hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
補体のホメオスタシス機能を活用した魚類粘膜の自然免疫バリアの強化

抗CD46抗体でこれら細胞株上に発現したCD46をクロスリンクして刺激し、細胞の形態変化および細胞内のタイトジャンクション構造を観察した。その結果、CD46を刺激すると、上皮細胞シートを形成する細胞の密度が上がり、さらにZO1タンパク質で可視化されたタイトジャンクションの構造が強化されることが判明した。プロパージンのアイソタイプ間の機能の違いを確認できたことで、硬骨魚類におけるプロパージンのホメオスタシス機能解析に必要な分子基盤情報を得ることができた。上皮細胞におけるCD46の機能については、当初は、細胞シートの電気抵抗をシートの完全性を評価するTransepitherial resistance assayを試みたが、供試した細胞株がアッセイ用の培養基でまったく増殖しないことが判明したために、提供できなかった。しかしながら、通常の培養ディッシュ/プレートで生育した細胞シート中のタイトジャンクション構造を、抗ZO1抗体を用いた蛍光免疫染色で観察することができたので、研究を進展させることができた。体全体が粘膜組織に覆われている魚類にとって、その粘膜上皮の完全性は病原微生物の新入・感染を防御する第一線の機能として極めて重要である。本研究は、魚類補体制御因子CD46およびアポトーシス細胞認識分子として知られる補体成分C1qおよびプロパージンが果たすホメオスタシス機能に着目し、魚類上皮組織の健全性維持・強化の補体系による制御機構を解明することを目的とした。これまでに、膜型補体制御因子の一つであるCD46様分子が、コイおよびギンブナ上皮細胞の増殖、上皮シート形成を促進し、上皮の健全性維持に寄与していることを解明した。さらに、哺乳類でアポトーシス細胞認識分子として知られる補体成分プロパージンが、恋では2種のアイソタイプとして存在し、それらが補体成分C3のアイソタイプを異なる親和性で相互作用することを明らかにした。本年度は、上皮細胞に覆われた魚類の生体防御の第一線として機能する体表粘液における、補体活性化経路の存在を検討した。その結果、体表粘液中に、実際にCD46のリガンドとなるC3と、C3の第二経路による活性化を促進するためのポジティブ・レギュレーターであるプロパージンが存在することを、特異抗体を駆使したウエスタンブロッティングで突き止めた。以上の結果を総合すると、魚類の体表上皮細胞を覆う粘液中で、主に補体第二経路の活性化が起こり、その結果生じた活性化型C3(おそらくC3b)がCD46のリガンドとして上皮細胞を刺激し、その増殖・シート形成を促して微生物の侵入を最小限にとどめている、という感染防御メカニズムが提唱される。当初予定した抗体作製や特異性検定には成功しているので、CD46については、上皮細胞株を用いたより詳細な機能解析を行う予定である。具体的には、上皮細胞シートの完全性を評価するTransepitherial electric resistanceの測定と、上皮細胞シートを介したFITC-デキストランの通過試験である。そのためには、KF-1細胞やCFS細胞の、各種メンブランセル上での培養条件を確立する必要がある。また、CD46以外の補体成分・補体制御因子については、さらに多様なタンパク質に対する抗体を樹立して、研究対象の幅を広げていく予定である。
ジュウイチのヒナによる宿主操作:仮親はどのように騙されているのか?

ジュウイチは東アジアにのみ生息するカッコウ科托卵鳥で,ルリビタキなどの小鳥に卵を産み込み,雛を育てさせる.ジュウイチの雛は翼の裏側に口内と同じ色をした皮膚裸出部(以下翼角パッチ)があり,給餌にやってきた宿主にたいし,翼を持ち上げ,この翼角パッチをディスプレイするという,他の鳥類では確認されていない,非常に珍しい特徴を持っているが,これまでの研究からこのディスプレイは宿主により多くの餌を運ばせるための適応であり,ジュウイチの雛は翼角ディスプレイによって生育に十分な餌量を確保しているということがわかっている.これは恐らく宿主は翼角パッチと雛の嘴を区別できず,雛の数を実際よりも多いと錯覚してしまうためであると考えられる.本研究では宿主が実際に雛の数を多く錯覚しているのかどうかを検証した.これまでの観察から,ディスプレイされた翼角パッチの数が増加するにつれ,宿主が巣に滞在する時間が長くなるということが確認された.このことから宿主の在巣時間は提示されている数に対する特異的な反応であるということが考えられる.そこで,托卵されていないルリビタキの巣を用い,雛の数を人工的に増減させる実験を行った.現在までに得られている最新の成果を以下の国内・国外における学会にて発表し,議論を行った.7月23日より29日までフランス・トゥールで行われた国際行動生態学会第11回大会にて口頭発表『Does a Horsfield's hawkcuckoo chick deceivehosts numerically?』,8月13日より19日までドイツ・ハンブルクで行われた第24回国際鳥学会議にてポスター発表『Does a Horsfield's hawkcuckoo chick deceive host parents numerically?』,9月15日に盛岡大学農学研究科で行われたCOEフォーラムにて『ジュウイチの雛による宿主操作-鳥類における認知と寄生者による搾取-』,3月19日より23日まで松山大学で行われた日本生態学会第54回大会にてポスター発表『ジュウイチの雛による宿主操作:宿主は雛の数を認識しているのか?』を行った.また,9月15日より19日,盛岡大学で行われた日本鳥学会2006年度大会にて自由集会『統計モデルによるデータ解析入門:線形モデルとモデル選択』を企画し,講演『統計モデル入門』を行った.現在,宿主であるルリビタキの親鳥による数に対する反応と,ジュウイチに寄生されたときの行動に関し,宿主が自分の雛を育てているときの雛の数と,ジュウイチに托卵された場合の翼角パッチの数に対する反応を比較した論文を執筆中である.ここで用いられている寄生されていない巣における親鳥の行動は,実験を行っていない,自然状態でのものであり,実験処理に関してはまだ十分な例数は確保できていないため,今後も引き続き研究を継続していく.現在までの,野外にて行った実験研究の結果に関する論文が米科学振興協会刊行のScience誌に掲載された(論文1).鳥類における親子間信号伝達と托卵寄生者による搾取に関する総説論文の依頼を受け,執筆したものが日本鳥学会刊行Ornithological Scienceにて発行された(論文2).スウェーデン生態学会刊行Journal of Avian Biologyにて,野外で観察された宿主による誤認行動を短報にて報告した(論文3).5月下旬より8月上旬まで静岡県駿東郡にて野外調査を行い,被寄生巣3巣,正常巣7巣にて観察を行い,また,うち4正常巣においては雛入れ換え実験を行った.今年度の調査で得られたデータも含め,宿主による数認識に関する分析結果を日本鳥学会2005年度大会,日本動物行動学会第24回大会にて口頭発表として発表した.日本鳥学会2005年度大会においては生物統計学の実践に関する自由集会を企画し,発表を行った.また,日本行動学会より依頼を受け,同会が運営するインターネット上の映像ライブラリにて,研究対象動物であるジュウイチの雛の行動の映像を公開した.現在,ジュウイチの雛の生理的需要と宿主に対する信号発信の強度との関係に関する論文を執筆中であり,3月下旬に国際行動生態学会刊行Behavioral Ecology誌に投稿予定である.ジュウイチは東アジアにのみ生息するカッコウ科托卵鳥で,ルリビタキなどの小鳥に卵を産み込み,雛を育てさせる.ジュウイチの雛は翼の裏側に口内と同じ色をした皮膚裸出部(以下翼角パッチ)があり,給餌にやってきた宿主にたいし,翼を持ち上げ,この翼角パッチをディスプレイするという,他の鳥類では確認されていない,非常に珍しい特徴を持っているが,これまでの研究からこのディスプレイは宿主により多くの餌を運ばせるための適応であり,ジュウイチの雛は翼角ディスプレイによって生育に十分な餌量を確保しているということがわかっている.これは恐らく宿主は翼角パッチと雛の嘴を区別できず,雛の数を実際よりも多いと錯覚してしまうためであると考えられる.本研究では宿主が実際に雛の数を多く錯覚しているのかどうかを検証した.これまでの観察から,ディスプレイされた翼角パッチの数が増加するにつれ,宿主が巣に滞在する時間が長くなるということが確認された.このことから宿主の在巣時間は提示されている数に対する特異的な反応であるということが考えられる.そこで,托卵されていないルリビタキの巣を用い,雛の数を人工的に増減させる実験を行った.現在までに得られている最新の成果を以下の国内・国外における学会にて発表し,議論を行った.7月23日より29日までフランス・トゥールで行われた国際行動生態学会第11回大会にて口頭発表

