hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規低分子量G蛋白質DexRas1とグルココルチコイドの細胞骨格・接着制御機構

Dexras1は、合成グルココルチコイド(GC)剤デキサメタゾンによって発現が誘導される新しいRasファミリー低分子量GTP結合蛋白質であり、GCによる細胞骨格や細胞接着の制御に関与する可能性がある。GCの代表的な標的細胞に免疫担当細胞があるが、これらの細胞の遊走には細胞骨格や細胞接着の制御が必須である。そこで、Dexras1と細胞骨格・細胞接着の制御機構との関連を調べる目的で、好中球などの細胞遊走に重要な役割を果たすケモカイン受容体(IL-8受容体)を介するシグナル伝達経路をモデルとした解析を行った。IL-8受容体を発現させたCOS7細胞をIL-8で刺激すると、serum response element (SRE)を介するレポーター遺伝子の転写活性化が認められた。IL-8受容体とDexras1を同時に発現させたころ、この転写活性化が抑制された。しかし、Dexras1のdominant negative変異体では抑制は起こらなかった。このことから、GCによる細胞遊走の抑制にDexras1が関与している可能性が示唆された。また、Dexras1は、そのアミノ酸配列の特徴からRasとは異なる標的分子や活性制御分子と相互作用すると考えられる。そこで、Yeast Two-Hybrid法を用いてDexras1全長、N末端及びC末端領域をbaitとして各種cDNAライブラリーからDexras1相互作用分子の検索を行った。その結果、N末端のRasホモロジー領域と相互作用する分子としてHECTドメインを持つ分子EDD、核内レセプター様分子EAR等を得ており、Dexras1の作用機構との関連を検討している。Dexras1は、合成グルココルチコイド剤デキサメタゾンによってその発現が誘導される新しいRasファミリー蛋白質であり、グルココルチコイドの細胞接着制御機構に関与する可能性が高いと考えられる。Dexras1は、Rasのアミノ酸32-40番に相当する標的分子結合領域のうち3アミノ酸がRasと異なっており、Rasとは異なる標的分子と相互作用する可能性が高い。また、他のRasファミリー蛋白質には無い特異なC末端領域を持ち、Rasとは異なる活性制御を受けている可能性がある。私共の研究室ではグルココルチコイドによる細胞接着や細胞骨格の制御におけるDexras1の関与の可能性について検討するため、Mouse embryoおよび、human heart cDNAライブラリーからDexras1全長をbaitとしてYeast Two-Hybrid法を用いたDexras1相互作用分子の検索を行った。その結果、Dexras1と相互作用する分子として、コイルドコイル構造を持つPIBF1、C末端側にHECT(homologous to E6-AP carboxyl terminus)ドメインを持つEDD、及びアネキシンVIを見出した。このうちC末端領域を欠いたDexras1をbaitとして用いた解析より、EDDはDexras1のN末端(Ras相同)領域と相互作用する事が明らかになった。このことから、EDDはDexras1の標的蛋白質である可能性があると考え、現在、解析を進めている。
PPARアゴニストが高血圧・糖尿病動物モデルの心脂質量・心機能に与える影響の検討

アンジオテンシンII投与ラットにPPAR-γアゴニスト(ピオグリタゾン)を経口投与し、その効果を解析した。ピオグリタゾンは血中・心組織中の脂質量を低下した。ピオグリタゾンは虚血再灌流後の心収縮能・拡張能の低下を抑制することをランゲンドルフ体外灌流で示した。また、ピオグリタゾンは心臓維化を抑制した。ピオグリタゾンは、脂質プロファイルの改善などを介してアンジオテンシンIIによる心障害を緩和する可能性が示唆された。われわれは、アンジオテンシンIIの持続投与ラットの心臓において、中性脂肪を主成分とした脂質集積が認められること、また、脂質集積部位において、スーパーオキサイドの過剰産生が生じていることを報告した(Eur J Pharmacol.2009 ; 604(1-3) : 87-92)。今回の検討では、心臓の脂質集積の改善が、アンジオテンシンIIによるラット心の形態的・機能的な改善につながるかどうかを検討した。心筋における脂質代謝改善の目的で、アンジオテンシンII投与にくわえ、PPARγアゴニスト、ピオグリタゾンを経口的に強制投与した。心臓の形態的障害の検討は、心臓の線維化領域の定量により検討した。心機能については、循環血漿量の増減の問題を回避するため、摘出心について、ランゲンドルフシステムにて、dp/dtを計測することで評価した。アンジオテンシンII投与は、血清中性脂肪濃度を1.8倍に増加したが、ピオグリタゾン投与により、1.3倍に抑制された。また、ピオグリタゾン投与は心臓の組織中性脂肪量をコントロールレベルまで減少し、線維化も有意に抑制した。ランゲンドルフによる心機能評価では、アンジオテンシンIIの単独投与自体は、当初の予想と異なり収縮能・拡張能ともに、有意な低下を惹起しなかった。そこで、体外灌流モデルにおいて、30分間のglobal ischemiaにより無酸素-再酸素化障害を与えたところ、アンジオテンシンII投与群では再灌流時の収縮能、拡張能はともに低下しており、虚血に対する予備能が低下していると考えられた。また、ピオグリタゾン投与は、アンジオテンシンII投与による無酸素-再酸素化後の心機能低下を有意に抑制した。これらのことから、ピオグリタゾンは、アンジオテンシンII投与による心臓の形態的、機能的低下を改善し、またその機序として、心臓の脂質含量増加の抑制が関与している可能性が示唆された。昨年度までの研究により、ラットへのアンジオテンシンIIの持続投与は、心臓および腎臓に脂質集積を誘導し、脂質集積部位において、スーパーオキサイド産生が亢進していることを明らかにした。今年度の研究では、アンジオテンシンII投与ラットへのPPARγアゴニスト(ピオグリタゾン2.5mg/kg/day)投与が心臓の機能的・形態的障害にどのような影響を与えるかについて検討した。PPARγアゴニスト投与は、アンジオテンシンII投与ラットの心筋において、オイルレッドOで染色される脂質滴の集積を抑制し、心臓組織における中性脂肪含量を減少させた。これらの現象は、PPARγアゴニストによる直接的な心臓における脂質代謝系のmodulationというよりは、血中の脂質プロファイルの改善に伴うものである可能性が考えられた。また、PPARγアゴニスト投与は、dihydroethidiumで染色される心臓におけるスーパーオキサイドの産生も減少し、形態的には心筋壊死とそれに引き続く心臓の線維化を抑制した。さらに、ランゲンドルフ体外灌流モデルにて心機能を解析したところ、PPARγアゴニスト投与は、アンジオテンシンIIラットの心臓の収縮能(+dP/dt)、拡張能(-dP/dt)に対して、非ストレス状態では明らかな影響を与えなかったが、虚血再灌流負荷後では、いずれのパラメータも改善した。PPARγアゴニストの効果を腎臓においても検討した。PPARγアゴニストはアンジオテンシンII投与ラットの腎臓においても組織脂質量を減少し、蛋白尿を抑制した。PPARγアゴニストの心・腎保護作用の一部は、これらの臓器への鉄の集積の抑制とヘムオキシゲナーゼ-1の発現維持が関与している可能性もあるが、今後の検討を要する。われわれは、ラットへのアンジオテンシンIIの投与が、心臓・腎尿細管への中性脂肪の集積を惹起すること、同部位にスーパーオキサイドの過剰産生を認めることを報告した。今回、臓器への脂質集積の生理的な意義について検討した。アンジオテンシンIIをラットへ持続投与し、PPAR-γアゴニストとしてピオグリタゾン(2.5 mg/kg/d)の経口投与行った。ピオグリタゾン投与は、中性脂肪値をコントロールと同レベルに低下し、アンジオテンシンIIによるタンパク尿の増加を抑制した。アンジオテンシンIIは心・腎において組織中性脂肪含量の増加、オイルレッドO染色による脂質滴の集積、および同部位におけるスーパーオキサイドの過剰産生などを惹起した。ピオグリタゾンの共投与は、アンジオテンシンIIより惹起される、これらの現象を抑制した。

