hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
炎症による内皮機能障害を背景とする肺高血圧病態の解明と治療法の開発

本研究は、肺動脈性肺高血圧症(PAH)の発症、ならびにPAHに続発する右心不全の発症には肺および冠動脈血管における炎症性内皮障害が関与するという仮説を検証するため、重症肺高血圧症ラットモデル(SuHx)を対象に、1)肺血管リモデリングおよび右心不全発症における炎症性シグナルの分子機序についてinterleukin-6(IL-6)に着目して検討し、2)IL-6阻害によるPAHの新規治療法の開発を目指すものであった。平成30年度は、CRISPR-Cas9の系で作成したIL-6ノックアウト(KO)ラットを用いて、SuHxモデルのPAH病態が抑制されるかについての検討を行った。その結果、SuHxモデルではWTラットにおいて右心室収縮期圧(RVSP)が100mmHgまで顕著に増加したが、IL-6KOラットではおよそ60mmHgまで著明に抑制されたことを確認し、肺血管リモデリングも抑制されることが確認された。また、エンドセリン受容体拮抗薬のマシテンタンをIL-6KOラットに投与した場合では、RVSPがおよそ30mmHg程度にまでに改善し、PAH病態が著明に抑制されるといった相加的な効果を確認することができた。また、平成29年度で明らかにしたSuHxモデルラットにおける右心機能および右冠動脈血管拡張機能の低下が、3週間のマシテンタン投与により、MRIによる右心機能評価では駆出率の有意な改善がみられ、FDG-PET検査では右心および左心室の糖代謝亢進が正常レベルまで回復することが明らかとなった。また、SuHxモデルラットで減弱した右冠動脈の内皮依存性およびNO応答性の血管拡張応答が、マシテンタン治療により有意に改善することが明らかとなった。以上の結果から、PAHの発症およびPAHに続発する右心不全の発症には炎症シグナルのIL-6が関与することが示唆された。平成29年度はヒトでの重症PAHに類似する病変を来す動物モデルとして、Sugen /Hypoxia(SuHx)ラットモデルの作成と解析を行った。SuHxモデルの右心機能計測にはPV-loop解析に加えMRIによる解析を加え、モデル作成後5週、8週での顕著な右心特異的な機能低下が右心室駆出率の低下、右心室拡張時間の延長から明らかになった。また、SPring-8での右冠動脈造影により、SuHxラットではアセチルコリンや一酸化窒素依存性の血管拡張応答が顕著に減弱することが明らかとなった。以上のことから、SuHxラット重症肺高血圧モデルにおいて、右心機能低下時に右冠動脈の血管拡張機能低下が生じることが明らかとなった。また、SuHxモデルの経時的な肺血管リモデリングについての検討により、先行研究(Abe et al. Circulation,121(25):2747-54, 2010)と同様に、モデル作成の5週後では血管の内膜病変が顕著に生じ、8週後では叢状病変に良く似た血管病変が出現することを確認した。この血管病変の形成に炎症細胞が関与していることを明らかにするため、まず始めにモデル作成8週後の肺における炎症細胞動態の検討をFACSにより行ったが、SuHxモデルで特異的に増加する細胞を見出すことはできなかったため、より詳細なリンパ球分画の検討を継続して行っている。また、炎症シグナルの一つであるIL-6が肺高血圧病態形成に関与するかを明らかにするため、CRISPR/Cas9の系でIL-6KOラットを作成した。作成したラットに対しLPSを腹腔内投与し、4時間後に採血および肺組織を採取した。ELISAによる血中IL-6濃度の検討および肺組織のStat3のリン酸化の検討をWestern Blottingにより行い、IL-6の欠損を明らかにした。重症肺高血圧症モデルであるSuHxの作成が継続的にできるような設備が完成し、遺伝子発現の定量のための組織の回収などは問題なく進んだ。また、本年度から検討予定であるIL-6KOラットの作成も順調に進行し、IL-6が欠損した個体を作成することができた。さらに、肺高血圧症の治療薬として承認されている新規エンドセリン受容体拮抗薬のマシテンタンをアクテリオンファーマシューティカルズより供与していただき、本年度から治療モデルでの検討をおこなう準備が整っている。炎症細胞動態の検討をFACSにより行っているが、市販のラット抗体がマウスに比べると少ないこともあり、判別可能な細胞種が限られてしまうが、肺のリンパ球を回収して遺伝子発現解析を行うことで、ある程度は大体できると考えている。

また、エンドセリン受容体拮抗薬のマシテンタンをIL-6KOラットに投与した場合では、RVSPがおよそ30mmHg程度にまでに改善し、PAH病態が著明に抑制されるといった相加的な効果を確認することができた。また、平成29年度で明らかにしたSuHxモデルラットにおける右心機能および右冠動脈血管拡張機能の低下が、3週間のマシテンタン投与により、MRIによる右心機能評価では駆出率の有意な改善がみられ、FDG-PET検査では右心および左心室の糖代謝亢進が正常レベルまで回復することが明らかとなった。また、SuHxモデルラットで減弱した右冠動脈の内皮依存性およびNO応答性の血管拡張応答が、マシテンタン治療により有意に改善することが明らかとなった。以上の結果から、PAHの発症およびPAHに続発する右心不全の発症には炎症シグナルのIL-6が関与することが示唆された。本年度は1)PAH病態と内皮機能連関におけるET-1受容体拮抗薬(ERA)の効果の検討、および2)炎症性シグナル阻害とERAによるPAH治療の相乗効果に対する検討をおこなう。前年度での解析をもとに、エンドセリン受容体拮抗薬のマシテンタンをSuHxモデル作成の5週後および8週後に投与することによる治療モデルをWTラットおよびIL-6KOラットで作成する。作成したモデルに対し、A)心エコーや心臓カテーテル検査での心機能に関する生理学的解析、B)SPring-8における放射光微小血管造影法による肺および右冠動脈のin vivo血管機能評価、C)肺および心臓における炎症関連遺伝子・タンパク質の発現解析、D)気管支肺胞洗浄で回収したマクロファージの解析(FACS、qRT-PCR解析)、E)肺および心臓の右心室および左心室からMACSにて抗CD31抗体にて精製回収した内皮細胞における血管内皮機能関連因子の発現解析、についての検討を行う。SPring-8での実験は課題応募制であるため、採択されなかった場合では、冠循環の評価をレーザー血流計の埋め込みによる血流動態計測やバリウム造影法による血管構造の評価、および摘出心から回収した内皮細胞の機能評価などを代替として行う。国際学会における参加および発表はしなかったため、若干のずれが生じてしまった。本年度は、FACS用抗体、ELISAキットおよび細胞分離試薬をさらに整備して、実験を進める予定である。そのため、消耗品などの物品費として120万円程度を見込み、学会発表を国内で2件予定しており、SPring-8での実験に掛かる旅費とあわせて20万円程度を予定している。また、論文投稿に掛かる経費などをその他の経費として20万円程度予定している。
「革かフェルトか！」打弦素材の変換がもたらした鍵盤音楽におけるパラダイム転換研究