『Does a Horsfield's hawkcuckoo chick deceivehosts numerically?』,8月13日より19日までドイツ・ハンブルクで行われた第24回国際鳥学会議にてポスター発表『Does a Horsfield's hawkcuckoo chick deceive host parents numerically?』,9月15日に盛岡大学農学研究科で行われたCOEフォーラムにて『ジュウイチの雛による宿主操作-鳥類における認知と寄生者による搾取-』,3月19日より23日まで松山大学で行われた日本生態学会第54回大会にてポスター発表『ジュウイチの雛による宿主操作:宿主は雛の数を認識しているのか?』を行った.また,9月15日より19日,盛岡大学で行われた日本鳥学会2006年度大会にて自由集会『統計モデルによるデータ解析入門:線形モデルとモデル選択』を企画し,講演『統計モデル入門』を行った.現在,宿主であるルリビタキの親鳥による数に対する反応と,ジュウイチに寄生されたときの行動に関し,宿主が自分の雛を育てているときの雛の数と,ジュウイチに托卵された場合の翼角パッチの数に対する反応を比較した論文を執筆中である.ここで用いられている寄生されていない巣における親鳥の行動は,実験を行っていない,自然状態でのものであり,実験処理に関してはまだ十分な例数は確保できていないため,今後も引き続き研究を継続していく.
院内における突然の心停止を予防する方策の検討

院内における突然の心停止を予防する方策を明らかにするため、2001年から9年間の、突然の院内の心停止症例を含む院内急変症例を、可能な限り詳細なデータをカルテ閲覧により回収した。症例数は286例であった。死亡退院を従属変数として単変量解析を行い、単変量解析で有意な因子となった15項目を多変量解析した。その結果、入院患者である、悪性腫瘍を罹患している、夜間帯の急変、SOFA5以上、到着前にCPA症例であった、の5項目が生命予後不良因子であることが分かった。2003年から2008年の院内急変による救急コール(当院ではCPRコールと呼称)の報告書を元に症例を検索したところ、235例の症例を認めた。235例について検討したところ、CPRコール中、実際に心肺停止症例であった症例は71症例であった。71症例を検討してみると、心・脈管疾患は29例、悪性疾患は25例であった。続いて、代謝・内分泌・免疫疾患は9例、眼科疾患は2例、精神疾患は2例、その他は脳外科疾患、整形外科疾患、腎疾患、小児外科疾患が1例ずつで、合計4例であった。予兆となる因子としては、心・脈管疾患か、もしくは悪性疾患であるということがあきらかとなった。しかし、それ以上の詳細な因子については、カルテ記載から拾い上げることには限界があることがあきらかとなり、今後、コール周辺での状況を詳細にインタビューする方策が必要であると考えられた。特に詳細な記載が残っている2005年から2008年のデータに着眼してみると、発症より緊急コールまでの時間が10分以上必要とした症例が40%前後であり、今後の改善を必要としたが、一方で、蘇生チームが現場へ到着するまでは、おおむね5分以内との結果であった。71例の心肺停止症例に着眼してみると、自己心拍再開例は、53例(75%)、そのうち生存退院は17例(24%)であった。17例中、脳機能障害を呈したものは、3例であり、残りの14例は高次脳機能を含む脳機能の障害を残さずに退院していた。14例中、高度な蘇生処置である、PCPSを行った症例が4例、外科的気道確保を行った症例が1例含まれていた。今後、新たなCPRコールの報告用紙の改訂と、電子入力によるペーパーレス化、および予兆因子を拾い上げるため、個別にヒアリングをかけるシステムの検討を行う。2001年から2009年の阪大病院における院内急変患者のカルテをすべて見直して、分析した。9年間の院内救急コールは286件あった。そのうち134件(46.9%)は死亡退院であり、152件(53.1%)は生存退院であった。19件はPCPSが導入されていた。3件は、現場で緊急輪状甲状靭帯切開が施行されていた。CPA症例は104件であり、31例が生存退院となったが、そのうち21件(20,2%)は神経学的な問題を合併せずに退院した。神経学的な予後が良好な状態で退院した21件のうち3件はPCPSを導入された患者であった。生存退院にとって必要な因子を多変量解析で分析したところ、悪性腫瘍の合併、SOFAスコアが5より大である、夜勤帯に発生している、外来患者に対して入院患者である、コールされた症例がCPAである、という因子であることがあきらかとなった。また、報告用紙だけでは情報は不十分で、カルテから改めて情報を集めなければ正しい情報が得られないということも明らかとなった。一定以上の重症度を有する患者を診療している大学病院において、急変することそのものを減じることには意義はないが、急変後の対応を改善し、結果的には急変後の神経学的予後を改善することに意義があると考えられる。当初よりPCPSなどの高度な救急処置を行えるシステムを導入することは有意義であると考えられた。また、悪性腫瘍合併の場合の急変に対する予想およびあらかじめの患者および患者説明に関しては、現在DNARワーキングを立ち上げ、院内で検討している。早期に現場に救命スタッフが到着しやすいように、エレベーターのシステムを一部改善し、優先的にスタッフが現場に到着できるようにした。今後の院内での予後改善に必要な因子を見出し、よりよい結果に結び付けるような情報を得るために、報告用紙を電子化して、現在4月以降の導入に向けての最終調整中である。死亡退院を従属変数として、単変量解析を行い、有意となった因子を共変量として多変量解析(二項ロジスティック回帰)を行った。

