hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
貝食性オサムシと陸貝の多様性，適応，共進化

貝食性オサムシ亜族における巨頭化,狹頭化といった採餌形態の多様化と,陸貝相の対応関係を明らかにするために,中国,韓国,アルメニア,モロッコにおいて野外調査を行った.中国内陸部には,多様な形態の貝食性オサムシ亜族と陸貝(有肺類)が生息するが,巨頭型のオサムシ亜族が生息するのは,小型のオナジマイマイ科陸貝が豊富な場所であった.また,巨頭型・狹頭型のオサムシ亜族が共存する場所では,オナジマイマイ科の種間で著しい形態の多様化がみられ,捕食圧によって,陸貝の適応放散が起こったことが推察された.貝食性オサムシ亜族における巨頭化,狹頭化といった採餌形態の多様化と,陸貝相の対応関係を明らかにするために,中国,韓国,アルメニア,モロッコにおいて野外調査を行った.中国内陸部には,多様な形態の貝食性オサムシ亜族と陸貝(有肺類)が生息するが,巨頭型のオサムシ亜族が生息するのは,小型のオナジマイマイ科陸貝が豊富な場所であった.また,巨頭型・狹頭型のオサムシ亜族が共存する場所では,オナジマイマイ科の種間で著しい形態の多様化がみられ,捕食圧によって,陸貝の適応放散が起こったことが推察された.(1)中国における貝食性オサムシ亜族と陸産貝類の調査貝食性オサムシ亜族と陸貝相の関係を調べるために,2012年6月に,研究代表者曽田が,研究協力者2名(ホシザキグリーン財団林成多,東北大学森井悠太)とともに,河北省,北京市での野外調査を行った.貝食性オサムシ亜族では,コウガオサムシ(巨頭型),アオカブリモドキ(狭頭型),マンダラオサムシ(狭頭型)が採集された.陸産貝類は16種が採集され,コウガオサムシの餌としては,Cathaica fasciola(殻径15mm程度)が多数確認された.アオカブリモドキが産する場所では,Bradybaena (Acusta) ravida(殻経21mm程度)が比較的大きい貝であったが,全般に小型の陸貝が多かった.これに関係してか,他の産地では大型となるアオカブリモドキが非常に小型であった.小型の陸産貝類が多いのは,降水量の少ない気候条件と関係しているものと思われるが,そのために,小型や巨頭型の貝食性オサムシにとって有利な餌条件となっている可能性がある.また河北省の北西部では,貝食性と考えられているクギヌキオオズオサムシ(巨頭型)も採集されたが,生息環境には陸産貝類が生息する形跡が見あたらなかった.雨季など特定の時期に軟体動物が出現するか,あるいはコウガオサムシが貝類以外の動物を餌としている可能性が考えられた.(2)クビナガオサムシ亜属Acoptolabrusの形態進化東アジア東部,日本に分布するクビナガオサムシ亜属における狭頭型,巨頭型の分化過程を解明するために,2012年7月,連携研究者高見泰興が韓国において野外調査を行った.さらに,本亜属の標本に基づく形態調査と分子系統解析を行い,狭頭型の中から,ひとつの巨頭型の系統が分化したことを明らかにした.本研究では,餌の陸貝の種・形態構成と貝食性オサムシ亜族の種・形態の間の生態的・進化的対応関係を解明することを目的としている.本年度は,貝食性オサムシ亜族と陸貝の分布・生態・進化に関する以下の調査研究を実施した.海外調査に関しては,2013年6月に,研究代表者曽田,連携研究者千葉,研究協力者森井悠太(東北大学)が,中国科学院動物学研究所の共同研究者とともに,中国遼寧省の本渓市および丹東市においてオサムシ(カブリモドキ亜属・クビナガオサムシ亜属)と陸貝の採集調査を行った.また2013年9月には,アルメニア共和国内において,研究代表者曽田,研究協力者加藤真(京都大学)が,アルメニア科学アカデミーのGayane Karagyan博士とともに,オサムシと陸貝の採集調査を行った.とくにオサムシ亜族の中でも最大級のサイズを持つ貝食性オサムシProcerus scabrosusと,その餌となる大型陸貝Helixの生息地を調査した.また,2014年2月に研究代表者曽田は北京市の中国科学院動物学研究所の共同研究者・Hongbin Liang博士を訪問し,本研究に関する打合せを行い,Liang博士らが採集した貝食性オサムシ亜属サンプルの検討を行った.これまでの調査で得られたサンプルを用いて,以下の分析を行った.捕食者に対応して殻形態が多様化したと考えられる中国産オナジマイマイ科の陸貝について,分子系統解析を行い,捕食者に対する防御形態と考えられる急速な殻形態の多様化が起こっていることを明らかにした.また,中国産の貝食性オサムシ亜族について分子系統解析を行い,巨頭型と狹頭型の形態分化が複数の亜属内で繰り返し起こってきたことを検証した.2014年3月にアルメニア共和国から共同研究者のKaragyan博士を京都大学に招聘し,貝食性オサムシの染色体に関する共同研究を行った.本年度は以下の3つの海外調査を実施した.(1)中国内陸部における貝食性オサムシの多様性と陸貝相:2012年6月16日30日に,中国山西省,陝西省,寧夏回族自治区,甘粛省において調査を行った.

