hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
神経膠腫の遺伝子欠失における両親由来遺伝子の関連に関する分子遺伝学的研究

本研究では,脳腫瘍特に神経膠腫でrestriction fragment length polymorphism(RELP)分析で認められる第17染色体のヘテロ接合性の消失が両親由来のアレルのどちらかと関連性を持っているかを分析検討することを目的に,若年者に発生した神経膠腫から腫瘍および白血球genomic DNAを抽出し,RFLP分析によって比較検討をまず行った.両親からも血液採取が可能な若年者神経膠腫は比較的まれであり,3年間の研究期間で当施設で,腫瘍および患者・両親白血球からgenomic DNAを採取し得た症例は現在の所,15例にとどまっている.この15例中,両親白血球由来DNAに比較して,患者白血球にてヘテロ接合性が消失している症例は現在のところ見いだされていない.すなわち,両親の各2本のアレルが互いに独立したfragment長を持つ症例で単一のfragment長を持つホモ接合アレル対をもつ患児が生じたものは見いだされていない.この結果の説明としては,第17染色体上にあるp53遺伝子は,WT1遺伝子と異なり,腫瘍ではじめてヘテロ接合性の消失と変異がおこるという可能性を示唆するが,限られたDNA sampleでの酵素切断によるfragment長を見るRFLP分析ではinformative caseが当然限定されること,分析するDNA長が長ければ減数分裂時の組換えが生じることにより,第17染色体上のp53遺伝子の近傍の変化を見逃している可能性もあると考察された.そこで,この点を解決するために,より直接的にp53遺伝子の変異の有無を腫瘍,患者、両親の白血球のmRNAおよびgenomic DNAにて解析するため,酵母を用いたp53遺伝子検出法を,1994年度後半より導入し研究を継続した.この方法は酵母内でヒトp53 RT-PCR産物を発現vectorに導入,p53蛋白として発現させ、この転写活性をADE2 gene転写を指標としてassayする方法であり,患者のgenomic DNAの一方のアレルのmethylationによる不活化も含めて,発現するp53遺伝子の異常を検出できる.この方法により現在のところ4例の若年者(30才以下)神経膠腫にp53変異を検出し得たが,患者白血球DNAではp53変異は見いだされていない.従って,Li-Fraumeri症候群(遺伝性のp53変異)などの特殊な例を除き,脳腫瘍のp53変異は患者両親の遺伝子とは関連なく,腫瘍発生時に初めて,ヘテロ接合性の消失、変異として生じるものと推定された.なお,今後も症例を積み重ね,この研究結果を確認する予定である.本研究では,脳腫瘍特に神経膠腫でrestriction fragment length polymorphism(RELP)分析で認められる第17染色体のヘテロ接合性の消失が両親由来のアレルのどちらかと関連性を持っているかを分析検討することを目的に,若年者に発生した神経膠腫から腫瘍および白血球genomic DNAを抽出し,RFLP分析によって比較検討をまず行った.両親からも血液採取が可能な若年者神経膠腫は比較的まれであり,3年間の研究期間で当施設で,腫瘍および患者・両親白血球からgenomic DNAを採取し得た症例は現在の所,15例にとどまっている.この15例中,両親白血球由来DNAに比較して,患者白血球にてヘテロ接合性が消失している症例は現在のところ見いだされていない.すなわち,両親の各2本のアレルが互いに独立したfragment長を持つ症例で単一のfragment長を持つホモ接合アレル対をもつ患児が生じたものは見いだされていない.この結果の説明としては,第17染色体上にあるp53遺伝子は,WT1遺伝子と異なり,腫瘍ではじめてヘテロ接合性の消失と変異がおこるという可能性を示唆するが,限られたDNA sampleでの酵素切断によるfragment長を見るRFLP分析ではinformative caseが当然限定されること,分析するDNA長が長ければ減数分裂時の組換えが生じることにより,第17染色体上のp53遺伝子の近傍の変化を見逃している可能性もあると考察された.そこで,この点を解決するために,より直接的にp53遺伝子の変異の有無を腫瘍,患者、両親の白血球のmRNAおよびgenomic DNAにて解析するため,酵母を用いたp53遺伝子検出法を,1994年度後半より導入し研究を継続した.この方法は酵母内でヒトp53 RT-PCR産物を発現vectorに導入,p53蛋白として発現させ、この転写活性をADE2 gene転写を指標としてassayする方法であり,患者のgenomic DNAの一方のアレルのmethylationによる不活化も含めて,発現するp53遺伝子の異常を検出できる.この方法により現在のところ4例の若年者(30才以下)神経膠腫にp53変異を検出し得たが,患者白血球DNAではp53変異は見いだされていない.従って,Li-Fraumeri症候群(遺伝性のp53変異)などの特殊な例を除き,脳腫瘍のp53変異は患者両親の遺伝子とは関連なく,腫瘍発生時に初めて,ヘテロ接合性の消失、変異として生じるものと推定された.なお,今後も症例を積み重ね,この研究結果を確認する予定である.悪性神経膠腫での染色体上の遺伝子欠失を検索するため、第10染色体と第17染色体のrestriction fragment length polymorphism(RFLP)分析を行った。研究者の所属する施設にて手術を行い検体の得られた神経膠腫組織より高分子DNAを抽出しサザンブロット分析を行い、glioblastoma 6例・anaplastic astrocytoma 4例、計10例の悪性神経膠腫を現時点では解析している。