一方、ピオグリタゾンはアンジオテンシンIIによる、FAS・SREBP-1などの脂質合成系の遺伝子の発現増加には影響を与えなかった。以上から、ピオグリタゾンによる心・腎への脂質集積の抑制は、血中の脂質プロファイルの改善による者の可能性が高いと推察された。体外灌流による心機能アセスメントではアンジオテンシンII投与は非ストレス状態では収縮能、拡張能、および、左室圧には有意な影響を与えないことが明らかになった。しかし、30分間の灌流中断とそれに続く再灌流による低酸素ストレスを与えた状態では、アンジオテンシンIIは各指標を低下させた。ピオグリタゾン共投与は、これらのパラメータを改善した。形態的な検討ではピオグリタゾンの共投与はアンジオテンシンIIにより生じた心室の線維化領域の縮小に働いていた。以上から、PPAR-γアゴニストの投与はアンジオテンシンIIにより誘導される心・腎における脂質集積の抑制にはたらき、これらの臓器の形態的・機能的障害を緩和することが示された。アンジオテンシンII投与により高血圧を発症したラットにたいしてPPARγアゴニストを共投与するモデル作成に成功した。また、目標の一つであるPPARγアゴニストがアンジオテンシンII投与ラットの心臓で認められる脂質集積・superoxideの産生・機能障害に与える影響について論文化することができた。24年度が最終年度であるため、記入しない。アンジオテンシンII投与ラットにおいて、PPARγアゴニストの投与が、心臓・腎臓に保護的な作用を及ぼすことが明らかになった。以前われわれは、アンジオテンシンII投与が腎内動脈壁に脂質集積を惹起すること、同部位でTGF-β1の発現が亢進していることを報告している。多施設から、PPARγアゴニストが粥状硬化巣における炎症を緩和する可能性や動脈スティッフネスを改善する可能性について報告がなされている。次年度は、PPARγアゴニストが、大動脈における脂質の動態やsuperoxide産生に与える影響について検討を行いたいと考えている。
浅水域における船の操縦運動推定法の開発に関する研究

海難事故は最近でも世界の各地で発生しており,万一タンカー等の海難事故が起これば積荷の油が流出し,海洋環境を破壊することが考えられ大きな社会問題になる。これらの海難事故を防ぐ為には人間要素いわゆる操船者の技量を高めることと同時に,船体固有の操縦性能を向上させることが必要となる。現在IMO(国際海事機関)では人命安全,海洋環境保全の観点から新たに船舶の操縦性能基準を規定しており,この為船の設計の段階で操縦性能を精度よく推定し,評価することが不可欠となる。ところが,過去の海難事故の例では深水域よりむしろ水深の浅い海域で起こっている場合が多い。従って操縦性能基準に規定されている深水域だけでなく,浅水域における性能を推定し評価することは極めて重要なこととなる。同一の船舶でも深水域と浅水域とでは操縦運動特性が顕著に異なることがあり,海難事故防止の観点からも浅水域での操縦運動性能を的確に推定することが必要となる。本研究は以上のような問題を背景にしているが,現在のところ浅水域における船の操縦運動特性を船型要素や船体形状等を充分考慮して推定する方法はほとんど公表されておらず,従って実用的な推定方法の開発が急務となっている。そこで本研究は,細長体理論を応用して,まず水深の深い海域における船体に作用する流体力について船体形状の影響を考慮することのできる計算法を開発を行った。続いて,この計算法を基礎に浅水域の問題への拡張について検討を行った。本研究において開発した船体流体力の計算法は,従来主要寸法の影響しか考慮することのできなかった問題に対して,船型要素,即ち船体形状あるいは船尾形状を充分な精度で考慮することが可能であり,設計の段階で充分実用に供される計算方法となるものと考えられる。本研究においては,浅水域における船舶の操縦運動特性を実用的な見地から充分な精度で計算することのできる方法を開発することを目的としている。船舶の操縦運動特性を正確に推定するためには,船体に作用する流体力を精度良く推定することが不可欠であるため,本年度は模型試験を実施して浅水域において船体に作用する流体力の計測を行った。さらに,できるだけ正確に船体の形状を考慮して,船体に作用する流体力を理論的に推定する方法についても検討を行った。まず,模型試験については,船体に作用する流体力は船尾形状の違いによって大きく変化することが考えられるため,船長,幅,吃水は等しく船尾部分のフレームライン形状のみが異なる3隻の模型船を対象として浅水域において拘束模型試験を実施し,斜航時ならびに旋回運動時に船体に作用する流体力の計測を行った。その結果,船体に作用する流体力は船尾形状ならびに水深によって大きく変化し,特に旋回運動においてその差が顕著に現れることを明らかにした。続いて,浅水域において船体作用する流体力の理論的推定法の開発については,その第一段階として,深水域において船体に作用する流体力の推定法について検討を行った。本研究においては船体を表す写像関数について高次の項まで考慮することにより,船体のフレームライン形状をできるだけ正確に表現し,細長体理論に基づく理論計算法の推定精度の向上を図った。船舶の操縦運動特性を正確に推定するためには,船体に作用する流体力を精度良く推定することが不可欠であるため,本年度は,平成7年度に引き続き流体力の理論的な推定法について検討を行い,その推定精度の向上を図った。船体に作用する流体力の理論的推定法ついては,浅水域への拡張を念頭におき,船体のフレームライン形状をできるだけ正確に表現し,細長体理論に基づいて定式化することにより,深水域を対象として開発を行った。

