hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
分裂するプロトセル：設計原理と力学機構の解明

細胞はDNAにコードされた情報に従って多様な分子を産生し、自らのコピーを生み出し増殖する自己複製システムである。自律的な分裂を行うプロトセルを再構成することは、生命の定義にもせまる重要課題の1つと位置づけられる。ここで意味するプロトセル(Proto-cells)とは、現実の細胞を模倣しながらも、可能な限り単純な仕組みで動作する人工物を意味する概念である。そこで本研究では、10ミクロンサイズの細孔を脂質二重膜でシールし、自律的な遺伝子発現を行うプロトセル-マイクロウェルを作成し、その設計を通じて原始的な細胞の構築原理を探求した。プロトセル-マイクロウェルの区画内には水, DNA,そして必要なタンパク質分子のリボソーム, RNAポリメラーゼ, tRNA, ATP,イオン等が閉じ込められ、遺伝子発現が自律的に行われる無細胞反応系を構成している。区画となる脂質二重膜は平均的には5-6時間の後に破裂することが多いものの、遺伝子発現をdeGFPの蛍光輝度でモニターしたところ反応液に含まれるATP濃度に応じてタンパク質合成が持続することがわかった。この結果は、境界形状や内部の反応液の量を設計しながらも、遺伝子発現の自律的反応を誘導できることを示している。さらに、外液に高分子溶液を加えて浸透圧を調節すること、さらに脂質ミセルを加えることで膜の安定性が高まり、24時間以上も安定的に遺伝子発現を持続することが明らかになった。また、脂質二重膜の増殖を検討するため外部に脂質ミセルを加え、マイクロウェルの上部にゆるやかな流れを与えると、反応液をシーリングする脂質二重膜が増殖し、多数の小胞の形成を誘導する過程が観察された。今後、脂質膜の分裂を制御するためにFtsZなどのタンパク質の合成を誘導することで、自律的に動作するプロトセルの設計原理と力学的メカニズムの解明につながると期待できる。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。そこで本研究では、10ミクロンサイズの細孔を脂質二重膜でシールし、自律的な遺伝子発現を行う「プロトセル-マイクロウェル」の開発を進めることで、細胞の設計原理を力学的に解き明かすことを目的とする。これらの区画内には、水, DNA,そして必要なタンパク質分子のリボソーム, RNAポリメラーゼ, tRNA, ATP,イオン等が閉じ込められ、遺伝子発現が自律的に行われる無細胞反応系を構成している。この内部の遺伝的プログラムに基づき、脂質膜が不安定化し小胞の出芽・分裂を行うプロトセルを構築する。さらに、冥王代における原始細胞の誕生との関連に目を向けると、我々が構築するプロトセル-マイクロウェルは細孔の形状をしており、岩石表面にみられる多数の細孔を想起させる。上記の再構成実験は、原始的な代謝系が細孔内に捕捉され、自律的に動作するプロトセルが誕生する過程を追体験すると期待される。細胞様機能の再構成のみならず、冥王代疑似環境下で細孔から細胞を模したベシクルが自発的に誕生する力学的機構を解明する。本年度は、リン脂質二重膜でシールされたマイクロウェル内でおこる無細胞転写翻訳反応の活性度が、プロトセルの形状やサイズに依存してどのように変化するかを調べることを目的に研究を行った。第1に、プロトセル-マイクロウェルの構築と、その内部に置ける自律的な遺伝子発現の動態計測と解析を進めた。10ミクロンサイズのマイクロウェルを平面脂質二重膜でシールし、無細胞転写翻訳の遺伝子発現を行うマイクロ流体デバイスを作成することに成功した。遺伝子発現の動態の詳細な解析を進めており、論文投稿準備中である。一方で、区画の幾何学的な形状やサイズが異なると、膜表面の性質が遺伝子発現に与える影響も異なると考えられる。そこで第2の研究課題として、セルフリー抽出液を微小な区画に封入し、遺伝子発現に与える影響を解析した。区画のサイズと遺伝子発現量の依存性を解析したところ、プロトセルの体積の増大に対して遺伝子発現量は比例せず、遺伝子発現量は体積に対して非線形に増大していくことが実験から明らかになった。この非線形な依存性は、水滴表面における抑制的な翻訳過程を考慮した数理モデルで説明することができ、プロトセルの区画表面では転写・翻訳とりわけ翻訳過程が抑制的になっていることが考えられる。本研究成果は学術雑誌に投稿され、論文改訂中である。以上のように、細胞サイズの微小な空間に置ける遺伝子発現動態について成果が得られており、当初計画の通りに進展している。

そこで本研究では、10ミクロンサイズの細孔を脂質二重膜でシールし、自律的な遺伝子発現を行うプロトセル-マイクロウェルを作成し、その設計を通じて原始的な細胞の構築原理を探求した。プロトセル-マイクロウェルの区画内には水, DNA,そして必要なタンパク質分子のリボソーム, RNAポリメラーゼ, tRNA, ATP,イオン等が閉じ込められ、遺伝子発現が自律的に行われる無細胞反応系を構成している。区画となる脂質二重膜は平均的には5-6時間の後に破裂することが多いものの、遺伝子発現をdeGFPの蛍光輝度でモニターしたところ反応液に含まれるATP濃度に応じてタンパク質合成が持続することがわかった。この結果は、境界形状や内部の反応液の量を設計しながらも、遺伝子発現の自律的反応を誘導できることを示している。さらに、外液に高分子溶液を加えて浸透圧を調節すること、さらに脂質ミセルを加えることで膜の安定性が高まり、24時間以上も安定的に遺伝子発現を持続することが明らかになった。また、脂質二重膜の増殖を検討するため外部に脂質ミセルを加え、マイクロウェルの上部にゆるやかな流れを与えると、反応液をシーリングする脂質二重膜が増殖し、多数の小胞の形成を誘導する過程が観察された。今後、脂質膜の分裂を制御するためにFtsZなどのタンパク質の合成を誘導することで、自律的に動作するプロトセルの設計原理と力学的メカニズムの解明につながると期待できる。次年度はプロトセル-マイクロウェルにおける脂質膜の機能化と、膜の分裂や増殖を取り入れた力学的な変形について解析を進める。第1に、プロトセル-マイクロウェルにおける脂質小胞の分裂過程の再構成を行う。外部から取り込まれる脂質ミセルの濃度と浸透圧を変えながら、プロトセルの安定化・不安定性の誘起に最適な濃度領域を探索する。次に、プロトセル-マイクロウェルの内部に細胞骨格系の自己組織的形成を誘導し、膜の分裂や形態制御を司る機能制御の構築を進める。バクテリア細胞分裂において収縮力発生に関わるFtsZ、形態制御を司るMreBを無細胞遺伝子発現によりプロトセル内で合成する。現れる細胞骨格構造のパターン形成を蛍光顕微鏡で解析し、脂質膜の変形と力発生・形態変化をタイムラプス計測することで自ら分裂する機能的な人工細胞の構築条件を明らかにする。さらにプロトセル-マイクロウェルでは、脂質二重膜が自発的に変形し、脂質ベシクルが出芽する事象が確率的に起こる。このような脂質ベシクルの自発的形成を効率よく行うために必要とされる物理的要因を探索する。余剰の脂質面積を作り出すミセルの取り込みや、脂質膜のゆらぎを系統的に調査する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
単球のマクロファージへの分化誘導に関わる初期カルシウム信号の解析

