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タイ文学の変遷と国家統治-社会,思想,作家たちの活動をめぐって-

*当該年度研究計画に従って調査地、タイとイギリスに赴き、先行研究(科学研究費補助金基盤研究(B))をより発展させた総括として調査研究の補完作業後、関係資料の分析・考察のまとめに着手し、研究成果報告の完成を目指した。1.当該文芸誌、文学作品、文献、史料の複写資料入手、あるいは閲覧(複写、複印刊行マイクロフィルム)の補完研究課題対象の作家たち、特にM. R. NimitmongkonとO. Udakornを中心として、また看過してはならない彼らと同時代の作家たちについて、彼らの文学活動に関連する資料入手と追跡調査の補完作業を行った。2.タイ、イギリス双方の共同研究者、及び専門家の助言、レクチャーを現地において受講タイ文学の研究を包括する深い研究課題であるため、研究内容が狭小にならないよう、また偏らないようタイ、イギリズの共同研究者、及び専門家たちの助言、レクチャーを聴講、意見交換を行った。3.研究成果発表(1)解説書執筆1)『タイ文学:入門から研究へ(1)-「タイを学ぶ本」(第2回)-』2)『タイ文学:入門から研究へ(2)-「タイを学ぶ本」(第3回)-』(3)講演1)公開講座「アジア学への招待:タイ現代文学の展開-社会、思想、作家たちの活動をめぐって-」共催:奈良県社会教育センター、天理大学、2006年6月2)「タイ文学と政治:2006.9.19クーデターその後」主催:関西ジャーナリストクラブ、2006年12月4.国の内外(タイ、中国)で開催された学会、セミナー、研究会に積極的に参加。*研究計画に従って、本年度は先ず研究対象の調査地の一つ、タイに赴き、先行研究(科学研究費補助金基盤研究(B))をより発展させた研究対象の重要文芸誌、文学作品、関連文学作品、文献史料の調査、収集、あるいは複写に専念し、本研究に不備、不足のないように実施した。また現地の共同研究者、研究者、専門家、あるいは協力者と緊密な連携をとり、意見交換、及び助言を仰ぎ、研究内容を深め、遜色のないよう努めた。1.当該文芸誌、文学作品、文献、史料の複写資料入手、あるいは閲覧(複写、複印刊行マイクロフィルム)に専念*上記に加え、本研究課題に関連する文学作品、史料、文献、資料の入手を積極的に図った。*当該文芸誌に関連する作家たちの文学活動について追跡調査を行ったが、中でも、研究対象作家の一人、M.R.Nimitmongkonについて、その作品追究、及び翻訳許可を受諾することができた成果は非常に大きい。2.現地においてタイ、イギリス双方の共同研究者、及び専門家の助言、レクチャーを受講タイ文学の研究を包括する深い研究課題であるため、研究内容が狭小にならないよう、また偏らないようタイ、イギリス(バンコクにて調査研究中)双方の共同研究者、及び専門家の助言、レクチャーを聴講した。3.収集した文芸誌、文学作品、文献、史料等の分類、整理前述した「研究目的」を効率よく遂行するために収集した原本、文献、関連史料の確認・分析、整理に着手した。4.当該研究課題について上記資料の分析、解読、考察に着手*当該年度研究計画に従って調査地、タイとイギリスに赴き、先行研究(科学研究費補助金基盤研究(B))をより発展させた総括として調査研究の補完作業後、関係資料の分析・考察のまとめに着手し、研究成果報告の完成を目指した。

1.当該文芸誌、文学作品、文献、史料の複写資料入手あるいは閲覧(複写、複印刊行マイクロフィルム)の補完研究課題対象の作家たち、敷特にM.R.NimitmongkonとO.Udakornを中心として、また看過してはならない彼らと同時代の作家たちについて、彼らの文学活動に関連する資料入手と追跡調査の補完作業を行った。2.タイ、イギリス双方の共同硯究者、及び専門家の助言、レクチャーを現地において受講タイ文学の研究を包括する深い研究課題であるため、研究内容が狭小にならないよう、また偏らないようタイ、イギリスの共同研究者、及び専門家たちの助言、レクチャーを聴講、意見交換を行った。3.研究成果発表(1)解説書執筆1)『タイ文学:入門から研究へ(1)-「タイを学ぶ本」(第2回-』2)『タイ文学:入門から研究へ(2)-「タイを学ぶ本」(第3回)-』(3)講演1)公開講座「アジア学へ招待:タイ現代文学の展開-社会、思想、作家たちの活動をめぐって-」共催:奈良県社会教育センター、天理大学、2006年6月2)「タイ文学と政治:2006.9.19クーデターその後」主催:関西ジャーナリストクラブ、2006年12月4.国の内外(タイ、中国)で開佳された学会、セミナー、研究会に積極的に参加。
蛋白質チロジン残基脱ニトロ化酵素の精製を機能解析

脱ニトロ化酵素の特異的基質であるヒストンH1.2は分子中にチロジン残基を一個だけ持つので、この近傍のアミノ酸配列からなる合成ペプチドを基質としてアッセイ系を組んだ。ペプチド中のABZ(Aminobenzoylgroup)は蛍光を持つが近傍にあるニトロチロジン残基によってクエンチされる。脱ニトロ化されてニトロ基が除去されるとクエンチング効果が無くなって蛍光を発するようになる。他方、ABZとニトロチロジン残基の間で切断が起こっても蛍光を発してしまうので、これを避けるため、ABZとニトロ基を持たない競合ペプチドを過剰量アッセイ系に加えた。上記アッセイ系を用いて、マウス肝臓から活性を示す画分を精製した。最終精製画分をSDS pageにかけ、Peptide Mass Fingerprinting法を用いて、酵素の同定を行った。その結果、得られた酵素は、新規のペプチダーゼであることがわかった。精製した酵素で基質ペプチドを反応後、低分子量画分を質量分析装置で解析したところ、ニトロチロジン残基近傍で切断された生成物の分子量に相当するピークが認められた。また、精製した酵素を用いて、種々の酵素学的検討を行った結果、この酵素は1)ニトロチロジンを含むペプチドを優先的に切断すること、2)遊離ニトロチロジンによって競合阻害を受けることがわかった。また、3)この酵素を用いて、ヒストンH1.2蛋白質を用いた膜上脱ニトロ化反応(研究目的参照)が起こるかどうかを調べたところ、脱ニトロ化活性を示さなかった。以上のように、本研究は当初の研究計画とは異なり、脱ニトロ化酵素の同定には至らなかったが、一方でニトロ化修飾特異的ペプチダーゼ(NSP)という思いがけない新領域の発見に繋がった。現在、この酵素の生理的機能についての解析を進めている。1)脱ニトロ化酵素精製のためのアッセイ系確立:脱ニトロ化酵素の特異的基質であるヒストンH1.2は分子中にチロジン残基を一個だけ持つ。この近傍のアミノ酸配列からなる合成ペプチドを基質として、蛍光プレートリーダーを用いて脱ニトロ化活性を測定するためのアッセイ系を組んだ。ABZ(Aminobenzoyl group)とニトロチロジン残基をもつ基質ペプチドと、両者を持たないがアミノ酸配列が同じ競合ペプチドを合成した。両者の濃度比を振ってマウス肝臓抽出液を用いた蛍光アッセイを行ったところ、競合ペプチドによって抑制されない脱ニトロ活性が認められた。競合ペプチドが基質ペプチドの100倍以上存在するときに、蛍光アッセイで測定される活性は、ほぼ脱ニトロ化活性だけであると考えられた。2)種々の臓器における脱ニトロ化活性の測定:マウスの種々の臓器の抽出液について、競合ペプチドの存在下、非存在下でアッセイを行った。肝臓抽出液が最も高い活性を持っていることがわかった。3)脱ニトロ化活性の特牲:脱ニトロ化活性の特性を検討するため、肝臓抽出液に種々の操作を行って活性を測定した。この結果、EDTA存在下、脱塩カラム処理、透析では活性は失われないが、煮沸、トリプシン処理では活性が失われ、また、限外濾過では30kDa以上の分画に活性が認められた。これらのことから、脱ニトロ化活性の本体は蛋白質であることが示唆された。また、種々の塩濃度、pHの条件下で脱ニトロ化活性を測定したところ、NaCl150mM, pH=7.5という生理的条件下で最も活性が高かった。4)硫安沈殿による分画化:最終濃度40-60%飽和硫安溶液による、マウス肝臓抽出液の分画化を行い、脱ニトロ化活性を測定した。45%飽和硫安溶液では、活性が上清画分に存在したが、60%飽和硫安溶液ではほぼ完全に沈殿画分に移行した。

