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易感染宿主,特に経口摂取が不可能な患者の口腔ケアと感染予防に関する研究

易感染宿主における感染症の中で発生頻度が高い,下気道感染症や肺炎の予防には,口腔内や上気道における感染を予防する口腔ケア法の開発が必要である。平成11年度は,易感染宿主の全身性免疫能低下に対応して口腔局所の免疫能-生体防御能の変動の有無を検討するために,健常者を対照にして易感染宿主の口腔含嗽液に含まれる局所産生性生体防御成分(分泌型-IgA)レベルを酵素関連免疫測定法(ELISA)で測定し,分析した。平成11年8月2日21日,T大学医学部附属病院に入院し,全身性免疫機能低下が予測される呼吸器疾患患者を対象に,昼食摂取約2時間後に1回20mlの滅菌蒸留水で,約5秒間ブクブクによる含嗽を行い,含嗽液中の分泌型-IgAを測定し,健常志願者20名の含嗽液と比較した。その結果,1.含嗽液採取時間や採取方法等は対象への負担が少ない継続可能な方法である,2.分泌型-IgAの測定にはELISAでの測定が有効であることがわかった。そこで平成12年度は,対象を呼吸器疾患のうち悪性疾患患者・肺癌に限定し,治療による経時的変化を知るため,化学療法(抗癌剤投与)前後に含嗽液を採取して分泌型-IgAを測定し,調査対象と同年齢層の健常者の含嗽液を同じ方法で採取して比較した。その結果,1.肺癌患者4名について,含嗽液中分泌型-IgAの含有量の経時的経過は,個人差があるものの治療前に比して治療開始後2週間前後には低下し,治療4週間後・次回治療前には治療前程度に増加し,そして治療回数を重ねるに伴い減少傾向を示した,2.肺癌患者24名と同年齢層健常者28名の比較では,含嗽液中分泌型-IgAの含有量は,肺癌患者群が健常者群に比して高い値を示す者が多く,ばらつきも大きかった。以上のことから今後は,1.同対象について採取時間による相違について比較する,2.化学療法を受ける対象についての症例数を増やす等継続して追及していく。さらに,易感染宿主における全身性免疫能の低下に対応した口腔内感染の発生の有無について調査し,感染予防の観点から口腔ケア法の開発に取り組んでいく。易感染宿主における感染症の中で発生頻度の高い,下気道感染症や肺炎を予防するためには,口腔内や上気道における感染を予防する口腔内ケア法の開発が必要であると考えられる。今年度は,低下した口腔内感染防御機能を改善したり,維持するような,口腔ケアの方法を開発するための基礎的研究を行なった。易感染宿主において全身性免疫能の低下に対応して口腔局所の免疫能-生体防御能がどうのように変動しているかを解析するために,口腔含嗽液に含まれる局所産生性生体防御成分(分泌IgA)レベルを酵素関連免疫測定法(ELISA)で分析した。平成11年8月2日21日の期間中,T大学医学部附属病院に入院し,全身性免疫機能低下が予測される呼吸器疾患患者に対して,昼食摂取約2時間後に1回量・20mlの減菌蒸留水を用いて,約5秒間ブクブクによるうがいを行い,その含嗽液内に含まれる分泌型IgAを測定した。健常志願者20名を対照とした。その結果,1含嗽液採取時間や採取方法等は対象への負担は少なく,含漱時間および方法は今後継続可能であった.2分泌型IgAの測定についてはELISAでの測定が有効であった,そこで今後は,1対象患者を選定し,化学療法前後・X腺照射前後等治療による経時的変化を知るため,治療状況に応じて咳嗽液を採取し,分泌型IgAを測定する,2調査対象と同年齢の健常者の含嗽液を同じ方法で採取して比較する,3同じ対象者についても採取時間による相違について比較する,4分泌型IgA以外の液性生体防御成分についても調査する,等について継続して追及していく。さらに,易感染宿主における全身性免疫能の低下に対応した口腔内感染の発生の有無について調査し,上記口腔内局所性生体防御因子レベルとの関連性について検討する。

そこで平成12年度は,対象を呼吸器疾患のうち悪性疾患患者・肺癌に限定し,治療による経時的変化を知るため,化学療法(抗癌剤投与)前後に含嗽液を採取して分泌型-IgAを測定し,調査対象と同年齢層の健常者の含嗽液を同じ方法で採取して比較した。その結果,1.肺癌患者4名について,含嗽液中分泌型-IgAの含有量の経時的経過は,個人差があるものの治療前に比して治療開始後2週間前後には低下し,治療4週間後・次回治療前には治療前程度に増加し,そして治療回数を重ねるに伴い減少傾向を示した,2.肺癌患者24名と同年齢層健常者28名の比較では,含嗽液中分泌型-IgAの含有量は,肺癌患者群が健常者群に比して高い値を示す者が多く,ばらつきも大きかった。以上のことから今後は,1.同対象について採取時間による相違について比較する,2.化学療法を受ける対象についての症例数を増やす等継続して追及していく。さらに,易感染宿主における全身性免疫能の低下に対応した口腔内感染の発生の有無について調査し,感染予防の観点から口腔ケア法の開発に取り組んでいく。
字体記述のデジタル化に基づく文字規範史の定位

