hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
骨髄不全患者で検出された新たな抗原蛋白の造血障害発症メカニズムとの関連性の解析

我々はZNF292全長cDNA確定のためRACEやRT-PCRで上流へのgene walkingを施行。その結果全長10610bpで、8exonでmRNAが構成され、第8 exonは非常に長く約9kbという長さが特徴的であった。この配列はgenebank NM_015021.1(2008.2.11更新)と同一配列であり、蛋白はC2H2タイプのZn-finger蛋白で、機能的には成長ホルモン遺伝子発現に重要な転写因子と報告された。造血細胞発現検索のためにexon6とexon7の間でイントロンを挟むprimerを作製して発現を再確認した。結果は以前のprimersで検索した細胞株すべてに発現が再確認され(系統特異性は認めず)、また正常リンパ球分画の発現も同様の結果であった。さらにStealth Select RNAi ZNF292 setを購入、ZNF292発現阻害実験を試みた。しかし浮遊細胞への導入効率が低く、ZNF292 RNAi導入細胞におけるZNF292発現阻害を確認できず、抑制実験結果は確認できなかった。2.ZNF292遺伝子産物が造血細胞に対する細胞傷害活性を有するCTLを誘導できるかどうかの解析我々はHLA A2402結合motif中で最もaffinityが強いと考えられたpeptideを用いて、健常人末梢血からCTL line作製を試みたが、健常人からは反応するCTL lineを作製できなかった。しかしこの蛋白は、一部の白血病患者血清中にもSEREX法により抗体の存在が検出され、さらに担癌患者においても同様のことが報告されていた。この結果から、液性免疫を誘導することは確認できたが、細胞性免疫のターゲットになることは確認することができなかった。
日本近世城下町漁師の史的特質解明

今年度は、松江藩・鳥取藩を中心とする山陰地域を分析対象とし、島根・鳥取両県立図書館や旧城下町・湊町にある市町村立図書館等において史料調査を実施し、関連文書の写真を収集した。また、自治体史や刊行資史料集を購入のうえ分析を行った。現在のところ、両県とも近世漁業・漁村・漁(師)町に関する研究は低調であり、・昨年・昨年度に比べ関係史料は豊富ではなかったが、研究成果として次の4点があげられる。(1)両藩とも他藩にみられるような城下町への漁民の強制集住は確認されない。むしろ松江藩の場合は、神社との由緒をもつ町人漁師や、前時代の領主の浪人とされる町人漁師の漁業権・居住地を追認している。なお、町人漁師のみならず、松江藩領漁師の漁場利用秩序は、種々の神社の由緒に密接に関係しており、注目される。また、内陸部に位置する鳥取城下町には、町人漁師は存在しない。(2)両藩の漁獲物流通機構は城下町松江・鳥取を中心に構築されており、松江藩は町人漁師を漁獲物献上の儀礼に参加させる一方、在方漁師に対しては他所売禁止を命じている。鳥取藩は、近世初期には地理的有利さから漁獲物が自然集荷されていたが、藩支配の特性から米子や境港に水揚げ量や流通の繁栄を奪われることとなり、後期には城下問屋制度の強化を行うなど対応に苦慮している様相が明らかになった。(3)両藩はいずれも江戸幕府への献上漁獲物が豊富であるが、確保に大きな関心が払われたのは松江藩では俵物であり、鳥取藩では鮭である。他の漁獲物に関しては資史料が確認されていないが、同様の統制体制をとっている可能性は高く、今後も史料調査を継続する必要性を感じた。(4)・昨年・昨年度の当該研究(若狭・丹後・加賀・越中国諸藩を対象)の成果として確認された、19世紀に他領へ魚肥鰯が流出する現象に対する藩の危機意識とその対応が、松江・鳥取両藩でも確認され、魚肥鰯の確保が、当該期の日本海側領主層の共通の課題であったことが改めて確認された。以上の知見をもとに、山陰諸藩の漁(師)町に関する研究成果を今年度の成果としてまとめる一方、3年間の研究成果を「日本近世城下町漁師の史的特質」として成稿している(発表時期は現段階では未定)。本研究は、日本近世に存在した町人身分の漁師の存在形態を明らかにし、その史的特質を解明することを課題としている。特に、日本海側の近世城下町を研究対象とするが、これまでに城下町漁師に関するまとまった研究が皆無であったことを鑑み、まず、全国の城下町漁師について、自治体史や地名辞典等から、城名・領主名・居住区域の呼称・漁業権の根拠(由緒)・支配組織・漁業争論における主張の特質等についての情報を抽出し、データベース化する作業を行った。次に、今年度の具体的課題である現京都府・現福井県下の城下町の漁師に関して、各地に赴き、史料調査を行った。これらの史料のうち、すでに自治体史編纂の過程で目録作成や写真撮影が完了しているものについては、それらを収集し、未調査の史料群については、あらたに目録を作成し、デジタルカメラによって写真撮影を行った。調査地は、旧宮津藩、田辺藩、小浜藩の城下町、及び、城下町ではないが、小浜藩領の漁獲物調達に大きな位置を占めた敦賀町である。各地の史料分析から、それぞれの城下町漁師の歴史的展開があきらかになったが、全体として次の点が指摘できる。まず、いずれも夫役負担を漁業権の根拠としながらも、現京都府下の城下町漁師は、旧領主に対する勲功の対価として自らの漁業権を認識しており、一方、現福井県下の漁師は、朝鮮出兵時の水主役を根拠として認識しているという地域的差違の存在である。また、他の町人から、居住区域や階層の面で一段下位にあると認識されているという社会的環境の類似性や、19世紀にはいると、在方漁師との漁業争論において、自らが漁業専一で生計をたてていることを主張し始める動向の共通性、等が明らかになった。なお、次年度は、申請当初の予定通り、現石川県、及び現富山県下の城下町漁師について、今年度同様に検討する予定である。加賀・富山両藩を研究対象とした今年度は、金沢市立近世史料館・富山県立図書館所蔵史料を中心に調査を実施し関連文書の写真を収集した。その成果として、次の4点があげられる。(1)両藩とも城下町が内陸部に位置し、他藩にみられるような城下町への漁民の強制集住は確認されないが、加賀藩の場合、金沢の外湊である宮腰町に、一般的な町方(城下町)漁師に存在形態の近い特権的漁民(諸役免除特権などを有する)を集住させた。一方、富山藩領内では、町方漁師に類似する特権的漁民集団の存在は確認されない、(2)両藩の漁獲物流通機構は金沢を中心として構築されており、若狭湾側は勿論、富山湾岸の漁獲物も、上魚は高岡魚問屋に集荷され、金沢に送られていた。

