hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
GLUT4一分子動態に基づくインスリン抵抗性の詳細な分子基盤の定量的解明

本研究課題は、2011年3月の東日本大震災への対応により研究期間が一年延長され、本年度が最終年度となった。昨年度までに、3T3L1脂肪細胞に存在するGLUT4の繋留機構とインスリンによる解放作用を見出し、それぞれVps10pソーティングレセプターであるsortilinとインスリンシグナル伝達下流で活性が調節されるRabGAPであるAS160が必須であることを見出してきた。そして、GLUT4輸送システムの未成熟な3T3L1繊維芽細胞にこれら二つのタンパク質を発現させることで、成熟したGLUT4輸送システムを再構成したモデル細胞を構築できることを発見した。本年度は、GLUT4輸送を調節するもう一つの重要なRabGAPであるTbc1d1の作用について、モデル細胞を用いて詳細に解析した。その結果、Tbc1d1発現細胞ではAS160発現細胞と異なりインスリンに応答してGLUT4を繋留から解放させる作用は示されず、一方でAMPK活性化刺激によってGLUT4解放が誘導された。AMPK活性化刺激を除くとGLUT4は再繋留されるが、ここにインスリン刺激を行うと、興味深いことに再繋留されたGLUT4は顕著に解放された。また、インスリン刺激のみを与えた細胞に、続いてケイジドカルシウム試薬の光活性化によって細胞内カルシウム濃度上昇を与えると、GLUT4の解放が観察された。すなわち、上記のような逐次・複合刺激を行うことによって、Tbc1dlのGLUT4輸送調節様式が遷移し、インスリン応答性を獲得できることを見出した。このような過程はTbc1d1のN末に存在するPTB領域に依存し、この領域に存在する肥満関連変異ではインスリン応答性の獲得が選択的に失われていた。このTbc1d1の調節様式遷移が運動効果(運動によるインスリン作用の向上)や病態と関連する可能性を示唆する。GLUT4は脂肪・筋におけるインスリン作用に最も重要な蛋白質の一つである。この蛋白質は、インスリン依存的に細胞内の貯蔵部位から細胞膜へと移行して生理作用を示す。現在までにGLUT4の細胞膜移行を調節する因子群は多く同定されてきたが、細胞内におけるGLUT4動態そのものについては未解明な点が多く残されていた。そこで、私たちは近年、極めて安定な蛍光ナノ粒子Qdotを用いて3T3-L1脂肪細胞におけるGLUT4の細胞内動態を一分子レベルで定量的に追跡できる系を確立した。この方法により、基底状態におけるGLUT4の動的実体やインスリン刺激時の動態変化、インスリン抵抗性下におけるGLUT4動態異常について定量的な記述を可能とした。本年度は、本手法を用いて3T3-L1脂肪細胞分化に伴うGLUT4動態変化とその分子基盤について解析を行った。まず、GLUT4一分子動態は3T3-L1脂肪細胞分化に伴って大きく変化し、一般的なリサイクリング蛋白質との比較により、GLUT4選択的な繋留機構の形成過程を一分子レベルで検出した。この過程には脂肪細胞分化に伴って発現が上昇する蛋白質sortilinが関与し、未分化細胞にこの蛋白質を過剰発現させることで分化した脂肪細胞におけるGLUT4動態と類似の動態を示した。さらに、この蛋白質の変異体を用いることで、この繋留機構にはGLUT4のエンドソームからトランスゴルジ網への逆行性輸送が関与することを見出した。加えて、インスリン依存的なGLUT4動態変化にはさらに別の蛋白質が関与することも見出している。本年度は、昨年度に引き続き、私たちの新しく開発した細胞内GLUT4-分子動態追跡系を用いて、3T3-L1脂肪細胞分化に伴って形成される特徴的なインスリン応答性GLUT4輸送システムの分子基盤と、2型糖尿病において特徴的なインスリン抵抗性との関連について詳細な解析を行った。まず、昨年度明らかにした「脂肪細胞分化に伴って形成されるSortilinによるGLUT4繋留部位への輸送過程」について詳細に解析した結果、この過程には一般的な細胞内輸送機構を調節する各種タンパク質群との協調作用が関与することを明らかにした。また、重要なインスリン作用の一つである「GLUT4の繋留部位からの解放過程」には、やはり脂肪細胞分化に伴って発現の増加するタンパク質AS160が関与することを見出した。すなわち、3T3-L1脂肪細胞分化に伴って形成される特徴的なインスリン応答性GLUT4輸送過程を「システム」として解明することに成功した。また、このSortilinに依存的なGLUT4輸送システムの破綻とインスリン抵抗性との関連を見出し、インスリン抵抗性が「インスリンシグナル伝達の減弱」のみならず「GLUT4輸送過程の障害」によっても引き起こされるという新たな概念を示唆する知見を得た。さらに、研究実施計画に記した光を用いた細胞内環境操作系とGLUT4-分子動態追跡系との組み合わせも完了し、現在この手法も用いることによってさらに詳細な解析が進行中である。本年度は、昨年度までに構築の完了した「GLUT4-分子動態計測系」と「光を用いた細胞内環境操作系」とを組み合わせた実験系を用いて、同じく昨年度までに解明したインスリン応答性GLUT4輸送システムの分子基盤とインスリン抵抗性下における輸送障害についてさらに詳細に解析を行う予定であった。しかし、昨年発生した震災によって、実験の遂行に必須である顕微鏡システムが破損し、修理と光学系の再構築が必要となった。また、長期にわたる停電・断水の影響で、実験試料である培養細胞が全て死滅した。さらに、研究室の他キャンパスへの移転も余儀なくされた。

