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戦前期アジア主義の変容と「日本の記憶」 ―― 郷土とアジアの視点から ――

佐賀・アジア主義人脈のふたつの流れ、ときに強い反発を招いた大隈重信の合理主義と江藤新平、島義勇らの狂おしいまでの非合理的な熱情、このふたつの極端の間で揺れ動きつつもアジアへの独特の思いを貫いたのが佐賀・九州出身の明治の青年たちであったことを明らかにした。佐賀・九州出身の副島八十六(大隈の側近・南洋・インド専門家)、田中丸善蔵(南洋貿易にも大きな役割を果たした佐賀出身実業家)、石橋正二郎(久留米・世界的企業ブリジストン創業者)らの近代南方進出に果たした郷土人脈の役割に着目、彼らの抱いた南方イメージと開拓精神を、地方の視点から検証・再定置した。本年度は、主として明治期のアジア関連団体である「東邦協会」、大正期日印協会、南洋協会等の活動実態、関係・後継団体、企業などを取り巻く人物に関する基礎的な史資料調査に重点を置き研究を実施した。「東邦協会」の実質的な代表発起人副島種臣をはじめとする主要メンバー、副島八十六、福州組事件周辺人物として佐賀出身の山口五郎太らに着目。さらにその後副島八十六が「南方専門家」、日印協会理事として頭角を示すと、軌を一にしたかのように田中丸善蔵らによる南洋関係企業活動が活発化したことについて、史資料所在状況、研究整理などを行った。とりわけ地元佐賀とともに「東邦協会」、「日印協会」の活動拠点である東京、第一次大戦下の南洋貿易株式会社と田中丸善蔵らを視野に入れた史資料状況について調査を実施、地元での紹介など成果還元も試みた。また、アジア主義の大きな伏流といわれる鍋島直正から江藤新平、副島種臣らを源とする佐賀閥アジア主義とあわせて、島津斉彬、西郷隆盛らに連なる薩摩閥がいかに合流・展開し、1930年代へとつながっていくのかをめぐる、基礎的な裏付け史資料収集を実施している。南洋専門家として登場する以前の副島八十六、孫文、樋口一葉らをめぐる、明治期の思潮背景についても先行研究・史料の考察をすすめている。さらにこれらと並行して、海外連携共同研究パートナーであるインドネシア国立ガジャマダ大学の連携研究者らと連携、佐賀・九州という郷土ならではの視点をふまえた、日本=アジア関係史における位置付けについて、特にアジア地域からの視点を踏まえた助言を受けた。特に本研究が射程とする明治以降の日本人および日本の対外政策の及ぼした事跡や影響、南方各地に残る「日本の記憶」、対日観についての情報を共有交換討議をすすめている。今後の国内外各地域現地調査の具体的可能性についても検討、研究の中間とりまとめをすすめている。本年度は、前年度の明治期アジア関連団体(東邦教会ほか)をとりまく郷土ゆかりの人物等についての調査を踏まえて、それらの後継となっていったと考えられる諸団体・人物に関する悉皆的基礎資史料調査を実施した。本年度は特に九州・佐賀といった郷土・地域との関わりに力点を置いて、これまで本研究代表がその解明に取り組んできた郷土ゆかりの人物、日印交流に大きな足跡を残した副島八十六、佐世保・佐賀・博多など北部九州地域を基盤とした事業から南洋貿易にシフトし、大正期経済的南進の傑出した存在となった田中丸善蔵についての未解明の事績等に関する調査を継続深化させた。それととともに、今年度はさらに北部九州から華北、満州、さらにジャワへと活動域を拡大した石橋正二郎など郷土ゆかりの各人物の対アジア認識、その言動・事績に顕れたアジア主義的な側面の有無を明らかにするための事績・事業・思潮などの析出に努めた。アジア諸国からみた日本のアジア関与・歴史認識についても、インドネシアの歴史研究者の対日観と人的交流に着目、現地インドネシアにおいて成果の一部を発表している。今年度は勤務先の学部改組・既存学部の教育・運営業務と併行した改組・新学部準備に伴う業務が重なり、まとまった調査研究時間が必要な国内外調査・研究に取り組むことが困難であった。しかし逐次研究計画を見直し修整することで研究の進捗をおおむね順調に達成することができた。中長期の国内外調査に代えて可能な限り短期の調査計画を臨機に立て、資史料収集・聞き取り・意見交換に努めた。さらに収集した資史料の読み込み分析に努めるとともに、業務をやりくりすることで今年度2回の国内外国際学会等での中間成果発表を実施できた。さらに新たに着手した久留米出身の石橋正二郎と戦前期アジアとの関わりについて成果の一部を論文として発表している。本年度は日本=東南アジア関係史における郷土のアジア主義再考という課題取組みの中で析出された特徴的な佐賀・九州要因の再定置考察総括を行い、成果還元取組みました。代表者はこれまで郷土ゆかりの副島八十六、田中丸善蔵、石橋正二郎ら三人の南方開拓の先駆者の半生を調査、継続発表・公刊してきましたが、本科研研究企画集成として「佐賀大学地域間交流分析に基づく佐賀地域の歴史文化研究ー地域学の発展に向けて(交流プロジェクト・伊東昭弘代表・佐賀大学地域学歴史文化研究センター)」の助成により、一般・市民の方々にも手に取りやすいかたちで刊行発信、本科研企画成果社会還元ができました。(『佐賀・九州の南方開拓者たち』海鳥社平成29年)平成29年1月21日には佐賀県有田町にて佐賀大芸術地域デザイン学部の支援を受け学術講演・シンポ「佐賀・九州から見た近代日本の南方関与」を開催、国内外研究者の連携協力で国内外研究動向の地域発信を行いました。

