hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト肥満細胞トリプターゼの分泌・顆粒内での活性調節と生理作用に関する研究

つまり、単量体から2量体への変換、2量体から不活性の4量体への変換、そして活性型の4量体への変換である。これらの新知見により、生理的にトリプターゼが単量体から4量体に変換する酸性条件下が細胞外または細胞内に存在するかどうかを今後検討する必要があることが示された。生理的なpHである中性領域では、ヒト肥満細胞中に存在するβ-トリプターゼはヘパリンにより活性型の4量体として存在し、生体内に存在するセリン性プロテアーゼ阻害剤に対して耐性を持っている。生理的条件下での4量体のトリプターゼからヘパリンを除去すると中性領域では直ちに不活性の単量体に変換し、再びヘパリンを加えても活性型の4量体には戻らない。昨年度の研究において、一度不活性になった単量体のヒトβ-トリプターゼが生理的条件下で活性型の4量体に変換する可能性について調べたところ、酸性条件下でトリプターゼは不活性の単量体から活性のある4量体に変換することを明らかにした。単量体から活性のある4量体に変換する至適pHは6.0、至適塩濃度は160mM、至適温度は22度から37度であった。トリプターゼの活性型と不活性型の相互変換は、トリプターゼの局在部位である肥満細胞の分泌顆粒内で起こる可能性があるので、本年度の研究では、肥満細胞の分泌顆粒内に含まれるヘパリンなどのプロテオグリカンやヒスタミンがトリプターゼの活性型と不活性型の相互変換に影響を及ぼしているかどうかを調べた。その結果、酸性条件下で起こる不活性の単量体から活性の4量体に変換する際にはヘパリンなどのプロテオグリカンなどを必要としないことを明らかにした。本年度の知見より、トリプターゼがプロセシングにより酸性領域で不活性の単量体から活性のある4量体に変換する際にはヘパリンを必要とするのに対し、一度活性のある4量体のトリプターゼが不活性の単量体になったものが、再び活性のある4量体に変換する際にはヘパリンを必要としなくなる機構について検討する必要があることが示された。生理的なpHである中世領域では、ヒト肥満細胞中に存在するβ-トリプターゼはヘパリンにより活性型の4量体として存在し、生体内に存在するセリン性プロテアーゼ阻害剤に対して耐性を持っている。中性領域の生理的条件下において、4量体のトリプターゼからヘパリンを除去すると、直ちに不活性の単量体に変換し、再びヘパリンを加えても活性型の4量体には戻らない。一昨年および昨年度の研究において、一度、不活性になった単量体のβ-トリプターゼが生理的条件下で活性型の4量体に変換する可能性について調べたところ、酸性条件下でトリプターゼは不活性の単量体から活性のある4量体に変換することを明らかにし、不活性の単量体から活性の4量体に変換する際にはヘパリンなどのプロテオグリカンを必要としないことを明らかにした。本年度の研究では、肥満細胞の分泌顆粒内において、酸性条件下で不活性の単量体から活性の4量体に変換する際に、ヘパリンなどのプロテオグリカンなどを必要としなくなる機構を、再度、活性型になったトリプターゼが分子内の修飾やプロセシングを受けているかどうかを検討した。FPLCによる分子ふるいカラムを用い、トリプターゼの分子量の変化を指標として検討した結果、不活性の単量体から活性の4量体に変換したトリプターゼの分子量は約12万と推定され、分子量からみたトリプターゼの更なる修飾やプロセシングはないものと推定された。
偽性副甲状腺機能低下症１Bにおけるメチル化異常の遺伝的背景は？

1)広範囲のメチル化異常を示した孤発性PHP1B患者27例について遺伝学的解析を施行した。2)20番染色体のマイクロサテライト解析にて、27例中2例に20番染色体長腕の父性片親性ダイソミー(patUPD20q)を認めた。3)patUPD20q認めなかった25例のうち23例についてSTX16-GNAS locusでのターゲットゲノムシークエンス解析を施行した。新規変異、微小な父性片親性ダイソミー、微小な欠失はいずれも検出できなかった。4)1例についてはSNP-CGHアレイを施行した。コピー数の異常やloss of heterozygosityは認めなかった。偽性副甲状腺機能低下症(Pseudohypoparathyroidism 1B, PHP1B)は、腎臓近位尿細管での副甲状腺ホルモン(PTH)への抵抗性により、低カルシウム血症、高リン血症、高PTH血症をきたす疾患である。PHP1B症例のgenomic DNAでは、染色体20番長腕に位置するGNAS locusのメチル化可変領域の広範囲または一部のメチル化異常を示し発症の原因とされている。これまでに、家族例ではGNASまたはその上流のSTX16において母由来の欠失または重複を認め、メチル化異常の原因として報告されている。しかし、PHP1Bの多くは孤発である。本研究の目的は孤発性PHP1Bにおけるメチル化異常の遺伝学的背景を解明することである。これまでに、1)孤発性PHP1B患者25例を収集し、末梢血白血球からgenomic DNA抽出した。2)MS-MLPA法でGNAS locusのメチル化状態を解析した。25例とも広範囲のメチル化異常を示したが、その程度は様々であった。3)片親性ダイソミーを検出するために染色体20番のマイクロサテライト解析を行なった。25例中2例に20番染色体長腕の父性片親性ダイソミー(patUPD20q)を認めた。4)patUPD20q認めなかった23例についてはSTX16-GNAS locusでのターゲットゲノムシークエンス解析(症例と可能なかぎり両親)を施行している。現在までに、新規変異は検出できていない。微小な父性片親性ダイソミーと微小な欠失の有無を解析中である。症例の収集、メチル化解析、片親性ダイソミーの検出に関しては解析手法は確率できており効率的に行えている。STX16-GNAS locusにおいて新規変異の有無を確認できたことは、当初の研究計画通りである。結果としては、新規変異を同定できなかった。STX16-GNAS locusでのターゲットゲノムシークエンスを施行しているものの、微小な父性片親性ダイソミーと微小な欠失等の構造異常の有無を現時点で解析できていない点が未達成であった。今回の研究では、1)孤発性PHP1B患者27例を収集し、末梢血白血球からgenomic DNA抽出した。MS-MLPA法でGNAS locusのメチル化状態を解析した。27例とも広範囲のメチル化異常を示したが、その程度は様々であった。2)片親性ダイソミーを検出するために染色体20番のマイクロサテライト解析を行なった。27例中2例に20番染色体長腕の父性片親性ダイソミー(patUPD20q)を認めた。3)patUPD20q認めなかった25例のうち23例についてはSTX16-GNAS locusでのターゲットゲノムシークエンス解析を施行した。しかしながら、新規変異、微小な父性片親性ダイソミー、微小な欠失はいずれも検出できなかった。4)ターゲットゲノムシークエンス解析施行しなかった2症例のうち1例についてはSNP-CGHアレイを施行した。しかしながら、コピー数の異常やloss of heterozygosityは認めなかった。平成29年度は、本年度施行したSTX16-GNAS locusでのターゲットゲノムシークエンスのデータをさらに解析し、新たな構造異常を同定することを目標としている。その上でメチル化異常の原因が特定できない症例に関しては、全ゲノムシークエンス解析を考慮している。

