hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
虚血性脳神経細胞障害におけるグリア細胞の多面性の解析

その結果、虚血再潅流後旧目からMCP-1mRNAの発現が海馬dentate gyrus(DG)でみられ、2日目には遅発性神経細胞死がみられるCA1領域全体に分布していた。発現している細胞はアストロサイトであった。ELISAによるタンパクの定量実験でも2日目にもっとも多い発現が確認された。本実験結果および虚血再潅流1日目から血液脳関門の透過性の著明な亢進が起こるというわれわれの知見とを考慮すると、アストロサイトが発現するMCP-1によって、血中から脳内に侵入した単球および脳内に存在するミクロダリアが活性化されて神経細胞の障害に関与することが推察され、アストロサイトとミクロダリアが相互に作用することも裏付けられた。われわれは脳卒中、特に虚血性脳神経細胞障害の機構を解明し、治療薬を開発することを目的としている。脳卒中易発症高血圧自然発症ラット(SHRSP)は若年期より著明な高血圧を発症し、10分間の総頚動脈結紮により海馬CA1領域に遅発性の神経細胞死を誘発する。正常血圧のWKY系ラットではこのような現象はみられない。昨年度の実績報で明らかにしたように、SHRSPに一過性前脳虚血負荷後2日目の海馬CA1領域のアストロサイトにmonocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)が著明に発現する。そこでWKYおよびSHRSPからアストロサイトを分離・培養し、in vitroで低酸素・無グルコース下でincubationした後、通常酸素・メディウムに戻して48時間incubationした。RT-PCR法でMCP-1の発現を調べたところ、SHRSPでは著明な発現がみられたが、WKYではわずかな発現であった。また、一過性虚血を負荷したあとの細胞障害性を比較するために、LDHの測定およびMTT assayを行ったところ、SHRSPのアストロサイトではWKYに比べより障害性が高いことがわかった。アストロサイトはBBBの構成に重要な役割を果たすことが知られており、SHRSPではBBBの破綻も示唆される。これらの結果から、SHRSPのアストロサイトは一過性虚血負荷により、WKYに比較してより高い障害性を受ける一方、自分自身でMCP-1を発現することが明らかになった。また、培養ミクログリアについても障害性を検討したが、両系における差はみられなかった。SHRSPミクログリアにMCP-1を添加したところ、iNOSの発現がわずかながら増加した。MCP-1は単球の遊走化因子であるとともに、ミクログリアの活性化因子としても作用することが考えられ、アストロサイトが発現するMCP-1がミクログリアのiNOSの発現を促進し、神経細胞障害の誘発に関与することが推察される。今回の結果から、アストロサイトとミクログリアの相互作用の一端が明らかになり、SHRSPにおいては虚血に対するアストロサイト自身の障害性の高さおよびMCP-1の発現という反応が虚血性神経細胞障害にっながることが示唆された。
翻訳関連分子種の一次構造解析に基づく微胞子虫類の系統進化学的位置づけ

微胞子虫類はミトコンドリアをもたない単細包の真核生物であり、広範な動物種を宿主とする細胞内寄生性の原虫である。本研究では、微胞子虫類の翻訳関連分子種の一次構造データに基づく分子進化学的な解析から、微胞子虫類の真核生物内部での系統的位置および微胞子虫類内部の系統関係を明らかにすることを目的とした。本研究においては、Glugea plecoglossi(アユ寄生虫)のサンプル採取および核酸抽出、Encephalitozoon cuniculiおよびE.hellemの継代、培養、核酸抽出を行なった。これらの核酸サンプルをもとに、G.plecoglossi, E.hellem, E.cuniculiについて、ヴァリンtRNA合成酵素(ValRS)、イソロイシンtRNA合成酵素(IleRS)、ミトコンドリア型70kDa熱ショック蛋白質(mit-HSP70)の遺伝子解析を行なった。さらにミトコンドリアをもたない別の原虫であるGiardia intestinalis, Trichomonas vaginalisおよびEntamoeba histolyticaについても、データが存在しないものについてはそれらの遺伝子解析を行なった。これらのデータを含め、さまざまな分子種による分子系統樹を推定し、個々の解析結果を総合評価した結果、微胞子虫類が進化の過程でミトコンドリアを2次的に喪失したものであること、微胞子虫類は従来示唆されていたように真核生物の初期に分岐した分類群ではなく菌類と近縁であること、などの可能性の高いことが明らかとなった。さらに、微胞子虫類のリボソーム蛋白種を分析するための準備段階として、ミトコンドリアをもたない別の原虫であるGiardia intestinalis, Trichomonas vaginalis, Mostigamoeba balamuthiについて、リボソームの蛋白解析を行なった。微胞子虫類の翻訳関連分子種の一次構造データに基づく分子進化学的な解析から、微胞子虫類の真核生物内部での系統的位置および微胞子虫類内部の系統関係を明らかにすることを目的として研究を進めている。本年度は、アユに寄生する微胞子虫で培養ができないGlugea plecoglossiについては、大量のサンプルを採取して核酸抽出を行なった。また、培養が可能な(EncephalitozooncuniculiおよびEncephalitozoon hellem)については、培養条件を確立し、核酸抽出およびその大量調製を行なった。これらの核酸サンプルをもとに、G.plecoglossi,E.hellem,E.cuniculiのそれぞれについて、インロイシン-tRNA合成酵素(IleRS)およびヴァリン-tRNA合成酵素(ValRS)の遺伝子解析を行った。さらに、E.hellem,E.cuniculiについては、ミトコンドリア型の70kDa熱ショック蛋白質(hsp70)の遺伝子解析も行った。これらのデータを含めてさまざまな分子種による分子系統樹を推定し、それらの結果を総合評価した結果、微胞子虫類が進化の過程でミトコンドリアを2次的に喪失したものであること、微胞子虫類は従来示唆されていたように真核生物の初期に分岐した分類群ではなく、むしろ菌類もしくは動物と菌類の共通祖先の近くに位置づけられること、などの可能性が高いことが示された。さらに、微胞子虫類のリボソーム蛋白種を分析するための準備段階として、微胞子虫類と同様にミトコンドリアをもたない真核生物であるGiardia lamblia,Trichomonasvaginalisについてリボソーム蛋白解析のシステムを確立した。微胞子虫類はミトコンドリアをもたない単細胞の真核生物であり、広範な動物種を宿主とする細胞内寄生性の原虫である。