そのため、本年度は移転した新たな研究室において震災被害から復旧させることを急務として作業を進め、現在までに顕微鏡システムの再構築は完了し、震災以前に取得していたデータの再現性も確認済みである。また、実験試料や試薬類の復旧も既に完了している。本研究課題は、震災対応により研究期間が一年間延長された。そこで、本来本年度中に行う予定であった解析は来年度中に行い、本研究課題の達成を目指している。以上のように本年度は実験の遂行は困難な状況であったが、速やかに震災以前の状況へと回復させることができたとともに、震災以前までに得られた知見を元に研究代表者を筆頭著者とする論文として報告し、さらにそれらの知見を発表した第54回日本糖尿病学会において若手研究奨励賞を受賞したことは特記に値する。本研究課題は、2011年3月の東日本大震災への対応により研究期間が一年延長され、本年度が最終年度となった。昨年度までに、3T3L1脂肪細胞に存在するGLUT4の繋留機構とインスリンによる解放作用を見出し、それぞれVps10pソーティングレセプターであるsortilinとインスリンシグナル伝達下流で活性が調節されるRabGAPであるAS160が必須であることを見出してきた。そして、GLUT4輸送システムの未成熟な3T3L1繊維芽細胞にこれら二つのタンパク質を発現させることで、成熟したGLUT4輸送システムを再構成したモデル細胞を構築できることを発見した。本年度は、GLUT4輸送を調節するもう一つの重要なRabGAPであるTbc1d1の作用について、モデル細胞を用いて詳細に解析した。その結果、Tbc1d1発現細胞ではAS160発現細胞と異なりインスリンに応答してGLUT4を繋留から解放させる作用は示されず、一方でAMPK活性化刺激によってGLUT4解放が誘導された。AMPK活性化刺激を除くとGLUT4は再繋留されるが、ここにインスリン刺激を行うと、興味深いことに再繋留されたGLUT4は顕著に解放された。また、インスリン刺激のみを与えた細胞に、続いてケイジドカルシウム試薬の光活性化によって細胞内カルシウム濃度上昇を与えると、GLUT4の解放が観察された。すなわち、上記のような逐次・複合刺激を行うことによって、Tbc1dlのGLUT4輸送調節様式が遷移し、インスリン応答性を獲得できることを見出した。このような過程はTbc1d1のN末に存在するPTB領域に依存し、この領域に存在する肥満関連変異ではインスリン応答性の獲得が選択的に失われていた。このTbc1d1の調節様式遷移が運動効果(運動によるインスリン作用の向上)や病態と関連する可能性を示唆する。震災被害の影響により、約1年の遅れが発生している。しかし、(1)震災以前には当初の計画以上に進展していたこと、(2)現時点において実験系は震災以前の状態に復旧していること、(3)研究期間が1年間延長されたこと、から、来年度中に当初の研究計画を遂行し、目的を達成することは十分に可能である。当初の研究計画において昨年度実施予定であったことを予定通りに逐行する。
ヘビーフェルミオンの理論研究

ヘビーフェルミオン系における超伝導と弱い反強磁性の共存の問題、輸送現象特にHall効果に強い関心が寄せられ、また、ヘビーフェルミオン系と強い電子相関という観点から同じ地盤に立つ高温超伝導の研究に多くの努力がなされたことが、本年度の本班の研究活動に特徴であった。1.周期的アンダーソン模型に立つフェルミ液体論の展開(1)局在f軌道の縮退、LS結合、結晶場分裂をすべて考慮した一般の場合についてフェルミ液体理論が展開され、比熱、帯磁率の表現が導かれた。(芳田、山田)(2)新しく、磁場を導入し、Hall効果の係数の一般式を導いた。(山田)2.ウラニウム、稀土類化合物の研究。(1)ヘビーフェルミオン系における超伝導と反強磁性の共存の可能性を群論的考察により一般的に論じ、UPt_3の場合を検討した(上田)中間価数状態にあるTm不純物の帯磁率をNCA近似を用いて計算した(佐宗)3.高温超伝導の研究(1)2次元CuO_2系の強い電子相関をもつ電子系の基底状態を小さな系に対して、モンテカルロ法により数値的に調べた。(斯波)(2)CuO_2系のCuの3d、Oの2p電子を対象にその有効ハミルトニアンを導き、超伝導発生の機構を論じた。(福山)(3)CuO_2系において電荷のゆらぎを調べ、これによる超伝導出現の可能性を考えた(立木)(4)Cu^<3+>を含むCuO_2系の電子状態をslaveボゾン、slaveフェルミオンを用い且つ従来の平均場近似を使わない。より精度のよい理論を展開し、超伝導を論じた。(大川)ヘビーフェルミオン系における超伝導と弱い反強磁性の共存の問題、輸送現象特にHall効果に強い関心が寄せられ、また、ヘビーフェルミオン系と強い電子相関という観点から同じ地盤に立つ高温超伝導の研究に多くの努力がなされたことが、本年度の本班の研究活動に特徴であった。(大川)
微量試料用表面張力測定法の開発

昨年度制作した装置Iに必要な試料溶液の量をさらに少なくするために、測定用容器の内径を16mmから13、12、10、8mmに変更し、プローブに作用する力の最大値(Fmax)を測定したが、得られたFmaxはYoung-Laplace式から求めた理論値よりもわずかに小さな値となり、精度の良い表面張力測定を行うためには内径16mm以上の測定用容器(試料溶液にして0.3ml以上)を用いる必要があることが分かった。Fmaxから表面張力を求めるには、測定用容器の内径とプローブの直径を含む複雑な微分方程式であるYoung-Laplace式を解く必要があるため、計算に非常に時間がかかる。この問題を解決するために、測定に用いる測定容器とプローブの組み合わせごとにFmaxの理論計算を行いFmaxと表面張力の関係を近似する関数を予め求めておき、測定されたFmaxから表面張力を求めるにはこの近似関数を用いることにした。装置IIは装置Iの10分の1の費用で作成できたが、プローブを測定用容器の中央に正確に配置するのは難しく、さらなる工夫が必要である。装置Iは、上述のような平衡表面張力だけでなく動的表面張力や高分子フィルムと液体の接触角の測定にも応用できると考えられ、現在検討中である。試料液体の垂直方向および水平方向の位置を1μmの精度で制御する必要があるため、コンピュータ制御により上下、前後、左右に1μm単位で移動する試料台を作成した。この試料台と分析用電子天秤の大きさに適するdirectional converterter armと、プローブとして使用する直径10mmのステンレス棒を作成し、内径100mmのシャーレに入れた水の表面張力測定を行い作成した装置が正常に機能していることを確認した。表面張力測定に適したプローブの材質を調べるために、ガラスやテフロンなどでもプローブを作成し測定を行ったが、試料液体とプローブとの接触角および加工のし易さからステンレス棒が最適であることが分かった。少量の試料液体で測定が出来るように、測定用容器を内径100mmのシャーレから内径16mmのバイアルに換え、プローブであるステンレス棒の直径も10mmから6mmに変更して、液面からのプローブの高さ(h)の関数としてプローブにかかる力(F)を測定した。試料液体には1mlの水を使用した。得られた結果は、Young-Laplace式から求めた理論曲線と良い一致を示した。測定に用いる液量を順次減らしていき、0.3mlまでは測定されたF vs.h曲線が理論曲線と一致することを確かめた。表面張力はFの最大値(Fmax)から求めることができるが、測定用容器の内径とプローブの直径を含む複雑な関数であり、その計算は容易ではない。現在Fmaxから表面張力を簡単に求める方法を検討している。
超伝導性単分子量子磁石の合成と物性に関する研究

