hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
大気CO2上昇下で高い生産性を発揮するイネ科・マメ科作物の品種選抜手法の開発

1つ目は,栽植密度を用いた方法で,栽植密度を低くとしたときの応答性,疎植応答性が高い品種がよりCO2応答性が高いことをイネとダイズで確認した.さらに栽植密度を用いた手法については,インディカイネ452品種を用いたゲノムワイド関連解析を行い有意なQTLを見出し,そのQTLの効果を高濃度CO2条件で確認した.2つ目は,年次によるバイオマスの可塑性(Finlay-Wilkinsonの回帰)を用いる手法で,全品種の平均と個別の品種の値の間での相関をとり,その回帰直線の傾きを品種別に算出したところ,その傾きが高いほど,CO2応答性が高いことをイネとダイズで確認した.以上,一連の研究により,2つの選抜方法が将来の高濃度CO2下で高い生産性を示す品種選抜に有効であることを見出した.進行している大気中CO2濃度増加を「資源」とし,生産性の向上に効率的に結び付けることができる適応品種の選抜とその利用は,世界の食料生産への貢献が期待される.本研究では,莫大なコストのかかるCO2濃度制御する大規模施設を用いることなく安価でかつ信頼できる代替の選抜手法の開発のためイネ科・マメ科作物について,(1)低大気CO2濃度,(2)気孔のCO2応答,(3)栽植密度,(4)可塑性,(5)Rural-Urban gradient,(6)自然CO2スプリングを用いた6種類の選抜法を検討した.結果,(3)栽植密度と(4)可塑性を用いる手法が高濃度CO2適応品種の選抜に有効であることを見出した.本課題は,簡易な高濃度CO2応答品種の選抜手法の確立を目的としているが,既に2つの手法が有効であることを見出している.この枠組みの中で,次のステップである候補品種の選抜も開始しており,当初の計画以上の進展をみせている.27年度が最終年度であるため、記入しない。作物学本課題での目的とする簡易な高濃度CO2応答品種の選抜法の有効性を明らかにするためには,昨年度に選抜した品種の実際の高濃度CO2環境での応答を評価する必要があると考えられる.当初計画通りに6手法(1.低大気CO2濃度下での選抜,2.気孔のCO2応答による選抜,3.栽植密度での間接的な選抜,4.年次によるバイオマスの可塑性による選抜,5.Rural-Urban gradientを用いた選抜,6.自然CO2スプリングを用いた選抜),すべてについて検討を行い,それぞれの有効性を評価することができた.27年度が最終年度であるため、記入しない。発表を予定していた解析を追加し,27年年度に学会発表を行うため.27年度が最終年度であるため、記入しない。26年度の課題として,25年度に有効性を確認した2手法(3.栽植密度での間接的な選抜,4.年次によるバイオマスの可塑性による選抜)の再現性を確認するとともに,他の2手法(2.気孔のCO2応答による選抜,6.自然CO2スプリングを用いた選抜)については手法の改良を行う.学会発表の経費として使用する.27年度が最終年度であるため、記入しない。26年度に行う高濃度CO2を付加するチャンバー試験遂行の費用として繰り越した.繰越額と平成26年度請求額をあわせて,26年度に行う高濃度CO2を付加するチャンバー試験のCO2代として使用する.
脂質異常症の分子基盤としてのアポリポタンパク質構造異常の解析

血中や脳内での細胞外脂質輸送を制御しているアポリポタンパク質の遺伝子変異や多型は、脂質異常症やアミロイドーシスなどの疾患発症を引き起こす。その構造的機序解明を目的として、ヘリックス型アポリポタンパク質であるアポA-I及びアポE変異体の高次構造、安定性、脂質結合性並びにタンパク質凝集性などを調査した結果、変異によるN末ヘリックスバンドル並びにC末ヘリックス構造の破壊が疾患発症の構造的基盤であることが示唆された。本研究課題では、アポリポタンパク質のアミノ酸変異や遺伝子多型による脂質異常症やアミロイドーシス、神経変性疾患などの発症機序を、タンパク質のフォールディング構造異常という物理化学的観点から解明することを目的とする。平成22年度は、まず、低HDL血症でみられるヒトアポA-I変異体をターゲットとして、変異によるN末ヘリックスバンドル構造の安定性やC末ドメインヘリックス構造の変化、さらには、それらの構造変化による細胞脂質膜可溶化・HDL粒子形成作用への影響の解析を行った。その結果1.N末ドメインアミノ酸の変異・欠失によるアポA-Iのヘリックスバンドル構造の不安定化が、タンパク質疎水性領域の露出を誘起することで脂質膜との相互作用を促進すること2.C末ヘリックス領域アミノ酸の変異・欠失は、C末端ヘリックス構造の部分的破壊による脂質結合性・細胞膜可溶化能の低下を引き起こすことで、HDL粒子形成異常の原因となること3.アポA-Iの種差間のホモロジー解析に基づいた部位特異的アミノ酸改変により、ヒトのC末端に多く存在する芳香族アミノ酸は、両親媒性ヘリックス疎水面の疎水性度の増大によってC末ドメインの高親和性脂質結合を担うとともに,N末-C末ドメイン間の疎水的相互作用に関与している可能性があることなどが明らかとなった。さらに、アポA-IのHDL結合構造の解析に向けて、部位特異的にシステイン残基を導入した新たな変異体の設計・作製を行った。平成23年度は、血中や脳内でのコレステロール代謝調節異常を引き起こすアポE4アイソフォームをターゲットとして、野生型であるアポE3との脂質結合構造の差異の検出を行った。得られた成果を下記に示す。1.アポEタンパク内への環境感受性蛍光プローブであるピレンやアクリロダン分子を導入するため、新たな変異体の設計を行った。アポEのN末とC末ドメインにおける標識位置として、94番目のセリンと264番目のトリプトファン、290番目のセリン残基を選択し、それぞれをシステイン残基に置換した変異体を作製した。いずれの変異によってもアポE構造に大きな摂動を与えていないことが確認された。2.脂質結合に伴うピレン蛍光強度変化のリアルタイム解析や、分子内トリプトファン残基-アクリロダン間の蛍光巽鳴エネルギー移動測定などから、人工脂質粒子やHDL粒子に対するアポEの結合挙動の解析を行った。その結果、HDL2粒子上でのアポEのN末ドメインコンフォメーションが、アポE3とアポE4間で異なることが示唆された。3.さらに詳細な結合構造の解析に向けて、アポE分子内トリプトファン残基の位置をコントロールした変異体の設計に着手した。本研究課題では、アポリポタンパク質のアミノ酸変異や遺伝子多型による脂質異常症やアミロイドーシス、神経変性疾患などの発症機序を、タンパク質のフォールディング構造異常という物理化学的観点から解明することを目的としている。平成24年度は、全身性アミロイドーシスの原因となるヒト変異アポA-Iに焦点を絞り、そのフォールディング構造あるいは脂質結合構造の異常と脂質代謝調節異常やアミロイドーシス発症との相関を解析することで、アポリポタンパク質構造異常による疾患発症の分子メカニズム解明を試みた。ヒトアポA-Iのアミロイドーシス変異にはN末領域アミノ酸のアルギニン残基への置換が多く見られることから、典型的変異として26番目のグリシンがアルギニンに変異したG26Rをターゲットとして、その全長変異体や組織沈着領域であるN末フラグメントを大腸菌発現系によって作製し、それらのアミロイド線維形成能や線維形態の評価を行った。その結果、G26R変異がアポA-Iヘリックスバンドル構造を不安定化するとともに、N末1-83残基フラグメントの生理的中性環境下でのアミロイド線維化を促進するという二元的な役割を有していることを世界で初めて見出した(JBC 288, 2848, 2013)。また、構造モデル予測により、R26がD24及びD28との塩橋形成によってβシート構造を安定化していることが示唆された。今後の展開として、生体環境を模倣した不均一膜系や細胞外マトリックスでのアポA-Iアミロイド線維形成機構の物理化学的解析、細胞膜やリポタンパク質環境下におけるアポA-Iアミロイドのタンパク質超分子構造や線維凝集体の組織障害作用の解析などを進めていく予定である。タンパク質構造に大きな摂動を与えることなく、アポE分子内に環境感受性

