hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
血管密着型培養器でのBMPとHAPの複合移植に関する異所性骨形成実験

14日目、BMPは消失し、HAPに沿って活発な線維性の骨形成が認められた。新生骨は未熟で、層板構造は認められなかった。28日目、毛細血管の新生が著明で、とくにHAP周囲に沿って旺盛な線維性の骨新生が観察され、新生骨では吸収と添加のリモデリングがみられ、一部骨髄様組織の形成もみられた。今後、移植後90日までの長期例についての観察を行うと同時に電気泳動によるBMPの蛋白分析およびより純粋なBMPの抽出、精製を行う予定である。我々の教室で考案した血管密着型培養器にBMPとHAPの複合移植を行い、成犬の総頸動脈壁での異所性骨形成に関して以下の結果を得た。[実験方法]前年度に引き続き以下の実験を行った。1.牛骨からの骨形成蛋白(BMP)の抽出、精製2.上記の方法によって得られたBMPとHAPをポリプロピレン製の血管密着型培養装置に混合充填し、成犬の総頸動脈壁に取付け、一定期間飼育後、資料を採取し、脱灰および非脱灰の薄切切片標本を作製し、病理組織学的に観察した。観察時期は移植後7日目、14日目、28日目、60日目、90日目である。[実験結果]1.本実験に用いた血管密着型培養装置内の培養環境は、内容液分析の結果、非常に優れた環境であることが確認された。2.BMPとHAPの複合移植における異所性骨形成実験では、7日目、HAP周囲に線維性結合組織が増生し、線維芽細胞が増生配列していた。14日目、BMPは吸収され、一部未熟な線維性の骨形成が認められた。28日目、毛細血管の新生とHAP周囲に沿った線維性の骨新生が観察され、新生骨では吸収と添加のリモデリングがみられ、一部骨髄様組織の形成もみられた。60日目、毛細血管の新生が著明で、旺盛な線維性の骨新生が観察され、とくにHAPの表面に沿って、連続した骨が形成されていた。90日目、旺盛な骨形成はみられなくなったが、新生骨は層板構造を呈し、骨の成熟化が認められた。また新生骨の周囲には扁平な静止期様の骨芽細胞が観察された。以上より、血液の豊富な本実験の培養環境下では軟骨性骨化ではなく、線維性の骨化形式をとることが明らかになった。またHAPは担体としての重要な役割を果たしていた。今後、電顕用試料を作製し、新生骨およびHAP周囲の電顕的観察を行うとともに電気泳動によるBMPの蛋白分析を行う予定である。
自律神経系機能と耐糖能異常に関する疫学研究

欧米の疫学研究から循環器疾患や糖尿病に自律神経系機能が関与していることが報告されてきた。そこで、地域一般住民を対象に自律神経系機能と耐糖能異常との関連について検討した。愛媛県T市において糖尿病治療中等を除く1032人に対し5分間の自律神経系機能検査と75gぶどう糖負荷試験による耐糖能の評価を行った。結果、心拍変動や自律神経系機能を表すSDNNやHRV indexの値が大きくなるに従って、耐糖能異常や糖尿病が出現するリスクは小さくなった。この関係は、BMI、拡張血圧、降圧薬内服有無、身体活動量、喫煙、飲酒を調整した後も有意であった。自律神経系機能と耐糖能が関連していることが示唆された。本研究は、メタボリックシンドロームあるいは糖尿病の新たな発症要因として、自律神経機能との関わりについて検討した。本年度は自律神経系機能評価の基本的なデータを収集することを目的に、健康ボランティア49人(男性23人、女性26人、平均年齢21.3歳)を対象に当該検査を行い、さらに鏡映描写テストによる急性期のストレス負荷が自律神経系機能に及ぼす影響について検討した。鏡影描写テストは星形の線上を、被験者が鏡を見ながらなぞってくテストであり、描く線が外れるとブザーが鳴るような仕掛けになっている。自律神経系機能評価はTAS-9を2台使用した。本器により、5分間の安静時心拍数の記録から心拍波形の3次微分によりRR間隔を計測し、心拍変動の指標であるSDNN、さらに心拍変動のスペクトラム解析に基づい新低周波領域(LF)、高周波領域(HF)、さらにLF/HFの指標を計測した。安静時の5分間心拍数、SDNN、LF、HF、LF/HFの幾何平均はそれぞれ、398、53,8、595.6、294.7、3.29であった。鏡映描写後の変化について検討したところ、心拍数の有意な増加を認めたが、それ以外の指標の有意な変化は認めなかった。性別、肥満度別、運動習慣別にみても心拍数以外の指標の変化はなかった。安静時では、女性、BMI22未満、運動習慣ありの群ではLF/HFがほぼ1.5であり、交感神経と副交感神経は理想的なバランスを保っていた。一方、男性、BMI22以上、運動習慣なしの群ではやや高い傾向にあり、これら環境要因との関わりが示唆された。急性のストレス負荷に対して、心拍数を除けば大きな変動はなく、平均としてみた場合には安定した指標として把握が可能と考えられた。近年、欧米の研究を中心に循環器疾患や糖尿病の発症機序として自律神経系機能の影響が注目されている。わが国においても安静時心拍数が死亡のリスクになることが確認されており、この両者には自律神経系機能の関わりが推察された。そこで、本研究は地域一般住民を対象に自律神経系機能と耐糖能異常との関連について検討することを目的として実施した。本年度は愛媛県T市において糖尿病治療中を除く439人(男性126人、女性313人、平均年齢63.1歳)に対し、自律神経系機能評価と75gぶどう糖負荷試験による耐糖能異常についての評価を行い、様々な交絡要因を含めた関連について分析を行った。なお、本研究計画は愛媛大学の医の倫理委員会の承認を受けて実施している。自律神経系機能評価は、TAS-9を用い、しばらくの安静の後、座位にて5分間示指から脈波を解析し、時間領域分析とスペクトラム解析による周波数領域分析を行った。性年齢調整後の相関分析の結果、SDNN、並びにHRV indexと空腹時血糖値、負荷後1時間血糖値との間に有意な負の関連を認めた(偏相関係数=-0.10-0.15)。周波数領域分析の指標であるLF/HF等との関連は認めなかった。また、安静時の心拍数は空腹時インスリン値、負荷後1時間インスリン値と有意な正の相関を認めた。肥満の有無で層別化したところ、非肥満群でこれらの関連がやや強く認められた。これまでの報告からSDNN、HRV indexの低下は循環器疾患発症リスクになるが、日本人の集団においても、これらの指標が空腹時血糖や負荷後1時間血糖値の上昇に関与していることが示唆された。今後、調査対象者数を増やし、社会環境要因を含めた分析が必要である。欧米の疫学研究から循環器疾患や糖尿病の発症機序として自律神経系機能が関与していることが報告されてきた。また、わが国の前向き研究から安静時心拍数が死亡のリスクになることが確認されているが、自律神経系機能を観察.した疫学研究はほとんど見あたらない。

