hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
DNAマーカーを用いた広島湾における魚介類種苗の放流効果に関する研究

クロダイ(1)クロダイについては、単離したマイクロサテライト(以下MS)、4遺伝子座を用いて、西日本および韓国クロダイ、および広島市水産振興協会で生産された種苗の集団解析を実施した。その結果、クロダイ各集団間には遺伝子頻度の異質性に有意差が認められなかった。従ってクロダイは明確な地域集団を形成していないと結論した。また、放流種苗と天然種のヘテロ接合体率の比較から、放流種苗は天然種に匹敵する遺伝的多様性を保持していることが判明した。(2)広島市水産振興協会で生産された放流種苗とその親魚(51尾)について親子鑑定を行った。その結果、種苗に寄与した親魚は雄親26尾中21尾、雌親25尾中23尾、親全体で80%以上が、産卵に関与していた事が明らかとなった。この値はマダイやヒラメに比べると極めて高い。この時、クロダイ親魚の集団の有効な大きさは40程度と算出された。この値はFAOの提示した基準値より若干低い事が明らかとなった。従って、クロダイの親魚数は80尾程度が望ましいと考えられた。(3)MSによる放流種苗の親子鑑定技術を応用し、広島湾に放流された種苗の追跡調査を実施した。その結果、従来鰭カットや耳石標識で標識放流されたクロダイと同様な分散・生残率が確認された。従ってMSが放流魚の遺伝マーカーに有効であることが確認された。メバル・マナマコストレプトアビジン結合型磁気ビーズを用いて,マイクロサテライト領域を含むDNA断片を選抜し,濃縮ライブラリーを作成する方法を確立した。この方法を用いてメバル,マナマコよりマイクロサテライトDNAを単離した。その結果、両種とも20程度のMSが単離された。MSの多型性を広島市水産振興協会で生産された放流稚ナマコと天然メバルを用いて調査した結果、極めて多型性に富んでいることが判明した。今後、単離したMSを用いて、クロダイ同様、集団解析、放流種苗の親子艦別、放流魚の追跡調査が可能と考えられ、遺伝資源としてのメバル,マナマコの資源管理に有益であろう。クロダイは瀬戸内海を代表する放流有用魚種で、放流種苗の遺伝的多様性の低下および天然集団への遺伝的影響が懸念されている。そこで本年度はクロダイより高感度DNAマーカーであるマイクロサテライト(MS)DNAを単離した後、その遺伝様式を交配群の分析から確認した。さらにクロダイ天然集団と人口種苗の遺伝的変異性の比較を試みた。【方法】クローニングにより得られた(CA)n、(GT)n陽性クローンの配列を決定し、クロダイの9種類のMSを単離した後、MS領域近傍にプライマーを設計した。人工交配により作出した雌雄1対1交配群27尾のMS領域をPCR法により増幅後、15%ポリアクリルアミドゲルで電気泳動し、遺伝子型がメンデルの遺伝様式に従っているか否か確認した。また、単離されたMSのうち6遺伝子座について、放流が行われている海域である広島市似島大黄湾で捕獲した天然集団、放流の影響が少ないとされる韓国麗水湾で捕獲した天然集団、および放流用人口種苗集団各50尾を同様に電気泳動し、各集団の対立遺伝子頻度、平均へテロ接合体率観察値(Ho)、期待値(He)等を求めた。【結果】雌雄一対一交配群を用いてメンデル遺伝の確認を行った結果、9遺伝子座のうち8遺伝子座はメンデルの遺伝様式に従っていた。6遺伝子座について人口種苗集団および広島天然集団の多型性を調査した結果、全ての遺伝子座において変異が確認され、有効なマーカーになりうることが示唆された。また、平均対立遺伝子数は、人口種苗、似島産天然集団、韓国麗水産天然集団でそれぞれ10.3、12.2、11.0であり、Heはそれぞれ0.776、0.793、0.776であった。Ho/Heは人口種苗は天然集団と比べてわずかに低い傾向を示した。前年度の研究では、瀬戸内海を代表するクロダイよりマイクロサテライトを単離し、放流種苗、人工種苗ならびに韓国産クロダイの遺伝的多様性を評価した。今年度は、1)マイクロサテライトを用いてクロダイの親子鑑別、放流魚の追跡調査を行った。その結果、マイクロサテライトにより親魚と放流種苗の親子鑑別が完全に判別でき、放流魚の追跡調査も可能であった。特に、マイクロサテライトマーカーによる放流魚の追跡調査で、放流魚の分散・生残率は例年通りの傾向を示したことから、マイクロサテライトが放流魚の遺伝マーカーに有効であることが確認された。2)mtDNA塩基配列解読による西日本ならびに南韓国におけるクロダイの集団解析においては、我が国と放流の影響が少ないとされる韓国とでハプロタイプの出現頻度や多様度に差異は認められなかった。したがって、我が国では例年200万尾のクロダイが放流されているが、幸いにも放流による遺伝的撹乱は回避されていると考えられる。また、クロダイは我が国と韓国で遺伝子プールを形成していると考えられ、遺伝資源の保全という観点からすれば、両国でクロダイの放流事業を管理すべきであろう。3)マナマコは瀬戸内地方で珍重され、商品価値も高い。マナマコは体色によりアカ、アオ、クロの3型に分けられ、市場価格も大きくことなる。ただし、体色が異なるマナマコ3型に亜種レベルの違いがあるのか、体色は単なる環境変異体にすぎないのかは不明である。

