hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
遊離脂肪酸の量的・質的変化と好中球の動態変化による内臓脂肪組織炎症の解明

好中球はインフラマソームの構成成分であるASC、Caspase-1/11依存的にIL-1 betaを産生することが示唆されたが、NLRP3は関与しないことから、NLRP3以外のASC依存性インフラマソームが好中球のIL-1 beta産生に関与することが示唆された。さらに、LTB4の生合成酵素(5-Lox)欠損マウスでは、高脂肪食(HFD)摂餌による好中球のVAT浸潤が軽減し、VATにおけるS100A8の発現が軽減すると共にマクロファージのVAT浸潤も軽減することを確認した。また、3T3-L1脂肪細胞やVATをIL-1 betaで刺激することによりS100A8の発現が増加することがわかった。さらにASC欠損マウスは、HFD摂餌によるIL-1 beta産生が軽減し、S100A8の発現やマクロファージのVAT浸潤も軽減した。以上から、VATに浸潤した好中球は脂肪細胞との相互作用によりIL-1 betaの発現を増加し、ASC依存性のインフラマソームによって産生されることがわかった。さらにIL-1 betaは脂肪細胞に作用してS100A8の発現を誘導し、マクロファージのVAT浸潤に関与することが示唆された。肥満に伴い増加した遊離脂肪酸が、内臓脂肪組織(Visceral Adipose Tissue:VAT)への免疫細胞の浸潤を促し、炎症を惹起・増悪することが知られている。我々は、定常状態においてVATの好中球がIL-1βを高発現し、その発現増加には脂肪細胞とのクロストークが重要であることを見出した。平成28年度は、脂肪細胞と好中球のクロストークの詳細な解析のため、脂肪細胞株と骨髄由来好中球の共培養による遺伝子変化をDNAマイクロアレイで網羅的に解析し、遺伝子発現が2倍以上に変化する59遺伝子を同定した。その中には、マクロファージのVAT浸潤に関与することが報告されている分子もあった。β3アドレナリン受容体作動薬CL316,243のマウス腹腔内投与により、血中遊離脂肪酸が増加し、VATにおいて顕著な好中球浸潤や炎症反応、インスリンシグナルの阻害が誘導された。また、抗Gr-1抗体の投与による好中球の除去により、CL316,243投与によるVATの炎症反応やインスリンシグナルの阻害が改善することから、VATに浸潤した好中球は炎症反応とインスリンシグナル阻害に関与することが示唆された。さらに、CL316,243投与によりVATのケモカイン(CXCL1, CXCL2)および脂質メディエーターであるロイコトリエンB4(LTB4)の生合成関連タンパク質(細胞質型ホスホリパーゼA2、5-リポキシゲナーゼ、5-リポキシゲナーゼ活性化タンパク質)の遺伝子発現が増加した。以上から、遊離脂肪酸の増加に伴う好中球のVAT浸潤に、ケモカインやLTB4が関与する可能性が示唆された。当初の予定通り、DNAマイクロアレイで脂肪細胞と好中球のクロストークの詳細な解析を行い、マクロファージのVAT浸潤に関与することが報告されている分子を同定することができた。また、好中球がVATの炎症反応やインスリンシグナル阻害に関与する結果を得ることができ、VATにおける好中球の機能を示唆する結果を得ることができた。さらに、遊離脂肪酸の増加に伴う好中球のVAT浸潤に、ケモカインやLTB4の関与が示唆され、平成29年度はその検証を行う予定である。肥満に伴う好中球の動態変化を解析するため、β3アドレナリン受容体作動薬(CL316,243)を用いて脂肪細胞からの遊離脂肪酸産生を増加させたところ、内臓脂肪組織(Visceral Adipose Tissue: VAT)に顕著な好中球の浸潤と炎症反応が誘導された。さらに、浸潤した好中球は大量のIL-1βを産生し、インスリンシグナルを阻害することもわかった。そこで平成29年度は、好中球のpro-IL-1βの発現誘導機構と遊走因子を明らかにすることを目的とした。高脂肪食摂餌により普通食摂餌マウスよりもVAT好中球のpro-IL-1βの発現が増加することを見出した。一方、骨髄や末梢血、脾臓由来の好中球ではこのような発現の増加は認められなかった。さらに、骨髄由来の好中球と脂肪細胞株の接触性の共培養により、pro-IL-1βの発現が顕著に増加したことから、VAT好中球は脂肪細胞との接触性相互作用により、pro-IL-1βを高発現することが示唆された。そのpro-IL-1βの発現増加はNF-κB活性化阻害剤により抑制され、さらにVAT好中球はNF-κB p65の核内移行が骨髄由来の好中球よりも亢進していることから、VAT好中球は脂肪細胞との接触性相互作用によりNF-κB経路を介して、pro-IL-1βを高発現することが示唆された。また、CL316,243投与により血中のロイコトリエンB4(LTB4)が増加し、VATの器官培養により培養液中のLTB4濃度が増加することから、LTB4はVATから産生されることが示唆された。LTB4の生合成酵素の1つである5リポキシゲナーゼの遺伝子欠損マウスでは、CL316,243投与による好中球のVAT浸潤が抑制された。

