hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ベトナムにおける国有林再生事業と地域住民の貧困認識に関する研究

それは2007年度に出版予定の論文集のために既に完成稿として提出されている。プロジェクト第3期(2007年4月1日2008年3月31日)3つの活動が計画された、その3つとはデータ分析、研究背景に関する会議及び出版。前年の収集されたデータの使用により調査結果が分析されそれをもとに3種の出版物が発行準備となった。この3点は以下に記す。下記参照。それによると貧困の受容と植樹活動だけでなくいかに施工されているか。ベトナムそしてその他の地域における植林の再生にも焦点が当てられている。地域社会の福利にも大きな影響を与えている。独自のデータ及び他の情報の分析に加えて主主の結果は、他の関連研究と対比されてもいる。この点は、三番目の出版物『森林再生の移行』につながり、そしてそれは熱帯地域の森林移行分析に関する3月に行われた国際会議にて発表された。3つのうちの出版物の1つは完結し、広く伝わった。また、1つは科学雑誌に掲載され現在論評を待っている段階である。3つ目の出版物は、2008年3月NYで行われた国際会議で発表された。
能における太鼓及び太鼓伝書の研究－国広伝書群を例に－

本研究は、能で使用される太鼓に着目し、「太鼓の在り方」について記された太鼓伝書の内容検討を中心に他楽器(笛・小鼓・大鼓)の伝書や謡伝書との比較を通じて、能における太鼓の役割・位置付けについて明らかにしていくものである。太鼓伝書より「太鼓の位置付け」に対する考え方を抽出し、太鼓(役者)の視点から「太鼓と能はどのような関係性を築こうとしてきたのか」を示すこと、それによって今後の能楽研究に新たな視座を提供することを目的とする。この研究の成果としては、現存する全ての太鼓伝書の源流となった観世国広執筆『永禄十二年奥書太鼓伝書(上・下)』の全文翻刻作業を完了させた。これにより、今後あらゆる太鼓伝書を扱う際の比較・参考史料とすることができるようになった。また、他の能楽研究者もこの成果を自身の研究に利用することが可能となった。これは能楽研究に貢献する大きな成果であるといえよう。今年度は、この成果をふまえて内容検討についてを重点的に行った。他の囃子伝書や謡伝書との比較を通して、使用されている用語および言い回しの意味や執筆者・観世国広の意図の解釈した。また、観世国広の父・国忠の流れを汲む『天文四年加納入道太鼓伝書』の全文翻刻も完了させ、それぞれの太鼓伝書の影響関係の整理や国広周辺の伝書執筆事情についての考察も行った。これらの考察結果は、学会(民族藝術学会など)や研究会(六麓会など)における口頭発表を中心に発信した。現在は口頭発表の内容を論文化する作業を進めており、これから学会誌に投稿していく予定である。太鼓伝書に焦点を当てた考察は現在もほとんど行われていないことから、今後も能楽研究に多角的視点を与える重要な意義を持つ研究となっていくと考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。平成25年度においては、観世国広執筆『永禄十二年奥書太鼓伝書(上・下)』の全文翻刻作業を終了し、その内容検討を行った。まず、翻刻作業の完了に関しては、自身ばかりでなく他の研究者もすぐに利用が可能な史料とすることができたことは大きな成果であった。現存する全ての太鼓伝書の源流でありながら、これまで未整理であった史料を誰もが扱える状態にしたからである。そして内容の検討についてであるが、世阿弥伝書・謡伝書・他の囃子伝書や必要に応じて他分野の文献を主な比較史料としながら、伝書中に用いられている用語の解釈、記されている能の曲に着目しての記事内容の解明といったことを中心に考察を行った。具体的に今年度は、伝書中で互いを比較対象としながら記述されている「菩薩の能」と「天人の能」について考察した。「菩薩の能」と「天人の能」は、どちらも「心弾むように打つ」ものであることは共通しているが、「菩薩の能」は「敬虔」な、「天人の能」は「ひたすら高揚した」心持でなければならないと説かれている。この違いはなぜ生じているのかを考え、自身の太鼓の稽古経験も活かして実際に現代ではどのような打ち方がされているのかも参考にしながら、ふたつの能を隔てるのは「女人成仏」にという概念に対する国広の理解であったのではないかと結論づけた。この考察結果は、待兼山芸術学会にて口頭発表し、学会誌『フィロカリア』にて論文として投稿し掲載された。これまで、音楽面あるいは史料・資料面どちらかの側面からのみのアプローチであったのに対し、両側面から『永禄十二年奥書太鼓伝書(上・下)』の内容検討を行ったことは、今後の能楽研究や囃子伝書研究に大きく貢献するものである。実践面のみ、文献面のみからの考察に陥りがちな現在の能楽研究において、両方の側面からの研究結果はさらなる研究発展につながる新たな視点・着眼点を与える契機となるからである。本年度は、太鼓伝書研究において実演研究と史料・資料研究の両方に寄与できる重要な成果を残せた。また、観世国広の父・国忠の流れを汲む

『天文四年加納入道太鼓伝書』の全文翻刻も完了させ、それぞれの太鼓伝書の影響関係の整理や国広周辺の伝書執筆事情についての考察も行った。これらの考察結果は、学会(民族藝術学会など)や研究会(六麓会など)における口頭発表を中心に発信した。現在は口頭発表の内容を論文化する作業を進めており、これから学会誌に投稿していく予定である。太鼓伝書に焦点を当てた考察は現在もほとんど行われていないことから、今後も能楽研究に多角的視点を与える重要な意義を持つ研究となっていくと考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。これまで未整理であった、太鼓伝書群の中でももっとも重要と考えられる観世国広執筆『永禄十二年奥書太鼓伝書(上・下)』の全文翻刻により、原資料の体系的な整理が大きく前進した。現在、伝書の詳細な検討を行っており、膨大な量があるので少々時間がかかっているものの、多角的な視点からの考察結果を出している。したがって本研究の目的である、太鼓伝書より「太鼓の位置付け」に対する考え方を抽出し、太鼓(役者)の視点から「太鼓と能はどのような関係性を築こうとしてきたのか」を示すことについて、順調に進展しているものと考える。これまで、観世国広執筆『永禄十二年奥書太鼓伝書(上・下)』の全文翻刻と内容考察については順調に進展してきているが、本研究でもうひとつ研究対象にしている太鼓の「手附」の検討に関してはいまだ着手できていない。これは、手附が伝書そのものよりさらに未整理であること、写本・版本の影響関係の判断が非常に難しいこと、技術的な知識がなければ理解できないことなどが理由である。しかし、手附と伝書はほぼ一対のものである。したがって、まずは現代の演能時に使用されている太鼓の手附に絞り、『鴻山文庫蔵能楽資料解題下』に記載されている太鼓金春流・観世流の主な手附を網羅的に調査する。そして、時代的には現代のものからより古い手附へ遡っていく方針をとる。今年度は、この調査を伝書の内容検討と同時に行う。研究計画に変更はない。問題点としては、手附が各地に散逸していたり、各太鼓方で保管していて見ることができなかったりする場合がある。その際には、原則として法政大学能楽研究所に保存しているものを中心史料に据え、各太鼓方と直接交渉して学術的にどこまで公開できるか話し合いを設ける対策をとる。
RFLPおよびRAPD分析法による栽培イネの祖先の解明

