hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
宮座におけるカミ観念の比較研究-地域的特質と歴史的展開-

本研究は、これまでの宮座研究史をふまえて、とくに滋賀県以外の近畿地方の宮座や中国・九州の宮座に注目して調査研究を実施し、この地域の宮座と近畿地方の宮座との地域的・歴史的比較研究を通じて、宮座祭祀とその背景にあるカミ観念をより一般的に解明するのが目的である。したがって、本研究では、宮座の組織、儀礼、芸能の三つの視点から、多角的に宮座のカミ観念にアプローチする研究を進めてきた。3年間の研究期間中に本研究では、つぎの3点を中心に研究を進めてきた。第一は、これまでの日本の宮座祭祀にかかわる日本民俗学、宗教学、社会人類学、社会学などの文献を収集し、文献目録を作成した。第二は、現地調査による資料の収集であり、奈良県、滋賀県、福井県(とくに若狭)などの近畿地方、佐賀県や大分県国東半島などの九州地方、および中国・四国地方の宮座を中心にその組織、祭祀、芸能の調査を実施した。第三に、大正から昭和初期にかけて実施された宮座関係資料の分析によって、近畿地方を中心に当時の宮座の実態を明らかにするとともに、現在の宮座との比較分析を実施した。これらの研究によって、近畿地方以外の中国・四国・九州地方にも広範に宮座が存在し、現在においても地域の神社祭祀に重要な役割を果たしていることが明らかになった。しかしながら、近畿地方と同様に特権的な家筋が衰退し、宮座の特権的祭祀組織とひての性格が変化した宮座もしばしば見られた。したがって、一部の特権集団のカミという観念から、地域社会全体のカミとういう観念に変化した事例も認められた。また、近畿地方の宮座と比較して、とくに組織において年齢階梯制的な要素が微弱であることも明らかになった。1.文献の収集と文献目録の作成これまでの日本の宮座祭祀にかかわる日本民俗学、宗教学、社会人類学、社会学などの文献をコピーによって収集した。今年は主に、滋賀県と大分県関係の文献を中心に収集し、収集した文献をもとにして文献目録を作成した。2.現地調査による資料の収集--平成9年度は主に以下の地域で現地調査を実施した。(1)福井県小浜市野代の六所神社の宮座と芸能(2)奈良県室生村の宮座祭祀(3)滋賀県野洲町の宮座祭祀(4)島根県平田市多久町の多久神社の宮座と芸能(5)岡山県新見市唐松字皆籠の岩山神社の宮座祭祀(6)佐賀県佐賀市川久保の白髭神社の宮座と芸能(7)大分県西国東郡大田村の白髭田原神社の宮座祭祀3.『奈良県風俗誌』と『肥後和男宮座調査資料』から、主として滋賀県、奈良県の宮座祭祀を中心に資料整理にあたった。とくに『肥後和男宮座調査資料』にある昭和初期の宮座と現在の宮座祭祀との比較分析を開始した。1.文献の収集と文献目録の作成これまでの日本の宮座祭紀にかかわる日本民俗学、宗教学、社会人類学、社会学などの文献をコピーによって収集した。今年は主に、奈良県関係の文献を中心に収集し、収集した文献をもとにして文献目録を作成した。2.現地調査による資料の収集-平成10年度は主に以下の地域で現地調査を実施した。(1)静岡県天竜市懐山のおこないの調査(2)奈良県室生村の宮座祭紀(3)滋賀県野洲町の宮座祭紀(4)滋賀県湖北町尾上のおこないの調査(5)福井県小浜市野代における民俗芸能の調査(6)高知県物部村市宇におけるいざなぎ流御祈祷調査(7)長崎市西山町の長崎くんちの文献調査

3.『奈良県風俗誌』と『肥後和男宮座調査資料』から、主として滋賀県、奈良県の宮座祭紀を中心に資料整理にあたった。とくに『肥後和男宮座調査資料』にある奈良県、滋賀県などの昭和初期の宮座について、現在の宮座との比較分析を開始した。1.文献の収集と文献目録の作成これまでの日本の宮座祭祀にかかわる日本民俗学、宗教学、社会人類学、社会学などの文献をコピーによって収集した。このうち滋賀県・奈良県・福井県・大分県関係の文献について文献目録を作成した。2.現地調査による資料の収集--平成11年度は主に以下の地域で現地調査を実施した。(1)青森県八戸市および弘前市における神社祭祀の調査(2)福井県小浜市野代における民俗芸能の調査(3)奈良県室生村の宮座祭祀(4)滋賀県野洲町の宮座祭祀(5)滋賀県湖北町尾上のおこないの調査(6)広島県口和町の神社祭祀の調査(7)佐賀県佐賀市の白髭神社の民俗芸能の調査(8)長崎市西山町の「長崎くんち」の文献調査3.『奈良県風俗誌』と『肥後和男宮座調査資料』から、主として滋賀県、奈良県の宮座祭祀を中心に資料整理にあたった。とくに『肥後和男宮座調査資料』にある奈良県、滋賀県などの昭和初期の宮座について、現在の宮座との比較分析を実施した。
室内塵中グアニン測定とダニおよびアレルギー性疾患

昨年度までに高速液体クロマトグラフィー(HPLC)による室内塵中グアニアン量の定量法を確立,予備調査を実施した。本年度はこれらの成果をふまえ,ぜん息患者家庭32世帯と一般家庭123世帯の室内塵中ダニ数(MBA)法,グアニン量,室内塵中ダニアレルゲン量(ELISA法を原理とするダストチッカー)を測定した。その結果,ぜん息患者家庭,一般家庭共に住宅構造の気密性が増加するにつれ,すなわち木造木枠窓住宅<木造モルタル・アルミサッシ窓<鉄筋・鉄骨住宅の順にダニ数,グアニン量,アレルゲン量が増加した。また居間の床素材については板張りフローリング<畳<じゅうたんの順に各項目共に値が増加し,各群間に有意差が認められた。ぜん息患者家庭と一般家庭の比較では各項目共,一般家庭の平均値が高かった。これは患者家庭の掃除回数が頻回であったためである。ダニ数とグアニン量(I),ダニ数とアレルゲン量(II),グアニン量とアレルゲン量(III)のぜん息患者家庭での相関係数は(I)0.694,(II)0.725,(III)0.713.一般家庭では(I)0.625,(II)0.665,(III)0.701を示した。グアニン量又はアレルゲン量を従属変数とし,居間床素材,住宅構造,建築年数,喫煙の有無,室内でのペット飼育の有無を独立変数として,数量化I類による多変量解析を行った結果,ぜん息患者家庭でグアニン量R^2=0.681,偏回帰係数は居間の床素材0.708,建築年数0.621を示し,アレルゲン量はR^2=0.693,偏回帰係数,床素材0.625,建築年数0.553を示した。以上のことから,室内塵中グアニン量の測定により,室内塵中のダニ数やアレルゲン量の推定が可能であることが示唆され,従来のダニ数測定のような煩雑な前処理後,実体顕鏡下でダニをカウントする代りに,HPLCによる室内塵中グアニン量の測定により,室内塵中のダニアレルゲン量を予測しえることが示唆された。近年、気管支ぜん息やアレルギ-性鼻炎などのアレルギ-性鼻炎が増加しており、その原因として室内塵中ダニの増加が考えられている。従来、室内塵中ダニ数の測定は、複雑な前処理後、顕微鏡下でカウントしてきたが、多量の検体を処理するには多くの労力と時間および習練を必要とする。ダニの生体および生体産物にはグアニンが多く含まれる。そこでもし室内塵中のグアニン量がダニ数と関連するのであれば、グアニン量をもって、ダニ数を代表させうる可能性がある。本年度は室内塵中グアニンの定量法およびダニ数との関連について基礎的検討を行なった。グアニンの定量法には液体クロマトグラフィ-を用い、カラムはゲルカラム(日立No.3013N、4mm径×150mm)を使用した。溶離液はA:0.5N酢酸アンモニウム溶液、B:0.1Mリン酸二水素カリウム溶液に0.2%リン酸を添加したもの2種類とした。カラム流量は0.5ml/分、カラムオ-ブン温度63°C、254mmで検出した。

