hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規カチオン性薬物輸送機構におけるオーファン分子の役割解明と創薬への展開

In vivo解析の結果、血液網膜関門においてクロニジンやニコチン、リボフラビン、L-オルニチンなどに対する取り込み輸送機構の存在が示唆された。モデル細胞を用いたin vitro解析の結果、これらカチオン性化合の輸送は担体介在型であることが示唆され、特に、血液網膜関門クロニジン取り込み輸送機構が網膜への薬物送達に有用であることが示された。In vitro阻害解析やノックダウン解析の結果、血液網膜関門を介したL-オルニチン輸送にCAT1 (SLC7A1)の寄与が示唆されるとともに、内側血液網膜関門を介したリボフラビン輸送にRFVTs (SLC52A)の寄与が示唆された。薬物の体内動態に多大な影響を及ぼす新規薬物輸送機構に着目し、その分子実体となる機能未知トランスポーター分子群の発現や機能を明らかとすることは、安全で効率的な薬物送達法の開発や精密な薬物体内動態の予測に繋がる。本研究では、血液網膜関門などに存在する新規薬物輸送機構を取り上げ、その機能特性と分子実体の解明を目的とした。平成26年度は、研究目的の「2オーファン分子群の機能」に関連する研究計画「オーファン分子群の機能アノテーション」を主に実施した。新規薬物輸送機構の分子実体候補となる機能未知のトランスポーター分子群をそれぞれアフリカツメガエル卵母細胞に発現させ、基質マトリクスを用いた輸送解析を実施した。解析の結果、複数の機能未知トランスポーター分子に関して、その機能や役割解明の糸口となる基質輸送活性を検出した。このうち、高い基質活性が示されたトランスポーター分子に関しては、その基質をプローブ化合物として種々の輸送特性解析を実施し、そのトランスポーター分子の輸送特性(膜電位依存性やpH依存性)を解析した。一方、基質輸送活性が検出されつつも、その活性の低さを考慮すると、より詳細な解析が困難であると考えられたトランスポーター分子に関しては、異なる基質マトリクスを構築して、再度の基質探索を実施した。また、以上に加え、本年度は、研究目的の「1新規薬物輸送機構」に関してもin vivoおよびin vitro解析を実施し、神経保護作用を有するclonidineの網膜への送達に有用なカチオン性薬物輸送機構を新規に同定した。この成果は、本研究が着目している「血液網膜関門に存在する新規薬物輸送機構」の有用性を強く支持するものである。本研究では、血液網膜関門や血液脳関門において薬物体内動態に寄与する新規輸送機構に着目し、その分子や機能、薬理的あるいは生理的役割を明らかとすることを目指している。計画の2年目となる平成27年度は、先年度から引き続き、研究目的「2オーファン分子群の機能」に関して、研究計画「オーファン分子群の機能アノテーション」を実施した。遺伝子発現系を用いることで、複数の機能未知トランスポーター分子のプローブ化合物や基質特異性を明らかとした。また、研究目的「3個体や組織での役割」に関しては、研究計画「In vivo/in vitro遺伝子ノックダウンによるオーファン分子群の役割解」を開始した。siRNAを用いた遺伝子ノックダウン解析を実施し、カチオン輸送能が示唆されたトランスポーター分子に関して、その生理的・薬理的役割をin vitroレベルで検証した。さらに、研究計画「オーファン分子群に対する特異的抗体作製」を開始し、薬理的寄与が示唆されたトランスポーター分子に関して、抗原タンパク質をリコンビナント合成し、ウサギなどに免疫した。以上に加え、研究目的の「1新規薬物輸送機構」に関して、カチオン性化合物であるニコチンやプトレシン、リボフラビンなどのin vivoおよびin vitro解析を実施した。その結果、これら化合物の取り込みや排出に関わる輸送機構の存在が示され、これら輸送機構がカチオン性薬物の体内動態に寄与することが示唆された。平成27年度(本年度)は、研究目的「1新規薬物輸送機構」や「2オーファン分子群の機能」、「3個体や組織での役割」に関わる研究計画として「オーファン分子群の機能アノテーション」や「オーファン分子群に対する特異的抗体作製」、「In vivo/in vitro遺伝子ノックダウンによるオーファン分子群の役割解」などを実施した。「1新規薬物輸送機構」に関して得られた結果は、新規同定された輸送機構が、組織関門における薬物動態に重大な影響を及ぼすことを示唆し、その一部に関しては、「2オーファン分子群の機能」において実体候補分子が示唆されている。特に、血液組織関門における有意な寄与が想定される候補分子に関しては、「3個体や組織での役割」の解明に向けて、in vitroノックダウン解析や特異的抗体の作成を開始した。以上のように、初年度(平成26年)に引き続き、本研究は計画に沿った成果が得られており、順調な進捗状況にあると考えられる。本研究では、神経疾患治療薬の新規開発に向けて、血液組織関門に存在する新規輸送機構探索と分子実体同定を行い、その役割や創薬応用性の検証を目的とした。カチオン性薬物であるclonidineやカチオン性化合物であるnicotine、riboflavin、L-ornithine、histamineなどに関するin vivo解析をラットで実施し、これらを輸送基質とする輸送機構が血液脳関門や血液網膜関門に存在することを示唆した。また、機能アノテーションでは、これらを基質とするトランスポーター分子群の探索を行った。モデル細胞を用いたin vitro輸送解析の結果、これらカチオン性化合物の輸送が担体介在輸送であることが示唆された。特に、clonidineには神経保護作用が報告されており、内側血液網膜関門のclonidine輸送機構が神経保護作用薬の網膜への送達に有用であることが示された。

