hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
骨肉腫におけるｍＴＯＲの役割の解明

mTOR阻害薬(ラパマイシン)はマウス骨肉腫細胞株(LM8)に対し、有意な腫瘍増殖抑制効果をin vitroにおいて示した。他の抗癌剤(ゲムシタビン)との併用することにより相加効果がみられた。LM8をC3Hマウスに移植する骨肉腫担癌モデルマウスを使用したin vivo実験においてmTOR阻害薬(ラパマイシン)は原発巣の増殖抑制と肺転移の抑制をみた。さらに、in vitroと同様に抗癌剤(ゲムシタビン)を併用することによる相加効果がみられた。骨肉腫は造血系腫瘍を除いた原発性骨悪性腫瘍の中では最も頻度が高く、また遠隔転移をきたしやすく予後不良である。手術療法の進歩、系統的化学療法の導入により60%以上の生存率となっているが、さらなる改善を目指し骨肉腫のための新規抗癌剤の研究が重要である。本研究において、我々はmTORの骨肉腫における働きを研究し、新規分子標的製剤としての可能性を探る点で大きな意義があると考えている。平成24年度は骨肉腫細胞を使用しIn vitroの実験を施行した。マウスの骨肉腫細胞株を2種、ヒト骨肉腫細胞株を4種準備し、それぞれにmTOR阻害薬(Rapamycin)を濃度、時間を変化させ作用をみた。WST assayにて増殖抑制を評価し、結果としては濃度、時間依存的にRapamycinによる細胞増殖抑制を確認した。次にannexin Vと7AADを用いたFACSにてアポトーシス、ネクローシスの評価を行った。結果としては濃度依存的にアポトーシスする細胞の割合は増加していた。平成25年度はまず、in vitroでの実験で、RapamycinとGemcitabinの併用効果について検討した。併用することによって、それぞれの単独投与に比較して有意に細胞増殖を抑制した。またこの効果は濃度依存的、時間依存的であった。次に、マウスの骨肉腫肺転移モデルを使用しIn vivoの実験を施行した。細胞は高率に肺転移を起こすマウス骨肉腫細胞株LM8をC3Hマウスに皮下移植した。投与薬剤はRapamycinとGemcitabinを使用した。腫瘍増殖および転移の抑制効果を検討した。結果は、それぞれの薬剤の単独投与よりも併用投与によって腫瘍移植部位の腫瘤の大きさが有意に抑制され、全生存期間の延長もみた。また、肺転移の結節数も単独投与より併用時の方が有意に減少していた。その研究計画として、平成24年度は骨肉腫細胞を使用しIn vitroの実験を、平成25年度はマウスの骨肉腫肺転移モデルを使用しIn vivoの実験を予定していた。まず、マウスの骨肉腫細胞株を2種、ヒト骨肉腫細胞株を4種準備し、それぞれにmTOR阻害薬(Rapamycin)を濃度、時間を変化させ作用をみた。結果としては濃度依存的にアポトーシスする細胞の割合は増加しているが、細胞株によってはアポトーシスの形態は少なく直接的にネクローシスへ向かうものも確認された。WB assayにてmTOR複合体のの標的分子である、4EBP1、S6K1、AKT、SGK、PKCaのリン酸化をみた。これらのうち、mTORC1に関与する分子の多くは無刺激においてもリン酸化されており、これらがRapamycinによって阻害されることを確認した。平成25年度は以上の結果を踏まえて、In vitroの実験に取り組んでいく予定である。平成24年度の実験計画としては主に骨肉腫細胞株を使用し、In vitroの実験を予定していた。交付申請書に記載した具体的な実験計画としては以下のとおりであり、1)骨肉腫細胞を培養し、mTOR発現の検討する。1骨肉腫細胞を培養し、mRNAレベルでのmTORの発現をPCR法で定量した。2タンパクレベルでのmTORの発現をWB法で定量した。2)骨肉腫細胞におけるmTORの局在を調べる。1チャンバースライドで骨肉腫細胞を培養し、抗mTOR抗体を用いた免疫染色法によってmTORの細胞質内、核内、細胞表面の局在比率を確認している。

2ヒト骨肉腫手術検体(生検時および切除時)を用いて、腫瘍組織における局在を免疫染色法および蛍光抗体法にて確認する予定であったが、本年度に適応症例がなく過去の保存検体が使用可能であるか検討中である。3)mTOR複合体のの標的分子(4EBP1,S6K1 AKT, SGK, PKCa)のリン酸化を確認する。1標的分子のリン酸化をリン酸化抗体を用いてWB法により定量した。また、これらのうち、mTORC1に関与する分子の多くは無刺激においてもリン酸化されており、これらがRapamycinによって阻害されることを確認した。4)mTORおよび標的分子と、骨肉腫細胞の増殖関係を検討する。1濃度、時間依存的にRapamycinによる細胞増殖抑制をWST assayにて確認した。2annexin Vと7AADを用いたFACSにてアポトーシス、ネクローシスの評価を行った。以上の計画と実験の推移によりおおむね順調に推移している考えられる。平成25年度はマウスの骨肉腫肺転移モデルを使用しIn vivoの実験を予定している。平成24年度の研究において、使用した骨肉腫細胞株の中で、細胞増殖抑制およびアポトーシスがmTOR阻害薬(Rapamycin)によって有意に引き起こされたものを使用し、マウスへ移植し担癌マウスを制作し、mTOR阻害薬を投与し、マウスの全生存期間(カプラン・マイヤー曲線を統計学処理)、腫瘍の増殖抑制効果(TUNEL法)、転移予防効果(転移巣の病理組織学的手法)を検討することが目的となる。実験計画としては、1)高肺転移マウス骨肉腫細胞株(LM8)をC3Hマウスに移植する完全マウス型骨肉腫肺転移モデルおよび、ヒト骨肉腫細胞(143B)をヌードマウスに移植するヒト骨肉腫型肺転移モデルとして2種類の骨肉腫担癌モデルマウスを作製する。2)この担癌マウスモデルにmTOR阻害薬をいくつかの投与方法(経口、経静脈、腹腔内)また、投与期間(1回/週、3回/週)で投与し、マウスの全生存期間(Kaplan-Meier法にて統計学的処理)、腫瘍の増殖抑制効果(大きさの検討、病理による壊死率の検討、TUNEL法で組織内のアポトーシスの確認)、転移予防効果(肺その他の臓器の解剖)を検討する。平成24年度のIn vitroの結果と、平成25年度のIn vivoの結果を合わせて骨肉腫におけるmTORの働きの一部を解明し、その阻害薬の治療標的分子としての可能性を示したい。該当なし
海洋生物を起源とする抗腫瘍性物質の探索と開発