本年度は前年度の聞き取り調査で確認された、ハンマーヘッドの最上部がフェルトか革かに起因する音色の相違についてのフランス語圏の修復家とドイツ語圏の修復家との間で見解が異なっている要因について、使用されていた革の質の相違に起因するという有力な仮説を立てることができた。ドイツ語圏においてハンマーヘッドを覆う革の層は23層から徐々に増え36層となっていくものの、植物性タンニン鞣しの革が使用されており、最上部についても同様であった。この植物性タンニン鞣しの革は硬く締まっており、後述する油鞣しの革と比較すると薄く(12mm)、色は茶色である。そして40年代に一時的にフェルトの使用が模索されるものの、再び植物性タンニン鞣しの革が選択され、これが1850年代以降も継続された。一方で1830年代にフェルトと革のハンマーヘッドの最上層が混在していたフランスにおいては、黄色い油鞣しの革が同箇所に使用され、この革は比較的分厚く(45mm)触感は植物性タンニン鞣しの革と比較するとより柔らかであった。つまりパリとウィーンでは打弦素材の変遷の過程が異なっていたのだ。前述の質感の相違がフランスにおいてはフェルトと革の選択の柔軟性に繋がるとともにフェルトへの移行を容易にし、一方でドイツ語圏においては革のみの時期が長く続き、革からフェルトに移行した際の音色の変化は大きかったと考えられる。また現代の修復家はそれぞれ専門としている楽器が限定されている場合が多く、音色に関する見解の相違に繋がったものと考えられる。この他に下層部については1840年代以降も、パリ、ウィーン共に革は用いられたことも明らかとなっており、1820年代から1840年代にかけてみられるハンマーヘッドの素材の多様性は、同時代のピアノ演奏に多大な影響を与えていたと推測されるところである。これまでのピアノの歴史観は、チェンバロの時代からフォルテピアノの時代に入り、革のハンマーヘッドを持つ5オクターブから6オクターブ半の音域を持つ楽器が作られた後、フェルトへの転換が図られ現代の楽器に至るといった大まかな変遷が語られるのみであり、19世紀におけるピアノのめまぐるしい技術革新にはほとんど目が向けられていなかったと言えよう。しかし19世紀は産業革命の波及効果によって、ハンマーヘッド一つとっても、構造、素材、製法において日進月歩の変化があり、それはまさに西欧諸国における工業化の賜物であったと言える。こういった劇的な変革が実はチェンバロの発音機構において起こっていなかったことから、フォルテピアノにおける発音機構の技術革新は鍵盤楽器の歴史家にとって盲点であったと言って良い。本研究はこの盲点を現時点において以下のように補完するものとなっている。1)1840年代以降も、パリ、ウィーン共に革は用いられた。2)しかし、革の使い方がパリとウィーンで異なっている。パリにおいては、分厚い革を使うことによって革のフェルト化が行われていた。一方、ウィーンでは1840年代においても薄い革が使用された。3)パリとウィーンでは打弦素材の変遷の過程も異なっていた。パリでは、1820年代から1840年代にかけて、革とフェルトを併用することによって、革からフェルトへの変化は緩やかに行われた。それゆえ、特にプレイエルの場合、革からフェルトへの変化によって音色が極端に変わったとは考えにくい。ウィーンの場合、フェルトの導入は遅く、革のみの時期が長く続いた。それゆえ、革からフェルトに移行した際の音色の変化は大きかったと考えられる。4) 1820年代から1840年代にかけてみられるハンマーヘッドの素材の多様性は、同時代のピアノ演奏に影響を与えていたと推測される。引き続き現代の一般的なピアノのハンマーヘッドの構造であるフェルト2層に落ち着くまでのハンマーヘッドの歴史についてできるだけ多くの資料を収集し、18世紀から20世紀初頭までのハンマーヘッドの歴史の基本的な流れを把握する必要がある。それは1最上層の素材の変遷、2第2層以下の革とフェルトの構成の変遷の把握に加え、3パリを中心としたフランス語圏、イギリス、ウィーンを中心としたドイツ語圏といった地域ごとの変遷の差異について、できるだけ多くの情報を集約していく必要がある。次に最終年度に向けての録音サンプルの作成についてである。ショパンはワルシャワ時代にウィーンとイギリスの楽器の双方を経験し、パリにおいてプレイエルを使用しながらもハンマーヘッドの最上部が革である場合とフェルトの場合の双方を経験した作曲者として、本研究においては非常に重要な存在となっている。ただし前述の分厚い油鞣しの革については鹿の首の背中側の革が使用されていたことが分かっているものの、パプのフェルトについてはその製法が殆ど分かっていない。プレイエル修復の専門家であるオリヴィエ・ファディーニ氏によれば復元の途上であるとのことである。従って現在のところ、1830年代のパリにおける革からフェルトへの緩やかな移行を踏まえた両者の音の比較を目的とした録音企画は時期尚早であると考えている。そこで同じショパンにおいて、ワルシャワ時代のタンニン鞣しのハンマーヘッドを持つ楽器と、パリに移ってからの油鞣しの分厚い革のハンマーヘッドを持つ楽器の比較をする録音サンプルの作成を考えている。その際楽譜上に書かれたスラー、スタッカート記号、アクセント記号、強弱記号、ペダル記号等のワルシャワ時代の記譜とパリ時代の記譜の相違を明らかにすることによって、フェルトへと緩やかに移行するプレイエルのハンマーヘッドの特性を明らかにすることができると考えている。