蛍光プローブを導入することに成功した。この成果により、これまで直接的な観察が不可能であったアポEの脂質粒子結合挙動のリアルタイム観測が可能となり、アポEアイソフォームによるリポタンパク結合構造の異常と脂質代謝異常との相関解析のための基盤整備が大きく前進した。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題の目的の一つである、アポEアイソフォーム間での脂質結合構造の差異を検出するための物理化学的手法の基盤整備にメドがついたため、来年度以降は、培養細胞を用いた変異体やアイソフォーム間での細胞コレステロール代謝機能の比較など、アポリポタンパク質の構造作用相関の統合的解析を行っていくための実験系の構築を開始する。
脾臓内肝細胞移植における移植免疫機構の解析-CD80およびCD86の関与について-

【方法】(1)実験動物:ドナーには、5週齢のC57BL/6(B6)およびFasを欠損しているC57BL/6lpr/lpr(B6lpr)マウスを用い、レシピエントにはC3H/He(C3H)およびFasLを欠損しているC3H/Heglg/gld(C3Hgld)マウスを用いた。(2)肝細胞分離と肝細胞移植:ドナーの肝臓からコラゲナーゼ灌流法により分離した肝細胞2×10^6個(viability90%以上)をレシピエントの脾臓内に移植した。抗CD80抗体(RM80,ラットIgG2a)と抗CD86抗体(PO3,ラットlgG2b)を、各100μg/マウスを術直後より5日間連日腹腔内投与した。移植後7日目にPAS染色標本で脾臓内の肝細胞の生着を評価した。【結果】(1)移植後7日目における脾内移植肝細胞:B6細胞は抗CD80/CD86抗体投与にもかかわらず、抗体を投与しない群と同様にC3Hマウスの脾臓内で7日以内に完全に拒絶された。脾臓内には拒絶された肝細胞を貧食した多数の巨核球のみを認めた。つぎに移植肝細胞拒絶におけるFasのかかわりを検討するために、B6lprマウスの肝細胞(Fas欠損)をC3Hマウスに移植した。B6lpr肝細胞は、抗体を投与しなければC3Hマウスの脾臓内で7日以内に拒絶されたが、抗体投与によりPAS陽性の肝細胞の生着を確認することができ、その生者は移植後50日目においても確認することができた。また、B6マウスの肝細胞は抗体非投与ではC3Hgldマウス(FasL欠損)の脾臓内で7日以内に拒絶されたが、抗体投与によりその生着を確認することができた。(2)抗CD80/CD86抗体によるallo反応性T細胞の増殖抑制:移植後20日目のレシピエントT細胞のallo抗原への反応をin vitroで測定した。B6lpr肝細胞を移植し抗体を投与しなければ、レシピエントのT細胞はドナー抗原に対し強い反応を示した。しかし、抗CD80/CD86抗体投与により、レシピエントT細胞のドナー抗原に対する増殖能は有意に低下し、自己への反応と同程度までに抑制された(p<0.001)。【考察】今回の検討で、肝細胞移植に抗CD80/CD86抗体投与のみではその効果が得られないことが明らかになり、移植肝細胞の拒絶には、CD28非依存型の経路が関与していることが示唆された。

