hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
家蚕濃核病ウイルスの増殖機構とその宿主特異性の分子機構

これらの研究の結果、本ウイルスは今までに報告されている他の線状1本鎖DNAウイルス(パルボウイルス)とは全く異なった遺伝子構造を持つ新しいタイプのウイルスであることが判明した。まず、本ウイルスがBmDNV-1など他のパルボウイルスとは異なるDNA複製機構を有する事が示唆された。次に、本ウイルスの2種のウイルスゲノム(VD1,VD2)の一次構造が判明し、ゲノムDNA上に存在するORFの大きさや位置、そしてウイルス遺伝子の発現制御に関わると考えられる配列などが明らかになった。また、VD1/ORF2には主要構成タンパク質がコードされており、VD1/ORF3とVD1/ORF4にコードされているウイルスタンパク質(p37,p14)は共に主要構成タンパク質遺伝子のプロモーターをアクティベートする制御タンパク質である事が判明した。さらに、VD2/ORF2にコードされているウイルスタンパク質(p27)はウイルスのゲノム上に存在する全てのプロモーターをアクティベートすることが示され、p27が本ウイルスの宿主、および組織特異性を決定している分子機構を理解する上で極めて重要なタンパク質であることが推定された。
CXC型ケモカインSDF-1を標的とした口腔癌に対する増殖転移抑制療法の開発

口腔癌細胞に対するケモカインSDF-1の作用を抑制することにより、その受容体CXCR7を介した増殖とCXCR4を介した転移を集学的に抑制することを試みた。SDF-1抗体は口腔癌細胞のinvi troでの足場非依存性増殖を抑制したが,in vivoでの増殖・転移に影響を与えなかった。一方,CXCR4特異的阻害剤であるAMD3100は口腔癌細胞の転移を有意に抑制した。以上より,SDF-1抗体によるCXCR4とCXCR7の抑制はin vivoでは困難であるが,CXCR4特異的阻害剤であるAMD3100は,口腔癌の転移抑制療法に有用である可能性が示唆された.口腔癌細胞に対するケモカインSDF-1の作用を抑制することにより、その受容体CXCR7を介した増殖とCXCR4を介した転移を集学的に抑制することを試みた。以上より,SDF-1抗体によるCXCR4とCXCR7の抑制はin vivoでは困難であるが,CXCR4特異的阻害剤であるAMD3100は,口腔癌の転移抑制療法に有用である可能性が示唆された.われわれは、口腔扁平上皮癌のリンパ節転移過程において、ケモカインレセプターCXCR4を発現している癌細胞がリンパ節間質の産生するリガンドstromal cell-derived factor(SDF)-1に引き寄せられながら転移していることを見いだしてきた。SDF-1は長年CXCR4に対する唯一のリガンドとして考えられてきたが、近年新規ケモカインレセプターであるCXCR7がSDF-1と結合することが明らかにされた。SDF-1/CXCR7システムは、SDF-1/CXCR4システムとは異なり細胞増殖や細胞接着に関与すると考えられており、SDF-1を阻害することで口腔扁平上皮癌の増殖と転移を集学的に阻害できる可能性が示唆される。そこで、本年度はCXCR4とCXCR7を共発現している口腔扁平上皮癌細胞株B88を用いて、リガンドSDF-1の細胞増殖に与える影響を検討した。まず、種々の濃度(1, 10, 100ng/ml)のSDF-1が足場依存性増殖に与える影響をMTT assayを用いて検討したが、いずれの濃度においても細胞増殖促進効果は認められなかった。しかしながら、soft agar assayにより足場非依存性増殖能に関して検討したところ、100ng/mlのSDF-1によりコロニー形成能の促進が認められた。そこで、B88細胞をヌードマウス咬筋内に同所性移植し、SDF-1抗体による実験的治療を行った。しかしながら、10μg/body/dayのSDF-1抗体はB88細胞の増殖・転移いずれに対しても有意な抑制効果は認めなかった。本研究結果はSDF-1抗体の濃度が1点のみであったこと、投与経路が腹腔内であり腫瘍内濃度が上昇しなかった可能性があること、などの問題点がある。次年度は、SDF-1抗体の投与量を再考し、投与経路に関しても腹腔内と静脈内投与を比較することで、上述の仮説が可能か否か検証する予定としている。われわれは,口腔扁平上皮癌のリンパ節転移過程において,ケモカインレセプターCXCR4を発現している癌細胞がリンパ節間質の産生するリガンドstromal cell-derived factor(SDF)-1に引き寄せられながら転移していることを見いだしてきた.SDF-1は長年CXCR4に対する唯一のリガンドとして考えられてきたが,近年新規ケモカインレセプターであるCXCR7がSDF-1と結合することが明らかにされた.SDF-1/CXCR7システムは,SDF-1/CXCR4システムとは異なり細胞増殖や細胞接着に関与すると考えられており,SDF-1を阻害することで口腔扁平上皮癌の増殖と転移を集学的に阻害できる可能性が示唆される.平成21年度は10μg/bodyの抗マウスSDF-1抗体を使用し,CXCR4とCXCR7を共発現しているB88細胞の咬筋内同所性移植における転移抑制実験を行ったが,転移抑制効果は認めなかった.そこで本年度は,SDF-1抗体の投与量を倍量の20μg/bodyとし,投与経路に関しても腹腔内と静脈内投与を比較することで,上述の仮説が可能か否か検証した.その結果,双方の投与経路にて定量性PCRによる転移細胞数の減少傾向が確認されたが,特に静脈内投与群ではデータにばらつきを認めた.また,咬筋に生じた腫瘍体積においても,SDF-1抗体投与群とコントロール群で有意な差は観察されなかった.さらに,比較実験として行ったCXCR4の特異的阻害剤であるAMD3100の皮下投与群と比較すると,SDF-1抗体投与群における転移抑制効果は低かった.以上の実験結果より,SDF-1抗体によるCXCR4とCXCR7の抑制はin vivoでは困難であるが,CXCR4特異的阻害剤であるAMD3100は,in vivoにおいてもCXCR4の抑制効果が強く,転移抑制効果を発揮することが示唆された.
西アフリカにおける感染症対策と生権力の複数性に関する人類学的研究

