hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
発達障害の環境要因検討と有効な心理治療の研究

就学前幼児を対象として、幼児の発達の特徴を調査・研究した。1幼児の発達指数の分布はほぼ正規分布となるが、発達の偏りには非常にばらつきが大きいこと、23歳児が5・6歳児より偏りが有意に大きい傾向があること、3神経発達障害児との比較では、発達の量的な遅れに関しては両者に有意な差はあったが、発達のアンバランスについては有意な差は認められなかった。幼児の発達特徴を明らかにすることにより、発達障害の診断の精巧化に貢献。親子の関係性改善の心理学的アプローチとして、個別の支持的相談と併行して集団療法を取り入れることが効果的であることを明らかにした。この10数年の知的能力障害を伴わない神経発達障害の著しい増加の原因として、本来の脳機能の障害に加えて、養育環境などの心理・社会的に要因による不適応群の増加が一因であると考えている。主に2点を研究目的としている。1は横断、2は縦断研究である。1障害発症には個人の特性だけではなく環境要因が作用していることを調査・研究するため、子どもの発達像を掴み、養育環境の変遷を明らかにする。1歳児から5歳児を対象としての発達相談会を実施し、新版K式発達検査を用いて、一般の乳幼児の発達状態像を調査した。幼稚園・保育園の協力を得、また保護者の関心が強く、順調に予定を上回る相談希望者があり、各園でキャンセル待ちが起こった。収集データーから、検査項目の中で15年前の新版K式発達検査改定時の通過率と比べて変動の大きい内容を分析している。内容分析の際、以下の3点に該当する乳幼児が全体のどの位の割合を占めるか調査中である。i認知面と言語社会面の発達間の顕著な差、ii検査の上限(高い能力)と下限(低い能力)との間の顕著な差、iii検査時と日常の行動観察で発達凹凸が顕著であることが認められる。2知的能力障害を伴わない神経発達障害の特性を持つ子どもが障害発症にはならないための効果的な介入の在り方を志向し、心理治療の有効な手立てを探る。保護者の協力・了解を得て、現在5名の発達障害と診断されている幼児の縦断研究に取り掛かっている。心理治療では、詳しく生育歴やその時々の親の関わりを傾聴し、絵画法を取り入れ気づきを高めつつ、解決志向アプローチ面接を継続している。子どもの適応力促進、養育者の子育て支援となっているとの当事者からの積極的な参加の評価を得ている。横断研究では、幼稚園・保育園の協力を得られ、また保護者の関心が強く相談希望者が多数で、園が休みとなる休日に実施。一斉に検査ができ、予定を上回るデーターを収集した。ただ、希望者を募っての実施の為、3歳児のデーターが多い(63名)一方、2歳児は少ない(21名)等の各年齢のデーター数にばらつきが現在生じているので、次年度は年齢に焦点を当てた発達相談会を実施していく。神経発達障害特性を抽出する内容分析では、1歳児から5歳児を対象予定にしていたが、1歳児の対象となる新版K式発達検査項目が少なく、明確な差を設定することが困難なため、2歳児から5歳児を対象とした。縦断研究では、既に発達障害と診断されている5名に月2回の心理治療的アプローチを行っている。母子共に研究参加意欲が高まって、順調に継続している。両研究で専門家の対応が必要であり、研究計画では、専門家の人件費を予算化していた。しかし、公的機関等で活躍している修了生をアルバイト雇用する手続きが困難なため、修了生の希望で全員が無償参加となった。そこで、修了生は一斉の横断研究参加に限定し、研究代表者が修了生が関心を持っている精神医学分野の研究会等に参加して研鑽を積み、得た知識を伝えていく修了生の学びの会を定期的に開催。そのため、人件費が計画より減少、研修参加の旅費が増加している。この10数年の知的能力障害を伴わない神経発達障害の著しい増加の原因は、本来の脳機能の障害に加えて、養育環境などの心理・社会的に要因による不適応群の増加が一因であると考えている。現在の神経発達障害の診断では、家庭や教育現場で不適応症状を呈した子どもに対して発達検査を実施して発達に大きな凹凸が発見されると、神経発達障害の診断がつく傾向がある。しかし一般に考えられている以上に子どもは発達に大きな凹凸を持っている。この研究では、1、の横断研究で、子どもの発達像の特徴を明らかにし、2、の縦断研究で神経発達障害の特性を持つ子どもが不適応症状を起こさないための効果的な介入の在り方を志向し、心理治療の有効な手立てを探ることを目的としている。そのことが養育者への子育て支援と子どもの自尊感情の向上につながることを目指している。1、1歳児から5歳児を対象として、保育園・幼稚園にて発達相談会を実施し、新版K式発達検査を用いて、通園している幼児の発達状態像を調査した。以下の3点に着目して、子どもの発達像を掴み、養育環境の課題を明らかにする。(1)認知面と言語社会面の発達間の顕著な差、(2)検査の上限(高い能力)と下限(低い能力)との間の顕著な差、(3)検査時と日常の行動で神経発達障害の特性が観察される。2、3点に着目した発達像から発達に大きな凹凸があるが不適応症状を起こしてない子どもと不適応を起こしている子どもを抽出し、個別に継続している。

心理治療では、詳しく生育歴やその時々の親の関わりを傾聴し、絵画法を取り入れ気づきを高めつつ、解決志向アプローチ面接・TEACCHを活用して対応している。子どもの適応力促進、養育者の子育て支援となっているとの当事者からの積極的な参加の評価を得ている。横断研究では、幼稚園・保育園の協力を得られ、2歳児から5歳児を対象として253人の被験者数獲得。その中で全ての検査項目実施できていたのが206人であった。予定の被験者数を獲得したので、保育園・幼稚園での相談会は終了して、3点(認知面と言語社会面の発達間の差・検査の上限と下限間の差・検査時と日常の行動観察)に着目して、内容分析を行っている。相談会の実施日が5月から翌2月まで幅があるため、例えば2歳児クラスには、2歳1か月から3歳10か月までの子どもが在籍することとなってしまうので、生活年齢毎に内容分析を行うこととした。すなわち2歳児は2歳0か月から2歳11か月とし、2- 5歳児クラスは2-6歳の年齢別に分けることとした。縦断研究では、今年度ノースカロライナ大学のTEACCHの視察・研修に参加して個別の心理治療に活用、また総合福祉センター弘済学園の施設見学では虐待の実態を再認識して母子治療に活かすことができた。既に発達障害と診断されている5名に月2回の心理治療的アプローチを継続している。また、京都市保健センターでは10数名の発達障害児をもつ母親グループへの母親へのカウンセリングと保健師へのスーパーバイズを実践し、心理治療の有効な手立てを探る研究を継続している。保育所・幼稚園に通う2歳から6歳の幼児を対象として、新版K式発達検査2001を実施して、幼児の発達の特徴を調査・研究した。その結果、第一に、一般幼児(238名)はDQ(発達指数)の分布がほぼ正規分布になるが、L-S DQ(言語・社会群の発達指数)とC-A DQ(認知・適応群の発達指数)の群差、またT(上限:最も高い通過年齢)-B(下限:最も低い不通過年齢)検査項目の差には非常にはばらつきが大きいことが明らかとなった。L-S DQとC-A DQの差は3歳児に発達の凸凹が大きく、3歳児が5・6歳児より有意に大きい傾向がみられた。第二に、定型発達幼児と神経発達障害と診断された幼児の間では、両者に発達の遅れに関して有意な差はあったが、偏りに関しては有意な差はなかった。第三に、T-B差に関しては診断、有意な差が見られた(F(4、233)=7.66、p<.001)。多重比較では知的能力障害確定診断児と注意欠如・多動症確定診断児間では有意な差があった。幼児の発達特徴を明らかにすることは、発達障害の診断をより精巧にできる。現在増え続けている知的能力障害を伴わない発達障害幼児の診断の在り方への検討に提言できる。親子の関係性改善の心理学治療では、個別と集団にアプローチした。個別では、6組の親子を対象にして、9分割統合絵画法を活用して継続面接し、集団では、神経発達障害の特性を持つと診断された幼児の母親(59名)を対象にして、継続グループカウンセリングを実施した。幼児の発達の指数の伸び、母親の育児不安の軽減、子どもへの関わりに良好な態度変容が認められた。問題解決に焦点化したグループカウンセリングは短期でも効果が明らかであった。就学前幼児を対象として、幼児の発達の特徴を調査・研究した。
魚の挙動解析用画像処理システムの開発

