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文芸/歴史研究の中間的領域「史伝」研究-「少年史伝叢書」を中心に-

研究の第一の目的であった大同館書店「少年史伝叢書」(国光社版は刊行されていなかった)の目録は、2005年度までに『国文学論集』(国士舘大学文学部文学科日本文学専攻紀要)への掲載を介し、内容紹介を含むものが紹介できた。若干、入手・閲覧ができなかった資料もあったが、今回の調査で、ほとんどの点数とその性格が公開された。今年は最終年のため、目野は2006年3月刊行の『国文学論集』に、資料紹介「大同館版「少年史伝叢書」の調査(3)」と、本叢書における例外的文献についての考察論文「「少年史伝叢書」の叢書構成について(2)-児童に読ませない少年読物-」の、二本を乗せることとなった。第二の目的として、類似する少年向け伝記叢書の刊行状況調査があったが、こちらは資料収集の段階に留まった。とはいえ、2006年4月15日の日本比較文学会4月例会(於清泉女子大学)で発表予定の「東京、ブエノスアイレス、ニューデリー-藤村の旅」は、この資料収集成果を踏まえたものである。今後、こうした戦中から昭和期の類似する叢書研究を、さらに進展させる所存である。最終年にあたる今年度の公的な成果発表としては、2005年の6月11日に、日本児童文学学会6月例会(於日本フラワーデザイン専門学校)の席上で、「「『少年史伝叢書』の生成について」の口頭発表を行ったことが挙げられる。学会参加者は少数だったが、ほぼフロア全員からの質疑応答があり、有意義な発表であった。ここで指摘された参考文献などを補足し、今後改めて、より大きな形で3年間の調査をまとめていきたい。平成15年度に得られた研究実績は、以下の通りである。(1)「少年史伝叢書」の古書店を通じた現物収集は、これまでも本叢書収集に関して協力を依頼している、神田神保町の古書店山口書店の尽力を得た。ただしこれまでに研究代表者が未購入分の本叢書収集は難航し、入手できたのは橋本賢康『阪上田村麻呂の史話全』(大同館書店、1941、函つき)一冊のみであった。ただし山口書店の配慮により、前掲書とともに、本叢書研究を益する同時代資料を各種購入することができた。(2)東京都内の資料館の所蔵資料をめぐる「少年史伝叢書」目録化については、研究代表者と本学大学院生である研究協力者7名で進めた。研究代表者はこれまでのデータ収集成果と調査出張などに基づいて作業を行い、研究協力者は国際子ども図書館を訪問して調査カードを作成した。(研究協力者作成分の調査内容は、最終的に研究代表者が国際子ども図書館を訪問し裏付けを行った。)(3)「少年史伝叢書」及び児童向け「史伝」関連文献を有する関西方面の施設への調査訪問については、平成15年の本務校の夏期休暇を利用し、大阪国際児童文学館へ出張し(9月19日)、三冊の書誌カードを作ることができた。年度当初、来訪を予定していたもう一つの資料館、大阪府茨木市の梅花女子大学図書館収蔵の資料については、都内でも閲覧可能とわかりこれを省略した。(4)上記の成果をまとめ、『国文学論輯』第二十五号(国士舘大学国文学会)に発表(目野「大同館版『少年史伝叢書』の調査(1)」、99p162p)した。なお、(1)の『阪上田村麻呂の史話』については、入手時期が遅くなり、『国文学論輯』原稿執筆締め切りに間に合わなかった。そのため、目録化を次年度に繰り延べることとした。平成16年度に得られた研究実績は、以下の通りである。(1)「少年史伝叢書」の古書店を通じた現物収集は、昨年通り神田神保町の古書店山口書店の協力を仰いだが、今年度はいまだ入手できていない分はより少なくなり、昨年度よりいっそう難航したため、入手できたのは戦前の少年文学に関する資料のみとなった。それでも山口書店の配慮により、戦前の伝記や少年文化・文学を専門とする書店関係資料、教科書や類似する叢書など、重要な文献を購入することができた。(2)東京都内の資料館の所蔵資料をめぐる「少年史伝叢書」目録化については、研究代表者と本学大学院生である研究協力者十名で進めた。研究代表者はこれまでのデータ収集成果と調査出張などに基づいて作業を行い、研究協力者は国際子ども図書館・国会図書館・日本近代文学館・三康図書館などを訪問して調査カードを作成した。研究協力者作成分の調査内容の、最終的な文責は目野にある。(3)平成16年には、資料収集は都内で十分実施できたため、出張は行わなかった。(4)上記の成果をまとめ、『国文学論輯』第26号(国士舘大学国文学会)に「大同館版「少年史伝叢書」の調査(2)」、『人文学会紀要』第37号(国士舘大学文学部人文学会)に「「少年史伝叢書」の叢書構成について-「史伝」概念の生成-」を発表予定である。(5)本研究は三年計画で行っており、最終的な調査結果とその分析は平成17年度に発表予定である。そのため、今年度までは途中経過を紀要発表するのみであったが、次年度は専門の学会での発表を行うのが望ましい。そこで平成16年度は次年度の準備のため、日本児童文学学会に入会した。

研究の第一の目的であった大同館書店「少年史伝叢書」(国光社版は刊行されていなかった)の目録は、2005年度までに『国文学論集』(国士舘大学文学部文学科日本文学専攻紀要)への掲載を介し、内容紹介を含むものが紹介できた。若干、入手・閲覧ができなかった資料もあったが、今回の調査で、ほとんどの点数とその性格が公開された。今年は最終年のため、目野は2006年3月刊行の『国文学論集』に、資料紹介「大同館版「少年史伝叢書」の調査(3)」と、本叢書における例外的文献についての考察論文「「少年史伝叢書」の叢書構成について(2)-児童に読ませない少年読物-」の、二本を乗せることとなった。第二の目的として、類似する少年向け伝記叢書の刊行状況調査があったが、こちらは資料収集の段階に留まった。とはいえ、2006年4月15日の日本比較文学会4月例会(於清泉女子大学)で発表予定の「東京、ブエノスアイレス、ニューデリー-藤村の旅」は、この資料収集成果を踏まえたものである。今後、こうした戦中から昭和期の類似する叢書研究を、さらに進展させる所存である。最終年にあたる今年度の公的な成果発表としては、2005年の6月11日に、日本児童文学学会6月例会(於日本フラワーデザイン専門学校)の席上で、「「『少年史伝叢書』の生成について」の口頭発表を行ったことが挙げられる。学会参加者は少数だったが、ほぼフロア全員からの質疑応答があり、有意義な発表であった。ここで指摘された参考文献などを補足し、今後改めて、より大きな形で3年間の調査をまとめていきたい。
眼表面ムチンのバリア機能および水濡れ性に関する検討

