hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
染色体の安定維持に重要なヒトRad51ファミリータンパク質の構造、機能解析

DNA修復は細胞分裂の恒常性維持にとって必須であるが故、複数の経路によって担われている。それらの経路は、DNAが受けた損傷の種類に依存して役割分担をしていると考えられている。中でも、電離放射線や化学療法剤、またはDNA複製のエラーによってしばしば引き起こされる二重鎖DNA切断は、姉妹染色分体間でのDNA組換え(相同組換え)によって修復されることが知られている。姉妹染色分体間での相同組換えが欠損した細胞では、二重鎖DNA切断が修復されずに蓄積し、染色体間での無秩序なDNA組換えを誘発する。その結果、染色体異常がおこり、細胞はその秩序だった増殖調節能を失い、そして細胞はがん化する。この相同組換えを経由したDNA修復は、HsRad51を中心として行われていると考えられている。ところが、HsRad51の発現が臓器特異的で、脳などの臓器ではHsRad51が発現していないことが分かってきた。このことはHsRad51を含まない組換え修復経路が存在することを示唆した。本研究において、HsRad51に依存しない相同組換え経路に働く遺伝子産物を同定するために、HsRad51と約20-30%の相同性を有するRad51 family(Xrcc2,Xrcc3,Rad51B,Rad51C,Rad51D)に着目した。これらの遺伝子は脳での発現が確認されている。このRad51 familyの内、その変異がある種のがんと関連していることが報告されたXrcc3を選び、その相互作用因子をhuman brain cDNA libraryからスクリーニングした。その結果、Rad51Cが脳内でのmajor Xrcc3-interacting factorであることが分かった。そして、Xrcc3・Rad51C複合体をリコンビナントタンパク質として精製し、そのDNA組換え活性(相同的対合活性)を検討した結果、Xrcc3・Rad51C複合体がHsRad51よりも強い相同的対合活性を持つことが明らかになった。XRCC3遺伝子が欠損すると染色体に不可逆的に切断が蓄積することが報告されており、このことと合わせて今回の結果は、Xrcc3がRad51CとともにDNA組換え修復の要の反応である、相同的対合反応の過程で働くDNA修復酵素であることを明らかにした。
昆虫のメラトニン受容体の機能の証明

現在まで無脊椎動物において機能的なメラトニン受容体の存在に関する確たる証拠はない。申請者は昆虫において合成酵素が概日振動体と光周性の出力因子を仲介する結節点であることを示した。このことは昆虫でメラトニン受容体を介した生理調節機能の存在を強く示唆する。加えて応募者の発表及び未発表データはメラトニンが概日リズム及び行動多型の制御機能を担っている可能性を示唆する。応募課題では機能的な昆虫メラトニン受容体の存在の証明、機能解析及び生理機能の調節様式を解明する。これらは生物学的な新規性のみならず、昆虫の光周性に対する理解を介して地球温暖化により急速に分布域を広めている衛生害虫に対する対策にもつながる可能性を秘めている。メラトニンが概日リズムに与える影響を調べるためにワモンゴキブリを用いてメラトニンの経口投与実験を行った。その結果コントロールの水投与群と比較して有意にその行動リズムの変化が確認され、リズムのノイズが減少することが確認された。ワモンゴキブリは夜行性の昆虫であるが、水投与群と比べてメラトニン投与群では昼間の行動が有意に減少し、夜間の行動活性が上昇することが確認された。引き続いてメラトニン受容体のRNAiを誘導し、行動リズムを測定したところ、メラトニンの経口投与とは逆に、行動リズムのノイズが上昇し、リズムを消失する個体が上昇した。メラトニンの合成酵素のaaNATに対してRNAiを行うと、メラトニン受容体のRNAiと同じようにリズムのノイズが上昇することが確認された。さらにaaNATのRNAi誘導個体にメラトニンを経口投与するとノイズの消失から回復することが認められた。免疫組織学的解析によりメラトニン受容体、aaNAT陽性反応はともに時計細胞及び左右に存在する時計を連結している神経線維に認められた。さらにaaNATの誘導個体にメラトニンを経口投与するとノイズの消失から回復することが認められた。メラトニンが概日リズムに与える影響については順調に進んでおり、現在投稿準備中の論文の査読にあわせて追加実験を行う予定であるが2016年度に行う予定の実験はほとんどない。しかしながら、サクサンを用いた季節適応における役割については2015年度に実験材料の手配の不備によりやや遅れており、メラトニン受容体の分子クローニングがいまだに成功していない。加えて、今年度からミツバチの行動多形に対するメラトニン受容体の役割ついて解析する予定であったが、巣箱を設置していた箇所での改修工事に合わせて2016年1月からキャンパス内から巣箱を移動することになった。改修工事終了時にあわせて改めて巣箱の設置申請を行ったが現在の所、安全上の理由により今年度は却下されてしまった。このためメラトニンの季節適応と行動多形に関する研究はやや遅れている。

ワモンゴキブリは夜行性の昆虫であるが、水投与群と比べてメラトニン投与群では昼間の行動が有意に減少し、夜間の行動活性が上昇することが確認された。引き続いてメラトニン受容体のRNAiを誘導し、行動リズムを測定したところ、メラトニンの経口投与とは逆に、行動リズムのノイズが上昇し、リズムを消失する個体が上昇した。メラトニンの合成酵素のaaNATに対してRNAiを行うと、メラトニン受容体のRNAiと同じようにリズムのノイズが上昇することが確認された。さらにaaNATのRNAi誘導個体にメラトニンを経口投与するとノイズの消失から回復することが認められた。免疫組織学的解析によりメラトニン受容体、aaNAT陽性反応はともに時計細胞及び左右に存在する時計を連結している神経線維に認められた。サクサンについて、今年は夏ごろから手配について密に連絡をやり取り、確実にサンプルを手配する。ミツバチに関しては大学での飼育に関しての申請を継続させるとともに、現在コロニーを維持している神戸市北区でRNAiの誘導やサンプリングが行うことができるように再計画をする予定である。組換え動物細胞にメラトニンを投与する実験に関しては、メラトニンが受容体に結合しないか、受容体が哺乳類細胞のエフェクターに作用しないか、あるいはカルシウム以外の系に作用しているかが今のところ不明であるために問題を解決する手段が不明である。ミツバチについてはaaNATにRNAiを誘導し、外勤化の阻害が起こるか検証をする。また、メラトニンの注射とメラトニン受容体のRNAi誘導を同時に行い、メラトニンの注射による外勤の誘導がメラトニンを介して行われているかの検証をする。PERのRNAiを行い、中枢神経系でのMELの蓄積が外勤を誘導するかの検証を行う。メラトニン受容体と生物時計因子、aaNATを免疫組織染色にて染色し、これらの位置関係がどのようになっているかの検証を行う。サクサンについてはメラトニン受容体の分子クローニングを行い、メラトニン受容体にRNAiを誘導し、休眠覚醒条件におくことで休眠覚醒が阻害されるかの検証を行う。ミツバチを用いた実験の予備実験を遂行することができなかったことが主な理由である。ミツバチについて飼育体制か、現在飼育している北区での研究体制を早急に建て直し、春先の予備実験ができなかった部分の遅れを取り戻して使用する予定である。
アスリートのキャリアトランジションに伴う発達モデルの質的検討