本研究は、本文テキスト・文字表記・書物の様式等が確立した中国宋版以降の印刷文化の影響下において、日本の文字規範が如何に形成され変遷してきたのかを実証的に明らかにするために、鎌倉時代から近世初期の日本の漢字(中国印刷本の模写本及び日本印刷本での用例整理に基づく)と同時代の中国・韓国の漢字(公的性格・規範性の高い印刷本での用例整理に基づく)について、文字規範の影響関係と史的変遷を通覧する資料体を構築し、文字規範の編年を確立する。また、本研究は、文献資料に出現する文字字形のデジタル記述法を検討し、異体字集約の方式を明示した上で国際的・学際的な合意形成を行い、資料体の高度利活用をはかることを目的とする。平成26年度は以下の研究活動を行った。(1)中国元(王朝)版と日本五山版の所蔵先の調査を行った。(2)(1)の調査に基づき秋田県立図書館所蔵の日本五山版『韻府群玉』の原本書誌調査及び撮影を行った。(3)「漢字字体規範データベース」収録の字体資料の一部をサンプルとして、文字字形のデジタル記述法の検討に着手した。本研究は、本文テキスト・文字表記・書物の様式等が確立した中国宋版以降の印刷文化の影響下において、日本の文字規範が如何に形成され変遷してきたのかを実証的に明らかにするために、鎌倉時代から近世初期の日本の漢字(中国印刷本の模写本及び日本印刷本での用例整理に基づく)と、同時代の中国・韓国の漢字(公的性格・規範性の高い印刷本での用例整理に基づく)について、文字規範の影響関係と史的変遷を通覧する資料体を構築し、文字規範の編年を確立する。平成27年度は以下の活動を行った。(1)東洋文庫や京都大学付属図書館所蔵の日本中世印刷本の書誌調査を行った。(2)(1)の書誌調査に基づき京都大学付属図書館所蔵普済寺版の一部について用例整理を行った。(3)宋版出現以前の書写による文字規範(初唐標準字体)を示す長安宮廷写経について、「漢字字体規範史データベース」収録資料の一部を対象として、Unicode、IDS(Ideographic Description Sequence)、グリフウィキによるデジタル記述を試行・実践した。(4)(3)によって作成したデータを、守岡知彦(研究分担者)が運営する文字オントロジー(CHISE)に取り込み、一般公開を行った(http://www.chise.org/hng-ids-find)。(5)研究成果の公表として、シンポジウム「「字体と漢字情報」ーHNG公開10周年記念ー」(2015年11月21日ー22日)を開催した。「漢字字体規範史データベース」収録資料の一部を対象として、Unicode、IDS(Ideographic Description Sequence)、グリフウィキによるデジタル記述を試行・実践し、守岡知彦(研究分担者)が運営する文字オントロジー(CHISE)に取り込み、一般公開を行うなど(http://www.chise.org/hng-ids-find)、資料体の整備は順調に進んでいる。また、国立国語研究所共同研究プロジェクト(基幹型)「文字環境のモデル化と社会言語科学への応用」(代表:国立国語研究所・横山詔一)、科学研究費補助金基盤研究A「歴史的文字に関する経験知の共有資源化と多元的分析のための人文・情報学融合研究」(代表:奈良文化財研究所・馬場基)、人間文化研究機構連携研究「表記情報と書誌形態情報を加えた日本語歴史コーパスの精緻化」(代表:国立国語研究所・高田智和)との連携により、シンポジウム「「字体と漢字情報」ーHNG公開10周年記念ー」(2015年11月21日ー22日)を開催し、日本語学・文献学だけでなく、歴史学・考古学・仏教学・心理学・情報学・日本語教育学など、分野横断的に字体と漢字情報について議論を行った。平成28年度は以下の活動を行った。(1)平成27年度に実施したシンポジウム「字体と漢字情報ーHNG公開10周年記念ー」をもとに、論文集『漢字字体史研究2ー字体と漢字情報ー』を刊行した。(2)宋版出現以前の中国文字規範である開成石経について、京都大学人文科学研究所所蔵の拓本を対象として、Unicode、IDS(Ideographic Description Sequence)、グリフウィキによるデジタル記述を試行・実践した。

(3)フランス国立図書館所蔵の長安宮廷写経『P2195妙法蓮華経巻六』と朝鮮活字本『白雲和尚抄録祖直指心體要節巻下』を対象に、永崎研宣(連携研究者)が所属する人文情報学研究所の技術支援の下、IIIF(International Image Interoperability Framework)を用いた文字画像データを作成し、守岡知彦(研究分担者)が運営する文字オントロジー(CFISE)に取り込む準備を行った。(4)ベトナム・漢喃研究所とミシガン大学図書館において、漢文資料や字体資料の調査を行った。日本語学・文献学だけでなく、歴史学・考古学・仏教学・心理学・情報学・日本語教育学など、分野横断的に字体と漢字情報について議論を行った平成27年度のシンポジウム「字体と漢字情報ーHNG10周年記念ー」の成果を、論文集『漢字字体史研究2ー字体と漢字情報ー』としてまとめ、平成28年11月に刊行した。宋版出現以前の中国文字規範である開成石経について、京都大学人文科学研究所所蔵の拓本を対象として、Unicode、IDS(Ideographic Description Sequence)、グリフウィキによるデジタル記述を試行・実践するとともに、フランス国立図書館所蔵の長安宮廷写経『P2195妙法蓮華経巻六』と朝鮮活字本『白雲和尚抄録祖直指心體要節巻下』を対象に、永崎研宣(連携研究者)が所属する人文情報学研究所の技術支援の下、IIIF(International Image Interoperability Framework)を用いた文字画像データを作成し、守岡知彦(研究分担者)が運営する文字オントロジー(CFISE)に取り込む準備を行った。日本語学会2016年度春季大会での高田智和(研究代表者)・守岡知彦(研究分担者)による研究発表「CHISEによる漢字字体のデジタル記述ー漢字字体規範史データベースを例としてー」が、日本語学会大会発表賞を受賞した。本研究は、本文テキスト・文字表記・書物の様式等が確立した中国宋版以降の印刷文化の影響下において、日本の文字規範が如何に形成され変遷してきたのかを実証的に明らかにするために、鎌倉時代から近世初期の日本の漢字(中国印刷本の模写本及び日本印刷本での用例整理に基づく)と、同時代の中国・韓国の漢字(公的性格・規範性の高い印刷本での用例整理に基づく)について、文字規範の影響関係と史的変遷を通覧する資料体を構築し、文字規範の編年を確立する。また、本研究は、文献資料に出現する文字字形のデジタル記述法を検討し、異体字集約の方式を明示した上で国際的・学際的な合意形成を行い、資料体の高度利活用をはかることを目的とする。平成29年度は以下の活動を行った。(1)「漢字字体規範史データベース」の前身である字体資料(情報カードのスキャン画像及びメタデータ)の整理を行い、データセットリポジトリの作成を行った。(2)フランス国立図書館所蔵の長安宮廷写経『P2413大樓炭経巻三』を対象に、永崎研宣(連携研究者)が所属する人文情報学研究所の技術支援の下、IIIF(International Image Interoperability Framework)を用いた文字画像データを作成し、守岡知彦(研究分担者)が運営する文字オントロジー(CHISE)との連結を検討した。(3)大英図書館において、漢文資料や字体資料の調査を行った。(4)文字オントロジー(CHISE)についての大学院生向け講習会を行った。
環東シナ海貿易圏における琉球・対馬・朝鮮間交流史の研究

1.対馬歴史民俗資料館において、宗家文庫の以酊庵輪番僧の関係史料を中心に収集し、前年に収集した京都五山建仁寺両足院所蔵の以酊庵関係文書との比較研究を行った。これらの文書は、以酊庵輪住勤行簿・以酊庵御役筋之事・以酊庵輪番記・驢山滞在日記等の内部史料、信使来聘記録、対州信使接待新定事例伺書等の朝鮮信使関係、遣禮曹告譯使渡海書・対韓文書、朝鮮来書抜粋・訳官記録等の交渉記録、日韓書契分類、遣朝鮮国歳条書契・朝鮮国歳条回翰等の外交文書、その他封進目録等の交易記録からなっている。実務的には、釜山倭館に駐在した対馬藩派遣の裁判(外交官)及び特命の裁判による信使送迎、輸入米・賜品等に関する交渉と、これらを補佐する倭館内東向寺の僧による朝鮮側との調整が行われ、以酊庵輪僧は、倭館で勘案・審査された外交文書を監査する立場にあった。すなわち外交は、幕府任命の対州修文職(以酊庵輪番僧)によって統制された。2.対馬藩の貿易は、伝統的に管理貿易的性格が強く、品質の高い特鋳銀が貿易決済の中心をなしている。このために、京都の対馬藩邸で、生糸・絹織物の京都仲買問屋から糸代先納銀を得て、京都の銀座から特鋳銀を交換・調達し、釜山に直送した。銀輸出停止後は、同様に、大坂の対馬藩邸で銅問屋から独占的に銅を入手して直送した。官営貿易である封進の輸出用物産の蘇木・胡椒等は、あらかじめ長崎会所で「除き物」として処理され、それを対馬藩長崎屋敷で調達している。これらの貿易体制は、そのもの自体が藩の管理体制下に置かれ、釜山倭館内においても商人身分の代官は、私貿易の監督や決済銀の管理等を行うなど、実務的にこの体制の中で官民の地位を共存して内外の流通に関与したものである。
高分子薄膜における垂直配向界面の創成と分子配置基盤技術

