hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
GAF1-GRASタンパク質複合体による転写抑制機構の解明

ジベレリン(GA)は種子発芽、茎部伸長、花芽形成などに関与する植物ホルモンである。GAの内生量はフィードバック制御により一定の範囲内に保たれている。DELLAはGAの信号伝達において負の制御因子として機能する。研究代表者らは、DELLAは負の制御因子として機能するだけでなく、転写因子GAF1のコアクチベーターとしてGA生合成酵素遺伝子の転写を活性化することを見出した。続いて、DELLAと同じGRASファミリーに属するタンパク質GRXがGAF1とDELLAによる転写活性をほぼ完全に抑圧することを明らかにした。本研究は、GRXがどのようにGAF1-DELLA複合体の転写活性を抑制するのかを解明することを目的とした。前年度の研究により、GRXはGAF1とDELLAの結合を競合的に阻害することなくGAF1-DELLA複合体の転写活性を抑制することを示した。また、GRXはCaMV 35Sプロモーターの活性を抑制したことから、GRX自身が転写抑制能をもつことが示唆された。GAF1はDELLAの非存在下でGAF1のEARモチーフを介してコリプレッサーTPLと結合し、標的遺伝子の転写を抑制することがわかっている。平成30年度の研究から、GRXの転写抑制にはEARモチーフは必要ないことが示され、TPL非依存的な転写抑制能が示唆された。また、GRXはDELLAの存在下でも転写抑制能を示したこと、GAF1とDELLA、DELLAとGRX、GAF1とGRXがそれぞれヘテロ二量体を形成したことから、GAF1、DELLA、GRXは三者複合体を形成し、転写を抑制している可能性が示唆された。これらの結果から、TPLとは別の未知の転写抑制機構の存在が示唆された。乾燥や塩、低温などのストレス条件下では、植物の成長は抑制される。このような状況では、DELLAタンパク質が蓄積するにも関わらず、GA生合成酵素遺伝子の発現の上昇は見られない。したがって、フィードバック制御を一時的に抑制することでGA生合成酵素遺伝子の発現を抑圧する上位の制御が存在すると推定されるが、詳しい分子機構は明らかになっていない。研究代表者らは、DELLAが転写因子GAF1のコアクチベーターとしてGA生合成酵素遺伝子の転写を活性化することを見出した。DELLAと同じGRASファミリーに属するタンパク質GRXがGAF1とDELLAによる転写活性化能をほぼ完全に抑圧したことから、フィードバックよりも上位の制御の存在が示唆された。本研究は、GRX自身が強い転写抑制能をもつのか、あるいはGRXがGAF1またはDELLAと強く結合することでGAF1とDELLAの結合を競合的に阻害しているのかを調べ、GRXがどのようにGAF1-DELLA複合体の転写活性化能を抑制するのかを解明することを目的とした。平成29年度の研究実績として、GRXはカリフラワーモザイクウイルスCaMVの35Sプロモーターの転写活性を抑制したことから、GRXは転写抑制能をもつことが示唆された。続いて、GRXの転写抑制領域の同定を試みた。欠失変異導入を行った結果、GRXのN末端側とC末端側の両方に転写抑制能があることが示唆された。また、DELLAタンパク質の一つRGAとのドメインスワッピングを行ったが、いずれのキメラタンパク質においてもRGAの転写活性化能、およびGRXの転写抑制能が失われた。平成29年度の計画通り、1)一過的発現系を用いたGRXの転写抑制能の解析、2) GRXの転写抑制領域の同定を行い、GRXが転写抑制能をもつことを明らかにした。当初、GRXに特徴的なアミノ酸配列が転写抑制能を示すと予想していたが、そのアミノ酸配列は転写抑制能には必要ないことが示された。GRXは、N末端非保存領域とC末端側のGRAS領域のそれぞれに抑制領域が存在することが明らかになり、現在その領域の同定を試みている。したがって、おおむね順調に進展していると考えている。

また、GRXはDELLAの存在下でも転写抑制能を示したこと、GAF1とDELLA、DELLAとGRX、GAF1とGRXがそれぞれヘテロ二量体を形成したことから、GAF1、DELLA、GRXは三者複合体を形成し、転写を抑制している可能性が示唆された。これらの結果から、TPLとは別の未知の転写抑制機構の存在が示唆された。平成30年度の研究計画に沿って以下の実験を行う。1) GRXとDELLAのヘテロ二量体形成を調べる。二量体を形成した場合、GRXが相互作用することでDELLAが転写活性化能を失うかを調べる。2) GAF1とDELLA、GAF1とGRXはそれぞれ二量体を形成することから、これらの三者複合体形成を調べる。2) GRXがDELLAよりもGAF1と強く結合することで、DELLAとGAF1の結合が競合的に阻害されるのかを調べる。3)ストレス条件下におけるgrx変異体の発芽率を調べることで、GRXがGAF1-DELLAの活性を抑制する生理的な重要性を調べる。平成29年度の研究計画で記述したように、一過的発現系を用いたGRXの転写抑制能の解析を行ったが、これまで報告されていた一過的発現系のプロトコールを見直し、酵素や試薬の量をかなり削減することに成功した。したがって、次年度使用額が生じた。平成30年度分として申請した助成金を使用し、当初の研究計画に沿ってGAF1-DELLA複合体の転写活性化能がGRXによってどのように抑制されるのかを解明する。平成30年度は、共免疫沈降法を用いて複合体形成を検証する研究計画であるが、平成29年度に生じた未使用額を用いて、今まで用いてきたビーズよりも非特異的なタンパク質の吸着が少ないビーズの比較検討を行うための費用に充てる。また、電気泳動は自作のゲルなどを用いて行う予定であったが、市販のゲルの購入に充てる。
ダウン症児の吃症状における関連要因の分析とその対処法の確立

吃音のあるダウン症候群児を対象に、吃症状と各機能を評価し、これらの相関性があるかどうかを検討する。また、年齢の高低、知能の高低より4郡に分け、吃症状の経過を辿ったり、吃症状に対する訓練が可能な者には訓練を実施し経過をみることで、訓練の有効性の有無や、訓練適応の対象を明らかにすることを目的とする。
新規ラジカル生成系と高勾配磁気分離を融合した環境保全システムの構築

