hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
部分多様体の幾何学の展開と応用

極小等径超曲面のインデックスの計算は,主曲率の個数が3以下の場合は,Yan氏によってすでになされ,ここでは,4,6の場合を明らかにしたかったが,当初2年で行う計画が,やむを得ぬ事情で1年半で帰国という状況になったこともあり,まだ最終結論には至っていない.しかし,主曲率の個数6の場合は3の場合との対応がわかっており,しかも分類定理により,等質であることがわかっているので,3の場合を手掛かりに考えられると信じている,4の場合も2の場合との関連でとっかかりがありそうである.ただ,そのバンドル構造を明らかにすることは,かなりの計算を要するので未完成である.このインデックスの計算は,焦部分多様体という次元の下がった極小部分多様体に対しても,超曲面の極限として,調べることが重要である.実際,極小部分多様体に対してインデックスやナリティを調べることは,退化した部分に集約される情報を見出すことがヒントとなる.例えばクリフォード超曲面の場合,退化した極小部分多様体は単に低次元全測地的球面であるから,インデックスもナリティも簡単にわかる.そのチューブをとったものがクリフォード超曲面で,その中に極小のものが唯一現れるので,この様子を調べれば主曲率4の場合につながる.さらには3,6の対応につなげることも試みている.これにより,もう一つの課題である極小部分多様体の安定性を探ることになり,もし主曲率の個数4の場合にもこの議論ができると,非等質な場合の考察につながるので,より本質的である.最終結論には至らずとも,非等質なものをどう扱って良いのかは大きな課題である.さらにガウス写像の像が複素2次超曲面の極小ラグランジュ部分多様体になっていることから,その安定性を調べることにも関係してくる.いずれも等質な場合にリー群論を用いて,計算を行っている.27年度が最終年度であるため、記入しない。27年度が最終年度であるため、記入しない。1..S.T.Yauの予想の解決の拡張:「球面のコンパクト極小超曲面の第一固有値はその次元に等しい」は最終的にYan氏の貢献によりすべての等径超曲面について肯定的に解決された(Tang-Yan, JDG 2013).これをより一般の極小超曲面に対して拡張するため,デュパン超曲面を考察している.2.モーメント写像による表現の拡張:球面内の等径超曲面は,異なる主曲率の個数gが4のとき,運動量写像のノルムの二乗の等位面として記述される(宮岡, Math. Ann. 2013). g=1,2,3,6に対しても運動量写像を用いての記述を行なうことを目指し,さらに複素射影空間などの対称空間の等径超曲面についても同じ問題に取り組んでいる.3.等径超曲面の焦部分多様体の更なる研究:焦部分多様体にはアインシュタイン多様体との類似性があり,リッチ曲率を調べることにより,GrayのA多様体,B多様体の具体例が現れる.この観点から焦部分多様体の研究をより深めている.さらに新たな取り組みとして,4.シンプレクティック幾何,特にラグランジュ部分多様体の研究のため,体積安定性,平均曲率流による変形,ガウス像の交叉理論などの探求の準備を行い,超曲面で成り立つ事実を余次元の高い場合に拡張しつつある.極小等径超曲面のインデックスの計算は,主曲率の個数が3以下の場合は,Yan氏によってすでになされ,ここでは,4,6の場合を明らかにしたかったが,当初2年で行う計画が,やむを得ぬ事情で1年半で帰国という状況になったこともあり,まだ最終結論には至っていない.しかし,主曲率の個数6の場合は3の場合との対応がわかっており,しかも分類定理により,等質であることがわかっているので,3の場合を手掛かりに考えられると信じている,4の場合も2の場合との関連でとっかかりがありそうである.ただ,そのバンドル構造を明らかにすることは,かなりの計算を要するので未完成である.このインデックスの計算は,焦部分多様体という次元の下がった極小部分多様体に対しても,超曲面の極限として,調べることが重要である.実際,極小部分多様体に対してインデックスやナリティを調べることは,退化した部分に集約される情報を見出すことがヒントとなる.例えばクリフォード超曲面の場合,退化した極小部分多様体は単に低次元全測地的球面であるから,インデックスもナリティも簡単にわかる.そのチューブをとったものがクリフォード超曲面で,その中に極小のものが唯一現れるので,この様子を調べれば主曲率4の場合につながる.さらには3,6の対応につなげることも試みている.これにより,もう一つの課題である極小部分多様体の安定性を探ることになり,もし主曲率の個数4の場合にもこの議論ができると,非等質な場合の考察につながるので,より本質的である.最終結論には至らずとも,非等質なものをどう扱って良いのかは大きな課題である.さらにガウス写像の像が複素2次超曲面の極小ラグランジュ部分多様体になっていることから,その安定性を調べることにも関係してくる.いずれも等質な場合にリー群論を用いて,計算を行っている.この半年間,Yan氏は乳児を抱えながら,日本語の習得に時間を費やす中でも,国際研究集会で2回,学会の特別講演で1回の成果発表をして,質疑応答を経て今後の研究への指針を得ており,今後の研究の加速が期待される.研究テーマも広がりつつあり,順調な研究の進展が見込まれる..27年度が最終年度であるため、記入しない。

レギュラーにセミナーを行い,論文執筆に向けて共同研究を進めている.博士院生も交え,極小部分多様体の安定性や,平均曲率流への新しい取り組みも既に始めている.具体的課題は1.非コンパクト完備安定極小ラグランジュ部分多様体の体積安定性の研究に宮岡とともに取り組み始めた.2.余次元の高い部分多様体の平均曲率流の研究,特にラグランジュ部分多様体に対する平均曲率流,及びリッチ流とのcoupled flowと呼ばれる新しい幾何学流の研究に,宮岡,博士院生の國川,修士院生の浦川とともに取り組みを始めた.これらの研究においてはYan氏によるラプラシアンの固有値の計算が活かせるので,この方針で研究を進めている.27年度が最終年度であるため、記入しない。
近代沖縄における教育実態史に関する基礎的研究