本研究では、微胞子虫類の翻訳関連分子種の一次構造データに基づく分子進化学的な解析から、微胞子虫類の真核生物内部での系統的位置および微胞子虫類内部の系統関係を明らかにすることを目的としている。昨年度と同様に、Glugea plecoglossi(アユ寄生虫)のサンプル採取および核酸抽出、Encephalitozoon cuniculiおよびE.hellemの継代、培養、核酸抽出を行なった。これらの核酸サンプルをもとに、昨年度に引き続き、E.hellem,E.cuniculiについて、さらに新たにG.plecoglossiについてミトコンドリア型70kDa熱ショック蛋白質(HSP70)の遺伝子解析を行った。これらのデータを含め、さまざまな分子種による分子系統樹を推定し、それらの結果を総合評価した結果、微胞子虫類が進化の過程でミトコンドリアを2次的に喪失したものであること、微胞子虫類は従来示唆されていたように真核生物の初期に分岐した分類群ではなく菌類と近縁であること、などの可能性の高いことが明らかとなった。さらに、微胞子虫類のリボソーム蛋白種を分析するための準備段階として、微胞子虫類と同様にミトコンドリアをもたない原虫であるGiardia lamblia, Trichomonas vaginalisについて、リボソームの蛋白解析を行った。微胞子虫類はミトコンドリアをもたない単細胞の真核生物であり、広範な動物種を宿主とする細胞内寄生性の原虫である。本研究では、微胞子虫類の翻訳関連分子種の一次構造データに基づく分子進化学的な解析から、微胞子虫類の真核生物内部での系統的位置および微胞子虫類内部の系統関係を明らかにすることを目的とした。これらの核酸サンプルをもとに、昨年度に引き続き、G.plecoglossiについて、さらに新たにミトコンドリアをもたない別の原虫であるGiardia intestinalisおよびEntamoeba histolyticaについて、ミトコンドリア型70kDa熱ショック蛋白質(HSP70)の遺伝子解析を行った。さらに、微胞子虫類のリボソーム蛋白種を分析するための準備段階として、ミトコンドリアをもたない別の原虫であるTrichomonas vaginalis,Mastigamoeba balamuthiについて、リボソームの蛋白解析を行った。
医薬品開発の複雑性と多様性に対する統計的意思決定の方法の理論と展開

本研究では,近年の複雑性を増す医薬品の臨床試験おいて,適切な意志決定を行うための統計的方法論を研究した.とくに,社会的要請と貢献の高い統計的課題として,複数の達成目標を設定する臨床試験(たとえば,複数の評価指標を主要変数として設定し,それらのいずれか,あるいはすべてについて統計的有意性を評価する,非劣性評価と優越性評価を同時に評価する)において,試験の効率性と生産性の向上を目指し,群逐次デザインおよび適応的デザインにおいて,適切な意思決定を行うための統計的な枠組みを検討した.初年(H26年度)では, (1)複数仮説を伴う臨床試験のデザインと解析について,これまでの結果を報告することに加えて,最新の研究の状況を確認し,とり組むべき内容とその方向性を改めて確認した.また, (2)予測バイオマーカに基づくEnrichment集団を対象とする臨床試験のデザインについても.これまでの研究の結果を改めて点検したうえで,主として残された課題と方法の拡張に関する理論的研究を行った.H26年度の具体的な研究内容と研究体制は以下のとおりであった.(1)複数仮説を伴う臨床試験のデザインと解析[濱﨑(主)・杉本(副)・寒水](1a)正規指標と事象時間指標が混在する場合の方法の検討,(1b)評価項目間の相関の不確実性を考慮する方法の検討,(1c)準競合リスクの問題を扱うための方法の拡張にとり組くんだ.(2)予測バイオマーカに基づくEnrichment集団を対象とする臨床試験のデザインと解析[濱﨑(主)・寒水(副)]:(2a)これまでに提案された予測バイオマーカに基づくEnrichment集団を対象とする臨床試験のデザインと解析方法を通常の臨床試験との対比で捉え直し,実際場面での適用可能性にする問題を整理した.併せて(2b)予測バオマーカの誤分類に基づく効果推定の問題を検討した.事象時間データにおいて,例えば死亡を先に観測すれば関心のあるその他の事象を観測できないような,致死的な事象が他方の事象を打ち切る関係にあるエンドポイント(準競合リスク)の問題に対する,試験デザインの方法を検討した.これまでの研究では,二つのエンドポイントのいずれについても統計的有意性を検証するIntersection-Union検定の問題のみを扱ったが,これに加えて二つのエンドポイントのいずれかについて統計的有意性を検証するUnion-Intersection検定の問題を,とくに日常的に用いられるBonferroni調整に焦点をあてて検討した.これらの成果を国際学会等で発表した.連続データと2値データの場合については,短期追跡で十分なエンドポイント(短期追跡エンドポイント)と長期的追跡が必要なエンドポント(長期追跡エンドポイント)が混在する場合の試験デザインとして,群逐次デザインの活用を検討した.このとき,群逐次デザインの枠組みにおいて,短期追跡エンドポイントについて試験進捗の初期で解析を実施し,長期追跡エンドポイントについては,試験進捗の後期で解析を実施できるようなエンドポイント間で異なる回数の解析や異なる時点での解析の実施を可能とする柔軟性の高いデザインを検討した.これらの成果を学会誌などで公表した.この考え方を,侵襲性の高いエンドポイントと侵襲性の比較的低いエンドポイントが混在する場合に応用した.これより侵襲性の高いエンドポイントを測定を途中で止めることにより,試験参加者への負担を軽減することが可能になる.以上の検討より,試験のサイズを結果として小さくしたり,試験期間を短くすることが可能となるような効率的で生産性の高い試験デザインを設計する基盤を構築することができた.本年度に目標に掲げた事項をほぼ達成できた.得られた成果は国際学会や国際学術誌で公表し,情報発信につとめた.複数仮説を伴う臨床試験のデザインと解析として,本研究では,循環器領域やがん領域の臨床試験で多くみられる,複数の事象時間指標が主要評価項目である場合を集中的に検討した.1.先行の研究では事象時間指標のすべてが致死的な事象でないとして検討を行ったが,例えば循環器領域では死亡までの時間と入院までの時間,がん領域では死亡までの時間と再発までの時間といったように,致死的な事象が他方の事象を打ち切る関係にあり,それらの事象が強く関連をもつ準競合リスクである場合が一般的である.そこで,本研究では,このような準競合リスクの問題を扱うための方法の拡張を検討した.複数仮説を考慮する場合の検出力,標本サイズおよび第1種の過誤確率が相関とどのように関連し,挙動するかを明らかにした.実際場面においてこれらの方法を利用するにあたり,評価指標間の相関は未知であるか,推定のためのデータが利用可能であっても限定的で,それを利用するにしても推定値に伴う変動をどのようにデザインに考慮するかが問題である.本研究では評価項目間の相関に絡む不確実性を考慮する方法を検討し,試験デザインにおいてどのように相関を考慮すればよいかを検討した.2. 1で得られた成果を群逐次・適応的デザインへ拡張した.