佐賀・九州郷土ゆかりのアジア主義者らの非合理的なまでの狂おしい熱情は、アジア侵略の陥穽と隣り合わせの危うさも持ちながら、草の根レベルでのアジア主義の理想に結実します。一方で南・東南アジアを射程に入れた平和的経済南進を唱道し南洋に活路を見出した明治リベラリストの気骨あふれる先駆的企業人らをも輩出している事実があります。従来知られることのなかった佐賀・九州人脈の多様な伏流の中に、良質なアジア提携と欧米との協調・平和的経済交流を併せ持つ「アジア主義」を創出しうる可能性を明らかにする途上にあります。大隈に代表される合理主義と江藤・島の流れをくむ激しい伝統回帰の熱情、この佐賀の育んだ両極的な特性の解明と近代日本・アジアに与えた影響の分析を通じて、近代日本の「アジア主義」の限界と可能性を明らかにしようと引き続き研究を継続、地域連携のもとでさらに国際的な成果発信と交流を準備しています。研究実績の概要にもふれたように、平成29年1月には研究成果の地域社会還元の一環として佐賀県有田町(九州陶磁文化館)において、科研補助金とともに佐賀大芸術地域デザイン学部の支援を受け学術講演・シンポ「佐賀・九州から見た近代日本の南方関与」を開催しました。ここでは国内外研究者の連携協力により本研究分野の国際的な研究動向と成果をわかりやすく紹介してもらうことで、中間成果を地方・郷土から発信を行うことができました。さらに代表者は、これまで佐賀・九州郷土とゆかりの深い南方開拓の先駆者の半生を調査、継続発表・公刊してきましたが、専門的な学術研究としての刊行発表であったこともあり、今回の郷土・地域社会の視点に立った本科研研究企画の集成・還元を行うことが課題としてありました。そこで平成28年度、佐賀大学地域間交流分析に基づく佐賀地域の歴史文化研究ー地域学の発展に向けてー(交流プロジェクト・伊東昭弘代表・佐賀大学地域学歴史文化研究センター)」の助成により、一般・市民のみなさんも手に取りやすいかたちでとりまとめ刊行発信、研究成果の地域社会還元に、一部ながら寄与をすることができたと考えます。(『佐賀・九州の南方開拓者たち』海鳥社平成29年)こうした研究成果の地域・郷土社会還元を実施するなかで、当該年度に達成途上の課題として残されたのは以下の点です。すなわち本研究企画の眼目であるアジア主義の地域・郷土要因を、国際的・国内外の地域連繋的な視点から再定置し、郷土・地域史のなかのアジア主義をグローバルな文脈のなかで議論再考・海外との連携により発信還元することです。アジア・海外を視野に入れたさらなる国内外への発信還元が喫緊の課題です。佐賀・アジア主義人脈のふたつの流れ、大隈のときに強い反発を招いた合理主義と江藤新平、島義勇らの狂おしいまでの非合理的な熱情、このふたつの極端の間で揺れ動きつつもアジアへの独特の思いを貫いたのが佐賀・九州出身の明治の青年たちであったことを明らかにした。本研究代表者は、いずれも佐賀・九州出身の副島八十六(大隈の側近・南洋・インド専門家)、田中丸善蔵(南洋貿易にも大きな役割を果たした佐賀出身実業家)、石橋正二郎(久留米・世界的企業ブリジストン創業者)らの近代南方進出に果たした郷土人脈の役割に着目、彼らの抱いた南方イメージと開拓精神を、地方の視点から検証・再定置することを目指した。本研究は平成29年1月に、副島・田中丸・石橋らに加えて先行研究者の成果(後藤乾一、1977年、1987年、2007年他)を踏まえ佐賀県有田にゆかりのある南方調査専門家原口竹次郎、熊本県人吉出身の草の根のアジア主義者(インドネシア独立戦争で戦死)
社会的交渉に基づくマルチエージェント型生産管理システムの提案とその実証的特性解析

消費者ニーズの多様化や複雑化,さらに製品ライフサイクルの短命化が進むにつれ,製造業を中心とするサプライチェーン全体において,納期の短縮化や変種変量生産への迅速な対応などが求められるようになってきた.そこで本研究では,人間社会が有する社会的交渉をアナロジーとしたシステム理論に基づく新しいマルチエージェント型生産管理システムを提案し,その有効性について実規模のラインを対象とした実証的特性解析により定量的に示すことを試みた.その結果,従来の自律分散型に基づくフレームワークとは異なる特徴と優位性をもった新しい生産管理システム構築のための方法論を確立するとともに,その有用性や実用性についても実証的に確認することができた.消費者ニーズの多様化や複雑化,さらに製品ライフサイクルの短命化が進むにつれ,製造業を中心とするサプライチェーン全体において,納期の短縮化や変種変量生産への迅速な対応などが求められるようになってきた.そこで本研究では,人間社会が有する社会的交渉をアナロジーとしたシステム理論に基づく新しいマルチエージェント型生産管理システムを提案し,その有効性について実規模のラインを対象とした実証的特性解析により定量的に示すことを試みた.その結果,従来の自律分散型に基づくフレームワークとは異なる特徴と優位性をもった新しい生産管理システム構築のための方法論を確立するとともに,その有用性や実用性についても実証的に確認することができた.消費者ニーズの多様化や複雑化,さらに製品ライフサイクルの短命化が進むにつれ,製造業を中心とするサプライチェーン全体において,納期の短縮化や変種変量生産への迅速な対応などが求められるようになってきた.そこで我々は,現実の社会が有する効率性と安定性,頑健性などに着目してきた.そして本研究では,システム内の構成要素のインタラクションとして,我々が日常社会で実践している社会的交渉を抽象化し適用することで,現実の社会と同様に大規模で動的に変容する生産環境下において,効率性と安定性を同時に実現できるような優れた性能を示す生産管理システムの新しい方法論について明らかにすることを目的として研究を進めた.具体的には,マルチエージェントシステムによる社会的交渉モデルに関する基礎的考察により理論的枠組みの整理・体系化を進めた後,マルチエージェント型の社会的交渉プロトコルに関し生産管理に特徴的な資源配分タスクに合ったものを検討した.また,生産管理における基準計画策定モジュールである日程計画プロセスに,組合せ最適化手法の一つである勝者決定オークションシステムの組込み等を検討し,タイムバケット単位での最適なスケジュール解の導出について検討を進めた.消費者ニーズの多様化や複雑化,さらに製品ライフサイクルの短命化が進むにつれ,製造業を中心とするサプライチェーン全体において,納期の短縮化や変種変量生産への迅速な対応などが求められている.そこで我々は,現実の社会が有する効率性と安定性,頑健性などに着目し,システム内の構成要素のインタラクションとして,我々が日常社会で実践している社会的交渉を抽象化し適用することで,現実の社会と同様に大規模で動的に変容する生産環境下において,効率性と安定性を同時に実現できるような優れた性能を示す生産管理システムの新しい方法論について明らかにすることを目的として研究を進めた.具体的には,昨年度進めた社会的交渉モデルに関する理論的枠組みの整理・体系化をベースとして,今年度は,加工ワークを決定する方法として納期余裕と段取り時間を競り値としたディスパッチング型オークション方式を用いた社会的交渉プロトコルの運用系生産管理システムへの統合化,および生産管理プロトタイプシステムの検討を実施した.その結果,リアルタイムスケジューリングと並行して短期的な予測シミュレーションを実施することの有効性を確認し,さらに,現実の大規模機械加工ジョブショップラインを対象として,提案に基づき試作した生産管理システムの効果を明らかにできた.また,本システムの導入前と後でラインの性能を定量的に比較し,提案法の効果や有効性について検証・まとめを行った.
処理粒度・粒質を問題に適応可能な超並列計算機アーキテクチャの研究

