hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
病原菌の標的となる植物免疫因子の分子機能の解明

植物は、受容体を介して病原菌の構成成分を検出し、迅速な免疫応答を誘導する。一方、病原菌はエフェクターと呼ばれるタンパク質を植物の細胞内に送り込み、植物の免疫応答を抑制している。本研究では、植物受容体からの情報を細胞内に伝達する鍵因子であるOsRLCK185を同定し、その機能を明らかにするとともに、白葉枯病菌のXoo1488エフェクターがOsRLCK185の活性化を阻害することで感染を拡大していることを明らかにした。植物は、病原菌が感染した際、それぞれの病原菌を構成する因子を、病原菌に特有な分子パターン(PMAPs)として認識し、迅速な抵抗性反応を誘導する。このPAMPsの認識は、植物自身がもつ病原菌認識受容体を介して行われる。受容体が認識した情報は速やかに伝達され、様々な防御応答を誘導する引き金となるが、その信号伝達機構は不明である。我々は、白葉枯病菌が宿主の免疫反応を阻害するために、植物細胞内に分泌するエフェクターを利用して、新規な免疫因子OsRLCK2を単離した。OsRLCK2の過剰発現体では、キチンに応答した免疫応答が向上し、またOsRLCK2が細胞膜に局在することから、OsRLCK2が細胞膜に存在するキチン認識受容体であるOsCERK1と相互作用することが示唆された。そこで、酵母TwoHy brid法、免疫沈降法、BiFC法を用いて解析したところ、OsRLCK2は細胞膜上でOsCERK1と相互作用していることが明らかになった。また、OsRLCK2の抗体を作成し、生化学的な解析を行ったところ、キチンに応答してOsRLCK2がリン酸化されることが明らかになった。OsCERK1の細胞質ドメインは、タンパク質キナーゼドメインであることから、キチンを認識した活性化したOsCERK1によりOsRLCK2がリン酸化されている可能性が示唆された。さらに、OsRLCK2は、他の病原菌認識受容体とも相互作用することが明らかになった。これらの結果は、OsRLCK2が病原菌認識受容体からの信号を受け、それを下流に伝達することで、様々な防御応答を誘導していると考えられる。植物は病原菌の感染を認識した際、病原菌を構成する成分を、病原菌に特有な分子パターン(PAMP)として認識し、迅速な抵抗性反応を誘導する。このPAMPsの認識は、植物の細胞表面に存在する受容体を介して行われる。前年度までの解析により、イネのキチン受容体OsCERK1がキチンを認識して活性化されると、OsCERK1の細胞質キナーゼドメインに結合しているOsRLCK185をリン酸化することで、細胞内に情報を伝達していることが明らかになった。本年度、OsRLCK185のシロイヌナズナホモログとして、PBL27を同定した。PBL27も、OsRLCK185と同様に、シロイヌナズナのキチン受容体であるAtCERK1と細胞膜上で相互作用していることが明らかになった。また、in vitroリン酸化実験により、AtCERK1はPBL27を強くリン酸化することがわかった。そこで、PBL27の機能欠損変異体を単離し、キチンに対する応答を解析したところ、PBL27変異体では、キチンに応答したMAPKの活性化や防御遺伝子の発現が抑制されていることが明らかになった。一方、フラジェリンペプチドflg22に応答した防御応答に関しては、PBL27変異体と野生型の間で差が見られなかった。これは、in vitroリン酸化実験により、flg22認識受容体複合体の構成因子であるFLS2やBAK1により、PBL27がリン酸化されないことと一致していた。このように、イネとシロイヌナズナには、非常に似たキチン信号伝達機構が存在していることが明らかになった。植物は、病原菌が感染した際、それぞれの病原菌を構成する成分を、病原菌に特有な分子パターン(PAMPs)として認識し、迅速な抵抗性反応を誘導する。我々は、前年度までの解析により、白葉枯病菌のエフェクターの標的としてOsRLCK185を単離し、OsRLCK185がキチンやペプチドグリカンの認識に関わる受容体OsCERK1と相互作用することを明らかにした。OsRLCK185の発現抑制体を作出し、キチンやペプチドグリカンに対する免疫応答を解析したところ、両PAMPsに応答した防御遺伝子の発現が減少していることが明らかとなり、OsRLCK185がOsCERK1からのシグナルを細胞内に伝達していることが強く示唆された。また、OsRLCK185は、キチンに応答してリン酸化されるため、OsCERK1によって直接、リン酸化される可能性が示唆された。

そこで、in vitroキナーゼ活性測定法を用いて解析を行ったところ、OsCERK1は直接OsRLCK185の活性化ループにあるセリン残基とスレオニン残基をリン酸化することが明らかになった。さらに、Xoo1488によるOsRLCK185の阻害機構を解析したところ、Xoo1488は、OsCERK1によるOsRLCK185のリン酸化を阻害していることが明らかとなった。さらに、OsRLCK185発現抑制体では、キチンに応答したMAPキナーゼの活性が抑制されていることが分かった。OsRLCK185は、OsCERK1からのシグナルをMAPキナーゼカスケードに伝達する役割を果たしていると考えられる。23年度は、OsRLCK2とエフェクターおよびキチン認識受容体OsCERK1との相互作用解析を行うことを計画していたが、それらの相互作用の解析に加えて、OsRLCK2がキチンに応答してリン酸化修飾を受けることを見出した。この結果は、OsRLCK2がOsCERK1によりリン酸化により信号を受け取っていることを強く示唆するものであり、今後の研究の遂行に大きく寄与するものになった。25年度が最終年度であるため、記入しない。植物免疫応答において、病原菌認識受容体の下流で、MAPキナーゼが活性化され、それに引き続いて様々な免疫応答が活性化されることがよく知られていたが、受容体からMAPキナーゼにどのように情報が伝達されているかは不明であり、植物免疫応答のブラックボックスの一つとなっていた。OsRLCK185発現抑制体では、キチンに応答したMAPキナーゼの活性化が抑制されていることから、OsRLCK185がOsCERK1からの信号をMAPキナーゼに伝達していることが明らかとなり、OsRLCK185が受容体とMAPキナーゼを繋ぐ分子であることがわかった。その成果は、Cell Host & Microbeに掲載された。OsRLCK2がOsCERK1によるリン酸化修飾によって信号を受け取っていることが明らかになったので、OsCERK1によってリン酸化をうけるOsRLCK2のアミノ酸残基を特定し、OsRLCK2の活性化機構を明らかにする。また、エフェクターがOsRLCK2の活性化にどのような影響を与えているかを明らかにする。さらに、OsRLCK2が情報を伝達する植物免疫因子を同定する。OsRLCK185が、キチン受容体であるOsCERK1からの信号をMAPキナーゼカスケードに伝達していることが明らかになった。このことから、OsRLCK185がMAPキナーゼの活性化の起点となるMAPKKKを直接、活性化している可能性が示唆される。そこで、OsRLCK185が相互作用するイネのMAPKKKを同定し、OsRLCK85によるMAPKKKの制御機構を、分子生物学的および遺伝学的に解析する。
ケモカインによる好酸球の肺血管内皮細胞への接着と間隙遊走の調節機序の解析

