hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
有用動植物の実態と利用に関する共同研究

さらに黄仁躍校長をはじめ、雲南農業大学の関係者らと共同研究の今後の進め方について具体的な検討を行った。一方、中国側研究分担者3名(畜産学の婁義洲副教授、園芸学の暴卓然副教授、作物学の段紅平講師)は、平成6年12月7日から12月20日にかけて招聘し、鹿児島大学農学部の他、大隅および薩摩地方において家畜の飼養管理技術、果樹作物と水稲の育種及び栽培技術に関する現地共同調査と活発な学術交流を行った。今年度は、中国側研究分担者の招聘が冬季にずれこんだため、夏作物に関する現地調査が不可能となった。そこで、平成7年度は、本研究が効果的かつ幅広く展開されるよう雲南農業大学の研究者を我国の農畜産物の事情がよく把握できる夏季に招聘することが必要であろう。なお、平成7年度は日本側から3名の派遣、中国側から3名の招聘を予定している。平成7年10月10日から10月22日まで,鹿児島県大学農学部から有隅健一教授,萬田正治教授及び角明夫教授の3名を,中国・雲南省に派遣した.そして,雲南農業大学の家畜管理学,作物学及び園芸学を専門とする研究者とともに雲南省内の肉用牛,豚,馬,山羊,アヒル,鶏なとの家畜の飼養管理,増殖,在来家畜の評価などについて共同研究を行った.更に水稲,豆類などの食用作物,果樹,疏菜,花卉などの園芸作物についてその生産の実態と近年における消費の動向,及びこれら作物の育種事情に関する現地での共同研究・調査を行い,多大な成果を挙げることができた.また黄仁躍校長はじめ,雲南農業大学の多数の研究者らと農学の教育・研究に関する幅広い情報の交換を行い,この方面でも大きな収穫があった.一方,中国側研究分担者3名(畜産学の毛華明副教授,園芸学の唯副教授,,作物学の彭桂芬副教授)を,平成7年10月21日から11月1日にかけて招聘し,鹿児島大学農学部と附属農場(唐湊果樹園,指定植物試験場,入来牧場を含む)の他に鹿児島県の農業試験場,果樹試験場及びバイオテクノロジー研究所,たばこ産業の葉たばこ技術センター等の見学を行うとともに,県下の農家における家畜の飼養管理技術,果樹・疏菜,花卉等の園芸作物の栽培技術に関する現地共同調査と活発な学術交流を行った.昨年度と同様本年度も中国側の都合で,招聘が10月下旬となり,夏作物に関する現地調査が不可能となった.幸い本年度は専門が工芸作物の彭副教授であったため所期の目的を達することができたが,水稲等の夏作物ではやはり夏期に招聘する必要がある.なお,平成8年度は最終年度に当るので日本側から研究代表者の橋口勉教授を含め4名の派遣,中国側3名の招聘を予定している.平成8年9月5日から9月14日まで、鹿児島大学の橋口勉(家畜育種学)、衛藤威臣(蔬菜園芸学)、冨永茂人(果樹園芸学)、佐藤宗治(植物育種学)が中国・雲南省に派遣されて、雲南農業大学の研究者と雲南省の有用動植物の実態と利用について共同調査した。雲南省では水稲、ソルガム、タバコが主要作物であったが、特有の食用作物も多く見られた。また、薬用を兼ねた作物も見られた。例えば、ドクダミの近縁種と思われる魚腥草は、現地では漢方薬として利用されるほか、健康によい野菜として食されている。また、宝珠梨(砂梨:Pyrus pyrijoliaの1品種)と呼ばれるナシがあり、雲南省特産で、皇帝への献上品であったとされる。その他、Araceaeに属する植物で、若い花軸を食する野菜、更に、固有種と思われる多くのキノコ類など希少有用植物が多数見られた。これらに対する学術的な研究、利用法の開発が今後必要になるものと思われた。
新しいケイ素-遷移金属多重結合の構築と反応性の解明およびその触媒反応への展開

1.独自に開発した方法により,ヒドリド(ヒドロシリレン)ルテニウム錯体の合成に初めて成功した。この錯体は,アルデヒド,ニトリル及びアルキンと容易に反応し,いずれも一次生成物として,[2+2]環化付加反応の後Si-H結合が部分的に還元的脱離したと考えられるagostic錯体を選択的に与えた。また,エノン,イソシアナート,イソチオシアナート等ともスムーズに反応し,[4+2]環化付加,ヒドリド移動,C=S結合開裂等を経由して興味深い構造を持つ錯体を与えた。2.シリル(シリレン)ルテニウム錯体の合成に成功し,その構造および動的挙動を明らかにした。この錯体は鉄類縁体よりも反応活性であり,強いルイス塩基であるDMAPを加えると,ケイ素上の置換基のスクランブリングを伴って塩基で安定化されたシリル(シリレン)錯体を生成した。また光照射すると,前例のないη^4-シラ-ο-キノジメタン錯体に変換された。さらに,アルコールとの反応では,驚くべきことにシリル基上のメチル基が全てアルコキシ基に置換された生成物を与えた。3.アリール配位子とシリレン配位子を持つタングステン錯体は,穏やかな加熱によりタングステン上のアリール配位子がシリレンケイ素上へ1,2-転位することを明らかにした。生じた配位不飽和シリル錯体はニトリルと反応し,タングステン-ケイ素結合にニトリルが挿入し,k^2-イミノアシル錯体を生成した。これにさらにニトリルを反応させると,もう1分子のニトリルの挿入が起こり,五員環メタラサイクルが得られた。4.ビス(ホスフィン)白金錯体とかさ高い置換基を持つトリブロモシランとの還元剤存在下での反応により,初めてのブロモシリレン白金錯体の合成に成功した。この錯体のX線結晶構造解析の結果,白金-ケイ素結合はその二重結合性を反映して非常に短く,またケイ素は平面構造をとっていることが分かった。(1)ヒドリド(ヒドロシリレン)ルテニウム錯体の合成と極性分子との反応タングステン錯体に続いて,今回ルテニウムのヒドリド(ヒドロシリレン)錯体の合成と構造解析に成功した。X線結晶構造解析等から,このルテニウム錯体ではタングステン錯体と異なり,ヒドリド-シリレン配位子間に相互作用は無いことがわかった。また,このルテニウム錯体はケトン,ニトリル等の極性分子と容易に反応し,ニトリルの場合には炭素-炭素結合の切断を伴い,シリルイソシアニド錯体をほぼ定量的に与えることがわかった。(2)ハロシリレン白金錯体の合成と構造ビス(ホスフィン)白金錯体とかさ高い置換基を持つトリブロモシランとの還元剤存在下での反応により,初めてのプロモシリレン白金錯体の合成に成功した。X線結晶構造解析の結果,この錯体の白金-ケイ素結合距離は非常に短く,またケイ素周りの結合角の和は360°でケイ素は平面構造をとっていることから,白金-ケイ素結合は二重結合であることが確認された。また,シリレン配位子上のプロモ基をメチル基に置換することにも成功した。(3)アリール(シリレン)タングステン錯体とニトリルとの反応アリール