平成7年度に検討を行った推定法における船体まわりの流れ場のモデルにおいては,船体から剥離する自由渦の剥離線をkeel line上に仮定したが,偏角の大きな範囲においては良好な一致を得ることができなかった。従って,本年度は剥離線を両舷のビルジ部に仮定したモデルを導入した。さらに平成6年度に実施した模型実験において流体力の計測を行った船尾形状の異なる3隻の船舶を対象として流体力の推定を行い,模型実験の計測結果との比較を行った。その結果,剥離線をkeel line上に仮定したモデルと比較して定量的にも,定性的にも精度良く船体に作用する流体力を推定可能であることを示した。本研究においては,浅水域における船舶の操縦運動特性を実用的な見地から充分な精度で計算することのできる方法を開発することを目的としている。船舶の操縦運動特性を正確に推定するためには,船体に作用する流体力を精度良く推定することが不可欠であるため,本年度は,平成8年度に引き続き船体に作用する流体力の理論的な推定法について検討を行い,その推定精度の向上を図った。平成8年度は,細長体理論に基づいて船体まわりの流れ場の定式化を行い,船体のフレームライン形状をできるだけ正確に表現し,さらに剥離線を両舷のビルジ部に仮定したモデルを導入した。続いて船体に作用する流体力の推定を行い,模型実験結果との比較、を行った結果,運動の小さな範囲においては定量的にも,定性的にも精度良く船体に作用する流体力を推定可能であることを示した。しかしながら,運動が大きな範囲においては,推定結果と実験結果に定量的な差が生じていたため,本年度は離散的な渦糸の強さに時間的な減衰を考慮して渦モデルの改良を行った。その結果,偏角βや無次元回頭角速度γ′の大きな範囲における流体力の推定精度が向上されることを示した。続いて,本計算法によって推定した流体力より線形微係数を求め,針路安定指数により針路不安定現象について検討を行った結果,比較的良い精度で針路安定判別を行うことが可能であることを示した。さらに、計算法を基礎に浅水域の問題への拡張について検討を行った。
HDLコレステロールの上昇に効果的な身体活動パターンの検討

HDLコレステロールが低下傾向にあり,かつ運動習慣のない男性を対象に身体活動の増加を目的としたプログラムを提供し,介入期間中のどのような身体活動パターンがHDLコレステロールの上昇に貢献するか検討した.その結果,概ね3分から5分以上継続した中高強度身体活動時間の増加がHDLコレステロールおよびHDL2コレステロールの上昇と関連することが明らかとなった.身体活動ガイドラインで示される10分以上継続した身体活動・運動でなくとも,比較的短時間の身体活動・運動の蓄積でHDLコレステロールの改善が見込める可能性が示唆された.HDLコレステロールが低下傾向にあり,かつ運動習慣のない男性を対象に身体活動の増加を目的としたプログラムを提供し,介入期間中のどのような身体活動パターンがHDLコレステロールの上昇に貢献するか検討した.その結果,概ね3分から5分以上継続した中高強度身体活動時間の増加がHDLコレステロールおよびHDL2コレステロールの上昇と関連することが明らかとなった.身体活動ガイドラインで示される10分以上継続した身体活動・運動でなくとも,比較的短時間の身体活動・運動の蓄積でHDLコレステロールの改善が見込める可能性が示唆された.HDLコレステロールの低値は循環器疾患の発症リスクを増加させる。HDLコレステロールを増加させる方法として、身体活動を増加させることが効果的であることは以前より知られているが、どのような強度で、どの程度の時間継続しておこなえば良いかなどはよく分かっていない。平成25年度は、HDLコレステロールの上昇に対してより効果的な身体活動パターンを検討することを目的とした。HDLコレステロール低値のリスクが高いとされる中年肥満男性36名を対象に12週間の運動実践を含む生活習慣介入をおこない、介入前後におけるHDLコレステロールの変化量と身体活動諸量(低強度身体活動時間、中・高強度身体活動時間)の変化量との関連を探索的に分析した。その結果、3メッツ以上の中・高強度身体活動時間の変化量との間に有意な正の相関(r = 0.37)を認めた。さらに、中・高強度身体活動時間の継続時間(10分未満の細切れ活動および10分以上の継続活動)に着目して検討したところ、10分以上継続した中・高強度身体活動時間のみと有意な関連(r = 0.47)を認めた。これらのことより、HDLコレステロールを上昇させるには、ある程度の時間(10分以上)継続した中強度以上の身体活動が必要であることが示唆された。心疾患に代表される動脈硬化性疾患の重要な危険因子として,HDLコレステロール(以下HDL-C)の低値が知られている.身体活動の増加がHDL-Cの上昇に関係することは以前より報告されているが,1回あたりの時間や回数など,どのような身体活動パターンが関係するのかについては未解明である.最終年度となる平成26年度では,まず,前年度に収集したデータの解析を進めた.その経過において,1. HDL-Cが低値傾向(<50 mg/dl)を示す対象者が少なかったこと,2.身体活動パターンの種類を検討する必要があること,が課題として挙がった.したがって,平成26年度においては追加の介入研究によって分析対象者を増やし,身体活動パターンについては当該分野に詳しい研究者から助言を受けた上で,最終的な検討をおこなった.追加のデータ収集(運動介入)をおこない,運動習慣がなく,かつHDL-Cの低値傾向を示す男性29名を最終分析対象者とした.評価項目として,HDL-C,HDL2-C,HDL3-Cを測定し,身体活動パターンとしては,これまで想定していた「10分以上継続した中高強度身体活動時間」以外にもさらに短時間(1分以上,3分以上,5分以上)の区分を設定して検討をおこなった.その結果,HDL-CおよびHDL2-Cの上昇と3分以上継続した中高強度身体活動時間の増加に有意な関連が認められた.さらに,HDL2-Cの前駆段階であるHDL3-Cは中高強度身体活動時間の増加に伴って有意に減少した.このことから,3分という比較的短い時間の活動でもHDL-Cは増加する可能性があり,中でもHDL2-Cとの関連も認められたことから,コレステロール逆転送系の活性化が関与していることが示唆された.今後は,これらの知見を実際の運動現場に活かす方法を検討していく必要がある.26年度が最終年度であるため、記入しない。健康増進学26年度が最終年度であるため、記入しない。当初の研究計画通り、介入研究をおこない、データを収集することができた。しかし、HDLコレステロール分画の測定やより詳細な身体活動パターンの検討が不十分であるため、早い段階でそれらの検討をおこなう必要がある。そのため、計画以上の進展とはいかないまでも、概ね計画通りに課題を遂行できていると考えられる。身体活動量の評価に関する情報収集をおこなうため、第68回日本体力医学会大会に参加し、様々な研究者と意見交換をおこなった。平成25年度に得られた結果をもとに、HDLコレステロールの上昇と身体活動促進を企図した介入プログラムを作成し、実現可能性を検討する予定である。
乳幼児の急病時に対する家庭での対処能力の向上をめざした支援プログラムの作成