結果、anaplastic astrocytomaの2例およびglioblastomaの3例に第17染色体短腕上のloss of hetrozygosity(LOH)を認め、組織学的悪性度に関わらず各々50%にLOHを示した。anaplastic astrocytomadeは第10染色体長腕上のLOHは認めず、glioblastomaでは3例にLOHが認められた。この結果より、glioblastomaへ悪性化するためには第10染色体長腕上の抑制遺伝子の不活化が必要であることが推定され、神経膠腫発生の初期に第17染色体短腕の遺伝子変化がおきていることが想定された。この研究成果をもとに、第17染色体短腕上にヘテロ接合性の消失を示した例の両親の白血球DNAをRFLP分析を行うのが本来の当研究の目的であるが、解析を行った10例は全て成人例でありかつ比較的に高齢者が多く、両親ともに生存中であるものは1例のみであった。この1例の両親のDNAの分離は既に済ませている。このようにヘテロ接合性の消失を有する症例の選択は平成4年度研究計画に従い可能であるとの結果まで得られたが、平成5年度計画である対立遺伝子の消失が両親のいずれか由来であるかの検討にはより若年症例を選択し研究を遂行しなければならないと考えている。現在、各種神経膠腫についてその第10染色体と第17染色体におけるloss of heterozygosity(LOH)を腫瘍組織、患者末梢血白血球、その両親の末梢血白血球について検索し、germ lineのLOHが両親由来なのかあるいは胎形成期に生じたものなのかを検討中である。悪性神経膠腫は高齢者に発生する事が多く、両親の白血球を得る事は極めて困難な事は昨年報告した。平成5年度は若年症例に対象をしぼり、両親白血球を含めて12症例のDNA検体を採取することができた。この12症例についてDNAを制限酵素切断しSouthern blot法にて検討したところ、第10染色体に1例、第17染色体に2例のLOHを腫瘍細胞DNAに認めた。しかし、このDNA異常は患者白血球には見いだし得ず、germ lineのLOHは現地点では発見できていない。昨年は10例の悪性神経膠腫組織を解析し、第17染色体に5例・第10染色体に3例のLOHを認めたが、患者年齢層の変化による発見頻度の低下とも考えられる。この結果は、本実験法RFLPが神経膠腫遺伝子のpoint mutationを高率的にdetectできないという欠点による制約とも考えられ、今後は症例を更に蓄積すると共に他の方法を併用し検討を重ねる予定である。最近、神経膠腫第17染色体上の異常はp53遺伝子の異常に帰着できることが定説となっており、p53遺伝子の異常に狙いを絞り、SSCP-PCRおよびsequencingによりp53遺伝子の部分欠失・point mutationを効率的にdetectし、その異常の由来を患者白血球および両親白血球DNAとの比較にて検討することである。現在、既にnon-isotonicSSCP法の技術を当施設内で応用しており、今後p53 geneのexon 5exon 9について上記症例の検討を開始するところである。特に、小児神経膠腫例についてそのgerm line mutationの由来について検索していく予定である。
音声対話システム応用のための音声認識に関する研究

従来の音声認識システムに不足していた,音声対話システムに応用するための機能を実現した.具体的には,入力音声が断片化している場合に複数の断片を統合して認識する機能,音声認識結果と発話音声の持つ韻律情報から発話終了を推定する機能を実現した.これらの機能を応用して,適切なタイミングで発話を開始することのできる音声対話システムを実現し,会話ロボット上に実装した.従来の音声認識システムに不足していた,音声対話システムに応用するための機能を実現した.具体的には,入力音声が断片化している場合に複数の断片を統合して認識する機能,音声認識結果と発話音声の持つ韻律情報から発話終了を推定する機能を実現した.これらの機能を応用して,適切なタイミングで発話を開始することのできる音声対話システムを実現し,会話ロボット上に実装した.1.音声対話・音声認識システムに関する調査国内で行われた研究会を中心に,音声対話システムとそこで利用される音声認識システムの現状について調査した.現状の音声認識システムには,発話権授受に関する情報を処理する特別な機構は備わっていない.この結果をふまえ,本研究ではそれに必要な機能を追加することを改めて目標と設定した.2.音声認識システムの設計・実装2-1.音声入力部の拡張音声入力部には,従来から用いられていた特徴抽出の他に,発話権授受の推定に有用と考えられる韻律情報抽出モジュールを統合した.また.後述するグループ会話への応用を見据え,従来の2チャンネル処理から多チャンネル(最大5チャンネル)に対応した.2-2.認識部の拡張認識部においては発話の断片化に対処するため,時間的に複数区間に区切られた音声を統合した上で認識処理する機構を実現した.また,発話権授受に関する推定を,韻律情報を用いて行う枠組みについて検討した.これらの機構は次年度に統合することを目標としている.3.応用システムの検討実現した音声認識システムの応用として,グループ会話に参加するロボット上の音声対話システムを検討した.このロボットは一人の司会と複数の回答者がいるクイズゲームに回答者の一人として参加するもので,回答者として適切に振舞う為には人の音声を逐次認識しながら,自らの発話のタイミングを適切に推定しなければならない.そのために,本研究で実装した音声認識システムを用いることを検討した.実際の応用は次年度の目標のーつとして挙げられる.本年度は,構築した音声認識システムを実際の音声対話システムに統合した.音声対話システム自体の構成も見直し,よりスムーズなターンテイキングが可能な対話制御法を考案した.具体的には,音声対話システムがその発話を期待されているかどうかと,自らが発話をしたいかどうかを,ユーザの発話が入力されれる度に計算し,その値の大小によってユーザの発話に割り込むかどうかをリアルタイムに決定するという手法である.発話を期待されているかどうかは期待度として定義し,ユーザの発話断片が入力されるごとに,その終末区間の韻律情報(具体的には基本周波数とパワーの時間概形)と,音声認識結果の複数候補とその音響的尤度を用いて確率的に計算する。また,発話をしたいかどうかは意欲度として定義し,システムの発話がどれだけ緊急を要するかを強・中・弱の三段階で表現することとした.緊急を要するかどうかとは,例えば何かしらの情報検索を,ユーザが与えた条件を元に行うタスクの場合,条件が増えすぎると検索結果が無くなることがある.この時,それ以上ユーザが検索条件を与え続けるのは無駄になるので,ユーザが発話を続けようとしていても,その条件では見つからない旨をいち早く伝えることが重要となる.この場合緊急を要すると判断される.これらを統合した音声対話システムを実現することにより,従来にない,スムーズなターンテイキングを行うことができる会話ロボットを構築することができた.
マウス亜系間比較による新規コレステロール吸収制御因子の探索