オキュラーサーフェスの構成成分の一つであるムチンは眼表面で重要な役割を担っている。最近、ドライアイ治療薬としてムチン産生促進作用をもつ治療薬が複数上市され、ドライアイと眼表面ムチンの関連の重要性が注目されている。本研究では、各種ドライアイ治療薬によるムチン発現および眼表面の水分上昇の特徴について検討した。また、高速度カメラを用いた接触角計のシステムを構築し、ムチンによって接触角が小さくなり水濡れ性が向上することを証明した。本研究の結果がドライアイの病態解明の一助となると考えられ、さらにムチンを介した効果的なドライアイ治療方法の構築に役立つと思われる。ムチンは生体内で粘膜保護という重要な役割を担う糖タンパクであり、眼表面においても角膜や結膜を保護するムチンが涙液中および角結膜上皮細胞の最表層に存在している。これらムチンは眼表面においてバリア機能と水濡れ性の二つの大きな役割を担っている。本研究の目的は、眼表面ムチンのバリア機能と水濡れ性について実験的に再現することである。本年度は、眼表面の水濡れ性を検討するための接触角を計測する接触角計について、眼表面上皮細胞においても計測できるような測定機器の改良を行った。具体的には、接触角計SImage 100 (エキシマ社)に高速度撮影カメラシステムを搭載し、自動測定ソフトを組み込んで比較的水濡れ性のよい角膜結膜上皮細胞においても接触角が測定できるように改良を行った。種々の濃度のムチン溶液(ウシ顎下腺ムチン)を滴下した時の接触角を測定したところ、ムチンの濃度が上昇するにしたがって接触角が減少することを計測することができ、本機器のシステムがムチンと水濡れ性の関連についての研究に有効であることが明らかになった。また、本システムを用いて各種コンタクトレンズの水濡れ性についても検討を行っており、本システムは、眼表面の水濡れ性の評価のみならず、コンタクトレンズ等の医療機器や生体材料等の新規開発の際にも有用なシステムであると考えられる。また、現在眼表面のムチン発現を上昇させることでドライアイ治療を行う点眼が市販されているが、本研究を進めることにより、どのようなドライアイ患者にどれだけムチンが上昇して眼表面の水濡れ性が改善しているかを、臨床的に評価できる可能性が考えられる。薬剤の治療効果の評価判定や、眼表面の障害の評価の一つの指標など、眼表面の水濡れ性を評価する意義は非常に高いと考える。眼表面ムチンがオキュラーサーフェスにおいてどのような役割を果たしているかを検討するために、本研究ではバリア機能と水濡れ性に焦点をあてて研究を行っている。バリア機能に関しては、培養ヒト結膜上皮細胞をもちいて、電気抵抗(TER: transepithelial electrical resistance)を計測することでバリア機能を定量することができるが、現在、実験系を構築中である。水濡れ性に関しては、高機能接触角計のシステムを構築することができた。本システムは材料に水滴を滴下する様子を高速度カメラで撮影し、接触角を計測できるようになった。現在、ハードコンタクトレンズおよびソフトコンタクトレンズを用いて接触角を測定することに成功しており、培養細胞シートをもちいての計測を今後行っていく予定である。また、現在我が国では眼表面ムチンを増加させてドライアイを治療する点眼が発売されている。これらには、ジクアホソルナトリウム点眼とレバミピド点眼があるが、この2種類の点眼をどう使い分けて行くかが今後の課題となっている。昨年、我々は、正常ウサギおよびラットドライアイモデル(眼窩外涙腺摘出モデル)を用いて、ジクアホソルナトリウムがレバミピドに比べて点眼後短時間においての涙液量の増加が多いことを解明し、日本眼薬理学会にて報告した。今後は、これらの点眼が眼表面のバリア機能や水濡れ性とどのようにかかわっているかを解明する予定である。本研究により、これらドライアイ点眼をどのように使い分けて行くかを臨床にフィードバックできると考えている。ムチンは高分子の糖タンパクであり、生体内では粘膜保護という重要な役割を担っている。ムチンはその構造上から膜型ムチンと分泌型ムチンがあり、眼表面においても角膜や結膜を保護する膜型および分泌型ムチンが涙液中および角結膜上皮細胞の最表層に存在している。ムチンの眼表面における役割は、潤滑剤としての役割、水濡れ性を上昇させる役割、バリア機能としての役割の3つが大きな柱となっており、昨年度、我々は接触角計SImage 100 (エキシマ社)に高速度撮影カメラシステムを搭載し、自動測定ソフトを組み込んで比較的水濡れ性のよい角膜結膜上皮細胞においても接触角が測定できるように改良を行い、ウシ顎下腺ムチンを滴下した時の接触角を測定したところ、ムチンの濃度が上昇するにしたがって接触角が減少することを計測することができ、本機器のシステムがムチンと水濡れ性の関連についての研究に有効であることを証明した。

本年度は、ムチン発現を上昇させる2種類のドライアイ治療薬を用いて、ムチン発現の上昇にはそれぞれ特徴があることを証明した。特にジクアホソルナトリウム点眼が、点眼直後からムチンと水分の分泌を上昇させていることを培養細胞および動物実験で明らかになった。本研究にて、ドライアイ患者にどれだけムチンが上昇して眼表面の水濡れ性が改善しているかを、臨床的に評価できる可能性が考えられる。薬剤の治療効果の評価判定や、眼表面の障害の評価の一つの指標など、眼表面の水濡れ性を評価する意義は非常に高いと考える。眼科学本年度は、接触角計の改良およびシステムの構築に時間を要したが、ムチンの濃度の上昇により接触角が小さくなることを再現することができた。また、ドライアイ治療と眼表面のバリア機能および水濡れ性に関しては、平成25年度より実際の患者の涙液を用いて米国ハーバード大学スケペンス眼研究所との共同研究を開始している。本研究のもう一つの柱である眼表面のバリア機能に関しては、本年度は実験の成果としては大きな進展はなかったが、眼表面のバリア機能を改善させると考えられているレバミピド点眼液に関連した学会発表および論文報告を行った。また、ドライアイや涙液に関する臨床研究においてもいくつかの学会発表および論文報告を行った。本年度は、培養細胞を用いたin vitroの実験においては、バリア機能の評価のための電気抵抗(TER)を測定するシステムを構築することができた。また、水濡れ性の評価に関しては、接触角計の改良を行い、比較的水濡れ性の良い材料の上でも有意差を出すことができる高感度ハイスピードカメラを用いた測定系のシステムを立ち上げることができた。また、動物実験モデルに関しても、ラットを用いた眼窩涙腺摘出ドライアイマウスを作製することができ、このモデルをバリア機能、水濡れ性の評価として用いたいと考えている。これまでは分泌型ムチンと水濡れ性の関連の実験であったが、次年度は現在構築している接触角計のシステムを用いて、膜型ムチンの発現と眼表面の水濡れ性の関連について実験を行う予定である。また、ムチンが過剰に発現した場合の水濡れ性についての検討を行っていきたい。これは、臨床的にムチンや涙液が過剰になる流涙症やアレルギー性結膜炎などの疾患と対応していると考えられ、病態解明につながる研究であると思われる。また、バリア機能においては、上皮細胞のタイトジャンクションとムチン発現の関係を培養細胞およびSiRNAを用いた方法で解明していきたいと考えている。今後は、本年度に構築した実験系を用いて、実際に眼表面のバリア機能(タイトジャンクションと電気抵抗の関係)と水濡れ性(接触角の変化)を、様々な条件を設定して測定し、評価していきたいと考える。25年度は24年度(初年度)からの繰越金が527,616円あり、それがおよそそのまま残ってしまったことになる。研究代表者(堀)が次年度(2014年4月1日)より大学内での転任が決定したため、年度の終わりに新たな購入を控えていたことが大きな理由として考えられる。次年度は、Windows XP関連によるコンピューターおよび周辺機器の新規購入や、本研究が最終年度のため、学会発表や論文投稿のための費用が本年度より多く見込まれる。
多目的下での環境配慮技術のライフサイクル評価と意思決定のための支援システムの構築

