点変異を誘発することが示された。1、UNG (Uracil DNA glycosylase)とPOLH (DNA polymerase η)の二重欠損マウスにおける体細胞変異について解析した結果、UNGとPOLHが異なるU:G損傷をターゲットとすることを明らかにした。抗体遺伝子の体細胞変異は、AIDとよばれる酵素によって誘発される。AIDはシトシン(C)をウラシル(U)に変換し、ゲノム上にU:G損傷を誘導する。UNGはUを除去し、その結果生じる脱塩基部位が複製される過程で、C:G塩基対にtransversion変異が導入されると考えられている。一方、U:G損傷がミスマッチとしても認識され、その“修復"過程で、損傷のないA:T塩基対にも高頻度の変異が誘発される。これまでの解析から、A:T変異の誘発には、複製エラーを起こしやすいPOLHが必須であることが示された。

本研究により、UNGとPOLHはそれぞれ細胞周期のG1期とS期に誘発されるU:G損傷をターゲットとし、C:G transversionとA:T変異を誘発することが示唆された。2、A:T変異に見られるstrand-biasはAIDの発現量が高い時にのみ誘発されることを示した。A:T変異は、upper strandでは、Aにおける変異がTにおける変異の約2倍も多く、その原因は長年不明のままであった。本研究では、strand-biasのメカニズムを解明するためのin vitro実験系の樹立に成功した。初歩的な解析結果から、AIDの発現量が高く、upper strandとlower strandに多くのU:G損傷が誘発された場合、upper strandのUがより効率よくミスマッチ修復系に認識されることが示唆された。これらの研究成果は、C:GとA:T塩基対における変異誘発機構の更なる解明に重要な知見を提供した。POLHと相互作用する胚中心特異的因子をまだ同定できていないが、A:T変異の誘発には速い細胞増殖速度が重要であることを見出した。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は引き続きPOLHに結合する因子の同定およびRamsとHeLaにおけるPOLHのユビキチン化及びリン酸化状態の比較を行い、何故胚中心B細胞でのみA:T変異が誘発されるのかを解明する。
疾患特異的iPS細胞を用いた神経成熟異常における小胞体ストレスの寄与解析

細胞内小器官の一つである小胞体は細胞内膜系の大半を占め、膨大な量の分泌型/膜結合型タンパク質の合成や品質管理、さらには生体膜を含む種々の脂質合成を行っており、細胞機能を維持する上で極めて重要な役割を担っている。したがって、遺伝子変異に伴う異常タンパク質の産生/蓄積や脂質の輸送/代謝異常は、小胞体の機能に負荷をかけ、細胞内恒常性や生理機能を著しく障害することが推察される。事実、多くの神経変性疾患における脳内の神経細胞は小胞体ストレス状態にあることが報告されている。本研究では、疾患特異的iPS細胞を活用することで希少難治性疾患における病態形成と小胞体ストレス応答との関連を解明することを目的とする。
脂質蓄積調節酵素・レセプターの免疫化学的制御法の開発と低脂肪食肉生産への応用

家畜の肥満を抑制し、「低脂肪食肉」を安定的に生産するための実用的な免疫化学的方法を開発することを目的として、以下の試験を行なった。(1)脂肪組織リポプロテインリパービ(LPL)に着目した脂肪蓄積制御24種の鶏LPLモノクローナル抗体を作成し、そのうちCLP-16の実験的連続投与を行ったところ、抗体投与区の腹腔内脂肪重量が対照区の約半分に減少した。また、飼料摂取量が対照区に比べ有意に低下したのに対し、体重の減少はわずかであった。すなわち、LPL抗体投与が鶏脂肪蓄積制御技術として有効であると判断された。(2)脂肪組織リポプロテインレセプター(LR)に着目した脂肪蓄積制御各種LR(LRP,LRP380,LR8)の抗血清を用いて鶏脂肪組織に発現するLRを検索したところ、LR8が脂肪蓄積に関与する可能性が見出された。そこで、LR8抗体を作成し、鶏脂肪細胞における脂質取り込み阻害試験を行なったが、脂質取り込み阻害活性は認められなかった。