hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
DSPを用いた振動インテンシティ制御の研究

1.一次元構造体中を伝搬する振動インテンシティに着目した固体音制御について,数式処理システムを利用して解析を行った.その結果単に一点における振幅制御では,伝搬エネルギーを最小にすることはできないことを明らかにした.また,インテンシティを制御する場合,制御点を半波長以上はなさなくては最小値をゼロにできないこと,その理由は,境界付近の減衰波の影響であることを明らかにした.また,半波長以上離れた場合には,一点制御とインテンシティ制御は,等価であることを明らかにした.2.減衰波の影響が無視できない場合について,インテンシティを制御するための適応ディジタルフィルタを用いた振動インテンシティの制御方法について検討した.その結果,インテンシティを4つのセンサを用いて差分法によって周波数軸上で計算し,その値を誤差信号として適応ディジタルフィルタに入力すればよいことを明らかにした.周波数軸上での計算には,周波数軸上ブロックアルゴリズムを導入し,計算上折り畳み歪みが起こらないよう工夫を施した方法を提案した.3.減衰波が無視できる振動場を仮定したインテンシティ制御の実験を行った.DSPボードをパーソナルコンピュータに組み込み適応フィルタによる制御プログラムを開発した.そこへ,一次元構造体による実験系を構築し,一点制御,インテンシティ制御の2つの方法を実現した.その結果,高周波数においてインテンシティ制御が有効に動作することが分かった.1.一次元構造体中を伝搬する振動インテンシティに着目した固体音制御について,数式処理システムを利用して解析を行った.その結果単に一点における振幅制御では,伝搬エネルギーを最小にすることはできないことを明らかにした.また,インテンシティを制御する場合,制御点を半波長以上はなさなくては最小値をゼロにできないこと,その理由は,境界付近の減衰波の影響であることを明らかにした.また,半波長以上離れた場合には,一点制御とインテンシティ制御は,等価であることを明らかにした.2.減衰波の影響が無視できない場合について,インテンシティを制御するための適応ディジタルフィルタを用いた振動インテンシティの制御方法について検討した.その結果,インテンシティを4つのセンサを用いて差分法によって周波数軸上で計算し,その値を誤差信号として適応ディジタルフィルタに入力すればよいことを明らかにした.周波数軸上での計算には,周波数軸上ブロックアルゴリズムを導入し,計算上折り畳み歪みが起こらないよう工夫を施した方法を提案した.3.減衰波が無視できる振動場を仮定したインテンシティ制御の実験を行った.DSPボードをパーソナルコンピュータに組み込み適応フィルタによる制御プログラムを開発した.そこへ,一次元構造体による実験系を構築し,一点制御,インテンシティ制御の2つの方法を実現した.その結果,高周波数においてインテンシティ制御が有効に動作することが分かった.
重症アレルギー眼疾患の結膜線維芽細胞におけるペリオスチンの恒常的な発現機構の解明

重症アレルギー性角結膜炎は結膜の強い炎症や線維化を主体とする難治性の疾患であるが、その機序は不明である。申請者はこれまでに患者由来の結膜線維芽細胞に着目し、遺伝子発現パターンを比較解析したところ、患者由来結膜線維芽細胞ではペリオスチン遺伝子が無刺激状態において有意に高発現し、継代培養後にも発現が維持されることを見出している。本研究では、患者由来結膜線維芽細胞のペリオスチンのプロモーターにおいて、ヒストンのメチル化状態の変化が起こっていること、さらにTGF-βが長時間ペリオスチンを発現誘導しうることを確認した。よって、ペリオスチン発現誘導にエピジェネティック制御機構が関与することが示唆された。重傷アレルギー性眼疾患は結膜の強い炎症や線維化を主体とした慢性炎症疾患であるが、難治化に至る過程は不明である。本研究では、重症アレルギー性眼疾患患者の線維芽細胞において、無刺激の状態においても高発現するペリオスチンに着目し、その発現過程においてエピジェネティック変化が関与することを明らかにし、さらにペリオスチンの新たな発現制御メカニズムを解明することを目的とする。当該年度の研究では、まず申請書項目1に基づき、正常および重症アレルギー性結膜炎患者由来の線維芽細胞におけるペリオスチン遺伝子のプロモーター領域のヒストン修飾状態を比較検討した。重症アレルギー性角結膜炎患者と正常ドナー由来の結膜線維芽細胞をそれぞれ同一条件で培養後、いくつかの抗ヒストン修飾抗体を用いてChIP assay法で調べた。結果、正常由来線維芽細胞に比べ、重症アレルギー性角結膜炎患者線維芽細胞において、ペリオスチンのプロモーター領域におけるH3K9me3(遺伝子発現抑制マーカー)が減少傾向を示すことがわかった。一方で、H3K4me3(遺伝子発現促進マーカー)は変動がなかった。次に申請書項目2に基づき、正常結膜線維芽細胞について、ペリオスチンのエピジェネティクスな発現誘導を引き起こす候補因子を解析した。まずはペリオスチンの発現誘導をおこすことが既知であるIL-13およびTGF-βについて、刺激正常ドナー由来の結膜線維芽細胞へ長期間(7日間)刺激を行い、その後wash outを行い、さらに細胞培養を続けた後のペリオスチンの遺伝子発現をqPCRで確認した。その結果、IL-13は刺激がある状態ではペリオスチンを発現誘導するが、wash out後には徐々に発現が低下し、無刺激の細胞とほぼ同じレベルになるのに対し、TGF-βはwash out後にもペリオスチンの遺伝子発現を維持しうることが分かった。当初の目的通り、同一環境で継代培養された重症アレルギー性角結膜炎患者と正常ドナーの結膜線維芽細胞において、ペリオスチン遺伝子のプロモーター領域におけるヒストン修飾状態が変化していることを同定できた。このことは、線維芽細胞が生体内の炎症環境で受けたサイトカインなどの影響によってエピジェネティック変化をおこし、単離培養後にもしばらく継続して残ることを示している。さらに、正常ドナーの結膜線維芽細胞を用いた検討において、TGF-βがペリオスチン遺伝子のエピジェネティックな発現誘導に関与している可能性を発見した。引き続き、この成果をもとに、TGF-βの下流シグナルによるエピジェネティクス誘導メカニズムを検討し、重症アレルギー性角結膜炎患者由来線維芽細胞で観察されたエピジェネティック変化との共通性を調べる予定である。当該年度の研究では、まず申請書項目3に基づき、ペリオスチン遺伝子のエピジェネティクス誘導に関与するシグナルの探索を行った。無刺激の重症アレルギー性眼疾患患者の線維芽細胞と正常結膜線維芽細胞についてマイクロアレイを用いて網羅的な遺伝子発現解析を実施し、正常群よりも疾患群において有意に高発現する遺伝子群を抽出し、IPA (Ingenuity pathway analysis)を用いてパスウェイ解析を行った。その結果、TGF-b signalingが最も可能性が高い上流候補因子として予測された。次に、ペリオスチン高発現のシグナル経路の検証のため、ステロイド剤(Dexamethasone)に対する反応性を調べたところ、無刺激においても恒常的に発現するペリオスチンを部分的に抑制した。一方、上流候補因子として予測されたTGF-bを用いて正常線維芽細胞へ刺激を行った際のペリオスチン発現は、ステロイド剤ではほとんど抑制できなかった。このことから、疾患由来の線維芽細胞におけるペリオスチンの高発現は、ステロイド応答性と抵抗性の2つの要素があり、TGF-bは後者への関与が想定される。さらに、疾患群において有意に高発現する遺伝子群の中にエピジェネティック誘導に関連する因子があるかどうかを検索したところ、いくつかのエピジェネティック関連因子を発見した。興味深いことに、その中のヒストンの脱メチル化因子のひとつが、無刺激の結膜線維芽細胞におけるペリオスチン遺伝子発現と正の相関がみられることがわかった。昨年度の研究成果より、疾患由来結膜線維芽細胞では、ペリオスチンのプロモーター領域で、ヒストンのメチル化状態が変動していることを明らかにしており、この結果とも一致する。よって、このヒストン脱メチル化因子がペリオスチン遺伝子のエピジェネティクス誘導に直接関与する可能性が示唆された。本研究では、患者由来結膜線維芽

