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日本近世〜近代における偽文書と古文書鑑定技術の年次的変遷の研究

平成14年度は、前年度に引き続き、偽文書のサンプル収集のため、以下のような調査・研究をおこなった。(1)まず、科研費の旅費を活用して、全国各地において史料調査を実施し、基礎資料となる古文書を採訪した。調査を実施したのは、以下の機関・所蔵先である。(1)東京都文京区東京大学史料編纂所影写本調査、(2)東京都品川区国文学研究資料館史料館、(3)長野県木曽郡大桑村定勝寺古文書整理、(4)山梨県南都留郡河口湖町野沢家・中村家、(5)長野県上伊那郡辰野町小野神社。(2)調査方法は、史料保存機関では、古文書の閲覧と必要史料の複写を依頼し、データ収集に努めた。個人の所蔵者宅では、古文書の現状記録作業と目録編成、必要史料のマイクロ撮影、デジタル情報の収集作業をおこなった。(3)つぎに古文書の画像情報を、科研費で購入したデジタルカメラにデジタル化し、パーソナルコンピュータに入力した。こうして構築したデータベースを基礎に、古文書の真偽鑑定を試みた。主にデーベース化の作業をおこなったのは、戦国大名の印鑑および筆跡に関する情報、及び臨済宗妙心寺派の聖教類の撮影である。特に聖教では、新発見の史料を数多く発見することができた。(4)上記の成果の一部については、平成14年9月28・29日に関西大学千里キャンパスにおいて開催された第36回歴史科学協議会大会で、大会テーマ「社会における由緒と正統性」のもと、「近世の村と由緒」と題して報告することができた。平成15年は、年度当初に計画した実施計画に基づき、以下のような調査・研究をおこなった。(1)本年度は、過去2年間の研究成果を踏まえて、具体的な偽文書作成のパターンを究明し、鑑定技術の年次的な変遷について検討を進めた。そして長野県木曽郡大桑村定勝寺文書の整理作業を継続しておこなった。まず科研費の旅費を活用して、全国各地において偽文書に関する補充調査を実施し、基礎資料となる古文書を採訪した。調査を実施したのは、以下の機関である。(1)山梨県甲府市山梨県立図書館郷土資料室「甲州文庫」,(2)東京都品川区内藤家文書,(3)新潟県小千谷市魚沼神社文書,(4)長野県木曽郡大桑村定勝寺古文書整理,(5)東京都千代田区国立公文書館内閣文庫,(6)東京都文京区東京大学史料編纂所。(2)調査方法は、大学図書館や博物館、史料保存機関では、古文書の閲覧と必要史料の複写を依頼し、データ収集に努めた。つぎに古文書の画像情報を、科研費で購入したデジタルカメラにデジタル化し、パーソナルコンピュータに入力した。主にデータベース化の作業をおこなったのは、戦国大名武田氏や徳川氏の印判状の、印鑑および筆跡に関する情報である。鑑定の結果、いわゆる偽文書が作成される経緯・目的・作成時期について様々な情報を得ることができた。(3)以上の結果、定勝寺については、すべての古文書の目録編成作業を終了した。あとは目録データのデータベース入力だけである。
男子大学生在学時のライフスタイルと動脈硬化性疾患の危険因子の変化に関する疫学研究

わが国では動脈硬化性疾患の発症に関して、若年期からの食生活の西欧化による動物性脂質の摂取増加、あるいは運動不足などによる肥満など、いわゆるライフスタイルの悪化の影響が懸念されており、将来の動脈硬化性疾患の予備軍である若年者を対象とした対策が急務となっている。本研究では男子大学生1年生と4年生を対象にして動脈硬化性疾患の危険因子、およびこれらの危険因子に影響を与えると考えられる食習慣を中心としたライフスタイルの調査を行った。平成8年度および9年度に1年生男子174名および4年生男子112名を対象として、健康診断時に血圧、身長、体重、体脂肪率を測定した。同時に採血を行い、動脈硬化性疾患の危険因子である血清総コレステロール(T-chol)、HDL-コレステロール(HDL-chol)、中性脂肪(TG)脂肪酸および血漿フィブリノーゲン(FIB)の測定、および食習慣を中心としたライフスタイルについて、個別聞き取り調査を行った。その結果、男子大学生は朝食を抜くあるいは夜食を摂る者が多く、脂質の摂取源としては魚介類が少なく、肉類、乳製品、油脂類が多かった。また4年生は1年生に比べて、魚介類、乳製品の摂取が少なく、油脂類の摂取が多かった。飲酒率や喫煙率は4年生で高かったが、身体特性については1年生と4年生の間では大きな相違を認めなかった。通学生と寮生の比較では、寮生で魚介類の摂取が極端に少なかった。血液検査については、4年生は1年生と比較して、TGは有意に高値を、T-cholは高い傾向を示した。脂肪酸構成については4年生は1年生と比較して飽和脂肪酸および一価不飽和脂肪酸の構成割合(%)が有意に高く、多価不飽和脂肪酸、特にn6系不飽和脂肪酸が有意に低かった。男子学生全体についての解析では魚介類摂取頻度とn3系不飽和脂肪酸割合とは正の相関を示し、肉類摂取頻度とn3系不飽和脂肪酸割合は負の相関を、n6系不飽和脂肪酸とは正の相関を示した。男子学生においては魚介類の摂取が少なく、肉類・油脂類の摂取増加を認め、この傾向は4年生で顕著であった。これらの食習慣の特性はまたいくつかの動脈硬化性疾患危険因子と関連し、男子大学生におけるライフスタイル改善の必要性が示された。成人病予防のためには若年時からの適切な食習慣の確立が重要である。今年度は、東京商船大学男子学生のうち新入生(96名)および4年生(60名)を対象にして、動脈硬化性疾患の危険因子である血圧、肥満度、血清総コレステロール(T-cho)、HDL-cho、中性脂肪、脂肪酸構成、血漿フィブリノーゲンの測定と動脈硬化危険因子に影響を与えると考えられる喫煙、飲酒を含めた食習慣、運動習慣等ライフスタイルの聞き取り調査を実施した。ライフスタイル調査の結果では、男子大学生、特に4年生は食事の不規則な者が多く、朝食を抜く者(78%)あるいは夜9時以降に食事をするもの(93%)が多かった。また4年生は1年生に比べて、魚介類の摂取が少なく、卵や乳製品の摂取も少なかった。