本研究は,「キャリアトランジションプロセスを経ていく中で,どのような発達課題に直面するのか」というリサーチクエスチョンの下,元オリンピアンへのインタビューを質的に検討した結果,オリンピアンは『自分らしさの感覚と自分らしさの混乱の間で, (1)引退に向き合い,(2)現役に折り合いをつけ,(3) 0次のキャリアに移行し, (4)つながっている感じを見出し, (5)積極的に取り組む,という発達課題に直面する』という知見を導き出した.本研究は,「キャリアトランジションプロセスを経ていく中で,どのような発達課題に直面するのか」というリサーチクエスチョンの下,元オリンピアンへのインタビューを質的に検討した結果,オリンピアンは『自分らしさの感覚と自分らしさの混乱の間で, (1)引退に向き合い,(2)現役に折り合いをつけ,(3) 0次のキャリアに移行し, (4)つながっている感じを見出し, (5)積極的に取り組む,という発達課題に直面する』という知見を導き出した.(1)研究手法の熟達(研究方法を充分利用するために取り組むべき前提)まず、質的研究法に関連する先行研究を概観・整理することで、研究手法の熟達を目指した。このことによって、調査の観点や進行方法、タイムスケジュール、インタビューの仕方や観察記録の取り方など、一貫性かつ柔軟性を有する調査マニュアルを作成することができた。(2)生涯発達心理学研究の優れた知見を概観し、整理する(発達課題についてのレビュー)生涯発達心理学研究において、これまで導き出されてきた優れた知見を概観し、整理することによって、アスリートがキャリアトランジションに伴って直面する発達課題を予測する。特に、レビンソン(1978)やブリッジズ(1980)によって、人生における過渡期に着目した一定レベルの発達モデルが導き出されている。また、その他の発達モデルを参考にしつつ、インタビュー調査における到達目標を設定した。(3)アスリートの過渡期における心理・社会的発達課題の検討対象:元日本代表級アスリートおよび元オリンピアン数名調査マニュアルを基に、元日本代表級アスリートや元オリンピアンを対象として、集中的なインタビューを実施した。その際、インタビュー資料として抽出するのは、会話の内容を録音して起こした逐語(テキスト・データ)と、「語り」の様子をビデオ収録してコード化したもの(プロトコル・データ)である。そして、それらのインタビュー資料から、「語り」の表象的特徴を分析し、会話分析によるアスリートにとっての「過渡期」の形態や意味づけ、体験様式等を明らかにすることを目指した。(1)研究手法の熟達(研究方法を充分利用するために取り組むべき前提)質的研究法に関連する先行研究を概観・整理したレビュー研究を、日本体育学会第62回大会(鹿屋体育大学:平成23年9月25日27日開催予定)における体育心理分科会主催のキーノートレクチャーで公表する予定である。そこでは、本研究テーマにおいて中心的な分析方法である質的研究法について、1.質的研究を行う上での留意点、2.手法としてのリーズナブルさに惑わされない、3.そもそも「質的」とはどういうことか、などのトピックを掲げ、持論を披瀝し、有意義な意見交換の場にしたい。そこでは、これまでに公表された様々な心理社会的発達モデルを参考にしつつ、インタビュー調査における到達目標を設定する。(3)アスリートの過渡期における心理・社会的発達課題の検討対象:元日本代表級アスリートおよび元オリンピアン数名調査マニュアルを基に、元日本代表級アスリートや元オリンピアンを対象として、集中的なインタビューを実施した研究報告を、日本体育学会第61回大会(中京大学)にて発表した。タイトルは、「アスリートのキャリアトランジションに伴う発達モデルの質的検討TEMを利用した質的アプローチから」であった。昨今の質的研究への関心度の高さの影響もあり、有意義な意見交換の場となった。(1)研究手法の熟達質的研究法に関連する先行研究を概観・整理することで、研究手法の熟達を目指した。このことによって、調査の観点や進行方法、タイムスケジュール、インタビューの仕方や観察記録の取り方など、一貫性かつ柔軟性を有する調査マニュアルを作成し、実践することができた。(2)生涯発達心理学研究の優れた知見を概観し、整理する(発達課題についてのレビュー)生涯発達心理学研究において、これまで導き出されてきた優れた知見を概観し、整理した。このことにより、アスリートがキャリアトランジションに伴って直面する発達課題を仮説的に導き出すことができた。(3)アスリートの過渡期における心理・社会的発達課題の検討対象:元日本代表級アスリートおよび元オリンピアン10名調査マニュアルを基に、元日本代表級アスリートや元オリンピアンを対象として、集中的なインタビューを実施した。そして、それらのインタビュー資料から、「語り」の表象的特徴を分析し、会話分析によるアスリートにとっての「過渡期」の形態や意味づけ、体験様式等を仮説的に導き出した。(4)研究過程で得られた知見の公表()本研究から得られた成果を国内外で著書の分担執筆として公表した。また、3ヶ年計画の最終年度であることから、研究成果報告書を作成した。
高齢者の健康寿命延伸のための身体能力向上効果に着目したマウスガードの試作研究

