hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
中・高層建築への木材用途拡大を目指した木－RCハイブリッド床システムの開発

また、恒温恒湿環境下の試験体については、試験は実施したが恒温恒湿槽の不調により、試験を途中で断念することとなったため、来年度改めて試験を実施し、環境の違いについても検討する。3については、昨年度より進めていた解析検討結果をもとに、最適な金物配置を見出した。この結果をもとに、均等に接合具を配置した場合と最適に配置した場合について実大試験体を用いて比較し、解析通りの約1.2倍の剛性向上の結果を得た。また、本解析手法を用いることで剛性の計算が可能であることが確認できた。ただし、耐力の計算はうまく説明できない部分があるため、来年度の課題として残った。この実験における成果をもとに、4の実大床クリープ試験の試験体の金物配置などの調整を行った。来年度は建材試験センター西日本試験場を借りて、本複合床試験体を用いた実大クリープ試験を実施する。平成29年度の当初の計画では、2に関する接合部クリープ試験を開始することとなっており、実際に予定していたパラメータによる実験を開始し、そのデータに関する評価も先述の通り実施できている。ただし、恒温恒湿環境下の試験については、試験槽の不調により実施が困難であったが、来年度実施のめどがついており、3か月の短期で評価が可能であるため、本課題期間内で評価までおこなえるため、おおむね問題ないと考えている。同様に当初計画では、3に関する実大床の曲げ試験を進めることとなっており、複合床の数値解析モデルの構築を進めた結果、接合部の性能に合わせて最適配置を提案できるに至っている。さらに本モデルの確かさを実大実験により確認できたため、設計法の提案についても前進していると考える。さらに当初計画では、4に関する実大床のクリープ試験を開始、または準備することとなっており、これについても概ね実施準備ができたことから、問題なく遂行していると考える。実際には、建材試験センター西日本試験センターにて、試験体作成場所および試験場所の確保、試験用錘および試験用冶具の準備を進めており、来年度できるだけ早い時期に載荷可能となるよう準備が進んでいる。これらを勘案し、おおむね順調に進展していると判断している。本年度では、これまでに検討を行った要素接合部と実大曲げ試験体について、クリープ性能を評価する長期試験を行った。1.接合部単位のクリープ試験とその評価異形鉄筋を溶接した穴あき鋼板及び穴あきチェッカープレートを折り曲げた物、また一般に用いられているスタッドタイプの接合部を用いた接合部せん断クリープ試験を実施した。現在までに、大気下で約1年8か月間、恒温恒湿下で約10か月間継続した加力を行っている。大気下条件では鋼板接着型の両タイプのクリープ変形は0.1mmに満たず、スタッドタイプの変形と比べて相当抑制されており、提案している接合方法の長期性能が高いことが確認された。また、大気下条件では恒温恒湿条件よりもクリープ変形の進行が若干大きい傾向が確認された。2.実大床の曲げ試験及び設計法の検討昨年度短期性能を把握した実大床試験体と同条件の試験体について、短期試験から推定した長期許容耐力に相当する荷重を与え、長期曲げ載荷試験を実施した。現時点で試験開始後約1年が経過した。試験開始1時間後の変形を初期変形としたクリープ変形増大係数は、二次クリープを用いたPower則の計算により6.8程度であり、RC(16)と木材(2)の変形増大係数の中間的値を示すことを確認した。
ヒアルロン酸の代謝動態とCD44の相互作用が肺癌の生物学的悪性度を規定する

肺癌組織におけるCD44standard form (CD44std)、CD44 variant 6 (CD44v6)、およびgalectin-9の発現と、組織型、分化度、病期、予後について検討を行った。組織型別には扁平上皮癌でCD44std、CD44v6の陽性率が高く、腺癌でgalectin-9の陽性率が高かった。分化度別には、腺癌において低分化になるほどCD44v6の陽性率が低下する傾向があり、扁平上皮癌において低分化になるほどgalectin-9の陽性率が低下する傾向が認められた。以上の結果は腺癌と扁平上皮癌でヒアルロン酸を中心とする細胞外マトリックスに対する生物学的態度が異なっている可能性とともに、肺癌組織においてgalectin-9の発現によりCD44の機能に何らかの調節がなされている可能性が示唆された。ヒアルロン酸は、ほぼすべての組織に存在する細胞外マトリックスであり、細胞の成長、増殖および運動などに影響を与える重要な分子である。ヒアルロン酸受容体として細胞膜上に存在するCD44は、リンパ球や好中球、樹状細胞、また血管内皮や腫瘍細胞にも広く発現している。本研究では、肺癌組織中のヒアルロン酸代謝動態と腫瘍細胞におけるヒアルロン酸受容体CD44の相互作用が、肺癌の生物学的悪性度に与える影響を解明することを目的とした。平成22年度は、肺癌組織におけるCD44standard form (CD44std)、CD44 variant 6 (CD44v6)、およびgalectin-9の発現について検討を行った。ホルマリン固定パラフィン包埋された肺癌組織を、3.5μmに薄切し、加熱による抗原賦活処理を加えた後、それぞれの抗原に対する一次抗体と反応させた。抗原抗体反応は、ストレプトアビジンビオチン法およびDAB発色により可視化した。CD44stは、検討した肺癌組織(腺癌および扁平上皮癌)において、腺癌より扁平上皮癌での発現率が高く、扁平上皮癌ではほぼ全例で発現を認めた。CD44v6は、CD44stdの発現を認めた肺癌組織の一部に発現しており、腺癌より扁平上皮癌での発現率が高かった。一方、galectin-9の発現は、扁平上皮癌ではほとんど認めらなかった。また、腺癌では、CD44の発現が認められなかった組織にgalectin-9が発現する傾向を認めた。これらの結果から、CD44stdおよびCD44v6の肺癌組織型による発現率の違いは、腺癌と扁平上皮癌でヒアルロン酸を中心とする細胞外マトリックスに対する生物学的態度が異なっている可能性を示唆すると考えられた。さらに、肺癌組織においてgalectin-9の発現によりCD44の機能に何らかの調節がなされている可能性が示唆された。平成23年度は、検討症例を腺癌43例、扁平上皮癌31例(平成14年度切除例)として、肺癌組織におけるCD44 standard form(CD44std)、CD44 variant 6(CD44v6)、およびgalectin-9の発現と、組織型、分化度、病期、予後について検討を行った。免疫組織化学法は、ホルマリン固定パラフィン包埋された肺癌組織を、3.5μmに薄切し、加熱による抗原賦活処理を加えた後、それぞれの抗原に対する一次抗体と反応させた。CD44stdおよびCD44v6の染色性は、細胞膜に陽性であり、galectin-9は細胞質に陽性であった。CD44stdは、扁平上皮癌の87.1%、腺癌の44.2%に陽性、CD44v6は扁平上皮癌の80.6%、腺癌の27.9%に陽陸、galectin-9は扁平上皮癌の58.1%、腺癌の95.3%に陽性であった。全生存率に対するCD44std、CD44v6、galectin-9の陽性所見が与える影響については、これまでの検討では有意な関係を示すことができなかった。
Co基耐熱金属間化合物合金の設計開発