これに対して生理検査および血液検査結果は、(1年vs4年):血圧(116/66mmHg vs 114/65mmHg),肥満度:%fat(20.1% vs 21.2%),T-cho(167.8mg/dl vs 172.3mg/dl),HDL-cho(58.4mg/dl vs 57.1mg/dl),Fiblinogen(225.2mg/dl vs 233.0mg/dl),n-3系不飽和脂肪酸の構成割合(6.5% vs 7.0%)には有意差を認めなかったが、n-6系不飽和脂肪酸の構成割合(41.7% vs 39.5%:p<0.01)n3/n6比(0.16 vs 0.18:p<0.01)で1年生と4年生の間に差を認めた。男子大学生においては1年生と4年生のライフスタイルに大きな差を認め、また脂肪酸構成の一部にも相違を認めた。来年度はさらに例数を増やしてライフスタイルと動脈硬化性疾患危険因子の相互関係を検討する予定である。男子大学生1年生と4年生を対象にして動脈硬化性疾患の危険因子、およびこれらの危険因子に影響を与えると考えられる食習慣を中心としたライフスタイルの調査を行った。平成8年度(1年生87名および4年生52名)、平成9年度(1年生63名および4年生61名)の健康診断時に血圧、身長、体重、体脂肪率を測定した。同時に採血を行い、動脈硬化性疾患の危険因子である血清総コレステロール(T-chol)、HDL-コレステロール(HDL-chol)、中性脂肪(TG)、脂肪酸および血漿フィブリノーゲン(FIB)の測定を行った。さらに食習慣について、個別に聞き取り調査を行った。平成8年度の男子1年生87名(平均年齢19.4歳)および4年生52名(平均年齢22.4歳)を対象とした解析の結果を以下に示す。男子大学生は朝食を抜くあるいは夜食を摂る者が多く、脂質の摂取源として魚介類が少なく、肉類、乳製品、油脂類が多かった。また4年生は1年生に比べて、魚介類、乳製品の摂取が少なく、油脂類の摂取が多かった。飲酒率や喫煙率は4年生で高かった。身体特性については1年生と4年生の間で大きな相違を認めなかった。血液検査については、男子大学生は成人男子と比べてT-cholは低く、脂肪酸の構成はn6系不飽和脂肪酸の割合が高値、n3系不飽和脂肪酸の割合が低値であった。また4年生は1年生と比較して、TG(mg/dl)は有意に高値(112.8vs75.8)を、T-chol(mg/dl)(171.8vs166.1)、FIB(mg/dl)(230.1vs220.1)はやや高値であった。脂肪酸構成については4年生は1年生と比較して一価不飽和脂肪酸の構成割合(%)が有意に高く(26.4vs24.4)、多価不飽和脂肪酸(46.4vs48.1)、n-6系不飽和脂肪酸(39.5vs41.6)、n6/n3比(6.23vs6.81))が低かった。男子学生においては食習慣が成人と大きく異なり、また1年生と4年生の間にも食習慣、および血中脂質、脂肪酸構成に相違を認めた。
リディアン・クロマティック・コンセプトと武満徹についての研究

作曲家武満徹はリディアン・クロマティック・コンセプト(以下LCC)という主にジャズで用いられる理論から大きな影響を受けたと述べているが、実際この理論が彼の作品においていかに取り入れられたかについては不明な点が多い。従って本研究の目的は、LCCが本来ジャズでどのような形で使用された理論であるかを解明し、そこから武満のLCCの自作への取り入れ方の特徴を明らかにすることである。本研究に取り組むことにより、武満の作曲技法がより明らかになること、またLCCの理解を深め、これがジャズ以外のジャンルにおいても有効な理論になりうるかを解明することなどが期待される。
放射線大腸炎に於ける接着分子の発現

放射線大腸炎は、骨盤内の悪性腫瘍に対し放射線治療を行った場合に生ずる副作用で、重篤な場合には大腸狭窄を生じ手術を必要とする症例もある。放射線によるという原因と放射線を照射した部位に大腸炎を生ずるという因果関係は明らかであるが、その間の病態については必ずしも明らかではない。近年の研究の進歩により、炎症には血管内皮接着分子が重要な役割を果たしていることが判明している。そこで、子宮頚癌で放射線照射を受けた10症例に対し大腸内視鏡を施行し、生検材料を得た。凍結切片を作製しABC法を用い免疫染色を施行した。用いた抗体は、Intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1),Vascularcell adhesion molecule-1(VCAM-1),Endothelialadhesion molecule-1(ELAM-1),Very late activation antigen-4(VLA-4)に対するモノクローナル抗体である。コントロール抗体としてヒト絨毛性ゴナドトロピンに対する抗体を用いた。正常の大腸粘膜には、ICAM-1の軽度の発現が認められたが、他のものは陰性であった。放射線照射を受けた大腸粘膜では、内視鏡所見では10例中9例に発赤が認められ軽度の大腸炎を生じていた。VCAM-1,ELAM-1,VLA-4の発現は認められなかった。ICAM-1の発現量を見るため抗体濃度を変化させたところ10例中4例に大腸炎部位にICAM-1の発現が亢進していた。今回の検討法は比較的感度の低い方法であることを考慮に入れると放射線照射を受けた大腸粘膜では、他の血管内接着因子の発現はないが、ICAM-1の発現は亢進していると考えられた。VCAM-1,ELAM-1は炎症の際に発現する血管内皮接着分子と考えられており、ICAM-1は炎症および免疫反応の時に発現すると考えられ、放射線大腸炎の発現機序に免疫反応の関与が考えられる。放射線大腸炎の病因を解明するため放射線照射を受けた症例に於ける血管内皮に対する接着分子の発現を検討した。方法は、子宮頚癌で骨盤内に放射照射を受けた症例に大腸内視鏡検査を行いその粘膜所見を参考にし、直腸粘膜及び下行結腸もしくは横行結腸の生検を行った。生検組織を直ちに凍結し、凍結切片を作成した。血管内皮に存在する接着分子に対する単クローン抗体(ELAM-1,VCAM-1,ICAM-1)およびコントロール抗体(HCGに対する抗体)を用いて免疫組織染色を行った。現在までに行った症例は、照射終了後6カ月以内の症例であるが、ELAM-1,VCAM-1の発現は認められなかった。ICAM-1は正常大腸粘膜にもある程度発現されていたが、照射後の粘膜に発現が増加していた。この結果より、現在我々は、ICAM-1の放射線大腸炎への関与を考えている。すなわち、ELAM-1やVCAM-1は炎症の極期に発現され、白血球やマクロファージの炎症巣へのリクルートに関与するものと言われており、ICAM-1は炎症と免疫(リンパ球)に関与するものと言われている。ICAM-1のみが、初期の変化(臨床的潜伏期)に関与している可能性から、放射線大腸炎に於ける免疫機構の関与を考えている。現時点で、症例数が6例である。症例数が少ない点および明かな放射線大腸炎の症例がまだ検討されていない点が問題と考えられる。次年度では、症例数を増やすと共に臨床症状のある症例も検討する予定である。
時限骨膜伸展負荷による膜性骨化骨形成法の検討

