hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ペプチドホルモン受容体調節機構のエイジングに関する研究

ゴナドトロピン(FSH,LH)、プロラクチン,ゴナドトロピン放出ホルモン(GnRH)の受容体調節機構のエイジングに関する研究を行い、以下の成果を得た。1.ゴナドトロピン受容体のエイジング過程での変化の一つにダウンレギューレーションのあることをマウスで発見した我々の知見を解析する基礎として、LH受容体遺伝子のクローニングを行った。細胞外ドメインのホモロジーの高い部分をプローブとして、マウス精果cDNAライブラリーをスクリーングして陽性クローンを得た。現在なお同定を進めている。2.プロラクチン受容体のエイジング過程を解析するため、正常・下垂体移植マウスの子宮組織にプロラクチン受容体が存在することを確かめた。その結果、肝臓のプロラクチン受容体と同じ性質をもつ受容体がマウス子宮にも存在することがわかった。また、正常マウスでは若合と成獣とで子宮内におけるプロラクチン受容体に量的な差はなかった。しかし、長期間実験的に血中プロラクチン濃度を高く保つと、プロラクチン受容体量が増加し、子宮線筋症発現の原因の一つとなることがわかった。3.GnRHの分布は正中隆起だけでなく、脳内各所に認められる。特に、魚類ドワーフグラミに著しい、GnRH受容体が存在すれば何らかの生理的役割が権定されるが、この研究に先行して脳内分布の正確な地図を描く必要がある。GnRHニューロンの性質はいろいろと明らかになり、論文としていくつか公表したが、GnRH受容体のエイジングの研究は、現在進行中のGnRH受容体のクローニングが完成してからとなる。4.賢臓のバソプレシン受容体のエイジングに関する研究は、賢臓機能のエイジングに伴う変化の研究の形で進め、特に尿浸透圧を調べた。受容体と結合するホルモンを標識することにより,ホルモンー受容体複合体の細胞内行動を追跡し,受容体分化と標的器官の機能分化の関係を調べる。また,受容体分化に必要な液性因子を受容体定量により検索することを本年度の基本的な目的として,以下の成果を得た。1.ゴナドトロピン受容体調節機構でマウス精巣のFSH受容体について従来われわれが得たダウンレギュレ-ションの知見が,C57BL/6N以外の系統にもあてはまるか否かを調べ,BALB/C,BBA/2N系統にも同様の現象を認めた。次に,この現象を分子レベルで解析する第一歩として,受容体の遺伝子と蛋白質の情報を得る目的で,マウス精巣のゴナドトロピン受容遺伝子のクロ-ニングを試みた。クロ-ニングはマウス精巣cDNAで作製されたラムダバクテリオファ-ジライブラリ-を用いて行い,3個の陽性クロ-ンを得た。現在その同定を進めている。(朴,川島)2.プロラクチン受容体のエイジング過程を解析するため,プロラクチンの子宮に対する作用の基礎デ-タを得る目的で,子宮内膜組織をインスリン・トランフェリン・上皮増殖因子・コレラトキシン・牛血清アルブミンなどを添加したHam's Fー12とDMEMの混合培地中で培養する系を確立した。現在,培地にプロラクチンを添加し,内膜組織細胞の増殖率の変化を検討中である。また,子宮のプロラクチン受容体の局在をオ-トラジオグラフィ-で調べている。(守)3.魚類脳の終神経系にはゴナドトロピン放出ホルモン免疫陽性細胞があり,これは視束前野ー脳下垂体系の陽性細胞とは独立の構造をもち,機能分化している知見を得た。終神経のゴナドトロピン放出ホルモン陽性細胞群が神経修飾物質としてはたらいている可能性が,電気生理学・形態学(免疫電顕)・行動学的手法によって示唆された。(岡)ペプチドホルモン受容体調節機耕のエイジングに関する研究において,平成3年度に以下の成果を得た。(1)マウスでわれわれが発見したFSH受容体のダウンレギュレ-ションが,マウス一般の現象であるか否かを確かめるため数系統で比較したところ,ICR系雄マウスにC57BL系と同様の現象が認められた。(2)エイジングに併うマウス子宮のプロラクチン受容体量の変化を調べたところ,2か月齢の若いマウスに比べて,7か月齢の成熟マウスではその量が約1/2に減少していることが分った。しかし,生後1か月から同じ系統のマウスの下垂体を異所性移殖して高プロラクチン血症にしておくと,プロラクチン受容体量の減少は生じなしことも明らかになった。(3)ラットのゴナドトロピン受容体遺伝子はGータンパク質連結受容体ファミリに属し,このファミリの遺伝子で保存性の高い膜通過部位のDNA配列を用いて,マウスの精巣cDNAライブラリからクロ-ニングを行った。しかし,陽性反応を示した3つのクロ-ンを選別し塩基配列を調べた結果,ラットのゴナドトロピン受容体との共通性は見られなかった。この結果は精巣にはゴナドトロピン受容体以外にもGータンパク質と連結して情報を細胞に伝える受容体が存在することを示唆する。現在ラットとヒトの受容体の中でゴナドトロピン受容体に特異的に保存性の高い部位のcDNAを用い,再クロ-ニングを行っている。(4)ゴナドトロピン放出ホルモン(GnRH)の産生細胞である終神経細胞は,脊椎動物のペプチド作動性ニュ-ロンの神経修飾作用の研究モデルとして適していることが分った。

熱帯魚ドワ-フグ-ラミ-の脳標本を用い,終神経GnRH細胞の細胞内記録と細胞分染色により,終神経細胞の自発放電は膜の内因性の性質に起因していること,神経突起の投射域に存在するGnRH受容体を持つ細胞に作用する可能性が分った。ゴナドトロピン(FSH,LH)、プロラクチン,ゴナドトロピン放出ホルモン(GnRH)の受容体調節機構のエイジングに関する研究を行い、以下の成果を得た。1.ゴナドトロピン受容体のエイジング過程での変化の一つにダウンレギューレーションのあることをマウスで発見した我々の知見を解析する基礎として、LH受容体遺伝子のクローニングを行った。細胞外ドメインのホモロジーの高い部分をプローブとして、マウス精果cDNAライブラリーをスクリーングして陽性クローンを得た。現在なお同定を進めている。2.プロラクチン受容体のエイジング過程を解析するため、正常・下垂体移植マウスの子宮組織にプロラクチン受容体が存在することを確かめた。その結果、肝臓のプロラクチン受容体と同じ性質をもつ受容体がマウス子宮にも存在することがわかった。また、正常マウスでは若合と成獣とで子宮内におけるプロラクチン受容体に量的な差はなかった。しかし、長期間実験的に血中プロラクチン濃度を高く保つと、プロラクチン受容体量が増加し、子宮線筋症発現の原因の一つとなることがわかった。3.GnRHの分布は正中隆起だけでなく、脳内各所に認められる。特に、魚類ドワーフグラミに著しい、GnRH受容体が存在すれば何らかの生理的役割が権定されるが、この研究に先行して脳内分布の正確な地図を描く必要がある。GnRHニューロンの性質はいろいろと明らかになり、論文としていくつか公表したが、GnRH受容体のエイジングの研究は、現在進行中のGnRH受容体のクローニングが完成してからとなる。4.賢臓のバソプレシン受容体のエイジングに関する研究は、賢臓機能のエイジングに伴う変化の研究の形で進め、特に尿浸透圧を調べた。
皮膚疾患治療、アンチエイジング効果をもつ薬剤開発とその経皮吸収促進