高温構造用材料として開発が期待される金属間化合物合金は常温で極めて脆いため、これまでに常温延性改善を狙った多くの研究が行われてきた。延性化と高強度化は互いに相反する事象であり、高温強度を維持することが実用化に際して最終的な課題となる。そこで、延性を改善したCo基耐熱金属間化合物合金の高温強度特性を調べることを目的として本研究を行った。供試合金にはCo-Al-C3元系B2/E2_1/(CO)3相合金、および微量B添加Co-AI-Ni-Ti4元系B2/L1_2/(Co,Ni)3相合金を選んだ。B2相はCoAl、E2_1はCo_3AlC、Ll_2は(Co,Ni)_3(Al,Ti)、(Co)と(Co,Ni)は一次固溶体である。Co-Al-C合金では初晶グラファイトが大量に偏析するため、真空高周波溶解による大型インゴット作成は不可能であり、製造プロセスの改良が必要であることがわかった。そこで、室温引張試験と高温クリープ試験はCo-Al-Ni-Ti合金に対して行った。常温延性の改善は、B2とLl_2の2つの化合物に一次固溶体を加えた3相合金とすることで達成した。まず、平行部直径4mmの丸棒試験片を用いて引張試験を行い、室温での機械的性質を調べた。ひずみ速度3.3×10^<-3>S^<-1>で試験を行った結果、塑性ひずみ4.3%の優れた引張延性、0.2%耐力770MPa,引張強度1100MPaの高強度を示すことを明らかにした。高温引張クリープ試験は平行部直径6mmのJIS規格フルサイズ試験片を用いて一定応力で行った。850°C、50MPaでの試験結果は、破断時間47時間、最小クリープ速度4.8×10^<-7>s^<-1>である。応力を100Mpaに、または温度を900°Cにすると、いずれの場合もクリープ強度は著しく低下する。破断ひずみは約40%と極めて延性的であり、これが低いクリープ抵抗の主因となる。この合金は、クリープ寿命の20%程度という短い遷移城を経て最小クリープ速度を示し、緩やかに加速に転じて破断に至る。破断後の組織観察の結果、一次固溶体相中にき裂の存在が確認され、加速域の発現はボイドを起点としたき裂の成長過程に起因すると考えられる。
防災用自動販売機に適した位置情報利用ルーティング

本研究では,災害時の通信インフラ途絶に対応可能な災害対応型自動販売機システムの実用化を行う.具体的には,安価なバッテリーと無線LAN機能を有するコンピュータシステムを搭載し,同じ機能を有する自動販売機間で通信を中継するアドホックネットワークを構成する.このことで,通信インフラが途絶した際の緊急通信ネットワークを実現する.本研究では,災害時に発生する自動販売機の故障やバッテリー切れに対応可能な位置情報利用ルーティング手法を開発し,最終的にシミュレーションはもちろん,バッテリー切れや故障を想定した模擬システムの上でその有効性を検証する.本研究では,災害時の通信インフラ途絶に対応可能な災害対応型自動販売機システムの実用化を行う.具体的には,安価なバッテリーと無線LAN機能を有するコンピュータシステムを搭載し,同じ機能を有する自動販売機間で通信を中継するアドホックネットワークを構成する.このことで,通信インフラが途絶した際の緊急通信ネットワークを実現する.本研究では,災害時に発生する自動販売機の故障やバッテリー切れに対応可能な位置情報利用ルーティング手法を開発し,最終的にシミュレーションはもちろん,バッテリー切れや故障を想定した模擬システムの上でその有効性を検証する.
新出文献に基づく中世チベット仏教伝播後期における空白期間の綜合的解析

チベットにおいて中世が始まる9世紀から13世紀あるいはチベットにおけるインドからの仏教伝播後期については史料が極めて少なく、一種の「空白期」とされてきた。しかし2004年以降、ダライ・ラマ5世(1617ー1682)の秘蔵書をはじめとする、この時代に関するチベット語の写本文献の発見が相次ぎ、チベットの中世史研究は新しい局面に入ったと言える。本研究は、チベット語の新出写本文献を4つのカテゴリーに分け、これら新出文献群の全体像と特徴を明らかにし、さらに文献群間の比較研究も行う。本研究によってこの時代のチベットの歴史的事象、仏教伝播の特徴について明らかにすることを目指す。
可搬型分折機器を用いた未調査文化財の材質調査に関する研究

平成12年度に引き続き、東京文化財研究所が中心になって近年開発された可搬型の蛍光X線分析装置を用いて、様々な文化財資料の材質調査を行い、材料や技法に関する数多くの知見を得ることができた。平成13年度は本研究課題の第2年度(最終年度)として、立体的で複雑な形状の資料や、壁画など大型の試料についても積極的に調査を行い、これまで知られていなかった新たな知見を得ることができた。以下に、平成13年度に測定を行った資料と得られた結果の概要を示す。(1)国宝「源氏物語絵巻」の顔料分析平成12年度に引き続き、徳川美術館および五島美術館に所蔵される国宝「源氏物語絵巻」について、顔料同定を目的に分析を行った。両美術館に専用の測定架台を持ち込み、従来からの測定と併せて700ポイント以上の測定を実施するに至った。今年度の調査により、これまで知られていない緑色顔料が用いられている部分があることを新たに発見した。(2)国宝「普賢菩薩騎象像」の表面彩色分析東京・大倉集古館に所蔵される国宝「普賢菩薩騎象像」について、表面彩色材料の評価を目的に分析を行った。蓮弁部分に残存している明緑色の部分から、従来考えられていなかった亜鉛を含む緑色物質を検出した。(3)輸出漆器の表面装飾分析18世紀末から19世紀初頭にかけて日本から欧州へ輸出され、現在英国のアシュモリアン美術館に所蔵されている「ナイフボックス」表面に施されている蒔絵や装飾品の材質調査を目的に分析を行った。表面の茶色や灰色に変色した蒔絵部分の材料が真鍮粉であることを見出した。(4)中国壁画の顔料分析可搬型の蛍光X線分析装置を中国に輸送し、北京の智化寺に保管されている明代(15世紀)製作の壁画(470W×300Hcm、床面から150cm)の顔料分析を行った。海外で大型の文化財試料の測定を実施できたことは大きな意義がある。東京国立文化財研究所で近年開発された可搬型の蛍光X線分析装置を用いて、様々な文化財資料の材質調査を行い、材料や技法に関する新たな知見を数多く得ることができた。今年度は本研究課題の初年度として、絵画や障壁画といった平面的な資料の顔料分析を積極的に行うとともに、木彫像の表面彩色の分析を行うなど、立体的で複雑な形状の資料についても分析を試みた。以下に、今年度測定を行った資料と得られた結果の概要を示す。(1)国宝「源氏物語絵巻」の顔料分析徳川美術館および五島美術館に所蔵される国宝「源氏物語絵巻」について、顔料同定を目的に分析を行った。両美術館に専用の測定架台を持ち込み、これまでに(従来からの測定と併せて)600ポイント以上の測定を実施した。Hgを主成分とした白色顔料を見出すなど、美術史研究に新たな展開をもたらす数多くの知見を得ることができた。来年度も調査を継続する予定である。(2)名古屋城本丸御殿天井画・障壁画の顔料分析名古屋城本丸御殿の天井画および障壁画の復元模写の過程において、用いられている彩色材料や顔料の特定を目的に調査を実施した。名古屋城小天守閣において測定を実施し、剥落・変色などで材料が不明だった顔料の特定を行うことができた。(3)四日市市立博物館での銅造仏の組成調査および木彫像の彩色材料調査三重県内で近年出土した銅造仏および木彫彩色像について、四日市市立博物館で調査を実施した。(4)神奈川県・称名寺本尊の彩色材料調査称名寺において本尊弥勒菩薩立像表面の彩色材料調査を行った。台座から補彩と考えられる顔料を検出した。(5)京都・大将軍八神社の神像彩色材料調査大将軍八神社において、多数の神像を対象に彩色材料を調査した。特徴のある緑色顔料が存在していることを見出した。