形状記憶合金メッシュと生体吸収性糸を組み合わせた時限的骨膜伸展骨形成システムの応用を行い、骨移植を行わず、さらに、骨膜伸展刺激を与えるきっかけを生体吸収性糸の分解過程による強度の減弱によってはかる非侵襲的な方法を用いた。これにより、これまでの移植医療のドナーサイトへの侵襲を回避できる可能性が示唆され、さらに、自動的に骨ー骨膜間隙を開大させることで骨形態の増大をはかることが示唆された。時限骨膜伸展骨形成法(以下TIME-PEO)の有用性について検証したところ、形状記憶合金(以下SMA)メッシュとグリコール酸/乳酸ポリエステル糸の組み合わせによる骨膜自動伸展刺激により形成された骨膜下間隙に新たな骨新生が確認された。従来の研究によるSMAメッシュ固定に用いたスクリューの除去を要さずに、吸収性糸の生体内吸収過程による固定力の減弱にともない、SMAメッシュが有する形態回復力が自動的に働くことが確認された。しかしながら、その応力開始時期の詳細な時期を検証することは困難であり、あくまでもSMAメッシュ埋入、装置固定後、約23週間での動作確認がなされたのみで、具体的な時期を特定するには毎日のレントゲン撮影を必要とし、放射線被爆の問題が課題として挙げられた。SMAメッシュと母骨間の間隙については、μ-CTによる評価で、SMAメッシュ埋入後5週群、8週群のすべて母骨側からの骨新生が確認され、さらに母骨への皮質骨尖孔を併用した方が骨新生に有意であることが示唆された。昨年度半ばから新たな施設での実験環境を整えることで、全体的に研究の進捗は遅れており、TIME-PEOに関しての組織学的評価を完了させ、それらの報告を行う予定である。TIME-PEOは、従来までの骨延長、または骨膜延長(Periosteal distarction osteogenesis, Periosteal elevation)の報告にあるような徒手的な伸展刺激を回避できること、さらに、徒手的な伸展に必要な回転ロッド(activation rod)を必要としないことから、装置を軟組織内に完全閉鎖できるという2つの大きな利点を有している。このことより、装置の露出、感染リスクを低減させ、骨膜下間隙を安定した状態で保つことが可能となり、最終的には骨形成の安定化がはかられることが示唆された。本年は使用材料と使用動物の事前調査を中心に行い、材料選定、各種申請手続きを中心に行った。まず、使用する生体適合性形状記憶合金のメッシュについては膜性骨化様式の骨形成を促す上で厚さを0.275mmと設定し、その形態回復力をトルク計測器などを用いて計測し、0.4Nとした。しかしながら、この材料を使用した場合、ブタ頭頂骨を被覆する軟組織(皮膚、皮下組織)は厚く、伸展力に対する組織量のバランスが悪いことが予想されたため、使用動物をより小型の動物種であるウサギ(日本白色種)に変更することとした。これにより、伸展力に対する組織反応性が高められ、骨膜間隙の自動形成が確実に促されるものと予想している。次に、伸展刺激が加わるまでの待機期間中に形状記憶合金(SMA)を抑制する材料について検討したところ、糸状のグリコール酸/乳酸ポリエステルを用いることとした。この材料は組織埋入後の組織抗張力が21日目で50%であることから、SMAの持つ形態回復力を至適期間と考えられる術後24週で作動させると予測している。初期実験で作動までの期間が4週以上と長期になる場合は、使用する材料の径を小さくするか、また2週未満と短期になる場合は径を大きくすることで対応する予定である。以上の材料および実験プロトコールにて現在実験を継続中であるが、年度内に研究機関を異動したため実験の進行は当初の計画よりやや遅れている。試料採取、組織形態評価を行い、学会、科学雑誌にて投稿予定である。2012年9月より九州歯科大学から東北大学に異動したため、計画していた動物実験施設が変更となり、新施設での実験計画書の受理など書類手続き、実験器具の調達に時間を要した。現在、実験を進行中であり、試料採取後の評価についても既に準備は終了している。積極的に動物実験を進め、早期に評価過程に移行する予定である。進行中の動物実験に関連した飼育費、材料費の他、組織評価に関わる物品に対して使用する予定である。また、取得した結果から国内外の学会参加と論文投稿についても研究費を使用する予定である。
脳神経活動が機械を操作するためのインターフェイス

