hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細径ペンシル型生体顕微鏡開発と心筋虚血再灌流時冠微小循環障害発症メカニズムの解明

毛細血管レベルの微小血管が観察可能なペンシル型生体顕微鏡を作成し、生体内での安全性を確認後、病態モデル小動物[Cu, Zn-SOD-knockout(KO)mice]を対象に、腸間膜微小循環を多角的に直接観察し、反応性充血時の微小循環における内皮由来過分極因子のH_2O_2の役割を評価し、同時に腸間膜組織標本を用いて、組織血管内H_2O_2蛍光輝度を評価し、定量的評価を行なった。WILD typeにおけるマイクロスフェアによる反応性充血時の血流評価では、コントロール1時には、baselineの血流が反応性充血時には、2倍以上の血流増加を認めたが、その反応は、カタラーゼ投与により130%程度に低下した。Cu/Zn-SOD-KOマウスでは、カタラーゼ投与前後では、変化なく、120130%程度の増加であった。心筋及び腸間膜標本における血管内一酸化窒素に対する蛍光輝度は、WILD typeとCu/Zn-SOD-KOマウスともに有意差を認めなかった。一方、過酸化水素に対する蛍光輝度は、WILD typeでは、輝度増加を認めたが、Cu/Zn-SOD-KOマウスでは、輝度増加を認めなかった。以上より、生体内腸間膜細動脈において、Cu/Zn-SOD-KOマウスでは、過酸化水素を介した血管反応の低下を認め、腸間膜微小血管においても、過酸化水素に対する蛍光輝度の低下を認め、Cu/Zn-SODがEDHF合成酵素として重要な役割を示す事が明らかとなった。ペンシル型高品位CCD生体顕微鏡の試作と動物における心筋内冠微小循環観察システムの確立(1)ペンシル型CCD生体顕微鏡の試作、測定精度の評価1)光学系:倍率600倍、空間分解能0.5m,焦点深度50mで、安定した計測が可能であった。(2)ペンシル型CCD生体顕微鏡のin vivo実験への応用および安全性の評価in vivo実験への応用:イヌ心臓の拍動下心外膜側微小血管(毛細血管径約5m)の計測を行った。毛細血管の観察は、冠動脈前下行枝の灌流領域である左室自由壁で行った。心拍動に伴う観察領域の心筋壁の動きを最小にするため、中央に直径5mmの穴が空いた厚さ3mmのアクリル板をアロンアルファで心筋表面に軽く接触させ冠毛細血管の観察を行った。実験終了後、記録した毛細血管像は、コンピュータに取り込み画像編集ソフトNIH imageを用いて解析した。血管径の計測は、対象血管像が垂直になるように画像を回転し、水平方向のdensity profileを求めた。その結果、毛細血管のネットワークは、複雑な網目状の構造を示し、Y型、T型、H型、ヘアピン型などの吻合が観察された。血液の流れ方向は互いに平行する順行性灌流と逆行性灌流が混在し、その時相はほとんど拡張期優位の流れパターンを示した。また、静脈の中には、生姜状の物が認められ、毛細管からその静脈へ流入する様子が観察された。マウス腸間膜動脈(径50m以下)の血管観察を行ったが血行動態に影響なく観察が可能であった。長時間(23時間)の血管径および心筋を観察したが、使用前後で組織損傷がないことを確認した。ペンシル型CCD生体顕微鏡を用いた虚血再灌流後の微小循環における評価[目的]スーパーオキサイド分解酵素(SOD)が、内皮由来過分極因子(EDHF)合成酵素としての重要な役割をしていることがin vitroで証明されている。本研究では、Cu/Zn-SOD-KOマウスを用いて生体内腸管膜微小血管の反応性充血時にEDHFの一因子である過酸化水素が重要な役割を示しているか否かについて、評価を行った。[方法]WILDtypeとCu/Zn-SOD-KOマウス各8匹を対象にCCD生体顕微鏡(倍率600倍、空間分解能0.5μm)を用い、腸管膜表面の微小血管を観察した。

WildタイプとCu/Zn-SOD-KOタイプのマウス(各々n=8,血管径25-54μm)の腸管膜細動脈を、サイクロオキシゲナーゼ阻害剤(indomethacin)投与下でアセチルコリン(Ach)に対する血管拡張反応と反応性充血(RH)において、3っの条件下(control群、L-NMMA群、L-NMMA+catalase群)でペンシル型生体内顕微鏡により持続的に観察した。[結果]Wildタイプのマウス(n=8)において、Achに対する内皮依存性弛緩反応及び、RH時の血管拡張反応は、L-NMMA投与によって抵抗(both P<0.05)を示したが、L-NMMA+catalaseの混合投与によって、反応はより有意に低下した(both P<0.01)。Cu/ZrSOD-KOマウス(n=8)では、controlはAch、RHの反応に対して、L-NMMA投与下では、Ach, RHはいずれも有意な低下(P<0.01)を認め、その反応はcatalaseを付加により、さらに抑制されなかった。[結論]内皮のCu/Zn-SODは生体内で、マウスの腸管膜の微小血管での反応性充血時に、EDHF合成酵素として重要な役割をしていることが窺われた。病態モデル小動物[Cu, Zn-SOD-knockout (KO) mice]を対象に、ペンシル型高品位血流動態解析システムを用いて、腸間膜微小循環を多角的に直接観察し、反応性充血に伴う微小循環におけるH_2O_2の役割を評価することを目的として実施した。WILD typeとCu/Zn-SOD-KOマウスを対象にマイクロスフェアによる反応性充血時の血流評価および腸間膜微小血管及び心筋標本における蛍光色素(DAR, DCF)による血管内一酸化窒素および過酸化水素に対する蛍光の度合いを評価した。WILD typeにおけるマイクロスフェアによる反応性充血時の血流評価では、コントロール時には、baselineの血流が反応性充血時には、2倍以上の血流増加を認めたが、その反応は、カタラーゼ投与により130%程度に低下した。Cu/Zn-SOD-KOマウスでは、カタラーゼ投与前後では、変化なく、120-130%程度の増加であった。腸間膜微小血管及び心筋標本における血管内一酸化窒素に対する蛍光輝度は、WILD typeとCu/Zn-SOD-KOマウスともに有意差を認めなかった。一方、過酸化水素に対する蛍光輝度は、WILD typeでは、輝度増加を認めたが、Cu/Zn-SOD-KOマウスでは、輝度増加を認めなかった。以上より、生体内腸間膜細動脈において、Cu/Zn-SOD-KOマウスでは、過酸化水素を介した血管反応の低下を認め、心筋内微小血管においても、過酸化水素に対する蛍光輝度の低下を認め、Cu/Zn-SODがEDHF合成酵素として重要な役割を示す事が明らかとなった。
ニューロンのライアノジン受容体-Ca^<2+>チャネル-作用分子間の三叉連関機構