(4)中国壁画の顔料分析可搬型の蛍光X線分析装置を中国に輸送し、北京の智化寺に保管されている明代(15世紀)製作の壁画(470W×300Hcm、床面から150cm)の顔料分析を行った。海外で大型の文化財試料の測定を実施できたことは大きな意義がある。
グローブ座におけるエリザベス朝演劇の上演形態の研究

グローブ座で演じられた劇に絞り、エリザベス朝戯曲の初演の形態(original staging)を、ト書き研究にローズ座とグローブ座の考古学的証拠を接合して分析した。劇のテクストを広く精査し、ト書きを中心に文献上の証拠を拾いあつめた。さらに、1996年に開場した新グローブ座での実際的な知見を活用して、劇場構造が上演にどのような制限を課し、どのような特徴をあたえたかを調査した。具体的に次の4点が明らかになった。(1)舞台上の二本の柱の上演への影響二本の柱は左右対称性を作りだし、本来は別の場所で起きている出来事が、舞台の右半分と左半分で同時に演じられた例が多くみつかった。また柱と舞台の縁との間を演技空間として用いた可能性もある。(2)登退場のト書きと二つの登退場口の利用シェイクスピア時代の俳優たちは「舞台裏への登場」をすることができたし、'Exit aside'というト書きの示すように「舞台上に留まったままの退場」もあり得た。『ヨークシャーの悲劇』で死骸があるはずの舞台で、別の場面が演じられることがあるが、こうしたときに上舞台を利用した可能性は一般に思われているより少ない。むしろ本舞台の前と奥(中央開口部もふくむ)を、観客が主観的に分節して、別の空間となしたと仮定できる。(4)再建グローブ座での演技再建されたグローブ座では、囁いても叫んでもせりふがよく通ることが分かった。また平土間にいる観客との濃密な交感により、「場のスピリット」に触発された演技が、大いに用いられた可能性があると推測された。11年度はシェイクスピア作品を中心に、ト書きと、舞台上の動きや劇場の各部に言及している台詞を分析した。舞台の柱の機能については、太田が柱の外側の空間が登退場の経路として利用された可能性、また柱を中心として舞台が左右二つの別空間として用いられた可能性を調べて、口頭発表をメンバーのなかで行なった(来年度刊行の予定)。また登退場については、Oxford U.P.から刊行したStaging in Shakespeare's Theatresで市川真理子が、実際の登退場とト書きの位置の問題について包括的な分析を示した。また下館和巳が「シェイクスピア劇と劇場」(『言葉と想像力-斎藤和明教授退官記念論文集』所収)で、劇場建築とシェイクスピア劇の上演にかかわるコメントを行なった。さらにグローブ座の新プラトン主義的な意味付けについては、藤田実が「新プラトン主義とシェイクスピアの『あらし』」で考究した。この藤田論文がおさめられた世界思想社刊『シェイクスピアを学ぶ人のために』には、太田、小林の関連論文も所収している。こうした成果を総合し、新たな調査結果や知見をくわえて12年度に、論文集を刊行する予定である。グローブ座で演じられた劇に絞り,エリザベス朝演劇の初演の形態(origiral staging)を,ト書き研究にローズ座・グローブ座の考古学的証拠を接合して分析した。劇のテクストを広く精査し,ト書きを中心に文献上の資料を広く拾いあつめた.さらに,1996年に開場した新グローブでの実際的な知見を活用して,劇場構造が上演にどのような制限を課し,どのような特徴を与えたかを調査した.具体的に次の6点が明らかになった.(1)舞台上の二本の柱の上演への影響二本の柱は左右対称性をつくり出し,本来は別の場所で起きている出来事が,舞台の左半分と右半分で同時に演じられた例が多くみつかった.また柱と舞台の縁との間を演技空間として用いた可能性もある.(2)登退場のト書きの曖昧さ

シェイクスピア時代の俳優たちは「舞台裏への登場」をすることができたし,「舞台上に留まったままの退場」も'Exit aslde'などのようにあり得た.(3)上舞台と中央開口部の場面転換への利用『ヨークシャーの悲劇』で死骸があるはずの舞台で,別の場面が演じられることがあるが,こうした時に上舞台を利用した可能性は一般に思われているようも少ない.むしろ,舞台の奥行きを利用して,舞台前面と奥(中央開口部もふくむ)を,観客が主観的に分節して,別の空間としてみなしたと仮説できる.(4)再建グローブ座から推測される演技の方向性再建されたグローブ座では.囁いても叫んでもせりふがよく通ることが分かった.また手工間にいる観客との濃密な交感により,<場のスピリット>に触発された演技が,大いに用いられた可能性があると推測された.
わが国の文化的文脈に則したシティズンシップ教育カリキュラム開発のための基礎的研究

