hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
「日本型」学校経営のモデル開発－「学校経営サロン」の実践と国際研究交流を通じて－

2017年度までに上越と群馬にて、大学教員と現職教職員らによる学校経営サロンをそれぞれ開催してきた。このサロンでの対話から抽出できたポイントについて、2016年11月に愛媛にて開催されたJapan-U.S. Teacher Education Consortiumでの発表(1件)と、2017年9月にスイスにて開催されたschulleitungssymposiumにおける発表(2件)を行った。なおスイスの発表のうち1件は、ドイツの研究者との共同発表である。これらに加え最終年度には、上越での開催となったInternational Society for Teacher Educationでの全体会Aにおいて、その成果の一部を発表するに至った。期間中を通じて、教育現場との共同研究体制の構築や研究交流をしながら進めてきた。なかでもミネソタ大学のKaren Seashore Louis氏からは、上越および仙台にて、我々とともに学校を訪問したり上越の学校経営サロンを参観したりしながら、有益な示唆を得ることができた。以上のような活動を通じ、日本の学校が、いかに地域に支えられているか、その地域とは何者であるのか、異動する教職員の存在を前提とした学校経営モデルをどう構築するか、などを今後の研究課題として抽出するに至った。平成29年度は、9月の国際学会発表へ向けて7月に一度目の、そして、発表して得られた成果を検討するために12月に二度目の研究会を開催する。なお、発表の際には、参加している海外の研究者らと積極的な研究交流を行い、今後の研究推進体制の充実化をはかる。並行して、引き続き、国内外の訪問による実態調査を行い、それぞれの国・地域における学校経営の基盤となっている教育制度・行政、地域文化、学校内における校長と教職員の関係性、それぞれにおけるリーダーシップ論などについて明らかにする。あわせて、上越と群馬においての学校経営サロンの取り組みを継続して行っていく。現時点までに、すでに準備を進めてきているが、5月中旬の国際教師教育学会での企画打合せや報告内容の検討を行う。学会期間中には、参加している海外からの会員らと積極的な交流を行い、今後の研究の推進を図る。また今年度も上越および群馬にてそれぞれ実施する学校経営サロンにおいて、海外との交流の成果を還元しながら、日本の学校経営実践が蓄積してきた「地域」連携のノウハウの再評価に取り組む。また年度末までに分担者・連携協力者と分担して報告書の執筆をすすめる。なお、国際学会での発表内容は、学会誌等への掲載を目指し、論文投稿を検討している。海外研究者との研究交流については、本科研以外の予算を使用可能であったため、支出額を抑えることができたため。平成29年度には、スイスで開催された国際学会への参加費を含めた旅費が、支出額のほとんどを占めている。計画当初は、この国際学会参加に伴い、資料整理等による人件費や謝金の支出を見込んでいたが、海外旅費としての支出を確保するため、人件費・謝金が発生しないように研究費を執行した。
脂肪蓄積の局在変化は動脈硬化リスクの増大に関与するか？

本研究は、筋細胞内・外脂肪含有量と動脈硬化との関係について、性別、年齢、運動習慣の影響を検討することを目的とした。40歳以上の中高齢者では、女性においてのみ筋細胞内脂肪含有量と動脈硬化との間に負の相関関係があり、特に低体力者で有意に影響した。一方、動脈硬化と筋細胞外脂肪含有量との間には年齢・性別・体力に関係なく有意に正の相関関係が認められた。また、有酸素性トレーニングによる筋細胞内脂肪含有量の増加量と動脈硬化の低下量との間には有意な相関関係が認められた。筋細胞内・外脂肪含有量は動脈硬化と関連性があることが明らかになった。また、その関係は年齢や性別、運動習慣によって異なる可能性が示唆された。脂肪が体内に過剰に蓄積した状態である肥満は、心血管系疾患リスクを増大させる。体内の脂肪は皮下脂肪、内臓脂肪だけでなく、各組織内においても蓄積される。しかしながら、筋細胞内脂肪(IMCL)および筋細胞外脂肪(EMCL)含有量による動脈硬化リスクへの影響については明らかでない。そこで本研究では、IMCLおよびEMCL含有量と動脈硬化度との関係について、性別および年齢の影響を横断的に検討することを目的とした。本研究では、健常な男女139名(18-81歳;男性75名、女性64名)を対象に大腿部のIMCLおよびEMCL含有量を1H-MRSにて測定した。また、動脈硬化度は上腕-足首間の脈波伝播速度(baPWV)にて評価した。男性において、IMCL含有量とbaPWVとの間に有意な相関関係は認められなかったが、女性では有意な負の相関関係が認められた(R=-0.396,P=0.0012)。さらに、40歳を基準として群分けして検討した結果、40歳以下では男女共にIMCL含有量とbaPWVとの間に有意な相関関係は認められなかった。しかしながら、40歳以上の女性において、有意な負の相関関係が認められた(R=-0.36,P=0.0176)。一方、EMCL含有量とbaPWVとの間に有意な正の相関関係が認められ、性別、年齢、体力の有無により分割してもその関係は同様であった。以上の結果から、IMCL含有量と動脈硬化度との間の相関関係には性差があり、特に中高齢女性において関連性があることが、EMCL含有量と動脈硬化度との間には年齢、性別、体力の有無に関係なく正の相関関係あることが示された。脂肪が体内に過剰に蓄積した状態である肥満は、心血管疾患リスクを増大させる。昨年度の本研究課題の横断的な検討により、IMCL含有量と動脈硬化度との間の相関関係には性差があり、特に中高齢女性において、負の関係が認められたこと、さらに、EMCL含油量と動脈硬化度との間には年齢、性別、体力の有無に関係なく正の相関関係であることが認められた。しかしながら、習慣的な運動によるこれらの関係性への影響についてでは明らかでない。そこで本研究では、IMCLおよびEMCL含有量と動脈硬化との関係について、性別および年齢、運動習慣の影響を縦断的に検討することを目的とした。本研究では、健常な中高齢者13名(66±2歳;男6名、女7名)を対象に8週間の有酸素性トレーニング(60-70%VO2peak強度、45分間、週3日)を実施し、介入前後の最高酸素摂取量(VO2peak)、大腿部IMCLおよびEMCL含有量(1H-MRS法)、動脈硬化指標として上腕-足首間の脈波伝播速度(baPWV)を測定した。その結果、有酸素性運動介入により、VO2peakは有意に増大し、baPWVは有意に低下した。さらに、IMCL含有量の変化量とbaPWVの変化量との間には有意な負の相関関係が認められた(r=-0.68, P<0.05)。しかしながら、EMCL含有量の変化量とbaPWVの変化量との間には有意な相関関係が認められなかった。以上の結果から、有酸素性トレーニングによる動脈硬化改善にIMCL含有量の変動が関与する可能性が示唆された。

