hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
SPF環境による老化病態制御-老化促進モデルマウス(SAM)を用いて-

1.緒言:最近の研究により、老化促進モデルマウス(SAM)に認められるマウス老化アミロイドーシス発症には、前駆蛋白質であるアポA-IIの分子型のみならず、他の遺伝、代謝、環境因子もまた重要であることが明かとなった。今回我々は、SAMに認められる促進老化微候発現、及びマウス老化アミロイドーシス発症に対し、細菌学的飼育環境の及ぼす影響について検討した。2.方法・結果:(1)通常飼育、及びSPF飼育されたSAMPX(Apoa2c)の各々211か月齢(各月齢雌雄各34匹)を検索した。(2)加齢に伴う促進老化微候発現は、通常飼育群に比べSPF飼育群で有意に抑制された。また雌に比べ雄で有意に高値を示した。(3)通常飼育群では、6か月齢で33%に軽微な消化管アミロイド沈着を、11か月齢では100%に肝脾を含む全身性アミロイド沈着を認めた。SPF飼育群においては、いずれの月齢でもアミロイド沈着は認められなかった。(4)体重、及び肝臓・腎臓・心臓重量は、SPF飼育群、及び雄で有意に高値を示した。(5)逆に脾臓重量は、SPF飼育群、及び雄で有意に低値を示した。3.結語・考察:以上の結果より、促進老化微候発現、及びマウス老化アミロイドーシス発症に対し、細菌学的飼育環境が重要な影響を及ぼしていることが明かとなった。細菌学的飼育環境の違いは第一にマウスの免疫系に影響を及ぼすと考えられる。脾臓重量が通常飼育群に比べSPF飼育群で有意に低値を示した事は、SPF飼育群が免疫学的に"低刺激状態"におかれている事を示唆している。SPF飼育群と通常飼育群の免疫学的パラメーターを詳細に比較検討し、"細菌学的環境-免疫機能異常-促進老化微候発現-マウス老化アミロイドーシス発症"連関を総合的に解析する事は、今後の重要な課題である。1.武田薬品工業中央研究所におけるSAMP1のSPF化は、SAMP1の繁殖力が他の近交系マウスに比べて低いこと、及び親マウスの新生児食殺が多いこと等により当初計画より遅れていたが、他施設におけるSPF化も含めようやく軌道に乗り、平成5年度中にはSPF化SAMP1を福井医科大学医学部附属動物実験施設に導入出来る見通しが付いた。2.平成5年度に導入した分取用SDS-PAGE電気泳動システム(バイオラッド社170-2926)により、マウス老化アミロイド線維構成蛋白質であるアポA-II(モノマー)を、従来のように電気泳動後ゲルを切り出し溶出する方法に比べ、遥かに短時間に、しかも高収率で分離・精製出来るようになった。3.平成6年度計画(1)SPF化SAMP1を、SPFおよびコンベンショナルの2条件で、兄妹交配により繁殖、維持する。(2)免疫機能の加齢変化および飼育環境による相違を検討するため、両条件下で飼育された212ヶ月齢SAMP1について、種々の免疫学的パラメーターを比較検討する。(3)促進老化徴候発現の飼育環境による相違を検討するため、両条件下で飼育された212ヶ月齢SAMP1の各月齢における促進老化徴候発現度を、"老化度判定システム"を用いて評価する。(4)マウス老化アミロイドーシス発症の飼育環境による相違を検討するため、両条件下で飼育された612ヶ月齢

SAMP1の各臓器におけるアミロイド線維沈着量を、病理組織学的(コンゴーレッド染色、免疫組織化学)、および生化学的に定量する。1.緒言:最近の研究により、老化促進モデルマウス(SMA)に認められるマウス老化アミロイドーシス発症には、前駆蛋白質であるアポA-IIの分子型のみならず、他の遺伝、代謝、環境因子もまた重要であることが明らかとなった。今回我々は、SAMに認められる促進老化徴候発現、及びマウス老化アミロイドーシス発症に対し、細菌学的飼育環境の及ぼす影響について検討した。2.方法・結果:(1)通常飼育、及びSPF飼育されたSAMPX(Apoa2c)の各々211か月齢(各月齢雌雄各34匹)を検索した。(2)加齢に伴う促進老化徴候発現は、通常飼育群に比べSPF飼育群で有無に抑制された。また雌に比べ雄で有意に高値を示した。(3)通常飼育群では、6か月齢で33%に軽微な消化管アミロイド沈着を、11か月齢では100%に肝脾を含む全身性アミロイド沈着を認めた。SPF飼育群においては、いずれの月齢でもアミロイド沈着は認められなかった。(4)体重、及び肝臓・腎臓・心臓重量は、SPF飼育群、及び雄で有意に高値を示した。(5)逆に脾臓重量は、SPF飼育群、及び雄で有意に低値を示した。3.結語・考察:以上の結果より、促進老化徴候発現、及びマウス老化アミロイドーシス発症に対し、細菌学的飼育環境が重要な影響を及ぼしていることが明らかとなった。細菌学的飼育環境の違いは第一にマウスの免疫系に影響を及ぼすと考えられる。脾臓重量が通常飼育群に比べSPF飼育群で有意に低値を示した事は、SPF飼育群が免疫学的に"低刺激状態"におかれている事を示唆している。SPF飼育群と通常飼育群の免疫学的パラメーターを詳細に比較検討し、"細菌学的環境-免疫機能異常-促進老化徴候発現-マウス老化アミロイドーシス発症"連関を総合的に解析する事は、今後の重要な課題である。
オートファジーによる糖尿病性心筋症の新たな治療メカニズムの解明