本研究では分子生物的手法を用いて栽培イネの祖先を明らかにすることを試みた。材料は栽培イネを含むAゲノム種より、栽培種2種14系統(O. sativa8系統、O. glaberrima6系統)、栽培イネと同じゲノム構成を持つ野生種2種16系統(O. perennis13系統、O. breviligulata3系統)の、計30系統を用いた、これらよりDNAを抽出し、分子レベルでの変異を検出するため、核、葉緑体、ミトコンドリアの3つのゲノムについてのRFLP分析および全DNAを用いたRAPD分析を行った。さらに、これら4つの分析それぞれについて、各系統間における類緑度を求め系統樹を作成した。まず、核、葉緑体、ミトコンドリアの3つのゲノム間における分化の違いについては、これらはほぼ同調して分化していたが、特に核ゲノムでの分化の程度が他の2つより大きいことが明らかになった。さらに、RFLP分析とRAPD分析の変異の検出頻度について比較したところ、RAPD分析の方がより多くの変異を検出できることがわかった。以上の結果をまとめ、総合的に分子レベルにおける栽培イネと野生イネとの系統関係について調べたところ、Aゲノム種内において、野生種のO. perennisのオセアニア、アフリカおよびアメリカ型が大きく分化しており、栽培種のO. sativaはO. perennisのアジア型と、もう1つの栽培種であるO. glaberrimaは野生種のO. brebiligulataとグループを作ることが明らかになった。これは、栽培種のO. sativaとO. glaberrimaの祖先野生種はそれぞれO. perennisのアジア型とO. breviligulataであることを示唆するものであった。
衝突ジェット法により創生される非保存力を受ける柱の振動と安定性

前年度の研究成果を踏まえて、当該年度は、本研究において創生されたほとんど純粋な非保存力を受けるロイトの柱のフラッター型不安定限界に及ぼす、内部減衰、外部減衰、付加減衰器の効果を、理論的ならびに実験的に研究した。主要な研究成果は、次のようである。内部減衰の効果:フラッター解析において、内部減衰をはじめから無視した理論フラッター値は、内部減衰を考慮した理論値よりも高いことを確認した。しかし、内部減衰のみの効果は、実験的に検証できなかった。外部減衰の効果:理論的には外部減衰は安定化効果を有することを確認した。しかし、外部減衰のみの効果は、実験的に検証できなかった。付加減衰器の効果:内部減衰と外部減衰は実験では分離できないこと、また、これら二つは有意に制御しにくいことから、実験で制御しやすい付加減衰器を取付け、その減衰係数の大きさと取付位置がフラッター限界値へ及ぼす効果を、理論的ならびに実験的に研究した。減衰係数の大きさの効果:付加減衰器は、安定化効果を有する。減衰係数が大きい程安定化効果が大きい。減衰器の取付位置の効果:減衰係数の大きさに依存するが、取付位置が柱の固定端から全長の60%80%の位置で、最大の安定化効果が生じる。その最大安定化位置より自由端側では、安定化効果は小さくなる。付加減衰器の効果を実験的に検証するため、アクリル平板と水とからなる減衰器を柱の試験片に付加して実験を行った。理論計算によると、本実験系では柱の全長の80%の位置で最大の安定化効果が生じる。理論計算値に比べ、実験系の安定化効果は大きい目ではあったが、理論予測は、実験により検証された。高照度ストロボスコープを用いて、実験系のフラッター形態を撮影し、理論形態と比較し、両者はよく対応していることを確認した。空気圧縮機,空気タンク,流量調節バルブおよびノズルからなる空気ジェット系の構築を行い,得られる空気ジェットを片持ち支持された柱の先端に取り付けた平板状アタッチメントへ衝突させることにより,ロイト力型の非保存力を創生させることに成功した。種々の非保存度を実現することを目的として,平板状アタッチメントの表面の凹凸を変化させる材料を種々試行錯誤的に試験した。試験の結果,ナイロンタワシ,カ-ペット,くつの内底などの不織布を用いると,非保存力が創生できることがわかった。メッシュの大きい不織布を用いると,きわめて純粋な非保存力(非保存度のパラメ-タα=0.001)を実現できることを確認した。メッシュの小さい不織布では,α=0.2サンドペ-パ-を用いるとα=0.4,また,最も滑らかな表面としてガラス板を用いるとα=0.7を実現できることがわかった。それぞれの非保存度の非保存力を受ける柱の不安定を実験的に観察し,対応する臨界力を測定した。理論解析から,非保存度のパラメ-タαが,0【less than or equal】α【less than or equal】0.17では,柱はフラッタ-で,0.17<α【less than or equal】1.0では,柱はダイバ-ジェンスで不安定になることが予測される。実験結果を理論値と比較した結果,両者は,定性的のみならず定柱の不安定形態の内のフラッタ-型不安定の振動形態を,鮮明なストロボ写真に撮影するため,設備備品として,2灯式高照度ストロボスコ-プ一式を購入した。この備品を用いることにより,長さ1mの試験片のフラッタ-振動形態を鮮明なストロボ写真に記録することができるようになった。研究はおおむね当初の計画通り進捗しており,現在研究結果を整理し,論文の形にまとめて発表する準備をしている。
憲法学と歴史学の対話可能性の再検討――戦後経済史学との協働と相克の過程に着目して

本研究の目的は、憲法学が戦後日本を代表するフランス経済史家、高橋幸八郎(1912-82)とその門下生(岡田与好、二宮宏之、遅塚忠躬ら)の歴史研究といかに協働ないし相克したのかを分析することを通じて、憲法学と歴史学が対話を再開するための条件を見出すことにある。これを達成するために、2018年度は敗戦直後に社会科学全般に影響力を誇ったものの今日忘却された高橋の論考を、最初の赴任先である京城帝国大学時代の作品やフランス留学時に執筆された仏語論文を含めて収集・読解し、イデオロギー的束縛から離れて高橋史学の特質及び同時代の社会科学に強いインパクトを与えた背景を解明することを、当初の課題としていた。しかし、1930年代から50年代にかけて高橋が発受した書簡類を大量に古書店で発見したため、その整理・分析を優先にした。具体的には、書簡のこれ以上の劣化を防ぐために資料保存用封筒に入れて整理番号を付したうえで、表題、作成年、差出人、差出人住所、受取人、概要を記載した目録の作成を開始した。また、福島大学附属図書館・大塚久雄文庫及び一橋大学経済研究所資料室・都留重人名誉教授寄贈資料に所蔵されている高橋の書簡を関連して調査するとともに、尚絅学院大学図書館・服部英太郎・文男遺文庫において、1950年代に高橋が東北大学で行った集中講義「欧州経済史」の受講ノートを閲覧した。その結果、不明な部分も多かった高橋のパリでの現地の歴史家との交流の一端が明らかになったほか、留学を契機に比較憲法史的視座を強調するようになる、という歴史叙述の力点の変化が高橋に生じたことを裏書きする一次史料などを発見した。これらを東大退官時の座談における発言などとつき合わせることを通じて、戦中から敗戦直後にかけて歴史観を完成させた後の高橋には晩年まで理論的深化が見られなかった、という従来の見解を再検討することが可能になると思われる。高橋書簡が膨大であり整理に多大な時間と労力を要するうえに、手書き文字の読解が困難を極めているため。2019年度も高橋書簡の整理・分析、及び高橋の論稿の収集・読解を進めつつ、憲法学者が1970年代以降に高橋史学といかに向き合ったか、という課題の本格的な検討にも着手したい。
造血幹細胞の分化増殖の分子生物学的解析

