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ルーモールにおける美学と美術史学

ルーモールは、美学と美術史学という2つの学科が近代的な学として成立する際に大きな影響を与えた人物である。しかし、この2つの領域で彼が残した多くの業績の相互関係や共通基盤については、これまで充分には明らかにされてこなかった。本研究では、このルーモールを、(1)イタリア初期版画研究(美術史学)者として、(2)料理と食卓の社交哲学(美学)者として、さらには、(3)多才な文人、画家、芸術後援者、美術教育者、愛国的貴族などとしてとらえながら、その業績を、同時代の同一のコンテクスト内に置いて分析することで、専門学科の枠組みには収まりきらないこの稀有な人物の歴史的、現代的意義を明らかにした。当初の計画で今年度に予定していた課題は次の3点である。1.同時代の多くの美食論や食文化哲学のテクストと『料理術の精神』との比較。2.美食論や食文化哲学の隆盛をもたらした社会的背景の分析。3.カントの『判断力批判』における、味覚や料理術関連の記述の意味づけ。このうち、1.については、「食文化哲学(Gastrosophie)」という語を初めて使用したフーリエ(Francois M. Ch. Fourier)の「ユートピア社会主義」にもとづく共同体における食文化理論や、ルーモールとイタリアに旅行したロマン主義詩人ティーク(Ludwig Tieck)の風刺童話劇に見られる食事や調理についての描写などに注目しつつ、それらをルーモールの主張と比較し、そこから得られた成果の一部を美学会西部会で発表した。同時に、2.についても、当時のヨーロッパへの植民地食材の流入や、革命後のフランスにおけるレストラン増加などの状況などを、おもに文献などにより調査した。3.については、とくに同時代の、軽佻浮薄な「趣味」論と、それに対するカントやルーモールの批判的な姿勢を、やはり文献分析を中心にして明らかにした。また、当初の計画にはなかった「ナザレ派」について、前倒し支払いにより、必要な文献購入と現地調査を行った。7月に行ったドイツとイタリアでの調査では、マインツで開催中の「ナザレ派」展を観覧して資料の調査と収集を行い、カッセルとジェノヴァでは、ルーモールが『イタリアへの三つの旅』などで言及している絵画作品や聖堂建築などについて、資料の調査と収集を行った。3年次に予定されていた課題は、ルーモールが「文人」として詩や文学、素描や版画などの領域で発揮した多彩な才能と、その美学や美術史学との関係を解明することであった。この課題の解決のために、今年度は、(1)ルーモールの第一次イタリア滞在をめぐる前年度からの研究成果を、論文「ルーモールのイタリア旅行(1805-06年)ー食文化哲学と美術史研究のあいだで」(『人文論究』)において発表するとともに、それに続いて、(2)彼の第二次イタリア滞在にとくに注目して、その際に彼が、ヴァイマールでその才能を見いだしてローマへと同行した若い画家のホルニーを、当時ローマに滞在中であった多くのドイツ語圏からの芸術家や「文人」たちとの交流のなかで、どのようなかたちで教育しようとしていたのかを、彼の旅行記や随筆などのテクスト分析を通じて明らかにした。この第二の成果は、竹林舎から刊行された、佐藤直樹編『ローマー外国人芸術家たちの都ー』に所収の論文「ローマ滞在中のルーモア[ルーモール]ーナザレ派との関連を中心にー」によって公表した。また、2014年2月に行った現地調査では、ローマ市内および、ローマ郊外のオレヴァノにある、ルーモール(および、ローマに滞在中の芸術家や文人たち、とくに風景画家としての教育のためにホルニーを預けたコッホや、後援者として作品制作の支援を行ったオーヴァベック、コルネリウスらの、いわゆる「ナザレ派」の画家たち)が滞在した旅館や教会、修道院を訪れ、彼らが描こうとした理想的風景や宗教的理念がどのようなものであったのかを実地に調査した。本研究の目的は、ルーモールについて、1、イタリア初期版画研究者(美術史学者)、2、料理と食卓の社交哲学者(美学者)、3、多才な文人、としての業績を調査し、その成果を同時代の同一のコンテクスト内に置いて分析することで、専門学科の枠組みには収まりきらないこの稀有な人物の歴史的、現代的意義を明らかにすることにある。初年度の重点は、美術史学の実質的創設者としてのルーモールの実像を浮かび上がらせることに置いた。とくに集中的な調査を予定していたのは、有名な『イタリア研究』(1827-31年)とともに、1841年のイタリア初期銅版画研究にも注目して、彼の研究の「実証性」が具体的にどのようなものであったのかについての解明を試みることであった。

そのために今年度は、まずルーモール著作集全16巻(のうち、現在入手可能な15巻)および関連図書を備品として購入し、なかでも、いま挙げた2点のテクストの内容を詳細に点検した。さらに、計画調書でも言及した展覧会カタログ(「美術・料理術・家計術ーカルル・フリードリヒ・フォン・ルーモール(1785-1843)と文化史の発見ー」)に所収の諸論考を精査し、また、2012年3月には、ゲッティンゲン、リューベック、およびコペンハーゲンで、彼が見た版画やその制作と収集の現場についての現地調査を行った。その結果、彼の研究の「実証性」は当時の政治的コンテクストに具体的に強く制約されたものであったということや、版画に対する彼の知識や経験の主要な部分はゲッティンゲンの大学美術収集との直接的接触の中で形成されていたことなどが新たに判明した。次年度は社交哲学(美学)が研究の中心になるが、今回は充分に明らかにできなかった、ロマン主義者たちとの交流やプロシアの銅版画収集との関連についての調査と分析を継続する。最終年度の課題は、これまで継続してきたルーモールについての調査と分析を、同じ1つのコンテクストの中で生きてきた同じ1人の人間の中で総合することであった。また、そのための具体的な作業としては、ルーモールのテクストを日本語に訳し、彼についてのウェブページを作成するなどして、研究成果を公開することを予定していた。ルーモールのテクスト翻訳については『料理術の精神』を選択することにしていたが、最近になって、すでに中央公論美術出版社において翻訳の計画が、かなり完成度の高い状態にまで至っていることが判明したため、急きょ題材を変更して『イタリア研究』の一部を、紹介のかたちで訳すことに変えた。ただし本年度中の完成は困難であるため、完成した箇所から順次ウェブページ上に掲載することにした。その他、本研究の成果発表の場として開設したウェブページには、本研究の概要、代表者による研究成果、ルーモールの年譜や著作、関係文献リスト、原典や肖像、素描作品などへのリンクなどを、原則として日英独3ヶ国語対応のかたちで掲載した。ドイツ語への対応が間に合わなかったところもあるが、全体としては、ほぼ当初の目的を達成したと考えている。なお国外旅費による調査では、ルーモールがゲーテやホルニと出会ったヴァイマールと、彼がホルニをコッホに預けるとともに、ローマでの主たる滞在地としていたオレヴァノ・ロマーノを訪れて、風景画についての彼の捉え方の近代性について明らかにするための資料を収集した。この問題については、「イメージ人類学」という普遍的な視点からの視覚文化研究との関連で、今後も検討を継続したい。美学・芸術学今年度の研究目的は、おもに料理と食卓の社交哲学(美学)という観点からルーモールの業績を調査し、彼の活動が持つ歴史的、現代的意義を明らかにすることにあった。この点については、学会発表や論文執筆を順調に行うことで、当初の目的は充分に果たすことができた。とくにルーモールと、第一次ローマ滞在の前後に彼が出会った何人かの、いわゆるロマン主義の思想家たちとの交流について考察したことで、今年度は期待以上の成果が得られたと言ってよい。なかでもローマへと共に旅をしたルートヴィヒ・ティークとの関係について、当時の浮薄な「趣味」の流行を痛烈に風刺するティークの戯曲作品などのテクスト分析を通して明らかにできたことは、計画の進展にとって、とくに大きな意味があった。この他、前年度に取り組んだ「美術史」の観点からの研究についても、5度にわたる彼のイタリア旅行の行程を追跡するなかで、いくつかの重要な補完ができた。
フラーレン薄膜の光学非線形性とフェムト秒緩和過程の研究