本研究は、わが国固有の文化的文脈に則したシティズンシップ教育カリキュラム開発を行うための基礎的研究として、日本・英国・米国におけるシティズンシップの調査・分析を行い、以下2つのことを明らかにした。第1は、シティズンシップ教育を支えている各国・地域固有の市民性意識、第2は市民性意識と教育実践の関係性である。これら2つを通して、シティズンシップ教育実践と各国・地域固有の市民性意識の関係性を明らかにした。本年度は、主に3点を明らかにした。第1は分析フレームワークの設定である。先攻研究を検討した結果、シティズンシップ教育は、各国固有の学校制度や法、またカリキュラムや教科書といった顕在的要因と、子どもの意識や、慣習、推論のバイアス、自己のアイデンティティー形成や集団への帰属意識のなど、可視化されない文化的要因(潜在的要因)の2つにより成立していることを明らかにした。そこで本研究では、「文化心理学の研究成果を市民性意識調査研究へ応用し、調査研究を基盤に帰納的に授業構成の違いを分析する」というフレームワークを設定した。第2は日英におけるシティズンシップの意味内容の違いを明らかにした。日本にて300名強ヘアンケート調査を実施した結果、市民性の要件として儒教的道徳、子どもの判断基準として道徳心が第1におかれていることが明らかになった。ここから、日本は人々の行動基準として「政治的市民」よりも、儒教的観点や道徳心などの要因で価値判断・意思決定を行う場合が多い。すなわち、「政治的市民」としての感覚が子ども達に伝播しているイギリスと、あくまでも道徳的な価値判断を行う日本では、依って立つ市民性の意味内容が異なっていることを明らかにした。第3は日英のシティズンシップ教育にみられる授業構成の違いである。民主主義という同じテーマの授業を分析した結果、英国は政治的市民育成へ向けた実態的活動に基づく授業構成、日本は論理的思考育成へ向けた分析的活動に基づく授業構成を採っていることを明らかにした。政治的市民育成を目指すイギリスの場合、社会での活動を学校の中に再現し、実際に議論・活動する必要がある。対して、子ども達の判断基準が儒教的道徳などの非論理的観点に操作されている日本の場合、教育にて子どもの思考を分析的思考へと修正・改善・発展させてゆく必要がある。このような違いを明らかにした。第2は、具体的事例を通して、シティズンシップの教育実践と文化的文脈の関係を分析した。はじめに実践分析として、政治学習の領域(投票)を事例を検討した。その結果、英国と日本の教育実践の違いとして、実体的活動を取り込む英国に対し、分析的活動を基本とする日本という、授業構成論の違いを明らかにした。次に、教育実践とその社会環境の相互作用を、部落差別を通して分析し、教育と通した価値観の形成過程,並びにその反省方略を明らかにした。それらの研究成果を以下の国際学会で発表した。Noboru Tanaka, Civil Rights in Japan : A Closer Look at the Buraku, National Council for the SocialStudies, Annual Conference in Atlanta, 2009.第3は、研究方法論の検討を行った。本研究の課題であった理論研究・実践研究の往還の方略として、社会科教育学をデザイン科学と捉える枠組みを提案した。学習環境をキーワードに構築主義的な研究方法を採用することで教科教育学内(社会科教育学内)に留まらず、同一の事象に対する学際的研究が可能であることを、以下の論文で論証した。田中伸「デザイン科学としての社会科教育学-教科教育において学際的協働はいかにして可能となるのかー」『教育学研究紀要』中国四国教育学会、第55巻、pp.702-707、2010。
高齢者胃癌の発生過程におけるmicroRNAエピジェネティック制御

胃癌は加齢とともに発生率が急増する代表的ながんであり、これまで組織型に基づき分化型癌・未分化型癌の2つに大別され発癌経路が研究されることが多かった。しかし胃癌の中には組織学的多様性を示す腫瘍が少なからず存在し、従来の組織分類と発癌経路を一対一で関連づけることは困難であることが判明してきた。そこで我々はマイクロサテライト不安定性(MSI)を指標として検討した結果、MSIは高齢者、女性、乳頭腺癌と充実型低分化腺癌で高率であることを見出した。この高齢者に特徴的な胃癌におけるmicroRNAプロファイルを検討したところ、大腸癌と異なり、胃癌ではmicroRNAプロファイルとMSIとの関連性は認められなかった。これは胃癌の多様性に関係しているかもしれない。また、低分化腺癌の充実型と非充実型とでは異なるmicroRNAプロファイルを示したことから、充実型と非充実型とは異なる発癌経路を経て発生する可能性が示唆された。胃癌は加齢とともに発生率が急増する代表的ながんであり,その発癌経路は大腸癌と同様に染色体不安定性とマイクロサテライト不安定性(MSI)の2つに大別できる.高齢者胃癌では染色体不安定性経路が優位であるものの,加齢とともにMSI経路の比率が増加し,80歳代では胃癌発生数の約1/3に達する.MSIを示す胃癌の発生にはミスマッチ修復遺伝子プロモーター領域のメチル化が関与する.一方,microRNA(miRNA)は転写後レベルで標的遺伝子の発現を抑制する機能を有する.癌化過程でのCpG islandのメチル化により,ミスマッチ修復系遺伝子とともにmiRNAの発現も抑制されている可能性がある.そこで,加齢とともに増加するメチル化・MSIを示す胃癌の発生にmiRNA発現のエピジェネティック制御がどう関与するかを明らかにする目的で,高齢者胃癌におけるmiRNA発現プロファイルとMSIとの関係を検討した.高齢者によくみられる充実型低分化腺癌4例を含む胃癌手術例10例(男性8例,女性2例,7585歳)を対象として,腫瘍と非腫瘍部粘膜から抽出したRNAを用い網羅的にスクリーニングした.その結果,高齢者胃癌で正常粘膜より発現が亢進しているmiRNAは,miR-106a,106b,126,21,1290,1249,10a,1247,107,103であった.一方,発現が現象しているものは,miR-133b,125b,193a-5p,29c,125-5p,100であった.このうちmiR-133bの発現減弱は,MSIを示す充実型低分化腺癌との関連性が示唆された.以上より,miRNAの一部はMSIと関連し,臨床病理学的特徴に影響を与える可能性が示唆された.胃癌は加齢とともに発生率が急増する代表的ながんであり,その発癌経路は大腸癌と同様に染色体不安定性とマイクロサテライト不安定性(MSI)の2つに大別できる.高齢者胃癌では染色体不安定性経路が優位であるものの,加齢とともにMSI経路の比率が増加し,80歳代では胃癌発生数の約1/3に達する.MSIを示す胃癌の発生にはミスマッチ修復遺伝子プロモーター領域のメチル化が関与する.一方,microRNA(miRNA)は転写後レベルで標的遺伝子の発現を抑制する機能を有する.癌化過程のメチル化により,ミスマッチ修復系遺伝子とともにmiRNAの発現も抑制されている可能性がある.そこで,加齢とともに増加するメチル化・MSIを示す胃癌の発生にmiRNA発現のエピジェネティック制御がどう関与するかを明らかにする目的で,高齢者胃癌におけるmiRNA発現プロファイルとMSIとの関係を検討した.高齢者によくみられる充実型低分化腺癌6例を含む胃癌手術例12例(男性10例,女性2例,6685歳;MSI陽性6例,MSI陰性6例)を対象として,腫瘍と非腫瘍部粘膜から抽出したRNAを用い網羅的にスクリーニングした.その結果,高齢者胃癌で正常粘膜より発現が亢進しているmiRNAは,miR-106a,106b,126,1290,106b^*,21^*,10a,107,103,10bであり,発現が減少しているのは,miR-133b,125b,125-5p,29c^*,143^*,let-7a,28-3p,100,193a-5pであった.クラスター解析の結果,miRNAプロファイルとMSIとの関連性は認められなかった.