説明変数として挙げた項目は、(1)男性である、(2)65歳以上である、(3)入院患者である、(4)既往歴(糖尿病、高血圧、喘息、高脂血症)がある、(5)悪性疾患を罹患している、(6)入院期間中に手術を受けている、(7)酸素投与されていた、(8)経口摂取していなかった、(9)(介助下も含めて)車椅子以上のADLは得られていなかった、(10)気管切開又は気管挿管されていた、(11)何らかの前駆症状がある、(12)急変前のSOFAスコアーが5以上である、(13)救援チームが到着前にCPAであった、(14)夜間帯に発生している、(15)目撃者がいない、以上15項目とした。これらを解析した結果、入院患者である、悪性腫瘍を罹患している、夜間帯の急変、SOFA5以上、到着前にCPA症例であった、の5項目が生命予後不良因子であることが分かった。これらの結果より、院内急変は、生命予後を不良とする因子が存在することが分かり、その因子はそれぞれの病院ごとが扱う疾患によって異なる。院内急変の予後を改善するためには、病院ごとの現状に見合った対応が有意義であると考えられる。それぞれの病院の現状を把握するためには、情報収集が必要であるが、当院では、現在、電子カルテシステムを利用して、院内急変症例の登録を電子化することに実現した。平成24年4月より運用開始が可能となった。
傾斜機能を有する二酸化チタンバイオセラミックスの創生

この研究の目的は二酸化チタンを原料とした生体材料の創製である.アナターゼ型二酸化チタンは光触媒作用および骨造成機能を有することが知られている.本研究は,この機能を応用してインプラントの材料を開発するための基礎研究である.アナターゼ型二酸化チタンを焼成して焼結体を作製し,焼成温度と細胞増殖性との関係を検討した.また,焼成温度と結晶構造および表面性状との関係についても検討した.この研究の目的は二酸化チタンを原料とした生体材料の創製である.アナターゼ型二酸化チタンは光触媒作用および骨造成機能を有することが知られている.本研究は,この機能を応用してインプラントの材料を開発するための基礎研究である.アナターゼ型二酸化チタンを焼成して焼結体を作製し,焼成温度と細胞増殖性との関係を検討した.また,焼成温度と結晶構造および表面性状との関係についても検討した.現在までに、生体材料としての二酸化チタンセラミッ評価する研究や、その焼結体を作製しその機械的性質を報告するものは少ない。本研究では、生体材料として応用できる二酸化チタンセラミックスの創生を目的として、出発材料をルチル型およびアナターゼ型の2種類を使用し焼結体試料を作製し、その結晶相の同定、硬さ、表面観察を行った。実験試料としてナノサイズ粒子径の二酸化チタンを使用した。二酸化チタン粉末を充填した金型を、1軸方向からプレスして作製した。6001200度まで焼成条件を設定し、焼結体を作製した。600度では焼結するだけの温度に達していないため、焼結体として形状維持できないものもあった。液体に焼結体を浸漬させただけで、形状が崩壊してしまった。アナターゼ型は焼成温度900上を超えると、ルチル型二酸化チタンに転位してしまうことがX線回折による結晶相の道程により明らかになった。これはアナターゼ型の特徴である光触媒作用が低下してしまうと考えられる。また焼結条件の温度を上昇させると、焼結体のヌープ硬さが増加し、焼き締まって、形状が収縮した。生体材料として応用するためには、その表面性状やぬれ性が細胞付着に大きく関与すると考えられるため、焼結体の表面観祭を行った。焼成温度が低いと焼結が進んでいないため、焼結前の出発原料に近い、粒子をブレス形成した後の状態であった。焼成温度を高くした焼結体の表面は、二酸化チタン粉末の焼結が進み、粒子同士が融合している状態が観察できた。これより、二酸化チタン粉末を出発材料とした焼結体は、粒子が焼結する温度に達していれば、形態を保持し硬さを持った焼結体の作製が可能であることが明らかになった。現在までに、生体材料としての二酸化チタンセラミックスを評価する研究や、その焼結体を作製しその機械的性質を報告するものは少ない。アナターゼ型は焼成温度900度以上を超えると、ルチル型二酸化チタンに転位してしまうことがX線回折による結晶相の道程により明らかになった。また焼結条件の温度を上昇させると、焼結体のヌープ硬さが増加し、焼き締まって形状が収縮した。焼成温度が低いと焼結が進んでいないため、焼結前の出発原料に近い、粒子をプレス形成した後の状態であった。焼成温度を1500度まで上げると、出発原料の粒子径の存在は無く、個々の粒子が融合して粒子径の増大が確認された。このことにより、焼成温度が高くなると表面積の減少が考えられる。本研究では、生体材料として応用できる二酸化チタンセラミックスの創生を目的としている。出発材料をアナターゼ型二酸化チタンを使用し、種々の温度にて焼結させることで試料を作製した。焼成温度が600度であると溶媒の中に浸漬させると試料が崩壊してしまった。そのため700度以上で、1300度まで100度毎に温度を変え焼結体を作製した。生体材料として応用できるある程度の硬さを得ることができた。アナターゼ型二酸化チタンは、900度前後でルチル型に転移することを念頭に置き、アナターゼ型の触媒作用がどのように変化するのかをメチレンブルー溶液の脱色作用を指標として計測した。傾斜機能付与にこの触媒作用を制御できることは不可欠である。