そこで、地域一般住民を対象に、自律神経系機能と耐糖能異常との関連について検討した。平成2122年度、愛媛県T市において糖尿病治療中、安静時心電図検査から不整脈を除く1032人(男性329人、女性703人、平均年齢59.7歳)に対し、自律神経系機能検査と75gぶどう糖負荷試験による耐糖能の評価を行い、交絡要因を含めた関連について分析を行った。なお、本研究計画は愛媛大学の医の倫理委員会の承認を受けて実施している。自律神経系機能評価は、TAS-9を用い、安静の後、座位にて5分間示指から脈波を解析し、時間領域分析とスペクトラム解析による周波数領域分析を行った。自律神経系機能の指標としては、SDNN、rMSSD、HRV index、Ln LF、Ln HF、Ln LF/HFを用いた。性、年齢、ならびに安静時心拍数を調整後の相関分析の結果、空腹時血糖、負荷後1時間血糖値、負荷後2時間血糖値とSDNN、rMSSD、HRV index、Ln HFとの間に有意な負の関連を認めた(偏相関係数=-0.66-0.117)。また、空腹時、ならびに負荷後インスリン値とも有意な関連を認めたが、血糖値に比べると若干相関係数は小さくなった。糖負荷試験に基づく糖尿病型に対する性、年齢、心拍数調整済みオッズ比は、SDNNやHRV indexの値が大きくなるに従って有意に低下した(第一四分位に対する第4四分位のオッズ比はSDNN=0.39、HRV index=0.46)。BMI、拡張血圧、降圧薬内服有無、身体活動量、喫煙、飲酒を調整した後もこの関連は有意であった。地域での疫学研究から、横断的研究ではあるがSDNNやHRV indexを指標とする自律神経系機能が耐糖能に関連していることが示唆された。
19世紀後半から20世紀初期ロシアにおける文学生産の場の社会史的研究

本研究は、19世紀後半から20世紀初頭のロシアに起こった文学生産の場の大きな変容を確認し、それが当時の文学や文化にもたらした影響を考察することを目的としている。なぜなら、モダニズムにいたるロシア文化史の大きな変化の背後には、読書行動や識字率、教育、出版、文学研究など、文化の再生産システムの大規模な変動があると考えられるからである。この目的のために、とくに三つの視点を重視した。(1)文学研究の変化と流行、(2)文学教育の変容、(3)出版・ジャーナリズムと読書行動、である。(1)についてはプイピン、ヴェンゲーロフらの文学史研究と文学の国民化との関係を指摘した。(2)については、ロシアの中等教育のカリキュラムから当時の文学教育の変遷をあとづけ、それが読者の増大や文学の国民化と関連していることを確認した。(3)については、民衆の読書教育と、当時の読書行動研究を検討し、文学が大衆化される過程をあきらかにした。本年度の研究実績としては、おもに19世紀後半から20世紀初期ロシアにおける、普通義務ギムナジアでの文学教育カリキュラムおよび教育制度改革にかんする調査をおこない、また教育関係者、文学研究者、政府、言論界における文学教育に関する言説についての資料収集、調査をおこなった。それによって、この時期にロシアの教育界、言論界で、文学の歴史的教育の必要性が次第に叫ばれるようになったこと、そしてその背景に、文学によるナショナリズムの涵養や文学そのものの一般への普及があることが裏付けられた。この結果は原稿用紙約120枚の論文としてまとめ、北海道大学スラブ研究センターの学術誌「スラヴ研究」に投稿し、すでに原稿審査をパスして掲載が決定している(2006年5月刊行予定)。また、同じ時代の読書史、読者研究、出版・ジャーナリズム史にかんする資料収集を開始し、この時代に文学が実際にどう読まれていたのか、あるいは人々にどのような文学を読ませようとしていたのか、といった問題について検討をはじめた。とくに19世紀末に多数現れた民衆読書の研究にかんする資料を精力的に集め、ルバーキン、アルチェフスカヤ、プルガーヴィン、アン-スキイら、ナロードニキ運動以後の主要な読書研究に関する資料を入手し、労働者や農民の読書行動と、そうした民衆に古典文学を読ませるためのさまざまな研究について検討した。現在さらなる資料収集、読解と、その結果の整理を行っている。本年度は、主として19世紀後半から20世紀初期のロシアにおける民衆への識字・読書教育に関する資料の収集や、すでに収集したマイクロ資料のプリント化をおこない、それらの資料の読解をとおして、この時期のロシアにおいて「文学」が教育を通して大衆的に浸透してゆく過程を明らかにした。1860年代のゼムストヴォや70年代のナロードニキの活動家、民間の識字教育者、とりわけ、オストロゴルスキイ、アルチェフスカヤ、アン...スキイ、プルガーヴィン、ルバーキンによる、初期の読書研究を参照することで、1880・90年代に読書行動の大きな転換が始まったことが明らかになった。こうした研究成果は、2006年12月13-15日に北海道大学スラブ研究センターで行われた国際シンポジウム「2006Winter International Symposium"Beyond the Empire : Images of Russia in the Eurasian Cultumal Context"」においてロシア語で発表されたまた、2007年3月3-4日、北海道大学スラブ研究センターで行われた、科研費共同研究「スラブ・ユーラシアにおける東西文化の対話と対抗のパラダイム」/19世紀研究会/目本学術振興会研究プロジェクト「越境と多文化」の合同研究会「文化研究と越境:19世紀ロシアを中心に」において、この2年の研究成果を総合した「19世紀後半のロシアにおける文学教育・読書教育の展開一学校教育と民衆読書」と題する発表をおこなった。今年度は引き続き帝政末期ロシアの民衆読書教育と出版ジャーナリズムについての資料収集および読解をおこなった。民衆への識字教育の過程で、ロシアの近代文学作品に特別な価値が見出され、また民衆向け出版物とエリート知識層向けの出版物が1880-90年代を境にその境界をあいまいにし、文学の大衆的普及が進んだことが明らかとなった。また2008年3月、モスクワにおいてメディア関係資料の収集をおこなった。民衆読書教育や雑誌と読者の関係にかんする研究成果として、下記の成果を発表した。「革命前ロシアの民衆読書教育と国民意識形成-1870年代から20世紀初頭」

『21世紀COEプログラム「スラブ・ユーラシア学の構築」研究報告集No.23文化研究と越境:19世紀ロシアを中心に』北海道大学スラブ研究センター、2008年2月、pp.1-19.「厚い雑誌の興亡」-一九世紀の雑誌読者」大江健三郎ほか『21世紀ドストエフスキーがやってくる』集英社、2007年6月、pp.265-270.「ナショナリズムと帝国支配を超えて-イルホム劇場『コーランに倣いて』のなかのプーシキン」『舞台芸術』12号、2007年10月pp.114-120.
霊長類胚性幹細胞(ES細胞)を用いた選択的成熟赤血球産生の基盤技術開発

