hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
電気刺激を用いた多能性幹細胞からの心筋分化誘導法の開発

1)生後8週齢から20週齢の成ラットから採取して凍結しておいた脂肪組織由来間質細胞を解凍し、直径100mmのポリスチレン製細胞培養用ディッシュに培養した。白金線電極を固定したディッシュを用いて様々な強度およびパターンの電気刺激を細胞に加えて検討した結果、パルス幅10ms以下の電気刺激の極性を毎回交互に出力することで培養液の電気分解などを引き起こさず、長期間の刺激でも細胞に明らかなダメージを与えないことが確認された。2)コンフルエントに培養した脂肪組織由来間質細胞に対して過去の報告などを参考にパルス幅5ms、10Hzの電気刺激を24時間連続で与えたのちにTrizo1でRNAを回収した。半定量的RT-PCR法を用いてmRNAの変化を対照群と比較したところBMP2およびBMP4のmRNA発現増加がみられたことから、脂肪組織由来間質細胞においても他の細胞と同様に電気刺激がBMPシグナル伝達系に影響を与えるものと考えられた。3)上記の条件で24時間の電気刺激を行ったのちに2週間以上培養を継続したところ、ディッシュの一部に筋細胞様集団の形成が認められた。しかしながら免疫組織学的検討等の結果、これらの細胞は心筋よりもむしろ骨格筋細胞に近い性質をもつことが推測された。これらの細胞では明らかな拍動は認められなかったが、同じラットより初代培養を行った骨格筋芽細胞からは自発的に収縮するmyotubeの形成が認められた。過去の報告の中には拍動(自発的収縮)を心筋細胞分化のcriteriaとして用いているものが見られるが、これらの報告の一部には骨格筋様細胞の自発的収縮が含まれている可能性が考えられた。4)最近の報告では心筋分化にはBMPシグナル以外の複合的な要因が重要と述べているものもあり、電気刺激に他のサイトカイン等を組み合わせた分化誘導の方法について研究を継続中である。平成18年度は間葉系幹細胞からの心筋分化誘導を検討するための準備として、必要となる実験系の構築をおこなった。(1)培養細胞に対して電気刺激を効率的かつ定量的に与えるための電気刺激装置を開発するため、当初はガラスディッシュの表面にスパッタリングによって金属薄膜を形成し、その上で各種の細胞を培養して生着率などの評価をおこなった。その結果、線維芽細胞などでは従来のディッシュと比較して大きく劣ることはなかったものの、骨格筋芽細胞および心筋細胞の培養においては細胞の増殖に伴って接着性の低下が観察され、コラーゲンコーティングなどによっても改善がみられなかった。そこで次に、白金線を培養用ディッシュに平行に固定したものを作成し、これを滅菌したのちに骨格筋芽細胞を培養してパルス通電刺激をおこなった。その結果、両電極間に存在する分化した骨格筋線維はほぼ均一に収縮しており、また電界シミュレーションソフトウェアであるMaxwellを使用してディッシュ内の電界分布を検討した結果からも、両電極間にはほぼ均一な電界が存在していると考えられた。現在この細胞培養用ディッシュを使用して、脂肪組織由来間質細胞など各種の細胞に対して様々なパターンの電気刺激をおこない、細胞形態および遺伝子発現の変化を検討している。(2)実際の細胞移植にあたって細胞の生着や拒絶反応の有無などを確認するため、凍結保存してある細胞を解凍したのち、DiIなどで染色をおこない実験動物の骨格筋および心筋に移植した。2週間、1ヶ月後に移植部位の組織を採取し、蛍光顕微鏡による観察で移植細胞の生着を確認した。(3)今後の実験に備えるため実験動物であるラットおよびハムスターから各種の細胞(線維芽細胞、脂肪細胞、骨格筋芽細胞、心筋細胞など)の初代培養によって最適な培養条件の検討をおこなうとともに、凍結保存によるセルバンクの樹立をすすめている。
ニュージーランド沖陸棚堆積物試料を用いた後期新生代汎世界的海水準変動の解析

統合国際海洋掘削計画(IODP)317次航海「ニュージーランド沖海水準変動研究」によって得られた試料について, 1)底棲有孔虫を用いた酸素同位体比曲線と年代モデルの作成,2)底棲化石群集解析による古水深解析,3)粒度分析と堆積相の解析と化学分析を総合した海進海退サイクルの解析,4)浮遊性微化石による海洋環境変動の解析などの分析をおこなった.さらに,それらをもとに海水準変動の時期とその振幅を求めた.求めた海水準変動の振幅は,0.8 Maまでは約50 mの小さい振幅を示すことが多いが(平均63m),0.8 Ma以降は大きくなり最大132m(平均98m)の振幅を示す.統合国際海洋掘削計画(IODP)317次航海「ニュージーランド沖海水準変動研究」によって得られた試料について, 1)底棲有孔虫を用いた酸素同位体比曲線と年代モデルの作成,2)底棲化石群集解析による古水深解析,3)粒度分析と堆積相の解析と化学分析を総合した海進海退サイクルの解析,4)浮遊性微化石による海洋環境変動の解析などの分析をおこなった.さらに,それらをもとに海水準変動の時期とその振幅を求めた.求めた海水準変動の振幅は,0.8 Maまでは約50 mの小さい振幅を示すことが多いが(平均63m),0.8 Ma以降は大きくなり最大132m(平均98m)の振幅を示す.統合国際海洋掘削計画(IODP)第317次航海で得られたコアの内,陸棚斜面の掘削サイト(U1352)の海底下深度0550mの試料に普遍的に含まれる底棲有孔虫(Nonionella flemingi)殻の酸素同位体,炭素同位体測定をおこない,その結果に基づき年代モデルの作成を試みた.分析は高知コアセンターの質量分析計を用いて酸素同位体比,炭素同位体比測定を3回に分けておこなった.その結果,1から1.78Ma(深度200550m)に関しては1万年から5000年間の精度で同位体比変動が求まり,Stage2363までの海洋酸素同位体ステージを認識した.これにより,この区間でMilankovitchスケールの海水準変動を認識することが出来た.さらに,1Ma以前についても同様のスケールで分析が終了し,年代モデルを作成中である.一方,陸棚の2つのサイトのコアについて,底棲有孔虫,貝形虫化石の分析が進み,4Maから1Maの間の古水深変化が明らかになりつつある.さらに,1Maより新しい時代についても検討を進めている.今後、古水深変化と陸上削剥時期などを検討する.粒度分析と堆積相解析の整理は一通り終わり,年代モデルとの総合化に進みつつある.また,U1352コア中の堆積有機物の安定炭素同位体比が有孔虫のδ^<18>0変動と一致していることがわかった.したがって,有機物の安定炭素同位体比が気候変動曲線として使えることで底棲有孔虫が産出しない層準などでも精度高く年代モデルを作成できる.無機化学分析は,分析を開始したところである.また.浮遊性微化石による海洋環境変動の解析については,分担者の須藤の珪藻化石の解析によって,すでにdata reportとして投稿済み.浮遊性有孔虫の解析は陸棚斜面のU1352コア試料について分析をおこなっている.2009年11月から2010年1月に行われた統合国際海洋掘削計画(IODP)317次航海「ニュージーランド沖海水準変動研究」は,陸棚と陸棚斜面の掘削によって浅海域における連続試料(コア)の採取に成功し,陸棚上で中新統まで,陸棚斜面で始新統までのコアを得た.これらの得られた試料について, 1)底棲有孔虫を用いた酸素同位体比曲線と年代モデルの作成,2)底棲化石群集解析による古水深解析,3)粒度分析と堆積相の解析と化学分析を総合した海進海退サイクルの解析,さらに,それらをもとに海水準変動の時期とその振幅を求めた.具体的には,斜面U1352サイト(水深344m)と陸棚U1354サイト(水深113m)のコア試料について,コアの微化石層序と底棲有孔虫の酸素同位体比変動に基づき,1万年精度の年代モデルを作成した.この年代モデルに基づきコア中に認められた7つのシーケンス境界形成の年代と海水準変動曲線中の位置を決定した.最下位のシーケンス境界(PT1)は,陸棚および斜面とも2.7から1.8 Maの間の時間間隙(ハイエイタス)をもち,3次オーダーシーケンス境界で,この時期にみられるユースタシーの長期低下傾向に対応して形成されている.一方,上位の6つのシーケンス境界(PT2から7)は,氷期のMIS54, 22, 16, 12, 8, 6の最も海水準の下がった時に形成されている.

