hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
科学的リテラシーを育成する天文分野の探究学習プログラム開発に関する実証的研究

本研究では、空間認識能力が必要とされる中学校天文分野の学習を対象に、科学的リテラシーを育成する学習プログラムを開発し、その指導の効果を実証的に明らかにした。特に満ち欠けの学習では、天体の位置関係を位相角でとらえさせ、モデル実験用教材で満ち欠けと位相角の関係についての仮説を検証させる指導が有効であることが明らかとなった。現象とそれを引き起こす要因との因果関係について仮説を設定させ、それを検証させる探究的な学習に作図を導入することは、現象を科学的に説明する能力の育成に有効であることが示唆された。まず、中学校天文分野の学習で科学的リテラシーを育成する上で重要となる満ち欠けの理解に関わる空間認識能力に影響を及ぼす諸要因を調査から同定し、その因果構造を明らかにした。因子として、「関係性の数学的図式化」、「天文への関わり」、「理科学習への好感度」、「日常の方位認識経験」、「問題解決への論理的思考」、「小学校天文学習への好感度」の六つが同定できた。この六つの因子と空間認識能力の七つの変数についてパス解析を行った結果、「天文への関わり」、「日常の方位認識経験」、「小学校天文学習への好感度」の三つが空間認識能力に間接的に影響を及ぼしていることが明らかとなった。また、「問題解決への論理的思考」と「関係性の数学的図式化」が空間認識能力に直接的に影響を及ぼしていることが明らかとなった。これらの結果を踏まえ、中学生の満ち欠けの理解に関わる空間認識能力を育成するためには、満ち欠けが起こる仕組みを説明するための論理を思考させる場面を導入するとともに、天体・太陽・地球の位置関係と天体の陰の関係性を視覚化させる指導が重要となることの示唆を得ることができた。次に、因果構造を踏まえて満ち欠けの指導方略を検討し、天体の位置関係を作図によって位相角でとらえさせる指導が、満ち欠けの現象を科学的に説明する能力の育成に与える効果について実証的に検証した。検討した指導は、作図によって満ち欠けが位相角によって変化するという仮説を形成させ、モデル実験においてその仮説を検証させるというものである。本指導方法は、満ち欠けの現象を空間認識的に理解させたり、科学的に説明したりする能力の育成に有効であることが明らかとなった。調査結果の分析を効率よく進めることができ、満ち欠けの学習についての指導方法の検討とその有効性の検証に取りかかることができた。28年度は、予定していた「地球の公転と見える星座の関係」の授業を構想し実践した。また、その実践を検討していた中で、「地球の公転と四季の変化」の理解を図る指導の開発という新たな課題が表出したため、その開発も行い実践した。具体的には、27年度に明らかにした「作図が生徒の空間認識を促し現象の科学的な説明を支援すること」を踏まえ、学習内容「地球の公転と四季の変化」において、作図を導入した学習プログラムを開発した。学習プログラムでは、地球の位置の変化による太陽の南中高度の変化、地面に当たる太陽光の量、四季、といったそれぞれの変数の因果関係に着目した仮説を形成させ、かつ南中高度を作図させる方略を導入した。また、学習内容「地球の公転と見える星座の関係」において、4QSによる仮説形成過程を生かしてモデル実験の計画立案を組み入れた学習プログラムを開発した。学習プログラムでは、地球の公転による位置の変化、星座の見える方向、といった変数の因果関係に着目させた仮説を形成させ、その変数をモデルに変換する思考を可視化させた検証計画立案場面を組み入れた。この2つの学習プログラムによる授業を協力校に依頼し、その有効性を検証する実践を行った。なお、実践中、及び実践の前後で、生徒の学びと現象を科学的に説明する能力について調査した。本実践による調査結果を分析することで、中学校理科天文分野の「満ち欠け」以外の学習における指導方法への示唆を得る。授業実践協力校との連携が図れ、2つの検証授業を行うことができた。29年度は,28年度に開発・実践した「地球の公転と四季の変化」の指導の効果について分析を行った。その結果,地球の位置の変化による太陽の南中高度の変化,地面に当たる太陽光の量,四季といったそれぞれの変数の因果関係に着目させた仮説を形成させ,かつ南中高度を作図させる指導方法により,四季の現象を科学的に説明できるようになることが明らかとなった。また,28年度に開発・実践した「地球の公転と見える星座の関係」の指導の効果について分析を行った。その結果,地球の公転による位置の変化,星座の見える方向といった変数の因果関係に着目させた仮説を形成させ,その変数をモデルに変換する思考を可視化させた検証計画立案を行わせる指導方法により,地球の公転による星座の見え方についての現象を科学的に説明できるようになることが明らかとなった。これらの成果を,日本理科教育学会関東支部大会で発表し,前者についての論文を臨床教科教育学会誌に投稿した。研究機関全体を通じて,中学校理科における「月の満ち欠け」,「金星の満ち欠け」,「地球の公転による四季の変化」,「地球の公転による星座の見え方」の学習プログラム(指導方法)を開発し,その授業の分析から,現象を科学的に説明する能力の育成に本学習プログラム(指導方法)効果があることを明らかにすることができた。特に,満ち欠けの学習については,天体の位置関係を作図によって位相角でとらえさせるという新しい指導方法をその効果とともに提案することができた。また,地球の公転による四季の変化や星座の見え方の学習については,モデル実験と作図の関係性をとらえさせる指導方法をその効果とともに提案することができた。

本研究では、空間認識能力が必要とされる中学校天文分野の学習を対象に、科学的リテラシーを育成する学習プログラムを開発し、その指導の効果を実証的に明らかにした。特に満ち欠けの学習では、天体の位置関係を位相角でとらえさせ、モデル実験用教材で満ち欠けと位相角の関係についての仮説を検証させる指導が有効であることが明らかとなった。現象とそれを引き起こす要因との因果関係について仮説を設定させ、それを検証させる探究的な学習に作図を導入することは、現象を科学的に説明する能力の育成に有効であることが示唆された。本年度は、「地球の公転と見える星座の関係」の学習について、教材と探究学習プログラム及び検証のための質問紙の開発を行う。また、検証授業を実施する。2つの検証授業の分析を行い、成果を論文として発表する。理科教育学研究計画では次年度に開発する教材材料について一部購入を検討していたが、次年度の検証授業実践者決定後の購入が現実的であったため、その分の購入がなく次年度に充てたため次年度使用額が生じた。昨年度検討して今年度使用分とした調査・実践に関わる開発費に充て、研究を加速させる。
海産無脊椎動物の突然死,変態に関わる海洋性原生動物起源のケミカルシグナル