細胞のペリオスチンのプロモーターにおいて、ヒストンのメチル化状態の変化が起こっていること、さらにTGF-βが長時間ペリオスチンを発現誘導しうることを確認した。よって、ペリオスチン発現誘導にエピジェネティック制御機構が関与することが示唆された。平成27年度に得られた結果を基にして、引き続きペリオスチン遺伝子のエピジェネティクス制御因子を同定する。具体的には、ペリオスチン遺伝子の発現誘導、および発現維持が確認されたTGF-βについて、重症アレルギー性眼疾患患者由来結膜線維芽細胞と同様のエピジェネティックな変換が誘導可能かどうか、ヒストンの化学修飾状態を調べる。また正常結膜線維芽細胞において、TGF-βによるエピジェネティック変換が誘導される際の薬剤感受性(FK506、ステロイドおよびヒストン脱アセチル化酵素阻害剤などを予定)を検討する。さらに、病態形成に関与するエピジェネティック変換のメカニズムを検証するため、申請書項目3に基づき、このエピジェネティック誘導における下流のシグナル伝達経路について詳細に検討を行う。正常結膜線維芽細胞においてエピジェネティック変換が誘導されるタイミングにおいて、マイクロアレイを用いた網羅的な遺伝子発現変動を解析する。ここで得られたいくつかの誘導候補因子に関しては、siRNA導入実験を実施し、ペリオスチン遺伝子発現への影響をqPCR、ELISAで調べる。また、既知の下流シグナル経路(Smad2/3, STAT3活性化)の関与についても、ウェスタンブロット法を用いて確認する。アレルギー購入を予定していたいくつかの抗体および汎用試薬について、実験系における使用量の節減が効率よくできたため、購入の必要がなくなった。これらは、次年度に予定しているsiRNA関連試薬の購入費用の補てん分としたい。免疫染色、Western blottingおよびクロマチン免疫沈降用抗体、qPCR、ELISA、クロマチン免疫沈降などに用いる抗体以外の試薬(プライマーセット、アッセイキット、磁気ビーズ、専用バッファーなど)の購入、siRNA導入実験関連試薬、各種プライマリー培養線維芽細胞の維持管理に必要な試薬、消耗品(培養液、抗生剤、Trypsin-EDTAなどの継代試薬、各種プラスチックウェア、ピペット、チップなど)の購入、各種学会への参加費(国内、海外)などを予定している。
人口減少時代のキリスト教と外国人宣教師

本研究の目的は、過疎化・人口減少社会日本におけるキリスト教会と外国人宣教師を対象に、人口減少地域で活動する外国人宣教師の住民や地域社会へのかかわりを捉え、彼らの取組が教会と信者の生活をどのように守り、結果として地域社会の維持にどうつながっているのかを明らかにすることにある。研究初年度である2018年度においては、資料の収集と整理を図る一方で、上記の視点から、人口減少地域における宗教者・団体の実証的な先行研究を参照しながら、各地域における過疎化、高齢化実態に加え、キリスト教会の歴史的経緯・展開過程・現況などの把握に主力した。近年、人口減少や高齢化などにともない、日本のキリスト教界における牧師・司祭不在や教会統廃合、兼務などが年々増えている。このような問題を解決すべく、とりわけ日本のカトリック界においては、日本人司祭ばかりではなく、とりわけ韓国やベトナム、フィリピンなどアジア出身の宣教師を、教区所属司祭として積極的に迎え、過疎地域に派遣している。2018年度においてはカトリック鹿児島教区を中心に、機関資料などを参照しながら、過疎対策に関する取組みを収集した。また、教区傘下諸教会を訪問し、外国人宣教師に聞き取り調査を行った。調査を通して、彼らは教会維持だけではなく、教会を基盤として保持されてきた信者同士の支えあい、教会外の地域の人々との連携、地域福祉など生活に必要な資源など、地域維持・活性化の起爆剤として大いに期待されているケースが少なくないことがわかった。従来、人口減少地域において仏教宗派を中心に検討されてきた研究に、キリスト教会が対応している事例を加えて考察する必要があることが明確となった。今年度に得られた視点は、次年度の教団教派教区・地域間の比較分析を行う上でも重要であると考えられる。カトリック教会に関しては、カトリック鹿児島教区を中心に、関連史・資料および機関紙などを提供してもらい、整理および分析を行っている。また、同教区の韓国人・ベトナム人司祭から調査許可および協力を得て聞き取り調査を進めている。さらに、他教区の外国人宣教師の紹介もすでに許可を得ている。一方、プロテスタント教会に関しては、仏教宗派やカトリックとの比較分析ができるよう、人口減少地域の宗教者・団体の実証例を参照しながら、各地域における過疎化、高齢化実態に加え、キリスト教会の歴史的経緯・展開過程・現況などの把握を進めている。以上の作業を通して、次年度にはプロテスタント教会訪問および外国人宣教師への聞き取り調査を予定している。以上の点から、調査は計画通り順調に進めていると考える。2019年度においては、カトリック教区およびプロテスタント教会の事例を加え、データの整理および分析を実施する予定である。また、申請者が加入している学会や研究会で報告し、参加者からのコメントを随時集約しながら、調査結果の検討を行う予定である。そこで得られたコメントを検討し、従来の仏教宗派を対象とした研究との比較を重点的に行いたい。
現代英語の右方移動構文と左方移動構文を統一的に扱う統語理論の枠組みに関する研究

