hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Osseointegrated implantによる咬合機構に関する研究

口腔機能だけでなく忠者の精神面での回復にも成果を上げているOsseointe-grated implantは、インプラント体(fixture)が骨に密着する構造的特性から、支持組識の機能的生理的特性が天然歯歯周組識の場合とは大きく異なる。従って本法における咬合機能の解明は上部構造の設計および術式の改善に必須であり、天然歯列における咀嚼機構の解明にも役立つと考えられる。骨組識と結合したfixtureの被圧変位量およびその特性について調査し、天然歯のそれと比較した。2kgまでの唇・舌側的荷重に対して、変位量は直線比例関係で増加し、上部計測点で約37114μm,下部計測点で約2671μmと天然歯よりも小さな値を示し、大きく異なった変位特性が認められた。荷重除去後のクリープは認められずfixtureは直ちに原点に復位した。被圧変位時の回転中心は、荷重量の増減による変化を示さないが、各fixtureにおける回転中心の位置には上下的な差がみられた。以上の結果から、fixtureの被圧変位特性は骨組識,ことにfixture先端付近の骨の弾性変形の影響を受け、fixtureのネック部と先端部とにおける骨性状の差異の程度がその回転中心の上下的位置に影響すると考える。また、fixture周囲組織の圧感覚閾値は静的荷重に対して100g以上,動的荷重に対して35g以上と天然歯に比較して有意に大きな値を示した。周囲粘膜の感覚を排除する目的からabutmentを除去して閾値を調査したが、abutment装着時との間に有意差はなく、粘膜の感覚はこの程度の被圧変位量の下では関与していないと考えられる。さらに、fixture周縁骨骨膜の感覚の影響を把握するために、浸潤麻酔下で調査を行ったが特定の傾向は認められなかった。現在、上記研究に関して、垂直方向および近遠心方向のfixtureの被圧変位量の計測と、定量的動的荷重装置による感覚閾値の調査を本法の適用46症例に対して実施している。
アクチナイド純良結晶試料の作成

従来、ウランに代表されるアクチナイド元素は核燃料物質としてのみ利用されて来ている。しかし、アクチナイド元素は、内在する5f電子のユニークな振舞いのため、基礎的物性物理学のみならず、材料科学における新機能物質の探索という観点からも最近極めて注目を集めている。本研究の目的は、ウランならびにトリウム金属の高純度化を行い、これを用いて高品質の化合物あるいは合金結晶を育成し、「重い電子系」の物性を明らかにすることにある。本年度においては、昨年にひきつづきウラン金属の高純度化を最大の力点としたが、新しい結晶あるいは合金の探索、育成についても一部活動を開始した。以下にその手順と成果を列記する。(1)超高真空溶融精製実験:直径10mmphi、長さ200mmのウラン金属丸棒を横型水冷銅ハースを用いてRF加熱による帯溶融を行い金属不純物量を約1桁低減させることに成功した。(2)超高真空エレクトロ・トランスポート実験:新に超高真空排気装置を導入し、真空到達度10^<-11>torrの雰囲気中で上記帯溶融を行ったウラン金属丸棒のエレクトロ・トランスポート実験を行うことに成功した。ガス不純物の除去が期待されるが現時点では化学分析が終了していないので定量的結論が得られていない。(3)新物質探索実験:本年設置されたトリ・アーク式単結晶引上装置を用いて、北大、東北大、筑波大、名古屋大、大阪大、広島大などからの各グループ参加により各種の2元系ならびに3元系ウラン基化合物あるいは合金の作成が試みられた。物性測定は現在上記各グループにおいて精力的に行われつつある。(4)光学式浮遊帯域溶融装置を設計製作し、高融点ならびに高蒸気圧ウラン化合物結晶の育成純化を行うことが可能になった。
NER中間体がもたらす新たなDNA損傷生成とその防御応答の解析

生体内におけるDNA損傷応答反応の理解は、抗がん剤や効率的な治療法を開発する上で重要である。興味深いことに、生体を構成する大部分の細胞と同様な休止期の状態ではNERの後期過程が不完全な場合があり、不完全なNERの中間体がプロセッシングを受け、2種類の二次的なDNA損傷が生成する。重要な点は、NERの基質となるDNA損傷がよりリスクの高いものに変換されていることである。しかし、その生成メカニズムや意義は不明瞭である。本研究では、NER反応の中間体に作用するヌクレアーゼを明らかにし、その欠損の影響や制御機構を解析することにより、NER反応中間体のプロセッシングの生物学的意義の解明を目指す。
個性豊かな子どもを育む小中学校教員養成のための「形学習プログラム」の開発

