hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
単色X線マイクロビーム照射を受けた肺上皮細胞におけるバイスタンダー効果の研究

1.単色X線マイクロビーム(5.35keV、10μmx10μm)により細胞核照射を受けた肺上皮細胞でのDNA鎖切断:DNA修復酵素γH2AXに対する免疫蛍光染色フォーカスアッセイを行った。NHBE細胞において01000Rの領域で、線量依存的にフォーカス蛍光量は増加した。またマイクロビーム照射された肺繊維芽細胞でのNBS1酵素に対するフォーカス蛍光量も300Rまで線量依存的に増加した。マイクロビーム照射により標的細胞核にDNA損傷を生成していることが確認された。2.肺細胞内一酸化窒素(NO)のDAF-2DAバイオイメージング:細胞間接触が無い状態でのNHBE細胞集団の一部を細胞核照射したところ、照射後24時間までではDAF-2DA由来蛍光量の有意な増加は認められなかった。細胞が互いに接触しうる状態では、播種細胞の1%以下の細胞を照射(500R)したとき、非照射の場合に比べ、照射後10および24時間目に、有意な蛍光強度を示す細胞数の割合は増加した。また、蛍光を発する細胞では、細胞当たりの蛍光強度が照射後増加した。照射標的細胞の周辺に存在する非照射細胞における蛍光量が増加した。これは細胞内NO量の増加によるものと考えられ、照射された細胞から非照射細胞へのバイスタンダー効果を示唆する。3.細胞内一酸化窒素合成酵素(NOS)の誘導:誘導型NOS(iNOS)について免疫蛍光染色を行った。NHBE細胞で細胞間接触がある場合、非照射細胞ではiNOS由来の蛍光を認めないが、マイクロビーム照射細胞群では、照射後24時間では有意な蛍光を示す細胞が認められた。4.細胞間接触(コミュニケーション)が存在する状態に置かれた肺上皮細胞ではバイスタンダー効果による細胞内活性の変化が示唆された。1)放射線照射後の細胞内DNA切断を調べるため、DNA切断修復酵素であるリン酸化H2AX(γH2AX)およびNBS1に対するフォーカスアッセイを行った。対照実験としてスライドガラス上に接着、培養した肺線維芽細胞をブロードビームのCo60γ線で照射した場合、照射後30分でγH2AXおよびNBS1のフォーカス量は最大になり、以降120分にかけてフォーカス量は減少した。単色X線マイクロビーム(5keV)を細胞毎に一定線量照射した場合、照射30分後のNBS1フォーカス量は03Gyの線量域で線量に比例して増加した。肺上皮細胞のγH2AXフォーカスも線量依存的に増加した。2)肺上皮細胞内での一酸化窒素(NO)量の増減を測定するため、NO結合性蛍光色素のDAF-2DAを用いた細胞内NOのバイオイメージングを行った。スライドガラス上に培養した細胞をDAF-2DA(2μg/ml)を含む緩衝液中で一定時間培養,洗浄後に、細胞毎の蛍光強度を蛍光顕微鏡で測定した。DAF-2DA処理開始後経時的にNO結合DAF-2DA由来の蛍光強度は増加したが、3060分の処理でほぼ蛍光強度はプラトーに達した。細胞は定常的にNOを生成していると考えられる。γ線4Gy照射後24時間で蛍光量は有意に増加した。3)細胞内のNO合成酵素(NOS)量を知るため,nNOS、eNOSおよびiNOSの3種類の酵素について免疫蛍光染色法を用い、個々の細胞からの蛍光量を測定した。非照射細胞において、nNOS、eNOSおよびiNOSによる蛍光が観察された。γ線4Gy照射細胞では照射12時間後にiNOSによる蛍光量が増加した。

X線マイクロビーム照射では、照射後数時間の培養期間中に起こる細胞移動により、照射細胞を特定できないことがあり、iNOS由来蛍光量について照射細胞と非照射細胞の間で統計的有意差を見いだしていない。1)X線マイクロビーム(5keV、10x10μm)により細胞核照射を受けた肺上皮細胞(NHBE, A549)でのDNA切断:DNA切断修復酵素リン酸化H2AX(γH2AX)に対する免疫蛍光染色フォーカスアッセイを行った。細胞核線量010Gyの領域で、線量依存的にフォーカス量(蛍光量)は増加した。フォーカスは照射された細胞核の部位に一致して生じた。2)コンフルエントNHBE細胞集団でのバイスタンダー効果による細胞内一酸化窒素(NO)量の変化:ディッシュ上にプレートされた細胞数の1%以下の細胞を選び、それらの細胞核をマイクロビームで5Gy照射し、細胞内NOをDAF-2T蛍光により測定した。非照射細胞群に比べ、照射後10および24時間目に、有意なDAF蛍光強度を示す細胞数の割合は増大した。また、蛍光を発する細胞において、細胞当たり、単位面積当たりの蛍光強度は照射後増大した。照射細胞の周辺に存在する非照射細胞におけるDAF蛍光量が増大し、これは細胞内NO量の増加の結果と考えられ、照射された細胞から非照射細胞へのバイスタンダー効果によるものと考えられる。3)コンフルエント細胞集団におけるNOS(一酸化窒素合成酵素):同一ディッシユ内のマイクロビーム照射細胞および非照射細胞におけるNOSについて免疫蛍光染色を行った。iNOSについては、非照射細胞ではほとんどの細胞が染色されないが、照射後10および24時間においては、照射細胞および非照射細胞からなる細胞集団のうち有意に蛍光を示す細胞が観察された。
メタロシリケートを基材とする高活性・高耐久化メタン脱水素芳香族化触媒の開発