本研究は、C_<60>、C_<70>薄膜の光学非線形性とその超高速応答性をフェムト秒非線形レーザー分光によって明らかにすることを目的として行われた。(1)広帯域縮退4光波混合測定装置の整備:今年度は、先ず、広い波長領域で非線形感受率を測定するために、QスイッチYAGレーザー励起のパルスチタンサファイアレーザーを購入し、その調整を行った。その結果、基本波の波長領域としては、700950nm、その第2高調波領域として360470nmのナノ秒パルス光(パルス幅:5ns)を得ることができた。(2)C_<60>薄膜の3次非線形感受率χ^<(3)>の測定:液体窒素温度におけるχ^<(3)>を23eVの範囲で測定したところ、χ^<(3)>の値は薄膜試料に特有な吸収帯(2.42.8eV)で共鳴的に増大することがわかった。吸収ピークにおけるχ^<(3)>の最大値は1x10^<-5>esuであった。この吸収帯は、フェムト秒の緩和ダイナミクスの考察及び那須らの計算により、C_<60>分子間の電荷移動励起子に基づくと考えられるが、このような大きな非線形性は、電荷移動励起子が大きな分極をもつことに対応している。(3)フェムト秒ポンプ・プローブ分光の研究:紫外光領域のポンプ光(波長305nm、パルス幅200fs)を用いて、C_<60>分子(トルエン溶液)及び結晶の高い励起状態の励起を行い、励起状態の緩和ダイナミクスを調べた。溶液中の分子では、励起状態の寿命は100ps以上であり、2nsでは三重項状態が十分に生成される。即ち、一重項の励起状態は三重項状態に緩和し、それを経由して基底状態に戻ることがわかった。一方、結晶では、全く異なる緩和挙動を示し、約1psで第1段階の緩和が起こり、続いて100ps以上の遅い緩和過程が存在する。この速い緩和過程は、電荷移動励起子が格子との強い相互作用によって分子間距離を変位させて安定化する、いわゆる自己捕獲励起子を形成することに起因するを、フラーレン結晶としては初めて明らかにした。今後C_<70>へ同様の研究を拡張して行く予定である。
国会議事堂ブロンズ製正面扉の製作に関する基礎研究

○研究目的:東京芸術大学所蔵の、国会議事堂正面他ブロンズ製扉製作に関する資料の基礎研究を行った。本扉は大蔵省営繕管財局から委嘱を受け東京美術学校(現東京芸術大学)が製作した。○研究方法:東京芸術大学所蔵の、国会議事堂正面扉に関する第一次資料をデジタルカメラで撮影しデジタルデータ化し、その全てについて精読後、特に重要な資料をタイプした。○研究成果:資料は全2冊に綴られ保存されていた。1冊目367枚、2冊目218枚、計585枚の資料を確認し、内容別に以下の4区分に大別整理した。1)大蔵省営繕管財局と東京美術学校との連絡記録2)東京美術学校と、ブロンズ扉地金鋳造会社である、住友伸銅鋼管との連絡記録3)東京美術学校内に設置した、扉製作工場に関する記録4)製作に伴う職員雇用等に関する記録1)の資料を整備し、大蔵省営繕管財局が委嘱先(東京美術学校)に提示した「仕様書」は、製作を請負った東京美術学校が事前に作成提出した「工作仕様書」を、ほぼそのまま転用していたことがわかった。また、扉製作は2回に分け学校へ依頼があり、1回目(正面玄関正面、側面、境界、衆議院玄関、参議院玄関の各扉)の工事のあと、2回目(総理大臣、大臣、秘書官室の各扉)の製作依頼・工事が実施されたことがわかった。つまり、東京美術学校による国会議事堂内ブロンズ製扉工事は、正面玄関正面扉(5組)、側面扉(2組)、境界扉(1組)、衆参両議員玄関扉(各院共3組)、総理大臣室テラス側扉(1組)、大臣室テラス側扉(2組)、秘書官室テラス側扉(1組)が、その全体であるとわかった。2)の資料を整備し、東京美術学校が住友伸銅鋼管から購入したブロンズ量(33t)とその発注回数(7回)がわかった。3)の資料を整備し、学校内に39坪の仮設工場を設置、次に担当教官であった津田信夫(つだしのぶ)の自宅工房を借用、さらに校内に3棟増築したことがわかった。また、仮設工場設置の記述文から立体図を作成し、各工場の外観図による復元を行った。4)の資料を整備し、製作に伴う雇用等については、学校教官2名を中心に、経理担当1名、製造技術担当1名のもとで、50名の雇用者が関わっていたことを確認した。さらに、本扉の図面製作(デザイン)は、学校教官であり製作責任者であった、津田信夫が行ったことがわかった。
意識的な語彙・文法学習を取り入れた多読プログラムの開発とその教育的効果の検証