沖縄県教育会の機関誌として発行され続けた『沖縄教育』の総目次および索引の作成と解説執筆を本研究の基盤とし、以下の諸点を明らかにした。(1)沖縄県教育会の組織および事業の一端である郷土博物館設立や九州沖縄八県連合教育会への参加状況を明らかにした。(2)標準語や唱歌の教育実態に注目し、県庁、教育会、各教員の関係性とその齟齬を明らかにした。(3)明治期以来の資料を継承してきた、ある小学校の所蔵資料の整理紹介を行なった。1、沖縄県教育会の組織と活動について、今年度はその機関誌である『沖縄教育』に関して基礎的解明を進めた。機関誌は、1911年で1000部、1933年で400部であるなど、その発行部数はその時点の会財政の状況に強く左右されていること、また常に会員全員に配布されていたわけではなく、学校規模に応じた部数が学校あてに送られていた時期もあることなどを明らかにできた。また会則や予算等の調査によって、1911年以降基本的に編輯主任(時期によって編輯幹事などと呼ばれる)が単独で編集していた。その編集体制ゆえに、県の教育方針を詳細に伝える一方で、若手中堅の小学校教員に対して投稿を促したり、郷土史に関する特集や連載を組んだりした親泊朝擢など、編集者の独自色が色濃く出る時期もあったことを明らかにした。2、1915年の沖縄県からの諮問に対する「普通語ノ励行方法答申書」を通じて、1910年代半ばの沖縄におけることばの教育実態を指摘した。答申は、沖縄社会においては標準語を話すことが「冷笑」の対象であったことを自覚したうえで、家庭や社会に対し学校が行なう標準語励行の妨害をしないことを要望していた。標準語励行を進めることは学校の役割であると認識し、教員自らが手本となり、「方言使用者」に対する「訓戒」と「普通語使用児童」への「称揚」を根気強く続けること、そして児童生徒に自発的な標準語の使用を求めた。沖縄県庁は「普通語励行ノ方法」について諮問しており、教員たちに求められたものは「普通語励行」の是非ではなく、あくまでもその具体策であった。3、沖縄県教育会の活動、あわせて教育界が直面していた課題を明らかにするため、九州沖縄八県連合教育会での議題とりわけ沖縄県からの提案議題を整理すべく、九州各県の教育会雑誌の調査を進めた。1、沖縄県久米島町立久米島小学校が所蔵していた学校史料の目録とともに、その通覧に基づき解題を発表した。久米島小学校旧蔵史料の収集整理を通じて、同校に19111916年に勤務していた本山万吉が同校在職中に作詞した「久米島めぐり」という歌の教育実践を、『島尻教育部会二十五年記念誌』(1912年)などの他史料も活用しながら、同校の歴史および本山万吉のライフストーリーに位置づけた。すなわち、同校にとっても本山万吉にとっても、それ以前からまたそれ以後も歌を用いた教育実践を行なっていたことを具体的に論じた。歌詞やリズムなどの分析により、比較においてその特徴を論じることは残された課題である。2、琉球処分直後の沖縄への学校教育の導入について1900年頃までを対象に論じた(実業教育や青年会については1910年頃まで)。従来の研究において明らかにされていなかった旧慣温存下の沖縄における教育課程および教育財政制度について、教育令から第一次小学校令期の施行実態を明らかにした。第二次小学校令期以降については、引き続き課題とすべきである。3、沖縄県教育会機関誌『沖縄教育』の整理とともに、九州沖縄八県連合教育会を構成する九州各県の教育会機関誌が掲載する連合教育会記事の収集整理を行なうことにより、九州各県との比較および交流の視点をもちつつ、沖縄県教育会の会組織および機関誌編集体制、また沖縄教育において課題とされていたことの整理を進めた。ただし、その成果の発表は次年度以降に持ち越さざるをえなかった。(1)『沖縄教育』や沖縄県初等教育研究会の刊行物などに依拠して、1930年代半ばの標準語教育政策とそれに伴う実践および実態を明らかにした。1936年7月、沖縄県庁は沖縄人の精神作興の一環として標準語教育とその励行を政策課題とし、県知事の訓示とともに学校長会議に諮問した。学校長会議はそれを議論、答申し、実践に取り組もうとするが、そこには標準語が未熟であることから生じる沖縄人の損失をなくし、差別から脱却し、沖縄の振興を図ろうとする意図が込められていた。そのような齟齬をはらみつつ、この標準語励行は国民精神総動員運動以降につながっていった。(2)『沖縄教育』の新たなる発掘ができ(184号および253号)、それらの史料紹介記事を発表するとともに(『沖縄タイムス』紙)、復刻版第37巻を新設することとした(2012年5月刊行予定)。

また『沖縄教育』の終焉を全国的な状況に位置づけるべく、全府県教育会機関誌の終刊状況を明らかにした。(3)沖縄県令規の整理を進め、沖縄が他府県と比較して特別な教育制度であった第二次小学校令期(1890年代)を中心に、沖縄の初等教育制度の特徴を明らかにした。(4)『沖縄教育』復刻を終え、それを共有財産として、これからの近現代沖縄史研究をどのように展開していけるか、いくべきかを、沖縄学研究者の集うシンポジウムにおいて公開により実施した。(5)九州各県の教育会雑誌の収集整理により、九州沖縄八県連合教育会の開催状況および義論を整理し、各県の対応の違いなどにより、沖縄における教育実態を描出する手がかりを得た。(藤澤担当)(6)奄美教育史に関する基礎史料の一つとして、鹿児島県教育会機関誌『鹿児島教育』を能う限り悉皆調査し、そこに掲載されている奄美関係記事の一覧を作成し、今後の基盤を築いた。(武藤担当)なお(3)(6)は口頭発表や史料整理にとどまっており、今後、図書や論文として発表する予定である。本年度は、沖縄県教育会の活動について機関誌編纂と博物館事業にかかわり、以下のことを明らかにする論文を発表した。(1)沖縄県教育会機関誌『沖縄教育』(19061944年)の復刻刊行を終えた。そこでは第328号までは収録できたものの、最後の状況について詳らかにすることはできなかった。そのため、他府県との比較を含め全国的な出版統制とのかかわりから考察し、『沖縄教育』では明確な終刊号が存在せず自然休刊と呼べる事態であったが、それは全国的に約半数の府県が該当するものであったことを明らかにできた。ただし沖縄県教育会の組織状況に即した編纂体制についての解明は、来年度以降の課題として持ち越すこととなった。(2)沖縄県教育会の活動と教育実践(とくに郷土教育実践)との接点として、1936年に沖縄県教育会附設郷土博物館が開館する経緯と、その中心人物であった同会主事島袋源一郎の郷土史観について論じた。設立過程においては進捗と停滞を繰り返しており、島袋が沖縄県教育会の運営から離れた時期には事業が停滞し、戻ってくるや進捗し他組織と協働して開館に至ったことを明らかにした。同館が開館した1930年代には全国各地に郷土博物館が設けられており、沖縄の郷土博物館の特質はやはり資料収集と展示に求められるべきである。そこで博物館の展示を復元している先行研究や関連する資料に基づいて、見学者は郷土博物館に入るや、交易によって繁栄している琉球王国と同時に、古代から日本の一部である琉球・沖縄を見聞することになったことを示した。このような琉球・沖縄史像は、島袋の郷土史叙述を反映したものであったことを明らかにした。今後は、郷土研究・郷土教育について島袋を中心に追究していくことが課題となる。その他、奄美諸島での教育や九州沖縄八県連合教育会に関する資料の収集、整理などを行った。それらに基づいた論文発表は今後の課題である。『沖縄教育』の復刻版を編集刊行しつつ、それらはもちろん、さらなる関連史料の調査収集整理により、20092011年度にかけて、「教えと学び」の具体像を解明する論文、それに関連する基礎的な史料紹介、復刻版を刊行し終えて以降の近現代沖縄史研究のあり方に関するシンポジウム開催などを実施できているため。また発表には至っていないが、史料整理を終えているなどのものもあり、それらの紹介や、それらに基づく図書刊行や論文執筆も期待できるため。24年度が最終年度であるため、記入しない。
R3hdmlを用いた筋腎連関の機序解明および新規治療戦略の確立