本研究において以下の成果を得る事ができた。(1)光触媒・超音波照射法によるOHラジカル生成機構:二酸化チタンへの超音波照射時のOHラジカルの生成機構に関して,溶液中に粒子が存在する場合キャビテーション気泡の生成が促進され,気泡圧壊による局所高温場(>5000K)での二酸化チタンの熱励起によってOHラジカル生成量が促進すると考えられる。またソノルミネッセンスによる光触媒作用でもOHラジカルの生成が促進する可能性がある。(2)有害微生物の殺菌:二酸化チタン・超音波触媒法による殺菌法の優位性は,OHラジカルによる病原性微生物の細胞膜傷害のみならず,キャビテーション気泡の崩壊時に二酸化チタン界面近傍で生ずる超高速の流れ(ジェットストリーム)及び衝撃波による物理的な細胞膜傷害が挙げられる。またキャビテーション気泡圧壊時に形成される高温・高圧場の形成も極めて有効に殺菌に寄与する。(3)機能性二酸化チタン微粒子の構築と光触媒活性の評価:磁性をもつ粒子に二酸化チタン層をコーティングすることで、磁場の付加により水相から簡便に分離・回収可能な機能性二酸化チタン微粒子を作製した。また抗エストロゲン抗体のアミノ基を縮合試薬で結合することで,二酸化チタン・ナノ粒子に抗エストロゲン抗体を固定化することに成功し,極めて低濃度のエストロゲンを二酸化チタン・ナノ粒子表面に濃縮し高効率で分解できることを示した。(4)有害化学物質の分解及び病原性微生物殺菌のためのリアクターの開発:二酸化チタン・超音波照射法を用いたリアクターでの実用化を目指し,プロトタイプの流通管型反応装置を試作した。この試作装置では大腸菌濃度が100,000cells/mL,あるいは環境ホルモンであるビスフェノールA(濃度1ppm)を含む処理水(10L)を30分以内で完全に殺菌あるいは分解する事に成功した。本年度は以下の4点に焦点を絞り研究を進めた。1.OHラジカル生成機構の解明水中で二酸化チタン微粒子に超音波を照射すると,高濃度のヒドロキシルラジカル(OHラジカル)が生成する。このメカニズムを超音波周波数,溶存ガスの影響,さらには超音波造影剤によるキャビテーション増強効果などから調べた。2.磁性二酸化チタンナノ粒子の作製核となるマグネタイト微粒子の出発原料としてFeCl2水溶液を調整し,シリカで包括されたマグナタイト微粒子を合成した。合成された粒子を酸化チタンで修飾するためにチタニウムテトライソプロポキシド(TTIP)を添加した。微粒子を安定化させるために酸化雰囲気下500°C,2時間熱処理を施し,目的とする微粒子を得た。3.機能性二酸化チタンナノ粒子表面の化学修飾内分泌撹乱物質はすべて疎水性である。このため,溶媒が水系で微粒子表面が疎水性であれば,疎水性相互作用により内分泌撹乱物質を微粒子表面に吸着できる。これには疎水性を有する脂質オレイル基と,水溶性を高めるためのポリエチレングリコール(PEG)からなるOleyl-O-PEG-NH_2を用いた。これは微粒子表面のカルボキシル基とアミノ基の縮合反応により粒子表面に固定化できる。これによって内分泌撹乱物質を二酸化チタン微粒子表面に濃縮し,超音波照射により発生したOHラジカルによる分解を検討した。4.高勾配磁気分離に関する研究磁性微粒子を溶媒中に均一に分散させ,またその接触面積を大きくするためには粒径を小さくする必要がある。しかし,磁性微粒子の粒径が200nm以下になると磁性微粒子の磁性が急激に弱まり,磁場による分離が困難である。

このため高勾配磁場を利用し,磁気的に弱い微粒子をも分離・回収が可能な磁気分離装置の開発を行った。以下の点について検討を行った。1.TiO_2粒子がラジカル生成に及ぼす影響サリチル酸ナトリウム水溶液と,TiO_2粒子を反応容器に入れ,これを20°Cに調整した恒温槽中で超音波照射(2536kHz,200W)を行った。試料を経時的に採取し,高速液体クロマトグラフィーと電気化学検出器によってdihydroxy benzoic acid(DHBA;サリチル酸へのOHラジカル付加反応による生成物)の定量を行った。粒子無添加の場合及びAl_2O_3粒子(Dp=2mm)を用いて同様の実験を行い,添加粒子による比較検討を行った。粒子無添加ではDHBAの生成は極微少量しか確認出来なかったが,粒子添加では超音波照射に伴いDHBA濃度は増加し,TiO_2とAl_2O_3の間には有意な差が認められた。これは溶液中に粒子が存在する場合キャビテーション気泡の生成が促進され,気泡圧壊による局所高温場での水の熱分解が促進し,・OH生成量が増加したと考えられる。またTiO_2粒子添加ではソノルミネッセンスによる光触媒作用によっても,さらに・OH生成が増加した可能性がある。(2)溶存アルゴン(Ar)がラジカル生成に及ぼす影響サリチル酸と二酸化チタン粒子を入れた反応容器を30分間脱気した後,Arで10分間加圧した。加圧によりArを溶存させた後,反応容器内を常圧に戻して超音波照射を行った。TiO_2粒子の場合,30分間の超音波照射におけるDHBA生成量は,Al_2O_3粒子と比較して約2倍であり,両者の差は有意であった。Arは熱容量比がN_2,O_2と比較して大きいためキャビティ圧壊時の温度が上昇し,水の熱分解の促進により・OH生成量が増加したと考えられる。さらに,Ar溶存下ではソノルミネッセンスにより,TiO_2の光触媒効果がより活性化された可能性もあり,さらに詳細な検討が必要である。二酸化チタン・超音波触媒法によるOHラジカルの生成メカニズムと有害化学物質・微生物の分解・殺菌について検討した。OHラジカルの生成メカニズムに関しては異なる5種類のガスを溶存させた溶液へ超音波照射を行い,OHラジカルの経時変化を調べた。O_2溶存下で超音波を60分間照射した場合,N_2溶存下と比較して約2倍のOHラジカルの生成が観察された。またArとXe溶存下ではO_2溶存下よりさらに多くのOHラジカルの生成が見られた。キャビテーション気泡圧壊時の気泡内温度はモル熱容量比に依存して高くなる。したがって,Xe,Ar溶存下とO_2,N_2溶存下でのDHBAの生成量の差はモル熱容量比の差に起因することが示唆される。局所高温場での水の熱分解,またソノルミネッセンスや高熱エネルギーで生ずる二酸化チタン表面の正孔によってひき起こされる水分子からのOHラジカル生成などが二酸化チタン・超音波触媒法での主要な活性酸素種生成機構と考える。二酸化チタン・超音波触媒法を基盤技術とする実用型の流通型反応器を作製するための予備実験として,コイル状の反応器とカラム状の反応器を用いた場合との分解効率の比較検討を行った。同じ流量で比較するとコイル状の反応器の場合は短時間で分解率が定常に達し,高い分解率が得られた。
植物葉上で増殖するメタノール酵母におけるストレス顆粒形成とその生理的意義の解明