2型糖尿病モデルであるTSODマウスの有する内因性の心筋保護機能におけるオートファジーの関与について評価した。TSODマウスの心筋組織ではオートファジー関連タンパク発現量が明らかに増加していた。糖尿病発症前のTSODマウスの心筋ではこの様な変化は認められなかった。このことから、TSODマウスの心筋では2型糖尿病の進行に伴ってオートファジー活性が高まることが明らかとなり、糖尿病により産生される不完全タンパクを効率良く除去していることが示唆された。平成23年度の研究により、新規自然発症型2型糖尿病モデルマウスであるTsumura Suzuki Obese Diabetes (TSOD)マウスの心筋においてオートファジー・リソソーム経路が活性化していることを明らかにした。平成24年度では、2型糖尿病発症前である1か月齢のTSODマウスの心筋におけるオートファジー関連タンパクの発現解析を行い、病態進行との関連性について評価した。また、遺伝的背景の異なる2型糖尿病モデルマウスdb/dbを用い、心筋におけるオートファジー関連タンパクの発現解析を行った。顕著な2型糖尿病所見を呈する7か月齢のTSODマウスの心筋では、オートファジーの誘導に関わるAtg12-Atg5複合体およびK63結合型ポリユビキチン化タンパクの発現量が同月齢の対照群(Tsumura Suzuki Non-Obesity; TSNO)と比べて有意に増加していた。一方、1か月齢のTSODマウスは同月齢のTSNOマウスと比べて血中のグルコース、総コレステロール、トリグリセリド、インスリン、レプチン濃度に何ら変化は認められないことに加え、心筋におけるオートファジー関連タンパク発現量も対照群と比べて有意な差は認められなかった。3か月齢のdb/dbマウスは顕著な2型糖尿病所見を呈し、その重症度は7か月齢のTSODマウスとほぼ同程度であることを確認した。db/dbマウスの心筋におけるオートファジー関連タンパク発現量は対照群であるdb/+マウスと比べて有意な変化は認められなかった。これらの結果から、TSODマウスの心筋では2型糖尿病の進行に伴ってオートファジー活性が高まることが示唆された。また、レプチン受容体欠損型であるdb/dbマウスの心筋では、顕著な2型糖尿病所見を呈していても、オートファジー活性が認められないことが明らかとなった。Tsumura Suzuki Obese Diabetes (TSOD)マウスはddY系マウスのうち肥満と尿糖を呈する個体同士を交配することで近交系化された自然発症型2型糖尿病モデル動物である。我々は最近、TSODマウスの心機能について評価したが、予想に反して心機能の低下や心臓病理所見の異常は認められなかった(Kawada et al., Biol. Pharm. Bull., 33: 998-1003, 2010)。このことから、TSODマウスの心筋は糖尿病に対して抵抗性を示すと考えている。そこで本研究では、TSODマウスの心筋におけるオートファジー活性について解析し、TSODマウスの有する内因性の心筋保護機能におけるオートファジーの関与について評価した。その結果、TSODマウスの心筋組織ではオートファジー関連タンパクであるAtg12-Atg5結合体の発現量が、TSNOマウスに比べて明らかに増加していた。また、免疫組織学的染色法による解析の結果、TSODマウスの左心室壁ではオートファゴソーム膜タンパクであるLC3が心筋細胞の核周辺に多数集積しており、その多くはリソソーム膜タンパクであるLAMP-1と共発現していたが、TSNOマウスの心筋細胞ではLC3の集積はわずかであった。電子顕微鏡により微細構造を解析した結果、TSODマウスの左心室筋では多数のオートリソソームが確認された。これらのことから、TSODマウスの心筋ではオートファジーリソソーム経路が活性化しており、糖尿病により心筋細胞内に蓄積した不完全タンパクなどを積極的に分解・除去するため、心筋細胞死に至らないと考えられる。当初の計画通り、TSODマウスの心筋においてオートファジー活性が亢進していることが本研究によって明らかにされた。今後、その具体的な誘導メカニズムについて追究していく計画である。本研究によって得られたデータとこれまでの研究成果を精査してまとめ、学会発表および国際誌上で成果を発表する。研究を総括するための追加研究ならびに論文の作成に要する資料と消耗品の購入費用、英文校正費用および論文投稿料に使用する。また、論文が受理された際には、その別刷り購入費用としても使用する。また、学会にて成果報告するために、学会参加費、旅費および宿泊費に使用する。
人工種子システムによる器官分化植物の大量繁殖

極く近い将来の食糧不足に対処するために、迅速な育種法及び優良植物の大量繁殖法が考案されねばならない。その一つとして人工種子システムについて研究した。人工種子に封入する植物体としては、未分化細胞である植物カルスから誘導される不定胚を用いる。そこで、不定胚を経由する再分化小植物体の効率的な生産方式の確立と内封物の選別方法の自動化について重点的に研究した。具体的には、植物細胞をアルギン酸で固定化し、高い剪断応力から植物細胞を保護すると同時に、アルギン酸から培地中に漏れ出てくる細胞が大部分不定胚となっていることをセロリ細胞について見いだした。この培養法はスケールアップが比較的簡単であり、かつ効率よく同調性の高い不定胚を生産することができる点で画期的な培養法である。内封物の選別方法の自動化については、知識工学的手法を応用することによって不定胚の成長段階の客観的評価を可能にし、コンピューターを組み込んだロボットシステムによって人工種子に適した不定胚・不定芽を自動選抜しうることを示した。さらに、色情報を取り入れることも重要であることがわかった。また、我々は不定胚以外の内封物として毛状根由来の不定芽を利用することがよいことを提案した。毛状根の最大の特徴は遺伝的に非常に安定であることであり、未分化細胞が遺伝的に不安定なことと対照的である。このように毛状根は形質転換されており、通常の植物と比較して二次代謝産物などの有用物質が多く含まれているものが多く、再分化した植物体は農業上優れた性質をもつ。さらに毛状根を誘導する際、Riプラスミドに外来遺伝子を挿入する操作により、既存の植物よりも優れた性質を遺伝子レベルで付与した新しい機能を持つ遺伝子組換え植物を生産できる。そこで、毛状根を利用した人工種子の製造プロセスの効率化を検討し、大量生産に適したシステムであることがわかった。1本年度は西洋ワサビを用いて人工種子の内封体として利用できる不定芽の生産工程の開発を行った。まず、大量培養において有効と考えられる液体培養系での検討を行った。人工種子の大量調製を目的とした場合、毛状根の大量断片化が必須である。ブレンダーを用いて毛状根を機械的に断片化することで、大量の人工種子の獲得を可能とした。断片化した毛状根をカイネチンを添加した培養液で再分化させて小植物体を形成させることができた。アルギン酸カルシウムに小植物体を包括するまえに、脱水処理を施すことでカプセル化後の再分化効率が顕著に増大した。2西洋ワサビ毛状根で行った人工種子生産工程を、ステロイド化合物を生産する植物のアジュガに応用した。毛状根増殖期にはオーキシンを添加することで増殖速度が増大し培養期間が短縮することが可能であった。再分化培養期では光を照射するだけでは出芽は確認できなかったが、ベンジルアデニンを添加することで再分化がおこり小植物体への再生が進行した。さらに光で誘導されるように構築したβ-グルクロニダーゼ遺伝子を導入したアジュガ毛状根について検討した。3セロリ-不定胚をアルギン酸で包括して培養を進めた場合、遊離してくる植物体は同調性が高いことを発見した。Caイオン濃度を5mM添加して培養を進めることにより、ゲルの崩壊が抑制され100日以上に渡る不定胚の生産が可能となった。1.イネ不定胚をフラスコレベルの培養からバイオリアクター培養へのスケールアップについて検討した。

