hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
低酸素ストレス応答が制御する発がん機構の解明

Meis1の皮膚発がんにおける機能についてはあまり知られていない。c-MetインヒビターであるSU11274はHOXA9とMEIS1により誘導された白血病細胞株に対するドラッグスクリーニングから同定された。Meis1ノックダウン細胞をSU11274で処理するとMeis1存在下でのみ細胞増殖を抑制した。さらに皮膚腫瘍を用いてChIP sequencingを行った。同定されたMeis1下流候補遺伝子のひとつのStk25のプロモーター配列はMeis1存在下で強いルシフェラーゼ活性を示した。さらにStk25ノックダウン細胞では、Meis1ノックダウン細胞株と同程度に遊走能の低下が見られた。Meis1は白血病細胞において、Hoxa9と共発現することで細胞増殖を促すがん遺伝子として働くことが確認されているが、固形がんである肺腺がんにおいては、細胞増殖の抑制に機能することが明らかとなっている。このことから、固形がんにおけるMeis1は白血病細胞とは異なり、むしろがん抑制遺伝子に近い機能を示すことが推察された。しかし、現段階においては、Meis1が肺腺がんとは異なる他の固形がんにおいて同様に機能するかは不明である。また、Meis1の機能については細胞の表現型、すなわち細胞の増殖率や内在活性酸素量について盛んに解析が進められている一方で、その転写標的や下流の因子についての情報は乏しく、分子的な作用経路については未だに不明瞭な点が多く存在している。申請者の在籍する研究室では、変異原性物質であるDMBA(dimethylbenz(a)anthracene)と炎症剤であるTPA(tetradecanoyl-phorbol-acetone)を用いた多段階皮膚発がん実験を日常的に行っている。この化学発がん実験は扁平上皮がんの形成から悪性化までマウスの皮膚において継時的に観察できる極めて稀な発がんモデルである。化学発がんにより誘発した悪性腫瘍および正常皮膚を対象に、anti-Meis1抗体を用いたChIP sequencingを行い、固形がんにおけるMeis1の転写標的を探ることで、腫瘍におけるMeis1の分子的な機能を明らかにすることを試みた。その結果、悪性腫瘍において48のMeis1結合ピークが検出された。次に、これらのピークがシス領域に存在すると考えられる遺伝子を抽出したところ10個の遺伝子が検出された。4つの遺伝子(Dedd2、Sh2b1、Cep120、Stk25)がMeis1の発現と連動することを確認した。化学発がんにより誘発した悪性腫瘍および正常皮膚を対象に、anti-Meis1抗体を用いたChIP sequencingを行い、そのデータ解析が順調に進んだ。その結果、Meis1の標的候補と思われる遺伝子を10個程度にまでせばめることができた。昨年度はMeis1遺伝子のノックダウン細胞を用いた機能解析に進展が見られた。Meis1はHox9と共発現することにより白血病を協調的に誘導することが知られている。また、c-MetインヒビターであるSU11274がMeis1/Hox9で誘導した白血病細胞に対して増殖抑制効果を示すことも知られていることから、我々はSU11274がMeis1を標的として皮膚腫瘍細胞に対しても同様の増殖抑制効果を示すのではないかと着想し、マウス皮膚扁平上皮がん細胞であるB9とD3をSU11274により処理した。その結果、1uMの低濃度ではほとんど効果を示さなかったものの、10uMの濃度では有意な増殖抑制効果を示した。そこで、2種類のMeis1に対するshRNAを作製し、Meis1ノックダウン細胞株をB9、D3の2種類の細胞を用いて作製した。それらの細胞株をSU11274により処理を行った。その結果、すべてのノックダウン細胞株において、SU11274の増殖抑制効果は見られなくなった。すなわち、SU11274がMeis1を直接的、または間接的にMeis1を標的として皮膚腫瘍細胞に対しても増殖抑制効果を示すことが示された。また、Meis1は転写因子としてHif1α、p16、p19の発現を制御することが既に示されているが、それらのMeis1の下流の遺伝子の発現についても、ノックダウン細胞株を用いて調べた。その結果、Hif1αに関しては、Meis1ノックダウン細胞株では発現が低下し、これをSU11274で処理しても発現が上昇することはなかった。しかし、p16、p19に関してはMeis1ノックダウン細胞株では発現の低下が見られたが、これをSU11274で処理することで発現の再上昇が見られた。すなわち、p16とp19はMeis1を介さない経路からもc-Metにより発現が制御されていることが示唆された。研究実績の概要に記載したように、Meis1のノックダウン細胞株を用いた実験が順調に進行した。以前、変異原性物質であるDMBA(dimethylbenz(a)anthracene)と炎症剤であるTPA(tetradecanoyl-phorbol-acetone)を用いて誘導した良性腫瘍パピローマ、皮膚扁平上皮がん、コントロールとして正常皮膚からクロマチンを分離し、anti-Meis1抗体を用いて免疫沈降を行い、沈殿したクロマチンからDNAを抽出してsequencingを行うというChIP sequencingを行った。その結果、、悪性腫瘍において48のMeis1結合ピークが検出された。

このうち、4つの遺伝子(Dedd2、Sh2b1、Cep120、Stk25)の発現がMeis1ノックダウン細胞からRNAを抽出してqRT-PCRを行い発現を確認したところ、Meis1の発現と連動することを確認した。これらのうち、Stk25(Serine/threonin protein kinase25)は耐糖能を低下させ、インスリン感受性を減弱させることが知られており、糖代謝における役割が知られている。そこで、この遺伝子の機能解析から行った。Stk25のノックダウン細胞株を皮膚扁平上皮がん細胞のB9を用いて作製した。するとこの細胞株はMeis1ノックダウン細胞株と同様に細胞遊走に異常を来すことが判明した。さらにプロモーター領域をクローニングしてルシフェラーゼアッセイを行った。Meis1の全長cDNA配列とStk25のプロモーター領域を連結させたルシフェラーゼコンストラクトを同時にB9細胞にトランスフェクションしたところ、強いルシフェラーゼ活性が検出され、Stk25がMeis1の下流で機能することが確認された。Meis1の皮膚発がんにおける機能についてはあまり知られていない。