hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
抗菌活性を持つ培養皮膚の生体内における機能の解析

細胞とともにヌードマウス皮下に移植すると、形成された類上皮嚢胞周囲の新生血管(CD31陽性細胞)の密度が有意に高くなる、ことを確認している。平成26年度は、hBD3 cDNA、hCAP-18/LL37 cDNAの両者を2A配列にてタンデムに連結した遺伝子を組換えたウイルスを様々なmultiplicity of infection(MOI)でヒト表皮細胞に感染のうえ、ヒト真皮線維芽細胞とともにヌードマウス皮下に移植し、形成された類上皮嚢胞を切除して、再生ヒト皮膚の構造に対する影響を確認した。ウイルスのMOIが300までは、組み換えウイルス感染ヒト表皮細胞は移植後にヒト皮膚に類似した組織構造を再生し、基底膜蛋白陽性、基底細胞のki67、p63陽性であることが確認された。一方、MOIが1000を超えると皮膚組織の再生は不良となり、周囲に炎症反応が認められた。以上から、hBD3およびhCAP-18/LL37 cDNAを2A配列で連結した遺伝子組換えアデノウイルスをMOI 300で感染させることで、幅広い抗菌活性をもつ培養皮膚が作製できると考えられた。医歯薬学平成24年度までに、hCAP18/L37のcDNA組換えアデノウイルスを感染させたヒト培養表皮細胞を用いた培養皮膚は、当該遺伝子を一定期間発現し、好中球プロテアーゼ存在下で抗菌活性を持つLL37が生成されることが判明している。十分なウイルスストックの作製に時間を要したため全体計画がやや遅れていたが、平成25年度の研究結果から、hCAP18/L37遺伝子導入ヒト培養表皮細胞を線維芽細胞とともに免疫不全マウスへ移植したところ、再生ヒト皮膚組織に悪影響は見られず、周囲の血管新生を促進することが明らかとなった。現在さらに動物実験を実施中であるが、本研究の結果から培養皮膚移植の問題点である感染への脆弱性が克服できる可能性が高く、当初の目的はおおむね達成されつつあると考えている。本研究の目的は、hBD3およびhCAP-18/LL37遺伝子を導入した培養皮膚が、移植後生体内において当該抗菌ペプチドを発現・分泌し、またヒト皮膚組織の再生および局所免疫に対して悪影響を与えないことを明らかにすることである。昨年度までに作製した組み換えアデノウイルスの力価が不十分であったため、hBD3 cDNA、hCAP-18/LL37 cDNA、両者をタンデムに連結した遺伝子を組み替えたウイルスをそれぞれ再度作製し、さらに各ウイルスをウイルスストックを充分量準備したため、研究の開始までにやや時間を要した。現在、既にヒト表皮細胞に目的遺伝子を導入し、免疫不全マウスへの移植実験を開始しており、本年度実施を計画していた研究プロセス自体は順調に推移している。以上から、研究目的の達成に大きな影響はないものの、やや遅れていると評価した。平成26年度には、hBD3 cDNAおよびhCAP-18/LL37 cDNAをタンデムに連結した遺伝子を導入したヒト表皮細胞、線維芽細胞についても、同様の移植実験を実施し、当該遺伝子の発現およびヒト皮膚組織の再生への悪影響がないこと、血管新生への影響などを確認する。また、マウス細胞に当該遺伝子を導入して同系マウスに移植し、過剰な炎症反応が惹起されないかどうかについても確認する。本研究では、目的を達成するために、1抗菌ペプチド遺伝子を導入したヒト表皮細胞からなる培養皮膚の免疫不全マウスへの移植とその解析、
虚血性網膜神経細胞死の細胞内機構とその調節因子の生存維持機能の解明

我々は、ラット初代培養網膜神経細胞を用いてグルタミン酸による神経細胞死がN-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)受容体を介して発現することはすでに突き止めていたが、この細胞死にNOが関与するかどうかについて精力的に研究した。まず、我々の培養網膜細胞系においてNO合成能があるかどうかをみるため、培養網膜細胞のNO合成酵素活性を測定し5±3pmol/min/mg proteinあることがわかり、続いて、NO合成酵素であるNADPH diaphorase染色を行い培養細胞の一部に陽性細胞があることを突き止め、培養網膜細胞にNO合成能があることを確認した。また、神経細胞化学的研究からNMDA受容体を介するグルタミン酸誘発細胞死にNOが介在していることを見いだした。網膜神経細胞系では一旦NOが発生するとCa^<2+>流入とは無関係に網膜神経細胞死が生じることがわかり、Ca^<2+>流入はNO合成酵素の活性化のための前段階でありNOが細胞死の直接の引き金となっていることがわかった。ところが、NOそのものには毒性はなく、むしろ低濃度ではグルタミン酸誘発網膜神経毒に拮抗しNOが保護的に作用するという逆説的作用があることを見いだした。この保護作用は、網膜神経細胞のパッチクランプ法による単一細胞でのwhole-cell currentsの研究から、NMDA受容体がNOによって抑制されることに基づくことがわかった。一方、高濃度のNOの毒性は過剰のNOが活性酸素(スパーオキサイド)と反応して生じたペルオキシ亜硝酸(ONOO)に基づく現象であることを突き止めた。(1)細胞化学的実験:グルタミン酸(1mM)、NMDA(1mM)、カイニン酸(1mM)を10分間投与した直後の培養細胞の生存率は非処理群と差はないが、124時間これら興奮性アミノ酸を含まない溶液で培養すると培養細胞の生存率が3040%に著明に低下した。これら興奮性アミノ酸の短時間投与による遅延性の細胞死は、NMDA受容体拮抗剤であるMK-801(10μM)によって拮抗された。一方、カイニン酸の10分投与による遅延性細胞死はtetrodotoxin(0.3μM)同時投与によって抑制されたが、60分投与後の細胞死は拮抗されなかった。NO合成酵素阻害剤のN^ω-nitro-L-arginineおよびNOに対する結合能を有するヘモグロビン(Hb)はグルタミン酸、NMDA神経毒性を抑制した。NO生成試薬のニトロプルシド(SNP,500μM)およびS-ニトロソシステイン(SNOC,500μM)の短時間投与で遅延性細胞死が生じた。SNP,SNOCにより誘発される神経毒性はHbにより抑制された。NO生成試薬は、単独では細胞生存率に影響を与えない低濃度(50μM)でNMDA神経毒性を著明に抑制した。(2)電気生理学的実験:whole cell clamp法にてMg^<2+>非存在下、-80mVに膜電位を固定してNMDA(50μM)あるいはカイニン酸(50μM)を投与すると90160pAの内向き電流が誘発された。この内向き電流は2つの減衰相より構成されており、脱感作(desensitization)における急速および緩除相を表しているものと考えられた。一方、-80mVに膜電位固定下、カイニン酸(50μM)を投与すると350540pAの内向き電流が誘発されたが、3秒間の投与時間中において電流の振幅には減衰傾向は認められなかった。続いて、SNP(500μM)を3分間投与して後、直ちに興奮性アミノ酸を投与した際誘発される電流を調べた。SNPは、NMDAによる誘発電流を著明にに抑制した。この抑制効果はSNP投与5分後には消失し、NMDAによる電流の誘発は完全に回復した。一方、SNP(500μM)は、カイニン酸誘発電流には影響を与えなかった。