したがって,その形成周期は0.1から0.7 m.y.である.貝形虫化石の分析による古水深変動から求めた海水準変動の振幅は,0.8 Maまでは約50 mの小さい振幅を示すことが多いが(平均63m),0.8 Ma以降は大きくなり,最大132m(平均98m)の振幅を示す.このように,海水準変動の振幅が80万年以降(中期更新世漸移期,MPT)に大きくなったことが実証された.IODP,第317次航海のニュージーランド南島カンタベリー平野沖の陸棚・斜面掘削で得られた試料の分析によって次のことが明らかになった.1.斜面サイトにおける底棲有孔虫を用いた酸素同位体比曲線を掘削深度0から550m区間で5,000年から10,000年の精度で描くことが出来た.その結果,海洋酸素同位体ステージ(MIS)63(1.76Ma)までを見出した.また,同時に深度502510mに180万年から90万年程度の間の地層の欠如(ハイエイタス)が存在しすことがわかった.また,陸棚のU1354についても,酸素同位体比変動曲線を求めた.2.底棲化石群集解析による古水深解析をおこなった.底棲有孔虫化石を用いた解析では,陸棚のU1354コアでは古水深変化が測定された酸素同位体比に基づく氷期間氷期サイクルと対応している.一方,貝形虫化石でも,周辺の現生貝形虫の分布を参考に、古水深を推定した.3.堆積物の有機炭素量と安定炭素同位比分析を斜面サイトコア(U1352B)の深度500mまで約2m間隔で224層準、224試料の分析をおこなった.結果はいずれも海洋酸素同位体ステージとよい対応を示しており,氷期で少ない有機物量と低い安定炭素同位体比、間氷期で高い有機物量と高い安定炭素同位体比をとる.このことから,海洋生産性を左右する海洋変動と海水準変動の関係が考察できる.4.浮遊性微化石解析では,産出・計数した珪藻化石群集を環境指標種群(遠洋性種・沿岸性種・淡水性種および温暖種・寒冷種)ごとに分け,その産出頻度の変動を解析した結果,海洋酸素同位体ステージから分かっている約2.5Maまでの気温変動記録とよく一致していることが分かった.研究分担者,研究協力者などの努力でコアサンプルの分析が進み,多くのデータが求められた.その解釈も進みつつあり,進行状況としてはおおむね順調といえる.しかし,一部の時代で年代モデルのもとになる酸素同位体比変動が得られていない.これは分析のターゲットとしている底棲有孔虫がほとんど含まれなかったためである.この部分については,有機物の同位体比変動曲線を代わりに用いているが,他の底棲種もしくは浮遊性種の有孔虫などを用いてでクロスチェックする必要がある.25年度が最終年度であるため、記入しない。1万年精度での底棲有孔虫を用いた酸素同位体分析は終了し,さらに高分解の分析を試みている.また,有孔虫、貝形虫の群集解析なども進み,研究はおおむね順調に進展していると判断できる.2年目の24年度はデータを集約して,分析間隔の広いところなどを埋める形で年代モデルのさらなる高精度化をはかる.そして,基礎となる年代モデルを論文としてまとめることが最重点である.さらに,この高精度な年代尺度を用いて,海水準変動の周期とその変動幅を古水深変化や堆積環境変遷などのデータと合わせ,具体的な変動像を描くことが,24年度は重要になる.これらの点を,研究分担者,研究協力者との連絡を充分に取って推進する.さらに,学会発表を通して成果を発信し,海外の研究者のデータとも合わせて,結果の総合化・まとめに向けた準備の年とする.すなわち,これまでの成果の発表と総合的解釈の開始が24年度の重点項目となる25年度が最終年度であるため、記入しない。25年度については,ニュージーランド沖陸棚U1252サイトで採取されているコアから,シーケンス境界付近での高分解での海水準変動解析のために新たな分析用試料をアメリカ合衆国テキサス州カレッジステーションのコア貯蔵センターで採取する.この新たに採取した試料から,昨年までと同様に底棲有孔虫化石を抽出して,その酸素同位体比を測定してコア中のシーケンス境界の位置と海水準の関係を高分解に考察する.なお,サンプリング間隔は境界の上下5mを20cm間隔で採取する.そのことによって,シーケンス境界形成字の海水準変動を2000年の精度で求めることが可能である.
肺癌・悪性胸膜中皮腫における新規癌関連遺伝子の同定と機能解析

