hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
父方祖父－父親－子の３世代間におけるアタッチメント関係

平成27年度の主たる目的は、データ収集であったが、多くの募集をかけたものの、この3世代研究に合う条件でデータ収集できたところは1件であった。平成26年度同様に、参加希望者を募る点においては、いくつかの問題がある。特に、今回多かったケースは、父親が参加できないというものであった。データ収集が思うように進まない間、すでに収集した成人アタッチメント面接のトランスクリプトの読み込みや分析、質問紙調査の点数化、子どもの父と母それぞれに対するアタッチメントの得点化等を順次進めている。11組のデータであるが、成人アタッチメント面接のトランクリプトは40ケースあるため、このコーディングとカテゴリー化に関する課題に取り組んでいる。もともと、成人アタッチメント分析は、乳幼児を持つ養育者用に開発されたもので、高齢者の語りを分析する上では部分的にコードの援用をせざるをえない。特に、高齢者の場合は、喪失している人物が多いだけではなく、時代性の影響に関する部分をどのように扱うかについて、判断をしているポイントを成人アタッチメント面接の資格者間で話し合っている。また、尺度の得点化等、順次進めている。参加者を得ることの困難につきる。本研究の平成28年度の目的は、父方祖父と父親と子ども、および、母親と子どもとのアタッチメント、養育に対する態度・意識、対人関係などに関する関連について、引き続きデータを集めることであった。このために幼児(1歳半3歳)を持つ家族で、その父方祖父にも面接調査に協力してもらえるところを募集して、実施した。実際、複数の家族が興味を示しはしたが、データ収集までに至ったところは3組であり、1組は祖父が最終的に参加できなくなった。また、集めた面接の調査を中心に分析を進めて、アダルト・アタッチメント・インタビュー(Adult Attachment Interview, AAI)の分類方法に従って、成人のアタッチメント分類のカテゴリーの特定を進めた。特に、父方祖父と父親とのアタッチメントの関連と養育経験については,分析を進めた。その中で明らかになったことは、祖父世代の多くが、父母以外の者からの養育的な関わりを受けていることであった。その相手とある程度(最低でも2、3年)の期間の継続的な接触がある場合は、祖父にとってアタッチメント対象となっていたことがAAIという研究的な信頼性・妥当性が十分である手法で明確になったことは、重要な知見と言えるだろう。この内容に関して、さらなる詳細な分析を進める必要がある。アタッチメントQソート法(Attachment Q-sort, AQS)、養育に関する質問紙等は、それぞれ、随時分析を進めている。AQSに関しては、2名以上で行った観察に基づく信頼性の検証を同時に進めている。本研究の目的は、父方祖父、父親、および、子ども間のアタッチメントの関連性を明らかにすることであった。子どもにとっては、父母どちらでも、あるいは両方と、安定的なアタッチメントを発達させることが、後の様々な心理的発達にとって重要である。
刺激に応答したmRNA翻訳マシナリーの神経突起への移動と活性化機構

平成15年度は以下の点について明らかにした。1)翻訳マシナリーの細胞内局在一連の翻訳因子、開始、伸展、終結の各因子群の脳内分布および細胞内局在を培養神経細胞及び脳切片を用いた免疫染色で明らかにした。ほとんどの因子に関してラット海馬における発現は、ニューロンにおいて強く、グリアでは弱かった。脳内のグリアは静止期にあるので、細胞周期との関連が考えられた。またニューロン内ではシナプス近傍や樹状突起内にも各因子が存在しており、局所的な翻訳調節と蛋白合成を示唆していた。2)刺激に応答した神経細胞のシナプス部での翻訳マシナリーの活性化機構シナプトゾーム画分を脳由来神経栄養因子(brain-derived neurotrophic fact : BDNF)で刺激すると、すみやかな翻訳因子、翻訳調節シグナル分子のリン酸化が認められ、同時に蛋白合成の増強が観察された。さらにまた初代培養神経細胞に刺激を与え、抗リン酸化翻訳因子抗体で免疫染色して可視化し翻訳因子の活性化部位のマッピングを行ったところ、樹状突起での翻訳活性化が見られた。BDNFの産生・放出は脳内では神経活動に依存していることを考えあわせると、以上の結果はシナプス近傍での局所的な翻訳調節が神経活動に応答して起こっていることを示しており、今後神経可塑性との関連という観点から研究を行いたい。
方法としての比較思想―知覚論の東西比較をモデルとして

知覚をテーマとして,インド哲学・仏教学と心の哲学・認知科学などの現代の哲学的研究との学際的な比較思想研究のプラットフォームを構築することが,本研究の目的である。この目的を達成するために,国内外の研究者を招へいしての国際ワークショップ,ならびに若手研究者を中心としたワークショップを各1回づつ開催して,それぞれの専門領域の枠を超えた,開かれた議論の場を作り,相互の交流を促進した。その成果として,知覚の概念主義をめぐる現代哲学の諸議論と,インド哲学で問題とされた有分別知覚・無分別知覚と知覚の真偽に関する議論との関連性や,知覚経験における主体および主観性の問題などに新知見を得ることができた。知覚をテーマとして設定して、西洋哲学・インド哲学・認知科学の分野横断的な対話の場を構築することを目指す本研究では、2015年11月14.15の二日間にわたる国際ワークショップを企画・開催し、次のような具体的な成果を挙げることができた。1. E. Franco (Leipzig University), K. Preisendanz (University of Vienna)をはじめとする海外の研究者を招へいすることで、最新の比較思想研究・インド哲学研究の成果に基づいた議論を構築することできた。また、英語を公用の言語とすることにより、それぞれの分野に特有の難解な訳語に悩まされることなく、共通の概念について実りある討議が可能になった。2.インド哲学研究の側からは、西洋哲学との対話を意識することで、従来の研究では思想史的な文脈で整理されてきた、知覚の非概念性/概念性をめぐる議論や誤謬知や錯覚をめぐる議論に対して、その哲学的意義を掘り下げる考察が行われた。その結果、インド哲学内部で閉じられてきた議論を、現代の知覚の哲学で論じられる知覚の概念主義/非概念主義をめぐる論争や虚構主義における非存在対象の問題などへ接続可能であることが明らかになった。3.一方、西洋哲学の側からは、「見える」などの知覚に関わる動詞の分析から知覚の本性へ迫るアプローチや、知覚経験と時間性の関連についての議論などを通して、インド文法学における知覚動詞の分析や、仏教における刹那滅論との比較研究への展望が開かれてきた。4.ただし、相互の対話が現代の知覚の哲学とインド哲学の知覚理論との間にある親和性や類似性の指摘に終始したことは反省すべきであろう。二つの伝統の対話を阻害する要因亀裂や差異性に着目することで、それぞれの伝統に特有の固有性を明確にすることが次の課題となる。当初の計画では、知覚の比較哲学に関して前・後期で2回に分けてシンポジウムを行う予定であったが、今年度はそれを1回にまとめ、より拡張した形での国際シンポジウムとして実施することができた。シンポジウム開催にあたり、研究分担者と密接に連携をとりながら、図書購入などの研究環境の整備、また、西洋哲学とインド哲学双方における知覚論の問題点についての討議・検討を進めることができた。また、次年度のシンポジウムや比較思想学会での発表エントリーも進めており、研究成果の公表に向けても、順調に計画が進められている。知覚をテーマとして設定して,西洋哲学・インド哲学・認知科学の分断横断的な対話の場を構築することを目指す本研究では,2017年3月4日に信州大学において,昨年度に引き続き第2回ワークショップ「知覚の比較哲学」を開催し,次のような成果を得た。1.護山(研究代表者)の他,片岡啓(九州大学),三代舞(早稲田大学)の三者により,仏教認識論における自己認識(svasamvedana)について,(1)それが無我を説く仏教における主観性の確立の問題と結びつくこと,また,(2)その思想史的展開において「把握」という能動的なメタファーから「輝き」という自己照出のメタファーへと移行したことが分かること,(3)自己認識をはじめとする知覚経験一般において,その前提となる反復経験が重要な役目を担っていること,などが確認された。2.これに対して,西洋哲学の側からは,小川祐輔(筑波大学),呉羽真(京都大学),三谷(分担研究者)の三者が研究報告を行い,(1)ディヴィドソニアンから見た自己知論の展開,(2)デューイにおける経験の理論とその射程,(3)知覚の言語表現と関連する西田の場所の論理について,それぞれの知見を示した。3.ただし,これにより分野横断的な議論の場を用意することには成功したものの,それぞれの研究をフィードバックして,自らの研究に反映させていくというところまでは,議論が熟さなかった点は反省される。また,護山は,以下の二つの学会・国際ワークショップにおいて本研究の成果を発表した。比較思想学会(6月,関西大学)では,仏教認識論の議論をエナクティブ主義の観点から読み直すことの意義を明らかにした。また,神の全知と実在論/反実在論をめぐる国際ワークショップ(3月,ハワイ大学)では,神の全知と時間認識,ブッダの全知と時間認識をめぐるインド哲学の議論を分析し,ダメットの見解との比較を行った。