両親媒性物質(amph.)との複合体形成が、美白剤であるhydroquinone(HQ)を安定、安全な成分にできることを明らかにしてきたが、今回それを発展させ、種々amph.とでHQ複合体形成を試み、その皮膚透過について検討した。複合体は単鎖、二本鎖各々を有するカチオン性amph.間で得られ、これらは単体HQに比べ熱安定性も増加していた。皮膚透過性実験では、HQに比べて、HQ複合体は高い皮膚移行性が見られた。アンチエイジング機能を持つポリフェノールの皮膚吸収には、低HLB値の非イオン性界面活性剤溶液を用いることが有効であった。皮膚疾患、特に色素沈着治療に対して皮膚科、形成外科専門医からその有用性に定評のあるhydroquinoneには酸素、光に対して不安定な性質がある。また皮膚刺激性も高く治療中に紅斑、かゆみ等が見られるケースも少なくなく専門医間で問題視されている。筆者のこれまでの研究において両親媒性物質と「複合体化」することにより、これら問題点を改善し、hydroquinoneの美白効果は維持したまま高い安定、安全性を持つ新規の美白成分として得ることに成功した。今回の本研究ではさらにこれまでの研究を発展させ、人体に適用可能な両親媒性物質を用いてのhydroquinone分子複合体について、皮膚透過性の検討を単体hydroquinoneと比較してFranz型拡散セルを用いて行い、皮膚への移行率をHPLC分析により算出した。その結果、hydroquinone単体の皮膚移行率に比べて、人体に適用可能な両親媒性物質との複合体としたhydroquinoneは高い皮膚移行性が見られ、複合体化することによる効果として確認できた。これは、界面活性剤が皮膚の角質層に対して良く相互作用し、薬物移行の増大を促したと考えられる。両親媒性物質は、薬物の吸収促進剤として良く知られているが、その機能が有効に働き吸収効果を高めたと思われる。新規に作製したhydroquinone分子複合体が、安定、安全性に優れるというこれまで筆者により得られている結果に加え、皮膚吸収性に富む皮膚疾患治療薬としてその有用性が期待できると思われる。両親媒性物質と色素沈着治療薬として良く知られているhydroquinoneとの複合体は、これまで単鎖を有する4級アンモニウム塩型両親媒性物質との間に得られることを明らかとしてきた。今回2本鎖を有するカチオン性両親媒性物質との間での生成を試みたところ単鎖を有する4級アンモニウム塩型両親媒性物質との複合体同様、結晶体として得ることができた。2本鎖を有するカチオン性両親媒性物質との分子複合体と、単鎖4級アンモニウム塩型両親媒性物質との分子複合体について、(1)熱に対する物質安定性、(2)皮膚吸収性を検討したところ(1)について両者とも複合体形成することにより単体hydroquinoneに比べ昇温に伴う揮発が抑えられていることがわかった。(2)皮膚吸収性について単体hydroquinoneと上記2種の分子複合体を用いて、Franz型拡散セルを使用して薬物(hydroquinone)の皮膚移行率を調べたところ、単鎖を有する4級アンモニウム塩型両親媒性物質とで形成された分子複合体が高い透過性を示した。またアンチエイジング効果を持つことで知られるポリフェノールとの分子複合体生成についても試みた。ポリフェノールは皮膚吸収性が低いことで知られる。HLBの比較的小さい非イオン性界面活性剤溶液を用いて皮膚透過実験を行うと皮膚吸収性の向上が見られることがわかった。今後この様な溶液からの結晶化を積極的に進め、両者間の相互作用をX線構造解析を用いて解明していきたいと考えている。
PPRコードを利用した細胞質雄性不稔の稔性回復因子の同定と創成

様々なアミノ酸多型を持つRf候補遺伝子の機能検定を生化学、計算科学的手法で行い、Rf遺伝子の機能性を司るアミノ酸群を詳細に明らかにした。さらに、オグラ型細胞質ダイコンのRf蛋白質が、ミトコンドリアCMS遺伝子であるorf125転写物の翻訳開始コドン直下に結合し、2次構造形成を促進することでorf125遺伝子を翻訳の段階で抑制することを明らかにした。CMS遺伝子の発現を不活化するカスタムPPR蛋白質の構築を行った。いくつかの人工PPRタンパク質と予想したRNA配列との特異的な結合を得ることができた。BT型細胞質不稔イネのCMS遺伝子の発現を阻害する分子ツールの開発を行った。(1) Rfとして働く天然型PPR蛋白質の予測と同定(a)様々なアミノ酸多型を持つRf様遺伝子の機能検定オグラ型細胞質ダイコンを材料に様々なアミノ酸多型を持つRf候補遺伝子の機能検定を行う。オグラ型細胞質のRfとして働くorf687遺伝子では、数箇所のアミノ酸多型でその機能性(稔性回復における優性もしくは劣性)が変化する。H25年度は様々なダイコン品種、数十種、を材料に供し、計算科学による予測を行い、CMS遺伝子との結合を計算科学的に予測した。また、研究代表者らはオグラ型細胞質ダイコン(CMS遺伝子orf125;Rf遺伝子orf687)では、16個のPPRモチーフを持つRf蛋白質が、ミトコンドリアCMS遺伝子であるorf125転写物の翻訳開始コドン直下に結合し、2次構造形成を促進することでorf125遺伝子を翻訳の段階で抑制することを生化学的な手法で明らかにした。b)未同定Rf遺伝子の同定Rf遺伝子が未同定のCMS系統について、潜在的なRf-PPR遺伝子を推測し、遺伝学的な解析と合わせて、Rf遺伝子の高速同定法を確立する。H26年度はイネCMSを用いて、該当する核ゲノム領域中のPPR遺伝子を抽出し、潜在的なCMS遺伝子と考えられるorf352と配列特異的に結合するPPR遺伝子を予測した。(2) PPR蛋白質の改変によるカスタムRfの創出PPRコードを用いて、CMS遺伝子の発現を不活化するカスタムPPR蛋白質の構築を行う。最初の実験材料として、いまだRf遺伝子が同定されていないCW型細胞質イネのCMS原因遺伝子orf307に特異的に結合し、不活化するカスタムPPR蛋白質を構築する。H25年度は迅速な評価が可能な酵母モデル系(RNA・蛋白質の相互作用を検証するthree-hybrid法)を用いて、カスタムPPR蛋白質のRNA結合特性を解析したが、酵母実験系で再現性のある結果が得られなかった。異なるアッセイ系の確立が必要と考える。(1) Rfとして働く天然型PPR蛋白質の予測と同定(a)様々なアミノ酸多型を持つRf様遺伝子の機能検定H25年度に予測した様々なダイコン品種、数十種、の実際の遺伝子機能の判定を行い、予測との比較を行った。(b)未同定Rf遺伝子の同定H25年度に予測したorf352に作用する候補PPR遺伝子を順次HL-CMSイネに導入し、予測の結果を検証について実験的な検証を行った。(2) PPR蛋白質の改変によるカスタムRfの創出本年度は、昨年度の結果を踏まえて、構築したカスタムPPRタンパク質の機能性を動物培養細胞で検証する実験系を確立した。また、新たな生化学的な実験系として、alpha screen法によってタンパク質とRNAとの結合を解析する実験系を確立した。これら実験系を基に、いくつかの人工PPRタンパク質を構築、検証したところ、予想したRNA配列との特異的な結合を得ることができた。(1) Rfとして働く天然型PPR蛋白質の予測と同定(a)様々なアミノ酸多型を持つRf様遺伝子の機能検定H27年度は、これまでのオグラ型細胞質ダイコンRf遺伝子の機能性の予測値と実測値についての解析を行った。予測プログラムへの反映を行った。(b)未同定Rf遺伝子の同定遺伝学的に優性のRf遺伝子として働くことが明らかになったPPR遺伝子について、ミトコンドリアorf352遺伝子mRNAとの結合を生化学的に検証した。具体的には、当該PPRの組換えタンパク質をコムギ胚芽無細胞系により調製し、ゲルシフト法、アルファスクリーン方などの生化学的な手法で、orf352遺伝子mRNAとの結合を検証した。(2) PPR蛋白質の改変によるカスタムRfの創出BT型細胞質不稔イネのCMS遺伝子であるorf79に特異的に作用し、編集(C→Uへの変換)することで、タンパク質コード領域に新たな翻訳終止コドンを形成し、CMS遺伝子の発現を阻害する分子ツールの開発を行った。動物培養細胞で当該分子ツールの検証を行った。具体的には複数個のPPRモチーフを人工的に連結することで、目的とするカスタムPPR分子を設計し、全遺伝子合成により目的DNA断片を得た。設計したPPR分子の配列特異的なRNA結合能を動物培養細胞で検証した。目的とする性質が検証できたPPR分子にRNA編集を補助するエフェクタードメインを連結し、解析に用いた。

