hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
極低温におけるグルタチオン合成酵素の反応中間体を含む状態での構造研究

大腸菌由来グルタチオン合成酵素のループ欠損変異型酵素の結晶構造を決定し、天然型酵素との生化学的データの比較によって、本酵素中のループ構造がスムーズな酵素反応進行に重要な役割を果たしていることを明らかにした。また反応中間体の解析の基礎データとして本酵素の基質複合体の構造を詳細に決定するために、液体窒素温度においてデータの収集ができる方法、条件を検索した。その結果、硫酸アンモニウムを沈殿剤として結晶させた本酵素結晶を、ショ糖約2Mを含む結晶化母液に置換したものおよび、グリセロール20%を含む母液に置換したものが-150度でも良好な回折を与えることが明らかになった。この両者の結晶の回折強度データを-150度で、高エネルギー物理学研究放射光実験施設のシンクロトロン放射光を用いて収集した。これらの回折強度データは現在処理中である。次に、反応中間体を極低温条件下でトラップするためにcaged-ATPとγ-Glu-Cysとの共結晶化を試み、これらを含んだ結晶を硫酸アンモニウムを沈殿剤として得た。また、基質結合を阻害しにくいPEGを沈殿剤としてcaged-ATPとγ-Glu-Cysとの共結晶化を試み、新たな結晶系の結晶を得た。これらの結晶の回折強度データを実験室レベルのX線発生装置を用いて収集し、構造の精密化を行なった。今後、光照射によってcaged-ATPを分解しATPを生成させる実験条件の検索を行ない、放射光でのマシンタイム配分時に反応中間体を極低温条件下でトラップした結晶の回折強度データを収集する予定である。
山間地など多様な条件不利地域を想定した森林エリアネットワーク実用化技術の確立

日本は傾斜地や山林周辺に多数の集落が存在し,高齢・過疎化,自然災害など多くの地域課題を抱えている.これらの課題解決に情報通信技術を活用する事例は多いが,こうした地域では,通信・電力インフラが脆弱なため有効活用することが難しい.山間集落やその周辺の森林地などで利用可能な地域情報通信インフラを森林エリアネットワークと定義し,運用試験により実用化の課題を明確化してきた.これまでの研究や運用試験によって明らかとなった通信インフラの課題,電力インフラの課題,ネットワーク運用の課題の3点の課題解決手段を開発し,運用試験を行い,多様な環境下での森林エリアネットワークの実用化技術の確立を目指す.日本は傾斜地や山林周辺に多数の集落が存在し,高齢・過疎化,自然災害など多くの地域課題を抱えている.これらの課題解決に情報通信技術を活用する事例は多いが,こうした地域では,通信・電力インフラが脆弱なため有効活用することが難しい.山間集落やその周辺の森林地などで利用可能な地域情報通信インフラを森林エリアネットワークと定義し,運用試験により実用化の課題を明確化してきた.これまでの研究や運用試験によって明らかとなった通信インフラの課題,電力インフラの課題,ネットワーク運用の課題の3点の課題解決手段を開発し,運用試験を行い,多様な環境下での森林エリアネットワークの実用化技術の確立を目指す.
厳密な基質特異性を有するアラビノフラノシダーゼの構造機能相関の解明

糖加水分解酵素ファミリー62 (GH62)に分類されるアラビノフラノシダーゼはアラビノキシランには作用するが,アラビナンやアラビノガラクタンといったアラビノース含有多糖には作用しない厳密な基質特異性を有するが,そのメカニズムは不明であった.本研究では,放線菌のGH62アラビノフラノシダーゼの結晶構造を解明し,その基質特異性を決定するメカニズムを解明した.ゲノム遺伝子解析が完了している放線菌Streptomyces coelicolorより、糖加水分解酵素ファミリー62に分類されるα-アラビノフラノシダーゼ遺伝子をクローニングした。組換え酵素を得るために、クローニングした遺伝子をT7プロモーターによる大腸菌での発現と放線菌S. lividansの発現系を用いた発現を検討したところ、S. lividansの発現系によって活性型の組換え酵素を得ることに成功した。得られた酵素の特性解析を行った結果、本酵素の活性の至適はpH 5.5、35°Cであり、pH 79の間、30°C以下で安定であることが判明した。また、様々な基質にへの作用を検討した結果、本酵素は小麦、トウモロコシ種皮由来、オートムギ由来のアラビノキシランへのみ作用し、アラビノースを遊離したが、アラビナンやアラビノガラクタン等のアラビノースを含む基質には作用しなかったことから、本酵素がα-アラビノフラノシダーゼであることを確認した。また、本酵素が示した基質特異性は、典型的な糖加水分解酵素ファミリー62に分類されるα-アラビノフラノシダーゼの特徴であったことから、未解明である糖加水分解酵素ファミリー62の作用メカニズム解明へ向け、構造機能相関の解析を行うため、本酵素の結晶化条件のスクリーニングを行った。20% (w/v)PEG3350、0.2M tripotassium citrate, pH 8.3の条件で、最大0.5 ×0.2 ×0.1 mmのロッド状の結晶が得られた。昨年度得られた結晶をもとに重原子置換法によりGH62アラビノフラノシダーゼの立体構造を解明することに成功した。本酵素はGH62触媒ドメインとCBM13基質結合ドメインから構成されるが、CBM13ドメインについては電子密度が得られず、構造を解明することができなかった。アラビノース、キシロトリオース、キシロヘキサオースをそれぞれソーキングした構造も解明し、本酵素の基質結合部位を特定したところ、本酵素はアラビノフラノースを認識するポケットに加え、主鎖キシランを認識する基質結合クレフトを有することが明らかとなった。このことにより、本酵素が同様のアラビノース側鎖を有するアラビナンには作用できず、アラビノキシランに特異的であることが明確となった。本酵素の基質特異性のメカニズムを解明するために、基質結合構造をもとに9種類の変異体酵素をデザインし、発現ベクターの構築を行った。昨年度にデザインした変異体酵素を発現,精製し,特性解析を行った.サブサイト+3NRに位置するキシロースと疎水的に相互作用していると予測されたアミノ酸Trp270の変異体(W270A, W270Y, W270F)では,PNP-アラビノフラノシド(PNP-α-L-Araf)に対する活性が顕著に低下したが,アラビノキシランに対する活性大きく低下しなかった.サブサイト+1に位置するキシロースと疎水相互作用していると考えられるアミノ酸、Tyr461の変異体(Y461A, Y461F, Y461W)についても同様にPNP-α-L-Arafに対する活性が顕著に低下したが,アラビノキシランに対する活性大きく低下しなかった.Asn462-Oδ1原子はサブサイト+2NR位xyloseのO3原子と水素結合しているアミノ酸である.N462の変異体N462A, N462Qでは,他の変異体(Y461, W270)とは異なり,PNP-α-L-Arafに対する活性の減少はみられなかったが,アラビノキシランを基質として用いた場合には,基質との親和力が大きく低下し,活性の減少が観察された.そこで,GH10キシラナーゼの分解物であるA1X2とA1X3を基質として特性を解析したところ,A1X2を基質として使用した場合,WTと変異体のkcat/Km値に大きな変化は見られなかったがA1X3を基質とした場合には,変異体のkcat/KmはWTの値の約1/3と低い値を示し,アミノ酸の変異によって活性が大きく低下していた.これらの結果からGH62アラビノフラノシダーゼの基質特異性は基質結合クレフトにおけるキシラン主鎖との結合が大きく関与し,基質の選択性やキシラン側鎖に対する選択性を決定していると考えられた.糖加水分解酵素ファミリー62 (GH62)に分類されるアラビノフラノシダーゼはアラビノキシランには作用するが,アラビナンやアラビノガラクタンといったアラビノース含有多糖には作用しない厳密な基質特異性を有するが,そのメカニズムは不明であった.本研究では,放線菌のGH62アラビノフラノシダーゼの結晶構造を解明し,その基質特異性を決定するメカニズムを解明した.立体構造が解明できたが、糖結合モジュールの構造が得られなかった。しかしながら、基質結合モジュールは基質と酵素の親和力にのみ影響し、触媒ドメインの基質特異性には影響しないことから、本研究の計画の進行には問題ないと判断された。