海洋生物は特異な環境に生息し、適応するため、陸上生物とは異なる代謝系あるいは生態防御系を発達させてきたと考えられる。したがって、それらの代謝産物の中には、陸上性物由来の天然物質にはみられない新しい骨格を持ち、強力な抗腫瘍活性を示す癌化学療法剤開発のリ-ド化合物の存在が期待される。本年度は、先に見出している抗腫瘍物質カリクリン類の絶対構造を明らかにするとともに、抗腫瘍物質スウィンホリド類の構造活性相関、プロティンフォスファタ-ゼ阻害剤オカダ酸および細胞融合阻害物質ハレナキノ-ルサルフェ-トの作用機作の検討を行った。さらに、沖縄サンゴ礁域、瀬戸内海、伊豆半島をはじめ日本各地沿岸において採集した海綿類、軟体動物、海洋微生物など種々の海洋生物の試料について、ウニおよびヒトデ受精卵卵割阻害効果や癌細胞増殖阻害効果をin vitroで迅速に検討し、新規抗腫瘍性物質の探索を行った。そして以下のように、多彩な化学構造を有する種々の新規抗腫瘍性物質[海綿類....ポリケチド(テオペデリン類),テルペノイド(ステリフェリン類,イルシノリド類,マノアリド類),ペプチド(オ-ビクラミドA),色素配糖体(アラウラント類):軟体動物....ジテルペン類,糖タンパク,レクチン:海洋微生物....マクロリド(アンフィジノリド類)]などを見出している。今後、顕著な活性を示す抗腫瘍性質物については、さらに活性とその作用機序について詳細に調べるとともに、構造活性相関の観点から、化学修飾および化学合成を検討する。また、引き続いて海洋生物由来の新規抗腫瘍性物質の探索を継続する。
準周期性を有する自己組織化材料の学理と実践

準結晶表面は表面自由エネルギーが小さく、有機化合物との接着性に乏しい。そのため、代替テフロンとしてフライパンの表面加工などに用いられてきた。一方、準結晶が持つ準周期性原子配列を特異的に認識できる有機材料を見出すことができれば、準結晶界面化学という新しい研究分野が拓けるのみならず、新たな金属ー有機複合材料の創出が期待できる。本研究では、準結晶表面に選択的な有機分子を探索するため、生物進化法であるファージディスプレイ法による準結晶認識アミノ酸配列の探索を行った。その結果、疎水性アミノ酸や中性アミノ酸を含む配列が準結晶表面に選択的吸着することを見出した。そのため、これまでに代替テフロンとしてフライパンの表面加工などに用いられてきた。研究実施計画に即した研究実績:1結晶と有機・半導体・無機酸化物の相互作用の解明本研究では、準結晶表面に選択的な有機分子を探索するため、生物進化法であるファージディスプレイ法による準結晶認識アミノ酸配列の探索を行った。本法では、108-109個のランダムなペプチドライブラリの中から、準結晶に選択吸着するナノサイズ(数-10nm)のペプチドを探索できる。その結果、準結晶を認識するナノサイズのペプチド配列(12残基)のスクリーニングに成功した。一般的に、金属酸化物を認識するペプチドでは、酸化金属表面との静電的な相互作用によって結合するため、カチオン性のアミノ酸配列が多い。しかし、準結晶認識ペプチド配列には、アラニンのような疎水性アミノ酸やアスパラギンのような中性アミノ酸を含む配列が選択的に得られるという、これまでの金属表面を認識するペプチドとは全く異なる新しい知見が得られた。本研究では、まず、準結晶と有機・半導体・無機酸化物の相互作用の解明することから着手した。具体的には、準結晶表面に選択的な有機分子を探索するため、生物進化法であるファージディスプレイ法による準結晶認識アミノ酸配列の探索を行った。本法では、ランダムなペプチドライブラリの中から、準結晶に選択吸着するナノサイズ(数-10nm)のペプチドを探索できる。さらに、H26には、スクリーニングする際において、準結晶を塩基性条件下に置くと、特定の元素だけがご準結晶中から抜けるリーチングの手法を用い、大気汚染源を除去する触媒としての機能も新たに見出した。本年度は、さらにELISA測定などを行い結合メカニズムの詳細について検討を行った。当初予定していた準結晶表面に選択的に認識し結合するモチーフを、ファージディスプレイによってスクリーニングすることに成功している。

さらに、現在では、用いる準結晶基板の種類のバリエーションを増やすことで、準結晶認識モチーフの一般化に向けて研究を進めている。生物進化法であるファージディスプレイ法を使った準結晶を認識するペプチド探索では、当初立ち上げに苦労をしたが、H26年度には、博士研究員や研究補助員を補充することで研究が大きく進展した。その中でも特記すべき点は、スクリーニングを塩基性条件で行った際に、準結晶を構成する特定の元素のみがリーチング(溶解)し、多孔体構造を形成することを見出した。さらに、この多孔体構造を使って、大気汚染源となるガス成分の分解実験を行ったところ、非常に高い活性を示すことを見出した。これは、準結晶ならびにその類縁体構造に由来する特異な現象であり、当初予定していた準結晶の新規機能の発見である。今後は、更に詳細に準結晶構造に由来する触媒機能発現の機能解明に焦点を当てて研究を進めていく。27年度が最終年度であるため、記入しない。高分子界面本研究ではソフト準結晶を作製するための要素技術を確立することを狙いとしている。H25年度の研究成果において、準結晶を認識するペプチドモチーフの同定に成功するのみならず、新たに球殻タンパク質の2次準結晶アレイが出現する可能性を見出した。本発見はこれまで報告例の無いタンパク質における準結晶相の発見に繋がるものであることから、当初の予定に加え本研究を推進する。最終年度となるH27年には、これまでの研究で得られた2つの成果について、さらに研究を進めていく。(1)準結晶認識ペプチドの同定と機能解析すでに、ペプチド自身のスクリーニングは終了しているが、まだ限定的な組合せのみしか結果が得られていない。今後は、スクリーニングに用いる準結晶のバリエーションを増やすことで、準結晶認識ペプチドに共通するモチーフを見出していく。さらには、その知見を元に、準結晶と異なる材料との複合化に関する知見も収集する。(2)準結晶およびその類縁体を出発源とする多孔体構造による触媒機能評価H26年度には、これまで予想していなかった準結晶およびその類縁体構造に由来する特異な不均一触媒としての機能を見出した。現時点では、予備的知見であるが、H26年度に引き続きH27年度も触媒活性の評価を行っていく。予定していた金額より消耗品代が節約できたため消耗品などの経費の端数の計算上、金額が903円の差額が発生したため、次年度使用額とした。次年度の消耗品代として使用する。消耗品の経費として計上する。
脂肪滴構成蛋白perilipin遺伝子の発現調節機構と病態生理学的意義の解明