酸素通気方法が不定胚誘導効率に影響するので、テフロンチューブを用いた酸素通気方法により、剪断力を最小にする培養方法を試み、この方法でスケールアップできることがわかった。2.毛状根を人工種子に応用する試みとして、さらに利用価値の高い植物について検討した。具体的には有用な二次代謝産物を含有するアジュガを用い、まず培地組成、培養方法等の改良により、毛状根の高密度培養方法の検討を行なった。次に培地の植物ホルモンの濃度バランス、光強度、ブレンダー等を用いた機械的切断処理などの検討を行ない、人工種子の内封物として適当な形状と性質を持った小植物体の効率的培養が可能であることがわかった。3.イオンチャネルトランスポーターやジャスモン酸感受性プロモーターまたは光誘導性RuBiscoプロモーターを支配下にあるGUS遺伝子を毛状根に導入し、この毛状根を経由して人工種子化し、遺伝子組換え植物の大量繁殖が基本的に可能であることを実証した。不定胚を経由する再分化小植物体の効率的な生産方式の確立と内封物の選別方法の自動化、不定胚以外の内封物として毛状根由来の不定芽を利用することについて重点的に研究した。未分化細胞から培養環境を調整して同調性の高い不定胚を効率よく生産することが困難な植物が多いが、未分化細胞をアルギン酸で固定化し、アルギン酸から培地中に漏れ出てくる細胞が大部分不定胚となっていることを見いだした。この方法はスケールアップが比較的簡単であり、かつ効率よく同調性の高い不定胚を生産することができる点で画期的な培養法である。また、イネカルスの増殖段階において、溶存酸素濃度の制御及び酸素供給法の改良によって小植物体を作る能力の高いイネカルスの培養に成功した。内封物の選別方法の自動化については、ファジィニューラルネットワークなどの知識工学的手法を応用すつことによって不定胚の成長段階の客観的評価を可能にし、コンピューターを組み込んだロボットシステムによって人工種子に適した不定胚・不定芽を自動選抜しうることを示した。毛状根経由の効率的な人工種子作成系の構築については、毛状根を揺動撹拌型バイオリアクターで人工種子として適した形で培養できる事を明らかにした。このようにして培養した毛状根を、大量処理に適したブレンダーを用いた機械的切断処理を行い、さらに植物ホルモンの種類と濃度を最適な状態にすることによって、毛状根経由の小植物体の大量調整に成功した。さらに、有用な二次代謝産物を含有し、人工種子の内封物として適当な形状と性質を持ったアジュガ毛状根にレポーター遺伝子としてGUS遺伝子を導入し、この遺伝子組換え毛状根経由の人工種子の大量調整に成功した。
少子高齢社会における墓地及び墳墓承継に関する法社会学的研究

本研究成果は3つの柱から成り立っていた。第一は、無縁墳墓改葬制度についての分析である。ここでは、(1)無縁墳墓の概念、(2)無縁墳墓改葬の制度史、(3)平成11年5月から平成16年3月までのほぼ5年間の官報に掲載された無縁墳墓改葬公告についてデータベース化を行った。この期間の公告件数は1,125件である。また、無縁墳墓改葬公告に掲載された墓地に実際行き調査を行った事例についても報告している。手続きの簡素化により、墓地使用者の権利や死者の尊厳性は護られているのか、多くの問題点も残している。無縁墳墓改葬が実際にどのように行われているのか、今後も引き続く調査を実施する必要があるだろう。第二は、野田山墓地の無縁墳墓の改葬に関する実証的研究である。ここでは、石川県金沢市の野田山墓地における無縁墳墓の改葬事情(墓地の整備事業)の実態について調査を行った。野田山墓地は、領主前田家の墳墓地であったが、そこに家臣団が埋葬されるようになり、さらに町人階層も埋葬されるという壮大な規模の墓地である。金沢市による墓地の整備事業は平成2年から始まったものであるが、現在でもまだ道半ばにあるが、全体の4割程度が無縁墳墓となっている。この金沢市の整備手続き・方法は、行政による墓地整備事業の一つのモデルであるといっても良いだろう。第三は、愛媛県周桑郡丹原町における墓地(無縁墳墓)に関する意識調査である。いわゆる過疎農村のおける墓地の継承に関しての意識調査である。アトツギの不在による墓の継承の危機意識がどのようなものであるか、調査者の意識はそこにあったけれども、必ずしも特徴的な結果が出てきた訳ではない。この調査は、丹原町の老人連合会に委託して調査を実施したが、回答者がすでに承継者を確保している高齢者が多かったのがその理由である。しかし、潜在的には、次世代において起こるであろうアトツギ問題や、誰にも管理されない無縁墳墓の増加等、これから大きな問題へと展開することは充分に予想できる調査結果ではあった。1無縁墳墓改葬公告について平成11年5月から、無縁墳墓の改葬(「無縁改葬」と略)公告の方法が日刊紙(新聞)による公告の掲載から官報への掲載に変更になった。そのため、無縁改葬の公告に関する情報が1ヵ所にまとめられたので、この情報のデータベース化が可能になった。データは、(1)公告の日時、(2)無縁改葬を行う場所(住所)、(3)墓地の名称、(4)死者の名前(あるいは墓地使用者の名前)、(5)無縁改葬を行う人、(6)無縁改葬の理由、等であり、今年度平成12年末までの入力が終了した。データは分析の途上であるが、次の傾向が窺えるのではないかと思う。(1)無縁改葬の事由として、道路工事などの工事関係によるものが多いが、次第に「墓地の整理」を理由にした改葬も増える傾向にある。(2)公告の記載事項である「死者の名前」が不明で「不詳」と記載される事例が多い。今後も無縁墳墓改葬事例が増加することを考えるならば、現行の記載事項についても再検討を行う必要がでてくるだろう。2金沢市営野田山墓地の調査