研究目的は高伝導性を示す単分子量子磁石を合成して、伝導電子と局在単分子量子磁石との間の相互作用を用いて、巨大磁気抵抗などの新たな量子分子スピントロニクスを創製することである。今回、最初の試みとして、これまで数多くの超伝導性を示す有機伝導体の代表例であるBEDT-TTFをドナー分子として用い、アクセプター分子として希土類単分子量子磁石のLn(NO2)4(Ln=Tb(III), Dy(III))を用いて溶液中で電解酸化することにより2種類の半導体性単分子量子磁石を合成することに成功した。室温の伝導性は半導体であり、低温では絶縁体となった。そのために、伝動性の電子と、局在単分子量子磁石との間の相互作用がなかったために、負の磁気抵抗効果を観測することができなかった。次に、硫黄原子を配位子(=L)にもつLn2L6 (Ln=Tb(III), Dy(III))を合成することに成功した。低温で単分子量子磁石挙動を示した。また、2種類の緩やかに磁気緩和を示した。低温側は直接緩和であり、高温側はラマン過程による緩和であると考えられた。直流磁場を加えることにより、単緩和へと変化した。この錯体においても、伝導性が小さいために、負の磁気抵抗効果を観測することはできなかった。更に、伝導性のドナーとして有名なBEDOを用い、アクセプターとしてCo(II)単分子磁石を用いて、溶液を電解酸化することにより、伝動性の単分子量子磁石を得ることに成功した。17Kまで金属的挙動を示し、5K以下で伝導電子と局在単分子量子磁石との相互作用により、負の磁気抵抗効果(ー2%)を示した。これはdーπ相互作用によるものである。更に大きな巨大磁気抵抗効果を示すためには更に高伝導性の単分子量子磁石を合成する必要がある。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。超伝導性単分子磁石を合成してその物性を測定することが最終的な研究課題である。まず、ドナー分子として単分子磁石を用いて、アクセプター分子として伝動性の金属錯体を用いて電解酸化法により合成を試みてきた。しかしながらいずれも半導体であり、伝導電子と単分子磁石の相互作用は観測されなかった。そこで、ドナー分子とアクセプター分子を入れ替えて、様々な伝導性有機ドナーと、単分子磁性のアクセプター分子を組み合わせて電解酸化法を用いて合成を行ってきた。このために、伝導体としては有機ドナーとして有名なBEDT-TTF分子を用い、アクセプターとしてはDy(NCS)4単分子磁石を用いて、電解法により単結晶を作製することに成功した。結晶構造は、BEDT-TTFはκー型のパッキング構造をとっており、BEDT-TTFの4量体で+1という珍しい酸化数であった。電気伝導度は室温から200K付近までは金属的挙動を示し、200kから100K付近までは半導体的挙動を示し、100K付近から低温まで再び金属的挙動を示し、11Kで超伝導を示した。世界で始めての超伝導性単分子磁石の合成に成功したことになる。磁場を加えると超伝導温度が低下することがわかった。また、いずれの温度の超伝導性挙動のところに肩が観測された。これは、超伝導性と単分子磁石との相互作用によるものと推定される。今後はこの超伝導性単分子磁石のバンド計算や、磁場効果や比熱やNMR測定など、詳しい物性測定を行う予定である。研究課題は、「超伝導性単分子磁石の合成と物性」であるが、既に世界で始めての超伝導性単分子磁石の合成に成功した(BEDT-TTF)4(Dy(NCS)4。超伝導状態では完全反磁性体(マイスナー効果)を示すはずであるが、単分子磁石をアクセプターとして含んでいるために、超伝導性の挙動の部分に肩が観測される。これが、超伝導状態と単分子磁石の相互作用によるものと考えられる。これを証明するためには更なる意物性測定が必要である。いずれにしても単分子磁石を一種の強磁性体と考えると、世界で始めて分子系で、強磁性超伝導体の合成に成功したことになる。このような物質がこれまで分子系ではないために、全く新しい物性の出現が期待される。

低温側は直接緩和であり、高温側はラマン過程による緩和であると考えられた。直流磁場を加えることにより、単緩和へと変化した。この錯体においても、伝導性が小さいために、負の磁気抵抗効果を観測することはできなかった。更に、伝導性のドナーとして有名なBEDOを用い、アクセプターとしてCo(II)単分子磁石を用いて、溶液を電解酸化することにより、伝動性の単分子量子磁石を得ることに成功した。17Kまで金属的挙動を示し、5K以下で伝導電子と局在単分子量子磁石との相互作用により、負の磁気抵抗効果(ー2%)を示した。これはdーπ相互作用によるものである。更に大きな巨大磁気抵抗効果を示すためには更に高伝導性の単分子量子磁石を合成する必要がある。世界で始めて超伝導性単分子磁石の合成に成功したので、今後の展開で重要なのは更なる詳細な物性実験と理論的な解釈である。特に超伝導性と磁性の相関が大変興味深い点である。今後、バンド計算、磁場下の伝動性の測定、比熱、高圧化の磁性と伝動性の測定などを行う予定である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
子宮体癌細胞より分泌される新しい血管新生刺激ペプチドのクローニングと機能評価