神経細胞(ウシガエル交感神経節細胞)内のCa^<2+>誘起性Ca^<2+>遊離(CICR)に関し、前年度確立した新概念である「Ca^<2+>波の最小波束(Ca^<2+>wavelet)」について、今年度それがCICRを担うライアノジン受容体分子一つ一つの開口部近傍に形成される高濃度Ca^<2+>領域を通じて相互に受容体が活性化される結果生じるものであることが判明した。すなわちそれは受容体分子が密集する小胞体膜に沿ってCa^<2+>waveletが伝播することを意味する。以上はCa^<2+>に対する結合速度が遅いCa^<2+>キレーターであるEGTA(10mM)、及び速いCa^<2+>キレーターであるBAPTA(1mM)でCa^<2+>波が消失されないことから確定した。またCICR活性化後10-20ms後に起こるCa^<2+>依存性の不活性化過程についても、EGTAはそれを阻害しないことが判明した。このことは不活性化も同様に開口した受容体相互の高濃度Ca^<2+>領域を通じて引き起こされることを意味する。但し不活性化については0.3-1mMのBAPTAで完全に阻害されたことから、不活性化は活性化の際の受容体上のCa^<2+>結合部位よりも距離的にやや離れたところに存在する何らかの別のCa^<2+>結合分子を介して引き起こされていることが示唆された。以上の活性化・不活性化の連関について、我々は受容体の4状態モデルを構築し、コンピューター上で実験結果を再現することにも成功した。これらの一部は昨年(2003年)11月の米国神経科学会で発表した。またM型カリウム電流のCICRによる調節機構については、二種類の異なるCa^<2+>依存性経路を介して時間的に二相性の調節がもたらされることが明らかになった。以上の今年度中に得られた所見は現在3報の論文としてまとめている最中である。Ca^<2+>再取込みの可塑的機構については今年度さらなる追求をすることができなかったのが残念である。神経細胞(ウシガエル交感神経節細胞)の細胞膜直下で引き起こされるCa^<2+>誘起性Ca^<2+>遊離(CICR)に関し、今年度我々はそのCICRにより形成される「Ca^<2+>波」が「最小Ca^<2+>波束」の重ねあわせからなることを発見した。一つの「最小Ca^<2+>波束」は、単位ユニット数の細胞膜電位依存性Ca^<2+>チャネルの開口を通じて活性化されるCICRで形成され、総和としてのCa^<2+>波と同一の細胞内空間を伝播する最小の細胞内Ca^<2+>濃度上昇の波という意味で、筋肉等で知られる「Ca^<2+> spark」とは異なり、我々はそれを「Ca^<2+> wavelet」と名づけた。これはCa^<2+>濃度上昇の量的変化を説明する全く新しい概念であり、細胞内Ca^<2+>ストアの構造及び前年度の研究で判明したCICRの不活性化過程やその分子レベルでの調節と強く連関しているため、この成果は前年度のものと統一した大きな報告として現在まとめている段階である。さらに新たな研究テーマで得た知見として、様々な神経細胞で重要な「M電流」という細胞膜K^+透過性について、我々はそれもまた膜直下のCICRによって可塑的な調節を受けることを発見した。この調節は以前われわれが明らかにしたCICRによる他のK^+透過性調節に比べて時間経過が秒単位と遅いものであり、この発見により我々はCICRが数ミリ秒-数百ミリ秒-数秒の三段階の時間差をもって細胞膜興奮性を調節することを示したことになる。現在更なるデータを追加中で、成果を一部3月の日本生理学会で発表した。なお前年度投稿中と報告の「細胞内Ca^<2+>ストアへのCa^<2+>再取込みの可塑的機構」については、論文査読者によりストア内Ca^<2+>膿度変化の直接測定を示唆されたため、次年度その実験を行う予定である。また、前年度出版準備中と報告した共同研究の成果について、正式な出版記録を次欄に記載する。このことは不活性化も同様に開口した受容体相互の高濃度Ca^<2+>

領域を通じて引き起こされることを意味する。但し不活性化については0.3-1mMのBAPTAで完全に阻害されたことから、不活性化は活性化の際の受容体上のCa^<2+>結合部位よりも距離的にやや離れたところに存在する何らかの別のCa^<2+>結合分子を介して引き起こされていることが示唆された。以上の活性化・不活性化の連関について、我々は受容体の4状態モデルを構築し、コンピューター上で実験結果を再現することにも成功した。これらの一部は昨年(2003年)11月の米国神経科学会で発表した。またM型カリウム電流のCICRによる調節機構については、二種類の異なるCa^<2+>依存性経路を介して時間的に二相性の調節がもたらされることが明らかになった。以上の今年度中に得られた所見は現在3報の論文としてまとめている最中である。Ca^<2+>再取込みの可塑的機構については今年度さらなる追求をすることができなかったのが残念である。
網膜変性症の分子機構の完全解明