悪性胸膜中皮腫細胞株NCI-H28における3p21.3ホモザイガス欠失領域内においてβ-cateninの欠失および新規遺伝子MTSK1(仮称)の欠失を同定した。β-catenin自身がNCI-H28細胞株における腫瘍抑制性を有するかどうかを確認するために、細胞内へトランスフェクションを行った。ルシフェラーゼアッセイによりβ-cateninの転写活性能を確認したのちコロニー形成能を検討したところNCI-H28細胞株の著しい増殖抑制が認められた。TUNEL法によりこの抑制がアポトーシス誘導によるものであることを確認した。また、NCI-H28株はβ-cateninを欠失しているためβ-catenin非存在下にてγ-cateninの機能を解析し、γ-cateninがTCF/LEF依存性の転写活性能を有することを明らかにした。一方、MTSK1遺伝子の予想されるオープンリーディングフレームにおいてゲノミックPCR-SSCP法にて悪性胸膜中皮腫9検体および肺癌63検体を解析したが、体細胞突然変異は認められなかった。MTSK1遺伝子は3種類のオールタナティブスプライシングフォームが存在することが明らかになり、それぞれの発現ベクターを構築してNCI-H28株にトランスフェクションしたところウエスタンブロット法にてその発現が確認された。また、MTSK1導入によるNCI-H28株のコロニー形成能の抑制が示唆された。さらに154人の原発性肺癌患者の手術検体を用い、RAS遺伝子の変異検索を行った。11例のKRAS変異が認められマイクロダイセクション法によりそのうち9つの腫瘍は野生型KRASを保持していることが明らかになり、変異型KRASの過剰発現がKRASの活性化にとって重要であることが示唆された。我々はヒト悪性胸膜中皮腫由来の細胞株NCI-H28における新規3p21ホモザイガス欠失を以前報告した。この新規ホモザイガス欠失の切断点をクローニングし、さらにGenbank検索、EST検索、RT-PCR法を用いホモザイガス欠失領域内に存在する新規遺伝子(MTSK1)を同定した。MTSK1はNCI-H28株において3'側のエクソン6個の欠失をきたしており、mRNA発現が見られないことを明らかにした。予想されるopenreading frameは1275アミノ酸であった。ノーザンブロット解析によりmRNAサイズは約4.7kbと1.4kbであり、正常組織では精巣に特異的に高発現していることが明らかにされた。MTSK1遺伝子の悪性胸膜中皮腫および肺癌における変異解析をSSCP法およびシークエンシング法を用いて行ったところ幾つかのsingle nucleotide polymorphism(SNP)が検出された。現在cDNA発現ベクターを構築中であり、また、オリゴペプチドを作成し、ポリクローナル抗体を作成中である。また肺癌手術標本を用いp53アポトーシスカスケードにおける主要癌関連遺伝子(p14^<ARF>,MDM2,p53,Bax, Bcl2)の異常について変異および発現解析を行い、高頻度の異常を明らかにした。さらにKRAS遺伝子の変異解析を行い、KRAS遺伝子の変異が存在する検体において染色体12番領域(KRASが存在)のHeterozygosityを検討した。その結果、ヒト肺癌においては正常KRASが欠失する頻度は低く、正常KRASに比べ変異KRAS遺伝子が過剰発現することが重要であることが明らかになった。悪性胸膜中皮腫細胞株NCI-H28における3p21.3ホモザイガス欠失領域内においてβ-cateninの欠失(exon2以降)および新規癌関連遺伝子候補遺伝子MTSK1(仮称)の欠失(3'領域)を同定した。MTSK

1遺伝子の予想されるオープンリーディングフレーム(1275アミノ酸)においてゲノミックPCR-SSCP法にて悪性胸膜中皮腫9検体および肺癌検体63検体(細胞株40株、外科切除標本23検体)を解析したが、体細胞突然変異は認められなかったが、稀な一塩基多型を複数同定した。MTSK1遺伝子はさらに短い2種類のオールタナティブスプライシングフォームが存在することが明らかになった。pcDNA3.1ベクターに、それぞれのインサートを組み込み、カルボキシル末端にヒスチジンタッグ(+)及び(-)の発現ベクターを構築した。NCI-H28株およびp53癌抑制遺伝子のホモザイガス欠失の存在する肺癌細胞株NCI-H1299にトランスフェクションしたところウエスタンブロット法にてその発現が確認された。コロニー形成能を測定したところNCI-H28細胞株においてMTSK1導入による増殖能の抑制が示唆された。一方、154人の原発性肺癌患者から手術切除した肺癌検体を用い、R4Sの変異検索を行った。11例のKRAS変異が認められマイクロダイセクション法にてアリル欠失を検討した結果、そのうち9つの腫瘍は野生型KRASを保持していることが明らかになり、変異型KRASの過剰発現がKRASの活性化にとって重要であることが示唆された。
B細胞ハイブリドーマを用いるアレルゲン特異的IgE抗体産生誘導システムの開発

本研究においては、特異抗原による刺激を受けたB細胞におけるIgE産生へのクラススイッチ機構を解析することを目的として、B細胞ハイブリドーマTP67.21株を用いて種々の検討を行った結果以下のような成果が得られた。1.B細胞活性化因子である8-mercaptoguanosineをIL4と共に添加した場合において抗原レセプターからの刺激に依存してIgMからIgEへのクラススイッチが誘導できることが明らかとなった。In vitroにおいて、抗原レセプターからの刺激に応答して細胞株レベルでIgEへのクラススイッチを誘導できるシステムは未だ報告されていないので、本研究の成果により確立された方法は、今後、抗原特異的なIgE産生調節機構を解析する上で非常に有用な手段となると考えられる。2.成果1で得られた結果をもとに培養系に極少数しか存在しないと考えられるIgE産生細胞を検出する方法について検討したところ、in situの蛍光染色法により感度良くIgE産生細胞が検出できることが明らかとなった。この方法を用いることにより、培地中に分泌された抗体濃度が低く検出が困難な場合にも、抗体産生細胞の有無を調べることが出来、クラススイッチ検出方法として非常に有用な手段になると考えられる。3.さらに、TP67.21株においてIgEへのクラススイッチに伴い発現が誘導される種々の遺伝子について検索した結果に基づき、正常B細胞についても同様の検討を加えたところ、従来、成熟B細胞では発現していないと言われていたrecombination activating gene 1,2が末梢の成熟B細胞では再発現しているということを発見した。このことは、従来からのB細胞分化機構の学説に大幅な変革をもたらす成果と考えられ、国内外から非常に高い評価得ている。
青年期における主観的無気力感と抑うつに関する人格心理学的研究