運動生理・生化学本年度は若年者および中高齢者の男女を対象に運動習慣の有無や性差,加齢による筋細胞内・外脂肪含有量の変化と動脈硬化リスクとの関連性を横断的に検討することが目的であったが、健常な男女139名(18-81歳;男性75名、女性64名)を対象として解析した結果、筋細胞内・外脂肪含有量の変化と動脈硬化リスクとの間には有意な関連性が認められるという結果が得られた。また、これらの関連性には、年齢、性別、体力の有無によっても変動する可能性も認められるという結果も得られたことから、計画どおりに研究が行われていると考えられる。動脈硬化指標に対する筋細胞内脂肪および筋細胞外脂肪の蓄積量との関連性を解明するために、横断的な検討を実施し、性別、年齢、体力の有無によってこれらの関連性に違いがある可能性が示されたことから、次年度は計画どおり、縦断的な検討により、動脈硬化指標に対する筋細胞内脂肪および筋細胞外脂肪の蓄積量との関連性を明らかにしていく。本年度計画の被験者数が予定よりも数十名測定が少なかった点や被験者数が多いため、血液解析に時間がかかったことから次年度に解析を行うために次年度使用が生じた。本研究計画に従い、2年間の研究で検討するため、次年度に追加の測定や血液解析および次年度研究計画の測定、解析に関わる費用として使用する。
マメ科植物のP450とテルペン合成酵素の反応と生態機能に関するポストゲノム的研究

植物成分の多様性に深く関わるシトクロムP450とトリテルペン環化酵素(OSC)の遺伝子/タンパク質構造と反応様式の関係,発現制御と生成物の生態生理機能,および分子進化を,ゲノム構造解析が進行中のマメ科モデル植物ミヤコグサを主な材料として研究した.ミヤコグサEST中のP450のカタログ化,一部の酵素機能の同定に続いて,イソフラボノイド骨格構築に関わるP450(IFS)の遺伝子構造を調べ,ミヤコグサゲノム中ではIFSが連続した生合成反応を担うO-メチル転移酵素遺伝子と並列して存在することを見出した.またマメ科に特徴的な共生窒素固定器官である根粒で強く発現するP450についてゲノムレベルで解析を行った.さらにIFSの遺伝子情報を基盤としたホモロジーモデリングと部位特異的変異導入によるタンパク質工学的な展開を試み,特異なアリール基転位反応における酵素活性部位のアミノ酸残基の役割を解明した.OSCに関しては,ミヤコグサの主要な酵素をほぼ網羅的に解析し,β-amyrin, lupeol, cycloartenol合成酵素を含む8種の遺伝子を見出した.また他植物の情報とあわせた分子系統解析により,植物トリテルペノイド骨格の多様性の進化要因が,特にβ-amyrin合成酵素群の変異によることが推定された.OSCの過剰発現・発現抑制形質転換ミヤコグサによる遺伝子機能の解析に着手するとともに,exon/intron構造の情報に基づくタンパク質工学的な手法によるOSC触媒機能の厳密な解析が可能になった.さらに生合成系の遺伝子発現と成分変動の全般的な関連付けに向け,ミヤコグサの種々の器官,細胞について成分プロファイルの解析を行った.これらの研究を通じて,特にP450とOSCのタンパク質構造と触媒機能の相関,および特徴的な植物二次代謝系の分子進化の機構に関して興味深い知見がもたらされた.植物成分の多様性に深く関わるシトクロムP450とトリテルペン環化酵素(OSC)の遺伝子/タンパク質構造と反応様式の関係,発現制御と生成物の生態生理機能,および分子進化を,ゲノム構造解析が進行中のマメ科モデル植物ミヤコグサを主な材料として研究した.ミヤコグサEST中のP450のカタログ化,一部の酵素機能の同定に続いて,イソフラボノイド骨格構築に関わるP450(IFS)の遺伝子構造を調べ,ミヤコグサゲノム中ではIFSが連続した生合成反応を担うO-メチル転移酵素遺伝子と並列して存在することを見出した.またマメ科に特徴的な共生窒素固定器官である根粒で強く発現するP450についてゲノムレベルで解析を行った.さらにIFSの遺伝子情報を基盤としたホモロジーモデリングと部位特異的変異導入によるタンパク質工学的な展開を試み,特異なアリール基転位反応における酵素活性部位のアミノ酸残基の役割を解明した.OSCに関しては,ミヤコグサの主要な酵素をほぼ網羅的に解析し,β-amyrin, lupeol, cycloartenol合成酵素を含む8種の遺伝子を見出した.また他植物の情報とあわせた分子系統解析により,植物トリテルペノイド骨格の多様性の進化要因が,特にβ-amyrin合成酵素群の変異によることが推定された.OSCの過剰発現・発現抑制形質転換ミヤコグサによる遺伝子機能の解析に着手するとともに,exon/intron構造の情報に基づくタンパク質工学的な手法によるOSC触媒機能の厳密な解析が可能になった.さらに生合成系の遺伝子発現と成分変動の全般的な関連付けに向け,ミヤコグサの種々の器官,細胞について成分プロファイルの解析を行った.これらの研究を通じて,特にP450とOSCのタンパク質構造と触媒機能の相関,および特徴的な植物二次代謝系の分子進化の機構に関して興味深い知見がもたらされた.マメ科モデル植物ミヤコグサの,シトクロムP450(P450)と環状トリテルペン合成酵素(OSC)の遺伝子構造と反応様式を明らかにし,発現制御と生態機能のメカニズムを明らかにすることを目標にしている.環境応答性の遺伝子,器官特異的な発現をする遺伝子に注目して,それらのクローニングと詳細な機能解明を試みる一方,形質転換体の表現型や成分プロファイルとの対応より遺伝子機能に迫ることを企てた.これまでに以下の成果を得ている.ミヤコグサで発現しているP450遺伝子をESTデータベースよりカタログ化し,少なくとも66種の独立のP450が幼植物体や花で発現していることを見出した.また一部のP450については触媒機能を確認した.今後配列情報やDNAアレイを用いた発現プロファイルの検討などにより特徴的な遺伝子を選定し,機能解明を目指すことにしている.一方イソフラボノイド系の既知P450について遺伝子構造を検討したところ,連続する生合成反応を担うメチル基転移酵素とクラスターを成している例を見出し,独特の代謝の分子進化に関する興味深い知見を得た、OSCのcDNAを数種クローニングし,ラノステロール合成酵素欠損酵母による機能解析により,β-amyrin合成酵素cDNAを同定し,そのゲノム構造を明らかにした.一方,各器官毎のトリテルペンアルコールとトリテルペン酸の検出を行った.OSCの発現様式と成分変動を併せ検討することにより,トリテルペノイド系の遺伝子機能に関する詳細な知見が期待される.逆遺伝学的解析の要であるミヤコグサの効率的な形質転換法を確立した.またフラボノイド系の重要なP450遺伝子による形質転換植物を作製し,さらにOSCの導入に用いるアグロバクテリウム用ベクター作製に着手した.マメ科植物の生態生理には,多様な天然有機化合物がきわめて重要な役割を果たしている.おもな材料としてゲノムおよびESTデータベースの整備が進んでいるモデル植物

