hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
カルバペネム耐性腸内細菌感染症の効果的感染対策の確立及び新規治療標的の解析

2004年4月1日から2013年3月31日の期間に東京大学医学部附属病院で検出された腸内細菌(27,956株)の内、大腸菌の0.21%、クレブシエラ属の1.4%、シトロバクター属の5.0%、セラチア属の7.0%、エンテロバクター属の10.8%がCREの定義を満たし、これまでの国内の報告と比し高率であった。また検出部位は尿32%、呼吸器系30%、腹腔内16%、創部15%、血液3%、生殖器系2%であり、欧米の報告と比較し、尿・呼吸器検体での検出が多い傾向が認められ、これらの検体の取り扱い時には厳重な接触感染対策を行うことが重要であると考えられた。またこれらのCREの中で既知の耐性遺伝子(IMP-1, VIM-2, KPC, OXA-48, IMI, NDM)を保有しない新型カルバペネマーゼ候補6株が認められた。これらの株に関して大量発現系及び精製系を確立し、Class A及びDのカルバペネマーゼ配列情報を比較したところ、69番、238番のシステインが重要であり、またジスルフィド結合が関与している可能性が示唆され、新たな新規治療標的と考えられた。国内におけるCRE感染症の疫学、細菌学的特徴、耐性機構の解明を行った。腸内細菌科細菌27,956株の内、大腸菌の0.21%、クレブシエラ属の5.0%、セラチア属の7.0%、エンテロバクター属の10.8%がCREの定義を満たし、これまでの国内の報告と比し高率であった。また検出部位は尿、呼吸器系検体が多く、水平伝播防止のために標準予防策の遵守に加え、接触予防策が必要と考えられた。また今回検出されたCREの内、新型のカルバペネマーゼ候補が6株認められ、69番・238番のシステイン変異が重要であることが示唆され、新たな治療標的候補と考えられた。次年度以降は新型のカルバペネマーゼ産生株6株のエックス線構造解析、kinetics解析を進める。また新型カルばペネマーゼ点変異体の作成し、最終的にはマウス敗血症モデルにおける病原性解析を行う。次年度は新型カルバペネマーゼのX線構造解析、kinetics解析を実施し、新規治療標的部位の同定を目指す。感染制御学今年度の遺伝子解析などに必要な試薬はすでに保有していたものを使用したため今年度の解析に必要な試薬は昨年度に購入していたものを使用したため。次年度にX線構造解析やkinetics解析などの大規模な解析を予定しており、主に使用する予定である。次年度にX線構造解析やkinetics,動物実験などの大規模な解析を予定しており、主に使用する予定である。
口腔・顔面の神経因性疼痛発現機序の解明

神経損傷ラットの情報伝達機構が大きく変化することが、神経因性疼痛発現の基礎にあることが明らかになった。ぺプチド性C線維を介したシグナリングが侵害刺激をよりシャープに上位中枢に送るが、非ぺプチド性C線維のシグナリングがそのぺプチド性C線維を抑制するといった制御に関わっている可能性を示すデーターを得た神経損傷ラットの情報伝達機構が大きく変化することが、神経因性疼痛発現の基礎にあることが明らかになった。ぺプチド性C線維を介したシグナリングが侵害刺激をよりシャープに上位中枢に送るが、非ぺプチド性C線維のシグナリングがそのぺプチド性C線維を抑制するといった制御に関わっている可能性を示すデーターを得た侵害受容線維にはサブスタンスP(SP)、カルシトニン遺伝子関連物質(CGRP)等のペプチドを含有するものと、Griffonia simplicifolia B4(IB-4)に結合性を持つ非ペプチド性のものとに大別されているが、その機能的意義については不明である。私たちは細胞質内に入って毒性を発揮するサポリンをSPに結合させたSP-サポリンを延髄の後角(Vc;三叉神経尾側亜核)に作用させ、I層やIII層に存在するSPの受容体であるニューロキニン1受容体(NK1)を持つニューロンを削除することに成功した。NK1ニューロンを削除した動物では対照動物に比べ上口唇へのホルマリン注射が誘導する疼痛関連行動の第2相が減少した(ホルマリンテスト)。ホルマリン注射2時間後に誘導されるc-Fos発現はVcで減少し、GABA_A受容体のアンタゴニストであるビククリンの全身投与(2mg/kg)で侵害受容反応が対照動物では減少するところ、NK1ニューロンを削除した動物では効果が無かったことを明らかにした。すなわちSPに代表されるペプチド性C-線維が伝達するニューロン活動が無ければ、GABA_A受容体を介する制御が変化することを明らかにした。さらにIB-4サポリンを延髄の後角に作用させて非ペプチド性C-線維を削除したラットを使用して同様にホルマリンテストを行ったところ、第1相の疼痛関連行動が減少した。ペプチド性C-線維は上位中枢への侵害受容情報を伝達するだけでなく、GABA_A受容体を介した下行性制御に関わっている一方、非ペプチド性C-線維は、急性痛とそれに続く一次中継核内でのGABA系の制御に関与する可能性を検証するべく研究を続行中である。侵害受容線維にはサブスタンスP(SP)、カルシトニン遺伝子関連物質(CGRP)等のペプチドを含有するものと、Griffonia simplicifolia B4(IB-4)に結合性を持つ非ペプチド性のものとに大別されているが、その機能的意義については不明である。さらにIB-4サポリンを延髄の後角に作用させて非ペプチド性C-線維を削除したラットを使用して同様にホルマリンテストを行ったところ、第2相の疼痛関連行動が増加した。ペプチド性C-線維は上位中枢への侵害受容情報を伝達するだけでなく、GABA_A受容体を介した下行性制御に関わっている一方、非ペプチド性C-線維は、一次中継核内での炎症性疼痛のGABA系の制御に関与する可能性を示した。
蛋白質合成素過程の解析とポリアミンの役割

1.ポリアミン(プトレスシン、スペルミジン、スペルミン)が細胞増殖を促進する際、RNAポリメラーゼ(α2ββ')のプロモーター認識がポリアミンによりどのように変化するかを、7種のσ因子量を測定することにより検討した。その結果、σ^<28>因子の量がポリアミンにより4倍増加することが明らかになった。ポリアミンの効果は翻訳レベルであることが明らかとなっているが、σ^<28>因子の場合は蛋白質レベルだけでなくmRNAレベルでも増加していた。従って、σ^<28>因子の合成量をコントロールしている諸因子の合成量を測定したところ、アデニレートシクラーゼの合成がポリアミンにより翻訳レベルで上昇していることが明らかとなった。蛋白質合成速度はShine-Dalgarno(SD)配列と開始コドンに依存しているが、アデニレートシクラーゼの開始コドンは通常のAUGではなくUUGであった。ポリアミンはこの効率の悪いUUG依存のfMet-tRNAのリボソームへの結合を促進することが明らかとなった。
メナキノン新規生合成経路酵素群の機能と構造に関する研究