溶離液の割合はA:B=1:1である。室内塵からのグアニン含有物質の抽出にはメタノ-ル:水=1:5(V/V)に1.28gのNaOH(1l当り)を添加して用いた。市販のグアニン・アデニン・ウラシルの混合液を分析した結果、分離は完全になされ、グアニンのretention timeは6.5分であり、回収率は95%、再現性は98.5%であった。一般家庭14世帯の室内塵を収集し、従来の顕微鏡下でのダニ数のカウント数とグアニン量の相関係数を求めたところ、総ダニ数とグアニン量のγ=0.703、室内塵中ダニの優占種であるチリダニ数とはr=0.658(いずれもP<0.01)を示し、グアニン量をもって室内塵中のダニ数を代表しうる可能性を明らかにした。なお室内塵中グアニン定量の攪乱因子となる髪の毛、爪の切れ端、食べこぼす可能性のあるたらこ、いくら、ししゃもの卵中のグアニン量は、ダニ由来のグアニン量の0.050.1%であり、問題のないことを確認した。昨年度、高速液体クロマトグラフィ-(HPLC)による室内塵中グアニンの定量法を確立、室内塵中グアニンとダニ数が高い相関を示すことを明らかにした。本年は横浜市内K小学校、全児童486名から無作為抽出した36世帯について予備的な疫学調査を実施した。即ち、7月上旬、各世帯に一週間分の室内塵の収集およびATSーDLD標準化質問票(環境庁日本語版)を用い児童の呼吸器症状、家族構成、住宅構造、暖房様式、床の素材、ペット飼育等の生活形態の調査を実施した。得られた室内塵の総ダニ数はMBA法により室内塵を固定し、実体顕微鏡下でカウントした。また室内塵中グアニン量は前処理後、HPLCにより分析した。その結果、例数が少ないため育意差は認められなかったものの、住宅構造については、総ダニ数、グアニン量共に住宅の気密性、即ち木造木枠窓住宅〈木造モルタル・アルミサッシ窓住宅〈鉄筋・鉄骨住宅の順に平均値は増加した。また暖房器具の種類により、排気型暖房様式と非排気型暖房様式に分類して検討するとダニ数、グアニン量いずれの項目も非排気型家庭により高値を示した。最も顕著な差が認められたものは、居間の床についてであり、ダニ数、グアニン量共に、板張りフロ-リング〈畳〈じゅたん使用の順に高値を示し、有意差も認められた。更に一般家庭の室内塵中のダニおよびグアニン量が生活環境条件により、どの程度説明できるかを検討するため、数量化I類を用いて多変量解析を行った。即ち基準変数をダニ数またはグアニン量とし、説明変数を住宅構造、床の素材、暖房様式、ペットの飼育の有無、建築年数等として解析した。その結果、ダニ数については重相関係数(R^2)は0.676を示し、偏相関係数は床の素材:0.714、建築年数:0.649、ペットの飼育:0.481、寝具:0.406、住宅構造:0.382、を示し、グアニン量についてはR^2=0.735、偏相関係数は床の素材:0.741、建築年数:0.681、寝具:0.422等を示した。昨年度までに高速液体クロマトグラフィー(HPLC)による室内塵中グアニン量の定量法を確立、予備調査を実施した。本年度はこれらの成果をふまえ、ぜん息患者家庭32世帯と一般家庭123世帯の室内塵中ダニ数(MBA法)、グアニン量、室内塵中ダニアレルゲン量(ELISA法を原理とするダストチェッカー)を測定した。その結果、ぜん息患者家庭、一般家庭共に住宅構造の気密性が増加するにつれ、すなわち木造木枠窓住宅<木造モルタル・アルミサッシ窓<鉄筋・鉄骨住宅の順にダニ数、グアニン量、アレルゲン量が増加した。また居間の床素材については板張りフローリング<畳<じゅうたんの順に各項目共に値が増加し、各群間に有意差が認められた。ぜん息患者家庭と一般家庭の比較では各項目共、一般家庭の平均値が高かった。これは患者家庭の掃除回数が頻回であったためである。
非共線スピン遍歴強磁性体の圧力誘起相転移と輸送特性