1.ADRPプロモーター領域の解析前年度PPARγライガンド(チアゾリジンダイオン、15-デオキシ-12,14-プロスタグランジンJ2)、PMAなどがADRP発現を調節していることを見いだしていたが、さらにマウスADRP遺伝子promoterの-2090-2005bpの領域にPMAの作用点を認めた。またこの作用にはPEA3/AP-1複合配列が関与していることを見いだした。2.マウス心臓ADRP関連蛋白cDNAのスクリーニングλTriplexシステムを用いてマウスADRPcDNAをプローブとしてマウス心臓cDNAライブラリーよりADRP関連のクローンをスクリーニングし、いくつかのクローンを得、それらをplasmidへconversionし解析を行ったが、現在のところADRPとの関連は明らかにできていない。現在ADRP関連蛋白をyeast two-hybrid法によってもスクリーニングし、関連の可能性のあるクローンとしてprotein phosphatase2Amethylesterase-1(PME-1)が得られたため、解析を行っている。3.ヒトperilipinゲノムの全構造の決定上記研究を優先したため、いくつかのクローンについて、DNA配列の解析は進行しているが、エクソン、イントロン配列の決定までには至っていない。欠損している部分が示唆されているため、その部位のスクリーニングを行っており、早急にエクソン、イントロン配列を決定したい。以下に示すプロジェクトに対して研究が進んでいる。1.マウス心臓ADRP関連蛋白cDNAのスクリーニングλTriplexシステムを用いてマウスADRPcDNAをプローブとしてマウス心臓cDNAライブラリーよりADRPのクローンをスクリーニングし、いくつかのクローンを得た。それらが、ADRPとどのように関連しているかは不明であるが、現在、それらをplasmidへconversionし、それらのクローンの同定を進めているところである。今後、いくつかについてはdirect sequencing、northerm blots等により、解析を進めていき、ADRPとの関連を決定していく。2.ヒトperilipinゲノムの全構造の決定上記研究を優先しているため、ヒトゲノムライブラリーのスクリーニングは進んでいないが、すでにいくつかのクローンを得ている。それらの配列を決定し、エクソン、イントロンを決定し、プロモーターまで獲得する。欠損している部分についてはスクリーニングを追加する。3.ADRPプロモーター領域の解析肝細胞、マクロファージを用いてプロモーター解析を進行中である。すでにPPARγライガンド(チアゾリジンダイオン、15-デオキシ-^<12,14>-プロスタグランジンJ2)、PMAなどがADRP発現を調節していることを見いだし、それらが作用するおおよその部位を同定した。さらにmutagenesis等により、確認を急いでいる。追加承認になってから期間が短いため、まだ多くの実績が出ているわけではないが、平成14年度はさらに実績を示せる予定である。
熱水系における沸騰現象のダイナミクスと鉱床の形成

高温熱水系において重金属が気相として運搬され、濃集・沈殿して鉱床が形成される過程を明らかにするために、重金属の気液分配を室内実験で行なった。銅などの揮発性金属元素は硫黄が存在すると選択的に気相に分配することが明らかとなった。各種熱水鉱床に産する鉱石鉱物、脈石鉱物の酸素、水素、および硫黄同位体比から鉱床形成に関与した熱水溶液の起源を明らかとした。斑岩型鉱床ではマグマ水が、造山帯型鉱床では変成水が、浅熱水性鉱床ではマグマ水と天水の両者が関与していたことが示された。熱水の沸騰は鉱床を伴う熱水系で普遍的に生ずる現象で、気相に富む流体包有物と液相に富む流体包有物が共存する事などによって、沸騰が生じていたことの証拠とされている。沸騰に伴い、一部の揮発性の金属が気相として運ばれ、特定の鉱床に濃集する可能性がある。この点を実験的に再現するためにCuおよびAuの気/液分配について硫黄を含む熱水溶液中で明らかにする。さらに、地下浅所で形成された鉱脈では、熱水の沸騰が鉱物の沈殿の引金となっていることを脈石石英の酸素同位対比の測定から明らかにする。気相と液相の共存下、600および650°Cで流体包有物を合成した。CuやAuなどの金属は硫化物錯体として溶液中に溶存していると考えられ、金属の気/液分配に関与する硫黄の影響を明らかにする目的で、熱水合成は種々の硫黄還元種存在下で行った。合成流体包有物中の重金属濃度の分析を、放射光蛍光X線法によって行いつつある。熱水が沸騰すると水の酸素同位体比は大きく変動し、その熱水から沈殿する石英などの脈石鉱物の酸素同位体比も変動する。石英の酸素同位体比の測定をサブミリメートル単位で行い、熱水の沸騰の指標とすることができる。酸素同位体比を測定するために、CO2レーザー加熱五フッ化臭素法によって珪酸塩鉱物から酸素を抽出する真空ラインを作成し、現在標準試料の分析を行っている。西部モンゴルの鉱脈型金鉱床の現地調査時に採取した、含金石英脈試料を分析する予定である。この点を実験的に再現するためにCuおよびZnの気/液分配について硫黄を含む熱水溶液中で明らかにする。CuやZnなどの金属は硫化物錯体として溶液中に溶存していると考えられ、金属の気/液分配に関与する硫黄の影響を明らかにする目的で、熱水合成は種々の硫黄還元種存在下で行った。合成流体包有物中の重金属濃度の分析を、放射光蛍光X線法によって行った。CO2レーザー加熱五フッ化臭素法によって鉱脈型鉱床の脈石石英の酸素同位体比を分析した。北海道、豊羽鉱床の鉱脈群のいくつかについて得られたデータでは、前期脈および後期脈で酸素同位体比に系統的な差がみられた。石英の酸素同位体比から見積もられる熱水の同位体比は、-9.3-4.2‰(前期脈)および-7.7+1.6‰(後期脈)で、後期脈を形成した熱水は堆積岩を同化したマグマに起源を有する。モンゴル西部の、バヤンオンゴル帯の金鉱床についても脈石石英の酸素同位体比を求めた。含金脈と後期の石英・炭酸塩脈では全く異なる同位体比を示すことから、両者の形成に関与した熱水は異なる起源である。この点を実験的に再現するためにCuの気/液分配について硫黄を含む熱水溶液中で明らかにした。

650°Cまでの高温条件で気相と液相の共存下で流体包有物を合成し、流体包有物中に取り込まれた溶液を分析することによりCuの気/液分配を求めた。合成流体包有物中の重金属濃度の分析は、放射光蛍光X線法よって行った。天然石英片、CuやZn等の重金属(塩化物)、シリカゲルおよび塩溶液を金チューブに封入し、オートクレーブ中で加熱して石英中に流体包有物を合成した。金属の気/液分配に関与する硫黄の影響を解明するために、熱水合成系に還元剤を加え、酸化還元状態がCuの気/液分配との関係を得た。地下浅所で形成された鉱脈では、熱水の沸騰が鉱物の沈殿の引金となっていることを脈石石英の酸素同位対比の測定から明らかにする。北海道豊羽鉱床およびモンゴル西部のTsagaan Tsahir Uul金鉱床に伴う石英の酸素同位体比を分析した。豊羽鉱床では前期および後期鉱化作用では熱水の起源が異なること、Tsagaan Tsahir Uul金鉱床では含金石英脈は変成水に伴い形成されたが、不毛浅熱水性鉱脈の形成に関わった熱水は天水起源であることが酸素同位体比から明らかとなった。
GPCRシグナル複合体細胞内輸送の時空間的制御に関する検討

