hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ステロイドホルモンによる転写因子の制御とその変態に及ぼす役割

熱ショックによりBHR4を過剰発現する遺伝子組み換えカイコを作製して、蛹化前に熱ショックを与える実験を行い、現れる影響を検証した。その結果、アポリシス後、脱皮行動を全く起こさずに幼虫のクチクラの内部で蛹化する個体が観察された。このことから、BHR4の発現が抑えられることが、脱皮行動を引き起こすことに重要である可能性が考えられる。この時に見られた異常個体はエクダイソンアゴニストを注射した時と同様な異常形態を示した。これらの結果から、BHR4はエクダイソン合成に関与していることが示唆された。BHR4は昆虫の脱皮変態に重要であることが証明され、転写因子を標的にした哺乳類に安全で昆虫特異的に作用する薬剤開発の助けになると考えられる。昆虫の変態時には、種々のcellular eventsが一つの状態から他の状態に変化しなければならず、commitment及びdeterminationが起こる必要がある。その後、エクダイソンの作用により最終的な変化が引き起こされる。幼虫特異的組織の腹脚の爪(crochet)は蛹への変態の際に退化し、これはcrochetの細胞死が起っているためと考えられる。この細胞死は5齢3日目から始まり、4日には完了した。この細胞死のcommitmentには皮膚の蛹commitmentに重要な転写因子broadは関与していなかった。一方crochet細胞が次のcrochetを形成する能力の低下は4齢後半と終齢初期と2段階によって引き起こされることが予備実験の結果わかった。4齢後半の低下は脱皮を引き起こすエクダイソンによって引き起こされることがin vivoの実験により明らかになったが、終齢初期形成能力の低下は血中の幼若ホルモンの低下によって引き起こされていることが示唆された。カイコの転写因子であるBHR4は、エクダイソンの血中濃度の上昇に反応して発現し、脱皮前に発現が停止することが知られている。カイコの蛹化脱皮前の時期にBRR4の発現を強制的に持続させると、脱皮行動を起こさない個体が観察されることを昨年度明にした。しかしこれらの個体もクチクラのアポリシスまでは正常に行っていた。このことから、BHR4の発現停止とエクダイソン濃度の低下には、何らかの関連性があることが示唆されるが、エクダイソンのアゴニストを蛹化前のカイコに注射したところ、BER4の発現停止に影響は見られなかった。ゆえにBRR4の発現停止がエクダイソンの血中濃度低下に影響している可能性が考えられた。BHR4過剰発現個体ではエクダイソンの血中濃度が低下しないことを見出し、正常に脱皮するにはBHR4の発現が止まることが必要であることが明らかとなった。幼虫特異的組織である腹脚のカギ爪(crochet)は、蛹化に向かい退化する。すなわち、crochetの細胞死が起こる。この過程で、crochet細胞の形成能力の低下は、4齢後期から5齢4日目にかけて2段階で起こり、その後、5齢3-4日目にcrochet細胞の細胞死が起こることをすでに見出している。1段階目の能力の低下は上昇するエクダイソンによって引き起こされ、2段階目は栄養の摂取によっていることを突き止めた。その時annexin IXが上昇し、その後転写因子であるE74Bの上昇低下が見られ、これら因子の共同作用により、crochet細胞の形成能力の低下から細胞死に至ることが示唆された。
超音波を利用したin vitroおよびin vivoでの遺伝子導入の増強

(1)非ウイルスベクターの創製遺伝子は負電荷をもりアニオン性の高分子であり、細胞表面の負電荷との斥力により、そのままでは細胞内へ導入することは困難である。本研究では、カチオン性高分子を用いて、遺伝子とポリイオンコンプレックスを形成させることによって、細胞への遺伝子導入を試みた。まず、細胞との親和性の高い水溶性高分子である、ゼラチンあるいは細胞接着に関係するペプチド配列をもつプロネクチンFに対して、カチオン性のエチレンジアミンあるいはスペルミンを化学導入した。得られたカチオン化水溶性高分子と遺伝子との複合体について、分子サイズや表面電荷などの物理化学的性質を調べたところ、分子サイズが約200nmの正に帯電したポリイオンコンプレックスが形成されていることがわかった。(2)細胞の接着環境および培養方法が遺伝子導入に与える影響細胞の接着環境を変化させるために、異なる3種類の三次元足場材料を作製した。すなわち、ポリエチレンテレフタレート(PET)繊維からなる不織布、コラーゲンスポンジ、およびポリグリコール酸(PGA)繊維を用いてコラーゲンスポンジの力学的特性を改善したPGA-コラーゲン複合スポンジである。これらの三次元足場材料へ、(1)で作製したカチオン化水溶性高分子と遺伝子とのポリイオンコンプレックスを含浸させることによって、遺伝子を担持した三次元足場材料を得た。現在、骨髄から単離した間葉系幹細胞(MSC)をこの足場材料内で培養することによって、MSCへの遺伝子導入が可能かどうかについて検討しているところである。また、遺伝子を担持した異なる三次元足場材料へ播種したMSCを用いて、通常の静置培養に加えて、旋回培養あるいは還流培養することにより、細胞に対する酸素・栄養・老廃物の交換、あるいは流体力学的刺激などが遺伝子導入に与える影響について検討している。非ウイルス性遺伝子キャリアとして、エチレンジアミンあるいはスペルミンなどを導入したカチオン化ゼラチン、ならびにジエチレントリアミノペンタン酸あるいはスペルミンなどのキレート残基を導入したデキストランやプルランを調製した。これらの遺伝子キャリアとプラスミドDNAとの相互作用を調べたところ、カチオン化ゼラチンとプラスミドDNAとのポリイオンコンプレックス形成、ならびにキレート残基を導入した多糖とプラスミドDNAとの亜鉛を介した金属配位結合形成がそれぞれ認められた。β-ガラクトシダーゼをコードするプラスミドDNAとカチオン化ゼラチンとの複合体からなる非ウイルスベクターを用いて、培養細胞に対する超音波照射を組み合わせた、in vitroにおける遺伝子導入を行ったところ、カチオン化ゼラチンとプラスミドDNAとの重量混合比が5:1の場合、最も高い遺伝子導入が認められ、その遺伝子発現は超音波照射により増強された。また、カチオン化ゼラチンとプラスミドDNAとの複合体をマウス筋内へ投与後、超音波を照射することによって、in vivoにおける遺伝子導入の増強できることがわかった。一方、スペルミンを導入したデキストランとプラスミドDNAとの亜鉛を介した金属配位複合体をマウス尾静脈へ投与したところ、あらかじめ接種しておいた癌組織への集積が認められ、その結果、癌組織への選択的な遺伝子導入ができた。また、スペルミンを導入したプルランとプラスミドDNAとの亜鉛を介した金属配位複合体をマウス尾静脈へ投与したところ、プルランの肝臓へのターゲティング能を利用した、肝臓への遺伝子導入が可能であることがわかった。以上のように、超音波や遺伝子キャリアの特異的臓器へのターゲティング能を利用して、in vivoにおける部位特異的な遺伝子導入が可能なことが示された。
平膜浸漬型膜分離活性汚泥法の膜モジュール内流動特性の解明と膜設置間隔の最適化