(3)肝臓リポプロテインレセプタ-(LR)に着目した脂肪蓄積コレステロール蓄積制御鶏肝臓cDNAより、新規LRのクローニングを試みたが有効な配列を得ることはできなかった。そこで、コレステロール負荷した鶏のLDL、CaおよびRAP結合タンパク質の変動を検討したところ、100および130kDaにLDLとは結合するもののCaやRAPとは結合しない、これまでのLDL receptor familyとは異なる特異的なタンパク質を検出した。(4)血中コレステロールエステル転送蛋白質(CEIP)によるコレステロール蓄積制御法成長期の鶏では血中CEIP活性が高い値を示したものの、産卵開始直前にその活性が急激に低下し、産卵開始後活性が検出限界以下となった。すなわち、鶏にはCEIPが存在し、コレステロール代謝に重要な働きをしている可能性が示唆された。そこで、鶏CETPをクローニングするために哺乳動物のCETP cDNAをprobeとして、鶏cDNA libraryをスクリーニングしたが、ホモログを得ることはできなかった。家畜の肥満を抑制し、「低脂肪食肉」を安定的に生産するための実用的な免疫化学的方法を開発することを目的として、本年度は脂肪組織での主要な脂肪蓄積調節酵素であるリポプロテインリパーゼ(LPLasc)モノクローナル抗体を用いた免疫学的制御作用を観察した。(1)抗LPLasc抗体連続投与による脂肪蓄積の抑制作用研究代表者らが作成した抗LPLaseモノクローナル抗体(CLP-16)の具験的連続投与を行なった。4週齢の雄ブロイラーにCLP-16を一日一回静脈投与もしくは浸透圧ポンプによる連続投与により7日間投与したところ、腹腔内脂肪重量が対照区の約半分に減少した。また、飼料摂取量がコントロール区に比べ有意に低一下したのに対し、体重の減少はわずかであった。以上の結果より、LPLaseは鶏脂肪蓄積を制御する主要因である可能性が示された。(2)鶏脂肪蓄積制御要因のリポプロテインレセプター(LPR)の同定脂肪組織のmRNAを調製し、これまで報告されている鶏リポプロテインレセプターの発現をRT-PCRで同定したところ、VLDLレセプターのみが発現していることが明らかとなった。さらに脂肪細胞細胞膜を用いてLigand blotを行なったところ、VLDLレセプター(95kDa)タンパク質が最も強く検出された。そこで、VLDLレセプターのモノクローナル抗体を作成するために、現在その精製を進めている。

本研究は、「低脂肪食肉」を安定に生産するための免疫化学的制御法を開発することを目的として、VLDLレセプター(VLDLR)およびリポプロテインレセプター(LPR)の抗体を作成するために以下の試験を行った。(1)抗鶏VLDLR血清は鶏脂肪組織におけるVLDLRを特異的に認識することをWestern blot法で確認した。さらに脂肪細胞の細胞膜に本レセプターが存在することを免疫染色法で確認した。(2)抗鶏VLDLR抗体を200μg/mlの濃度で脂肪細胞の培養を培地に添加しても、^<125>I-VLDLの細胞への取り込みはほとんど変化しなかった。しかし全てのリポプロテインレセプターのリガンドであるRecepterassociate protein(RAP)を200μg/mlの濃度で添加したところ、^<125>IVLDLの取り込みが著しく減少した。(3)各種リポプロテインレセプターの抗血清(VLDLR,LRP,LR11,LRP380)を用いて、脂肪組織におけるリポプロテインレセプター発現を検索したところ、VLDLRの他にLRPおよびLRP380が成長中の鶏脂肪組織に発現していることが確認された。しかし、その発現量はVLDLRに比べて小さいと推定された。以上の結果から、脂肪細胞VLDLR抗体の作成には、VLDLRタンパク質の全長を用いるより、RAP認識部位およびその周辺配列を抗原とし用いることが適切であると推測された。(4)肝臓に発現するLRPは未だその全貌が明らかではない。