初年度は文献調査と国内の楽器博物館および個人所蔵の楽器のフィールドワークを通し、次年度の海外調査における基本方針を明らかにすることを課題とした。文献調査からは以下の6点が明らかとなった。1、革からフェルトへの変化の状況に関する基本的な研究はほぼ手つかずの状態である。2、現在のピアノのフェルトと、1826年にパプが特許を取得した後1840年代頃までのフランスのピアノのフェルトとでは、素材、巻き方、密度において大きな相違がある。3、1826年から約20年という短期間にハンマーヘッドの素材と革およびフェルトの層の構成に多様性が認められる。4、フェルトのハンマーヘッド先進地域であるパリでも1830年代においては、革のハンマーヘッドが共存していた。5、ウィーンにおいては、1840年代初頭フェルトが試されたものの、1840年代以降も製革技術の革新を重ねながら、引き続き革のトップが維持された。6、しかし品種改良によって良質の羊毛が採れるようになった一方で皮の質の低下が報告されていた。一方フィールドワークによって、ハンマーの素材とそれらの層の構成の差異による音質の相違が確認されたが、あわせて以下の4点も確認された。1、ダンパーの素材および形状による残響の相違が演奏表現に大きな影響を与える。2、1840年代のドイツ語圏のフォルテピアノにはトップから革・フェルト・革の層を持ち、さらには音域によってトップの素材がフェルトであったりする混成型楽器が存在する。3、ハンマーヘッドのトップとダンパーの素材および構造については、走査電子顕微鏡によるフェルトの繊維鑑別および平均繊維直径の科学的調査から、オリジナルの状態が維持あるいは復元されていない可能性の高い楽器が複数確認された。4、これは文献調査による情報との齟齬よっても確認された。申請時には、1820年代から30年代にかけての各種ペダルの設置状況の年代ごと変化と打弦素材の変化との関係について明らかにすることも課題の一つとしていた。しかし初年度のフィールドワークの結果、ペダルの演奏効果については、ダンパーの素材と形状の変遷の調査に収斂されるべきであり、とりわけアーティキュレーション法との関係について解明することがより重要であるとの結論に至った。ところでダンパーの素材と形状についての文献資料がハンマーヘッドの素材に関する文献資料に比して格段に少ないことが初年度の調査であきらかとなっている。しかし研究者らは国内の楽器博物館に所蔵されている多くのオリジナル楽器について、文献によるピアノ製作法の変遷との対照による製作年の再確認、過去の修復部分の確認のための撮影方法の工夫とその分析走査電子顕微鏡によるフェルトの分析、といった手法を総合することによって真贋の判定は可能であるとの判断に至っている。この調査方法はハンマーヘッドに関しても有効である。また申請時にはパリにおける鍵盤音楽の出版状況調査も視野に入れていたが、ペダル調査に関する方針転換から、パリに定住する以前に主としてウィーン式ピアノを演奏していたショパンのペダリングとスラーに関する記譜法について自筆譜と初版譜を年代毎に分析する手法が有効であると現時点で研究者らは考えている。
現代哲学におけるカント的テ-ゼの帰趨とその意義

(1)『純粋理性批判』を「論理的意味論」として解読する作業に従事し、「形式論理原」が、二値原理や排中律を認める現代の実在論的古典論理の部分系としての意味論をもつこと、一方「超越論的理原」は我々の時空的な感性的直観の裏づけを要する可能的経験に制限された反実在論的な直観主義的論理原の意味論を親近性をもつことを明らかにした。(2)アンチノミ-論では、無限をめぐる集合論上のパラドクス、論理主義のケ-デルの不完全性定理による破諚、ヒルベルトの無矛盾性証明を巡る困難、有限主義の検討といった現代的話題と関連させて、アンチノミ-の意義を論じた。(3)レ-ヴェンハイム・スコ-レムの定理や入れ換え関数による「指系の不可性」「翻訳の不確定性」を引き受けた上で、外部的(形而上学的)反実在論と内部的実在論を主張するパトナムの所論に見られるように、超越学的観念論と批判的(経験的)実在論とを併せ主張するカントの立場の、現代における検討の余地は十分おることを示した。(4)フレ-ケとの比較において、カントのアプリオリ-アボステリオリ、分析的ー結合的の区分の、現代における意義を検討した。(5)我々の可能的経験の枠組である、時間空間を示す日常語「いま」「ここ」「きょう」「きのう」、あるいは、実体を示す指示語「これ」「あれ」などの意味深を吟味した。(6)カントは、アプリオリ性の徴表を、普遍性と必然性に求めたが、近年展開されたクリプリらの可能世界意味論においては、アプリオリ性と必然性とは、はっきり区別されるべきカテゴリであることが示された。1.「カント哲学の現代性」においては、(1)『純粋理性批判』を《論理的意味論》として読み解く作業に従事し、「形式論理学」を二値原理に基く実在論的な現代の古典論理の部分系、「超越論的論理学分析論」を可能的経験に制限された反形而上学的、反実在論的意味論であるとの規定に達した。(2)アンチノミ-論と、現代の数学基礎論上のパラドクス、非ユ-クリッド幾何学を含めた直観的幾何学のモデル的性格、論理主義のゲ-デルの定理による破綻を通じて、カントの算術・幾何学の綜合性の主張の現代的意義を明らかにした。(3)クワイン・パトナムの指示の不確定性の主張が、カントの超越論的概念論と経験的実在論とを併せ主張することの現代的意義を照明するものであることを示した。レ-ヴェンハイム・スコ-レムの定理に基くパトナムの内部実在論との連関も考察された。2.カントのアプリオリ性や様相概念と現代の様相論理の可能世界意味論の連関、パラロギスムスと現代の信念文の意味論をめぐるパズルとの連関を追求した。カントはアプリオリ性と必然性とを密接に連関させたが、それはミスリ-ティングであることが示された。3.カントの算術の綜合性の主張は、ヒルベルトらの形式主義・ブラウワらの直観主義の〈有限の立場〉と密接な連関をもち、更にその内実を探究することが必要とされる。4.カントが主張する経験科学のアプリオリ性と、反実証主義的なポパ-や、更には理論負荷性を主張するハンソン、科学革命の断絶と反収束主義・反実石論的なク-ン・ファイヤ-ア-ベントらの主張との異同と考察された。(1)カントの分析的ー綜合的、アプリオリーアポステリオリという判断の認識価値の差異を、新しい視点から捉え直したフレ-ゲの所論と詳しく比較検討した。

フレ-ゲの場合には、分析ー綜合の区別は、当の判断・命題が、普遍的論理法則と定義のみから帰結するか否かにかゝっている。一方、アプリオリーアポステリオリの区別は、その命題の真理性の証明が、(一定領域の)一般的法則に依存うるか、それとも個々の事実に依存するかの区別である。算術に関する「論理主義」とは、算術が分析的であることを示そうとするものである。また、分析的真理が、カントと異い、我々の認識を拡張する拡張判断でもあるうると認められる。(2)カントは、超越学的論理学の意味論を,我々の威性的な時間空間に限定したが、時空をはじめ、時空的な位置を占める個体実体やパラロギスムスの活題になる経験的自我にかゝわる基礎的な用法、「いま」「ここ」「まよう」「きのう」「あした」「これ」「あれ」「私」などの意味論を構築することにより、カントの意義を更に追求する基礎固めとした。
水環境における新規防汚剤の運命および生態影響