本研究では製品ライフサイクルのモデル化手法を提案した上でライフサイクル工学(LCE)(シミュレータ、最適化手法、意思決定のツール)の要素技術を統合するためのウェブベースの基盤の開発を行った。まず構造機能モデル化技法IDEFOを製品ライフサイクルのモデル化に用い、実際にはXMLによってモデル形式を与えて、モデル化に関連して必要となる様々な活動を支援するためのプロトタイプシステムを開発した。本システムのGUIを通して、新しいモデルを作製したり、既存のものを編集したり、別々のサブモデルを1つに結合したり、これらの結果を点検することができる。またこのようにして得られたモデルを使用して、製品ライフサイクルのあらゆる段階で原料、中間生成物、副産物、および主産物に加えて環境評価、例えば、エネルギー使用量、CO_2発生量などの計算ができる。次に、種々の製品に対して、様々なユーザの意思決定を支援できる枠組みを与えた。そこでは、モデルを検索する、データベースにアクセスする、アプリケーション(シミュレータ、最適化手法、意思決定のツール)を使用する、それらのコンポーネントを統合する、などの作業を行なえる基盤となるシステム構築を最近の分散オブジェクト指向技術であるウェブサービスアキテクチュアを用いて実現した。一方、このような基盤の開発に加えて、LCE上の問題解決のための要素技術を提供することも研究目的として以下に示す3課題に関わり、それぞれ斬新な方法を開発した。ソフトコンピューティングを援用した多目的最適化のための手法MOON^<2R>の通用性を拡張した。この方法は、価値関数の柔軟なモデル化能力があり、広くLCE上の問題解決への応用が可能である。また設計段階で再生と再製造のための分解に関わる意思決定を支援するプロトタイプシステムを開発した。本システムは使用済製品の設計時や幾何学的形状に関する情報に基づいて、最適な分解順序を自動的に決め、複数の目的の下で定量的に分解容易性を評価できる。さらにロジスティクスの最適設計問題を定式化し、効率的に解決するための階層的方法を開発した。本手法は環境問題と密接に関係する種々の類似の問題に適用可能である。ビジネスプロセス分野のモデリング手法であるIDEFO (Integration DEFinition for Function Modeling)を用いて循環型生産システムの機能的な構造解析を行い、製品ライフサイクルの階層的モデル化を行った。そこでは構成要素をオブジェクトとみなして、XMLを用いてオブジェクト指向型のライフサイクルモデルを構築する一般的手順について検討を加えた。そして、分散情報利用技術のコンポーネントの一つとして、ネットワーク上で断片的モデルから完全なモデルの構築に必要な種々の作業を効果的に行うことを可能とするフレームワークを与えた。また環境配慮技術の評価・意思決定支援のための分散情報利用基盤の概要設計において、上述のモデルを利用するシミュレーション、データベース管理及びこれらの作業に必要となるGUI (Graphic User Interface)をJavaのように広く公開されている開発環境の下で開発を行った。以上のような観点からのシステム開発(モデル作製・修正・検証用ブラウザー、データベース利用環境など)によって、システム開発者にとっては拡張性に優れた、また利用者にとっては、システムの内容を知らずとも評価・解析・意思決定に集中できる一方で,必要に応じて固有の内容を追加・修正できるシステム構築が実現されたといえる。さらに、具体例として、廃棄物の中でも特に近年、多くの問題が鑚積しているプラスチック廃棄物を対象として、そのライフサイクル全般にわたる技術や戦略シナリオに対する解析を通じてモデルとシステム両者の健全性の確認を行った。

昨年度までに決定した仕様に基づき作成したXML製品ライフサイクルモデルを分散情報利用技術のコンポーネントの一つとして活用を図るため、XML記述仕様の整備・拡張を行った。またこれと併せてモデル作製を支援するGUIの設計も行った。これによって、仕様やモデルの内容について知識のないユーザであっても、比較的容易にユーザ独自のモデル作製が可能できるようになった。さらに分散情報利用基盤の具体的設計を行ない、断片的モデルや種々の要素技術となる情報資源がネットワーク上に存在するという環境を仮想的に構築して、断片的モデルから完全なモデルの構築するための作業や種々のデータベース、LCA手法、最適化手法などの外部アプリケーションとライフサイクルモデルと統合して利用する方法について検討を行った。実際にはウェブサービスアーキテクチャに着目して、このようなLCE要素技術の統合環境のフレームワークを提案した。一方、ライフサイクル評価のための新たなコンポーネントとして、(1)多目的最適化手法の新しい手法を開発した(2)製品の分解容易性配慮設計を支援するシステムのプロトタイプ開発を行った。前者は、環境配慮技術の評価は工学システムにおいては現実的には多属性となることから、そこでの意思決定支援には不可欠である。開発した手法は手法自体についての知識がなくても相対的価値判断のみで適用可能である。また後者の主要な考察は、最適な製品分割順序の導出に関わるもので、具体的には問題を組み合せ最適化問題として定式化し、解法として遺伝プログラミングを適用した。資源の有効利用のための製品設計を支援する要素技術として今後の活用が期待されるものである。持続ある発展に配慮し、その意識を経済活動に織り込むことの重要性は、ますます増加してきていると同時に複合化している。このため達成に関して互いの調整が必要となる多様な要請の下で、新しく創製されたり、既存のものから再構成された技術やシステムをライフサイクル全般にわたって総合的に評価し、新しいしくみの構築につながる意思決定を支援できる技術の体系化を目指した。このため、特に、これまで開発してきたフレームワークおよび要素技術について再検討を行った。すなわち分散情報利用基盤の基本概念に基づいて仮想的に構築したネットワーク上の要素技術の統合利用環境の構成法にさらに検討を加えた。そして断片的な部分モデルや要素技術をライフサイクル技術開発管理者が登録、公開する一方で、任意のユーザがこれらを自由に検索し、データやアプリケーションの取得を経て、ユーザ独自の解析や意思決定を行う手順が与えられるWebサービス機能を実現した。またライフサイクルモデルの活用をシナリオ解析やシステム解析のためだけでなくシステム合成のためも利用できるようXML記述仕様の整備・拡張について検討を行った。
膀胱がんにおける尿中腫瘍マーカーの探索