高分子ミクロ相分離薄膜におけるナノ構造制御に関する研究の一環として,近年重要な課題となっている垂直配向制御に着目し,未だ解明されていない高分子の一次構造,形態,基板界面,および配向性などとの相関について明らかにし,さらにその垂直配向界面を利用した高度な分子配置技術とサブナノ界面薄膜材料に展開するための基盤研究である.前年度に得られた知見を基に,本年度30年度はミクロ相分離ドメインの垂直配向制御における信頼性を高め,さらに広く一般性を追求することを目的に,新たなブロック共重合体(PS-b-PGMA)を用い,これらの概念の検証と垂直配向機構を明らかにすることを目的とした.ポリスチレン(PS)とポリメタクリル酸グリシジル(PGMA)から構成されるPS-b-PGMAはリビングアニオン重合法に従い合成した.続いて,従来に比べてブロック成分のより自由度の高い表面自由エネルギー値の調整を可能とするために,PGMAのグリシジル基と各種チオール化合物の高分子反応による側鎖官能基の導入を図った.アルキル基,フッ素化アルキル基をそれぞれ側鎖に有する各ホモポリマー(PHEtMA,PHFMA)の接触角測定から表面自由エネルギー値の算出を実施した後,各種ブロック共重合体の合成を行った.得られたブロック共重合体の薄膜に対し,前年度までの知見を基に表面改質剤となるランダム共重合体の調整と熱アニーリング温度の最適化を行った.その結果,PSよりも表面自由エネルギー値の低いフッ素化アルキル基を有するブロック共重合体(PS-b-PHFMA)のみでミクロ相分離ドメインの垂直配向が達成され,熱アニーリングの過程で起こるPHFMA成分の表面偏析がミクロ相分離ドメインの垂直配向に有効に働いていることが示唆された.本年度30年度はミクロ相分離ドメインの垂直配向制御における信頼性を高め,さらに広く一般性を追求することを目的に,新たなブロック共重合体(PS-b-PGMA)を用い,これらの概念の検証と垂直配向機構を明らかにすることを目的とした.(1)ポリスチレン(PS)とポリメタクリル酸グリシジル(PGMA)から構成されるPS-b-PGMAはリビングアニオン重合法に従い合成した.異なる分子量および組成比が制御された5種類のPS-b-PGMAを準備することに成功した.(2)ブロック成分のより自由度の高い表面自由エネルギー値の調整を図るために,PGMAのグリシジル基と各種チオール化合物を用いる高分子反応に着目し,アルキル基およびフッ素化アルキル基をそれぞれ側鎖に有する各ホモポリマー(PHEtMA,PHFMA)とブロック共重合体(PS-b-PHEtMA,PS-b-PHFMA)の合成を行い目的物を得た.(3)得られた各ホモポリマーの接触角測定から表面自由エネルギー値を算出した.(4)表面改質剤にはPS,ポリメタクリル酸メチル(PMMA)およびPGMAで構成されたランダム共重合体を用い,ブロック共重合体薄膜のミクロ相分離ドメインの垂直配向に関する実験を実施した.熱アニーリング温度の最適化を行いながら,原子間力顕微鏡によるミクロ相分離ドメインの形成と垂直配向観察を行った.その結果,PSよりも表面自由エネルギー値の低いフッ素化アルキル基を有するブロック共重合体(PS-b-PHFMA)のみでミクロ相分離ドメインの垂直配向が進行することがわかった.熱アニーリングの過程で起こるPHFMA成分の表面偏析がミクロ相分離ドメインの垂直配向に有効に働いていることが示唆される興味深い結果を得た.以上の結果から,本年度の進捗状況は一部計画以上に進展する内容も含んでおり,おおむね順調であると考える.次年度31年度は,前年度2年間で得られた知見を基に,ミクロ相分離ドメインの垂直配向機構を明らかにすることに注力する.ブロック共重合体および表面改質剤に用いるランダム共重合体の化学構造および表面自由エネルギー値,薄膜における膜厚がドメインの垂直配向に及ぼす影響について,電子顕微鏡観察による断面構造解析と原子間力顕微鏡による薄膜表面構造解析により明らかにする.一方で,ドメインの垂直配向を利用するサブナノ界面薄膜材料の開発を実施する.ブロック成分間の化学結合部位に機能性分子となる有機基を導入し,それらの集合体をブロック共重合体界面に配置配列化させることにより,任意の分子がサブナノメートル界面にて精密に構造制御された新しい界面薄膜材料の創成に関する基盤研究を実施する.高分子ミクロ相分離薄膜におけるナノ構造制御に関する研究の一環として,近年重要な課題となっている垂直配向制御に着目し,未だ解明されていない高分子の一次構造,形態,基板界面,および配向性などとの相関について明らかにし,さらにその垂直配向界面を利用した高度な分子配置技術とサブナノ界面薄膜材料に展開するための基盤研究である.初年度となる29年度は,本研究者がこれまでに開発したシリコン含有ブロック共重合体(PS-b-PMHxOHS)を用い,シリコン基板上の表面改質膜(下地膜)とミクロ相分離ドメインの垂直配向との相関について明らかにした.下地膜に用いる疎水・親水性ポリマーにはポリスチレン(PS)を疎水性ポリマーとして固定し,ポリ(2ービニルピリジン),ポリヒドロキシエチルメタクリレート,ポリメタクリル酸メチル,ポリメタクリル酸をそれぞれPSに対する親水性ポリマーとした組成比の異なるランダム共重合体を取り上げて合成し,得られた各ポリマーの接触角測定の結果から表面自由エネルギーの算出を行った.シリコン基板上における下地膜の定着密度とブロック共重合体の垂直配向の相関について原子間力顕微鏡観察により明らかにした.ミクロ相分離ドメインが垂直配向を起こすには基板表面の全面が下地膜によって均質に覆われている必要があることがわかった.

