hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
葬制から見た古代エジプト文明の変化とその社会的背景に関する学際的研究

シャフト周辺の発掘では、シャフト造営時の掘削排土、埋葬後の盗掘時の盗掘排土が層位的に明らかになり、今後の発掘で盗掘排土から副葬品の断片の出土が期待される。また、中王国時代と新王国時代の間にあたる時代の集団埋葬から発見された遺物の原料が、メソポタミア起源である可能性が示され、当該時期の副葬品の変化の背景として、原料の流通が関係しているという知見が得られた。副葬品の内容や人骨の分析からもからも被葬者は西アジア地域との関係が示され、人の移動や交易活動がもたらした影響について今後検討していくための資料とすることができた。古代エジプト文明の転換期である中王国時代から新王国時代にかけての葬制の変遷過程とその社会的背景を、物質的資料を用いて評価することが本研究の目的であり、本年度も資料の取得、整理のためのエジプト現地調査を2回実施した。2015年8月に実施したダハシュール北遺跡の調査では前年度発掘を行った新王国時代の墓の周辺にある竪穴墓の発掘調査を実施した。4基の竪穴墓を発掘し、2基は中王国時代、別の2基は新王国時代のものであることが判った。これまでダハシュール北遺跡の中王国時代の墓は墓地の西端地点でした確認されていなかったが、今回の調査の結果、より広い範囲にわたって存在していることが明らかとなった。また新王国時代の竪穴墓については、前年度に発見された墓と隣接しているものの、副葬品の内容の差が際立っていた。こうした違いを整理することが、今後の葬制の変遷を解明していく上で重要であることが認識されるに至った。2015年9月に行われたアブ・シール南丘陵遺跡の調査では、新王国時代第19王朝の王子カエムワセトの石造建造物、および王女イシスネフェルト墓周辺の発掘調査が継続された。特にイシスネフェルト墓において、墓の造営に関する痕跡や、墓に納められていた土器の一部が出土するなど、これまでの成果を補完する発見があった。新王国時代の王族の埋葬習慣を知る手掛かりとなるもので、葬制の変遷をより広い視点から考察する上で有意義な成果といえる。この埋葬からは12体分の人骨が発見されており、その分析の結果注目されるのは、複数個体に死亡時前後に受けたと推測される受傷痕があり、下肢に集中していることが前回の調査で明らかになったが、さらに詳細について検討した。中王国時代から新王国時代にかけての葬制の変遷過程を解明する上での調査、分析が進展している。現地調査では、ダハシュール北遺跡、アブ・シール南丘陵遺跡での発掘を行い、今後の分析のための資料が取得できた。ダハシュール北遺跡では、中王国時代だけでなく、新王国時代における墓の形状についても整理を進めているが、長期にわたって拡張、改変が行われていることや、別の時代のものを再利用して改変している可能性が指摘されるようになっており、新王国時代の墓においては副葬品の分析により比重が置かれることになった。アブ・シール南丘陵遺跡調査では、イシスネフェルト墓のシャフト周辺の発掘を継続して行い、盗掘排土の層から副葬品を構成していたと思われる土器片が出土し、シャフトの北側からは、埋葬時にシャフト上部に土留めを築くために置かれたと思われる日乾レンガ積みが検出され、埋葬時の作業の一端を明らかにすることができた。集団埋葬の人骨の調査は昨年に引き続いて継続され、死亡時に受けたとされる受傷痕について詳細な分析が行われた。古代エジプト文明の転換期である中王国時代から新王国時代にかけての葬制の変遷過程とその社会的背景を、物質的資料を用いて評価することが本研究の目的であり、本年度は資料の取得、整理のためのエジプト現地調査を2回実施した。
代数群のmodular表現

最近,Lusztigは,正標数のreductive群Gの既約指標に関する自身の予想を拡張する形で,GのLie環の表現に関する非常に興味深い予想を提出し,それに答えるべくBezrukavnikov, MirkovicとRumynin,以下[BMR]と略記,はcrystalline differential operatorsなるものを用いる代数解析的方法を提示した。則ち,Gの定義するflag variety G/B上のcrystalline differential operatorsのなす層を\cDと記すと,[BMR]は,\cD上のcoherent modulesが成すbounded derived categoryと\cDのglobalsectionsのなす環D上の有限生成加群の成すbounded derived categoryがderived global section functorによって三角圏同値になり,DはGのLie環のuniversal enveloping algebraのcentral reductionと同型であることを証明した。この結果に触発されて,我々は,その代数版,或いは,無限小版を調べたい。則ち,\cDのcentral reductionであるG/Bの構造層のFrobeniusdirect imageのendomorphism ring \bar\cDを考えて,それに対して,上記[BMR]のようにderived global section functorによる三角圏同値が成立するかどうかを調べる。これは,G/Bの構造層のFrobeniusdirect imageがtiltingであることがほぼ同値であることが分かっており,G/Bがprojective spaceである場合,この時は,BはBorel部分群ではなく極大parabolic部分群になる,また,G=SL_3の場合には,実際成立することも分かっていた。下記第一論文では、同様な局所化定理が、G=Sp_4でも成立することを示した。これらは、$F_*$\mathcal{0}_X$がX上のtilting sheafになることを見るのであるが、実は、そのindecomposable direct summandsは整数環上定義されており、それらは、複素数体へbase changeを行うと、Catanese予想というX上の連接層のなすbounded derived categoryを記述する為のcompletestrongly exceptional posetを与えることを発見した。これらdirect summandsは、X=G/PPはGのparabolic部分群、と書いて、G_1をGのFrobenius kernelとする時、PからG_1Pへの誘導加群、Humphreys-Verma加群の構造によって制御される。この現象は、上記の場合から一般化されることが期侍され、3月には、手塚、柳田との議論によって、quadricsについても見通しをつけた。最近の橋本義武,D.Rumynin,Ye Jiachenとの共同研究から,homogeneous projective variety X上の連接層のなすbounded derived categoryを記述する為の連接層のcompletestrongly exceptional posetを構成するには,正標数で考えるのが適当なのではないかと考えるに至った。則ち,Xをreductive algebraic groupGとそのparabolic subgroup Pによって,X=G/Pと書くと,そのstructure sheafのFrobeniusdirect imageは,GのFrobenius kerne1をG_1とすると,PからG_1Pへのtrivial moduleの誘導表現で記述できる。従って,その表現の構造の研究が必要になるが,PがBorel部分群の時には従来,よく研究されており,その一般化としても面白いと思われる。下記論文では,Kapranovが複素数体上のGrassmannianにおいて構成したcomplete strongly excbptional posetは,整数環上定義できるが,それらを正標数にbase changeしても標数が十分大きければ,正標数においてもcomplete strongly exceptional posetを与えることを示した。これらが,上記のようにstructure sheafのFrobeniusdirect imageのindecomposabledirect summandsとして,PからG_1Pへのtrivial moduleの誘導表現の構造から予想されるような形で出現するかどうかの見極めは今後の課題である。Gをreductive代数群,Pをそのparabolic部分群とし,WをGのW_PをPのWeyl群としよう。Ye Jiachenとの共同研究により,rankGが2以下の時,われわれは,G/P上でKaroubian complete exceptional sequenceを構成するcoherent sheaves\cE_wを,wをW/W_P走るものとして,G/Pの構造層のFrobenius direct imageの中に発見した。これらは,整数環上定義されているので,基底変換により複素数体上のcoherent sheavesももたらす。正確には,G_2型でGがBorel部分群の時には,構成した層が本当にFrobeniusdirect imageのなかに現れるかどうかは検証できていないが,この現象は一般に成立するのではないかと期待している。さて,G_1をGのFrobenius kernelとすると,G/Pの構造層のFrobeniusdirect imageは,Pの自明表現をG_IPまで誘導した加群によって記述される。従って,この加群の研究が肝心になるのであるが,その構造を以下に記したJ. Alg.掲載の論文において,G/Pがprojective spaceの時に完全に決定した。則ち,この時は,TをPのmaximal torusとすると,この誘導表現はG_1T加群としてuniserialになり,対応するinvertible sheaf\cE_wが,wでparametrizeされるGの既約加群をmultiplicity spaceとして,G/Pの構造層のFrobenius direct imageに現れる。一般的な予想は,以下に記したRIMS講究録別冊に述べた。予想の解明に向けて今後,励みたい。年明けに出版されたArhusのAndersenとの共著論文について報告する。