加賀藩の墓地として出発した野田山墓地は、古い伝統がある墓地であるために無縁墳墓が増加し、金沢市はその環境整備を行い、現在でもその作業が続いている。その手続きは広大な面積を有する墓地の整備事業のモデルとも言えるものである。この環境整備(無縁改葬)事業を実証的に明らかにするために、無縁墳墓を特定するために準備を進めている区域を中心に無縁の可能性のある墳墓(立て札を立てた墳墓)を特定した。その数は1,000基を超えており、この墳墓の行方を注目したい。平成14年度には1,000基の墳墓のデータを整理し(戒名・建立年などの墓標に刻まれている文字情報)、その傾向を明らかにしたい。1無縁墳墓改葬公告について平成11年5月から平成14年3月までの無縁墳墓の改葬(「無縁改葬」と略)公告のデータベース化を完了した。データは、(1)公告の日時、(2)無縁改葬を行う場所(住所)、(3)墓地の名称、(4)死者の名前(あるいは墓地使用者の名前)、(5)無縁改葬を行う人、(6)無縁改葬の理由、等であり、無縁公告の「公告」全文もデータベースに収録した。次年度に平成14年度分を入力し、最終的な分析を試みたいが、現在のところ次の傾向が窺えるのではないかと思う。(1)無縁改葬の事由として、道路工事などの工事関係によるものが多いが、次第に「墓地の整理」を理由にした改葬も増える傾向にある。(2)公告の記載事項である「死者の名前」が不明で「不詳」と記載される事例が多い。(3)土葬墓地から火葬へと葬法が変化する中での改葬公告、あるいは墓地を廃止に伴う改葬公告など、予想しなかった事例もあり、今後より詳細な分析が必要となってきた。2「無縁墳墓改葬公告」事例研究無縁墳墓改葬公告を見ていると、この公告だけではその実態が見えにくいものが多い。「屋敷墓」の改葬公告(徳島県)、墓地廃止に伴い改葬公告(三重県)、土葬から火葬へ変化するなかでの改葬公告(奈良県)等の事例についてその経過を含めてその実情について調査を始めた。3金沢市営野田山墓地の調査加賀藩の墓地として出発した野田山墓地は、古い伝統がある墓地であるために無縁墳墓が増加し、金沢市はその環境整備を行い、現在でもその作業が続いている。平成14年はある墓地区画な墳墓のデータを整理し(戒名・建立年などの墓標に刻まれている文字情報)、1000基を超える無縁墳墓のデータベース化が完成した。今年度はこのデータの分析を試みたいが、どのような過程で無縁化していったのか、その事例研究も検計対象にしたい。1無縁墳墓の改葬公告のデータベース化平成11年5月から平成15年5月までの4年間に官報に掲載された無縁墳墓改葬公告についてデータベース化を行った。その数は4年間で900件を超え、平成15年度中には1000件に達するであろう。(1)無縁改葬の事由として、道路工事等による公共工事関連によるものが多いが、(2)公営墓地・事業型墓地、特に寺院による「墓地の整理」を理由にした改葬が増える傾向にある。(3)無縁墳墓改葬の事例が今後増加することを考えるならば、現行の記載事項についても再検討を行う必要がでてくるだろう。2金沢市営野田山墓地における無縁墳墓の調査
高次元領域における走化性方程式系の爆発解の挙動に関する研究

我々は細胞性粘菌の集中現象を記述するために導出された方程式系の爆発解の研究を行った。当該方程式系の解は粘菌の密度に対応している。また、ある時刻・ある場所において解の値が無限大になる事を解が爆発すると言う。この事と粘菌の集中現象が対応していると考えている。我々は、爆発解を構成しその爆発解の性質を解明する事に成功した。この事により、2次元領域における解の性質と高次元領域における解の性質の違いを明確にした。単純化された走化性方程式系の爆発解の挙動に関する研究を行う。そして、その結果と2次元領域における単純化された走化性方程式や関連する他の方程式群の爆発解の挙動との共通点や相違点を明らかにする。1)JL系の定常解に関する研究JL系の定常解は、Gel' fand方程式と呼ばれる楕円型方程式となり、その球対称解の性質に関する幾つかの結果がある。これらをJL系のType II爆発解の研究への応用という観点で検討した結果、今まで得られている結果をより精密化する必要があることがわかり、その事について理論的な研究を行い。必要となる結果を得た。その結果は研究発表の1番目の論文にまとめ、発表した。2)JL系の球対称なTypeI爆発解に関する研究2005年に仙葉によって、3次元以上9次元以下のユークリッド空間における球対称なJL系の自己相似解が無限個存在する事が明らかになった。これらの定常解は、特異定常解との交点の数と対応付けられる。本年度の内藤氏との共同研究により、上記の自己相似解は特異定常解との交点が大きくなるとき特異定常解に近づくことが明らかになった。さらに、この事を用いて3次元以上9次元以下の球対称な領域上でType Iの爆発を起こすJL系の解の存在を明らかにした。3)JL系の球対称なType II爆発解を構成とそれらの爆発解の爆発の速さ・特異i性の研究1)の定常解の研究を用いることで、11次元以上のユークリッド空間上のJL系の球対称なType II爆発解を構成した。また、この爆発解は爆発点・爆発時刻の近くで特異定常解に近づく事がわかった。従って、この爆発解が爆発時刻・爆発点で特異定常解と同じ特異性を持つ事が明らかになった。この結果は研究発表の1番目の論文のなかにまとめた。本年度は、Keller-Segel系を単純化した方程式系(以後、単純化方程式系と呼ぶ)の爆発解について以下のような新たな知見を得た。11次元以上のユークリッド空間における単純化方程式系の球対称なTypeII爆発解は2005年に仙葉によって構成されたが、爆発の速さについては上からと下からの評価が得られているだけで速さを決定するまでには至らなかった。本年度の研究によって、各々の爆発の速さが異なる球対称なTypeII爆発解を加算無限個構成し、各々解の爆発の速さを決定する事ができた。この結果を研究発表の3番目の論文の中にまとめた。ここで、自己相似的な爆発と同じ速さの爆発をTypeI爆発と呼び、爆発の速さがそれよりも速い爆発をTypeIIの爆発と呼ぶ。また、3次元以上のユークリッド空間における単純化方程式系は球対称なTypeI爆発解をもつ事が本研究で明らかになり、その事を平成18年度の研究実績報告書で報告した。本年度の研究によって、2次元ユークリッド空間における単純化方程式系は球対称なTypeI爆発解をもたない事を明らかにし、その結果を研究発表の1番目の論文としてまとめた。この結果は、低次元領域における単純化方程式系の爆発解の性質についてのものであるが、高次元領域における爆発解の構造が低次元領域におけるそれよりも豊富である事を示したという意味では、本研究における新しい知見と考える。交付申請書の研究目的の欄に本研究の特色・独創的な点として記載したように、このような観点で高次元領域における走化性方程式系の解を研究する事が、本研究の特色・独創的な点の一つである。本年度は、走化性方程式の球対称な後方自己相似解と呼ばれる爆発解についての研究を行った。全空間を領域とする走化性方程式の球対称な後方自己相似解は、2005年の仙葉の論文の中で無限個発見されており原点が爆発点となる。さらに、爆発点における特異性については空間変数xの-2乗、つまり爆発時刻での原点における特異性は「定数倍×1/|x|^2」となっている事を明らかにした。この事を踏まえて本年度は以下の研究成果を得た。上記の論文で発見された無限個の球対称な後方自己相似解の特異性に対応する「定数」がどのような値なのかは不明であった。本年度の研究では「定数」を具体的に決定することは出来なかったが、それらは少なくとも無限種類ある事を明らかにした。