コレステロールの消化管吸収は体内のコレステロールレベルを制御する上で重要なプロセスである。しかしその吸収メカニズムには未解明な点が多い。本研究ではマウス亜系間でコレステロール吸収効率が違うことに着目し、この違いを説明する新規のコレステロール吸収制御分子を見出すことを目的に企画された。本研究で行われたプロテオミクス解析により複数の制御分子候補が見出され、今後の研究の発展が期待される。コレステロールの消化管吸収は、肝臓での生合成と並んで体内のコレステロールレベルを制御する重要なプロセスである。これまでに、消化管の間腔側膜に発現するNPC1L1がコレステロール吸収担体として機能していることは明らかとなっているが、その活性(または発現量)制御因子や、取り込まれたコレステロールをリンパ管へと排出する因子は未解明のままである。このような背景の中、申請者は、マウス亜型間でコレステロールの消化管吸収量が大きく異なることを見出した。本申請研究では、この吸収効率の違いを説明しうる因子を探索・同定することで、新規の消化管コレステロール吸収制御因子を見出すことを目的としている。本年度(平成27年度)は、各マウスにおける消化管NPC1L1の発現量の検討と、新規コレステロール吸収制御因子を探索するためのプロテオーム解析の準備を進めた。マウス亜型間において小腸NPC1L1の発現量の違いを検討するために、各マウスの小腸から抽出したRNAを用いて、定量的RT-PCRを行った。その結果、各マウスでNPC1L1のmRNAレベルに有意な違いは認められなかった。また、蛋白質発現量についてもWestern blottingで検討を行ったが、違いは認められなかった。これらの結果から、マウス亜型間における消化管コレステロール吸収量の違いは、NPC1L1の発現量の違いが原因でないことが示唆された。そこで、プロテオーム解析により、コレステロール吸収量の違いをもたらす新規因子の探索を行うこととした。本年度は主に解析系の構築を進めた。これまでに、Orbitrap型質量分析機とナノフロー液体クロマトグラフィーを組み合わせたnanoLC-MS/MSシステムを用いることで、生体(臓器)試料や培養細胞試料のプロテオーム解析を行うことが可能となった。次年度は、構築したプロテオーム解析系を用いて、当該因子の探索を進める予定である。各マウスにおけるNPC1L1の消化管発現量に関する検討が計画通りに進められ、また、消化管コレステロール吸収の新規制御因子を見出すためのプロテオーム解析系の構築も順調に進んだため。このような背景の中、申請者は、マウス亜系間でコレステロールの消化管吸収量が大きく異なることを見出した。本研究では、この吸収効率の違いを説明しうる因子を探索・同定することで、新規の消化管コレステロール吸収制御因子を見出すことを目的としている。昨年度(平成27年度)までに、マウス亜系間での消化管コレステロール吸収量の違いは、NPC1L1の発現量の違いが原因でないことが示唆された。そこで、本年度(平成28年度)はプロテオーム解析による新規コレステロール吸収制御因子の探索を試みた。具体的には、1各マウスから採取した小腸上皮細胞の可溶化液を用いて、2次元泳動と組み合わせたショットガンプロテオミクスを行い、マウス亜系間で発現量の異なる蛋白質の探索を行った。また、2NPC1L1抗体を用いた免疫沈降実験とショットガンプロテオミクスを組み合わせることにより、NPC1L1と相互作用する蛋白質の探索を行った。これら網羅的解析の結果、これまでに複数の候補分子を見出すことに成功し、各候補分子を発現するプラスミドベクターを構築することができた。得られた発現ベクターを培養細胞に導入し、ウェスタンブロットを行った結果、期待される分子量のバンドを検出することに成功した。現在、各候補分子がコレステロール吸収に及ぼす影響やNPC1L1の機能・細胞内局在に与える影響について解析を進めている。研究2年度目となる次年度(平成28年度)には、1年度目に構築されたプロテオーム解析系を駆使して、マウス亜型間で消化間における発現量が異なる因子の探索を進める。また、見出された因子がコレステロール吸収に及ぼす影響について、in vitro・in vivoの両面から検討を進め、消化間コレステロール吸収を制御する新規因子の同定を目指す。医歯薬学平成27年度の収支状況報告書において、次年度使用額が存在するが、プロテオーム解析で見出された候補タンパク質を発現(またはノックダウン)するアデノウィルスの構築を平成27年度に行わず、平成28年度へと予定を変更したことによる。候補タンパク質の遺伝子クローニングおよび発現プラスミドの構築は順調に進んでいるため、今後は、これらタンパク質を発現(またはノックダウンする)アデノウィルスの作製・精製に移り、本年度予定されている各種マウスを用いたin vivo実験に使用する計画である。

平成27年度と同様、各種試薬や実験用動物購入費用などの消耗品費として主に使用することになるが、一部は得られた研究成果を学会において発表するための旅費、国際誌への論文投稿のための校閲費・印刷費・研究成果投稿料としての謝金・その他の費用として使用する予定である。
選択的組織採取と統合ゲノム解析による子宮腺筋症の病態解明と新規治療法の開発

子宮腺筋症は、子宮内膜組織が子宮平滑筋に浸潤して形成され、経困難症や不妊症の原因となる頻度の高い婦人科疾患であるが、その発症メカニズムは依然として不明である。本研究では子宮腺筋症とその発生母地とも考えられている正常子宮内膜に対し、レーザーマイクロダイセクションを用いた選択的組織採取を用いたサンプリングを行い、対象組織から核酸(DNA・RNA)の採取を行う。網羅的塩基配列の決定から子宮腺筋症発生に関わる遺伝子変異を同定し、また組織特異的な遺伝子発現を明らかにすることで子宮腺筋症の病態・発症メカニズムを明らかにする。
聴覚の動特性のモデル化に基づくディジタル補聴器の研究

話し言葉の聞き易さを最適に補聴する高機能の補聴器、ディジタル信号処理型補聴器の開発を目指して、聴覚系の時間に関連する基本的特性を調べた。1)長さや刺激間隔を変化させた母音の聴取実験を行ったところ、単及び二連母音の知覚には長さ、刺激間隔などの時間要因が重要であることが示された。さらに、2)破裂子音の有声・無声判断に及ぼす音響的特性(基本周波数、無音区間長、音圧、VOTなど)と聴覚特性(周波数選択性、時間分解能など)との関係を調べた結果、両者は複雑に絡み合うことが明かとなった。特に、難聴者が無声判断を行う場合、基本周波数が低ければ低いほど長い無音区間長を必要とすること、健聴者でも音圧が低いと類似の傾向を示すものの難聴者に比較してその効果は小さいことが分かった。このことは言語音の微細な判定にも聴覚の末梢特性がある程度関与することを示している。3)単音節明瞭度と3種類の発話速度での単語音声の正当率との関連を調べた。内耳性難聴者では、遅い発話では単音節明瞭度に比較して単語正当率が高いものの、速度が上昇するに従って両者は接近した。後迷路性難聴者では遅い発話でも単語正当率は単音節明瞭度と同程度であった。このことは、内耳性難聴者では速度が遅ければ時間波形上に分散している弁別的Cueを分析統合し得るのに対し、後迷路性難聴者ではそれが難しいことを示している。4)難聴者が聞き取り易い話し言葉の諸特性を調べた結果、音節長が長い、文法境界に間が入る、階層的な単文が多用される等の特徴が観測された。現在、5)上記の結果を説明し得る聴覚系の基本的特性と言語音知覚の関係に関する精密なモデルを構成し、6)聞き易さを最適に設定し得るディジタル補聴信号処理方式の開発を進めている。話し言葉の聞き易さを最適に補聴する高機能の補聴器、ディジタル信号処理型補聴器の開発を目指して、聴覚系の基本的特性(純音聴力、時間分解能、周波数分解能)と言語音知覚の関係を調べた。以下の成果が得られた。1)伝音・内耳・後迷路性聴力障害者を対象に、コンピュ-タシミュレ-ションによって、純音聴力損失と言語音知覚能力とがどう対応するかを調べた結果、内耳性聴力障害者の一部と、後迷路性聴覚障害者においては、純音聴力損失から予測される言語音知覚能力を大きく下回ることが明らかになった。2)そのような障害者が引き起こす言語音の聞き誤りの特徴を、異聴地図という手段で解析したところ、伝音性および内耳性聴覚障害者の一部においては、ほぼ純音聴力損失から予測されるような異聴を起こすのに対し、後迷路性聴覚障害者では必ずしもそうではなく、特に子音の誤りが多いことが分かった。3)長さや刺激間隔を変化させた母音の聴取実験を行ったところ、感音性難聴者では音響的特徴の抽出と音素情報の統合過程の機能低下や時間的遅れが著しいと考えると、説明し易い結果が得られた。4)破裂子音の有声・無声判断に及ぼす音響的特性(基本周波数、無音区間長、音圧、VOTなど)と聴覚特性(純音聴力、周波数選択性、時間分解能など)との関係を調べた結果、両者は複雑に絡み合うことが明かとなった。時に、聴覚障害者にとって、無音区間長、音圧、基本周波数などの音響特性が語音聴取能を大きく左右することが明かとなった。現在、5)上記の結果を説明し得る聴覚系の基本的特性(時間分解能、周波数分解能)と言語音知覚の関係に関する精密なモデルを構成し、さらに、6)モデルによってディジタル補聴器に適した信号処理方式の検討をシミュレ-ションによって明らかにし、7)聞き易さを最適に増大し得るディジタル補聴器に適した信号処理方式を開発する、ための研究を進めている。