本研究で得られた成果は以下の通りである。(1)処理粒度可変方式の研究:超並列問題の多種多様な論理的粒度に物理的粒度を整合性を失うこと無くマッピングさせるためのシステム構成方式について研究した。まず、物理的粒度を仮想化することによって粒度のマッピングにおける効率低下を防ぐアーキテクチャを構築した。次に、ハードウェア・アーキテクチャによって定まる処理フロー長や処理幅という物理的粒度の可変化方式について考察を加えた。処理粒度の制御は、従来、コンパイラによる静的解析情報及びOSによる動的解析情報のみに頼る方法で行われていた。本研究では、これらの解析情報をハードウェア要素によるシステムの動的再構成に適用する方式を提案した。(2)処理粒質の問題への適応方式の研究:超並列問題から静的/動的に内在する処理フローを抽出・解析し、その定性的属性(粒質)に沿った処理機構の動的再構成方式について研究した。具体的には、コントロール(命令)フローやデータフローの抽出であり、その依存関係に関する情報をハードウェア構成要素の動的割り付けに利用し、問題に最適なハードウェア要素のスケジューリングや負荷分散を行うことのできるアーキテクチャを構築している。論理的な命令フローやデータフローを物理的な処理ユニットやメモリユニットにダイレクトマッピングできる問題適応方式についても考察を加えた。
アナトリア古代遺跡出土遺物の産地推定

アナトリア古代遺跡出土遺物の産地推定のプロジェクトは、1997,1998,1999年の3年間行った。このプロジェクトでは、アナトリア古代遺跡から出土する青銅製品、鉄製品、鉛製品、ガラス製品、黒曜石製品、土器の原材料の産地を同定する作業を行った。まず最初として、出土地点の明確な遺物の採集が基本であり、その作業に重点を置いた。遺物を層位的に採集した遺跡は、アナトリアの中央部に一するカマン・カレホユック遺跡遺物である。また、出土層位の明確な遺物を、カイセリ近郊のキュルテペ遺跡、塩湖の東岸のアジェムホユック遺跡の発掘調査の協力により入手、分析資料として使用した。カマン・カレホユック遺跡では第I層-オスマン・トルコ時代、第II層-鉄器時代、第III層-中期・後期青銅器時代、第IV層-前期青銅器時代の4層を検出している。プロジェクトの基本作業は4点に絞られた。第一点目は、考古学的立場から、カマン・カレホユック発掘調査を行い、遺物の確認、出土遺物の整理、周辺遺跡の遺物の採集、第二点目は分析用遺物の分類、第三点目は、採集、分類、抽出した遺物の分析、第四点目は、考察、である。第一点目は、大村が中心となりカマン・カレホユックの層序をもとに遺物の採集を行った。第二点目は、平尾、平井、赤沼、中井、望月等が中心となり、中近東センター付属アナトリア考古学研究所で採集遺物の分類を行った。第三点目は平尾、平井、赤沼、中井、望月等が中心となりアナトリア考古学研究所で蛍光X線装置による採集遺物の組成分析を行った。蛍光X線装置以外による分析は、採集遺物日本へ持ち帰り組成分析を行っている。当プロジェクトによって、現段階で下記の点が明らかとなった。1)鉄器時代の銅の産地、2)鉄器時代の鉄の産地、3)全時代の黒曜石の産地、4)鉄器時代の土器の胎土の産地、等である。これらの他にも今後継続して行われる分析により他の遺物の産地も明らかになるものと思われる。アナトリアの古代遺跡出土遺物の産地推定は、考古学、分析化学の両面から、調査、研究を行った。考古学の調査研究では、研究代表者の大村幸弘が、中央アナトリアに位置するカマン・カレホユックで発掘調査を行った。1986-1997年までの発掘調査で、4層(第I層オスマン・トルコ時代[1617世紀]、第II層鉄器時代[前12前4世紀]、第III層中期・後期青銅器時代[前2012世紀]、第IV層前期青銅器時代[前3020世紀])を確認している。今シ-ズンは、各層から出土している土器、青銅製品、鉄製品、ガラス製品、骨角製品、黒曜石製品等の整理を層序ごとに行い、産地推定のための基礎データの作成に重点を置いた。高浜秀は、第II層鉄器時代出土の青銅製品、骨角製品の、雪嶋宏一は、同じく第II帽出土の青銅製鏃の整理、研究を行い、アナトリアと黒海沿岸地域の文化的影響および関係を示唆し、考古学的側面から産地推定を試みた。分析化学の調査研究では、平尾良光が中心となり、1986-97年のカマン・カレホユツク葉IIIV層出土の青銅製品の採集、整理、分析を行った。

分析は現在継続中であるが、層序により産地に相違が見られることが明らかになりつつある。また、平井昭司、赤沼英男は第II層出土の鉄製品の採集、整理、分析を行つた。両者の分析により、各層の鉄製品の化学組成が明らかになるとともに、鉄製造技術も解明されつつある。特に赤沼の研究によって、ヒッタイト帝国時代に鋼の製造技術が存在していたことが明らかになったことは特筆すべきである。一方、中井泉等の研究グループは、カマン・カレホユック第I、II層出土のガラス製品、土器の組成分析を試みた。望月明彦は第IIV層出土の黒曜石製品、前年度、中央アナトリアの黒曜石の産地で採取した資料の分析、比較を待つた。1998年度のアナトリア遺跡出土遺物の産地推定は、カマン・カレホユツク出土の遺物を中心に研究が進められた。カマン・カレホユック発掘調査は、6月22日から9月25日にかけて行われ、産地推定の分析に使用する遺物は、8月15日から二週間に渡って採集、分類が行われた。カマン,・カレホユックの発掘調査では、オスマン・トルコ時代の第Ia層、第Ib層、鉄器時代の第IIa層、第IIb層、第IIc層、第IId層、第IIIa層、第IIIb層、鉄製品、青銅製品、銅製品、黒曜石製品、ガラス製品、鉛製品を中心に採集を行った。考古班の大村幸弘は、6月1日にカマン・カレホユツクのキャンプに入り、調査の準備を行った。6月15日から20日にかけて遺物を採集する北区の保護屋根の取り外しを行い、6月22日から本格的発掘に入った。同時に産地推定の遺物採集を目的として、発掘作業で検出された遺物の精査、抽出、分類も行った。青銅製品、銅製品、鉛製品の産地推定では研究分担者である平尾良光、榎本淳子が8月28日9月7日の期間キャンプ地で、考古班によって確認、分類された遺物の整理を行った。分析用サンプルの抽出も行われ、現在それらの一部は東京国立文化財研究所で分析中である。鉄製品に関しては、研究分担者である赤沼英男、平井昭司が8月28日9月7日の期間力マン・カレホユツク第I層、第II層、第III層出土の鉄製品の分類、整理を行い、その一部を日本に持ち帰り現在分析中である。黒曜石製品に関しては、望月明彦が担当した。カマン・カレホユツク出土の黒曜石、中央アナトリアの遺跡で採集した黒曜石製品の分類、整理をキャンプ地で行った。分析には蛍光エックス線が用いられた。中央アナトリアの原産地で採集した黒曜石の分析は終了しており、それとカマン・カレホユツク出土の黒曜石の比較研究が行われた。カマン・カレホユックのガラス製品では、中井泉が中心となり蛍光エックス線を使用しながら研究を進めた。ガラス製品に関しては、第I層、第II層、第III層出土の遺物が分析に使用され、産地推定のための基礎的データが作成された。1999年度のアナトリアの古代遺跡出土遺物産地推定調査は、9月12日から9月25日まで行った。今シーズンの調査目的は、二点あった。第一点目はカマン・カレホユックで分析用の遺物を採取すること、第二点目はその遺物の組成分析を行い産地同定を行うことであった。カマン・カレホユックに於ける分析用遺物の採取は大村幸弘が中心となり行った。大村は、カマン・カレホユックで現在まで確認されている4文化層、つまり第I層-オスマン・トルコ時代、第II層-鉄器時代、第III層-中期・後期青銅器時代、第IV層-前期青銅器時代の各建築層毎に鉄製品、青銅製品、ガラス製品、鉛製品、土器の取り上げを行った。研究分担者の平尾良光、平尾の助手として参加した榎本淳子は、各建築層から採取した青銅製品、鉛製品を建築層毎に分類、記録、撮影を行った。
心筋におけるミトコンドリア融合阻害の病態的意義の解明