出発材料の粒子径、潜在的触媒作用の強弱、焼成温度などが傾斜機能の制御に大きな影響を与えることが判明した。今回の焼成条件では、二酸化チタンの結晶相は1000度以上ではすべてルチル型に転移していた。生体材料の条件として生体適合性を調べる必要性がある。特にアナターゼ型二酸化チタンの触媒作用が、生体にどのような影響をおよぼすかについて、作製した試料上での細胞培養実験を行った。実験用シャーレに配置した試料上に、マウス由来線維芽細胞を播種しその細胞増殖および細胞形態を観察した。光触媒能の強い700度試料上では、細胞が萎縮し播種時より細胞数の減少が認められた。900度以上では細胞増殖が顕著に現れた。900度以上では細胞形態に萎縮等の異常はみとめられなかった。これにより、光触媒能が顕在しまた細胞増殖の見られる焼成温度は900度前後あることが明らかになった。本研究では、生体材料として応用できる二酸化チタンセラミックスの創生を目的としている。焼結体作製では、1次粒子の異なる種々のアナターゼ型二酸化チタン粉末を成形・焼結し、その触媒能の効果を検討した。1次粒子が微細なほどその触媒能による脱色・抗菌効果が高かった。焼成条件温度が高くなると、焼結が進み体積の収縮が大きくなり硬度が増し、アナターゼ型二酸化チタンからルチル型二酸化チタンに転移し、触媒能である脱色・抗菌効果は減少した。焼成条件温度を高くすると、アナターゼ型、ルチル型ともに、表面粗さは減少した。また1次粒子が微細なものは粒子が大きいものと比較して低温度下でも表面粗さが減少する傾向があった。口腔インプラント体材料として要求される性質は、骨埋入部分では骨細胞との適合性が良好であること、また相反して口腔内細菌から感染を除去・予防することが必要である。当該年度にて、アナターゼ型二酸化チタンの焼成温度を変化させ、傾斜機能を有する焼結体試料を作製し、その評価としてin vitro試験にて細胞分化の状況を知るため、アルカリフォスファターゼ(ALP)活性を検討した。この結果、焼成温度が700度と低い焼結体上に培養したマウス由来骨芽細胞(MC3T3-E1)では、細胞数の増加はわずかしか確認されなかったが、ALP活性が高く確認された。これは同温度で焼成したルチル型試料と比較して大きな値を示した。触媒能を有するアナターゼ型二酸化チタンがALP活性上昇に関与することが示唆された。試料作製条件の設定に少し時間はかかったが、マウス由来繊維芽細胞による細胞培養実験を終えた。またマウス由来骨芽細胞培養実験はほぼデータ処理段階である。24年度が最終年度であるため、記入しない。現在までに試作した試料以外の形状にするための作製方法の考案を行う。また焼結体を作製する上で、どのようなバインダー材料が適当かを検討する。
日本人ＥＦＬ学習者の読解指導における文処理と談話処理に関する研究

本科研の主な目的は、日本人EFL学習者の第2言語英文読解における主要な困難点を解明し、日本の英語教育における読解指導の改善に資することである。本科研では、主に談話情報と音声情報が第2言語文処理における統語的曖昧性や複雑性の解消に及ぼす影響を解明するために、1実証的研究2調査研究3指導法研究などの複合的分析に取り組んできた。一連の(実証的研究)結果から、主な困難点としては、(1)閉鎖の原理などの統語処理原理(2)(即時処理)、(選択的)再分析処理などの統語処理ストラテジー(3)中間言語に基づく日本人EFL学習者特有の読解ストラテジーの3要因が主に複雑に関与していることが認められた。文献研究としては、第2言語文処理、第2言語統語処理、第2言語談話処理に関する、2012年度までの研究結果と内外の先行研究結果を比較分析した。実証的研究としては、袋小路文などの英文の統語処理における困難点の同定と解明を目指した複合的実証分析に4名の研究分担者と4名の研究協力者と取り組んだ。一連の研究結果から、日本人EFL学習者が第2言語文処理・第2言語統語処理を遂行する場合に、困難を生じる要因として(1)統語処理原理に関する要因(2)統語処理ストラテジーに関する要因(3)日本人EFL学習者特有の読解ストラテジーの3つの要因が主に関与していることが認められた。次に実験参加者の熟達度の差異に関する要因に焦点をあて、各々の困難点との関連性を検討した。その結果、(1)統語処理原理に関わる要因に関しては、熟達度の高い被験者では「曖昧性」に関わる要因の方が「複雑性」に関わる要因と比較すると、より理解しにくいことが認められた。一方、熟達度の低い被験者では、「曖昧性」と「複雑性」に基づく統計的な有意差は認められなかった。(2)統語処理ストラテジーに関わる要因に関しては、熟達度の高い被験者の方が「並列処理」や「即時処理に基づく再分析処理」をより効果的に活用することが認められた。また3つの「再分析処理」の使用を比較すると「選択的再分析処理」の方を、「前方再分析」や「後方再分析」よりも効果的に活用することが認められた。(3)日本人EFL学習者特有の読解ストラテジーに関しては、特に熟達度の低い学習者では、個々人の中間言語文法に特有の、「統語処理的には容認されない構文解析ストラテジー」がより多用される傾向が顕著に認められた。「読解指導の調査」の予備調査の結果として、統語的に理解が困難な英文の「省察的再読」の指導の場合には、「遅延処理」と「選択的再分析」をより重視して指導する傾向が認められた。本科研では、日本人EFL学習者の英文読解における困難点を解明し、日本の第2言語読解指導の改善に資するために、下記のように、日本人EFL学習者を主な被験者として英文読解における文処理、談話処理に関する実証研究、調査研究、指導法研究に取り組んだ。2011年度は、第2言語処理研究、特に第2言語統語処理、第2言語談話処理、第2言語音声処理に関する内外の先行研究結果を、主に日本人EFL学習者の読解指導の改善に資するという観点から分析・考察し、それらの結果を研究論文にまとめた。さらに2012年度実施予定の本実験のために予備実験を実施し、実験上の諸問題を再確認し、修正すべき項目を改善した。2012年度は、特に談話文脈情報と韻律的情報などが第2言語統語処理における袋小路文に内在する統語的曖昧性や複雑性の解消に及ぼす影響を解明するために、日本人大学生、大学院生を主な被験者として本実験を実施し、研究論文にまとめた。さらに、それらの研究成果を広く一般にも公開するために、研究分担者、研究協力者とともに応用言語学、英語教育学研究における実証的研究法の専門書として『英語教育学の実証的研究法入門』(寺内正典、中谷安男編著)(研究社)(2012)を刊行した。2013年度は、上記の本実験の結果との統合的な比較分析を遂行するために、被験者変数(英語熟達度、英語学習年数、英語のインプット量の差などの諸要因)が異なる被験者を対象とする実証研究を遂行した。また、ELEC英語教育学会の大学、高校、中学の英語教員168名を対象とする「読解指導法のアンケート調査」を実施し、分析結果を研究論文にまとめた。さらに第2言語処理研究の成果を援用して本科研で独自に開発した授業談話分析シートを活用し、第2言語読解授業を対象とする授業の談話分析を実施し、分析結果に基づき、読解指導の改善への示唆と提案を当該学会紀要の研究論文にまとめた。一連の(実証的研究)結果から、主な困難点としては、(1)閉鎖の原理などの統語処理原理(2)(即時処理)、(選択的)再分析処理などの統語処理ストラテジー(3)中間言語に基づく日本人EFL

