hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
結核菌の感染戦略における宿主防御免疫制御の分子機構

本研究での解析から、結核菌の病原性に重要なRD1が感染マクロファージのカルパインおよびカスパーゼ1の活性化を誘導し、IL-1α、IL-βやIL-18の成熟化に関与することが明らかとなった。また、結核菌因子PPE37はマクロファージのMAPKやp38の活性化を抑え、炎症性サイトカインであるIL-6およびTNF-α産生を抑制することが示された。さらにBCG感染では、PD-1を介した抑制性シグナルを阻害することで防御免疫が亢進するが、結核菌感染の場合はPD-1シグナル経路を阻害するとCD4+ T細胞が過剰反応して重度の組織傷害が生じ、菌の排除が困難になることが示された。BCG感染マクロファージの機能解析GFPを発現するBCGをC57BL/6マウスに感染させた。感染3-4週後に脾臓中の感染マクロファージあるいは樹状細胞の割合を調べたが、その割合は脾細胞の0.1%以下であることが示された。この結果は、C56BL/6マウスがBCG感染に対して抵抗性であるとする従来の報告を支持するものであるが、この実験系では感染マウス由来マクロファージの機能を正確に判断することができない。そこで、C57BL/6の代わりに結核菌やBCGに対して感受性であるC3HあるいはBALB/cマウスを用いて実験を継続する。また、結核菌感染によるマクロファージ機能への影響を調べるため、各種結核菌病原因子を発現するマクロファージ細胞株を樹立し、その機能を正常株と比較して検討する。BCG感染後の防御免疫発現制御におけるPD-1/PD-L1抑制性シグナル経路の関与BCG感染後に観察されるIFN-γ産生性T細胞数の減少にPD-1/PD-L1経路が関与するかどうかを調べるため、PD-1欠損マウスにBCGを感染させ、その後の臓器内菌数および抗原特異的T細胞応答を解析した。その結果、正常マウスとPD-1欠損マウスの感染3週目までの脾内菌数に違いは認められなかったが、PD-1のリガンドであるPD-L1の発現上昇が認iめられる3週目以降では正常マウスに比較してPD-1欠損マウスの脾臓からは速やかに菌が排除されることが示された。また、PD-1欠損マウスでは抗原特異的IFN-γ産生性T細胞数が感染後期でも高いレベルで維持されることが明らかになった。以上の結果から、BCG感染では防御免疫に関与するIFN-γ産生性T細胞が感染後3週目以降に誘導されるが、その後PD-1経路を介したシグナルによりその発現が抑制されることが明らかとなった。結核菌初感染防御におけるPD-1経路の重要性結核菌に対する感染防御におけるPD-1シグナル伝達経路の役割を調べるため、正常マウスとPD-1欠損マウスに結核菌を点鼻感染させた。正常マウスの肺では、経時的に感染3週目まで菌数が増加したが、それ以降の菌の増殖は発現した獲得抵抗性により抑えられた。しかし、PD-1欠損マウスの肺では感染3週目以降でも菌の増殖を制御できなかった。感染3週目以降のPD-1欠損マウスの肺ではケモカインや炎症性サイトカインの強い産生と、それに伴う好中球やマクロファージの著明な浸潤、および広範な組織傷害が認められたことから、結核菌感染に対して過剰な炎症反応が誘導されていることが示された。さらに、結核菌を感染したPD-1欠損マウス由来CD4^+T細胞は、抗原刺激に対して強いIFN-γ産生を示した。以上の結果から、PD-1経路を介した抑制性シグナルがないと、結核菌に対する宿主応答が過剰に誘導されてしまい、炎症性細胞の浸潤を伴う組織傷害が引き起こされることが示された。結核菌因子PPE37の宿主防御免疫発現制御への関与PPE37はin vivoおよびin vitro感染後にその発現が高まることがわかっており、菌の病原性との関係が示唆されている。そこで、PPE37の機能を明らかにするため、PPE37を発現するM.smegmatis(Ms_ppe37)を作製し、in vitroでマクロファージに感染させ、各種サイトカイン産生応答を解析した。その結果、親株M.smegmatis感染マクロファージに比べて、Ms_ppe37感染マクロファージのTNF-α、IL-6、IL-12p40およびIL-1β産生は、明らかに低いことが示された。さらに、Ms_ppe37感染ではNF-κBおよびMAPKsの活性化レベルが低いことが明らかとなった。

以上の結果から、PPE37は感染後に誘導される炎症性サイトカイン産生のシグナル伝達系を抑制することで、それらの産生を抑える活性があることが示された。本研究では、結核菌初感染後の宿主感染防御おけるPD-1シグナルの影響について解析した。PD-1は抗原特異的T細胞に抑制性シグナルを伝達するレセプターとして機能する分子である。結核菌感染後、正常マウスに比較してPD-1欠損マウスの肺では強い炎症反応と著しい菌数の増加が認められ、結核菌を感染したPD-1欠損マウスは感染後早期に死亡した。この原因について解析したところ、PD-1欠損マウスの肺では結核菌感染後に炎症性サイトカインおよびケモカイン産生の上昇と、マクロファージおよび好中球の著明な集積が観察された。これらの結果から、PD-1欠損マウスの肺では結核菌感染後に過剰な炎症反応が誘導され、その結果菌の増殖をコントロールできなくなるため感染が増悪したと考えられる。また、正常およびPD-1欠損マウスのCD4+ T細胞をRAG2欠損マウスに移入して結核菌を感染させると、正常マウスのT細胞を移入したマウスに死亡例は認められなかったが、PD-1欠損マウスのT細胞を移入したマウスは感染早期に死亡することがわかった。さらに、結核菌感染後にIFN-γに対する中和抗体を投与すると、PD-1欠損マウスで見られた激しい炎症が減弱し、延命効果が認められた。以上の結果から、結核菌を感染すると宿主では感染抵抗性CD4+ T細胞が誘導されるが、その際PD-1を介した抑制性シグナルがないとT細胞は過剰に応答し、IFN-γを大量に産生する。それが引き金となり、過度な炎症反応が惹起されて組織障害が生じ、菌の排除が困難になることが示された。また、結核菌因子PPE37は感染後にその発現が上昇することから、結核菌の病原性に関係があると考えられる。その菌の病原性における機能を解析した結果、PPE37はマクロファージのMAPKやp38の活性化を抑え、炎症性サイトカイン産生の抑制に関与することが示された。
19世紀末から20世紀初頭のロシア法思想における神秘主義の影響に関する研究

