hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
トランスポートソームと細胞骨格の相互制御機構

2.コンピューター解析によってSGIP1αと高い相同性を示す分子2種(FCHO1とFCHO2)を明らかにした。このうちFCHO2は、普遍的に発現しており、SGIP1αと同様に微小管、リン脂質、Eps15に結合し、トランスフェリンのエンドサイトーシスを制御していた。また、FCHO2は微小管オーガナイジングセンターである中心体にも局在しており、この分子のノックダウンは中心体を増大させて微小管の分布異常と細胞分裂の障害を引き起こした。中心体のコンポーネントはユビキチン化されてダウンレギュレーションされることが知られており、FCHO2は細胞膜やエンドソームのみならず中心体からのEps15-ユビキチンを介した分子の輸送を制御している可能性が考えられる。このように本年度の本研究は予想以上に進展し、当初の目的をほぼ達成することができた。私共は、複数の新しい微小管結合蛋白質を見出しており、このうちSGIP1αとその関連分子FCHO2はリン脂質に結合し、細胞膜を変形させてクラスリン依存性エンドサイトーシスを制御していることを見出している。また、FCHO2が中心体に局在し、このノックダウンは中心体を増大させて、微小管の分布異常と細胞分裂の障害を引き起こすことも明らかにしている。本年度の本研究において、FCHO2の研究を発展させ、以下の成果を得た。1. FCHO2がインテグリンのエンドサイトーシスを制御していること、この過程でインテグリンがユビキチン化されること、さらにFCHO2がこのユビキチン化をコントロールしていることを明らかにした。また、インテグリンのユビキチン化に関わる酵素(E3)としてNedd4Lを見出した。2. GFPとγチュブリンの融合タンパク質を細胞に発現させ、FCHO2のノックダウンが分裂終期の中心体の縮小を抑制することを見出した。さらにDendra2とγチュブリンの融合タンパク質を発現させた細胞株を樹立した。Dendra2は、ある波長のレーザー光を照射すると、緑から赤に変わる蛍光タンパク質である。この細胞株を用いて、FCHO2のノックダウンが間期の中心体からのγチュブリンのダウンレギュレーションを抑制することを明らかにした。また、中心体におけるFCHO2と関連したユビキチン化酵素(E3)としてWWP1を見出した。私共は、リン脂質結合タンパク質FCHO2が細胞膜を変形させてクラスリン依存性エンドサイトーシスを制御していることを見出している。また、エンドサイトーシスの過程でFCHO2はユビキチン化酵素Nedd4Lと密接に関わっていることを見出している。さらに、FCHO2は中心体に局在し、そのノックダウンは中心体を増大、増加させて、微小管の分布異常と細胞分裂の障害を引き起こすことも明らかにしている。1. FCHO2は細胞膜に直径約50nmの膜チューブを形成し、Nedd4Lはこの膜チューブにリクルートされた。一方、Nedd4Lは他のリン脂質結合タンパク質が形成する150nmや25nmの膜チューブにリクルートされなかった。また、FCHO2の強制発現はNedd4Lを活性化したが、他のリン脂質結合タンパク質は活性化しなかった。
アルミナ拡散防止中間層を含む作製容易なニオブ基合金用耐酸化コーティングの開発

ニオブ基合金は高融点で、高温強度に優れていることから、将来の超高温用構造材料として期待され、研究されている。このニオブ基合金の耐酸化性は1000°C以上で非常に悪いため、高温大気中で使用する際は耐酸化コーティングが必要となる。しかし、コーティング層と基材間の熱膨張係数の差からクラックの形成が起こり易く、また基材との相互拡散によるコーティング層の劣化が起きやすいため高温大気中で長時間使用可能なコーティングは未だに開発されていない。ここで本研究では昨年度まで、最外部層としてMo(Si,Al)_2あるいはMo-Si-B系金属間化合物層をコーテイング、耐酸化性の評価を行ってきた。しかしMo(Si,Al)_2あるいはMo-Si-B系金属間化合物は室温で非常に脆く、熱応力でクラックが発生しやすい問題が起こりやすかったため、今年度は最外部層を室温で比較的高靭性で、アルミナ形成能のあるNiAl置き換える試みを行った。その結果、CVD等数種類のコーティング処理かつ熱処理を組み合わせることにより、ニオブ基材全面に均一な厚さ(20μm40μm)のNi-Al系金属間化合物/Al_2O_3二層被膜が形成可能であることを明らかにした。このコーティングは基本的に複雑形状のニオブ基合金基材にも適用可能で、かつAl_2O_3拡散防止中間層とNiAl、及びAl_2O_3拡散防止中間層とニオブ基材との密着性も良好なため、熱サイクル特性等をさらに詳細に確認する必要があるが、長時間高温で反応層の形成されにくいニオブ基合金用コーティングとして、工業的に適用できる可能性が高いと考えられる。なお今年度はスパッタリング法による,Moコーティング+パックセメンテーション法によるコーティングも試みたが、スパッタリングによるMo被膜の形成速度が非常に遅く、上記方法の方が短時間で良好な被膜の得られやすいことが分かった。しかし、コーティング層と基材間の熱膨張係数の差からクラックが形成されたり、基材との相互拡散によるコーティング層の劣化が起きやすいため高温大気中で長時間使用可能なコーティングは未だに開発されていない。本研究では、(1)ニオブ基材の上に耐酸化性に優れるMo(Si,Al)_2、NiAl、Cr添加Nb(Si,Al)_2、B添加Mo_5Si_3粉末を直接のせ放電プラズマ焼結結合を行う、(2)(1)の粉末とニオブ基材間にAl箔を挟み、放電プラズマ焼結接合を行う、の二通りの方法でニオブ基材へのコーティングを試みた。その結果、(1)について、B添加Mo_5Si_3層のみがニオブ基材に密着することが分かり、さらにコーティング層と基材間の熱膨張係数の差を小さくするためB添加Mo_5Si_3層に5wt%SiO_2を添加するとコーティング層中にクラックが形成されにくくなることが分かった。またMoSi_2-SiO_2/B添加Mo_5Si_3-SiO_2二層で全面コーティング(コーティング層厚さ約100μm)したニオブ基材(外径5mm、厚さ3mm)の耐酸化性を調べたところ、乾燥空気中1200°C1400°Cで50hr保持しても、コーティング層の剥離、基材の内部酸化が全く起こらないことが分かった。今後減圧プラズマ溶射法などを取り入れながらさらにサイズの大きい基材のコーティングを試みる予定である。また(2)について、すべてのコーティング層はニオブ基材に密着したが、拡散防止機能が期待できるアルミナ中間層はMo(Si,Al)_2粉末を用いたときのみ形成され、他の場合は金属間化合物層が形成されることが分かった。この原因については今後検討する予定である。本研究では、今年度まず昨年度放電プラズマ焼結法+パックセメンテーション法を用いて得られた、1400°Cで優れた耐性を示すMoSi_2-SiO_2/B添加Mo_5Si_3-SiO_2二層コーティングが減圧プラズマ溶射法+パックセメンテーション法で作製可能か確認する実験を行った。その結果粒径2μmあるいは-45μmの5wt%SiO_2粉末をB添加Mo_5Si_3粉末に混合して溶射するとSiO_2相の体積比が、特に前者でかなり減少してしまうことが明らかになった。これは基材に到達前SiO_2粉末粒子が軽いために基板外へ飛んだかあるいは気化してしまったためではないかと予想される。またSiO_2相を含まない形式でB添加Mo_5Si_3層をコーティングした場合、コーティング面積が大きくなると一部コーティング層の基材からの剥離が見られることが分かった。