学習者特有の読解ストラテジーの3要因が主に複雑に関与していることが認められた。平成23年度の主な研究実績に関しては、以下のとおりである。(1)「本研究に関連する内外の先行研究の進展状況の調査と研究文献収集」第2言語習得、第2言語文処理・第2言語談話処理・第2言語音声処理に関する本研究と密接に関連する先行研究文献を出来るだけ広範囲に収集するために、内外の関連学会に参加するとともに大学や研究所の図書館によるデータベース検索を行った。また入手した研究文献の概要に関する研究会を研究分担者、研究協力者とともに毎月1回開催し、知識と情報を共有した。また研究会では、本研究の効果的且つ効果的な遂行のために、より適切で多角的なデータを収集し、分析するための統計処理・統計分析に関する実証的研究方法に関する研究と討議を行った。(2)「前置談話文脈情報と韻律的情報が日本人EFL学習者の統語処理に及ぼす影響に関する実証的研究」本研究では、統語処理方略に関して、主に閉鎖の原理(早い閉鎖と遅い閉鎖)に関する曖昧性の解消と中央埋め込み文などに関する複雑性の解消に研究の焦点を絞り、日本人大学生と大学院生75名を対象にして実験を行った。この実験では、前置談話文脈情報と韻律的情報が及ぼす単文単位の統語処理に対する影響に関してオフライン処理を採用して実験参加者のデータを収集し、調査・分析した。その結果、この二つの情報は実験参加者の統語処理における曖昧性と複雑性の解消に対して有効であることが統計的に認められた。また曖昧性や複雑性の解消が適切に行なわれない場合に生じる誤りの主な原因としては、母国語としての日本と英語の統語的な差異や実験参加者の中間言語の影響が見受けられた。(3)「日本人EFL学習者を対象とする読解指導の実態調査」調査項目の作成を行い、平成24年度の本調査の実施の前に30名を対象とする予備調査を実施し、G-P分析を行ない、また信頼度係数を算出し、調査項目の修正を行なった。(1)実証的研究:前置談話文脈と韻律的情報の効果に関する研究:前置談話文脈と韻律的情報が日本人EFL学習者の統語解析における曖昧性と複雑性の解消に及ぼす影響に関する実証的研究を実施した。これらの一連の研究結果から、前置談話文脈と韻律的情報は、両情報ともに日本人EFL学習者の統語解析における曖昧性と複雑性の解消に顕著な影響を及ぼしたことが認められた。さらに、統語情報、意味情報、前置談話文脈情報の三種類の情報の影響の度合いを比較した結果、前置談話文脈情報が最も顕著な影響を及ぼすことが認められた。また同様に統語情報、意味情報、韻律的情報の三種類の情報の影響を調査した結果、韻律的情報が最も顕著な影響を及ぼすことが認められた。(2)文処理、談話処理、音声処理に関する読解指導法の調査:大学英語教員(ELECリーディング研究部会研究部員)を対象に、文処理、談話処理、音声処理に関する指導法調査の予備調査を実施した。この予備調査の結果を分析し、GP分析を実施し、また信頼度係数を算出し、調査項目の加除修正を行った。(3)研究書の出版:2012年9月に、寺内正典(編集代表)『英語教育学の実証的研究入門』を研究社から出版した。本書は、後続の研究者が応用言語学などの実証的研究を実施するのに役立つように、研究分担者の中谷、飯野、長沼氏とともに、毎月1回の編集会議を実施し、約1年半の歳月を費やし、本研究の研究成果と研究方法を分かりやすく詳細にまとめたものである。(4)指導法研究:2012年度のELEC大会とELEC公開研究部会で、発展的な内容理解力を育成するために「英語で行う」
家族内発症例の遺伝的要因の同定を基盤とした骨髄増殖性腫瘍発症機序の解明

フィラデルフィア染色体陰性の骨髄増殖性腫瘍(MPN)は、造血幹細胞に体細胞変異が生じ、血液細胞が異常に増える血液疾患である。MPN患者は、QOLの著しい低下を招く脳梗塞や心筋梗塞のリスクが高く、時に、急性白血病へと病型移行する。現在のところ、リスクを伴う造血幹細胞移植以外には根本的な治療法が無く、発症メカニズムの解明による有効な治療戦略の確立が求められている。そこで本研究では、骨髄増殖性腫瘍(MPN)多発家系の発症原因であるプレ因子を同定し、健常者のiPS細胞にゲノム編集技術を用いてプレ因子やドライバー遺伝子を導入した際に、血液前駆細胞の増殖能や分化能の違いを明らかすることで、MPN発症メカニズムを解明し、将来的なMPNの早期診断や新規治療法の開発を目指している。平成30年度は、平成29年度に樹立した家族性MPN患者のiPS細胞株およびその元となっている患者末梢血から得られたゲノムDNAについて、次世代シークエンサーを用いた網羅的遺伝子変異解析を行い、MPNにおいて高頻度に見出されるエピジェネティックな変化やスプライシングに関わる遺伝子変異が存在しないことを明らかにした。さらに、アッセイのコントロールとして必要な、ドライバー変異陽性の健常者由来のiPS細胞株を作出するために、JAK2V617F変異をゲノム編集技術により導入し、JAK2V617Fホモ型、ヘテロ型を有するiPS細胞株を樹立した。これまでに家族性MPN患者由来のiPS細胞株の樹立について成功し、さらにその解析も計画通り行っている。家族性MPN患者における「プレ因子」の同定は現在行っている途中であるが、ドライバー遺伝子変異をゲノム編集技術を用いて健常者から樹立したiPS細胞に導入することに成功しており、今後、「プレ因子」の同定の後には同様にゲノム編集を速やかに行うことが可能である。以上のことから、おおむね順調に進展していると考える。これまでに、家族性MPN患者由来のiPS細胞株の樹立に成功し、このiPS細胞株にゲノム編集技術を用いて、標的因子を導入することが可能であることを示せていることから、2019年度以降は、家族性MPN患者のゲノム解析で候補として挙げられているプレ因子を導入して、血球前駆細胞に誘導し、その表現型を比較することで、発症因子の検証を行う予定である。本研究では、骨髄増殖性腫瘍(MPN)多発家系の発症原因であるプレ因子を同定し、MPN発症メカニズムを解明することで、将来的なMPNの早期診断や新規治療法の開発を目指すことを目的に研究を行った。平成29年度は全ゲノム解析によるプレ因子候補の抽出、および家族性MPN患者からiPS細胞株を樹立した。全ゲノム解析については、家族性MPN患者と非発症者からゲノムDNAを抽出して実施した。シーケンス解析によって得られたリードデータをもとに、発症者2名と非発症者1名でトリオ解析することによって、遺伝子変異の抽出を行った。現在、非発症者には見られず、MPN発症者のみに見られる数万の遺伝子変異の中から、「ドライバー変異」と「プレ因子」の候補の抽出を試みている。また、MPNモデル系を構築するために、家族性MPN患者細胞と非発症者の末梢血からiPS細胞株を樹立した。樹立したiPS細胞から造血幹細胞を誘導し、その誘導効率がMPN患者と非発症者とで差がないことを確認した。その後、得られた造血幹細胞にサイトカインを添加し、分化能と増殖能をフローサイトメトリーで解析し、赤芽球系と巨核球系の両系統に分化することを確認した。さらに、サイトカインを含むコラーゲン培地で培養して、赤芽球系コロニー・巨核球系コロニーの形成を検討したところ、MPN患者由来の細胞ではトロンボポエチン非依存的に誘導される巨核球系コロニーが見られたが、非発症者由来の細胞ではサイトカイン非依存的なコロニー形成はみられなかった。これらの実験結果から、MPNの病態をin vitroで再現できることが確認できた。家族性MPN患者と非発症者のゲノムDNAを抽出し、全ゲノム解析を予定通りに行うことができた。「ドライバー変異」と「プレ因子」の同定にはまだ至っていないが、MPN発症者のみに見られる遺伝子変異の候補が挙げられており、今後解析が可能と考える。また、家族性MPN患者由来のiPS細胞株の樹立については成功しており、その解析も順調に実行できていることから、おおむね順調に進展していると考える。