以上から、遊離脂肪酸の増加に伴いVATからLTB4が産生されから、好中球がVATに浸潤することが示唆された。VATにおいて好中球のpro-IL-1βの発現が高く、高脂肪食摂餌によりさらに発現が増加することを明らかにした。また、好中球のpro-IL-1βの発現増加に、脂肪細胞との接触性相互作用によるNF-κB経路の活性が重要であることを見出し、VAT好中球のpro-IL-1βの発現誘導機構の一部を明らかにすることができた。さらに、遊離脂肪酸増加による好中球のVAT浸潤にLTB4が関与することを見出し、好中球のVAT浸潤機構の一部も明らかにした。好中球はインフラマソームの構成成分であるASC、Caspase-1/11依存的にIL-1 betaを産生することが示唆されたが、NLRP3は関与しないことから、NLRP3以外のASC依存性インフラマソームが好中球のIL-1 beta産生に関与することが示唆された。さらに、LTB4の生合成酵素(5-Lox)欠損マウスでは、高脂肪食(HFD)摂餌による好中球のVAT浸潤が軽減し、VATにおけるS100A8の発現が軽減すると共にマクロファージのVAT浸潤も軽減することを確認した。また、3T3-L1脂肪細胞やVATをIL-1 betaで刺激することによりS100A8の発現が増加することがわかった。さらにASC欠損マウスは、HFD摂餌によるIL-1 beta産生が軽減し、S100A8の発現やマクロファージのVAT浸潤も軽減した。以上から、VATに浸潤した好中球は脂肪細胞との相互作用によりIL-1 betaの発現を増加し、ASC依存性のインフラマソームによって産生されることがわかった。さらにIL-1 betaは脂肪細胞に作用してS100A8の発現を誘導し、マクロファージのVAT浸潤に関与することが示唆された。1.VAT好中球の動態とその活性化機構の解明:脂肪細胞との相互作用による好中球のIL-1βの発現誘導機序を解明するため、両細胞間の相互作用が、接触性相互作用と液性因子のどちらに因るのかトランスウェルを用いて明らかにする。2.遊離脂肪酸によるVAT好中球の活性化機構の解明:遊離脂肪酸による好中球のIL-1β産生に、インフラマソームの活性化が必須であるのかを明らかにする。NLRP3インフラマソームの構成成分であるNLRP3, ASC, Caspase-1のそれぞれの遺伝子欠損マウス、または野生型マウスに遊離脂肪酸産生を誘導するβ3アドレナリン受容体作動薬(CL316,243)を投与し、VATを器官培養する。培養上清中のIL-1β産生量をELISA法で測定し、インフラマソーム依存性を明らかにする。3.遊離脂肪酸の量的・質的変化による好中球浸潤の誘導機構の解明:平成28年度の研究成果として、遊離脂肪酸の増加に伴う好中球のVAT浸潤に、ケモカインやLTB4が関与する可能性が示唆された。平成29年度は、好中球のVAT浸潤にどの遊走因子が関与するのか明らかにするため、ケモカインレセプターの阻害剤やケモカイン中和抗体の投与が、CL316,243投与による好中球のVAT浸潤を抑制するのか解析する。また、LTB4の関与を明らかにするため、LTB4の生合成酵素である5リポキシゲナーゼの遺伝子欠損マウスにCL316,243を投与し野生型マウスと比較して解析する。1.脂肪細胞との相互作用による好中球の活性化機序の解明脂肪細胞と好中球の接触性の相互作用に関与する分子を明らかにするため、様々な接着因子の阻害抗体を添加し好中球のpro-IL-1βの発現増加が抑制されるのか調べる。2.遊離脂肪酸によるVAT好中球のIL-
マウス生殖系列の成立とその幹細胞性を制御する機構の解析

1、様々な幹細胞システムにおいて機能するWnt/β-cateninシグナルのPGCの発生における機能を解析したところ、このシグナルは、PGCの脱分化には関与しないが、増殖に重要であることが明らかとなった。2、様々な細胞におけるAktシグナルの機能を調べるために、Aktの酵素活性を自在に制御できるAkt-Mer融合タンパクを全身の細胞において発現するトランスジェニックマウスを作製した。このマウスのPGCにおいてAktシグナルを活性化したところ、EG細胞の形成効率が上昇することが分かった。この結果は、PI3Kの下流のAktシグナルが、PGCから多能性幹細胞への脱分化を担っていることを示している。3、Aktシグナル活性化が、表皮の幹細胞システムに与える効果を検討した。その結果、休止期の毛包が成長期に移行し、発毛が誘導されること、毛包および毛包間表皮において前駆細胞の増殖が亢進することが分かった。この結果から、表皮幹細胞システムにおいて、Aktシグナルは、休止状態にある毛包幹細胞を活性化し前駆細胞を産生すること、前駆細胞の増幅を促進することが明らかとなった。本年度は、以下の研究を行った。1、ES細胞など様々な幹細胞システムにおいて機能しているWnt/β-cateninシグナルのPGCの発生における機能を解析したところ、このシグナルは、PGCの脱分化には関与しないが、増殖に重要であることが明らかとなった。同様のシステムを用いて、クロマチン制御因子などの脱分化に関与する可能性のある遺伝子について、生殖細胞特異的ノックアウトマウスを作製したので、来年度、その表現型を解析する。このマウスを用いて、PGCにおいてAktシグナルを活性化したところ、EG細胞の形成効率が上昇することが分かった。また、Aktシグナルを神経幹細胞で活性化させると、幹細胞の自己複製能が亢進するというデータを得つつあり、組織幹細胞の人為的制御に向けての準備をおこなった。また、このマウスにおいて、Aktシグナルの活性化が、血管腫の発症と維持に重要であるという結果を得た。本年度は、以下の研究を行つた。1、PI3Kの下流分子であるAktシグナルの活性化が、PGCの脱分化に与える影響を調べるために、Aktの酵素活性を自在に制御できるAkt-Mer融合タンパクをランスジエニックマウスにおいて発現させた。その結果、Aktシグナル活性化が、PI3K活性化と同様に、PGCからEG細胞への脱分化を促進することを明らかにした。2、土記のAkt-Merマウスを用いて、Aktシグナル活性化が、表皮の幹細胞システムに与える効果を検討した。以上のように、Aktシグナルは、ES細胞やPGCにおいては、未分化性を維持するが、表皮などの組織幹細胞においては、幹細胞の活性化や前駆細胞の増幅を促進する。
異方性多孔質体の格子ボルツマン法による熱流動解析