超高齢社会を迎えた我が国では、慢性腎臓病(CKD)やサルコペニアの増加が問題となっている。両者はしばしば合併し「筋腎連関」という共通のメカニズムの存在が示唆されるものの、その機序はこれまで不明であった。我々はこれまでに新規遺伝子であるR3hdmlの解析を行い、R3hdmlがCKDやサルコペニアに関連する因子であるという結果を得てきた。本研究はR3hdmlを通して「筋腎連関」の病態メカニズムを解明し、CKD/サルコペニアの新たな治療戦略を確立する。
タイ・クーイ人の家族と村落に関する基礎的研究

クーイ人の家族に関しては先祖祭祀が天霊信仰と関係なく自然霊とのみ関係していた。その点で、先祖祭祀がタイ人やラーオ人、クメール人と異なっていた。村落の形成に関しては、タイ人やクメール人たちのそれと相違はなかったが、それらの民族ほど生活は豊かではなかった。はじめにクーイ人が居住している村を調査地として選定した。その後、調査地に住み込んで以下の事項について調査した。1つは、当該地に居住する全世帯の基本的事項について悉皆調査をおこなった。世帯員と農地の規模、出稼ぎ先、年収、借金、学歴などのデータを調べた。このデータは数が多いため、その分析はまだおこなっていない。2つめは、調査地の村落の基本的構造について調べた。村長などの村役員の構成と学校や寺院などの共同の機関、年中儀礼、農作業の方法などにかんして基礎的なデータを収集した。そのほか、政府・役場が農村で実施しているさまざまな支援事業と、それにたいする村の取り組みを調べた。これらは村落を把握するうえでの基礎的資料をなすものである。本年度は初年度ということもあり、まずはデータの収集に努めた。これらのデータを用いた村落構造の分析はこれからおこなう。3つめは、家族と村落以外のこと、とくに人びとを取り巻いている社会状況を把握した。たとえば、近隣にある中学校・高等学校卒業生の進路状況を調べた。そのほか、当該の村を比較するうえで重要であると考え、近隣の村のようすについて、たとえば政府が村にたいしておこなった支援事業にたいする村の取り組みや農作業の方法などにういて調べた。データの整理はこれからおこなうので、ここでは全体について考察することはできないので、ユニークなデータを発見することができたものをひとつ記しておくことにする。当該地では、北タイや東北タイ北部のように、二者間で労働力交換をしてこなかったことがわかった。これまでは、ロンケークと呼ばれる農地の規模に関係なく誰でも農作業の方法だけをおこなってきた。この点については、よその地域ではこれまで聞くことがなかっただけに重要なデータであると言える。今年度は昨年度調査した地区で補充調査をおこなうとともに、図書館利用や高校・大学への進学率など地区を含む地域レベルの資料を収集した。また、近くの教会でキリスト教を信仰している人びとがなぜ信仰するにいたったのかを、参与観察とインタビュー調査をおこなった。これは、タイの基層文化にある精霊信仰がキリスト教を信仰するさいにも潜在しているのかどうか、また信仰ネットワークが個人を媒介するのではなく、家族を媒介とするかどうかを、調べることが目的であった。そのほか、クーイ人の村を幅広く知るために異なる条件下にある調査地を1つ増やして調べた。その村には、クーイ人のみならず、クメール人やラーオ人、中国人が居住している。今後、多民族共存という問題が重要になるが、その条件を考えるうえでこの村はきわめて重要なケースであると思われる。その村で、区と行政村の概要と村落の仕組み、住民組織、言語使用の状況、婚姻関係、暮らしぶりなどを調べた。他の地区を調査することは、比較することを可能にするため、ひとつのフィールドで調査したことを安易に一般化するのを避けるうえで有効である。この2か年で調査を精力的にすすめたので、資料の整理は今後営為おこなうことになる。とりわけ、家族の基礎的調査票の整理がまだ不十分なので、これも整理していきたい。最終年度なので補充調査を実施し、以下のことをおこなった。1つめは、クーイ人が住んでいるタイ国内の分布と移動経路を整理した。2つめは、タイ社会全体のなかでスリン県のクーイ人の歴史的文化的位置づけをおこなった。1657年にチャンパサックから6名の代表者が引き連れてスリンに移動してきたことがわかった。3つめは、調査した家族のデータを集計整理した。クーイ人は象を飼育していた家族だけがパッカンと称するカミを祀っている。これはほかの民族には見られないものであった。また、結婚の仕方は夫婦それぞれの民族のやり方を守っておこなっているため、クーイ人の民族性が保たれていること、すべての精霊をヤチュとして崇めていること、家神がいることなどがわかった。4つめは、調査した地区の村落構造についてデータをまとめた。クーイ人の村でもタイ政府・官僚はほかの民族の村と同様に住民組織を作り農村生活の整備をすすめていた。5つめは、タイ・クーイ人がタイ・クメール人やタイ・ラーオ人と比べて有する特徴について論文として発表した。異民族との婚姻がすすみ言語が消滅しつつあること、結婚の仕方は夫婦それぞれの民族のやり方を守っているため保たれていること、自然霊すべての霊やカミをヤチュと称していて、素朴な信仰をしていることなどがわかった。これまではクーイ人の研究が少ないためほとんどその姿を知ることができなかったが、今回の調査でその穴を少し埋めることができたと思う。
ニューロに基づく車の定量的腐食予測と防食設計