GHRH受容体のGHRH刺激後の細胞表面発現量変動についての検討昨年度作成したGHRHRとタンパク質A両者を発現する細胞系を用いて、この受容体がGHRH刺激後に、細胞表面受容体発現量がどのように変化するのか、またタンパク質Aの発現が受容体の細胞表面発現にどのように影響するかについて抗GHRHR抗体を用いる蛍光免疫染色を行い、Flowcytometry法により定量を行った。その結果、受容体全長を発現させたものでは、GHRH刺激により受容体の細胞表面発現量が経時的に増加したのに対し、受容体のC末4アミノ酸欠損させたものではGHRH刺激にもかかわらず受容体の細胞表面発現量は変化しなかった。これは、受容体のC末4アミノ酸が受容体の細胞表面発現量は変化に重要であることを考えている。さらに受容体と相互作用する細胞内タンパク質Aを受容体とともに共発現させるとGHRH刺激後、一過性に受容体の細胞表面発現量は減少したがその後、増加に転じた。受容体の細胞表面発現量はリガンドであるGHRH刺激後増加したが、タンパク質A存在下では受容体の細胞内トラフィックが変化することが明らかになった。GHRHRのシグナル伝達におけるタンパク質Aの関与の検討GHRHRは、Gsタンパク質共役型GPCRであり、リガンドであるGHRHの結合により、細胞内cAMP濃度を亢進する。このGHRH刺激による細胞内cAMP濃度亢進においてGHRHRとタンパク質Aとの相互作用がどのように影響を与えているかについて検討を行った。すな診ち、cAMP濃度の細胞内変化をcAMP濃度に応答するプロモータとしてCRE(cAMP response element)、リポーター遺伝子のルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだプラスミドをGHRHRとタンパク質Aを発現する細胞にトランスフェクションを行い、cAMPレポーターアッセイ系の確立を行った。本研究は、GPCRの一つGHRHR、及びそのシグナル伝達複合体が細胞表面に局在する分子機構について種々の方法を利用して解析を行う。GHRHRとタンパク質Aとの相互作用の詳細な検討A.インビトロ結合実験:GHRHRのカルボキシ末端細胞質ドメインのアミノ酸配列をGST融合タンパク質として、またタンパク質Aの全長をマルトース結合タンパク質(MBP)との融合タンパク質として大腸菌を用いて発現・精製した。これらを用いてインビトロにて結合実験を行った。すなわち各融合タンパク質を混合した後、グルタチオン架橋担体にてGST融合タンパク質を沈降し、MBP融合タンパク質の共沈の有無をウエスタンブロット法にて確認した。さらにタンパク質Aのどの部分がGHRH受容体との結合に必須であるかを検討するために、タンパク質Aのアミノ末端側あるいはカルボキシ末端側のみを持つPICK1変異体を作成し、インビトロ結合実験を行った。GHRH受容体との結合には、タンパク質AのN末端が必須であることが明らかとなった。B.免疫沈降実験:Aで確認されたGHRHRとタンパク質Aの相互作用が生体内においても起きていることをラット脳抽出液を用い、GHRHRに対する特異的抗体を使用して免疫沈降を行った。その後、この免疫沈降物にタンパク質Aことを、抗タンパク質A抗体を用いるウエスタンブロット法にて検証し、GHRHRとタンパク質Aの相互作用が生体内においても起きていることを確認した。C.GHRHRとタンパク質A両者を発現する細胞系の作製:GHRHR発現細胞及びその細胞にタンパク質Aをさらに発現させた細胞を樹立するために、それぞれのcDNAを組み込んだレンチウィルスベクターを作製し、Chinese Hamster Ovary細胞(CHO-K1)にこれらのウィルスを感染させた。感染後、導入した遺伝子の発現確認をRT-PCRおよびそれぞれのタンパク質に対する特異抗体を用いるWestern blotにより確認した。
機能性水酸基を有するテトラアザ[14]アヌレン金属錯体の合成と分子認識

1.テトラアザ[14]アヌレン及びそのニッケル(II)錯体の合成...1,2-ジアミノベンゼン、アセチルアセトンと塩化ニッケルより、テトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)錯体(1-Ni)を、さらに1-Niよりテトラアザ[14]アヌレン(1)を合成した。2.機能性基の合成...3-ヒドロキシ安息香酸とベンジルブロミドより3ステップで酸塩化物(2)とオルトやパラ異性体も合成した。3.7,16位置換ベンゾイルテトラアザ[14]アヌレン及びそのニッケル(II)錯体の合成...1あるいは1-Niをトルエン中トリエチルアミン存在下2と反応させ、ベンジルエーテル置換基を有する化合物(3、3-Ni)を合成し、それを還元しして、目的のヒドロキシ置換基を有する化合物(4、4-Ni)を合成した。4.キノン類とヒドロキシ化合物との相互作用...(a)^1H NMRスペクトルによる検討...6種類のヒドロキシ化合物に種々の濃度のキノンを添加して相互作用を検討した。、キノンを1:1よりも過剰に添加した時、水酸基のプロトンシグナルは極めたわずかに低磁場側へシフトした。また、さらに、キノンのプロトンシグナルも極めてわずかしか高磁場側へはシフトしなかった。(b)赤外スペクトルによる検討...6種類のヒドロキシ化合物についてはキノンとのモル比を0.1:1から、100:1まで変化させ、水酸基とキノンのカルボニル基との相互作用によるυ(O-H)とυ(C=O)のシフトを測定したが、そのシフト幅は極めて小さい。5.キノン類との相互作用に関する考察......以上のことから、6種類の化合物とキノン類との相互作用は非常に弱いと考えられる。その理由としては、水酸基の分子運動によるカルボニル基の部分の回転、アヌレン環とキノン類とのπ-π相互作用が弱いことや、さらにο体については分子内水素結合形成も原因の一つと考えられる。1.テトラアザ[14]アヌレン及びその金属錯体の合成...1,2-ジアミノベンゼン、2,4-ペンタンジオンと塩化ニッケルより、ニッケル(II)イオンの鋳型反応を利用して、テトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)錯体(1-Ni)を約50%の収率で合成した。この錯体を、無水エタノール中塩化水素ガスを吹き込み、テトラアザ[14]アヌレン(1)を約40%の収率で合成した。1と酢酸銅より、その銅(II)(1-Cu)を約60%の収率で合成した。2.機能性基の合成...3-ヒドロキシ安息香酸とベンジルジブロミドより、3-ベンジルオキシ安息香酸を経て、塩化チオニルと反応後、酸塩化物(2)を合成した。他のオルトやパラ置換のベンジルオキシ安息香酸やその酸塩化物も類似の方法で合成した。同様にして、アニス酸よりその酸塩化物(3)を合成した。3. 7,16位置換ベンゾイルテトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)錯体(4-Ni,5-Ni)の合成...1-Niと2をトルエン中トリエチルアミン存在下、3日間加熱還流し、7,16位置換ニッケル錯体(4-Ni)を約50%の収率で3種類合成した。