そこでこれまでの研究で申請者らがすでに明らかにしたLPRのアミノ酸配列より、RT-PCR法、3'-RACE法、コロニーハイブリダイゼーション法、リガンドスクリーニング法で本レセプターのクローニングを試みたが、現在のところ有効な配列は得られておらず、引き続きスクリーニングを進行中である。家畜の肥満を抑制し、「低脂肪食肉」を安定的に生産するための実用的な免疫化学的方法を開発することを目的として、本年度はVLDLレセプターの抗体作成と肝臓リポプロテインレセプターの検索、鶏血中における脂質転送蛋白質の同定を試みた。VLDLRのReceptor associated protein(RAP)結合部位付近の配列(N末端付近)を持つ、リコンビナントGST結合タンパク質を大腸菌で作成し、それを抗原として、抗血清を作成して、脂肪細胞を用いたリポプロテイン取り込み阻害試験を行なった。作成した抗体は、鶏VLDLRを特異的に認識するものの、^<125>I-VLDLの脂肪細胞への取り込み阻害はわずかであった。(2)肝臓リポプロテインレセプター(LRP)の検索鶏肝臓cDNAより、RT-PCRおよびハイブリダイゼーション法を用いて、LRPのクローニングを試みたが有効な配列を得ることはできなかった。そこで、コレステロール負荷した鶏のLDL、CaおよびRAP結合タンパク質の変動を検討したところ、100および130kDaにLDLとは結合するもののCaやRAPとは結合しない、これまでのLDL receptor familyとは異なる特異的なタンパク質を検出した。
計量社会学的手法による新しい若者研究の基盤形成のための調査研究

2010年代以降の十年あるいは二十年間で、日本の若者の社会意識がどのように変化するのかを、社会調査データを使用して解明するために、現時点で、どのような新しい意識項目を測定すべきかを検討した。その目的での予備調査としてのインターネット調査の有効性を、データ分析によって示し、若者の意識研究のプロセスを明確化した。自尊感情や友人関係の志向等が現代の若者の意識・行動に影響を与えていること等が明らかとなった。平成25年度の研究実績としては、第1に、若者の社会意識・社会行動の調査をインターネット調査法によって実施した。日本全国の、2012年12月31日時点で、満25歳以上34歳以下の男女個人3000名を対象とし、5歳刻みの当該年齢階級の都道府県(計94セル)の住民基本台帳人口に比例させてサンプルサイズを割付け、調査会社の公募登録モニターから、目標回答数充当法によって回答を得た。男女比は依頼配信の際に、なるべく等しくなるよう配慮した。調査期間は2013年12月13日19日であり、目標の3000人からの回答を得た。無効票判定を行い、一般的な学術的インターネット調査の質は確保できていると判断した。質問項目作成の際に、大学生とのコラボレーションを用いた。質問項目としては、社会的属性の他に、音楽聴取行動、「おたく」的趣味行動、自己啓発・成功体験談への志向、スピリチュアリティ志向、ファッションの選択、「ごほうび消費」行動、友人関係の志向と行動などを設定した。第2に、上記のようなインターネット調査のデータの質を判断する方法を検討し、方法論の論文を発表した。これによって、本研究で実施しているインターネット調査のデータの質についても、一定程度の保証を行うことが可能になった。第3に、特定層(社会学研究者)の世代的な意識変化の反映と考えられる事例として、学術論文における謝辞行動と論文投稿・査読のプロセスを取り上げ、隣接領域や海外の状況と比較することで、日本の若手社会学研究者の置かれている社会状況と、意識のありようについて考察し、学会報告を行った。この問題の背景には、専門研究者層の若者の社会環境と、それに適応的な意識変容があると考えられ、本研究の応用領域となった。平成26年度の研究業績としては、第1に、平成25年度に実施した、若者の社会意識・社会行動に関するインターネット調査(全国男女、25歳以上34歳以下、サンプルサイズ3000)データを分析し、基礎集計表および調査の基礎情報を含む報告書を刊行した。若者の現代的な行動・意識である、音楽聴取、自己啓発・成功体験談への志向、ファッション選択行動、「ごほうび」的な消費行動、友人関係志向、睡眠満足度等と、社会的属性(職業、教育、都市規模など)や基礎的社会意識変数(権威主義的態度等)との関連を分析し、報告書としてまとめた。