ヒトと類似する点が多いカニクイザルから樹立されたES細胞を用い、選択的に成熟赤血球を大量産生するin vitroでの培養システムの開発を試みた。カニクイザルES細胞とマウスストローマ細胞株であるOP9細胞とを共培養し、6日目に出現する早期造血前駆細胞であるvEGFR-2high CD34+細胞をセルソーターを用いて単離した。純化したVEGFR-2high CD34+細胞は、赤血球に特異的に作用するサイトカイン(EPO、IL-3、SCF、TPO)存在下に再びOP9ストローマ細胞上で培養し、出現する血液細胞を経時的に解析した。浮遊細胞中には培養12日目と30日目をピークとした血球産生が観察され,その90%以上は赤血球であり、赤血球の約1割は脱核した成熟赤血球であった。胚型(ε、ζ)、胎児型(γ、α)、成体型ヘモグロビン(β)の各抗体を用いた免疫染色またはリアルタイムRT-PCRの継時的解析により出現した赤血球のヘモグロビンの発現パターンを継時的に解析すると、後期の赤血球産生に一致して胚型グロビン(ε、ζ)の発現低下と成体型グロビン(β)の発現上昇を認め、in vivoにおける一次造血から二次造血への赤血球造血の移行を再現していることが明らかとなった。一方、ストローマ細胞に付着した造血前駆細胞からは一次・二次造血由来のコロニーが順に出現していた。個々の赤血球系コロニーのヘモグロビンの発現パターン解析から、胚型・成体型グロビン遺伝子の発現レベルの変化が二次造血由来の個々のコロニー内で既に起こっていることが明らかとなった。この培養システムはヒトES細胞を用いた輸血可能な成熟赤血球のex vivo増殖の基盤技術開発において有用であると考えられた。霊長類ES細胞を血管内皮増殖因子(VEGF)存在下でM-CSF機能的欠損マウス由来のストローマ細胞株OP9の上で共培養し、6日後に出現する造血前駆細胞である血管内皮増殖因子受容体(VEGFR)-2強陽性、CD34陽性細胞をフローサイトメトリーを用いてソーティングした。以後は得られた前駆細胞を赤血球の増殖・成熟に作用するサイトカイン(EPO、IL-3、SCF、TPO)存在下でOP9細胞上にまき直し、出現する血液細胞の特性を経時的に解析した。浮遊細胞中には培養12日目と30日目をピークとした血球産生が観察され、その90%以上は赤血球で構成されていた。培養18日目以降より赤血球の最終分化過程である脱核を終了した赤血球も出現した。免疫染色およびリアルタイムPCRによるヘモグロビンに対する経時的解析では、後期の赤血球産生に一致して胚型グロビン(ε、ζ)の発現低下と成体型グロビン(β)の発現上昇を認め、卵黄嚢(一次造血)から胎児肝(二次造血)の赤血球造血を再現していることが明らかとなった。付着血液細胞を用いたコロニーアッセイにおいても一次・二次造血由来のコロニーが順に出現することを確認した。OP9細胞の共培養システムと細胞選別システムの併用により、霊長類ES細胞から比較的純化された成熟赤血球の分化誘導が可能になった。今後は,赤芽球系前駆細胞をさらに純化し、機能的に成熟した大量の成体型赤血球のみを選択的に増殖する培養方法を検討していく予定である。
口腔扁平上皮癌特異的細胞障害性Tリンパ球による腫瘍免疫遺伝子活療

口腔癌を含む頭頚部癌においても、腫瘍特異的CTL誘導の試みが行われたが、CTL誘導は容易ではない。また、CTL誘導成功例のほとんどは細胞源として、腫瘍浸潤リンパ球を用いており、末梢血リンパ球からのCTL誘導の報告はほとんどない。口腔癌を含む多くの固型癌細胞において、CD80の発現はほとんど認められず、がん細胞に対するT細胞反応を惹起できない理由として、このCD80の欠如が考えられる。そこで、ヒトCD80遺伝子を口腔から扁平上皮癌細胞に導入し、人為的にCD80分子を発現させることによる末梢血リンパ球からの腫瘍特異的CTL誘導の可能性につき検討し、以下の知見が得られたので報告する。1、口腔癌細胞において、抗腫瘍免疫反応に関わる細胞表面抗原を調べたところ、MHC class IおよびCD54の十分な発現を認めたが、CD80の発現は欠如していた。2、アデノウイルスベクターを用いることにより、短時間で高効率かつ充分量のCD80分子の発現を得ることができた。3、同種末梢血リンパ球からは、悪性黒色腫においてCD80遺伝子導入の効果を見ることができたが、口腔扁平上皮癌においては効果を認めることができなかった。4、口腔癌患者末梢血リンパ球から、CD80遺伝子導入自家癌とIL-12およびIL-2の組み合わせで自家癌に対する腫瘍特異的CTLを誘導することができたが、十分な細胞数の確保が困難であった。今後以上のことを念頭に、さらに効果的な遺伝子やサイトカインとの組み合わせが口腔癌特異的CTL誘導には必要と考えられる。腫瘍特異的細胞障害性Tリンパ球(CTL)を効果的に誘導するために、接着分子のなかでもT細胞の抗原特異的な活性化に重要な共刺激分子(co-stimulatory)分子であるCD80分子の遺伝子導入を行った。ヒト口腔癌やメラノーマの培養腫瘍細胞株にアデノウィルスベクターを用いてCD80遺伝子を導入し、CD80高発現癌細胞を得た。抗腫瘍サイトカインであるIL-12存在下で、このCD80高発現癌細胞と健常人あるいは患者末梢血Tリンパ球を初期培養(45日間)後、IL-2を添加して1014日間培養し、in vitroで腫瘍特異的CTLの誘導を試みた。誘導したCTLを用いて遺伝子非導入親細胞株である口腔偏平癌細胞株、メラノーマ、K562、Daudiに対する抗腫瘍活性を51Cr遊離試験にて測定した。アロタイプの腫瘍特異的CTLの抗腫瘍活性は、メラノーマ細胞株に対しては、CD80遺伝子導入した腫瘍細胞と共培養して得られたCTLで細胞障害活性の増強が顕著に認められた。また、CD80遺伝子導入した腫瘍細胞とIL-12存在下で共培養して得られたCTLでは抗腫瘍活性はさらに増強した。偏平上皮癌細胞株に対しては、CD80遺伝子導入した腫瘍細胞と共培養して得られたCTLでは細胞障害活性の増強がみられず、CD80遺伝子導入した腫瘍細胞とIL-12存在下で共培養して得られたCTLで細胞障害活性の増強が認められた。CD80遺伝子導入した細胞と共培養して得られたCTLの抗腫瘍活性は、IL-12の存在により増強するという相乗効果が確認できた。この系に抗CD3抗体や抗CD8抗体などを加えた阻害実験や、K562、Daudiを用いることにより、誘導されたCTLがスペシフィクなCTLとは言い難いものであった。我々は口腔扁平上皮癌細胞へのCD80遺伝子導入あるいは抗腫瘍免疫増強サイトカインであるIL-12との併用においてin vitroにおける抗腫瘍CTL誘導効果について検討したので報告する。口腔扁平上皮癌培養細胞株の抗腫瘍免疫反応に関わる細胞表面抗原をFACSにより解析した結果、ほとんどの細胞で十分なclassI,ICAM-1の発現を認めたが、CD80の発現は欠如していた。そこでこれらの腫瘍細胞にCD80遺伝子導入を試みた。遺伝子導入の方法としてはアデノウイルスベクターを用いた。