しかし,MSIを示す充実型低分化腺癌ではmiR-106a,106b,125高発現,miR-133b,125b低発現が高頻度にみられ,一部の組織型では特異なmiRNAプロファイルがみられる可能性が示唆された.胃癌は加齢とともに発生率が急増する代表的ながんであり,その発癌経路は大腸癌と同様に染色体不安定性とマイクロサテライト不安定性(MSI)の2つに大別できる.高齢者胃癌では染色体不安定性経路が優位であるものの,加齢とともにMSI経路の比率が増加し,80歳代では胃癌発生数の約1/3に達する.MSIを示す胃癌の発生にはミスマッチ修復遺伝子プロモーター領域のメチル化が関与する.一方,microRNA (miRNA)は転写後レベルで標的遺伝子の発現を抑制する機能を有する.癌化過程のメチル化により,ミスマッチ修復系遺伝子とともにmiRNAの発現も抑制されている可能性がある.そこで,加齢とともに増加するメチル化・MSIを示す胃癌の発生にmiRNA発現のエピジェネティック制御がどう関与するかを明らかにする目的で高齢者胃癌におけるmiRNA発現プロファイルとMSIとの関係を検討した結果,miRNAプロファイルとMSIとの関連性は認められなかった.そこで次に高齢者胃癌の代表的な組織型である充実型低分化腺癌の特徴を明らかにする目的で,低分化腺癌における充実型と非充実型のmiRNAプロファイルを比較検討した.充実型低分化腺癌5例,非充実型5例を対象として,腫瘍と非腫瘍部粘膜から抽出したRNAを用い網羅的にスクリーニングしクラスター解析した.その結果,充実型と非充実型とで発現の差異が認められた.非充実型低分化腺癌で正常粘膜より発現が亢進し,充実型低分化腺癌で低下している代表的なmiRNAは,miR-23b, 125b,497,29c,133a,145,125-5p,30a*,143であった.この結果から,低分化腺癌には2つの亜型にそれぞれ特異なmiRNAプロファイルがみられる可能性が示唆された.高齢者胃癌におけるmicroRNAプロファイルとマイクロサテライト不安定性の関連については順調に解析が進んでいるが,その結果から得られた候補microRNAに焦点を当てた多数例での解析はやや遅れている.microRNA抽出法は確立したが,リアルタイムPCPでの解析法の確立にやや時間を要した.24年度が最終年度であるため、記入しない。候補microRNAに焦点を当て,胃癌の多数例での解析を行う.また,この結果をもとに,血清に遊離したmicroRNAを用いての検出法の開発にも着手する予定である.24年度が最終年度であるため、記入しない。
遷延する慢性感染が慢性閉塞性肺疾患の免疫応答に与える影響とその機序の解明

93名のCOPD患者の観察研究の結果、安定期の測定した歯周病抗体価の高値は、COPD増悪頻度に抑制的に関連するという、予想とは反対の結果を得た。血清中のIL-4とIL-7の濃度は、歯周病抗体価の陰性群で、歯周病抗体価陽性群に比して高値であるという結果であり、抗体産生能力と、液性免疫に関連するサイトカインが増悪の有無に関連する可能性が示唆された。また、肺気腫は増悪を経験することによって進行することが明らかとなった。本研究は、全身性疾患・慢性炎症性疾患とされるCOPDにおいて、歯周病やsubclinical recurrent aspirationといった、口腔相が慢性炎症に影響を及ぼしているとの仮説を想定し、嚥下機能・歯周病抗体価が慢性炎症に与える影響とCOPDの病態との関連を検討するものである。平成21年、22年は口腔相と気道炎症・COPD増悪との関連を解明するため、外来COPD患者において、嚥下反射機能検査・血清中歯周病抗体価・血清中炎症性サイトカイン濃度・炎症細胞におけるMAPK活性化の評価を施行しつつ、症例を蓄積中である。エントリーした症例は前向きに、呼吸機能の推移や画像上の気腫化の進展の程度・増悪頻度など、COPDの予後に関連する因子との関連についての検討を継続中である。上記の検討の一環として、これまで蓄積した症例などを中心に、後方視的にCOPDにおける気腫化病変の進展の程度と予後を検討したところ、胸部CT画像上の気腫化の程度が、既報にある呼吸機能・BMIなどの予後関連因子とは独立した因子として、COPDの生命予後に関連することを見出し、Chest誌に投稿、採択された。また、嚥下反射の低下がCOPD増悪の関連因子であることも見出し、Chest誌に投稿、採択された。今後は、これらの予後因子が、どのような機序でCOPDの病態・予後に関連しているか、研究計画にのっとり、末梢血中の血清マーカー・炎症細胞の活性化の程度に関する検討を継続する予定である。慢性閉塞性肺疾患(COPD)は、慢性炎症性疾患であり、全身炎症を伴うことが判ってきた。本研究では、歯周病合併により歯周の慢性感染・口腔内細菌の増加とsubclinical recurrent aspirationがCOPDの慢性炎症に影響を及ぼしているとの仮説を想定し、嚥下機能・歯周病抗体価が慢性炎症に与える影響とCOPDの病態との関連を検討するものである。平成21年より、外来COPD患者において、嚥下反射機能検査・血清中歯周病抗体価・血清中炎症性サイトカイン濃度・炎症細胞におけるMAPK活性化の評価を施行し、前向き観察研究にて、呼吸機能の推移や画像上の気腫化の進展の程度・増悪頻度など、COPDの予後に関連する因子との関連についての検討を継続中である。現時点では、予想に反し、歯周病抗体価の低値群が、歯周病抗体価高値群に比して増悪回数が頻回であるという結果であった。歯周病抗体価の低値群同時に測定したIL-4, IL-7が高い傾向にあり、なんらかの液性免疫状態の変化がCOPD増悪と関連していることが示唆された。引き続き症例を蓄積し、解析を継続する予定である。また、細菌菌体成分(Lipopolysaccharide : LPS)が誤嚥により、気道上皮に接触する状況を仮定し、ヒト気道上皮にLPS刺激を加えたところ、気道上皮からConnective tissuegrowthfactorの分泌が確認され、気道リモデリングに関与していることが示唆された。研究期間中に、93名のCOPD患者がエントリーされ、観察期間中の増悪の有無、呼吸機能の変化、CT画像における気腫化病変の変化を、前向き観察研究で検討を行った。結果的に、安定期の測定した歯周病抗体価の高値は、COPD増悪頻度に抑制的に関連するという、予想とは反対の結果を得た。Bioplexを用いて、27種の炎症に関連するサイトカイン(PDGF,IL-1b,IL-1Ra,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-7,IL-8,IL-9,IL-10,IL-12,IL-13,IL-15,IL-17,eotaxin,FGF,G-CSF,GM-CSF,IFN-γ,IP-10,MCP-1,MIP-1α,MIP-1β,RANTES,TNF-α、VEGF)を網羅的に検討したところ、血清中のIL-4とIL-7の濃度は、歯周病抗体価の陰性群で、歯周病抗体価陽性群に比して高値であるという結果であり、抗体産生能力と、液性免疫に関連するサイトカインが増悪の有無に関連する可能性が示唆された。高感度CRPにおいては、両群で差は見られなかった。本内容は論文化し、PlosOneでリバイス中である。