本研究の最終年度にあたり2018年度は、(1)これまでの研究で明らかになってきた、当該地域における結核対策、オンコセルカ症対策、マラリア対策、エボラ出血熱対策、乳幼児に対するワクチン接種と栄養管理といった公衆衛生的な実践の相互関係について検討し、最終成果の発表に向けて、それらをどのように統一的な視野のもとで議論できるのかについて検討した。その際、特に、社会福祉という観点からの捉え直しを行い、また、生権力や生市民性という概念に焦点を当てた。それに加えて、(2)ガーナ南部のカカオ農村地帯において追加調査を実施し、上記のプロジェクトの最新の状況を確認するとともに、(3)当該地域で新たに導入されている幼稚園・小学校における学校給食と、調査地において問題が深刻化してきている住宅地における土壌流出や集落付近の水田の利用状況に対する調査を実施した。(2)の追加調査に関しては、ガーナ大学のコジョ・セナ教授と面会し、これまでの研究の成果について説明し、情報提供とアドバイスを受けることができた。(3)に関しては、当初の研究計画では調査対象としてなかったが、これまでの調査によって学校給食は公衆衛生における栄養管理の延長線上にあるものと見なすことができ、土壌流出と水田の利用はマラリア対策における環境の管理と密接に関連していることが明らかになったために、詳細について調査を行った。特に、学校給食については、現地調査を通じて、材料の仕入れや資金の管理、国からの予算の配分方法などに関して様々な困難があることも明らかになり、また、調理・配膳・資金管理に関する細かな手続きについて、公衆衛生プロジェクトの異同についても検討した。これらの調査の成果については、現在、原稿を用意しているところである。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。初年度である2015年度は、(1)アフリカの生物医療に関する国際シンポジウム" How Do Biomedicines Shape Life, Sociality and Landscape?"を主催するとともに、(2)ガーナ南部の農村地帯におけるオンコセルカ対策プログラムに関する現地調査を実施した。国際シンポでは、オスロ大学からウェンゼル・ガイスラー教授とルース・プリンス准教授を招聘したほか、国内から10名の研究報告者の参加もあり、サハラ砂漠以南アフリカにおいて、生物医療が人々の生活、社会性、景観をどのように変容させているのかを各地からの事例に基づいて検討した。その結果、アフリカにおける生物医療について考える際に、複数の時間性や空間性について検討することの有効性が明らかになった。現地調査とそれを通じた思索の具体的な成果としては、以下の諸点が明らかになった。(1)従来の薬剤の人類学では、薬剤の入手可能な地域の空間的な広がりに焦点が当たっていたが、とりわけ医療従事者による実践においては、むしろ薬剤摂取のタイミングを整序することに焦点が当たっている、(2)薬剤摂取のタイミングは、病気と薬剤、それに人間の身体の関係性の特性に由来しており、病気や薬剤の種類によって、摂取の間隔や許容されるタイミングのズレが大きく異なる(例えば、結核対策は一日毎に厳密に摂取することが求められるが、オンコセルカ対策では半年に一度の摂取でよく、ときに数か月のずれが許容される)、(3)オンコセルカ症対策は、半年から一年に一度の摂取が求められるという例外的に長い周期性を持っており、また、摂取のタイミングは純粋に医学的な論理だけでなく、人々の生活に関する民族誌的な知識に基づいても決定されている。これらの成果については、2016年度に研究論文として発表する予定である。初年度の2015年度は、年度初めに計画した通り、国際シンポを行うことで当該分野の最新動向を把握するとともに、ガーナ南部の農村地帯においてオンコセルカ対策に関する現地調査を実施することができた。特に現地調査においては、空間性を問題にしてきた従来の薬剤の人類学に対し、時間性に注目することの重要性を見出すことで、この分野に新しい知見を付け加えるための足掛かりを作ることができた。その一方で、グローバルヘルスに関する人類学的研究の世界的な広がりは当初の予測を超えるものがあり、最先端な議論を行うためにはより文献研究に力を入れる必要があることも判明した。この点については、次年度以降に計画を修正する必要があるものの、大幅な計画の変更を必要とするものではないため、おおむね順調に進展していると言える。本研究の二年度目にあたる2016年度は、(1)アネマリー・モルの『多としての身体』の共訳等を通した文献研究の実施と本研究計画の再調整、(2)ガーナ南部の農村地帯におけるオンコセルカ対策プログラムに関する追加調査と研究論文の投稿、(3)乳幼児のワクチン接種とマラリア対策プログラムに関する現地調査の実施を行った。文献研究では、特定の疾病の存在が確認される方法への着目や、異なる対象の相互包摂的な関係、グローバルヘルスにおける計算のされ方といった論点に注目することが、グローバルヘルスにおける感染症対策や生権力について考える際に重要な意味を持つことが明らかになった。これを踏まえて、現地調査では、オンコセルカ症の存在がオンコセルカ対策によっていかに確認されているのかや、オンコセルカ対策における薬剤のカバー率を計算するための数え方が、プロジェクトの実施方法にどのように依存しており、また、当該地域で暮らす人々の生活のあり方とどのように関係していたのかについて明らかにした。これらの成果について、研究論文として発表した。

乳幼児のワクチン接種とマラリア対策プログラムに関する現地調査については、まだ充分に進められていないが、前者に関しては、ワクチンを接種したかどうかを確認するための方法に、人間の行為を統治することとともに、人間の行為を統治しなくても良いようにすることが含まれていることが明らかになった。これは、特定の人々を統治することによって、他の人々を統治をしなくてもいい状態にしておくというものであり、グローバルヘルスにおける生権力のあり方を検討する際の、重要の着目点のひとつになりうると考えられる。本研究の二年目となる2016年度は、年度初めの計画とは異なり現地調査を一度しか実施できなかった。また、当初予定していた国際ワークショップの実施を行うことができなかった。これは、2016年度に実施した国際ワークショップのプロシーディングスの取りまとめ作業を優先したためである。その一方で、文献研究の実施を踏まえて、アフリカ地域におけるグローバルヘルスと生権力について知見を深めるとともに、医療人類学一般における新しい分析枠組みが、本研究に与える影響についても検討することができた。現地調査では、オンコセルカ対策に加えて、母子保健やマラリア対策についても資料を収集することができた。これらの調査の成果の一部は、『文化人類学』の81巻4号に掲載される予定である。本研究の三年度目にあたる2017年度は、(1)これまでの研究成果として、2015年度に実施した国際シンポジウムの成果であるプロシーディング集"How Do Biomedicines Shape Peoole's Lives, Socialities and Landscapes?"を編集・出版した。それに加えて、(2)近年注目を集めている人類学におけるいわゆる「存在論的転回」に関する文献研究を行い、物や複数種のエージェンシーに注目するアプローチの感染症についての人類学的研究の応用可能性について論考を出版した。また、(3)ガーナ南部のカカオ農村地帯におけるマラリア対策についての追加調査を実施した。文献研究では、ポストプルーラルという概念を中心に検討することで、社会人類学の伝統に依拠する文化についての研究と科学技術論の影響を受けた自然についての研究の差異と関連性について検討し、両者の多様な接続のあり方を模索した。これにより、人工的なものと自然のものが交差する領域で展開する感染症について検討する新しい視座が開けつつある。現地調査では、マラリア対策の一環としても重視され、すべての住民が行うべきとされる家屋の周囲の雑草取りが、土壌流出の一因となることが認識されることによって、軋轢や葛藤が起きていることが分かった。これは、ひとつの領域に対する複数の働きかけが相互に矛盾する状況の一例と見なしうる状況であり、本課題の主要テーマの一つである統治実践の複数性とも関連している。この点については、引き続き、情報を収集すると共に歴史的な経緯についても検討を進めていく。本研究課題の成果として、国際シンポジウムのプロシーディング集を出版できたことは重要なステップを踏めたと考えている。また、人類学における近年の理論的動向についてレビュー論文を発表できたことで、本研究課題について単一の事例を越えた視野を持つことができたことも当初の計画にはない大きな進展と言える。
乳癌の進展における不完全な上皮-間葉移行現象とその分子機構