心筋細胞においてミトコンドリアは細胞の代謝、エネルギー産生及び細胞死に重要である。ミトコンドリアは、分裂・融合を繰り返し、恒常性を維持している。ミトコンドリア内膜融合阻害因子MIFIの発現を各臓器において検討し、心臓において優位な発現を認め、さらに心病態において発現の低下を認めた。心筋特異的にMIFIを過剰発現させた動物を作製した結果、生理条件下においては、心重量・心エコーによる心機能解析・分子マーカーの変化を認めなかったが、大動脈縮窄により圧負荷を作製し、ストレス応答を検討したところ、心重量の有意な増大と左室駆出率の有意な低下を認め、ストレス応答において障害的に働く事が明らかとなった。ミトコンドリア内膜融合阻害因子(Mitochondrial Innermembrane Fusion Inhibitor,以下MIFI)の心筋における役割を明らかにする事を目的に研究を進めた。MIFIの発現は圧負荷モデルマウスにおいて低下した。心筋特異的MIFI過剰発現マウス(MIFI-TG)を作製し3ラインを得た。MIFI-TGは生理的条件下において心エコーを用いた評価による心機能の変化や心重量の増大等の心肥大の増悪は認めなかった。さらに電子顕微鏡を用いたミトコンドリアの観察を施行したが、明らかなミトコンドリアの断片化の所見は観察されなかった。また心筋のストレス分子マーカーであるANFの発現にも差を認めなかった。MIFI過剰発現の病態的意義を明らかにするために、大動脈縮窄術を用いて圧負荷に対する反応を評価したところ、心肥大反応の増悪と心エコーによる左室内径短縮率の低下を認め心不全の増悪を認めた。さらにANFとI型コラーゲンの有意な上昇を認め、分子マーカー的にも心肥大と線維化の増悪がMIFI-TGにおいて示唆された。また過酸化脂質マーカーである4-HNEの染色により酸化ストレスの亢進が明らかとなった。以上の結果より、MIFIの心筋特異的過剰発現は生理条件下においては有意な病態は惹起しないが、圧負荷ストレスに対しては、病態を増悪させる方向に働き、その機序に酸化ストレスが関与している事が示唆された。またさらに心筋細胞レベルにおける解析を進めるべく、MIFIのアデノウィルスベクターを作製した。心筋細胞において、ミトコンドリアは細胞の代謝、エネルギー産生及び細胞死において重要な役割を果たしている。ミトコンドリアは、分裂・融合を繰り返し、その恒常性を維持している。ミトコンドリア内膜融合阻害因子であるMIFIの発現を各臓器において検討したところを心筋特異的に過剰発現させた動物を作製した。遺伝子改変マウスは、メンデルの法則に従って得られ、心筋においてウェスタンブロットにより発現の上昇を確認した。生理条件下においては、心重量・心エコーによる心機能解析・分子マーカーの変化を認めなかった。大動脈縮窄により圧負荷を作製し、ストレス応答を検討したところ、心重量の有意な増大を認め、心肥大の分子マーカーであるANFの発現の上昇を認めた。また、コントロールと比較し、左室駆出率の有意な低下を認めた。以上の結果を、第124回日本薬理学会近畿部会において、演題名「新規ミトコンドリア融合阻害因子MIFIの心筋特異的過剰発現マウスを用いた生理・病態機能解析」にて発表した。さらに、ミトコンドリア関連遺伝子の発現を検討した。その結果、MIFI過剰発現マウスにおいてPGC-1aの有意な発現の低下を認めたが、ミトコンドリア分裂因子であるDRP-1、Fis-1の発現は圧負荷により低下したものの、コントロール群と比較して有意差を認めなかった。これらの結果を、第125回日本薬理学会近畿部会において演題名「ミトコンドリア融合阻害因子MIFIによる心病態の増悪機序に関する解析-遺伝子発現プロフィール解析-」にて発表した。最後に、MIFIの遺伝子発現に影響を及ぼす化合物を、化合物ライブラリーを用いてスクリーニングした。その結果、心毒性が認められるアントラサイクリン系抗癌剤においてMIFIの発現が上昇する事が明らかとなった。今後、薬剤性心筋症モデルを用いて、その意義を明らかにし、論文投稿する。循環器内科基礎本研究において、生体におけるGain-of-function研究は、1解析すべきラインが確立され、タンパク質の発現が明確に確認できていること。2生理条件科下において、心機能に影響をおよぼさない事3ストレス時に病態を増悪させることの以上の重要な3点が確認された事より解析の重要なステップはクリアできている。現在、ミトコンドリアの断片化が生理条件下において確認できていない点が、唯一の問題点であるが、今後、病態の増悪を認めている圧負荷心において電子顕微鏡を用いた解析を進めていく事により、心筋でのミトコンドリア断片化におけるMIFIの意義が明らかになると予想している。