さらに、オグラ型細胞質ダイコンのRf蛋白質が、ミトコンドリアCMS遺伝子であるorf125転写物の翻訳開始コドン直下に結合し、2次構造形成を促進することでorf125遺伝子を翻訳の段階で抑制することを明らかにした。CMS遺伝子の発現を不活化するカスタムPPR蛋白質の構築を行った。いくつかの人工PPRタンパク質と予想したRNA配列との特異的な結合を得ることができた。BT型細胞質不稔イネのCMS遺伝子の発現を阻害する分子ツールの開発を行った。(1) Rfとして働く天然型PPR蛋白質の予測と同定、に関して、目的とした課題を達成しつつある。(2) PPR蛋白質の改変によるカスタムRfの創出、に関して、モデルアッセイ系を構築することができ、カスタムRf分子の設計が完了しつつある。27年度が最終年度であるため、記入しない。植物分子生物学計画通りに研究を進める。H25年度に注力したカスタムPPR蛋白質のモデル実験系の確立において予想した結果が得られなかったため。年度末時に予定していた研究が次年度に若干ずれこんだため27年度が最終年度であるため、記入しない。(1) Rfとして働く天然型PPR蛋白質の予測と同定、についてはH25年度の結果に立脚し、研究を進める。(2) PPR蛋白質の改変によるカスタムRfの創出、については、ほ乳類培養細胞によるアッセイ系の確立、および試験管内での分子力学的な解析を行うとともに、植物個体内での効果を検証する。次年度使用額77502円は研究試薬費として使用する。年度末の不足な試薬購入に備えたため。試薬の購入など、有効な予算執行を計画している。
bcl-2アンチセンスオリゴDNAによる尿路性器癌遺伝子治療の基礎的研究

1.腎癌細胞株および膀胱癌細胞株でのbcl-2の発現の検討(1)腎癌細胞株での発現RT-PCRおよびイムノブッロトで検討した7種の細胞株でmRNAレベル、蛋白レベルともに高度の発現が見られた。この中で、ACHNは比較的中程度の発現であった。(2)膀胱癌細胞株での発現同様に検討したところ、mRNAはすべてで発現が見られ、蛋白はRT-4では低発現、他の3種類では高発現であった。2.bcl-2アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASODN)のbcl-2発現に対する効果の検討(1)腎細胞癌細胞株での検討ASODNをACHN,KRC/Yに対し作用させ、bcl-2発現の程度を検討したが,他癌種の細胞株でbcl-2発現抑制に効果的であった20uMの濃度でもbcl-2の発現に変化は見られなかった。(2)膀胱癌細胞株での検討bcl-2高発現細胞株であるT24について検討した。この結果、ASODNの濃度依存性にbcl-2発現の抑制が見られた。(3)bcl-2の発現抑制とアドリアマイシン(ADR)によるアポトーシスT24細胞を血清非添加に培養したところ、ASODN添加細胞で軽度の増殖抑制とアポトーシスが観察された。ASODNとADRの双方を作用させたところ,T24のアポトーシスは著名に増強された。1.腎癌細胞株および膀胱癌細胞株でのbcl-2の発現の検討a.腎癌細胞株での発現RT-PCRおよびイムノブッロトで検討した7種の細胞株でmRNAレベル、蛋白レベルともに高度の発現が見られた。b.膀胱癌細胞株での発現同様に検討したところ、mRNAはすべてで発現が見られ、蛋白はRT-4では低発現、他の3種類では高発現であった。2. bcl-2アンチセンスオリゴヌクレオチドのbcl-2発現に対する効果の検討a.腎細胞癌細胞株での検討転写開始コドンから20塩基にたいするS化アンチセンスオリゴヌクレオチドを作成した。これをbcl-2高発現株のKRC/Yにたいし、リポソームとともに種々の濃度で作用させ、イムノブロット法でbcl-2発現の程度を検討した。他癌種の細胞株でbcl-2発現抑制に効果的であった20uMの濃度でもbcl-2の発現に変化は見られなかった。b.膀胱癌細胞株での検討同様にbcl-2高発現細胞株であるT24について検討した。この結果、アンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度依存性にbcl-2発現の抑制が見られた。3. bcl-2の発現抑制とアポトーシスT24細胞を血清非添加に培養したところ、bcl-2アンチセンスオリゴヌクレオチド添加細胞でアポトーシスが観察された。bcl-2アンチセンスオリゴヌクレオチドのbcl-2発現に対する効果の検討1.腎細胞癌細胞株での検討転写開始コドンから20塩基にたいするS化アンチセンスオリゴヌクレオチドをbcl-2高発現株のKRC/Y,bcl-2中等度発現株ACHNにたいし、種々の濃度で作用させ、イムノブロット法でbcl-2発現の程度を検討した。他癌種の細胞株でbcl-2発現抑制に効果的であった。20uMの濃度でもbcl-2の発現に変化はみられなかった。さらに,ACHNでこのアドリママイシンの殺細胞増強効果を検討したところアンチセンスのみならず,センスオリゴヌクレオチド単独でも殺細胞効果が見られた.ACHNでは非特異的反応が見られたと考えられる。2.膀胱癌細胞株での検討(1)膀胱癌細胞株での検討bcl-2高発現細胞株であるT24について検討した。この結果、ASODNの濃度依存性にbcl-