本年度は、脳神経活動が機械を操作するためのインターフェイスの実用試験を行った。昨年度開発したリアルタイムにマルチニューロン活動を単一ニューロン活動に分離するためのシステム(RASICA)を更に拡張し、インターフェイスの精度を向上させた。また、昨年度にラット海馬から計測した予備データをRASICAシステムで解析することで、インターフェイスの作動原理の候補と成り得るロバストな同期活動現象を発見した。1、ラットが実際に行動することなく、脳神経活動が機械を操作するためのインターフェイスを介すことで、脳活動だけで報酬を得ることを検証した。2、RASICAシステムから取得できるニューロン群の情報をリアルタイムに視覚化するツールを開発した。3、高い音と低い音の違いを遅延期間後に判別するdelayed non-matching to sample taskを遂行中のラットの海馬に特殊電極(Dodecatrode)を5本刺入して、複数のマルチニューロン活動を記録した。このデータをRASICAシステムで解析したところ、近傍のニューロン群が1ミリ秒以下の精度で同期活動をしている現象を発見した。本年度で本研究課題の目的である脳神経活動が機械を操作するためのインターフェイスが完成した。この革新的なインターフェイスを用いることで、既存手法では検証することが困難であった脳内可塑性についての研究を今後発展的に行っていく予定である。昨年度に開発したRASICAシステムとdodecatrodeについての研究は、Neuroscience誌上で発表された。その内容は国内特許出願中であり、PCT出願準備中である。また、今年度の成果(1)と(3)については、学術雑誌に投稿準備中である。本年度は、脳神経活動が機械を操作するためのインターフェースの基幹部分であるニューロン活動を自動的かつリアルタイムに計測するシステム(RASICA)を開発した。RASICAは、(1)ニューロン活動収録モジュール、(2)特殊電極、(3)マイクロドライブ、(4)ニューロン活動解析モジュールから構成されている。ニューロン活動収録モジュールは、増幅された最大64チャンネルのニューロン活動を同時に収録することができ、それらをD/Aコンバータを介しディジタル化する。(1)このディジタル化されたデータは、複数のニューロン活動を含んでいるため、個々のニューロン活動に分離・抽出しなければならない。ところが、既存手法では詳細なニューロン相互作用を検出することができなかった。これらの問題を解決するために、12本のマイクロワイヤーを一束にした特殊電極(Dozentrode)を開発した。(2)多数のニューロンを安定かつ長期間に渡り記録するために、Dozentrodeを独立に稼動させることが可能な専用マイクロドライブを開発した。その計測対象領域は、体性感覚野はもちろんのこと、海馬などの深部をもカバーすることができる。(3)Dozentrodeから得られた多量の情報を含んだ神経活動を有効に活用するために、独立成分分析を組み込んだアルゴリズムを開発した。このアルゴリズムを用いることにより、リアルタイムかつ正確に複数のニューロン活動から個々のニューロン活動を分離抽出することが可能になった。本年度作製したシステムRASICAは、来年度に開発予定であるニューロン活動を機械の操作情報に変換するプログラムの基盤となるシステムであり、脳神経活動が機械を操作するためのインターフェイスをより精巧で有効なものにすると期待できる。本年度は、脳神経活動が機械を操作するためのインターフェイスの予備実験として、行動中のラットからマルチニューロン活動を記録した。また、昨年度開発したリアルタイムにマルチニューロン活動を単一ニューロン活動に分離するためのシステム(RASICA)やマイクロドライブを更に拡張した。(1)高い音と低い音の違いを遅延期間後に判別するdelayed non-matching to sampletaskを6頭のラットに訓練し、昨年度に開発した12本のマイクロワイヤーを一束にした特殊電極(Dodecatrode)を海馬や体性感覚野に3本から5本刺入して、複数のマルチニューロン活動を記録した。(2)複数のDodecatrodeを刺入するには、コンパクトで軽量なマイクロドライブとヘッドアンプが必要となる。そこで、プリント基板を用いることで、マイクロドライブとヘッドアンプを小型・軽量化した。(3)ラットの行動を観察するために、去年度開発したRASICAシステムにビデオシステムを追加した。(4)細胞内記録と細胞外記録を組み合わせた手法により得られたデータを用いて、昨年度開発した独立成分分析によるマルチニューロン活動の分離方法を検証した。本年度に取得したマルチニューロン活動データを解析することで、来年度には脳神経活動が機械を操作するためのインターフェイスが完成すると期待できる。昨年度に開発したRASICAシステムとdodecatrodeについての研究は、Neuroscience誌に受理された。また、その内容は特許出願準備中である。

このデータをRASICAシステムで解析したところ、近傍のニューロン群が1ミリ秒以下の精度で同期活動をしている現象を発見した。本年度で本研究課題の目的である脳神経活動が機械を操作するためのインターフェイスが完成した。この革新的なインターフェイスを用いることで、既存手法では検証することが困難であった脳内可塑性についての研究を今後発展的に行っていく予定である。昨年度に開発したRASICAシステムとdodecatrodeについての研究は、Neuroscience誌上で発表された。その内容は国内特許出願中であり、PCT出願準備中である。また、今年度の成果(1)と(3)については、学術雑誌に投稿準備中である。
多極子異方吸収による新しいエネルギー準位創出と表面増強ラマン分光法への応用

一軸配向を考慮して偏光ラマン散乱強度を解析的に計算した結果,分極率に比例する式が得られた.言い換えると,分極率のみをくくりだした式が得られたため,異なる偏光測定の式と比を取ると,唯一の未知数さえも消し去ることができ,配向角だけの関数にすることができた.これにより,ラマンスペクトルから薄膜中の官能基の分子配向を定量的に決定することに成功した.一軸配向を考慮して偏光ラマン散乱強度を解析的に計算した結果,分極率に比例する式が得られた.言い換えると,分極率のみをくくりだした式が得られたため,異なる偏光測定の式と比を取ると,唯一の未知数さえも消し去ることができ,配向角だけの関数にすることができた.これにより,ラマンスペクトルから薄膜中の官能基の分子配向を定量的に決定することに成功した.平成24年度は,とくに理論の構築と検証に時間を割いた.ローレンツの相反定理を基軸に取り込み,かつ散乱テンソル異方性を考慮したラマン散乱解析理論はこれまでなく,詳細な異方性解析がすでに行われているステアリン酸カドミウムLangmuir-Blodgett膜を標準試料として実験的にも検証した.ローレンツの相反定理は,薄膜の構造や異方性,不均一性などに関係なく,分子をアンテナに見立ててそこから制動放射されるラマン散乱光を定量的に予測できるシンプルで強力な理論である.これを電磁場解析に組み込み,さらにフレネル係数の計算に吸収の効果も組み込むことができる.これにより,分子座標系でのテンソルと実験室座標系を定量的につなぐことができ,そこから分子配向を明らかにすることができる.これには,標準試料のラマンスペクトルから,どのバンドを解析に使うのが適当かを見極める必要があった.すなわち,偏光ラマンスペクトルの偏光の組み合わせを制御して得られるバンド強度の変化から,基準振動の持つ振動の対称性に関する知見を得て,そこからもっとも簡単なラマン散乱テンソルに結び付けられるb1g対称性のバンドを選んで解析を行った.実験的には,単分子膜レベルの超薄膜のラマンスペクトルを非共鳴条件で測定することができるようになった.また,分光器の偏光特性の除去に専心し,きわめて精度の高い変更解消度測定ができるようになった.これを用いて測定した偏光ラマンスペクトルから,b1gに対応するCH2逆対称伸縮振動に解析の対象を絞り解析したところ,分子が膜面に垂直配向し,かつ分子座標でのラマン散乱テンソル成分がαxx=αzzを満たす時に,偏光解消度がゼロになることを突き止めた.さらに,分子座標系で見たいわゆるラマン散乱テンソルの相対関係にも着目し,量子化学計算を同時に進めてた.最初の2年間で,金ナノ粒子薄膜を用いた表面増強ラマン散乱(SERS)分光法の基礎に,局在プラズモン吸収異方性の考え方を導入する研究を行った.さらに,有機超薄膜を非共鳴条件で偏光解消度を定量性良く測定できる光学系を完成させ,並行して偏光ラマンスペクトルから分子配向を定量的に引き出すための理論的枠組みの構築にも成功した.具体的な内容を以下にまとめる.1)拡散反射測定の仕組みを抜本的に見直す研究を,実験と理論の両面から検討する.2)基板としてよく用いる表面酸化シリコンの表面の酸化状態を,酸化層のLOモードの測定とSAM膜反応性の両面から検討する.3)基板表面のラフネスと表面疎水性の程度の相関を,表面に存在する微量の分子水に着目して解析するテーマ1)は,赤外拡散反射法を利用して詳しく解析する.具体的には,表面が荒れたアルミナの板を用い,粗さの程度をAFMで観察したあと,拡散反射法とクロスニコル偏光測定を組み合わせた角度変化スペクトルを測定する.クロスニコル条件を使うことで正反射成分を除去し,拡散反射成分に含まれる多重反射と粒子内透過の2成分を割り出す.想定外の成分が現れた場合には,それが拡散反射の定量性を崩す要因と考えられるため,光学計算などから詳しく解析した.テーマ2)では,きわめて多用されるシリコン板表面の酸化の程度が薄膜形成およびスペクトル測定に与える影響を検討する.たとえば,赤外MAIRS測定に原理的にシリコンは適用できる材料だが,表面の酸化層が示す低屈折率により測定が大きく阻害される.また酸化層の深さは,表面に作るSAM膜の成否にも大きく影響する.これをラマン分光法で測定・解析可能にするため,酸化層そのものの詳しい光学モード解析を行った.テーマ3)では,粗表面での吸着分子の構造解析を可能にするため,赤外分光法での表面選択律を明らかにする研究を行った.平成24年度は,とくに理論の構築と検証に時間を割いた.ローレンツの相反定理を基軸に取り込み,かつ散乱テンソル異方性を考慮したラマン散乱解析理論はこれまでなく,詳細な異方性解析がすでに行われているステアリン酸カドミウムLangmuir-Blodgett膜を標準試料として実験的にも検証した.ローレンツの相反定理は,薄膜の構造や異方性,不均一性などに関係なく,分子をアンテナに見立ててそこから制動放射されるラマン散乱光を定量的に予測できるシンプルで強力な理論である.これを電磁場解析に組み込み,さらにフレネル係数の計算に吸収の効果も組み込むことができる.これにより,分子座標系でのテンソルと実験室座標系を定量的につなぐことができ,そこから分子配向を明らかにすることができる.