海産無脊椎動物の突然死、変態に関わる海洋性原生動物:太陽虫起源のケミカルシグナルを解明する目的で本研究に着手した。太陽虫メタノール抽出物が付着生物であるカンザシゴカイ幼生の変態誘導活性、ワムシに対する致死作用を有することを見出し、物質的レベルでの解明研究を展開した。カンザシゴカイの変態誘導物質はカンザシゴカイ棲管から別途単離構造決定した。これらは新規DHAモノグリセリドを初めとする高度不飽和脂肪酸のグリセリドであった。また飽和脂肪酸誘導体の活性は極めて低いことも明らかとした。メタノール抽出物の一画分が光照射条件下でのみ変態誘導活性、致死作用の両活性を示すことからこれらをワムシおよびブラインシュリンプに対する致死作用を指標として精製したところ、活性画分にはクロロフィル関連化合物およびカロテノイド関連化合物が主として含まれていることを明らかとすることができた。クロロフィル誘導体であるフェオフォルバイドbは光照射下で致死作用を示したが、カロテノイド誘導体であるゼアキサンチンは致死作用を示さなかった。精製画分は光照射下でのみ強い活性を示すことからフェオフォルバイド関連化合物などのような光増感作用を示す物質であることが強く示唆された。光照射によって容易に分解するなど化学的に極めて不安定なため単離、構造決定に至らなかったが海産無脊椎動物間の新たなケミカルシグナルの存在を化学的に明らかにし得た点において本研究は重要な知見を与えたものといえる。フェオフォルバイド誘導体は太陽虫によって生合成されたものではなく、餌として取り込んだ微細藻類由来の物質であると考えられる。本年度は特に以下の研究を進めた。1)太陽虫の大量培養:殺ワムシ活性物質の起源である太陽虫を逐次培養し計約2000万個体を冷凍保存した。2)生物検定系の確立:ワムシ10個体に対し10万から100万個体の太陽虫が存在するとワムシがほぼ24時間以内に死滅する。ワムシに対して太陽虫の超音波破砕、オートクレーブ処理、太陽虫の培養液等を与えたところ超音波破砕区にのみ強いワムシ活性が認められた。従って加熱に対して不安定であり、太陽虫体外に分泌されない殺ワムシ活性物質の存在が示唆された。太湯虫のメタノール抽出物も同様な殺ワムシ活性を示した。同時により簡便な毒性評価系としてArtemiaを用いた方法を導入した。Artemiaに対しても致死活性を示したが約10倍量必要であることがわかった。いずれの場合も光照射下でのみその活性が認められ暗黒化での活性はその10分の1以下であった。3)殺ワムシ活性物質の精製:光照射下でのArtemiaに対する致死活性を指標にして各種カラムクロマトグラフィー、HPLCで致死物質を精製した。致死活性を示す画分はいずれもクロロフィル類似の紫外・可視スペクトルを与えた。活性の高い画分ほど不安定であり、分解に伴って致死活性も低下した。比較的安定性の高い致死作用画分を得て^1H-NMRを測定した。その結果pheophorbideの分解産物であることが強く示唆された。現在さらに致死活性物質の精製・単離を進めている。上記の成果を1996年度マリンバイオテクノロジー学会(東京)にて口頭発表した。1.本年度の研究成果1)太陽虫の大量培養:殺ワムシ活性物質の起源である太陽虫を逐次培養し抽出材料の確保を試みた。しかしながら太陽虫の毒性が著しく低下したため太陽虫をワムシ培養液に曝すなどして太陽虫の毒性上昇を図った。これまでのところ以前の数十分の一程度の毒性を持つ太陽虫しか得られておらずこれが本研究遂行上大きなネックとなっている。2)殺ワムシ活性物質の精製:光照射下でのArtemiaに対する致死活性を指標にして各種カラムクロマトグラフィー、HPLCで致死物質を精製した。

昨年度までに致死活性を示す画分はいずれもクロロフィル類似の紫外・可視スペクトルを与えることを明らかにしてきたが、活性の高い画分ほと不安定であり致死活性物質の単離には困難をきわめている。さらに精製を進める過程で、クルロフィル類とは異なる色調を有し、かつ紫外・可視スペクトルから力カロテノイド類縁体と考えられる複数の物質を含む致死活性画分を得た。これらも不安定であり、かつ超微量であるため単離には至っていない。3)上記の成果を1999年度日本農芸化学会大会(福岡)にて発表予定である。2.今後の課題と展望本研究を進める上で二つの大きい課題が顕在化した。一つは材料の確保、二つ目は目的物質の安定性である。これらはある程度当初から予想されはしたが、生理活性天然物化学的研究の根幹に関わる問題である。今後は毒性の高い太陽虫の大量培養に注力し、致死物質が微量かつ不安定であることを踏まえて迅速な精製、単離を目指す。海産無脊椎動物の突然死,変態に関わる海洋性原生動物:太陽虫起源のケミカルシグナルを解明する目的で本研究に着手した。太陽虫メタノール抽出物が付着生物であるカンザシゴカイ幼生の変態誘導活性、ワムシに対する致死作用を有することを見出し、物質的レベルでの解明研究を展開した。カンザシゴカイの変態誘導物質はカンザシゴカイの棲管から別途単離構造決定した。これらは新規DHAモノグリセリドを初めとする高度不飽和脂肪酸のグリセリドであった。また飽和脂肪酸誘導体の活性は極めて低いことも明らかとした。メタノール抽出物の一画分が光照射条件下でのみ変態誘導活性、致死作用の両活性を示すことからこれらをワムシおよびブラインシュリンプに対する致死作用を指標として精製したところ活性画分にはクロロフィル関連化合物およびカロテノイド関連化合物が主として含まれていることを明らかとすることができた。クロロフィル誘導体であるフェオフォルバイドbは光照射下で致死作用を示したが、カロテノイド誘導体であるゼアキサンチンは致死作用を示さなかった。精製画分は光照射下でのみ強い活性を示すことからフェオフォルバイド関連化合物などのような光増感作用を示す物質であることが強く示唆された。光照射によって容易に分解するなど化学的に極めて不安定なため単離、構造決定に至らなかったが海産無脊椎動物間の新たなケミカルシグナルの存在を化学的に明らかにし得た点において本研究は重要な知見を与えたのもといえる。フェオフォルバイド誘導体は太陽虫によって生合成されたものではなく、餌として取り込んだ微細藻類由来の物質であると考えられる。
ナイモウオウギ培養細胞による免疫増強物質の生産性の検討