2発現の抑制が見られた。(2)bcl-2の発現抑制とアドリアマイシン(ADR)によるアポトーシスT24細胞を血清非添加に培養したところ、ASODN添加細胞で軽度の増殖抑制とアポトーシスが観察された。ASODNとADRの双方を作用させたところ,T24のアポトーシスは著名に増強された。
人文系研究者のためのポータブル型日本語方言音声分析システムの開発研究

本研究では、ポータブル型のノートパソコンを用いて、高価なソナグラム等の実験機器と同等以上の分析機能を持ちながら、人文系の研究者にも使い易く、さらに、方言調査の現地、研究室、教室等へ携帯可能な対話型の音声分析システムを開発した。本研究を要約すると以下のようになる。1.小型音声入出力装置の開発:音声の入出力に必要な機能を全て組み込み、携帯に便利なオールインワンタイプの小型音声入出力ボードを、企業の研究者と共同で開発した。この装置には、高精度の16ビットA/DとD/A変換素子を使用し、長時間の音声が入出力可能なように、FIFO(First-In-First-Out)メモリーを有しマルチサンプリング周波数に対応できる種々の機能を持っている。2.対話型長時間音声分析プログラムの開発:計算機に関する知織を持つ工学系の研究代表者が、音声分析プログラムを開発した。この音声分析システムでは、10kHzサンプリングで最大12分の長時間音声を処理でき、ホルマント周波数軌跡、基本周波数軌跡、ソナグラフ、音響特徴量(波形、スペクトル、声道断面積関数、音声パワー、ゼロクロス数等)を、対話的に分析処理可能である。また、人文系の研究者にも使い易くするため、メニュー方式のコマンドインタフェースを用いていると同時に、多量に音声データを処理するため、一括処理による分析も実行できるようになっている。3.システムの評価:国語方言学に関する知識を持つ人文系の研究分担者により、実際にシステムの評価を行った。この結果、対話型であり長時間音声の処理が可能であるため、音声分析処理の効率を高めることができ、商用電源を使用して、現地や教室でも使用できることが分かった。方言音声は、学校教育やテレビ等の影響により変化しつつあり、急速に方言が矢われつつある現在、方言音声の音響分析による記述と比較の研究は、日本文化や社会的な観点から非常に緊急で重要な課題となっている。このため、本研究では、ポ-タブル型のノ-トパソコンを用いて、高価なソナグラムの実験機器と同等以上の音響分析機能を持ち、さらに、人文系の研究者にも使い易く、方言調査の現地へ携帯可能な対話型の音声分析システムを開発することを目的として研究を行った。1.音声分析システムのハ-ドウェアとして、企業に所属する共同研究者と数回の研究打ち合せを行い、ノ-ト型パソコンにケ-ブルを介して接続可能な、小型のディジタル音声入出力装置を試作した。この装置には、アンプ、低域通過フィルタ、A/D,D/A変換器等の方言音声のディジタル入出力に必要な機器の全てを含んでいるにもかかわらず、LSIを用いて1枚のボ-ド内に納めることに成功し、ポ-タブル化に必要な小型化を実現した。また、あらゆるディジタルソ-スに対応するため、低域通過フィルタの遮断周波数をプログラム可変とする機能を付けた。2.音声分析システムのソフトウェアとして、(1)音声を視覚化表現するソナグラフ(声紋)を表示する機能、(2)方言のアクセント記述のための基本周波数の抽出機能、(3)方言の母音体系の記述のための調音位置を表すオホルマント周波数の抽出機能、さらに、(4)方言の拍数の記述のための音素の持続時間の計測の機能等を、実現するプログラムを作成した。特に、パソコンの拡張メモリ機能を用いることにより、長時間の方言音声を、連続的に分析処理することが可能となった。3.人文系研究者が、実際に日本語方言音声の収集と分析処理を行うことにより、システムの問題点を整理し、次年度への研究課題とした。本研究では、ボータブル型のノートパソコンを用いて、高価なソナグラム等の実験機器と同等以上の分伏機能を持ちながら、人文系の研究者にも使い易く、さらに、方言調査の現地、研究室、教室等へ携帯可能な対話型の音声分析システムを開発した。1.小型音声入出力装置の開発:音声の入出力に必要な機能を全て組み込み、携帯に弁利なオールインワンタイプの小型音声入出力ボードを、企業の研究者と共同で開発した。

この装置には、高精度の16ビットA/DとD/A変換素子を使用し、長時間の音声が入出力可能なように、FIFO(First-In-First-Out)メモリを有し、マルチサンプリング周波数に対応できる種々の機能を持っている。2.対話型長時間音声分析プログラムの開発:計算機に関する知識を持つ工学系の研究代表者が、音声分析プログラムを開発した。この音声分析システムでは、10kHzサンプリングで最大12分の長時間音声を処理でき、ホルマント周波数軌跡、ソナグラフ、音響特徴量(波形、スペクトル、声道断面積関数、音声パワー、ゼロクロス数等)を、対話的に分析処理可能である。また、人文系の研究者にも使い易くするため、メニュー方式のコマンドインタフェースを用いていると同時に、多量の音声データを処理するため、一括処理による分析も実行できるようになっている。3.システムの評価:国語方言学に関する知識を持つ人文系の研究分担者により、実際にシステムの評価を行った。この結果、対話型であり長時間音声の処理が可能であるため、音声分析処理の効率を高めることができ、商用電源を使用して、現地や教室でも使用できることが分かった。
「閉じこもり」高齢者の寝たきり化予防のための介入研究