次年度には変異体酵素の特性解析を行うことが可能であり、当所の計画通り、厳密な基質特異性を有するアラビノフラノシダーゼの基質特異性のメカニズムを解明できる。農学本年度構築した変異体酵素の特性解析を行い、厳密な基質特異性を有するアラビノフラノシダーゼの基質特異性のメカニズムを解明する。また、類似の基質特異性を有する別ファミリーのアラビノフラノシダーゼとの構造、基質特異性、そのメカニズムを比較検討する。大腸菌を用いた発現がうまく行かなかったことから、結晶へセレノメチオニンを導入することが困難になったが、難航すると思われた結晶化がスムースに進行し、重原子置換などの方法によって結晶構造が解析可能であり、次年度以降の研究計画に大きな変更はなく、研究を進めることができる。Streptomyces coelicolor由来ファミリー62α-アラビノフラノシダーゼの結晶構造、糖結合構造を解明する。基質結合構造から、糖認識、糖結合認識、酵素の作用様式の決定に重要であると予想されるアミノ酸残基を特定し、変異体酵素を構築する。構築した各種変異体酵素の特性解析を行い、Streptomyces coelicolor由来ファミリー62α-アラビノフラノシダーゼの基質特異性のメカニズムを解明する。類似の性質を有する別ファミリーのアラビノフラノシダーゼの立体構造、基質特異性、そのメカニズムを比較考察する。
Cre/loxPターゲティングシステムを用いた平滑筋特異的変異マウスの作製

成体では平滑筋細胞特異的に発現しているヒトカルポニン遺伝子とそのホモログであるSM22遺伝子をクローニングした。ルシフェラーゼレポーターアッセイによって、両遺伝子プロモーターの平滑筋細胞での発現に必須な領域を同定した。続いてそのプロモーターをCre/loxP発現制御系を用いて、培養血管内皮細胞と平滑筋細胞で解析した。LacZ標識遺伝子の発現を指標にすると、血管平滑筋細胞:内皮細胞の発現比率は、カルポニンプロモーターで22倍、SM22プロモーターでは15倍であり、いずれも平滑筋細胞に極めて特異性の高いプロモーターであることを明らかにした。カルポニンとSM22プロモーターをCre recombinaseの上流に連結し、マウス受精卵に導入してそれぞれ5-7系統のトランスジェニックマウスを作製した。一方、レポーターとして、CAGプロモーターの下流に2つのloxP部位にはさまれたCAT遺伝子とその3'側にlacZ遺伝子を連結したコンストラクトをマイクロィンジェクションして、トランスジェニックマウスを得た。この2種のトランスジェニックマウスの系統を樹立し、掛け合わせて、カルポニンとSM22プロモーターのin vivoでの平滑筋特異的な発現を、lacZ遺伝子の発現を指標にして追跡できるマウスを作製した。現在、このマウスを用いたミオシン軽鎖キナーゼ遺伝子とRhoキナーゼ遺伝子の平滑筋特異的な欠失マウスを作製する実験が進行中である。Creトランスジェニックマウスの作成ヒトカルポニン遺伝子とヒトSM22α遺伝子のプロモーターをクローニングし、ルシフェラーゼレポーターシステムを用いてそれぞれの基本転写領域を決定した。未分化間葉系細胞やクローン化した平滑筋を用いた、欠失変異体のプロモーター活性の測定により、SM22α遺伝子は、既に報告されているマウスプロモーターと同様、翻訳開始点の上流約400bpの領域に平滑筋での発現を可能にする転写活性があることを明らかにした。カルポニン遺伝子は、翻訳開始点の上流約400bPの領域に平滑筋での発現を可能にする転写活性があることを明らかにした。両プロモーターの下流に、Cre酵素遺伝子を挿入したCre発現カセットを作製した。Cre酵素遺伝子は核内移行シグナルをもち、5'端と3'端にそれぞれSV40とglobin遺伝子のポリA構造をもつ(pxAWNCre)。Cre酵素遺伝子を挿入した発現カセットをマウス受精卵の前核にマイクロインジェクションした。今後の研究計画次年度はプロモーター由来の平滑筋特異的なCre酵素の発現を、組織抽出液のCre酵素活性の測定と、loxP部位をもつLacZ遺伝子を導入した標識マウスとの交配により検定し、発現効率の高いマウスを選択する。その後、loxP部位をもつ相同組み換え遺伝子をもつマウスとの交配により、平滑筋特異的な遺伝子欠失マウスを得る予定である。一方、レポーターとして、CAGプロモーターの下流に2つのloxP部位にはさまれたCAT遺伝子とその3'側にlacZ遺伝子を連結したコンストラクトをマイクロインジェクションして、トランスジェニックマウスを得た。