魚通過可能な水車ランナケーシングをアクリルで製作し,ビデオカメラで魚が通過する様子を撮影可能にした.また,4種類のディフューザ(ストレート型,広がり角15°および24°のディフューザ,広がり角24°のドラフトチューブ)を製作し,水車に取り付けた.実験より,ランナ内を魚が通過する場合の水車性能,ランナ内流速,ケーシングの壁面圧力(負圧)およびランナの翼枚数を詳細に調べ,魚の通過率との関係を明らかにした.その結果,魚が通過する条件を次のように絞り込むことができ,画像処理を行うための基礎データが得られた.1.魚が通過可能な水車回転数は,無負荷運転時では250rpmに達するが,最高効率運転時には150rpm程度が限界である.2.魚が通過可能なケーシング内の負圧は,無負荷運転時には-40mm水柱程度であったが,最適負荷運転時には-500mm水柱程度まで魚は通過可能である.3.魚の体長は通過率に大きく影響する.つまり,ランナ回転数が速かったり,羽根枚数が多いことによる通過し易さは,体長が小さいほど有利である.しかし,流速等が速いと大きな魚の方が体力が優るため,通過し易いことがある.本研究によって,水車の条件によっては,魚には1秒当たり体長の10倍程度の遊泳能力があることが明らかになった.以上のようにランナ内流速,圧力,魚の体長,遊泳能力に関する結果を取りまとめた.今後はこれらをデータベース化し,画像処理システムに載せ,環境に優しい魚が通過可能な水車形状および運転状態の決定を行う予定である.魚通過可能な水車ランナケーシングをアクリルで製作し,ビデオカメラで魚が通過する様子を撮影可能にした.また,4種類のディフューザ(ストレート型,広がり角15°および24°のディフューザ,広がり角24°のドラフトチューブ)を製作し,水車に取り付けた.実験より,ランナ内を魚が通過する場合の水車性能,ランナ内流速,ケーシングの壁面圧力(負圧)およびランナの翼枚数を詳細に調べ,魚の通過率との関係を明らかにした.その結果,魚が通過する条件を次のように絞り込むことができ,画像処理を行うための基礎データが得られた.1.魚が通過可能な水車回転数は,無負荷運転時では250rpmに達するが,最高効率運転時には150rpm程度が限界である.2.魚が通過可能なケーシング内の負圧は,無負荷運転時には-40mm水柱程度であったが,最適負荷運転時には-500mm水柱程度まで魚は通過可能である.3.魚の体長は通過率に大きく影響する.つまり,ランナ回転数が速かったり,羽根枚数が多いことによる通過し易さは,体長が小さいほど有利である.しかし,流速等が速いと大きな魚の方が体力が優るため,通過し易いことがある.本研究によって,水車の条件によっては,魚には1秒当たり体長の10倍程度の遊泳能力があることが明らかになった.以上のようにランナ内流速,圧力,魚の体長,遊泳能力に関する結果を取りまとめた.今後はこれらをデータベース化し,画像処理システムに載せ,環境に優しい魚が通過可能な水車形状および運転状態の決定を行う予定である.
スピン選択的化学反応の量子ダイナミクス

ラジカル対のスピン選択的な化学反応について,ラジカル対のスピン状態と電荷再結合生成物との間でのコヒーレンスの生成の有無を明らかにする事を目的として,理論,実験の両面からの研究を行った.ラジカル対のダイナミクスとして理想的に振る舞うC-P-F(カルテノイドーポルフィリンーフラーレン)三元分子系の強磁場中における化学反応動力学を観測する事により,申請者が提案する理論モデルとの関係を実験的に明らかにする事を目的とし,実験結果と理論との関連を以下の様に検討した.スピン選択的逆電子移動反応に伴うこコヒーレンスの生成はBixonーJortner型のモデルで考えることが出来る.しかし化学反応が溶液中で起こるために,ラジカル対が活性化状態に励起される事が必要であり,その活性化状態において分子系のデコヒーレンスが起こる可能性(量子観測と呼ばれる)が議論されてきた.活性化のプロセスについて,ラジカル対の減衰の温度依存性から新たに考察した.アーレニウスプロットから活性化エネルギーを決定した.本逆電子移動反応は,マーカル理論の逆転領域に存在し,その事から活性化状態に励起されたラジカル対が化学反応を起こす確率は50%を超えることはありえない.以上のことを元にして,かつ実験的に得られたラジカル対の減衰を条件に,ラジカル対の基底状態と活性化状態との2サイトモデルを構築した.2サイトモデルによる分子反応ダイナミクスと,電子スピンのダイナミクスを計算したところ,量子観測によるスピンのデコヒーレンスは最大でも30%.さらに実験で用いられた実際の予想される活性化速度を考えれば,デコヒーレンスの寄与は殆ど無いものと結論され,実験結果とよく一致している.結果は以前に測定されたC-P-F(カルテノイドーポルフィリンーフラーレン)三元分子系の実験結果と合わせて現在投稿準備中である.26年度が最終年度であるため、記入しない。26年度が最終年度であるため、記入しない。
In-situ定量画像診断のための体内組織音速の透過型ビームCT映像法