ミヤコグサを用い,基質および反応の特異性が異なる多数の分子種が存在して成分の多様性を産み出しているシトクロムP450(P450)と環状トリテルペン合成酵素(OSC)の遺伝子構造を解析し,タンパク質構造と反応様式の相関関係,分子進化,発現制御と生態機能のメカニズムなどを明らかにすることを目的としている.マメ科独特のイソフラボノイド骨格をつくり出すP450(IFS)の反応機構を部位特異的変異導入酵素を用いたタンパク質工学的手法により検討した.その結果より,マメ科の成立の過程で,一般植物のフラボン合成酵素と共通の祖先からイソフラボン系が進化したことを推察した.ミヤコグサOSC cDNAを取得して酵母発現系で触媒機能を解析し,β-アミリン合成酵素に加えて,ルペオール,シクロアルテノールなどの合成酵素を同定した.またそれら遺伝子構造を解析し,ゲノム中クラスター状に配置された2組のOSC遺伝子グループが存在することを見出した.さらにエキソン-イントロン構造をシロイヌナズナOSC遺伝子と比較し,分子系統進化に関する新知見を得た.触媒機能未知のOSCや偽遺伝子を含め,ミヤコグサからはこれまでに89種のOSC遺伝子の存在が明らかにされ,現時点でのマメ科植物OSCの最も網羅的な解析を達成している.ミヤコグサのP450,OSC遺伝子を過剰発現,発現抑制させた形質転換体を作製し,それらの植物生理機能を検討するため,導入ベクターの作製,形質転換実験を行った.アグロバクテリウム法によりIFSといくつかのOSCのセンス,アンチセンス遺伝子を導入した植物体を育成中である.植物成分の多様性に深く関わるP450とトリテルペン環化酵素(OSC)の遺伝子/タンパク質構造と反応様式の関係.発現制御と生成物の生態生理機能,および分子進化を研究した.P4501FS(CYP93C)は特異なアリール基転位反応によりマメ科特有の活性物質イソフラボノイドを合成する.複数(最大3ヶ所)の部位特異的変異を導入したCYP93Cタンパク質は熱安定性が著しく向上し,広く植物に存在するフラボン合成酵素(FNS)活性が発現した.従ってIFSはFNSと共通祖先より,タンパク質の安定性を犠牲にして進化したと示唆された.一方改変CYP93Cの分子シャペロンとの共発現により,大腸菌での大量調製と精製に成功した.今後,物理化学的解析を通じて反応特異性に関する知見を深める.さらに,IFSと次の段階の脱水酵素を酵母で共発現させ,反応の共役により異種細胞でのイソフラボン合成能を格段に向上させた.他方,マメ科モデル植物ミヤコグサの根粒で発現するP450の遺伝子構造をかずさDNA研究所と共同で解析し,多数のパラログ遺伝子が存在し,個々の発現様式に差異があることを見出した.植物微生物相互作用におけるこれらのP450の生態生理機能は非常に興味深く,今後形質転換ミヤコグサを用いて機能を解明する.ミヤコグサOSCの網羅的解析をほぼ終了し,植物OSCの分子進化の方向性に関して知見を得た.特にβ-amyrin
非線型・非一様時空構造の創成・進化と数値的宇宙論

本研究ではまず数値的宇宙論の定式化を行った。申請者達により宇宙論の問題を数値的相対論として扱うため考案された新しい方法は、重力崩壊のときのテクニックを充分に活用できるもので、今までの数値的相対論の研究の自然な延長上にある。この定式化を用い、インフレ-ションの普遍性問題の解決のため、簡単な場合として宇宙項のみ存在する場合の1次元面対称時空のシミュレ-ション計算を実行した。Goldwirth,Piranは1次元球対称の場合に計算を行い、インフラトン場の非一様性のスケ-ル長が、地平線より大きな場合インフレ-ションが起こることを示している。我々はその問題と相補的な場合、つまり重力波による非一様性がインフレ-ションにどう影響するかを考えた。結果は、特異点に崩壊して行く様な場合は存在せず、すべて一様・等方なdeSitter時空に進化していった。このことはインフレ-ションの普遍性を支持する。この結果はGoldwirth、Piran達のものと異なるが、それが重力波による非一様性の特性か、仮定した対称性によるものがどうかは、現時点では、明かでない。また、本研究の大きな成果として、これらのシミュレ-ションなどをもとにし、インフレ-ションの普遍性問題に関する新しい仮説、“Gosmic Hoop Conjecture"を提案し、宇宙項が存在する場合の非一様性空の進化のようすを解析的および数値的に解明しつつある。この結果は近い将来国際会議および学術雑誌に発表の予定である。さらには、宇宙における非一様性の生成・進化、特に、宇宙初期の相転移に伴う泡構造やブラックホ-ルなどの非一様性の生成とその進化の問題、に関しては、主に、一般化されたアインシュタイン理論に基づいた研究を行った。インフレ-ションそのもののモデルに関しては、我々はsoft inflationを提案しているが、そのモデルによると理論に含まれるパラメ-タの微調整は必要なく、インフレ-ションを導く自然なモデルと考えられる。また、La、Steinhardtの提案しているextended inflationは、荒い評価では生成された泡の作る非一様性が観測と矛盾することから、オリジナルなモデルは否定されているが、実際にはその泡の膨張則はより厳密に計算されなければならない。その解析を行った結果、extended inflationの初期にはこれまで考えられていたのとは異なるタイプの相転移が起こることが明らかになり、観測と矛盾するかどうかはさらにシミュレ-ション計算等を行う必要のあることを示した。また、このextended inflationが正しいとすると、old inflationで佐藤達によって提案された宇宙の多重発生が起こり得ることも示した。一方、銀河などの構造形成問題は、宇宙における非一様性の問題としてもう一つの重要なテ-マである。ここでは、この構造形成問題が「一般化されたされたアインシュタイン理論」の枠内で自然に理解できないかを考察した。nonーminimal couplingがある場合、密度ゆらぎが十分増幅されるモデルがあるが、残念なことにその宇宙モデル自身は見かけの“重力定数"が負になる領域まで進化し、不自然なものといわざるを得ない。