異方性多孔質体に対する非線形なフォルクハイマー項を解析できるように、最適化手法を適用することで、ブリンクマン・フォルクハイマーモデルに基づく保存式系を解析できる熱流動格子ボルツマン法を開発した。正方キャビティー内の自然対流解析において、流速分布、温度分布、ダルシー数およびレイリー数に対するヌセルト数との関係について、参照解と良い一致が得られた。計算精度を向上させた埋め込み境界法により任意形状の境界条件の設定も可能にした。多孔質体を構成する粒子や繊維の形状は当方ではなく、孔径も不均一であることから、多孔質体には流体が流れ易い場や流れにくい場が存在し、熱の伝わり方にも場所により違いが生じます。より一般性の高い多孔質体内熱流動解析の実現を目指し、透過係数および熱伝導率に異方性を有する多孔質体内の熱および流体運動の計算が可能な格子ボルツマン法の開発を目的としました。最初に、多孔質体内の熱流動運動をマクロなスケールから解析出来るように、多孔質体を空間平均し、透過係数などの巨視量を用いるブリンクマン・フォルクハイマー・ダルシー・モデルに基づく保存式系を解析できる格子ボルツマン法を開発しました。ここで、格子ボルツマン法では、粒子速度分布関数の運動方程式を解くことにより、流体の運動が解析されます。その結果として、粒子速度分布関数による運動量の定義式にフォルクハイマー項が影響を及ぼし、非線形方程式を解く必要が生じます。運動量の定義式に対し汎関数を定め、最適化手法を適用することによりこの非線形問題を解決しました。外力項が線形方程式になるブリンクマン・モデルに対してもモデル開発を行い、フォルクハイマー・モデルとの比較検討を行いました。検証方法に、熱伝導率を等方とした二次元正方キャビティー内の自然対流の計算を用いました。ダルシー数やプラントル数に対するヌセルト数との相関関係について、実験結果や他の数値計算による参照解と比較し、モデルの有効性を実証しました。本研究で提案した格子ボルツマン法が、従来手法に比べ、高速に計算ができることも同時に示しました。熱伝導率の異方性を考慮する問題については、まだ、解決できませんでしたので、今後も継続して検討していく予定です。格子ボルツマン法で用いられる衝突項に多緩和時間近似を用いる手法が、最も有力な解決策と考えられ、現在この方針に基づき、モデル開発に着手しています。多孔質体を構成する粒子や繊維の形状は等方ではなく、孔径も不均一であることから、多孔質体には流体が流れ易い場や流れにくい場が存在し、熱の伝わり方も場所によって異なります。多孔質体内の熱流動運動をマクロなスケールから解析出来るように、多孔質体を空間平均し、透過係数などの巨視量を用いるブリンクマン・フォルクハイマーモデルに基づく保存式系を解析できる二次元格子ボルツマン法を開発しました。異方性多孔質体に対する非線形なフォルクハイマー項を解くためには、最適化手法を用いなければならないため、格子ボルツマン法が有する高速演算能力が大幅に低下する問題が明らかになりました。フォルクハイマー項を削除したブリンクマンモデルに基づく格子ボルツマン法を提案し、二次元正方キャビティー内の自然対流解析を行い、ダルシー数やプラントル数に対するヌセルト数との相関関係について、実験結果や他の数値計算による参照解と比較し、モデルの有効性を実証しました。また、格子ボルツマン法では、プラントル数を高くするためには、緩和時間と圧縮性誤差の問題から代表長さを大きくする必要があること判明し、今後の三次元計算において格子点数の増加に対処する必要性が明らかになりました。代表長さを大きくする代わりに、ポアソン方程式を解くことにより圧縮性誤差を縮小させる手法も提案し、テイラー渦流れやポアズイユ流れにより有効性を確認しました。三次化モデルでは、辺や角の部分に対する境界条件の精度が計算精度に強く影響を与えることが報告されています。上記の問題に加え、境界条件の設定条件も考慮しながら、三次元自然対流解析によりモデルの定量的な評価を行って行く予定です。多孔質体を構成する粒子や繊維の形状は等方ではなく、孔径も不均一であることから、より一般性の高い多孔質体内熱流動解析の実現を目指し、透過係数および熱伝導率に異方性を有する多孔質体内の熱および流体運動の計算が可能な格子ボルツマン法の開発を目的としました。異方性多孔質体に対する非線形なフォルクハイマー項を解析できるように、最適化手法を適用することで、ブリンクマン・フォルクハイマーモデルに基づく保存式系を解析できる熱流動格子ボルツマン法を開発しました。正方キャビティー内の自然対流解析において、流速分布、温度分布、ダルシー数およびプラントル数に対するヌセルト数との相関関係について、参照解と良い一致が得られました。

本研究期間中に他機関により提案された多緩和時間モデルにより、熱伝導率に対する異方性の導入も可能となりました。モデルの三次元計算において、従来の手法では辺や角に対する境界条件の精度に問題があり、また、実用的な製品に対する任意形状の境界条件の設定に最適なことから、埋め込み境界法を適用した格子ボルツマン法による自然対流解析について検討しました。同心二重円筒間熱伝導問題の計算を行い、緩和時間の増大による境界近傍で温度分布の歪みが判明し、緩和時間の適切な設定値を明確化しました。同心二重円筒間の自然対流解析における流れ関数分布と温度分布、および、円柱周り自然対流解析における円柱半径と平均ヌセルト数との関係が、参照解と良い一致を示しました。Implicit Correction Methodに基づく埋め込み境界法を熱流動格子ボルツマン法に適用し、境界点数による計算精度への影響を一次精度まで向上させることに成功しました。三次元異方性多孔質体内自然対流解析モデルを構成する技術全てを定量的に評価し、その有効性を示しました。
皮膚悪性腫瘍,特に悪性リンパ腫の発癌遺伝子に関する研究