4)難聴者が聞き取り易い話し言葉の諸特性を調べた結果、音節長が長い、文法境界に間が入る、階層的な単文が多用される等の特徴が観測された。現在、5)上記の結果を説明し得る聴覚系の基本的特性と言語音知覚の関係に関する精密なモデルを構成し、6)聞き易さを最適に設定し得るディジタル補聴信号処理方式の開発を進めている。
心筋における興奮の発生と伝導の分子機構とその制御

わが国の社会の急速な近代化に伴い突然死が増し、社会的関心事となっているが、突然死の主因は心臓死であり、その根底にあるものは心臓のポンプ機能を喪失させる重篤な不整脈であり、その予防と治療は緊急の課題である。しかし、この課題の解決は、心筋の異常興奮の発生と伝導のメカニズムを、サブセルラーレベルから、生体内心臓のレベルの各レベルにおいて適格に把握し、最も有効な予防、制御の発見によってのみ達成されよう。このためにはかかる研究を重点領域研究として精力的に推進すべきであるという考えのもとに、昭和64年度発足重点領域研究「心臓異常電気活動の分子機構とその制御に関する研究」を準備して申請した。しかし、採択されなかったので、本研究を通し、ヒアリングにおけるコメントを参考に計画を練り直し、平成2年度発足重点領域研究「心臓異常電気活動のサブセルラーメカニズムとその制御に関する研究」の申請を行った。新計画においては、主要研究項目として、1.心筋イオンチャンネル、2.心筋の異常興奮と伝導のメカニズム、3.心筋興奮・伝導の細胞内調節機構、4.心筋異常電気活動の人工制御、5.心筋興奮・伝導のシミュレーションの5本の柱を立てて、それぞれを計画研究とし、各々に約8名の研究者を配した。加えて、各計画研究間の調整、目的志向の研究の推進のため、総括班を設けたが、これには研究領域外から若干名の評価委員を求め、研究が自己満足に終ることのないように配慮した。心筋興奮の素過程であるイオンチャンネル作動のサブセルラーメカニズムの研究から、ヒトの心臓全体の異常電気活動のコンピュータシミュレーションの研究まで包含する研究は、この領域の基礎知識の発展のみならず、重篤な不整脈の予防・治療という社会的要請にも応えることができると考えられる。
脳機能におけるDNA相同組換え修復機構の関与について

DNA修復機構には、大別して主にDNA一本鎖上で行われる除去修復機構、DNA二重鎖切断修復機構があり、その経路には様々な種類がある。DNA二重鎖切断修復機構には非相同DNA二重鎖切断端結合(NHEJ)と相同組換え修復(HR)とがある。最近、哺乳類においてHR関連遺伝子を欠損したマウスにおいて、神経前駆体細胞の増殖低下・ニューロンにおけるアポトーシス亢進、胎生期における中枢神経系の形態形成異常が示されていることから、私は脳神経系の発達及び機能に相同組換え修復機構が重要であると推測し、特にHRの中心的役割を担うRad51遺伝子ファミリーであり、遺伝子欠損マウスで胎生期における中枢神経系の形態形成異常を示すXrcc2、及び相同組換えのfidelity(忠実度)を調節することが示唆されているXrcc3に注目した。これまでに、成体マウス脳でも相同組換え修復酵素分子群が発現しており、それらは胎生期と異なる発現パターンを示し、脳神経系の発達及び機能においてDNA相同組換え修復酵素分子群が重要であることが示された。DNA相同組換え修復分子群の脳神経系における役割の普遍性を検証するために、ゲノムの再編成によって高度に組織化する点で神経系と類似した免疫系において、B細胞の分化、増殖、免疫応答、アポトーシスにDNA相同組換え修復酵素分子群がどのように関わるか調べた。転写因子NF-κB活性化に必須であり,アポトーシスが亢進されるBCAPを欠損したB細胞にDNA相同組換え修復分子群の遺伝子導入を行い、転写因子NF-κBの活性化や細胞死のシグナル、抗体産生能にDNA相同組換え修復分子群の発現が影響を与えるか解析を行ったが、明らかな差は見られなかった。DNA二重鎖切断修復機構非相同DNA二重鎖切断端結合(NHEJ)と相同組換え修復(HR)とがある。2000年にDeansらによって報告された、最近、哺乳類においてHRの中心的役割を担うRad51遺伝子ファミリーの1つ、Xrcc2遺伝子を欠損したマウスにおいて、NHEJに異常を持つマウスで報告されていた、神経前駆体細胞の増殖低下・ニューロンにおけるアポトーシス亢進に加え、胎生期における中枢神経系の形態形成異常が示された。私は脳神経系の発達及び機能に相同組換え修復機構が重要であると推測し、まず、相同組換え修復関連分子群のmRNAが成体マウスの大脳皮質、海馬、小脳、脳幹で発現していることを、RT-PCR法で確認した。次に、Xrcc2、及び相同組換えのfidelity(忠実度)を調節することが示唆されているXrcc3に注目し、in situ hybridization法を用いて発現部位を調べた。その結果、Xrcc2、Xrcc3のmRNAはいずれも胎生期のマウス中枢神経系で、分裂・増殖が盛んな脳室帯周辺部のみでなく神経細胞に分化した細胞が豊富な部位にも発現しており、周産期まで持続していた。さらに成体マウス脳でのXrcc2、Xrcc3 mRNAの発現部位をin sutu hybridization法を用いて調べたところ、胎生期では見られなかった、両分子間の発現パターンの違いが観察された。また、Xrcc3コンディショナルターゲティングベクターを作製し、ES細胞への導入を行った。現在組換えの起こった細胞をサザンハイブリダイゼーションでスクリーニングしている。
イモリとマウス心臓の再生能力を規定するシグナルと心筋細胞の応答能の解明