これは,正標数の半単純代数群と複素数体上の1の冪根の量子群のtilting加群のLoewy構造を調べたものである。正標数の半単純代数群の表現論の主要な研究対象として,既約表現,Weyl加群,tilting加群がある。この内,Weyl加群の指標はWeylの指標公式で与えられ,既約指標も標数が非常に大きいときは最近になって分かるようになったが,tilting加群についてはその予想式さえ知られていない。一方,複素数体上の1の冪根の量子群については,tilting加群の指標が分かっている。当論文では,先ずこの量子群上,regular highest weightを持つ直既約projective tilting加群はrigidであることを証明した。則ちそのsocle seriesとradical seriesは一致する。一方,projectiveではないtilting加群についてはrigidでない場合があることも示した。更に,多くのWeyl加群がrigidであることを得たが,そうでない場合があることも例示した。量子群がA_2型或いはB 2型のときには,regular highest weightを持つWeyl群のLoewy構造を具体的に決定した。次いで,正標数の半単純代数群においても,highest weightがJantzen regionにある場合には,量子群のときと同様なことが成立することを得る一方,highest weightがJantzen regionを逸脱する場合にはrigidでないtilting加群が生ずることも示した。
海外現地生産の拡大と自動車工業集積地域の再編成

今年度の当初の計画は,1.自動車メーカーへのヒアリングおよび既存の統計資料,新聞・業界情報から自動車産業の内外での生産・立地の動向の継続的な追跡,2.現地調査では,地域経済に関する地域情報の収集の継続と部品・下請等の地元関連企業からの聞き取り調査,の大きく2点からなっていた.当初計画の1.については,自動車業界の急激な低迷の中で,昨年同様に思うような協力が得られず,ヒアリング調査は不十分なものであった.それを補うべく実施している統計資料,新聞・業界情報の継続的な追跡の方も,平成3年後半からの国内販売の低迷を受けて,国内生産体制の再編が急であり,予定していた作業が追いつかない状況にある.これまでに得られた知見としては,海外現地生産の拡大つまり輸出ドライブによる国内での量産の確保が困難になる中で,自動車産業の競争構造がこれまでにない形に変容してきており,このことが自動車メーカーの国内外での戦略の大きな転換を招いているにとどまらず,部品・下請等の関連企業群へも従来にない再編成を惹起しつつあることが明らかになりつつある.当初計画の2.は,こうした動向の自動車工業集積地域への影響に関わるもので,昨年に引き続き,調査対象地域である「両毛地域」において平成4年7月から8月にかけて現地調査を集中的に実施した.業界の動きが急な中で,企業調査はなかなか協力が得られず困難を極めた.しかし,それ以上の問題は,上述の新たな再編は自動車工業地域の重大な岐路にもなりかねない状況であるが,平成4年以降に急激な変化として生じており,これまでの収集データではフォローできないということであった.最新の資料の収集と分析につとめているが,工業地域への影響もこれまでにないドラスティックなものになると,現在までの分析において予想される.まず調査地域については,個人でできる範囲は限定されているので,一つに絞り込むことにし,栃木・群馬両県にまたがる「両毛地域」を取り上げた。当該地域は,申請者が従来2度にわたり調査してきた地域であり,またそこに立地する自動車メ-カ-が経営悪化の中で輸出市場におけるシェア維持のために現地生産を拡大せざるを得ない状況にあり,この間の海外現地生産の本格化により大きな影響が予想されている地域でもある。現地調査は,8月から9月にかけて集中的に実施した。今年度の作業としては,企業に関する聞取調査および企業・業界資料等の収集を予定していた。後者については予定通り進展したが,前者の聞取調査はなかなか協力が得られず,次年度も行う必要がある。なお,企業・業界資料の分析から,平成元年以降の労働力不足,労働時間短縮の動きが,現地生産化の動きとともに,国内生産体制の再編を早める要因となっていることがわかった。また,地域経済循環に関しての資料収集・分析を予定していたが,対象地域の県および市町村での関係資料の整備が必ずしも十分ではないため,オ-ソドックスな資料である企業・産業・就業・労働力等に関する地域集計資料の収集・分析に切り替えて実施した。併せて,自治体・商工会議所,関係諸組合等からのヒアリングも行なった。地域資料に関してはまだ集計中であるが,関係団体からの聞取調査によれば,メ-カ-直の一次下請企業群での影響はほぼストレ-トに出ているかが,そりよりも下位の企業群ではかなりの「自動車離れ」や多角化が進んでいる。また当該地域では自動車以外の業種の集積が進んでおり,その動向との錯綜がみられる。その意味で地域経済への影響も階層的で多様になっているようである。次年度はこの辺のところに焦点を絞って調査する予定である。今年度の当初の計画は,1.自動車メーカーへのヒアリングおよび既存の統計資料,新聞・業界情報から自動車産業の内外での生産・立地の動向の継続的な追跡,2.現地調査では,地域経済に関する地域情報の収集の継続と部品・下請等の地元関連企業からの聞き取り調査,の大きく2点からなっていた.当初計画の1.については,自動車業界の急激な低迷の中で,昨年同様に思うような協力が得られず,ヒアリング調査は不十分なものであった.それを補うべく実施している統計資料,新聞・業界情報の継続的な追跡の方も,平成3年後半からの国内販売の低迷を受けて,国内生産体制の再編が急であり,予定していた作業が追いつかない状況にある.これまでに得られた知見としては,海外現地生産の拡大つまり輸出ドライブによる国内での量産の確保が困難になる中で,自動車産業の競争構造がこれまでにない形に変容してきており,このことが自動車メーカーの国内外での戦略の大きな転換を招いているにとどまらず,部品・下請等の関連企業群へも従来にない再編成を惹起しつつあることが明らかになりつつある.当初計画の2.は,こうした動向の自動車工業集積地域への影響に関わるもので,昨年に引き続き,調査対象地域である「両毛地域」において平成4年7月から8月にかけて現地調査を集中的に実施した.業界の動きが急な中で,企業調査はなかなか協力が得られず困難を極めた.しかし,それ以上の問題は,上述の新たな再編は自動車工業地域の重大な岐路にもなりかねない状況であるが,平成4年以降に急激な変化として生じており,これまでの収集データではフォローできないということであった.最新の資料の収集と分析につとめているが,工業地域への影響もこれまでにないドラスティックなものになると,現在までの分析において予想される.
末梢血幹細胞の特性と機能を誘導するメカニズムに関する研究