単球(monocyte; MO) /マクロファージ(macrophage; MΦ)系は多機能性フアゴサイト(食細胞)であり,炎症刺激を受容体で感受して遊走,接着,食作用,免疫細胞活性化,細胞障害性を発揮する.MOは循環血から組織・器官に浸潤しMΦに分化する.種々の細胞系でカルシウムイオン(Ca^<2+>)は受容体刺激一反応間を仲介する細胞内信号である.本研究ではMO/MΦのATP受容体及びCD14受容体刺激,lipopolysaccharide(LPS;バクテリア外毒素の成分)による炎症刺激に対する初期反応をCa^<2+>濃度( [Ca ^<2+> ]i)上昇でとらえ,さらにMΦ分化過程における反応性の変化を調べた.ヒト末梢血の遠心分離しガラスシャーレへの接着性を利用してMO画分を得,培養系に持ち込んだ.Ca^<2+>結合性蛍光指示薬fur-2を細胞内に取り込ませ,個々の細胞で蛍光強度の変化を画像処理解析装置で記録し,[Ca ^<2+> ]i成果を得た.1) MO/MΦはATP投与P_<2U>とP_<2Y>受容体を介して一過性の[Ca ^<2+>]i上昇を示した.適当な細胞株を低張液処理で破壊した上澄を投与して同様の[Ca ^<2+> ]i反応を得た.培養皿でナチュラルキラー細胞に攻撃され死んでいく腫瘍脂肪の周辺のMO/MΦでCa^<2+>反応が記録された.MO/MΦに貧食されるべき細胞の死を,ATPがメッセンジャーとなってMO/MΦに伝えるという考えを実証した.2)LPSを認識する細胞表面分子とれるCD14は抗CD14抗体で刺激し,約45%の細胞が反復・減衰性のCa ^<2+>増加を示した.CD14は細胞膜にアンカーされており,この分子がCa ^<2+>信号を誘導する機序は興味深い.3)LPSそのものによっては1ng/ml100μg/mlの広範囲濃度でCa ^<2+>増加反応を誘発できなかった.LPSは血漿中の他の分子を介してCD14と結合すると考えられる.4)MΦコロニー刺激因子(M-CSF)投与のより約25%の細胞でCa ^<2+>反応が起こった.MO/MΦをM-CSF存在下培養すると大きなMΦ分化した.培養に日数を追ってCD14刺激に応ずる細胞が90%に増加し,反応のピーク値が増強した.また45%の細胞でLPSに直接反応してCa ^<2+>増加を示した.一方,ATPによるCa ^<2+>反応は減少した.分化が進行する過程でCD14受容体の発現および結合性が増強することが示唆された.単球(monocyte; MO) /マクロファージ(macrophage; MΦ)系は多機能性フアゴサイト(食細胞)であり,炎症刺激を受容体で感受して遊走,接着,食作用,免疫細胞活性化,細胞障害性を発揮する.MOは循環血から組織・器官に浸潤しMΦに分化する.種々の細胞系でカルシウムイオン(Ca^<2+>)は受容体刺激一反応間を仲介する細胞内信号である.本研究ではMO/MΦのATP受容体及びCD14受容体刺激,lipopolysaccharide(LPS;バクテリア外毒素の成分)による炎症刺激に対する初期反応をCa^<2+>濃度( [Ca ^<2+> ]i)上昇でとらえ,さらにMΦ分化過程における反応性の変化を調べた.ヒト末梢血の遠心分離しガラスシャーレへの接着性を利用してMO画分を得,培養系に持ち込んだ.Ca^<2+>結合性蛍光指示薬fur-2を細胞内に取り込ませ,個々の細胞で蛍光強度の変化を画像処理解析装置で記録し,[Ca ^<2+> ]i成果を得た.1) MO/MΦはATP投与P_<2U>とP_<2Y>受容体を介して一過性の[Ca ^<2+>]i上昇を示した.適当な細胞株を低張液処理で破壊した上澄を投与して同様の[Ca ^<2+> ]i反応を得た.培養皿でナチュラルキラー細胞に攻撃され死んでいく腫瘍脂肪の周辺のMO/MΦでCa^<2+>反応が記録された.MO/MΦに貧食されるべき細胞の死を,ATPがメッセンジャーとなってMO/MΦに伝えるという考えを実証した.2)LPSを認識する細胞表面分子とれるCD14は抗CD14抗体で刺激し,約45%の細胞が反復・減衰性のCa ^<2+>増加を示した.CD14は細胞膜にアンカーされており,この分子がCa ^<2+>信号を誘導する機序は興味深い.3)LPSそのものによっては1ng/ml100μg/mlの広範囲濃度でCa ^<2+>増加反応を誘発できなかった.LPSは血漿中の他の分子を介してCD14と結合すると考えられる.4)MΦコロニー刺激因子(M-CSF)投与のより約25%の細胞でCa ^<2+>反応が起こった.MO/MΦをM-CSF存在下培養すると大きなMΦ分化した.培養に日数を追ってCD14刺激に応ずる細胞が90%に増加し,反応のピーク値が増強した.また45%の細胞でLPSに直接反応してCa ^<2+>増加を示した.