子育て中の親にとって、初めての子どもの急病時は不安が強く、対処行動については保護者自身で判断することが困難であることがわかった。また、子どもの病気の知識や対応について多くの情報があるものの、情報の伝え方や活用の方法も含めた伝達にも課題があることが見えてきた。そのため、「情報の媒体」「伝達方法」「保護者による活用方法」を軸に支援プログラムを作成した。今後、その効果について検証を行う予定である。平成25年度は、【小児の急病時における保護者の不安の軽減につながる要因の検討】を研究目的とし、乳幼児をもつ保護者を対象に、1質問紙調査:保育所、幼稚園などに子どもを通わせている保護者を対象に、子どもの急病時における対応や、急病時における不安、その不安の解決に向けての方策など、保護者の不安の内容や要因やその不安の軽減につながる項目に関して質問紙により調査を行う。2グループインタビュー:乳幼児をもつ保護者のうち、上記質問紙調査の際にグループインタビューへの承諾が得られた人、A市小児医療座談会へ参加している保護者のうち承諾が得られた人を対象に、質問紙調査の結果から明らかになった不安要因や不安の軽減につながる項目についてグループインタビューを行った。質問紙調査の結果、第一子の時がもっとも保護者の不安が大きく、子どもの発病時の対処行動について保護者自身での判断が難しいことがわかった。その際に、保護者の親(祖父母)や友人に相談している割合が高かった。子どもの発病時の受診については、「迷う」と答えた保護者の割合が高く、その内容としては「受診しても良いかどうか(症状)」「受診のタイミング」「受診先」などが挙がっていた。子どもの急病時の対応の方法や受診先に関する情報としては、ほとんどの保護者がパンフレットなど持っていたが、「事前にしっかりと目を通した」「理解できた」という実感はなく、子どもが発病した際に参考にするという事例が多かった。初めて子どもが発病した際に「落ち着いて対応できた」と感じている保護者では、事前に家族や友人と発病時の対応や受診先などについて話したことがあると答えたケースが多かった。以上の結果より、次の目的である【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラムの作成】を行っているところである。本研究は1子どもの急病時に保護者が抱く不安と、保護者が家庭でできる子どもの急病時の初期対応について保護者の不安の軽減につながる内容や要因を明らかにする、21の結果をもとに、小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラムを作成し、実施・評価する、を目的としている。平成24年度は、「小児の急病時における保護者の不安の軽減につながる要因の検討」を目的として、乳幼児をもつ保護者を対象に質問紙調査およびグループインタビューを行う予定であった。質問紙調査では、保育所、幼稚園などに子どもを通わせている保護者を対象に、子どもの急病時における対応や、急病時における不安、その不安の解決に向けての方策など保護者の不安の軽減につながる要因に関して明らかにすることを目的として、質問項目を選定し調査票を作成した。最終年度でも同じ質問紙を用いて評価を行う計画のため質問項目の洗練に時間がかかり、3月に質問紙が完成し、平成25年度早々に調査を実施する予定である。平成26年度は、平成25年度の結果をもとに【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラムの作成】を目的に実施した。平成25年度の質問紙調査の結果より、1第一子出産後の不安が最も強く、子どもの発病時の対処行動については保護者自身の判断が難しい2相談者としては保護者の親(祖父母)や友人の割合が高かった、の2点が明らかになった。また子どもの発病時の受診について、「受診してもよいかどうか(症状)」「受診のタイミング」「受診先」などについて迷うという意見が多く見られた。さらに、手元にある子どもの急病時の対応や受診先などのパンフレットについては、実際に発病した際に参考にするケースが多く、実際に子どもが初めて発病した際に「落ち着いて対応できた」と感じている保護者では、事前に家族や友人と子どもの発病時の対応や受診先について話したことがある、と述べていた。以上の結果より、パンフレットを渡すだけでは小児の急病時における保護者の不安の軽減にはつながらず、パンフレットなどの情報の伝え方や活用の方法も含めた伝達が課題であることが見えてきた。そのため、現在、既存のパンフレットの活用も含めて保護者への子どもの発病時の対応や受診先などの情報の提供のあり方を視野に入れて【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラム】を試作し修正を加えている段階である。平成25年度の調査結果を元に、平成26年度27年度にかけて【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラム】を試作し、修正を行った。平成27年度は、乳幼児の子どもをもつ家族を対象に、試作・修正したプログラムの効果について調査を行う計画を立てていたが、実施できず効果の検証ができていない。補助金助成による研究は中途で終了することになるが、今後このプログラムの効果を検証する方法を再度検討し、実証、活用へと繋げていきたいと考えている。