目的:(1)外出の程度から「閉じこもり」を測定するスクリーニング尺度を作成し、信頼性、妥当性を検討する。(2)地域における「閉じこもり」高齢者に対する健康情報の提供とライフレビューを用いた介入プログラムを作成し、その有効性を検討する。(3)痴呆予防事業の「閉じこもり」予防との関連による予防プログラムを検討する。対象と方法:(1)福島県某市A地区在住の70歳以上のうち介護保険利用者を除いた住民全員を対象とした(2001年は822名、2002年は590名)。信頼性の検討は平行テスト法で行う。妥当性は「閉じこもり」に関連する項目に対する感度、特異度で検討する。(2)上記(1)と同じ対象を用いた。2001年の訪問調査対象者のうち、「閉じこもり」と判定された74名から痴呆、聴覚の障害がある人を除いた64名が対象。対象を介入群と対照群の2群に無作為に分け、介入群に対し週1回、計6回の介入を行った。(3)石川県T町で平成13年の「すこやか健診」を受診した65歳以上の高齢者を対象とし、平成14年度のアンケートを配布し、466名のデータを回収した。結果:(1)「閉じこもり」スクリーニング尺度と同質とみなせる「障害老人のための自立度判定基準(1991)」との相関は0.367(P<.01)であった。妥当性では、感度は30.360.9%、特異度は79.691.9%の範囲であった。概ね使用可能な指標と考えられた。(2)介入により「閉じこもり」の解消にまでは至らなかったが、介入群では生活体力で有意に維持・改善していた。「閉じこもり」高齢者に対する本プログラムの有効性が示唆された。(3)「閉じこもり」状態ともの忘れ状態に、ある程度は関連がみられた。「閉じこもり」予防と痴呆予防とを包含した対応が今後重要と考えられる。1.「閉じこもり」スクリーニング測定尺度の開発を目的として、先行文献での情報収集と分析を行った。Medlineや医学中央雑誌等を用いて国内外の文献を収集した。Medlineで「閉じこもり」とほぼ同義と考えられるHousebound/Homeboundをキーワードとして検索すると196件が拾い上げられた。これらの文献でHousebound/Homeboundの概念等に関して分析を行った。「閉じこもり」と同様に、Housebound/Homeboundは用いる研究者によりかなり違っており、使用目的によって使い分けられていることが明らかになった。2.上記の文献等を参考に、「閉じこもり」を操作的に定義し、外出頻度を軸とした「閉じこもり」のスクリーニング尺度の開発を行った。そして、この尺度を用いてプリテストの実施した。対象は、平成12年4月1日現在、石川県某町に居住する一人暮し高齢者245名のうち9月の調査時点で在宅の一人暮しの117名であった。質問紙の内容は基本属性、スクリーニング尺度、日常生活自立度の判定基準、バーセルの日常生活自立度、老研式活動能力指標、高齢者うつ状態尺度、日常生活動作自己効力感尺度、家族・友人との交流手段と交流頻度、生きがいの有無、独居年数、生活場所等である。

特に、75歳以上である後期高齢者56名について検討すると、「閉じこもり」は、非「閉じこもり」と比べ、有意に身体能力が低く、抑うつ状態得点が高く、生きがいありの人が少なく、独居年数が長かった。今回開発した「閉じこもり」スクリーニング尺度は、先行研究で言われている身体的、心理精神的、社会的に虚弱な傾向である高齢者をスクリーニングできる可能性があることを示していた。3.次年度以降に実施を予定しているスクリーニング尺度の妥当性を検証するための研究、及び、介入研究のデザイン等に関する検討を行った。目的:(1)外出の程度から高齢者の「閉じこもり」を測定する「閉じこもり」スクリーニング尺度を作成し、その信頼性、妥当性を検討する。(2)地域における「閉じこもり」高齢者に対する心理療法をメインとする介入プログラムの作成とその実施の可能性を検討する。対象:(1)2001年福島県某市A地区在住の70歳以上の全住民614名(男性188名、女性426名)のうち、介護保険利用者は除き、会場面接と訪問調査を実施し546名のデータが得られた。(2)上記の訪問調査対象者253名のうち、「閉じこもり」と判定された人が74名(男性25名、女性49名)であった。さらに、介入研究の除外基準とした痴呆、聴覚の障害がある人を除き64名が対象となった。介入研究は「閉じこもり」と判定された人を介入群と対照群の2群に無作為に分け、介入群に対し週1回、計6回(6週間)の介入を行った。介入の内容は心理療法の一つである回想法と健康情報の提供である。結果:(1)「閉じこもり」スクリーニング尺度の信頼性の検討を平行テスト法で行った。「閉じこもり」スクリーニング尺度と同質とみなせる「障害老人のための自立度判定基準(1991)」との相関は.545であった。また、妥当性は同時に調査した項目を用いて、感度、特異度で検討した。その結果、生活体力尺度項目のうち、「早足で他人を追いこすことができる」の感度は80.4%、特異度は51.5%となり、「飛び上がることができる」の感度は79.5%、特異度は52.9%であった。感度は54.580.4%、特異度は51.594.0%の範囲であった。(2)介入群のうち、6回全て継続した人は18名だった。介入の実施可能性を検討するため、対象者の発言の回数、意欲、表情、雰囲気など8項目で検討すると、いずれも回数が増えるほど、対象者の反応が良くなっており、「閉じこもり」高齢者に対する本プログラムの実施可能性が示唆された。目的:(1)外出の程度から高齢者の「閉じこもり」を測定するスクリーニング尺度を作成し、その信頼性、妥当性を検討する。(2)地域における「閉じこもり」高齢者に対する健康情報の提供とライフレビューを用いた介入プログラムの作成とその有効性を検討する。対象:(1)福島県某市A地区在住の70歳以上うち介護保険利用者を除いた住民全員を調査対象とした。2001年は、985人(男358名、女627名)の中、介護認定者163名を除外した822名を、2002年は1019名(男371名、女648名)の中、介護認定者139名を除外した880名を調査対象とした。会場面接と訪問調査を実施し、2002年は590名(男性223名、女性367名)のデータが得られた。(2)2001年の訪問調査対象者のうち、74名(男25名、女49名)が「閉じこもり」と判定された。除外基準とした痴呆、聴覚の障害がある人を除き64名が対象となった。
住宅の温熱環境が居住者へ与える影響の定量的評価