この原因としてB添加Mo_5Si_3層とNb基材の熱膨張係数の違いによる熱応力の発生が考えられる。平成16年度は直接溶射でB添加Mo_5Si_3層をコーティングするのではなく、まず溶射法あるいはPVD法(下記のスパッタ装置)でMoあるいはMo-B二元系合金をコーティング、次にB、Si、Al等の拡散処理を行う方法でコーティング層の密着性の改善を試みる予定である。またMo(Si,Al)_2/Al_2O_3二層コーティングについては、溶射法のみでは薄いAl_2O_3層の形成が難しいことから平成15年度末研究代表者が所属する研究グループに設置されたスパッタ装置を用いて上記コーティングを試みる予定である。ニオブ基合金は高融点で、高温強度に優れていることから、将来の超高温用構造材料として期待され、研究されている。このニオブ基合金の耐酸化性は1000°C以上で非常に悪いため、高温大気中で使用する際は耐酸化コーティングが必要となる。しかし、コーティング層と基材間の熱膨張係数の差からクラックの形成が起こり易く、また基材との相互拡散によるコーティング層の劣化が起きやすいため高温大気中で長時間使用可能なコーティングは未だに開発されていない。ここで本研究では昨年度まで、最外部層としてMo(Si,Al)_2あるいはMo-Si-B系金属間化合物層をコーテイング、耐酸化性の評価を行ってきた。しかしMo(Si,Al)_2あるいはMo-Si-B系金属間化合物は室温で非常に脆く、熱応力でクラックが発生しやすい問題が起こりやすかったため、今年度は最外部層を室温で比較的高靭性で、アルミナ形成能のあるNiAl置き換える試みを行った。その結果、CVD等数種類のコーティング処理かつ熱処理を組み合わせることにより、ニオブ基材全面に均一な厚さ(20μm40μm)のNi-Al系金属間化合物/Al_2O_3二層被膜が形成可能であることを明らかにした。このコーティングは基本的に複雑形状のニオブ基合金基材にも適用可能で、かつAl_2O_3拡散防止中間層とNiAl、及びAl_2O_3拡散防止中間層とニオブ基材との密着性も良好なため、熱サイクル特性等をさらに詳細に確認する必要があるが、長時間高温で反応層の形成されにくいニオブ基合金用コーティングとして、工業的に適用できる可能性が高いと考えられる。なお今年度はスパッタリング法による,Moコーティング+パックセメンテーション法によるコーティングも試みたが、スパッタリングによるMo被膜の形成速度が非常に遅く、上記方法の方が短時間で良好な被膜の得られやすいことが分かった。
知的障害養護学校における新領域「自立活動」に対応した「動作法」の適用

本研究は,3年計画で実施され,本年度は,最終年度にあたる。本研究の研究目的は,知的障害養護学校の中で,障害の重い知的障害児,自閉症児の「自立活動」の指導において,「動作法」をどのように適用すれば効果的であるかについて,事例研究を中心に検討することである。3年間の研究の概要及び得られた研究成果については,以下の通りである。(1)平成11年度,6名,平成12年度,6名,平成13年度,4名,3年間で計16名の知的障害児,自閉症児への「動作法」適用の事例研究を実施した。平成11年度の事例は,動作課題の検討が主であり,膝立ち位での腰の落とし停めとせり上げ,立位での左右への体重移動が行動特徴をみる課題として効果的であることが分かった。平成12,13年度の10名の事例では,「動作法」による動作変容が,他の心理行動(例えば,手指による作業課題,人物画描写,動作模倣,遊び等)の発達・変容とどのような関連性をもつか,に焦点をおいて実施された。これらの事例では,動作変容が心理行動の発達・変容に効果をもたらすことが示された。(2)この結果は,「動作法」の適用が,児童・生徒の心理行動の向上に効果的であることを示し,知的障害養護学校における「自立活動」の目的に合致し,指導法としても有効であることを示唆している。(3)研究成果報告書では,平成13年度に実施した4名の事例研究(2名は,「動作法」と動作模倣発達の関連性を,2名は,「動作法」と遊びの発達の関連性をテーマとした)を掲載した。(4)3年間の間に,九州大学大学院人間環境学府附属発達臨床心理センター,独立行政法人国立特殊教育総合研究所,愛知教育大学に出向き,本研究への貴重な助言を受けた。本研究は、3年計画で実施され,本年度は,初年度にあたる。本研究の目的は,知的障害養護学校の中で,障害の重い知的障害児,自閉児の「自立活動」の指導において,「動作法」をどのように適用すれば効果的であるかについて,事例研究を中心に検討することである。初年度は,以下の成果を得た。(1)四国4県の知的障害養護学校において,「動作法」を利用している数名の教師に対し,「自立活動」の指導において「動作法」をどのように適用するかについてインタビューを行った。その結果,「養護・訓練」から「自立活動」に名称が変わって,指導内容や方法についても変えていく必要があるものの,具体的な方策は,まだ未整理の部分が多いというのが現状であった。また,「動作法」は肢体不自由児に対する指導法という観念が教員の中に強く,知的障害児,自閉児への適用に踏み出せない教員が多いという実態も分かった。(2)平成11年夏期に徳島県及び高知県で実施された5泊6日の集団集中訓練において,6名の知的障害児,自閉児に「動作法」による指導を実施した。用いられた指導技法は,座位での躯幹反らせ,膝立ち位での腰の落とし停めとせり上げ及び左右への体重移動,立位での左右への体重移動が多かった。これらの課題の中で,知的障害児,自閉児の行動的特徴をより知るためには,膝立ち位での腰の落とし停めとせり上げ,立位での左右への体重移動が効果的であることが分かった。(3)九州大学発達臨床心理センター及び国立特殊教育総合研究所に出向き,本研究の理論的枠組み及び事例を検討し,助言を得た。本研究は,3年計画で実施され,本年度は,2年目にあたる。