平成15年度(以下、昨年度)に引き続き主に2点の研究を行なった。まず骨髄幹細胞と顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)により誘導された末梢血幹細胞の細胞表面分子の差異を検討する中で昨年度は発現量に差のあるタンパクを見いだしており本年度はその分子の解析を行なった。構造的な特徴を明確にするには至っていないが、このタンパクを分離精製しラットを免疫した後に得られた抗血清をポリクローナル抗体として組織免疫染色を行なった。その結果、末梢血幹細胞だけでなく胎盤、脾臓、骨髄などの血管で部分的に染色される箇所が確認された。胎盤では臍帯付着部周辺の血管とその他の部位の血管とで染色性に差があり発現量の違いがあるものと考えられる。他の造血幹細胞や血管内皮細胞に発現する分子との違いを検索しているが、特徴的な発現をうかがわせており興味深い分子であることから分子構造の解析を進め、モノクローナル抗体の作成に進んでいきたい。もう一つ昨年度から検討を進めている内容として、末梢血幹細胞分画から得られた既知のものとは異なる受容体型チロシンキナーゼ分子の機能解析の検討がある。前述の研究を主に進めたことから相対的に検討が遅れているものの、クローニングを終了し全長のDNAシークエンスがほぼ終了したことからモノクローナル抗体の作成に進んでおり、この分子の機能解析を行なう予定である。末梢血幹細胞においてどのような役割を持つのかはまだ明らかではないが、骨髄幹細胞での発現の差異が明らかになれば骨髄からの離脱やあるいは骨髄への生着のメカニズムの解明につながるものと期待できる。末梢血幹細胞の持つ特性の解明を最終目的に、特にいかにして造血幹細胞が骨髄から末梢血に誘導されるのかという点に注目して研究を行なっている。顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)の濃度勾配によって造血幹細胞が移動することは以前から知られているがどのような分子がそこに関与するのかは十分に解明されていない。平成15年度はマウスの骨髄幹細胞と末梢血幹細胞に発現されている様々な分子の発現の比較から検討を開始した。現在解析中であるが分子量120から150ダルトンの間に両者において発現量に明らかに差が認められるタンパクが発見された。骨髄幹細胞では発現が少ないが末梢血幹細胞で発現が上昇しており骨髄血管からの離脱に利用されている分子の可能性があり興味深い。この分子に対する結合因子は骨髄の血管内皮細胞に発現している可能性が高いと考えられ同時に検索を進めている。一方、両幹細胞からDNAを抽出し受容体型チロシンキナーゼの保存領域を検出するPCRプライマーセットを利用してどのような分布にあるかを検討した。明確な差は得られていないが、末梢血幹細胞から既知の受容体型チロシンキナーゼとは異なると考えられるDNA配列が得られている。新規の分子である可能性があり現在クローニングを行なっている。今後同様の手段を用いて臍帯血幹細胞と臍帯血管内皮細胞に特殊な分子の発現が存在していないのかを検討していく予定である。以上のように今年度は新規の造血幹細胞関連の分子の存在の可能性が見いだされており来年度に引き続き検討する。
前向き難治性喘息コホートにおける、バイオマーカーの経年的変化についての研究

北海道難治性コホート研究は、実臨床を反映するために喫煙者(約60%)を含めたコホートである。本コホートでは、呼吸器科専門医により喘息と診断され、ガイドラインに沿った適切な診療が行われている患者を対象としている。2018年10月で6年間の前向き調査が終了しており、現在データクリーニングを行っている。3年間の増悪調査を基にした解析結果は、Clin Exp Allergy誌に報告している(Kimura H, et al. Clin Exp Allergy 2018)。この報告では、毎年2回以上増悪する頻回増悪群、一度も増悪のない増悪なし群、それ以外の中間群に分類して解析を行った。1年目に頻回増悪であると、2年目にも頻回増悪であることが示された。また、最初の2年間がともに頻回増悪であることは、3年目も頻回増悪であることの有意な関連因子であった。頻回増悪群では、末梢血好酸球数と子機中一酸化窒素濃度(FeNO)が高値であったが、血清ペリオスチンや呼吸機能検査の結果には差がみられなかった。また、1年後のVisitを基準として、前向き2年間で同様の解析を行ったところ、頻回増悪群においてFeNOが高値であった。これは、後ろ向き1年間の増悪状況と独立した関連因子として同定された。これらのことから、重症喘息における増悪については、気流閉塞やリモデリングよりも、現在のType2気道炎症の存在が重要である可能性が示唆され、特にFeNO測定が有用であると考えられた。今後は、Type2炎症の指標となるマーカーの中から日常臨床で使用可能なものを中心に、増悪との関連を検討していきたい。研究成果は学会等にて発表を行っており、論文も受理されている。今後もバイオマーカーの測定、結果の解析などを継続し、病型分類や個別化治療に繋がる病態の探索を続ける。今年度は当初予定していたほど物品購入を行わなかったため、次年度使用額が生じた。次年度にも、物品購入は行う予定であり、また国際学会で結果を報告予定のため、その旅費に充てる。
ヒト歯根膜細胞の骨芽細胞分化におけるWNT関連遺伝子発現