2.各種遊走因子が好酸球のVCAM-1発現血管内皮細胞間隙遊走におよぼす効果:Transwell insertsのフィルター上で、HPMECをTNF-α+IL-4で24時間刺激しVCAM-1の発現を誘導した。好酸球浮遊液をその上室に、各種遊走因子を下室に入れ3時間培養し、好酸球の下室への遊走率を測定した。C-Cケモカイン(RANTES,eotaxin,eotaxin-2,MCP-3,MCP-4)による好酸球の内皮細胞間隙遊走は、無刺激のHPMECに対し、VCAM-1発現誘導HPMECで有意に増強した(p<0.05)。これに対しPAF,FMLP,IL-5,GM-CSF,IL-8,MCP-2による好酸球の内皮細胞間隙遊走はHPMEC刺激の有無で差はみられなかった。4.まとめ:以上の成績よりC-Cケモカインによる好酸球遊走能は、α4-インテグリン/VCAM-1を介した好酸球・内皮細胞相互作用により選択的に増強される可能性が示唆された。1.肺微小血管内皮細胞上のICAM-1,VCAM-1の発現肺微小血管由来内皮細胞を96穴カルチャープレート内で培養し,サイトカインで24時間刺激した後,FLISA法にてICAM-1,VCAM-1の発現を測定した.ICAM-1の発現はTNF-α単独とTNF-α+IL-4(各100pM)とでは有意差はみられなかったが,VCAM-1の発現はTNF-α単独では0.167±0.034,TNF-α+IL-4では0.691±0.057(O.D.at490nm,n=3)でありTNF-αとIL-4との組み合わせにより有意な発現の増強が観察された(p<0.0001).2.C-Cケモカインが好酸球のVCAM-1発現血管内皮細胞間隙遊走におよぼす効果つぎにCell culture insertsのフィルター上で内皮細胞をTNF-αとIL-4で24時間刺激しVCAM-1の発現を誘導した.この条件下で末梢血より分離した好酸球浮遊液を上室に,さらに各種好酸球に対する刺激因子を下室に入れ,3時間培養後に好酸球の遊走率を好酸球ペルオキシダーゼをOPD試薬で発色することにより測定した.PAFおよびIL-5による好酸球遊走は内皮細胞の刺激の有無に関係なく同程度に観察された(PAF:無刺激16.9±4.1%,刺激あり18.7±4.1%,IL-5:無刺激6.0±0.6%,刺激あり8.9±1.8%).これに対し,C-Cケモカインによる好酸球の遊走は,無刺激の内皮細胞に対しTNF-α+IL-4刺激内皮細胞で有意に増強されることが観察された(RANTES:無刺激23.7±4.0%,刺激あり43.6±8.4%,Eotaxin:無刺激17.3±2.7%,刺激あり33.4±3.4%,p<0.05).これらの結果は好酸球血管内皮細胞間隙遊走はVCAM-1発現下で増強されることを示唆している.現在は遺伝子組み換えICAM-1,VCAM-1および抗インテグリン抗体を用いてその機序の解明を検討中である.Cell culture insertsのフィルター上で、肺微小血管内皮細胞(HPMEC)をTNF-α+IL-4で24時間刺激しVCAM-1の発現を誘導した。末梢血より分離した好酸球浮遊液をその上室に、各種好酸球遊走因子を下室に入れ3時間培養し、好酸球の下室への遊走率をOPD試薬にて測定した。C-Cケモカイン(RANTES,eotaxin,eotaxin-2,MCP-3,MCP-4)による好酸球の内皮細胞間隙遊走は、無刺激のHPMECに対し、VCAM-1発現を誘導したHPMECで有意に増強した(p<0.05)。

一方、PAF,FMLP,IL-5,GM-CSF,IL-8,MCP-2による好酸球の内皮細胞間隙遊走はHPMEC刺激の有無で差はみられなかった。以上の成績からC-Cケモカインによる好酸球遊走は、α4-インテグリン/VCAM-1相互作用により選択的に増強される可能性が示唆された。
責任ある研究・イノベーションの実現に向けた日本の研究者と疾患当事者の関係構築

本研究の大きな目標は、科学技術と社会の良好で持続可能な関係を目指す「責任ある研究・イノベーション」の観点から、日本における疾患当事者・市民の研究参画の現状と課題点の分析を行うこと、そして、それらを踏まえて国内における責任ある研究・イノベーションの実現に向けた研究参画のあり方を理論的に吟味し、いくつかの試行を行い、それらの結果をもとに国内状況に適した研究参画のあり方と、その実現に向けた方法を開発することである。本年は、国内外の状況についてのこれまでの調査結果を手がかりに、1)必要な調査を継続するとともに、2)国内における研究への患者・市民参画の適切なあり方の検討を行い、3)現時点で必要かつ有効と考えられる実装方法について複数の疾患を対象とする試行を行った。3)の具体的な内容としては、(1)国内の患者・市民並びに研究者の双方にとって認知度が高いとはいいがたいであろう「研究への患者・市民参画」という概念について、短時間に、「なぜ必要なのか」、「どのような形が考えられるのか」といった概要を把握できるよう、患者・市民と研究者の双方に向けたリーフレットを作成した。また、欧米等の先行事例や国内状況を踏まえると、国内では研究への患者・市民参画の素地を育む場が不足しているという問題認識のもと、(2)そのような素地を育む場作りの具体的かつ適切な方法を探り、良い参画手法のあり方を検討することを目的とする場として、主として再生医療領域における疾患を対象に、研究者ー患者・市民の対話企画を複数回企画して結果の分析を行っている。国内外の状況の調査、検討と国内状況に適した素材の開発や試行については、多方面の協力のもと、それぞれ当初予定を上回る形で行うことができた。特に国内状況については他機関の調査との絡みもあり、当初予定の数例の深掘り調査ではなく国内全体について調査を行うことができ、試行についても学会や研究機関等の取組の一環として知見を生かした形で複数の異なるタイプの企画を行うことができる等、当初予定を超える形で進んでいる。ただし多くの結果が得られたこともあり、得られた結果を踏まえた多様な専門家間における検討作業(と、それを踏まえた論文化)は遅れている。これらを総合すると、現状は、当初の計画を超える進捗と遅れを併せ持つ状態であり、全体としておおむね順調に進展していると考える。2018年度までの調査と試行結果に対して多分野間での批判的な検討作業を行い、責任ある研究・イノベーションの観点から国内における研究への患者・市民参画のあり方像を明確化し、それに向けた方法論を具体的に考えていく予定である。特に方法論については、それらの結果を踏まえた小規模企画を行い、目的等に応じたより良い方法の提案に結びつけたい。先端医療の研究開発における「疾患当事者の参画」は、研究の意義や妥当性、受容度等を高める上での有用性が期待され、特に近年、欧州や米国を中心に注力され、様々な取組が進んでいる。そのような状況を受け、本研究では、先端医療の研究開発への積極的な投資を行う日本を対象に、科学技術と社会の良好で持続可能な関係を目指す「責任ある研究・イノベーション」の観点から、広義の疾患当事者並びに市民の研究参画の現状と課題点の分析を行うこと、それらを踏まえた試行と評価を通じて国内状況に適した研究参画手法を検討することを目指している。本年度は、1)英国や欧州等の海外における研究参画の取組について定義の整理と現状の調査を行って学会等で発表し、2)国内における参画の現状と比較検討する中で、3)国内ではどのような参画あるいは参画の下地の醸成が望まれるのかを考察した。その一部を反映した参画手法を検討し、2種の試行的な研究者ー患者・市民間の対話「「聞イテミル・考エテミル!?がん研究の今と未来:ゲノムデータの共有ってなんのため?」」や小型対話企画を開催した。国内における研究への患者・市民参画は、先行する米国や英国等と比べると認識されておらず、実践面では小規模な試みが大半であり、今後の展開が期待される。ただし先行する各国における研究への患者・市民参画の取組は、当該国の患者・市民・研究者の関係を深く反映した形で進んでいる。責任ある研究・イノベーションの実現という観点では、そのような歴史的背景を踏まえ、国内に適した手法やあり方を検討し、実践していく必要性が改めて示唆された。なお3)の結果については、効果並びに手法の妥当性の両面から、論文化に向けて内容検討を進めている。海外動向の動きが激しいため、特に研究への市民・患者参画が盛んな英国を中心に、文献化された動向並びに組織としての取組等の調査を進めることとし、大まかな状況は把握できた。次年度の計画に合わせて、今後、必要な情報を適宜収集する。国内の現状については概要が把握でき、当初は30年度実施予定であった試行についても複数回試みることができた。評価手法については、結果を踏まえて現在分析を行っている段階である。これらを踏まえ、全体として、おおむね当初の計画通りであると考える。