このニッケル(II)錯体の7,16位のベンジルエーテルを還元し、水酸基を有するニッケル(II)錯体(5-Ni)を得た。4. 7,16位置換ベンゾイルテトラアザ[14]アヌレン(6)の合成...1と3をトルエン中トリエチルアミン存在下、1日80°Cで加熱後7,16位置換テトラアザ[14]アヌレンを得た。置換基のメチルエーテルを還元し、水酸基を有するテトラアザ[14]アヌレン(6)を得た。これらの化合物は、質量、電子、IR、NMRのスペクトルや元素分析等よりその生成を確認した。現在キノン等の分子認識を、IRやNMRのスペクトル等より検討している。1.ヒドロキシテトラアザ[14]アヌレン(H_2tmtaa)及びそのニッケル(II)錯体(Ni(tmtaa))の合成とスペクトル・・・合成したo,m,pの3種類の異性体を有するH_2tmtaaとNi(tmtaa)錯体を、質量、電子、赤外とNMRスペクトル及び元素分析等より、その生成を確認した。2.キノン類とH_2tmtaa及びNi(tmtaa)錯体との相互作用・・・(a)^1HNMRスペクトルによる検討・・・3種類のH_2tmtaa及びNi(tmtaa)錯体の重クロロホルムや重アセトン中のNMRスペクトルを測定し、これらの各々に種々の濃度のp-ベンゾキノンを添加して、再び各々のNMRスペクトルを測定した。p-ベンゾキノンを1:1よりも過剰に添加したとき、H_2tmtaaやNi(tmtaa)錯体の水酸基のプロトンシグナルは極めてわずかに低磁場側へシフトした。また、p-ベンゾキノンのプロトンシグナルも極めてわずかしか高磁場側へはシフトしなかった。その他のキノンについても、これと同様な結果を得た。(b)赤外スペクトルによる検討・・・3種類のH_2tmtaaについては塩化メチレン中10mM濃度で、Ni(tmtaa)錯体については0.1mMの濃度で、p-ベンゾキノンとのモル比を0.1:1から100:1まで変化させて測定した。H_2tmtaa及びNi(tmtaa)錯体の水酸基とp-ベンゾキノンのカルボニル基との相互作用によるv(O-H)とv(C=O)のシフトを測定したが、そのシフト幅は極めて小さい。また、その他のキノンについても、これと同様な結果を得た。3.キノン類とH_2tmtaa及びNi(tmtaa)錯体との相互作用に関する考察・・・・・・以上のことから、3種類のH_2tmtaa及びNi(tmtaa)錯体とキノン類との相互作用は非常に弱いと考えられる。その理由としては、水酸基を有するH_2tmtaa及びNi(tmtaa)錯体の分子運動によるカルボニル基の部分の回転、アヌレン環とキノン類とのπ-π相互作用が弱いことや、さらにo体については分子内水素結合形成も原因の一つと考えられる。
凍結保存卵巣からの卵子再生:効率的な妊娠への新たな手技の確立

本研究では、卵巣断片を体外培養下でPI3K/PKB経路を刺激することで休眠している原始卵胞を活性化させ、その卵巣断片を体内に移植することで活性化原始卵胞を発育させ、最終的に排卵前卵胞まで達した卵胞より成熟卵子を回収した。さらに、体外受精胚移植を行い、正常な産子を得た。この手法は、卵胞発育が認められない不妊患者のうち、原始卵胞が残存している患者への卵子再生による自らの卵子を用いた妊娠成立への新たな手法の開発に繋がる。生後3日目のマウスの卵巣を摘出し、体外でPTEN抑制剤(bpv(pic))を作用させ、原始卵胞の活性化を誘導を試みた。PTEN抑制剤で処理した卵巣と非処理の卵巣を、卵巣を切除した同系統の成体マウスに移植し、各条件の至適化を行った。移植部位は、血流の豊富な腎被膜下が最も適していた。bpv(pic)の至適濃度はまだ検討の余地がある。培養時間は24時間が適していた。組織学的に卵巣内の卵胞発育を検討したところ、上記条件で原始卵胞の活性化が確認された。レシピエントマウスの寿命に相当する長期観察期間中に、一時的なPTEN抑制剤処理を施した卵巣が移植後に癌を発生することはなかった。卵巣移植翌日よりFSH投与を開始し、18日後にはLH刺激に反応する卵胞の発育が認められた。LH投与後12-14時間で卵巣を摘出し、卵巣内の排卵前卵胞から卵子を圧出したところ、成熟卵子が得られた。得られた卵子を同系統の雄マウスより採取した精子を用いて体外受精を行い、受精卵を偽妊娠マウスの子宮内に移植して産子を得ることができた。出生マウスは組織学的検索、行動異常の有無、妊孕性、寿命の検討において全て正常であった。成熟卵のインプリンティング遺伝子のメチル化解の結果、ゲノムインプリンティング異常は認められなかった。DNAマイクロアレイによるこの手法により得られた成熟卵および受精卵と体内で発育した成熟卵、受精卵との遺伝子発現プロファイルの比較検討は完了しなかったが、本年度の目的である、PTEN抑制剤による原始卵胞活性化法を確立はほぼ達成された。本研究では、卵巣断片を体外にてPTEN抑制剤処理をすることで、原始卵胞を活性化させ移植した卵巣断片からの効率的な卵子再生を試み、妊娠成立への新たな手法の開発を目指す。マウスの卵巣を摘出し、体外でPTEN抑制剤(bpv(pic))を含む培養液で培養し、原始卵胞を活性化させた。PTENはPI3Kシグナル経路を抑制する分子であり、直接PI3K経路を活性化すれば更に効果があると考え、PI3K活性化ペプチド(740Y-P)の併用を検討した。PTEN抑制剤(bpv(pic))およびPI3K活性化ペプチド(740Y-P)を併用し、処理群卵巣と非処理群卵巣を卵巣を切除した同系統の成体マウスに移植し、各条件の至適化を行って至適条件を見出した。レシピエントマウスの寿命に相当する長期観察期間中に、一時的な薬剤処理を施した卵巣および周囲臓器が移植後に悪性腫瘍を発生することはなかった。出生マウスは交配によりF2世代まで組織学的検索、行動異常の有無、妊孕性、寿命の検討を行い、正常性を確認した。本研究によりPTEN抑制剤およびPI3K活性化剤による原始卵胞活性化法が確立された。
17型コラーゲンの分子イメージングによる水疱性類天疱瘡の病態メカニズムの解明