現在はGain-of-function研究に焦点をあてており、Loss-of-function研究に関しては、現在キメラマウスの作製を進めている段階である。細胞レベルの実験においては、アデノウィルスの作製をすすめている。以上を鑑み、概ね順調に経過していると考える。今後、以下の如く研究を推進する。1心筋特異的MIFI過剰発現マウスによるGain-of-function研究は、1圧負荷後の病態増悪の機序2他の心病態モデルにおける意義の解析の2点を中心に解析を進める。前者においては、MIFI過剰発現後の圧負荷心におけるミトコンドリアの形態と機能の解析を中心に実験を遂行する。さらに、他の機序についても探索的アプローチを進める。後者においては、心筋梗塞モデルと加齢モデルを用いた解析を進めていく。2生体におけるLoss of function研究については、ノックアウトマウスの作製を引き続き進める。KOMPより購入したMIFI遺伝子をLac-Zと置換したES細胞を用いて、キメラマウスを作製しライン確立をめざす。3細胞実験に関して、作製したアデノウィルスを用いて心筋細胞におけるミトコンドリアの形態変化の解析をすすめる。過剰発現マウスのストレス負荷後の電子顕微鏡解析のための費用および遺伝子欠失マウス作製の遅れによる動物飼育費用が減少したことより182945円の次年度使用額が生じた。次年度使用額については、主として電子顕微鏡解析費用と遺伝子欠失マウスの作製のための飼育費として使用する予定である。
固体と分子にまたがる中間相の物理(メゾスコピック粒子の電子物性)

今年度は計画研究のうちA01班(理論)が科学研究費補助金の交付願を提出することを失念したので、A01班の全員をA02班に吸収するとともに、A02班を理論グル-プと実験グル-プに分割し研究を進めることにした。またこの理論グル-プには、総括班,A02,A03班から研究費を分け、実質上計画研究に変更がないようにしたので、研究遂行上には何の支障もなかった。また公募研究も全員各班に編入し、計画研究と一体になって研究を遂行して頂くように組織化し、研究能率の向上につとめた。研究成果の発表と共同研究の強化を目的として、A02班理論グル-プ,A02班実験グル-プ,A03班とも1回の研究会を開催した。また総括班を中心として、全体会議を2回開催し、研究の促進・情報交換の緊密化をはかった。これらの研究会の詳細は、その都度総括班で報告書の形で編集し、文部省に報告するとともに全研究者に配付し、研究遂行上の便を図った。特筆することは、昨年のはじめC_<60>にNaやKを添加すると超伝導性を示すことが報告されて以来、急激にフラ-レンの研究が活撥化し、当研究班でもかなりの方々が、当初の目的の研究以外にフラ-レンの研究を行なうようになり、研究会に於いての報告がかなりなされた。またシリコンの電場発光が昨年発表され、それについて活撥な討論が研究会でなされたのが印象的であった。今年度の研究経過および成果についての詳細は、現在印刷中であり、3月末には文部省へ提出する予定であるが、主要発表論文数だけでも、100件以上におよんでいる。
血球膜のマルチスケールモデリングと接着現象の解明

本研究では,血球の接着挙動および高せん断場での挙動を明らかにするために,1)脂質二重層とスペクトリン層の滑りを考慮した二層膜モデルの構築,2)膜の半透性を考慮した浸透圧による膨張・収縮の定式化の提案,3)実験的な接着力評価のための逆問題推定手法の提案を行った.これにより,高せん断場において,血球膜面で局所的に滑り速度が発生し,また膜応力の局所的な違いが浸透挙動に影響を与えることを明らかにした.さらに,三次元的な変形場を考慮した接着力逆推定の可能性を示すことができた.平成25年度は、粗視化MD法あるいDPD法など分子動力学および統計力学に立脚するモデル構築を行い、生体膜のマルチスケール・フィジックスに基づく方法論の基盤であるミクロモデルを構築する予定であった。しかしながら、将来的には、ミクロモデルと連続体スケールとの連成を行う必要があるため、今年度は、熱揺らぎに起因する分子運動を取り入れる事が可能な連成モデルの理解を文献調査を通じて深めていった(例えば、Atzberger et al.,J. Comput. Phys., 224, 2007, 1255; Atzberger, J. Comput. Phys., 230, 2011, 2821)。これらの方法を拡張する事により、熱揺らぎに由来する膜面の挙動を自然に取り込む事ができると考えられる。血球を構成する生体膜は半透膜であるため、周囲溶液の溶質濃度の局所的な変化が膜面挙動に強く影響する事が調査していくうちに分かった。そこで、今年度は上記の取り組みに加え、浸透圧による血球変形モデルの構築を行った。流れと血球変形の力学的な連成にImmersed Boundary法(Peskin, J. Compu. Phys., 10, 1972, 252)を適用するとともに、界面で不連続を持つ溶質濃度の輸送に関してもImmersed Boundary法を基に定式化を組み込んだ。これにより溶質濃度に由来する血球の膨張・収縮を周囲流体の運動と併せて解析する事が可能となった。H26年度は,浸透圧により膨張・収縮するカプセルの数値解析手法の開発に引き続き取り組み,赤血球が溶質の濃度差由来の浸透圧によってどのように時間的に変化するか過去の実験結果と比較する事により,提案手法の妥当性の検証を行った.結果より,浸透圧による溶媒透過による血球体積の時間変化は膨張および収縮において実験結果と良く一致した事から,提案手法の妥当性を検証できた.また,せん断流場において,浸透圧による血球の膨張および収縮がその変形度合いにどの程度影響を与えるか調査した結果,血球膜上の張力の空間分布により,膜を隔てた浸透圧にも分布ができ溶質濃度も空間的に分布した状態で定常解に達する事が明らかになった.この事より,膜面でのスペクトリン層および脂質層の滑りに影響を与える事が示唆された.ミクロモデルとの連成に関しては,理論モデルと数値モデルの構築を引き続き行っており,その一端として,膜面の応力を流体場に反映させる従来型のImmersed Boundary法(Peskin, J. Comput. Phys., 25, 1977, 220)に代わって,粒子速度が与えられる際にその速度を流体場のモデルに組み込むPenalty型のImmersed Boundary法(Kim & Peskin, Phys. Fluids, 19, 2007, 053103)の実装を行い,プログラムの検証を行った.これにより,ミクロモデルで決定される膜運動に起因する速度場が与えられた際に,流体場とのカップリングを行えると考えられる.提案した血球膜の脂質二重層とその直下に裏打ちされたスペクトリン層間の滑りを考慮したモデルを用いて,せん断速度場における脂質層とスペクトリン層の面積変化がどの程度異なるか調査した.その結果,脂質層は強い面積抵抗を持つため,せん断速度にほぼ依存せずに膜面積の変化が生じない一方,スペクトリン層は脂質内の膜貫通タンパクをアンカーとして適当な抵抗を持ち面積変化が可能となるため,せん断速度に依存し面積変化が生じた.また,せん断速度に依存して,層間の滑りによるエネルギー散逸が非線形的に増加した.これらより,高せん断場における膜間の滑りを考慮した血球運動のモデル化の重要性を示した.また,狭い流路内を通過する血球膜にどのような滑り速度が働くか調査した.流路内を通過する際に付近の膜面に速い滑り速度が発生し,特に血球後端部が通過する際に非常に速い滑り速度が観察され,血球後端部に大きなシワができ不安定な形状となった.これらより,狭い流路内を通過するような一部高せん断場が形成されるような場合,膜間で滑りが誘起され膜面ひいては血球動態に影響を与えることを示唆した.上記に加えて,本研究主題の一つである血球の接着現象を捉えるための予備的検討として,接着力推定手法の確立を行った.これにより,細胞牽引力顕微鏡(TFM)実験より接着力の空間的分布と強度を得ることが可能となり,提案モデルとの検証・比較を行うことが可能となる.基質を模擬したPAAゲルの深さ方向に任意次数の多項式展開により自由度を確保することで,高精度かつ低コストの解析モデルを提案した.さらに,本モデルを変分問題に基づく逆問題定式化に適用し,接着力の推定を行った.