その成果として,知覚の概念主義をめぐる現代哲学の諸議論と,インド哲学で問題とされた有分別知覚・無分別知覚と知覚の真偽に関する議論との関連性や,知覚経験における主体および主観性の問題などに新知見を得ることができた。本年度の成果を受けて、心理学や認知科学などの他分野とも協同する形での、知覚の比較哲学に関する討議の輪を広げるとともに、その成果がそれぞれの分野にフィードバックされるために必要な方策を練っていく予定である。また、最終成果の公表の準備も進めていく。インド仏教認識論図書の入荷が遅れたため、次年度への繰り越しが必要となった。予定していた図書の購入を進めることで、次年度に平成28年度請求額と合わせて適正に使用する。
チェルノブイリ周辺小児甲状腺がん発症分子機構の解明

ヒトがんの生物学的特徴を明らかにする為、チェルノブイリ周辺の多発している放射線関連甲状腺がんの特徴を明らかにすることを目的に現地調査を行った。すでに日本・旧ソ連邦チェルノブイリ原発事故医療協力専門家派遣事業と笹川記念保健協力財団による人道支援プロジェクトに参画中であり、チェルノブイリ周辺の3ケ国(ベラル-シ、ロシア、ウクライナ)の各研究機関と共同研究を行なっている。単年度予算配分の中ではあったが、甲状腺がんの病理組織を検索する機会を得た。また、実際に施行した小児の超音波画像診断下の細胞診の結果を報告した(Thyroid 5:365-368,1995)。入手した甲状腺がん組織は変異遺伝子の存在を明確にする為、共同研究の提案を行なっているが、実際に入手できた20例の小児甲状腺がん組織については、日本の症例と比較検討を行ないその一部を報告した(Int J Cancer in press,1996)。これらの組織はすべて免疫組織学にPTHrPの強陽性を認めがん遺伝子、がん抑制遺伝子の検討を行なっている。現在小児甲状腺がん患者の個人データの収集に務めているが、正確な被曝線量の評価を行ない分子疫学調査を継続予定である。ヒト甲状腺の培養細胞系を用いて放射線誘発アポトーシスの機序とアポトーシスからの逸脱機構として報告した(Cancer Res 55:2075-2080,1995)。現在p53遺伝子の解析以外にもdifferential display法による放射線誘発甲状腺特異的遺伝子のクローニングに着手している。次年度にも現在の研究成果を継続する予定である。
毛細管内の赤血球運動に及ぼす変形性の影響

毛細管内における赤血球の運動及びその安全性に及ぼす赤血球変形性の影響について、実験的及び理論的に研究を行った。まず実験的研究では、正常赤血球及び薬物により変形性を劣化させた硬化赤血球のサスペンションをガラス毛細管内に流し、個々の赤血球の挙動をビデオ画像に収録して、運動の違いを顕微鏡下で詳細に調べた。その結果、硬化赤血球はくるくる回転しながら流れ、非定常運動するのに対して、正常赤血球は外力が働いていない場合の円盤状から大きく変形した状態で、ほとんど形状を変えずに定常的に流れていることが観察された。正常赤血球の変形の程度は血管径が細くなる程、そして流速が大きくなる程大きいことが分かった。理論解析では、実際の赤血球に対応して薄膜で囲まれた粒子を赤血球のモデルとして採用し、毛細管内における赤血球の運動及び媒質の流れを流体力学の基礎方程式に基づいて有限要素法で数値解析した。その結果、正常赤血球に対応して内部流体の粘度が低い場合には管内で安定な配置が存在するが、硬化赤血球に対応して内部粘度が高くなると非定常な回転運動が起こることが分かり、実験結果と一致した。即ち、赤血球の変形性は管内に於ける赤血球配置の安定性に寄与していることが実験的にも理論的にも示された。更に、毛細管の径が小さくなって赤血球の大きさと同程度になった場合について解析を行ったところ、硬化赤血球の場合でも流体力学的な壁効果によってある赤血球配置に漸近する可能性があることが示されたが、実験的には確かめられなかった。
カプセル化された有機微結晶の薄膜形成および光デバイスとバイオセンサーへの応用