マウスガードの身体能力を向上する効果として、等尺性筋活動における背筋力、ならびに等張性筋活動におけるベンチプレス、レッグプレスの運動速度を向上する効果が有意に認められた。これらの主導筋と顎二腹筋の活動に強い相関が認められたため、マウスガードによる下顎骨の固定が、筋活動を向上することを明らかにした。歯学における顎口腔領域では、補綴・咬合が健康状態や身体能力に影響を及ぼすという臨床的報告はなされているものの、その効果発生メカニズムは明らかにされていない。咬合改善が可能なマウスガードの装着目的は、一般的には顎顔面口腔領域の外傷予防と脳震盪の予防などが挙げられる。身体能力向上については、とくに背筋力や握力などの等尺性筋力の向上効果や重心動揺の減少など一部の臨床的報告がなされている。マウスガードが身体能力向上に及ぼす影響を定量化し、メカニズムを工学的に解析することで、高齢者の身体能力向上を図り健康寿命の伸長を目指す。歯科医師会との地域共同プロジェクトとして新しい発想によるマウスガードを開発するため、研究メンバーがこれまでに構築してきた工学的手法を応用して身体能力向上メカニズムを解明するとともに、高齢者に有用な設計について検討する。当該年度はマウスガードの力学特性評価と顎口腔筋骨格系有限要素モデルの構築、および基本的な身体運動能力の定量的評価を中心に実施した。具体的には、マウスガードによる咬合時の顎口腔内筋骨格系の工学的解析手法の検討のため、マウスガードの装着を可能とする顎口腔内筋骨格系の三次元有限要素モデルの構築を進めるとともに、マウスガードの有無が基本的身体運動能力に及ぼす影響の定量的評価として、背筋力、脚伸展力ならびにバットスイング速度を計測し、統計的手法に基づいて、背筋力の向上に有意な差が認められることを明らかにした。これまで、身体能力向上については、とくに背筋力や握力などの等尺性筋力の向上効果や重心動揺の減少など一部の臨床的報告がなされている。これまでに、等尺性筋力では背筋力に顕著な向上効果が認められ、等張性筋力では上肢の運動であるベンチプレス、ならびに下肢の運動であるレッグプレスともに、初期加速時において顕著な運動速度向上が認められた。当該年度は、筋力向上効果のメカニズムを解明し、高齢者の健康寿命延伸を目的としたマウスガードの新たな設計を明らかにする。等尺性筋力で有意な差が認められた背筋力の向上効果に的を絞り、主導筋である僧帽筋の上部の筋活動と、マウスガードを装着することにより変化する顎口腔領域周辺の筋肉の筋活動との関連をEMGを用いて実験的に計測した。その際、口腔内における咬合圧分布、ならびに咬合面積についても同時に計測した。その結果、僧帽筋の筋活動と咀嚼筋群の筋活動、ならびに咬合圧との間に、強い相関は認められなかった。その一方で、顎二腹筋との間には比較的強い相関が認められたため、マウスガードを装着することにより、下顎骨の固定状態が変化し、頸部周辺の筋活動の変化が力学的に主導筋である僧帽筋の筋活動に影響を与えた結果、背筋力が向上したと予想された。そのため、背筋力を向上するマウスガードには、最適な厚さがあることを明らかにした。
ココナッツミルク中の主サイトカイニンの生物学的意義

サイトカイニンは、植物組織の培養細胞技術の開発途上で見出された植物ホルモンの総称であり、極低濃度で植物細胞に対し増殖や分化の制御に関わっている。申請者は、古くからサイトカイニン活性を持つことが知られているココナッツミルク(Cocos nucifera L.)から、タバコカルスを用いた生物検定法を指標として、活性全体の20%を説明できるサイトカイニン活性物質を単離した。2〓-NMR,HRFAB-MS,GLC,光学分割HPLCのデータ解析により、この化合物はtrans-zeatine ribosideに2分子のL-arabinose ,3分子のD-galactoseが結合した構造(14-O-{3-O-[β-D-galactopyranosyl-(1→2)-α-D-galactopyranosyl-(1→3)-α-L-arabinofuranosyl]-4-O-(α-L-arabinofuranosyl)-β-D-galactopyranosyl}-trans-zeatin riboside)であることを証明しGAZERと命名した。GAZERは水溶性であり、安定性も高いが、細胞内では加水分解されzeatinとして活性発現に携わっているものと予想される。水溶性・安定性に対して糖鎖はいかなる役割を担っているのか、糖鎖とサイトカイニン活性との関連性については、誘導体等を作成し引き続き検討を行う。一方、N-phenyl-N′-(4-pyridyl)urea(4PU)をリガンドとしたアフィニティーゲルを作成し、モヤシよりサイトカイニン結合蛋白(CSBP)を単離した。cDNAから分子量は17kDaであり、ホモロジー検索から花粉アレルギー症に関与する蛋白質に近いとの結果を得た。ココナッツミルク(Cocos nucifera L.)にはサイトカイニン活性があることが知られておりzeatin,zeatine ribosido(ZR)などがサイトカイニン活性物質として単離された。しかしながら、1,3-diphenylureaを含めたいずれの化合物も、その単独の含有量からココナッツミルクのサイトカイニン活性全体の1%未満しか説明できない。申請者は、ココナッツミルク中の主サイトカイニンの探索を、タバコカルスを用いた生物検定法を指標として行い、新規サイトカイニンG_3R_2-ZRを単離し構造式を決定した。この化合物の活性と含有量からG_3R_2-ZRがココナッツミルク中の主サイトカイニンであると結論した。G_3R_2-ZRは水溶性であり、安定性も高い。成熟発芽過程において、G_3R_2-ZRがどのように関与しているか、水溶性・安定性に対して糖鎖はいかなる役割を担っているのか、その生物学的意義を究明することは、サイトカイニンの生理作用に対する理解に貢献するのみならず、使いやすく安定な植物ホルモンの供給への道を開くものと期待される。ココナッツの各成長熟成段階でのG_3R_2-ZRの分布と含量を分析し、種子胚の発育とサイトカイニンの貯蔵体および活性体との関連性を探究するために、高速液体クロマトグラフィーによる安定した定量分析の条件検討を行うと共に、成熟度別・組織別ココナッツ試料の入手方法の調査を行っている。一方、G_3R_2-ZRは細胞内で加水分解されzeatinとして活性発現に携わっているものと予想される。糖鎖とサイトカイニン活性との関連性についてG_3R_2-ZR誘導体を作成して検討を行っている。

サイトカイニンは、植物組織の培養細胞技術の開発途上で見出された植物ホルモンの総称であり、極低濃度で植物細胞に対し増殖や分化の制御に関わっている。申請者は、古くからサイトカイニン活性を持つことが知られているココナッツミルク(Cocosnucifera L.)から、タバコカルスを用いた生物検定法を指標として、活性全体の20%を説明できるサイトカイニン活性物質を単離した。2D-NMR,HRFAB-MS,GLC,光学分割HPLCのデータ解析により、この化合物はtrans-zeatine ribosideに2分子のL-arabinose,3分子のD-galactoseが結合した構造(14-O-{3-O-[β-D-galactopyranosyl-(1→2)-α-D-galactopyranosyl-(1→3)-α-L-arabinofuranosyl]-4-O-(α-L-arabinofuranosyl)-β-D-galactopyranosyl}-trans-zeatin riboside)であることを証明しGAZERと命名した。GAZERは水溶性であり、安定性も高いが、細胞内では加水分解されzeatinとして活性発現に携わっているものと予想される。水溶性・安定性に対して糖鎖はいかなる役割を担っているのか、糖鎖とサイトカイニン活性との関連性については、誘導体等を作成し引き続き検討を行う。一方、N-phenyl-N′-(4-pyridyl)urea(4PU)をリガンドとしたアフィニティーゲルを作成し、モヤシよりサイトカイニン結合蛋白(CSBP)を単離した。cDNAから分子量は17kDaであり、ホモロジー検索から花粉アレルギー症に関与する蛋白質に近いとの結果を得た。
日本酒のグローバル展開に関する複眼的研究－現場発の理論創造－