L-Ornithineに関しては、機能アノテーションの結果、その血液網膜関門を介した輸送の分子実体としてcationic amino acid transporter 1 (CAT1/SLC7A1)の寄与が示唆された。外側血液網膜関門モデル細胞を用いた方向性輸送解析の結果、外側血液網膜関門におけるL-ornithine輸送は血液→網膜方向が優勢であると示唆され、このことは、特異的抗体を用いた免疫組織化学的解析の結果からも支持された。Riboflavinに関しては、その内側血液網膜関門を介した輸送の分子実体としてriboflavin transporters (RFVTs/SLC52A)の寄与が示唆された。発現解析の結果から、内側血液網膜関門におけるRFVT2およびRFVT3の発現が示唆され、riboflavin輸送におけるこれら分子の寄与はin vitro遺伝子ノックダウン解析の結果からも支持された。In vivo解析の結果、血液網膜関門においてクロニジンやニコチン、リボフラビン、L-オルニチンなどに対する取り込み輸送機構の存在が示唆された。モデル細胞を用いたin vitro解析の結果、これらカチオン性化合の輸送は担体介在型であることが示唆され、特に、血液網膜関門クロニジン取り込み輸送機構が網膜への薬物送達に有用であることが示された。In vitro阻害解析やノックダウン解析の結果、血液網膜関門を介したL-オルニチン輸送にCAT1 (SLC7A1)の寄与が示唆されるとともに、内側血液網膜関門を介したリボフラビン輸送にRFVTs (SLC52A)の寄与が示唆された。本年度は、研究目的の「1新規薬物輸送機構」に関して、神経保護薬の網膜への取り込み輸送機構を実際に解析し、その網膜への薬物送達における有用性を強く示唆するとともに、研究目的の「2オーファン分子群の機能」に関して、研究計画「オーファン分子群の機能アノテーション」を実施し、複数の機能未知トランスポーター分子に関して、基質マトリクス([3H]verapamilや[3H]pyrilamine、[3H]nicotine、[3H]spermine、[3H]putrescine、[3H]histamine、[3H]1-methyl-4-phenylpyridiniumなどのカチオン性化合物を含む)を用いて解析した。特に、「オーファン分子群の機能アノテーション」において得られた結果は、複数の機能未知分子の機能や役割解明において重要な糸口となるものであり、優れたプローブ化合物が得られた一部のトランスポーター分子に関しては、その輸送特性が詳細に解析された。研究計画の初年度において、以上のような成果が得られたことは、本研究の目的を達成する上で大きな足掛かりになるものと考えられる。本年度にプローブ化合物が得られたオーファントランスポーター分子に関しては、in vitro阻害解析や輸送特性解析を実施して、その機能的特徴を明らかとするとともに、種々新規輸送機構との機能的相同性をさらに検証していく予定である。また、特異的抗体の作成
義足のアライメントとソケット圧力における適合評価の最適化

切断者が装着する義足は,失われた身体機能を代償するパーツの組合せで構成されており,パーツの位置関係をアライメントという.アライメントは,立位の姿勢や歩行の安定性に大きな影響を与える.臨床的において,義足のソケットとアライメントの調整は,リハビリスタッフが切断者ごとに目視評価と主観的評価によって判断している.そこで,本研究は,義肢装具の適合評価の向上を目的として,リハビリ分野におけるIOH(Internet of Human)を応用した適合評価の支援システムの構築を目指す.これにより評価内容がデジタル化されることで経時的なデータの蓄積を可能にし,Evidenceの構築にも役立つ.切断者が装着する義足は,失われた身体機能を代償するパーツの組合せで構成されており,パーツの位置関係をアライメントという.アライメントは,立位の姿勢や歩行の安定性に大きな影響を与える.臨床的において,義足のソケットとアライメントの調整は,リハビリスタッフが切断者ごとに目視評価と主観的評価によって判断している.そこで,本研究は,義肢装具の適合評価の向上を目的として,リハビリ分野におけるIOH(Internet of Human)を応用した適合評価の支援システムの構築を目指す.これにより評価内容がデジタル化されることで経時的なデータの蓄積を可能にし,Evidenceの構築にも役立つ.
東南アジア・大洋州における社会・文化の基層とその現代的位相の分析

1.本研究の最終年度である昭和62年度において行われた研究会とその討議の内容は以下の如くである.(1)研究会は東京で三回,大阪で一回行われた.当初の計画より回数が増えたのは,以下で述べるように,研究の主題の絞り込みのため総括的な討議が必要になったことと,その主題に関する専門家に講師として参加発表を求め実施したこと,による.その増加した分の旅費には,設備備品費,その他,の費目から充当したが,設備備品に関しては昭和61年度までに充分な図書が備えられた,と,また「その他」の中の報告書作成費は研究代表者所属機関の既存の設備を利用することで報告書作成可能と,それぞれ判断し行った.(2)今年度の討議で次第に明らかとなった主題とは,東南アジア・大洋州における社会・文化の基層が,この地域に多様な形で存在する複合社会における文化的シンボルとして国家の意匠(デザイン)となっていることである.そのことは,当該地域の国家,または民族が,その現代的位相のなかで,国民国家(NationーState)として,またその構成部分として,外には独立の権利を主張し,内にはその統合を必要としているところから来る.しかしながら,その国民国家としての枠組自体がそれらの国々にとって全く新たなものであるがゆえに,その国家としての内実はしばしば不安定で不充分なものでありながらも,その国家であることへの希求と意識化は非常に先鋭なものがあり,その交差した軸に世界の他の地域とは異なる文化と政治のダイナミズム,が見られる.この主題を考察することによって,この研究会は東南アジアと大洋州の国々の現在の歴史的局面を理解するという個別的課題と,国家そのもののこれからの行方を構想するという一般的課題の二つを果たして来たと考える.今後,その成果は,報告書,及び出版物として発表される.第2年度に入った今年度の研究内容は下記の通りである。1.今年度では特に、東南アジア、オセアニア地域における伝統文化、あるいは、文化基層の現代的位相という、当研究計画の当初に設定された本来のテーマに絞り込んだ、より定性的な研究が着実に進展した。2.研究上の基礎資料として、前年度にひきつづき、東南アジア、オセアニア関係の民族誌資料の一層の充実が図られた。とりわけニューギニア、メラネシア関係の資料は確実に蓄積しつつあり、研究分担者の利用に益するところが大であると期待される。特に『パシフィック・リンギスティックス』をまとめて入手することが出来たのは大きい。3.今年度は、当初の計画通り、4回の研究会を実施できたのみならず、更に、合宿形式の研究討議も追加して行なわれる充実したものとなった。これら計5回の研究討議では、各研究分担者のフィールドワークに主として依拠した独自の研究成果の披露と討議、情報交換が行なわれた。これらの研究発表の中には、たとえばフィリピンのアキノ政権樹立の背後にある文化基層や集団編成原理についての分析や、インドネシアの儀礼や宗教の動的側面、あるいはミクロネシアの社会変化など、現代的諸問題と密接に関わる重要な報告も少なからず含まれていたのは意義深い。4).今年度は最終年度である62年度への移行期であることも考え、第4回の研究会において、これまでの研究討議の総括と、今後の全体計画についての討議が行なわれた。この討議の過程から、本研究組織の活動成果が、たとえば「国家の意匠」といった鍵概念を軸に今後、展開させ、収斂させていくことができるのではないか、という重要な指摘もなされ、62年度の研究活動の指針も確認されて、地歩が固まりつつある。1.本研究の最終年度である昭和62年度において行われた研究会とその討議の内容は以下の如くである.(1)研究会は東京で三回,大阪で一回行われた.当初の計画より回数が増えたのは,以下で述べるように,研究の主題の絞り込みのため総括的な討議が必要になったことと,その主題に関する専門家に講師として参加発表を求め実施したこと,による.その増加した分の旅費には,設備備品費,その他,の費目から充当したが,設備備品に関しては昭和61年度までに充分な図書が備えられた,と,また「その他」の中の報告書作成費は研究代表者所属機関の既存の設備を利用することで報告書作成可能と,それぞれ判断し行った.(2)今年度の討議で次第に明らかとなった主題とは,東南アジア・大洋州における社会・文化の基層が,この地域に多様な形で存在する複合社会における文化的シンボルとして国家の意匠(デザイン)となっていることである.そのことは,当該地域の国家,または民族が,その現代的位相のなかで,国民国家(NationーState)として,またその構成部分として,外には独立の権利を主張し,内にはその統合を必要としているところから来る.しかしながら,その国民国家としての枠組自体がそれらの国々にとって全く新たなものであるがゆえに,その国家としての内実はしばしば不安定で不充分なものでありながらも,その国家であることへの希求と意識化は非常に先鋭なものがあり,その交差した軸に世界の他の地域とは異なる文化と政治のダイナミズム,が見られる.この主題を考察することによって,この研究会は東南アジアと大洋州の国々の現在の歴史的局面を理解するという個別的課題と,国家そのもののこれからの行方を構想するという一般的課題の二つを果たして来たと考える.今後,その成果は,報告書,及び出版物として発表される.
積層型金属ナノ構造体の作製とその光学特性評価