下地膜の表面自由エネルギーとドメインの垂直配向に一定の相関があることが傾向から見て取れたが,一方でランダム共重合体成分がドメインの配向により大きく関わっていることが示唆される結果を得た.垂直配向に適したブロック共重合体の分子設計指針を確立するために,PSとポリメタクリル酸グリシジルからなるブロック共重合体(PS-b-PGMA)を合成し,高分子反応による側鎖基の導入法を確立した.これにより,表面自由エネルギーを自在に制御可能なブロック共重合体の創成が可能となった.本研究では,高分子ミクロ相分離薄膜におけるナノ構造の垂直配向制御について,一次構造,形態,基板界面,および配向性の相関などの未だ解明されていない基礎的な問題を解決し,さらにその垂直配向界面を利用した高度な分子配置技術とサブナノ界面薄膜材料に展開するための研究基盤の確立を目的としている.初年度の取り組みとして,これまでに本研究者が開発したブロック共重合体を用いたミクロ相分離ドメインの垂直配向に再び目を向け,その仕組みに対する理解を深めるための実験を試みた.一方で,垂直配向に適したブロック共重合体の分子設計指針の確立を図るために,新規ブロック共重合体の創成を行った.以下に簡潔に進捗結果を纏める.(1)基板にシリコンを取り上げ,表面改質膜(下地膜)に用いる各種ランダム共重合体を当初の計画通りに合成することに成功した.下地膜の定着密度,また各種得られたランダム共重合体の表面自由エネルギーとドメインの垂直配向との相関について調べ,それらの結果を整理することで関係性を明らかにすることができた.表面自由エネルギーを算出する構成式における極性の配向成分と非極性の分散力成分,およびドメインの垂直配向の関係から,ランダム共重合体の構成成分がドメインの配向により大きく関わっていることが示唆される結果を得た.(2)垂直配向に適したブロック共重合体の分子設計指針を確立するために,PSとポリメタクリル酸グリシジルからなるブロック共重合体(PS-b-PGMA)を合成し,高分子反応による側鎖基の導入法を確立した.合成化学的なアプローチにより,表面自由エネルギーを自在に制御することを可能にするブロック共重合体の創成は他に例がなく,興味深いブロック共重合体の開発に成功した.以上の結果から,本年度の進捗状況は一部計画以上に進展する内容も含んでおり,おおむね順調であると考える.高分子ミクロ相分離薄膜におけるナノ構造制御に関する研究の一環として,近年重要な課題となっている垂直配向制御に着目し,未だ解明されていない高分子の一次構造,形態,基板界面,および配向性などとの相関について明らかにし,さらにその垂直配向界面を利用した高度な分子配置技術とサブナノ界面薄膜材料に展開するための基盤研究である.前年度に得られた知見を基に,本年度30年度はミクロ相分離ドメインの垂直配向制御における信頼性を高め,さらに広く一般性を追求することを目的に,新たなブロック共重合体(PS-b-PGMA)を用い,これらの概念の検証と垂直配向機構を明らかにすることを目的とした.ポリスチレン(PS)とポリメタクリル酸グリシジル(PGMA)から構成されるPS-b-PGMAはリビングアニオン
培養肝幹細胞の細胞工学による肝細胞化とその特殊脾内移植による代用肝の代成

門賑塞栓肝に肝幹細胞の肝上皮細胞(LEC)を誘導してこれを分離し、細胞工学的に肝細胞に分化させたうえで、肝類似に血行変換をした脾に移植して代用肝を作成することが研究の目的である。得られた結果は以下である。1)ラット門脈結紮葉でLECが著明に増加し、ラサトではLEC分離に適した時期は結紮後7日目であった。この時期に門脈結紮葉からLECを極めて効率良く分離できた。ヒト門脈塞栓肝では、塞栓後2週目をピークとしてAFP陽性、アルブミン陰性の細胞が増加した。2)非持続灌流コラゲナーゼ法でLECの分離・培養が可能で、生検肝からLECが得られる可能性がある。また、EGF、HGF添加によりLECの増殖能が亢進した。3)細胞工学的HNF3aの移入のみでは、培養LECをアルブミン産生細胞まで分化させることはできなかった。4)脾臓皮下固着と門脈狭窄により、血流動態上、脾を肝と同様な門脈・動脈の2重血流支配臓器に変換することが可能であった。5)無アルブミンラットへの移植から、LECが肝臓内では肝細胞に分化しうることが証明された。しかし、皮下固着脾に移植したLECが肝細胞へと分化している証拠は得られず、その代わり胆管上皮細胞へと分化していることが示唆された。以上から、門脈塞栓肝から肝幹細胞であるLECを効率良く分離でき、移植に供することが可能である。細胞工学的手法を用いて、in vitroでLECを肝細胞へ分化させる、ことには成功しなかったが、肝臓内移植でLECが肝細胞へと分化することが証明された。しかし、血流動態上の「肝類似の脾」では肝細胞への分化は証明されなかった。脾臓内でのLEC増殖には、周囲細胞との協調が重要と考えられ、今後、星細胞など肝非実質細胞とLECの同時移植などを試みる予定である。大量肝切除や劇症肝炎による肝不全には肝補助・代行が必要で、肝移植が究極の治療とされるが、移植用肝臓の不足と移植関連の高額の医療費は、患者の生命の質と国の経済に著しい負担を与える。人工肝臓も近々には完成され難く、現在実験の域に止まっている。本研究の目的は、培養・増殖可能な肝幹細胞(肝上皮性細胞、以下Lec)を肝から分離・培養・増殖させ、それを高度壊死肝に移植して肝細胞化し新肝臓を作成すること、及び、Lecを細胞工学的に成熟肝細胞にし、肝類似に血行変換をした脾に移植して代用肝を作成することにある。1、門脈枝結紮肝におけるLecの多量の発現の証明及びその分離とcharacterization1)SDラットを用い、無処置ラット及び門脈右枝結紮ラットについて、肝門脈域の肝細胞のalbumin、AFP、cytokeratin 19の発現を免疫組織学的に検索した。結果は、卵形核で細胞径1015μm、albuminのみ陰性で他は陽性の細胞の存在が出現し、これがLecと思われる。組織上、結紮葉では非結紮葉と比較して明らかなLecの増殖が確認され、前記した所見と一致した。