ナイモウオウギ培養細胞による免疫増強物質(1P)の生産に最適な培養条件の解明を目的として検討を行なった。まず、光、温度等の物理的培養条件について検討したが、培養細胞による一Pの生産性との相関関係は認められなかった。次に、基本培地、成長ホルモン等、化学的培養条件について検討したところ、培養細胞の増殖と1Pの生産の間には、負の相関関係が存在することが明らかとなった。すなわち、細胞が活発に増殖するような基本培地(Murashige-Skoog培地)による培養条件下では1Pの生産は、ほとんど確認されなかった。しかし、細胞がほとんど増殖しない基本培地(White培地)による培養条件下では、1Pの生産が確認された。この傾向は、成長ホルモンについても同様であった。すなわち、2,4-D、NAAなど細胞の増殖に適した成長ホルモンを培地中に添加した場合、1Pの生産は、ほとんど認められなかった。研究者らは、既にオウギ(黄耆)から1Pを精製し、1Pの活性本体が、糖タンパク質あるいは、多糖類であることを確認している。従って、本研究においても培地中に添加する糖に関する検討は重要であると思われる。培地中に添加する糖の種類について検討したところ、糖の種類により、1Pの生産性が異なっていた。すなわち、ショ糖より、グルコースを培地中に添加した方が、1Pの生産性が高かった細胞株の違いによる1Pの生産性について検討した結果、細胞株により1Pの生産性が大きく異なることが確認された。この結果から、ナイモウオウギ培養細胞による1Pの生産性をさらに高めるためには培養条件についての検討に付け加え、1Pの生産性が高い細胞を選抜することが不可欠であることが明らかとなった。
CUL3依存的なコレステロール輸送に着目した抗腫瘍血管新生医薬品の開発

本研究では、血管新生に必須となるユビキチンE3複合体の足場タンパク質Cullin-3(CUL3)が、血管内皮細胞のコレステロール代謝制御において、コレステロールの脂肪内局在に関与していることを見出し、一昨年度の研究では、CUL3のアダプター蛋白として知られているBTB domein containing protein (BTBP)183種類について網羅的な検証を行い、コレステロールの細胞内局在を制御していることが推測されるCUL3アダプター分子を複数同定している。昨年度は更に研究をすすめ、アルファスクリーニングの系の構築により、この同定したBTB蛋白に対する基質タンパク質の同定を試みた。現在までのところ、コレステロール制御に関連していると予測されるCUL3-BTBP軸の基質となる複数の分子の同定に成功している。さらに、該当するBTBPのsiRNAを用いた発現抑制によるヒト血管内皮細胞、HUVECの性状解析を行った。コラーゲンゲル3次元培養下における血管伸長は、発現抑制により抑制され、さらに細胞増殖や透過性、形態などの変化も認められ、血管新生を抑制する方向に作用することが部分的に示された。複合体を阻害する薬剤については、化合物らいぶらりーを用いてアルファスクリーニングによるCUL3-BTBP軸、基質タンパク質間の結合を指標として阻害剤を探索し、いくつかの候補薬剤の同定に至っていある。コレステロール制御に関連していると予測されるCUL3-BTBP軸の基質となる複数の分子の同定に成功したが、現在までのところ、CUL3-BTBPと基質タンパク質を特異的に阻害する薬剤の同定には至っていない。コレステロールの細胞内局在を制御していることが推測されるCUL3-BTBP軸および、それらに対応する基質との結合を特異的に阻害する薬剤の同定を試みる。血管内皮細胞の細胞膜上のコレステロールの正常な局在は血管新生に必須である事が知られている。本研究では血管新生に必須なユビキチンE3複合体の足場タンパク質Cullin-3 (CUL3)が、血管内皮細胞において、コレステロールの細胞内局在を制御する事を既に見出している。そこで、本年度においては、コレステロールの細胞内局在を制御するCUL3のアダプター分子の同定を試みた。CUL3はBTB domain containing protein (BTBP)を介して、基質タンパク質をユビキチン化する。ヒトでは183種類のBTBPが知られているが、申請者らの研究グループは細胞内物質輸送を制御するBTBPを約10分子同定している。本研究では、これらのBTBPのうち、コレステロールの細胞内局在に関与するBTBPをsiRNAを用いた発現抑制実験で探索した結果、コレステロールの細胞内局在を制御する複数のBTBPの同定に成功した。計画通り、コレステロールの細胞内局在を制御するBTBPを同定する事ができた。各BTBPに対する基質タンパク質の同定については、アルファスクリーンの系の構築を進めている。本年度に同定したコレステロールの細胞内局在を制御するBTBP依存的にユビキチン化を受ける基質タンパク質の同定を至急進める。具体的にはアルファスクリーンを用いた結合タンパク質スクリーニングを実施するために、そのポジティブコントロールとなる各BTBPの結合タンパク質を過去の報告をもとに選定する。また、当該BTBP発現抑制時における血管内皮細胞の性状解析(血管新生、増殖、移動、透過性)も実施する。基質タンパク質同定においては、TR-TUBE法だけでなく、SILAC法も用いた実施したい。BTBPに対する基質蛋白質のスクリーニングシステムの導入が遅れた。本年度は、このシステムを稼働させ、研究を進める予定である。CUL3-BTBPと基質タンパク質の結合を阻害する薬剤のスクリーニングシステムの稼働が遅れた。同システムは昨年度、後半から稼働しており、本年度はさらに探索を進める予定である。
コンピテンスを関門学年に配置した歴史スタンダード・カリキュラムの開発研究