細胞により差はあるが、高効率でCD80遺伝子導入をすることができた。さらに、CTL誘導を増強できるサイトカインであるIL-12存在下に初期培養し、その後、低濃度IL-2(20U/ml)を添加し、さらに培養を続けCTL誘導を試みた。alloリンパ球を使用した、口腔扁平上皮癌細胞では、CD80とIL-12の併用で始めて活性の増強を認めましたが、腫瘍特異的とは抗CD3抗体等の阻害実験から言いがたいものであった。現在autoリンパ球を用いて検討中である。口腔癌を含む頭頚部癌においても、腫瘍特異的CTL誘導の試みが行われたが、CTL誘導は容易ではない。また、CTL誘導成功例のほとんどは細胞源として、腫瘍浸潤リンパ球を用いており、末梢血リンパ球からのCTL誘導の報告はほとんどない。口腔癌を含む多くの固型癌細胞において、CD80の発現はほとんど認められず、がん細胞に対するT細胞反応を惹起できない理由として、このCD80の欠如が考えられる。そこで、ヒトCD80遺伝子を口腔扁平上皮癌細胞に導入し、人為的にCD80分子を発現させることによる末梢血リンパ球からの腫瘍特異的CTL誘導の可能性につき検討し、以下の知見が得られたので報告する。1、口腔癌細胞において、抗腫瘍免疫反応に関わる細胞表面抗原を調べたところ、MHC class IおよびCD54の十分な発現を認めたが、CD80の発現は欠如していた。2、アデノウイルスベクターを用いることにより、短時間で高効率かつ充分量のCD80分子の発現を得ることができた。3、同種末梢血リンパ球からは、悪性黒色腫においてCD80遺伝子導入の効果を見ることができたが、口腔扁平上皮癌においては効果を認めることができなかった。4、口腔癌患者末梢血リンパ球から、CD80遺伝子導入自家癌とIL-12およびIL-2の組み合わせで、自家癌に対する腫瘍特異的CTLを誘導することができたが、十分な細胞数の確保が困難であった。今後以上のことを念頭に、さらに効果的な遺伝子やサイトカインとの組み合わせが口腔癌特異的CTL誘導には必要と考えられる。
超音波画像解析装置を用いた原発閉塞隅角緑内障、隅角の評価

杏林大学附属病院眼科緑内障外来を受診した患者から原発閉塞隅角緑内障(PACG)、狭隅角眼、Plateau iris syndrome(PIS)と診断された患者を選択し、ハンフリー社製Ultrasound Biomicroscope model 840(UBM)を用い隅角の生体観察および記録を行った。解析可能であった症例は9例15眼(男性1例2眼、女性8例13眼)であり、年齢は33歳から75歳、平均57.2歳であった。内訳はPACG急性発作の僚眼2例2眼、慢性原発閉塞隅角緑内障2例2眼、狭隅角眼5例10眼、PIS 2例3眼であった。PACG、狭隅角眼ではレーザー周辺虹彩切開術(LI)以前の状態を、PISはLI後でレーザー隅角形成術以前の状態を対象とした。また、狭隅角眼は暗所における自然散瞳により、少なくとも1ヶ所で隅角閉塞が確認されたものを対象とした。上方、下方、耳側、鼻側の4方向での垂直断層像を記録した。画像から石川らの方法に準じArea0からArea3までの面積を測定、合計をその部位の隅角面積とし、各部位の合計面積の平均を対象眼の隅角の広さとして評価した。面積の測定には我々とウエルシステムで共同開発したUBM専用画像解析ソフト「RATE」を使用した。全体の平均隅角面積は0.076mm^2であり、石川らによる開放隅角眼の測定結果0.427mm^2と比較すると有意に狭かった。今団測定した3群ではPACGが0.066から0.120mm^2、平均0.097mm^2と最も広く、狭隅角眼では0.056から0.112mm^2、平均0.076mm^2、PISでは0.013から0.062mm^2、平均0.043mm^2と最も狭かった。症例数も少なく、比較は困難であるが実際の緑内障発症機転には単に隅角の広狭のみでなく、様々な因子が関与していることが予測された。角膜径、眼軸長、水晶体厚、虹彩厚、虹彩水晶体接触距離等の因子を含めて更なる検討が必要と考えられた。本年度は対象となる患者の選択とその前房隅角の超音波前眼部解析装置・ハンフリー社製Ultrasound Biomicroscope model 840(UBM)による生体観察およびそのデータの記録、保存を主として行った。杏林大学病院附属病院眼科緑内障外来を受診した患者から原発閉塞隅角緑内障(PACG)、狭隅角眼と診断された患者を選択し、可能な症例でUBMを用い隅角の生体観察および記録を行った。症例は9例16眼(男性2例4眼、女性7例12眼)であり、年齢は33歳から75歳、平均57.6歳であった。症例の内訳はPACG急性発作の僚眼2例2眼、慢性原発閉塞隅角緑内障2例3眼、狭隅角眼5例9眼、Plateau iris syndrome(PIS)1例2眼であった。狭隅角眼のうち1例2眼はUBMによる検索によりIncomplete type PISであることが疑われた。更に著明な眼圧上昇により発症した37歳男性例はUBMによりComplete type PISと診断された。レーザー周辺虹彩切開術、レーザー隅角形成術を施行する以前の状態を対象とした。上方、下方、耳側、鼻側の4方向での垂直断層像を基本とし、必要に応じて他の部位の観察、記録を行った。得られた画像データは一旦UBM内蔵のハードディスクに保存、更に光磁気ディスクに出力し保存した。データの記録とともに画像解析を行うためのコンピューターシステムのセットアップを行った。次年度は更に症例数を増やすとともに随時画像解析を進めていく予定である。

今団測定した3群ではPACGが0.066から0.120mm^2、平均0.097mm^2と最も広く、狭隅角眼では0.056から0.112mm^2、平均0.076mm^2、PISでは0.013から0.062mm^2、平均0.043mm^2と最も狭かった。症例数も少なく、比較は困難であるが実際の緑内障発症機転には単に隅角の広狭のみでなく、様々な因子が関与していることが予測された。角膜径、眼軸長、水晶体厚、虹彩厚、虹彩水晶体接触距離等の因子を含めて更なる検討が必要と考えられた。
p53,SCO2による心筋ミトコンドリア好気的エネルギー代謝調節と心筋細胞死