c-MetインヒビターであるSU11274はHOXA9とMEIS1により誘導された白血病細胞株に対するドラッグスクリーニングから同定された。Meis1ノックダウン細胞をSU11274で処理するとMeis1存在下でのみ細胞増殖を抑制した。さらに皮膚腫瘍を用いてChIP sequencingを行った。同定されたMeis1下流候補遺伝子のひとつのStk25のプロモーター配列はMeis1存在下で強いルシフェラーゼ活性を示した。さらにStk25ノックダウン細胞では、Meis1ノックダウン細胞株と同程度に遊走能の低下が見られた。Chipsequencingデータの解析は順調に進んだが、その特性上、ノイズ等が多く観察されるのも事実であり、さらにデータの検証や、培養細胞を用いた検証実験を進めていくことが必要である。昨年度、主に行ったChipsequencingデータの解析を継続して行っているが、これもノックダウン細胞株を用いたレスキュー実験等により、検証していく計画である。マウス遺伝学27年度はChip sequencingのデータ解析に時間の多くを割いたため、細胞培養関連試薬や分子生物学試薬類に関しては手持ちの試薬を使用することでまかなうことができたため。27年度にChipsequencingデータの解析に多くの時間を割き、試薬類は手持ちの試薬でまかない、28年度に繰り越した研究費がほぼ、そのまま29年度使用額となっているため。Chip sequencingデータの検証実験に時間の多くを割く予定のため、細胞培養試薬や一般試薬類を大量に購入する予定である。Meis1ノックダウン細胞を使った実験に必要な細胞培養試薬や分子細胞試薬類の購入に使用する予定である。
『集神州三宝感通録』の美術史料論的研究

3年間で唐道宣の著作『集神州三宝感通録』のうち仏塔・仏舎利の霊験を扱った巻上について現代語訳と詳細な注釈をほぼ完成させた。注釈は特に美術史の観点からおこない、付注項目は総計440にのぼった。また、抽出した問題点を更に追究した研究ノート計15編を得た。これらの成果は毎年度末に同人誌『奈良美術研究』誌上で公開し、総分量はA4版462頁に達した。これは、仏教初伝から初唐に至る間の舎利信仰史の基礎的研究でもある。本研究は、中国唐代の仏教界を代表する律学匠であり、屈指の仏教史家として名高い道宣の著作『集神州三宝感通録』について、美術史の立場から全文の現代語訳と詳細な注解をおこない、美術史料としての本書の位置付けを追究することを目的とする。今年度は、阿育王伝説を有する仏塔と舎利の霊験記事を集めた、巻上の「石趙青州東城塔縁三」から「隋〓州晋源県塔縁十四」について、訳と注釈を付した。底本は『大正新脩大藏経』巻52所収本(406頁aから408頁b)を用い、『続高僧伝』巻26感通篇、『廣弘明集』巻17、道世の『法苑珠林』を参考にして、文字の異同を校勘した。注解に当たっては、原則的に初出の固有名詞はすべてを対象とし、美術史の立場から内容の拡大的解説を施した。注釈を付した箇所は118箇所に上る。その主なものを挙げると、仏骨と舎利との語義の相違、舎利容器の入れ子形式、「救苦寺大像」「扶風法門寺塔」、「三十年一開」(舎利の開帳の時期・作法・意義について)、「燃指供養」「行道」「塔内の像」「舎利の放つ光明」「法門寺舎利の形状」「仏頂骨・仏頂骨の献上」「地獄の情景」「廊廡」「白馬寺」「福感寺」「心礎に舎利を安置する例」「斗栱」「博山」「四神」「十二神王」「依図刻木」(神仏の姿を描き写して彫刻を作ること)、「塔を守護する龍」などである。上記の結果については、申請時に計画したとおり広く意見を聴取して改正を加えるべく、年度内の2010年2月に冊子体の形で公開し、国内外の関連分野の研究者・研究機関に配布した。なお、本研究の研究協力者として、大学院生ら13名の熱心な協力を得た。また、『三宝感通録』巻上の仁寿舎利塔建立について考察を進め、これに始まる-州-寺制度が、王朝中央から地方への-元的な規範-様式・図像・主題の上でも-の波及に与った可能性を「隋・唐前期の-州-寺制と造像」で論じた。昨年度に引き続いて、道宣の著作『集神州三宝感通録』巻上の「階鄭州超化寺塔十五」から「雑明神州山川蔵宝等縁二十」条(『大正新脩大藏経』巻52、408頁b410頁a)について現代語訳と詳細な注釈をおこなった。注解に際しては、史書・地誌・僧伝などから関係記事を博捜し、遺物や遺迹が確認できるものであればその調査報告や先行研究を洗い出しつつ、本著作から可能な限り美術史料的な情報と論点を抽出することに務めた。注釈を付した箇所は全部で100を数えるが、そのうち「鄭州の超化寺」「塔の立地」「床」「塔基の構造」「細腰」「崑崙」「懐州の妙楽寺」「并州の浄明寺」「楡社の塔」「誌公」「高麗と高句麗の名称」「土塔」「高句麗の木塔」「儀相」「日本の阿育王塔」「益州の空慧寺」「七仏龕」「玉華宮寺」「一層碑塔」「起塔の理由」「護塔善神」「塔側の古窯」「大興国寺」「相州の大慈寺」「道宣の相州行」「太子思惟像」「遊豫園」などの項目については、上記の見地に立った本研究独自の論述をおこなった。また研究協力者である清水紀枝・大島幸代・稲葉秀朗・小野英二が該当箇所から抽出した課題について考察を深め、それぞれ「後白河院政期における阿育王塔の制作について」「護塔神について」「北周の尉遅廻と奉仏-拉梢寺摩崖大仏を主として」「唐高宗期扶風法門寺阿育王塔にみる仏塔と仏像の関係」と題した研究ノートをまとめた。なお、大学院生11名の研究協力を得た。

これらの成果は申請時に計画したとおり広く意見を聴取して改正を加えるべく、2011年2月に冊子体の形で公開し、国内外の関連分野の研究者・研究機関に配布した。また今年度に発表した下記の論文・学会報告は本研究で得た知見をもとにしたものである。最終年度の本年も、引き続いて道宣の著作『集神州三宝感通録』巻上の現代語訳と美術史の立場からの詳細な注解をおこなった。すなわち『大正新脩大藏経』巻五二所収テキストを底本として、四一〇頁aからはじまる「含利感通篇」の漢魏、東晋、劉宋時代を舞台とした計十五の説話と、四一一頁bからの「仁寿舎利塔篇」における「序」以下「隋文帝仁寿舎利塔造立詔」までであり、三年間の研究期間内に、仏塔と仏舎利の霊験を扱った同書巻上をほぼ終えることができた。研究遂行にあたっては大学院生15名の研究協力を得た。本年度に注釈を付した箇所は全部で115、叙述に要した文字数は400字詰原稿用紙換算で約390枚に上る。特に美術史的問題意識に立ってインド、ガンダーラから日本までをも視野に入れ、遺物や関連する歴史史料、最新の発掘報告をはじめとする先行研究に目配りしながら、一項あたり多いものでは約6000字を費やして叙述したが、単なる平板な辞書的解説にならず、何らかの新たな見解や問題提起を行うことを特に意図したことは、従前のとおりである。主な付注項目に「(釈迦の)牙歯」「髪爪」「目精」「衣鉢瓶杖」「坐処」「漢法本内伝」「踊身高飛」「周閭百間」「騰光上踊作大蓮花」「如来の金剛の骨」「〓獲」「斎食と舎利の感得」「八関斎」「神尼智仙」「仁寿宮」などがあり、釈迦の遺身や遺物に関する事項や、仁寿舎利塔の関連事項には、とりわけ力を入れた。また、仁寿舎利塔事業の目的と、起塔地の分布、仁寿舎利塔関連出土遣物については、研究協力者である大島幸代・萬納恵介が可能な眼りの資料を博捜し、詳細な研究ノート「隋仁寿舎利塔研究序説」を著した。以上の本年度の成果は、2012年2月に刊行された『奈良美術研究』(早稲田大学奈良美術研究所発行)第12号に掲載し、様々な指摘や意見の聴取のため国内外の関連分野研究機関に配布した。