19世紀末から20世紀初頭のロシア法思想において、宗教思想、とりわけ宗教的神秘主義への関心が増大する。その背後には、社会の産業化と大衆化にともなう、旧来の「個人」概念の動揺と、新しい「個人」概念の模索というロシアおよび西欧が置かれていた時代状況があった。P.ノヴゴロツェフが『現代法意識の危機』で指摘したように、人権が個人の自由で理性的な意志に由来するとする旧来の法理論(権利意志主義)は大衆化社会の権利理論としては不十分なものとなった。ロシア国家のありかたそのものを変革し、かつ集団としての個人の権利を擁護する枠組みの必要性が、当時の法思想に求められていた。この過程でロシア法思想は宗教に注目する。ロシア法思想と宗教思想の特殊な結合あるいは融合が生じるのである。本研究は、法思想と宗教思想の融合というロシアの特殊な脈絡の中で、その結節点としてウラジーミル・ソロヴィヨフの思想を分析し、新しい個人概念と集団概念の形成におけるその意味を析出した。ソロヴィヨフに代表されるロシア宗教思想の特色は、現実変革の理論として神的世界を現実の中で実現させようとする志向、つまり人間を物資を地上世界において「霊化」しようとする志向」にある。霊化された人間と物質は、理性的存在であると否とにかかわらず全面的な存在の権利を有することになる。したがって旧来の権利意志主義は克服される。この議論の構造を論文「ウラジーミル・ソロヴィヨフとオカルティズム」等において解明した。研究の過程で、神秘主義がプラトニズムと密接に結びついていることが明らかとなってきた。ロシアにおけるプラトンとプラトニズムの受容の特質とその機能については、今後の研究課題としたい。研究の初年度にあたる今年は、ロシア宗教思想関連の文献・資料調査に重点をおいた。二度にわたってロシアを訪問し、ロシア国立図書館(旧レーニン図書館)、モスクワ大学、サラトフ大学において資料調査、研究交流をおこなった。またサラトフ大学とチェルヌィシェフスキー博物館の共催で開催された国際会議「チェルヌィシェフスキーとその時代」に日本側研究者の団長として参加し、報告「ドミートリー・カヴェーリンにおける理性の問題をおこなった。研究の結果明らかになってきたのは、18世紀の70年代、いわゆる「ロシア啓蒙的民主主義」の全盛期に、その理論的指導者たちの中に、すでに理性に対する懐疑が生じていたことであり、この懐疑が19世紀末の宗教思想の復活と法思想との結合へと向かう潮流を育てたことである。この点を、ロシア自由主義の指導者でロシア法制史家でもあったカヴェーリンの思想展開に即して解明したのが上記国際会議の報告である。ロシア側の財政事情のために報告集の刊行は遅れているが、遅くとも今年秋には論集としてサラトフ大学とチェルヌィシェフスキー博物館から出版される予定である。これと平行して、イタリアルネッサンスのネオプラトニズムの研究も引き続きすすめ、フィツィーノ、ピコ・デラ・ミランデロの思想分析をおこなった。この研究領域はまだ論説として発表するにいたっていないが、イタリア・ネオプラトニズムとロシア宗教思想との関連について概略はつかめつつあるので、近くその成果を発表する予定である。今年度は、革命以前のロシア的福祉国家形成の動きを、ロシア宗教思想との関連において検証することをめざした。そのため、8月に3週間のヘルシンキ大学図書館において、資料調査を実施した。調査において、当該時期のネオ・プラトニズムの影響をしめるいくつかの貴重な資料を収集することができた。これら資料にもとづいて、研究会「プラトンとロシア」を立ち上げ、3月には札幌にて研究報告会を実施した。私は報告「ロシアにおけるプラトニズム」を行った。報告は、平成16年夏に論文として刊行予定である。

これと平行して、ウラジーミル・ソロヴィヨフの宗教哲学とロシア自由主義との関連のもんだいを研究し、平成16年2月17日に開催されたロシア思想史研究会年次総会において「ウラジーミル・ソロヴィヨフにおける『自然』」と題する報告を行った。報告は平成18年度秋に刊行予定である。また、ロシア福祉国家論とスラヴ主義との関連についても研究をすすめ、論文「K.D.カヴェーリンとロシア的福祉国家」を執筆した。論文は『ロシア思想史研究会論集』として千葉大学より、本年度3月に刊行予定である。さらに、北海道大学21世紀COEプログラム「スラヴ・ユーラシア学の構築」の事業推進者の一人として、その予算により、モスクワにて資料調査を実施し、ロシアにおけるプラトン研究の現状に関する資料を収集した。あわせて、若手研究者を組織して、ロシアにおける政治思想の現状を分析する研究会「ロシア政治思想研究会」を設立した。19世紀末から20世紀初頭のロシア法思想において、宗教思想、とりわけ宗教的神秘主義への関心が増大する。その背後には、社会の産業化と大衆化にともなう、旧来の「個人」概念の動揺と、新しい「個人」概念の模索というロシアおよび西欧が置かれていた時代状況があった。P.ノヴゴロツェフが『現代法意識の危機』で指摘したように、人権が個人の自由で理性的な意志に由来するとする旧来の法理論(権利意志主義)は大衆化社会の権利理論としては不十分なものとなった。ロシア国家のありかたそのものを変革し、かつ集団としての個人の権利を擁護する枠組みの必要性が、当時の法思想に求められていた。この過程でロシア法思想は宗教に注目する。ロシア法思想と宗教思想の特殊な結合あるいは融合が生じるのである。本研究は、法思想と宗教思想の融合というロシアの特殊な脈絡の中で、その結節点としてウラジーミル・ソロヴィヨフの思想を分析し、新しい個人概念と集団概念の形成におけるその意味を析出した。ソロヴィヨフに代表されるロシア宗教思想の特色は、現実変革の理論として神的世界を現実の中で実現させようとする志向、つまり人間を物資を地上世界において「霊化」しようとする志向」にある。霊化された人間と物質は、理性的存在であると否とにかかわらず全面的な存在の権利を有することになる。したがって旧来の権利意志主義は克服される。この議論の構造を論文「ウラジーミル・ソロヴィヨフとオカルティズム」等において解明した。研究の過程で、神秘主義がプラトニズムと密接に結びついていることが明らかとなってきた。ロシアにおけるプラトンとプラトニズムの受容の特質とその機能については、今後の研究課題としたい。
がんと糖尿病を併せ持つ高齢患者のセルフケア支援プログラムの開発