以上の結果より、NMDA受容体刺激により生成したNOは、神経毒性に関与するとともにフィードバック的にNMDA受容体を抑制するという二面性を持つと考えられるに至った。我々は、ラット初代培養網膜神経細胞を用いてグルタミン酸による神経細胞死がN-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)受容体を介して発現することはすでに突き止めていたが、この細胞死にNOが関与するかどうかについて精力的に研究した。我々の培養網膜細胞系においてNO合成能があるかどうかをみるため、培養網膜細胞のNO合成酵素活性を測定し5±3pmol/min/mg proteinあることがわかり、続いて、NO合成酵素であるNADPH diaphorase染色を行い培養細胞の一部に陽性細胞があることを突き止め、培養網膜細胞にNO合成能があることを確認した。また、神経細胞化学的研究からNMDA受容体を介するグルタミン酸誘発細胞死にNOが介在していることを見いだした。網膜神経細胞系では一旦NOが発生するとCa^<2+>流入とは無関係に網膜神経細胞死が生じることがわかり、Ca^<2+>流入はNO合成酵素の活性化のための前段階でありNOが細胞死の直接の引き金となっていることがわかった。ところが、NOそのものには毒性はなく、むしろ低濃度ではグルタミン酸誘発網膜神経毒に拮抗しNOが保護的に作用するという逆説的作用があることを見いだした。この保護作用は、網膜神経細胞のパッチクランプ法による単一細胞でのwhole-cell curentsの研究から、NMDA受容体がNOによって抑制されることに基づくことがわかった。一方、高濃度のNOの毒性は過剰のNOが活性酵素(スパーオキサイド)と反応して生じたペルオキシ亜硝酸(ONOO^-)に基づく現象であることを突き止めた。
ヒドロゲナーゼ成熟化の分子機構に関する構造生物学研究

超好熱性アーキアT. kodakarensis由来のヒドロゲナーゼ成熟化タンパク質の構造・機能解析を行った.ヒドロゲナーゼへのNi原子組み込み機構解明のため,Niの組み込みに関わるHypAとヒドロゲナーゼ大サブユニットHyhLとの複合体の結晶化,構造解析を行った.HypA-HyhL複合体の調製法はすでに確立されており,予備的な結晶も得られていた.2種の結晶は(空間群C222およびP23)4Å分解能を超える回折を示していたが,さらに高い分解能の結晶を得るため,試料調製および結晶化条件の最適化を行い,それぞれの結晶系で3.5Å分解能を超える回折を与える結晶を得た.放射光X線で測定した回折データに分子置換法を適用し, 3.3Å分解能でR値およそ30%にまで精密化を行った.HyhL-HypA複合体の結晶構造では対応する構造からのいくつかの変化が見られた.この複合体の構造から,[NiFe]ヒドロゲナーゼの成熟化過程において,活性部位へのNi挿入がHyhLのNおよびC末端の空間上の再配置を引き起こすことが示唆された.ヒドロゲナーゼへのFe原子組み込み機構解明のため,Feの組み込みに関わるHypCとHyhLとの複合体の調製した.結晶が得られたがX線の回折は観察できなかった.ヒドロゲナーゼ成熟化後の切断機構を解明するため,[NiFe]クラスターが組み込まれたHyhLの調製に取り組んだ.嫌気チェンバーを用いて菌体の大量培養を行ったが,HyhL(pre-HyhL)はほとんど検出できなかった.新たに,このアーキアに存在するもう一つの成熟化プロテアーゼHycI(主に膜結合性ヒドロゲナーゼ(大サブユニット)MbhLに作用するが,HyhLに対しても触媒作用がある)を構造解析した.HycIを結晶化して,放射光X線を用いて1.6Å分解能の回折データを測定し,R値20.6%まで精密化したヒドロゲナーゼへのNi原子組み込み機構解明においては,HypA-HyhL複合体について,その複合体化が困難な対象であるにもかかわらず結晶が得られ,およそ3.3Å分解能での構造解析に成功した.今後,さらなる分解能の向上や複合体構造の詳細な検証を行うことが必要であるが,この構造決定はHypA-HyhL複合体での初めての成果であり,ヒドロゲナーゼへのNi原子組み込み機構の解明に大きく貢献するものと思われる.ヒドロゲナーゼへのFe原子組み込み機構解明において,HypC-HyhL複合体の調製ならびに結晶化はまだ達成できていないが,当初から困難が予想された研究対象であり,今後も実験状況を適切に判断して今後の指針を検討することが必要である.ヒドロゲナーゼ成熟化後の切断機構の解明については,[NiFe]クラスターが組み込まれたヒドロゲナーゼ大サブユニットHyhL(pre-HyhL)の調製を継続している.新たに,T. kodakarensisに存在するもう一つの成熟化プロテアーゼHycIの構造解析に成功した.HycIは主に膜結合性ヒドロゲナーゼ(大サブユニット)MbhLに作用するが,HyhLに対しても触媒作用があるためことが分かったため構造解析の対象とした.放射光X線を用いて1.6Å分解能の結晶構造が得られた.HycIの全体構造は,HyhLに作用する成熟化プロテアーゼHybDに類似しているが,基質を認識すると思われるクレフトに存在するループ構造が長くなっており,これが触媒作用の違いに関係する可能性があるという興味深い知見が得られた.HyhL-HypA複合体について,これまでに得られている結晶構造から,HyhLとHypAの相互作用の詳細をさらに検討する.また,得られている他の複合体の結晶構造を参照して,HyhL,HypA,HypB間の相互作用や成熟化前後のHyhLの構造変化を検証する.それらによって,ヒドロゲナーゼへのNi原子組み込みによる成熟化機構を検討する.また,HyhL-HypA複合体結晶の分解能の向上を目指して,結晶化条件の検討をさらに継続して,より高い精度での複合体構造の決定を目指す.HyhL-HypC複合体について,これまでに得られている結晶からはX線の回折像が得られなかったため,新たな発現系構築を含めた調製方法の検討,結晶化条件の再検討等を行い,良好なHyhL-HypC複合体結晶の作製を行う.ヒドロゲナーゼ成熟化後の切断機構解明について,HyhL(pre-HyhL)の調製条件の検討を行う.HyhLの発現量の向上を目指して.高発現プロモーターを組み込んだT. kodakarensis菌体の作製を試みる.さらに,これまでに蓄積されている成熟化タンパク質群の構造生物学的知見を総括して,金属原子取り込みならびにヒドロゲナーゼ成熟化の分子機構の全体像を明らかにする.超好熱性アーキアT. kodakarensis由来のヒドロゲナーゼ成熟化タンパク質の構造・機能解析を行った.ヒドロゲナーゼへのNi原子組み込み機構解明のため,Niの組み込みに関わるHypAとヒドロゲナーゼ大サブユニットHyhLとの複合体の結晶化,構造解析を行った.HypA-HyhL複合体の調製法はすでに確立されており,予備的な結晶も得られていた.2種の結晶は(空間群C222およびP23)4Å分解能を超える回折を示していたが,さらに高い分解能の結晶を得るため,試料調製および結晶化条件の最適化を行い,それぞれの結晶系で3.5Å分解能を超える回折を与える結晶を得た.