2つの金ナノブロック構造にSiO_2層を挟んで積層させ、化学エッチング法を用いてSiO_2層を選択的にエッチングすることにより形成したナノギャップを有する積層型金ナノ構造体を作製し、プラズモン分光特性を解析した。構造体が示す光電場増強効果について、金の2光子励起発光計測により検討を行った結果、エッチングによりナノギャップが形成されることで発光強度が増大すること、そして2次元的に配列させた構造よりも積層型構造のほうがより高い発光強度を示すことが明らかとなった。本申請課題は、金属ナノ構造をシングルナノメートルオーダーの間隔で積層させた積層型金属ナノ構造体を作製する手法の開発、及び作製した構造体の光学特性を明らかにすることを目的として研究を行っている。本年度はまず、下層の金属ナノブロック構造体を作製する上で重要となる基板のエッチング条件、及び金属膜のスパッタ条件について検討を行った。シリコン基板上に電子線描画用ポジ型フォトレジストをズピンコートし、横: 40nm、縦: 200450nmの構造パターンを300nm間隔で30マイクロメートル四方の領域に描画した。現像後、ICPドライエッチング装置によって基板を深さ40nmエッチングし、その後スパッタ装置によって金を39nm、SiO_2を1nm成膜した。最後にレジスト膜を剥離することで構造体を得た。エッチング及びスパッタによる成膜の条件の最適化を行うことにより、構造表面のラフネスが1nm以下の金属ナノ構造体をシリコン基板内に形成することに成功した。またSiO_2のスパッタ時間を制御することで、作製した構造上面と基板表面との高低差を1nmの精度で制御することが可能であることが明らかとなった。次に、金属ナノ構造体(横: 40nm、縦: 200450nm、高さ: 20nm)をSiO_2層をはさんで張り合わせた構造の光学特性についても検討を行った。挟み込んだSiO_2層の高さを18nmの範囲で変化させたときの構造体の透過スペクトルを測定した結果、SiO_2層が高くなるにつれてプラズモンピークが短波長側にシフトし、スペクトル幅も小さくなることが明らかとなった。これは上下に配列した金ナノ構造体間において、プラズモンによる静電的な相互作用が誘起されたためであると考えられる。次年度においては、金属ナノ構造間の相互作用の詳細なメカニズムの解明を目指す。本年度はシリコン基板上に2つの金ナノブロック構造にSiO_2層を挟んで積層させ、さらに化学エッチング法を用いてSiO_2層を選択的にエッチングすることで、ナノギャップを有する積層型金ナノ構造体を作製し、そのプラズモン分光特性の解析を行った。エッチング前後の構造体のプラズモン共鳴スペクトルを計測した結果、ギャップ形成に基づいて共鳴スペクトルが短波長シフトすることが明らかとなった。これはSiO_2層が一部除去されたことによる誘電率の変化と上下の金ナノ構造間の電磁的な相互作用が増大したためであると推察される。さらに、これらの構造体が示す光電場増強効果について、金の2光子励起発光計測により検討を行った。フェムト秒レーザー光(中心波長:800nm、繰り返し周波数:82MHz、パルス幅:120fs)を顕微鏡用対物レンズで構造体に任意の強度で集光照射したときに観測される金からの発光スペクトルを測定した結果、金からの発光由来のブロードなピークが観測され、その発光強度はレーザー光強度の2乗に比例した。したがって、金ナノ構造からの2光子発光が確認された。積層型ナノギャップ金構造のエッチング前後、及び2次元的に配列させたナノギャップ金構造の2光子励起発光強度をそれぞれ測定した結果、エッチングによりナノギャップが形成されることで発光弾度が増大すること、そして2次元的に配列させた構造よりも積層型構造がより高い発光強度を示すことが明らかとなった。
寄生バチのウイルス様粒子:ノックダウンハチを用いた機能解明と有用遺伝子資源の探索

