hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
造血器腫瘍の染色体転座におけるゲノム刷り込みの解析

平成8年度までに、患者自身の末治療診断時の骨髄細胞を用いたmitogenを含まない短期培養にて染色体標本を作製し、その分析が可能であり、かつその両親からinformed consentを得て末梢血単核細胞のPHA添加3日間培養によるTリンパ球の染色体標本作製が可能であった症例は、t(8;21)^+AML-M2が7例、t(15;17)^+AML-M3が6例、t(9;22)^+CMLが5例となった。これらのうち、t(8;21)^+AML-M2においてはうち4例がAg-I染色により21q^+染色体が父母いずれに由来するかが同定可能であり、その内訳は父親由来が1例、母親由来が3例。同様に、t(15;17)^+AML-M3においてはうち3例がAg-I染色により15q^+染色体の由来が同定可能であり、その内訳は父親由来が2例、母親由来が1例。t(9;22)^+CMLにおいてはC分染法により9q^+染色体の由来が同定可能であったものはうち2例で父親由来、母親由来が各1例。Ag-I染色により22q^-染色体の由来が同定可能であったものは3例で、父親由来が1例、母親由来が2例であった。C分染法およびAg-I染色法を用いたHaasらによる検討では、t(9;22)^-CMLおよびALL症例における9q^+染色体はいずれも父親に、22q^+染色体はいずれも母親に由来すると報告された。しかしながら、その後の他施設からの遺伝子多型を用いた検討では、いずれもHaasらの報告を支持しない。今回のわれわれの検討でも、1例のt(9;22)^+CML症例において9q^+染色体が母親に、22q^-染色体が父親に由来することが明らかとなった。さらにはt(8;21)^+AML-M2における21q^+染色体、t(15;17)^+AML-M3における15q^+染色体とも父母のいずれからも由来しうることが判明した。従ってこれらの結果は、上記の疾患における異常染色体の絡む遺伝子に関しては、ゲノム刷り込みの存在は否定的であることを示唆する。マウスにおいてはじめて見いだされたゲノム刷り込み現象は、ヒトにおいても固形腫瘍の一部においてその存在が報告されている。白血病については最近オーストリアのHaasらによって慢性骨髄性白血病(CML)および成人急性リンパ性白血病(ALL)の一部においてその特異的染色体異常であるt(9;22)に関して、異常な9番染色体はもっぱら父方由来であり、22番染色体は母方由来であることが報告された(Nature 359:414,1992)。長崎大学では長年にわたって原爆放射線誘発白血病の研究を行ってきたが、CMLはその代表的病型でありt(9;22)を保有している。ゲノム刷り込みをこれらの疾患において明らかにすることは放射線による白血病誘発機構の理解につながる重要な課題である。

平成6年度においては研究計画の第一段階としてCMLのt(9;22),および急性骨髄性白血病(AML)に多いt(8;21),t(15,17)などの安定型転座におけるゲノム刷り込みの検出法の確立を目指した。すなはちAg-I染色法による染色体多型の判定法の確立とその応用による父方、母方由来の判定を正常人親子3組について検討して、方法論を確立できた。現在この方法を染色体異常を有する例について応用しはじめたところである。また各病型について十分な数の親子のペア-を集積するため関連病院を含む白血病治療機関への研究協力を要請して鋭意症例集積を図っているところである。ゲノム刷り込みについての最終判定は少なくとも各病型とも5例以上、理想的には10例程度を必要とするためそのデータは次年度あるいは、最終年度に持ち越されると予想される。また染色体多型による判定法以外の方法、すなはちDNA多型による判定も同時に行うことが出来るようにDNAを抽出して保存することも開始した。現時点において、Ag-I法あるいはCバンド法にて構造異常を有する染色体が両親のいずれに由来するかが判明している症例は、t(8;21)を有するAML-M2症例が5例、t(15;17)を有するAML-M3症例が3例、t(9;22)を有するCML症例が1例である。t(8;21)M2症例における21q+異常染色体は、2例において母親由来、1例において父親由来、残る2例においては判定不能であった。t(15;17)M3症例における15q+異常染色体は、2例において母親由来、残る1例は判定不能。t(9;22)CML症例における22q-異常染色体は母親由来であったが、9q+については判定不能であった。判定不能となる理由は、D群およびG群染色体においては仁形成部位の大きさに、9番染色体においてはmajor C bandの大きさに差異を認め難いことによるもので、そのような例は少なからず存在することが明らかとなった。t(8;21)M2症例における21q+異常染色体については、少数例での検討ながらゲノム刷り込みの存在を否定する結果となったが、t(15;17)M3症例における15q+異常染色体およびt(9;22)CML症例における9q+および22q-異常染色体については、なおその可能性を否定しえない。今後さらに症例を重ねて検討する必要があると思われる。平成8年度までに、患者自身の未治療診断時の骨髄細胞を用いたmitogenを含まない短期培養にて染色体標本を作製し、その分析が可能であり、かつその両親からinformed consentを得て末梢血単核細胞のPHA添加3日間培養によるTリンパ球の染色体標本作製が可能であった症例は、t(8;21)^+AML-M2が7例、t(15;17)^+AML-M3が6例、t(9;22)^+CMLが5例となった。これらのうち、t(8;21)^+AML-M2においてはうち4例がAg-I染色により21q^+染色体が父母のいずれに由来するかが同定可能であり、その内訳は父親由来が1例、母親由来が3例。同様に、t(15;17)^+AML-M3においてはうち3例がAg-I染色により15q^+染色体の由来が同定可能であり、その内訳は父親由来が2例、母親由来が1例。t(9;22)^+CMLにおいてはC分染法により9q^+染色体の由来が同定可能であったものはうち2例で父親由来、母親由来が各1例。Ag-I染色により22q-染色体の由来が同定可能であったものは3例で、父親由来が1例、母親由来が2例であった。C染色法およびAg-I染色法を用いたHaasらによる検討では、t(9;22)
キチナーゼによるアレルギー反応の制御機構