本年度の研究目的は,障害の重い成人知的障害者,自閉症者及び自閉症幼児に対し,「動作法」をどのように適用すれば効果的であるかを,事例研究を中心に検討することである。本年度は,以下の成果を得た。(1)平成12年度は,成人知的障害者と自閉症者4名及び就学前の自閉症幼児2名,計6名について,平成12年2月11月の長期間,週1回の「動作法」による指導を実施した。知的障害者,自閉症児(者)への長期間の指導を実施し,「動作法」によってどのような動作改善がなされるかを課題としたため,あえて学齢の児童・生徒を対象としなかった。成人自閉症者及び自閉症幼児,計4名の指導で特に共通して見られた動作特徴は,「状況に応じて腕に力を入れ,その力を保持する」ことの不得手さである。例えば,腕立て伏せ,腕相撲等は,あるルールに応じて腕に力を入れ,一定時間保持することであり,これは,彼らの握力を計測しようと試みる際にも同様である。「動作法」によって,まず,身体各部位のリラクセイションを進め,その後タテ系訓練によって身体に適切に力を入れるという操作を行えるような訓練プログラムを組んだところ,4名とも,腕に力を入れる操作を獲得し,特に,自閉症幼児の場合に顕著であった。こうした指導が,自閉症児の「自立活動」の指導に貢献できるとの確信を得た。(2)九州大学大学院人間環境学府附属発達臨床心理センター及び国立特殊教育総合研究所に出向き,本研究の理論的枠組み及び事例を検討し,助言を得た。本研究は,3年計画で突施され,本年度は,最終年度にあたる。本年度の研究目的は,障害の重い知的障害幼児及び自閉症幼児に対し「動作法」を実施し,同時に,他の心理課題を行い,「動作法」による動作変容と心理行動の発達・変容がどのような関連性をもつか,に焦点をあてて,事例研究を実施した。また,最終年度であるため,3年間で得られた研究成果を報告することも行った。本年度の研究成果は,以下の通りである。(1)平成13年度は,就学前(45歳)の知的障害幼児2名及び自閉症幼児2名,計4名について,平成13年2月11月の長期間,週1回の「動作法」による指導を実施した。4名とも,動作法の実施と同時に,心理課題を行った。2名の知的障害幼児には,訓練者とのごっこ遊びを行い,2名の自閉症幼児には,動作模倣課題を行った。「動作法」による動作課題は,知的障害幼児では,膝立ち位,立位での左右への体重移動,自閉症幼児では,リラクセイション課題(躯幹反らせ),「ギッコン・バッタン」(対面座位で手をつなぎ,交互に引き合う)であった。4名の幼児とも動作改善がみられ,同時に,訓練者とのごっこ遊び,動作模倣課題の発達・変容もみられ,動作改善と心理課題の発達・変容の間の関連性が明確となった。これは,訓練者の指示に従い,「身体に力を入れる・力を抜く」というコントロールの向上が,心理課題に効果をもたらすことを表し,「自立活動」の指導に貢献できることが分かった。(2)3年間の研究成果報告書として,本年度の4事例を中心に掲載した。(3)九州大学大学院人間環境学府附属発達臨床心理センター,独立行政法人国立特殊教育総合研究所,愛知教育大学に出向き,本研究の理論的枠組み及び事例を検討し,助言を得た。
恐怖感・不安感に対してカスタマイズ可能なインフォームドアセント用ツールの開発

プレパレーションに重要なのは,理解につなげる要素をプレパレーション・ツールに組み込んでいるか否かである.一つは,画面内の必要な箇所を確実に見させてその時点で説明を行えるようにすること.もう一つは,リアル表現から痛みを感じてしまい不安感や恐怖感を誘発するぎりぎりの画像を提示することで,真実味と痛みの感じるレベルをコントロールして,最大の理解へとつなげることである.本研究では,この2つの機能を組み込んだCVカテーテル用プレパレーション・ツールを開発した.その後,概念モデル可視化ツールの開発も行った.患児に説明するために画面提示する医療処置器具をリアルなまま見せるのかイラストのようなCGで見せるかによって,恐怖感・不安感は大きく異なる.つまり,インフォームドアセント用ツールを構成するデザイン要素によって患児の心への負担は大きく異なるのである.そこで本研究では,恐怖感・不安感をコントロールできるデザイン要素を明らかにすることを目的とし,非接触型アイマークカメラを使った実験を行い,そこから得られたデザイン要素をツールに組み込むことで,画面表示する医療処置器具をイラストからリアルへと自由にカスタマイズでき,患児の年齢・発達・状況に最適化できるインフォームドアセント用ツールを開発し,医療現場に無料ダウンロード提供する.プレパレーションに重要なのは,理解につなげる要素をプレパレーション・ツールに組み込んでいるか否かである.一つは,画面内の必要な箇所を確実に見させてその時点で説明を行えるようにすること.もう一つは,リアル表現から痛みを感じてしまい不安感や恐怖感を誘発するぎりぎりの画像を提示することで,真実味と痛みの感じるレベルをコントロールして,最大の理解へとつなげることである.本研究では,この2つの機能を組み込んだCVカテーテル用プレパレーション・ツールを開発した.その後,概念モデル可視化ツールの開発も行った.中心静脈カテーテルに関するインフォームドアセント用ツール“KIZUNA"のプロトタイプを完成させた,“KIZUNA"は,CVカテーテルを挿入する患児への説明用ツールであり,インタラクティブな操作が可能である.コンテンツは,CVカテーテルを挿入済みの患児に対して挿入前後の疑問点等を集約し,実装した.CVカテーテル本体の説明と身体に挿入した時の状態説明・消毒のシーン等において,イラストからリアルまでの5段階で表示できるように設計した.デザイン要素の組み合わせによる5段階表示によって,患児の恐怖感・不安感を考慮した説明が可能かどうか,静岡県立こども病院において倫理委員会を経て実験に入った段階である.これと平行して,非接触アイマークカメラを2台使った説明者と被説明者の視線移動をシンクロさせ定量的評価を行うためのプレ実験を行った(継続中).これは,看護師が患児に対してツールの画面を見ながら言葉による説明をしているとき,看護師と患児の視点移動からその理解を定量的にとらえるためのプレ実験である.内容は,絵画鑑賞とし,“一人で自由に鑑賞したとき",“説明者が鑑賞法を指南しながら鑑賞したとき",“ある一定期間を空けて再び一人で同じ絵画を鑑賞したとき"の視線移動の比較から,対話型鑑賞法の有効性を定量的に評価できることを示すためである.これとは別に,外来用予防接種と血液の働きの2点について,アナログツールを用いながらデジタルツールとしての機能も融合させてプレパレーションが実施できるツールの開発を行った.また,保健行動のリテラシーツールとして,コンテンツをダウンロードして子どもとその保護者が共同で製作できるアナログツールの開発も行った.CVカテーテル用プレパレーション・ツール"Kizuna"のプロトタイプを用いて,北里大学病院小児病棟での使用実験,および静岡県立こども病院での継続的な使用により,その有効性を明らかにした.また,各病院のフィードバックによって得られた知見をデザインに生かしてバージョンアップした.バージョンアップしたツールは,第3回キッズデザイン賞(主催:NPO法人キッズデザイン協議会,後援:経済産業省)のリサーチ部門において受賞した.次に,画面上で伝えるべき情報となる「要点箇所の視認性を促進するためのデザイン要素」と「人が痛みを感じるレベルを変化させるためのデザイン要素」を明らかにし,その要素を画面説明箇所に組み込んだツールとして更にバージョンアップした.「説明者(=看護師)」と「聞き手(=患児)」によるプレパレーション時において,理解へと導くためには,先ず説明したい要点箇所の視認性を高める必要がある.そこで,入院患児を対象とした実験の代替として,理解度の高い側から低い側へ説明し理解を図る状況を「説明者(=画家)」と「聞き手(=素人)」による対話型鑑賞法によって実験を行った.この実験結果から,写真を元に単色でベタ塗りにした画像を作成し,その加工画像を元の写真のレイヤー上に重ねて透明度のみを変化させる画像表示機能が有効であることを明らかにし,患児が感じる痛みと情報の真実味のバランスコントロールする機能を10段階に増やして実装した.本ツールは,看護医療関係者に限定し,チャイルドライフ・デザインのHPから無料ダウンロード提供を開始し,フィードバックを得ている段階である.これとは別に,プレパレーションを実施する看護師に患児が信頼をおいていなければ,いかに有効なツールを開発しても効果的な運用はできないため,看護師と患児の関係を密にするためのツール"Kimito"を開発した.現在,北里大学病院にて稼働中である.前年度に恐怖感・不安感を軽減するためのデザイン要素を明らかにしている.そこで画面全体のデザイン構成要素を明らかにするために明日手術を行う患児を対象に北里大学病院において非接触型アイマークカメラ2台を用いて実験を行った.