抑うつに関する研究は,Freud, S.に始まる精神分析的研究,Beck, A.の抑うつの認知理論がよく知られるが,精神分析理論にもとづく抑うつの検討は,実証的レベルでは十分になされていない。抑うつに関しては,ベック抑うつ質問紙(Beck, Ward, Mendelson, Mock, & Erbaugh, 1961)をはじめ,多くの測定尺度が開発されている。本研究では,主観的無気力感が抑うつに影響を及ぼす過程に位置する予備的兆候に関して,精神分析的視点による検討を試みるため,まず,抑うつの認知社会心理学的研究に関する文献レビューを詳細に行った。本研究では,谷(1998)で示唆された基本的信頼感と抑うつとの関連について,既述した抑うつの諸尺度の文献的検討を踏まえた上で,概念間の関連性についての理論的構築を行うことを目的とした。本研究で意図する仮説モデルは,基本的信頼感から主観的無気力を媒介として抑うつへと影響する因果関係と,基本的信頼感のみが抑うつに影響する経路とが想定される。理論的には,基本的信頼感が抑うつを規定する程度に比べ,主観的無気力が抑うつに直接影響を及ぼす程度は強くないと考えられる。こうしたモデルの理論的妥当性を明らかにするため,本研究では,Erikson (1959)の漸成発達理論に関する詳細な文献的研究を行った。それに並行し,Klein (1975)の対象関係論や土居(1971)の甘え理論などいくつかの重要な精神分析理論について,詳細に文献的研究を行った。こうした基礎的研究は,今後の実証的モデル生成段階への土台となると考えられる。
顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーの臨床分子遺伝学的研究

顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー(FSHD)は常染色体優性の遺伝形式をとる頻度の高い筋疾患である。多くは染色体4q35領域に存在する繰り返し配列(D4Z4)の欠失によることが明らかとなっているが、その発症メカニズムは明らかでない。一因として体細胞・生殖細胞モザイクの関与が示唆されていることから、我々は患者およびその両親におけるサザンブロット(SB)解析をおこない、FSHD患者の約20%は親世代の体細胞モザイクに起因していること、欠失のサイズおよび割合と発症年齢、臨床的重症度とは関連ないことを明らかにした。また親世代ですでに遺伝子欠失を有するにもかかわらず全く臨床症状を認めない場合が約半数存在することが明らかになった。これはFSHDが極めて高い浸透率を示すという従来の定説を覆すものである(Goto et al. Med Genet 41:e12,2004).またFSHDの臨床症状はきわめて多彩であり、同一家系内においてさえも個人差が著しい。我々は独自のFSHDデータベースを基に、臨床的にFSHDと診断された200例中、4q35領域に遺伝子欠失の認められない症例40例に注目し、詳細に解析した。その結果FSHDは臨床的にも遺伝学的にも多様であり、他の疾患であってもきわめて似た臨床症状をとる場合があることを報告した(Yamanaka et al. J Neurol Sci 219:89,2004)。FSHD患者で欠失のみられるD4Z4リピートの数は個人差が大きく、SB解析で検出されるEcoRI断片は10300kbときわめて多様である。さらにこの領域はGC含有量が多く、また他の染色体領域にも似た配列が存在するなどの点から、現在のSB法による遺伝子解析はきわめて複雑で困難を伴っている。そこで我々はPCR法を用いた簡便で、しかも短時間で行える方法を開発した。本方法を用いてFSHD75例について解析したところ、サザンブロット解析結果に合致するPCR増幅産物を95%でみいだすことができ、本方法がきわめて有用であることが明らかとなった(特許出願中、paper submitted)。顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー(FSHD)は常染色体優性の遺伝形式をとり,そのほとんどは染色体4q35領域に遺伝子欠失が認められる.その発症メカニズムは明らかでないが,体細胞モザイクの関与も示唆されている.我々は患者およびその両親におけるサザンブロット解析をおこない,約20%で体細胞モザイクが次世代で新たな遺伝子欠失を引き起こしていること,欠失のサイズおよび割合と発症年齢,臨床的重症度とは関連ないことを明らかにした.また驚いたことに,親世代ですでに遺伝子欠失を有するにもかかわらず全く臨床症状を認めない場合が約半数存在することが明らかになった.とれはFSHDが極めて高い浸透率を示すという従来の定説を覆すものであり報告した(Goto et al.J Med Genet 41:e12,2004).FSHDの臨床症状はきわめて多彩であり,同一家系内においてさえも個人差が著しい.我々は,本邦におけるFSHD家系についてのサザンブロット解析のほとんどを担っており,詳細な臨床情報を加えた独自のFSHDデータベースを有している.

これを基に,臨床的にFSHDと診断された200例中,4q35領域に遺伝子欠失の認められない症例40例に注目し,他の疾患との鑑別診断を行うとともに,臨床症状を4q35-FSHDと比較検討した.その結果,4q35-FSHDと鑑別不能な症例が8例あり,うち2例はBecker型筋ジストロフィー(BMD)であった.この結果から,FSHDは臨床的にも遺伝学的にも多様であり,他の疾患であってもきわめて似た臨床症状をとる場合があることを報告した(Yamanaka et al.J NeurolSci 219:89,2004).FSHDは常染色体優性の遺伝形式をとる頻度の高い筋疾患である。染色体4q35に存在する3.3-kb繰り返し配列(D4Z4)の欠失によることが明らかとなっているが、遺伝子欠失領域から責任遺伝子は単離されておらず、遺伝子診断は現在サザンブロット解析によっている。我々は、本邦におけるFSHD家系についてのサザンブロット解析のほとんどを担っているが、診断施設が一極化している要因として、その方法の複雑さ、困難さが挙げられる。すなわち、FSHD遺伝子領域は10300kbと多様であること、GC含有量の多い繰り返し配列を有していること、他の染色体領域に似た配列が存在することなどによる。我々は、この煩雑な診断法に代わるより簡便で、しかも短時間で行える方法を開発した。この簡易遺伝子診断法は、PCR法を用いて実際のD4Z4リピート数を数えるもので、サザンブロット解析に比べ、少量のDNAで短時間に簡便に診断の行える有用なものである。本方法を用いてFSHD75例について解析したところ、サザンブロット解析結果に合致するバンドを95%でみいだすことができた。サザンブロット解析の診断率は98%であると言われていることから、本方法がきわめて有用であることが明らかとなった(特許出願中、paper in preparation)。
蛍光in situハイブリダイゼーション法のDNA複製系解析への導入