バイオマーカーの探索において、患者への負担が少ないという利点から血清又は尿が試料として多く用いられる。膀胱がんの最も効果的なバイオマーカーとしてNMP22があるが、偽陽性の割合が高い。そこで、膀胱がんの早期発見のためにがん患者からの尿を使用し、NMP22を補完する新しい診断バイオマーカーの探索を行った。その結果、がん患者の尿中にSNAレクチンと強く反応する75kDa(糖タンパク質X)と50kDa(糖タンパク質Y)のタンパク質が同定できた。さらに、SNAレクチンとの反応の強さは腫瘍の悪性度と相関があり、糖タンパク質XおよびYの糖鎖がNMP22を補完する新規バイオマーカーとしての可能性を見つけた。研究の目的泌尿器系がんのなかでも膀胱がんは前立腺がんにおけるPSAのような有効なスクリーニングマーカーがないことなどから、現在のところ一般人を対象とした検診スクリーニングは施行されていない。しかし、膀胱がんの予後は依然として悪く早期発見・診断が強く望まれる。申請者は、膀胱がんの早期発見につながる患者への負担が少ない尿中腫瘍マーカーの探索を行った結果、候補と成り得る糖タンパク質を見つけた。糖タンパク質の性質を詳細に調べると共に糖鎖修飾ペプチドを抗原とする抗体を作製し、膀胱がんの早期発見・診断につながる尿中腫瘍マーカーとしての有効性を評価する。研究実施計画1.膀胱がん患者(グレード3以上)及び健常人由来の尿から糖タンパク質X及びYを免疫沈降及びゲル濾過法を用いて精製した。単離した糖たんぱく質X及びYをトリプシン消化後、Sepharose CL4Bを用いる和田らの方法に従ってGlycopeptideを分離精製した。膀胱がん患者由来の糖たんぱく質X及びYではNeuAc α2-6/ 3Gal/ GalNAcを有する糖鎖構造が上昇していた。抗体を作製するのに必要な抗原であるGlycopeptideの必要量を得るのに予定よりも時間を要した。2.Glycopeptide抗体の作製:精製した抗原Glycopeptideをキャリア担体に結合させた。[ウサギへの免疫]キャリア担体に結合させたペプチドをFreund's complete adjuvant 100ulと混ぜてエマルジョン化しウサギ背皮下数か所に注入した。→追加免疫は同量の抗原とincomplete Freund's adjuvantを用いて行った。→耳静脈より採決し血清を分離した。→ELISA或はウエスタンブロットにて抗体の確認。→プロテインGカラムにてIgGを精製した。→ウエスタンブロット等で抗体の特異性を評価中である。「研究の目的」泌尿器系がんのなかでも膀胱がんは、前立腺がんにおけるPSAのような有効なスクリーニングマーカーがないことなどから、現在のところ一般人口を対象とした検診スクリーニングは施行されていない。「研究実施」Glycopeptide抗体の評価:「1.ウサギで作製した抗体の評価」前年度に作成した抗体の特異性と感度を評価した。ウエスタンブロット法で評価した結果、膀胱がん患者の悪性度のGradeが進行する程に、抗体で染色される割合が増加した。特に、75kDaの糖タンパク質X由来の抗体で顕著であった。膀胱がん患者由来の尿と健常人由来の尿を優位に区別することが可能であった。しかし、50kDaの糖タンパク質Y由来の抗体はGrade 1と2の間であまり差がなく、Grade 3まで進まないと差が見られなかった。現在、抗体の精製度を上げ、特異性と優位性を評価中である。尿10ul中の糖鎖タンパク質X or Yを検出可能であることから、十分な感度が得られた。「2.マウスで作製した抗体の評価」ウエスタンブロット法で評価した結果、75kDaの糖タンパク質X由来の抗体の特異性は、ウサギの抗体より高い傾向を示したが、感度が不十分であった。膀胱癌は泌尿器系悪性腫瘍の中では前立腺癌に次いで多い癌であるが、前立腺癌におけるPSAのような有効なスクリーニングマーカーがない。しかし、膀胱癌の予後は依然として悪く早期発見・診断が強く望まれる。現在、膀胱癌マーカーとして最も有効性が高いといわれている尿中NMP22は尿路感染症で偽陽性率が高い。我々は、膀胱癌の早期発見につながる患者への負担が少ない尿中腫瘍マーカーの探索を行った結果、候補と成り得る糖タンパク質を見つけた。この糖タンパク質から糖鎖修飾ペプチドを抗原とする抗体を作製し、膀胱癌の早期発見・診断につながる尿中腫瘍マーカーとしての有効性を評価した。膀胱癌患者尿から見つけた糖タンパク質X及びYのタンパク質に対する抗体(市販品)と作製した糖ペプチド抗体を用いた多項目同時測定系の構築を図った。サンドイッチELISA法により健常者と癌患者由来の尿を比較し、特異性と感度の評価を行った。一次抗体にタンパク質に対する市販品の抗体X及びYを用い尿中のタンパク質X及びYをキャプチャーした。その後、二次抗体としてビオチン標識糖鎖修飾ペプチド(糖ペプチドX及びY)抗体を結合させ、ストレプトアビジン-フィコエリスリン(PE)で蛍光ラベルした。この方法により、尿中の糖タンパク質X及びYの糖鎖修飾ペプチド量を同時に測定することが可能となり、従来のELISA法に比べ試料量や測定時間を短縮することができた。