また、本年度実行したメチル化解析おいて、症例によってメチル化異常の程度が様々であることが判明しているが、その理由としては体細胞におけるモザイク現象であることを予測している。メチル化異常が部分的である症例の線維芽細胞のcell lineを確立し、サブクローニングをした上で、メチル化解析を行うことで、モザイク現象を証明することを目指す。小児科未使額の発生は、ターゲットシークエンスの経費を抑えられたことに起因する。翌年度に新たに予定している全ゲノムシークエンス解析の予算に充てる予定である。
3成分系合金の数学的なモデルにおける自由境界値問題

本研究では3成分系合金の相境界の動きを記述する幾何学的な時間発展モデルを解析することを目的とする。本年度は時間発展させたときの解の挙動に関する研究を行った。その解析にあたって3相境界問題を最初から扱うのは難しいため、研究対象となる方程式の本質を知るべく、まずは2相境界問題の解析を進めた。具体的には以下の2つのことを研究した。1つ目は、相境界の動きが曲率流方程式によって記述されるモデルの解析である。実際の研究では、曲率方程式を含むような、より一般的な非線形の方程式について解析した。この問題において、自由境界と外部領域との交点で境界条件として角度条件が課されるが、ある角度条件においては対応する自己相似解が唯一つあることを明らかにし、さらにその自己相似解が漸近安定であるという結果を得た。昨年度において、方程式が熱方程式の場合について類似した結果を得ていたが、本年度はその結果を非線形方程式に拡張できたのが成果として挙げられる。またこの問題に対する大域解の存在に関して明確に論じたものがなかったので、論文ではその証明を付した。この結果は台湾師範大学のYa-Ling Chang氏とJong-Shenq Guo氏との共同研究であり「Asymptotic Analysis」に公開予定である。2つ目は、ある有界領域内に存在する相境界の動きが表面拡散方程式によって記述されるモデルの解析である。表面拡散方程式では線分や円弧が定常解となるが、それら定常解の安定性の判断基準を、定常解のまわりで方程式を線形化し、そこから導かれる固有値問題を解析することで得た。この結果はHarald Garcke氏(Regensburg大学)と伊藤一男氏(九州大学)との共同研究であり、現在、論文を作成中である。また、同様の手法が3相境界問題へも適用できることが期待されることから、その解析にも取り組んでいる。今後は解析半群の理論などをもちいて、非線形安定性にも取り組んでいく予定である。以上が本年度の研究実績の概要である。
果菜類熟度判定の実用化に関する研究

1.60年度の成果:スイカ,マクワウリ,マスクメロンについて打撃試験を行ない,打撃による衝撃・振動特性と打撃音の音響特性と上記食品の物性との相関等について検討した。単振子状に吊り下げたスイカ等に単振子ハンマを衝突させ,衝突打撃面に対して各種方向における衝撃を加速度計により,また打撃音はエレクトリック・コンデンサ・マイクロフォンで受けてともに記録した。振動波形,打撃音波形の解析のために,デジタルメモリやデイジタル・スペクトラムアナライザを用いた。スイカについてその結果を示すと,振動波形及び打撃音波形の両方ともに,未熟なスイカでは波形が対称にならず,熟度が増すにつれて波形は対称となり減衰振動が持続する。さらに対数減衰率,波形のアタックタイム,ディケィタイム,サスティンタイム,レリースタイムと熟度との相関も検討した。FFT法で求めた打撃音のパワースペクトル密度をみると,未熟なスイカではピーク周波数が高く,種々の周波数成分を含むが,収穫適期のスイカではピーク周波数が低下し,単一の周波数成分のみがみられた。それはそれぞれ189,140Hzであった。2.61年度の成果:前年度の成果をもとに,スイカ等の収穫現場において熟度を判定することを目的とした装置の開発を行なった。2種類を製作したがそのうち1つはノッチ・フィルタの中心周波数を適宜切替えて,打撃音の特徴周波数(FFT法によるピーク周波数)の減衰の大きさで,熟度の推定を行うものである。2つめは打撃音をA/D変換し,そのデータ解析とFFT法によるパワースペクトル密度の計算,および熟度判定の論理演算を行う回路を含む16bitワンボードマイコンシステムである。上記2つの判定装置を用いて多数のスイカ等について熟度判定を今後行う。はじめに果菜数の熟度を推定し、出荷・輸送を考慮した収穫適期を判定するために、果菜類生育圃場において用いる現場測定計器の開発を目的とし初年度において基礎データを得る目的をもって実験を行なった。実験装置及び方法メロンの伸長の経時変化をみるために、大ひずみゲージをメロン果実表面に貼り、その肥大伸長を記録した。さらに収穫適期と称せられる時期を選び、スイカを対象として、数日間打撃試験を継続した。打撃音の波形から、最大振巾比である対称度、ピーク周波数、対数減衰率を求めた。また試料を円筒形に切り取り荷重を載せて、ひずみを測定した。その結果、応力-ひずみ曲線を画き直線部分からみかけのヤング率を求めた。また収穫したスイカを用いて打撃試験・載荷試験、プランジャを用いた貫入実験を行なった。貫入実験から計算により破断強度を求めた。実験結果及び考察メロン果実の肥大伸長をみると、生育前期が著しく、中期・後期に緩やかである。さらに24時間の生長では深夜-翌朝に肥大し、午後から夜半にかけて収縮している。スイカの打撃音の波形の上下対称度、ピーク周波数、果皮のヤング率、重量、体積、直径について重回帰分析を行なうと、ヤング率は波形の対称度と赤道直径と5%の危険率で有意となった。このことからスイカは熟期が近づくと振動波形は上下対称となり、減衰は緩やかとなる。この時期には歯ざわりも良くなってくる。肥大伸長は熟期に近づくと停滞することから、ある程度外観が大きいものは熟度がよいと考えられる。生育途中の生育阻害がなければ、大きいものが質もよく、熟度もよいと云える。
新しいヘパリン結合性成長分化因子ミッドカインの神経可塑性における役割