平成30年度は、発達段階に応じた形の学習プログラムの考案及び学習を促す出題方法の検討のため{1形の学習目的、2形の学習内容・方法}の研究を行った。1「形の学習目的」の研究では、子どもの自由な造形活動において、美しいものやことに対して感性を働かせて考えることの重要性を示すと共に、こうした活動を促すには、子どもが取り組みたいと思う魅力となる美(自然)が教材に内包されることの必要性を示した。また近年「生きる力」として重視されるストレスへの対処力を造形・美術教育で育成することの可能性を検討し、ストレスを軽減する「趣味〔hobby〕」が「美的趣味〔taste〕」と重複する点を明らかにし、その趣味の教育にはV.ローウェンフェルドが提唱した美術教育療法が有効であるとした上で、美術教育療法の成立のためには、遊びの創造的で美的な潜在力に注目した人間学的な遊戯観に基づく「遊ぶことを学ぶ」ための教材開発が必要である点を確認した。他方、2「形の学習内容・方法」の研究では、1の結果に基づいて開発した教材及びカリキュラムを小学校教員養成課程の授業で実施し、その学習順序と内容を、P.クレーが『教育スケッチブック』に挙げた講義を手掛かりに検証して、結果、難度が高い内容の学習を複数回行う教材及びカリキュラムへの改良の必要性を確認した。また、形に関する知識を大学生に尋ねたアンケート結果をB.ムナーリの『円』『正方形』『三角形』の内容と比較し、大学生の回答が学校教育で習得した算数及び数学的内容に限られ画一的であったことから、見立てや印象、文化や伝統等の汎用性があり制作方法に着目出来る知識や、形の捉え方をメタ認知したり思考したりするための鑑賞の発達段階や美術批評に関する知識、更には論理的な感性の理解のための知識の習得が必要であることを示した。研究計画調書に記載した研究内容は概ね遂行しつつあるが、本年度予定していた海外の美術施設に赴いて行う調査を延期したため上記の進捗状況とした。今後の研究では、海外での形の学習に関する資料の収集及び調査に加え、「形学習診断表」システムの構築及び「形学習プログラム」の自学自修用アプリの配布に向けた研究を行う。平成28年度は「形に関する基礎知識」の調査・収集及び「形の学習診断用『形学習診断表』作成」のための調査・分析を行った。「形に関する基礎知識」の調査・収集では、文献やTV番組、展覧会等の調査を中心に行い、形の種類や学習方法、社会における形の役割等について整理した。また、「形の学習診断用『形学習診断表』作成」のための調査・分析においては、子どもの形の学習過程の研究についての文献調査の他、先行研究が少ない(制作を業とせず、描画活動の経験が中学校までの)大人の描画に現れる形の調査・分析を行った。具体的には、被験者が毎日描いた描画に現れた形の変遷を診ると共にその形を分類し、更に、出現する形の由来や形の変遷の理由を個人の学習履歴やインタビューから探った。これらの調査・分析の結果、形の学習において特に重要な点として、人体を描く能力と透視図法の習得、個人が拠って立つ分野に関する知識の獲得の3点を確認した。更に、これらの3点に関する過去の学習方法を調査し、例えば、人体を描く能力に関しては、明治期に海外よりもたらされた黒板画の教授法や、人体画の描画力習得のための初期段階の学習法の一つの「人体ピクトグラム」(仮称)の学習法等があることを確認した。他方、透視図法については、個人によって奥行きの捉え方が異なることが分かったことから、透視図法によって描かれた作品の解読(鑑賞)のための学習が必要であると考え、そのための学習プログラムの内容を検討した。計画調書に記載した研究内容は概ね遂行しつつあるが、研究の過程において新たに生じた課題について、それらの解決のための実験や考察及び検討を行っていることから、上記の達成度とした。新たな課題は、次の2点である。(1)形に関する基礎知識は、当初、造形美術分野を中心に収集する予定であったが、調査の結果、「形の科学会」が行っている様な形から科学を見る視点や科学を形に集約する視点があることが分かり、造形美術分野以外の形に関する基礎知識の収集を広く行う様にした。(2)形の学習診断用「形学習診断表」作成のための調査では、当初、造形美術分野の形に関する基礎知識や子どもの描画の発達理論を主な対象としていたが、描画の発達理論においては描画診断の視点や学校教育を終えて一旦描画活動を離れた大人の描画再開後の描画の発達についても目を向けて調査を行う様にした。平成29年度は、前年度の調査結果で得た結果に基づき、形の造形事項や構成原理の中でも取分け写実的に描けないことと関係が深い「奥行き」に関わる知識や技能について調査を行い、形の学習プログラム開発に資する「奥行き」の事項を検討した。具体的に検討した事項は、「奥行き」の研究内容を整理することから得た観点に基づき「奥行き」の認識を主軸とするアンケートを作成し、教員養成課程の学部生及び大学院生を対象に調査を実施した。このアンケート結果の分析及び考察に基づき、形の学習プログラムの開発において検討を要する奥行きに関する事項を5観点に整理した。

これに合わせて、子どもの描画の発達段階及び形の鑑賞能力の発達についての文献調査を行い、発達段階の各説を整理した一覧表を作成すると共に、描画に現れる形の発達段階の基準にされることの多いローウェンフェルドの発達段階理論の理解を深めるため、ローウェンフェルドが作成した発達段階評価表に文章を補う作業を行った。その結果、1教員養成課程の造形・美術分野では、描画に現れる個々の形や色についての分析は、多くの子どもに見られる特徴的な形を解釈する程度であるが、心理学や精神医学では、個々の形や形の組み合わせ、色の使い方についての診断や治療の目的に応じたアプローチがあり、専門分野やアプローチの方法に応じて詳細なマニュアルが作成されていること、2子どもの描画の目的は、子どもの個性や生育環境等に拠って様々あること、3描画の発達段階における最終到達点が写実的な描画とは限らないこと、等が分かった。更に、新たな視点として数学における「形の美」に注目し、これに関する授業を開発することにより、受講者が美術における形の美との異同を考えるための手掛かりを検討すると共に、美術における形の美を理解するために必要な過程を考察した。計画調書に記載した研究内容は概ね遂行しつつあるが、形に関する基礎知識の調査の一環として海外の美術施設に赴き、生活環境とデザインの関係や日本の工芸教育への影響等を調査する点に関して、事前準備の幅を広げたことで延期したため上記の達成度とした。平成30年度は、発達段階に応じた形の学習プログラムの考案及び学習を促す出題方法の検討のため{1形の学習目的、2形の学習内容・方法}の研究を行った。1「形の学習目的」の研究では、子どもの自由な造形活動において、美しいものやことに対して感性を働かせて考えることの重要性を示すと共に、こうした活動を促すには、子どもが取り組みたいと思う魅力となる美(自然)が教材に内包されることの必要性を示した。また近年「生きる力」として重視されるストレスへの対処力を造形・美術教育で育成することの可能性を検討し、ストレスを軽減する「趣味〔hobby〕」が「美的趣味〔taste〕」と重複する点を明らかにし、その趣味の教育にはV.ローウェンフェルドが提唱した美術教育療法が有効であるとした上で、美術教育療法の成立のためには、遊びの創造的で美的な潜在力に注目した人間学的な遊戯観に基づく「遊ぶことを学ぶ」ための教材開発が必要である点を確認した。他方、2「形の学習内容・方法」の研究では、1の結果に基づいて開発した教材及びカリキュラムを小学校教員養成課程の授業で実施し、その学習順序と内容を、P.クレーが『教育スケッチブック』に挙げた講義を手掛かりに検証して、結果、難度が高い内容の学習を複数回行う教材及びカリキュラムへの改良の必要性を確認した。また、形に関する知識を大学生に尋ねたアンケート結果をB.ムナーリの『円』『正方形』『三角形』の内容と比較し、大学生の回答が学校教育で習得した算数及び数学的内容に限られ画一的であったことから、見立てや印象、文化や伝統等の汎用性があり制作方法に着目出来る知識や、形の捉え方をメタ認知したり思考したりするための鑑賞の発達段階や美術批評に関する知識、更には論理的な感性の理解のための知識の習得が必要であることを示した。研究計画調書に記載した研究内容は概ね遂行しつつあるが、本年度予定していた海外の美術施設に赴いて行う調査を延期したため上記の進捗状況とした。今後の研究では、まず、「形に関する基礎知識」の調査の一環として海外の美術施設に赴き、生活環境とデザインの関係や日本の工芸教育への影響等を調査する。
乱流の情報縮約手法の開発:ウェーブレットの視点から