本研究は、DNA複製系の解析に蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)法を導入し、細胞核内のDNAの動態を多数のカラーで検出・画像化して捉えることを目的として以下のような結果を得た。遺伝子導入系として、HepG2細胞に導入したエルスロポエチン(EPO)遺伝子は、特定の染色体の一ケ所に導入されていることが判った。また、新たに導入されたEPO遺伝子は、細胞周期のS期の前半に複製することが判明した。これは、新たに遺伝子導入されたものでactiveなものは、S期の前半に複製することを示した一例である。また、ジヒドロ葉酸還元酵素の遺伝子領域のDNAを入手し、マルチカラーFISHが可能となったところであり、複製系の解析まで進んでいないが今後の進展が期待される。これにかわる対象として、ヒト主要組識適合抗原遺伝子複合体領域のDNA複製の進行過程を解析した。この領域のHLA-ClassI,II,IIIの領域は、数多くのDNAクローンが入手可能で、また、ClassIIとClassIIIの間にDNA組成上、GC含量の変化する領域が存在する。ClassI,II,IIIのDNA断片のそれぞれの複製時期をFISHにより検討した結果、いくつかの細胞で、ClassIIのDNAが他の領域のDNAより遅く、複製していることが示唆された。また、GC含量の変化する境界領域のDNAの複製時期を解析した結果GC-rich領域と早期複製領域の一致が示唆された。さらに、3種のClassIII領域のDNA複製順序を解析した結果、調べた3種の細胞株で、平均値では、同一順序で複製されるが、必ずしも、全ての核で複製順序が一致しないことが示唆された。これは、従来の分子生物学的方法では、分子集合の平均値としてしか捉えることができなかったDNAを1コピーでも捉えることを可能にし、しかも視覚化できるFISH法の有効性を示すものである。また、YACクローンに対するマルチカラーFISHも示し、これを用いた、特定DNA領域のS期における伸張の解析方法も提示した。
Wボソン対生成をプローブとした質量起源粒子の探索

本研究は、唯一LHC-ATLAS実験でのみ取得可能な世界最高エネルギー(7TeV)の衝突データを用いて、質量起源粒子や超対称性粒子などの新物理探索に感度があるトップ(t)・クォークのτ粒子とbクォークへの崩壊事象(t→τυb)の生成断面積測定を目的とする。本年度の成果として下記2点挙げる:(1)終状態にτ粒子及びμ粒子を含むトップクォーク対生成事象の選別手法確立2010年から本格的にデータ収集を開始した全物理データ(35pb^<-1>)を用いて、特に、信号事象の運動学的特徴を元に事象選別の最適化を実施した。その結果、これまでのデータで、全事象選別を通過した24事象の中に、約98%の統計的有意さで、t→τυb信号が含まれることを立証した。この結果は、2011年夏までに取得が期待される500pb^<-1>のデータによって、99.9999%以上の統計的有意さで信号事象の発見が可能であることを示すものである。また、本事象選別による選別効率が4.9%,信号対雑音比(S/N比)が0.7であることを示した。以上は実機性能を忠実に反映させたモンテカルロシミュレーションを元に抽出した結果であるが、事実、これまでに得た実験データは本研究による予想値と誤差の範囲で一致を示す。(2)検出器性能評価を基礎とした本測定の系統誤差の評価輝度(ルミノシティー)測定から生じる誤差が3.2%、信号事象の検出に伴う系統誤差が17%であることを明らかにした。現在の統計量ではトップクォーク対生成事象の選別に用いるbジェットの要求、MCシミュレーションのモデリングが支配的系統誤差であることを示し、前者は今後データが増えることによって向上することが可能であることを明らかにした。本研究の目的は、到達エネルギー(14TeV)および輝度(1034cm-2s-1)双方において世界最高水準である陽子衝突型加速器実験,LHC-ATLAS実験にて質量起源粒子の直接探索を行うことにある。本年度は、この実践に向けて必要かつ重要なステップである下記二点を着実に実践した:1.一億事象以上の宇宙線及び10万事象のビームデータを用いて、ATLAS実験用ミュー粒子トリガー検出器(TGC)を万全な状態に仕上げた。特にトリガー検出器の要である検出効率の評価、そのフィードバックによる更なる高検出効率の実現に関して主体的役割を果たした。本研究によってTGC検出器が有感度領域において99%以上という設計値通りの高い検出効率を持つ事が明らかとなり、ビームデータ収集に向けて万全な状態であることを明白にした。この成果が認められ、ICATPP国際会議での発表(2009年10月)を行った。2.質量起源粒子の探索を開始した。本研究でターゲットとする質量起源粒子は2010年中に得られる200pb^<-1>の実験データでは検証が困難であることを鑑み、本探索において最も大きな背景事象を組むトップクォーク対生成事象数の見積もりを優先して行っている。これまでに質量起源粒子に感度が高い崩壊過程として、終状態にミュー粒子及びタウ粒子を含むトップクォーク対生成事象(tt→WWbb→bbτνμν)を選び、事象選別手法の確立・本探索の鍵となるタウ粒子の識別効率評価を行って来た。いずれも実験グループ内で未確立の分野であり徐々にヴィジビリティーを上げつつある。
強みに基づく認知行動療法のうつ病予防，再発予防における有効性の検証