寄生バチであるギンケハラボソコマユバチがホスト制御に用いるウイルス様粒子(VLP)に関連した因子の機能を解明するため、VLPを産生する蛹の毒液腺で発現するmRNAのレパートリーを網羅的に取得し、続いていくつかの因子についてRNA干渉を利用した遺伝子ノックダウンを行って特定の因子を欠損したVLPを産生するハチを作成した。これら欠損VLPの機能解析を通じて、細胞性生体防御を担うホスト血球の機能を阻害する、タンパク化学的な性質を共有する2種類の因子を発見した。寄生蜂であるギンケハラボソコマユバチが産卵時にホスト昆虫に注入するウイルス様粒子(VLP)が持つ生体防御応答の抑制作用の分子基盤を解明して昆虫の生体防御系の特性について学術的に重要な新知見を得るとともに、産業分野で利用可能な有用遺伝子資源の探索を行なうことを目的として本研究を行った。まず、ハチが用いる主要な分子のパートリーを網羅的に取得するため、毒液腺のcDNAライブラリーからのランダムな配列決定とクラスタリングを行ない、パブリックデータベースへ登録した。次に219個のESTクラスターの部分アミノ酸配列に基づいて簡便なアノテーションを行ってそれぞれの機能を推定した。次に5個の候補因子について様々な組み合わせでノックダウンハチを作成して得た変異型VLPの機能解析を行い、新規な2種の因子が、ホスト昆虫の生体防御において中心的な役割を担う接着性血球の仮足形成と伸展を阻害する活性を持つことを発見した。最終年度には、それぞれのクラスターについて精密にアノテーションをやり直した。また複数の因子についてのノックダウン実験を行ったが、ホストの生体防御に影響を与える新たな因子は残念ながら見出せなかった。現在はこれらの成果について論文を準備中である。当初計画した内容のすべてを期間内に実施することは残念ながらできなかったが、1)ギンケハラボソコマユバチが用いる主要分子レパートリーを提示し、2)VLPに含まれる新規因子が実際にホストの生体防御応答を抑制することを示し、3)その抑制の様式から、血球を含めた細胞の運動を制御できる可能性を持った新規遺伝子2種を得ることができた。また派生的な成果として、4)ギンケハラボソコマユバチでの研究を通じて確立した手法を適用することにより、貯穀害虫・コクヌストモドキの生体防御系についても複数の新知見を得た。本研究では多種類のチョウ目害虫に寄生することができるギンケハラボソコマユバチが寄生時にホストに注入するウイルス様粒子(VLP:超微細構造はウイルス粒子に似るが遺伝子となる核酸を含まない)の機能を解明することを目的に研究を行っている。本年度はまず、ギンケハラボソコマユバチの毒液腺のcDNAライブラリーのランダムシーケンスから得た219個のESTクラスターの核酸配列情報のパブリックデータベースへの登録を行った。さらに、これらのうちから次の段階の解析へ回した21個の因子の全長の配列を決定し、これらについてもデータベースへの登録を行った。続いて、これら21個の因子の発現レベルを調査し、毒液腺特異的な発現を示す10因子についてRNA干渉による遺伝子ノックダウンを試みたところ、5因子について有効なノックダウンを得た。当初の計画通り、これら5因子について様々な組み合わせでノックダウンハチを作成し、各ノックダウンハチから調整したVLPをチョウ目害虫のin vitroの血球培養系に加えて血球の接着および伸展に与える影響を野生型の場合と比較検討した。その結果、04_A07および03_A09と名付けた2つのクローンをダブルノックダウンした場合に、ホスト昆虫の生体防御に重要な顆粒血球およびプラズマ血球の仮足形成と伸展が野生型VLPに比べて顕著に回復することを発見した。これらの2因子はサイズ、等電点、アミノ酸配列などに一定レベルの共通性があり、これまで知られているタンパク質との相同性が見いだされないことから、血球を含めた細胞の運動を制御できる可能性を持った新規因子群を同定したと考えた。また、これら2因子をノックダウンしたハチをin vivoでホストに寄生させた場合の寄生成功率には野生型との差はなく、寄生の成功自体はより多くの因子の機能によって総合的に達成されていると考えられた。交付申請書に記述した当該年度の研究計画では、解析予定因子をそれぞれの推定される機能から細胞接着阻止やアポトーシス誘導、機能未知だが発現量が多いものなどの6群に分類し、それぞれに属する因子ついて、1)まず定量RT-PCR法により因子のノックダウンを確認してから実験に用いる;2)in vitroの血球培養系に、RNA干渉法を用いてそれぞれの因子を欠損したノックダウンハチから調整したVLPを加え、血球の接着および生存に与える影響を野生型の場合と比較検討する;3)それぞれのノックダウンハチを作成し、in vivoでの寄生の成功の有無と表現型について検討する、であった。データベースへの配列の大量登録などの作業が発生したが、「研究実績の概要」のセクションで述べたように、これら予定した内容についてもおおむね遂行することができたと考えている。

また、研究目的である「VLPの機能を解明して学術的に重要な新知見を得るとともに、産業分野で利用可能な有用遺伝子資源の探索を行なう」に関しても、細胞の仮足形成と進展を阻害する新規な2種のタンパク質を同定したことにより、ある程度達成されたと考えた。ただし、上記1)でのノックダウンの確認については、半数ほどの因子で有効なノックダウンが観察されず、2本鎖RNAを作成する位置を変えるなどの検討が必要であることが示唆された。今後の研究の推進方策についてであるが、まずこれまで得ている219個のESTクラスターおよび21個の完全長クローンについて、もう一度BLASTX解析を用いたアノテーション業をやり直す予定である。これは近年、続々と様々な生物種から得られた配列がパブリックデータベースに登録されるようになってきており、アノテーションのアップデートは成果を取り纏めて発表する際にも必須となるからであり、また新しく登録されている因子との相同性が見いだされれば、これまで機能未知としていたギンケハラボソコマユバチの因子についても機能が推定できるようになる可能性もあり、新たな解析対象を見出すうえでも重要な作業であると考えている。また、今後は当該年度の研究によりホストの生体防御に重要な血球の伸展を阻害することが見いだされた、代表クローン名から仮に名付けている2つの新規因子、04_A07および03_A09についてのさらなる解析を中心に進めていきたいと考えている。まず、モデルホストとして用いているアワヨトウの血球以外にその他の昆虫の血球、あるいは培養細胞の仮足形成・進展に及ぼすこれら2種の因子の影響を評価し、これらの阻害作用が広い作用スペクトラムを持つものかどうか明らかにしてゆく。さらに、培養細胞での発現とその表現型の調査、さらに組み替えタンパク質や特異抗体を用いた検討などを通じ、これら新規因子の性格付けを行ってゆく予定である。計画している研究の遂行はほぼ現有設備あるいは共同利用可能な設備でまかなうことができるため、次年度の研究費については、今年度の少しの残額を含め、その多くを消耗品を中心とした物品費にあてたいと考えている。より具体的には、たとえば2本鎖RNA作成や核酸の配列決定、細胞へのプラスミド導入や組み替えタンパク質の作成・生成に用いる比較的高価な特殊試薬類の購入に使用したい。また、成果発表のための旅費、論文掲載費や論文別刷代、報告書の印刷費にも使用する予定である。
第一・第二鰓弓症候群患者の顎骨および咀嚼筋の三次元形態について