本研究は平成2年度発足の重点領域研究「造血幹細胞の分化増殖の分子生物学的解析」の準備を目的とし、下記の4つのテ-マを柱とする。1)単離濃縮した造血幹細胞の生物学、生化学及び分子生物学的特性の検討2)組替え純化造血因子の構造と作用の分子生物学的検討3)正常造血細胞、造血因子と造血器腫瘍細胞の比較と相互関係4)造血細胞支持細胞の役割とその物質的基盤この目的の為に下記のことを行った。1)重点領域研究施行の方針を討議する準備会議を平成元年9月27日に開き研究開始に至る諸問題につき討論した。2)このほか重点領域研究審査会について必要な調査打合せや、研究進行の内容についての打合せを数回行った。3)平成2年2月26日文部省重点領域研究審査会が開かれ一般公募研究費の配分を決定した。4)研究施行の準備の為の実験を行った。これには下記のものが含まれる。(1)造血幹細胞の濃縮純化についての条件の設定(2)造血幹細胞に似た株細胞表面の造血因子に対するレセプタ-の分離、解析と分子クロ-ニングの準備(3)白血病株細胞の亜株を作ることによる細胞分化実験の準備(4)造血支持機能を有する株細胞による細胞表面物質の単離本研究は平成2年度発足の重点領域研究「造血幹細胞の分化増殖の分子生物学的解析」の準備を目的とし、下記の4つのテ-マを柱とする。(1)造血幹細胞の濃縮純化についての条件の設定(2)造血幹細胞に似た株細胞表面の造血因子に対するレセプタ-の分離、解析と分子クロ-ニングの準備(3)白血病株細胞の亜株を作ることによる細胞分化実験の準備(4)造血支持機能を有する株細胞による細胞表面物質の単離
白血病関連転写因子ＡＭＬ１／Ｒｕｎｘ１の新規機能制御メカニズムの探索

造血発生において必須の転写因子Runx1のC末端領域に存在するリン酸化修飾の標的となり得る9箇所のセリン・スレオニン残基を対象として、脱リン酸化状態を模倣するアラニンへの置換、またはリン酸化状態を模倣するアスパラギン酸への置換を行い、転写活性化能およびES細胞の血球への分化誘導能について検討を行った。9箇所全てのアラニン変異体、アスパラギン酸変異体は、いずれも野生型Runx1と比べて転写活性化能に変化が認められた。また、両変異体共にES細胞の血球分化を誘導し得たが、血球コロニーの出現頻度に差が認められ、リン酸化修飾によるRunx1の機能調節が示唆された。本研究課題では、Runx1のリン酸化修飾による機能制御機構について検討を行うため、Runx1のリン酸化を受ける標的部位とされる(S/T)Pmotifについて、runtドメイン以降に存在する9箇所を対象とし、セリン、スレオニンをアラニン(脱リン酸化状態を模倣する)、またはアスパラギン酸(リン酸化状態を模倣する)に置換するよう変異を導入したものを作製した。この変異体について、野生型Runx1に比して転写活性化能に変化がないか調べるため、造血関連遺伝子のプロモータ下にレポーター遺伝子が発現するコンストラクトを用いて、レポーターアッセイを行った。この結果、アラニン変異体は野生型Runx1と比較して転写活性化能は2.5倍程度に上昇し、アスパラギン酸変異体は2分の1程度に低下していた。このことから、Runx1の転写活性化能はリン酸化修飾によって制御されていると考えられ、リン酸化修飾による蛋白安定性の変化、共役因子との親和性の変化、細胞内局在の変化が起きている可能性が推測された。また、Western blottingでの検討により、アラニン変異体はより安定に存在している可能性が示唆されたため、^<35>S-Methionine標識を用いて蛋白半減期をより詳細に調べる予定である。さらに、得られたアラニン変異体、アスパラギン酸変異体については、マウスES細胞へ相同組み換えによって導入するためノックインベクターに載せ換え、現在in vitroでの血球系統への分化誘導実験を行うため、マウスES細胞への導入ならびに相同組み換えクローンの選別の工程に進んでいる。Runx1は急性骨髄性白血病の相互転座の解析によって遺伝子が同定され、その後の研究によって胎生期における二次造血の開始、また成体における巨核球やT細胞の分化における役割が示されているが、細胞内外からのどのようなシグナルによってRunx1の機能が制御されているかについては、不明な点も多い。本研究では、造血発生、造血制御に重要な役割を果たす転写因子Runx1について、どのような機構で機能制御を受けているのかについて、特にリン酸化修飾に焦点を絞って検討を行っている。当該年度では、Runx1タンパク内のセリン/トレオニンをアスパラギン酸に置換したリン酸化状態を模倣した変異体、またはアラニンに置換した脱リン酸化状態を模倣した変異体Runx1をノックインベクターに載せ換え、Runx1ノックアウトマウスES細胞に遺伝子導入を行い、変異体Runx1が相同組み換えにて挿入されたクローンをSouthern Hybridizationを行って選択した。これらのES細胞クローンを、in vitroで血球細胞への分化誘導を行うため、エリスロポエチンやSCFなどの造血サイトカインを含むメチルセルロース培地上で培養を行った。この培養条件において、Runx1ノックアウトES細胞は全く血球細胞への分化が見られないが、Runx1ノックアウトES細胞に野生型Runx1を相同組み換えにて導入したものは、再び血球細胞への分化が認められるようになる。アスパラギン酸変異体、またはアラニン変異体を相同組み換えにて導入したRunx1ノックアウトES細胞の結果の解析を進めているところである。これまでの結果ではアラニン変異体、アスパラギン酸変異体の両方において血球細胞の分化が認められている。野生型と比較してどうであるか、また出現する血球細胞の形態に特徴が無いか、などについてより詳細な解析を進めていく予定である。これまでマウスとヒトRunx1のC末端領域に存在する、リン酸化標的となる9箇所のセリン、スレオニン全てをアスパラギン酸に置換したリン酸化模倣変異体(1-9D)、またアラニンに置換した脱リン酸化模倣変異体(1-9A)を作製し、解析を行ってきた。1-9A、1-9Dは野生型Runx1と比較してM-CSF受容体プロモーターの転写活性化能がそれぞれ約2倍、また約2分の1になっており、リン酸化修飾がRunx1の機能に影響を及ぼすことが示唆された。1-9A、1-9DはそれぞれRunx1ノックアウトマウスES細胞に相同組み換えによって導入し、Runx1変異体を片アリルのみ有するES細胞クローンを複数樹立した。