p38-MAPKは一部の症例で測定可能であったが、測定が安定せず、残念ながら、評価は不能であった。並行して施行した臨床項目の解析の結果、肺気腫は増悪を経験することによって進行することが明らかとなり、今後のCOPDの評価指標として、画像による気腫評価が重要であることを報告した(AJRCCM)。
口腔癌における癌抑制遺伝子INGファミリーの機能解析

1.口腔癌は複数の癌関連遺伝子に生じた遺伝子変化が蓄積した結果生じる。今回我々は以前同定したING1b、ING1cまたはING3の機能解析を始めた。まずmRNA発現をRT-PCR法によって調べたところ、ING1bの発現は口腔癌組織で30%低下していたが、ING1cの場合は58%であった。ING3は50%での癌サンプルで正常に比較し減少した。次に制限酵素に基づいたメチル化アッセイではING1bは51%の癌サンプルでメチル化を認めたが、ING1cの場合はなかった。この結果ING1のsplicingバリアントの機能と不活性メカニズムは違うと考えられた。2.さらにFlagをタッグしているING1b、ING1cまたはING3の発現ベクターに単独またはp53発現ベクターとの併用導入をHEK293、SCCKN、HSC2、HSC3細胞株にトランスフェクションし、Trypan Blue Dye ExclusionまたはMTTアッセイによる結果では単独トランスフェクションの場合ING1b、ING1c、及びP53が細胞増殖を抑制した。一方併用処理の場合はING1c-p53の組み合わせでの細胞増殖抑制効果が、更に上昇したが、ING1b-p53とING3-p53組み合わせの場合は抑制効果が有意的でなかった。FACSアッセイにより、アポトーシスの解析でも問じような結果が得られた。これらの実験により、ING1cの場合はp53依存約経路が重要で、ING1bまたはING3の場合はp53非依存的経路も大切であることが考えられた。3.さらに抗癌剤の5-FU、Cysplatin、Etoposideを用いたところ、上述の細胞株でING1b、ING1c、ING3、proapoptotic(Bax)またはantiapoptotic(Bcl-2)遺伝子のmRNA発現を検討したところ、薬剤または細胞株によって、Proapoptoticまたはantiapoptotic反応の相違があった。これらの結果による、抗癌剤の効果メカニズムが異なることが分かった。4.さらに、ING3mRNAの腫瘍組織での発現が正常の場合は5年間の生存は60%であり、減少している患者の場合は40%であった。これらの結果によりING3が口腔癌を含む頭頸部癌で予後因子として使用可能になっている。今後siRNAにより、遺伝子抑制の実験または動物実験の検討を行う予定である。さらに、本研究の成果を拡大し、INGファミリー遺伝子のネットワークの解明により、口腔癌における標的治療を開発したい。口腔癌は複数の癌関連遺伝子に生じた遺伝子変化が蓄積した結果生じる。そこで今回我々は以前同定したINGファミリー癌抑制遺伝子のING1b、ING1cまたはING3の機能解析を仕始めた。まずそれぞれの遺伝子のmRNA発現をRT-PCR法によって調べた。PCR産物のバンドの濃度はコンピューターソフトにより定量しました。その結果ING1bの発現は口腔癌組織で30%低下していたが、ING1cの場合は58%であった。ING3は50%での癌サンプルで正常に比較し低下した。次に制限酵素に基づいてメチル化アッセイではING1bは51%の癌サンプルでメチル化を認めたが、ING1cの場合はなかった。

この結果ING1のsplicingバリアントの機能と不活性メカニズムは違うと考えられた。さらに組織レベルでp53変異ステイタスを調べたところでだいたい40%の癌サンプルでミュウテイションを見られた。現在ミュウテイションステイタスとINGファミリー遺伝子の発現関連を検討している。それぞれのINGファミリー遺伝子のp53依存的と非依存的経路について成果を得られると考えられます。さらにそれぞれのINGファミリー遺伝子の機能解析について検討している。これのために培養細胞SCCKN, SCCTF, T3M1を購入し、ING1とp53のミュウテイションまたは発現レベルをDNAレベルでそれぞれのエクソンのPCR-ダイレクトシーケンスによって調べた細胞全株p53変異が認めた。一方ING1の場台遺伝子変異はなかったこの細胞株に以前に作成したFlagをタッグしているING1bまたはING1cベクターを単独、併用またはp53発現ベクターと同時にトランスフェクションして、MTTアッセイ、trypan bluedyeexclusionアッセイによって細胞増殖、TUNNELまたはFACS解析によってアポトーシスを検討している。予備的結果はそれぞれのINGファミリー遺伝子が細胞増殖を抑制し、アポトーシスを誘導していた。次の段階として、メカニズム解析としてsiRNAによって抑制実験またはp53関連について免疫沈殿の実験を予定している。以前我々は癌抑制遺伝子であるINGファミリーメンバーのING1またはING3を世界初で同定した。ING1のsplicingバリアントであるING1bまたはING1c及びING3の機能解析を現在行っている。今回以前に作製したFlagをタッグしているING1b、ING1cまたはING3の発現ベクターに単独またはp53発現ベクターとの併用トランスフェクションし、細胞増殖、アポトーシスを検討した。HEK293、SCCKN,HSC2,HSC3細胞にそれぞれの遺伝子を導入し、細胞増殖アッセイとしてTrypan Blue DyeアッセイまたはMTTアッセイによる結果では単独トランスフェクションの場合ING1b、ING1c、及びP53が細胞増殖を抑制した。一方併用処理の場合はING1 c-p53の組み合わせでの細胞増殖抑制効果が、更に上昇したが、ING1b-p53とING3-p53組み合わせの場合は抑制効果が有意的でなかった。FACSアッセイにより、アポトーシスの解析でも同じような結果が得られた。これらの実験により、ING1cの場合はp53依存的経路が重要で、ING1bまたはING3の場合はp53非依存的経路も大切であることが考えられた。
高エネルギ-電子線を用いた新しい機能性材料の作成