ActinfilamentをCD44などの細胞接着因子へ繋ぐERM familyのうち、ezrinが癌細胞の浸潤と接着・転移に関与することを検討してきた。現在は卵巣癌におけるezrinの意義に注目した。最近の報告では、更年期婦人におけるホルモン補充療法が卵巣癌のリスクを増加させるとさる。しかし何故ホルモン補充療法とくにestrogenが卵巣癌のリスクを増加させるか明らかではない。そこでEzrinの発現に関する調節因子としてのestradiolの役割を検討した。SKOV3およびDOV13細胞株を用いて検討をおこなった。SKOV3はestrogen receptor(ER)α>βの株である。一方DOV13はERαくβの株であり、2つの受容体の作用を解析できるものである。Estradiolで処理された細胞をmatrigel貫通アッセイにて検討した結果、ezrinは細胞質から細胞膜へtranslocationした。matrigel貫通アッセイの結果はSKOV3:33±0.8,68±2.6,29±1.2ならびに34±1.7%(mean±SD, control, estradiol, estradiol+raloxifene, estradiol+tamoxifen), DOV13細胞も同様の変化を示し、ezrinの発現とmtrigelの貫通度には強い正の相関が見られた。さらにこの浸潤傾向はtamoxifenならびにraloxifeneにより抑制され、ERの関与が示唆された。次に子宮体癌株Ishikawaよりcis-platinumに耐性なISIW+株をclonal selection法で分離した。Ishikawa, ISIW+は染色体数がそれぞれ68と70(mode)であり、G0/G1=47.1,58.0%,S=35.1,29.7%,G2/M=17.8,12.2%であった。増殖の倍加時間は22.1±2.8,32.3±4.2hrでISIW+で有意に延長していた(p<0.003)。両株を500pg/mlのCDDPで処理し、CB-17/Icr-scid Jclマウスに腹腔内投与したところ、ISIW+のみ死亡した(50%生存期間=33日)。このISIW+株では、MTPIF分泌がIshikawaに比較して約100倍高い。またISIW+ではSteroid and xenobiotic receptor(SXR)の発現が高くこのSXRのmRNAに対するantisense cDNA(AS)を作成し、その増殖、SXR発現ならびにMTPIF分泌に与える影響を検討した。その結果ASは増殖は変化させず、SXR発現を抑制した。またMTPIFの分泌を抑制した。このことからISIW+から分泌されるMITPFはSXRの調節下にあることが示唆された.現在MTPIFの分離精製においては十分な成果が得られていない。したがってbioassayを行っている。

このことからISIW+から分泌されるMITPFはSXRの調節下にあることが示唆された.現在MTPIFの分離精製においては十分な成果が得られていない。したがってbioassayを行っている。(3)次にこの2分画が実際に子宮体癌細胞の血管新生を誘導するかどうかを、(i)熱処理(70°C)、または非熱処理の2分画を各々添加した培養液中で前培養(48時間)した低転移性子宮体癌細胞をnude miceに皮下接種し、腫瘍内の血管数を対照群(無治療群)およびvascular endothelial growthfactor(VEGF)治療群と比較検討した。(ii)低転移性子宮体癌細胞をnude miceに皮下接種し、腫瘍形成後腫瘍内に熱処理(70°C)、または非熱処理の2分画を各々1週間局注し、腫瘍内の血管数を対照群(CM治療群)およびVEGF治療群と比較検討した。現在、実験(i),(ii)において腫瘍内の血管数の計測を病理学的に行っており、比較分析予定である。子宮体癌の転移形式はリンパ行性転移であるが、転移のリスク因子としては子宮筋層内への癌浸潤の深さと、リンパ管や毛細血管などの脈管への浸潤の有無が最も有意な因子として知られている。我々は子宮体癌の間質において血管増殖因子であるThymidine Phosphorylase(以下TPと略)が発現していることを初めて報告した[H.Sakamotoetal : Gynecologic Oncology,1998].さらにこの発現は子宮内膜間質に集簇するmacrophageに特に強く見られている。すでに我々は次頁に概略をのべるように、この体癌由来の液性因子(仮称Macrophage TP Inducing Factor : MTPIF)の精製に着手した。現在までの経過:(1)MTPIFの精製とそのアミノ酸配列の一次構造の決定を継続中(2)MTPIFのcDNAの単離(予定)(3)MTPIFの遺伝子導入による機能解析(予定)精製、同定の研究計画は遅れており、早急に予定を消化する。一方体癌の末期症例では、化学療法剤に対する耐性が生じ、臨床的な問題となる。そこで体癌株(Ishikawa)よりcis-platinum耐性株をclonal selection法で分離した。このISIW+株では、MTPIFの分泌が親株に比較して約100倍高く、このMTPIFが薬剤耐性の獲得に関与することが示唆された。今後はこの株においてMDR-1,MRP,LRPの薬剤耐性遺伝子発現も検討する予定である。ヒト卵巣癌の末期症例においては、腹水の貯溜が頻繁に見られる、これは患者のQOLを悪化させるのみならず、病状の進行を促す予後不良の徴候である。
人工抗HLAヒト抗体の作製

人工ヒト抗体の作製研究に取り組んでいる。本申請研究の課題は、人工抗HLAヒト抗体の作製である。臓器移植、親子鑑定、疾患分析でおこなわれているHLA class I, IIのタイピングにはヒト血清が使用されるが、ヒト血清はモノクローナルではないために交差反応が起き、結果が鮮明でないことがある。さらに、大部分の血清が経産婦から得るため、特異性・親和性に優れたもの、希少HLAタイプを認識する血清などの確保は難しい。方法は、まずHLA class I B51抗体陽性者およびclass II DR9抗体陽性者のB細胞にEBVを感染して細胞を不死化する。その後B51抗体に関してはハイブリドーマ法でB51ヒト抗体産生細胞を樹立し、また、class, II DR9に関してはEBV感染細胞から目的抗体産生細胞を分離した。次に、これらの細胞からRNAを抽出し、これを材料に抗体遺伝子のFab領域の増幅とクローニングを行って抗体遺伝子を保存し、かつ、大腸菌でFab抗体を発現させた。最後に、得られた組み換えヒト抗体の特異性について分析を行った。陽性FabクローンのL鎖、H鎖のDNA塩基配列、および発現した抗原のWestern blot法による分析で、B51抗体のサブクラスはヒトIgM/λ、DR9はIgM/κであった。B51組換えFab抗体を発現・精製し、表面抗原の異なる白血球を使用してAHG-LCT法およびFACScan解析で分析した結果、FabクローンはB51抗原陽性の白血球に特異的に反応する事が判明した。DR9抗体に関しては、クローニング発現・精製は行った。血球を使用した分析は計画中である。HLA class Iのタイピングは臓器移植、親子鑑定、疾患分析の際に行われるが、タイピングの多くの部分が経産婦のヒト血清が使用されている。この様な条件下で、特異性・親和性に優れた血清や、希少HLAタイプを認識する血清の確保は難しく、慢性的に不足している状態が続いている。この問題に対しては、ハイブリドーマ法で抗体産生細胞を樹立するか、あるいは抗体遺伝子をクローニングし、組み換えヒト抗体を作製する方法が考えられる。本研究では、上記の2種の方法を連結し、まず、ハイブリドーマ法でHLA class I B51ヒト抗体産生細胞を樹立し、次に抗体遺伝子のFab領域をクローニングをして抗体遺伝子を保存し、かつ、組み換えFab抗体を大腸菌で発現させることにした。この様にして得た組み換えヒト抗体の特異性について報告する。手順は(1)B51抗体陽性者のB細胞にEBウイルスを感染して不死化し、培養上清の抗B51抗体をLCT法でスクリーニングを行い、抗体産生細胞を集め、ミエローマ細胞(JSM-3)と融合してヘテロハイブリドーマ細胞を作製する、(2)抗体陽性細胞、JRH-04細胞、からRNAを抽出し、抗体用PCRプライマーでH鎖Fd領域、L鎖の全領域を増幅し、増幅したDNA鎖を抗体発現ベクターpRPLS/Fab-His2にクローニングする、(3)大腸菌で抗体発現をしFACScanにより、抗体陽性クローンを分離する、などの段階を経る。陽性FabクローンのL鎖、H鎖のDNA塩基配列、Western blot法による分析で、抗体のサブクラスはヒトIgM/λであった。組換えFab抗体を精製し、表面抗原の異なる白血球を使用してAHG-LCT法で分析した結果、FabクローンはB51抗原陽性の白血球に特異的に反応する事が判明した。ハイブリドーマ細胞では抗体産生能の消失が観察されるが、本方法では抗体遺伝子の保全ができたことになる。臓器移植・親子鑑定・疾患分析でおこなわれているHLA class I、IIのタイピングに使用される血清はヒト血清であるが、モノクローナルではないために交差反応が起き、結果が鮮明でない事態が発生する。