p53により転写制御される細胞内シグナルとしてTIGAR(TP53-Induced Glycolysis and Apoptosis Regulator)及びミトコンドリアの構成蛋白であるSCO2(Synthesis of Cytochrome c Oxygenase 2)が、細胞のエネルギー代謝を調節しマウス、ラットを用いて虚血時における心筋の生存に関わっている事を発見証明した。この成果は、今後の臨床治療研究に結びつく。1.心不全モデルを用いたミトコンドリア機能・定量研究および心筋エネルギー代謝の評価アドリアマイシン心筋症モデルにおいて、左室心筋にp53およびSCO2蛋白の発現増強を認めた。心臓超音波検査にて、心機能の低下を認め、上記蛋白の発現増強と時期が一致していた。現在、脂肪酸の代謝と解糖系の代謝の割合及び関与を検討中である。ミトコンドリアの機能は、クラーク型酸素濃度計による酸素消費量測定し、p53, SCO2の発現亢進時に、上昇していた。現在フリーラジカルの関与を検討している。また、Cytochrome Oxidase C complexの酵素活性の上昇、乳酸産生能を低下を認めているが、個体数を増やし追加実験中である。ミトコンドリア膜電位測定は、TMRM染色及びJC-1染色にて行い、現在のところ大きな変化は認めていない。細胞を10-nonyl acridine orange(NAO)により染色しFACSにて解析定量し、ミトコンドリアのバイオジェネシスの影響を検討中である。Real time PCR法を用いて、ミトコンドリア遺伝子であるCOXIと核遺伝子(PPRC1, C17)のDNA量を定量したが、現在検討している範囲内では大きな差は認めていない。電子顕微鏡によるミトコンドリア超微形態も今のところ著変は認めていない。2.p53KOモデルを用いたミトコンドリア機能・定量研究および心筋エネルギー代謝の評価現在、p53野生型、ヘテロ接合体、ノックアウトマウスを用いて、心筋梗塞モデル、糖尿病モデルを作製し、その心筋ミトコンドリア機能解析を前述と同様に行っており個体数を増加している。ミトコンドリアの機能は、クラーク型酸素濃度計による酸素消費量測定し、p53,SCO2の発現亢進時に、上昇していた。また、Cytochrome Oxidase C complexの酵素活性の上昇、乳酸産生能を低下を認めていた。細胞を10-nonyl acridine orange(NAO)により染色しFACSにて解析定量し、ミトコンドリアのバイオジェネシスに影響は無かった。Real time PCR法を用いて、ミトコンドリア遺伝子であるCOXIと核遺伝子(PPRC1,C17)のDNA量を定量したが、有意差は認めなかった。電子顕微鏡によるミトコンドリア超微形態も著変は認めていない。2. p53KOモデルを用いたミトコンドリア機能・定量研究および心筋エネルギー代謝の評価p53野生型、ヘテロ接合体、ノックアウトマウスを用いて、心筋梗塞モデル、糖尿病モデルを作製し、その心筋ミトコンドリア機能解析を前述と同様に行っており、SCO2、TIGARの代謝変化について論文投稿中である。
エキソソームを介したB型肝炎ウイルスの新規感染経路の解析

本研究では、培養細胞系およびB型肝炎ウイルス(HBV)感染モデル動物を用いて、エキソソームを介した新規感染機構の解明、感染性の評価および予防法の確立を目的としている。本研究ではこれまで、エキソソームに内包されたB型肝炎ウイルス(HBV)がウイルス感染個体の血液中に存在し、これらウイルスがHBs蛋白質を標的とした中和抗体に対して抵抗性を示すことを明らかにした。本年度では、エキソソーム内包ウイルスの感染性および予防法を評価すべくHBV感染感受性を示すツパイを用いて実験を行った。まずはツパイへのウイルスの感染性を解析したところ、遺伝子型によってウイルスの感染性が異なったものの、ツパイでの感染が確認された。続いてエキソソームを介した感染の予防法を確立すべく、ツパイにHBs抗原やHBc抗原を各種投与法によって免疫し、誘導される免疫応答の解析を行った。その結果、HBs抗原とHBc抗原を基剤であるカルボキシビニルポリマーと混合し、鼻粘膜投与をすることで、ツパイにおいて強力な中和抗体およびIgA抗体の誘導がみられた。さらに脾細胞を回収し、ウイルス蛋白質で刺激したところ強いIFNg応答が見られたことから、本免疫法によって細胞性免疫が強く誘導されることが示された。エキソソームを介したウイルス感染を防ぐには中和抗体の誘導のみでは十分ではないと考えられることから、本免疫法によって細胞性免疫を誘導することで、エキソソームを介した感染を防げるものであると期待される。感染実験に使用する予定であったツパイの繁殖が想定よりも遅れており、調達が困難であったため。現在、繁殖状況が改善されてきていることに加えて、中国からの輸入の目途もたったことから、次年度は研究の遂行ができるものと考えられる。今後は当初の予定に従い、ウイルス感染モデル動物であるツパイなどを用いてHBVにおけるエキソソームを介した感染を予防するワクチンの確立を試みる。本年度の研究成果を基に、エキソソームに内包されたHBVの感染機構を詳細に明らかにし、HBVの感染環における役割の解明を試みる。先の研究で、培養細胞系において、HBVの遺伝子およびウイルス蛋白質がエキソソームに内包されており、さらにウイルスとして肝細胞への感染性を有することを見出した。このことは、エキソソームを介したHBVの感染が動物レベルでも起こりうることを示唆している。本研究では、培養細胞系およびHBV感染モデル動物を用いてエキソソームを介したHBVの新規感染機構の解明および感染性の評価を目的としている。平成29年度はHBVを感染させたヒト肝臓置換キメラマウスを用いて、生体におけるエキソソームに内包されたHBVの解析を行った。HBV感染キメラマウスの血清よりエキソソームを抽出し、解析を行ったところ、感染個体のエキソソームよりウイルスの遺伝子が検出された。さらにこのエキソソームを肝細胞へ接種すると、ウイルスが肝細胞に接着することが明らかとなった。またHBVに対する中和抗体を用いた中和試験を行ったところ、エキソソーム画分ではないウイルスの肝細胞への接着は中和抗体によって阻害されたの対して、エキソソームを介したHBVの接着は、中和抗体では阻害されなかった。以上の結果から、生体においてもエキソソームに内包されたHBVの存在が示された。さらにエキソソームを介した感染を防ぐためには中和抗体のみの誘導では十分ではないと考えられることから、細胞性免疫等を誘導するような新規免疫法の検討をHBV感染感受性動物であるツパイを用いて進めており、良好な結果が得られている。エキソソームを介したHBVの新たなる感染経路は、ウイルスに対する中和抗体を回避する感染機構として重要な意味を持つため、今後のさらなる解析が期待される。HBV感染感受性動物であるヒト肝臓置換キメラマウスの調達に時間を要してしまったため、キメラマウスを用いた研究に関してはやや遅れてしまっている。一方で、エキソソームを介した感染を予防する免疫法の検討はツパイを用いて進めており、当初の予定以上に進展している。