Oxford Bookworms (OBW)の読書を通じて,どのような英語力を高めることができるか明らかにするため「OBWコーパス」を構築した。各ステージを「単語」「語彙チャンク」「文法」の観点から分析し、分析結果を基に,授業で「OBWの英語表現」を明示的に取り上げ学習する機会を定期的に設けた。このような教育的な働きかけの効果を吟味するため,学期始めと終わりにテストを実施した。結果は語彙力・文法力の面で大きな変化がなかった。一方,読解力の平均点が伸びた。本研究を発展させるために,OBWの英語の分析データをいかに明示的な語彙・文法学習に活かしていけるか,研究していく必要がある。平成23年度・24年度にかけて、Oxford University Pressから許可を得てOxford Bookworms Library(OBW)シリーズのStage1からStage 6の各Stageから10冊を選び60冊の「OBWコーパス」をインターネット上に構築した。そして「Stageが上がっていくごとに「単語」「レクシカル・チャンク」「文法」がどのように変化し発達して行くか、具体的に分析し考察できるデータ・ベースを完成させた。平成24年度後期に「OBWコーパス」を活用した「実験授業」を実施した。最終年度にあたる平成25年度前期に「OBWコーパス」を授業でより効果的に活用する方法を考案する。すなわち、学習者の読書量をさらに促進し語彙力・文法力を高めるためのプログラム(教材)を新たに開発し組み込む。そして、平成25年度後期に、本研究が掲げる「意識的・明示的な語彙・文法学習を取り入れた多読プログラム」を実施する。また、平成25年度学期末にはG-TELPという英語運用能力テストを行い英語力の変化を考察し、本プログラムの成果を問い報告書にまとめる。本研究は、3年間を通じて以下の3つの研究を行った:1オックスフォード出版局から承諾を得て、Oxford Bookworms Libraryシリーズの英語を分析するため60冊をデータ・ベース化し、それを「文法」と「語彙チャンク」の観点から分析できるシステムを開発した。21で開発したデータ・ベースを学生が自ら「観察」し、英語のチャンク(慣用表現)や「単語の文法性」に対する「意識化(Language Awareness)」を意図的に図る学習システム(Data-Driven Learning: DDL)を、1のデータ・ベースに実装した。32のDDLを活用して授業を行い、その教育的効果を検証した。12については、GR Databaseという名のサイトをインターネット上に構築し、2つの国際学会で発表した。3については、平成25年度の4月と1月に「文脈から一番ふさわしい単語を、同義語から選択するテスト」「単語にバラバラに分解されたチャンクを統語的に正しく並べるテスト」を行った。テスト結果は、1月の平均点と4月の平均点で大きな変化がなかった。今後、構築したデータ・ベースの教育的価値を引き出すために、DDLの授業をいかに行うかが大きな課題である。一方、「英語の運用能力」の変化を見るためにG-TELPのテストを25年度の4月と1月に行った。その結果、特に「リーディングセクション」の点数についてt検定を用いて比較したところ、有意確率5%水準で有意な差が見られた。平均点を比較したところ、1月の平均点が高いことから、本研究がデザインした多読による学習効果があった可能性が示唆された。Oxford Bookworms Library(OBW)シリーズのStage1からStage 6において、各Stageから10冊を選び60冊の「OBWコーパス」を構築した。そして「Stageが上がっていくごとに、(1)単語、(2)レクシカル・チャンク、(3)文法がどのように変化し発達して行くか」を系統的に分析し、OBWの"Graded"の実態を明らかにする分析ソフトの開発にプログラマーと取り組んだ。そのようなソフトを開発することにより、OBWシリーズを多読することを通して「どのような言語リソースと、どのくらいの頻度で出会うのか」、OBWの多読によるインプットのデータを(1)(2)(3)の観点から具体的に可視化することができる。そして、OBWシリーズを活用した多読プログラムを実践する際の「インプット」に対する「教育的価値」を考察することが可能となる。単語の観点については、「各本」「各ステージ」における「単語(Type/Token)出現リスト」とその「出現頻度」を調査した。そして、以下の単語リストとOBWの使用単語リストのカバー率を分析した: British National Corpus, A General Service List of English Words, The Longman Defining Vocabulary, Basic English, JACET 8000, ALC 12000。その結果、OBWで使用されている単語が現代英語を見事に反映しており、OBWの英語の"Authenticity"の高さが明らかになった。

Oxford Bookworms Library(OBW)シリーズにおいて、Stage1からStage 6の各Stageから10冊を選び60冊の「1OBWコーパス」を構築した。この「OBWコーパス」を授業で効果的に活用するために「2OBW語彙・文法辞典」「3OBW英文解説ツール」を平成24年度に新たに開発した。これら3つの道具を活用した実験授業を平成24年度後期に実施し、開発した3つのプログラムの有効性を吟味した。実験授業に対するアンケートの結果、90%の受講生が「英語の基本語の使われ方について意識的に学習することの面白さと重要性を認識した」と答えた。洋書を読むだけでなく、言葉の使われ方を観察し自分の英語の知識を再構築する学びを実践することがいかに教育的価値を持つかについて示唆を得られた。この実験授業をふまえて、最終年度にあたる平成25年度後期に本研究が掲げたプログラムを実施し、その効果を検証する。60冊の「OBWコーパス」を構築した。次に「(1)単語」「(2)レクシカル・チャンク」「(3)文法」の観点から、各本、各Stageごとに分析し統計を出すためのプログラム開発を行った。その分析プログラムに実装すべき様々な機能とインターフェイスを、プログラマーと試行錯誤しながら開発するのが予想以上に困難を極め、プログラム開発に多くの時間がかかってしまった。そのため、開発したソフトを駆使して「OBWコーパス」を分析するための時間が、平成23年度は十分にとることができなかった。「(1)単語」の観点については分析は終了し、各本、各Stageごとに「どんな単語」が「何度、使用されているか」が、質的・量的に明確にわかった。一方、「(2)文法」「(3)レクシカル・チャンク」の観点からの分析がまだ終了していない。平成24年度の実験授業の経験から、「OBWコーパス」のデータは教師がデータを整理しそれを学習者に示すだけでなく、学習者自らが「OBWコーパス」を観察し帰納的にパターンを発見していくData-drivenLearningとしても活用すべきものであることがわかった。「OBWコーパス」のデータを学生が観察できる「OBWコーパス学習者バージョン」を開発する。OBWシリーズは一冊一冊をマイペースで愉しみながら読むもの(Reading for Pleasure)であり、英語力を集中的に短期間に引き上げるトレーニングを行うには、OBWの読書と基本語に対する語彙・文法学習だけでは不十分であることがわかった。そこで、OBWシリーズの読書とは別に「速読トレーニング」を「授業中」に行う。「速読トレーニング」を授業の中に取り入れることにより、「授業外」のOBWシリーズの読書量に「拍車」がかかり、学期末に行うG-TELPのスコアの向上を期待することができる。平成24年度は、平成23年度に開発したソフトを使って「OBWコーパス」を「(2)レクシカル・チャンク」「(3)文法」の観点から、各本、各Stageごとに質的・量的に分析する。
シグナル伝達の制御に向けた膜内タンパク質切断における基質特異性決定因子の探索