本研究では、実環境で長期間使用される実構造機器において、材料、構造、使用環境、施した防食処理などの情報から、腐食の発生する時期、部位、腐食の種類及び程度を定量的に予測し、その予測技術をベースとして、腐食に関する定量的な目標レベル(いつ、どこに、どのような種類の、どの程度の腐食が発生するか)を設定し、それを満足するための実構造機器の防食に関する設計変数(構造や材質、防食処理)を定量的に決定するという防食を目指した多目的満足化設計法を研究開発した。具体的には、自動車の腐食現象を対象として、下記のような研究を行った。(1)階層型ニューラルネットワークに、実際の腐食試験のデータを与え、学習させる。学習の精度および学習効率、獲得されたネットワーク構造に関して詳細な分析を行い、学習済ネットワークの信頼性について詳細に検討した。(2)(1)の学習済ニューラルネットワークを用いた感度係数、すなわち、錆パラメータの各車両パラメータに対する感度、や車両パラメータ間の相関係数について詳細に調べ、錆パラメータに強く影響を与える車両パラメータ項目の絞り込み法について検討を行い、最終的に絞り込手法を提案した。(3)(2)で絞り込まれた車両パラメータと錆パラメータの非線形関係を再度近似する。ここでも、(2)と同様に、学習の精度(汎化能力)、学習効率、獲得されたネットワーク構造に関して詳細な分析を行った。(4)(1)(3)の非線形関係の定量化手法の研究開発と平行して、所定の腐食レベルを満足する車両パラメータの組み合わせの集合を多次元のデザインウインドウとして表示するシステムの研究開発を行った。最終的に、腐食寿命の予測を行い、さらにターゲット寿命を実現する防錆処理設計の2段階設計法を開発し、実車に適用し、良好な結果を得た。初年度である本年度は、まず自動車の腐食試験の実施計画を作成した。次に、計測設備の整備を行った。自動車の材料や構造、走行環境、防錆処理に係わるパラメータ(車両パラメータと称する)のうちどのようなパラメータが、発生する錆形態や錆程度に影響を与えるかは定かでないので、可能な限り多くのパラメータを測定した。具体的には、部位のトポロジー(構造)、寸法、材質、成分、防錆処理(被膜)の種類・程度(厚み)などを測定した。一方、市場で長年利用され廃車となった多種類(30種類程度)の実車から錆発生部位を切り出し、錆形態、発生場所、錆面積、板厚減少量(これらのパラメータを錆パラメータと称する)の計測を行った。(4)標準的なバックプロパゲーションアルゴリズムによるニューロ非線形多変量解析コードを作成し、データの解析、具体的には車両パラメータと錆パラメータ間の多次元非線形関係の定量化に関する予備解析を行った。なお、計測される車両パラメータや錆パラメータの項目数に比べてテスト車両数・部位数が少ないので、通常のネットワークでは過剰学習を起こしやすい。そこで、階層型ニューラルネットワークの学習アルゴリズムに関して検討を行なった。その結果、ある程度絞り込まれた問題設定の範囲では、比較的良好に学習することが確認された。しかしながら、すべての実験環境においてすべでの項目をもれなく計測することがなかなか難しいため、多少情報が欠落した中で、総合的に学習を進めるためにはどうすればよいかが、今後の検討課題であることがわかった。本年度は、初年度に取得されたデータと、ニューラルネットワークを用いて、車両パラメータと錆パラメータ間の関係の定量化手法を開発した。具体的には階層型ニューラルネットワークに、実際の腐食試験データを与え、学習させた。学習の精度(特に学習データに対する予測能力を表す汎化能力の確認)及び学習効率、獲得されたネットワーク構造に関して詳細な分析を行い、学習済みネットワークの信頼性について詳細に検討した。次に、学習済みネットワークを用いた感度係数について詳細に調べ、錆パラメータに強く影響を与える車両パラメータ項目の絞込み法について検討を行い、最終的に絞り込む方法を検討した。

ここでは、ネットワークを用いた寄与度評価と線形相関係数を用いた2パラメータ法を開発した。絞り込まれた車両パラメータと錆パラメータの非線形関係をリカレント型ニューラルネットワークを用いて、再度近似した。ここでも、絞込み前のデータを学習させたネットワークと絞込まれたデータを学習させたネットワークを比較することにより、絞込みの効果を定量的に検討した。非線形関係の定量化法の研究開発と平行して、所定の腐食レベルを満足する車両パラメータの組み合わせの集合を多次元のデザインウインドウとして表示するシステムの研究開発を行った。2次元モニター上に、4次元以上の多次元デザインウインドウを表現する手法を開発した。さらに、ニューラルネットワークによる推定値と実測値の比較を容易に行うための2次元マッピング法開発した。本年度は、初年度に取得されたデータと、ニューラルネットワークを用いて、車両パラメータと錆パラメータ間の関係の定量化手法を開発した。具体的には次のように行った。(1)階層型ニューラルネットワークに、実際の腐食試験のデータを与え、学習させる。学習の精度(特に未学習データに対する予測能力を表わす汎化能力の確認)および学習効率、獲得されたネットワーク構造に関して詳細な分析を行い、学習済ネットワークの信頼性について詳細に検討した。(2)(1)の学習済ニューラルネットワークを用いた感度係数、すなわち、錆パラメータの各車両パラメータに対する感度、や車両パラメータ間の相関係数について詳細に調べ、錆パラメータに強く影響を与える車両パラメータ項目の絞り込み法について検討を行い、最終的に絞り込手法を提案した。(3)(2)で絞り込まれた車両パラメータと錆パラメータの非線形関係を再び創発型ニューラルネットワークを用いて、再度近似する。ここでも、(2)と同様に、学習の精度(汎化能力)、学習効率、獲得されたネットワーク構造に関して詳細な分析を行った。(4)(1)(3)の非線形関係の定量化手法の研究開発と平行して、所定の腐食レベルを満足する車両パラメータの組み合わせの集合を多次元のデザインウインドウとして表示するシステムの研究開発を行う。この多次元デザインウインドウの次元数は一般に3を超える。一方、現在のコンピュータのモニター上には、3次元の物理空間までしか表現できない。そこで、4次元以上の多次元デザインウインドウを3次元空間に表現する手法について計算幾何学の技法をもとに研究を行った。最終的に、腐食寿命の予測を行い、さらにターゲット寿命を実現する防錆処理設計の2段階設計法を開発し、実車に適用し、良好な結果を得た。
地域保健活動におけるエンパワーメント -長野県八千穂村の健康づくり活動を中心に-

本研究の目的は、予防に力を入れて長寿と医療費縮減に成功した地域の健康づくり事業の実地調査を通して、住民の自主的な動きを生み出すコミュニティ・エンパワメントの方法を考察することにある。調査の中心は長野県八千穂村(合併により現在は佐久穂町)だが、沖縄県佐敷町(合併により現在は南城市)のデータを加えることによって八千穂村の検討内容の相対化を企図した。八千穂村と佐敷町、どちらの自治体においても、行政主導で開始された健康増進事業から住民主体の活動が生み出されており、その過程を検討することによって、住民の主体性を引き出した専門職の支援が明らかになった。両地域で展開されたコミュニティ・エンパワメントの過程には、行政機関等が社会的、政治的経済的資源を整備して個人や組織が活動しやすい環境をつくるコミュニティレベルのエンパワメントアプローチと、専門職が住民組織に対して地域の政策や資源配分に影響を及ぼす力量をもてるように支援する組織レベルのエンパワメントアプローチが含まれていた。(1)国の健康増進政策の流れの中で独自の事業展開を可能にした、「官」と「民」が重なりあう「公共」領域の創出(2)地域に根ざした健康づくりを実現した専門職の的確なアセスメント(3)専門職と住民の間の円滑なコミュニケーションに基づいて地域に張りめぐらされたネットワーク(4)病院や大学など外部資源の有効活用留意すべきは、両地域の実践から見出されたこれらのエンパワメントアプローチが、専門職が住民に対して指導者ではなく協働者として接することによって実効性を発揮している点である。そして、地域社会とそこに住む人々の「個別性」を捉え、一人ひとりの主体的な取り組みを生み出す健康づくりの実践が、狭義の保健・医療活動の域をこえた地域づくりとしての側面をもつことも見逃せない。1.基礎資(史)料の収集これまで、八千穂村全村健康管理事業に関する文献は、事業を主導した村や佐久病院による活動記録や研究・報告などが大半を占めていた。本研究では、これら既刊の二次資(史)料を整理するとともに、村の担当者や住民の保管している一次資(史)料の発掘に努め、いくつかの貴重な資(史)料を入手することができた。佐久総合病院所蔵の文書についても、活字化された記録や報告だけでなく、健康診断に使用された台帳や手書きの日誌などの収集・整理を行い、活動の実像を検証するための基礎資(史)料を見出すことができた。2.当事者・関係者からの情報収集と実態調査健康管理活動に従事してきた新旧の職員および保健・医療・福祉の諸分野で活動を展開してきた住民の方々に対する聞き取り調査を行い、村の健康づくり活動を他面的に把握することができた。健康管理事業の実務を担った村役場の事務担当者、広く地域で活動を展開した保健師、保健所で直接住民に対して指導や講習を行った栄養士、農業改良普及所の指導員などさまざまな職種の方々から、具体的な活動の実態を聴取させていただいた結果、行政や専門機関の職員と住民とのかかわりの諸相が明らかになった。衣食住のさまざまな場面で生活改善に取り組んできた住民の方々から、地域の中で、住民中心の活動がどのように始まり発展していったのかを具体的に教えていただき、エンパワーメントが実現していく過程の一端を知ることができた。3.研究の基盤整備資(史)料収集と聞き取り調査によって、地域において、住民を主体とした健康づくり活動に関する基礎的な情報を入手することができた。これらの情報の整理・検討とさらなる調査によって、地域保健活動におけるエンパワーメント・アプローチの検証が展望できる。1.基礎資(史)料の収集