また、富山藩領の在方漁民のうち、特権的漁業権をもつ漁民は、加賀藩主に対する功労を漁業権の根拠と認識しており、この点でも漁民が金沢を中心に編成されていたことがわかる、(3)上記の点と関連するが、両藩における漁獲物のうち最大の関心が払われたのは、献上魚である鰤・鯛等であり、加賀藩は通常の流通統制にとどまらず、不漁の際には、(1)に示した宮腰町の特権漁師に随時漁獲物確保を命じていた、(4)前年度の当該研究(若狭・丹後諸藩を対象)の成果として確認された、19世紀に他領へ魚肥鰯が流出する現象に対する藩の危機意識とその対応が、加賀・富山両藩でも確認され、魚肥鰯の確保が、当該期の日本海側領主層の共通の課題であったことが明らかになった。これらの成果をふまえ、来年度も引き続き、町方(城下町)漁師・藩の漁業政策(漁政)・漁業観の観点から研究をすすめる予定である。今年度は、松江藩・鳥取藩を中心とする山陰地域を分析対象とし、島根・鳥取両県立図書館や旧城下町・湊町にある市町村立図書館等において史料調査を実施し、関連文書の写真を収集した。また、自治体史や刊行資史料集を購入のうえ分析を行った。現在のところ、両県とも近世漁業・漁村・漁(師)町に関する研究は低調であり、・昨年・昨年度に比べ関係史料は豊富ではなかったが、研究成果として次の4点があげられる。(1)両藩とも他藩にみられるような城下町への漁民の強制集住は確認されない。むしろ松江藩の場合は、神社との由緒をもつ町人漁師や、前時代の領主の浪人とされる町人漁師の漁業権・居住地を追認している。なお、町人漁師のみならず、松江藩領漁師の漁場利用秩序は、種々の神社の由緒に密接に関係しており、注目される。また、内陸部に位置する鳥取城下町には、町人漁師は存在しない。(2)両藩の漁獲物流通機構は城下町松江・鳥取を中心に構築されており、松江藩は町人漁師を漁獲物献上の儀礼に参加させる一方、在方漁師に対しては他所売禁止を命じている。鳥取藩は、近世初期には地理的有利さから漁獲物が自然集荷されていたが、藩支配の特性から米子や境港に水揚げ量や流通の繁栄を奪われることとなり、後期には城下問屋制度の強化を行うなど対応に苦慮している様相が明らかになった。(3)両藩はいずれも江戸幕府への献上漁獲物が豊富であるが、確保に大きな関心が払われたのは松江藩では俵物であり、鳥取藩では鮭である。他の漁獲物に関しては資史料が確認されていないが、同様の統制体制をとっている可能性は高く、今後も史料調査を継続する必要性を感じた。(4)・昨年・昨年度の当該研究(若狭・丹後・加賀・越中国諸藩を対象)の成果として確認された、19世紀に他領へ魚肥鰯が流出する現象に対する藩の危機意識とその対応が、松江・鳥取両藩でも確認され、魚肥鰯の確保が、当該期の日本海側領主層の共通の課題であったことが改めて確認された。以上の知見をもとに、山陰諸藩の漁(師)町に関する研究成果を今年度の成果としてまとめる一方、3年間の研究成果を「日本近世城下町漁師の史的特質」として成稿している(発表時期は現段階では未定)。
肝内胆管細胞における胆汁酸代謝の検討

胆汁酸は肝細胞でコレステロールから合成され胆汁中に分泌される。胆汁中では脂溶性物質のミセル化を行い、小腸では脂溶性栄養素のミセル化と消化に重要な役割を果たす。その後、回腸上皮で再吸収され肝へと環流するが、これが胆汁酸の腸肝循環である。一方、原発性胆汁性肝硬変など胆汁うっ滞性疾患では胆汁酸の1つであるウルソデオキシコール酸により病態の改善が得られる。近年、胆管細胞の管腔側に回腸上皮細胞と同様の管腔側胆汁酸トランスポーター(ASBT)が発現していることが報告されたが、その意義はいまだ不明である。我々は不死化したマウスの肝内胆管細胞株を用い、胆管における胆汁酸代謝について検討した。その結果、1.実験で用いた細胞株はASBTを発現していたが、胆汁酸の細胞質内移送に関わる回腸型胆汁酸結合タンパク(iBABP)は発現していなかった。2.単層培養した細胞株では胆汁酸の経上皮細胞間移送(管腔側から血管床側へ)が行われていた。3.この移送は温度依存性、ナトリウムイオン依存性、他の胆汁酸による競合的阻害の存在から、ASBTの特性に従った移送であると考えられた。4.ある種の胆汁酸をあらかじめ添加して培養することにより、この移送能は増加した。以上より、肝内胆管は生理的状態で、回腸上皮細胞とは異なったメカニズムで胆汁酸の腸肝循環に能動的な役割を果たしていると考えられた。特に原発性胆汁性肝硬変に対するウルソデオキシコール酸の効果などから病態時(特に胆汁うっ滞時)での役割は小さくないものと考えられた。胆汁酸は肝細胞で合成、抱合され胆汁中に分泌される。胆汁は胆管で水分で電解質の調整を受け、十二指腸に排出される。その後、胆汁酸は小腸内で脂溶性植物の可溶化と消化に関わり、そのほとんどが回腸で能動的に再吸収される。回腸上皮細胞における胆汁酸の吸収には、管腔側に存在するトランスポーター(apical sodium-dependent bile acid transporter;ASBT)と細胞質内における胆汁酸運搬タンパク質(bile acid binding protein;BABP)が重要な役割を果たしている。近年、このASBTが肝内胆管細胞にも発現していることが報告されたが、その意義は不明である。本研究では、不死化したマウス肝内胆管細胞(以下、胆管細胞)を用い、胆汁酸はRlラベルのタウロコール酸を用いた。透過膜上でこの胆管細胞を単層に培養し、管腔側および基底膜側から対側への移送とそれらに影響を与える因子について検討した。[結果]RT-PCRによる検討では、細胞はASBTのmRNAは陽性であったが、BABPのmRNAは認められなかった。胆汁酸の移送能は、管腔側から基底膜側へが、その逆方向に比し約3倍あった。次に、この移送は4°CやNaイオン除去培地のもとでは約40%に抑制された。また、同量のグリココール酸を添加した系では、約60%に抑制され、胆汁酸による競合阻害が確認された。以上から、胆管細胞はBABPは発現していないが、ASBTは発現しており、その特性に従った形で胆汁酸を管腔側から基底膜側へ能動的に移送していると考えられた。
新規細胞傷害マーカー・テネイシンC(TN-C)による急性心臓死の病理診断