現在、ごのマウスを用いたミオシン軽鎖キナーゼ遺伝子とRhoキナーゼ遺伝子の平滑筋特異的な欠失マウスを作製する実験が進行中である。
ブートストラップ型リサンプリングに関する基礎的研究

未知母集団からの標本に基づく経験分布からの標本抽出により統計量分布近似を得るリサンプリング法は,比較的小さな標本サイズへの適用が多いのにも拘らず,数値実験を除けば,標本サイズを無限大とした漸近的性質のみが従来議論されてきた.本研究の中心は,リサンプリング法を各観測値に与える重みの抽出と見て,リサンプル経験分布の特性を正確に表現することにある.分布の積率の分布を表す積率(積率の積率)を元の標本の積率と重み分布の積率で書くとともに,その標本変動に対応した積率の積率の積率を母集団積率と重み分布積率で書くことに成功している.その成果は,既存法の比較および新たな方法開発に有用と思われる.1.ブートストラップ法の本質はリサンプル中の観測値出現頻度の頻度分布にあることを明確化し,ブートストラップ法で生じる頻度・頻度分布の一般化を行った.また,その一般化された分布がPitman確率分割と双対の関係にあることを見出し,原著論文として学術誌に投稿済みである.2.その一般化をもとにしたブートストラップ法の拡張(Infrated Bootstrap)が可能であり,リサンプリング法の大きな欠点である確率的変動の過小評価を解決する手段のひとつになると考えている.また,その拡張法から生じるリサンプル・モーメントの性質の一部について,すでに投稿準備が整っている.3.ブートストラップ型リサンプリング法の(漸近評価ではない)正確な評価については,国際会議等で発表してきた途中成果に基づいて,より具体的な形でのまとめを行う準備ができた段階にある.4.ブートストラップ法を典型例として含むGPUを用いた並列繰返し計算に関する研究が,具体的な成果としてまとまりつつある.そのうち,計算時間分布がガンマ分布で近似できる根拠を実験と理論的な観点の両面から議論した部分は,すでに学術誌に投稿中である.また,具体的な実装の関する論文も投稿準備が整っている.5.リサンプリングに関する文献調査は,未だ十分とはいえない.特に,最も基本的な部分には特別な確率論的検討が必要であるが,既存研究だけではカバーしきれないように感じている.未知母集団からの標本に基づく経験分布からの標本抽出により統計量分布近似を得るリサンプリング法は,比較的小さな標本サイズへの適用が多いのにも拘らず,数値実験を除けば,標本サイズを無限大とした漸近的性質のみが従来議論されてきた.本研究の中心は,リサンプリング法を各観測値に与える重みの抽出と見て,リサンプル経験分布の特性を正確に表現することにある.分布の積率の分布を表す積率(積率の積率)を元の標本の積率と重み分布の積率で書くとともに,その標本変動に対応した積率の積率の積率を母集団積率と重み分布積率で書くことに成功している.その成果は,既存法の比較および新たな方法開発に有用と思われる.1.ブートストラップ型リサンプリング法に関して,漸近評価によらない正確な性質を明らかにするため,数式処理と対称式演算を駆使した方法論を確立し,実際に高性能計算機上へのインプリメントが可能なアルゴリズム設計を行った。良く知られた母集団からのモーメントのモーメントのモーメントを正確に表現することで,母集団や統計量によらない議論が可能であることを明らかにし,また,その事実に基づく基本算法設計および得られた成果の一部について,国内外での発表を行った。このことにより,従来にはない見方と応用の可能性を与えるとともに,今後の研究進展の方向性が定まったと思われる。2.高性能計算機上での並列計算環境を構築し,複数のマルチコアCPUによる並列計算,および,GPUを用いた数百数千のコアによる並列統計計算の実験を行い,有用性の確認を行った.統計計算のような確率的要素を含む計算にGPUを用いることは,SIMD並列処理の特性から避けられてきたが,目的によれば代表的なCPUの20倍から100倍の計算速度が得られることを実証したことにより,関係分野へのGPU計算の可能性を大きく広げた意義は大きいと思われる.具体的内容は,25年度公開を目指した論文を作成中である。3.24年度に実施予定であったリサンプリング法の分類や文献調査は,担当を予定していた連携研究者の妊娠・出産・育児により,大きく進行が遅れている。25年度半ばでの復帰を待って,順次実施していくことになろう.1.ブートストラップ型リサンプリング法に関して,漸近評価によらない正確な性質を明らかにするため,数式処理と対称式演算を駆使した方法論を確立した.その成果により,母集団や統計量によらない議論が可能となり,従来にはない見方と応用の可能性を与えた.2.最終年度の目標である再標本の確率変動(リサンプリング分布の積率の積率)を観測値積率で正確に表現し,そのサンプリング変動(積率の積率の積率)の正確な表現を母集団積率を用いて与えた.このとき,数通りの算法による代数計算を行うことで,論理的・実装上の誤りを排除しながら,原点周り積率だけでなく,平均周り積率についても求めている.3.ブートストラップ法の本質はリサンプル中の観測値出現頻度の頻度分布にあることを明確化し,ブートストラップ法で生じる頻度・頻度分布の一般化を行った.また,その一般化された分布がPitman確率分割と双対の関係にあることを見出した.また,その一般化をもとにしたブートストラップ法の拡張(Infrated Bootstrap)が可能であり,リサンプリング法の大きな欠点である確率的変動の過小評価を解決する手段のひとつになると考えている.