また、このextended inflationが正しいとすると、old inflationで佐藤達によって提案された宇宙の多重発生が起こり得ることも示した。一方、銀河などの構造形成問題は、宇宙における非一様性の問題としてもう一つの重要なテ-マである。ここでは、この構造形成問題が「一般化されたされたアインシュタイン理論」の枠内で自然に理解できないかを考察した。nonーminimal couplingがある場合、密度ゆらぎが十分増幅されるモデルがあるが、残念なことにその宇宙モデル自身は見かけの“重力定数"が負になる領域まで進化し、不自然なものといわざるを得ない。数値的相対論は十年ほど前からスタ-トし、いろいろ研究されているが、その宇宙論に関する研究は、その重要性に世界的にも最近気がつき始めたこともあり、まだまだ未開托であった。そこで今年はまず数値的宇宙論の定式化を行うことから始めた。申請者達により宇宙論の問題を数値的相対論として扱うため考案された新しい方法は、重力崩壊のときのテクニックを充分に活用できるもので、今までの数値的相対論の研究の自然な延長上にある。この定式化のもと、膨張宇宙における座標系としてどういうものがよいかを知られている解析解を使い考察した。さらに、星の重力崩壊問題の時同様、非一様時空の進化において重要となる『見かけの地平線』をどのようにして求めるかを研究し、数値的に好ましい方法を発見した。これらの成果はPhysical Reviewに掲載される予定である。宇宙における非一様性の生成・進化(1)宇宙初期の相転移に伴う泡構造やブラックホ-ルなどの非一様性の生成とその進化、(2)量子的宇宙の創成・進化と宇宙の一様・等方性)に関しては、今年度はおもに解析的観点から生成問題の研究を行った。まず、宇宙初期の相転移に伴う泡構造やブラックホ-ルなどの非一様性の量子論的生成問題においては、重力場の存在が重要となるが、重力を考慮した場合の定式化を行い、解析的考察を行った。また、最近の銀河の赤方偏移などの観測で、宇宙には非常に大きなスケ-ルの非一様性が存在することがわかってきた。また、宇宙には、そのような大きなスケ-ルの周期構造が存在するかもしれないというごく最近の観測もある。これらのことは一様・様方性を仮定している宇宙の標準モデルが本当にそれでいいのかという疑問を与える。これらの非一様性が本当であるとすると、本研究テ-マに密接に関連した重要な問題が提起されたことになる。そこで、『そのような構造がどのようにしてできたのか』を調べることは、本研究遂行に非常に重要と考えられるので、本年度その研究もスタ-トし、来年度の研究テ-マにも加えた。前年度の研究成果を踏まえ、本年度はインフレ-ションの普遍性問題の解決のてめ、本格的な数値計算を行った。前年度に完成した定式化を用い、簡単な場合として、宇宙項のみ存在する場合の1次元図対称時空のシミュレ-ション計算を実行した。
治療抵抗性口腔癌に対する分子標的治療についての基礎的研究

p53新規ターゲット遺伝子p53R2が,ヒト癌治療における化学療法感受性に関与していることを明らかにしてきた。本年度は,口腔癌細胞株SAS,HSC-4,Ca9-22,および乳癌細胞株MCF7そして正常皮膚線維芽細胞NHDFを用いてp53R2の発現と5FU感受性との関連を検討し,p53R2が高発現している細胞株は5FUに抵抗性を示すことを明らかにした。そして,各癌細胞に5FUを作用させると,正常型p53を持ったものではp53依存的にp53R2発現が誘導されるのに対して,変異型p53を持ったものではp53非依存的にp53R2発現が誘導されていた。また,具体的な口腔癌治療の分子標的として,このp53R2が有用であるかどうかを検討するために,RNA interference法による特異的タンパク発現阻害作用を利用して,p53R2発現阻害を行った。するとRNA interference法によりp53R2蛋白は癌細胞特異的に発現が阻害され,さらに,5FU感受性を増強させることが明らかとなった。これらの結果から,p53R2は口腔癌の分子標的治療において重要な役割を果たす可能性が示唆され,抗癌薬との併用により治療効果の増強につながることが明らかとなった。p53経路の異常が発癌や悪性度をはじめとする細胞生物学的特性に関与しているとされ,臨床ではこれらをマーカーとして用いることが悪性度の評価や臨床経過の推測に有用であると考えられている.そこで,p53経路に属するp53,mdm2およびp21の各遺伝子発現と臨床病理学的因子がどのような関連性があるのかを明らかにし,さらに,p53によって誘導され,DNA修復に関与しているとされる新規p53ターゲット遺伝子p53R2について,口腔癌における発現の意義を明らかとすることを目指した.研究対象は,当科で治療した口腔扁平上皮癌症例,白板症症例および智歯抜歯の際に得られた歯肉のホルマリン固定パラフィン包埋切片で,p53,mdm2,p21およびKi-67の発現を免疫組織化学的染色を用いて,p53R2をin situ hybridization法を用いて,そして,PCR-SSCP法にてp53変異を検索した.そして,得られたデータと臨床病理学的因子,すなわち,年齢,上性別・部位・組織学的分化度,リンパ節転移の有無,生命予後および術前放射線化学療法の組織学的効果の各因子との関連性について検討した.その結果,口腔扁平上皮癌において,p53,mdm2およびp21の3つの蛋白発現の組み合わせを検索することが,腫瘍増殖能所属リンパ節転移,そして生命予後の各因子の推定に有用なマーカーであることが示唆された.さらに,新規p53ターゲット遺伝子p53R2は,口腔扁平上皮癌の発症に関与している可能性があり,腫瘍進展,分化および放射線化学療法の感受性に関与する分子であることが示唆された.p53依存的に誘導されるp53R2は,細胞DNA修復および合成に際してのdNTP供給に関与する遺伝子である。本研究では,標的とする遺伝子のmRNAを特異的に分解し,タンパク質発現を効率良く阻害するRNA interference法(以下RNAi)を用いて,p53R2が口腔癌治療における分子標的となり得る可能性について検討した。ヒト口腔扁平上皮癌細胞株SAS, HSC-4,OSC19およびCa9-22に対して5-FUを作用させ,p53R2発現をRT-PCRで解析した。また,p53R2のRNAiについては,21塩基対の2本鎖RNA(dsRNA)を設計し,オリゴフェクタミンを用いてSASおよびHSC-4細胞にトランスフェクションした。また,p53R2発現抑制による抗腫瘍効果についてMTT法を用いて検討し,さらに5-FU感受性への影響についても検討した。p53R2の発現はp53依存的であった。RNAiによりp53R2発現は特異的に抑制されていた。p53R2RNAiによる抗腫瘍効果において,SAS細胞は生細胞率63.4%,HSC-4は63.8%であり,ほぼ同様な腫瘍増殖抑制効果がみられた。さらに5-FU感受性については,p53R2 RNAi投与群は非投与群と比較して,SAS細胞では1.9倍,HSC-4細胞では1.5倍に腫瘍増殖抑制効果が増強していた。p53R2は口腔癌治療における分子標的として有用であり,その発現抑制と抗癌薬との併用により,さらに強力な治療効果が期待できることが示唆された。