本年は、国内外の状況についてのこれまでの調査結果を手がかりに、1)必要な調査を継続するとともに、2)国内における研究への患者・市民参画の適切なあり方の検討を行い、3)現時点で必要かつ有効と考えられる実装方法について複数の疾患を対象とする試行を行った。3)の具体的な内容としては、(1)国内の患者・市民並びに研究者の双方にとって認知度が高いとはいいがたいであろう「研究への患者・市民参画」という概念について、短時間に、「なぜ必要なのか」、「どのような形が考えられるのか」といった概要を把握できるよう、患者・市民と研究者の双方に向けたリーフレットを作成した。また、欧米等の先行事例や国内状況を踏まえると、国内では研究への患者・市民参画の素地を育む場が不足しているという問題認識のもと、(2)そのような素地を育む場作りの具体的かつ適切な方法を探り、良い参画手法のあり方を検討することを目的とする場として、主として再生医療領域における疾患を対象に、研究者ー患者・市民の対話企画を複数回企画して結果の分析を行っている。国内外の状況の調査、検討と国内状況に適した素材の開発や試行については、多方面の協力のもと、それぞれ当初予定を上回る形で行うことができた。特に国内状況については他機関の調査との絡みもあり、当初予定の数例の深掘り調査ではなく国内全体について調査を行うことができ、試行についても学会や研究機関等の取組の一環として知見を生かした形で複数の異なるタイプの企画を行うことができる等、当初予定を超える形で進んでいる。ただし多くの結果が得られたこともあり、得られた結果を踏まえた多様な専門家間における検討作業(と、それを踏まえた論文化)は遅れている。これらを総合すると、現状は、当初の計画を超える進捗と遅れを併せ持つ状態であり、全体としておおむね順調に進展していると考える。29年度の結果を踏まえ、研究への市民・患者参画の理念面の整理を目指し、国内における歴史的背景に着目した分析と検討を、文献調査並びにメンバー間の議論を通して深めていく予定である。合わせて、研究への患者・市民参画の手法面についての検討も進める。ただし先行する各国と国内の状況は大きく異なっているため、検討すべき事項は多い。29年度の試行結果を踏まえたさらなる試行を重ね、それらの手法を当プロジェクト主催企画以外の場、そして他の研究領域や疾患等に応用できる形にすべく検討を進める予定である。29年度は学会発表や講演を通じた議論が中心であったが、今後は、成果を学術論文やウェブサイト等、アクセスしやすく参照しやすい形にする予定である。2018年度までの調査と試行結果に対して多分野間での批判的な検討作業を行い、責任ある研究・イノベーションの観点から国内における研究への患者・市民参画のあり方像を明確化し、それに向けた方法論を具体的に考えていく予定である。特に方法論については、それらの結果を踏まえた小規模企画を行い、目的等に応じたより良い方法の提案に結びつけたい。一部分担者の海外出張が延期されたため。研究機関や組織等と共同開催した大型企画において,会場費や謝金等が不要であったため。前者は当該分担者の次年度出張に、後者は次年度開催企画の講師謝金と旅費に充てる。主として、共同研究者間打合せ複数回分を後ろ倒ししたために次年度使用額が生じた。
図形学習でのコミュニケーションを通して、筋道を立てる力を養う指導

1.研究の目的と方法...考えをまとめて言葉で表し伝えることができない生徒が多くなってきた。そのため、周囲の生徒どうしや大人との関係もスムースにいかない場面をしばしば目にする。何を根拠にして自分は考えているのかを意識する論理的思考力を養うために、生徒が証明や論証の意味とその必要性を理解し、「図の役割」を意識し「図」を通して考え、意見交換する学習場面をつくる。研究方法は次の(1)(4)である。(1)日常論理を使うコミュニケーション場面での生徒の説明・伝達表現力を把握する。(2)(1)をもとに実態調査問題を作成し、調査を行い、分析をする。(3)(2)をもとに、指導内容、指導方法の検討と教材開発を行う。(4)授業を実施し、生徒の反応を分析する。2.実態調査からわかったこと...教科書とは異なった「相手にわかりやすく説明しなさい」の調査問題の発問によって生徒の取り組む姿勢が顕著に改善された。情報を読み、判断し、利用するときに図が大きな役割を果たしていた。また、2年図形の論証の学習経験があるか否かの違いが、説明する力に大きな段差があることがわかった。3.ねらいを目指した実際の指導例の紹介多くの学習場面で、「相手(教師、クラスの人、下級生など)にわかるように説明しなさい」、「図を使ってもいいです」または「わからなかったら図で考えよう」などの示唆を与えながら指導にあたった。次の指導例を紹介する。・花壇のデザインと問題づくりと問題解決(作図とデザイン、方程式等を使って)(1)正方形の土地に、面積が50m^2の花壇をデザインした問題を作る。(2)クラスの人が作った(1)の問題解決(3)(2)の問題解決の回答を問題作成者が添削、コメントする。・√<5>の作図(1)直角をはさむ2辺が1の直角二等辺三角形をもとに、√<3>、2、√<5>・・・と順々に行う作図を学習する。なぜ、その作図が正しいかの説明を考える。(2)(1)とは違う方法で√<5>の作図を考え、発表する。(3)(2)の発表を聞き、他者の考えた作図方法で√<5>の作図を実際に行う。4.授業上の成果について常に他者を意識し、図を使った学習場面は、説明をすることに対して、生徒は構えず、自分なりの工夫をする姿勢が見られた。また、説明を聞く生徒もそれを身近に感じ取れていた。
ゆっくり回転する中性子星の重力波と結びついた振動