本研究では、メタノール資化性酵母Candida boidiniiの植物葉上におけるストレス顆粒形成とその生理的意義の解明、およびメタノール資化時におけるストレス顆粒形成とその生理的意義の解明を目的に、以下の研究を行った。Processingbody(P-body)およびStress granule(SG)に集積するタンパク質をコードする遺伝子をC. boidiniiにおいて複数同定し、各遺伝子破壊株の表現型、各タンパク質の細胞内動態を解析した結果、C. boidiniiにおいて、これらストレス顆粒が出芽酵母と同様の働きを担うことが示唆された。続いて、植物葉上におけるストレス顆粒形成を確認したところ、P-bodyのみその形成が観察されたことから、葉上での増殖にP-bodyが重要な役割を果たす可能性が示された。さらに、植物葉上での主要な炭素源と考えられるメタノール資化におけるストレス顆粒形成を調べるため、各種炭素源培養時のP-body、SG形成を顕微鏡にて観察したところ、SGはどの培養条件下においても形成されなかったが、メタノール培養時にのみP-bodyの著しい形成が確認された。これらの結果より、メタノール資化におけるP-body形成の重要性が示唆された。また、代表的なストレス応答因子として知られるHog1が、酵母の種を超えてストレス顆粒に局在し得ることを見出し、その局在化機構と生理的意義ついて解析した。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
表皮特異的及び表皮とT細胞特異的なKOマウスによるSOCS1の乾癬病態関与の解析

難治性の疾患である乾癬の病態形成におけるSOCS1の役割を解明することを目的とした。STATfamilyのnegative regulatorであるSOCS1の乾癬の病態形成への関与を解析するためSOCS1-flox/floxマウスとK5-Creマウスを交配した。表皮特異的にSOCS1を欠損したマウスには創傷治癒遅延を認めた。病理組織、免疫組織染色法の結果より過剰な炎症反応により創傷治癒遅延を生じていることが推測された。本研究の目的は難治性で多くの患者のQOLの低下を招く疾患である乾癬の病態形成におけるSOCS1の役割を解明することである。乾癬では表皮の過増殖、炎症性細胞浸潤を特徴とし、さらには血管内皮の過剰増殖も報告されている。炎症性角化症とも呼ばれる。一渡発症すると増悪と寛解を繰り返しながら、長期間続き、時に関節症状も伴い、患者にとって大きな負担を強いる疾患である。STATfamilyのnegative regulatorであるSOCS1は免疫機構の制御に重要な役割を持ち乾癬の病態形成への関与が推測される。本年度は実験に必要なコンディショナルノックアウトマウスのもととなるSOCS1-flox/floxマウス(吉村昭彦教授よりすでに本研究者に供与されている、またC57/B6マウスと交配を繰り返しすでにB6 backgroundとなっている)そしてケラチン5(K5)プロモーターでCre-recombinaseを発現するトランスジェニックマウス(K5-Creマウス、大阪大学竹田潤二教授より供与されている、B6 backgroundとなっている)これらのマウスの繁殖、交配を行いPCR法にてgenotypinigを行っている。現在のところ表皮特異的にSOCS1を欠損したマウスには皮膚の紅斑、鱗屑などの明らかな変化はコントロールマウスと比較して認められていない。機械的刺激が強いと思われる尾部の皮膚においても変化は認められていない。炎症の引き金となる創傷などの刺激を与えて比較する予定である。一度発症すると増悪と寛解を繰り返しながら、長期間続き、時に関節症状も伴い、患者にとって大きな負担を強いる疾患である。本年度はSOCS1-flox/floxマウス(吉村昭彦教授よりすでに本研究者に供与されている、またC57/B6マウスと交配を繰り返しすでにB6 backgroundとなっている)そしてケラチン5(K5)プロモーターでCre-recombinaseを発現するトランスジェニックマウス(K5-Creマウス、大阪大学竹田潤二教授より供与されている、B6 backgroundとなっている)これらのマウスの繁殖、交配を行いPCR法にてgenotypinigを行っている。表皮特異的にSOCS1を欠損したマウスには皮膚の明らかな変化は認められていない。本年度は創傷治癒に注目して実験を行った。すなわち、生後約3ヶ月のマウスを麻酔下に背部皮膚にパンチ生検により創傷を作成しその治癒速度を比較した。すると表皮特異的にSOCS1を欠損したマウスでは明らかな創傷治癒遅延を認めた。この原因について現在病理組織、免疫組織染色法にて検討中である。STATfamilyのnegativeregulatorであるSOCS1は免疫機構の制御に重要な役割を持ち乾癬の病態形成への関与が推測される。SOCS1-flox/floxマウス(吉村昭彦教授よりすでに本研究者に供与されている、またC57/B6マウスと交配を繰り返しすでにB6 backgroundとなっている)そしてケラチン5(K5)プロモーターでCre-recombinaseを発現するトランスジェニックマウス(K5-Creマウス、大阪大学竹田潤二教授より供与されている、B6 backgroundとなっている)これらのマウスの繁殖、交配を行いPCR法にてgenotypinigを行っている。すなわち、生後約3ヶ月のマウスを麻酔下に背部皮膚にパンチ生検により創傷を作成じその治癒速度を比較した。

病理組織ではノックアウトマウスにおいて創傷部の著明な炎症細胞の浸潤をコントロールと比べて認めた。免疫組織染色法では表皮細胞においてリン酸化STAT3の染色を核に認めた。以上の結果より過剰な炎症反応の遷延により創傷治癒遅延を生じていることが推測された。
慢性関節リウマチおよび変形性関節症における関節破壊のメカニズムの解明に関する研究

本研究では、OAおよびRAの関節軟骨・軟骨下骨髄組織を免疫組織学的に観察し、関節破壊の発症のメカニズムの差異について検討した。RAならびに変形性関節病患者(OA)の手術時に採取した軟骨・軟骨下組織におけるc-fosの発現について、手術時に採取した硬組織のパラフィン包埋切片を作成し、小路らの方法に準じたc-fosのチミン二量体標識プローブによるin situ hybridization法を用いて検討した。RAの関節軟骨細胞ではc-fosの発現は認められ、これらの細胞では軟骨基質の主要な分解酵素であるMMP-1およびMMP-3による染色性が増強していたが、そのインヒビターの1つであるTIMP-1による染色性はわずかに観察されるにすぎなかった。さらに、こうした変化を示す軟骨層の直下の骨髄には、c-fos発現陽性の細胞成分の増加が観察された。これに対して、OA患者の関節軟骨では、その表層部分の軟骨細胞にMMP-1,MMP-3およびTIMP-1による染色性が観察されるものの、c-fosの発現はほとんどの症例で認められなかった。以上の結果をまとめると、OA患者ではその2%の表層軟骨細胞にわずかなc-fosの発現を見るにすぎないのに対して、RA患者ではその73%において軟骨組織全層の軟骨細胞にc-fosの発現が観察されることがわかった。このことから、RA関節の軟骨組織ではc-fosの発現が増加することにより、そのマトリックス代謝の恒常性が破綻し関節破壊が進行するものと考えらた。以上の結果からRA患者では、II型コラーゲンに対する抗体が産生されており、自己免疫応答の発現には、関節軟骨と軟骨下骨髄組織の細胞との間に生じる相互作用が起因となっている可能性があること、また、ヒトRAの関節軟骨においてはc-fosが過剰発現しており、本遺伝子が、軟骨組織内の軟骨マトリックスの合成を抑制するのみならず、分解酵素とそのインヒビターとの不均衡をもたらすことによりRAの関節破壊の進行に重要な役割を演ずることが見い出され、同部におけるc-fosの発現を抑制することがRAの骨・軟骨破壊の治療につながる可能性が示唆された。我々は、これまでに、ヒト血清から非特異的反応を最小限に抑えた抗コラーゲン抗体の検出法(ELISA)を開発し、これにより、慢性関節リウマチ(RA)患者はII型コラーゲンに対する特異的な自己抗体を保有しており、特に、発症直後には同抗体の出現率が極めて高いことを見い出している。また、変形性関節症(OA)患者では同抗体が出現しないことも明らかにしている。今回は、RA患者におけるII型コラーゲンの自己免疫応答機構を明らかにする目的で、RAおよびOA患者の関節軟骨・軟骨下骨髄組織を免疫組織学的に観察し、関節破壊のメカニズムについて比較検討した。OA患者の関節軟骨では、その表層部分でII型コラーゲンおよびプロテオグリカンに対する抗体での染色性が低下し、抗ヒトII型コラーゲンCNBrペプチド抗体によって染色される傾向を認めた。また、表層部に存在する軟骨細胞に、MMP-1およびMMP-3による染色性の増強が観察された。これらのことから、OA患者の軟骨破壊は、軟骨組織の表層部分から進展するものと考えられた。