網膜変性症の病態解明を目的として原因が異なる6種類の網膜変性動物モデルを用いて1)網膜電図(ERG)による機能評価、2)網膜形態評価、3)レチノイドの解析、4)ロドプシン再生能、5)ロドプシン脱燐酸化能および6) cGMP濃度変化について解析した。その結果、これらの網膜変性モデルに共通の視細胞機能異常として明暗順応を制御する機構(ロドプシン燐酸化脱燐酸化の障害)に異常があり、最終的に網膜が変性してしまうとERGの障害や組織障害がみられることが判明した。次に機能異常としての順応障害を是正し、網膜変性阻止効果が期待される薬物として1)視細胞における機能是正を目剤したカルシウムチャンネルブロッカーおよび2) RPEにおける是正を目指したレチノイドおよびアントシアニンを各種モデル動物に投与し、それらの薬物効果を検討した。その結果、カルシウムチャンネルブロッカーであるニルバジピンは今回試したいずれのモデルに対しても有効性を示したのに対し、レチノイドやアントシアニンは補助効果は期待されるもののさらなる検討が必要と考えられ、今後本症の有効な治療薬のとして臨床応用できる可能性が強く示唆された。眼科領域において未だ治療法が確立されていない網膜変性症の原因には、遺伝性に発症する網膜色素変性およびその類似疾患と自己免疫機序で発症する癌関連網膜症がある。両者とも、臨床的に暗順応の低下、視野狭窄、網膜血管の狭細化および網膜電位図でaおよびb波の振幅低下を特徴とし病理学的には視細胞のアポトーシスによる変性が主である。我々はこれら網膜変性症の病態を分子レベルで解析し、その病態に基づいた新しい治療法を開発し、最終的に臨床応用する目的で研究を行ってきている。今回の研究により以下の研究成果を得た。1)癌関連網膜症の臨床像、分子病態、ウエスタンブロット法を用いた診断法の確立、特異動物モデルの作製により本症においてカルシウム結合蛋白質リカバリンによる視物質ロドプシンの燐酸化および脱燐酸化の異常を見出した。2)現在遺伝性網膜変性症である網膜色素変性の種々のモデル動物における網膜視細胞機能異常としてロドプシンの燐酸化および脱燐酸化の異常が関係することを初めて見出した。3)未だ治療法の無い網膜変性症に対してロドプシンの燐酸化および脱燐酸化の異常を正常化させるための新しい薬物治療の可能性としてカルシウム拮抗剤が有効であることを見出した。4)弘前大学医学部倫理委員会の承認の元網膜色素変性患者に十分な説明と同意を得てカルシウム拮抗剤の臨床前向き試験を行ったところカルシウム拮抗剤投与群において網膜変性の有意な進行の遅延がみられた。遺伝性網膜変性症である網膜色素変性およびその類縁疾患は、病理学的には視細胞変性が主で根本的な治療法が確立していない難病で、臨床的に暗順応の低下、視野狭窄、網膜血管の狭細化および網膜電位図(ERG)でaおよびb波の低下を特徴とする。本疾患は本邦における中途失明の上位の原因疾患で、未だ治療法の確立していない本症の病態を解明し、新しい治療法を開発することは社会的に失明予防対策の観点からも非常に重要である。近年の研究によれば本症の原因として網膜色素上皮や網膜視細胞などの網膜神経細胞特異蛋白質をコードする遺伝子や網膜以外の細胞にも広く発現している種々の遺伝子の異常に起因していることが明らかとなっている。遺伝性網膜変性症における分子病態を完全に解明し、その知見に基づいて新しい治療法を開発する目的で、具体的に1原因を超えて存在すると考えられる共通の分子病態機序を明らかにすること2網膜神経細胞内でそれらの分子病態を修飾し、異なる病型へと導く未知の機序を明らかにすること3上記で得られた知見に基づいて新しい治療法の可能性を考え最終的に臨床応用できるようにすることを遂行するために平成19年度それぞれ網膜色素上皮の遺伝子異常を持つRCSラット、ロドプシン遺伝子異常を持つP23H、S334terラットおよび自己免疫機序で発症するCARモデルラットなどの網膜変性モデル動物を用いて網膜機能および形態を詳細に検討したところこれらに共通にロドプシン燐酸化の制御に異常を来していることを見出した。

本疾患は本邦における中途失明の上位の原因疾患で、未だ治療法の確立していない本症の病態を解明し、新しい治療法を開発することは社会的に失明予防対策の観点からも非常に重要である。近年の研究によれば本症の原因として網膜色素上皮や網膜視細胞などの網膜神経細胞特異蛋白質をコードする遺伝子や網膜以外の細胞にも広く発現している種々の遺伝子の異常に起因していることが明らかとなっている。遺伝性網膜変性症における分子病態を完全に解明し、その知見に基づいて新しい治療法を開発する目的で、1原因を超えて存在すると考えられる共通の分子病態機序を明らかにする事2網膜神経細胞内でそれらの分子病態を修飾し、異なる病型へと導く未知の機序を明らかにする事3上記で得られた知見に基づいて新しい治療法の可能性を考え最終的に臨床応用できるようにする事を遂行するために網膜色素上皮の遺伝子異常を持つRCSラット、ロドプシン遺伝子異常を持つP23H、S334terラットおよび自己免疫機序で発症するCARモデルラットなどの網膜変性モデル動物を用いて網膜機能および形態を詳細に検討したところこれらに共通にロドプシン燐酸化の制御に異常を来していることを見出した。
人工市場を用いたオーストリア学派市場過程論の実験的分析