骨再生を目的とした細胞移植において、移植前の細胞に対する骨分化誘導は広く行われているが、そのメカニズムには明らかでない点も多い。そこで我々は、ヒト歯根膜細胞由来間葉系幹細胞(hMSCs)の骨分化誘導時における分化制御因子の探索を行った。石灰化誘導培地(OIM)により上昇したアルカリフォスファターゼ(ALP)活性は、WNTシグナル・カノニカル経路を選択的に阻害するXAV939により濃度依存的に抑制されたことから、hMSCsの骨芽細胞分化にはWNTシグナル・カノニカル経路が関与することが示唆された。またPCRにより、hMSCsをOIMで培養するとWNTの細胞外アンタゴニストであるsecreted frizzled-related protein 3(SFRP3)の発現は上昇する一方、SFRP4の発現は抑制された。ALP活性はrhSFRP4により抑制され、sisFRP4により上昇したことから、sERP4はhMscsの骨芽細胞分化を抑制すると考えられる。一方、siSFRP3によりALP活性は抑制され、pull-down assayによりSFRP3はノンカノニカル経路の代表的リガンドであるWNT5Aと結合したことからSFRP3はノンカノニカル経路で作用すると考えられる。このことから、SFRP3とWNT5Aが結合してノンカノニカル経路を抑制することにより間接的にカノニカル経路が増強され、hMSCsの骨芽細胞分化を促進する可能性が示された。今回の結果より、SFRP3およびSERP4はWNTシグナルのカノニカル経路およびノンカノニカル経路を介しhMSCsの骨芽細胞分化を制御することから、SFRP3およびSFRP4は骨分化の制御因子として再生医療に応用できる可能性があるものと期待される。ヒト歯根膜細胞(hPDLCs)には歯周組織再生能があると言われ、再生治療への活用が期待されている。しかしながら石灰化誘導培地(OIM)でアルカリフォスファターゼ(ALP)活性が上昇する一方、BMP2(Bone morphogenetic protein 2)には反応せず、OIM+BMP2では相乗的にALP活性が上昇するなどその性質には明らかでない点も多い。そこで本研究では骨芽細胞分化に関与するWNTシグナルに注目し、hPDLCsの骨芽細胞分化におけるWNT関連遺伝子発現を検索することにより再生治療への応用の可能性を検討した。OIMによりhPDLCsのALP活性は上昇し、WNT阻害剤であるXAV939をOIMに添加することによりALP活性は抑制されたことから、hPDLCsの骨芽細胞分化にはWNTシグナルが関与することが示唆された。またOIMによりWNTの細胞外アンタゴニストであるsecreted frizzled-related protein 3(SFRP3)の発現が有意に上昇する一方、SFRP4の発現が抑制されることが明らかとなった。リコンビナントSFRP3/4(rhSFRP3/4)またはsiSFRP3/4によりALP活性及び石灰化の変化を検討したところsiSFRP3では抑制され、一方rhSFRP4により抑制されるがsiSFRP4では上昇することから、これらSFRP3およびSFRP4がhPDLCsの骨芽細胞分化に深く関与することが示唆された。現在までに、次世代シークエンサーによる網羅的遺伝子解析や、目的とする遺伝子の骨芽細胞分化における発現の変化およびタンパク発現についての解析を進めており、おおむね順調に進展しているものと考えられる。これまでにSFRP3およびSFRP4がヒト歯根膜細胞の骨芽細胞分化に関与することが示唆された。しかしながら、これらSFRPsのタンパク質間相互作用は十分に解明されていないため免疫沈降法などを用いて解明していく。また、in vivoにおいてSFRPsが骨再生に及ぼす影響を検討するため、マウス皮下へのSFRP3およびsFRP4局所的投与による器質的変化を組織学的に評価する。

さらにイヌ歯周病モデルへのSFRP3およびSFRP4局所投与による歯周組織再生量の評価や、既存の歯周組織再生療法と歯周組織再生量を比較検討する予定である。
フィトクロム相互作用タンパク質の解析に基づく植物の光情報伝達機構の解明