結果,低次の展開次数で接着力の空間分布と強度をある程度の精度で推定できることを示し,シミュレーションモデルと実験結果による比較検討のための基礎的技術の確立を行うことができた.本研究では,血球の接着挙動および高せん断場での挙動を明らかにするために,1)脂質二重層とスペクトリン層の滑りを考慮した二層膜モデルの構築,2)膜の半透性を考慮した浸透圧による膨張・収縮の定式化の提案,3)実験的な接着力評価のための逆問題推定手法の提案を行った.これにより,高せん断場において,血球膜面で局所的に滑り速度が発生し,また膜応力の局所的な違いが浸透挙動に影響を与えることを明らかにした.さらに,三次元的な変形場を考慮した接着力逆推定の可能性を示すことができた.ミクロモデルの理論モデルおよび数値モデルの構築を行うかたわら,マクロモデルである流体場との連成解析方法に関して理解を深めるとともに既存手法の実装を行い,最終的な連成に向けた統合的な連成解析手法の基盤を積み上げている.また,浸透圧由来の血球膨張・収縮がせん断場における膜変形に与える影響など,膜面でのスペクトリン層および脂質層の滑り現象にともなう重要な因子を提示している.計算力学,バイオメカニクス,数値流体力学最終年度においては,当初の予定通り,ミクロモデルとマクロモデルの連成を行い,膜面でのスペクトリン層および脂質層の滑りが,血球変形および壁面への粘着にどのような影響を与えるかを調査する予定である.当初の計画を変更し、平成25年度はミクロモデルとマクロモデルの連成方法に着目し文献調査を行いその理解を深めていった。また、接着現象において、接着面付近での周囲溶質濃度の局所的な分布が、浸透圧由来の血球変形を誘起する事実より、これらを取り扱える解析手法の構築に努めた。このため、平成25年度の当初予定していたミクロモデルを用いた解析は平成26年度より行う予定である。研究を進めていく上で必要に応じて研究費を執行したため当初の見込み額と執行額は異なった.今後は当初の計画通り、熱揺らぎを含む血球運動を記述するミクロモデルの構築を行うとともに、マクロモデルとの連成解析を行っていく予定である。研究計画に支障はなく,前年度の研究費も含め,当初予定通りの計画を進めていく.研究を進めていく上で必要に応じて研究費を執行したため当初の見込み額と執行額は異なった。研究計画に変更はなく、前年度の研究費も含め、当初予定通りの計画を進めていく。
核磁気共鳴スペクトロスコピ-法による放射線治療効果の測定方法の研究

東芝磁気共鳴イメ-ジング装置(MRTー200/RX型)を使用して腫瘍中の核種リン化合物を定量することにより、放射線抵抗癌の治療効果を早期に判定することができる先行指標を求めることを目標としてファント-ム実験を行った。本研究では、研究目的を達成するために位置情報とスペクトル情報を同時に得ることのできるSpectroscopic Imaging法を採用した。収集デ-タはMR装置本体からデ-タ解析システム(VAX stationII)に転送し、NMR1ソフトウエアにより解析処理を行った。得られた結果は、以下のとおりである。(1)検出感度の空間分布MRSにより治療効果判定において重要なことは、種々のリン化合物について再現性のある定量的評価を可能にすることである。この目的のために、各種リン化合物について空間的感度分布を求めた。ボクセルサイズは3x3x3cm^3とし、5x5マトリックスのファントム中心のボクセル(3,3)のPi信号の絶対強度及び絶対積分強度で規格化した感度分布をPi、PCr、γーATP、αーATP及び、βーATPについて求めた。(2)pH校正曲線Piの緩衝溶液にPCrを加えた溶液のpHを種々調整して、PCrを基準物質としたPiの化学シフトを求めた。測定結果は他の研究者の報告と実験誤差の範囲内で一致した。治療患者の腫瘍細胞内のpHの経過観察は、治療効果の早期判定に有用な情報をもたらすことが期待される。(3)検量線単位ボクセル(3x3x3cm^3)もNMR信号とリン化合物の濃度との関係を示す検量線をPiとPCrについて求めた。NMR信号を絶対強度及び絶対積分強度とした場合にはPの濃度と良い相関(r≧0.99)で直線関係が認められた。(4)最適パルス繰り返し時間(t_r)の決定t_rを種々変化させて、Pi、PCr、γーATP、αーATP及び、βーATPについて信号の絶対強度及び絶対積分強度を求めた。その結果、t_rを500msとすることが最適であると判断された。
「語り」についての臨床教育学的研究-Langeveldの「コロンブス」を通して