フラストレーション格子系における電荷・スピン結合系の物理を探索するため、モット転移系であるパイロクロア型モリブデン酸化物における超高圧力効果を広範囲に調査した。その結果、この系では常圧下での基底状態に関わらず、圧力下では電子相関の強い常磁性金属状態が基底状態となることを発見した。この異常金属状態は外部圧力による反強磁性相互作用の増大とスピン・フラストレーションのために引き起こされると考えられる。本年度は、主にパイロクロア型モリブデン酸化物における16GPaまでの超高圧かつ静水圧性の高いキュービックアンビルセルによる広範な圧力下電子相図を完成させ、その起源について現時点での最良と考えられるメカニズム(拡張された二重交換相互作用モデル)によって明らかにした。本研究で扱ったパイロクロア型モリブデン酸化物は、常圧下では希土類元素のイオン半径の違いにより超交換-二重交換相互作用の働き方が変化するモット転移系であると以前から報告されていた。しかし、代表者らのこれまでの研究により、高圧下では単純な超交換-二重交換相互作用モデルでは説明できない振る舞い(非常に抵抗率の高い常磁性金属相への転移)を示すことが分かって来た。その起源を探るためにまずは希土類イオン半径、印加圧力ともに広範囲な全体相図を得ることを試みた。圧力効果はフラストレーション系などにおいては特に試料依存性、不純物などの負の要因を限りなく排除し、連続的な圧力パラメータによる変化を捕らえることが出来るため非常に有効な手段である。その結果、イオン半径の違い、すなわち常圧下での基底状態、によらず全ての組成で非常に散漫な常磁性金属相へ転移することが分かった。しかもその常磁性金属相は常圧でのモット転移点から広がっており、強い電子相関の帰結であることは明らかである。これは、フラストレーション格子系での多軌道系のモット転移における新しい電荷-スピン結合の結果であると考えられ、今までに研究例の少ない、もしくはその複雑さの為にあまり理解が進まなかった重要な例の一つであると考えられる。このような多軌道が関与するモット転移系物質の研究は、モット転移に関する深い理解のために近年その重要性を増しており、本研究結果はそれらの発展に寄与できるものと考えられる。前年度から得られたパイロクロア型モリブデン酸化物の超高圧力下での常磁性金属相に関する結果をまとめ、論文発表を行なった。また、理論的な研究での進展もあり、圧力下におけるR2Mo2O7の状況に近いモデル計算でも実験結果と同様の温度変化がほとんど無い金属状態が発現することが分かって来た。そこで分かってきたことは、超交換相互作用と二重交換相互作用の拮抗する系であってもパイロクロア型モリブデン酸化物めようなフラストレーション格子系では、超交換相互作用の増大が必ずしも反強磁性(またはスピングラス)絶縁体を有利にするわけではなく、温度変化の非常に少ないスピンフラストレーションの強い金属的状態も現れ得るということである。このように実験、理論の両面からフラストレーション系のモット転移系における伝導現象の詳細が明らかになってきており、モット転移をより深く理解するためにも同様のモット転移系の更なる調査が望まれる。また、スピングラス絶縁体であるY2Mo2O7にCdを置換することで、ホールドーピングによる金属化も試みた結果、圧力下と同様の温度依存性のほとんど無い比較的高い抵抗率を示す常磁性状態を示すことが分かって来た。この相は常圧で得られることから、高圧下では不可能だった(磁気)比熱や(異常)ホール抵抗率、ゼーベック係数などのより詳細な測定が可能であり、電子相関の強いフラストレーション系の輸送現象の詳細な調査、理解が期待できる。特に近年では、パイロクロア格子系において特有に現れるスピンカイラリティーといった物理量が輸送現象に与える影響や、フラストレーション系における電荷・スピン複合自由度の系での輸送現象についての関心なども高まってきており、本研究結果はそれらの一助となると考えられる。
膵癌モデルマウスを用いた非機能性反復配列ＲＮＡの膵発癌における生物学的意義の検討

膵癌で早期に発現する非コードRNAの一種、反復配列RNAの発現状況を検討したところ、膵癌組織特異的で正常組織では全く発現が見られなかった。そのためこの反復配列RNAが癌の表現型に何か寄与しているのではないかと考え、細胞で発現する状況を創ってみたところ、遺伝子異常の修復障害や染色体の分裂異常が惹起された。その分子機構はまだ解明すべき点があるが、この非コードRNAの発現が癌の悪性化に寄与していると考えられた。膵癌組織における反復配列由来のRNA産物の発現が以上に亢進することを、ヒト癌組織アレイ、および当研究室で既に樹立しているマウス膵がんモデル由来組織のin situ hybridizationにて確認した。特に組織内分布については癌組織のみならずその周囲組織でも高発現していた。次に反復配列RNAを高発現するコンストラクトを作製し、マウスのPanIN細胞に導入したところ、細胞の分裂以上が惹起された。その分子機構を解明する一助として、反復配列RNAに結合するたん白をRNA-IPおよび質量分析法にてYBX1蛋白を同定した。YBX1蛋白は本来DNA障害を修復するための働きを持つ蛋白であるが、YBX1と反復配列が結合することによる機能変化を検索中である。いっぽう、反復配列RNAを過剰に発現するtransgenic mouseも作成し現在表現型を検討中である。まず、膵癌組織における反復配列由来のRNA産物の発現を確認した。膵癌組織において反復配列由来のRNAの転写が増加することを、ヒト癌組織アレイ、および当研究室で既に樹立しているマウス膵がんモデル由来組織のin situ hybridizationにて確認した。次に、過剰発現系コンストラクトの作製を試みた。培養細胞において反復配列RNAを過剰発現させる系を確立するために、両方向に向けたpromoterをもつ発現ベクターに、それぞれの方向の反復配列の最小単位のn倍(n = 2 or 3をまず作製)の長さのコンストラクトを組み込んで、過剰発現に用いるplasmidを作製した。このプラスミドの発現によって、反復配列過剰発現時の形質変化を観察した。このコンストラクトをまず培養細胞に過剰発現させ、生じるphenotypeを観察したところ、細胞分裂時の染色体の移動が不完全になり、さまざまな倍数体が生じていた。このことから反復配列RNAの発現が細胞分裂時の染色体分配に影響を与えて、細胞障害が生じる可能性が考えられた。その結果、反復配列RNAの発現細胞に染色体異常が蓄積し癌化に進む可能性が考えられた。癌組織では100%、これらの反復配列RNAが発現していた。同時にこの反復配列は正常組織ではほとんど発現していないことも確認しているが、癌周囲の組織では発現が見られたのが特徴である。この反復配列RNAの生物学的機能を解明するために、このRNAに結合するタンパクを質量分析で同定したところ、YB-1というタンパクが同定された。YB-1蛋白とこの反復配列RNAが結合することにより、本来あるYB-1の機能(DNA障害の修復及び染色体分裂の調節機構)が破たんし、その結果、癌化と強く関連するDNA障害が蓄積する可能性が示唆された。たとえば活性酸素による細胞刺激後のDNA障害の程度は、反復配列RNAを発現した細胞ではコントロールに比べて際立って強くなった。この結果は、膵癌癌化の早期に反復配列RNAが高発現し、その結果、DNAへの障害が入りやすくなり、そのため細胞自体が癌化に傾くことが想定された。YB-1蛋白の強制発現によってそれらの表現型はキャンセルされることから、YB-1蛋白量を増やすことが、反復配列RNAによる癌化機構を予防するための方策となる可能性が示唆された。また、この反復配列RNAを高発現するトランスジェニックマウスを作製し、その表現型を解析するための準備を整えた。消化器内科学反復配列RNAを発現するコンストラクトを用いたtransgenic mouseを作製したが、生後最長6-8週程度では明らかな表現型は得られていない。今後の表現型の出現を注意深く観察する。反復配列RNAはPCRがかけにくく、通常のRT-PCR法が使えない中、膵癌における反復配列RNAの検出法を確立し実際に癌で高発現していることを確認し、その過剰発現系も構築できた。ほぼ計画通りに推移していると考えている。In vitroでの反復配列過剰発現の生物学的意義を引き続き詳細に解明するとともに、transgenic mouseについては自然経過で表現型が得られない場合には何らかの形で発癌誘導・炎症誘導を行う。引き続きin vitroでの解析を行なうための分子生物学的検討のための消耗品購入が大部分をしめ、さらにin vivoでの解析のためのコンストラクト作製・遺伝子改変マウスの作製費用を予定する。
日本製鉄遺跡デ-タベ-ス作成に関する研究