配位子およびシリレン配位子を持つタングステン錯体にニトリルを反応させたところ,タングステン上のアリール配位子がシリレンケイ素上へ1,2-転位し,生じたシリル配位子とタングステンとの結合にニトリルが挿入し,η^2-イミノアシル錯体が生成することを見出した。さらにこの錯体にニトリルを反応させると,もう1分子のニトリルの挿入が起こり,五員環メタラサイクルに変換されることがわかった。(4)タングステン-ケイ素-リンからなる三員環メタラサイクルの合成ホスフィノヒドロシランとメチル(カルボニル)タングステン錯体との光反応により,標記メタラサイクルの合成に成功した。この錯体は,以前合成した鉄誘導体と比べて,極性分子に対する反応性がずっと低いことを明らかにした。(1)ヒドリド(ヒドロシリレン)ルテニウム錯体と様々な不飽和有機分子との反応昨年度合成に成功した標記ルテニウム錯体とアルデヒド,ニトリル及びアルキンとの反応で,いずれも[2+2]環化付加反応を経由したと考えられる前例のない生成物を選択的に得た。また,エノン,イソシアナート,イソチオシアナート等とも独特の新しい反応を行うことを明らかにした。(2)シリル(シリレン)ルテニウム錯体の合成およびその特異な反応性以前合成に成功している鉄錯体と同様の合成法を用い,標記錯体の合成と構造解析に成功した。この錯体は鉄類縁体よりも反応活性であり,強いルイス塩基である4-(ジメチルアミノ)ピリジン(DMAP)を加えるとケイ素上の置換基の再配列を伴って塩基で安定化されたシリル(シリレン)錯体が,また光照射すると初めてのη^4-シラ-o-キノジメタン錯体が生成することを見出した。また,アルコールとの反応では,シリル基上のメチル基が全てアルコキシ基に置換されるという予想外の反応を見出した。(3)アリール(シリレン)タングステン錯体のアリール基の1,2-転位反応の機構解明DMAPで安定化されたアリール(シリレン)タングステン錯体とその異性体である(アリールシリル)タングステン錯体は,アリール基の1,2-転位を経由して可逆的に相互変換することを以前報告していた。今回,これちの錯体からトリフェニルボランによってDMAPを引き抜くことにより中間体であるη^3-シラベンジル錯体の単離と構造解析に成功し,アリール基の1,2-転位反応の機構を解明した。(4)水素架橋ビス(シリレン)タングステン錯体の合成と構造極めてかさ高いペンタベンジルシクロペンタジエニル配位子を支持配位子として用い,二つのシリレン配位子が水素によって架橋されたビス(シリレン)錯体の合成・単離に初めて成功し,分光学的データおよび理論計算に基づいてその構造を推定した。
アメリカ大規模製造企業における労使関係の歴史的変遷に関する実証的研究-革新主義時代における労使関係管理の生成,およびそれと安全運動との関連について

本研究は,第一次大戦期に基本的な枠組みが形成され,その後,大量生産産業における労務管理の主要な流れとなる「労使関係管理」industrial ralationsについて,その起源と歴史的展開過程とを実証的に検討し,とくに安全運動との関連を明らかにするものである。今年度は,以下の二点について新たな知見を得ることができた。1安全運動と労使関係管理との関連については,(1)この運動の中心的プログラムである安全委員会が労使協議制として機能するようになり,そこに従業員代表制の原型を確認することができること,(2)安全運動の指導者「セイフティ・マン」と技術者との間に当初安全対策をめぐる意見の食い違いがあったが,やがて安全運動のなかに潜在的に含まれていた労使関係管理特有の労働者観に技術者の理解が及んだことを明らかにした。これは安全運動が,技術者たちの意識の根底にある伝統的な労働者観に変革を迫り人事管理への接近を可能にする要因になったことを意味している。2安全運動のなかから多様な福利厚生活動が生成したが,それがさまざまな非営利団体によって企業の外部から支えられていた点が興味深い。19世紀末葉からの企業規模の飛躍的な拡大と移民の大量流入は,労働者福祉を専門に取り扱う非営利組織の活動をおおいに刺激し,企業もまた自己の福利活動をそのような専門家組織に依存する方向を辿った。このような私的福祉の部門間協力の実態を,セイフティ・マンとシカゴ訪問看護婦協会の派遣する産業看護婦との共働作業のなかに具体的にたどることによって,安全運動の社会統制としての側面を明かにした。3今後、以上の研究を発展させ,(1)第一次大戦期までをも視野に入れて,労使関係管理の成立をあとづけることと,(2)人事管理運動の主要な源泉のひとつである雇用管理運動について,安全運動との関連を究明することが次の課題となるであろう。
生体超分子の表面選択吸着機構の解明及び選択吸着技術を用いたナノ電子デバイスの創成

