hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
造血幹細胞特異的S76遺伝子の機能解析と相互作用分子の同定・造血支持能の解析

造血幹細胞特異的遺伝子S76と相互作用するたんぱく質としてCalnexinおよびGRP78を同定した。また、血液細胞・血管内皮細胞特異的S76遺伝子欠損マウスの作成を行った。造血幹細胞(HSCs)としての性質(自己複製能と多分化能)の維持には造血支持細胞が深く関与しており、骨髄内にそれらの細胞で構成される造血幹細胞ニッチェが存在することが知られてしる。以前我々は、HSCsと血管・血液共通前駆細胞(Hemangioblast)とのサブトラクション法により骨髄再構築能の有無に関与する遺伝子のスクリーニングを行った。このスクリーニングにより膜蛋白質をコードする新規遺伝子、S76遺伝子を同定した。本研究では、造血幹細胞と造血幹細胞ニッチェに重要な役割を持つ可能性があるS76遺伝子の解析を通して、これらの二つの細胞の相互作用を明らかとしていくことを目的としている。申請者はS76タンパク質と相互作用する分子を同定するために、COS7細胞でFlagタグしたS76タンパク質を作製した。次に、造血支持能力が高いことで知られているOP9ストローマ細胞のライセートと混合することでS76タンパク質に相互作用させ、抗Flag抗体を用いて免疫沈降を行った。その結果、S76タンパク質と特異的に相互作用する分子を二つ同定した。質量分析装置を用いて解析を行ったところ、Calnexinおよび、GRP78タンパク質であることがわかった。現在これらのタンパク質と実際に相互作用するかを検討しているところである。次に、in vivoにおけるS76遺伝子の機能を解析するために、S76コンディショナルノックアウトマウスの作成を行っている。2種類のターゲティングベクターを作製し、ES細胞での組み換えに成功した。このうち一つのES細胞で、キメラマウスの作成を行い、Germ line transmissionに成功している。現在は、Flpトランスジェニックマウスとの掛け合わせにより、薬剤耐性遺伝子を抜いたマウスを得ることができている。今後は、Tie2-Creトランスジェニックマウス、Mxl-Creトランスジェニックマウスと掛け合わせすることで、ホモマウスを作出し、その表現系を解析する予定である。造血幹細胞(HSCs)しての性質(自己複製能と多分化能)の維持には造血支持細胞が深く関与しており、骨髄内にそれらの細胞で構成される造血幹細胞ニッチェが存在することが知られている。申請者はS76タンパク質のin vivoにおける機能を解析するために、S76コンディショナルノックアウトマウスの作成を行った。S76遺伝子のゲノムは2つのエクソンから構成されている。申請者は、第一エクソンにある開始コドンを欠損させたベクターと、第二エクソン全体を欠損させたベクターを作製した。開始コドンを欠損させるためのベクターについては、ES細胞での組み換えと、キメラマウスの作成を行い、Germ line transmissionに成功した。次に、Flpトランスジェニックマウスとの掛け合わせにより、薬剤耐性遺伝子を抜いたマウスを得ることができた。現在は、Tie2-Creトランスジェニックマウスとの掛け合わせを行い、S76(fl/+)Tie2Cre+の♂マウスを作製することに成功し、S76(fl/fl)♀マウスとの掛け合わせをして、S76(fl/fl)Tie2Cre+のマウスが生まれてくるかどうかの検討を行っているところである。今後の予定では、現在作製できたマウスの解析とともに、Mx1-Creトランスジェニックマウスと掛け合わせすることで、成体での血液細胞でS76遺伝子を欠損させ、その表現系を解析する予定である。
糸球体再構築促進による慢性糸球体疾患の組織修復治療法の開発-腎移植法を用いて-

Wistarラットに抗Thy-1腎炎を惹起、あるいはハブ毒による腎炎を惹起させた後、病気腎(左側)を摘出し、同週齢のGFPラット(Wistarラット由来)の左腎摘出部に、腎移植を行った。初年度、糸球体上皮細胞に増殖刺激を与えると考えられるパミドロネートの投与を移植後に試みたが、パミドロネート投与群と非投与群との間で有意な差はなかった。今年度、移植後にエリスロポイエチン投与あるいはアンギオテンシン受容体拮抗薬投与を行い、移植3ヵ月後に内皮細胞再生、メサンギウム細胞再生への作用につき検討したが有意差は得られなかった。移植自体による侵襲性がこれら薬剤の再生に関わる効果を観察させにくくしてしまっている可能性も考えられ、今後は不可逆的な進行性の腎不全モデルでの検討が望ましいと考えられた。また期間中、腎間質を含めた修復機構の改善についても検討するためのモデル選定を行うなかで、老化関連蛋白SMP-30のノックアウトマウスにおいて老化に伴い腎で見られる間質病変を早期に発症するとともに、老化関連蛋白の発現やリポフスチン蓄積も早期に見られたことから、老化に伴う腎障害のモデルとして適切であることを見出した(Histol Histopathol 2006;21:1151-1156)。また近年腎におけるリンパ管の役割が注目されるようになり、リンパ管の再生についても重要な検討課題であると考えられた。腎におけるリンパ流の基礎的な知見を得るため、期間中、抗体による染色法、リンパ管への色素洗入など行った。結果、メサンギウムから糸球体血管極、腎間質へと続くリンパ流路の存在が確認された(論文作成中)。この流路の存在は以前より推測されていたが、今回この流路がリンパと関与することを視覚的に捉えたのは世界初である。期間中、Wistarラットに抗Thy-1腎炎を惹起させた。その後、左腎を3日後に摘出し、同週齢のGFPラット(Wistarラット由来に変更)に移植を行った。移植はレシピエントであるGFPラットの左腎を一旦摘出し、ドナー腎(Thy-1腎炎惹起)の動脈、静脈、尿管を吻合し行う方法をとった。同様の実験をハブ毒による腎炎を惹起させた腎についても同週齢のGFPラットに移植し行った。移植後は、糸球体上皮細胞に増殖刺激を与えると考えられるパミドロネートの投与を試みた。しかしながら、パミドロネート投与群と非投与群との間で有意な差は見られていない。今後は、エリスロポイエチン投与、抗血小板薬およびアンギオテンシン受容体拮抗薬による内皮細胞再生、メサンギウム細胞再生への作用につき検討予定である。また腎間質を含めた修復機構の改善についても検討するためのモデル選定を行った。これは一般的に慢性糸球体腎炎の腎障害の進展には糸球体とともに間質障害も密接に絡むため、尿細管の障害を初めから有するモデルに糸球体障害を惹起させ、その修復につき検討する必要があると考えたからである。今回、老化関連蛋白SMP-30のノックアウトマウスにつき解析を試みた。その結果、本モデルにおいては老化に伴い腎で見られる間質病変を早期に発症するとともに、老化関連蛋白の発現も早期に見られたことから、老化に伴う腎障害のモデルとして適切であることを見出した(Histol Histopathol 2006,in press)。今後は、本モデルを用いたマウスへの腎移植実験に使用する予定である。腎におけるリンパ流の基礎的な知見を期間中、抗体による染色法、リンパ管への色素注入などにより得ることができた。
翻訳阻害剤による浸透圧耐性獲得機構の研究