本研究課題では、高度好熱菌Thermus thermophilusと放線菌を用いて、生体にとって重要なメナキノンの新規生合成経路の全容を明らかにするとともに、その生合成酵素の結晶構造を基に触媒機構の解明を目指した。T.thermophilusのポリプレニルジリン酸合成酵素(TTC1291)については、平成21年度に引き続き、より高解像度のX線回折データを得るために、結晶化条件のスクリーニングを行った。また、平行して、該酵素の基質であるファルネシルジリン酸のアナログ分子、ファルネシルチオジリン酸を化学合成し、このアナログ分子との共結晶のスクリーニングを実施した。また、もう一つの基質であるイソペンテニルジリン酸との共結晶のスクリーニングも実施した。その結果、構造解析に適した大きさの結晶が得られたので、高エネルギー研究所のX-線回折装置を用いて解析データを収集するとともに、解析ソフトを用いて結晶構造解析を進めた。最終的に、イソペンテニルジリン酸との共結晶の構造を2.8オングストロームの解像度で解くことに成功した。一方で、基質アナログであるファルネシルチオジリン酸との共結晶を得ることはできなかった。次に、放線菌、Streptomyces sp CL190株のポリプレニルジリン酸合成酵素と推定されるNphNの機能解析を行った。その結果、大腸菌で発現させた組換え酵素NphNは、イソペンテニルジリン酸とジメチルアリルジリン酸からゲラニルジリン酸を合成する酵素であることが判明した。次に、本酵素の酵素学的パラメータを算出したところ、イソペンテニルジリン酸とジメチルアリルジリン酸に対するK_0値は、それぞれ、10.7μMと65.4μMであり、K_<cat>値は0.51s^<-1>であった。メナキノンは、超好熱菌、Thermus thermophilusにおける呼吸鎖で働く電子伝達に利用される唯一のイソプレノイドキノンである。最近になって、本菌から、メナキノンの新規経路、フタロシン経路が発見された。本研究では、この新規経路に関与する生合成酵素の機能と構造を明らかにすることを目的とし以下の結果を得た。1.新規経路に関わると予想される酵素遺伝子を検索した結果、TTC0006,TTC0188,TTC0240,TTC0451,TTC0452,TTC0727,TTC1203,TTC1291,TTC1503,TTC1553を候補遺伝子を見いだした。そこでこれらの遺伝子について、大腸菌用ベクターpET26b^+にクローニングした大腸菌における発現系を構築した。2.それぞれの遺伝子を発現させるため、大腸菌の形質転換体を培養してIPTG添加によって発現を誘導した結果、TTC0452(機能未知)、TTC0727(機能未知)、TTC1291(オクタプレニルジリン酸合成酵素)、そして、TTC1203(脱水酵素)の発現と精製に成功した。その他の遺伝子については、本条件では発現しなかった。3.精製したタンパク質の結晶化を開始し、リン酸二水素ナトリウムとリン酸二水素カリウムを含むpH7.5の緩衝液中で微細結晶を得た。4.TTC1553は、オクタプレニル4-ハイドロキシベンジル酸脱炭酸酵素と予想され、おそらく、メナキノン生合成における最後の反応を触媒すると考えられる。これを証明するため、まずは、TTC1553の遺伝子破壊株の作製を試みた。その結果、本破壊株は必須遺伝子であり、培地にメナキノン4を添加したときのみ生育が可能であることが分かり、TTC1553がメナキノン生合成に関与することが明らかになった。本研究課題では、高度好熱菌Thermus thermophilusのメナキノン新規生合成経路に関する酵素の機能解析と結晶構造解析を行う。平成21年度は、メナキノン生合成に関与する10種類の酵素遺伝子を大腸菌の発現べクターにクローニングしシーケンスを確翻した。次いで、組換えタンパク質の発現条件について、培地成分や誘導条件、培養温度を検討し、ニッケルレジンカラムを含むキレートカラムなどいくつかのカラムクロマトグラフィーを用いて高度に精製するための条件検討を行った。その結果、4種類の酵素が可溶性酵素として精製可能であることが分かった。そこで次に、結晶化スクリーニングキットを用いて、主に、ハンギングドロップ法にて結晶化条件を検討した。その結果、3種の酵素については針状結晶が得られたが、現状では大きさが不十分であった。もう1つの酵素(TTC1291)、ポリプレニルジリン酸合成酵素については、X線構造解析に適した大きさの結晶が得られたので、高エネルギー研究所のX-線回折装置を用いて解析データを収集するとともに、解析ソフトを用いて結晶構造解析を進めた。その結果、2.0オングストロームの解像度で構造を解くことに成功した。さらに、このポリプレニルジリン酸合成酵素は、酵素反応系に添加する2価金属イオンによって炭素数30から炭素数45の鎖長の異なるポリプレニルジリン酸を合成できることを見出した。このような知見は、これまでに報告がなく、金属イオン依存的な鎖長決定機構の構造基盤に興味が持たれる。

T.thermophilusのポリプレニルジリン酸合成酵素(TTC1291)については、平成21年度に引き続き、より高解像度のX線回折データを得るために、結晶化条件のスクリーニングを行った。また、平行して、該酵素の基質であるファルネシルジリン酸のアナログ分子、ファルネシルチオジリン酸を化学合成し、このアナログ分子との共結晶のスクリーニングを実施した。また、もう一つの基質であるイソペンテニルジリン酸との共結晶のスクリーニングも実施した。その結果、構造解析に適した大きさの結晶が得られたので、高エネルギー研究所のX-線回折装置を用いて解析データを収集するとともに、解析ソフトを用いて結晶構造解析を進めた。最終的に、イソペンテニルジリン酸との共結晶の構造を2.8オングストロームの解像度で解くことに成功した。一方で、基質アナログであるファルネシルチオジリン酸との共結晶を得ることはできなかった。次に、放線菌、Streptomyces sp CL190株のポリプレニルジリン酸合成酵素と推定されるNphNの機能解析を行った。その結果、大腸菌で発現させた組換え酵素NphNは、イソペンテニルジリン酸とジメチルアリルジリン酸からゲラニルジリン酸を合成する酵素であることが判明した。次に、本酵素の酵素学的パラメータを算出したところ、イソペンテニルジリン酸とジメチルアリルジリン酸に対するK_0値は、それぞれ、10.7μMと65.4μMであり、K_<cat>値は0.51s^<-1>であった。
内蔵鉄筋を利用した CFT 接合部の開発