本研究では、ドイツの学習指導要領を検討し、ドイツでは初等段階と中等段階を接続するカリキュラムをどのように構築しているのかを明らかにすることをめざした。本研究の成果の第1は、カリキュラムの再編を教育改革の視点から明らかにした点、第2は、事実教授や歴史科の目標が歴史意識の育成であると確定した点、第3は、ドイツのカリキュラムではコンピテンスが能力枠として機能していることを示した点、第4は、コンピテンスの到達水準が明示化されていることを提示した点、第5は、歴史意識の育成という歴史科の教育目的、コンピテンスという能力枠、到達水準が初等・中等段階の接続を可能にする要件であることを解明した点である。平成25年度の研究は、主としてドイツの歴史教育カリキュラムの理論的背景である学力政策を考察し、学力観を解明することを目的とした。そこで、事実教授や歴史科における学力観を考察する研究を実施した。実施した内容は以下の3点である。第1は、ドイツの事実教授および歴史科の教授学者へのインタビュー調査である。7月3日にゲッティンゲン大学教授Michael Sauer氏、7月4日にハンブルク大学教授Kerstein Michalik氏に対し、事実教授及び歴史科の歴史的内容や学力観に関するインタビューを実施した。第2は、学会発表である。研究代表者は、11月9日に全国社会科教育学会において「初等段階と中等段階の接続の観点に基づく歴史教育の考察ードイツ歴史教育をてがかりにー」というタイトルで、事実教授と歴史科に共通する学力観の解明をめざす発表を実施した。第3は、論文発表である。研究分担者が今年度の成果を生かし、名古屋市立大学大学院人間文化研究科『人間文化研究』20号(2014年)において、「ドイツの統合教科「事実教授」の新スタンダードー初等教育段階の歴史学習に着目してー」という論文を発表した。本年度は、インタビュー調査により、ドイツの事実教授及び歴史科の学力観を明らかにし、その学力観に基づいた指導要領や教科書の分析に基づいた成果を学会や研究紀要において発表した。これらの成果は本年度の研究の目的に合致するものであり、来年度以降の研究の基盤に位置づいている。本年度は、来年度以降の研究の円滑な実施を可能にする成果を上げることができたと考える。平成26年度の研究は、ドイツの歴史教育カリキュラムを分析し、ドイツの歴史教育における能力枠と到達水準を抽出することを目的とした。そこで、ドイツの初等段階と中等段階の教科書を分析し、両段階の接続を可能にしている要件を考察し、各段階における歴史教育の発展を解明するという研究を実施した。実施した内容は、以下の3点である。第1は、ドイツの初等段階と中等段階の教科書の分析である。両段階の教科書の分析から、両段階を接続する要件が歴史意識であることを究明し、その段階的発展を明らかにした。第2は、ドイツ歴史教授学者へのインタビュー調査である。両段階を接続する要件が歴史意識であることが判明したので、歴史意識研究が盛んになされているミュンスター大学のBernd Schoenemann、及び、Saskia Handro両教授へのインタビューを実施し、ドイツにおける歴史意識研究に関する調査を行った。第3は、学会発表である。研究代表者と研究分担者の共同研究として、2014年10月11日に日本教育方法学会において「歴史意識の連続的形成を図る小中接続研究ードイツ歴史教科書の分析をもとにー」というタイトルで、歴史意識を視点としたドイツの初等と中等の教科書の分析を通して,初等段階と中等段階の歴史学習における接続を考察する発表を実施した。本研究では、近年のドイツにおける教育改革から学力観を考察し、その学力観のもとで作成された学習指導要領を検討することで、ドイツでは初等段階と中等段階をどのように接続するカリキュラムを構築しているのかを明らかにすることをめざした。本研究の意義は以下の点である。第1は、ドイツにおけるカリキュラムの再編を教育改革の視点から明らかにした点である。第2は、事実教授の歴史的展望や歴史科においてめざすべき目標が歴史意識の育成であると確定した点である。第3は、ドイツのカリキュラムにおいては、コンピテンスが能力枠として機能していることを示した点である。第4は、能力枠としてのコンピテンスの到達水準が明示化されていることを提示した点である。第5は、歴史意識の育成という歴史科の教育目標、コンピテンスという能力枠、到達水準が初等段階と中等段階の接続を可能にする要件であることを解明した点である。これら3要件が有機的に機能することで各学習指導要領において両段階の接続が実現されていることを検討した。以上5点の意義から、歴史スタンダード・カリキュラムを開発するためには、日本においても歴史的分野独自の教育目標、コンピテンスという能力枠、到達水準を設定することが急務の課題であることを明らかにした。

「おおむね順調に進展している。」と評価した理由は、研究実績の概要で示した通り、研究計画で設定していた「ドイツの初等段階と中等段階の教科書を分析し、両段階の接続を可能にしている要件を考察し、各段階における歴史教育の発展を解明する」という本年度の目的を達成できたからである。両段階の接続を可能にしている要件が歴史意識であることを突き止め、その連続的形成のありようを示すことができた。社会科教育本年度の成果を受け、今後の研究も研究計画通りに進めることが可能となっている。本年度のカリキュラム分析研究の成果を踏まえ、27年度は歴史スタンダード・カリキュラムを開発するための基礎的研究を予定している。ドイツ歴史教育における能力枠の日本歴史教育への適用可能性を考察し、日本独自の新しい能力枠と到達水準を考察する研究を実施する予定である。」と評価した理由は、研究実績の概要で示した通り、研究計画で設定していたドイツ歴史教育における学力観を解明するという本年度の目的を達成できたからである。インタビュー調査をもとに、学会発表や論文発表まで実施することができた。本年度の成果を受け、今後の研究も研究計画通りに進めることが可能となっている。本年度の学力観の分析研究を基に、26年度は日本とドイツの指導要領や教科書の分析を実施、日本の歴史教育の分析からは能力枠、ドイツの歴史教育の分析からは能力枠と到達水準を抽出し、到達度評価を解明することで、歴史教育スタンダード・カリキュラム開発の基盤研究を実施する予定である。
紅色光合成細菌の光合成電子伝達網の全容解明と計画的改変