そこで、18SrDNAを指標にマナマコ3型間の分子系統学的研究を行った。その結果、マナマコ3型の1690塩基対中、わずか3座位で塩基置換が認められた程度であった。この結果よりマナマコ3型は同種であるとの結論を得た。4)遺伝マーカーとしてのマイクロサテライトの有効性は周知の通りであるが、魚類は多種多様で、魚種間でのマイクロサテライトの汎用性が低いことから、簡便で効率よくマイクロサテライトを単離する方法が切望されている。そこで、磁気ビーズ法によるマイクロサテライト断片の選抜方法を検討した結果、従来の方法より数十倍の効率でマイクロサテライトが単離できた。クロダイ(1)クロダイについては、単離したマイクロサテライト(以下MS)、4遺伝子座を用いて、西日本および韓国クロダイ、および広島市水産振興協会で生産された種苗の集団解析を実施した。その結果、クロダイ各集団間には遺伝子頻度の異質性に有意差が認められなかった。従ってクロダイは明確な地域集団を形成していないと結論した。また、放流種苗と天然種のヘテロ接合体率の比較から、放流種苗は天然種に匹敵する遺伝的多様性を保持していることが判明した。(2)広島市水産振興協会で生産された放流種苗とその親魚(51尾)について親子鑑定を行った。その結果、種苗に寄与した親魚は雄親26尾中21尾、雌親25尾中23尾、親全体で80%以上が、産卵に関与していた事が明らかとなった。この値はマダイやヒラメに比べると極めて高い。この時、クロダイ親魚の集団の有効な大きさは40程度と算出された。この値はFAOの提示した基準値より若干低い事が明らかとなった。従って、クロダイの親魚数は80尾程度が望ましいと考えられた。(3)MSによる放流種苗の親子鑑定技術を応用し、広島湾に放流された種苗の追跡調査を実施した。その結果、従来鰭カットや耳石標識で標識放流されたクロダイと同様な分散・生残率が確認された。従ってMSが放流魚の遺伝マーカーに有効であることが確認された。メバル・マナマコストレプトアビジン結合型磁気ビーズを用いて,マイクロサテライト領域を含むDNA断片を選抜し,濃縮ライブラリーを作成する方法を確立した。この方法を用いてメバル,マナマコよりマイクロサテライトDNAを単離した。その結果、両種とも20程度のMSが単離された。MSの多型性を広島市水産振興協会で生産された放流稚ナマコと天然メバルを用いて調査した結果、極めて多型性に富んでいることが判明した。今後、単離したMSを用いて、クロダイ同様、集団解析、放流種苗の親子艦別、放流魚の追跡調査が可能と考えられ、遺伝資源としてのメバル,マナマコの資源管理に有益であろう。クロダイ単離したマイクロサテライト(以下MS)、4遺伝子座を用いて、西日本、韓国クロダイ、および広島市水産振興協会産種苗の集団解析を実施した。広島市水産振興協会産の放流種苗とその親魚(51尾)について親子鑑定を行った結果、種苗に寄与した親魚は雄親26尾中21尾、雌親25尾中23尾、親全体で80%以上が産卵に関与していた事が明らかとなった。
可塑基板へのカルコパイライト半導体薄膜の成長と太陽電池への応用

高効率太陽電池の光吸収層として期待されるCuInSe_2(CIS)系薄膜を、可塑基板上へ作製する技術を開発した。結晶成長に適した組成比に制御した上で短時間熱処理を行うことで、CISの結晶成長に十分な耐熱性を持っていないポリイミド基板上でも、結晶粒径の増大に成功した。また新たなアプローチとして、引き剥がし法による高品質CIS系薄膜の可塑基板上への転写にも取り組み、動作する太陽電池の試作にも成功した。CuInSe_2(CIS)系太陽電池では、異種基板上(ガラス・ポリマー・金属泊)に構成元素(Cu, In, Se, Ga, Al等)を堆積させることによって、太陽電池を作製できる。基板に超軽量・フレキシブル基板を用いることにより、超軽量・フレキシブル太陽電池も作製可能であり、光があればどこでも発電でき、軽量・フレキシブルゆえにどこにでも装着・携帯できるユビキタス電源としても期待でき、大型太陽電池モジュール以外の新しい応用範囲を広げる事ができる。CIS薄膜をポリイミド(PI)基板上へ堆積した後にランプ加熱装置によって結晶成長の促進を試みた。CIS太陽電池への応用を考え、裏面電極となるMoをPI基板に堆積させ、この基板にIn過剰とCu過剰組成のCIS薄膜を堆積させた。ここでは、基板の反りを抑えるため、Mo(1ミクロン)をPI基板(50ミクロン)の両面に堆積させた。また、CISの最適な成長温度(550度程度)においてPIが分解するため、比較的低温の400度でCIS膜を堆積させた。得られたCIS薄膜にランプ加熱装置で450度で短時間熱処理を施した。X線回折測定よりIn過剰、Cu過剰ともにCIS特有のピークが得られ、また、熱処理によって結晶性が向上することを確認した。走査型電子顕微鏡によるCIS薄膜の表面・断面観察から、In過剰組成のCIS薄膜には変化がないが、Cu過剰組成のCIS薄膜では、結晶粒径の増大が確認された。また熱処理時間を長くすることで、粒径が増大することが確認された。これはCISがCu過剰となり、CIS薄膜中のCu_2Seが影響し、結晶成長が促進されたためと考えられる。今回のCIS薄膜は400度以上の短時間熱処理により結晶性が向上し、特に熱処理温度450度以上でCu過剰のときにより結晶成長が促進された。CuInSe_2(CIS)系太陽電池では、基板上に構成元素(Cu,In,Se,Ga,Al等)を堆積させることにより、太陽電池を作製できる。基板に超軽量・フレキシブル基板を用いることにより、超軽量・フレキシブル太陽電池も作製可能であり、光があればどこでも発電でき、軽量・フレキシブルゆえにどこにでも装着・携帯できるユビキタス電源としても期待でき、大型太陽電池モジュール以外の応用範囲を広げる事ができる。多元蒸着装置中でのCIS薄膜の高品質化を図るために、昨年度までの同時蒸着法ではなく、三段階法によるCIS薄膜の堆積を試みた。3段階法では1段階目にIn-Seを照射することでIn_2Se_3層を形成し、2段階目でCu-Seを照射し、Cu不足のCISからCu過剰のCISを形成する。Cu過剰組成になるとCu_2Se層がCISの表面に形成され、結晶成長が促進される。3段階目でIn-Seを照射し、太陽電池に適した組成を有する若干Cu不足のCIS薄膜を形成した。これまでの3段階法では、第2段階と第3段階の基板温度を450度と固定してきたが、昨年度のポリイミド基板の耐熱温度のデータを基に、2段階目終了時に基板温度を500度まで急速に上昇させて1分間保持することで結晶成長を促進した。その結果、X線回折から結晶性の指標である半値幅が改善されていることがわかった。また走査型電子顕微鏡による結晶断面の観察からは、結晶粒径の増大が確認された。今回、このCIS膜を用いて太陽電池を試作したが、漏れ電流が非常に大きく、太陽電池性能を得ることができなかった。また、フレキシブルCIS太陽電池を実現する新プロセスとして、CIS膜の引き剥がし法による可塑基板上への転写も行った。その基本プロセスを確立した結果、通常構造に比べて変換効率が減少したものの、引き剥がし法によるフレキシブル太陽電池の試作に成功した。
膵臓癌の浸潤、転移に対するリゾホスファチジン酸アンタゴニストの治療効果

