hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
脳外傷後の高次脳機能障害におけるリハビリテーションプログラムの検討

外傷性脳損傷、脳卒中後の高次脳機能障害患者に対する回復期リハビリにおいて、訓練量の違いによる訓練効果を検討した。【対象】平成16年1月12月に当院に入院した記憶障害、注意力障害、遂行機能障害、社会行動障害等を認めた高次脳機能障害患者64名。【方法】訓練は各4週間ごとにAターム、Bタームで区切り、ABAとBABの2方法を用意した。Aタームでは作業療法士による通常のADL訓練、認知訓練を行い、Bタームでは通常の訓練に加えて言語聴覚士による1日1時間の計算課題を行う集団訓練を週5日間負荷した。評価はFIM、FAM、WAIS-R、Trail Making Test、Wisconsin Card sorting Testなどで行い、入院時と各タームの最終週に評価を行った。対象患者は入院順に振り分けた。【結果】対象患者64名の内、発動性低下等で課題実施が困難であった20名、失語症合併12名、訓練を拒否した2名、障害軽度例や嚥下訓練を優先させた20名を除外し、10名のみが対象となった。10名の入院時におけるFIM運動項目合計は77.3点、認知項目合計は24.2点、WAIS-RのTIQは68.6であった。10名中3ターム完了したのは2名、2ターム完了したのは2名で、6名が途中退院した。2、3ターム完了した4名の入退院時のWAIS-RのTIQは平均61→72点に改善しているが、ターム間で差を認めた検査はなかった。8名の途中退院の理由は入院生活の拒否が4名、家族の早期受け入れが2名、転院が2名であった。【考察】回復期リハビリの効果を脳損傷後の自然回復と区別して検討するためにABA法を採用した。しかし、今回のプログラムでは13週の入院期間を要すため、80%の患者が入院継続困難により中止となった。入院により身体機能、認知機能に改善はみられたが、訓練時間を増加することでの差は見られなかった。脳損傷患者の症状は様々で、また情動面での影響も大きく、画一的な訓練を行うのは困難であった。1外傷性脳損傷後の高次脳機能障害患者に認知訓練を行い、入退院時のMMSE、FIM認知3項目(社会的交流・問題解決・記憶)合計、メタ認知レベルを評価検討した。対象は22名、平均受傷後日数77日、平均在院日数65日であった。入退院時の変化として、MMSE13点→17点、FIM認知3項目合計10点→13点と改善し、またメタ認知レベルは7割で1(障害に全く気づいていない)から3(障害に部分的に気づく)に改善した。国際障害分類に認知障害を当てはめると、心身機能・構造レベル、活動レベルの両者で改善がみられたことになり、この改善にはメタ認知の関与が大きいことが示唆された。2外傷性脳損傷、脳卒中後の高次脳機能障害に対する訓練において、異なる訓練法を順に用いることで回復期リハビリにおける訓練効果を検討した。対象は5名で、平均年齢43才、平均発症後日数96日、病名は脳挫傷4名、くも膜下出血1名であった。方法は、2種類(A、B)の訓練法を設定し、A→B→Aの順に各3週間ずつ行った。訓練法のAはドリル中心の机上訓練、Bは買い物など日常に即した訓練とした。入院時、A、Bの各訓練終了後にFIM、WAISR、FAMの障害適応の項目等を評価した。入退院時で比較したところWAISR(FIQ)69→79点、FIM合計89→108点と改善がみられたが、AかB一方での伸びが他方より大きいという一定の傾向は認められなかった。メタ認知(FAMの障害適応)が3/7以上に改善した時点でFIM、WAISの得点改善が得られる傾向にあった。高次脳機能障害の症状は多彩であり、また情動面、精神面の波が訓練や検査に与える影響も大きいため、A、Bの優劣が不明確となった可能性がある。今回の研究のみでは自然経過と治療効果との区別は困難であるが、メタ認知の改善と高次脳機能障害の改善が関連することから、ある程度の訓練効果の存在が示唆された。

10名の入院時におけるFIM運動項目合計は77.3点、認知項目合計は24.2点、WAIS-RのTIQは68.6であった。10名中3ターム完了したのは2名、2ターム完了したのは2名で、6名が途中退院した。2、3ターム完了した4名の入退院時のWAIS-RのTIQは平均61→72点に改善しているが、ターム間で差を認めた検査はなかった。8名の途中退院の理由は入院生活の拒否が4名、家族の早期受け入れが2名、転院が2名であった。【考察】回復期リハビリの効果を脳損傷後の自然回復と区別して検討するためにABA法を採用した。しかし、今回のプログラムでは13週の入院期間を要すため、80%の患者が入院継続困難により中止となった。入院により身体機能、認知機能に改善はみられたが、訓練時間を増加することでの差は見られなかった。脳損傷患者の症状は様々で、また情動面での影響も大きく、画一的な訓練を行うのは困難であった。
カメの性フェロモン受容システムに関する研究

フェロモンとは一般に体内で産生され、体外に分泌された後、同種の他個体に一定の変化をもたらす物質を指す。繁殖期のカメでは、オスが求愛行動に先立って他個体の排泄腔付近に鼻を近付け、おそらく糞や尿に含まれる物質から相手の性別や、さらには繁殖可能な状態かといった情報を得ていると考えられる。本研究では、カメのフェロモン受容システムの解明を目的として、カメの嗅覚器におけるフェロモン受容体候補遺伝子の発現を解析し、周年変化や成長に伴う変化を明らかにする。さらに、カメの嗅覚器における性ホルモン受容体遺伝子の発現を解析することによって、嗅覚受容体遺伝子の発現制御に関与する性ホルモンの同定を試みる。
郊外住宅団地の社会学的研究