英語の右方移動と左方移動とでは、その局所性が大きく異なり、右方移動については意味役割による制約や、「重さ」による難易度の差などの要因があり、これら2種類の移動は全く別個の制約に従っているものと一見思われる。しかし例文を検討していくうちに、右方移動が示す制約の中で、狭義の統語論の中で扱うことができる部分があるとの見解に達した。「意味」や「重さ」といった狭義の統語論以外で扱われるべき部分を捨像して考えてみると、右方移動が示す厳格な局所性は狭義の統語論の枠組みで捉えられるはずだというわけである。こうした右方移動の制約と、従来より学界で研究が進んでいる左方移動の制約を同じメカニズムで説明できる統語理論を目指して研究を進めた。そして、最大投射は障壁とし、これを越えるためには指定部か付加位置経由で抜け出さねばならず、右方移動で右側付加位置に残される中間痕跡が適正統率を欠くような空範疇原理を打ち立て、それを中心に、このメカニズムの理論的妥当性の補強と各種の島の制約などに対する説明力の増強を図った。勿論このメカニズムで右方移動のすべての性質を捉えられるわけではないが、その局所性は左方移動と同じ土俵で取り扱われ得ることを示すことができたと考える。今後の展開としては、説明できる統語現象の数を増大して、より説明力の高い枠組みへと進化させることが考えられる。また、右方移動の他の性質についてもこの枠組みで捉えられる余地がないか検討することも考えられる。
レンサ球菌属のCRISPRスペーサー配列解析による新規流行株予測法の確立

タイ保健省に収集されたタイ国内の分離株349株についてMタンパク血清型を決定した.内訳は,タイの各地の保健所57箇所で2010年から分離された菌株234株およびタイ国内における劇症型感染症サーベイランスにより2011年より分離された菌株115株あった.これらの菌株を通報を用いてM型を決定したところ,66種類のM型に分類された.日本や欧米で報告されている菌株とは大きく様相が異なり,日本や欧米で主流とされているM1型はほとんど検出されず,emm44型が12%, emm104型6.8%などが検出された.また,CRISPRのスペーサー配列の解析により,新規流行株の予測が可能であることが示された.本研究では、日本・タイで流行するレンサ球菌感染症の原因菌であるA群レンサ球菌、肺炎球菌、ブタレンサ球菌を対象として、これらの新規流行株のこれまで行われている血清型分類に加え、CRISPRスペーサー領域の遺伝子配列を比較解析することにより、新規の流行を予測する方法を開発することが目的である.そのため、どのような外来性遺伝子が挿入されるかを予測する基盤を創出する本研究は、病態に応じた安全で有効性の高い治療を提供できることからも高齢者、患者の長寿命化、QOLの向上を見込むことができる.また、日本・タイにおける流行株の予測は、東アジアだけでなく世界的な流行の予測も可能となる可能性を秘めており、社会的にも重要な研究になると考えられる.本研究では、日本・タイで流行するレンサ球菌感染症の原因菌であるA群レンサ球菌、肺炎球菌、ブタレンサ球菌を対象として、これらの新規流行株のこれまで行われている血清型分類に加え、CRISPRスペーサー領域の遺伝子配列を比較解析することにより、新規の流行を予測する方法を開発することに目的がある.特に、タイ北西部、タイ北東部は、インドから東南アジアに向けた不法労働者の流入窓口となっており、他の感染症の流入口となっていることが予測される.そのため、申請者らのグループは、タイ保健省およびチュラロンコン大学の協力のもとに、タイ、特に北部山岳地帯で流行するレンサ球菌感染症の原因菌を収集し、血清型などを解析するとともに、CRISPRスペーサー配列を解析することにより、新規流行株を予測するための技術的基盤を創出する.そのため、平成25年度には、出来うる限りの菌株を収集し、スペーサー配列の塩基情報を解析して次年度の予測が可能かどうかの判定を行う.本研究では、日本・タイで流行するレンサ球菌感染症の原因菌であるA群レンサ球菌、肺炎球菌、ブタレンサ球菌を対象として、これらの新規流行株のこれまで行われている血清型分類に加え、CRISPRスペーサー領域の遺伝子配列を比較解析することにより、新規の流行を予測する方法を開発することが目的である.そのため、どのような外来性遺伝子が挿入されるかを予測する基盤を創出する本研究は、病態に応じた安全で有効性の高い治療を提供できることからも高齢者、患者の長寿命化、QOLの向上を見込むことができる.また、日本・タイにおける流行株の予測は、東アジアだけでなく世界的な流行の予測も可能となる可能性を秘めており、社会的にも重要な研究になると考えられる.本年度は,A群レンサ球菌およびブタレンサ球菌の解析を行った.A群レンサ球菌では259株の解析結果から,1)A群レンサ球菌では,スペーサー配列は,ほぼ全てがファージをターゲットとしていること2)このスペーサー配列は,M型と非常に強い相関が見られることから,単にファージを排除しているのではなく,菌株で感染できるファージを規定していることが明らかとなった.また,S. suisでは,スペーサー配列については外来性遺伝子が主にターゲットになっているが,このスペーサー位置を,ファージ,CRISPR/Cas, MTnで競合的に取り合っていることが明らかとなった.Streptococcus suisの莢膜は白血球の食菌作用に抵抗するための重要な病原因子である。ところが、心内膜炎病変部から無莢膜株が分離される頻度が高いこと、莢膜の欠失により、本菌の血小板への付着能、バイオフィルム形成能および自家凝集性が亢進することを見出した。さらに無莢膜株がバイオフィルムを形成することで、接着能力が低い有莢膜株の足場となり、宿主体内での定着に寄与する可能性がin vitroの実験から示唆された。これらの結果は、有莢膜株と無莢膜株が宿主内に共存し、協働して病変を形成している可能性を示しているが、有莢膜株と無莢膜株が真に同一個体に共存するのかは確認されていなかった。そこで、本研究では、有莢膜株と無莢膜株が同一検体から分離されるのかを調査するとともに、分離された株の遺伝学的な背景を解析した。分離株はPCRでS. suisと同定し、血清型別用PCRにより血清型を推定後、型別用抗血清による共凝集反応により莢膜保有の有無を判定した。両表現型が分離された場合は、両表現型株間の遺伝学的近縁性を調べるため、各検体から有・無莢膜株を1株ずつ選び、MLSTによる遺伝型を決定するとともに、同一病変部由来の両表現型株間の遺伝学的近縁性を調べるために、全ゲノム配列を決定、比較した。