このことにより走化性方程式の解として現れる爆発解たちの中に無限種類の特異性が現れる事が明らかになった。また、2005年の仙葉の論文で発見された後方自己相似解は領域が全空間である場合にのみ定義されるが、解の爆発は空間局所的なものであり領域が全空間でない場合も後方自己相似解と同様の爆発の遠さや特異性を持つ爆発解が存在すると予想している、この問題に対して本年度は、有限の半径を持つ球を領域とする走化性方程式の球対称な爆発解の中に後方自己相似解と同じ速さの爆発を起こす解があることを明らかにした。本研究の対象は移流項をもつ反応拡散系であり、走化性方程式系と呼ばれる偏微分方程式系である。走化性方程式系の解は空間上のある領域の中の生物の密度分布や化学物質の濃度分布が時刻と共に変化する様子を表している。本研究では主に3次元以上の領域における走化性方程式系の爆発解の挙動や爆発点の周りでの解の性質を明らかにする事を目的とした。本年度は、11次元以上の領域における走化性方程式には爆発の速さが異なる無限種類の無限時刻爆発解が存在する事、ならびにそれらの解が爆発点の周りで定常解を自己相似変換した関数に近づくと言う共通の性質を持つ事を明らかにした。3次元以上の領域における走化性方程式の無限時刻爆発解の存在とその爆発の速さを明確にした初めての研究であり、爆発解の構造を研究する上で意義のある成果であると考える。この成果は本報告書の研究発表の欄に記載されている論文として発表した。
末梢血単核球IL-2産生能高値の重症筋無力症例の病態と免疫抑制剤FK506の効果

平成16年度は未治療の重症筋無力症(MG)を対象に,低量FK506早期投与の効果を無作為割付,前向き試験により検討した新患入院MGを無作為にFK506(3mg/日)投与群(18例:57±17歳),非投与群(16例:54±16齢に割り付け,両群とも,以下の治療により十分な改善を得た上で,必要とされた治療内容を比較しFK506の有効性を検討した一入院初期治療は抗コリンエステラーゼ剤非使用とし,FK506以外の治療は,経口prednisolone (PSL)20mg/日以下と免疫吸着法(IA)+ステロイドパルス(HMP)併用療法のみとした.初期治療終了はPSL 10mg/日以下で日常生活に支障ないレベル(Minimal Manifestations' of Myasthenia Gravis Foundation of America (MGFA) Postintervention Status : MM)に到達した時点とした.初期治療終了後も治療開始1年後の時点までフォローアップしたこのフォローアップ期間の治療はPSL20mg/日以下,Pyridostigminebromide 120mg以下,IA+HMP併用療法,HMPとした.その他のパラーメータとして,初期治療終了時と治療開始1,6,12ヶ月後の重症度(MGFAに準拠),重症度比率(治療後/前),interleukin-2 (IL-2)産生能,IL-2産生能比率(治療御前),抗アセチルコリン受容体(AChR)抗体価抗AChR抗体価比率(治療後/前)を評価した.両群ともに十分な改善が得られ(MM),両群間の重症度に差はなかった.FK506投与群では非投与群に比し,有意(p<0.05)に初期治療期間が短く,初期治療に要したIA/HMP(回)が少なく,PSL投与量が少なかった.フォローアップ期間に要した治療の比較でも,FK506投与群では非投与群に比し,有意(p<0.05)にIA/HMP(回),HMP(回)が少なく,PSL投与量が少なかったMGに対する低量FK506早期投与は有効であることが示された.平成15年度は,末梢血単核球(PBM) interleukin-2 (IL-2)産生能高値の重症筋無力症(MG)例の臨床的特徴と,免疫抑制剤FK506の早期効果について検討した.末治療MG患者75例のPBM IL-2産生能を測定し,健常対照48例との比較,臨床所見(重症度,抗AChR抗体価,胸腺組織所見,胸腺摘出の効果)との関連を検討した.MG患者のPBM IL-2産生能は対照例と同程度の例から高値の例まで様々であったが,平均値を比較すると,対照例に比し有意に高値であった.MG患者のうち,PBM IL-2産生能が対照の平均+2SDを越える高値例は29例(39%)であり,その有意な臨床的特徴は,全身型重症,抗AChR抗体陽性,胸腺過形成,胸腺摘出有効であった.一部のMG例では,IL-2産生能がMGのT細胞病態を反映する可能性が考えられた.FK506はIL-2転写抑制作用を有し,T細胞活性化を抑制する薬剤である.MG患者に対する低用量FK506 (1日量3mg)の有効性をPBM IL-2産生能高値例9例と正常値例10例で比較した.IL-2産生能高値例では投与1週後に重症度スコア,IL-2産生能の低下がみられ,この効果は1ヶ月後も持続した.投与1週後,1ヶ月後の重症度スコア改善は,IL-2産生能高値例で正常値例に比し有意に優れていた.以上より,FK506はIL-2産生能高値のMG患者に対し,より有効である可能性が示唆された.FK506の長期効果を検討するため,現在,無作為割り付けによるFK506投与(18例,非投与(16例)MG例の長期観察を行っている.平成16年度は未治療の重症筋無力症(MG)を対象に,低量FK506早期投与の効果を無作為割付,前向き試験により検討した新患入院MGを無作為にFK506(3mg/日)投与群(18例:57±17歳),非投与群(16例:54±16齢に割り付け,両群とも,以下の治療により十分な改善を得た上で,必要とされた治療内容を比較しFK506の有効性を検討した一入院初期治療は抗コリンエステラーゼ剤非使用とし,FK506以外の治療は,経口prednisolone (PSL)20mg/日以下と免疫吸着法(IA)+ステロイドパルス(HMP)併用療法のみとした.初期治療終了はPSL 10mg/日以下で日常生活に支障ないレベル(Minimal Manifestations' of Myasthenia Gravis Foundation of America (MGFA) Postintervention Status : MM)に到達した時点とした.初期治療終了後も治療開始1年後の時点までフォローアップしたこのフォローアップ期間の治療はPSL20mg/日以下,Pyridostigminebromide 120mg以下,IA+HMP併用療法,HMPとした.その他のパラーメータとして,初期治療終了時と治療開始1,6,12ヶ月後の重症度(MGFAに準拠),重症度比率(治療後/前),interleukin-2 (IL-2)産生能,IL-

2産生能比率(治療御前),抗アセチルコリン受容体(AChR)抗体価抗AChR抗体価比率(治療後/前)を評価した.両群ともに十分な改善が得られ(MM),両群間の重症度に差はなかった.FK506投与群では非投与群に比し,有意(p<0.05)に初期治療期間が短く,初期治療に要したIA/HMP(回)が少なく,PSL投与量が少なかった.フォローアップ期間に要した治療の比較でも,FK506投与群では非投与群に比し,有意(p<0.05)にIA/HMP(回),HMP(回)が少なく,PSL投与量が少なかったMGに対する低量FK506早期投与は有効であることが示された.
ヒトpIg-receptor遺伝子発現調節機構の解析