昨年度までにおいて,M-doped TiO_2層(10nm)上に金電極(100nm)と金ナノ粒子(GNP)プラズモンアンテナを形成したデバイスを作製し,波長400-800nmの範囲の光を照射しながら電流を測定した結果,波長620nm付近に光電流増大率ピークをもつ波長依存性を確認し,GNPの局在表面プラズモン共鳴(LSPR)を電気的に検出できることを示した.しかしながら,具体的なLSPR検出機構は明らかになっていない.そこで本年度では,実験的手法と計算的手法の両方を用い,LSPRの検出機構の解明を目指すとともにデバイス構造の最適化を行った.その結果,デバイスのAu電極膜厚を変えて光電流増大率を評価した実験より,Au電極膜厚が薄くなるにつれて波長620nm付近のピーク強度が増大することがわかった.この結果は,光照射によってAu電極表面に励起された電子が光電流に寄与していることを示している.また,光電流増大率のピーク強度の光照射角度依存性から,Au電極の表面プラズモン共鳴(SPR)が電子を励起していることを見出した.さらに,有限要素法の電磁場解析より,本デバイスの構造においてAu電極表面にSPRが起こり得ることを確認した.以上の結果より,光電流Au電極のSPRが,波長620nm付近の光電流増大率ピークの一因になっていることがわかり,金電極のSPRと金ナノ粒子のLSPRが互いに作用しあっていることを見出した.これは,金ナノ粒子の形状・サイズやAu電極の構造を設計・最適化することで,金ナノ粒子のLSPR波長とAu電極のSPR波長を一致させることができれば,信号強度(光電流増大率)の飛躍的な増大が期待できることを示している.本年度の成果は,バイオセンサーを半導体チップ上に集積した小型バイオセンサーチップの基盤技術の足がかりとなることが期待できる.近年、従来のトップダウン型半導体プロセスにボトムアップ型バイオプロセスを融合させることで、基板上にナノ構造を構築し、新規ナノデバイスを作製する研究が盛んに行われている。その中で、バイオミネラリゼーション能により、金属ナノ粒子を内包できるフェリチンタンパク質は、基板上に金属ナノ粒子を配置するナノブロックとして注目されている。このフェリチンタンパク質は、Tiに特異的に吸着するペプチドをN末端に修飾することで、基板上に形成したTiパターンへ選択吸着させることが可能である。本研究では、Ti認識ペプチドを修飾したフェリチンタンパク質(TBF)による金属ナノ粒子選択配置技術を用い、金属ナノ粒子の量子効果や局在表面プラズモン共鳴等を利用した、新奇なナノ電子光デバイスの作製を目指す。本年度では、早い段階で、TBFの選択吸着機構において基板表面の電荷状態とTWEEN20の作用が重要であることを明らかにした。そこで、ナノ電子光デバイス作製の足がかりとして、TBFをさらに応用し、そのC末端にAu認識ペプチドを修飾したフェリチンタンパク質のサブユニット(TFG)による金ナノ粒子の選択配置を行った。その結果、TFGで覆った金ナノ粒子(TFG-GNP)はTiパターンのみに高密度選択配置可能であることを示した。また、そのプラズモニック特性を評価した結果、高密度であるにもかかわらず、凝集していない金ナノ粒子固有の吸収ピークを得ることができた。以上の結果は、TFGで覆われていない金ナノ粒子では成し得ないもので、TFGによる金ナノ粒子選択配置の優位性を示すものである。また、TFG-GNP配置後のTFG除去方法として、大気圧Heプラズマ処理法を提案し、金ナノ粒子の凝集を抑制しつつTFGを除去することに成功した。さらに、TFG除去後の金ナノ粒子のセンサー応答も確認した。この技術は、デバイス作製に向けて重要なものであり、TFGによる金ナノ粒子選択配置技術を用いたナノ電子光デバイスへの一歩となる。本研究では,"more than more"の概念の下,フェリチンと呼ばれるタンパク質を利用したナノバイオプロセスを使い,金ナノ粒子を電子デバイス上に集積した新奇光電子デバイスの創成を目指している.本年度では,金ナノ粒子の局在表面プラズモン共鳴(LSPR)の吸収スペクトルを電子デバイス上で直接電流として検出する構造の提案とその実証を目指した.第一の提案として,金ナノ粒子のLSPRとチャネル電流の相互作用に期待し,バックゲートトランジスタ(BGT)のチャネル上に金ナノ粒子を並べたデバイスを試作した.デバイスのプラットフォームとして作製したSOI(Si-on-insulator)バックゲートトランジスタ(BGT)からは,良好なトランジスタ動作を確認することができた.しかし,ナノバイオプロセスを用い,この作製したBGTのチャネル上に金ナノ粒子を並べ,単色波長光によるチャネル電流の変調の観測を試みたが,LSPRスペクトルのような電流スペクトルは得られなかった.その原因として,チャネルのSOI層自体も光を吸収していることが挙げられた.そこで,その対策として,加熱条件次第で透明半導体になり得るNbドープTiO_2(NB-TiO_2)をチャネル上に用いた.また,金ナノ粒子周囲の電場増強による電流への効果より,金自体に直接電流を流した方がLSPRを観測しやすいと考え,電流を流す電極に金を,チャネル層にTiO_2を用いたAu/TiO_2ショットキーダイオードを作製した.Nb-TiO_2層が半導体的性質を示す加熱条件は,400°C・1時間であった.半導体的性質を示すNb-TiO_2層上に500×500um^2四方のAu電極(100nm)を形成したデバイスを用い,単色波長光に対する光電流を波長に対してプロットしたところ,波長620nm付近にピークを持つ電流スペクトルが観察できた.

この結果は,このデバイス構造によりLSPRを検出できたことを意味しており,本年度の目標は達成できたと言える.昨年度までにおいて,M-doped TiO_2層(10nm)上に金電極(100nm)と金ナノ粒子(GNP)プラズモンアンテナを形成したデバイスを作製し,波長400-800nmの範囲の光を照射しながら電流を測定した結果,波長620nm付近に光電流増大率ピークをもつ波長依存性を確認し,GNPの局在表面プラズモン共鳴(LSPR)を電気的に検出できることを示した.しかしながら,具体的なLSPR検出機構は明らかになっていない.そこで本年度では,実験的手法と計算的手法の両方を用い,LSPRの検出機構の解明を目指すとともにデバイス構造の最適化を行った.その結果,デバイスのAu電極膜厚を変えて光電流増大率を評価した実験より,Au電極膜厚が薄くなるにつれて波長620nm付近のピーク強度が増大することがわかった.この結果は,光照射によってAu電極表面に励起された電子が光電流に寄与していることを示している.また,光電流増大率のピーク強度の光照射角度依存性から,Au電極の表面プラズモン共鳴(SPR)が電子を励起していることを見出した.さらに,有限要素法の電磁場解析より,本デバイスの構造においてAu電極表面にSPRが起こり得ることを確認した.以上の結果より,光電流Au電極のSPRが,波長620nm付近の光電流増大率ピークの一因になっていることがわかり,金電極のSPRと金ナノ粒子のLSPRが互いに作用しあっていることを見出した.これは,金ナノ粒子の形状・サイズやAu電極の構造を設計・最適化することで,金ナノ粒子のLSPR波長とAu電極のSPR波長を一致させることができれば,信号強度(光電流増大率)の飛躍的な増大が期待できることを示している.本年度の成果は,バイオセンサーを半導体チップ上に集積した小型バイオセンサーチップの基盤技術の足がかりとなることが期待できる.当初期待していたバックゲートトランジスタによる局在表面プラズモン共鳴(LSPR)の検出は,いくつかの課題に直面し,上手く果たせなかった.しかし,そこから得た教訓を生かし,透明半導体のTiO_2とAuのショットキーダイオードによるLSPR検出に可能性を見出すことができたので,自己点検による評価は(2)とした.上記の研究実績で述べたように,作製したAu/TiO_2ダイオードからは波長620nm付近にピークがある電流スペクトルが得られた。しかしながら,Au電極の大きさは局在表面プラズモン共鳴が起きる程小さく,620nm付近にピークが現れたメカニズムについてはまだ明らかになっていない.そこで今後,この電流スペクトルの起源を探るとともに,Au電極構造やNb-TiO_2層の加熱条件の最適化等を行い,スペクトルのピーク位置の調整を目指す必要がある.また,金ナノ粒子との複合化の検討も行っていく.
分子種によるP450活性部位の構造的個性とその反応性への影響