するとRNA interference法によりp53R2蛋白は癌細胞特異的に発現が阻害され,さらに,5FU感受性を増強させることが明らかとなった。これらの結果から,p53R2は口腔癌の分子標的治療において重要な役割を果たす可能性が示唆され,抗癌薬との併用により治療効果の増強につながることが明らかとなった。
メタンと水と窒素からアンモニアを合成する触媒の研究

従来、不均一系触媒上での窒素と水素からのアンモニア合成反応では、非常の還元的な雰囲気が必要とされ原料中の微量の酸素やCO、水の除去が重要であった。本研究では、メタンと水の反応で生成する水素を用いるという、「特殊反応場」でのアンモニア合成を試みた。このような触媒系として、我々は以前、シリカに高分散されたルテニウム金属が活性を有することを見い出している。本研究では先ずこの触媒系を取り上げ、Ru金属の粒子径や担体、添加物依存性について検討した。触媒としては、Ru_3(CO)_<12>カルボニルクラスター錯体及びRuCl_3を前駆体としてシリカ(S)及びアルミナ(A)に含浸担持したもの(Ru(CO)及びRu(Cl))、それにセシウムイオンを添加したもの(Ru(Cl)-Cs)、Ru(NH_3)_6Cl_3錯体をY-ゼオライトにイオン交換により担持したもの(Ru(i)/YZ)を検討した。触媒の活性序列としては、セシウムを添加したRu(Cl)-Cs/Aが最も高活性を示したが、それでもN_2-H_2反応の活性の約1/30であった。金属粒子径としては、カルボニルクラスター担持のRu(CO)/S(分散度0.48)が塩化物担持のRu(Cl)/S(分散度0.26)より3倍程度活性が高く、Ru粒子径の小さいほうが、この反応に有効であることが示唆された。担体としては、アルミナが最も活性が大きく、ゼオライト、シリカの順であった。添加物効果としては、セシウムを検討したのみであるが、無添加触媒にくらべ4倍活性が向上し著しい添加効果が観測された。Ru(CO)/S触媒上でのCH_4-H_2O-N_2反応中の表面吸着種を赤外分光法で観測した結果、反応中Ru金属表面は大部分が吸着COにより覆われ、窒素の活性化を阻害していることが確認された。このCOの阻害効果のより小さい触媒の設計が重要であることが結論された。
ムギ類のアルミニウム抵抗性の種間差異の実体と発現機構

この研究は、オオムギ、コムギ、エンバクの間に認められる顕著なアルミニウム抵抗性の実体と発現機構の解明を目的とし、平成2年度と3年度の2年間継続した。初年度においては、根の発達様式の定量的な計測方法と、微小部位の微量のアルミニウムの測定方法の確立を中心に検討した。その結果、種子根と冠根に分けさらに分岐根の発生量を追跡する方法が実用可能となった。また、ムギ類の幼植物の根を根端から0ー5mm、5ー10mmに切断した微小試料を分解しフレ-ムレス原子吸光法によりアルミニウムの測定可能が確かめられた。本年度の研究においては、培養液に0、1、4、および12ppmのアルミニウムを添加した幼植物個体について、根の発達様式の差異と部位別のアルミニウム濃度の測定を中心に行なった。発芽後3週以降の個体では、三種類のムギとも種子根と冠根、およびその分岐の判別が容易になった。そこで発芽後2週目の個体を1週間アルミニウム添加処理したものについて、地上部、種子根と冠根の主根、分岐根の重量と部位別アルミニウム濃度の測定を行なった。根の重量と外観に最も顕著な差異が認められ、オオムギではアルミニウム処理によって主根と分岐根の伸長がとまり、一方、エンバクの根では、種子根が既に処理前から生育が止まり褐変していたが、アルミニウム処理区においても冠根からの分岐根と新しい冠根の発生と伸長がみられた。新しい根のアルミニウム濃度は、古い根よりもいづれの種でも有意に低かった。また、根端、準根端、中央部、基部の部位別のアルミニウム濃度の比較では、エンバクの分岐根と新しい冠根の先端部の濃度が、オオムギ、コムギのものよりも明かに低く保たれていた。オオムギ、コムギ、エンバクの間には、アルミニウム抵抗性の顕著な種間さい認められる。コムギのアルミニウム抵抗性の品種間差異の発現機構には根からのリンゴ酸分泌量の多少が関係していると認められたが、ムギ類の種間差異の機構の解明には根の発達様式の相違を考慮した根の微小部位ごとの生理的反応を追跡する研究手法の導入が必要である。そこで平成1年度の研究においては、根の発達様式と根の微小部位のアルミニウム濃度の追跡を中心として、オオムギ、コムギ、エンバクのアルミニウム抵抗性の種間差異の実体と発現機構を明らかにしようとした。水耕栽培した幼植物の根を(1)種子根、(2)古生冠根(3)中生冠根(4)新生冠根の4つに分けて、無処理区、アルミニウム添加区での根量を測定し、また根の先端を切除した後の再生能を比較した。また形態別に区分された上記の根について、根の先端から0-0.5cm、0.5-1.0cm、中央部、および基部のそれぞれの微小部位のアルミニウム濃度をフレ-ムレス原子吸光法により測定した。オオムギの根は4ppm以上のアルミニウム添加で根端切除後の再生能が消失し、中生冠根に処理期間中に発生した側根の量が著しく減少した。一方、エンバクの根は12ppm添加区でも根端の再生能が維持されており、側根の発生も阻害されなかった。コムギは両者の中間の性質を示していた。根の微小部位のアルミニウム濃度については、未だ側根の発生していない新生冠根については有意の種間差異が認められたが、それ以外の根では変動の巾が大きく傾向差は認められなかった。オオムギでは古い根のアルミニウム濃度がコムギ、エンバクと比較して明らかに低く、一方新生冠根の先端部位の濃度が高かった。エンバクでは古い根のアルミニウム濃度は高いが、新生冠根の根端部のアルミニウム濃度が際立って低くなっていた。