シロイヌナズナの赤色光・遠赤色光受容体フィトクロムの相互作用タンパク質として機能未知のジンクフィンガータンパク質を単離した。その遺伝子に対するタグ挿入突然変異体を用いた遺伝学的解析によってphyBの下流、FT遺伝子の上流で成長相制御に関与することがわかった。時空間的発現特異性解析、突然変異体の表現型相補を指標に機能的な解析によって、この遺伝子の維管束における核内で作用することが重要でることが示された。光環境と成長相制御をつなぐ制御因子であることが示された。生存を光に依存する植物にとって、光環境の適切な認識と生理応答は個体の繁栄に重要である。植物の赤色光・遠赤色光受容体フィトクロムは、多重遺伝子族にコ-ドされ、光量や光質を識別することにより、発芽から開花に到る多岐の生理応答を制御する。フィトクロムは光による立体構造の変換が機能発現の鍵となることが知られており、この構造の違いを識別する機構の解明が光によるシグナル伝達の本質的な理解につながると考えられる。フィトクロムが受容した光シグナルを細胞内情報として発信する分子機構を、phyAまたはphyBが相互作用するタンパク質因子を同定することにより解明することを目指した。エピト-プタグ付きフィトクロム発現系を活用し、光質特異的phyB相互作用因子を質量分析を利用したプロテオミクス手法によりタンパク質同定する。また、これを補完する手法として、酵母ツ-ハイブリッド法を利用し、盛んに成長する時期の相互作用タンパク質を同定する。同定された相互作用タンパク質に対する突然変異体や遺伝子を改変し植物体へ導入した系統を解析することにより、そのタンパク質の生物学的評価を行い、植物体における役割を検証する。また、その機能発現の分子機構を明らかにする。フィトクロムは赤色光/遠赤色光受容体であり、発芽、緑化、細胞の伸長抑制や花成の制御など様々な植物の光応答を制御している。シロイヌナズナにおいて、フィトクロムB(phyB)は明所において最も主要な役割を担っているフィトクロムであり、植物の赤色光/遠赤色光可逆的応答に関与する。本研究では、近年植物の分野で発展が著しいプロテオミクス手法を用い、phyBと光特異的に相互作用する因子の網羅的な探索を行った。PhyBと相互作用する因子の単離に免疫沈降を用いるため、C末端にエピトープタグを付与したphyBを発現するコンストラクトを作製し、phyB変異体に導入した。PhyBを介した応答である赤色光高照射反応を指標に、タグを付与したphyBが生体内で機能的であるかを調べた。変異を相補した形質転換体の芽生えに赤色光を照射し、架橋剤で処理することで、赤色光特異的相互作用因子が会合したphyB複合体を生体内で安定化させた。組織の抽出液から、タグに対する抗体を用いた免疫沈降によりphyB複合体を精製した。得られた複合体をSDS-PAGEで展開した結果、phyBに相互作用する因子と思われるバンドが8つ得られ、さらにその中には、赤色光特異的に強く検出されるバンドが5つあった。赤色光特異的に検出されたバンドから、質量分析により少なくとも1つの相互作用因子候補を同定した。また、植物の赤色光応答において、phyBシグナルにより制御される因子を、プロテオミクスを用いて網羅的に単離するために、暗所で生育したWTシロイヌナズナの黄化芽生えに赤色光を照射し、抽出したトータルタンパク質を二次元電気泳動で展開した。その結果、赤色光照射から24時間以内に発現量が変化したスポットを60個検出した。これらのスポットは、phyBを含む光受容体を介した赤色光シグナルにより制御されるタンパク質のものと思われる。光は植物の発生や成長に影響を与える主要な環境要因である。フィトクロムは植物の赤色光応答、遠赤色光応答や超低光量応答の主要な光受容体である。我々はフィトクロムの細胞内信号伝達を明らかにするために、フィトクロム相互作用因子をスクリーニングした。これまでに知られているフィトクロム相互作用因子は、芽生えの植物体を利用して同定されていた。フィトクロムは花成などの成長後期の生理応答にも重要な機能を持っている。そこで、成長相転換時のシロイヌナズナから調製したcDNAライブラリーを用いて、酵母ツーハイブリッドスクリーニングを行い、新奇ジンクフィンガータンパク質VOZを単離した。VOZは2分子種存在し、コードする遺伝子もシロイヌナズナゲノムには2コピー存在する。T-DNAタグラインより遺伝子破壊株を同定した。単一遺伝子破壊では野生型と成長の差が見られなかったが、二重変異体では顕著な遅咲き表現型が観察された。フィトクロム遺伝子(phyAまたはphyB)との3重変異体を作成し、表現型を観察したところ、phyBの早咲き表現型ではなく、voz二重変異体の遅咲き形質が現れた。すなわち、VOZはphyBより下流に位置することがわかった。

また、花成の遅れの原因として、FT遺伝子の光周期依存的な発現誘導が抑制されていることがわかった。VOZが、phyBと花成の間をつなぐ因子であることから、フィトクロムを介した信号伝達に重要な分子を同定したと言える。VOZの発現特異性や発現制御に関する知見を蓄積することにより、植物光信号伝達の一端が解明されると期待された。フィトクロムは植物の主要な光受容体であり、多様な光生理応答に関与する。花成制御においても重要な役割を持つことが知られている。フィトクロムは光を吸収することで核から細胞質へと移行してシグナルを下流に伝達する。これまでにフィトクロム下流の信号伝達因子として、相互作用タンパク質(PIFs)が同定されている。しかし、生長した植物におけるフィトクロムシグナルは未だ明らかにされていない。抽苔時のシロイヌナズナcDNAライブラリーを用いた酵母ツーハイブリット法によるスクリーニングにより、フィトクロム相互作用因子として、転写因子VOZ (Vascular plant One-Zinc finger)を単離同定した。VOZは、シロイヌナズナにおいてAtVOZ1、AtVOZ2の二分子種が存在し、voz1 voz2二重変異体は長日条件下において遅咲きの表現型を示す。また、phyBとの三重変異体の解析からVOZがphyBの下流で花成を制御すること、WTとvoz1 voz2二重変異体における花成促進因子の発現解析からVOZがFTの発現を促進していることが示され、VOZがフィトクロムとFTの間をつなぐ因子であることが考えられた。FT上流の遺伝子発現を解析したところ、voz1 voz2二重変異体ではFLCの発現が上昇していることがわかった。次に、VOZの細胞内局在を蛍光タンパク質との融合実験により可視化するとともに、強制的に核内および細胞質への細胞内局在シグナルを与えた導入遺伝子による変異体相補により解析した。核局在シグナルをもつ遺伝子導入系統の花成が野生型と一致することより、VOZが核において機能するが示された。VOZを介する光受容体下流の信号伝達機構の実体の一端が明らかになった。フィトクロムは光シグナルを下流因子へ伝達し、花成を制御する。この光応答シグナル経路を明らかにするため、シロイヌナズナにおける新たなフィトクロム相互作用因子として、ジンクフィンガータンパク質であるVOZ1、VOZ2を単離した。これらの二重変異体ではフロリゲンと考えられているFTの発現が抑制され、花成遅延を示した。このことからVOZは重複した機能を持ち、フィトクロムの下流でFTの発現を制御する花成促進因子であることが明らかになった。FTの転写は、日長依存的な花成促進因子COと低温経路の花成抑制因子FLCにより制御を受けている。VOZが光質を認識することが予想されていること、最近、低R/FR比の条件で低温応答が上昇されることが報告されていることを参考に、FLCの発現を解析したところvoz1 voz2二重変異体ではFLCの発現が上昇していた。また、voz1 voz2二重変異体は低温に依存せずに低温馴化経路が誘導され、低温耐性が増強されていた。その一方で、葉肉細胞における光受容と維管束における刀の作用には空間的隔たりがあるという解決すべき問題がある。
真社会性昆虫における完全不妊ワーカーの進化