申請者は、costimulatory signalに着目し抗B7-1(CD80)、抗B7-2(CD86)抗体を用いてclonal anergyを誘導し、これら接着因子の関与による肝移植免疫機構の解析を、生体内培養モデルとされる脾臓内肝細胞移植を用いて解明することを目的とし研究を行った。【方法】(1)実験動物:ドナーには、5週齢のC57BL/6(B6)およびFasを欠損しているC57BL/6 lpr/lpr(B6 lpr)マウスを用い、レシピエントにはC3H/He(C3H)およびFasLを欠損しているC3H/He glg/gld(C3Hgld)マウスを用いた。(2)肝細胞分離と肝細胞移植:ドナーの肝臓からコラゲナーゼ灌流法により分離した肝細胞2x10^6個(viability 90%以上)をレシピエントの脾臓内に移植した。抗CD80抗体(RM80,ラットIgG2a)と抗CD86抗体(PO3,ラットIgG 2b)を、各100μg/マウスを術直後より5日間連日腹腔内投与した。移植後7日目にPAS染色標本で脾臓内の肝細胞の生着を評価した。【結果】(1)移植後7日目における脾内移植肝細胞:B6細胞は抗CD80/CD86抗体投与にもかかわらず、抗体を投与しない群と同様にC3Hマウスの脾臓内で7日以内に完全に拒絶された。脾臓内には拒絶された肝細胞を貧食した多数の巨核球のみを認めた。つぎに移植肝細胞拒絶におけるFasのかかわりを検討するために、B6lprマウスの肝細胞(Fas欠損)をC3Hマウスに移植した。B6lpr肝細胞は、抗体を投与しなければC3Hマウスの脾臓内で7日以内に拒絶されたが、抗体投与によりPAS陽性の肝細胞の生着を確認することができ、その生着は移植後50日目においても確認することができた。また、B6マウスの肝細胞は抗体非投与ではC3Hgldマウス(FasL欠損)の脾臓内で7日以内に拒絶されたが、抗体投与によりその生着を確認することができた。(2)抗CD80/CD86抗体によるallo反応性T細胞の増殖抑制:移植後20日目のレシピエントT細胞のallo抗原への反応をin vitroで測定した。B6lpr肝細胞を移植し抗体を投与しなければ、レシピエントのT細胞はドナー抗原に対し強い反応を示した。しかし、抗CD80/CD86抗体投与により、レシピエントT細胞のドナー抗原に対する増殖能は有意に低下し、自己への反応と同程度までに抑制された(p<0.001).【考察】今回の検討で、肝細胞移植に抗CD80/CD86抗体投与のみではその結果が得られないことが明らかになり、移植肝細胞の拒絶には、CD28非依存型の経路が関与していることが示唆された。申請者は、costlmulatory signalに着目し抗B7-1(CD80)、抗B7-2(CD86)抗体を用いてclonal anergyを誘導し、これら接着因子の関与による肝移植免疫機構の解析を、生体内培養モデルとされる牌臓内肝細胞移植を用いて解明することを目的とし研究を行った。【方法】(1)実験動物:ドナーには、5週齢のC57BL/6(B6)およびFasを欠損しているC57BL/6 lpr/lpr(B6 lpr)マウスを用い、レシビエントにはC3H/He(C3H)およびFasLを欠損しているC3H/He glg/gld(C3Hgld)マウスを用いた。(2)肝細胞分離と肝細胞移植:ドナーの肝臓からコラゲナーゼ灌流法により分離した肝細胞2×10^4個(vlabliity90%以上)をレシピエントの膵臓内に移植した。抗CD80抗体(RM80,ラットIgG 2a)と抗CD86抗体(PO3,ラットIgG2b)を、各100μg/マウスを術直後より5日間連日腹腔内投与した。【結果】(1)移植後7日目における脾内移植肝細胞:B
超高強度－高延性複層鋼板の開発とその基盤となる組織・界面設計の研究

世界で最も使用量の多い構造用金属材料である鉄鋼材料の特性向上は自動車等移動体の軽量化や燃費向上に伴う温室効果ガス削減の実現に向けて必要不可欠である。近年,本研究室で開発した高強度と高延性を両立する複層鋼板の更なる特性向上を目指すため,Liu氏は高強度を担う層を構成するマルテンサイト鋼の変形挙動について実験とシミュレーションによって検討した。特にLiu氏がこれまで研究してきた結晶塑性有限要素法を用いてマルテンサイトの大変形過程における結晶方位回転や活動すべり系の同定などを行い,従来の研究で考察されてきたマルテンサイト特有の変形挙動の異方性について検討した。具体的には、マルテンサイトのユニットは極めて薄いラス構造であるため、すべり系がラス面内に限定され、ラス面外方向のすべり系を駆動させるのは大きな荷重負荷が必要と考えてきた。超高強度マルテンサイト鋼において、SEMーEBSDで測定したマルテンサイトブロックなどの下部組織の結晶方位をもとに、Dream-3Dを用いてその組織を結晶塑性有限要素法で解析するためのメッシュを再構築し,その変形に伴う結晶方位回転や活動するすべり系について検討し、EBSDを併用した変形のその場観察実験や、変形組織のすべり帯の観察等と比較することにより、マルテンサイトの変形の機構の結晶学的な解明を進めた。従来、マルテンサイトは脆性的であるため、その変形機構の解明はこれまで不十分であったが、本研究はそれをブレークスルーするものである。29年度が最終年度であるため、記入しない。
希少糖の肝臓虚血再灌流障害保護作用及び肝切除後の再生促進効果の解析

希少糖の肝臓虚血再灌流障害保護作用及び肝切除後の再生促進効果の解析の研究を実施した。70%肝切除後の肝臓を30分間虚血に暴露した。100mg/ kg体重の割合でD-アロースを静脈内投与したところ、再還流後60分まで血流が改善し、白血球の浸潤が抑制された。また残存肝における肝細胞の増殖が促進された。次に肝臓の虚血の原因のひとつである、肥満や動脈硬化を招来するラットであるOLETFラットを用いて、抗酸化作用を有する別の希少糖D-プシコースの働きを解析した。D-プシコースは体重減少をおこし、動脈硬化を改善した。肝臓の脂肪毒性を改善するものとして注目された。肝臓は一定限界内の切除であれば正常まで再生する器官であり、臨床的にも70%の切除は残りの肝臓の正常な再生を用いる限界として認められている。大きい腫瘍か厳しい肝臓外傷などで70%以上切除が必要な場合には、肝臓機能は他の器官の機能障害失敗ともに増悪することが多い。そのような肝不全を防ぐため大きな切除術には、肝臓の再生を促進する刺激剤が必要かもしれない。D-alloseはラット肝臓の90%の切除後残存肝の再生を刺激するとされ、実験を行った。増殖している細胞の判定は組織切片を用いBrdU染色によるDNAのラベリングか、proliferating cell nuclear antigen(PCNA)および細胞増殖関連タンパク質であるCyclinEおよびCdk2の染色を、肝切除後の2、4、12、24そして48hrにおいて検出した。D-alloseは全てのタイムポイントにおいて、Cycline EおよびCdk-2両方の活性を有意に高めていた。BrdUとPCNAは肝切除後の12そして24hrにオズ化していた。D-alloseはCycline E/Cdk-2の活性化誘導および再生肝臓細胞のDNAの合成の開始に関与する可能性がある。平成21年度には、希少糖D-アロースの肝臓虚血再灌流障害保護作用及び肝切除後の再生促進効果が示されたので、平成22年度は、抗酸化作用とともに、糖代謝と脂質代謝にユニークな制御作用を有する希少糖D-プシコースについて、肝臓虚血再灌流障害保護作用の検証を行うとともに、2型糖尿病モデルラットOLETFを用いた研究を行った。肝臓虚血再灌流障害保護作用はD-アロースに比べて低いことが判り、本用途での使用には適さないことが判った。一方OLETFに5%D-プシコースを含む飲水を13週間にわたり投与し、非投与群と比較した。D-プシコースは体重と体脂肪の蓄積を有意に抑制した。実験経過中に実施した経口ブドウ糖負荷試験では、血糖およびインスリンのレベルが各測定ポイントで低下しており、これはD-プシコースが糖尿病状態におけるインスリン抵抗性を改善していることを示唆していた。肝臓においても、D-プシコースは脂肪の蓄積とグルコキナーゼの核から細胞質への移行が促進されるとともに、抗酸化状態の改善が認められた。これについて急ぎ論文化を行った。D-プシコースは膵臓においてもインスリン分泌に関与するβ細胞の保護作用があることがわかった。これも抗酸化作用に基づく可能性が示唆されている。D-アロースにD-プシコースを併用することで、D-アロースの効果をより強く、また広範囲に高めることができる可能性を発見したことは意義が大きい。我々は2つの実験系で2種類の希少糖(D-プシコースおよびD-アロース)を用いて以下の研究を行った。1)まずD-アロースの抗酸化作用を活用し、90%切除肝臓での虚血再還流障害への保護効果を解析した。虚血再還流により肝臓障害が起こり、切除肝における虚血状態を悪化しそれが残存肝の再生を遅らせる。200mg/kgのD-アロースの血管内投与により、残存肝の活性酸素の発生を抑え、また白血球により発生するmyeloperoxidaseを押さえることでmicrocirculationを約60%程度改善することにより、残存肝の障害を軽減し回復を促進することが明かになった。またD-アロースはBrdUを用いた解析でDNA合成を12時間後から48時間後まで促進すること、PCNA,Cyclin EよびCdk2の解析によりこれらを有意に活性化していることが判り、残存肝の肝細胞の増殖能力を高め再生に有効であることが明らかとなった。2)我々は肝臓などの臓器において虚血障害の悪化原因となる動脈硬化性の病変にD-プシコースがどのような影響があるかを検証した。D-プシコースはラットにおいて血糖値の上昇を抑え、動脈硬化を抑制し、脂肪の蓄積を抑制することが判った。そしてこの効果は糖尿病ラットにおいても認められた。