これらについては,投稿準備中である.4.ブートストラップ法を典型例として含むGPUを用いた並列繰返し確率的計算に関する研究を行い,主に計算時間分布の漸近理論および実際的な状況を意識した近似の部分は,すでに学術誌に掲載されている.また,具体的な実装の関する論文も,投稿準備が整っている.5.適用可能範囲を明確にするため必要とする統計的汎関数が関係する部分については,文献調査に基づく限り,概ね問題がなさそうである.しかし,厳密な証明には,既存研究では十分にカバーがされていない,解析論的・確率論的検討が必要と感じている.統計科学ブートストラップ型リサンプリングの確率論的解析は,予定した深度までに到達することを半ば断念せざるを得ず,確率論における既存論文で扱われている程度に留まると思われる.一方,当初の研究計画には含まれていなかった「Pitman確率分割との関係の明確化およびそれに基づくブートストラップ法の拡張」という発展を加えることができている.この両面から総合すれば,概ね順調といえよう.担当を予定していた連携研究者の出産・育児により,24年度に実施予定であったリサンプリング法の分類や文献調査は,あまり進んでいない。確率的アルゴリズムへのGPU利用に関する英語論文作成も当初予定より時間を要しているが,その他の部分については,概ね計画通りに進行している。研究のまとめに向かうことを第一と考えている.未だ計算機実験による形跡的結果の検証が不十分であり,当面数値的検証を集中的に進める必要がある.その検証を別にすれば,既存研究の調査に基づく部分以外,順調に論文化できる成果としてまとまりつつあるので,秋季には主要な部分を全て投稿済みとする計画である.また,時間的に余裕があれば,開発した方法・方法論の応用についても検討したい.当初の25年度計画を速やかに実施することを基本とする。すなわち,リサンプリング統計量に関する解析的表現導出について研究を進め,表現・表示の工夫を行って,結果のとりまとめ段階に入ることが求められる。また,24年度に実施予定であったリサンプリング法の分類や文献調査を並行して行い,理論的背景の整理を完結することを目標とする。主たる連携研究者の妊娠・出産・育児により,予定していた国内外の出張が大幅に減ったことが,前年度および当該年度における次年度使用額を生んだ大きな原因である.研究発表のため,旅費が高い夏期における欧州出張が予定されており,残額の大部分を初期予定額からの不足分の補充に使うことになる.主たる連携研究者の妊娠・出産・育児により,予定していた国内外の出張が減ったことが,次年度使用分を生んだ主な原因である。この分は,円安による海外出張旅費の高騰分と24年度に大きな金額となった国際会議参加費に充てることとする。
SQUID-NMRによる重い電子系超伝導体単結晶の研究

超伝導体の核磁気共鳴(NMR)はナイトシフトの温度変化からスピン帯磁率の変化を通し、クーパー対の対称性について調べる事ができ、また核スピン格子緩和時間(T_1)より超伝導エネルギーギャップの異方性に関して情報を得られる有力な方法である。その場合、表皮効果を避けるために、低周波数NMR測定が強く望まれている。このような条件では、SQUID-NMRは非常に有利である。本研究でSQUID-NMRの開発を始め、種々のトラブルを克服し、現在実用化に努力している。このため、現在重い電子系超伝導体の測定は通常のNMRを用いているが、今年度は以下の成果を得た。正方晶HoCoGa_5型の結晶構造を持つ重い電子系化合物CeCoIn_5は2.3Kの超伝導転移温度を持つ新しい超伝導体である。この系のCe-In面中の^<115>Inに関して(1)常伝導状態での1/T_1の変化はT^<1/4>に比例し、この物質が反強磁性秩序状態のすぐ近傍に存在している事を示す。(2)超伝導状態では転移温度直下にコヒーレンスピークが存在せず、低温でべき乗に近い温度変化が観測される(100mK付近まで)。この事は線状にノードを持つ異方的な超伝導状態が発生している事を示している。(3)(超伝導状態でのナイトシフトに関して)Ce-In面の^<115>Inのナイトシフトを単結晶試料を用い磁場を結晶のc-軸、a-軸両方向に磁場をかけて測定すると、両方向ともに大きな減少が観測される。以上の事からこの系で発生する超伝導がd-波等のスピン一重項超伝導である事が分かる。ただし層間に存在する^<59>Co核について、c-軸方向にはシフトの減少が観測されるが、a-軸方向ではほとんど変化しない。この点、さらなる研究が必要である。
子宮頚部異形成から子宮頚癌への進行に関する研究

昨年度に引き続き,ASCUS(Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance)の出現しているものと、していないものとで、癌化までの期間や細胞増殖能に違いを見い出す事ができるかどうかを検討した。結果は,(1)強陽性,陽性,疑陽性,陰性の4段階で判定を行ったが,PCNAの陰性率は,軽度異形成4/5例,中等度異形成2/7例、高度異形成2/4例、上皮内癌9/31例、微小浸潤癌1/8例、浸潤癌1/3例であった。(2)円錐切除術施行例55例でみると,子宮頚部細胞診での異常を指摘されてから円錐切除術までの期間(月数)は,PCNA陽性例では25ヶ月と短期間であった.(3)ASCUSの出現頻度については,後方視的にしか見ることができないため不確定ながら,PCNA陽性のものについては約30%に陽性であった.免疫組織染色の結果および進行のはやさからみると,軽度異形成から上皮内癌へと病変が強くなるにつれてそのactivityは明らかに高くなると考えられたが,ASCUS陽性群と陰性群とを明確に区別することは困難であり,より長い前方視的な研究が必要であると思われる.1.ASCUS(Atypical SquamousCells of Undetermined Significance)の出現しているものと、していないものとで、癌化までの期間や細胞増殖能に違いを見い出す事ができるかどうかを検討した。(1)対象は、1995年1月から1999年12月までの間に当科外来で子宮頚部レーザー円錐切除術を施行した92例で、最終診断は、中等度異形成4例、高度異形成7例、上皮内癌61例、微小浸潤癌17例、浸潤癌1例であった。子宮頚部細胞診での異常を指摘されてから円錐切除術までの平均期間(月数)をみてみると、中等度異形成1.75、高度異形成4.14、上皮内癌12.6、微小浸潤癌12.3、浸潤癌1であった。(2)これらの症例の初診時の子宮頚部細胞診標本上に、ASCUSが認められるかどうかを調べた。結果的には円錐切除術を施行した症例であり、後方視的にしか見ることができないため、その出現頻度は正確ではないかもしれないが、約半数にASCUSが認められた。しかしながら、軽度異形成との鑑別は困難なものも見られた。2.現在、これらの症例の円錐切除術で得られた組織標本を用いて、の抗体を使用し、免疫組織染色を行っている。3.ASCUS陽性例とASCUS陰性例とで、これらの結果に有意差が認められるかどうか、検討を加えていきたい.昨年度に引き続き,ASCUS(Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance)の出現しているものと、していないものとで、癌化までの期間や細胞増殖能に違いを見い出す事ができるかどうかを検討した。(2)円錐切除術施行例55例でみると,子宮頚部細胞診での異常を指摘されてから円錐切除術までの期間(月数)は,PCNA陽性例では25ヶ月と短期間であった.(3)ASCUSの出現頻度については,後方視的にしか見ることができないため不確定ながら,PCNA陽性のものについては約30%に陽性であった.免疫組織染色の結果および進行のはやさからみると,軽度異形成から上皮内癌へと病変が強くなるにつれてそのactivityは明らかに高くなると考えられたが,ASCUS陽性群と陰性群とを明確に区別することは困難であり,より長い前方視的な研究が必要であると思われる.
新しい遺伝子ベクターの設計:DNAを内包するcore-shell型ブロック共重合体ミセルの構築とがん遺伝子治療への展開