1.肝臓のP450の内、脂肪酸(omega-1)水酸化活性を有する2C2と2E1とは鎖長および水酸化位置の選択機構が異なることを昨年までに見出した。今回は、炭素数918の直鎖脂肪酸について水酸化産物をガスマスで分析同定し、両者の違いを一層明確にした。例えば、炭素数16の脂肪酸2E1の保存性Thr→Ser変異体を作用させると7種類の水酸化体を生じるが2C2の変異体は水酸化せず、一方、炭素数9の脂肪酸に対しては2E1の変異体は専ら(omega-1)水酸化体を生じるが2C2の変異体はomega水酸化体をより多く生じた。アセチレン酸アルコール類に対する感受性にも両P450の基質認識機構を反映すると推察される相違が見られた。2.2C2、2E1、2C14の保存性Thr→Lys変異体を作成脂、スペクトル的性質を比較することにより3種類のP450で活性中心であるヘム遠位環境のトポロジカルな相違を示唆する結果を得た。なお、野性型でこの位置のアミノ酸がProとなっている3A1についてもLys変異体を作成し、スペクトル的性質を検討すべく精製を行いつつある。還元型P450の窒素性配位体は二つの状態(455nm型と422nm型)をとり得、これに5配位状態を加えた三者の平衡関係にP450の個性が現れるので、これを指票に今後より広く比較したい。3.結晶構造解析が報告されているP450camについて保存性Thr→Lys変異体を作成、精製、スペクトル的性質を調べた。2に述べた三者の平衡関係に基質カンファーの有無が影響することが分かった。カンファーは野性型では外性窒素配位を妨害するのに対して、Lys変異体では内性窒素配性を促進する点は注目に値する。大量精製に好適な材料であるので、今後、ヘム物性について解析をすすめ、2つの状態の実体を解明したい。
早歌詞章の文学史的位置付けに関する総合的研究

平成30年度の成果は、新出の室町期譜本の資料的位置づけを行ったこと、および近代における早歌研究について総合的な整理を行ったこと、の三点である。まず、新出の室町期早歌譜本『拾菓抄』について、資料紹介を行った。該本は大阪在住の能楽師大西家が所蔵している。関屋俊彦関西大学名誉教授が、大西家資料調査の過程で『拾菓抄』を発見した。関屋から連絡を受けた筆者は、原本調査の機会を得て、該本が室町期の早歌譜本であることを確認した。所蔵者から許可を得て写真撮影を行い、さらに詳細に調査した。その結果、該本が京観世五軒家のうち岩井家の旧蔵であること、岩井家から大西家に移管されたものであることを確認した。さらに、金春家所蔵の『宴曲集』巻第一と同筆であること、その書写者が早歌中興の祖坂阿の可能性が極めて高いことを指摘した(「資料紹介:大西家蔵宴曲『拾菓抄』」『大阪工業大学研究紀要』63巻1号、2019年9月)。従来、坂阿については、節付本の存在だけが知られてきた。今回の成果によって、坂阿が自ら早歌本文を記したという新たな事蹟を付け加えることができた。さらに、該本の本文によって従来の早歌伝本論を見直す契機ともなり得る。第二に、新潟吉田文庫の調査によって、吉田東伍の早歌(宴曲)研究を意義づけた。従来、不十分であった近代における宴曲研究について総合的な整理を行った(「吉田東伍の宴曲本文校訂」『大阪工業大学研究紀要』63巻2号、2019年9月)。第三に、早歌の詞章が軍記物語に与えた文学史的な影響について考察した。具体的には、『宴曲抄』所収「熊野参詣」が『平家物語』本文に与えた影響について、書承・口承の側面から検討を加えた(関西軍記物語研究会第94回例会での口頭発表)。他の曲と『平家物語』との関連も含めて、今後の大きな課題となる。第一の理由は、室町期早歌伝本が新たに発見され、その本文紹介および位置づけ、今後の研究方針を定めることに時間を割いたことである。個人蔵という制約もあり、限られた時間で調査し、早歌伝本としての価値を確定するために尽力した。第二の理由は、かつての研究(中世道行文形成過程の総合的研究)で、積み残したままであった近代早歌研究について整理するために、時間を費やしたことである。具体的には、新潟吉田文庫における二回の調査を経て、その成果を報告書としてまとめた。第三の理由は、『外物』輪読会を立ち上げられなかったことである。研究協力者に協力依頼をし、協力の許可は得た。しかし、日程の調整が思うようにいかず、結局、一度も輪読会(研究会)を開くことができなかった。昨年度(平成30年度)の成果を踏まえて、以下の観点から研究を進める。第一に、大西家本『拾菓抄』本文を基点として室町期早歌譜本の伝本分類について新たな視点から検討を加える。従来、早歌本文については、室町期譜本と続群書類従系という二分類が行われてきた。大西家本に加えて、改めて詳細な異同を取ることで、伝本分類の新たな基準が見えてくるはずである。第二に、早歌詞章が平家物語本文に与えた影響について、総合的に検討を加える。「熊野参詣」が『平家物語』に与えた影響について、再度、詳細に検討する。さらに最も遅い時期に成立したと考えられる『源平盛衰記』に的を絞って影響関係がたどれないか検証する。第三に、『外物』十二曲注釈のための輪読会を本格的に立ち上げる。夏期休業期間を利用して集まることが第一の目的である。その場で、研究代表者が以下の発表を行う。第一に、『外物』に関する従来の研究を整理し、『外物』注釈の意義を述べる。第二に、「領巾振恋」注釈案を示し、研究協力者から意見を募る。研究協力者がそれぞれの専門分野を生かして、注釈の不備を補えるような体制を整える。第三に、他の十一曲について注釈担当者を決める。最後に、研究成果の公開方法について意見交換し、最終目標を定める。さらに、金春家所蔵の『宴曲集』巻第一と同筆であること、その書写者が早歌中興の祖坂阿の可能性が極めて高いことを指摘した(「資料紹介:大西家蔵宴曲『拾菓抄』」