3次元非圧縮乱流の情報縮約手法の開発をウェーブレットの視点から行った。具体的には、(A)等方な乱流に対する、ウェーブレット非線形フィルタリングとフーリエ線形フィルタリングの比較、(B)ウェーブレット解析による非等方な乱流の間欠性の定量化、(C)ウェーブレットに基づいた非圧縮乱流の適合格子シミュレーション手法の開発ならびに、混合層乱流に対するその手法の性能評価を行った。本研究の目的は、数理・物理学的根拠を持った乱流の情報縮約手法の開発をウェーブレットの視点から行うことである。平成22年度の主な成果は以下のとおりである。(A)乱流の巨大自由度を縮約する手法の1つである、適合格子を用いた秩序渦度シミュレーション(CVS)手法の計算コストの見積もりを行った。適合格子CVSには、直接数値計算(DNS)には存在しないオーバヘッド(ウェーブレット変換やデータ構造に伴うデータアクセスなど)がある。適合格子CVSで用いるデータ構造として、ハッシュテーブルを用いることで、適合格子CVSの計算量がO(N)とできることがわかった(Nは適合格子の全格子点数である)。(B)CVS手法は、乱流中に間欠的に分布する秩序構造のみを抽出し、その時間発展を捉える手法である。工学的に重要な非等方性乱流へのCVSの拡張に有用な知見を得るため、一様磁場下の低磁気レイノルズ数電磁流体乱流の間欠性を直交離散ウェーブレット解析により定量化した。フーリエスペクトル法によって、格子点数512の3乗のDNSを地球シミュレータ上で行い、得られたDNSデータに対して、スケールと方向に依存したウェーブレット解析を行った。その結果、ある強さの一様磁場に対して、(1)各スケールにおいて一様磁場と垂直な方向に乱流のエネルギーが卓越すること、(2)一様磁場が、乱流場の磁場方向の間欠性の増加に重要な役割を果たしていることなどが分かった。(A)と(B)によって得られた知見は、乱流の適合格子CVSの発展に重要であると考えられる。本研究の目的は、数理・物理学的根拠をもった乱流の情報縮約手法の開発をウェーブレットの視点から行うことである。ウェーブレット解析に基づく情報縮約手法として、適合格子を用いた秩序渦シミュレーション手法(CVS)を開発し、その信頼性や計算コストの評価を行う。平成23年度の主な成果は以下のとおりである。本研究では、(A)有限体積法に基づいた非圧縮性乱流に対する適合格子CVSを開発し、(B)対象として3次元非圧縮混合層乱流をとりあげ、適合格子CVSと直接数値計算(DNS)によって得られる統計量や、計算コストの比較を行った。(A)適合格子CVSとDNSともに、速度場の時間発展には部分段階法、2段2次のルンゲクッタ法を用いた。シミュレーションで解く必要のある圧力のポアソン方程式は、そのポアソン方程式に擬似時間項を付加して得られる放物型の方程式を時間積分し、その定常解を求めることで、解を得た。擬似時間の時間積分には2次精度有理ルンゲクッタ法を用いた。適合格子CVSでは、各時刻における適合格子の生成に双直交離散ウェーブレット変換を用いた。(B)適合格子CVSは、DNSによって得られた乱流エネルギーの時間発展をよく再現した。また、CVSでは強い渦構造の周囲に、適合格子が集中している様子を確認できた。自由度については、適合格子CVSはDNSの3040%程度、メモリについては、適合格子CVSはDNSの4050%程度まで削減できた。CPU時間を、(a)ポアソン方程式と(b)それ以外の部分にかかる計算にわけて計測したところ、(a)については削減できなかったが、(b)については削減できた。今後の課題としては、ポアソン方程式の高速解法の実装があげられる。
転写の亢進と抑制の双方に機能する核蛋白質IκB-ζによる自然免疫活性化の制御機構

炎症時の遺伝子の転写に対して亢進と抑制という双方の機能をもつIκB-ζについて、その分子機能、転写制御機構、刺激特異的誘導機構について解析を進めた。その結果、まず、IκB-ζ分子内部のアミノ酸153-187の領域に核移行シグナルが、アミノ酸329-402の領域に転写活性化活性をもつ領域が存在することを明らかにした。また、IκB-ζの過剰発現によって、リポ多糖(LPS)刺激に伴う腫瘍壊死因子(TNF-α)の産生が抑制される一方、インターロイキン(IL)-6の産生が転写レベルで亢進することを見出した。さらに、IκB-ζ遺伝子欠損マウスを解析し、IκB-ζ欠損マクロファージでは、LPS刺激に伴うTNF-αや一酸化窒素の産生は正常マウスと遜色ないものの、IL-6の産生がほぼ消失すること、in vivoでは、LPS刺激に伴うIL-12の産生が障害を受けているのに対し、TNF-αの産生が増強されていることを明らかにした。IκB-ζによってその転写が亢進する遺伝子のプロモーターの解析の結果、IκB-ζによる転写亢進には、NF-κBの結合配列が必須であるが十分でなく、この配列以外のシスエレメントの有無がIκB-ζの機能を左右していることが判明した。また、IκB-ζの刺激特異的誘導機構について、LPSとIL-1β刺激によってIκB-ζmRNAの安定性が著しく上昇していることを見出した。さらに、IκB-ζmRNAの3'非翻訳領域に存在する配列が、IκB-ζ遺伝子の転写後修飾機構による刺激特異的発現を決定していることを明らかにした。従って、IκB-ζは自然免疫刺激時に特異的に発現誘導され、一群の炎症遺伝子の発現に必須の役割を果たす一方、別の遺伝子群の発現を抑制する炎症応答の鍵を握る分子の一つであることが明らかになった。まず、核タンパク質であるIκB-ζの核移行シグナル(NLS)を同定するため、各種のIκB-ζ断片をGreen Fluorescence Protein (GFP)との融合タンパク質としてHeLa細胞で発現し、それぞれの局在を蛍光顕微鏡下で観察した。その結果、NLSはアミノ酸153-187の領域に存在することが示された。さらに、各種IκB-ζ断片を、GAL4のDNA結合ドメインとの融合タンパク質としてHEK293細胞に発現させ、その転写活性化能をGAL4 reporterを用いて測定することにより、転写活性化活性について検討した。その結果、ヒトIκB-ζ分子内部断片に強い転写活性化活性が検出された。この領域の示す活性は、全長のIκB-ζ及び、C末端側のアンキリンリピートを含む断片を用いた場合には見出されなかった。マウスIκB-ζを用いた場合にも同様の結果が得られ、分子内の相互作用により、この活性が抑制されていることが示唆された。このIκB-ζの活性発現機構について検討したところ、転写活性をもたないNuclear factor (NF)-κBサブユニットp50のGAL4融合タンパク質を全長のIκB-ζと共発現した際に、転写活性が検出されるようになることを見出した。