看護師が見るプレパレーション用ツール画面の視線移動とその説明を聞いている患児の視線移動をシンクロさせて比較することで,場面を構成するデザイン要素とその制御方法を明確にするためである.比較分析は,7画面で行った.この実験結果から,看護師は事前に説明のシナリオを考えているため,その箇所を重点的に見たが,患児は予備知識がないため見る個所が定まりにくかった.注射や手術など自分の身体に関わる場面においては,患児は急激に文字情報よりも視覚情報を重要視する傾向があっため,治療や処置の場面は他の場面よりも重点的に視覚情報を描写する必要がある.患児が不安感を抱いている場面では,母親に対する期待値が高まるため,「母親を大きく表示する」,「画面上の母親にアクションを起こさせる」,「母親の音声を再生する」などにより,プレパレーション効果を高めることができる.看護師は,声によって患児の視線移動を促すだけでなく,マウスの操作によって視線移動を促すことが重要であり,そのための効果的なデザインが必要である.等々の知見を得ることができた.そこで,これらをデザイン要素として,前年度開発したツールに組み込みチャイルドライフ・デザインのHPで提供を実施した.既に,恐怖感・不安感を制御するために,画像を10段階に変化するシステムを実装しているが,別のデザイン要素を制御することで恐怖感・不安感を詳細にコントロールできると考えて,その効果を検証するための実験ツールの開発に着手した.これとは別に,子どもの心理状態に適した段階でプレパレーションが実施できるタイミングを図るためのツールの開発にも着手した.前年度までに恐怖感・不安感を軽減するためのデザイン要素として色味の変化手法を明確にして,且つ,非接触型アイマークカメラを用いて画面全体のデザイン構成要素を明確にしている.また,それらの要素を組み込んでCVカテーテル用プレパレーション・ツール"Kizuna"として医療関係者に無料ダウンロード提供を行っている.そこで,更にツールの精度を高めるために,本年度は,デザイン要素を「写真-イラスト」「カラー-色無し」「アウトラインなし-アウトラインあり」の3つに分解して,それぞれの刺激が恐怖感・不安感に与える影響を実験から明らかにすることを目的とした.その実験のために,グラフィックエレメント・ブレンド・シミュレーターを新たに開発した.この実験ツールは,3つのスライダーバと視角刺激提示領域からなり,スライダーバを動かすことでリアルタイムに画像が加工されるものである.被験者34名を対象に,プレパレーション用の3枚の画像を提示して「高リアリティ(治療方法等が的確に伝達できる)かつ低恐怖感(痛み等の恐怖感を想起させない)に見える画像に3つのスライダを調整してください.」とのタスクを課した.その結果を受けて,"Kizuna"をバージョンアップした.また,同時に,医療機関からのフィードバックより,プレパレーションの有効性を直感的に表現でき,しかも瞬時に数値化できる感性評価ツールが必須であると考えるに至り,概念モデル可視化ツール"rami"を開発した.
自己集合性ペプチドを用いた酸蝕歯の予防法の確立