悪性黒色腫,皮膚悪性リンパ腫では,他の悪性腫瘍では高頻度に見られる癌抑制遺伝子のp15,p16,p53の欠損や変異はPCR法,PCR-SSCP法では認められなかった.しかし,免疫組織化学法では,有棘細胞癌に高頻度にp53の発現が認められ,日光角化症でも高頻度にp53の発現が認められた.すなわち,有棘細胞癌ではその前癌段階である日光角化症ですでに,p53の遺伝子異常が認められた.実際,日光角化症で高頻度にp53の発現が認められた2例では,その後有棘細胞癌のリンパ節転移が早期に確認され,予後も不良であった.このことは,日光角化症でもp53の発現が強い症例では、十分な治療が必要であることを示唆し,今後の治療方針を決定する上で有用な所見といえた.近年,悪性黒色腫や,皮膚悪性リンパ腫にインターフェロン療法が行われ,治療効果が得られている.このインターフェロン療法による効果の多くは免疫活性作用によるものと考えられてきた.しかし,本研究ではインターフェロンによる抗腫瘍効果が,腫瘍に対する直接作用も存在することを明らかとした.すなわち,インターフェロンによる細胞増殖抑制活性がp53を経由しないp21の活性化と,IRF-1の活性化を通じてのアポトーシスの誘導によるものであることを明らかにした.また,このインターフェロンゃインターロイキン1による増殖抑制効果はp15,p16,p73に欠損のあるA375-2悪性黒色腫細胞株では強く見られ,今後癌治療を考案する上で有用な所見と考えられた.また,インターフェロンによる増殖抑制効果がステロイドの併用により増強されることも証明した.悪性黒色腫,皮膚悪性リンパ腫では,他の悪性腫瘍では高頻度に見られる癌抑制遺伝子のp15,p16,p53の欠損や変異はPCR法,PCR-SSCP法では認められなかった.しかし,免疫組織化学法では,有棘細胞癌に高頻度にp53の発現が認められ,日光角化症でも高頻度にp53の発現が認められた.すなわち,有棘細胞癌ではその前癌段階である日光角化症ですでに,p53の遺伝子異常が認められた.実際,日光角化症で高頻度にp53の発現が認められた2例では,その後有棘細胞癌のリンパ節転移が早期に確認され,予後も不良であった.このことは,日光角化症でもp53の発現が強い症例では、十分な治療が必要であることを示唆し,今後の治療方針を決定する上で有用な所見といえた.近年,悪性黒色腫や,皮膚悪性リンパ腫にインターフェロン療法が行われ,治療効果が得られている.このインターフェロン療法による効果の多くは免疫活性作用によるものと考えられてきた.しかし,本研究ではインターフェロンによる抗腫瘍効果が,腫瘍に対する直接作用も存在することを明らかとした.すなわち,インターフェロンによる細胞増殖抑制活性がp53を経由しないp21の活性化と,IRF-1の活性化を通じてのアポトーシスの誘導によるものであることを明らかにした.また,このインターフェロンゃインターロイキン1による増殖抑制効果はp15,p16,p73に欠損のあるA375-2悪性黒色腫細胞株では強く見られ,今後癌治療を考案する上で有用な所見と考えられた.また,インターフェロンによる増殖抑制効果がステロイドの併用により増強されることも証明した.結論:造血器悪性腫瘍では,グリオーマ,悪性黒色腫等とは異なり,p53,p16(CDKN2/MTS1),p15(MTS2),p21(WAF1/CIP1),p27(KIP1)遺伝子の欠落の頻度は高くはなかった.結果:1.A375-2細胞株でp16,p15に欠損が見られたが,p21,p27,p53には欠損は見られなかった.2.IFNβでは,すべての細胞株に増殖抑制効果が見られたが,IL-1ではp15,p16欠損株であるA375-2のみに増殖抑制効果が見られた.3.rIFNβ添加1時間後および24時間後の培養細胞RNA中にp21,IRF-1の増加は見られた。p16,p53,IRF-2のmRNAの増減は見られなかった.4.rIFNβ添加24時間後のメラノーマ細胞株(MM28)にはアポトーシスが見られた.結論:IFNβ悪性黒色腫細胞株に対する増殖抑制効果は,IRF1を介したp21の活性化による細胞周期の進行の抑制によるものであり,この結果,培養細胞はapoptosisに陥るものと考えられた.悪性黒色腫,皮膚悪性リンパ腫では,他の悪性腫瘍では高頻度に見られる癌抑制遺伝子のp15,p16,p53の欠損や変異はPCR法,PCR-SSCP法では認められなかった.しかし,免疫組織化学法では,有棘細胞癌に高頻度にp53の発現が認められ,日光角化症でも高頻度にp53の発現が認められた.すなわち,有棘細胞癌ではその前癌段階である日光角化症ですでに, p53の遺伝子異常が認められた.実際,日光角化症で高頻度にp53の発現が認められた2例では,その後有棘細胞癌のリンパ節転移が早期に確認され,予後も不良であった.このことは,日光角化症でもp53の発現が強い症例では,十分な治療が必要であることを示唆し,今後の治療方針を決定する上で有用な所見といえた.

近年,悪性黒色腫や,皮膚悪性リンパ腫にインターフェロン療法が行われ,治療効果が得られている.このインターフェロン療法による効果の多くは免疫活性作用によるものと考えられてきた.しかし,本研究ではインターフェロンによる抗腫瘍効果が,必ずしも免疫活性作用によるものばかりでなく,腫瘍に対する直接作用も存在することを明らかとした.すなわち,インターフェロンによる細胞増殖抑制活性がp53を経由しないp21の活性化と,IRF-1の活性化を通じてのアポトーシスの誘導によるものであることを明らかにした.また,このインターフェロンやインターロイキン1による増殖抑制効果はp15,p16,p73に欠損のあるA375-2悪性黒色腫細胞株では強く見られ,今後癌治療を考察する上で有用な所見と考えられた.また,インターフェロンによる増殖抑制効果がステロイドの併用により増強されることも証明した.
ケアとインタラクティブメディア―遊びから考える「あいだ」の創造―