D-プシコースは高血糖により起こる膵臓の変性を阻止することが判った。虚血再還流による肝臓障害への有効性が示唆される結果となった。以上より、希少糖D-アロースやD-プシコースが、肝臓虚血再灌流障害保護作用及び肝切除後の再生促進効果に有効であることが示された。
がん抑制遺伝子pRbによる概日リズムの制御機構の解析

癌と概日リズムの関連は、疫学研究や分子生物学的研究により徐々に明らかとなっているが、未だ直接的な関連は不明である。そのため我々は、がん抑制遺伝子pRbによる概日リズム遺伝子の制御機構の解明を目的とした。マウス概日リズムの行動解析を行うために、脳視交叉上核特異的にpRbを欠損するVgat-Cre;Rbflox/floxマウスを作製したが、このマウスは生後まもなく死亡し、解析には不向きであった。制御機構の解析では、培養細胞にpRbを発現させ、概日リズム遺伝子の発現量をqPCR法により定量した結果、転写抑制遺伝子の発現が減少していることにより、Per2プロモーター活性が上昇するという知見を得た。概日リズムは、日々の睡眠サイクルを含む、生体の一日約24時間のリズムを制御している生物の基本的な機構である。長期的なリズムの欠失は、がん、糖尿病等の疾患と関連することが疫学研究において報告されている。一方、がん患者では、睡眠リズム障害が見られることや、糖尿病患者では、インスリン代謝リズム障害等が見られ、がんの罹患率も高いことが報告されている。上記の知見は、がんと概日リズムには、緊密な関連性があることを示唆している。しかし、その分子機構は不明な点が多い。そのため、我々は、がんと概日リズムの関連を、がん抑制遺伝子による概日リズムの分子レベルでの制御という視点から解明することを目的とした。その結果、我々は概日リズムの形成に必須の中枢時計とよばれる脳のSprachiasmatic Nucleus (SCN)において、がん抑制遺伝子Promyelocytic Leukemia (PML)がPER2の核局在を制御することにより概日リズムの制御を担うこと、また、p53はPER2を介して概日リズムを制御することも明らかとしている。そのため、本研究では、がん抑制遺伝子pRbの概日リズムに対する影響を分子的に解明することを目的としている。現在までの研究で、pRbを欠損した細胞を用いてforskolinにより細胞の概日リズムを同期し、4時間毎に48時間サンプリングを行った結果、野生型の細胞に比較して、有意に概日リズムの短縮が見られた。この現象をin vivoで検討するために、pRbの脳特異的欠損マウスを作製し、解析を行いつつある。癌と概日リズムの関連は、疫学研究や、最近の分子生物学的研究により、徐々に明らかとなっているが、不明な点は多い。我々は癌と概日リズムの直接のクロストークを解明する糸口として、がん抑制遺伝子pRbによる概日リズム遺伝子の制御機構を解明することを目的とした。pRb欠損マウスは胎生致死のため、成体マウスにおけるpRbの機能を調べるために、Vgat-Cre;Rbflox/floxマウスを作製した。しかし、このマウスは生後まもなく死亡してしまい、概日リズムの解析には不向きであった。そこで、現在はAlbumin-Cre;Rbflox/floxマウスを用いて、肝臓特異的にpRbを欠損させ、pRbによる概日リズム遺伝子への影響を検討するため、マウスの交配に取り掛かっている。また、pRbによる概日リズム制御機構の解析のため、培養細胞(野生型マウス胎児線維芽細胞)を用いてpRbを発現させ、Per2プロモーターへの影響を検討した。その結果、pRbの存在下で約20%のPer2プロモーター活性の上昇が見られたため、そのメカニズムの解析を試みた。pRbの主要なパートナーであるE2Fや、PMLは、pRbの細胞周期制御の機能に非常に重要である。そのためこれらの蛋白質を培養細胞に発現させ、Per2プロモーター活性を測定した。しかし、Per2プロモーター活性に関して、pRbとの関連を示唆するデータは得られなかった。実験が当初の計画どおりに進まなかったため、代替案としてpRbを発現させた時の他の概日リズム遺伝子の発現量をqPCR法により定量した結果、いくつかの転写抑制因子の発現が減少していることにより、Per2プロモーター活性が上昇しているのではないかという知見が得られた。今後はこの得られた知見を、そのプロモーター解析等と組合せ、詳細に解明していく予定である。分子腫瘍学本研究課題では、がん抑制遺伝子pRbの概日リズムにおける役割を解明することを目的としている。そのため、細胞レベルでのpRbの概日リズムにおける役割を明らかとできた点が非常に重要である。また、脳特異的pRb欠損マウスも作製には時間が掛かるが、すでに掛け合わせに着手しており、近日中に目的の遺伝子を保持するマウスが得られる予定であるため、おおむね順調に進展していると考えている。pRb部位