有機微結晶(色素J会合体)のイオン組換えによるサーモクロミズムの機構の解明を行うため、SPinrg8(兵庫県)の放射光光源を用い、X線回折実験を実施した。今年度上半期は、色素J会合体作成用の水面上単分子膜作製装置の設計・作製と予備的なX線回折実験とを早稲田大学で行った。サーモクロミズムの観察を行うため、温度制御可能な膜作製装置を自作した。温度制御にはペルチェ素子を用い、短時間で温度の調整を行えるようにした。膜作製装置設計に関する留意点は、SPring8で使用する多軸回折計の動きに支障なく、かつシグナル量を稼ぐために膜面積を大きくする点である。本現象は水面上で起こる現象であるが、予備実験では、膜を固体基板上に積層した試料を用いてX線回折実験を行い、回折パターンの全体像をできるだけ詳細に観察した。下半期では、作製した装置の試運転を行い、可視光吸収帯の温度に対する変化のデータをまとめ、SPring8での実験で最適な試料の条件を吟味した。選考結果により獲得した11月下旬のSPinrg8のマシーンタイムに、自作した膜作製装置を用い、サーモクロミズムのその場観察を行った。測定法は、X線を水面上単分子膜面で全反射するよう入射して、膜面内の周期構造から回折されるX線を観察する方法であり、研究代表者らが過去2年間にわたり測定法の検討をSPring8で行ってきた。実験の結果、膜面内からの回折ピークが温度に対して可逆的に変化すること突き止めた。すなわち、サーモクロミズムが有機微結晶の構造相転移であることを初めて実験的に証明することに成功した。また、それまでの早稲田大学での予備的なX線回折実験ではノイズに隠れ襯察できなかった回折ピークが、鮮明に観察することもできた。年度末には応用物理学会にて得られた成果をまとめて発表する。
南米先住民族の人類遺伝学的研究

アンデス先住民族(コロンビア南部からチリ北部に居住)には南西日本に多いヒト白血病ウイルス(HTLV-I)感染者が高頻度(510%)に出現し、しかも彼らは南西日本人と類似したHLA遺伝子を有しており、両者の遺伝学的背景やがん罹患分布には類似性が見られ、両者の民族疫学的関連性について興味が持たれている。また、ペル-南部やチリ北部の砂漠地帯には現在でも数千体のミイラが比較的好条件で残存している。これら先住民族のミイラを保存しているサンミグエル博物館(チリ第1州のアリカ市)、サンペドロ博物館(チリ第2州)、イロ博物館(ペル-南部)の考古学者らの協力を得てミイラ150個体(アリカ市96体、サンペドロ市42体、イロ市12体)から組織(骨、および骨髄)を採取した。これらのミイラはC^<14>の判定により約8000年から500年前に住んでいた先住民族のものとされている。これらの検体を日本に持ち帰り、遺伝子のDNA断片の増幅方法(PCA法)により核の白血球抗原(HLA)とベータグロビンの遺伝子のDNA断片、およびミトコンドリアDNAの抽出を試みた。さらに、南太平洋地域のポリネシア人が定着してきたイ-スター島(チリ共和国所属)を訪問し、同島の先住民族であるラパヌイから132個体粉の血液(各30cc)を採取し、日本に持ち帰ってリンパ球と血漿を分離し、リンパ球の核からは各種遺伝子のDNAを検索し、血漿を用いてHTLV-Iの抗体を検索した。イ-スター島の132人のHTLV-I抗体を検索した結果、1人のHTLV-I感染者(58歳の女、抗体価はPA法により256倍、WB法によりp28、p24、p19、GD21などが陽性)を発見した。彼女はリンパ球の核DNAの特性から、パプアニューギニアの先住民に由来するものではなく、むしろアンデス先住民族に由来することが判明した。次に、アフカの73検体とサンペドロアタカマの14検体のミイラのDNA検索の結果、3検体からHLA-DRDQ遺伝子のDNA断片、4検体からβグロビン遺伝子のDNA断片、3検体からHTLV-IのプロウイルスDNAのpX遺伝子の断片がそれぞれ検出された。現在はそれらの抽出された遺伝子の塩基配列を同定中である。一方、ミトコンドリアのDNAについてはD-loop領域の遺伝子の検索が、チリ北部の3先住民族(アイマラ族、アタカマ族、ケチュア族)の110個体、およびアリカとサンペドロアタカマのミイラ46個体(32個体と14個体)について終了した。その中で最も古いミイラは約8000年前のチンチョロ族と言われており、新しいものでは500年前のインカ族が含まれている。それらの遺伝子の塩基配列の同定により各グループのミイラの遺伝学的特徴が明らかになってきた。その結果、言語学的に全く異なるアイマラ族とケチュア族との間には遺伝学的に差が見られなかった。また、ミイラ集団のミトコンドリアDNAにも現存の南米先住民族にみられる4つのクラスターが現れ、その分布特性は現先住民族とやや異なることも明らかになった。これらの遺伝学的な分析結果がさらに進めていくとモンゴロイド集団である南米先住民族と日本人を含むアジア民族の遺伝学的関連性、現存の先住民族とミイラとの人類学的つながり、さらに各時代のミイラ集団におけるDNA特性の経時間的変動、などが明らかになってくる。また、それらの結果と従来から得られている考古学的、人類学的情報とを総合的に比較検討していくことにより、南米モンゴロイドの移動史をより深く探っていくことも可能となる。今後も南米アンデス地域における同様の研究を進展させるため約2年の期間を設定し、すでに採取された検体の遺伝子解析、および新しく発掘されたミイラの検体採取につとめ、それらのDNA特性を明らかにしていきながら、アンデス先住民族と日本民族のDNAの比較研究により、民族疫学的、免疫遺伝学的、人類学的、考古学的に有用となる両者のDNA情報を構築していく。