以上のように、本研究は当初の研究計画とは異なり、脱ニトロ化酵素の同定には至らなかったが、一方でニトロ化修飾特異的ペプチダーゼ(NSP)という思いがけない新領域の発見に繋がった。現在、この酵素の生理的機能についての解析を進めている。
ウシ象牙芽細胞の分泌するゼラチナーゼの役割

ウシ象牙芽細胞の培養期間中に、培養上清(基質であるマトリゲルを溶解する)を3日毎に回収し、このサンプルを0.2% gelatine zymographyにかけた結果、培養上清にMr.72,000と95,000のMMP-2とMMP-9の2種類の蛋白分解酵素の存在が確認された。そのうちMMP-2は培養初期では活性が低く、培養開始3から4週目(石灰化開始期;アルカリフォスファターゼの減少に伴い、オステオカルシンとミネラルの蓄積が開始される)に細胞突起の伸展、ALPの低下、基質の石灰化が起こるのと呼応して上昇すること、更にはこの時期のメディアをフォスフォフォリン(DPP)と酵素反応させ、リン蛋白に対する分解能を調べたところ、DPPを断片化することが判明した。また、3日毎のサンプルの全RNAを抽出し、RT-PCR法により培養基質を分解すると考えられる酵素のmRNAの発現を調べた。プライマーはヒトMMP-2(Biochem.J320,777-783,1996)、MMP-9(Biochem.J 320,777-783,1996)、GAPDH(J Steroid Biochem 57,349-355,1996)を用いた。その結果、MMP-2mRNAの細胞内メッセージの発現は、酵素活性とほぼ同時期であった。以上の知見からMMP-2は、石灰化のための細胞外リン酸化開始の引金となる、高分子のDPP分解の役割を担っていると示唆された。プライマーはヒトMMP-2(Biochem.J 320,777-783,1996)、MMP-9(Biochem.J 320,777-783,1996)、GAPDH(J Steroid Biochem 57,349-355,1996)を用いた。その結果、MMP-2 mRNAの細胞内メッセージの発現は、酵素活性とほぼ同時期であった。
精密サーボシステムの極限性能追及を目指した数理計画法に基づく制御器設計法の確立

本研究では,高速・高精度位置決め制御技術の極限性能追及を目指し,フィードバック(FB)制御におけるトレードオフ問題を追及可能なFB制御器設計法を確立した。提案法は,FB制御器の設計問題を効果的に数理計画問題に落とし込むことで,制御器構造とパラメータの両者をシステマティックに設計可能であり,従来の設計手法を超えるFB制御性能を獲得可能である。このことは,産業サーボシステムで経験される厳しい実問題を考慮した実験評価を通じて検証された。提案法は,本研究で扱った精密位置決め問題のみならず様々なFB制御問題に応用可能であり,本研究分野への波及効果が期待できる。本研究は,各種産業サーボシステムの極限性能追及を可能とする数理計画法に基づくフィードバック(FB)制御器設計法の確立を目的としている。平成28年度は,その基礎となるFB制御器設計理論の構築というステップであり,主に下記3点に取り組んだ。1.安定性・外乱抑圧性能を考慮した最適化問題の定式化:本研究で掲げるサーボ性能の極限追及は,FB制御器設計における安定性と外乱抑圧性能のトレードオフ追及を意味する。それを安定性制約下における外乱抑圧性能の最大化と捉えた数理計画問題に帰着するために,安定性はナイキスト線図上の不等式制約,外乱抑圧性能は等式制約あるいは評価関数として,線形行列不等式(LMI)や逐次2次計画法による最適化問題の枠組みで定式化した。2.産業サーボシステムの実問題を考慮したFB制御器設計法の検討:上記1の設計法をベースとして,産業サーボシステムでしばしば経験される稼働環境によるパラメータ変動・不確かさを考慮した,ロバスト安定・ロバスト外乱抑圧性能に係る最適化問題として拡張した。3.非線形パラメータ構造FB制御器に対する設計法への拡張:次年度に予定する極限性能追及アルゴリズムの構築を見据え,FB制御器構造をも自由度とするために,非線形パラメータ構造FB制御器に対する設計法について検討した。そこでは,非凸な評価関数が最適化問題の求解を難しくするため,評価関数を凸関数へと近似変換する方法を構築し,非線形パラメータ構造FB制御器を扱うことを可能とした。申請時の平成28年度研究計画・方法に従って,数理最適化問題に基づく安定性・外乱抑圧性能の性能追及問題の検討と基礎理論定式化が実施された。それらは,平成28年度購入したFFTアナライザを用いた実機検証によって,実課題に対する有用性も検証することができた。また,平成29年度に予定する極限性能追及アルゴリズムに向けてFB制御器構造も自由度として扱える可能性についても手応えを掴んでおり,順調な進捗である。研究成果の一部を国際会議にて発表し,その成果を広く公表できたと共に,学会において有識者と議論を交わすことで,多角的なアプローチによる研究推進に繋げることができた。産業サーボシステムの極限性能を追求するためのフィードバック(FB)制御器設計法の確立を目的に,平成29年度は,平成28年度に構築した数理計画法に基づくFB制御器設計法を基礎として極限性能追及アルゴリズムを構築・評価した。以下に,平成29年度の成果をまとめる。1.最適化問題の可解性と評価値解析に基づく極限性能追及アルゴリズムの構築:多様な構造自由度を有するFB制御器設計を数理計画法によって安定的に行うため,制御器の分子・分母パラメータを2種類の最適化アルゴリズムを組み合わせて設計するアルゴリズム構成を見出した。そして,指定する安定性制約下における外乱抑圧性能最大化問題の可解性と外乱抑圧性能の解析を効果的に行うことで,指定する複数の制御器構造の中から制御性能が最良となる構造・パラメータを一意に設計することが可能となった。2.ガルバノスキャナの特性変動に対するロバスト性能の実験評価:特性変動が生じた場合でも所望の安定性を確保し、かつ外乱抑圧性能を最大化する設計問題として,ガルバノスキャナに対して提案アルゴリズムを実験適用した。ある固定構造FB制御器に対する従来設計法と比較した結果,制御性能を30%以上向上するという優れた効果を得た。2年に渡る研究全体としては,概ね計画通りに進行し,数理最適化問題の可解性と評価値解析という独創的なFB制御器設計アプローチによって,従来技術では達成し得ない制御性能の追求をシステマティックに実行可能とする設計法を確立した。本技術は,様々な制御対象や制御問題への応用も可能であることから,メカトロニクス制御分野への波及効果が期待できる。また,本技術を基調とした将来的な研究課題も明らかになっており,更なる発展・展開も期待できる。平成29年度は,数理最適化の『可解性』と『評価値解析』による極限性能追及アルゴリズムの構築とその実験検証である。上期では,平成28年度の基礎理論をさらにブラシュアップし,数値シミュレーション環境を拡充して極限性能追及アルゴリズムに適した設計理論の見極めをスピーディに進めていく。下期は,産業サーボシステムに対する本研究の有効性を実験検証し,本研究を纏める。モーションコントロール
がん疼痛モデルにおけるオピオイド交差耐性の解明