特異的欠損マウスを用いた概日行動リズムの解析pRbの欠損マウスは、胎生致死であり、様々な組織特異的欠損マウスも発がんにより、生後早期に死亡する。そのため、我々は、最近同定されたSCNに特異的な発現プロモーター支配下のCreマウス(Vgat-Cre)とpRbflox/floxマウスを用いて、概日行動リズムの解析と、pRb欠損による概日リズム遺伝子に対する影響の解析を行う。DNA損傷応答に対するpRb経路の概日リズム関連遺伝子に対する影響を解析
脳神経細胞内Ca^<++>変動に伴う脳機能異常に対する治療薬の作用期序に関する研究

本研究は、高次脳機能障害発症因子の一つである脳神経細胞内Ca^<2+>調節機構に焦点を置き、Ca^<2+>channel活性を調節する広義Ca拮抗薬を基礎医学的手法により薬理効果ならびに作用機序を検索し多角的に解析することにより、安全性が高く、より選択的治療効果を見いだすことを主目的として行ってきた。この目的を完遂するため、本研究は脳神経細胞に存在するCa^<2+>channelのサブタイプの性質をより詳細に研究し、いずれのサブタイプが、いかなる高次脳機能障害を誘発させるかを明らかとして、さらに脳内Ca^<2+>channelに対する各種Ca拮抗薬の薬理学的特性に関して詳細な研究を行った。本研究で得られた成績を要約すると、1)中枢神経細胞における細胞内Ca^<2+>の動態異常は脳内神経細胞死のみならず痙攣発作、協調運動の失調、不安症を誘発させることが培養小脳顆粒細胞ならびに行動薬理学的研究から明らかとなった。2)現在までの研究から脳機能障害と関連したCa^<2+>channelは従来の報告通りglutamate連関受容体チャネルであり、本研究から明らかとなったBay K8644およびnicardipine高感受性のL型チャネルであった。しかも、このL型のCa^<2+>channelは尾状核におけるdopamine遊離ん関与していることが培養脳神経細胞ならびに脳切片を用いた研究から実証された。3)従来のCa^<2+>拮抗薬の中枢薬理作用をFura-2法による細胞内測定法によって比較し効力順に列挙すると、flunarizane>nicardipine>nifedipine=verapamil>>>diltiazemであった。これらの中枢薬理効果は列挙したCa拮抗薬の血液一脳関通過性とほぼ関連しておりdiltiazemと比較して他のCa拮抗薬は通過性が優位であるものと思われる。興味ある研究成績として、flunarizineあるいはnicardipineがglutamate誘発の細胞毒性に効果的であることがin vitroの成績から示唆された。さらに、各種の〔Ca^<2+>〕i修飾物質の薬理的特性の一連の検索中にGABA-peptide誘導体がCa^<2+>channel阻害作用を有することが明らかとなった。しかも、これらの誘導体の中でもPiv-D-Ser-Leu-GABAおよびPiv-Ser-Leu-GABAが大脳辺縁系のdopamine神経活性を特異的に抑制して、運動異常あるいは脳虚血後の機能障害に対して改善作用を有することが明らかとなった。すなわち、脳機能に影響を及ぼす〔Ca^<2+>〕i変動異常に対する治療法として幾種類かのCa^<2+>拮抗作用を有する薬物が有効と思われ、しかも従来とは異なった構造式を有するGABA-peptide誘導体に有効なもののあることが判明してきたことが本研究の成果として列挙される。向精神薬のうち抗不安薬を検定する行動薬理学的手法はいくつか実用化されているが、すべての抗不安薬の検定に不十分な点もあり、われわれは新しい精神疾患モデル動物の作製を初年度に手がけた。自然発症高血圧ラット(SHR)と対照群のWistar Kyotoラット(WKY)を85dBの音刺激を備えた未知環境下に暴露した直後、Varimexで15分毎に運動量を測定した。いずれの時間でもSHRがWKYよりも統計学的に有意な高い運動量の増加を示し、ことに測定開始30分間は運動量の亢進が認められた。その後、両群の運動量は経時的に減少し、2時間後には両群ともほぼ同程度の運動量を示した。この結果は、SHR,WKYいずれも時間経過に伴い環境に順応化するが85dBの音刺激を備えた未知環境下に動物を暴露すると、一種の恐怖あるいはストレスによる運動量の亢進が観察されることは先の我々の報告からも明かである(Neurosci Res,12;346-355,1991)。この運動量の亢進はことにSHRで顕著に出現するが血圧とは無関係であることから、SHRは、高血圧症のみならずある種の精神疾患モデル動物としても用いられる可能性が示唆された。そこで、SHRを未知環境下に暴露後30分間の運動量を基準とし、Ca拮抗薬の投与により変動する運動量の測定値から、その抗不安効果の有無を検索した。使用薬物は、抗不安薬として臨床的に認められるベンゾジアゼピン系のdiazepamおよび、5-HT_<1A>系のSM3997(tandospirone)を用い、Ca拮抗薬はnitrendipine,nicardipine,nifedipine,flunarizineおよびdiltiazemを使用した。薬物投与群のうち抗不安薬であるdiazepamとtandospirone投与群では約40%の運動量の減少が認められた。すなわち、異なった2種の抗不安薬の連続投与により不安状態から惹起される運動量の亢進は抑制された。Ca拮抗薬投与群では、nitrendipine,nicardipineおよびnifedipineの1,4-DHP系Ca拮抗薬およびflunarizineの連続投与が抗不安薬と同程度に運動量の亢進を著明に抑制した(p<0.01)。