一方,ATPによるCa ^<2+>反応は減少した.分化が進行する過程でCD14受容体の発現および結合性が増強することが示唆された.正常ヒト末梢血より得た単核球画分をガラスシャーレで11.5時間培養し、非接着細胞を洗浄して除去した後、CD3マイクロビーズに接着しない細胞を回収して単球画分を得た。これにCa^<2+>蛍光指示薬fura-2をAM体にて負荷し、単球の細胞内Ca^<2+>濃度を測定することができた。また、細胞調整後液体窒素中にて凍結保存したものを解凍して実験に供した場合にも同様のプロトコルでCa^<2+>測定が可能であったし、以下の各操作における細胞内Ca^<2+>増加反応も非凍結細胞と同様であった。1,単球をマクロファージに分化させるマクロファージ刺激因子(M-CSF)の投与によっては急性の細胞内Ca^<2+>増加反応は観察されなかった。2, 0.1100uMのATPの投与によって、著明な一過性(35分)の細胞内Ca^<2+>増加反応が誘発された。各種プリン受容体の阻害剤による抑制効果を検討した結果、このCa^<2+>増加反応はP2Y型プリン受容体の阻害剤で抑制された。3,抗CD14抗体の投与により、一過性の細胞内Ca^<2+>増加反応が誘発された。4,リポポリサッカライド(LPS)を単独で投与した場合には細胞内Ca^<2+>増加反応は誘発されなかった。ヒト血清を投与すると単球はCa^<2+>増加反応を示す。LPSはCa^<2+>増加反応を介することなく単球を活性化しているのか、血清中の補助因子が共存するとCa^<2+>増加反応を誘発するのか、未だ不明である。5,マクロファージ刺激因子によって単球から分化させたマクロファージにおいて、抗CD14抗体の投与による細胞内Ca^<2+>増加反応が増強されることが観察された。単球は炎症刺激を感受して循環血から血管壁を通過して組織・器官に浸潤し,多機能性ファゴサイト(食細胞)であるマクロファージに分化する.マクロファージはさらに炎症刺激を受けて食作用,免疫細胞の活性化,細胞傷害性を発揮する.本研究では,バクテリア外毒素の成分であるリポポリサッカライド(LPS)による炎症刺激に対して単球・マクロファージ系がどのよに反応するかを,細胞内カルシウムイオン濃度([Ca^<2+>]_i)上昇でとらえ,さらに分化過程における反応性の変化をしらべた.ヒト末梢血を遠心分離し,ガラスシャーレへの接着性を利用して単球画分を得,培養系に持ち込んだ.[Ca^<2+>]_iはCa^<2+>結合性蛍光指示薬fura-2を細胞内に取り込ませ,蛍光強度の変化を画像解析装置で記録し,以下の結果を得た.1)単球・マクロファージ系細胞はLPSそのものによってはCa^<2+>増加反応を示さなかった.2) LPSに対する細胞表面認識分子とされるCD14を抗CD14抗体で刺激すると,約45%の細胞が持続数分の一過性のCa^<2+>増加反応を示した.血清や補体の投与でも同様のCa^<2+>増加反応が誘発された.LPSは血漿中の他の分子を介してCD14と結合すると考えられる.3)マクロファージを長期培養するのに必要なマクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)を投与すると,約25%の細胞でCa^<2+>増加反応がおこるが,多くは起こらない.M-CSF存在かで培養すると細胞は大きなマクロファージに分化した.培養日数をおって,CD14に対する刺激に応ずる細胞数が90%に増加し,反応のピーク[Ca^<2+>]_i、値が増強した.また45%の細胞でLPSに直接反応してCa^<2+
癌抑制遺子産物Doc-1による口腔白板症の癌化の予測に関する検討

I.Doc-1タンパク質の発現状況ヒト白板症40例を用いて、Doc-1タンパク質の発現状況について異型上皮を中心に検討した。1.実験方法採取した組織をRIPI buffer中で粉砕し遠心分離する。上世をポリアミドゲルを用いSDS-PAGEを行う。ゲル状のタンパク質をPVDF膜に転写し、アルカリフォスファターゼ検出法によりDoc-1タンパクの有無・減弱の確認を行った。コントロールには抗アクチン抗体を用いた。2)免疫組織化学染色採取した組織を凍結切片にし間接蛍光抗体法に準じて、一次抗体として抗マウスDoc-1ポリクロナール抗体を反応させ、FITCを用いた標識二次抗体で一次抗体を検出した。2.結果・考察・経過観察中に癌化した症例は、実験1,2とも陽性であった。・経過観察中に病変に変化がなかった症例は、実験2のみ陽性であった。・経過観察中に病変内で異形成が進んだ症例は、実験1,2で結果に傾向は認められなかった。以上から、ヒト白板症において初診時あるいは経過観察中の生検でWestern blotting・免疫組織化学染色でDoc-1タンパクが認められた場合は、異形成が進行し癌化する可能性が高いことが示唆された。II.白板症患者の唾液中のサイトカインの変化ヒト白板症32例の全唾液中のIL-6,8を測定し健常者のそれと比較した。1.実験方法ELISA法を用いた。2.結果・考察白板症患者では健常者に比べて有意差をもってIL-8の上昇が認められた。本年度はヒト白板症を用いて、Doc-1タンパク質の発現状態について異型上皮を中心に検討した。採取した組織をRIPI buffer中で粉砕し、遠心分離する。上清をポリアミドゲルを用い、SDS-PAGEを行う。ゲル上のタンパク質をPVDF膜に転写し、アルカリフォスファターゼ検出法により、Doc-1タンパク質の有無を・減弱の確認を行う。2.免疫組織化学染色採取した組織を凍結切片として、切片を間接蛍光抗体法に準じて、一次抗体として抗マウスDoc-1ポリクロナール抗体を反応させFITCを用いた標識二次抗体で一次抗体を検出した。3.結果の検討ヒト白板症(異型上皮)でのDoc-1タンパク質の発現状態について、検討したところ以下の結果を得た。(1)経過観察中に癌化した症例では、実験1,2の結果とも陽性であった。(2)経過観察中に病変に変化がなかった症例は、実験2のみ陽性であった。(3)経過観察中に病変内で癌化まで行かず異形成が進んだ症例は、実験1,2の結果での傾向性は見られなかった。この結果から、白板症においてDoc-1タンパク質の発現状態は予後の予測に有用性があることが示唆された。しかし、その指標となる基準は今年度の結果のみでは言及できず、次年度に症例を増やし検討する。本年はヒト白板症を用いて、Doc-1タンパク質の発現状態について異型上皮を中心に検討した。ゲル状のタンパク質をPVDF膜に転写し、アルカリフォスファターゼ検出法により、Doc-1タンパク質の有無を・減弱の確認を行う。2.免疫組織学染色採取した組織を凍結切片として、切片を間接螢光抗体法に準じて、一次抗体として抗マウスDoc-1ポリクロナール抗体を反応させFITCを用いた標識二次抗体で一次抗体を検出した。