これには,標準試料のラマンスペクトルから,どのバンドを解析に使うのが適当かを見極める必要があった.すなわち,偏光ラマンスペクトルの偏光の組み合わせを制御して得られるバンド強度の変化から,基準振動の持つ振動の対称性に関する知見を得て,そこからもっとも簡単なラマン散乱テンソルに結び付けられるb1g対称性のバンドを選んで解析を行った.実験的には,単分子膜レベルの超薄膜のラマンスペクトルを非共鳴条件で測定することができるようになった.また,分光器の偏光特性の除去に専心し,きわめて精度の高い変更解消度測定ができるようになった.これを用いて測定した偏光ラマンスペクトルから,b1gに対応するCH2逆対称伸縮振動に解析の対象を絞り解析したところ,分子が膜面に垂直配向し,かつ分子座標でのラマン散乱テンソル成分がαxx=αzzを満たす時に,偏光解消度がゼロになることを突き止めた.さらに,分子座標系で見たいわゆるラマン散乱テンソルの相対関係にも着目し,量子化学計算を同時に進めてた.繰り越しをさせていただいたおかげで,予定通り研究を進めることができた.25年度が最終年度であるため、記入しない。予定していた散乱理論の構築が順調に進んだことと,苦労していた定量的に信頼できる偏光解消度の測定が万全な体制を整えることができたため,極めて順調に予定をこなすことができたといえる.本課題の向かっている方向は,非平滑な界面に対応できるラマン散乱分光法を構築することである.H24年度前半までに平滑界面を仮定した場合のラマン散乱分光解析の理論が完成したため,今後は非平滑界面での入射光の反射・散乱・吸収を考慮できる解析方法の開発に乗り出す.25年度が最終年度であるため、記入しない。本課題の向かっている方向は,非平滑な界面に対応できるラマン散乱分光法を構築することである.H24年度に平滑界面を仮定した場合のラマン散乱分光解析の理論が完成したため,今後は非平滑界面での入射光の反射・散乱・吸収を考慮できる解析方法の開発に乗り出す.
杆体一色型色覚におけるCNGA3およびCNGB3遺伝子の解析