その結果,70検体中61検体から本菌が分離され、そのうち33検体(54.1%)からは有莢膜株、2検体(3.3%)からは無莢膜株のみが分離された。一方、26検体(42.6%)からは有莢膜株と無莢膜株の両方が分離され、無莢膜株と有莢膜株が同一病変部内に高頻度で共存することが明らかとなったこれらの26検体由来の52菌株の全ゲノム配列をもとに、莢膜合成系遺伝子に変異が集中する領域があることを明らかとした.タイ保健省に収集されたタイ国内の分離株349株についてMタンパク血清型を決定した.内訳は,タイの各地の保健所57箇所で2010年から分離された菌株234株およびタイ国内における劇症型感染症サーベイランスにより2011年より分離された菌株115株あった.これらの菌株を通報を用いてM型を決定したところ,66種類のM型に分類された.日本や欧米で報告されている菌株とは大きく様相が異なり,日本や欧米で主流とされているM1型はほとんど検出されず,emm44型が12%, emm104型6.8%などが検出された.また,CRISPRのスペーサー配列の解析により,新規流行株の予測が可能であることが示された.本研究では、日本・タイで流行するレンサ球菌感染症の原因菌であるA群レンサ球菌、肺炎球菌、ブタレンサ球菌を対象として、これらの新規流行株のこれまで行われている血清型分類に加え、CRISPRスペーサー領域の遺伝子配列を比較解析することにより、新規の流行を予測する方法を開発することに目的がある.A群レンサ球菌では,株数を大きく増やすことで,スペーサーと菌株の血清型の関連が見いだすことが可能となってきた.ブタレンサ球菌では,現在知られている全ての血清型の全ゲノム解析が終了し,その外来性遺伝子排除機構の特異性が明らかとなってきた.ブタレンサ球菌については,さらに今後タイからの分離株を広げることで,その詳細な解析が明らかにできると考えているが,同じレンサ球菌のグループであるA群レンサ球菌とは全く異なる生存戦略をとっていることが明らかとなった.A群レンサ球菌では,ファージを排除しているだけでなく,その種類を見分けて自身に必要なファージは取り込むことができるが,ブタレンサ球菌では,ゲノム上の単一のlocusをファージ,CRISPR/Casシステム,mobilegenetic elementが競合的に取り合っていることが,比較ゲノム解析の結果から明らかとなった.27年度が最終年度であるため、記入しない。細菌学A群レンサ球菌については,スペーサー配列を解析することで,これまでの血清型による分類に変わる新しい流行予測プロトコールが開発する道筋ができたと考えられている.CRISPR/Casシステムによって認識された外来性遺伝子の断片は,CRIPSR領域に保存されていくため,これよりも新しいスペーサー挿入された菌株が出現した場合には,それを速やかに検出すると共に,血清型別を行わなくても簡便に検出することが可能となると考えられる.A群レンサ球菌については、タイ保健省および日本の感染症研究所で収集された菌株B群レンサ球菌については、各地点でのサンプリングを行っているが、A群レンサ球菌は、タイでの臨床データが不十分な状態であり、その収集に手間取っている.これは、タイ保健省に集められている菌株が、タイの各地から送られてきたサンプルであるが、その時点で既に臨床データが散逸しているケースが多く、単に菌株としてのみ送付されてきている場合が多い.また、チュラロンコン大学のサンプルについては、比較的臨床データがそろっているが、菌株の保存状態があまりよくない場合が多く、電力状況の不安定さからフリーザー内で死滅している場合も多々見受けられた.
アレロパシーを用いた水産養殖初期餌料生物の増殖と栄養価の改善