これに対して、RA患者の関節軟骨では、II型コラーゲンおよびプロテオグリカンに対する抗体での染色性が軟骨の表層部分に比べて深層部分で低下し、同部に存在する軟骨細胞ではMMP-1およびMMP-3による染色性が増強していることから、早期より軟骨組織の深層から破壊が進む傾向があることが判明した。以上の結果から、RAにおけるII型コラーゲンに対する自己免疫応答の発現には、関節軟骨と軟骨下骨髄組織の細胞との間に生じる相互作用が起因となっている可能性が示唆された。本研究では、OAおよびRAの関節軟骨・軟骨下骨髄組織を免疫組織学的に観察し、関節破壊の発症のメカニズムの差異について検討した。RAならびに変形性関節症患者(OA)の手術時に採取した軟骨・軟骨下組織におけるc-fosの発現について、手術時に採取した硬組織のパラフィン包埋切片を作成し、小路らの方法に準じたc-fosのチミンニ量体標識プローブによるin situ hybridization法を用いて検討した。RAの関節軟骨細胞ではc-fosの発現が認められ、これらの細胞では軟骨基質の主要な分解酵素であるMMP-1およびMMP-3による染色性が増強していたが、そのインヒビターの1つであるTIMP-1による染色性はわずかに観察されるにすぎなかった。さらに、こうした変化を示す軟骨層の直下の骨髄には、c-fos発現陽性の細胞成分の増加が観察された。これに対して、OA患者の関節軟骨では、その表層部分の軟骨細胞にMMP-1,MMP-3およびTIMP-1による染色性が観察されるものの、c-fosの発現はほとんどの症例で認められなかった。以上の結果をまとめると、OA患者ではその2%の表層軟骨細胞にわずかなc-fosの発現を見るにすぎないのに対して、RA患者ではその73%において軟骨組織全層の軟骨細胞にc-fosの発現が観察されることがわかった。このことから、RA関節の軟骨組織ではc-fosの発現が増加することにより、そのマトリックス代謝の恒常性が破綻し関節破壊が進行するものと考えられた。以上の結果から、RAにおいては、深層に存在する軟骨細胞と軟骨下骨髄との相互作用が、関節炎の初期病変とII型コラーグンに対する免疫応答の発現に極めて重要であり、同部におけるc-fosの発現を抑制することが、RAの骨・軟骨破壊の治療につながる可能性が示唆された。
多局所青錐体網膜電図を用いた黄斑部青錐体システムの分析

糖尿病網膜症は蛍光眼底法により精密に診断される。しかし、蛍光剤の静脈内投与を定期的に繰り返し行うことは困難である。網膜電図(ERG)が診断方法として可能性を有している。しかし、糖尿病網膜症は網膜全体に均一に起こるものではなく、局所から始まりその重症度も位置によって大きくことなる。したがって、全視野刺激ERGではその病態を十分に捉える事は出来ない。局所ERGが必要である。多局所網膜電図(mfERG)は複数の局所網膜から電気反応を記録できるため、従来の横斑ERGに比べて糖尿病網膜症の分析に適している。なぜなら、糖尿病網膜症は黄斑部外から始める事が多いからである。この特性を利用して網膜症を分析した。一般的に青錐体は赤緑錐体より脆弱であるとされるため、色刺激(silent substitution)を用いた青錐体mfERGを記録した。非常に反応が小さく容易ではなかったが、通常のmfERG(赤緑錐体)より情報が多く、出血や血管の異常が無いところからも振幅の異常や潜時の遅れが見られた。問題は白斑を伴う場合であった。白色病変は刺激光を反射し、周辺部網膜を刺激して散乱光反応を混入させることが本研究で分かり、糖尿病網膜症への局所ERGの応用自体に疑問がもたれた。その解決方法としては局所反応の二次核を用いる事である。二次株には散乱光によるERGは混入しないので白色病変を無視出来ることが判明した。しかし、青錐体mfERGの二次核の分析は振幅が小さく現時点では不可能であった。今後はさらに能率良く青錐体mfERGを記録する方法を開発して糖尿病の診断に役立てたい。平成13年度は多局所網膜電図(multifocal ERG, mfERG)のCRT colorモニターの色調を変え、青錐体ERGを記録した。色調や光強度などの最適化を計り正常者のデータを集めた。青刺激と黄色刺激を赤緑錐体に対して等価とし、これらを交代で提示し、青錐体ERGのみを記緑するのが理想である。しかし、赤緑錐体の特性や水晶体の黄色化の程度が個人によって異なり、普遍的な条件決定するのは困難であった。そこで青色と黄色の変換により、赤緑錐体ERG b波と青錐体ERG b波の両方が分離して記録できる条件をさがした。この方法はfull-field ERGでGrourasらが用いたのと同じ方法であり、青錐体ERGを観察する1つの標準的方法である。この方法によると、一回のmfERG記緑で赤緑錐体ERG(潜時の早い成分)と青錐体ERG(潜時の遅い成分)の両方が記録できる。両者の分布は異なり、それぞれの細胞密度と概ね一致した。また高頻度刺激には青錐体ERGは追従できず、従来からの青錐体の特性に一致した。明順応下で行うため、杆体の関与は否定的である。以上のことから、局所青錐体ERGの配線方法は概ね完成したと考えた。次は症例での検討であるが、多局所ERGのエレメント数と記緑時間の問題がある。現在はエレメント数7個と4分記録で行っているが、情報量を増やすためには、さらにエレメント数を増やす必要がある。しかし、記緑時間の延長は症例に負担がかかる。現在は症例から記録し、至適条件を検討している。平成14年度は青錐体多局所網膜電図の臨床応用を行う予定であったが、多局所網膜電図の散乱光の影響が問題となり、散乱光について詞べた。すなわち青錐体多局所網膜電図では多局所網膜電図に散乱光による反応が混入し局所の反応ではなくなる可能性がある。