生理活性リゾリン脂質であるリゾホスファチジン酸(LPA)はG蛋白連関受容体リガンドとして機能する。LPA受容体として、現在までEDG-2/LPA1,EDG-4/LPA4,EDG-7/LPA3,GPR23/LPA4の4種のG蛋白連関受容体が同定されている。生体に広く分布し細胞運動、接着、増殖、生存、アポトーシスなど細胞の基本的な生命活動を制御していると考えられている。我々はこの中で、LPA1、LPA3に特異性を示すLPA受容体アンタゴニストKi16425を開発した(Ohta, H. et al Mol.Pharmacol.2003)。本研究では、膵臓癌患者腹水中の癌細胞運動亢進物質がLPAである可能性を検証し、このLPA作用の受容体サブタイプ同定、さらに、インビトロでの細胞増殖、浸潤などに対する新規LPAアンタゴニスト効果を調べ、LPAアンタゴニストの抗癌剤としての有用性を解析した(Yamada, T. et al. JBC 2004)。その結果、(1)9名の膵臓がん患者腹水中に血中濃度より10倍以上高濃度のLPAを検出した。(2)ボイデンチャンバー法により細胞遊走活性を測定すると、膵臓癌細胞(YAPC-PD、PK-1、PK-9,、Panc-1、BxPC-3、CFPAC-1、HPAC)はLPA、膵臓癌患者腹水に応答して細胞遊走を引起すが、この作用はLPA受容体アンタゴニストKi16425処理により、著明に抑制された。また、この作用はLPA1受容体特異的siRNAでも著明に抑制され、この細胞遊走作用はLPA1を介していると推定された。(3)同様にトランスウエルを用いた浸潤活性(マトリゲルコート膜の透過能)を測定したところ、Ki16425はLPA、膵臓癌患者腹水による浸潤活性を著明に抑制した。このように、癌性腹水中の癌細胞運動亢進物質としてLPAを同定した。LPA受容体アンタゴニストKi16425、LPA1受容体特異的siRNAは少なくともインビトロにおける膵臓癌細胞の運動制御に有効であると結論された。
タンパク質を多能性配位子とした精密制御反応場の創出

天然の金属酵素は常温常圧下といった温和な条件下において非常に高難度な反応を触媒するものが多数知られており、有機合成化学などへの応用が期待されてきた。しかし、一般的に金属酵素は不安定であり、汎用性も低いため、そのままでは利用できない場合がほとんどである。このような問題を解決するため、酵素の活性中心を模倣した小分子金属錯体が数多く開発され、多様な反応に応用されてきた。一方、最近では、より温和な条件でも高い反応性と選択性を発揮する触媒の開発をめざして、タンパク質の精密制御反応場としての有用性と遷移金属の触媒機能を巧みに組み合わせた新しいハイブリッド生体触媒(人工金属酵素)の開発が活発に行われている。こういった背景のもと、我々のグループはタンパク質配位子として超好熱菌Thermotoga maritima由来のTM1459タンパク質に着目した。このタンパク質は、高い熱安定性を有し、cis位に空いた配位座を提供可能な4つのヒスチジンからなる金属結合部位を備えている。これらのヒスチジン残基に金属イオンを結合させることで、タンパク質骨格がより安定化され、非常に安定な生体触媒の構築が可能となる。さらに、様々な遷移金属イオンを導入することで、多彩な触媒機能を期待出来る。これまで、我々はTM1459タンパク質を配位子として、高い反応性、選択性を達成したアルケンのcisジオール化反応2やマイケル付加反応系を構築してきた。そこで本年度では、このTM1459タンパク質を金属配位子としての汎用性を向上させるため、オレフィンの立体選択的なシクロプロパン化反応について検討を行い、困難とされているシス選択的反応系の実現を目指した。現在までにシクロプロパン化反応に用いられてきたbis(oxazoline)骨格を持つBOXやPyBOX配位子のような二座もしくは三座の窒素系配位子を模倣し、4-His部位のヒスチジンの1つ、及び2つをアラニンに変異させることで、様々な第一配位圏を包括した変異体を構築した。これら変異体に、銅(II)を導入し、単核銅タンパク質ライブラリーを調製した。次に、これを用いて、基質としてスチレンとエチルジアゾアセテート(EDA)を用いたシクロプロパン化反応についてスクリーニングを行った。銅(II)のみを触媒として用いた場合、1: 2の割合でtrans体が優先的に生成され、エナンチオ選択性は全く見られなかった。それに対し、H52A変異体を用いた場合、高いcisジアステレオ選択性(89: 11)とエナンチオ選択性(56% ee)を示した。さらに、H58A/H92A変異体を用いた場合では、高いtrans選択性(24: 76)を示し、反転したジアステレオ選択性をもつ変異体を得ることに成功した。今後は第二配位圏の残基にさらなる変異導入を行い、さらなる選択性の向上を試みる。H52A変異体にCuを導入した結晶構造をもとに基質であるEDAとタンパク質キャビティのドッキングシミュレーションを行ったところ、一方の基質であるスチレンが間隙の広い側から銅に結合したEDAに接近することにより、高いcis選択性を示したと推測された。そこで、スチレンの接近方向を制御するため、キャビティを形成するアミノ酸残基(R39, C106, I108, A52)に着目し、さらなる変異導入を試みる。また、他のC-C結合反応にも挑戦する。

次に、これを用いて、基質としてスチレンとエチルジアゾアセテート(EDA)を用いたシクロプロパン化反応についてスクリーニングを行った。銅(II)のみを触媒として用いた場合、1: 2の割合でtrans体が優先的に生成され、エナンチオ選択性は全く見られなかった。それに対し、H52A変異体を用いた場合、高いcisジアステレオ選択性(89: 11)とエナンチオ選択性(56% ee)を示した。さらに、H58A/H92A変異体を用いた場合では、高いtrans選択性(24: 76)を示し、反転したジアステレオ選択性をもつ変異体を得ることに成功した。今後は第二配位圏の残基にさらなる変異導入を行い、さらなる選択性の向上を試みる。H52A変異体にCuを導入した結晶構造をもとに基質であるEDAとタンパク質キャビティのドッキングシミュレーションを行ったところ、一方の基質であるスチレンが間隙の広い側から銅に結合したEDAに接近することにより、高いcis選択性を示したと推測された。そこで、スチレンの接近方向を制御するため、キャビティを形成するアミノ酸残基(R39, C106, I108, A52)に着目し、さらなる変異導入を試みる。また、他のC-C結合反応にも挑戦する。
DDS化生理活性物質を利用した内科的再生医学