鉄筋内蔵の充填コンクリート鋼管(CFT)接合部は、鋼管内面に充填コンクリートに対するずれ止めを設け、鋼管と鉄筋間の応力伝達を可能としている。このため、柱継手では鋼管を溶接せずに鉄筋で応力を伝達できるし、柱脚ではベースプレートも省略できるなど、経済性、施工性が改善する。700ニュートン級鋼の普及の妨げは溶接の難しさにあるので、溶接が省略できる本接合部はこの解決策である。本研究は系統的な実験から以上の実用性を証明した。本年度に実施した実験により以下の結論を得た。1.鉄筋内蔵CFT柱継手:高強度鉄筋を内蔵させることで内面リング付き鋼管同士を無溶接で接続する継手である。・等曲げ試験:角形CFT柱継手は、鋼管幅厚比と鉄筋定着長を変数として実験し、定着長が40d(dは鉄筋径)では鉄筋が降伏、20dでは付着破壊することから、この間に必要付着長があることを示した。円形CFT柱継手では付着破壊しなかった。外面リング付き円形鋼管内蔵の角形CFT柱継手も実験したが、安定した挙動を示した。・引張試験:当初計画を変更して追加した。断面形状、幅厚比(径厚比)、鉄筋定着長が変数である。定着板付きPC棒鋼内蔵や外面リング付き円形鋼管内蔵も含めた。角形CFT柱継手では定着長が30dでは鉄筋が降伏し、15dでは付着破壊し、付着強度は幅厚比で変わった。PC棒鋼内蔵ではPC棒鋼が降伏した。鋼管内蔵では付着破壊したが、二重鋼管のリング位置関係が原因と考えられ、今後の課題である。2.鉄筋内蔵CFT露出柱脚:高強度鉄筋を角形CFT鋼管柱とコンクリート基礎梁に通して配筋した柱脚試験体の柱頭に一定軸力と繰返し水平力を作用した。・ベースプレート無し:軸力比は0,0.25,0.5である。履歴ループはスリップ形で、軸力比が高いとループは膨む。最大荷重は部材角3%以上で発生し変形性能は高い。実験耐力が一般化累加強度に達しないのが今後の検討課題である。・ベースプレート有り:当初計画を変更して追加した。実験変数は幅厚比、内蔵鉄筋の有無である。柱脚曲げ耐力はCFT柱の一般累加強度を超えた。繰り返し荷重に伴う耐力の低下はなく、履歴ループはスリップ形でセルフセンタリング機能があると言える。以上、高強度鉄筋を内蔵した柱継手および露出柱脚は、CFT柱の応力伝達が可能であり,柱脚では繰り返し水平荷重に対して安定しており,十分に実用性があることを示した。本研究は、円形および角形コンクリート充填鋼管(CFT)の接合部に鉄筋を内蔵させて、その応力伝達を利用して原則として鋼管の溶接を不要とする接合部を開発する。1.「柱継手の研究」(1)継手の引張試験昨年度は、当該継手は靭性に富む挙動が期待できることを明らかにした。本年度は、鉄筋の必要定着長の限界および束ね鉄筋による大量配筋を検討した。鉄筋内蔵継手の実験変数は(1)鋼管の断面形状、(2)鉄筋量(束ね鉄筋による大量配筋)、(3)鉄筋の定着長さ、(4)リブ段数(2段と1段)とし、さらにPC棒鋼内蔵CFT継手を含めて、当初予定の2倍の12体とした。その結果、当該継手の耐力評価式および内蔵鉄筋の必要定着長の評価式の目処を立てた。また、リブ段数はコンクリートの支圧破壊を避けるために2段が望ましいことを明らかにした。さらに、束ね鉄筋の付着力は単鉄筋より低下するので、適切な低減方法の検討を行った。(2)継手のせん断試験計画は、(1)断面形状、(2)せん断スパン比を実験変数とする実験であったが、予算確定が延期されたため、次年度に行うこととした。(3)継手の等曲げ試験計画は、高強度鋼管(H-SA700)に高強度鉄筋を大量配筋したCFT継手の試験を4体行うものであるが、予算確定後の11月に試験体製作を発注した結果、年度内の実験には間に合わず、次年度早期に実験することとした。2.「露出柱脚の研究」(1)ベースプレート無し露出柱脚の実験計画は、高強度鋼管(H-SA700)を用いた円形および角形CFT柱脚を前倒しで実験するものであるが、予算確定後の11月に試験体製作を発注した結果、年度内の実験には間に合わず、次年度早期に実験することとした。なお、昨年度の課題であった実験耐力が一般化累加強度に達しない問題について、新たな耐力評価用柱脚モデルを提案して解決した。1.「柱継手の研究」

(1)継手の引張試験:本年度は鉄筋の代わりに鋼管を内蔵したCFT継手に関する実験を行った。実験変数は、1柱鋼管と内蔵鋼管の重ね長さ、3柱鋼管と内蔵鋼管の径厚比である。その結果、内蔵鋼管継手では鋼管内面リブと内蔵鋼管外面リブのずれ止め効果を高めるためには、コンクリートストラットの形成のための相対位置が重要であるこを明らかにした。(2)継手のせん断試験:単純支持した試験体に2点載荷を行い、継手部にせん断力を作用させる(せん断スパン比=1.0)。実験変数は、内蔵鋼材の種類、断面形状、幅厚比で、角形CFT柱継手2体、円形CFT柱継手2体である。実験は安定した荷重変形関係を示すこと、せん断耐力は鋼管で横拘束されたRC断面のせん断耐力評価式で安全側に評価できることを明らかにした。(3)継手の等曲げ試験:高強度鋼管(H-SA700)に大量配筋したCFT継手の試験を4体行った。実験変数は、1断面形状、2軸力比とし、試験体数は4体とした。付着強度を基に鉄筋の降伏を上回る定着長とした鉄筋内蔵CFT柱継手は鋼管が高強度の場合も安定した荷重たわみ角関係を示した。2.「露出柱脚の研究」高強度鋼管(H-SA700)を用いた鉄筋内蔵CFT柱のベースプレート無し柱脚の実験を行った。実験変数は、1断面形状、2軸力比とし、試験体数は4体である。実験の結果、履歴ループはスリップ形であるが、大変形域まで安定していることを明らかにした。また、柱脚の終局曲げ耐力は柱脚部分のRC断面の全塑性モーメントで評価できることを示した。柱継手の引張り試験を平成22年度と平成23年度に多数実施し、耐力評価式および内蔵鉄筋の必要定着長の評価式に見通しを付けた。柱継手の等曲げ試験では普通強度鋼管は実験を完了した。高強度鋼管(H-SA700)は、本年度の予算確定の時期の関係で年度内実験は無理となった。柱継手のせん断試験も同様であるが、いずれも、平成24年度に実験予定である。柱脚は、ベースプレート付き柱脚の実験は完了した。ベースプレート無しで普通強度鋼管の柱脚の実験は完了し、高強度鋼管の場合は、本年度の予算確定時期の関係から試験体は製作したが実験は平成24年度へ延期した。平成24年度(最終年度)には本研究の当初の目的をすべて達成可能である。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題の推進方策は当初と変更はなく、研究を遂行する上での問題点もない。次年度は最終年度であり、既に製作を完了している高強度鋼管の柱継手およびベースプレート無し柱脚の実験を早期に終了させ、積み残しとなった柱継手のせん断試験を実施する。柱継手は、鋼管の強度、鋼管の断面形状(円形、角形)、径厚比(幅厚比)、内蔵鉄筋量、内蔵鉄筋定着長を考慮した耐力式および内蔵鉄筋の必要定着長の評価式を提案する。露出柱脚は、ベースプレートを省略した場合とそうでない場合について、鋼管の強度・断面形状、径厚比(幅厚比)、内蔵鉄筋量を考慮した柱脚の耐力式および復元力特性モデルを提案する。以上で、当初のすべての目的を達成する予定である。
結晶成長方位制御した高機能耐還元無鉛強誘電体酸化物セラミックスの創製と物性評価