水熱合成法により調製したH-MFIおよびGa格子置換H-MFIメタロシリケートへのMoO_3修飾触媒を用いたメタン脱水素芳香族化活性の経時変化追跡による活性評価、とくに高活性化および失活抑制のための条件を検討した。その結果、triethoxyvinylsilaneを用いたMo(5wt%)/H-MFIへのシリル化は、700°Cでの本反応に初期活性の低下を与えるものの、経時失活の抑制による高耐久化を与え、芳香族化収率の増大を与えることがわかった。一方、Ga格子置換MFIを担体としたMo/H-GaMFI触媒では高濃度Ga含有で低活性を示したのに対し、Ga含有量の低下に従い活性の増大および経時失活の乏しい良好な高活性傾向が顕著であった。本触媒の活性化にはMFI酸点の制御、過剰の酸強度の抑制が不可欠であり、とくに外表面の強酸点の抑制効果が極めて重要であることが総括された。本研究では、(1)高活性を与えるモリブデン種の還元的構造変化とその役割、(2)炭素析出失活の主要因であるMFIの強酸点を抑制したメタロシリケートの担体効果、の双方からメタン脱水素芳香族化触媒の高活性因子の追求と高耐久化を達成する計画である。平成21年度の研究において、触媒活性試験評価のための固定床流通系反応ラインの設置を完了、同時にメタロシリケートも含めた種々のゼオライト基材の水熱合成も行った。その結果、含有SiO_2/Al_2O_3組成比の異なるMFI型およびそのGa等格子置換資料の合成も成功した。これらの触媒活性試験およびMoのL殻XANESを含めたMo活性種局所構造解析の結果より、先述の研究計画(1)(2)について以下の知見を得た。(1)について、高活性を与えるMo種の還元種の条件として高度の炭化還元を受けず結晶化アルファ相の炭化モリブデンを形成させないこと(一部酸化物種残存の非晶質炭化物種の高活性種としての存在を示唆)を結論づけた。また(2)については、H-MFI担体へのGa格子置換型では高濃度のGa置換により酸性度低下を与えメタン転化活性そのものを低下させること、および(GaやWなど種々の金属イオンの)表面修飾型ではMoとの共置換により活性発現初期の転化率は抑制傾向を示す一方、活性劣化の抑制にはVなどの修飾が有効であることが明らかとなった。本研究では、天然ガス石油資源化のための直接GTL(XTL)触媒の研究開発として、Mo/H-MFI触媒の高活性化および高耐久化のための構造因子並びに活性化修飾要素とその制御に主眼を置き、(1)高活性を与えるモリブデン種の還元的構造変化とその役割、(2)炭素析出失活の主要因であるMFIの強酸点を抑制したメタロシリケートの担体効果、の双方からメタン脱水素芳香族化触媒の高活性因子の追求と高耐久化を達成する。平成22年度の研究において、とくに炭素析出による失活抑制が困難なH-MFIからのメタロシリケート(Ga置換およびGa-Al共置換MFI)への変換による高耐久化効果について、とくにGaなどの置換比の効果、Al残存量の影響、およびこれらに伴う修飾Mo種の還元的構造変化について、とくに表面酸強度並びに酸量からの検討と合わせて、MFI型構造特有の強酸点の抑制による高耐久化への寄与について、触媒活性および活性種微細構造変化の両面から詳細な検討を加えた。その中でメタロシリケートも含めた種々のゼオライト基材の水熱合成も行い、触媒活性構造とその因子についての一定の知見を得た。同時に、組成比の異なるMFI型およびそのGa等格子置換資料の合成も成功し、さらにシリル化表面修飾法により失活因子であるMFI外表面炭素析出点の被覆についても検討を加えた。これらの検討から、H-MFI担体へのGa格子置換型では高濃度のGa置換により酸性度低下を与えメタン転化活性そのものを低下させること、およびMFI外表面の強い酸点を選択的に被覆するアルキルシリル化処理が高耐久化に有効であることが明らかとなった。水熱合成法により調製したH-MFIおよびGa格子置換H-MFIへのMoO_3(5wt%)修飾触媒を用いたメタン脱水素芳香族化活性の経時変化追跡による活性評価を、固定床流通型反応装置にて行った。

昨年度までの研究成果に従い触媒前処理および反応温度は700-750°Cとし、失活抑制のためのシリル化処理をMo/si=10での活性極大となる修飾条件にて活性化および失活抑制のための条件を検討した。その結果、トリエトキシフェニルシランを用いたMo/H-MFIへのシリル化は、700°Cでの本反応に初期活性の低下を与えるものの、経時失活の抑制による高耐久化を与え、芳香族化収率の増大を与えることがわかった。さらにこのシリル化は750□では熱安定性の限界により高耐久化を与えないこと、および共存水素による炭素析出失活の抑制とは同時には用いることが高耐久化効果につながらないこともあわせて結論づけられた。一方、Ga格子置換MFIを担体としたMo/H-GaMFI触媒では、S:/Al_2=40の組成条件でのGa含有比Al/Ga=1の高濃度Ga含有では本反応に低活性を示したのに対し、Ga含有量の低下に従い活性の増大および経時失活の乏しい良好な高活性傾向が顕著であった。先述のGa非含有Mo/H-MFI触媒では反応初期の高活性を反応経時において維持できないのに対し、Gaの低濃度格子置換により初期活性の低下は示すものの経時失活の抑制が顕著であり、とくにAl/Ga=10付近での本反応活性はシリル化後の場合と同様、反応初期の高活性をおおむね保持し経時失活に乏しい効果を与えたことが推論された。以上の結果、および高活性・高耐久性Mo活性種が非晶質Mo部分酸化炭化物種としていずれも確認された結果より、本触媒の活性化にはMFI酸点の制御が不可欠であり、とくに外表面の強酸点の抑制効果が極めて重要であることが総括された。
新任および中堅保健師の実践能力の発展を支援する方法の開発