教育や心理臨床の場で人が出会うとき、つねに交わされている「語り」をどのように理解するか、臨床教育学的な観点から次の研究をおこなった。(1)教育学と臨床心理学との学際的な視点から、語りを解釈する方法論を検討した。(2)保育園等でLangeveldの心理テスト「コロンブス」を実施し、その発展としてのフィールドワークをおこない、現場における臨床データに基づいて、解釈の方法論についての検討を進めた。平成19年度は、1)関連する文献の収集・検討、および、2)「コロンブス・テスト」を用いた調査とその検討をおこなった。1)関連する文献として、「語り」の解釈とその方法論に関係する文献を、教育学・心理学・精神分析学・社会学等、学際的な領域からの収集をおこなった。「コロンブス」における「語り」が、書かれたテクストではなく、関係の中で生成されるものであることに着目し、「語り」の体験に着目したレビューをおこなった。また、投影法の一種と捉えられる「コロンブス」において、Langeveldが「投影」に込めた実存主義的な意味に基づき、未来への成長に向かう投企がおこなわれる場として投影法をとらえなおす可能性を示し、論文「M. J. Langeveldの「コロンブス・テスト」における投影法理解とその意義について-臨床教育学が心理臨床に示唆するもの-」として発表した。2)十数名の女子大学生どうしによる「コロンブス」の試行をおこなった。また、その経験を踏まえて、平成20年度以降の計画を先取りする形となったが、研究者により、幼稚園児・小学生・成人に対する「コロンブス」の実施を10名程度おこなった。研究協力者との話し合いを経てその記録を検討し、このテストが幼稚園児も含めて、かなり積極的に取り組んでもらえるものであるという手応えを得ることができた。平成20年度は、1)「語り」を解釈する方法論について文献に基づく検討、2)「コロンブス・テスト」を用いた大学性への調査、3)保育園児を対象とした「コロンブス・テスト」の関与観察的調査をおこなった。1)関係性のなかで生み出される「語り」について、精神分析学・社会心理学・体験過程療法にまたがる学際的検討をすすめ、その一部を論文「関係性の投影スクリーンとしての身体」として発表予定である。また、投影法としての「コロンブス」をTATと比較した論文を発表した。2)十数名の女子大学生および数名の大学院生による「コロンブス」の試行をおこない、幼稚園児から小学生との実施経験を、研究協力者とともに事例研究論文にまとめた。就学前の子どもたちにも十分取り組んでもらえるテストであるとの感触を得ることができた。3)保育園との連携により、保育園児に対する「コロンブス」の実施を重ねた。保育園児たちのさまざまな表現活動の展開を、映像記録等により研究素材として蓄積しつつある。また、定期的に保育園を訪れることにより、保育園児たちが生み出す自由な「語り」について、関与観察的なアプローチによって、研究代表者自身との関係性のなかでの解釈の可能性を探る調査活動を続けている。このような保育現場との連携活動をもとに、今後学会発表・論文作成をおこなう予定である。1.フィールドワークと事例研究本年度は、子どもを主な対象としてつくられた「コロンブス・テスト」を、実際に保育園児たちに実施し、得られたデータからの検討をおこなった。また、コロンブスの作成にあたってLangeveldが"ともに手を取り合って子どもの心の世界を渉猟する"ことを意図していたこと、またコロンブスのもととなったTATが、精神分析における"自由連想"に導きやすくする手段であったという、本来の意義に基づいて、自ら保育園の子どもたちとかかわるフィールドワークを30回以上おこない、そこで得られる子どもの「語り」についての記録・検討を進めた。2.事例にもとつく方法論的研究学会発表「共時性ー関係の中で語りを理解する視点」では、子どもたちのコロンブス的な「語り」を解釈する方法論について、保育園での事例にもとつく検討をおこない、ユング心理学における「共時性」の概念を「語り」を理解するという新しい観点から捉えなおす意義を示した。また、図書の一部として発表した論文「関係性の投影スクリーンとしての身体ーフォーカシングにおける語りとその意味」においては、フォーカシング事例にもとつく会話の詳細な検討を通じて、これまで進めてきた「語り」を解釈する方法論についての仮説をさらに支持する例証を示した。3.今後に向けて先述した保育園・幼稚園でのフィールドワークは現在も継続しており、そこでの事例をもとに、さらに箱庭療法学会にて「関係性の中で移行するイメージの多層性」を発表するなど、臨床心理学・臨床教育学・保育学における研究成果の発表を続けていく予定である。
フィロウイルスの粒子形成過程を阻害する抗体の研究

マールブルグウイルス(MARV)の表面糖蛋白質(GP)特異的モノクローナル抗体を作出し、ウイルス出芽阻害活性の有無を解析した。その結果、通常の中和活性は持たない抗体の中に、MARV粒子の感染細胞からの出芽・放出を顕著に抑制する抗体が存在することが明らかとなった。これらの抗体存在下で増殖可能なエスケープ変異体を選択し、GPに導入されたアミノ酸変異を調べた結果、ムチン様領域の大規模な欠損またはfurin開裂部位の点変異が認められた。以上の結果より、抗体によるMARV感染抑制の新規メカニズムとMARVのユニークな免疫逃避メカニズムが明らかとなった。通常のウイルス感染性中和試験とは、細胞外でウイルスに結合した抗体がウイルスの細胞侵入を阻害する「細胞外中和活性」を検出する方法である。したがって、ウイルス感染性中和と感染防御抗体の従来の概念は、「細胞外中和」の有無によって形成されてきた。しかし、これまでに申請者は通常の中和試験では活性が殆ど認められない抗体でも、ウイルス感染(吸着・侵入)後に培養細胞の上清に抗体を添加しておくと、ウイルスの増殖を著しく減少させる現象を見出した。本研究は、フィロウイルス(エボラウイルスおよびマールブルグウイルス)感染モデルを用いて、抗体が感染細胞表面でウイルスの出芽・粒子形成過程を抑える「細胞表面」中和の可能性を探り、抗体による新たな中和原理の発見を目指す。これまでに、通常の中和活性(細胞外中和)の無い抗体(マールブルグウイルスに対する抗体)でも、単層培養したVero E6細胞にマールブルグウイルスを感染させた後に、抗体を含む培地で培養すると、細胞表面に発現したウイルス表面糖蛋白質GPに結合してウイルスの出芽を抑えるものが存在することを明らかにした。また、これらの抗体存在下で選択されたエスケープミュータントには、エピトープを完全に欠失するあるいはGPの開裂阻害するなどユニークな変異が認められた。さらに、エボラウイルスに対する抗体の中にも出芽阻害する抗体が存在することが示唆された。通常のウイルス感染性中和試験とは、培養細胞外でウイルスと抗体を混合することによって、ウイルスに結合した抗体がウイルスの細胞侵入を阻害する「細胞外中和活性」を検出する方法である。しかし、これまでに申請者は通常のウイルス中和試験では活性が殆ど認められない抗体でも、ウイルス感染(吸着・侵入)後に培養細胞の上清に抗体を添加しておくと、ウイルスの増殖を著しく減少させる現象を見出した。本研究は、フィロウイルス感染モデルを用いて、抗体が感染細胞表面でウイルスの出芽・粒子形成過程を抑える「細胞表面」中和の可能性を探り、抗体による新たな中和原理の発見を目指す。これまでに作出したフィロウイルス(エボラおよびマールブルグウイルス)の表面糖蛋白質(GP)に対するマウスモノクローナル抗体について、非増殖性シュードタイプVesicular Stomatitis Virus (VSV)および増殖性シュードタイプVSVを用いて、通常の中和試験および細胞表面の中和試験を行った。その結果、通常の中和活性(細胞外中和)の無い抗体(マールブルグウイルスに対する抗体)でも、単層培養したVero E6細胞に増殖性シュードタイプVSVを感染させた後に、抗体を含む培地で培養すると、抗体が細胞表面に発現したGPに結合してウイルスの出芽が抑えられ、プラック形成抑制効果を有することが明らかとなった。予想通り、ウイルス感染(吸着・侵入)後に培養細胞の上清に抗体を添加することによって認められるウイルス増殖抑制は、出芽を抑えることによってウイルスの拡散を防いでいるからであることが明らかとなり、さらなるメカニズムの解析に向けた充分な情報を得ることが出来たから。さらに、エピトープの同定・電子顕微鏡による観察、VLPを用いた実験にも成功し、当初平成25年度に予定していた研究計画の一部も実施済みであるため。(1)マールブルグウイルスだけでなく、エボラウイルスに対する抗体にも同様の性質を持つ抗体が存在するはずなので、モノクローナル抗体の作出を継続する。(2)出芽阻害メカニズムが、GPの未知の機能阻害によるものなのか、細胞側の因子が関係するのかについて、探索する。(3)動物実験によって、このような抗体が感染防御免疫に関係するのか否かを明らかにする。24年度同様に、主に消耗品費と旅費に使用する。特に、本物のウイルスを用いた感染実験は、アメリカのBSL4施設で行うため、アメリカへの渡航費を計上する。
染色体一本鎖テロメア測定によるカリブ海で多発するパーキンソニズムの早期診断