ミッドカインを結合させたビーズをアフリカツメガエルの筋肉細胞と共に培養すると、フセチルコリン受容体のクラスター化が引き起こされた。また、アフリカツメガエルの神経、筋シナプスにはミッドカインが局在した。そして、シナプスを形成する神経細胞にもミッドカインは存在した。これらの知見から、ミッドカインは神経筋シナプス形成において神経側からこれを助ける因子として分泌されていると提唱することが出来た。ヘパラン硫酸プロテオグリカンであるアグリンがシナプス形成に重要であることが判明している。BIA-COREを用いた解析によって、アグリンとミッドカインの強い結合も示すことが出来た。ミッドカインはアグリンとの複合体としてシナプス形成に関与する可能性が強い。マウスに於てミッドカインの役割を解明するため、ミッドカイン遺伝子ノックアウトマウスを作成した。このマウスは一見正常に発育した。しかし、海馬の歯状回において、カルレチニン陽性の神経細胞の生後の発育に伴う消失が大幅に遅れることが見出された。出生直後の海馬歯状回にはミッドカインmRNAが発現し、それはマウスの生後発達に伴い消失してゆく。これらの知見から、ミッドカインは海馬の生後発育を促進する因子であると結論した。なお、実験的脳梗塞の際、ミッドカインを大脳皮質で発現する細胞はアストロサイトと同定した。ミッドカインは神経回路の形成と修復に共に重要な因子と考えることが出来る。
単一ナノ磁性粒子の超高速スイッチングの直接計測とその制御手法の開発

本研究では単一ナノ磁性粒子の超高速ならびに高感度な磁気計測技術の開発および,超高速かつ低磁場反転技術の開発を行うことを目的として研究を行った.大振幅高速パルス磁場印加システムならびに単一磁性粒子の残留磁化状態の超高感度逐次計測システムの構築を行い,それを用いて垂直磁気異方性を有するCo/Pt多層膜の単一ナノ磁性粒子を用いた磁化反転実験を進めた.その結果,単一ナノ磁性体におけるスイッチング過程をナノ秒スケールで実験的に明らかにすることに成功した.またマイクロ波を用いた新規スイッチング技術についての検討を行い,その優位性を確認した.本研究では単一ナノ磁性粒子の超高速ならびに高感度な磁気計測技術の開発および,超高速かつ低磁場反転技術の開発を行うことを目的として研究を行った.大振幅高速パルス磁場印加システムならびに単一磁性粒子の残留磁化状態の超高感度逐次計測システムの構築を行い,それを用いて垂直磁気異方性を有するCo/Pt多層膜の単一ナノ磁性粒子を用いた磁化反転実験を進めた.その結果,単一ナノ磁性体におけるスイッチング過程をナノ秒スケールで実験的に明らかにすることに成功した.またマイクロ波を用いた新規スイッチング技術についての検討を行い,その優位性を確認した.ハードディスク等をはじめとする次世代の超高密度磁気記録媒体の実現には,ナノ磁性体のダイナミクス挙動の解明が不可欠であり,本研究では単一ナノ磁性粒子の超高速ならびに高感度なリアルタイム磁気計測技術の開発および,超高速かつ低磁場反転技術の開発を行うことを目的としている.ここまで,パルス磁場による単一磁性粒子の磁化反転実験においては,現時点で立上り時間0.4ナノ秒以下かつ300Oeの大振幅高速パルス磁場発生装置ならびに残留磁化状態の逐次計測システムの構築に成功している.更に,それを用いた実際の単一ナノ磁性粒子を用いた磁化反転実験を開始し始めた段階であり,これまでにパルス磁場による実際の磁化反転を確認するに至っている.3年間の研究計画における1年目としては充分な成果であり,目標達成に向けて順調に遂行できていると判断している.今後は種々の条件における単一ナノ磁性粒子の磁化反転実験を進める予定である.ここまでは残留磁化状態の計測であるため,結果の解析にはシミュレーションの併用が必要であり,現在,計算プログラムの開発も併せて行っている.更に,高速Hall効果計測系の構築も同時に進めており,ギガHz帯での信号伝送系,高周波アンプ等についての検討を行っている.他に,計測対象である単一ナノ磁性粒子の微細加工プロセスに対する検討も併せて進めており,直径40ナノメートル以下の形成ならびに,Hall効果計測における電極線の高制御位置決めによる超高感度化の実現を目指す.ハードディスク等をはじめとする次世代の超高密度磁気記録媒体の実現には,ナノ磁性体のダイナミクス挙動の解明が不可欠であり,本研究では単一ナノ磁性粒子の超高速ならびに高感度なリアルタイム磁気計測技術の開発および,超高速かつ低磁場反転技術の開発を行うことを目的としている.ここまで,パルス磁場による単一磁性粒子の磁化反転実験において,立上り時間0.4ナノ秒以下かつ3000eの大振幅高速パルス磁場発生装置ならびに残留磁化状態の逐次計測システムの構築に成功し,更にそれを用いた実際の単一ナノ磁性粒子を用いた磁化反転実験を進めている最中である.現在までにナノ秒オーダーのパルス磁場によるスイッチングの確認,さらにパルス振幅に対するスイッチング確率の明瞭な変化を実験的に確認することに成功した.この成果を詳細に解析することにより,サブナノ秒領域での反転核生成の物理的メカニズムの解明を進めている.今後,更にパルス長などに対する依存性を詳細に検討していく予定である.また,高速Hall効果計測系の構築も同時に進めており,ギガHz帯での信号伝送系,高周波アンプ等についての検討を行っている.それらの検討結果をもとに,単一ナノ磁性体の反転ダイナミクスの高感度リアルタイム計測の基礎技術を構築する.最終的には,ここまで進めてきたパルス発生系と融合させることにより,ナノ秒パルス磁場に対するリアルタイム計測を実現し,更に種々の磁化反転モードおよび各種材料について検討する準備を進めている.ハードディスク等をはじめとする次世代の超高密度磁気記録媒体の実現には,ナノ磁性体のダイナミクス挙動の解明が不可欠である.そのため,本研究では単一ナノ磁性粒子の超高速ならびに高感度なリアルタイム磁気計測技術の開発および,超高遠かつ低磁場反転技術の開発を行うことを目的として研究を行った.昨年度までに,先端微細加工技術と我々が独自開発した高圧パルス発生器を巧みに組み合わせることにより,立上り時間0.4ナノ秒以下かつ磁場振幅が数kOeにも達する大振幅高速パルス磁場印加システムならびに単一磁性粒子の残留磁化状態の超高感度逐次計測システムの構築を行い,それを用いて垂直磁気異方性を有するCo/Pt多層膜の単一ナノ磁性粒子を用いた磁化反転実験を進めてきた.本年度では,このシステムを用いて,ナノ秒オーダーのパルス磁場によるスイッチング実験を様々なパルス条件下で行った.まず,大振幅ナノ秒パルスのみによる完全なスイッチングが行えることを確認し,更にパルス幅を変化させることにより,ナノ磁性体におけるスイッチング過程がナノ秒スケールで変化することを明らかにした.その後の詳細な解析により,スイッチング時における初期核形成とその後に続く磁壁伝搬の過程が異なる時間スケールで進行していることを実験的に明らかにした.本成果は将来の超高密度磁気記録だけでなく,スピントロニクス素子などにおける高速スイッチングの基礎となる重要な結果と判断している。
出芽酵母のearly , lateゴルジ槽と細胞質膜へ膜蛋白質が局在化される機構