調査は中国科学院・Hongbin Liang博士のグループと共同で行い,日本からは研究代表者曽田と,東北大学千葉聡(連携研究者)・森井悠太(研究協力者)が参加した.山西省,陝西省内では,貝食性のオサムシとしては大型のカブリモドキ類が得られたのみであったが,寧夏,甘粛においては,数種の貝食性オサムシが得られた.とくに甘粛省文県においては,巨頭型・狹頭型の貝食性オサムシの生息地を精査し,そこに生息する陸貝の多様性を確認した.陸貝では,オナジマイマイ科の種の形態が非常に多様化していることが分かり,捕食者の影響が示唆された.(2)韓国におけるクビナガオサムシ亜属の調査:2012年8月21日25日,韓国智異山におけるクビナガオサムシ類の調査を,神戸大高見泰興(連携研究者)が,韓国の共同研究者,金重洛博士と行った.しかし悪天候のため,目的の種を採集することができなかった.(3)モロッコにおけるクチボソオサムシの分布と陸貝相:2012年12月1日7日に,モロッコで貝食性のクチボソオサムシCathoplius asperatusとその餌となる陸貝の調査を行った.調査には研究代表者曽田,神戸大学高見(連携研究者),東北大学森井悠太(研究協力者)が参加した.カサブランカから,アガディールまでの大西洋岸の数カ所で,野外観察を行った.この地域の唯一の貝食性オサムシであるクチボソオサムシは,陸貝の豊富な場所の石下などに見出された.クチボソオサムシは頭部の狹頭化が顕著で,比較的小型の貝に頭を突っ込んで捕食することが確認された.以上の野外調査で得られた試料について,形態解析,分子系統解析を行った.中国の調査に関しては,巨頭型のコウガオサムシの生息状況の調査は順調に進んだが,河北省内の調査では貝類相の貧弱な地域で,十分なサンプルが得られなかった.また,計画では,秋季冬季に,モロッコを中心とする地中海沿岸での野外調査を実施する予定であったが,現地協力者との連携がとれず,H23年度の実施を断念した.これらの点から,計画よりやや遅れていると自己評価した.25年度が最終年度であるため、記入しない。本研究計画では,比較的アクセスの難しい地域の陸貝が豊富で,多様な貝食性オサムシが生息する石灰岩地帯や乾燥地帯における調査を主としている.そのため,調査旅行の実施が現地の状況や気象条件によって困難な場合もあり,昨年度は十分な調査が行えず,計画に遅れが生じていた.今年度は,中国甘粛省,モロッコという本計画の主要な調査地へ赴くことができ,昨年度の遅れをやや挽回できた.調査で得られた試料の解析がまだ完了してはいないが,オサムシと陸貝双方のの系統的・形態的多様性に関して,とくに中国内陸部での新しい知見が得られており,おおむね順調に進展していると自己評価できる.次年度には,中国においては,巨頭型と狭頭型のヨロイオサムシ群の種が共存する甘粛省南部を中心に野外調査を行い,両型の共存と陸産貝類相の対応を明らかにすることが主要な課題となる.この調査については,中国の共同研究者と十分に打ち合わせを行い,6月中に実施する.また,地中海沿岸地域については,スペイン,イタリアの共同研究者と連絡をとり,詳細な情報を得てモロッコを中心とした野外調査を11月12月頃に実施する.25年度が最終年度であるため、記入しない。来年度は最終年度となるが,中国東北部およびアルメニアでの野外調査を行い,異なる貝食性オサムシと陸貝相の関係を明らかにしたい.また,オサムシと陸貝の形態解析・分子系統解析を進め,両者における形態多様化と系統進化の関係を明らかにし,形態多様化に捕食者と被食者の相互作用が関与しているかを検討したい.また分析結果に関しては,速やかに論文化して公表することに努める.さらに海外調査に現地で協力した共同研究者との交流,共同研究を推進するために,共同研究者の日本への招聘も行う.
悪性脳腫瘍に対する免疫療法ー脳内免疫担当細胞の分子生物学的解析とその臨床応用ー

過去5年間に、悪性グリオ-マ患者に対して行なわれた養子免疫療法は、合計35症例に達し、治療終了後87カ月間再発していないmeningeal carcinomatosis患者や、58カ月間も再発の無い神経膠芽腫患者をはじめ10数名の外来通院患者が得られている。最近では、各種in vitroテストにより制癌剤に反応しない患者に、LAK細胞を用いた局所養子免疫療法を6カ月毎繰り返し、制癌剤による維持療法と同程度かあるいはそれ以上の成績を得ている。この様に、リンパ組織が皆無で、主要組織適合抗原が存在しない脳内に発生した悪性グリオ-マに免疫療法を行なうには、能動免疫を期待した治療方法により、養子免疫療法の方が有用であると推測される。一方、わが教室では、既に30以上のグリオ-マ株を樹立しており、その中には世界中で未だ10株も樹立できていない髄芽腫細胞株を2株も樹立できている髄芽腫は、発症早期に髄腔内播種をきたし、四肢麻痺から死亡する事が多く、この病態を治療するために考えられた髄芽腫播種モデルの作製にも成功している。そして、ヒト髄芽腫細胞に対するマウスモノクロ-ナル抗体もすでに作製できており、髄腔内に浮遊する髄芽腫細胞とリンパ球との鑑別診断に用いている。また、髄芽腫関連抗原の抽出とその同定を試みると共に、髄芽腫細胞の神経系あるいはグリア系への分化誘導と、腫瘍関連抗原の表現性や癌遺伝子動態について検索中である。今後、この神経系に分化しているヒト髄芽腫細胞(ONSー76やONSー81)は、インタ-フェロン・ガンマにてHLAーDR抗原やHLAーABC抗原を表出あるいは増強しているので、髄芽腫細胞の分化と、IFNーβ、ーγおよびIRFー1、ー2遺伝子発現との関連についても検索すると共に、ヒトoligodendroglioma細胞上に存在するILー2レセプタ-の同定(Proc Natl Acad Sci USA 87:6584ー6588,1990)と、その情報メカニズムについて研究を行なう予定である。
細胞増殖の停止シグナルを受容する転写制御因子の同定

D-typeのcyclin dependent kinase (cdk4,cdk6)の活性阻害蛋白質であるp15(INK4B)は、TGFβ刺激によってその発現が上昇し、cdk4ないしcdk6に結合してそのキナーゼ活性を阻害することで細胞の増殖を停止させると考えられており、TGFβの作用を媒介する重要な分子であると考えられている。そこでまず、TGFβ処理によるINK4BのmRNAレベルの変動について調べた。TGFβ処理によって増殖が停止する肝細胞癌由来の細胞株HepG2をTGFβ処理した際のINK4BmRNAレベルをRT-PCR法により調べたところ、TGFβ処理後4時間で誘導され、18時間でさらにそのレベルが上昇していた。対照としたINK4A遺伝子(INK4ファミリーに属する)のmRNAレベルは常に一定であった。また、蛋白質合成阻害剤であるシクロヘキシミド存在下でもINK4BmRNAの誘導が観察されたことから、この発現誘導がTGFβのレセプターを介したシグナル伝達系のすぐ下流に位置する現象であることが推測された。次に、すでに単離したマウスINK4Bのプロモーター約700bpについて塩基配列を決定し、その活性をluciferase assayによって検討した。プロモーターを結合したreportar plasmidをHepG2細胞にtransfectすると、TGFβ処理によってluciferase活性が5倍程度上昇した。そこで、プロモーターのさまざまな部分を欠失させたreporter plasmidを構築して同様のassayを行ったところ、TGFβによる活性の上昇には少なくともプロモーター上の2つの領域が関与していることがあきらかになった。現在、これらの領域に結合する転写制御因子の同定を試みている。このような因子はTGFβによる細胞増殖の停止のシグナルを直接受容するものである可能性が高いと考えている。
種分化の室内実験 : ショウジョウバエの雑種に由来する種の分離