平成30年度は、低酸素分圧下での焼成を可能にする耐還元性を有し、かつ大気雰囲気焼成試料と同等の優れた電気的特性を発現する無鉛圧電セラミックス材料を開発するための研究をBaTiO3系を中心に行った。はじめに、試料焼成時の還元雰囲気の制御を再現性よくかつ正確に行えるような酸素分圧制御法の確立に注力した。ここでは、CO2-H2混合ガス系における平衡反応を応用したCO2-H2-Ar混合ガス雰囲気を用いることで、圧電酸化物セラミックスとNi卑金属電極との同時焼結を想定したNi + 1/2O2 →NiO酸化反応における各焼結温度域での平衡酸素分圧に対して高精度な酸素分圧制御(例えば、焼結温度を1350°Cとしたときの平衡酸素分圧の1/100の酸素分圧に制御)を実現した。なお、酸素分圧のモニタリングには、ジルコニア式酸素センサーシステムを使用して制御の正確さを証明できるようにした。また、優れた圧電特性を示す(Ba,Ca)(Ti,Zr,Sn)O3系組成においては、Ni金属の融点以上での焼結温度を必要とするものもあるため、より低い温度域で十分に粒成長を進行させ、高密度に焼結した試料を得るための鍵となる添加物(焼結助剤)としてのLi2CO3の効果を明らかにした。添加されたLi2CO3は1000°C以下の温度域から試料中に液相を生じて粒成長を促進し、その後焼結温度域となる高温域では大部分のLi成分が揮発により試料より除去されるという挙動も微構造観察と化学組成分析により明らかとした。このLi2CO3の添加量を最適化(最適値:約3 mol%)することにより、Ni金属の融点よりも低い温度域である1200°C1350°Cの焼結温度で、鉛系圧電セラミックスに匹敵するような圧電定数値を示しかつ還元雰囲気焼成した場合にも大気雰囲気焼成と同等の電気的特性を発現する試料の作製に成功した。平成30年度の本研究課題の進捗状況については、試料焼成時の還元雰囲気の制御を再現性よくかつ正確に行えるような酸素分圧制御法の確立ができたこと、セラミックス試料の粒成長促進剤の選択とその添加量の最適化により、Ni金属の融点よりもかなり低い温度となる焼結温度域でも、鉛系圧電セラミックスに匹敵するような圧電定数値を示す試料の作製を可能とし、かつ還元雰囲気焼成した試料において大気雰囲気焼成試料と同等の圧電特性を達成することに成功したため、ほぼ順調に遂行できていると考えられる。また、ここで得られた知見(研究成果)をよりキュリー温度が高いNaNbO3系強誘電体化合物を中心とした材料系にも適用するための道筋を明らかにすることもできた。さらに、耐還元性を有する無鉛多結晶セラミックス材料の機能を最大限に(単結晶に近いレベルまで)高めるセラミックス中の結晶粒子の成長方位を制御する技術としてのTemplated Grain Growth法を応用した粒子配向セラミックス作製に対しても、今回確立した還元雰囲気制御法と耐還元無鉛材料の粒成長促進による焼結挙動の制御は目標とする耐還元粒子配向無鉛圧電セラミックスの実現に向けて大きく貢献するものとなり得ると考えられる。平成31年度(令和元年度)以降は、よりキュリー温度が高いNaNbO3系強誘電体化合物系において鉛系圧電セラミックスに匹敵するような特性を示す組成系を探索しながら耐還元性の付与を行う。これに加え、BaTiO3系と同様に還元雰囲気焼成した試料における大気雰囲気焼成試料と同等の圧電特性の達成を目指す。同時に、ここで開発された耐還元性を有する多結晶セラミックス材料の機能を最大限に(単結晶に近いレベルまで)高めるため、セラミックス中の結晶粒子の成長方位を制御する技術(Templated Grain Growth法)を応用した粒子配向セラミックスの作製について検討を行う。特に、結晶配向を付与するための鍵を握るシード結晶となるアスペクト比の大きな板状粒子の合成条件については、板状ビスマス層状ペロブスカイト酸化物前駆体粒子の合成および板状ペロブスカイト酸化物粒子を得るトポケミカルマイクロクリスタルコンバージョン反応の条件(フラックス剤の効果、組成変性効果、加熱処理条件の効果など)について調べ、望む粒径とアスペクト比を達成し、かつ最終生成物中の不純物元素濃度をできる限り低くするための方策について、結晶構造解析、微構造観察、化学組成分析により明らかにしていく。粒子配向試料作製については、各組成系に対して粒成長促進剤を駆使した焼結挙動の制御を行い、高配向性を有する耐還元粒子配向無鉛圧電セラミックスの作製を目指す。また、粒子配向セラミックスの結晶配向度、微構造、電気的特性を詳細に調べることで作製プロセスの最適化を行い、粒子配向性・分極状態と誘電特性・強誘電特性・圧電特性の解析データとの関係性から特性向上のための因子を明らかにする。さらに、実際の積層型圧電素子を想定した際に重要となる卑金属電極材料との同時焼結を行い、これに関する問題点(電極との界面の評価を含む)と改善点を明確にする。