ゼラチンのカルボキシル基にエチレンジアミンを化学導入することによって、カルボキシル基の50モル%がアミノ基に置換されたカチオン化ゼラチンを作製した。このカチオン化ゼラチンをグルタルアルデヒドにて化学架橋することによって生体吸収性のカチオン化ゼラチンハイドロゲルを得た。凍結乾燥したハイドロゲルを、MMP-1プラスミドDNA水溶液で膨潤させることによってMMP-1プラスミドDNA含浸ハイドロゲルを調製した。放射性同位体を用いた体内物質トレーサー実験により、in vivoにおいて、ハイドロゲルの分解にともないMMP-1プラスミドDNAが徐放されることがわかった。架橋反応条件を変化させることで、ハイドロゲルの生体内分解性をコントロールすることができ、この分解性によってプラスミドDNAの体内での徐放性を変えることができた。MMP-1プラスミドDNA含浸カチオン化ゼラチンハイドロゲルによる慢性腎炎モデルラットの治療実験を行った。ストレプトゾトシン投与により慢性腎炎を起こした腎実質へハイドロゲルを投与した。MMP-1プラスミドDNA含有ゼラチンハイドロゲルの埋入部位周辺における組織免疫試験を行ったところ、MMP-1タンパク質の発現が認められた。一方、MMP-1プラスミドDNAの水溶液投与では発現は見られなかった。組織学的評価を行ったところ、プラスミドDNA含浸ハイドロゲル投与群では、腎組織中での線維性組織の占める面積が減少していた。また、繊維化の指標であるハイドロキシプロリンを定量したところ、遊離MMP-1プラスミドDNA投与群に比較して、プラスミドDNA含浸ハイドロゲル投与群では、有意にその量が減少していた。血液中の尿素窒素の値もハイドロゲル投与群では正常化していた。以上の結果から、線維性組織を分解消化する酵素であるMMP-1を慢性疾患部位で発現させることにより、線維性組織が消化され、その部位が治療修復することがわかった。これは、本研究計画によって提案した内科的再生医学の可能性を強く示唆している。本研究では、まず、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)-1の遺伝子を含むプラスミドDNAを作製した。Flagシステムを用いて得られたプラスミドDNAがMMP-1タンパク質を発現することを確かめた。このプラスミドDNAをトランスフォームした大腸菌を増殖させることにより、大量のMMP-1プラスミドDNAを得た。ゼラチンのカルボキシル基にエチレンジアミンを化学導入することにより、カルボキシル基の50%がアミノ基に置換されたカチオン化ゼラチンを作製した。このカチオン化ゼラチンをグルタルアルデヒドにて化学架橋することによってハイドロゲルを得た。得られたカチオン化ゼラチンハイドロゲルならびにMMP-1プラスミドDNAをそれぞれRI標識した後、マウスの背部皮下に埋入、経時的に放射活性を測定することによりハイドロゲルのin vivo分解およびプラスミドDNAのin vivo徐放について評価した。その結果、架橋反応条件を変化させることで、ハイドロゲルの生体内分解性をコントロールすることができた。また、この架橋条件はプラスミドDNAの体内での徐放性にも影響を与えた。両者の放射活性の時間変化はよく相関しており、プラスミドDNAがカチオン化ゼラチンハイドロゲルの分解とともに徐放されていることがわかった。MMP-1プラスミドDNAを含有したゼラチンハイドロゲルの埋入部位周辺における組織免疫試験を行ったところ、MMP-1タンパク質の発現が認められた。一方、MMP-1プラスミドDNAの水溶液投与では発現は見られず、このことは、プラスミドDNA徐放化が発現に有効であることを示している。

以上の結果から、線維性組織を分解消化する酵素であるMMP-1を慢性疾患部位で発現させることにより、線維性組織が消化され、その部位が治療修復することがわかった。これは、本研究計画によって提案した内科的再生医学の可能性を強く示唆している。
歯周病原性細菌の免疫調節物質の分子生物学的解析

Actinobacillus actinomycetemcomitansは限局性若年性歯周炎歯周炎局所から高頻度で分離され、その発症と進行に重要な役割を果たすと共に成人性歯周炎にも密接に関与していると考えられている。免疫抑制因子はTreponema denticolaやA.actinomycetemcomitansをはじめとする口腔細菌で報告されている。本菌の免疫抑制物質は免疫応答からの回避により宿主への定着から歯周炎の発症のステップに関わっていると考えられる。このメカニズムを明らかにする目的で本菌の免疫抑制物質の遺伝子を明らかにすることを試みた。得られた陽性クローンのDNA塩基配列から免疫抑制成分のN-末端アミノ酸配列と一致するタンパクをcodeするopenreading frame(ORF)を認めた。得られたORFのサイズは324bpであった。このORFは107amino acidによりなるアミノ酸配列をコードしており、予想される分子量は11,595であった。得られた遺伝子とアミノ酸配列と相同性を示すタンパクをFASTAによって検索すると、このORFの塩基配列はHaemophilus influenzae thioredoxinと70%程度の相同性を示し、アミノ酸レベルでもH.influenzae thioredoxinと76.6(%),N.meningitidisのthioredoxinと67.3(%)の相同性が認められた。この結果は免疫抑制成分として単離されたタンパクがthioredoxinであり、本酵素が何らかのメカニズムを介し免疫抑制を引き起こしていると考えられる。歯周病原性細菌が歯周局所に定着する過程で宿主の防御応答から逃れる必要がある。このため免疫抑制物質は歯周炎発症の過程で重要な役割を持つと考えられている。歯周病原性細菌のうちTreponema denticolaとActinobacillus actinomycetemcomitansには免疫抑制活性があることが報告されている。われわれはこれらの免疫抑制成分を分子生物学的手法により明らかにすることを試みた。T.denticolaを超音波で破砕し遠心分離を行った。その上清をgel濾過によって分離し100kDa付近からConcanavalinAによるマウスリンパ球の活性化を抑制する成分を分画した。この分画に認められる抑制成分は耐熱性の物質であった。現在この抑制成分をion交換クロマトグラフィーを用いてさらに精製中である。A.actinomycetemcomitansの免疫抑制成分はOchiraiら(Infect.Immun.1996,64:50-54)によって報告されている。このタンパクをクローニングするためA.actinomycetemcomitansY4株のgenomicDNAを抽出しSau3AIで部分消化した。これをlambda Zapにligationし、genomic libraryを作成した。このlibraryをin vitro packagingしE.coliに感染させ、培地に接種した。得られたgenomic libraryに対してOchiraiらによる免疫抑制物質のN-terminal aminoacid sequenceをもとに作成したoligo nucleotide primerを用い、スクリーニングを行い陽性クローンを得た。現在このクローンの塩基配列から免疫抑制物質の遺伝子を検索中である。
チロシンホスファターゼによるプロテアソーム活性制御を介した情報伝達調節機構の解明