〔デ-タの収集と製鉄遺跡デ-タベ-スの作成〕1.収録した遺跡デ-タは、昭和61年度科学研究費補助金『わが国前近代製鉄技術の起源と転移経路の総合的研究』において、各府県教育委員会の協力をえて収集した約1000件のデ-タを基礎とすることとし、それを市販のデ-タベ-ス上の「製鉄遺跡DB」として入力した。2.これを各府県毎に教育委員会または埋蔵文化財センタの関係者に送付して修正を依頼するとともに、発掘調査報告書などによって補充した。その結果、収録した遺跡件数は45府県1682件に達した。これは当初の予想以上の増加であった。3.東京工業大学の研究者とともに進めていた研究では、理工学技術による遺跡の性格解明が一つの重要な課題であり、その成果を受け継ぐ意味で、本遺跡デ-タベ-スにはスラグと鉄製品の化学組成値を収録した。収録件数は1043件である。なお資料収集中に、より適したDBーSOFTが発売されたため、その上で手直しを加えた。〔製鉄遺跡デ-タベ-スの構成と内容〕1.「製鉄遺跡DB」のデ-タは、基本となる遺跡表(MEIN)と遺跡出土スラグ化学組成表(KAGAKU)とよりなる。2.遺跡表(MEIN)は、遺跡ID・遺跡名(+フリカナ)・都道府県・市町村・地字・遺跡の性格・時代(時代区分+世紀)・関連出土遺物・発掘調査(年・主体・判定根拠)・報告書(書名・筆者等)・化学組成表の有無・備考の各欄よりなり、夫々に検索が可能である。なお、遺跡コ-ドは5桁の自治体コ-ドに2桁を加えたもので、これによって国立歴史民俗博物館で作成されている他のデ-タベ-スと関連づける事が出来る。3.化学組成表は、分析者と分析機器等の情報と、珪素(SiO_2)・チタン(TiO_2)・アルミニュ-ム(Al_2O_3)・鉄(Fe_2O_3)・マンガン(MnO)・マグネシュ-ム(MgO)・カルシュ-ム(CaO)・カリウム(K_2O)・燐(P_2O_5)など、製鉄の原料や技術に密接な関係のある諸元素の量を酸化物の重量百分比で表した。このKAGAKUの表は、コ-ド番号によってMEINの情報とつなげられている。
マルチモダリティイメージングによるヒト腫瘍微小転移検出マウスモデルの樹立

悪性腫瘍の治療における基礎研究では、その対象病態となるヒト腫瘍モデル動物の構築が重要である。そこで、より臨床に近い形を再現できる動物モデルの開発を行った。。また放射性プローブを用い、微小転移腫瘍への集積性をイメージングした。使用する核種の放射能量等の様々なパラメータを変えながら、SPECTイメージングの至適撮像条件について実験を行った。微小転移が検出出来たところで、解剖法により比較を行い、1mm以下で検出できていることを確認した。さらに臓器毎の集積放射能量をガンマカウンターで計測した。本研究の目的は、ヒト腫瘍微小転移マウスモデルを樹立し、腫瘍の転移機構の解明と、転移抑制剤の評価系の確立に供することである。腫瘍の転移は原発巣のわずかな細胞が正常組織に移動する微小転移から始まるが、この微小転移の機序解明は、患者の予後を向上する上で極めて重要である。微小転移は極めて少数の細胞集団であるため、これまでマウス体内で腫瘍の微小転移を検出することは困難であった。そこで研究代表者は鋭敏な検出感度を有する分子イメージング技術(SPECT/CT、光イメージング)を応用し、ヒト腫瘍微小転移マウスモデルを樹立し、微小転移を可視化することで評価系を構築し新規治療法の開発を目指した。11月までに、現有SPECT装置の解像力や感度均一性評価を行うためのマウス様模擬線源(ファントム)を手作りし、3つの核種Ga-67、Tc-99m、I-131に対して実験を行っている。このように核種や放射能量、使用コリメータ、投影数などイメージデータ収集に必要な条件を様々に変えた実験を行っている。次にこれらの撮像条件の違うデータに対して再構成処理パラメータを変化させ、現有SPECT装置の解像力および検出感度等の総合的な性能評価を行いながら各実験プロトコルに最適なイメージング条件を検討している。現有装置でもファントムのような静態物の撮像ではTc-99mで1mm程度の高解像力を達成できることを確認した。さらに空間分解能、放射能濃度分解能、コントラスト分解能、視野均一性等の性能を詳細に評価できるように3Dプリンタによる独自設計のマイクロファントムを試作し、その後のSPECT評価実験の準備を行っている。空間分解能、放射能濃度分解能、コントラスト分解能、視野均一性等の性能を詳細に評価できるように3Dプリンタによる独自設計のマイクロファントムを試作している。しかし、平成27年11月、研究代表者の不測の病気により、その後遂行予定であったSPECT評価実験の延期が生じた。昨年ファントム実験で最適化した条件をマウスに適用した。転移モデルマウスの作製は研究代表者が樹立したNude-RJ-EGFPマウスに各種腫瘍細胞を皮下移植することで行った。転移能が高い細胞株としてヒト肺癌細胞株(A431, H69, A549)、リンパ腫(Raji, Jurkut, BCBL-1)、メラノーマ(Ihara, GAK, G361)、胆管癌(M213)を選んでいる。検出用イメージングプローブは当施設で使用可能であるソマトスタチン受容体またはボンベシン受容体のリガンドを用いた。ファントム実験と異なり実際のマウスでは心臓の拍動や肺の呼吸運動による臓器のブレによる解像力低下の影響も予想されるため、その影響についても検討を行った。使用する核種の放射能量、放射性プローブの標識率や安定性および親和性、他臓器集積からの影響などを考慮して核種、投与量、uptake時間、撮像時間、コリメータ、再構成条件等のパラメータを変えながら、SPECTイメージングの至適撮像条件を探った。しかしながら4月14日および16日の熊本地震により、当アイソトープ施設での非密封放射性物質の使用が不可能となった。また、準備していた転移モデルマウスも再度作製し直しとなり、大幅に研究遂行が遅れた。当大学でのイメージング実験再開は建物の改修工事を待つこととなり、年度内には見通しが立たなかったため、他大学のPET/SPECT/CTを使わせてもらうこととなった。消耗品や試薬も再調達が必要になり、他大学への旅費も必要となったことから転移モデルマウスの作製は二種に抑えることとなった。イメージングはF-18やI-131を用い微小転移の検出を行った。また解剖により比較を行い、臓器毎の集積放射能量をガンマカウンターで計測を行い解析している。。研究遂行にまず必要なマイクロファントムは、SPECT評価に最適な数種を作製しているので、研究代表者の復帰後はSPECT評価実験を行い、腫瘍微小転移モデルマウスの作製へと進んでいく予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。分子イメージング28年度が最終年度であるため、記入しない。
プルーストと舞台芸術