我が国で使用されていると考えられる数種類の新規防汚剤を供試し、以下の課題に取り組んだ。1.新規防汚剤による我が国水環境の汚染瀬戸内海を中心とした西日本沿岸海域の港湾海水中での防汚剤の残留分析を行った。海水中の最高濃度は、Irgarol 1051が0.30μg/L、M1が1.9μg/L、Diuronが3.1μg/Lであった。定点における3年間にわたる調査結果から、残留濃度は概して高い順にDiuron>Irgarol 1051>M1であった。2.分解性評価Irgarol 1051が水銀イオンによって触媒される加水分解により分解し、分解産物M1を生成した。Irgarol 1051は太陽光によっても分解し、分解産物M1を生成した。太陽光下での分解速度は天然水中で早く、腐植物質による光増感分解が示唆された。Irgarol 1051およびDiuronを含む市販塗料を用いた実験から、我が国沿岸海水に検出されたDiuron, Irgarol 1051, M1は市販塗料に由来することを確認した。3.生態系影響評価Irgarol 1051とその分解産物M1について、細菌、微細藻類、海藻、ウキクサ、甲殻類、陸生植物に対する影響を定量的に評価し、残留濃度と比較することによってIrgarol 1051の環境リスクを評価した。数種類の新規防汚剤について、魚類の生死および細胞増殖、ウニ受精卵の発生、3種類の非標的植物の増殖に対する影響を評価した。魚類試験では28日間の初期生活段階試験と24時間の浮遊培養細胞試験を実施した。金属ピリチオン化合物の毒性が全ての生物に対して強く、特にウニ受精卵に対する影響が極めて強かった。UV-Aランプを用いて光分解処理した金属ピリチオン化合物はワムシとウニに対する毒性が減少したので、金属ピリチオン化合物は容易に光分解したと考えた。1.新規防汚剤による水環境の汚染の現状把握1)市販防汚塗料の活性成分の把握活性成分としてIrgarol 1051およびDCMUを含有する市販防汚塗料を明らかにした。両化合物の定量法をそれぞれ確立した。2)環境水中の残留分析広域調査では、瀬戸内海、紀伊半島、琵琶湖沿岸において、1999年8月末に海水・湖水(計140試料)を採取した。定期調査では、岡山県南の2定点(各3地点)において、1999年1月から1年間にわたり定期的に海水を採水した(計102試料)。環境水中におけるDCMU,Irgarol,M1の検出率はそれぞれ、広域調査では86,60,30%、定期調査では83,63,19%であった。最高検出濃度は、高いほうからDCMU>Irgarol>M1の順であった。2.新規防汚剤の分解性評価市販船底塗料に含まれる防汚剤の運命について、(1)水中への溶出、(2)太陽光分解、を6ヶ月間の野外実験により評価した。Irgarol 1051は速やかに水中に溶出し、暗所では経時的に飽和濃度となり、明所では分解して分解産物M1を生成した。塗料を除くと親化合物は太陽光により比較的速やかに完全分解したが、明所で生成した分解産物M1は長期にわたり残留した。以上の実験結果から、瀬戸内海の海水中に検出される両物質の由来は市販の船底塗料であることが支持された。

今後の課題として、分解産物M1の環境残留(水、底質、生物体)および生態影響(特に植物に対する影響)を明らかにすることが急務である。我が国で使用されていると考えられる数種の新規防汚剤を供試し、以下の課題に取り組んだ。1.新規防汚剤による水環境の汚染の現状把握1999年4月から2001年1月までの間、2週間毎に定点でのサンプリングを行い、海水中のIrgarolおよびその分解産物M1、DCMUの残留濃度を定量した。濃度は高い順にDCMU>Irgarol>M1であった。2.分解性評価太陽光近紫外線を模擬するランプを48時間連続照射し、水中での防汚剤の光分解性を評価した。過酸化水素やベンゾフェノンなどの既知の光増感物質はIrgarolおよびM1を完全分解させた。一方、土壌や河川水由来の天然腐植物質が存在する場合、Irgarolは50%以上が分解したが、M1は殆ど分解しなかった。これら天然に存在する物質による光増感反応は太陽光近紫外線が入射する水の表層において現実に生じていると考えられるので、防汚剤の運命に大きな影響を及ぼしていると推察された。3.生態系影響評価キングサーモン胚由来の魚類浮遊培養細胞(CHSE_<SP>細胞)を用いた毒性試験法を開発した。この試験結果を、従来から行われている魚類個体試験(初期生活段階試験)の結果と比較した。5種類の新規防汚剤はいづれも、魚類細胞よりも魚類個体に対してより強い致死影響を示した。両試験から求められた5種の防汚剤の毒性強度(24-hour EC50,28-day LC50)には高い相関が認められたので、細胞試験は個体試験を代替できることが示された。次に、植物に対する影響を微細藻類、ウキクサ、レタスを用いたマイクロバイオテストにより評価した。供試防汚剤の内、ZnPT,CuPTは魚類に対する影響が極めて強かったが、植物に対する影響は最も弱かった。これとは逆に、lrgarol,DCMUは植物に対する影響が極めて強く、魚類に対する影響は最も弱かった。KH101は魚類および植物の両方に対して中程度の毒性を示した。1.新規防汚剤による水環境の汚染の現状把握1999年1月から2001年12月までの間、2週間毎に岡山県南部の2定点でのサンプリングを行い、海水中のIrgarol、その分解産物M1、Diuronの残留濃度を定量した。残留濃度は、概して、高い順にDiuron>Irgarol>M1であった。数年間にわたる継続分析の結果を取りまとめ、残留濃度の季節変動をボート活動と関連付けたい。2.光分解性評価太陽光近紫外線を模擬する紫外線ランプを照射し、水中での防汚剤の光分解性を評価した。水中における防汚剤(CuPT, KH101)は数時間の内に分解した。光分解による分解産物の分析を試みたが、HPLC-DADでは検出することが出来なかった。光分解処理した試料の毒性を評価したところ、藻類に対する毒性は有意に減少したので、光分解により毒性の弱い化合物へと変換されると考えた。3.植物への影響評価10種類の防汚化合物が植物に及ぼす影響を評価した。供試植物として淡水産微細藻類、淡水産アオウキクサ、レタスを用いた。
鼻フローモニタリングは静脈内鎮静時の呼吸異常を低減するか：ランダム化比較試験