本研究の目的は、第一・第二鰓弓症候群患者の咀嚼筋の体積および形状と、顎顔面骨格の形状を三次元的に記録、解析し、筋肉に関するパラメータについて左右差が存在するのか、またもし存在するなら、それは顎顔面のいかなる形態的特徴と関連を有するのかを明らかにすることにある。臨床診査において、第一・第2鰓弓症候群と診断された思春期前期の患者12名に対し、ヘリカルタイプCTスキャナを用いて、顎顔面部のCT撮影を行った。得られたCTデジタルデータを、ワークステーション上で、三次元再構築した。画像解析ソフトウエアを用いて、両側の咬筋、外側翼突筋、内側翼突筋、側頭筋を分離した。分離方法の再現性が充分に高いことを、予備実験で確認した上で、咀嚼筋の体積及び表面形状を定量的に評価した。各咀嚼筋の体積および表面形状の不規則性について統計学的に有意に左右差を認めることを明らかにした。さらに咬筋と外側翼突筋の左右差の程度について、統計学的に有意な相関が認められることを明らかにした。また、下顎骨形成不全、歯の形成不全、耳介形成不全と咀嚼筋体積の左右差の程度には、統計学的に有意な相関を認めなかった。本研究の結果から、下顎骨、歯、耳介の形成不全の程度から咀嚼筋の形成不全の程度を予測できないことが明らかになった。仮骨延長術を行う際には、咀嚼筋の形成不全の程度を精査する必要があることが示唆され、臨床上重要な指針を与えるものである。本研究の目的は、第一、第二鰓弓症候群患者の咀嚼筋の体積および形状と、顎顔面骨格の形状を三次元的に記録、解析し、筋肉に関するパラメータについて左右差が存在するのか、またもし存在するなら、それは顎顔面のいかなる形態的特徴と関連を有するのかを明らかにすることにある。臨床診査において、第一、第二鰓弓症候群と診断された患者8名に対し、ヘリカルタイプCTスキャナを用いて、顎顔面部のCT撮影および顎関節部のMRI撮影を行なった。得られたCTデジタルデータは、ワークステーション上で、三次元再構築される。画像解析ソフトウェアを用いて、両側の咬筋、外側翼突筋、内側翼突筋、側頭筋を分離した。各咀嚼筋に関するパラメーターについて左右差が存在するか否か、さらに左右差の程度について、各咀嚼筋間に相関が認められるか否かについて統計学的検定を行なった。また、下顎骨形成不全、歯の形成不全、耳介形成不全と咀嚼筋の左右差の程度に相関があるか否かについても統計学的検定を行なった。顎関節部のMRIデータについては、現在解析中である。一方、43名の顎顔面部に形態異常を認める他の先天異常症候群患者についても、同様にCT・MAI撮影を行ない、第一・第2鰓弓症候群患者の咀嚼筋形態の特徴と、他の先天異常患者のそれとを比較検討している。
糸状菌二次代謝プロモーターの応用による有用物質生産系の構築と改良

伝統的発酵産業で使われる麹菌(Aspergillus oryzae)は、対数増殖後に余剰の糖を二次代謝としてコウジ酸に変換する。その変換効率は極めて高く、他化合物の高生産化への応用が期待される。コウジ酸生産に関わる遺伝子を解明したが、それを基にコウジ酸合成酵素のプロモーターを応用して胞子色素ポリケタイドの合成酵素を高発現し、二次代謝生産期での人為的なヘテロ化合物生産に成功した。糸状菌である麹菌は生育が定常期に入った後、培地中に残る余剰グルコースをコウジ酸(KA)に変換する。増殖が終わった後のKA二次代謝生産は、働く遺伝子も少なく、極めて効率的であり、その結果培地中にKAが大量に蓄積する。麹菌が高生産する2つの二次代謝化合物(コウジ酸KA、色素ポリケタイドYWA)生産時に働く遺伝子、代謝パスを明らかにすることを目標とする。最初にコウジ酸生産条件で、発現遺伝子をRNA-seq解析した。今年度は、麹菌で前述のヘテロ化合物生産株とその構築元の非生産株について、コウジ酸を生産する条件で培養し、3日目・5日目・7日目の3点の培養日数でRNAサンプルを各3本のフラスコから調製し、それでmRNA-Seq解析を行った。したがって実験重複度が3でmRNA-Seqのデータを得た。そのデータを用いて、麹菌でコウジ酸合成酵素遺伝子のプロモーターが稼働時に、これと協調的に稼働する他の遺伝子の探索を進めている。それにより、コウジ酸合成酵素遺伝子のプロモーター以外に、麹菌で二次代謝産物の異種生産および培養後期からの長期間生産に利用可能な新たなプロモーターを今後見つけ出す予定である。研究代表者が、採択年度から本部組織へ異動になり、研究部署と兼務で実施している。このため、期間途中から同じ研究部署に所属する研究員1名に主に実験部分を分担頂き、情報解析をする研究代表者と共同実施する体制を整えた。分担者の加入で加速し、これまでの成果を国際誌に論文として投稿し、査読を受けている。提案と比べて遅れている分、結果を基に計画を精緻化し、1年以内に取り戻したい。提案した計画に沿って、分担者と協力して進めていく。今までにコウジ酸合成酵素のプロモーターを応用して胞子色素ポリケタイドの合成酵素を高発現し、二次代謝生産期での人為的なヘテロ化合物生産に成功した。本研究では、この色素のさらなる生産性向上を目標として、色素およびコウジ酸生産時に機能する遺伝子と代謝を詳細に明らかにして、高生産と相関の高い代謝の知見獲得を目指す。麹菌を、コウジ酸を生産する条件で培養し、1日毎に菌体を回収し、その菌体内で転写されているmRNAを解析した。同時にコウジ酸を生産しない条件でも培養し、同様にmRNAを解析した。既にRNAのデータは取得していたため、情報科学的に有意に発現が上昇している遺伝子を特定してリスト化した。コウジ酸の生産に直接かかわる3つの遺伝子はもちろんであるが、それ以外にも日によって有意に発現が生産と関連して上昇する遺伝子が見られた。研究所内の管理部門へ出向し、研究を兼務として実施している。そのため申請時と比べて5分の1程度のエフォートを使って研究しているために、当初予想よりは遅れている。また、同じ条件で組換え麹菌が色素を生産する際のmRNAを解析する。