本研究では,日本酒の開発,生産から販売そして消費までの間でおこなわれる一連の情報の生成とその流通の過程を考察することで,どのようなアクターが存在し,それぞれの段階でどのような情報を生成しているのかについて,理論的枠組みを提示することができた。日本酒の開発から消費までの間では,生産の現場で生産情報が生成されていた。それが商社や問屋に引き渡され,そこで分類情報が生成されていた。分類情報を基に,最終的な消費の現場であるレストランや小売店で,適合情報が生成されていた。これらの3つの情報(3M information)の生成が,それぞれの現場でおこなわれていた。平成27年度は、国内の灘・伏見の大手酒造会社2社と新潟県内の酒造会社7社、日本酒関連製品のメーカーを訪問し、海外輸出の概況についてヒアリングを実施した。また、新潟県酒造組合、県醸造試験場を訪問し、県内酒造会社の海外展開に関する概況についてもヒアリングをおこなった。さらに、研究代表者は県酒造組合の香港事業にも参加し、香港でおこなわれた商談会(BtoB)と香港ミニ酒の陣(BtoC)において参与観察をおこなった。さらには、新潟県内で日本酒の流通を担う酒販会社を訪問し、流通の観点から日本酒の海外展開に関するヒアリングも実施した。国内の酒造会社でのヒアリング結果から見えてきたことは、大手のナショナルブランドとして確立している酒造会社と地酒と呼ばれる地域に密着した酒造会社とでは、海外展開の仕方に違いがあることであった。進出時期や輸出製品の価格帯、輸出数、現地製造拠点の有無など多くの違いが見られた。さらには、地酒の海外展開にいおいては、その大部分が価格帯の高い製品群であり、海外の日本食レストランが主要な販売先となっていた。ここ近年における日本酒の輸出量の伸びは、海外における日本食レストランの増加と比例しており、海外での小売り販売の比率はまだまだ極めて低い現状である。今後は、国内でのヒアリングに基づき、日本酒の輸出量が多いアメリカ・香港・韓国・台湾の4つの市場で現地調査をおこない、現地でどのように流通し、販売され、消費されているのか、それぞれの市場の特徴を考慮に入れながら分析をおこなっていく予定である。初年度である平成27年度は、国内の酒造会社を訪問し、海外展開に関する基礎的なヒアリングをおこなう予定であった。当社の計画通り、灘・伏見の大手酒造会社2社と新潟県内酒造会社7社でヒアリングを実施し、各酒造会社の海外展開の概況を把握することができた。さらには、2年目から本格的に開始する海外調査の協力を各酒造会社に依頼し、概ね快諾をもらっており、2年目からの海外調査をスムースに開始することができる。平成28年度は、本研究プロジェクトの2年目に当たり、国内の地酒メーカーと商社、さらには日本からの輸出上位国での調査を実施した。具体的には、地酒メーカーの調査では、主として輸出を始めるきっかけから、現在の輸出状況、さらには現在抱えている問題点などをヒアリングすることで、輸出開始時期から現在までの輸出の概略について基礎的なデータを収集した。商社へのヒアリングでは、多くの銘柄を扱う中で、銘柄ごとの違いを顧客にどのように伝えているのかについてヒアリングをおこなった。平成28年度の一つの大きな目的は、日本からの日本酒輸出上位国での市場調査と現地生産拠点の調査であった。結果、今年度は、中国・香港・アメリカ・台湾・タイの5つの国と地域で調査をおこなった。アメリカ・台湾では、市場調査に加えて、現地で生産される清酒の調査もおこなった。上記の調査から、以下のような7つの知見を得ることができた。(1)日本からの日本酒輸出が増加している、(2)海外生産の日本酒の消費と合わさって海外での需要は増えている、(3)日本酒の消費拡大は、量的な拡大とともに、質的な多様化をもたらしている、(4)量的拡大は、レストランという消費チャネルの拡大が背景にある、(5)質的多様化は、レストラン間での競争によって生み出された、(6)質的多様化の背後には、消費者のワイン消費のスタイルの踏襲がある、(7)こうした消費スタイルに合うような形で、情報の付加プロセスが構築されつつあることで、多様な消費の増加がみられるようになった平成28年度は、計画通り、主要な海外市場と海外生産拠点の調査を実施することができた。他方で、日韓関係が芳しくないこともあり、韓国市場調査については延期をしている。国内の地酒メーカーや商社への調査についても、新潟県や新潟県酒造組合からの協力もあり、順調に進んでいる。以上のように、平成28年度も国内調査、海外調査ともに概ね順調に進展してきていると言うことができる。平成29年度は、主に日本酒が輸出されている主要な市場である米国と韓国での流通・販売の現地調査をおこなった。米国での調査では、日本酒の輸出商社である共同貿易、JFC、西本貿易のロサンジェルス事務所を訪問して、米国での流通・販売状況に関するヒアリングをおこなった。また韓国では、日本の主要な銘柄を取り扱っている現地ディストビューターである日本酒コリアを訪問して、韓国での流通・販売の状況のヒアリングをおこなった。また、米国・韓国では、現地の日本食レストランを訪問し、どのような形式で日本酒が提供されているのかに関するレストラン調査や日系のスーパーや現地の高級スーパーマーケットで日本酒がどのように販売されているかについてのレストラン・小売店調査もおこなった。さらに、日本国内の酒蔵調査も前年度に引き続き実施し、新潟県の佐渡の酒蔵3社を訪問し、海外展開に関するヒアリングを実施した。