放射光X線で測定した回折データに分子置換法を適用し, 3.3Å分解能でR値およそ30%にまで精密化を行った.HyhL-HypA複合体の結晶構造では対応する構造からのいくつかの変化が見られた.この複合体の構造から,[NiFe]ヒドロゲナーゼの成熟化過程において,活性部位へのNi挿入がHyhLのNおよびC末端の空間上の再配置を引き起こすことが示唆された.ヒドロゲナーゼへのFe原子組み込み機構解明のため,Feの組み込みに関わるHypCとHyhLとの複合体の調製した.結晶が得られたがX線の回折は観察できなかった.ヒドロゲナーゼ成熟化後の切断機構を解明するため,[NiFe]クラスターが組み込まれたHyhLの調製に取り組んだ.嫌気チェンバーを用いて菌体の大量培養を行ったが,HyhL(pre-HyhL)はほとんど検出できなかった.新たに,このアーキアに存在するもう一つの成熟化プロテアーゼHycI(主に膜結合性ヒドロゲナーゼ(大サブユニット)MbhLに作用するが,HyhLに対しても触媒作用がある)を構造解析した.HycIを結晶化して,放射光X線を用いて1.6Å分解能の回折データを測定し,R値20.6%まで精密化したヒドロゲナーゼへのNi原子組み込み機構解明においては,HypA-HyhL複合体について,その複合体化が困難な対象であるにもかかわらず結晶が得られ,およそ3.3Å分解能での構造解析に成功した.今後,さらなる分解能の向上や複合体構造の詳細な検証を行うことが必要であるが,この構造決定はHypA-HyhL複合体での初めての成果であり,ヒドロゲナーゼへのNi原子組み込み機構の解明に大きく貢献するものと思われる.ヒドロゲナーゼへのFe原子組み込み機構解明において,HypC-HyhL複合体の調製ならびに結晶化はまだ達成できていないが,当初から困難が予想された研究対象であり,今後も実験状況を適切に判断して今後の指針を検討することが必要である.ヒドロゲナーゼ成熟化後の切断機構の解明については,[NiFe]クラスターが組み込まれたヒドロゲナーゼ大サブユニットHyhL(pre-HyhL)の調製を継続している.新たに,T. kodakarensisに存在するもう一つの成熟化プロテアーゼHycIの構造解析に成功した.
卵母細胞の核小体構築に関する研究

哺乳類の卵巣内の発育途上の卵母細胞には,リボソームRNAの転写とリボソーム構築を活発に行う核小体が存在するが,卵母細胞が発育の完了に近づくと,核小体は転写活性を低下させて緊密な形態となる。同様な核小体の緊密化は転写阻害剤によって引き起こされた。一方,細胞内の蛋白質分解を行うプロテアソームに対する阻害剤で卵母細胞を処理すると,核小体の体積は増加した。卵母細胞の成熟過程で核小体は消失するが,卵母細胞の成熟を停止させた状態で核から核小体を抜き取って細胞質に移すと,核小体は細胞質中で一旦消失した後,核内に再び形成された。哺乳類卵巣内の発育途上の卵母細胞には,リボソームRNAの転写とリボソーム構築を活発に行う体細胞型の核小体が存在するが,卵母細胞が発育の完了に近づくと,転写活性を低下させ,緊密な形態となる。本研究では,新規な卵母細胞核小体の染色法を考案し,卵母細胞の成熟過程における核小体の変化を調べるとともに,2細胞期胚の核小体の特性について検討を加えた。材料としては,ブタ卵巣内の卵胞より採取した発育を完了した卵核胞期の卵母細胞と,成熟培養後,電気刺激によって単為発生させて作出した2細胞期胚を用いた。1)卵母細胞の核小体を染色するヘマトキシリン染色法を考案し,卵母細胞の成熟過程における核小体を染色した。卵母細胞の核小体の直径は卵核胞崩壊(GVBD)直前に有意に減少し,GVBDとともに消失した。2) 2細胞期胚は卵母細胞と同様な緊密な形態の核小体を有するが,卵母細胞の核小体が1個であるのに対して,2細胞期胚には複数個(25個:82%)の核小体が含まれていた。胚を遠心分離すると核小体は1個となった。3)2細胞期胚の1割球当たりの核小体の体積の合計は卵母細胞の核小体の体積の約1/2であり,卵母細胞の核小体の構成分は,発生後の胚に受け継がれると考えられる。4)2細胞期胚を遠心分離後,顕微操作によって抜き取った核小体を,成熟させた脱核小体卵母細胞の細胞質中に注入すると,核小体は細胞質中で一旦消失した。この卵母細胞を単為発生させると,胚の核には核小体が形成された。本研究では,卵母細胞の核小体の形態変化を引き起こす機構,および顕微操作によって核から細胞質へと移された核小体が核内へと移動し,再構築される現象を実証し,その機構を明らかにすることを目的とした。材料としては,ブタ卵巣内の種々の直径の卵胞より採取した卵核胞期の卵母細胞を用いた。卵母細胞の体外培養および核小体の顕微操作実験から以下の結果が得られた。1)ブタ卵母細胞が直径100 umから120 umへと発育する間に,卵母細胞の核小体の直径は15.5 umから13 umへと減少した。2)卵母細胞をプロテアソーム阻害剤のMG132あるいはlactacystinで処理すると,核小体の直径は有意に増大した。一方,発育途上の卵母細胞を転写阻害剤のactinomycin Dあるいはα-amanitinで処理すると,核小体の直径は有意に減少した。この減少作用はMG132によって部分的に阻害された。これらのことから,卵母細胞の核小体の体積の制御にはユビキチンープロテアソーム系が関与することが示唆された。3)卵母細胞の核小体を顕微操作によって核から抜き取り,細胞質中に注入すると,核小体は細胞質中で一旦消失した後,再び核内で構築された。当初計画していた卵母細胞の核小体の体積がユビキチンープロテアソーム系によって制御されている可能性を示すことができた。また,卵母細胞の核から細胞質中に移された核小体が一旦消失し,その後核内で再構築されることが実証された。体細胞や発育途上の卵母細胞の核小体と反応する核小体成分に対する抗体は,発育を完了した卵母細胞の緊密な核小体とは反応しないことから,卵母細胞の成熟過程や受精過程における核小体の消失・再構築過程を詳細に検討することは困難である。