本研究の目的は、新任および中堅保健師の実践能力の発展過程を明らかにすることにより発展を支援する方法を考察することである。新任および5年目保健師を対象として、一定間隔をおいて保健師実践能力の到達度、到達するための取組、得た支援を確認し実践能力の発展過程を分析し、発展の促進に有効な支援を検討した。この結果を指導保健師と検討し、実践能力の発展の促進に有効な支援を考察した。すなわち、1年目は説明や具体的な行動の指示、2年目は主体性の育成、5年目は自立して取組める役割の付与、年数にかかわらず相談し合える職場づくりであった。また、大学教員は現任教育体制や有効な支援方法を提案する役割があると考えられた。平成26年度にA県内の自治体に採用された保健師(以下新任保健師)28名のうち、本人および指導保健師の同意が得られた23名について、筆者らが開発した新任保健師実践能力到達目標チェックシート(以下チェックシート)を用いて採用後5か月6か月時及び11か月12か月時に、自己・他者(指導保健師)評価を実施してもらい、評価後面接調査を実施した。調査内容は、5か月6か月時に到達していなかった保健師実践能力到達目標項目、到達を目指して取り組んだこと、取り組み過程で指導保健師から得た支援、調査時点での到達の有無等であった。5か月6か月時点では、調査を実施した23名全員が到達していない実践能力の項目があった。現在、調査結果の分析中である。平成27年度は、同じ対象者(23名)について、1年11か月2年0か月時にチェックシートにより自己・他者(指導保健師)評価を実施してもらい、その後面接調査を実施し、11か月12か月時到達していなかった目標項目について、到達を目指して取り組んだこと、取り組み過程で得た支援、調査時点での到達の有無等を調査する。以上の調査結果から、5か月6か月、11か月12か月、1年11か月2年0か月の保健師実践能力到達状況の変化を分析するとともに、新任保健師の実践能力向上を目指した2年間の取り組みを明らかにして、新任期の保健師実践能力の発展過程と支援方法を明らかにする。平成26年度にA県内の自治体に採用された保健師(以下新任保健師)28名のうち、本人および指導保健師の同意が得られた23名について、筆者らが開発した新任保健師実践能力到達目標チェックシート(4か月時チェックシート)を用いて採用後56か月時および1112か月時の到達状況を分析した。その結果、56か月時では、到達者が6割未満だったのは35項目中17項目と約半数あり、所属組織と活動の成り立ちの理解、施策化、地域のヘルスケア体制整備、健康危機管理、保健福祉事業の展開、住民との協働、実践の中で研鑚する能力であり、到達者が6割以上だったのは、個人・家族への援助、他機関・他職種との連携・協働、所属機関内での連携・協働、倫理に適った看護実践であった。新任者は、個別援助を中心として、所属機関内の連携活動から活動や視野を拡大していることが推測された。1112か月時では、到達者が6割未満だったのは35項目中1項目(健康危機管理)のみとなり、4か月時点の実践能力到達目標はほぼ到達していた。次に、56か月時では到達していなかったが、1112か月時には到達した項目について、到達を目指して取組んだことは、所属組織と活動の成り立ちの理解や施策化では、担当事業に関連して先輩保健師の指導を受けて予算を組んだり事業計画を作成する等の経験、地域のヘルスケア体制整備や個人・家族への援助では、県主催の新任保健師研修の事前課題(地域の健康問題の分析、個別援助の実践と振り返り等)への取組み、住民との協働や他機関・他職種との連携・協働では、関係機関や住民との集まりに出向いて話を聞いたり、個別援助の連携先への働きかけ等の積極的な行動、援助に必要な知識の自己学習等であった。得た支援として認識されていたことは、経験する機会を創ってもらった、時に応じて具体的な助言を受けた、公費で研修に参加させてもらった等であった。平成27年度は、ほぼ計画どおり進めることができた。平成26年度にA県内の自治体に採用された保健師(以下新任保健師)28名のうち、本人および指導保健師の同意が得られた19名について、筆者らが開発した新任保健師実践能力到達目標チェックシート(11か月時チェックシート)を用いて、採用後1112か月時および1年11か月2年時の到達状況を分析した。1112か月時に到達者が6割未満だったのは12分類40項目中9項目で、分類別にみると、所属組織と活動の成り立ちの理解1項目(自治体の基本計画、保健・福祉計画、保健・福祉事業計画の関連の理解)、施策化3項目(地域のニーズを他者に説明できる資料の作成、ニーズに即した事業計画作成の試行、次年度の計画立案について所属組織全体の検討の場への参画)、地域のヘルスケア体制整備1項目(現状の体制で不足している資源の明確化)、地区活動の展開1項目(保健福祉事業の利用のない人々を含めた対象地区全体の健康問題のアセスメント)、保健福祉事業の展開1項目(担当事業の評価・計画)、住民との協働2項目(先輩保健師の指導下での住民への連絡・相談、住民の主体的な活動支援の試行)であった。

1年11か月2年時では、到達者が6割未満だったのは、2分類2項目と減少し、地区活動の展開1項目(保健福祉事業の利用のない人々を含めた対象地区全体の健康問題のアセスメント)、住民との協働1項目(住民の主体的な活動支援の試行)であった。1112か月時には到達していなかったが、1年11か月2年時には到達した項目について、到達を目指して取り組んだことは、到達者が少なかった施策化では、ニーズ把握の実施、把握結果の資料化、ニーズに即した事業計画の立案、保健師全体の業務検討会での報告等であった。また、到達に向けて得た支援は、先輩保健師等に悩みを聞いてもらう、取組む機会をつくってもらう、具体的な方法・手段の助言や上司との調整等であった。当初計画のうち、中堅保健師対象の調査時期が研究協力者との調整で1年遅れ、1回目調査はH27.9、2回目調査はH28.9となったため、後続する研究として計画していた「調査結果を指導保健師と共有し、新任保健師および5年目保健師の支援について検討する会」の実施が遅れている。この計画については、補助事業期間の延長が承認されたので、平成29年度に取組む予定である。平成26年度のA県内の自治体に採用された新任保健師(以下新任保健師)28名を対象とした保健師実践能力の発展過程の調査結果を新任保健師の指導保健師6名と共有し、指導の現状を把握するとともに、実践能力の発展を支援する方法を検討した。その結果、指導保健師は、指導に困難を感じながらも新任保健師の個々の状況を判断し様々に工夫してチックシートに示す実践能力の到達目標を達成できるように支援しており、新任保健師の実践能力の発展を支援する方法としては、新任保健師自身のキャリアプランを共有し進捗状況を確認・助言すること、職場全体で新任保健師の育成方法を検討・共有することが必要であると考えられた。5年目保健師の実践能力の到達状況およびその発展を支援する方法を明らかにするために、A県内の自治体に就業し平成27年度に実務勤務年数が5年目となる保健師のうち同意が得られた4名を対象として、筆者らが開発した5年目保健師実践能力到達目標チェックシートを用いて、4年5・6か月(1回目)および5年5・6ヶ月(2回目)の2回到達状況を把握し、1回目に到達していなかったが2回目には到達した目標について、達成するための取組および得た支援を調査した。その結果、5年目保健師は与えられた役割や担当事業について主体的・積極的に関わり、上司は未経験の業務に携われるように配慮していたことが明らかになった。5年目保健師の実践能力を高めるには、事業担当者として予算確保から事業の企画・実施・評価という一連のプロセスを経験すること、自立して取り組める業務や役割を与えることが必要であると考えられた。以上を5年目保健師の上司2名と共有し、実践能力の発展を支援する方法を検討した。その結果、5年目保健師の課題意識を尊重した支援計画の作成、職場全体での指導体制づくり、保健所保健師による教育支援が必要であると考えられた。本研究の目的は、新任および中堅保健師の実践能力の発展過程を明らかにすることにより発展を支援する方法を考察することである。新任および5年目保健師を対象として、一定間隔をおいて保健師実践能力の到達度、到達するための取組、得た支援を確認し実践能力の発展過程を分析し、発展の促進に有効な支援を検討した。この結果を指導保健師と検討し、実践能力の発展の促進に有効な支援を考察した。すなわち、1年目は説明や具体的な行動の指示、2年目は主体性の育成、5年目は自立して取組める役割の付与、年数にかかわらず相談し合える職場づくりであった。また、大学教員は現任教育体制や有効な支援方法を提案する役割があると考えられた。
L1_2型金属間化合物(Al,Cr)_3Tiの凝固機構と組織制御