平成元年度においては、当研究代表者らのグル-プが開発した電子線照射誘起現象を用いた新素材作製法の内で、特に電子線照射誘起異種原子注入(EII-FAI)について考察を加え、その共通原理を求めることを目的とした。この方法は予め電着、機械的な圧着、熱処理などの手法で標的異種原子よりなる物質の母材の表面、または母材の中に球状とか平板状に分布させておき、それに所定の方向から高エネルギ-電子線を照射して所望の異種原子の注入を行なうものである。総計15種類におよぶ標的異種原子/母材基板の組み合わせについてEII-FAI法の実験を行ない、異常原子の注入速度は次の諸因子に左右されることを明らかにした。a)異種原子物体に電子線照射損傷を発生させる電子の臨界エネルギ-と入射電子の比。後者が前者に対して大きいほど効果的であり、実用的には後者が前者の約3倍以上となると効果的である。b)注入しようとする物体と母相固体の衝突断面積の比。両者は共に電子のエネルギ-に依存するが、前者が後者に対して出来るだけ大きくなる電圧を設定することが効果的である。c)EII-FAIを行なう材料の温度。空孔の不動化する低温ほど有利。d)注入原子と母相原子間の結合力およびそのモ-ドに依存する。すなわち注入原子によってアモルファス化する場合には注入速度は桁違いに速くなる。e)注入原子および母相原子の原子半径比に強く依存する。一般に前者が後者より大きいほど注入は容易となる。f)母相で電子チャンネリング現象が盛んであることを必要とする。
脊髄反射を促通または抑制する条件付け課題での脳活動に関する研究

本研究では、ヒラメ筋や前脛骨筋において、被験者にH反射の大きさを促通もしくは抑制させる条件づけ課題にて、反射興奮性の変化を明らかにすることを目的とした。さらに、経頭蓋直流電気刺激(tDCS)を用いて、反射興奮性の変化に対する皮質興奮性の影響を調べることとした。ヒラメ筋におけるH反射は与えられた条件に応じて、興奮性の変化がみられた。tDCSでは皮質脊髄路の興奮性は増加したが、反射興奮性に与える効果は大きくなかった。ヒトの身体運動は上位中枢からの下行性指令と反射応答の相互作用によって調節されており、反射自体も促通性と抑制性の両入力によりその興奮性が修飾されている。この反射興奮性の変化に関して、感覚神経への経皮的な電気刺激によってHoffmann反射(H反射)として誘発される単シナプス性の脊髄反射を中心に研究されているが、上位中枢との掛かり合いについてはいまだ不明な点が多い。ラットやサルなどの動物実験では報酬訓練による学習で反射を随意的に促通・抑制させることが可能との報告があることから、本研究ではヒト被験者に対してヒラメ筋のH反射を促通もしくは抑制させるよう条件を提示し、その際の反射変化度合いと脳活動の関連性を調べることを目的としている。本年度は成人健常者を対象に、座位姿勢にてヒラメ筋H反射や前脛骨筋H反射で随意的な反射調節の程度を調べ、ヒラメ筋に比べて上位中枢からの入力を受けやすいとされる前脛骨筋で経時的な反射変化を確認した。実験中に被験者が実験参加のモチベーションを高く維持するよう、課題の成功数に応じた報酬を与えることとした。また、非侵襲的に脳の興奮性を変えることができる経頭蓋直流刺激(tDCS)が年度末に所属学部に導入されたため、この装置を用いた実験を開始した。健常被験者に対して30分間のtDCSを運動野に与え、電極の極性を変えることによって運動野の興奮性を前もって促通もしくは抑制させ、脊髄反射の随意的な調節に影響が生じるのか現在実験を進めている。ヒトの身体運動は上位中枢からの下行指令と反射応答の相互作用からなり、反射は促通性と抑制性の両入力により調節されている。この反射興奮性の変化は感覚神経への電気刺激で誘発されるHoffmann反射(H反射)を用いて単シナプス性の脊髄反射を中心に広く研究されているが、上位中枢との掛かり合いについてはいまだ不明な点が多い。機能的核磁気共鳴画像法(fMRI)による脳機能イメージングに向けて、本年度は通常の実験環境(MRI室の外)にて実験プロトコルの確立のため検証実験を実施した。成人健常者に対して臥位もしくは立位姿勢にて矩形波(1 ms)による経皮的電気刺激を膝窩部で脛骨神経に与え、ヒラメ筋H反射を導出した。随意的なH反射の促通・抑制を引き起こすために、有効となる刺激回数、刺激の与え方、被験者への反射振幅のフィードバック方法などを検討した。さらに、MRI環境下での計測・刺激機器の確認、刺激の与え方、課題設計を含めてMRI撮像方法などに関して、研究分担者や放射線技師とのディスカッションを行い、MRI環境下での実験実施に向けた準備を進めた。ヒトの身体運動は上位中枢からの下行指令と反射応答の相互作用によって調節されており、反射自体も促通性と抑制性の両入力によりその興奮性が修飾されている。この反射興奮性の変化に関しては、感覚神経への経皮的な電気刺激で誘発されるHoffmann反射(H反射)を用いることで、単シナプス性の脊髄反射を中心に研究されているが、上位中枢との掛かり合いについてはいまだ不明な点が多い。ラットやサルの動物実験において、報酬訓練での学習によって反射を随意的に促通・抑制させることが可能との報告がすでになされている。そこで、本研究ではヒト被験者に対してH反射を促通もしくは抑制させるよう指示し、その際の反射変化度合いと脳活動の関連性を調べることを目的としている。本年度は、非侵襲的にヒトの大脳の興奮性を変化させることができる経頭蓋直流刺激(tDCS)によって運動野の興奮性を変化させ、H反射興奮性の随意的な調節に対する影響を調べた。健常被験者に対し、大脳皮質の運動野上に陽極電極を置き、30分間のtDCSを与えて、運動野の興奮性を促通させた。tDCSによる運動野の興奮性変化は、経頭蓋磁気刺激(TMS)で生じる運動誘発電位より確認した。被験者にはヒラメ筋のH反射振幅を視覚フィードバックし、反射振幅が大きくもしくは小さくなるよう努力させた。その結果、反射の大きさに変化がみられたが、tDCSによる刺激を行わないコントロール条件との間に有意な差は確認されなかった。