本年は、これまで蒐集・読解を行ってきた世紀転換期の演劇テクストおよび新聞・雑誌の批評記事を整理するとともに、こうした作品群がプルーストの初期作品および『失われた時を求めて』にもたらした影響の検討をおこなった。フランソワ・ド・キュレルをはじめとした、プルーストにとりわけ大きな影響を与えたと考えられる作家については、テクストの精読に加えて、出演者や当時の上演状況を総合的にとらえた上でプルーストに与えた影響関係を考察した。ルネ・ペーター、レーナルド・アーン、アントワーヌ・ビベスコなど、プルーストと交友関係にあった演劇関係者についても調査を行った。また、ノルウェーの劇作家・イプセンのフランスでの受容についての調査を行い、プルーストの作品にもたらした影響の分析を行った。プルーストが執筆・上演の相談に乗っていたアントワーヌ・ビベスコの戯曲『嫉妬する男』や、友人であったジョルジュ・ド・ポルト=リッシュ『恋する女』『過去』、フランソワ・ド・キュレル『招かれた女』などの作品がプルーストの作品にもたらした影響を分析した。また、同時代の新聞雑誌に掲載された劇評の調査をフランス国立図書館の電子サイトGallicaを通じて行った上で、プルーストの作品の主要テーマである「嫉妬」「無関心」「嘘」などが世紀転換期の心理劇でいかに扱われているかを検証し、19世紀末の文化的コンテクストのなかにプルーストの作品を位置づけた上で、類似性とプルーストの独創性を検証した。プルーストは先行作品と共通するモチーフを応用しながら、独自の表現方法を見いだす思索の深さと鋭い批判精神において特異な作家であり、その点については19世紀小説との比較研究では詳細な分析がなされているが、本研究によって戯曲においても「文学の記憶」を自らの作品にとりこみ、応用するプルーストの創作について新たな考察を加えることができた。28年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題の採用1年目にあたる本年は、主に「プルーストと舞台芸術」を実証的・総合的に研究するための基礎作業に費やされた。具体的には1プルーストの作品中で言及されている作品2プルーストが実際に鑑賞したことが明らかになっている作品3プルーストと親交のあった人物(作家・劇場関係者・女優等)がかかわった作品4プルーストが影響を受けた作家や批評家が言及している作品5当時の新聞・雑誌で話題になった作品、という条件でコーパスを洗い出し、各作品の詳細をおもにフランス国立図書館が運営する電子サイトGallicaで調査した。上記の5にかんしては資料の量が膨大であるため、検索の方法等も工夫しながら次年度も調査を続けていく。プルーストが劇場に日参していた19世紀末に隆盛した自然主義演劇および象徴主義演劇は現在顧みられることが少ない分野であるが、ゾラやゴンクール兄弟をはじめ、19世紀後半から世紀転換期の作家の多くは自らの小説の戯曲化やオペラ台本の執筆などを通して舞台芸術にかかわっていた。プルーストによる19世紀小説の受容にかんする研究は数多いが、プルーストが19世紀小説を戯曲・オペラを介しても受容していたという点はこれまで看過されてきた。そこで、10月25日に広島大学で行われた日本フランス語フランス文学会においては戯曲版『ジェルミニー・ラセルトゥ』を中心に、同時代の舞台芸術や女優レジャーヌと作家の関係を検証し、『失われた時を求めて』のいくつかのエピソードの再解釈を試みた。また、これまでプルーストへの影響が看過されてきたポール・エルヴューやモーリス・ドネ等、世紀転換期の新聞・雑誌の調査をすすめたことも今年度の成果である。本研究課題採用2年目にあたる本年は、フランス国立図書館の電子サイトGallica等を活用し、世紀転換期の演劇テクストおよび新聞・雑誌の批評記事の読解・分析を主に行った。プルーストの『失われた時を求めて』は当時のヨーロッパの教養をレジュメした小説と評されるが、その「教養」は広範であると同時に個人的な経験にも裏打ちされており、とりわけ舞台芸術をめぐる関心は作家のひろい人間関係とも密接にかかわっていた。そのため、新聞・雑誌などの読解を通した当時の社会的コンテクストの調査と、プルーストの個人的経験という両方の観点から、作家と舞台芸術の関係を調査する必要がある。『失われた時を求めて』には、現在はほとんど忘れ去られている作品への目配せも数多くなされており、社交界での会話などに織り込まれる幾多の固有名は、登場人物の趣味を浮き彫りにするだけでなく、ときには変奏曲のように物語に奥行きを与えている。こうしたコンテクストの解読を通して、プルーストが張り巡らせた糸を解きほぐし、青年期のプルーストが同時代の文学・芸術から何を吸収し、その記憶がどのように小説で開花しているかを調査した。本研究の成果の一部として、世紀転換期の劇作家モーリス・ドネの作品の影響をもとに『失われた時を求めて』のエピソードを再解釈した論文をフランスのプルースト専門誌『Bulletin Marcel Proust』に投稿し、掲載が決定した。また、フランソワ・ド・キュレルやジョルジュ・ド・ポルトリッシュといった、世紀転換期の心理劇がプルーストの作品にもたらした影響について調査を行い、その成果は2016年5月の日本フランス語フランス文学会で発表予定である。夏期休暇中のフランス滞在が叶わなかったため、国内の図書館およびGallicaをはじめとするインターネット上で閲覧が可能な資料の調査が中心となったが、プルーストが実際に鑑賞したと考えられる作品の多くを参照することができた。

こうした調査を通じて、プルーストの作品がどのような戯曲から影響を受けているか、具体的に提示することができるようになった。また、フランソワ・ド・キュレルをはじめとする世紀転換期の心理劇の系譜を精査することで、これまで「世紀末」という枠組みではとらえきれていなかった、青年期プルーストと同時代の文化の関連が明らかになった。なお、フランスでの調査は2016年度の夏期休暇に予定をしている。本年は、これまで蒐集・読解を行ってきた世紀転換期の演劇テクストおよび新聞・雑誌の批評記事を整理するとともに、こうした作品群がプルーストの初期作品および『失われた時を求めて』にもたらした影響の検討をおこなった。フランソワ・ド・キュレルをはじめとした、プルーストにとりわけ大きな影響を与えたと考えられる作家については、テクストの精読に加えて、出演者や当時の上演状況を総合的にとらえた上でプルーストに与えた影響関係を考察した。ルネ・ペーター、レーナルド・アーン、アントワーヌ・ビベスコなど、プルーストと交友関係にあった演劇関係者についても調査を行った。また、ノルウェーの劇作家・イプセンのフランスでの受容についての調査を行い、プルーストの作品にもたらした影響の分析を行った。プルーストが執筆・上演の相談に乗っていたアントワーヌ・ビベスコの戯曲『嫉妬する男』や、友人であったジョルジュ・ド・ポルト=リッシュ『恋する女』『過去』、フランソワ・ド・キュレル『招かれた女』などの作品がプルーストの作品にもたらした影響を分析した。また、同時代の新聞雑誌に掲載された劇評の調査をフランス国立図書館の電子サイトGallicaを通じて行った上で、プルーストの作品の主要テーマである「嫉妬」「無関心」「嘘」などが世紀転換期の心理劇でいかに扱われているかを検証し、19世紀末の文化的コンテクストのなかにプルーストの作品を位置づけた上で、類似性とプルーストの独創性を検証した。プルーストは先行作品と共通するモチーフを応用しながら、独自の表現方法を見いだす思索の深さと鋭い批判精神において特異な作家であり、その点については19世紀小説との比較研究では詳細な分析がなされているが、本研究によって戯曲においても「文学の記憶」を自らの作品にとりこみ、応用するプルーストの創作について新たな考察を加えることができた。当初予定していた、世紀転換期の新聞・雑誌の基礎調査は、フランス国立図書館の運営する電子サイトGallicaで参照可能なものについては順調に進行した。フランス国立図書館・パリ国立古文書館・オペラ座図書館等に所蔵されている世紀転換期の舞台芸術作品のパンフレットやプログラムにかんしては、2014年度中に調査が叶わなかったため、今年度の調査滞在の際の課題のひとつとしたい。「演劇を介した小説の受容」は従来の文学研究および演劇史研究では看過されてきた側面であるが、2014年10月の日本フランス語フランス文学会において、ゴンクール兄弟による『ジェルミニー・ラセルトゥ』の戯曲版をプルーストがいかに受容したかを検証し、問題提起を行うことができた。
裁判員制度のもとにおける刑法理論の在り方に関する研究