合金の組織/特性制御に重要な役割をするミクロ偏析や非平衡第2相を従来法より制度よく予測する方法として、合金の凝固パス解析法に関して凝固時のkの変化と固相内拡散を考慮した漸化型凝固解析式を提案し、これをL1_2型(Al,Cr)_3Ti相を初晶とするAl-Ti-Cr合金に適用してそのミクロ偏析と非平衡第2相の予測を高精度で行う方法について明らかにした。凝固組織形成の基本単位であるミクロ的体積要素(volume element)での溶質保存則から求めた漸化型凝固解析式:C_<Li>=C_<Li-1>=[{1-(1-B・k_<i-1>)fs_i}/[{1-(1-B・k_<i-1>,)fs_<i-1>}]^<(ki_-1-1)/(1-Bki-1)を用いて、溶質分配係数kの変化を必要に応じた精度でn区間に分けて表し、i=1からnまで順に解くことにより融液濃度C_L及び固相濃度C_s(=k・C_L)の変化を計算し凝固パス解析を行った。ここで、B値は、例えばFlemingsモデルではB=2α、α=θf・D/L^2である。この解析において、凝固中に粗大化するデンドライト組織における固相内拡散のおこる基本単位を再検討し、拡散距離と拡散係数のより精度の高い評価を行った。固相内拡散の評価には、拡散の起こる基本単位として2次アーム間隔(d_2)の半分(volume elementの長さ:L=d_2/2)が通常は用いられているが、凝固中にcoarseningやcoalescenceを起こして次第にアームが粗大化するため、拡散単位は最終凝固組織のd_2の半分(L=d_2/2)とは異なり実効的にはL=d_2/4である。そこで、実験的に求めた固相内拡散係数(D)と体積要素の大きさ(実効体積要素長:L=s・d_2/2、s:構造因子(=0.51))を再評価し、拡散程度を示す上記のパラメータαを用いて解析した。種々の組成のAl-Ti-Cr合金の凝固パスを初晶(Al,Cr)_3TiのTi及びCr分配係数(k_<Ti>,k_<Cr>)(融液組成の関数)を用いて計算し、晶出第2相を精度よく予測できることを明らかにした。さらに、ブリッジマン法によりL1_2型Al_<65>Cr_<10>Ti_<25>合金単結晶を作成して、降伏応力の温度依存性を圧縮試験により求め、高温で強化される異常温度依存性を数種の結晶方位について確認した。また、転位の電子顕微鏡観察を行い、強度の異常温度依存性の発現機構について考察した。さらに、ブリッジマン法によりL1_2型Al_<65>Cr_<10>Ti_<25

>合金単結晶を作成して、降伏応力の温度依存性を圧縮試験により求め、高温で強化される異常温度依存性を数種の結晶方位について確認した。また、転位の電子顕微鏡観察を行い、強度の異常温度依存性の発現機構について考察した。合金のミクロ偏析予測については、Flemingsらの式、Clyne-Kurzらの式、或いはOhnakaの式による解析法や計算機シミュレーション法を含め種々提案されているがそれぞれ一長一短があるので、凝固時のkの変化と固相内拡散を考慮した漸化型凝固解析式を提案して、Al-Ti-Cr合金の凝固パスを解析した。すなわち漸化型凝固解析式:(C_<Li>/C_<Li-1>)=[{1-(1-B・k_<i-1>)fsi}/[{1-(1-B・k<i-1>}fs_<i-1>^<}](ki-1-1)/(1-Bki-1)>(B値はFlemingsモデルではB=2α、Clyne-KurzモデルではB=2α(1-exp(-1/α))-exp(-1/2α)、OhonakaモデルではB=2α/(1+2α))により、分配係数kの変化を必要に応じた精度でn区間に分けて表してi=1からnまで順に解くことにより精度の良い凝固パスの計算を可能とした。この漸化型凝固解析式を用いて、種々の組成のAl-Ti-Cr合金の凝固パスについてTi及びCrの分配係数(k_<Ti>, k_<Cr>)の測定値(融液組成の関数)を用いて計算し、晶出第2相を予測して実際の合金との対応を確認した。上記計算においてはAl-Ti-Cr系三元状態図情報が必要であり、このためL1_2相の固相面(12501350°C)および平衡する液相面(12501370°C)を決定してL1_2相液相面領域と周辺相液相面領域の境界の二元共晶線、二元包晶線、及びそれらの交点となる複共晶点・包共晶点を求め、初晶L1_2相と液相間のTiおよびCrの分配係数k_<Ti>, k_<Cr>を融液組成の関数として求めた。さらに、ブリッジマン法によりAl-10%Cr-25%Ti組成のL1_2型(Al, Cr)_3Ti合金単結晶を作成し、その降伏応力の温度依存性を圧縮試験と3点曲げ試験により測定し、高温で強化される異常温度依存性を数種の結晶方位について確認し、その発現機構を考察した。L1_2型(Al,Cr)_3Ti相を初晶とするA1-Ti-Cr合金のミクロ偏析と非平衡第2相の予測を行う方法について、溶質分配係数の組成依存性と固相内拡散を考慮した漸化型凝固解析式を提案し、状態図を利用した凝固パス解析を行った。解析において、凝固中に粗大化するデンドライト組織における固相内拡散のおこる基本単位を再検討し、拡散距離と拡散係数のより精度の高い評価を行っん凝固組織形成の基本単位であるミクロ的体積要素(volume element)での溶質保存則から求めた漸化型凝固解析式:(C_<Li>/C_<Li-1>)=[{1-(1-B・k_<i-1>)fs_i}/[{1-(1-B・k_<i-1>)fs_<i-1>}]^<(ki-1-1)/(1-Bki-1)>を用いて、溶質分配係数kの変化を必要に応じた精度でn区間(n≧1)に分けて表し、i=1からnまで順に解くことにより融液及び固相濃度の変化を計算し凝固パス解析を行った(B値は、例えばFlemingsモデルではB=2α、α=θ_f・D/L^2)。固相内拡散の評価には、拡散の起こる基本単位として2次アーム間隔(d_2)の半分(volume elementの長さ:L=d_2/2)が通常は用いられているが、凝固中にcoarseningやcoalescenceを起こして次第にアームが粗大化するため、拡散単位は最終凝固組織のd_2の半分(L=d_2/2)とは異なり実効的にはL=d_2/4である。そこで、実験的に求めた固相内拡散係数(D)と体積要素の大きさ(L)を再評価し、拡散程度を示す上記のパラメータαを用いて解析した。
中枢グリア細胞の睡眠機構への関与