本研究の目的は、大都市の郊外住宅団地という特殊な居住環境が、その居住者の生活や人間関係等にどのような影響を及ぼしているか、また造成後数10年を経過したこんにち、それはどのように変質してきているか等の問題を、新旧2つの住宅団地(花川団地と真駒内団地)を調査対象として選定し、それを社会学的視点から組織的・統合的に研究することにある。新旧2つの団地研究では、約10項目にわたる生活事象を中心に調査を行ない多くの興味ある知見を得た。結果の1部はなお整理分析中であるが以下2,3の点についてのみ報告する。1.郊外住宅団地居住者の定着性と移動性居住者の地域構成は大別すると3つになる。1つは戸建住宅地区、2つ目は中・高層集合住宅地区、3つ目は混合住宅地区である。このうち第1の戸建住宅地区は定着率が極めて高いが、第2の中・高層集合住宅地区においては年率4.1%から20.7%に至る移動率を示しており、したがってコミュニケ-ション意識が他地区に比べ弱い。2.郊外住宅団地の高齢化現象と社会問題の顕在化定着率の高い戸建住宅地区に高齢者の多いのは当然であるが、中高層集合住宅地区にも高齢者が極めて多い。特に古く造成された真駒内団地において著しく、830戸を容するG団地では独居老人世帯を含む老人世帯率は18.7%、1,240戸を容するA団地では23.2%に及び、その構成も夫婦のほか、姉と妹、姉と妹、母と娘、母と息子、祖母と孫など多種多様であり、水道やガス、電気やゴミ処理など日常生活において様々なトラブルを生ぜしめている。3.古く造成された郊外住宅団地は、今建替え期に至っており、駐車場問題、空屋における青少年の非行行動など、問題が多発している。本研究の目的は、大都市の郊外住宅団地という特殊な居住環境が、その移住者の生活や人間関係等にどのような影響を及ぼしているか、また造成後数10年を経過したこんにち、それはどのように変質してきているか等の問題を、新旧2つの住宅団地を調査対象地として選定し、それを社会学的視点から組織的・総合的に研究することにある。平成元年度(第1年度)の研究は、比較的新しく造成された石狩町花川北団地(5700世帯、人口19.00人)を対象に、約10項目にわたる生活事象を中心に調査したものである。その結果は目下整理分析中であるが、幾つかの事項については興味ある知見を得た。以下その概要を述べることにする。1.郊外住宅団地居住者の来住目的と社会構成について......来住者の階層構成は全体の95%が会社員、公務員、団体職員等のいわゆるホワイトカラ-層でしかも課長以下の中・下級幹部層が多く、したがって年齢構成は極めて若い。郊外住宅団地への来住目的は「価格(家賃)が適当だったから」「公庫の融資があったから」「割賦払い制度があったから」「住宅地としての環境がよかったから」「子供の生育環境がよかったから」等多岐にわたっているが、その背景には「持家が欲しい」「住宅が狭い」「住宅が古い」「家賃が高い」等の諸条件があったことによる。2.郊外住宅地居住者の家族類型とその変化......来住当時の家族類型をみると全体の80%が夫婦家族で、いわゆる直系家族は僅か15%有余に過ぎなかった。しかも夫婦家族ではR.Hillのライフサイクル説によると段階IVのものが30%近く占め最も多く、以下段階III、II、I、Vの順となっていた。

15年後の今日、その構成がどのように変わったか興味深いところであるが、それらは目下分析中である。本研究の目的は、大都市の郊外住宅団地という特殊な居住環境が、その居住者の生活や人間関係等にどのような影響を及ぼしているか、また造成後数10年を経過したこんにち、それはどのように変質してきているか等の問題を、新旧2つの住宅団地を調査対象地として選定し、それを社会学的視点から組織的・総合的に研究することにある。平成2年度(第2年次)の研究は、北海道で最も古く造成された札幌市真駒内団地(約13,000世帯)を対象に、約10項目にわたる生活事象を中心に調査したものである。その結果は目下整理分析中であるが、幾つかの事項について興味ある知見を得た。以下その中から2、3の点についてのみ述べることにする。1.郊外住宅団地居住者の地域的特徴と社会的特性居住者の地域的特徴は、大別すると3つになる。1つは中層集合住宅地区、2つめは戸建住宅地区、3つめは混合住宅地区である。このうち第1の中層集合住宅地区の居住者は、大半が社員や公務員の転勤族によって占められているためモビリティがはげしく、したがってコミュニティ意識が極めて弱い。しかし子供の教育については関心度が強く(特に本社が関東・関西にある会社社員の場合)、PTA活動への参加は積極的である。概して戸建住宅地区の居住者は居住歴が長く、したがってまたコミュニティ意識が極めて強い。2.戸建居住地域の住民には高齢者が多く、その点ではシルバ-タウンの特性が現われはじめている。3.この住宅団地の自然環境はすべての面で優れているが、しかし近時、社宅団地の空屋を利用しての青少年の非行行動が顯在化しており、郊外住宅団地に新しい問題を生むに至っている。本研究は、大都市の郊外住宅団地という特殊な居住環境が、その居住者の生活や人間関係等にどのような影響を及ぼしているか、また造成後数10年を経過したこんにち、それはどのように変質してきているか等の問題を、新旧2つの住宅団地(花川団地と真駒内団地)を調査対象地として選定し、それを社会学的視点から組織的・総合的に研究することを目的とするものである。本年度は本研究の「まとめ」の年であり、特に前年度とり残した3つの問題、すなわち(1)団地居住者のモビリティの実態(2)団地における高齢者の実態(3)団地社会における政治過程の把握に全力をそそいだ。(1)の問題については公団・公社との係わりがあり資料の収集に思わぬ時間を費やし、なお整理中であるが、極めて興味ある知見を得ている。(2)の問題もプライバシイにかかわるとして資料の閲覧に至る迄に種々困難があったが、一部に関してのみ興味ある資料を収集出来、その整理を終えたところである。(3)の問題については市会議員との接触に手間どり、調査の入口に入ったところである。調査課題のうちまだ残されている問題があるが、しかし興味ある幾つかの知見を得ることが出来た。特に団地居住者の移動性の高さ、したがって居住地域に対するコミュニティ意識の欠落、そして団地社会の高齢化現象など、市民から羨望の的とされていた郊外住宅団地も、今や驚異的な変貌を遂げつつあるということが出来る。かってアメリカの社会学者が郊外の高齢化現象を「The Graying Suburbia」と呼んだことがあるが、わが国においても、そして特に古くに形成された郊外住宅団地においては、まさに「郊外のたそがれ」現象が急速に顕在化しつつあると認めることが出来る。それはある意味では社会学上の「郊外の神話説」に対して、1つの問題提起をなすものである。
in vivoホールセル記録による頭部回転刺激に対する前庭ニューロンの反応特性