大腸菌細胞の塩耐性に対する様々な薬剤の効果を調べたところ、翻訳阻害剤であるクロラムフェニコール、カスガマイシン、テトラサイクリンの添加は細胞の塩耐性を上昇させることを明らかにした。qRT-PCRを用いて、膜関連のシグマ因子であるシグマEの一過的発現が早まることを明らかにした。さらに、細胞の塩耐性は細胞内セカンドメッセジャーであるppGppを産生させるセリンハイドロキサメートによっても引き起こされることを明らかにした。最終的に、細胞の浸透圧(塩)耐性に至る経路には、ppGpp依存経路とppGpp非依存経路の2つの異なった経路があることを明らかにした。これまでに「ある種の翻訳阻害剤により細胞が高濃度の塩に対する抵抗性を獲得する」という予備的な実験結果を得ているが、この現象は、既知の浸透圧耐性メカニズムから説明することは困難であり、それゆえに浸透圧(塩)耐性の新しいメカニズムの存在を示唆するものとなっている。本研究は、遺伝学的手法、生理学的手法ならびに生化学的手法を駆使して、翻訳阻害剤による浸透圧抵抗性獲得のメカニズムおよびその遺伝的背景を明らかにすること、そして、それを基礎とする新しい浸透圧ストレス応答の遺伝子発現ネットワークの全体像を明らかにすることを目的とする。昨年度は、カスガマイシン等の翻訳阻害剤により、大腸菌の細胞が塩ショックから早期に立ち直ることを明らかにしたが、本年度は、細胞の浸透圧(塩)耐性がセリルtRNA合成酵素の阻害剤であるセリンハイドロキサメートによっても引き起こされることを明らかにした。セリンハイドロキサメートは、細胞内のセカンドメッセンジャーであるppGppを生産させることが知られており、本研究では、翻訳阻害剤による浸透圧(塩)耐性に対するppGppの効果を解析した。まず、ppGpp合成酵素であるRelAとSpoTを欠損した細胞を作製した。このppGpp非生産細胞では、セリンハイドロキサメートの効果はなくなったが、カスガマイシン等の翻訳阻害剤の効果は依然として見られた。これらの薬剤とppGpp欠損との相乗効果なども考慮し、最終的に細胞の浸透圧(塩)耐性に至る経路には、ppGpp依存経路とppGpp非依存経路の2つの異なった経路があることを結論づけた。また、昨年度明らかにしたシグマE(膜結合型シグマ因子)の一過的活性化が通常より早期におこるという現象は、ppGpp依存経路とppGpp非依存経路のどちらで同じように起こることを明らかにした。本年度はまず、細胞の塩耐性に対する様々な薬剤の効果を調べた。翻訳阻害剤であるクロラムフェニコール、カスガマイシン、テトラサイクリンの添加は細胞の塩耐性を上昇させた。翻訳阻害剤でも、ストレプトマイシン、ネオマイシン、フシジン酸は効果がなかった。また、転写阻害剤やDNA合成阻害剤も効果がなかった。次に、各種翻訳阻害剤存在下におけるシグマE(膜結合型シグマ因子)の遺伝子発現についてqRT-PCRを用いて調べた。まず、通常の状態(翻訳阻害剤非存在下)においては、浸透圧ショック後数時間経過した後、シグマEの一過的発現が見られた。シグマEの一過的発現は塩濃度が高いほど、その開始が遅くなっていた。おもしろいことに、翻訳阻害剤存在下においては、シグマEの一過的発現が早く始まるようになっていた。まず、細胞の塩耐性(浸透圧耐性)に対する各種薬剤の効果を整理することにより、翻訳阻害剤にのみ効果があることを明らかにした。また、すべての翻訳阻害剤に効果があるわけではないことも明らかにした。また、翻訳阻害剤によりシグマEの一過的発現が早く始まるようになっていることを明らかにしたが、この発見は細胞内における未知のストレス耐性遺伝子発現ネットワークを解明する上での第一歩となることを期待させるものであった。1.シグマEの一過的発現が塩耐性(浸透圧耐性)の原因になっているのか、あるいは単なる結果なのかを明らかにする。2.細胞の塩耐性に対するシグマE以外のシグマ因子の効果を明らかにする。該当なし
鉄欠乏時の骨代謝変動に及ぼす因子の検索とメカニズムの解明