第2に、2015年1月に、首都圏20地点の居住者(調査時点で2059歳の男女)を対象として、サンプルサイズ500のインターネット調査を実施した。無作為抽出によって選ばれた調査対象市区町村に在住する、調査会社の公募登録モニターから、1地点25ケースを割り当て、目標回答数充当法によって回収した。回収標本において20代が12%、30代が30%であり、それよりも高い年齢層と比較が可能な設計とした。質問項目は、基本的属性項目の他、メディアを利用した情報摂取行動、喫煙行動、職場に関する評価、政治意識・政治行動、階層帰属意識、生活満足度などである。本調査は、同地点(同自治体)で同時期に実施した、他の調査モードによる調査と同じ質問を多く含んでおり、モニター型インターネット調査の特性について分析することができる設計としている。以上の調査を実施し、調査データを収集した。第3に、現代の若者の生活満足(幸福感)に関する近年の議論について検討し、先行研究で用いている世論調査の質問文の変更について発見をし、その上で90年代の「若者の幸福化」命題の再検証を行って、分担著書の原稿を執筆した(平成27年度に刊行予定)。平成27年度の研究実績としては、第1に、若者の価値意識・生活行動に関するインターネット調査(全国男女2029歳、調査会社のアクセスパネルを使用、地域5区分×性別×年齢2階級で割付、1,052人が回答)を2015年12月に実施した。質問項目の設計においては、研究室の学生との緊密なコラボレーションを行い、また若者研究の専門家からのアドバイスを得た(シンポジウム「グローバル時代における若年世代の価値に関する人間科学」および調査票設計・分析研究会を開催した)。今回新しく開発した質問項目は、仕事へのコミットメント、マイノリティへの寛容性、嫌消費志向、専門家や科学技術への態度などである。属性等をコントロールした基本的な多変量解析によって、権威主義的態度とマイノリティへの寛容性に、従来、成人全体データにおいて見られたものとは逆の関係が確認される等の知見を得、これらを分析レポートとして執筆した。第2に、平成27年度に実施した調査データを含めて、調査モードによる回答時間の比較分析を行い、日本社会学会において学会報告を行った。そして、調査法研究に関する現代的な課題について、海外研究者からの聞き取り調査の知見を含め、学術論文を共著で執筆し、学会誌において発表した。これらは質の高い調査データ、特にCAIであるインターネット調査の方法を追求するための基礎研究として位置づけた。

第3に、若年層の幸福感(生活満足度)の推移に関する、重要とされている先行研究の主張を、調査データを用いて検証して、その問題点を明らかにし、関西社会学会において学会報告を行った。そこから展開し、日本の年長世代の幸福感の推移と、若年層のそれとを比較し、学校教育制度の意味を考察する原稿を執筆した(近刊予定)。2010年代以降の十年あるいは二十年間で、日本の若者の社会意識がどのように変化するのかを、社会調査データを使用して解明するために、現時点で、どのような新しい意識項目を測定すべきかを検討した。その目的での予備調査としてのインターネット調査の有効性を、データ分析によって示し、若者の意識研究のプロセスを明確化した。自尊感情や友人関係の志向等が現代の若者の意識・行動に影響を与えていること等が明らかとなった。計画通りに、第2回のインターネット調査を実施したため。他の調査モードのデータと比較することで、データの質を検証することが可能な調査設計を取ることもできた。また、第1回のインターネット調査のデータ分析による報告書を刊行することができたため。社会学第1に、大学生へのインタビューをさらに時間をかけて行い、把握すべき若者の社会意識・社会行動・社会的知識・価値観のポイントを抽出する。そのための、研究基盤は構築済みである。第2に、計画通りに新しい質問項目を設定したインターネット調査を、これまでの知見を活かして実施する。第3に、若者論、青年社会学・心理学を専門とする研究者から専門的な立場での研究交流を促進する。