アジア諸国と日本の比較法社会学に関する基礎的研究

本研究計画の目的は、法社会学の比較的研究を進める手がかりとして法と社会との相互作用に関する経験的な研究についての文献調査を行い、一般的な分類枠組みによって文献リストに整序することである。予算の関係で当初よりも対象を限定して、日本近隣のアジア諸国の法と社会に関する研究文献とし、広く隣接諸分野に及び、和文・欧文文献を含めて諸種の書誌情報を調査した。その中から上記の性質に当たるものを抜き出し、その結果をもとにしてデータベースを作り、ついで、その分類の枠組みを作り上げ、それを個々の文献に適用して、分類記号を付した。その結果は、パソコンソフト「カード3.ver5.」のうえで、検索可能なデータベースとなっている。研究成果報告書として添えたものは、和文・欧文別、分類項目別一覧である。法と社会との関連に関する経験的研究の既存文献を収集・整理することが主たる目的であるので、諸種の書誌情報から関係文献を抜き出し、分類する仕事を進めてきた。1)第2次大戦後の日本の法に関する文献については、諸種の書誌情報がそのまま利用できるので、関心のある文献の収集を中心とした。2)アジア諸国の法に関する文献については、法文文献と欧文文献とに分けて、該当するものを抜き出し、ソフト・カード3でコンピュータ入力し、検索可能とした。今年度の作業結果として、合計1000点近くの文献名を入力し、文献表として打ち出した(添付資料参照)。ただし、分類については未完成である。本研究は、アジア諸国の法と社会との関連に関する経験的研究の既存文献を収集・整理し、今後の研究のための基礎資料とすることを目的としている。本年度は、昨年度にひきつづき、主にアジア諸国の文献について調査収集を行い、かつ関連文献総一覧をソフト・カード3でコンピュータ入力する作業の残り分を行った。また、予定どおり、分類作業を試み、その結果できた分類項目に基づいて分類記号を加え、分類文献表として打ち出した。
粒子分散透明樹脂で作成したRPモデルの高精度3次元応力場計測の実用化

本測定方法で4つの成果が得られた。1)静荷重を受ける単純支持ばりの3次元たわみ場と応力場、2)動荷重を受ける片持ちばりの3次元応力場、3)撹拌棒と撹拌タンク内流れの同可視化、4)2波長再生法を用いたデジタルホログラフィ法による水素気泡法の3次元可視化。よって、得られた結果が実際の製品の設計・開発に適用できることを期待できる。本研究の目的は、RP (Rapid Protyping)モデルの3次元応力場計測法の実用化である。このRPモデルは透明アクリル樹脂内にマーカーとなる微小粒子が分散している。従来の静荷重に限定される3次元光弾性に対して、現在までに開発を進めている動荷重の計測が可能な「粒子分散透明樹脂を用いたRPモデルの3次元応力場計測法」の1.計測精度向上、2.複雑形状モデル計測を実施した。開発した計測法を迅速生産における工業解析に適用することで実用化する。研究目的1に示した計測精度向上の実施は、ソフトウェアで解析する粒子位置の検出方法を高精度化することで実現した。また、研究目的2の複雑形状モデル計測については、複雑形状物体の加工が可能なシステムを構築した。そのシステムは、3次元設計ソフト、自動制御ソフト、NC(数値制御)加工機から構成されている。平成22年度の研究成果は、切り欠けがある単純支持ばりの3次元応力場、座屈する長柱の3次元変位場、動加重を受ける片持ちばりの3次元計測を学術論文、国内海外発表で公開した。また、本提案手法を拡張した充填層内の3次元流動場の計測、タンク内の撹拌棒の運動と周囲流体の流動の同時3次元計測が可能であることもあわせて公開した。以上の取組みから、従来の3次元光弾性では不可能であった、動加重下における3次元応力場計測の精度向上とさらなる本研究テーマの拡張となる流体と構造体の3次元同時計測に適用することができた。加えて、実用化に向けては、迅速生産における工業解析に必要なCAD/CAMを用いた複雑形状の加工システムを構築できた。本年度は実用化に向けた研究を実施した。まず、粒子分散透明樹脂を円柱状に加工して、電磁石によって屈折率調整液を満たした容器内で回転させた。この回転によって完全な3次元剛体流れ場を実現することが可能となり、校正流れ場として利用できる。この研究では、一般的な2次元粒子画像流速測定法で、校正流れ場によって剛体回転場が得られていることを確認した。さらに、ホログラフィック粒子追跡流速法を用いて3次元剛体流れ場も観測して、その有用性を確認できた。また、前年度実施した流体と構造体の個別認識を発展させるために、流体と構造体の3次元連成運動を計測した。観測対象は高速増殖炉もんじゅで起きたナトリウム漏洩火災事故の原因となった、渦を放出する円柱が流れ方向に振動する現象である。この現象を模擬できる装置によって、円柱周囲の3次元速度場と円柱の流れ方向への振動を観測した。このことより、3次元応力場計測だけでなく、3次元連成運動にも適用可能であることを示すことができた。最後に、複雑な境界を持つ遠心ポンプ内の3次元速度場計測をホログラフィック粒子追跡流速法と屈折率調整法で実施した。この観測結果から、従来では観測が困難であった羽根車周囲の3次元速度場が可能となり、ポンプ設計・開発に対して有用な実験手法が提案できた。遠心ポンプは透明アクリル樹脂製で、仮想設計環境(CAD/CAM)によって得られた3次元データを基にNCマシンで加工されている。このことからも、仮想設計環境を援用するポンプ設計・開発に役立つ事がわかった。本研究の目的は、従来の静荷重に限定される3次元光弾性に対して、開発を進めている動荷重下の3次元応力場計測が可能な「粒子分散透明樹脂で作成したRPモデルの高精度3次元応力場計測の実用化」である。