アナナスショウジョウバエとパリドーサショウジョウバエは南太平洋の島嶼部(サモア・トンガ・フィジー)において同所的に分布する近縁種である(同所的集団)が、他の地域の熱帯・亜熱帯では前者のみが生息する(異所的集団)。実験室で人工的に作出された雑種には雌雄ともに妊性があるので、なぜこれら2種の集団は遺伝子が混じり合って融合してしまうことなく、同所的に生存可能なのか生態学的・進化学的に謎であった。本研究ではこの疑問に答えるべく、雑種に由来する実験室集団を確立・維持し、これまでに分子マーカーを用いた遺伝学的な解析を行ってきた。基礎データが蓄積し、現在これらを統計処理することで考察を試みているところである。本年度は以下の点が明らかになった。(1)正逆交配で非対称な交配前隔離が存在し、異所的集団よりも同所的集団の方が隔離の程度は強い(つまり、隔離の強化あるいは生殖形質置換が生じている)。(2)これまでに検出されてこなかった交配後接合前隔離(種間交配における受精率の低下)の存在が示唆された。(3)雑種の生存率や妊性は親種と遜色がないので、自然界では(1)および(2)の隔離によって2種が維持されているものと思われる。これらの研究成果については、現在投稿論文として執筆中である。本研究以前に野外集団の遺伝学的解析(系統樹作成)によって、これら2種間でゲノムの一部に遺伝的浸透があることが分かっていた。しかし、本研究の結果が示唆するところでは、生殖的隔離の原因となるゲノム領域では種間遺伝子浸透が妨げられており、これらによって種が維持されているものと考えられる。つまり、性的隔離および受精率低下の原因遺伝子は、これら2種の種分化を引き起こす「種分化遺伝子」であると言うことができる。本年度はアナナスショウジョウバエとパリドーサショウジョウバエの混合実験室集団を確立するにあたり、さまざまな観点から使用系統の検討・選定を行った。アナナスショウジョウバエにはパリドーサショウジョウバエと同所的な集団と異所的な(熱帯・亜熱帯に汎世界的な分布)集団がある。まず明らかになったことは、形態的特徴から同所的集団にも2つの型があることである。サモア・トンガではアナナスショウジョウバエは体色が黒く、体色の薄いパリドーサショウジョウバエとは容易に区別できる。一方、フィジー・ニューカレドニアではアナナスショウジョウバエの体色はそれほど黒くなく、パリドーサショウジョウバエとも大きくは異ならない。これらの間で種内および種間交配を行うことにより、強い性的隔離は存在するが雑種致死や不妊は示さないことが確認できた。実験結果を数値化するために、産卵数・生存率・精巣の長さ・精子の運動量など、さまざまな適応形質の測定を開始している。また、競争下および非競争下における交配後接合前隔離の存在を明らかにするために、遺伝的マーカーを持ったアナナスショウジョウバエを材料として用いることを考慮し、複数の可視突然変異系統を実験に導入した。一方、実験室集団を確立・維持するための飼育箱を試作し、検討中である。分子マーカーについては、これまでに研究室で蓄積されているデータを検討し、種間で確実に区別のできるPCR-RFLPマーカーを開発しつつある。種特異的な染色体逆位があるため、これを考慮して最終的な分子マーカーの選定を行う予定である。アナナスショウジョウバエには、パリドーサショウジョウバエと同所的に分布して体色の暗い集団と、パリドーサショウジョウバエと異所的に分布して体色の明るい集団が存在する。これら3つの集団間で、これまで交配前隔離(性的隔離)・交配後/接合前隔離(競争的(あるいは非競争的)配偶子間競争)・接合後隔離(雑種適応度)に関して基礎的なデータを収集してきた。これまでにも報告されているように、アナナスショウジョウバエとパリドーサショウジョウバエの間の性的隔離は強いが、その程度は交配の方向によっても異なり、集団が同所的であるか異所的であるかによっても大きく左右される。また、同種内の暗色型と明色型の間にも性的隔離が存在するらしい。これまでこれら2種間で交配後/接合前隔離を調査したという報告はないが、明らかに交配後/接合前隔離が存在することが分かった。さらに、これまでこれら2種の間では接合後隔離がないというのが定説であったが、現在、詳細にパラメータ(生存率・妊性など)を分けて定量しており、検討中である。以上と並行して、これらの集団を区別するための分子(PCR-RFLP)マーカーを開発してきた。アナナスショウジョウバエとパリドーサショウジョウバエを交配して雑種集団を確立し、実験室集団を維持している。各世代における個体のサンプルは冷凍保存してあり、これから遺伝的構成を決定する予定である。これにより、雑種由来の集団がどのように進化するか考察ができるものと期待する。

本研究ではこの疑問に答えるべく、雑種に由来する実験室集団を確立・維持し、これまでに分子マーカーを用いた遺伝学的な解析を行ってきた。基礎データが蓄積し、現在これらを統計処理することで考察を試みているところである。本年度は以下の点が明らかになった。(1)正逆交配で非対称な交配前隔離が存在し、異所的集団よりも同所的集団の方が隔離の程度は強い(つまり、隔離の強化あるいは生殖形質置換が生じている)。(2)これまでに検出されてこなかった交配後接合前隔離(種間交配における受精率の低下)の存在が示唆された。(3)雑種の生存率や妊性は親種と遜色がないので、自然界では(1)および(2)の隔離によって2種が維持されているものと思われる。これらの研究成果については、現在投稿論文として執筆中である。本研究以前に野外集団の遺伝学的解析(系統樹作成)によって、これら2種間でゲノムの一部に遺伝的浸透があることが分かっていた。しかし、本研究の結果が示唆するところでは、生殖的隔離の原因となるゲノム領域では種間遺伝子浸透が妨げられており、これらによって種が維持されているものと考えられる。つまり、性的隔離および受精率低下の原因遺伝子は、これら2種の種分化を引き起こす「種分化遺伝子」であると言うことができる。
自動車リサイクルビジネスにおける戦略性の検討