これまでに、モルヒネを連日投与し耐性形成したSDラットに対し、レミフェンタニルを持続尾静注し、モルヒネとレミフェンタニルの交差耐性について研究を行った。SDラットを2群に分け、モルヒネ群と、対照として生食群とした。その結果、モルヒネ耐性形成したラットには、体性痛と内臓痛どちらにおいてもレミフェンタニルへの交差耐性が生じており、交差耐性は内臓痛に対してよりも体性痛に対してより強く生じることが示唆された。次に、オキシコドンとレミフェンタニルの交差耐性について研究を行った。SDラットを2群に分け、オキシコドン群と、対照として生食群とした。オキシコドン群は、オキシコドン耐性モデルラットの作成のため1日2回1.5mg/kgオキシコドンを6日間皮下投与し、1、5、7日目にオキシコドン皮下投与後、TF test、CD testを行いオキシコドン耐性形成を確認した。生食群は同様に生食を投与し、TF test、CD testを行った。オキシコドン群では7日目の抗侵害受容効果が1日目と比較してTF test、CD testともに有意に低下した。次に、オキシコドン群、生食群ともに8日目にレミフェンタニル10μg/kg/min持続尾静注を120分間行い、TF test、CD testを用いてオコシコドンとレミフェンタニルとの交差耐性を評価した。その結果TF testにおいて、オキシコドン群の抗侵害受容効果が生食群と比較して有意に低下した。オキシコドン耐性形成したラットには体性痛においてレミフェンタニルへの交差耐性が生じることが示された。これまでに、ラットにおけるモルヒネおよびオキシコドン前処置後のレミフェンタニル交差耐性について、TF test、CD testを行って明らかにした。ラットの耐性モデル作成に時間を要したため、当初の計画よりやや遅れている。がん疼痛に用いられるモルヒネ、オキシコドン以外のオピオイド、フェンタニル、タペンタドールを全身投与して耐性モデルラットを作成し、レミフェンタニルとの交差耐性を解析する。また、オピオイドの脊髄くも膜下投与によって耐性モデルラットを作成し、脊髄レベルでのレミフェンタニルとの交差耐性について解析する。モルヒネ群は、1日2回モルヒネ10mg/kgを9日間皮下投与し、モルヒネ耐性モデルラットを作成した。生食群は、生食を同様に9日間皮下投与した。侵害刺激に対する鎮痛効果の測定は、体性侵害刺激試験には尾に輻射熱を当て逃避行動を起こすまでの潜時を測定するtail flick (TF)test、内臓侵害刺激には直腸内挿入したバルーンを膨らませていき、腹壁の筋肉の収縮が見られる閾値を測定するcolorectal distention (CD)testを行った。1日目と10日目にモルヒネ5mg/kgを皮下投与し、TF test、CD testを行い、モルヒネ耐性形成を確認した。10日目の抗侵害受容効果は1日目よりもTF test、CD testともに有意差をもって低下していた。次に、モルヒネ群、生食群ともに、11日目にレミフェンタニル10μg/kg/min持続尾静注を120分間行った。前値、レミフェンタニル投与30分後、60分後、90分後、120分後、投与終了から30分後にTF test、CD testを行いモルヒネとレミフェンタニルとの交差耐性を評価した。TFを用いた体性痛に対するレミフェンタニルの抗侵害受容効果は、モルヒネ群では生食群と比較して、60分後、90分後、120分後で有意差を持って低下していた。CDを用いた内臓痛に対するレミフェンタニルの抗侵害受容効果は、モルヒネ群では生食群と比較して、90分後、120分後で有意差を持って低下していた。レミフェンタニル投与中のモルヒネ群内の時間経過による比較では、TFでは前値と比較して30分後は有意差があったが、60分後、90分後、120分後には有意差がなかった。一方、CDでは前値と比較して30分後、60分後、90分後、120分後すべてにおいて有意差を認めた。ラットにおける、モルヒネ前処置後のレミフェンタニル交差耐性について、TF test、CD testを行って明らかにした。ラットのモルヒネ耐性モデル作成に時間を要したため、当初の計画よりやや遅れている。また追加試験として、生食チャレンジ群を作成し、1日2回生食を9日間皮下投与し、1日目と10日目にモルヒネを皮下投与し、tail flick (TF) test、colorectal distention (CD)testを行った。(生食群では1日目と10日目も生食を皮下投与しTFtest、CD testを行った。)さらに11日目にレミフェンタニル持続尾静注を120分間行い、TF test、CD testを行った。