(2)経過観察中に病変に変化の無かった症例は、実験2のみ陽性であった。(3)経過観察中に病変内で癌化まで行かず異形成が進んだ症例は、実験1,2の結果での傾向性は見られなかった。この結果から、白板症においてDoc-1タンパク質の発現状態は予後の予測に有用性があることが示唆された。次年度ではさらに症例数を増やし検討を続けてゆく予定である。今年度はヒト白板症を用いて、Doc-タンパク質の発現状況についてsivire dysplasiaを中心に検討した。採取した組織をRIPI中で粉砕し、遠心分離した。上清をポリアミノゲルを用い、SDS-PAGEを行った。ゲル上のタンパク質をPVDF膜に転写し、アルカリフォスファターゼ検出法により、Doc-1タンパク質の有無・減弱の確認を行った。コントロールには抗アクチン抗体を用いた。2.免疫組織化学染色採取した組織を凍結切片として、切片を関接蛍光抗体法に準じて、一次抗体として抗マウスDoc-1ポリクロナール抗体を反応させFITCを用いた標識二次抗体で一次抗体を検出した。3.結果の検討ヒト白板症(sivire dysplasia)でのDoc-1タンパク質の発現状況について検討したところ、以下の結果を得た。(1)経過観察中に癌化した症例では、実験1,2とも陽性であった。(2)経過観察中に病変に癌化がなかった症例は、実験2のみ陽性であった。(3)経過観察中に病変内で異形成が進展した症例は、実験1,2の結果で特筆すべき傾向は認められなかった。この結果から、口腔白板症においてDoc-1タンパク質の発現状況は癌化の予後の予測に有用性があることが示唆された。
可視光駆動型ハイブリッド触媒の創製とエネルギー・物質変換

ビタミンB12のCo(I)種の新たな利用として、プロトンとの反応により生成するコバルト-ヒドリド錯体に着目し、本錯体を中間体とする光水素発生及びアルケン還元反応を行った。本反応の触媒として、ビタミンB12誘導体と酸化チタンを共有結合で固定化したハイブリッド触媒を合成した。本触媒をEDTA水溶液に懸濁させ紫外線照射することで、水からの水素発生に成功した。また2-フェニルプロペン酸存在下では、C-C二重結合の還元が高効率で進行した。またカテコール基を結合部位とするビタミンB12-TiO2ハイブリッド触媒の開発にも成功し、可視光照射下で、ビタミンB12モデル反応を進行させることにも成功した。当該年度は、可視光に応答するビタミンB12-酸化チタン複合触媒の開発を行った。可視光応答化の原理として、エンジオール化合物と酸化チタンとの界面錯体形成に基づく可視光応答化を試みた。その結果、ジヒドロキシベンゼンを酸化チタン表面に修飾することで、可視光応答化に成功した。実際にビタミンB12のコバルト錯体が本可視光応答型酸化チタンで還元されるかどうかを確認したところ、トリエタノールアミン存在下420nm以上の可視光を照射すると、酸化チタンからの電子移動が起こり、ビタミンB12が還元されCo(I)種が生成することを確認した。そこで本システムを用いてトリクロロメチルベンゼンの脱塩素化反応を行ったところ、脱塩素化反応が効率良く進行し、ジクロロスチルベンが得られた。本反応は暗所下や犠牲還元剤であるトリエタノールアミン不在下では進行しなかった。また照射波長を変化させて本触媒反応を行いアクションスペクトルを作製したところ、本触媒の可視光吸収帯と生成物収率が良い相関関係を示し、界面錯体形成に基づく可視光応答性が作動していることが確認された。さらにより優れた複合触媒を作製するために、ビタミンB12の側鎖にドーパミンを化学修飾することで、末端にジヒドロキシベンゼンを有するビタミンB12誘導体を合成し、酸化チタンと複合化させた。本複合触媒を用いても、可視光応答型の脱塩素化反応を効率良く進行することが明らかとなった。本研究では、可視光を駆動力とするエネルギーおよび物質変換触媒の開発を目的に、天然の金属酵素であるビタミンB12のモデル錯体と酸化チタンを複合化した、ハイブリッド触媒(第一世代)を合成した。さらに酸化チタンに可視光応答性を付与するために、1,2-エンジオール基を有するビタミンB12誘導体を合成し、酸化チタンとの間で界面錯体を形成させ、可視光に応答するビタミンB12-酸化チタン(第二世代)の合成に成功した。前者の第一世代のハイブリッド触媒においては、紫外線照射により酸化チタンが励起され、酸化チタンの伝導体からビタミンB12錯体への電子移動が起こり、ビタミンB12が触媒活性なCo(I)種を生成することを確認し、犠牲電子剤となるエチレンジアミン四酢酸存在下で光照射し続けることで、水素を生成させることに成功した。さらにアルケン共存下では、基質アルケンが還元された生成物が高い効率で生成することを見いだした。第二世代の界面錯体型ハイブリッド触媒においては、可視光照射することで同様にCo(I)種を生成させることに成功し、本性質を利用し、トリクロロメチルベンゼンやDDTなどの有機塩素化合物の脱塩素化反応や、ラジカル中間体を経由した有機合成反応に応用することに成功した。また最終年度には、本触媒の反応機構を明らかにするためにアクションスペクトルを作成し、本可視光応答型触媒が、界面錯形成に由来して出現する電荷移動吸収帯に基づく光吸収により作用することを確認した。またみかけの量子収率を求めたところ、約11%の収率で本光触媒反応が進行することが明らかとなった。以上本研究では、天然金属酵素の活性中心をモデル化した金属錯体と無機化合物である酸化チタンを複合化した触媒を作成し、可視光に応答して作用するクリーンな触媒システムの構築に成功した。当該年度は、水素発生および物質変換反応を触媒するハイブリッド型酸化チタンの作製と機能評価について検討を行った。まず側鎖にトリアルコキシシリル基を有するビタミンB12誘導体を合成し、本錯体を酸化チタンの表面に化学修飾したハイブリッド触媒の作製に成功した。ハイブリッド触媒は、電子顕微鏡観察、元素分析、赤外分光法、拡散反射電子スペクトルおよび質量分析スペクトルにより同定した。本ハイブリッド触媒は、表面ゾルーゲル法でハイブリッド化されているため高い耐久性を保持していた。本触媒を用い、エチレンジアミン4酢酸塩水溶液からの光水素発生を検討したところ、24時間で約100マイクロLの水素の生成が確認された。ビタミンB12錯体あたりの単位時間あたりの触媒回転数は、約1回/1時間であった。暗所