水産増養殖の現場では,栄養価の高い微細藻の大量生産と安定供給が強く求められている。一方,アレロパシー物質は,ある植物が産生する他種の増殖抑制・促進に作用する生化学的信号物質であり,自然界の個体群動態に重要な役割を果たしている。本研究では,アレロパシーを用いた餌料用微細藻の増殖改善技術の開発を目的とし,数種微細藻のアレロパシー効果を調べた。結果として,珪藻キートセロスのアレロパシーが高い栄養価を持つパブロバの増殖を改善できることに加え,パブロバは自己増殖阻害物質を産生していた。以上より,アレロパシー物質の利用や濃度管理は,餌料用微細藻の安定した大量培養技術の開発に寄与できる可能性がある。水産増養殖の現場では、餌料価値の高い微細藻類の大量生産と安定供給が強く求められている。本年度は、二枚貝類に対して高い餌料効果を有するが、高水温条件で培養不良を起こすハプト藻パブロバ・ルセリの増殖改善を目的として、主要な餌料生物として知られる珪藻Chaetoceros neogracile (キートセロス)のパブロバに対するアレロパシー効果を調べた。また、パブロバ自身による増殖阻害因子の関与の有無を判定した。キートセロスのパブロバに対するアレロパシー効果を調べた結果、低濃度のキートセロス培養ろ液は高水温(25°C)条件下におけるパブロバの増殖を促進し、パブロバの至適培養温度である20°Cでの増殖と比較して80%程度まで増殖を改善した。限外濾過や透析などの結果から、キートセロスのアレロパシー物質は、熱に安定な分子量10kDa以上の高分子物質であることが示唆された。また、アレロパシー物質添加の有無によるパブロバの糖及びタンパク質含有量を測定した結果、アレロパシー物質の添加によってパブロバのタンパク質含有量は若干増加したが、糖有量は減少傾向にあった。さらに、海洋細菌の増殖に対するアレロパシー物質の影響を調べた結果、キートセロスのアレロパシー物質添加の有無に関わらず、パブロバ培養液中の海洋細菌の増殖に影響を与えなかった。一方、パブロバ自身の持つ自己増殖阻害効果を調べた結果、自身の培養ろ液濃度に依存的な自己増殖阻害効果が認められた。また、限外濾過や透析などの結果から、パブロバが産生する自己増殖阻害物質は熱に安定な分子量10kDa以下の物質であり、高水温時に起こる本種の培養不良への自己阻害物質の関与が示唆された。以上の結果は、高水温環境下におけるパブロバの増殖改善に有効であり、高い餌料効果を有するパブロバの安定した大量培養技術の開発に寄与できる可能性がある。水産増養殖の現場では、パブロバ・ルセリ等の二枚貝類に対して高い餌料効果を有する微細藻類の大量生産と安定供給が強く求められている。昨年度の研究により、低濃度のキートセロス培養ろ液は高水温(25°C)条件下におけるパブロバの増殖を改善できることが明らかとなった。そこで本年度は、キートセロスのアレロパシーによって増殖改善されたパブロバの餌料効果の評価、およびキートセロスが産生するアレロパシー物質の化学的性状を解析した。低濃度のキートセロス培養ろ液をパブロバに添加した結果、25°C条件下におけるパブロバの増殖が促進され、パブロバの至適培養温度である20°Cでの増殖と比較して80%程度まで増殖を改善した。これら培養条件の異なるパブロバを用いて給餌試験を行った結果、シオミズツボワムシの増殖は至適水温である20°Cより、培養不良の起こる25°Cで培養したパブロバを給餌した試験区の方が高い傾向にあり、アレロパシーによる増殖改善を行ったパブロバはシオミズツボワムシに対する良好な餌料効果を示した。一方、定常期後期のパブロバを用いて給餌試験を行った結果、シオミズツボワムシの増殖は、パブロバの培養温度やキートセロス培養ろ液添加の有無に関係なく変化が認められなかった。透析により得られたキートセロス培養ろ液の高分子画分に含有する成分の分析を行った結果、タンパク質およびフコースやガラクトースなどを主成分とする単糖類が検出された。また、上記高分子画分がパブロバの増殖に与える影響を調べた結果、培養8日目から高分子画分の添加濃度依存的なパブロバに対する増殖改善効果が認められた。以上のことから、キートセロスが産生する多糖やタンパク質などから成る高分子アレロパシー物質は、高水温環境下におけるパブロバの増殖改善に有効であり、高い餌料効果を有するパブロバの安定した大量培養技術の開発に寄与できる可能性がある。

水産増養殖は食料問題解決法のひとつとして世界的に注目を浴びている。現在、水産増養殖では初期餌料生物として微細藻類が使用されているものの単独種給餌では魚介類の飼育が不可能であるため、配合飼料や抗生物質などの併用が行われており、飼育水や周辺環境への負荷が問題となっている。よって、安全・安心な食の供給のためには、生産過程における配合飼料や薬剤使用量の軽減が強く求められている。本研究では、高機能生物餌料の安定供給を最終目的として、アレロパシーという本来実環境中で起こっている生物間の相互作用を用いて餌料用微細藻類の増殖を向上させるとともに、タンパク質や脂肪酸含量などの栄養価の変動パターンを明らかにする。当該年度の研究では、水産養殖に用いられる餌料用微細藻類に対するヘテロシグマ(ラフィド藻)やスケレトネマ(珪藻)のアレロパシー効果を調べた。ヘテロシグマのアレロパシーは、各微細藻類の増殖を促進し、その最大増殖促進効果は、アレロパシー物質を含む培養ろ液の濃度と各微細藻類の初期細胞密度が高い場合に観察された。特に、二枚貝に高い餌料効果を有するパブロバや水産養殖で頻繁に用いられるナンノクロロプシスでは、顕著な増殖速度や最大到達密度の増加が観察された。一方、スケレトネマのアレロパシーは、各微細藻類の増殖を抑制する傾向が観察された。また、両種のアレロパシーは、種特異的に各微細藻類の増殖を促進あるいは抑制するだけでなく、アレロパシー物質を含む培養ろ液の濃度や対象種の初期細胞密度によっても大きく変化した。よって、両種のアレロパシーは、その特異的な増殖促進および抑制効果を通して、水産養殖に用いられる微細藻類の増殖制御に有効である可能性が示唆された。当該年度の特筆すべき成果は、ヘテロシグマのような有害種ではなく、餌料生物として一般的に用いられるキートセロスのアレロパシー物質を用いて数百mLの培養規模でパブロバの増殖を改善させることに成功したことである。また、実用化を考慮した場合にも、パブロバとともに培養される場合の多いキートセロスのアレロパシーを利用する方が、安全性やコストの面からもより効果的であると考えられる。前年度の成果と比較すると、若干培養規模のスケールアップが遅れているものの、キートセロスのアレロパシーによるパブロバに対する増殖改善効果は、前年度実施したヘテロシグマによる増殖改善効果より飛躍的に増殖改善効率が高かった。また、海洋細菌の増殖に対するアレロパシー物質の影響を調べた結果、キートセロスのアレロパシー物質添加の有無に関わらず、パブロバ培養液中の海洋細菌の増殖に影響を与えなかったことから、アレロパシー物質の使用は飼育水の水質悪化の原因にはならないことも確認された。さらに、パブロバ自身による自己阻害物質の産生が明らかになったことから、キートセロスのアレロパシーによる増殖改善に加え、パブロバの培養液から自己阻害物質を除去する技術を開発することにより、更なる増殖の改善効果が期待できる。以上のことから、当該年度の研究成果は、高い餌料効果を持つパブロバの安定かつ大量供給のための技術開発に貢献するものであり、研究はおおむね順調に進展している。一方、アレロパシーによって増殖が改善されたパブロバの二枚貝に対する餌料効果や脂肪酸組成などをはじめとする栄養価の評価が今後の課題として挙げられるとともに、自己阻害物質の効果的な除去方法についても検討を行う必要がある。当該年度の研究では、試験管培養(mL)レベルで確認された増殖促進効果をフラスコ培養(L)レベルにスケールアップした場合においても高い再現性を得ることに成功しており、当初の計画が順調に進展していると判断できる。
可視域衛星データを用いた東アジア域エアロゾル時空間分布の解析