生食チャレンジ群では、生食群と同様に、モルヒネに対して耐性を形成していないこと、レミフェンタニルに対して交差耐性が生じていないことを確認した。次に、オキシコドンとレミフェンタニルの交差耐性について研究を行った。まだトライアル試験ではあるが、オキシコドン耐性モデルラットの作成のため1日2回オキシコドンを6日間皮下投与し、1日目と7日目にオキシコドン皮下投与後、TF test、CD testを行いオキシコドン耐性形成を確認した。7日目の抗侵害受容効果は1日目よりもTF test、CD testともに低下している傾向が見られた。次に、8日目にレミフェンタニル持続尾静注を120分間行い、TF test、CD testを用いてオコシコドンとレミフェンタニルとの交差耐性を評価したところ、TF testにおいて交差耐性が生じる傾向がみられた。ラットにおける、モルヒネ前処置後のレミフェンタニル交差耐性について、TF test、CD testを行って明らかにした。現在、ラットにおける、オキシコドン前処置後のレミフェンタニル交差耐性について研究を行っているところである。ラットの耐性モデル作成に時間を要したため、当初の計画よりやや遅れている。これまでに、モルヒネを連日投与し耐性形成したSDラットに対し、レミフェンタニルを持続尾静注し、モルヒネとレミフェンタニルの交差耐性について研究を行った。SDラットを2群に分け、モルヒネ群と、対照として生食群とした。その結果、モルヒネ耐性形成したラットには、体性痛と内臓痛どちらにおいてもレミフェンタニルへの交差耐性が生じており、交差耐性は内臓痛に対してよりも体性痛に対してより強く生じることが示唆された。SDラットを2群に分け、オキシコドン群と、対照として生食群とした。オキシコドン群は、オキシコドン耐性モデルラットの作成のため1日2回1.5mg/kgオキシコドンを6日間皮下投与し、1、5、7日目にオキシコドン皮下投与後、TF test、CD testを行いオキシコドン耐性形成を確認した。生食群は同様に生食を投与し、TF test、CD testを行った。オキシコドン群では7日目の抗侵害受容効果が1日目と比較してTF test、CD testともに有意に低下した。次に、オキシコドン群、生食群ともに8日目にレミフェンタニル10μg/kg/min持続尾静注を120分間行い、TF test、CD testを用いてオコシコドンとレミフェンタニルとの交差耐性を評価した。その結果TF testにおいて、オキシコドン群の抗侵害受容効果が生食群と比較して有意に低下した。オキシコドン耐性形成したラットには体性痛においてレミフェンタニルへの交差耐性が生じることが示された。これまでに、ラットにおけるモルヒネおよびオキシコドン前処置後のレミフェンタニル交差耐性について、TF test、CD testを行って明らかにした。がん疼痛に用いられるモルヒネ以外のオピオイド、フェンタニル、オキシコドン、タペンタドールを全身投与して耐性モデルラットを作成し、レミフェンタニルとの交差耐性を解析する。また、オピオイドの脊髄くも膜下投与によって耐性モデルラットを作成し、脊髄レベルでのレミフェンタニルとの交差耐性について解析する。
アグロバクテリウムを利用した作物の生理機能の転換とその利用に関する研究

1.富山県内の栽培バラやノイバラの腫瘍から、約60菌株のアグロバクテリウム属菌を分離し、TPU(Toyama Prefectural University)の菌株名を与え保存した。2.分離されたTPU-50,-54,-55,-57菌株は、細菌学的手法により、それらの分類学的所属を検討したところ、アグロバクテリウムチュメファシエンスでバイオバ-2と同定された。しかし、他の菌株は、生物学的性質やT-DNA型がアグロバクテリウム属菌に類似しているが、確定は出来なかった。3.サザンハイブリダイゼションの手法により、TPU菌株のT-DNA型について検討を進めたところ、分離されたTPU菌株のT-DNA型は、それぞれ特徴のある5型に分類できた。しかも、これらのT-DNA型は、標品の外国菌株のNIAES1724とA13型と全く異なることが明らかになった。オピン型は、分離されたTPU菌株の大部分において、ノパリン、アグロピン、ミキモピンが同定された。一方、TPU菌株には、rolBとrolCの遺伝子が存在することも明らかになった。4.TPU菌株をトマトやキュウリの下胚軸に接種したところ、腫瘍、カルス、不定根(毛状根)が胚軸の接種部分に発生した。これら形質転換体組織中のサイトカイニンやアブシジン酸を分析したところ、組織中の含有量は非接種組織に比べ著しく高くなることが明らかになった。この事は、高サイトカイン組織が、TPUの接種により作出できることを示唆している。5.TPU-57と-58菌株を種子繁殖用サツマイモの胚軸に接種し、得られたカルスを再分化培地で培養したところ、不定芽、不定根ならびに再生個体が認められた。これらの結果から、高サイトカイン作物の作出には、TPU菌株のベクター系を利用すれば極めて有利であることが明らかになった。1.アグロバクテリウムの探索:富山県内の栽培バラとノイバラから、59菌株のバクテリアを分離し、それぞれTPU名(TPU1TPU59)を付け保存した。菌株保存には新規に講入した「日立低温インキュベータ,CR-14」で行った。菌株の細菌学的性質:70項目による生理・生化学的性質について調査したところ、59菌株にはアグロバクテリシム属菌とエルビニア属菌が存在することが明らかになった。前者にはTPU49TPU57が、後者にはTPU14TPU28がそれぞれ相当した。菌株の生物学的性質:トマト,キュウリ,インゲンの下胚軸に、TPU1TPU57菌株を感染させたところ、クラウンゴール型と毛状根型にそれぞれ分類できた。また、オピンの種類は、オクトピン・ノパリン型、アグロピン・マンノピン型,ミキモピン型に分類できた。T-DNA型:HindIII制限酵素断片の分析結果から、分離菌株のT-DNA型は約5種類に分類できた。(1)アグロバクテリウムTPUシリーズの細菌学的性質:定法(60項目)によりTPU菌株の細菌学的性質について検討した結果,TPU-50,-54,-55,-57の4菌株はアグロバクテリウム属細菌のbiovar2の細菌学的性質とほぼ一致し,他のTPU-1,-2,-13,-14,