Tremblay教授(カナダ・マギル大学腫瘍学研究所)より供与されたTC-PTPノックアウトマウスの胎児胚より樹立されたMEF(mouse embryonic fibroblast)を用い,インスリンで刺激した際のインスリン受容体型PTKのインターナリゼーションと細胞膜表面への再局在の様子を,細胞生物学的手法,生化学的,分子生物学的手法を駆使して詳細に調べた。報告されているPDGFレセプター程ではないが,MEF-TC-PTP^<+/+>に比べMEF-TC-PTP^<-/->ではインスリン刺激後のインスリン受容体のインターナリゼーションが抑制され,チロシンリン酸化レベルも亢進していた。これらの結果はTC-PTPを標的としたsiRNAの導入によっても再現された。またMEF-TC-PTP^<-/->にTC-PTPおよびその欠失変異体を順次導入したところ,野生型ではフェノタイプが回復したが,C末端の塩基性アミノ酸クラスター領域を欠く変異体では回復しなかった。この変異体はプロテアソームに結合しないことから,同領域を介したTC-PTPとプロテアソームとの結合が,TC-PTPの機能発現に必須であることが明らかとなった。また野生型およびTC-PTPヘテロノックアウトマウスの肝臓および骨格筋を摘出し,ホモジネートを調製後,抗TC-PTP抗体を用いて免疫沈降したところ,野生型では26Sプロテアソームの共沈降が明確に確認出来たが,ヘテロノックアウトマウスでは,沈降量がほぼ半減していた。この結果は,個体レベルでもTC-PTPと26Sプロテアソームが結合して機能する可能性を強く示唆する。TC-PTPと26Sプロテアソーム細胞内局在解析選択的スプライシングに起因するTC-PTPの2つのアイソフォーム,TC45とTC48をGFPとの融合タンパク質としてHEK293で発現させた。一方,プロテアソームサブユニットとの一つ,CPα/βを特異抗体を用いて検出した。いずれのアイソフォームもプロテアソームとの共局在が観察され,pull-dowアッセイ法での結果とほぼ矛盾しない共局在パターンを示した。TC-PTPと26Sプロテアソームとの結合様式の解明既に構築しているTC45およびTC48とGSTとの融合タンパク質発現ベクターをベースにして,TC-PTPの触媒領域(N末端),非触媒領域(C末端)を欠く変異体を作成し,HEK293にトランスフェクトした。グルタチオンセファロースビーズを用いてpull-downし,沈降物をSDS-PAGEで分画後,26Sプロテアソームの構成サブユニットに対する特異抗体を用いたウエスタンブロット法により調べたところ,酵素領域を欠く変異体,およびC末端の核あるいは小胞体局在シグナルを欠く変異体は26Sプロテアソームと結合しなぐなることが新たに明らかとなった。また細胞をヂロシン脱リン酸化酵素阻害剤バナジン酸で処理するとTC-PTPと26Sプロテアソームとの結合が阻害されたが,26Sプロテアソームのチロシンリン酸化が亢進する結果は得られなかった。結合様式にっいては今後さらに詳細な解析が必要である。
中国に入った日本文学の翻訳のあり方-夏目漱石から村上春樹まで-

1.中国語に翻訳された日本文学の目録(1919年1949年:単行本編)の作成従来の漢訳日本語書籍の目録は主なものでも幾つもあるが、そのいずれも、日本語の原題名を明示せず、ただ原作者と訳者と漢訳名と訳出の時期を記したものがほとんどであった。当研究は、原題名を調査して明示することによって、日本文学のいかなる作品が漢訳されたのかを初めて具体的に提示した。以前のカード化に変わる各種のソフトの発展は目録作成という作業を簡素化させてきてはいるものの、こうした目録の作成は訳本の内容から原文の題名を確定するという膨大な手間を必要とした。そのため、こうした作業につきものとはいえ、調査の行き届かなかったものや思わぬ勘違いなどがあると思われる。またさらに、雑誌類に訳出された日本文学の作品目録も一定程度手をつけており、今後同じく原題名を調査して、今回の成果と併せて近い将来公表したいと考える。2.中国語訳に関する論文研究分担者の各自の問題意識に従って、以下の論文をまとめた。・池上貞子「翻訳の可能性と限界をめぐる一考察-川端康成著・唐月梅訳「古都」を中心に」・小林二男「中国における日本文学受容の一形態-周作人の「日本近三十年小説之発達」と相馬御風の「明治文学講話」「現代日本文学講話」をめぐって」・渡辺新一「<吾輩は猫である>はどう漢訳されているか」これらはいずれも、翻訳という作業が異文化を跨いでおこなわれる刺激にみちた行為であることを共通の前提とした当研究の偽らぬ成果の一部といえ、各自の論文の指し示す方向性と問題意識は今後さらに深めていくことが求められている。1.中国語に翻訳された日本文学の作品リストを作成するための予備的作業として、(1)五四から1949年の解放まで、(2)解放後の17年間、(3)文革時期、(4)1976年以降現在まで、のように時代区分し、各時期の先行する業績を調べた。(1)に関しては比較的詳細な資料が存在するが、その他の時期、特に(4)に関しては網羅的に収集するのはかなり困難であると思われる。しかし、リストの資料的価値は正確性とともに網羅的であることにあるので、出来うる範囲で完全なリスト作成を指向することとし、まずは『中国新文学大系(10)』などにより、(1)のリスト作成を急いでいる。2.具体的な作品に即して日本語原文と中国語訳文を比較検討し、その作家固有のものを含む日本的なるもの(こと)がどのように中国語に訳されているかを、以下の分担で2003年夏をメドに検証することとした。なお、検証作業の過程で作家および作品は変更の可能性がある。池上貞子:高樹のぶ子作・徐静波訳『時を青く染めて』、小林二男:大岡昇平作・尚侠訳『野火』、渡辺新一:大江健三郎作・王中訳『性的人間』。3.研究代表者が3月に復旦大学日本研究中心の徐静波氏および清華大学中文系の王中氏と会い、上述の1.に関する中国側の資料を調査し、さらに日本語と中国語の混在するデータベース化のさいに予想される諸問題について打ち合わせる。また、2.に関して今後の検討課題を詰める。1.中国語に翻訳された日本文学の作品リストを作成するために、(1)五四から1949年まで、(2)解放後の17年間、(3)文革時期、(4)1976年以降現在まで、と区分して各時期の先行する業績と実際の状況を調べた。その結果、(4)に関してはかなり膨大な時間と労力が必要であることが判明した。