本研究により、水疱性類天疱瘡(BP)患者IgG自己抗体が表皮基底細胞膜上に発現している17型コラーゲン(COL17)へ結合したのち、ダイナミックに細胞内へ取りこまれることが明らかとなった。COL17の細胞外領域は細胞膜近傍で切断されるが、BPの自己抗体が、切断された後に生じる新規抗原エピトープに対し反応するものがあることも解明した。更に、COL17は、細胞外マトリクス中のラミニン332やIV型コラーゲンと相互作用しており、表皮細胞はCOL17を切断しながら遊走することも明らかにした。本研究の目的は、自己免疫性水疱症の中で最も患者数の多い水疱性類天疱瘡(bullous pemphigoid ; BP)の病態メカニズムを解明する事である。その手法として、BPの自己抗原であり表皮基底細胞ヘミデスモゾーム構成分子の1つのXVII型コラーゲン(COL17)を分子イメージングするという方法を用いた。本研究により、BP患者自己抗体がCOL17分子へ結合した際のCOL17分子の動態を直接視覚的に捉えることが可能となり、BP患者自己抗体によるCOL17に対する直接的病原性有無の解明のほか、自己抗体により切断されたCOL17断片の生理学的機能などを解明することが可能となる。その手法として、BPの自己抗原であり表皮基底細胞ヘミデスモゾーム構成分子の1つのXVII型コラーゲン(COL17)を分子イメージングするという方法を計画した。本研究により、マウス皮膚へ分子イメージング化したヒトCOL17を導入しBP患者自己抗体がCOL17分子へ結合した際のCOL17分子の動態を直接視覚的に捉えることができると、BP患者自己抗体によるCOL17に対する直接的病原性有無の解明のほか、自己抗体により切断されたCOL17断片の生理学的機能などが明らかとなる。平成20年度は、COL17イメージングのためのcDNAコンストラクト作成を行い、EG5FP、DsRed,をCOL17 cDNAN末端およびC末端側に組み込みそれぞれ2種類のコンストラクトを作成した。作成したこれらのCOL17イメージングベクターを、HEK293細胞へ遺伝子導入した結果、細胞質内に加え膜タンパクとしてのGFP融合タンパクの発現を確認した。これは、今後の研究を進める上で非常に重要な結果である。更にEGFPをDsRedに変更したコンストラクトも同様に2種類作成し解析中である。次に、各種ベクターを種々の方法でCol17ノックアウトマウス培養表皮細胞へ遺伝子導入を試みたが、遺伝子導入効率は極めて低いものであった。これは表皮細胞が、遺伝子導入が最も困難な細胞の一つであるためであり、そのため、Col17ノックアウトマウス培養表皮細胞へのCOL17イメージングベクター導入する目的で、エレクトロポレーションによる遺伝子導入をすすめている。これまでin vitroにおいてもCOL17タンパクのイメージング化に成功した報告はない。従ってこれらの研究成果は平成21年度以降の研究を進める上で非常に有用であると考えている。本研究は、水疱性類天疱瘡(bullous pemphigoid ; BP)の自己抗原であるXVII型コラーゲン(COL17)を分子イメージングする事により、BPの病態解明を行うものである。平成21年度は、EGFPあるいはDsRedを全長および種々の大きさのCOL17遺伝子のアミノ末端あるいはカルボキシ末端へ結合させ、培養細胞(COS7細胞)に導入し発現を検討した。その結果、DsRedをアミノ末端へ結合した場合においてCOL17が膜タンパクとして発現可能であることを確認した。この結果は、COL17の細胞内領域の動態を直接把握することが可能となった事を示している。細胞外領域については、切断されたCOL17の切断部位特異抗体を作成出来し、分子イメージングされたCOL17の細胞外領域を特異抗体により同定することも可能となった。現在、エレクトロポレーションを用い、COL17ノックアウトマウス培養表皮細胞への遺伝子導入を試みている。平成22年度は、分子イメージング化COL17を導入したマウス表皮細胞へBP患者自己抗体を投与し、COL17分子へ抗体が結合した際のCOL17の動態を直接視覚的に捉える予定である。また、平成21年度では、新しいマウスのBPモデルを作成し(Nishie W, et al. Journal of Immunology 183 ; 4088, 2009)、BP患者抗体に加え新しいBPのマウスモデルを用いた解析もすすめる。更に、分子イメージング化COL17がマウス表皮細胞でも機能することを確認したのち、イメージング化COL17 cDNAを導入したトランスジェニックマウス作成を開始する。これまでin vivoのみならずin vitroにおいてもCOL17タンパクのイメージング化に成功した報告はなく、本研究によりBPの病態解明が大きく進むことが期待できる。

平成21年度に得られたこれらの研究成果は、平成22年度移行も引き続きの研究を進める上で非常に有用である。本研究は、水疱性類天疱瘡(bullous pemphigoid ; BP)の自己抗原であるXVII型コラーゲン(COL17)を分子イメージングする事により、BPの病態解明を行うものである。平成22年度は、COL17の細胞内領域をEGFPにより標識し、EGFP-COL17コンストラクトが表皮角化細胞において効率的に発現することを確認した。実際にレトロウイルスを用い、COL17発現(-)患者由来表皮細胞へ、EGFP-COL17コンストラクト遺伝子の安定導入細胞株作成に成功した。平成23年度は、コンフォーカル顕微鏡下でBP患者IgGを培地へ添加した際のCOL17の細胞内領域の動態についてタイムラプス観察を行い、BPの発症メカニズム解明を行う。同時に、EGFP-COL17コンストラクトを発現するトランスジェニックマウス作成も継続する。そのほか平成22年度では、平成2021年度研究で作成した"COL17細胞外領域特異的抗体"を用い、COL17の切断後に出現する抗原エピトープがBP発症に関与することを明らかにした(Nishie W, et al.J Immunol 185 : 4938-4947, 2010)。現在、COL17細胞外領域特異的抗体を更に発展・応用し、COL17と細胞外マトリクスタンパクであるラミニン332やCOL4との相互作用機序解明を進めている。平成23年度では、これらの研究成果を統合させ、表皮細胞で発現するCOL17の動態解明を、EGFP標識COL17とCOL17細胞外領域特異的抗体の両者を用い、総合的な解析をすすめていく。平成23年度は、コンフォーカル顕微鏡を用いタイムラプス観察し、実際に蛍光標識したBP患者IgGが培養正常ヒト表皮細胞(NHEK)の細胞内へダイナミックに取りこまれることを明らかにした。次に、細胞内領域をEGFP標識したCOL17を安定発現するCOL17発現(-)患者由来不死化表皮細胞(平成22年度に作製)を用い、同様に標識BP患者IgGを投与したところ、細胞内へのIgG取り込みが、COL17と共存するかたちで行われることを解明した。これらの結果は、NHEKの表面に発現するCOL17へBP患者IgGが結合すると、直接複合体を形成しながらinternalizationすることを示唆しており、BPの発症病理となっていると予想された。現在、これらの研究成果をin vivoで確認する目的で、EGFP-COL17コンストラクトを発現するトランスジェニックマウス作成開始しており、近日、F1仔マウスが得られる予定である。
翻訳開始因子eIF4E、eIF4G、mRNA複合体の溶液構造解析

翻訳開始因子の一つであるeIF4E蛋白質はmRNAの5'末端に付加されたキャップ構造(m^7GpppN,Nは任意の塩基)を認識して結合し,mRNAをリボゾーム4OSサブユニットに結合させる過程で不可欠な働きをする。mRNAの塩基とeIF4E蛋白質の間の相互作用をNMRを用いて調べるためにはキャップ構造を持つ^<15>N,^<13>C安定同位体標識されたRNAが必要である。我は、化学合成とプライマーゼを用いた酵素合成を組み合わせ、キャップ構造(m^7GpppA)を持つ安定同位体標識されたRNAの効果的な合成法をした。キャップ構造(m^7GpppA)は化学的に合成した。異なる金属によって個々に活性化される二つのリン酸付加反応部位を持つ反応試薬(Oー8-(5-chloroquinoly1)S-phenyl phosphate)を用いて、m^7G^5PとA^5pを付加したリン酸でつなぎ5',5'三リン酸橋を形成させた。次に、このキャップ構造アナログ(m^7GpppA)に酵素合成によって塩基を付加した。我々が用いたbacteriophage T7gene4 primaseはキャップ構造アナログを普通のリボヌクレオチドと同様の効率で取り込むことが出来る。また、合成する一番目の塩基としてアデニンに高い選択性があるため、m^7Gの3'に塩基が付加される反応が起こらず、効率的に目的のRNAを合成する。我々はこの方法を用いてm^7Gppp^<13C,15N>ACCとm^7GpppA^<13C,15N>C^<13C,15N>Cを合成し、eIF4E蛋白質との相互作用を解析した。eIF4E蛋白質とアデノシンに化学シフトの変化とシグナル線幅の広がりが観測されたが、はっきりとした分子間のNOEは観測されなかった。eIF4E蛋白質のリン酸化や他の翻訳開始因子(eIF4G)とeIF4E蛋白質の結合がmRNAとの結合を強くするという報告があるので、それらを構造生物学を用いて研究することが今後の課題である。
近世朝鮮における漢訳西学書の伝来と受容に関する研究