研究期間全体を通じて、日本酒が海外に輸出される際の生産現場・流通現場・消費現場の3つの段階を、日本酒の主要輸出先である米国・台湾・香港・韓国の4つの国と地域を中心に調査を実施してきた。また、研究計画で構想したように、日本酒に関連する現場の方々と研究者とが一緒に考えるワークショップを開催する場を作り出すための土台作りをおこなった。具体的には、研究代表者が所属する新潟大学と新潟県酒造組合、新潟県醸造試験場を所管する新潟県の3者で「日本酒学」についてのMOUを締結し、産官学が連携して日本酒の研究をおこなえる環境を整えてきた。今後は、今回の研究機関では調査できなかった中国での調査を実施していく予定である。近年日本酒の中国への日本酒の輸出が急増しており、大きな市場となっている。今後は、中国の日本酒市場も研究対象に入れて生産から流通・販売までの日本酒輸出の一連の流れを引き続き研究していく予定である。本研究では,日本酒の開発,生産から販売そして消費までの間でおこなわれる一連の情報の生成とその流通の過程を考察することで,どのようなアクターが存在し,それぞれの段階でどのような情報を生成しているのかについて,理論的枠組みを提示することができた。日本酒の開発から消費までの間では,生産の現場で生産情報が生成されていた。それが商社や問屋に引き渡され,そこで分類情報が生成されていた。分類情報を基に,最終的な消費の現場であるレストランや小売店で,適合情報が生成されていた。これらの3つの情報(3M information)の生成が,それぞれの現場でおこなわれていた。平成28年度は、国内でのヒアリングに基づき、日本酒の輸出量が多いアメリカ・香港・韓国・台湾の4つの市場で現地調査をおこない、現地でどのように日本酒が流通し、販売され、消費されているのか、それぞれの市場の特徴を考慮に入れながら分析をおこなっていく。さらには、新潟大学において、日本酒の海外展開に関するワークショップを開催し、これまでの研究成果を酒造会社の関係者にフィードバックし、意見交換をこなう場を設ける予定である。これまで国内の酒造メーカーや商社の輸出現状、さらには海外生産や海外市場の状況に関して、具体的なフィールドワークをおこない、多くのデータを収集してきた。今後は、これらのデータを整理して、現場の実態に即した日本酒のグローバル化に関する理論化を試みる。既に多くの地酒メーカーや商社と関係を構築しているため、それらのネットワークを生かして、現場発の理論創造を目指していく。人的資源管理論、国際社会学今年度予定していた新潟県内酒造会社への訪問が、スケジュールの調整の都合上、翌年度になったため、その分の費用が次年度使用額として発生した。会計処理が次年度にまたがってしまうため。次年度使用額は、新潟県内酒造会社への訪問費用として充当する予定である。上記の理由により、実際にはすべて使用している。
クワ遣伝資源の特性に関するバイオテクノロジーの活用と利用の基礎的研究

研究課題にもとずき1991および1992年に行った各分担者の研究成果は次の通りである。押金は、クワ主要品種およびコウゾの葯培養について、低温処理を加えた前培養の後WH,MS,B_5培地にオーキシンとサイトカイニンの濃度別組合せによる本培養を行った。その結果、クワでは胚様体形成への肥大化のみ認められたが、コウゾにおいては胚様体および不定芽の形成が観察された。本間は、クワのシュート培養におけるCdとNiの化学耐性について実験を行い、高濃度(10^<-4>M)から低濃度処理(5×10^<-7>M)へ移植する場合と、その逆の場合とについて比較検討した結果、高濃度から低濃度の場合は耐性が現れず、低濃度から高濃度処理のとき、とくにNiに高い化学耐性が認められた。久野は、クワカルスの生長に及ぼす重金属の影響を検討した。MS培地にCd,Tl,Se,Te,Fe,MnおよびCoの各濃度別元素を加え、カルス増殖の阻害度を調べた結果、10^<-6>M区ではCd>Se>Tl>Teの傾向に、10^<-5>M区ではCd>Tl>Se>Teであった。またFe50ppm,Co10ppm区では増殖を抑制し、FeおよびCo添加区ではカルス中のFe,Co濃度が対照区に比べ著しく増加した。平田は、簡便な非培養系によるクワへの遣伝子導入系を確立するため、クワ催芽種子とアグロバクテリウムとの共存培養を行った。その結果、若干個体のカナマイシン添加培地で、共存する実生が得られた。大西は、クワ下胚軸由来遊離細胞の培養条件について検討した結果、LS培地を基本にP_2O_5濃度を2倍にし、これに10^<-5>M2,4-D,10^<-7>MBA,0.1Mスクロースおよび4mL/20mLの中古培地を加えた培地を用い、28°C暗で、70回/分の往復振盪によるバッチ培養をすることにより不定根を活発に誘導させ、生長を続けることができた。柳沢は、クワの主・側根および葉から抽出したサイトカイニンを薄層クロマトで分離し、各ピークのサイトカイニンをMS培地に一定量加えカルスを培養した。その結果、葉から抽出したサイトカイニン、とくにゼアチン部分が最もカルス増殖を促進した。研究課題にもとずき行った各分担者の研究成果は次の通りである。本間は、クワのシュ-ト培養におけるCdとNiの影響について実験を行い、高濃度処理区では生長は抑制され枯死したが、継体培養によって生長は回復した。カルス培養においては上記同様の傾向に加え、継体培養による耐性のものが出現した。久野は、クワカルスの生長に対するCd,Tl,SeおよびTeの影響を調べ、Teを除く各区で処理濃度及び処理回数が増加すると、成長阻害が増大した。