『大阪工業大学研究紀要』63巻1号、2019年9月)。従来、坂阿については、節付本の存在だけが知られてきた。今回の成果によって、坂阿が自ら早歌本文を記したという新たな事蹟を付け加えることができた。さらに、該本の本文によって従来の早歌伝本論を見直す契機ともなり得る。第二に、新潟吉田文庫の調査によって、吉田東伍の早歌(宴曲)研究を意義づけた。従来、不十分であった近代における宴曲研究について総合的な整理を行った(「吉田東伍の宴曲本文校訂」『大阪工業大学研究紀要』63巻2号、2019年9月)。第三に、早歌の詞章が軍記物語に与えた文学史的な影響について考察した。具体的には、『宴曲抄』所収「熊野参詣」が『平家物語』本文に与えた影響について、書承・口承の側面から検討を加えた(関西軍記物語研究会第94回例会での口頭発表)。他の曲と『平家物語』との関連も含めて、今後の大きな課題となる。第一の理由は、室町期早歌伝本が新たに発見され、その本文紹介および位置づけ、今後の研究方針を定めることに時間を割いたことである。個人蔵という制約もあり、限られた時間で調査し、早歌伝本としての価値を確定するために尽力した。第二の理由は、かつての研究(中世道行文形成過程の総合的研究)で、積み残したままであった近代早歌研究について整理するために、時間を費やしたことである。具体的には、新潟吉田文庫における二回の調査を経て、その成果を報告書としてまとめた。第三の理由は、『外物』輪読会を立ち上げられなかったことである。研究協力者に協力依頼をし、協力の許可は得た。しかし、日程の調整が思うようにいかず、結局、一度も輪読会(研究会)を開くことができなかった。昨年度(平成30年度)の成果を踏まえて、以下の観点から研究を進める。第一に、大西家本『拾菓抄』本文を基点として室町期早歌譜本の伝本分類について新たな視点から検討を加える。従来、早歌本文については、室町期譜本と続群書類従系という二分類が行われてきた。大西家本に加えて、改めて詳細な異同を取ることで、伝本分類の新たな基準が見えてくるはずである。第二に、早歌詞章が平家物語本文に与えた影響について、総合的に検討を加える。「熊野参詣」が『平家物語』に与えた影響について、再度、詳細に検討する。さらに最も遅い時期に成立したと考えられる『源平盛衰記』に的を絞って影響関係がたどれないか検証する。第三に、『外物』十二曲注釈のための輪読会を本格的に立ち上げる。夏期休業期間を利用して集まることが第一の目的である。その場で、研究代表者が以下の発表を行う。第一に、『外物』に関する従来の研究を整理し、『外物』注釈の意義を述べる。第二に、「領巾振恋」注釈案を示し、研究協力者から意見を募る。研究協力者がそれぞれの専門分野を生かして、注釈の不備を補えるような体制を整える。第三に、他の十一曲について注釈担当者を決める。最後に、研究成果の公開方法について意見交換し、最終目標を定める。第一に、遠隔地の研究協力者の参加を前提とする研究会(輪読会)開催のための旅費を計上していたが、輪読会を開催しなかった。その結果、それが未使用となった。第二に、撮影した資料の紙焼き写真作成を予定していたが、年度をまたいだ会計となるため、次年度に繰り越したため、その分が未使用となった。2019年度は、この未使用分を輪読会開催のための旅費、および紙焼き写真作成費用に充当する。さらに、論文執筆に必要な資料作成のための費用、文献資料調査のための旅費(研究代表者および研究協力者)に充当する。
独居高齢者の生活上の危機と危機管理の方法に関する研究

本研究は、在宅で生活している高齢者の生活上の危機とその管理の内容を明らかにすることを目的に行った。2016年に、2自治体における郵送調査を実施し、回収した4292件を分析した。分析の結果、多くの高齢者が危機と感じる項目は「災害」「屋外での転倒・事故」「心身の衰え」「断水・停電等の生活の障害」「認知症」だった。独居高齢者は他の世帯形態の人に比べ、不安と感じている項目が多かった。危機への対処は、健康管理、防犯、火災予防などを70%以上の人が実施していた。独居高齢者は、人的ネットワークを活用した危機管理を実施しているが、火災や災害のための物理的環境の整備が課題であることを明確にした。研究の平成27年度の実績:本研究の最終目標は、在宅で生活している高齢者の生活上の危機とその管理のために行われている内容を明らかにし、今後の危機管理の支援のあり方を検討するものである。研究は大きく2つの研究課題を想定しており、1点目は、高齢者が「もしも、万が一」という主観的な危機の内容を相対的に、量的記述的に明らかにすることである。2点目は、在宅の高齢者における、身体機能低下に伴うリスクや、災害等の外的危機による生活のダメージの回避などのために、高齢者が生活の中で行っている対処・工夫を明らかにすることである。平成27年度は、平成28年度の量的調査の実施に向けて主に以下の5点を行った。1)危機と危機管理に関する国内外の研究報告論文の収集とレビューを行った。2)1)をもとにした調査票の作成を行った。3)計4回の研究会の実施により、調査方法、レビューの方向を定めた。4)調査対象地域の選定を行い自治体担当者との交渉により、1市1地区と1町の悉皆調査の受諾が決定し、調査方法と内容について検討を進めることができた。5)作成した調査票を用い予備調査を実施した。平成27年度の総括:平成27年度は研究計画作成時の内容をほぼ実行できた。特に、予備調査と、自治体からの意見交換を踏まえて、実態に即しかつ高齢者支援の現場に有用なデータを得るための調査票の精度を高めることができた。平成28年度の本調査は、計画通りに進行できる予定であり、これらは平成27年の実績によるものである。平成27年度は、研究計画に基づき以下を行った。第1に、危機と危機管理に関する国内外の研究報告論文の収集とレビューを行い、高齢者の危機管理には、認知症発症を含む心身機能の低下、家屋・経済問題、災害の対応などが含まれることを明らかにした。第2に文献からの知見をもとに、調査票の作成を行った。調査票は、研究会において、近接領域の研究者との議論、及び高齢者支援の専門職との討議から、研究目的を明確にするためのブラッシュアップを行い、精度を高めることができた。第3に、調査対象地域の選定を行い自治体の担当部署の代表との交渉により、1市1地区と1町の悉皆調査の受諾が決定し、調査方法と内容について検討を進めることができた。倫理審査及び、対象自治体の法規担当部署の確認を得ることができた。自治体からの調査のための宛名の提供について、個人情報保護の方法について自治体と協議を進めることができた。さらに、当初の研究会メンバーは保健師職を主としていたが、本研究に関心を持つ理学療法士、作業療法士と、本研究テーマの危機と危機管理に関する研究会を拡大し、多職種連携による検討を加えた。第4に、作成した調査票を用い予備調査を実施した。予備調査によって、後期高齢者も調査票への回答が可能であること、軽度の認知症を持つ場合も、簡易な設問と文言、文字の拡大により、自記式での一定の回答が得られることを確認した。危機管理という用語への抵抗がみられたため、危機を「もしもの時」という用語へ置き換えること等、研究目的に合致し、かつ研究対象者の理解に添った調査票の修正を行った。平成27年度の本研究の進捗は、平成27年度の当初の研究計画と一致する。研究は、順調に進展していると評価でき、調査の対象者数を計画以上の規模の人口集団へと拡大できたことと、研究会メンバーとして多職種との検討を加えられたため、計画以上の進展と判断した。本研究の目標は、在宅で生活している高齢者の生活上の危機とその管理の内容を明らかにし、今後の危機管理の支援のあり方を検討するものである。研究課題の1つは高齢者が「もしも、万が一」という主観的な危機の内容を相対的に、量的記述的に明らかにすることである。もう1点は、在宅の高齢者における、身体機能低下に伴うリスクや、災害等の外的危機による生活のダメージの回避などのために、高齢者が生活の中で行っている対処・工夫を明らかにすることである。研究の意義と重要性:平成28年度は2地域(A町人口約167,00人、B市C地区人口約7,800人)における郵送の悉皆調査を実施した。平成27年度の予備調査と自治体からの意見を踏まえて、実態に即しかつ高齢者支援の現場に有用なデータを得るための調査票の精度を高めることができ、回収率はA町51.3%(2,566件)、B市59.1%(1,726件)の計4292件を分析した。平均年齢75.2±7.3歳である。