錐体cGMP依存性カチオンチャネルはα鎖とβ鎖とから成るヘテロ4量体であり、いずれかの先天的異常により色覚欠損(杆体一色型色覚)を生ずる。初年度の研究では両鎖の正常cDNAを単離し、これらを培養細胞で単独発現あるいは共発現させパッチクランプ法で膜電流を測定した。α単独発現細胞では電流が得られたがβ単独発現細胞では電流が得られなかった。α/βを共発現させた細胞ではα単独の場合と比べ、cGMP感受性が低下し、細胞外Caイオンによる内向き電流阻害も軽減されていた。これらのことから、α単独でもチャネルは形成されるが、βが加わると生理的な条件下で働き得るチャネルとなることが示唆された。次年度は杆体一色型色覚において見出されているミスセンス変異(αは39種類、βは2種類)を導入したα鎖およびβ鎖について膜電流を測定した。αの変異では、膜電流が記録できなかったものが32種で、記録できたのが7種であった。記録できたものについてさらに詳しく解析したところ、cGMPに対する感受性が高くなっているものや逆に低くなっているものがあることが判明した。前者では、光子受容時にcGMP濃度が低下してもチャネルが閉じず、また後者ではcGMPの増減にかかわらず常にチャネルが閉じでいるため、錐体機能が損なわれているものと推定された。一方、βの変異に関しては、いずれの変異においても、正常α/βチャネルで見られたようなcGMP感受性の低下が認められず、また、細胞外カルシウムによる内向き電流阻害の軽減も認められなかった。今年度は、その後新たに見出されたミスセンス変異(αで6種、βで8種)を導入したα鎖およびβ鎖について膜電流の測定を行った。今のところαの変異で電流の記録できるものはなく、またβの変異は常にαとの共発現が必要なため未解析である。(1)錐体カチオンチャネルのcDNAの単離と変異の導入:ヒト網膜よりCNGB3のcDNAを単離しpCR3.1にクローニングした。(2)錐体カチオンチャネルの培養細胞での一過性発現と膜電流の測定:上記cDNAをHEK293細胞に導入し、パッチクランプ法で膜電流を測定した。CGNA3のみを導入した細胞では、膜電位に依存し、かつ、cGMPによって増大する膜電流が測定された。一方、CNGB3のみを導入した細胞では、膜電流は全く観察されなかった。そこで、CNGA3とCNGB3の両方を導入し膜電位を測定した。αサブユニットのみで構成されるチャネル(α)と、αβ両サブユニットで構成されるチャネル(α/β)を比較し、次の3つの違いを明らかにした。(i)脱分極側における電流で、α/βのみ時間依存性の減衰を示した(半減期=32.3msec)。過分極側の電流では、両チャネルとも減衰は示さなかった。(ii)膜電流に対するcGMPの1/2有効濃度は、αで15.6μM、α/βで26.0μMであった。(iii)10μMのヂルチアゼム存在下において、αの膜電流は殆ど抑制されなったが、α/βのそれは30%抑制された。(3)錐体カチオンチャネルβ鎖の培養細胞での安定発現と膜電流の測定:CNGB3のクローンをHEK293細胞に導入し、ネオマイシン耐性細胞をクローン化し凍結保存した。(4)杆体一色型色覚における新たな変異の同定:4名の杆体一色型色覚例におけるCNGA3、CNGB3遺伝子の解析を終了しているが、上記の変異(変異2)以外に新たな変異は見出されていない。CNGB3に関しては、多型が見出された(T297P)ので、アレル頻度を求めた(日本人で0.15:0.85、コーカソイドで0.44:0.56)。錐体カチオンチャネルはα鎖とβ鎖とから成るヘテロ4量体であり、いずれかの先天的異常により色覚欠損(杵体一色型色覚)を生ずる。今年度は、杵体一色型色覚において見出されている変異を導入したα鎖およびβ鎖について膜電流の測定を行い、これらの変異が機能に及ぼす影響を解析した。これまで報告されているα鎖の遺伝子(CNGA3)の変異は39個である。それぞれの変異を導入したα鎖単独およびwild typeのβ鎖とのキメラについてパッチクランプ法を用いて膜電流を測定した。その結果cGMPに対する感受性が高くなっているものや低くなっているもの、また、電流がまったく記録されないものなど様々あることが判明した。これらの中でα鎖のcGMP結合部位の変異であるT565MおよびE593Kについてさらに詳しく解析をおこなった。1/2有効cGMP濃度(K_<1/2>)が、wild typeのα鎖単独では9.0μMであったのに対し、T565Mの変異を導入したものでは160μMとcGMPに対する感受性がかなり低くなっていた。一方、E593Kの変異を導入したものでは3μMとcGMPに対する感受性が高くなっていた。また、α鎖とβ鎖とのキメラではK_<1/2>は15.0μMであり、α鎖単独よりもcGMPに対する感受性が低くなっていた、E593KおよびT565Mを導入したα鎖とβ鎖とのキメラでも同じ傾向が見られた。

これらのことから、T565Mの変異をもつα鎖を含むチャネルは錐体内cGMPの増減に関わらず閉じたままであること、一方、E593Kの変異を持つα鎖を含むチャネルは錐体内cGMPの増減に関わらず開いたままであることが推定され、杵体一色型色覚における錐体カチオンチャネルの機能不全の機序として少なくとも2種あるらしいことが分った。また、正常β鎖の機能の一つとしてチャネルのcGMPに対する感受性を下げることが判明した。錐体cGMP依存性カチオンチャネルはα鎖とβ鎖とから成るヘテロ4量体であり、いずれかの先天的異常により色覚欠損(杆体一色型色覚)を生ずる。初年度の研究では両鎖の正常cDNAを単離し、これらを培養細胞で単独発現あるいは共発現させパッチクランプ法で膜電流を測定した。α単独発現細胞では電流が得られたがβ単独発現細胞では電流が得られなかった。α/βを共発現させた細胞ではα単独の場合と比べ、cGMP感受性が低下し、細胞外Caイオンによる内向き電流阻害も軽減されていた。これらのことから、α単独でもチャネルは形成されるが、βが加わると生理的な条件下で働き得るチャネルとなることが示唆された。次年度は杆体一色型色覚において見出されているミスセンス変異(αは39種類、βは2種類)を導入したα鎖およびβ鎖について膜電流を測定した。αの変異では、膜電流が記録できなかったものが32種で、記録できたのが7種であった。記録できたものについてさらに詳しく解析したところ、cGMPに対する感受性が高くなっているものや逆に低くなっているものがあることが判明した。前者では、光子受容時にcGMP濃度が低下してもチャネルが閉じず、また後者ではcGMPの増減にかかわらず常にチャネルが閉じでいるため、錐体機能が損なわれているものと推定された。一方、βの変異に関しては、いずれの変異においても、正常α/βチャネルで見られたようなcGMP感受性の低下が認められず、また、細胞外カルシウムによる内向き電流阻害の軽減も認められなかった。今年度は、その後新たに見出されたミスセンス変異(αで6種、βで8種)を導入したα鎖およびβ鎖について膜電流の測定を行った。今のところαの変異で電流の記録できるものはなく、またβの変異は常にαとの共発現が必要なため未解析である。
自作分光器によるCaⅡK吸収線の高次スペクトルを用いた太陽彩層の立体構造の研究

自作した太陽観測用分光器によるさまざまな観測・解析への応用を研究してきたが、今回、高次スペクトルを用いることでさらに波長分解能を上げたCaIIK吸収線の太陽全面スキャン観測を行った。高次スペクトルを用いる場合、次数カットフィルターを工夫する必要があるが、フィルター類の購入に当補助金を活用し観測が可能となった。使用した回折格子は、格子定数1200本/mm、大きさ25×25mm、ブレーズ波長500nmであるが、4次のスペクトルを用いることによりR=120000、波長分解能⊿λ=0.003nmとなり、小型の観測装置としては優れた性能となっている。この装置を用いて、CaIIK吸収線付近を30分ほどかけて太陽全面スリットスキャンを行うことで約5000フレームのスペクトル画像を取得し、CaIIK吸収線の両翼にある波長の分かっているFe吸収線の中心位置をガウスフィットにより求め、そこからCaIIK線の中心を割り出し、さらに吸収線の湾曲を補正しながら吸収線内を中心波長に対して±0.15nmにわたって波長シフトさせて各波長での太陽全面画像(スペクトロヘリオグラム)を作成した。スペクトル線の中心(K3)では太陽彩層の最上部、翼部(K2, K1など)では中心波長から離れるに従って見ている彩層高度が下がることが知られており、太陽彩層を立体的に捉えることができる。観測から得られた画像を見ると、例えば、中心波長K3では比較のため撮像したHα線中心の画像と比べて、フィラメントがより長く、また多く見られるなど、彩層最上部の特徴をよく示す画像となっている。K2、K1と中心波長(K3)から離れるにしたがってフィラメントやプロミネンスは見られなくなり、太陽全面の輝度が増加、黒点がはっきりと見えるようになるなど彩層を立体的に捉えた画像が得られた。今回の観測は小型の分光器のさらに広い応用の可能性を示すもので、このような装置を教育現場等へ展開していくことの有用性がより一層明確になったと考えている。
医用画像に基づく計算解剖学の創成と診断・治療支援の高度化