死体血清中TN-C濃度をELISA法で測定した。死後48時間以内101例の血清中TN-C濃度は24.01,000<ng/mlであり、臨床事例よりも高い事例が多かった。死因、死後経過時間、受傷(発症)から死亡までの時間、および急性炎症マーカーのC反応性タンパク(CRP)との明らかな相関は認めなかった。炎症過程との関連について、特に急性心臓死が疑われる事例の心筋病理組織所見との相関を検討中である。今年度は予備実験として、死体血清中テネイシンC(TN-C)濃度の測定と心筋組織からのTN-CのmRNAの検出を試みた。1. ELISAによる血清中テネイシンC(TN-C)濃度の測定死後経過時間48時間以内の法医解剖事例(内因死9例、外因死4例)の心臓血および末梢血(大腿静脈血)血清中のTN-C濃度をELISA法で測定し、それら測定値と死因、死後経過時間、受傷(発症)から死亡までの時間などとの関連について検討した。これまでに死体血におけるTN-C濃度測定を行った報告は無く、健常人血清中のTN-C濃度は23.474.8ng/mlと報告されている。今回測定した13事例の血清中TN-C濃度は心臓血で261, 635ng/ml(n=13)、末梢血で114960ng/ml(n=4)であり、何れも健常人血清中より高値を示す症例が多かった。なお、心臓血と末梢血を比較すると末梢血がやや低い値を示した。血清中TN-C濃度に大きな影響を与えると考えられる死因および受傷(発症)から死亡までの時間については、特徴的な傾向を見いだすことができなかったが、縊死および溺水などの死亡までの時間が短時間の事例では他の事例に比べて低値を示した。但し、何れの事例も健常人血清中よりも高値であり、何らかの死後変化の影響が考えられた。今後、さらに症例を増やして統計的に解析を行う必要がある。2.心筋組織のRT-PCRを用いたTN-CのmRNAの検出現有のホモジナイザーを用いてホルマリン固定前の心筋組織からmRNAの抽出を試みたが、mRNAが非常に壊れやすいため困難であった。そこで、新規に三次元ビーズ衝撃式細胞試料粉砕装置を購入した。現在、その条件設定と試料収集を行っている。テネイシンC(TN-C)が法医学分野で応用できる「新規心筋細胞傷害マーカー」となり得るか否かを明らかにすることを目的とする。今年度は死体血清中TN-C濃度の測定及び炎症マーカーの1つでもあるC反応性蛋白(CRP)濃度について測定して、その関係性や各因子について統計的解析を行った。1、ELISAによる血清中TN-C濃度およびCRP濃度の測定死後経過時間48時間以内の法医解剖症例101例(男性64名/女性37名、年齢0.193歳、内因死54例/外因死47例)の心臓血血清中のTN-C濃度をELISA法で測定し、また合わせて同症例のCRP濃度についても測定を行った。それらの測定値と死因、死後経過時間、受傷(発症)から死亡までの時間などとの関連について検討した。これまでに死体血におけるTN-C濃度測定や検討を行った報告は無く、健常人血清中のTN-C濃度は23.474.8ng/mlと報告されている。今回測定した101例の血清中TN-C濃度は心臓血で241,000<ng/ml(281.9土278.5ng/ml)であり、何れも健常人血清中より高値を示す症例が多かった。また、死体血でも比較的安定であると報告されているCRP濃度も合わせて測定したが、CRP濃度とTN-C濃度間に有意な相関関係はなく、血清中TN-C濃度に大きな影響を与えると考えられる死因および受傷(発症)から死亡までの時間については特徴的な傾向を見いだすことができなかったが、縊死および溺水などの死亡までの時間が短時間の症例では他の症例に比べて低値を示した。但し、何れの症例も健常人血清中よりもほぼ高値であり、何らかの死後変化の影響が考えられ、死体血においてはTN-C測定値そのものでは心筋傷害の指標として用いられないことが明らかになった。
電荷移動錯体を用いた新規有機トランジスタに関する研究

本研究では電荷移動錯体の持つ構造や特性をいかした有機デバイスの作製を目的として、キャスト法にて(BEDT-TTF)(TCNQ)錯体薄膜を形成し、電界効果トランジスタ(FET)を作製した。作製したキャスト膜の構造は針状結晶が電極間を架橋するように成長しており、三斜晶のc軸または、単斜晶のb軸が基板面に対し垂直に配向していることをX線回折測定により確認した。また顕微ラマン分光測定を行い、錯体の電荷移動量を見積もると0.20.3となった。この値は三斜晶の文献値に近い値となった。これらの結果から、チャネル部は三斜晶結晶のBEDT-TTFおよびTCNQからなる連続カラムによって形成されていると考えられる。この素子のFET特性は電子・正孔の両方が薄膜内を伝導する"ambipolar"動作を示した。このような現象が現れた原因は、正孔および電子が伝導カラムに注入されることにより実現すると考えられる。また、導電率の温度依存性を測定すると、V_<GS>=0Vまたは負の電圧を印加した場合には典型的な熱活性型の温度依存性を示した。一方で正のV_<GS>を印加した場合には約250K付近まで金属的な温度依存性を示した。他のモット絶縁体においては化学的キャリアドープを行うことで金属状態の発現が報告されている。従って、今回得られた結果は電界効果キャリアドーピングによる物性の制御の可能性を示したものである。また極大値をとる温度付近ではI_S-V_<DS>特性の形状が変化していることが確認された。250K以下ではV_<DS>=0V付近における曲率が変化しており、注入障壁の出現を示唆するものである。このことは何らかの原因によって錯体が絶縁化したものと考えている。周波数特性についても測定を行った。その結果、ゲート-ソース間の静電容量による電流が増加したため100Hz以上の測定は困難となったが、その範囲ではほとんど信号は減衰しなかった。従って、電極構造を工夫すれば、高速動作する素子の作製も可能になると考えている。本研究では電荷移動錯体の持つ構造や特性をいかした有機デバイスの作製を目的としている。最終的な目標は(BEDT-TTF)(F_4TCNQ)_x(TCNQ)_<1-x>膜を用いたものであるが、1年目はその基礎特性の確認を行うためにBEDT-TTFおよび(BEDT-TTF)(TCNQ)錯体について調べた。キャスト法にてBEDT-TTFおよび(BEDT-TTF)(TCNQ)錯体薄膜を形成し、電界効果素子(FET)を作製した。まずBEDT-TTF単独膜に関しては基板上に針状の結晶が形成された、そのFET特性はpチャネル特性を示した。次に、(BEDT-TTF)(TCNQ)薄膜について調べた結果、膜の構造はやはり針状結晶が電極間を架橋するように成長しており、この素子のFET特性はn、pの両チャネルの特性(バイポーラ特性)を示した。まずドレイン電圧(V_<DS>)が正の場合、低いV_<DS>領域では電子蓄積による動作が確認でき飽和特性も現れている。また高V_<DS>領域においては電流値の急激な増加が観測された。V_<DS>が負の場合においても同様の現象が観測された。このような現象が現れた原因は、膜構造に起因すると考えている。ドナー・アクセプタの積層構造が形成されゲート電圧を印加することでドナー層に正孔(V_G<0)またはアクセプタ層に電子(V_G>0)が蓄積する。素子を流れる電流はそれらの和となるのでバイポーラ的な動作をしたものと考えている。また、ゲート電圧(V_G)を印加しながらソース電流(I_S)の温度依存性を測定したところ特異な現象が現れた。V_G=0または負の場合には典型的な熱活性型の温度依存性を示した。一方でV_Gが正の場合では約250K付近に極大値を持つような特性が得られた。この特性は金属-絶縁体転移付近の挙動によく似ている。このことから金属-絶縁体転移温度をゲート電圧によって制御できる可能性を示した。詳細なメカニズムについては今後解析する予定である。来年度は、上記の現象のメカニズムの解析や(BEDT-TTF)(F4TCNQ)_x(TCNQ)_(1-x)膜を用いた素子の特性評価を行う予定である。