一方で、組換えヒト抗体の作製技術が進歩し、疾病治療用のヒト抗体が数多く作製されている。我々は組み換えヒト抗体作製研究に取り組んできた。本研究では、特異性が明瞭な組み換えヒト抗HLA抗体を作製する問題に取り組んだ。対象はdasslB51,およびclassIIDR9抗体である。方法は、まず抗体陽性者のB細胞にEBVを感染して細胞を不死化する。その後B51抗体に関してはハイブリドーマ法でHLAclassIB51ヒト抗体産生細胞を樹立し、また、classIIDR9に関してはEBV感染細胞から目的抗体産生細胞を分離した。次に、これらの細胞からRNAを抽出し、これを材料に抗体遺伝子のFab領域の増幅とクローニングを行って抗体遺伝子を保存し、かつ、大腸菌でFab抗体を発現させた。さいごに、得られた組み換えヒト抗体の特異性について分析を行った。陽性FabクローンのL鎖、H鎖のDNA塩基配列、および発現した抗原のWestern blot法による分析で、B51抗体のサブクラスはヒトlgM/λ、DR9はlgM/κであった。B51組換えFab抗体を発現・精製し、表面抗原の異なる白血球を使用してAHG-LCT法およびFACScan解析で分析した結果、FabクローンはB51抗原陽性の白血球に特異的に反応する事が判明した。DR9抗体に関しては、クローニング、発現・精製は行った。血球を使用した分析は計画中である。
バクテリアのトランスポゾンISとTnの転移・制御機構とゲノム再編へ関与

トランスポゾンは、自身がコードするトランスポゼースの働きにより転移すると共に、遺伝子の再編を促し、ゲノムを改変する。本研究は、バクテリアの数多くのトランスポゾンにより構成される三つのファミリーの代表で、それぞれ異なる様式で転移する挿入因子IS3、IS1とアンピシリン耐性トランスポゾンTn3の切断・再結合による転移の機構を解明することを目的としたものである。IS3は特異的な8の字型分子から環状分子として切り出され、直鎖状分子に変換されたのち標的分子に組み込まれると考えられているが、本研究において我々は、精製したトラシスポゼースがIS3の末端逆向き配列(IR)に結合しIRの一方の端をもう一方の端とDNA鎖連結反応により8の字型分子を形成すること、この反応はトランスポゼースが一方のIRの末端側ドメインと他方のIRの内側ドメインに結合し2つのトランスポゼース分子と両端のIRから成る複合体の形成を通して起こることを明らかにした。さらに、IS3のトランスポゼースが、IS3を運ぶプラスミドと標的プラスミド間で融合体をIS3自身の複製を伴って形成する能力を持つことを見出し、単純挿入体を与える別の経路が存在することを提示した。IS1に関して我々は、IS1の転移に宿主因子H-NSが必須であること、また、古細菌を含む様々な細菌に存在するIS1ファミリー因子にコードされるトランスポゼースのC末に保存されている3つの酸性アミノ酸残基D,D,Eが活性中心として機能するモチーフを形成することを明らかにした。また、IS1のトランスポゼースのN末にはhelix-turn-helixと共にZinc-fingerモチーフが自身のIR DNAへの結合に関与していることを明らかにした。Tn3に関しては、そのトランスポゼースによる転移の第一段階のIRの3'末端ニッキング反応を解析し、それが宿主のACP(acyl carrier protein)によりクロマチン様構造を形成することによって促進されることを示した。一方、病原性大腸菌O157とEPECに存在するプラスミド、さらにO157のゲノムに存在する様々なISを同定し、ISが各種病原遺伝子の付与に関係していること、欠失・重複・逆位などり変異の作出にも関与していることを明らかにした。さらに、大腸菌K-12株、O157、さらに他の種々の病原性大腸菌において挿入・欠失・逆位・置換変異に基づいた系統樹を作成し、系統関係を明らかにした。トランスポゾンは、自身がコードするトランスポゼースの働きにより転移すると共に、その能力により欠失・重複・逆位等を促し、ゲノムを改変する。我々は、細菌の数多くのトランスポゾンにより構成されるファミリー中で最大の二つの代表である挿入因子IS3とアンピシリン耐性トランスポゾンTn3のトランスポゼースの機能と発現の制御機構解析を行ってきた。IS3はDNA複製を伴わない転移を、Tn3はそれを伴う転移をするという、異なる様式で転移するものである。本研究は、IS3とTn3DNAの切断・再結合による転移の機構を解明することを目的としたものであり、(1)IS3転移の中間体生成反応機構の解析、(2)Tn3