ここでは、CO2-H2混合ガス系における平衡反応を応用したCO2-H2-Ar混合ガス雰囲気を用いることで、圧電酸化物セラミックスとNi卑金属電極との同時焼結を想定したNi + 1/2O2 →NiO酸化反応における各焼結温度域での平衡酸素分圧に対して高精度な酸素分圧制御(例えば、焼結温度を1350°Cとしたときの平衡酸素分圧の1/100の酸素分圧に制御)を実現した。なお、酸素分圧のモニタリングには、ジルコニア式酸素センサーシステムを使用して制御の正確さを証明できるようにした。また、優れた圧電特性を示す(Ba,Ca)(Ti,Zr,Sn)O3系組成においては、Ni金属の融点以上での焼結温度を必要とするものもあるため、より低い温度域で十分に粒成長を進行させ、高密度に焼結した試料を得るための鍵となる添加物(焼結助剤)としてのLi2CO3の効果を明らかにした。添加されたLi2CO3は1000°C以下の温度域から試料中に液相を生じて粒成長を促進し、その後焼結温度域となる高温域では大部分のLi成分が揮発により試料より除去されるという挙動も微構造観察と化学組成分析により明らかとした。このLi2CO3の添加量を最適化(最適値:約3 mol%)することにより、Ni金属の融点よりも低い温度域である1200°C1350°Cの焼結温度で、鉛系圧電セラミックスに匹敵するような圧電定数値を示しかつ還元雰囲気焼成した場合にも大気雰囲気焼成と同等の電気的特性を発現する試料の作製に成功した。平成30年度の本研究課題の進捗状況については、試料焼成時の還元雰囲気の制御を再現性よくかつ正確に行えるような酸素分圧制御法の確立ができたこと、セラミックス試料の粒成長促進剤の選択とその添加量の最適化により、Ni金属の融点よりもかなり低い温度となる焼結温度域でも、鉛系圧電セラミックスに匹敵するような圧電定数値を示す試料の作製を可能とし、かつ還元雰囲気焼成した試料において大気雰囲気焼成試料と同等の圧電特性を達成することに成功したため、ほぼ順調に遂行できていると考えられる。また、ここで得られた知見(研究成果)をよりキュリー温度が高いNaNbO3系強誘電体化合物を中心とした材料系にも適用するための道筋を明らかにすることもできた。さらに、耐還元性を有する無鉛多結晶セラミックス材料の機能を最大限に(単結晶に近いレベルまで)高めるセラミックス中の結晶粒子の成長方位を制御する技術としてのTemplated Grain Growth法を応用した粒子配向セラミックス作製に対しても、今回確立した還元雰囲気制御法と耐還元無鉛材料の粒成長促進による焼結挙動の制御は目標とする耐還元粒子配向無鉛圧電セラミックスの実現に向けて大きく貢献するものとなり得ると考えられる。平成31年度(令和元年度)以降は、よりキュリー温度が高いNaNbO3系強誘電体化合物系において鉛系圧電セラミックスに匹敵するような特性を示す組成系を探索しながら耐還元性の付与を行う。これに加え、BaTiO3系と同様に還元雰囲気焼成した試料における大気雰囲気焼成試料と同等の圧電特性の達成を目指す。同時に、ここで開発された耐還元性を有する多結晶セラミックス材料の機能を最大限に(単結晶に近いレベルまで)高めるため、セラミックス中の結晶粒子の成長方位を制御する技術(Templated Grain Growth法)を応用した粒子配向セラミックスの作製について検討を行う。
１８ー１９世紀の英語語彙と文体：理性・道徳・感情に関する概念の表現

本研究は18世紀から19世紀の後期近代英語の語彙に注目し、当時の社会的背景を踏まえ、その意味を明らかにするものである。理性・道徳・感情に関する語彙を取り上げ、そういった抽象語が文学作品において、価値の重層性を描き出すのに効果的に機能することを指摘し、小説の登場人物の人物像の形成やアイロニーの構築にも貢献していることを明らかにした。また、評価的意味を表す語は、その内容的意味が時代とともにますます曖昧になり、使用者の主観を反映し、文脈に依存する傾向を強めること、また、一人の作家においても、書簡と小説とで語の用いられ方に異なる点が観察されることを明らかにした。本研究は18世紀から19世紀にかけての後期近代英語と呼ばれる時代の英語の語彙のうち、特に、理性、感情、道徳に関する概念を表す抽象語をとりあげ、その意味と用法を当時の社会状況に照らして明らかにするものである。Jane Austenの小説にみられる理性、感情、道徳に関する語彙のそれぞれの場面のテクストにおける意味とその語彙を使用することの意義について、考察を行った。例えば、mindは人間の意識・思考・感情など、人が判断をする際働かせる総合的な活動の場として捉えることができる語であるが、Jane Austen特有の用い方や定冠詞・不定冠詞の有無についても興味深い点が指摘される。mindが表すのは人の内面的性質(innate qualities)のもので、eleganceやaccomplishmentsがマナーや知性に関わって演出され得るものである一方で、moralsに関わる人格の重要な基盤を示すものとされる。このようなmindという語がどういったコロケーションで用いられているかに注目してみたところ、_Emma_の中でも、the beauty of mind, the beauty of a mind, all the elegancies of mind, delicacy of mind, liberty of mindなどといったコロケーションで用いられている。mindを核として用いられる抽象概念を表す語彙について、そのコロケーションや、当時の英語史的、また、社会的時代背景をふまえて考察した。また、Jane Austenの作品の注釈をつける研究会に参加することで、テキストの精緻な読みを他の研究者と確認し、より文学的な観点からの解釈を深め、語彙理解についても協議する機会をえられたことは意義深いものであった。本研究は18世紀から19世紀の後期近代英語について、理性・感情・道徳に関する概念を表す抽象語を取り上げ、その意味を明らかにし、類義語の体系化を目指すものである。Jane Austenの小説にみられる理性・感情・道徳に関する語彙の検索とそれぞれのテクスト文脈における意味の整理を行った。特に、mindと共起する語群として、delicacy, elegance, beauty, liberty, sensibilityなどに注目した。また、sense, sensibility, sensibleといった一連の語彙については、近代英語期における個々の意味変化と、それぞれの関連性、さらには、それぞれの語が他のどういった語や概念と共起するかという点について調査した。先行研究でも、文学作品において文脈を踏まえて語の分析をすることにより、その概念を表す意味の体系において現代英語のと異なる用いられ方がある可能性は指摘されているが、本研究においても、詳細に、通時的な辞書や当時の社会や文化を反映する文献での記述を考察することにより、当時の語彙体系において現代英語と異なる意味の特徴を示す場合があることがある程度確認できた。特に大きな成果としては、当該年度訪れたオックスフォードの図書館では、当時のレキシコンの記述や時代の社会を映し出すニュースジャーナルを資料として用いることができ、そこから読み取れる価値観が語彙分析に示唆をもち、意義深いものであった。本研究は18世紀から19世紀の後期近代英語について、理性・道徳・感情に関する語彙を取り上げ、当時の社会的背景を踏まえ、その意味を明らかにするものである。最終年度の主たる成果は以下の通りである。日本オースティン協会において、「Emmaにおける理性・道徳・感情に関する概念の表現」と題し発表した。作品が著された当時の英語の語彙体系における単語の意味変化をたどり、価値の重層性を描き出すのに抽象語が効果的に機能することを指摘した。時代を背景として、意味の幅を持つmindの多様なコロケーションや、評価的意味が揺れその解釈に幅を持つcondescensionといった語が効果的に用いられ、小説の登場人物の人物像の形成やアイロニーの構築に貢献していることを明らかにした。オックスフォードのボドレアンを始めとする各種図書館で、18世紀以降の各種辞書、後期近代英語期の散文文学作品の各エディション、書簡、その他の関連資料を閲覧し、また、バースでは当該分野の造詣の深い複数のネイティブスピーカーから貴重な示唆をうけ、大きな成果を得た。「英単語niceの意味を探る:Niceーit does for every thing」と題した論文においては、niceの意味変化の過程を考察した。