本研究では、イモリとマウスの心臓において、その再生能力に違いが生じる機構を解明することを目標としている。これまでに心筋細胞の増殖に重要な役割を果たすcyclin D1遺伝子の発現を蛍光タンパク質により可視化できるマウスとイモリを用いて、その詳細な発現パターンを解析するとともに、イモリの心筋細胞にcyclin D1遺伝子を強制発現させて、その増殖に与える影響を調べるためのイモリ作製を行って来た。当該年度は、広島大学のグループとともに行って来たCRISPR/Cas9を介した遺伝子ノックアウト法の構築について、その実験手法を確立して、実際に肢の再生に関わることが知られているshh遺伝子の発現を操作できることを示すとともに、tbx5遺伝子が心臓の形成に不可欠であることを示して、原著論文として発表した(Dev. Biol. 447: 127-136)。イベリアトゲイモリの遺伝情報の整備については、再生中の心臓を始め様々な器官や発生段階の異なる胚から約30種類の試料から得たRNAのRNA sequencingを行い、そのデータを元にイベリアトゲイモリの持つタンパク質の98%以上をカバーすると予想される遺伝子のモデルを作成した。併せて、このデータベースが再生に関わる遺伝子の発現量の変化を知る上で有効であることを示し、DNA Research誌にて発表した(印刷中)。さらに複数の研究グループと共同で、イベリアトゲイモリのための研究リソースを提供するポータルサイト(iNewt: https://www.nibb.ac.jp/imori/main/)を作製してパプリックサーバー上で公開している。本研究ではこれまでに、心筋細胞の増殖を制御する上で重要な機能を持つcyclin D1遺伝子について、その発現を制御していることが示唆される領域を絞り込むことができた。これらの配列について、イモリとマウスそれぞれの制御配列の下流に、蛍光タンパク質を繋いだコンストラクトを導入したイモリとマウスを作製した。これらの動物を用いて、その発現パターンの解析も行ってきた。これにより、2つの種間におけるcyclin D1遺伝子の転写制御機構の比較解析を同時に進めることができた。上述の成果に加えて、イモリの心臓再生過程における遺伝子発現の変化を解析する上で不可欠なリファレンスとなるデータベースを作製して、その成果を国際科学誌に発表するとともに、コミュニティーリソースとしてウェブサイトで公開した。加えて、CRISPR/Cas9システムを介した遺伝子ノックアウト法についても国際科学雑誌に発表できた。これにより、データベースから得られた情報をもとに、関連が予想された遺伝子を破壊して機能を解析するまでの時間を大幅に短縮できるようになった。当該年度は、メカニカルストレスが心臓再生に与える影響の検討を目指した。このために、マウスなどで行われている心臓の圧負荷モデルをイモリ用に改変して、イモリ心臓の動脈幹に対してクリッピングを行う方法を考案した。このイモリの心臓に起こる変化を継時的に解析した結果、予想に反して、イモリでは網羅的な遺伝子の発現パターンの変化で評価する必要があることがわかり、計画を変更することとなった。計画の変更に伴う研究期間の延長が必要となったことから、進捗状況はやや遅れている判断したが、最終年度の研究をより着実に推進することで遅れを取り戻す。今年度は、残りの研究題目であるメカニカルストレスが心臓再生に与える影響の検討を重点的に行う。これまでの研究により、イモリ心臓の動脈幹に、シリコン製のチューブを加工して作製したクリップをはめることで、心室に高い血圧を負荷するモデルを確立することができた。当初は、マウスの先行研究に倣い、組織学的な解析を中心に行う計画であったが、イモリでは組織レベルの変化は期待したほどには大きくなかった。そこで、これら圧負荷された心臓における遺伝子発現の変化を網羅的、かつ継時的に解析することで、その影響を明らかにしていく。その際、昨年度までに構築したイベリアトゲイモリ遺伝子のデータベースを利用したり、心室切除後の再生シリーズ試料との比較を行うことで、研究を効率的に推進する。また、研究の最終年度であることから、これまでに得ることができた研究成果の取りまとめを重点的に行う。これらの成果については、国際科学雑誌上で発表することを目指すとともに、それらを広く発信するために、積極的な学会発表を行う。このように、延長された研究計画の着実な実施に務める方針である。本研究は、イモリとマウスの再生能の違いが生じる機構を解明する目的で、イモリを用いた再生開始シグナルと、それに応答するcyclin D1の転写制御領域を同定して、同様の領域がマウスに存在するか、存在するならなぜ応答できないかを調べる。さらにイモリで同定したシグナルが、損傷後のマウス心臓でどこまで機能しているかを示すことを目指す。心臓再生を開始させるシグナル機構を解明する上では、そのシグナルに応答するcyclin D1の転写制御領域の同定をより早く進めることが重要であると考えられた。そのため本年度は、マウスとイモリそれぞれのゲノム配列からクローニングした転写制御領域の候補配列(約10 kb)を、異なる長さに区切った上でレポーター遺伝子につないだコンストラクトをイモリに導入する実験を行い、転写制御に関わる領域を絞ることに成功した。また、イモリとマウスの種間におけるcyclin D1プロモーターの機能比較を進める為に、マウスとイモリそれぞれから単離した転写制御領域の下流にレポーター遺伝子をつないだコンストラクトを持つトランスジェニックマウスの作製を行った。加えて、同じcyclin Dグループに属するcyclin D3遺伝子に付いても解析を行うため、イモリのcyclin D3上流配列の単離を行った。