オーストリア学派の経済学は、市場分析において優れた実績を持つがその特徴は市場を「過程」とみなすことにある。その基礎を築いたイスラエル・カーズナー等が示した「企業家精神」や「価格の発見機能」などは分析において重要な役割を果たすものであるが、しかしながら、これらはおもに生産物市場における経済活動に関するものであり、「企業家的発見」や「俊敏性」などの重要な概念も生産物市場での企業家活動から着想されたものである。本研究では、指数先物市場を人工的に構築し実験的に分析することで、これらの重要な概念に関して、部分的ではあるが、金融市場のおいても働く余地のあることを確かめたものである。研究は交付申請書の研究計画の通りほぼ進んでいる。大まかには以下のような内容である。オーストリア学派の市場過程論におけるカーズナーらの議論はおもに生産物市場における企業活動から着想を得たものであるが、これに対して本研究は金融市場における市場過程に関するものである。よって、金融市場の市場過程論の分析と展開に関しては、生産物市場におけるオーストリア学派の市場過程論のコアとなる部分を確認する必要がある。これらに関して、ある程度の知見が得られた。すなわち、オーストリア学派は18世紀の主観主義革命に始まり、その中から市場過程論が誕生したといえる。よって市場過程論の背景には経済学における主観主義革命があると考えられるので、この主観主義革命と市場過程論の関連を調べて考察した。近年の発展の著しい実験経済学や経済心理学にみられる「経済学の自然化」と関係が深く、またプルトロジーとしての経済学からカタラクティクスとしての経済学への転換とも関連するので、この方面の理論的探索を行っている。この方面の考察は来年度も引き続いて行う。これらの理論的探索と平行して人工市場実験(U-Mart実験)による取引の基礎的なデータを収集した。平成25年度は7月から8月にかけて、本学の学生を主な実験参加者として人工市場実験(U-Mart実験)を行った。実験に協力した学生数はのべ100人近くになる。この一連の実験は、コンピュータ・プログラムマシンとの共同参加実験である。実験に関しては、市場過程論の分析の関連から一度きりの取引実験では得られることの難しい時系列に関するデータも得られた。市場で得られる利得に関して、コンピュータ・プログラムマシンに対して、実験参加者の学習効果が明瞭に現れ、参加者の利得はおおむね高くなった。市場に関する学習の効果がどのように取引の結果に反映されるか、市場過程の観点からも興味深い結果が得られた。研究は交付申請書の研究計画に従っておおむね順調に進んでいる。今年度の研究は以下のようなものである。市場における売買行動を交換行動から考察した。すなわち売買が行われる時にはその売買によって双方がなんらかの利得を得るという意味で売買主体の行動は同じ論理でなくてはならないはずであるが、なぜ同じ財に対して正反対の行動、すなわち売りと買いという行動様式が生じるのか、また1回の売買から得られる「利得」と「市場過程論」が想定する連続する複数回の売買すなわち、裁定による「利得」とは同じものであるのか。これらについて交換の原理から考察した。使用財は目的の達成にはある程度の時間が必要であるから、売手と買手もある程度固定している。だが投機の行われる金融市場では売手と買手は瞬時に入れ替わる。売買を行う二者の立場が瞬時に入れ替わる場合でも双方に利得が得られるような売買行動の原因と理由について考察した。これらの理論的探索と平行して人工市場(U-Martシステム)による取引を行い貴重な実験データを収集した。平成26年度は8月と11月に本学の学生を主な実験参加者として人工市場実験(U-Mart実験)を行った。実験に協力した学生数はのべ40人近くになる。この一連の実験はコンピュータ・プログラムマシンとの共同参加実験であり、市場過程の分析との関連から一回限りの実験では得られることの難しい時系列に関するデータも得られた。とりわけ今年度は市場取引において、強い(利得を比較的に常に得ることのできる)取引者が偶然的であるが顕著に出現した。そこでこの取引者の戦略を当該取引者から聞き取り調査して、その戦略をマシン・エージエントに組み込むことができた。人工市場実験によって得られた売買データを使って,金融市場において売買と裁定が行われる様子を時間経過に沿って詳細に追跡分析した.とりわけ「板寄せ方式」と呼ばれる取引方法では取引者の売買希望価格を「呼値」として外部から観察できるので,これを参照して行なわれる取引に関して調べることができた.詳細は発表論文に譲るが,呼値と評価の関係が「交換の原理」を用いて明確にされた.簡単に述べると次の通りである.すなわち,金融指標先物取引として,板寄せの板ができているとしよう.「最良売気配値」とは板に現れた最も低い値の売り注文であり,また「最良買気配値」とは最も高い値の買い注文である.呼値とは売手と買手の希望する売買価格であり,売買実行されるとき,交換ベクトルと価格ベクトルは広い意味で直交する.よって売買対象の財に関して,交換ベクトルが決まれば価格ベクトルは決定する.あるいは価格ベクトルが決まれば交換ベクトルが決まる.オーストリア学派のミーゼスは,(金融市場において)価格は価値評価が等しいから生じるのではなく,価値評価に懸隔があるから生じると述べた.しかし,「交換の原理」からこの主張は正確ではないことがわかる.正確には価値評価に懸隔があるだけではなく,その懸隔はある範囲内(価格ベクトルを超平面としてその両側)になければならない.

そうでなければ売買取引を実行する根拠がなく,結果として市場に約定価格は出現しない.さらに,売買と裁定は異なるものであり,その動機と帰結も異なるものであることがわかる.すなわち売買は,価格とは明確に区別される評価が売買当事者間で相違することによって実行されるのであるが,裁定の成果は少なくとも2回の売買取引を実行することで得られる.その意図は利得の獲得であるが,経済的帰結は必ずしも正の成果を生まない.これらのことが幾つかの実験データから明示的に確かめられた.オーストリア学派の経済学は、市場分析において優れた実績を持つがその特徴は市場を「過程」とみなすことにある。その基礎を築いたイスラエル・カーズナー等が示した「企業家精神」や「価格の発見機能」などは分析において重要な役割を果たすものであるが、しかしながら、これらはおもに生産物市場における経済活動に関するものであり、「企業家的発見」や「俊敏性」などの重要な概念も生産物市場での企業家活動から着想されたものである。本研究では、指数先物市場を人工的に構築し実験的に分析することで、これらの重要な概念に関して、部分的ではあるが、金融市場のおいても働く余地のあることを確かめたものである。以下の二つの点からおおむね順調に進展しているといえる。第1点は研究が目的とする交換と売買と裁定に関しての理論的な根拠を得ることができた点である。実験を行うことで実験データを得ることができても、そのデータの解釈と理解にあたっては、原理的なまた理論的枠組みが必要である。オーストリア市場過程論は生産物市場における売買から着想されたものであるが、昨年度から考察している「経済学の自然化」との関連で、その延長線上に、今年度は金融市場の売買行動と裁定行動を、基礎的・原理的な点から捕捉し理解できた。第2点は、実験に関してはすでに開発済みのシステムを用いての人工市場実験(U-Mart市場実験)であるので、実験を繰り返すことで必要なデータが得られた。とりわけ平成26年度はのべ参加者数が40名近くになる実験を行ったが、その中から強い(取引において利得を比較的に常に得ることのできる)ヒューマン・エージェント(人間の取引者)が出現した。そこで、この当該取引者からその戦略を聞き取り調査し、その戦略をコンピュータ・プログラム・マシンエージェントのプログラムに反映させることができた。強い戦略を持ったプログラム・マシンエージェントを作成することができた。これらの成果は進化経済学会で報告することができた。社会科学基本的には交付申請書の研究計画の通り推進するが、今年度に得られた知見をうまく生かせるようにして進める。すなわち、市場過程論の核となる連続的な取引形態に焦点を合わせて、生産物市場と金融市場の売買を比較検討し、考察を継続する。実験データに関しては、昨年度と今年度の2カ年の実験から必要とされるデータはほぼ得られているので、来年度は補足的な実験に限って行うこととし、理論面で、交換と価格に関して、生産物市場と金融市場の相違や関連性を考察して行く。
心内膜床形成での心内皮細胞の形質転換におけるBMPとTGFβの協調作用の分子機構