自己集合性ペプチドの適用の有無が酸蝕歯モデルの機械的性質に及ぼす影響について、超音波透過法を用いて非破壊的に検討した。ウシ歯エナメル質をオレンジジュース(pH3.4)に5分間浸漬した後、人工唾液に保管した。この操作を1時間ごとに1日6回、28日間行うことで酸蝕歯モデルを製作した。酸蝕歯モデルを以下に示す条件で保管した。1)コントロール群:自己集合性ペプチドP11-4(以後、P11-4)を5分間塗布した酸蝕歯モデルを、37°C人工唾液中に28日間保管2)未処理群:P11-4未塗布の酸蝕歯モデルをオレンジジュースに5分間浸漬した後、水洗、乾燥し、人工唾液に保管。この操作を1時間ごとに1日6回、28日間継続3)処理群:P11-4を5分間塗布した酸蝕歯モデルをオレンジジュースに5分間浸漬した後、水洗、乾燥し、人工唾液に保管。この操作を1時間ごとに1日6回、28日間継続超音波測定装置を用いて、各条件で保管した試片を透過する超音波の伝搬時間を計測し、試片の厚さとの関係から縦波および横波音速を求め、理論式から弾性率を算出した。なお、測定時期は、実験開始0、7、14、21および28日後とした。酸蝕歯モデルを各実験環境下に保管した際の弾性率の経時的変化は、未処理群で実験期間の経過に伴って低下したのに対し、コントロール群および処理群では上昇し、処理群で、実験開始7日以降で未処理群と比較して有意に高い値を示した。また、未処理群の28日後のSEM像では、オレンジジュースへの浸漬によって露出したエナメル小柱の脱灰が進行し、さらに粗造な面を呈したのに対し、処理群では、脱灰したエナメル質の間隙を埋めるように析出物が観察された。これは、P11-4の応用によって、歯質表面に再石灰化による緻密な層が形成され、これが酸に対する抵抗層として機能するとともに、弾性率の向上に寄与したものと考えられた。ウシ歯エナメル質をオレンジジュース(pH3.4)に5分間浸漬した後、pH7.0に調整した人工唾液に保管した。超音波測定装置を用いて、以下の条件で保管した酸蝕歯モデルを透過する超音波の伝播時間を計測し、試片の厚さとの関係から縦波音速を求めるとともに、理論式から弾性率を算出した。1処理群:自己集合性ペプチドP11-4(以後、P11-4)を5分間塗布した酸蝕歯モデルを、37°C人工唾液中に28日間保管する。2未処理+脱灰群:P11-4未塗布の酸蝕歯モデルをオレンジジュースに5分間浸漬した後、水洗、乾燥し、人工唾液に保管。この操作を1時間ごとに1日6回、28日間継続する。3処理+脱灰群:P11-4を5分間塗布した酸蝕歯モデルをオレンジジュースに5分間浸漬した後、水洗、乾燥し、人工唾液に保管。未処理+脱灰群では経時的に音速が低下する傾向が認められたのに対し、処理群および処理+脱灰群では、実験期間を通じて音速が上昇し、実験開始7日以降の音速は未処理+脱灰群と比較して有意に高い値を示した。硬組織中を伝播する超音波の音速の変化は、歯質の石灰化の程度と相関があり、無機成分の増加に伴って上昇するところから、P11-4の応用は、脱灰されたエナメル質を再石灰化させる可能性が示された。また、処理+脱灰群の音速の上昇程度は処理群と比較して顕著であり、実験開始7日以降の音速は有意に高い値を示した。歯質に塗布されたP11-4は、低pH環境下で線維化を開始し、3次元網目状構造が形成される。したがって、pHの低い条件で石灰化の足場としての機能がより発揮されたために、処理群と比較して処理+脱灰群で有意に高い値を示したものと考えられた。本研究を遂行するために必要な酸蝕歯モデルの作製および超音波透過法による測定手技は確立されており、研究計画通り順調に進行している。また、これまでに得られた研究成果を国内および国際学会にて発表、新たな知見を得たことで、研究計画のブラッシュアップを図り、H29年度以降の研究のさらなる進展を目指している。この操作を1時間ごとに1日6回、28日間継続OCT装置のA-

scan modeから、各条件で保管した酸蝕歯モデルの信号強度分布を解析、最大ピーク強度値(dB)を検出するとともに、その波形幅(1/e2幅、μm)を求めた。最大ピーク強度値は、未処理群で実験期間の経過に伴って上昇する傾向を示したのに対し、処理群では実験開始7日以降で未処理群と比較して有意に低下した。また、実験開始28日後のSEM像では、未処理群ではエナメル小柱が明瞭に観察されたのに対し、処理群ではエナメル質表面に析出物が認められた。本研究で用いたOCTは近赤外線を歯質に照射して、その表層および内部で反射あるいは散乱した光の様相を光学干渉計によって捉えるものである。したがって、未処理群ではエナメル質の脱灰が進行することで表面が粗造化し、照射光線の散乱が大きくなることで最大ピーク強度値が上昇したのに対し、処理群ではP11-4塗布による析出物の存在によって粗造面が平坦になったために、エナメル質表面での照射光線の散乱が少なくなり、最大ピーク強度値が低下したものと考えられた。本研究を遂行するために必要な酸蝕歯モデルの作製およびOCTによる測定手技は確立されており、研究計画通り順調に進行している。また、これまでに得られた研究成果を国内学会にて発表する予定(日本歯科保存学会2018年度春季学術大会(第148回))であり、研究の方向性が適切か再確認するとともに、研究内容のブラッシュアップを図り、成果のまとめとともに論文発表を目指す。自己集合性ペプチドの適用の有無が酸蝕歯モデルの機械的性質に及ぼす影響について、超音波透過法を用いて非破壊的に検討した。ウシ歯エナメル質をオレンジジュース(pH3.4)に5分間浸漬した後、人工唾液に保管した。この操作を1時間ごとに1日6回、28日間行うことで酸蝕歯モデルを製作した。酸蝕歯モデルを以下に示す条件で保管した。1)コントロール群:自己集合性ペプチドP11-4(以後、P11-4)を5分間塗布した酸蝕歯モデルを、37°C人工唾液中に28日間保管2)未処理群:P11-4未塗布の酸蝕歯モデルをオレンジジュースに5分間浸漬した後、水洗、乾燥し、人工唾液に保管。この操作を1時間ごとに1日6回、28日間継続3)処理群:P11-4を5分間塗布した酸蝕歯モデルをオレンジジュースに5分間浸漬した後、水洗、乾燥し、人工唾液に保管。この操作を1時間ごとに1日6回、28日間継続超音波測定装置を用いて、各条件で保管した試片を透過する超音波の伝搬時間を計測し、試片の厚さとの関係から縦波および横波音速を求め、理論式から弾性率を算出した。なお、測定時期は、実験開始0、7、14、21および28日後とした。酸蝕歯モデルを各実験環境下に保管した際の弾性率の経時的変化は、未処理群で実験期間の経過に伴って低下したのに対し、コントロール群および処理群では上昇し、処理群で、実験開始7日以降で未処理群と比較して有意に高い値を示した。また、未処理群の28日後のSEM像では、オレンジジュースへの浸漬によって露出したエナメル小柱の脱灰が進行し、さらに粗造な面を呈したのに対し、処理群では、脱灰したエナメル質の間隙を埋めるように析出物が観察された。これは、P11-4の応用によって、歯質表面に再石灰化による緻密な層が形成され、これが酸に対する抵抗層として機能するとともに、弾性率の向上に寄与したものと考えられた。H28年度の超音波透過法を用いた研究において、自己集合性ペプチドはエナメル質の脱灰抑制および再石灰化促進効果を有するとともに、とくに低いpH環境下において効果の発現が顕著であることが判明した。
高エネルギー電子照射による金属間化合物の非晶質化