本申請課題においては、5年間にわたる研究成果のとりまとめと、研究成果を社会・国民に発信することの2つが目的であった。第一の目的である研究成果のとりまとめにおいては、計算解剖学の目的、研究組織、計画班および公募班それぞれの研究成果(著書・論文のリスト、特許を含む)と共に、計算解剖学という新たな領域としての状況、計算解剖学主催による学術研究集会およびアウトリーチ活動、諮問委員による研究評価、などを含め、研究成果報告書として取りまとめて印刷・製本した。また、同報告書の内容に研究成果をより理解しやすいように一部の動画をも含めてCDも作成した。これらは関係研究機関に配布した。第二の目的である研究成果の社会・国民への発信に関しては、2つの取り組みを行った。一つは、「3Dプリンタで臓器モデルを作ろう!」と題した中学・高校生向け講座である。これは日本学術振興会主催の「ひらめき☆ときめきサイエンスプログラム」の一つとして2014年8月21、22日の2日間にわたって名古屋大学にて開催したもので、CT画像から臓器を抽出し、それを3Dプリンタで打ち出すまでを体験させた。次代を担う世代に計算解剖学の成果の一端を分かりやすく紹介したものである。二つ目は東京農工大学にて開催した「計算解剖学」最終成果報告シンポジウムである。計算解剖学プロジェクトで新たに開発された基礎から応用(診断・手術支援)までの研究成果を関連分野で活躍する研究者・技術者に対して広く紹介した。また、専門的・学術的な立場から計算解剖学の現状評価と今後の方向性や課題を議論し、次のステップへの礎とした。26年度が最終年度であるため、記入しない。解剖構造上のランドマークの検出法、主要臓器の統計数理モデルの構築、それに基づく臓器構造理解の方法を開発し、主要臓器の解剖構造理解が全自動で精度良く行えるようになった。医用画像の高度理解を基礎に、診断支援が高度化され、安全性と精度を確保した手術支援法などの高度化が実現できた。総括班の活動としては、200症例のデータベースを開発した。これはセグメンテーション手法の評価の基準として活用できる。また、各研究班における研究を促進するための汎用ソフトウェアを整備し、セミナーやワークショップの開催により計算解剖学を担う若手育成も進めた。初年度の取組としては、2009年9月に第一回総括班会議を開催し、領域全体の運営に欠かせない各種ワーキンググループを構成した。また、同年11月には第二回総括班会議を開催し、国際シンポジウムの詳細決定と諮問委員会の開催を最終決定した。2009年度の総括班としての主要な活動は以下のようです。1.データベース構築のための基盤となるサーバを整備した。さらに、データベースの収集の前提となる倫理委員会の承認手続きなどを進め、初年度分として40症例を選定した。2.人材育成の取組の一つとして、「計算解剖学・英文論文ブラッシュアップ・ワークショップ」を開催した。若手研究者の英文論文作成技術の向上をはかると共に、今後の領域の活動を広く世界へ発信できる若手を育成することを目的にしたものである。4名の計画班代表者を指南役とし、若手研究者約15名が執筆中の具体的論文を持ち寄って参加したもので、成功裏に終了した。今後も継続の予定である。3.計算解剖学の取組・研究計画を広く社会に披露し、かつ半年間の研究成果を発表する機会ともする国際シンポジウムを開催した。総勢で約110名の参加者を得、極めて活発な議論が展開された。また、外国の著名な研究者2名を含む6名の諮問委員からは研究目的、計画などにつき高い評価を受け、今後の研究の進展に大きな期待が寄せられた。4.医工連携研究の促進として、有限要素解析を模したニューラルネットワークによる臓器モデル変形の検討を行った。また、成果の共同活用とその結果のフィードバックとして、大腸疾患の診療におけるバーチャル内視鏡システムの有用性を検討した。5.海外研究拠点との連携促進として、9月に韓国からYoung Soo Kim先生を、11月には、ドイツからHeinz U. Lemke先生を、12月にドイツのAndreas Pommert先生とオーストリアのRainer Schubert先生を招き、講演会を開催し、研究上の情報交換を行なうと共に、相互の連携を深めた。3回の総括班会議を開催し、領域全体の活動計画を立案し確実に実行した.主要な活動を以下に示す.1.データベース構築:166症例の胸腹部X線CT画像を収集し,内10症例18臓器に対する手入力ラベリングを完了した.2.計算解剖学サマースクール開催:大学の枠を超えた共同研究意識の向上と計算解剖学の国際的研究者の育成を目的とし,40名の参加者による合宿形式での討論・集中講義を行った.3.国際シンポジウム開催:計算解剖学の取組・研究成果を広く社会に披露し,併せて外国の著名な研究者2名の特別講演をも含めた国際シンポジウムを開催した.総勢で約135名の参加者を得,極めて活発な議論が展開された.また、6名の諮問委員からは研究成果や進捗状況などにつき率直な意見を頂いた.幸いにも「期待を上回る進捗状況にある」との高い評価を受け,今後の研究の進展に大きな期待が寄せられた.4.共通ソフトウエア基盤整備:各研究班の研究成果を統合し、その相互利用を可能ならしめ.かつその利用・評価結果を効果的に反映させるソフトウエア基盤"PLUTO"の改良および新規機能の開発を実施した.