ケア行為・空間をアートや遊びを用いて変換するインタラクティブなデジタルメディア開発の方法論がケアされるものとケアするものにおける新しい「あいだ」となり、ケアの主体性の再確保と間口の拡大が可能か、多くの事例の蓄積を行ってきた。インタラクティブメディアの身体性が新たなコミュニケーションチャンネルとして機能するとともに、「遊び」の要素が、時として閉塞しがちなケア空間を変容させることが明らかになった。ケア現場におけるインタラクティブなデジタルメディアの開発に関する本研究においては、ケア現場におけるデジタルメディア-アートや遊びを交えた体験的な映像装置やガジェットと呼ばれる高度デジタル玩具の開発を軸に、平成25年度は以下の研究を行った。まず、子供向けの開発として、遊びながら親子で学習を行うことのできる展示作品とそのシステム開発を行った。円の図形原理をベースに、子どもたちが自ら遊びを発展させることを期待したシステム設計を目指し、「光のコンパス:まるの王様」という作品を制作した。綺麗なまるやわざと歪んだまるを描く面白さに気がついたり、描くプロセスそのものにも楽しさを見出し、親子や友達同士で言葉を交わし息を合わせる二人の関係様子を観察することができた。展示は愛知県児童総合センター(長久手市)およびキッズプラザ大阪(大阪市)にて行い、体験者の観察を行った。同様に、乳幼児に対する育児において、乳幼児施設職員の聞き取りをもとに、育児に新しい視点と気付きをもたらすようなデジタル映像装置を開発し、「おえかキセキ」という作品と制作、展示した。両作品に関する観察および協力施設職員からの聞き取りの分析は今後の課題とする。また、高齢者施設におけるデジタル映像装置の開発も並行して行い、大阪府堺市にある通所介護事業所の協力のもと、フィールドワークを行い、これまでのリハビリテーションやレクリエーションとは異なる役割をもつ余暇の過ごし方が必要であることがわかった。このフィールドワーク結果を受けて、場の空気・空間づくりに関与するデジタル作品の開発を進めている。この研究成果については、第37回認知症介護研究会(立命館大学、京都市)およびアートミーツケア学会2013年度総会・大会(金沢美術工芸大学、金沢市)にて研究発表を行った。ケア現場におけるインタラクティブなデジタルメディアの開発に関する本研究においては、ケア現場におけるデジタルメディア、アートや遊びを交えた体験的な映像装置やガジェットと呼ばれる高度デジタル玩具の開発を軸に、平成26年度は以下の研究を行った。まず、子供向けの側面として、身体遊びを行いながら子供同士あるいは保護者を交えた関係構築を行うための幼児向けとして手芸素材に皮膚接触センサーを組み込んだぬいぐるみ型デバイスおよびダンスプログラムを組み合わせたパッケージを開発し、高槻現代劇場(大阪府高槻市)でのワークショップの実施を行った。また、ブリコラージュの手法を用いた創作ワークショップを青山学院大学(東京都渋谷区)にて行った。さらに、小学生を対象に食とコミュニケーションを活性化するためのデジタルデバイスの開発を行い、静岡文化芸術大学(静岡県浜松市)においてワークショップの実践を行った。また、高齢者施設におけるデジタルメディアの開発も並行して行い、大阪府堺市にある通所介護事業所の協力のもと、場の空気・空間づくりに関与するデジタル作品の開発を進めた。これは介護施設の空間に親和性のある黒電話型の筐体をもった据え置き型のデバイスであり、その機能として偶発的なコミュニケーションを誘発しようとすることで、ケアする/される立場を相対化させ、ケア現場への気付きと転換を行う可能性がある。この取り組みにおいては、アートミーツケア学会2014年度総会・大会(デザイン・クリエイティブセンター神戸、兵庫県神戸市)およびインタラクション2015(日本科学未来館・東京国際交流館、東京都江東区)において研究発表を行った。さらに、立命館大学生存学センターと連携しながらデジタルメディア技術と老い、身体を切り口とした研究会「身体とテクノロジー:アンドロイドは身体と老いの夢を見るか」(立命館大学、京都府京都市)を開催した。研究代表者(望月)は、ケア現場におけるインタラクティブなデジタルメディアの開発に関する研究においては、まず、子供向けの側面として、身体遊びを行いながら子供同士あるいは保護者を交えた関係構築を行うための幼児向けとして手芸素材に皮膚接触センサーを組み込んだぬいぐるみ型デバイスおよびダンスプログラムを組み合わせたパッケージを平成26年度に引き続き開発し、高槻現代劇場(高槻市)でのワークショップの実施を行った。また、障害者ケアの側面として、厚生労働省「平成27年度障害者の芸術活動支援モデル事業」に採択されているNPO法人スローレーベルと連携し、(1)障害の有無に関わらず様々な市民が参加できる(2)身体や感覚を拡張させる技術開発(3)世界・地域ごとの多様性にアプローチする、の3点を柱としたパフォーミングアーツ制作を共同で行った。さらに、車椅子の車輪速度を音楽の再生速度に変換するデバイス車椅子DJを開発し、超福祉展(渋谷ヒカリエ、東京都渋谷区)に出品するとともに、インタラクション2016(科学技術館、東京都千代田区)にて学術発表を行った。研究分担者である鈴木は、これまでの日本におけるケア現場での研究を元にして、2015年4月と5月にネパール連邦民主共和国で発生した大地震によって大きな被害を受けた、カトマンズ盆地に居住するネワール族の生活文化、とくに古都パタンにおけるネワール族の被災後に始まった高齢者向けケアハウスを対象とした研究を行った。具体的な研究には、朝の体操や血圧検査、新聞紙を使ったバッグや座布団づくり、ヨモリプルという年中行事、瞑想、スタッフの打ち合わせなどの動画記録がある。これらの記録はケアハウスの活動記録として公にされることを目的にするだけでなく、ケアハウスに来る高齢者とともに視聴する会を開催し、フィールドワークを行った。

ケア行為・空間をアートや遊びを用いて変換するインタラクティブなデジタルメディア開発の方法論がケアされるものとケアするものにおける新しい「あいだ」となり、ケアの主体性の再確保と間口の拡大が可能か、多くの事例の蓄積を行ってきた。インタラクティブメディアの身体性が新たなコミュニケーションチャンネルとして機能するとともに、「遊び」の要素が、時として閉塞しがちなケア空間を変容させることが明らかになった。本研究は、ケア行為・空間をアートや遊びを用いて変換し、主体的な参加を促そうとするインタラクティブなデジタル機構を備えるデジタルメディア開発の方法論が、ケアされるものとケアするもの、そしてケアを見守る存在となるべきものにおける新しい「あいだ」となり、ケアの主体性の再確保と間口の拡大が可能か、開発実践を行いながら考察することを目的としている。平成26年度においては、育児に関する開発実践として、3件ワークショップを行うことができ、体験者によるアンケート・コメントおよび施設職員からのヒアリングを行うことができた。このヒアリング事例の分析は前年度分を含めて行うことが課題となるが、実践事例の蓄積を行うことができた点は、当初の予定に対して概ね順調に進展しているといえる。また、高齢者施設におけるフィールドワークを元にした開発実践に関して2件の学会発表を行うことにより、第三者との議論を行うことができ、当初の予定を含めて概ね順調に進展していると言える。インタラクティブメディア平成27年度においては、最終年度として、これまでのケアの現場におけるデジタルメディアの開発事例の蓄積の整理、分析を行う。この過程においては、連携協力者に評価を受けることで到達点と課題の焦点化を行う。また、研究成果の発信にも本格的に取り組むことにより、学会や研究会等で発表することに加え、本研究の開発物がエンターテイメント性や芸術性のあるデジタルメディアであることや、映像を用いたフィールド・ノートを制作していくことの強みを生かし、映像上映や美術展示などによる効果的な発信を一般向けに行なっていくことを狙う。これにより、直接ケアに携わる/携わらないに関わらず、ケアに関して幅広く当事者意識をもつための方法について議論・検討していく。平成25年度においては、育児に関する開発実践として、3件の展示を育児関連施設で展示を行うことができ、体験者によるアンケート・コメントおよび施設職員からのヒアリングを行うことができた。
日本宗教研究の新展開－ローカリティーへのグローバルなアプローチ