将来心臓の中隔や弁を形成する心内膜床は、原始心筒の心内皮細胞が心筋細胞より分泌される未知の誘導因子により間葉に分化し形成される。申請者は、TGFβ(形質転換成長因子β)ファミリーに属するBMP(骨形成因子)-2が、心筋細胞から分泌される因子としてTGFβ3の活性を促進し、心内皮細胞を完全な間葉に分化転換することを明らかにした。この心内皮細胞に対する協調作用を明らかにするため、前年度は転写調節因子であるMsx1ついて調べた。さらに、Msx1とTGFβ3やBMP2のシグナルとの関係を明らかにするため、in vitroのアッセイ系において心内皮細胞を単離・培養し、TGFβやBMPの受容体7種類(TGFβタイプIレセプター、タイプIIレセプター、タイプIIIレセプター、ALK2、BMPタイプIAレセプター、タイプIBレセプター、タイプIIレセプター)の遺伝子発現の変化を調べた。その結果、TGFβタイプIレセプターは、BMP2によって誘導されるが、TGFβ3では誘導されなかった。一方、ALK2とBMPタイプIレセプターは、TGFβ3とBMP2を同時に投与したときに強く誘導された。上記以外の受容体は変化が見られなかった。この結果は、特定の受容体の発現変化が、TGFβ3とBMP2の協調作用に関係している可能性を予想させる。申請者は、TGFβ(形質転換成長因子β)ファミリーに属するBMP(骨形成因子)-2が、心筋細胞から分泌される因子の一つで、TGFβ3の活性を促進し心内皮細胞を完全な間葉に分化転換することを明らかにした。申請者は、この協認作用にホメオボックス遺伝子のMsx-1が関与していると予想した。心内膜床領域の心内皮細胞だけを培養し、TGFβ3やBMP2を作用させMsx-1の誘導の有無をMSX1/2抗体による免疫組織化学法で調べた。その結果、BMP2を作用させた心内皮細胞に陽性が観察された。そこで、正常胚の心内膜床形成過程でのMsx-1の局在をin situ hybridization法と免疫組織化学法を用いて明らかにした。その結果、Msx-1mRNAは形質転換が起こる前のst14の心内膜床領域の心内皮細胞に、発生が進み間葉細胞が観察されるst16以降ではその両方に発現した。Msx-1タンパク質はst15ではじめて心内皮細胞に存在し、st16-23ではmRNAの局在と同様の発現様式を示した。次にMsx-1が心内皮細胞の形質転換に必要であるか調べるため、器官培養系でアンチセンスオリゴDNAを用いMsx-1の機能阻害実験を試みた。その結果、心内皮細胞の間葉細砲への形質転換は抑制された。
体外循環中の高酸素管理下における炎症反応機序の解明 －理想的な体外循環法の検討－

人工心肺に代表される体外循環法は心臓手術や急性期の心肺補助には無くてならない手技である。しかしながら、この体外循環法は生体に様々な悪影響を及ぼすことが知られている。今回、我々は、体外循環中の高酸素管理が炎症反応反応を助長しているという仮定を持ち、研究を行ってきた。今回の研究で、体外循環中の高酸素管理は活性酸素を発生させ、全身性の炎症反応を助長していることが確認できた。今後、臨床へフィードバックすることができると考える。人工心肺に代表される体外循環は心臓血管手術において無くてはならない手技である。しかしながら、この体外循環は生体に様々な悪影響を及ぼすことが知られており、その中でも炎症反応は血液が体外循環回路・デバイスなどの異物に接触することで起こるとされており、臓器障害につながる重要な因子となっている。また、一般的に患者は人工心肺中、高酸素状態管理されることが多く、非生理的状態である。近年、生体中の過剰な酸素はoxygen free radicalを産生し炎症や細胞障害を起こすことが分かってきている。このような背景のから、本研究では、我々が構築した小動物体外循環システムを用いた実験を行い、体外循環中の炎症反応と生体の高酸素の関係を明確にし、理想的な体外循環法を検討することを目的を目的としている。課題として以下の3つを掲げている。課題1.高酸素管理体外循環において酸化ストレス及び炎症反応が増大されていることの証明。課題2.体外循環中の高酸素のレベルによる酸化ストレス及び炎症反応の程度の評価。課題3.体外循環による酸化ストレス及び炎症反応が主要臓器に引き起こす障害の評価。である。平成25年度は、主に課題1および課題2について研究を進めた。その結果、動脈血酸素分圧が400 mmHgを超えるような高酸素状態での人工心肺管理では生理的に近い条件(動脈血酸素分圧100-150 mmHg)に比較して炎症性サイトカインが有意に上昇していることがわかった。以上の結果から、高酸素の状態が体外循環中の炎症反応を助長している可能性が示唆された。人工心肺に代表される体外循環法は無くてはならない手技である。しかしながら、この体外循環は生体に様々な悪影響を及ぼすこと知られている。我々は、血液が体外循環回路・血液ポンプ・人工肺を中心とした体外循環デバイスなどの異物に接触することで起こるとされている炎症反応に注目した。それに関連して、一般的に患者は体外循環中、非生理的な高酸素状態管理されることが多い。近年、生体中の過剰な酸素はhydroxyl radical等のoxygen free radicalを産生し炎症や細胞障害を起こすことが分かってきいる。このような背景から、本研究では、我々がこれまでに構築してきた小動物体外循環モデルを用いた実験を行い、体外循環中の炎症反応と生体の高酸素の関係を明確にし、理想的な体外循環法を検討することを目的として研究を行ってきた。である。最終年度となる平成26年度は、前年度までの結果を踏まえ主に、課題2および課題3について研究を進めた。その結果、400mmHg以上の高酸素分圧管理の体外循環では炎症性サイトカインの上昇に加え、生化学データ(AST・ALT・LDHなどの酵素)の急激な上昇を観察することができた。また、肺組織浮腫が顕著で、肺組織・肝組織でoxygen free radicalの一つであるスーパーオキサイドの産生が多いことが分かった。以上の結果から、生体の高酸素分圧管理が体外循環中の炎症反応および臓器傷害を助長していることが証明できた。また、この反応にはoxygen free radicalの産生が関与していることも分かった。循環生理学体外循環学臨床工学当初予定した、課題1.高酸素管理体外循環において酸化ストレス及び炎症反応が増大されていることの証明。についてラットを用いた体外循環実験を施行し、血液サンプル、組織サンプルおよび生化学データが集まりつつある。本年度の予定を十分に達成できている。最終年度となる平成26年度は、活性酸素種(スーパーオキサイド)を各臓器で検出し、体外循環による酸化ストレス及び炎症反応が主要臓器に引き起こす障害の評価する。さらに、血液サンプルからサイトカインおよび生化学データを計測する。さらに、これまでに得られた知見を統合して、体外循環中の高酸素管理下における炎症反応メカニズムを解明し理想的な体外循環法の検討を行う。今年度は、これまでに持っていた実験回路等を使用することができたため、物品費(消耗品代)を節約することができた。よって、次年度使用額が生じた。

次年度は、今年度に比べ、さらに動物実験が進み、血液サンプルが揃うことから検査費(外注検査費)および物品費の支出増加が予想される。サイトカイン等の検査費は高額であるが、次年度使用額含め、慎重かつ適切に使用していきたい。
北海道の少子高齢化および過疎化のインパクトと住民の生活構造