さらに、アッセイのコントロールとして必要な、ドライバー変異陽性の健常者由来のiPS細胞株を作出するために、JAK2V617F変異をゲノム編集技術により導入し、JAK2V617Fホモ型、ヘテロ型を有するiPS細胞株を樹立した。これまでに家族性MPN患者由来のiPS細胞株の樹立について成功し、さらにその解析も計画通り行っている。家族性MPN患者における「プレ因子」の同定は現在行っている途中であるが、ドライバー遺伝子変異をゲノム編集技術を用いて健常者から樹立したiPS細胞に導入することに成功しており、今後、「プレ因子」の同定の後には同様にゲノム編集を速やかに行うことが可能である。以上のことから、おおむね順調に進展していると考える。これまでの研究から、「ドライバー変異」と「プレ因子」の遺伝子の候補が挙げられ、家族性MPN患者由来のiPS細胞株の樹立にも成功していることから、平成30年度以降は、このiPS細胞株にCRISPR/Cas9ゲノム編集技術を用いて、ゲノム解析で候補として挙げられている発症因子を導入して、血球前駆細胞に誘導し、その表現型を比較することで、発症因子の検証を行う予定である。これまでに、家族性MPN患者由来のiPS細胞株の樹立に成功し、このiPS細胞株にゲノム編集技術を用いて、標的因子を導入することが可能であることを示せていることから、2019年度以降は、家族性MPN患者のゲノム解析で候補として挙げられているプレ因子を導入して、血球前駆細胞に誘導し、その表現型を比較することで、発症因子の検証を行う予定である。
tRNAに対する修飾の導入順序を制御する機構に関する構造生物学的研究

これまでに本研究において、成熟tRNAを作り出す過程においては、tRNAのL字型立体構造が確立していることを確認した上で機能する酵素(aTrm5)が存在すること、そして、tRNA成熟化過程においては複数の"3次構造のチェックポイント"となる酵素が存在しており、各tRNAは成熟化過程のどこかでそのチェックを受けた上で翻訳プロセスへと送り出されるという機構が存在しているということを提唱した。実際には、aTrm5は、tRNAL字型の角にあたる保存された塩基対が閉じていることを指標としてtRNAのL字型完成をチェックしていることがわかった。そこで、複数のtRNAにおいて、この保存された塩基対がtRNAL字型構造の指標として適していることを検証する実験を行った。また、aTrm5以外にもtRNAL字型完成のチェックポイントとして働く酵素があるだろうと考え、文献調査を行い、真核生物のTrm7p(アンチコドン1文字目のグアノシンとシトシンの2'-O'-メチル化酵素)をチェックポイント酵素の候補の1つとして見出した。更に、真核生物においてはtRNAの核外輸送もtRNAL字型完成のチェックポイントとして機能する可能性があると考えた。そこで、tRNA輸送に関わる複数の因子について生化学的、立体構造学的な研究を行うために、試料調製の条件検討を行った。まず、複数の因子について大腸菌における大量発現系を構築した。更に、試料を結晶化に適した高純度で調製することに成功した。本年度初めに、本研究において着目しているtRNA修飾酵素Trm5のN末ドメインD1が、超好熱古細菌M.jannaschiiの生育温度付近では、活性を大きく上昇させる効果を持つことを見出した。続いて、変異体を用いた実験により、D1とL字型tRNAの角G19:C56との相互作用が、aTrm5の活性に重要であることがわかった。また、野生型や変異体のtRNAやaTrm5の反応速度定数K_m、K_<cat>を測定し、tRNA G19:C56とD1の残基が相互作用することがtRNAとaTrm5の親和性を強める(K_m値を下降させる)ために重要であることを見出した。更に、tRNAの立体構造を安定化させるために必要だと考えられている修飾とaTrm5の反応との関連性を調べた。初めに、tRNA内部の立体構造を安定化するための修飾を行う酵素ArcTGTが存在するとaTrm5の活性が落ちることがわかった。また、C56の糖2'-OHをメチル化する酵素であるaTrm56によってC56の2'-OHをメチル化したtRNAを用意して、未修飾tRNA転写産物と活性を比較したところ、活性に差は見出せなかった。また、aTrm5とtRNAとの複合体立体構造においては、C56の2'-OHの先にメチル基が入る空間が存在することがわかった。今回の研究から、成熟tRNAを作り出す過程においては、tRNAのL字型立体構造が確立していることを確認した上で機能する酵素(aTrm5)が存在することが明らかになった。この知見をもとに、tRNA成熟化過程においては複数の"3次構造のチェックポイント"となる酵素が存在しており、各tRNAは成熟化過程のどこかでそのチェックを受けた上で翻訳プロセスへと送り出されるという機構が存在しているのではないだろうかということを、初めて提唱するに至った。
高齢化社会に対応した新たな歯髄保護法をさぐる

ヒト歯髄組織より分離した細胞を培養し、Dentinogenesisに関する機序を明らかにする目的で、以下の実験を行った。2)結果:培養12日目においてDEXとPTHを添加した細胞のALP活性、PG合成、OCmRNAの発現がcontrol群の細胞と比較して有意に増加した。また、PTH単独処理では、これらの分化マーカーは増加傾向にあるものの、control群と比較して有意差はみられなかった。3)考察:以上の結果からPTHはDEXとの相乗効果によりヒトの歯髄細胞のodontogenesisを促進することが分かった。現在、PTHは骨組織の分野において骨量を増加させるホルモンとして注目されているが、本研究結果より、歯髄組織への応用も可能であることが示唆された。なお、本研究は第105回日本歯科保存学会で報告した。
妊娠中の大気汚染曝露は次世代の気管支喘息発症を増加させる.