本年度は複雑形状モデルとして、遠心ポンプ内で回転するブレードの応力計測を試みた。仮想設計環境(CAD/CAM)を利用して、NC工作機械によって透明アクリル樹脂から複雑形状を持つポンプケースとブレードを作成した。ブレードには100μm程度の微小粒子を塗布し、100rpm時の形状を基準として、1100rpmまでのブレード変形を塗布した粒子位置の移動から計測した。各回転数における粒子像はディジタルインラインホログラフィ法により記録・再生し、粒子位置からブレードの変形を計測することが可能であることを示せた。その際、作動流体に屈折率調整液を使用して、屈折率差による像のゆがみを抑制できた。本研究結果から3次元応力計測が充分に可能であることも示せた。最終年度に向けて、実用化に必要な各項目を達成できたため。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度達成した各項目をまとめて、本研究課題を達成する。
膜移行シグナル付きSindbisVirusトレーサーを用いた嗅球内局所回路の解析

本研究では、嗅覚の一次中枢である嗅球を脳局所回路のモデルとして、そのシナプス構成について解析を行った。中枢神経系ニューロンの三次元構造は広範かつ複雑であり、そのシナプス構成を解析するには、光学顕微鏡による全体像と電子顕微鏡によるシナプス結合像を明確に対応させることが不可欠である。そのためにまず、ゴルジ染色様に神経を可視化できる細胞膜移行シグナル付きのGFPが組み込まれたSindbis Virusトレーサーを、ラット嗅球に注入し、嗅球内に存在する種々のニューロンの軸索、樹状突起、細胞体の形態を明らかにして、さらにそれらに免疫組織化学法を用いて、個々の化学的な特性を明らかにした。これらがどのように情報をやりとりしているのかを形態学的に明らかにするために、興奮性軸索終末に発現するシナプス小胞性グルタミン酸トランスポーター1(VGluT1)およびシナプス小胞性グルタミン酸トランスポーター2(VGluT2)の免疫組織化学法を用いて、興奮性の終末を標識した。この蛍光標識された軸索や軸索のスパインと興奮性終末を共焦点レーザー顕微鏡を用いて三次元的にその対応関係を確認した上で、そのうちのいくつかをPAP法と金コロイド抗体を用いて二重免疫電子顕微鏡標本を作製し、本当のシナプスの存在を確認した。その結果、共焦点レーザー顕微鏡で見られる終末とスパインの近接(Apposition)と電子顕微鏡で確認される本当のシナプスにはかなりの差異があることが判明した。しかしながら、実際には、超薄切の立体的な条件上ミスカウントするシナプスも勘案される上に、脳内におけるシナプスの可塑性は劇的でないにしろ、常に変化し、シナプスしたり、また離れたりを繰り返しているはずであり、シナプスしうる、または、こののちシナプスするという形態の意味は小さくないと考えられる。現在これらの実験で得られた所見を公表の準備を進めている。本研究では、嗅覚の一次中枢である嗅球を脳局所回路のモデルとして、そのシナプス構成について解析を進めている。そのためにまず、嗅球のニューロン群を形態的および化学的性質を免疫細胞化学的に明らかにすることが重要である。嗅球の各種ニューロンの形態は、主にゴルジ法や色素注入法により明らかにされてきた。しかし、ゴルジ法などでその存在は判ってもシナプス結合について明らかにされていないニューロンも数多い。そこで本研究では、近年開発されたゴルジ染色様に神経を可視化できる細胞膜移行シグナル(palmitoylation site)付きGFPが組み込まれたSindbis Virusトレーサーを、ラット嗅球に注入し、共焦点レーザー顕微鏡を用いて、嗅球内に存在する種々のニューロンの軸索、樹状突起、細胞体の形態を明らかにし、さらにそれらに免疫組織化学法を用いて、個々の化学的な特性を明らかにしつつある。また、近年、神経再生の分野で、成体齧歯類の側脳室下層に存在し神経幹細胞と考えられるtypeBアステロサイトが鎖状に連なりながら嗅球へ移動しニューロンに成熟することが明らかにされ、またこれらの神経幹細胞がドーパミン受容体を強く発現しているということが報告された(Nils et al., 2006)。本研究で5種類あるとされるドーパミン受容体subtypeのうちどれがそれを担っているのかを明らかにするためにin situ hybridizationを行い、その担い手を特定することに成功した。平成18年度はこれらの明らかになりつつある所見を統合して嗅球内の局所回路をさらに解明していく計画である。
海底熱源が作る深層循環3次元構造の解明と物質循環への影響

先行して開始していた炭素循環を含む低次生態系モデル実験について、オフライントレーサーモデルを用いて3000年強の時間積分を完了した。海底熱源を与えた場合、太平洋の底層循環が17%強化される。これに伴い、北太平洋底層でのΔ14C値及び溶存酸素濃度が5-10%ほど上昇した。これらは前年度に確認された北太平洋での水塊年齢の若年化と整合的な結果であり、循環強化に伴う海洋底層のベンチレーションの強化に起因すると推察される。一方で溶存酸素濃度については東部熱帯太平洋の底層で最大80%ほど濃度が増加することがわかった。この海域は貧酸素水塊が存在する海域であり、表層から中層にかけても30μmol/Lを下回る貧酸素水塊が厚く存在している。海底熱源を与えた場合、この貧酸素水塊の厚さが100m程度薄くなる。これは元々の厚さの7%程度に相当する。海底熱源による底層循環の強化が中層にも影響を与えることが明らかになった。また、1936年から2017年に相当するフロンガス・六フッ化硫黄ガスの大気中濃度を境界条件として与え、海底熱源の有無による循環の違いが、これら化学トレーサーの海洋中での分布に与える影響について調査した。これらの化学トレーサーのうちCFC-11については、2017年に世界で初めて北太平洋底層付近で検出下限を超える濃度が観測されている。気象研究所で実施された第6次結合モデル相互比較計画における海洋モデル相互比較計画の実験においては、CFC-11濃度が観測で得られたものよりも小さいことがわかっている。この事は本実験で再現された底層循環の強度が現実よりも弱いことを示唆している。海底熱源は底層循環の強化につながるため、この観測との相違を説明する可能性がある。2017年の観測点底層におけるモデルのCFC-11濃度は、海底熱源を考慮した実験では考慮しない実験の2倍にも至ることがわかった。