本研究は、高度処理にも対応できる高性能小型合併処理浄化槽の合理的な設計法を確立するために、平膜浸漬型膜分離活性汚泥法における膜モジュール部の流動特性を解明し、また汚泥の付着・堆積過程を明らかにし、曝気量や膜間隔などとの関係を求め、膜設置間隔の合理的設計値を提示することを目的として、実験的・理論的検討を行ったものである。得られた主要な成果は以下にまとめられる。まず、汚泥堆積過程を記述する因子として、平衡汚泥堆積量、汚泥堆積速度、汚泥堆積開始時間という因子を見出し、平衡汚泥堆積量は、せん断力と逆比例するという関係を得た。実験により得た関係式は、曝気流中のろ過及び懸濁液クロスフロー流中のろ過において同様であり、ろ過形態によらない統一的な関係を見出すことができた。汚泥堆積開始時間は、曝気流中のろ過において、せん断力だけではなく膜間距離に依存するという傾向が見出された。また、膜間距離が狭くなるほど汚泥堆積開始時間が短くなるという傾向を得た。平膜においては、せん断力が変わらないにも関わらず汚泥堆積開始時間が短くなるのは、汚泥フロックの乱れによる膜間距離の移動度に対して膜間距離が相対的に短くなるためとした定式化をおこない、実験結果をよく説明することが出来た。このことにより、膜設置間隔の影響を定量的に明らかにすることができ、汚泥堆積開始時間を十分長くするような設計因子が抽出できた。さらに、懸濁液クロスフロー流虫では、膜近傍の層流境界層が発達して行くことによって、膜面の汚泥堆積量に分布が生じ、また遷移領域において緩い堆積が生じることが示された。境界層の発達を抑制するためには膜セグメントを流下方向に分断する法が得策であり、それに膜面積の減少とのトレードオフで最適膜設置間隔が決まる。このような設計は、特に間欠曝気ろ過を採用する場合に重要となる。
アポトーシスの機構と機能

アポトーシスの実行過程では、DNAの断片化を中心とする核の断片化やアポトーシス小体の形成と言った共通の現象がみられる。このことは多様な死の情報カスケードは最終的にはある1つの共通経路に収束することを示唆している。すなわち、アポトーシスには、共通の自死装置があると考えられる。この自死装置の中心に位置するのがDNAを切断するエンドヌクレアーゼである。本研究では、このアポトーシス・エンドヌクレアーゼに焦点を絞り、その構造と機能を解明することを目的とする。ラット及びウシ胸線細胞核には、CM5PWHPLCで分離される3種のエンドヌクレアーゼが存在することを見出し、DNaseα、β、γと命名した。ウシ胸線細胞にX線を照射した後、経時的に細胞を採集、核内のDNase活性の変動を調べたところ、DNaseαとβはアポトーシスに伴い速やかに減少するのに対して、DNaseγはアポトーシスを起こした核に保持されていた。そこで、正常なラット胸線細胞からDNaseαとβを、アポトーシスを誘発させたそれからDNaseγを、種々のカラムクロマトグラフィーを用いて精製をおこなった。完全精製したDNaseの標品を用いてその性質を詳細に検討した。DNaseαとβは共に、分子量32kDaの2価陽イオン非依存性の酸性エンドヌクレアーゼであった。一方DNaseγは分子量33kDaの中性エンドヌクレアーゼであった。その活性には、Ca^<2+>とMg^<2+>の両者を必要とした。また、Zn^<2+>に高感受性を示し、IC50は40μMであった。さらに、DNAK切断様式をDNA末端標識性により解析した。DNAの酵素的切断様式には、3'-OH/5'-P型と、3'-P/5'-OH型の2つがある。前者の場合は、アルカリホスファターゼによる前処理の有無にかかわらず、ターミナルデオキシヌクレオチジルトタンスフェラーゼ(TdT)と[α^<32>P]dCTPにより3'末端を標識することができる。しかし、ポリヌクレオチドキナーゼと[γ^<32>P]ATPによる5'末端の標識は、アルカリホスファターゼの前処理を行って末端のリン酸基をはずしておかないと起こらない。逆に、後者の場合は、末端標識が起こらないのは、アルカリホスファターゼ未処理の3'末端標識のときである。実際に、HeLa細胞核とDNaseα、β、γをインキュベートした後に、DNAを調製し、上述の末端標識を行った後に、アガロースゲル電気泳動にかけ、オートラジオグラフィーにより解析すると、図5に示すように、αとβはいずれも3'-P/5'-OH型であることが判明した。しかし、DNaseγは3'-OH/5'-P型であった。そこで次に、アポトーシスを起こした細胞の断片化DNAの末端がどのようになっているかについて、同様の末端標識法を用いて解析した。放射線照射やデキサメサゾン処理によってアポトーシスを誘発させたラット胸線細胞では、DNA切断様式は、いずれも3'-OH/5'-P型であり、DNaseγの切断様式と一致していた。DNaseγの精製標品をリシルエンドペプチダーゼ、又はアルパルティックエンドペプチダーゼで処理し、得られたペプチドをHPLCにより分取し、気相アミノ酸シークエンサーによってそれらの部分アミノ酸配列を決定した。これらの部分アミノ酸配列を基にプローブを作製し、ラット胸線cDNAライブラリー(λgtll)よりクローニングを行ない、その全塩基配列を決定した。このcDNAの解析から、DNaseγ遺伝子のオープンリーディングフレーム(ORF)は933塩基より成り、予想されるアミノ酸配列(310アミノ酸残基)から、DNaseγはN末端にプリカーサーペプチド(25アミノ酸残基)を有することがわかった。又、興味深いことに、このプリカーサー領域にはロイジンジッパーが存在していた。一方、N末端及びC末端には、核移動シグナルを表す塩基性アミノ酸のクラスターが存在していた。DNase活性を担う活性中心は内部に存在し、しかもDNaseIに類似しいてることが判明した。私共がラット及びウシ胸線細胞から精製したDNaseγは、分子量が33kDaのCa^<2+>/Mg^<2+>依存性のエンドヌクレアーゼで上述のエンドヌクレアーゼとは異なる新規なものであった。また、その遺伝子構造もこれまでに報告されていない新規なものであった。DNaseγの酵素学的性質、特に、Ca^<2+>要求性とZn^<2+>に高感受性であることと、アポトーシスの際に細胞内Ca^<2+>濃度の上昇がみられることや、細胞内にZn^<2+>を添加することによってアポトーシスが阻害される知見を考えるとアポトーシスのDNA断片化はDNaseγによって触媒されている可能性が高い。さらに、DNaseγによるDNAの切断様式が3'-OH/5'-P型であり、アポトーシスを起こしたラット胸線細胞の断片化したDNAの末端(3'-OH/5'-P)と一致していくことを考え合わせるとγタイプのDNaseがアポトーシスのエンドヌクレアーゼであると結論される。本研究において、アポトーシスの顕著な特徴であるDNAのヌクレオソーム単位での断片化を司るエンドヌクレアーゼを世界で初めて同定し、完全精製することができた。さらにDNaseγのcDNAクローニングにも世界で初めて成功し、その全塩基配列を決定しタンパク質の一次構造を明らかにすることができた。