そこには、ある概念のある一面から別の一面へ、すなわち、一つのことが好ましくも疎ましくも解釈される、認知的な意味の変化があり、特に、口語場面で用いられるniceのような評価的意味を表す語は、その内容的意味が時代とともにますます曖昧になり、使用者の主観を反映し、文脈に依存する傾向を強めることを明らかにした。また、一人の作家においても、書簡と小説とでその語の用いられ方に異なる点が観察されることを指摘し、意味変化の過渡期にある語について、文献学的成果による辞書的参照に加え、テキストタイプや個々の使用場面の文脈における解釈が重要であることを説いた。英語学小説における語彙研究については、ある程度の成果をあげているが、研究時間に厳しい制約があったこと、また、一方で、小説というテクストの抽象語を扱うため、文学的価値、社会背景、作家の意図といったところまで踏み込んで研究すると一語でも多面的調査と深い考察の必要が生じ、扱う語彙数の拡大が課題となっている。小説における語彙研究については、ある程度成果を見たが、研究時間に制約があるため、まだ扱うテクストや作家が限られており、さらに言語資料を拡大したい。図書館での当時の資料の閲覧・調査については、図書館には豊富な資料がありながら、現在まで調査ができたのはごく一部であり、まだ充分ではない。引き続き、小説の言語についての分析を進める一方で、扱う語彙の精査が必要である。ある程度類似の語彙の比較も行いつつ、核となる重要語に絞って、コロケーションや使用場面の文脈やテクストにおける使用の意義について慎重に考察をすすめる。コーパスについては、書簡などその他のテクストタイプの言語にもコーパスを拡大する。引き続き、小説の言語についてその分析を進める一方、書簡などその他のテクストタイプの言語にもコーパスを拡大する。理性・道徳・感情に関して取り上げるべき語彙の精査を行う。当初計画より若干作業が遅れており、洋書で時間がかかるものもあり、図書の選択が間に合わなかった。図書の購入。近代英語関係の図書と社会言語学関係の図書を中心に購入し、当時の社会背景を考慮した語彙分析を行う。国内の学会で成果を発表し論文にまとめる。
有機地球化学的分析手法を用いた先史時代の食性復元

1土器付着炭化物の炭素年代測定や安定同位体分析による食性解析法,2土器残存有機物組成や分解生成物を同定するバイオマーカー分析,3土器から抽出した炭素数16,18の直鎖状飽和脂肪酸の炭素同位体比を現生生物と直接比較することにより,起源物質を推定する手法,これら三つの手法(1,2,3)を法補的に組み合わせることにより,土器付着炭化物と土器胎土吸着物を用いて,土器で調理された食材を復元することができた。つまり,新しい縄文土器を用いた古食性研究手法を確立した。本研究の目的は,縄文土器表面に付着する炭化物(土器付着炭化物)と土器胎土に吸着する有機物(土器胎土吸着物),二種類の残存有機物の起源を最新の有機地球化学的手法で探ることにより,土器で調理された食材を復元することである。今年度は,まず宮田と堀内(分担)が協力して,ブリストル大学(英国)での脂質分析の経験を活かしながら,本申請経費でリースした新設のガスクロマトグラフ質量分析計(GC-MS)の立ち上げを行った。様々な標準物質(脂質)の保持時間とピーク強度を基準に,GC-MSの性能を評価したところ,十分な繰り返し再現性を持つデータが得られた。知多半島の製塩遺構である松崎,上浜田遺跡(愛知県東海市)から出土した製塩土器,調理土器,用途不明土器の胎土試料を用いて,脂質分析ならびに塩分分析を行った。製塩土器は調理用土器と異なり,検出された脂肪酸は微量で,その炭素数は18以下であった。さらに,炭素鎖10-22までの直鎖状長鎖アルコールが脂肪酸よりも多く検出されたことが調理用土器とは大きく異なる特徴である。また,実験製塩土器と検出された脂質組成を比較検討することにより,用途不明土器が海水を加熱濃縮する鹹水作りに利用されていた可能性を示唆した。つまり,土器で調理された食材を直接推定する前段階として,考古学的コンテクストの高い土器試料を脂質分析することにより,様々な形で利用されてきた土器の用途を科学的に区別することに成功した。さらに,研究協力者(上條,遠部,村本)らの協力をえて,考古学的コンテクストが明瞭である土器をはじめとする様々な遺物を新たに採取した。現在,各遺物の年代測定や安定同位体分析(中村,南)を行いながら,土器胎土脂質分析結果の解釈を行っている。縄文晩期,亀ヶ岡文化圏にある三つの異なった環境の遺跡,不備無遺跡,今津遺跡,杉沢遺跡から出土した大洞C2式を主体とする土器片に焦点を絞り,1.土器に残留した脂質の同定,2.脂質中の炭素数16,18の直鎖状飽和脂肪酸の分子レベル炭素同位体分析,3.内面土器付着物中の炭素・窒素食性解析を行い,当時の縄文人が土器をどのように使用し,何を調理していたか,科学分析の観点からみえてくる食生活の地域特異性や共通性を考察した。海浜部不備無遺跡のスス・炭化物付着深鉢は,APAA*が残留するため海洋性生物の煮炊きに使われたと推測できる土器と,APAAは含まないがコレステロールが残留するため,陸生動植物を調理したと推測できる土器に大きく二分された。手法2,3の結果もこの傾向を支持し,食材による土器使い分けの可能性を示唆した。製塩遺跡の今津遺跡出土土器からはAPAA等の海洋性生物の痕跡は認められなかった。しかし,動物性由来コレステロールと海洋生物に多い長鎖不飽和脂肪酸が検出されたため,陸生動物と海洋性動物が一緒に調理された可能性がある。また,用途不明壺の脂質組成が製塩土器と類似することから,鹹水作製など,製塩過程との関連性も推測された。内陸性杉沢遺跡では,堅果類に含まれる植物性脂質が陸生動物脂質と同時に検出され,脂質含量の高い,高カロリーな陸生動植物が調理された事が示唆された。以上,土器による作り分けの可能性と環境に応じた食生活の差異を科学的に説明することができた。*炭素鎖18,20,22の芳香環を含む脂肪酸(ω-(o-alkylphenyl)alkanoic acids: APPA)は二重結合をもつ脂肪酸が270°C以上に加熱されると土器内で生成し,(数千年間も)残存するため,環境中では分解し,残留できない魚類等海洋性生物に多く含まれる長鎖不飽和脂肪酸が加熱(調理)された事を示すバイオマーカー本研究の目的は,縄文土器表面に付着する炭化物(土器付着炭化物)と土器胎土に吸着する有機物(土器胎土吸着物),二種類の残存有機物の起源を最新の有機地球化学的手法で探ることにより,土器で調理された食材を復元することである。今年度は,少数であるが,器種,部位などを特定した考古学的コンテクストの高い土器試料を用いて,残存有機物の脂質分析(バイオマーカー分析;A)と分子レベル炭素同位体分析(B)との整合性を検討し,本分析手法の汎用性を検証した。縄文晩期大西貝塚(愛知県豊橋市)の分析例をあげる。同遺跡は,東海地方最大の干し貝を専門に作る加工場と考えられており,多量の蛤の殻とともに出土した少量の土器片の用途は,煮貝作製や製塩などと推定されている。