中国では16世紀末以降、イエズス会宣教師によって、キリスト教思想や西洋の天文・暦学、地理学を紹介した多くの漢訳西学書が刊行された。本研究では、それらの漢訳西学書が、朝鮮にいつ頃、誰によって持ち込まれることになったのかという問題について、最近韓国で刊行された資料集『韓国歴代文集叢書』や『韓国文集叢刊』に基づいて、個別具体例を取り上げて考察したものである。また、西洋に関する情報が、日本や中国政府、或いはそれらの国々に滞在した朝鮮人によって伝えられた事実についても明らかにした。本年度は、昨年に続き、1631年に山東半島の登州で、朝鮮からの使節鄭斗源がイエズス会宣教師ロドリゲスから贈与された漢訳西学書の内容についての研究を行った。研究の結果、鄭斗源が寄贈された漢訳西学書は、これまで一次史料として利用されていた『國朝寶鑑』の記述に基づいて分析するのではなく、『國朝寶鑑』の当該記事を叙述する際に利用した『乱中雑録』に基づいて分析しなければならないことが明らかとなった。これまでの研究によって、鄭斗源将来の漢訳西学書をはじめて記述した史料は、『乱中雑録』であり、次にふれたのが『春波堂日月録』、そして次が官撰史料である『國朝寶鑑』となる。日本や韓国に現存する『乱中雑録』と『春波堂日月録』は、きわめて少ない状況である。写本と版本の『乱中雑録』を入手し、その内容を分析している。また、『春波堂日月録』は、写本でのみ現存しているため、現存本はいつ頃に書写されたものなのか、という問題を含めて分析・検討を行っている。なお、今年度は、「文禄・慶長役後に朝鮮被虜人と刷還使が将来した西洋情報」(『越境者の世界史』春風宇社、2013年)と題して研究成果の一部を論文として発表した。来年度も、史料調査を続けながら、鄭斗源将来の漢訳西学書の研究を完成させる予定である。明国に滞在するイエズス会宣教師等が著述した漢訳西学書の中でも、1631年に、鄭斗源が将来した漢訳西学書に関する研究を集中しておこなった。「朝鮮仁祖九年陳慰使鄭斗源が将来した漢訳西学書とその反響」ど題して平成25年度中に発表する予定である。本年度は、昨年に続き、1631年に山東半島の登州で、朝鮮使節鄭斗源がイエズス会士ロドリゲスから贈与された漢訳西学書に関する研究をおこなった。贈与された漢訳西学書については、最近の台湾の研究者による成果によって、その全貌が明らかとなり、また、漢訳西学書の内容についても、そのほとんどが1620年代にイエズス会士によって著述された最新の情報を盛り込んだものであることが明らかとなった。鄭斗源が持ち帰った漢訳西学書の書目とその内容について、また持ち帰った漢訳西学書を含む西洋の文物の朝鮮における反響について、「朝鮮仁祖九年陳慰使鄭斗源が持ち帰った漢訳西学書とその反響」と題して論文をまとめている。さらに今年度は、1631年の四年後の1635年に、当時朝鮮から江戸の徳川将軍に派遣された朝鮮通信使、その副使に任命されて来日した金世溓について研究をおこなっている。金世溓は、これまで研究されることのなかった人物であるが、彼が日本に滞在したときに書いた日記「東溟海槎日録」の1635年11月9日の条に、イエズス会士マテオ・リッチの世界図を見たと明記する部分がある。彼が見たものはマテオ・リッチのどの世界図なのか、また彼はその世界図をどこで見たのか、金世溓自身の研究も含めて、こうした問題については、これまで誰も追求してこなかった問題である。現在、金世溓に関する史料を収集しながら、彼が見たリッチ世界図はどのようなものであったのか、いつ頃、どこでその世界図を見たのか、研究を進めている。平成27年度は、昨年に引き続き、1635年に朝鮮通信使の副使として訪日した金世濂について検討した。金世濂が書き残した日記『東溟海槎日録』には、イエズス会士マテオ・リッチの世界図を見たとする文言が記されているのだが、実際の所、彼が見たのはリッチのどの世界図だったのか、あるいはその世界図をどこで見たのか、検討を行った。考察した内容については、「朝鮮仁祖代金世濂が見たマテオ・リッチの世界図」(『高橋継男教授古稀記念東洋大学東洋史論集』、汲古書院、2016年)と題して発表した。平成24年から27年にわたって近世朝鮮における漢訳西学書の伝来と受容に関する研究をおこなった。対象とした時期は「近世」となっていたが、実際に史料を通して検討できた時期は、宣祖代後半の1590年代から1635年までであった。この時期に朝鮮に伝えられた漢訳西学書を示す史料は多くなく、個人の文集に記される事実も少なかった。1640年代以降に朝鮮に伝えられた漢訳西学書については今後とも追跡していきたい。

本研究では、それらの漢訳西学書が、朝鮮にいつ頃、誰によって持ち込まれることになったのかという問題について、最近韓国で刊行された資料集『韓国歴代文集叢書』や『韓国文集叢刊』に基づいて、個別具体例を取り上げて考察したものである。また、西洋に関する情報が、日本や中国政府、或いはそれらの国々に滞在した朝鮮人によって伝えられた事実についても明らかにした。本来であれば、1631年に鄭斗源が持ち帰った漢訳西学書に関する論文は、今年度中に完成し、発表されていなければならなかったものである。しかし、最近の台湾における研究の状況が明らかになったので、そうした成果も含めて論文を著述しなければならなくなった。こうした理由により、現在までの達成度はやや遅れていると判断した。人文学当初の予定通り、国内・韓国・中国内の大学図書館・史料館で所蔵する漢訳西学書を閲覧・調査すると同時に、朝鮮にいつ頃、誰によって漢訳西学書が伝えられたのか、官撰史料個人文集などを通じて明らかにしていきたいと考えている。これまで1631年に鄭斗源が将来した漢訳西学書について、諸史料で記述されていた内容について、なぜ違いが出てくるのか不明であった。しかし、それら諸史料の成立の順番がほぼ明確となったため、鄭斗源が将来した漢訳西学書の実際の内容が明らかとなった。これによって、本研究の進展はほぼ順調に進んでいると評価している。調査は順調におこなってきたが、論文として平成24年度中にまとめなければならなかったものが、次年度の発表となってしまった。これが主な理由として、達成度はやや遅れているとなった。本研究は平成27年度まで継続されているため。当初の予定通り、国内・韓国内の大学図書館・史料館で所蔵する漢訳西学書を閲覧・調査すると同時に、朝鮮に、いつ頃、どのような漢訳西学書が伝えられていたのか、官撰史料か個人文集など通じて明らかにしていきたいと考えている。当初の予定通り、着実に研究を進めていきたい。平成27年度中に滞りなく使用していく予定である。該当なし。
ヨ-ロッパキリスト教文化圏の形成過程における社会と宗教