骨形成に関わる骨芽細胞と脂肪細胞の前駆細胞はともに間葉系幹細胞に由来するが、骨芽細胞への分化にはRunx2が、脂肪細胞への分化にはPPARγが関与することが知られている。鉄欠乏ラットは脂質代謝異常を引き起こすことが報告されており、骨芽細胞分化に関わる転写因子であるRunx2の発現が減少することから、鉄欠乏時の脂質代謝変動も骨代謝に影響を及ぼすことが考えられる。本研究では、鉄欠乏時の骨量減少に及ぼす要因について検討を行っているが、3年目の研究実施計画として、鉄欠乏時の脂質代謝変動と骨形成低下との関係について検討を行った。被験動物として幼若Wistar系雄ラットを用い、飼料はAIN-93G飼料組成に基づき正常食と鉄欠乏食を作成した。また、脂質代謝研究を行う時には、一般的に解剖前にラットを絶食にさせることから、今回は絶食の有無による影響も検討した。鉄欠乏食投与により貧血症状を示したが、絶食の有無による影響は観察されなかった。血清中脂質成分については、鉄欠乏食投与より高値を示した。また、絶食により、血清中脂質濃度は低下した。肝臓中脂質代謝関連遺伝子は鉄欠乏食投与による変動と絶食による変化がみられた。鉄欠乏食投与により、大腿骨の骨塩量・骨密度は低下したが、絶食の有無による影響はみられなかった。鉄欠乏により、いくつかの骨形成関連遺伝子の発現は低下したが、絶食による影響がみられたものもあった。大腿骨中脂質代謝関連遺伝子については明らかな影響は観察されなかった。鉄欠乏食摂取時の骨量減少は、主に骨形成関連遺伝子の低下による影響が強いことが示唆された。また、絶食の有無により、肝臓中脂質代謝関連遺伝子だけでなく、骨中の骨・脂質代謝関連遺伝子の変動もみられたことから、遺伝子発現を検討する際には絶食をすることによる影響も考慮する必要があることが示された。本研究では、鉄欠乏時の骨量減少に及ぼす要因について、骨代謝関連遺伝子の変動により検討した。被験動物として3週齢Wistar系雄ラットを用い、正常食または鉄欠乏食を投与し4週間の飼育観察を行った。鉄欠乏食投与により明らかな貧血症状を示し、大腿骨の骨塩量と骨密度は有意に低下した。骨代謝マーカーの結果より骨形成の低下が観察された。また、骨形成関連遺伝子(Runx2、Osterix、OPN、OCN、Col1a1)の鉄欠乏食投与による発現の低下が観察され、同時に、大腿骨中IGF-IとBMP2 mRNA発現量の低下もみられた。これらのことから、鉄欠乏食投与による骨形成の低下はIGF-IとBMP2の遺伝子発現量低下により骨形成関連遺伝子の低下が引き起こされた結果であることが示唆された。一方、骨吸収マーカーである尿中DPD排泄量は鉄欠乏食投与により有意に低値を示したことから、鉄欠乏時の骨吸収の低下が観察されたが、大腿骨中の骨吸収関連遺伝子であるTRAPの発現低下が観察されたため、鉄欠乏時には破骨細胞の活性が低下することが示唆された。さらに、鉄欠乏食投与ラットへの2週間の正常食投与を行ったところ、貧血症状は完全には改善されなかった。しかし、活性型ビタミンD、骨形成マーカー、骨吸収マーカーは回復し、大腿骨骨密度も回復傾向がみられた。大腿骨中OCN、Col1a1、IGF-I、BMP2の遺伝子発現観察を行ったところ、これら遺伝子発現量の回復もみられたため、鉄欠乏状態が完全回復しなくても、骨代謝の回復がみられることが示唆された。また、鉄欠乏により低下した血清中総タンパク質濃度の改善もみられたことから、鉄欠乏がタンパク質代謝にも影響を及ぼしていることも示唆された。当初の予定通り、骨代謝に関わる遺伝子発現の検討から新たな知見が得られた。また、タンパク質代謝の変動を示唆する結果も得られた。本研究では、鉄欠乏時の骨量減少に及ぼす要因について検討を行っているが、2年目の研究実施計画として、鉄欠乏時の骨代謝に及ぼすタンパク質摂取量の影響について検討を行った。被験動物として幼若Wistar系雄ラットを用いた。飼料はAIN-93G飼料組成に基づき作成し、鉄欠乏と同時に低タンパク質の飼料を作成し、鉄欠乏食投与ラットとの違いについて検討を行った。鉄欠乏食投与により明らかな貧血症状を示したが、鉄欠乏低タンパク質食投与による影響は観察されなかった。鉄欠乏食投与により、いくつかの骨形成関連遺伝子の発現は低下したが、鉄欠乏低タンパク質食投与による明らかな影響はみられなかった。これまでの研究において、鉄欠乏食投与により、タンパク質代謝に影響を及ぼすことが示唆されているが、今回の研究において、鉄欠乏時に低たんぱく状態にしても骨代謝については更なる悪影響はみられなかったことから、飼料中タンパク質濃度の設定にもよるが、本実験で設定したタンパク質濃度においては、骨代謝に対しては鉄欠乏食投与の影響が強いことが示唆された。また、鉄欠乏食投与ラットにおけるカルシウム代謝に関わる因子の遺伝子発現についても検討を行った。鉄欠乏食投与ラットにおいて、カルシウム吸収にかかわる遺伝子発現の低下が観察された。これまでに鉄欠乏ラットにおいて血清中の活性型ビタミンD濃度の低下が引き起こされることを報告しており、そのことが、今回の結果の一因であることが推察された。現在、さらなる検討を行っているところである。当初の予定通り鉄欠乏時の骨代謝に及ぼすタンパク質摂取量の影響について検討を行った。また、前年のサンプルを用いて、カルシウム代謝に関する検討も行った。

骨形成に関わる骨芽細胞と脂肪細胞の前駆細胞はともに間葉系幹細胞に由来するが、骨芽細胞への分化にはRunx2が、脂肪細胞への分化にはPPARγが関与することが知られている。鉄欠乏ラットは脂質代謝異常を引き起こすことが報告されており、骨芽細胞分化に関わる転写因子であるRunx2の発現が減少することから、鉄欠乏時の脂質代謝変動も骨代謝に影響を及ぼすことが考えられる。本研究では、鉄欠乏時の骨量減少に及ぼす要因について検討を行っているが、3年目の研究実施計画として、鉄欠乏時の脂質代謝変動と骨形成低下との関係について検討を行った。被験動物として幼若Wistar系雄ラットを用い、飼料はAIN-93G飼料組成に基づき正常食と鉄欠乏食を作成した。また、脂質代謝研究を行う時には、一般的に解剖前にラットを絶食にさせることから、今回は絶食の有無による影響も検討した。鉄欠乏食投与により貧血症状を示したが、絶食の有無による影響は観察されなかった。血清中脂質成分については、鉄欠乏食投与より高値を示した。また、絶食により、血清中脂質濃度は低下した。肝臓中脂質代謝関連遺伝子は鉄欠乏食投与による変動と絶食による変化がみられた。鉄欠乏食投与により、大腿骨の骨塩量・骨密度は低下したが、絶食の有無による影響はみられなかった。鉄欠乏により、いくつかの骨形成関連遺伝子の発現は低下したが、絶食による影響がみられたものもあった。大腿骨中脂質代謝関連遺伝子については明らかな影響は観察されなかった。鉄欠乏食摂取時の骨量減少は、主に骨形成関連遺伝子の低下による影響が強いことが示唆された。また、絶食の有無により、肝臓中脂質代謝関連遺伝子だけでなく、骨中の骨・脂質代謝関連遺伝子の変動もみられたことから、遺伝子発現を検討する際には絶食をすることによる影響も考慮する必要があることが示された。本年度も計画通りに研究を進めていく。また、昨年度の臓器サンプルも保存してあるため、そのサンプルを用いて鉄欠乏による新たな骨代謝変動要因の検討も行う予定である。本年度も計画通りに研究を行っていく。また、データをまとめ、論文を投稿する予定である。当初の計画よりも順調に実験が進み、効率的な予算執行ができたため。ほぼ当初計画通りに研究を遂行できたが、効率的な予算執行ができたため、少額の繰越となった。この額も含めて、追加の解析検討を行うこととする。初年度に保存しておいたサンプルを用いて追加の解析を行うため、初年度未使用額をその費用として充てる予定である。
酸化物表面の光反応環境場に及ぼす分極場効果