ここでは試験途中での,評価指標の変更と選択,試験仮説の変更,標本サイズの再設定などを,意思決定に伴う不確実性の影響を最小限にとどめ試験途中でも合理的な選択ができるような統計的方法を頻度流接近法の枠組みで検討した.とくに試験の無効中止と有効中止を組み合わせた方法を検討した.提案方法について利用可能な解析プログラム(R/Fortran),より利用が簡便なソフトウェアとして提示し,広く実地で使用できるように配慮した.本研究では,近年の複雑性を増す医薬品の臨床試験おいて,適切な意志決定を行うための統計的方法論を研究した.とくに,社会的要請と貢献の高い統計的課題として,複数の達成目標を設定する臨床試験(たとえば,複数の評価指標を主要変数として設定し,それらのいずれか,あるいはすべてについて統計的有意性を評価する,非劣性評価と優越性評価を同時に評価する)において,試験の効率性と生産性の向上を目指し,群逐次デザインおよび適応的デザインにおいて,適切な意思決定を行うための統計的な枠組みを検討した.がん臨床試験や循環器領域の臨床試験で用いられる事象時間応答についての準競合リスクの問題を扱うための方法を整理し,標本サイズ再計算などを含む群逐次試デザインへの拡張のアイディアを創出することができきた.これまでの研究成果を改めて評価したうえで残された課題・問題点を整理する.進捗状況を整理し,進展が著しい,または進展がとくに期待されるか,または他の領域に大きい影響を及ぼすと考えられる研究箇所は適宜に役割分担を追加もしくは入れ替えといった調整を行う.最終年度のH28年度では,試験の効率性と生産性を高める手段として,「群逐次試験・適応的デザインへの拡張」を試みる.ここでは試験途中での評価指標の変更と選択,試験仮説の変更,標本サイズの再設定などの可能性を頻度流接近法の枠組みで検討する.加えて,頻度流接近法をBayes流接近法との対比で改めて捉え直し,これらの方法論の接合をはかる.これまでに得られた結果が実質科学の諸領域で実際に適用されることで意義をもつことから,AIDS/HIV,循環器疾患,がんなどの臨床試験への適用を試みる.統計科学先に示した全体計画に基づき,とくに実地での適用拡大と方法論の標準化の二つに重点をおきながら, H26年度からの研究を発展・拡大させる.研究代表者・分担者は年度末にそれぞれの結果をもち寄って議論し課題・問題点を整理し,そのうえで総合的な評価を試みる.また,その段階で進捗状況を整理し,進展が著しい,または進展がとくに期待されるか,または他の領域に大きい影響を及ぼすと考えられる研究箇所は適宜に役割分担を追加もしくは入れ替えといった調整を行うことを前提として,昨年度末に,研究計画・方法を見直しH27年度では, H26年度で得られた理論的研究の継続,およびH28年度での実践的研究の準備として,応用的研究を中心に行なうことした.このとき, (1)では,複数指標の問題のなかでの, (1d)複数仮説(優越性・非劣性仮説)との組み合わせ, (1e)3群以上の比較での標本サイズの設定の問題を検討する.また, (1f)仮説領域に対する制約の緩和を検討する. (2)では, (2c)実際には陽性患者と陰性患者での実質的に効果の差がないような状況でのEnrichment集団のみに基づく治療効果の推定の問題を吟味する.計画通りにほぼ助成金を支出したが,3月に予定していた研究打ち合わせが急きょ延期となったため,その旅費(5,620円)を翌年度に繰り越しすることとした.年度の途中で,今年度に計上していた使用予定分を次年度に変更して使用する方がより効果的に研究が進められることがわかったため次年度に繰り越した.研究打ち合わせの日程を早期に決定し,繰り越した分を使用する.この繰り越し分は,次年度で論文校正代として使用する予定である
現存大蔵経諸本をもちいた〈阿闍世王経〉漢訳諸本に関する文献学的研究

本年度は大蔵経の実地調査に関しては、醍醐寺蔵宋版一切経について調査することができた。福州東禅寺版が大半を占める同寺の宋版一切経と宮内庁所蔵の福州開元寺版本について部分的に比較した。両大蔵経はかなり密接な関係にあることがかねてより予想されているが、今回の調査の結果、『普超三昧経』については必ずしもそうではなく、むしろ、東禅寺版と湖州・思渓蔵(増上寺蔵)と近い可能性がうかがえた。次に、大蔵経諸本の異読調査を『普超三昧経』について行った。すなわち、日本古写一切経5種(聖語蔵経巻、七寺一切経、興聖寺一切経、高野山金剛峯寺蔵中尊寺金銀交書一切経、石山寺一切経)および江南系大蔵経7種(開元寺版、思渓蔵、普寧寺蔵、磧砂蔵、洪武南蔵、永楽北蔵、嘉興蔵)について異読を調査し、それにもとづいてそれらの相互関係について検討した。前者の日本古写経5種のうち、中尊寺経と七寺一切経の間に近接性がみられ、石山寺一切経については開宝蔵を参照した痕跡が確認できた。後者の江南系大蔵経諸本に関しては、昨年度入手した増上寺の三大蔵に含まれる思渓蔵と普寧寺蔵の画像を用いて調査した。それによって版本大蔵経諸本における編集の有無などについても新たなことが判明した。また、先年来取り組んできた大蔵経の概説書についても、本年度ようやく脱稿することができた。『大蔵経の歴史ー成り立ちと伝承』(方丈堂出版)として、2019年夏頃には上梓できる見込みである。そのほかに、論文(訳注研究含む)を4本、英文レビューを1本を公表し、海外での招待共同研究発表を1回、国内での招待講演を1回行った。当初研究計画になかった大蔵経の概説書(単著)の執筆が本年度完遂し、次年度に出版できる見込みになった。また、これまでに調査・収集してきた大蔵経諸本についても『普超三昧経』についてはほぼ調査を完了することができた。〈阿闍世王経〉諸本のうち、『普超三昧経』については調査をほぼ完了したが、今後は他の2種の漢訳、支讖訳『阿闍世王経』および失訳『放鉢経』について調査を進め、次年度中には完了させる。また、醍醐寺蔵宋版一切経については、今年度醍醐寺が台風21号の甚大な被害を受けたことで撮影をしていただくことができなかったが、次年度も再度調査を行い、醍醐寺の担当者と相談の上、可能であれば、撮影を依頼して、詳細な調査を行えるようにしたい。本年度は〈阿闍世王経〉漢訳諸本に関する資料の収集を行いながら、それらの調査およびデータの入力、これまでの研究成果の発表を行なった。1、資料の収集に関しては、京都・興聖寺蔵の写本一切経、名古屋・七寺蔵の写本一切経、大谷大学所蔵の高麗大蔵経再雕本(日本で現存する最古の高麗蔵再雕本と推定されるもの)、宋版(思渓蔵)、丹山順芸校訂の鉄眼版(黄檗版)などについて閲覧・撮影あるいは複写資料を収集することができた。特に前2者は平安末期の古写一切経であり、大変貴重な資料である。2、竺法護訳『普超三昧経』については、房山石経、聖語蔵経巻と高麗蔵2種に加えて、新たに、興聖寺、七寺の両一切経、磧砂蔵、宮内庁書陵部蔵の福州版を校合し、それらのデータの入力を済ませた。支婁迦讖訳『阿闍世王経』については、高麗蔵再雕本、聖語蔵経巻、金蔵に加えて、新たに興聖寺および七寺一切経との校合を完了し、思渓蔵、磧砂蔵、宮内庁書陵部蔵の福州版との校合を現在行なっている。3、竺法護訳『普超三昧経』の大蔵経諸本のうち、房山石経、聖語蔵経巻と高麗蔵2種の異読の共有関係に注目し、それらの相互関係に関する研究成果を公表した。本経に関しては、巻中・下のみに限定されたかたちで、高麗蔵初雕本と聖語蔵経巻の間に顕著な近似性が確認され、その両者は、系統関係上、かなり近しいと推定される。一方、高麗蔵再雕本は開宝蔵を底本とし、初雕本とは兄弟関係にあり、その制作にあたっては房山石経の底本とされる契丹蔵も参照にしたとみられることが異読の共有関係の上からも確かめられた。4、〈阿闍世王経〉の基礎研究の一環として、数年来取り組んでいるチベット語訳〈阿闍世王経〉全体の訳注研究の公表に先駆け、同第2章の訳注研究を雑誌論文のかたちで公表した。資料の収集に関しては、所蔵寺院ならびに国際仏教学大学院大学の落合先生や大谷大学の渡邊温子氏の協力により、七寺一切経ならびに興聖寺一切経について撮影もしくは複写資料を入手することができた。一方、大谷大学図書館所蔵の諸資料については、同図書館および人文情報学研究所の協力のもと、撮影および複写することができた。さらに、今年度末には、高野山金剛峯寺、高野山霊宝館および京都国立博物館の協力のもと、中尊寺経のマイクロフィルム資料を閲覧することができた。2017年度初めには同資料の複写を申請し、調査に用いる予定である。