また、NIH3T3細胞にレトロウイルス発現系を用いてIκB-ζを過剰発現したところ、LPS刺激に伴うinterleukin (IL)-6の産生を転写レベルで亢進することを見出した。以上の結果より、IκB-ζ分子の内部には転写活性化能をもつ領域が存在し、通常分子内の他の領域を介して抑制されているこの活性は、NF-κBやその他の因子との相互作用を介して発揮されるようになる可能性が示唆された。こうして活性化されたIκB-ζは、IL-6の転写などに代表される自然免疫応答を転写レベルで制御している重要な因子の一つであると考えられる。IκB-ζは、未刺激の細胞ではほとんどその発現がみられないが、LPSのみならず、他のToll-like receptor (TLR)を刺激する各種微生物由来物質や、IL-1β刺激によっても誘導される。一方、同様の炎症性サイトカインであるTNF-αによる刺激では、ほとんどその誘導がみられない。既に、この誘導にはNF-κBの活性が必須であるが十分でないことをこれまでに明らかにした。今回、この特異的誘導機構について検討した結果、LPSとIL-1β刺激によってIκB-ζmRNAの分解速度が低下し、安定性が著しく上昇していることが明らかとなった。従ってIκB-ζは、NF-κBの活性化に伴い転写が亢進するとともに、TLR/IL-1 receptorに共通する細胞質内ドメインであるToll/Interleukin-1 receptor (TIR)ドメインの活性化に由来する機構によってmRNAの安定性が上昇することにより、特異的に誘導されることが明らかになった。さらに、IκB-ζの生体内での機能を明らかにする目的で、大阪大学の審良教授のグループとの共同研究によってIκB-ζ遺伝子欠損マウスの解析を行った。マクロファージの自然免疫応答について検討したところ、LPS刺激を受けたIκB-ζ^<-/->マクロフアージでは、TNF-αやNOは正常マウスと遜色なく産生されるものの、IL-6がほとんど産生されないことが判明した。このマクロファージでは、mRNAレベルでIL-6の誘導がほとんどみられないが、通常のEMSAでみたNF-κBの活性化、あるいは活性型特異的抗体を用いて調べたp38 MAP kinaseの活性化は正常であった。以上の観察とこれまでの結果より、IκB-ζはLPS刺激時のIL-6の転写亢進に必須に因子であることが明らかになった。炎症時の遺伝子の転写に対して亢進と抑制という双方の機能をもつIκB-ζによって、どのようにして個々の遺伝子の転写の方向が決定されているのかという点は、本研究で解明すべき重要課題の一つである。代表者らは、NF-κBによってその発現が制御されているIL-8、β-defensin 2遺伝子に対するNF-κBとIκB-ζの共発現の影響について検討し、IκB-ζはNF-κBによるIL-8の発現を抑制する一方、β-defensin 2の発現を亢進することを明らかにした。β-defensin 2の発現は、NF-κB p50サブユニットやIκB-ζ単独の強制発現では、ほとんど誘導されないが、両者の強制発現によって強く誘導された。さらにβ-defensin 2遺伝子のプロモーターについて解析を進めた結果、IκB-ζとNF-κBによる転写亢進には、NF-κBの結合配列が必須であるが十分でなく、NF-κB結合配列以外のシスエレメントがさらに要求されることを見出した。一方、NF-κB結合配列のみをもつプロモーターに対しては、IκB-ζは逆に、NF-κB依存的な転写活性の抑制にはたらくことから、このシスエレメントの有無がIκB-ζの機能を左右していることが明らかになった。また、IκB-ζの刺激
神経筋機能と機械的特性を考慮した膝関節屈筋包括的力発揮能力評価方法の開発

当該研究は、磁気刺激を用いた神経筋機能計測と超音波エラストグラフィを用いた機械的特性計測を統合した新規的な膝関節屈筋の力発揮能力評価方法を開発することを目的とした。我々は経皮的磁気刺激を用いて坐骨神経を刺激し、膝関節屈筋の神経筋機能を定量的に評価する新規的な方法に取り組み報告している。この手法に加え、筋の機械的特性についても統合して評価することで新規的な力発揮能力評価を行う研究である。2018年度は、これまで行ってきた神経筋機能計測方法をより詳細に行うために、磁気刺激と多点筋電計測システムを用いた計測実験環境の整備と予備実験を行った。その結果、今回の目的を果たすために必要な神経筋機能の詳細な評価には、神経筋機能の評価自体もこれまで以上に詳細な検討方法が必要であることが考えられた。また、機械的特性計測として、膝関節屈筋での筋弾性計測の計測再現性の検討を行った。予備実験を継続し、健康な対象者での包括的力発揮能力の解明に向けて、神経筋機能計測と機械的特性計測を継続する。前年度に実施した神経筋機能計測と機械的特性計測の基礎的情報を整理した上で、本研究課題の目的である神経筋機能計測と機械的特性計測を統合した包括的力発揮能力の解明に向けて実験を継続する。まずは健康な対象者について、膝関節屈筋の包括的力発揮能力の評価を行い、並行して、運動経験豊富な対象者や筋損傷の既往のある対象への評価も行う。機器購入に伴う環境整備に時間をかけたため、実験による被験者謝礼が予定より執行額が少なかった。翌年度に実験を継続するため、次年度使用額については被験者謝礼として用いることを計画している。翌年度分として請求する助成金は、実験消耗品、被験者謝礼、研究の途中経過報告や情報収集としての学会参加旅費に使用する予定である。
食品タンパク質に対する腸管免疫応答の分子制御機構の解析