初年度は、がんと糖尿病を併せ持つ高齢患者のセルフケアの実態を調査し、疾病の捉え方やこれまでのセルフケアを理解した上で支援する必要性を明らかにした。平成20年度は、セルフケア支援プログラムを作成し、外来通院中の6名に介入を実施した。その結果、直接的にHbA1cの改善には結びつかなかったが、疾患を併せ持つことがセルフケアを行う上での強みとなるよう支援することが可能になると考えられた。また、疾病を併せ持つ高齢者の身体的・社会的状況は変化しやすく、継続した支援の必要性が示唆された。平成19年度の研究計画は、1.がん看護および糖尿病看護、セルフケアに関する先行研究を検索する、2.がんと糖尿病を併せ持つ高齢患者のセルフケア状況ならびにがん・糖尿病のとらえ方について実態調査を行う、3.専門領域の学術集会に参加し、がんおよび糖尿病を持つ高齢患者への支援についての情報を得ることであった。それぞれについて実績概要を説明する。1.平成19年5月から平成20年3月を通して国内外の文献検討を行った。2.平成19年7月に福井大学医学部倫理審査委員会の承認を受け、83月にF県内の総合病院に入院もしくは通院中のがんと糖尿病を併せ持つ高齢者6名(男性4名、女性2名、平均年齢72.5歳)を対象に面接調査を行った。がんと糖尿病を併せ持つ高齢患者のセルフケアの実態調査のデータを、がん・糖尿病をどのように捉え、どのようにセルフケアを行っているかという視点で質的に分析した。その結果、捉え方はがんの診断時期や症状等により変化しており、症状が落ち着いている2名は「がんよりも糖尿病が大変・怖い」と述べていた。セルフケアに関しては、糖尿病歴の長い患者はこれまで自分の行ってきた糖尿病のセルフケアをべースにがんに対する配慮をしていた。また、4名は「がんに関して何をしていいのか分からない」と述べ、5名の対象者が民間療法や健康食品などを試みていた。3.日本糖尿病教育・看護学会学術集会(9月)、日本がん看護学会学術集会(2月)に参加し、糖尿病と他の疾患を併せ持つ患者への看護や、高齢がん患者のもつ複合的な苦痛のコントロールへの支援の重要性についての知見を得ることができた。現在、上記の知見をもとに、セルフケア支援プログラム案を作成中である。平成20年度は、がんと糖尿病を併せもつ高齢者へのセルフケア支援プログラムの策定と支援の実施を目的とし、以下のことを実施した。1.がんと糖尿病を併せ持つ高齢患者に対するセルフケア支援プログラム案作成4-6月、研究者が平成19年までに実施した基礎的研究の結果および文献的考察に基づき、セルフケア支援プログラム案を作成した。7-8月、がん化学療法認定看護師、糖尿病認定看護師、がんと糖尿病を併せ持つ高齢患者2名から支援プログラムの内容に関する意見・アドバイスを得た。それらを参考に、プログラムの内容は、(1)対話を通して生活の状況および身体的・精神的・社会的状況を把握する、(2)対象のがん・糖尿病の捉え方、行っているセルフケアの意図について傾聴する、(3)対象の行っているセルフケアを支持しつつ、不快な症状等課題がある場合は改善策を対象者と共に考える、(4)対象が関心をもつデータ等の情報を視覚的に提示し共に振り返る、の4点とした。2.がんと糖尿病を併せ持つ高齢者のセルフケアを支援する看護援助の実施9月-平成21年3月、F県内の総合病院外来に通院中のがんと糖尿病を併せ持つ65歳以上の患者6名の研究参加が得られた。対象は男性4名、女性2名、悪性リンパ腫2名、胃癌、乳癌、肺癌、大腸癌が各1名ずつであった。全員が2型糖尿病であった。プログラムに則って、約半年間に24回、1回10分40分の介入を実施した。その結果、血糖コントロールのために行っていたセルフケア行動を、がんを持つ自己の身体にとってよいこととして捉えるようになった者もおり、疾患を併せ持つことを脆弱性としてではなく強みとして支援することも可能であると考えられた。また、症状の出現や治療方法の変更に伴い、新たなセルフケアの獲得が必要になった者が2名おり、併せ持つ疾患の状況をアセスメントして、継続した看護支援が必要であると考えられた。
ヘッジホッグの構造と機能:間質細胞-破骨細胞相互作用制御因子の分子生物学的解析

我々が最近確立した成熟破骨細胞の単離培養法により、ビタミンAが直接破骨細胞を活性化し、エストロゲンが破骨細胞を直接不活性することを報告した。さらに、ビタミンDは間質細胞を介し破骨細胞に作用することを見い出した。すなわち、転写因子である核内受容体を介してその生理作用を発揮する脂溶性生理活性物質のうちビタミンA、エストロゲンは直接破骨細胞の作用を調節するが、ビタミンDは間質細胞を介して破骨細胞を活性化することを見い出した。そこで、ビタミンDをツールに、間質細胞由来のビタミンD誘導性破骨細胞活性化因子を検索した。その結果、ビタミンDは間質細胞に作用し、Indianヘッジホッグの遺伝子発現を正に誘導することを見い出した。ヘッジホッグは分泌性のタンパク質で細胞間の情報伝達に関与することが報告されている。そこで、いくつかの研究を行った結果、本年度特に、以下のことをに成功し、明らかにすることができた。(1)大腸菌を用いワイルドタイプや、ドメインに分けたリコンビナントのヘッジホッグタンパク質の大量作製に成功した。(2)このリコンビナントヘッジホッグタンパク質をもちいることで、IndianヘッジホッグのN端は破骨細胞を活性化し、骨吸収窩(Pit)を増加させることを見い出した。しかしながら、これは、骨芽細胞にはほとんど作用しないことを見い出した。(3)さらにリコンビナントヘッジホッグタンパク質をもちい、ヘッジホッグの破骨細胞活性化機構を解析した結果、ヘッジホッグタンパク質は破骨細胞の骨吸収活性に重要と考えられるカテプシンKあるいは、カーボニックアンハイドラーゼIIの遺伝子発現量を増加させることを明らかにした。以上、間質細胞を介した破骨細胞機能制御にヘッジホッグのN端が関与していることを明らかにした。
網膜芽細胞腫遺伝子プロモーター領域における調節機構