エキソソームを介したウイルス感染を防ぐには中和抗体の誘導のみでは十分ではないと考えられることから、本免疫法によって細胞性免疫を誘導することで、エキソソームを介した感染を防げるものであると期待される。感染実験に使用する予定であったツパイの繁殖が想定よりも遅れており、調達が困難であったため。現在、繁殖状況が改善されてきていることに加えて、中国からの輸入の目途もたったことから、次年度は研究の遂行ができるものと考えられる。これまでに、ウイルス感染個体の血中に存在するエキソソームに、ウイルスが内包されていることが明らかとなった。今後は、ウイルス粒子とエキソソームに内包されたウイルスが感染個体の血中においてどの程度存在し、またそれぞれの他の動物に対する感染性を比較すべく、ヒト肝キメラマウスやツパイを用いて実際に感染実験を行うことで解析する。またエキソソームを介した感染の詳細なメカニズムを培養細胞系を用いて、解析を進める。さらには、予防ワクチンを接種したツパイへの感染実験を行い、エキソソームを介した感染を予防するワクチンの確立を試みる。本年度の研究成果を基に、エキソソームに内包されたHBVの感染機構を詳細に明らかにし、HBVの感染環における役割の解明を試みる。今後は当初の予定に従い、ウイルス感染モデル動物であるツパイなどを用いてHBVにおけるエキソソームを介した感染を予防するワクチンの確立を試みる。使用する動物の調達に時間がかかり、当初予定していた研究の順番を変更したために、次年度使用額が生じた。2018年度は、培養細胞や実験動物を用いた種々の研究に必要な試薬などの購入に使用する予定である。使用する動物の調達に時間を要したため、次年度使用額が生じた。2019年度は、培養細胞や実験動物を用いた種々の研究に必要な試薬などの購入に使用する予定である。
世界把捉の象徴としての芸術-西田およびハイデガ-の「芸術論」研究

本研究の目的は、西田幾多郎およびマルティン・ハイデガ-の思想を、「芸術論」の観点から捉え、双方の「芸術論」の特質を、「世界把捉の象徴として芸術を捉える」、「現代の思想」として規定することにあった。研究代表者は、研究を計画した当初、この規定に基づいて、同一の志向性を有する両者の思想を相互補足的関係の下において見るならば、これらが現代の芸術を正当に解釈する思想として新たに捉えなおされる端緒が開かれるだろう、という予測を立てていた。こうした目的を有する本研究を遂行する上での今年度の実績のひとつとして、これまでの研究代表者の西田哲学研究の成果である、西田哲学をひとつの「芸術論」として見る可能性を問うた小論の独訳を「国際版美学」誌(近日刊行)に投稿したことが挙げられる。しかしながら、西田とハイデガ-の思想を比較するとき、その前提となるべき両者の共通性は、計画当初予想していたほど容易に前提できるものではないことが徐々に明らかとなってきた。たとえば「思想」1995年11月号掲載のE.ヴァインマイヤー氏の論文「西田とハイデッガ--比較哲学の試み-」にも論じられているように、両者が目指す方向性の一致は、なるほどある程度認められるにしても、ロゴスを重視して「哲学から経験へ」と向かうハイデガ-の思想に対して、非哲学的な経験を哲学的に捉えようとして「経験から哲学へ」と向かう西田との間には、乗り越えがたい相違があると言わねばならない。また「存在論的差異」をはじめとし、現象学的に「差異」を問題にする前者に対して、対立する諸項を「矛盾的自己同一」的に一挙に媒介しようとする後者の「同一性」の観念論は、やはり相容れない関係にあると言うべきであろう。こうした相違を相補的関係において単純に総合することは、困難というよりも、むしろ不可能というべきだろう。上述したような本研究の目的を目指すとき、こうした両者の特質の対立関係をどのように捉えるかということがさしあたって問題となる。しかし、限られた時間と研究代表者の力量不足により、この問題は遺憾ながら今年度中に結論を見るには至らなかった。したがって、本研究代表者に課せられた今後の課題は、西田とハイデガ-の思想の対立的要素を調停しうる理論を展開することにより、本研究の方向を継承するか、あるいは問題設定を立て直してその方向を転じるか、いずれかの道を選択するということになろう。いずれにせよ、本来の意味での研究の実績は今後の研究に委ねられているといわざるをえない。
医療におけるサービス品質の測定と品質マネジメントへのフィードバックモデルの研究

患者による医療品質評価の最大のメリットは、受益者としての実際的な視点が取り入れられることである。また近年では、薬剤による副作用や、医療技術の進展に伴うブラックボックス化の中で、患者への侵襲が少ない代替補完医療や標準治療から外れる治療にも期待が高まっている。そこで本研究では、主としてかかる領域に焦点を当て、患者視点から医療サービス品質について調査・検討を行った。その結果、従来行われてきた病院機能に対する医療提供者側の自己評価や、専門家集団による第3者評価等によっては判断できない医療サービスの側面において、患者満足に影響すると考えられる各種の課題があることが明らかとなった。本研究の目的は、医療分野におけるサービス品質の測定尺度を精緻化し、当該分野のサービス品質測定尺度モデルを構築すること、測定結果のマネジメントへのフィードバックと、改善のための具体的方策を検討し、そのモデルを構築することである。平成25年度は、まず先行研究として、医療分野における品質測定尺度の収集・分類・整理を行った。Donabedianによれば、医療の質は、単純化すると「技術的要素」「人間関係的要素」「アメニティ」に分類できる。このうち「人間関係的要素」と「アメニティ」は患者側からの評価を前提とした質の要素であり、医療の究極的な質は、健康水準の向上と患者の満足を達成することである。患者による医療品質評価の最大のメリットは、従来行われてきた病院機能に対する医療提供者側の自己評価や、特定の専門家集団による第3者評価等によっては判断できない医療サービスの側面について、受益者としての実際的な視点が取り入れられることである(大和田他)。「医療技術」に関する病理学的知識を持たない患者にとって、臨床上の診断に関する専門的立場からの評価は不可能であっても、治癒感や術後経過等について、自身の体調に基づいた判断は可能である。また、「人間関係」は、医療提供者側の一方的な情報のみで評価すべき要素ではなく、患者を交えた双方の見解の比較が重要である。さらに、近年「アメニティ」は、本質的な医療サービスに対する周辺部のサービスとして、患者の嗜好や選択に基づく評価が注目されつつある。これらをふまえ、患者満足を中心に多角的な視点から測定尺度の検討を行うとともに、測定結果をマネジメントに対してどのようにフィードバックし、改善につなげるかという具体的方策に関する検討を行った。また、それらの検討結果をふまえつつ、ガイドラインに基づく標準治療を提供する機関と、独自の治療を提供する機関とにヒアリング調査を実施した。本研究の目的は、医療分野におけるサービス品質の測定尺度と、測定結果のフィードバック及び改善のための方策について検討し、そのモデルを提示することである。平成26年度は、前年度の先行研究をふまえながら、癌患者の支援活動等を行っている民間団体の協力を得て、患者視点からの医療サービス品質評価について検討を実施した。患者による医療サービス品質評価の最大のメリットは、従来行われてきた病院機能に対する医療提供者側の自己評価や、特定の専門家集団による第三者評価等によっては判断できない医療サービスの側面について、受益者としての実際的な視点が取り入れられることにある。病理学的知識を持たない患者にとって、専門的立場からの評価は不可能であったとしても、治癒感や術後経過等について、自身の体調に基づいた判断は可能である。当事者不在の医療や、技術・機器の進展によるブラックボックス化を防ぐといった観点からも、医療品質評価に患者視点を取り入れることが求められる。他方、現在の医療機関では、ガイドラインに基づく標準治療がほぼ一律に行われることが少なくない。ガイドラインに基づく標準治療の確立により、地域や医療機関による医療品質の差は格段に小さくなった。しかし、患者の状況等は千差万別であり、ガイドラインに基づく標準治療が全ての患者に適合するものではない。また、現状では非標準治療であるものが、将来的には標準治療になること(あるいはその逆)も生じ得る。これらのことから、医療サービス品質の評価は、標準治療のみならず、非標準治療も念頭において行われるべきものと考えられる。以上をふまえ、非標準治療が抱える様々な課題や問題などを考慮しながら、非標準治療にも適用可能な、患者視点による医療サービス品質評価について、患者とともに検討を進めた。現在の医療機関では、科学的根拠に基づくガイドラインにより、ほぼ一律の標準治療が行われることが少なくない。標準治療の確立により、地域や医療機関による医療品質の差は格段に小さくなった。他方、我が国では医療費の高騰が国家的な課題となっている。また、薬剤による副作用や医療技術・機器の進展によるブラックボックス化の中で、医師や医療に対する不信感の増大も指摘されている。かかる状況の中、医療における諸問題を解決し、医療サービス品質の向上に貢献するものとして、患者への侵襲が少なく、全人格的な医療を目指す、代替補完医療への期待が高まっている。一方、代替補完医療の中には、現代西洋医学を完全否定するもの、超自然主義を唱えて科学的根拠のない治療法を押し付けるもの、がんビジネスと呼ばれるものが含まれていることも否定できない。そこで最終年度は、代替補完医療に焦点を当て、終末治療等における医療サービスの質やQOLについて患者視点を取り入れながら議論を進めた。まず、代替補完医療に含まれる医療サービスを提供している医療機関など5団体に対してヒアリング調査を行った。ここでは、欧米と比較した場合の我が国における代替補完医療の研究や政府の取り組みに関する問題、医療者の地位の問題や経営上の問題が共通して指摘された。患者側については、代替補完医療を導入している11名のがん罹患者に対してロングインタビューを実施した。