しかし、diltiazemは有意な変化を起こさなかった本研究は、高次脳機能障害発症因子の一つである脳神経細胞内Ca^<2+>調節機構に焦点を置き、Ca^<2+>channel活性を調節する広義Ca拮抗薬を基礎医学的手法により薬理効果ならびに作用機序を検索し多角的に解析することにより、安全性が高く、より選択的治療効果を見いだすことを主目的として行ってきた。この目的を完遂するため、本研究は脳神経細胞に存在するCa^<2+>channelのサブタイプの性質をより詳細に研究し、いずれのサブタイプが、いかなる高次脳機能障害を誘発させるかを明らかとして、さらに脳内Ca^<2+>channelに対する各種Ca拮抗薬の薬理学的特性に関して詳細な研究を行った。本研究で得られた成績を要約すると、1)中枢神経細胞における細胞内Ca^<2+>の動態異常は脳内神経細胞死のみならず痙攣発作、協調運動の失調、不安症を誘発させることが培養小脳顆粒細胞ならびに行動薬理学的研究から明らかとなった。2)現在までの研究から脳機能障害と関連したCa^<2+>channelは従来の報告通りglutamate連関受容体チャネルであり、本研究から明らかとなったBay K8644およびnicardipine高感受性のL型チャネルであった。しかも、このL型のCa^<2+>channelは尾状核におけるdopamine遊離ん関与していることが培養脳神経細胞ならびに脳切片を用いた研究から実証された。3)従来のCa^<2+>拮抗薬の中枢薬理作用をFura-2法による細胞内測定法によって比較し効力順に列挙すると、flunarizane>nicardipine>nifedipine=verapamil>>>diltiazemであった。これらの中枢薬理効果は列挙したCa拮抗薬の血液一脳関通過性とほぼ関連しておりdiltiazemと比較して他のCa拮抗薬は通過性が優位であるものと思われる。興味ある研究成績として、flunarizineあるいはnicardipineがglutamate誘発の細胞毒性に効果的であることがin vitroの成績から示唆された。さらに、各種の〔Ca^<2+>〕i修飾物質の薬理的特性の一連の検索中にGABA-peptide誘導体がCa^<2+>channel阻害作用を有することが明らかとなった。しかも、これらの誘導体の中でもPiv-D-Ser-Leu-GABAおよびPiv-Ser-Leu-GABAが大脳辺縁系のdopamine神経活性を特異的に抑制して、運動異常あるいは脳虚血後の機能障害に対して改善作用を有することが明らかとなった。すなわち、脳機能に影響を及ぼす〔Ca^<2+>〕i変動異常に対する治療法として幾種類かのCa^<2+>拮抗作用を有する薬物が有効と思われ、しかも従来とは異なった構造式を有するGABA-peptide誘導体に有効なもののあることが判明してきたことが本研究の成果として列挙される。中枢神経細胞内へのCa^<2+>流入の主な調節機構に作用点を有する薬物は高次脳機能障害の発症を予防あるいは阻止することが予測される。本研究は、新規細胞内Ca^<2+>モジュレーターとしてGABA-peptide誘導体を3種合成して培養脳神経細胞での細胞内Ca^<2+>([Ca^<2+>]i)量の異常増加に対する抑制効果を検索した。
リーダーの自己概念の変容による多様化がリーダーシップ行動に及ぼす影響

当該研究では、以下の目的を設定した:(1)リーダーの自己概念とその変容について、過去のリーダーシップ研究を展望する。(2)リーダーの自己複雑性を測定する尺度を開発する。(3)これまでのリーダーシップ研究の成果をもとに、リーダーの自己概念の経時的変容を促すための具体的なリーダー育成研修を試み、その研修効果を検証する。リーダー育成研修は、自分自身のありようを見つめ直す自己覚知の促進を中心に行われる。(4)リーダーの自己概念の複雑性が進んでいるほど、リーダーとしての的確な行動が促進されるかどうかについて、Web調査を行って検証する。研究方法:(3)のリーダーの自己概念の経時的変化を促すリーダー育成研究においては、平成28年度で研修成果が認められたものについて、平成29年度および30年度も引き続き研修前後の自己概念の変化が検証された。(2)における自己複雑性尺度については、過去の研究で作成された測定尺度をもとに本研究用に再構成して、調査票の原版が作成された。平成30年度に自己複雑性尺度を含む調査がWebsite上で行われた。研究成果:平成29年度では、平成28年度に行われた自己概念を促進する目的をもった従業員研修プログラムのうち、明らかな研修効果が認められたプログラムに絞り込み、平成30年度にわたり実験的研究が継続実施された。研修期間前後で自己概念の3水準(個人水準・関係水準・集合水準)の変化について検証した結果、X社の人材育成プログラムにおいて、自己概念の3水準の指標が研修後に有意に高まった。平成30年度では、自己複雑性とリーダー行動について管理職者を調査対象としたWeb調査が行われた。分析の結果、自己複雑性はリーダー行動に影響をおよぼさず、今までの研究成果と同様に、自己概念の3水準のうち関係水準や集合水準の値が高いほど、的確なリーダー行動を行いやすかった。平成24年25年度・挑戦的萌芽研究(リーダー・アイデンティティの発達的変容に関する心理学的研究)では、変革型リーダーシップは3つの自己概念の水準(個人水準、関係水準、集合水準)がともに高いときに行われやすく、支援的リーダーシップは関係的自己概念と集合的自己概念の得点が高いときに行われやすかった。さらに、リーダーの個人的自己概念のみが高いときには、侮辱的行為が行われやすかった。この研究の結果は、リーダーの自己概念の個人水準だけが高いリーダーは部下や同僚を罵倒しがちで、リーダーとしての的確な行動はリーダーの自己概念がともに高いことが望まれることを示唆している。しかしながら、この研究ではリーダーの自己概念の水準に関して経時的変化は起こるのか、起こるとすればリーダーの自己概念の水準をどうすれば変えられるかについては検討できなかった。当該申請研究では、リーダーの自己概念の変容とそれがリーダー行動に及ぼす影響について、以下の目的を設定した:(1)リーダーの自己複雑性を測定する尺度を開発する。(2)これまでの研究成果をもとに、リーダーの自己概念の経時的変容を促すための具体的なリーダー育成研修を試み、その研修効果を検証する。リーダー育成研修は、自分自身のありようを見つめ直す自己覚知を中心に行われる。さらに、(3)リーダーの自己概念の複雑性が進んでいるほど、リーダーとしての的確な行動が促進されるかどうかについてWeb調査を行って検証する。平成28年度では、(2)のリーダーの自己概念の継時的変化を促すいくつかの企業での人材育成研修において、その研修前後の変化を検証した。<実験的研究>当該年度においては、職場でリーダーとして仕事する可能性のある従業員、あるいは企業の経営幹部を対象とした、自己概念の変容を促進する目的をもったいくつかの従業員育成プログラムに研究分担者2名が調査の協力を依頼し、それらの研修効果を検証した。研修では、参加者が自分自身を見つめ直すことを主旨とし、360度フィードバック技法を援用しながら、自己覚知を喚起させ、自己の多様なあり方を受容できるように支援した。研修期間前後で、自己概念の3水準が変化したかについてすでに申請者らが開発した多水準自己概念尺度(LSCS)を用いて測定し、経時的変化を検証した。分析の結果、X社における人材育成プログラムにおいて、自己概念の個人水準の指標が研修後に有意に高まり、関係水準・集合水準の指標も研修後に高くなる傾向を示した。<文献的研究>リーダー発達に関する心理学的研究についての最新研究論文を調査し、研究動向を俯瞰した。平成24年25年度・挑戦的萌芽研究(リーダー・アイデンティティの発達的変容に関する心理学的研究)では、変革型リーダーシップは自己概念の3水準(個人水準・関係水準・集合水準)がともに高いときに行われやすく、支援的リーダーシップは関係的自己概念と集合的自己概念の得点が高いときに行われやすかった。しかしながら、この研究ではリーダーの自己概念を変化させられるかについては検討できなかった。当該研究では、リーダーの自己概念の変容とそれがリーダー行動におよぼす影響について、以下の目的を設定した:(1)リーダーの自己概念とその変容について、過去のリーダーシップ研究を展望する。