キチナーゼ(acidic mammalian chitinase)は哺乳類の唾液腺と胃粘膜で産生され、消化液の中にも十分含まれる。また、気道の上皮にも弱く発現する。キチナーゼは食物(節足動物や甲殻類など)の消化ばかりでなく、キチン質をもつ寄生虫や真菌から生体を防御したり、レクチンとして免疫系を調節することが示唆されている。一方、キチンおよびキチナーゼがアレルギー反応を制御する可能性を示す所見が集まりつつある。本研究の目的は、キチンとキチナーゼによるアレルギー反応制御のメカニズムを明らかにすることである。初年度に作成した消化管キチナーゼ欠損マウスを形態学的および生化学的に解析した。遺伝子欠損マウスは、正常に生まれるものの、雄の出生頻度が野生型より低く、生殖器官(精巣など)に異常があることが予想された。通常飼育下では、顕著な形質異常は観察されていない。LacZの検出から、キチナーゼが本来発現すべき、耳下腺の終末部と胃体部の主細胞に発現することを確認した。また、ノックアウトマウスでは、耳下腺終末部と主細胞には本遺伝子および遺伝子産物が発現しておらず、遺伝子が完全にノックアウトされていた。主細胞はペプシノゲンを産生するが、キチナーゼの欠損はペプシノゲンの発現には影響せず、同一細胞内に共存する消化酵素の産生系には影響を与えないことがわかった。キチナーゼ欠損マウスは、アスペルギルス肺炎による炎症が悪化すること、一方オブアルブミン誘導肺炎の程度は低い傾向があることが示された。キチナーゼは食物の消化ばかりでなく、キチン質をもつ寄生虫や真菌から生体を防御したり、レクチンとして免疫系を制御することが示唆されている。一方、キチンおよびキチナーゼがアレルギー反応を直接制御する可能性を示す知見が集まりつつある。研究の目的は、キチンとキチナーゼによるアレルギー反応制御のメカニズムを明らかにすることである。そこで、初年度は、キチナーゼが粘膜免疫とアレルギー反応を調節していることの直接的な証拠を得るために、消化管キチナーゼ欠損マウスの作成を試みた。エクソン1をネオマイシン耐性遺伝子と置き換えたターゲティングベクターを作製した。これをマウス胚性幹細胞(ES細胞)に導入し、得られた相同組み換え体からキメラマウスを作成した。キメラマウスからヘテロ欠損マウスを作り、ヘテロマウス同士の交配によりノックアウトマウスを作成するに至った。遺伝子が欠損したことはゲノムDNAのサザンプロット、RT-PCR法により確認した。現在のところ、遺伝子欠損マウスは、正常に生まれており、通常の飼育下では顕著な形質異常は観察されていない。また、LacZ遺伝子を導入しており、LacZの検出から、本酵素は本来発現すべき、耳下腺と胃粘膜に発現していることを確認した。現在、戻し交配でF3の産子を得ており、F5,F6世代を使って、さまざまな実験を開始する予定である。また、上記研究と平行して、キチナーゼの肺や気道また、消化管における発現細胞の同定、細胞内局在を組織化学的に解析し、アレルギーモデルの作成準備を進めた。
非同期型コイル・プラネット遠心機による生体内高分子及び細胞分離法の開発

1.非同期型コイル・プラネット遠心機(Nonsynchronous Coil Planet Centrifuge(CPC))によるタンパク質の分離水性二相溶媒を用いたタンパク質分離を例として最適分離条件の検討とカラムの自転及び公転が分離に及ぼす影響を検討した。カラムは容量の異なる3種類の多層コイル(11,24,39mL)、水性二相溶媒は12.5%(w/w)ポリエチレングリコール(PEG)1000/12.5%(w/w)リン酸二カリウム水溶液、試料は(Cytochrome C、Myoglobin、Lysozymeを用いた。その結果、容量39mLのカラムにより公転800rpm、自転10rpmでhead to tailelution modeで行うと良好な分離が得られた。また、偏心コイル(eccentric coil)でも同様な結果が得られ、tail to headelution modeでは固定相は全く保持されないことがわかった。更に、公転800rpm、移動相流速0.2mL/minで自転速度を10-60rpmで変化させたところ、下層を移動相として自転と公転を同じ方向で行うと、上層を移動相とした場合とは異なり、自転速度を上げるにつれて固定相保持率が減少し、分離に影響を及ぼすことがわかった。ヒツジ血液を用いて公転800rpm、自転10rpmにより等張リン酸塩緩衝液(pH7.4)を分離用溶媒としてカラムの回転方向を検討した。その結果、タンパク質分離で下層を移動相に用いた場合と同様に、公転と自転を異なる方向で行うことにより血液細胞を分離できることが示唆された。そこで、公転800-1000rpm、自転0-10rpmでの分離を検討した結果、公転800rpmにより自転0rpmで赤血球以外の血液成分が、自転10rpmで赤血球が良好に溶出して互いに完全に分離した。また、ヒト血液でも公転700rpmで同様な分離が達成された。水性二相溶媒を用いたタンパク質分離により最適な分離条件を得るための検討及び本装置の特徴である自転と公転の速度と方向を互いに独立して変化させ、これらが分離に及ぼす影響についての検討を行った。カラムは容量の異なる3種類の多層コイル(11,24,39mL)、水性相溶媒は12.5%(w/w)ポリエチレングリコール(PEG)1000/12.5%(w/w)リン酸二カリウム水溶液、試料はCytochrome C, Myoglobin, Lysozymeを用いた。その結果、容量39mLのカラムで下層を移動相とし、公転800rpm、自転10rpmでhead to tail elution modeで行うと良好な分離が得られた。このときのCytochrome CとMyoglobin、MyoglobinとLysozymeの分離度はそれぞれ1.6、1.9であり、固定相保持率は35.0%であった。また、上層を移動相とした場合でも、同様に39mL容量のカラムで公転800rpm、自転10rpmでhead to tailelution modeでLysozymeとMyoglobinの分離度が1.5であり、固定相保持率は33.3%であった。いずれの場合でもtail to headelution modeでは固定相はほとんど保持されず、head to tailelution modeが分離に必須な条件であることが明らかとなった。更に、4.4%(w/w)PEG8000/7.0%(w/w)