細胞膜上に発現するシグナル分子前駆体の膜内配列を特異的に切断することでシグナル伝達を開始する膜内切断プロテアーゼ(I-CLiP)を研究対象とし、X線結晶解析と電子顕微鏡イメージングを複合的に用いることで立体構造を決定する。標的タンパク質にタグ配列を移植し、抗体断片を結合させることで、X線結晶解析では結晶化能を向上させ、電子顕微鏡イメージングでは分子配向の決定を効率化する。最終的には基質複合体の構造決定を行うことで、疎水的な細胞膜内という特殊な環境において基質特異性を生み出す構造的要因の解明を目指す。本研究の成果は、膜内配列切断におけるシグナル伝達制御のストラテジーの確立へと繋がると期待される。
博物館が提供する「学び」の体系化と社会的役割の解明

博物館の利用者層に広がりが見られるように成った。それは、特に特定の目的はなく、博物館を楽しもうとする利用者の出現であり、もうひとつは学校教育との連携事業の発展である。このような新しい利用者層の出現に対して、博物館は、提供できる学びの性格を変えるのではなく、博物館の最も特徴といえる「資料と学芸員という研究者の存在」という点を生かして、新しい利用者と対応しようとしている。すなわち、実物や最新の情報を伝えることで、自主的な学びを誘発することができるように、その結果、学ぶ楽しさを体験できるように意識されている。博物館をこれまで利用してきた人の中でも、はっきりした目的はなく、楽しみの場と考えてきた人に対しても、学ぶことの楽しさを提供する方法が実践されるようになって来た。博物館に来ない人の中でも、地域での様々な活動をしている人に対しては、その活動の中で必要な情報を博物館から発信することで、博物館の利用の仕方を知ってもらい、特に何らかの活動をしていない人に対しても、地域を調べることの楽しさが体験できるような機会を博物館から発信することができる。このようにして、これまで博物館とは無縁であった人も含めて、博物館を学びの場として利用できるような働きかけを行なうことができる。このような具体的な学習は、地域の自然や歴史などを活用しながら行なわれることになるために、学習の結果は地域への理解へとつながり、地域の自然や歴史などに関心を強め、地域そのものを見直す切っ掛けになっている。博物館の学習活動は、セミプロとも言えるようなアマチュアを作り出してきたが、これからは同時に、その人たちの協力を得ながら、地域の人たちが自分の住んでいる地域のことを考えるような働きかけをすることが求められている。この点が博物館の新しい社会的な役割となる。琵琶湖博物館が所有する全国の博物館の出版物および学会誌などの中から、博物館の学習活動にかかわる記事を取り出して、特徴を整理し、大きく時代区分をした中でどのように博物館の活動がされてきたのかを分析した。さらに、明治時代初期の日本の博物館の設立の時代に、博物館に期待された機能、および実態について考察を行った。日本の博物館はもともと、学校教育を補完し、国民に対する教育と国民意識を統一させることを目的として設立された。しかしその意図とは裏腹に、規模が小さいことや博物館に対しての実際の認識の低さなどから、博物館は独自の機能を持って活動をするようになってきたと考えられる。すなわち博物館は目的を持った個人が、博物館の職員と共に活動をすることで自らの学びの場として活用することになり、いわゆるアマチュア主体の場となってきた。しかしこの状態は自主的に博物館に来て、活動や学習をすることを希望する人だけを対象とした活動になってしまうことで、博物館の学習機能を狭めるものであった。さらに近年の学校と社会教育施設との連携の強化、あるいは生涯学習を求める声の拡大など、本来の博物館が対象として活動をすべき層が改めて浮き彫りになりつつある。博物館は現在、まだ学習の目標や内容を決めていない大部分の人々と向き合うことが求められるようになって来た。利用者の学習分野や目標の強弱と、博物館利用の経験の差などによって区分しうるグループごとに、どのような学習支援や学習の場が必要かを博物館から提案して学習の場を作り上げていくことが、必要であり、そのための、大くくりするグループごとに対応するための専門家としての人材が必要であろう。博物館が提供してきた「学び」の特徴は、対象者としては、主体的に希望して博物館を活用する人であり、方法論的には、知識を直接に伝えるのではなく、結論に至るための方法を一緒に探る、ということである。博物館での学びを体験した人が、興味を伸ばし、ステップアップをはかっていくという例は、博物館の現場では普通に見られる。しかし、博物館の利用者層に変化が見られるようになった。

それは、特に特定の目的はなく、博物館を楽しもうとする利用者の出現であり、もうひとつは学校教育との直接の連携事業の発展である。このような新しい利用者の出現に対して、博物館は、提供できる学びの性格を変えるのではなく、博物館のもっとも特徴といえる、「資料と学芸員という研究者の存在」という点を生かして、新しい利用者に対応しようとしている。すなわち、実物や最新の情報を伝えることで、自主的な学びを誘発することができるように、その結果、学ぶ楽しさを体験できるように意識されている。このような具体的な学習は、地域の自然や歴史などを活用しながら行なわれることになるために、学習の結果は地域の理解へとつながり、地域の自然や歴史などに関心を強め、地域そのものを見直す切っ掛けとなっている。博物館の学習活動は、セミプロともいえるようなアマチュアを作り出してきたが、これからは同時に、その人たちの協力を得ながら、地域の人たちが自分の住んでいる地域のことを考えるような働きかけをすることが求められる。この点が博物館の新しい社会的な役割となる。
甲状腺細胞におけるホスホリパーゼC/Ca^<2+>系の活性化とその生理・病理的意義