1.地上観測および衛星観測によるエアロゾル物理・光学特性の推定エアロゾルのフィルターサンプリングを長崎、岡山、甲府、東京にて実施し、コールター原理により黄砂の粒径分布を測定した。吸収測定より黄砂の分光複素屈折率虚部を求め、500nmで0.0030.006の値を得た。また、SeaWiFS衛星データと化学天気予報(CFORS)の予測エアロゾル鉛直分布、およびスカイラジオメータ観測結果を組み合わせて、2001年および2002年春季に日本海上で見られた黄砂エアマスの解析を行い、分光複素屈折虚部の推定を行ったところ、虚数部が500nm帯で0.001程度と、従来より小さな値が得られた(論文投稿中)。2.SeaWiFS衛星データセットによる日本近海エアロゾル特性の年次変化の解析東アジア域を対象に1998年1月から2004年12月までのSeaWiFS低解像度データを全て収集・処理し、エアロゾル画像データセットを作成した。これに基づき、日本近海の6海域におけるエアロゾル光学的厚さおよびオングストローム指数の年次変動を解析し、東シナ海、日本海、本州東方、本州南方海域でオングストローム指数が7年間に0.1程度増加していることを明らかにした。この増加はサブミクロン粒子の割合が増加していることを示唆するものである。3.衛星エアロゾル画像ホームページの運用1998年2004年の各年の春期(35月)の毎月について、SeaWiFSデータおよびTOMSデータの処理を行い、東アジア域および日本近海域の衛星エアロゾル画像を作成し、Webページの形で研究コミュニティに公開した。本研究の第1の目標は、衛星データを用いた陸域・海域上の黄砂および人為起源の吸収性エアロゾルの空間分布を求める手法を開発することである。これには東アジア域におけるエアロゾル光学モデルを検討することも含まれる。第2の目標は、開発した手法をSeaWiFS等の衛星データに適用し、衛星エアロゾル観測データセットを作成し、研究コミュニティに提供することである。今年度の成果の概要は以下のようである。なお、本特定研究に参加している村山(東京海洋大)、鵜野(九大)、太田(北大)らの研究協力を得ている。1.黄砂粒子の光学モデルに関する検討(福島・小林)2001年および2002年春に観測された黄砂イベント時における黄砂エアマス4例について、化学天気予報システムCFORSから予測されるエアロゾル鉛直分布、天空放射輝度観測システムAERONETによるエアロゾル粒径分布から大気上端輝度を算出し、衛星観測値と比較して黄砂粒子の複素屈折率虚部の値を推定した。4例とも500nmで0.001程度と従来言われているよりも低い値が得られた。また、地上で捕集した粒子の粒径分布をコールターカウンタで測定する方法の改良を行い、長崎、岡山、甲府、東京で捕集した粒子の測定を行った。2.森林火災起源のエアロゾルの衛星観測手法の開発(ヘラー)ADEOS-II/GLIの380nm帯と400(または412)nm帯を用いたsmokeエアロゾルの観測手法について検討し、地表面反射率が既知であれば光学的厚さをエアロゾルのタイプが推定できることを示した。3.衛星エアロゾル画像Webページの運用およびデータセットの整備(福島・虎谷)平成15年度に続き35月の間SewWiFSおよびTOMSデータによるエアロゾル画像準実時間処理を実施し、化学天気予報システムCFORSによるエアロゾル種ごとの光学的厚さ予測画像とともにWebページ上で公開した。また、1998年2004年の全SeaWiFSデータの再処理を行い、最終年度の解析のための準備を行った。

(1)地上観測および衛星観測によるエアロゾル物理・光学特性の推定エアロゾルのフィルターサンプリングを長崎、岡山、甲府、東京にて実施し、コールター原理により黄砂の粒径分布を測定した。吸収測定より黄砂の分光複素屈折率虚部を求め、500nmで0.0030.006の値を得た。また、SeaWiFS衛星データと化学天気予報(CFORS)の予測エアロゾル鉛直分布、およびスカイラジオメータ観測結果を組み合わせて、2001年および2002年春季に日本海上で見られた黄砂エアマスの解析を行い、分光複素屈折虚部の推定を行ったところ、虚数部が500nm帯で0.001程度と、従来より小さな値が得られた(論文準備中)。(2)SeaWiFS衛星データセットによる日本近海エアロゾル特性の年次変化の解析東アジア域を対象に1998年1月から2004年12月までのSeaWiFS低解像度データを全て収集・処理し、エアロゾル画像データセットを作成した。これに基づき、日本近海の6海域におけるエアロゾル光学的厚さおよびオングストローム指数の年次変動を解析し、東シナ海、日本海、本州東方、本州南方海域でオングストローム指数が7年間に0.1程度増加していることを明らかにした。この増加はサブミクロン粒子の割合が増加していることを示唆するものである。(3)衛星エアロゾル画像ホームページの運用1998年2004年の各年の春期(35月)の毎月について、SeaWiFSデータおよびTOMSデータの処理を行い、東アジア域および日本近海域の衛星エアロゾル画像を作成し、Webページの形で研究コミュニティに公開した。
咽頭・喉頭神経系における神経栄養因子およびその受容体の加齢による変化に関する研究

1.咽頭・喉頭における神経栄養因子の発現とその加齢変化に関する検討2.錐体神経節、節状神経節、疑核における神経栄養因子受容体の発現とその加齢変化に関する検討錐体神経節、節状神経節、疑核を含む脳幹の凍結切片を作製し、発現量の比較的多かった神経栄養因子受容体について、in situ hybridization法を行い、non-RI法によって可視化して各神経節・疑核内の神経栄養因子受容体の局在を検索し、画像解析装置を用いて定量的に解析中であるが、現在のところ明らかな結果は得られていない。1.咽頭・喉頭における神経栄養因子の発現とその加齢変化に関する検討2.錐体神経節、節状神経節、疑核における神経栄養因子受容体の発現とその加齢変化に関する検討錐体神経節、節状神経節、疑核を含む脳幹の凍結切片を作製し、発現量の比較的多かった神経栄養因子受容体について、in situ hybridization法を行い、non-RI法によって可視化して各神経節・疑核内の神経栄養因子受容体の局在を検索し、画像解析装置を用いて定量的に解析中であるが、現在のところ有意な結果は得られていない。
高感度測定GAD抗体とHLAによる新たな糖尿病分類の試み