RuO_2を担持した場合に水の分解反応に対して高活性な光触媒となるトンネル構造をもつ酸化物は、固体表面の光反応環境場として有用である。本年度の研究ではRectangular型およびPentagonal-prism型トンネル構造を持つ酸化物表面の光励起電荷発生能と光触媒作用の関係を調べ、優れた光触媒作用を発現するトンネル構造酸化物表面の光反応環境場について解析した。Rectangular型トンネル構造をもつM_2Ti_6O_<13>(M=Na,K,Rb)および層状構造のCs_2Ti_6O_<13>にRuO_2を担持した場合の水の分解反応に対する光触媒活性は、C.s<Rb<K<Naの順に増加した。M_2Ti_6O_<13>(M=Na,K,Rb)を酸素存在下77Kで光照射した場合に、Na_2Ti_6O_<13>では、g値としてg=2.020,g=2.018,およびg=2.004をもつO^-に帰属されるESRシグナルが生じた。M=Na,K,Rb,Csにおいて、ESRのシグナルが増加すると共に、光触媒活性も増加し、光励起電荷分離能が光触媒活性とが関連することが見出された。BaTi_4O_9を真空下で光照射した場合にも類似のシグナルは出現し、光の波長を変えた場合に、ESRシグナル強度の波長依存性はRuO_2/BaTi_4O_9光触媒活性のそれと良い一致を与え、BaTi_4O_9においても光励起電荷発生能と光触媒活性が密接に関連する結果が得られた。Rectangular型およびPentagonal-prism型トンネル構造において、Tiイオンは周囲の6ケの酸素イオンの重心の位置よりずれた歪み構造を持つが、この構造においては、光照射時にTi-Oの結合切断と再結合のダイナミックな変化が起こることが示唆された。トンネル構造酸化物では、TiO_6八面体構造に特有な局所的分極場および長短のTi-O結合の存在が、高い光励起電荷分離能を与え、高効率な光触媒作用をもたらすものと結論した。
GH産生細胞におけるGH産生特異性を決定する因子の単離と、その生理的病理的意義

RNA interference libraryを使用した、成長ホルモン(GH)遺伝子のローカスコントロールリージョン(LCR)に結合する因子のクローニングLCRの下流に、GHプロモーター、およびGreen Fluorescent Protein(GFP)cDNAを結合させたプラスミド(LCR-GH-GFPベクター)を作製した。さらに、このプラスミドに、CMVプロモーターと結合させたRed Fluorescent Protein(RFP)cDNAを挿入した。このプラスミドをマウス下垂体細胞株にトランスフェクトしたが、トランスフェクション効率が不十分であった。導入効率を改善ため,種々の検討を行ったが、十分に導入効率を上げることが困難であり、このレポーターベクターが導入された下垂体細胞株が得られていない。導入効率が改善した際には、RNA interference libraryと同時に導入し、セルソーターでGFP、RFP発現を指標とし、LCR結合因子の単離を試みることを計画していたが、実現していない。GH産生細胞分化におけるGH遣伝子LCRの意義LCR-GH-GFPベクターをES細胞のゲノムDNAに導入した細胞を樹立した。このES細胞を種々の条件下で,培養した。特定の条件下で、GH-LCR遺伝子下に位置するGFPの発現が増大することが確認できた。実際に,このとき内因性GH発現が増加しているか確認するため、GHをEIAで測定したところ、コントロールに比べ増加しており、この条件で、ES細胞からGH産生細胞の方向に分化させられる可能性が示唆された。同時に、LCRのGH産生細胞分化において作用している可能性が示唆された。ホルモンやグロースファクターによりGH産生細胞への分化を人為的に制御できないか検討した。GFP発現細胞数をセルソーターで定量する方法により評価したところ、予想外の結果であったが、LIFが最も分化促進活性をもっていた。RNA interference libraryを使用した、成長ホルモン(GH)遺伝子のローカスコントロールリージョン(LCR)に結合する因子のクローニングLCRの下流に、GHプロモーター、およびGreen Fluorescent Protein(GFP) cDNAを結合させたプラスミド(LCR-GH-GFPベクター)を作製した。さらに、このプラスミドに、CMVプロモーターと結合させたRed Fluorescent Protein(RFP) cDNAを挿入した。このプラスミドをマウス下垂体細胞株にトランスフェクトしたが、トランスフェクション効率が不十分であり、このレポーターベクターが導入された下垂体細胞株が十分得られていない。現在、導入効率を改善ため,種々の検討を行っている。導入効率が改善した際には、RNA interference libraryと同時に導入し、セルソーターでGFP、RFP発現を指標とし、LCR結合因子の単離を試みる。GH産生細胞分化におけるGH遺伝子LCRの意義上記のプラスミドをES細胞のゲノムDNAに導入した細胞を樹立した。

導入効率を改善ため,種々の検討を行ったが、十分に導入効率を上げることが困難であり、このレポーターベクターが導入された下垂体細胞株が得られていない。導入効率が改善した際には、RNA interference libraryと同時に導入し、セルソーターでGFP、RFP発現を指標とし、LCR結合因子の単離を試みることを計画していたが、実現していない。GH産生細胞分化におけるGH遺伝子LCRの意義LCR-GH-GFPベクターをES細胞のゲノムDNAに導入した細胞を樹立した。このES細胞を種々の条件下で,培養した。特定の条件下で、GH-LCR遺伝子下に位置するGFPの発現が増大することが確認できた。実際に,このとき内因性GH発現が増加しているか確認するため、GHをEIAで測定したところ、コントロールに比べ増加しており、この条件で、ES細胞からGH産生細胞の方向に分化させられる可能性が示唆された。同時に、LCRのGH産生細胞分化において作用している可能性が示唆された。ホルモンやグロースファクターによりGH産生細胞への分化を人為的に制御できないか検討した。GFP発現細胞数をセルソーターで定量する方法により評価したところ、予想外の結果であったが、LIFが最も分化促進活性をもっていた。
ブロック型言語とテキスト型言語の相乗効果を意図したプログラミング教育の実践的研究