2)この肝をコラゲナーゼ潅流法にて細胞を分散させた後、エルトリエーターによりLecを分離した。この細胞について細胞径と前項の蛋白マーカーを用いてWestern blottingならびに免疫組織染色法でcharacterizationを行った。得られた細胞はalbumin陰性、AFP、cytokeratin19陽性であり、継代培養可能な細胞であった。3)今後の予定2、培養Lecの高度壊死肝への移植・肝細胞化による新肝臓の作成と培養Lecの「肝類似の脾」への移植による代用肝臓の作成を行い、組織学的及びICG除去能、凝固因子生成能から評価して新肝臓としての意義を明らかにしていく。大量肝切除や劇症肝炎による肝不全には肝補助・代行が必要で、肝移植が究極の治療とされるが、移植用肝臓の不足と移植関連の高額の医療費は、患者の生命の質と国の経済に著しい負担を与える。人工肝臓も近々には完成され難く、現在実験の域に止まっている。本研究の目的は、培養・増殖可能な肝幹細胞(肝上皮性細胞、以下Lec)を肝から分離・培養・増殖させ、それを高度壊死肝に移植して肝細胞化し新肝臓を作成すること、及び、Lecを細胞工学的に成熟肝細胞にし、肝類似に血行変換をした脾に移植して代用肝を作成することにある。1、門脈枝結紮肝におけるLecの多量の発現の証明及びその分離培養我々はラットを用いたモデルにおいて門脈結紮葉から培養・増殖可能なLecを無処置ラットからより効率良く採取できることを確認した。この細胞はalbumin陰性、AFP、cytokeratin19陽性であり、継代培養可能な細胞であった。2、本細胞の脾臓への移植本細胞を無処置の脾臓内へ移植した。移植細胞数は107個で、400μlのPBSに浮遊させ、23G針にて直接脾臓へ注入した、脾臓内での生着を確認すると島状に集簇した卵円形の核を有する細胞を認めた。しかし免疫組織染色でのalbuminの発現は認められなかった。また生着している細胞の数は非常に少量で多くが移植時の操作によって細胞が損傷を受けたかもし<は静脈を介して細胞が流出したと推測された。3、今後の予定より確実に移植細胞を生着させる方法を検討し、培養Lecの高度壊死肝への移植・肝細胞化による新肝臓の作成を行う。また培養Lecの「肝類似の脾」への移植による代用肝臓の作成を行い、本細胞が有効利用できる手法を解明する。門脈塞栓肝に肝幹細胞の肝上皮細胞(LEC)を誘導してこれを分離し、細胞工学的に肝細胞に分化させたうえで、肝類似に血行変換をした脾に移植して代用肝を作成することが研究の目的である。本年度は、分離LECの肝特異的転写因子発現の解析とそれに基づく細胞工学的転写因子導入による肝細胞成熟化ならびに、ヒト門脈塞栓肝におけるAFP陽性細胞の出現を細胞回転、アポトーシスとともに検索した。1.肝臓分化過程において重要な肝臓特異的転写因子のうち、HNF3a, HNF3b, HNF4, HNF1a, C/EBPのラットLECでの発現をNorthernブロット法で検討した。その結果LECがHNF3bを発現していた。そこで燐酸カルシウム共沈法でLECにHNF3a cDNAを導入し、培養後にアルブミン産生細胞に分化するか検索した。しかしアルブミンの発現は認めず、HNF3a導入のみでは肝細胞へのin vitroでの分化誘導は困難と考えられた。2.ヒト門脈塞栓肝葉13例でAFPとアルブミン免疫組織染色を行った。塞栓前AFP陽性細胞数は10.3±5.9(平均±標準偏差)/1000肝細胞であったが、塞栓後40.7±9.7に増加した。AFP陽性細胞は門脈周囲に、より優位に増加していた。特に門脈塞栓による小葉の萎縮、脱落が著しい例でAFP陽性細胞増加が顕著で、アポトーシス細胞数と比例した。一方、PCNA染色でみた非塞栓葉の肝細胞再生度とAFP陽性細胞数は反比例の相関を示した。
親密な関係における関係効力性が安全な避難所機能・安全基地機能に及ぼす影響過程

研究の背景と目的恋人や友人といった親密な他者との関係には、安全な避難所機能と安全基地機能という2つの愛着機能が備わっているために(Feeney,2004)、人々の快楽的幸福度(快楽の享受・苦痛の回避)と達成的幸福度(個人的な成長・自己実現)の源となる。申請者の研究から、親密な二者間で共有された効力期待である「関係効力性」は、安全な避難所機能と安全基地機能を促進することが示されている(浅野・吉田,2011)。今年度は、親密な関係のなかで幸福度が高まるメカニズムの解明を目指し、相互作用の頻度、強度、多様性が、関係効力性に与える影響を縦断的に検証した。研究の具体的内容東海地方にある4つの大学にて、恋愛カップルもしくは同性友人ペアを対象とし、1ヵ月おきに3回のパネル調査を行った。その結果、恋愛カップル73組と同性友人ペア121組がすべての調査に参加した。これらのデータに対して、マルチレベル構造方程式モデリングによる分析を行うことで、2人の間で共有された二者関係レベルのプロセスと、個々人の心のなかで完結した個人レベルのプロセスを分けて検討した。分析の結果、相互作用の強度と多様性の高さが、その後の関係効力性を高めることが明らかとなった。また、相互作用の頻度の高さがその後の関係効力性を低めていた。これらの傾向は二者関係レベルでのみ認められた。研究の意義と重要性本研究の意義は、高い幸福度につながる関係効力性を形成・強化する要因を明らかにできたことにある。適度な頻度で影響力の強い相互作用を幅広く行うことで、恋愛カップルや同性友人ペアの関係効力性は高まると考えられる。これによって、われわれが高い幸福度を享受するためには、どのような対人関係を築けばよいのかという指針を得ることができた。最終年度最終年度研究の背景と目的恋人,配偶者,友人といった親密な他者との関係は,個人の幸福の基盤となる。親密な関係は,個人の快楽的幸福度(hedonic well-being;快楽の享受・苦痛の回避)と達成的幸福度(eudaimonic well-being;個人的な成長・自己実現)の両方を高めると考えられる。このような関係には,安全な避難所機能と安全基地機能という2つの愛着機能が備わっているからである(Bowlby,1988;Feeney,2004)。今年度の研究では,親密な二者間で共有された効力期待である関係効力性(relational efficacy)が,快楽的幸福度と達成的幸福度を促進するメカニズムを解明することを目的とした。研究の具体的内容上記の目的を達成するため,ソーシャル・サポートの利他性(相手への思いやりに基づき積極的に提供し合うサポート)と互恵性(相手からの見返りを期待して提供し合うサポート)を取り上げた。東海地方にある5つの大学にて,恋愛カップルと同性友人ペアを対象に対した質問紙調査を依頼した。その結果,恋愛カップル105組と同性友人ペア137組から有効回答を得た。これらのデータに対して,マルチレベル構造方程式モデリングによる分析を行った。この手法を用いることで,二者関係レベル(二人の間で共有された次元)と個人レベル個々人の心で完結した次元)のプロセスを分けて検討することができる。分析の結果,恋愛カップルや同性友人ペアの関係効力性は,ソーシャル・サポートの利他性を媒介して快楽的幸福度と達成的幸福度を高めることが示された。また,この傾向は二者関係レベルのみでみられた。研究の意義本研究の学術的意義は,親密な関係が個人の幸福を高める理由をより精緻化できたことにある。関係効力性の高いカップルやペアは,積極的に支え合うからこそ互いを幸せにできると考えられる。社会的意義は,親密な関係における幸福が,個人レベルよりも二者関係レベルのプロセスに基づいて高まると提言できることにある。これは,たとえネガティブな自己概念やパーソナリティ特性を持つ人であっても,幸せになれることを示唆している。