これら1-9Aおよび1-9DノックインES細胞を用いて、リン酸化修飾がRunx1の造血制御機能に及ぼす影響を観察するために、メチルセルロース培地上で血液細胞への分化誘導実験を行った。Runx1ノックアウトマウスES細胞では血液細胞への分化が全く認められず、野生型Runx1をノックインすると造血障害を完全に解除することが可能である。よって、この実験系では、血液細胞への分化誘導におけるRunx1変異体の機能を評価することができる。IL-3、G-CSF、GM-CSF、EPO、SCF存在下において、1-9A、1-9DノックインES細胞は、両者共に正常な血液細胞への分化を示した。また、それぞれのES細胞から産生された血液細胞はマクロファージ様大型細胞が主であり、赤芽球系細胞も認められ、細胞形態からも両変異体共に野生型Runx1ノックインで出現する血液細胞との明らかな違いは認められなかった。今後1-9A、1-9D変異体ノックインマウスを作製し、胎生期の初期造血発生、および成体での造血制御にRunx1のリン酸化が及ぼす作用について詳細に解析を行いたい。ノックインベクターの構築に時間がかかってしまったこと、マウスES細胞にRunx1変異体を相同組み換えさせ、その後Southern Hybrydizationで組み換え体クローンをスクリーニングする際、イメージング装置が故障してしまい、スクリーニングにかかる時間が予想以上に長くなってしまったため、達成度にやや遅れが認められる。24年度が最終年度であるため、記入しない。研究計画と同様に、作製したRunx1変異体の相同組み換えES細胞をマウス胚盤胞にインジェクションし、キメラマウスを作製し、その後ヘテロ、ホモのノックインマウスを作製するため交配を行っていく。その経過で、何らかの表現型が認められるかどうか、慎重に観察も行う。
タバコ培養細胞系におけるアミロプラストの誘導と細胞肥大のホルモンによる制御

タバコ培養細胞BY-2は、合成オーキシンである2,4-D(0.2mg/l)を含む通常の培地中では活発に細胞増殖を行い、その色素体は培養の全期間を通じて未分化な原色素体の状態を保つ。一方、2,4-Dを含まず、合成サイトカイニンであるBA(1mg/l)を添加した改変培地中では細胞はほとんど増殖せずに著しく大型化し、色素体は大量のデンプンを蓄積してアミロプラストに変換する(Sakai et al.1992)。今年度は、BY-2細胞の植物ホルモンに対する応答を詳細に解析し、アミロプラストの分化誘導に関しては-2,4D,+BAの条件が最良であることを確認した。しかし、ホルモンを全く含まない(-2,4-D,-BA)培地中でもデンプンの蓄積が認められることから、BY-2のアミロプラスト分化誘導では2,4-Dの除去が第一の要因であり、BAは2,4-Dの除去によって生じる変化を促進していると考えられる。それぞれのホルモンに対する応答を調べた結果、2,4-Dは細胞増殖を促進し、デンプン蓄積を抑制すること、BAは逆に細胞増殖を抑制し、デンプン蓄積を促進すること、そしてこれらの反応はホルモン濃度依存的であることが確認された。2,4-DとBA以外のオーキシンやサイトカイニンも類似の作用を示すことから、これらはオーキシン、サイトカイニンに共通の効果であると考えられる。各種培養条件を比較すると、細胞増殖率の低下とデンプン蓄積量の増大は平行関係にあった。しかし、真核型ポリメラーゼαの阻害剤であるアフィディコリンを添加して細胞の増殖を強制的に停止させても、デンプンの蓄積量は培地の種類ごとに明らかに異なっていた。したがって、デンプンの蓄積は増殖率の低下によって二次的にもたらされるのではなく、ホルモンにより独自の制御を受けていると考えられる。また、単離色素体核を用いたin vitroアッセイ系によりアミロプラスト分化過程における色素体ゲノムの機能変化を調べた結果、転写・複製活性ともに不活発であることが明らかになった。
英国大学評価における＜学生エンゲージメント＞の実証的研究

学生中心の学びへと転換しつつある近年の高等教育において、「学生の主体的な学びへの関与<学生エンゲージメント(student engagement)>」はその核となる概念である。英国では、<学生エンゲージメント>は、教育評価を含む大学評価における評価指標の一つとされている。本研究では、今後の日本の高等教育評価政策に資するため、英国での教育評価を含む大学評価に関する自己点検・評価報告書等を分析対象とし、テキストマイニングの手法を用いて、英国での大学評価における<学生エンゲージメント>の位置づけを明らかにし、日本の大学評価における<学生エンゲージメント>評価指標のあるべき姿を明らかにする。
アディポネクチンの鼻腔投与による新規神経変性治療法