分析した深鉢の土器片から,C30までのVLCFA(Very Long Chain Fatty Acid)とC32までのVLCA(Very Long Chain Alcohol)が検出されたこと,そして,C18のAPAAのみ検出されたことから,魚類や海獣等を専門に調理した容器ではなく,ワックスを多く含む植物を加熱したことが示唆される。例えば,ハマグリを入れたかごや網などの植物性繊維が煮炊きされた痕跡などと考えてもよいだろう。また,ジカルボン酸の検出から不飽和脂肪酸の存在,コレステロールの検出,分子レベル同位体分析結果から,二枚貝を調理した可能性も支持された。また,通常,製塩土器に残留する脂質量は極めて少なく,しかもアルコール類の方がFAよりも多く検出されるため,これらの深鉢が製塩に利用された可能性は低い。従って,これらの深鉢は製塩や通常調理ではなく,蛤加工に利用されたと考えても良さそうである。以上,考古学的なコンテクストに基づき,分析手法AおよびBの結果を調和的に解釈することによって,遺跡における人間活動を科学的に説明することができた。1土器付着炭化物の炭素年代測定や安定同位体分析による食性解析法,2土器残存有機物組成や分解生成物を同定するバイオマーカー分析,3土器から抽出した炭素数16,18の直鎖状飽和脂肪酸の炭素同位体比を現生生物と直接比較することにより,起源物質を推定する手法,これら三つの手法(1,2,3)を法補的に組み合わせることにより,土器付着炭化物と土器胎土吸着物を用いて,土器で調理された食材を復元することができた。つまり,新しい縄文土器を用いた古食性研究手法を確立した。本研究課題は,以下の2点により,当初の計画以上に進展していると判断した。1)本申請経費でリースした新設のGC-MSによって,順調に脂質分析が行われた。その結果,2)土器残留脂質組成分析(1),土器残留脂質中のC16:0及びC18:0(Cx:y=炭素数:二重結合数)の分子レベル炭素同位体分析(2),内面土器付着炭化物の炭素年代測定によるリザーバー効果の評価,炭素・窒素安定同位体分析(3)を相補的に用いることにより,縄文晩期亀ヶ岡文化期の食材に応じた土器(大洞C2式土器)作い分けの様子も含め,食生活の地域特異性や共通性を科学分析によって読み解くことができた。2年目としては,十分な成果である。27年度が最終年度であるため、記入しない。考古科学,考古生物化学,文化財科学,同位体地球化学平成26年度に引き続き,高感度脂質分析システムを用いて,以下の観点から土器試料の分析を進めて行く。1.特に,同一(個体)土器の付着炭化物のリザーバー効果や安定同位体組成(1),脂質分析結果(2),分子レベル脂肪酸の炭素同位体比(3)等,残存有機物情報の相関などの観点から検証を行う。2.多数の日本産現生生物の脂質組成とその脂肪酸炭素同位体比の基礎データ収集を継続する。3.調理実験を行ったモデル土器で,食材,土器付着炭化物1,残存有機物組成2,分子レベル脂肪酸同位体比3情報の整合性を確認し,上記1との比較検討も含めて,調理食材の多様性を検討する。以下の二点により,本研究課題は,おおむね順調に進展していると判断した。1)本申請経費でリースした新設のGCMSの立ち上げに成功した。2)用途の明らかに異なる製塩土器と調理土器を脂質組成により区別できた。さらに,実験製塩土器の脂質組成と比較検討することにより,用途不明土器が,海水を加熱濃縮して作る鹹水作りに利用されていた可能性を指摘した。つまり,土器で調理された食材を直接推定する前段階の成果が研究初年度できちんと得られた。年度末に実験を行うにあたり計上した消耗品代が残ってしまったため。
選択的神経細胞死を誘発ないし防護する興奮性アミノ酸関連薬物の開発

カイニン酸やアクロメリン酸などを全身投与すると、同じグルタミン酸familyの中でもアゴニストの違いにより神経細胞死の誘発部位が異なることは興味深い。ことに神経変性疾患との関係を論ずる場合は、重要なヒントを与えてくれる。血液脳関門が未だに形成されていないと考えられる出生直後からラットに連日大量のグルタミン酸を皮下注射したところ、数日後に脊髄前角運動ニューロンの喪失を伴う神経変性疾患が認められた。下肢の麻痺が初発の症状であり、視覚神経と脊髄下部の神経変性が顕著で完全に盲目となる。下半身には全く痛覚がなくなり、下肢の萎縮が顕著であり、かつ、関節の拘縮を伴う対麻痺が起こる。脊髄の細胞構築は乱れ、運動ニューロン喪失に伴い前根が異常に細くなっている。脊髄反射電位はほとんど認められず、尿失禁のため皮膚は潰瘍状になる。サブスタンスPの抗体による免疫組織化学染色によれば、脊髄下部後索の染色性が極端に低下しているが、後根神経節の細胞は正常に保たれている。新生ラットに同様な方法でグルタミン酸を大量投与することにより肥満ラットが作られ、視床下部に変性が生ずることは、すでに報告されている実験事実であるが、ほぼ同様の方法でグルタミン酸により脊髄前角運動ニューロンの喪失を伴うparaplegic ratが作られたことは、学術的に意義深いと考えられる。このモデル動物の更なる病理学的検索を現在進めているが、同時に、現時点ではこのparaplegic ratの発生率が極めて低いため、これを上昇させるべく方法の改善を図っている。筋萎縮性側索硬化症(ALS)の実験動物モデルの作成に成功したとの報告はまだなされていないが、脊髄前角細胞が脱落する動物モデルを作成できたことは画期的なことであろう。
新規転写調節遺伝子OASISの歯胚発生過程での発現と機能の解析