ラットin vivo標本において内側前庭神経核(MVN)ニューロンからホールセル記録を行い、頭部回転方向に対するニューロンの発火頻度の変化を調べた。その結果、記録したMVNニューロンの多くは記録側と同側方向への回転のときに発火頻度を上昇させる反応を示し、そのニューロンのほとんどは2相性のスパイク後過分極を示しスパイク間隔がほぼ一定で持続的な発火パターンを示すものであった。このことから、MVNには特定方向への頭部回転に反応するニューロン群が存在することが示唆された。前庭神経核は異なる電気生理学的膜特性をもつニューロン群により構成されているが、それらのニューロン群の前庭機能における役割については明らかでない。そこで、膜特性をもとに特徴づけられた個々の前庭神経核ニューロンにおいて、1)末梢前庭からの直接入力の有無、2)頭部回転方向への反応特性、3)頭部回転周波数に対する反応特性を調べることにより、前庭機能における役割を明らかにすることが研究目的である。本年度は、末梢前庭器官からの一次求心性入力を受けるニューロン群を明らかにするため、ラットのin vivo標本において前庭神経核ニューロンから記録を行い、どのニューロン群において末梢前庭器官刺激に対するシナプス応答が記録されるのかについて調べた。ラットを麻酔下のもと、外科的操作によりin vivo標本を作製し、前庭神経核ニューロンからホールセルパッチクランプ記録を行った。電流通電による電位応答を解析することにより、そのニューロンの膜特性を明らかにした後、末梢前庭器官の刺激に対するシナプス応答を調べることを試みたところ、2相性のスパイク後過分極を示すニューロンにおいて単シナプス性の応答が記録された。これまで他の膜特性を示すニューロン群からの記録に成功していないことから膜特性とシナプス応答の有無との関係については明確な答えが得られていないが、少なくとも2相性のスパイク後過分極を示すニューロンの一部は末梢前庭からの直接入力を受けていることが明らかになった。そこで、膜特性をもとに特徴づけられた個々の前庭神経核ニューロンにおいて、1)末梢前庭からの直接入力の有無、2)頭部回転方向への反応特性、3)頭部回転周波数に対する反応特性を調べることにより、前庭機能における役割を明らかにすることを本研究の目的としている。生後6-8週齢のラットにイソフルランの吸入麻酔を行い、外科的操作によりin vivo標本を作製した。ラットを回転台に設置した脳定位固定装置に固定し、パッチ電極を前庭神経核へ侵入させ前庭神経核ニューロンからパッチクランプ記録を行った。ギガオームシールを形成した状態(cell-attachedモード)で回転台を回転させて記録側と同側または対側への回転における発火頻度の変化を調べたところ、記録した前庭神経核ニューロンの多くは同側方向への回転のときに発火頻度を上昇させるタイプI型の反応を示した。cell-attachedモードの後、パッチ膜をruptureしてホールセル記録を行なうことを試み現在までわずかのニューロンにおいてしか成功していないが、その中のひとつは、2相性のスパイク後過分極を示し、スパイク間隔がほぼ一定な持続的な発火パターンを示した。この特徴は、我々のこれまでの研究により、グルタミン酸作動性ニューロンであることが示されている。内側前庭神経核ニューロン(MVN)の頭部回転に対する反応特性と膜特性との関係を調べるため、生後6-8週齢のラットを、イソフルラン麻酔下において、回転台に取り付けた脳定位固定装置に固定し、ホールセル記録を行った。その結果、記録したMVNニューロンの多くは記録側と同側方向への回転のときに発火頻度を上昇させるタイプ1型の反応を示した。タイプ1型の反応を示すニューロンのうち多くは2相性のスパイク後過分極とスパイク間隔が一定で持続的な発火パターンを示した。電流通電に対して発火頻度があまり上昇しない発火パターンを示すタイプ1型のニューロンも観察された。一方、記録側と対側方向への回転に対して発火頻度を上昇させるタイプ2型の反応を示すニューロンもわずかに見出されたが、ホールセル記録を行うことが容易ではなかったため、膜特性の解析には至らなかった。また、MVNとともに視線制御に関与する舌下神経前位核(PHN)の抑制性ニューロンの特性を明らかにするため、抑制性ニューロンがヴィーナスという黄緑色の蛍光分子を発現するトランスジェニックラットを用いてスライス標本を作製し、ホールセル記録法によって調べた。蛍光を発するニューロンと発しないニューロンのAHPと発火パターンについて調べたところ、蛍光を発するニューロンでは一相性のAHP、スパイクの生成が遅れる発火パターンや発振を示す発火パターンが占める割合が高く、一方、蛍光を発しないニューロンでは二相性のAHPと発火頻度の低いパターンが多く観察された。

PHNにはGABA作動性ニューロンのみならずグリシン作動性ニューロンの存在が知られていることから、ホールセル記録後RT-PCR解析を行ったところ、PHNの抑制性ニューロンはGABA作動性ニューロンかGABAとグリシン両方を持つニューロンがほとんどで、グリシン作動性ニューロンが少ないことがわかった。
仮想音楽空間の構築に関する研究

本研究は、参加して楽しむことのできる音楽的仮想世界の生成と演出の技術を確立することを目的としている。今年度の研究成果の概要は以下の通りである。1.2個の3次元加速度センサとデータグローブにより、手および腕の動作情報を取得し、ジェスチャーを認識して、音楽演奏を実時間で制御する次の2種類のシステムが完成した。a)仮想指揮システム(ジェスチャーによる演奏制御):楽曲のデータをあらかじめ計算機に登録しておき、指揮のルールに基づいて演奏を制御するシステムである。これにより、使用者はあたかもオ-ケストラを指揮しているような仮想的な現実感が得られる。b)仮想楽器システム(ジェスチャーによる楽音生成):ジェスチャーと音響出力の関係を使用者が任意に定義できる"動作-音響変換器"の実現を目指すものである。製作システムでは、音源波形として、身体運動波形を用い、種々のフィルタリングが実時間で制御できる。2.動画像からシーンの特徴パラメータを抽出して自動作曲システムと結び付けることにより、実時間でバックグランドミュージックを生成する実験に成功した。このシステムは、通常のパーソナルコンピュータに画像キャプチャボードを取り付けるだけで、その他はすべてソフトウエアのみで実現できる。3.歌声のピッチおよび母音の実時間認識を行い、楽譜と照合することにより、歌唱のテンポを推定し、自動的に追従する自動伴奏を生成することに成功した。さらに、歌い手の個人的な声特徴を保存したまま、歌の音程を補正する歌声の実時間分析合成手法を検討し、実験により動作を確認した。4.音響をキ-として、音色データベースを検索するシステムを製作し、有効性を実験により確認した。このシステムは、音響データの時間的および周波数的特徴を抽出して、検索キ-として与える音響と比較するものであり、非言語的なデータベースとして、音楽の生成や音響的演出の効率化を目指すものである。最終年度には、これらの成果を統合した音楽のための仮想空間を実現して、技術面ばかりでなく芸術的な面からの評価も試みる予定である。
Tecチロシンキナーゼを介する細胞増殖機構

(1)Tecのセカンドメッセンジャーの機能解析。我々が同定した新規ドッキング蛋白BRDG1は、細胞内でTec及びPyk2キナーゼの良い基質となった。またヒト成熟B細胞株においてTecの活性依存性にBRDG1のリン酸化がB細胞受容体刺激によって誘導されることが示された。さらに我々はBRDG1が細胞内でc-fosプロモーターおよびprotein kinase A(PKA)の活性化をそれぞれ誘導することを確認しており、BRDG1がチロシンキナーゼとPKAのシグナル伝達経路を介在する分子であることがしめされた。さらに、BRDG1及びTecの両者をconditionalに発現する酵母細胞を用いたtrihybrid screeningを行い、チロシンリン酸化依存性にBRDG1に会合する蛋白質の遺伝子スクリーニングを行い複数の陽性クローンを得た。(2)遺伝子破壊マウスを用いた解析。マウスにおいてTec又はBtk遺伝子のどちらか一方を破壊しても軽度のBリンパ球成熟障害を来すにすぎないが両者を欠損すると重度の免疫不全症に陥ることが確認された。またこの際にBRDG1のリン酸化が低下し、生体内でのBRDG1に対するTecの重要性が確認された。
ミエリン形成障害ミュ-タントにおけるオリゴデンドロサイト変性脱落の機構の解明