この研究は、オオムギ、コムギ、エンバクの間に認められる顕著なアルミニウム抵抗性の実体と発現機構の解明を目的としている。本年度の研究においては、微量のアルミニウムの測定方法にさらに検討を加えながら、前年度に引き続いて、培養液に0、1、4、および12ppmのアルミニウムを添加した幼植物個体について、根の発達様式の差異と部位別のアルミニウム濃度の測定を中心に行なった。発芽後2週目までの個体では、オオムギでは根の発達が遅く、種子根と冠根のその太さも外観も同じで、肉眼での区別は困難であった。コムギでは根子根の発達が顕著で、一方、エンバクでは種子根の褐変が早く、茎の基部から太い冠根の発生が数多く認められた。3週以降になると、三種類とも種子根と冠根、およびその分岐の判別が容易になった。そこで発芽後2週目の個体を1週間アルミニウム添加処理したものについて、地上部、種子根と冠根の主根、分岐根の重量と部位別アルミニウム濃度の測定を行なった。根の重量と外観に最も顕著な差異が認められ、オオムギではアルミニウム処理によって主根と分岐根の伸長がとまり、その部位がコブ状に肥大し褐色になっていた。一方、エンバクの根では、種子根が既に処理前から生育が止まり褐変していたが、アルミニウム処理区においても冠根からの分岐根と新しい冠根の発生と伸長がみられた。根のアルミニウム濃度の比較では、3週以降の個体では、新しい根の濃度は、古い根よりもいづれの種でも有意に低かった。また、根端、準根端、中央部、基部の部位別のアルミニウム濃度の比較では、エンバクの分岐根と新しい冠根の先端部の濃度が、オオムギ、コムギのものよりも明かに低く保たれていた。このような、エンバクの根の発達様式と根端の低いアルミニウム濃度がより大きいアルミニウム抵抗性の発現を支えているものと理解された。
マンノース結合レクチンの遺伝子多型が歯周疾患に及ぼす影響について

歯周疾患の発症には、宿主側の遺伝的な因子が関与していると考えられている。血清中に存在するマンノース結合レクチン(mannmose-binding lectin, MBL)は、マンノースなどの糖鎖を介して微生物と結合し、食細胞の食作用や,補体の活性化など、自然免疫において重要な役割を担っている。そして,MBLの遺伝子変異は、易感染性を引き起こすことが報告されている。そこで、MBL遺伝子の変異と歯周疾患の発症との関係、および、歯周疾患の病態形成におけるMBLの役割を明らかにすることを目的として検討を行った。血液検体は、明海大学歯学部付属明海大学病院に来院した侵襲性歯周炎患者、およびコントロールとして健常者より採取した。末梢血から抽出したDNAより、MBLのエクソン1コドン54遺伝子に特異的なプライマーを用いてPCR法により目的遺伝子を増幅した。PCR産物を制限酵素処理後、アガロース電気泳動により遺伝子変異を検出した。MBLの血清濃度は、ELISA法により測定した。MBLと歯周病原性細菌であるPorphyromonas gingivalisとの結合はImmuno-dot Blot法により検討した。MBLのエクソン]コドン54遺伝子の変異を有する者の割合は、健常者において27名中7名(25.9%)であったのに対して、侵襲性歯周炎患者では36名中14名(38.9%)と高い傾向が認められた。さらに,変異を有する者のうち喫煙者は,病態が重症化する傾向が認められた。また、変異を有する者は、血中MBL濃度が有意に低下していることが明らかになった。さらに、MBLは歯周病原性細菌であるP.gingivalisと結合することが明らかになった。これらの結果より、MBL遺伝子変異は、歯周疾患の発症に関与している可能性が示唆された。歯周疾患の発症には、疾患感受性を規定する、宿主側の遺伝的な因子が関与していると考えられている。血清中に存在するマンノース結合レクチン(mannose-binding lectin, MBL)はマンノースなどの糖鎖を介して微生物と結合し、食細胞の食作用を促進したり,補体を活性化するなど、自然免疫において重要な役割を担っている。そこで、MBL遺伝子の変異と歯周疾患の発症との関係、および、歯周疾患の病態形成におけるMBLの役割を明らかにすることを目的として検討を行っている。末梢血から抽出したDNAを、MBLのエクソン1コドン54遺伝子に特異的なプライマーとともにPCR反応液に加え、サーマルサイクラーにて目的遺伝子を増幅した。PCR産物を制限酵素処理後、アガロース電気泳動を行い遺伝子変異を検出した。MBLの血液濃度は、ELISA法(Statens Serum Institute社製)により測定した。MBLのエクソン1コドン54遺伝子の変異を有する者の割合は健常者において29%であったのに対して、侵襲性歯周炎患者では39%と高い傾向が認められた。血清中に存在するマンノース結合レクチン(mannose-binding lectin, MBL)は、マンノースなどの糖鎖を介して微生物と結合し、食細胞の食作用を促進したり,補体を活性化するなど、自然免疫において重要な役割を担っている。末梢血から抽出したDNAを、MBLのエクソン1コドン54遺伝子にと特異的なプライマーとともにPCR反応液に加え、サーマルサイクラーにて目的遺伝子を増幅した。MBLの血清濃度は、ELISA法(Statens Serum Institute社製)により測定した。MBLのエクソン1コドン54遺伝子の変異を有する者の割合は、健常者において27名中7名(25.9%)であったのに対して、侵襲性歯周炎患者では36名中14名(38.9%)と高い傾向が認められた。また、変異を有する者は、血中MBL濃度は有意に低下していることが明らかになった。

そこで、MBL遺伝子の変異と歯周疾患の発症との関係、および、歯周疾患の病態形成におけるMBLの役割を明らかにすることを目的として検討を行った。血液検体は、明海大学歯学部付属明海大学病院に来院した侵襲性歯周炎患者、およびコントロールとして健常者より採取した。末梢血から抽出したDNAより、MBLのエクソン1コドン54遺伝子に特異的なプライマーを用いてPCR法により目的遺伝子を増幅した。PCR産物を制限酵素処理後、アガロース電気泳動により遺伝子変異を検出した。MBLの血清濃度は、ELISA法により測定した。MBLと歯周病原性細菌であるPorphyromonas gingivalisとの結合はImmuno-dot Blot法により検討した。MBLのエクソン]コドン54遺伝子の変異を有する者の割合は、健常者において27名中7名(25.9%)であったのに対して、侵襲性歯周炎患者では36名中14名(38.9%)と高い傾向が認められた。さらに,変異を有する者のうち喫煙者は,病態が重症化する傾向が認められた。また、変異を有する者は、血中MBL濃度が有意に低下していることが明らかになった。さらに、MBLは歯周病原性細菌であるP.gingivalisと結合することが明らかになった。これらの結果より、MBL遺伝子変異は、歯周疾患の発症に関与している可能性が示唆された。
均一触媒反応による星間分子生成の可能性の分子軌道論的探求