各元素間では10^<-6>M区でCd>Se>Tl>Teの傾向にあったが、10^<-5>MではCd>Tl>Se>Teの順であった。カルス内の元素量はCd>Te>Tlの順に増加した。平田は簡便な非培養系によるクワへの遺伝子導入系を確立するため、桑4品種の系統を用い、アグロバクテリウムを催芽種子と共存培養させた。その結果、500実生のうち2例に僅かながらマ-カ-遺伝子GUSの発根が認められた。大西は、クワ下胚軸由来遊離細胞の培養には、分離用培地組成とは異なる培地を使うことにより良好な結果が得られた。即ちLS培地を基本にP_2O_5濃度を2倍,グルコ-ス2%,2,4-D 10^<-5>M,BA 10^<-5>M,中古培地を4ml/20ml添加し、PHを5.6に調整した培地に細胞を5×10^4/mlになるように懸濁した培養条件が最適であった。柳沢は、クワの根の主・側根および葉から抽出したサイトカイニンを薄層クロマトで分離し各ピ-クのサイトカイニンを培地に加えて、クワの条カルスを培養した結果、葉から抽出したサイトカイニンが最もカルス増殖を促進した。押金は、クワ2,3品種を用いて葯培養を行った結果、供試葯(花粉1核期)の低温処理(5°C)を行いB_5およびMS培地中にオ-キシンとサイトカイニンの濃度別組合せからカルスの形成はみられたが、胚様体の形成は認められなかった。研究課題にもとずき行った各分担者の当該年度の成果は次の通りである。押金は、前年度に続きクワと、本年新たにコウゾの葯培養について、低温処理を加えた前培養の後WH,MS,B_5培地に各種植物ホルモンの濃度別組合せによる本培養を行った結果、クワでは胚養体形成への肥大化のみ認められ、コウゾにおいては胚様体および不定芽の形成が認められた。本間は、クワのシュート培養におけるCdとNiの化学耐性について実験を行い、高濃度(10^<-4>M)から低濃度(5×10 ^<-7>M)処理へ移植する場合と、その逆の場合とについて比較検討した結果、高濃度から低濃度の場合は耐性が現れず、その逆の場合のとき、とくにNiに高い化学耐性が認められた。久野は、クワカルスの増殖におよぼす重金属の影響を検討し、MS培地にFe50ppm,Mn50ppm,Co10ppmを加えた結果、Fe,Coを加えた区では増殖を抑制した。Fe添加区ではカルス中Fe濃度は対照区の611倍、Co添加区では対照区の11002000倍に達していることが判明した。平田は、昨年の結果をふまえ、クワ10品種の催芽種子とアグロバクテリウムの共存培養を行った結果、明瞭な形質転換は得られなかったが、西伯で2個体のカナマイシン添加培地で、共存する実生が得られた。現在この個体の諸形質を調べつつある。大西は、昨年度に引き続き培地条件を検討した結果、LS培地を基本に、そのリン酸濃度を2倍にし、これに10^<-5>M2,4-D,10 ^7MBA,0.1Mサッカーロースおよび4ml/20mlの中古培地を加えた培地を用い、28°C暗で、70回/分の往復振盪によるバッチ培養から不定根の誘発並びに生長に成功した。柳沢は、クワ幼植物を根、茎、葉(子葉も含む)に分け、その各分画のサイトカイニンをMS培地に一定量加えた結果、カルスの増殖は葉から抽出したサイトカイニン、特にゼアチン部分で最も促進されることが判った。
17世紀イギリス劇作出版における文学編集確立の歴史

1616年までにベン・ジョンソンによって確立された劇作編集法が、当時の知識人や印刷出版業者からなるネットワークの中で継承され、特に1630年代と国王空位期間に出版された芝居において適用される様子と方法について調査を行った。具体的には、ジョンソン・フォリオの出版に継続して関与したリチャード・メイゲンとロバート・アロットが新参するシェイクスピア・セカンド・フォリオ(1632年)において、読み物としてのテクストを再構成するため、上演用の音声効果を支持するト書きが削除された背景を説明した。空位期間については、ウィリアム・ウィルソンの無記名印刷本の特定を進め、ネットワークの洗い出しを行った。25年度は研究計画に則し、1630年代にジョン・オークスの印刷所で印刷された劇作版本に見られる文学編集についての調査と資料収集に取り掛かった。その一方で、オークスの店を引き継ぎ、1647年のボーモント・アンド・フレッチャー・フォリオ(第一版)の印刷に始まる王党派印刷出版業者による国王空位期間の劇作出版に深く関わったウィリアム・ウィルソンによる印刷物の同定を英国の図書館に赴いて行った。ウィルソンについての調査は申請時その重要性を認識しておらず計画に含めていなかったものである。ウィルソンは、27年度に調査を計画しているボーモント・アンド・フレッチャー・フォリオ第二版(1679年)の印刷を請け負い王政復古期劇作編集の確立に貢献したジョン・メイコックの前任者でありながら、メイコック一派の祖とも言えるベン・ジョンソンの嫌ったオークス印刷所の流れを汲む人物でもある。先行研究がほとんど存在していないことから、今年度はウィリアム・ウィルソンの印刷物についての調査を先行研究の存在するオークス作品より優先した。空位期間から王政復古期に王党派の印刷出版業者の中核で活躍した印刷者であったにも関わらず、ウィルソンに関する研究がほとんど行われていないのは、彼が自らの印刷物にしばしば記名しなかったことによる。ウィルソンによる無記名印刷物の同定はそれ自体が書誌学研究分野に貢献するものでもあるが、同時に彼の後任者であるメイコックの印刷物における編集法の確立を相対評価する上で重要な資料を提供する。ウィルソン作品の同定については今年度中に論文を発表する。また、25年度のウィルソン研究を元に26年度は彼のネットワークを辿りながら時間を遡って、1630年代の劇作編集の実態について調査する計画である。26年度は、ジョン・ウェブスターおよびジョン・マーストンの劇作を中心に読本編集の発展について調査することにしていたが、次の理由により計画を変更した。ウェブスターおよびマーストンの劇作版本を調査したところ、記名されている出版社と印刷者が多種多様であるため、読本編集に貢献した人物を特定することが極めて難しい。また、これまでの研究で、組織的に劇作編集を行っていたことがわかっている、ヘンリー・へリングマンを中心とする編集者および印刷者、作家による文学同人グループの目立った関与も認められなかった。このため、劇作本の出版に関わった出版者および印刷者のネットワークに焦点を当てた調査に立ち返ることとした。研究調査内容は以下の通りである。25年度から継続中であった印刷者ウィリアム・ウィルソンの無記名印刷物に関して、印刷者同定が可能である版本が5作品にまで増加したため、長期休暇を利用して、主に大英図書館で欠損活字と使用された紙の調査を行った。結果、全作品についてウィルソンの関与を示す確証が得られたため、本調査結果を国際誌へ投稿予定の論文に含めることとした。本論文は昨年度中に投稿する計画であったが、同定対象の版本が増えたことで、証拠の収集に時間を要したことと、それぞれの版本につき共同印刷社の有無についても調査する必要があったため、現在も執筆継続中である。現在までに上記5作品に関する調査は完了した。ウィルソンの無記名印刷本はその大半がヘンリー・へリングマンによって出版されていることから、昨年度継続して行った印刷者同定の研究は、ウィルソンがへリングマンの出版グループの中核にいたことを証明する材料にもなる。このへリングマンのグループの中で行われていた編集作業の分担についても今後の重要な研究課題のうちの一つである。27年度は前年度までに英国の稀覯本図書館で収集した資料を基に引き続きウィリアム・ウィルソンの無記名印刷物5作品に関する論文の執筆を行った。執筆を行う過程において新たに確認の必要が生じた古版本については、他大学よりファクシミリを取り寄せて対応した。また、論文中、証拠として提出することが必要な写真についても、新たに20点を英国の肖像図書館より取り寄せた。本論考については、当初の計画より調査対象となる古版本数が増えたため、収集した証拠資料も膨大化し、その結果、分析と整理にも時間を要することとなった。27年度中に欠損活字と欠損した意匠および印刷紙の同定に関する議論を9割完了したため、残り1割のまとめの作業に正味一月かけ、peer-reviewを経て国際誌上で発表の運びをつける計画である。ウィルソンの無記名印刷物特定は、17世紀劇作編集の発展過程を解明する上で、当該印刷者がその一員として職務を果たした印刷出版業者グループによる編集活動の解明を行う上で基礎となる。しかし、不明印刷者の特定は特定作業の困難さから書誌学界においても敬遠される傾向の高い分野であり、1冊でも特定に成功すれば学界に貢献できる。27年度の研究成果は、前年度までの調査で印刷者特定の可能性が見込めた5作品について、活字の欠損部位の分析等から確証をもって結論に至ったことと、これを論文としてまとめたことである。