デキストランT500 in 5mMリン酸カリウム塩緩衝液(pH7.0)+2M塩化ナトリウムでは、上層を移動相とした場合にLysozymeとMyoglobinが分離度1.5で分離したが、固定相保持率は19.7%と低下した。また、4.0%(w/w)PEG8000/5.0%(w/w)デキストランT500 in 5mMリン酸カリウム塩緩衝液(pH7.0)+3M塩化ナトリウムでは、固定相はほとんど保持されなかった。偏心コイル(eccenthric coil)でも検討したが、多層コイルの場合と同様に分離にはhead to tail elution modeが必要であることがわかった。以上の結果から、Nonsynchronous CPCがタンパク質の分離に有用であることが証明されたが、現在、更に自転速度を大きくした場合での分離効率への影響などについてより詳細に検討中である。(1)水性二相溶媒を用いたタンパク質分離におけるカラムの自転および公転の分離効率に及ぼす影響:非同期型コイル・プラネット遠心機(Nonsynchronous Coil Planet Centrifuge (CPC))におけるカラムの自転と公転が分離効率に及ぼす影響を水性二相溶媒によるタンパク質分離により検討した。その結果、公転800rpm、移動相流速0.2mL/minで上層及び下層いずれを移動相としても自転10-60rpmでhead to tailelution modeにより固定相が保持したが、下層を移動相として自転と公転を同じ方向で行うと、上層を移動相とした場合とは異なり、自転速度を上げると固定相保持率が減少した。この結果から、カラムの公転と自転の方向及び速度が固定相保持率と分離に影響を及ぼすことがわかった。(2)ヒツジ及びヒト血液細胞成分の分離:ヒツジ血液を用いて公転800rpm、自転l0rpmによりカラムの回転方向を検討した結果・タンパク質分離において下層を移動相とした場合と同様に公転と自転を異なる方向で行うことにより、血液細胞成分を良好に分離できる可能性が示唆された。そこで、公転800-1000rpm、自転0-10rpmでの分離を検討した結果、公転800rpmにより自転0rpmで赤血球以外の血液成分が、自転10rpmで赤血球が溶出して互いに完全に分離した。また、ヒト血液を用いた場合では、公転700rpmにより白転0rpmで赤血球以外の血液成分が、自転10rpmで赤血球が互いに分離して溶出した。以上のことから、本装置が比重差による細胞分離に有効であることがわかった。(3)肥満細胞分離のための高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によるヒスタミン定量法の検討:ラット腹腔から分離した肥満細胞をcompound48/80で脱顆粒させ、遊離したヒスタミンをHPLCで分析する方法を検討した。o-フタルアルデヒドとN-アセチルシステインを溶離液中に溶解させ、ヒスタミンとオンカラムで誘導体化して蛍光検出する方法が有効であることを確認した。現在、Nonsynchronous CPCによる肥満細胞の分離法を検討中である。
自動調整型Correntropyによる電力負荷予測手法の再構築

電力会社において,翌日のピーク対応のガスタービン等の発電機の準備や揚水発電機の揚水量の決定のために,重要な情報となる翌日の最大電力負荷予測に対し,学習データに計測器の故障やネットワークの一時的な故障などによる異常値を含む場合に,従来型ニューラルネットワーク(ANN)のパラメータ学習に対し,コレントロピーを誤差関数として利用し,パラメータの調整に最新進化計算であるDifferential Evolutionary Particle Swarm Optimization(DEEPSO)を用いた方式を開発した。2018年度に開発した手法は,従来の誤差関数に最小二乗法を用いたバックプロパゲーション手法やPSOを用いた手法より,特に学習データ中の異常値率が高くなった際に,予測精度が他の手法より下がることなく,学習が可能であることを確認した。特に新電力においては,既存の電力会社と比較し,運用ノウハウの蓄積がないこともあり,学習データに異常値を含む割合が多くなっている。このような実務環境においては,従来,既存電力会社においても,異常値を手作業で除去するようなエンジニアリング業務が発生しており,長時間の作業を強いられてきた。これに対し,今回,開発した方法では,学習データに異常値を含んでいても,誤差関数にコレントロピーを用いることにより,異常値を除去するようなエンジニアリングを必要とせず,自然に異常値を無視した学習が可能となり,現場のエンジニアリングを大幅に削減できることが確認できた。この結果より,我が国が進めている新電力などによる電力分野の自由化の進展を促進することが可能となりえると考えられ,非常に意義深い結果と考えられる。電力会社において,翌日のピーク対応発電機の準備や揚水発電機の揚水量の決定に重要となる翌日の最大電力負荷予測に対し,学習データに異常値を含む場合に,従来型ニューラルネットワーク(ANN)のパラメータ学習に対し,コレントロピーを誤差関数として利用し,パラメータの調整に最新進化計算であるDifferential Evolutionary Particle Swarm Optimization(DEEPSO)を用いた方式を開発できた。予定通り,コレントロピーを誤差関数に利用することにより,従来の最小二乗法を用いたバックプロパゲーション手法やPSOを用いた手法より,特に学習データ中の異常値率が高くなった際に,予測精度が他の手法より下がることなく,学習が可能であることを確認できた。コレントロピーのカーネルサイズの最適化手法の確立については遅れているが,ニューラルネットワークのパラメータ学習に,最新の進化計算手法であるDEEPSOを適用することにより,学習データ中の異常値率が高くなった際にも,推定精度を下げることなく推定ができることを確認できたため,この部分については,予定にない成果をあげたと言える。予定では,2019年度より研究発表を予定していたが,前倒しで国内学会2件,国際学会1件(採択済で発表は2019年度)の研究発表を行うことができた。以上より,全体としては,おおむね順調に進展していると考えられる。2018年度は,研究の最初として,電力会社において,翌日のピーク対応発電機の準備や揚水発電機の揚水量の決定に重要となる翌日の最大電力負荷予測を対象として研究を開始し順調な進展ができた。しかし,予測業務において,学習データに異常値を含む可能性が高いのは,電力会社ほどに,現場の機器や通信ネットワークの信頼性を高くできない工場・ビル・マンション・家庭等の負荷予測を行う必要があるエネルギーマネジメントシステム(EMS)であり,2019年以降は,ビルEMS(BEMS)を対象に研究を進める。具体的には,明治大学中野キャンパスがBEMSの例となっており,異常値を含む負荷実績値データを入手できており,これを用いて研究を推進する。2018年度に実施した様々なコレントロピーの適用論文の調査から,正規分布型の関数の鋭利性を決定するカーネルサイズの調整が,現在,試行錯誤で行われており,大きな課題になっていることが改めて明確になった。従って,予定通り,コレントロピーのカーネルサイズの自動調整方法についての検討を進めていく。カーネルサイズの調整に関しては,当初予定していた統計的プロセス管理手法だけでなく,広く様々な統計的手法等の適用を検討していく。