我々は神経シグナルと考えられるアデノシンがラット甲状腺細胞においてTSHのAC/cAMP系活性を阻害し、一方でPLC/Ca^<2+>系活性を増強することを発見した。甲状腺細胞におけるCa^<2+>動員性シグナルとしてはノルエピネフリン、アセチルコリン、さらに我々が見いだしたATPなどが知られていたが、最近、我々はスフィンゴシン1リン酸(S1P)、スフィンゴシルホスホリルコリン(SPC)などのリゾスフィンゴ脂質も甲状腺細胞において強力なCa^<2+>動員性シグナルとなることを見いだした。本研究では甲状腺におけるこのようなPLC/Ca^<2+>系の生理、病理的役割を明らかにするために計画された。(1)ヒト甲状腺細胞でも、TSHとアデノシンのクロストークによるPLC/Ca^<2+>系制御機構の存在を証明した。(2)COS細胞における受容体、G蛋白遺伝子またそのミュウタント遺伝子の発現実験によりこのアデノシンとTSHのクロストーク機構を解析した結果、アデノシンによるTSHの2つの作用の修飾はいずれも単一種のG蛋白(G_i2またはG_i3)でもたらされること、また、G蛋白は通常、受容体刺激でα、βγサブユニットに解離するがαサブユニットがAC/cAMP系活性阻害を、βγサブユニットがPLC/Ca^<2+>系活性増強を仲介していることが判明した。(3)バセドウ病患者IgGがアデノシン存在下でPLC/Ca^<2+>系を活性化し甲状腺刺激(TSAb)活性の新しい測定法になりうることが示された。(4)S1P、SPCなどのリゾスフィンゴ脂質は、おそらく細胞膜受容体を介しPLC/Ca^<2+>系、H_2O_2産生、細胞増殖などを調節し、甲状腺の新規アゴニストとして機能していることが示唆された。1.アデノシン(Ado)によるTSHのホスホリパーゼC(PLC)/Ca^<2+>系活性化増強機構におけるGタンパク質Gi/Goの役割。1)この機構に関与するGi/Goを同定するため、百日咳毒素感受性部位のヌクレオチド配列を変えた百日咳毒素非感受性Giサブタイプ遺伝子を作成し、百日咳毒素処理により内在性のGi/Goを非活性化したCOS7細胞に発現させた。同細胞にTSH受容体およびAdoA1受容体遺伝子を導入発現させ、AdoによるTSHのPLC/Ca^<2+>系活性化増強作用を観察した。この再構成系を用い、少なくともGi2およびGi3が関与し得ることを確認した。2)このGiサブタイプ分子はAdo受容体を介してAdoにより活性化され、αおよびβγサブユニットに解離する。これらのサブユニットの作用機作を調べるため、常時活性化状態にあるように構造を改変したGi2αとβγサブユニット分子を別々に上記のTSH受容体+Ado受容体発現細胞に過剰発現させ、TSHとAdoの共同作用に対する影響を見た。その結果、これらの細胞にTSHとAdoを作用させたとき、βγ過剰発現細胞ではTSHに対するCaレスポンスが高いがAdoによる更なる促進は認められない。逆にα過剰発現細胞ではTSHに対するcAMPレスポンスは低いが、Adoによる更なる制御はおこらない。この結果は活性化により遊離したGi2αがAdoによるTSHに対するcAMPレスポンスの阻害を担当し、βγサブユニットがTSHに対するCaレスポンスを増強することを証明した。2.増殖制御系の解析。TSHはcAMP系を介してセルサイクルのS期への導入を促進し、AdoはGiを介して阻害、ATPは単独ではCa系を介して促進するが、TSHの増殖促進作用は阻害する事を明らかにした。3.スフィンゴシルフォスフォリルコリン(SPC)による細胞調節機構。

これまで細胞内の代謝産物と考えられていたが、細胞外からシグナルとして作用する可能性があることを立証し、新たな一群の脂質シグナルの存在が予見された。甲状腺細胞ではCa系を介してホルモン合成に必須の過酸化水素生成を引き起こし、生理、病理的役割がある可能性も指摘された。我々は神経細胞さらに甲状腺細胞自体から放出されるアデノシンが甲状腺細胞においてTSHのアデニル酸シクラーゼ/cAMP系活性を阻害し、一方でホスホリパーゼC(PLC)/Ca^<2+>系活性を増強することを発見した。その結果、TSHによるPLC/Ca^<2+>系に連関したヨード放出、過酸化水素(H_2O_2)産生応答がアデノシン存在下で著明に増強される。本研究ではまずCOS細胞にとける受容体、G蛋白遺伝子またはそのミュウタント遺伝子の発現実験によりこのアデノシンとTSHのクロストーク機構を解析した。その結果、アデノシンによるTSHの2つの作用の修飾はいずれも単一種のG蛋白(Gi2またはGi3)でもたらされること、また、G蛋白は通常、受容体刺激でα,βγサブユニットに解離するがαサブユニットがAC/cAMP系活性阻害を、βγサブユニットがPLC/Ca^<2+>系活性増強を仲介していることが判明した。我々はさらに甲状腺細胞においてCa^<2+>動員をひきおこす脂質であるスフィンゴシン1リン酸(S1P)、スフィンゴシルホスホリルコリン(SPC)の作用を詳細に解析した結果、S1P、SPCが甲状腺細胞において、おそらく細胞膜受容体を介してPLC/Ca^<2+>系、H_2O_2産生を活性化する新規アゴニストとして機能しうることが判明した。このS1P、SPCの作用もアデノシンで増強され、アデノシンが甲状腺細胞のPLC/Ca^<2+>系において重要な調節因子であることも推定された。
視覚系にゆける色、輝度応答の時空間伝達メカニズムの解明

1.視覚系への色刺激呈示用のコンピュータ制御によるカラーCRTディスプレイシステムを完成させた。2.視覚系の色チャンネルと輝度チャンネルの個々の時間特性を詳細に調べるために、呈示持続時間15msの2個の色度変化刺激光(C_1とC_2)および2個の輝度変化刺激光(L_1、L_2)を用意し、C_1とC_2、あるいはL_1とL_2を継時的に呈示し、その変化閾検出における時間的たし合わせ特性を調べた。その結果として、色チャンネルでは100msにピークがあり、300ms間持続する一相性の興奮型応答、輝度チャンネルでは100msに正のピーク、150msに負のピークがあり、300400ms間持続する二相性の興奮・抑制型応答が求まった。3.色輝度チャンネルの相互作用を調べるために、色度変化と輝度変化の両方の変化を持つ刺激C_1+L_1とC_2+L_2の時間的たし合わせ特性を調べた。その結果として、L_1とL_2は微小変化ならばC_1とC_2のたし合わせには効果をおよぼさないことがわかり、色チャンネルを輝度チャンネルは視覚系末端部レベルではほぼ独立に応答していることが明らかとなった。4.色、輝度チャンネルの空間特性を調べるために、C_1とC_2の時間的たし合わせにおよぼす刺激視野サイズの影響を調べた。その結果、色チャンネルの時間特性は刺激視野サイズによらないことが示され、輝度チャンネルの時間特性とは異なることが明らかとなった。5.以上24の結果をまとめ、視覚系末端部での色、輝度チャンネル構造のモデルを作成した。これはまず、末端部1次レベルでの赤錐体からの興奮信号と緑錐体からの抑制信号がそれぞれ中心と周辺に入力するRonGoff型セルと、その逆のGonRoff型セルが2次レベルで作られ、次に3次レベルで両セルの出力の和(輝度)と出力の差(色)をとるチャンネルが独立に存在するという3層モデルであり、本研究結果およびこれまでの実験結果を極めて簡単に説明することのできる初めてのモデルである。
MR位相画像情報と拡散情報を用いた現実的な高精度白質定量化法の確立