本研究は,自動車リサイクル市場(静脈市場)を,使用済自動車から生じる外部性の内部化を所有権理論,企業間関係論の観点より検討し,戦略的な市場化・事業化の方法を導出することを目的とした。3年間,企業調査を重点的に行い,企業間連携による経済効率の向上を明らかにしつつ,自動車産業のグローバル性とそれに伴う再資源化の国際展開,そして自動運転など将来の技術への再資源化の対応についても,視野を広げた。そのうえで静脈産業全体の経済性を向上させるには,個別最適の積み重ねによる全体最適の実現が必要であることを導出した。結果として「再生の経営」戦略が機能する「再生の経済」社会システムが必要であることを論じた。本研究は,自動車リサイクル市場(静脈市場)を,経済的費用で分析することでその戦略性を明確化するものである。要するに,使用済自動車から生じる外部性の内部化を所有権理論,企業間関係論の観点より検討し,戦略的な市場化・事業化の方法を導出することを目的としている。その上で静脈市場特有の戦略性の有無について言及を試みるものである。平成27年度は,フィールド調査を重点的に行った。研究手法としては,自動車リサイクルに関する産官学の研究会(任意)の参加と企業訪問(ヒアリング)である。研究会とは,広島資源循環プロジェクトとSR会議のことである。また,企業訪問(ヒアリング)先は以下である。三井金属鉱業(東京都平成27年5月8日),香川県豊島,直島の産業廃棄物処理施設(香川県6月4日),YAMANAKA(神奈川県6月19日), SRテクノ(北海道7月17日),阪神環境システム(大阪7月24日),いその(愛知8月6日),鶴ネット(静岡8月27日),マキウラ鋼業(兵庫12月16日),豊田メタル(愛知平成28年1月21ー22日),日産自動車(神奈川1月27日)である。自動車リサイクルに関連する団体が主催する第24回開催2015NEW環境展(東京平成27年5月29日),第8回アジア自動車環境フォーラム(秋田10月1-2日),IRRSG2015年第4回例会(東京10月16日),第44回東京モーターショー2015(東京10月31日)にも参加し、知見を得た。解体事業者の戦略の考察のため、中古自動車の輸出台数が目覚しいミャンマーでも調査を行った(平成27年8月)。自動車リサイクルビジネスの戦略の考察のために,フィールド調査による実態把握を重ねている。まずは,本研究の社会的位置を明確にした。静脈領域が我々の社会的課題解決の場であり,今後も増加する負の外部性の有価物化を担う産業である事実を確認した。また静脈は社会全体の永続性に貢献する資源有効活用の機能を担っていることを論じた。その上で規模の経済を必要とするリサイクルビジネスにおいては,回収の容易さと徹底性の点で法制度の貢献は大きいことを導出した。具体的な企業行動の分析としては,自動車リサイクルビジネスにおける解体事業の機能を確認し,解体事業者の現状を把握したこと,SWOT分析で外部環境(制度や鉄スクラップ価格)の変化の影響を受けることを確認したこと,製品ー市場マトリックスの観点より現在の事業,今後見込まれる事業を分析したこと,日本製中古自動車が海外に多く流出していることに着眼し,特にグローバル戦略の可能性について検討したこと,解体事業から資源循環事業へ,すなわち元請けとしてのビジネス創造へと静脈産業のドメイン転換が必要なことなどを導出している。その経過で解体事業者だけではなく,最終的なリサイクルに貢献する素材企業も重要な研究対象とし,産業として静脈市場に着眼することにした。なぜならば、動脈市場の戦略が動脈市場と差異があるか否かが,研究者の大きな問題意識でもあり,素材リサイクルがその考察に影響を与えるからである。以上のように自動車の外部性の内部化については,解体事業者のみでなく産業全体に視野を広げ,所有権理論,企業間関係論、またドメインの観点より検討し,本研究の目的である戦略的な市場化・事業化の方法を導出することに近づきつつある。平成28年度も,フィールド調査を重点的に行い、企業間連携による経済効率の向上を明らかにしつつ、全体最適が個別最適ではないことを明らかにした。そのうえで静脈産業全体の経済性を向上させるには、動脈への付加価値が課題であるとし、静脈産業の最終領域である素材産業への考察を加え始めたところである。また,企業訪問(ヒアリングもしくは見学)先は以下である。釧路コールマイン(釧路市、平成28年7月28日)、鈴木商会

石狩事業所(石狩市、平成28年7月29日)、太平洋セメント(東京都平成28年8月8日),太平洋セメント熊谷工場(埼玉県熊谷市平成28年8月19日)、日本シーム株式会社(川口市8月25日),拓南商事(うるま市平成28年9月16日、平成29年3月8日),東京製鐵岡山工場(倉敷市平成28年11月16日),株式会社ツルオカ(小山市、平成28年12月8日)である。また企業訪問のみではなく、自動車リサイクルに関連する団体が主催する第25回開催2016NEW環境展(東京平成28年5月26日),エコプロダクツ2016(東京平成28年12月9日),G7アライアンスワークショップー国際資源循環の促進に向けた公開ワークショップー(東京平成28年12月14日)にも参加し、新たな知見を得た。自動車リサイクルビジネスの戦略の考察のために,フィールド調査による実態把握を重ねている。自動車のような多種多様で勝つ膨大な複合材料を使用する静脈市場は、単体素材を使用する商品や小型家電等と比較し複雑かつ規模も大きい。自動車の静脈を担うのは、解体業、破砕業、中古部品販売業、素材産業である。素材産業とは製鐵事業、精錬事業、セメント事業であり、これらに事業が静脈の利益率向上の鍵となる。平成28年度は、その中でも日本のセメント事業者に着目し考察を加えてきた。なぜならば、セメント事業者は動脈で使用される素材を製造するが、静脈産業の最後の要でもあるからである。使用済自動車が解体、破砕され、再資源化の可能なものを他社が根こそぎ抜き取った最後の部分のシュレッダーダスト(Automobile Shredder Residue、以下ASR)を100%再資源化に活用している。これは我が国の特徴でありアメリカ等の他国では、セメント製造には石灰石等、バージン原料のみを使用していることも興味深い。この要因は、国による廃棄物の埋め立て地の不足容量や再資源化意識の相違にある。以上のことを踏まえ、自動車の再資源化(社会的費用の私的費用化)における意義(付加価値の再生)を、経済的コストの観点より考察し、再生(資源循環)の経済の可能性を探りつつある。研究の方法は、静脈の最後の要であるセメント事業者を考察(史的、資源循環)する。特に意欲的に再資源化活動に取り組んでいるA社を事例に対する詳細な定性調査を行い導出するものである。以上のように自動車の外部性の内部化については,解体事業者のみでなく産業全体に視野を広げ,特に素材産業に注力し、所有権理論,企業間関係論、またドメインの観点より検討し,本研究の目的である戦略的な市場化・事業化の方法を導出することに近づきつつある。本研究は,自動車リサイクル市場(静脈市場)を,経済的費用で分析することでその戦略性を明確化するものである。使用済自動車から生じる外部性の内部化を所有権理論,企業間関係論の観点より検討し,戦略的な市場化・事業化の方法を導出することを目的としている。その上で静脈市場特有の戦略性の有無について言及を試みるものである。平成29年度も,フィールド調査を重点的に行い,企業間連携による経済効率の向上を明らかにしつつ,自動車産業のグローバル性とそれに伴う再資源化の国際展開,そして自動運転など将来の技術への再資源化の対応についてと,視野を広げた。そのうえで静脈産業全体の経済性を向上させるには,個別最適の積み重ねによる全体最適の実現が必要であることを導出した。研究手法としては,自動車リサイクルに関する産官学の研究会の参加と企業訪問(ヒアリング)である。研究会とは,広島資源循環プロジェクトとSR再資源化会議のことである。また,企業訪問(ヒアリングもしくは見学)先は以下である。
赤血球分化と血液型物質の分子発現機構に関する研究