当研究代表者らは、1982年に、NiTi化合物が高エネルギー電子照射によりアモルファス化することを見出した。このような、高エネルギー電子照射による金属間化合物の結晶→非晶質遷移がどの程度普遍性のある現象であるのかを確かめる目的で、遷移金属同志から成る19種類の化合物ならびにアルミニウム(Al)亡遷移金属(T)から成る35種類の化合物を試料として選び、それらの電子照射によるアモルファス化の難易度を超高圧電子顕微鏡法によって系統的に調べた。得られた結果は以下のとおりである。3.これらの観察は、電子照射による金属間化合物の非晶質化が、遷移金属同志の化合物に限られず、一般の金属間化合物においても生じうる普遍性の高い現象であることを示している。4.これらの電子照射によって非晶質化する金属間化合物は、いずれも、それらの組成が当該二元合金系で液体急冷法や気相急冷法によってアモルファスや準結晶が生成される組成範囲とほぼ一致する特徴を有する。」5.以上により、金属間化合物の電子照射誘走結晶→非晶質遷移には、既に明らかにした照射温度や化学量論組成からのずれ等の因子に加えて、各化合物を構成する原子の化学種の組み合わせとその状態図上での位置が一つの重要な因子であることが判明した。
微弱電波を利用した視覚障害及び高齢者の歩行案内・誘導システムに関する研究

本研究で、街路を歩行している視覚障害者や高齢者に必要とする多くの情報を付与するために、微弱電波を利用して視覚障害者等が持つラジオから音声情報として伝達する案内・誘導システムを確立した。システムは、AM微弱電波送信装置とAF信号発生装置及び送信アンテナ部から構成した。送信装置は、2KHz1.9MHzの搬送波に音声信号をAM波に変調して0126dBμVの範囲で出力可能である。なお、本送信装置は同時に2チャンネルの搬送波で出力することも可能である。送信アンテナ部は、送信装置からの出力を微弱電波として展張延伸した同軸漏洩ケ-ブルから放出する。送信アンテナ部より放出される微弱電波の強さを測定し、受音点の位置によりどのように電波が減衰するかを明らかにするための実験を豊田市高原町で実施した。実験では送信装置部での出力を一定にして、アンテナ部をそれぞれ地上、地下10cm、地下20cm及び地下30cmに埋設して図に示すような10mメッシュ点での電界強度を測定した。この実験により、アンテナ部を地下の所望の点に埋設することで微弱電波の強さを計画者が欲する強さにコントロ-ル出来ることが明らかになった。また、受信用ラジオのAGCを取り除くことにより、不必要な微弱電波からの情報をカットすることが出来る事も明かになった。この結果、本案内・誘導システムは、一部に改正すべき点も見られるが十分実用に供し得ることが判明した。
バイオマーカーによって特定された口腔癌周囲組織の機能異常を探るプロジェクト

我々が口腔癌のバイオマーカーとしてこれまで注目し研究を行ってきたHigh Mobility Group I(Y)[HMGI(Y)]は染色質の構造維持や様々な遺伝子の転写を制御している非ヒストンDNA結合タンパクである。これまでヒト大腸組織において、HMGI(Y)過剰発現が癌特異的に認められることは報告済みであるが、本年度我々は、マウスにおいて実験的に作製した舌癌モデルマウスの病巣周囲においてもHMGI(Y)が過剰発現していることを確認し、さらに周囲の筋線維の特性を検索した。この結果、口腔癌予後予測因子としてHMGI(Y)発現レベルの有用性が実証されてきたと考えている。今後このバイオマーカーによる癌病巣の予防的切除、術後の再発などが予測できるようになると思われた。次に筋組織は周囲の環境によってその特性を大きく変えることから、癌ではなくても正常な機能は発揮できていないことも考えられるが、これまでの癌研究においてバイオマーカーより外側の正常組織にまで視点を広げ、詳細に本来の組織との分子機構の違いを検討したものはみられない。そこで、正常筋組織の分子機構を知らなくてはならないが、今年度も昨年度同様、特に頭部における正常筋組織の成長過程における筋線維特性分子機構の変化について研究、論文作成を行った。この3年間の研究で、筋は周囲の機能変化をシグナルとして受け取り、筋収縮蛋白の組成を変化させていることが様々な面から明らかとなった。今後は口腔癌周囲組織が正常な筋線維特性を獲得していく詳細な分子機構について解明していきたいと考えている。これまでヒト大腸組織において、HMGI(Y)過剰発現が癌特異的に認められることは報告済みであるが、本年度我々は、マウスにおいて実験的に作製した舌癌モデルマウスの病巣周囲においてもHMGI(Y)が過剰発現していることを確認した。これら一連の研究から、口腔癌予後予測因子としてHMGI(Y)発現レベルの有用性が実証されてきたと考えている。今後このバイオマーカーによる癌病巣の予防的切除、術後の再発などが予測できるようになった場合においても、次に訪れるであろう問題点として、周囲の正常組織はどこまで本質的に正常であるかを検討する必要が生じてくる。特に筋組織は周囲の環境によってその特性を大きく変えることから、癌ではなくても正常な機能は発揮できていないことも考えられるが、これまでの癌研究においてバイオマーカーより外側の正常組織にまで視点を広げ、詳細に本来の組織との分子機構の違いを検討したものはみられない。そこで、正常筋組織の分子機構を知らなくてはならないが、今年度は特に頭部における正常筋組織の成長過程における筋線維特性分子機構の変化について研究、論文作成を行った(業績欄記載の通り)。このデータはマウス咬筋のものであるが、今後、咬筋にも実験的に癌を発症させ、その周囲の正常筋組織にどのような分子機構の変化が起こるのかについて検討していきたい。そこで、正常筋組織の分子機構を知らなくてはならないが、今年度も昨年度同様、特に頭部における正常筋組織の成長過程における筋線維特性分子機構の変化について研究、論文作成を行った(業績欄記載の通り)。さらに、下記に記載した口腔癌周囲筋組織の分析も進んでおり、論文を投稿した(査読中)。この結果、周囲組織の筋線維特性は、対象と比較すると明らかに異なった筋線維特性を有していた。このことから、口腔癌による何らかの影響が、バイオマーカーを越え、周囲の正常部分に影響を与え、結果的に機能低下を及ぼしている可能性の一端が明らかとなった。