正常者とdisc coloboma症例の検討から、白色の刺激は網膜の色調が白いと光を反射し周辺部網膜を刺激し、局所網膜に周辺からの反応が混入してくることがわかった(Shimada&Horiguchi, Invest Ophthalmol Vis Sci,2003)。しかし、この影響は一次核のみへのものであり、高次核はこの影響を受けないことも発見した。なぜなら高次核は刺激光の少し前に光った光の網膜電図に対する影響(adaptative mechanism)をみているものであり、周辺部に及ぶ散乱光(反射光)は著しく弱いので網膜電図に影響を及ぼしにくい。青色光は反射しやすいという物理学的特性を持っため、青錐体多局所網膜電図の記録には高次核を用いた方がよいかもしれない。青錐体多局所網膜電図の高次核を分析する前に高次核の特性を全視野刺激網膜電図で調べた。多局所網膜電図と同じ時間的特性を持つ全視野刺激を作成し検討した。多局所網膜電図では三次核以上の高次核は記録不可能であるが、全視身刺激網膜電図では記録できた。高次核成分は低刺激では著しく減衰し、一次核より強い刺激を必要とするまた二次核とそれ以上、高次の核には特性に大きな差がない。以上から青錐体多局所網膜電図の臨床応用には二次核を用いるとよいことが分かり、平成15年度には臨床に用いる。多局所青錐体網膜電図(mfS-cone ERG)の記録方法mfS-cone ERGは、color CRT上に7個の刺激をbinary m-sequeneceしたがって青色/黄色と反転させる事により記録できる。mfS-cone ERGのみを分離するためには、青色と黄色は長波長、中波長錐体にmatchさせる必要がある。これは個人によって差があるのが、完全なmatchを行わない状態で記録するとS-cone ERGと長波長、中波長錐体ERG(LMcone-ERG)が記録される。それぞれ反応の潜時が異なるので、二つの波として評価できる。19-37個の刺激では、signal/noise ratioが悪く記録が困難であった。加齢黄斑変性では、進行した時期ではmfS-cone ERGとmfLM-cone ERGはともに異常をしめしている。その障害の程度に差は認めない。しかし、眼底にdrusenのみを認める時期からmfS-cone ERGは異常を示した。また色素変性でも早期にのみ差が認められる傾向があった。したがって視細胞障害を起こす疾患の極めて早期を捉えるにはmfS-cone ERGが有利である可能性がある。糖尿病網膜症でも進行した時期では、mfS-cone ERGとmfLM-cone ERGはともに低下している。その陣害の程度に差は認めない。早期においてもmfS-cone ERGとmfLM-cone ERGは大きな差がない。糖尿病網膜症のような網膜内層が障害される疾患では、mfS-cone ERGとmfLM-cone ERGよりむしろ網膜内層の反応を分離できる律動様小波(OPs)などが、その診断に適している可能性がある。
候補遺伝子アプローチによるIPMN感受性遺伝子のGENE-BASED相関検定

我が国や先進欧米各国において、膵癌は最も予後不良な癌であり、その解決のためには、膵癌発症関連遺伝子の同定が急務である。膵癌は複数の遺伝要因と環境要因の相互作用によって発症する多因子疾患であり、これまで、国際的にもいくつかの発症関連候補遺伝子が報告されたが、相反する結果も示され、未だ明確な答えが得られていない。その大きな原因の一つは、膵癌の遺伝的異質性にあり、したがって、通常型膵癌をはじめ、他臓器癌を高率に合併する易発癌性を示すIPMN症例に解析対象を特化したゲノム解析が、膵癌発症関連遺伝子解明の端緒となる。平成18年度は、IPMN発症感受性を規定する遺伝要因を探索する目的で、膵がんを含め、種々のがんにおいて発がんの遺伝要因となる可能性が報告されている候捕遺伝子多型について相関検定を実施した。具体的には、TP53、MTHFR、PPARG、IGFBP3、STKI5、MBD4、ADPRT、XRCC1、OGG1、APC、MMP2、STCH、ODC、MMP7計14遺伝子の主に遺伝子機能変化を伴うcSNPについて、IPMN患者群215名、健常対照群476名を対象としてTaqMan法によるSNPタイピングを実施し、こ群間における対立遺伝子頻度分布、遺伝子型頻度分布の差異をカイ2乗検定により検定した。その結果、対立遺伝子頻度分布、および、遺伝子型頻度分布の何れにおいても、有意差を認める遺伝子多型は同定されなかった。したがって、今回対象とした遺伝子多型は、IPMNの遺伝背景を説明するものではないと考えられた。今後も、候補遺伝子解析を継続するが、優先遺伝子として、STK11、BRCA2、SPINK1、PRSS1を挙げる。これらについては、今回解析した遺伝子群とは異なり、主として遺伝子領域にマーカーSNPを設定し、連鎖不平衡を利用した相関解析を実施する。平成18年度は、IPMN発症感受性を規定する遺伝要因を探索する目的で、膵がんを含め、種々のがんにおいて発がんの遺伝要因となる可能性が報告されている侯補遺伝子多型について相関検定を実施した。具体的には、TP53、MTHFR、PPARG、IGFBP3、STK15、MBD4、ADPRT、XRCC1、OGG1、APC、MMP2、STCH、ODC、MMP7計14遺伝子の主に遺伝子機能変化を伴うcSNPについて、IPMN患者群215名、健常対照群476名を対象としてTaqMan法によるSNPタイピングを実施し、二群間における対立遺伝子頻度分布、遺伝子型頻度分布の差異をカイ2乗検定により検定した。平成19年度は、候補遺伝子解析を継続するが、優先遺伝子として、STK11、BRCA2、SPINK1、PRSS1を挙げる。

これらについては、今回解析した遺伝子群とは異なり、主として遺伝子領域にマーカーSNPを設定し、連鎖不平衡を利用した相関解析を実施する。
高齢運転者のアクセレレション・ノイズの測定システムとその指標化に関する研究

1.アクセレレーション・ノイズの測定,解析システム(1)ノイズ測定装置速度検出器を車両の変速機に取り付けるに若干の時間を要するが、測定は図-1に示す必要とする諸データを簡便に収録しうる装置を完成した。(2)時間-速度図図-2で示すよう、(1)のデータレコーダーから時間-速度図を簡単に作図できる。(3)ノイズ解析装置(図-3)横軸に距離を(その区間は任意に設定可)、縦軸に速度又はノイズを取ることのできる解析図が得られる。また、距離に応じた、平均速度、ノイズの平均値及び分散も計算表示される。運転者ごとに色つき(最高8色)の線で表現できるので、高齢者にとっても見やすいように配慮した。2.実測交通条件を一定とするために、豊田市内の自動車学校練習用コース(130×【130^m】)を早朝1週間借用し、高齢者、若齢者それぞれ12名について、実車による走行及びシミュレーターによる走行実験を行ないノイズの測定をすると共に、前記解析システムを用いて分析した。図-4は、高齢者5名の実測結果の一部で5色で表示し、平均速度、ノイズも併記してある。
1.3〜1.6μm領域の波長可変固体レーザーの試作研究