また、子どもの病気の知識や対応について多くの情報があるものの、情報の伝え方や活用の方法も含めた伝達にも課題があることが見えてきた。そのため、「情報の媒体」「伝達方法」「保護者による活用方法」を軸に支援プログラムを作成した。今後、その効果について検証を行う予定である。当初の研究計画では、平成25年度までに【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラムの作成】を行い、平成26年度はその作成したプログラムを評価する予定であったが、支援プログラムの試作と修正に時間を要し、まだ評価を実施できていない。そのため、研究期間を延長し、今年度評価まで行う予定である。小児看護学支援プログラムを修正後、【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラム効果の検証】を目的に、乳幼児をもつ保護者や協力の得られた保育所、幼稚園、育児支援施設、関連機関などを対象として、1作成したプログラムの実施2実施した際の参加者に、その効果について質問紙調査(実施前・実施後)およびグループインタビューを実施する予定である。平成24年度に実施予定であった調査で使用する質問紙の作成に時間がかかったため、全体の進捗が遅れている。現在は、次の目的である【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラムの作成】に向けて、保護者の不安の軽減や対処能力の向上につながる支援プログラムを検討を行っているところである。【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラム】の試作と修正に時間を要し、平成26年度中に実施予定であったプログラムの効果を測るための調査を実施できていない。また、本来は最終年度であったため本研究課題の研究報告書の印刷代も計上していたが、調査が未実施であるため、報告書も未完成の状態であり、次年度への使用額が発生した。現在【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラムの作成】を目的とし、1小児の急病時における保護者の不安の軽減につながる要因のまとめをもとに、保護者の不安の軽減や対処能力の向上につながる支援プログラムの検討、2研究協力が得られた乳幼児の保護者並びに小児医療関係者に、内容や妥当性や実現可能性についてヒアリングを行い、修正を加えることを行っている。支援プログラムを作成後、【小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラムの効果の検証】を目的に、乳幼児をもつ保護者や協力の得られた保育所、幼稚園、育児支援施設、関係機関などを対象として、以下の方法で研究を実施する。1作成した小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラムを実施する。2実施した際の参加者に、その効果について質問紙調査(事前および事後調査)及びグループインタビューを行う。平成24年度に達成できていない質問紙調査の分析とグループインタビューによる調査・分析を、平成25年度早々より実施する。4月6月までに「小児の急病時における保護者の不安の軽減につながる要因の検討」を目的として、乳幼児をもつ保護者を対象に質問紙調査およびグループインタビューを行う。その結果をもとに、89月頃までに不安の軽減に加え家族の対処能力の向上も視野に入れた小児の急病時における保護者の不安の軽減および対処能力の向上につながる支援プログラムを検討
動物多細胞性進化メカニズムの分子生物学的解明

動物の多細胞システムはどのように進化したのか?これを分子レベルで解明するためには、動物に近縁ではあるが単細胞の生活環を持つ生物の解析が重要なカギを握る。そのような原生生物(単細胞ホロゾア)がもつ「多細胞的な」遺伝子、すなわち細胞接着や細胞間コミュニケーション、細胞増殖の制御、細胞がはい回るための足場(細胞外マトリクス)、臓器や器官のサイズ制御などにかかわる遺伝子の機能を解析し、単細胞生物が多細胞化を果たすためにどのような遺伝子レベルの進化が必要だったのか、解明に向けた研究を行った。動物の多細胞体制の進化・起源を分子レベルで解明するためには、動物に近縁ではあるが単細胞の生活環を持つ「単細胞ホロゾア」の解析が重要な鍵をにぎる。まず、単細胞ホロゾアの一種カプサスポラからカドヘリン様遺伝子をクローニングし、発現ベクターに組み込んだ。これをカプサスポラに導入し、タンパク質の局在と過剰発現系の表現型を見るなど、機能解析を行った。また同じくカプサスポラから、Notch様遺伝子2種類のうち一つをクローニングし、同様に機能解析を進めた。更に、カプサスポラとは独立した別系統の単細胞ホロゾアであるコラロキトリウムの解析を行った。顕微鏡下で詳細に観察することにより、コラロキトリウムは以前考えられていたよりも複雑な形態や増殖サイクルを持つことが分かった。単細胞生物の遺伝子機能を詳細に解析するには細胞内分子マーカーが必要である。そこでミトコンドリアを初めとする細胞内小器官に特異的に発現すると考えられる遺伝子を単細胞ホロゾアから多数クローニングし、その発現を調べた。その結果、カプサスポラの仮足への特異的マーカーを開発することができた。動物の多細胞体制の進化・起源を分子レベルで解明するために、動物に近縁ではあるが単細胞の生活環を持つ「単細胞ホロゾア」の解析を行った。1、単細胞ホロゾアが持つ(1)細胞接着分子カドヘリン様分子、(2)細胞間連絡や接着にかかわるNotchおよびDelta様タンパク質、(3)各種細胞外マトリクスタンパク質、(4)臓器サイズの制御にかかわるHippoパスウェイ関連遺伝子、(5)細胞間連絡や細胞増殖にかかわるチロシンキナーゼの過剰発現コンストラクトを作成し、これらを単細胞ホロゾア二種(クレオリマックス、カプサスポラ)に導入した。これらをコードする遺伝子は、単細胞生物に存在すること自体が興味深い「多細胞的な」遺伝子であり、過剰発現させて細胞の形態や運動を観察することで、その機能を解析した。2、1で解析した遺伝子の中には、過剰発現させても全く細胞に異常が見られないものもあった。これらについては逆にノックアウト実験が重要であると考え、ゲノム編集の手法を取り入れた。本支援による学会への参加等を通じて、国内の第一人者と共同研究を進めることができた。また、細胞内の微細構造に異常が生じている可能性も考慮し、単細胞ホロゾアのアクチン、チューブリン、ミトコンドリア、細胞膜、小胞体のライブイメージングマーカーコンストラクトをそれぞれ開発した。3、単細胞ホロゾアへの形質転換効率を向上させるため、海外(スペイン)研究室との連携の深化を通じて(学生を初年度、次年度それぞれ一人ずつ派遣)、大幅な技術的改善を得ることができた。4、新たな単細胞ホロゾアモデル生物の確立に向け、ゲノム支援コンソーシアムと連携した。支援対象に採択され、新たに2種(スフェロフォルマ及びアメービディウム)のゲノム配列決定を進めることができた。第一に、本支援により、研究に必要な機器の多くを調達できた。すなわち、「研究活動スタート支援」の大きなポイントである、独立した研究室をセットアップするという目標については、ほぼ達成できた。しかしながら、1年目の目標に掲げた、カプサスポラのカドヘリンやクレオリマックスのチロシンキナーゼの機能解析に関しては、必要なコンストラクトを作成することは出来たものの、それらを細胞に導入するステップで問題が発生した(「今後研究の推進方策」参照)。そこで初年度は、この問題を解決することに注力しつつ、元の計画になかった遺伝子の機能解析を平行して進めた。そのうちの一つがカプサスポラのNotch様遺伝子である。更に、2年目の計画(モデル生物としてのコラロキトリウムの確立)を前倒しでスタートさせた。すなわち、個々の解析に遅れている部分と進んでいる部分はあるものの、全体としての進捗はおおむね順調であるといえる。27年度が最終年度であるため、記入しない。生物学現在研究を進める上で最大の障壁となっているのは、細胞の形質転換効率の低さである。初年度当初は順調であったものの、徐々に効率が低下している。この改善のため、今後は海外の他研究室と密に連携する。すなわち、所属の学生を派遣し、実地でトラブルシューティングを行う。