最近、神経変性の病態に糖代謝障害が伴うことが注目されている。我々は、抗糖尿病作用をもつことで知られるアディポネクチンの発現や作用を、剖検脳、細胞モデル、マウスモデルを用いて検討した。その結果、パーキンソン病やレビー小体型認知症の剖検脳においては、APNがレビー小体に蓄積しており、αシヌクレイン発現神経芽細胞においては、APNは、αシヌクレインの凝集をAdipoRI-AMPキナーゼ系路依存的に抑制し、さらに、αシヌクレイントランスジェニックマウスにおいては、αシヌクレイン凝集などの病理像、運動試験の改善が観察された。これらの結果は、アディポネクチンが治療のポテンシャルを持つことを示唆している。糖尿病が神経変性の危険因子であることや神経変性疾患と生活習慣病に共通の病態的なメカニズムが存在することが注目されている。このことから、パーキンソン病を含めたシヌクレイノパチーの病態における代謝の変化に着目することは重要であり、抗糖尿病因子アディポネクチン(APN)の投与/添加により病態にどのような変化がもたらされるか非常に興味深い。我々は、細胞内の代謝産物(核酸、アミノ酸、有機酸、脂肪酸など)を網羅的に測定するメタボローム解析を用いてシヌクレイノパチーモデル(マウス・培養細胞)の代謝の変化を検討した。その結果、マウス・培養細胞両モデルにおいて、ミトコンドリアのTCA回路中に入る物質がそれぞれの対照群と比較し減少する傾向がみられ、シヌクレイノパチーモデルでは糖代謝に異常があるような所見を呈する結果を得られた。これまでの我々の研究では、APNがαシヌクレイン(αS)の凝集を抑制するなど抗神経変性効果を示したが、マウス・培養細胞両モデルにAPNを投与/添加した結果、GMPやIMPといった低リン酸化ヌクレオチドが減少することがメタボローム解析により明らかとなった。低リン酸化ヌクレオチドはDNA・RNA合成やATP合成の材料となるため、APNの投与により核酸やATP合成が亢進している可能性が考えられる。興味深いことに、試験管内でGMPおよびIMPが濃度依存的にαSの凝集を促進することがわかった。このことから、APN投与/添加による細胞内GMP、IMPの低下が、APNによるαS凝集抑制メカニズムの一因であることが示唆された。以上の結果より、APNの経鼻腔投与/添加による治療の可能性を示唆するものである。現時点で、パーキンソン病(PD)やその関連する疾患であるレビー小体型認知症(APN)は、アルツハイマー病(AD)と同様に増加の一途を辿っており、それらの疾患に必要な莫大な医療費、介護の負担は深刻な社会問題である。したがって、これらシヌクレイノパチーの根本治療の開発は、神経変性疾患の基礎研究分野の最も重要な課題の一つである。我々は、培養細胞やトランスジェニック(tg)マウスなどのシヌクレイノパチー病態モデルを用いて、抗糖尿病因子として知られているアディポネクチン(APN)がこれらの細胞やマウスの系における神経変性所見を軽減することを示した。特に、マウスにおいては、αシヌクレイン(αS)tgマウスの鼻腔からAPNを持続的に投与することにより、αSマウスの運動機能障害の発症が有意に改善されることを観察した。また、APNを鼻腔投与したαSマウスの脳の組織学的解析(免疫組織化学、免疫蛍光染色など)、及び、生化学的解析(ウェスタンブロット)において、αSの凝集・蓄積が緩和されるとを示した。これらの結果は、APNがシヌクレイノパチーの治療に有効である可能性を強く示唆するものであり、これらの成果を論文発表してAPNがPDなどのシヌクレイノパチーの早期治療に有効である可能性を提唱した(Sekiyama et al, Ann Clin Transl Neurol. 2014)。また、新年度を迎えた時点において、APNの神経変性疾患の治療に対する作用特許として米国における国際特許が認められた段階にある。超高齢社会を向えた我が国においては、アルツハイマー病(AD)やパーキンソン病(PD)などの神経変性疾患の頻度は、年々増加の一途を辿り、その莫大な医療費は大きな社会問題となっている。これにの多くの研究にもかかわらず、現状では、根治療法は存在しない。我々は、抗糖尿病作用、抗炎症作用を持つことで知られるアディポネクチン(APN)が神経変性の抑制に重要であり、APNのloss of functionが神経変性の進行に関与しており、APNの作用を補うことが治療に通じるのではないかと考え、この仮説の証明を細胞、マウスの実験系でこころみた検討した。その結果、PDやレビー小体型認知症などのシヌクレイノパチーのモデルであるαシヌクレイン(αS)発現神経芽細胞、トランスジェニック(tg)マウスにおいて、リコンビナントAPNの鼻腔投与がαSの凝集・蓄積を抑制し、マウスの運動能力の低下を抑制するなど、組織・行動のいずれにおいても神経変性所見の改善に有効であることを見出した。これまでの臨床治験の結果から、ADやPDなどの神経変性疾患のdisease modifying therapyには早期治療が不可欠であり、場合によっては何十年にも及ぶ予防治療を想定しなければならないことが言われているが、このことを考慮すれば、簡便な治療法が望ましいことは明らかである。この意味でAPNの鼻腔投与法は、ポテンシャルの高い方法であると言えるだろう。

我々は、抗糖尿病作用をもつことで知られるアディポネクチンの発現や作用を、剖検脳、細胞モデル、マウスモデルを用いて検討した。その結果、パーキンソン病やレビー小体型認知症の剖検脳においては、APNがレビー小体に蓄積しており、αシヌクレイン発現神経芽細胞においては、APNは、αシヌクレインの凝集をAdipoRI-AMPキナーゼ系路依存的に抑制し、さらに、αシヌクレイントランスジェニックマウスにおいては、αシヌクレイン凝集などの病理像、運動試験の改善が観察された。これらの結果は、アディポネクチンが治療のポテンシャルを持つことを示唆している。神経変性疾患APNの抗神経変性作用に関する基礎的な知見をより一層深めたいと考えている。この目的のため以下の二つの方向で研究を推進していく。i)APNの抗神経変性作用のメカニズムを明らかにするため、APNやインスリンの受容体シグナル伝達に関しては、これらのシグナルのクロストークが、細胞の増殖、生存、蛋白凝集の抑制などの調節において重要であることを見出して、さらなる検討を行っている。また、APNやインスリンの作用において、APPL1という分子が関与しており、神経変性下では特に重要であるような予備的結果を得ている。これらの知見を細胞モデル、マウスモデルにおいてさらに検討する。ii)P123Hβsyntgマウスに対するAPNの鼻腔投与実験をそれぞれ開始している。さらにAPNのKOマウスの交配実験なども進行中であり、APNの抗神経変性作用をより確実なものにする。近年、糖尿病をはじめとする生活習慣病とシヌクレイノパチーなどを含めた神経変性疾患との関連性が明らかになりつつあり、慢性炎症やミトコンドリアの異常など類似した病態メカニズムが存在することがわかってきた。この観点から神経変性疾患と他の生活習慣病と共通の治療ターゲットがあるのではないかと考え、抗糖尿病因子として知られるアディポネクチン(APN)に着目した。脳神経におけるAPNの機能は未だ不明点が多いが、中枢神経系を介してエネルギー代謝や神経保護に関与することが近年報告されている。そこで本研究では、PD及びDLBなどのシヌクレイノパチーの病態において、APNがα-シヌクレインの神経毒性に対し抑制因子として機能するという仮説を立て、剖検脳や培養細胞・動物モデルを用いて解析をおこなった。その結果、APNがシヌクレイノパチー病態において抑制的に作用することが示され、中枢神経系におけるAPNおよびAPNシグナルがシヌクレイノパチーに対する効果的な治療ターゲットになりうる可能性が示唆された。今後もさらにこの問題に関して詳しく明らかにしたいと考える。APNの鼻腔投与実験は、αStgマウスを用いて行い、αSマウスの運動機能障害が改善されることマウス脳の組織学的解析、及び、生化学的解析にも、αSの凝集・蓄積が緩和されるとを示すことができ、これらの成果を論文発表(Sekiyama et al, Ann Clin Transl Neurol.2014)、特許申請を予想より早く行うことができた。余った予算と時間で、論文審査などの過程で、αStgマウス以外の神経変性のモデルマウスに対してもAPNの治療効果があるかどうか?という複数のコメントに対応して、DLBのモデルマウスとして論文発表した変異型βシヌクレイン(βsyn)P123
ジメルカプトコハク酸の結合蛋白の固定と腫瘍細胞への取り込み機序についての解明