胎生12日のマウス胎仔より、RT-PCR法を用いてOASIS遺伝子を単離し、pGEM-TEasyベクタに組み込み、アンチセンスRNAプローブおよびセンスRNAプローブを作成した、これらを用いて、歯胚におけるOASIS遺伝子発現を調べるために、胎生12日以降のICRマウス胎仔を摘出し、その頭部を4%パラホルムアルデヒドにて浸漬固定した。通法に従い10μmのパラフィン薄切切片とし、プレパラートに貼付し、ディゴキシゲニンにてラベルされたプローブにより、ハイブリダイゼーション反応を行い、OASIS遺伝子の発現と消長を検索した。なお、センスプローブは対照実験に用いた。各々のプローブについて、電気泳動によりその分子量を調べ、正しいプローブであることも確認した。胎生12-16日以降のICRマウスの歯胚について、歯胚の発生段階に応じて比較検討した。胎生12日歯胚では、上皮である歯提や、その周囲の間葉には陽性反応を認めなかった。さらに発生の進んだ胎生14日歯胚では、蕾状期の臼歯および切歯の上皮組織である歯提に、ディゴキシゲニン陽性反応が認められ始めた。さらに、胎生16日での帽状期歯胚では、臼歯と切歯歯胚にOASIS遺伝子発現の差が認められ、まず臼歯歯胚では内エナメル上皮に、切歯歯胚では上皮であるアピカルループおよび間葉である前象牙芽細胞にディゴキシゲニン陽性反応が認められた。次いで、胎生18日の前期鐘状期歯胚においても臼歯と切歯歯胚にOASIS遺伝子発現の差が認められた。胎生18日の臼歯歯胚では内エナメル上皮特に咬頭付近の内エナメル上皮と、咬頭頂直下の前象牙芽細胞に、切歯歯胚ではアピカルループおよび前象牙芽細胞にディゴキシゲニン陽性反応が認められた。生後1日の後期鐘状期歯胚において、臼歯ではアピカルループ付近の内エナメル上皮に、切歯ではアピカルループおよび前象牙芽細胞に認められたが、切歯の前エナメル芽細胞には認めなかった。以上のようにOASIS遺伝子は、歯の発生段階に応じて、部位及び時期特異的に発現することが明らかとなった。このことより、OASIS遺伝子は歯胚発生に必須な因子であり、歯胚の形態形成に重要な役割を果たしている可能性が明らかになった。胎生12日のマウス胚より、RT-PCR法を用いてOASIS遺伝子を単離し、pGEM-TEasyベクタに組み込み、アンチセンスRNAプローブおよびセンスRNAプローブを作成した。センスプローブは対照実験に用いた。これらのプローブについては、電気泳動によりその分子量を調べ、正しいプローブであることを確認した。そこで、胎生12日以降のICRマウス胎仔を摘出しその頭部を4%パラホルムアルデヒドにて浸漬固定した。

通法に従い10μmのパラフィン薄切切片とし、プレパラートに貼付し、ディゴキシゲニン(Dig)にてラベルされたプローブにより、ハイブリダイゼーション反応を行い、OASIS遺伝子の発現と消長を検索した。胎生12-16日以降の歯胚について、発生段階に応じて比較検討した結果は以下の通りである。胎生12日では、歯提およびその周囲には陽性反応を認めなかった。胎生14日では、蕾状期の臼歯および切歯歯胚の上皮にDig陽性反応が認められ始めた。胎生16日の帽状期の臼歯歯胚では内エナメル上皮に、切歯歯胚では上皮であるアピカルループおよび間葉である前象牙芽細胞にDig陽性反応が認められた。以上より、本年度はまず、OASIS遺伝子は歯の発生段階に応じて、部位及び時期特異的に発現することを明らかとした。よってOASIS遺伝子は、歯胚発生に必須な因子であり、歯胚の形態形成に重要な役割を果たしている可能性が示された。前年続き、胎生12日のマウス胚より、RT-PCR法を用いてOASIS遺伝子を単離し、pGEM-TEasyベクタに組み込み、アンチセンスRNAプローブおよびセンスRNAプローブを次の通り用いた。胎生12日以降のICRマウス胎仔を摘出し、その頭部を4%パラホルムアルデヒドにて浸漬固定した。通法に従い10μmのパラフィン薄切切片とし、プレパラートに貼付し、ディゴキシゲニンにてラベルされたプローブにより、ハイブリダイゼーション反応を行い、OASIS遺伝子の発現と消長をさらに検索した。なお、センスプローブも前年同様対照実験に用いた。各々のプローブについて、電気泳動によりその分子量を調べ、正しいプローブであることを確認した。胎生12-16日以降のICRマウスの歯胚について、歯胚の発生段階に応じて比較検討した。胎生12日歯胚では、上皮である歯提や、その周囲の間葉には陽性反応を認めなかった。さらに発生の進んだ胎生14日歯胚では、蕾状期の臼歯および切歯の上皮組織である歯提に、ディゴキシゲニン陽性反応が認められ始めた。さらに、胎生16日での帽状期歯胚では、臼歯と切歯歯胚にOASIS遺伝子発現の差が認められ、まず臼歯歯胚では内エナメル上皮に、切歯歯胚では上皮であるアピカルループおよび間葉である前象牙芽細胞にディゴキシゲニン陽性反応が認められた。次いで、胎生18日の前期鐘状期歯胚においても臼歯と切歯歯胚にOASIS遺伝子発現の差が認められた。胎生18日の臼歯歯胚では内エナメル上皮特に咬頭付近の内エナメル上皮と、咬頭頂直下の前象牙芽細胞に、切歯歯胚ではアピカルループおよび前象牙芽細胞にディゴキシゲニン陽性反応が認められた。本年度は、前年までに明らかになった内容にくわえて、OASIS遺伝子は歯の発生段階に応じて、部位及び時期特異的に発現することがさらに明らかとなった。OASIS遺伝子が歯胚の発生過程に特異的時期に特異的部位に発現していることより、この遺伝子は歯胚発生に必須な因子であり、歯胚の形態形成に重要な役割を果たしている可能性が明らかになった。これまでの年度に続き、胎生12日のマウス胚より、RT-PCR法を用いてOASIS遺伝子を単離し、pGEM-T Easyベクタに組み込み、アンチセンスRNAプローブおよびセンスRNAプローブを次の通り用いた。
フランス教育行政機構における教育視学官制度の機能と役割に関する実証的研究

1,フランスの教育行政・制度に関する多くの文献・資料を収集するとともに、それらの整理を行いつつ、教育視学官制度についての簡単な文献リストを作成した。なお研究期間が1年に短縮されたことにより、当初予定していた教育視学官制度の歴史的研究については、概略を考察するにとどまらざるをえなかった。2,国レベルに設置されている中央教育視学(IGEN)は、従来は教育活動全体に実施状況を監督することを目的として、学校などに対する「助言」や「情報伝達」を任務としてきたが、1989年の新教育基本法の制定以後、より教育改革に効果的な役割を果たすことが求められ「評価・点検」および「教育政策の実施の研究」が主たる任務として位置づけられた。他方で、地方レベルに設置されている教育視学官は、単独制の教育行政官として、あるいは教育指導助言者として重要な役割を果たしてきている。3,これまで国の中央教育視学の教育実態分析の報告書については、行政内部文書として処理されるにとどまり一般に公表されることはなかった。しかし教育改革の遂行において点検・評価の情報公開が求められる中で、教育行政視学については1984年度から、教育視学については1990年度から総合的な報告書が公表されてきた。現在これらをもとに、教育改革の遂行と教育視学官の機能・役割との関連構造について検討を進めており、近いうちに関連学会などで発表することを予定している。4,本研究の一環として、地方レベルの国民教育視学官が初等学校教員の人事管理に果たす役割について、および前述の中央視学官による報告書を分析しつつ、中等学校生徒の現状と課題についての論文を執筆した。