本年度は3つの実験を行い、海底熱源の有無が海洋大循環場に与える影響を評価し、先行研究と整合的な結果が得られる事を確認した。3つの実験とはすなわち、海底熱源を与えないCTRL実験、水平分布を有した海底熱源を与えるGTHM実験、海底熱源の水平平均値(63.6mW/m2)を一様に与えるGTHMuni実験である。モデルは気象研究所共用海洋モデルを用い、実験設定はCMIP6/OMIPに準拠し、1200年弱の数値積分を行った。海底熱源を与えた場合、全球平均温位はCTRL実験に比べ0.03度昇温した。深層に限定すれば約0.1度の昇温となり、水の熱容量の大きさを考慮すれば決して小さな熱量差ではない。子午面循環(MOC)に着目すると、大西洋MOCにはほとんど影響がなく、太平洋MOCが7.8から9.5Svに1.7Sv強化され、南大洋MOCも0.7Sv強化された。南極周極流流量も2Sv大きくなり、これは深層対流強化に伴う傾圧性強化を反映したものと考えられる。先行研究の太平洋MOC強化は、最も近い実験設定のもので7.7から9.2Svである。ただしこの実験の海底熱フラックスは100mW/m2一様であり、本研究で用いたモデルの方が海底熱源に対する感度は高い。3,400m以深の太平洋深層水平流の場を比べると、海底熱源は循環場の構造を変えるというよりはむしろ、既存の循環場を強化する方向に働いていた。上記結果はGTHM, GTHMuni実験で同じであり、海底熱源水平分布の有無は上記指標に影響を及ぼさない。本研究で先行研究よりも小さい海底熱フラックスを与えたのは最新の研究による示唆に従ったためであるが、それでも先行研究に比して現実的なモデルを用いて行った実験で同等のMOC強化が確認された事は、海底熱源の重要性を再確認する意義深い結果である。来年度以降の研究と合わせて、その影響評価をより詳細に行う必要がある。研究計画の通り海底熱源の与え方によって3実験を行い、1,200年弱の数値積分を年度内に完了した。全球平均温位にはまだわずかにトレンドが残っており、完全に定常状態には至っていないが、子午面循環流量はほぼ定常に達しているため、循環場を議論する上では必要十分であると判断した。海底熱源による昇温、循環強化の様相などは先行研究と整合的であることを確認し、海底熱源が水平深層循環場に与える影響も調査した。GTHM, GTHMuni実験の比較から、海底熱源水平分布の有無が与える影響についても調査し、少なくとも今回用いた指標の範囲では両者に大きな違いは無いことを確認した。全て研究計画の通りに進行しており、本研究課題はおおむね順調に進展していると判断できる。実施計画の通り鉛直拡散係数(Kv)を0.1cm2/sと極端に小さな値に設定した実験を行った。ただし熱源水平分布の有無による影響はほぼ無いことが平成27年度研究結果から判明していたため、水平一様熱源を与える実験は実施しなかった。Kv以外の設定は平成27年度実験と同じである。1200年強の数値積分を終えた時点での太平洋における海底熱源による子午面循環(MOC)強化量を比較すると、平成27年度実験が1.7Svであるのに対し、本年度実験では1.4Svであった。

Kvが小さい程海底熱源によるMOC強化が大きいという従来の知見に反する結果である。調査したところ、平成27年度実験ではウェッデル海中央部の非現実的な外洋ポリニアにて底層水形成が行われており、海底熱源の供給はポリニア発生を強化しているが、本年度実験では海底熱源の有無にかかわらずウェッデル海ポリニアの発生は認められなかった。これに伴い、特に海底熱源を与えていない本年度実験が準定常状態に達していないことがわかった。そこで加速法を用いて更に1000年弱数値積分を延長した。Kvを小さく設定した実験においても、加速法の導入と同時にウェッデル海中央部で小さな外洋ポリニアが発生し、それと共に太平洋MOCの強化量が増大、平成27年度実験での強化量を上回る結果を得た。従来の知見と整合した結果を得たが、一方でこれらMOC強化は非現実的な底層水形成と密接に関連していることが示唆された。低解像度モデルでは現実的な底層水形成をこのような外洋ポリニアに頼らなければならない現状にあるため、高解像度モデルを用いた定量的評価が必要とされる。研究代表者は本課題と並行して第6期結合モデル相互比較計画(CMIP6)で用いられる海洋モデルの開発を行っている。CMIP6で使用するモデルは現在本課題で用いているモデルに比べ、ウェッデル海での非現実的な外洋ポリニア発生がより抑制されるモデルとなっている。本年度の研究実績からも明らかであるように、極域での深層水・底層水形成機構と海底熱源による循環強化は密接な関連がある。そのため可能な限り最新設定のモデルを用いることが望ましいと言える。平成29年度は本年度までに実施した物理モデル結果を用いてオフライントレーサーモデルを駆動する予定であったが、その前にCMIP6海洋モデルを用いた物理場の再現実験を行い、その結果を利用したオフライントレーサーモデル実験を実施することとする。CMIP6で使用する設定とほぼ同じ海洋モデルを用い、事後解析において障害となる経年変動成分を除くために境界条件に気候値外力を用いた物理実験を行い、温位・塩分場が準定常に至るまで1800年程度の積分を行なった。得られた物理循環場を用い、炭素循環を含む低次生態系モデルをオフライントレーサーモデルとして構築し、平成30年度に先んじてモデル実験を開始した。平成29年度に実施予定であった化学トレーサー実験に関しては、実験の効率化を図るため低次生態系モデル実験とあわせて行うことにした。その代わりに本年度は物理実験とともに計算を行っていた水塊年齢トレーサーの解析を行った。これは化学トレーサー実験で実施する炭素同位体比トレーサーと本質的に同じものである。海底熱源を与えない実験では太平洋深層の水塊年齢についてOka and Niwa (2013;今後ON13)で示されている炭素同位体比観測値と整合する分布を再現することができなかった。ON13では本研究と同じ鉛直拡散係数を用いた実験を行っており、そこでも観測と整合的な炭素同位体比分布は再現できていない。この結果と整合的な結果を得ることができたと言える。一方、海底熱源を与えた実験においても観測と同じような炭素同位体比分布を再現することはできなかった。海底熱源が深層循環場水平分布に与える影響は小さいことが本課題前半での調査によって明らかになっており、整合的な結果であると言える。しかし2つの実験の水塊年齢分布差には北太平洋東部に極小値を持つ分布が見られた。これは北太平洋東部に最も古い深層水が存在するとする炭素同位体比分布と正反対の結果である。