下やビタミンB12を有しない原料酸化チタンを用いた場合では水素発生はほとんど観測されないことから、ビタミンB12と酸化チタンの複合化により本光水素発生反応が進行しているものと言える。また基質としてスチレンなどのアルケン類存在下で光照射反応を行うと、水素発生は完全に抑制され、アルケンの還元および還元二量化反応が進行した。従って、これらの反応の中間体として、コバルト-水素結合を有するコバルト-ヒドリド錯体が生成しているものと推察された。以上当該年度において合成に成功した本ハイブリッド触媒は、水素発生(エネルギー変換)のみならず、基質還元を行う物質変換能も有することを見出した。当該年度の目標であった可視光に応答して触媒作用が発現するビタミンB12-酸化チタン複合触媒の開発に成功し、順調に進展していると言える。当該年度は、触媒反応時に問題であった高い耐久性を有するハイブリッド触媒の作製を第一目標とし、共有結合でビタミンB12誘導体と酸化チタンを連結した複合触媒の作製を行った。当初の目標通り、作製した共有結合型酸化チタンは高い耐久性を有し、広いpH領域でも脱色せず、また触媒反応後も安定に存在していた。また本触媒の反応性を評価するために、紫外線照射下における水素発生能を検討したところ、目的通り水の光還元による水素発生が進行することを確認出来た。本光水素発生が予想通り進行したことを踏まえ、中間体として生成しているコバルト-ヒドリド錯体の還元力を利用したアルケン類の還元反応においても、ねらい通り進行することを見出せた。従って、当該年度の研究の目的における達成度としては、「耐久性の獲得」、「水素発生によるエネルギー変換」、「物質変換反応」を有するハイブリッド触媒の合成に成功したことから、当初の目的を十分に達成した成果と自己評価する。一方では、可視光応答化については今だ未達成であることから、次年度の最優先課題として集約して研究を推進する必要がある。合成した可視光応答型ビタミンB12-酸化チタン複合触媒を用い、脱塩素化反応以外の様々な物質変換反応への適用を検討する。また光反応の量子収率を決定し、反応の効率化の目安とする。さらに本触媒の耐久性の更なる向上を目指し、酸化チタンとビタミンB12の結合様式を再検討する。また可視光応答化の原理として、他の界面錯体形成を利用して、反応の効率化を検討する。作製したハイブリッド触媒を用い、引き続き水素発生反応の条件検討や、アルケン還元反応における基質汎用性について検討を行う。またアルケン類以外にも、アルキン類やイミン類の還元反応等についても検討を行う。またプロキラルな基質アルケンを用いることで、得られた還元体は不斉中心を保持しうるので、不斉還元反応についても検討する。また本ハイブリッド触媒に可視光応答性を保持させるため、各種色素を共固定化したハイブリッド触媒を作製し、温和で省エネルギーな可視光応答型ハイブリッド触媒の開発を行う。また可視光応答化として、ナフトラート類を酸化チタンの表面に修飾した界面錯体型酸化チタンを作製し、その可視光応答性を評価し、引き続きビタミンB12を修飾させ、目的の可視光応答型ビタミンB12-酸化チタンハイブリッド触媒の開発を行う。得られた触媒を用い、可視光照射時における水素発生能やアルケン還元能について評価する。
日常会話における「ほめ」行為の日韓対照研究

平成27年度は、以下の5点の研究成果が得られた。第一に、この1年間の研究成果を論文で報告することを目指し、以下2本の論文を執筆した。一つは、森本郁代先生(関西学院大学)と共同研究として、ほめに対する「そうですか?/そう?」の応答と「否定」の応答を比較するもので、平成28年5月に学会誌に投稿することを目標としている。もう一つ目の論文は、会話分析者である山本真理氏(早稲田大学)と共同研究として、日韓対照研究を行った論文である。今後、共通点と相違点をより明確にし、平成28年7月までには学会誌にて報告を行う予定である。第二に、韓国語と日本語における自然な日常会話の収集および整理を行った。これまでは、主に日本語の日常会話の収録を行っていたので、比較的に韓国語の日常会話は少なかった。そのため、今年度は韓国語母語話者の協力をいただき、12人の日常会話場面約3時間、267人の日常会話場面約7時間、3電話会話約5時間、以上の3点の韓国語日常会話のデータが得られた。これらの会話データはすべて書き起こしを行った。第三に、この1年間の研究成果を、社会言語科学会大会にて研究報告を行い、様々な分野の専門家からコメントを得ることができた。コメントを踏まえた上で、論文執筆を行う予定である。第四に、エスノメソドロジー・会話分析の専門家である山内裕先生(京都大学)と平本毅先生(京都大学)と共同研究を行い、学会誌に研究報告を行った。この論文は組織科学という学会誌に掲載された。第五に、平成26年度に研究報告した「相互行為としてのほめとほめの応答ー聞き手の焦点ずらしの応答に注目してー」の論文が、第15回社会言語科学会徳川宗賢賞萌芽賞を受賞することができた。このことは、本研究の意義が認められた結果であると考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。平成26年度研究実績は以下の三点である。第一に、データの数を増やすためデータ収集を行った。本研究で用いる会話分析は質的分析であるため、データの数が少ないと指摘されている。そこで、データの数を増やして分析の説得力を高めるように、以下のようにデータ収録を計画し実施した。12014年10月から2014年11月にかけて週一回か二回の頻度で、研究室で行なわれる自然会話を収録した。データは、一日5時間程度で6回行ったので、総30時間程度のデータ量が収集できた。他方、2学校内の生協の方々に協力していただき、店頭で店員と学生のやり取りを収録した。このデータは指導教員である森本郁代先生との共同研究として、今後分析を行う予定である。第二に、会話分析の技能を習得することを目標とし、会話分析の最も大きな国際学会であるICCAに参加し、最近の会話分析の動向や情報を得た。また、会話分析図書や論文を読み、会話分析の知識を得た。第三に、この1年間の研究成果を、社会言語科学会誌や関西学院大学紀要などに論文を投稿し研究報告を行った。研究にあたって今年度最も焦点を当てたのは、「ほめ」と「ほめの応答」について明らかにすることであった。1社会言語科学会誌で報告した内容は、ほめの発話の特徴によってほめの応答が「同意」「不同意」のようにそれぞれ異なってくることを明らかにした上で、ほめられた側が自画自賛を回避するため、ポジティブな評価の対象を別の側面にずらして応答するやり方を示した。そして、現在分析を進めているのは、2ほめの発話の直後で「そうですか?」「そう?」などの応答が行われていることに注目し、なぜこのような応答を用いるのかという点である。学会で報告した内容やコメントなどを踏まえた上で、平成27年度は論文を執筆する予定である。