発表については残念ながら来年度の報告となる。加えて、27年度後半より、申請当初の計画にはないシェイクスピア・セカンドフォリオに確認される文学編集に関する調査にも取り掛かっている。本調査は26年度に成果の得られなかったウェブスター及びマーストン作品の古版本調査に代わり1630年代における劇作編集の過程を解明する手懸かりとなることが期待される。調査結果は28年度の学会において発表する。当初の計画より調査対象となる古版本数が増えたため、収集した証拠資料も膨大化し、その結果、分析と整理にも時間を要することとなった。前年度までの調査で印刷者特定の可能性が見込めた5作品について、確証をもって特定に至る過程の論考に調査と同程度の時間を要したことによる。28年度は計画を変更し、当初計画に含めていなかったシェイクスピア・セカンド・フォリオ(1632)に確認できる文学編集の形跡について調査を行った。本調査の途中経過については、2016年10月のシェイクスピア学会セミナー、`The Second Folio Revisited'(コーディネーター:住本規子明星大学教授)で発表した。シェイクスピア・セカンドフォリオについては、申請書にも記した通り、Black and ShaaberのShakespeare's Seventeenth-Century Editors (1937)によって、第三版、第四版とともにテクスト校訂が網羅されている。校訂の中には、誤植の修正に留まらない文学的意図を含む修正箇所が存在していることも報告されたが、誰が、どのような目的でそのような編集を行ったのかという謎については解明されていなかった。本研究では、Black and Shaaberによって「恣意的」と判断され、これまで追求されることのなかった音響効果のト書きの削除が、ベン・ジョンソンをはじめ、その劇作編集手法を継承した筆写者、レイフ・クレインによって採用された編集指針に則った編集であることを論証した。テクスト校合には、これまでに英国の稀覯本図書館で収集したデータベース資料および国内他大学図書館に依頼したファクシミリを用いた。セカンド・フォリオ出版に関わった印刷出版業者の作品調査は夏季休暇に国立国会図書館でEEBOを用いて行った。この後本学にもEEBOが導入されたことでテクストに関する調査は遥かに効率化できるようになった。また11月には、明星大学の住本規子教授のご指導の下、貴重図書館でシェイクスピア・フォリオの第一版から第四版まで複数のオリジナルコピーのテクストの差異について学会セミナー発表者の先生方とともに調査と議論を行う機会にも恵まれた。1616年までにベン・ジョンソンによって確立された劇作編集法が、当時の知識人や印刷出版業者からなるネットワークの中で継承され、特に1630年代と国王空位期間に出版された芝居において適用される様子と方法について調査を行った。具体的には、ジョンソン・フォリオの出版に継続して関与したリチャード・メイゲンとロバート・アロットが新参するシェイクスピア・セカンド・フォリオ(1632年)において、読み物としてのテクストを再構成するため、上演用の音声効果を支持するト書きが削除された背景を説明した。
光干渉断層法による冠動脈びらんとプラーク破綻による急性心筋梗塞の機序と予後の検討

急性冠症候群(ACS)の3分の2はプラークの破綻(RFC-ACS)とそれに引き続く血栓形成により引き起こされ、残る約3分の1はびらん(IFC-ACS)によると報告されている。一方RFC-ACSにおいては85μm以下のthin cap fibro-atheroma (TCFA)が、プラーク破綻に関与するとされてきたが、このTCFAをOCT以外でのデバイスで観察することは困難であった。今回私たちは解像度が69+/-6μmにまでになるIB-IVUSシステムを用い、OCTで観察されたTCFAを、IB-IVUSシステムで適切に診断できるかを検討した。不安定狭心症(UA)と急性心筋梗塞(AMI)からなる急性冠症候群(ACS)は、冠動脈プラークの破綻とそれに引き続く血栓形成が主なメカニズムとされてきたが、病理学的にはプラーク破綻(rupture)は3分の2で、残る3分の1はプラークのびらん(erosion)によるものと報告されている。私たちはCT上の陽性リモデリングとソフトプラークの存在により、将来のACSを予見できることを報告する一方、光干渉断層法(OCT)などの侵襲的な冠動脈内イメージングの手法を用いればプラークのびらんと破綻の鑑別診断も可能であることを明らかにしてきた。今回、急性冠症候群35例と安定狭心症群22例に、OCTおよび血管内エコー(IVUS)をPCI前に施行した。プラーク破綻が認められた25例をプラーク破綻群(Ruptured Fibrous Cap; RFC-ACS)、線維性被膜に破綻を認めないプラークびらん群10例(Intact Fibrous Cap; IFC-ACS)、および安定狭心症群22例の3つに分類し解析を行った。OCTによる線維性被膜厚の測定ではプラーク破綻群(RFC-ACS)が最も薄く、びらん群(IFC-ACS)、安定狭心症(SAP)群になるに従い厚くなることが確認された(RFC:45±12μm,IFC:131±57μm、SAP:321±146μm、P<0.001)。またIVUSによるリモデリング指数はプラーク破綻群が他の2群より有意に高値となっていた(RFC:1.14, IFC:1.00, SAP:0.95, P<0.001)。冠動脈CT画像については、プラークの脂質成分、リモデリング指数、ポジティブリモデリングの有無の各指標は、RFC-ACS群が他の群より有意に大きくなる傾向が認められ、今後症例を積んでこれらの関係もより明らかにしたい。急性冠症候群(ACS)では、冠動脈プラークの破綻とそれに引き続く血栓形成が主なメカニズムとされてきたが、病理学的にはプラーク破綻(rupture)は3分の2で、残る3分の1はプラークのびらん(erosion)によるものとされている。この中でもThin Cap Fibrous Atheroma (TCFA)はプラーク破綻をきたし易く、ruptured fobrous cap ACS (RFC-ACS)の一つの特徴とされている。一方、plaque erosionは、OCTによる観察では、intact fibrous cap ACS (IFC-ACS)の特徴をもつとされている。従来の血管内エコー(IVUS)の解像度は150micrometer程度で、従来OCTから報告されていた65micrometer以下の線維性被膜を持つTCFAをIVUSで検出することは困難とされていた。最近のNarulaらの病理学的検討において、TCFAはもう少し厚く84 micrometer程度の厚さをもつものまで含まれること、さらに私たちのVISIWAVE (Terumo, Tokyo, Japan)を用いた基礎的検討において、このIVUS system解像度が69+/-6micrometerであることも報告した。冠動脈内の血液を置換する必要がなく、継続的に冠動脈病変を暗殺可能なIVUSsystemによるintegratedbackscatter IVUS (IB-IVUS)systemを用い、今回OCTで検出されたTCFAをVISIWAVEIB-IVUSsystemをで十分な信頼度で検知できるか、さらにIB-IVUSにより定義されたTCFAは、OCTによるTCFAと同様、現在臨床的に大きな問題になっているPCI周術期の心筋梗塞(PMI)の発生に関連するかを検討した。現在解析が終了しているのは、急性冠症候群35例と安定狭心症群22例である。これらの症例に対し、OCTおよび血管内エコー(IVUS)をPCI前に施行し、プラーク破綻が認められた25例をプラーク破綻群(Ruptured Fibrous Cap; RFC-ACS)、線維性被膜に破綻を認めないプラークびらん群10例(Intact Fibrous Cap; IFC-ACS)、および安定狭心症群22例の3つに分類し3群間の比較解析を行った。