パイエル板上皮の免疫応答切り替え分子スイッチの解明

平成22年度の研究ではM細胞におけるE-FABP発現と抗原取り込みとの相関について以下の所見を得た。1.離乳期である生後1619日C57BL/6マウスM細胞でE-FABP発現は17日,18日を境に劇的に増強することが分かった。これは腸内細菌叢の変化する時期(Lee and Gemmell,1972)と一致しており腸管内の抗原環境の変化とM細胞のE-FABP発現との相関が示せた。2.パイエル板を含む成獣C57BL/6マウス小腸を栄養血管を生かしてバイエル板の頭尾側で結紮して閉鎖腔としビオチン標識IgA(100μg/ml)を注入して(loopassay)取り込み像を観察した。IgA取り込み像はE-FABP陽性M細胞に一致して観察された。同様の方法で生後16日と19日の比較をすると、E-FABP陰性M細胞(16日)では見られなかったIgA取り込み像がE-FABP陽性M細胞(19日)では観察された。1.で見られたE-EABP発現増強がM細胞の抗原取り込み能と相関することが示せた。3.ビオチンbovineserumalbumin(BSA),ovalbumin(OVA)choleratoxin B subunit(CTB),IgAをloop assayにてバイエル板を含む成獣C57BL/6マウス小腸に暴露した。OVAとIgAの取り込み像は:E-FABP陽性M細胞に、よく一致したが、BSA,CTBでは相関が乏しかった。暴露される抗原の種類と其々のM細胞の取り込み効率がE-FABP発現と相関することが示せた。しかし、E-FABPのアミノ酸配列内にはこの局在を説明できるシグナル配列は存在しないので共役するタンパク質が必要なはずである。1.剖出したパイエル板を30mMEDTA/PBS、37°C中で振とうすることで、上清中に上皮を分離できる。上皮と上皮化の組織それぞれから組織懸濁液を作製し、それぞれに対してE-FABP抗体を用いた免疫沈降を行った。上皮由来の検体にのみみられるバンドを切り出して質量分析で同定を試みた。解析サンプルのうち比較的上皮特異性があるものは、End A cytokeratin, cytokeratin 19,Galectin4であった。M細胞のin vivoモデルであるCaco2細胞への遺伝子導入で上記の所見が再現されるかを試みた。E-FABPとGalectin4との組合せでのみ両者は単独と異なる細胞内局在を示し、かつ共存した。この培養系に抗原標識直径1μm蛍光ビーズを加えたところ、観察頻度が少なく今後の追加実験による検証が必要であるが、E-FABP、Galectin4の共存部位に一致してビーズの取り込み像が観察された。M細胞の抗原取り込みとE-EA4BP発現との相関を確認するのに当初用いる予定だった抗原吸着マイクロビーズをつかった手法がうまく機能せず、代替手法の模索に時間がかかり、平成22年度中に終了するはずであった研究計画が23年度にずれ込んだため。24年度が最終年度であるため、記入しない。In vivoでM細胞におけるE-EABPとGalcetin4,あるいはCytokeratin19との複合体が抗原取り込み機構の一部をなすことが示唆された。今後caco-2細胞を用いたin vitroの系で以下の実験を行う。1.E-EABPとGalcetin4,あるいはCytokeratin19それぞれをtag付タンパク質としてcaco-2に共発現させ、共沈するかを確認し、E-FABPと直接結合することを確認する。2.Caco-2にE-EABP単独、E-EABPとGalcetin4,あるいはCytokeratin19を共発現したときにin vivoで確認できたとの同様な抗原取り込みの亢進が観察されるか確認する。3.E-FABP陽性M細胞の直下にはE-FABP陽性樹状細胞が集塊をつくる傾向があり、E-FABP陽性M細胞から樹状細胞遊走因子が分泌されていることが考えられる。2.の共発現系に抗原を負荷したときの培地を回収し、C57BL/6の腸管壁に注入し、樹状細胞が集塊を作るか確認する。また、抗原負荷前後のそれぞれの細胞懸濁液からそれぞれmRNA溶液を調整、Clontech PCR-Select^<TM> subtractionkitを用いてE-FABP陽性細胞で特異的1に発現が高い分子をスクリーニングすることで樹状細胞遊走因子の同定を試みる24年度が最終年度であるため、記入しない。
葉層構造と力学系の研究

円周上の向きを保つ無限回可微分同相写像で回転数がliouville数であるものを考え、その保存する測度のハウスドルフ次元が0であるものが通用的であることを示した。また無限回可微分同相写像がlebesgue測度により定める軌道同値類の型を研究し、任意の与えられた型をもつ可微分同相写像が空間全体の中で稠密であることを示した。また、コンパクト多様体上の葉層構造でその葉が双曲的リーマン面であるものを考え、その葉に沿ったホロサイクル流が極小となるための十分条件を得た。本年度に得られた成果は次の通りである。(1)閉局面の単位接束上の非特異流れのなす空間Xの部分空間としてAnosov流れのなす空間Aを考える。このとき、Aは可算無限個の連結成分を有し、各成分は単連結でないことを示した。(2)Mを3次元有理ホモロジー球面として、aをその体積要素とする。aを保存するAnosov流れの全体をA(a)で表す。そのうち、接触流れの時間変換となっているものをC(a)と表す。このとき、C(a)は、A(a)のC^1-開集合をなすことを示した。これは、接触Anosov流れが、予想外に豊富に存在することを示すものである。実は、Mが正のBetti数bを有する場合でも、C(a)は局所的には、A(a)の余次元bの空間をなすことが示されるている。(3)fをS^1の無限回微分可能同相写像とし、aをLebesgue測度とすると、fはLebesgue測度空間(S^1,a)上に標準的同値関係を導く。ところで、一般にLebesgue測度空間の標準的同値関係は、I型、II(1)型、II(infty)型、およびIII(lambda)型,0<lambda<1、III(0)型、III(1)型に分けられる。我々は。I型を除き、おのおのの型に対し、それを実現する微分同相写像fが存在することを示した。これらはすべて、回転数がLiouville数のものであり、これは、Liouville世界の豊かさを示す一つの例ということができよう。1.Fをコンパクト多様体M上の葉層構造とし、gを,葉向リーマン計量とする。このとき、葉向ラプラシアンが定まり、それが消える関数を葉向調和関数と呼ぶ。