気管支喘息などアレルギー疾患は世界的に増加している.大気汚染はその重要な発症要因の一つである.妊娠中の大気汚染曝露が小児アレルギー疾患発症の抗原非特異的危険因子となるか否かについてマウスモデルで検討した.大気汚染として石油燃焼灰燼の影響はすでに報告したが(文献3)、室内気汚染(ホルムアルデヒド、タバコ煙)についても、妊娠中の曝露で仔マウスは喘息病態を発症しやすくなることが示された.曝露により新生児期の免疫状態に影響することが認められ、次世代のアレルギー疾患発症に対する環境因子と一次予防の重要性が強調された結果となった.また、発展的な研究としてケモカイン受容体阻害薬の喘息発症抑制効果を明らかとし、喘息発症におけるTh1リンパ球の関与を示した。大気汚染粉塵の曝露モデルとして、石油燃焼灰燼(ROFA)溶出液(50mg/m1)のエロソール曝露を、正常妊娠マウス(BALB/c)の出産5、3、1日前に施行、出生した仔マウス(ROFA曝露群)に対し、生後3日に卵白アルブミン(OVA)+alumを腹腔内投与により感作し、その後第1214日齢ならびに3234日齢に抗原溶液をエロソール曝露して喘息病態を評価した。正常の無処置母親マウスから生まれた仔マウスは、生後3日の1回のみの抗原感作ではその後の抗原曝露によっても著しい喘息病態を示さないが、ROFA溶出液曝露群では喘息病態をきたし、妊娠中の大気汚染粉塵曝露が出生後の仔マウスの喘息感受性を充進することが示された。このモデルを用いて室内大気汚染であるホルムアルデヒド溶液(ガス状大気汚染)およびタバコ煙溶出液(大気汚染粉塵)について検討したところ、いずれも妊娠中の曝露が仔マウスの喘息感受性を充進させた。現在、仔マウスの脾細胞のRNA解析により機序の検討中である。また、治療に向けた発展的介入実験として、ケモカイン受容体拮抗薬の効果を検討し、Th2リンパ球の抑制のみならず、いわゆるTh1リンパ球の浸潤、機能を抑制することによっても喘息病態発症の抑制につながることを認めた。この点からも妊娠中の曝露の胎児あるいは新生児への影響を検討する必要が示された。大気汚染粉塵の曝露モデルとして、石油燃焼灰燼(ROFA)溶出液(50mg/ml)のエロソール曝露を、正常妊娠マウス(BALB/c)の出産5、3、1日前に施行、出生した仔マウス(ROFA曝露群)に対し、生後3日に卵白アルブミン(OVA)+alumを腹腔内投与により感作し、その後第1214日齢ならびに3234日齢に抗原溶液をエロソール曝露して喘息病態を評価した。正常の無処置母親マウスから生まれた仔マウスは、生後3日の1回のみの抗原感作ではその後の抗原曝露によっても著しい喘息病態を示さないが、ROFA溶出液曝露群では喘息病態をきたし、妊娠中の大気汚染粉塵曝露が出生後の仔マウスの喘息感受性を亢進することが示された。このモデルを用いて室内大気汚染であるホルムアルデヒド溶液およびタバコ煙溶出液について検討したところ、いずれも妊娠中の曝露が仔マウスの喘息感受性を亢進させた。新生児マウスの脾細胞のRNA解析によりIL-4、CTLA4、TGF-βなど発現が亢進しており、曝露が胎児・新生児期の免疫状態に関与することが示された。また、血清IL-4, IL-5, IL-12, IL-13, IL-17, IL-23, IFN-γが対照に比して高値であり,特に母親の血清値に比してIL-17の増加が目立っており機序への関与が示唆された。また、治療に向けた発展的介入実験として、ケモカイン受容体拮抗薬の効果を検討し、Th2リンパ球の抑制のみならず、CCR5およびCXCR3阻害薬TAK-779によりいわゆるTh1リンパ球の浸潤、機能を抑制することによっても喘息病態発症の抑制につながることを認めた。以上、妊娠中の大気汚染曝露の胎児あるいは新生児への影響を検討する必要が示された。
複合社会の形成原理に関する基礎研究

本研究は、マレーシアを構成する民族諸集団の相互接触と国民文化形成のダイナミズムを総合的に解明し、多文化接触のモデルを作り上げる研究との関連で、マレーシア国立文書館、シンガポール国立大学図書館、およびシンガポール国立文書館から収集した750本前後のマイクロ・フィルムに含まれている官報・政府報告書・新聞などを利用し、マレーシアという代表的な複合社会の形成過程を実証的に解明するための基礎データを統合化することを目的とした。具体的な作業としては、マイクロ・フィルム形態の政府公文書や新聞、各種出版物・研究書等に記載されている地図や統計その他をヴィジュアルな形でコンピューターに入力し、それらを分類・整理することによって、1850年前後から今日までの10年毎の情報地図を作成するものである。本年度は、これらの作業の前提となる最適な項目分類方式、記憶方式、システムを確立し、続いてデータ入力作業を開始した。こうした作業を積み重ねることによって、利用しにくい諸情報が、単にヴィジュアルな形で示されるだけでなく、コンピューターの上でハイパー・テキスト化されることにより、年代別、テーマ別に、総合的な情報把握と分析が可能になると期待している。
母親役割への精神的適応過程における対処パターンに関する研究