癌体質を診断するモデルとして、癌抑制遺伝子であるRB遺伝子のプロモーター領域の異常を検出することが有用であることを報告してきたが、本年度は更にRB遺伝子のプロモーター構造を解析した結果、サイレンサー部位を見出すことができた。私達が以前報告したように、RBF-1と名付けられた転写因子の結合する部位とそれに隣接するATF結合塩基配列に点突然変異が存在すると癌体質になることが知られている。今回、そのATF部位の下流に隣接しているE2F部位の作用を検討した。その結果、このE2F部位に点突然変異を入れ、E2Fタンパクが結合できなくなると、全体のRB遺伝子プロモーター活性が2-5倍に上昇することが明らかとなった。これはこのE2F部位が興味深いことにサイレンサーとして機能していることを示している。この部位に点突然変異が存在する家系が存在した場合、逆に癌に罹患しにくい家系になる可能性も考えられるが、それは今後の研究を待たなくてはならない(Oncogene,in the press)。更に、癌抑制遺伝子のp53がRB遺伝子プロモーターをp53結合部位を介して活性化することを見出した(J.Biol.Chem.,in the press)。更に、RB遺伝子産物自身がRB遺伝子プロモーターを活性化することを見出した(投稿準備中)。これらのデータより、理解の遅れていたRB遺伝子プロモーターの構造がかなり明らかになってきたように思われる。
EGF受容体活性化を介した気道ムチン遺伝子MUC5ACの発現調節機構の解明

気管支喘息病態におけるEGF受容体.(EGFR)発現と活性化の意義を、ラット喘息モデルおよび気道培養上皮細胞(NCI-H292細胞)を用いて検討した。Brown-Norway系ラットを卵白アルブミンにて感作および吸入刺激し、気道の形態評価(Alcian blue/PAS染色、MUC5AC免疫染色)、気管支肺胞洗浄(BAL)による細胞組成の解析およびメサコリンに対する気道過敏性の測定(penH)を行った。Alcian blue/PAS染色陽性領域、BALF中の炎症細胞数は、吸入刺激48時間後に有意に高値を示したが、2週後には自然回復傾向を認めた。一方penHは吸入刺激48時間後と同様、2週後も継続して高値であった。EGFRの発現は、吸入刺激後に杯細胞、基底細胞に一致して増強が認められた。喘息病態発現後に選択的EGFRリン酸化阻害薬(AG1478)を経気道的に投与すると、杯細胞過形成、炎症細胞浸潤、気道過敏性亢進はいづれも改善傾向を認め、杯細胞にはアポトーシスが認められた。in vitroの系では、TGFα投与によりMUC5AC、抗アポトーシス蛋白Bcl-2の発現増強が認められ、AG1478の前処置により抑制された。一方MEK阻害薬PD98059はMUC5ACの発現を抑制したが、アポトーシスには影響を与えなかった。またカスパーゼ阻害薬Z-VAD-fmkはAG1478によるアポトーシス増加を抑制した。以上より、気管支喘息ではEGFRの発現が増強し、その活性化はMUC5AC発現と抗アポトーシス蛋白(Bcl-2)の発現を惹起し、杯細胞過形成を維持する方向に働くことが推測された。すなわちEGFRチロシンキナーゼ阻害薬はMUC5AC発現抑制と杯細胞のアポトーシス促進により気道リモデリングを改善する可能性が示唆された。2.気道上皮杯細胞化成、炎症細胞浸潤、気道過敏性の経時的評価:気道上皮に対するAlcian blue/PAS染色陽性領域はDay14(吸入刺激前、8.7±2.8%)に比較して、Day18(最終吸入刺激48時間後)では68.5±5.8%と有意に高値を示したが、Day30(吸入刺激2週後)には12.7±4.5%と自然回復傾向を認めた。BALF中の細胞分画は、Day14(好酸球2%、好中球3%、マクロファージ95%)に比較して、Day18では好酸球25%、好中球12%と炎症細胞の気道腔への浸潤が認められたが、この変化も杯細胞化成と同様にDay30には消退傾向(好酸球3%、好中球3%、マクロファージ94%)を示した。一方メサコリンに対する気道過敏性(penH)は、Day18において著明な増強を認め、Day30においても継続して観察された。以上の結果より、気道リモデリングと気道過敏性の回復機構には差異が存在することが明らかとなった。3.EGF受容体(EGFR)の発現と杯細胞化成に対するEGFR活性化の関与:EGFRの発現はDay14ではほとんど認められなかったが、Day18では杯細胞、基底細胞に一致して発現の増強が観察された。杯細胞化成に対するEGFR活性化の関与を明らかにするため、EGFRの特異的リン酸化阻害薬であるAG1478をDay18より経気道的に投与したところ、杯細胞の消退が促進された。