昨年度までに、佐久総合病院や旧八千穂村(現佐久穂町)の進めてきた健康管理活動の資(史)料については、実践に関わる研究・報告などの二次資(史)料および、担当職員の日誌や住民による記録といった一次資(史)料を収集することができた。本年度は、すでに入手した資(史)料を整理・分析するとともに、沖縄県旧佐敷町(現南城市)の健康づくり活動に関する資(史)料の収集に努めた。現行の施策・実践にかかわる文書や記録に加えて、町の施策形成を支援してきた琉球大学や県の駐在保健婦制度についても、情報を得ることができた。「八千穂村」の活動を相対化し、地域保健活動に関する考察を深めていくために、「佐敷町」の資(史)料収集をさらに進める予定である。2.当事者・関係者からの情報収集と実態調査昨年度は、佐久地域を中心に、健康管理活動に従事してきた新旧の職員および保健・医療・福祉の諸分野で活動に取り組んできた住民の方々に対する聞き取り調査を行い、地域保健活動の形成過程をたどった。本年度は、「八千穂村」と同様に積極的に地域保健活動を推進してきた沖縄県「佐敷町」での聞き取り調査を進めた。健康づくり活動に携わってきた村役場の担当者、保健師、住民のボランティアグループのリーダー、住民による自主的なグループのメンバーなどさまざまな方々へインタビューを行い、活動の実態を把握することができた。「八千穂村」と「佐敷町」は、長野県と沖縄県という地理的条件がかなり異なる二つの県に存するが、それぞれの健康増進活動には共通点もみられ、独自のエンパワーメント・アプローチを生み出している点が注目される。3.研究のまとめに向けて二つの地域で収集した資(史)料と聞き取り調査結果の内容を吟味・比較しながら、住民を主体とした健康づくり活動を可能にする要件を提示した。今後は、その重要な要素であるエンパワーメント・アプローチについて、多面的に検証を重ねていく。1.史資料の収集・分析昨年度までに収集した佐久総合病院や旧八千穂村(現佐久穂町)の健康管理活動に関する史資料の読み込みと分析を進めると同時に、活動の総合的検証に必要な史資料を補完収集した。また、沖縄県旧佐敷町(現南城市)の健康づくり活動について、行政文書や実践記録などの一次史資料にあたるとともに、県公文書館や県立図書館所蔵の医療・保健に関する文献を調査し、町の施策や住民の活動の背景・基盤を解明する手がかりを得た。2.当事者・関係者からの情報収集と実態調査長野県佐久穂町および沖縄県南城市において、健康管理活動に従事してきた新旧の職員および保健・医療福祉の諸分野で活動に取り組んできた住民の方々に対する聞き取り調査を進めた。活動のさまざまな側面を時間軸にそって検討するために、現在活躍している人だけでなく、それぞれの地域で初期の活動を担つた年配の方へのインタビューを行った。その結果、活動に対する専門職の支援、住民の多彩な動きなどを示す事例を多数掘り起こすことができ、地域保健活動の過程で住民主体の活動が生み出される実践のダイナミズムが浮き彫りになった。「八千穂村」と「佐敷町」は、長野県と沖縄県という地理的条件がかなり異なる二つの県に存するが、それぞれの健康増進活動には共通点もみられ、それが独自のエンパワーメント・アプローチにつながっていることが興味深い。
コケ植物の仮根細胞における先端成長の分子機構とその進化的意義の解明

細胞が一定方向に伸長する極性成長は様々な生物で見られる現象で、形態形成や生殖過程に不可欠であり、細胞構成要素の組織化という普遍的な問題を内包している。特に、植物の花粉管・根毛・仮根・原糸体は明瞭な極性のある先端成長を行うため、良いモデル系である。先端成長では微小管やアクチン繊維といった細胞骨格が重要であるが、その成長方向の決定と維持の仕組みはほとんどわかっていない。本研究では、基部陸上植物ゼニゴケの仮根細胞を主なモデル系として、植物細胞の成長方向制御機構を解明する。
磁気的ホモジニアスアッセイによる新規臨床検査システムの構築

本研究では、酸化鉄等を用いた「磁気マーカー」から発する磁気信号を、高性能な磁気センサーで検出することにより、既存の分析装置に比べて簡便かつ高感度に目的成分(蛋白質や細菌等)を検出できる分析システムの開発を目指す。我々のこれまでの基礎研究により、目的蛋白質をピコモル単位で正確に分析できることが示されている。この要素技術をさらに高度化し、日常の臨床検査をはじめとして、環境分析や食品分析分野などに広く応用可能な高感度検査システムを構築することを目的とする。
マイコウイルスによる弱病原化機構を利用した白紋羽病菌の病原性関連遺伝子の解析