テネイシン-C(TNC)は乳癌をはじめとする固形腫瘍の浸潤部位で高発現し、特に小型の癌巣を形成する乳癌浸潤部には高頻度にTNCが発現していた。乳癌細胞株MCF7をTNCで処理すると、上皮間葉移行様変化が誘導され、更にTGF-β1を加えるとそれが増強されることを見出した。この変化に関与するインテグリン(ITG)の探索を行い、ITGαvβ6とαvβ1が関与することを明らかにできた。また、ITGと複合体を形成するFAK/SRCのシグナル伝達系の活性化が関与していた。さらに、免疫組織化学によりこれらのレセプターのヒト乳癌組織での発現が確認できた。Tenascin-C(TN-C)は乳癌で高発現し浸潤性を高めるとされている。上皮間葉移行(EMT)は癌浸潤の形質変化として重要である。本研究ではTN-C及びTGF-β1のEMTへの関与について検討している。乳癌細胞株MCF-7をTN-C/TGF-β1刺激下で培養し、蛍光抗体法、western blottingを行い、形態的変化とE-cadherinとβ-cateninの局在を観察した。Focaladhesion kinase(FAK), SRCとTN-Cレセプタであるintegrin αvβ6との関与について検討を行った。TN-添加でEMT様の形態変化とE-cadherinとβ-cateninの細胞質内移行、TGF-β1/TN-C刺激下ではより強いEMT変化とβ-cateninの核移行が認められた。EMT様変化に伴いintegrin αvβ6が動員され、同陽性接着斑の増加とその部位でのSRC Y418,FAK Y861,Y925のリン酸化の亢進が認められた。integrin αvに対する機能中和抗体やSRC kinase阻害薬の添加はEMT様変化を阻害したが、αvβ6の中和抗体やintegrin β6のノックダウンは阻害しなかった。TN-Cは乳癌細胞のEMT様形態的変化(不完全なEMT)を誘導し、SRCとFAKの活性化が分子機構として働くと考えられた。この変化はintegrin αvβ6の発現増加を伴ったが、この現象に不可欠なものではなかった。さらに、FAKとSRCの活性化を引き起こす分子機構とこれに伴う発現分子の変化について、来年度以降に研究を行う。本研究ではテネイシン-C及びTransforming growthfactor(TGF)-β1の上皮間葉移行への関与について検討している。昨年度までに、乳癌細胞株MCF-7をテネイシン-C/TGF-β1刺激下で培養し、蛍光抗体法、ウェスタンブロットを行い、形態的変化E-カドヘリンとβ-カテニンの局在から上皮間葉移行様変化を起こすこと、Focal adhesion kinase,SRCのリン酸化が重要であることを明らかとして論文を作成し、今年度にAmerican Journal of Pathologyに掲載された。さらに、この変化を起こすシグナルを受け取るテネイシン-Cレセプタについて検討を行い、昨年度明らかとしたインテグリンαvβ6に加えて、インテグリンα2β1とシンデカン-4が関与していることを生化学的手法および中和抗体やヘパリンによる阻害実験で明らかとした。また、両者はそれぞれ独立して上皮間葉移行様変化に関与していることが判明した。平滑筋細胞ではインテグリンαvβ3がテネイシン-Cからのシグナル伝達に重要であることを示した論文も発表しており、細胞により使われるテネイシン-Cレセプタが異なるようである。テネイシン-C添加による発現レベルの変化については、当初はアレイを予定していたが、関連すると思われる分子については、定量的PCR法により変化を十分に明らかとできたと考えている。また、mRNAとタンパクの発現レベルはインテグリン分子などでは相関しないことが分かった。現在、各インテグリンとシンデカン-4からのシグナルについて検討をしており、これらについては来年度に論文を作成する。本研究ではテネイシン-C及びTransforming growthfactor (TGF)-β1の上皮間葉移行への関与について検討している。昨年度までに、乳癌細胞株MCF-7をテネイシン-C/TGF-β1刺激下で培養し、蛍光抗体法、ウェスタンブロットを行い、形態的変化E-カドヘリンとβ-カテニンの局在から上皮間葉移行様変化を起こしていること、Focal adhesion kinase (FAK), SRCのリン酸化が重要であることを明らかとして論文を作成し、American Journal of Pathologyに掲載された。

さらに、この変化を起こすシグナルを受け取るテネイシン-Cレセプタについて検討を行い、21年度より明らかとなっているインテグリンαvβ6に加えて、22年度にインテグリンα2β1とシンデカン-4が関与していることを生化学的手法および中和抗体やヘパリンによる阻害実験で明らかとした。しかしながら、さらなる検討によりα2β1ではなく、αvβ1がインテグリンの活性化ならびにFAKリン酸化を引き起こし、上皮間葉移行に関与することが本年度中に明らかとなった。また、中和抗体による検討から、両者はそれぞれ独立して上皮間葉移行様変化に関与していることが判明した。さらに、これらのインテグリンの発現を免疫組織化学的にヒト乳癌組織で検討を行い、それぞれのインテグリンの発現を確認し、上皮間葉移行部位およびTNC発現部位でαvβ6の発現が有意に高いことを明らかにできた。これらインテグリンのEMTにおける役割と乳癌組織での発現については、論文を作成し登校している。シンデカン-4については、siRNAによる発現抑制を行ったところ、TNCによる上皮間葉移行様変化が抑制された。これについても、さらに検討を進め、論文として発表する予定である。
EMT誘導による骨微小環境変化の解明