1.MUC5ACの発現に対するEGFRの関与を検討する目的で、気道上皮NCI-H292細胞を用いEGFRリガンドであるTGFαを24時間添加培養し、免疫染色、ELISAにてMUC5AC、抗アポトーシス蛋白であるBcl-2の発現を検討した。さらに選択的EGFRチロシンキナーゼ阻害薬であるAG1478,MEK阻害剤であるPD98059,カスパーゼ阻害剤であるZ-VAD-fmkを前処置した群においても同様の検討を行った。また各群における粘液分泌細胞のアポトーシスをタネル染色にて評価した。2.TGFα刺激によりMUC5ACおよびBcl-2の発現は増強を認めた。AG1478の前処置はMUC5ACおよびBcl-2の発現増強効果を抑制し、粘液分泌細胞のアポトーシスを促進した。一方、PD98059はMUC5ACの発現を抑制したがアポトーシスには影響を与えなかった。またZ-VAD-fmkはAG1478によるアポトーシス増加を抑制した。卵白アルブミン感作ラットでは卵白アルブミン吸入刺激により杯細胞過形成および気道上皮でのEGFR、MUC5ACの発現増強を認めた。AG1478の経気道投与により杯細胞にアポトーシスの増加が認められ、杯細胞過形成からの回復傾向が認められた。3.以上の結果より、気管支喘息ではEGFRの発現が増強し、その活性化はMUC5AC発現と抗アポトーシス蛋白(Bcl-2)の発現により杯細胞過形成を促進し維持する方向に働くことが推測された。すなわちEGFRチロシンキナーゼ阻害薬はMUC5AC発現抑制と杯細胞のアポトーシス促進により杯細胞過形成を改善する可能性が示唆された。
ニワトリ機能遺伝子の大規模染色体マッピングによる比較染色体地図の作製

ニワトリ脳のcDNAライブラリーから得られたヒト遺伝子ホモログのESTクローンと共同研究者より分与された既存の遺伝子DNAクローンを用いて、昨年度までに192の機能遺伝子よりなるニワトリの染色体地図を作製した。今年度は新たに25個の機能遺伝子をニワトリ染色体上にマップするとともに、FANCG, FANCC, RPS6,VASAの4遺伝子がニワトリZ染色体上に存在することを確認し、ニワトリ性染色体の起源に関する新たな情報を提供した。また、8つのSOX遺伝子をニワトリ染色体上にマッピングし、染色体上でのSOX遺伝子群の存在様式がヒト-マウス間よりもヒト-ニワトリ間の方が保存性が高いことを明らかにした。次に、ニワトリとホロホロチョウ間の染色体相同性を明らかにするために、ニワトリ1-9番染色体とZ染色体染色体特異的DNAプローブを用いてホロホロチョウに比較染色体ペインティングを行った。さらに、我々がニワトリ1-8番染色体およびZ染色体にマップした45のコスミドクローンを用いてニワトリ-ホロホロチョウ間で比較染色体地図を作製した。その結果、ニワトリ-ホロホロチョウ間で高い染色体相同性の存在が確認されたが、ニワトリ5番染色体はホロホロチョウの6番と7番染色体間の動原体融合によって生じ、ホロホロチョウの4番染色体はニワトリの4番染色体の長腕とニワトリ9番染色体の動原体融合によって生じたことを明らかにした。さらに、ホロホロチョウの7番染色体で逆位の存在が確認された。また、ニワトリの染色体特異的プローブを用いて、キジ目3科12種について比較染色体ペインティングを行い、キジ目鳥類の進化過程に生じた染色体再構成のプロセスを明らかにした。得られた結果はミトコンドリアのcytochromeb遺伝子の塩基配列から推定された分子系続関係とよく一致し、キジ目鳥類の祖先型の核型が、走鳥類のエミューに非常によく似ていることが判明した。ダイレクトR-バンディングFISH法をニワトリ染色体に応用し、これまでに106個の機能遺伝子をニワトリ染色体上にマッピングした。106機能遺伝子の中で、マクロ染色体にマップされたものは61(内5個はZ染色体上)、ミクロ染色体にマップされたものは48であった。ミクロ染色体上にマップされた機能遺伝子の頻度は全体の約44%であり、ミクロ染色体がゲノム中に占める割合が30%程度であることを考慮に入れると、ミクロ染色体上には高密度に機能遺伝子が存在することが、本研究でも実証された。本研究で得られた情報は、今後ミクロ染色体と遺伝連鎖地図を対応させる上で重要なものとなるであろう。本研究でマップしたほとんどのニワトリ遺伝子では、ヒトで既にその相同遺伝子がマッピングされているため、我々のデータをヒト機能遺伝子の染色体地図と比較した結果、ニワトリ第1染色体、第2染色体長腕、第4染色体、第5染色体長腕およびZ染色体でヒト染色体との間に計9つの保存領域が検出された。この結果は、鳥類と哺乳類が分化する以前に共通の祖先がもつゲノム構造が存在したことを示唆している。