イ-スター島の132人のHTLV-I抗体を検索した結果、1人のHTLV-I感染者(58歳の女、抗体価はPA法により256倍、WB法によりp28、p24、p19、GD21などが陽性)を発見した。彼女はリンパ球の核DNAの特性から、パプアニューギニアの先住民に由来するものではなく、むしろアンデス先住民族に由来することが判明した。次に、アフカの73検体とサンペドロアタカマの14検体のミイラのDNA検索の結果、3検体からHLA-DRDQ遺伝子のDNA断片、4検体からβグロビン遺伝子のDNA断片、3検体からHTLV-IのプロウイルスDNAのpX遺伝子の断片がそれぞれ検出された。現在はそれらの抽出された遺伝子の塩基配列を同定中である。一方、ミトコンドリアのDNAについてはD-loop領域の遺伝子の検索が、チリ北部の3先住民族(アイマラ族、アタカマ族、ケチュア族)の110個体、およびアリカとサンペドロアタカマのミイラ46個体(32個体と14個体)について終了した。その中で最も古いミイラは約8000年前のチンチョロ族と言われており、新しいものでは500年前のインカ族が含まれている。それらの遺伝子の塩基配列の同定により各グループのミイラの遺伝学的特徴が明らかになってきた。その結果、言語学的に全く異なるアイマラ族とケチュア族との間には遺伝学的に差が見られなかった。また、ミイラ集団のミトコンドリアDNAにも現存の南米先住民族にみられる4つのクラスターが現れ、その分布特性は現先住民族とやや異なることも明らかになった。これらの遺伝学的な分析結果がさらに進めていくとモンゴロイド集団である南米先住民族と日本人を含むアジア民族の遺伝学的関連性、現存の先住民族とミイラとの人類学的つながり、さらに各時代のミイラ集団におけるDNA特性の経時間的変動、などが明らかになってくる。また、それらの結果と従来から得られている考古学的、人類学的情報とを総合的に比較検討していくことにより、南米モンゴロイドの移動史をより深く探っていくことも可能となる。今後も南米アンデス地域における同様の研究を進展させるため約2年の期間を設定し、すでに採取された検体の遺伝子解析、および新しく発掘されたミイラの検体採取につとめ、それらのDNA特性を明らかにしていきながら、アンデス先住民族と日本民族のDNAの比較研究により、民族疫学的、免疫遺伝学的、人類学的、考古学的に有用となる両者のDNA情報を構築していく。アンデス先住民族(アタカマ族)には南西日本に多いヒト白血球ウイルス(HTLV-I)感染者が高頻度(10%)に出現し、しかも彼らは南西日本人と類似したHLA遺伝子を有しており、両者の遺伝学的背景やがん罹患分布には類似性が見られ、民族疫学的にも興味が持たれている。また、チリ北部の砂漠地帯には現在でも数千検体のミイラが比較的好条件で残存している。そこで、今年度はこれら先住民族のミイラを保存しているサンミグエル博物館(アリカ市)やサンペドロ博物館、およびミイラが未だに埋葬されている同地域の古代墓地を訪問し、同博物館の考古学者らの協力を得てミイラ138体(アリカ市96体、サンペドロ市42体)から組織(骨、および骨髄)を採取することがきでた。それらの組織はDNA(核、ミトコンドリア)を検索するために日本まで持ち帰った。まず、サンペドロ博物館の約千年前の標本14検体につき、乾燥量100-500mgを用い、PCR法にてヒト白血球抗原と血色素のDNA断片の抽出を試みた。その結果、4検体からHLADQB1(400bp)とβクロビンDNA(800bp)が得られた。
中世後期の東国・畿内地域における顕密・禅宗寺院の展開と武家

『歴史学研究』980号に掲載された『中世東国寺社別当職をめぐる僧俗の都鄙関係ー伊豆密厳院別当職問題を事例にー』では、東国顕密寺社と醍醐寺双方に関係のある歴史的事件を研究対象に据えることで、これまで個別的に進めてきた二つの研究テーマの融合を試みた。具体的には、南北朝・室町時代に発生した伊豆国走湯山密厳院(現伊豆山神社)のトップである別当職をめぐる問題を扱った。この件をめぐっては、鎌倉の鶴岡八幡宮寺と京都醍醐寺の院家である三宝院、報恩院が争い、それぞれの外護者である鎌倉府と室町幕府も巻き込む形となった。本事件は、室町幕府と鎌倉府の関係悪化を象徴する事件として著名な一方で、相論の具体的な展開過程などで、先行研究で見解が分かれている状態にあった。本稿では宗教史的な観点に留意しつつ、本問題の推移の再検討を行い、東西関係の変化の過程を明らかにした。また、栃木歴史文化研究会の会誌『歴史と文化』27号に掲載された「『輪王寺文書』における「上様」の語義について」では、中世の『輪王寺文書』にみられる「上様」という文言の語義について再検討し、先行研究では「上様」=鎌倉公方と比定されていたのに対し、「上様」=日光山別当と比定すべきことを指摘した。2本の査読論文が掲載され、海外を含む5つの学会・研究会で口頭を報告を実施することができた。口頭報告の内容も、論文化に向けての作業が進展しつつある。以上の理由からおおむね順調に進展していると評価する。1.中世日光山と近世日光山の関係についての検討...近世に徳川家康が埋葬されたことで、徳川幕府から重んじられることになった日光山であるが、なぜ家康が埋葬されることになったのか、その理由は必ずしも明確ではない。この問題について、中世の日光山の歴史的伝統との関係から検討することを目指している。3.中世禅僧の東西往還について...中世の禅僧が、東西武家政権の使者の役割を果たしていたことに注目して、どのような禅僧がその役割を担ったのか、禅僧の存在が東西武家政権の関係に与えた影響を検討する。4.戦国期の鶴岡八幡宮寺の研究...研究が少ない戦国時代の鶴岡八幡宮寺の寺内組織や寺院運営について『当社記録』や『快元僧都記』などの鶴岡僧が残した記録類から検討する。5.醍醐寺理性院流の検討...同じく研究が進んでいない、醍醐寺の理性院という院家の歴史的展開を、祈祷行為との関わり注目しながら検討する。
問題解決のための社会関係資本を形成する自己足場かけスキル育成手法の研究

本研究は、問題解決の場において、必要に応じて他者の助けを引き出して組織化することで協働的課題解決のための社会関係資本(人的・物的資源のネットワーク)を構築するとともに、他者と協働することをとおして自身の能力を高めていけるような「自己足場かけスキル」を備えた人材の育成をゴールとし、自己足場かけスキルの解明、自己足場かけスキル育成手法の提案、上記手法の実施を支援する学習システムの設計と開発と評価、上記の育成手法および育成システムを運用するためのカリキュラム開発を目指すものである。当該年度は、1調査ツールの開発、2自己足場かけスキル明確化と育成手法立案にむけた調査をおこなった。1調査ツールの開発:大学におけるPBL授業の観察をとおして自己足場かけスキルに関する知見を得るための調査ツールとして、多人数の学習者による助け合いの経緯を記録し、分析するための作業状況記録・可視化するシステムを開発する。既存の利用した助け合い状況記録システムを改良し、文字による助け合い内容記録機能、インタフェース向上、スマホ環境での稼働のための改善をおこなった。2自己足場かけスキルの明確化および手法立案のための調査:自己足場かけスキル育成手法を提案する基盤となる知見を得るために関連研究の文献調査と観察研究を実施した。文献調査では、学習科学、教育工学にとどまらず、組織論、贈与論といった関連領域も対象した。ここより、発達の最近接領域の捉え方、互酬性規範の設定に仕方等について新たな知見が得られた。観察研究については、適切な実験の手法および実験環境について検討し、計画の立案をおこなった。文献調査とともにおこなう予定であった観察調査は、文献調査によって得られた新たな知見を組み入れたことから時期をずらして実施することとなった。しかしながら計画の遂行には問題のない範囲である。計画に基づき実施する。調査によって新たな知見が得られた場合には、それに基づいて、訓練手法の内容や支援システムの仕様を柔軟に調整するが、全体の進行には影響がでないように配慮する。
中学校数学におけるESDの観点からの統計教育の開発・研究