遺伝性にミエリン形成障害を示すジンピ-マウスにおいてはミエリンの主要構成蛋白質であるプロテオリピド蛋白(PLP)の遺伝子内に点突然変異が見い出されており、ミエリン形成細胞であるオリゴデンドロサイト(ODC)が変性脱落する。本研究において、遺伝子導入を通してその治療を試みた。まず、ジンピ-変異を同定する遺伝子診断法を開発した。すなわち、ジンピ-変異の両側をはさむようにオリゴヌクレオチドを合成し、その領域をPolymerase Chain Reaction(PCR)法により増幅した。ポリアクリルアミド電気泳動後メンブランにトランスファ-し、オリゴヌクレオチドプロ-ブで検出することにより、野生型とジンピ-型の識別ができるようになった。次に、PLPの発現ベクタ-を用いてトランスジェニックマウスを作製した。マウスPLP遺伝子のプロモ-タ-領域とポリA付加部位を持ち、間にラットPLP cDNAを含んだPLPミニジ-ンを構築し、マウス受精卵前核に注入した。生まれて来た24匹のトランスジェニックマウスを解析したが外来性のPLPミニジ-ン由来のPLPを発現しているマウスはいなかった。この理由としてPLP発現ベクタ-に発現に必須な領域を充分に含んでいなかったことが考えられるのでPLP全遺伝子をクロ-ニングし、トランスジェニックマウスを作製し直すことを計画した。Lorist Bコスミドベクタ-を用いてマウスジェノミックライブラリ-を作製しPLP cDNAおよびPLP遺伝子の5′、3′末端に対応する合成オリゴヌクレオチドでスクリ-ニングしたところ、5′上流領域20kb、3′下流領域5kbを含んだPLP全遺伝子をクロ-ニングすることに成功した。現在、このものを用いてトランスジェニックマウスを作製中である。この系が確立されれば導入するPLP遺伝子を改変することによりPLP異常とオリゴデンドロサイトの変性脱落との関連が推察できると思われる。
確率系と力学系の数理解析

自然科学や工学などの諸分野に現れる確率系と力学系の数理的な側面を、確率論、数理統計学、微分方程式、関数解析、幾何学、数値解析などの種々の手法を用いて数学的に解明した。またこれらの成果の統計力学、生物物理学などへの応用も目指した。具体的には1.確率系の数理解析:(1)数理統計学における各種統計量の漸近展開、成長曲線モデルの検定理論の研究(藤越),(2)ランダムフラクタル集合のハウスドルフ次元の計算、ランダムな力学系の斜積変換の研究(十時)2.力学系の数理解析と数値解析:(1)反応拡散方程式の解の定性的研究、特に安定性とか分岐現象の出現についての研究(三村、西浦、加古),(2)モンジュ・アンペ-ル方程式の解の研究(草野),(3)半群の非線形摂動の理論(大春),(4)pー調和空間のマルチン境界の理論(前田),等がなされた。これらの成果の中には、確率系の研究に密接に関連するものもあり、又コンピュ-タシミュレ-ションによる数値解析に負う所が大きい研究もある。3.力学系の幾何学的研究においては、(1)ある種の結び目が自明であることの条件の研究(松本),(2)補共役軌道における、キリロフ・コスタント理論及びファインマン積分の研究(岡本),等がある。これらの成果は数理物理学や生物物理学など応用分野に多大の貢献をするものである。自然科学や工学などの諸分野に現われる確率系と力学系の数理的な側面を、確率論、数理統計学、微分方程式、関数解析学、幾何学、数値解析などの種々の手法を用いて数学的に解明した。またこれらの成果の統計力学、生物物理学などへの応用も目ざした。これらの成果を得るについては、他大学の研究者との研究連絡に負う所が多大であった。確率系の数理解析的研究においては、ランダムフラクタル集合のハウスドルフ測定が確率1で定数であることの証明(十時);無限粒子系のランダムウォ-クの統計力学的なモデルに対する定常測度の構造の決定(谷口);多粒子系の運動からのボルツマン方程式の導出(内山);数理統計学における多変量の各種統計量の分布の漸近展開とその誤差評価の研究(藤越)などを行った。力学系の数理解析を数値解析の研究においては、反応拡散方程式の解の定性的研究、特に解の安定性やホップ分岐現象の出現などの研究における多大の成果(三村のグル-プ);中立形関数微分方程式の解の振動性の条件(草野);楕円形常微分方程式の解の定性的性質(内藤);ナビヤスト-クス方程式の可解性(宮川);非線形半群の非線形摂動論(大春);pー調和空間に対するマルチン境界の理論(前田)などが得られた。これらの成果の中には確率系の研究に密接に関連するものもあり、またコンピュ-タシミレェ-ションによる数値解析に負う所が大きい研究もある。力学系の幾何学的研究においては、有限群が作用する位相空間のシェ-プの研究(松本)などがある。具体的には1.確率系の数理解析:(1)多変量成長曲線モデルの、MLEを求めるアルゴリズムの提案およびMLE,LR testの漸近分布を与えた。(2)エルゴ-ド的な保測変換の、自己相似性についての考察。(十時)(3)自己相似型安定過程の構成と決定性。(竹中)2.力学系の数理解析と数値解析:(1)反応拡散方程式の解の定性的研究、特に安定性とか分岐現象の出現についての研究(三村、西浦、加古),

(2)モンジュ・アンペ-ル方程式の解の研究。(草野),(3)非線形分散系に対する初期値境界値問題。(大春),(4)Pー調和空間のマルチン境界の理論(前田),等がなされた。これらの成果の中には、確率系の研究に密接に関連するものもあり、又コンピュ-タによる数値解析に負う所も大きい研究もある。3.力学系の幾何学的研究においては、(1)ある種の結び目が自明であることの条件の研究(松本),(2)補共役軌道における、キリロフ・コスタント理論及びファインマン積分の研究(岡本),等がある。これらの成果は数理物理学や生物物理学など応用分野に多大の貢献をするものである。
Ggα遺伝子欠失マウスを用いた海馬シナプス可塑性の解析

海馬のシナプス可塑性は学習や記憶の細胞レベルでの基礎過程と考えられ、この研究をとおしてシナプスでの信号伝達自身の機構の解明が進んでいる。代表的シナプス可塑性現象の長期増強(LTP)誘導の細胞内機構の研究では、NMDA型グルタミン酸受容体からのCa^<2+>流入がCa^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII(CaMキナーゼII)を活性化すること、代謝型グルタミン酸受容体(mGluR)からホスホキパーゼCをかいした経路がプロテインキナーゼC(Cキナーゼ)を活性化することがLTP誘導に必要とする報告が多くある。しかし、後者の経路(mGluRからCキナーゼ)の間に位置するGq蛋白質がLTP誘導に関与する報告はない。他の百日咳毒素感受性G蛋白質も含めた研究での結果は一定していない。本研究はGαq遺伝子欠失マウスを用いてLTPとGαq蛋白質の関係を解明することを目的とする。Gαq遺伝子欠失マウス(MT)は明らかな海馬の解剖学的異常を示さない。海馬薄切片法を用いて興奮性後細胞電位(epsp)を細胞外記録で記録し、epsp起始部の傾き(slope)によりシナプス伝達強度を評価した。MTは同腹の野生型(WT)との比較で、刺激強度とslopeの関係、Paired Pulse Facilitation(PPF)に差を示さず、シナプス伝達の基本的能力は保たれていた。CA1、CA3のLTPは時間経過、大きさとも差がなかった。しかし、CA1のLTPの閾値が上昇していた。この閾値の上昇がGαqと結合する受容体のいずれと関係したものかを薬理学的に検討し、mGluRをかいすることが示唆された。
動脈硬化症における舌動脈及び下歯槽・歯髄動脈の石灰沈着機構に関する比較研究