平成29年度では、(2)における自己複雑性尺度について、過去の研究で作成された測定尺度をもとに本研究用に再構成して、調査票の原版が作成された。(3)のリーダーの自己概念の経時的変化を促す人材育成研究のうち、平成28年度で研修成果が認められたものについて、引き続き研修前後の自己概念の変化について検証した。<文献研究>平成28年度に行われた、リーダー発達に関する心理学的研究についての研究動向の文献研究は、平成29年度に論文に掲載された。<実験的研究>当該年度では、平成28年度に行われた自己概念を促進する目的をもった従業員研修プログラムのうち、明らかな研修効果が認められたプログラムに絞り込み、実験的研究が継続された。研修期間前後で自己概念の3水準(個人水準・関係水準・集合水準)が変化したかについて、検証した結果、平成28年度に引き続き、X社の人材育成プログラムにおいて、自己概念の個人水準の指標が研修後に有意に高まり、関係水準・集合水準の指標も研修後に高くなる傾向を示した。<調査研究>自己複雑性とリーダー行動についてのWeb調査で盛り込むべき調査項目が確定され、調査依頼する業者が選定された。<学会での研究進捗報告>平成28年度までの研究成果を、日本応用心理学会第84回大会と経営行動科学学会第20回年次大会で発表した。当該研究では、以下の目的を設定した:(1)リーダーの自己概念とその変容について、過去のリーダーシップ研究を展望する。(2)リーダーの自己複雑性を測定する尺度を開発する。(3)これまでのリーダーシップ研究の成果をもとに、リーダーの自己概念の経時的変容を促すための具体的なリーダー育成研修を試み、その研修効果を検証する。リーダー育成研修は、自分自身のありようを見つめ直す自己覚知の促進を中心に行われる。(4)リーダーの自己概念の複雑性が進んでいるほど、リーダーとしての的確な行動が促進されるかどうかについて、Web調査を行って検証する。研究方法:(3)のリーダーの自己概念の経時的変化を促すリーダー育成研究においては、平成28年度で研修成果が認められたものについて、平成29年度および30年度も引き続き研修前後の自己概念の変化が検証された。(2)における自己複雑性尺度については、過去の研究で作成された測定尺度をもとに本研究用に再構成して、調査票の原版が作成された。平成30年度に自己複雑性尺度を含む調査がWebsite上で行われた。研究成果:平成29年度では、平成28年度に行われた自己概念を促進する目的をもった従業員研修プログラムのうち、明らかな研修効果が認められたプログラムに絞り込み、平成30年度にわたり実験的研究が継続実施された。研修期間前後で自己概念の3水準(個人水準・関係水準・集合水準)の変化について検証した結果、X社の人材育成プログラムにおいて、自己概念の3水準の指標が研修後に有意に高まった。平成30年度では、自己複雑性とリーダー行動について管理職者を調査対象としたWeb調査が行われた。
有限長PN系列を用いたユーザ識別位置センシング非同期CDMA通信方式

本研究は、センサネットワーク、アドホックネットワークの要素技術として、自己相関関数が両端の微小値を除いてインパルスとなる有限長系列を用いてユーザ識別と位置センシングが同時にできる非同期スペクトル拡散多重伝送方式の開発を目的としたものである。本研究における主要な研究実績は以下の通りである。(1)実数有限長系列の研究本方式のために送受信の効率が高い系列を開発した。そのほか、今後、送受信者が選択的に無線ネットワークを形成できるように、送受信の効率はやや低いが相関出力がインパルスになる実数有限長系列対を研究した。(2)多重通信方式の開発4ユーザに長さ65の実数有限長系列を割り当て、可変速度のデータ入力に対して変調出力を2値符号として送信し、受信信号を相関処理することによって、振幅歪み、雑音、相互干渉を低く抑える方式を開発した。この方式は周波数効率が高く、OFDM方式(地上波デジタルTVの方式)よりも振幅歪みに強い。(3)位置検出方式の開発3角形の頂点に受信アンテナを配置して送信アンテナからの距離差を求め、距離差から双曲線上の位置を検出する方式を開発した。検出位置の精度はアンテナの相互の距離とシステムクロックの時間間隔に依存する。本研究によって、符号を割り当てられた人や物の位置を特定し通信するために、一つの方式が提案された。今後は実用化のための改善研究が期待される。本研究では、センサネットワーク、アドホックネットワークの要素技術として、自己相関関数が両端の微小値を除いてインパルスとなる有限長系列を用いてユーザ識別と位置センシングが同時にできる非同期スペクトル拡散多重伝送方式の開発を行うことを目的としたものである。本年度の研究実績を以下に要約する。(1)系列の絶対値と相互相関関数の絶対値が小さい系列組の研究絶対値が小さい系列の組を構成し、部分系列の置換によって相互相関を抑える方法を導いた。(2)他局間干渉およびマルチパス干渉の算定と信号弁別に関する研究他局間干渉および直接波とマルチパスのある伝搬環境の特性を調査し、信号検出をシミュレーションで評価した。(3)非同期CDMAの符号構成と性能に関する研究バースト的な系列および相互相関に0値を多く含む長い系列で符号を構成した。また、畳み込みに基づく速度可変の符号を構成した。そして、2値被積分符号による伝送での相関出力の干渉と誤差を明らかにした。(4)位置センシング方式の構成に関する研究送信アンテナ1基に対し受信アンテナ3基を三角形の頂点に配置し、信号の到達時間差から定まる双曲線の交線から位置を算出する方式を構成した。相関パルスの時間差の検串法を提案し、距離分解能を明らかにした。(5)被積分符号発生器とマッチトフィルタの構成法に関する研究2値被積分符号発生器のROMによる構成法、マッチトフィルタ群の最小素子数での構成法を明らかにした。(6)基礎データ収集用スペクトル拡散実験システム設計広帯域ディスコーンアンテナを送信側に1基、受信側に3基設置し、10MHzのクロック周波数で発生した1040ビット長の被積分符号を200MHzの搬送周波数で変調、送信し、復調、相関検波する実験システムを設計した。(7)スペクトル拡散伝送による基礎データ収集実験実験システムの動作確認を行った後、室内でアンテナによる符号伝送実験を行った。伝搬遅延、受信レベル、背景雑音、相関特性を測定した。これらの実験から、各信号の適切なレベル配分、実装法の改善が課題となった。(8)平成18年度の研究のまとめ数値計算、シミュレーションにより理論の妥当性は確認され、基礎実験により、ハードウエア実現のための参考データが得られた。これらの結果は一部を学会発表すると共に、次年度の研究に役立てる。本研究では、センサネットワーク、アドホックネトワークの要素技術として、自己相関関数が両端の微小値を除いてインパルスとなる有限長系列を用いてユーザ識別と位置センシングが同時にできる非同期スペクトル拡散多重伝送方式の開発を目的としたものである。平成18年度の研究に基づき、具体化のための研究を行った。平成19年度の実積は以下の通りである。1.非同期CDMA通信・測位システムの方式設計