第四に、エスノメソドロジー・会話分析の専門家である山内裕先生(京都大学)と平本毅先生(京都大学)と共同研究を行い、学会誌に研究報告を行った。この論文は組織科学という学会誌に掲載された。第五に、平成26年度に研究報告した「相互行為としてのほめとほめの応答ー聞き手の焦点ずらしの応答に注目してー」の論文が、第15回社会言語科学会徳川宗賢賞萌芽賞を受賞することができた。このことは、本研究の意義が認められた結果であると考えられる。計画以上に進展しているとした理由は以下のとおりである。一点目は、計画以上にデータ収集することができたからである。研究協力者のおかげで自然会話のデータを30時間以上収集することができた。それによって、これまでのほめの研究でまだ不明確であったことが、日常会話を会話分析の手法で分析することによって新たな見解を示すことができると期待できる。二点目は、様々な学会に参加し、現在の研究成果を報告することができたからである。とくに、平成26年度は、査読付きの論文2本が掲載されたが、このことは本研究の意義があるものとして認められたからであると考えられる。そして、学会発表も積極的に参加し、平成26年度は3回発表した。これらの内容や指摘、コメントを踏まえ、平成27年中には学会誌に論文を投稿する予定である。最後に、海外や東京、北海道で開催された会話分析セミナーに積極的に参加し、知識だけではなく、実際の技能を習得できるように努力したからである。とくに、海外の学会などに参加して最近の研究の動向を調査することができたので、そのような意味でも平成26年度は多様な観点から分析を進めるきっかけになった一年だったと思われる。27年度が最終年度であるため、記入しない。本年度の計画は以下のとおりである。第一に、平成26年度に収録したデータを文字化し、分析を進めることである。第二に、韓国語のデータの分析を進め、日本語のデータを比較することである。第三に、海外学会に参加し、最近の研究の動向について調査することである。第四に、韓国の学会や、日本の学会で報告を行うことである。とくに、平成27年度は、日本の学会誌と韓国の学会誌に投稿する予定である。本研究によって「ほめ」という行為がどのような機能を持っているのか、ほめの応答はどのようなものを用いるのかなどが解明されつつある。「ほめ」という行為は相手の気持ちをよくさせ、コミュニケーションを円滑にする働きがあるので、お互いに誤解や摩擦が生じないように、より具体的な様相を明らかにする必要がある。本研究では質的研究である会話分析を採用し、より詳細な検討を行うことによって、韓国人日本語学習者が、自身の母語におけるほめと、日本語母語話者によるほめとの共通点と相違点をより適切に理解し、日本語母語話者と良好な関係を築く一助となると予想される。
全身性エリテマトデスリンパ球に発現される機能亢進VLA-4分子の構造に関する研究

SLE末梢血T細胞に発現されるVLA-4分子の構造SLEで血管炎を合併する症例では、末梢血T細胞上にLFA-1に加えVLA-4分子の発現が亢進していることが明らかとなった。その構造を検索したところ、血管炎合併例では、正常T細胞に発現される140kdのバンド以外に、180kdに移動度を有するα4/180が見いだされた。それは、7例の血管炎合併例中3例に認められたが、SLE以外で血管炎を合併した膠原病ではこのような異常VLA-4分子は見られなかった。VLA-4分子を介した細胞接着機能とシグナル伝達発現亢進、高分子量フォームを有するVLA-4分子の異常が明かとなった血管炎合併SLEにおいて、VLA-4分子の接着機能について検索した。血管炎合併SLE症例の末梢血T細胞は、フィブロネクチン、VCAM-1に対して著明な接着能の亢進を示した。さらに、接着によって、カルシウム流入が認められ、この系を介して細胞内にシグナルが伝達されることが明かとなった。SLE患者末梢血T細胞に発現される機能亢進VLA-4分子からのシグナル伝達インテグリンの発現、機能共に亢進したSLET細胞において、インテグリンからのシグナル伝達に関与する分子について、検討を加えた。インテグリンβ鎖は、リガンドと結合した後、接着斑の形成を惹起して、シグナルを細胞内に伝達する。接着斑を形成する構造蛋白であるタリンの発現を観察すると、正常人に比べ有意にその発現が亢進していた。SLET細胞は、無刺激でもフィブロネクチンと接着するが、この際接着斑が形成され、その部位に一致して強いチロシンリン酸化を認めた。このことから、インテグリン/タリンを介して接着斑が形成され、さらにチロシンリン酸化が引き起こされ、最終的には細胞増殖、細胞分化へとシグナルが伝達されていくものと考えられた。接着斑に局在するチロシンキナーゼFAK125の発現SLET細胞がリガンドと接着する際に、タリンの発現や、チロシンリン酸化が強く惹起されたことから、接着斑に局在するチロシンリン酸化酵素が注目された。繊維芽細胞、血小板では接着斑に局在するチロシンキナーゼとしてFAK125が明らかにされ、脚光を浴びていたことから、SLET細胞においてもその可能性について検討した。興味深いことに、SLET細胞においても、接着斑に一致して強くFAK125が発現され、しかもそれがチロシンリン酸化されていた。SLEリンパ球に発現されるVLA-4分子の構造SLE患者で、血管炎を合併する例では、リンパ球上のVLA-4分子数が増加することが明らかとなった。その構造を検索するため、ビオチンで表面ラベルしたリンパ球ライゼートから、抗VLA-4抗体を用いて免疫沈降し、SDS-PAGEで展開して解析を試みた。