Cr^<4+>:YAGを用いた1.31.6μm領域の波長可変固体レーザーの試作するために、チタンサファイヤレーザーの設計、作成を行なた。作成したチタンサファイヤを用いた2光子共鳴分光法によりZnSe薄膜、量子井戸の電子状態の研究を行った。その結果、SHG光が励起子状態に共鳴したときに著しい増大効果があること、および2P励起子状態は正孔の異方性を反映して微細構造を持つことを示した。次ぎにレーザー結晶をCr^<4+>:YAGに替え、誘電体ミラーを2組用意することにより、1.38μmから1.58μmの領域で発振が可能であるレーザーシステムを試作した。励起光源であるNd:YAGレーザーをCW動作させた場合、8W励起でCr:YAGレーザーの出力は0.9Wまで向上していることが確認できた。このレーザーシステムを用いて、バンドギャップが1.5μm程度にあるInGaAsP量子井戸構造の電子状態を調べ、このレーザーがこの系を調べる最適のレーザーシステムであることを公表した。CWQスイッチNd:YAGレーザー励起の場合は、5W励起で、最大で150mWの出力が得られている。そのときのパルス幅は100nsであった。繰り返し周波数は3kHzであるので、ピークパワーは500Wとなり、十分非線形光学現象観測のための光源になり得ることが判明した。現在、予定通りこのレーザーシステムを2光子共鳴分光法の光源として用いてGaAs/AlGaAs超格子の量子閉じ込め構造の解明を行なっている。特に、1S励起子状態で共鳴SHGの大きな増大効果が観測され、この方法がこの系の量子状態を解明するために非常に有効であることがわかった。この研究課題であるCr^<4+>:YAGを用いた1.31.6μm領域の波長可変固体レーザーを設計、試作した。共振器構成はチタン・サファイアレーザーシステムを参考にして、4枚ミラー構成にした。数回の改良の結果、Nd:YAGレーザーの1.06μm光を励起光源とした波長可変固体レーザーシステムの試作に成功した。5W連続励起の場合、試作したレーザーシステムの出力は最大で400mWであった。発振特性は本予算で購入した光スペクトラム・アナライザーを用いて調べた。複屈折フィルターを用いることにより、発振波長は1.391.53μmまで可変であることが分かった。目的としている波長範囲より少々狭いが、これは使用している誘電体ミラーと、レーザー結晶の質の問題であることが分かった。現在誘電体ミラーと結晶を良質の結晶に変えることを検討中である。スペクトル幅は0.9A以下になることが確かめられた。またレーザー結晶の冷却系の改善により、出力特性が大幅に改善されることも判明した。現在、このレーザーシステムを用いて、光通信用の半導体素子として最も有望と思われているInGaAsP量子井戸の電子構造を調べている。CWQスイッチNd:YAGレーザーで励起することにも成功した。平均パワー5W、パルス幅100ns、繰り返し3kHzで励起した場合、最大で150mWの出力が得られた。発振波長範囲は連続励起の場合とほぼ同じであり、スペクトル幅は2Aであった。この出力特性から判断すると、このレーザーシステムにより、GaAs系の超格子中の2光子共鳴過程を調べることは可能である。前年度に引続きCr4+:YAGを用いた1.31.6μm領域の波長可変固体レーザーの試作、改良を行なった。レーザー結晶を良質のものに変え、誘電体ミラーを2組用意することにより、発振波長は1.38μmから1.58μmの領域に拡大することができた。

励起光源であるNd:YAGレーザーをCW動作させた場合、8W励起でCr:YAGレーザーの出力は1Wまで向上していることが確認できた。このレーザーシステムを用いて、バンドギャップが1.5μm程度にあるInGaAsP量子井戸構造の電子状態を調べ、このレーザーがこの系を調べる最適のレーザーシステムであることを公表した。CWQスイッチNd:YAGレーザー励起の場合は、5W励起で、最大で150mWの出力が得られている。そのときのパルス幅は100nsであった。繰り返し周波数は3kHzであるので、ピークパワーは500Wとなり、十分非線形光学現象観測のための光源になり得ることが判明した。現在、予定通りこのレーザーシステムを2光子共鳴分光法の光源として用いてGaAs/AlGaAs超格子の量子閉じ込め構造の解明を行なっている。特に、2P励起子状態で共鳴SHGの大きな増大効果が観測され、この方法がこの系の量子状態を解明するために非常に有効であることがわかった。以上の成果が得られたので、カーレンズ効果を用いたフェムト秒パルス発生の試みも現在着手し始めた。共振器長を延ばし、石英のプリズムを2つ共振器内に挿入してフェムト秒パルスの発生を試みている。
日常生活の姿勢変化からみた高齢者の生活リズム解析と寝たきり防止の指針に関する研究

1.在宅加療中の高齢者を対象とした日常生活下における姿勢解析在宅加療中の高齢者を対象に、日中約10時間の無拘束姿勢計測を行った。対象者は年齢70代・80代の女性4名である。各被験者に対して午前8時から午後6時までの10時間の姿勢変化を測定間隔0.2秒で測定・記録した。得られたデータから各人の姿勢ヒストグラムを求めるとともに、動画表示の解析から各被験者の歩行回数及び歩行時間、姿勢の変化数、各肢位での休息時間等を求めた。その結果、高齢者の日常生活下における行動や活動性というものが客観的に評価可能であることが確認されるとともに、家族構成、家屋構造、立地条件などを含めた生活環境の違い以上に、人生観や生活信条の差異による姿勢の種類や頻度、活動性に大きな差が見られることが客観的に示された。2.寝たきり防止をめざすリハビリテーションの検討上記をふまえ、老人病院入院中の高齢患者の生活環境、および生活信条、人生観等の情報から、週間スケジュール、日課等の調整により在宅に近い状況を作るアプローチを実施し、有効な結果を確認することができた。何らかの障害を持つ高齢者の治療に際して「寝たきり」状態を惹起させないためには、障害の回復状況に応じて患者の生活環境をも考慮すべきであることが確認され、生活スタイル、生活信条をも把握したリハビリテーションプログラムの必要性が示された。本研究は、開発した無拘束姿勢計測装置を用いて日常生活下における高齢者の姿勢状態の長時間計測を行い、要介護老人と健常者との比較を通して、寝たきり防止のための客観的なリハビリテーションに関する基礎的知見を得ることを目的としている。今年度の研究概要は次の通りである。1.健常成人および健常高齢者を対象として姿勢の長時間無拘束計測を行い、装置の測定制度および信頼性・安定性について実験的に検討し、装置の実用性を確認した。2.在宅の健常高齢者、および入院、あるいは老人保健施設入所中の高齢障害者、合計8名を対象として、日常生活下における姿勢を無拘束で取得した。得られた姿勢データより、各被験者の日常生活の活動性を1日の生活における各種姿勢のとる割合や姿勢変化の頻度から検討した。3.病院入院患者の場合、在宅者や老人保健施設入所者に比べて歩行や立位といった活動姿勢が少なく、休息座位や臥位といった休息姿勢をとることが多いうえ、姿勢変化も少なかった。4.在宅では家族と同居しているか単身かにより、日常の姿勢・活動に大きな差が見られた。上記結果より、平成10年度は下記の通り研究を遂行する予定である。1.在宅加療中の高齢者を対象にデータ収集を続け、在宅下での生活リズムの特徴を見いだす。2.1をもとに活動性を向上せしめ早期離床を促進するリハビリテーションの実際等について検討する。
安定同位体ラベルによる末端酸化酵素プロトンポンプ機構の解明