ここでは、情報の問題、家族や仕事の問題、金銭的負担の問題などが明らかとなった。同時に、従来行われてきた病院機能に対する医療提供者側の自己評価や、特定の専門家集団による第三者評価等によっては判断できない医療サービスの側面について、受益者としての実際的な視点から検討することができた。患者による医療品質評価の最大のメリットは、受益者としての実際的な視点が取り入れられることである。また近年では、薬剤による副作用や、医療技術の進展に伴うブラックボックス化の中で、患者への侵襲が少ない代替補完医療や標準治療から外れる治療にも期待が高まっている。そこで本研究では、主としてかかる領域に焦点を当て、患者視点から医療サービス品質について調査・検討を行った。その結果、従来行われてきた病院機能に対する医療提供者側の自己評価や、専門家集団による第3者評価等によっては判断できない医療サービスの側面において、患者満足に影響すると考えられる各種の課題があることが明らかとなった。平成25年度は、研究計画として掲げた、医療分野における品質測定尺度の収集・分類・整理、患者満足を中心とした多角的な視点からの品質測定尺度の検討、品質マネジメントへのフィードバックに関する検討を、ほぼ予定通り実施できた。平成26年度は、平成25年度に実施した先行研究の結果をもとに検討を進め、研究対象等をより具体的に絞り込んだ。非標準治療が抱える様々な課題や問題などを考慮しながら、非標準治療にも適用可能な、患者視点による医療サービス品質評価(測定方法)について検討するため、実際に非標準治療を受けた患者とともに議論を進めることができた。医療サービス・マネジメント上半期で(9月を目途に)、非標準治療を受けた患者に対するロングインタビューを完了し、10月・11月に、テキストマイニング等を用いた解析を実施する。また、必要に応じてアンケート調査等も行う。その後、12月・1月で研究成果をまとめ、2月・3月に研究成果の報告を行う予定である。ただし、非標準治療を受けた患者の中には、再発・転移によって当該治療を選択した人も少なくないことから、患者に負担がかからないよう(特にロングインタビューの実施においては)最善の注意を払うこととする。平成25年度の研究計画として掲げた、医療分野における品質測定尺度の収集・分類・整理、患者満足を中心とした多角的な視点からの品質測定尺度の検討、品質マネジメントへのフィードバックに関する検討が、ほぼ予定通り実施できた。加えて、ガイドラインに基づく標準治療を提供する医療機関と、独自の治療を提供する医療機関に対し、EBM・NBMの観点から、ヒアリング調査も実施できた。非標準治療が抱える様々な課題や問題などを考慮しながら、非標準治療にも適用可能な、患者視点による医療サービス品質評価(測定方法)について検討するため、実際に非標準治療を受けた患者を研究調査の対象とした。
転写因子の標的遺伝子及び生物作用の個体レベルでの解析

多細胞生物における高次生命現象の分子的基盤を理解するためには、転写因子レベルでの遺伝子発現調節機構を解明することが不可欠である。個体発生や細胞系列の分化などを分子レベルで理解するために、本研究では発生・分化を時間軸に沿った遺伝子発現カスケードの流れとして捉え、転写因子がそれぞれの細胞系列、発生時期で細胞増殖・細胞死・分化などにどのように関与しているかを検討した。具体的には、以下のような研究結果を得た。1.コリプレッサーSkiの関連遺伝子産物Snoの変異マウスを作製・解析し、もともと発がん遺伝子産物として見い出されたSnoががん抑制因子としても機能することを明らかにした。2.促進性bHLH型転写因子Math3とMash1はニューロンへの分化決定因子として機能することが明らかになった。両者はお互いに補いあって幹細胞からニューロンへの運命決定を行うことが明らかとなった。3.転写因子Pitx2の発現は左側でのみ発現するが、この左側特異的なな発現はNodalシグナル伝達経路によって誘導され、転写因子NkxZによって維持されることが明らかにされた。4.lRF-1は新規の高発がん感受性遺伝子であるが、癌抑制に関わるlRF-1及びp53の標的遺伝子の同定を進め、その過程でp53依存性に転写誘導される新規遺伝子Noxaを単離した。5.遺伝子制御領域内のGATA配列を認識するDNA結合蛋白GATA-3はそのアセチル化状態が変化することにより生体内でのT細胞の生存およびホーミングを制御することが示された。6.転写因子小Maf群因子が,その存在量により,MAREを介する転写を正にも負にも制御し得ることが,トランスジェニックマウスと遺伝子破壊マウスを用いて巨核球における小Maf群因子の発現量を操作することにより,証明された。発生や細胞の分化・機能発現の際の遺伝子の発現制御には、多くの転写因子が関わっており、メディエーターを含めたそれらの間の相互作用及び基本転写装置との相互作用による転写開始複合体の形成によって転写が開始されると考えられている。個体発生や細胞系列の分化など複雑な高次生命現象を分子レベルで理解するために、本研究では発生・分化を時間軸に沿った遺伝子発現カスケードの流れとして捉え、転写因子がそれぞれの細胞系列、発生時期で細胞増殖・細胞死・分化などにどのように関与しているかを検討し、具体的には以下のような研究成果を挙げた。(1)転写コアクティベータ-CBPのショウジョウバエ及びマウス変異体を作製・解析し、CBPの形態形成における役割を明らかにした。(2)ヘリックス・ループ・ヘリックス(HLH)型転写因子Math3のノックアウトマウスを作製・解析し、Math3が網膜発生に関与することを明らかにした。(3)転写因子PEBP2のβサブユニットのターゲティング・マウスの解析により、胎仔肝におけるデフィニティブな造血能の発生に必須の機能を担っていることを明らかにした。(4)早期老化の症状を示すマウス変異体を分離し、その原因遺伝子Klothoから膜蛋白質及び分泌型蛋白質が産生されることを明らかにした。(5)ニワトリ胚の神経性網膜細胞の培養系において、L-mafの強制発現により水晶体分化を誘導できることを証明した。(6)GATA-1遺伝子を新たに開発したノックダウン法で部分的に破壊することに成功した.その形質が生殖細胞系列に伝播したマウスの解析から,GATA-1が胎児型および成人型造血のそれぞれに必須であることを実証した。