適度な頻度で影響力の強い相互作用を幅広く行うことで、恋愛カップルや同性友人ペアの関係効力性は高まると考えられる。これによって、われわれが高い幸福度を享受するためには、どのような対人関係を築けばよいのかという指針を得ることができた。恋愛カップルや同性友人ペアを対象としたデータを収集することができた。また,このデータに基づいた国内外での学会発表や学術雑誌への投稿の準備も予定通りに進んでいる。最終年度研究代表者は平成23年度で博士後期課程を修了した。そのため平成24年度は,昨年度よりもさらに,新たなデータを収集したり学術論文を執筆したりすることに集中できる。時間や労力を有効に活用し,次年度の研究を進める予定である。最終年度
胃上皮幹細胞を制御する免疫関連分子の異常による胃老化・発癌機序の解明

自然免疫関連分子NOD1を欠損するマウス胃において顕著な胃粘膜萎縮を認めたことから、免疫関連分子が胃粘膜の老化を直接的に制御していると考え、NOD1の機能不全が胃上皮幹細胞を介して、胃の老化・発癌に関与する機序を明らかにする。その目的で、若齢および老齢のNOD1欠損および野生型マウス胃からオルガノイドを作成し、NOD1によって制御される幹細胞維持や分化に関連する遺伝子、胃粘膜の老化や胃発癌に結びつく新規遺伝子の同定を試みる。同定した遺伝子の機能解析を行い、ヒト胃組織標本における新規同定遺伝子の発現も評価し、最終的に、NOD1による胃上皮幹細胞の胃老化・発癌の制御に関する基礎的な知見を得る。
細菌由来RNAによる抗菌薬の早期効果判定法確立および薬剤選択法の構築

本研究ではpre-rRNAという細菌の増殖速度によって変動する核酸をマーカーとして利用し、迅速な抗菌薬の効果判定法を確立することで、感染症治療における最適な薬剤選択法および薬物療法設計法の構築を行うことが目的である。これまでに抗菌薬を曝露しない条件において、緑膿菌PAO-1株の細菌増殖とpre-rRNAの関係について行った検討では、細菌増殖とより関連が強いものは一細菌あたりのpre-rRNA値であることを明らかにした。次にβラクタム系抗菌薬を緑膿菌PAO-1株に対して曝露した際の、生菌数の変化と細菌から抽出したpre-rRNAの関係性の解析を行った。抗菌薬の濃度条件を変化させて、抗菌薬曝露後に継時的にサンプリングを行った結果、一細菌あたりのpre-rRNA値は、抗菌薬非曝露群では細菌増殖23時間後に最大値を示したことから、この3時間値をマーカーとして使用し、一細菌あたりのpre-rRNA値から、細菌に対する感受性判定が可能となることを明らかにした。一方で、シプロフロキサシンの曝露ではメロペネムに比較してより顕著な低下、トブラマイシンは逆に大きい変化が見られないという結果が得られ、pre-rRNAのプロファイルに薬剤の作用機序ごとの特徴があることを突き止めた。また、当初の測定方法では寒天培地を用いて生菌数を計測していたため、測定に長時間を要すとともに、細菌の取り扱い技能が必要であった。そこで生菌数の代わりに細菌のペレットから抽出したゲノムDNAの定量値で標準化することで約6時間程度と短時間で簡便に一細菌あたりのpre-rRNA値に相当する値を得ることが可能とした。さらに、核酸の測定方法をインターカレーター法から特異度の高いプローブ法に変更したこと、および既存のRNA抽出キットを用いたことで汎用性の高いプロトコールを構築することで、臨床現場で使用しやすい測定法を確立した。近年、多剤耐性菌が原因となる感染症が増加しており、エンピリック治療として使用される抗菌薬に対しても耐性化している細菌が分離されることが少なくない。現在用いられている抗菌薬の効果判定法は長時間を要す上に、得られる情報の信頼性が乏しい場合があることが臨床上問題となっている。本研究ではpre-rRNAという細菌の増殖速度によって変動する核酸をマーカーとして利用し、迅速な抗菌薬の効果判定法を確立するとともに、各抗菌薬の薬効発現プロファイルを詳細に検討し、数理モデルを構築することで、感染症治療における最適な薬剤選択法および薬物療法設計法の構築を行うことが目的である。細胞・動物実験により、各種細菌へ抗菌薬曝露実験による生菌数プロファイルとpre-rRNA量の相関性を評価・解析し、pre-rRNAによる細菌の抗菌薬感受性予測モデルの構築と、動物感染モデルによるin vivoにおけるpre-rRNAプロファイルの評価を行う。さらに患者サンプルにおいても同様の現象がみられるか確認する目的で、肺炎患者、泌尿器感染症患者のサンプルを用いたpre-rRNAプロファイルの評価と効果判定法の確立を行い、さらに臨床検体中の菌濃度が低い菌血症患者の血液サンプルを用いたpre-rRNAプロファイルの評価と効果判定法の確立を行う。これらの検討の結果を解析しpre-rRNAと各抗菌薬の薬効の数理モデルを構築し、最適な薬剤選択法および薬物投与設計法を構築する。Pre-rRNAは細菌の細胞増殖の際に合成されるribosomal RNAの前駆体であるため、生菌が増殖すると上昇するが、菌が死滅しRNA合成が止まると、pre-rRNAの合成は止まり、RNaseにより成熟のribosomal RNAとなるため、中間体であるpre-rRNAは減少する。抗菌薬により細菌が死滅した場合も同様の現象がみられると考えられる。まず、抗菌薬を曝露しない条件において、緑膿菌PAO-1株の細菌増殖とpre-rRNAの関係について詳細に検討を行った。その結果、細菌増殖とより関連が強いものは一細菌あたりのpre-rRNA値であることが示唆された。次に、各種抗生物質(βラクタム系、アミノグリコシド系、ニューキノロン系)を緑膿菌PAO-1株に対して曝露した際の、生菌数の変化と細菌から抽出したpre-rRNAの関係性の解析を行った。具体的には抗菌薬の濃度条件を変化させて、抗菌薬曝露後に継時的にサンプリングを行った。一細菌あたりのpre-rRNA値は、抗菌薬非曝露群では細菌増殖23時間後に最大値を示したことから、我々はこの3時間値をマーカーとして使用し、緑膿菌PAO-1株に対するメロペネムの曝露実験では、その上昇が抑制されることを見出した。この差異を測定することで、感染症サンプル中の起因菌の抗菌薬感受性は判定可能となった。一方でメロペネム以外にシプロフロキサシンとトブラマイシンを用いた検討を行った結果、pre-rRNAのプロファイルに薬剤間の違いがみられた。これは各抗菌薬の作用機序の違いによりpre-rRNAの合成・分解に変化が起こったためと考えられた。一律のモデル式で表すことができないことが示唆され研究計画に比較して多少遅れが生じている。現在は作用機序が違う抗菌薬ごとにpre-rRNA値の変化を表すモデルの構築を目的に、種々の抗菌薬の曝露実験データを収集している。Pre-rRNAは細菌の細胞増殖の際に合成される