がんの遺伝子治療を成功させるには、生体内で安定に遺伝子を保持し、細網内皮系等の異物処理機構による認識を免れて、効率良く目的部位における遺伝子導入を達成せしめるベクターシステムの構築が不可欠である。本研究の目的は、内核に遺伝子を保持し、かつ表層部に目的細胞による取り込みを促進させるパイロット分子を連結した標的指向性高分子ミセル型遺伝子ベクターを設計することにある。この様なミセル型ベクターの調製にあたって、本年度は、高分子ミセルの外殻を構成するセグメントであるポリエチレンクリコール(PEG)の末端に、種々のパイロット分子と結合可能な官能基を効率良く導入する方法論を確立するとともに、ポリエチレングリコール/ポリリシンブロック共重合体からなる高分子ミセル中に、安定に遺伝子DNAを取り込む事に成功した。その概要を以下に記す。1.両端側に異なる官能基を有するPEG合成手法の確立:パイロット分子と容易に反応可能な官能基としてformyl基に着目し、PEG末端への導入をはかった。すなわち、formyl基の保護基であるacetalを有する開始剤を用いてエチレンオキシドの重合を行った後に、生長末端にtosyl基を反応させることによって、α-acetal-ω-tosyl-PEGを収率良く得ることに成功した。2.PEG/ポリリシンブロック共重合体ミセル中へのDNAの安定包接化:PEG/ポリリシンブロック共重合体を、PEGの末端一級アミノ基からのγ-carbobenzoxy-L-lysine-N-carboxyanhydride(NCA)の重合により合成した。得られたブロック共重合体について、静電結合を介したDNAとの複合体ミセルの形成を行なわせた。その結果、この複合体ミセルは、溶解性、安定性ともに、従来のポリリシン/DNA系に比して格段に優れており、直径数十nmの粒子として存在することを明らかにした。
ARID1A遺伝子変異がもたらす悪性リンパ腫進行メカニズムの解明

クロマチン再構成因子複合体欠失、発現抑制は、多くの悪性腫瘍の発生、進行に関係することが明らかにされつつある。しかし、その発癌メカニズムの解明、特に、クロマチン再構成因子の機能抑制が、細胞死ではなく、細胞増殖に正に働くメカニズムは不明である。本研究はクロマチン再構成因子複合体、特に、その複合体のなかで、DNA結合モチーフをもつARID1Aの発現の発現異常と悪性リンパ腫形成の関係を検討することを目的にした。その結果、悪性リンパ腫細胞においてRABFIP11, LRP1B, TMEM207の発現誘導が腫瘍進行に関わることが明らかになった。クロマチン再構成因子複合体機能不全が、さまざまな悪性腫瘍の発生、進行に関わることが明らかにされている。ARID1A (BAF250a)は酵母SWI1の哺乳類での相同分子で、クロマチン再構成因子複合体の主要な因子で、AT-rich interacting domainを介してDNAへの結合を受け持つ分子である。本研究ではARID1A遺伝子変異がもたらす悪性リンパ腫進行メカニズムの解明を分子病理学手法を用いて検討いていく。当該年度は1年目にあたり、免疫組織学的にARID1Aの発現低下を、遠くにElonginAとの発現と比較検討した。その結果、約23%の悪性リンパ腫で、今回我々が作製したARID1A機能ドメインを認識する特異抗体で、ARID1Aタンパク質の発現低下、あるいは欠損が、見出された。興味深いことに、Elongin A発現強度とは相関性が見出され、特定のリンパ腫亜型では、特に60%以上の症例で発現低下が認められた。ARID1A-ElonginA pathway異常で引き起こされる発現遺伝子の差異を、網羅的遺伝子解析でスクリーニングしたところ、数個の候補遺伝子産物が、ARID1A遺伝子変異、その発現低下で、有意に発現が上昇することが明らかになった。すなわち、これらの候補遺伝子群は、ARID1A変異悪性リンパ腫における標的分子となりうることが期待できる結果と考える。1年目であるが、3か年計画の最終到達目標である、標的候補因子のスクリーニング段階を終えている。ARID1A遺伝子変異がもたらす悪性リンパ腫進行メカニズムの解明のため、本年度は、悪性リンパ腫細胞で、ARID1A遺伝子発現をsiRNA法を用いて減少させ、生じる遺伝子発現の差を網羅的にmicroarray解析を用いて検討した。また、ARID1A発現異常のある悪性リンパ腫が、有意に予後が不良との解析結果を得た。興味深いことに網羅的遺伝子解析ではいくつかのタンパク質コード遺伝子の発現も変動したが、long non-coding RNAのNEAT-1, MALATの発現がARID1A発現低下、機能障害により約5倍以上に増加することが判明した。近年、NEAT-1、MALATは種々の固形癌で発現が増強しており癌細胞増殖、浸潤能力の増強とともにアポトーシス阻害を起こすことが判明しつつあり、本研究結果はクロマチン再構成因子複合体機能不全がnon-coding RNA発現を変え、腫瘍発育に関係していることを国内外に先駆けて明らかにしたと考える。また、悪性リンパ腫でのNEAT-1, MALATの過剰発現は詳細には明らかにされておらず、リンパ球で、ARID1Aの制御するクロマチン再構成因子複合体異常が、long non-coding RNAの発現制御を司っており、その抑制が悪性リンパ腫で崩壊している可能性があることを示唆する結果と考える。ほかの固形癌でも同様の病態が生じている可能性もあると思われる。NEAT-1, MALATの過剰発現がおこる分子メカニズムについて追加検討中である。さらにARID1A発現抑制がかかわるタンパク質コード遺伝子の発現変化は、いわばARID1A機能経路の下流にある分子メカニズムと思われる。クロマチン再構成因子複合体機能不全がnon-coding RNA発現を変え、腫瘍発育に関係しておることを国内外に先駆けて明らかにした。ARID1A遺伝子変異がもたらす悪性リンパ腫進行メカニズムの解明について網羅的遺伝子解析を行い検討した。ARID1A変異遺伝子をドクシサイクリンあるいはテトラサイクリン依存性に発現するリンパ腫細胞株を樹立し、誘導前と誘導後での遺伝子変化を検討した。その結果、複数のアポトーシス関連遺伝子が、ARID1A変異遺伝子発現により転写が亢進あるいは減弱することが判明した。その中でもharakiri遺伝子は、我々の別研究で胃癌でもみられたように、ARID1A発現異常で、著明に転写が抑制されることが判明した。この発現低下は、定量RT-PCRおよびイムノブロットでも確認され、また、ARID1A発現異常がみられたリンパ腫では、免疫組織染色でharakiriタンパク質が、欠損あるいは発現低下していることが確認された。ARID1A遺伝子変異発現は、いわゆるドミナントネガテブに働くことが示唆されており、本研究で、ARID1A機能不全はクロマチン再構成不全をもたらし、harakiriを含むアポトーシス経路分子の発現異常をもたらすことが示唆された。逆に、複数のMelanoma associated antigen geneの発現がARID1A発現異常により、亢進することが明らかになった。すなわち、これらのMelanoma associated antigen gene産物を標的にした、抗体治療の萌芽があることが示唆された。