これらの成果は、DNaseγの遺伝子発現、及び活性化機構を解明する上で重要な手掛りとなる知見である。また、ここを足場として、アポトーシスの実行過程の分子メカニズムを解明する突破口となる成果である。アポトーシスの実行過程では、DNAの断片化を中心とする核の断片化やアポトーシス小体の形成と言った共通の現象がみられる。このことは多様な死の情報カスケードは最終的にはある1つの共通経路に収束することを示唆している。すなわち、アポトーシスには、共通の自死装置があると考えられる。この自死装置の中心に位置するのがDNAを切断するエンドヌクレアーゼである。本研究では、このアポトーシス・エンドヌクレアーゼに焦点を絞り、その構造と機能を解明することを目的とする。ラット及びウシ胸線細胞核には、CM5PWHPLCで分離される3種のエンドヌクレアーゼが存在することを見出し、DNaseα、β、γと命名した。ウシ胸線細胞にX線を照射した後、経時的に細胞を採集、核内のDNase活性の変動を調べたところ、DNaseαとβはアポトーシスに伴い速やかに減少するのに対して、DNaseγはアポトーシスを起こした核に保持されていた。そこで、正常なラット胸線細胞からDNaseαとβを、アポトーシスを誘発させたそれからDNaseγを、種々のカラムクロマトグラフィーを用いて精製をおこなった。完全精製したDNaseの標品を用いてその性質を詳細に検討した。DNaseαとβは共に、分子量32kDaの2価陽イオン非依存性の酸性エンドヌクレアーゼであった。一方DNaseγは分子量33kDaの中性エンドヌクレアーゼであった。その活性には、Ca^<2+>とMg^<2+>の両者を必要とした。また、Zn^<2+>に高感受性を示し、IC50は40μMであった。さらに、DNAK切断様式をDNA末端標識性により解析した。DNAの酵素的切断様式には、3'-OH/5'-P型と、3'-P/5'-OH型の2つがある。前者の場合は、アルカリホスファターゼによる前処理の有無にかかわらず、ターミナルデオキシヌクレオチジルトタンスフェラーゼ(TdT)と[α^<32>P]dCTPにより3'末端を標識することができる。しかし、ポリヌクレオチドキナーゼと[γ^<32>P]ATPによる5'末端の標識は、アルカリホスファターゼの前処理を行って末端のリン酸基をはずしておかないと起こらない。逆に、後者の場合は、末端標識が起こらないのは、アルカリホスファターゼ未処理の3'末端標識のときである。実際に、HeLa細胞核とDNaseα、β、γをインキュベートした後に、DNAを調製し、上述の末端標識を行った後に、アガロースゲル電気泳動にかけ、オートラジオグラフィーにより解析すると、図5に示すように、αとβはいずれも3'-P/5'-OH型であることが判明した。しかし、DNaseγは3'-OH/5'-P型であった。そこで次に、アポトーシスを起こした細胞の断片化DNAの末端がどのようになっているかについて、同様の末端標識法を用いて解析した。
REM睡眠の神経性・液性機構の解明

REM睡眠の導入・維持には外背側被蓋核のアセチルコリン作動性ニューロン(ACh neuron)が重要な役割を演じていることが昔から示唆されてきたが、無麻酔ラットでのそのニューロンの活動をスパイクの幅によって同定しながら記録したわれわれの研究が、この役割の確定に大きな力となった。今回の研究は、しからばそのACh neuronが興奮するのはどのような入力によるかを検証するものである。それを何種類かの研究で追求した。まず、脳内の数カ所(前頭葉皮質、視床、視索前野、乳頭体、海馬)に刺激電極を固定し、その電気刺激によるACh neuronの順行性反応を見ると、視索前野、乳頭体という視床下部の刺激で反応するニューロンが最も多く、逆行性反応によって調べたACh neuronの投射先でも視索前野が一番多かったこととあわせ、ACh neuronを含む脳幹と視床下部はお互いに影響しあいながら睡眠・覚醒全体をコントロールしていることがうかがわれた。次に、ACh neuronに対する伝達物質の作用を調べた。まず、無麻酔動物でACh neuronを睡眠・覚醒による振る舞いの違いによってタイプ分けして、それぞれに対するモノアミンの作用を見たところ、ノルアドレナリンの作用はいずれに対しても抑制性で、タイプによって作用が異なるネコの場合と違っていることが明らかになった。さらに、視床下部ニューロンの持つ神経ホルモンであり、脳室内投与によってREM睡眠を増やすことが知られているプロラクチンの作用を見たところ、長く続く興奮を起こすACh neuronが多いことがわかった。これらを総合すると、REM睡眠を起こすAChneuronの興奮には、覚醒時に活動するモノアミンニューロンからの抑制がとれることによる脱抑制以外に、視床下部からのプロラクチンなどの神経ホルモン性の入力が強く関係していることがうかがわれる。我々は、睡眠・覚醒を繰り返す無麻酔動物で脳幹のコリン作動性ニューロンの活動を記録して、REM睡眠の導入維持にこのニューロンが重要な役割を果たしていることを示した世界で3つしかない研究グループの1つであり、その中でもコリン作動性ニューロンとノルアドレナリン作動性ニューロンが混在していないラットで記録する技術を持った世界でただ1つのグループである。そのコリン作動性ニューロンはスパイクの幅が他のニューロンよりも広いことで識別できることをさまざまな根拠から示してきたが、上記の他の追随を許さない技術を持つことに対する怨嗟を持つとしか思えない人達が少数いて、その人達はそのスパイク幅によるコリン作動性ニューロンの同定を認めようとしなかった。そこで私達は今回の研究課題のうちの神経機構についての基礎を固めるために、単一ニューロン活動を記録したニューロンを電極内に入れたneurobiotinでマークし、そのneurobiotinを発色させた標本をNADPH-diaphorase組織化学法で二重染色して、幅の広いスパイクを発する外背側被蓋核ニューロンはコリン作動性であり、幅の狭いスパイクのニューロンは非コリン作動性であることをみごとに示すことができた(Neuroscience,1998)。この一方で、液性機序に関する研究の方は大きな壁にぶつかって、方法論からの検討をせまられている。すなわち、当初の計画では考えうる液性因子(prolactin等)を第4脳室に挿入したカテーテルを通して注入することにしていたが、何匹ものラットでの予備実験で、第4脳室に確実に効率よくカテーテルを挿入することはほぼ不可能ということがわかった。そのため、多連電極を用いて空気圧による射出を行うべく、そのための機械を手配してセットしているところである。この研究は2年目に待たざるを得ない。