本研究では以下の検討を実施した。(1)厚生労働省より人口動態統計データを入手し、死因と気象条件の関連性を死亡場所別、地域別に分析した。(2)在宅医療・看護を実施している医療機関の協力を得て、室内温熱環境と生理データを同時に計測し、室内温熱環境が身体へ与える影響を把握した。(3)入浴前後の室内温熱環境と生理データ(血圧、心拍数)を同時に計測し、室内温熱環境が身体へ与える影響を把握した。(4)住宅内の室温分布データを活用し、室温分布発生の要因分析を行い、室温確保に必要な住戸の断熱性能・必要なエネルギー消費量を把握した。(5)安全と健康に配慮した住宅計画・住環境計画の指標を作成した。1.人口動態統計による死因の分析と気象条件との関連性評価厚生労働省の人口動態統計データを目的外使用で入手し、各地のアメダスデータと関連付け、死亡率の季節依存性が高い心疾患、脳血管疾患、呼吸器疾患と外気温度との関係を検討した。その結果、月平均気温の低下に伴い自宅での死亡率が病院と比較し顕著に増加した。また、月平均外気温度と65歳以上の死亡リスクの関係をオッズ比(15-20°Cを1)で評価すると、心疾患では四国・東海・中国、脳血管疾患では中国・四国・東海、呼吸器疾患では九州沖縄・四国・東海の順で死亡リスクが高い。さらに、住宅土地統計データを活用した建物性能と死亡リスクの関係を評価すると、木造住宅の比率が高く、築年数の大きな住宅の比率が高い地域ほど、死亡リスクが高くなった。2.在宅医療・看護時の室内温熱環境が身体へ与える影響の実態把握医療施設による在宅医療実施時に得られた74人の生理データを用い、住宅の温熱環境と高齢者の生理データとの関連性を調査・分析した。その結果、10°Cの室内温度低下に対して約10mmHgの血圧上昇があった。夏季から冬季という季節の変化に対して被験者74人中全員で室温が低下し65人で血圧の上昇がみられた。低断熱の住宅では室内での温度差が大きく、それにより血圧変動が生じ血圧障害を起こす危険性を把握した。3.入浴環境が身体へ与える影響の実態把握札幌と福井の65歳以上の被験者17人を対象に、冬期の入浴時における室温変化に対する高齢者の血圧変化を明かにするため、入浴時の温熱環境と生理データの計測を行った。その結果、居間から脱衣室へ移動した際、室温低下に対する収縮期の血圧上昇の相関は、福井の方が札幌よりも顕著であった。その理由は、札幌の住宅の方が外気温度は低いにも関わらず、居間および脱衣室の温度が高くなっているためである。また、室温低下が5°C以上になると、80%の確率で上昇することを明らかにした。季節と健康に関する研究は生気象学・公衆衛生学に関する分野であり、既に多くの研究がなされている。しかし、自宅における死亡実態の把握は十分でなく、また冬期に心疾患や脳血管疾患が多いことが分かっても、具体的な対策は十分とはいえない。本研究では、1人口動態統計を用いた分析による住環境と死亡の関係の明確化、2居住者を対象にした住環境変化による身体へ与える影響の実態把握、3室温確保に必要な住戸の断熱性能・必要なエネルギー消費量把握までを一貫して行い、安全と健康に配慮した住環境計画の指標作成を目的に以下の事項を実施した。これにより、住宅の熱性能と自宅での死亡率の変化を明らかにした。(2)在宅医療・看護を実施している医療機関の協力を得て、室内温熱環境と生理データ(血圧、心拍数)を同時に計測し、室内温熱環境が身体へ与える影響を把握した。これらの成果は、省エネルギー基準見直し、健康維持増進住宅の研究に有用な基礎資料となり、高齢者対策・福祉の向上に寄与できるものと考えている。平成23年度から実施している本研究では、1人口動態統計を用いた分析による住環境と死亡の関係の明確化、2居住者を対象にした住環境変化による身体へ与える影響の実態把握、3室温確保に必要な住戸の断熱性能・必要なエネルギー消費量把握までを一貫して行い、安全と健康に配慮した住環境計画の指標作成を目的に以下の事項を実施した。

1.人口動態統計による死因の分析と気象条件との関連性評価:厚生労働省より新年度(平成22年1月12月)の人口動態統計データを入手し、死因と気象条件の関連性を死亡場所別、地域別に分析し、過去(平成14年平成21年)と比較した。その結果、外気温度と死亡率の関係において、病院ではいずれの地域も外気温度に対する死亡リスクの変動は見られないが、自宅では温暖な地域ほど外気温度が低下した場合の死亡リスクが増大することを明らかにした。また、アメダス気象データとの関連付けを行い、都道府県別外気温度影響度を定量化した。さらに、最寒日からの日数と死亡率の関係を分析評価した。2.在宅医療・看護時の室内温熱環境が身体へ与える影響の実態把握:今年度は福井県および兵庫県内で、在宅医療・看護を実施する際、室内温熱環境と生理データ(血圧、心拍数)を同時に計測し、室内温熱環境が身体へ与える影響を把握した。その結果、室内環境の温度差が大きな対象のデータも加わり、室温の低下と収縮期の血圧上昇の関係を定量化した。3.入浴環境が身体へ与える影響の実態把握:福井県を中心に、入浴前後の室内温熱環境と生理データ(血圧、心拍数)を同時に計測し、室内温熱環境が身体へ与える影響を把握した。4.住宅内温度の分析と基礎室温の提案:全国の住宅内温度分布の実測結果から室温分布発生の要因分析を行い、室温確保に必要な住戸の断熱性能・必要なエネルギー消費量を把握した。人口動態統計データの入手、実測調査は概ね予定通り実施できた。25年度が最終年度であるため、記入しない。1.人口動態統計による死因の分析と気象条件との関連性評価:厚生労働省より新年度(平成22年1月12月)の人口動態統計データを目的外使用の申請で入手し、死因と気象条件の関連性を死亡場所別、地域別に分析し、過去(平成14年平成21年)と比較評価している。最新のデータは2年前であり、毎年申請を行い入手する必要がある。アメダスデータとのリンク方法も計算機上で自動化するソフトウエアを開発し、分析の効率向上を図っている。前年度から、最寒日からの日数と死亡率の関係に関し、統計的な手法を駆使し分析を進めている。この検討は当初の予定にはないが、興味深い成果が期待できる。2.在宅医療・看護時の室内温熱環境が身体へ与える影響の実態把握:これまで、北海道(夕張市)、福井県(福井市)および兵庫県内(神戸市)で、在宅医療・看護を実施する際、室内温熱環境と生理データ(血圧、心拍数)を同時に計測し、室内温熱環境が身体へ与える影響を把握している。在宅医療を実施する医師の協力を得ながら進めているため、サンプル数には限界があるが、粘り強く継続している。3.入浴環境が身体へ与える影響の実態把握:北海道(札幌市)および福井県(福井市)を中心に、入浴前後の室内温熱環境と生理データ(血圧、心拍数)を同時に計測し、室内温熱環境が身体へ与える影響を把握している。この課題もサンプル数を増やすことに苦慮しているが、得られた結果から、室内環境と血圧等の生理データの相関が明らかになってきている。4.住宅内温度の分析と基礎室温の提案:全国の住宅内温度分布の実測結果から室温分布発生の要因分析を行い、室温確保に必要な住戸の断熱性能・必要なエネルギー消費量を把握している。分析に必要なデータの入手は概ね完了している。以上の成果から、住環境における「住環境危険注意報」の立案と「建築計画・住環境計画の改善」提案としてまとめる。実測調査ではサンプル数の確保が要になる。
チェコ・ナショナリズムの音楽表象と民族的アイデンティティ獲得の為の闘争