また、導電率の温度依存性を測定すると、V_<GS>=0Vまたは負の電圧を印加した場合には典型的な熱活性型の温度依存性を示した。一方で正のV_<GS>を印加した場合には約250K付近まで金属的な温度依存性を示した。他のモット絶縁体においては化学的キャリアドープを行うことで金属状態の発現が報告されている。従って、今回得られた結果は電界効果キャリアドーピングによる物性の制御の可能性を示したものである。また極大値をとる温度付近ではI_S-V_<DS>特性の形状が変化していることが確認された。250K以下ではV_<DS>=0V付近における曲率が変化しており、注入障壁の出現を示唆するものである。このことは何らかの原因によって錯体が絶縁化したものと考えている。周波数特性についても測定を行った。その結果、ゲート-ソース間の静電容量による電流が増加したため100Hz以上の測定は困難となったが、その範囲ではほとんど信号は減衰しなかった。従って、電極構造を工夫すれば、高速動作する素子の作製も可能になると考えている。
東チベットにおける中国共産党の民族政策・宗教政策及び民族自治に関する研究

本研究における最大の成果は、現地調査と文献調査を通して、四川省チベット地区における民族問題と宗教問題の現状を検証したことである。2年間にわたる研究成果の概要を以下に示す。1.四川省カンゼ州にて、現地調査を実施した。2004年8月、五明仏学院(四川省セルタ県)にて、中国共産党が行った宗教弾圧事件の調査を実施した。テンジン・ギャムツォ副院長へのインタビューを行った。ヤチェン修行地(四川省ペユル県)にて、カリスマ性を持つ宗教指導者を中心とした修行地の構造を調査した。アチュウ法王へのインタビューを行った。2.2005年12月、中国国家図書館にて、中国の宗教学・民族学・政治学に関する文献調査を実施した。3.陳暁東のルポルタージュ「ニンマの紅い輝き」を分析することで、五明仏学院事件の遠因を分析した。4.中国政府が掲げる民族政策・宗教政策の内容と東チベットにおける実情の相違を明らかにした。5.デルゲ印経院における政治と宗教の軋轢について、聴き取り調査を行った。6.インターネット上に構築された、中国人によるチベット仏教の受容状況について調査した。7.上記の調査に基づき、研究論文を6編執筆した。研究課題を遂行するにあたり、2度海外出張を行った。1.現地調査(場所:中国四川省甘孜(カンゼ)チベット族自治州、期間:2004年8月22日9月7日)ラルン五明仏学院にて、ジグメ・プンツォク学院長圓寂後の教学状況、政治と宗教の緊張関係を調査した。帰国後論文を執筆し、研究誌に掲載した。2.文献調査(場所:中国北京市、期間:2004年12月23日30日)地方誌、政治学、宗教学に関する研究文献の調査と収集を行った。研究成果として論文を2篇執筆した。「『五明仏学院事件』の検証」ジグメ・プンツォク法王逝去前後の仏学院を取り巻く政治状況、法王に向けられた政府からの監視状況、法王とダライラマ14世の交流関係を新資料と聞き取り調査をもとに明らかにした。「荒涼と豊饒の浄土」四川省甘孜(カンゼ)チベット族自治州を研究対象地域にした理由を、毛沢東と長征、中国人民解放軍のチベット侵攻という視点から明確にした。五明仏学院に関する文献調査とフィールド調査を実施した結果、十分な研究成果をあげることができた。1.研究課題を遂行するにあたり海外出張を行った。場所:中国北京市、期間:2005年12月22日28日、目的:文献調査中国国家図書館を中心に、四川省カンゼチベット族自治州における地方誌・政治学・宗教学・民族自治に関する研究文献の調査と収集を行った。中国チベット学研究センターにて、文献資料の収集と研究者との学術交流会を行った。2.研究成果として論文を3編執筆した。「デルゲ印経院を守り抜いた書記と医師--周恩来のチベット政策と世界文化遺産・四川省徳格県」徳格印経院(デルゲパルカン、四川省カンゼ州)はチベット文化圏最大規模の経典印刷所である。1960年代、文化大革命の動乱から徳格印経院は守られた。その背景には、周恩来首相のチベット政策と宗教政策があった。「ヤチェン修行地に派遣された「工作組」と「慈輝会」--現代中国の宗教空間を探る・四川省白玉県」「ヤチェン修行地(亜青寺、四川省カンゼ州)はチベット仏教ニンマ派の修行地である。主宰者はアチュウ法王。修行者数8,000名。「宗教指導者の持つ強大なカリスマ性」と「漢人支援者ネットワーク」をキーワードに、中国政府の宗教政策を明らかにした。「ヤチェン修行地とインターネット--チベット仏教にみる「新霊性運動」の芽生え・四川省白玉県」
ハマウツボ科寄生植物の寄生形質獲得と適応進化