また、哺乳類のX染色体と鳥類のZ染色体間に対応がみられないことから、鳥類と哺乳類の性染色体は異なる進化過程によって生じたことが本研究においても示唆された。大量のニワトリ機能遺伝子のcDNAクローンの単離とEST(expressed sequence tag)化を実施するため、ニワトリ雌の脳より、λZAPファージベクターを用いてcDNAライブラリーを作製した。現在、ファージクローンをランダムに単離し、DNA断片のEST化の作業を開始している。ニワトリの脳より作製したcDNAライブラリーから2,000個のcDNAクローンを単離し、部分配列を決定してEST化を行った。NCBIのデータベースを用いてホモロジー検索を行った結果、1,468種類の遺伝子のESTクローンを得ることができた。既知の機能遺伝子と高い相同性をもつクローンが高頻度で同定され、今回得られた1,468ESTクローンの内、それぞれ507、342、179のヒト、マウス、ニワトリ遺伝子のホモログが得られた。今年度はこれらのESTクローンの中から46のヒト遺伝子ホモログと共同研究者より分与された既存の40遺伝子DNAクローンをダイレクトR-バンディングFISH法を用いてニワトリ染色体上にマッピングした。86機能遺伝子の中で、マクロ染色体にマップされたものは50、マイクロ染色体にマップされたものは36であり、ニワトリ-ヒト間で新たに5つの染色体相同領域が検出された。昨年度のデータを加えると192の機能遺伝子が新たにニワトリ染色体上にマップされたことになり、ニワトリ-ヒト間で計14の新たな保存領域が検出された。この数はこれまでに全世界でマップされた機能遺伝子の約3分の1に当たる。次に、我々がニワトリコスミドDNAライブラリーより得たニワトリ1-8番染色体およびZ染色体にマップされる50のコスミドクローンと16の機能遺伝子cDNAクローンを用いてニワトリ-ニホンウズラ間で比較染色体地図を作製した。その結果、ニワトリ-ウズラ間で高い染色体相同性が存在することが判明し、さらに4つの染色体逆位の存在を同定することができた。この結果は、DNAクローンの比較染色体マッピングが、異なる鳥類種間に生じた染色体構造変化を詳細に分析する手段として非常に有効であることを示している。ニワトリ脳のcDNAライブラリーから得られたヒト遺伝子ホモログのESTクローンと共同研究者より分与された既存の遺伝子DNAクローンを用いて、昨年度までに192の機能遺伝子よりなるニワトリの染色体地図を作製した。今年度は新たに25個の機能遺伝子をニワトリ染色体上にマップするとともに、FANCG, FANCC, RPS6, VASAの4遺伝子がニワトリZ染色体上に存在することを確認し、ニワトリ性染色体の起源に関する新たな情報を提供した。また、8つのSOX遺伝子をニワトリ染色体上にマッピングし、染色体上でのSOX遺伝子群の存在様式がヒト-マウス間よりもヒト-ニワトリ間の方が保存性が高いことを明らかにした。次に、ニワトリとホロホロチョウ間の染色体相同性を明らかにするために、ニワトリ1-9番染色体とZ染色体染色体特異的DNAプローブを用いてホロホロチョウに比較染色体ペィンティングを行った。さらに、我々がニワトリ1-8番染色体およびZ染色体にマップした45のコスミドクローンを用いてニワトリ-ホロホロチョウ間で比較染色体地図を作製した。その結果、ニワトリ-ホロホロチョウ間で高い染色体相同性の存在が確認されたが、ニワトリ5番染色体はホロホロチョウの6番と7番染色体間の動原体融合によって生じ、ホロホロチョウの4番染色体はニワトリの4番染色体の長腕とニワトリ9番染色体の動原体融合によって生じたことを明らかにした。
INI1蛋白不活性化の有無からみた中枢神経系ラブドイド腫瘍の臨床病理学的研究

中枢神経系ラブドイド腫瘍(CNSRT)をINI1蛋白の陰性化の有無により分類すると、陰性群はすべての症例が非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍(AT/RT)に相当していた。また、INI1陽性のグリオーマの要素とINI1陰性のラブドイド腫瘍の要素が混合した腫瘍も見出された。陽性群ではepithelioid/rhabdoidcellを伴う高悪性度グリオーマとINI1陽性のAT/RTとみなされる腫瘍が見出された。群馬大学附属病院や関連施設の症例およびコンサルテーションを依頼された症例の中から、ラブドイド腫瘍27例を抽出し検索した。このうち16例がINI1不活性化を示し、11例はINI1蛋白が保たれていた。不活性化群は、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍(AT/RT)に相当する腫瘍で、形態学的多様性やマーカー発現のパターンは従来の報告に一致する特徴を備えていた。新たな点として、年長者には発生するAT/RTでは、間葉系要素や間葉系基質を形成する傾向が認められた。一方不活性化のない群は組織像の再検討から、このうち8例は、典型的なラブドイド細胞を含む症例もあるが、多くはepithelioid cellといわれる細胞が主体で、近年報告されたepithelioid glioblastoma(GBL)に相当する腫瘍と考えられた。文献的にはrhabdoid GBLとepithelioid GBLは区別されているが、本来両者を分けることは難しく、epithelioid/rhabdoid GBLとすべき腫瘍と考えられた。これらはAT/RTに匹敵する高悪性度腫瘍である。2例は形態とマーカー発現の上からはAT/RTによく類似した腫瘍であるが、INI1蛋白の不活性化がない点のみが異なる腫瘍である。最近の研究でINI1と異なるBRG1遺伝子の異常を示す家族性rhabdoid tumor predisposition syndromeが報告されたことから、この遺伝子がAT/RTの第2の責任遺伝子である可能性が示唆された。今後BRG1蛋白の発現について検索する予定である。不活性化のない群はwaste basket的な群であったが、まだ、コンセンサスは得られていないもののepithelioid/rhabdoid GBLが新たな腫瘍型として認識される可能性が高い。このコンセンサスの形成に寄与しうると考えられた。新たな6例を加え、rhabdoid featureを示す脳腫瘍33例について解析を行った。このうち17例がINI1陰性化を示し、14例はINI1蛋白が保たれていた。新たな群として、INI1陽性の従来のグリオーマの中にfocalにINI1陰性のrhabdoid featureを示す要素が出現した症例が2例見出された。陰性群は、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍(AT/RT)に相当する腫瘍で、新たに未熟腺管やAFP陽性要素の出現など、未熟奇形腫様の腫瘍があり、腫瘍発生について問題を提起する症例と考えられる。一方、陽性群のうち9例では、rhabdoid cell/epithelioid cellの要素とグリオーマの要素を有している。近年報告されたepithelioid glioblastoma(GBL)に相当する腫瘍と考えられる。文献的にはrhabdoid GBLとepithelioid GBLは区別されているが、今回の検討から、本来両者を分けることは難しく、epithelioid/rhabdoid GBLとすべき腫瘍と考えられた。これらは結合性の低下とGFAP発現の低下が特徴的で髄液播種を起こしやすく、非常に悪性度の高い腫瘍である。現在1症例につきCGH法による染色体・遺伝子異常の解析を進めている状態で、3番遺伝子の欠失が腫瘍発生と関係している可能性が見出されている。また、最近の研究でINI1陰性化のない症例で、INI1/SMARCB1と同じグループのBRG1/SMARCA4の不活性化を示すAT/RTが報告されたことから、INI1陽性AT/RTが疑われる2症例につきBRG1蛋白の発現を調べたが陰性化は見られなかった。陽性群はwaste basket的な群であったが、この中からepithelioid/rhabdoid GBLが新たなGBLのvariantとして確立されるべき腫瘍と考えられた。中枢神経系ラブドイド腫瘍についてINI1蛋白陰性化を示す群とINI1蛋白が保持された群について臨床病理学特徴を明らかにすることが目標であった。陰性化群はすべてatypical teratoid/rhabdoid tumor(AT/RT)の範疇に入る腫瘍であった。また、INI1蛋白陽性のグリオーマとともにINI1陰性のAT/RTに類似した腫瘍要素が出現した症例が2例あり、グリオーマ要素はそれぞれhigh grade gliomaとependymomaであった。これらの腫瘍はグリオーマ要素がparent tumorであり、これにINI1遺伝子の不活性化が生じINI1蛋白の陰性化、ラブドイド腫瘍が発生した可能性が高い。