ribosomal RNAの前駆体であるため、生菌が増殖すると上昇するが、菌が死滅しRNA合成が止まると、pre-rRNAの合成は止まり、RNaseにより成熟のribosomal RNAとなるため、中間体であるpre-rRNAは減少する。抗菌薬により細菌が死滅した場合も同様の現象がみられると考えられる。これまでに、抗菌薬を曝露しない条件において、緑膿菌PAO-1株の細菌増殖とpre-rRNAの関係について詳細に検討を行った。その結果、細菌増殖とより関連が強いものは一細菌あたりのpre-rRNA値であることが示唆された。次に、各種抗生物質(βラクタム系、アミノグリコシド系、ニューキノロン系)を緑膿菌PAO-1株に対して曝露した際の、生菌数の変化と細菌から抽出したpre-rRNAの関係性の解析を行った。具体的には抗菌薬の濃度条件を変化させて、抗菌薬曝露後に継時的にサンプリングを行った。一細菌あたりのpre-rRNA値は、抗菌薬非曝露群では細菌増殖23時間後に最大値を示したことから、我々はこの3時間値をマーカーとして使用し、緑膿菌PAO-1株に対するメロペネムの曝露実験では、その上昇が抑制されることを見出した。この差異を測定することで、感染症サンプル中の起因菌の抗菌薬感受性は判定可能となった。一方でメロペネム以外にシプロフロキサシンとトブラマイシンを用いた検討を行った結果、pre-rRNAのプロファイルに薬剤間の違いがあることが明らかとなった。抗菌薬曝露時のpre-rRNAの変化が抗生物質の系統ごとに(βラクタム系、アミノグリコシド系、ニューキノロン系)異なることから、一律のモデル式で表すことができないことが示唆され研究計画に比較して多少遅れが生じている。数理生物学的に考え得るモデル式を検討し、現在までに得られたpre-rRNAのデータでフィッティングするか検討したところ、正確にpre-rRNA値の変化を表すモデル式を構築ができていない。本研究ではpre-rRNAという細菌の増殖速度によって変動する核酸をマーカーとして利用し、迅速な抗菌薬の効果判定法を確立することで、感染症治療における最適な薬剤選択法および薬物療法設計法の構築を行うことが目的である。これまでに抗菌薬を曝露しない条件において、緑膿菌PAO-1株の細菌増殖とpre-rRNAの関係について行った検討では、細菌増殖とより関連が強いものは一細菌あたりのpre-rRNA値であることを明らかにした。次にβラクタム系抗菌薬を緑膿菌PAO-1株に対して曝露した際の、生菌数の変化と細菌から抽出したpre-rRNAの関係性の解析を行った。抗菌薬の濃度条件を変化させて、抗菌薬曝露後に継時的にサンプリングを行った結果、一細菌あたりのpre-rRNA値は、抗菌薬非曝露群では細菌増殖23時間後に最大値を示したことから、この3時間値をマーカーとして使用し、一細菌あたりのpre-rRNA値から、細菌に対する感受性判定が可能となることを明らかにした。一方で、シプロフロキサシンの曝露ではメロペネムに比較してより顕著な低下、トブラマイシンは逆に大きい変化が見られないという結果が得られ、pre-rRNAのプロファイルに薬剤の作用機序ごとの特徴があることを突き止めた。
網羅的ゲノム1次構造異常解析と発現プロファイリングを応用した新規膵癌治療戦略

本研究は、網羅的DNA1次構造異常解析と網羅的遺伝子発現プロファイリングを統合することで、膵癌特異的遺伝子の同定を試みた。まず膵癌摘出標本における凍結サンプルを薄切した後、マイクロダイセクションにより膵癌細胞のみを回収した。そのDNAとRNAを抽出し、DNAはGeneChip Mapping Array10OKに、RNAはGeneChip Human plus U133arrayにかけ、網羅的遺伝子解析を行った。膵癌1次構造異常解析において、homozygous deletionを認めた領域はch3p24.1-p23, ch9p21.3, chgp22.3, ch9q22.32, ch17p12, ch18q21.1の6カ所であった。このうち2サンプル以上(10%)で認めたのは2カ所で、ch9p21.3が9サンプル(45%)とch18q21.1が5サンプル(25%)であった。この2領域の候補遺伝子は前者がCDKN2A(p16),CDKN2B(p15)およびMTAPで、後者はSMAD4であった。次に膵癌におけるLOH領域の同定を試みた。LOH領域のうち、最も頻度が高い領域はch17p13.3-p11.2で18サンプル(90%)、ch9p23-p22.3, ch18q22.1, ch18q22.3で17サンプル(85%)、ch9p21.3, ch18q12.3-q21.1で16サンプル(80%)であった。そのうちch17p13.3-p11.2の18サンプルのうち1サンプルで一部homozygous deletion領域を認め、ch9p21.3ではLOHの16サンプルに加え3サンプルにhomozygous deletionを認め、ch18q12.3-q21.1では16サンプルのうち5サンプルの一部にhomozygous deletion領域を認めた。3copy以上の増幅を認めた領域はch18q11.1-q11.2で9サンプル(45%)と最も頻度が高く、続いてch1q21.1-q23.1, ch1q23.3-q24.1, ch1q42.2-q44, ch7p, ch8q24.21, ch17q12-q21.32で5サンプル(25%)であった。Homozygous deletion領域における候補遺伝子群のRNA発現量の絶対値はいずれも200未満で、ほとんど発現を認めず、DNA1次構造とその発現に矛盾を認めなかった。Hemizygous deletion領域における候補遺伝子群のうち、CDKN2A, CDKN2B, SMAD4の遺伝子発現プロファイルを検討した。SMAD4における1copyサンプルの発現量は、2copyサンプルと0copyサンプルの平均発現量の間に認め、また最大発現量サンプルと最小発現量サンプルとの比は2.1であった。一方、CDKN2AとCDKN2Bにおける1copyサンプルの発現量には、サンプル間で大きなばらつきを認め、最大発現量と最小発現量の比はそれぞれ5.2と3.0であった。このことは、SMAD4の発現量はcopy数に大きく影響を受けるのに対し、CDKN2AとCDKN2Bの発現量はcopy数のみならず、メチル化などのeventに左右されていることが示唆きれた。本研究は、膵癌における網羅的DNA1次構造異常および遺伝子発現解析を同時に行うことで新たな膵癌特異的な遺伝子変異を明らかにし、その異常に着目した新規膵癌治療戦略を構築することである。【方法】当教室で切除した膵癌組織のfresh-frozen tissueを採取し、マイクロダイセクションにて膵癌細胞のみを選択的に回収し、DNAとRNAを抽出した。1)膵癌細胞より抽出したDNAを同個体の血液より抽出したDNAを用い、GeneChip Mapping assay(Affymetrix社)を10 pair行った。2)網羅的1次構造異常解析に用いた膵癌組織10例とコントロールとして正常膵管組織をそれぞれマイクロダイセクションし、GeneChip Human U133 plus 2.0 array(Affymetrix社)を用いたmicroarray assayを行った。【結果】網羅的DNA解析ではCh9p21.3領域とCh18q21.1にそれぞれ5例(50%)、2例(20%)でHomozygous deletionを認め、LOHはCh9、Ch17、Ch18、Ch22で高頻度に認めた。Ch9p21.3とCh18q21.1領域の遺伝子RNA発現量は、Homozygous deletionを認めた膵癌サンプルではほとんど発現を認めず、LOHサンプルでは様々な発現パターンを示した。【結語】網羅的DNA1次構造異常の解明とoligonucleotide microarrayを用いた網羅的発現プロファイリングを統合させることで、1次構造に伴う遺伝子群の発現量の変化を解析することができた。さらなる解析を加え、膵癌発生機構の鍵となる遺伝子群の同定を探求することで、膵癌新規治療の開発につながることが期待された。