本研究では,プログラミングの学習者がどのような作業や試行錯誤を経てプログラムを構築しているのかを明らかにするため,プログラムの構築過程を時系列データとして収集し,そのデータ分析を通じて学習者の作業パターンや思考パターンを調べる必要がある。今年度はこのデータ収集を行うサーバの構築を行い,ブロック型言語Blocklyが生成するイベントメッセージを取得できるようにした。イベントメッセージはブロックの選択や移動,変更,消去などの際に生成・発信されるため,これらのメッセージをサーバ側で逐一受信・記録することによって,学習者のプログラミング学習行動を把握するための詳細な履歴を得ることができる。この履歴から最も明らかにしたいことは学習者がどのような試行錯誤を経てプログラミングを行っているのか,ということである。研究計画の段階では試行錯誤が「場当たり的か系統的か」という観点からデータ分析を行い,プログラム構築過程のパターンと論理的思考との関係を調査することにしていたが,研究を推進する過程で「条件分岐処理」を伴う場合の試行錯誤が特に場当たり的な傾向にあることがブロック型言語を使った授業実践の前段階で判明したため,急遽アンプラグド的な手法でその実態調査を行った。その結果,条件分岐処理の際に全ての条件を調べ尽くしていないにもかかわらず,直観や勘に頼ってたまたま正解に辿り着いている学習者が多いという実態が浮き彫りになり,今後のプログラミング教育を実施する上で特に留意すべき観点のひとつを明確化することができた。これらの成果については,教育システム情報学会および比治山大学現代文化学部紀要にて既に公表を行っている。また本研究の対象は大学生であるが,当初の計画になかった小学校での授業の機会を得たため,小学生の意識調査や教員からの聞き取り調査を行い,今後の研究を小学生も対象に含めて展開する体制を整えた。当初の研究計画ではブロック型言語のBlocklyを使ったプログラミング教育を行って学習者のプログラム構築過程を時系列データとして取得し,その分析から学習者の試行錯誤や論理的思考の特徴を明らかにすることとしていた。しかしブロック型言語を導入する前段階で学習者の「条件分岐処理」が場当たり的な傾向が強いことが判明したため,ブロック型言語を使った授業実践を一時保留にしてアンプラグド的な手法で条件分岐の全ての場合を学習者が列挙できるかどうか,という問題に焦点を絞った実態調査を行った。そのため学習者のプログラム構築過程をデータとして収集するという当初の計画に遅れが生じる結果になった。しかしデータを収集するサーバの構築と実際にデータを取得できるかどうかの検証は既に終えており,授業実践を保留にして行った実態調査からは研究を遂行する上での有益な結果が得られるなどしているため,単に計画が滞ったための遅れではなく,研究をより深めるために生じた課題に取り組んだ結果による遅れである。この遅れは今後の研究計画の範囲内で回復できるものであり,課題の本質には何ら影響はないため,今後も当初の計画と目的に沿って研究を進める。当初の研究計画では,ブロック型言語による授業実践を行った後テキスト型言語を使った授業実践へと移行し,その教育効果を分析する予定としていたが,現在までの進捗状況欄で述べたように当初予定していなかった実態調査を行ったためブロック型言語による授業実践とプログラミング構築過程の履歴データの収集が行われていない状況にある。そこで今後はまず,ブロック型言語によるプログラミング教育の実施とデータの収集・分析を最優先で行うが,ブロック型言語を扱う授業とテキスト型言語を扱う授業をそれぞれ設定し,学習者が段階的に授業を履修していくという当初の計画を変更し,ひとつの授業の中でそれぞれの言語を段階的に導入し,両言語を並列的に扱いながら研究を推進することにする。この計画の変更は進捗の遅れを回復させるための安易な方策を選択したものではなく,ひとつの授業の中で両言語の接続性や関連性を強調することによって本研究の狙いである「相乗効果」がより明確になるメリットがあるという判断によるものである。また当初の計画にはなかった小学校でのプログラミング教育を実施する機会が得られ,今後も引き続いて実施できる見込みとなったため,本研究は本学での大学生を対象とした授業と並行して小学校での授業も行い,それぞれの発達段階に応じたプログラミング教育の効果を検証しながら研究を遂行していくこととする。

これらの成果については,教育システム情報学会および比治山大学現代文化学部紀要にて既に公表を行っている。また本研究の対象は大学生であるが,当初の計画になかった小学校での授業の機会を得たため,小学生の意識調査や教員からの聞き取り調査を行い,今後の研究を小学生も対象に含めて展開する体制を整えた。当初の研究計画ではブロック型言語のBlocklyを使ったプログラミング教育を行って学習者のプログラム構築過程を時系列データとして取得し,その分析から学習者の試行錯誤や論理的思考の特徴を明らかにすることとしていた。しかしブロック型言語を導入する前段階で学習者の「条件分岐処理」が場当たり的な傾向が強いことが判明したため,ブロック型言語を使った授業実践を一時保留にしてアンプラグド的な手法で条件分岐の全ての場合を学習者が列挙できるかどうか,という問題に焦点を絞った実態調査を行った。そのため学習者のプログラム構築過程をデータとして収集するという当初の計画に遅れが生じる結果になった。しかしデータを収集するサーバの構築と実際にデータを取得できるかどうかの検証は既に終えており,授業実践を保留にして行った実態調査からは研究を遂行する上での有益な結果が得られるなどしているため,単に計画が滞ったための遅れではなく,研究をより深めるために生じた課題に取り組んだ結果による遅れである。この遅れは今後の研究計画の範囲内で回復できるものであり,課題の本質には何ら影響はないため,今後も当初の計画と目的に沿って研究を進める。当初の研究計画では,ブロック型言語による授業実践を行った後テキスト型言語を使った授業実践へと移行し,その教育効果を分析する予定としていたが,現在までの進捗状況欄で述べたように当初予定していなかった実態調査を行ったためブロック型言語による授業実践とプログラミング構築過程の履歴データの収集が行われていない状況にある。そこで今後はまず,ブロック型言語によるプログラミング教育の実施とデータの収集・分析を最優先で行うが,ブロック型言語を扱う授業とテキスト型言語を扱う授業をそれぞれ設定し,学習者が段階的に授業を履修していくという当初の計画を変更し,ひとつの授業の中でそれぞれの言語を段階的に導入し,両言語を並列的に扱いながら研究を推進することにする。この計画の変更は進捗の遅れを回復させるための安易な方策を選択したものではなく,ひとつの授業の中で両言語の接続性や関連性を強調することによって本研究の狙いである「相乗効果」がより明確になるメリットがあるという判断によるものである。また当初の計画にはなかった小学校でのプログラミング教育を実施する機会が得られ,今後も引き続いて実施できる見込みとなったため,本研究は本学での大学生を対象とした授業と並行して小学校での授業も行い,それぞれの発達段階に応じたプログラミング教育の効果を検証しながら研究を遂行していくこととする。
沸騰現象のカオス特性に関する研究