その結果、血管炎合併例では、140kda,80kda,70kdaのVLA-4の鎖のすべてのコンポーネントの濃度が亢進し、VLA-4分子全体の発現が亢進していることが確認された。大変興味深いことに、7例の血管炎合併例中3例に、通常では観察されない180kdaのバンドが認められた。これが、VLA-4の鎖を構成するポリペプチドか否かを明らかにするため、抗VLA-4の鎖モノクローナル抗体でウエスタンブロットを施行したところ、180kdaに一致する所に明瞭なバンドを認め、これが、VLA-4の鎖の高分子量フォームであることが、明らかとなった。VLA-4分子を介した細胞接着機能、シグナル伝達発現亢進、高分子量フォームを有するVLA-4分子の異常が明らかとなった血管炎合併SLEにおいて、VLA-4分子を介した接着機能、シグナル伝達の異常が想定される。そこで、VLA-4の接着リガンドであるフィブロネクチンCS-1ドメインおよび血管内皮に発現されるVCAM-1分子に対する接着能を検討したところ、患者リンパ球は両者に対して著明な接着能の亢進を示した。シグナル伝達に及ぼす影響を、Ca流入の系で観察すると、血管炎合併SLE症例では、VLA-4架橋後、早期にしかも高度のCa流入が惹起されることが示された。SLE患者末梢血T細胞に発現される機能亢進VLA-4分子からのシグナル伝達血管炎合併SLE患者末梢血T細胞にはLFA-1に加えβ1インテグリンのVLA-4分子が強く発現していることを明らかにした。VLA-4のリガンドとしてフィブロネクチンと血管内皮に存在するVCAM-1が明らかにされているが、これらの接着を介して血管の炎症が持続しているものと考えられる。最近、これらの接着分子は単に接着に関与するばかりではなく、接着によって細胞内にシグナルを伝達することが明らかにされている。そこで、インテグリンの発現、機能共に亢進しSLET細胞において、インテグリン空のシグナル伝達に関与する分子について、検討を加えた。インテグリンβ鎖は、リガンドと結合した後、接着斑の形成を惹起して、シグナルを細胞内に伝達する。接着斑を形成する構造蛋白であるタリンの発現を観察すると、正常人に比べ有意にその発現が亢進していた。SLET細胞は、無刺激でもフフィブロネクチンと接着するが、この際接着斑が形成され、その部位に一致して強いチロシンリン酸化を認めた。このことから、インテグリン/タリンを介して接着斑が形成され、さらにチロシンリン酸化が引き起こされ、最終的には細胞増殖、細胞分化へとシグナルが伝達されていくものと考えられた。接着斑に局在するチロシンキナーゼFAK125の発現SLET細胞がリガンドと接着する際に、タリンの発現や、チロシンリン酸化が強く惹起されたことから、接着斑に局在するチロシンリン酸化酵素が注目された。繊維芽細胞、血小板では接着斑に局在するチロシンキナーゼとしてFAK125が明らかにされ、脚光を浴びていたことから、SLET細胞においてもその可能性について検討した。興味深いことに、SLET細胞においても接着斑に一致して強くFAK125が発現され、しかもそれがチロシンリン酸化されていた。
多官能性有機金属化合物を用いる新規有機反応と合成化学への応用

有機金属化学における新分野の研究の一環として、高反応性有機金属化合物の合成設計と新反応およびその合成化学への応用を目指した研究の一環として,(1)新しいケイ素-銅交換反応を見つけた.例えばアルキニルシランと銅(I)塩をジメチルホルムアミドを溶媒として反応すると,緩和な条件下アルキニル銅種が生成した.本反応を用いた新規有機合成反応を見つけた.(2)サマリウムを用いる新反応を開発する目的で非安定化カルボニルイリドの生成と新規反応を見つけた.アルデヒドとヨードシランから定量的に合成可能なヨードメチル(シリル)エーテルに2価サマリウムを作用させることにより対称オキシランが,カルボニル化合物存在下に行うとジオキソランが,また,アルケン類およびアルキン類共存下では高収率で対応するテトラヒドロフラン類とジヒドロフラン類が生成することを見つけた.さらに,ビスクロロアルキルエーテルとサマリウムの反応により,これまで得ることの難しかった,母体のカルボニルイリドばかりでなく,"Tailor-made"非安定化カルボニルイリドを得る全く新しい反応を明らかにした.(3)合成化学的に重要であるが反応性が高いために十分に活用されていない反応活性種である有機ラジカルを用いる新しい立体選択的な有機合成反応を見つけた.アリルスタナンはスタニルラジカルの発生源およびアルキルラジカルの受容体としての2つの役割を持つ.ラジカル開始剤存在下アルケンとアリルスタナンを反応させることにより,スタニルラジカルのアルケンへの付加および生成するアルキルラジカルのアリル化により,ラジカル的アリルスタニル化の初めての例を見つけた.(4)有機マンガンアート錯体を新規電子移動型還元剤として用いるマンガンエノラートおよびアリルおよびプロパルギルマンガン種の新規生成反応を見つけた.(5)分子内の適当な位置に水酸基を有するビニルシランを用いたところ,プロトンやLewis酸触媒による反応によって生じるβ-シリル炭素陽イオン中間体が水酸基と反応して,テトラヒドロフランやテトラヒドロピラン誘導体などの含酸素環状化合物を立体選択的に効率よく与えることを見つけた.有機金属化学における新分野の研究の一環として、高反応性有機金属化合物の合成設計と新反応およびその合成化学への応用を目指した研究の一環として,(1)新しいケイ素-銅交換反応を見つけた.例えばアルキニルシランと銅(I)塩をジメチルホルムアミドを溶媒として反応すると,緩和な条件下アルキニル銅種が生成した.本反応を用いた新規有機合成反応を見つけた.(2)サマリウムを用いる新反応を開発する目的で非安定化カルボニルイリドの生成と新規反応を見つけた.アルデヒドとヨードシランから定量的に合成可能なヨードメチル(シリル)エーテルに2価サマリウムを作用させることにより対称オキシランが,カルボニル化合物存在下に行うとジオキソランが,また,アルケン類およびアルキン類共存下では高収率で対応するテトラヒドロフラン類とジヒドロフラン類が生成することを見つけた.さらに,ビスクロロアルキルエーテルとサマリウムの反応により,これまで得ることの難しかった,母体のカルボニルイリドばかりでなく,"Tailor-made"非安定化カルボニルイリドを得る全く新しい反応を明らかにした.(3)合成化学的に重要であるが反応性が高いために十分に活用されていない反応活性種である有機ラジカルを用いる新しい立体選択的な有機合成反応を見つけた.アリルスタナンはスタニルラジカルの発生源およびアルキルラジカルの受容体としての2つの役割を持つ.ラジカル開始剤存在下アルケンとアリルスタナンを反応させることにより,スタニルラジカルのアルケンへの付加および生成するアルキルラジカルのアリル化により,ラジカル的アリルスタニル化の初めての例を見つけた.(4)有機マンガンアート錯体を新規電子移動型還元剤として用いるマンガンエノラートおよびアリルおよびプロパルギルマンガン種の新規生成反応を見つけた.(5)分子内の適当な位置に水酸基を有するビニルシランを用いたところ,プロトンやLewis酸触媒による反応によって生じるβ-シリル炭素陽イオン中間体が水酸基と反応して,テトラヒドロフランやテトラヒドロピラン誘導体などの含酸素環状化合物を立体選択的に効率よく与えることを見つけた.有機金属化学における新分野の研究の一環として,高反応性有機金属化合物の合成設計と新反応およびその合成化学への応用を目指した研究の一環として,本研究では,ビニルラジカルの分子間付加反応を2あるいは3置換オレフィンの立体選択的な合成反応に利用するために,ヨウ化ビニルから発生するビニルラジカルとその受容剤となるオレフィンとの反応について検討した結果,1)ビニルラジカルの水素引き抜き反応や1,5-水素移動反応を抑さえ,分子間付加反応を優先させることができた.2)ビニルラジカルはアルキルラジカルと同様に求核的なラジカルであり,ラジカル中心にアルキル基ような電子供与性基を導入したり,受容剤として電子不足なオレフィンを用いることにより,分子間付加反応の効率が向上することがわかった.3)2位に置換基を有するヨウ化ビニルとオレフィンとの反応では,(E)体の2置換オレフィンが選択的に得られた.反応温度による選択性の変化はほとんどなかった.4)1および2位に置換基を有するビニルラジカルの付加反応は,トリブチルスタナンやトリス(トリメチルシリル)シランからの水素引き抜き反応と同様な立体化学で進行する.しかし,その選択性は水素引き抜きの場合よりもずっと高いものであった.