しかし、その発癌メカニズムの解明、特に、クロマチン再構成因子の機能抑制が、細胞死ではなく、細胞増殖に正に働くメカニズムは不明である。本研究はクロマチン再構成因子複合体、特に、その複合体のなかで、DNA結合モチーフをもつARID1Aの発現の発現異常と悪性リンパ腫形成の関係を検討することを目的にした。その結果、悪性リンパ腫細胞においてRABFIP11, LRP1B, TMEM207の発現誘導が腫瘍進行に関わることが明らかになった。ARID1A変異悪性リンパ腫における標的分子となりうるのか、候補遺伝子産物の発現を検討し、また培養細胞株を用いて、制御方法(抗体療法が可能か)の検討を進めていく。どのようにARID1Aの発現異常がlong non coding RNAの発現を増強させるのか、特に、核内でのparaspeckle. formationとクロマチン再構成の足場との関係から解明する。人体病理
ユビキタス時代の音声インタフェース実現のための高齢者音声認識に関する研究

高齢者が使いやすいヒューマン・マシン・インタフェース実現のために、音声認識技術が期待されている。しかし、高齢者音声は一般成人の音声よりも音声認識性能が大幅に低下してしまうという問題がある。本研究は、高齢者音声の認識性能を一般成人並みに改善することを目的として、高齢者音声の音響分析を行い、高齢者特有の音響的特徴を定量的に解析した。本研究の主な成果として、高齢者音声の聴感的特徴である「めりはりの無さ」と「嗄れ声」に関して解析を行い、物理的な音響特徴との関係を明らかにした。「声のめりはりの無さ」は、老化で調音器官の筋肉の動きが緩慢になり、声道が音素の調音形状に達しないうちに次の音素へ遷移するために生ずる現象である。音響的には音声波形の時間変化パターンとして表現される。我々は、前の音素から次の音素へ遷移する部分におけるスペクトルの時間変化率として遷移量を定量化し、聴感的なめりはり度合いと時間変化率の間に強い相関があることを示した。また、スペクトル遷移のかわりに単に音声パワーの時間変化率を用いてもほぼ同様の結果を得た。「嗄れ声」は、声帯の劣化によって有声音に雑音が重畳する現象である。母音ごとに一般成人の平均スペクトルと高齢者の嗄れ声スペクトルを比較すると、全ての母音に対して嗄れ声の高齢者スペクトルは2.5kHz以上の成分が大きく、逆に1.52.5kHzの成分が小さいことがわかった。この現象をスペクトルの傾きとして定量化し、聴感的嗄れ度合いとスペクトルの傾きの間に強い相関があることを示した。さらに高齢者スペクトルの傾きを一般成人のスペクトルの傾きに補正し、母音認識実験を行って、認識率の向上を確認した。これによって、高齢者音声の認識率低下の原因の1つが「しゃがれ」によるものであることが明らかになった。本研究では、高齢者が、いつでも、どこでも使うことができる音声認識システムを構築することを最終目標としている。本年度は、まず高齢者音声と成人音声の差異を明確にするために、聴感上の印象に基づき、それらの主観的な違いを見出した。その結果、高齢者音声を特徴付ける主な特徴として、高齢者音声に特有の「しゃがれ」と「メリハリのなさ」とに着目した。次に、「しゃがれ」と「メリハリのなさ」とのそれぞれの主観的特徴を、音声認識で用いられている特徴量を用いて定量的に説明することを試みた。その結果、「しゃがれ」は音声の静的特徴として対数振幅スペクトル包絡の傾き、「メリハリのなさ」は音声の動的特徴としてパワー及びスペクトルの時間差分値と密接な関係があることがわかった。高齢者音声は、成人音声と比較し、対数振幅スペクトル包絡の傾きが小さく、パワー及びスペクトルの時間差分値も小さい。これは、加齢による発声器官の衰えが原因であろうと推測できる。高齢者音声の「しゃがれ」に関しては、入力音声である高齢者音声の対数振幅スペクトル包絡の傾きを適切に補正することによって、成人音声による標準パターンを用いた場合においても、高齢者音声認識率が向上することがわかった。つまり、対数振幅スペクトル包絡の傾きが高齢者音声(高齢者音声に特有のしゃがれ声)を特徴付ける大きな要因であると言える。来年度は、本年度の研究成果をより発展させるために、更に厳密な高齢者音声の分析を行い、高齢者音声認識システムの構築を目指す予定である。本年度は、当研究補助金により既存の音声データベース(電子協日本語共通音声データベース、S-JNAS高齢者の音声認識用大規模データベース)を購入した。