微小な白金細線を用いてすいのプール飽和沸騰実験を行い,核,遷移,膜の各沸騰モードにおける白金細線の温度変動を高速で記録した.その時系列データに対し,高速フーリエ変換を行ってスペクトル解析するとともに,相互情報量を計算し,位相空間を再構成するための遅れ時間間隔を導き,アトラクターを描いて,沸騰モードの違いを調べた.その結果,遷移沸騰は核沸騰と膜沸騰が混在する形で現れることが明らかになった.時系列データから,さらに相関次元を求め,沸騰モードの複雑さを定量化した.その結果,核沸騰から限界熱流束にかけて次元は次第に増加するが,遷移沸騰から膜沸騰にかけて減少し,膜沸騰は次元3程度の比較的低次元現象であることがわかった.一方,沸騰で現れる蒸気泡は非線形挙動を示し,沸騰現象をモデル化する際はその非線形性を明らかにしておく必要がある.このための基礎研究として,水と空気の2相系で,オリフィスから生ずる単一気泡の成長,離脱の挙動を実験的に調べた.すなわち,熱線により気泡まわりの水の流速変動を測定し,それを基に非線形解析をおこなった.その結果,気泡に見られる周期や離脱径の複雑さは,気泡同志の干渉と合体により生じること,そうした挙動は高流量(沸騰だと高熱流束に対応する)で現れ易いことなどが見出された.また,理論モデルを構成してシミュレーションを行った結果,干渉や合体の精密なモデル構成の問題は残るものの,気泡の基本的な挙動は理論的にも説明可能であることが判明した.微小な白金細線を用いてすいのプール飽和沸騰実験を行い,核,遷移,膜の各沸騰モードにおける白金細線の温度変動を高速で記録した.その時系列データに対し,高速フーリエ変換を行ってスペクトル解析するとともに,相互情報量を計算し,位相空間を再構成するための遅れ時間間隔を導き,アトラクターを描いて,沸騰モードの違いを調べた.その結果,遷移沸騰は核沸騰と膜沸騰が混在する形で現れることが明らかになった.時系列データから,さらに相関次元を求め,沸騰モードの複雑さを定量化した.その結果,核沸騰から限界熱流束にかけて次元は次第に増加するが,遷移沸騰から膜沸騰にかけて減少し,膜沸騰は次元3程度の比較的低次元現象であることがわかった.一方,沸騰で現れる蒸気泡は非線形挙動を示し,沸騰現象をモデル化する際はその非線形性を明らかにしておく必要がある.このための基礎研究として,水と空気の2相系で,オリフィスから生ずる単一気泡の成長,離脱の挙動を実験的に調べた.すなわち,熱線により気泡まわりの水の流速変動を測定し,それを基に非線形解析をおこなった.その結果,気泡に見られる周期や離脱径の複雑さは,気泡同志の干渉と合体により生じること,そうした挙動は高流量(沸騰だと高熱流束に対応する)で現れ易いことなどが見出された.また,理論モデルを構成してシミュレーションを行った結果,干渉や合体の精密なモデル構成の問題は残るものの,気泡の基本的な挙動は理論的にも説明可能であることが判明した.
Ｓｒｃファミリーキナーゼ活性を制御するラフト機構の解明：１分子観察法による研究

SrcファミリーキナーゼLynの活性化/不活性化の切替が、タンパク質間、及び、ラフト脂質問相互作用の協同によってなされているという作業仮説の解明のため、Lynによってリン酸化され、同時にLyn不活性化のための足場タンパク質にもなる膜貫通型タンパク質Cbpに着目した。従来は、Cbpは常にEBP50-ERMを介してアクチン骨格と結合し、そこでほかのシグナル分子と相互作用するという静的なモデルが定説であったが、本研究によってCbpは常に拡散運動を行うことが明らかになった。このため、CbpとEBP50、ERM、アクチン骨格の結合、および、LynによるCbpリン酸化が、これらのタンパク質の結合に与える影響を検討した。まず、EBP50の細胞膜での挙動を観察した。イリノイ大学Wonhwa Cho教授よりGFP-EBP50を分与していただき、1分子観察を行った。EBP50の1分子観察の結果、EBP50が細胞質タンパク質としては、非常に珍しい挙動を示すことが明らかとなった。全反射蛍光顕微鏡では、細胞膜近傍約100nmにあるEBP50のみを観察することが出来るため、EBP50が細胞質から細胞膜にやってくる位置、すなわち、Cbpなどの膜タンパク質と相互作用する場所を知ることができる。ラット腎由来線維芽細胞にGFP-EBP50を発現させ、細胞膜にやってきた位置(点)を示すと、点の分布は、均一ではなく、ある領域では直線上に並んでいるところもあり、アクチン線維に結合していることが示唆される。さらに、点が密集した領域も存在することから、EBP50のhot spotが存在し、シグナル伝達プラットフォームが出来やすい場所がある可能性がある。(抄録なし)SrcファミリーキナーゼLynの活性化/不活性化の切替が、タンパク質間、及び、ラフト脂質問相互作用の協同によってなされているという作業仮説の解明のため、Lynによってリン酸化され、同時にLyn不活性化のための足場タンパク質にもなる膜貫通型タンパク質Cbpに着目した。まず、EBP50の1分子観察を行うため、EBP50の1分子観察用プローブの作製を行った。イリノイ大学Wonhwa Cho教授よりGFP-EBP50を分与していただき、より長時間の1分子観察を可能にするため、GFP部分をHaloタグに置換し、HaloタグフユージョンEBP50のコンストラクトを作製した。さらに、発現量を抑えるため、ベクターをpOsTetベクター変更し、Halo-EBP50の発現量を1細胞当たり1000個程度にした。すなわち、過剰発現に全くならないような条件を実現した。EBP50は、ERM-アクチン骨格に結合して、常に停止していると思われていたが、実際には、EBP50は細胞膜上を拡散運動しながら、1.8秒に1回、0.5秒程度の一時停止をくり返すことがわかった。さらにEBP50の細胞膜上での滞在時間には2種類あり、0.7秒と6秒であることが分かった。膜貫通型タンパク質Cbpの挙動を直接に制御する機構として、EBP50の1分子観察に成功し、さらにEBP50とCbpの相互作用の研究も進んでおり、総じて、順調な研究の進展である。