動力波の発生源のひとつとして中性子星などの相対論的な天体が期待される。その重力波は星の固有振動で記述されるが、そのような振動のスペクトラムは回転していない中性子星の場合、又は相対論的効果がきかない回転星の場合に限って求められたにすぎなかった。そこで、回転と相対論的効果を同時に考慮しなければならない時に振動のモード、振動数がどのようになるかを調べた。その第一歩として、回転速度が小さい場合を考え、これまでに求められている回転していない相対論的な星の固有振動に回転の効果を摂動的に加えるという定式化を行った。その後、数値計算を行い、定量的に振動数がどのように回転速度の増加とともに変化するかを調べた。その結果、次の事が明確になった。(1)回転していない時はパリティによる分離していたモードが回転の影響でモード間の混合が起こり、その結合の法則はある種の法則に従うことがわかる。(2)回転していない時は縮退していた固有値が回転により縮退がとれることがわかる。また、回転と同方向に伝わる波の振動数は増加し、逆方向に進む波の振動数は減少することがわかる。そしてその変化の割合は回転速度とともに増加することがわかる。この振動数の変化は高速で回転している星での非軸対称モードによる重力波放出に伴う不安定性と定性的に一致することがわかる。現在、これらの結果をより詳しく解析を行い、検討をしている。また、これらの内容が宇宙物理学でどのような所で意義を持つかの検討も行っている。
軟骨吸収における脂肪酸と脂肪酸結合タンパク質の役割

マウス骨端板の骨軟骨境界部に存在するセプトクラストに、表皮型脂肪酸結合タンパク(E-FABP)が発現することを見出した。その突起の形態は軟骨内骨化の活動と関連することが示唆された。E-FABPはレチノイン酸とも親和性をもつが、セプトクラストはレチノイン酸の過剰や不足に対して、PPARやCD-RAPを介してアポトーシスや突起減少などの形態変化を示した。メッケル軟骨の吸収にも、セプトクラストが関与することが分かった。以上の結果から、生理的な軟骨吸収にセプトクラストは重要な役割を果たすこと、セプトクラストにE-FABPに結合する脂肪酸やレチノイン酸を介するシグナル伝達機構が存在することが解明された。脂肪酸結合タンパク質FABPの硬組織と口腔組織の分布を調べた結果,表皮型が骨端板のセプトクラスト(骨端板横隔吸収細胞)に,脳型が破骨・破軟骨細胞に局在することが,電子顕微鏡レベルでも確認された.脳型FABPの破骨細胞における発現は,胎生期には認められず,生後になって認められた.この現象は骨端板の他,膜性骨化を起こす頭蓋骨発生においても認められた.しかし破骨細胞のマーカーである酒石酸耐性酸性フォスファターゼ活性は胎生期においても認められた.このことは,脳型FABPの発現が,破骨細胞の成熟,または吸収する硬組織の石灰化度の変化に依存しているのでないかと考えられた.1)表皮型脂肪酸結合タンパク(E-FABP)はperoxisome proliferator-activated receptor (PPAR) betaを介する細胞増殖を誘導する脂肪酸またはレチノイン酸(RA)シグナル伝達に関与すると考えられている。RA300mg/kgを経口過剰摂取させた生後4週齢(P4w)、ビタミンA欠乏食を離乳期より摂食させたP9wddyマウス、およびそれらのコントロールから採取した脛骨骨端板を用いた。ビタミンA欠乏(RA欠乏)でseptoclastに細胞増殖抑制と形態変化を誘導するCD-RAPが局在した。RA過剰でseptoclastに細胞増殖を媒介するPPARbetaの発現抑制と、アポトーシスのマーカーのTUNEL陽性反応、RAによるアポトーシス誘導を介するRARbetaの局在が認められた。本研究結果から、RA欠乏・過剰におけるseptoclastの細胞数減少、形態変化にはPPARbeta、CD-RAP、RARbetaが関与することが示唆された。2)マウスを,固形食飼育(SD)群と流動食飼育(LD)群の2群に分けて,抗心筋型FABP(H-FABP)抗体と抗fast-myosin heavy chain(F-MHC)抗体を用い免疫組織化学的に軟口蓋筋,咽頭収縮筋,および内喉頭筋(外側輪状披裂筋,甲状披裂筋,披裂間筋,後輪状披裂筋)を解析した。H-FABPの発現は内喉頭筋にほぼ均質に認められたが,特に後輪状披裂筋と披裂間筋においてその発現が強かった。また,H-FABPは,後輪状披裂筋と披裂間筋で,SD群と比較してLD群で免疫活性が低下した。以上の結果から,H-FABPは咽頭・喉頭筋のエネルギー代謝に重要な役割を担っていること,また,テクスチャーの違いは,これらの筋の生後発育におけるエネルギー代謝の役割に対して影響をおよぼす可能性が示唆された。概ね順調に推移しており,上記1)については現在論文を準備中,2)については既に出版済みで,2)については予定より早く仕上げることができた。前年度に予定通り進行しなかった脳型脂肪酸結合蛋白の骨組織に於ける役割に関する研究においては,電子顕微鏡による結果が得られたため,ほぼデータが出そろった。当初の実験計画にあった下顎頭軟骨における脂肪酸結合蛋白の解析は1および2)研究に集中したために十分な成果が得られなったが,動物実験の試料がほぼ揃った。1)表皮型脂肪酸結合タンパク(E-FABP)がメッケル軟骨吸収面に存在する小型の単核細胞に発現すること,その細胞が血管内皮と隣接して存在し,軟骨基質の非石灰化基質とも隣接していることを見出した。さらに吸収時期によって細胞の形態が異なることも見出した。E-FABP陽性細胞はcathepsinBを発現し,さらにDBAレクチンにも陽性を示したことから,骨端板の非石灰化基質で構成されている横隔を吸収するseptoclast(セプトクラスト,横隔吸収細胞)であることが分かったseptoclastは骨端板では成長時期により突起の本数や長さなどの形態の変化を示すことから,メッケル軟骨のseptoclastの形態変化も,吸収活性の変化を反映したものと考えられた.この関係については,今後より詳細に検討して結論を得る必要がある.2)骨端板の軟骨吸収については,BーFABPを発現する破骨細胞(破軟骨細胞)も関与することを既に示したが,ノックアウトマウスによる解析では顕著な変化が見られなかった。そこで,脂肪酸欠損食を与えて飼育したノックアウトマウスと正常マウスを比較して解析した,その結果,破骨細胞の形態変化や数の減少が見られたが,現在詳細を解析中である。3)メッケル軟骨を含むマウスの発生初期の下顎を器官培養し,低酸素環境下で培養したところ,軟骨細胞の分化の遅延や成長抑制,小下顎症などの症状が現れた。これは将来の吸収阻害を示唆する所見であり,1)で明らかとなった吸収細胞であるseptoclastとの関係をin vivo,in vitroの両面で解析したところ,低酸素環境は軟骨吸収に抑制的であることが示唆された。