REM睡眠の導入・維持には外背側被蓋核のアセチルコリン作動性ニューロン(ACh neuron)が重要な役割を演じていることが昔から示唆されてきたが、無麻酔ラットでのそのニューロンの活動をスパイクの幅によって同定しながら記録したわれわれの研究が、この役割の確定に大きな力となった。今回の研究は、しからばそのACh neuronが興奮するのはどのような入力によるかを検証するものである。それを何種類かの研究で追求した。まず、脳内の数カ所(前頭葉皮質、視床、視索前野、乳頭体、海馬)に刺激電極を固定し、その電気刺激によるACh neuronの順行性反応を見ると、視索前野、乳頭体という視床下部の刺激で反応するニューロンが最も多く、逆行性反応によって調べたACh neuronの投射先でも視索前野が一番多かったこととあわせ、ACh neuronを含む脳幹と視床下部はお互いに影響しあいながら睡眠・覚醒全体をコントロールしていることがうかがわれた。次に、ACh neuronに対する伝達物質の作用を調べた。まず、無麻酔動物でACh neuronを睡眠・覚醒による限る舞いの違いによってタイプ分けして、それぞれに対するモノアミンの作用を見たところ、ノルアドレナリンの作用はいずれに対しても抑制性で、タイプによって作用が異なるネコの場合と違っていることが明らかになった。さらに、視床下部ニューロンの持つ神経ホルモンであり、脳室内投与によってREM睡眠を増やすことが知られているプロラクチンの作用を見たところ、長く続く興奮を起こすACh neuronが多いことがわかった。これらを総合すると、REM唾眠を起こすAChneuronの興奮には、覚醒時に活動するモノアミンニューロンからの抑制がとれることによる脱抑制以外に、視床下部からのプロラクチンなどの神経ホルモン性の入力が強く関係していることがうかがわれる。
アレルギー性鼻炎の病態形成に関わる免疫細胞浸潤機構の解明とその制御

アレルギー性鼻炎の有病者は日本を含め、先進国を中心に年々増加している。また、近年は小児での患者の増加傾向についても報告され、アレルギー性鼻炎の予防法や抜本的な治療法の確立は喫緊の課題である。アレルギー性鼻炎では、吸入などにより体内に抗原が入ると、その抗原に対する生体の免疫応答が起こり、発症へのプロセスが進行する。アレルギー性鼻炎の炎症の現場である鼻粘膜には、抗原の感作から発症に至る時間軸に沿った様々な段階で、免疫細胞が浸潤し病態が形成されていく。本研究では細胞遊走因子のケモカインに着目し、アレルギー性鼻炎における免疫細胞の鼻粘膜浸潤機構を明らかにする目的で解析を行っている。前年度までに、アレルギー性鼻炎のモデルマウスを用いた解析から、ケモカインCCL28がその受容体を発現するT細胞の鼻粘膜浸潤に関わることを見出し、その結果を踏まえて、CCL28欠損マウスを用いてアレルギー性鼻炎モデルマウスを作製して解析を行っていた。その結果、CCL28欠損マウスでは野生型マウスに比べて、鼻炎症状が軽減されること、また、アレルギー性鼻炎の病態形成に深く関わる各種の免疫細胞の鼻粘膜への浸潤細胞数が少なくなることなどを見出していた。平成30年度では、これら解析結果について、それらの精査、拡充を行った。また、CCL28欠損の及ぼす鼻腔での影響が全身でどのように作用するのかについても解析するため、まず粘膜系を中心とした組織を採取して解析を行ったところ、好酸球では腸管での分布や配置に影響が認められたので、今後これらの詳細についても解析を行う予定である。これまでの解析から、CCL28を欠損したマウスにおいて、アレルギー性鼻炎の病態を形成する各種の免疫細胞の鼻粘膜への浸潤が影響を受けることを見出している。平成30年度は引き続きその解析を行った。また、鼻粘膜への浸潤にCCL28の関与が考えられた細胞群については、その浸潤の詳細な分子機構の解析を実施予定であったが、平成30年度はあまり十分な実施が行えなかった。研究代表者の勤務先の異動に伴い、研究環境の整備などを行う必要が生じたため、研究の進捗に遅れが出た。今後は、これまでの解析で、CCL28の欠損により鼻粘膜浸潤の低下が認められた各種の免疫細胞について、平成30年度には不十分だったその詳細な浸潤機構の解析を、in vivoおよび、in vitroの実験系により実施する。また、CCL28の関与が未同定の免疫細胞についても、その鼻粘膜浸潤への影響について解析を行う。さらに、鼻粘膜でのCCL28の発現制御機構の解析にも着手する。くしゃみ、鼻水、鼻づまりを主症状とするアレルギー性鼻炎は、先進国を中心に増加する一方で、治療にはそれら症状改善のための対症療法が主として行われている。そのため、予防法や根本的治療法の開発が強く望まれている。アレルギー性鼻炎では、T細胞や好酸球、形質細胞など、種々の免疫細胞が時系列に沿って鼻粘膜に動員され、それらが複雑に相互作用することで病態が形成される。しかし、免疫細胞の鼻粘膜浸潤の分子機構の詳細は明らかではなかった。本研究では、細胞動態制御による新規の予防法や治療法の創出を目指し、アレルギー性鼻炎の病態形成に関わる免疫細胞の鼻粘膜浸潤の分子機構を解明することを目的とした。予備検討でアレルギー性鼻炎への関わりが予想されていた細胞走化性因子ケモカインCCL28について、その欠損マウスのアレルギー性鼻炎モデルを作製し、機能解析を行った。その結果、CCL28欠損マウスでは野生型と比較して、くしゃみの頻度が有意に減少し、鼻炎症状が緩和された。CCL28は、受容体CCR3とCCR10を介して標的細胞に作用する。そこで、鼻粘膜に動員される細胞群の解析を行なったところ、CCL28の受容体を発現するCD4陽性エフェクター/メモリーT細胞、好酸球、IgA陽性形質細胞の鼻粘膜浸潤が有意に抑制されることが明らかになった。一方、CCL28欠損マウスの鼻腔にCCL28タンパク質を添加すると、鼻炎時の細胞浸潤が一部回復した。また、ヒトのアレルギー性鼻炎患者鼻腔組織を用いた解析からは、ヒト鼻粘膜においてもアレルギー性鼻炎によりCCL28が発現上昇する傾向が認められたことから、CCL28による免疫細胞の鼻粘膜浸潤誘導機構は、ヒトでも同様に働いている可能性が考えられた。これらの解析から、CCL28がアレルギー性鼻炎制御の標的となる候補分子である可能性を見出すことができた。アレルギー性鼻炎の病態形成に関わるケモカインに関しては、野生型マウスで作製したアレルギー性鼻炎モデルの解析から、CCL28の発現が、鼻炎の誘導で鼻粘膜に上昇することを見出していた(既報)。そこで、CCL28の機能的意義について詳細に解析するためにCCL28欠損マウスを用いてアレルギー性鼻炎モデルを作製して解析を行った。これらの解析から、CCL28はアレルギー性鼻炎の病態に深く関係する細胞群の鼻粘膜浸潤の誘導を行なっていることが明らかとなり、その結果、CCL28はアレルギー性鼻炎の症状や病態形成に重要な役割を担っていることが示唆された。これらの成果を踏まえて、現在までのところ、当初の研究計画はおおむね順調に進展している。