学会報告、研究会開催をベースとする。第4に、研究協力者を含む若手社会学者との共同を深め、専門職層の若者をターゲットとする行動分析を踏まえた論文の準備を進める。計画通りに1回目のインターネット調査を実施するに至ったため。新しい質問項目を、大学生とのコラボレーションによって試行することができ、良質なデータを収集することができた。また、データの質を判断する方法についての研究論文を発表することができた。高校生とのコラボレーションについては、高校教員とのコンタクトを行う段階に至っているが、詳細なインタビューを平成26年度に実施する必要がある。インターネット調査の調査委託費が想定よりも安価であったため、未使用額が生じた。第1に、大学生へのインテンシブなインタビューをさらに丁寧に実施し、把握すべき若者の社会意識・社会行動・社会的知識のポイントを抽出することが重要である。このための時間、機会を確保することが、研究の質を大きく高めると考えている。第2に、上記と同様に、高校教員と高校生に対するインタビューの実施は、本研究の射程を適切に広げ、より長いスパンでの若者の変化を捉えるデータを得るための、理論的な基礎を得るために重要であり、早期に実施計画を立てる。第3に、調査データ分析を進める。このために新規の分析機材を導入する。第4に、計画通りに別の質問項目を設定したインターネット調査を、上記の知見を活かして実施する。第5に、研究協力者を含む若手社会学者と共同で、専門職層の若者をターゲットにした、行動分析をさらに進める。翌年度分として請求した助成金と合わせ、次年度に実施する第3回インターネット調査の設計において、サンプルサイズや質問項目、調査設計、メタデータの取得に関する充実を図り、データの質の向上に用いる。
株式市場におけるアノマリーの時変構造と投機的バブルの関連性についての国際比較研究

本研究の目的は,一般化最小2乗法に基づいた時変多変量回帰モデルを構築し,Fama-French (1993, 2015)で提案された2つのマルチファクターモデルに適用することで,国際株式市場における様々なアノマリーの時変構造を解明することである.さらに,様々なアノマリーの時変構造が生じる原因を投機的バブルとの関連性から検証する.様々なアノマリーの存否に通時的な変動が生じる原因を投機的バブルとの関係から明らかにすることによって,より正確に株式の期待収益率(資本コスト)を計測するためのモデルを新たに構築するための素地となることが期待される.本研究の目的は,一般化最小2乗法に基づいた時変多変量回帰モデルを構築し,Fama-French (1993, 2015)で提案された2つのマルチファクターモデルに適用することで,国際株式市場における様々なアノマリーの時変構造を解明することである.さらに,様々なアノマリーの時変構造が生じる原因を投機的バブルとの関連性から検証する.様々なアノマリーの存否に通時的な変動が生じる原因を投機的バブルとの関係から明らかにすることによって,より正確に株式の期待収益率(資本コスト)を計測するためのモデルを新たに構築するための素地となることが期待される.
カルフォバインディンmRNAの血管内皮培養細胞および悪性腫瘍における発現について

当教室で発現したカルシウム・リン脂質結合蛋白(カルフォバインディン:CPBー1)の胎盤組織、各種培養細胞、および婦人科悪性腫瘍でのmRNA発現について、Northern blot法とin situ hybridization法(ISH)で検討した知見について報告する。Northern blot法では、組織あるいは細胞から抽出したmRNAを^<32>pをラベルしたCPBー1 cDNAをプロ-ブとしてhybridizationを行った。その結果、約1.6kbにCPBー1 mRNAの単一のバンドを認めた。また、I.S.H.法では、CPBー1 cDNAを鋳型としてビオチン結合dUTPを組み込んでPCR法を行い451bpのビオチン標識DNAプロ-ブを作製しシグナルの検出を行った。