本研究はRAW264.7細胞を用いて骨微小環境におけるTGF-βおよび細胞外基質の硬さと破骨細胞分化への影響を検討することを目的とした。TGF-βやRNKLを投与下に硬い細胞外基質上で培養すると円形の細胞は紡錘や多角形へ変化し、TGF-βとRNKLを投与し群が最も破骨細胞に分化した。一方、TGF-βおよびRNKLを投与しても軟らかい基質上で培養すると細胞は円形のまま変化せず、分化もしない。破骨前駆細胞において細胞外基質と分化には関係がある可能性があると考えられた。運動性の高い単球系破骨前駆細胞は血中から骨へ遊走し、細胞周期の停止した静止期破骨前駆細胞に変化し、骨芽細胞と安定した構造を構築し数週間支持されている。このようなニッチと呼ばれる安定した微小環境の状態へ、運動能の高い破骨前駆細胞を誘導し、静止・維持させる因子は明らかでない。細胞が接着性の高い上皮細胞から運動性の間葉系様細胞に形質変化する現象を上皮間葉転換(epithelial-mesenchymaltransition:EMT)、またその逆はMETと呼ばれている。EMT/METの概念は、がん研究だけではなく、最近はES細胞やiPS細胞に関する研究にも取り入れられている。TGF-βはがん細胞にEMTを誘導することが知られており、本研究は、破骨前駆細胞におけるTGF-βを介したEMT/METの関与を明らかにすることを目的とした。運動性の高い破骨前駆細胞から静止した破骨前駆細胞への変化を、EMT/METの概念からEMTマーカーおよび細胞運動能に関与するタンパク(CDC42、RAC123、RhoA)発現を比較検討した。血中から骨へ遊走した破骨前駆細胞は骨芽細胞とともに破骨細胞ニッチと呼ばれる安定した骨微小環境を維持し、破骨細胞へ分化していく。本研究では、破骨前駆細胞が微小環境内で遊走、定着する過程でのTGF-βの影響を検討した。TGF-β1およびTGF-β阻害薬(SB435142)を投与し細胞増殖能を検討したところ、細胞増殖への明らかな影響はみられなかった。また、TGF-β1の刺激によりRAWの細胞形態は円形から紡錘形に変化した。しかし、SB431542投与下では細胞形態は変化しなかった。TGF-β1およびSB431542を投与しRAWの細胞にRANKL投与を行い、破骨細胞への分化をTRAP染色で検討した結果、RAW細胞はRANKL投与により破骨細胞への分化が見られたが、SB431542の投与により分化は抑制された。そしてTGF-β1刺激によりRAW細胞は遊走能が減少した。RAW細胞にTGF-β1およびその阻害剤であるSB431542,RANKL投与を行いRhoA,Rac1,Cdc42タンパクの発現をウェスタンブロット法にて検討した結果、TGF-β1刺激によりRhoA,Cdc42の発現には変化は見られなかったが、Rac1の発現は減少した。遊走性の高い破骨前駆細胞はTGF-β1の上昇した骨微小環境内で遊走能を消失し、骨リモデリング開始部に定着する。さらに骨芽細胞から提供されるRANKLにより、破骨前駆細胞はRac1発現の減少に伴い、安定,静止した破骨前駆細胞となり骨芽細胞とともに破骨細胞ニッチを形成し、破骨細胞へと分化していくと考えられた。当初の実験計画では、EMTを誘導するとされているTGF-βとsonic hedgehogをautoclineで産生する繊維芽細胞を遺伝子導入にて作成し、良性腫瘍細胞と破骨前駆細胞に作用させる予定であったが、遺伝子導入が困難であった。そこで細胞培養液にTGF-βを添加し、細胞方法に変更して研究を進めているため。運動性の高い単球系破骨前駆細胞は血中から骨へ遊走し骨芽細胞と安定した構造を構築する。このようなニッチと呼ばれる安定した微小環境の状況へ運動性の高い破骨前駆細胞を誘導する機構は明らかでない部分も多い。破骨前駆細胞が骨微小環境内で分化する過程においてTGFーβ1およびRANKLの投与下での細胞運動がどのように変化するのかを検討した。TGFーβ1、RANKL作用群は細胞増殖が抑制され、拮抗薬(SB431542)を作用させると増殖抑制が回復した。TRAPAssayでは、TGFーβ1単独作用による破骨細胞の分化は認められなかったがRANKL作用により分化を認めた。Migration assayでは、TGFーβ1などの試薬作用時間によって運動能の強・弱が認められ、Rhoファミリー(Rho、Rac1、CDC42)などのWestern blotでも試薬作用の時間によってタンパクの発現に差が見られた。Adhesion assayやImmunofluorescence等の実験を追加し細胞運動能がどのように変化していくのか検討している。当初の実験計画では、EMTを誘導するとされているTGFーβとsonic hedgehogで産生する繊維芽細胞を遺伝子導入にて作成し、良性腫瘍細胞と破骨前駆細胞に作用させる予定であったが、遺伝子導入が困難であった。そこで細胞培養液にTGFーβを添加して研究を進めているため。細胞外環境の硬さの変化は細胞の分化状態を規定する重要なファクターの一つされている.そこで,破骨前駆細胞の細胞外物理的環境の変化(血液中から骨)に依存する細胞運命決定機構におけるTGF-β,Hippoシグナルの関与について検討した.