マウス骨端板の骨軟骨境界部に存在するセプトクラストに、表皮型脂肪酸結合タンパク(E-FABP)が発現することを見出した。その突起の形態は軟骨内骨化の活動と関連することが示唆された。E-FABPはレチノイン酸とも親和性をもつが、セプトクラストはレチノイン酸の過剰や不足に対して、PPARやCD-RAPを介してアポトーシスや突起減少などの形態変化を示した。メッケル軟骨の吸収にも、セプトクラストが関与することが分かった。以上の結果から、生理的な軟骨吸収にセプトクラストは重要な役割を果たすこと、セプトクラストにE-FABPに結合する脂肪酸やレチノイン酸を介するシグナル伝達機構が存在することが解明された。薬理学的実験の再現性が安定せず,投与方法の調整などに予定以上の時間がかかったが,現在は安定している.計画に沿って実験を進めていく予定である。1)表皮型脂肪酸結合蛋白陽性の骨端板セプトクラストに関しては,胎児指骨器官培養系を用いて,脂肪酸またはレチノイン酸の影響を解析する。2)表皮型脂肪酸結合蛋白陽性のメッケル軟骨セプトクラストについては,その局在の変化を統計処理し,吸収活性と吸収形態,セプトクラストの形態と数との関係を解析する。3)脳型脂肪酸結合蛋白の破骨細胞については,データの整理を行い,論文執筆と出版を図る。4)下顎頭軟骨の実験は,基本的な組織染色を行い,骨端板とメッケル軟骨の結果と比較する。5)すべての実験結果の総括を行い,必要な結果発表を行う。口腔解剖学・組織学・発生学申請書の予定に従って研究を進める.また破骨細胞の機能との関連が想定されたので,異なる石灰化度を有する状態での脳型FABPの発現の違いについての実験を追加し,発現と石灰化度との関連を明らかにする予定である.購入予定の試薬(キット)の国内在庫がなく,次年度の納入となったため。また,一部の動物実験に使用する動物の匹数の再検討行った結果,実験が順調に推移していて予定していた追加購入の必要が無くなったため。購入予定だった試薬の使用量が予定を下回り,追加購入の必要が無かったため概ね実験改革に沿った試薬と実験動物の計画に沿った購入で支出する。また最終年度のため,学会等においてその成果を発表する機会が増えるので,論文出版に関する経費に支出する予定である。次年度当初には現有試薬が消費される見込みなので,予定通り試薬の追加購入に充てる.
球状分子による新化学反応高速化システムの開発

デンドリマー添加系における反応加速現象の探索を行った。64ニトリル末端型のポリ(トリメチレンイミン)デンドリマーを添加した、ヘキシルアミン開始剤によるサルコシンN-カルボキシ無水物(Sar-NCA)のリビング重合をクロロホルム溶媒中で行った。開始剤をデンドリマー表面に集合させるため、ブチルアミンとサルコシンNCAの1対1付加物1を合成し、加速効果を比較した。この化合物1は、ヘキシルアミンより極性が高く、クロロホルム中で均一に存在するより、ニトリル基が配列したデンドリマー表面に吸着されやすく、加速効果を誘導できた。アレーニウスプロットによる解析より、デンドリマー表面へのモノマー濃縮効果が加速の要因として考えられた。他のモノマー系として、N-プロピルグリシンNCAの放射成長重合(RGP)についてもポリ(トリメチレンイミン)デンドリマーを開始剤に用いて検討した。通常の線状重合体の場合を想定した対照実験として、n-ヘキシルアミン開始剤の重合を検討して、球状開始剤の加速効果を算出した。新たに両親媒性表面ブロック型デンドリマー開始剤による放射成長系の探索を行ったところ、この場合にも加速現象が確認できた。この両親媒性表面ブロック型デンドリマーは、溶媒として用いたクロロホルム中で逆ミセル状の集合体を形成するため、新たな高速反応系の設計に利用できることを見出した。
新規分泌性因子Ｎｅｕｄｅｓｉｎの高脂肪食誘導肥満形成における役割の解明