1)胎盤組織のCPBー1 mRNAの発現をNorthern blot法で検定したところ、妊娠週数別胎盤では、妊娠初期胎盤や中期胎盤では正常満期胎盤に比較してその発現は多い傾向にあった。また,胞状奇胎では非常に強いシグナルを認めた。妊娠中毒症胎盤では、正常胎盤より発現の強いものを多く認めたが,逆に少ないものもあり妊娠中毒症などの病的状態ではCPBー1の発現が一定しないという事実を知り得た。また、I.S.H.法により胎盤の脱落膜細胞、絨毛膜細胞にCPBー1mRNAをシグナルを認めたことから、胎盤の個々の細胞がCPBー1を発現していることが証明された。2)各種培養細胞を用いた検討では、臍帯血管内皮細胞、羊膜細胞、HLー60細胞についてmRNAを抽出してNorthern blot法をおこなった結果、全ての細胞で約1.6kbにCPBー1 mRNAの単一のバンドを認めた。3)婦人科悪性腫瘍に関して、子宮内膜癌組織でNorthern blot法を行ったところ、正常内膜組織に比較してCPBー1 mRNAの減少を認めた。I.S.H.法でも同様の所見を認めた。また、子宮頚部癌でI.S.H.法を行ったところ、扁平上皮の傍基底細胞ではCPBー1 mRNAの発現が認められたが、癌組織の細胞では発現の減少を認めた。以上の知見から、CPBー1が癌化のメカニズムに何らかの関係があるのではないかと推測された。
食道扁平上皮癌の発生・増殖・進展におけるＭ２マクロファージ／癌細胞相互作用の解析

ヒト食道癌組織には早期よりM2型マクロファージが浸潤し、癌の悪性度や不良な予後に関与することを明らかにした。食道扁平上皮癌培養上清によりM2様に分化させた単球性白血病細胞株や正常成人末梢血単球由来マクロファージで特異的に発現変化する遺伝子をマイクロアレイにより解析し、前者からCyr61を後者からGFD15を抽出した。Cyr61はMEK/Erk系を介してマクロファージの運動能とCD204発現を誘導し、GDF15はAktおよびErk系を介して食道癌細胞の増殖能を亢進した。活性化マクロファージは共培養により不死化正常ヒト食道扁平上皮細胞の増殖を促進した。本研究では食道扁平上皮癌の発生・増殖・進展におけるM2マクロファージ(MΦ)/癌細胞相互作用を臨床検体ならびに培養系を用いて解析し、分子病態における意義を明らかにするとともに、早期病変の正確な病理組織診断に応用することを目的とする。本研究計画では、浸潤性食道扁平上皮癌へのM2 MΦ浸潤と臨床病理学的要因の相関解析【研究1】、食道扁平上皮癌細胞とM2 MΦの細胞生物学的相互作用の解析【研究2】、食道上皮内腫瘍形成におけるM2 MΦの役割の解明と病理診断への応用【研究3】を平行して行う。平成24年度は研究1のまとめと前年度研究2マイクロアレイ解析で抽出された候補遺伝子の機能解析を行うとともに、【研究3】の一部に着手した。【研究1】前年度解析した食道癌78例から、長期予後情報が得られた70例を選別し、血管新生、予後を含めた臨床病理学的因子の相関を解析したところ、腫瘍関連MΦ密度と微小血管密度、CD204陽性M2 MΦ浸潤密度と壁深達度、脈管侵襲、リンパ節転移、臨床病期および再発予後が有意な相関を示すことを明らかにした。【研究2】TPA処理単球由来細胞THP-1に食道癌細胞培養上清を作用させるとCD204とVEGF-Aが特異的に誘導された。食道癌の微小環境内は浸潤MΦをCD204陽性M2分化させるとともにVEGF-A誘導による血管新生促進作用がある事が示唆された。マイクロアレイ解析によりM2MΦに分化したTHP-1で特異的に発現誘導される遺伝子の内IL-11, IL-24, flt-3, CYR61について細胞生物学的解析を実施中である。また、健常人末梢血単球由来MΦも食道癌細胞培養上清によりM2MΦに分化することを明らかにし、分化過程でのマイクロアレイ解析から特異的発現誘導遺伝子群を抽出した。【研究3】食道癌5例全割標本粘膜内M2MΦ分布ヒストグラムを作成した。平成25年度はマイクロアレイ解析で抽出された候補遺伝子の機能解析を行うとともに、それらの食道癌における臨床病理学的意義について検討した。得られた結果は以下のごとくである。