RhならびにDuffy mRNAのスプライシング・マップを完成するとともに、赤血球分化の初期、あるいは後期に出現するアイソフォームを見出した。また、種々のRh cDNAを挿入したMFGベクターによる遺伝子導入実験や各種Rh変異型の遺伝子解析を行い、Rh抗原の赤血球膜への発現機構について検討した。その結果、各Rh抗原の抗原性は、多型性を示すアミノ酸置換とポリペプチド鎖のコンフォーメーションとの相互作用により形成されていることが判明した。さらに、Rh抗原の赤血球膜への発現に際しては、Rh50糖蛋白質をはじめ複数のco-moleculeとコンプレックスを形成することが必要不可欠と考えられた。Rh、Duffyシステムの遺伝子解析にも取り組んだ。Rhシステムについては、RhD遺伝子のエキソン-イントロン構成、プロモーター構造を明らかにするとともに、RhD、RhCE遺伝子の位置的関係と両遺伝子間のスペーサー領域の構造を決定した。Duffyシステムについては、新たなmRNAを同定したが、このmRNAがDuffy遺伝子の主な転写産物であることをつきとめるとともに、赤芽球系細胞と血管内皮細胞における各々の転写開始部位も決定した。なお、赤芽球系細胞の転写開始部位の約40塩基上流にはGATA配列があり、Duffy陰性者ではこのGATA配列にミューティションが生じていることも明らかにした。今回の研究を通し構築することができたRhシステム、Duffyシステムに関する遺伝子情報、赤血球前駆細胞の分化に伴うアイソフォームの変化、抗原の発現機構、抗原のエピトープなどに関する新知見を踏まえつつ、本研究を今後さらに発展させ、赤血球分化におけるこれら抗原分子の役割、機能などについてより明確にしていきたいと考えている。(1)Rh蛋白遺伝子解析を進め、RhPIおよびRhPII蛋白-cDNAのスプライシングマップを完成するとともに赤血球前駆細胞の分化におけるスプライシング・スイッチングとRh蛋白分子種の変換を明らかにした。(2)RhPIおよびRhPIIのゲノム構造解析を進め、プロモーター領域の塩基配列を決定するとともにイントロン内に特徴的な塩基配列領域を見出した。(3)Duffy蛋白の新しいcDNAをクローニングし、赤血球系細胞と血管内皮細胞における各々の転写開始部位を同定した。(4)Duffy蛋白-mRNAのスプライシング・アイソフォームを分離するとともに、Duffy蛋白のゲノム構造を決定した。(5)各種白血病細胞株における血液型物質の発現について、蛋白とmRNAの両側面から検討した。(1)Rh抗原系のエピトープを解析する目的で、種々のRh cDNAを挿入したMFGベクターを用いて赤芽球系白血病細胞株KU812Eに遺伝子導入を行った。KU812E細胞に発現したリコンビナントCEポリペプチドは、遺伝子解析から予想されたアミノ酸置換部位がCcEeの抗原性発現に重要な意義を有することを示した。さらに、RhD cDNAとRhCE cDNA間でキメラ分子を作製し、上記アミノ酸置換部を含まない細胞外ループ(6番目)のRh抗原活性に与える影響を検討した結果、E抗原活性の消失、D抗原活性の著名な減弱を誘導することが判明した。以上の結果より、各Rh抗原における抗原性の発現には多型性を示すアミノ酸置換のみならず、ポリペプチド鎖全体のコンフォーメーションも必要不可欠と考えられた。(2)Rh抗原が赤血球膜に発現するためには、Rhポリペプチドに加え何らかのco-moleculeが必要と考えられきた。これらのco-moleculeについて、より詳細に検討するため、RhD陽性例とRhD陰性例の遺伝子比較、Rhnull,-D-などのRh変異型における遺伝子解析を行った。その結果、正常なRhD遺伝子を保有するRhD陰性例、正常なRhCE遺伝子の存在する-D-例が見出され、、これらに注目すると、RhD,RhCE抗原の各々に特異的なco-moleculeの存在が強く示唆された。一方、Rhnullおいて、Rh50 cDNAにsplicing異常による122bpの欠失とそれに伴うフレームシフトが見出され、Rh50糖蛋白の大きな構造変化が予想された。

そして、この異常なRh50糖蛋白は、Rh抗原を担うRhcE、RhDポリペプチドと安定したコンプレックスを形成することができないため、全てのRh抗原が欠失したと考えられた。
高歪分子と電子移動錯体を形成する超活性受容体の創製と合成反応

シクロプロパノンアセタール類1が、分子骨格の高歪のみならず酸素置換基によって高電子供与性を賦与されていることをこれまで報告した。このことと1がC3合成素子のb-カルボニルラジカル等価体として利用できる特長を生かし、適切に設計された電子受容体と組み合わせ特色ある炭素結合形成反応を新規に開拓した。例えば、適切な脱離基を持ったアリールメチル基と1は、光誘起電子移動を起こしたあと、いずれも脱離基を外してラジカル対(イオン対ではない)を形成し、高効率の炭素結合形成を行ってエステルb位でのアリールメチル化を可能にした。カルボニル化合物との反応においては、込み合ったb-位で炭素結合を形成し、g-ヒドロキシカルボン酸エステルあるいは対応するラクトンを生じた。具体的な成果を2つ次に示す。(1)2-フェニル置換シクロプロパノンアセタール(1a)とカルボニル化合物の光反応。1aとベンゾフェノンをCH_3CN溶液中湿ったMg(ClO_4_2)を1モル加えて-40度で光照射すると、期待したC-C結合生成物のg-ヒドロキシエステル3aが78%で生成した。この反応条件を用いて2a以外のカルボニル化合物との反応を検討した結果、同様に期待した通りの結果が得られた。(2)2,2-二置換シクロプロパノンアセタールおよびビシクロアセタールとの反応。2-オキサ1-シリルオキシビシクロ[3.1.0]型アセタールとケトンとの反応では環広大生成物の6員環エーテル誘導体が効率高く生成した。
前障－嗅内野の神経経路における情報伝達の実態解明