電力会社において,翌日のピーク対応発電機の準備や揚水発電機の揚水量の決定に重要となる翌日の最大電力負荷予測に対し,学習データに異常値を含む場合に,従来型ニューラルネットワーク(ANN)のパラメータ学習に対し,コレントロピーを誤差関数として利用し,パラメータの調整に最新進化計算であるDifferential Evolutionary Particle Swarm Optimization(DEEPSO)を用いた方式を開発できた。予定通り,コレントロピーを誤差関数に利用することにより,従来の最小二乗法を用いたバックプロパゲーション手法やPSOを用いた手法より,特に学習データ中の異常値率が高くなった際に,予測精度が他の手法より下がることなく,学習が可能であることを確認できた。コレントロピーのカーネルサイズの最適化手法の確立については遅れているが,ニューラルネットワークのパラメータ学習に,最新の進化計算手法であるDEEPSOを適用することにより,学習データ中の異常値率が高くなった際にも,推定精度を下げることなく推定ができることを確認できたため,この部分については,予定にない成果をあげたと言える。予定では,2019年度より研究発表を予定していたが,前倒しで国内学会2件,国際学会1件(採択済で発表は2019年度)の研究発表を行うことができた。以上より,全体としては,おおむね順調に進展していると考えられる。2018年度は,研究の最初として,電力会社において,翌日のピーク対応発電機の準備や揚水発電機の揚水量の決定に重要となる翌日の最大電力負荷予測を対象として研究を開始し順調な進展ができた。しかし,予測業務において,学習データに異常値を含む可能性が高いのは,電力会社ほどに,現場の機器や通信ネットワークの信頼性を高くできない工場・ビル・マンション・家庭等の負荷予測を行う必要があるエネルギーマネジメントシステム(EMS)であり,2019年以降は,ビルEMS(BEMS)を対象に研究を進める。具体的には,明治大学中野キャンパスがBEMSの例となっており,異常値を含む負荷実績値データを入手できており,これを用いて研究を推進する。2018年度に実施した様々なコレントロピーの適用論文の調査から,正規分布型の関数の鋭利性を決定するカーネルサイズの調整が,現在,試行錯誤で行われており,大きな課題になっていることが改めて明確になった。従って,予定通り,コレントロピーのカーネルサイズの自動調整方法についての検討を進めていく。カーネルサイズの調整に関しては,当初予定していた統計的プロセス管理手法だけでなく,広く様々な統計的手法等の適用を検討していく。次年度使用額(B-A)は全体の6.6%のみであり,2018年度は,ほぼ予定通りの支出となっているが,若干の支出が残ったと言える。2019年度は,担当学生を1名追加しており,当初予定より論文投稿数をあげて予定している。
新規組織透明化技術を応用した教育用透明臓器標本の作製

【研究目的】解剖学の学習において、教科書の図では臓器内の血管の立体的な広がりを把握することは大変難しい。本研究では、申請者が所属する研究室で開発された組織透明化技術を用いて、血管に色素を注入したマウス臓器の透明化を行い、学習効果の高い解剖学教材の開発を目的とした。【研究方法】全身の血管を描出するために、麻酔下にマウス成獣の左心室からEDTA加生理食塩水で還流したのちに、希釈した黒色インクを注入した。インクは、筆記用具あるいはプリンター用として一般に市販されているものを流用した。インク注入後に、脳、肝臓、腎臓、骨格筋など各臓器を摘出し、組織透明化処理(特許出願のため非公開)を行った。動物実験は金沢医科大学動物実験委員会の承認を受けた。【研究成果】今回用いたカーボン系および顔料系インクは希釈時に凝集しやすく、凝集塊が大きい場合は血管の目詰まりを引き起こすため微小血管の描出は困雜であった。一方、超音波洗浄機にかけながら希釈した後に、顕微鏡下で凝集塊が破砕されていることを確認したインクを用いた場合、毛細血管を超えて静脈層まで描出することが可能であった。このことから、インクの調整に超音波処理が有効であることが確認された。大脳では、髄膜から内部に侵入する血管が大脳皮質内で枝針のように分枝する様が観察された。腎臓では、輸入細動脈、糸球体、輸出細動脈が非常に明瞭に観察された。皮膚を剥離した上腕を観察したところ、上腕動脈の枝が筋束に枝を出すとともに、栄養血管が上腕骨に侵入している像が観察された。肝臓については、肝動脈の詳細な分布を確認することができたが、類洞を描出することはできなかった。このように、ホールマウント標本の深部の血管走行を観察することができた。当初に計画していたホールマウント免疫染色標本の透明化については、免疫染色条件を決定することができず、今後の課題となった。
アポトーシスを制御する遺伝子間の転写調節

CAT遺伝子の上流にbaxプロモーターをつないだプラスミドをc-mycの発現ベクターと共にrat-1細胞に遺伝子導入し、CAT活性を測定することによりbaxプロモーターの活性を測定した。その結果c-mycは遺伝子導入量に依存してbaxのプロモーター活性を抑制することが判明した。次にこの抑制が転写段階で働いているのか、あるいはそれよりあとに作用しているのかを検討するため、遺伝子導入されたCAT、あるいは内因性のbaxのRNA発現量をノーザンブロット法で解析したところc-mycによる制御は認められなかった。これらのことからbaxのc-mycによる抑制は転写後のいずれかの段階で行われていると推測された。2.グルココルチコイド受容体の転写制御能に及ぼすBcl-2の影響グルココルチコイドによるアポトーシス誘導のメカニズムとBcl-2の強発現によるその抑制機序を解析した。グルココルチコイド受容体(GR)は転写因子の一つであり、グルココルチコイドと結合することにより細胞質から核に移行して機能する。GRによる下流の遺伝子の転写活性化はBcl-2の強発現により影響を受けなかったが、転写因子AP-1を介する転写抑制能はBcl-2強制発現により解除されることがわかった。この抑制解除のメカニズムをみるため、Bcl-2とGRの結合の有無をGST融合蛋白を用いて検討したが、少なくともこの2者の直接の結合は証明されなかった。以上のことより、グルココルチコイドは、AP-1によって転写調節されている“survival gene"を抑制することによってアポトーシスを誘導しており、Bcl-2はその抑制を解除することでアポトーシスを阻止している可能性が示されたが、その解除のメカニズムまでは明らかにできなかった。
新規遺伝子発現制御を目指したDNA疎水空間における部位特異的修飾法の開発