(M,F,g)が定値でない連続な葉向調和関数を持つかという問題は興味深く、様々な研究がなされている。本研究では、この問題を、Fが余次元1の場合に考え、次を得た。「Fが横断的に等長的なとき、M上の連続葉向調和関数は定値関数に限る。」この結果は、FeresとZhegibによる、先行研究において、必要であった計量gに関する条件を取り払うことに成功したものである。証明は、葉向ブラウン運動の性質をくわしく調べることにより、与えられたものである。2. 25年ほど前にEtienne Ghysにより次のような問題が挙げられた。「n次元の多様体のCr級微分同相写像のなす群がn-1以下の次元の多様体にCp級に作用することができるか」作用を連続なものに限れば、できないことは30年以上前から知られていた。したがって、問題は連続とは限らない作用に関するものである。これについて2012年にKathryn Mannは、nを2以上とし、rをn+1でないとしたとき、n次元多様体MのCr級微分同相写像で台がコンパクトなもののなす群Gは1次元多様体にC2級に作用することはできないことを示した。本研究では、証明の簡明化を目指し、わかりやすい証明を得た。さらに、実はC1級にも作用できないことを示した。この部分の証明には、Bonatti, Monteverde, Navas, RivasによるBaumslag-Slitar群BS(1,2)の実直線上へのC1級作用についての結果が用いられる。1.2次元球面上の吸引反発的写像hの回転数について:表記写像hとは北極aを反発的固定点(反発領域W_a)、南極bを吸引的固定点(吸引領域W_b)として持つ、向きを保つ同相写像であり、以下の条件(1)(2)を満たすもののことである。(1)W_aとW_bは交わる。(2)W_aにもW_bにも入らない点がある。このとき、W_aおよびW_bのCaratheory境界上にhの導く写像の回転数をR_a, R_bで表すことする。これに対し継を証明した。(A)任意の実数x, yに対し,R_a=x, R_b=yをみたす吸引反発的写像hが存在する。(B)Cをhの鎖同値類とするとき、その回転数区間の中の有理数zに対し、それを(回転数として)実現する周期点がC内に存在する。(C)R_a=xが有理数のとき、それを実現する周期点が存在する。(このとき、その周期点はもちろんW_aにもW_bにも入らない。)2.無限生成Fuchs群Gがtightであるとは、Poincare平面をGで割って得られる(非コンパクト)曲面をSとするとき、Sがコンパクト部分曲面S_nの増大列の合併集合として表され、しかも各S_nの測地的境界の長さが一様に上から抑えられることを言う。

このときSの単位接空間(=PSL(2,R)/G)上のホロサイクル流は、極小集合を持たないことを示した。(したがって、特にホロサイクル流の各軌道は閉集合ではない。)研究業績の概要欄にのべた(1)、(2)は、興味深い結果と思われるが、このほかにも、双曲的曲面を葉としてもつ葉層構造においては、葉の中の大きい円板上の区分的に線形な関数により与えられる測度たちの(円板を大きくした時の)極限は、葉層構造の調和測度になることを示した。また、2次元以上の多様体の無限回微分可能同相群は円周上に1回微分可能には作用できないことを示した。これは2回微分可能の場合のKathryn Mannの結果の拡張である。ちなみに、連続作用も持たないことが予想されるが、これについては、現時点では不明である。1.群Gの部分群Hは、Gの各元の共役類と交わるとき、[類満」という。Gの類満部分群がG自身に限られるとき、Gは「不変生成」という。有限群やまた仮想可解群は不変生成である。一方非可換自由群や双曲群はそうではない。本研究では、単位区間上の区分的に線形な向きを保つ同相写像の全体のなす群Pを考え、Pおよびそのいくつかの部分群が不変生成であることを示した。そのなかにはThompson群Fも含まれる。これは松田能文氏との共同研究である。群Fとは、各切片の傾きが2の整数乗で、各分点が2進分数であるような区分的に線形な同相写像のなす群のことである。群Fは自由群自由(非可換自由群を部分群として含まない)であることが知られているが、アメナブルか否かはわかっていない。我々の手法で、非アメナブル群で不変生成なものが構成できないかと考えている。一方、FないしはPの交換子部分群は不変生成でないことが容易に示される。よく知られたことではあるが、この結果は、不変生成という性質が部分群に遺伝しないことを示す例となっている。またほかのThompson群TおよびVは不変生成ではない。2.群Gの左順序(左移動不変な全順序)の全体はコンパクト距離付け可能な位相を持つ。その位相において孤立点となるような順序は特に興味深い。群G上に左順序が与えられたとき、その「力学系的実現」と呼ばれるGの直線への作用が構成できるのであるが、左順序の孤立性はこの作用の剛性と関連しているのである。我々は孤立左順序の力学的実現の性質を調べ、とくに極小集合を持つことを示した。また、3糸組み糸群B_3にはDubrovina-Dubrovin順序と呼ばれる孤立左順序の存在が知られていたが、それとは異なる孤立左順序をB_3上に構成した。本研究の当初の目的は群作用と葉層構造の研究であった。研究業績欄に述べた本年度の業績1と2は、群の1次元多様体への作用に関連したものであり、ともに興味深いものと考えられる。とくに区間のPL同相群の不変生成性の証明は、汎用性の高いものであり、今後、同様の結果が他の同相群についても得られる可能性を秘めている。また、群の左不変順序に関する研究は、基本的なものであり、今後の様々な研究において有用であろうと考える。葉層構造の研究については、本年度は、特筆すべき結果を出すには至らなかったが、M. Martinez氏、及びA. Verjovsky氏との共同研究を継続中である。研究実績は次のように大別される。(1)コンパクト多様体上の双曲的リーマン面を葉とする極小葉層Fに付随する葉層ホロサイクル流の研究。(2)様々な群の円周上への作用の研究。(3)そのほか。(1)における「付随するホロサイクル流」は、葉層の葉の方向の単位ベクトル束TFの上のものである。
難治性婦人科がんに対する腫瘍融解ウイルス治療法の開発