本研究は、コシオガマのゲノム解析とトランスクリプトーム解析によって、寄生植物の寄生形質がどのように出現し、どのように適応していったのかを明らかにすることを目指す。本年度は、コシオガマゲノムのアセンブリとアノテーションをおこなった。PacBIoデータを合わせてアセンブリの向上を図るとともにRNAseqデータを入れて、遺伝子の機能アノテーションをおこなった。さらに、独立栄養植物であるMimulusや絶対寄生植物のストライガのゲノムと比較をおこない、寄生植物に得意的に重複している遺伝子の探索をおこなった。その結果、ストリゴラクトン受容体遺伝子がコシオガマとストライガを含むハマウツボ科寄生植物で重複していることが明らかになった。このことは、ストリゴラクトンの需要システムがハマウツボ科で特異化したことを示す。また、受容体の重複は多様な宿主植物から分泌されるストリゴラクトンの構造と関係している可能性が考えられた。また、トランスクリプトーム解析から得られた、オーキシン合成酵素の詳細な解析をおこなった。この遺伝子は、吸器の先端部分で特異的に発現するオーキシン合成の鍵酵素をコードし、またノックダウンにより、吸器の形成が阻害されることを示した。さらに、異所的なオーキシン合成酵素の発現により、吸器状の形態を誘導できることを明らかにした。これらの結果は、オーキシンの局在が吸器の形成に重要な役割を果たすことを示している。27年度が最終年度であるため、記入しない。ハマウツボ科寄生植物は、吸器と呼ばれる宿主への侵入器官を発達させ、宿主から栄養を奪って生育する特殊な生存戦略を獲得している。ハマウツボ科には条件的寄生植物と絶対寄生植物があり、その進化の過程で種子サイズや光合成能の退化などの複数形質の適応進化が生じている。本研究では、条件的寄生植物コシオガマにおける寄生過程で特異的発現を示す遺伝子の機能解析により寄生の鍵遺伝子を同定し、コシオガマおよび絶対寄生植物ストライガの比較ゲノム解析により寄生形質の複合適応形質進化の過程を解明することを目的とする。1.コシオガマにおいて寄生時に特異的に発現する遺伝子の機能解析前年度までの成果としてトランスクリプトームにより寄生時に特異的に発現上昇する遺伝子リストを得ている。中でも、宿主との相互作用で特異的に発現するプロテアーゼをコードする遺伝子群に着目し、コシオガマおよびストライガから全長cDNA配列とゲノム配列をPCRにより増幅、シーケンス配列決定した。プロモーター領域を単離し、GUSまたはGFPレポーター遺伝子上流にクローニングしたコンストラクトを作成し、Agrobacterium rhizogenesを用いた毛状根形質転換法によりコシオガマ根に導入し、発現部位の特定を試みた。2.コシオガマゲノム解読コシオガマのゲノム解読を進めた。自家受粉を繰り返した純系統からゲノムDNAを抽出し、短いインサートサイズ(180 bp)のフラグメントライブラリと様々な長さ(500 bp, 3 kbp, 5kbp, 10kbp, 20kbp)のインサートサイズによるジャンプライブラリをを作成し、illumina HiSeq2000による解析をおこなった。また、PacBioシーケンサーにより8倍深度程度のロングリードシーケンスを解析し、アセンブリに加えることを試みている。1.コシオガマゲノム解読コシオガマのゲノム解読を進めた。ゲノムシーケンスには、短いインサートサイズ(180 bp)によるフラグメントライブラリーと様々な長さ(500 bp, 3 kbp, 5kbp, 10kbp, 20kbp)のインサートサイズによるジャンプライブラリーをを作成し、それぞれ100倍以上の深度でillumina HiSeq2000による解析をおこなった。また、領域が所有するPacBioシーケンサーにより8倍深度程度のロングリードシーケンスを解析し、アセンブリに加えることで、スカッフォールドギャップの穴埋めを試み、アセンブリおよびアノテーションを終了した。2.条件的寄生植物コシオガマと独立栄養植物および絶対寄生植物とのゲノム比較解析上記1で得られたコシオガマ寄生特異的遺伝子について、他の植物の遺伝子情報と比較し、系統解析をおこなった。近縁の独立栄養植物としてシソ目ゴマノハグサ科ミゾホオズキ(Mimulus guttatus)のドラフトゲノム(http://www.mimulusevolution.org/)を、絶対寄生植物としてストライガ(Striga asiatica)のドラフトゲノム(申請者らが解析済み、論文未発表)を用いた。寄生特異的遺伝子について、これらの種のゲノム上に含まれるホモログ遺伝子配列をデータベースから抽出し、系統解析をおこなった。

また、トランスクリプトーム解析から得られた、オーキシン合成酵素の詳細な解析をおこなった。この遺伝子は、吸器の先端部分で特異的に発現するオーキシン合成の鍵酵素をコードし、またノックダウンにより、吸器の形成が阻害されることを示した。さらに、異所的なオーキシン合成酵素の発現により、吸器状の形態を誘導できることを明らかにした。これらの結果は、オーキシンの局在が吸器の形成に重要な役割を果たすことを示している。平成25年度に中断が入ったため、一年繰り越しをおこなっているが、本年度の当初予定をほぼ終えることができたため、計画以上に進展していると考えている。27年度が最終年度であるため、記入しない。コシオガマの遺伝学的研究基盤の確立をさらに進める。コシオガマのアノテーションの精度を上げ、成果を論文として発表する。今年度は、産前・産後休暇のため一時中断するが、既に目標としていた遺伝子の配列決定やゲノムシーケンスを終えており、順調に研究が進展している。計画通り、トランスクリプトームで得られた遺伝子の機能解析をすすめる。トランスクリプトームの結果から、植物ホルモンの関与が示唆されたので、それについても機能解析を進める予定である。またゲノムのアセンブリを完成させる。
バスク語諸方言の記述言語学的調査

今年度は、バスク語ゴイスエタ方言、オイヤルツン方言、アスペイティア方言、オンダリビア方言について記述言語学的調査を行った。今回が初めての調査となるゴイスエタ方言、オイヤルツン方言については、基礎的動詞の語彙調査、助動詞直説法現在形と過去形の活用の調査、「動詞の単純形」の形態と意味・用法に関する調査を行った。アスペイティア方言については以前からの継続調査であるが、「能力や可能性を現す表現」について、現在まで調査者が蓄積してきたデータをさらに補強するための調査を行った。オンダリビア方言についても以前からの継続調査であるが、「動詞の単純形」について現在まで調査者が蓄積してきたデータをさらに補強するための調査を行った。結論としては、ゴイスエタ方言、オイヤルツン方言では、(1)助動詞の「聞き手が親しい女性か男性かによる活用変化」に関して、「聞き手が親しい女性である場合の活用」は、世代にもよるが、ほとんど使われなくなってきていること、(2)「動詞の単純形」については単純形を有する動詞の数が56にすぎなくなっていることがわかった。アスペイティア方言では、助動詞の「聞き手が親しい女性か男性かによる活用変化」は非常によく体系だった形で保存されており、「動詞の単純形」もこれを有する動詞は11存在する。また、「動詞の単純形」の意味・用法もゴイスエタ方言、オイヤルツン方言ではアスペイティア方言に比べ狭くなっており、「動作の進行中であること」を表すに留まると言えるようだ。オンダリビア方言の「動詞の単純形」もほぼゴイスエタ方言、オイヤルツン方言と同様の状況にあると言える。アスペイティア方言の「能力や可能性を現す表現」については一部すでに1995年に発表済みであるが、それを補うデータを収集することができた。
宇宙論に於ける重力波の研究

當初の予定を一部變更して以下の通り研究を行った。重力レンズ効果は顕著な一般相對論的効果の一であるが我々が前年行った宇宙現存在の試験としての重力レンズ効果確率の計算には相當の興味が寄せられ、且ハツブル望遠鏡での観測計画に組入られたので其重要性に鑑み此研究を重点的に継続した。目的の第一は現在入手可能なる銀河に關する情報を用ひ出来る限り正確に確率を予言する事であり、第二は同様の試験を〓えて〓わる様な他のレンズ現象を探す事である。前者に關しては論文リストの通り發表済であり、後者はリスト(3)に一部含まれるが未發表である。第二の課題として行った研究は重力波観測に於て最重要な重力源となるVirgo銀河團の距離決定と其形態の推定である。Virgo銀行團への距離推定は長年月に亘って行われて〓を〓〓であり其中心への距離は約15Mpcに落着しつつある様に思えるが、距離決定の有力方法であるTullyーFisher法を用ひると15ー22Hpcと應用の仕方に據り50%の誤差が出る。我々は此誤差を除く目的を以てVirgo銀河團に属する250ケの渦巻銀河の測光を行いTullyーFisher法を注意深く適用する事と據って、的〓Virgo銀河團の「中心」への距離は15Mpcである事、及び同銀行團は見掛けの大きさに比べて奥行が十倍程度拡ッており、〓〓〓著者に據って異る結果を待ていたと云う結論に到達した。此事は例ば重力波検出器の振幅より、重力波放出の効率を推定する場合奥行効果を考慮に入れる必要がある事を意味する。(未發表)重力波放出自體に關する計算は予備的なものと留った。例ば量子色力學の有限温度相〓〓等は一つの候補であったが、其〓〓〓は二次であり重力波放出には全く〓写しない。更にインフレ-ションの〓〓物としての重力波と關して与備的な考察を行った。
日本人の人工弁置換術後における抗血小板療法の有効性および安全性に関する臨床研究