膀胱癌患者の悪性度のGradeが進行する程に蛍光強度が増加した。特に、75kDaの糖タンパク質Xで顕著であり、膀胱癌患者由来の尿と健常人由来の尿を優位に区別することが可能であった。試料量は尿10100ulで検出可能であることから、感度は十分であった。糖タンパク質X及びYの糖鎖を同時に測定することにより膀胱癌患者由来の尿と健常人由来の尿を優位に区別することが可能であり、NMP22を補完できる診断法の可能性を示した。バイオマーカーの探索において、患者への負担が少ないという利点から血清又は尿が試料として多く用いられる。膀胱がんの最も効果的なバイオマーカーとしてNMP22があるが、偽陽性の割合が高い。そこで、膀胱がんの早期発見のためにがん患者からの尿を使用し、NMP22を補完する新しい診断バイオマーカーの探索を行った。その結果、がん患者の尿中にSNAレクチンと強く反応する75kDa(糖タンパク質X)と50kDa(糖タンパク質Y)のタンパク質が同定できた。さらに、SNAレクチンとの反応の強さは腫瘍の悪性度と相関があり、糖タンパク質XおよびYの糖鎖がNMP22を補完する新規バイオマーカーとしての可能性を見つけた。膀胱がん患者(Grade 3以上)及び健常人由来の尿から糖タンパク質X及びYを免疫沈降及びゲル濾過法を用いて精製し、目的の抗原Glycopeptideを精製できた。ウサギで作成した75kDaの糖タンパク質X由来の抗体は膀胱がん患者の悪性度のGradeが進行する程に、抗体で染色される割合が増加し、また、健常人と優位に区別することが可能であった。また、尿10ul中の糖鎖タンパク質X or Yを検出可能であることから、十分な感度が得られている。50kDaの糖タンパク質Y由来の抗体はGrade 1と2の間であまり差がなく、Grade 3まで進まないと差が見られなかったが、作製した抗体の精製度を上げる(純度を良くする)ことにより十分解決可能と考えている。ELISA法を構築する上で、ウサギあるいはマウスで作製した抗体のどちらがより有効で実用的であるか、現在、検討を重ねているところである。また、実用的なELISA法にする為に測定可能なプロトコールや反応条件の最適化も検討している。今回作製した抗体は、一般的なペプチドあるいはタンパク質に対する抗体と違い、糖鎖修飾を含むペプチド構造全体を認識するのが特徴的であり、がん特異的な糖鎖修飾ペプチド配列を認識している。研究全体としておおむね順調に進展している。質量分析によるタンパク質翻訳後修飾解析「糖鎖修飾ペプチド抗体の特異性の評価」作製した抗体をダイレクトあるいはサンドイッチELISA法により健常者とがん患者由来の尿を比較し、特異性と感度の評価を行う。膀胱がん患者の早期診断への実用性を評価する。「多項目同時測定システムの開発」
抗体ライブラリーを用いた全遺伝子産物の網羅的機能構造解析

抗体による多種多様な抗原の認識には生物が有する標的分子認識機構が総動員されていると考えられる。抗体の標的分子認識の分子機構を抗体ライブラリーを使って網羅的に解析することで、生物の有する標的分子認識機構のインデックス(データベース)を作成し、それを用いて抗体をプローブとして用いる、機能が未知の遺伝子産物の機能を探索できるストラテジーの開発を行う。また、先に得られた知見を基盤に、任意の遺伝子産物に適用可能な機能制御分子の設計アルゴリズムの開発を行う。"[抗体]-[抗原]データベース"、"[抗体]-[エピトープ]データベース"、"[抗体機能部位]-[エピトープ]データベース"の段階的構築を進めている。"[抗体]-[抗原]データベース"の構築は順調に進んでおり、約40種類の抗原に対する約1,000個の抗体遺伝子の登録を終えている。特筆すべきは、抗原(プロテインキナーゼの一種や細胞内シグナル伝達系の調節因子)の機能を調節する抗体が、当該研究で使用している抗体のスクリーニング法で得られたことであり(投稿準備中)、これは抗体をプロトタイプとして使用するドラッグデザインの第一歩である。抗体による抗原機能の制御の分子機構を明らかにするために、いくつかの抗体-抗原のセットを選択して、エピトープマッピングを開始している。その中で、プロテインキナーゼの機能阻害抗体は、酵素の基質結合部位に直接作用するのではなくて、その活性制御ドメインに作用することで酵素反応を抑制することが解った。他の抗体に関しても同様の解析を進めており、"[抗体]-[エピトープ]データベース"を構築する予定である。"[抗体機能部位]-[エピトープ]データベース"の構築において必須となる、抗体遺伝子からの抗体分子の立体構造モデリングおよび機能部位抽出のために、当該分野の専門家との共同研究を模索中である。
子宮内膜症におけるアポトーシス受容体DR6の発現低下と病態形成への関与

卵巣子宮内膜症間質細胞とそのヒストン脱アセチル化酵素阻害剤刺激群(バルプロ酸)とを比較したcDNAマイクロアレイによって抽出されたdeath receptor (DR) 6について子宮内膜症の病態形成への関与を検討した。対照群には正常子宮内膜間質細胞を用いた。DR6タンパクおよびmRNAの発現は卵巣子宮内膜間質細胞で低下していた。バルプロ酸刺激でDR6プロモーター領域ヒストンH4のアセチル化が起こり、卵巣子宮内膜間質細胞におけるDR6タンパク発現は増強した。正常子宮内膜間質細胞のDR6遺伝子のノックダウンによって、細胞増殖亢進及びアポトーシス耐性が認められた。3VPA処理によってECSCsにおけるDR6の発現は増強した(mRNAおよび蛋白)。4VPA処理によってECSCsにおけるDR6プロモーター領域ヒストンH4のアセチル化が起こった。以上34の結果から、cDNA microarrayによる候補遺伝子スクリーニング結果を再現できた。6組織切片(正常子宮内膜および卵巣子宮内膜症組織)においても同様の結果を得た。7DR6 siRNA導入によってDR6蛋白およびmRNAの発現は減弱した。以上567の結果から、DR6の発現低下が子宮内膜症に特異的であることが示された。子宮内膜症細胞が子宮外で生着、増殖する原因として、アポトーシス制御シグナルの破綻と増殖シグナルの活性化が考えられている。我々は、このシグナル伝達の異常にエピジェネティック機構におけるヒストン修飾が関与することを報告した。今回の研究は、卵巣子宮内膜間質細胞(endometriotic cyst stromal cells: ECSCs)とそのヒストン脱アセチル化酵素阻害剤処理群(valproic acid: VPA)を比較したcDNAマイクロアレイにより抽出された候補遺伝子、Death Receptor (DR)6について、子宮内膜症の病態形成への関与を検討することが目的であった。初年度に実施した研究によって以下6つの知見を得た。1正常子宮内膜間質細胞(normal endometrial stromal cells: NESCs)と2ECSCsの分離・培養に成功した。5DR6の発現(蛋白およびmRNA)は、NESCsに比較してECSCsで減弱していた。最終年度に実施した研究によってさらに以下3つの知見を得た。8NESCsにおけるDR6ノックダウンによって細胞増殖が亢進した(MTT assay、BrdU incorporation assay)。9NESCsにおけるDR6ノックダウンによってアポトーシスは減弱した(Caspase 3/7 assay、cell death detection ELISA)。以上から、DR6の発現低下は子宮内膜症に特異的でること、及びDR6の発現抑制による機能的変化を証明できた。結論として、子宮内膜症におけるアポトーシス受容体DR6の発現低下が子宮内膜症の病態形成に関与することが示された。ヒストン脱アセチル化酵素阻害薬を用いたcDNAmicroarrayによる候補遺伝子のスクリーニング結果が再現されたこと。また、DR6の発現低下がNESCsには認められず、ECSCsに特異的であることが示された。つまり、DR6の発現低下が卵巣子宮内膜症の病態形成に関与している可能性がある。産婦人科学DR6 siRNAの細胞内導入:DR6遺伝子の発現抑制実験モデルを構築するために、DR6 siRNAのNESCsへの細胞内導入を行い、細胞増殖、アポトーシスへの影響を検討する。NECSsにおけるDR6ノックダウンによるDR6 mRNAおよびタンパクの発現変化の検討:NESCsにDR6 siRNAを導入し、核および細胞質蛋白を回収する。DR6 mRNAの発現変化をRT-PCR法で、DR6タンパクの発現変化をウエスタンブロット法により比較比較する。NESCsにおけるDR6ノックダウンの生細胞への影響:NESCsにDR6 siRNAを導入し、MTT assayを用いた生細胞定量化のための呈色性ELISAを行う。NESCsにおけるDR6ノックダウンの細胞増殖への影響:NESCsにDR6 siRNAを導入し、BrdUを用いた細胞増殖定量化のための呈色性ELISAを行う。NESCsにおけるDR6ノックダウンのカスパーゼ3/7活性への影響:NESCsにDR6 siRNAを導入し、Caspase 3/7 Assayを行う。NESCsにおけるDR6ノックダウンのアポトーシスへの影響:NESCsにDR6 siRNAを導入し、Cell Death DetectionELISAを行い、細胞がアポトーシスに陥った後に細胞質に出現するヒストン/DNA断片複合体を検出する。