また、近年は小児での患者の増加傾向についても報告され、アレルギー性鼻炎の予防法や抜本的な治療法の確立は喫緊の課題である。アレルギー性鼻炎では、吸入などにより体内に抗原が入ると、その抗原に対する生体の免疫応答が起こり、発症へのプロセスが進行する。アレルギー性鼻炎の炎症の現場である鼻粘膜には、抗原の感作から発症に至る時間軸に沿った様々な段階で、免疫細胞が浸潤し病態が形成されていく。本研究では細胞遊走因子のケモカインに着目し、アレルギー性鼻炎における免疫細胞の鼻粘膜浸潤機構を明らかにする目的で解析を行っている。前年度までに、アレルギー性鼻炎のモデルマウスを用いた解析から、ケモカインCCL28がその受容体を発現するT細胞の鼻粘膜浸潤に関わることを見出し、その結果を踏まえて、CCL28欠損マウスを用いてアレルギー性鼻炎モデルマウスを作製して解析を行っていた。その結果、CCL28欠損マウスでは野生型マウスに比べて、鼻炎症状が軽減されること、また、アレルギー性鼻炎の病態形成に深く関わる各種の免疫細胞の鼻粘膜への浸潤細胞数が少なくなることなどを見出していた。平成30年度では、これら解析結果について、それらの精査、拡充を行った。また、CCL28欠損の及ぼす鼻腔での影響が全身でどのように作用するのかについても解析するため、まず粘膜系を中心とした組織を採取して解析を行ったところ、好酸球では腸管での分布や配置に影響が認められたので、今後これらの詳細についても解析を行う予定である。これまでの解析から、CCL28を欠損したマウスにおいて、アレルギー性鼻炎の病態を形成する各種の免疫細胞の鼻粘膜への浸潤が影響を受けることを見出している。平成30年度は引き続きその解析を行った。また、鼻粘膜への浸潤にCCL28の関与が考えられた細胞群については、その浸潤の詳細な分子機構の解析を実施予定であったが、平成30年度はあまり十分な実施が行えなかった。研究代表者の勤務先の異動に伴い、研究環境の整備などを行う必要が生じたため、研究の進捗に遅れが出た。今後は、アレルギー性鼻炎におけるCCL28の標的細胞として平成29年度に見出したCD4陽性エフェクター/メモリーT細胞、好酸球、およびIgA陽性形質細胞に関して、引き続き、鼻粘膜浸潤機構の詳細な解析をin vitroおよび、in vivoの実験系により実施する。また、免疫抑制に重要な制御性T細胞や、アレルギー性鼻炎の即時相反応で重要なIgE産生形質細胞においては、CCR10を発現することが予想されるため、CCL28の鼻粘膜における標的細胞である可能性が考えられる。さらに、平成29年度に行った解析からは、CCL28の標的細胞には、新たに好塩基球が含まれる可能性についても得ることができた。そこで、鼻粘膜におけるCCL28の新たな標的細胞を探索し、それら細胞の時系列に沿った鼻粘膜浸潤機構の詳細について解析する。また、鼻粘膜におけるCCL28発現細胞の特定や、発現誘導機構についてはまだ詳しく解析が行われていない。そこで、それら検討を免疫組織染色やCCL28プロモーターの解析により行い、標的細胞の時系列に沿った鼻粘膜浸潤への影響についても解析する。これらを通じて、CCL28のアレルギー性鼻炎の病態形成における関与をより詳細に解析する予定である。
膜タンパク質のオルガネラ標的化とトポロジー形成の分子機構

本研究では、これまでに明らかにした小胞体への膜タンパク質の組み込み様式をもとに、いくつかの代表的なマルチスパン膜蛋白質のすべての膜貫通セグメントの膜内配置機構を徹底的に解析した。アミノ末端側を膜透過させる1型シグナルアンカー配列が、予想外に長いドメインを膜透過できることを明らかにし、その際に、燐酸高エネルギー化合物や小胞体内腔の熱ショックタンパク質(hsp70,BiP)は関与せず、リボソームが膜透過自体に寄与し、膜透過の駆動力が初期段階とその後の連続的段階とで異なることを明らかにした。また、われわれが明らかにしてきた「内在性シグナルアンカー配列による他律的な低疎水性セグメントの膜組み込みモデル」を支持する、新たな事例を見出した。並行して、疎水性度の高い膜蛋白質が小胞体への標的化を回避し、ミトコンドリアやペルオキシソームなどの分泌経路以外のオルガネラに標的化するためのシグナル配列を解析し、膜蛋白質に特化したミトコンドリア標的化シグナルを明らかにした。このシグナルは小胞体への合成に共役した標的化を抑制し、ミトコンドリアへの合成後の輸入を実現するものであった。さらに、ミトコンドリア外膜の膜貫通蛋白質TOM22のトポロジー形成シグナルを明らかにした。またミトコンドリア蛋白質膜透過チャネルを形成するTOM40の大量発現、精製、再生系を確立し、低分子透過活性のあること、ミトコンドリアシグナルを認識し、分子の奥深くにそれを収納することを明らかにした。本研究では小胞体における膜蛋白質の構造形成機構ならびにミトコンドリア外膜への特異的標的化シグナル配列について探求した。進展内容は以下のとおりである:(1)小胞体では膜組み込み特性の強いセグメントによって、膜に組み込まれる特性のないポリペプチドセグメントが膜貫通配置を取るという我々のモデルを、いくつかの実例でさらに実証し、膜貫通セグメントの「他律的配置(autonomous positioning)」と命名した(Sakaguchi, BBRC,2002;Ukajiら,BBRC,2002)。タンパク質のフォールディングにおいて、他のセグメントの立体配置決定によって特定のセグメントの配置が他律的に決定されてしまうことを明確に示したものである。(2)膜貫通セグメントが他のセグメントと極性または電荷間相互作用することによって膜内に組み込まれることを2例(ヒト赤血球バンド3および植物カリウムイオンチャネル)について実証した(Kankiら,Biochemistry,2002;Satoら, PNAS,2002;Satoら, JBC,2003)。これで、疎水性セグメントが自発的に組み込まれるモード、疎水性の不十分なセグメントが他の疎水性セグメントの組み込みに伴って強制的に組み込まれるモード、および極性相互作用による膜組み込みモード、のすべてを実験的に示すことが完了した。(3)膜蛋白質が、小胞体への標的化を回避してミトコンドリア外膜に到達するためのシグナルを、カルボキシル末端に膜結合セグメントを持つTom5について確定した(Horieら、Mol. Biol. Cell,2002)。膜貫通セグメントが長すぎず適度な疎水性度を有することと、膜貰通セグメント直後に正荷電アミノ酸が存在することが必須である。膜タンパク質の細胞内局在と膜トポロジー形成機構の全容解明を目的として研究を行ってきた。本年度は小胞体でのマルチスパン膜タンパク質のトポロジー形成機構をさらに探究し、またミトコンドリア外膜タンパク質の標的化とトポロジー形成に展開した。小胞体系では、電位依存性イオンチャネルの電位センサー部分を構成する「多数の正電荷を有する膜貫通セグメントS4」が、その前(アミノ末端側)の膜貫通セグメント内に存在する負荷電アミノ酸残基と特異的に相互作用ながら膜貫通トポロジーを形成することを明らかにした。疎水性以外の要因によって膜貫通トポロジーを形成する様式として明確となったはじめての例である。また、多くのイオン輸送体には透過ポア部分に深く進入しているループ構造、いわゆる「フィルター領域」、が存在する。