ヨ-ロッパキリスト教文化圏の形成過程において、ゲルマン諸部族がどのような伝統と保持しつつ、社会的文化的発展を逐げ、ロ-マの影響を受け、またその遺産を継承して、どのようなヨ-ロッパ文化圏の形成の緒についたか、そのヨ-ロッパキリスト教文化圏のヨ-ロッパキリスト教世界の形成過程における社会と宗教の解明と特質の把握に、本研究の目的を置いた。1.ゲルマン諸部族の祖先たちの祭祀・定住共同体における社会経済状態とその変遷。森林・沼沢・河川が自然の要害をなし、分散して安定した諸部族のうち、スヴェ-ベン系諸部族についてのTacitus,Germania,c.39に記された宗教儀礼と聖森林信仰,C.40の北海ゲルマン・北ゲルマンの「母なる大地」である豊穣神ネルトゥス、ヒャウケン部族の安住生活と農業生産の発達,57,8世紀の土地の分割相談などを検討した。2.ゲルマン諸部族とロ-マとの接触。ヒェルスカ-部族に例をとると、その上層にロ-マとの人的交流のあったこと、Tacitus,Annales,1,55,1,60などに記された指導者アルミニウスはロ-マで教育を受け、市民権・騎士階級の地位を得、義弟ゼギムントは「ウビ-ア部族とロ-マ皇帝ウグストゥスの祭壇」の祭司職にあったこと、有力者の家屋敷で、製陶・溶鉱金属加工などの手工業者、ガラス・真鍮製容器などのロ-マからの輸入品を扱う遠距離交易従事者をかかえ、部族の正治的社会経済的関係を実質的に変化させていった。3.フランク部族の発展と周辺部族、フランク国家の形成過程とキリスト教、役人制。ザクセン部族集団とカ-ル大帝の遠征と勅令、部族法典。とくに「ザクセン部族定住諸地域についての勅」「ザクセン部族の人びと宛ての勅令」についての本格的な考察はわが国では初めてであり、また欧米研究者以上の社会と宗教と法に関する検討を心がけた。ヨ-ロッパキリスト教文化圏の形成過程について、まずフランク国家成立以前のゲルマン諸部族のもとで、スウェ-ビ-系諸部族は聖森林信仰でまとまった祭祀団体をなしていた。彼らの一部はイシス女神を穀物豊饒の農業神、家の炉の神として信仰した。レウディ-グニ部族を始めとする7部族は、一柱のネルススを母なる大地の豊饒女神とする祭祀団体をなした。これらが例示するように、聖林信仰と豊饒女神信仰が特徴的である。ネルススク部族のもとで、織物、車、祭司、奴隷など、日常生活と社会状態が推測される。7部族のなかのロイディンガ-部族は、その部族名が「森林のあいだの開墾した土地の人びと」を意味し、はやくから鉄製の斧と計量〓の発達によって開墾活動が可能となっていた。これらの点について、古典古代の諸文献、語源学的研究成果、考古学的研究から、最近の見知をまとめた。次に、フランク社会の国家発展を彼らの自由民定住共同体とその成員、自由民定住共同体における奴隷、マンキピア、リ-トゥスとその解放、その家族形成、自由民定住共同体への王権の伸長、とりわけ村の近くに軍隊とともに滞在していたグラ-クが債権者から判沢の執行を請願され、債務者の家へ赴き、差し押えを行ない。平和金を取得し、やがて裁判権をも獲得して、自由民・王双方から専門職者として認められるに至る村の社会生活の組織化と王吏制の発達などの検討を通して考察した。

第三に、フランク国家の拡大とザクセン部族の編入過程について、ザクセンの祖神の聖所てあったイルミンズ-ルの破壊、異教徒に対する聖戦とキリスト教的支配の観念、オストファ-レン、エンゲルン地域の人びとの集団洗礼、ヴィドキントの降伏、彼の改宗、ザクセン自由民層の分裂、貴族層のフランク王権との提携などを『ザクセン諸地域に関する辞令』『ザクセン部族法典』依拠して、考察し、成果を得た。ヨ-ロッパ文化圏の形成は、ギリシァ・ロ-マ古代の社会的文化的伝統、キリスト教、住民のあいだの土俗・民間信仰、とりわけゲルマン諸部族のフランク国家社会の形成と文化圏としての発展の諸要素を内包し、中世初期以来、ヨ-ロッパキリスト教文化圏の形成として始った、とみられる。本研究の目的を、ゲルマン諸部族がどのように社会的文化的に発達し、ロ-マの影響を受けて、どのようにヨ-ロッパ文化圏の発展の緒についたか、その文化圏としての形成過程の解明に置いた。1.ゲルマン諸部族の定住の時期的地域的発達。2.諸部族法典の成文化自体、様式・内容にロ-マ的教養をもつ貴族・聖職者の介在を要したこと。3.フランク王国の発達とキリスト教の伝播、教会・修道院建設および村落・荘園の発達過程とのかかわり。4.住民のあいだの土俗・民間信仰、キリスト教の霊魂救済と寄進。5.クロ-ヴィスのキリスト教への改宗、カ-ル大帝の教会建設、同帝の西ロ-マ帝国の戴冠など。6.カ-ル大帝発布の勅令を適用対策、勅令の翻訳、内容の検討により、以下の成果を得た。同帝発布の「ザクセン地域に関する勅令」は、人びとの異教への復帰や国王と機会に対する民衆の攻撃を厳しく罰するものであったが、次に出された「ザクセン宛ての勅令」は先の勅令の苛酷さを緩和しつつ、それぞれの土地の民衆栽判人を栽判に協力させ、さらに大帝がア-ヘン帝国会議を開催して発布された「レ-クス・サクソヌム」では、ザクセン古来の法を集録しつつ、再興された西ロ-マ帝国の統治を実現しようとするものあった。以上の検討を通じて、ヨ-ロッパの社会的宗教的文化的特質を、フランク、ザクセン諸部族定住地域について考察した。ヨ-ロッパ文化圏の形成は、ギリシャ・ロ-マ古代の社会的文化的遺産、キリスト教、住民のあいだの生活文化、とりわけゲルマン諸部族の産業・経営形態・土俗的民間信仰、およびフランク国家社会の形成などの諸要素の交流・融合を内包し、中世初期以来、ヨ-ロッパキリスト教文化圏の形成として始った、とみられる。本研究の目的を、ゲルマン諸部族がどのような伝統を保持しつつ、社会的文化的発達を遂げ、ロ-マの影響を受け、またその遺産を継承して、どのようにヨ-ロッパ文化圏の発展の緒についたか、その文化圏・世界の形成過程の解明と特質の把握に置いた。全体としてのまとめとして、1.ゲルマン諸部族の定住実態の地域的時期的発達。2.諸部族法典の成文化自体、部族内の高貴で卓越した有力者・王の登場と、様式・内容にロ-マ的教養を持つ貴族・聖職者の介在を要しており、一方で民衆法を保持し、他方で社会経済的規定を受けた内容であること。3.フランク王国の発達とキリスト教の伝播、教会・修道院建設、さらにこれらと村落・荘園の発達過程との関わり。4.住民のあいだの土俗的民間信仰、キリスト教の霊魂救済と寄進。5.クロ-ヴィスのキリスト教への改宗、カ-ル大帝の教会建設、同帝の西ロ-マ皇帝載冠などを通したキリスト教との結合。6.カ-ル大帝の発布した勅令・法典の適用地域と内容の検討から、『ザクセン地域に関する勅令』は、適用地域の人びとの異教への復帰、国王・教会に対する民衆の攻撃を厳しく罰するものであったこと。