1.パイエル板におけるインターロイキン(IL)-5,IL-6産生機構の解析(1)パイエル板由来樹状細胞,特にCD11b+樹状細胞は脾臓由来樹状細胞と比較してIL-6を産生能が高いことを明らかにした.(2)パイエル板由来未感作型CD4T細胞のIL-6分泌能が高いことを見い出した.(3)パイエル板においてIL-2レセプター(IL-2R)を発現し,CD3,B220を発現しない非T非B細胞が,IL-2刺激に対し,IL-5を分泌することを明らかにした.このIL-2R発現細胞はこれまでIL-5を分泌することが知られるT細胞,NK細胞,好酸球,マスト細胞と異なっていた.また,パイエル板細胞からこの細胞群を除去した場合IL-5の分泌が有意に低下した.2.卵白アルブミンを長期間経口摂取し経口免疫寛容の誘導された卵白アルブミン特異的T細胞抗原レセプタートランスジェニックマウス由来脾臓T細胞において,T細胞抗原レセプター(TCR)からのシグナル伝達について解析した.経口免疫寛容状態のT細胞はTCR刺激に対するTCR-ζ,ZAP-70,LATのリン酸化の程度が低く,細胞内Ca^<2+>濃度上昇,NF-ATの脱リン酸化および核内移行が抑制されていた.一方で,Ras/MAPK経路のERK, SAPKには差が認められなかった.これらの結果からTCR刺激によるCa^<2+>経路の活性化が弱いことが低応答性の原因と考えられた.一方経口免疫寛容状態のT細胞についてIL-2Rからのシグナル伝達経路について解析したところ,IL-2Rの発現量やJAK-STAT系の活性化には変化がなかったが,細胞周期抑制分子p27^<kip1>のIL-2刺激による分解が抑制されており,これがIL-2に対する低応答性の要因であると考えられた.1.パイエル板におけるインターロイキン(IL)-5,IL-6産生機構の解析(1)パイエル板由来樹状細胞,特にCD11b+樹状細胞は脾臓由来樹状細胞と比較してIL-6を産生能が高いことを明らかにした.(2)パイエル板由来未感作型CD4T細胞のIL-6分泌能が高いことを見い出した.(3)パイエル板においてIL-2レセプター(IL-2R)を発現し,CD3,B220を発現しない非T非B細胞が,IL-2刺激に対し,IL-5を分泌することを明らかにした.このIL-2R発現細胞はこれまでIL-5を分泌することが知られるT細胞,NK細胞,好酸球,マスト細胞と異なっていた.また,パイエル板細胞からこの細胞群を除去した場合IL-5の分泌が有意に低下した.2.卵白アルブミンを長期間経口摂取し経口免疫寛容の誘導された卵白アルブミン特異的T細胞抗原レセプタートランスジェニックマウス由来脾臓T細胞において,T細胞抗原レセプター(TCR)からのシグナル伝達について解析した.経口免疫寛容状態のT細胞はTCR刺激に対するTCR-ζ,ZAP-70,LATのリン酸化の程度が低く,細胞内Ca^<2+>濃度上昇,NF-ATの脱リン酸化および核内移行が抑制されていた.一方で,Ras/MAPK経路のERK, SAPKには差が認められなかった.これらの結果からTCR刺激によるCa^<2+>経路の活性化が弱いことが低応答性の原因と考えられた.一方経口免疫寛容状態のT細胞についてIL-2Rからのシグナル伝達経路について解析したところ,IL-2Rの発現量やJAK-STAT系の活性化には変化がなかったが,細胞周期抑制分子p27^<kip1>のIL-2刺激による分解が抑制されており,これがIL-2に対する低応答性の要因であると考えられた.(1)パイエル板におけるインターロイキン(IL-)5,IL-6産生機構の解析パイエル板由来樹状細胞はCD40分子からの刺激やLPS刺激によりIL-6を産生した.また,パイエル板由来未感作型CD4T細胞のIL-6分泌能が高いことを見い出した.さらにパイエル板においてIL-2レセプター(IL-2R)を発現し,Thy-1,B220を発現しない非T非B細胞が,刺激に対し,IL-5を分泌することが明かとなった.このIL-2R発現細胞の細胞表面分子を解析した結果,この細胞は樹状細胞,マクロファージ,NK細胞のいずれでもなかった.(2)経口免疫寛容の誘導におけるT細胞内シグナル伝達機構の解析OVAを長期間経口摂取し経口免疫寛容の誘導されたTCR-Tg由来脾臓T細胞において,T細胞抗原レセプター(TCR)からのシグナル伝達について解析した.経口免疫寛容により低応答化したT細胞はTCR刺激に対するLAT,ZAP-70,TCR-zetaのリン酸化の程度が低く,また,Ca2+/カルシニューリン(CN)経路の下流においてNF-ATの脱リン酸化および核内移行が抑制されていた.一方で,Ras/MAPK経路のERK,MEKのリン酸化は経口免疫寛容の誘導されていないT細胞と差が認められなかった.

経口免疫寛容状態のT細胞においてTCR刺激によるTCR-zetaの活性化が阻害され,その結果,ZAP-70,LATの活性化が低く,このためCa2+/CN経路が活性化されず,これがT細胞低応答性の原因と考えられた.1.パイエル板におけるインターロイキン(IL-)5, IL-6産生機構の解析パイエル板におけるIL-2レセプター(IL-2R)を発現し刺激に対しIL-5を分泌する細胞が,T細胞,B細胞.樹状細胞、マクロファージ、NK細胞のいずれでもないことを既に確認していたが,さらに好酸球、マスト細胞とも異なることが示された.また,パイエル板細胞からこの細胞群を除去した場合,IL-2刺激,抗CD3抗体刺激により誘導されるIL-5の分泌が大きく低下し,この細胞がパイエル板細胞のIL-5産生に大きく寄与していることが示唆された、一方,パイエル板樹状細胞はin vitroにおいてIgA産生を誘導し、抗IL-6抗体の添加によりこのIgA産生は阻害された.このことから,パイエル板樹状細胞がIL-6産生により腸管におけるIgA産生に関与することが示唆された.さらに,パイエル板樹状細胞のうちCD11b陽性のミエロイド系樹状細胞のIL-6産生が高いことが明らかになった.また,この細胞群は成熟マーカーDEC-205を発現している細胞が多く存在し,腸内の微生物や食物による刺激により成熟が促進されている可能性が考えられた.2.経口免疫寛容の誘導におけるT細胞内シグナル伝達機構の解析経口免疫寛容状態のT細胞についてIL-2Rからのシグナル伝達経路について解析したところ,IL-2Rの発現量やJAK-STAT系の活性化には非寛容T細胞と違いがなかった.一方,IL-2刺激による細胞周期抑制分子p27kip1の分解が抑制されており,これがIL-2に対する低応答性の要因であると考えられた.
人工膜上に再構築したRasシグナル伝達系の1分子可視化解析