白紋羽病菌は果樹類の根を腐敗させる病原糸状菌である。本菌の病原性機構を明らかにするため、病原力を低下させるメガビルナウイルスの感染により発現が変動する遺伝子群の特徴付けと機能解析を行った。発現が変動する10遺伝子の発現抑制株、あるいは過剰発現株を作出したが病原力との明確な相関は認められなかった。メラニン合成酵素遺伝子については、土壌中での白紋羽病菌の長期生存に寄与していることが明らかとなった。白紋羽病菌(Rosellinia necatrix)は果樹類の根を腐敗させるために大きな被害をもたらす果樹病原菌である。これまでに白紋羽病菌からは複数種のマイコウイルスが見いだされており、ウイルスの特徴づけも進んでいる。これらウイルスには、菌の表現型に影響がみられない無病徴ウイルス、および菌の病原力を大きく低下させるウイルスが含まれる。そこで、本課題では、マイコウイルス感染による宿主菌の遺伝子発現変化を調べることで、白紋羽病菌の病原性関連遺伝子を探索・解析することを目的とする。メガビルナウイルス(RnMBV1)は白紋羽病菌から見いだされた新科のウイルスであり、白紋羽病菌の病原力を低下させる。本年度は、ウイルスフリー菌、およびRnMBV1を含む各種ウイルスを感染させた白紋羽病菌からmRNAを抽出し、高速シークエンサー(イルミナHiSeq)でRNAシークエンス配列を解析した。得られた配列を取得済みの白紋羽病菌のドラフトゲノムにマッピングし、各遺伝子の発現量を定量した。加えて、継代培養により得られたRnMBV1変異株について、ウイルスゲノムの構造および白紋羽病菌の菌糸生育への影響を調査した。さらに、RnMBV1感染によって発現量が低下する白紋羽病菌のメラニン合成遺伝子は、RNAi法による解析により、土壌中での菌の長期生存に関与することを明らかとした。白紋羽病菌は果樹の根を腐敗させる難防除病害であるが、その病原性機構についてはほとんど何も分かっていない。一方、生物防除への利用を企図してこれまでに白紋羽病菌から多様なマイコウイルスが分離、同定されている。これらマイコウイルスには菌の病原力を低下させるウイルス(メガビルナウイルス(RnMBV1)、マイコレオウイルス(MyRV3))、あるいはウイルス感染が菌の表現型に影響しないウイルス(パルティティウイルス(RnPV1)、ビクトリウイルス(RnVV1))などが含まれる。本課題ではこれらのマイコウイルス感染により発現が変動する遺伝子を解析することで、白紋羽病菌の病原性機構を解明することを目的とする。本年度は、RnMBV1感染菌に着目して反復のあるRNA seqを行うともに、これまでに行った各種ウイルス感染株のRNA seqの結果と比較しながら白紋羽病菌遺伝子の発現変化を解析した。特に転写調節因子に着目して弱病原性と相関のある遺伝子を抽出し、注目遺伝子については発現量の変化をqPCRにより再確認した。そして、これらの遺伝子の機能を解析するため、過剰発現株、あるいは発現抑制株の作出を行う準備を進めている。本課題においては、白紋羽病菌の遺伝子の機能解析を行うための実験系構築も同時に行っている。今年度はこれまでに構築したヘアピン誘導型RNAiによる機能解析系に加えて、transitive RNAi機構を利用した遺伝子機能解析の系を作出することも試みたが、効率的な系作出には至らなかった。しかしながらその過程において、白紋羽病菌のRNAiシグナルは局所的に誘導されてコロニー全体には広がらないという興味深い現象を見出し論文発表した。また、マイコウイルス感染に対する防除応答として働くと推定されるRNAi機構の要素遺伝子について各ウイルス感染による発現変動をqPCRにより解析した。白紋羽病菌の病原力を低下させるマイコウイルスであるメガビルナウイルス(RnMBV1)感染により変動する白紋羽病菌の遺伝子を解析することで白紋羽病菌の病原性に関する機構を明らかにすることを目的とする。昨年度までにRnMBV1感染により変動する転写因子ホモログの抽出を行った。本年度はこれら転写因子ホモログの機能解析を行った。RnMBV1感染により発現が変動する転写因子ホモログのうち、特に変動が大きかった2遺伝子、cTF2(発現抑制)、cTF8(発現増加)について、それぞれRNAiベクターと過剰発現ベクターを作製した。ウイルスフリーの標準菌株であるW97へ各ベクターを導入し、発現抑制株(cTF2i)と過剰発現株(cTF8ox)を作出した。得られたcTF2iおよびcTF8oxの菌株の生育を調べたところ、cTF2i株の一部では生育の減少が確認されたが、それ以外の菌株は、ベクターコントロールと同程度の生育を示した。また、いくつかの菌株においてリアルタイムPCRにより発現量を調べたところ、cTF2i株はcTF2遺伝子の発現が抑制され、cTF8ox株はcTF8遺伝子の過剰発現が確認された。以上の結果から、各遺伝子単独の発現変動は、白紋羽病菌の菌そう生育に影響を及ぼさなかった。RnMBV1に含めた5種のマイコウイルスについて、RNAサイレンシング関連遺伝子RnDCL-2, RnAGL-1, RnAGL-2, RnRdRP-1, -2, -3, -4)の発現レベルをリアルタイムPCRで解析したところ、白紋羽病菌の病原力を低下させるRnMBV1やマイコレオウイルス3(RnMyRV3)の感染により、RnDCL-2, RAGL-2, RnRdRP-1, RnRdRP

-2の発現上昇することが明らかとなった。これらの遺伝子の過剰発現体を作出したが、生育に顕著な変化は認められなかった。白紋羽病菌遺伝子の機能解析系を開発している。また、病原力低下効果の大きいマイコウイルス感染によって発現が変動する遺伝子群が抽出されており、これらのうち着目する遺伝子について順次解析を行っているため。本研究では、白紋羽病菌の病原性に関連する遺伝子を明らかにすることを目的に、本菌の病原力を低下させるマイコウイルス(メガビルナウイルス;RnMBV1)の感染により発現変動する遺伝子群の特徴づけと機能解析を起こった。昨年度までに明らかにした白紋羽病菌のゲノム情報を基に、RnMBV1感染により変動する遺伝子群のGene ontology解析を行ったところ、とくに代謝経路に関連する遺伝子群が変動していることが示され、細胞壁分解酵素やサイトカラシン合成酵素遺伝子などの細胞外分泌タンパク質の生産に関わる遺伝子も含まれていた。すなわち、これらの細胞外分泌タンパク質が白紋羽病菌の病原性に関与することが示唆された。これらの成果については論文投稿準備中である。RnMBV1感染による発現変動する遺伝子のうち、細胞接着に関与するとされるレクチン遺伝子に着目し、RNAサイレンシング法による発現抑制株(lec2i株)を作出した。Lec2i株のリンゴマルバ苗への接種試験を行ったが、明確な病原力の低下は認められなかった。また、発現変動が大きい機能未知遺伝子についても同様に発現抑制株を作出したが、病原力低下は認められなかった。RNAサイレンシングでは標的遺伝子の発現を完全に抑制することが出来ないため、白紋羽病菌における遺伝子破壊法の確立が望まれる。RnMBV1ゲノム二本鎖RNA(RNA1, RNA2)は、RNAサイレンシングの標的となりスモールRNA(vsRNA)が産生される。vsRNAが白紋羽病菌の生育・病原性に関与する可能性を検証するため、RnMBV1ゲノム二本鎖RNAを発現する白紋羽病菌を作出したところ、RNA2のvsRNA蓄積株で生育および病原力の低下が認められた。この結果は、RnMBV1がvsRNAを介して白紋羽病菌の生育・病原性に関わる遺伝子を発現抑制している可能性を示す。白紋羽病菌は果樹類の根を腐敗させる病原糸状菌である。本菌の病原性機構を明らかにするため、病原力を低下させるメガビルナウイルスの感染により発現が変動する遺伝子群の特徴付けと機能解析を行った。発現が変動する10遺伝子の発現抑制株、あるいは過剰発現株を作出したが病原力との明確な相関は認められなかった。メラニン合成酵素遺伝子については、土壌中での白紋羽病菌の長期生存に寄与していることが明らかとなった。当初の計画通り、各種ウイルス感染菌株のRNAseq解析を行い、ウイルス感染により変動する遺伝子、および病原力低下を伴うウイルスの感染により変動する遺伝子の比較解析を行うことで、注目遺伝子の絞り込みが順調に行われている。また、当初計画に加えて研究進行過程で見いだされた興味深い知見についても論文発表することが出来た。
自己免疫性甲状腺疾患における抗TSH受容体抗体の作用機序に関する研究ーーTSH受容体の構造と使用部位の分析ーー