平成10年度はpIgR遺伝子発現におけるNF-κBの役割について検討した。1.方法2.結果CHXとTNF-αのco-stimulationにより、48時間後にはNF-κBのtranslocationは完全に抑制された。TPAとTNF-αのco-stimulation48時間後ではNF-κBのtranslocation量はTNF-α単独よりも増加した。また、CHXまたはTPAとのco-stimulationいづれにおいてもpIgR mRNA発現は完全に抑制された。PDTC処理によりpIgR mRNAの発現は抑制されたが、完全な抑制ではなかった。3.考察CHXとYNF-αのco-stimulationにより、NF-κBのtranslocationとpIgR遺伝子発現の双方が阻害されていることは、TNF-α刺激によるpIgR遺伝子発現には新規タンパク質合成が必要であり、その一つに、NF-κBの新規合成が関与していることを示している。しかしながら、NF-κB阻害剤によるpIgR遺伝子発現の抑制が不完全であったことは、pIgR遺伝子発現にはNF-κBの活性化だけではなく、他の制御因子も必要であることが示唆される。また、TNF-αとTPAによるNF-κBの活性化はTNF-αとTPAそれぞれの作用によるIκBリン酸化の相加作用の結果であると考えられるが、pIgR遺伝子発現が完全に抑制されていることは、PKCの活性化によって抑制される制御因子の関与が示唆される。以上の結果からTNF-αによるpIgR遺伝子発現には,転写開始地点近傍に存在するNF-kB結合部位にp50およびp65のheterodimerが結合し,転写活性化に関与することが示唆された。2)TNF-α刺激によるNF-kB結合部位のpromoter活性に及ぼす影響pIgR遺伝子5′上流域のDNA fragementをNF-kB結合部位を2個,1個もしくは1つも含まないchloramphenicol acetyltransferase(CAT)vectorを作製した。これらのvectorをHT-29細胞にtransfectionした。Transfectionした細胞からcell lysateを調製し,CAT活性を測定することによりpromoter活性を検討した。その結果,TNF-α刺激によるCAT活性の有意な増加は検出できなかった。そこでさらに検出の感度をあげるため,CAT遺伝子をluciferase遺伝子に換え,luciferase活性を測定した。その結果,NF-kB結合部位を1つも含まないvectorと比較し,NF-kB結合部位を含むvectorをtransfectionした細胞ではTNF-α刺激によりluciferase活性が有意に増加した。しかしながらその活性の増加度は約120%と非常に弱かった。これらの結果より,TNF-α刺激によるpIgR遺伝子発現において,promoter活性を充分に上げるためにはさらに上流の塩基配列もしくは3′-untrnslated regionも必要である可能性が示唆された。
薬物依存症のシナプスメカニズム

ヒトを対象にした臨床研究で、貧困や虐待などのストレス経験は肥満・薬物依存症の強いリスクファクターであることが示されている。しかし、その神経回路メカニズムの多くは不明である。私は、ショウジョウバエを慢性的な貧栄養ストレス下で飼育すると、砂糖、アルコール、覚醒剤など様々な報酬刺激物質への嗜好性が顕著に増大することを見出した。ショウジョウバエは強力な遺伝学ツールにより、個々の神経細胞の機能を詳細に調べることが可能である。私はこのモデル実験系を用い、慢性ストレスが報酬刺激物質への嗜好性の変化をもたらすメカニズムの解明を試みた。私たちの研究を含めた一連の研究により、ショウジョウバエにおいても哺乳類などと同様に、ドーパインが様々な報酬シグナルを伝達することが知られている。興味深いことに、貧栄養ストレスを経験したハエではシナプスにおけるドーパミン産生酵素と興奮性のD1型ドーパミン受容体の量が増大しており、報酬刺激物質への感受性が高まっていることが示唆された。実際にドーパミンの神経や受容体の機能を阻害したところ、経験依存的な嗜好性の増大が消失し、ドーパミン報酬系の関与が示された。さらに、ドーパミン受容体を過剰に発現させることにより、嗜好性が増大した。以上の結果から、環境依存的なドーパミン報酬系の性質の変化が行動の変化を引き起こすことが明らかになった。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。本研究の目的は、多様な遺伝学ツールを用いることのできるショウジョウバエをモデルに、薬物依存症の形成メカニズムをドーパミン報酬系に着目し、シナプスレベルで解明することである。この目的のため、まず、薬物依存症の形成を引き起こす環境要因を行動学的に特定した。その目的達成の第一歩として、アルコールや覚醒剤などの摂取量を自動かつ大規模に測定するための行動実験を開発した。これは、一週間に最大で200グループ以上の実験群の薬物摂取行動を測定することのできる装置である。この装置を使った実験により、羽化直後の環境要因がアルコールや覚醒剤など様々な依存性物質の摂取パターンを大きく左右することが判明した。従って、こうした環境要因が薬物乱用の大きなリスクファクターであるといえる。さらにその分子・神経基盤を明らかにするため、様々な変異体の薬物摂取量を測定した。その結果、特定のドーパミン受容体がこの行動変化に関与することが判明し、ドーパミン報酬系の環境要因依存的な性質の変化が示唆された。薬物摂取に大きく影響する因子を複数発見した。さらにドーパミン報酬系の関与を示唆する予備データも得ることができた。環境要因によるドーパミン報酬系の変化を高解像度で解明し、その行動制御における因果関係を証明することを目指す。特にシナプス構成因子に着目し、特定の細胞における局在変化、発現量の変化を、高解像度で解明する。さらにそれらの因子の人為的な発現操作により、行動制御の実現を図る。
暖候期の京阪奈地域に発達する局地循環の解析