生産条件を確認し、mRNAを取得する時間を検討した。コウジ酸、色素の発言時の発現しているmRNAを比較することで、物質生産に共通して働く遺伝子、およびそれぞれの生産に関わる遺伝子を特定する。研究所内の管理部門へ出向し、研究を兼務として実施している。そのため申請時と比べて5分の1程度のエフォートを使って研究しているために、当初予想よりは遅れている。今年度から、研究部門の玉野氏に、実施者として参加して頂いている。実験部分を進めて頂くことにより、研究計画全体を効率化することができた。伝統的発酵産業で使われる麹菌(Aspergillus oryzae)は、対数増殖後に余剰の糖を二次代謝としてコウジ酸に変換する。その変換効率は極めて高く、他化合物の高生産化への応用が期待される。コウジ酸生産に関わる遺伝子を解明したが、それを基にコウジ酸合成酵素のプロモーターを応用して胞子色素ポリケタイドの合成酵素を高発現し、二次代謝生産期での人為的なヘテロ化合物生産に成功した。糸状菌である麹菌は生育が定常期に入った後、培地中に残る余剰グルコースをコウジ酸(KA)に変換する。増殖が終わった後のKA二次代謝生産は、働く遺伝子も少なく、極めて効率的であり、その結果培地中にKAが大量に蓄積する。麹菌が高生産する2つの二次代謝化合物(コウジ酸KA、色素ポリケタイドYWA)生産時に働く遺伝子、代謝パスを明らかにすることを目標とする。最初にコウジ酸生産条件で、発現遺伝子をRNA-seq解析した。今年度は、麹菌で前述のヘテロ化合物生産株とその構築元の非生産株について、コウジ酸を生産する条件で培養し、3日目・5日目・7日目の3点の培養日数でRNAサンプルを各3本のフラスコから調製し、それでmRNA-Seq解析を行った。したがって実験重複度が3でmRNA-Seqのデータを得た。そのデータを用いて、麹菌でコウジ酸合成酵素遺伝子のプロモーターが稼働時に、これと協調的に稼働する他の遺伝子の探索を進めている。それにより、コウジ酸合成酵素遺伝子のプロモーター以外に、麹菌で二次代謝産物の異種生産および培養後期からの長期間生産に利用可能な新たなプロモーターを今後見つけ出す予定である。研究代表者が、採択年度から本部組織へ異動になり、研究部署と兼務で実施している。このため、期間途中から同じ研究部署に所属する研究員1名に主に実験部分を分担頂き、情報解析をする研究代表者と共同実施する体制を整えた。分担者の加入で加速し、これまでの成果を国際誌に論文として投稿し、査読を受けている。提案と比べて遅れている分、結果を基に計画を精緻化し、1年以内に取り戻したい。研究計画に従って進めるが、兼務でも加速できるように工夫する。分析等で外注などの委託を利用して、時間の節約を図る。結果として消耗品の節約にも効果が出ると考えられる。提案した計画に沿って、分担者と協力して進めていく。実験で予定していた分が計画の遅れのために次年度の使用として残っている。研究計画が遅れているが、H30年度にゲノム科学的な解析に必須のデータ取得のための委託分析を必要としており、今までの年度で計画していた各年度の予算額を超えるため、今まで使用しなかった分を合わせて支出することで、重要なデータを取得することができる。
昆虫類における多型発現のエピジェネティクス

ミツバチの働きバチと女王バチへのカースト分化、およびアブラムシの有翅・無翅型の多型発現におけるエピジェネティックな制御機構を明かにすることを目的として、セイヨウミツバチとエンドウヒゲナガアブラムシのDNAメチル化をゲノムワイドに解析した。ミツバチではカースト間でメチル化の状態が異なる1,717サイトのCpGを同定した。興味深いことに、カースト間でメチル化度の異なる遺伝子の中には、幾つかの性決定遺伝子が含まれており、カースト分化に性決定遺伝子が関与している可能性が示唆された。アブラムシでは、有翅型と無翅型でメチル化度の異なる226サイトのCpGサイトを同定した。ミツバチとアブラムシのDNAは、昆虫としては例外的にメチル化される。ミツバチでは女王バチと働きバチのカースト分化、アブラムシでは、有翅型と無翅型という多型発現に関与していると考えられる。本課題では、昆虫多型発現のエピジェネティックな制御機構を調べるため、これらの昆虫のゲノムのメチル化の全体像を明らかにし、多型間でメチル化の状態の異なる遺伝子を検索し、遺伝子のメチル化が転写にどのように影響するかを解析することを計画した。平成23年度は、ミツバチのDNAメチル化パターンをゲノムワイドに解析した。具体的には、働きバチに分化するか、女王バチに分化するかが運命づけられた孵化後4日目の幼虫からDNAを抽出し、次世代シークエンスを利用してゲノムワイドにメチル化の解析を行った。平成24年度は、23年度の解析結果に基づき、働きバチと女王バチでメチル化の頻度が異なる20個の遺伝子を選び、カースト決定期前後のメチル化パターンの継時的な変化を詳細に調べた。孵化後3日目、4日目、5日目の幼虫について調べたところ、女王バチでは、働きバチに比べ、メチル化の頻度が徐々に低下する傾向が強いことが明らかになった。また、23年度の解析から、性決定遺伝子の1つであるtransformer 2 (tra2)が女王バチと働きバチでメチル化のパターンが異なるという結果が得られていた。性決定遺伝子がカースト分化にも関与している可能性を示唆する興味深い結果であったため、この遺伝子について逆転写定量PCR法で発現解析を行った。しかし、発現レベルの違いを検出することはできなかった。アブラムシについては、有翅型と無翅型のDNAを次世代シークエンスで解析し、得られたリードをゲノムにマッピングした。昆虫類では、同一ゲノムから形態的,機能的に異なる個体が作られるという多型発現がしばしば見られる。ハチやアリの仲間における女王とワーカーのカースト分化、アブラムシの有翅型・無翅型などはその典型的な例である。興味深いことに、これらの昆虫のゲノムは、昆虫としては例外的にCpGサイトがメチル化修飾を受けることが知られている。本研究課題は、ゲノムデータを利用できるセイヨウミツバチとエンドウヒゲナガアブラムシを材料に、DNAメチル化をゲノムワイドに解析し、昆虫の多型発現におけるエピジェネティックな制御機構を明かにすることを目的として実施した。23年度には、ミツバチの女王バチと働きバチの幼虫のゲノムメチル化パターンを比較するために次世代シークエンスを利用して解析した。この解析により、ミツバチのゲノムに存在する約900万のCpGサイトのうち、メチル化されるのは約1%ほどであることが明らかになった。また、カースト間でメチル化の状態が異なる1,717個のCpGサイトを同定した。24年度には、カースト間でメチル化度の異なるいくつかの遺伝子について、カースト決定期前後におけるメチル化の継時的な変化を解析する一方、アブラムシの無翅個体と有翅個体の比較に着手した。最終年度にあたる25年度は、アブラムシでの解析を進め、最終的に有翅・無翅でメチル化度の異なる226サイトのCpGサイトを同定した。本研究の最も興味深い成果として、ミツバチの性決定に関わる幾つかの遺伝子のメチル化状態が働きバチと女王バチで違っていることが明らかとなり、カースト分化に性決定遺伝子が関与している可能性が示唆された。ミツバチのゲノムは約230Mbpで、そこに約900万のCpG配列が含まれる。