動脈硬化症は本邦における高齢化社会の到来とともに医学的及び社会的に大きなテーマとなっており、基礎ならびに臨床医学的あるいは分子生物学的技法を用い比較的多彩な研究がなされている。従来本症は主に脂質代謝障害による退行性病変との観点から検索されてきている。しかし今回の研究では本症の終末像に出現する石灰化物や結晶構造物を異所的石灰化の観点からとらえ、口腔及び頭頚部領域における各種疾患の異所的石灰化と比較検討した。病理解剖検体及び手術生検材料より採取した大動脈、舌動脈、下歯槽・歯髄動脈における動脈硬化症の石灰化・結晶構造物を生体の異所的石灰化の観点から検索し、以下の成果を得た。病理組織学的に、動脈の内膜は線維性に肥厚し、空胞状の脂質沈着やコレステリン裂隙からなる粥腫形成がみられ、その一部にヘマトキシリンに染まる顆粒状ないし塊状、びまん性の石灰沈着が観察された。偏光顕微鏡に粥腫内及びその周囲の内膜において光輝性の針状構造物が散在性に認められ、ロゼット状、扇状、松葉状、あるいはそれらが互いに連結したような形態を示した。またこれら結晶構造物はvon Kossa染色で陰性を示す部と黒褐色に陽性を呈する部が混在していた。顕微FT-IR解析及び走査電顕観察において、これら構造物はリン酸カルシウムあるいはシュウ酸カルシウム結晶と考えられた。本結晶構造物は異種の結晶が混在する可能性を有し、消化器疾患や寄生虫感染症を背景とした成因が推察された。上顎洞炎症性病変に出現した石灰化物は、炎症性環境下における異栄養性石灰化であり、その形成過程でマクロファージおよびLiesegang現象が関与しているものと推論された。腺様歯原性腫瘍の実質における石灰化は実質細胞の基質分泌により、間質の石灰化は局所の循環障害や変性によるものと考えられる。海綿状血管腫にみられた骨形成は化生によるものと推察された。動脈硬化症において環境因子の異なる顎骨外の軟組織に位置する舌動脈および下歯槽・歯髄動脈の石灰沈着を病理組織学的ならびに,その石灰化物の成分について顕微FT-IRを用いて検索した結果以下の結論が得られた。病理組織学的に,舌動脈および下歯槽動脈では,潰瘍形成や内弾性板の蛇行・断裂・不明瞭化,線維硝子化,脂質沈着,あるいはfocal,ときに全周性にびまん性の石灰沈着を伴った主として内膜性硬化が観察された。また場所により,壁着性の血栓形成をみる部も存在した。一方,歯髄動脈は内腔の拡張や充血が目立ち,内皮細胞の剥離・消失や壁筋層の膠原化をきたし,壁外周に血管の走行に沿ってびまん性に石灰沈着がみられた。また石灰化物の一部は塊状に集積し,層状を呈して象牙粒に類似する構造を示すものもあった。血管周囲にフィブリンの析出あるいは線維硝子化を呈する部も存在した。これら動脈硬化態度の相違は,既存の血管の大きさ・太さや壁の厚さに起因するものと考えられた。すなわち,動脈硬化は比較的大型の舌動脈や下歯槽動脈では全身の大血管における所見と近似した主として内膜硬化症の型を呈し,小型の歯髄動脈では,最小動脈硬化の特徴である壁全層性の変化として出現したものと推察された。

顕微FT-IRを用いた成分分析では,動脈硬化に伴う石灰化物は赤外吸収スペクトルが1230,1340,1400,1460,1560および1660/cm付近にI型コラーゲンに近似するピークが認められた。このことから,動脈硬化症における石灰化機構はコラーゲンが関与し,石灰沈着の基質となることが示唆された。なお,舌動脈,下歯槽動脈・歯髄動脈におけるそれぞれの石灰化物の成分分析は現在データを集積,比較検討中である。動脈硬化症において,環境因子の異なる顎骨外の軟組織に位置する舌動脈および顎骨内・歯牙硬組織内に位置する下歯槽・歯髄動脈の石灰化沈着を,病理組織学的ならびにその石灰化の成分について微小部X線回折装置を用いて検索した結果,以下の結論が得られた.病理組織学的には前年度の実績報告に加えて,舌動脈および下歯槽動脈においてはズダンIII染色で赤染する中性脂肪が内膜から中膜に近接する部位にみられ,その程度が進行するにつれてアザン・マロリー染色でアニリン青に染まる線維硝子化やコッサ染色で黒染する石灰化を混在あるいは随伴していた.また所々針状の構造物も散在していた.内膜のこれら病変の著明なところでは,中膜が萎縮傾向を呈していた.一方歯髄動脈では脂肪沈着がみられるものは少なく,壁全体に石灰化が塊状にあるいはびまん性に観察された.微小部X線回折で舌動脈および下歯槽動脈においてはアパタイトやコレステロール結晶が認められたが,歯髄動脈ではアパタイト結晶のみであった.以上の結果は,骨や歯牙という同一に硬組織内に位置する動脈でも,動脈硬化症の脂肪沈着や,石灰化はその太さにより差違があることを示唆しているものと考えられ,今後更なるデータを集積し,比較検討中である.動脈硬化症は本邦における高齢化社会の到来とともに医学的及び社会的に大きなテーマとなっており、基礎ならびに臨床医学的あるいは分子生物学的技法を用い比較的多彩な研究がなされている。従来本症は主に脂質代謝障害による退行性病変との観点から検索されてきている。しかし今回の研究では本症の終末像に出現する石灰化物や結晶構造物を異所的石灰化の観点からとらえ、口腔及び頭頚部領域における各種疾患の異所的石灰化と比較検討した。病理解剖検体より得られた大動脈、舌動脈、下歯槽及び歯髄動脈における動脈硬化症の石灰化物及び結晶構造物を病理組織学及び生体鉱物学的に検索し、以下の結果を出し、考察を加えた。病理組織学的に動脈の内膜は線維性に肥厚し、空胞状の脂質沈着やコレステリン裂隙からなる粥腫状ないし塊状、びまん性の石灰沈着が観察された。偏光顕微鏡にて、粥腫内及びその周囲の内膜において光輝性の針状結晶を束ねた高い複屈折性を示す黄色青色調の結晶構造物が散在性に認められ、ロゼット状、扇状、松葉状あるいはそれらが互いに連結したような形態を示した。またこれら結晶構造物はvon Kos sa染色で陰性を示す部と、黒褐色に陽性を呈する部が混在していた。顕微FT-IR解析及び走査電顕観察において、これら構造物はリン酸カルシウムあるいはシュウ酸カルシウム結晶と考えられた。本結晶構造物は異種の結晶が混在する可能性を有し、寄生虫感染症や消化器疾患を背景とした成因が推察された。上顎洞炎症性病変に出現した石灰化物は、炎症性環境下における異栄養性石灰化であり、その形成過程でマクロファージおよびLiesegang現象が関与しているものと推論された。腺様歯原性腫瘍の実質における石灰化は実質細胞の基質分泌により、間質の石灰化は局所の循環障害や変性によるものと考えられる。海綿状血管腫にみられた骨形成は化生によるものと推察された。
電子吸引基を持つ不飽和炭化水素化合物の新規環化付加反応