平成21年度においては、基礎的・準備的作業として「裁判員制度のもとにおける刑法理論の在り方」について検討を加えた。具体的には、(1)裁判員制度の導入の背景や制度趣旨に関する理解を含め、裁判員法の内容に関する基本的な検討を行った。また、(2)判例研究のあり方や実務と理論の関係性などについて、従来からの議論に分析を加え、学説のあるべき関与のあり方について、検討を加えた。これらの検討の成果として、裁判員裁判を実効化させるためには、従来の裁判実務における実質的な考慮を顕在化させ、その核心部分を明確なかたちで言語化し、裁判員に対して説明を行う作業が必要であり、その分析においては、刑法理論が重要な機能を果たすことを再確認するに至った。これらの基礎的・準備的作業を踏まえつつ、刑法解釈論における重要な概念が、いわゆる「判例理論」においてどのように理解されてきたか、また、そのような理解を支える実質的な考慮がどのようなものであったかについて、具体的な検討に着手した。本年度は、正当防衛における急迫性や、いわゆる自招侵害をめぐる問題について、判例の立場を多角的に検討したほか、殺意や共謀の認定などについても、裁判例についての網羅的な検討を加えた。次年度は、これらの作業をさらに継続するとともに、その「判例理論」の核心部分をいかにして明確に言語化できるかについても、検討を加えていくことにしたい。また、裁判員裁判による刑事判決もある程度集積しているので、それらの検討を通して、裁判員裁判導入による刑事判決の変化、とりわけ量刑の動向についても、継続的に検討を加える予定である。本年度においては、昨年度の「裁判員制度のもとにおける刑法理論の在り方」に関する基礎理論的・準備的考察を前提としつつ、故意(殺意)の認定、正当防衛の成立要件、責任能力の判断、正犯(共同正犯)と従犯の区別の基準などの刑法解釈の重要問題について、従来の学説・実務について再検討を加え、その「核心部分」を抽出する作業をすすめた。これらの検討作業によって、従来の判例・学説の対立にもかかわらず、一定の「共通理解」が共有されており、それが判例理論の核心をなしていることが確認されたが、同時に、従来の判例においても、必ずしも十分に明確化されていない問題があることも明らかになった。たとえば正当防衛状況において、被侵害者〔防衛行為者〕が現場から退避する必要があるかという問題については、退避義務を否定する理解が一般的であるが、従来の裁判例においては、この問題についての明確な判断が示されているわけではない。また、共同正犯と幇助犯の区別についても、たとえば振り込め詐欺における「出し子」についても共同正犯の成立が認められるなど、一般理論と具体的な結論との間に乖離が認められる場合もある。このような問題について、裁判員裁判においてはどのような取扱いが適切なのか、さらに検討を進める必要があろう。そのほか、本年度は、裁判員裁判における量刑の傾向についても、具体的な裁判例を分析の対象としつつ、検討を加えたが、なお分析対象の件数が十分ではないため、次年度以降も研究を継続する必要がある。平成21年度、平成22年度においては、「裁判員制度における刑法理論の在り方」に関して、基礎理論的・準備的考察を行うとともに、故意の認定、正当防衛の成立要件、正犯(共同正犯)と幇助犯の区別の基準などの刑法解釈の重要問題について、従来の判例理論の「核心部分」を抽出する作業を行ったが、本年度においても、これらの問題点について継続的に検討を加えた。また、殺意の認定などについては、裁判員裁判による判断がある程度集積しているため、これらの裁判例についても、検討を加えた。これらの検討の結果、司法研究における刑法上の難解概念に関する説明の在り方が、実務においても、相当に浸透しているものの、その具体的説明の当否については、なお慎重な検討を要すると思われた。また、正当防衛の解釈として、量的過剰防衛、侵害の継続性ゐ判断基準などについて、解釈論的な研究を行うとともに、裁判員裁判における説明の在り方について検討を加えた。これらの研究成果は、次年度以降、法律雑誌等に公表するべく、準備中である。本年度はさらに、量刑判断の在り方についても、理論的な観点から研究を行った。研究においては、ドイツ刑法学における量刑論の正確な理解に努めた。また、現実の裁判員裁判における量刑判断の傾向やその問題点についても、一定の分析をおこなった。その結果、性犯罪や家庭内犯罪に関する量刑傾向の変化や、執行猶予判決に保護観察が付される件数の顕著な増加などの傾向を見いだすことができたが、その理論的な分析については、さらに事例の集積を待たざるを得ない。次年度以降、これらの研究を取りまとめて、裁判員裁判における刑法理論の在り方について、まとまった研究成果を公表することにしたい。
脊椎動物に特異なネトリンGサブファミリーの機能解析