昨年度作成されたマウスモデルを用いて、確立されたMRI基礎技術の確認と、問題となっていたアーチファクトの抑制に関する研究を進めた。特に定量値を得るための撮像法であるマルチエコーGRE法の位置ずれと、ノイズの低減を主な課題として今期前半の研究を進めた。位置ずれの問題は、スライス方向に顕著に表れるため、臨床でも行われているオーバーサンプリングやpixel bandwidthの変更などを試みたが、大きく改善するものはなかった。可能性を一つ一つ探り、のこった原因のうちもっとも大きな原因となり得るものがeddy currentによる位置ずれの可能性があるため、メーカー技術者の派遣を依頼し、三日間という長時間の調整を行い補正を行ってもらった。補正の結果、位置ずれが改善されたため、原因の主なものはeddy currentであったと考えられる。しかしながら、補正後の画像でもT1強調画像などの解剖学的な画像と、大きくは数ピクセルのずれがある場所が認められた。この補正を機械的に行うことは現段階の検討法では限界があると判断したため、本研究期間中の位置ずれ補正は、Matlabを用いた画像処理を用いた位置ずれ補正と信号補正で対応することとした。以上の補正を用いた画像で解析を行った結果、染色とより高く相関するミエリンマップを得ることができるようになった。そこで、次年度以降のヒトへの応用を見込んで、撮像法の高速化と処理の高速化を目指すこととした。撮像法は、echo数を変化させて少ないechoでも再現性に変わりの無い最小のecho数を調べたところ、5echosまでが下限であることが明らかになった。さらに、再構成時間を短縮するためにモデルのfitに要する時間が最も長いために、従来の最小二乗法からLevenberg-Marquardt法にへんこうすることで、25%の時間短縮を実現できた。アーチファクトの低減や位置ずれの解決に時間を要したため、年度末に計画していた人への応用に向かうことができなかった。しかしながら、丁寧な検討のおかげで、撮像時間の大幅な短縮と再構成時間の短縮を実現し、社会実装に向けた基礎技術を確立することができた。ただし、これらの技術をモデルマウスで再検討をして確かめる予定であったが、2019年頭に発生した熊本付近を震源とする地震による影響で、動物用MRIクエンチを起こし、5月の現段階まで使用不可能であるため、次年度はもう少しの予定遅れを覚悟している。同時に定量性の検証は最終的な動物実験が行われない限りは、染色などに回せないため、定量性の検討が続けられないのが最も重要な問題である。前項にあるように、地震による動物実験機への影響が大きく、動物実験機を使用したこれ以上の検討が難しいのが現状である。このため、次年度は動物を使用しない検討法(検証法):例えばコンピュータシミュレーションなどを検討する必要がある。さらに、直接、ヒトへの応用にトライすることも考えられる。この際に、事前にライセンスフリーで使用できるヒトデータを用いて事前検討を行い、撮像・再構成に向かいたいと考えている。この事前検討方法の利点は、ミエリンマップを得ているデータが公開されている点にあるため、(時間短縮した撮像法を検討できないものの)ヒト脳を用いた検証再構成実験を行えるため、本来の目的に近い検討を進めることができると期待できる。実際のヒトを用いた検討は、健常者10名程度を用いて、年齢を10代から60代までをスキャンし、過去の剖検による報告と加齢に伴うミエリン低下を観察できるかを検討できるようにしたい。この意義は、健常者の脳内ミエリンが捉えられることを示して、脱髄疾患を感度高く検出できる保証とするためである。本年度は、まず交付申請に従い動物実験による、脳内ミエリンの定量測定のためのMRI基礎技術の確立を行った。本研究では、NODDIと位相画像情報を用いたMRI撮像後処理によって、ミエリンを定量化することが目的であったため、まずはそれぞれの処理が行えるように、二種類(拡散強調画像・マルチエコーGRE法)による撮像法が、動物実験機でも可能になるように撮像実験を重ねた。また同時並行に、研究分担者によるミエリンを失う(脱髄する)マウスの作成検討を行った。作成検討は7月まで要したが、脱髄疾患の特徴である歩行困難や振戦などの症状が現れるマウスの作成に成功した。さらに、このマウス脳を研究分担者が染色を行い、最も効率的で定量性が高い染色法を検討し、BlackGold IIによる染色が効果的であることを明らかにした。この手法により、染色されたモデルマウスの脳は、明らかな脱髄を示し、マウスが適切に作成されたことを証明した。これらの準備を基に、あらかじめ準備していたMRI撮像法を用いて、秋頃より撮像検討を開始した。撮像自身は順調であったが、得られた画像が複数の原因で、位置ずれなどのアーチファクトを多く含むことがわかり、このようなアーチファクトを含む画像からは、NODDI再構成がうまくいかないだけではなく、位相情報による定量評価も満足得られる結果を得られなかった(染色画像と完全に対応する結果ではなかった)。このため、現在はこれらアーチファクトを抑制する撮像法の検討と、補正を行う画像処理法の開発を優先的に行っているところである。NODDI法で用いる拡散強調画像化法による撮像と、位相画像情報を得るためのマルチエコーGRE法による撮像のいずれも、原因不明の位置ずれが起こるため、メーカーの協力のもと、その原因究明と、解決法を探っている状態が続いている。