(1)に関して、『中国翻訳日本文学年表』(未発表)と『中国日本学文献総目録』(北京日本学研究中心編)を基に、単行本部と雑誌等掲載部に分けてリスト化する作業に着手した。2.具体的な作品に即して日本語原文と中国語訳を比較し、その作家固有のものを含む日本(語)的な表現がどのように翻訳されているかを、研究分担者の個々の関心に即して検証することにしていたが、当初の予定から若干の変更があり、以下の題目で各自がまとめている。池上貞子:「<女ことば>はどう中国語訳されているか--高樹のぶ子の作品を通して」、小林二男:「周作人における日本文学紹介の一側面」、渡辺新一:「「吾輩は猫である」の中国語訳が語るもの」。なお、検証作業の過程で作家および作品は変更の可能性がある。3.研究分担者の池上貞子が2月に復旦大学日本研究中心の徐静波氏および清華大学中文系の王中忱氏と会い、上述の1.に関する中国側の資料を調査し、さらにオリジナルの作品名を特定する際の問題点および中国語と日本語が混在するデータベース化の作成の際に予想される問題点について、意見の交換と打ち合わせをおこなった。1.中国語に翻訳された日本文学の作品リストを作成する過程で、予想される仕事の量を考慮に入れ、(1)五四から1949年までに期間を限る、(2)単行本所収の作品と雑誌類掲載の作品に分ける、(3)前年度までに構想しすでに着手していた解放後文革期までの翻訳作品リストの作成は当面の作業から外す、ことを確認して各自の分担作業を行った。その際、各種の先行する文献を検討した結果、王潔白編『中国訳介日本文学年表』を主に参照することにし、日本語の原文名については分担研究者が参考資料を分担して確定にあたった。判明できない作品を残すことになった。(2)の雑誌類掲載の作品に関しては、なお相当困難で量的にも多大な作業であることが判明したので、今後に回すことにした。2.具体的な作品に即して日本語原文が中国語にどのように訳出されているかを、研究分担者の個々の関心に即して検証することにしていた。当初の予定から若干の変更があり、具体的には、池上貞子:「川端康成の「古都」をめぐって」、小林二男:「中国における日本文学受容の一形態」、渡辺新一:「「吾輩は猫である」はどう漢訳されているか」を執筆した。3.4月からすすめてきた各自の作業を確認するため、平成十六年暮に伊豆のルネッサ赤沢で合宿をおこなった。さらに、不明である中国語の単行本を確認するために、渡辺が北京に出張し国家図書館で実物を調査し、海外研究協力者である清華大学中文系の王中忱氏と調査の協力と打ち合わせをおこなった。
藻場造成による湖沼生態系修復技術に関する研究-ニューラルネットワークを利用した中海アマモ場造成手法の提案-

研究の最終年度として,アマモ生成密度に寄与する環境要因として,水温,塩分,水深,光量,流速,底質,砂面変動量を抽出し,各アマモ場造成試験データをもとに,ニューラルネットワークを構築しその認識率を検討した.さらに得られたネットワークに対して,感度解析を行い,各要因がアマモの株密度にどのように影響するかを調べ,藻場造成に適した環境要因ならびに造成条件を明らかにした.解析に使用した調査データは,鳥取県中海水域,瀬戸内海域,九州沿岸域など全部で57地点のデータである.得られた結果を要約すると以下のようである.1.水底勾配は0に近ければ近いほど,アマモの生育には好適である.2.光量はアマモ場生成に重要な要素の1つで,光量が多いほどアマモ密度が向上する.3.ホトトギス貝は,アマモの競合生物で,アマモの生育水深のうち比較的,砂の安定度の高いところでマット状に分布する.ホトトギス貝がマットを形成されるとアマモの密度が下がる.4.海水流動の作用としては,栄養塩の補給,代謝老廃物の排除,懸濁物質の藻体への付着・育成基盤への堆積防除,胞子・卵の分布拡大などがあるが,アマモ場に必要な流速は3.3(cm/s)がよい.以上である.本研究では,中国,九州域で行われてきた藻場造成のデータを使用したが,全国的に網羅することができなかった.今後さらに多くのデータを収集して同様の解析を行う必要がある.研究の最終年度として,アマモ生成密度に寄与する環境要因として,水温,塩分,水深,光量,流速,底質,砂面変動量を抽出し,各アマモ場造成試験データをもとに,ニューラルネットワークを構築しその認識率を検討した.さらに得られたネットワークに対して,感度解析を行い,各要因がアマモの株密度にどのように影響するかを調べ,藻場造成に適した環境要因ならびに造成条件を明らかにした.解析に使用した調査データは,鳥取県中海水域,瀬戸内海域,九州沿岸域など全部で57地点のデータである.得られた結果を要約すると以下のようである.1.水底勾配は0に近ければ近いほど,アマモの生育には好適である.2.光量はアマモ場生成に重要な要素の1つで,光量が多いほどアマモ密度が向上する.3.ホトトギス貝は,アマモの競合生物で,アマモの生育水深のうち比較的,砂の安定度の高いところでマット状に分布する.ホトトギス貝がマットを形成されるとアマモの密度が下がる.4.海水流動の作用としては,栄養塩の補給,代謝老廃物の排除,懸濁物質の藻体への付着・育成基盤への堆積防除,胞子・卵の分布拡大などがあるが,アマモ場に必要な流速は3.3(cm/s)がよい.以上である.本研究では,中国,九州域で行われてきた藻場造成のデータを使用したが,全国的に網羅することができなかった.今後さらに多くのデータを収集して同様の解析を行う必要がある.1.アマモ場造成に関するアンケート調査:これまで全国で行なわれてきたアマモ場造成の実状を把握するために,アンケート調査を行い,造成方法,造成地の環境条件ならびに造成後の経過等について調べた。その結果、大半の事業が十分な造成事前調査を行っておらず,また造成終了後のモニタリングもなく,経過も必ずしも良くない状況にあることがわかった。2.中海のアマモ繁茂地の環境調査:中海のアマモ繁茂地の環境調査データから,アマモは、緩勾配の砂質、砂泥域に生息していること,繁茂水深は,光が十分に届く水深2m程度であることなどがわかった。3.ニューラルネットワークによるアマモ場造成手法の検討:1.のアンケート調査結果をもとに,アマモ場ネットワークをニューロシステムによって構築した。ネットワークへの入力データは,造成方法や、物理環境データ,化学的環境データならびに生物量データである。一定の学習回数のもとにニューラルネットワークを構築し、その認識率を検証した。その結果、80%以上の認識を得た。さらに、同じニューラルネットワークによって、造成手法ならびに物理環境要因が,アマモの株密度にどのような影響をおよぼすかについて感度解析を行って検討した。その結果、現在のアマモ場造成の指針とほぼ一致することがわかった。研究の最終年度として,アマモ生成密度に寄与する環境要因として,水温,塩分,水深,光量,流速,底質,砂面変動量を抽出し,各アマモ場造成試験データをもとに,ニューラルネットワークを構築しその認識率を検討した.さらに得られたネットワークに対して,感度解析を行い,各要因がアマモの株密度にどのように影響するかを調べ,藻場造成に適した環境要因ならびに造成条件を明らかにした.解析に使用した調査データは,鳥取県中海水域,瀬戸内海域,九州沿岸域など全部で57地点のデータである.得られた結果を要約すると以下のようである.1.水底勾配は0に近ければ近いほど,アマモの生育には好適である.2.光量はアマモ場生成に重要な要素の1つで,光量が多いほどアマモ密度が向上する.3.ホトトギス貝は,アマモの競合生物で,アマモの生育水深のうち比較的,砂の安定度の高いところでマット状に分布する.ホトトギス貝がマットを形成されるとアマモの密度が下がる