派遣先の研究室ではおおむね順調に形質転換が行われており、メールや電話では伝わりづらいトリックを学べるものと考える。本研究の解析対象の遺伝子には、イントロンを多数持つ大きな遺伝子が多く、クローニングにはある程度の技術が必要である。初年度は、実験の主たる施行者である学生の技術的な問題もあり、想定したよりも多くの時間がかかった。2年目はその問題が解消され、コンストラクト構築を迅速化できる。2年目の計画のひとつであるアメービディウムの遺伝子機能解析には、信頼性の高いゲノム塩基配列が必須であるが、残念ながら現時点では、アメービディウムゲノムのアセンブリの質は大変低い(N50:値1.2kb)。これはアメービディウムのゲノムに繰り返し配列が非常に多く、リードのペアリング情報が十分に活用されないことによる。そこで、第三世代シーケンサー(超ロングリード)による配列決定とゲノムアセンブリを目指す。そのため、外部のシーケンスセンター等との共同研究制度を積極的に活用する。27年度が最終年度であるため、記入しない。
江戸時代医学・本草学資料の整理と研究　Ⅲ

江戸時代、伝統医学に関して日本は中国を凌駕する発展を遂げ、厖大な量の資料が伝承され、著述された。現在、国内外の特殊図書館や博物館に保管されている資料のほか、民間に伝存しつつも世に埋もれた資料は少なくない。本研究では、これら未発掘、未整理の伝統医学資料に光を当て、修復・整理・目録作成の作業を行い。電子データ化し、今後の伝統医学文化研究の基盤確立を試みたものである。従来の研究を踏襲し、今回の研究によって獲得した保存資料のデータ量は多大である。1文献の補修:新出資料群の内、主に岡田昌春文庫、石原保秀文庫、日本医史学会文庫(掛軸)新規購入分を含む北里医史研新収資料等について、整理対象となる資料の所蔵先に赴き、損傷の度合いを鑑定、補修が必要となる資料を選定した。その後、補修対象となる資料を当研究部に運搬し、当研究部にて補修作業を行った。この作業を通し、専門業者と知識を交換し、さらなる補修技術の向上が認められた。2文献資料の画像データ化:当研究所所蔵の文献資料の内、重要度の高い古文献を選び、複写(撮影)及び文献資料の画像データ化を行った。画像データは大容量の専用ハードディスクに保存し、データの管理・運営の便を図り、同時に、当研究所所蔵の文献資料の目録作成作業も進めた。3マイクロフィルムの電子画像データ化:マイクロフィルムの電子画像データ化については、当研究部が所蔵するマイクロフィルム(35mmネガ・ポジフィルム、マイクロフィッシュ等)の中から重要度が高く、経時的劣化の著しいものから順次電子画像データ化を進めている。電子画像データ化は次年度も引き続き行う。4文献資料の整理:一昨年度に新出した金沢文庫旧蔵本・宋版『孫真人玉函方』研究の一環として、金沢文庫旧蔵の医薬書の書誌を明らかにし、整理した。福井崇蘭館旧蔵古医書、武田科学振興財団杏雨書屋蔵書、下関市長府博物館所蔵古医学資料、山口県文書館所蔵医学史料、出雲岩崎家所蔵古医書等の調査、また『観聚方要補』安政版の編集刊行など、医史学研究の基盤整備に精力的に取り組んだ。新出資料群の内、主に出雲岩崎家文庫、和田泰庵文庫、田中弥性園文庫、小曽戸家文庫、岡田昌春未公開文書、新規購入分を含む北里医史研新収資料等について、整理対象となる資料の所蔵先に赴き、損傷の度合いを鑑定、補修が必要となる資料を選定した。当研究所所蔵の文献資料の内、重要度の高い古文献を選び、複写(撮影)及び文献資料の画像データ化を行った。撮影・目録作成は次年度も引き続き行う。マイクロフィルムの電子画像データ化については、当研究部が所蔵するマイクロフィルム(35mmネガ・ポジフィルム、マイクロフィッシュ等)の中から重要度が高く、経時的劣化の著しいものから順次電子画像データ化を進めている。また、新出資料である金沢文庫旧蔵本・宋版『孫真人玉函方』についての調査・撮影も行った。『孫真人玉函方』は12世紀、900年前のきわめて珍しい資料であり、本書の存在はこれまで全く知られていなかった。本書の発見は中国医学史上、また中国印刷出版史上、重要な資料を提供するものである。このほか同書を所有していた館山上野家旧蔵の医学史料、また足利学校遺蹟図書館の古医書についても調査を進め、さらに金沢文庫旧蔵医書、福井崇蘭館旧蔵医書、曲直瀬道三玄朔関連医書、『観聚方要補』安政版などについても精力的に研究を進めた。新出資料群の内、主に武田科学振興財団杏雨書屋蔵書の新規購入資料等について、整理対象となる資料の所蔵先に赴き、調査研究を行った。北里大学東洋医学総合研究所収蔵の古医書については損傷の度合いを鑑定、補修が必要となる資料を選定し、その後、当研究部にて補修作業を行った。マイクロフィルムの電子画像データ化については、当研究部が所蔵するマイクロフィルム(35mmネガ・ポジフィルム、マイクロフィッシュ等)の中から重要度が高く、経時的劣化の著しいものから順次電子画像データ化を行い、このたびすべての画像データ化を完了。

さらにその目録作成作業も終了した。このほか金沢文庫旧蔵医書、福井崇蘭館旧蔵医書、曲直瀬道三玄朔関連医書、などについても精力的に研究を行った。東洋医学和漢書誌学医学史科学技術史当初の進捗予定に従い、文献の補修、当研究所所蔵の文献資料・マイクロフィルムの電子画像データ化・目録作成作業が進んでいるため。当初の進捗予定に従い、文献の補修、当研究所所蔵の文献資料・マイクロフィルムの電子画像データ化・目録作成作業が進んでいるため。前年度の研究方針を踏襲しつつ、本年度は前年度の基礎作業をうけて情報の集成と加工に重点を置く。他から流用して兼用できる研究費があったので、それを優先し、当該研究費を有効に活用せるため、剰余分を次年度に繰り越すこととした。文献の補修、目録作成作業に必要な消耗品。文献資料調査費用。諸研究作業における研究補助者への謝金。資料目録と報告書の刊行・印刷費用。画像データ出力のための高解像度プリンタ購入費用。文献資料調査費用。
明暗変化に伴うラット網膜のCREBの遺伝子活性化機構