次年度の研究では,核小体の色素による染色,核小体蛋白質とGFPを結合させたmRNAの注入によって核小体を染色する方法を検討し,卵母細胞の核小体の消失・再構築過程を調べる。卵母細胞の細胞質に卵母細胞の核小体を顕微注入すると,核小体は細胞質中で一旦消失したのち核内に核小体が再構築されることから,この過程についても新規な染色法を用いて検討する。細胞質中に複数の核小体を注入した場合,注入した核小体数に応じた複数の核小体が核内に形成されるのか,あるいは大型の核小体が形成されるのかを明らかにする。また,細胞質中に体細胞核を同時に注入した場合,体細胞の核内で卵母細胞の核小体が構築される可能性を調べる。経費は主に卵母細胞の培養および顕微操作のためのガラス器具およびプラスチック器具,培養液,培養液に添加する阻害剤および核小体蛋白質に対する抗体,論文の別刷りの購入に充てる。
『今昔物語集』語彙の計量的研究

『今昔物語集』は,各巻が言語的に等質ではなく,天竺・震旦・本朝の各部,さらに本朝のなかでも仏法関係の巻と世俗の巻とで差がある。本研究の目的は作品中の全語彙の度数をしらべて,客観的にその特徴をあきらかにすることである。おもな成果は,以下にあげるようなものである。(1)『今昔物語集』の全語彙の巻ごとの使用度数を記した語彙頻度表を作成し,この頻度表にもとづいて,つぎのような結果をえた。(2)全体の語数は,つぎのとおり:(3)各部分間の語彙の類似度はであり,天竺と震旦が近い関係にあるのに対し,本朝は,これら外国をあつかった部分から,やや遠い位置にある。また,本朝のなかでも仏法の部は天竺・震旦と近いが,世俗の部は遠い関係にある。(4)古典作品14との語彙類似度は『今昔物語集』は,各巻が言語的に等質ではなく,天竺・震旦・本朝の各部,さらに本朝のなかでも仏法関係の巻と世俗の巻とで差がある。(4)古典作品14との語彙類似度は基本的な台帳として馬淵和夫監修『今昔物語集文節索引』(笠間書院,全28巻)を使用することとし同索引の具体的な検討にはいった。この素引は,(1)各巻の底本が一致していない。(2)おなじ漢字の読みも巻によってまちまちである。(3)単語の認定のしかたがバラついている。などの欠点がある。これは,最初はゼミの資料として学生などに分担して作らせたもので,方針が最初から統一されていたわけではないからである。これでは,統計をとるうえで困難があるが,現在,これにかわるべきものはない。とくに,単位の認定は語彙の統計的研究にとって基本的な重要性をもつものである。本統計表は,完成後,宮島編『古典対照語い表』と相互参照できるようにしておくのが望ましいので,単位の切り方などをそろえておく必要があり,分担者・協力者がそろって,慎重に審議し方針を決定した。このような検討をへて,アルバイターに索引の語数を計算する仕事を始めさせた。昨年度にひきつづき,馬淵和夫監修『今昔物語集文節索引』(笠間書院,全28巻)の検討をした。この索引は,(1)各巻の底本が一致していない。などの欠点があり,そのままでは台帳にできないからである。現在,全31巻のうち,第24巻までの検討がすんだ。一方でアルバイターに索引の語数を計算する仕事を始めさせた。その結果はさらに調査しなおす必要のあるものであるが,たとえば巻1の高頻度語は,362言ふ・/302こと/282仏/231有り/230其の/204此の/167太子162此れ/161我155時/128人/124見る/122汝/116無し/111又107のたまふ/99心/92申す/91す/91思ふ/86王/86成る/84今79もと/77聞く/75以て/70もの/70きたる/70出づ/64わが62出家す/62帰る/58ゆく/58家/57皆/55供養す/53子52依る/52出家/52得/52いたる/51もろもろ/50のちという順である。基本的な台帳として馬淵和夫監修『今昔物語集文節索引』(笠間書院,全28巻)を採用し,『今昔物語集』各巻の全語彙の使用度数をかぞえて,これをコンピューターに入力することから出発した。この頻度表は,古代語研究者にとって,大いに利用価値のあるデータベースとなるであろう。ただし,現在のところ,いちおう全巻のデータの入力はおわったが,完全な点検はすんでいない。今昔物語の巻ごとに平均語数を集計すると,つぎのようになる。異なり語数延べ語数天竺2195.40 13304.00震旦2157.25 12802.25本朝2364.16 12687.42これだけの表からでも,すでにある文体的な特徴をみることができる。すなわち巻の平均延べ語数は,天竺・震旦にくらべて本朝がすくない(すなわち,巻の長さがみじかい)にもかかわらず,平均異なり語数は本朝がもっとも多いのである。

逆にいえば,天竺・震旦の部は,おなじ語のくりかえしが多い,といえる。上位にある語は「言ふ」「その」「こと」「あり」など,一般的な用語で,ほかの作品とちがう点はすくない。ただし,天竺の部で「ほとけ」が第6位にあることは,説話としての特色をしめすものである。今後,この頻度表を使って,各巻および天竺、震旦、本朝それぞれに特徴的な語の抽出,各巻の語彙の類似度,語彙からみた文体差などの研究をする予定である。
カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス複製におけるウイルス性前開始複合体の分子基盤の解明