本研究では、ESDで育成する能力の観点として、(1)多面的、総合的なものの見方を育てる。(2)情報を収集、分析し、表現してコミュニケーションをとることができる力を育てる。(3)情報を鵜呑みにするのではく、客観的に思考し、分析・整理して、精査する思考である代替案の思考力(クリティカルシンキング)の3点と規定した。その上で、持続可能な世界を作っていくのには、「資料を基にして判断する」が求められていると考え、資料の活用領域で、「データの扱い方」、「標本調査・確率」と「情報の選択」の3つの教材を開発した。「データの扱い方」では、目的を持ってデータを集めたり、データの扱い方を気をつけたり、データをクリーニングすることやデータをクリティカルに見ることに焦点化した授業を行った。「標本調査・確率」の課題では、「2社の電池の問題」を拡張して、生徒が確率を用いて判断する課題として授業を行った。この授業では、2種類の電池の寿命をそれぞれの班で調査(標本調査)を行いその結果を基に、課題について確率的判断に基づく考察を行う授業を行った。全体課題の枠を提示して議論する場面、複数の個別課題をグループ毎に提示して個別課題の解き方を振り返る場面、という2つの場面を持つ授業設計の方法を用いた授業である。その結果、生徒たちは、電池の組合わせを考えて、基準を自ら決め、それに基づいた確率を求め、判断を行うことができた。「情報の選択」の授業は、「ハンドボール投げ」に関するデータを縮約したものや、男女別の経年変化を示したグラフ等を8枚用意する。この8枚は、それぞれの属性を全て記載するのではなく、ある程度属性を隠したものである。授業の構成としては、「課題の提示」を行い、全体でその課題についての意見を出し合う。次に班ごとに異なった資料(8枚の内の1枚)を渡して、その資料を基にして班としての解決を行い、それを発表する。他の班の発表を聞く中で、同じ課題であるが、資料が違うことでその判断が違うことを知る。次に、各班に残っている資料全てを配布して、同じ課題を再度検討して、その判断とその理由を発表しあう授業を行った。3つの授業とも、生徒は資料に対してバイアスを持ってあたっていることを実感し、それに気付かせ、資料をクリティカルに観ることを習得し、それを活かした活動を行うことができた。中学校の統計教育にESDの観点を導入することにより、新しい授業を創造することができた。今後、研究を継続し、発表を続ける。
食品コロイド分散系の流動特性が消化管内細胞に与える物理的刺激に関する研究

生物が普遍的にもつ物理的感覚受容に関する研究の一環として、消化管内でのずり応力に対する生体応答について検討した。まず、典型的な血流のずり応力感知の仕組みを利用して、イオンチャネル型プリンヌクレオチド受容体であるP2X4遺伝子を過剰発現させたHEK293細胞(P2X4/HEK)のカルシウム応答を指標にしたずり応力を感知できる実験系を構築した。次に、数種類の消化管組織由来細胞のP2X4遺伝子発現量を調べた結果、ヒト結腸腺由来のHT29-MTX、咽頭由来のDetroit562に対してP2X4遺伝子の発現が認められ、ずり応力試験を行ったところ、いずれの細胞においても僅かながら蛍光上昇が観察された。本研究の目的は、食品コロイド分散系の粘性流動や幾何学的特性の物理的刺激が口腔内などの消化管内にてどのように受容されるのか、また、味物質などによる化学的刺激との相互関係について細胞レベルにおいて明らかにすることである。平成25年度は、まず、血流のずり応力に血管内皮細胞が応答する現象をモデルに、食品からの物理的刺激に応じる細胞応答を評価できるフローチャンバー流路系を構築した。倒立型蛍光顕微鏡の観察テーブルに、細胞を潅流できる平行平板型フローチャンバー流路系のデバイスを設置し、流路系を一定の温度37°Cにする恒温装置を備え付ける。シリンジポンプにて送液し、フローに対する細胞内の蛍光変化の様子をCCDカメラで観察し、コンピュータによる画像処理で評価した。血管内皮細胞はずり応力に対して細胞内カルシウム動員を起こすことが知られているので、そのずり応力を感知する受容体であるP2X4プリンヌクレオチド作動性受容体を発現させたHEK293トランスフェクタントを作製した。ヒトP2X4受容体をコードするcDNAをpcDNA3.1(+)動物細胞発現用ベクターにサブクローニングし、リポフェクション法を用いてHEK293の安定発現株を得た。Fluo-8カルシウム蛍光指示薬を細胞に導入しフローチャンバー流路系にセットし、流速を段階的に上昇させ細胞内蛍光量を観察したところ、無処理のHEK293細胞はフローに対して蛍光を示さなかったが、トランスフェクタントはフローに対して蛍光を発した。この応答は、EGTA存在下において消失した。次に、消化管由来の株化された内分泌細胞にずり応力応答性のP2X4受容体が存在するか否かについて解析した。ヒトNCI-H-716細胞を用いてRT-PCRを行ったところ、P2X4受容体を示すバンドが観察され、内分泌細胞がずり応力を感知できる可能性を示唆した。血管内皮細胞では、血流によるずり応力を感知する種々の生体応答が知られている。本研究では、生物が普遍的にもつ物理的感覚受容に関する研究の一環として、消化管内でのずり応力に対する生体応答について検討した。まず、典型的な血流のずり応力感知の仕組みを利用して、細胞のカルシウム応答を指標にしたずり応力を感知できる実験系を構築した。その実験系を用いて数種類の消化管組織由来細胞がずり応力に対して応答するか否かを解析した。その結果、イオンチャネル型プリンヌクレオチド受容体であるP2X4遺伝子を過剰発現させたHEK293細胞(P2X4/HEK)では通常のHEK293細胞に比べてずり応力に伴い蛍光変化の上昇が確認された。また、その蛍光上昇はP2X4受容体アンタゴニストである5-BDBD存在下では消失したことから、P2X4受容体を介したずり応力刺激であった。次に、このP2X4/HEK細胞に対してずり応力刺激を段階的に上昇させていったところ、ずり速度の上昇に伴い有意な上昇が見られた一方、その上昇はずり応力3.42 dyne /cm2を最大に減少に転じた。カルシウムキレート剤であるEGTAの存在下では蛍光上昇が消失した。プライマリーカルチャーであるHPAEC細胞においても同様のずり応力刺激への応答が観察された。次に、数種類の消化管組織由来細胞のP2X4遺伝子発現量を調べた。その結果、ヒト結腸腺由来のHT-29、咽頭由来のDetroit562に対して、P2X4遺伝子の発現が認められた。ずり応力試験を行った結果、どちらの細胞もわずかながらの蛍光上昇にとどまったが、蛍光比率の増加はP2X4遺伝子発現量が比較的高かったHT-29細胞において有意差が観察された。HT-29細胞に対してP2X4受容体アンタゴニストである5-BDBDの存在下でずり応力刺激を与えると、蛍光の上昇は減少したことからP2X4受容体の発現とずり応力応答には相関があることを明らかにした。