本課題研究の目的は、近現代におけるチェコ芸術音楽の表象を「ナショナリズム」の視座から解明することにある。最終年度の主な研究成果は、1)2018年3月29日に東京大学(本郷キャンパス)で開催された「日本スラヴ学研究会大会」での招待講演「チェコ国民オペラの創造ーB.スメタナの喜歌劇《売られた花嫁》にみる『チェコ性』のイメージ」をもとに、約3万字超の学会誌論文(招待論文)を『スラヴ学論集Slavia Iaponica (第22号)』(シンポジウムI;印刷中)に寄稿したことにより、音楽とチェコ語表現の問題も含め、本課題研究を総括するに至ったといえる。本論文では、19世紀後半における「国民オペラ」の理念を紐解きながら、チェコ国民楽派の始祖B.スメタナ(1824-84)が、「祝祭劇」という一つの「仮説」としての「チェコ国民オペラ」のありようを提示した点を論じるとともに、当時、彼自身が希求した「チェコ国民オペラ」の本質的条件を解明することができた。また本研究期間全体を通して、民族主義の主要な様相である「英雄的なるもの」としての連作交響詩の分析とともに、他方で「素朴さ」のシンボルとしての田園生活を描写した《売られた花嫁》等にみる現実主義を表徴する(民族主義の)多彩な方向を通して、当時、危機に瀕したチェコ語を基軸に、「詩と音楽の統合」を強調しつつ、特に後者では「チェコ語デクラマツィオーン」という言葉と音の関係性から、音楽表象にみる「チェコ性」の問題を多面的に追求し、民族的アイデンティティ獲得に向けたスメタナの創作の道程を詳細に洞察することにより、本課題を集大成することができたと考える。2)加えて本年度は、『東欧文化事典』の第4章音楽:クラシック「A.ドヴォルジャーク」の項目を、「スラヴ時代への道程」「作曲家としての名声と栄光」「不当な評価と擁護論」という観点から執筆した。本研究の目的は、主に19世紀から20世紀初頭の、まさに世紀の転換期における「チェコ芸術音楽」の動向を「民族性の獲得」という「文化ナショナリズム」の視点から繙くことにある。こうした「近代チェコ音楽」の成立に向けた動きの中で、H27年度は、具体的に芸術表現に組み込まれたメッセージやメタファーを解読すべく、スメタナの喜歌劇を分析することで、「チェコ性」がどのように決定されていったのかを解明した。その成果は、1)「19世紀『国民オペラ』の表象ーB.スメタナの喜歌劇と地方色(ローカル・カラー)の描写ー」という研究課題について、既に4月下旬に開催の「民族藝術学会第31回全国大会」での発表をもとに、同学会誌に論文を投稿し、採択・発行された。また、2)「中欧のチェコにおける『民族主義オペラ』の変遷ー『ボヘミア楽派』から『モラヴィア・フォークロア主義』へ」をテーマとする研究を遂行し、民族的アイデンティティを軸とした「チェコ・ナショナリズムの様式上の変遷」をスメタナからヤナーチェクに至る系譜として明らかにすることができた。さらに、3)音楽の「ナショナリズム論」を基礎づけるために、「19世紀『ナショナリズムの音楽』の美学」と題して『地域学論集』(鳥取大学地域学部紀要)に論考を纏め、ナショナリズムの音楽現象の前提をなす「地方性への回帰と歴史的合意」について洞察し、「チェコ国民オペラ」の成立と「ローカル・カラー」の描写の意味を、単に固有性としてではなく、19世紀という時代を貫徹する普遍的条件として捉えることで、「ナショナリズムの音楽」の理念と解釈の問題について論究した。特にH27年度は、チェコ国民音楽の創始者であるスメタナのオペラ作品に注目し、「チェコ性」を喚起する要因とは何かを分析・追究しつつ、「ナショナリズムの音楽」の解釈とその前提条件の一事例を明解に示すことができたと考える。本研究課題は、H.27年度10月下旬の採択であり、故に研究期間は5ヶ月程残されていたに過ぎなかったが、既に研究のプロローグとして、同年4月26日の「民族藝術学会大会」での発表を通して、本研究に関する活動を始動させていた為に、まず「国民オペラ」を通して明示され得る「チェコ性」についての考察を、さらなる資料を通して進展させた結果、同学会誌に論文を投稿、採択されるに至った。同時に、その基礎学としての、「音楽のナショナリズム論」を展開させつつ、何よりも音楽作品における「チェコ性」のイメージ形成のプロセスや、「国民オペラ」を構成すると見られる諸要素について、詳細な分析を試みることができたと考える。加えて新国立劇場(東京)のオペラ解説誌に、そうした「チェコ性」の内容を包含する「民族主義オペラの系譜とその様式上の変遷」を軸とする招待論文を纏め上げたことも大きな成果といえる。その他、地元管弦楽団によるA.ドヴォルジャーク公演に際し、ドヴォルジャークの音楽に関する「インタビュー記事」の執筆を通して、その「スラヴ性」に関する論考が、さらに本課題研究を、次年度の研究内容へと発展させる一つの契機になったと考えることができること等が、その主な事由として挙げられる。本研究の目的は、近現代における「チェコ芸術音楽」の動向を「ナショナリズム(民族主義)」という視点から繙くことにある。19世紀「チェコ民族主義の音楽」は、「素朴なるものと英雄的なるもの」(J.Samson)として顕現したと考えられ、前者はフォークロア主義や田園の生活・情景を象徴化した、所謂「地方色(ローカル・カラー)」として表出されたといえる。

そうした前年度の研究を踏まえた上で、H28年度は、1)まず後者の、チェコ近代音楽における「英雄的なるものの表象」の研究に取り組み、主にチェコ古代の神話やカレル四世の歴史、何よりも中世期の「フス教徒運動」といった文化的・歴史的記憶に基づく音楽表象に注視して、特にB.スメタナの連作交響詩《わが祖国》(地誌的標題に基づく交響詩)を例に、チェコ民族の音芸術とそこに描写された聖地にまつわる歴史的イメージがどのように結びついて「ナショナルな表現」へと昇華されて行ったのかを明らかにした。中でもチェコ建国の女神を描いた「リブシェ神話」やチェコ人の精神的支柱を担うとされた「フス教徒運動」の音楽表象を通して(《わが祖国》第一曲と第五曲)、スメタナの民族主義思想の深層を読み解くとともに、チェコ人にとって「ナショナルなもの」の原点とは何か、さらに空想と現実が交錯する中で、民族にとって「神聖なる土地」が意味するものとは何かを洞察し、それを第33回民族藝術学会全国大会で発表すべく1月に応募した(4月22日に学会発表)。2)またチェコ国民楽派の一人A.ドヴォジャーク研究においても「チェコ性」の獲得という視点で著作の修正を行ない、第5版を刊行した。3)スメタナを擁護した美学者O.ホスティンスキーの思想を「民族性の美学」という視点で分析し、『地域学論集』(第13巻第3号)に「オタカル・ホスティンスキーの美学思想ー『美』と『民族性』の論理」と題した論文を投稿した。本研究は元来3年間で達成する内容であるが、採択そのものがH27年度の10月下旬となった為に、約7ヶ月間の遅れで着手する結果となった。しかしながら、既に採択前より本研究課題に取り組み、学会発表等も実施していたことで、一歩ずつ順調に課題を克服していると考えている。当テーマに関する発表が最も相応しいと考えられる「民族藝術学会」での成果発表を中心に(H27年4月発表、及びH29年1月に応募し4月発表)、さらに同学会誌への投稿を行い、まずスメタナの国民オペラに関する研究が「民族藝術学会誌第32巻」(H28年3月30日発行)に採択された。また同H28年10月には美学会全国大会(京都:同志社大学)等に参加することで、「民族性」を中心とするチェコ研究の成果(ミュシャの「スラヴ叙事詩」の研究)や近現代の西洋音楽における美学思想の展開など、大いに刺激になる論考に触れたことも本研究を加速させたといえる。H28年度では、特に「チェコ性」を追求する上で、チェコの美学者O.ホスティンスキーの美学思想を解明すべく、「美と民族性」の相互関係性の論理について『地域学論集』(第13巻第3号;H29年3月24日発行)に研究成果を発表した。さらにドヴォジャーク研究の第5版の刊行(H28年7月31日発行)を通して、スメタナのみならず、ドヴォジャークの音楽表象を見直す契機にもなったといえる。こうして今年度まで進めてきた本課題研究を、次年度の研究へと発展させつつ集大成することを目指しながら、チェコ人作曲家による音楽表象を通して、いわば「チェコ性」としての「民族的アイデンティティ」をどのように作品に投影し表出させて「民族主義」の表象を実現していったのか、またその思想の真意を追究することを通して、決して一枚岩ではない、その複雑な思想の絡み合いを文化・社会・政治的背景を照射させつつ、現在、読み解いている段階である。本課題研究の目的は、近現代における「チェコ芸術音楽」の表象を「ナショナリズム」の視座から解明することにある。
VDT作業における作業パフォーマンスと生理的疲労の時系列的関連についての一考察