高齢者が危機と感じる項目で半数以上の多数だったのは「災害」「屋外での転倒・事故」「心身の衰え」「断水・停電等の生活の障害」「認知症」だった。いずれも単独世帯の人が他の世帯形態の人に比べ有意に危機と認識する割合が多かった。危機への対処は、健康管理、防犯、火災予防などにおいて70%以上の人が実施していた。単独世帯の人は、緊急の連絡先の明示と安否確認をしてもらう工夫、近隣との危機時の話し合いの実施割合が高かったが、家屋の管理、火災予防・災害の備えの割合が低かった。これらのことから単独世帯の高齢者が人的ネットワークを活用した危機管理を実施しているが、火災や災害のための物理的環境の整備が課題であることを明確にした。今後の分析により、危機と危機管理の類型化と対象者特性に沿った支援を明らかにする予定である。平成28年度は、研究計画に基づき危機と危機管理に関する先行研究からの知見をもとに、調査票作成と調査を実施した。計画以上に進展した理由は以下である。第一に、研究会において、近接領域の研究者・行政の高齢者支援担当者を含む多職種による討議から、研究目的を明確にするための調査票の精度を高めることができた。第2に悉皆調査の受諾、倫理審査及び、対象自治体の条例に基づく調査を多職種連携による検討を加え、個人情報保護を厳守しつつ、地域の全数を把握する調査手法を確立した。第3に調査の有効回答率の高さである。高齢者対象の郵送調査において、2地区とも50%を超える有効回答であったことは、住民、地域の支援者、自治体担当者の価値・関心、ニーズにあった調査内容だったためと考える。第4に、調査票のチェック、データ入力・クリーニングが済み、記述統計まで分析が進んだことである。これにより、平成28年度1月に日本公衆衛生看護学会学術集会でのワークショップでの本研究結果の報告、および平成29年度開催の日本老年看護学会、日本在宅ケア学会への研究報告の登録ができた。第5に、2地区の行政担当者への結果報告に加えて、一自治体では、民生児童委員協議会と介護支援専門員の定例会議で、調査結果を報告することができた。いずれも、地域での活動に役立てる示唆が得られる等の意見を得た。平成28年度の本研究の進捗は、当初の研究計画の全てを遂行し、調査対象者数と有効回答率が予定をはるかに上回り、調査の分析結果の公表、関係者との意見交換の実施等から、きわめて順調な進展であり計画以上の進展だったと評価できる。本研究は、在宅で生活している高齢者の生活上の危機とその管理の内容を明らかにし、今後の危機管理の支援のあり方を検討するものである。研究課題の1つは高齢者が「もしも、万が一」という主観的な危機の内容を、量的記述的に明らかにすることである。もう1点は、身体機能低下に伴うリスクや、災害等による生活のダメージの回避のために、高齢者が行っている対処・工夫を明らかにすることである。平成28年度に、2地域(A町人口約167,00人、B市C地区人口約7,800人)における郵送の悉皆調査を実施した。回収率はA町51.3%(2,566件)、B市59.1%(1,726件)の計4292件を分析した。平均年齢75.2±7.3歳であった。
海産由来環状ブロモエーテル化合物の生合成研究

環状ブロモエーテル化合物は、紅藻ソゾ属の海藻から、数多く単離、構造決定されており、現在までに数十種類が知られている。これらの化合物は天然界では容易く合成されているにもかかわらず、人工的な合成は困難を窮めており、生合成反応の化学的解明が求められている。本研究では、このなかで特に注目されているロ-レナン型化合物の生合成反応について検討を行った。ロ-レナン型化合物は、紅藻ウラソゾから単離される8員環ブロモエーテル化合物であり、ロ-レアチン、イソロ-レアチン、ローラレン等が知られている。これらの化合物は、いずれもプレロ-レアチンを前駆体とし、ブロモペルオキシダーゼにより生じた臭素カチオン種と反応することで生合成されていると考えられていたが、実験的な証拠は皆無であった。。そこで、今回、ウラソゾより単離したロ-レアチンを(3E)-および(3Z)-プレロ-レアチンに誘導し、これをNaBr,過酸化水素存在下、ペルオキシダーゼの一種であるLPOにて反応を行った。すると、(3E)-体からはローラレンが得られ、(3Z)-体からはロ-レアチン、イソロ-レアチンが生成した。これらの化合物は全て、天然物のスペクトルデータと一致することで、構造を確認した。本研究によって、3位の幾何異性によって、これらロ-レナン型化合物が作り分けされることが強く示唆され、一連のブロモエーテル化合物の生合成解明に重要な知見を与えたと考えられる。。
生殖細胞の形成と受精、および初期発生の生理分子機構