また、音声収録も可能な簡易防音室を設けるために吸音パネルを購入し、マイクロホンならびにPC用USBオーディオインタフェース等も購入し、研究環境の整備も行った。本研究は、高齢者が、いつでも、どこでも使うことができる音声認識システムを構築することを目指し、認識率向上のために高齢者音声の特徴を明らかにするのが目的である。当年度は昨年度に引続き、高齢者の代表的な静的音響特徴(嗄声)と動的特徴(いわゆるメリハリの無さ)の性質をさらに精密に調べた。嗄声に関しては、話者の発声器官の寸法差の影響を軽減するために、声道長の正規化を行った。これによって、話者の個人差の影響を除き、年齢と嗄声度の関係をより明確にすることが可能になった。その結果、男声においては、20代50代の一般成人と、60代、70代の高齢者のスペクトルには顕著な違いがあり、高齢者においては嗄声度に対応して4kHz以上のスペクトルが上昇することが確認できた。一方、女声においては、高齢者のほうが一般成人よりもスペクトルの高域が多少上昇する傾向はあるが、それほど顕著な差は認められなかった。高齢者音声のみの聴取実験においても女性話者の榎声の聴き分けは難しく、高齢化に伴う嗄声化は主に男声の特徴であることが判明した。動的特徴であるメリハリ度に関しては、昨年度提案したパワーおよびスペクトルの時間変化速度・変化幅のより正確な検討と、それに加え、フォルマント周波数の変位量を調べた。聴感的メリハリ度とF1-F2平面上の音素配置の関係は、男女声共に、聴感的メリハリ度が小さくなるほど、音素間の距離が小さくなる傾向が明確に現れた。ただし、メリハリ度は発声速度の影響を強く受けることもわかり、発声速度を正規化した評価が必要になる。高齢者の特徴を補正して一般成人に適合させれば、高齢者音声の認識率が向上することを確認している。今後は、高齢者音声の音響的特徴を、嗄声とメリハリのみでなく、より幅広く検討すると共に、認識システムへの適用を進める。
保健指導の効果指標としてのPreference（選好）の変化の適用可能性の検討

本研究の目的は,Preferenceの変化を測定することが保健指導の効果指標として適用可能かどうかを検討することである。Preferenceとは,経済学,マーケティング,行動心理学の分野において"選好"として用いられる概念のことであり,本人の価値観から導き出される"好みの度合い"のことである。本研究では,健康教育や保健指導等の実施によって,本人のこれまでの価値観が変化し,Preferenceの変化に結びつくかどうかに着目している点が新規性になっている。つまり,短期間,長期間によらず健康教育や保健指導を受けた者のPreferenceが変化するということは,価値観の変化を伴っていることを示しており,長期的な効果につながる可能性も考えられるということである。これまでの分析により,健康教育や保健指導によってPreferenceが変化することは明らかとなったものの,その効果は短期間なものに留まってしまうことが明らかとなった。また,指導内容のインパクトがPreferenceに大きく影響することが示唆された。そのため,今年度は介入内容を研究者で固定せず自身の経験がPreferenceおよびその二次指標である支払い意思額にどう影響があるのかについて,産後ケア施設の利用状況別に比較・検討を行った。その結果,介入内容に依らず自身の産後ケア施設の利用経験が最も高い集団において有意にPreferenceが高いことが明らかとなった。また,支払い意思額については個人の世帯年収に大きく影響を受けており,利用経験の最も高い集団と最も低い集団とで有意な差はみられなかった。以上のことより,保健指導の効果指標としてPreferenceは有効であるものの,長期的な効果の指標として用いるには個人の背景要因や指導内容そのもののインパクトに大きく影響を受けるため更なる検討が必要であることが明らかとなった。本研究の目的は,Preferenceの変化が保健指導の効果指標として適用可能かどうかを検討することである。Preferenceとは,経済学やマーケティングの分野でいわゆる"選好"として用いられている概念であり,本人の価値観から導き出される好みの度合いのことを示す。教育や指導によって,本人のこれまでの価値観が変化し,選好の変化にまで結びつくことは,長期的な効果へと繋がる可能性が考えられており,海外の教育学の分野でも選好の変化に着目した研究が散見されるようになっている。そこで,本研究では,教育や指導の効果の指標としてのPreferenceの変化に着目し,保健指導の実施によって対象者のPreferenceがどの程度変化するのかを分析し,Preferenceの変化が保健指導の長期的な効果と関連するかどうかを検討する。今年度は,Preferenceの調査方法に関する情報収集等を実施したため,今年度以降は対象にベースラインのPreferenceの計測,ならびに保健指導介入を実施する予定である。なお,ベースラインデータとして,保健指導への参加を予定している対象者から血液指標,セルフ・エフィカシー尺度,行動変容段階,現在の身体活動状況等を収集する。血液指標は当該年度における健診データとする。その他,体重や体脂肪率等必要な測定指標が生じた場合は,保健師と相談の上適宜追加していく。Preferenceの計測にはコンジョイント分析を使用する。研究実施施設の選定に一部困難が生じたため,現在当初計画よりやや遅れ気味である。Preferenceとは,経済学やマーケティングの分野において選好として用いられる概念のことであり,本人の価値観から導き出される好みの度合いのことである。本研究では,健康教育や保健指導によって,本人のこれまでの価値観が変化し,Preferenceの変化に結びつくかどうかに着目しており,Preferenceの変化が起こることは,健康教育や保健指導の長期的な効果へとつながる可能性があると考える。今年度は,昨年度に入手したデータの一部の分析および,内容についての専門家の確認を実施した。現在の保健指導のデータは短期間の運動指導に関するデータのみであるため,今後は長期的な介入を有する別の保健指導に関するデータの入手を検討していく。また,今年度はさらに,全国の地域包括支援センターに対して郵送法で本研究の一部の調査依頼を実施した。地域包括支援センターに対して実施した調査については,回収率が低いという状況であった。今年度入手したデータに関しては,現在入力が終了し,データクリーニングおよび分析の途中である。研究の対象数がまだ少なく。進捗そのものにも遅れが生じている。本研究の目的は,Preferenceの変化を測定することが保健指導の効果指標として,適用可能かどうかを検討することである。本研究では,健康教育や保健指導の実施によって,本人のこれまでの価値観が変化し,Preferenceの変化に結びつくかどうかに着目している点が新規性になっている。つまり,短期間,長期間によらず健康教育や保健指導を受けた者のPreferenceが変化するということは,価値観の変化を伴っていることを示しており,長期的な効果につながる可能性も考えられる。昨年度までに入手したデータとして,運動指導の効果を調査したものが存在するものの,短期指導の効果しか検討ができていなく,Preferenceの効果を検討するには,長期指導の効果も測定することが必要であると考える。また,分析もまだ高度な分析に耐えうるほどのデータは収集できていないため,一部の統計解析等は実施したものの多変量の解析は実施できておらず,さらなるデータ数の確保が必要である。そのため,調査期間を延長している状況である。