個体発生や細胞系列の分化などを分子レベルで理解するために、本研究では発生・分化を時間軸に沿った遺伝子発現カスケードの流れとして捉え、転写因子がそれぞれの細胞系列、発生時期で細胞増殖・細胞死・分化などにどのように関与しているかを検討した。具体的には次の3項目を中心に研究を行った。1)生体機能発現における転写因子の重複利用と多重制御2)生体機能発現における転写因子機能の階層性と転写因子の標的遺伝子3)人為的操作を行った個体を用いた生体機能発現における転写機能の解析。その結果、水晶体形成においては転写因子L-Marが決定的な役割を果たすことを明らかにした。また、腸管形成に重要な役割を果たす新たなホメオドメイン蛋白質をショウジョウバエの遺伝学的手法を用いて同定した。そして、酸化ストレス応答には転写因子Nrf2とその制御因子Keaplが重要な役割うを果たすことを明らかにした。またがん遺伝子産物Evi-1がTGF-βシグナル伝達系において必須の転写因子Smad3に結合してその機能をい抑制することを明らかにした。さらに、skiがん遺伝子産物が転写仲介因子コリプレッサーと結合してヒストンデアセチラーゼと複合体を形成することを明らかにした。多細胞生物における高次生命現象の分子的基盤を理解するためには、転写因子レベルでの遺伝子発現調節機構を解明することが不可欠である。具体的には、以下のような研究結果を得た。1.Skiがん遺伝子産物が種々のコリプレッサーやヒストンデアセチラーゼと複合体を形成し、多様なリプレッサーによる転写抑制に必須であることを見い出した。2.BHLHタイプの転写因子Heslの欠損マウスを解析し、Notch-Heslが活性化されるとT細胞が分化し、Notch-Heslが活性化されないとB細胞が分化することが示された。3.転写因子IRF-l欠損マウスでは自然発癌の発見は上昇しないが、Ha-ras遺伝子のトランスジェニックマウスやp53欠損マウスと掛け合わせマウス腫瘍発生の頻度が著明に上昇する事を見出した。このことから、IRF-lが新規の高発がん感受性遺伝子であることを明らかにした。4.lefty-2とnodal遺伝子の非対称な発現を制御するエンハンサーへ結合する転写因子として、FASTを同定した。この転写因子は両側に存在するが、左側において何らかのシグナルにより機能が活性化されていると推定された。5.T boxを含む転写因子Tbx5とTbx4がニワトリにおいて羽と脚を形成する特異性を決定していることを見い出した。6.抗酸化剤に応答して転写活性化因子Nrf2に結合して、Nrf2を細胞質に停める役割を果たす阻害因子Keapを同定した。多細胞生物における高次生命現象の分子的基盤を理解するためには、転写因子レベルでの遺伝子発現調節機溝を解明することが不可欠である。
変異原性ヌクレオチド存在下における真核細胞DNA合成抑制に関する研究

生体内活性酸素によって生ずる変異原性ヌクレオチドアナログの一つである8-oxo-dGTPの真核細胞DNA複製に及ぼす影響を、1本鎖DNAを鋳型としたアフリカツメガエル卵無細胞系をS期におけるDNA鎖合成のモデルに用いて解析した。その結果、8-oxo-dGTP存在下では非存在下と比較してDNA合成量が著しく減少することが明かとなった。又、タンパク質りん酸化酵素阻害剤(スタウロスポリン)を用いた研究より8-oxo-dGTPによるDNA合成低下にはprotein kinase C様のタンパク質りん酸化酵素の活性化が関与していることが示された。一方、紫外線損傷DNA(UV-DNA)も8-oxo-dGTPと同様にこの系でDNA合成低下を起こすことが明かとなったが、UV-DNAの場合ではprotein kinase C様のタンパク質りん酸化酵素の関与は見られず、むしろPI_3キナーゼ関連キナーゼ活性が重要であることが明かとなった。。以上の結果から、アフリカツメガエル卵無細胞系で見られるDNA合成低下の機構は、8-oxo-dGTPとUV-DNAとでは異なることが示唆された。。その結果、8-oxo-dGTP存在下では非存在下と比較してDNA合成量が著しく減少すること、およびこの合成量低下は合成速度の低下に起因することが明かとなった。又、タンパク質りん酸化酵素阻害剤を用いた研究より8-oxo-dGTPによるDNA合成速度低下にはprotein kinaseC様タンパク質りん酸化酵素の活性化が関与していることが示された。一方、紫外線損傷DNA(UV-DNA)も8-oxo-dGTPと同様にこの系でDNA合成速度低下を起こすことが明かとなったが、UV-DNAの場合ではprotein kinaseC様タンパク質りん酸化酵素の関与は見られなかった。以上の結果から、アフリカツメガエル卵無細胞系で見られるDNA合成速度低下の機構は、8-oxo-dGTPとUV-DNAとでは異なることが示唆された。生体内活性酸素によつて生ずる変異原生ヌクレオチドアナログの一つである8-oxo-dGTPの真核細胞DNA複製に及ぼす影響を、1本鎖DNAを鋳型としたアフリカツメガエル卵無細胞系をS期におけるDNA鎖合成のモデルに用いて解析した。又、タンパク質りん酸化酵素阻害剤(スタウロスポリン)を用いた研究より8-oxo-dGTPによるDNA合成低下にはprotein kinase C様タンパク質りん酸化酵素の活性化が関与していることが示された。一方、紫外線損傷DNA(UV-DNA)も8-oxo-dGTPと同様にこの系でDNA合成低下を起こすことが明かとなったが、UV-DNAの場合ではprotein kinase C様タンパク質りん酸化酵素の関与は見られず、むしろPl_3キナーゼ関連キナーゼ活性が重要であることが明かとなった。。以上の結果から、アフリカツメガエル無卵細胞系で見られるDNA合成低下の機構は、8-oxo-dGTPとUV-DNAとでは異なることが示唆された。