遺伝子に対するアルキル化反応は、抗ガン剤のメカニズムとして知られており、シスプラチンなどが臨床応用されているが、標的遺伝子に対する選択性がないことが問題とされる。遺伝子に対し選択的にアルキル化する方法論の開発は、副作用のない抗ガン剤になる可能性を持つ。本申請研究では、標的遺伝子に1塩基欠失部位を持つオリゴあるいはペプチド核酸を加えることで形成される疎水性空間において部位特異的にアルキル化を誘導できる分子の開発を目指した。これらの分子の開発は選択的な新規遺伝子発現制御の方法論として展開できると期待される。遺伝子に対する化学反応は、アルキル化剤などの低分子が遺伝子に反応し変異を誘導することが古くから研究されており、癌などの病気の原因になることが知られている。一方で遺伝子に対するアルキル化反応は、抗ガン剤のメカニズムとしても知られており、シスプラチンなどが臨床応用されているが、標的遺伝子に対する選択性がないことが問題とされている。遺伝子に対して選択的にアルキル化する方法論の開発は、副作用のない抗ガン剤になる可能性を持つ。本申請研究では、標的遺伝子に1塩基欠失部位を持つオリゴあるいはペプチド核酸を加えることで形成される疎水性空間において部位特異的にアルキル化する低分子プローブの開発を目指す。これらのプローブの開発は選択的な新規遺伝子発現制御の方法論として展開できると期待される。今年度はまず標的1本鎖DNAに対しAP-サイトを持つオリゴDNAを用いて配列選択的に疎水空間を形成させ、その部位における特異的化学修飾法の開発を検討した。その方法論として、AP-サイトの相補的な位置にある塩基に対し水素結合形成により活性化され選択的にアルキル化反応するプローブを設計した。具体的には既に開発している反応性塩基として2-アミノ-6-ビニルプリンを用い、2本鎖DNAに対して親和性を持つペンタペプチドを導入したプローブを合成することとした。まず2本鎖DNAのAATT配列のマイナーグルーブに結合するPRGRP導入したプローブを合成し、塩基欠失部位を持つ2本鎖DNAとの反応を検討した。その結果、塩基欠損部位の向かいのチミンに対して選択的に反応することがわかった。さらにより2本鎖DNAに対して親和性が高いと考えられるペンタアルギニンを導入したプローブを合成し、同様の方法で反応性を評価した。その結果、中性条件下、24時間後、約60%の収率で塩基欠損部位の向かいのチミンに対して選択的に反応することがわかった。今年度はまず標的1本鎖DNAに対してAP-サイトを持つオリゴDNAを用いて配列選択的に疎水空間を形成させ、その部位における特異的化学修飾法の開発を検討した。その方法論として、AP-サイトの相補的な位置にある塩基に対して水素結合形成により活性化され選択的にアルキル化反応するプローブを設計した。昨年度までの検討においてペンタアルギニンを有するプローブが反応性は高いものの、1本鎖に反応することから、今年度は2本鎖に対して親和性を持つアクリジン及びヘキストを導入したプローブを合成し、その反応性を評価した。その結果いずれも塩基欠損部位の向かいのチミンに対して選択的に反応すること、1本鎖には反応せず塩基欠損部位をも持つ2本鎖DNAに対し選択的に反応することがわかった。さらに反応したDNAをテンプレートとしてDNAポリメラーゼによるプライマー伸長反応を検討したところ、いずれの場合にも反応点であるチミンのところで、伸長反応が阻害されることもわかった。さらにインベージョン能を持つ擬相補的PNAの合成を達成した。本申請研究では、標的遺伝子に1塩基欠失部位を持つオリゴを加えることで形成される疎水性空間において部位特異的にアルキル化する低分子プローブの開発を目指した。

昨年度までの検討において2-amino-6-vinylpurineとヘキストをコンジュゲートしたプローブが塩基欠損部位の向かいのチミンに対して選択的に反応することがわかっていた。そこで、本年度はさらにこのアルキル化プローブの機能拡大をめざし、7位の窒素を炭素で置換し、アルキンを導入したデアザ体とヘキストをコンジュゲートしたプローブを合成し、その反応性を評価した。その結果、塩基欠損部位の向かいのチミンに対して選択性が非常に高いこと及び1本鎖に対してほとんど反応しないことを明らかにした。さらにDNAに対して反応させたのち、アルキンに対するクリック反応により、蛍光基を導入することにも成功した。遺伝子に対するアルキル化反応は、抗ガン剤のメカニズムとして知られており、シスプラチンなどが臨床応用されているが、標的遺伝子に対する選択性がないことが問題とされる。遺伝子に対し選択的にアルキル化する方法論の開発は、副作用のない抗ガン剤になる可能性を持つ。本申請研究では、標的遺伝子に1塩基欠失部位を持つオリゴあるいはペプチド核酸を加えることで形成される疎水性空間において部位特異的にアルキル化を誘導できる分子の開発を目指した。これらの分子の開発は選択的な新規遺伝子発現制御の方法論として展開できると期待される。本年度、計画していた2つの分子プローブとして、ヘキストを持つプローブ及びアクリジンを持つプローブの合成に成功した。これらのプローブの反応性を検討したところ、選択性及び効率とも非常に高いブローブの開発に成功した。ヘキストを持つ反応性プローブについては、その反応性がヘキストの結合部位であるAATT配列と反応点である塩基欠損部位のチミンとの距離に依存することもわかった。この結果は、当初の設計どおりに、ヘキスト部分が2本鎖DNAに結合し、塩基欠損部位の向かいのチミンに対して反応性塩基2-AVPが水素結合形成することで反応が進行したことを示していると考えている。またこれらのプローブが反応した位置で、DNAの伸長反応が止まることもわかった。これらの結果は当初、予期していなかったことであり、これらのプローブを今後検討していくにあたり、非常に有用な性質であると考えている。さらに予備的ではあるが、反応性塩基側の構造についてもいくつか検討した。その結果、非常に高い反応性を持つプローブの開発、さらには反応後に機能性分子を導入可能なプローブの合成にも成功した。これらの研究の進展は当初予定していた計画よりも早いと考えられる。本研究で目標としていた、疎水空間の一つである塩基欠損部位での選択的アルキル化反応を誘導するプローブは開発できたものと考えている。さらに2本鎖DNAを標的としたアルキル化反応の検討に必要な擬相補的ぺプチド核酸の合成にも成功したので、これを用いて今後は検討を行う予定である。27年度が最終年度であるため、記入しない。核酸化学、ケミカルバイオロジー昨年度までにDNAの疎水空間の一つである塩基欠損部位における選択的アルキル化反応するプローブ開発に成功した。本年度は2本鎖DNAに対してアルキル化反応するプローブの開発及び細胞内への適用について検討する。まず昨年度までに合成した低分子プローブと擬相補的PNAを用いて2本鎖DNAに対する反応性を評価する。
バイオロジカルモーションを用いた対人技能ダイナミクスの解明