低分子量Gタンパク質の一つRasは細胞の増殖や分化の促進に重要な役割を果たす、代表的なシグナル伝達タンパク質である。通常はGDPと結合した不活性型であるが、ホルモンなどの細胞外刺激により、GTPと結合した活性型へと交換される。活性型のRasはRafやRalGDSなど多様な標的タンパク質と結合することにより、様々なシグナル伝達経路に関与している。しかし、Rasがどのようにしてそれら多様な標的タンパク質を選択しているかは明らかではない。本研究は、人工膜上という、比較的生体内に近い条件で、しかし環境をコントロール系を構築することで、Rasの詳細な機能解明を目的としている。DOPCとNi-NTA-DOGSを混合して作成したliposomeを20mMCa^<2+>条件下で融合させ、電気炉で処理したスライドガラス上に脂質二重膜を形成させることに成功した。His-tagを融合させたRasタンパク質を膜上で観察することに成功した。1分子観察時においては、タンパク質は固定されていることが望ましいが、AnnexinVを加えることで、膜上のタンパク質の拡散を抑制することに成功した。さらに、非特異的結合の激しいRasの標的タンパク質を、二重膜で防ぐことにより、Rasと標的タンパク質との1対1の結合乖離の観察に成功した。また、蛍光標識したRasと蛍光性GTPアナログとのFRETを、ガラスとの相互作用にみだされることなく観察することに成功した。その結果、Rasの構造はmsecsecの領域でゆっくりと揺らいでいることが示唆された。本研究で作成した系は、膜タンパク質の研究やシグナル伝達系の研究において、非常に有用であり、今後これらの分野において、積極的に利用される系と考えられる。低分子量Gタンパク質の一つRasは、細胞の増殖や分化の促進に重要な役割を果たしている代表的なシグナル伝達タンパク質である。ホルモン等の細胞外刺激に応じて、GTPと結合した活性型となる。活性型のRasは、RafやRalGDS、PI3K等の多様なエフェクター分子と相互作用し、様々なシグナル伝達経路に関与している。しかしながら、Rasがそれら多様なエフェクター群をどのように認識し、相互作用しているかは未解明である。本年度、申請者は、1分子イメージング技術と、蛍光共鳴エネルギー移動法(FRET)を融合させた、1分子FRET技術を用いることで、活性型Rasの構造変化と機能の相関を調べた。FRETとは、二つの異なる蛍光色素(ドナー、アクセプター)を用いることで、二つの色素間の位置関係を調べる手法である。タンパク質1分子に蛍光色素をそれぞれ標識し、1分子レベルでイメージングすることで、タンパク質分子内の構造変化を観ることができる。野生型Rasと、特定のエフェクターとのみ選択的に結合する変異体であるRasT35SとRasE37G(それぞれエフェクターであるRafとRalGDSと選択的に結合する)を、それぞれ組み替え体として得た。ドナーとしてRasは蛍光色素Cy3で特異的に標識し、アクセプターとして申請者が合成した蛍光性GTPアナログCy5-GTPを用いた。Cy3とCy5の蛍光を、同時に1分子イメージングすることで、Ras1分子のミリ秒から秒オーダーでのゆっくりとした構造変化を溶液中において可視化することができる。野生型Rasを1分子FRETを用いて観察したところ、同じ野生型であるにも関わらず、それぞれ異なる構造をとっている様子が計測された。さらに、Rasの構造が秒オーダーという非常にゆっくりとした時間で自発的に遷移している様子が計測された。また、同じように変異体RasであるRasT35SやRasE37Gを計測したところ、野生型Rasとは異なり、ある特定の構造に固定されていることを示唆する結果を得た。今回得られた結果から、活性型のRasは、多様な準安定状態をとり、その状態間をミリ秒から秒オーダーという、非常にゆっくりとした時間で遷移することで、多様なエフェクターを認識し、相互作用していることが示された。低分子量Gタンパク質の一つRasは、代表的なシグナル伝達タンパク質である。Rasは多様なエフェクター分子と相互作用し、様々なシグナル伝達経路に関与していることが知られている。細胞の増殖や分化に関与している一方で、細胞死にも関与するなど相反する経路の調節に関わっている。Rasがエフェクターをどのように認識し選択しているかは未解明である。近年、タンパク質の柔らかさが、その機能と深く関わっていることが重要視されていることをふまえ、本研究では、Rasの構造変化と、エフェクターの分子認識機構について明らかにすることを目的としている。実験系は、全反射顕微鏡による1分子イメージング法を用いた。本年度は、新たにRasとエフェクター分子であるRafとの相互作用の1分子レベルでの可視化を行った。その結果、不活性型Rasと活性型Rasのどちらにも同じ時定数Rafが結合することがわかったが、結合頻度には10倍以上の差があることがわかった。また蛍光共鳴エネルギー移動法(FRET)に加え、蛍光色素の偏光を同時観察可能な顕微鏡を新規に開発し、Ras 1分子の構造変化の可視化に成功した。その結果、Rasの構造には複数の準安定状態がみられ、その状態間を秒オーダーでゆっくりと遷移していることが示唆された。また特定のエフェクターとのみ結合できる変異体及びエフェクターとの結合時の構造を計測したところ、Rasの構造とエフェクターとの選択性は1対1に対応していることが示唆された。