出芽酵母のearly, lateゴルジ体層と細胞質膜へ膜蛋白質が局在化される機構を明らかとするために,N糖鎖,O糖鎖の付加を担う糖転移酵素に代表されるゴルジ体に局在するII型膜蛋白質を対象として解析を行った.今まで解析を行っていなかったマンノース転移酵素Mnt2, Mnt3にタグを付加して,ゴルジ体槽間の分布や,結合する可能性のある蛋白質の探索を行った.その結果,Mnt2, Mnt3のERからの搬出をSvp26が促進することを見出した.また多くの蛋白質のERからの搬出を促進するErv14が,Erv25のゴルジ体からERへの逆行輸送に関与している可能性があることを見出した.出芽酵母のearly , lateゴルジ槽と細胞質膜へ膜蛋白質が局在化される機構を明らかとするために,本研究ではゴルジ体に局在するII型の膜蛋白質であり,N糖鎖,O糖鎖付加に関わるマンノース転移酵素を対象として実験を行っている.それらの局在化機構に関して可能な限り網羅的に調べるために,本年度はまず今までにタグの付加による観察をしていなかったマンノース転移酵素残りの二種類にもタグを付加し,顕微鏡による細胞内の局在の解析や,当研究室で開発した免疫学的な手法によりゴルジ体early槽,late槽を単離するサブコンパートメント方により,ゴルジ体における分布を定量的に解析した.予想通り,それらがゴルジ体early槽により多く局在していることを見出した.また当研究室で取得した,ERからの候補搬出アダプター膜蛋白質をコードする遺伝子の多重遺伝子欠損株を活用することにより,それらのマンノース転移酵素のERからの搬出に関わる蛋白質を探索した.現在候補蛋白質の解析を行っている.またサブコンパートメント方のさらなる改良を目的とし,より簡便に,より定量的にゴルジ体のearly, late間の分布を検出できるよう,免疫沈降に用いるビーズの選択など,系の調整を行った.また細胞質膜に向かうII型膜蛋白質に関して,ゴルジ体に局在する同じトポロジーを持った蛋白質や,GFP蛋白質とのキメラを発現し,どの領域,また必要なアミノ酸配列がlate Golgi体から細胞質膜に関わるのか,またその過程に関与する細胞の因子を探索するための材料の調製に着手した.最初の年度の計画にほぼ沿った形で進めることができ,次年度以降の研究に必要なサブコンパートメント精製系の開発,調整を行うことができた.また必要な酵母菌株やプラスミドなどの試薬の準備を行い,それらを用いた解析に着手した.出芽酵母のearly , lateゴルジ槽と細胞質膜へ膜蛋白質が局在化される機構を明らかとするために,本研究ではゴルジ体に局在するII型の膜蛋白質であり,N糖鎖,O糖鎖付加に関わるマンノース転移酵素や,細胞質膜で機能する膜貫通型蛋白質を対象として実験を行っている.それらの局在化機構に関して可能な限り網羅的に調べるために,今までにタグの付加による観察をしていなかったマンノース転移酵素Mnt2, Mnt3にタグを付加し,当研究室で開発した免疫学的な手法によりゴルジ体early槽,late槽を単離するサブコンパートメント方や,共免疫沈降法により,ゴルジ体における分布や,結合する可能性のある蛋白質の探索を行った.その結果,Mnt2-3HAとMnt3-3HA共にearly Golgiに約7割、late Golgiに約3割存在することが明らかとなった.またそれぞれのマンノース転移酵素と共免疫沈降する蛋白質として,Mnt2について,113 kDa、98 kDa、76 kDaの三つの蛋白質,Mnt3については127 kDa、111 kDa、90 kDa、87 kDaの四つの蛋白質を検出した.現在質量分析により,それらの蛋白質の同定を試みている.ERからの候補搬出アダプター膜蛋白質をコードする遺伝子の多重遺伝子欠損株を活用することにより,細胞質膜のGas1のER搬出を担うErv25の局在化機構に関する新たな知見を得た.引き続き詳細な機構の解明を目指した解析を進めている.また細胞質膜に向かうII型膜蛋白質に関して,ゴルジ体に局在する同じトポロジーを持った蛋白質や,GFP蛋白質とのキメラを発現し,どの領域,アミノ酸配列がlate Golgi体から細胞質膜への特異的な輸送に関わるのか,またその過程に関与する細胞の因子を探索を開始した.計画にほぼ沿った形で進めることができ,次年度の研究に必要な酵母菌株やプラスミドなどの試薬の準備を行い,それらを用いた解析に着手した.また結合蛋白質探索のための共免疫沈降実験の系をさらに改良し,より特異的な結合の同定が可能になった.それにより,Mnt2, Mnt3と相互作用する可能性のある蛋白質の検出も行った.II型の膜貫通型のマンノース転移酵素であるMnt2, Mnt3のゴルジ体局在の機構は不明である.ERからの搬出アダプターの候補遺伝子の多重破壊株の解析より,それら破壊した遺伝子の中にMnt2, Mnt3のERからの搬出を促進する分子が含まれることを推測させる知見を前年度までに得ていた.その知見を元にアダプターの検索を再度詳細に行ったところ,他の複数のマンノース転移酵素のERからの搬出アダプターであるSvp26がMnt2, Mnt3の搬出を促進している可能性を示唆するデータを得た.具体的には,まずショ糖密度