本研究では、腹部体表周囲上の多地点に置いた送受信器間で低周波百kHz帯超音波の透過観測を行い、その伝搬時間データをもとに腹部断面音速のトモグラフィ映像を実現するための検討を行った。ここでは、メタボリックシンドローム診断に役立てることを意図して、脂肪領域が他の領域に比べて100m/s程度音速が遅いことを利用して、再現された腹部断面の音速映像から内臓脂肪面積を推定する方法の提案および評価試験を行った。本研究における直線経路伝搬モデルを前提にしたトモグラフィ計算の技術的困難点の第一は、強散乱体である脊髄が映像化の障害になることである。この問題に対して、参照波に対するひずみが一定以上に大きい受信波は、脊髄の通過その他の原因で直線経路伝搬モデルを満足しないと判断して、画像計算のデータから取り除くこととした。第二は、通常のMHz帯では音波減衰が大きく腹部体表間の音波の送受信が困難であるため、百kHz帯の低周波超音波を用いた。第三は、データの観測時間を短縮し、しかも装置を安価に実現するために、少数の送受信経路データをもとに画像再現を行った。このような不完全なデータから画像を再現する方法として、経路平滑化ART法(代数的画像再構成法)を考案し本問題に適用した。具体的には、直径400mmの円周上の等角度32地点の場所を、対向送受信器対を回転走査させることで、脊髄を通る経路を除いた約100経路の少ない伝搬時間の観測データをもとに画像再現を行った。また、X線CT像との比較を含めて、被験者に対するへそ周囲の腹部断面映像の評価実験を行った。音波トモグラフィ法による腹部断面領域(筋肉、皮下脂肪、内蔵脂肪、腸、腎臓、脊髄)の形状の再現性能は多少正確さを欠くが、脂肪面積の推定精度については、ほぼ満足のいく精度が実現できることが確認された。これにより本手法のメタボリックシンドローム診断への適用の可能性が示された。本研究では、腹部体内を対象とした可視化定量画像診断を可能にすることを目的として、百kHz帯の超音波の多方向透過型観測に基づいた、低周波透過型ビームCT音速映像法を実現するための検討を行った。本手法を実現するに当たって、CT計算の前提条件として、低周波拡散波照射の際の透過伝搬位相差が、媒質中の逆音速の直線経路積分計算モデルによって表すことができることの前提条件が成立している必要がある。また、映像化の妨げとなる強散乱体である脊髄の影響を取り除くための対策、さらに脊髄を回避しながら低周波領域の透過型観測を行うことの必要性から、少数の送受信データから画像を再現するための過小決定逆問題に如何に対処するかが大きな問題になる。本研究では、これらの問題に具体的に対処するための方法の提案とその評価試験を行った。具体的には、実際の腹部を模擬した生体模擬ファントムを用いて、直線経路積分計算モデルの妥当性、ならびにそのための最適な送受信観測条件を、有限差分法による数値シミュレーションにもとづいて明らかにした。ここでは、直線経路伝播モデルを用いることによって、脊髄を通る経路上の測定データを取り除いたCT計算を可能にした。更に、経路平滑化ART法を用いることにより、数十オーダの少ない観測経路データからCT音速映像を再現することを可能にした。腹部を囲む円周上の16箇所に配置した送受信兼用の狭開口送受信素子の各々から中心周波数200kHzのパルス音波を照射した際の透過波を受波するシステムを構築した。脊髄を含む腹部模擬ファントムを用いたシミュレーション評価

試験の結果、おおむね定量精度の良い腹部音速映像が再現できる結果を示すことができた。本研究では、腹部体表周囲上の多地点に置いた送受信器間で低周波百kHz帯超音波の透過観測を行い、その伝搬時間データをもとに腹部断面音速のトモグラフィ映像を実現するための検討を行った。ここでは、メタボリックシンドローム診断に役立てることを意図して、脂肪領域が他の領域に比べて100m/s程度音速が遅いことを利用して、再現された腹部断面の音速映像から内臓脂肪面積を推定する方法の提案および評価試験を行った。本研究における直線経路伝搬モデルを前提にしたトモグラフィ計算の技術的困難点の第一は、強散乱体である脊髄が映像化の障害になることである。この問題に対して、参照波に対するひずみが一定以上に大きい受信波は、脊髄の通過その他の原因で直線経路伝搬モデルを満足しないと判断して、画像計算のデータから取り除くこととした。第二は、通常のMHz帯では音波減衰が大きく腹部体表間の音波の送受信が困難であるため、百kHz帯の低周波超音波を用いた。第三は、データの観測時間を短縮し、しかも装置を安価に実現するために、少数の送受信経路データをもとに画像再現を行った。このような不完全なデータから画像を再現する方法として、経路平滑化ART法(代数的画像再構成法)を考案し本問題に適用した。具体的には、直径400mmの円周上の等角度32地点の場所を、対向送受信器対を回転走査させることで、脊髄を通る経路を除いた約100経路の少ない伝搬時間の観測データをもとに画像再現を行った。また、X線CT像との比較を含めて、被験者に対するへそ周囲の腹部断面映像の評価実験を行った。音波トモグラフィ法による腹部断面領域(筋肉、皮下脂肪、内蔵脂肪、腸、腎臓、脊髄)の形状の再現性能は多少正確さを欠くが、脂肪面積の推定精度については、ほぼ満足のいく精度が実現できることが確認された。これにより本手法のメタボリックシンドローム診断への適用の可能性が示された。
イネケイ酸吸収遺伝子の機能解析