【方法】マクロファージ系破骨前駆細胞RAW264.7(RAW細胞)にRANKL,SB431542(TGF-β1型受容体キナーゼ活性阻害剤)の投与を行い,破骨細胞への分化に対する各種薬剤の影響を検討した.また,上記薬剤投与下で細胞外環境の異なる状態(血液中または骨を模倣した状態)で培養を行ったRAWの破骨細胞への分化の影響を検討した.硬い基質はポリスチレン製ディッシュ,血液中を模倣した状態はポリスチレンにハイドロゲルを結合し細胞を浮遊した状態で培養可能なultra-low attachment(ULA)ディッシュを用いた.【結果】ポリスチレン製ディッシュおよびULAディッシュでRAW細胞をTGF-β, SB431542の投与下で培養し,細胞増殖に有意差はみられなかった.ポリスチレン製ディッシュで培養した場合は,細胞形態は円型のほかに紡錘形が多くみられたが,ULAディッシュやコラーゲンゲル上で培養した場合は円型であった.RAW細胞はRANKL投与により破骨細胞様細胞への分化が見られ,TGF-β刺激によりさらに分化細胞数が増加した.SB431542の投与により分化は抑制された.ULAディッシュやコラーゲンゲル上で培養したRAW細胞は,RANKL+TGF-β投与群を含む全ての群で破骨細胞様細胞への分化は認められなかった.破骨細胞様細胞への分化傾向と同様にRAW細胞のYAP発現が増加し,LATS1が減弱していた.本研究はRAW264.7細胞を用いて骨微小環境におけるTGF-βおよび細胞外基質の硬さと破骨細胞分化への影響を検討することを目的とした。TGF-βやRNKLを投与下に硬い細胞外基質上で培養すると円形の細胞は紡錘や多角形へ変化し、TGF-βとRNKLを投与し群が最も破骨細胞に分化した。一方、TGF-βおよびRNKLを投与しても軟らかい基質上で培養すると細胞は円形のまま変化せず、分化もしない。破骨前駆細胞において細胞外基質と分化には関係がある可能性があると考えられた。当初の実験計画では、EMTを誘導するとされているTGF-βとsonic hedgehogをautoclineで産生する線維芽細胞を遺伝子導入にて作成し、当科で培養可能である良性腫瘍細胞(KCOT)および破骨前駆細胞(RAW264.7細胞)に作用させる予定であったが、遺伝子導入が困難であった。そこで,細胞培養液にTGF-β(Human TGF-β1)を添加し,細胞にTGF-β刺激を加える方法に変更して研究を進めているため。単球系破骨前駆細胞が骨へ遊走してきた後、遊走性の高い単球系細胞がどのような機構で骨表面にとどまって破骨細胞へ分化するのかは不明な点が多い。体内の細胞は細胞外環境から絶えず張力など力学的な力が働いている。このような力学的シグナルが細胞増殖・分化・運動などに影響を及ぼすことが明らかになってきた。そこで、破骨前駆細胞の細胞外物理的環境の変化(血液中から骨)に依存する細胞運命決定機構におけるHippoシグナルの関与についても検討していく予定である。単球系破骨前駆細胞が骨へ遊走した後、遊走性の高い単球系細胞がどのような機構で骨表面にとどまって破骨細胞へ分化するのか不明な点が多い。力学的シグナルが細胞増殖・分化・運動などに影響を及ぼし、破骨前駆細胞の細胞外物理学的環境の変化に依存するシグナルについて検討していく予定である。口腔外科学
高温プラズマ中の軽元素不純物挙動解明への真空紫外レーザー蛍光分光法の適用

高温プラズマ中に混入する不純物や、水素のリサイクリニグ研究のためには、軽元素の遷移波長に同調できる真空紫外レーザーを用いたレーザー螢光法が大きな可能性を持つと考えられ乍ら、この波長域での可変波長レーザーに十分なものがなく実験が行える段階に達していない。そこで、本研究では可変波長色素レーザーの非線形媒質による高調波発生により目的を達するべく光源の開発から研究に着手し、以下の結果を得た。(1)昭和60年度までに製作したライマニα線に同調可能な光源について光軸の設計変更等を行い、安定な10W以上の出力を半日以上にわたって維持できるようにした。またスペクトル制御についても予備測定を行った。(2)水素原子検出については、ライマニβ線の二光子励起をArFレーザーのストークス線を用いて行い、螢光観測をバルマーα線で行えば、光学的アクセスその他が真空紫外の場合に比して大幅に緩和され、大形プラズマ装置で実行出来るシステムになりうることを示した(裏面第6文献として発表予定)。(3)真空紫外レーザーの波長同調域を拡げるため、金属蒸気中の二光子共鳴四波長混合により炭素の共鳴線に同調できる出力10Wの光源を得た(第1文献として発表)。色素と金属媒質を変えれば、ベリリウム,酸素等ほとんどすべての軽原子に同調できる光源を得ることが出来る。以上新領域のレーザー螢光法の発展の研究と併せて、現在のレーザー光源を用いた高温プラズマ中の粒子挙動解明のためのSN比の検討(第3文献に発表して、第5文献に投稿中),それを用いてのヘリオトロニEプラズマ中の粒子挙動の解明(第2文献として発表)を行い、高温プラズマ中への水素原子の侵入,その異方性,プラズマの粒子閉じ込め時間の評価等について成果を挙げた。
初期生体防御系におけるストレスシグナル受容体としてのスフィンゴ糖脂質

本研究は、初期生体防御系(自然免疫系)におけるストレスシグナルの受容機構を明らかにする目的で行われ、Hsp70の構造と免疫学的機能について以下に示す結果が得られた。分子シャペロンのなかで熱ショックタンパク質70(Hsp70)を取り上げた。最初に、小胞体のHsp70であるBiPと実際の変性タンパク質(セルピンである卵白アルブミンの熱変性分子)との相互作用について調べた。その結果、BiPが結合するペプチドはタンパク質が熱変性すると分子表面に露出する疎水性ペプチドで、その相互作用はK_d値が0.5μM程度であることを見出した。次に、自然免疫系の細胞がHsp70を認識するためのHspの構造的特徴を明らかにした。マウス誘導型Hsp72とその変異体タンパク質を大腸菌で発現させた。Hsp72のC末端αヘリックス領域はオリゴマーの形成と機能制御に関与していることが明らかとなった。組換体をプローブとして、株化された培養細胞およびマウス由来の脾細胞や腹腔マクロファージとの結合ならびにその認識部位について解析した結果、Hsp72は、マクロファージや樹状細胞、NK細胞などの自然免疫担当細胞、B細胞の抗原提示細胞と結合した。さらに、培養細胞P388D1においてHsp72と相互作用する受容体分子の検索を試みた。プロテアーゼ処理した細胞へのHsp72の結合を解析したところ、プロテアーゼKおよびトリプシン消化した細胞へのHsp72の結合が有意に低下したため、受容体はタンパク質性であることが示された。細胞への結合を阻害するような化合物を探すことによって、その特徴から受容体の候補を検討したところ、Hsp72に対する受容体はスカベンジャー受容体の一種であるか、あるいはスカベンジャー受容体と似た結合特性を持つ他の受容体である可能性が示唆された。細胞が"非自己である"または"危険である"ということを生体防御機構の免疫系に知らせるには,常にMHCクラスI分子に依存するとは限らない。細胞が受ける種々のストレスに応答して発現される分子が"危険信号"として関与する機構も考えられる。本研究では,ストレス誘導型発現分子である熱ショックタンパク質(Hsp)の免疫学的機能と自然免疫系との相互作用について解析を試みた。まず,Hsp分子が生細胞の表面上に危険信号として提示される機構が存在するのかについて考察した。ハプロタイプH-2^b系統マウスC57BL/6由来のルイス肺癌カルシノーマLL/2細胞を42°Cで2時間処理し4時間の回復期をおいた後の生存率はトリパンブルー染色において99%以上であり,熱処理細胞において顕著なhsp72の誘導がウエスタンブロッティング法により観察された。細胞表面上に提示された誘導型hsp72の検出は,死細胞の核に特異的に取り込まれるヨウ化プロピジウムで染色することによって生細胞と死細胞を区別し,抗hsp72モノクローナル抗体を用いたフローサイトメトリー法(FCM)によって行った。その結果,熱処理していない生細胞でもその約16%が,熱処理を施すことにより約32%の細胞がhsp72を表面提示することが観察された。また,ヒト細胞株K-562についても同様な結果が得られ、ある種の腫瘍生細胞において通常細胞内にしか誘導されないと考えられていたhsp72が特殊なストレス条件下で細胞外に提示される機構が存在することを明らかにした。次に,自然免疫系の細胞群との結合を調べるために,プローブとなるhsp72分子を大腸菌発現により調製した。