-19,-20,-25,-28,-29,-31,-33,-40,-44,-45,-48,-49の16菌株はアグロバクテリウム属以外の細菌であると判断された。(2)TPUシリーズのプラスミドDNAの性質:制限酵素断片のサザン分析の結果から,既知のアグロバクテリウムのサザンのパターンとも異る約5種のFDNA型に分類できることが明らかになった。、また,PCR法によってrol遺伝子の増幅を試みたところ,TPU-1,-18,-28,-33等でrolBまたはrolCに対するハイブリダイゼーションでも陽性のバンドが認められた。さらに,4菌株由来のrolB遺伝子のPCR産物の塩基組成を調べたことろ,国外菌A4とほぼ同じ配列を示した。(3)形質転換体の作出:形質転換組織(タバコ)から植物体の再生を試みたところ,TPU-16感染組織から植物体の再生が認められ,TPU-19のベクターとしての有用性が示唆された。(4)新しいベクター系の開発:(1)に示した16菌株のベクターとしての新規性が示唆された。(1).種子繁殖用サツマイモ(品種:ビッグワン)を用い,TPU-Y57、TPU-W57,TPU-オ試57,TPU-B58の4菌株の形質転換能について検討した。(2).4菌株の生物学的特徴について検定したところ,供試菌株全てがAgrobacterium tumefaciensと同定され,オピン型はミキモピンであった。(3).4菌株のサツマイモ胚軸における形態形式能力について調査したところ,全ての菌株で接種約50日目でカルス,不定根ならびに不定芽の発生が観察された。主要な結果は次の通りであった。a).TPU-Y57菌株.45個体の胚軸切片に接種したところ,ほぼ全ての接種部位にカルスの形成,不定根の発生が著しく認められた。とくに,不定根の数では,個体当たり15本以上の発生個体も認められた。しかし,不定芽(幼植物体)の発生個体は2個体のみであった。b).TPU-W57菌株.本菌株も45個体の胚軸切片に接種したところ,カルスの形成,不定根ならびに不定芽の発生能力はTPU-Y57菌株に比べて劣った。不定根と不定芽の発生個体は,前者では25個体,後者では1個体のみであった。c).TPU-オ試57菌株.36個体に接種したところ,ほぼ全ての個体にカルスの形成ならびに不定根の発生が著しく認められた.不定芽は1個体のみで発生が認められた。d).TPU-B58菌株.18個体に接種したところ,不定根と不定芽の形成は4個体のみで認められた。以上,不定芽(幼植物)を培養・順化し,それらの形質転換体作物の生理的機能について調査を進めた。
散在神経系から見る神経系の起源と進化

(1)ヒドラの散在神経系における神経伝達物質としてのペプチドの役割:ヒドラのペプチド性シグナル分子の大規模スクリーニング(300種以上のペプチドの分離・200種以上のペプチドのアミノ酸配列決定)のプロジェクトの進行により、10種以上の興味ある活性を持つ神経ペプチドを同定した。それらの全てについて抗体作製を行った。その結果、ヒドラのペプチドは神経ペプチドと上皮細胞に局在する上皮ペプチドに大別できることが判明した。また、数種のペプチドについては前駆蛋白質の遺伝子構造まで明らかになり、in situ hybridizationも成功した。(2)ヒドラの神経ペプチドの一般性:ヒドラのペプチドプロジェクトの中で、C末端にGLWamideの共通配列を持つ神経ペプチドが同定された。この抗体を使って、各種の動物に同種のペプチドが存在するか調べたところ、プラナリア・線虫・ミミズ・アプリシア・ショウジョウバエ・ヤムシ・メダカ・ウシガエル・ニワトリ・マウス・ラット・サルなど調べた全ての動物の神経細胞を染色した。哺乳類では、特に原始的な脳である辺縁系に細胞体があり、神経繊維は大脳皮質に伸びていた。(3)ヒドラの散在神経系における古典的伝達物質の存在・機能についての検討した。その結果、コリン類・アミン類のいわゆる古典的伝達物質については、抗体染色・ラジオイムノアッセイ・合成酵素の活性測定・HPLCによる物質同定・薬理学的検定・古典的な様々な染色法(アミン類の蛍光法)などの結果は、全て陰性であった。(4)神経網の形成機構については、再生系・出芽系・再導入系・正常成熟系などの沢山の実験系を用いて、また、神経網形成異常の突然変異体を同定し、そのキメラも用いて、制御要因を細胞レベルで明らかにした。更に、その分子機構に関連して、ヒドラの神経細胞の分化を促進する神経ペプチドと抑制する上皮ペプチドを同定(構造決定・化学合成・機能同定・抗体による局在決定)した。
極限的金属ヘテロ界面構造制御のための薄膜成長初期過程に関する研究

最終年度は、第一原理的電子論により大きな垂直磁気異方性を示すことが予想されるAu/Co-Fe人工格子を実際に分子線エピタキシ-法により作製し、その構造評価および垂直磁気異方性エネルギーの測定を行った。異なった種類の金属を数原子層レベルで交互に積層した金属人工格子は、自然界には存在しない新物質であり、垂直磁気異方性や巨大磁気抵抗効果など特異な物性が発見され、光磁気メモリ材料や磁気抵抗ヘッド材料などへの応用が期待されている。これらの新物性は異種金属間のヘテロ界面の存在による発現する。われわれはこれまでに第一原理的電子論に基づいて垂直磁気異方性エネルギーの理論計算を行ってきた。その結果、垂直磁気異方性に対しては、界面磁気異方性と歪誘導磁気異方性の二つが寄与していることを明らかにした。特に、界面磁気異方性は、界面での異なる金属間の電子軌道の混成の大小に依存し、その結果として磁気異方性がユニットセル当たりの価電子数の関数として表せることを見いだした。特に、Au/Co-Fe人工格子がユニットセル当たり2meVほどの大きな磁気異方性エネルギーをもつことを予測した。本年は、この系を実際に分子線エピタキシ-法を用いて作製し、理論計算通りの大きな垂直磁気異方性を示すことを確認した。以上の研究の結果、界面での価電子の数を制御することにより垂直磁気異方性の大きさをコントロールできることが明らかとなった。本年度は、Modified Embedded Atom Method(MEAM)を用いたサーファクタントエピタキシ-の理論計算を行い、どのような金属の組み合わせでサーファクタントエピタキシ-が起こり得るかということを明らかにした。異なった種類の金属を数原子層レベルで交互に積層した金属多層膜では、垂直磁気異方性や巨大磁気抵抗効果など特異な物性が発見され、光磁気メモリ材料や磁気抵抗ヘッドなどへの応用が期待されている。これらの新物性は金属ヘテロ界面構造に敏感であり、金属超薄膜の成長初期過程とヘテロ界面構造制御が重要なポイントである。本年度はMEAM法によるサーファクタントエピタキシ-理論計算を行った。基板Bの上に薄膜Aが1ML載った構造(A/B/B)と薄膜と基板の1MLが入れ替わった構造(B/A/B)のエネルギー差を計算した。B/A/B構造が安定である場合は、B上のAのヘテロエピタキシ-に際して基板原子が表面に現れ、成長表面を平坦化する可能性がある。逆にA/B/B構造の方が安定な系については、B金属のホモエピタキシ-においてA金属がサーファクタントとなり得る。B/A/B構造が安定なのは基板の表面エネルギーの方が小さい場合であることがわかった。Al/Pd、Al/Ptでは合金形成エネルギーが負の大きな値、すなわち合金を形成した方が安定であるため、基板の表面エネルギーの方が薄膜の表面エネルギーより2倍程度大きいにもかかわらず、B/A/B構造の方が安定となっている。逆に薄膜がbccの系では、基板の表面エネルギーの方が小さいがA/B/B構造の方が安定となるものが合金の形成エネルギーが正の場合に認められた。本年度は、理論的に大きな垂直磁気異方性を示すことが予想されるAu/Co-Fe人工格子を実際に分子線エピタキシ-法により作製し、その垂直磁気異方性エネルギーを測定するとともに、Modified Atom Method(MEAM)を用いたサーファクタントエピタキシ-の理論計算を行った。その結果、Au/Co-Fe人工格子がユニットセル当たり2meVほどの大きな磁気異方性エネルギーをもつことを予測した。