うつ病治療において再発予防は重要な課題である。これまでに個人の強みという心理社会的資源を利用することが抑うつの軽減や精神的健康に有効である可能性が示されている。そこで本研究では、強みに焦点を当てた認知行動療法(Strengths-based Cognitive Behavioral Therapy, SB-CBT; Padesky&Mooney, 2012)の日本語版マニュアル、マテリアルを作成し、その安全性、妥当性および、うつ病の予防や再発予防における有効性を検証し、今後予定されるランダム化比較試験の基盤構築を行うことを目的とする。1年目は、SB-CBTの開発者であるPadesky博士およびMooney博士と直接面会して研究相談を行い、プログラムの内容や進め方についての助言を得た。マテリアルおよびマニュアルの作成にあたり、強みに関するエクササイズやワークの収集、強みを治療内容の一部に組み込んだ心理療法のレビューを実施した。また、SB-CBTで重視されるポイントを抽出し、そのポイントに沿って収集した内容を組み込み、日本版のSB-CBTのプログラムを構成した。2年目である本年度は、前年度に引き続きプログラムの作成を行った。作成したプログラムに沿ってマニュアル、マテリアルを作成し、臨床心理学の専門家の助言を得て改良を加えマテリアルを完成させた。また、うつ病患者の協力を得て、作成したマテリアルを用いた心理面接を試験的に実施し、今後の研究の示唆を得るとともに、マテリアルのさらなる加筆修正を行い、プログラムの改良を行った。上記の通り、今年度は今後予定される臨床試験の準備段階として、SB-CBTのプログラムの改良に力を入れた。専門家および臨床群の協力者による助言を得て、より実情に即したプログラムを作成することができている。しかしマテリアル完成が予定よりも遅れており、それに伴って介入研究の開始も遅れていることから、研究全体の進捗としては「遅れている」と判断した。次年度に予定されているSB-CBTの開発者であるPadesky博士による研修を受講するとともに、日本版SB-CBTプログラム内容およびマテリアルをSB-CBT開発者に最終確認をしていただいて完成を目指す。また、並行して試験デザイン確定し、実施施設との調整、リクルートのための広報活動を進め、研究を進めていく。本研究の目的は、強みに基づく認知行動療法(Strengths-based Cognitive Behavioral Therapy: SB-CBT)の日本語版マニュアル、マテリアルを作成し、その安全性、妥当性および、うつ病の予防や再発予防における有効性を検証し、今後予定されるランダム化比較試験の基盤構築を行うことである。初年度である平成29年度は、SB-CBTの日本語版マニュアル、マテリアルの作成(研究1)、一般大学生を対象としたSB-CBTの安全性とうつ病予防効果の検証(研究2)を実施する予定であった。まず、研究1に関しては、おおむね実施できた。具体的には、SB-CBTの開発者であるPadesky博士およびMooney博士と直接面会して研究相談を行い、プログラムの内容や進め方についての助言を得た。構成したプログラムに沿ってマニュアル、マテリアルを作成し、現在修正や改良を加えているところである。今後、開発者よりコンサルテーションを受けた上で、マニュアル、マテリアルを完成させる予定である。マニュアル、マテリアルの完成が遅れているため、研究2の開始が遅れている。平成29年度はプログラム作成と並行して、SB-CBTの効果を測定するための評価指標の検討や実施場所の確保など、介入研究を実施するための基盤を整えた。SB-CBTの日本語版マニュアルやマテリアルの作成にあたって、予定していた開発者のPadesky博士やMooney博士との対面での研究相談が、Padesky博士の長期海外出張や多忙により後ろ倒しとなった。その間に強みに関するエクササイズやワーク等を収集し、入念に検討して、これらを日本版SB-CBTのプログラムに取り入れることができた。しかし、マニュアル、マテリアルの完成が予定よりも遅れており、それに伴って介入研究の開始も遅れていることから、研究全体の進捗としては「やや遅れている」と判断した。

上記の通り、今年度は今後予定される臨床試験の準備段階として、SB-CBTのプログラムの改良に力を入れた。専門家および臨床群の協力者による助言を得て、より実情に即したプログラムを作成することができている。しかしマテリアル完成が予定よりも遅れており、それに伴って介入研究の開始も遅れていることから、研究全体の進捗としては「遅れている」と判断した。平成30年度は、作成した日本版SB-CBTのマニュアル、マテリアルを英訳し、開発者の指導を受ける。これをもとにさらに修正や改良を加え、マニュアル、マテリアルを完成させる。その上で、平成30年度中に一般大学生を対象としてSB-CBTの安全性およびうつ病予防効果を検討するため、介入研究を開始する。次年度に予定されているSB-CBTの開発者であるPadesky博士による研修を受講するとともに、日本版SB-CBTプログラム内容およびマテリアルをSB-CBT開発者に最終確認をしていただいて完成を目指す。また、並行して試験デザイン確定し、実施施設との調整、リクルートのための広報活動を進め、研究を進めていく。SB-CBTマニュアル、マテリアルの完成が予定より遅延しており、介入研究の開始が遅れている。そのため、予定していた研究補助者等の人件費の謝金としての支出がなかった。平成30年度は、介入開始に伴い、研究補助者やセラピスト、コーディネーター等の人件費や、開発者からのコンサルテーションやスーパービジョンを受けるための旅費や謝金としての使用する計画である。日本版SB-CBTプログラム、マテリアルおよびマテリアルの完成が予定より遅延しており、介入研究の開始が遅れている。次年度は、介入開始に伴って必要となる人件費や物品の購入、開発者からのコンサルテーションやスーパービジョンを受けるための旅費や謝金としての使用する計画である。
離れた曲線を繋ぐ極小曲面の非存在

3次元Poincare球に共形なRiemann多様体(M,g) = (H^3, e^{2f}g_0) (|df| < a < 1/2, f < b)において,平均曲率の絶対値がe^{ーb}(1ー2a)以下の曲面についての分離定理が成立する.即ち,Mにおける任意有限個の点の配置{P_i}に対して,次の性質を持つ正の定数rが存在する:各点P_iを中心として半径r以下の測地球B_iがあり,それぞれの中に閉曲線G_iがあれば,その和集合を境界とする平均曲率の絶対値がe^{ーb}(1ー2a)以下の曲面は測地球の和集合に含まれる.3次元負定曲率空間Mにおいて,次の定理を得た.ここで,領域D_±は[0,1]上のある関数y = f(x)で(0,1)上正値,f'(0) = c, f'(1) = -∞なるものを用いてy^2+z^2 < f(|x|)^2と表される.この定理はEuclid空間における極小曲面に関する対称錘定理の3次元負定曲率空間へのもっとも自然な拡張であると考えられる.Riemann多様体Mが次の性質を持つ時,「極小曲面の分離定理が成り立つ」という.Mにおける任意有限個の点の任意の配置{P_i}に対して,次の性質を持つ正の定数rが存在する:各点P_iを中心として半径r以下の測地球B_iがあり,それぞれの中に閉曲線G_iがあれば,その和集合を境界とする完閉極小曲面は球の和集合に含まれる.すなわち,G_iを極小曲面で繋ぐことは全くできない.本研究では,Euclid空間において証明したこの性質をなるべく一般のRiemann多様体に拡張することを目標としている.前年度までに,3次元Poincare球において,極小曲面を一般化して平均曲率の小さい曲面の分離定理を証明した.今年度はこの結果を再び極小曲面に適用するかわりに空間を変形することによって次の結果を得た.定理: 3次元Poincare球(M, g_0)に共形なRiemann多様体(M, g = e^{2f}g_0) (|df| < 1/2)において,極小曲面についての分離定理が成立する.ただし,gが完備であるためには例えばfの下からの有界性などが必要.この定理では共形平坦性を仮定しているという意味では一般のRiemann多様体はまだ遠い目標である.しかし,fには1階微分の条件しか仮定していないので,泡のようにいくらでも多くの領域の曲率を正にできるという意味では,一般のRiemann多様体の場合にかなり近づいたということができる.3次元Poincare球に共形なRiemann多様体(M,g) = (H^3, e^{2f}g_0) (|df| < a < 1/2, f < b)において,平均曲率の絶対値がe^{ーb}(1ー2a)以下の曲面についての分離定理が成立する.即ち,Mにおける任意有限個の点の配置{P_i}に対して,次の性質を持つ正の定数rが存在する:各点P_iを中心として半径r以下の測地球B_iがあり,それぞれの中に閉曲線G_iがあれば,その和集合を境界とする平均曲率の絶対値がe^{ーb}(1ー2a)以下の曲面は測地球の和集合に含まれる.3次元Euclid空間において次の定理を得た.定理: xy平面における原点中心,半径1/2の円板を底面とする円筒のうち中心(1,0,0)半径1の球の上部と中心(-1,0,0)半径1の球の下部にはさまれる領域をΩとし,Ωのうち原点中心勾配π/2の円錐の内部にある領域の連結成分をD1, D2とする.そのとき,D*内の閉曲線Γ*のみを境界にしてΩに含まれる平均曲率1のコンパクト曲面は連結ではない.この結果は極小曲面の場合と比べると弱い.負定曲率(-1)空間における平均曲率1の曲面を考えることが自然であることを示唆している.Riemann多様体Mが次の性質を持つとき,「極小曲面の分離定理が成り立つ」という.Mにおける任意有限個の点の任意の配置{P_i}に対して,次の性質を持つ正の定数rが存在する:各点P_iを中心として半径r以下の測地球B_iがあり,それぞれの中に閉曲線G_iがあれば,その和集合∪_iG_iを境界とする有界な極小曲面Sは測地球の和集合∪_iB_iに含まれる.即ち,Sは完全に分離される.Euclid空間において極小曲面の分離定理が成り立つことは錐定理を用いて証明される.本研究では空間と曲面の双方を一般化することに成功した.即ち,Euclid空間を一般化し,また「極小曲面の分離定理が成り立つ」の概念を平均曲率が定数でない曲面に拡張し,次の定理を証明した.このような定理は曲率が負であることと相性がいいが,上の定理の条件はfの1階までの微分しか現れていないので,局所的には正の曲率を許すということは注目すべきである.微分幾何学研究実績の概要で述べたように,Euclid空間における極小曲面についての非連結性定理を自然な設定で負の定曲率空間における有限平均曲率曲面の非連結定理に拡張することができた.