Neudesin KOマウスでは高脂肪食による血糖値、肝臓への中性脂肪の蓄積、インスリン抵抗性の出現が改善し、そのエネルギー消費量、脂肪酸酸化も亢進していた。Neudesin KOマウスの心拍数、脂肪組織中、血漿中のNE濃度が増加し、その脂肪組織で熱産生因子や脂肪酸酸化関連因子の発現が増加した。さらに、その脂肪組織でリポリシスが亢進していた。さらに交感神経系を破壊したNeudesin KOマウスでは抗肥満の表現型が一部消失し、Neudesin添加によるERK活性化が、カンナビノイド経路の阻害によって抑制された。従って、本研究成果は肥満症成因解明に重要な手掛かりを与えるものと期待される。1. Neudesin KOマウスにおける肥満誘導性の脂肪肝・インスリン抵抗性に関す検討血中パラメーターを測定した結果、Neudesin KOマウスでは高脂肪食による血糖値・血中インスリン濃度の増加が抑制されていた。また、グルコース負荷試験・インスリン負荷試験を行った結果、Neudesin KOマウスで肥満によるインスリン抵抗性の出現に改善が見られた。さらに、高脂肪食飼育による肝臓への中性脂肪の蓄積がNeudesin KOマウスでは殆ど認められなかった。これらの結果から、Neudesin KOマウスが肥満誘導性のインスリン抵抗性の出現や脂肪肝の発症に強い耐性を示すことが明らかとなった。2.高脂肪食飼育時のNeudesin KOマウスにおけるエネルギー摂取・消費に関する検討高脂肪食飼育時の摂食量にはジェノタイプ間の変化が認められなかった(Fig. 3A)。また、Neudesin KOマウスは自発行動量が変化していなかったにも関わらず、体温の上昇が認められた。このことから、Neudesin KOマウスでエネルギー消費が増加している可能性が考えられた。そこで、エネルギー消費を評価するためにそれぞれのマウスの呼気ガスを測定した。その結果、Neudesin KOマウスではエネルギー消費の指標となる酸素消費量が増加していた。また、基質利用の指標となる呼吸商の値が減少傾向を示したことから、Neudesin KOマウスは消費するエネルギーの基質として脂質を活発に利用している可能性が示唆された。そのため、脂肪酸酸化量を算出した結果、Neudesin KOマウスで脂肪酸酸化が亢進していた。これらの結果から、Neudesin KOマウスで肥満が抑制される原因として、エネルギー消費の増加が関与することが示唆された。一般的に交感神経が活性化するとエネルギー消費も亢進する。そこで、高脂肪食飼育時におけるneudesin KOマウスのエネルギー消費の亢進に、交感神経の活性化が寄与している可能性を考えて、解析を行った。その結果、交感神経の活性を反映する心拍数や脂肪組織におけるNEの含量が増加していることが明らかになった。これらの結果から、高脂肪食飼育時においてneudesin KOマウスの交感神経が活性化している可能性が示唆された。さらに、neudesin KOマウスの血漿中のNE濃度にも増加が認められた。血中のNEは交感神経節後神経の相同器官である副腎髄質から分泌されるため、neudesin KOマウスの副腎髄質の機能も亢進している可能性が示唆された。交感神経が活性化することにより脂肪組織においてエネルギー消費が亢進することが知られている。そこで、高脂肪食飼育時におけるneudesin KOマウスの脂肪組織で熱産生因子Ucp1や脂肪酸酸化関連因子Pgc-1α、Pparα、Cpt1bの発現を測定した。その結果、neudesin KOマウスのWAT、BATのいずれにおいてもUcp1や脂肪酸酸化関連因子の発現が増加していることが明らかになった。また、熱産生や脂肪酸酸化には脂肪組織に蓄えられた中性脂肪が分解されることで生じる脂肪酸が基質として用いられる。この脂肪分解のプロセスすなわちリポリシスも交感神経の活性化によって亢進するが、高脂肪食飼育時におけるneudesin KOマウスのWATでリポリシスが亢進していた。これらの結果から、neudesin KOマウスの脂肪組織において熱産生、脂肪酸酸化やリポリシスが亢進し、エネルギー消費が亢進していることが示唆された。1.Neudesin欠損(KO)マウスにおける肥満誘導性の脂肪肝・インスリン抵抗性: Neudesin KOマウスでは高脂肪食による血糖値・血中インスリン濃度の増加が抑制されていた。また、Neudesin KOマウスで肥満によるインスリン抵抗性の出現に改善が見られた。さらに、肝臓への中性脂肪の蓄積がNeudesin KOマウスでは殆ど認められなかった。2.高脂肪食飼育時のNeudesin KOマウスにおけるエネルギー摂取・消費:高脂肪食飼育時の摂食量にはジェノタイプ間の変化が認められなかった。しかし、Neudesin KOマウスではエネルギー消費(酸素消費量)が増加していた。さらに、Neudesin KOマウスで脂肪酸酸化も亢進していた。4.高脂肪食飼育時のneudesin KOマウスの脂肪組織のエネルギー消費の亢進:高脂肪食飼育時におけるNeudesin KOマウスの脂肪組織で熱産生因子や脂肪酸酸化関連因子の発現が増加した。5. Neudesinとカンナビノイド経路の関係: Neudesinより培養神経細胞でのチロシンヒドロキシラーゼ発現が低下した。さらに交感神経系を破壊したNeudesin KOマウスでは抗肥満の表現型が一部消失した。

さらに、Neudesin添加によるERK活性化が、カンナビノイド経路の阻害によって抑制された。従って、Neudesinの作用はカンナビノイド経路を介する可能性が期待される。Neudesin KOマウスでは高脂肪食による血糖値、肝臓への中性脂肪の蓄積、インスリン抵抗性の出現が改善し、そのエネルギー消費量、脂肪酸酸化も亢進していた。Neudesin KOマウスの心拍数、脂肪組織中、血漿中のNE濃度が増加し、その脂肪組織で熱産生因子や脂肪酸酸化関連因子の発現が増加した。さらに、その脂肪組織でリポリシスが亢進していた。さらに交感神経系を破壊したNeudesin KOマウスでは抗肥満の表現型が一部消失し、Neudesin添加によるERK活性化が、カンナビノイド経路の阻害によって抑制された。従って、本研究成果は肥満症成因解明に重要な手掛かりを与えるものと期待される。研究実績の概要に記載した通り、25年度はNeudesin KOマウスが肥満誘導性のインスリン抵抗性の出現や脂肪肝の発症に強い耐性を示すことは明らかにした。26年度はこれらの耐性のメカニズムの解明を目指し、そのメカニズムとして、高脂肪食飼育時のneudesin KOマウスの交感神経の活性化や脂肪組織のエネルギー消費の亢進を明らかにした。それらの知見は今後の詳細なメカニズム解明やNeudesin受容体解明に重要な手掛かりを与えるものである。従って、これまでの研究成果から本研究計画は概ね順調に進展していると判断している。分子生物学1.高脂肪食で飼育したNeudesin遺伝子欠損の解析によるNeudesinのエネルギー代謝調節における役割の解明26年度の研究計画の実験内容を引き続き進める。平成27年度以降の新たな研究計画は下記の通り。1) Nerve growthfactor (NGF)添加によりラット副腎髄質由来のPC12細胞をカテコラミン産生神経細胞に分化させる。さらに、その分化神経細胞にneudesinを添加し、カテコラミン産生能を検討する。2) 6-OHDA投与して交感神経系破壊でマウスに高脂肪食飼育を行い、その白色脂肪組織(WAT)、肝臓及び心臓の重量を測定する。3)高脂肪食飼育した交感神経系を破壊neudesin KOマウスの熱産生関連因子と脂肪酸酸化関連遺伝子の発現量を定量する。2. Nuedesin受容体の同定とそのシグナル伝達機構を解明1) His-tagで標識したNeudesin組換えタンパク質を培養神経前駆細胞あるいは培養前駆脂肪細胞に作用させる。その後、架橋化試薬を加え、このリガンド-受容体間を共有結合させる。細胞膜タンパクを回収する。His-tagを利用したアフィニティークロマト法によりNeudesin-受容体タンパク質の精製を行う。2) Neudesin受容体高発現細胞系を用いて、Neudeisn細胞内情報伝達系とその制御メカニズムを解明する。研究実績の概要に記載した通り、Neudesin KOマウスが肥満誘導性のインスリン抵抗性の出現や脂肪肝の発症に強い耐性を示すことを明らかにした。
β-カテニン遺伝子導入樹状細胞ワクチンによる大腸癌の発生予防