本研究では網膜において、CREBが明暗変化でどのような様式で、燐酸化されていくのかを抗燐酸化CREB抗体を用い、免疫染色とウエスタンブロットを行なった。暗期には抗燐酸化CREB抗体を用いた免疫染色によって染色されなかった。また、ウエスタンブロットにおいても検出できなかった。以上より暗期にはCREBは燐酸化されていないことが明かとされた。さらに、明期に変化した後、20秒、1分、5分、のラット網膜を採取して、免疫染色とウエスタンブロットを行なったところ、1分をピークとして燐酸化CREBが検出され、明暗の変化により、つまり光が刺激として、CREBが燐酸化されることが明かとなった。次に、Caイオンの流入がc-fos mRNAや、燐酸化CREBの発現にどのような影響を及ぼすかを、Caチャンネルアゴニストやブロッカーを投与したラットを用い、in situ hybridization法によりc-fos mRNAの発現を観察した。Caチャンネルアゴニスト投与後45分後にc-fos mRNAの発現や、CREBの燐酸化にピークが見られ、網膜においてもCaイオンの流入がc-fos mRNAの発現や、CREBの燐酸化に必須であるということが明かとなった。今後はCaイオンの流入から、CREBの燐酸化の間にどのような細胞内情包伝達系の経路が存在するかの検討をする予定である。我々は、c-fos mRNAが明暗の変化によって網膜に発現し、2つの異なった機構で変動していることを初めて明らかにした(Neuron,vol.10,1993)が、c-fosは、たんぱく質合成を調節する役割をもつ転写制御因子である。さらに、このc-fos mRNAをCREB(cAMP response element binding protein)が転写促進をする細胞があること、CREBはソマトスタチンなど多くの蛋白質の転写を調節すること、実際に活性があるのは、燐酸化されたCREBであり、Caイオン流入がCREBの燐酸化に必要らしいということがMontminyら(Nature1989)によって明らかにされている。今年度はCREBが明暗変化でどのような様式で、燐酸化されていくのかを抗燐酸化CREB抗体を用い、免疫染色とウエスタンブロットを行なった。
溶液内における金属イオンの動態の解明と動的分析化学への展開

時間軸を入れた分析を用いることによって分析感度や選択性を高めたり、機構や反応性のキーポイントになる不安定短寿命中間体を検出・分析するといった「動的分析化学」と言える新しい分野を開拓することを目的とする。このため、溶液内分析化学反応の機構論的研究を系統的に遂行した。(1)金属イオンの溶媒和構造と反応性との関係:(a)EXAFS法を用いて溶媒構造を決定した。(b)NMR法を用いて溶媒交換反応速度を測定した。(c)非経験的分子軌道計算法を用いて水交換反応の遷移状態を解析した。これらの結果から溶媒や金属イオンの大きさと反応機構との関係を解明した。(2)立体特性を持つ配位子との錯形成反応機構:(a)SAT錯体の生成機構と脱プロトン反応機構を解明し、金属ポルフィリン錯体の生成反応機構を統一的に解明した。(b)有機スズの光分解反応の機構、(c)ホウ酸のポリオール錯体の金属イオン取り込み機構、(d)シクロパラデーション反応の機構、(e)ベリリウム(II)イオンの錯形成反応機構を解明し、溶媒の大きさや塩基性との関係、キレート効果、圧力効果を解明した。(3)外圏型電子移動反応と酸化還元反応の機構:金属(II/III)錯体間の外圏型電子移動反応速度を系統的に研究し、内配位圏の構造変化が律速となる機構、いわゆる「ゲート機構」を詳細に解明した。(4)不安定中間体の検出と解析:(a)レーザー光によって誘起される有機スズ化合物の光分解反応や超臨界二酸化炭素中における熱異性化反応の機構を解明した。(b)超臨界二酸化炭素中で、ポルフィリン錯体生成の外圏会合体の検出に成功した。(c)アセトニトリル中でSAT中間体を検出し、その構造を決定した。(5)動的分析化学のための方法論の開発:(a)時間分解ストップトフローEXAFS法を開発した。(b)超臨界二酸化炭素流体中における金属錯体の溶解度や電子スペクトルが測定できるセル、迅速反応が追跡できるストップトフロー装置、誘電率変化が測定できる高周波分光装置を開発した。(c)加速フロー装置を試作し、通常のストップトフロー法では測定できない速い反応を追跡可能にした。以上のような研究成果から動的分析化学の一つの方向を示すことができた。本研究では、時々刻々変化(反応)している系の構成物質を分析することが可能な方法論を開拓し、反応時間というもう一つの次元を導入することによって、分析の感度と選択性を飛躍的に高めると同時に、このような、いわば“動的分析化学"といえる新しい分野を開拓することを目的としている。このために、溶液内分析化学反応の機構論的研究を系統的に遂行し、その反応動態の分析化学的見地での評価を行った。(1)各種溶媒中における金属イオンの溶媒交換反応と溶媒特性による反応性の差異に関しては、EX-AFS法を用いて様々な非水溶媒中における金属イオンの溶媒和構造を決定し、また、NMR法を用いて溶媒交換反応の活性化パラメーターを測定した。

これにより、溶媒分子のかさ高さによる溶媒和構造の変化とその溶媒交換反応機構への影響を解明した。(2)立体特性を持つ配位子との錯形成反応機構の解明に関しては、ポルフィリンのメタレーション反応とシクロパラデーション反応のメカニズムを詳細に解明し、金属イオンの速度論的分析法の確立とより高い選択性の発現に向けての重要な情報を得た。(3)電子移動反応の機構と酸化還元反応に及ぼす触媒作用の解明に関しては、各種錯体間の電子移動反応速度を均一溶液中ならびに電極表面において測定し、錯体内部の構造変化に要するエネルギーが外圏型電子移動反応の活性化に至る過程を支配していることを明らかにした。(4)短寿命反応中間体の構造化学的研究に関連しては、高精度の時間分解EXAFSスペクトルをより短時間で測定するための放射光を光源とするエネルギー分散型光学系を備えた時間分解EXAFS装置の開発に着手した。本研究では、時々刻々変化(反応)している系の構成物質を分析することが可能な方法論を開拓し、分析化学に反応時間の次元を導入することによって分析感度と選択性を高めると同時に、"動的分析化学"と言える新しい分野を開拓することを目的としている。このため、溶液内分析化学反応の機構論的研究を系統的に遂行し、その反応動態の分析化学的見地での評価を行った。(1)溶媒和構造と反応性との関係に関して、NMR法を用いて非配位性溶媒中に存在するBe^<2+>およびAl^<3+>イオンの混合溶媒和化学種のスペシエーションを行い、非経験的分子軌道計算と合わせて、配位子と金属イオンの大きさによる錯体構造の変化や金属ー配位子間結合の特性を系統的に明らかにした。(2)速度論的分析法における触媒作用の解明に関して、種々の金属(II,III)錯体間の外圏型電子移動反応速度を系統的に測定し、速度および機構に対する内配位圏の構造変化に由来するエネルギー因子を明らかにした。(3)不安定短寿命中間体の構造解析に関して、エネルギー分散型光学系を有する放射光を光源として時間分解EXAFSビームラインの開発に着手し、電子移動前駆中間体の構造解析を行った。(4)分析化学反応の反応機構解明に関して、アセトニトリル中における金属ポルフィリン錯体生成反応速度を測定し、SAT中間体の構造や物性を解明し、一般的なメタレーション機構を分子論的に解明した。(5)動的分析化学のための方法論の開発として、超臨界二酸化炭素溶液間の迅速混合によって開始する化学反応の速度を測定することが可能な超臨界二酸化炭素用ストップトフロー装置を開発し、金属ポルフィリン錯体生成反応速度の測定を行った。本研究では、時々刻々変化(反応)している系の構成物質を分析することが可能な方法論を開拓し、時間軸を入れた分析を用いることによって分析感度や選択性を高めたり、機構や反応性のキーポイントになる不安定短寿命中間体を検出・分析するといった「動的分析化学」と言える新しい分野を開拓することを目的とする。このため、溶液内分析化学反応の機構論的研究を系統的に遂行し、その反応動態を分析化学的見地から評価した。(1)金属イオンの溶媒和構造と反応性との関連に関して、5配位溶媒和コバルト(II)イオンの溶媒交換反応機構を明かにした。(2)速度論的分析法における触媒作用に関して、金属(II/III)
慢性容量負荷心における心筋機能(収縮末期圧容積関係について)