本年は、この系を実際に分子線エピタキシ-法を用いて作製し、理論計算通りの大きな垂直磁気異方性を示すことを確認した。また、MEAM法により分子動力学法による結晶成長のシミュレーションを行い、サーファクタントエキピタシ-の起こる微視的な機構を解明した。その結果、Ni上にあらかじめPbを蒸着しておくと、Niの三次元成長が回避され、二次元成長が促進されることが明らかとなった。
新規の脳特異的bHLH型転写調節タンパク質(KW8)の機能の研究

海馬スライスにおけるテタヌス刺激による長期増強(LTP)は、入力および出力特異性が特徴とされるように限局された領域の現象である。tetraethylammonium(TEA)処理では海馬の広い領域の神経細胞でLTPが誘引されると考えられる。TEA処理で発現が増大するクローンを検索しており、3個の神経組織に特異的な遺伝子(KW8、KZ3、HE5)を特定してきた。その一つKW8は、NeuroDとほぼ相同なbasic helix-loop-helix領域を持つ遺伝子であった。two-hybrid法で検討したところ、この蛋白質のC末側には転写活性作用があり、転写因子であることはほぼ確実であるが、その生理機能は未だ不明である。このタンパク質は日本の他の研究グループにてNDRF(Neuro D related factor)として、アメリカのグループでNeuro D2として、我々の報告の数ヶ月後に相次いで発表され、この因子の注目度を伺わせる。合成ペプチドを抗原とする抗体を作成しKW8蛋白質の発現を検討したところ、神経系組織ではリン酸化などの修飾を受けていることが明らかになった。(この修飾は培養細胞の過剰発現の実験では、COS細胞ではほとんど見られず、Neuro 2aで確認された。)マウスゲノムの解析では、成体由来のcDNAは二つのエクソンに由来するが、発生時に別のエクソンが組み込まれる可能性を検討している。HE5は神経突起伸長作用が培養細胞で見られ、norbinと命名した。norbinは中枢神経のみならず末梢神経の細胞質に存在していることを確認した。KW8ならびにnorbinのノックアウトマウス作成などによって生理機能の解明を今後目指す。ラット海馬スライスの長期増強(LTP)は記憶のモデルとして注目されている。その機構としてはカルシウム流入によるリン酸化カスケードの活性化などが提唱されている。近年、tetraethyl ammonium(TEA)処理によって海馬スライスをLTP状態にすることが報告された。TEA処理したスライスのメッセージと未処理の脳由来のメッセージの差分ライブラリーを作成し、LTPに関連した未知遺伝子の検索を行った。その結果得られたKW8とHE5に注目して研究を行っている。KW8は、大脳皮質、小脳、海馬といった脳組織特異的に発現がみられ、NeuroDのbHLH構造と高い相同性を示す領域を持つ新規のbHLH転写制御因子であった。また、その発現は、発生初期だけではなく、成体の脳組織でも観察された。bHLH構造を持つ遺伝子は、発生分化に関連する転写制御因子に多く見られるが、こうした遺伝子は、神経の可塑性にも関連している可能性も考えられる。LTPと関連した発現の変化は見いだされなかったが、in vivoでリン酸化していることが確認された。このリン酸化と生理現象の関係を今後は研究していきたい。一方、HE5も、神経組織特異的に発現がみられたが、特にモチーフ構造などは見られない新規の遺伝子であった。HE5を神経細胞株であるNeuro2A細胞に遺伝子導入したところ、神経突起の伸長が観察された。このことから、神経突起の伸長に関連する遺伝子とも考えられ、norbin(neurite-outgrowth related protein from rat brain)と名付けた。神経の可塑性における新たな神経回路形成には、神経突起の伸張が起こると考えられる。この遺伝子はTEA処理によって僅かながら発現が上昇した。現在、5'側が僅かに欠けるものの、reading frameをコードするエクソンを全て含むゲノムcDNAが得られたので、ノックアウトマウスのためのコンストラクトを作成中である。

従来より申請者は、TEA処理で発現が増大するクローンを検索しており、3個の神経組織に特異的な遺伝子(KW8、KZ3、HE5)を特定してきた。その一つKW8は、NeuroDとほぼ桓同なbasic helix-loop-helix領域を持つ遺伝子であった。two-hybrid法で検討したところ、この蛋白質のC末側には転写活性作用があり、転写因子であることはほぼ確実であるが、その生理機能は未だ不明である。合成ペプチドを抗原とする抗体を作成しKW8蛋白質の発現を検討したところ、神経系組織ではリン酸化などの修飾を受けていることが明らかになった。(この修飾は培養細胞の過剰発現の実験では、COS細胞ではほとんど見られず、Neuro 2aで確認された。)マウスでも神経細胞の核に局在していることが確認された。最近報告されたNDRFおよびNeuroD2はKW8と相同であることが確認された。マウスゲノムの解析では、成体由来のcDNAは二つのエクソンに由来するが、発生時に別のエクソンが組み込まれる可能性を検討している。発生の制御因子と類似のKW8は成体でも発現している。新たな神経回路の形成はある意味では分化と類似の過程であり、KW8が神経可塑性の制御因子であることが期待される。海馬スライスにおけるテタヌス刺激による長期増強(LTP)は、入力および出力特異性が特徴とされるように限局された領域の現象である。tetra ethylammonium(TEA)処理では海馬の広い領域の神経細胞でLTPが誘引されると考えられる。TEA処理で発現が増大するクローンを検索しており、3個の神経組織に特異的な遺伝子(KW8、KZ3、HE5)を特定してきた。その一つKW8は、Neuro Dとほぼ相同なbasic helix-loop-helix領域を持つ遺伝子であった。このタンパク質は日本の他の研究グループにてNDRF(Neuro D related factor)として、アメリカのグループでNeuro D2として、我々の報告の数ヶ月後に相次いで発表され、この因子の注目度を伺わせる。(この修飾は培養細胞の過剰発現の実験では、COS細胞ではほとんど見られず、.Neuro 2aで確認された。)マウスゲノムの解析では、成体由来のcDNAは二つのエクソンに由来するが、発生時に別のエクソンが組み込まれる可能性を検討している。HE5は神経突起伸長作用が培養細胞で見られ、norbinと命名した。norbinは中枢神経のみならず末梢神経の細胞質に存在していることを確認した。
Buerger病発症メカニズムにおけるTLR・CD40L遺伝的多型に関する研究