解決には、撮像法そのものの改良による、位置ずれなどのアーチファクトの抑制と、後処理による画像補正技術の検討を並行して行っており、現在の所、撮像法よりも画像処理による解決法が有効ではないかと考えている。NODDI法はかなり繊細な処理法であるため、データの完全性が要求されるためさらなる改善が必要であるが、位相画像情報から試みられる定量化法は一定の成果を上げている。少ない例数ながらも、手動により位置ずれを解消したデータを用いてマルチエコー法によるデータの解析が可能であったため、これを申請時の提案法により解析を行い、得られたミエリンの定量値が染色画像との相関を示すかを検討した。この初期検討の結果、染色画像と同様の傾向にあるミエリン量が定量値(数値)として得られることがわかり、確実に脱髄が起こっているマウス脳の一部では、その数値が下がることが明らかになった。ここまでの結果は、当初予想されていたNODDI,位相画像法の両手法による定量値取得とは行かないまでも、問題点を明らかにし、臨床応用に至る研究の道筋を示しているものとして、当該評価とした。昨年度作成されたマウスモデルを用いて、確立されたMRI基礎技術の確認と、問題となっていたアーチファクトの抑制に関する研究を進めた。特に定量値を得るための撮像法であるマルチエコーGRE法の位置ずれと、ノイズの低減を主な課題として今期前半の研究を進めた。位置ずれの問題は、スライス方向に顕著に表れるため、臨床でも行われているオーバーサンプリングやpixel bandwidthの変更などを試みたが、大きく改善するものはなかった。可能性を一つ一つ探り、のこった原因のうちもっとも大きな原因となり得るものがeddy currentによる位置ずれの可能性があるため、メーカー技術者の派遣を依頼し、三日間という長時間の調整を行い補正を行ってもらった。補正の結果、位置ずれが改善されたため、原因の主なものはeddy currentであったと考えられる。しかしながら、補正後の画像でもT1強調画像などの解剖学的な画像と、大きくは数ピクセルのずれがある場所が認められた。この補正を機械的に行うことは現段階の検討法では限界があると判断したため、本研究期間中の位置ずれ補正は、Matlabを用いた画像処理を用いた位置ずれ補正と信号補正で対応することとした。以上の補正を用いた画像で解析を行った結果、染色とより高く相関するミエリンマップを得ることができるようになった。そこで、次年度以降のヒトへの応用を見込んで、撮像法の高速化と処理の高速化を目指すこととした。撮像法は、echo数を変化させて少ないechoでも再現性に変わりの無い最小のecho数を調べたところ、5echosまでが下限であることが明らかになった。さらに、再構成時間を短縮するためにモデルのfitに要する時間が最も長いために、従来の最小二乗法からLevenberg-Marquardt法にへんこうすることで、25%の時間短縮を実現できた。アーチファクトの低減や位置ずれの解決に時間を要したため、年度末に計画していた人への応用に向かうことができなかった。しかしながら、丁寧な検討のおかげで、撮像時間の大幅な短縮と再構成時間の短縮を実現し、社会実装に向けた基礎技術を確立することができた。
Toll様受容体とナチュラルキラー細胞受容体とのクロストーク

ナチュラルキラー(NK)細胞受容体(NKR)ならびにToll様受容体(TLR)はそれぞれ微生物感染細胞の排除ならびに微生物の侵入の感知において重要な役割を果たすが両者のクロストークに関しては不明な点が多い。本研究ではNKR存在下におけるTLRシグナル伝達に焦点を当て、以下のことを明らかにした。1.HEK293細胞にTLR2遺伝子ならびにNKR遺伝子を導入しTLR2リガンドFSL-1で刺激した際に、活性化型NKRであるNKG2D/DAP10遺伝子導入時のNF-κB転写活性がDAP10遺伝子導入量に依存して阻害された。2.抑制性NKRであるNKG2A/CD94の発現は同NF-κB活性に影響を与えず、TLR3発現型HEK293細胞をTLR3リガンドであるPoly(I:C)で刺激した際のIRF3転写活性に対してはいずれのNKRも影響を与えなかった。3.DAP10遺伝子の導入はNKG2Dの細胞膜表面への発現を増強したが、DAP10とTLR2との会合は認められなかった。4.ヒトNK細胞株NK-92の表現型はTLR2^-TLR3^+であり、TLR3リガンドに応答しIL-2とは非共働的にIFN-γ産生能ならびに細胞傷害活性能を増強そせた。5.DAP10をリン酸化することで下流のシグナル伝達を媒介するSrcファミリーキナーゼのLckに注目しTLR2シグナルに及ぼす影響を調査したところ、Lckの共発現によりTLR2下流のNF-κB活性が有意に減少した。6.TLR2シグナルはLckおよびAktのリン酸化ならびにLckのTLR2への会合を促進した。7.Lckのキナーゼ不活型ならびに活性化型変異体を用いた研究から、Lckの活性化状態はTLR2シグナルの抑制作用と相関することが分かった。以上の結果から、TLR2下流には既存の経路に加えDAP10ならびにLckを介在する新たな経路が存在すること示唆され、NK細胞の微生物認識機構において重要な役割を担うことが推測された。ナチュラルキラー(NK)細胞受容体ファミリーにおけるCタイプレクチン受容体スーパーファミリー(NKR-CLR)とToll様受容体(TLR)とのクロストークを調べるために、NKR-CLR遺伝子をクローニングし、TLRシグナル伝達に及ぼす影響ならびに細胞表面における各タンパク質の発現状態に関して調査した。NKR-CLRであるNKG2A、CD94、NKG2DならびにDAP10遺伝子をTLR2遺伝子とともに293細胞に遺伝子導入し、NF-κB転写活性をルシフェラーゼアッセイで確認した。NKG2D及びDAP10遺伝子を導入することにより、TLR2リガンド刺激で活性化されるNF-κB転写活性が阻害された。また、NKG2AならびにCD94遺伝子導入によるTLR2依存性NF-κB転写活性に変化はなかった。一方、各NKR-CLRの遺伝子導入によってTLR3依存性IRF-3転写活性が影響を受けることはなかった。そこで、TLR2ならびにNKG2Dの発現状態に注目し共焦点レーザー顕微鏡解析を行ったところ、両受容体は細胞内外に発現していた。フローサイトメトリー解析からNKG2DはDAP10遺伝子導入時のみに細胞表面に発現することが明らかとなったが、TLR2遺伝子の導入はNKG2Dの発現状態に影響を及ぼさなかった。次に、NK細胞株であるNK-92細胞株を用いてNK細胞に発現しているTLRの生物学的機能を調査した。種々のTLRリガンドで刺激したところTLR3リガンド刺激でのみNK-92におけるIFN-γ産生が誘導され、また、K562標的細胞株に対する細胞傷害活性が増強された。これらの実験結果から、NKG2D/DAP10複合体の発現はTLR2下流のNF-κB活性を特異的に抑制することが示唆されるため、NKG2D/DAP10複合体を刺激した状態での免疫沈降等を行うことで、このメカニズムの解明に取り組んでいる。