紅色光合成細菌ルブリビバクス・ゲラチノーサスにおいて光合成反応中心複合体への電子供与体として働きうるタンパク質が、少なくとも5種類あることを明らかにした。5番目に見つかったものは単ヘムの水溶性チトクロムcで、ゲノム解析の結果からは亜硝酸還元で主に働くNirMと同定された。光合成と亜硝酸還元の電子供与体が系統進化的に関連していることと、このNirMの大量発現株を光合成培養することで高い亜硝酸還元活性が得られることを明らかにした。1.紅色光合成細菌Rubrivivax gelatinosusの光化学反応中心への電子供与体としてすでに同定されているHiPIP(鉄-イオウタンパク)、高電位(HP)及び低電位(LP)チトクロムc8,2ヘム型のチトクロムc4の4つに加え、新たにモノヘムのチトクロムcを見いだした。このチトクロムは高電位(HP)チトクロムc8と高い配列相同性を示したためiso-HPチトクロムc8と名付けた。このiso-HPチトクロムc8遺伝子を含む約10kbの領域の塩基配列を決定したところ,緑膿菌の亜硝酸還元酵素遺伝子群とほぼ同様の遺伝子群が保存されており,iso-HPチトクロムc8は本来亜硝酸還元酵素への電子供与体であるチトクロムc551あるいはNirMであることが示唆された.2.R.gelatinosusのエネルギー代謝経路の全容を明らかにすべくゲノム解析を行った.全塩基配列は5,043,252塩基で約4,800の遺伝子座を含んでいた.水溶性チトクロムに関してはモノヘムのものがチトクロムc8の他に2つ,チトクロムc4に低い相同性を持つものが4つ存在することが見いだされ,本細菌のエネルギー代謝の複雑さや冗長性の高さがうかがえた.3.銅タンパクであるオーラシアニンは緑色繊維状細菌において光合成反応中心に対する電子供与体と考えられている。このオーラシアニンをコードする遺伝子をRoseiflexus castenholziiからクローニングし大腸菌で発現させ大量精製することに成功した.しかしながらこれら精製オーラシアニンを紅色細菌およびR. castenholzii自身の光合成膜と混合し閃光照射実験を行ったところ,いずれも電子伝達は観察されなかった.1.紅色光合成細菌Rubrivivax gelatinosusの光化学反応中心複合体への電子供与体として、これまで示してきたHiPIP、チトクロムc_4、高電位(HP)および低電位(LP)チトクロムc_8に加え、第5の水溶性チトクロムを同定した。この新規チトクロムは酸化還元電位が280mVであり、アミノ酸配列からはチトクロムc_8のホモログであった。その遺伝子は亜硝酸還元酵素遺伝子群nirSMCFDLGHJENオペロンの中にあり、かつR.gelatinosus野生型で初めて亜硝酸呼吸能が認められたことから、この新規チトクロムの本来の位置づけが亜硝酸還元に働くNirMタンパクであることが明らかとなった。遺伝子情報に基づく分子系統学的解析の結果はNirMがR.gelatinosusのチトクロムc_8の起源であることを示唆した。この菌の光合成関連遺伝子は遺伝子水平伝播によって比較的新しく獲得されたことがすでに示されているが、NirMはこの細菌が光合成能を得るときにその電子伝達を補うようになり、やがて遺伝子重複によって生じたチトクロムc_8が光合成での電子伝達に適したものへと進化していったと考えられた。2.海洋性の紅色光合成細菌Rhodovulum sulfidophilumでは、光合成反応中心への電子供与体として多くの紅色光合成細菌に見られる水溶性のチトクロムc_2に加え膜結合性のチトクロムc_<2m>も電子供与体として働いている。チトクロムc_<2m>が進化的にどのように生じたかを近縁種におけるチトクロムC_2およびチトクロムc_<2m>のアミノ酸配列を比較することにより推定した。分子系統樹を作成したところ、チトクロムc_<2m>はRhodovulum属が他の属と分岐してまもなく、かつR.sulfidofilumと他の種が分岐する以前に生じたことが示唆された。紅色光合成細菌Rvi.gelatinosusで光化学反応中心への潜在的電子供与体として見つかった水溶性のチトクロムcは、系統進化的には亜硝酸還元に働くNirMとして同定すべきタンパクである事が分かった。同菌種での亜硝酸還元能はこれまで報告されておらず、一般的な硝酸呼吸(脱窒)の能力を潜在的に持つ可能性が考えられため、この菌のゲノム情報を精査した。その結果、完全な脱窒反応(NO_3^-→NO_2^-→NO→N-2O→N_2)の第1段階である硝酸還元(NO_3^-→NO_2^-)酵素遺伝子は見つからなかったものの、亜硝酸還元から先の反応に必要な亜硝酸還元(NO_2^-→NO)

酵素、一酸化窒素還元(NO→N_2O)酵素、亜酸化窒素還元(N_2O→N_2)酵素の遺伝子が見いだされ、亜硝酸呼吸による生育も確認された。また、光化学反応中心への5つの潜在的電子供与体のうちNirM以外のものを欠損させた複合変異株において、光合成生育速度が復活する復帰変異株が高頻度で得られたが、これらの復帰変異株ではNirMを含む亜硝酸還元酵素遺伝子が大量発現していることが明らかになった。復帰変異株だけでなく、亜硝酸の培地への添加によって亜硝酸還元酵素遺伝子の発現が誘導された株においても光合成生育速度が復活した。これはNirMが亜硝酸還元酵素だけではなく光化学反応中心へも電子を供与しているためと考えられる。さらに興味深い事はこの復帰変異株が光合成培養条件で野生株に比べ非常に高い亜硝酸還元能を示したことで、このことは生物の持つ光エネルギー代謝を人為的に改変出来たことを表している。細菌を利用した窒素酸化物(NOx)の処理に活用できるかもしれない。
黄色ブドウ球菌のバイオフィルム形成を阻害する低分子化合物の作用機序解析