上記結果から、Buerger病の発症において、細菌やウイルスの感染免疫と関わるTLR pathwayとの関与が示唆される。血栓形成と関わる分子であるsCD40L遺伝子はX染色体に位置するため、今後性別をマッチしたコントロールを用いて、CD40Lの遺伝子多型とBuerger病との関連性を調べる必要がある。【研究1】TLR及びその下流分子の遺伝子多型とBuerger病の関連性を調べた。A)MyD88rs7744A>G多型:昨年の結果では、コントロールにおいてGG genotypeの頻度は15.9%に対しBuerger病は6.9%と有意に低かった(P=0.011, odds ratio=0.39, 95% confidence interval ; 1.13, 1.79)。したがってGG genotypeはBuerger病の抵抗性を示すことが示唆された。B)今年、追加解析としてMyD88rs7744A>G多型とTakayasu病の関連も調べた。Takayasu病でもGG genotypeの頻度が低下する傾向を示しているが、有意差がなかった(11.1% vs 15.9%, P>0.05)。この結果がBuerger病とTakayasu病との発症メカニズムの違いを示唆する。A)FPR1-FPR2領域のSNP rs4801893、rs11666254、rs2070745、rs2070746およびrs5030880とBuerger病の関連を調べた。コントロールにおいてrs11666254 CC genotypeの頻度は31.8%に対し、Buerger病は44.8箔と有意に高かった(P=0.016, odds ratio=1.74).,さらに、この五つのSNPが構成するHaplotypeの頻度を解析した。コントロールに比べ、Buerger病FPR1 TCCCT haplotypeの頻度は有意に高かった(P=0.0048, odds ratio=2.77)。したがって、FPR1 TCCCT haplotypeはBuerger病の感受性を示すことが示唆された。B)FPR1 TCCCThaplotypeが構成されるSNPはFPR1のpromoterとcoding領域に位置している。今、これらのSNPとFPRの発現、あるいは機能の関連を調べている。【研究1】TLR及びその下流分子の遺伝子多型とBuerger病の関連性A)FPR1-FPR2領域のSNPrs4801893,rs11666254,rs2070745,rs2070746およびrs5030880:コントロール群に比してBuerger病群では有意に高かった.この5つのSNPが構成するHaplotypeの頻度を解析するとコントロール群に比べBuerger病FPR1 TCCCThaplotypeの頻度は有意に高かった.従ってFPR1 TCCCT haplotypeはBuerger病の感受性を示すことが示唆された.
悪性黒色腫におけるPRAMEの蛋白質の発現分子機構と免疫療法への応用

基礎研究の一部については雑誌論文に投稿を行い、既に受理・公表された。しかし、大震災の影響で標本・検体やデータの一部を喪失してしまい、当初の予定よりも研究は大幅に遅延している状態である。今後も検体の収集ならびに免疫療法開発に向けての基礎実験を展開していくことにしている。早期に浸潤・転移をきたし、化学・放射線療法の奏効率の低い悪性黒色腫において、免疫療法は他の治療との合併療法の開発において重要なツールとして認知されている。がん免疫療法は、第一世代のBRM療法から、第二世代のサイトカイン療法、第三世代の非特異的免疫細胞療法を経て、第四世代の樹状細胞やがんワクチンによる「がん標的免疫療法」の開発の段階に入っている。我々は、悪性黒色腫において高発現しており、免疫療法の標的分子となりうるcancer-testis antigenであるPRAME遺伝子について分子機構の解析研究を進め、新たな治療法への礎としたい。H21年度は、研究計画のstap.1で示した、当科での悪性黒色腫切除検体、49例におけるPRAMEプロモーター領域におけるメチル化解析および、ΔΔCT法によるmi-211の定量はほぼ完了することができ、良好なdataを得ることができた。PRAME蛋白の発現制御機構にmi-211が関与していることは、我々が世界で初めて明らかにしており、免疫療法への基礎研究を継続し、その展望を広げることは、有効は治療法のない転移性悪性黒色腫の新たな治療法を開発する基礎研究となる。現在は、stap.2であるPRAME特異的モノクローナル抗体の作製、および切除検体の免疫染色を行いCTL担当細胞の集簇の評価を引き続き行っている状況である。H22年度は、研究実施計画にあるように、免疫療法開発に向けての基礎実験の準備も着実に進め、これまでのデータをまとめ、論文の公表も行う方針である。かん免疫療法は、第一世代のBRM療法から、第二世代のサイトカイン療法、第三世代の非特異的免疫細胞療法を経て、第四世代の樹状細胞やがんワクチンによる「がん標的免疫療法」の開発の段階に入っている。平成23年度では、平成22年度に施行しきれなかったPRAME特異的モノクローナル抗体による解析を終え、免疫療法開発に向けての基礎実験の準備を引き続き行う。さらにHLA-A*02拘束性のプラムペプチドを合成し、悪性黒色腫および健常人の末梢血から分離採取した単核球分画について、刺激培養を行い、培養上清のサイトカイン濃度、ELISPOT法で評価する。刺激培養したリンパ球を悪性黒色腫培養細胞株と混合培養し、細胞障害性についても検討する予定である。レチノイン酸とPRAME抗体のcombination therapyの妥当性について結果が出た場合、論文を作成し公表し、In vitroで有効な結果のえられたペプチドについて、xenograftでの腫瘍抑制効果を検討も併せて行うことにしている。がん免疫療法は、第一世代のBRM療法から、第二世代のサイトカイン第三世代の非特異的免疫細胞療法を経て、第四世代の樹状細胞やがんワクチンによる「がん標的免疫療法」の開発の段階に入っている。平成23年度では、平成22年度に施行しきれなかったPRAME特異的モノークローナル抗体による解析を終え、免疫療法開発に向けての基礎実験の準備を引き続き行う予定であった。しかし未曾有の大震災の影響で保存していた検体などが失われたこと、試薬の調達などに障害が生じたために平成22年までの研究成果を論文投稿することに時間を費やした(下記雑誌論文に投稿し、アクセプトされている。現在は、研究環境のついては復旧が済んでいる。再度目標の検体数を収集しており、目標数に到達し次第、悪性黒色腫および健常人の末梢血から分離採取した単核球分画について、HLA-A*02拘束性のブラムペプチドにて刺激培養を行う手はずとなっている。その結果をふまえて刺激培養したリンパ球を悪性黒色腫培養細胞株と混合培養し、細胞障害性についても検討する予定である。
高機能自閉症児における社会性障害の改善に関する研究