ミツバチのDNAでメチル化修飾を受けるのはCpGのCだけで、女王バチでも、働きバチでもメチル化されるCpGは10万サイト以下であった。哺乳類ではゲノム中のほとんどのCpGがメチル化されるが、ミツバチでは全CpGの1%程度しかメチル化されず、メチル化される遺伝子は限られていることが明らかになった。また、女王バチと働きバチの比較から、カースト間でメチル化の度合が有意に異なる1,171個のCpGサイトを同定した。遺伝子単位でみると、985遺伝子がカースト間でメチル化の状態が異なるCpGサイトを含んでいた。カースト間でメチル化が異なる遺伝子は1,000個以下であることから、これらの遺伝子から特に重要と考えられるものを選別し、遺伝子レベルでの詳細な解析が可能となった。アブラムシについては、有翅型と無翅型の個体からDNAを抽出し、次世代シークエンスによる解析に着手した。平成23年度に女王バチと働きバチのDNAメチル化パターンの解析を実施した。平成24年度は、23年度の解析から得られるカースト間でメチル化頻度の異なる遺伝子について、カースト決定期前後におけるメチル化の継時的な変化を調べることを計画していた。当初の計画では、この実験は通常のバイサルファイト・シークエンスで行うことを予定していたが、実際には次世代シークエンスを利用したアンプリコン解析を実施した。次世代シークエンスを利用することで、当初の計画以上に多くの遺伝子について、より信頼できる結果を得ることができた。また、24年度には女王バチと働きバチでメチル化の異なる遺伝子について、逆転写定量PCR法で発現レベルを調べることも計画していた。23年度に性決定遺伝子であるtra2のメチル化のパターンがカースト間で異なるという興味深い結果が得られていたので、この遺伝子の発現解析を実施した。残念ながら、tra2については発現レベルでの違いを検出することができなかった。しかし、その一方で23年度の結果をより詳細に調べたところ、tra2以外に、malelessやmales absent on the first (mof)などの性決定に関わる遺伝子でも、メチル化頻度がカースト間で異なっていることが明らかになった。アブラムシについては、24年度中に有翅個体と無翅個体のDNAについて、ミツバチの場合と同様の方法でゲノムのメチル化パターンを解析することを計画していた。計画通り、次世代シークエンス解析を終わらせシークエンス・リードをゲノムにマッピングすることまで完了できた。平成23年度に計画していた女王バチと働きバチのDNAメチル化パターンの解析を計画通りに実施した。実際に解析する前は、ミツバチのゲノムが高度にメチル化されていて、女王バチと働きバチでメチル化の異なる部分が無数存在し、その後の研究の方向性を決めかねる可能性があることを危惧していたが、メチル化修飾を受けるのは、全CpGサイトの1%以下で、カースト間で違いの見られるサイトは限られているという結果が得られた。今後の方針を定めるうえで幸運な結果であった。また、個々の遺伝子に注目したところ、性決定遺伝子の1つであるtransformer2がカースト間でメチル化の状態の異なるCpGサイトを3つ含んでいた。
リンゴの自家結実性品種育成に関する基礎的研究

1)果樹試験場盛岡支場および青森県りんご試験場に保存されているそれぞれ75および35品種について調査した.自家受粉による自家結実率の高い品種としては,'Poritan''Antonovke'など,またGA処理による単為結実率の高い品種としては'de Ollo''Tetofsky'などが新たに見出された.2)'恵'と他品種との交雑による雑種集団を供して,自家結実性の遺伝性(自家結実個体割合)を調査したが'恵'と'Golden Delicious'との組合せで高かった(平均13%).遺伝性の指標となる反復率(repoatobility)を算出した.自家受粉による自家結実率では7080%とやゝ高かったのに対し, GA処理による単為結実率では2040%と低かった.3)単為結実率は樹体内外の条件によって大きく変動するが,特に6月の高温(平均気温18°C以上)での落果率は著しく, 100%に達することが多い.4)'恵'では自家受粉の24時間前に不活性花粉で他家受粉した場合,自殖種子の採種効率は約2倍に高まった.また,開葯前の花粉を懸濁花粉(5%蔗糖液)として交雑に供することの有効性が明らかとなった.5)珠心組織からのカルス形成にはMS基本培地にオーキシン類と低濃度のBAPを添加したものが適していること,また低頻度であるが珠心カルスから不定胚形成がみられた.培養シュートおよび珠心カルスに由来する2種のプロトプラストの融合による,雑種プロトプラストが低頻度ながら出現し,コロニーを経てカルスが形成された.6)'国光'では慣行受粉法と同程度のけいじつを確保するに要する/花当り受粉花数および種子の数は50個および5個以上であって,種子数の増加に伴って最低果重が増加する. '恵'では,他家受粉果に比較して自家受粉果および単為結実果の皮層部割合は果心部割合よりも大きかった.ただし,果実品質と貯蔵性には老異が認め難かった.1)果樹試験場盛岡支場および青森県りんご試験場に保存されているそれぞれ75および35品種について調査した.自家受粉による自家結実率の高い品種としては,'Poritan''Antonovke'など,またGA処理による単為結実率の高い品種としては'de Ollo''Tetofsky'などが新たに見出された.2)'恵'と他品種との交雑による雑種集団を供して,自家結実性の遺伝性(自家結実個体割合)を調査したが'恵'と'Golden Delicious'との組合せで高かった(平均13%).遺伝性の指標となる反復率(repoatobility)を算出した.自家受粉による自家結実率では7080%とやゝ高かったのに対し, GA処理による単為結実率では2040%と低かった.3)単為結実率は樹体内外の条件によって大きく変動するが,特に6月の高温(平均気温18°C以上)での落果率は著しく, 100%に達することが多い.4)'恵'では自家受粉の24時間前に不活性花粉で他家受粉した場合,自殖種子の採種効率は約2倍に高まった.また,開葯前の花粉を懸濁花粉(5%蔗糖液)として交雑に供することの有効性が明らかとなった.5)珠心組織からのカルス形成にはMS基本培地にオーキシン類と低濃度のBAPを添加したものが適していること,また低頻度であるが珠心カルスから不定胚形成がみられた.培養シュートおよび珠心カルスに由来する2種のプロトプラストの融合による,雑種プロトプラストが低頻度ながら出現し,コロニーを経てカルスが形成された.6)'国光'では慣行受粉法と同程度のけいじつを確保するに要する/花当り受粉花数および種子の数は50個および5個以上であって,種子数の増加に伴って最低果重が増加する. '恵'では,他家受粉果に比較して自家受粉果および単為結実果の皮層部割合は果心部割合よりも大きかった.ただし,果実品質と貯蔵性には老異が認め難かった.1.青森県りんご試験場に保存されている34品種を新たに供試し、自家受粉およびジベレリン処理による結実率を調査した。大部分の品種(31品種)は自家不結実性と認められたが、自家和合性の高い品種はクランダール(26%),蝦夷衣(23%),また、他動的単爲結果性の高い品種はスタークスプレンダー(55%),蝦夷衣(33%)であることが明らかとなった。なお、自家和合性と単爲結果性との間に、特定の関係は見られなかった。2.自家和合性の高い品種(恵)と低い品種(紅玉)を供試し、自家受粉と他家受粉による花粉管伸長について調査した。いずれの品種においても、自家受粉された花粉管の先端が花柱内で肥厚する傾向の強いことが認められた。また、他家受粉された花粉管の伸長速度は自家受粉されたものに比較して早い傾向が認められたが、今後更に検討を重ねたい。3.種間交雑における種子稔実率ならびに受精胚珠の発育停止期には組合せ間に顕著な差異が認められた。印度×