黄色ブドウ球菌の増殖は阻害せずバイオフィルム形成を選択的に阻害するというコンセプトのもと,化合物ライブラリーを使用したスクリーニングによって,黄色ブドウ球菌と表皮ブドウ球菌に対して高いバイオフィルム形成阻害活性を示す低分子化合物norgestimateを取得した.続いて,norgestimateの有効性評価のためのin vivoバイオフィルム感染症モデルの構築を行なった.モデルの構築にあたりパスツール研究所(フランス,パリ)微生物学部門Genetics of Biofilms Unit (PI: Jean-Marc GHIGO教授)を訪問し,現地で研究を行なった.欧州連合(EU)の動物実験に対する規約に基づき,動物実験開始に必要な種々の講習を受講し,動物実験開始資格取得のための試験に合格した後に,動物実験に着手した.ラットの背部皮下に小児用埋込型中心静脈カテーテルのポート部分を埋め込み,頸静脈にカテーテルの挿入する手術様式とした.既報をもとに手術方法を確立するためにラットの種類・サイズ,麻酔薬や鎮痛薬の選択(静脈麻酔か吸入麻酔,鎮痛薬投与のタイミング),手術手順(ポートとカテーテルの挿入順番),静脈カテーテルの種類などについて検討した.予備実験を経て最適な手術方法を見出し,ラットバイオフィルム感染症モデルを確立した.現在,norgestimateの安全性試験を行っており,安全性を確認次第,今後,norgestimateの有効性評価を進める予定である.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。黄色ブドウ球菌の増殖は阻害せずバイオフィルム形成を選択的に阻害するというコンセプトのもと,化合物ライブラリーを使用したスクリーニングによって取得された,黄色ブドウ球菌と表皮ブドウ球菌に対して,高いバイオフィルム形成阻害活性を示すnorgestimate(NGM)の作用機序解析および抗菌薬との併用効果の評価を行った.NGMは細胞外マトリクス構成成分である多糖とタンパク質の産生を抑制することで,複数の黄色ブドウ球菌臨床分離株に対し,高いバイオフィルム形成阻害活性を示すことを明らかにした(IC50:12 μM).さらにNGMが黄色ブドウ球菌のタンパク質合成に与える影響をプロテオーム解析により評価したところ,NGM存在下でバイオフィルム形成への関与が報告されている細胞壁アンカータンパク質surface protein Gやenolaseの発現が低下することが示された.また,これまでにNGMはβ-ラクタム系抗菌薬に対する黄色ブドウ球菌の感受性を向上させる効果を見出しており,その作用機序解析のために細胞壁合成への影響を透過電子顕微鏡観察により検討した.その結果,NGM存在下では細胞壁の肥厚化や異常な隔壁合成が認められた.さらに,細胞壁合成と分解に関連する遺伝子注目してトランスクリプトーム解析により評価した結果,細胞壁合成と分解に関与する複数の遺伝子の発現がNGM存在下で上昇することが明らかになった.以上のことから,NGMは黄色ブドウ球菌のタンパク質発現プロファイルを変化させることでバイオフィルム形成を阻害し,細胞壁の恒常性に影響を及ぼすことでβ-ラクタム系抗菌薬高感受性化を誘導することが示唆された.経口避妊薬として臨床的に使用されているプロゲスチンの一種である,Norgestimate(NGM)が黄色ブドウ球菌のバイオフィルム形成を阻害することを見出しており,本年度はNGMの作用機序の解析について取り組んだ.その結果,NGMはバイオフィルムの構成成分である細胞外マトリクス内の多糖とタンパク質の量を減少させることを明らかとした.またプロテオーム解析の結果,NGMはバイオフィルム形成への関与が報告されているenolaseとSasGの発現を抑制することが明らかとした.さらに驚くべきことに,NGMは細胞壁の恒常性の破綻を引き起こし,β-ラクタム系抗菌薬に対する黄色ブドウ球菌の感受性を向上させる効果を見出した.本研究は既存薬にバイオフィルム形成阻害という新たな活性が見出された点においても意義が大きい.さらに,細胞外多糖の産生抑制や細胞壁の恒常性破綻など,分子メカニズムの一端を明らかにすることができた.また,バイオフィルム形成阻害活性と抗菌薬に対する感受性向上という効果を持ち合わせた化合物の報告例は今までになく,本研究が与えるインパクトは大きい.以上のことから,本研究課題は概ね順調に進展していると考えられた.黄色ブドウ球菌の増殖は阻害せずバイオフィルム形成を選択的に阻害するというコンセプトのもと,化合物ライブラリーを使用したスクリーニングによって,黄色ブドウ球菌と表皮ブドウ球菌に対して高いバイオフィルム形成阻害活性を示す低分子化合物norgestimateを取得した.続いて,norgestimateの有効性評価のためのin vivoバイオフィルム感染症モデルの構築を行なった.モデルの構築にあたりパスツール研究所(フランス,パリ)微生物学部門Genetics of Biofilms Unit (PI: Jean-Marc GHIGO教授)を訪問し,現地で研究を行なった.欧州連合(EU)の動物実験に対する規約に基づき,動物実験開始に必要な種々の講習を受講し,動物実験開始資格取得のための試験に合格した後に,動物実験に着手した.ラットの背部皮下に小児用埋込型中心静脈カテーテルのポート部分を埋め込み,頸静脈にカテーテルの挿入する手術様式とした.既報をもとに手術方法を確立するためにラットの種類・サイズ,麻酔薬や鎮痛薬の選択(静脈麻酔か吸入麻酔,鎮痛薬投与のタイミング),手術手順(ポートとカテーテルの挿入順番),静脈カテーテルの種類などについて検討した.予備実験を経て最適な手術方法を見出し,ラットバイオフィルム感染症モデルを確立した.現在,norgestimateの安全性試験を行っており,安全性を確認次第,今後,norgestimateの有効性評価を進める予定である.Norgestimate(NGM)は

細胞壁合成・分解関連遺伝子(pbp2,femA,atl,isaA,lytM)の発現を亢進させ,細胞壁恒常性破綻を引き起こしていると推察される.そこで,これら細胞壁関連遺伝子の過剰発現株を作製し,バイオフィルム形成能,細胞外多糖などの産生に及ぼす影響を解析する.また,各細胞壁関連タンパク質をmCherry融合タンパク質として発現させ,蛍光ラベル化ペニシリンを用いてβ-ラクタム系抗菌薬と細胞壁関連タンパク質の蛍光二重標識を行うことで,NGMによるβ-ラクタム系抗菌薬高感受性化メカニズムの解明に迫る.さらに,in vivoバイオフィルム感染症モデルを用いて、NGMの有効性評価を行う.ラットに小児用皮下埋め込み型中心静脈ポートを挿入しバイオフィルム感染モデルを作製する.ラットにNGMを経静脈的投与および非投与下で黄色ブドウ球菌生物発光株Xen36(Caliper Life Science)をポート感染させる.発光イメージングシステムを用いて,NGMによるバイオフィルム形成阻害効果を経時的に評価する.ラットを安楽死後,ポートや各臓器を回収して細菌量を評価する.これまでの研究よりNorgestimateは黄色ブドウ球菌のβ-ラクタム系抗菌薬の感受性を向上させることを見出しており,代表的なβ-ラクタム系抗菌薬であるアンピシリンやイミペネムとの併用下についても同様の検討を行う.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
小胞体とゴルジ体間の小胞輸送の障害による心筋症発症機構の解明

分泌蛋白、膜蛋白は小胞体で成熟し細胞内に分泌輸送されて機能を発現する。虚血、低酸素、毒物や遺伝子変異などにより異常蛋白が小胞体に集積すると小胞体ストレス反応が起こり、異常な蛋白は分解処理される。我々はKDEL受容体が、ゴルジ体から小胞体への逆輸送を担うCOPI小胞輸送の制御機構であると共に、小胞体quality control機構の重要な要素でもあることを培養細胞で示して来た。そこで、個体におけるKDEL受容体によるゴルジ体から小胞体への逆行性輸送の意義を明らかにするために、輸送が制限された、変異KDEL受容体発現トランスジェニックマウスを作製した。変異KDEL受容体マウスでは生後10数週を経てから心不全を発症するものが現れた。心室腔の拡大や心重量の増加も見られ、組織所見で心筋細胞に大小不動、空胞変性が見られた。また、TUNEL染色により心筋細胞死が観察された。心不全症状を呈していない変異マウスにおいても、摘出心標本による機能測定から左室の収縮力低下、また、パッチクランプ法によってCaイオンチャネルの機能低下が認められた。電子顕微鏡による観察では、小胞体の分画と考えられる部分に異常な凝集物の集積を認めた。ウエスタンブロット法によれば、変異マウス心筋細胞にはユビキチン化蛋白、CHOPの集積を認めた。こうした所見から、ゴルジ体から小胞体への逆行性輸送の障害によって小胞体quality control機構が障害され、心筋細胞に異常な蛋白質が蓄積され、小胞体ストレス反応から細胞死が誘導され、拡張型心筋症が発症したと考えられた。これらの解析から、個体レベルでもKDEL受容体によるゴルジ体から小胞体へのCOPI逆輸送は小胞体quality control機構に重要であると共に、心疾患にも神経変性疾患で想定されているのと同様に小胞体ストレス反応が関与し得る事が示唆された。虚血、低酸素、毒物や蛋白の一次構造の変異などにより異常蛋白が小胞体に集積すると小胞体ストレス反応が起こり、異常な蛋白は分解処理される。そこで、KDEL受容体による逆行性輸送が制限された、変異KDEL受容体発現トランスジェニックマウスを作製した所、驚くべきことに、生後10数週を経て拡張型心筋症による心不全が発症した。本研究では変異KDEL受容体トランスジェニックマウスを用い、その心臓、心筋細胞を生理学的、形態学的、生化学的に解析し、拡張型心筋症発症に至る分子機構を明らかにしようとしている。また、マウス大動脈を縮窄し心臓に圧負荷をかけた状態での検討も行っている。こうした検討はメンブレントラフィックの破綻による心筋症や心不全、あるいは心筋細胞死発症の分子機構の解明に繋がると同時に、KDEL受容体による逆行性輸送によるquality controlを制御することによる疾患の予防、治療法の開発へと発展すると考えている。
血中循環腫瘍細胞センシングを行うマイクロ流体デバイスの開発