本研究は生理的疲労の増大により作業パフォーマンスが低下するという疲労研究の前提の正否を検討する基礎資料として、実験を通じて作業パフォーマンスを評価できる指標と生理的疲労を評価できる生理的指標の両者の時間的推移を比較検討し、両者の時系列的関連の定量的検討を示すことを目的として行われた。VDT作業として、横一列に提示された1桁の4数字を、左から順次加算、減算、乗算のいずれかを行い解が1となる演算プロセスを、+、-、×を用いてキーボードより入力させる作業を2日間各60分間ずつ被験者に課し、作業パフォーマンスの指標として処理時間を計測した。また同時に生理的指標として心電図を連続で計測し、R-R間隔時系列を求めた。なお実験の初日は作業習熟及び心電図計測の慣れのために行い、2日めのみ解析対象とした。この60分間の作業パフォーマンスと生理的指標の時間的推移の時系列的関連を検討するために、処理時間の時系列とR-R間隔時系列のコヒーレンスを求めたところ、全ての被験者に対して0.050.40Hzの範囲で高いコヒーレンスが示された。このことから生理的指標と作業パフォーマンスの時間的推移には密接な時系列的関連が存在することを定量的に示唆できた。ところでR-R間隔時系列の周波数解析によって得られる各周波数成分帯(0.050.15Hz及び0.150.40Hz)の大きさには生理的負担、疲労が反映されることが知られているが、本実験における処理時間の時系列とR-R間隔時系列のフェイズからは、被験者毎かつその周波数帯毎に両者の時間的前後関係が異なることが示唆され、総合的な作業パフォーマンスと生理的疲労との間の時間的前後関係についてまでは知見を得ることはできず、課題として残された。
マイクロアレイを用いた神経芽細胞種特性の統合的解析-オーダーメイド療法をめざして-

染色体1,2,3,11,13,17,19,21,22番の大腸菌人工染色体(BAC)クローンからアレイCGHを作製して検討した結果,予後良好な神経芽腫では遺伝子量の増減はほとんど認められなかったが,予後不良例では1番,11番欠失と17番増幅等遺伝子量の増減が認められた。さらに,既知遺伝子及び胎児神経組織cDNAライブラリー由来の遺伝子,遺伝子断片6500余りを用いてマイクロアレイを作製し,遺伝子発現解析したところ,予後不良腫瘍で43遺伝子,予後良好な腫瘍の中で自然退縮例,分化例各々20,32遺伝子の発現増強を認めた。また,マイクロソート法にてスクリーニングしたところ,各々に発現増強した遺伝子を63と39個みいだした。これらを,定量PCRにて検索し,発現が異なる既知の遺伝子を21個(MYCN, hTERT, VGEF, Cyclin G1,CD44,NGF, Caspase等)明らかにした。病理所見でheterogeneityの存在する混成型腫瘍の異形性の強い部分,同一腫瘍内でテロメラーゼ発現が明かな部分,また化学療法後の残存或いは再発部分をマイクロダイセクションを切り出して,アレイ解析した結果,23種類の遺伝子の発現上昇を認めた。これらの多くは,予後不良腫瘍で発現上昇した遺伝子と一致していた。一方,明かな退縮例ではCaspase 8などアポトーシス関連遺伝子の発現増強が,一方分化例ではNGFなどの成長因子の発現がみられた。テロメラーゼが活性化した腫瘍とその他の腫瘍の比較から,発現の異なる遺伝子を102個スクリーニングしたがその中でHSP90とRAD50はテロメラーゼの活性化に直接関与しており,臨床応用可能と考えられた。以上の結果を,臨床的データとから,悪性度を規定し,個別化に有用な遺伝子変異は1p,11p,17q,遺伝子発現は21種類と考えられた。凍結保存された約300の神経芽細胞腫症例の腫瘍組織と末梢血を用いて,以下の検討を行った。染色体1.2.3.11.13.17.19.21.22番の大腸菌人工染色体(BAC)クローンから作製した、アレイCGHを作製し、これに腫瘍と末梢血由来のDNAをラベルしてハイブリダイスした。その結果、予後良好な神経芽腫では遺伝子領域の欠失或いは増幅はほとんど認められなかったのに対し、予後不良であった神経芽腫では1番の欠失と17番の増幅を認め、他の領域にも遺伝子量の増減が認められた。さらに胎児神経由来cDNAライブラリー由来のcDNAから作製したアレイと、市販のアレイを用いて、予後良好な神経芽腫と不良な神経芽腫由来のRNAをラベルしてハイブリすると、予後不良の神経芽腫ではMYCN, hTERT, VGEF, Cyclin G1などの発現が増強しており、一方予後良好例ではMMP9, CD44, NGF, Caspase等の発現が増強していた。5例で腫瘍内heterogeneityの検討(5例)や化学療法後の摘出腫瘍での腫瘍細胞の変化の検討(4例)では、腫瘍細胞の存在する領域をマイクロダイセクションシステムで切り出し、hTR, hTERT発現の測定を行い、また、DNA, RNAを抽出、増幅して、ラベルしてアレイ解析した。前者では、2例にRT-PCR,免疫染色でhTERT発現に差を認め、アレイ解析ではhTERTのみならすPDGFR, Cyclin等の増強がみられた。後者では、化学療法前と比較し、遺伝子変化は乏しかったが遺伝子発現ではCaspase, Cadherin等の変化を認めた。