1例についてarray CGH法で検索したところ、染色体の異常は2つの要素で一致しており、22qの欠失が両者に認められた。今後INI1遺伝子の変異について検索する予定である。稀な腫瘍であるが、陰性例と陽性例を10数例ずつ集めることができて、臨床病理学的な特徴をある程度明らかにできる見通しが立ったこと。また、詳細な検索が可能な症例を1例加えられ、染色体・遺伝子異常の解析を含めて検索を進めたところ、3番遺伝子の欠失が腫瘍発生と関係している可能性が見出されている。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度が最終年度であるため、それぞれの群の臨床病理学的特徴をまとめて報告する。特に、陽性群の中のepithelioid/rhabdoid GBLとみなされる腫瘍について、最近、新たに解析可能な症例が1例加わったため、これについても、染色体・遺伝子異常の解析を進め、新たな疾患概念として確立できるか否か検討して、その結果を雑誌に発表する。
Ｘ線自由電子レーザーを利用する液体中の中距離立体構造の解明

X線自由電子レーザー(XFEL)を利用して非周期系物質の3次元構造解析を目指した実験手法と装置開発を行った。XFELを用いて巨大希ガスクラスターの小角X線散乱・蛍光X線・イオンスペクトル同時計測実験を実施し、ナノメートルサイズのクラスターの単粒子構造情報と得ることに成功した。また、XFELを用いた時分割計測実験法を確立し、サブピコ秒の時間分解能でダイナミクス計測が可能であることを示した。中距離構造を有する液体試料である常温イオン液体について、実験室での小角X線散乱実験に基づき、RTILに添加する芳香族分子の結合性に依存して中距離構造が変化することを見出した。23年度は、既存の希ガスクラスター装置を利用して、SCSS試験加速器を用いて電子分光やポンプープローブ計測の為の実験技術開発を行うと共に、SACLAから得られるX線自由電子レーザーを利用する実験装置の立ち上げ、調整を行った。SCSS試験加速器では、希ガスクラスターを試料として極紫外自由電子レーザーの照射効果の研究を行った。運動量画像分光装置による電子スペクトル計測について、バックグランド信号低減の為の改良を加えることで、強力なFELパルス照射下においても信頼性の高い電子スペクトルが得られる事を確認した。特に、ネオンクラスターの電子スペクトルについて詳細な検討を加え、エキシトンーモット転移によりFEL照射後のネオンクラスターで励起子の非局在化が起とっていることを示唆する結果を得た。さらに、FELと赤外レーザーの波長の異なる二色のレーザーを用いたポンプープローブ実験の為の技術開発を進め、キセノンクラスターを試料としてポンプープローブ実験により実時間計測を行い、FEL照射後数ピコ秒から数十ピコにわたる早い時間スケールでのクラスター解離ダイナミクスの情報を得ることに成功した。SACLAでは、実験装置の動作試験を行い、装置の性能評価を行った。23年度は、原子・分子や希ガスクラスターを試料とした計測によって、XFEL専用のクラスター源、荷電粒子検出装置、X線検出器(CCD検出器)、精密位置合わせ機構や、散乱X線を除去するための光学部品の動作を確認し、SACLAの本格稼働に向けた準備を進めた。まず、前年度までに得られた実験結果に基づき、希ガス・クラスターにおけるナノ・プラズマの生成・崩壊ダイナミクスに関する多くの論文を執筆・公表した。合わせて、アルカリ金属におけるプラズモン共鳴に関する理論と実験の論文も公表した。日本のXFEL施設SACLAを用いて、巨大キセノンクラスターの単粒子X線回折実験を行った。粒子サイズが数百ナノメートル程度となる巨大キセノンクラスターにXFELを照射して、単一クラスターからのX線散乱像の取得に成功した。同時に、クラスターから放出される蛍光X線やイオンスペクトルの計測に成功し、高強度XFELパルスと物質の相互作用についての情報を得た。実験からはクラスターの放射線損傷がXFELパルス強度に加えてクラスターサイズにも依存することが示唆された。単粒子の構造解析を遂行する際に問題となる電子損傷の影響について、実験結果に基づき評価を進めている。これと平行して、海外のFEL施設を利用する極紫外FEL実験も進めた。具体的にはイタリア国で稼働を開始したFERMI実験施設での利用実験のために、クラスター源の開発を行った。液体実験については、非等方な中距離立体構造を有する室温イオン液体を中心に、XFELを用いた構造ダイナミクス観測の実現可能性について検討した。具体的には、実験室での小角X線散乱を用いた予備的な構造解析を進め、ベンゼン等の溶質分子の種類により中距離構造に変化が現れることを確認した。第一原理分子動力学計算などからサブピコ秒の構造ダイナミクスが予想されているカルコゲン液体、特に液体イオウについて、XFEL利用実験の実現可能性の検討を進めた。日本のXFEL施設SACLAで利用実験を実施した。特に、X線自由電子レーザー(XFEL)を利用するX線散乱実験を行う際に重要となる、XFELが試料に与える損傷を評価するために、原子・分子や希ガスクラスターを試料としてイオン・電子分光を行った。実験から、XFEL照射により単一原子でさえも多数の光子を吸収する多光子過程が起こることが確認され、結果を専門誌に発表した。また、海外グループとの共同研究として、SACLAを用いてシングルショットX線散乱実験を実施した結果について、タンパク質微結晶試料のX線回折実験による構造解析および異常散乱実験の結果を専門誌に発表した。FEL利用によるポンプープローブ実験技術の開発を進めるために、SCSS試験加速器の極紫外FELパルスと赤外レーザーを用いて希ガスクラスターを試料とした実験を進めた。特に、ネオンクラスターを試料とした実験では、極紫外FELによりネオンクラスターに多数の励起子を生成することで、希ガスクラスターで励起子モット転移が起きていることを示唆する結果が得られた。