研究成果は日本生物物理学会及び日本分子生物学会上で発表した。これまでの研究成果は本年中に学術論文に投稿をする。また、膜上で観察するためのRasは既に遺伝子工学的に作成し、人工膜上でのRasとエフェクター1分子を観察する顕微鏡の立ち上げはほぼ完了した。本年度は、論文投稿を中心に、積極的に海外での学会発表を行い、国内外へ研究成果の発表を行っていく。低分子量Gタンパク質の一つRasは細胞の増殖や分化の促進に重要な役割を果たす、代表的なシグナル伝達タンパク質である。通常はGDPと結合した不活性型であるが、ホルモンなどの細胞外刺激により、GTPと結合した活性型へと交換される。活性型のRasはRafやRalGDSなど多様な標的タンパク質と結合することにより、様々なシグナル伝達経路に関与している。しかし、Rasがどのようにしてそれら多様な標的タンパク質を選択しているかは明らかではない。本研究は、人工膜上という、比較的生体内に近い条件で、しかし環境をコントロール系を構築することで、Rasの詳細な機能解明を目的としている。DOPCとNi-NTA-DOGSを混合して作成したliposomeを20mMCa^<2+>条件下で融合させ、電気炉で処理したスライドガラス上に脂質二重膜を形成させることに成功した。His-tagを融合させたRasタンパク質を膜上で観察することに成功した。1分子観察時においては、タンパク質は固定されていることが望ましいが、AnnexinVを加えることで、膜上のタンパク質の拡散を抑制することに成功した。さらに、非特異的結合の激しいRasの標的タンパク質を、二重膜で防ぐことにより、Rasと標的タンパク質との1対1の結合乖離の観察に成功した。また、蛍光標識したRasと蛍光性GTPアナログとのFRETを、ガラスとの相互作用にみだされることなく観察することに成功した。その結果、Rasの構造はmsecsecの領域でゆっくりと揺らいでいることが示唆された。本研究で作成した系は、膜タンパク質の研究やシグナル伝達系の研究において、非常に有用であり、今後これらの分野において、積極的に利用される系と考えられる。
多機能性金属ポルフィリン組織体の構築と界面を利用した光誘起電子移動反応

本研究の目的は均一系による水の完全分解反応の達成である。これまでに、クロロプラストのPSI、PSIIを模倣した反応系の構築を行った。特に、合成系で困難な反応過程においては、生体分子あるいは生体系をそのまま利用し、酸素発生反応系および水素発生反応系をそれぞれ構築した。将来的に、全て人工系に置き換えた水の完全分解反応の実現が期待される。本研究の実施計画に従い、水溶液中で光励起一重項を利用した光水素発生系の構築を実現した。光励起一重項を利用することにより、1分子当たりの水素発生量の上昇ならびに、吸収したフォトン当たりの水素変換効率の上昇が期待できる。水溶液系において光励起一重項経由の電子移動が進行する化合物として、ビスビオローゲン結合型疎水性ポルフィリンを創製した。電子移動反応について調べた結果、光励起一重項経由でのみ電子移動が進行することがわかった。また、水溶液中で蛍光寿命がさらに短いことから、電子移動が促進されているといえる。これは、水中でsolvent cageの形成に有利であることを示しており、このビオローゲン結合型ポルフィリンの特徴が顕著に見られた。調製したビスビオローゲン結合型疎水性ポルフィリンと酵素ヒドロゲナーゼとを組み合わせた光水素発生反応を行った。その結果、効率の良い光水素発生反応が進行した。以上のように、水溶液中で光励起1重項を利用した水素発生反応系を構築することができた。本研究は高機能性を有する分子配列された多機能性金属ポルフィリン組織体を合成し、光励起分子内電子移動過程を明らかにするとともに、本系を利用した光水素発生システムの構築を目指すものである。従来より均一系による光水素発生反応では電子供与体-光増感剤-電子伝達体-触媒よりなる4成分系がよく用いられている。本反応では光励起された光増感剤と電子伝達体との間の電荷分離過程が反応速度を支配する重要なステップである。そこで光増感剤と電子伝達体とを結合し、光励起分子内電子移動が容易に進行する光増感剤組織体を合成すれば、光増感作用と電子伝達作用との複合的機能を持つことが期待され、より効率の良い光水素発生系の構築が可能である。また、ミセル等の界面を利用すれば、静電反発による電荷分離効率の向上が期待される。本年度は電子供与体-光増感剤-電子伝達体-触媒より成る均一系4成分系による光水素発生を行い、各成分化合物の合成を行った。特に、ポルフィリン、フタロシアニンを中心とした光増感剤の開発を行い、光化学的性質を調べるとともに、反応機構の解明を行った。これら4成分系において得られた結果に基づき、電子伝達体結合型光増感剤の設計・合成を行っている。その中、ビオローゲン結合型ポルフィリンおよびビオローゲン結合型ルテニウム錯体では分子内に結合している光増感剤とビオローゲンとの間で光励起分子内電子移動が起こり、効率の良い電荷分離および光水素発生反応が進行することがわかった。さらに、効率の良い光水素発生を行うには電荷分離効率、および触媒との電子伝達の向上が重要であることを明らかにし、電荷分離効率の向上には、電荷分離種同士の再結合抑制が重要であり、現在ミセル界面による静電反発の利用を検討している。

そこで光増感剤と電子伝達体とを結合し、光励起分子内電子移動が容易に進行する光増感剤組織体を合成すれば、光増感作用と電子伝達作用との複合的機能を持つことが期待され、より効率の良い光水素発生系の構築が可能である。また、ミセル等の界面を利用すれば、静電反発による電荷分離効率の向上が期待される。昨年度は均一系4成分系による光水素発生を行い、各成分化合物の合成を行った。特に、ポルフィリン、フタロシアニンを中心とした光増感剤の開発を行い、光化学的性質を調べるとともに、反応機構の解明を行った。この結果に基づき、電子伝達体結合型光増感剤の設計・合成を行った。その中、ビオローゲン結合型ポルフィリンおよびビオローゲン結合型ルテニウム錯体では分子内に結合している光増感剤とビオローゲンとの間で光励起分子内電子移動が起こり、効率の良い電荷分離および光水素発生反応が進行することがわかった。さらに、効率の良い光水素発生を行うには電荷分離効率、および触媒との電子伝達の向上が重要であることを明らかにし、亜鉛ポルフィリンでは光励起一重項状態と三重項状態を経由したメチルビオローゲンへの電子移動過程と逆電子移動過程に焦点を当てた実験を行っている。本研究は高機能性を有する分子配列された多機能性金属ポルフィリン組織体を合成し、光励起分子内電子移動過程を明らかにするとともに、本系を利用した光水素発生システムの構築を目指すものである。ポルフィリンは、可視光領域に強い吸収を有しており、光増感剤としてよく用いられている。また、水素発生触媒には酵素ヒドロゲナーゼが有効であることが知られている。ヒドゲナーゼへの電子伝達は生体内における電子伝達体であるチトクロームc_3が有効であるが、チトクロームc_3は光励起されたポルフィリンとの間で効率の良い電荷分離が進行しない。そこで、電子伝達体としてメチルビオローゲンとを組み合わせた系を検討した。また、電気化学水晶振子微量天秤を用い、チトクロームc_3とメチルビオローゲンの間の電子伝達における分子認識・複合体形成について研究を行った。ポルフィリン濃度が高濃度の場合、チトクロームc_3の濃度の増加に伴い、水素発生速度が飛躍的に増加した。これは、光励起したポルフィリンから、メチルビオローゲン、チトクロームc_3、ヒドロゲナーゼへと効率よく電子が伝達した結果、水素発生効率が上昇したためと考えられる。このように、電子伝達体としてのチトクロームc_3を用いる系は人工の電子伝達体であるメチルビオローゲンを単独で用いる場合より効率がよい。そこで、チトクロームc_3の有する分子認識・複合体形成などの電子伝達機能の解明を行い、光水素発生の効率化を目指した。チトクロームc_3の電子伝達機構を解析するために、酸化還元と共役した分子間相互作用の測定法として、電気化学的水晶発振子微量天秤を用いたシステムを新たに構築した。これを用いて、まず、チトクロームc_3とビオローゲンとの間の電子伝達複合体形成について検討を行った。電子移動複合体内で電子伝達反応が進行し、チトクロームc_3の還元が終了すると、電子移動複合体は解離することがわかった。チトクロームc_3は還元されると構造変化が起き、ビオローゲンとの間の親和性が変化したと考えられる。アノード応答でも同様の周波数変化が観測されており、チトクロームc_3がビオローゲンと電子伝達する際の複合体形成反応を明らかにした。高機能性を有する分子配列された多機能性金属ポルフィリン組織体を合成し、光励起分子内電子移動過程を明らかにするとともに、本系を利用した光水素発生システムの構築を目指すものである。
雄性配偶子形成における小胞体品質管理の役割-小胞体Jタンパク質に着目した解析