神経細胞の周囲を取り囲んで,脳全体のエネルギー代謝の要となっているアストロサイトの細胞機能が,種々の薬剤により変化することが明確になった。特にGlu取込活性がギャップ結合(GJ)阻害剤で増強されることは興味深い。Gluは最も広汎に存在する興奮性伝達物質であり,その取込活性が増強されることは,脳全体の覚醒レベルの低下に繋がる。GJが阻害され細胞間相互作用が抑制されることが,脳全体の覚醒レベルを下げ,グリコーゲンの消費モードから蓄積モードにスィッチされる可能性がある。動物の睡眠/覚醒とアストロサイト細胞機能との直接の繋がりについては今後の課題となるが,本研究はそれらの基礎となる仮説を提唱している。平成25年度は,アストロサイトの細胞機能を変化させる薬剤をいくつか見出すことができた。神経細胞の生存維持に重要な働きを演ずる神経栄養因子類の産生がアンフォテリシンBにより増加すること,テオフィリンによりNO産生能が増強すること,ドーパミンによりEC-SOD活性が誘導されることなどである。原著論文を3報出版することができ,現在2報投稿中である。アストロサイトが神経細胞の周囲を取り囲んで,脳全体のエネルギー代謝の要となっていることから,種々の薬剤によりその細胞機能が変化することは,中枢神経系における睡眠/覚醒のエネルギー代謝の変化を制御している可能性がある。アストロサイトの細胞機能のうち,神経栄養因子やサイトカイン類の産生に加え,細胞外構造の形成維持に必須の働きを演ずるトランスグルタミナーゼ(TG)の消長についても複数の学会発表の機会を得た。また,論文として今後発表することのできうる結果として,以下の2つの結果を得ている。アストロサイトのグリコーゲン代謝:昨年度開発したグリコーゲンの高感度定量法を用いて,以下の結果を得た。ATPの1時間刺激によりグリコーゲンが減少する傾向が見られるが,24時間刺激によりATP濃度依存的に約2倍に増加した。これは既報の結果を再現するものである。アストロサイトのグルタミン酸(Glu)取込み:アストロサイトは周囲のアストロサイトとギャップジャンクションにより結合しており,細胞相互の代謝物の交換や情報伝達の手段となっていると考えられているが,ギャップジャンクション阻害剤のcarbenoxolone (CBX) 150 μMやoctanol 300 μMによりアストロサイトのGlu取込み活性が有意に上昇した。今後これらを発展させるべきである。平成24年度は,培養アストロサイトを用いて,神経細胞の生存維持に重要な働きを演ずる神経栄養因子類の産生や,酸化的ストレスからの保護作用が強い細胞外スーパーオキシドディスムターゼ(EC-SOD)の遊離に対して,いくつかの薬剤(ドパミン,イミプラミン)が影響を持つことを明らかにして,3報の原著論文を報告することができた。神経細胞の周囲を取り囲んで,脳全体のエネルギー代謝の要となっているアストロサイトの細胞機能が種々の薬剤により変化することは,アストロサイトの細胞機能変化が睡眠/覚醒のモードを切り換える役割を演じている可能性を示唆している。今後は睡眠関連物質の作用の検討を更に推進したい。脳内でのグリコーゲン合成能はアストロサイトに局在している故に,アストロサイトは脳のエネルギー貯蔵機能も果たしているとされている。エネルギーを貯蔵するか反対に放出するかの切換が何によってもたらされるかを見極めるには,アストロサイトのグリコーゲン合成の調節がいかなるものであるのかを検討する必要がある。培養グリア細胞のグリコーゲン合成と分解を定量化する測定法を確立することが平成24年度の検討課題の1つであった。グリコーゲンの高感度定量法としてNADP+を2種類の酵素を用いてサイクリング増幅する方法が知られているが,我々はそれを改良して,NADP+をG-6-P脱水素酵素とmethoxy-PMSを用いてサイクリング増幅し,WST-1色素の発色反応により直接サイクリング増幅をモニターする測定系を新たに開発できた。この方法により,24-wellに培養したアストロサイトのグリコーゲン量を定量することが可能となった。前年度までに,神経栄養因子類の産生がイミプラミンやアンホテリシンBにより変化すること,ドーパミンやLPSによりEC-SODの発現や活性が変化すること,テオフィリンがNO産生を増強すること,などを見出すことができた。

平成26年度には,ギャップジャンクション(GJ)阻害剤であるcarbenoxoloneやoctanolにより,グルタミン酸(Glu)取込み活性が有意に増強されることを見出した。またその機構の詳細は不明であるが,細胞表面をビオチン化してアビジン沈降して得られる画分の免疫検出により,細胞表面膜に発現する輸送体GLASTの量が増加する可能性を示唆するデータが得られた。Gluは最も広汎に存在する興奮性伝達物質であるが故にその取込み活性を担うアストロサイトの細胞機能調節は重要である。GJ阻害剤によりGlu取込み活性が増強されることは,脳全体の興奮性神経活動が抑制され,覚醒レベルの低下の原因となりうる。アストロサイトは周囲の細胞とGJにより結合しており,細胞相互の代謝物の交換や情報伝達の手段となっていると考えられている。それらの相互作用の程度が抑制されることにより,それぞれの細胞がグリコーゲン(エネルギー)の消費モードから蓄積モードにスィッチされる可能性がある。実際の動物の睡眠/覚醒とアストロサイトの細胞機能との繋がりについてはこれからの課題となるが,本研究ではそれらの基礎となり得る仮説を提唱するものである。獣医生理学アストロサイトのエネルギー代謝状況を解析するための検討課題の1つであったグリコーゲンの高感度定量法はほぼ確立することができたが,96ウェルプレートを用いる培養細胞系ではばらつきが大きいことがわかり,24ウェルプレートに切り換えることにし,他にも改良を加える必要があった。種々の睡眠関連物質の効果を検索したが,現在のところ,グリコーゲン量変化を大幅に引き起こす新規薬剤は見出されていない。今後とも継続する必要がある。グリコーゲンを蛍光染色する色素を用いて,脳内のグリコーゲン量の可視化についてすることを計画していたが,まず,培養アストロサイトに適用することが必要である。Glu取込みについてはギャップジャンクション阻害剤によりその活性が有意に上昇することを見出したが,大幅に増強されるというものではない。他の薬剤等で効果の大きいものを見出す必要がある。ギャップジャンクション阻害剤のグリコーゲン代謝についても検討の必要がある。生体動物の脳におけるグリコーゲン量の解析を行う計画についても,まだ端緒に付いておらず,今後多くの準備が必要となる。蛍光色素による半定量から開始すべきと考えられる。エネルギー代謝状況を解析するための検討課題の1つであったグリコーゲンの高感度定量法の確立に予想外に手間取った。原法(Passonneau, JV and Lauderdale, VR, Anal. Biochem. 60:405-412 (1974))は2種類の酵素G-6-P脱水素酵素とGlu脱水素酵素を用いてサイクリング増幅してできた6-P-gluconateを,更に3種類目の酵素6-P-gluconate dehydrogenaseを用いてNADPHの紫外部の吸収増加で定量する方法であるが,今回我々は,反応系を見直して,NADP+をG-6-P脱水素酵素とmethoxy-PMSを用いてサイクリング増幅し,WST-1色素の発色反応により直接サイクリング増幅をモニターする測定系を新たに開発することを試みた。
急性冠症候群における動脈血栓形成の解明および細胞接着阻害薬の開発