hsp72をビオチン化した後,C57BL/6マウスの牌細胞との結合についてFCMで解析したところ,hsp72は脾細胞と結合し,全脾細胞中の約36%が陽性を示した。結合した細胞のポピュレーションを検討したところ,hsp72を結合する細胞のほとんどが,CD3εに対して陰性であるのに対してMHC classIIに陽性であったことから,T細胞群ではなく抗原提示能を有する細胞群に属することが判明した。熱ショックタンパク質(hsp)は細胞内において様々なシャペロン機能に関与している他、近年では腫瘍免疫等にみられるような自然免疫系への関与が知られている。しかしhspが自然免疫系の細胞によって認識される機構については不明なところも多い。そこで、本年度は、マウスの誘導型hsp72を用いて自然免疫担当細胞との結合に重要なhspの構造部位を明らかにすることを目的に実験を行い、以下の成果を得た。まず、hsp72のC末端を順次欠失したd(1-615),d(1-562),d(1-543),d(1-384)とhsp72の全長を合むFullおよび、N末端のATPaseドメインを欠失したd(385-641),d(385-615)をそれぞれ大腸菌により発現させ、これをプローブとして自然免疫担当細胞との結合について検討した。細胞にはDBA/2マウス由来のlymphoid neoplasmであるP388D1細胞と、同系マウス由来のmastocytoma、P815をコントロールとして用い、ビオチン化した各hspとの結合を間接蛍光法によりフローサイトメトリーで検出した。まず、Full, d(1-543),d(1-384)について検討したところP388D1とFullのみが結合し、この結合は飽和曲線に従い、非ビオチン化Fullによってのみ阻害された。さらにd(1-615),d(1-562)およびd(385-641),d(385-615)についても検討したところ、Fullには及ばないもののP388D1細胞と結合した。さらにC57BL/6マウス脾細胞との結合について検討すると、Full、d(385-641)、d(385-615)がそれぞれ全脾細胞の約43%、65%、74%と結合した。さらに、結合した細胞の大半がCD3_εに陰性であるのに対してMHCclass llに陽性であったことから、結合した細胞はT細胞群ではなく抗原提示能を有する細胞群に属することが明らかとなり、これらの細胞の一部のポピュレーションがマクロファージのマーカーであるCD11bおよび樹状細胞のマーカーであるCD11cに陽性を示した。また、マーカーNK1.1陽性のNK細胞への結合も観察された。そこで、チオグリコレート培地のC57BL/6マウスへの腹腔内注射により腹腔滲出性マクロファージを誘導し、hsp72-Full、d(1-384)、d(385-641)、d(385-615)との結合について検討したところ、hsp72-Full、d(385-641)、d(385-615)がCD11b陽性腹腔マクロファージのそれぞれ42%、92%、98%と結合した。以上より、自然免疫担当細胞とhsp72との結合にはhsp72の543残基以後のC末端の構造が重要であるこを明らかにした。熱ショックタンパク質(hsp)はシャペロン機能の他に免疫系への機能も有することが報告されている。前年度において、免疫細胞に作用するにはマウス誘導型hsp72の543残基以後のC末端の構造が重要であることを明らかにした。本年度は、hsp72と相互作用する分子に関する実験を行い、以下の成果を得た。
麻酔・手術侵襲の客観的指標としての細胞アポトーシス測定の有用性の検討

【目的】アポトーシスは細胞の自然死として壊死とは異なる細胞死と定義される。これまで手術侵襲によるアポトーシスの可溶性成分に対する影響について報告してきた。今回、生体防御と免疫能に最も関連する好中球とリンパ球の心臓手術周術期でのアポトーシスの変化について検討したので報告する。【対象および方法】大量フェンタニール麻酔により冠動脈バイパス術を受けた患者6名を対象とした。術前、術直後、術後1日目、術後5日目に採血を行い、好中球、リンパ球を分離し、それぞれを1X10^6/mLになるように調整した。これを37度の恒温槽で6時間培養し、塗沫標本、DNAラダー、フローサイトメトリーを用いてアポトーシスの程度を測定した。また培養上清を用いてCe11 Death Detection ELISAによる検討も行った。【結果】好中球数は術前平均2475/mm3から術後9062へと増加したのに対して、リンパ球数は術前2301/mm3から術後689へと減少した。好中球での術前、アポトーシスの率は30.5%から術後10.4%へと低下し、その後徐々に術直前値へと回復した。これに対してリンパ球の術前アポトーシス率は13.3%から術後33.5%へと増加した。これらの血球数、アポトーシスの変化は術後徐々に術前値へと回復してきた。【総括】心臓手術侵襲手術侵襲の中でも過大侵襲の一つであるが、術後の好中球数の増加は好中球のアポトーシスが抑制されたことと関係し、術後のリンパ球の減少はリンパ球のアポトーシスが促進されたことと関連性があることが示唆された。アポトーシスは遺伝子にプログラムされた細胞死として知られ“プログラム細胞死"と考えられている。多くの病理的要因や生理的現象にもみられ、生命現象に必須な“生理的細胞死"として重要な役割を果たしている。手術などの侵襲が生体のアポトーシスにどのような影響を与えるかについての報告はされていない。われわれは心臓手術侵襲、敗血症、帯状疱疹などのストレスが生体のアポトーシスへ及ぼす影響について可溶性Fas(sFas)と核マトリックスタンパク質(NMP)の変化を見ることで検討した。さらにインターロイキン6(IL6)などのサイトカインと関係についても検討した。心臓手術患者の術前値を正常値とみなすとsFasは1.13±0.16U/ml,NMPは測定値未満、心臓手術術後ではsFas3.59±0.28,NMP24.58±10.6U/mlと有意に高値を示した。敗血症患者ではsFas2.57±0.61と増加傾向を示しNMPは測定値未満であった。心臓手術患者では手術直後にsFasの上昇が見られ術後徐々に低下してくることが判明した。これより心臓手術侵襲によりアポトーシスは促進され、侵襲程度も表す可能性が示唆された。コルチゾールとsFasの間には相関係数0.691,p<0.011の良い相関が得られた。しかしIL6,IL8とsFasの間の相関係数はそれぞれ0.22,0.15と有意な相関関係は認められなかった。敗血症患者では内分泌・サイトカインネットワークが密接に関係し、活性化されていることが判明した。帯状疱疹の発症早期の患者では治療経過によるsFasの変動は認めずアポトーシスへの影響は少ないと考えられた。1)手術侵襲におけるアポトーシスへの影響について可溶性アポトーシス成分の変動を周術期で検討した。対象手術は冠動脈バイパス術、食道切除再建術、肝部分切除術とした。測定項目は可溶性Fas、可溶性Fas-Ligand、可溶性Bcl-2のアポトーシスに関連する成分と手術侵襲程度を示すIL-6、コルチゾールとした。sFasは各手術群とも手術終了後に高値を示し、sFas-L、Bcl-2はほぼ一定の値を示すか、測定感度以下であった。sFasはIL-6、コルチゾールと同様の変化を示した。手術侵襲の可溶性アポトーシス成分への影響はsFasの変動がsFas-L、Bcl-2より大きく、かつ心臓手術侵襲での影響が大きいことが判明した。2)敗血症性ショックの病態の形成について、敗血症性ショック患者の予後とNOX、サイトカイン、内分泌、アポトーシス反応との関連について検討した。敗血症性ショック患者の死亡群は生存群に比べサイトカイン反応、内分泌反応、アポトーシスの変化を示す種々のメディエータが高値を示す傾向が認められた。3)肝の虚血再灌流障害における障害メカニズムの検討をラット肝虚血再灌流モデルを用いて検討した。肝障害モデルにおいては肝細胞の虚血のみでなく、アポトーシスが関与していることが、肝組織のTUNNEL法を用いた染色で証明され。同時にWestern Blot法でFasの増加が認められ、肝虚血再灌流にはFas-Fas-L系を介したアポトーシスの関与が示唆された。4)肝虚血再灌流、上腸間膜動脈の虚血再灌流、敗血症のラットモデルで各病態に応じたサイトカイン反応、アポトーシス反応が異なり、種々病態で特徴があることが解明され、治療に応用されることが期待された。【目的】