食品科学倒立型蛍光顕微鏡と平行平板型フローチャンバー流路系を組み合わせて、食品からの物理的刺激に応じる細胞応答を評価できる測定系を構築できたのは予定どおりであった。しかし、トランスフェクタントを含めて幾種類かの細胞ではスライドガラスへの付着性が乏しく、ずり応力を供すると観察以前に細胞が剥がれることが多い。そのため、スライドガラスのゲルコーティング処理の工夫を施すのに時間を要した。細胞応答は、細胞内カルシウムの消長をFluo-8カルシウム蛍光指示薬を細胞に導入することで観察しているが、Fluo-8指示薬を細胞に導入する段階で剥がれ易いので、細胞内カルシウムに反応して蛍光を発するタンパク質を安定的に発現HEK293安定発現株を作製することで効率を高める。平成26年度は、NCI-H716細胞のほかに、マウス口腔粘膜上皮細胞シート、消化管由来のタフト細胞のLIM1863細胞や微絨毛を形成するCaco-2細胞を取りあげる。溶質の流動特性、形状やサイズが異なる様々なコロイド分散系を流し、粘性や幾何学的特性に対する細胞内カルシウム応答を蛍光顕微鏡観察する。細胞応答は、細胞内カルシウムの消長をFluo-8カルシウム蛍光指示薬を細胞に導入することで観察しているが、Fluo-8指示薬を細胞に導入する段階で剥がれ易いので、この操作ステップを再検討する必要が生じたため。細胞内カルシウムの変動を、Fluo-8カルシウム蛍光指示薬のほかに、細胞内カルシウムに反応して蛍光を発するタンパク質を安定的に発現させたHEK293安定発現株を作製することで効率を高めることを試みるための試薬に使用する予定である。
大量の情報の機密性・完全性を保証する情報セキュリティ技術の研究

本研究では,機密性保証のためのストリーム暗号と完全性保証のためのハッシュ関数という二つの効率の良い暗号構成要素の安全性解析を行うとともに,それらを用いて構成できる認証・秘匿機能付データ構造の設計と評価を行った.本研究成果は,大量の情報に関する問合せに対して過不足のない正しさの保証された応答を効率良く行うことに寄与するものであり,近年注目を浴びているクラウドを利用したデータベースサービスのアウトソーシング等への応用が期待できる.本研究開発は以下の三つの研究を行うことを目的とする.(1)機密性保証に適したストリーム暗号の安全性解析(2)完全性保証に適したハッシュ関数の安全性解析(3)大量の情報を扱うための効率的な認証・秘匿機能付データ構造の設計と評価上記(1)では,現在進行中のストリーム暗号の選定プロジェクトやRC4などの普及型ストリーム暗号を対象とし,安全・安心なストリーム暗号の構築を研究する.(2)では,標準ブロック暗号AESを利用したハッシュ関数や,現在NISTが利用を推奨しているSHA-2族のハッシュ関数を対象として,それらの構成法の妥当性および安全性を研究する.(3)では大量の情報を扱うための効率的な認証・秘匿機能付データ構造を設計し,(1)及び(2)で行った成果を要素技術として利用し,安全性と効率の観点から性能を評価する.本研究では,機密性保証のためのストリーム暗号と完全性保証のためのハッシュ関数という二つの効率の良い暗号構成要素の安全性解析を行うとともに,それらを用いて構成できる認証・秘匿機能付データ構造の設計と評価を行った.本研究成果は,大量の情報に関する問合せに対して過不足のない正しさの保証された応答を効率良く行うことに寄与するものであり,近年注目を浴びているクラウドを利用したデータベースサービスのアウトソーシング等への応用が期待できる.本年度は,(1)ストリーム暗号の安全性解析,(2)ハッシュ関数の安全性解析,(3)認証技術に関する研究を実施した.(1)については,無線LANのWEPやWPA等で広く利用されているストリーム暗号RC4の擬似乱数生成アルゴリズムの安全性解析を行った.本研究では,最近RC4の初期内部状態について2バイトのみ異なる初期内部状態を生成する秘密鍵の組の存在することが示されたことに着目し,2バイトのみ異なる内部状態から生成される鍵系列を観測することにより,初期内部状態を推測する手法を考案し,その有効性を計算機実験により確認した.(2)については,ブロック暗号を利用して構成されるハッシュ関数の衝突計算困難性を,理想暗号モデルを仮定して解析した.さらに,理想暗号モデルよりもさらに弱いモデルを仮定した解析を行い,そのモデルにおいて衝突計算困難性を有するハッシュ関数の構成法を明らかにした.また,原像計算困難性,第二原像計算困難性,ユニバーサルー方向性と呼ばれるハッシュ関数の安全性に関する性質について検討し,それぞれの性質を有するハッシュ関数を利用してその他の性質を有するハッシュ関数を効率良く構成する方法を提案した.(3)については,多数の実体がネットワークを構成するような状況における効率のよい認証技術について検討を行った.そのために,特に,センサーネットワークやRFIDにおける認証技術について研究開発を行った.より具体的には,センサーネットワークの認証方式として,EschenauerとGligorの鍵共有プロトコルにおける問題点を解決するために,多項式を利用した柔軟な鍵共有方式を提案し,評価を行った.また,RFIDについては,多数のRFIDの認証子をまとめて通信を行うような,通信効率のよい認証方式について研究開発を行った.本年度は,(1)ストリーム暗号のアプリケーション適用時の安全性解析,(2)ハッシュ関数のアプリケーション適用時の安全性解析,(3)認証・秘匿機能付データ構造に関する研究を実施した.(1)に関しては,ストリーム暗号のシステム組み込み時に設定されるパラメータである鍵に着目して,鍵の相関性が出力に及ぼす影響を実験的に検出し,その実験結果を用いて,鍵の相関性を利用した安全性解析を行った.さらに,相関性をもつ鍵を攻撃者が現実的な時間で構築できるアルゴリズムを提示するとともに,その計算量を理論的に示した.さらに,具体的に構成した相関鍵を提示した.(2)に関しては,ハッシュ関数のアプリケーションとして,MAC(メッセージ認証コード)関数の構成に関する研究を行った.SHA-2の構成法を含む,ブロック暗号に基づく様々な構成法について,MAC関数を構成する方式を検討し,証明可能安全性の観点から,MAC関数の安全性か構成要素であるブロック暗号の安全性に帰着可能であるかどうかを網羅的に検討した.その結果,SHA-2の構成法は,他の多くの構成法と同様に必ずしもMAC関数の構成に関して適切ではないことを確認するとともに,最適な構成法を特定した.(3)に関しては,分散ハッシュ表の代表的な実現であるChordシステムを対象とし,そのオーバーレイネットワークとして,効率的な認証・秘匿機能付データ構造を設計した.具体的には,Chord上に分散ハッシュ木を効率よく構築することを目指した予備的なシミュレーション実験を行い,提案方式の挙動や効率について検討を行った.本年度は,(1)ストリーム暗号のアプリケーション適用時の安全性解析,(2)データ構造の認証・秘匿機能に関する研究を実施した.(1)に関しては,暗号組み込み時に設定されるパラメータである鍵に着目し,相関性をもつ鍵(衝突鍵)を人為的に構成できる新たなアルゴリズムを提示した.なお,衝突鍵に関する研究成果は本研究と三菱電機の研究のみである,さらに提案アルゴリズムを一般化し,衝突鍵の一般的な構成を実現した.