このループ構造が生合成とトポロジー形成途上では、一度大きく小胞体内腔側に露出してから膜内に収納されることを2種のカリウムチャネルで示した。さらに、赤血球膜の陰イオン交換輸送体(バンド3タンパク質)について知られている遺伝病(SAO)において、第一膜貫通セグメントが膜組み込み不全となっていることを見出した。遺伝病の病因が膜トポロジー形成不全によっていることを見出したはじめての成果である。ミトコンドリア系では、分子のカルボキシル末端に膜結合領域を持つTom5と、分子の中央部分にそれをもつTOM22の2種の外膜タンパク質について、小胞体標的化を回避しミトコンドリア外膜に特異的に標的化されるためのシグナル情報を明らかにした。いずれの場合も膜貫通セグメントの高すぎる疎水性度は小胞体標的化をきたすため、適度に低い疎水特性が要求されることが明らかになった。TOM22ではαヘリックスがシグナルの構成要因であることも示した。本研究では、これまでに明らかにした小胞体への膜タンパク質の組み込み様式をもとに、いくつかの代表的なマルチスパン膜蛋白質のすべての膜貫通セグメントの膜内配置機構を徹底的に解析した。アミノ末端側を膜透過させる1型シグナルアンカー配列が、予想外に長いドメインを膜透過できることを明らかにし、その際に、燐酸高エネルギー化合物や小胞体内腔の熱ショックタンパク質(hsp70,BiP)は関与せず、リボソームが膜透過自体に寄与し、膜透過の駆動力が初期段階とその後の連続的段階とで異なることを明らかにした。また、われわれが明らかにしてきた、内在性シグナルアンカー配列による他律的な低疎水性セグメントの膜組み込みモデルを支持する、新たな事例を見出した。並行して、疎水性度の高い膜蛋白質が小胞体への標的化を回避し、ミトコンドリアやペルオキシソームなどの分泌経路以外のオルガネラに標的化するためのシグナル配列を解析し、膜蛋白質に特化したミトコンドリア標的化シグナルを明らかにした。このシグナルは小胞体への合成に共役した標的化を抑制し、ミトコンドリアへの合成後の輸入を実現するものであった。さらに、ミトコンドリア外膜の膜貫通蛋白質TOM22のトポロジー形成シグナルを明らかにした。またミトコンドリア蛋白質膜透過チャネルを形成するTOM40の大量発現、精製、再生系を確立し、低分子透過活性のあること、ミトコンドリアシグナルを認識し、分子の奥深くにそれを収納することを明らかにした。
同種骨髄移植後の造血系・免疫系細胞の再建と免疫寛容獲得におよぼすGVHの影響

骨髄移植後、骨髄幹細胞より成熟T細胞へ分化する過程で、ホスト抗原反応性T細胞はnegative selectionによってクローン消去を受ける。抗原として内因性スーパー抗原の一つ、Mls-l^aに注目し、Mls-l^a反応性T細胞そのクローン消去のメカニズムについて解析した。その結果Mls-l^aは、ホストの放射線抵抗性T細胞によって産生されることが判明した。さらに産生されたMls-l^a産物は、ドナー幹細胞由来のMHCクラスII陽性細胞(マクロファージ、樹状細胞)に移行され、その後Mls-l^a-クラスII複合体が、Vβ6^+またはVβ8.1^+のMls-l^a反応性T細胞を胸腺髄質内において消去することを明らかにした。しかし、マイナ-GVHRの存在下では、ドナー成熟CD8^+T細胞によって、トレロジェンを産生するホスト放射線抵抗性T細胞が完全に排除されるため、Vβ6^+またはVβ8.1^+T細胞のクローン消去が生じなかった。この事実は、マイナ-GVHRによる発癌性ウイルス産物を発現する細胞の排除(graft versus leukemia)への道を拓くもので、今後白血病の治療として骨髄移植を行う場合に、基礎データとなると考えられた。トレロジェン(Mls-l^a)産生細胞は、主としてCD8^+T細胞で、CD44^+CD8^+ T細胞は中枢核、末梢性いずれのクローン消去も誘導したが、CD44^-CD8^+ T細胞は胸腺内のクローン消去を生じなかった。この結果からCD44分子は、T細胞が胸腺に入る際のレセプターとなっていることが示唆された。最後に、胸腺内にNK1.1^+TCR α/β^+細胞が同定された。これらはCD4^+8^+未熟型胸腺細胞をFasを介して殺すことが判明した。現在NK1.1^+TCR α/β^+ T細胞によるGVHRの誘導と制御メカニズムを解析中である。
スキンケアの深化：スキンテア（皮膚裂傷）予防システムの構築