ワリンゴでは受粉後14日目以降に胚珠の70%が、また、印度×エゾノコリンゴでは60日目以降に約20%のものが発育を停止した。印度×エゾノコリンゴの末熟胚(受粉後約80日)を培養したところ、幼植物の生長や茎葉の分化がみられた。なお、4680日間の低温処理(4°C)が生長促進に有効であった。4.葯培養による胚様体形成率の高い品種は王鈴(7.3%),リチャードデリシヤス(5.2%),レッドキングデリシャス(4.1%)などであったが、発根が全く認められず、完全な植物体分化をみるに至らなかった。5.自家結実性の高い品種(恵)の無種子果(GA処理による単爲結実果)および有種子果(自家受粉による自家結実果)の品質や貯蔵性について比較検討したが、前者の大きさは後者よりやゝ小さいものの、糖度,硬度に差異は認め難かった。
前１千年紀エジプトにおける軍事勢力と神官団に関する研究

本研究は、前1千年紀のエジプト社会において支配層を形成していた軍事勢力と神官団の動向を、彼らが残した碑文を主な史料として分析することによって、前1千年紀エジプトの衰退史観に再考を迫ることを目的とする。補助事業期間の前半は、国内・国外に所在する史料を収集・整理して、前1千年紀エジプトの軍幹部称号所持者と神殿上位層の神官称号所持者の正確なプロソポグラフィを作成することに努める計画であった。そこで2018年度は、まずオックスフォード大学図書館所蔵の未公刊資料であるウィルキンソンのマニュスクリプトを調査した。その結果、破壊されるなどして今では見ることが出来なくなったサッカラ北部にかつて存在した前4世紀の墓の碑文から、当時の軍幹部や神官の情報を得ることができた。この調査の結果は、今後予定している資料調査の結果とあわせて公表する予定である。また英国滞在の機会を利用して、英国内の幾つかの博物館を訪れ、本研究の進展に有益な碑文を確認することができた。国内では天理参考館所蔵の資料を調査した。その成果を第47回古代エジプト研究会で報告した。またこの調査結果の一部は『天理参考館報』に公表予定である。また以前から進めていた松岡美術館所蔵の彩色木棺の研究を進め、特殊なヒエログリフ用例を含む碑文を解読した。この成果は2019年度中に学会誌に投稿する予定である。本研究は、前1千年紀の西洋中心的な世界史像に再考を迫ることも目的としている。そこで2018年度は、前1千年紀後半の後期王朝時代(Late period)の最盛期と目されるサイス王朝(エジプト第26王朝)について、古代の文献、特に旧約聖書やヘロドトスの『歴史』に同王朝がどのように描かれているのかを検討した。この研究成果の一部は、2019年4月に同志社大学で開催される国際会議において公開講演として発表する。2018年度は研究初年度ということもあって、計画では国内で収集可能な資料を収集・整理することに努める予定であったが、幸い渡英の機会を得ることができ、次年度(2019年度)に行う予定であった海外での調査を繰り上げて実施することができた。さらに目的としていたサッカラ所在の墓の碑文だけでなく、私の知見に無かった碑文の存在も知ることができた。予想を超える数の資料の写真撮影ができたことは大きな収穫であった。その他、入手し得たデータを、この時期の基礎研究となっているChevereauやBuhlの著作に提示されているプロソポグラフィ的データと照合し、先行研究のデータの不備を確認することもできた。今後もデータを増やしながら、この作業は続けていくことになる。この様に資料の収集と検討が進んでいることから、研究はおおむね順調に進んでいると考える。これまでと同様に、今後も国内・国外の資料を収集・整理し、先行研究に提示されているデータと照合しながら、新たな史料的証左を加えたより正確なプロソポグラフィ的データを作成していく。ここ数年、欧米ではこの時期のエジプトの特に軍幹部の動向に関するそれぞれ見解を異にする新たな議論が展開されている。これらを踏まえ、収集し得たデータから当時の軍幹部らの動向を検討していく。また既に口頭で発表した議論や検討を終えた資料に関しては、順次学会誌や紀要に発表していく。

2018年度は研究初年度ということもあって、計画では国内で収集可能な資料を収集・整理することに努める予定であったが、幸い渡英の機会を得ることができ、次年度(2019年度)に行う予定であった海外での調査を繰り上げて実施することができた。さらに目的としていたサッカラ所在の墓の碑文だけでなく、私の知見に無かった碑文の存在も知ることができた。予想を超える数の資料の写真撮影ができたことは大きな収穫であった。その他、入手し得たデータを、この時期の基礎研究となっているChevereauやBuhlの著作に提示されているプロソポグラフィ的データと照合し、先行研究のデータの不備を確認することもできた。今後もデータを増やしながら、この作業は続けていくことになる。この様に資料の収集と検討が進んでいることから、研究はおおむね順調に進んでいると考える。これまでと同様に、今後も国内・国外の資料を収集・整理し、先行研究に提示されているデータと照合しながら、新たな史料的証左を加えたより正確なプロソポグラフィ的データを作成していく。ここ数年、欧米ではこの時期のエジプトの特に軍幹部の動向に関するそれぞれ見解を異にする新たな議論が展開されている。これらを踏まえ、収集し得たデータから当時の軍幹部らの動向を検討していく。また既に口頭で発表した議論や検討を終えた資料に関しては、順次学会誌や紀要に発表していく。購入を予定して書籍が、3月末までに海外から送られてこなかった。従って、次年度に書籍購入代として使用する。