本年度は、地方学会の歴史と現状についての研究会(西日本宗教学会および北海道宗教学研究会)、他地域(タイおよびインド)におけるローカリティーに注目した宗教研究についての研究会、および日本国内における出自地域についての調査研究やGIS(地理情報システム)を活用した全国の宗教関連情報のマッピングについての研究会を実施した。地方学会に関しては、中央都市部からの距離や情報格差という地理的な制約を越えて普遍性を目指した努力が見られる一方で、それぞれの地域的宗教性の特色に配慮した研究蓄積も見られるため、今後の他地域の事例収集の上での指針が得られた。他地域のローカリティーと宗教学・宗教研究からは、その地域の宗教史や諸宗教の現状が宗教学の置かれ方に如実に反映しており、国内のローカリティーを見る上で全国的傾向と、前近代的な宗教状況を重ねて見ていくことの必然性、および大学において宗教学が講座や教員配置上置かれていないところで、どのような形で宗教に対する研究アプローチが見られるかどうかという点についても留意する必要性が感じられた。出自地域(自身あるいは前世代親族の出身地)に関する文化人類学的調査の事例からは、インフォーマントとのラポールの取りやすさや、海外の調査地における研究テーマとの比較の視点などが見られる。これは外国人研究者が国内調査地を決める際のラポールの作り方との比較が可能であると考えられる。また、宗教関連情報のマッピングがもたらす利点や留意点についても知見が得られた。並行して、地方出版における地域宗教誌(史)関連の一覧作成と地図化作業に着手した。国内における外国人研究者がもつ研究動向の地域的特性について、調査を着手することができなかったため。研究分担者・連携研究者を招集しての研究集会を年度中2回(予算の余裕があれば3回)実施する。地方学会等の動向調査の継続と、昨年度未着手の国内における外国人研究者がもつ研究動向の地域的特性についての予備的調査に当てる。また、パイロット調査の本調査も開始する。地方学会の動向調査については、歴史的経緯も含め現状を把握している研究者へのインタビューも実施する。国内における外国人研究者による研究の地域的特性を把握し、とりわけ当初どのような形で対象地域への参入を果たしたかについて予備的調査を実施する。パイロット調査については、長崎県島原半島における宗教に関して、昨年度実施した予備調査を踏まえて、夏季に現地調査を実施する。
C型肝炎ウイルスによる肝炎、肝がん発症の予防

本研究においては、ウイルスタンパク質が細胞の増殖に果す役割と、感染予防的な観点からHCVの感染増殖系の開発、ウイルスゲノムの複製制御についての研究を行った。以下にこれまでの成果を箇条書きで示す。(1)HCVコアタンパク質によるNF-κBの活性化機構:HCVタンパク質コアおよびNS5Aを一過性、恒常的あるいは誘導的に発現する細胞を作製した。コアタンパク質発現細胞についてはNF-κBの活性化をレポーターアッセイによりモニターした。その結果、コアタンパク質が小胞体に局在することがNF-κBの活性化に重要であることが明らかになった。(2)HCVコアタンパク質による核内受容体の転写活性化機構:コアと会合するタンパク質の中に核内受容体の活性をを抑制する働きがあることを見いだした。本タンパク質についてさらに解析し、本タンパク質がコアと会合すること、それにより抑制作用が解除されて核内受容体依存的な転写活性が生じることを明らかにした。(3)HCVコアタンパク質によるMAKキナーゼの活性化:コアを産生する細胞ではRas/Raf径路が活性化されるこさを見い出した。活性化には、コアがシグナルカスケードの中で、アダプター的に機能していることが示唆された。HCVゲノムが恒常的に自律複製する培養細胞を樹立した。それを用いて、ウイルスゲノム複製機構を解析した。その結果、HCVゲノム複製は細胞内の核膜周辺の限られた環境内に膜構造に守られて行われることを明らかにした。また、ウイルスゲノムの複製がサイクロスポリンにより強く阻害されることを見いだした。HCVゲノム複製の阻害は、サイクロスポリンの免疫抑制阻害活性ではなく、サイクロスポリンと結合し、その酵素活性が抑制されるサイクロフィリンにより制御されていることを示唆する成果を得た。また、HCVゲノムの複製は二本鎖RNAにより誘導される自然免疫系により強く制御されることを明らかにした。C型肝炎ウイルス(HCV)たんぱく質による細胞の増殖制御を解析し、コアたんぱく質が転写活性化因子NF-kBを活性化することによりアポトーシスを抑制することを見い出した。コアたんぱく質のNF-kB活性化の機構を解析し、コアたんぱく質が小胞体膜上に会合する時に活性が最大になること、コアたんぱく質により転写因子、elk1が活性化されることを明らかにした。また、コアたんぱく質を産生させた細胞においてはインターフェロンで誘導される遺伝子のうち2-5'オリゴアデニル酸合成酵素遺伝子が活性化されることを見い出した。コアたんぱく質を産生するトランスジェニックマウスにおける肝脂肪化に引き続き発生する肝がんの機構を解析し、以下のことを明らかにした。(1)肝脂肪化は、肝細胞内ミトコンドリアにおけるベータ酸化の障害とVLDLの肝細胞からの分泌の異常とによりもたらされる。(2)マウス肝に蓄積する脂肪成分にC18単不飽和脂肪酸(C18:1)からなるトリグリセリドが有意に増加していた。C18:1脂肪酸はヒト慢性C型肝炎患者の肝においても、B型肝炎患者肝や単純肥満による脂肪肝に比して、有意に増加していた。(3)マウス肝では、組織学的な炎症像の不在にもかかわらず活性酸素の増加を認めた。また、活酸素の発生において、コア蛋白とアルコールとは共同作用をもつ。これらの現象はヒトにおける肝発がんを説明するものとして重要と考えられる。(4)別途に作製したコアたんぱく質を発現するトランスジェニックマウス肝においてはFasによるアポトーシスに対する感受性が高くなった。C型肝炎ウイルスタンパク質が細胞の増殖に及ぼす効果を解析する目的で、ウイルスの非構造タンパク質、NS5Aの機能解析をおこなった。