染色体の末端のテロメアDNAはヒトの場合10kbp程度の長さがあり、最末端部分は3'末端が数百塩基ほど突出した-本鎖テロメアDNA (G-tail)である。このG-tailは、DNA傷害として認識されないように二本鎖のテロメアDNAが開裂した中にもぐり込み、染色体の末端がループ構造(t-loop)を形成して染色体保護として働いている。そのため、テロメアG-tailの長さが短くなるとt-loop構造の安定性が悪くなり細胞レベルでの様々な機能不全が現れ、その組織における機能不全に結びついている可能性があり、G-tailの長さを指標に細胞の機能レベルの指標となる可能性がある。本研究の目的は、カリブ海などでは、サワーソップ果実の摂取を主原因とするパーキソンニズムの多発が問題になっており、これらの疾患のリスク評価が末梢血をもちいたG-tail長の測定により可能し、それらの進行を早期に回避できる早期診断システムを構築することである。そこで、果実を摂取していない健常人群とすでにパーキソンニズムが発症している患者群から末梢血を採取してDNAを精製しテロメアG-tail長を測定することを計画し、カリブのGuadelopeに連絡を取り、患者からのサンプル採取について手続きを行った。さらに、カリブ諸島におけるパーキンソニズム発症患者の血液及び脳脊髄液を採取して保存できるシステムを構築するために必要なインフォームドコンセントを得る為の手続き、書類作成、データベース構築などは行ったが、受け入れ病院の体制確立の問題解決に時間を要していおりサンプル採取までには至っていない。しかし、日本側の準備としては、患者の血液サンプルから簡便かつ効率よくDNAを精製する方法を検討して、測定誤差が少ないDNA精製法を開発できた。それらを用いてCV値が5%以内の誤差範囲で高感度かつ迅速にG-tail長を測定できる体制は確立できた。本年度は、血液および脳の組織からのG-tail測定のためのG-tail測定法の確立を行い、カリブ海などのパーキソニズム発症地域での疾病とG-tailの関係を明らかにすることを目的とした。初年度は、特にサンプルの保存方法、輸送方法について検討して、輸送過程におけるサンプルの分解などを未然に予想し、貴重な患者の検体が無駄にならないように十分に対策を行うこととした。1.G-tail測定のための脳組織、血液サンプルからのDNA精製方法の検討●脳組織を用いて液体窒素にて冷凍させた脳組織から粉砕器を用いて、組織を均一に粉状にしたものを用いたが、粉砕しない場合に比べてDNAの精製純度がきわめてよかった。粉砕組織からのサンプル溶解方法も改善し、G-tail測定に適したDNA精製の方法を確立した。2.脳の生検サンプルを用いたG-tail測定法の確立●インフォームドコンセントの得られた脳の組織を用いて、G-tail測定が感度、測定の直線性、定量性のいずれにおいても十分なレベルに確立できた。G-tail測定においては、最低1マイクログラムの未変性ゲノムDNAが必要であった。3.血液サンプルの保存状態がG-tail測定へ及ぼす影響についての検討●カリブ海からの患者の血液の輸送を行うことを想定し、室温でのサンプルの安定性、冷凍での安定性、それらがG-tailに及ぼす影響を検証し、冷凍状態ではG-tail長測定に問題があることがわかり改善中である。
分泌型ムチン自身がマルチマ-形成に関わる酵素である可能性について

我々は、従来、単に粘膜被覆物質としての認識しかなかった分泌型ムチンが酵素としての活性をもつという新規の発想をここに提唱した.これは、あくまでも一次止血に関わるvon Willebrand factor(vWf)の酵素活性領域との相同性から推察したものであるが、もし、そうであれば、ムチンの酵素活性はおそらく自己のマルチマ-形成に関わることが予想された。この研究成果は酵素学領域への新しい研究素材提供という基礎的な面だけでなく、粘稠な気道分泌物を伴う慢性呼吸疾患の治療薬の開発研究に新しい方向性を示し得ると考えた.本研究では,まず,MUC2のD3とGSTのfusion蛋白を作成し、酵素-基質実験を行うことにした.さまざまな方法を用いて,pGEX2T vectorにサブクローニングしようとした.しかし,サブクローラングはうまく行かず,現在,方法を検討中である.関連実験として,粘液を抗原にして,モノクローナル抗体を作成した.その抗体は,分泌型粘液に反応し,糖鎖をエピトープとして認識していることがわかった.病態のmucinとして慢性呼吸器疾患患者の肺洗浄液または喀痰を用いて,サンドイッチELISAを行った.これらのサンプルは長崎大熱帯医学研究所呼吸器内科の大石医師から御提供頂いた。その結果,その抗体はすべての疾患の粘液と反応し,治療薬投与後にその量が減少することがわかった.今後,病態時と正常時のhumanのBAL中の粘液に対する種々の抗体を作成し,Western blotting等の方法により定量後,BALの粘度を測定し、その関連をみる予定である.我々は、従来、単に粘膜被覆物質としての認識しかなかった分泌型ムチンが酵素としての活性をもつという新規の発想をここに提唱した.これは、あくまでも一次止血に関わるvon Willebrand factor(vWf)の酵素活性領域との相同性から推察したものであるが、もし、そうであれば、ムチンの酵素活性はおそらく自己のマルチマ-形成に関わることが予想された。その結果,その抗体はすべての疾患の粘液と反応し,治療薬投与後にその量が減少することがわかった.今後,病態時と正常時のhumanのBAL中の粘液に対する種々の抗体を作成し,Western blotting等の方法により定量後,BALの粘度を測定し、その関連をみる予定である.