初年度の段階で、以上のような貴重な諸資料にアクセスできたことで、資料収集については想定よりも順調に進んだ。今年度は,大蔵経の成立および変遷についての概説書(単著)を書き下ろしのかたちでまとめることになり,主にその執筆活動を行なったために,当初の計画どおりに研究を遂行することができなかった。けれども,大学生・一般以上を対象とする大蔵経に関する概説書をまとめることは漢訳大蔵経を主たる研究対象とする本プロジェクトとも密接に関わるものであり,アウトリーチ活動にもあたる。当該書籍は順調にいけば次年度中,おそくとも2019年度中には出版できる予定であり,本プロジェクトの主たる成果のひとつにもなりうる。そうした単著書籍執筆の合間に今年度も写本調査と成果発表を継続し,一定の成果を上げることができた。まず,写本調査に関しては,石山寺一切経について,石山寺綜合調査団のご協力のもと,夏と冬の大調査の折,2回にわたって閲覧・調査することができた。また,座主猊下より特別のご許可をいただき,綜合調査団団長の奥田勲先生のご協力もあって,奈良文化財研究所が撮影した画像を利用することができることになった。また,2月には増上寺の宋版,元版大蔵経の調査・撮影を関係各位のご協力のもとに行うことができた。研究成果の発表としては,5月に国際仏教大学院大学・日本古写経研究所で開催された第1回公開研究会および8月にカナダ・トロント大学で開催された国際仏教学会(IABS)において研究発表を行った。ともに,竺法護訳『普超三昧経』に関して,これまで調査を行ってきた日本古写一切経と版本大蔵経について,主に異読の共有関係から明らかにできる諸本の系統関係に関して日本語と英語でそれぞれ口頭発表した。所属先の学内学会の研究例会では仏典に広く見られる「順忍」という術語に関する研究発表を行なった。また,『阿闍世王経』チベット語訳からの訳註研究として,第IV章および第XI章前半部分について,それぞれ雑誌論文のかたちで公表した。当初の研究計画にはなかった,書き下ろしの書籍(単著)の執筆に従事したため。本年度は大蔵経の実地調査に関しては、醍醐寺蔵宋版一切経について調査することができた。福州東禅寺版が大半を占める同寺の宋版一切経と宮内庁所蔵の福州開元寺版本について部分的に比較した。両大蔵経はかなり密接な関係にあることがかねてより予想されているが、今回の調査の結果、『普超三昧経』については必ずしもそうではなく、むしろ、東禅寺版と湖州・思渓蔵(増上寺蔵)と近い可能性がうかがえた。次に、大蔵経諸本の異読調査を『普超三昧経』について行った。すなわち、日本古写一切経5種(聖語蔵経巻、七寺一切経、興聖寺一切経、高野山金剛峯寺蔵中尊寺金銀交書一切経、石山寺一切経)および江南系大蔵経7種(開元寺版、思渓蔵、普寧寺蔵、磧砂蔵、洪武南蔵、永楽北蔵、嘉興蔵)について異読を調査し、それにもとづいてそれらの相互関係について検討した。前者の日本古写経5種のうち、中尊寺経と七寺一切経の間に近接性がみられ、石山寺一切経については開宝蔵を参照した痕跡が確認できた。後者の江南系大蔵経諸本に関しては、昨年度入手した増上寺の三大蔵に含まれる思渓蔵と普寧寺蔵の画像を用いて調査した。それによって版本大蔵経諸本における編集の有無などについても新たなことが判明した。また、先年来取り組んできた大蔵経の概説書についても、本年度ようやく脱稿することができた。『大蔵経の歴史ー成り立ちと伝承』(方丈堂出版)として、2019年夏頃には上梓できる見込みである。そのほかに、論文(訳注研究含む)を4本、英文レビューを1本を公表し、海外での招待共同研究発表を1回、国内での招待講演を1回行った。当初研究計画になかった大蔵経の概説書(単著)の執筆が本年度完遂し、次年度に出版できる見込みになった。また、これまでに調査・収集してきた大蔵経諸本についても『普超三昧経』についてはほぼ調査を完了することができた。当初の計画通り、2017年度も資料の収集と校合作業および入力作業を継続する。
フォトクロミック界面流れによる非接触液滴操作法の開発