ヒトを含む真核生物ではゲノムからRNAをつくりだす際に,TATAボックス結合タンパク質,基本転写因子群,RNAポリメラーゼIIなどからなる前開始複合体を形成し,転写を開始する.近年,カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(KSHV)をはじめとした一部のヘルペスウイルスにて,前開始複合体と機能的相同性をもつウイルス性前開始複合体の存在が明らかになりつつある.本研究により,KSHVがコードするORF34ならびにORF66が,ウイルス性前開始複合体の構成因子として機能し,かつウイルス複製にきわめて重要であることを見出した.上記にくわえて,KSHV ORF23ならびにORF66欠損ウイルスの性状解析について研究を展開した.ORF23ならびにORF66欠損BACクローンを構築し,これらBACクローンを安定的に保持する定常発現細胞株,すなわち,ORF23ならびにORF66欠損ウイルス産生細胞を樹立した.これらの細胞からのウイルス産生量を評価したところ,ORF23欠損ウイルス産生細胞での顕著な低下はみとめられなかった.一方で,ORF66欠損ウイルス産生細胞では,野生型ウイルス産生細胞と比して明らかなウイルス産生量の低下をみとめた.以上のことから,KSHV ORF66がKSHV産生により重要な役割を果たしていることが示唆された.ORF66欠損ウイルスの解析をすすめたところ,野生型ウイルスならびにORF66欠損ウイルス産生細胞において,細胞内ウイルスゲノム複製の差異をみとめなかった.さらに,RT-qPCRアレイによるKSHV遺伝子発現解析から,ORF66欠損ウイルス産生細胞では野生型ウイルス産生細胞に比して, K8.1遺伝子をはじめとしたKSHV後期遺伝子群の発現が低下していることを確認した.これらの結果はゲノム複製以降の段階,後期遺伝子発現にORF66が寄与していることを示すものである.すなわち,KSHV ORF66がウイルス性前開始複合体構成因子として機能していることを強く示唆する結果を得るに至っている.初年度研究課題である“KSHV ORF23ならびにORF66欠損ウイルスの性状解析"では,ORF66欠損ウイルスにのみ顕著な表現型,すなわちウイルス産生量の低下を観察したため,ORF66欠損ウイルス性状解析に集中することとした.そのため,ORF23欠損ウイルスに関しては解析を中断している.一方では,ORF66欠損ウイルスの性状解析については,前述のとおりの進捗が得られている.また,次年度計画・目標である“vPIC相互作用宿主性因子の同定および機能解析"に必要不可欠な研究材料であるエピトープタグ付加KSHV BACクローンの構築が現在難航している.当初予定していたエピトープタグ(S-tag)のKSHV BACクローンへの挿入が確認できていないためである.これについては再度BACクローン構築を試みるとともに,他のエピトープタグ(FLAG-tagまたはHA-tag)の挿入についても同時に取り組んでいる.これまでに,ORF66欠損カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(⊿ORF66 KSHV)の性状解析を中心に研究を実施してきた.⊿ORF66KSHV産生細胞からの顕著なウイルス産生量の低下をみとめた.さらにRT-qPCRアレイによるKSHV遺伝子発現解析から,⊿ORF66 KSHV産生細胞では野生型ウイルス産生細胞に比して,ウイルス後期遺伝子群の発現が低下していることを確認した.あわせて今年度は,ORF66欠損ウイルス産生細胞へORF66発現プラスミドを導入したところ,ウイルス産生量の回復をみとめた.このことは,ORF66がウイルス産生に必須であることを強く裏付ける結果である.さらにChIP法により,ORF66がウイルスゲノム上のウイルス後期遺伝子転写開始領域と会合していることが示された.以上のことから,ORF66は,KSHV後期遺伝子発現に重要なウイルス性前開始複合体を構成し,かつ機能する因子であることが強く示唆された.次に,ORF66がどのようにウイルス性前開始複合体中で機能しているのかを明らかにするため,機能的ドメインの探索にとりくんだ.複合体形成に中心的役割を担うと我々が明らかにしたORF34とORF66との結合領域を,ORF66欠失変異体を用いたPull-downアッセイにより検討したところ,ORF66のC末端に含まれる4領域が重要であることが示唆された.さらにはアラニンスキャニングにより重要アミノ酸残基の同定をこころみたところ,数箇所のシステイン残基を含むアミノ酸モチーフ配列が重要だとの結果を得ている.同定したモチーフ配列保持領域のひとつは,前開始複合体構成因子である基本転写開始因子TFIIB(好熱古細菌Pyrococcus furiosus由来)のドメインの一部と,類似相同構造を有する領域であった.ヒトを含む真核生物ではゲノムからRNAをつくりだす際に,TATAボックス結合タンパク質,基本転写因子群,RNAポリメラーゼIIなどからなる前開始複合体を形成し,転写を開始する.近年,カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(KSHV)をはじめとした一部のヘルペスウイルスにて,前開始複合体と機能的相同性をもつウイルス性前開始複合体の存在が明らかになりつつある.本研究により,KSHVがコードするORF34ならびにORF66が,ウイルス性前開始複合体の構成因子として機能し,かつウイルス複製にきわめて重要であることを見出した.前述したとおり,KSHV ORF66欠損ウイルスの性状解析から,ORF66がウイルス産生に必須であり,かつKSHV後期遺伝子発現に重要であることを示唆する知見を得ている.

また,アミノ酸配列をもとにしたin silico構造相同性解析より,前開始複合体構成因子である基本転写開始因子TFIIB(好熱古細菌Pyrococcus furiosus由来)の一部ドメインと,ORF66が類似相同構造を有することが推測された.これらの知見から,タンパク質構造をもとに,各種ORF66変異体を構築し,ウイルス複製における機能や他のウイルス性前開始複合体構成因子との相互作用を評価する.これによりORF66のウイルス性前開始複合体における役割,さらには分子機構の解明につなげる.次年度計画・目標である“ウイルス性前開始複合体と相互作用宿主性因子の同定および機能解析"については,早急にタグ付加組換えKSHV BACクローンの構築に終えるとともに,当初の予定通りウイルス性前開始複合体の分離・精製ならびに結合タンパク質のMALDI-TOF/MS解析に取り組んでいく.あわせてCHIP-SeqによるKSHVゲノム上のウイルス性前開始複合体結合領域の同定も試みる予定である.日本薬学会第138年会において、2演題(指導学部生:伊藤知恵,鶴見さやか)が学生優秀発表賞を受賞した。日本薬学会近畿支部大会において、1演題(指導学部生:前田佳子)が優秀ポスター賞を受賞した。ウイルス学当初予定していた,初年度後期からのウイルス性前開始複合体の分離・精製が,研究スケジュール遅延により遂行できなかったため,使用を予定していた研究試薬の購入に至らなかった.タンパク質複合体分離・精製のための精製ビーズやCHIP用抗体などの研究試薬を中心とする物品費として次年度に使用する.
ソフトウェア開発における適切なコミュニケーション誘発度を持つ空間に関する研究