野生型および変異型β-カテニン遺伝子のマウス骨髄由来樹状細胞への導入を試みた。発現ベクターに各遺伝子を組み込みAMAXA法を用いて樹状細胞に導入を試みたが、樹状細胞の良好なviabilityが得られず、有効な方法とはなり得なかった。そこで、各遺伝子のRNAをAMAXA法を用いて樹状細胞に導入したところ、良好な導入効率が得られた。しかし、同方法による樹状細胞のβ-カテニン遺伝子発現は時間とともに低下し、導入24時間を経過ると、著しい低下が認められた。マウスを用いたvaccinationの実験のためには遺伝子発現の期間が短すぎると考えられた。そこで、安定した形でβ-カテニンの抗原性をT細胞に提示するために、野生型および変異型のβ-カテニン遺伝子を線椎芽細胞株に導入してstable transfectantを樹立した。Polyethylene glycolを用いて、この細胞と樹状細胞の融合細胞を作製してマウスに投与し、β-カテニンに対する特異免疫の獲得を試みる予定である。実験系としてはβ-カテニンの細胞内蓄積を認めるBALB/cマウス由来の大腸癌細胞株Colon-26を使用し、前もって融合細胞で免疫したBALB/cマウスがColon-26の移植を拒絶するかを検討する。同時に、融合細胞で免疫したマウス脾細胞にβ-カテニン遺伝子導入細胞およびColon-26細胞に対する細胞障害活性が誘導されるかを検討する。β-カテニン遺伝子導入樹状細胞の作成とその抗原提示能につき基礎的検討を行った。Full lengthのβ-カテニン遺伝子を挿入したベクターを2種類のコンストラクトで作成し、C57BL6マウス骨髄由来樹状細胞にリポフェクチン法を用いて法遺伝子導入を試みた。樹状細胞は成熟段階により貪食能が異なり、未熟樹状細胞は貪食能に富むため遺伝子導入には効率が良いと考えられるが、一方抗原提示能に乏しいというジレンマが存在する。従って、遺伝子導入に最も適した成熟状態の樹状細胞を得るための検討を行った。GM-CSF 10ng/ml,IL-4 10ng/mlを用いてTNF-αなどの成熟促進のためのagentは使用せず、4日間培養して得られる樹状細胞が遺伝子導入効率に関しては最も適していることが判明した。樹状細胞はこの時点で増殖反応がほぼ停止し、耐性遺伝子を用いた導入細胞のselectionは不可能なため、樹状細胞による宿主の免疫のpreliminary studyにおいてはこの時点の樹状細胞を用いて実験を行った。遺伝子導入効率の検討のため、FACSを用いて樹状細胞マーカーであるCD11cとβ-カテニンの両方を発現するdouble positive細胞の出現頻度を検討すると、約10-30%であった。APC1309 gene knockoutマウスはヒトの家族性大腸腺腫症のモデルマウスであり、生後3週ころより消化管に多数の腫瘍が発生する。同マウスより樹立したT tumor細胞と樹状細胞の融合細胞でAPC1309KOマウスを免疫すると、マウスには強い抗腫瘍免疫が誘導される。β-カテニン遺伝子導入樹状細胞と、T tumorと樹状細胞の融合細胞で免疫したマウスの脾細胞を混合培養すると、Tリンパ球の増殖反応が認められた。このことより、抗腫瘍免疫の標的抗原にβ-カテニンが含まれる可能性が示された。β-カテニンはAPC遺伝子異常を伴う大腸癌細胞内に蓄積が認められ、核内の転写因子を活性化させて発癌に関与すると考えられている。β-カテニンはそのペプチド構造の一部が特定のMHC class I分子との結合性を示し、プロテアソームで分解されたβ-カテニンの一部は抗原性ペプチドとしてMHC class I分子に結合して細胞表面に提示される。細胞障害性T細胞にβ-カテニンの抗原エピトープに対する感作を誘導できればβ-カテニンの蓄積した大腸癌細胞を免疫的機序により排除できる可能性がある。強力な抗原提示細胞である樹状細胞(以下DC)にβ-カテニン遺伝子を導入し、この遺伝子導入DCを腫瘍ワクチンとして宿主に投与すれば、β-カテニンの抗原エピトープを認識する細胞障害性T細胞を誘導できると考えられる。

昨年度はβ-カテニン遺伝子の発現ベクターをリポフェクチン法によりDCに導入を試みたが、その導入効率は10%前後と不良であり、その発現も低かった。そこで、本年度はβ-カテニン遺伝子を線維芽細胞3T3に導入してstable transfectantを作成し、この3T3細胞とDCを細胞融合させ、この融合細胞を腫瘍ワクチンとして使用する方法につき検討を行った。β-カテニンはGSK-3βにより分解される野生型と分解されない変異型が存在する。野生型β-カテニン遺伝子と種々の変異を導入した変異型β-カテニンの遺伝子をクローニングし、3T3細胞に導入して、stable transfectantを樹立した。この細胞とDCの融合細胞による免疫でβ-カテニン発現細胞を免疫的機序により排除できるか検討を進めている。野生型および変異型β-カテニン遺伝子のマウス骨髄由来樹状細胞への導入を試みた。遺伝子DNAの導入24時間後の導入効率(GFP蛋白発現)を検討すると、GFP蛋白の発現は約50%の樹状細胞で認められたが、導入操作後の樹状細胞のviabilityは著しく低かった。同遺伝子のmessenger RNAをAMAXA法を用いて樹状細胞に導入したところ、DNA導入時と同様の良好な導入効率が得られ、導入後の樹状細胞のviabilityも比較的良好であった。しかし、導入後24時間が経過すると、著しい低下が認められた。そこで、マウス由来不死化樹状細胞株DC2.4細胞を使用して、GFP遺伝子をコードしたmRNAをAMAXA法を用いて導入を試みたところ、良好な導入効率と、導入後の良好な細胞の生存率が得られた。β-カテニン遺伝子を導入したDC2.4をAPC1309マウスに2回皮内注射し、その後マウス脾細胞を採取してβ-カテニン遺伝子導入DC2.4に対する障害活性を検討したところ、有意な細胞障害活性が検出され、β-カテニンに対する免疫反応の誘導が示された。一方、安定した形でβ-カテニンの抗原性をT細胞に提示するために、野生型および変異型のβ-カテニン遺伝子を線維芽細胞株3T3細胞に導入してstable transfectantを樹立した。Polyethylene glycolを用いて、この細胞と樹状細胞の融合細胞を作製してマウスに投与し、β-カテニンに対する特異免疫の獲得の有無を検討した。その結果、融合細胞で免疫したマウスの約半数はβ-カテニンを発現するColon-26細胞の生着を拒絶し、そのようなマウス脾細胞にはColon-26細胞に対する細胞障害活性が誘導された。
訪問看護師のためのフィジカルアセスメント教育プログラムの開発