ビニルラジカルを経由する反応では,一般に出発物質の立体化学が保持されないことは,遷移金属触媒を用いるカップリング反応と異なり,出発物資を立体選択的に合成する必要がない利点である.また,ラジカル反応では多くの場合,官能基の保護は必要がない.ビニルラジカルの分子間付加が2あるいは3置換オレフィンの立体選択的合成に有効であることを明らかにした.本研究課題で今年度得られた成果を以下に示す。有機マンガンアート化合物の電子移動型還元挙動の解明と新規ケトンエノラートの位置特異的生成反応の開発を行った。遷移金属は種々の酸化数を取り得るために遷移金属化合物は中心金属が合成化学的に有用な酸化・還元的性質を示す。本研究では高配位有機金属化合物の化学の新たな展開を目指して中心金属をマンガン金属とした有機マンガンアート化合物の、特にその電子移動型還元挙動を明らかにすると共に、新しいケトンエノラートの位置特異的生成反応の開発を行った。有機マンガンアート錯体の生成とその反応挙動はこれまで殆ど知られておらず、その詳細を明らかにすることにより、今後有機合成上重要な有機金属試剤となり得るであろう。α-位に還元され得る酸素官能基を有するケトンに対して有機マンガンアート化合物を反応することにより、マンガンエノラートが直接的に得られることを見つけた。得られたエノラートに対してアルデヒドを作用させることにより、アルドール誘導体が高収率で得られた。また、生成したマンガンエノラートは種々の求電子剤と反応して対応する置換生成物を高収率で与えた。さらに、有機マンガンアート化合物はアリルブロミド,プロパルギルブロミドとの反応により、還元的メタル化を起し、対応するアリルマンガンアート反応剤、および、プロパルギルマンガンアート反応剤を高収率で与えることを見つけた。この際、有機マンガンアート化合物の有機リガンドとして、テトラブチルマンガナ-ト錯体が好都合であった。
溶原化繊維状ファージの植物病原菌に対する影響

本年度は、青枯病菌ゲノム上に溶原化している繊維状ファージ配列について、相同組換えを利用したファージ配列欠失株の取得を試みた。この際に得られた株の解析により、不明であったRSS1ファージの溶原/誘発機構について新たな知見を得た。昨年度の研究で作製した相同組換え用コンストラクトをエレクトロポレーション法により青枯病菌C319株へ導入し、コンストラクトにコードされる抗生物質耐性を利用しスクリーニングを行った。得られた株について解析を行った結果、目的領域の欠失は行われず、しかし、コンストラクトの導入は観察された。このことからシングルクロスオーバーでの組換えを予想した。ところが、詳細な解析を行ったところRSS1ファージゲノム配列より予想された溶原領域外側に20bp程度の特異的な配列が4箇所存在し、その配列を利用しての組込みであることが判明した。この配列はdjf-siteであり、XerC/D系の機構を利用したものであることが予想された。これは植物病原菌に感染する繊維状ファージでは初めての発見である。このことからこの溶原化ファージはdif-siteを失った6662bでの切り出しと完全長である7288bでの切り出しとの2種類の切り出しが行われることが予想された。実際にファージの誘発を試みたところ完全長ファージが得られ、RSS0と名付けた。現在までに自然界より単離されている類似ファージ(RSS2)はRSS1と同様の構造をしており、完全長のRSS0ファージとこれら欠失型ファージとの出現比、安定性等に興味が持たれた。さらにRSS1ファージとRSS0ファージが宿主に与える影響については新たなテーマと成り得る。4月28日に「植物病原菌の生存戦略における繊維状ファージ」(若手研究(B))が採択され、一部関連する内容についてはさらなる研究を行っている。本年度は、青枯病菌ゲノム上に溶原化している繊維状ファージ配列の決定、比較を行い、相同性組換えによるこの配列の除去を試みた。さらに、この溶原化配列のファージとしての機能の有無についての解析と宿主認識タンパク質(P3)の置換による宿主特異性への影響を明らかとした。1.「溶原ファージ配列の決定、比較」RSS様ファージ配列について:MAFF 106611株、MAFF 211271株の2株において塩基配列を決定した。さらにC319株、M4S株から誘発されたRSS様ファージの塩基配列とあわせ、4種のRSS様ファージ配列の比較を行った。RSM様ファージ配列について:MAFF 211270株、MAFF 730139株の2株において塩基配列を決定した。さらにゲノム解析が終了している青枯病菌(UW551株)について、溶原ファージ領域の推定を行い、これらの比較を行った。2.「相同性組換えによるファージ配列の除去」C319株、MAFF 106611株からRSS様ファージ配列を除去する相同性組換え用コンストラクトを作製した。現在、エレクトロポレーション法によるファージ配列除去株の作製を試みている。3.「溶原化配列のファージとしての機能の有無」RSS様ファージについて:C319株、M4S株、MAFF 211271株に溶原化している配列がファージとして機能することを確認した。RSM様ファージについて:MAFF 211270株、MAFF 730139株に溶原化している配列がファージとして機能することを確認した。4.「宿主認識タンパク質(P3)の置換による宿主特異性への影響」RSS様ファージ、RSM様ファージ共にP3タンパク質のD2ドメインの置換のみで容易に宿主域を変更できることを明らかとした。

現在までに自然界より単離されている類似ファージ(RSS2)はRSS1と同様の構造をしており、完全長のRSS0ファージとこれら欠失型ファージとの出現比、安定性等に興味が持たれた。さらにRSS1ファージとRSS0ファージが宿主に与える影響については新たなテーマと成り得る。4月28日に「植物病原菌の生存戦略における繊維状ファージ」(若手研究(B))が採択され、一部関連する内容についてはさらなる研究を行っている。