バセドウ病の抗TSH受容体抗体は甲状腺を刺激し,特発性粘液水腫のそれは逆にTSHの甲状腺刺激を阻害する. ^<125>IーTSHと受容体の結合を阻害する活性に関して両抗体に差はなく,なぜ両者が相反する生物学的活性を呈するか不明である.この点を明らかにすることを目的とした.バセドウ病のTSH結合阻害活性(TBII)と甲状腺刺激活性(TSAb)は相関したが, TBII陰性例では結合部位の異なる受容体抗体が見出された.特発性甲状腺機能低下症の抗TSH受容体抗体はTSHの甲状腺刺激作用を阻害し,本抗体高値の患者が妊娠すれば新生児は,過性甲状腺機能低下症を来す.さらに,抗TSH受容体抗体をエビトー10に関係なく検出し得るHTTRAb活性の測定法を確立した.抗TSH受容体抗体の多様性を検討するため,バセドウ病および特発性粘液水腫患者リンパ球を骨髄腫細胞と融合することによって抗TSH受容体モノクローナル抗体を作成し,分析した.その結果, 4つの異なったTSH結合阻害活性,甲状腺刺激活性を有する4つのモノクローナル抗体を作成した.甲状腺刺激型および抑制型の4抗体とも,甲状腺可溶化分画,糖蛋白分画との結合を示した.TSH受容体結合非阻害性,刺激型抗体のみが,糖脂質との有意な結合を示した.そして,イノラミニダーゼ,エンドグリコシダーゼ処理後は結合が消失した.結合阻害および非阻害の4種のモノクローナル抗体を用い,免疫ブロット法によって受容体との結合をみると,いずれも56Kレセプター分子との結合を示した.以上の成績は,抗受容体抗体には,生物学的活性および受容体との結合領域の異なるもののあることを示している.この様な結合部位と生物学的活性の関係を明らかにするためには,遺伝子工学的アプローチが必要と考えられ,ヒト甲状腺TSH受容体のcDNAのクローニングに成功した.バセドウ病の抗TSH受容体抗体は甲状腺を刺激し,特発性粘液水腫のそれは逆にTSHの甲状腺刺激を阻害する.TSHと受容体の結合を阻害する活性に関して両抗体の間に差はなく,なぜ両者が相反する生物学的活性を〓するか不明である.この点を解明することを目的とした.バセドウ病のTSH結合阻害活性(TBII)と甲状刺激活性(TSAb)は相関したが, TBII陰性側では結合部位の異なる受容体抗体が見出された.特発性甲状腺機能低下症の抗TSH受容体抗体はTSHの甲状腺刺激作用を阻害し,本抗体高値の患者が妊娠すれば,新生児は一過性甲状腺機能低下症を来す.さらに,抗TSH受容体抗体をエピトープに関係なく検出し得るHTTRAb活性の測定法を確立した.抗TSH受容体抗体の多様性を検討するため,バセドウ病および特発性粘液水腫患者リンパ球を骨髄腫細胞と融合することによって抗TSH受容体も1クローナル抗体を作成し,分析した.その結果, 4つの異なった, TSH結合阻害活性,甲状腺刺激活性を有するモノクローナル抗体を作成した.甲状腺刺激性および抑制性の4抗体とも甲状腺細胞可溶化膜分画,糖蛋白分画との結合を示した.TSH受容体結合非阻害性,刺激型の抗体のみが,糖脂質との有意な結合を示した.そして,ノイラミンダーゼ,コンドグリコシダーゼ処理後は結合が消失した.結合阻害および非阻害の4つのモノクローナル抗体を用い,免疫ブロット法によって受容体との結合をみると,いずれも56Kdレセプター分子との結合を示した.以上の成績は,抗受容体抗体には生物学的活性および受容体との結合領域の異なるもののあることを示している.この様な結合部位と生物学的活性の関係を明らかにするためには,遺伝子工学的アプローチが必要と考えられ,今回ヒト甲状腺TSH受容体のcDNAのクローニングに成功した.バセドウ病の抗TSH受容体抗体は甲状腺を刺激し,特発性粘液水腫のそれは逆にTSHの甲状腺刺激を阻害する. ^<125>IーTSHと受容体の結合を阻害する活性に関して両抗体に差はなく,なぜ両者が相反する生物学的活性を呈するか不明である.この点を明らかにすることを目的とした.バセドウ病のTSH結合阻害活性(TBII)と甲状腺刺激活性(TSAb)は相関したが, TBII陰性例では結合部位の異なる受容体抗体が見出された.特発性甲状腺機能低下症の抗TSH受容体抗体はTSHの甲状腺刺激作用を阻害し,本抗体高値の患者が妊娠すれば新生児は,過性甲状腺機能低下症を来す.さらに,抗TSH受容体抗体をエビトー10に関係なく検出し得るHTTRAb活性の測定法を確立した.抗TSH受容体抗体の多様性を検討するため,バセドウ病および特発性粘液水腫患者リンパ球を骨髄腫細胞と融合することによって抗TSH受容体モノクローナル抗体を作成し,分析した.その結果, 4つの異なったTSH結合阻害活性,甲状腺刺激活性を有する4つのモノクローナル抗体を作成した.甲状腺刺激型および抑制型の4抗体とも,甲状腺可溶化分画,糖蛋白分画との結合を示した.TSH受容体結合非阻害性,刺激型抗体のみが,糖脂質との有意な結合を示した.

そして,イノラミニダーゼ,エンドグリコシダーゼ処理後は結合が消失した.結合阻害および非阻害の4種のモノクローナル抗体を用い,免疫ブロット法によって受容体との結合をみると,いずれも56Kレセプター分子との結合を示した.以上の成績は,抗受容体抗体には,生物学的活性および受容体との結合領域の異なるもののあることを示している.この様な結合部位と生物学的活性の関係を明らかにするためには,遺伝子工学的アプローチが必要と考えられ,ヒト甲状腺TSH受容体のcDNAのクローニングに成功した.バセドウ病患者および粘液水腫患者のリンパ球とヒト骨髄腫細胞株とのハイブリドーマを作成し、種々の活性を有する抗TSH受容体をモノクローナル抗体の作成に成巧した。すなわち、TSH結合阻害活性(TBII)と甲状腺刺激作用(HTACS)を呈する抗体、TBII(+)でTSHの甲状腺刺激作用阻害活性(HTACI)を呈する抗体、TBII(-)でHTACS(+)の抗体、および、TBII(-)でHTACI(+)の抗体を産生するハイブリドーマ系を確立した。これらは臨床的にバセドウ病および特発性粘液水腫患者に見出される抗受容体抗体の性質と一致し、これらの疾患の病因が抗TSH受容体抗体であることが明らかになった。一方、TSH受容体の構造を解明し、これらモノクローナル抗体との相互作用を検討するため【^(125)I】-TSHとTSH受容体をHSABを用いてフォトアフィニティラベルしたのち、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動し、オートラジオグラフィーを行ったところ、分子量55,000および35,000の分子が受容体のサブユニットとなっていることが判明した。さらにSDS-PAGEを行ったTSH受容体をウエスタンブロットし、モノクローナル抗体と反応させたところ、4種類のモノクローナル抗体とも分子量55,000の分子との結合が認められた。
大腸癌浸潤先進簇出巣のp16蛋白発現異常・遺伝子メチル化と予後・治療効果との関連