1)完全不妊種の生態調査巣仲間認識は、社会性昆虫でみられる特徴的な性質であり、これは非血縁個体による利己的産卵(寄生者)を防止するためと考えられている。ワーカーが産卵能力がない完全不妊種では、たとえ受け入れたとしても利己的産卵による適応度の低下は生じない。そのため、受け入れコストが下がり、妊性種にくらべ受け入れやすくなると予測される。そこで、完全不妊種であるPachycondyla luteipesを用いてカースト間の受け入れ頻度を比較したところ、妊性のある女王はほとんど受け入れられなかったのに対し、妊性の無いワーカーは攻撃されずに受け入れられた。このことは妊性の有無が受け入れ頻度に影響をあたえることを示していた。今後は、さらに多くの完全不妊種で巣仲間認識行動のカースト間比較を行い、妊性の有無が巣仲間認識行動に影響を与えるのかどうか調査したいと考えています。2)完全不妊種の形態調査ワーカーの形態はコロニーレベルの選択(コロニーの生存率、生産性の向上)と個体レベルの選択(産卵能力の保持)のバランスによって決定されると考えられている。完全不妊種のワーカーは、卵巣が消失しているため個体レベルの選択がもはや働かず、そのためコロニーレベルの選択によってワーカー多型や特異的な形態のワーカーが進化しやすいと予測される。そこで、完全不妊種のPachycondyla luteipesを用いて、女王とワーカーの形態比較を行った。この種のワーカーは単型であるにもかかわらず、女王とワーカーで形が大きく異なり、ワーカーは女王に比べ大きな頭部をもっていた。このような形質はワーカー多型種でみられるが、単型種のワーカーでは初めての報告である。このように、完全不妊種ではワーカーの単型、多型にかかわらずワーカーの大きな形態変化がみられ、これは個体レベルの選択の消失によって、コロニーレベルの選択に影響受けやすいことを示唆していた。社会性昆虫の一部の種では、産卵能力を完全に失った絶対的不妊個体が報告されており、これらは直接適応度を残せず、唯一の繁殖個体である女王を通じて間接的にしか適応度を稼ぐことができないため、究極の利他個体といえる。本研究では、この進化生物学上の問題点を、生態的、遺伝的、系統的側面から調査し、完全不妊ワーカーの進化を促す選択圧の特定と分子系統樹による完全不妊ワーカーの進化回数の推定を目的とした。初年度は、完全不妊種リストの作成と完全不妊ワーカーと生態形質との相関関係を調査した。1:完全不妊種完全不妊種はこれまで、Monomorium,Tetramorium,Solenopsis,Pheidologeton,Pheidole,Hypoponera,Brachyponera,Cardiocondyla,Vollenhoviaの9属で報告されていたが、今回の調査で新たにLeptanilla,Strumygenys,Pyramica,の3属で見つかった。それぞれの属でのサンプリング種数がまだ少ないため断定できないが、上述した属に含まれていた種が全て完全不妊ワーカーであったため、この形質は属レベルで進化したものと推測された。2:コロニーサイズコロニーサイズは大きく変動しており、数十個体のものから一万個体をこえるものまで様々であった。この変動は属間だけでなく属内でも見られた事から、コロニーサイズと完全不妊の発生パターンとの関係性は弱いと推測された。3:女王数女王数の変動はコロニーサイズと同様、属間、属内で大きく変動し、単女王制、多女王制コロニーの両方で完全不妊ワーカーが見られた4:生息場所生息場所は完全不妊の形質よりも、女王数やコロニーサイズと直接的に関係し、多女王制でコロニーサイズの大きな種はOpen landや二次林に、単女王制でコロニーサイズの小さな種は一次林で多く見られた。社会性昆虫の一部の種では、産卵能力を完全に失った絶対的不妊個体が報告されており、これらは直接適応度を残せず、唯一の繁殖個体である女王を通じて間接的にしか適応度を稼ぐことしかできないため、究極の利他個体といえる。今年度は、完全不妊種リストの作成と完全不妊ワーカーと生態形質との相関関係を調査するとともに、遺伝解析の予備実験を行った。1:完全不妊種Monomoriumは属レベルで完全不妊と考えられてきたが、日本産の6種を解剖した結果、シワヒメアリ(Monomorium lationode)のワーカーは全て卵巣を所持しており、また多くの栄養卵を含んでいた。このことから、この種のワーカーの卵巣は機能的であると考えられた。3:血縁度完全不妊種のPachycondyla luteipesにおいて血縁度を測定するためマイクロサテライトマーカーを開発したところ、個体群内の遺伝的多様性が著しく低く、近親交配の可能性が示唆された。これは3倍体の雌が見られた事とも一致している。また、コロニーサイズの小さな完全不妊種、Pyramica属、Strumigenys属は非常に狭い場所に集中分布しており、これらの属においても近親交配の可能性が高いと考えられる。今後は、遺伝構造の解析を他の完全不妊種でも行い、完全不妊と近親交配の関係を調べる必要があると考えられる。

1)完全不妊種の生態調査巣仲間認識は、社会性昆虫でみられる特徴的な性質であり、これは非血縁個体による利己的産卵(寄生者)を防止するためと考えられている。ワーカーが産卵能力がない完全不妊種では、たとえ受け入れたとしても利己的産卵による適応度の低下は生じない。そのため、受け入れコストが下がり、妊性種にくらべ受け入れやすくなると予測される。そこで、完全不妊種であるPachycondyla luteipesを用いてカースト間の受け入れ頻度を比較したところ、妊性のある女王はほとんど受け入れられなかったのに対し、妊性の無いワーカーは攻撃されずに受け入れられた。このことは妊性の有無が受け入れ頻度に影響をあたえることを示していた。今後は、さらに多くの完全不妊種で巣仲間認識行動のカースト間比較を行い、妊性の有無が巣仲間認識行動に影響を与えるのかどうか調査したいと考えています。2)完全不妊種の形態調査ワーカーの形態はコロニーレベルの選択(コロニーの生存率、生産性の向上)と個体レベルの選択(産卵能力の保持)のバランスによって決定されると考えられている。完全不妊種のワーカーは、卵巣が消失しているため個体レベルの選択がもはや働かず、そのためコロニーレベルの選択によってワーカー多型や特異的な形態のワーカーが進化しやすいと予測される。そこで、完全不妊種のPachycondyla luteipesを用いて、女王とワーカーの形態比較を行った。この種のワーカーは単型であるにもかかわらず、女王とワーカーで形が大きく異なり、ワーカーは女王に比べ大きな頭部をもっていた。このような形質はワーカー多型種でみられるが、単型種のワーカーでは初めての報告である。このように、完全不妊種ではワーカーの単型、多型にかかわらずワーカーの大きな形態変化がみられ、これは個体レベルの選択の消失によって、コロニーレベルの選択に影響受けやすいことを示唆していた。
視覚神経系における情報分割原理の研究