平成30年度は,液滴駆動が2種類の駆動因子(ラプラス圧と濃度差マランゴニ対流)を有しており,その支配因子が液滴サイズにより異なることを実験により示した.また,昨年度の実験で不明瞭だった,異性化分子の混合が液滴駆動の減速に与える影響については,数値計算により立証された.以下に,実験の経緯を記す.ガラス管内のμL液滴の操作において,液滴前方のガラス管壁面に張られた厚さ数ミクロンの薄膜に内部流動が生じることをPIV計測法により確認した.そこで,液滴を遮光板で隠し,実験開始時に薄膜のみに紫外光を照射する実験を試みた.その結果,固定された遮光板からメニスカスが露出した直後,液滴の駆動速度が急激に上昇した.ここで液滴駆動は,メニスカスの露出以前で等速直線運動を,露出後で減速運動(ラプラス圧に依る運動)をそれぞれ示した.そこで,等速直線運動時の駆動メカニズムを解明するため,接触線近傍に作用する駆動力を記述する式の構築を試みた.結果として,等速直線運動時の液滴駆動速度は異性化分子の濃度勾配と動的接触角の正接の積が一定となる条件が必要なことが判明した.よって,ラプラス圧とは異なるもう1つの駆動因子の存在が示唆され,本研究ではこの駆動因子を(メニスカス側から薄膜側へ移動した異性化分子の濃度勾配により誘起する)濃度差マランゴニ対流であると結論づけた.また,従来の1/5倍の直径を有するガラス管を用いてnL液滴を操作した結果,薄膜の厚さにより駆動方向と速度が変化することから,薄膜内部流(濃度差マランゴニ対流)を駆動源としていることが示唆された.以上より,本操作法が2種類の駆動因子を使い分けることで幅広いサイズの液滴に適応可能な操作法であることを示した.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。界面流動による反応の高効率化を狙った混相流型マイクロ流体デバイスでは,DNAや血液を封入したナノ・ピコリットルの微小液滴から不良サンプルや特定ウイルスを摘出する,特定個数の液滴の選択的な操作・分離が必要とされる.そこで,光応答性界面活性剤を添加した液滴に光を照射することで,内部分子の異性化により界面物性を能動的に制御できるフォトクロミズムに着目した.本研究では,フォトクロミズムを有する「フォトクロミック界面流れ」を駆使することで,幅広いサイズの液滴に対応した非接触液滴操作の実現を掲げている.研究初年度の平成29年度は,特定波長の光を液滴に局所照射できる2波長縮小光学系を開発,液滴操作の能否を確認し,液滴サイズの変化に伴う操作特性を調査した.光の照射と標本の顕微観察を同時に行えるように,光学系は可視光・紫外光の独立2光軸が顕微鏡内の光学フィルタと対物レンズを通して標本に焦点を結ぶように構築された.また,操作に向けて,界面活性剤濃度や照射光波長の変化に伴う界面張力の変化量を懸滴法により計測した.液滴操作に関しては,mmサイズの円筒形状のガラス管内に存在するμLの液滴が紫外光照射部へ向かうのに対し,可視光照射部からは避けることから,波長により引力と斥力の切替が可能なことを確認した.さらに,操作時の駆動に要する力は液滴サイズに依存しないと一般的に推論されているが,液滴サイズを大きくすると移動量が減少傾向を示すことを実験的に確認した.これは,当初,液滴とガラス管の接着面積に依存する壁面せん断応力に依るものと考えられた.しかし,液滴が等速直線運動から特定の時間で減速して静止する傾向を観測し,この時間は液滴サイズへの依存性を示した.よって,界面活性剤の異性化分子が液滴駆動に伴って移流し混合することで誘発される,サイズ依存の減速効果が原因であると数式的見解から示唆している.平成29年度では,液滴の非接触操作と観測が可能な2波長縮小光学系を利用した実験システムを構築し,スケール効果による操作特性を評価した点で,当初予定していた計画を全て遂行しており,現在までの進捗はおおむね順調に進展していると評価できる.しかしながら,液滴駆動が非熱プロセスなことを証明するために液滴の光吸収による温度上昇をレーザ誘起蛍光法から計測する目標を副次的に掲げていたが,計測対象とする任意断面の温度場には奥行き方向の情報が含まれるために計測が困難であった.さらに,構築した実験システムでは高倍率の対物レンズを用いて光源をμmサイズまで縮小露光できるので,上述の研究実績に加えて来年度の計画として予定していた,ガラス管内に存在するnL-pLの液滴の操作を試みた.液滴サイズを広い範囲で変更した際の駆動に要する力を実験及び理論から比較し,駆動原理を解明することを目的としていたが,実験では,界面張力の影響が顕著となるスケール効果により,操作特性がガラス管壁面の濡れ性に強く依存することでデータの再現性が低くなった.そのため,液滴(水)をそれと混ざり合わない連続相流体(油)の自由界面上に浮かべた状態での(液-液界面における)操作を試みたが,紫外光を液滴に照射するとエマルションの解乳化により混ざり合ってしまうために実験の続行を断念した.以上から,駆動因子の解明にあたっては液滴サイズを変えることではなく他のアプローチから実施する必要があるため,今後の研究の推進方策を研究計画立案時から変更することにした.

平成30年度は,液滴駆動が2種類の駆動因子(ラプラス圧と濃度差マランゴニ対流)を有しており,その支配因子が液滴サイズにより異なることを実験により示した.また,昨年度の実験で不明瞭だった,異性化分子の混合が液滴駆動の減速に与える影響については,数値計算により立証された.以下に,実験の経緯を記す.ガラス管内のμL液滴の操作において,液滴前方のガラス管壁面に張られた厚さ数ミクロンの薄膜に内部流動が生じることをPIV計測法により確認した.そこで,液滴を遮光板で隠し,実験開始時に薄膜のみに紫外光を照射する実験を試みた.その結果,固定された遮光板からメニスカスが露出した直後,液滴の駆動速度が急激に上昇した.ここで液滴駆動は,メニスカスの露出以前で等速直線運動を,露出後で減速運動(ラプラス圧に依る運動)をそれぞれ示した.そこで,等速直線運動時の駆動メカニズムを解明するため,接触線近傍に作用する駆動力を記述する式の構築を試みた.結果として,等速直線運動時の液滴駆動速度は異性化分子の濃度勾配と動的接触角の正接の積が一定となる条件が必要なことが判明した.よって,ラプラス圧とは異なるもう1つの駆動因子の存在が示唆され,本研究ではこの駆動因子を(メニスカス側から薄膜側へ移動した異性化分子の濃度勾配により誘起する)濃度差マランゴニ対流であると結論づけた.また,従来の1/5倍の直径を有するガラス管を用いてnL液滴を操作した結果,薄膜の厚さにより駆動方向と速度が変化することから,薄膜内部流(濃度差マランゴニ対流)を駆動源としていることが示唆された.以上より,本操作法が2種類の駆動因子を使い分けることで幅広いサイズの液滴に適応可能な操作法であることを示した.操作対象や目的に応じて操作手法を選定する際には,液滴の駆動に要する力(液滴サイズや駆動速度に影響)や駆動メカニズムの知見が必要不可欠である.そこで,今後の研究として下記の推進方策をとる.まず,力の解明に関しては,ラプラス圧から導かれた液滴駆動の物理式と動的接触角の計測データを用いることで定量評価を試みる.ここで,導出済みの液滴駆動の物理式には液滴サイズ,異性化分子の混合,壁面せん断応力の影響が含まれていないので,それらを複合した式を再構築する必要がある.異性化分子の混合については,目視で観測することが困難であることから,今後は数値解析か核磁気共鳴装置を用いた詳細な調査が必要とされる.さらに,動的接触角の計測については,今年度に開発した懸滴法の装置を改良することで実施する.続いて,駆動メカニズムの解明に関しては,液滴駆動がガラス管壁面の濡れ性に強く依存することから,それらの接触面と(液滴・気体・固定壁面の3相が共存する)接触線の顕微観察を実施する.調査対象とする理由は,接触線の移動が液滴駆動を誘起するため,接触線近傍の接触面に流れ込む流動の微視的な観測が駆動メカニズムの解明に繋がると予測されるからである.この流動場の可視化にはPIV計測法を用いるが,円筒形状のガラス管では取得画像が歪んでしまうことから,ガラス管と同屈折率であるPDMS (Polydimethylsiloxane)を用いて壁面形状を平面にすること(インデックスマッチング)で,界面挙動のより詳細な計測を試みる.以上の調査により,せん断応力や異性化分子の混合による影響を含む液滴駆動の力と駆動メカニズムを複合的に調査することで,最終的な目標であるフォトクロミック界面流れを用いた非接触液滴操作法の確立を目指す.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
連結会計情報の有用性に関する実証研究