暖候期晴天日の京阪奈地域周辺では、日の出後の混合層の発達に伴い、上空の風の影響を受けた風が10時頃から地上で吹くようになり、その後、大阪湾からの海風が侵入してくる。谷や山の斜面の近くでは、夜間に局所的に山風が吹き、日の出から数時間の間にその風向きが逆転する。暖候期晴天日の夕方に京阪奈地域で吹く風は、弱風、西寄り、東寄り、北寄りの4つのタイプに分類された。西寄りの風が吹く海風日では、弱風日に比べて、京阪奈地域の日最高気温の時刻や光化学オキシダント濃度が高くなる時刻が早くなる傾向がみられた。気象庁地域気象観測システム(AMeDAS)の10分毎のデータと国立環境研究所でアーカイブされている大気汚染状況常時監視の1時間毎のデータを用いて、京阪奈地域を中心とする関西エリアの暖候期静穏日の局地風の特徴を地域を分けて調べた。その結果、大阪湾からの海風が生駒山地の北側を通って京阪奈地域(枚方や京田辺)に到達する日は、大阪の都市域よりも京阪奈地域の方が日最高気温が高くなる傾向があることが分かった。また、海風が生駒山地の南側を通って奈良盆地内に侵入する日も盆地内の日最高気温は高い傾向があった。奈良盆地内の気温が日最高となる時刻が、海風の侵入する日の方がその他の静穏日よりも早かったことから、盆地内が高温となったことで海風が盆地内に侵入し、その海風により盆地内に冷気がもたらされたと解釈される。関西エリアの各地の海風の侵入時刻や侵入頻度は、過去40年のデータの中で変化が見られた。大阪平野の都市化がこの変化の主な原因と考えられるが、その変化の実態を理解するには、大阪平野全体の夜間の陸風や局所的な都市部のヒートアイランド循環を含めて、大阪平野の地上風の日変化の経年変動を調べる必要があると考えられた。大気汚染物質濃度データの解析からは、大阪湾からの海風が卓越する暖候期静穏日の午後に大阪府北東域で光化学オキシダント濃度が高くなる傾向があることが分かった。また、この海風の風速が強い日よりも弱い日の方が大阪府の光化学オキシダント濃度が高くなる傾向があった。光化学オキシダント濃度が特に高くなる日は、午前の早い時間帯から通常よりも濃度が高いことが多く、海風で大阪平野に運ばれてくる空気の履歴もその後の濃度変化にとって重要であると考えられた。本研究は、京阪奈地域の暖候期静穏日に発達する局地循環の特徴を明らかにすることを目的としている。初年度は、気象庁地域気象観測システム(AMeDAS)の10分毎のデータと国立環境研究所でアーカイブされている大気汚染状況常時監視の1時間毎のデータを用いて、大阪湾からの海風が内陸に進行する様子と、それが京阪奈地域の気温や光化学オキシダント濃度の日変化に及ぼす影響を中心に解析を行なった。また、奈良盆地の暖候期静穏日の地上風と気温の日変化の特徴や奈良盆地と大阪平野、京都盆地との間の空気移動の日変化についても調べた。使用データの整備に当初の予定よりも時間がかかったが、現在では、地上気象観測データを使って京阪奈地域の局地循環に関連する局地風の解析を順次進めていける状況にある。このデータ解析環境の構築により、今後、予定通りに研究を発展させる(気象庁メソモデル解析値のデータ解析や領域大気モデルによる数値実験による研究)ことができると考えている。気象庁地上気象観測データと大気汚染状況常時監視の1時間値データを用いて京阪奈地域の暖候期晴天静穏日の特徴について調べた。その結果、大阪平野の海風が日没後に弱まり向きを変えて陸風となる時刻が、1970年代後半から近年にかけて遅くなっていることが分かった。これは、1970年代以降に大阪平野や京都盆地、奈良盆地で都市化が進行し、日没後の内陸の地上気温が下がりにくくなったことによるものと考えられた。また、大阪平野北部の地域では海風の吹く時刻が早まり、海風の吹く割合が増加する傾向が見られた。この原因として、この地域の夜間の陸風の弱化が示唆された。京阪奈地域の京田辺や枚方では、大阪や京都に比べて、猛暑日の日数が1990年代以降に急激に増加している。熱帯夜の日数は、特に1980年代後半から2000年にかけて枚方で急激に増加している。京田辺が猛暑日になる日は日最高気温の時刻が15時以降となる傾向があることが分かった。また、京田辺の日最高気温は、日の出前の気温が高く、日中の大阪湾からの海風が弱い日に高くなりやすいことが分かった。暖候期に京田辺の市街地と郊外で多地点同時気象観測を行った結果、周辺よりも市街地の気温が高くなるヒートアイランド現象が確認されたが、その影響は限定的であり、近年の京田辺の急激な気温上昇を局地的な都市化だけで説明するとはできなかった。京阪奈地域及びその周辺地域の都市化に伴う京阪奈地域の局地風の弱化が、近年の京田辺の猛暑日増加に寄与したものと考えられた。気象庁メソモデルのモデル面解析値を用いて大阪平野の海風の特徴を調べた結果、内陸に侵入した海風の風速は上空の風の影響を強く受けていることが分かった。日中の大気境界層の発達に伴い、地上付近と上空の大気との間で運動量や熱エネルギーが交換され、その交換量に応じて地上付近の大気環境や気温が変化していると考えられた。

京都府、大阪府、奈良県の大気環境測定局で測定された過去約40年の地上気象観測値を整備し、気象庁の地上気象観測データと合わせて京阪奈地域の暖候期の気候を調べてきた。その結果、近年の都市化に伴う京阪奈地域の局地気候の変化が明らかとなってきた。また、気象庁メソ解析値のデータ解析から、晴天静穏日であっても上空の総観規模大気場が大気境界層の発達に影響を与え、地上付近の局地風の風速に影響を及ぼすことが分かってきた。京阪奈地域の気候を上空を含めてより詳しく調べるために領域大気モデルによる数値実験を行う計画であるが、その準備も進めてきている。京阪奈地域周辺の10地点のアメダス日照時間をもとに期間1988-2005年の暖候期(5月1日9月30日)の晴天日をひと月に5日程度の割合で抽出した。そして、晴天日の午後に京阪奈地域で卓越する風をもとに、抽出した晴天日446日を弱風日(31%)、西風日(36%)、東風日(13%)、北風日(13%)の4つのタイプに分類し、それぞれのタイプにおける風の日変化の特徴を調べた。その結果、西風日では、10時頃に大阪湾沿岸で内陸に向かう風、京都盆地で南南西の風が吹き、12時頃までに京阪奈地域を含む大阪平野、京都盆地、奈良盆地の全域で大阪湾から内陸に向かう風が吹くことが分かった。この風は午後になって強まり、16時頃に最大となったのちに奈良盆地,京都盆地,大阪平野の順で弱まってゆく。東風日では、深夜から早朝にかけて京都盆地から大阪平野を横切って大阪湾に向かって風が吹き、日の出後にその風が強まる。午後になってその風を逆転させる海風が大阪湾沿岸で発達してくるが、京都盆地や奈良盆地への海風の侵入はほとんど見られない。京阪奈地域では伊賀方面からの東風が終日卓越する。北風日は5月と9月に多く見られる。京都盆地から奈良盆地に向かう風が12時頃までに吹きはじめ、午後の気温の高い時間帯に強まる。弱風日の京都盆地、奈良盆地の午前中の風は弱く、夕方の時間帯に大阪湾からの海風が大和川に沿って奈良盆地南部に侵入してくるが、京阪奈地域までは到達しない。これら4タイプの地上風は、潮岬、米子、輪島の850 hPaの風の風向・風速と密接に関係していることが分かった。京都盆地や奈良盆地、大阪平野の内陸側の都市域では、日の出後の混合層の発達に伴い、一般風の影響を受けた風が10時頃から地上で卓越しはじめ、その後に大阪湾から侵入する海風の影響が重なるものと解釈される。暖候期晴天日の京阪奈地域周辺では、日の出後の混合層の発達に伴い、上空の風の影響を受けた風が10時頃から地上で吹くようになり、その後、大阪湾からの海風が侵入してくる。谷や山の斜面の近くでは、夜間に局所的に山風が吹き、日の出から数時間の間にその風向きが逆転する。暖候期晴天日の夕方に京阪奈地域で吹く風は、弱風、西寄り、東寄り、北寄りの4つのタイプに分類された。西寄りの風が吹く海風日では、弱風日に比べて、京阪奈地域の日最高気温の時刻や光化学オキシダント濃度が高くなる時刻が早くなる傾向がみられた。今後は、気象庁地域気象観測システム(AMeDAS)の10分毎のデータと国立環境研究所でアーカイブされている大気汚染状況常時監視の1時間毎のデータに加えて、気象庁メソモデルのモデル面解析値(メソ解析値)を用いて、上空の風の循環を含めて局地風の特徴を調べる。メソ解析値は、気象庁メソ数値予報の初期値として用いられるものであり、水平格子間隔約5km、鉛直50層、3時間毎のデータである。解析値は観測データと数値モデルを組み合わせて作られたものであり、特に小規模の現象においては、純粋な観測値とは決定的に異なることに注意する必要がある。
マンソン裂頭条虫擬充尾虫由来の成長促進因子についての研究