視覚神経系では網膜で捉えた画像の情報が、動き、色、形といった視覚属性に分割され、異なった経路で処理されている。情報分割によって、視覚神経系は外界の立体構造の知覚や顔の識別といった複雑で困難な課題をいくつも同時に、高速に処理している。我々は現在までに、マカクザルV4野において、従来知られていた視覚画像中に存在する線分や明暗の境界などのエッジに応答する神経細胞だけではなく、エッジに全く応答せずテクスチャーと呼ばれる物体表面の模様にのみ応答し、その密度などを表現する細胞が存在することを示している。この結果はV4野においてエッジとテクスチャーの情報が独立、並列的に処理されていることを示している。動きや、色、形といった基本的な視覚属性は視覚情報処理の初期段階で分割されていることが知られているが、物体認識に至る過程でどのような情報分割が、なぜ、どういう方法で行われているか、そのようなシステムはどのように形成されるのか、といった問題についてはまだ明らかになっていないことが多い。エッジとテクスチャーの情報分割がどの部位で行われているかを明らかにする目的で、マカクザルV1、V2、V4野において神経細胞のエッジおよびテクスチャーに対する応答を調べた。V1、V2ではエッジよりもテクスチャーによく応答する細胞は見られなかったが、空間的均一度の高い正弦波格子よりもランダムテクスチャーによく応答する細胞は見られた。テクスチャーの視覚属性として、その要素配置のランダム度が大きな意味を持ち、V1、V2における局所的ランダム度の検出が、エッジとテクスチャー情報の分割に寄与していると考えられる。またこのようなランダム度の検出には古典的受容野の周辺野が関与していると考えられる。
全固体型マイクロ電池用ミクロ造形法に関する研究

ゾル・ゲル法を用いることにより、電池材料として十分な性能を有する薄膜の作製に成功した。作製した薄膜はLi_4Ti_5O_<12>、LiCoO_2、LiMn_2O_4である。作製した薄膜内のリチウムイオンの拡散定数についていくつかの測定法を用いて評価した。その結果、得られたLi_4Ti_5O_<12>、LiCoO_2、LiMn_2O_4中でのリチウムイオンの拡散は負極あるいは正極材料としてこれらの材料を使用する上で十分に高い値であった。充放電特性は、粉末の試料と同等あるいはそれ以上であることが確認され、開発したゾル・ゲル法はリチウム二次電池用活物質を作製する上で有効であることが分かった。これらのゾルを用いて、マイクロインジェクション装置により、ドットの印刷を行った。ドットの形状はゾルの粘度、界面張力、基板の濡れ性などによって大きく影響されることがわかった。これらの物性を最適化した結果、50μm程度の大きさのドットを均質に印字することが可能であった。また、得られたゲルドットを焼成することでLi_4Ti_5O_<12>、LiCoO_2、LiMn_2O_4活物質ドットを作製することができた。得られたドットの電気化学的な特性は、焼成条件に依存し変化するため、焼成条件についても最適化を行った。最終的に得られたドットは、リチウム二次電池用電極として十分な性能を有していることが分かった。これらを重ねて印字することで電池を作製する予定であったが、非常に難しい技術であることが分かった。そこで、櫛型マイクロ電極を用いる手法を考案した。この場合、ドットではなくラインが必要である。そこで、ドットの場合と同様の装置を用いてラインを作製した。ライン状のリチウム二次電池用活物質は十分な性能を有することが分かった。正極および負極のラインを作製し、電池を作製した。電池は高速に充放電可能であり、新型リチウム二次電池を作製することに成功した。インクジェットプリンターなどに代表される液滴を噴出して描画する装置が一般化しいろいろな用途に使用されている。本研究ではこの技術をセラミックスの造形に利用しようとするもので、本年度はインクを噴出するためのマイクロマニュピュレーションシステムの設置とその稼働、およびインクとして用いるセラミックス用ゾルの開発研究を行った。セラミックスとして、リチウム電池に用いられる混合伝導性およびイオン伝導性酸化物を選択し、マイクロ二次電池の開発を目的とした。そこで、まず始めにこれらの酸化物が生成するゾルを調整した。具体的には、LiCoO_2、LiMn_2O_4、Li_4Ti_5O_<12>、Li_<0.35>La_<0.55>TiO_3を合成するためのゾルである。どのゾル溶液もポリビニルピロリドン高分子を添加剤として加えることにより、急激な加水分解を抑制され長期間安定なゾルを得ることができた。また、この添加剤の効果として焼成時に発生するクラックを抑制できることを明らかにした。このゾルを用いて購入したマイクロマーキングシステムを用いて、ゾルのドットの作製を行い、さらにそれを焼成することにより酸化物のドットを得ることができることが分かった。しかし、ゾルの基板上への噴出・乾燥により形成されるゲル体の形状は基板とゾル溶液の濡れ性、ゾルの粘度により大きく影響を受けることが分かった。

そこで、接触角計および粘度計をもちいてゾルの物理化学的な性質を測定しながら、現在検討を続けている。電気化学的な評価として、ドット一つ一つの電気化学的な特性(電材料としての特性)を調べることが必要である。そのためには、10μm程度の大きさの物体一つの電気化学計測が可能でなければならない。そこで、マイクロマーキングシステムを使用して10μm程度の大きさの正極粒子の測定を行った。電流が非常に小さいために測定にはピコアンペアブースターを必要としたが十分測定可能であることが分かった。今回は大気下で測定を行ったが、実際にはドライボックス内での測定が必要と考えられる。リチウム二次電池のマイクロ化は、今後の電子機器の発展において非常に重要であり、オンボードの電池ができれば、電気回路の設計理論上に革新的な技術となる。そこで、本研究においては、低コストで量産可能な手法としてインクジェットプリンターに代表されるような印刷技術を用いたマイクロ型リチウム二次電池の作製に関する研究を行っている。前年度までに印刷用のインクとして電池材料用セラミックスのゾルの開発を行ってきた。本年度は実際にインジェクション装置を用いてドットを作製し、その電気化学的な特性評価を行った。正極材料にはLiCoO_2を、負極材料にはLi_4Ti_5O_<12>を、固体電解質についてはLi_<0.35>La_<0.55>TiO_3を用いて電池の作製を行う予定であり、本年度はLiCoO_2ドットおよびLi_4Ti_5O_<12>のドットの作製を行うとともに、電気化学的な特性評価を行った。ドット状態の活物質の場合、両電極ともに不純物相を含むため、ゾル組成の調整を行った。また、ドット形状の制御を行うために、粘度、基板(金電極)との濡れ性を調節するためにもゾル組成の調整を行った。その結果LiCoO_2については、ほぼ単相(六方晶)のドットが得られた。この材料は可逆性に優れた電気化学的な特性を示すことが分かった。一方、Li_4Ti_5O<12>ドットの場合には不純物相としてTiO_2が存在することが分かった。現時点では、わずかにTiO_2が残存しており、今後の検討が必要である。電気化学的な特性を評価した結果、不純物相が存在するものの比較的可逆的な特性を示すことが分かった。固体電解質であるLi_<0.35>La_<0.55>TiO_3については、薄膜の作製を行い、そのイオン伝導性について評価した結果、室温10^<-3>Scm^<-1>以上のLi^+イオン導電率を示すことが分かった。今後、これらの部材を組み合わせることにより電池を構成できることを明らかとし、5mm×5mm程度の範囲内に200個程度の電池を作製マイクロ電池アレイの作製を行う。インクジェットプリンター技術を用いたセラミックスの作製に関する研究を行い、実際にこの手法を用いてマイクロリチウム二次電池の作製を行ってきた。本年度は研究計画の最終年度となり、以下に記述すように大きく進展することができた。リチウム二次電池の正極活物質および負極活物質を50100μmの大きさで作製するためのゾル組成の決定および基板処理法の最終的な調整を終了した。
壊死細胞に対する免疫応答の分子機構および生理的意義の解明