OCTによる線維性被膜厚の測定ではプラーク破綻群(RFC-ACS)が最も薄く、びらん群(IFC-ACS)、安定狭心症(SAP)群になるに従い厚くなることが確認された(RFC:45±12μm,IFC:131±57μm、SAP:321±146μm、P<0.001)。またIVUSによるリモデリング指数はプラーク破綻群が他の2群より有意に高値となっていた(RFC:1.14, IFC:1.00, SAP:0.95, P<0.001)。また現在100例近い症例に対し、OCTおよび血管内エコー(IVUS)をPCI前に施行し、追加解析を施行中である。以上、症例も順調にエントリーされており、研究は順調に進んでいる。循環器内科学現在新たに100例をエントリーしておりこれらの、詳細な画像解析、統計解析を順次進めて行く方針である。症例も順調にエントリーされており、研究はほぼ順調に進んでいる。購入した物品の金額により端数が生じたため。今後、より多数例を集め、より詳細な画像解析、統計解析を順次進めて行く方針である。次年度の助成金と共に使用する。新たな症例をエントリーするために冠動脈内イメージングデバイスや画像媒体を新たに購入する必要があるため。冠動脈内イメージングデバイスや画像媒体購入。
犬の血栓症におけるADAMTS13を用いた新規診断・治療法の確立に向けた基盤研究

犬ADATS13は人VWF73を切断することが確認された。また、抗N10抗体は、ADAMTS13による人VWF73切断面のC末端を認識することが明らかとなった。よって、人VWF73と抗N10抗体から構成されている人ADAMTS13活性測定ELISAキットが、犬の血漿ADAMTS13活性測定に応用可能であることが明確となった。さらに、菌血症に罹患した犬の血漿ADAMTS13活性は、健常な犬のそれと比較して有意に低下していることが明らかとなった。研究最終年度である平成24年度は、前年度において人用に市販されているADAMTS13活性測定ELISAキットが犬の血漿中ADAMTS13活性測定に応用可能であることを示唆する成果が得られたため、それをさらに発展させた。具体的研究実績は以下の通りである。まず、犬血漿ADAMTS13測定における本測定キットの精度ならびに再現性を検討した。血漿ADAMTS13活性値が97.2%, 51.3%そして26.2%である犬3症例の血漿を、健常犬から得た標準血漿を加温処理した非働化血漿を用いて段階希釈し、それらを検体としてADAMTS13活性を測定することで希釈直線性を評価した。その結果、全ての検体で良好な直線性を認めた。血漿ADAMTS13活性値が81.4% 41.5% 9.9%の3種の血漿を用いて同時再現性および日差再現性について検討した。その結果、同時再現性の変動係数(CV)は3.0%から12.4%であり、日差再現性のCVは11.5%から12.5%であった。さらに本測定キットの臨床的有用性を明らかにするために、血栓好発疾患である細菌感染犬における血漿ADAMTS13値の評価を行った。症例として血液培養により菌血症であることが確認された犬6例(菌血症群)、対照群として臨床上健康な犬7例を用い、これら症例から得たクエン酸血漿を本キットによるADAMTS13活性測定に供した。その結果、菌血症群の血漿ADAMTS13活性は、健常群と比較して有意に低かった(p <0.05)。以上のことから、人用に市販されているADAMTS13活性測定ELISAキットが犬の血漿中ADAMTS13活性測定に応用可能であることが明確となった。研究期間全体を通して得られた成果は、犬における血栓症の病態解明に寄与するものであり、病態に立脚した新規診断法・治療法の確立に大きく貢献するものである。平成23年度は、犬の血栓症における新規診断・治療法の確立に向けた基盤形成を目的とし、ヒトVWF73を使用した市販のELISAキットが犬の血中ADAMTS13活性測定に有用であるかウエスタンブロット法と比較検討した。研究実績の具体的概要は以下の通りである。ADAMTS13の基質となるヒトVWF73は、N-末端にGSTタグを、C-末端にはHisタグを付加する形で発現ベクターを構築し、大腸菌BL21により発現させた後ニッケルカラムにて精製することで得た。犬ADAMTS13組換え蛋白(crADAMTS13)は、Hela細胞を用いた一過性発現系にて得た。一定量のVWF73に種々の濃度のcrADAMTS13を添加し、塩化バリウムを含むバッファー中で切断反応を行った。また、健常犬から得た種々の濃度の血漿による切断反応も併せて行った。ヒトADAMTS13により切断されたVWF73断片を認識するN10抗体および抗GST抗体を用いて、crADAMTS13によるVWF73切断産物をウエスタンブロット法にて検出した。その結果、crADAMTS13もしくは血漿の濃度が増加するに従い切断産物も増加した。すなわち、犬のADAMTS13はヒトVWF73を効率良く切断することが確認された。さらに、ウエスタンブロット法に用いた検体のADAMTS13活性をELISA法にて測定した結果、両法の間に良好な相関性が認められたことから、ウエスタンブロット法と比較してより多くの検体を同時測定可能であり、かつ操作性が簡便であるヒトVWF73を用いた市販のELISAキットを犬のADAMTS13活性測定に応用できることが明確となった。平成23年度における当初の計画では、1)ヒトADAMTS13活性測定ELISAキットの犬への応用に関する検討、ならびに2)犬ADAMTS13組換えタンパクを用いた抗ADAMTS13自己抗体検出ELISA法の開発、を完遂する予定であった。1)においては良好な結果が得られ、当初予定していた成果に十分到達したと考えている。