結腸直腸癌の異常なp16INK4a遺伝子メチル化の予後値対象と方法対象は結腸・直腸癌手術を行った151人の患者(平均65.8歳;39-86歳)で、経過観察期間の中央値は79カ月(60-123ケ月)であった。HE染色標本を検鏡し、UICC/TNM分類に従ってpT/pN、病理学的病期分類を評価した。別に新鮮癌組織と腫瘍から離れた粘膜を25人の患者から採取した。DNAは151例の癌と10例の非腫瘍粘膜のホルマリン固定パラフィン包埋切片から抽出し、RNAは25例の新鮮癌組織、4例の非腫瘍粘膜から抽出した。亜硫酸水素塩修飾されたDNAを用い、p16^<INK4a>プロモーター領域のメチル化及び非メチル化特異的なプライマーで定量的リアルタイムPCRを行い、p16メチル化指数(p16メチル化量/p16メチル化+非メチル化量[%])を算出した。RNAからcDNAを合成し、p16^<INK4a>イントロン1/エキソン1αに相補的なプライマーを用い、p16mRNAの定量的リアルタイムPCRを行った。免疫染色には抗p16モノクロナール抗体(E6H4、Dako社製)を用い、免疫染色標本の画像解析を40例に行った。結果非腫瘍粘膜のp16メチル化指数は0-2%に対し、腫瘍は0-100%(中央値14.2%;P=0.01)で、p16過剰メチル化(p16メチル化指数>2%)は100/151例(66%)、p16蛋白発現低下(免疫染色陽性率<5%)は22/151例(15%)の大腸癌にみられた。P16免疫染色の画像解析ではp16染色率とp16メチル化指数に有意の相関は認められなかった。p16mRNA発現レベルは非腫瘍粘膜に比べ、癌組織で有意に高かった(P=0.003)。p16mRNA発現レベルと染色率との間には有意な相関(P=0.043)があったが、p16メチル化指数とmRNA発現レベルには相関がなかった。p16過剰メチル化は小さい腫瘍に多かったが(P=0.048)、その他の臨床病理学的事項との関連は認められなかった。Coxの多変量解析ではp16過剰メチル化(P=0.007)、高pT(P=0.007)と高病期(P<0.001)は総生存率に対する独立予測因子で、p16過剰メチル化(P<0.001)、高pN(P<0.001)、高pT(P=0.014)は非再発生存率に対する独立予測因子であることが明らかとなった。

Coxの多変量解析ではp16過剰メチル化(P=0.007)、高pT(P=0.007)と高病期(P<0.001)は総生存率に対する独立予測因子で、p16過剰メチル化(P<0.001)、高pN(P<0.001)、高pT(P=0.014)は非再発生存率に対する独立予測因子であることが明らかとなった。大腸癌浸潤先進部簇出巣(以下、簇出巣)とは、数個までの未分化な癌細胞より成る小胞巣状増殖巣を示した所見で、これまで研究申請者及びその研究グループは簇出が小型進行癌の特徴的な浸潤増殖パターンであり簇出高度例はリンパ節転移が高率で術後の肺転移再発率も高いことを報告した。そこで今回、患者背景調査にて予後観察可能なstageII以上の当院手術症例、大腸癌患者159例を検索し、癌浸潤度、リンパ節転移、脈管侵襲、TNMステージなどの臨床病理学的事項と予後因子(再発ないし死亡までの期間)の調査をおこなった。また、全症例の切除標本のHE標本を用いて、腫瘍先進部の簇出の程度を軽度、中等度、高度の3段階にわけて検討した。多変量解析の結果、簇出が大腸癌術後の独立した予後規定因子であることを見いだした。また摘出検体の正常粘膜を有する腫瘍組織で、p16INK4aの免疫組織化学的検索を行なった。さらに、ホルマリン固定パラフィン切片で、p16INK4aの免疫染色を追加した結果、多変量解析により腫瘍中心部のp16INK4a蛋白発現は予後に関与しないのに対し、簇出巣のp16INK4a蛋白発現が予後と関連することを新たに発見した。加えて、この159例のうち、大腸癌部のホルマリン固定パラフィン切片からDNAを抽出できた154例について、p16INK4aプロモーター領域のメチル化の定量的検出を行なった。この結果、p16INK4aプロモーター領域のメチル化が簇出とともに独立した予後因子である事を見いだした。結腸直腸癌の異常なp16INK4a遺伝子メチル化の予後値(患者と材料)我々の研究の対象は、1996年4月から2001年3月の間の結腸直腸癌手術例151人の患者。95人は男性、56人は女性。65.8年の平均年齢で(中央値(67年);範囲(39-86))。HEで染色される標本は、左結腸曲で腫瘍に近位と遠位の腫瘍が定義された。全ての外科的に切除された腫瘍の浸潤(pTカテゴリー)(リンパ節転移(pNカテゴリー)と病理学的病期分類)の深さは、UICCTNM分類(国際対癌連合、1997)によって行われた。151人の患者から、70人はTNM II期、57人はIII期であった。そして、24人はIV期であった。(結果)正常な粘膜サンプル(N=10)は、0から2%(中央値、0.07%)までp16メチル化を示した、そして、腫瘍サンプル(N=151)は、0100%を表した。(中央値(14.2%)。標準と腫瘍組織との間のp16メチル化は、統計学的に有意だった。(P=0.01)。P16メチル化2%>を(+)として定義すると、p16の異常なメチル化、100/151(66%)腫瘍サンプルで見つけられた。P16免疫染色は明らかに識別され、腫瘍先進部に強く染まる傾向であった。p16免染のない例は(免疫活性<5%)は、22/151(15%)だった。臨床病理学的な特徴とp16メチル化状態は、癌関連の生存の危険因子として単変量解析によって分析される。この分析に基づしいて、p16メチル化を有すり患者は、悪い生存率(P=0.01)を呈した。加えて、腫瘍の分化度(poor、P<0.001)、pT(腫瘍径)(P=0.003)、pN(リンパ節転移)(P<0.001)とTNM分類(P<0.001)は、癌関連の生存に重要な影響を及ぼした。p16メチル化(P=0.007)、pT(P=0.007)と先進の腫瘍の病期(P<0.001)は、独立予測因子であると判明した。