スキンテアは脆弱な皮膚に認める創傷で、強い疼痛を伴う。そのため、スキンテアの予防は重要である。そこで、まずスキンテアを褥瘡や他の皮膚疾患と混同しないための「判定ツール」を作成した。つぎに、調査よりスキンテアの発生に関連する【皮膚の健康状況】と【摩擦・ずれといった一時的な外力の発生状況】の2因子を抽出して、「リスクアセスメントツール」を開発した。最後に、発生因子に関する状況を選択すると必要なケア導きだせる「予防ケアツール」を作成し、以上3つのツールからなるスキンテア予防システムを構築した。スキンテア(皮膚裂傷)は、せん断力、摩擦力または鈍的な力により皮膚層が分断する外傷で、通常の医療・療養環境の中で生じる。スキンテアが発生すると強い疼痛をもたらすだけでなく、上皮化の遅延や再発が続くと慢性創傷に移行するリスクが高い。さらに、スキンテアは、主に脆弱な皮膚を有する高齢者に多いと海外では報告されており、超高齢社会の本邦が注目すべき創傷である。しかし、未だ本邦における有病率並びに発生率は十分に解明されていないだけではなく、スキンテアという状態も周知されていない。そこで、スキンテア判定教育ツール、発生予測スケール、予防ケアツールの3つで構成するスキンテア予防システムを構築することは意義がある。初年度はスキンテア判定教育ツールの作成に着手した。まず、スキンテアと他の創傷とを混同するケースについて創傷ケアに精通している10名の看護師を対象にフォーカスグループインタビューを行った。その結果、持続する圧迫やずれで生じた創傷である褥瘡と医療関連機器圧迫創傷、失禁によって起こる失禁関連皮膚障害があがった。さらに、下肢の血管障害によって起こりうる静脈性・動脈性潰瘍と、糖尿病性潰瘍があがった。そのため、画像を用いてスキンテアの判定を行う資料を作成した。なお、創傷の特徴として真皮までの損傷であることが抽出された。また、スキンテアは、国際的にSTAR分類システムによって5つのカテゴリーに分けられるため、スキンテアの画像からカテゴリーを判定できる練習システムを構築した。なお、作成した資料は、創傷を専門としない看護師に確認を依頼し、利用可能かを検証した。スキンテア(皮膚裂傷)は脆弱な皮膚に認める創傷で、強い疼痛を伴う。そのため、スキンテアを予防するために、1.スキンテア判定教育ツール、2.発生予測スケール、3.予防ケアツールの3つで構成するスキンテア予防システムを構築する必要がある。そこで、前年度には、スキンテア判定教育ツールを開発した。今年度は、発生予測スケールの開発にむけて、発生リスクの同定を行うために調査を行った。その結果、発生に関連する因子が抽出され、海外の文献から導き出された因子とも照合した。その後、それらの因子は、スキンテアは脆弱な皮膚に認める創傷であることより患者個々によって皮膚の健康度が異なるため皮膚に注目した「個体要因」と、摩擦・ずれといった一時的な外力によってスキンテアが発生することより「外力発生要因」の2つに大別できた。個体要因のアセスメント項目は、加齢、治療(長期ステロイド薬使用、抗凝固薬使用)、低活動性、過度な日光曝露歴(屋外作業・レジャー歴)、抗がん剤・分子標的治療歴、放射線治療歴、透析治療歴、低栄養状態(脱水含む)、認知機能低下、皮膚の脆弱状態である。なお、皮膚の脆弱状態は、乾燥・鱗屑、紫斑、浮腫、水疱、ティッシュペーパー様の有無で判断する。外力発生要因のアセスメント項目は、患者自身の行動である痙攣・不随意運動、不穏行動、物にぶつかる(ベッド柵など)と、それ以外の、体位変換・移動介助、入浴・清拭等の清潔ケアの介助、更衣の介助、医療用テープの貼付、器具の使用、リハビリテーションの実施である。なお、個体要因がなくとも医療用テープ剥離時に発生していたため、早急な対応が必要と考え、テープによるスキン-テアの予防ケアアルゴリズムを完成させた。我々の調査結果で、個体要因がなくとも医療用テープ剥離時に発生していた。さらに、全国調査の結果からテープによるスキンテアの発生が本邦でも最も多いという情報を得た。そのため、医療現場でよく用いられる医療用テープの予防策を早急に立案することが必要と考え、医療用テープによるスキンテアの予防ケアアルゴリズムを完成させ、予防ケアを明確にした。そのため、その他の因子の関する予防ケアの抽出が遅れている。そこで、前年度までに、スキンテア判定教育ツールと発生予測スケールを開発した。今年度は、予防ケアツールの開発にむけて、発生予測スケールにある発生に関する因子ごとに予防策をコンセンサスメソッドにて検討した。その結果、皮膚の健康度が異なるため皮膚に注目した「個体要因」と、摩擦・ずれといった一時的な外力によってスキンテアが発生することより「外力発生要因」の大別された2要因について、発生に関連する状況ごとに必要なケアを導き出せるものとした。この状況は、スキンテア発生の因子があるか否かのアセスメントを行う際の観察項目となる。具体的には、「個体要因」の栄養では栄養状態不良などの2つ、スキンケアでは皮膚が乾燥しているといった7つの状況を抽出した。

「外力発生要因」の外力保護ケアでは、≪安全な環境≫について8つ、≪安全なケア方法≫について2つ、≪安全な医療用品などの使用≫について4つの状況を抽出した。これらの状況に応じたケアを決定し、一覧で状況と必要なケアをチェックできる予防ケアツールを完成させた。さらに、スキンテアが発生した場合には、STARスキンテア分類システムによって創傷を5つに分類し、それぞれに応じた創管理の留意点をまとめた。なお、個体要因がなくとも医療用テープ剥離時にスキンテアが発生していたため、医療者のみならず患者や家族もわかる予防のためのリーフレットも作成した。以上より、今年度の目標である予防ケアツールが完成し、3つからなるスキンテア予防システムは完成した。スキンテアは脆弱な皮膚に認める創傷で、強い疼痛を伴う。そのため、スキンテアの予防は重要である。そこで、まずスキンテアを褥瘡や他の皮膚疾患と混同しないための「判定ツール」を作成した。つぎに、調査よりスキンテアの発生に関連する【皮膚の健康状況】と【摩擦・ずれといった一時的な外力の発生状況】の2因子を抽出して、「リスクアセスメントツール」を開発した。最後に、発生因子に関する状況を選択すると必要なケア導きだせる「予防ケアツール」を作成し、以上3つのツールからなるスキンテア予防システムを構築した。初年度は、スキンテア判定教育ツールの開発後に臨床で実態調査の実施の開始を予定していたが、研究計画作成後に公表された国外の論文は研究者が異なるとスキンテアの危険因子が異なっていた。また、人種によって皮膚の耐久性、さらには日光暴露に関連する生活習慣にも差があるため、その点を考慮した調査項目ではないと必要な結果を得ることができない。そのため、世界のスキンテア研究を牽引しているDr. Carville K.(Curtin Univ. of Technology)にアドバイスを受ける機会を設け、その間に創傷関連の学会にてスキンテアに関する情報を収集して調査項目の確定を行ったため、調査開始が次年度となった。早急に医療用テープ以外の因子に関する予防ケアを抽出する。さらに、予防ケアツールの評価までを時間通りとするために、効果判定の研究準備を同時進行で進める。医歯薬学早急に、医療施設におけるスキンテアの有病率並びに発生率の推定と発生・治癒状況の実態調査を開始する。さらに、予防ケアツールの開発までの時間を当初通りとするために、発生者個々の事例から発生要因を導き出す際には、可能な予防ケアも同時に検討する。医療現場でよく用いられる医療用テープによるスキンテアの予防策を早急に立案することが必要と考え、テープによるスキンテアの予防ケアアルゴリズムを完成させ、予防ケアを明確にした。そのため、その他の因子の関する予防ケアの抽出が遅れ、その抽出に要する交通費と印刷費の使用が次年度使用額となった。調査開始にあたり、調査項目を再検討すると、当初の計画時までに公表された国外の論文間でスキンテアの危険因子が異なっていた。また、人種によって皮膚の耐久性、さらには日光暴露に関連する生活習慣にも差があるため、その点を考慮した調査項目ではないと必要な結果を得ることができないと判断した。
複雑性心的外傷後ストレス障害に対する介入法の検証

本研究では、国際疾病分類の第11回改訂版(ICD-11)で新たに採用された複雑性心的外傷後ストレス障害(CPTSD)に対する認知行動療法(STAIR/NST)の実施可能性、安全性、有効性について多施設共同研究によって検証する。STAIR/NSTは主に幼少期の虐待サバイバーを対象として米国で開発された治療法であり、感情調整と対人関係のスキルトレーニングに加えて、トラウマ記憶の処理を段階的に行うものである。本研究では、日本各地の医療機関と協働した多施設共同研究を行い、一般化可能性を担保した形で介入効果を検証する。同時に、治療プロセスの詳細な検証や治療ノウハウのまとめを行う。
鄒守益著作の文献学的研究