アスピリン試験は多施設共同観察研究で2013年6月2016年6月に人工弁置換術を受けた159例をワルファリン単独群(69例, W群)とアスピリン併用群(90例, W+A群)へ振り分けた。平均観察期間2.5年、3例が追跡不能となった。一次エンドポイント(主要塞栓症及び動脈硬化性イベントまたは心血管死)はW群4例、W+A群7例(p=0.76)、二次エンドポイント(全死因死亡、出血性イベント及び消化性潰瘍)はW群9例、W+A群15例に発生した(p=0.51)。全死因死亡はW群5例、W+A群4例で有意差を認めなかった(p=0.39)。アスピリンは人工弁置換術後症例の心血管イベントを減少させなかった。人工心臓弁(機械弁)置換術後の患者は血栓塞栓症予防のため、外国でも日本においてもワルファリンによる抗凝固療法が生涯にわたり必須であるが、ワルファリンは治療域が狭く、高容量では出血リスクが、低容量では脳梗塞を含む全身性塞栓症のリスクが問題とされている。近年、塞栓症に対する抗血小板療法の有用性が注目され、外国では人工弁置換術後の症例にはワルファリンに抗血小板薬(アスピリン)を併用した方が予後良好という報告があり、ACC/AHAガイドライン上、ワルファリン+アスピリンが全ての症例でクラスIの適応となっている。しかしながら日本人における人工弁置換術後の抗凝固・抗血小板療法に関する大規模な臨床試験はほとんど見当たらず、日本での人工弁置換術後のアスピリン併用に関しては日本循環器学会ガイドライン上も取り扱いが不明瞭である。本研究の目的は、人工心臓弁(機械弁)置換術後に抗凝固療法の適応となる日本人症例において、脳血栓・塞栓症や一過性脳虚血発作(TIA)、心筋梗塞、全身性塞栓症の発症、また頭蓋内出血や消化管出血等の出血性合併症の発症、および心血管疾患による死亡の発生を、ワルファリン単独群(W群)およびワルファリン+低容量アスピリン併用群(W+A群)で比較・検討し、日本人の機械弁置換術後患者における抗血小板療法の根拠に基づく医療(EBM)を確立することである。H25年4月からH26年3月の12ヶ月の間に、九州・沖縄地区の11大学病院にて研究への同意が得られ人工弁置換術が施行された症例は30例(男性20例、女性10例)、平均年齢56.6歳(2075歳)、W群4例、W+A群25例、不明1例であった。大動脈弁、僧帽弁、三尖弁位において人工弁置換術が施行され周術期死亡は0例であった。2弁置換術症例も数例含まれていた。塞栓症や出血性合併症は、この12ヶ月ではまだ報告例がなかった。人工弁(機械弁)置換術後の患者は血栓塞栓症予防のため、ワルファリンによる抗凝固療法が生涯にわたり必須であるが、ワルファリンは治療域が狭く、高容量では出血リスクが、低容量では全身性塞栓症のリスクが問題とされる。しかしながら日本人における人工弁置換術後の抗凝固・抗血小板療法に関する大規模な臨床試験はほとんど見当たらず、日本での人工弁置換術後のアスピリン併用に関しては日本循環器学会ガイドライン上も取扱が不明瞭である。本研究の目的は人工弁(機械弁)置換術後に抗凝固療法の適応となる日本人症例において、脳血栓・塞栓症や一過性脳虚血発作(TIA)、心筋梗塞、全身性塞栓症の発症、また頭蓋内出血や消化管出血等の出血性合併症の発症、および心血管疾患による死亡の発生を、ワルファリン単独群(W群)およびワルファリン+低容量アスピリン併用群(W+A群)で比較・検討し、日本人の機械弁置換術後患者における抗血小板療法の根拠に基づく医療(EBM)を確立することである。平成25年4月から平成28年3月の36カ月の間に、九州・沖縄地区の11大学病院にて研究の同意が得られ機械弁置換術が施行された症例は133例(男性83例、女性50例)、平均年齢57±12歳(1880歳)、W群54例、W+A群79例であった。大動脈弁置換術が最も多く続いて僧帽弁置換術が多かった。機械弁の種類はSJMが最も多く、次にATSが多かった。周術期死亡は0例であった。2弁置換術施行症例が9例含まれていた。塞栓症や出血性合併症はこの36カ月で報告がなかったが、W+A群で1例貧血進行があり、骨髄穿刺にて骨髄抑制が報告されアスピリンを中止となった。本研究は、九州・沖縄地区11大学病院での多施設共同研究であり、研究への同意が得られ人工弁(機械弁)置換術を受けた症例が適応となる。11病院全体での手術件数を年間200件程度を想定していたが、昨年一年間で新たに追加登録されたのは53症例で、合計133症例に留まっている。