勾配遠心により,Mnt2, Mnt3はsvp26遺伝子欠損株においてゴルジ体画分から,ER画分へシフトすることを見出した.HAタグでは,不明な理由により関節蛍光体法による局在の変化が検出されなかったため,sGFP2との融合タンパクを発現したところ,低コピーベクターで発現した場合も,多コピーベクターで発現した場合でもsvp26遺伝子欠損株においてMnt2, Mnt3はリング状のER局在を示した.またCOPIIbudding assayを行い,Mnt2とMnt3のCOPII小胞への積み込み効率を比較した.野生株とsvp26欠損株のER膜の間で,コントロールとなるカーゴの積み込み効率が全く影響を受けなかったのに対して,Mnt2, Mnt3の積み込み効率はsvp26欠損株から取得した膜を使った系で顕著に低下していた.共免疫沈降実験を行ったところ,ER搬出がSvp26非依存であるMnn1との共免疫沈降が全く見られない条件下において,Mnt2, Mnt3はSvp26と再現性良く共免疫沈降した.これらの結果により,Svp26が,Mnt2, Mnt3のERからの搬出のアダプターであることが強く示唆された.出芽酵母のearly, lateゴルジ体層と細胞質膜へ膜蛋白質が局在化される機構を明らかとするために,N糖鎖,O糖鎖の付加を担う糖転移酵素に代表されるゴルジ体に局在するII型膜蛋白質を対象として解析を行った.今まで解析を行っていなかったマンノース転移酵素Mnt2, Mnt3にタグを付加して,ゴルジ体槽間の分布や,結合する可能性のある蛋白質の探索を行った.その結果,Mnt2, Mnt3のERからの搬出をSvp26が促進することを見出した.また多くの蛋白質のERからの搬出を促進するErv14が,Erv25のゴルジ体からERへの逆行輸送に関与している可能性があることを見出した.出芽酵母のマンノース転移酵素のearly, lateゴルジ槽への局在をサブコンパートメント方により,定量化し,各槽への特異的な局在に必要な領域や蛋白質を探索する.またlateゴルジ層から細胞質膜への輸送に必要な蛋白質を探索する.Mnt2, Mnt3と共免疫沈降する蛋白質の同定を行う.昨年度に見出した,Erv25のER-Golgi体局在化機構の詳細を明らかにする.細胞質膜へ向かう蛋白質に関しても相互作用する蛋白質の探索や,局在に関与する領域の同定を行う.微生物学
強相関液晶が構築するナノらせん構造体の光制御

近年,高度情報化社会の成熟とともに,広い波長領域で高速に光信号を変調・分波・分配できるフォトニクス材料の開発が望まれている。液晶が構築するナノらせん構造体は,光と強く相互作用することから,光材料としての高い資質を有する。本研究では,キラル分子中に光応答部位ならびに液晶形成部位を導入し,光によってキラル分子と液晶分子間の相関強度を変えることで,液晶が示すナノらせん構造の変化を誘起し,可視から赤外までの広い領域の光に対する透過・散乱などの光学物性を高速・高効率に制御できる材料の構築を目的とした。キラル部位として炭酸環状エステル,光応答部位としてアゾベンゼンを分子内に有する種々の化合物を合成したところ,有機溶媒に対してゲル化能を有する化合物を見いだした。原子間力顕微鏡で観察した結果,繊維状の三次元ネットワークが形成されていることがわかった。ラセミ体あるいは非液晶化合物ではゲル化能を示さないことから,双極子-双極子相互作用やキラル部位に基づく分子間相互作用がゲル化に大きな影響を及ぼすと考えている。これまでに水素結合やコレステロール部位を利用しない低分子物理ゲル化剤は報告されておらず,極めて珍しい例である。また,このゲルに光照射したところ,強い散乱を示すゲル状態から透明なゾル状態へ変化を起こすことが明らかとなった。光によって光の透過・散乱を制御できることから新しいフォトニクス材料への展開が期待できる。
SLPIによるアディポカインの制御機構の解明

蛋白分解酵素阻害物質SLPIは、アディポカインを抑制していることが明らかとなったが、マウスの実験系において、脂質糖代謝系への影響は明らかではなく、その生理的意義は不明であった。一方、肺の上皮細胞株においては、SLPIは増殖能を高めているが、浸潤・遊走能への影響は明らかではなく、蛋自分解酵素阻害作用以外の肺上皮細胞への作用の存在が示唆された。SLPI(secretory leukoprotease inhibitor)は、気管分泌液中のエラスターゼインヒビターの主要成分の一つである。SLPIは炎症が過剰に広がり、肺自体を破壊しないように、トリプシン、キモトリプシン、カテプシンGなど蛋白分解酵素の活性を阻害し、炎症をコントロールする役割を担っている。当教室で作成されたSLPIノックアウトマウスは、エンドトキシンショックに対して感受性が高いことを、われわれはこれまで報告しており、通常の飼育環境においても細菌感染も発生しやすいことが明らかとなった。細菌感染が慢性的に存在することより、SLPIノックアウトマウス肺のホモジェネイトと野生型C57B1/6マウスの肺ホモジェネイトを比較すると、SLPIノックアウトマウス肺において転写因子NfkBが活性化しており、核内移行した量が多いことが明らかとなった。以上より恒常的に炎症の状態となっていることが明らかとなり、この傾向は肺以外の臓器にもあると考えられ、それが以下に述べる血糖値の変化と関連している可能性が示唆される。また、生後8ケ月のマウスSLPI-KOと野生型の血清中の16時間絶食後の空腹時血糖を測定すると、SLPI-KOの方が高い血糖値を示すことが明らかとなった。一方コレステロール値や中性脂肪はSLPI-KOの雌で低値を示す傾向があることが明らかとなった。雄に関しては、そのような傾向は認められなかった。マウスの飼育条件を変更してさらに解析をすすめる方針である。SLPIは炎症が過剰に広がり、肺自体の破壊を防ぐため、蛋白分解酵素の活性を阻害し、炎症をコントロールする役割を担っている。当教室で作成されたSLPIノックアウトマウスは、エンドトキシンショックに対して感受性が高く、ストレスに弱いと考えられている。生後8ヶ月のマウスSLPI-KOと野生型の血清中の16時間絶食後の空腹時血糖を測定すると、SLPI-KOの方が高い血糖値を示す傾向が明らかとなった。これらのマウスの肝組織をホルマリン固定後、Hematoxilin-Eosin染色で構造を確認したが、差は認められなかった。In vitroの実験系の樹立のため、肺胞上皮細胞のモデル細胞株として用いられるA549にレトロウィルスベクターを用い、SLPIを強制発現させる細胞株A549-SLPIを樹立した。本細胞株の細胞増殖能は野生型と比較して増加傾向を認めた。遊走能について検討するため、scratch assayを施行したが、差は認められなかった。また、insuhnやinsulin-like growth factor receptor(IGFR)によるsignalが細胞老化(cellsenescence)を誘導することが知られており、A549にBleolnycin刺激を加えcell senescenceを誘導し、ヒトリコンビナントSLPIを添加することでのsenescence associatedbeta-galactosidaseの活性を観察したが、差を認めなかった。SLPIの肺胞細胞に対する影響については更に検討する必要がある。
宇宙の進化における位相的欠陥の役割