本年度は,昨年構築した実験系を用いて,投手の投球動作を映像としてスクリーンに呈示し,それに対する打者の動作を計測した.まず,投手の投球動作をビデオとモーションキャプチャで記録した.今年度はビデオ映像を用いて投球準備動作のみを時間的に伸張・短縮加工し,投手のボールリリース後のボールの球速は同じになるようにして,そのビデオ映像に対する打者の反応を計測する実験を行った.実験は3種類行われた.1)投球準備動作の長さ(速さ)が異なる2種類の映像(ボールリリース前までの投球準備動作のみ)を連続して呈示し,どちらが速いかの球速判断を行わせる.2)投球準備動作の長さ(速さ)が異なる2種類の映像をボールリリース後から打者の位置まで飛んでくるボールの軌道まで呈示し,どちらが速かったかの球速判断を行わせる.3)投球準備動作が速い,通常,遅いの3種類の映像(打者の位置までのボールの軌道あり)に対して,実際にボールを打つタイミングで素振りを行う.そしてその打撃動作をモーションキャプチャと小型床反力計測装置を用いて計測した.その結果,投球準備動作のみを見て判断した場合も,ボール軌道まで見て判断した場合も,投球準備動作の速度に球速判断が引きづられる,すなわち,速い投球準備動作は球速が速いと予測あるいは判断していた.しかしながら,ボールの軌道を見た場合の方がその確率は低かった.さらに,実際にバットを振る場合においても,打撃準備動作は投球準備動作の速度によって,影響を受けることが明らかになったが,タイミング一致誤差には大きな違いは見られなかった.まずは新たに導入した実験系において,ビデオ映像を用いたものではあるが,知覚判断実験から実際の動作の測定までできたことは大きな前進である.また,対照実験としてビデオ映像を用いたことによって,今後行うバイオロジカルモーションでの実験との比較が可能になったことが大きい.また,ビデオ映像による動作のわずかな速度の違いによって,その後の予測や判断に大きな影響を及ぼし,動作をも変えてしまう可能性が示唆されたことは,対人技能における二者間の駆け引きや他者の「気配」を感じる仕組みを解明する上で大きな発見である.さらに,この実験の基礎となる打者の打撃準備動作に関するフィールド研究と,理論的枠組みに関するレビュー論文を国際誌に掲載できたことも大きい.今後は前年度と同じ投手の投球動作をバイオロジカルモーションで呈示することによって,どのような情報の違いがこの予測や判断に影響を及ぼすかを検討することである.つまり,バイオロジカルモーションでは呈示する光点の数や位置を自由に操作でき,どの部位の運動情報が正確な予測,あるいは誤った予測を生み出すのかを検討することができる.さらに,より熟練した打者を対象に,この実験を行うことで,対人技能ダイナミクスの解明につなげていく.本年度は,対人技能ダイナミクス解明のための実験系の構築を主とした.具体的には,透過型スクリーンにバイオロジカルモーション刺激を呈示することと,呈示刺激に追従する際,あるいは実際の他者の動きに対する身体の動きを,モーションキャプチャで身体全体のキネマティクスを,小型床反力計測装置で下肢のキネティクスを,さらに無線筋電計で筋出力を同時計測できる実験系を,MATLABのPsychotool boxを用いて構築した.こうした実験系を利用した実験計画を検討し,予備実験をいくつか行った結果,スクリーンへ呈示されたバイオロジカルモーション刺激を追従する場合には,全身反応時間よりも明らかに速い追従動作の開始と下肢の加重が見られた.このことは限られた光点の動きからでも次の動きが予測できることを示唆していると考えられた.したがって,どのような情報に基づいてこうした予測が成り立つのかを検討することができる.また,二者の動作(野球における投手のけん制動作と走者の離塁・帰塁動作)を筋電計で計測した予備実験では,キネマティクスでは観察されないわずかな他者(投手)の下肢の筋出力に対応して自ら(走者)の動作方向の判断と動作を開始していることが観察された.このことは,他者の筋出力という視覚情報による観察によって得ることができないと思われる情報を「気配」として感じている可能性を示唆する.平成30年度は,さらにこうした点について詳細に検討を加える予定である.対人技能ダイナミクス解明のための実験系の構築が順調に進み,スクリーンに呈示した刺激に対する反応動作,あるいは実際の他者の動きに対する反応動作を,キネマティクス,キネティクス,筋出力という異なるレベルで計測することができた.これらの実験系によって,バイオロジカルモーションのように実際の情報を縮約した状況から,実際の動き(ビデオや実体)までさまざまな刺激を用いて対人技能ダイナミクスの解明が可能となる.二者間の駆け引きや他者の「気配」を感じる仕組みの解明への実験的アプローチが可能となる.本年度は,昨年構築した実験系を用いて,投手の投球動作を映像としてスクリーンに呈示し,それに対する打者の動作を計測した.まず,投手の投球動作をビデオとモーションキャプチャで記録した.今年度はビデオ映像を用いて投球準備動作のみを時間的に伸張・短縮加工し,投手のボールリリース後のボールの球速は同じになるようにして,そのビデオ映像に対する打者の反応を計測する実験を行った.実験は3種類行われた.1)投球準備動作の長さ(速さ)が異なる2種類の映像(ボールリリース前までの投球準備動作のみ)を連続して呈示し,どちらが速いかの球速判断を行わせる.2)投球準備動作の長さ(速さ)が異なる2種類の映像をボールリリース後から打者の位置まで飛んでくるボールの軌道まで呈示し,どちらが速かったかの球速判断を行わせる.