既存の三菱電機の結果は本提案の構成の一部になる.本成果により衝突鍵をもつストリーム暗号の特徴を明らかにした.(2)に関しては,以下の成果を得た.(1) P2P (peer-to-peer)システムを仮定し,分散セグメント木と呼ばれるデータ構造を利用して,負荷分散を考慮した,範囲質問を処理できる認証付データ構造を設計した.なお,従来のほとんどの認証付データ構造ではクライアント・サーバモデルを仮定していた.また,P2Pシステムを仮定した認証付データ構造に関しては負荷分散が考慮されていなかった.(2) P2Pシステムにおいて,分散ハッシュ表の実現としてはChordなどが代表的であるが,個々の分散ハッシュ表の特徴を利用して,より効率的な認証・秘匿機能付データ構造を設計するため,分散ハッシュ表への応用が可能な,ネットワーク環境におけるハッシュ連鎖の構成と応用等について研究した.提案したハッシュ連鎖法では,大規模ネットワークにおける効率的な認証が可能になるだけでなく,状況に応じた柔軟なリボケーションが可能になるといった利点がある.(3)これまでに多くの共通鍵認証暗号方式が提案されているが,秘密鍵の漏洩や更新時の再暗号化の効率の観点から,幾つかの代表的な方式の比較を行った.本年度は,(1)ストリーム暗号のアプリケーション適用時の安全性解析,(2)データ構造の認証・秘匿機能に関する研究を実施した.(1)に関しては,ストリーム暗号RC4について,衝突鍵を生成するアルゴリズムを暗号解読に適用する方法を構築し,この方法を用いて実際にRC4が解読できることを具体的に示した.本研究成果により,衝突鍵を生じるストリーム暗号の特徴と,さらにその脅威が明らかになり,ストリーム暗号設計時の脆弱性解析に大きな成果をもたらした.(2)に関しては,以下の成果を得た.(1)分散ハッシュ表の有名な実現の一つであるChord上でのハッシュ木の実現を目的として,Chanらが考案した固定トポロジにおけるブロードキャスト認証法を利用して大量の情報の完全性を保証する方法を開発した.(2)前年度までに開発した範囲質問を処理できるP2Pシステムを仮定した認証付データ構造について,データのハッシュ値の計算に鍵付ハッシュ関数を利用することにより,質問範囲外の情報を利用者に漏らすことのない秘匿機能を付加した.(3)木構造データに対する編集可能署名について,木の各節点の出次数があらかじめ定められた定数以下であるという仮定の下で,通常の署名法と鍵付ハッシュ関数を利用したMerkle木に基づく方式を構成した.さらに,本方式の安全性を利用される署名法と鍵付ハッシュ関数の安全性に帰着した.(4)ハッシュ関数のみを用いた認証法としてonetime signatureの効率的な構成法を提案した.
バーグマングリアに発現するグルタミン酸受容体結合分子の機能的役割

本研究では小脳バーグマングリアに発現するAMPA型グルタミン酸受容体およびその結合分子であるStargazinファミリー(TARPs)の詳細な細胞内局在解析を行い、バーグマングリアに発現するStargazinファミリーであるγ5サブユニットのノックアウトマウスを用いて、バーグマングリアでのAMPA型グルタミン酸受容体の発現調節機構を分子解剖学的に明らかにすることを目的として研究を行った。その結果、バーグマングリアに発現するAMPA型グルタミン酸受容体とγ5は共に平行線維および登上線維が形成する興奮性シナプスのシナプス間隙に面するバーグマングリアの突起の細胞膜に局在していた。また、バーグマングリアの細胞体内部のゴルジ装置に囲まれた小胞にも局在し、これらの分子が貯留していることが認められた。さらに、γ5サブユニットノックアウトマウスでは、このAMPA受容体のバーグマングリア細胞体内での貯留が消失し、グリア突起による不完全なシナプス被覆が認められた。以上の結果からバーグマングリアにおけるAMPA受容体は放出されたグルタミン酸を効率よく受容できる部位に局在するように制御を受けており、γ5はAMPA受容体の細胞体から突起への輸送を調節していることが示唆された。ニューロンではこのようなAMPA型グルタミン酸受容体の細胞体での貯留等は認められないことから、バーグマングリアではニューロンとは異なった受容体の局在調節機構が存在する可能性が示唆された。平成18年度の研究では小脳バーグマングリアに発現するAMPA受容体の細胞内局在を明らかにし、その細胞表面発現機構へのAMPA受容体結合分子であるTARPsの関与を明らかにすることを目的として研究を行っている。まず、マウス小脳バーグマングリアに発現するAMPA受容体のサブユニットであるGluRα1とGluRα4の局在解析を行った。その結果、AMPA受容体は平行線維とプルキンエ細胞の興奮性シナプスの周囲に豊富に存在し、特にシナプス間隙近傍のバーグマングリア細胞膜に局在していた。このことは放出されたグルタミン酸をバーグマングリアが効率よく受容するための局在制御機構が機能していると考えられる。また、バーグマングリアに発現するTARPs g5の特異抗体を用いて局在解析を行ったところ、AMPA受容体と同様に平行線維-プルキンエ細胞シナプス間隙近傍のバーグマングリア細胞膜に局在していた。このことはg5がAMPA受容体の局在を制御する可能性を示唆している。また、神経細胞と比較するためg8の局在解析およびノックアウトマウスの解析の結果、g8はAMPA受容体が豊富なPSDに多く局在し、棘突起や樹上突起の細胞膜にも存在していた。g8ノックアウトマウスではシナプス部および棘突起や樹上突起の細胞膜でのAMPA受容体が減少していた。このことからg8はAMPA受容体の局在制御に深く関与していることが明らかとなった(Fukaya et al.,2006,Eur J Neurosci)。以上の結果から、バーグマングリアでのAMPA受容体の局在制御には、神経細胞と同様にTARPsが関与する可能性が示唆された。
生きたヒト脳組織切片の生理代謝計測による神経機能修復効果評価システムの開発