本研究では薬剤抵抗性を示す癌細胞にはテロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルスが有効であることを示した。特に、表面抗原CD117/CD44陽性細胞は高い増殖能を示しプラチナ抵抗性である。この分画の細胞集団にテロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルスの効果をin vitroで検討した。シスプラチン抵抗性癌細胞やヌードマウス腹膜播種モデルでも同様に抗腫瘍効果が観られた。これは融解ウイルスが薬剤抵抗性の難治性癌に有効であることを示唆する。次に、GFP発現型テロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルス(OBP-401)によってGFP発光させ、肉眼的に可視した数個の末梢血液中の腫瘍細胞(CTC : Circulating Tumor Cell)を回収できた。Whole Genome Amplification法にてゲノム増幅後、HPV consensus primerにてPCR・制限酵素反応を行なったところ、原発巣とCTCにおいて同一のHPV-genomeが検出された。本法は様々な腫瘍での応用が可能であり、生検不能な深部病変の診断、治療法決定や癌の早期診断、非侵襲性のがん検診等に有用であると考えられる。【目的】我々は卵巣癌腹膜播種モデルでのテロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルスの有効性を示してきた.これらの結果は進行癌や抗がん剤抵抗性の癌においてもテロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルスを用いた治療が有用である可能性を示したものである.本年は進行癌治療への基礎データとして癌幹細胞への有効性について検討した.【方法】卵巣癌細胞株SKOV3をFACSにより表面抗原CD117とCD44の発現の有無で癌幹細胞の同定を行い、各分画を回収し,増殖能,コロニー形成能,マウスでの造腫瘍能を各々の分画で評価した.各々の分画に対してcisplatinとテロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルスの効果をin vitroで検討した.またcisplatinならびにテロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルス存在下でのCD117/CD44発現分画の変化を観察した.【成績】CD117陽性CD44陽性の細胞分画は他の分画に比べてin vitroで高い増殖能とコロニー形成能を示し,またマウスでの造腫瘍能も高く癌幹細胞の候補と考えられた.この分画はcisplatinに対して抵抗性が高かったがテロメラーゼ依存性腫瘍溶解には高感受性を示した.またcisplatin存在下ではCD117/CD44発現分画の増加が認められたがテロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルスの存在下ではこの変化は消失した.【結論】CD117陽性CD44陽性の卵巣癌幹細胞はcisplatin抵抗性を示したがテロメラーゼ依存性腫瘍溶解には感受性であり,プラチナ抵抗制卵巣癌への応用あるいはプラチナ製剤との併用療法の有用性が示された.これまでの研究で卵巣癌腹膜播種モデルにおいてテロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルスの有効性を示してきた.本年度では進行性の卵巣癌や抗がん剤抵抗性の卵巣癌や進行性の消化器癌に有効性が見られ臓器特異性が低いことが示された。特に抗がん剤抵抗性の源となっている癌幹細胞に有効であるかを昨年と継続的に検討した。その結果、卵巣癌細胞株SKOV3をFACSにより選別したところ、表面抗原CD117/CD44陽性分画が高い増殖能を示し癌幹細胞であると推定できることから、これらの細胞におけるcisplatinとテロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルスの同時併用効果をin vitroで検討した。cisplatin抵抗性の株化癌細胞に抗腫瘍効果が見られた。これはシスプラチンに抵抗性を示す難治性癌に融解ウイルスが臨床的有効性を示唆する結果であった。次年度では、本年度の結果を踏まえて、テロメラーゼ依存性腫瘍融解ウイルスの胆癌動物での治療効果に加えて癌の診断の臨床応用を検討する。さらに、テロメラーゼ融解ウイルスにGFP蛋白を発現させ、少数存在する血液中のCTC (circulating tumor cells)の検出法を開発する。株化癌細胞を用いた基礎的検討では有効性が示唆されている。本法ではhTERTプロモータの活性化された細胞のみが蛍光を発し、極めて特異性が高い。癌患者の臨床検体(血液)に存在するCTCを本法で検出し、実際の臨床現場で治療効果や癌の進展程度、さらには検診などに臨床応用できないか検討予定である。

本法では非侵襲性であり、将来の医療に福音を与えると考える。分子標的薬の発達により癌の遺伝子変異や癌細胞内情報伝達系の解明はその治療の面においても重要性を増してきている。特に、微小検体を用いた非侵襲性の検査法の開発は重要である。しかしながら、微小検体には病変部が含まれ可能性は減少する。そこで、効率よく腫瘍細胞を補足し細胞内遺伝子情報を検出するシステムの開発が望まれる。2011年度はGFP発現型テロメラーゼ依存性腫瘍溶解ウイルス(OBP-401)によってGFP発光させ、肉眼的に可視した末梢血液中の腫瘍細胞(CTC:Circulating Tumor Cell)を顕微鏡観察下に超微量ピペットで単離し、一個の腫瘍細胞の遺伝子解析を行うシステムの解析を目指した。原発巣のHPVtypeデータが得られている子宮頸癌患者(初発・再発患者とも含む)よりインフォームド・コンセントのもとに得られた末梢血5mlを溶血処理後、OBP-401を感染させた。24時間インキュベーション後に白血球を除外するためにCD45(白血球共通抗原)蛍光ラベルを追加し、GFP陽性かつCD45陰性の細胞を蛍光顕微鏡下に微小ピペットにて回収した。Whole Genome Amplification法にてゲノム増幅後、HPV consensusprimerにてPCR・制限酵素反応を行いHPV-genotypingした。末梢血からのCTC回収が可能であった5例では全例において原発巣とCTCにおいて一致したtypeのHPVゲノムが検出された。以上より単一の末梢血中腫瘍細胞を回収しそれを用いて遺伝子解析を行うことが可能であった。今後はゲノム上の遺伝子変異の解析に耐えるようシステムに改良する。本法は様々な腫瘍での応用が可能であり、生検不能な深部病変の診断、治療法決定や癌の早期診断、非侵襲性のがん検診等に有用であると考えられる。