本研究では、電界効果トランジスタの原理を用いた超高感度電位計測バイオセンサにより血中循環腫瘍細胞(Circulating Tumor Cells: CTC)の検出と核酸解析を行う小型・可搬型デバイスの創製に関する研究を行うことを目的とした。プローブ分子を固定化した表面を用いてCTCモデルの乳がん上皮細胞をセンサに固定化し、電気計測を行った。がん細胞はシアル酸に由来する負電荷を有するため、腫瘍細胞表面のシアル酸発現量の違いに伴い、がん細胞と上皮細胞を電気的に識別することに成功した。その中に含まれる核酸の解析を行うことにより、がんの早期診断デバイスの創製を目指した。本研究では、電界効果トランジスタの原理を用いた超高感度電位計測バイオセンサにより血中循環腫瘍細胞(Circulating Tumor Cells: CTC)の分離検出と核酸解析を行う小型・可搬型デバイスの創製に関する研究を行う。CTCとは、原発腫瘍組織から遊離し血管内に侵入した細胞のことであり、わが国の死因第一位である悪性新生物つまり悪性腫瘍の遠隔臓器への転移の主要因である。血管内へ浸潤するがん細胞の大半は自己免疫系により死滅するが、ごく一部はCTCとして血液内を循環し標的臓器の毛細血管でトラップされ、基底膜を破壊して血管外へ遊出し、転移巣を形成すると考えられている。近年では、血液中のCTCの解析ががんの病態予測において有用だと認識されており、転移性乳がん、転移性結腸直腸がん、転移性前立腺がんにおける予後予測のバイオマーカーとしての有用性が示されている。血液10 mLあたりに、赤血球や白血球といった血球細胞は10の7乗から10乗個のオーダーで存在するのに対しCTCは数から数百個程度しか存在せず、一般的な遠心分離法で分画化することは困難である。また、CTCが血球細胞より大きいことを利用したサイズによるフィルタリングを利用したCTC分離分析装置は既に製品化されているが(例えばCellSearch(Veridex社))、装置や検査費用が高額であり、分離後のCTCの特性解析には不向きであるなどの課題が指摘されており、これらの製品に代わる新たな検出原理を有する分離検出デバイスが求められている。プローブ分子を固定化したセンサ表面にCTCを固定化し、CTCに由来するシアル酸負の電荷を有するため腫瘍細胞表面のシアル酸発現量の違い及びその中に含まれる核酸の解析を行うことにより、がんの早期診断デバイスの創製を目指すとともに、CTCに関する新たな生理機能を探究する。モデル系としてまずは培養細胞を用いてがん細胞を電気的に検出するデバイスの開発を試みた。ターゲットであるヒト乳腺がん細胞のMDA-MB-231(MM231)および正常ヒト乳腺細胞のMCF-10Aに関してゼータ電位を計測したところ、MM231の方が負の電荷を有していることがわかり、正常乳腺細胞との違いは1 mV程度であることが明らかとなった。また、10の7乗個あたりの細胞表面のシアル酸発現量を定量した結果、MCF10Aでは検出に有効な数字が得られなかった。これらの結果から両者のシアル酸発現量の違いがゼータ電位の違いをもたらしていることを見出した。バイオセンシングにおいて、センサ表面の機能化および最適化は、高い信号/雑音(S/N)比を実現する上で欠かせない。シアル酸由来の負電荷により変化する界面電位すなわちがん組織の有無を、電位差として判断するためプローブ分子の検討を行った。MM231およびMCF10Aを、プローブ分子を固定化したセンサ表面上に播種し、その相互作用を電位計測にて確認した。その結果、フェニルボロン酸(PBA)誘導体を固定化したセンサを用いた場合、細胞数に応じた電位応答を示し、MM231においてMCF10Aより多く存在しているシアル酸由来の負電荷を検出可能であることが分かった。これらの成果から、初年度は電極の設計と特異的分子認識反応を起こす電極表面の構築を目標としていたため、おおむね順調な経過といえる。血液10 mLあたりに、赤血球や白血球といった血球細胞は107-1010個のオーダーで存在するのに対しCTCは数から数百個程度しか存在せず、一般的な遠心分離法で分画化することは困難である。

また、CTCが血球細胞より大きいことを利用したサイズによるフィルタリングを利用したCTC分離分析装置は既に製品化されているが(例えばCellSearch(Veridex社))、装置や検査費用が高額であり、分離後のCTCの特性解析には不向きであるなどの課題が指摘されており、これらの製品に代わる新たな検出原理を有する分離検出デバイスが求められている。プローブ分子を固定化したセンサ表面にCTCを固定化し、CTCに由来するシアル酸負の電荷を有するため腫瘍細胞表面のシアル酸発現量の違い及びその中に含まれる核酸の解析を行うことにより、がんの早期診断デバイスの創製を目指すとともに、CTCに関する新たな生理機能を探究する。前年度はモデル系としてまずは培養細胞を用いてがん細胞を電気的に検出するデバイスの開発を試みた。ターゲットであるヒト乳腺がん細胞のMDA-MB-231(MM231)および正常ヒト乳腺細胞のMCF-10Aに関してプローブ分子を固定化したセンサ表面上に播種し、その相互作用を電位計測にて確認した。その結果、フェニルボロン酸(PBA)誘導体を固定化したセンサを用いた場合、細胞数に応じた電位応答を示し、MM231においてMCF10Aより多く存在しているシアル酸由来の負電荷を検出可能であることが分かった。この結果を踏まえ、今年度は乳がんに特異的な核酸の増幅と検出を行うデバイスの開発に努めた。増幅中の副生成物であるプロトンを検出の指標とすることでラベル化剤を必要としない電気化学計測デバイスの作製に成功した。これらの成果から、CTCの検出および核酸解析を行う計測原理を確立でき、最終年度のシステム化・実装化に繋げることができたためおおむね順調な経過といえる。本研究では、電界効果トランジスタの原理を用いた超高感度電位計測バイオセンサにより血中循環腫瘍細胞(Circulating Tumor Cells: CTC)の分離検出と核酸解析を行う小型・可搬型デバイスの創製に関する研究を行う。CTCとは、原発腫瘍組織から遊離し血管内に侵入した細胞のことであり、わが国の死因第一位である悪性新生物つまり悪性腫瘍の遠隔臓器への転移の主要因である。血管内へ浸潤するがん細胞の大半は自己免疫系により死滅するが、ごく一部はCTCとして血液内を循環し標的臓器の毛細血管でトラップされ、基底膜を破壊して血管外へ遊出し、転移巣を形成すると考えられている。近年では、血液中のCTCの解析ががんの病態予測において有用だと認識されており、転移性乳がん、転移性結腸直腸がん、転移性前立腺がんにおける予後予測のバイオマーカーとしての有用性が示されている。血液10 mLあたりに、赤血球や白血球といった血球細胞は107-1010個のオーダーで存在するのに対しCTCは数から数百個程度しか存在せず、一般的な遠心分離法で分画化することは困難である。
伊勢物語絵の体系構築に向けた近世作品の研究ー住吉如慶筆「伊勢物語絵巻」を中心にー