軸索誘導因子であるUNC-6/netrin分子群にドメイン構造が類似するNetrin-G1およびNetrin-G2を同定した。これらの発現領域は相互排他的であり、互いに機能的重複を示さないと考えられた。脳における両蛋白質の局在を詳細に解析し、成体では軸索終末の細胞質膜上に分布すること、シナプス近傍にも分布することを明らかとし、機能的神経回路の形成維持への関与を示唆する成績を得た。機能を明らかにする手段の一つとして、精製したNetrin-G1およびNetrin-G2を固層化し、その上で神経細胞の培養をしたところ、優位な神経突起の伸長を観察した。一方、抗Netrin-G1抗体を固層化し、その上で神経細胞を培養する事により、異なった細胞形態が誘導された。これらの結果は、これらの分子が両方向性のシグナル伝達機構を担うことを示唆している。脳におけるこれらの遺伝子の機能を明らかとするため、各々の遺伝子をノックアウトしたマウスを作製し、それらを解剖学的、行動学的および電気生理学的に解析した。Netrin-G1欠損マウスおよびNetrin-G2欠損マウスは共に成体まで発育し、生殖能力は正常であった。組織学的にも巨視的な異常は示さなかった。しかしながら、電気生理学的解析の結果は、NMDA受容体/AMPA受容体の比率が野生型マウスのものと異なることを明らかとした。このような異常の脳機能における意義を評価するために、一連の行動学的解析を行った。それらの結果を総合的に見ると、Netrin-G1欠損マウスは感覚情報の入力処理に異常を持つこと、Netrin-G2欠損マウスは情報のより高次の統合処理過程に異常を示すと解された。これらの結果は、Netrin-G1およびNetrin-G2の発現分布の特性と良く一致しており、それらが独立した神経回路の形成と維持に重要な役割を担うことを示唆している軸索誘導因子であるUNC-6/netrin分子群にドメイン構造が類似するNetrin-G1およびNetrin-G2を同定した。これらの結果は、Netrin-G1およびNetrin-G2の発現分布の特性と良く一致しており、それらが独立した神経回路の形成と維持に重要な役割を担うことを示唆しているネトリンG1は軸索誘導因子であるネトリンに構造的に類似するが、GPIアンカーにより膜表面に結合され、受容体を古典的ネトリンと共有しない分子として同定された。新たに、UNC-6/ネトリンファミリー内でネトリンG1と共にサブファミリーを形成するネトリンG2遺伝子を同定した。ネトリンG2もGPIアンカーにより膜表面に結合され、受容体を古典的ネトリンと共有しない。固層化したネトリンG1およびネトリンG2は胎児の大脳皮質および視床から分離した細胞の神経突起伸長誘導活性を、有する事を明かとした。また、固層化した抗ネトリンG1抗体は胎児視床由来細胞に形態的変化を誘導した。一方、ネトリンG1は軸索表面に分布する事を明かとした。これらの結果に基づき、ネトリンGサブファミリー分子は、未知の受容体を介してその受容体を発現する細胞へのシグナル伝達とともに、ネトリンGサブファミリー分子を発現するニューロンの細胞内へのシグナル伝達の両方向シグナル伝達分子として働く事を示唆した。以上の結果は、ネトリンGサブファミリー分子が古典的ネトリンから独立した機能を有する事を示唆している。また、ネトリンG1とネトリンG2は始どの脳領域で相互排他的に発現するので、生体内では殆ど機能的に重複しないと考えられる。これらの成績については、Mechanisms of Development誌に報告した。ネトリンG1およびネトリンG2遺伝子の欠損変異マウスを作製し、その表現形を形態学的、行動学的、および電気生理学的に解析中である。

Netrin-G1およびNetrin-G2を同定し、その発現分布および諸性状を明らかとし、これらの分子が両方向性のシグナル伝達機構を担うことを提唱する論文を公表した(Mech. Dev.,111,47-60,2002)。脳における両蛋白質の局在を詳細に解析し、成体では軸索終末の細胞質膜上に分布すること、シナプス近傍にも分布することを明らかとし、機能的神経回路の形成維持への関与を示唆する成績を得た。脳におけるこれらの遺伝子の機能を明らかとするため、各々の遺伝子をノックアウトしたマウスを作製し、それらを解剖学的、行動学的および電気生理学的に解析した。Netrin-G1欠損マウスおよびNetrin-G2欠損マウスは共に成体まで発育し、生殖能力は正常であった。組織学的にも巨視的な異常は示さなかった。しかしながら、これらの分子をリガンドと捉えた場合の仮想的受容体(未同定)を発現すると考えられる細胞の樹状突起の形態に異常があることを、パッチクランプ法による単一細胞標識によって明らかとした。また、電気生理学的解析の結果は、これらの細胞の樹状突起におけるNMDA受容体/AMPA受容体の比率が野生型マウスのものと異なることを明らかとした。このような異常の脳機能における意義を評価するために、一連の行動学的解析を行った。それらの結果を総合的に見ると、Netrin-G1欠損マウスは感覚情報の入力処理に異常を持つこと、Netrin-G2欠損マウスは情報のより高次の統合処理過程に異常を示すと解された。これらの結果は、Netrin-G1およびNetrin-G2の発現分布の特性と良く一致しており、それらが独立した神経回路の形成維持に重要な役割を担うことを示唆している。これらの成績について、公表準備中である。軸索誘導因子であるUNC-6/netrin分子群にドメイン構造が類似するNetrin-G1およびNetrin-G2を同定した。これらの発現領域は相互排他的であり、互いに機能的重複を示さないと考えられた。機能を明らかにする手段の一つとして、精製したNetrin-G1およびNetrin-G2を固層化し、その上で神経細胞の培養をしたところ、優位な神経突起の伸長を観察した。一方、抗Netrin-G1抗体を固層化し、その上で神経細胞を培養する事により、異なった細胞形態が誘導された。これらの結果は、これらの分子が両方向性のシグナル伝達機構を担うことを示唆している。しかしながら、電気生理学的解析の結果は、NMDA受容体/AMPA受容体の比率が野生型マウスのものと異なることを明らかとした。
細胞核形態と病害応答時遺伝子発現の制御におけるアクチン脱重合因子の機能解析