イネ科植物は一般的にケイ素集積植物とされているが、その集積程度は種によって大きく異なり、イネがオオムギやトウモロコシより高い集積を示す。しかし、これまでにイネやオオムギ、トウモロコシから同様なケイ酸トランスポーター遺伝子が同定されている。本研究ではケイ酸吸収における種間差の機構を明らかにするために。ケイ酸内向きケイ酸トランスポーターLsi1と外向きケイ酸トランスポーターLsi2の局在性、発現量、輸送活性などについてイネ、オオムギとトウモロコシ間で比較検討した。オオムギとトウモロコシのLsi1およびLsi2について生化学的手法を用いて細胞内局在性を調べたところ、両者のLsi1,Lsi2とも細胞膜に局在することが明らかになった。抗体染色でLsi2の組織局在性を調べた結果、イネのLsi2とは異なり、オオムギとトウモロコシのLsi2は内皮細胞だけに局在していた。またイネとオオムギとの間で根でのそれぞれの遺伝子の発現量をReal-time RT-PCRを用いて絶対定量法により比較した結果、根におけるmRNAの発現量はLsi1、Lsi2共にオオムギに比ベイネの方が数倍から10倍高かった。さらにアフリカツメガエルoocyteを用いたヘテロ発現系でそれぞれの輸送体の持つケイ酸輸送活性の比較も行った。Lsi2に関してoocyteで発現させた同時にoocyteよりmicrosomeを抽出しwestern blotで発現しているタンパク質の定量を行い、発現タンパク質レベルでの輸送活性を比較した。その結果、イネとオオムギと比較してイネの方がわずかに高かった。これらの結果はイネのケイ酸吸収能力の高さは主にケイ酸吸収関連遺伝子がオオムギやトウモロコシより高いのに加え、トランスポーターの組織局在性に起因することを示唆している。イネの根から単離したケイ酸輸送体Lsi1は6つの膜貫通領域を持ち、アクアポリンのNIPサブファミリーに属する(Ma et al.,2006)。アフリカツメガエルの卵母細胞(oocyte)を用いて、Lsi1の輸送特性を調べた。まずLsi1のケイ酸輸送のkineticsを調べたところ外液中のケイ酸濃度の増加に伴って細胞内への輸送活性が直線的に増加した。このことはLsi1が濃度依存的にケイ酸を輸送していることを示している。次に、Lsi1の基質特異性を調べるため、ケイ酸と同じく中性条件下で電荷を持たない中性分子で存在しているグリセロール、尿素、ホウ酸の輸送活性を測定した。NIPの中にはこれらを透過するものがこれまでにいくつか報告されている。Lsi1はグリセロールに対して輸送活性を示さなかったが、尿素やホウ酸に対して輸送活性を示した。しかし、ケイ酸と等モルの尿素の共存下でケイ酸の輸送活性が影響されなかった。また等モルのホウ素の共存下で、ケイ素の輸送活性は20%減少した。これらのことはLsi1がケイ酸に対して高い親和性を持っていることを示している。さらにLsi1の双方向性について検討したところ、ケイ酸の輸送に関して双方向性が認められた。また、イネのケイ酸吸収は水銀処理や低温処理により阻害されることからLsi1の輸送活性に及ぼすこれらの影響も検討した。塩化水銀の共存下でLsi1のケイ酸の取り込みは約60%低下した。これに対して、低温処理による影響は認められなかった。さらにNIPサブファミリーの他のタンパク質についてもケイ酸の輸送活性を調べた。Lsi1を含むサブグループ(イネのLsi1とOsNIP2;2、トウモロコシのZmNIP2-1、ZmNIP2-2)はすべてケイ酸の輸送活性を示した。しかし、異なるサブグループのNIP(イネOsNIP1;1OsMP3;1)はケイ酸の輸送活性を示さなかった。本年度はinflux型ケイ酸輸送体Lsi1の輸送特性の解析を中心に機能解析を行い、以上述べたことを明らかにした。これらの結果は日本土壌肥料学会(9月、秋田)と日本植物生理学会(3月、松山)で、口頭発表した。イネの根から新たに単離されたケイ酸トランスポーターLsi2は11個の膜貫通ドメインを持ち、アニオントランスポーター様のタンパク質をコードしている(Ma, et. al.,2007)。Lsi2は先に単離されたLsi1との相同性はなく、イネゲノム上に存在するいくつかの相同遺伝子の機能も明らかにされていない。そこで、Lsi2の機能解析をアフリカツメガエル卵母細胞発現系を用いて行なった。Lsi1とは異なりLsi2にはケイ酸の内向きの輸送活性は見られなかった。共同研究者の実験結果よりLsi2はイネの根の内皮細胞と外皮細胞の向心側にLsi1と対をなすように局在していることが明らかとなっていたため、次にケイ酸排出能を調べた。その結果Lsi2はケイ酸の排出能を持っていることがわかった。また、Lsi2タンパク質のケイ酸輸送活性は低温処理や、CCCP、FCCP、2,4-DNPなどのプロトノフォアによって低下した。更にケイ酸の輸送活性は外液のpHの増加に伴い減少した。これらのことからLsi2は細胞内外のプロトンの濃度勾配を利用してケイ酸を能動的に排出する輸送体であることが明らかになった。以上の結果は2007年7月、Nature誌に発表した。またLsi1、Lsi2の相同遺伝子(ZmLsi1、ZmLsi2)をトウモロコシから新たに単離した。

トウモロコシもケイ酸を積極的に吸収する植物のひとつである。RT-PCRによりZmLsi1、ZmLsi2のmRNAの発現部位を調べたところともにイネと同様、根で発現していた。ケイ酸の前処理によりトウモロコシのケイ酸吸収は3日目以降低下した。このときのZmLsi1、ZmLsi2のmRNAの発現量をreal-time PCRで調べたところZmLsi1は変化しなかったが、ZmLsi2はケイ酸処理3日目以降低下した。イネではLsi1、Lsi2ともにケイ酸処理によりその発現が低下することが報告されている。更に共同研究者によってZmLsi1は根の表皮細胞と皮層細胞に、ZmLsi2は内皮細胞に局在していることが明らかにされており、これらのことからトウモロコシにはイネに見られるようなLsi1とLsi2の協調した働きが見られないことによってイネほど効率よくケイ酸の吸収が行えていないと考えられる。これらの結果は2007年8月の日本土壌肥料学会年会、および2008年3月の日本植物生理学会年会で報告した。イネ科植物は一般的にケイ素集積植物とされているが、その集積程度は種によって大きく異なり、イネがオオムギやトウモロコシより高い集積を示す。しかし、これまでにイネやオオムギ、トウモロコシから同様なケイ酸トランスポーター遺伝子が同定されている。本研究ではケイ酸吸収における種間差の機構を明らかにするために。ケイ酸内向きケイ酸トランスポーターLsi1と外向きケイ酸トランスポーターLsi2の局在性、発現量、輸送活性などについてイネ、オオムギとトウモロコシ間で比較検討した。オオムギとトウモロコシのLsi1およびLsi2について生化学的手法を用いて細胞内局在性を調べたところ、両者のLsi1,Lsi2とも細胞膜に局在することが明らかになった。抗体染色でLsi2の組織局在性を調べた結果、イネのLsi2とは異なり、オオムギとトウモロコシのLsi2は内皮細胞だけに局在していた。またイネとオオムギとの間で根でのそれぞれの遺伝子の発現量をReal-time RT-PCRを用いて絶対定量法により比較した結果、根におけるmRNAの発現量はLsi1、Lsi2共にオオムギに比ベイネの方が数倍から10倍高かった。さらにアフリカツメガエルoocyteを用いたヘテロ発現系でそれぞれの輸送体の持つケイ酸輸送活性の比較も行った。Lsi2に関してoocyteで発現させた同時にoocyteよりmicrosomeを抽出しwestern blotで発現しているタンパク質の定量を行い、発現タンパク質レベルでの輸送活性を比較した。その結果、イネとオオムギと比較してイネの方がわずかに高かった。これらの結果はイネのケイ酸吸収能力の高さは主にケイ酸吸収関連遺伝子がオオムギやトウモロコシより高いのに加え、トランスポーターの組織局在性に起因することを示唆している。
肺高血圧における遺伝子発現プロファイル解析による病態分子機構の解明