好気的呼吸鎖の末端酸化酵素によるプロトンポンプ機構を解明するためには、ヘム-銅複核中心における微細構造の理解が必要不可欠である。ミトコンドリア型シトクロム酸化酵素と機能・構造の両面で高い相同性を有し、分子遺伝学的取り扱いが容易な大腸菌シトクロムbo複合体(ユビキノール酸化酵素)を用いた解析に重点に置いた研究を行った。1野生型大腸菌シトクロムbo複合体及びその阻害剤(安定同位体によりラベルしたシアン、アザイド)結合型のEPR及びFT-IRスペクトルの解析によりこの酵素がミトコンドリア型シトクロム酸化酵素の非常に良いモデルであることを明らかにした。2ミトコンドリアシトクロムc酸化酵素の酸化型に^<13>CN,C^<15>N,^<13>C^<15>N,^<15>N_2N,^<15>NN_2といった阻害剤を結合させた微結晶を作製しその固体^<13>C/^<15>N-NMRスペクトルをCP-MAS法により測定した。現在測定結果を解析中である。4大腸菌呼吸鎖のユビキノール酸化酵素であるシトクロムbdとシトクロムbo複合体との差違をEPR、共鳴ラマン散乱及びFT-IRスペクトルの解析により明らかにした。
可溶性導電性高分子・酸化還元高分子を介する酵素-電極間の電荷伝達

20°C以下では水に可溶で、30°C以上では不溶となる酸化還元高分子をアクリルアミド誘導体とビニルフェロセンから合成し、水溶性の酵素グルコースオキシダーゼとともに約10°Cの水に溶解し、電極表面に塗布、乾燥して新しい酵素電極を作製した。この電極が窒素下においてもグルコースに対し酸化電流応答を示したことから、上記の高分子はグルコースオキシダーゼの固定化担体として、なおかつグルコースオキシダーゼ-電極間の電荷伝達メディエーターとして機能することが明らかになった。これらの機能を同時に持つ高分子は従来報告がなかった。一方、上記のアクリルアミド誘導体とビニルフェロセンを架橋剤存在下で重合することにより、全く新しい酸化還元ゲルを合成した。このゲルは水溶液中において体積相転移を示し、20°C以下で膨潤、30°C以上で収縮する。このゲルを電極上に固定化し、膨潤させてグルコースオキシダーゼを取り込ませ、収縮させると、高分子を用いた場合と同様、グルコースに対する応答を示した。ゲルを再び膨潤させてグルコースオキシダーゼを新しいものと交換したり、ラクテートオキシダーゼなど異種の酵素に交換することによって異なるセンサーにすることも可能であった。本研究により、親水性の高い酸化還元高分子/ゲルを用いることによって、水溶性の酵素と電極の間の速やかな電荷伝達を起こせることがわかった。同様に、水に可溶な導電性高分子を用いることによっても、酵素-電極間の電荷伝達が可能であることがわかった。
日常相互作用文脈における語彙発達

就学前の言語発達に関するデータベースを作成することを目的に、1人の女児の2歳から6歳の誕生日における1日観察を実施した。子どもの言語獲得は、その子どもの日常での経験内容を検討し、そこでの言語的インプットの量と質を押さえ、他者との相互作用の中で生ずる子どもの言語をみていくことが必要である。既に実施した5歳までの観察に加え、6歳の時点での家庭での観察の実施、およびそのビデオ録画資料の文字データへの転記を行なった。その中から、特に感覚・感情語に焦点を当てて検討を行なった。語彙獲得はその語の特性に基づいた固有の獲得がありうると考えられる。事物名称や動作に関する獲得の研究はいくつかあるが、感覚・感情語についての資料は必ずしも多くはない。また、これらの語は知覚的対象指示によるのではなく、文脈に依存する傾向が強いと考えられる語である。そこで、これらの語を含む相互作用を観察記録から抽出し、その年齢における変化と語のタイプにおける相違をみた。特に、食事を含むルーティン的場面でのデータについて、2歳から5歳までの検討を行なった。この結果、これらの語を含む相互作用は年齢によって異なり、初期には親の入力語と子どもの使用語には緊密な関連がみられるものの、特に4歳では親の入力語に依存しない子ども独自の使用が多くなることが示された。また、初期には子どもの状態を示す何らかのサインに対する言語化が多くみられたが、徐々に親からの推論と推論内容の確認へと移行する中でこれらの語が用いられることが示された。このことから、感覚・感情語の獲得においては、親子の日常的相互作用のいくつかのパターンが重要な役割を果たしていることが示唆された。これらのパターンを整理し、獲得に関与する相互作用のパターンと年齢変化、およびこれらが事例を超えて普遍化できるものであるかどうかを確認していくことが今後の課題となる。
中世チェコのドイツ人植民運動にみる「辺境」の変容