今年度はさらなるデータ数を確保するために,一般的な質問紙を用いたアンケート調査だけでなく,モニター等を用いたオンラインアンケートの実施を予定している。今年度は,研究以外での業務が多忙を極めたため,研究そのものの進捗が滞ってしまったため,もう一年延長し,研究を当初の予定通り進めていくこととする。研究対象数がまだ少なく,今年度は大きな進捗を果たすことができなかった。本研究の目的は,Preferenceの変化を測定することが保健指導の効果指標として適用可能かどうかを検討することである。Preferenceとは,経済学,マーケティング,行動心理学の分野において"選好"として用いられる概念のことであり,本人の価値観から導き出される"好みの度合い"のことである。本研究では,健康教育や保健指導等の実施によって,本人のこれまでの価値観が変化し,Preferenceの変化に結びつくかどうかに着目している点が新規性になっている。つまり,短期間,長期間によらず健康教育や保健指導を受けた者のPreferenceが変化するということは,価値観の変化を伴っていることを示しており,長期的な効果につながる可能性も考えられるということである。これまでの分析により,健康教育や保健指導によってPreferenceが変化することは明らかとなったものの,その効果は短期間なものに留まってしまうことが明らかとなった。また,指導内容のインパクトがPreferenceに大きく影響することが示唆された。そのため,今年度は介入内容を研究者で固定せず自身の経験がPreferenceおよびその二次指標である支払い意思額にどう影響があるのかについて,産後ケア施設の利用状況別に比較・検討を行った。その結果,介入内容に依らず自身の産後ケア施設の利用経験が最も高い集団において有意にPreferenceが高いことが明らかとなった。また,支払い意思額については個人の世帯年収に大きく影響を受けており,利用経験の最も高い集団と最も低い集団とで有意な差はみられなかった。以上のことより,保健指導の効果指標としてPreferenceは有効であるものの,長期的な効果の指標として用いるには個人の背景要因や指導内容そのもののインパクトに大きく影響を受けるため更なる検討が必要であることが明らかとなった。本研究の遂行で懸念される点は,参加者の数が少ないことによる統計的分析力の欠如である。また,本研究は長期的な効果を検討するために保健指導1年後まで調査を実施する予定である。しかし,調査が長期に渡るため,ある程度の脱落が発生することも予期される。その場合は,複数自治体での調査も検討し,可能な限り統計的検出力を上げる工夫をする。今後は,研究対象施設の確保ならびに保健指導の内容の多様性が必要と考える。
幕末維新期の地域社会の動向と明治維新の地域史的意義に関する研究

明治維新とは、地域社会の人びとにとってどのような体験であり、どのような意味を持ったか、小倉藩(領)を事例として、城下町の構造とその変化、長州戦争や戊辰戦争への動員・参加を中心に検討した。後者については、そのような体験がどのように語られ、記憶されたかという問題に主眼を置いた。小倉城自焼、藩士退却、藩庁移転という「敗戦」の記憶を、幕府に対する「尽忠」の物語によって克服しようとしたことが具体的に明らかになった。1小倉戦争(第二次長州戦争)について,小倉藩の大庄屋を勤めた中村平左衛門や小森承之助の日記,小笠原文庫の関係資料と,明治末年に編纂された小倉戦争の「正史」と言うべき『豊倉記事』を対照しつつ,戦争の情報はどのように伝達されたか,戦争の情報や体験はどのように記録されたかという観点から検討した。また,小倉戦争に参加した諸藩のうち,佐賀藩・府内藩・臼杵藩、熊本藩関係資料の調査・収集を行い,小倉戦争に諸藩がどのように参加したか検討した。引き続き未調査資料の調査・検討を進めて,小倉戦争の史実を詳細に解明するとともに,そのような出来事(情報・体験)がどのように記録され,記憶されたか検討する。2江戸末期の小倉城下屋敷図と明治時代の2万5千分の1地形図に拠り,各期の土地利用図を作成して,土地利用の変化という観点から,城下町小倉の解体と再編の様相について検討した。その際,藩士の居住域は大きく変容(歩兵第14聯隊や後の小倉陸軍造兵廠などの軍用地に充当されていくと思われる)しているのに対して,町人の居住域には連続性が大きいことが判った。今後は,香春、豊津藩時代および廃藩置県後の小倉、豊津における士民の動向を居住、就労という観点から検討する。3東北地方に残されている戊辰戦争関係資料にっいて,官軍として参戦した小倉藩の動向を示す資料の調査、収集を行った。今後は,小倉藩の戊辰戦争関係資料にっいて調査を行って,戊辰戦争の際の小倉藩の動向を解明し,小倉藩の戊辰戦争体験がどのように記録され,記憶されたか検討する。1小倉戦争(第二次長州戦争)について、小倉藩の記録のほか、熊本・鹿児島・萩藩などの記録を調査・参照しつつ、小倉戦争における小倉藩や他藩の動向について、特に小倉城自焼前後を中心に詳細に検討した。その際、小倉戦争という出来事(体験や情報)がどのように記録され、記憶されたかという問題に主眼を置いた。それは、幕末維新期の動乱・戦争がどのように記録され、記憶されたか、さらに、人びとの歴史意識の中でどのような意味を持ったか考えるうえで好個の事例研究と言える。2幕末の小倉城下町図のデータベース化と書き起こし図の作成を行い、住民構成と居住分布について明らかにした。それによって、小倉城下町の社会構造について検討するとともに、小倉城の自焼と藩・藩士の離脱による城下町の破壊や、明治維新後の変化について明らかにするうえでも不可欠な基礎的作業を行うことができた。それは、城下町を母胎とする近代都市において、城下町としての歴史がどのような意味を持ち、都市住民のアイデンティティにどのような影響を与えたのか考えるうえで興味深い事例研究と言える。3 1854(嘉永7)年にペリー率いる米国艦隊が再来航した際、小倉藩は松代藩(真田家)とともに横浜の警衛を担当した。そこで、真田家文書のほか、長野県内所在の古文書資料から、ペリー再来航関係資料の調査・収集を行い、小倉藩の記録と対照しつつ、ペリー再来航の際の対応がどのようなものであったか、その一端を具体的に明らかにした。このときの経験が小倉藩の藩政や藩士の意識、その後(幕末維新期)の動向にどのような意味を持ったか考えるうえで不可欠な基礎的作業である。