3)投球準備動作が速い,通常,遅いの3種類の映像(打者の位置までのボールの軌道あり)に対して,実際にボールを打つタイミングで素振りを行う.そしてその打撃動作をモーションキャプチャと小型床反力計測装置を用いて計測した.その結果,投球準備動作のみを見て判断した場合も,ボール軌道まで見て判断した場合も,投球準備動作の速度に球速判断が引きづられる,すなわち,速い投球準備動作は球速が速いと予測あるいは判断していた.しかしながら,ボールの軌道を見た場合の方がその確率は低かった.さらに,実際にバットを振る場合においても,打撃準備動作は投球準備動作の速度によって,影響を受けることが明らかになったが,タイミング一致誤差には大きな違いは見られなかった.まずは新たに導入した実験系において,ビデオ映像を用いたものではあるが,知覚判断実験から実際の動作の測定までできたことは大きな前進である.また,対照実験としてビデオ映像を用いたことによって,今後行うバイオロジカルモーションでの実験との比較が可能になったことが大きい.また,ビデオ映像による動作のわずかな速度の違いによって,その後の予測や判断に大きな影響を及ぼし,動作をも変えてしまう可能性が示唆されたことは,対人技能における二者間の駆け引きや他者の「気配」を感じる仕組みを解明する上で大きな発見である.さらに,この実験の基礎となる打者の打撃準備動作に関するフィールド研究と,理論的枠組みに関するレビュー論文を国際誌に掲載できたことも大きい.この実験系を用いて,基礎的な左右の動きへの追従動作,剣道における二者の駆け引き,投手ー打者間の駆け引きなどに見られる他者の動きの「気配」を感じ,それに対する素早い判断を行い,実際に動きを遂行する過程を実験的に解明していくことになる.どういった情報に基づいて「気配」を感じるのかを,刺激呈示による情報操作によるアプローチと,実際の場面での二者の同時計測による情報探索アプローチの両面から明らかにしていく.今後は前年度と同じ投手の投球動作をバイオロジカルモーションで呈示することによって,どのような情報の違いがこの予測や判断に影響を及ぼすかを検討することである.つまり,バイオロジカルモーションでは呈示する光点の数や位置を自由に操作でき,どの部位の運動情報が正確な予測,あるいは誤った予測を生み出すのかを検討することができる.さらに,より熟練した打者を対象に,この実験を行うことで,対人技能ダイナミクスの解明につなげていく.
『観無量寿経』十六観の図像表現からみた中国浄土教の変遷とその美術

本研究の目的は、『観無量寿経』所説の十六観に着目し、現存作例が集中する敦煌の作例について実地調査を行い、文献研究と摺り合わせることにより、信仰の実態と造形美術との関係を動的・実証的に明らかにすることにある。本年度は、敦煌莫高窟の壁画を引き続き調査し、既調査の諸作例を含めた分析・分類を行い、時代的変遷を洗い出すとともに、敦煌の十六観図に関わる文献資料として、フランス国立図書館が所蔵する敦煌文書を調査し、これまでの調査研究と考察の結果をまとめた。(1)現地調査:未公刊の中唐以降の作例を対象に現地調査を行った。2007年10月には、敦煌莫高窟において第91窟(南壁)、第92窟(南壁)、第116窟(南壁)、第117窟(南壁)、第126窟(北壁・南壁)、第188窟(北壁・南壁)、第18窟(南壁)、第19窟(南壁)の十六観図を計10点調査し、うち破損により図様が確認できなかった第92窟の1例を除く計9点について、調書と描き起こし図を作成した。また2007年12月には、フランス国立図書館において、計4点の敦煌文書(pelliot chinois2868,3304,3352,4515.16.2)を調査し、調書を作成した。(2)成果発表:2007年7月29日に名古屋大学において開催された、科学研究費補助金(基盤研究B,研究課題「交流と伝統の視点から見た仏教美術の研究-インドから日本まで-」研究代表者:宮治昭氏)の研究会において、「西方浄土変の研究-唐代における『観無量寿経』十六観とその造形化をめぐって-」と題して、これまでの研究の成果をまとめ発表した。また、敦煌における十六観図の分類と変遷について、論文「敦煌十六観図の分類と変遷」(『朝日敦煌研究員派遣制度記念誌』所収)を執筆した。本研究の目的は、『観無量寿経』所説の十六観を絵画化した十六観図に注目することによって、中国浄土教における信仰の実態と造形作品との関わりを明らかにすることにある。本年度は、ニューデリー国立博物館所蔵と敦煌莫高窟における現地調査と、十六観図データベースの構築を中心に、十六観図の分類に関わる考察研究を行った。(1)現地調査:未公刊の中唐以降の作例を対象に、現地調査を行った。2007年2月には、ニューデリー国立博物館所蔵スタイン・コレクションの絹本画(Ch.0051,Ch.V.001,Ch.Lvi.0018,Ch.Lv.0047)を、同年3月には、敦煌莫高窟の壁画(第147窟南壁,第177窟南壁,第200窟南壁,第201窟北壁,第201窟南壁)を調査し、それぞれ調書と描き起こし図を作成した。(2)データの整理と分析:これまでに収集した図像およびテキストのデータを収集・整理するにあたって、国立情報学研究所ディジタル・シルクロード・プロジェクトが開発しているメタデータ管理システム(ASPICO)を用いて十六観図データベースを構築し、15作例のデータ入力を行った。さらに、今後のデータ整理を効率的に進めること、かっ手作業での主観的分類を検証することを目的として、入力した15作例を対象に、データベースを用いた数量的分析による作例の分類についても試みた。(3)成果発表:十六観図データベースの構築と分析に関する成果は、2006年12月15日に同志社大学にて行われた「人文科学とコンピュータシンポジウム」において「メタデータ管理システム(ASPICO)を用いた十六観図DBの構築とその分析」と題して発表した。また、平成18年度科学研究費補助金「研究成果公開促進費(学術図書)」による出版物『西方浄土変の研究』(中央公論美術出版、2007年2月)を刊行し、これまでに得られた十六観図に関する知見や、初唐期から盛唐期を中心とする敦煌画十六観図の基礎資料を発表した。

また2007年12月には、フランス国立図書館において、計4点の敦煌文書(pelliot chinois2868,3304,3352,4515.16.2)を調査し、調書を作成した。(2)成果発表:2007年7月29日に名古屋大学において開催された、科学研究費補助金(基盤研究B,研究課題「交流と伝統の視点から見た仏教美術の研究-インドから日本まで-」研究代表者:宮治昭氏)の研究会において、「西方浄土変の研究-唐代における『観無量寿経』十六観とその造形化をめぐって-」と題して、これまでの研究の成果をまとめ発表した。また、敦煌における十六観図の分類と変遷について、論文「敦煌十六観図の分類と変遷」(『朝日敦煌研究員派遣制度記念誌』所収)を執筆した。
生理活性を有する海産ジテルペノイドの合成研究