低酸素性肺高血圧モデルラットは、ヒト肺高血圧の病態に酷似した組織変化を示すことが知られている。このモデルでのトランスクリプトーム(mRNA)の経時的変化を、我々が独自に作成したRat Lung HypoxiaChipを用いてDNAマイクロアレイ法によりスクリーニング解析した。このChipはFluorescent Differential Display (FDD)にて低酸素により発現変化が認められたクローン、およびハウスキーピングジーン等、約200遺伝子を増幅し、スライドガラス上にスポットしたものである。DNAマイクロアレイ法は、スライドグラス上に多数の異なったプローブcDNAを高密度に張り付けたDNAチップを作製し、そこに蛍光標識したターゲットcDNAをハイブリダイズさせ、レーザー照射による蛍光強度を数値化し、ターゲット遺伝子の発現変化を解析する方法である。その結果、低酸素1日目に著明に上昇するパターンを示すものとして、tropoelastin、β-globin、低酸素3日目に著明に上昇するパターンとして、S-adenosylmethionine decarboxylase、collagen alpha 1 type I、低酸素7日目に著明に上昇するパターンとして、S100A9などが認められた。このように、Hypoxia response gene clusterを同定し、それぞれの経時的変化と役割を解析することによって、病態に関連する分子種について包括的な情報が得られた。この病態の経時的変化を解析するために、曝露期間を1,3,7日間に設定した低酸素曝露による肺高血圧ラットを作製して、マイクロアレイ法により遺伝子発現変化を解析した。以前我々はディファレンシャルディスプレイ法を用いて、低酸素性肺高血圧モデルラットにおいて、病態の初期に発現量の変化する遺伝子群をクローニングしたが、今回さらに、S100ファミリー遺伝子群を追加し、マイクロアレイ法のプローブとして用いた。まずすでにクローニングされている各遺伝子をPCR法により増幅、濃縮したcDNAを、Genetic Micro Systems社製のGMS417 Arrayerにてスライドガラス上に配置しDNAチップを作製した。低酸素曝露による肺高血圧ラットと対照群の肺組織からmRNAを抽出し、蛍光標識ヌクレオチドを含んだ溶液中で逆転写を行い、ハイブリダイズ用ターゲットcDNAを作製した。以上の、DNAチップとターゲットcDNAより得られたデータより、ターゲット遺伝子の発現を数値化し、発現比を求め比較した。発現の増大、または減少している遺伝子の配列をシークエンスし、遺伝子データベース(NCBI BLAST)で検索した。現在は、マイクロアレイ法で増減した遺伝子発現を、RT-PCR法など他の方法で、さらに検証中である。このChipはFluorescent Differential Display(FDD)にて低酸素により発現変化が認められたクローン、およびハウスキーピングジーン等、約200遺伝子を増幅し、スライドガラス上にスポットしたものである。
C/N栄養シグナルと花成制御シグナル統合分子基盤の解明

本研究課題では,C/N栄養シグナルと花成制御シグナル統合分子基盤の解明を目指し,新たなアプローチを試みた。まず,トランスクリプトーム解析から,C/Nシグナルの伝達に重要な因子として新規リン酸化キナーゼを単離し,機能を明らかにした。また,C/Nに応答したリン酸化プロテオーム解析の結果,栄養シグナルと花成シグナルの統合に関わる鍵因子候補が単離された。これら候補因子の変異体解析および遺伝子発現解析によって,栄養シグナルと光周期性依存花成経路のクロストークに関する新たな知見が得られた。これらの研究成果から,これまで未知であった栄養環境に応答した植物の成長相転換制御分子機構の一面が明らかになった。本研究では,「C/N栄養シグナルと花成制御シグナル統合分子基盤の解明」を目指し,新たなアプローチを試みる。基幹代謝の根幹を担うC/N(炭素/窒素)バランスが植物の花成制御に関与することに着目し,独自の植物材料および実験系も用いた3つの実験課題を実施する。1)ATL31と花成制御因子変異体を用いたC/N誘導性花成経路の遺伝学的解析, 2)C/N応答性の定量的リン酸化プロテオームおよびマイクロアレイ解析を行うことで,C/N誘導性花成制御ネットワーク(既存の花成制御因子群・新規伝達経路)について明らかにする。さらに,3)C/Nに応答した14-3-3依存的TPS活性制御とTPS変異体のC/N誘導性花成を検証することで,C/N応答性花成を直接的に誘導する鍵代謝物とその制御機構の詳細を明らかにする。当該年度は,既存の花成制御変異体を用いた表現型解析から,C/N栄養応答と光周期花成経路のクロストークに関する知見を得た。また,並行して進めたリン酸化プロテオーム解析から,光周期花成に関わる転写因子のリン酸化がC/N栄養条件に応じて変動することを突き止めた。さらに,植物の一次代謝系おけるに鍵代謝物であるトレハロース-6リン酸の定量解析から,トレハロース-6リン酸蓄積量がC/N栄養状態に応じて変動することも分かった。これらの解析結果から,今まで未知であったC/N栄養素シグナルによる花成制御分子メカニズムの実態が見えてきた。本研究課題を構成する3つの実験課題に関して,いずれも当初予定していた進捗が見られた。特に,リン酸化プロテオーム解析で単離したC/N栄養応答性花成の鍵因子と既存の花成変異体を用いた解析結果から得られた知見は,互いに関連しており,重要な情報となった。本研究では,「C/N栄養シグナルと花成制御シグナル統合分子基盤の解明」を目指し,新たなアプローチを試みた。基幹代謝の根幹を担うC/N(炭素/窒素)バランスが植物の花成制御に関与することに着目し,独自の植物材料および実験系も用いた3つの実験課題を実施した。当該年度は,昨年度得られた結果をもとに,C/N栄養シグナルと光周期依存花成経路とのクロストークに焦点を当てた解析を進めた。その結果,光周期依存花成経路で重要な役割を果たす転写因子がC/N条件に応じてリン酸化されることが分った。また,高感度MS解析から,複数のリン酸化部位を特定した。加えて,詳細な遺伝子発現解析から,この転写因子の標的遺伝子群が確かにC/N条件に応じた発現変動を示すことが確認された。これらの解析結果から,今まで未知であったC/N栄養素シグナルと花成制御シグナルクロストークの分子実態が見えてきた。これまでのリン酸化プロテオーム解析と花成変異体を用いた遺伝学的解析から得られた,新規C/N栄養応答性花成の鍵因子に関して,より深い生化学的および生理学的解析を進める。具体的には,鍵因子のリン酸化修飾がタンパク質機能に与える影響を特定する。また,トレハロース-6リン酸経路との関連を精査することで,栄養素シグナルと花成シグナルの統合に関する新たな分子メカニズムを明らかにする。植物科学平成27年度中に納品したが、支払い手続きが次年度以降になったため。平成27年度中に納品したが、支払い手続きが次年度以降になった物品購入支払いに使用する。
形状測定データのマルチスケール化と圧縮法