動脈硬化の最終段階では粥腫の破裂に引き続き、冠動脈血栓が形成され、不安定狭心症や急性心筋梗塞などの致死的な急性冠症候群が発生する。生体内における血栓形成において、血小板P-セレクチンを介した血小板と白血球の接着機構が関与していることを、これまで我々は報告してきたが、生体内血栓形成における血小板P-セレクチンの詳細な役割は不明であった。そこで我々は、動脈血栓形成における血小板P-セレクチンの役割を検討する為にP-セレクチン欠損マウスを用いて研究し、以下のような研究成果が得られた。1)P-セレクチン欠損マウスにおいて、P-セレクチンが真に欠損していることをPCR法で確認した後にP-セレクチン欠損マウスと野生型マウスを用いて、塩化鉄刺戟によるマウス頚動脈血栓モデルを作成した。そして血栓により閉塞されるまでの時間(血栓閉塞時間)を比較検討した。野生型マウス群と比較しP-セレクチン欠損マウス群では血栓閉塞時間が延長し、さらにP-セレクチン欠損マウス群では血栓形成により動脈が閉塞された後にもしばしば自然再還流現象が観察されたが、野生型マウス群ではこのような現象は観察されなかった。2)血小板凝集についての検討では、ADPによる血小板凝集能はP-セレクチン欠損マウス群と野生型マウス群では差は認められなかった。3)血小板および白血球が存在する全血凝集についての検討では、ADPによる全血凝集能は野生型マウス群に比較しP-セレクチン欠損マウス群で抑制されていた。4)フローサイトメトリーを用いたADPによる全血凝集塊の検討では全血凝集塊の増大はP-セレクチン欠損マウス群では認められなかったが、野生型マウス群で増大した。5)フローサイトメトリーを用いて、ADPによる全血凝集塊を血小板および白血球活性化のマーカーで二重染色を行った検討では、上記4)と同様の結果が得られ、全血凝集塊の機能的評価が可能であった。以上の結果から、生体内動脈血栓形成過程において、血小板P-セレクチンを介した血小板-白血球との相互作用は動脈血栓の増大と安定化に大きく関与していることが明らかになった。動脈硬化の最終段階では粥腫の破裂に引き続き、冠動脈血栓が形成され、不安定狭心性や急性心筋梗塞などの致死的な急性冠症候群が発生する。生体内における血栓形成において、血小板P-セレクチンを介した血小板と白血球の接着機構が関与していることを、これまでに我々は報告してきたが、生体内血栓形成における血小板P-セレクチンの詳細な役割は不明であった。そこで我々は、動脈血栓形成における血小板P-セレクチンの役割を検討するために、P-セレクチン欠損マウスを用いて研究し、現在まで、以下のような研究成果が得られた。1)P-セレクチン欠損マウスにおいて、P-セレクチンが真に欠損していることを、PCR法で確認した後に、P-セレクチン欠損マウスと野生型マウスを用いて、塩化鉄刺激によるマウス頚動脈血栓モデルを作製した。

そして、血栓により閉塞されるまでの時間(血栓閉塞時間)を比較検討した。野生型マウス群と比較し、P-セレクチン欠損マウス群では血栓閉塞時間が延長し、さらにP-セレクチン欠損マウス群では血栓形成により動脈が閉塞された後にもしばしば自然再還流現象が観察されたが、野生型マウス群ではこのような現象は観察されなかった。2)血小板凝集についての検討では、血小板凝集能はP-セレクチン欠損マウスと野生型マウス群では差は認めなかった。3)血小板および白血球が存在する全血凝集についての検討では、全血凝集能は野生型マウス群に比較し、P-セレクチン欠損マウス群で抑制されていた。4)フローサイトメトリーを用いた全血凝集塊の検討では全血凝集塊の増大はP-セレクチン欠損マウス群では認められなかったが、野生型マウス群で増大した。以上の結果から、血小板P-セレクチンは生体内において血小板-白血球凝集塊の増大と安定化に関与していることが示唆され、さらなる詳細な検討を行う予定である。動脈硬化の最終段階では粥腫の破裂に引き続き、冠動脈血栓が形成され、不安定狭心症や急性心筋梗塞などの致死的な急性冠症候群が発生する。生体内における血栓形成において、血小板P-セレクチンを介した血小板と白血球の接着機構が関与していることを、これまで我々は報告してきたが、生体内血栓形成における血小板P-セレクチンの詳細な役割は不明であった。そこで我々は、動脈血栓形成における血小板P-セレクチンの役割を検討する為にP-セレクチン欠損マウスを用いて研究し、以下のような研究成果が得られた。1)P-セレクチン欠損マウスにおいて、P-セレクチンが真に欠損していることをPCR法で確認した後にP-セレクチン欠損マウスと野生型マウスを用いて、塩化鉄刺戟によるマウス頚動脈血栓モデルを作成した。そして血栓により閉塞されるまでの時間(血栓閉塞時間)を比較検討した。野生型マウス群と比較しP-セレクチン欠損マウス群では血栓閉塞時間が延長し、さらにP-セレクチン欠損マウス群では血栓形成により動脈が閉塞された後にもしばしば自然再還流現象が観察されたが、野生型マウス群ではこのような現象は観察されなかった。2)血小板凝集についての検討では、ADPによる血小板凝集能はP-セレクチン欠損マウス群と野生型マウス群では差は認められなかった。3)血小板および白血球が存在する全血凝集についての検討では、ADPによる全血凝集能は野生型マウス群に比較しP-セレクチン欠損マウス群で抑制されていた。4)フローサイトメトリーを用いたADPによる全血凝集塊の検討では全血凝集塊の増大はP-セレクチン欠損マウス群では認められなかったが、野生型マウス群で増大した。5)フローサイトメトリーを用いて、ADPによる全血凝集塊を血小板および白血球活性化のマーカーで二重染色を行った検討では、上記4)と同様の結果が得られ、全血凝集塊の機能的評価が可能であった。以上の結果から、生体内動脈血栓形成過程において、血小板P-セレクチンを介した血小板-白血球との相互作用は動脈血栓の増大と安定化に大きく関与していることが明らかになった。
褐藻の同型配偶子接合におけるアロ認証～形態学的同型性と生理学的異型性～