静脈内鎮静法は歯科においても治療を円滑かつ安全に遂行するために広く用いられているが、静脈麻酔薬による呼吸抑制に加え、特に歯科領域では歯牙切削時に口腔内に注水を行うため誤嚥等のリスクが高く、慎重な呼吸管理が必要とされる。しかし、一般的に用いられている経皮的酸素飽和度測定は無呼吸低呼吸などの呼吸異常を迅速かつ正確にとらえることは出来ない。研究代表者は先行研究で簡易睡眠検査装置の鼻フローセンサーを用いた呼吸モニタリングにより、経皮的酸素飽和度測定だけでは発見できない呼吸異常を発見できることを示した。本研究の目的は鼻フローセンサーのモニタリングにより、呼吸異常の変化を早期発見し対処することで、鎮静中の呼吸異常の頻度を減らせるかをランダム化比較試験で検証する。また呼吸異常の頻度と関連する背景因子の検討も行い、安全な静脈内鎮静法のための新たな呼吸モニタリングとリスクスクリーニングの手法を確立することである平成30年度は研究体制の構築を行った。簡易睡眠検査装置を用いた鼻フローモニタリングと同時に生体モニタ情報、術野記録カメラ、患者体動記録カメラを同時記録できるシステムを構築し、運用可能な状態とした。このシステムを用いることにより、それぞれの記録の時間的誤差を解消することができ、より正確なデータ収集と解析を可能にした。このシステムを用いた記録を第30回日本臨床モニター学会総会にて発表した。次年度よりデータ収集を開始する予定である。当初の計画では本年度中にデータ収集を開始する予定であったが、研究代表者の異動もあり平成31年度よりデータ収集が開始できるよう準備を進めている。サンプルサイズは92名で、46名ずつ2年間でデータ収集を行う予定であったが、適応基準を満たす患者は1日平均3名程度来院しているので、期間内に予定症例数を十分カバーできる見込みである。来年度中にサンプルサイズの半数のデータ収集を終え、中間解析と中間発表を行う。術前睡眠時無呼吸評価で無呼吸低呼吸指数が05回/時間のNon-OSA群と515回/時間のMild-OSA群において、鼻内圧測定により鎮静深度を調整する介入群と調整しない非介入群との間に呼吸異常頻度に有意差があるか検定を行う。平成30年度はデータ収集を開始できなかったため、睡眠記録検査装置の購入を見合わせたため物品費が大幅に予算を下回った。次年度購入予定である。
高齢者のEOLケア基盤に関する研究-プロセスマップ策定と看護教育プログラム構築-

わが国は、高齢化にともなって高齢者の死亡数が増大し多死社会に突入する。2040年には死亡数は最多の170万人となるといわれる。地域包括ケアシステムを展開することが始まったが、EOLケアの具体的方略とケア基盤の構築は、いまだ進んでいない。多くの高齢者が望むように住み慣れた場所で豊かに暮らし、豊かな暮らしの中でEOLケアを行えるような基盤をつくることが急務である。本研究において、わが国で初の高齢者のEOLケアのためのプロセスマップを策定する。プロセスマップが有効に運用できるように看護教育プログラム行い、教育を受けた看護師がケアの中心となりEOLケアを先導できる基盤を構築したい。
ディケンズを中心とした近代英語の話法の発達を解明する研究へ向けたデータベース構築

話法に関する計量的な研究はこれまでもなされているが、作家の文体的特徴を記述する研究はあまりなされていない。話法に関する文体研究を進めていくため、TEI(Text Encoding Initiative)のガイドラインに沿って、ディケンズの作品に発話者、社会階級、年齢、性別等の社会言語学観点からも研究できるよう、テクスト内にアノテーションとして情報を付与する作業を進めている。TEIのガイドラインを採用した理由は、個々の研究者が、自分の研究を遂行するために、独自のアノテーションを付与した電子テクストを作成し研究しているが、埋め込んだアノテーションの書き方やタグの付け方が異なると、他の研究者が作成した電子テクストと比較することが難しい。本研究では、他の研究者と相互利用可能な電子テクストを作成することを目指し、Oliver Twistのタグ付けから始めた。性別については「male/female」で、年齢については「young/adult/old」で分類している。また、職業の部類の作業にあたっては、Every thing in Dickensを参考に行った。現在は、Oliver Twistのタグ付け作業を終了し、Great Expectationsにアノテーションを埋め込む作業を行っている。昨年から発話者および聞き手が一人ではなく、複数いる場合などさまざまな状況が考えられるものもあるため、時間が予想以上にかかっているが、アノテーションを付与する作業を進め、できる限り多くの作品にアノテーションを付与できるよう作業を進めている。また、この作業で作成したデータをもとに、2019年に行われる国際文体論学会(Poetics and Stylistics Association)で研究発表を行う予定である。発話者、聞き手の特定が難しい場合、あるいは聞き手が複数いる場合のアノテーションの付与をする際に、精緻な読みが必要となり、どのアノテーションを付与するかについて検討するのにも時間を要したため。Oliver Twistの作品に次いで、現在Great Expectationsの作品にアノテーションを付与する作業を行っているが、まずは、この電子テクストへのアノテーションの付与作業を終わらせる。また、今年度夏に国際文体論学会で発表する予定である。テキストマイニングの手法についても引き続き、学びながらデータ分析を進めていく予定である。今年度は、発表後、データ分析を行い、論文を投稿する予定である。話法に関する計量的な研究はあるが,作家の文体的特徴を記述する研究はあまりなされていない.そこで本研究では,国際基準であるTEI(Text Encoding Initiative)のガイドラインに沿って,今年度はディケンズのOliver Twistの作品に,誰が発話しているか,聞き手はだれか,また話者および聞き手の社会階級,年齢などをタグとして,テキスト内にそれらの情報を埋め込む作業を行った.TEIを採用した理由は,個々の研究者が,自分の研究を遂行するために,独自のアノテーションを付与した電子テクストを作成して,研究しているのをよく見受けられる.しかしながら,埋め込んだアノテーションの書き方もやタグの付け方が違っている場合があり,他の研究者が作成した電子テクストと比較することが難しい.本研究では,他の研究者と相互利用可能な電子テクストを作成することを目指し,Oliver Twistのタグ付けから始めた.この研究においては,今後の研究において社会言語学的観点も考慮に入れることを考え,社会階層や年齢に関する情報ももアノテーションとしてテクスト内に埋め込むこととした.発話者,聞き手(この場合,一人ではなく,複数人いる場合,また周りにいる聴衆の場合もある),発話者および聞き手の社会階級,職業,年齢(年齢は,次の3つに分類young/adult/old),性別も加えることとした.一部判断が難しいものもあるが,現時点ではこれらのアノテーションを付与しつつ作業を進めている.タグとして電子テクストに付与されるべき基本的な情報(書誌情報・チャプター・パラグラフ・文の切れ目など)については、すでにタグを埋め込んだ電子テクストを作成しているため,問題はないが,発話者,聞き手(この場合,一人ではなく,複数人いる場合,また周りにいる聴衆の場合もある),発話者および聞き手の社会階級,職業,年齢(年齢は,次の3つに分類young/adult/old),性別を付与していく際に,読み手の主観が入るのではないか,という懸念があった.深い読みの必要性と,その際の対応について考慮するのに時間を要した.最初に取り組む作品でルールを決めて,その後の作品におけるタグ付けを進めていくため,慎重かつ丁寧にタグ付けをする必要があったため,予定よりも時間がかかってしまった.話法に関する計量的な研究はこれまでもなされているが、作家の文体的特徴を記述する研究はあまりなされていない。