鄒守益著作の調査・収集を終え、今まで全く知られていなかった明版『東廓鄒先生遺稿』を発見し、現存する清以降の刊本との異同を指摘した。また、従来全く言及されることのなかった、世界に唯一現存する孤本である『鄒東廓先生詩集』を発見し、そこに収められている鄒守益の詩の大部分は従来全く知られていなかったものであることを明らかにした。これらの明版諸本の発見が、単なる校訂上の資料ではなく、明代における思想の展開と出版物の流布との密接な関係を物語るものでもあることを指摘し、学界に一定の影響を与え、今後の鄒守益研究に新生面を開くものである。平成24年度においては、引き続き王守仁の弟子たちに関する文献の収集を努め、鄒守益の著作の成立、出版および各時代における流布状況について考察を行った。とくに、鄒守益の著作の編集、出版と関わった人物について考察し、その著作の出版に関わった人物のネットワークを分析した。そのうち従来知られてこなかった逸文を収集し、翻刻を行った。また、鄒守益を含めた王守仁の弟子たちによる出版活動の過程を考察し、王守仁の言葉の書籍に定着した歴史について論文をまとめた。以上のような研究に基づき、「思想家の言葉はどのようにして書籍に定着したのかー王陽明を一例として」(『文化都市寧波』/東京大学出版会98-1192013年2月)。また、本研究で得た知見も生かして、読む事典として企画された『中国・日本<漢>文化大辞典』(明治書院)のために「王守仁」、「陽明学」、「李贄」などの項目を執筆した。なお、欧米における明清思想文献の研究文献の収集と翻訳にも行い、その成果として下記の論文を翻訳した。「19世紀のベストセラーについて:四堡における商業出版」(シンシア・J・ブロカウ著、永冨青地訳、『人文社会科学研究』No53、29-86、2013年3月)。本研究は順調に推移しており、すでに鄒守益の著作の全世界における所蔵状況の調査を終え、それらの大部分について複写を完了している。その過程において、従来、研究者に全く知られていなかった、明版の『東廓鄒先生遺稿』が日本および台湾において現存することを発見し、本年三月に発表した、「『東廓鄒先生遺稿』の諸本について」(『東洋の思想と宗教』第三十一号)において、現存する清以降に刊行された諸本との異同を指摘しておいた。また、これらの明版諸本の発見が、単なる校訂上の資料というのにとどまらず、明代における思想の展開と出版物の流布との密接な関係を物語るものであることを指摘しておいた。このような指摘は、従来思想書に関しては具体的になされてきたことがなかったため、学界に対して一定のインパクトを与えうるものと考えられる。平成23年度においては、本研究の基礎となる調査として、現在までに活字化された、陽明学関係の文献学的資料を網羅的に収集した。特に大陸において新たに編纂された『王陽明全集』を調査することによって、今日までの王守仁とその弟子たちとに関する逸文収集の水準を確認できた。一方で、明代文献学に関する欧米の文献の収集も行い、この分野の最先端の情報を入手している。これらの成果に基づき、永冨が収集を開始した鄒守益文献のうち、従来知られていないものがどれであるかを確認することが出来た。その結果、新発見の資料である事が確認できたものに関しては、すでに翻刻の作業を開始している。以上のような調査に基づき、平成23年度において、以下のような成果を挙げることが出来た。まず、陽明学研究における文献学の意義に関して、「陽明学研究における文献学の意義ー『王文成公全書』所収の「年譜」への挑戦」(『東アジア書誌学への招待』第二巻/東方書店、123-146、2011年12月)において検証し、同時に江戸期の日本においてどのように陽明学の文献学的研究がすすめられたのかに関しては、「佐藤一斎と『伝習録欄外書』ー江戸期における陽明学の研究」(永冨青地編『儒教その可能性』/早稲田大学出版部、121-167、2011年12月)において詳説することが出来た。一方、明代文献学に関する欧米文献の調査の成果としては、「ケンブリッジの漢籍コレクションについて」(ジョセフP.マクダーモット(著)、永冨青地(訳)、『人文社会研究』52号、1-20、2012年3月)がある。

これらの成果は、次年度以降の研究に道筋をつけるものである。。本研究においては、現在陽明学研究において最も注目を浴びている陽明後学の資料のうち、特に研究の遅れていた鄒守益に関する文献の収集に努め、鄒守益の著作の成立、出版および各時代における流布状況について考察を行った。その成果としては、「『東廓鄒先生遺稿』の諸本について」(『東洋の思想と宗教』31、2014年3月)などがあるが、特に、従来全く知られていなかった鄒守益の詩集である内閣文庫蔵『鄒東廓先生詩集』の紹介(「内閣文庫蔵『鄒東廓先生詩集』について」、『汲古』66/汲古書院、2014年12月)および翻刻(「『鄒守益集』未収詩輯佚」(一)(二)、『人文社会科学研究』54・55、2014・2015年3月)をおこなったことは、研究期間中、精力的に海外における学会に参加し、アジア各地の研究者と交流を行ったことと相まって、日本国内はもちろん、中国・台湾の研究者からも高い評価を得ることができた。また、鄒守益を含めた王守仁の弟子たちによる出版活動の過程を考察・研究し、多くの論文をまとめることができた。その成果としては、「陽明学研究における文献学の意義ー『王文成公全書』所収の「年譜」への挑戦」(『東アジア書誌学への招待』第二巻/東方書店、2011年12月)、「思想家の言葉はどのようにして書籍に定着したのかー王陽明を一例として」(『文化都市寧波』/東京大学出版会98-1192013年2月)、「《王文成公年譜》訂補」(『版本目録学研究』4/北京大学出版社、2013年8月)、「白鹿洞本『伝習録』について」(『陽明学』33、2015年3月)が挙げられる。同時に欧米における明清思想文献の研究文献の収集と翻訳も行い、その成果は近日中に、『中国書籍史のパースペクティブ出版・流通への新しいアプローチ』として勉誠出版より刊行されることがすでに確定している(ISBN:978-4-585-29097-1)。中国思想平成24年度においては、本研究の中心課題である、鄒守益関係の資料の網羅的な収集を行った。特に大陸において新たに編纂された『陽明後学文献叢書』を調査することによって、今日までの王守仁の弟子たちの逸文収集の水準を確認できた。これらの成果に基づき、永冨が収集を開始した鄒守益文献の翻刻を体系的に行うことができた。その成果の一部は、「思想家の言葉はどのようにして書籍に定着したのかー王陽明を一例として」において、鄒守益の残した文献からの言及として活用することができた。また、本研究の背景となる、中国の出版文化に関する調査の一環として、「19世紀のベストセラーについて:四堡における商業出版」を翻訳し、当該分野における欧米の研究水順を確認することができた。さらに、本研究によって得た知見は、『中国・日本<漢>文化大辞典』(明治書院)のための「王守仁」、「陽明学」、「李贄」の各項目において、十分に活用されている。以上のような成果に基づき、平成24年度においては、研究はほぼ順調に進んでいるものと判断する次第である。本研究は、すでに現存する鄒守益著作の所在に関する調査を終了し、それらの複写もほぼ完了するなど、おおむね順調に推移している。また、その過程において、従来全く知られていなかった新資料である、明版の『東廓鄒先生遺稿』や『鄒東廓先生詩集』を発見することができた。しかしながら、これらの新発見の資料の量があまりにも膨大であるため、その分析および翻刻になお若干の時間を要する見込みである。平成二十三年度においては、本研究の基礎となる調査として、現在までに活字化された、陽明学関係の文献学的資料を網羅的に収集した。とくに大陸において新たに編纂された『王陽明全集』を調査することによって、今日までの王守仁とその弟子たちとに関する逸文収集の水準を確認できた。