不飽和炭化水素間での炭素-炭素結合生成反応において、遷移金属触媒が高い活性を示すことが知られている。私はこのタイプの反応に興味を持ち、共役エンイン、およびアレンの反応について検討を行った。その結果、電子吸引基を有する共役エンイン、およびアレンはニッケル触媒の存在下、二量化反応を起こし、2環性化合物、およびシクロブタン誘導体を与えることを見いだした。これらの反応にはニッケル触媒が必須であり、反応がきわめて高選択的に進行すること、また穏和な条件下で進行することを見いだした。これらの生成物の構造はX線結晶構造解析により最終的に明らかにした。さらに私はより単純な反応である、アレンの二量化反応についてその反応機構の詳細について検討した。ニッケル触媒に結合している配位子の種類を変換することにより、二量化反応を触媒反応から当量反応へとかえることができる。私はアレンとニッケル錯体との当量反応について検討を行い、反応生成物の構造からこれらの反応の反応機構について検討を行った。こうした検討により電子吸引基の効果、あるいは配位子の効果に関してさらなる知見を得た。こうした検討により遷移金属触媒反応における新たな触媒サイクルの存在を明らかにするとともに、これまでに知られていない新規炭素環形成反応を開発することに成功した。最近私は、このタイプの新反応を発見した。すなわち、共役エンインはパラジウム触媒の存在下で二重化反応を起こし、このような1,4-二置換ベンゼンを高選択的、なおかつ高収率で与えることを見いだした。この反応における置換基効果について種々検討している過程において、私はさらに画期的な新反応を見いだした。すなわち、2-パーフルオロヘキシル-1-ブテン-3-インはニッケル触媒の存在下、二重化反応を起こし、図に示すような2環性化合物を与える。この反応は過去に全く類例のない、新規反応であり、また得られる生成物の構造も非常に興味深い。私は以上の結果に基づき、「共役エンインをはじめとする不飽和炭化水素を用いる新規環化付加反応について検討すること」を研究目標として設定した。具体的には、本反応の一般性について明らかにした。その結果、1.本反応は2位にパーフルオロアルキル基やシアノ基を導入したエンインにおいて進行すること。2.多くの多置換エンインでは反応が進行しないこと。3.電子吸引基の導入位置を変えた場合には種々のベンゼン環形成反応が進行すること。を明らかにした。
二酸化炭素を原料とした共重合ポリエステルの生合成に関する研究

組換えRalstonia eutrophaによる二酸化炭素からの生分解性共重合PHAの合成を最終目的とし、低基質特異性PHA重合酵素(PhaC1)、3-ヒドロキシアシル(3HA)-ACP:CoAトランスフェラーゼ(PhaG)、3HA-CoAリガーゼ(PA3924)、3-ヒドロキシブタン酸(3HB)ユニット供給系酵素(PhbAB)の全遺伝子を大腸菌およびR. eutrophaに導入した組換え株を作製し、脂肪酸合成経路を介した共重合PHAの合成を試みた。組換え大腸菌はグルコースから中鎖長3HAユニット(炭素数814)を含むP(3HB-co-5.4 mol% 3HA)共重合ポリエステルを合成した。水素細菌Ralstonia eutrophaは従属培養および独立培養の栄養制限下において、硬くて脆いPHAであるポリ(3-ヒドロキシ酪酸)、P(3HB)、を合成する。炭素数412の3-ヒドロキシアルカン酸(3HA)をモノマー単位とするP(3HB-co-3HA)共重合体は丈夫でしなやかな物性である。この共重合PHAをR. eutrophaの組換え株を用いて二酸化炭素から合成することが本研究の目的である。第一に、Pseudomonas sp. 61-3由来の低基質特異性のPHA重合酵素(PhaC1)、重合酵素の基質となる炭素数6以上の3-ヒドロキシアシルCoA(3HA-CoA)を脂肪酸合成経路から供給する3-ヒドロキシアシルACP:CoAトランスフェラーゼ(PhaG)、3HBユニット供給系酵素(PhbAB)の遺伝子に加え、Pseudomonas aeruginosaのゲノムDNAより推定3HA-CoAリガーゼ遺伝子(PA3924)を導入した組換え大腸菌を作製した。この組換え大腸菌はグルコースを唯一の炭素源として培養した結果、炭素数810(極微量の炭素数12および14を含む)の3HAユニットが5.4 mol%取り込まれたP(3HB-co-3HA)共重合体が合成された。これにより、PA3924が3HA-CoAリガーゼ活性を有することが明らかとなった。また、この共重合体の破断伸びは186%であり、P(3HB)ホモポリマーの5%と比べて丈夫でしなやかな素材であった。微生物が合成するポリヒドロキシアルカン酸(PHA)は生分解性プラスチックとして期待される。水素細菌Ralstonia eutrophaは糖や二酸化炭素を唯一の炭素源として硬くて脆いポリ(3-ヒドロキシ酪酸)、P(3HB)を合成する。炭素数412の3-ヒドロキシアルカン酸(3HA)をモノマー単位とするP(3HB-co-3HA)共重合体は丈夫でしなやかな物性を示す。この共重合PHAを、R. eutrophaの組換え株により二酸化炭素から合成することが本研究の目的である。次に、組換えR. eutrophaを作製し、糖あるいは二酸化炭素を炭素源として培養を行ったところ、合成されたPHA鎖中の3HA分率は数mol%以下であったため、さらなる分子育種を進めている。応用微生物学大腸菌を宿主とした場合、脂肪酸合成経路を介した共重合PHAの生合成に成功した。しかしながら、Ralstonia eutrophaを宿主として、二酸化炭素を原料とした場合に合成されるPHAは、今のところP(3HB)ホモポリマー、あるいは、中鎖長3HAが微量取り込まれた共重合PHAである。実用的なポリエステルを合成するためには、3HA分率を510 mol%程度まで高める必要がある。導入する3HA-CoAリガーゼ遺伝子をP.aeruginosa由来のものからPseudomonas sp. 61-3由来のものに置き換えるなどして、R. eutrophaの分子育種をさらに進める。また、培地成分や培養温度など組換えR. eutrophaの培養条件について検討し、二酸化炭素や糖からの中鎖長3HA分率を高めた共重合PHAの合成を目指す。当初購入予定だった機器よりも高性能のものが学部共通機器として購入できたため、購入する必要がなかった。さらには、本研究には高額な消耗試薬を使用するため、その費用として次年度に繰り越す必要があったため。次年度に繰り越した研究費の大半は物品費(ほとんどが消耗品)に使用する予定である。
急性・亜急性の脳炎・脳症における積極的な神経保護療法の導入のための研究