本研究では、後生動物・緑色植物(緑藻と陸上植物)と系統を異にする不等毛植物(ストラメノパイル系統群)に属する褐藻の同型配偶子接合におけるアロ認証機構について、1)雌雄配偶子の前後鞭毛と鞭毛基底小体の超微細構造解析、2)雌雄配偶子間・前後鞭毛間での鞭毛構成タンパク質に対するプロテオーム解析、3)雌雄配偶子が持つ走光性と雄性配偶子が持つ走化性(フェロモン受容体)の解析を目的として研究を進めている。平成24年度は、褐藻シオミドロの全ゲノムデーターベースを基盤として、フィールドより採集した褐藻ワタモの遊泳細胞から前後鞭毛を単離して、LC-MS/MSで鞭毛タンパク質の同定を試みた。その結果、約600個の鞭毛タンパク質を同定し、さらに前鞭毛特異的タンパク質として25個、後鞭毛特異的タンパク質として53個が存在していることを明らかにした。さらに、雌雄配偶子の走光性に関与すると考えられる新奇青色光受容体タンパク質を発見した。組換えタンパク質に対する特異的抗体を用いた免疫学的試験により、本タンパク質は後鞭毛に局在していることが明らかとなった。走光性と走化性は、褐藻の受精において重要な刺激反応系であるため、走光性に関与する青色光受容体の発見は、アロ認証機構において大きな意味をもつものと考えられる。雌雄配偶子の認識・受精に関しては、雌性配偶子からの性フェロモンに対する受容体は雄性配偶子の鞭毛、特に推進力を担う前鞭毛に存在しているという仮説のもとに、配偶子の前後鞭毛について電子線トモグラフィーによる詳細な観察を行った。前鞭毛ではマスチゴネマと呼ばれる小毛と鞭毛軸糸を連結する構造が確認できた。また、高速ビデオを用いた観察から、雄性配偶子の前鞭毛が受精時における雌雄間の最初の認識に重要な働きを担っていることが示唆された。褐藻の受精において、雌雄配偶子の鞭毛が大きな役割を担っていると考え、質量分析により約600個弱の鞭毛タンパク質を同定した。さらに、前後鞭毛に特異的なタンパク質を同定することができた。その中には、走光性に関与すると考えられる新奇の青色光受容体タンパク質が含まれている。このタンパク質は2つのRGSドメイン(regulator of G protein signaling)と4つのLOVドメイン(light, oxygen and voltage sensing)を有していた。一般に青色光に対して走光性を示す褐藻配偶子の後鞭毛は、フラビンによる自家蛍光で緑色自家蛍光を呈する。我々が発見したRGS/LOVタンパク質は、1)フラビン結合能を有するLOVドメインを有すること、2)走光性を示さないコンブ類の遊走子の鞭毛には存在していないこと、3)大腸菌により発現させた組替えタンパク質に対する抗体を用いた免疫形態学的観察から、後鞭毛に局在することから、新奇の青色光受容体タンパク質である可能性が極めて高いと考えられる。現在まで、青色光受容体タンパク質について、オーレオクロームやクリプトクロームなど幾つか報告されているが、生活環を通して遊泳細胞時期の走光性に特化して関与するものはなく、褐藻を含めた不等毛藻類の走光性、受精、そして環境適応を考える上で、大きな発見であると考えている。昨年度と同様に褐藻雌雄配偶子の鞭毛に焦点をあてて、研究を進める。新奇青色光受容体タンパク質については、継続してその生理的機能を分子生物学的手法を用いて研究を展開していく。さらに、本年度は雄性配偶子に存在している性フェロモンレセプターの同定を目的に研究を開始する。褐藻のフェロモンレセプターは鞭毛、あるいは細胞本体の膜上に存在していると考えていたが、雌性配偶子からの性フェロモンが脂溶性の低分子であることから、レセプターは雄性配偶子の細胞内部、特に鞭毛軸糸と関係した状態で存在し、鞭毛運動に直接的に関係している可能性がある。そこで、受精過程の電子顕微鏡観察、高速ビデオによる鞭毛運動解析を進めて行く。また、全ゲノムが明らかとなったシオミドロm32株から派生した突然変異体の幾つかを、フランス・ロスコフ臨海実験所から供給を受けている。その中には、胞子体と配偶体の世代交代を行わず、配偶体世代のみの生活史を持つ突然変異体も含まれている。そこで、大量培養を行い、LC-MS/MS解析に耐える十分量を雌雄配偶子を得ることが可能となったため、これらの株を用いて雌雄配偶子鞭毛間のタンパク質の相違を明らかにする。

組換えタンパク質に対する特異的抗体を用いた免疫学的試験により、本タンパク質は後鞭毛に局在していることが明らかとなった。走光性と走化性は、褐藻の受精において重要な刺激反応系であるため、走光性に関与する青色光受容体の発見は、アロ認証機構において大きな意味をもつものと考えられる。雌雄配偶子の認識・受精に関しては、雌性配偶子からの性フェロモンに対する受容体は雄性配偶子の鞭毛、特に推進力を担う前鞭毛に存在しているという仮説のもとに、配偶子の前後鞭毛について電子線トモグラフィーによる詳細な観察を行った。前鞭毛ではマスチゴネマと呼ばれる小毛と鞭毛軸糸を連結する構造が確認できた。また、高速ビデオを用いた観察から、雄性配偶子の前鞭毛が受精時における雌雄間の最初の認識に重要な働きを担っていることが示唆された。褐藻の受精において、雌雄配偶子の鞭毛が大きな役割を担っていると考え、質量分析により約600個弱の鞭毛タンパク質を同定した。さらに、前後鞭毛に特異的なタンパク質を同定することができた。その中には、走光性に関与すると考えられる新奇の青色光受容体タンパク質が含まれている。このタンパク質は2つのRGSドメイン(regulator of G protein signaling)と4つのLOVドメイン(light, oxygen and voltage sensing)を有していた。一般に青色光に対して走光性を示す褐藻配偶子の後鞭毛は、フラビンによる自家蛍光で緑色自家蛍光を呈する。我々が発見したRGS/LOVタンパク質は、1)フラビン結合能を有するLOVドメインを有すること、2)走光性を示さないコンブ類の遊走子の鞭毛には存在していないこと、3)大腸菌により発現させた組替えタンパク質に対する抗体を用いた免疫形態学的観察から、後鞭毛に局在することから、新奇の青色光受容体タンパク質である可能性が極めて高いと考えられる。現在まで、青色光受容体タンパク質について、オーレオクロームやクリプトクロームなど幾つか報告されているが、生活環を通して遊泳細胞時期の走光性に特化して関与するものはなく、褐藻を含めた不等毛藻類の走光性、受精、そして環境適応を考える上で、大きな発見であると考えている。昨年度と同様に褐藻雌雄配偶子の鞭毛に焦点をあてて、研究を進める。新奇青色光受容体タンパク質については、継続してその生理的機能を分子生物学的手法を用いて研究を展開していく。さらに、本年度は雄性配偶子に存在している性フェロモンレセプターの同定を目的に研究を開始する。褐藻のフェロモンレセプターは鞭毛、あるいは細胞本体の膜上に存在していると考えていたが、雌性配偶子からの性フェロモンが脂溶性の低分子であることから、レセプターは雄性配偶子の細胞内部、特に鞭毛軸糸と関係した状態で存在し、鞭毛運動に直接的に関係している可能性がある。そこで、受精過程の電子顕微鏡観察、高速ビデオによる鞭毛運動解析を進めて行く。また、全ゲノムが明らかとなったシオミドロm32株から派生した突然変異体の幾つかを、フランス・ロスコフ臨海実験所から供給を受けている。その中には、胞子体と配偶体の世代交代を行わず、配偶体世代のみの生活史を持つ突然変異体も含まれている。そこで、大量培養を行い、LC-MS/MS解析に耐える十分量を雌雄配偶子を得ることが可能となったため、これらの株を用いて雌雄配偶子鞭毛間のタンパク質の相違を明らかにする。
低出力超音波療法が筋再生に及ぼす影響とその作用機序の解明