「北海道の地域社会の少子高齢化および過疎化のインパクトと住民の生活構造」というテーマで、平成13年度は次のような研究を行った。1.資料の収集・整理少子高齢化・過疎化をキーワードに、さまざまな資料を検討したり、自治体職員に聞き取りを行った。その結果、北海道の地域社会でも、少子化対策、高齢化対策については、全国水準とほぼ同じように行われている印象を得た。これは、全国レベルで展開されてきたエンゼルプラン、介護保険制度の影響だと思われる。ところが、過疎対策についていえば、近年、議論の質が若干変化してきた。すなわち、従来の「まちおこし」、「まちづくり」、「地域活性化」という言葉で語られてきた地域社会の生活の質を向上させたり、住民の地域社会への愛着を高める方向から、全国レベルで議論されている「自治体合併」という語で語られるように、地域社会生活の水準の維持、あるいは自治体自体の存続・生き残りという方向に議論が傾いてきているのである。このことは、「まちおこし」パラダイムによって強化された地域社会システムが、現在、急にゆらいでいることを物語る。2.アンケート調査北海道の過疎地域である長万部町(高齢化率27.9%)と、非過疎地域である八雲町(高齢化率19.1%)の2つの自治体住民を対象にアンケート調査を行った(数値は2000年「国勢調査」)。サンプリングは、無作為抽出法で、選挙人名薄から、長万部町400名、八雲町500名をそれぞれ対象者として選び、郵送法で行った。内容は、地域社会の生活構造に関する項目である。このアンケートの分析には、もう少し時間がかかる予定である。なお以上の研究は、『東京理科大学紀要』にて報告する予定である。本研究の成果は、科研費補助金で購入させていただいた機器備品であるサーバー・マシンにより、インターネットでも公開する予定である。「北海道の少子高齢化および過疎化のインパクトと住民の生活構造」というテーマにおいて、平成12年度は、以下のような研究を行った。まず、北海道の212ある全市町村に関して、昭和40(1965)年から平成7(1995)年までの7回分の「国勢調査」の男女別年齢別人口データの入力を、マイクロソフト社のExcelを用いて行った。市町村合併のあるところでは、可能な限りデータのクリーニングを行った。そして、各自治体について、平成2(1990)年と平成7(1995)年のデータから、コーホート変化率法の人口推計プログラムを作成し、行った。北海道においては、多くの自治体が、今後も人口減少傾向にあり、少子高齢化が進行することが確認された。しかし、厚生労働省がホームページで公開している市町村データベースとつきあわせると、人口減少がつづく過疎地において概して合計特殊出生率が高いが、これらに関して統計パッケージソフトであるSPSSを用いた詳細な分析は、いまなお継続中である。なお、緻密な分析が終了した後に、これらのデータベースを、エクセル形式のファイルでインターネット公開する予定である。また、平成12年度は、少子高齢化に関する地域住民のアンケート調査の調査票を設計した。継続が予定されている平成13年度は、これらの研究成果をふまえて、アンケート調査を実施する。
〈身体＝違和〉の哲学――実存主義的現象学からトランスジェンダーの現象学へ

採用一年目にあたる2018年度の研究方針は、トランスジェンダー現象学の研究で著名なゲイル・サラモン氏の著書Assuming a Body: Transgender and Rhetorics of Materiality (2010)の翻訳を中心として、トランスジェンダー現象学を日本の学術界に導入することだった。まず翻訳に関しては、ほぼ完成し、2019年5、6月ごろに出版できる状況であり、研究の進展は順調である。また、これに関連して、トランスジェンダー現象学(及び、それに対する実存主義的現象学の影響)に関する研究についても研究計画で当初想定した以上に進めることができた。日仏女性研究学会の交流セミナー(2018年6月9日)では、シモーヌ・ド・ボーヴォワールの思想とトランスジェンダー現象学の思想的関係について、立命館で行われたワークショップ「ジェンダーと身体」(2019年1月12日)ではモーリス・メルロ=ポンティの哲学とトランスジェンダー現象学の関係について発表し、これらの発表はそれぞれ、2019年度に論文化する予定である。『現代思想』(青土社)にも、トランスジェンダー現象学に関する論文を二本寄稿した。とくに、『現代思想』の二月号「男性学特集」に寄稿した論文「とり乱しを引き受けることー男性アイデンティティとトランスジェンダー・アイデンティティのあいだで」は反響が大きく、朝日新聞(2019年2月23日)の論壇時評「今月の三点」に選出された。さらには、國學院大學で行われたシンポジウム「トランスジェンダーの哲学」(2019年3月4日)では、海外のトランスジェンダー現象学の研究者と意見交流を行うことができた。総じて、研究計画書の年次計画で記していた計画よりも、大幅に進展したと言える。また、各種の発表や論文を通して、本研究の社会的意義を改めて実感することになった。もともとの計画では、初年度はアメリカ合衆国で発展しているトランスジェンダー・スタディーズの基礎研究を遂行する予定であり、二年目以降にその現象学的実存主義との影響関係を研究する予定であったが、結果としては、Gayle Salamonの著書の翻訳そのものはほぼ完了し、その著書が位置付けられるトランスジェンダー・スタディーズの歴史的発展についての基礎研究も当初より進展し、二年目に計画していた研究の一部に着手できたことが大きな要因である。また、『現代思想』に寄稿した論文が朝日新聞の論壇時評「今月の三点」に取り上げられるなど、予想以上の反響があったことも理由のひとつである。昨年度は、基礎研究及び研究発表を中心に進めてきたので、今年度の前半ではそれらを論文としてアウトプットすることで、これまでの研究をより社会に向けて公表していきたい。その上で、今年度は「トランスジェンダーにとって他者から見られる」とはどういう経験かという問題を主題として、サルトルの『存在と無』を読解し、トランスジェンダー現象学として読み直す研究を行っていく。また、この観点から「社会がトランスジェンダーをどのように眼差し、捉えているか」という社会的な分析をも行っていきたい。

その上で、今年度は「トランスジェンダーにとって他者から見られる」とはどういう経験かという問題を主題として、サルトルの『存在と無』を読解し、トランスジェンダー現象学として読み直す研究を行っていく。また、この観点から「社会がトランスジェンダーをどのように眼差し、捉えているか」という社会的な分析をも行っていきたい。
イランにおけるアレクサンドロス遠征の経路と実態に関する歴史学的地誌学的研究