これまで行われてきたコスミックストリングの研究のほぼ全て、テンションは時間に依らないと仮定されてきた。しかしながら、振動する場との結合がある場合やブレインワールドモデルにおいては、一般にテンションは時間依存性を持つ。この新しいクラスのストリングに初めて着目し、宇宙における進化や構造形成への影響を議論した。また、超紐理論に基づいて提案されている宇宙に収縮時期があったとするシナリオにおいて、これまでの常識を覆し、コスミックストリングが最新の観測によって示唆されている密度揺らぎの性質を説明できる可能性があることを示した。WMAP衛星による宇宙背景放射の非等方性の観測により、インフレーション宇宙論がほぼ確かめられました。次のステップは、どのインフレーションモデルが実際に起きたのかを決定することです。そのヒントとなりうる観測結果が示唆されました。原始密度揺らぎのスペクトル指数が、大きなスケールから小さなスケールになるにつれて一を跨いで急速に小さくなることです。このような密度揺らぎの性質を説明することは一般に極めて難しいです。私は、超重力理論での(スムーズ)ハイブリッドインフレーションが自然にそのようなスペクトルを説明出来ることを示し、生成される密度揺らぎを数値計算により正確に求めました。また、この際に起きる共鳴現象のために、あるスケールの揺らぎが増幅され原始ブラックホールが形成されうることを示しました。これまで行われてきたコスミックストリングの研究のほぼ全てで、テンションは時間に依らないと仮定されてきました。しかしながら、振動する場との結合がある場合やブレインワールドモデルにおいては、一般にテンションは時間依存性を持ちます。この新しいクラスのストリングに初めて着目し、宇宙における進化や構造形成への影響を議論しました。まず、テンションに時間変化がないときと同じように、系がスケーリング則に落ち着く事を解析的に示しました。また、宇宙背景放射の非等方性の観測や大規模構造の観測から、これらのテンションに対する制限を与えました。次に、ニュートリノの質量やウォームダークマター(WDM)の質量に対する考察を行いました。ニュートリノやWDMの質量の絶対値については、それらのfreestreamingによる宇宙の大規模構造への影響を考察することにより一番厳しい上限が得られます。しかしながら、これらの制限は、初期の密度揺らぎとしてインフレーションから作られたものだけを考えることにより得られておりますが、ストリングから作られる揺らぎを考慮することにより、制限が緩和される可能性があります。私は、解析的・数値的両方の手法により、ニュートリノの質:量に対する制限はほぼ変わらない一方、WDMの質量に対する制限は大きく緩和されうることを示しました。暗黒物質の存在量とバリオンの存在量はわすか数倍の違いしかなく、二つ量の間には何らかの関係があることが期待されます。標準模型を超対称化した際に現れる"平らな"方向と、その際に出来るQボールと呼ばれる非位相的ソリトンを使う事により、この二つの量の間に自然に関係をつけることが出来ます。一方、暗黒物質には何種類かの候補がありますが、宇宙の大規模構造の比較的小さい構造まで見ると、ある程度の速次分散を持ったものが観測と良く合うことが知られています。そのような候補はあまりないのですが、Qボール起源のaxinoと呼ばれる粒子がそのような観測結果を説明することが出来る有力候補であることを示しました。また、バリオン数の非対称性は、レプトン数の非対称性があれば、スファレロン効果によりレプトン数の非対称性をバリオン数の非対称性に転換することが出来、説明することが出来ます。右巻きのニュートリノがマヨラナ型の質量を、つているとレプトン数が保存せず、その崩壊によりレプトン数の非対称性を作ることが出来ます。ブレーンワールドのシナリオでは、プランクスケールブレーンではレプトン数を破る相互作用が一般に大きいですが、我々の住むテブスケールブレーンでは、ワープ因子のためにレプトン数を破る相互作用は小さくなり、一般には十分なレプトン数の非対称性を作ることは難しいと考えられます。しかしながら、そのような相互イ用は、カルツァクラインモードに小さな質量の分離を起こすために、生成されるレプトン数の非対称を増大させることが可能です。我々は、観測されているバリオン数を説明できるくらい十分大きなレプトン数をこのシナリオで説明することが出来ることを示しました。超紐理論の低エネルギー有効理論である超重力理論における二次型のカオティックインフレーション理論において、その再加熱機構を提案し同時にバリオン非対称性も説明できることを示した。また、超紐理論に良く現れる重力と非最小結合しているスカラー場におけるインフレーションについて議論を行なった。特に、Jordan frameとEinstein frameにおけるslow-roll条件、rapid-roll条件及び密度揺らぎの性質について一般的な対応をつけた。さらに、この対応関係を多成分のスカラー場またはリッチスカラーの高次項によりインフレーションが引き起こされる場合に拡張した。

次に、超紐理論に存在するモジュラスと呼ばれる場がインフレーションを起こす場の崩壊率を決定し、その揺らぎによって原始密度揺らぎを説明するシナリオの非ガウス性について、最新の観測に照らし合わせて予言を行なった。また、超紐理論に基づいて提案されている宇宙に収縮時期があったとするシナリオにおいて、これまでの常識を覆し、宇宙紐と呼ばれるものが最新の観測によって示唆されている密度揺らぎの性質を説明できる可能性があることを示した。最後に、等曲率揺らぎの性質について、最新のWMAP衛星による観測結果を用い、非ガウス性、特に三点相関関数およびミンコウスキー関数から、断熱揺らぎに対してどのくらいの割合まで許されるかについて制限を与えた。
創造的活動によるスキーマの発達と映像視聴に関する実験研究

映像の分類方法として、ある対象物を鍵(キュー)としてその対象物があるかないかという共通点を探し出す方法(共通点分類)と、いくつかの映像から受け取る印象を総合的にまとめる方法(意味分類)があることが今回の実験でも確認できた。特に、今回キューとなった対象物は映像の中で占める割合が大きい、もしくは色、画面上の動きなどの点で主要なものと判断され、各被験者とも共通点分類を行った。実験後のインタビューにより、スキーマと大きく関連していると思われる意味分類は創造的活動によるものというよりはむしろ広い意味での文化や背景知識によるものではないかと考えられた。例えば、ドイツに滞在していたある被験者は、音楽ではなくライン川の映像より「ブラームス」で意味分類を行ったり、町中の人通りのある映像よりドイツでの風習から「ビール」で意味分類を行ったりしている。また、アメリカに滞在していた別の被験者は同じく町中の人通りのある映像を「street」として意味分類を行っている。海外だけではなく、日本史、仏像に精通し、接触する機会の多い被験者は民芸品や噴水の彫像も「像」として意味分類を行っている。しかし、映像には画像のほかにクラシック音楽と、一部民族音楽が流れていたが、音楽に深く造詣があり、自身でも楽器演奏などの経験をかなり持つ被験者の「音楽なら分けられるのに」という発言があったにもかかわらず、音楽では分類しないという結果となった。これは前回までの結果と同じであり、音楽の背景知識は一部だけでは存在しないのか、追求する必要がある。今後、アイカメラなど分析的手法を使い研究の一般化を追究するとともに、衛星放送を利用する、留学生を被験者にするなど、文化や背景知識によるスキーマと映像視聴の関連を明らかにしていきたい。
高等教育機関における障害学生の修学支援に対する包括的エビデンスの構築