分泌タンパク質の合成の場である小胞体には,新規に合成されたタンパク質の高次構造形成を監視する品質管理機構が存在する.申請者は,シロイヌナズナ小胞体分子シャベロン,AtERdj3Bは小胞体品質管理で機能しており,その遺伝子欠損株は高温条件である29°Cで不稔となる.申請者は,aterdj3b株を用いて,雄性配偶子形成における小胞体品質管理の役割の解析を行ってきた.本年度は,AtERDJ3B遺伝子が,葯の最も内側の組織であるタペート細胞で発現していること,タペート細胞特異的なAtERDJ3Bの発現により,aterdj3b株の高温での不稔が部分的に抑圧されることを明らかにした.光学顕微鏡観察により,aterdj3b株ではタペート細胞の肥大化や空胞化などの異常が引き起こされていることを見いだした.これらの結果から,AtERdj3Bがタペート細胞での機能発現において重要な役割を果たしていることが示めされた.このようなaterdj3b株とよく似た表現型を示す変異体として,細胞膜に局在するleucin rich-repeat recptor like kinase, RPK2の変異体が知られている.そこで,29°Cで栽培したaterdj3b株から全RNA画分を調製し,RT-PCR法で遺伝子発現の解析を行った.結果,aterdj3b株では,RPK2遺伝子自身の発現には影響はないが,RPK2の下流で機能する遺伝子の発現パターンに異常が見られたことから,29°Cで栽培したaterdj3b株では,RPK2が正常に機能していないことが示唆された.つまり,AtERdj3Bが,RPK2の生合成において重要な役割を果たしていることが示唆された.小胞体には異常タンパク質を除去する品質管理機構が存在する.本研究では,植物の雄性配偶子における小胞体品質管理の役割を明らかにするため,モデル植物シロイヌナズナの小胞体品質管理で機能すると予測された小胞体Hsp40, AtERdj3Bに注目し解析を行った.本年度は,1.AtERdj3Bが小胞体品質管理で機能しているか解析,2.AtERdj3Bの胞子体世代における機能を解析,3.新規小胞体品質管理基質,AtCPY*-GFPの解析を行った.1.GST融合タンパク質(GST-AtERdj3B)を大腸菌から調製し,解析を行なった.結果,AtERdj3Bは,ATP依存に小胞体Hsp70,Bipと結合することや異常タンパク質の凝集を抑制することが明らかとなった.この結果は,AtERDj3Bが小胞体品質管理で機能していることを強く示唆する結果である.2.本年度は,aterdj3B欠損株の葯の樹脂切片を作製し,顕微鏡観察を行った.シロイヌナズナの花粉表面はpollen coatとよばれる構造体で覆われており,雌しべへの受粉や花粉の保護において重要な役割をはたしている.aterdj3b欠損株ではpollen coatの形成,特にpollen coatの花粉表面への沈着過程に異常が観察された.これまで,pollen coatの沈着過程の分子機構の詳細は明らかになっていない.今後,花粉形成における新たな知見が得られることが期待される.3.AtCPY*-GFPの出芽酵母における分解経路を解析し,出芽酵母と植物細胞の分解経路の比較を行なった.AtCPY*-GFPは糖鎖をもつが,分解にその糖鎖を必要としないユニークな性質をもつこと.分解における小胞体-ゴルジ体輸送の必要性が植物細胞では必要ないが,出芽酵母では必要なことを明らかとした.分泌タンパク質の合成の場である小胞体には,新規に合成されたタンパク質の高次構造形成を監視する品質管理機構が存在する.申請者は,シロイヌナズナ小胞体分子シャベロン,AtERdj3Bは小胞体品質管理で機能しており,その遺伝子欠損株は高温条件である29°Cで不稔となる.申請者は,aterdj3b株を用いて,雄性配偶子形成における小胞体品質管理の役割の解析を行ってきた.本年度は,AtERDJ3B遺伝子が,葯の最も内側の組織であるタペート細胞で発現していること,タペート細胞特異的なAtERDJ3Bの発現により,aterdj3b株の高温での不稔が部分的に抑圧されることを明らかにした.光学顕微鏡観察により,aterdj3b株ではタペート細胞の肥大化や空胞化などの異常が引き起こされていることを見いだした.これらの結果から,AtERdj3Bがタペート細胞での機能発現において重要な役割を果たしていることが示めされた.このようなaterdj3b株とよく似た表現型を示す変異体として,細胞膜に局在するleucin rich-repeat recptor like kinase, RPK2の変異体が知られている.そこで,29°Cで栽培したaterdj3b株から全RNA画分を調製し,RT-PCR法で遺伝子発現の解析を行った.結果,aterdj3b株では,RPK2遺伝子自身の発現には影響はないが,RPK2の下流で機能する遺伝子の発現パターンに異常が見られたことから,29°Cで栽培したaterdj3b株では,RPK2が正常に機能していないことが示唆された.つまり,AtERdj3Bが,RPK2の生合成において重要な役割を果たしていることが示唆された.