13世紀のオロモウツ司教領における入植活動を分析し、これを主導したとされる司教ブルーノ亡きあとも、1引き続きドイツ系騎士が活発に活動していたこと、2封土の授与とともに軍事奉仕の具体的な条件が入植契約書に記載されるようになったこと、3従前よりモラヴィアで活動していたチェコ系騎士も司教宮廷へ取り込んでいること、4モラヴィアからシレジアにかけて開墾の余地があったと同時に、軍役を課す必要にせまられていたこと、を明らかにした。また、旧ハムリーコフ村の実地調査では、1入植者にとって欠かせない水源があること、しかし2周囲と比べるとやや標高が高く、農作業に何らかの障害が生じていた可能性を確認した。本年度は、前年度に実施することのできなかった現地調査を9月におこなった。モラヴィア南部の村ルプレヒトフを訪問し、隣接する地域にかつて存在した植民村ハムリーコフの跡地を訪ねた。台地のうえに位置し、近くに小川は流れているものの、全体として農耕・流通・生活にはそれほど有利な環境ではないことが確認できた。しかし、隣のルプレヒトフももともと開墾村であるが、それほど地理的条件は変わっているようにはみえず、なぜハムリーコフだけが消滅したのかは現地調査からでは明らかにできなった。今後、文献資料からもアプローチしていく必要がある。現地調査により、中世植民村がどのような環境(高低差、水利、近隣諸村との距離など)に置かれていたのかを、地図上だけではなく、自分の目で確認できたことは大きな収穫だった。一方、証書史料の分析としては、フラボヴァーなどの先行研究で取り上げられてきたオロモウツ司教ブルーノ時代の所領を示す史料の確認を終え、オロモウツ司教座が設置された前後の特権文書から、ブルーノの前後の時代、そして14世紀にはいるあたりの史料までを確認した。具体的な分析に関しては新年度の課題になるが、ブルーノ時代との比較についての材料はそろえることができた。以降の研究に関わる準備として、プラハ司教領・大司教領についてのモノグラフを収集した。オロモウツ司教領との比較が目的である。また、それらの分析が早く進んだ場合に備えて、修道院関連の文献も収集した。予定通り、先行研究の把握と研究文献の収集に努めた。本研究は中世における「辺境」の分析を課題としているため、文献の収集にあたっては、チェコ・ドイツ周辺に限定せず、広く北海地域やイベリア半島なども対象とした。また、L.フラボヴァーの『オロモウツ司教領の封建所領経済』(1964)の読み直しをおおない、そこで利用されている証書史料とカヴァーしている地域の範囲を確認した。そのうえでフラボヴァーのあげている『モラヴィア証書史料集』Codex diplomaticus Moraviaeの3巻および4巻に所収されている史料の分析をすすめた。彼女の研究では関連資料として列挙されているものの、必ずしも内容に関する言及ないし分析がないため、重複するものもあるが、いちから自分で確認した。現段階で確認できた範囲では、ブルーノ司教がてがけた農村の植民開墾はいずれも大規模で、なかには210フーフェに達する村落も存在した。かつて報告者が確認したところでは、チェコの入植者は夫婦で平均0.5フーフェを与えられていた。これにしたがえば、420組の夫婦が入植したことになり、これはもはや都市である。一方、阿部謹也氏の研究によればプロイセンでは3フーフェが与えられていたというが、こちらの数字をあてはめた場合でも70組の夫婦が入植したことになり、規模が大きいことにはかわりがない。今後さらなる史料分析をすすめ、正確な数字を算出しなければならない。その他、ブルーノの出身地を反映してマクデブルク法(ドイツ東部で優勢)で入植がおこなわれていること、入植を監督する代官に何度も同名の者が現れること、などが確認できた。代官の同定については、その他の史料との突き合わせをおこなうことにより確定させたい。本年度はオロモウツ司教領の所領拡大・入植運動のデータ整理をさらにすすめた。ブルーノ時代だけではなく、前後のロベルト、ジェトジフ時代まで広げて分析し、ブルーノ時代の革新性が確認できた。具体的には、ブルーノの前代にあたるロベルト時代までは、所領の自力拡大の痕跡は認められるものの、それが入植活動によるものであったという史料上の証拠はほぼ皆無であったことから、少なくともブルーノ時代に本格的に導入されたことが判明した。一方、次代ジェトジフは、ブルーノの所領拡大政策を基本的には継承しているようにみえる。引き続き入植を示す用語が複数確認でき、また後者の政策の特徴とされてきた授封行為とセットで史料に言及されているのである。ブルーノ時代には確認できない所領名も数多く登場し、ジェトジフが積極的に所領拡大に従事している様子がうかがえる。

授封行為に関していえば、単に封土を授与するだけではなく、それと引き換えに要求する奉仕の内容に対する言及も増えてくる。したがって、従来はブルーノの個性に帰されてきたオロモウツ司教の東方植民誘致策も、たしかに彼の司教就任がきっかけになってはいるが、時代的趨勢のなかで理解できることが指摘できる。また、現段階では所領の所在地を地図上で確認する作業を済ませていないために、確実なことはいえないが、おおよそモラヴィアの北方にあたるシレジア国境付近での活動が活発化しているようである。モラヴィア/オロモウツ司教領の内的発展だけではなく、シレジアをめぐる政治的状況(シレジア諸侯の分裂、チェコ王への臣従など)も考慮に入れながら、入植運動と軍事的再編成の進展を把捉する必要性を指摘できる。ヨーロッパ中世史当初の目標としてはプラハ司教領の証書史料の分析までを終えるつもりであったが、以前採択された科研費の研究成果である博士論文の刊行準備に時間をとられ、文献確認の段階にとどまり、実際の史料分析にまで着手することができなかった。また、ブルーノ時代の史料だけではなく、確認する時代の幅を大きくとったことが、オロモウツ司教領の史料分析を終えるのに時間がかかった理由である。しかし、その結果として、ブルーノ時代の特徴をより鮮明に捉えることができた。上記のように、先行研究の把握や研究文献の収集は予定通りにおこなうことができた。しかし、証書史料の確認は、当初予定していたブルーノ司教時代についてすべて終わらせることができなかった。その理由は二つある。一つは、本研究とは別の科研費による共同研究の成果として、2013年5月に開催される日本西洋史学会の大会シンポジウムで発表をおこなうことになり、その準備に時間をさかれたこと、そしてもう一つは、2012年度で前任校を退職し、4月より新たな職場へ異動することになったため、学内行政の引継作業などにおわれたこと、である。前年度の段階では、オロモウツ司教領の分析を終えたあとは、シトー会系の修道院かプラハ司教領との比較をおこなうことを考えていたが、現段階では後者の分析に絞る方向に計画を変更している。当然、制度的に考えて修道院よりも司教領のほうが比較対象としては適切なのだが、史料の残存状況も確認した結果として改めて選択した。ただし、モラヴィア地方の状況を確認するために、チェコ全体ではなく、モラヴィア地方の大修道院にかぎって、比較対象として分析を継続しようと考えている。上記のように、平成24年度の研究計画を達成できなかったため、今年度は継続してブルーノ司教時代のオロモウツ司教領における入植状況の把握に優先して取り組む。そのうえで同時代の他の教会所領、具体的にはシトー会系修道院領やプラハ司教領などの分析へとすすむ。計画実施の遅れをふまえて、今後の作業の進展速度により、修道院領かプラハ司教領のどちらかにしぼることもある。その場合には、世俗所領との比較検討は断念し、3年間かけて教会所領全体の入植運動を考察することにする。なお、本年度はインターネットなどで入手できないチェコ語の研究文献を入手するためにチェコへ渡航し、あわせて文書館などを訪問する。該当なし
グリム兄弟の思想の文化学的研究

グリム兄弟の文献学を〈記憶〉の問題として捉え直し、〈文化学〉の視点と手法で明らかにする。彼らは、伝承は口承性・集合性の点で恣意的変更を許容しない〈精確な〉記憶保存力を有し、古代からの〈文化的記憶〉を保持していると考えた。そして衰退から救った口頭伝承を、近代において特に女性を通じて〈再生〉しようとした。そこには、女性を〈自然に近い性〉および子どもに接する身体として表象するジェンダー観、国民アイデンティティーを強化する〈文化的記憶〉のカノン化、人為的創作(Kunst)に対する自然(Natur)の優位を視覚化するイメージ的思考、またこれらが〈学術性〉に支えられているなどの問題がある。