トランスポゼースによるニッキング及び標的DNA鎖連結(strand transfer)反応の解析、に大別される。本年度において、IS3を運ぶプラスミドからIS3転移の中間体と考えられる環状及び直鎖状分子が生じる分子機構を解析した。直鎖状分子は、各DNA鎖上のIS3の3'端と5'端から3塩基離れた位置における二つの異なる切断によると考えられるが、3'端における切断が他よりはるかに高頻度で起こること、また環状分子が直鎖状分子に変換されるという結果から環状分子が直鎖状分子の供給源であることが分かった。Tn3に関しては、in vitro系でトランスポゼースによる転移の初期反応、即ちTn3末端に存在する逆向き繰り返し配列(IR)の3'末端でのニッキング反応を見いだし、この反応がACP(acyl carrier protein)により促進されることを示した。トランスポゼース及びACPによるニッキング反応の化学量論的研究を行い、ACPの促進効果を詳細に調べた結果、ACPがトランスポゼースのDNA結合状態を変え、あたかもクロマチン様構造を形成することが分かった。トランスポゾンは、自身がコードするトランスポゼースの働きにより転移すると共に、その能力により遺伝子の再編を促し、ゲノムを改変する。本研究は、細菌の数多くのトランスポゾンにより構成されるファミリー中で最大の二つの代表である挿入因子IS3とアンピシリン耐性トランスポゾンTn3(IS3はDNA複製を伴わない転移を、一方Tn3はそれを伴う転移をする)のトランスポゼースによるIS3とTn3DNAの切断・再結合機構を解明することを目的としたものである。IS3を運ぶプラスミドからは、IS3転移の中間体と考えられる環状及び直鎖状分子が生じ、環状分子が効率よく直鎖化される。本年度において、環状分子は、プラスミド上のIS3の末端が他端近くに結合した8型状分子を経由して生成することを明らかにした。一方、直鎖状分子は、IS3の3'端と5'端から3塩基離れた位置における二つの異なる切断により生じること、3'端における切断は他よりはるかに高頻度で起こることを明らかにした。また、recQ宿主変異株においてIS3の標的分子への転移が正常には起こらず、IS3の両端ではなく片端のみが関与したような異常な組み換え体を生じることを見いだし、RecQヘリカーゼが相同組み換えばかりではなく、トランスポゾンの転移組み換えにも関与することを示した。Tn3に関しては、これまでに転移のin vitro系で宿主因子としてacyl carrier protein(ACP)が必要であることを示した。本年度において、ACP存在下でTn3変異体のニッキング効率と転移を調べることによって、Tn3末端の変異はACP存在下でニッキングも転移も阻害すること、末端逆向き配列IRにはトランスポゼースが結合する領域と結合しない領域があるが、結合する領域内において両反応に強く影響を与える部位とそうでない部位があることを明らかにした。トランスポゾンは、自身がコードするトランスポゼースの働きにより転移すると共に、遺伝子の再編を促し、ゲノムを改変する。本研究は、バクテリアの数多くのトランスポゾンにより構成される三つのファミリーの代表で、それぞれ異なる様式で転移する挿入因子IS3、IS1とアンピシリン耐性トランスポゾンTn3の切断・再結合による転移の機構を解明することを目的としたものである。
初期「新フランス評論」誌と同時代文芸誌――「詩と散文」誌との関係を中心に――

過去4年間の主要な成果としては次の2点がある。第一は、フランスにおいて初期「新フランス評論」誌にかんする多数の関連未刊文献を参照・筆写し、同時代の文学環境について具体的な知見を得たこと。第二に、同誌と相互交流のあった雑誌「詩と散文」「ラ・ファランジュ」を調査し、とりわけ後者については総目次および各種索引を作成したこと(この成果はフランスのジッド研究センターから出版予定)である。いずれの資料体も当該研究課題にかんする第一次資料として大きな重要性をもつものであり、すでに少なからぬ新事実が発見・解明されている。報告者は,すでに科学研究費補助金による2つの研究--「アンドレ・ジッド草稿研究」および「初期『新フランス評論』誌とフランス語圏ベルギー文学」--をつうじて,未刊書簡をはじめとする多数の文献や資料を渉猟し,これによって20世紀初頭フランスの文学環境にかんする実証的知見を深めた。とりわけジッドが1909年に創刊した「新フランス評論」誌は一貫して主要な研究対象であった。上記の実証的蓄積をつうじて「新フランス評論」誌創刊前後のフランス国内外の文学交流の重要性を強く認識したことが本研究課題の着想源となっている。周知のように「新フランス評論」が編集方針のひとつとして標榜したのが20世紀の新たな文学理念の確立であった。外国文学を積極的に受容・紹介したのもその一環であったが、国内的には「世紀末象徴主義との決別」という面を強く打ち出していた。ポール・フォール主宰の「詩と散文」(1905年創刊)をはじめ、いくつかの文芸誌が象徴主義の継承を謳ったのとは対蹠的な編集方針だったといえよう。だが実際には、アンドレ・ジッドら「新フランス評論」グループはこれらの文芸誌とは相当に密接な関係を保ち、頻繁に情報を交換しつつ、ときには相互に作品を提供しあったのである。本研究の目的は、このように理念と現実とが複雑に錯綜する同時代文学環境の具体相を実証的に考究し、あわせて、第1次大戦を機に象徴主義諸誌が相次いで消滅した後も「新フランス評論」誌が如何にして存続し新たな発展・成長期を迎ええたのかを探ることにある。まずは「詩と散文」誌以外にも,編集者間の人的繋がりをつうじて「新フランス評論」誌と交流のあった同時代文芸誌類の確定から始め,次いで,主要執筆者による著作・回想録など印刷文献にくわえ,彼らがジッドと交した書簡も参照する。これらの書簡をはじめ未刊行の資料はその多くが複製不可のため,とりわけ初年度第2年度はフランス本国での実地調査が大きな比重を占める。以上の作業成果にもとづき最終年度では,研究課題にかんし「具体的かつ実質的な概観の提示」を目指す。当初の計画どおり、初年度の研究作業は「新フランス評論」誌創刊前後の文芸誌間交流についての具体的調査が中心となった。本研究課題が対象とする時期(一応の区切りとして1904年からの10年間)に刊行され、かつ「新フランス評論」グループと何らかの関わりがあったフランス内外の文芸誌については、すでに関連書誌作成などの予備的作業にもとづき研究方針を定めていたが、本年度は、なかでもとりわけ重要な同時代文芸誌「詩と散文」(ポール・フォール主宰)にかんする資料調査をおこなった。掲載テクストの総体的分析によって同誌の基本的な編集方針や文学的主張の傾向を探るとともに、未刊行の文献や資料の閲覧・筆写のために、2度にわたりフランスで現地調査をおこなった。主要な訪問機関は、パリ大学附属ジャック・ドゥーセ文庫およびパリ国立図書館の2カ所であったが、ポール・フォールと「新フランス評論」の創刊者アンドレ・ジッドとの聞で交わされた未刊書簡の調査を完了。これによって両者の交友のみならず、2つの文芸誌間での活発な相互交流の実態を把握することができた。記載テクストの精確な筆写は時間をとる作業であるが、すでに親交を結んでいるフランス人研究者・図書館司書に解読・筆写の協力を仰ぎ、効率よく作業を進めることができた(協力は個人的な友誼にもとつくものであり、すべて無償である)。当初の計画どおり、第2年度(4年計画のうち)の研究作業は、初年度につづき「新フランス評論」誌創刊前後の文芸誌間交流についての具体的調査が中心となった。本研究課題が対象とする時期(一応の区切りとして1904年からの10年間)に刊行され、かつ「新フランス評論」グループと何らかの関わりがあったフランス内外の文芸誌については、すでに関連書誌作成などの予備的作業にもとづき研究方針を定めていたが、本年度は、これをもとに掲載テクストの総体的分析によって各誌の基本的な編集方針や文学的主張の傾向を探るとともに、未刊行の文献や資料の調査をおこなった。