アレクサンドロス大王の東方遠征のなかで、アケメネス朝ペルシア帝国の首都スーサからペルセポリスに至る経路を解明した。大王はまず山岳民族のウクシオイ人を平定し、次いでペルシア門と呼ばれる隘路で総督アリオバルザネスの軍勢を破った。ザグロス山中で実地調査を行った結果、これら2つの戦闘地点について、通説ではなくスペック教授の新説が正しいことがわかった。さらにペルシア門におけるアレクサンドロスの迂回路を実際に踏査して、戦闘経過を復元することに成功した。迂回路の学術調査は、おそらく世界初の試みである。以上の成果に基づき、アケメネス朝時代の「王の道」には夏と冬の2つのルートがあったことが明らかになった。前330年1月、アレクサンドロス大王はスーサからペルセポリスへ向かう途中、ペルシア門と呼ばれる関門=現ヤスジ近郊のメーリアン渓谷においてペルシア軍を破った。当該年度の最大の課題は、この関門でアレクサンドロスがたどった迂回路を検証することであった。そのためイラン人協力者とともに2泊3日の登山を行ない、可能な経路の一つを実際に踏破した。これを古代史料と照合した結果、個々の地形の特徴が史料に合致すること、ただし史料には山道の困難さについて誇張があること、迂回に要した時間は2晩と1日ではなく、3晩と2日である可能性が強いことがわかった。これはアレクサンドロス研究において世界初の成果である。アレクサンドロスがスーサからぺルシア門に至った経路は、アケメネス朝ペルシア時代のスーサ・ペルセポリス間の「王の道」のうち、夏のルートと冬のルートを組み合わせたものであるとの仮説をたてた。冬のルートは現在の幹線道路に沿っており、通説が採用するものだが、夏のルートについては十分に解明されていない。そこでスーサ・イゼー・ヤスジをつなぐザグロス山中の道を車で走破し、これが「王の道」の一つであった可能性を探った。現デーダシュトの北に巨大な岩にはさまれた隘路を発見し、これがスシア門と呼ばれる関門であったとの仮説をたてた。これが正しければ、この関門を通過する道は、夏の道と冬の道の連結路であったと考えられる。アレクサンドロスはスーサから平地の冬の道を通り、スシア門を通過しザグロス山脈を縦断して夏の道からペルシア門に至り、これを突破して夏の道をたどってペルセポリスに到達したのである。彼の経路はまさしくアケメネス朝の「王の道」によって規定されていたことが明らかになった。前331年末から前330年1月にかけて、アレクサンドロス大王がアケメネス朝ペルシア帝国の首都スーサからペルセポリスまで行軍した際の経路、および2度の戦闘地点を特定するため、3年続けてイランで実地調査を行った。その結果、従来の通説は誤りであり、2002年にスペック教授が発表した仮説が正しいことを確認した。すなわち山岳民族であるウクシオイ人との戦闘地点=ウクシオイ門は、スーサの東のザグロス山脈入口であり、ペルシア門と呼ばれる隘路は現安治近郊のメーリアン渓谷に同定できる。ペルシア門でアレクサンドロスは迂回路をたどり、ペルシア軍の背後に出てこれを打ち破った。その迂回路を特定するため、現地協力者とともに2泊3日の登山を敢行した。その結果、大王伝の記述と一致する山中の経路を発見し、迂回路と戦闘の経過を復元することに成功した。おそらくこれは世界初の成果である。ペルシア側から見た時、ペルシア門での戦闘は、アケメネス朝最後の戦闘として再評価しなければならない。次に、アレクサンドロスがウクシオイ門からペルシア門へ進んだ経路を解明するため、ザグロス山中の道を可能な限り車で走破した。しかしながら現地の情勢と時間の制約のため、最終的な結論には至らなかった。それでも、スーサとペルセポリスを結ぶ「王の道」には、平地の冬のルートと山中の夏のルートの2つがあった可能性が高いという結論が得られた。これにより、アレクサンドロスがアケメネス朝の交通網をそっくり利用して遠征したという事実があらためて証明できた。前330年夏にダレイオス3世が東へ逃走し、これをアレクサンドロスが追撃した経路を実地調査した。大王の宿営地とされる地点を訪問し、ダレイオスの死亡地点が現ダムガン付近であるとの結論を得た。また大王がマケドニア軍を再結集したヘカトンピュロスと呼ばれる地点を探索し、グシェ村の南にその跡を確認した。アレクサンドロス大王が前331年12月末から前330年1月末にかけて、ペルシア帝国の首都スーサからペルセポリスに侵攻した経路を、古典史料の精査と現地調査の両面から研究した。

その結果、これまでの通説は誤りであり、スペック教授の新説がおおむね正しいことを証明することができた。まず二つの説を比較検討しながら古典史料を詳細に検討して、論点を明らかにした。次いで研究協力者とともにイランで実地調査を行ない、約2週間にわたってザグロス山中を連日タクシーで走破し、調査ポイントを歩いた。その結果、(1)山岳民族ウクシオイ人との交戦地点については、スーサの東、ザグロス山脈の入口に、史料と完全に符合する地形を見出した。(2)アレクサンドロスがペルシア防衛軍を撃破したペルシア門については、通説によるファーリアン渓谷は史料と一致せず、ここでの戦闘は不可能であること、スペック説によるメーリアン渓谷は史料の記述と完全に一致することを発見した。これにより、遠征軍の経路は、通説の想定する南寄りの経路ではなく、スペックの想定する北寄りの経路であることが証明できた。以上の検証をふまえて、ペルシア門での戦闘をアケメネス朝側からの視点によって再構成し、これをアケメネス朝最後の戦いとして評価しなおすことができる。なおアレクサンドロスが敢えて真冬のザグロス山脈を踏破した理由については、(1)補給上の理由から兵力を分散させる必要があったこと、(2)将兵の略奪欲を満たすためにペルセポリス占領を急がねばならなかったこと、の2点があげられる。全体として、目的の主要部分はほぼ達成できた。残された課題は目的の個々の部分にかかわるもので、全体の8割を達成できたと考えている。第一に、ペルシア門の位置とマケドニア軍の迂回路が特定できたことにより、前330年1月スーサからペルセポリスに至るアレクサンドロス遠征路のうち、もっとも重要な部分が解明できた。とりわけ登山によって迂回路を実地に踏破し、可能性の一つを証明したことは、アレクサンドロス研究において世界初の成果である。調査の手掛かりは、これまでの通説を根底的に批判したスペック教授の仮説であるが、実地調査によってスペック説の主要部分の正しさを証明できた一方、遠征経路の一部についてスペック説とは別の仮説をたてることができた。このように2年間で予期した以上の成果を得られた。第二に、現地における協力体制についても、当初の見込み以上の結果が得ることができた。すなわち在イラン日本大使館とイラン文化遺産庁付属研究所から後方支援を得て、現地では考古学教授とプロの山岳ガイドが調査に同行してくれた。ザグロス山脈の辺境地帯における調査は、こうした支援体制なくしては到底不可能であった。他方で、遠征経路の調査を通じてアケメネス朝時代の「王の道」を復元するという目的については、残された課題が少なくない。1アレクサンドロスがザグロス山脈に入った地点と、そこからペルシア門までの経路については、まだ完全に調査しきれておらず、スペック説にとって替わるだけの証拠が集められていない。2「王の道」の夏のルートを山中のカールーン川流域に求める仮説については、アケメネス朝時代の直接の証拠が不足している。3スシア門を通る道が夏と冬のルートの連結路であったとの仮説はまだ思いつきの段階であり、実証するだけの証拠がまだ揃っていない。古典史料と照合しながら2つの説を比較検討するという作業は全く問題なく終了した。現地調査についてはさまざまな困難が予想されたが、現地イラン人はおおむね協力的で、連日のタクシーによる走破に問題はなかった。
脂肪組織由来スキャホ－ルドと脂肪幹細胞を用いた骨再生