生体内で発生する細胞死に対して免疫細胞が応答し、自己由来の死細胞を除去することは個体の恒常性維持にとって重要である。細胞の壊死に伴ってDNAが放出されると、免疫細胞は核酸認識受容体であるTLR9を介して活性化する。TLR9は本来は微生物由来のDNAに対する受容体であるため、感染防御に重要である。しかしTLR9シグナル経路の異常な活性化は恒常性の範囲を逸脱した炎症反応を引き起こす原因となり、その一例として全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患が挙げられる。TLR9は小胞体で合成されるが、DNAと結合するのはエンドライソソームである。TLR9の小胞体からエンドライソソームへの局在変化がTLR9経路の活性化に不可欠であるされている。この局在変化は厳密に制御されるはずだが、詳細な機構は不明である。平成25年3月までの研究により、軸索身長阻害因子として以前報告されたNogoがTLR9刺激に対する免疫応答に必須の分子であることを明らかにした。Nogo欠損マウスを用いて解析を進めた結果、NogoはTLR9のエンドライソソームへの局在を促進することが明らかになった。またNogo結合分子を探索したところ、機能未知のタンパク質であるGRAMD4がNogoと結合し、かつTLR9の局在変化を阻害することを見出した。NogoとGRMAD4はともに小胞体に集積する性質を示したことから、これらの分子はTLR9の小胞体からの搬出をそれぞれ促進的および抑制的に制御すると考えられる。一部の自己免疫疾患や炎症性疾患では核酸認識受容体の活性化が亢進している。本研究であきらかにしたNogoとGRAMD4に注目することで、これらの疾患の治療標的を見出すことが期待される。26年度が最終年度であるため、記入しない。自己由来壊死細胞に対する免疫系の異常な活性化は自己免疫疾患の原因となる。壊死細胞から放出された核酸はTLR9に認識され炎症応答を惹起する。抑制性免疫受容体PIR-BはTLR9の活性化を阻害し、自己免疫疾患発症を抑制している。PIR-Bが免疫細胞における機能が未知であるNogoタンパク質と結合することが報告されたため、NogoがTLR9刺激応答に関与し炎症応答を制御する可能性を検討した。本年度における研究において、Nogo欠損マクロファージは野生型と比較して、TLR9刺激に伴うサイトカイン発現が顕著に減弱することを見出した。TLR9発現量並びにTLR9活性化に必要なリガンドの細胞内への取り込みとエンドソームへの移行をFACSと共焦点顕微鏡観察により評価したが、Nogo欠損マクロファージではいずれも野生型と同等であった。そこでTLR下流のサイトカイン発現に重要な転写因子NF-_KBとp38のTLR9刺激に伴う活性化レベルを解析した。Nogo欠損マクロファージは野生型と比較して、NF-_KBとp38活性化レベルが著明に低い状態に留まることが観察された。従ってNogoはTLR9からNF-_KB/p38活性化に至るシグナル伝達経路で機能すると示唆された。続いてTLR直下で、シグナルを伝達する分子であるIRAK1のTLR9活性化後の挙動を解析したところ、野生型細胞ではIRAK1タンパク質は刺激後速やかに分解されるが、Nogo欠損マクロファージではIRKA1の分解が遅延するという結果を得た。従って、Nogoタンパク質はTLR9からIRAK1へシグナルを伝達する過程に関与しており、刺激誘導性のサイトカイン産生を正に制御する分子であることを明らかにした。TLR9は感染微生物由来の核酸を認識する受容体であり、感染防御に重要である。しかしそのシグナル経路が破綻すると不必要な炎症が発生し、炎症性疾患の原因となるためTLR9シグナルは厳密に調節されている。生体内で発生する自己由来の壊死細胞から放出される核酸もTLR9のリガンドとなり、TLR9経路の制御不全は炎症性疾患や自己免疫疾患の発症と増悪に関与する。しかしながら、その制御機構については未だ不明な点も多く残されている。当研究室で同定されたPIR-BはTLR9経路を抑制的に制御する。本研究では神経系においてPIR-Bに結合する分子として報告されたNogoに着目し、Nogo欠損マウスを用いて解析を行い、NogoがTLR9シグナル経路の活性化因子であることをこれまでに明らかにした。当該年度では、NogoがTLR9経路を活性化する分子機構の解明を目指して研究を実施した。NogoとPIR-Bが結合するという報告にもとづき、当初はPIR-Bが有するシグナル抑制機能をNogoが阻害していると想定して検証を行った。しかしながら、先述の報告と異なり、両者の結合は見出せなかった。そこで免疫系では両者は結合せずNogoはPIR-Bとは独立にTLR9シグナルを制御すると考え、Nogo自体の機能解明を試みた。まずNogoを免疫沈降し、Nogoと結合する分子を質量分析を用いて網羅的に解析した。その結果、複数の新規Nogo会合分子を同定した。それらを哺乳類細胞内で共発現して結合を確認した上で、免疫細胞において過剰発現並びにノックダウンを行い、TLR応答に対する影響を検討した。解析の結果、本研究で新たに同定されたNogo結合タンパク質の一つがTLR9経路を抑制的に制御することを見出し、現在はNogoがその分子の抑制的機能を阻害すると想定して研究を進めている。