.4.海水流動の作用としては,栄養塩の補給,代謝老廃物の排除,懸濁物質の藻体への付着・育成基盤への堆積防除,胞子・卵の分布拡大などがあるが,アマモ場に必要な流速は3.3(cm/s)がよい・以上である.本研究では,中国,九州域で行われてきた藻場造成のデータを使用したが,全国的に網羅することができなかった.今後さらに多くのデータを収集して同様の解析を行う必要がある.
生体適合性接着剤を用いた膵瘻予防法の開発

膵瘻モデル、膵消化管吻合モデルにおいて、2週間では、BCB群はNVによる被覆効果を認め周囲臓器との癒着が軽度であったのに対し、FG群では被覆が不十分で、周囲臓器との癒着が高度であった。8週間では、BCB群で膵瘻部、吻合部が線維性の被膜に覆われて、周囲との癒着はほとんどないのに対し、FG群では感染を伴う仮性嚢胞を形成し、周囲臓器との癒着が高度であった。組織学的には、BCB群では被覆部も本来の膵組織が持つ組織学所見を保っているのに対し、FG群では炎症細胞浸潤と線維芽細胞の極度の集中が目立ち、臓器の組織所見は保たれてなかった。BCBは従来のFGよりも効果的に膵瘻を予防できる可能性が高いと考えられた。本研究は大動物を用い、我々が開発している生体親和性接着剤(Biocompatible Bond; BCB)と生体吸収性素材を用いた膵損傷部における膵瘻予防効果を、従来法であるフィブリン糊(FG)を用いた方法と比較検討することにある。初年度は、BCBの物理的強度について、摘出腸管を用いて計測し、従来医療用に用いられているFGと比較することにある。BCBの物理的シーリング力はFGより5-6倍強いことが確認でき、膵瘻部へのBCB塗布実験を開始している。膵瘻予防効果に関しては短期的な効果を確認できており、日本膵臓学会にて学会発表を予定している。実験計画における(i)、(ii)の一部はすでに完遂している。各群の実験個体数、術後8週以上の経過観察や、シーリング部の組織学的評価を今後行っていく予定である。腹部外科手術に伴う膵液瘻は、外科学が進歩した現在でもなお難治性であり一度発症すると重篤な合併症を引き起こす。膵瘻の予防策として様々なものが報告されているが、それらの効果は十分とはいえない。膵液瘻を予防するには、損傷した微小膵管からの膵液漏出をシーリングし、この部分を正常に治癒させることが必要である。本研究は大動物を用いて、我々が開発している生体親和性接着剤(Biocompatible Bond; BCB)と生体吸収性素材を用いた膵損傷部における膵瘻予防効果を、従来法であるフィブリン糊(FG)を用いた方法と比較検討することにある。BCBが今までにない膵瘻予防効果を認め、生体内で安全に使用可能であることが証明されれば、膵臓外科における多大な躍進となる可能性がある。初年度は、BCBの物理的強度について、摘出腸管を用いて計測し、従来医療用に用いられているFGと比較した。結果としてはBCBの物理的シーリング力はFGより5-6倍強いことが確認でき、次年度からは物理的膵瘻部へのBCB塗布実験を開始した。膵瘻予防効果に関しては短期的には良好な効果が確認できており、日本膵臓学会にて学会発表を行った。今年度はさらに実験動物を増やして膵消化管吻合部へのBCB塗布実験を進め、術後8週以上の長期経過観察や、シーリング部の組織学的評価を進めてBCBの臨床適応の可能性について検討する。内容については日本外科系連合学会にて発表予定である。物理的シーリング力が強化できることが確認できており、膵瘻部の塗布実験も予定通り行うことができている。膵瘻のシーリングについても短期的に良好であることが確認できている。【結果】耐圧試験においては、BCB群はFG群に比べて有意差を持って強固であることが示された。膵瘻モデル、膵消化管吻合モデルにおいては、シーリング後1週間の時点では、BCB群でネオベールによる強固な被覆効果を認め周囲臓器との癒着も軽度であったに対し、FG群ではネオベールの一部が脱落していて被覆が不十分であり、周囲臓器との癒着が高度であった。シーリング後8週間の時点になると、BCB群では膵瘻部、吻合部が線維性の被膜に覆われており、周囲との癒着はほとんど認められなくなっていた。一方でFG群では膵瘻部、吻合部は一部感染を伴う仮性嚢胞を形成し、周囲臓器との癒着は高度であった。組織学的には、BCB群では被覆部も本来の膵組織が持つ組織学所見を保っているのに対し、FG群では炎症細胞浸潤と線維芽細胞の極度の集中が目立ち、もともとの臓器の組織所見は保たれておらず、高度の炎症反応を呈していることが確認された。【考察】BCB群では、FGに比べ、初期段階において強固なシーリング能力があり、膵瘻の発生を十分に予防していると判断できた。長期間での観察にては周囲臓器との癒着もほとんど認められず、異物反応に伴う有害事象も少ないと考えられた。FG群ではシーリング能力が低いため膵瘻を発症し、長期的に見ると、その部分が過度の炎症とそれに伴う周囲臓器との癒着、感染などの異物反応の原因となっていた。BCBは従来のフィブリン糊による固着よりも、膵損傷部にネオベールを強く固着させ、膵瘻を予防できる可能性が高いと考えられた。

8週間では、BCB群で膵瘻部、吻合部が線維性の被膜に覆われて、周囲との癒着はほとんどないのに対し、FG群では感染を伴う仮性嚢胞を形成し、周囲臓器との癒着が高度であった。組織学的には、BCB群では被覆部も本来の膵組織が持つ組織学所見を保っているのに対し、FG群では炎症細胞浸潤と線維芽細胞の極度の集中が目立ち、臓器の組織所見は保たれてなかった。BCBは従来のFGよりも効果的に膵瘻を予防できる可能性が高いと考えられた。実験動物の個体数を増やして、研究計画通り各群10頭を目標に実験を行っていく。各群の実験個体数を増やし、術後8週以上の長期経過観察や、シーリング部の組織学的評価を追加で行っていく予定である。学会発表についても行う予定としている。膵臓外科初年度は、BCBの物理的強度について、摘出腸管を用いて計測し、従来医療用に用いられているFGと比較することにある。次年度はBCBの物理的シーリング力を用いた膵瘻部へのBCB塗布実験を行う予定である。実験計画に沿っておおむね順調に進んでいるが、次年度に行う実験結果と合わせて学会発表や論文投稿を行う予定としたため、国内、海外への学会発表経費、英文校正費、論文投稿費などの差額が生じることになった。実験は概ね順調に進展に進展している。海外での学会発表がなかったため、次年度使用額が生じたと考えている。次年度は実験計画に基づいた研究を引き続き行う。また実験結果に基づいた研究成果について、国内、国外の学会発表、論文作成、投稿を予定している。実験頭数を増加して追加の実験を行い、長期経過観察とその組織的検査を加えて学会、論文発表を行う予定としている。
生体内ダイレクト・リプログラミングによる膀胱平滑筋の再生