種々の分子軌道計算により、多くの多環式芳香族炭化水素(PAH)の陽イオンラジカルが、極低温の星間空間で2個の水素原子から水素分子が生成する反応の触媒となりうることがわかった。個々のPAHイオンについて見れば、水素原子が結合していない炭素原子上で反応が進行する場合には、反応は遷移状態を経ないで進行する。ナフタレン陽イオンに水素原子が付加して生成する1-ナフタレニウムイオンは、ほとんど活性化エネルギーなしに、メチル、エチニル、ヒドロキシル、NH_2、CH_2、CHなどの水素付加反応を媒介し、メタン、アセチレン、水、アンモニア、メチル、メチレンなどの星間分子を生成することが予想される。また、ナフタレニウムイオンはCNラジカルとも反応し、シアン化水素(HCN)とイソシアン化水素(HNC)の両方を生成すると予想されるが、熱力学的により不安定なHNCを生成する反応経路の方が活性化エネルギーが小さかった。この傾向は星間空間でHNCが予想以上に多く存在するとする観測結果と符合する。当初、反応経路の計算に主としてB3LYP法を用いたが、この計算方法は水素移動反応の活性化エネルギーを過小評価することが判明したので、B3LYPとPMP2を組み合わせた方法およびKMLYP法により反応を追跡した。以上の研究から、星間空間で均一触媒反応により水素分子や星間分子が比較的容易に生成しうることが判明した。しかし、星間化学におけるこの種の触媒反応の重要性を確立するためには、もっと高度の分子軌道計算を行い、関係する化学反応の活性化エネルギーの精度を上げる必要がある。われわれは以前に、密度汎関数法B3LYPを用いて、多環式芳香族炭化水素(Polycyclic AromaticHydrocarbon ; PAH)の陽イオンラジカルが触媒となって、ほとんど活性化エネルギーを必要とせずに、2個の水素原子から1個の水素分子が生成することを見いだした。ところがその後、B3LYPが水素原子移動反応の遷移状態の活性化エネルギーを著しく過小評価することが判明し、その欠点を補うべく、B3LYPとは別個にMP2の計算を行い、両者で得られたエネルギーと分子構造を平均することにより、より正確な情報を得たが、この方法によってもPAH陽イオンは極低温でも水素分子生成反応の触媒となりうることを確認した。次にこの水素分子生成反応からの類推から、メタンや水のような典型的な星間分子が生成する際に、最終段階の水素原子付加がPAH陽イオンを触媒として進行することが考えられる。それを確かめるために、PAH陽イオンのモデル分子としてナフタレン陽イオンを取り上げ、その水素付加体(ナフタレニウムイオン)とCH_3、OH、C_2H、NH_2、CNなどのラジカルが反応して、メタンCH_4、水H_2O、アセチレンHCCH、アンモニアNH_3、シアン化水素HCN、イソシアン化水素HNCなどが生成する反応をB3LYPとMP2を用いて追跡したところ、いずれの反応も数kcal/mol以下の活性化エネルギーで進行することがわかった。最近開発された密度汎関数法KMLYPを用いてこれらの反応を再追跡したが、この結論は十分正しいと思われる。これまで、星間分子は主としてイオン・分子反応によって進行すると考えられてきたが、本研究によって、PAH陽イオンのような多原子分子を触媒とする反応が関与している可能性も十分考えられる。われわれは昨年度、密度汎関数法(DFT)を用いて、多環式芳香族炭化水素(PAH)の陽イオンラジカルが触媒となって、気相において活性化エネルギーをほとんど必要とせずに、代表的な星間分子前駆体と水素原子から星間分子が生成することを見いだした。ところが、極低温の宇宙空間での化学反応を議論するには、非常に高精度で活性化エネルギーを算出する必要があるが、DFTではそれが十分保証されないことが分かった。

そこで原点に戻って、最も簡単な芳香族炭化水素イオンであるベンゼン陽イオンを触媒として、2個の水素原子から1個の水素分子を生成する反応を、CCSD(T)までのレベルの計算によって追跡し、最も蓋然性の高い活性化エネルギーがMP2とB3LYPで求めた値の中間にあり、活性化エネルギーの計算値は基底関数のレベルを上げることにより低下する傾向にあることを確認した。このような傾向をもとにすると、ナフタレン陽イオンを触媒として、CH_3、OH、C_2H、NH_2、CNなどのラジカルが水素原子と反応して、メタンCH_4、水H_2O、アセチレンHCCH、アンモニアNH_3、シアン化水素HCN、イソシアン化水素HNCが生成する反応の少なくともいくつかは、ほとんど活性化エネルギー(<1kcal/mol)を必要とせずに進行すると考えられる。特に興味があることは、CNと水素原子との反応で、HCNが生成する経路よりHNCが生成する経路の遷移状態のエネルギーが低いことで、このことは、宇宙において熱力学的に不安定なHNCが比較的多く生成することの理由になるかもしれない。精度を下げたDFT計算によると、フラーレンC_<60>やシアノポリイン類の陽イオンも、PAH陽イオンと同様に、水素分子や星間分子の生成反応の触媒となる可能性がある。
プロテオミクスと抗原チップ解析によるピロリ菌感染症抗体群の胃発癌シークエンス

胃癌を誘導するピロリ菌感染症において、小児血清中のピロリ菌抗体に対するピロリ菌抗原蛋白質の網羅的同定を行なった。二次元ゲル上の40抗原蛋白質スポットを切り出し質量分析に供して、新規9抗原蛋白質を含む24抗原蛋白質を同定した。全てのピロリ菌陽性血清はCagAに反応し、多くの血清では強く反応した。CagAリコンビナント蛋白質シリーズを用いた解析より、主要エピトープドメインはCagA中央領域(CagA-M)であった。そこでCagA-Mを重複してカバーする25ペプチドを合成後アレイ状に基板に固定化し、血清抗体を反応させた。この方法によりCagA-M領域から2つ主要抗原エピトープペプチドを同定した。ピロリ菌は長い慢性感染を経て胃癌を誘導する。胃癌撲滅を進めるために、本研究では、胃炎患者や青少年感染者の中から後に胃癌を発症するリスクの高い人を判別する前癌バイオマーカーを見出すことを目標とする。そのために、最も一般的な血清を試料とし、小児血清中のピロリ菌抗体に着目して、ピロリ菌抗原蛋白質の網羅的同定を行なった。40の抗原蛋白質スポットを二次元ゲルから切り出し質量分析に供して、新規9抗原蛋白質を含む24抗原蛋白質を同定した。全てのピロリ菌陽性血清は、CagAに反応し、多くの血清では強く反応した。そこで、CagA抗体の主要エピトープドメインを解析した。8種類の部分的CagA蛋白質をGFP融合リコンビナント蛋白質として大腸菌に発現させ、その粗抽出液をSDS-PAGE後、血清イムノブロット解析を行った。その結果、CagA中央領域(CagA-M)が最もよく反応したため、主要な抗原ドメインと考えられた。そこでこのGFP-CagA-M蛋白質を精製すると共に、CagA-Mを重複してカバーする25ペプチドを合成した。ペプチドはCagA-M蛋白質と共に基板上にアレイ状に固定化した。チップにはこれまでの解析と同じ血清を反応させ、蛍光二次抗体で抗体の結合したスポットを可視化した。この方法によりCagA-M領域から2つの抗原エピトープペプチドを同定した。CagAをモデルとして、多血清試料の多種類の抗体を同時に定量的に分析する新しい方法の確立もめざしている。そのために、最も一般的な血清を試料とし、小児血清中のピロリ菌抗体に着目して、ピロリ菌抗原蛋白質の網羅的同定を行った。さらに抗原アレーチップの作製を試みて、多血清試料を分析する新しい方法の確立をめざしている。インフォームドコンセントを得て採取されたピロリ菌感染小児血清22試料と非感染者血清2試料の提供を受け、2次元電気泳動と血清2次元ウエスタン解析後、約40の抗原蛋白質スポットを2次元ゲルから切り出し、質量分析に供して、抗原蛋白質を同定した。新規10抗原蛋白質を含む24抗原蛋白質を同定した。また全てのピロリ菌陽性血清が反応したCagAについては、8つの部分的CagAリコンビナント蛋白質をGFP誘導蛋白質として大腸菌に発現させ、その粗抽出液をSDS-PAGE後、血清イムノブロット解析を行った。全小児血清が反応する領域を同定した。