その結果、翻訳開始領域より上流数キロをイモリのゲノムよりクローニングすることができた。本研究の成果を基に学会発表を5件(全て招待演者または指定演者)行った。加えて、高校生を対象としたアウトリーチ活動を2件、市民公開講座を1件行い、研究の成果を広く紹介した。本研究を開始するにあたり、計画全体をより着実に推進する上においては、イモリの心臓再生開始シグナルに応答するcyclin D1の転写制御領域の同定を優先するべきであると判断されたため、本年度はそれに関連する実験を重点的に行った。その結果、これまでに予備的な結果として得られていたcyclin D1上流側の約10 kbの配列のうち、実際の制御機能に重要であることが示唆される領域を絞り込むことができた。この際、イモリとマウス、それぞれの転写制御候補配列を、イモリ個体とマウス個体双方に導入する実験を進めることができたため、2つの種間におけるcyclin D遺伝子の転写制御機構の比較も同時に進めることができた。その結果、転写制御に関わる重要な領域がどのように保存されているのかに付いても知見を得ることができた。加えて、新たにイモリの心臓再生に対する重要性が示唆されたcyclin D3遺伝子についても、その転写制御機構を解析するために必要なゲノム配列のクローニングを進めた結果、来年度以降に解析する準備ができた。イモリの心臓再生を開始させるシグナルの同定に向けた解析は、次年度以降に重点的に行うこととなった。しかしながら、計画全体の進捗状況としては、概ね順調に進んでいると判断される。本研究は、イモリとマウスの心臓において、その再生能力に違いが生じる機構を解明することを目指すものである。当該年度は、昨年度までに作製してきた、心筋細胞の増殖に重要な役割を果たすcyclin D1遺伝子の発現を蛍光タンパク質により可視化できるマウスとイモリを用いて、その詳細な発現パターンを解析することができた。さらに、イモリの心筋細胞にcyclin D1遺伝子を強制発現させて、その増殖に与える影響を調べるためのイモリについて、より効率的な作製方法を確立することができた。これらに加えて、研究代表者自らが確立した、新規モデル動物であるイベリアトゲイモリを用いた研究を推進するために、複数のグループとの共同研究により、遺伝情報の整備を行い、イベリアトゲイモリの持つタンパク質の98%以上をカバーすると考えられるデータベースを構築した(論文投稿準備中)。このデータベースは、イモリ心臓の再生過程における遺伝子発現の変化を解析するために不可欠なリファレンスとなる。さらに、再生に関わることが期待される遺伝子を操作するため、広島大学のグループとともに、CRISPR/Cas9を介した遺伝子ノックアウト法の構築を行った(論文投稿中)。さらに複数の研究グループと共同で、イベリアトゲイモリのための研究リソースを提供するポータルサイト(Webサイト)の試運用版を作成することができた。このWebサイトについては、関係する論文の受理と同時に公開する計画である。
ガングリオシドの合成経路、発現の改変による神経細胞の分化誘導

マウス神経芽腫瘍細胞Neuro2a細胞にGD3合成酵素遺伝子を導入すると細胞表面にそれまで発現していなかった糖鎖(GD3,GQ1b)が発現するように変化し、それに伴って細胞の形態も変化することを示してきた。これら糖鎖の発現と細胞の形態の変化との関連を明らかにするために、本研究においては糖転移酵素遺伝子発現および糖鎖の発現の制御可能な系のもとで糖鎖の変化と細胞の形態変化を経時的にとらえることを目的とした。まず遺伝子発現の制御可能な系の確立した。その結果としてテトラサイクリンを用いる系がすぐれていることが判明した。この系ではテトラサイクリン存在下では遺伝子の発現が抑制されているが、テトラサイクリンを培養液中から取り除くことにより遺伝子の転写が開始される。この系のもとでをNeuro2a細胞中に制御可能な状態でGD3合成酵素遺伝子を導入し遺伝子を発現可能な状態にすると、GD3合成酵素遺伝子の発現そのものは4時間で最大になりその後この発現レベルを維持した。細胞の形態変化は遺伝子の発現後10日後より顕著に始まり20日目まで増加した。そこでGD3合成酵素遺伝子を発現可能な状態にした後4時間、3日、10日、20日目の細胞よりmRNAを調製しディファレンシアルディスプレー法で発現が変化する遺伝子を検索した。その結果少なくとも数種類の遺伝子の発現量がGD3合成酵素遺伝子の発現並びに糖鎖の発現に応じて経時的に増加することを見いだした。現在これらの遺伝子について解析を進めている。さらに細胞表質層糖鎖の変化が神経細胞の形態や挙動にどの様に関わっているかを調べるためにNeuro2a細胞にフコース転移酵素遺伝子を導入した。この遺伝子導入細胞では主要なガングリオシドがフコシルGM1に変化した。親株が無血清状態でアクソン様の長い神経突起を伸長するのに対し、この細胞は無血清状態でデンドライト様の短い神経突起を多数伸長するようになっていた。この現象は可逆的であり、細胞表層からフコシルGM1を除くことにより親株と同様のアクソン様の突起を伸長するようになった。これらの結果は細胞表層のガングリオシドが神経細胞の分化や機能に重要な役割を演じていることを強く示唆している。また糖鎖の機能を明らかにする上で糖転移酵素の細胞への導入、特に制御可能な状態での導入が非常に優れた方法であることを示している。細胞表面の糖鎖は細胞分化に応じて劇的に変化することが知られている。この過程での糖鎖の機能を明らかにすることを目的とし、糖転移酵素特にシアル酸転移酵素に注目し研究を行っている。本研究では特定の糖転移酵素遺伝子を細胞に強制発現させ細胞内の糖鎖合成経路を改変し、その結果として、細胞表面の糖鎖の発現パターンが変化した場合、細胞がどのように応答するかを明らかにすることを目的とした。昨年b-シリーズガングリオシド合成に必須なGD3合成酵素をクローニングした。本酵素遺伝子を神経芽腫瘍細胞Neuro2aに導入したところ、その結果としてそれまでには発現していなかったGD3およびb-シリーズガングリオシドが細胞に新たに発現するようになった。このような細胞では神経突起の伸長が著しく増強され、最終的に腫瘍細胞からより正常細胞に近い性質を獲得する方向へ分化することを見いだした。そこで同様の現像が他の糖転移酵素遺伝子を導入した場合でも観察されるかどうかを検討した。その結果α1,2-フコース転移酵素遺伝子をNeuro2a細胞に導入した場合アクソンの著しい伸長阻害を見いだした。このときガングリオシドは親株には存在しないフコシルGM1が主成分となっていた。一方、フコシルGM1を合成しないα1,2-フコース転移酵素遺伝子を細胞に導入してもアクソンの伸長阻害は見られなかった。これらの結果は細胞表面の糖鎖の発現が神経細胞の突起伸長や分化といった現象に直接関連していることを物語っている。一方、神経系に特異的に発現しているシアル酸転移酵素を更に3種クローニングした。3種ともα2,8-シアル酸転移酵素であることが明らかになった。またこのうち2つは神経細胞接着分子(N-CAM)のポリシアル酸合成に関与するポリシアル酸合成酵素であることを明らかにした。