本タンパク質はすでにPKRの機能を抑制する事が知られており、その抑制には本タンパク質のほぼ中央部に存在するインターフェロン感受性決定配列(ISDR)が重要な機能を果たすと報告されている。筆者は試験管内翻訳反応に対するPKRの機能抑制作用をNS5Aが解除する作用があることを用いてNS5A分子中のどの領域がその機能発揮に必要かを調べた。その結果、ISDRは必要でなく、むしろC端側の配列が重要であることを示唆する結果を得た。また、NS5Aの他の機能を明らかにするために酵母two-hybrid法を用いてNS5Aに会合するタンパク質を探索した。その結果、これまでに報告されているもの以外に新たなタンパク質としてビンキュリンに結合するタンパク質ビネキシンを得た。本タンパク質は細胞接着を通してシグナルを中に伝える働きがあると考えられるので、NS5Aが細胞接着に対して何らかの作用を発揮している可能性が考えられた。C型肝炎ウイルスタンパク質が細胞の増殖に及ぼす効果を解析する目的で、ウイルスの構造タンパク質コアの機能解析をおこなった。我々は、本タンパク質がアポトーシスを抑制する働きがあることを既に示したが、コア蛋白質を発現するトランスジェニックマウスでは肝細胞がアポトーシスの誘導に感受性を示すことも見いだしている。そこで機能的に異なるこれらの作用がコアのどのような働きによるかを明らかにすることを目的とした。そこでコア蛋白質と会合する細胞性因子を明らかにするために酵母を用いたtwo-hybridを行い結合する候補蛋白質を得た。その中の一つに核内受容体と、結合する因子を見いだした。本蛋白質はコアと結合すると同時に核内受容体に結合する配列を持つ。コア蛋白質との結合に必要な領域を決め、その領域を欠失した変異体を構築した。これら野性体と変異体を用いてコア蛋白質による核内受容体依存的な転写活性化を解析したところ、野性体結合蛋白質の場合にはコア依存的に核内受容体依存的な転写活性が見られたのに対して、結合能を失ったものでは活性が見られなかった。一方、コア蛋白質によるアポトーシスの誘導がレチノイドにより増加することを見いだした。この現象はコアと結合できない野性型蛋白質を発現させた場合にのみ観察され、コアと結合できない変異体では観察されなかった。以上の実験からコアと結合する細胞性因子によりレチノイド依存的な核内受容体の転写活性が制御されるが、この働きにコア蛋白質が関与すると推定される。なお、核内受容体の下流に存在する遺伝子の一つでアポトーシスを促進させる働きを持つtissue trans-glutaminaseがコア発現細胞で有意に高くなることも見いだした。C型肝炎ウイルス(HCV)の感染防御と感染者からのウイルスの排除および治療をめざして、以下の研究を行った。(1)HCVゲノム自律複製細胞の樹立。HCVゲノムが恒常的に自律複製する培養細胞を樹立した。それを用いて、ウイルスゲノム複製機構を解析した。
マイクロサテライトマーカーを用いたラットのbg遺伝子のマッピング

ヒトのChediak-Higashi症候(CHS)は常染色体劣性の遺伝性疾患であり、ヒト以外にもウシ、ネコ、ミンク、マウス等で報告されている。本症の主微はリンパ球、好中球の細胞質の巨大顆粒化であり、その結果CHS患者の皮膚および毛髪はメラノゾームの異常な融合により淡色化する。マウスのCHSに相当する突然変異体は毛色の淡色化のためベ-ジュ(遺伝子記号:bg)マウスと命名されている。本症についてもラットのモデル動物の開発が期待されていたが、浜松医大・動物施設で維持されていたDA系ラットに起こった毛色の突然変異体がこれに相当することがわかり、DA-bg系と命名された。この系統については血液学、病理学および寄生虫学的な検索がなされているが、bg遺伝子の染色体へのマッピングがなされていなかったので今回、以下の手順で試みた。1、マウスのbg遺伝子は第13染色体に位置しているので、ラットについてマウスの第13染色体と相同性のある第17染色体に注目し同染色体に位置することがわかっているマイクロサテライトマーカー(MSM)を8個入手した。2、これらの内6個のMSMについてPCR法によりDNA増幅することができたので、それらについて浜松医大・動物施設で維持されている近交系ラットについて肝臓より抽出したDNAを用いてPCRを行ない各系統間での増幅産物の多型の有無を調べた。3、その結果、DA-bg系とBN系の間でProlactin(PRL)とCholinergic receptor,muscarinic3(ACRM)に多型が認められた。そこで、この両系でBCF_1を80匹作出し、連鎖を調べたところ、PRL-bg間で30cM、ACRM-bg間で23cM、PRL-ACRM間で11cMの連鎖関係があり、ラットのbg遺伝子は第17染色体にマッピングされた。CHSの発症する分子機構は未だ明らかにされておらず、本系統を用いたさらなる展開が期待される。国内より分与されたマイクロサテライトマーカーで系統間で多型性の認められたbgラットとBN系ラットの間でF_2を作出し、これまでに総計108匹の個体よりDNA抽出用の肝臓を採取し、凍結保存している。この内54匹分のF_2世代からのDNAの採取を完了した。残りの分についても継続してDNAを採取して行く予定である。採取の終わったDNAについてPCR法によりタイピングを行なっている。マイクロサテライトマーカーについてはマウスのbg遺伝子がマッピングされている第13番染色体と相同性のあるラットの第17番染色体のマーカーについて国内、国外の機関より分与依頼をしているが、これまでに第17番染色体上にマップされているマイクロサテライトマーカーの4種類を入手する事が出来た。したがって今後はbg.BNおよびF_1のそれぞれのDNAについてこれらのマーカーの多型性を調べ、リンク-ジマーカーとしての有効性を確認して行く予定である。ラットのbg遺伝子をマッピングするために以下のことをおこなった。1、マウスのbg遺伝子は第13染色体に位置しているので、ラットについてマウスの第13染色体と相同性のある第17染色体に注目し、同染色体に位置することがわかっているマイクロサテライトマーカーを収集した。

2、米国より、HITH,R-834,R-232,の3つを、国内よりPRL,ACRM,HH1TTS,RPL35P,D17KY01,の5つの計8つのマイクロサテライトマーカーのプライマーを入手できた。3、これらのプライマーについてPCR法によってDNAを増幅する条件を検討した。その結果R-834,R-232,とPRL,ACRM,HH1TTS,RPL35P,の6つについてそれぞれの増幅条件を設定することができ、それらの増幅産物を電気泳動法で確認した。4、次に浜松医大・動物施設で維持されている近交系ラット10系統について上記の各マーカーのタイピングをおこなった。各系統の肝臓よりDNAを抽出し3、で設定した濃度に希釈し、各プライマーについてDNAを増幅した。5、その結果、R-834,R-232,HH1TTS,については調査した系統すべてが同一の泳動パターンでありマッピングには不適であることがわかった。6、RPL35PはDA-bg系とTM系の間で増幅産物に多型があったが交雑F_1の型はDA-bg系と同様であり、これもマッピングには不適であることがわかった。7、ACRMについてはDA-bg系とBN系で多型があり、それらのBCF_1を検索した結果からACRMとbgは23.6±4.9cMの連鎖がありbg遺伝子はラットの第17染色体に位置していることがわかった。詳細は来月刊行する報告書で報告する。
スイレン科植物の花の形態形成と進化に関する分子生物学的研究