マンソン裂頭条虫擬充尾虫感染によって生ずる宿主の成長促進の発現機序を明らかにするために虫体抽出液及び虫体培養液中から成長促進因子の精製を行なった.1.本虫の虫体抽出液はヒト成長ホルモン(hGH)のラジオリセプターアッセイ(RRA)において,受容体に対してhGHと競合置換し抽出液中にGH様活性が検出された.2.hGH-RRAによるGH様活性を指標として虫体抽出液からGH様物質を各種クロマトグラフィーを用いて精製した.精製GH様物質はSDS-PAGEにて26KDの分子量を持つ蛋白であり,糖鎖を持ことが推察された.3.本虫の培養上清中にもGH-RRAでGH様活性が検出され,同様に精製したところSDS-PAGEにて27KDの分子量を持ち,ほぼ抽出液中から精製されたものと同じであった.4.27KDのGH様物質は, 3T3細胞転換脂肪のリポ蛋白リパーゼ活性を抑制した.5.本物質の宿主の糖質,脂質代謝,甲状腺ホルモン,肝細胞DNA合成能に及ぼす影響を観察した(精製量が微量であり感染実験で観察した).(1)本虫の感染はゴールデンハムスターの糖質代謝において末梢組織での糖利用を亢進することによって血糖値を低下させた.(2)マウスの脂質代謝においてリポ蛋白リパーゼを抑制することにより高脂血症を引起した.(3)甲状腺刺激ホルモンを抑制することにより,サイロキシン,サイロキシン結合グロブリンを抑制した.6.今後の課題:精製GH様物質の生理学的作用及び分子生物学的研究により, hGHとの対比において本物質の特性を明らかにする.さらに,治療薬としての可能性を追求する.マンソン裂頭条虫擬充尾虫感染によって生ずる宿主の成長促進の発現機序を明らかにするために虫体抽出液及び虫体培養液中から成長促進因子の精製を行なった.1.本虫の虫体抽出液はヒト成長ホルモン(hGH)のラジオリセプターアッセイ(RRA)において,受容体に対してhGHと競合置換し抽出液中にGH様活性が検出された.2.hGH-RRAによるGH様活性を指標として虫体抽出液からGH様物質を各種クロマトグラフィーを用いて精製した.精製GH様物質はSDS-PAGEにて26KDの分子量を持つ蛋白であり,糖鎖を持ことが推察された.3.本虫の培養上清中にもGH-RRAでGH様活性が検出され,同様に精製したところSDS-PAGEにて27KDの分子量を持ち,ほぼ抽出液中から精製されたものと同じであった.4.27KDのGH様物質は, 3T3細胞転換脂肪のリポ蛋白リパーゼ活性を抑制した.5.本物質の宿主の糖質,脂質代謝,甲状腺ホルモン,肝細胞DNA合成能に及ぼす影響を観察した(精製量が微量であり感染実験で観察した).(1)本虫の感染はゴールデンハムスターの糖質代謝において末梢組織での糖利用を亢進することによって血糖値を低下させた.(2)マウスの脂質代謝においてリポ蛋白リパーゼを抑制することにより高脂血症を引起した.(3)甲状腺刺激ホルモンを抑制することにより,サイロキシン,サイロキシン結合グロブリンを抑制した.6.今後の課題:精製GH様物質の生理学的作用及び分子生物学的研究により, hGHとの対比において本物質の特性を明らかにする.さらに,治療薬としての可能性を追求する.マンソン裂頭条虫擬充尾虫はその感染マウスのソマトメジン活性を増加さすことによって宿主の成長を促進させるが、この虫体の抽出液中に成長ホルモン(GH)様活性物質が検出された。そこで本虫がGH様物質を分泌するものと考え、培養液より成長促進因子の分離・精製を試みた。材料及び方法:ヘビから採取した擬充尾虫を1匹/1mlの割合でMEM培地にて培養した。24時間毎に培養液を交換して、虫体の分泌物質を含む培養液を集め遠沈後、ホローファィバー濃縮器で濃縮し、凍結真空乾燥した。この試料から成長ホルモン様物質の分離を行った。成長ホルモン活性の測定:家兎の肝臓から調製したGH受容体を用いてラジオリセプター・アッセイにて行なった。結果:凍結真空乾燥した試料を10m M Ammonium Bicarbonate Bufferwith2mMMercaptoethanol(PH8.4)に溶解、GH様活性が検出された。培養液中のGH活性は2,189±516nIU/mg proteinであった。そこでこの試料を陰イオン交換クロマトグラフィにて分画するとイオン強度0.01の画分に溶出され、GH活性は4,419±1,491nIU/mg proteinであった。ついでこの画分をゲル濾過したところ著しく低分子量域に溶出するピークに活性を認めた。しかし、低分子量域の物質は、ホロファイバーによる濃縮過程(分子量3500以上を採取)で取除かれているはずのものであり、クロマトグラフィの際に変性によって生じたものかまた担体への吸着によるものか現段階では明らかにできていない。今後、生物学的活性の検討が必要である。