本研究は、高機能自閉症児の社会性障害が彼らに特有な自己制御機能から生成されるとの仮説のもとに、彼らの社会性障害を改善する方策を探ることを目的とした。高機能自閉症児の指さし行動や「不自然な動作」が、それぞれの行動への自己制御が乏しい「無制御期」、他者の指示とそれに対応する自己の動作の相補的な随伴関係をなぞる「他者制御期」、そして、内的活動が脱文脈的に顕現化してしまうことで指さしやその他の動作が不自然になる「自己制御期」、の質的に異なる時期区分に従うことが明らかになった。また、無制御期や他者制御期にみられる指さし行動は、他者の指さしの理解や日常生活動作の獲得といった適応の手段として出現するのに対して、自己制御期に出現する指さし行動や「不自然な動作」は、内的世界における活動が現実世界において脱文脈的に顕現化し、彼らの社会的な適応を阻む要因となっていることが示唆された。高機能自閉症児に見られるこうした内的世界への没入現象は、「自閉的ファンタジー」と呼ばれている。「自閉的ファンタジー」の出現の契機を明らかにするために、高機能自閉症児と特定の他者との関係性について共同注意行動を尺度として分析したところ、二者の関係性が希薄な時期よりも、むしろ愛着関係が成立した後に、「自閉的ファンタジー」の出現頻度が高くなることが分かった。この研究を受けて、現在、「高機能広汎性発達障害児の社会性障害とファンタジー世界への傾倒」(平成18年度平成21年度、基盤研究(C))でファンタジー世界への傾倒を防ぎ、社会性障害を改善する手立てを検討中である。本研究は、高機能自閉症児の社会性障害が彼らに特有な自己制御機能から生成されるとの仮説のもとに、硬直化した自己制御機能をもたらすことになった特定の他者モデルの取り込みに介入することによって彼らの社会性障害を改善する方策を探ることを目的とした。平成15年度は2名(A児、B児)の高機能自閉症児に関する生活場面のVTR資料、養育者の手記、担当保育士による観察記録などの資料を蓄積した。2名の資料のうち、A児については資料の集積を終了したが、B児については現在も継続中である。ここでは、既に資料の収集を終えたA児の指さし動作に関する分析結果を述べる。A児の指さし動作は、行動の制御機能に基づく時期区分ごとに明瞭な発達変化を示した。以下にその特徴をそれぞれの時期ごとに記述する。1)無制御期の終わり頃になって指さし動作の初出が見られた。しかし、その指さし動作は母親の動作を同型的になぞり、しかも身体軸までもなぞることで指示対象を探索しようとする、いわば「なぞり」としての指さし動作にその特徴があった2)他者制御期になると、他者の指示とそれに対応する自己の動作との相補的な随伴関係をなぞる指さし動作が出現した。3)自己制御期になると自他分化が成立し、自己と他者の相補的な関係性を基盤として自己の意図や要求を他者に伝達する、いわば他者志向性の明確な指さし動作が出現してきた。しかし、こうした指さし動作の出現頻度はきわめて低く、むしろこの時期を特徴づけるのは、肥大化した内的活動の一端が指さし動作として現実場面に侵襲して顕現化する非社会的な指さし動作であった。4)無制御期や他者制御期にみられる指さし動作は、他者の指さしの理解や日常生活動作の獲得といった適応の手段として出現するのに対して、自己制御期の指さし動作は内的世界の現実世界への侵襲として起こり、結果的に適応を阻む要因の一つとなっていた。高機能自閉症児の社会性障害が、彼らに特有な自己制御機能から生成されるとの仮説に基づき、彼らが示す「不自然な動作」に着目して、その認知・社会的な背景要因を検討した。

本年度は前年度に引き続き、対象とした2名の高機能自閉症児のうち、継続中のB児について観察資料の集積を行うとともに、すでに収録を終了したA児についても更なる分析を行った。A児については、既に指さし動作に焦点化した分析が終了している。それによれば、A児の指さし動作は、行動の制御機能に基づく時期区分ごとに明瞭な発達変化を示すことがわかった。この分析から、その妥当性が検証された制御の時期区分に基づいて、本年度はA児が示す「不自然な動作」の全般について検討を加えた。その結果、自閉症児が示す「不自然な動作」には、制御機能が関与しないものと、制御に依存するものがあることが判明した。制御に依存しない「不自然な動作」は、発達的な時期区分に関係なく一貫して出現していた。この動作は、従来、神経学的な背景のもとで論じられてきた現象と重なる特徴を持つが、神園(1988)が指摘した身体図式の未成立の枠組みで解釈できることが明白になった。一方、制御依存の「不自然な動作」は、制御機能の発達に伴う質的な変化によって大きく性質が異なった。他者制御期における「不自然な動作」は、他者の指示とそれに対応する動作の随伴性をなぞることで出現し、その不自然さは動作そのものではなく、動作が生起する文脈を背景にしたときに際立つものであった。自己制御期の「不自然な動作」は、規範やルールに合わせて自らの行動を制御しようとするがために結果として動作が不自然になってしまうタイプ1と、内的活動が脱文脈的に顕現化してしまうことで動作が不自然になるタイプ2の2種類が見出された。タイプ2はその出現率がタイプ1に比べて圧倒的に高く、高機能自閉症児の行動特性を如実に表していると推察された。本年度は、高機能自閉症児の対人社会性を阻害し、社会性障害を重篤化する要因としてのファンタジーへの没入現象に着目して、その出現の契機を明らかにした。一般に、自閉的ファンタジーは対人的な場面における不安や恐怖に対する自閉症児の防衛機制として出現するといわれている。つまり、ファンタジーに浸ることで外界との接触を遮断し、その結果、自己を防衛しているというのである。ところが、筆者の臨床経験によれば、対人的な不安や恐怖を喚起しがちな、いわゆる見知らぬ他者との接触場面においてはファンタジーへの没入は見られず、見知らぬ他者との愛着関係が構築され、見知らぬ他者が特定の他者となり、そして愛着対象として認識されるようになった段階で、ファンタジーへの没入現象が出現する傾向があった。このことを確かめるために、筆者は共同注意行動に着目して、高機能自閉症児と2名の大人の特定の他者との関係性を観察した。その結果、対象児の共同注意行動は関わりの初期には出現頻度が低く、その後セッションを重ねるにつれて次第に増加するものの、ある時点を頂点として減少に転じ、頂点に達するまでのセッション回数とほぼ等しい回数で関わりの初期の水準まで減少した。こうした傾向は、関わる相手が代わっても、同じ様相を示した。対象児と特定の他者との二者関係の分析から、共同注意行動の増加期は、対象児にとってまさに見知らぬ他者が特定の他者に変わり、その特定の他者への愛着を形成する時期と重なることが明らかになった。ところが、特定の他者を愛着対象とみなした関わりが成立してしばらくすると、対象児はファンタジーに浸ることが多くなり、結果として二者の関わりは次第に希薄になった。この結果は、自閉的ファンタジーが愛着関係を基盤とする対人関係の在り様によって規定されることを示しており、先述した筆者の臨床経験が実証的に確認された。