本研究は、高等教育機関における障害学生支援の現状についての包括的エビデンスを構築することにある。1)障害学生、2)障害学生支援担当者、3)障害学生を支援するサポーター学生の3者に対して2度に渡り調査を実施した。その結果、障害学生支援担当者については雇用環境の悪さ、専門性の低さ、経験不足が示唆された。障害学生については、幸福感や対人満足度、自尊心など心理的適応指標については障害のない学生と差異は示されなかったが、一方で日常生活上の行動に社会的制約が多く、半数が大学生活でなんらかの困りごとを抱え、その半数が未解決であった。修学支援だけでなく、障害学生の学生生活環境の改善も必要であることが示された。高等教育機関において障害学生に対する持続可能な修学支援体制の維持や、一般化可能な質の高い支援方法論の発見に資するエビデンス構築のため、全国の障害学生支援現場対象の調査を実施する。具体的には、1)大学の障害学生支援組織体制、2)障害学生支援担当者の意識や取り組み、3)障害学生支援ボランティア学生の意識や動機付け、4)支援利用学生の意識と一般学生の障害学生に対する意識などを、web上に設置したアンケートと構造化面接形式のインタビューにより収集し、かつそれらの関連を検討する。大学によって障害学生支援体制(例、予算規模、支援に携わる教職員の有無や数など)、は多様である。他にも組織体系の違いや全学的な教員によって構成される委員会の有無なども挙げられる。こうした障害学生支援における大学環境要因をアンケートおよびアーカイブデータにより収集、統制した後、障害学生支援担当者の取り組みや意識が、障害学生支援ボランティアの学生の支援動機付けやコミットメントレベルや、障害学生の満足度、主体性やエンパワメントレベルなどに与える影響を検討する。また、支援ボランティア学生の確保や養成、彼らの支援に対する動機付けの維持は、持続可能な障害学生支援を実施するために必要不可欠である。そこで、ボランティア学生の支援動機や支援技術を保持するための各大学の取り組みを明らかにし、その支援ボランティア学生および障害のある学生への効果等も検討する。初年度は、第一回調査2015年度末に実施する予定であったが、調査項目の選定等に予定以上に時間を要してしまい、調査を2016年6月に実施時期を変更した。その準備は既に完了している。現在までに、名古屋大学、京都大学、大阪大学の障害学生支援に係わる研究者に加えて新たに東京大学バリアフリー支援室の教員2名が研究協力者としてプロジェクトに参画した。アンケート調査項目の選定(1高等教育機関の障害学生支援担当者用、2障害学生支援活動を展開している登録学生サポーター用、そして3障害のある学生用)、アンケートのウェブ上への設置、調査に関する依頼状等の作成・封入など大規模調査に関する準備は完了し、いつでも調査開始ができる状況にある。研究倫理審査の結果を待っている状況であるので、審査結果通知後、6月中に第一回調査を実施する予定である。日本は、国連の障害者のための権利条約を批准し、障害者に関する法律を改正、新たに施行するなど、障害者の社会的参画推進に舵をきった。教育においても同様であり、近年高等教育機関において障害学生数が増加し続けている。障害者差別解消法により、一部高等教育機関において合理的配慮の不提供が禁止され(私学は努力義務)、障害のある学生に対して適切な合理的配慮が提供できるかどうかは重要な課題となっている。しかし、その実態を把握するエビデンスは極端に少ないのが現状である。そこで、本研究では、大規模な実態調査を実施することで、それらの包括的エビデンスの構築を試みるものである。第1回目の調査では、高等教育機関における障害学生支援担当者約700名から、障害学生支援を行っている学生サポーター300名以上から、そして障害のある学生約200名から回答が得られている。これらの調査により、JASSOによる障害のある学生の修学支援に関する実態調査にはない全く新しいデータの収集ができた。解析はまだこれからであるが、支援担当者は、人的資源、支援機器などの整備状況、情報発信、支援担当部署の物理的スペース等において不十分と考えていることなどが示されている。特に人的資源の枯渇が浮き彫りになっており、大学の規模や体力によって、障害学生支援の格差が露呈した結果である。こういった高等教育機関における障害学生支援に関するエビデンス構築の試みは、障害者の取り巻かれている環境改善に資するものである。研究代表者に次いで、研究のマネジメントを担う研究分担者に兼任業務が新たに発生したこと、当初予定よりも研究倫理審査に時間を要してしまったこと、それに伴い年1回の調査タイミングの再考をする必要に迫られたため、調査が遅れていた。しかし、今年度は体制も改善され、順調に研究が進行すると思われる。高等教育機関において、障害学生の修学支援についてのエビデンスが少ない現状を鑑み、障害者差別解消法施行後2回に渡り、高等教育機関の障害学生支援担当者に対して悉皆調査を行い、かつ支援サポーター学生、障害学生に対しても調査を実施した。その結果、支援担当者の専門性が必ずしも高くない可能性が示された。5割相当の支援担当者が、事務職と嘱託職員に該当し、専門職は常勤や非常勤を入れても2割に満たないことが示され、また教員籍も3割に満たないことが示されている。また、障害学生支援担当者の足場の悪さが示唆された。契約年数のある支援担当者が多く、契約期間が3年以内の支援担当者が5割以上であり、1年以内の契約期間の者が3割近くもいた。

そして、これまでの障害学生の修学支援経験の有無および所属担当部署が適切にそれら修学支援を提供できるかどうか尋ねたところ、生活介助、インターンシップ先の開拓・連携、就職先の開拓、就職活動支援、医療機器、薬剤の保管等、ビデオ教材字幕付・文字起こし、点訳・墨訳、リーディングサービス、手話通訳については、支援提供に自信がないと答える支援担当者が多いことが示された。高等教育機関では障害学生支援体制整備が進められているが、未だ改善の余地がある。また、障害学生に対する調査においては、障害学生と障害のない学生で、幸福感や自尊心、精神的健康等を比較した結果では両者に差が示されなかったが、障害を理由とした学内での困りごとについての自由記述回答を確認したところ、通常の修学に関する合理的配慮の枠組みでだけでは解決できない困りごとが示され、困りごとの約4割は未解決だった。修学上の合理的配慮だけではなく、学生生活全般について支援が必要な可能性が示唆された。幸福感や自尊心、精神的健康等に障害学生とない学生で差異が示されなかったが、セレクションバイアスの可能性もあり今後さらなる検証が必要である。本研究は、高等教育機関における障害学生支援の現状についての包括的エビデンスを構築することにある。1)障害学生、2)障害学生支援担当者、3)障害学生を支援するサポーター学生の3者に対して2度に渡り調査を実施した。その結果、障害学生支援担当者については雇用環境の悪さ、専門性の低さ、経験不足が示唆された。障害学生については、幸福感や対人満足度、自尊心など心理的適応指標については障害のない学生と差異は示されなかったが、一方で日常生活上の行動に社会的制約が多く、半数が大学生活でなんらかの困りごとを抱え、その半数が未解決であった。修学支援だけでなく、障害学生の学生生活環境の改善も必要であることが示された。現在、アンケート調査項目の選定、アンケートのウェブ上への設置、調査に関する依頼状等の作成など大規模調査に関する準備は完了している。研究倫理審査の結果を待っている状況であるので、審査結果通知後、6月中に第一回調査を実施する予定である。その後、第一回調査データの解析を行うと同時に、第二回目調査のため、調査項目の一部変更を行う。第二回目調査は2016年度末に実施する予定である。また、第一回目調査において、インタビュー調査に協力の意思を表明した障害のある学生への構造化面接項目の選定を行い、適宜インタビューを実施していく。なお年度末には、得られたデータを元に、論文執筆や学会発表等といった得られた知見に関する情報発信の準備を行う。今年度は、前年度に実施した大規模調査の解析を進めると同時に、第二回目調査の調査内容を決定する。第二回目調査のためのインフラ、ノウハウはできあがっており、予定通り、今年度後半での調査実施となる。教育経営学Qualtricsと呼ばれるweb上アンケート設置ソフトウェアの2年間契約料を計上していたが、調査実施の遅れによりその契約料が1年間分の契約で済んだためである。しかし、実施予定の大規模調査回数2回に関しての変更はない。
ヒトrDNAのDNA複製様式の解析によるゲノム不安定性原因メカニズムの解明