急性・亜急性の経過をとる小児の脳炎・脳症における積極的な神経保護療法導入のために、剖検脳を用いた神経病理学的解析とELISA法による生体試料(尿、血清、髄液)中のバイオマーカー測定、多種類サイトカイン定量を組み合わせ、脳炎・脳症の病態の系統的な解析を試みた。髄液タウ蛋白や酸化ストレスマーカーなどは、脳炎・脳症の病態解析や治療効果判定に応用可能と考えられた。また、患者血清を用いた免疫組織化学染色は、自己免疫が関与する亜急性脳炎の診断に有用であることが示唆された。急性・亜急性の経過をとる小児の脳炎・脳症における積極的な神経保護療法導入のために、剖検脳を用いた神経病理学的解析とELISA法による生体試料(尿、髄液)中のバイオマーカー測定、多種類サイトカイン定量を組み合わせ、脳炎・脳症の病態の系統的な解析を試みた。本年度は、脳梁膨大部に可逆性病変を呈する軽症脳炎・脳症(MERS)における髄液バイオマーカー解析を行った。髄液中のDNA酸化ストレスマーカー8-OHdG値はMERS患者群で対照と比べて有意の高値を示した。また、MERS患者6名中3名でIL-6、IL-10の軽度上昇を認め、このうち2名はMRI上脳梁膨大部以外の白質病変を認めた。以上の結果から、MERSでの白質病変の拡大に軽度のサイトカイン上昇が関連する可能性が示唆された(Brain Dev投稿中)。また、インフルエンザウイルスA/H1N1による急性脳症の1例において、経時的に髄液バイオマーカーの測定を行った。発症時には髄液タウ蛋白、炎症性サイトカインが上昇し、第9病日にはタウ蛋白の更なる上昇、炎症性サイトカインの低下傾向を認めた。臨床的にはMRI上びまん性脳浮腫、脳幹病変を呈し、ステロイドパルス療法、大量γグロブリン投与、エダラボン投与、抗脳浮腫療法に加えて、脳低温療法を行った結果、ほぼ後遺症なく治癒した。本例では抗サイトカイン療法+神経保護療法が有効であった可能性が示唆された(脳と発達)。さらに、不随意運動で発症し、FDG-PETで左側頭葉、基底核に代謝亢進を呈した1歳10ヵ月の自己免疫関連脳炎例において、γグロブリン大量療法前後の患者血清を用いて、対照脳組織での免疫組織化学染色を行った。治療前の血清ではFDG-PETの病変部位に一致して神経細胞に染色がみられたが、治療後には染色性が消失した。この結果、抗神経抗体が脳炎の病態に関与していると考えられた。(J.Pediatr)。本年度は急性脳症の治療としてフリーラジカルスカベンジャー(エダラボン)を使用した症例について治療前後で髄液酸化ストレスマーカーを測定し効果を検討した。対象は急性脳症5例、けいれん重積1例で、エダラボンは712日間投与(1mg/kg/日)した。治療前後での髄液酸化ストレスマーカー(DNAに対する8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine ; 8-OHdG、脂質の過酸化マーカーHexanoyl lysineadduct ; HELの2種類)測定を実施した。治療前の髄液8-OHdGは、6例中5例(脳症4例中3例、けいれん重積1例)で高値を示し、治療後はいずれも改善を示した。HELは測定しえた5例中3例で治療前に高値を示したが、治療後の改善も8-OHdGに比べて乏しかった。けいれん重積の1例は脳症への進展が考慮され、入院時より脳症急性期治療が開始された結果、後遺症なく退院した。今回の検討は少数例でありエダラボンの有効性の確認はできなかったが、治療開始を早期に行うことによって効果が得られる可能性があることが示唆された(論文準備中)。さらにHemiconvulsion-hemiplegia-epilepsy(HHE)症候群類似のけいれん重積・群発を2年間に3回繰り返した9歳男児例において、患者血清を用いて対照脳組織での免疫組織化学染色を行った。2回目のけいれん重積時の血清では側頭葉・後頭葉のニューロンに陽性染色を認めたが、回復期には染色性が消失した。この結果、抗神経抗体が関与した病態が考えられた(Barin Dev)。

急性・亜急性の経過をとる小児の脳炎・脳症における積極的な神経保護療法導入のために、剖検脳を用いた神経病理学的解析とELISA法による生体試料(尿、血清、髄液)中のバイオマーカー解析を組み合わせ、脳炎・脳症の病態の系統的な解析を試みた。本年度は自己免疫が関与する脳炎・脳症につき、患者血清を用いた対照脳組織での免疫組織化学染色を行い、ヒト脳組織と結合する抗神経抗体のスクリーニングも実施した。まず、hemiconvulsion-hemiplegia-epilepsy症候群様のけいれん重積症状を繰り返した限局性脳症の9歳男児例について、患者血清を用いた免疫染色で側頭後頭葉の大脳皮質ニューロンに陽性所見を認め寛解期には消失したことから、本症例の発症に自己免疫機序が関与している可能性が示唆された。次にA群β溶連菌感染関連自己免疫性神経障害として、急性散在性脳脊髄炎(ADEM)、Pediatric autoimmune neuropsychiatricdisorders associated withstreptococci (PANDAS)、亜急性脳炎の症例を解析した。ADEMは10歳女児で、発熱、意識障害で発症し頭部MRIで両側基底核に信号異常を認めた。患者血清を用いた解析で急性期に淡蒼球ニューロン陽性、回復期に染色性が消失した。PANDAS症例は7歳女児で、溶連菌感染後6日に行動異常で発症、患者血清を用いた抗神経抗体スクリーニングでは急性期に淡蒼球ニューロンに染色性を示した。亜急性脳炎は9歳女児で、異常興奮と行動異常で発症し亜急性脳炎が疑われIVIG治療を行った。患者血清を用いた脳組織染色で急性期に側頭葉ニューロンに陽性、回復期は染色性が消失した。以上の結果、患者血清を用いた免疫染色は溶連菌感染関連自己免疫性神経障害の抗神経抗体スクリーニングに有用であることが示唆された。本年度当初予定していた計画がほぼ達成されたため。24年度が最終年度であるため、記入しない。急性脳炎・脳症の病態に酸化ストレスが関与していることはこれまでの本研究において明らかにすることができたと考えている。今後は亜急性脳炎にも焦点をあてて、解析を進めていく必要がある。また、抗酸化療法をはじめとする神経保護療法のプロトコール作成のための知見をさらに集積していく。
グリコサミノグリカンによる骨形成促進作用と骨形成因子担体としての機能の研究