1ヒトの体脂肪組織から、ASCsを抽出・培養した後の組織からスキャホールドを作成し、含有される各種成長因子を網羅的に検討した。2骨への分化誘導した脂肪幹細胞と脂肪組織より分離精製するスキャホ-ルドの共培養を行った。3骨分化誘導した脂肪幹細胞と脂肪組織より分離精製するスキャホ-ルドの複合体のin vivoにおける骨組織再生の検討を行った。口腔外科領域においては歯周病による歯槽骨欠損から、腫瘍切除に伴う顎骨の再建まで、骨再生は非常に重要な課題である。骨再生には、細胞、成長因子、スキャホールドの3つの要因が必要とされている。本研究では、ヒト脂肪組織から、細胞としての脂肪幹細胞と脂肪組織から調整される結合組織由来スキャホールドと細胞増殖因子の役割を兼ね備えた新規自己担体を用いることで骨再生ならびに骨分化誘導の検討を目的と資本研究を行った。すなわち、本研究計画では、美容外科領域で低侵襲で採取されたヒト体脂肪組織から、ASCsを分離するとともに、同じく脂肪組織から調整された新規自己担体を利用し、骨組織の再生を検討した。具体的には、以下の研究を行った。2骨への分化誘導した脂肪幹細胞と脂肪組織より分離精製するスキャホ-ルドの共培養。3骨分化誘導した脂肪幹細胞と脂肪組織より分離精製するスキャホ-ルドの複合体のin vivoにおける骨組織再生の検討。再生医療に使用される担体はコラーゲンが多用されており、そこにある種の成長因子を加えると言った手法が取られていたが、我々が考える担体は単なる一種類の成長因子の添加による骨形成を企図するのもではなく、生理的な、かつ包括的な成長因子を内包、そして放出を兼ね備えた自家担体を目指していた。このニーズに合致したものが、MEDKAN社FillerGeller LIPOMAX-SCシステムによる脂肪組織の濃縮加工産物の利用である。我々はヒトの脂肪組織を遠心し遊離脂肪を除去したFATGELの特性に顎口腔領域の骨欠損再生療法における新規足場材料としての可能性を見出し、このFATGELに物理的機械刺激を加えて分化誘導したASCsを加えて従来の骨再生法を凌駕する手法の確立を期待している。具体的手法に関しては、ヌードマウスの頭蓋冠に形成した骨欠損部にFATGEL+ASCsを充填、移植することによって当該部位に骨形成を誘導、従来の様々な知見を上回る骨再生が生じ得るかを検討した。当該年度においては、FATGELの新規担体としての評価をするために、マウス骨欠損部モデルに移植し、形成された組織に関してμCT画像および組織学的に解析して行く予定だったが、正確な解析はいまだ行われておらず、本年度に持ち越しとなった。当該年度においては、FATGELの新規担体としての評価をするために、マウス骨欠損部モデルに移植し、形成された組織に関してμCT画像および組織学的に解析して行く予定だったが、組織切片の作製に時間を多く費やしてしまったことと、μCTの撮影が1サンプルあたり約45分かかってしまうということがあり、1つ1つの正確な解析はいまだ行われていない。物理的機械刺激の一つである低酸素暴露は細胞に血管新生因子、転移促進因子をはじめとして様々な遺伝子発現促進をもたらす。骨系細胞においても低酸素刺激は骨軟骨分化に重要な遺伝子発現増加が確認されている。脂肪幹細胞の骨系細胞への分化誘導においてもこの低酸素刺激が有効に働く可能性がある。これはわれわれが既に確認しているshare stressによる分化誘導と同様、外部から何らかの因子を添加するよりも安全性に優れている手法である。このため1.ASCs低酸素暴露による骨系細胞への分化誘導確認物理的機械刺激の一つである低酸素暴露をASCsに加えてsharestress同様に分化誘導が起こるか検討する。低酸素状態はO2 515%の範囲で検討する。一定期間培養後形成されたペレットを取り出し, RT-PCR (II型コラーゲンとアグリカンmRNA),サフラニンO染色,グリコサミノグリカン(GAG)量およびDNA量の測定を行う。GAG量の測定はジメチレンブルー法でおこない, DNA量の測定にはHoechst 33258dye法を用いた.GAGの産生量は細胞数の増加を考慮してGAG/DNAで示す予定である。2.低酸素暴露ASCsによる骨欠損モデル動物での骨再生評価前項で誘導のかかった低酸素条件で培養したASCsをFATGELもしくはアテロコラーゲンと共にヌードマウス骨欠損モデル応用、結果評価する。3.低酸素暴露自家ASCsによる骨欠損モデル動物での骨再生評価同一個体の脂肪組織から採取した自家ASCsを低酸素暴露を加えて分化誘導させ同じ脂肪組織から調整した自家FATGELとととに骨欠損モデルに応用、評価する。これらは、前年度に持ち越しとなったデーター解析と共に行って行く予定である。設備備品今回の実験に要する設備備品はほとんどが整備されている。各専用機器に対する専用消耗品が必要となるのみである。

ただし、結果解析のためのパーソナルコンピュータは必須となる。消耗品脂肪濃縮液を作成する際の専用デイスポーザブル容器、シリンジ、細胞培養のための培養液、シャーレ、ピペットが全年に渡って必要不可欠である。また成長因子、アテロコラーゲン、プライマーなどの試薬、薬品、実験動物および機材が必要である。旅費本研究では、学外の共同研究者が存在するため、メール等のインターネットを使用した情報交換のみならず、直接立ち会いのもとの情報交換が研究遂行に必要不可欠である。また再生工学の専門知識、特に脂肪幹細胞に関する情報と専門技術が必要となる場合も想定され、他施設・他分野専門機関との協力、学会参加による資料・情報採取が重要となる。そのための旅費について必要額を計上した。