本研究はEuclid空間が持つ性質を可能な限り一般のRiemann多様体に拡張することであるが,実際に定曲率空間以外のRiemann多様体に分離定理を拡張できた.研究実績の概要の通り,初年度において期待した定理を得ることができた.また,それによって次年度以降の目標である,Euclid空間以外への拡張への手がかりを得ることができた.現在の結果は3次元に限るので,まずこれを高次元に拡張する.また任意個数の閉曲線の場合に拡張する.ついで,負の断面曲率をもつ一般のRiemann多様体において今までの結果を拡張する.基本的な方針は,1つの測地線に直交する測地線群によって多様体に座標を入れ,その座標を用いて定曲率空間と同様な評価を得ることである.今年度に得られた極小曲面についての分離定理を再び平均曲率の小さい曲面についての分離定理に拡張する.また,現在得られている結果の条件は共型平坦であるが,この条件を弱めるべく研究する.当初の目標通り,高次元および3つ以上の閉曲線を境界とする場合に拡張をする.また,自然な設定と考えられる負定曲率空間の場合に極小曲面との類似性の高い結果を得る.幾何学関係図書および解析学関係図書を購入する.また,研究打ち合わせのための旅費を支出する.研究はEuclid空間における極小曲面の非存在に関する結果を定曲率-1の空間における平均曲率1の曲面に関する結果に拡張するところまで進展した.目標としては,可能な限り一般のRiemann多様体における結果に拡張することであるが,定曲率-1の空間を一般のRiemann多様体の方向に拡張する方法が開発されたので,それを実際に適用するためにまだ時間が必要である.現在まで得られた定曲率空間における結果とその拡張を幾何学シンポジウムなどで発表する.その準備及び旅費として使用する.状況によっては,一部を機材購入費にもあてる.幾何学関係図書および解析学関係図書を購入する.また,研究打ち合わせのための旅費を支出する.
産業マテリアルおよびスラグによる岩絵の具への応用研究

本研究は岩絵の具の安定供給、安全性を考慮に入れ、画家にとっての表現手法の拡大を目指し、スラグや産業マテリアルを岩絵の具へ応用したものである。内容は産業マテリアルとスラグの試料収集、試料と既存の岩絵の具の成分分析、ペーハーテスト、比重検査、粒度範囲および顕微鏡による粒状性調査、1年間を通しての被曝テストなどであった。また日本画専攻の学生、教員に協力してもらい、使用感のアンケート調査をおこなった。その結果、提供した試料の内いくつかは、十分に岩絵具としての実用に耐えるものであったと確信できた。さらに実用の可能性の認知のため、それらの試料を使った絵画作品の展示発表をおこなった。日本画で使用される天然岩絵の具は、人工の新岩絵の具と異なり、独特の深みのある色を表現できる。しかし、天然岩絵の具はどれも高価であり、その制作には高額な費用がかかる。また、原料の産出国の政治、治安事情、国内の職人の高齢化などによって色材の安定供給に不安があり、中には廃番となる色が出てくるといった問題が生じている。そこで、岩絵の具を安価で安定的に供給する方法として、産業マテリアル(金属・セラミック)に注目した。本研究では、「1安価で大量に供給されている産業マテリアルを絵の具として転用」、「2産業マテリアルが生み出される過程で発生する二次生成物(廃棄物)の絵の具への再生」を試み、実際に絵画制作に使用し、発表を行う。そして、多くの人々にこれらの材料の持つ可能性を知ってもらい、絵画表現における表現手法の発展の一躍となる手段の確立を目指していく。この研究は、天然色材に重点を置いた旧来の価値観を変え、材料的にも思想的にも現代の社会と密接に関わりを持っていくことが期待できる。26年度におこなった研究は1資料の収集、調査。2収集した資料の絵具に見立てての画面への塗布、実際の絵画制作。3成分分析。等である。1に関しては30種類、50試料ほどのサンプルを入手したが、実際に使用できそうな試料は15種類ほどであった。続いてペーハー試験、ふるいにかけての粒状性調査、写真撮影などをおこなった。2は試料を実際の岩絵の具のようにパネルに筆で塗布し、筆降りなどの使用感、耐候性の調査、メジウムとの相性などを調査した。3は天然岩絵の具、新岩絵の具、スラグ、産業マテリアル合わせて15種類ほどを調査した。それと同時に日本画材の専門家に岩絵の具の現状等について聞き取り調査をおこなった。また、原料の産出国の政治、治安事情、国内の職人の高齢化などによって色材の安定供給に不安があり、中には廃盤となる色が出てくるといった問題が生じている。そこで岩絵の具を安価で安定的に供給する方法として、産業マテリアル(金属・セラミック)に注目した。これらは、天然色材に重点を置いた旧来の価値観を変え、材料的にも思想的にも現代の社会と密接に関わりを持っていくことになり、日本画が現代の美術として生き残っていく為に、重要であると考える。平成27年度の研究内容は、岩絵の具製造業者や画材店主などの専門家へのインタビュー、試料の成分分析および直射日光に1年間曝しての被曝試験、粒状性検査、ペーハー検査などである。また試料を日本画の学生に配布し、その色味や使用感などをアンケート調査した。その中から特に好感触を得た数名の学生に引き続き資料を提供し、再び長期使用のアンケートをとる予定である。また自分の制作においても重点的にこれらの試料を使っていく予定でいる。研究はおおむね順調に進んでいる。平成27年度はさらに一歩進めて、入手した試料の成分分析を市販の岩絵の具と合わせておこなった。分析の結果は平成28年度発表予定であるが、ほとんどの試料は安全に使えることがわかった。天然岩絵の具の中にはヒ素などの毒物が含まれているものもあり、また新岩絵の具が鉛を含んでおり、有毒で海外に輸出できないことを考えると、入手した試料には絵具としての可能性が大きいことを感じた。あわせておこなったことは資料をパネルに塗っての被曝試験である。6月から成果発表の展示まで約一年、このパネルを直射日光に曝してどれだけ変色するか、劣化するかを観察している。また顕微鏡で試料の粒状性を写真に収めた。さらに試料を入手してから時間をおいてのPHテストも加えておこなった。ほかには、多摩美術大学の日本画研究室に協力してもらい、資料のサンプルを日本画を専攻する学生に配った。10数種類、40試料ほどを配付したうえで、後日使用感のアンケートを回収して試料の使い心地の調査をおこなった。配付した試料の使用感はおおむね好評であった。専門家へのアンケート調査もおこなった。