ラット骨折モデル作成と骨形成評価Anらの方法(An YH et al.J.Orthop.Trauma.8:111-5,1994)に準じた装置を作成し、成熟ラット脛骨に閉鎖性横骨折を作成した。具体的には、0.9mm Kirschner鋼線を先に脛骨髄内釘として通した後、脛骨中央部に500gの重さのギロチンブレードを40cm落下させて再現性のある骨折を作成した。骨折後同部に各々5匹を標本数として1.無処置とした群2.rhBMP-2溶液単独を加えた群3.rhBMP-2(+/-)のヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸を添加した群を作成した。試薬処置後の後の骨形成を軟線撮影で週毎に8週まで経時的に観察した。rhBMP-2溶液単独群は、骨形成が良好であり、骨折作成後3週で過剰仮骨を伴い骨癒合が完成した。一方rhBMP-2(-)のヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸を注射した群では、rhBMP-2溶液添加時ほどの骨形成は見られず、各群間の骨形成に著明な相違を認めなかった。またコントロール群とは較べても、骨形成に著明な相違を認めなかった。rhBMP-2(+)のヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸を注射した群では、rhBMP-2溶液添加時同等の骨形成が観察されたが、各群間の骨形成に著明な相違を認めなかった。骨形成領域はrhBMP-2溶液単独群に較べ、骨折周囲に限局しており、drug delivery systemとしては有用と考えられた。
ヒト遺伝子の系統的な機能解析に向けた高効率ジーンターゲティング系の開発

ヒト細胞からジーンターゲティングによりノックアウト株の作製は、ターゲット効率低く困難である。最近、我々はヒトプレB細胞腫由来のNalm-6株が高いターゲット効率を持つことを見出した。そこで本研究はヒト遺伝子の系統的な機能解析に応用するため、Nalm-6株を用いた高効率ターゲティング系を開発することを目的とする。今年度、常染色体遺伝子変異・有糸分裂組換え系を作製と、増殖必須遺伝子の条件致死変異株の作製を行った。その結果、(1)10種類の遺伝子座のターゲティングを行い、210%の高効率でターゲットクローンを得た。したがって、Nalm-6細胞が高効率のターゲティングが可能な株であることを確認した。(2)16番染色体に座乗するAPRT遺伝子のターゲティングを行い、ヘテロ破壊(APRT+/-)株を得た。この株を用いて、8-アザアデニン耐性でホモ破壊(APRT-/-)細胞の自然突然変異を検出するFluctuationtest系をほぼ作製した。(3)変異遺伝子の構造解析のため、APRT遺伝子領域を増幅できるPCR解析系を作製した。また、APRT座にリンクし相同染色体を識別できるミニサテライトマーカーを見出した。(4)一方、DNAの2重鎖切断修復やテロメア維持に働くKU70遺伝子の欠損株を取得するためターゲティングを行い、ヘテロ変異株を得た。ついで、第2のターゲティングを行ったがホモ変異株が得られず、KU70は増殖・生存に必須と思われた。(5)そこで、Tet制御系を用いて条件致死株として分離するため、まずヘテロ変異株にTetベクターを導入した。ついで、Tet応答性ヒトKU70 cDNAベクターを導入し、DOXで発現制御できる株を分離した。この株にKU70ターゲティングを行ったがターゲットクローンを得られず、さらに分離法を検討している。
シャーマニズムと精神分析における後継者育成のシステムと理論についての比較研究-口頭伝承論の観点から精神分析を研究する試みを中心に-

本研究は、エクスタシーをその実践と理論の核とするシャーマニズムとラカンの精神分析について、口頭伝承論の観点から、後継者育成のシステムと理論を中心に比較研究し、次のことを明らかにすることを目的としている。すなわち、エクスタシーが後継者の育成にどのように関わるのかについて、精神分析とシャーマニズムそれぞれがどのような理論を有し、かつ実践としてはどのように行っているのか、類似と相違を具体的・実証的に明らかにする。そして、「ことば」では伝達され得ないものを、いかにして後継者に伝達しようとしているのか、また実際にそのようなことがどこまで可能なのか、シャーマニズムと精神分析の可能性と限界について明らかにする。本研究をすすめる過程で、20世紀の両大戦間におけるフランスの精神分析・シュールレアリスム・民族学の相互の思想史的影響関係においてエリアーデの論とラカンの論とを考察することが重要であることに気づき、それぞれの領域と関係の深いミシェル・レリスを軸に調査・研究をおこなってきた。本年度は、3領域の思想史的状況を整理し、以下の点を明確にするための調査をおもにフランスにおいておこなった。(1)シュールレアリストたち(離脱者を含む)が、両大戦間にフロイト理論を参照してゆく過程(2)エリアーデの『シャーマニズム』(1949年)およびレヴィ=ストロースの『構造人類学』(1958年)において、シャーマンによる治療との比較という脈略で検討された「精神分析」の、同時代における治療技法の整理(3)エリアーデ的「エクスタシー」と、カイヨワやバタイユ、レリスなどの「エクスタシー」のとらえ方との相違、および、同時代のフランスにおけるエリアーデ的エクスタシー概念の位置。(4)(3)で考察した両者とラカンにおけるそれとの相違、および、個々の文脈におけるそれぞれの概念の射程範囲と意義本研究は、エクスタシーをその実践と理論の核とするシャーマニズムとラカンの精神分析について、口頭伝承論の観点から、後継者育成のシステムと理論を中心に比較研究し、次のことを明らかにすることを目的としている。そして、「ことば」では伝承され得ないものを、いかにして後継者に伝達しようとしているのか、また実際にそのようなことがどこまで可能なのか、シャーマニズムと精神分析の可能性と限界について明らかにする。本年度は、後継者の養成について、数名の精神分析家へのインタビューを行ったほか、文献収集など、日本およびフランスにおいて調査を行った。フランスでは特に、シャーマニズムの研究および精神分析との双方に関係をもつ民族学者・作家であるミシェル・レリスについての調査を行った。彼は民族学者であり、作家でもあり、精神分析を受けた経験もある。ものごとの「伝達」の問題に深く関心をよせずにはいられなかった人物であるが、民族学者および作家としての彼の探求の足取りをたどることで、20世紀の中盤以降のシャーマニズム研究と精神分析理論の絡み合いがよりくっきりと浮かび上がってきた。平成14年度におこなった調査・研究において、民族学者であり詩人・作家でもあるミシェル・レリスの存在が、精神分析とシャーマニズムを横断する理論の構築に深く関わっていることが明らかになり、本年度は引き続き、レリスの論における「伝達」をめぐって、シャーマニズムがいかなる価値を与えられているのかについて調査・研究を進め、1920年代から30年代におけるシュールレアリスムと関わりながら展開した精神分析と民族学との接近におけるレリスの果たした役割が明らかになった。また、精神分析家の養成については、ユング研究所(チューリッヒ)およびタヴィストックセンター(ロンドン)を中心に資料収集をおこない、精神分析と宗教の問題について、近年、ユング派とフロイト派との歩み寄りが見られる状況が明らかになった。