この方法によりCagA-M領域から2つの抗原エピトープペプチドを同定した。同ペプチドとその周辺ペプチドを固定化したCagAペプチドELISAプレートも作製し、多血清試料中のエピトープの異なるCagA抗体を定量的に分析する方法を作出した。感染症、微生物学、生化学、プロテオミクスピロリ菌感染小児血清22試料と非感染者血清2試料の提供を受け、ピロリ菌全蛋白質を用いた二次元電気泳動と血清二次元イムノブロット解析後、40の抗原蛋白質スポットを2次元ゲルから切り出し、質量分析に供して、抗原蛋白質を同定した。新規9抗原蛋白質を含む24抗原蛋白質を同定した。全てのピロリ菌陽性血清は、CagAに反応し、多くの血清では強く反応した。そこで、CagA抗体に着目して、CagAの主要エピトープドメインを解析した。8つの部分的CagA蛋白質をGFP融合リコンビナント蛋白質として大腸菌に発現させ、その粗抽出液をSDS-PAGE後、血清イムノブロット解析を行った。部分的CagA蛋白質のうち、CagA中央領域(CagA-M)が最もよく反応し、主要な抗原ドメインと考えられた。そこでこのGFP-CagA-M蛋白質を精製すると共に、CagA-Mを重複してカバーする25ペプチドを作製し、CagA-M蛋白質と共にマレイミド基導入基板にアレイ上に固定化した蛋白/ペプチドチップを作製した。チップには同じ血清を反応させ、蛍光二次抗体で抗体の結合したスポットを可視化した。このチップ解析により、主要な2つのエピトープペプチドが判明した。この2ペプチドの配列を、それぞれピロリ菌の東アジア株6株および西洋株5株の配列と比較したところ、両ペプチド共に東アジア株に特有のアミノ酸を含有していることが分かった。ここまでの解析を論文にまとめ、投稿した。小児抗原同定のうち、多くの血清が反応する重要な蛋白質スポット1つが未同定である。全てのピロリ菌陽性血清が反応したCagAについては、8つの部分的CagAリコンビナント蛋白質をGFP誘導蛋白質として大腸菌に発現させ、その粗抽出液をSDS-PAGE後、血清イムノブロット解析を行った。これらの蛋白質に付加してあるHisタグを利用して蛋白質精製を行ったが、8つの部分的CagA蛋白質のうち、4領域は蛋白質が不安定で、精製が困難であった。26年度は、小児血清の追加分の他、成人ピロリ菌陽性血清を用いて解析を進める。ピロリ菌蛋白質を二次元電気泳動にて展開し、成人患者血清抗体が反応するピロリ菌抗原蛋白質をリストする。また二次元展開した胃上皮系細胞蛋白質に対してピロリ菌感染症特異的に反応する自己抗体の抗原蛋白質を、質量分析にて同定する。CagA-M上の2抗原エピトープについては、アミノ酸置換を行ったペプチドを準備して、抗原エピトープのアミノ酸特異性をチップ解析にて確認する。この2抗原エピトープペプチドを用いて、同じエピトープを持つ抗体を作成し、東アジア型CagA蛋白質への反応性を確認する。またCagA蛋白質のC末端領域(CagA-C)を網羅するペプチドを固定化したCagA-C蛋白ペプチドチップを作製し、多血清チップ解析を行う。質量分析のデータベースを追加し、未同定抗原の同定を進める。成人ピロリ菌陽性血清を用いて、抗ピロリ菌抗体、およびピロリ菌感染症特異的自己抗体の抗原蛋白質を、質量分析にて同定する。
サマリウム化合物のドハース・ファンアルフェン効果

Sm化合物(SmGa2、SmIn3,SmPr6等)のdHvA周波数のブランチの角度依存性は参照化合物(LaGa2等)のそれらと非常に良く類似しているが、特定の角度範囲でブランチの欠損や消失のあることが報告されている。これは(1)格子定数変化やそれによるs-f混成の度合いががフェルミ面の曲率因子を変え、それががdHvA振動を消失させる、(2)磁気的ブリルアンゾーンが形成されてフェルミ面の再構成が起こっていることなどによって説明されている。これらの説明には、しかしSm^<2+>状態がフェルミレベルの直上にあることの特殊性が考慮されていない。Sm^<2+>とs電子が混成して、s電子の質量が増強することは十分起こり得ることである。この可能性の提起と、確認を行うことが本研究の目的である。実験を進めるための設備の更新と測定プロブの開発を初めに行い、0.3Kで9.5Tの超低温・強磁場下でのdHvA効果の測定装置の完成をみた。これを用いてSmGa2のdHvA効果を観測した。超低温での測定から、10^4T台のdHvA周波数が広い角度範囲に存在することを新たに見いだした。dHvAブランチの角度依存はLaGa2のそれとは大幅に異なり、ブランチの消失や新しいブランチの現れなど、提起したs-f混成の効果を捉えることができた。またs-f混成の効果を映すフェルミ面(dバンドフェルミ面)とそうでないフェルミ面(spバンドフェルミ面)が共存していることが判明したことも大きな効果であった。また反強磁性状態のフェルミ面は、磁気的ブリルアンゾーンの形成による畳み込みの効果を反映して、複雑なブランチを呈することが判明した。今後の課題として参照物質のdHvA効果の確立した物質SmAl_2、SmIn_3、SmCu_2、SmPr_6等のサマリウム化合物のdHvA効果の研究を進めたい。