住吉如慶筆「伊勢物語絵巻」(東京国立博物館蔵)に描かれた80章段の各絵画場面について物語の内容がどのように絵画化されているのか読み取りを行った。美術史、国文学、建築史・住宅史の3分野の研究者が、住吉如慶の作風や絵画表現について、注釈書や版本の図様との比較をとおして、討議を重ね検討した。その結果として、本絵巻は伊勢物語絵の伝統をふまえて、独自性を備えた場面解釈や絵画表現を持つ作品であることが明らかになった。この研究によって、伊勢物語絵の体系を構築する上で、江戸時代前期を代表する作品として基礎的な研究データを得ることができた。この研究成果を研究書として公刊する予定である。1作品調査住吉如慶筆の次の2作品について、熟覧と部分撮影などの調査を行った。「紀州東照宮縁起絵巻」5巻本(紀州東照宮蔵)7月29、30日実施。「伊勢物語絵巻」6巻本(東京国立博物館蔵・如慶本と略称)8月6日実施。いずれも大部の絵巻であるため、描写や構図を比較する上で多くの貴重なデータが得られたことと、併せて、細部までおろそかにしない丁寧な制作姿勢が確かめられ、顔料など材料の質の高さも読み取れた。2詞書本文の分類如慶本絵巻詞書の定本については、研究主担である国文学専攻の研究分担者によって、藤原定家の天福本系統であることがあらためて確認された。この系統の定本は写本類にも多く用いられており、そのことは如慶本が伊勢物語絵の正統な系譜を引いて制作されているとの判断を導く。3絵画部分の読み取り全125段のうち、第1巻、第2巻(第1段第43段)の読み取りを終えた。当初は第1巻第3巻までの読み取りを完了する予定であったが、各場面の緻密な描写を追いながら絵と詞書との対応を解釈する上で研究分担者が意見を述べあいながら進めることにやや時間を要したため、計画の進行を阻んだ。しかし、丁寧な読み取りができたため研究成果に繋がり、メリットになると考えられる。4絵画表現の考察研究主担は研究代表者を含めた美術史と建築史・住宅史の専攻者である。主要人物の表情は、物語の場面状況を反映させ、微妙な描写の差異が見て取れた。建物や草木などの景物描写は精緻な筆遣いで特徴を捉えていることがわかった。建物には構造に多少不自然な点も認められたが、それは画面構成を重視したためなのか、他に目的があるのか結論には至らなかった。他の場面を読み解いて行く中で総合的に検討することとした。1作品調査アメリカの美術館、図書館が所蔵する伊勢物語絵の調査を8月下旬に行った。対象とした美術館、図書館は、1ネルソン・アトキンス美術館(8/17)、2ミネアポリス美術館(8/18)、3インディアナポリス美術館(8/20)、4クリーブランド美術館(8/21)、5ニューヨーク・パブリック・ライブラリー(8/22)、6メトロポリタン美術館(8/24)でる。調査した作品は、宗達の伊勢物語図色紙、住吉如慶や具慶、土佐派絵師による近世の伊勢物語絵を中心に、併せて近世の源氏絵や歌仙絵など伊勢物語絵に関連する作品も含めた。多くの作品が調査できたことによって、本研究対象である如慶本伊勢物語絵巻の特徴を多角的に研究する上での貴重な資料が得られた。また各美術館の学芸員や研究者と情報の交換ができたことも今後の研究にとって収穫であった。2絵画部分の読み取り如慶本第3、4、5、6巻の場面の読み取りを終了した。平成27年度当初の計画では、如慶本第3、4巻を対象とするとしていたが、平成28年度に予定している注釈書や版本との関連、詞書の料紙装飾などの研究効率を考えて、読み取りを終了させることを先行した。その結果、読み取りは順調に進み、平成26年度から継続してきた全6巻の絵画部分80場面すべての読み取りを終えた。3絵画表現の考察36巻を対象にして、美術史と建築史・住宅史の専攻者がそれぞれの立場で意見を出し、分担研究者と議論を重ねて、筆致、彩色、画面構成、描かれた建築の要点を取り上げた。その中で、絵巻の所々に組み入れられた1メートルを超える長さの料紙に描かれた場面は、遠近感を強調し、緻密な描写を用いて独自の画面に仕立てていることが確認でき、他の伊勢物語絵に比べて本絵巻が有する大きな特徴であることが判明した。アメリカの美術館、図書館が所蔵する伊勢物語絵をはじめとして関連作品の調査を行うことが平成27年度の主たる研究目的であった。調査対象館の各担当者と事前に打ち合わせを進めていたので、予定していた6箇所の所蔵作品調査がもれなく行えた。作品を熟覧することによって彩色や金銀箔による装飾などが生み出す表現効果について認識が新たにできたこと、その作品調査の経験が本研究対象絵巻の絵画場面を読み取る場合に基礎的な知識として活かされ、読み取る内容が深められた。平成26年度に行った絵巻1、2巻の読み取りには海外作品の調査が反映されておらず、再度の読み取りが必要になる点では課題を残しているが、それ以外の研究はおおむね順調に進展している。1作品調査アメリカの美術館が所蔵する伊勢物語絵や住吉如慶に関連する作品調査を8月中旬に実施した。これは平成27年度の作品調査で果たせなかった作品や新たに追加した作品を対象にした。