難治側頭葉てんかん患者手術例全例にポジトロンCTにおける脳ブドウ糖代謝計測、ベンゾディアゼピン受容体計測、新たに開発したC-11MPDXによるアデノシンA1受容体計測を全例で行った上で手術時のスライス標本を採取しての実験を継続した。統計的解析の結果それぞれの計測法による異常発現部位に同じ側頭葉内でも差があることが判明しており、これと脳標本の採取部位とを対比し解析を行った。術前のポジトロン計測では切除部脳のブドウ糖代謝の低下程度は患者間で大きな違いがある。これを機能障害の指標とみなし、個体間の脳スライスで機能障害の程度が計測できるかを検討して,その結果、培養液内で最大限に神経細胞の発火を生じるように高カリウム処理をしたスライスにおけるブドウ糖代謝が術前の安静状態の脳ブドウ糖代謝と極めて有意な相関関係を有していることが明らかとなった。また、生きたスライスのレベルで機能障害を反映した代謝が見られることも興味深い知見であり、ヒト神経細胞の代謝に関する新たな知見かと考える。光学的計測法との併用においては薬理学的処理により変化する皮質神経層間の神経伝播の相違に関与し症例を増やし検討した。同一標本の代謝計測による解析を組み合わせ、神経細胞の代謝反応と電気生理学的反応の性質の相違に関し検討した。前年度の実験で記録に難渋した海馬に関しての神経活動の記録の試みを継続したが本年度も良好な記録はできなかった。また同一培養条件下での光学計測法による神経活動の伝播計測を継続して行い例数を増やした。全てのデーターを組み合わせた検討を進めている。難治側頭葉てんかん患者全例に術前にポジトロンCTにおいて脳ブドウ糖代謝計測を行ないスクリーニングを行なった。そのうち手術対象となる患者に対しては、ベンゾディアゼピン受容体計測を術前のroutineプロトコールとして行なった。新たに開発された脳イメージング法としてC-11MPDXによるアデノシンA1受容体計測、C-11SA4503によるシグマ受容体計測が今年度より臨床使用が開始された。難治てんかん患者ではアデノシン受容体計測を前述のプロトコールにあわせ行う臨床研究計画がスタートされた。患者のポジトロンCT画像は全て患者自身のMRIと重ね合わせ統計学的解析を行った。難治側頭葉てんかん焦点切除患者においては海馬、および前方側頭葉皮質を採取し生きたまま培養液中でスライスとして生かしポジトロン計測を行なうというプロトコールを開始し6例の実験が終了した。外側側頭葉皮質は全例で培養条件下で生かしての代謝計側ができたが、海馬に関して良好な記録は一例のみで可能であった。今後は、海馬切除時の標本採取法をさらに検討する必要がある。新皮質標本では神経細胞層が保たれている場合と、かなりグリオーシスが生じた状態では、カリウム刺激による代謝の反応が異なることが判明しこれに関しては論文発表準備中である。また同一培養条件下で細胞内神経活動記録に関しては光学計測法による神経活動の伝播計測が活動の2次元的広がりの画像化ができよりポジトロン計測との対比が容易であることが判明し3例にて併用した計測を行ったが、今後も例数をさらに加え代謝および電気活動の対比を行い検討する必要があると思われる。
より迅速で簡便な大腸菌内での組み換え単純ヘルペスウイルス作製法の確立

単純ヘルペスウイルス(HSV)は基礎研究の分野で古くから勢力的に解析が行われ、また近年では遺伝子治療ベクターとして臨床研究の分野でも注目を集めている。いずれにおいても第1段階として組換えウイルスの作製が必須である。しかし、従来の組換えウイルス作製技術は煩雑でありかつ、かなりの長期間を要した。本研究の目的は1.HSV研究の壁になっている組換えウイルス作製法の技術改変法の確立。2.1で確立した手法に基づき、未だ明らかにされていない、または機能の解明されていない遺伝子を解析しその生物学的機能を明らかにする。3.最終目標としては1,2,を元に安全で治療効果の高い有用なHSV遺伝子治療ベクターを開発することにある。本研究では昨年度までにRecA法、RecET法を駆使した、あらゆる変異導入が可能な大腸菌内での組み換えウイルス遺伝子作製法を確立し、この系を用いて全てのヘルペスウイルスで保存されているプロテインキナーゼであるUL13をターゲットとして組換えHSV作製を試みてきた。昨年までにUL13のキナーゼ活性のみを消失した変異HSV作製に成功しその性状解析を行い報告した。本年度はそこから得られた興味深い知見を元に、さらなるULl3の生物学的機能、病原性への関与等を検討している。さらに、HSV未知遺伝子であるUL7の欠損ウイルス作製にも成功し、現在解析を進めている。また、repaireウイルス作製が困難な場合の大腸菌内での組換えウイルスゲノム作製法も確立すべく検討中である。何れにおいても第一段階として組み換えウイルスの作製が必須といえる。しかし、従来の組み換えウイルス作成技術は煩雑でありかなりの長期問を要した。本研究の目的は1.HSV研究の壁になっている組み換えウイルス作製法の技術の改変法の確立。2.1.で確立した手法に基づき未だ明らかにされていない、または機能の解明されていない遺伝子を解析しその生物学的機能を明らかにする。3.最終目標としては1,2を元に安全で治療効果の高い有用なHSV遺伝子治療ベクターを開発することにある。本研究の今年度の成果は以下のようである。1.大腸菌内での組み換えウイルス遺伝子作製法の確立。従来のRecA法、RecET法に改変及びこれらを組み合わせることで、新たな大腸菌内での組み換えウイルスゲノム作製法を確立した。この方法を用いることで、あらゆる変異(削除、挿入、点変異)が従来よりも低costで導入可能となった。2.新たな変異HSVの作製及びその生物学的機能の解析具体的には、HSVの病原性に深く関与することが示唆され、かつ全てのヘルペスウイルスに共通するウイルス特異的酵素であるHSV UL13遺伝子を標的とし、特定部位に1アミノ酸置換を導入した変異HSVの作製に成功した。現在、この変異ウイルスについて増殖能等の生物学的機能解析を行っている。本研究の今年度の成果は、UL13に1アミノ産地間を導入することで、そのキナーゼ活性のみを消失した変異ウイルスの作製に成功し、その性状解析を行った。その結果、現在までに報告されてきた、UL13欠損ウイルスを用いた実験結果はUL13のキナーゼ活性には影響されないことが判明し、UL13が多機能ウイルス制御因子である可能性が強く示唆された。現在さらなる解析を進めるとともに、新たなウイルス因子をターゲットとして様々な組換えHSVを構築中である。

本研究では昨年度までにRecA法、RecET法を駆使した、あらゆる変異導入が可能な大腸菌内での組み換えウイルス遺伝子作製法を確立し、この系を用いて全てのヘルペスウイルスで保存されているプロテインキナーゼであるUL13をターゲットとして組換えHSV作製を試みてきた。昨年までにUL13のキナーゼ活性のみを消失した変異HSV作製に成功しその性状解析を行い報告した。本年度はそこから得られた興味深い知見を元に、さらなるULl3の生物学的機能、病原性への関与等を検討している。さらに、HSV未知遺伝子であるUL7の欠損ウイルス作製にも成功し、現在解析を進めている。また、repaireウイルス作製が困難な場合の大腸菌内での組換えウイルスゲノム作製法も確立すべく検討中である。