もし研究が当初計画どおりに進まない場合、あるいは進んだ場合は、cDNA microarryにて抽出した他の候補遺伝子(MT1G, IL8, PPP2R2B, ABCB1)についても検討を行う。
病変探知装置内蔵型腹腔鏡下手術用細径robot armの開発

研究実績:奨励研究申請書の研究計画書の記載に従い、robotic surgery用機器の開発を進めている。2000年9月より現在までに臨床試験を開始し良好な成績を出すに至っている。現在までに通常開腹胃切除術において5例、腹腔鏡下胃切除術2例、腹腔鏡下大腸切除術2例において全例病変探知が可能であった。また、robotic surgeryにおいて最も問題となる金属製手術機器に囲まれた環境による誤動作は皆無に近いレベルに至っている。2000年11月に金原出版の外科系雑誌:手術に特集号として上記の2000年9月時点までの研究成果を掲載した。2001年1月より、robot hand本体のモックアップの作成に着手している。基本的な構造の計画に難渋しているが、2001年7月までにはモックアップを完成させる予定である。
高血圧責任遺伝子同定への新規アプローチ：ストレス応答遺伝子と高血圧をつなぐ

脳卒中易発症高血圧自然発症ラット(SHRSP)は過剰なストレス感受性を示し、SHRSPで見られる循環器病態との関連が指摘されているが、原因となる遺伝的要素については不明である。以前我々はコンジェニック系統を用いた遺伝学的方法論を軸に、SHRSPの第1染色体の約1.8-Mbpの領域にストレス感受性遺伝子が存在することを示した。本研究ではサブコンジェニック系統を用いた解析により候補領域を約1.2-Mbpに絞り込んだ。さらに、SHRSPにおいてナンセンス変異に起因する変異型タンパク質の発現およびタンパク質レベルでの発現低下が見られたStim1遺伝子を有力な候補遺伝子として同定した。脳卒中易発症高血圧自然発症ラット(SHRSP)は高いストレス感受性を示し、高血圧・脳卒中病態との関連が示唆されている。以前我々は、正常血圧を示すWistar-Kyotoラット(WKY)とSHRSPの間で作成したコンジェニックラットを用いた生理学的解析により、ラット第1染色体の約1.8-Mbpの領域に、交感神経の活性亢進を介して血圧上昇を引き起こす遺伝子が存在することを明らかにした。本研究では、既存のコンジェニックラット(SPwch1.72)を親系統であるSHRSPと交配し、より狭い染色体領域を保持する新しいコンジェニックラット(SPwch1.71)を作成した。これらのコンジェニック系統のストレス下における血圧と交感神経活性の変化を比較評価することで、ストレス感受性遺伝子の存在領域を1.2-Mbpにまで絞り込んだ。全ゲノムシークエンス解析の結果に基づき、この領域に含まれるStim1遺伝子について、SHRSPでナンセンス変異(p.Arg640X)が存在することを見出した。WKY、SHRおよびSHRSPの亜系に加え、一般に用いられている複数の実験用ラット系統について個別にシーケンシングを行ったところ、このStim1のナンセンス変異がSHRSP系統に特異的であることが明らかになった。ウェスタンブロット解析により、SHRSPの吻側延髄腹外側野(RVLM)を含む脳幹領域において野生型よりも短い変異型STIM1の発現が確認され、加えてSTIM1タンパク質の発現量はWKYと比較して有意に低いことがわかった。STIM1は小胞体カルシウム貯蔵センサーとして機能する。機能面への影響はまだ不明だが、SHRSPにおけるナンセンス変異の存在やタンパク質レベルでの発現低下を考慮すると、STIM1は現時点における最も有力な候補遺伝子である。本研究の目的は、高血圧モデルラットSHRSPのストレス性高血圧遺伝子を同定することである。現在までに、SHRSPにおいて交感神経活性亢進を介する血圧上昇に関わる遺伝子の存在領域を、第1染色体の約1.2 Mbpの範囲に絞り込んだ。また、この領域に含まれるStim1遺伝子について、SHRSPでナンセンス変異が存在し、また野生型より短い変異型STIM1が発現していることを見出した。本年度は、Stim1を有力な候補遺伝子と考え、種々の解析を行った。まず、交感神経活性と血圧調節の中枢である吻側延髄腹外側野(RVLM)を含む脳幹領域をターゲットとして、STIM1の発現量をSHRSPと正常血圧ラットWKYの間でウェスタンブロット法により比較した。無処置のコントロール群において、SHRSPの方がWKYよりも有意に発現量が低かった。これは、4°C・6時間の低温ストレスを加えたストレス負荷群においても同様だった。STIM1は小胞体カルシウム貯蔵センサーであり、細胞膜チャネルタンパクORAI1やTRPC1およびTRPC4を介した細胞質へのカルシウム取り込みに必須である。そこで現在、内因性の変異型STIM1の機能評価を目的として、SHRSPおよびWKY胎児由来のアストロサイトを用いたカルシウムイメージングを行っている。系統差を見出しつつあるが、まだ結論には至っていない。これと並行して、野生型と変異型のSTIM1、およびSTIM1の機能的パートナーであるORAI1やTRPC1/4のcDNA配列を組み込んだ発現プラスミドベクターを構築した。現在、共発現系による評価を行うべく、準備を進めている。我々が新規に見出した変異型STIM1は機能的に重要なドメインを欠失している。この変異がSHRSPにおける交感神経活性亢進に関与しているかは不明だが、現時点における最も有力な候補遺伝子である。研究実績の概要で述べたとおり、現在、候補遺伝子の機能解析をカルシウム蛍光インジケーターを用いた培養細胞カルシウムイメージングを軸として展開中である。我々の研究施設内で実現可能なカルシウムイメージング法の確立に時間がかかり、機能的評価はまだ不十分である。また、複数の遺伝子をターゲットにして発現プラスミドベクターを構築したが、正しcDNA配列が組み込まれているもののウェスタンブロッティングにおいて予想と異なる位置にバンドが検出される、シーケンシングが困難でエラーの有無の確認ができないなど、解析を進める上でクリアすべき問題点が複数あり、これらが研究計画の進行の妨げになっている。