コミュニケーションとプロジェクト能力や進捗に関係があることを明らかにした昨年度の成果に基づき、今年度は仮想空間におけるコミュニケーションの効率について検証実験を行った。検証実験のために大学内に学生や教職員が利用できるWebベースのコミュニケーションシステムを構築し、主にプロジェクトシミュレータのプログラム開発の協調作業における仮想空間コミュニケーションの学生実験をおこなった。協調作業中のWebベースのシステム上でのコミュニケーションを自動収集するツールと解析するツールもあわせて開発し、作業における仮想空間コミュニケーションを計測した。その結果、コミュニケーションの発生件数の累積に関する新しい知見を得ることができた。従来、ソフトウェアの品質を計測するためのモデルであったソフトウェア信頼性成長モデルを、バグの件数の代わりにコミュニケーション件数を利用することで、プロジェクト成長モデルを構築できることがわかった。これは、従来のソフトウェア信頼性成長モデルの考え方と同様に、一定の条件を満たすプロジェクトでは一定のコミュニケーションが発生するはずであり、その発生推移には規則性があるという基本概念に基づく。検証実験で収集したプログラム開発中の仮想空間コミュニケーションログを利用してプロジェクト成長モデルを構築し、今後のコミュニケーション発生の推移予測と実際の計測結果を比較することにより、プロジェクト状態(通常状態、混乱状態など)を示唆することができた。検証実験でのプログラム開発作業により作成したソフトウェアの品質と比較した結果、示唆されたプロジェクト状態と相関があることが確認できた。さらに物理空間でのコミュニケーションは仮想空間のコミュニケーションと比較して、雑談などの無意味な会話が多く発生し、仮想空間のコミュニケーションを解析するほうがプロジェクト状況の把握に役立つことが分かった。ソフトウェア開発における適切なコミュニケーション誘発度を研究するために、まずコミュニケーション発生の仕組みを研究した。コミュニケーションは基本的に作業を分担して実施する時に発生する。分担された作業間に関係がある場合、作業者らは作業分担によって切断された作業間関係についてのコミュニケーションを要求される。作業間の関係は分担される作業種類によって異なる。例えば、詳細設計とプログラミング作業間の関係は強いが分析作業とプログラミング作業間の関係は弱い。また、同一作業内分担においてもそれぞれの作業インスタンス間の関係の強さにも差がある。例えば、共有するデータをもつプログラムインスタンス間の関係は強いが、プログラム引数にてデータを受け渡しするプログラムインスタンス間の関係は弱い。強い関係をもつ作業が分担されたならば、多くのコミュニケーションが発生し、弱い関係をもつ作業が分担されたならば、少しのコミュニケーションしか発生しない。これらのコミュニケーション発生仕組みをオブジェクト指向開発のクラス図を用いて作業間関係モデル化した。オブジェクト指向開発方法論の作業関係モデルを作成することで、ソフトウェア開発における作業分担によるコミュニケーション発生の仕組みとその量を予測することができた。更に、"適切なコミュニケーション"について研究した。コミュニケーションはグループ能力とも大きく関係すると考えられる。高品質のソフトウェアを開発できるグループは高いグループ能力を持つと考えられる。高い能力をもつグループでのコミュニケーションを分析することで"適切なコミュニケーション"を明確にした。高い能力をもつグループでは、同一話題が特定期間に集中してコミュニケーションされる現象が観察された。つまり、コミュニケーションの適切さは特定問題のコミュニケーション発生時間の分散を使って計測できる。つまり、同一話題のコミュニケーション発生時間の分散と尖度を計算することで、コミュニケーションの適切さ、さらにはグループ能力を計測できることがわかった。したがって、"適切なコミュニケーション"を定義する場合、同一話題のコミュニケーション発生時間の集中度をひとつの要素として利用可能であることがわかった。本年度は昨年度のコミュニケーションの発生のメカニズムについてのモデルを元に、実際のソフトウェア開発のコミュニケーション発生の様子を計測ツールにて自動計測した。計測ツールはコミュニケーション自動収集機能と自動分析機能をあわせもち、コミュニケーション自動収集機能はWeb上での会話からコミュニケーションログを収集することを可能とした。また、この自動収集機能を大学の研究教育システムの一部として装備することで、学生のWeb上のバーチャルコミュニティにおけるソフトウェア開発コミュニケーションを自動収集することができた。さらに、計測ツールに装備された自動分析機能では、コミュニケーション発生の過程をビジュアルに表示した。また、蓄積されたコミュニケーションログと作成されたソフトウェアの品質の記録より、プロジェクト能力モデルも構築した。本モデルでは自然言語処理の文書類似度計算やクラスタリング処理によってコミュニケーションログを同一話題に自動分類した結果を用いて、話題別のコミュニケーション発生とプロジェクト能力の関係を知ることができる。プロジェクト能力モデルを本ツールの分析用機能を装備することで、プロジェクトの進行途中の危険性を察知することが可能であることがわかった。これらのコミュニケーションログをつかったプロジェクト能力測定方法は、現在の新しい開発方法論アジャイル開発において有効であることがわかった。また、複数プロジェクトのコミュニケーションを分析する過程で、同一話題のコミュニケーション蓄積曲線が一定の形を示すことを発見した。これは、プロジェクトの規模と種類が決まれば、おおよそそのプロジェクトで話し合うべき話題数が決まり、さらにその蓄積過程が指数関数曲線やS字曲線などの一定の曲線に従うであろうと考えが導かれる。この考えはソフトウェア信頼度成長モデルに類似する。ソフトウェア信頼度成長モデルのバグの蓄積数をコミュニケーションの蓄積数に置き換えることで、ソフトウェア信頼度成長モデルがコミュニケーションを用いたプロジェクト成長モデルへ展開できる可能性があることがわかった。

その結果、コミュニケーションの発生件数の累積に関する新しい知見を得ることができた。従来、ソフトウェアの品質を計測するためのモデルであったソフトウェア信頼性成長モデルを、バグの件数の代わりにコミュニケーション件数を利用することで、プロジェクト成長モデルを構築できることがわかった。これは、従来のソフトウェア信頼性成長モデルの考え方と同様に、一定の条件を満たすプロジェクトでは一定のコミュニケーションが発生するはずであり、その発生推移には規則性があるという基本概念に基づく。検証実験で収集したプログラム開発中の仮想空間コミュニケーションログを利用してプロジェクト成長モデルを構築し、今後のコミュニケーション発生の推移予測と実際の計測結果を比較することにより、プロジェクト状態(通常状態、混乱状態など)を示唆することができた。検証実験でのプログラム開発作業により作成したソフトウェアの品質と比較した結果、示唆されたプロジェクト状態と相関があることが確認できた。さらに物理空間でのコミュニケーションは仮想空間のコミュニケーションと比較して、雑談などの無意味な会話が多く発生し、仮想空間のコミュニケーションを解析するほうがプロジェクト状況の把握に役立つことが分かった。
ナノ粒子による炎症反応誘導機構の解明と炎症性疾患のリスク評価法の開発