やや遅れている理由として、近年人口の高齢化に伴い大動脈弁狭窄症自体は増加しているが、高齢者症例に対しては機械弁よりも生体弁がより多く用いられていること、平成25年10月より経カテーテル大動脈弁留置術(TAVI)が健康保険の適応となり、手術リスクが高い症例では機械弁置換術が少なくなった可能性があり、機械弁置換術の総数が当初の計画より少ないことが考えられる。【背景】人工弁(機械弁)置換術後患者は血栓塞栓症予防のためワルファリンによる抗凝固療法が生涯にわたり必須であるが1-2%/年の主要血栓塞栓症が発症する。欧米のガイドラインではワルファリン+アスピリン併用が予後良好という報告に基づき人工弁置換術後の全症例で併用がクラスIの適応だが、日本人では大規模臨床試験がなく本邦ガイドラインではその取扱は不明瞭である。【目的】人工弁(機械弁)置換術後に抗凝固療法の適応となる日本人症例において脳血栓・塞栓症や一過性脳虚血発作、心筋梗塞、全身性塞栓症の発症、頭蓋内出血や消化管出血等の出血性合併症の発症、および心血管疾患による死亡の発生を、ワルファリン単独(W)群およびワルファリン+低容量アスピリン(W+A)群で比較・検討することである。【方法】本研究は非ランダム化多施設共同前向き観察試験で、患者登録が平成25年6月より開始、平成28年6月に完了した。九州・沖縄地区11大学病院にて研究の同意が得られ機械弁置換術が施行された症例を、担当主治医および患者の自由裁量権でいずれかの群に登録、フォローアップした。両群とも目標PT-INR1.63.0とし、W+A群ではアスピリン100mg/日が投与された。【結果】159例(男性101例、女性58例)で登録完了した。W群69例、W+A群90例で平均年齢は両群とも57歳であった。両群間の背景では、入院時血圧、脂質異常症と狭心症の既往、アスピリンおよびβ遮断薬投与、血小板数と血清クレアチニン値以外に有意差を認めなかった。心房細動の有無や心拡大、NYHA分類、弁膜症の種類(狭窄や閉鎖不全等)も両群間で有意差を認めなかった。置換術弁位はW群は僧帽弁位(33%vs11%)、W+A群は大動脈弁位(76%vs55%)が有意に多かった。イベントはW群5例(7%)、W+A群13例(14%)発生し、W+A群で高い傾向を認めた。本研究は、九州・沖縄地区11大学病院での多施設共同研究であり、研究への同意が得られ人工弁(機械弁)置換術を受けた患者が適応となる。11病院全体での手術件数を当初年間200件程度と想定していたが、近年人口の高齢化に伴い大動脈弁狭窄症の患者数自体は増加しているが、高齢患者に対しては機械弁よりも生体弁が多用されること、平成25年10月より経カテーテル大動脈弁留置術(TAVI)が保険償還され、さらに2016年からは二種類目のTAVI弁であるCoreValve弁も保険償還されたため、手術リスクが高い症例ではTAVIが選択され機械弁置換術の総数が少なくなった可能性が最も考えられ、このため本研究の全登録症例数は想定よりも少ない159例に留まったと考えられる。【背景】人工弁(機械弁)置換術後患者は血栓塞栓症予防のためワルファリンによる抗凝固療法が生涯にわたり必須であるが、1-2%/年の主要血栓塞栓症が発症する。欧米のガイドラインでは機械弁置換術後の全症例でアスピリン併用がクラスIの適応だが、日本人では大規模臨床試験がなく本邦ガイドラインではその取扱は不明瞭である。【目的】機械弁置換術後に抗凝固療法の適応となる日本人症例において脳血栓・塞栓症や一過性脳虚血発作、心筋梗塞、全身性塞栓症の発症、頭蓋内出血や消化管出血等の出血性合併症の発症および心血管疾患による死亡の発生を、ワルファリン単独(W)群およびワルファリン+低容量アスピリン(W+A)群で比較・検討することである。
オーキシン生合成遺伝子の発現を解析し極性移動という概念を見直す

NtAMI1遺伝子を大腸菌細胞内で発現させて調製したNtAMI1タンパク質を用いて機能解析を行なった。その結果、NtAMI1遺伝子産物はインドール-3-アセトアミド(IAM)をインドール-3-酢酸(IAA;代表的なオーキシン)に変換する酵素であることを明らかにした。これまで、IAM→IAAの変換酵素は植物には存在しないと考えられてきたので、定説を覆す重要な発見になった。平成24年度および研究期間を通じて実施した研究の成果は下記の通りである:(1)植物のオーキシン生合成経路に関する論文が外国誌に掲載された。(2)NtAMI1遺伝子のオーキシン生合成に関わる機能に関して、海外の学会で発表した。(3)NtAMI1遺伝子産物の機能解析を行なった。(4)NtAMI1遺伝子の転写制御領域をレポーター遺伝子GUSに連結したのち植物細胞組織に導入し、形質転換植物を作出した。(5)その形質転換植物を用いて、NtAMI1遺伝子の発現制御様式を解析した。(1)に関して:J. Exp. Botanyに掲載された。これはオックスフォード大学出版局が発行している学術雑誌であり、評価指標として知られるインパクトファクターが5.364という高い数値を持つ。我々の論文は「最もよく読まれる論文50」の上位に入り、大きな影響力を持つ論文を公表できたと考えられる。(2)に関して:アメリカ合衆国で開催された“Auxin 2012"で発表した。オーキシンの生合成や、そのシグナル伝達、生理作用などに関して、4年に一度開催される学術会議であり、世界各国からその分野の研究者が集い、活発な質疑応答がなされた。我々の研究成果は注目され、有意義な情報交換ができた。(3)に関して:NtAMI1遺伝子を大腸菌細胞内で発現させ、その細胞抽出液からタンパク質を精製し機能解析した。その結果、インドール-3-アセトアミド(IAM)をインドール-3-酢酸(IAA;代表的なオーキシン)に変換する酵素であることを明らかにした。これまで、IAM→IAAの変換酵素は植物には存在しないと考えられてきたが、定説を覆す重要な発見になった。(4)と(5)に関して:オーキシン生合成酵素遺伝子NtAMI1の発現制御様式を解析した結果、オーキシンが作用しているとされる部位で本遺伝子が発現していることが示唆された。平成23年度に実施した研究の成果は下記の通りである:(1)植物のオーキシン生合成経路に関する論文を投稿し受理された。(2)タバコN.tomentosiformisのゲノムDNAからNtAMI1遺伝子の転写制御領域(約1400 bp)を単離し、その塩基配列を決定した。ただし、一定の成果が得られるまでは公表を差し控えたいので、データバンクにはまだ登録していない。(3)NtAMI1遺伝子の転写制御領域をレポーター遺伝子GUSに連結したのち、バイナリーベクター(pRAMgus)を作成した。それをAgrobacteriumに導入し、その感染系を用いて、植物細胞組織への遺伝子導入を試みた。(4)アクティベーション・タギング用のプラスミドを持つAgrobacteriumをBY-2細胞に接種し、生育にオーキシンを必要としない形質転換植物細胞をスクリーニング中である。(5)IAM生合成酵素遺伝子の単離に向けて、候補となる遺伝子配列を選び、単離条件の検討を行なった。(1)に関して:Journal of Experimental Botanyに投稿し受理された。植物のオーキシン生合成経路に関する文献を整理し、極めてわかりやすく解説できた。曖昧な情報に基づく偽りの生合成経路を正すことができた点が意義深い。今後、本論文はこの分野で頻繁に引用されると思われる。(2)と(3)に関して:単離したNtAMI1遺伝子の上流域には、CAAT、GC、およびTATAボックスが認められた。このような領域が約1400 bpも単離できたので、遺伝子の発現制御を解析するには十分な長さだと考えられる。定法に従い、pRAMgusを導入した形質転換植物を作出すれば、NtAMI1遺伝子の発現とオーキシン生合成との関連を解析できる。その準備が調ったという点で、大きな成果だと考えられる。本研究のメインテーマである「植物のオーキシン生合成」に関する論文を外国誌に掲載できたことは大きな成果である。また、多くの論文を精読し、それをまとめることによって、IAMを経由する生合成経路が主要な経路であり、植物界で普遍的に存在していることを示すことができた。インパクトファクターの大きい外国誌に、研究成果を発表できたことは1つの目標を達成できたと考えている。バイナリーベクターpRAMgusを作成できた。それを植物に導入することによって、IAMをIAAに変換する酵素遺伝子の発現が検出できるようになる。その準備が調った点は大きく評価でき、前半1年間の目標はおおむね達成されたと考えている。オーキシンが「いつ、どこで」作られるのかを知るために、次の実験を行なう。(1)トランスジェニック植物体を用いたNtAMI1遺伝子の発現