昨年から発話者および聞き手が一人ではなく、複数いる場合などさまざまな状況が考えられるものもあるため、時間が予想以上にかかっているが、アノテーションを付与する作業を進め、できる限り多くの作品にアノテーションを付与できるよう作業を進めている。また、この作業で作成したデータをもとに、2019年に行われる国際文体論学会(Poetics and Stylistics Association)で研究発表を行う予定である。発話者、聞き手の特定が難しい場合、あるいは聞き手が複数いる場合のアノテーションの付与をする際に、精緻な読みが必要となり、どのアノテーションを付与するかについて検討するのにも時間を要したため。まずは,現在作業途中であるOliver Twistの電子テクストへのアノテーションの付与作業を終わらせる.その後,統計解析環境R(tsukuba.ac.jp/bin/macosx/old/R-3.0.1.pkg)によるテキストマイニングの手法を用いて、データ分析を行い,社会言語学的観点も踏まえ,作家の文体分析につながる研究発表をする予定である.Oliver Twistの作品に次いで、現在Great Expectationsの作品にアノテーションを付与する作業を行っているが、まずは、この電子テクストへのアノテーションの付与作業を終わらせる。また、今年度夏に国際文体論学会で発表する予定である。テキストマイニングの手法についても引き続き、学びながらデータ分析を進めていく予定である。今年度は、発表後、データ分析を行い、論文を投稿する予定である。
生物間の間接相互作用網を創出する「捕食－被食関係」に関する行動生態学的研究

本研究では、(1)捕食者の産卵場所選択に被食者2種間の相互作用が影響すること、(2)同所的に存在する非被食者が捕食回避のために作り出す構造物が、捕食者の生存に影響を及ぼすこと、(3)被食者の捕食回避行動は周囲に生息する他の捕食者個体の影響を受けること、(4)共食いの回避に血縁認識能力を有するメスの産卵選好性が影響することが示された。これらは、捕食者-被食者の一対一の関係に、複数の個体あるいは複数の種が互いに影響を及ぼしあう間接的な相互作用が捕食の強度を弱めることによって、自然界における捕食者と被食者の共存を可能にすることを示すものである。ナミハダニ(以下ハダニ)の食害は、植物にミカンキイロアザミウマ(以下アザミウマ)に対する抵抗性を誘導し、アザミウマによるハダニ卵の捕食が増加、両種の捕食者でミヤコカブリダニ(以下カブリダニ)にとっても卵捕食の危険が高まる。そのような状況で、カブリダニは2種が存在するパッチよりもハダニパッチを好むことが、昨年度までに明らかとなった。本年度、オランダ・アムステルダム大のSabelis教授を訪問し、この結果について議論をした。その結果行った追加実験により、カブリダニが2種の存在するパッチを避ける手がかりとして、ハダニが放出する警報フェロモンの関与は小さく、捕食されたハダニ卵の痕跡が重要であることが示された。また、アザミウマによる卵捕食の影響を検討するため、捕食量の小さい1齢幼虫を用いた結果、カブリダニの忌避はなかった。これらの結果は、原因と結果からみると、ハダニが植物を食害するとカブリダニが避けるという一見「風が吹けば桶屋がもうかる」のような現象に、被食者同士の直接的・間接的な相互作用が関与していることが明らかとなった。今年度は、異なる実験系を用いエンドウヒゲナガアブラムシ(以下アブラムシ)による捕食回避行動(落下)を調べた。本研究ではアブラムシコロニー周囲に存在する捕食者他個体が及ぼす影響について調べた。その結果、(1)テントウ幼虫に遭遇したアブラムシは、周囲にテントウ成虫がいる場合に落下を減少すること、(2)この反応はテントウ成虫に由来する揮発性物質、アブラムシが捕食される際に放出される警報フェロモンの関与する可能性、(3)遭遇している捕食リスクと周囲のリスクを比較している可能性が示された。これは、研究代表者が注目してきた、「捕食ー被食関係」が生物間の間接相互作用網の中で維持される、という現象がハダニーカブリダニ以外の系でも起こる一般性を持つことを示す重要な成果である。本研究の目的は、自然界に共存する生物種間の直接的・間接的な相互作用が、捕食ー被食関係の維持に及ぼす影響を明らかにすることである。本年は、(1)ナミハダニ(以下ハダニ)が捕食回避のために生産する網が、他種の被食者ミカンキイロアザミウマ(以下アザミウマ)と捕食者キイカブリダニ(以下カブリダニ)に及ぼす影響、と(2)カブリダニの産卵場所選択に共食いとアザミウマによる卵捕食が及ぼす影響について実験を行った。(1)カブリダニはアザミウマを捕食する一方、卵がアザミウマに捕食されることもある。カブリダニはハダニの網がある葉でアザミウマを捕食し、産卵することを好むことを明らかにした。しかし、ハダニが多い(網が多い)葉は逆に避けた。一方、網があることで卵の捕食が減少した。(2)カブリダニのメス成虫は自分と他個体の卵がある場所を区別すること、それにより子供間の共食いが減少することを明らかにした。その認識には卵に由来する物質の関与が強く示唆された。また、餌としてアザミウマ(卵捕食の危険がある)ではなく、人工餌を与えた場合には産卵選好性が変化し、卵捕食のリスクが影響することが示された。本研究結果から、捕食ー被食関係は単に前者が後者を食い尽くすというだけではなく、他の捕食者、被食者(植食性、雑食性)の存在によって、その捕食の強度が直接的・間接的に変化することで、自然界における両者の共存を促進する可能性が示された。このようなメカニズムは、単に生物間の関係を理解するだけでなく、生物多様性の保全を進める上でも重要であると考えられる。ナミハダニ(以下ハダニ)とミカンキイロアザミウマ(以下アザミウマ)は捕食者ミヤコカブリダニ(以下カブリダニ)のエサであり、3者は野外で同所的に観察される種である。ハダニとアザミウマは一般的には植食者として知られているが、アザミウマは寄主植物の質が悪いとハダニやカブリダニの卵をエサとする捕食性を示すことも報告されている。