長さ65の自己直交有限長系例を用いて送信機4台、受信機1台のCDMA通信・測位システムの方式を設計した。関連して、速度可変や送受異系列の方式も検討した。2.非同期CDMA通信・測位システムのハードウエア信号処理系の設計・製作DSP開発キット上に被積分符号器、高速相関器を中心に送受信ハードウエアを設計製作した。3.非同期CDMA通信・測位システムのソフトウエア信号処理系の設計・制作送信データを発生し、受信データの誤り率測定、位置計算を行うプログラムを設計した。4.非同期CDMA通信におけるデータ伝送実験4ユーザでの雑音混入とデータ伝送の実験を行った。5.非同期CDMA通信における測位実験実空間において200MHzの搬送周波数で電波伝送し、測位実験を行った。6.自己直交有限長系列を用いた非同期CDMA通信・測位方式の評価数値計算、シミュレーション、実験を照合し、方式を評価した。シミュレーションと実際に差が見られ、実装技術が今後の課題として残された。
スタチンによるRho-Rhoキナーゼ系調節を介した前立腺癌進展制御機構の解析

結果:(1)前立腺癌細胞増殖・運動性におけるスタチンの影響3つの前立腺癌細胞株(LNCaP,,PC-3,DU145)を用いてその増殖曲線および細胞運動性に及ぼす各種スタチンの影響を検討した。いずれのスタチンにおいても有意な細胞増殖および細胞運動抑制が観察され、その程度の強さははpravastatin<fluvastatinくsimvastatinの順であった。(2)スタチン刺激による低分子G蛋白の発現変化比較的低分子G蛋白の基礎発現量の高いPC-3細胞を用いた検討の結果、スタチン投与により、Rac1のリン酸化は濃度依存的に抑制され、蛋白レベルは不変であった。一方、RhoAの発現レベルは濃度依存的に増加した。(4)スタチン刺激による各種シグナル伝達関連蛋白の発現変化Statin刺激時に変化する蛋白の中で特にStress Activated Protein Kinases(SAPKs)であるp38MAPK,JNKについて前立腺癌のautocrine growthstimulatorとして作用するInterleukin-6(IL-6)との関連について検討したところ、IL-6の分泌調節にはp38MAPKが主たる促進因子として作用していることがわかった。結論:スタチンは特たアンドロゲン非依存性前立腺癌細胞に対する増殖・運動抑制効果を有することが明らかとなった。その効果はstrong statinと呼ばれるコレステロール低下作用の強いものほど顕著であった。これにはおそらく低分子G蛋白の活性変化が関与しており、おそらくはRac1のリン酸化上昇とこれとは反対にRhoA蛋白レベルの低下が作用していることが予想された結果:(1)前立腺癌細胞増殖・運動性におけるスタチンの影響3つの前立腺癌細胞株(LNCaP,,PC-3,DU145)を用いてその増殖曲線および細胞運動性に及ぼす各種スタチンの影響を検討した。これにはおそらく低分子G蛋白の活性変化が関与しており、おそらくはRac1のリン酸化上昇とこれとは反対にRhoA蛋白レベルの低下が作用していることが予想された本年度は以下の点について検討を行った。1.前立腺癌細胞の増殖に与える各種スタチンの効果2.低分子量G蛋白の発現の解析スタチンはメバロン酸代謝経路の抑制により、その下流に存在する低分子量G蛋白へも影響することが知られていることから、次にスタチンを添加した場合のPC-3細胞におけるRho A, Rac1, cdc42の発現をWestern blottingで検討してみた。まずRac1の発現はいずれのスタチン投与によっても用量依存性に蛋白レベルは変化がないものの、強いリン酸化の抑制が観察された。一方、Rho Aおよびcdc42の発現に関してはRac1と挙動が異なり、用量依存性に蛋白レベルの上昇が観察された。3.MAPK発現の変化一部のスタチンに関してはその他のシグナル伝達分子についても発現の解析をおこなった。結果、phospho-MAPK, phosphor-JNKおよびphosphor-p38MAPKの発現上昇が観察され、一方でAktの発現に変化はみられなかった。4.これまでの結果のまとめスタチン投与により、PC-3細胞の強い増殖抑制が観察された。これに伴い、低分子量G蛋白をはじめとした種々のシグナル伝達分子の発現に変化が生じたが、増殖、細胞運動、細胞死など何れの現象にどのような形で関わっているかは現時点では不明である。今後さらに解析を進めていく予定である。昨年度の結果に基づき本年度は以下の点について検討を行った。1.スタチン投与による細胞運動性の変化PC-3細胞を用い、この培養系に種々のスタチン(pravastatin, fluvastatin, simvastatin)を添加し、その運動性についてトランズウェルを用いた検討を行った。その結果、何れのスタチンも用量・時間依存性にPC-3細胞の増殖を抑制した。その効果は概ね細胞増殖抑制効果と同様にpravastatin<fluvastatin<simvastatinの順であった。2.SAPKsの発現変化とIL-6昨年度の検討結果、スタチン投与によりphospho-MAPK, phosphor-JNKおよびphosphor-p38MAPKの発現上昇が観察されたが、特にStress Activated Protein Kinases (SAPKs)であるp38MAPK,JNKについて前立腺癌のautocrine growth

stimulatorとして作用することが知られているInterleukin-6(IL-6)との関連について検討したところ、IL-6の分泌調節にはp38MAPKが主たる促進因子として作用していることがわかった。この点についてはさらにスタチン投与との関連性について解析を進めているところである。4.これまでの結果のまとめスタチン投与により、PC-3細胞の強い増殖抑制とともに細胞運動の抑制が観察された。おそらくはRho, Raclなどの低分子量G蛋白の発現変化により惹起されたものと予想されるが、現時点では詳細な関連性については結論が得られていない。また、派生して得られた知見としてアンドロゲン非依存性前立腺癌細胞におけるIL-6分泌調節にストレス関連分子の1つであるp38MAPKが重要な役割を持っていることが示された。