トレニア属およびアゼトウガラシ属の近縁種を用いた解析により、助細胞が分泌する花粉管誘引物質には、強い種の特異性があることが明らかとなった。誘引物質の候補と長年考えられてきた細胞外カルシウムについては、少なくとも単独で誘引物質として働くことはないことが示された。誘引物質は、進化速度の速い、助細胞で生合成される物質である可能性が示唆された。そこで、助細胞の遺伝子発現プロファイルから解析を進めた。助細胞のcDNAライブラリーを作製し、EST解析を行ったところ、5%もの高頻度で、Low-molecular-weight Cysteine-rich Protein(LCR)ファミリーの1つの遺伝子が見出された。LCRはアブラナの自家不和合性において花粉側リガンドとして働くSP11など、しばしば細胞間コミュニケーションにおけるリガンドとして働く。RT-PCR解析の結果、この遺伝子(TfLCR1)は、助細胞で特異的に発現していた。SignalPプログラムによりC末端側の70アミノ酸が細胞外に分泌される予測され、花粉管ガイダンス分子の候補と考えられる。現在、独自に開発したレーザーマイクロインジェクターを用いて、モルフォリノアンチセンスオリゴによる発現阻害や、大腸菌で発現させたTfLCR1の花粉管誘引能のin vitroアッセイなどを進めている。精製TfLCR1に、これまで報告例がないような強い誘引活性が認められたことから、誘引物質の有力な候補が得られたと考えている。I)蛍光プローブを用いた分子細胞学的解析研究計画に基づき、主にシロイヌナズナTUB9プロモーターおよびユリgH2Aプロモーターを用いた蛍光プローブコンストラクトの作製を行った。さらにゲートウエイテクノロジーによりバイナリーベクターへの移行を進めるとともに、トレニアおよびシロイヌナズナの両者で形質転換を開始した。シロイヌナズナにおいては現在までのところgH2A::GFPのシグナルは得られないようであるが、引き続きTUB9プロモーターのラインや、トレニアのTUB9およびgH2Aプロモーターラインの作製などを進めている。II)助細胞が分泌する花粉管ガイダンス分子の解析単離助細胞25個を初発材料に、cDNAを作製しPCR増幅した。ライブラリーの作製とともに、EST解析を進める予定である。また今後の解析のため、レーザーマイクロインジェクション法について詳細な条件設定を行い、商品化の準備も進めた。III)花粉管の受精能獲得を制御するタンパク質AMORの解析トレニアの花1万個の子房を解剖して胚珠を培養し、培養液から精製したAMOR(70kDa)を用いてN末端配列のアミノ酸シーケンシングを試みたが、タンパク質量が不十分でありシグナルを得られなかった。そこで花10万個分相当のAMORを得ることを目指し、これまでに花6万個以上の子房を回収するとともに、子房のホモジェネートからの活性をもつAMORの精製法を確立した。AMORはヤリブ試薬で沈殿するなどアラビノガラクタンタンパク質としての挙動を示すが、AMOR自体に糖鎖がついているかはまだ不明であり、現在さらにその分子的側面からの解析を進めるとともに、遺伝子同定のためのタンパク質精製を進めている。
短波長可視光レ-ザ用半導体の液相エピタキシアル成長と量子井戸構造の作成

InGaAlPの液相成長では,Alの固相中への取り込みが困難であるといわれてきた.そこでAlの投入方法を変えて,成長層内への取り込まれ具合を実験的に求めた.投入方法としては,1)Alを単独で,2)InーAl合金の形で,3)GaAs基板上にAl蒸着して,の3つを用いた.その結果,1)2)の方法では,成長層中にはほとんどAlは取り込まれないこと,3)の方法では,ほぼ状態図から予想される傾向と一致してAlが固相中に入ることが判明した.成長に先立つ溶液の冷却によって過飽和度をつけることは,温度差法では本来必要がない.そこで,012°Cの溶液温度降下幅によるAlの成長層中への取り込まれかたを比較したが,違いはみられなかった.これらの事実は,In溶媒中では,Alが溶液内に均一に溶けていないことを示唆する.成長したInGAAlP層はX線マイクロアナライザによる組成分析の結果,基板全体にわたって均一というものではなく,まったくAlが含まれていない部分が見られた.この結果と一致して,PLやCL測定からもInGaAlPとInGaPの2つのスペクトルが同じ基板上で観測された.基板上に均一に成長させるための条件を見いだすことが今後の課題である.量子井戸構造の作成に向けて,InGaP/GaAs多層薄膜の成長条件と成長層膜厚の関係を実験的に求めた.その結果,成長温度で格子整合する成長層組成のとき,平坦で結晶性の良い薄膜が得られることが,SEM,X線回折およびPL測定より明らかになった.得られた最小膜厚は,現在のところ約200Aである.しかしながら,X線サテライトピ-クは観測されていない.CLスペクトルの電子線加速電圧依存性から成長層の吸収係数や真の発光スペクトルを求める方法を検討,考察した.この方法は,多層成長膜の各層の結晶性などを非破壊で評価する有効な手段となり得る.InGaAlPの液相成長では,Alの固相中への取り込みが困難であるといわれてきた.そこでAlの投入方法を変えて,成長層内への取り込まれ具合を実験的に求めた.投入方法としては,1)Alを単独で,2)InーAl合金の形で,3)GaAs基板上にAl蒸着して,の3つを用いた.その結果,1)2)の方法では,成長層中にはほとんどAlは取り込まれないこと,3)の方法では,ほぼ状態図から予想される傾向と一致してAlが固相中に入ることが判明した.成長に先立つ溶液の冷却によって過飽和度をつけることは,温度差法では本来必要がない.そこで,012°Cの溶液温度降下幅によるAlの成長層中への取り込まれかたを比較したが,違いはみられなかった.これらの事実は,In溶媒中では,Alが溶液内に均一に溶けていないことを示唆する.成長したInGAAlP層はX線マイクロアナライザによる組成分析の結果,基板全体にわたって均一というものではなく,まったくAlが含まれていない部分が見られた.この結果と一致して,PLやCL測定からもInGaAlPとInGaPの2つのスペクトルが同じ基板上で観測された.基板上に均一に成長させるための条件を見いだすことが今後の課題である.量子井戸構造の作成に向けて,InGaP/GaAs多層薄膜の成長条件と成長層膜厚の関係を実験的に求めた.その結果,成長温度で格子整合する成長層組成のとき,平坦で結晶性の良い薄膜が得られることが,SEM,X線回折およびPL測定より明らかになった.得られた最小膜厚は,現在のところ約200Aである.しかしながら,X線サテライトピ-クは観測されていない.CLスペクトルの電子線加速電圧依存性から成長層の吸収係数や真の発光スペクトルを求める方法を検討,考察した.この方法は,多層成長膜の各層の結晶性などを非破壊で評価する有効な手段となり得る.
RNA結合タンパク質の機能障害を介した選択的神経変性機構の解明