前障は大脳皮質の全域と相互に連絡する脳深部の領域である。この特異な投射様式から、前障は何らかの高次脳機能を担うと推察されてきたが、その具体的な機能は長年にわたり謎だった。研究代表者らは近年、前障が空間記憶に重要な内側嗅内野にとりわけ強く投射し、記憶を調節することを見出した。本研究は、この前障→内側嗅内野の経路における情報伝達の実態を、げっ歯類における大規模細胞外計測と光操作により解明することを目的としている。前障が、内側嗅内野における格子細胞・頭方向細胞などの空間表象にあたえる影響を明らかにするため、これらの細胞が多く分布する内側嗅内野の表層から細胞外計測をおこない、さらに、前障→嗅内野経路を光遺伝学的に活性化した。動物がオープンフィールドにおいて空間探索行動をおこなう際の神経活動を解析したところ、光照射の有無によらず、格子細胞・頭方向細胞は安定した空間発火パターンを保ち、光操作による顕著な影響を受けなかった。こうした結果となった理由にはいくつかの可能性が考えられる。第一に、前障は細長い形状をした脳領域であり、光操作が前障の全域に至らなかった可能性が考えられる。第二に、前障は内側嗅内野の深層にとくに強く投射することから、(表層ではなく)深層の神経細胞のみに選択的に影響を与える可能性も考えられる。今後は、上記の点を考慮して実験方策を最適化しつつ、さらなる検証をおこなう必要があると考える。これまでに、前障→内側嗅内野経路の光活性化が、内側嗅内野表層の格子細胞・頭方向細胞に与える影響を検証した。これは、ウイルスベクター・光照射・多点細胞外計測・行動試験を組み合わせたチャレンジングな実験であり、この実験系を確立できたことは当研究における重要なステップである。現在までのところ、光操作による顕著な影響を見出すには至っていないが、内側嗅内野表層の空間表象が頑健であるという結果は、今後の研究の推進方策を考えるために重要な知見であり、おおむね順調に進展していると判断した。前障→嗅内野経路をより確実に光操作するために、ウイルスベクターの系を改善する。近年、強力な逆行性感染能をしめす組替アデノ随伴ウイルスベクターが開発されており、これを取り入れる。また、細胞外計測を大規模化し、内側嗅内野の表層と深層を同時に計測する。本研究は、研究代表者らが見出した前障→内側嗅内野という神経投射における情報伝達の実態を、行動中の動物における大規模神経活動計測および光操作により明らかにすることを目的としている。本年度は本研究を実施するための実験系の構築に注力した。具体的には、脳に多点電極や光ファイバの埋め込みをおこなう手術設備(脳定位固定装置、手術用実体顕微鏡、気化麻酔装置)、多点同時記録システム(最大512チャネルの多点記録電気生理装置、動物の行動を記録するビデオシステム、データ取込および解析用ワークステーション、シリコンプローブ電極、3Dプリンタで作成した電極保持ドライブ、各種の行動課題装置)、および光遺伝学システム(ウイルス注入装置、レーザードライバー、脳に挿入する光ファイバ・レーザーアセンブリ)を構築した。これらの機器を用いて、最大256点からなる多点電極を脳に慢性的に留置することで、動物が各種の行動課題をおこなうさいに100個程度の神経細胞の活動を一斉に計測することができるようになった。また、離れた2か所の脳領域に電極を留置することで、2領域間の神経活動の相互作用について調べることも可能となった。さらに、光感受性のカチオンチャネルであるチャネルロドプシンおよびその改変体を発現するウイルスベクターとレーザー光源をもちいた光照射により、神経活動を増減させる光遺伝学のシステムも構築した。これらの成果により、動物の行動と神経活動とを関連付けて調べるとともに、神経活動の光操作による他領域や動物の行動への影響を評価するための実験系が整った。本年度は、本研究における中心的な実験技術となる大規模神経活動計測と光操作法を確立することができた。これにより、各種の課題を行うさいの動物の行動と神経活動の関係を調べることができるようになり、また、光操作によって神経活動との因果性を調べることも可能となった。これらの理由から、おおむね順調に進捗していると判断した。

第二に、前障は内側嗅内野の深層にとくに強く投射することから、(表層ではなく)深層の神経細胞のみに選択的に影響を与える可能性も考えられる。今後は、上記の点を考慮して実験方策を最適化しつつ、さらなる検証をおこなう必要があると考える。これまでに、前障→内側嗅内野経路の光活性化が、内側嗅内野表層の格子細胞・頭方向細胞に与える影響を検証した。これは、ウイルスベクター・光照射・多点細胞外計測・行動試験を組み合わせたチャレンジングな実験であり、この実験系を確立できたことは当研究における重要なステップである。現在までのところ、光操作による顕著な影響を見出すには至っていないが、内側嗅内野表層の空間表象が頑健であるという結果は、今後の研究の推進方策を考えるために重要な知見であり、おおむね順調に進展していると判断した。今年度にセットアップした実験系をもちいて、前障および嗅内野の神経活動の計測をすすめる。この2領域の神経活動の同時計測をおこない、個々の領域の神経活動のパターン、および、2領域間の神経活動の相互作用について明らかにしていく。内側嗅内野は空間情報の処理にかかわることがよく知られていることから、空間課題を中心としたいくつかの行動課題を実施していく。さらに、同時計測から得られた知見をもとに前障の光操作の実験をすすめ、行動中の特定のタイミングにおける前障の神経活動の操作が、下流の脳領域である内側嗅内野の神経活動に与える影響を明らかにする。前障→嗅内野経路をより確実に光操作するために、ウイルスベクターの系を改善する。近年、強力な逆行性感染能をしめす組替アデノ随伴ウイルスベクターが開発されており、これを取り入れる。また、細胞外計測を大規模化し、内側嗅内野の表層と深層を同時に計測する。おおよそ当初の計画通りに支出したものの、若干の次年度使用額(8,320円)が生じた。次年度に物品費として使用することを計画している。多点電極を再利用する技術が向上したため、当初の想定よりも電極の購入数が減り、次年度使用額が生じた。次年度は、実験系の最適化のために幾つかの検討(ウイルスベクター、多点計測の大規模化等)が必要となるので、繰り越した分はこれに充てる。また、翌年度分として請求した助成金は、下記の各種費用として使用する:実験動物費・手術用具費・光学部品費・大規模データのストレージ費・その他の一般試薬費・旅費。
クロムを固溶するムライトの結晶場スペクトル解析