さらに、その利用促進を図るための講習会を一般の参加者をも含む形で開催し,計算解剖学の発展に向けた基盤形成と研究成果の社会還元を進めた.5.計算解剖学セミナー開催:海外研究拠点との連携強化を図る一環として海外の著名研究者による講演会を6回、国内研究者によるセミナーを1回、合計で7回の計算解剖学セミナーを開催した.6.この分野で最も伝統ある"コンピュータ支援放射線医学・外科学に関する国際会議"(2010年6月スイス・ジュネーブ)において、3名の計画班代表者の招待講演による構成される本領域の特別セッションが企画され、欧米の研究者との意見交換を行った.7.情報発信:本領域の研究成果等を記したWebページの充実を図り,社会への情報発信を進めた.平成23年度には3回の総括班会議を開催し、領域全体の活動計画の立案とその着実な実施に努めた。主要な活動を以下に示す。1.画像データベース収集の完了:昨年度までの収集データに新たに34症例を加え、当初の予定数200症例の収集を完了した。これらの症例に関して、15臓器のラベリング作業を進め、18症例(非造影11,造影7症例)のラベリングを完了し、各研究班への配布を行った。また、ラベリングのためのソフトウエアを研究班に配布し、ラベリング作業の加速化を図った。2.共通ソフトウエア基盤整備:各研究班の研究成果を共有し、相互利用を可能ならしめるためのソフトウエア基盤"PLUTO"の更なる改良および新規機能の開発を進めた。また、その利用促進を図るための講習会を一般の参加者も含めた形で定期的に開催し、研究の一層の促進と社会還元を進めた。さらに、臓器セグメンテーションのための高機能ソフトウエアを一般公開し、計算解剖学全体の基盤強化を図った。3.国際シンポジウム開催:計算解剖学の取り組みや研究成果を広く社会に披露すると同時に、著名な外国からの研究者を含めて国際シンポジウムを開催した。同時に、諮問委員による研究の進捗状況の評価をも行い、順調に研究が進展しているとの高い評価を得た。4.計算解剖学サマースクールおよびウィンタースクールの開催:若手研究者の育成と研究室間の共同研究を一層促進し、グローバル化へ対応できる研究者として成長していくように、2泊3日の合宿形式で集中講義、討論、プレゼンテーションを実施し、所属している研究室だけでは得難い体験の場を提供した。平成25年度は最終年度にあたることから、本プロジェクト全体の最終研究目標の確実な達成をはかることに力点をおき、以下に示すように、総括班の下に設置したWGにより主要課題を計画通りに実施・解決した。(1)工学的融合連携支援と臨床的融合連携支援:収拾した画像データにつき、未完であった臓器ラベリングを完了し、評価用データベースとして整備し、あわせて計算解剖モデルのデータベース化も行い、各研究班に配布し有効活用に供した。また、医工連携研究を促進し、得られる成果の共同活用とその結果のフィードバックを組織的に実行するため、それらを共通プラットフォームPLUTO上に統合化をはかり、医用画像の完全理解からそれに基づく診断・治療支援までをシームレスにつなぐ高度化システムのプロトタイプを開発した。これらは、平成26年3月に開催した第5回国際シンポジウムの場で実演・発表された。
ヘリコバクター・ピロリ関連特発性血小板減少性紫斑病発症メカニズムの解明

Helicobacter pylori関連慢性特発性血小板減少性紫斑病(以下H. pylori関連cITP)発症に関与していると考えられるH. pylori 17 kDa蛋白の同定を試みた。種々の解析から、H. pylori菌体膜蛋白(Outer membrane protein : OMP)の一つが同定された。ラットを免疫して得られたOMPに対するポリクローナル抗体は、数種のH. pylori株と高感度かつ特異的に反応性を有し、さらに免疫沈降法による解析結果では、OMPが血小板と結合することも確認した。Helicobacter pylori(以下H. pylori)感染によって引き起こされる特発性血小板減少性紫斑病(ITP)発症メカニズムとして、免疫複合体(H. pylori低分子蛋白-血小板-抗血小板抗体)が本疾患発症に関与する可能性を示唆したことからH. pylori低分子蛋白の同定を目的として実験を行っている。これまでに、H. pylori関連cITP患者血清のイムノブロットにて反応性を認めたH. pylori 26695株の二次元電気泳動スポット(蛋白)のLC-MS/MS解析からH. pylori 17 kDaの候補蛋白を検索し11個の候補蛋白を得た。各候補遺伝子は発現プラスミドでconstructを作製し、大腸菌内で過剰発現させHis融合リコンビナント蛋白(以下、融合蛋白)を作製した。これら11個の融合蛋白を各cITP患者血清(H. pylori陰性群(HP-N群)、H. pylori陽性群(除菌奏効群(CR群)および無効群(NR群))を使用したイムノブロット法にて、各融合蛋白に対する反応性を解析した。さらに、多血小板血漿を使用した血小板凝集能試験にて各融合蛋白の血小板凝集への影響を解析した。LC-MS/MS解析で得られた11個の融合蛋白に対する反応性をイムノブロットで解析した結果、1個の蛋白(H. pylori膜蛋白)を見出した。本融合蛋白のcITP患者血清との反応性はHP-N群で0.0%(0/2)およびNR群で40.0%(2/5)に対しCR群では71.4%(5/7)と、CR群のみに有意に高い反応性が認められた。さらに本融合蛋白による血小板凝集能を検討した結果、強い血小板凝集能を有することも確認された。今後、見出したH. pylori膜蛋白の血小板との結合性およびその結合部位の解析を進め、本膜蛋白がcITP発症に関与する分子メカニズムを解明する。Helicobacter pylori(以下H. pylori)感染によって引き起こされる特発性血小板減少性紫斑病(ITP)は、H. pyloriの除菌により速やかに血小板数が回復し治癒することが知られているが、そのメカニズムはほとんど解明されていない。我々は、H. pylori低分子蛋白(17kDa)が血小板に結合しさらに抗血小板抗体が結合する免疫複合体が本疾患発症に関与する可能性を示唆しており、これまで血小板に結合するH. pylori蛋白の同定を進めてきた結果、H. pylori膜蛋白を同定した。本年度は、本蛋白による血小板凝集試験、血小板結合試験および本蛋白に対する抗体を作成しウェスタンブロット解析および免疫沈降法により詳細な解析を行った。まず、H. pylori膜蛋白は発現プラスミドを使用してHis-Tag融合リコンビナント蛋白(以下、融合蛋白)として作製した。融合蛋白に対する患者血清の反応性は、H. pylori陽性除菌無効群で40%と低く、H. pylori陽性除菌有効群で71.9%とCR群で高い反応性が認められた。さらに、健常人血小板を用いて、融合蛋白による血小板凝集能を解析した結果、強い血小板凝集能を有することも明らかとなった。H. pylori膜蛋白に対する抗体を作成し詳細な解析を行った。H. pyloriに対する本抗体の反応性をイムノブロットにて検討した結果、約17kDa付近にバンドを認めた。健常人血小板にH. pyloriライセートを添加し反応させたのち、抗血小板抗体で免疫沈降を行いSDS-PAGEにて分離後、H. pylori膜蛋白に対する抗体を用いてイムノブロットを行った結果、約17kDa付近にバンドを認めたことから、血小板にH. pylori膜蛋白が結合していることが明らかになった。現在H. pylori感染マウスにおける血中での本蛋白の動態を解析している。