「緒言」心筋は代謝エネルギーを機械エネルギーに変換するエネルギー形態変換装置であり、心室がこの機械エネルギーを血液に与えることにより血流が維持される。血液は生涯を通じ絶え間なく流れており、心室が血液に供給する機械エネルギーは積算すると莫大なものとなる。従って、いかに効率良く代謝エネルギーを機械エネルギーに変えるか、あるいは発生した機械エネルギーを血液に供給するかは生体にとって極めて重大な意味を持つ。そこで本研究は心室が発生した機械エネルギーをどのような効率で血液に与えるか健常心及び不全心について検討した。「方法,結果」予めトレッドミルを走る様に訓練した犬に左室圧、大動脈流量を測定するための器具を装着した。手術からの回復を待って運動負荷を行い、心室と動脈の整合性を検討した(コントロール)。さらに左冠動脈に微粒子を注入し心不全を作成し、不全心の心室と動脈の整合性を調べた。「結果,考察」健常心では安静時も運動時も心室はほぼ最大出力(仕事)で動作しており動脈と整合していたが、不全心では最大仕事のおよそ半分の所で動作しており心室と血管は整合していなかった。不心全では薬剤で血管低抗を下げ且つ心収縮力を上げてやると心室の仕事量は増大し、強心剤や血管拡張療法が単に心拍出量を増加させるだけでなく心室と血管の整合性を改善することが明らかになった。容量負荷による心不全は実験的な困難さのため充分に検討できなかった。しかしながら、容量負荷では収縮末期エラスタンスが低下することから動脈低抗が低下したときに心室の仕事量は最大になり合目的な適応が起きているものと推定される。
新規転写因子DEC1の低酸素応答における機能解析

固形がん内部は細胞増殖と血管新生の不均衡により低酸素状態に陥る。このとき低酸素状態により誘導される転写因子Hypoxia-inducible factor 1(HIF-1)の発現が亢進し、血管新生を促進しがん細胞の増殖や転移に重要な役割を果たしていると考えられている。近年、申請者らは新規転写因子DEC1をクローニングし、低酸素状態で発現が誘導されることを見出した。本研究では、DEC1の低酸素による発現調節のメカニズムおよび細胞癌化におけるDEC1の関与を検討した。DEC1遺伝子のプロモーター領域の数種類の断片をルシュフェラーゼレポーターベクターに繋ぎ、転写活性を測定したところ、低酸素処置によって転写が亢進し、HIF-1の結合配列がDEC1遺伝子のプロモーター上に見いだされた。そこで、上記のレポーターベクターとHIF-1α発現ベクターを共発現させると、転写活性が上昇し、その上昇は翻訳開始点から524bpから401bp上流の配列を削除することにより観察されなくなった。これらの領域に、HIF-1結合コンセンサス配列が1つ(DEC1-HRE)存在し、そのエンハンサー活性を検討した結果、HIF-1αの一過性強制発現により転写活性が上昇した。さらに、DEC1-HREをプローブとして、293T核抽出液を用いてゲルシフトアッセイを行ったところ、HIF-1がDEC1-HREと直接結合することが判明し、DEC1はHIF-1の新規標的遺伝子であることを証明した。また、12種類の乳がん細胞株におけるDEC1の発現を検討したところ、全ての細胞株でDEC1の発現がみられ、その発現量は細胞間で数倍から数十倍の差が見られた。DEC1の機能を検討するために、現在、乳腺を含むいくつかの組織特異的にDEC1を発現するトランスジェニックマウス作製を行っている。
脳の情報処理機構への統計力学的アプロ-チ

脳内での情報処理のメカニズムを明らかにするために,計算論的な視点からモデルを設定し,その働きを動的な側面に重点をおいて解析した。まず,甘利と馬被による同期過程における信号/雑音比解析の手法の妥当性を検討するために,モンテカルロシミュレ-ションを行い,彼らの理論では裏付けなしに用いられている仮定の成立条件を調べた。各ニュ-ロンへの入力から正しい信号の部分を取り去った残りの雑音とみなされる部分の強さが,彼らが主張するとおり正規分布に従っているかどうかを,コンピュ-タ上でシミュレ-トしてみたのである。結果は,甘利・馬被理論は,最終的に想起が成功する場合にのみ正しいというものであった。次に,甘利・馬被の信号/雑音比解析のテクニックを,外部雑音が付加されたケ-スに適用し,有限温度での平衡統計力の結論との整合性を調べた。結果は,定常条件下での記憶容量限界の外部雑音強度への依存性について,定性的によく一致するものであった。このように,全く違った立場からのアプロ-チによってほとんど同じ結論が得られたということは,双方に高い信頼性を与えるものと考えられる。さらに,平衡状態の統計力学から動的な過程への直接的なアプロ-チとして,非同期過程での平衡自由エネルギ-に基づくTDGL方程式を立ててその解の解析をした。この方程式は,システムが自由エネルギ-の最急降下方向に時間発展するという考え方をあらわに定式化したものである。結果は,想起が成功する場合,その最終段階において,定性的に信号/雑音比解析のそれと一致するものであった。