膵癌1次構造異常解析において、homozygous deletionを認めた領域はch3p24.1-p23, ch9p21.3, chgp22.3, ch9q22.32, ch17p12, ch18q21.1の6カ所であった。このうち2サンプル以上(10%)で認めたのは2カ所で、ch9p21.3が9サンプル(45%)とch18q21.1が5サンプル(25%)であった。この2領域の候補遺伝子は前者がCDKN2A(p16),CDKN2B(p15)およびMTAPで、後者はSMAD4であった。次に膵癌におけるLOH領域の同定を試みた。LOH領域のうち、最も頻度が高い領域はch17p13.3-p11.2で18サンプル(90%)、ch9p23-p22.3, ch18q22.1, ch18q22.3で17サンプル(85%)、ch9p21.3, ch18q12.3-q21.1で16サンプル(80%)であった。そのうちch17p13.3-p11.2の18サンプルのうち1サンプルで一部homozygous deletion領域を認め、ch9p21.3ではLOHの16サンプルに加え3サンプルにhomozygous deletionを認め、ch18q12.3-q21.1では16サンプルのうち5サンプルの一部にhomozygous deletion領域を認めた。3copy以上の増幅を認めた領域はch18q11.1-q11.2で9サンプル(45%)と最も頻度が高く、続いてch1q21.1-q23.1, ch1q23.3-q24.1, ch1q42.2-q44, ch7p, ch8q24.21, ch17q12-q21.32で5サンプル(25%)であった。Homozygous deletion領域における候補遺伝子群のRNA発現量の絶対値はいずれも200未満で、ほとんど発現を認めず、DNA1次構造とその発現に矛盾を認めなかった。Hemizygous deletion領域における候補遺伝子群のうち、CDKN2A, CDKN2B, SMAD4の遺伝子発現プロファイルを検討した。SMAD4における1copyサンプルの発現量は、2copyサンプルと0copyサンプルの平均発現量の間に認め、また最大発現量サンプルと最小発現量サンプルとの比は2.1であった。一方、CDKN2AとCDKN2Bにおける1copyサンプルの発現量には、サンプル間で大きなばらつきを認め、最大発現量と最小発現量の比はそれぞれ5.2と3.0であった。このことは、SMAD4の発現量はcopy数に大きく影響を受けるのに対し、CDKN2AとCDKN2Bの発現量はcopy数のみならず、メチル化などのeventに左右されていることが示唆きれた。
中性子スピンエコー法による紐状ミセルの集団運動の研究

非イオン性界面活性剤のポリオキシエチレンを水に混合して得られるミセルは、組成と温度によって様々な自己組織化をすることが知られているが、特に温度上昇と共に通常の球状ミセルが一方向に伸び、紐状となることが知られている。これらの準希薄(数%)以上の組成においては、紐状ミセルが鎖状高分子のように絡み合って存在しており、少なくともその静的な性質は高分子溶液系のスケーリング則で説明できることが分かっているが、動的な性質についてはまだ不明な点が多かった。本研究では、この紐状ミセル系のセミミクロスケールにおけるダイナミクスを明らかにするために、中性子スピンエコー(NSE)法を用いた。この方法は、セミミクロスケール(0.01【less than or equal】Q【less than or equal】0.25Å^<-1>)における数十ns程度の時間間隔の運動を捉えることができる。紐状ミセルの系は相関距離が数十から数百Å程度なので、この方法によりミセルの集団運動の様子を知ることができる。実験は原研の研究用原子炉JRR-3M内の物性研のものと、ドイツ・ユーリッヒ中央研究所の研究用原子炉FRJ-2内のものの2つのNSE装置により行った。測定した試料は1.6%,6.4%,12.8%,20%で、温度は35°Cと45°Cの2点である。得られた中間相関関数I(Q,t)はZilman and Granekのモデルの1次元高分子の場合の式:exp(-(Γt)^<3/4>)で説明できた。フィッティングから得られた緩和係数Γから求めた有効拡散係数D_<eff>の濃度依存性より、希薄・準希薄領域ではミセルの自由拡散が支配的なのに対し、濃厚領域ではreptationが支配的である、と言うことが示唆される結果となった。今年度は上記の組成に加え、3.2%,9.6%,15.8%の3つの組成について同様の実験を行った。解析についてはいまだ進行中であるが、得られた中間相関関数はやはりexp(-(Γt)^<3/4>)で説明でできることが分かった。今後の解析、及び理論的な考察により、紐状ミセルの運動の特徴について明らかにできるものと考えられる。この方法は、セミミクロスケール(0.01【less than or equal】Q【less than or equal】025Å^<-1>)における数十ns程度の時間間隔の運動を捉えることができる。紐状ミセルの系は相関距離が数十から数百Å程度なので、この方法によりミセルの集団運動の様子を実験は原研の研究用原子炉JRR-3M内の物性研のものと、ドイツ・ユーリッヒ中央研究所の研究用原子炉FRJ-2内のものの2つのNSE装置により行った。

得られた中間相関関数I(Q,t)はZilman and Granekのモデルの1次元高分子の場合の式:exp(-(Γt)^<3/4>)で説明できた。フィッティングから得られた緩和係数Γから求めた有効拡散係数D_<eff>の濃度依存性より、希薄・準希薄領域ではミセルの自由拡散が支配的なのに対し、濃厚領域ではreptationが支配的である、と言うことが示唆される結果となった。今年度は上記の組成に加え、3.2%,9.6%,15.8%の3つの組成について同様の実験を行った。解析についてはいまだ進行中であるが、得られた中間相関関数はやはりexp(-(Γt)^<3/4>)で説明でできることが分かった。今後の解析、及び理論的な考察により、紐状ミセルの運動の特徴について明らかにできるものと考えられる。