本研究では、近年化粧品や食品などに広く利用されている二酸化チタンや酸化亜鉛のナノ粒子について、THP-1マクロファージ様細胞および大腸癌細胞Caco2を用いて炎症反応の誘導および炎症性疾患増悪作用の検討を行った。その結果、二酸化チタンのナノ粒子による炎症反応誘導作用は、ルチル型よりアナターゼ型で強く認められた。また、THP-1マクロファージ様細胞において、酸化亜鉛のナノ粒子により粥状動脈硬化進行の原因とされるマクロファージ泡沫化の促進が認められたが、二酸化チタンのナノ粒子では認められなかった。酸化亜鉛ナノ粒子はマクロファージの泡沫化を促進し、粥状動脈硬化症を増悪する可能性が示唆された。本年度は、ナノ粒子によるスカベンジャーレセプターを介した炎症反応の誘導およびマクロファージ泡沫化の促進作用を検討した。ヒト単球細胞THP-1をphorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)で刺激しマクロファージ様に分化させ、二酸化チタンおよび酸化亜鉛のナノ粒子を曝露し、まず細胞内活性酸素産生の解析を行った。その結果、二酸化チタンナノ粒子1および5 ug/mlでは活性酸素の産生は認められなかったが、10 ug/mlでは認められた。一方、酸化亜鉛ナノ粒子曝露では、1 ug/mlから産生が認められた。次に、マクロファージはスカベンジャーレセプターを介して変性LDLを取り込むと泡沫(foam)化することから、ナノ粒子曝露におけるマクロファージ泡沫化の促進作用を検討した。酸化亜鉛ナノ粒子をTHP-1単球へ曝露後、マクロファージ様細胞に分化させたところ、アセチル化LDLの取り込みが増加した。一方、二酸化チタンのナノ粒子の曝露においては変化が認められなかった。スカベンジャーレセプターのCD36およびSR-Aの発現は、酸化亜鉛ナノ粒子の曝露により増加したが、二酸化チタンのナノ粒子曝露では変化が認められなかった。酸化亜鉛ナノ粒子はスカベンジャーレセプターCD36およびSR-Aの発現の上昇を促し、マクロファージの泡沫化を促進させ粥状動脈硬化症を増悪する可能性が示唆された。さらに本年度は、血管内皮前駆細胞を用いて酸化亜鉛ナノ粒子およびミクロ粒子による細胞毒性作用および血管形成作用への影響についても検討を行った。その結果、酸化亜鉛ナノ粒子、ミクロ粒子の曝露により同程度に濃度依存的に生存率が減少し、アポトーシスの誘導も認められた。さらにチューブ形成についても酸化亜鉛ナノ粒子、ミクロ粒子の曝露により同程度に阻害が認められた。ナノ材料は、次世代の産業基盤技術として期待されているが、安全性評価法の確立は進んでいない。ナノ粒子曝露による生体への影響としては、酸化ストレスおよび炎症反応の惹起が考えられ、炎症性疾患の誘導あるいは増悪に関与する可能性がある。タンパク質複合体のインフラマソームの中でも特にNLR pyrindomain containing 3(Nlrp3)インフラマソームは、炎症反応の過程で重要な働きをしていることが報告されている。本年度は、二酸化チタンナノ粒子曝露による炎症反応の過程におけるNlrp3発現の検討を行った。種々の粒径の二酸化チタンナノ粒子(一次粒径:50250nm)を、ヒト単球細胞THP-1をphorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)で刺激しマクロファージ様に分化させた細胞に暴露した。まず、細胞毒性作用は、一次粒径が小さい二酸化チタンナノ粒子(一次粒径:50nm)の方が大きいもの(一次粒径:100250nm)より強い傾向にあった。また、細胞内活性酸素種(ROS)は、一次粒径が小さいほど多く産生された。次にウェスタンブロット法によってNlrp3発現の解析を行った結果、同様に一次粒径が小さいほどNlrp3が発現する傾向が見られた。Nlrp3インフラマソームは、炎症性サイトカインIL-1βの産生に関与することが知られていることから、今後、さらにIL-1βなどの炎症関連因子の発現についても解析を行う予定である。一次粒径が1100nmのナノ材料は、次世代の産業基盤技術として期待されているが、その安全性評価は進んでいない。ナノ粒子曝露による生体への影響としては、酸化ストレスおよび炎症反応の惹起が考えられ、炎症性疾患の誘導あるいは増悪に関与する可能性が考えられる。本研究では、化粧品や医薬品、食品添加物などに広く利用されている酸化亜鉛や二酸化チタンなどのナノ粒子について、炎症反応の誘導・増悪作用を解析し、安全性の検討を行う。本年度は、種々の結晶型および粒子径の二酸化チタン(TiO2)粒子(アナターゼ型:50nm,100nm、ルチル型:50,100nm、80%アナターゼ/20%ルチル(P25):21nm)について、ヒト単球細胞THP-1をphorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)の刺激によりマクロファージ様に分化させた細胞および大腸上皮癌細胞Caco-2を用い、炎症反応誘導作用について検討を行った。その結果、活性酸素種の産生は、THP-1マクロファージおよびCaco-2において、すべての種類のTiO2粒子(25,50μg/ml)曝露により認められたが、THP-1マクロファージにおける炎症性サイトカインのIL-1βの産生は、50μg/mlのアナターゼ型粒子(50nm)のみ認められた。