本研究の目的は、回帰分析モデルを用いて、連結会計情報の有用性を明らかにすることである。個別会計情報と連結会計情報(親会社概念に基づく連結会計情報および経済的単一体概念に基づく連結会計情報)のいずれが企業価値との関連性が高いかということをわが国の企業を対象にして検証するという構想のもとに、Ohlsonモデルに基づく株価モデルとEaston and Harris(1991)に基づくリターンモデルを用いて、連結会計情報と企業価値との関連性(value relevance)について検証した。そしてそのことから、(1)リターンモデルの実証結果からは個別会計情報と連結会計情報との間にリターンの説明力に顕著な差は認められなかったこと、(2)株価モデルの実証結果からは最近においては連結会計情報の方が個別会計情報よりも株価説明力が高いことが明らかになった。また、(3)株価モデルの実証結果からは経済的単一体概念に基づく連結会計情報と親会社概念に基づく連結会計情報との間に株価説明力に顕著な差がないことが明らかになった。それは少数株主持分および少数株主利益の金額が連結純資産簿価や連結利益の金額と比べて極めて小さいことによるものであった。本研究の成果を、平成14年度の秋期に開催された第9回国際会計研究学会(主催:中部大学)と第3回アジア会計学会(Asian Academic Accounting Association)(主催:名古屋大学)において英語で発表した。連結会計情報と企業価値(株価)との関連性に関する回帰分析モデルの構築にあたっては、いくつかのモデルを設定するが、その中で企業価値(株価)を最もよく説明するモデルを採用する。そして、このモデルを用いた回帰分析を行い、連結会計情報と個別会計情報のいずれが企業価値(株価)に関連しているのかについて実証研究を行う。本年度の研究実績は以下のとおりである。(1)春期に財務会計および株価のデータベースから必要な連結会計データおよび株価データを検索し入手し、回帰分析モデルを構築した。回帰分析モデルでは企業集団の実態を反映するさまざまな要因を考慮して、いくつかの回帰分析モデルを設定した。(2)モデル構築のため、夏期にイギリスのウォリック大学ウォリック・ビジネス・スクールのAnthony Steel教授のレビューを受けた。研究成果を平成14年度の秋期に開催された第9回国際会計研究学会(主催:中部大学)と第3回アジア会計学会(Asian Academic Accounting Association)(主催:名古屋大学)において英語で発表した。
例題からの学習に基づく3次元環境モデルの構築に関する研究

本研究の目的は、できるだけ少数の画像系列から、任意視点の画像を合成するための基本手法を確立することである。本年度は、生成画像の(画質)高度化を目的として、複数方向からのテクスチャ画像の中から最適なものを適応的に選択して用いる手法の研究を行った。このために、テクスチャ張付け対象面の法線を推定し、この法線成分に最も近い法線を持つ視点からのテクスチャを選択して用いる方式を考案し、単純に単一のテクスチャを一貫して用いる手法、面の大小(画像上での面積比)による重みを用いた線形結合を用いる手法等と比較計算機実験を行い、法線情報を用いる手法の有効性を確認した。また、画像合成の基礎となる概略3D形状を画像系列から求める手法の研究を併せて行った。従来このような目的のための代表的な手法として因子分解法が知られている。3D物体上の特徴点位置を多視点にわたって並べてできる行列の階数は3であるという拘束が知られているが、因子分解法は、与えられた計測データに最も近い階数3の行列を得るための手法でるとみなすことができる。但し、この手法の場合、隠れなどにより特徴点が得られない場合は行列に欠落が生じ問題となる。そこで、本研究では隠れた特徴点位置を未知パラメータとして取り扱い、まず未知パラメータの初期値を適当に与えてから因子分解を行い、次いでこれによって得られた階数3の行列に最も近くなるようにパラメータの最適化を行い、この因子分解とパラメータの最適化をさらに交互に反復して行っていくことで、隠れがある場合でも3D復元を行う手法を考案し、良好な実験結果を得た。なお、本研究の視点変換画像合成手法を顔画像認識に応用した研究をパターン認識国際会議(ICPR98)にて発表した。本研究の目的は、物体の3次元(ポリゴン)モデルを構築することなく画像系列の例題からの学習に基づいて、任意視点からの画像を生成するための基本方式を確立することである。今年度の研究においては、物体の特徴点の対応付けがなされているような例題画像(プロトタイプ)系列を仮定し、これらから線形結合モデルを用いて、任意視点からの画像を合成するための研究を実施した。剛体物体上のN個の特徴点の画像上での位置座標をまとめたベクトル(像)は、直交射影の仮定の下で、4つの異なる視点からの像の線形結合により表現できることが既に知られている。本研究では、物体はそれぞれの固有詳細部分は複雑であっても概略構造は簡単で共通なクラスに分類できるものも多いことに着目し、物体クラスに共通の簡略3次元モデルを作成し、このモデルの運動により、望ましい方向の画像特徴点位置を近似し、線形結合係数を求める手法を考案した。線形結合係数が求まればクラス内の物体固有の特徴点位置も線形結合モデルに従って導出することが可能になる。特徴点位置が求まれば、本手法では、これらを頂点とする3角形パッチを生成し、ここにデータとして与えられた画像からテクスチャマッピングを行うことにより画像合成を行っている。本手法においては、画像系列(プロトタイプ)をいくつかのクラスに分類し、画像が与えられると、これらのクラスから適当なものを選択することが必要になる。このために、各プトロタイプについて、他のプロトタイプへの距離を上記線形結合モデルの計算誤差で定義し、これの距離に基づいてk-mean法の考えに基づいて例題集合をクラスタリングする手法を考案し、現在検証を行っている。
塩害環境下におけるコンクリート中への塩化物イオンの浸透に関する研究