その結果少なくとも数種類の遺伝子の発現量がGD3合成酵素遺伝子の発現並びに糖鎖の発現に応じて経時的に増加することを見いだした。現在これらの遺伝子について解析を進めている。さらに細胞表質層糖鎖の変化が神経細胞の形態や挙動にどの様に関わっているかを調べるためにNeuro2a細胞にフコース転移酵素遺伝子を導入した。この遺伝子導入細胞では主要なガングリオシドがフコシルGM1に変化した。親株が無血清状態でアクソン様の長い神経突起を伸長するのに対し、この細胞は無血清状態でデンドライト様の短い神経突起を多数伸長するようになっていた。この現象は可逆的であり、細胞表層からフコシルGM1を除くことにより親株と同様のアクソン様の突起を伸長するようになった。これらの結果は細胞表層のガングリオシドが神経細胞の分化や機能に重要な役割を演じていることを強く示唆している。また糖鎖の機能を明らかにする上で糖転移酵素の細胞への導入、特に制御可能な状態での導入が非常に優れた方法であることを示している。マウス神経芽腫瘍細胞Neuro2a細胞にGD3合成酵素遺伝子を導入すると細胞表面にそれまで発現していなかった糖鎖(GD3,GQ1b)が発現するように変化し、それに伴って細胞の形態も変化することを示してきた。これら糖鎖の発現と細胞の形態の変化との関連を明らかにするために、本研究においては糖転移酵素遺伝子発現および糖鎖の発現の制御可能な系のもとで糖鎖の変化と細胞の形態変化を経時的にとらえることを目的とした。まず遺伝子発現の制御可能な系の確立した。その結果としてテトラサイクリンを用いる系がすぐれていることが判明した。この系ではテトラサイクリン存在下では遺伝子の発現が抑制されているが、テトラサイクリンを培養液中から取り除くことにより遺伝子の転写が開始される。この系のもとでをNeuro2a細胞中に制御可能な状態でGD3合成酵素遺伝子を導入し遺伝子を発現可能な状態にすると、GD3合成酵素遺伝子の発現そのものは4時間で最大になりその後この発現レベルを維持する。一方GD3の発現は遺伝子の発現より遅れ12時間後より細胞表面に出現し、3日目に最大になりその後減少するという一過性の発現パターンを示した。またGQ1bの発現はGD3よりさらに遅れて発現し始め、10日後に最大に達しその後20日目まで発現量を維持した。この結果は一つの糖転移酵素遺伝子の発現で異なる2つの糖鎖が異なる様式で発現をすることを示しており、糖鎖の発現が糖転移酵素遺伝子の発現にのみ依存しているわけではないことを示していて興味深い。細胞の形態変化は遺伝子の発現後10日後より顕著に始まり20日目まで増加した。そこでGD3合成酵素遺伝子を発現可能な状態にした後4時間、3日、10日、20日目の細胞よりmRNAを調製しディファレンシアルディスプレー法で発現が変化する遺伝子を検索した。
遺伝子未同定脊髄小脳変性症のエクソーム解析

遺伝子未同定の常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症(ARSCA)2家系および、常染色体優性遺伝性脊髄小脳変性症(ADSCA)2家系を対象としてエクソーム解析で新規責任遺伝子の同定を試みた。ARSCAの1家系については遺伝子Xのホモ接合性変異が原因であると同定した。先行報告がなされたため、他機関との共同研究で遺伝子X産物の酵素活性の測定を行い、酵素活性低下が発症に重要であることを確認し、現在報告準備中である。さらに本解析を通じて新たに収集したARSCA8家系のエクソーム解析を行い、本邦で報告のなかったSPG7変異例、SCARB2変異例を同定し報告した。既知遺伝子未同定の常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症(ARSCA)2家系(家系Aおよび家系Bとする)および、常染色体優性遺伝性脊髄小脳変性症(ADSCA)2家系(家系Cおよび家系Dとする)を対象として新規責任遺伝子の同定を試みた。前年度までに全ての対象家系について次世代シーケンサーによるエクソーム解析を終了しており、家系Aについては遺伝子X変異を責任遺伝子候補として同定していた。しかし他施設から遺伝子X変異が類縁疾患である常染色体劣性遺伝性痙性対麻痺(ARHSP)の原因であるとの報告が平成24年12月に論文掲載されたため、家系Aについては表現型の多様性のメカニズムを究明すべく、遺伝子Xの酵素活性の測定を他機関との共同研究で行い、論文を作成している。家系B、C、Dについては次世代シーケンサーによるエクソーム解析で認められた日本人正常コントロールにおける頻度の低い変異について、他の例で同じ遺伝子に認められないかどうか、SCA患者DNA160例のスクリーニングを、MiSeqを用いて行った。しかし、現時点では遺伝子同定に至っていない。本解析を通じて新たに収集したARSCA8家系についてもエクソーム解析を追加したが、そのうち2家系は本邦でまったく報告のなかったSPG7変異例、SCARB2変異例であることを同定し、それぞれ英文論文として報告した。また1家系においては既知の疾患関連遺伝子ではない遺伝子のホモ接合性ナンセンス変異を同定しており、今後解析を進めていく予定である。対象とした常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症(ARSCA)2家系(家系Aおよび家系Bとする)のホモ接合性マッピングおよび、常染色体優性遺伝性脊髄小脳変性症(ADSCA)2家系(家系Cおよび家系Dとする)のうち家系Cの連鎖解析についてはすでに終了していた。家系Aについては次世代シーケンサーを用いたエクソーム解析まで終了し、その結果、10種類の疾患責任遺伝子候補が同定されたがそのうち変異効果予測ソフトで病的変異と判断されたのは遺伝子Xのミスセンス変異1種類であることを確認していた。平成24年度予定していたのは下記の項目であった。1.ARSCA1家系で認められた新規ARSCA責任遺伝子候補である遺伝子Xの変異について、孤発例、他の家族例SCAで認められないかどうか、現在所有しているSCA患者DNA160例のスクリーニングを行ったが、確実に病的といえる遺伝子Xの変異をホモ接合性変異体、または複合ヘテロ変異体としてもつ例を発見できなかった。しかしARSCA家系を収集、解析していいく過程で、本邦でまったく報告のなかったSPG7変異例、SCARB2変異例を発見し、それぞれ英文論文を作成した。家系Aについては複数家系で遺伝子Xの変異が確認できれば平成24年度内に論文報告を行うことを目指していたが、他施設から遺伝子X変異が類縁疾患である常染色体劣性遺伝性痙性対麻痺(ARHSP)の原因であるとの報告が平成24年12月に論文掲載されたため、家系Aについてはセカンドリポートとして論文執筆中となっている。2.ARSCA1家系およびADSCA2家系のエクソーム解析家系Bの罹患者2名、家系C、Dの罹患者4名のエクソーム解析を行う予定であり、順調に解析を終了した。現在本学遺伝学教室研究室で蓄積した正常人、他疾患のエクソームデータから、頻度を確認し病的と思われる変異をピックアップしているところである。ARSCA1家系(家系A)で認められた新規ARSCA責任遺伝子候補である遺伝子Xの変異について、家系Aについては複数家系で遺伝子Xの変異が確認できれば平成24年度内に論文報告を行うことを目指していたが、他施設から遺伝子X変異が類縁疾患である常染色体劣性遺伝性痙性対麻痺(ARHSP)の原因であるとの報告が平成24年12月に論文掲載された。そのため、家系Aについては臨床像を主体とする報告に切り替える必要があり、臨床情報の再収集を行ったため報告作成まで時間を要したが現在は論文投稿直前となっている。ARSCA家系を収集、解析していいく過程で、本邦でまったく報告のなかったSPG7変異例、SCARB