ヒトゲノム中に数百コピー存在するリボソームRNA(rRNA)遺伝子(rDNA)には、複数種類の「DNA複製阻害配列・領域」が存在する。また、ヒトのガン組織や細胞では実際にrDNAの不安定性が観察されており、DNA複製とゲノム不安定性の関係性は興味深い。rDNAに存在する「DNA複製阻害配列・領域」のゲノム不安定性への影響を調べるために、これらの配列をヒト細胞内でDNA複製可能なプラスミド上にクローニングし、増殖中の細胞内でプラスミドの維持率を解析するアッセイを行った。先ず、rRNAコーディング領域の下流に存在するReplication fork barrier (RFB)の配列についてアッセイを行ったところ、DNA二次元電気泳動法でDNA複製の進行阻害は観察されるものの、プラスミドの維持率はコントロールプラスミドと同程度であった。このことはRFBで起こるDNA複製進行阻害は不安定性に直結する訳ではないことを示唆している。次にrRNAのプロモーター領域を含む上流配列をプラスミド上にクローニングしてアッセイを行ったところ、rRNAの転写がDNA複製と同じ方向で起こる場合にはプラスミド維持率はコントロールプラスミドと同程度であったが、転写とDNA複製が向かい合う方向から起こる場合には細胞内のプラスミドの複製が低下していた。またのこの低下は、転写の活性に依存していた。従って、rRNA転写とDNA複製との正面衝突は、複製を阻害して不安定性の原因になることを示唆している。本年度はAlternative lengtheningof telomere経路を獲得してテロメラーゼ非依存的にテロメアを伸長する細胞であるALT細胞についてrDNAにおけるゲノム不安定性を検証する実験を行った。Pierceらに確立されたパルスフィールドゲル電気泳動(PFGE)を用いたrDNAリピート長の検出方法(Gene Cluster Instability: GCI assay)では、1Mb以下の長さを持つrDNAリピートでは、不安定性が典型的なラダー状に検出される。この方法を用いて、ALT細胞株(U2OS, SaOS, SUSM1, VA13)とnon-ALT細胞株(HeLa, HCT116, HEL293, RPE1)のrDNAリピート長を解析し、rDNAの不安定性を比較した。その結果、ALT細胞株ではバルクの細胞集団において、non-ALT細胞株には見られないrDNAの不安定性を示すラダーパターンが見られたが、1細胞に由来するクローン細胞間ではrDNAクラスター長はnon-ALT細胞と同程度に均一であり、優位な不安定性は観察されなかった。この結果は、ALT細胞株では進行中のrDNA不安定性は起こっていないことを示唆している。しかしバルクの細胞集団ではrDNAクラスター長のheterogeneityが見られたことから、細胞株が樹立し増殖する過程に置いてrDNAの不安定性が誘導された可能性が考えられる。また、DNA複製阻害配列・領域のゲノム不安定性への影響を調べるために、rDNA内の配列をヒト細胞内でDNA複製可能なプラスミド上にクローニングし、増殖中の細胞内でプラスミドの安定性を解析するアッセイを構築した。ガン細胞などで見られるrDNAクラスターの不安定性を、ALT細胞株をモデルとしてDNA複製との関係を調べる予定であった。しかしALT細胞株では、バルク集団でrDNAクラスター長のheterogeneityが観察されるものの、進行中のゲノム不安定性はrDNAでは検出されなかった。したがって、rDNA不安定性とDNA複製の関係を明らかにするために、単純にALT細胞株で解析することは出来ない。そのため、アプローチの方法を変更する必要がある。rDNA不安定性とDNA複製との関係を明らかにするために、rDNAに存在するDNA複製阻害配列・領域のDNA複製を解析する。このためにDNA二次元電気泳動法を用いてDNA複製中間体を検出し、複製様式を明らかにする。

また、ヒト細胞中でDNA複製出来るプラスミド上にこの配列をクローニングして、増殖中の細胞内でのプラスミドの安定性を調べることによりゲノム不安定性への影響を解析する。ALT細胞株をモデル細胞としてrDNAの解析を行う予定であったが、変更した。そのため、当初予定していたよりも使用額が少なくなった。また、予定していた学会に参加しなかったため、旅費を使用しなかった。未使用額については、翌年度の実験のための消耗品(細胞培養、DNA解析、抗体等)や学会参加のための費用に使用する。
在宅医療における処方適正化を志向した混合研究

本研究では、在宅医療を行っている複数の施設において、「在宅医療の導入前後で処方がどのように変更されているか」を前後比較研究による量的研究で検証し、在宅医療における処方の問題点を抽出すると共に、「在宅医が在宅医療導入時の処方変更をどのように行い、どのような点に介入の困難さを感じているか」についてインタビュー調査を用いた質的研究により明らかにし、両者の結果を統合して解釈することで、在宅医療における処方適正化の手がかりを検討する本研究では、在宅医療を行っている複数の施設において、「在宅医療の導入前後で処方がどのように変更されているか」を前後比較研究による量的研究で検証し、在宅医療における処方の問題点を抽出すると共に、「在宅医が在宅医療導入時の処方変更をどのように行い、どのような点に介入の困難さを感じているか」についてインタビュー調査を用いた質的研究により明らかにし、両者の結果を統合して解釈することで、在宅医療における処方適正化の手がかりを検討する