海岸近くに建つRC造建築物では,飛来塩分のコンクリートへの吸着ならびに浸透による塩害が問題となる。本研究では,コンクリート中での塩化物イオンの移動現象を,セメント硬化体の細孔溶液中での濃度拡散による移動現象と,塩化物イオンがセメント硬化体の細孔中で細孔壁に固定される現象とを組み込んだ拡散方程式によって説明することを試みたものである。そのために,各種の水セメント比のセメントペーストを各種の濃度の塩水に浸漬して塩化物イオンを浸透させ,セメントペーストの表面からの深さ方向の全塩分の分布および細孔溶液中の塩化物イオン濃度の経時変化を測定し,セメントペーストに固定化される塩化物イオン量および細孔溶液中の自由な塩化物イオン量の関係,固定化される塩化物イオン量の限度などを求めた。その結果は,次のようにまとめられる。(1)セメントペーストの表面では,水セメント比の小さい方が塩化物を引き寄せる力が強く,表面付近では全塩分および細孔溶液中の塩化物イオン濃度ともに高くなる。(2)セメントペーストの内部では,水セメント比の大きい方が塩化物イオンが容易に拡散し,全塩分および細孔溶液中の塩化物イオン濃度ともに高くなる。(3)固定化される塩化物イオン量は,ある限界までは細孔溶液中の塩化物イオン濃度に比例する。(4)細孔容積に対する細孔壁表面積の比が大きいほど,すなわち水セメント比が小さいほど塩化物イオンを固定化する率は高くなる。これらの測定結果をもとにセメントペーストへの塩化物イオン浸透過程の数学モデルを構築した。鉄筋コンクリートの耐久性を支配する最も大きな要因の一つに,コンクリートの細孔溶液中に存在する塩化物イオンがあり,その挙動を把握することは鉄筋コンクリートの耐久性評価の上で非常に重要である。コンクリート中に存在する塩化物イオンの挙動は,便宜的にFickの法則にしたがう拡散方程式の解で表されることが多い。一方,実際の構造物におけるコンクリート中の塩化物イオンの分布をみると,材齢の経過と共に表面よりもコンクリート内部において塩化物イオン濃度が最大になる現象が多くみられる。この現象は,拡散理論のみでは説明がつかず,塩化物イオンのコンクリート中での移動に伴うセメント硬化体への固定化,セメント硬化体の風化・炭酸化などによる固定化された塩化物イオンの脱離の影響などを受けると考えられる。本研究は,セメント硬化体への塩化物イオンの固定化現象に着目して,水セメント比を変化させたセメントペースト供試体を,塩化物イオン濃度を変えた塩水へ浸し,セメントペースト中の全塩化物イオン量及び細孔溶液中の塩化物イオン量を測定し,固定化された塩化物イオン量を算出して,これらの関係を明らかにすることを目的とする。本研究の結果は,次のようにまとめられる。1)セメントペーストの表層部では水セメント比が小さいほど,細孔溶液中の塩化物イオン量及び固定化塩化物イオン量は共に大きな値をとる。2)一定時間にセメント硬化体に吸着される塩化物イオンの最大量は,そのセメント量に比例する。3)セメントペースト中の全塩化物イオン量と吸着塩化物イオン量の比は,吸着塩化物イオン量が最大量に達するまでは,セメントペーストの水セメント比によらずほぼ一定の値をとる。

そのために,各種の水セメント比のセメントペーストを各種の濃度の塩水に浸漬して塩化物イオンを浸透させ,セメントペーストの表面からの深さ方向の全塩分の分布および細孔溶液中の塩化物イオン濃度の経時変化を測定し,セメントペーストに固定化される塩化物イオン量および細孔溶液中の自由な塩化物イオン量の関係,固定化される塩化物イオン量の限度などを求めた。その結果は,次のようにまとめられる。(1)セメントペーストの表面では,水セメント比の小さい方が塩化物を引き寄せる力が強く,表面付近では全塩分および細孔溶液中の塩化物イオン濃度ともに高くなる。(2)セメントペーストの内部では,水セメント比の大きい方が塩化物イオンが容易に拡散し,全塩分および細孔溶液中の塩化物イオン濃度ともに高くなる。(3)固定化される塩化物イオン量は,ある限界までは細孔溶液中の塩化物イオン濃度に比例する。(4)細孔容積に対する細孔壁表面積の比が大きいほど,すなわち水セメント比が小さいほど塩化物イオンを固定化する率は高くなる。これらの測定結果をもとにセメントペーストへの塩化物イオン浸透過程の数学モデルを構築した。
高品質ビスマスフェライト系薄膜の作製と精密物性評価-圧電性・絶縁性向上に向けて-

BiFeO_3(BFO)薄膜の逆圧電特性の精密測定を電場印加時の結晶構造変形をその場観察することで実現した。また、高品質BFO薄膜の作成を目指し、新たにイオンビームスパッタによる作製を世界で初めて試み、室温でヒステリシスループの観察に成功した。さらに低酸素分圧でBFO薄膜を作製することで、第一原理計算において優れた特性が期待されている巨大c/a比を有するBFO相が得られることを明らかにした。本研究では、環境負荷の少ない非鉛強誘電体材料として注目されているマルチフェロイックBiFeO_3(BFO)薄膜の基礎物性の解明と作製プロセス開発を行った。1. BFO薄膜におけるリーク電流の精密評価本研究ではパルスレーザ堆積法(PLD)および化学溶液法(CSD)により作製したBFO薄膜のリーク電流と膜微細構造の関係を、電流検出型AFMを用いたリーク電流の面ないマッピングを行うことで明らかにした。その結果BFO薄膜のリーク電流はグレインバウンダリおよび、結晶粒中の両方で流れることがわかった。しかしリーク電流はグレインバウンダリで顕著に流れることを明らかにした。2. BFO薄膜における圧電性の精密評価また、PLD法で作製したBFO薄膜の圧電性の精密評価として電場印加下における時分割X線回折を行った。SPring-8 BL13XUの坂田氏と共に小型低温チャンバを立ち上げ、同実験を80Kの低温で行うことに世界で初めて成功した。低温において電界誘起相転移等は観察されなかったが、(100)配向結晶粒の80Kにおける圧電定数d_33が20.2pm/V程度であることを明らかにした。3.イオンビームスパッタ法(IBS)を用いたBFO薄膜の作製高品質BFO薄膜の作製を目指し、これまでに報告例のないIBS法を用いたBFO薄膜の作製を行った。IBS法は高エネルギー粒子の生成が可能であるため、高品質薄膜の作製が期待できるプロセスであり、従来のrfマグネトロンスパッタ法では得ることが難しい、D-Eヒステリシスループを室温で観察することに成功した。本研究では、環境負荷の少ない非鉛強誘電体材料として注目されているマルチフェロイックBiFeO_3(BFO)薄膜の基礎物性の解明を行った。本年度の実績概要は以下のとおりである。1.イオンビームスパッタ法(IBS)を用いた巨大c/a比を有するBFO薄膜の作製昨年度開発したIBSプロセスを用いて、さらなる高品質BFO薄膜の作製を試みたところ、第一原理計算で150μC/cm^2以上の巨大残留分極が示唆されている、巨大c/a比を有するBFO相が確認できた。また、これまでの報告例では格子定数の小さいLaAlO_3、YAlO_3単結晶基板上で主に確認されていたが本研究においてSrRuO_3/SrTiO_3基板上でも形成されることを世界で始めて明らかにした。2.巨大c/a比を有するBFO薄膜の特性評価作製した巨大c/a比BFOのドメインスイッチング特性および圧電性を圧電応答顕微鏡を用いて評価したところ、ドメインの反転が確認でき強誘電性を有していることが確認できた。しかしながら圧電性は小さく21pm/V程度であった。また、微細構造とドメイン構造を確認するためにHAADF-STEM像を観察したところ、ペロブスカイト構造が確認でき、巨大c/a比BFOが形成されていることが確認できた。また、基板/薄膜界面付近は菱面体晶BFOが形成されていることも確認でき、菱面体晶BFO-巨大c/a比BFOの新規ドメイン構造に起因する圧電性等の向上が期待できる。
発光イメージングを用いた軟骨の体内時計の発達過程の解明