乳癌細胞(RCB1192)、脳腫瘍細胞(RCB0763)及び肺癌細胞(RCB0815)を用いて、99mTc(V)DMSA(以下DMSA)の集積および洗い出しに関する実験を行なった。まず、生理的イオン濃度のBufferを用い、時間-集積曲線と時間洗出し曲線をそれぞれの細胞において作成した。いずれの癌細胞においても、DMSAの集積は経時的に漸増しており、全てはほぼ似た曲線を示した。洗い出しに関しては乳癌細胞・肺癌細胞では最初の10分で急速に洗い出しが見られ、後は暖徐となった。脳腫瘍細胞での洗い出しは、全体を通し暖徐であった。次いで、細胞膜にあるイオンチャンネルの関与を調べるため、それらを阻害する薬剤を加え、集積について実験した。全イオンチャンネル阻害剤として、高濃度のK+(140mmol/l)のbufferや、ウアバイン(Na+-K+ATPase阻害)の添加濃度を変化したBufferを用い実験した。これらを用いても、DMSAの集積には影響は見られなかった。DMSAの集積は、イオンチャンネルを介しておらず、もっぱら拡散によることが推察された。蛋白との結合あるいは競合により、集積が阻害されるかを調べるため、幼牛血清アルブミンを濃度を変えて添加し、それぞれの集積・洗い出しについて実験した。この結果、蛋白添加によって有意に集積の低下が見られた。蛋白濃度と摂取率には、有意な相関は見られなかった。洗い出しに関しては蛋白添加の有無は関与していなかった。このことから、DMSAと蛋白とは、競合では無く結合により集積阻害が起こることが推察できた。以上の実験から、1)DMSAの集積は拡散である。2)DMSAの集積は細胞外の蛋白との結合によって阻害されうる。3)今回の3種類の細胞では、実験結果にほとんど差異が見られなかったため、DSMAは非特異的な腫瘍シンチ製剤であろうという3つの結論に到達した。乳癌細胞(RCB1192)及び脳腫瘍細胞(RCB0763)を用いて、99mTc(V)DMSA(以下DMSA)の集積及び洗い出しに関する実験を行った。まず、イオンチャンネルの介在に関与した集積であることを前提に、生理的イオン濃度のBufferを用い、集積-時間曲線と洗い出し-時間曲線をそれぞれの細胞において作成した。両癌細胞において、DMSAの集積は1時間でほぼPlateauに達した。洗い出しについては、乳癌細胞では最初の10分で急速に洗い出しが見られ、後は緩徐となった。脳腫瘍細胞での洗い出しは全体を通し非常に緩徐であった。次いで、イオンチャンネルを阻害する薬剤を加え集積について実験した。全イオンチャンネル阻害剤として、高濃度のK+(140mmol/lのBufferや、ウアバイン(NA+-K+ATPase阻害)の添加濃度を変化したBufferを用い実験した。これらを用いても、DMSAの集積に影響なく、DMSAの集積機序は、イオンチャンネルを介しておらず、ほぼ拡散によることが推察された。蛋白結合あるいは蛋白との競合によって集積が阻害されるかを調べるため、幼牛血清アルブミンを濃度を変えて添加し、それぞれの集積・洗い出しについて実験した。この結果、加えた蛋白濃度については差異は見られないが、わずかでも添加された場合は集積の低下が見られた。洗い出しに関しては全く差異が見られなかった。このことによってDNSAと蛋白とは、競合ではなく結合による集積阻害が起こることが推察できた。
自己骨格筋を駆動源とした補助人工心臓の開発

自己骨格筋(広背筋)を駆動源とした補助人工心臓の開発において,筋の収縮力を如何に有効に利用するかが検討課題の一つとして挙げられていた.補助人工心臓の設計に先立って,広背筋の一回収縮長と,収縮前に筋に伸展を加えるときの前負荷はどの程度が最適であるかを検討した.ビ-グル犬の広背筋を露出し,上腕骨付着部を切断し遊離端とした.筋にリ-ド線を埋め込み高頻度電気刺激を加えた.遊離端に荷重量を加えたときの静止時の筋の伸び(伸展長)と,遊離端の筋収縮による変位量(収縮長)をレーザー変位計を用いて計測し,最適な荷重量と収縮長を検討した.伸展長はある荷重までは増加を続け,それに比例して収縮長も増加したが,それを越える荷重量では伸展量は変化せず,収縮長は減少した.さらに,筋弛緩期にバネによる強制的伸展を加えることで,心筋の如き一種の擬似的な自律弛緩性を骨格筋に与え,ポンプ高率の更なる改善を検討した.筋の伸展力を検討するため3枚のplateとpolyurethane chamberを用いてpull-plate式の駆動装置を作成した。筋の収縮により2枚のplateに接着させたpolyurethane chamberが圧縮されポンプが駆動し,弛緩期にはplateに取り付けられたバネの力で筋に伸展が加わる様にした.バネの力を変化させ,それぞれの場合でポンプ流量,吸引圧,ポンプ充満時間を測定し,最適の伸展力を考察した.前負荷40mmHgではポンプ流量から見て筋伸展力は必要なかったが,前負荷の低下に従ってバネによる擬似的な自律弛緩性が充満条件改善のため有効となり,前負荷20mmHgの場合ではバネ定数714x10^4dyn/cm程度の伸展力が最適であった.自己骨格筋(広背筋)を駆動源とした補助人工心臓の開発において,筋の収縮力を如何に有効に利用するかが検討課題の一つとして挙げられていた.補助人工心臓の設計に先立って,広背筋の一回収縮長と,収縮前に筋に伸展を加えるときの前負荷はどの程度が最適であるかを検討した.ビ-グル犬の広背筋を露出し,上腕骨付着部を切断し遊離端とした.筋にリ-ド線を埋め込み高頻度電気刺激を加えた.遊離端に荷重量を加えたときの静止時の筋の伸び(伸展長)と,遊離端の筋収縮による変位量(収縮長)をレーザー変位計を用いて計測し,最適な荷重量と収縮長を検討した.伸展長はある荷重までは増加を続け,それに比例して収縮長も増加したが,それを越える荷重量では伸展量は変化せず,収縮長は減少した.さらに,筋弛緩期にバネによる強制的伸展を加えることで,心筋の如き一種の擬似的な自律弛緩性を骨格筋に与え,ポンプ高率の更なる改善を検討した.筋の伸展力を検討するため3枚のplateとpolyurethane chamberを用いてpull-plate式の駆動装置を作成した。筋の収縮により2枚のplateに接着させたpolyurethane chamberが圧縮されポンプが駆動し,弛緩期にはplateに取り付けられたバネの力で筋に伸展が加わる様にした.バネの力を変化させ,それぞれの場合でポンプ流量,吸引圧,ポンプ充満時間を測定し,最適の伸展力を考察した.前負荷40mmHgではポンプ流量から見て筋伸展力は必要なかったが,前負荷の低下に従ってバネによる擬似的な自律弛緩性が充満条件改善のため有効となり,前負荷20mmHgの場合ではバネ定数714x10^4dyn/cm程度の伸展力が最適であった.
職場における男女雇用均等の実態と改善の展望に関する研究