ムライトは天然に産する鉱物であると同時に,古くから耐火物として利用されている。近年チッ化ケイ素や炭化ケイ素と同様,超高強度材料として注目されている。ムライトは一般に外来イオンを殆んど固溶しないが,最近クロムが11%も固溶することが発見された。このように多量に固溶するメカニズムは通常のメカニズムでは説明し難い。従って本研究ではクロムを固溶するムライト結晶を合成し,その結晶場スペクトルを解析することにより固溶のメカニズムを解明した。電気炉を用いて焼結法によりクロムを含有する粉末結晶を合成した。結晶間に介存するガラス質マトリックスはフッ酸と塩酸混液により除去した。得られた結晶はX線,偏光顕微鏡,電子顕微鏡等により観察し,ムライト以外の結晶は存在しないことを確認した。分光々度計により反射法を用いて結晶場スペクトルを測定した。得られたアナログチャ-トをデジタイザ-によりデジタル化し,パソコンにインプットし,ガウス曲線によりデコンボル-ションを行なった。結果として2組のスペクトルが得られた。高エネルギ-側の組は正規8面体中のアルミニウムイオンを置換しているものと解釈される。低エネルギ-側の組はムライト結晶中をC軸方向に走る8面体で構成される空のチャンネル中に入るものと解釈される。空のチャンネルを構成する8面体は全部で6種類あるが,スペクトルのデ-タはこのいずれの8面体とも符号せず,結局のところムライトのチャネル中にはもっと小さい8面体があると推定される。この小さな8面体は結晶構造から導くことができる。
二光子共鳴による新しい非線形光学現象と固体の電子構造解明のための応用

二光子共鳴による、いくつかの新しい非線形光学現象を観測し、同時にこれらの現象を手段に用いて、新しい半導体系の電子構造の解明を行うなど多大な成果をあげた。新しい現象としては、共鳴SHG発生現象、フォノン・ハイパーラマン散乱現象、励起子分子による過渡的ブリュスター反射現象、並びに励起子分子2光子吸収現象であり、関連して定常ブリュスター反射現象および4波光混合現象の新しい側面も見い出した。物質系としては、-化合物半導体薄膜、化合物量子井戸・量子ドット、擬2次元電子系における、励起子、励起子分子の量子閉じ込め状態、電子構造の多くの重要知見を得ることができた。1 ZnSe,ZnSなどの薄膜並びに-超格子における1S、2P励起子に2光子共鳴して光第2高調波発生信号が生ずることを見い出し、その機構を解明した。また、逆にこの現象が、電子構造を解明するための新しい分光法として有用であることを実証した。2 -量子井戸の量子数の異なる準位間の2光子吸収を初めて観測した。この知見を基にして、最も重要なバンドオフセット値を実験的に求めた。3 CdSの微結晶において、個別閉じ込め電子状態に2光子共鳴して光第2高調波散乱現象と共鳴ハイパーラマン(2光子ラマン)現象が生ずる事実を初めて観測した。同様に、CuBrの微結晶でも励起子に2光子共鳴した類似の現象を観測した。これらの現象はいずれも、画期的な新しい分光法となりうることを実証した。4直接的2光子吸収により、問題になっていた-量子井戸の励起子分子の存在を初めて観測した。また、この吸収係数が異常に大きいことも明らかにした。5フェムト秒領域の過渡的ブリュスター角反射現象を世界で初めて観測し、2光子吸収による励起子分子からの信号の存在を見い出した。以上の多くの成果は10編以上の論文として発表(予定も含む)する。1.チタンサファイアレーザー装置を駆使して、二光子共鳴による光第2高周波(SHG)発生現象、二光子吸収現象、並びに共鳴ハイパーラマン散乱現象(二光子励起フオノンラマン散乱)の詳しい実験を進めた。本年度は、エピタキシヤル成長させたZnSe薄膜、Zns薄膜並びに各種のZnSe/ZnS超格子(量子井戸)の試料について詳しい測定を行った。通常の、最低次では発生しえない(電気双極子近似)偏光配置で、入射光フォトンの2倍のエネルギーに1S励起子、あるいは2P励起子エネルギーが一致するとき、強いSHG光が通常の前方方向に発生する現象を初めて見いだした。また、その共鳴効果の程度が、非共鳴の場合に比べて3桁以上である事実を、水晶の非共鳴SHG強度との比較により明らかにした。2.上記の現象が、半導体薄膜の電子構造、特に量子閉じ込め励起子構造並びに励起子の束縛エネルギーを導出するのに優れた方法であることを実例により明らかにした。現在、盛んに研究がなされているII-VI化合物半導体のエピタキシヤル薄膜結晶は下地にGaAsを用いているが、本現象は2光子共鳴なので、この下地を除去する必要もなく、又、信号の観測は容易なので、新しい分光法として非常に優れていることがわかった。3.ZnS/ZnSe超格子で、2光子共鳴による光学フォノンのハイパーラマン散乱現象を世界で初めて観測した。電子構造を解明する新しい分光法としての可能性が十分に考えられるので、詳しく調べている。

4.世界で未だ全く研究されていない、ブリュスター角配置での2光子反射スペクトルの実験に着手した。その前段階として、これも又殆ど研究されていない、1光子のブリュスター反射分光に関する詳しい実験を行い、II・VI半導体薄膜の電子構造解明並びに評価のための優れた手段であることを明らかにした。2光子共鳴に基づく、いくつかの新しい現象を初めて観測するなど多くの成果を上げた。1.2光子共鳴のラマン散乱、すなわち電子励起状態共鳴ハイパーラマン散乱現象を半導体量子微結晶について世界で初めて観測し、その特性を詳細に調べた。すなわち、強い閉じ込め系の代表であるCdS量子ドットの量子閉じ込め電子準位に共鳴して、また、弱い閉じ込め系の代表であるCuBr量子ドット(弱い閉じ込め系)では1S、2P励起子に共鳴して、LOフォノン散乱による信号が生ずることを明らかにした。いづれの場合にも、量子閉じ込め効果のために散乱断面積が異常に増大することを発見した。2.上記の2種類の量子トッド系において2光子共鳴のSHG散乱現象を観測した。この現象も世界で初めての観測例であり、大きな成果である。これらの現象は量子閉じ込め系の電子構造を解明する上で有力な分光法である。3.ZnSe/ZnSSe量子井戸系で2光子共鳴励起によるbiexciton(励起子分子)の存在を世界で初めて明らかにした。すなわち、ブリュスター角反射過渡分光法によりbiexcitonが生成されている事実を、第2パルスの負領域での信号の存在から明らかにした。この結果は、量子閉じ込め効果が大きい、II-VI化合物量子井戸系でbiexcitonが本当に存在することを直接的に実証した画期的な成果である。4.ZnS/ZnSe量子井戸系でbiexcitonによる直接2光子吸収を観測することに成功した。しかしながら、未だ多少の疑義があるため、現在、前年度に我々が開発した共鳴SHG法を用いて、より弱励起状態での確認の実験を行っている。
女性の生殖可能期間を支える原始卵胞活性化とその分子機構の解明