なかでもとりわけ重要な同時代文芸誌「誌と散文」にかんする未刊行の文献や資料の閲覧・筆写のために、フランスでの現地調査を2度にわたっておこない(主要な訪問機関はパリ大学附属ジャック・ドゥーセ文庫とフランス国立図書館の2カ所)、両誌の交流の実態をかなり正確なかたちで把握することができた。その作業成果の一端として、ジッドと「詩の散文」主宰者ポール・フォールとの間で交わされた往復書簡(抄訳版)を解題・付注を添えて印刷公表した。付言すれば、書簡など自筆稿類の精確な筆写は時間をとる作業であるが、すでに親交を結んでいるフランス人研究者・図書館司書に解読・筆写の協力を仰ぎ、効率よく作業を進めることができた(協力は個人的な友誼にもとづくものであり、すべて無償である)。当初の計画どおり、第3年度(4年計画のうち)の研究作業は、第2年度につづき「新フランス評論」誌創刊前後の文芸誌間交流についての具体的調査が中心となった。本研究課題が対象とする時期(一応の区切りとして1904年からの10年間)に刊行され、かつ「新フランス評論」グループと何らかの関わりがあったフランス内外の文芸誌については、すでに関連書誌作成などの予備的作業にもとづき研究方針を定めていたが、本年度は、これをもとに掲載テクストの総体的分析によって各誌の基本的な編集方針や文学的主張の傾向を探るとともに、未刊行の文献や資料の調査を継続しておこなった。なかでもとりわけ重要な同時代文芸誌「詩と散文」にかんする未刊行の文献や資料の閲覧・筆写のために、フランスでの現地調査をおこない(主要な訪問機関はパリ大学附属ジャック・ドゥーセ文庫とフランス国立図書館の2カ所)、両誌の交流の実態をかなり正確なかたちで把握することができた。その作業成果の一端として、前年につづきジッドと「詩の散文」主宰者ポール・フォールとの間で交わされた往復書簡(後半)を解題・付注を添えて印刷公表した。
運動協調型ディスプレイの研究

近年モバイル環境が世界中で身近になり、新しい視点でディスプレイの認知特性について研究する必要がある。ディスプレイの動き、スクロール速度、身体運動等をコントロールして心理実験を行った。その結果、(1)身体運動とスクロール文字の認識の方向依存性の発見、(2)デジタルサイネージにおける2次元デジタルコードのインタラクティブ呈示手法の提案、(3)90度色相回転による色覚補助の提案、といった成果が得られた。ディスプレイの動き、スクロール方法、眼球運動、および、身体運動等をコントロールして、従来報告されていなかった知覚現象の確認を行うことを目的として研究を開始した。まず、これらは、多くの条件が重なっているので、単純に実験を行うと組み合わせの爆発を起こす。ここでは、予備実験において、身体の能動的な運動とディスプレイの運動、スクロール方法を組み合わせた際に情報受容領域の拡大が見込めることを発見しているので、その範囲や特性等の概要を明確化することからスタートし、実験を継続した。眼球運動測定装置を利用してより詳細に測定し、身体反射に関連して起こる眼球運動とディスプレイの視認性に対応関係があると推定された。データの信頼性を得るために、現在もデータの追加取得中である。また、今後実験を行うための主要な機器である視覚刺激作成装置ViSaGe(PCI express版)を購入した。現在は、本格的実験を開始するため、装置を調整中であり、予備実験などを行っている。調査研究では、2009年7月に日本視覚学会夏季大会に出席し、最近の研究動向の調査や人間の色知覚に関する研究発表などを行った。また、2009年9月に名古屋大にて3軸回転が可能な稼動椅子を用いた受動的動作中のディスプレイの情報受容特性の予備実験を実施した。2010年3月には、視覚心理、特に立体視や運動視の分野で著名な研究者であるProf. HiroshiOno(カナダ、ヨーク大学)と、試作した実験装置を用いた実験方法の検討や、視覚情報受容特性における新しい情報提示方式について本学において議論を交わした。ディスプレイの動き、スクロール方法、身体運動等をコントロールして、従来報告されていなかった知覚現象の確認を行うことが本研究の目的である。現在までの主な進捗は以下の3点である。(1)横スクロール文字の認識効率のyaw身体回転への方向依存性(特許出願1件、口頭発表1件)前額平行面上に設置したディスプレイに、認識困難な速度で右から左へスクロールする数字を提示する。その環境を保持した状態で、スクロールの方向と反対方向へ身体がyawの回転運動をすると、数字の認識が容易となることを確認した。11名の被験者の実験を行った結果、身体回転の方向に応じて認識効率が変化したにも関わらず、眼球運動に変化は見られなかった。本現象は、網膜像の差異では説明できず、注意などの高次認識機能が関係している可能性が示唆された。(2)色相回転法による2色覚補助(国際会議発表1件(査読有り))赤と緑の識別が困難な色弱者(2色覚者)は、男子人口の約5%と推定されており、決して少ない比率ではない。従来から色覚補助ツールは数多く考案されているが、2色覚者に3色覚者の色対比の感性を伝えることは困難であった。そこで、本研究では、3色覚者が主として利用している「赤-青緑」の色対比を、2色覚者が知覚し易い「黄-青」の色対比に変換し、原画像と変換画像とを任意のタイミングで「動的に」切り替えて表示する手法を考案した。評価実験の結果、色対比の感性を含めて効果的な補助が可能であることを確認した。(3)ADサイマル放送におけるアスペクト変化に伴う構図と画質の関係(口頭発表1件)現在、モバイル放送や地上波デジタルなど、同一コンテンツを制作者の意図とは異なるアスペクト比で視聴する機会が増えている。そこで、視聴者が構図から受ける印象の変化について検討した。画面構成に時間的変化のない静止画と変化のある動画では劣化傾向が異なることなどを明らかにした。今年度の主な進捗は以下の3点である。(1)デジタルサイネージにおける2次元デジタルコードのインタラクティブ呈示手法の提案(論文1件(査読あり)、国際会議発表1件(査読あり))近年急速に普及しつつあるデジタルサイネージにおいて、人の動きを感知しQRコードを動的に拡大表示する方法を提案した。評価実験により良好な評価結果が得られた。(2)身体や視覚的移動とスクロール文字の認識の方向依存性(国際会議発表2件(査読あり))前年度確認した、「スクロールの方向と反対方向へ身体がyawの回転運動をすると、数字の認識が容易となる現象」については、ディスプレイ関係では最大の国際会議(SID2011)に採録された。その他、電車側面やテレビ画面の横スクロール文字についても同様な現象が確認された、国際会議(IMQA2011)などで発表した。