現在訪問看護に従事している訪問看護経験5年未満の訪問看護師を、呼吸のフィジカルアセスメント研修後8週間に研修で習得したことを職場で活用するための支援を受ける群(実験群)と研修後に支援を受けない群(対照群)に無作為割り付けし2群間で比較するランダム化比較試験を行った。その結果、呼吸のフィジカルアセスメント研修により習得した知識及び技術を、現場での実践に活かすためには、学習に対するモチベーションを維持するために他者からの支援が有効であることが示唆された。1.教育内容、教育方法及び評価方法の策定地域看護学専攻修士課程修了者あるいは訪問看護分野の認定看護師であり、訪問看護経験5年以上で現在訪問看護に従事している訪問看護師11名にインタビューを実施した結果、先行研究及び文献を基に教育内容、教育方法、評価指標及び評価方法を策定した。これまでのフィジカルアセスメント研修では研修で修得した知識及び技術を実践で活用できないことが問題になっているため、訪問看護活動に活かせるように、研修内容は講義、実践を想定しシミュレーターを使用した演習及び事例を用いた演習とし、評価は実践を想定した実技試験とした。2.教育内容、教育方法及び評価方法の妥当性の検討策定した教育内容、教育方法及び評価方法について、フィジカルアセスメント教育及び研究に実績のある分担研究者、研究協力に承諾が得られた訪問看護分野の認定看護師8名と妥当性について検討を重ね、決定した。フィジカルエグザミネーションの技術及び事例を用いた演習では、訪問看護分野の認定看護師8名を指導者とすることとした。3.指導方法及び評価方法の信頼性の検討訪問看護分野の認定看護師8名が演習において技術指導ができるように、フィジカルエグザミネーションの実践状況を確認し、指導を行った。実技試験については、評価基準を用いて研究者との評価者間一致度κ係数が0.7以上になるまで、評価基準について話し合い評価を繰り返した。評価に用いる質問紙については、訪問看護師に協力を依頼し、再テスト法を用いて信頼性を検討した。1.研究方法現在訪問看護に従事している訪問看護経験5年未満の訪問看護師を、呼吸のフィジカルアセスメント研修後8週間に研修で習得したことを職場で活用するための支援を受ける群(実験群)と研修後に支援を受けない群(対照群)に無作為割り付けし2群間で比較するランダム化比較試験を行った。研修には研究参加に同意を得られた57名の訪問看護師が参加し、最小化法を用いてランダムに、験群29名、対照群28名に割り付けられた。実験群と対照群の2群間で参加者の特性では統計的な有意差はなく、ほぼ同質のグループであった。2.結果実技試験の研修前・研修後テストの平均値の差は、研修前17.14(SD7.41)、研修後29.75(SD6.87)であり、研修後は研修前に比べて実技試験の平均値が有意に上昇した(t(56)=-13.84,p=0.000)。実験群において、研修8週間後の得点は30.76(SD7.16)、研修直後の得点は29.24(SD7.95)であり、有意な上昇は認められなかった(t(28)=-1.16,p=0.254)。また、研修8週間後の実技試験において、実験群の得点は30.76(SD7.16)、対照群の得点は31.36(SD6.72)であり、有意な差は認められなかった(t(55)=-0.33,p=0.746)。研修後の実践調査において、実験群において研修後7週目の実践評価得点は10.71(SD2.60)であり、研修3週目の得点10.53(SD2.35)より高い得点を示さなかった(t(26)=-0.68,p=0.502)。研修7週目において実験群が対照群に比べ呼吸のフィジカルアセスメントを有意に実践していた(t(51)=2.01,p=0.049)。研修後の行動調査において、研修8週間後において、実験群と対照群の行動合計得点は有意な差が認められなかった(t(50)=1.45,P=0.154)。実験群において、研修8週間後の行動得点と研修7週目の実践得点のPearsonの相関係数は0.102(p=0.622)、研修8週間後の行動得点と研修8週間後の実技試験合計得点のPearsonの相関係数は0.537(p=0.005)、研修後7週目の実践得点と研修8週間後の実技試験合計得点のPearsonの相関係数は0.493(p=0,009)であった。

学習支援プログラムの評価については、満足度の平均値は、実験群39.30(SD4.61)、対照群34.56(SD5.08)であり、実験群の平均値が有意に高かった(t(50)=3.53,p=0.001)。呼吸のフィジカルアセスメント研修により習得した知識及び技術を、現場での実践に活かすためには、学習に対するモチベーションを維持するために他者からの支援が有効であることが示唆された。高齢社会を迎えかつて医療機関で展開されていた医療ケアを在宅において展開せざるを得ない状況にある。このような療養ケア環境に対応する訪問看護師には高いフィジカルアセスメント能力が求められる。その能力を向上するために本研究事業において実践的教育プログラムの開発に取り組んだ。初年度は、訪問看護の現状に相応しい教育内容及び教育方法を検討する必要があるため、現在訪問看護に従事している訪問看護師にインタビューを行い、その内容から訪問看護に必要なフィジカルアセスメント能力を構成する要素とフィジカルアセスメントに影響する因子を明らかにした。インタビューの結果と文献を基にフィジカルアセスメント教育内容、教育方法及び評価方法について検討し、教育プログラムを作成した。続く2年目には作成した教育プログラムの有効性について介入研究をもって検証した。さらに3年目には、それまでの教育プログラムの検証結果に基づき、教育内容及び方法について、研究協力者となった訪問看護分野の認定看護師とともに見直しを行った。実践能力の向上を目指した介入にあたっては、フィジカルアセスメントに必要な技術、推論に必要な形式知(知識や行動パターン)や暗黙知(経験等に由来する気づき、認識のアンカー)を整理し、その教育内容に反映した。実践能力向上をめざした研修では、その受講のみならず、具体的な実践に活かすために学習の継続が必要であることを明らかとした。そのために学習を促進し学習のモチベーションを維持するための職場環境や支援方法について実現可能な整備について検討した。これらの教育プログラムの有効性の検証結果については学会等で報告した。
ダール食塩感受性高血圧ラットにおける食塩感受性および高血圧臓器障害の分子機構解明

1)Dah1食塩感受性高血圧ラットの食塩易感受性:メカニズムの分子レベルでの解析アンジオテンシンII受容体拮抗薬ロサルタンの投与により、白血球接着因子の抑制が認められた。2)早期白血球接着と高血圧臓器障害:in vivoでの解析アンジオテンシンII受容体拮抗薬ロサルタンの投与により、血管内皮への白血球接着と腎障害は抑制されたが、血圧降下はわずかであった。食塩負荷による白血球接着増加に、血圧降下を介さずアンジオテンシンIIが関連する可能性が考えられた。研究の意義、重要性従来より食塩感受性高血圧患者は易臓器障害性であり、高血圧モデルラットにおいては非食塩感受性ラットでは臓器障害が弱く、食塩感受性ラットでは臓器障害が強いことが知られていた。今回ダール食塩感受性高血圧ラットの臓器障害には、アンジオテンシンIIを介した白血球接着が主要な因子となっていることが示された。高血圧臓器障害のより効果的な治療につなげられる可能性がある。1)Dah1食塩感受性高血圧ラットの食塩易感受性:メカニズムの分子レベルでの解析若齢Dah1S網膜血管において、蛍光付加レクチン灌流染色似より同定された白血球は、CD45,CD18,CD11b,CD11a陽性であった。2)早期白血球接着と高血圧臓器障害:in vivoでの解析抗ラットCD18中和抗体により、白血球接着は抑制された。また早期白血球接着を抑制したところ、血圧上昇は抑制されなかったが、後期の明らかな高血圧臓器障害は抑制された。今回ダール食塩感受性高血圧ラットの臓器障害には、食塩負荷後早期の白血球接着が主要な因子となっていることが示された。