低出力超音波療法(LIPUS)は、創傷治癒促進を目的とした治療法であり、骨折や腱損傷に対して使用されている。筋損傷に対するLIPUSの効果検証は、筋横断面積の変化や線維化の範囲など組織学的および筋張力評価などが多く実施されているが、有効とする報告と無効とする報告が混在する。またLIPUSの筋再生過程に及ぼす作用機序は未だ不明な点が多い。LIPUSは、機械的刺激を細胞に与えることから、先行研究ではLIPUSを照射した滑膜細胞や軟骨においてインテグリンを介したPI3K-Aktシグナル伝達経路の活性化が報告されている。そこで本研究では、骨格筋においてもLIPUS照射によりAktが活性化されるのか、また筋肥大に関連するAkt-mTOR-p70S6K経路に変化が生じるのか検証した。<方法>実験動物はICR系雌マウス(12週齢)を用いて、1筋損傷群、2筋損傷+LIPUS群にわけた。LIPUS照射条件は、周波数;3 MHz、強度0.5 W/1平方cm、照射サイクル; 50%、照射時間10分とした。照射は、損傷後2時間経過後に1回照射し、2回目以降は1回/日の頻度で実施した。なお筋損傷群では、照射強度を0WにしてLIPUS照射群と同様の操作を行った。損傷後3日および5日後に前脛骨筋を採取し凍結固定後に横断切片を作成し、損傷の程度を確認後、Akt, mTOR, p70S6Kのリン酸化についてイムノブロット法にて解析した。<結果・考察>Akt、mTOR、p70S6Kのリン酸化について検討した結果、3日後、5日後のいずれにおいても、LIPUS照射群でAkt、p70S6Kの活性化は高くなる傾向はあるものの有意差は認められなかった。今回の結果では、LIPUSは筋損傷回復を促進する効果は少ないことが示唆された。今後は、その他のシグナル伝達や筋分化マーカーを用いた解析もすすめて検討する必要がある。今年度は、Akt-mTOR-p70S6Kを対象に、3日後と5日後について検証をすすめた。LIPUS照射後の24時間後に筋サンプルを採取して解析をすすめていたが、Akt等の活性化に有意な変化が生じるのは刺激後短時間であるという報告もあることからサンプリング時間をより早めて検討することも必要であったと考える。今後は、LIPUS照射後のサンプリング時間やLIPUS照射条件も再検討し、Akt等の活性化について検討する。またLIPUSによって影響が生じることが報告されているERK1/2の活性化についても調査する予定である。また筋分化マーカーもあわせて評価する予定である。

(理由)今年度は、PI3K-Akt経路、またAkt-mTOR-p70S6Kシグナル伝達経路の評価を行う予定で計画したが、Akt-mTOR-p70S6K経路の検出を実験条件を検討しながらすすめたため、予定よりも時間を要した。そのため、使用する動物や試薬の使用量が少なく、次年度使用額が生じた。(使用計画)次年度は、LIPUS照射後のサンプリング時間やLIPUS照射条件を再検討し、PI3K-Akt経路の活性化の有無について検証する予定である。また筋分化マーカーの発現についてもあわせて検討する。これらの解析のために動物および抗体を購入する費用として使用する。
患者評価による医療の質評価の新たな手法の開発と実践

本研究は、医療の質の評価を、患者の視点から適切に行える評価手法の開発を行い、臨床現場で活用しやすい評価結果・評価データを提示するシステムの検討を目的として行った。まず、AHRQで用いられているCAHPSの項目や過去の国内の研究で用いられている項目を参考に、患者の視点から医師の質を評価するための評価方法・項目を検討した。評価方法は4つの方法を試行し、患者の視点から最も妥当といえる評価方法を検討した。調査は2,000人を対象とし、回答は557名から回答が得られた。4つの評価方法は、(1)従来の評価方法(肯定的な質問文を配し、かなりそうである全くそうではない、の選択肢とする)、(2)否定的な質問文を配する方法、(3)肯定的な質問文を配し、その頻度を尋ねる方法(いつもそうであるまったくそうではない)、(4)否定的な質問文を配し、その頻度を尋ねる方法、の4つを対象者に無作為割付を行ってその回答を比較した。その結果、従来の評価方法(1)と否定的な質問を配する方法(2)では、その結果が裏返しとはならず、従来の評価方法(1)で肯定的評価率が高く、従来の評価方法(1)が適切な評価方法といえないことが示唆された。また、選択肢を頻度とする評価方法(3)(4)では、(4)の方法の場合、10項目ののべ評価のうち、いつもそうであるが4.3%、しばしばそうである6.2%、たまにそうである27.6%と、改善すべきポイントが明示されやすい結果となった。信頼性係数(内的一貫性)はα=0.90、TIPS-J(日本語版Trust in Physician Scale)との相関係数も0.60と比較的高いことから、この方法の有効性は高いといえる。方法(3)の場合、方法(4)の裏返しの結果が得られたが、TIPS-Jとの相関係数0.49と低いことから、方法(4)が実践的に推奨される方法であることが示唆された。医療の質を測定するひとつの方法として、患者満足度を測定する取り組みが行われてきた。わが国でも、患者満足度調査が各医療機関において頻繁に行われるようになった90年代以降の段階で、満足度調査を超える測定方法についての議論はほとんどなされていない。そこで、本研究では、(1)医療の質の評価を、患者の視点から適切に行える評価手法の開発を行い、(2)評価手法の開発と同時に、臨床現場で活用しやすい評価結果・評価データを提示するシステムを検討する。平成17年度の研究では、医療の質の評価の手法について概要をレビューし、再検討をおこなった。そのうえで、医療従事者へのインタビュー、および既存の患者満足度調査等の再分析を行い、患者から見える範囲の医療の質と医療従事者が考える医療の質の違いについて分析し、患者評価による医療の質評価の方法について検討した。その結果、医療の質の評価、質の標準化、不確実性・不安定性という点で、医療従事者と患者の間には、その観点、考え方に大きな乖離が見られた。例えば、医療従事者が提供する治療や判断の個人差は、患者の側からすると理解不能であるが、現実的には能力や資質の差を含めて違いがあるのは、医療従事者から見れば通常のことである。また、医師が診断を確定していくプロセスにおいては観察・情報収集の積み重ねによって疾病を確定させる作業を踏んでいくが、患者の側にはそのプロセスは見えにくく、不確実な状況におかれ続けることに不満を感じる。また、医療は患者の個別性が高く、患者の予後に関する予見性も患者が思っているほど実際には高くない。結果的に良くないことが起きた場合にも、その責任をどこかに帰属せずにはいられないのが患者である。以上のように、患者から見える範囲での医療の質を検討しながら、具体的な評価方法の開発と実践を平成18年度にすすめる。

信頼性係数(内的一貫性)はα=0.90、TIPS-J(日本語版Trust in Physician Scale)との相関係数も0.60と比較的高いことから、この方法の有効性は高いといえる。方法(3)の場合、方法(4)の裏返しの結果が得られたが、TIPS-Jとの相関係数0.49と低いことから、方法(4)が実践的に推奨される方法であることが示唆された。