前年度までにマウス生体内神経細胞を標的としたRNA標識技術最適化を検討した。原生生物Toxoplasmagondii由来のUPRTをCre-loxP制御下で特定の神経細胞に誘導発現可能なUPRTTgマウスと全神経細胞、小脳プルキンエ細胞でそれぞれCreリコンビナーゼを発現するNestin-Creマウス、Pcp2-Creマウスを交配し、組織特異的にUPRTを発現するマウスを樹立した。更にグリア細胞にCreリコンビナーゼを発現するGfap-Creマウスを樹立し、4-TUを腹腔内に投与する量、濃度、投与後に脳脊髄組織を回収するまでの時間などのパラメーターを振って、4-SUが最も効率的にRNAに取り込まれる条件を確立した。その後、標識した全神経細胞、全グリア細胞、小脳プルキンエ細胞に由来する標識RNAを次世代シーケンサーで網羅的な解析を行った。全神経細胞の場合には、特徴的なRNA発現プロファイルが得られることが分かった。一方、小脳プルキンエ細胞のように、標識する細胞の数が少ない場合には、非特異的に混入するRNAの影響を強く受けることも明らかとなった。このため、手法の改良が必要となり、今年度は4-SUを介したクロスリンク法を導入することで、特異的なRNAを識別する手法を検討した。様々な条件検討を行って、次世代シーケンサーで確認したところ、標識する細胞の数が少ない場合でも、標識したRNAだけを選択的に抽出できることが確認できた。現在、脊髄小脳変性症モデルとUPRT Tgマウスを交配し、神経変性の過程で変動するRNAを解析中である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。1)マウス生体内神経細胞を標的としたRNA標識技術最適化の検討原生生物Toxoplasmagondii由来のUPRTをCre-loxP制御下で特定の神経細胞に誘導発現可能なUPRTTgマウスと全神経細胞、小脳プルキンエ細胞でそれぞれCreリコンビナーゼを発現するNestin-Creマウス、Pcp2-Creマウスを交配し、組織特異的にUPRTを発現するマウスを樹立した。また、グリア細胞にCreリコンビナーゼを発現するGfap-Creマウスとも交配したマウスも樹立に成功した。その後、4-TUを腹腔内に投与する量、濃度、投与後に脳脊髄組織を回収するまでの時間などのパラメーターを振って、4-SUが最も効率的にRNAに取り込まれる条件を確立した。小脳であれば、2匹分で十分ラベルされたRNAが回収できることを確認した。脳全体やグリア細胞の場合であれば1匹分で十分量のRNAが回収でき、腹腔から投与した4-TUが脳血管関門を通過し、各種神経細胞中のRNAに取り込まれることが分かった。2)各神経細胞の高精度RNA発現・RBP標的プロファイル作成と細胞種ごとの特徴付け神経細胞へのRNA標識法を確立した後、各神経細胞に由来するRNAを回収し、次世代シーケンサーで網羅的な解析を行う予定であった。すなわち、全神経細胞、全グリア細胞、小脳プルキンエ細胞に由来する標識RNAを十分量回収し、現在シーケンスを行っている。それぞれ2サンプルずるシーケンスしており、今後情報解析を行って、再現性を確認するとともに、各サンプルの性状を明らかにする予定である。研究開始当初予定していた通り、必要なモデル動物を樹立し、また4-TUを腹腔内投与した場合に脳神経細胞内のRNAがラベルされ、またこれを回収してシーケンスするに十分量が得られることが確認できた。現在、各神経細胞から回収したRNAをシーケンス解析中であり、おおむね順調に進展していると判断できる。1)マウス生体内神経細胞を標的としたRNA標識技術最適化の検討昨年、原生生物Toxoplasmagondii由来のUPRTをCre-loxP制御下で特定の神経細胞に誘導発現可能なUPRTTgマウスと全神経細胞、小脳プルキンエ細胞でそれぞれCreリコンビナーゼを発現するNestin-Creマウス、Pcp2-Creマウスを交配し、組織特異的にUPRTを発現するマウスを樹立した。今年度は、グリア細胞にCreリコンビナーゼを発現するGfap-Creマウスとの交配も行い、4-TUを腹腔内に投与する量、濃度、投与後に脳脊髄組織を回収するまでの時間などのパラメーターを振って、4-SUが最も効率的にRNAに取り込まれる条件を確立した。2)各神経細胞の高精度RNA発現・RBP標的プロファイル作成と細胞種ごとの特徴付け神経細胞へのRNA標識法を確立した後、各神経細胞に由来するRNAを回収し、研究分担者鈴木が、次世代シーケンサーで網羅的な解析を行った。非標識の全神経細胞、標識した全神経細胞、全グリア細胞、小脳プルキンエ細胞に由来する標識RNAを比較した。その結果、全神経細胞の場合には、特徴的なRNA発現プロファイルが得られることが分かった。このため、手法の改良が必要となった。現在、非特異的に混入したRNAをできるだけ除去し、かつ情報解析の段階でも見分けられるように改善を図っており、来年度も継続する予定。すでに、マウス生体内神経細胞を標的としたRNA標識技術を確立している。

これを用いて、特定の神経細胞特異的な標識を行い、すでに網羅的シーケンスも行った。その結果、細胞数が少ない場合には、非特異的なRNAの混入の影響を強く受けることが判明したが、すでに改善策を検討している。このため、おおむね順調に進展していると判断できる。前年度までにマウス生体内神経細胞を標的としたRNA標識技術最適化を検討した。原生生物Toxoplasmagondii由来のUPRTをCre-loxP制御下で特定の神経細胞に誘導発現可能なUPRTTgマウスと全神経細胞、小脳プルキンエ細胞でそれぞれCreリコンビナーゼを発現するNestin-Creマウス、Pcp2-Creマウスを交配し、組織特異的にUPRTを発現するマウスを樹立した。更にグリア細胞にCreリコンビナーゼを発現するGfap-Creマウスを樹立し、4-TUを腹腔内に投与する量、濃度、投与後に脳脊髄組織を回収するまでの時間などのパラメーターを振って、4-SUが最も効率的にRNAに取り込まれる条件を確立した。その後、標識した全神経細胞、全グリア細胞、小脳プルキンエ細胞に由来する標識RNAを次世代シーケンサーで網羅的な解析を行った。全神経細胞の場合には、特徴的なRNA発現プロファイルが得られることが分かった。一方、小脳プルキンエ細胞のように、標識する細胞の数が少ない場合には、非特異的に混入するRNAの影響を強く受けることも明らかとなった。このため、手法の改良が必要となり、今年度は4-SUを介したクロスリンク法を導入することで、特異的なRNAを識別する手法を検討した。様々な条件検討を行って、次世代シーケンサーで確認したところ、標識する細胞の数が少ない場合でも、標識したRNAだけを選択的に抽出できることが確認できた。現在、脊髄小脳変性症モデルとUPRT Tgマウスを交配し、神経変性の過程で変動するRNAを解析中である。今後は、全神経細胞、全グリア細胞、小脳プルキンエ細胞に由来する標識RNAについてシーケンスの結果がで次第、対照と比較し、神経細胞やグリア細胞に特異的とされるRNA分子について明瞭な差異があるかどうかなどライブラリーの質の検討を行う。小脳プルキンエ細胞についてはPCP2遺伝子など特異性のある遺伝子群の発現量について解析する。その上で、小脳プルキンエ細胞に発現するRNAの特徴を明確にする。例えば、Ataxin-2遺伝子については、特異性はないものの高発現していることが予測される。また、非コードRNAを含め、特異的に発現するRNA分子の質と量や、週齢による差異について明らかにする。また、幾つかの候補を選択し、in situ hybridizationで結果の検証を行う。一方で、疾患モデルマウスを用いた変性神経細胞特異的に発現変動するRNA分子の特定を進める。特に小脳プルキンエ細胞の変性に伴うRNA発現変化を追うため、小脳変性の生じるモデル動物の作製に入る。このため、アデノウイルスベクターを使って変性を生じうる遺伝子を導入するためのコンストラクトを作製し、実際にマウスに導入することで疾患モデルとしての妥当性を検証し、発症時期などを明確にする。今年度、改良中のRNA標識技術の確立を引き続き行う。また、神経変性疾患モデルであるSCA1マウスを導入済みであり、すでにUPRTマウスと交配中である。