今後は、EBP50とCbpを1分子同時観察し、EBP50の一時停留とCbpとの関連、さらにLynによるCbpのリン酸化との関連を調べる予定である。また、膜貫通型タンパク質Cbpは、活性化されたLyn、及び、ラフト脂質の両方の相互作用のためCD59会合体ラフトにリクルートされる、という作業仮説の検証を進めている。すなわち、直径40nmのyellow-green蛍光ビーズ(励起波長488nm)で誘導した、CD59会合体ラフトに、CbpとLynがどのような時間差でリクルートされるのかを、直接に解明したいと考えている。(抄録なし)
児童精神科における服薬アドヒアランス評価尺度の精度向上を目的とした質的研究

その方法は、既存のデータから必要な情報を抽出し分析すること、外来で薬物療法中の子どもと親へのインタビュー調査を行うこと、集団心理教育プログラムを実施しCAQを用いて評価を行うことである。
ヒト ヘムオキシゲナーゼ遺伝子の熱ショックエレメントの機能の抑制機構

ヒトヘムオキシゲナーゼ(HHO:hsp32)の誘導機序について以下のことを解明した。(1)熱ショックによる誘導の抑制機構:ヒトはラットとは異なりHOの熱による誘導はない。しかも、熱ショック処理をするとカドミウムやヘムによるHHO誘導まで抑制されてしまう。このことはヒトでは熱ショック下ではHO誘導を抑制する必要が存在する事を示唆している。そこでHHO遺伝子を解析し熱ショックエレメントのすぐ下流に28bpのサイレンサー配列の存在することを明らかにした。(2)カドミウムによる誘導機構:サイレンサーの存在下でカドミウムによるHHO誘導が抑制される。この機序を解明するためにはまずカドミウムがどのようにHHOを誘導するかを明らかにする必要がある。解析の結果転写開始点の上流5kbにTGCTAGATTTというカドミウム応答領域が存在した。この領域はヘムによるHHO誘導には全く関与しておらず、機構の異なるカドミウムとヘムによる誘導を熱ショックを介してサイレンサーが抑制することは非常に興味深い。しかもラットHOは違うエレメントによりカドミウム誘導が起きることが明らかとなり種差の存在が示された。(3)単球分化に伴う誘導機構:TPA処理で単球が分化するに伴いHHOは誘導される。この誘導には5'上流150bpに存在するエレメントGTCATATGACが関与していた。本エレメントを認識すると考えられる転写因子は5kbほどの大きさをもっているが、ラットに於いては1kbと小さいことが示され、現在解析中である。このように、解析を進めるにつれてヒトとラットのHOのストレスによる誘導機序が全く異なっているらしいことが示されてきた。同じ哺乳類に属しているにもかかわらず、どうしてこのような誘導機構の種差が存在するのかという考察を進めるうえで、誘導能のないHOのアイソザイム(HO-2)との進化上での関連、ことにHOが原始的な生命体のどこまでに存在するか、それらはショック蛋白であるか否かを解明して行く必要がある。
糸状菌エンドファイト-内生バクテリア間相互作用の解明とその利用

多くの分類群を含む菌株を供試して,内生バクテリアの存在を確認したところ,接合菌類からPCR増幅を確認できた.検出されたバクテリアは, M. elongataより検出されている内生バクテリアの近縁種であった.Veronaeopsis simplex3菌株を供試して,内生バクテリアの検出および系統解析を行った.DNA抽出を行いPCR増幅を行った.その後,クローンライブラリー解析に供し,内生バクテリアの同定を行った.解析の結果,V. simplex3菌株から共通してRhizobium属細菌が検出され,これらが宿主植物の生育に関わっていることが推察された.多くの分類群を含む菌株を供試して,内生バクテリアの存在を確認したところ,接合菌類からPCR増幅を確認できた.検出されたバクテリアは, M. elongataより検出されている内生バクテリアの近縁種であった.Veronaeopsis simplex3菌株を供試して,内生バクテリアの検出および系統解析を行った.DNA抽出を行いPCR増幅を行った.その後,クローンライブラリー解析に供し,内生バクテリアの同定を行った.解析の結果,V. simplex3菌株から共通してRhizobium属細菌が検出され,これらが宿主植物の生育に関わっていることが推察された.下等菌類(接合菌類)、高等菌類(ディカリア)、そして偽菌類をそれぞれ85菌株(16属)、110菌株(45属)、そして20菌株(3属)を供試菌株とした。供試菌株の菌糸体よりDNAを抽出し、バクテリア16S rRNA遺伝子を標的としたプライマーセット10F-907Rまたは10FM-1507RMを用いたPCR法により内生バクテリアの検出を行った。10F-907Rのプライマーセットを用いたPCRの結果、下等菌類(接合菌類)、高等菌類(ディカリア)、そして偽菌類(卵菌類)において、それぞれ21%(18菌株)、1%(1菌株)、そして100%(20菌株)のPCR増幅を確認した。このことから、菌類内生バクテリアは、高等菌類(ディカリア)に比べ、下等菌類(接合菌類)において高頻度に検出される傾向があることが示唆された。また、10FM-1507RMを併用することにより、下等菌類(接合菌類)において、32菌株(38%)より内生バクテリアを検出できた。接合菌類において、32菌株中28菌株を同定した。同定されたバクテリアはすべてプロテオバクテリアに属しており、このうち、βープロテオバクテリア綱に属するMortierella elongataより検出されている内生バクテリアの近縁種が16菌株となり最も多かった。また、M. vesiculosa 10DS89から検出されたDiplorickettsia属細菌は、マダニやムツテンヨコバイの細胞内共生バクテリアと85%の相同性を示し、菌類と節足動物の両方と関係を持つ可能性のある新規菌類内生バクテリアであると考えられた。本研究で供試した根部エンドファイトVeronaeopsissimplexは現在までに分離源の異なる3菌株(CBS 588.66, Y34およびIBA K45)が報告されている。基準株であるCBS 588.66は,南アフリカでAcacia karooのリターから分離されている.また,Y34およびIBA K45は当研究室において,それぞれ屋久島および茨城の雑木林土壌から釣餌法によりトマト苗から分離されており,根部エンドファイトとして植物の生育促進効果を示すことも明らかとなっている.これら日本分離株に関しては菌糸内にバクテリアの存在が示唆されているが,同定には至っていない(Khastini, 2013).そこで本年度は,V. simplexと内生バクテリアの相互作用を明らかにするために,V. simplex3菌株を供試して,内生バクテリアの検出および系統解析を行った.それぞれの菌株を2週間培養後,DNA抽出を行い,バクテリアのユニバーサルプライマー10F-907Rを用いてPCR増幅を行った.その後,クローンライブラリー解析に供し,内生バクテリアの同定を行った.さらに蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)により内生バクテリアの観察を行った.クローンライブラリー解析の結果,V. simplex3菌株から共通してRhizobium属細菌が検出され,顕微鏡観察においても菌糸内にバクテリア様構造物を確認した.また,検出されたRhizobium属細菌に関して,16S rDNA塩基配列に基づく系統樹を構築した結果,検出されたRhizobium属細菌はPiriformospora indicaの内生バクテリアとして報告されたRhizobium radiobacterに近縁であった.農学菌類内生バクテリアは、宿主菌類の分類や生態系における働きを変化させる重要な要素の1つであると考えられる。しかしながら、これまでに菌類内生バクテリアのスクリーニングがなされた菌類は、菌類全体からみて極めて少数であり、また、そのスクリーニングは、接合菌類や子嚢菌類といった分類群ごとに行われ、それぞれのスクリーニング条件も異なっていた。