またRT-PCR法を用いたCaco-2細胞における炎症性サイトカインIL-8の発現についても、50μg/mlのアナターゼ型粒子(50nm)により認められたが、ほかのTiO2粒子では認められなかった。以上のことから、今回使用した種々の結晶型、粒子径のTiO2粒子のなかでも、アナターゼ型TiO2ナノ粒子は炎症反応を誘導することが示唆された。その他のTiO2粒子についても活性酸素の産生が認められていることから、生体になんらかの影響を与える可能性が考えられる。結晶型や粒子径による細胞への取り込みの違いを解析するなど、さらなる検討が必要である。本研究では、近年化粧品や食品などに広く利用されている二酸化チタンや酸化亜鉛のナノ粒子について、THP-1マクロファージ様細胞および大腸癌細胞Caco2を用いて炎症反応の誘導および炎症性疾患増悪作用の検討を行った。その結果、二酸化チタンのナノ粒子による炎症反応誘導作用は、ルチル型よりアナターゼ型で強く認められた。また、THP-1マクロファージ様細胞において、酸化亜鉛のナノ粒子により粥状動脈硬化進行の原因とされるマクロファージ泡沫化の促進が認められたが、二酸化チタンのナノ粒子では認められなかった。酸化亜鉛ナノ粒子はマクロファージの泡沫化を促進し、粥状動脈硬化症を増悪する可能性が示唆された。本年度は、二酸化チタンナノ粒子のヒトマクロファージ様細胞への曝露による炎症反応誘導過程におけるNlrp3の発現の解析を中心に検討を行った。ウェスタンブロット法を用いて解析したが、結果を得るのが難しく、何度か追試を重ねる必要があった。しかし、一次粒径が小さい二酸化チタンナノ粒子の方が大きいものより強く発現する傾向が見られたため、今後追試を重ね、確実な結果を得て検討する予定である。また、Nlrp3に関連して産生する炎症性サイトカインIL-1βについても現在解析を進めている。ウェスタンブロット法を用いたタンパク質発現の解析は、目的とするタンパク質によっては安定した結果が得られるまで実験条件の検討を重ねる必要がある。今回、Nlrp3およびIL-1βの解析については、安定した結果が得られず、実験条件の検討に時間がかかった。医歯薬学今後、Nlrp3に関連する炎症性サイトカインIL-1βの発現だけでなく、他の炎症関連因子(IL-8, TNF-αなど)についても解析を進めていく予定である。また、種々のナノ粒子(二酸化チタン、酸化亜鉛など)について、ヒトマクロファージ様細胞を用いてスカベンジャーレセプター(SR-A,MARCO,CD36など)の発現を解析し、ナノ粒子取り込みへの関与を検討する。また、ヒト大腸上皮細胞とヒトマクロファージ様細胞を共培養し、ナノ粒子暴露により大腸上皮細胞がどのような影響を受けるかについても検討していく予定である。さらに動脈硬化モデル動物にナノ粒子を気管内投与し、初期動脈硬化病変である血管内脂肪沈着を解析することで動脈硬化の増悪を評価する。以上より、ナノ粒子の炎症反応誘導機構を明らかにし、炎症性腸疾患や動脈硬化への誘導・増悪効果の検討を行う。本研究では、種々のナノ粒子(二酸化チタン、酸化亜鉛、シリカなど)およびカーボンナノチューブについて、ヒトマクロファージ様細胞を用いてスカベンジャーレセプターを介したナノ粒子の取り込み、および炎症反応の誘導機構の解明を行う。本年度は、ナノ粒子曝露による炎症反応の誘導およびマクロファージ泡沫化促進作用の解析を行った。
「健康度・生活習慣診断検査」の開発

中学生から社会人までに適用できる健康度及び生活習慣を診断できる検査法の開発、その検査法を用いて年代差・性差の分析及び健康度と生活習慣の関連性を分析した。各年代の成果は以下のとおりである。1.平成12年度-診断検査の開発1)「健康度・生活習慣(睡眠、休養、運動・スポーツ、食生活など)に関する調査用紙を作成し、大学生565名から回答を得た。2)調査内容を統計的に分析し、診断検査としての信頼性、妥当性、因子構造検証し、大学生と対象とした評価尺度を作成した。3)とくに運動・スポーツの実施程度と健康度・生活習慣の関係を分析した結果、運動・スポーツの実施程度の多い人ほど望ましい健康度や生活習慣であることが確認された。4)研究の成果を日本健康心理学会、日本健康支援学会などで発表した。5)中学生、高校生、社会人を対象とした次年度の分析・考察について検討した。2.平成13年度-年代差・性差及び健康度と生活習慣の関連性の分析1)「健康度・生活習慣診断検査」を実施し、中学生389名、高校生468名、大学生567名、杜会人290名から回答を得た。2)中学生、高校生、大学生、社会人の年代差を比較し、それぞれの年代の問題点を指摘した。3)各年代ごとに、生活習慣が健康度に及ぼす影響を分析し、望ましい生活習慣を実施している者は、健康度評価が高いことを明らかにした。4)研究の成果を日本健康心理学会、日本スポーツ心理学会などで発表した。5)最終年度になるため、研究成果報告書を作成した。平成12年度は研究計画に従って、次の5点について調査・研究を行った。1.健康度及び生活習慣(睡眠、休養、運動・スポーツ、食生活など)に関する調査用紙を作成し、大学生565名から回答を得た。2.調査内容を統計的に分析し、診断検査としての信頼性、妥当性、因子構造検証し、大学生と対象とした評価尺度を作成した。3.とくに運動・スポーツの実施程度と健康度・生活習慣の関係を分析した結果、運動・スポーツの実施程度の多い人ほど望ましい健康度や生活習慣であることが確認された。4.研究の成果を日本健康心理学会、日本健康支援学会などで発表した。5.中学生、高校生、社会人を対象とした次年度の分析・考察について検討した。平成13年度は研究計画に従って、次の5点について調査・研究を行った。1.「健康度・生活習慣診断検査」を実施し、中学生389名、高校生468名、大学生567名、社会人290名の合計1,714名から回答を得た。2.中学生、高校生、大学生、社会人の年代差を比較し、以下のような結果を得た。1)中学生、高校生は、健康度、生活習慣とも高学年になるほど望ましくない傾向がみられた。その傾向は精神的・社会的健康度、積極的健康行動運動意図・環境、休養行動、休養度、睡眠の規則性で顕著であった。2)大学生は積極的健康行動、運動意図・環境、食生活状況、睡眠状況で著しく悪く、健康度・生活習慣とも最も悪い年代であった。3)社会人は健康度・生活習慣とも良好であったが、休養行動、男子の嗜好品摂取行動、食事の規則性、睡眠の障害で望ましくない傾向がみられた。3.各年代ごとに、生活習慣が健康度に及ぼす影響を分析し、以下のように望ましい生活習慣を実施している者は、健康度評価が高いことを明らかにした。1)生活習慣行動は健康度評価と顕著な関係がみられた。とくに、身体的健康度に最も影響し、次に社会的健康度、そして精神的健康度の順序で関係していた。2)運動条件、食生活状況、休養状況、睡眠状況はいずれも健康度評価と顕著な関係がみられ、いずれも身体的健康度に顕著な関係がみられた。

3)以上の傾向は各年代、男女に共通しており、望ましい生活習慣と実施している者は健康度評価が高く、その傾向は身体的健康度で顕著であった。4.研究の成果を日本健康心理学会、日本スポーツ心理学会などで発表した。5.最終年度になるため、研究成果報告書を作成した。