平成7年4月の4年制大学卒の新規採用数は厳しく抑制される結果となり、とくに、女性においてはその傾向は著しいものがあった。これは、バブル期の積極的採用策のバブル崩壊に伴う反動の結果であるとともに、いわゆるリストラクチャリングとして、事務・管理部門を中心に雇用の合理化を行う企業が少なくないことも関与している。以上の契機自体は女性の採用そのものに対するマイナス要因とはならないが、実際には、採用数抑制のターゲットは女性により強く向けられた。すなわち、企業経営戦略の当面する課題がリストラクチャリングであるとすれば、正規従業員の採用に関し、雇用リスクを最小限にとどめるという方針が重視される。とくに、将来的な企業経営の核となるべき長期雇用を前提とした総合職に関しては、企業の過去における経験に基づくならば、一般に、女性の結婚・出産等による早期退職のリスクを考慮せざるを得ず、いわゆる統計的差別仮説に基づいて、女性雇用を忌避する結果となるという訳である。しかし、こうした女性雇用にかかわる否定的な傾向とは対照的に、女性の積極的な採用・活用を行うケースも少なくなかった。「基本的に女性にできない仕事はない」とする企業もあり、予めいろいろな制約条件を云々する前に、何らかの対策をとりつつ女性を仕事につけるところから始め、問題が生ずるたびに解決していき、結果として、一定の層の厚みをもった女性の職場ができれば、継続就業にかかわる諸支援策の整備と相まって雇用継続は進むという。女性の資質を積極的に活かそうとする職域拡大事例も多く出された。女性のセンス・感覚を生かして、製品企画やサービス企画を担当させる例、さらには、女性が主なユーザーである製品(化粧品、食品、衣料品、家庭用品、住宅等)については、企画・開発、そして営業・販売の諸側面で女性の能力が求められている例がみられた。
培養上清中の胚由来物質とヒト胚発育動態：移植胚選択の新規バイオマーカーの開発

本研究を構成する「連続観察による凍結融解胚盤胞の経時的発生状況」および「胚盤胞の細胞構成とその細胞数」については、一定の成果を得ることができ、その結果をH30年度に国際誌に発表を行った(Iwasawa, Takahashi, Terada PloS ONE 2019)。さらに他の検討対象である「胚構成細胞の染色体数的異常と胚全体におけるその比率」についての検討を、受世代シーケンサー(NGS)を使用して進め、現在行われている栄養外胚葉細胞の生検で得られる結果と胚全体から得られた結果との間におよそ30%の不一致が認められ、必ずしも胚全体の染色体の状態を反映しないといった結果を得、東北生殖医学会(2018)および、日本産婦人科学会大会(2019)において発表を行ない、今後、生殖医療において行われるであろう胚の着床前診断・検査については慎重であるべきであるとのエビデンスを提示した。これまでの検討により胚の評価について、より深く追及すべき胚の動的挙動・構成細胞数の正確な測定・構成細胞の染色体の状態およびそれらの関連性について興味深い知見が得られ、それらは国際誌に掲載された他、学会においても高い評価を受けた。またこれらの知見は本研究における最終的な目的であるバイオマーカー探索に必要不可欠なものであり、バイオマーカー追及のストラテジーの構築が大きく進展したと考えられる。バイオマーカー候補物質を選定するため、ヒト胚を融解し培養する。それぞれの胚は個別培養下でタイムラプス画像が記録される。培養後、一部の胚についてはVeriSeqキットを用いたNGSによる核型解析を行い、異数性の有無、トリソミー、モノソミー、モザイクについて解析する。さらに残りの胚については免疫染色によりadherence junction関連タンパク質、tight junction関連タンパク質およびgap junction関連タンパク質、さらに胞胚腔の形成に重要な役割をはたすNa+/K+-ATPaseに特に注目し、その発現動態を蛍光免疫染色法用いて可視化する。また培養上清に関しては、タンパク質・miRNA解析に供するため保管する。
病原体センサーMincleを介する細胞間クロストークと脂肪組織線維化の分子機構

脂肪組織線維化に4ヶ月の時間を要する食餌誘導性肥満マウスに代わる短期脂肪組織線維化モデルの確立を試み,2週間でMincleの発現上昇,CLS(crown-like structure)の形成,脂肪組織の線維化が認められる脂肪組織虚血再灌流モデルを確立した。また,脂肪組織線維芽細胞の同定を試みた。コラーゲンプロモーター下でGFPを発現するマウスに高脂肪食負荷を行ったところ,内臓脂肪組織に存在するGFP陽性細胞はPDGFRαを発現することを見出した。さらに,内臓脂肪組織と皮下脂肪組織のPDGFRα陽性細胞は性質が大きく異なり,内臓脂肪組織PDGFRα陽性細胞は線維化促進型であることを見出した。病原体センサーMincleを介する細胞間クロストークと脂肪組織線維化の分子機構の解明を目的として,本年度,以下の検討を行った。1.Mincle活性化に関わる内因性リガンドの探索我々は,食餌誘導性肥満マウスにおいて脂肪組織の線維化が誘導された結果,脂肪組織における脂肪蓄積能が制限され,異所性脂肪蓄積が促進されることを報告している。一方,食餌誘導性肥満マウスは作製に少なくとも数ヶ月の期間を有するため,内因性リガンド探索に供する脂肪組織サンプルをより短期間で得るために,新規の脂肪組織線維化モデルを試みている。その結果,脂肪組織において虚血-再灌流障害を起こすと,肥満脂肪組織に類似した脂肪組織線維化,Crown-like structureの形成,Mincleの発現上昇が認められることを見出した。本年度は,条件を詳細に検討し,一定の条件を確立し,再現性のよい実験結果が得られるようになった。今後,本サンプルを用いて内因性リガンド探索に取り組む。2.脂肪組織線維化と脂肪組織機能障害の分子機構我々は,肥満脂肪組織にαSMA陽性の活性化線維芽細胞が存在することを報告している。一方,脂肪組織における線維芽細胞の由来や性質は全く知られていない。そこで,本年度は,コラーゲンプロモーター下でGFPを発現するCol1a2-EGFP Tgマウスに肥満を誘導し,活性化線維芽細胞を検討したところ,GFP陽性細胞は確かに存在し,PDGFRa陽性であることを見出した。また,肥満を誘導しないマウスにおいてもGFP陽性細胞は存在していた。今後,これらの細胞の性質を比較・検討していく。年度の途中に職場(大学)の移動があったが,動物実験の短期モデル,長期モデルをタイミング良く組み合わせることで,当初懸念されていた実験期間のブランクを最小限にすることができた。新職場には旧職場で使用していた機器と同等の機器類があり,特に,脂肪組織線維芽細胞の分取などは,かなり順調に進んだ。動物実験施設も充実しており,短期モデルの作製も順調に進んだ。1.Mincle活性化に関わる内因性リガンドの探索我々は,骨髄細胞特異的Mincle欠損マウスの解析より,Mincle発現細胞が骨髄由来細胞であること,in situ hybridization法によりMincle陽性細胞がCrown-like stracture(CLS)周囲に限局することを確認している。一方,これまでの報告で,CLS周囲のマクロファージはM1型,線維化を含む組織修復に関わるマクロファージはM2型のマクロファージであることが知られており,両者の性質を持ち合わせると考えられるMincle発現細胞は既存のM1/M2マーカーでフローサイトメーターによる分離ができない可能性が高い。そこで,Mincle遺伝子プロモーター制御下にGFPとDTRを組み込んだレポーターマウスを用いてMincle陽性細胞の単離を試みた。しかしながら,GFPの発現強度が弱く,単離の条件設定に時間がかかると想定されたため,磁気ビーズを用いた検討を開始した。現在条件を検討中であるが,今後,他の方法も含め,Mincle陽性細胞の単離を試み,性質を検討していく。2.脂肪組織線維化と脂肪組織機能障害の分子機構昨年度,コラーゲンプロモーター下でGFPを発現するCol1a2-EGFP Tgマウスに肥満を誘導し,活性化線維芽細胞を検討したところ,PDGFRα陽性GFP陽性細胞が存在することを見出した。また,非肥満マウスにおいても同様の細胞が存在することを見出した。今年度は,それらのマウスよりGFP陽性細胞を単離し,さらに,他臓器の線維化モデルを用いて,GFP陽性細胞の単離を試みた。今後,異なる臓器におけるGFP陽性細胞の性質を比較・検討していく。Mincle遺伝子プロモーター制御下にGFPとDTRを組み込んだレポーターマウスからのGFP陽性細胞単離は困難を極めたが,磁気ビーズを使用した方法を知る機会を得,現在,Mincle陽性細胞の単離を予定通り進めている。また,Col1a2-EGFP TgマウスからのGFP陽性細胞単離は,1匹のマウスより得られる細胞数が非常に少ないため大量のマウスを使用することとなり,マウス繁殖に時間がかかると考えられたが,飼育スペースが十分に確保できたことから,効率よく繁殖でき,順調に進んだ。1.Mincle活性化に関わる内因性リガンドの探索これまでの検討で,Mincle発現細胞は,炎症促進型のM1型,線維化を含む組織修復に関わるM2型の両者の性質を持ち合わせると考えられる。