適宜対応しているが、主たる目標である候補遺伝子の機能的評価がうまく進行していないという点で、やや遅れていると判断せざるを得ない。ただし、機能的異常を引き起こし得る変異が存在する遺伝子を研究計画の早期に同定できているという点においては、おおむね順調に進展していると判断してもよいと考える。方法論の面で当初の研究計画と異なるところはあるが、有力な候補遺伝子の同定には成功している。今後の課題は、野生型タンパクと変異型タンパクの機能的差異の評価とそれに基づく交感神経活性亢進への関与の解明である。この目的のため、現在行っている培養細胞レベルでのカルシウムイメージングを軸とする機能評価を継続して実施する。これと並行して、ラット個体レベルでのストレス応答性を評価するため、アデノウイルスベクターを用いたRVLMへのマイクロインジェクションの実験系の構築に取り掛かる。培養細胞レベルで機能的差異の評価とその分子基盤の解明を目指し、最も重要と考えられるストレス応答性の評価は培養細胞系では不可能なので、in vivoマイクロインジェクションの実験系で補完する。これらを組み合わせることで、Stim1のストレス性高血圧原因遺伝子としての評価が可能になると考える。該当なし
感染に関わる宿主植物因子の網羅的特定を介したファイトプラズマ防除戦略の基盤構築

本研究では、ファイトプラズマの感染に関わる宿主因子を網羅的に探索し、ファイトプラズマ感染メカニズムの全貌を解明することを目指した。昨年確立したファイトプラズマの網羅的接種系を利用して、様々なシロイヌナズナエコタイプ及び変異体シロイヌナズナにファイトプラズマの接種を行ったところ、ファイトプラズマの病徴発現において植物ホルモンが関与していることを示唆する知見が得られた。この事は植物ホルモンがファイトプラズマが感染を成立させる上で重要な因子として機能しており、その制御がファイトプラズマ病の治療につながることを示唆している。現在、様々な植物ホルモン関連因子に関するシロイヌナズナ変異体を用いて研究を進め、ファイトプラズマの蓄積量や病徴発現に与える影響を解析している。これにより植物ホルモン関連経路とファイトプラズマ感染との関連を明らかにしていきたい。また、今回確立した接種系をシロイヌナズナ以外の様々なモデル植物に適用し、さらなるファイトプラズマ感染に関わる宿主因子の探索を進める予定である。加えて、本年度は確立した接種系のノウハウを活用することで、ファイトプラズマに有効な抗生物質の効率的探索系の確立にも成功した。本系によりファイトプラズマ感染を抑える新規薬剤を探索した結果、ファイトプラズマ感染を強く抑制する複数の新規抗生物質を見出すこともできた。以上より、本年度はファイトプラズマの感染メカニズムを解明し、防除戦略を構築する上で、基盤となる知見を多数得た。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、絶対寄生性の植物病原細菌であるファイトプラズマが、自身の感染を成立させるために必要としている宿主因子を同定することで、その感染機構を明らかにするとともに、ファイトプラズマ防除に応用することを目指す。即ち、ファイトプラズマを様々なシロイヌナズナ変異体に接種し、症状の進展をモニタリングすることで感染が成立しなくなる個体を選抜する。選抜したファイトプラズマ非感受性個体についてその原因となる遺伝子を特定し、ファイトプラズマが感染し植物を発病させるまでの分子メカニズムを解明する。さらに当該遺伝子を発現抑制することで、ファイトプラズマ抵抗性の付与を試みる。本年度は、まず多個体のシロイヌナズナに対するファイトプラズマの接種系の確立を試みた。その結果タマネギ萎黄病ファイトプラズマ(OYファイトプラズマ)を媒介昆虫であるヒメフタテンヨコバイを用いて接種することで、多数のファイトプラズマ感受性シロイヌナズナ(Col-0)個体に対してファイトプラズマの感染が成立し、花器官の葉化や葉の紫色の着色(パープルトップ)といった症状が高率に観察されることを確認した。本接種系を用いて複数のシロイヌナズナエコタイプや変異体にOYファイトプラズマを接種したところ、いずれの個体においても同程度の病徴の進展が認められ、これらの個体におけるファイトプラズマの感受性には差異がないと考えられた。現在は変異体の個体数を増やし、さらなるスクリーニングを進めている。本年度はファイトプラズマの接種・病徴観察による非感受性個体のスクリーニング系を確立し、非感受性個体を選抜する予定であった。現在、スクリーニング系の確立には成功しており、順次シロイヌナズナ個体を供試して選抜を進めている。一方で、スクリーニングに供試できた個体数はまだ少なく、非感受性個体の選抜には至っていない。本年度に確立したスクリーニング系を用いてさらなる非感受性個体の選抜・原因遺伝子の特定を進める。並行して、他の植物病原体の感染成立に関わる遺伝子の変異体を取り寄せ、スクリーニングに供試する予定である。さらに植物ウイルスベクターを利用したシロイヌナズナの遺伝子発現抑制系を構築し、特定した遺伝子の発現抑制を行いファイトプラズマ感染に対する影響を解析する。
ヒト中耳真珠腫組織におけるインターロイキン1の存在と臨床病態の関連について

中耳真珠腫における組織学的病態の特徴は異常な上皮の増殖と分化であり、上皮下における骨破壊である。今回我々は、Macrophageや角化表皮細胞など様々な細胞で産生されるcytokineであるInterleukin-1alpha(IL-1alpha)に注目した。即ち真珠腫の増殖を解明する上で、真珠腫上皮におけるIL-1alphaの局在を明らかにすると共に、真珠腫の進展度、耳小骨破壊の程度、耳漏の有無、上皮下組織の状態、との関連性について比較検討した。方法は、手術時採取した中耳真珠腫組織を試料とし、SDS-PAGE、Western blotting法及び免疫組織学的手法を用いた。この結果により、中耳真珠腫症例17例中10例でIL-alphaの発現が認められたが、対象として用いた外耳道皮膚ではIL-1alphaの発現は認められず、真珠腫上皮増殖機序におけるIL-1alphaの関与が示唆された。また、IL-1alphaは上皮下に肉芽増生の多い症例とは強い相関がみられ、特に鼓膜裏面の肉芽の存在が真珠腫上皮の増殖に関して重要な役割を果たしている事が予想された。一方、真珠腫の進展度、耳小骨破壊の程度、耳漏の有無についてはIL-1alphaとの明らかな相関は認められなかった。今後の研究の展望であるが、今回の研究から、真珠腫の上皮増殖におれるIL-1alphaの関与が示唆されたものの、一連の上皮増殖機序を解明するためには他のcytokineや成長因子の関与を考える必要があると思われた。そこで我々は角化表皮細胞の増殖因子と言われるTransforming growthfactor-alpha(TGF-alpha)に注目した。当教室のin・situ Hybridization法を用いた研究で、真珠腫上皮においてTGF-alphaの受容体であるEpidermal growth factor receptorの異常発現が認められる事がわかっている。従って、真珠腫上皮の増殖機序におけるTGF-alphaの関与が充分考えられ、我々は既に昨年来、免疫組織学時手法を用いて検討を行っている。今後はさらに、in situ Hybridization法、組織培養などの手法を用いて、真珠腫上皮増殖に関する研究を発展させていく所存である。
磁場中の波動伝播問題の漸近解析と散乱逆問題