Halimedatrialはバハマ産の石灰藻から見出されたジテルペノイドで、抗菌活性、抗カビ作用、ウニ受精卵の卵割阻害作用など多彩な生理活性を示し、特異な化学構造を持つことから薬学的にも合成化学的にも興味の持たれる化合物である。しかし、この化合物の絶対配置は未決定である。著者は、halimedatrialのエナンチオ選択的合成法を確立し、その絶対配置を含めた全合成を明らかにする目的で本研究を行った。まず、本合成における重要な問題点の一つであるジホルミルシクロペンテン部の構築についてモデル化合物を用いて検討した。その結果、(S)-4-ヒドロキシ-2-シクロペンテノンの不斉中心をとなりに移し、4-アルキル-2-シクロペンテノン誘導体とし、これとトリメチルシリルアセチレンとの光反応によりシクロブテン環を形成し、その二重結合を酸化的に開裂する方法でこの問題を解決した。次いで、モデル実験で得た知見を基にhalimedatrialの合成を検討し、下図の合成経路によりhalimedatrialの鏡像体である(+)-halimedatrialの全合成を達成した。また、この合成によりhalimedatrialの絶対配置を確定した。
心筋収縮不全における解糖系・細胞内カルシウム・プロテアーゼ活性化の相互連関

本研究において、今年度は以下のことを行った。1.心筋再灌流障害における虚血時細胞内ナトリウム・イオン蓄積の意義の検討:心筋では、虚血と共に細胞内のナトリウム・イオン濃度が直線的に増加し、再灌流後は指数関数的に虚血前のレベルへと回復することを、ナトリウム磁気共鳴法を用い、確認した。さらに、再灌流後の収縮機能の回復と虚血中のナトリウム・イオンの蓄積量とには負の相関があること、しかし、再灌流時の回復速度を違えることにより機能回復に差をもたらし得ることを明らかにした。このことは、虚血中のナトリウム蓄積が再灌流障害の基質となっていることを示唆している。2.心筋細胞内でのカルパイン活性に要するカルシウム濃度の推定:昨年度に引き続き、モルモットの単離心筋細胞にカルシウム指示薬とカルパイン活性指示薬とを同時に負荷し、カルシウム・オーバーロード時のカルパイン活性化の過程を評価した。さらに、二種のカルシウム指示薬を用い、結果を対比することにより、カルパインが活性化される際の細胞内カルシウム・イオン濃度を定量的に評価し得た。その結果、カルパインは、比較的低い、生理的なカルシウム・イオン濃度においても活性化されることが明らかとなった。4.心筋梗塞急性期、亜急性期における心筋代謝の検討:ラット心筋梗塞・再灌流モデルを用い、急性期、亜急性期における、脂肪酸取り込み、糖取り込みを評価した。急性心筋梗塞に対する再灌流療法の効果を、BMIPP-SPECT、FDG-PETを用いて評価することの意義を検討した。次年度においては、当初予定通りに、各検討を進める予定である。本研究の初年度として、以下のことを行った。1.糖尿病心における虚血耐性の機序:streptozocinにより誘発したIDDMラットの心筋には虚血耐性が報告されている。その機序を解明するため、新たにNa-NMRによる細胞内Naイオン濃度の測定法を確立した。細胞内Naイオン濃度は虚血と共に増加するが、糖尿病心ではこの増加が抑制されており、その結果、再灌流時のカルシウム・オーバーロードが軽減され、虚血耐性を示すことが明らかにされた。また、細胞内Na蓄積の抑制には、細胞膜状のNa/H交換機構の活性低下が関与することも明らかにし得た。2.心筋グルコース・トランスポータ(GLUT)のdeoxyglucose(DG)に対する親和性の変化:GLUTのグルコースへの親和性に対するDGへの相対的親和性は、従来、一定と考えられていた。しかし、燐NMRを用いた心筋糖取込速度の定量化により、この相対的親和性が条件により変動することを明らかにした。3.心筋細胞内カルパイン活性の測定:モルモットの単離心筋細胞にカルシウム指示薬とカルパイン活性指示薬とを同時に負荷し、カルシウム・オーバーロード時のカルパイン活性の上昇を観測し得た。今後、この方法の感度の増加、定量的測定法の開発を行う予定である。4.拡張型心筋症(DCM)による心不全における心筋代謝の検討:DCMにより心不全を呈した患者に、FDG-PET、BMIPP-SPECTを施行し、心機能と心筋代謝との関連を検討した。その結果、空腹時、および糖負荷時におけるFDG取り込みのパターンから重症度を分類できる可能性が示された。次年度以降においては、当初予定通りに、各検討を進める予定である。
顎顔面免疫と生殖器免疫のクロストーク

一個所の粘膜関連リンパ組織(MALT)に抗原投与することで遠隔の粘膜面に抗原特異的免疫応答が誘導されることは現象論として知られているものの、その分子・細胞機構については不明であった。近年、パイエル板において誘導される抗原特異的免疫担当細胞の腸管粘膜指向性決定分子群が同定されたが、経鼻免疫および経眼免疫によって誘導される抗原特異的免疫担当細胞の膣粘膜組織指向性を決定する分子機構については未だ不明である。そこで、当研究室で同定しその組織形成分子・細胞機構を明らかにしてきた鼻咽頭関連リンパ組織(NALT)と涙道関連リンパ組織(TALT)を介して、抗原の経鼻免疫および経眼免疫によって遠隔の膣粘膜において抗原特異的免疫応答が誘導される分子・細胞機構を明らかにすることを目的とし、膣粘膜感染防御に必須であるエフェクターメモリーCD4+ T/CD8+ T細胞および抗原特異的lgA+ B細胞の誘導組織から膣粘膜組織への移動および局在の制御機構について解析する。そしてそれらの知見を利用した性感染症に対する新世代粘膜ワクチンの開発への基盤研究遂行を目指す。経鼻・経眼免疫した抗原タンパク質や細菌・ウイルスのイメージング:経眼投与または経鼻投与されたウイルス(HSV-2)・細菌(C.trachomatis)がどの組織(鼻粘膜組織やリンパ組織など)に局在し、抗原提示細胞により捕捉・処理されているのか、マクロ蛍光イメージング法により詳細に解析する目的で研究を遂行している。まず我々は作成に成功したEGFP発現HSV-2株を用いて、経鼻投与されたウイルスが所属リンパ節ではなく鼻粘膜固有層にて抗原提示細胞に補足されることを免疫組織染色法および定量RT-PCR法により明らかにした。以降、基盤Sの採択に伴い、以降の研究成果については基盤Sに移行する。