その性質を検討するため,マクロファージ融合能を検討したところ,野生型マクロファージに比較して,Mincle欠損マクロファージでは,マクロファージ融合能が低下している可能性を見出した。肥満の脂肪組織におけるCLS(Crown-Like Structure)形成は,Mincle欠損マウスで減弱するため,CLS形成にマクロファージ融合能が重要であることが示唆された。今後,どのような分子が重要であるか明らかにし,脂肪組織炎症・線維化の分子機構解明に繋げたい。2.脂肪組織線維化と脂肪組織機能障害の分子機構肥満に伴う脂肪組織線維化は,内臓脂肪に特徴的である。そこで,肥満マウスの内臓脂肪の線維芽細胞と皮下脂肪の線維芽細胞を比較,検討する目的で,それぞれの組織からPDGFRα陽性細胞を単離し,検討に用いた。その結果,線維化した脂肪組織で増加するとされているPDGFRα陽性CD9陽性細胞(Cell Metab. 2017 Mar 7;25(3):673-685.)が,皮下脂肪に比較して内臓脂肪で顕著に多いことを見出した。さらに,肥満マウスの内臓脂肪由来PDGFRα陽性細胞は,皮下脂肪由来PDGFRα陽性細胞に比較して脂肪細胞分化能が極度に低下していることが明らかとなった。脂肪組織線維化に4ヶ月の時間を要する食餌誘導性肥満マウスに代わる短期脂肪組織線維化モデルの確立を試み,2週間でMincleの発現上昇,CLS(crown-like structure)の形成,脂肪組織の線維化が認められる脂肪組織虚血再灌流モデルを確立した。また,脂肪組織線維芽細胞の同定を試みた。コラーゲンプロモーター下でGFPを発現するマウスに高脂肪食負荷を行ったところ,内臓脂肪組織に存在するGFP陽性細胞はPDGFRαを発現することを見出した。さらに,内臓脂肪組織と皮下脂肪組織のPDGFRα陽性細胞は性質が大きく異なり,内臓脂肪組織PDGFRα陽性細胞は線維化促進型であることを見出した。今年度の進捗を生かし,病原体センサーMincleを介する細胞間クロストークと脂肪組織線維化の分子機構の解明を引き続き検討する。特に,Mincle内因性リガンドの探索に精力的に取り組みたい。Mincle内因性リガンドの探索は,今後,絞り込んでいく過程で種々の問題が生じると考えられるが,情報収集しながら効率よく行いたい。また,脂肪組織線維芽細胞の同定と他臓器の線維芽細胞との比較は,非常に興味深い課題であるので,精力的に取り組みたい。内分泌代謝学当該年度中に異動があり,新職場でのセットアップに集中し,一時的に研究が中断することがあったこと,旅費の補助が出る学会に参加したことなどより,計画よりも使用額が少なくなった。実験動物について,自家繁殖を効率よくできたため,購入動物が計画より少なくなった。また,高脂肪食負荷実験が予定より減ったため,高脂肪食飼料の購入額が減少した。他施設や海外からのマウス移送など(購入費,施設搬入のクリーニング費含む)の実験
すべりおよび双晶変形による亜鉛のECAP中における組織形成機構の解明

本年度は、集合組織の異なる5種類の純亜鉛多結晶材に1passのECAPを行い、これまでに明らかになっている純亜鉛単結晶のECAP材の変形挙動と比較を行った。本研究では、純亜鉛(99.99%)鋳造材と圧延材の試験片を用意した。圧延材は、鋳造材に対して、種々の条件で圧延を施し、底面が板面から圧延方向へ30度傾斜した集合組織を有した。その圧延材から集合組織の異なる4種類と鋳造材の5種類をECAP出発材とした。鋳造材の結晶粒径は951μmであった。ECAPは、試験片サイズは4mm×4mm×20mm、押出温度は276K、押出速度は1.7×10^(-5)m/sの条件で行った。ECAP加工後の鋳造材の平均結晶粒径は22.4μmまで微細化していた。ECAP加工後の組織が等軸粒であることから加工と同時に回復・再結晶が生じていると考えられる。また鋳造材では、二極化した集合組織が観察された。極点図の解析から、集合組織は、ECAP加工による底面すべりと<c+a>二次錐面すべりの活動により形成することが分かった。一方、4種類の集合組織材のECAP後の粒径はほぼ同程度で、17μm前後であった。このことから、純亜鉛多結晶材のECAP加工後の組織は初期方位に依存しないことが明らかとなった。また、純亜鉛多結晶材のECAP加工後の組織は、単結晶材のECAP加工後の組織と類似していた。さらに、集合組織も類似しており、その形成は底面すべりと<c+a>二次錐面すべりの活動によると考えられる。1passのECAP加工においては、純亜鉛多結晶材と純亜鉛単結晶材の変形挙動や組織は非常に類似していることが明らかとなった。当初の計画通り、まずは単結晶の結果と比較を行うことができたため、順調に進展していると判断した。今後は多数pass材の作製可否とその力学特性について検討予定である。今年度の結果から出発材の集合組織は微細化に影響を与えないことが明らかになったため、出発材の変更を考えている。(理由)昨年度、新規のECAP加工ダイスを作製予定であったが既存のものが使用できた。しかしながら、やはり新規にダイスを作製することが好ましいため次年度に合わせて使用する。(使用計画)今年度には当初の予定通りの執行を考えている