神経生理学本年度はMRI環境下での実験を予定していたが、4月に所属先を異動したことでMRIでの実験を実施することができなかった。しかしながら、随意的な反射制御での上位中枢の関連性について、皮質脊髄路のコネクションが強いとされる前脛骨筋を対象にした実験課題にて研究を進めた。さらに、tDCSを用いることで、外部刺激で運動野の興奮性を変えた条件で実験を開始することができ、研究はおおむね順調に進展しているものと思われる。本年度は通常環境下での実験プロトコルの確立を課題としていたが、おおむね順調に進展したものと思われる。研究分担者や放射線技師を交えたディスカッションを行い、プロトコルの策定に対して有益なアドバイスを得た。一方、成功時の報酬の与え方やタスクに対するモチベーション維持など更なる検討が必要な事項もあり、課題の達成に向けて努力を要する。最終年度となる次年度は、tDCSを用いた研究を更に進める予定である。運動野や感覚野への刺激による随意的な反射調節への効果を明らかにし、皮質興奮性と反射調節の関連性を探る。実際に運動野の興奮性がtDCSの刺激で変化していたかを確認するため、経頭蓋磁気刺激(TMS)で誘発される運動誘発電位の大きさを調べることとする。現職では隣接する他学部にMRI装置があることから、その施設を利用したfMRI実験の実施についても検討していく。平成25年4月より他大学へ異動したため、実験場所や実験方法について新たな環境下で決定する必要がある。現職では他学部にMRI装置があるため、そこでの実施可能性を探る。不可能である場合には、研究分担者が所属している前職場での計測を計画する。MRIでの計測が難しいようであれば、経頭蓋直流刺激を運動野に与えて脳の興奮性を興奮もしくは抑制にあらかじめ変化させた状態で、反射調節の変化度合いを調べることで上位中枢による反射調節の関わりについて検討することを想定している。3月の時点で英文校閲のための予算を残していたが、次年度支出へと変更したことで5万円程度の次年度使用額が生じた。すでに電気刺激装置やデータ記録機器は揃っており、高額機器の購入予定はない。最終年度であることから実験回数の増加が予想され、被験者と実験補助者の謝金を多く支出する計画である。また、学会での成果発表に加え、研究分担者の機関での実験や打ち合わせのため、旅費を使用する予定としている。所属先の変更があったことでこれまでの機器が使用できないことから、次年度の研究費では電気刺激装置およびオシロスコープの機器購入を予定している。また、研究分担者の機関での実験も検討していることから、旅費としての使用が増えることが予想される。
先史時代における有用樹種クヌギおよびイチイガシの遺伝構造

先史時代の遺跡から堅果が発見される樹種のうち、クヌギおよびイチイガシを対象として、現生と先史時代の遺伝構造を解明することを目的とした。葉緑体シーケンシングにより、イチイガシの現生の遺伝構造はおおむね天然の分布変遷を反映していると考えられた。このことは遺伝構造が存在しないクヌギとは異なり、両種の分布変遷に人為がかかわった程度に違いがあることが示唆された。さらに両種とも次世代シーケンサーを用いることによりさらに詳細な遺伝構造を検出できる可能性が示された。一方、先史時代のサンプルを入手しDNA抽出を行ったが、葉緑体シーケンシングおよび次世代シーケンサーでは解析ができず、今後の課題として残った。有用樹木の遺伝構造は、自然のプロセスである進化や種分化、分布変遷のみならず、人間による種苗移動や栽培化により形成される。クヌギやイチイガシは、日本列島において人間により食糧や道具として長期間利用されてきた。従って人間による種苗移動により遺伝構造が自然のものとは異なる可能性がある。この2種は、先史時代の遺跡から堅果が発掘されるため、その堅果のDNA分析により先史時代の遺伝構造を明らかにすることが可能であると考えられる。そこで本研究ではこの2樹種について、先史時代の遺伝構造を明らかにし、現在の遺伝構造と比較することにより、現在の両種の分布に対する人為的影響の有無や現在生育している個体の由来を明らかにすることを目的とする。本年度は、イチイガシの現在の遺伝構造を明らかにし、また、ドングリピットからのサンプルの遺伝解析手法を確立することを目指した。イチイガシの現在の遺伝構造については、日本および中国本土、台湾の全28集団よりサンプルを収集し、葉緑体シーケンスを行った。その結果、遺伝構造を明らかにすることができ、イチイガシの現在の遺伝構造には地域性があることが分かった。一方で、飛び地的なハプロタイプの分布もあり、人為による移動も行われていたことが考えられた。ドングリピットからのサンプルは、大阪市立自然史博物館の協力により、イチイガシ堅果9サンプル、葉1サンプルおよびクヌギ堅果2サンプルを入手することができた。しかし長年エタノールに保存されていたサンプルで、DNAの抽出および増幅は成功に至らなかった。クヌギやイチイガシは日本列島において人間により食料や道具として長期間利用されてきた。したがって人間による種苗移動により遺伝構造が自然のプロセスのみを経たものとは異なる可能性がある。この2種は先史時代の遺跡から堅果が発掘されるため、その堅果のDNA分析により先史時代の遺伝構造を明らかにすることが可能であると考えられる。そこで本研究ではこの2樹種について、先史時代の遺伝構造を明らかにし、現在の遺伝構造と比較することにより、現在の両種の遺伝構造に対する人為的影響の有無や現在生育している個体の由来を明らかにすることを目的とする。本年度は、クヌギおよびイチイガシの現生の遺伝構造を、昨年度用いたマーカーでは識別できなかった集団も識別が可能になるように次世代シーケンサーを用いた葉緑体DNA解析を行い、イチイガシについてはさらに詳細な遺伝構造を解析できる遺伝情報を得ることができた。一方、クヌギにおいても次世代シーケンサーを用いて葉緑体DNAシーケンスの判読を行い、識別可能領域を抽出中である。さらに、山口県教育庁文化財課から縄文時代のイチイガシサンプルを15サンプルお借りしてDNA抽出およびPCRを試みた。しかし、いずれのサンプルからもDNAのPCR増幅をできなかった。本年度は、現生のイチイガシの葉緑体DNAのシーケンス情報をもとに遺伝構造を明らかにすることができた。さらに、次世代シーケンサーで得られた情報から、より詳細な遺伝構造が存在する可能性が示唆された。また、クヌギについても、これまでに明らかになっていた日本国内の多くの林分が固定されているハプロタイプがより細かく分類される可能性が示唆された。一方で、古代ドングリについては、引き続き山口県からお借りしたサンプルの解析を行った。今年度は次世代シーケンサーを用いて、検出可能なDNAすべてを解析したが、細菌類やバクテリアのDNAがほとんどであった。一部、針葉樹、広葉樹、アブラナ科草本のDNAが検出されたが、コンタミネーションの可能性もあり、さらに詳細な検証が必要であると考えられた。