アポトーシスは細胞の自然死として壊死とは異なる細胞死と定義される。これまで手術侵襲によるアポトーシスの可溶性成分に対する影響について報告してきた。今回、生体防御と免疫能に最も関連する好中球とリンパ球の心臓手術周術期でのアポトーシスの変化について検討したので報告する。【対象および方法】大量フェンタニール麻酔により冠動脈バイパス術を受けた患者6名を対象とした。術前、術直後、術後1日目、術後5日目に採血を行い、好中球、リンパ球を分離し、それぞれを1X10^6/mLになるように調整した。これを37度の恒温槽で6時間培養し、塗沫標本、DNAラダー、フローサイトメトリーを用いてアポトーシスの程度を測定した。また培養上清を用いてCe11 Death Detection ELISAによる検討も行った。【結果】好中球数は術前平均2475/mm3から術後9062へと増加したのに対して、リンパ球数は術前2301/mm3から術後689へと減少した。好中球での術前、アポトーシスの率は30.5%から術後10.4%へと低下し、その後徐々に術直前値へと回復した。これに対してリンパ球の術前アポトーシス率は13.3%から術後33.5%へと増加した。これらの血球数、アポトーシスの変化は術後徐々に術前値へと回復してきた。【総括】心臓手術侵襲手術侵襲の中でも過大侵襲の一つであるが、術後の好中球数の増加は好中球のアポトーシスが抑制されたことと関係し、術後のリンパ球の減少はリンパ球のアポトーシスが促進されたことと関連性があることが示唆された。
音声の絶対的特徴と相対的特徴を融合した頑健で柔軟な音声情報処理技術の構築

本研究では、主に二つの成果をあげた。一つ目は、大語彙連続音声認識において、音声の相対的特徴量を用いて性能向上を実現したことである。従来の大語彙連続音声認識手法は、計算の効率のため、音声の絶対的特徴量のみが用いられていた。本研究では、大語彙連続音声認識の後段処理にあたる、識別的リランキング処理に注目した。識別的リランキングの特徴量として、音声の相対的特徴量である構造的表象を用いることで、計算効率が高く、かつ精度の高い処理を実現することができた。二つ目は、雑音環境下に頑健な音声認識を実現するための雑音抑圧処理において、音声の動的な成分を適切に捉えて雑音抑圧処理を行う手法を開発し、高い性能を実現したことである。従来の雑音抑圧手法では、ある時刻フレームの音声特徴量を雑音抑圧するために、その時刻フレームの音声特徴量のみを用い、前後数フレーム分の特徴を用いていなかった。本研究では、前後数フレーム分の特徴量を入力とする手法を開発した。単純に前後数フレーム分の特徴量を入力とすると、過学習の問題が発生し、雑音抑圧性能は向上しない。本研究では、REDIAL(REgularized piecewise linear mapping with Discriminative region weighting And Long-span features)という手法を開発し、前後数フレーム分の特徴を適切に雑音処理に用いることに成功した。さらにこのREDIALは、雑音抑圧処理にとどまらず、帯域拡張処理、声質変換、マルチモーダル雑音抑圧の精度向上にも有効であることを示した。絶対・相対的特徴を融合した音声認識を実現するため、いったん音声の絶対的特徴量を用いて音声認識を行い、上位仮説をN個出力し、その後音声の相対的特徴を使って仮説をリランキングする技術を開発した。具体的には、音声の絶対的特徴として、短時間音響特徴量MFCCを隠れマルコフモデルでモデル化したものを用いて上位N仮説を出力し、音声の相対的特徴として音声の構造的表象を平均化パーセプトロンでモデル化したものを用いて仮説をリランキングした。これにより、絶対的特徴のみを用いる場合の認識精度から、10%程度の精度向上を実現した。またこの技術は、音声の構造的表象を、実用的な大語彙音声認識システムで利用することを実現した初めての技術となった。この成果を日本音響学会の全国大会で発表したところ、学生優秀発表賞を受賞することができた。相対的特徴である音声の構造的表象において、その時間変動成分を適切にモデルする手法として、「トラジェクトリ構造」と呼ぶ手法を、共同研究で開発した。従来は、MFCCの動的成分から構造的表象を抽出することで関節的に時間変動成分を取り入れていたが、トラジェクトリ構造では、構造的表象そのものの時間変動成分をモデル化している。これを先に提案したリランキング技術と組み合わせて利用したところ、精度向上が実現できた。この成果を第二著者として国際会議NCSPで発表したところ、Best Student Paper Awardを受賞することができた。音声の絶対的特徴と、音声の構造的表象の良いところを組み合わせた大語彙音声認識の実現は、2年間を通じた本研究の最終目標の一つであったが、当初想定していた解決策とは別の方法ではあったものの、既に実現し、精度向上まで確認できたため。加えて、共同研究者にも恵まれたため、同じ目的ではあるものの、あらかじめ計画していなかった手法(トラジェクトリ構造)を実現することができたため。今後も現状を維持して研究を推進していく。特に、大語彙音声認識に関しては、既に精度向上は実現したが、さらなる精度向上を実現するために、もとの研究計画で書いたモデル内での絶対的特徴・相対的特徴の組み合わせを実現する手法についてさらに詳しく研究していく。
うつ病患者の脳機能解明とこれに抗うつ薬がもたらす作用に関する機能的MRI研究