膀胱線維化(Bladder fibrosis)は神経の異常によって膀胱の収縮が慢性的に妨げられた状態や、前立腺肥大症などによって排尿時に膀胱内の圧力が異常に上昇した状態が慢性的に続くと起こる、不可逆的な病態である。根本的治療はなく、最終的に排尿は不可能となりバルンカテーテル留置が必要となるため、新規治療の開発が切望されている。我々は最近、平滑筋細胞を誘導する手法を世界で初めて開発した。本研究ではこの技術を、bladder fibrosisに対する新しい再生医療の樹立につなげるための基礎実験を行う。
日本倫理思想史における中国文化要素-中国思想・漢学・漢文学等の生成・位置・変容

日本漢学の古代から近代にいたる、変遷、文化的位置について、「漢学--書記・生成・権威」と題する論文を発表、初期には優位であった漢学がやがて国文学によって外縁的な地位をもつに至り、両者のシンクレティズムが日本文化を形成していることを明らかにした。この論文は、スタンフォード大学より英文版が出版予定である。また、近世については、漢学の作用を受けながら国学が生起し、それが近世の思想・宗教空間において、一種の不安定な構造を持っていること、そのため宣長・篤胤などにおいて主体性確立をめぐっての思想的模索が行われ、それが近代においても未解決の問題となって残っていること等を、「国学の死生空間と魂の行くえ」論文で明らかにした。また近代文学については、「「杜子春」は何処から来たか--中国文学との比較における新しい試み」において、芥川竜之介に対する、中国文学の影響を明らかにして、その文学的意義を論じた。その他、研究協力者との共同研究によって、中国・日本の思想史の種々の場面について、漢学およびその周辺の諸思想のさまざまな位相を明らかにすることができた。1.日本のおける中国文化要素について、黒住が、「漢学--その書記・生成・権威」を発表(1997年3月-4月コロンビア大)、その改訂・補充を1997年中に行った。古代から近代までの日本の言語・思想史における漢字・漢学の位置づけ・変化等を通観した。2.中国における近世思想史の展開について、伊東が、1997年に2本発表した(次頁参照)。中国思想史を鳥瞰、近代への変化を思想と社会構造の相関をとらえた。3.その他黒住は、(1)1997年8月北京、(2)同12月シンガポール国立大学、(3)1998年1月アメリカUCLAにおいて東アジア儒教関連の発表を行った。4.黒住と伊東とで、月に一度研究会をもち、中国・日本の漢字の交流関係について資料収集およびその検討を行った。この作業は、来年度もつづける予定である。1.まず理論的・地平的な側面において。漢学は、漢字という文字とともに訪れている。一昨年度以来行い、本年度初めに、その文字の働きが口話言語に対してもつ歴史的推移について広い観点から再把握し、また思想史的位置付けをはかった(「情報史」、「思想史」論文)。2.漢学が日本文化でもった位置について。漢学は言語文化の中で権威的ではあるが、しかし、トータルには、文化的アイデンティティを主張するものとして漢学を吸収しつつ浮上してくる和学によってある程度追い落としが行われ、結局両者の習合的関係が成立する。その歴史的・社会的文脈、教育との関連、テキスト生成の構造と変容等について、明らかにした(「漢学」、「思想と文学」、「国学の空間観」論文)。3.中国文化とともに伝わった仏教・儒教の責任観念について。仏教においては、責任の内的感受において発達が見られるものの、他面で結果責任について不問に付す構造があること、儒教はそれを補うものの、生命の世話を中心関心とする責任倫理であった、正義や公正の地平では弱点をもつこと等を明らかにした(「貴任論」論文)。日本漢学の古代から近代にいたる、変遷、文化的位置について、「漢学ー書記・生成・権威」と題する論文を発表、初期には優位であった漢学がやがて国文学によって外縁的な地位をもつに至り、両者のシンクレティズムが日本文化を形成していることを明らかにした。また、近世については、漢学の作用を受けながら国学が生起し、それが近世の思想・宗教空間において、一種の不安定な構造を持っていること、そのため宣長、篤胤などにおいて主体性確立をめぐっての思想的模索が行われ、それが近代においても未解決の問題となって残っていること等を、「国学の死生空間と魂の行くえ」論文で明らかにした。また近代文学については、「「杜子春」は何処から来たかー中国文学との比較における新しい試み」において、芥川竜之介に対する、中国文学の影響を明らかにして、その文学的意義を論じた。
レクチン組織化学法を用いた魚類耳石有機基盤の糖構造およびその合成・沈着経路の解明

耳石は耳石特有の有機基質に炭酸カルシウムが沈着して生長するとされる。本研究は、糖と特異的に結合するレクチンを用いて耳石有機基質の糖構造の決定、その産生細胞の特定および産生機構の解明を目的として行われた。材料としてニジマスの最も大きい耳石(扁平石)を包む内耳膜迷路である小嚢を用いた。研究結果の概要は以下の通りである。1.透過型電子顕微鏡観察により、小嚢上皮細胞を感覚細胞、支持細胞、移行上皮細胞、Mitochondria-rich cell(MRC)、扁平上皮細胞に分類した。MRCを除くすべての細胞が分泌活性を有するタンパク合成細胞であり、耳石形成に関与することを示唆した。2.MRCは、その微細構造はイオン輸送生細胞の特徴を有し、代表的なイオンポンプであるNa^+,K^+-ATPaseを高濃度に持つことを証明した。このことから、MRCは小嚢内リンパ液の特殊なイオン組成の形成にあずかるイオン輸送性細胞であると断定した。3.アルシアンブルー。PAS染色により、耳石には主として産生多糖類が、耳石膜には酸性多糖と中性多糖両方が含まれることを明らかとした。小嚢上皮のレクチン組織化学染色により、感覚上皮・移行上皮・扁平上皮細胞にはマンノース・N-アセチルグルコサミンが、支持細胞にはマンノースが含まれることを証明した。一方、ガラクトースやN-アセチルガラクトサミンが小嚢上皮に含まれる可能性は低いことを解明した。耳石抽出物を電気泳動・ウェスタンブロッティング後、レクチン(ConA)染色したところ、耳石基質タンパクの主要な成分はマンノースを含む糖タンパクであった。同様の成分は内リンパ液中にも存在した。これらのことから、小嚢上皮に含まれるマンノースの少なくとも一部は耳石基質タンパクと結合した後内リンパ液中に分泌され、耳石中に取り込まれることを示唆した。