2変異例を発見し、それぞれ英文論文を作成することができた点は本邦における新たな疾患の発掘という意味において貢献できたと考えられる。ARSCA1家系およびADSCA2家系のエクソーム解析家系Bの罹患者2名、家系C、Dの罹患者4名のエクソーム解析を行う予定であり、順調に解析を終了した。平成25年度は下記のように研究を進めていく。1.ARSCA2家系のうち家系Aで認められた新規ARSCA責任遺伝子候補である遺伝子Xの変異について他施設から遺伝子X変異が類縁疾患であるARHSPの原因であるとの報告が平成24年12月に論文掲載されたため、家系Aの責任変異であると確定したと考え臨床像について論文を執筆し、発表する。家系Bについては次世代シーケンサーによるエクソーム解析で認められた変異について他の家族例で認められないかどうか、現在所有しているSCA患者DNA160例のスクリーニングを行う。また、さらに新たに収集したARSCA3家系についてもエクソーム解析を追加し、各家系間で共通する遺伝子異常を検索していく予定である。2.ADSCA家系C、Dについては、エクソーム解析は終了している。検出された変異についてエクソームデータの解析を終え、同定した疾患責任遺伝子候補に対し、ARSCA家系の場合と同様に正常コントロール、孤発例、他の家族例スクリーニングを行い、遺伝学的に責任遺伝子を確定する。3.上記家系において新規遺伝子変異を同定したらその遺伝子の有する機能に特化した機能解析を行う。全てのデータが出そろい次第論文を作成し成果を公表する。上述のように家系Aについて研究方針を変更したため家系Aで見つかった遺伝子Xの機能解析を行う必要がなくなったこと、および米国神経科学会で発表を行うことができなかったことから繰越金が生じた。繰越金については新たに追加で収集したARSCA家系のエクソンキャプチャー試薬の購入に充当するよていである。次世代シーケンサー解析により多数の塩基変化が同定されるが、その検証には従来型のサンガーシーケンスが必須であるため、その経費としてPCR試薬、プライマー、シーケンス試薬購入する予定である。その他、発表論文、海外学会(アメリカ神経科学会)での発表費用として使用する予定である。
1950-60年代における文化産業としての文学の発展過程に関する総合的研究

「文化資本」として<作家>や<文学作品>をとらえ直し、1950-60年における文学市場の問題について、調査を行い、その実態を明らかにした。それは文学を取り囲む状況のなかで発信された批評の言説がどのように編成され、どのような現象を生じさせたのかについて考察するのみならず、文学者の生活のありようを指標として戦後日本社会や文化の変化のある局面を明らかにすることとなった。高度経済成長の中において文学が消費の対象になり、これまでにない規模で発展する中で「文学」や「文学者」果たした役割について分析・検討を行った。平成21年度は首都圏のみならず、地方の文化事業(作家講演・文学碑建立・文学館建設・文学散歩のコース設定・土産物などの関連商品)などについての調査を行った。具体的には民間(スルガ銀行)の出資により設立した井上靖文学館(沼津)、市民運動によって設立した火野葦平資料館(北九州)、行政(県ならびに市)によって設立した石川県立文学館、徳田秋声文学館、泉鏡花文学館、室生犀星文学館(金沢)について建設計画から開館に至るまでの資料についての調査を行った。その際、地方新聞において文学的・文化的事項がどのように記述されていたのか関連記事を集積することによって、地方における文学館建設の異議についてある程度明らかにすることができた。また徳田秋声文学館・湯涌夢二館の研究員・学芸員を交えての研究会を行い、観光産業における文学事業の果たす役割について歴史的な経緯と現場の抱える問題点などについて理解を深めた。地方で推進された産業振興策において観光資源として文学や文学者がどのように発見され、また貢献してきたのか、交通網の整備や人々の余暇の過ごし方の変質とどのように関わっているのか、また教育・アカデミズムの場においてどのように扱われてきたのか、今後継続して調査・考察を行いたい。「文学館」と介して「文学」を同時代のイデオロギーに縛られない<情報化>という問題系から<文学場>を捉えかえすための調査を多岐にわたって行っている。そのように前提することによって、従来の文学史観、政治史観からも自由な第三の批評的立場を獲得し、当時の文学状況の全体像を漸近的に復元することができると考える。また高度経済成長という波の中で文学を「文学館」として結実させようとする、行政の目論見とともに文学主義というものについて戦前・戦後の言説から実証的に追うことによって既成の文学史に囚われない文学環境について再解読することが可能となっている。文学が経済以外に政治・思想・文化など多ジャンルにわたる各種評論と同列的に扱われ、それを裏付けるような作家や評論家の創作の充実が達成されることによって<文化資源化>され、文学者は文化人となり文学は文学館へ収められるというようなキャノン化が行われていることが明からかとなりつつある。また現在は文学館の設立の過程について地方行政との関係性に重点を絞り調査を行い、資料を整理している。文学ジャーナリズムの内閉的な参照・往還の運動というものを高度経済成長期の中で抽出し、ジャーナリズム環境の変化を知る格好のサンプルとしての文学の役割についても継続的に考察し分析したいと思っている。文学館の基礎的な資料を調査するばかりではなく、地方において作家や文学作品といった「文化資本」がどのように発見され、運用されているのか実態調査を行った。戦後日本では、全国総合開発計画で打ち出された「均衡ある国土の発展」という理念に象徴されるように、様々な政策分野において中央集権型の計画策定にもとづく経済発展に向けた産業政策が行われてきたが、開発を受容する地域の側には固有の歴史・風土・文化・民俗性があり、画一的な開発政策と地域固有の事情の狭間で、さまざまな問題課題が生じてきたといえる。その中で「文学」・「文学者」がどのような役割をはたしてきたのか。本研究では、高度成長期以降の産業政策や国土開発をめぐる状況の変化を前提としつつ、地域における「文学」・「文学者」が産業の振興にどのような役割を果たしたのか、また影響について、さまざまな専門領域から総合的に検討を行なった。その一つの象徴として「文学館」を調査し、文化資産としての「作家」ならびに「作品」が再発見された社会的な背景(事情)について調査・分析をおこなった。「作家研究」といった研究方法をとる近代文学研究や地方大学の文学部ポストとの関係性もそこからあぶり出すことができた。「文学」と「経済」との関係について明確化しようとすることが本研究の独創性であり、地方の財源と国家の文化行政への補助金額の推移などについても調査を行った。