母親役割への精神的適応過程における対処パターンを検討する目的で研究を行った。I.妊婦57名を対象に調査を行なった。1)問題志向方略群は、情緒志向方略群に比べ出産準備を低く評価し、妊娠の受容を高く評価していた。2)SCI対処型とJ.PSEQの関連は、自己コントロール型を用いるほど、妊娠の受容や母親との同一化を低く、母親との関係を高く評価する傾向を示した。3)提示したストレス内容が妊娠と関連していた妊婦は、そうでない群と比較し、児への接近感情が低く、対決型、自己コントロール型、離隔型、肯定評価型の対処型を多く用いていた。II.初産婦31名を対象に縦断的調査を行なった。1)妊娠初期と後期のSCI方略型別J-PSEQ項目を比較すると、問題志向方略群は妊娠初期より後期の妊娠の受容が高く、分娩準備や分娩の痛みと恐怖への対応を低く評価した。情緒志向方略群では、後期の方が分娩準備の評価が低かった。2)対児感情は初期のみSCIと関連し、接近感情が対決型と、回避感情が情緒志向型方略及び対決型・自己コントロール型・逃避型・自己肯定型と関連した。3)問題志向方略を用いるほど妊娠後期で母親との関係を良好と評価し、情緒志向方略を用いるほど児への心配を低く評価する傾向が見られたが、これは、逃避型対処と関連していた。この結果から、問題志向型方略を多く用いる妊婦は、母親役割への準備状況を客観的に分析し、評価が厳しいこと。情緒志向方略を多く用いる妊婦は、感情の揺れが母親役割への精神的準備に影響し、逃避型対処の影響に注意する必要性が示唆された。本年度は、以下について計画した。2.母親役割の準備状態を確認する半構成質問紙の予備調査しかし、調査施設の倫理委員会制度の変革時期に伴い、二段階の倫理委員会(看護部倫理委員会-病院倫理委員会)の倫理審査を経ることになり、施設使用承諾を得るのに4ヶ月の期間を必要としたため、調査開始が遅れ、現在まだデータ収集中である。また、これまでの研究においてAMISスケールを日本語翻訳し、日本語版の検討から三項目(母親項目、児項目、二者関係項目)のうち、二者関係項目について再考が必要だと考えてきたが、今回の検討から、日本人母子の特性を考えたスコアリング基準の検討の必要性が出たため、項目内容の調整を含めて再度検討中である。昨年度の計画に基づき研究を行なった。1.ストレス尺度であるSCI(Stress Coping Inventory)測定スケールを妊婦に用いる上での問題と妥当性の検討について調査協力へ同意の得られた妊婦94名中SCI分析の出来た57名と大学生84名のSCIを比較検討した結果(1)妊婦の各SCI値は、大学生に比べ全て低い傾向を示したが有意差はなかった。(2)初産婦の逃避型の値は、経産婦より高く、有意差が見られた。(3)初・経産婦ともに妊娠時期別での各SCI値に差はみられなかった。(4)妊娠に関連しているストレス要因をあげた妊婦は、隔離型の値が高く、他のストレス要因をあげた妊婦との間に有意差を示した。この結果から、SCIは妊婦の対処状況の特徴を見る指標になることが示された。2.母親役割準備に対する質問紙の検討面接調査により質問項目を抽出し、調査用紙を作成した。現在検討のためのデータ収集中である。3.妊娠期のストレス対処と出産後の母親としての児への対応との関連について現在データ収集中である。SCIの問題志向型・情動志向型ストラテジーの2群別J-PSEQ比較では、問題志向型は出産準備、情緒志向型は妊娠の受容が一方の群より高く、有意差を示した。

また、下位尺度間での関連をみると、SCIの自己コントロール型はJ-PSEの妊娠の受容及び母親役割の同一化と正の相関、母親との関係が負の相関を示した。2.初産婦を対象とした縦断的調査のデータを上記同様に検討し、以下の結果を得た。(1)SCIストラテジー別J-PSEQの各項目の比較は、妊娠初期・末期とも差がみられなかった。(3)SCIストラテジー別に妊娠時期別のJ-PSEQの変化をみると、問題志向型では、妊娠の受容の値が妊娠初期より末期に低下し、分娩の準備と分娩の痛みと恐怖の値が高くなり、有意差が認められた。(4)情緒志向型では、分娩の準備の値が末期で高くなり、有意差を示した。(5)対児感情との関連は、情緒志向型ストラテジー、下位尺度の対決型、自己コントロール型、逃避型、自己肯定型が妊娠初期の回避感情と正の相関を示し、対決型が初期の接近感情と正の相関を示した。(6)J-PSEQとの関連では、自己コントロール型が初期・末期の母親との同一化と負の相関、情動志向型・逃避型が末期の児への心配と負の相関、責任受容型が末期の出産準備と正の相関、問題志向型ストラテジーが末期の母親との関係と負の相関を示した。従って、ストレスへの対処特性は、妊娠末期で明らかとなる母親役割獲得過程と関連することが示唆された。
動脈血行再建術後の内膜肥厚の発生機序の解明と治療法の開発

バルーン血管拡張術後の再狭窄の主たる原因である内膜肥厚の形成期にPDGF受容体の活性化がおこっている。本研究では、PDGF-B鎖の作用を阻害し得るPDGFXR(PDGF-β受容体の細胞外領域)に注目し、培養血管平滑筋細胞を用いてin vitroでPDGFXRがPDGF-B鎖の作用を特異的に阻害することを明らかにした。本研究では,第一に,ラット頸動脈バルーン障害モデルを用いて,現在PDGFの作用を阻害すると考えられている唯一の薬品であるTrapidilを内膜肥厚形成期に投与し,内膜肥厚形成期における内因性PDGFの重要性を証明した.第一に,前述のPDGFXR遺伝子をアデノウイルスベクターに組込み(AxCAPDGFXR)、ラット頸動脈バルーン障害血管に遺伝子導入し内膜肥厚を抑制することに成功し,PDGFのなかでもPDGF-B鎖がより重要な働きをしていることを証明した.この結果は、内因性PDGF-B鎖が内膜肥厚の形成に関与していることの直接的な証明となると同時にPDGFXRが内膜肥厚の治療手段となり得ることを示し,具体的な遺伝子治療法を提示した。第三に内膜形成期におけるPDGF-B鎖の由来について検討した。障害血管内の平滑筋細胞は形質変換をおこしており、従来の培養平滑筋細胞ではおこらない反応をおこす。そこで、ラット頚動脈に内皮剥離障害を加え、形成された肥厚内膜より樹立した内膜肥厚細胞を用いてPDGF-B鎖の発現誘導を調べてみると、アンギオテンシンII(ATII)刺激によりPDGF-B鎖遺伝子の発現が著明に誘導されていることを突き止めた。この細胞ではATII刺激によりPDGF-B遺伝子の発現が引き起こされPDGF-Bタンパクの発現を確認した。第四に,ATIIがPDGF-B鎖を遺伝子誘導する情報伝達系を解明した。特異的な受容体阻害剤を用いて、その作用がアンギオテンシンII-1型受容体を介する反応であることを明らかにした。また、ATIIはERK、JNK、p38MAPK、いずれも活性化することをつきとめた。特異的阻害剤や、各MAPキナーゼ優性抑制型変異体を遺伝子導入して、PDGF-B鎖遺伝子プロモーター活性を評価すると、ATIIによるPDGF-B遺伝子発現がERKとJNKに依存することがわかった。〈障害血管壁での増殖因子のクロストークアンギオテンシンIIとPDGF〉内膜肥厚の形成には様々な増殖因子が複雑に関与しているが、PDGFとアンギオテンシン(ATII)は重要な役割を果たしているものの、両者の関連は全く不明であった。障害血管内平滑筋細胞は形成変換をおこしており、従来の培養平滑筋細胞ではおこらない反応をおこす。そこで、ラット頚動脈に内皮剥離障害を加え、形成された肥厚内膜より樹立した内膜肥厚細胞を用いてATIIとPDGFとの関連を調べた。