1マイクロアレイ解析によりM2MΦに分化したTPA処理単球由来細胞THP-1で特異的に発現誘導される遺伝子の内Cyr61は食道癌細胞からも分泌され、MEK/Erkシグナル系の活性化を介してTHP-1の運動能を亢進するとともに、CD204の発現を誘導した。Cyr61の食道癌組織における免疫組織化学的発現レベルはリンパ節転移および癌組織内CD204陽性MΦ数と相関し、Cyr61が食道癌微小環境においてMΦのリクルートとM2分化に関与している可能性が示唆された。2前年度確立した健常人末梢血単球由来MΦの食道癌細胞培養上清によるM2MΦ分化系のマイクロアレイ解析を実施し、M2分化で特異的に発現変化する遺伝子を抽出した。その内GDF15が、MEK/ErkおよびAktシグナル系の活性化を介して食道癌細胞の生存・増殖を亢進させる事を明らかにした。

マクロファージは免疫を活性化するM1型と抑制するM2型の二極に分化し、M2型は様々なヒト悪性腫瘍の進展に関与する事が報告されつつあるが、食道癌における詳細な解析は見られない。予備的に食道癌組織におけるマクロファージの分布を検討したところ、上皮内腫瘍の時点からM2マクロファージが腫瘍内に存在する事を発見し、早期からの癌-間質相互作用への関与が示唆された。本研究では食道扁平上皮癌の発生・増殖・進展におけるM2マクロファージ/癌細胞相互作用を臨床検体ならびに培養系を用いて解析し、分子病態における意義を明らかにするとともに、早期病変の正確な病理組織診断に応用することを目的とする。本研究計画では、浸潤性食道扁平上皮癌へのM2マクロファージ浸潤と臨床病理学的要因の相関解析【研究1】、食道扁平上皮癌細胞とM2マクロファージの細胞生物学的相互作用の解析【研究2】、食道上皮内腫瘍形成におけるM2マクロファージの役割の解明と病理診断への応用【研究3】を平行して行う。平成23年度は研究1および2を中心に実施した。【研究1】浸潤性食道扁平上皮癌へのM2マクロファージ浸潤と臨床病理学的要因の相関解析:外科的に切除された食道癌78例について、免疫組織化学的にCD68、CD163およびCD204にて汎マクロファージおよびM2マクロファージを可視化したところ、腫瘍組織内M2マクロファージ平均密度は壁深達度の進行とともに有意に増加し、腫瘍内微小血管密度と正の相関を示した。【研究2】食道扁平上皮癌細胞とM2マクロファージの細胞生物学的相互作用の解析:TPA処理単球由来細胞THP-1に食道癌細胞培養上清を作用させるとCD163およびCD204発現が誘導された。cDNAマイクロアレイ解析によりM2マクロファージに分化したTHP-1で特異的に発現誘導される遺伝子群を抽出し、その役割を解析中である。研究1に関しては十分量の症例数を収集が完了し、M2MΦの浸潤と食道扁平上皮癌の増殖、進展に一定の相関関係を得た。研究2に関しては食道癌細胞培養上清によりTPA処理単球性白血病由来細胞THP-1にM2形質および血管新生因子発現亢進が誘導されることが見いだされ、研究1の成果とともに論文を1報まとめ、現在投稿中である。また、食道癌細胞培養上清で特異的に発現亢進する遺伝子からIL-11, IL-24, flt-3, CYR61の機能解析が進行中である。さらに、健常人末梢血単球由来MΦも食道癌細胞培養上清によりM2分化することを明らかにし、分化過程でのマイクロアレイ解析から特異的発現誘導遺伝子群を抽出し、現在解析中である。研究3に関しては研究1,2出得られた成果を元に研究の基盤となる食道粘膜内でのM2MΦ分布ヒストグラム作成を完了した。研究1に関しては十分量の症例数を収集が完了し、M2マクロファージの浸潤と食道扁平上皮癌の増殖、進展に一定の相関関係を得た。研究2に関しては食道癌細胞培養上清によりTPA処理単球性白血病由来細胞THP-1にM2形質が誘導されることが見いだされ、その際THP-1で特異的に発現亢進する遺伝子群をcDNAマイクロアレイ解析で抽出するまで達成され、本年度に計画した以上の実績を得ることが出来た。【研究2】食道扁平上皮癌細胞とM2MΦの細胞生物学的相互作用の解析1)癌細胞と分離培養MΦの三次元共培養を試みる。Green fluorescein