次に筋組織は周囲の環境によってその特性を大きく変えることから、癌ではなくても正常な機能は発揮できていないことも考えられるが、これまでの癌研究においてバイオマーカーより外側の正常組織にまで視点を広げ、詳細に本来の組織との分子機構の違いを検討したものはみられない。そこで、正常筋組織の分子機構を知らなくてはならないが、今年度も昨年度同様、特に頭部における正常筋組織の成長過程における筋線維特性分子機構の変化について研究、論文作成を行った。この3年間の研究で、筋は周囲の機能変化をシグナルとして受け取り、筋収縮蛋白の組成を変化させていることが様々な面から明らかとなった。今後は口腔癌周囲組織が正常な筋線維特性を獲得していく詳細な分子機構について解明していきたいと考えている。
電子線マイクロアナライザを用いた酸素定量分析と3価鉄定量見積もり:温度計の新展開

ザクロ石-輝石のFe/Mg比は地球内部温度構造を推定するために利用される.ただし,輝石中の鉄酸化状態の不確定さがあるために大きな誤差を含む.酸素は輝石の唯一のアンイオンであり,鉄は唯一の複数の三価状態に存在する主要カチオンなので,電荷均衡を仮定し,酸素とカチオンの分析から鉄の三価状態を算出できる.EPMAによる精度の良い酸素定量分析を実現するために分光結晶,試料表面,バックグラウンド測定位置,最適な補正計算を改良した.その結果,1%程度の誤差で分析に成功た.ザクロ石-輝石のFe/Mg比は地球内部温度構造を推定するために利用される.ただし,輝石中の鉄酸化状態の不確定さがあるために大きな誤差を含む.酸素は輝石の唯一のアンイオンであり,鉄は唯一の複数の三価状態に存在する主要カチオンなので,電荷均衡を仮定し,酸素とカチオンの分析から鉄の三価状態を算出できる.EPMAによる精度の良い酸素定量分析を実現するために分光結晶,試料表面,バックグラウンド測定位置,最適な補正計算を改良した.その結果,1%程度の誤差で分析に成功た.EPMAによるケイ酸塩鉱物中の酸素定量分析を行うために、予定していた機械改良はほほ終了し、実用的な分析を始める見込みができた。ただし、研究計画にある「地質温度計の再検討」を行うためにできるだけ制度の良い酸素定量分析が必要である。本年度特に特性X線の測定及びその補正や誤差要因の特定に力を注いだ.その結果は以下の通り.1.バックグラウンドの位置が決まった.妨害X線が多いので,もっとも影響の少ない場所を探し,必要な補正を検討した.元素によっては妨害X線があるので補正が必要ということが分かった.2.【定量分析】酸化物を仮定し補正計算をしたときの酸素濃度が正しいと仮定すると,数パーセントの誤差が生じることがあることが分かった.この誤差の原因を探る必要がある.酸素の測定で,バックグラウンドの形状に指数関数を用いることが望ましいことが分かった.直線ではパフォーマンスが著しく落ちる.4.表面損傷電子線照射による表面損傷が著しい場合(例えば石英)は,誤差が10パーセント以上の誤差を生じ、要注意である.これらの結果を踏まえ,次年度更なる制度向上を目指す予定である.測定を予定している試料の特徴を先に記載し、本年度その記載に基づいて2編の論文は雑誌に掲載された.EPMAによるケイ酸塩鉱物中の酸素定量分析を行うために、予定していた機械改良はほぼ終了し、実用的な分析を始める見込みができた。本年度特に特性X線の測定及びその補正や誤差要因の特定に力を注いだ.その結果は以下の通り.1.バックグラウンドの位置が決まった.妨害X線が多いので,もっとも影響の少ない場所を探し,必要な補正を検討した.元素によっては妨害X線があるので補正が必要ということが分かった.2.【定量分析】酸化物を仮定し補正計算をしたときの酸素濃度が正しいと仮定すると,数パーセントの誤差が生じることがあることが分かった.この誤差の原因を探る必要がある.酸素の測定で,バックグラウンドの形状に指数関数を用いることが望ましいことが分かった.直線ではパフォーマンスが著しく落ちる.3.【表面損傷】電子線照射による表面損傷が著しい場合(例えば石英)は,誤差が10パーセント以上の誤差を生じ、要注意である.これらの結果を踏まえ,次年度更なる制度向上を目指す予定である.測定を予定している試料の特徴を先に記載し、本年度その記載に基づいて2編の論文は雑誌に掲載された.平成21年度中、EPMAによる微少領域における酸素定量分析法の開発はほぼ完了した。詳細は以下の通りである。酸素を(1)1スポットだと5%程度,(2)10点くらい分析して平均すれば1%以下の精度で測定できるようになった.岩石における主要な鉱物の多くに対応できるようにバックグラウンド位置を決めている(22の物質を用いて決定).また、重要な点、教科害に書かれていない現象に気が付いた.LDEは累積多層膜疑似結晶で,高次線の反射が無いと言われている.しかし,Naの2次線が実際には観察された.Naの2次線は酸素のK線に干渉する.したがって,累積多層膜疑似結晶であってもPHAを用いた上で,X線の干渉補正を行う必要があることが明らかになった。(PHAと干渉補正の両方を行わなければならないのは,ガスフロー型比例計数管のエネルギー分解能が低く完全にNaと0を分離することができないからである.)本研究課題に関する学会発表を3回(内国際学会1回)行い、論文3本は査読有り国際雑誌に掲載された。また、酸素分析のcross checkとしてイギリスのブリストル大学の研究者に既にMossbauerで輝石中のFe^<++>/Fe^<+++>の比が決定済みのエクロジャイト試料を提供してもらった。両測定値は一致すれば本研究の信頼度と普及につながると考えている。Kokchetavエクロジャイトに関する分析のために必要な資料準備は出来た。
癌転移制御因子CD82による癌細胞の細胞間接着機構の解析と臨床応用