画材製造業の技術者、日本画専門店の店主などに資料を持参し、インタビューをおこなった。さらに1年を通しておこなったことは、これらの試料を使っての絵画制作である。これらの画材が使えるか否かは画家の個人的な感性によるところが大きい。実感を知るためにまず使ってみることが大切である。平成27年度はこれらの試料を使った作品群を自分の個展に出品してみた。鑑賞者からは新しい岩絵の具について、個性的で今までに無い色と輝きを持っているという感想をいただいた。産業マテリアルやスラグは様々な分野に流通しているが、産業廃棄物として厄介者扱いされている面を持つ。しかし違う観点からアプローチすれば新たな価値を引き出せる可能性が考えられる。本研究ではスラグや産業マテリアルによる岩絵の具への応用及び画家にとっての表現手法の拡大を目指した。研究は産業マテリアル、スラグの試料収集、集めた試料と既存の岩絵の具の成分分析、ペーハーテスト、比重検査、粒度範囲および顕微鏡による粒状性調査、1年間を通しての被曝テストをおこなった。また日本画科の学生に協力してもらい、試料を提供し、その使用感のアンケート調査をおこなった。試料を提供した学生のうち何人かは、柔軟な考え方で下地材に練り込むなど新しい使い方も試みてくれた。にかわとの相性も良いという意見が大半を占めた。中にはヘビーユーザーも現れ、作品の中の重要な要素として活用してくれた学生もいた。絵具には個人的な好みの要素が大きく関わってくるので一概にその善し悪しは言えない面もあるが、今回提供した試料の内いくつかは、十分に岩絵具としての実用に耐えるものであったと確信することができた。問題点としてはほとんどの試料において硬度が高いことがあげられる。このことで個人での番丁の調整が困難であることと、従来の岩絵の具に比べて筆が痛みやすいという難点が指摘できる。実際にこれらの材料がどれだけ岩絵具として使用できる可能性があるかは、展示発表によって明らかにした。2016年11月21日(月)から12月3日(土)まで開催された東邦アートでの展示で各作家が素材の可能性を発揮させ、作品の中で材料を効果的に使用してくれた。展示に参加したメンバーは、菊地武彦、武田州左、千々岩修、長谷川幾与、宮ヶ丁渡、青木香保里、山嵜雷蔵である。本研究は岩絵の具の安定供給、安全性を考慮に入れ、画家にとっての表現手法の拡大を目指し、スラグや産業マテリアルを岩絵の具へ応用したものである。内容は産業マテリアルとスラグの試料収集、試料と既存の岩絵の具の成分分析、ペーハーテスト、比重検査、粒度範囲および顕微鏡による粒状性調査、1年間を通しての被曝テストなどであった。また日本画専攻の学生、教員に協力してもらい、使用感のアンケート調査をおこなった。その結果、提供した試料の内いくつかは、十分に岩絵具としての実用に耐えるものであったと確信できた。さらに実用の可能性の認知のため、それらの試料を使った絵画作品の展示発表をおこなった。研究はおおむね順調に進んでいる。26年度中に精錬所、炭鉱での調査、試料入手をおこなう予定であったが、申し出をしたほとんどの施設から不承知の連絡をもらった。よって、ほかの仲介業者よりの試料の入手をおこなった。精錬所、炭鉱での調査をおこなわなかった分、成分分析に予算を振り分けたので、差し引きおおむね研究は順調だと言える。
細胞・基質間接着装置,ヘミデスモソームの接着分子の機能解析

細胞・基質間接着装置であるヘミデスモソームの接着分子の構造と機能を明らかにするため、180kDのヘミデスモソームの膜貫通タンパク質について研究実施計画に従い研究を進め、以下の成果を得た。1可溶性180kD分子の検出:界面活性剤処理により可溶化される180kD分子が組織細胞中にも培養細胞中にも存在することを、蛍光抗体法と免疫ブロット法を用いて証明した。2可溶性180kD分子の細胞内における存在状態:180kD分子が細胞外領域にコラーゲン様ドメインをもつことを利用して、細胞をコラゲナーゼ処理し、分子の影響を細胞外および細胞質部分をそれぞれ認識するモノクローナル抗体を用いて調べた。その結果、可溶性分子はすべて細胞膜タンパク質として発現されていることが明らかとなった。3可溶性180kD分子を大量に発現している細胞の発見:数種の細胞の検定から、他の細胞は180kD可溶性画分が10%以下であるのに対しウシ乳腺由来のBMGE+H細胞は60%以上であることを見いだした。1)可溶性180kD分子をショ糖密度勾配遠心法で沈降係数を測定し、7Sを得た。2)可溶性180kD分子の架橋実験および還元、非還元状態での2次元ゲル電気泳動法により、この分子が3量体を形成していることを示した。この結果は可溶性分子がコラーゲン型3重螺旋構造をとっていることを示唆している。