本研究では、機能面の形状情報をマルチスケール的考え方で統一して記録・保存し、要求に応じて任意のスケールで再生できる形式の提案と、そのための形状測定システムを高分解能の高精度画像読取り形式の測定ユニットとそのスキャニングによるワイドレンジ測定システムとして開発することを行なう。すなわち、機器開発に関しては高周波領域のデータを高精度・高分解能で高速測定する装置を、特に高速測定の点から画像読取り方式の測定顕微鏡で実現させ、これを機能面全体の測定領域でスキャンさせることにより、ワイドダイナミックレンジの測定を実現させる。ここで問題となるのは、スキャンさせた各領域のデータの接続と保存法である。接続法については機器の精度および相関技術によって行なう方法を実現した。一方、保存法については、高密度データの圧縮と、マルチスケールなデータの取り扱いを考慮して、新方式を検討した。その考え方は、人間の感性や認識特性に合致したものであり、現在主流のJPEGやMPEGの画像圧縮法よりさらに進んだFlashPixフォーマットに類似したものである。2年間の本研究の結果、マルチスケールな測定を開発したシステムにより実現できたこと、スティッチングによるつなぎ合せは有効であり実際にワイドレンジな測定が行なえたこと、これを応用したトランケーション摩耗の全体積を高精度に測定するなど本研究の目的が実際の機能評価において確認できたことなどが成果として挙げられる。一方、本研究の結果明らかになった今後の課題として、非平面形体においても本研究のマルチスケール測定を実現できることが望まれること、取得データの圧縮・保存・展開等に大きな容量を要することから、マルチスケール測定データを含む三次元表面データのファイルフォーマットの柔軟性を備えた体系化が望まれることなどが挙げられる。本研究では、機能面の形状情報をマルチスケール的考え方で統一して記録・保存し、要求に応じて任意のスケールで再生できる形式の提案と、そのための形状測定システムを高分解能の高精度画像読取り形式の測定ユニットとそのスキャニングシステムによるワイドレンジ測定システムとして開発することを行なう。接続法については機器の精度および相関技術によって行なう方法を実現する。一方、保存法については、高密度データの圧縮と、マルチスケールなデータの取り扱いを考慮して、新方式を採用する。2年計画の初年度に当たる本年度は、基本的実験システムを作成し、測定実験により得られた実データに基づいて、各微小領域のデータの接続法に関する検討を行なった。研究は概ね予定通り実施された。本研究で採用した画像読取り方式の測定システムの基本性能を確認し、併せて試料を走査させるテーブルの運動精度を検証した。その運動精度範囲内では接続を行なわせる最適化手法は単峰であることが実験的に確認され、データの接続がうまく行なえることが裏付けられた。

その考え方は、人間の感性や認識特性に合致したものであり、現在主流のJPEGやMPEGの画像圧縮法よりさらに進んだFlashPixフォーマットに類似したものである。2年間の本研究の結果、マルチスケールな測定を開発したシステムにより実現できたこと、スティッチングによるつなぎ合せは有効であり実際にワイドレンジな測定が行なえたこと、これを応用したトランケーション摩耗の全体積を高精度に測定するなど本研究の目的が実際の機能評価において確認できたことなどが成果として挙げられる。一方、本研究の結果明らかになった今後の課題として非平面形体においても本研究のマルチスケール測定を実現できることが望まれること、取得データの圧縮・保存・展開等に大きな容量を要することから、マルチスケール測定データを含む三次元表面データのファイルフォーマットの柔軟性を備えた体系化が望まれることなどが挙げられる。
組み換えC蛋白で誘発した実験的多発筋炎の発症機構の解明と特異免疫療法の開発

本研究は、1)C蛋白誘発筋炎の発症機構をより詳細に分析すること、2)得られた結果に基づいて、特異的な免疫療法を開発することを目標として遂行された。まず、C蛋白の全長をカバーする4つの遺伝子組み換え蛋白を作製してラットに免疫し、最も筋炎惹起性の強いフラグメント2を同定した。さらに、フラグメント2をカバーするオーバーラッピング・ペプチドを用いて、T細胞エピトープがペプチド5に、B細胞エピトープがペプチド3にあることを明らかにした。これらペプチドの筋炎惹起性を分析する過程で、自己免疫性多発性節炎にはある特性を持った抗C蛋白抗体が発症に重要な役割を果たすことが示され、より詳細な解析を行うためにモノクローナル抗体を作成した。現在、モノクローナル抗体投与実験による発症機構解析が進行中である。また、特異免疫療法については疾患の進行を抑制するケモカイン受容体DNA療法を開発し、その効果を検定しつつある。以上の解析を通じて、これまで充分解明されていなかったヒト多発性筋炎の発症機構を明らかにするとともに、免疫特異療法を開発することをめざす。本研究の目的は、1)C蛋白誘発筋炎の発症機構をより詳細に分析すること、2)得られた結果に基づき特異的な免疫療法を開発することにある。このために以下の分析を行なった。まず、C蛋白(140KDa)の全長をカバーする4つの遺伝子組み換え蛋白を作製してラットに免疫し、最も筋炎惹起性の強いフラグメントがフラグメント2であることを同定した。さらに、フラグメント2をカバーするオーバーラッピング・ペプチドを用いて、C蛋白分子のT細胞、B細胞の反序部位を決定した。現在、これらのペプチドを用いて筋炎発症にT細胞、B細胞がどのように関与しているか分析中である。自己免疫疾患発症に関与するT細胞レセプターやサイトカイン遺伝子を蛋白発現ベクターに組み込んで大腸菌で増幅後、精製してDNAワクチンを作製した。DNAワクチンをあらかじめ動物に投与して筋炎惹起性T細胞に対する抑制免疫を誘導し、筋炎の発症を抑制ことを試みた。現時点で顕著に疾患を抑制するDNAワクチンを見出していないが、次年度にはより広範囲に検索を行い、有効なワクチンの開発につとめる。これらの研究を通じて、これまで充分解明されていなかった多発性筋炎の発症機構を明らかにするとともに、免疫療法の基礎的な知見を得ることをめざす。
発達障害のある青少年の適切なインターネット利用を促進する心理教育プログラムの開発

特別支援教育が始まり,発達障害・知的障害のある児童生徒への情報通信技術(以下,ICT)を使った支援も広まりをみせているが,発達障害・知的障害のある青少年が安心してインターネットを利用するために必要な情報やスキルに関する研究はほとんど行われていない。発達障害・知的障害のある青少年にとっても,適切なインターネット利用方法を学ぶことは,これからもインターネットの普及と発展が広まるであろう社会で適応的な生活を送るために必要不可欠である。そこで本研究では,発達障害・知的障害のある青少年のインターネット利用の実態を明らかにし,よりよく利用するための心理教育プログラムを開発する。
長期データを用いたツキノワグマの繁殖パラメータの算出とそれに影響する要因の検討