癌転移抑制因子CD82はc-Metと複合体を形成し、c-Metアダプター蛋白質の結合を阻害することにより癌細胞の遊走を抑制することが明らかにされている。一方、上皮細胞接着因子E-カドヘリンは細胞内でβおよびγ-カテニンと結合し、α-カテニンおよびα-アクチニン分子を介してアクチン細胞骨格と結合し、強い細胞間結合を形成することが明らかにされている。また、E-カドヘリンの細胞質内領域にp120が結合することにより、E-カドヘリンの機能を制御している。これらのことから、E-カドヘリンは細胞間接着のみならず、細胞運動にも深く関与している可能性がある。実験結果から、CD82はE-カドヘリン-カテニン-アクチニン-アクチン細胞骨格系シグナル伝達を制御し、細胞間接着を保持させながら細胞運動を抑制している可能性が示唆された。転移抑制因子CD82/KAI-1がc-Metと複合体を形成し、c-Metアダブター蛋白質の結合を阻害することにより癌細胞の遊走を抑制することが明らかにされていることから、CD82の発現に伴って細胞遊走に関与するシグナルが制御され、細胞運動関連酵素の発現も変動することが推察される。そこで本研究では、CD82低発現細胞株h1299にCD82を遺伝子導入したh1229/CD82 transfecatantを用いてCD82の発現に伴うジペブチジルベブチダーゼIV gene familyとCaveolin-1の変動を検討した。樹立したCD82導入株ではDPP9のmRNAと蛋白の減少が見られたが、DPP4とDPP8ではわずかに減少がみられた。CD82をノックダウンしたCD82導入株におけるDPP4 gene familyの変動を検討したところ、CD82siRNA導入後48、72時間でDPP4とDPP8の発現は増加を認めたが、DPP9では減少し96時間で上昇した。CD82と複合体を形成するCaveolin-1をWestern blotで検討したところ、CD82導入株の細胞骨格分画に強発現を認めた。次に3種類の認識部位の異なった抗体でDPP9の局在をWestern blotで検討したところ、CD82導入株において細胞骨格分画にN未端領域と触媒領域で著しい発現を認めた。一方、DPP4、DPP8の発現はすべての分画で有意な差は認められなかった。蛍光抗体染色ではMOCKのCaveolin-1とDPP9は主に細胞膜と細胞質に局在していたが、CD82導入株では特に細胞質に強発現していた.Western Blotの結果から、CD82発現によりCaveolin-1とDPP9が細胞骨格分画に強発現すると考えられる。本研究と現在までの報告をまとめると、CD82はDPP4発現を介してDPP9の発現を抑制し、E-cadherin、β-cateninnなどの発現を促進し細胞間接着を亢進させること、さらに、caveolin1とDPP9タンパクを細胞骨格分画に誘導することにより癌細胞遊走を抑制することにより癌の浸潤・転移を制御していることが示唆された。今後、CD82と各酵素蛋白質の発現誘導経路、Caveolin-1とDPP9の細胞骨格蛋白への関連とその役割について明らかにする予定である。Tetraspanin superfamilyの一つである癌転移抑制因子CD82がc-Metと複合体を形成し、c-Metアダプター蛋白質の結合を阻害することにより癌細胞の遊走を抑制することが明らかにされている。一方、上皮細胞接着因子E-カドヘリンは細胞内でβおよびγ-カテニンと結合し、α-カテニンおよびα-アクチニン分子を介してアクチン細胞骨格と結合し、強い細胞間結合を形成することが明らかになっている。これらのことから、E-カドヘリンは細胞間接着のみならず、細胞運動にも深く関与しているのではないかと考えられる。そこで、CD82-E-カドヘリン相互作用からの癌細胞の接着・浸潤転移のメカニズムを検討するために、HGF刺激時のCD82によるE-カドヘリン-カテニン-アクチニン-アクチン細胞骨格系シグナル伝達への影響をreal-time PCRを用いて解析を行った。細胞株はCD82低発現細胞株hl299にCD82を遺伝子導入したhl229/CD82 transfectantとコントロールとしてMOCKを用いた。

HGF無刺激時では、MOCKと比較するとCD82導入株ではE-カドヘリン、アクチニンα4のmRNAの発現は高発現を認めたが、β-カテニンのmRNA発現には有意な差は認められなかった。HGF刺激ではE-カドヘリン、β-カテニン、アクチニンα4のmRNAの発現はCD82導入株では経時的に抑制されたが、MOCKの発現よりは常に高発現を示した。MOCKのβ-カテニン、アクチニンα4のmRNAの発現はHGF刺激後5分で発現のピークを向かえその後減少を認めたが、E-カドヘリンのmRNAの発現は著明な変化は認められなかった。以上の結果から、CD82はHGF刺激にによるE-カドヘリン-カテニン-アクチニン-アクチン細胞骨格系シグナル伝達を制御し、細胞間接着を保持させながら細胞運動を抑制している可能性が示唆された。Tetraspanin superfamilyの一つである癌転移抑制因子CD82がc-Metと複合体を形成し、c-Metアダプター蛋白質の結合を阻害することにより癌細胞の遊走を抑制することが明らかにされている。一方、上皮細胞接着因子E-カドヘリンは細胞内でβおよびγ-カテニンと結合し、α-カテニンおよびα-アクチニン分子を介してアクチン細胞骨格と結合し、強い細胞間結合を形成することが明らかになっている。また、E-カドヘリンの細胞質内領域にp120が結合することにより、E-カドヘリンの機能を制御している。これらのことから、E-カドヘリンは細胞間接着のみならず、細胞運動にも深く関与しているのではないかと考えられる。また、E-カドヘリンの裏打ちタンパク質であるβ-カテニンのリン酸化の亢進がE-カドヘリンの細胞間接着機能を低下させると言われている。そこで、HGF刺激によるβ-カテニンのリン酸化状態およびリン酸化部位について解析するために、CD82低発現細胞株h1299にCD82を遺伝子導入したh1229/CD82 transfectantとMOCKを用いた。継代培養12時間後に0.3%BSA含有の培養液(血清非含有)で12時間培養した後、1分、2分、5分、10分、30分、60分間50ng/ml HGFで刺激し、それぞれの細胞溶解液を作成した。この細胞溶解液を用いて、特異的抗リン酸化抗体(phospho-β-catenin(Ser33/37/Thr41, Thr41/Ser45, Ser552, Ser675)によりそれぞれウエスタンブロットで解析したが、明かなバンドは検出できなかった。ウエスタンブロットによるE-カドヘリンの検出が困難であったことおよび、免疫沈降法の技術が難しかったため、結果がでず、次のステージに移行するのに苦慮したため。24年度が最終年度であるため、記入しない。E-カドヘリンの裏打ちタンパク質であるβ-カテニンのリン酸化の亢進がE-カドヘリンの細胞間接着機能を低下させると言われている。そこで、CD82低発現細胞株hl299にCD82を遺伝子導入したhl229/CD82 transfectantの細胞溶解液を用いて、特異的抗リン酸化抗体によるウエスタンブロットでHGF刺激によるβ-カテニンのリン酸化をみる。