当該年度に行った研究では、ハダニの摂食による植物の質の変化を介してアザミウマのハダニ卵への捕食行動が変化するか、またそれによって両者をエサとして利用するカブリダニのエサパッチ選択がどのように変化するかを検証した。得られた結果は以下の通りである。(1)ハダニの食害はアザミウマに対して負の影響を及ぼす(誘導抵抗性)が、その影響はハダニの密度に依存する。(2)ハダニ密度が高い時は低いときよりもアザミウマは多くのハダニ卵を捕食する。(3)ハダニ密度が高い時にはカブリダニはハダニとアザミウマが共存するエサパッチを避け、それはアザミウマがハダニの卵を捕食した時にのみ生じる。(4)カブリダニは実際にアザミウマが存在するパッチでは卵捕食の効果により増殖が抑えられる。これら結果から、ハダニが植物を食害することで、アザミウマにとっての植物の質が低下し、その結果アザミウマによるハダニ卵の捕食が増加、アザミウマによる卵捕食のリスクを低下させるようカブリダニがエサパッチを選択することが明らかとなった。本研究は、複数のエサ種間の間接的な相互作用がそれらを利用する捕食者のエサパッチ選択に、特に子孫に対する捕食回避行動に大きな影響を及ぼしていることを示す新規な発見である。当該年度得られた結果は近畿大学・奈良キャンパスで開催された第56回日本応用動物昆虫学会大会において口頭発表を行う一方で、現在国際学術誌に投稿すべく執筆中である。当初予定していた通り2012年6月21日から7月3日に行った、オランダ・アムステルダム大学のMaurice Sabelis教授との研究打ち合わせ(これまでのデータに関するディスカッション)で得られた助言を元に追加実験を行い、これまでに得られた研究をさらに発展させることが出来た。昨年度まで材料として扱ってきたハダニーカブリダニを中心とした実験系に加え、アブラムシーテントウムシの実験系を新たに確立し、少なくとも2つの捕食者ー被食者相互作用系において、「捕食ー被食関係」が生物群集のなかで維持される可能性を示した点は、生物現象および科学的研究の一般性を検証する上で重要な意義がある。上記のような理由から、おおむね順調に進展していると判断する。本研究の特色は、捕食者と被食者の「捕食ー被食関係」にそれをとりまく生物群集およびその相互作用が及ぼす影響を解明しようと試みている点である。今年度得られた結果で、ハダニと植物の「捕食ー被食関係」によって植物の質が間接的に変化し、特にハダニの密度の影響によってアザミウマとハダニの間にの「捕食ー被食関係」が強まるという現象、エサ種間で生じる「捕食ー被食関係」によって捕食者が自身の子孫に対する捕食リスクを評価するという現象は、それだけでも興味深い発見である。また、捕食者1種と被食者2種を扱った生物間相互作用に関する研究では、捕食者が被食者間の競争に介在するというトップダウンの視点で行われることが多かったが、本研究では被食者間の相互作用がボトムアップ的に捕食者に影響を及ぼすことを示した点も斬新である。一方で、それぞれの「捕食ー被食関係」が間接的かつネットワーク的に影響し合っていることが、これまでの結果から支持されつつあり、本研究の目的は現在までのところ概ね順調に進展していると判断する。アブラムシーテントウムシの捕食者ー被食者相互作用系として特に注目し、これまで行ってきた研究を継続して行う予定である。具体的な計画としては、エンドウヒゲナガアブラムシと同一寄主植物上で観察されることがある、ソラマメヒゲナガアブラムシ、マメアブラムシに対する捕食がエンドウヒゲナガアブラムシの捕食回避行動にどのように影響を及ぼすのかについて実験を行う。
鼻粘膜より産生される一酸化窒素の産生由来と機能的意義の解明

1)手術時に得られる鼻粘膜標本(アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎)において、一酸化窒素合成酵素(NOS)の存在を免疫組織化学法を用いて確認した結果、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎の鼻粘膜ともNOSは、上皮細胞および血管平滑筋細胞に陽性所見を示した。しかし、両者における染色性に有意な差は認められなかった。このことより鼻腔内NOの産生部位は上皮細胞もしくは血管平滑筋であることが予想される。2)正常コントロール、アルレギ-性鼻炎患者における鼻腔内一酸化窒素(NO)濃度を測定するとともにacoustic rhinometryを用い鼻腔内容積を測定し、単位面積あたりの産生量を比較検討した結果、アレルギー性鼻炎患者においては有意に鼻腔内NO濃度が上昇していることを確認した。また、手術患者の協力のもと、鼻腔、上顎洞におけるNO濃度を副鼻腔炎症例、正常例にて上記同様単位面積あたりに換算し比較検討した結果では、副鼻腔炎症例においては鼻腔内NO濃度が上昇しているものの、NOの産生量に鼻腔と副鼻腔では有意な差がないことを確認した。この結果より鼻腔内NOガスは炎症により産生が増加することが確認できた。今後はこの機序にいかなるサイトカインが関与するかを検討する。3)鼻腔内NOの下気道における生理学的影響を検討するため、鼻呼吸と口呼吸において咽頭におけるNOガス濃度を比較するとともに、血液ガス交換の指標の一つである有効肺血流量を比較したところ、口呼吸に比べ鼻呼吸では有効肺血流量が増加する症例が多いことが確認できた。この結果は、鼻腔内NOガスが下気道の血液ガス交換に影響を及ぼす可能性があることを示唆している。今後は吸気中のNOが関与することを確認するため、鼻呼吸時と同濃度のNOガスを口呼吸時に吸入させ有効肺血流量が改善するか否かを検討する予定である。
新たな非肥満非アルコール性脂肪肝モデル動物の開発と脂肪肝改善法確立