長期に蓄積された学術捕獲個体、駆除個体の歯や生殖器、直接観察記録や、行動情報から、ツキノワグマの繁殖パラメータ各値を算出するとともに、それらの経年的変化に影響する各環境条件の有無やその程度を検討する。さらに、繁殖パラメータ値の経年変化が個体群構造に及ぼす影響を遺伝学的手法で検証することで、各環境条件がクマの個体群構造に及ぼす影響を国際共同研究体制のもとで解明する。本結果により、科学的根拠にもとづくクマ個体群の適正な管理体制の構築が期待できる。
健康観・保健行動の転換とその把握方法及び理論化に関する研究

近年、欧米諸国のみならず日本においても、健康が損われてからの対応や医者依存の健康管理ではなく、一般の人々自身の積極的で主体的な健康や病気への取り組みが広がりを見せている。例えば、日常の生活のスタイルを変えようとするlife style change、生活の量より質への転換をめざすquality of life、病気の早期発見や病気の発生予防から生き方や生活能力やコントロ-ル能力としての健康を高めていこうというhealthpromotion、医者依存ではないケアや課題解決や対応としてのselfーcareやselfーhelp、伝統的な健康法や治療法の見直しとしてのtraditional medicine、心と体の全体的な健康をめざすholistic health、安全な食品や快適な環境などと取り組んでいるconsumer health、相互援助の活動や仕組み作りとしてのmutnal helpやnetworkingなどがそれである。そしてこれらを通して、今日健康ということについての理解や考え方には、大きな変化や転換が生まれ、広がりつつあるとされている。いまここで健康についての受けとめ方や見方の変化や転換といわれているものを項目として列挙してみると、(1)専門職主体より生活者主体へ、(2)疾病・症状・異常の重視より生命・生活・人生の重視へ、(3)生物・物理・化学中心から心理・社会・文化中心へ、(4)生死の観点より生活の観点へ、(5)個人の行動変容から社会・文化的環境の変革へ、などを挙げることができるであろう。本研究では、上記のような健康観や保健行動の変化や転換を、《文献研究》並びに《調査研究》を踏まえて明らかにし、とりまとめを行なった。I文献研究の結果からは、(1)ライフ・スタイル・チェンジやヘルス・プロモーションということにおいても、一般の人々が主体となった日常の健康管理や健康増進の高まり、ということばは評価できるものの、現状では個人主義的な追求が強くなりつつあること、(2)セルフ・ケアについては、その推進者が、政府・行政であるか、医師や専門家であるか、患者や一般人であるかによって「自助」のもつ意味が大きく異なってくること、(3)身体と心、西洋と東洋の医学の統合をめざしているホリスティック・ヘルスにおいては、内面的、神秘的なものへの傾斜が強まってきていること、などの問題点が明らかとなった。IIヘルス・プロモーションに関連しては職域と地域での調査が実施された。このうち職域では2つの企業の従業員を対象として、健康状態、労働生活、ライフ・スタイル、保健行動の項目を中心に調査が行われ、役職別では部長、課長、一般の順で、また職種別では研究開発の部門で良好な健康状態や保健行動がみられ、仕事への生きがいや、満足度などがこれらに強く関連しているのではないかという結果が浮きぼりにされた。地域を基盤としたヘルス・プロモーションということでは、日本では今日なお、行政主導、専門職中心の取り組みが支配的であり、その他近年では民間企業のこの分野への参入もみられ、営利追求の手段とされることによるゆがみということも問題となってきている。III日本におけるセルフ・ヘルプの動向として取り上げた共同作業所を対象とした調査においては、障害者の親の会や家族会が主体となって、通所施設や共同住宅といった生活を支える拠点づくりや、地域ケアの資源を作る取り組みなどの自主的活動が前面に出はじめてきており、これらを中核として、在宅の障害者と一般市民との連携や結びつきが形成されつつあることが明らかになった。1.文献研究はセルフ・ヘルプに関連してのとりまとめを行ない、そこでのセルプということは、「自分」という以上に「自分たち」とか「われわれ」といった意味あいを強く持っていること、さらには、当事者たちの自主、自律、自治といったニュアンスが込められ、それは、特に、専門家との関係において、その指導や管理下におかれず、自分たちが中心になって運営するという意味が強く意識されている、ということを明らかにした。2.ライフ・スタイルのうち、性意識や性行動に関しては、男性同性愛者に着目し、彼らのエイズに対する認識や態度、そして性行動とエイズを機とした行動の変化などについて調査を行なった。3.セルフ・ケアに関連しては糖尿病患者会の調査を実施し、それが患者同士の交流促進や状態のコントロ-ルにも役割を果たしていることを明らかにした。4.コンシュ-マ-・ヘルスに関連しては、病院外来患者の満足度調査を実施し、建物や設備やイメ-ジ、病院の利便性などと共に、患者が主観的に受けとめている看護婦や事務系職員や医師の能力や態度が,患者の病院に関連する総合的な満足度にどの程度強い影響力を持っているかを明らかにした。5.ホリスティック・ヘルスに関しては、気功の施療者と受療者双方への配票調査を実施し、それらの病気や健康についての考え方や受けとめ方の特徴を明らかにした。6.ネットワ-キングに関しては、共同作業を中心とした障害者と地域住民との交流や新たな連携についての調査を実施している。7.健康増進やその目標設定、評価尺度の開発については、それを身体的、精神的、社会的なコントロ-ル能力の度合いという観点から,その理論化と調査研究を進めている。上記の一連の文献や調査研究を通して、自立性や連帯性の増進や開発とのかかわりにおいての新たな健康感の形成過程が明確なものとなりつつある。1)Traditional MedicineやHolistic Healthに関しては、(1)文献研究を通して、中国医学の基礎理論と哲学の源は『周易』の陰陽学説と『決範』の王行学説にあり、これは一方での『黄帝内経』にみられるように優れた医学として発展し、他方では、日常的な治療法や健康法として、人体の全体性と統一性、そして何よりもバランスを重視する自己健康管理法とつながっていることを明らかにした。また、