そこで、本研究では、同スクリーニング条件下における下等菌類(接合菌類)、高等菌類(ディカリア)、そして偽菌類(卵菌類)の3つの分類群ごとの内生バクテリアの検出率を比較した結果、菌類内生バクテリアは、高等菌類(ディカリア)に比べ、下等菌類(接合菌類)において高頻度に検出される傾向があることを示すことが出来た。さらに、接合菌類においてPCR増幅が確認されたBurkholderiaceae科に属する内生バクテリアを20菌株獲得出来、菌類ーバクテリア間の相互作用に関する研究モデル構築につながる結果となった。本年度の結果より、菌類の中では接合菌類において、より高い頻度で内生バクテリアが検出される傾向があることが示唆された。また、接合菌類から検出された29の内生バクテリアのうち15はMortierella elongataから検出されたBEFBに近縁なバクテリアであった。また、その宿主はM. elongataを含むMortierella属菌11菌株、Cunninghamella属菌2菌株、Radiomyces属菌1菌株、そしてCoemansia属菌1菌株であり、M. elongata以外の接合菌類も宿主とする可能性が示唆された。Mortierella属菌は土壌菌の中でも特に普遍的な菌類であり、一部は植物根部からの分離報告もある。その一方,動物の糞生菌としての一面も持ち多様な栄養特性を持つ菌群でもある。そこで、来年度は、このモデルを供試して植物ー菌類ーバクテリア間の相互作用解明を検討する。試薬類としての使用を予定していたが、2ー3月時の培養室内空調の故障により、菌類の培養温度が維持できなくなり、当該年度内での使用が困難となった。現状では、上記空調の故障も修繕が終わり、培養は継続している。5月半ばには、実験を終えることが可能となり、試薬類の使用が可能となる計画である。
帝国都市アウクスブルクにおける水の利用と管理―給水システム、河川利用、水の記憶―

本研究では、近年注目を集める都市環境史の議論を踏まえ、中世後期から近世にかけての帝国都市アウクスブルクを事例に、都市と自然環境との相互関係および都市の生活環境の実態を、都市生活に欠かせない必需品である「水」という問題領域に着目して解明することを目的にしている。本年度は、初年度ということもあり、関連する重要文献の収集を網羅的に行い、研究状況の把握に努めた。とくにアウクスブルクでは、数年前から、600年以上の歴史を有する都市の給水システムおよび水利経済の諸施設を「ユネスコ世界遺産」として登録する試みを続けており、2019年夏にその可否が決定することもあり、記念カタログや論文集の刊行が相次いでおり、その収集を滞りなく進めることができたことは大きな成果であった。帝国都市アウクスブルクの水をめぐる研究状況や当時の給水システムの概要については、2018年9月4日に福岡大学で開催された九州西洋経済史ゼミ合同研究会にて「中近世アウクスブルクにおける都市と水ー研究の展望」というタイトルで報告を行った。しかし、残念ながら、「研究実施計画」に照らしてみたとき、研究は順調に進んでいるとは言えない。2019年3月にアウクスブルクでの史料調査を予定していたが、研究遂行者が前日にインフルエンザに罹患し、やむなく出張を取りやめたのが大きな原因である。そのため、一年目に現地で行う予定であった史料調査は二年目に延期せざるを得ないのが現状である。2019年夏に上記のユネスコ世界遺産の登録結果が発表される予定であり、その動向にも注目しながら、スピード感をもって本研究に取り組んでいくことが必要となろう。研究実績の概要でも記したが、2019年3月に予定していたドイツ出張を、研究遂行者のインフルエンザ罹患のためキャンセルせざるを得なったため、一年目に予定していた現地での史料調査を行えなかったのが一番大きな原因である。とはいえ、ユネスコ世界遺産登録との関連で続々と刊行される記念カタログや論文集は収集できており、最新の研究状況もしっかりと把握できていることから、2年目以降、出張予定の回数を増加させる(あるいは、滞在期間のより長期なものとする)などして、この遅れを取り戻すことは十分に可能であると考えられる。現地での史料調査を効率的に行うために、引き続き、最新の研究動向の把握や関連文献の読み込みを進めていく。また、西洋史学会編『西洋史学』にて企画中の「環境史特集」号に、本研究の成果の一端を投稿する予定である。例年2回開催されている九州西洋経済史ゼミ合同研究会では、引き続き、毎回本研究の成果を口頭報告を行う予定となっている。前記の研究実績の状況でも記したように、2019年3月に予定されていたドイツ出張が、研究遂行者のインフルエンザ罹患ゆえにキャンセルとなった。当該出張費として計上していた35万円程度の予算が、そのため未執行のままとなってしまい、やむなく次年度と合わせて利用することとなった。