グルココルチコイド受容体遮断薬として知られるミフェプリストンを通常食に混和して、14週間マウスに与えると、体重増加が観察されない非肥満性の非アルコール性脂肪性肝炎様の肝病変を呈する。さらに、肝臓の組織切片をBodipy493/503を用いて染色して脂肪滴を検出すると、ミフェプリストン用量依存的にBodipy陽性像が増加し、脂肪滴が増加していることが明らかとなった。また、細胞内の脂肪滴を包含するための中間系線維であるビメンチンを免疫染色したところ、ミフェプリストン用量依存的に脂肪滴の周囲に強く発現しているとの結果が得られた。そこで、この脂肪滴が肝臓の如何なる細胞種において蓄積しているのかを検討するため、培養細胞を用いてミフェプリストン刺激を行い、脂質代謝に影響を及ぼす因子について検討した。肝実質細胞として代表的なHepG2培養肝細胞に対してミフェプリストン刺激を行うと、脂質代謝に影響を及ぼすMGAT-1遺伝子の有意な発現増加が観察された。一方、肝非実質細胞である肝星状細胞に対してミフェプリストン刺激を行うと、ビメンチンタンパク質の有意な発現増加が観察された。さらに、HepG2培養肝細胞および肝星状細胞に対して個別にミフェプリストンを長期刺激して脂肪滴の形成能を検討したところ、コントロールと明らかな差は認められなかった。ミフェプリストンが脂肪滴を形成する機序には、培養細胞系と臓器である肝臓とは異なる可能性が示唆された。我が国の非アルコール性脂肪肝の罹患者数は、諸外国と同様に成人の1030%の割合で存在すると推計されている。非アルコール性脂肪肝は40歳代以降、加齢とともに急速に増加するが、自覚症状がほとんどないため気づきにくい。また、脂肪肝の一部は酸化ストレスが加わることで非アルコール性脂肪性肝炎(NASH: Nonalcoholic steatohepatitis)を発症し、肝細胞が線維化して肝硬変や肝がんへと長い年月をかけて進行するため、NASHの予防は、近年非常に注目された病態である。NASHはメタボリック症候群の肝臓における表現型の一つではあるが、肥満の程度が比較的軽い本邦においてもNASH発症率が増加傾向にある。そこで、NASH発症の分子機構をさらに理解するための最適な非肥満非アルコール性脂肪肝モデル動物の開発が必要である。通常食で飼育したマウスにグルココルチコイド受容体遮断薬として知られるミフェプリストンを与えると非肥満性NASH様肝病変を早期に惹起するとした結果を得た。また、培養肝細胞に対してミフェプリストン刺激を行うと、肝細胞における脂質代謝に影響を及ぼすMGAT-1遺伝子の有意な発現増加が観察された。これらの知見は、ミフェプリストンが新たな非肥満非アルコール性脂肪肝モデル動物となり得るとともに、脂肪肝の発症メカニズムの解明および新たな治療法の開発に寄与するものであると期待される。予備的知見において、ミフェプリストン混和通常食を14週間与えた非肥満マウスは、NASH様肝病変を呈することを確認している。そこで、肝実質細胞のモデルであるHepG2細胞にミフェプリストンを単独刺激すると、脂質代謝に影響を及ぼすMGAT-1遺伝子の有意な発現増加が観察された。さらに、ミフェプリストンがPPARγ受容体の活性化を引き起こすとの報告もあることから、PPARγ受容体遮断薬(T0070907)との共存実験を行った。その結果、ミフェプリストン刺激によるMGAT-1遺伝子発現には有意な変化は認めらなかったものの、対照群としてのT0070907単独刺激でHepG2細胞の細胞死が誘導されるといった結果が得られた。申請時における初年度の研究計画は、ミフェプリストン混和通常食誘発性非肥満非アルコール性脂肪肝モデル動物の確立であったが、他の研究計画との進捗状況を考慮して培養細胞を中心としたものに変更したが、当初の平成28年度の研究実施計画は概ね遂行できたと考えている。肥満は、現在の我が国において20歳以上の男性の31.3%、女性の20.6%に認められ、肥満対策は生活習慣病の予防、健康増進を図る上で最も重要な課題と考えられる。また、肥満により引き起こされる脂肪肝は肝臓における炎症を惹起し、肝細胞が急速に壊されて機能しなくなるといった脂肪性肝炎を呈するようになる。この肥満や糖尿病を原因とする非アルコール性脂肪性肝炎(NASH: Nonalcoholic steatohepatitis)は、肝細胞が線維化して肝硬変や肝がんへと長い年月をかけて進行するため、NASHの予防は、近年非常に注目された病態である。通常食で飼育したマウスにグルココルチコイド受容体遮断薬として知られるミフェプリストンを与えると非肥満性NASH様肝病変を早期に惹起するとした結果が得られた。また、肝実質細胞として代表的なHepG2培養肝細胞に対してミフェプリストン刺激を行うと、脂質代謝に影響を及ぼすMGAT-1遺伝子の有意な発現増加が観察された。一方、肝臓における脂肪貯蔵細胞としての別名を有する肝非実質細胞である肝星状細胞に対してミフェプリストン刺激を行うと、細胞内の脂肪滴を包含するための中間径線維であるVimentinタンパク質の有意な発現増加が観察された。

そこで、ミフェプリストンが種々の肝細胞に及ぼす影響を明らかにすることは、脂肪肝の発症メカニズムの解明、ひいてはNASHに対する新たな治療法の開発に寄与するものであると期待される。ミフェプリストン混和通常食を14週間与えた非肥満マウスは、NASH様肝病変を呈すること、また、肝実質細胞のモデルであるHepG2細胞にミフェプリストンを単独刺激すると、脂質代謝に影響を及ぼすMGAT-1遺伝子の有意な発現増加が観察された。MGAT-1遺伝子発現がPPARγ受容体を介すること、ミフェプリストンがPPARγ受容体の活性化を引き起こすとの報告もあることから、PPARγ受容体遮断薬(T0070907)との共存実験を行った。その結果、ミフェプリストン刺激によるMGAT-1遺伝子発現には有意な変化は認めらなかった。HepG2細胞におけるミフェプリストンによるMGAT-1遺伝子の発現増加は、PPARγ受容体を介していないことが分かった。さらに、肝非実質細胞のモデルである肝星状細胞にミフェプリストンを単独刺激すると、細胞内の脂肪滴を包含するための構造物の一種である中間径線維のVimentinの有意な発現増加が観察された。申請時における当該研究期間における研究計画は、ミフェプリストン混和通常食誘発性非肥満非アルコール性脂肪肝モデル動物の確立であったが、他の研究計画との進捗状況を考慮して培養細胞を中心としたものに変更したが、当初の平成29年度の研究実施計画は概ね遂行できたと考えている。グルココルチコイド受容体遮断薬として知られるミフェプリストンを通常食に混和して、14週間マウスに与えると、体重増加が観察されない非肥満性の非アルコール性脂肪性肝炎様の肝病変を呈する。さらに、肝臓の組織切片をBodipy493/503を用いて染色して脂肪滴を検出すると、ミフェプリストン用量依存的にBodipy陽性像が増加し、脂肪滴が増加していることが明らかとなった。また、細胞内の脂肪滴を包含するための中間系線維であるビメンチンを免疫染色したところ、ミフェプリストン用量依存的に脂肪滴の周囲に強く発現しているとの結果が得られた。そこで、この脂肪滴が肝臓の如何なる細胞種において蓄積しているのかを検討するため、培養細胞を用いてミフェプリストン刺激を行い、脂質代謝に影響を及ぼす因子について検討した。肝実質細胞として代表的なHepG2培養肝細胞に対してミフェプリストン刺激を行うと、脂質代謝に影響を及ぼすMGAT-1遺伝子の有意な発現増加が観察された。一方、肝非実質細胞である肝星状細胞に対してミフェプリストン刺激を行うと、ビメンチンタンパク質の有意な発現増加が観察された。さらに、HepG2培養肝細胞および肝星状細胞に対して個別にミフェプリストンを長期刺激して脂肪滴の形成能を検討したところ、コントロールと明らかな差は認められなかった。ミフェプリストンが脂肪滴を形成する機序には、培養細胞系と臓器である肝臓とは異なる可能性が示唆された。肝実質細胞モデル(HepG2細胞)を用いた平成28年度の結果を踏まえ、平成29年度は肝非実質細胞のモデルであり、類洞周囲脂肪細胞とも呼ばれる肝星状細胞に対するミフェプリストンの影響を検討する。また、初年度で実施することができなかった、ミフェプリストン誘発性非肥満非アルコール性脂肪肝モデル動物を確立するため、ミフェプリストンの投与濃度および飼育期間の最適化を行っていく。