(2)調査研究として、中国の上海において住民の治療法や健康法に関する調査を実施し、中国では、健康に対する意識と、体質、環境、対人関係、心身の陰陽平衡とが密接に関連している、との見方が強いことが明らかにされた。2)Netーworkingに関連しては、喘息児をもつ母親たちの自発的、組織的な活動についての調査を行ない、親同士の交流の深さは、いらだちが少なく、成長感を促す方向に作用していること、また、自律的活動をしている親の会加入者の方に、より強くその傾向がみられ、同じ問題を抱える者同士が支え合い、情報を交換し合う場所が必要とされていることが明かとなった。また、かかりつけの医師に満足している者ほど発作時の対応に自信を持っていること、そして、満足している者でその半数以上がこれまでに医師を変更し、医師が喘息の専門医である率が高いことも明かとなり、母親たちは、かかりつけの医師に専門医を求め、それが満足とつながっていることが分かった。3)健康増進の評価に関連しては、全国の市町村のうちより675を選定して郵送によるアンケ-ト調査を行ない、健康づくり活動の理念(考え方)、具体的な目標、推進体制、達成度合いなどについての回答を得、現在集計分析中である。近年、欧米諸国のみならず日本においても、健康が損われてからの対応や医者依存の健康管理ではなく、一般の人々自身の積極的で主体的な健康や病気への取り組みが広がりを見せている。例えば、日常の生活のスタイルを変えようとするlife style change、生活の量より質への転換をめざすquality of life、病気の早期発見や病気の発生予防から生き方や生活能力やコントロ-ル能力としての健康を高めていこうというhealthpromotion、医者依存ではないケアや課題解決や対応としてのselfーcareやselfーhelp、伝統的な健康法や治療法の見直しとしてのtraditional medicine、心と体の全体的な健康をめざすholistic health、安全な食品や快適な環境などと取り組んでいるconsumer health、相互援助の活動や仕組み作りとしてのmutnal helpやnetworkingなどがそれである。そしてこれらを通して、今日健康ということについての理解や考え方には、大きな変化や転換が生まれ、広がりつつあるとされている。いまここで健康についての受けとめ方や見方の変化や転換といわれているものを項目として列挙してみると、(1)専門職主体より生活者主体へ、(2)疾病・症状・異常の重視より生命・生活・人生の重視へ、(3)生物・物理・化学中心から心理・社会・文化中心へ、(4)生死の観点より生活の観点へ、(5)個人の行動変容から社会・文化的環境の変革へ、などを挙げることができるであろう。本研究では、上記のような健康観や保健行動の変化や転換を、《文献研究》並びに《調査研究》を踏まえて明らかにし、とりまとめを行なった。
喉頭の神経系におけるcarbon monoxideに関する神経解剖学的研究

1.内喉頭筋内神経細胞におけるNADPHdとVIP, HO-2の共存イヌの輪状甲状筋と後輪状披裂筋において,NADPHd組織化学法と,抗VIP抗体または抗HO-2抗体をそれぞれ用いた免疫組織化学染色の二重染色を行った.内喉頭筋内神経節において,NADPHd陽性神経細胞の一部はVIP免疫組織化学染色でも陽性で,nNOSとVIPが共存する細胞がみられ.VIP陽性,NADPHd陰性の神経細胞体も認められた.NADPHd組織化学染色とHO-2免疫組織化学染色の二重染色でともに陽性となる神経細胞はみられなかった.内喉頭筋においてVIPとNOの共存が一部の細胞にのみ認められたことから,これらの細胞が単一の機能のものでなく,異なる性質の神経細胞が混在していることがわかる.また,NO, VIP, COいずれも副交感神経系にも広く存在が知られている伝達物質であるが,副交感神経節と考えられている喉頭内神経節ではNADPHdとCOの共存する細胞が存在するため,両者の共存がなかった内喉頭筋内神経細胞は喉頭内神経節の神経細胞と異なる性質をもつと考えられる.2.喉頭内神経節細胞における神経伝達物質の同定免疫組織化学染色法を用いてイヌ、ラット喉頭内神経節細胞への神経ペプチドやHO-2の局在を検索した.喉頭内神経節内にHO-2を持つ神経細胞の存在を確認した。イヌ喉頭内神経節ではHO-2とNADPHdは一部の神経細胞で共存していた.'喉頭内神経節内にHO-2を持つ神経細胞が観察された点も消化管の筋間神経叢の副交感神経節と類似する.イヌ喉頭内神経節ではHO-2とnNOSは一部の神経細胞で共存していた.イヌ食道筋間神経叢で観察したNADPHd陽性細胞中のHO-2陽性率は70-80%であり,HO-2陽性細胞中のNADpHd陽性率は頚部・胸部で35%,・横隔膜下で53%であった.したがって,喉頭内神経節細胞と食道筋間神経叢の細胞にはガス状伝達物質の共存率という点では大きな隔たりはないと考えられる.1.内喉頭筋内神経細胞におけるNADPHdとVIP, HO-2の共存イヌの輪状甲状筋と後輪状披裂筋において,NADPHd組織化学法と,抗VIP抗体または抗HO-2抗体をそれぞれ用いた免疫組織化学染色の二重染色を行った.内喉頭筋内神経節において,NADPHd陽性神経細胞の一部はVIP免疫組織化学染色でも陽性で,nNOSとVIPが共存する細胞がみられ.VIP陽性,NADPHd陰性の神経細胞体も認められた.NADPHd組織化学染色とHO-2免疫組織化学染色の二重染色でともに陽性となる神経細胞はみられなかった.内喉頭筋においてVIPとNOの共存が一部の細胞にのみ認められたことから,これらの細胞が単一の機能のものでなく,異なる性質の神経細胞が混在していることがわかる.また,NO, VIP, COいずれも副交感神経系にも広く存在が知られている伝達物質であるが,副交感神経節と考えられている喉頭内神経節ではNADPHdとCOの共存する細胞が存在するため,両者の共存がなかった内喉頭筋内神経細胞は喉頭内神経節の神経細胞と異なる性質をもつと考えられる.2.喉頭内神経節細胞における神経伝達物質の同定免疫組織化学染色法を用いてイヌ、ラット喉頭内神経節細胞への神経ペプチドやHO-2の局在を検索した.喉頭内神経節内にHO-2を持つ神経細胞の存在を確認した。イヌ喉頭内神経節ではHO-2とNADPHdは一部の神経細胞で共存していた.'喉頭内神経節内にHO-2を持つ神経細胞が観察された点も消化管の筋間神経叢の副交感神経節と類似する.イヌ喉頭内神経節ではHO-2とnNOSは一部の神経細胞で共存していた.イヌ食道筋間神経叢で観察したNADPHd陽性細胞中のHO-2陽性率は70-80%であり,HO-2陽性細胞中のNADpHd陽性率は頚部・胸部で35%,・横隔膜下で53%であった.したがって,喉頭内神経節細胞と食道筋間神経叢の細胞にはガス状伝達物質の共存率という点では大きな隔たりはないと考えられる.喉頭の自律、知覚、運動神経系のすべてにおけるcarbon monoxide(CO)の伝達物質としての関与を、その合成酵素であるhemeoxygenase-2(HO-2)に対する抗体を用いた免疫組織化学法によって検索し、以下の結果を得た。実験にはイヌならびにラットを用いた。1.喉頭の自律神経系におけるCOの関与の究明喉頭腺細胞の周囲にHO-2陽性線維の分布を認め、喉頭の腺分泌調節にCOが神経伝達物質として関与することが判明した。また、血管周囲にもHO-2陽性線維の分布を認め、喉頭の血流調節にCOが神経伝達物質として関与することが判明した。また、喉頭内副交感神経節細胞の多くのがHO-2陽性であることが明らかになった。これらの細胞から前述の腺や血管への陽性線維が送られると考えられる。2.喉頭の知覚神経系におけるCOの関与の究明粘膜上皮内には陽性線維を認めず、この結果は喉頭の知覚神経系にCOが関与しないことを示唆する。3.喉頭の運動神経系におけるCOの関与の究明内