解析:IAMからIAAへの変換に関わる酵素遺伝子NtAMI1の転写制御領域の下流に、レポーター遺伝子GUSを連結したバイナリーベクターpRAMgusで形質転換した植物体を用いて、オーキシンが関わる環境応答について解析する。環境応答のうち、光、重力、傷害などに対する植物の応答とNtAMI1遺伝子の発現誘導に注目して解析を進める。その手段としてGUS遺伝子を用いた組織化学的検出を行なうことにより、「いつ、どこで」オーキシン生合成遺伝子NtAMI1のmRNAが作られるのかがわかる。また、NtAMI1遺伝子産物によって生成したIAAを、抗IAA抗体を用いて検出することによって、「いつ、どこで」IAAが作られているのかを検出できる。(2)IAM生合成酵素遺伝子の単離:アクティベーション・タギングを用いる方法と、候補となる遺伝子配列をもとに作成したプライマーを用いたPCR法を試みる。以上の研究を推進することによって、オーキシンが茎の頂端部で作られたのち植物体内を極性的に移動するのではなく、植物体内に存在する不活性型のIAMが、オーキシン生合成遺伝子の適材適所の発現によって速やかにIAAに変換され、その結果、生理作用を発揮するという新しい概念を構築する。次年度の研究費は、主として試薬やガラス器具類、論文別刷代金等の消耗品費に使用する。研究成果の発表等に関わる国内外への旅費にも使用する。また、謝金等にも多くを割くことになる。その理由としては、学外の研究協力者と共に研究を推進する予定をしているからであり、専門的知識の提供および実験補助に係わる謝金や報酬に使用する。また、論文作成に係わる校閲代金にも使用することになる。その他、学外の研究協力者との通信費や運搬費にも使用を予定している。
ゲノムワイド解析による進行肺がんの治癒実現へ向けた基盤研究

「IV期肺がんにおいて治癒は見込めない」と考えられている一方で、非常にまれながら臨床的治癒に近いIV期症例が存在する。そのような症例を体系立てて集積し、その臨床的特徴とゲノム解析等で同定される分子生物学的特徴を比較検討した試みは無い。本研究の目的は、化学療法が著効し臨床的治癒に近い経過を示したIV期肺がんまたは中皮腫症例の全貌を検討し、IV期肺がんを臨床的治癒に結びつける要因を明らかにし、肺がんのさらなる個別化医療実現へ向けた基盤の確立を目指すことである。本研究では、以下の検討をおこなう。(1) IV期肺がん・中皮腫長期寛解維持症例から採取した検体を用いて全エクソーム解析にて遺伝子変化を網羅的に検索する。それらの臨床的特徴(組織型、治療反応性等)との統合解析を行い、IV期肺がん・中皮腫の治癒に関与する分子プロファイル・マーカーを探索的に検討する。(2)共同研究施設における症例についても同様の検討を行う。(3)同定した治癒に関与する遺伝子変異等の分子プロファイル及びマーカーを細胞株モデルにおいて検討し、創薬へ向けての橋渡しとなる前臨床データを取得する。これまでに化学療法が著効し、無治療で無再発が2年間以上維持できている検討候補症例を4例同定した。進行肺がんの長期生存と治癒実現に向けて、平成30年度の研究においてがん免疫抑制機構についての成果が得られた(Kubo, Cancer Invest, 2019)。また、本研究と同じがん遺伝子パネルを用いた次世代シーケンス解析における検出能について従来法との比較検討を行った(論文投稿中)。本研究対象症例の選択基準は、1)病理学的確定診断のあるIV期肺がんまたは中皮腫、2)年齢20歳以上、3)化学療法が奏効し(完全寛解CRまたは部分寛解PR)、最終治療終了後2年以上無治療で寛解が維持されていること、4) DNA抽出が可能な治療前の腫瘍検体があること、5)末梢静脈血の提供が可能であること、6)研究参加への書面によるインフォームドコンセント、である。適格症例は過去10年間で自験4例が同定され、詳細な臨床情報を得ているが、症例登録に至っておらず解析が開始できていないことが遅れの要因である。一方平成30年度の進展としては以下の2点があげられる。108例の非小細胞肺癌(NSCLC)切除検体を用いた解析において制御性T細胞の活性化が再発・予後におよぼす影響を明らかにした(Kubo, Cancer Invest, 2019)。また、本研究課題と同じがん遺伝子パネルを用いた次世代シーケンス(NGS)解析における検出能について従来法との比較検討を行った。876例のNSCLC治癒切除症例の腫瘍組織を用いてEGFRおよびKRAS遺伝子変異検出についてNGSとリアルタイムPCR法の詳細な比較検討を行った(論文投稿中)。令和元年度は、自験例4例の研究参加同意を得て登録を行い、次世代シーケンスを用いた網羅的遺伝子解析、全エクソーム解析を実施する。令和元年度に以下の検討を行う。(2)極めてまれな症例集団となるため、分担/連携研究者の所属する共同研究施設における症例についても同様の検討を実施し、さらなるデータ取得を行う。(3)同定した治癒に関与する遺伝子変異等の分子プロファイル及びマーカーは新規の治療標的となる可能性がある。これらを細胞株モデルにおいて検討し、創薬へ向けての橋渡しとなる前臨床データを取得する。自験例4例における次世代シーケンスを用いた網羅的遺伝子解析を実施する。パラフィン包埋腫瘍組織標本からDNA抽出を行い、次世代シーケンシングを実施する。(1)がん関連72遺伝子からなるホットスポット解析を行うとともに、遺伝子増幅解析(リアルタイムPCR)および蛋白発現解析(免疫染色)を実施する。(2)次世代シーケンスによる全エクソーム解析を行う。また、各症例から末梢静脈血を採取し、抽出したDNAをがん組織に対する正常対照として用いる。(3)自験例4例の臨床情報および網羅的遺伝子解析の統合解析。体細胞変異の遺伝情報解析において、それぞれの化学療法効果との関連、予後因子、がんの組織型等の臨床病理学的因子について探索的に検討を行う。また、本学とともに共同研究施設を通じて新規症例を探索し、症例の追加検討を行う。同定したゲノム異常の新規治療標的としての前臨床評価を行う。以上の結果をとりまとめ、学会および論文発表を行う。IV期肺がんにおいて治癒は見込めない。一般的にはそのように考えられている一方で、非常にまれながら臨床的治癒にきわめて近いIV期症例が存在する。そのような稀少な症例を体系立てて集積し、その臨床的特徴とゲノム解析等で同定される分子生物学的特徴を比較検討した試みは無い。