現在、糖尿病は成因により、1型糖尿病、2型糖尿病、その他特定の機序・疾患による型、に分類される。本研究は、膵beta細胞障害の指標となるLow gradeのGAD抗体価(高感度GAD抗体)とHLAのClass I, Class II及びそのハプロタイプを基盤とした、インスリン分泌能や膵beta細胞障害を反映する、新たな糖尿病の分類を試みるものである。本年度は、高感度GAD抗体の測定ならびに、インスリン分泌能の評価を目的とした血清Cペプチド測定を進めた。並行して、これまでに収集したサンプルに対する臨床情報(家族歴、発症年齢、性、BMI、過去最大BMIなど)の収集を行い、それらのデータベースの構築を進めた。高感度GAD抗体の測定に関しては、今年度、糖尿病及び対照コントロールを合わせて1972サンプルのGAD抗体価を測定した。高感度GAD抗体の測定はICT-EIA法にて測定した。GAD抗体濃度が0.6 U/mL以下のものを擬陽性、0.6 U/mL以上を陽性とした。擬陽性のサンプルに抗原に相当するGADを加え抗原抗体反応を起こさせたのち、さらにGAD抗体をICT-EIA法にて測定し、阻害率を計算した。擬陽性のもののうち阻害率50%以上を示したものをGAD抗体陽性とした。本年度測定した1972サンプルにおけるGAD抗体の陽性率は約3%であった。血清Cペプチド測定は、本年度、糖尿病及び対照コントロールを合わせて2314サンプルの血清Cペプチドを測定した。HLA ClassIおよびClassIIのタイピング、臨床情報の収集・データベース化についても引き続き進めた。本年度は、新たなサンプル収集ならびにこれまで収集したサンプルに対する臨床情報の収集およびそれらのデータベース化を行った。HLA typing, GAD抗体測定、血中Cペプチド、各種膵島関連自己抗体の今後の効率的な解析を目的として、解析開始に向けたサンプルの準備を行った。また、GAD抗体assayに関しては、臨床的に汎用されているassay法と好感度ELISA法の比較検討をなった。本年度は、当初予定していたHLA typing, GAD抗体測定などの具体的なassayの開始まで至らなかったが、大量サンプルに対する、効率的なassayに向けた準備を行った。不足サンプルの収集、臨床情報のデータベース化を完了して、HLA typing,各種膵島自己抗体の解析、高感度ELISAによるGAD抗体の測定、インスリン分泌能の評価を目的としたCペプチド測定を28年度中に開始する予定であったが、現在、臨牀情報の収集を含めたデータベースの構築を行っている。臨床情報の収集が律速となり本研究が遅れている。本年度は、高感度GAD抗体の測定ならびに、HLA Class IおよびClass IIの主要遺伝子座(A, B, C, DR、DQ, DP)各座の遺伝子型の解析を進めた。GAD抗体については、超高感度ELISA法によりこれまで測定が不可能であったタイターの低いGAD抗体を測定した。並行して、これまでに収集したサンプルに対する臨床情報(発症年齢、性、BMI、過去最大BMIなど)の収集を行い、それらのデータベースの構築を進めた。高感度GAD抗体の測定に関しては、糖尿病及び対照コントロールを合わせて約1000サンプルのアッセイを行い、これらの高感度GAD抗体の測定を行った。まず、最初に、血清サンプルのGAD抗体をICT-EIA法にて測定した。GAD抗体濃度が0.6 U/mL以上のものを擬陽性、1.0 U/mL以上を陽性とした。擬陽性のサンプルについては、抗原に相当するGADを加え抗原抗体反応を起こさせたのち、さらにGAD抗体をICT-EIA法にて測定した。同時に抗原なしの場合も測定し、阻害率を計算した。阻害率50%以上を示したものはGAD抗体陽性とした。これまでに測定した約1000サンプルにおけるGAD抗体の陽性率は約5.5%であった。HLA ClassIおよびClassIIの6遺伝子座のタイピング、臨床情報の収集・データベース化についても引き続き進めた。今後、HLA ClassIおよびClassIIのタイピング、インスリン分泌能(C-ペプチドの測定)の解析、自己免疫能(高感度GADの測定)、臨床情報のデータベース化を引き続き進め、本年度はこれらを統合した解析に持っていく。研究は遅延している。高感度GAD抗体測定、臨床情報のデータベース化および、インスリン分泌能の評価を目的としたCペプチド測定が当初の計画通り進んでいない。対照のデータベース化は進んだが、患者の臨床情報の収集、データベース化が遅延している。Cペプチド測定に関しては、血清のサンプリングはほぼ完了しており、30年度の早い時期にassayへもっていく。

GAD抗体濃度が0.6 U/mL以下のものを擬陽性、0.6 U/mL以上を陽性とした。擬陽性のサンプルに抗原に相当するGADを加え抗原抗体反応を起こさせたのち、さらにGAD抗体をICT-EIA法にて測定し、阻害率を計算した。擬陽性のもののうち阻害率50%以上を示したものをGAD抗体陽性とした。本年度測定した1972サンプルにおけるGAD抗体の陽性率は約3%であった。血清Cペプチド測定は、本年度、糖尿病及び対照コントロールを合わせて2314サンプルの血清Cペプチドを測定した。HLA ClassIおよびClassIIのタイピング、臨床情報の収集・データベース化についても引き続き進めた。臨床情報のデータベースの構築を完成させ、29年度はHLA typing,各種膵島自己抗体の解析、高感度ELISAによるGAD抗体の測定、インスリン分泌能の評価を目的としたCペプチド測定を開始し、大量サンプルに対する、効率的なassayを集中的に行う。遅延の原因となっている、患者の臨床情報の収集、データベース化および血中Cペプチドの測定を急ぎ、HLA情報、インスリン分泌能、GAD抗体情報、患者臨床情報のデータセットを完成させ、なるべく早く解析作業を開始する。Cペプチド測定に関しては、血清のサンプリングはほぼ完了しており、今年度早期のassay開始が可能となっている。患者臨床情報の取得が順調に進まない場合には、計画よりは小規模の解析になるが、これまでに収集した情報で解析を始めることも検討する。当初の予定より研究が遅れており、28年度に具体的なサンプル測定に至らなかった。予定していたサンプル測定用経費の支出に至らず余剰金となかった。当初の予定より研究が遅れており、インスリン分泌能を評価するC-ペプチドの測定が遅延している。主にその分の費用が剰余した。この剰余分は、30年度に行うC-ペプチド測定費に充てる。29年度予定している、サンプル測定に対する経費の一部として使用する。
Kupffer細胞より放出される各種メディエ-タ-に関する研究