5.DAP10をリン酸化することで下流のシグナル伝達を媒介するSrcファミリーキナーゼのLckに注目しTLR2シグナルに及ぼす影響を調査したところ、Lckの共発現によりTLR2下流のNF-κB活性が有意に減少した。6.TLR2シグナルはLckおよびAktのリン酸化ならびにLckのTLR2への会合を促進した。7.Lckのキナーゼ不活型ならびに活性化型変異体を用いた研究から、Lckの活性化状態はTLR2シグナルの抑制作用と相関することが分かった。以上の結果から、TLR2下流には既存の経路に加えDAP10ならびにLckを介在する新たな経路が存在すること示唆され、NK細胞の微生物認識機構において重要な役割を担うことが推測された。
病態局所の酸素環境と好中球の代謝動態と生体防御について

腫瘍壊死因子(TNF-α)や顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)等によるヒト末梢血好中球のプライミングには、チロシンキナーゼの活性化と数種の蛋白質のチロシンリン酸化が関与する。ウエスタンブロッテングと免疫沈降法による解析の結果、ヒト末梢血好中球にはLyn,Syk,Fgr,Hck,Btkの5種のチロシンリン酸化酵素が存在し、TNF-αによってLynとSykキナーゼが著明に活性化されることが判明した。また、プライミングによるスーパーオキシド産生およびチロシンリン酸化がSykキナーゼ阻害剤piceatannolにより抑制されることより、Sykキナーゼの関与が強いことが示唆された。この際、プライミングと平衡して115kDa蛋白質がリン酸化されることから、本反応がプライミングに関与する可能性が考えられる。プライミングはJAK2キナーゼ阻害剤AG490によって全く抑制されない。プロトオンコジーンc-Cblの抗体を用いた免疫沈降解析により、115kDa蛋白質の一部はc-Cblであることが判明した。好中球様に分化したHL-60細胞を用いてTNF-α依存性プライミング反応におけるチロシンキナーゼの関与を解析した結果、末梢血好中球と同様に、srcキナーゼと115kDa蛋白質のリン酸化と同時にスーパーオキシドが産生されることが判明した。c-Cblのアンチセンスを用いた解析により、本プライミングの一部にc-Cblが関与する可能性が示唆された。さらに、P38MAP kinaseの抑制剤や免疫抑制剤として知られるサイクロスポリンがチロシンリン酸化を抑制することなくプライミング反応を抑制することから、MAP kinaseやPI3 kinaseなどのリン酸化酵素が本現象に関与する可能性が示された。好中球は刺激物に依存して活性酸素を産生して生体防御に重要な役割を果たす細胞である。循環血液中の好中球の活性酸素産生能は低いが、起炎物質などでプライミングされると数十倍に活性化される。これまでに、ヒト末梢血好中球の腫瘍壊死因子(TNF-α)や顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)等によるプライミングにはチロシンキナーゼの活性化と数種の蛋白質のチロシン残基のリン酸化が関与していることを見いだしてきた。srcファミリーキナーゼの阻害剤であるPP1は、本プライミングによるスーパーオキシド産生およびチロシンリン酸化を著明に抑制した。ウエスタンブロッテングと免疫沈降による解析により、ヒト末梢血好中球にはLyn,Fgr,Hck,Syk,Btkの5種のチロシンリン酸化酵素が存在し、TNF-αによってLynとSykキナーゼ活性が本リン酸化により著明に活性化されることが明かとなった。特にSykキナーゼ阻害剤であるPiceatannolにより、本プライミングによるスーパーオキシド産生およびチロシンリン酸化が抑制されることより、Sykキナーゼが関与することが明かとなった。リン酸化蛋白質として115kDa蛋白質がスーパーオキシド産生と平衡することから、本蛋白質のリン酸化がプライミングに関与する可能性が考えられた。これまで、115kDa蛋白質についてはJAK2キナーゼである可能性が考えられたが、JAK2キナーゼ阻害剤であるAG490によってプライミングは全く抑制されなかった。また、プロトオンコジーンであるc-Cblの抗体を用いた免疫沈降による解析より、115kDa蛋白質の一部はc-Cblであることが判明した。好中球様に分化したHL-60細胞を用い、TNF-

αによるプライミングにおけるチロシンキナーゼの関与をさらに解析した結果、末梢血好中球と同様に一連のsrcキナーゼと115kDa蛋白質のリン酸化とスーパーオキシド産生の結果を得た。c-Cblのアンチセンスを用いた解析により、本プライミングの一部にc-Cblが関与する可能性が考えられた。また、本プライミングによるスーパーオキシド産生はPl3キナーゼの阻害剤であるワルトマニンによって抑制されるが、チロシンリン酸化は抑制されないことより、チロシンリン酸化の上流にPl3キナーゼがあることが推定された。腫瘍壊死因子(TNF-α)や顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)等によるヒト末梢血好中球のプライミングには、チロシンキナーゼの活性化と数種の蛋白質のチロシンリン酸化が関与する。ウエスタンブロッテングと免疫沈降法による解析の結果、ヒト末梢血好中球にはLyn,Syk,Fgr,Hck,Btkの5種のチロシンリン酸化酵素が存在し、TNF-αによってLynとSykキナーゼが著明に活性化されることが判明した。また、プライミングによるスーパーオキシド産生およびチロシンリン酸化がSykキナーゼ阻害剤piceatanno1により抑制されることより、Sykキナーゼの関与が強いことが示唆された。この際、プライミングと平衡して115kDa蛋白質がリン酸化されることから、本反応がプライミングに関与する可能性が考えられる。プライミングはJAK2キナーゼ阻害剤AG490によって全く抑制されない。プロトオンコジーンc-Cb1の抗体を用いた免疫沈降解析により、115kDa蛋白質の一部はc-Cblであることが判明した。好中球様に分化したHL-60細胞を用いてTNF-α依存性プライミング反応におけるチロシンキナーゼの関与を解析した結果、末梢血好中球と同様に、srcキナーゼと115kDa蛋白質のリン酸化と同時にスーパーオキシドが産生されることが判明した。c-Cblのアンチセンスを用いた解析により、本プライミングの一部にc-Cblが関与する可能性が示唆された。さらに、P38 MAP kinaseの抑制剤や免疫抑制剤として知られるサイクロスポリンがチロシンリン酸化を抑制することなくプライミング反応を抑制することから、MAP kinaseやPI3 kinaseなどのリン酸化酵素が本現象に関与する可能性が示された。