本研究はシュレディンガー方程式等分散型方程式に関する様々の数理モデルを研究対象にした。中心課題を磁場中の、特に低次元の波動伝播現象の解析に置き、2次元外部領域での磁場付きシュレディンガー作用素の一様なレゾルベント評価を得るのに成功した。これは逆問題を含む散乱理論の発展に寄与するものである。また、磁場を伴う外部領域でのクライン-ゴルドン方程式に対して、平滑化効果、ストリッカー評価の確立が期待される。1次元の散乱の逆問題では、種々の星型無限グラフ上での散乱行列からポテンシャルを同定す問題に一定の回答を得た。ここからは、一つのループから有限個の半直線状のレイが伸びている問題に研究を集中していく。磁場中のSchro"dinger作用素のレゾルベントの評価は対応する分散型発展方程式の解の漸近挙動を解析するうえで不可欠である。代表者は前回(平成22ー24年度)の科研費による研究で空間次元が3以上の場合にレゾルベントの一様評価を定め、それを発展方程式に援用した。今回は低次元の場合を主な研究対象としている。空間2次元の場合、外部領域での問題に同様の評価が得られることがわかり、その応用を含めた論文を完成させ、現在投稿中である。一方、空間1次元の問題は、グラフ上で考察している。いくつかの半直線と有界線分が一点で交わる一般化されたグラフ上のSchro"dinger作用素について、そのスペクトルの様子、散乱問題を考察している。すでにいくつかの有用な結果を得、現在投稿論文の審査が続いている。磁場中のSchr"odinger作用素の一様レゾルベント評価は高次元の場合には解決ずみであり、2次元の場合が未解決であったが、この解決を見、現在投稿中の論文がRIMS弟51巻2号に掲載されることになった.また、グラフ上のSchr"odinger作用素に対するスペクトル表現と散乱逆問題に対する結果もロシアの雑誌Inverse Ill-Posed Problemに掲載が決まり、すでに電子ジャーナルとして閲覧可能である。今回の研究課題は今年最終年を迎えるが、現在はレゾルベント評価を基にした関係する発展方程式(Schr"odinger方程式、Klein-Gordon方程式、音響波動方程式等)の平滑化効果、またStrichartz評価の導出に取り組み、結果を得つつある。部分的な結果を今年3月の数学会で発表した。最終結果をまとめるにはまだ少し時間が必要であるが、外部領域での問題を含んでいるので重要度は高いと思われる.この結果がまとまれば、非線形問題を含めた研究の進展に寄与できる.1次元のグラフ上のSchr"odinger作用素についてはスペクトル表現を基にした散乱理論の構成が出来、その逆問題も一意性を中心に結果が出ている。散乱行列からポテンシャルを再構成する問題は簡単ではないが、レゾナンスの現れ方などが解明され、解決への一歩は踏み出されている。本研究はシュレディンガー方程式などの分散型方程式およびその周辺に現れる様々な数理モデルを研究対象にしている。その中で未解決であった、2次元外部領域での磁場付きシュレディンガー作用素の一様レゾルベント評価を得ることに成功し、散乱理論、逆問題等への応用が可能になった。今年度はその結果をdissipationを伴う波動方程式に適用し,局所エネルギーの減衰、極限振幅の原理などを解析した。また、Klein-Gordon方程式の外部問題に対する平滑化効果を示し、摂動をうけた問題へのSchtrichartz評価の拡張に成功した。また、1次元シュレディンガー作用素の種々のグラフ上での散乱逆問題の進展にも取り組み、念願の、複数の半無限の枝を伴うループ状のグラフ上でマルチェンコ方程式の可解性を証明した。前年までの結果と合わせて、本研究の目標はおおむね達成されたと考えられる。もちろん未解決問題も多くあり、それらは今後の研究に引き継がれるであろう。磁場中のSchr"odinger作用素に対するレゾルベントの一様評価が2次元のばあいも含めて求められている。これを基に関連する発展方程式の解の漸近挙動の解明に力点を移すことになるが、Hilbert空間での平滑化効果からBanach空間でのStrichartz評価が導かれるので、研究の最終年度である今年はこの問題に一定程度集中できそうである。また、グラフ上の散乱逆問題も一意性の問題が解決している。散乱振幅(散乱行列)からのポテンシャルの再構成に向けた努力も続けられている。偏微分方程式これまでと推進方策はかわらない。主催する三大学偏微分方程式セミナーで内外の研究者との研究討論を活発に行う。特に若手の研究者達との交流を大切にしてアイデアの枯渇を防ぐとともに、新しい考えかたを学びたい。2次元Schro"dinger作用素レゾルベント評価は長年の懸案であった。

代表者は外部領域で一様評価が練り立つことを示すことができ、研究の道筋が見えてきた。一方1次元のグラフ上の散乱理論の研究も一定の結果が得られ、より複雑なグラフ上の問題に取り組む準備ができた。当初旅費としての使用を考えていたが、残高が予想より少し少なくなり、出張計画を取りやめた。これまでと方針は変わらない。問題点を一つずつ整理し、考察を重ねる。そのために主催するで、また国の内外の研究者との研究討論が大切になる。とくに若い研究者達との交流を深め、アイデアの枯渇を防ぎたい。次年度使用額は少ないが、出張旅費にに加えて使用したいと考えている。
セマフォリン7Aを標的とする、EGFR遺伝子変異陽性肺癌の新規治療法の開発

先行研究において、非小細胞肺癌(NSCLC)における変異EGFRシグナルのeffectorとしてセマフォリン7A(SEMA7A)の過剰発現を同定し、EGFRチロシンキナーゼ阻害薬(EGFR-TKI)耐性化を促進することを明らかにした。本研究においては、まずSEMA7AがEGFR-TKIの効果予測バイオマーカーであることを、臨床検体を使用して確認する。次に、培養細胞とマウスを使用して、SEMA7A高発現により経時的にEGFR-TKI耐性化が生じるメカニズムを解明する。更に、耐性化細胞の治療法、及び、耐性化予防法の開発に向けた、基礎的なデータを得る。