哺乳類卵巣においては卵母細胞は複数種の体細胞に支持され、これらの細胞が作る球状の細胞の集合体を「卵胞」とよぶ。最も未成熟な原始卵胞は前顆粒細胞と小さな卵母細胞からなり、休眠状態で長期間卵巣内に蓄えられているが、刺激に応答して活性化すると成熟過程に入って排卵される。女性が40年という長い生殖器官を維持できるのは、原始卵胞の維持と活性化のバランスをとる機構が働いているためだが、その分子機構の詳細については未だ不明である。本研究では、卵母細胞特異的に発現する転写因子Sohlh1, Sohlh2の機能の一端を明らかにした。原始卵胞活性化(PFA)を制御する機構としては、PI3K経路と転写因子Foxo3aによる制御が知られている。Foxo3aは原始卵胞中の卵母細胞において核に局在し、転写抑制によってPFAを抑制していると考えられている。PI3K経路が活性化するとFoxo3aがリン酸化され、核外に排出される。これによりPFAの抑制が解除され、原始卵胞は活性化して成熟過程にはいることが既に報告されている。我々は生殖細胞特異的なbHLH型転写因子Sohlh1とSohlh2がFoxo3aのリン酸化抑制を介してPFAを抑制に機能していることを発見した。Sohlhsのノックアウトマウス卵巣ではFoxo3aのリン酸化が亢進し、異常なPFAが誘導されるために卵胞が死滅していた。Foxo3aはSohlhsの転写標的遺伝子ではないため、間接的に活性制御を行っていると考えられる。現在はSohlhsとその下流で転写活性化される転写因子Lhx8とのタンパク質間相互作用に着目し、活性の制御機構について解析を進めている。哺乳類卵巣においては卵母細胞は複数種の体細胞に支持され、これらの細胞が作る球状の細胞の集合体を「卵胞」とよふ。当該研究費支援期間中は、Sohlhsとその下流で転写活性化される転写因子Lhx8とのタンパク質間相互作用に着目し、活性の制御機構について解析を行った。SohlhとLhx8の結合部位を特定し、修飾による違い、生理学的意義等についての解析を進めている。また、Sohlh1結合タンパク質の網羅的解析により新規の結合因子を同定し、そのノックアウトマウスの解析へと進めることができた。発生生物学我々はSohlhとLhx8が直接に相互作用していることを見出した。Lhx8は2つのLimドメインとホメオドメインを持つ転写因子である。Lhxファミリータンパク質は、2種のドメインが分子内結合していると転写抑制に、他の活性化タンパク質が結合すると転写活性化に働くことが明らかにされている。SohlhがLhx8の活性化因子として機能しうるかどうかを検証するため、我々は結合部位を同定するためのプロテインマッピングを進めている。現在のところ、Sohlh同士がbHLHとその周辺配列を介してダイマーを形成すること、SUMO化部位の削除はタンパク質間結合には影響しないことがあきらかになった。

今後、それらの変異タンパク質とLhx8の結合アッセイを進めて行く予定である。以上の実験と平行して、Sohlhの転写を制御する上流因子解析を行っているが、現在までに有力な候補は得られていない。培養系の改善が必要であることが判明したため、予備実験に時間がかかっている。Sohlhの変異タンパク質とLhx8の結合アッセイをさらに進めて行く。また、Lhx8ノックアウトマウスで転写が上方制御または下方制御されているような遺伝子のプロモーターをもちいて、SohlhによってLhx8の活性が制御されている可能性について検証をすすめていく。その他、最近新たに同定されたSohlhのコファクターとの関係についても検証する予定である。Sohlhの転写を制御する上流因子解析も卵巣培養系を用いて引き続きすすめる。現在の系では卵胞の発生率があまりよくないため、系の改良をまず試みる予定である。Sohlhの結合因子の網羅的探索については現在サンプリングを進めている。十分な量が得られ次第、解析を開始する。消耗品の納入価格変更等で小額で半端な金額が残ったため、無理に使用せずに次年度使用とした。本年度分と合わせて消耗品に使用する。
RNAエディティングによるゲノム情報の変換システム - 葉緑体ゲノムでの網羅的解析

1)RNAエディティングのシス配列の同定昨年度、開発に成功した蛍光標識ダイデオキシヌクレオチドとプライマー伸長法を組み合わせた新しい非RIアッセイ系である「in vitro RNAエディティング系」を用いて、光化学系のNADH脱水酵素サブユニットのmRNA上の19ヶ所のエディティング部位の効率を測定した。その結果35%の効率から活性が検出できないものまで部位によりエディティング効率が著しく異なることを明らかにした。次いで、効率の高いndhB-2とndhFのmRNAのエディティング部位についてシス配列の同定を行った。ndhB-2ではエディティング部位の上流から10から6ヌクレオチドの1ヶ所、次いでndhFでは上流40から36ヌクレオチドおよび上流15から下流6ヌクレオチドの2ヶ所がシス配列であることを決定した。これを基にエディティングの新しいモデルを考え出した。2)RNAエディティングのトランス因子の同定・単離UVクロスリンク法を用いて、ndhFとrpoBのmRNAのエディティング部位のトランス因子を82kDaと60kDaを同定した。psbE mRNAエディティングに対する56kDaのトランス因子を単離しMS/MS法でタンパク質の一次構造の決定を進め、いくつかのペプチド配列を得た。まだ充分ではないのでこれらの単離方法および一次構造決定に関する条件についてさらに検討・改良を試みた。3)RNAエディティングの進化メカニズムの考察栽培タバコ(Nicotiana tabacum)のエディティング部位をさらに同定し、ndhG mRNAで新しい部位2ヶ所を見出した。そのうちの1ヶ所は進化的に保有されないアミノ酸置換であった。更に双子葉植物のエンドウで葉緑体エディティング部位の体系的同定を進め、27ヶ所の部位を同定した。これらをタバコと比較しエディティング部位出現の進化的傾向を考察した。