(3)色相回転法に基づく2色覚補助(国際会議投稿1件(採録済み-査読あり))前年度は原理確認を行った段階であったので、スマートフォン上で実時間動作するアプリケーションの試作と2色覚者による評価実験などを実施した。その結果をまとめてディスプレイ関係では最大の国際会議(SID2012)に投稿し、採録が決定した。(4)その他運動知覚、色知覚、立体知覚等において基礎的な検討を行った結果をまとめて学会において口頭発表を行った。
コンピュ-タを利用する法学研究・教育プログラムの開発および情報蓄積のプロジェクト

(1)紛争処理の専門家が採用する解決のための定石的なアプロ-チに関する研究を行ったが、常に有効な定石的方法はなく、最新の情報は直接のインタビュ-や電話などによる照会でしか得ることができず、したがって情報源に関するノウハウを知識化することが重要であることが判明した。(2)不法行為および契約法の領域における法律スキスパ-トシステムを試作し、法的推論の分析を行った。また、デ-タベ-スから入手する判例デ-タを自動的に研究用のデ-タベ-スへと変換するプログラムを開発し、判例分析を行った。(3)裁判官経験者から、事件に関するメモ(いわゆる裁判官の手控え)の実物を披露してもらい、事件の事実をどのように整理するかについての定石的なアプロ-チと思える技法についてのデ-タをまとめることができた。(4)国際民事紛争その他において、必要情報を的確に入手し、裁判上および裁判外における交渉を体系的総合的見地から把握する試みとして、日米の独占禁止法に関する最近の紛争を分析した。(5)紛争処理に必要な情報をコンピュ-タによって調査する手法の開発のため、法学の分野までは初めての著作が共同分担研究者の加賀山氏によって公刊された。また、アメリカの法律関係のデ-タベ-ス、LEXISの活用に関する詳細なマニュアルを完成した。(6)エキスパ-ト・システムの一環として民法に関するデ-タベ-スの構築が進んでいる。(7)以上の研究の成果を使って、法情報学の講議を行い、コンピュ-タ利用による「法情報学記念論文第一号」を刊行した。(1)紛争処理のための情報収集の実際を知るために、国民生活センター職員、朝日新聞記者、弁護士などを招いて講演・検討会を実施した。その結果、的確で最新の情報を得るには、活字情報よりも電話やインタヴューによって関係者に接触することが最善の方法であることが判明した。このやり方をとるためには、該当問題の専門家、関係団体を索出するためのデータ・ベースを整備することが必要であり、この方面の準備を進めている。(2)本学部所蔵の外国雑誌、判例集などのデータ・ベースを作成し(約600件)、追録作業を継続している。また、法的推論の実際については、判例分析の方法に関する講演および実習を法情報学の講義の中で実施した。現在のところ、判例分析の要点の整理を終え、フローチャート化する前の段階まで検討が進んでいる。(3)適切な判例情報などを収集する方法については、判例データ・ベースや、判例および法令のCDーROMを利用して効率的な情報検索方法を検討中であるが、アメリカのシステムに比較するとわが国のシステムは情報の網羅性という面で改善すべきことが多いことが判明した。この問題に対処するためには、コンピュータによる情報収集と他の情報収集方法とをどのように組み合わせるのが望ましいかという点の検討が必要であり、現在のところ個別問題毎に考察を進めることにしている。(4)法についてコンピュータを利用する場合、言語としてプロログが最も適しているという判断から、法律家向けのプロログ教本の作成・出版の準備を進めている。同書は、平成元年度に公刊される予定である。(5)紛争処理の枠組の検討を進めているが、市場メカニズムを利用することに関する基礎的文献の邦訳を出版した。(1)金融リ-スの法律事務と紛争処理の実際に関する情報分析のため、銀行リ-スの専門家および消費者リ-スの専門家を複数招いて講演・研究会をおこなった。また、講演の機会を利用して、適切な質問の準備の仕方などの情報選別の技法を実習した。さらに、リ-スに利用の実態を把握するため学生による情報収集もあわせて実施した。(2)裁判外の紛争処理における情報操作を考察するため、いわゆる「交渉術」に関する資料を検討し、学生による交渉の実習訓練を実施し、その模様をテ-プに録音して交渉の動きを調査した。また、ディベイトと呼ばれる技術を導入して、議論の組み立て方および情報の取捨選択の検討もおこなった。

(この過程でコンピュ-タを用いた情報収集の訓練も学生に対しておこなった。)(3)法に関する情報収集と処理のために必要な技法に関する書物を公刊し、講義で活用することが可能となった。(4)コンピュ-タ利用のためのマニュアル類の整備も進み、アメリカのデ-タ・ベ-ス「レクシス」のマニュアルおよび法学部内の情報利用のためのLANのマニュアル整備も完了した。すでに完成しているわが国の判例デ-タ・ベ-ス「ジュピタ-」のマニュアルを含めて法情報のデ-タ・ベ-ス利用に関するマニュアルの整備はかなり進んだといえる。これらのマニュアルは学内外の希望者に提供する予定である。(5)法学部所蔵資料を効率的に利用するためのデ-タ・ベ-ス構築はデ-タ入力を継続中である。