スイレン科植物のコウホネ属コウホネNuphar japonicum、スイレン属ヒツジグサNymphaeatetragona、オニバス属オニバスEuryale feroxの発達過程の花芽からmRNAを抽出し、MADS-boxの保存性の高い塩基配列を基に作ったディジェネレートプライマーを用いて3'race法を行い、MADS-boxをもった花形成遺伝子のcDNAを合成、その遺伝子の3'側の塩基配列を決定した。そして判明した塩基配列をもとに新たなプライマーを設計し5'race法を行って、遺伝子の全塩基配列の決定を試みた。本年度は、コウホネのNJM-1(1020塩基対からなり217個のアミノ酸からなる蛋白質をコードする)、NJM-2(1118塩基対からなり226個のアミノ酸からなる蛋白質をコードする)、およびヒツジグサのNTM-3(1130塩基対からなり243個のアミノ酸からなる蛋白質をコードする)の3つの遺伝子についてクローニングしmRNAの全塩基配列を決定した。これらについてそのアミノ酸配列をいままでにクローニングされた他の植物の花形成遺伝子と比較し分子系統樹を構築したところコウホネのNJM-2とヒツジグサのNTM-3はシロイヌナズナのAGに代表されるクラスCの遺伝子群に、コウホネのNJM-1はシロイヌナズナのPIに代表されるクラスBの遺伝子群に含まれることがわかった。NJM-1はクラスB遺伝子群(AP3遺伝子に代表されるもの、PI遺伝子に代表されるものの2つのサブグループにわけられる)のうちでPI遺伝子のサブグループに入り、シロイヌナズナPI、キンギョソウGLOほかペチュニア、タバコなどの双子葉植物で単離された相同遺伝子より先に分岐していることがわかった。またNJM-2とNTM-3はクラスC遺伝子群のなかで早くに枝分かれしているものの裸子植物などからとれたDAL2などの遺伝子群よりは後に分岐していた。またNJM-2とNTM-3スイレン科としてよくまとまっており機能的には相同であると推定された。そのほかにコウホネ14遺伝子、ヒツジグサ11遺伝子、アニバス4遺伝子を単離し3'側の塩基配列を決定、5'race法を進めている。今後塩基配列の決定とともにin-situハイブリダイゼーションを行い各遺伝子の発現パターンを解析する予定である。
炎症性疼痛に関与するメディエーターの解析

本研究では、キニノーゲン欠損ラットを用いたカラゲニン足浮腫モデル、さらにC線維脱落マウスを用いたwrithingモデルでの検討を行い、腫脹反応と疼痛反応に関与するメディエーターを検索した。ブラジキニン(BK)の前駆体であるキニノーゲンの欠損ラットでの腫脹・疼痛反応は正常ラットの反応に比べ低値であり、カラゲニン誘発の足浮腫と疼痛にBKが深く関与することが示された。また薬理学的解析により、カラゲニン足浮腫モデルの腫脹・疼痛反応にはB_2受容体とプロスタグランジン(PG)が深く関与すること、また、PGはBKが存在する時にのみ関与することが示唆された。一方、神経系でのBKの作用を調べるために、神経芽細胞腫であるNeuro-2A細胞でのBK応答を調べたところ、B_2受容体の活性化はPLCの活性化を介した細胞内ストアからのカルシウム放出を引き起こし、細胞内カルシウム濃度を上昇させること。また、このBK応答を、PGI_2がcAMPの上昇を介して増強させることが示され、これがBKが関与する疹痛反応に対するPGの増強反応の基礎メカニズムとなっているものと推定された。さらに、新生児期にカプサイシンを投与することでC繊維を脱落させたマウスを用いた酢酸誘発writhingモデルにより、C繊維を介する痛覚伝達とそれに関与するメディエーターを解析した。BK、サブスタンスPはC繊維に、PGはC繊維だけでなくそれ以外の痛覚伝達経路にも作用することが示唆された。さらにカプサイシンなどの辛味受容体であるVR1受容体の関与を検討したところ、酢酸、プロピオン酸、乳酸で誘発されるwrithing反応をVR1拮抗薬カプサゼピンが有意に抑制したことから、酸誘発疼痛反応におけるVR1受容体の重要性が示唆された。以上より、炎症性疼痛に関与するメディエーターの相互作用をin vitro、in vivoで示すことが出来た。炎症性疼痛に関与するメディエーターの解析のために、ラットカラゲニン足浮腫モデルを用い、腫脹反応と疼痛反応に関与するメディエーターを検索した。ブラジキニンの前駆体であるキニノーゲンの欠損ラット(Brown Norway Katholiek)の初期の腫脹・疼痛反応は正常ラット(Brown Norway Kitasato)の反応に比べ顕著に低値であり、カラゲニン誘発の足浮腫と疼痛にブラジキニンが深く関与することが示された。ブラジキニンの受容体にはB_1、B_2の2種類が知られているが、B_2受容体拮抗薬であるFR173657を用いた解析により、B_2受容体が関与していると考えられた。さらに、シクロオキシゲナーゼ阻害薬であるインドメタシンにより正常ラットのカラゲニン誘発腫脹・疼痛反応は顕著に抑制されたのに対し、キニノーゲン欠損ラットの反応は影響されなかったことから、カラゲニン足浮腫モデルの腫脹・疼痛反応にはプロスタグランジンが深く関与すること、また、プロスタグランジンはブラジキニンが存在する時にのみ関与することが示唆された。一方、神経系でのブラジキニンの作用を調べるために、神経芽細胞腫であるNeuro-2A細胞でのブラジキニン応答を調べたところ、B_2受容体の活性化はPLCの活性化を介した細胞内ストアからのカルシウム放出を引き起こすことで、細胞内カルシウム濃度を上昇させることが示唆された。さらに、このブラジキニンによる細胞応答を、プロスタグランジンI_2がcAMPの上昇を介して増強させることが示され、ブラジキニンが関与する疼痛反応に対するプロスタグランジンの増強反応の基礎メカニズムとなっているものと推定された。以上より炎症性疼痛に関与するメディエーターの相互作用をin vitro、in vivoで示すことが出来、鎮痛薬の開発を考える上で有用であると考えられた。

さらにカプサイシンなどの辛味受容体であるVR1受容体の関与を検討したところ、酢酸、プロピオン酸、乳酸で誘発されるwrithing反応をVR1拮抗薬カプサゼピンが有意に抑制したことから、酸誘発疼痛反応におけるVR1受容体の重要性が示唆された。以上より、炎症性疼痛に関与するメディエーターの相互作用をin vitro、in vivoで示すことが出来た。