本研究は、うつ病における脳内神経回路の異常と、同疾患から回復する過程で起こる経時的変化、および背景に存在する薬物の脳内動力学を、機能的磁気共鳴撮像法(fMRI)によって評価することを目的とした。これらを明らかにする上では、比較対象として健常者ゐ認知機能を精査することが重要であり、前年度に引き続いてうつ病との関連性が深いと考えられる情動機構ならびに注意機構の神経基盤をfMRIによって検討した。更に、これらへの抗うつ薬の作用を定量的に理解する目的で、選択的セロトニン再取り込み阻害薬(SSRI)であるフルボキサミンを服用した場合の脳活動の変化も併せて検討した。各被験者(健常成人男性)には、フルボキサミンまたは乳糖(プラセボ)が無作為に割り付けられ(一重盲検試験)、指定薬物を服薬した上でfMRI検査に臨み、情動図版課題ならびにストループ型干渉課題(注意機能を調べる標準的な心理課題)を遂行した。検査で得られたfMRI画像に対して標準的な画像処理を施した上で統計解析を行い、情動機構ならびに注意機構に関わる脳領域の同定を行った。その結果プラセボ服用下では、情動図版課題遂行時に扁桃体・視床・帯状回・視覚野などの領域において、またストループ課題遂行時には帯状回運動野・尾状核・被核・視覚野・小脳などの領域において統計的に有意な脳活動の賦活が認められた。一方、フルボキサミン服用時は、これらの領域の多くで賦活の低下が認められ、その傾向は特に大脳辺縁系において顕著であることが分かった。現在、うつ病患者群を対象に同様のfMRI検査が進行中で、脳の賦活強度や範囲が発病期から寛解期に至る過程でどのように変化していくか、またうつ尺度等との関連が見られるか等の検討を行っている。本研究は、うつ病における脳内神経回路の異常と、同疾患から回復する過程で起こる経時的な変化、および背景に存在する薬物の脳内動力学を、機能的磁気共鳴撮像法(fMRI)によって評価することを目的とした。これを明らかにする上では、比較対象として健常者の認知機能を精査することが重要であるため、本年度は精神疾患への既往歴がない健常人を対象として、注意機構の神経基盤をfMRIによって精査した。また、これが抗うつ薬の影響下で如何なる修飾を受けるか定量的に検討する必要があるため、代表的な選択的セロトニン再取り込み阻害薬(SSRI)であるフルボキサミンを服用した場合の脳活動の変化も併せて検討した。被験者は健常男性13名(平均年齢29歳)とし、各人に対し最低2週間の間隔を空けて計2回の検査を実施した。毎回の検査でフルボキサミンまたは乳糖(プラセボ)が無作為に割り付けられ(一重盲検試験)、2回の検査を通して双方の薬物の影響下での脳活動が記録された。被験者は指定薬物を服薬した上でfMRI検査に臨み、ストループ型干渉課題(注意機能を調べる標準的な心理課題)を遂行した。検査で得られたfMRI画像に対して標準的な画像処理を施した上で統計解析を行い、注意機能に関わる脳領域の同定を行った。その結果、プラセボ服用下では、帯状回運動野、大脳辺縁系(尾状核・被核)、視覚野、小脳などの領域において統計的に有意な脳活動の賦活が認められた。また、各部位における活動の時間的な変動が互いに相関することが分かった。一方、フルボキサミン服用時は、これらの領域の多くで賦活の低下が認められ、その傾向は特に辺縁系において顕著であることが分かった。今後、うつ病患者群を対象に同様の検査を行い、脳の賦活強度や範囲が、発病期から寛解期に至る過程でどのように変化していくか、またうつ尺度等との関連が見られるか等の検討を行う予定である。

現在、うつ病患者群を対象に同様のfMRI検査が進行中で、脳の賦活強度や範囲が発病期から寛解期に至る過程でどのように変化していくか、またうつ尺度等との関連が見られるか等の検討を行っている。
マルハナバチ送粉系の成立過程と成立条件の解析

伊豆諸島のうち、マルハナバチの分布の有無によりマルハナバチの分布する伊豆大島とマルハナバチの分布しない八丈島、新島を対象に調査を行なった。対照のため本州千葉県の清澄山周辺においても調査を行なった。また、重点領域研究地球共生系の全体会議・班会議・シンポジウムに出席し、研究計画・研究成果を発表した。伊豆諸島の各島において調査場所を設定し、調査場所に存在する種子植物のリストを作成し、個体数を測定した。調査場所において開花している植物種について花をサンプリングした。サンプリングした花について花蜜の量をマイクロシリンジを用いて測定し、花蜜の濃度を糖度計を用いて測定した。実験室に持ち帰った花について花粉の量をセミミクロ分析天秤を用いて測定した。開花時期の調査により、本州の清澄山および伊豆大島では春から初夏にかけてマルハナバチが訪花・採餌するキブシ・オオシマザクラ・オオシマツツジ・ハコネウツギ・ウツギ・オオバイボタ・ホタルブクロなどの植物が約2週間間隔で次々と開花するのに対し、八丈島および新島ではこれらの植物の開花時期・開花期間などに変化が認められた。八丈島ではオオシマツツジが分布せず、4月下旬から5月上旬にかけて資源量の一時的な落ち込みが観察された。新島においてはマルハナバチにより採餌される植物の個体数が少なく、したがってマルハナバチにより利用される資源量も少ないことが判明した。即ち、八丈島にマルハナバチが分布していない理由の一つとして5月上旬の資源量の落ち込みを挙げることが出来ると思われる。一方新島にマルハナバチが分布していないのはマルハナバチが定着できるだけの資源量が存在しないためであると考えられる。