研究代表者はこれまでの先行結果をもとに、シロイヌナズナのアクチン脱重合因子(ADF)が、細胞核内のアクチン繊維の構造・動態制御を介して、核内ゲノム三次元構造および病害応答に関わる遺伝子発現を制御している、との仮説を立てた。本研究課題はこの仮説の検証を目的としており、新たな遺伝子発現制御の機構を明らかにする基盤研究、また、植物病害の新しい防除法確立に向けた基盤研究としての意義を持つ。上述の目的達成のため、平成28年度から始まった本研究では、(1)adf変異体における細胞核の形態解析、(2)ADFの欠損が遺伝子発現に与える影響を明らかにするためのマイクロアレイ解析、(3)細胞核内アクチン繊維の可視化解析、(4)アブラナ科炭疽病菌に対するadf変異体の表現型解析、を行った。最終年度となった平成30年度は、特に(3)と(4)について解析を進めた。(3)の細胞核内アクチン繊維の可視化解析については、細胞核局在シグナルと蛍光タンパク質を付与したアクチン繊維結合タンパク質を発現するシロイヌナズナ株を作成し、昨年度、ホモラインを得た。一方で、得られた植物体は、強い蛍光を示したものの、細胞核内には明確な繊維状構造は見られなかった。細胞核内アクチン繊維の可視化解析が報告されている動物細胞の例でも、ストレス下の細胞でのみ核内に繊維状構造が見られることが報告されており、現在、得られたホモラインを用いて細胞核アクチン繊維が出現する条件を探索している。(4)については、これまでの研究でadf変異体がうどんこ病に対して抵抗性の亢進を示すことを報告していたが、平成29年度に、うどんこ病に加えアブラナ科炭疽病菌にも抵抗性の亢進を示すことを明らかにした。平成30年度は、アブラナ科炭疽病抵抗性における植物ホルモンの役割を明らかにするため、植物ホルモン変異体を用いた病原体感染実験の準備を進めた。研究代表者はこれまでの先行結果をもとに、シロイヌナズナのアクチン脱重合因子ADFが、細胞核の構造制御を介して病害応答に関わる遺伝子発現の制御を行っている、という仮説を立てている。本研究課題はこの仮説の検証を目的としており、遺伝子発現制御に関する新たな機構を解明し、また植物病害の新しい防除法確立につながる基盤研究としての意義を持つ。上述の目的のため、本年度は、(1)ADFの欠損が細胞核形態に与える影響についての形態学的解析、(2)ADFの欠損が遺伝子発現に与える影響についてのマイクロアレイ解析、の2つの解析を中心に進めた。(1)については予備実験において、同じサブクラスに属する4つのADF、ADF1-4すべての発現を抑制した株で、成熟葉の細胞核ヘテロクロマチンサイズが減少することを示していた。本年度は画像定量解析により、このADF1-4発現抑制株におけるヘテロクロマチンサイズの減少を定量的に示した。またこのヘテロクロマチンサイズの減少が、芽生えの時期の根や子葉では見られないことを明らかにした。この結果は、ADF1-4の発現が、芽生えよりも成熟器官で上昇している事実と合致している。また本年度は、細胞核の形態をさらに詳細に解析するため、ADF4欠損変異体adf4およびADF1-4発現抑制株と細胞核構造マーカーラインとの掛け合わせを進めた。(2)については、野生株およびadf4、ADF1-4発現抑制株の、病原体非感染葉・感染葉のcDNAを用いてマイクロアレイ解析を行い、adf4で100以上、ADF1-4発現抑制株で500以上の遺伝子が、それぞれ発現上昇・減少を示すこと、発現上昇を示す遺伝子数よりも発現減少を示す遺伝子数のほうが多いことを明らかにした。GO解析の結果、これら発現減少を示す遺伝子には、病原体応答や免疫応答関連の遺伝子が多く含まれていることが明らかになった。当初の計画では、本研究課題の初年度である平成28年度、ADF変異体の細胞核形態解析や、変異体と細胞核マーカーラインとの掛け合わせによるホモラインの確立まで行う予定だったが、昨年4月に所属機関において形質転換植物体の流出が発生し、その後半年に渡って形質転換植物体を使った実験が禁止になったため、全体的に実験の進行がやや遅れている。また当初、病原体を使った解析には、ADF欠損株が抵抗性の上昇を示すことを明らかにしている糸状菌病原体うどんこ病菌を用いる予定だったが、うどんこ病菌実験の協力を仰いでいた奈良先端大西條研究室でうどんこ病菌が全滅したため、この実験の遂行が不可能になった。これについては現在、西條研究室で扱っている別の糸状菌病原体を用いた実験を計画している。研究代表者はこれまでの先行結果をもとに、シロイヌナズナのアクチン脱重合因子(Actin Depolymerizing Factor、ADF)が、細胞核の構造制御を介して病害応答に関わる遺伝子発現を制御している、との仮説を立てた。本研究課題はこの仮説の検証を目的としており、遺伝子発現制御に関する新たな機構を明らかにする基盤研究、また植物病害の新しい防除法確立に向けた基盤研究としての意義を持つ。上述の目的達成のため前年度は(1)adf変異体における細胞核の形態解析、(2)adf変異体を用いたマイクロアレイ解析、の2つの解析を進めたが、本年度はそれに加え、(3)細胞核内アクチン繊維の可視化解析、(4)アブラナ科炭疽病菌に対するadf変異体の表現型解析、(5)植物サイズに関するadf変異体の表現型解析を行った。

(1)については、前年度から進めていたadf変異体と細胞核構造マーカーラインとの掛け合わせを更に進め、ホモラインを得た。(2)については、前年度行ったマイクロアレイ解析の結果を解析し、adf変異体で発現が変化しており、病原体応答に関わっていることが予想される遺伝子を同定した。またこれらの候補遺伝子について、リソースセンターより変異体を取り寄せ、変異体ホモラインの単離を進めた。(3)については細胞核内のアクチン繊維を可視化するためのコンストラクトを作成し、植物体に導入した。(4)については、adf変異体が、これまで明らかにしていたうどんこ病菌に対する抵抗性の亢進に加え、アブラナ科炭疽病菌に対する抵抗性をも亢進させることを明らかにした。(5)については、adf変異体の植物サイズが野生型よりも有意に大きいこと、またその植物サイズの増加がプロイディの増加と細胞サイズの増大に由来していることを明らかにした。研究代表者は、ADFが細胞核内のアクチン繊維の構造や動態を制御することによって核内のクロマチン三次元構造を制御し、遺伝子発現に影響を与えているとの仮説を立てている。この仮説を裏付ける結果としてこれまでに、adf変異体でヘテロクロマチンサイズが有意に減少すること、遺伝子発現が大きく変化しており、さらに遺伝子発現変化を示す遺伝子群が、染色体上でクラスターを形成していることを明らかにしている。さらに平成29年度は、細胞核におけるADFの機能を明らかにするため、核内アクチン繊維を可視化するためのコンストラクト(Lifeact-GFP-NLS)を作成し、植物体に導入した。形質転換植物において、通常生育状態ではLifeact-GFPは細胞核全体に拡散し、繊維状構造は認められなかったが、核内アクチン繊維を見るためには特殊な生育状態に置くことが必要である可能性があり、今後さらに詳細に解析する予定である。また、adf変異体はうどんこ病菌に対して強い抵抗性の亢進を示すことを報告しているが(Inada et al., 2016 Plant Physiology)、それに加えてアブラナ科炭疽病菌に対しても強い抵抗性の亢進を示すことを明らかにした。また、新たなadf変異体の表現型として、植物サイズが大きくなることを定量的に明らかにした。植物サイズが大きく、病原体抵抗性が高まるという形質は、育種の上で非常に有用であり、ADF研究の重要性をさらに裏付ける結果となった。研究代表者はこれまでの先行結果をもとに、シロイヌナズナのアクチン脱重合因子(ADF)が、細胞核内のアクチン繊維の構造・動態制御を介して、核内ゲノム三次元構造および病害応答に関わる遺伝子発現を制御している、との仮説を立てた。本研究課題はこの仮説の検証を目的としており、新たな遺伝子発現制御の機構を明らかにする基盤研究、また、植物病害の新しい防除法確立に向けた基盤研究としての意義を持つ。上述の目的達成のため、平成28年度から始まった本研究では、(1)adf変異体における細胞核の形態解析、(2)ADFの欠損が遺伝子発現に与える影響を明らかにするためのマイクロアレイ解析、(3)細胞核内アクチン繊維の可視化解析、(4)アブラナ科炭疽病菌に対するadf変異体の表現型解析、を行った。最終年度となった平成30年度は、特に(3)と(4)について解析を進めた。(3)の細胞核内アクチン繊維の可視化解析については、細胞核局在シグナルと蛍光タンパク質を付与したアクチン繊維結合タンパク質を発現するシロイヌナズナ株を作成し、昨年度、ホモラインを得た。