平成30年度においては軟骨における体内時計の種を超えた普遍性を検討する目的で、前年度まで進めてきたマウス軟骨の体内時計の発光リズム測定に加え、ラットを用いた計測を試みた。このために、体内時計Period2(Per2)のプロモーター下で不安定型ホタルルシフェラーゼ(destabilized Luciferase, dLuc)を発現するラット(Per2ーdLuc)を用いた実験を行った。Per2ーdLucラットは発光を観察することで、Per2mRNAの発現をモニターする。一方で、これまで用いてきたPER2::Lucノックイン(K.I.)マウスでは、PER2タンパク質の挙動をモニターする。そこで、Per2ーdLucラット、およびPER2::Luc K.I.マウスの胎仔線維芽細胞を作成して比較したところ、いずれも明瞭な概日振動を示したが、ラットにおいては、マウスより数時間早くピークが観察された。これは、PER2タンパク質の発現ピークがPer2 mRNAよりも4時間程度遅いという報告と一致した。Per2ーdLucラットを用いて大腿骨や脊椎の器官培養を行って、発光リズムを観察した。その結果、大腿骨骨端部、関節部、椎間板に、明瞭な概日振動が確認された。このことから、種を超えて軟骨に体内時計が存在することが支持された。さらに、耳介や喉頭蓋などを採取して、発光を経時的に測定した結果、軟骨部に明瞭な概日リズムが観察された。このことから、硝子軟骨、弾性軟骨、線維軟骨、いずれにも概日時計の自律振動が存することが明らかになった。種を超えた軟骨の体内時計の存在を確認できたこと、および、当初の目的通り、硝子軟骨、弾性軟骨、線維軟骨、それぞれにおける体内時計の存在を確認できたことから、想定よりはやや遅延気味ではあるものの、おおむね順調に進展していると判断する。最終年度においては、若齢動物と新生仔の比較を含めた検討を進め、成果報告を行う。身体の中で「1日」を刻むメカニズムである体内時計は、Per1-3, Cry1-2, Bmal1, Clockといった一群の時計遺伝子が形成する複雑で精巧な転写・翻訳のフィードバックループから構成される。体内時計の中枢は視床下部視交叉上核に存在するが、それ以外の末梢臓器、例えば肝臓や軟骨でも時計遺伝子は概日リズム(約1日周期のリズム)を刻んで発現する。軟骨の時計は、単離・組織培養下でも明瞭な概日リズムを刻み、生理的意義を持つと考えられるが、その詳細は明らかではない。特に、臓器レベルでの体内時計の意義を検討するためには、組織全体を視野にいれて観察が可能なデバイスを用いることが肝要である。平成29年度には、軟骨の体内時計の意義に迫るために、体内時計の発光レポーター遺伝子をもつPER2::LUCノックインマウスを用い、マクロイメージング装置を持ちいた、軟骨の体内時計の発光イメージングを試みた。これまで成功例を重ねてきた大腿骨のイメージングを行った。従来報告してきた通り、大腿骨を単離して発光の時系列変化を観察した場合、膝関節部の成長軟骨板や大腿骨頭、膝関節部関節軟骨に概日リズムが認められた。さらに、椎骨、椎間板の発光イメージングを試みた。椎骨が連なった状態で外部に単離し、組織培養下に発光を観察したところ、椎間軟骨および椎間板に強い発光概日リズムを認めた。さらに椎骨と椎間板を単離して計測したところ、やはり椎間板に明瞭な概日リズムを認めた。さらに、過去の報告に倣い、培養液中にサイトカインを投与したところ、投与のタイミング依存的に概日振動に変化が生じた。このことから、椎間板の組織培養が成功したことが明らかであった。この他、肋軟骨における体内時計の発光イメージングにも成功した。当初の予定通り、様々な軟骨を用いた観察に取り組み、特に椎間軟骨および椎間板に発光リズムを認めた、すなわち体内時計のリアルタイムな観察に成功したことは、他の研究者の注目を惹き、共同研究の萌芽となった。一方で、発達過程の追求に関しては検討が遅れている。

さらに、耳介や喉頭蓋などを採取して、発光を経時的に測定した結果、軟骨部に明瞭な概日リズムが観察された。このことから、硝子軟骨、弾性軟骨、線維軟骨、いずれにも概日時計の自律振動が存することが明らかになった。種を超えた軟骨の体内時計の存在を確認できたこと、および、当初の目的通り、硝子軟骨、弾性軟骨、線維軟骨、それぞれにおける体内時計の存在を確認できたことから、想定よりはやや遅延気味ではあるものの、おおむね順調に進展していると判断する。椎間軟骨、椎間板の体内時計のマクロイメージングを用いたリアルタイムモニタリングについて、成果が期待されるため、優先的にこれを進めていく。実施にあたっては、京都府立医科大学統合生理学八木田教授との共同研究により行う。最終年度においては、若齢動物と新生仔の比較を含めた検討を進め、成果報告を行う。必要な実験を慎重に検討しながら進めた結果、使用予定額の一部を次年度に使用する見込みとなった。研究の進捗を鑑み、平成31年度の実験における消耗品費に充当する。
あくび行動の発現機序,とくにメラニン細胞刺激ホルモンの役割

本研究ではラットにおけるあくび行動の発現機序について検討を加え、以下の研究結果を得た。1.あくび行動はアポモルヒネ,ピリベジル,3-PPP,あるいはブロモクリプチン投与で誘発されたが、SK&F-38393では誘発されなかった。このあくび行動はスルピライドの前処置により抑制された。2.アポモルヒネ誘発あくび行動はピンドロールなどのβ-受容体遮断薬の前処置で増強されたが、β-受容体遮断薬とSK&F-38393の併用投与では出現しなかった。3.ピンドロールで増強されたアポモルヒネ誘発あくび行動は、スピペロン,YM-09151-2およびスコポラミンで抑制されたが、SCH-23390では影響されなかった。4.β-受容体遮断薬はフィゾスチグミンおよびピロカルピン誘発あくび行動を増強させ、この増強されたあくび行動は、スコポラミンにより抑制されたが、スピペロン,YM-09151-2およびSCH-23390では影響されなかった。5.ドパミン性,アセチルコリン性神経連絡系が考えられる線条体および中隔野にアポモルヒネ,ピリベジルあるいは3-PPPを投与するとあくび行動が発現した。6.ラットの幼若時に弓状核にあるメラニン細胞刺激ホルモン性神経の細胞体を破壊するグルタミン酸ナトリウムで処置した成熟ラットにアポモルヒネを投与してもあくび行動の発現は抑制されなかった。7.アポモルヒネ誘発あくび行動はメラニン細胞刺激ホルモンの抗体を脳室内に投与しても抑制されなかった。以上の結果より、ドパミン受容体作動薬誘発あくび行動はシナプス前ドパミンD-2受容体を介して発現し、線条体および中隔野が本行動の発現に関与することが明らかにされた。また薬物誘発あくび行動は、中枢性β-受容体の遮断効果により増強されることが明らかにされた。さらにアポモルヒネあくび行動はメラニン細胞刺激ホルモン性神経活動を介せずに発現することが示唆された。