1.Kupffer細胞と肝細胞および各種類洞壁細胞との細胞相関Kupffer細胞は、プロスタグランディンを産生し肝細胞に対して保護的に作用すること、Kupffer細胞から放出されるメディエ-タ-は肝細胞の産生したコラ-ゲンを溶解消失せしめること、あるいは肝細胞のCRP産生をうながすことを培養細胞あるいは臨床的研究より明らかにした。またエンドトキシンにより活性化されるとTNFを産生せしめるが、脾マクロファ-ジよりも産生量が少ないことを示した。また、Pit細胞の増加・活性化には、Kupffer細胞の活性化を伴うことも明らかにした。一方Kupffer細胞がエタノ-ル長期投与により貪食能が低下すると、代償的に類洞内皮細胞の貪食能が亢進し、生体防御として重要であることを示した。2.Kupffer細胞と肝障害との関連アルコ-ル性肝炎のよいモデル実験であるエタノ-ル長期ラットにエンドトキシン少量投与により作製される実験的アルコ-ル性肝炎において、TNFが重要な役割をすることを明らかにしたが、この際脾摘をすると肝障害がほとんどおこらぬことが証明した。このことはアルコ-ル性肝炎において、エンドトキシンが重要であり、それによって活性化されTNFを産生する主な細胞は、脾マクロファ-ジで、Kupffer細胞の役割は少ないことを明らかにした。同様にガラクトサミン肝障害においても、脾摘により肝障害が軽減することを明らかにした。これらのことから、同じマクロファ-ジ系の細胞でもKupffer細胞と脾マクロファ-ジは、機能的にも異ることが示された。肝在住マクロファージであるKupffer細胞にて産生・放出される各種メディエーターの種類およびその産生条件を、分離・培養Kupffer細胞を用いて検討するとともに、このメディエーターを介した他細胞との細胞間相互作用について研究した。Kupffer細胞は、プロスタグランディンE_2(PGE_2)の産生系を有しており、このPGE_2産生機能はエンドトキシン血症血清を添加した場合に有意に増強させることが可能であった。このPGE_2を含むKupffer細胞培養上清は、培養系での実験的肝細胞壊死誘導を抑制した。このことより、エンドトキシン血症を伴う肝障害時、Kupffer細胞は細胞保護的にも作用することが明らかとなった。またKupffer細胞によるコラゲナーゼの産生は、培養液中に微量のコラーゲンを添加した条件下が最も亢進した。実験的にコラーゲンを産生した培養肝細胞とKupffer細胞とをco-cultureしてみると、きわめて短時間でコラーゲンは溶解消失した。このことは、肝繊維化進展においてKupffer細胞がfibrolysisの機構としても重要な働きをしていることを示唆していた。さらに培養Kupffer細胞を各種物質にて刺激するとTNFの産生させることが可能であったが、この刺激物質としてはbiolgical response modifier(BRM)が最も効果的であった。しかし、このTNF産生能は脾マクロファージよりは劣っていた。また、培養Kupffer細胞をBRMで刺激すると極めて効果的にインターロイキン1(IL-1)を産生したが、このIL-1は肝関連natural killer細胞(pit細胞)の増殖・分化に密接に関係していることが推測された。以上のことより、Kuffer細胞は各種サイトカインを産生し得ることが証明され、肝病態の発生・進展に重要な関わりを有していることを明らかにすることができた。今後、サイトカインを介した肝類洞壁細胞間の相互作用についても検討する予定である。単一動物から同時に分離したKupffer細胞、肝細胞、類洞内皮細胞および肝関連naturalkiller細胞(pit細胞)を使用して、singleあるいはcoーculture系を作成し、Kupffer細胞を中心とした細胞間相互作用について検討を行った。培養

Kupffer細胞は、菌体粒子あるいはエンドトキシンで刺激されると活性化され、その培養上清中に肝細胞刺激因子を放出することが明らかとなった。この因子はインタ-ロイキンー6と推定され、これにより培養肝細胞は急性期蛋白であるCーreactive protein(CRP)を産生した。このようなKupffer細胞の活性化には一定の時間が必要であったが、超微形態学的には異物貪食機能の増強と、蛋白合成亢進を示唆する所見が観察された。このことにより炎症時の生体防御には、肝在住マクロファ-ジであるKupffer細胞と同時に、サイトカインで刺激を受けた肝細胞も重要な働きをしていることが明らかとなった。いっぽう、pit細胞はその増殖においてKupffer細胞から産生・放出されるインタ-ロイキンー1が必要であり、さらにその分化、成熱にはインタ-ロイキンー2の存在とKupffer細胞との接触が必要であった。このことによりKupffer細胞がPit細胞の抗腫瘍活性を誘導しているものと考えられ、抗悪性腫瘍機構の中でKupffer細胞とそのサイトカインは極めて重要な働きをしていることが示唆された。さらに、Kupffer細胞と類洞内皮細胞のcoーculture系では、類洞内皮細胞の機能、形態がよく保たれ、Kupffer細胞の産生するサイトカインは、肝網内系の一部を構成する類洞内皮細胞に対しても作用している可能性が示唆された。また本研究で、肝細胞と類洞内皮細胞間には、IV型コラ-ゲンを介した細胞間相互作用が存在することが明らかとなった。今後は、Kupffer細胞からのメディエ-タ-が、類洞内皮細胞と伊東細胞のコラ-ゲン産生に及ぼす効果についても検討を加える予定である。実験的肝障害の発生機序におけるKupffer細胞の役割について検討した。アルコ-ル長期飲酒は、Kupffer細胞の機能を低下させることは臨床的にも明らかとなっているが、実験的にLieberの液体飼料(カロリ-の36%をアルコ-ル)を6週投与したラットでは、Kupffer細胞は著しく肥大し、胞体内に多数の貪食物質を含み、細胞膜は平担化してみられ、Latex粒子を門脈内に投与すると、その取り込みは著しく低下してみられた。一方類洞内皮細胞は、コントロ-ルに比べてその胞体内に取り込んだ物質の増加がみられ、また門脈内に投与したLatex粒子の取り込みの亢進がみられた。すなわちKupffer細胞のphagocytosisがアルコ-ル投与によって抑制されると、代償的に類洞内皮細胞は物の取り込みの機能を亢進させ、肝における生体防御の役割をはたしていると思われた。しかしアルコ-ル長期投与のよる類洞内皮細胞の異物の取り込みの増加は、同細胞のporeの減少を招き、ひいてはアルコ-ル性肝障害の特徴である肝細胞周囲性線維化の遠因となると考えられた。アルコ-ル性肝炎の実験モデルであるLieber液体飼料長期投与に少量のエンドトキシンを投与したラット、あるいは実験的肝障害のモデルであるガラクトサミン投与ラットに、あらかじめ脾摘を行うと肝障害が著しく軽減することが明らかとなった。又この際エンドトキシンによって誘導される脾マクロファ-ジからのTNFが重要な役割をなすことが推定された。