これまでに得られている光電子分光などの結果と合わせて、FELの高強度パルス光でのみ誘起可能な新しい状態を創出していることが示唆されている。イオン液体の平均的な中距離構造について検討を加えるために、実験室でX線小角散乱実験を行った。イオン液体では分子の電荷を担う部分と電荷を持たない部分がそれぞれドメイン構造を形成することが知られているが、このドメイン構造の形成について検討するために、分極性や非分極性の分子をイオン液体に添加し、溶質分子によるドメイン構造の変化について検討を進めた。上記とあわせて、平成23年度に作成した試料作成真空槽やX線CCD利用に向けた装置の組み立てや調整を進めた。平成26年3月に、キセノン・クラスターを対象としたX線自由電子レーザー(XFEL)利用実験を行い、長年の夢であった「単一粒子・単一照射回折像」を得ることに成功した。同時にX線照射に伴う放射線損傷の多寡を調べるため、蛍光スペクトル、イオン飛行時間スペクトルも合わせて測定した。平成26年度は、これらの実験結果について詳しい解析を試みた。特に、回折像についてはモンテカルロ法を用いる解析法を独自に開発し、観測された最大のクラスターについては、ファセットをもつ微結晶である可能性を示唆した。液体研究としては、試料として比較的取り扱い易い室温イオン液体を念頭に、クラスター生成装置を改良することにより、液体ジェット噴流装置を製作した。また、超高輝度X線照射によりプラズマが生成されることから、強結合プラズマのプロトタイプである液体アルカリ金属等を対象にして、プラズマに関する実験的・理論的知見を深めた。26年度が最終年度であるため、記入しない。不規則系物理学26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度はSACLA稼働開始の年度にあたり、試験実験によりXFEL専用装置の性能評価を実施することができた。また、試験加速器を用いた予備実験により、FEL利用技術の開発と、FEL照射効果に関する理解を進めた。現時点で、研究目的の達成に向けて順調に研究が進展している。X線自由電子レーザーSACLAを利用して、本研究の目標の一つである希ガス(キセノン)巨大クラスターのone-shot imagingの実験に成功した。SACLAの利用実験により、たんぱく質試料のX線構造解析を実施し、成果を発表するとともに、X線領域の多光子吸収過程などの試料損傷過程についての知見の蓄積も進んでおり、X線自由電子利用実験について順調に進展している。これと並行して、極紫外レーザー施設を利用して自由電子レーザー利用技術の開発も進んでおり、特にポンプープローブ計測による時分割計測実験の技術開発も順調に進展し、新たな知見も得られた。実験室でのX線散乱実験による試料検討も進めており、現時点で、研究目的の達成に向けて順調に研究が進展している。24年度以降は、原子・分子やクラスターを試料として、XFELと物質の相互作用について基本的な知見を得ると共に、X線構造解析のための実験技術開発を進める。特に、研究当初に利用を予定していたドイツグループのX線検出器が利用困難となってしまったため、実験スケジュールの修正を行う。
ペルー北部ヘケテペケ谷最古の神殿はなぜその地点に建ったのか：編年と成立背景の研究

北部ペルー、モスキート平原に先土器期に神殿が成立した背景を、編年と地域社会の変化のプロセスに着目して考察するのが研究の主目的である。この平原には石造の基壇やテラスなどの遺構が多数分布する。それらの分布をトータルステーション測量し、27の地点にて発掘を実施した。大規模建築「モスキートZ1」の発掘では、何世紀にもおよぶ神殿の改変・更新過程が詳細に解明された。また他にも先土器期の祭祀的な建築複合や、耕作の痕跡のあるテラス群が平原内に複数認められた。これらの祭祀建築と、耕作地との空間的な関係および編年上の一致から、最初期の大規模建築の成立は農業生産と結びついていたと示唆される。ペルー中部・北部の諸河谷流域にて紀元前300050年頃にかけて、神殿建築を中核とする定住村落群が登場した。これがアンデス文明の始まりの画期とされる。近年とくに土器の導入に先立つ「先土器神殿」の発見が相次ぎ、各河谷の「最初の神殿」への関心が高まっている。しかし発掘規模の小ささや絶対年代測定の不徹底により、先土器神殿の編年の遺跡間・地域間比較が遅れており、また「神殿はなぜ最初にその地点に成立したのか」という根源的な問いに対する実証的研究が不十分である。研究代表者は本研究に先立って、ペルー北部ヘケテペケ川中流域のモスキート平原に分布する遺跡群が、流域最古の神殿群であることを確認していた。本研究は測量・発掘・絶対年代測定・景観分析によって、その編年および居住域などを含めた地域社会の動態を包括的に解明し、さらに他の河谷との長距離交易システムに着目することで、アンデス文明の形成過程の特徴を明らかにする計画である。平成25年の研究計画における主眼はモスキート平原の地形・遺構の3次元デジタル測量にあった。89月にかけてペルー共和国に渡航し、モスキート平原全域を精緻に踏査して遺構の分布を確認するとともに、トータルステーションと電子平板を導入して測量を実施した。その結果、当初の想定以上に遺構の分布範囲が広いことが判明した。平原東端の「Z区」などの神殿建築群から、平原西端の「C区」などの小規模基壇建築群までの間に、人為的な基壇、テラス、盛り土などが切れ目なく続いていたのである。それらはいずれも土器片を伴わず、また内部に多くの石を詰め込んだ工法などから、本研究の対象である先土器期の建築物と考えられる。またモスキート平原の東側に広がるラマダ平原でも、やや疎らながら同様の遺構が複数確認された。このように一帯の先土器期のセトルメントパターンの実相解明に大きく近づいた点で、意義深い成果となった。しかし発掘規模の小ささや絶対年代測定の不徹底により、先土器神殿の編年の遺跡間・地域間比較が遅れており、また「神殿はなぜ最初にその地点に成立したのか」という根源的な問いに対する実証的研究が不十分であった。研究代表者は本研究に先立って、ペルー北部ヘケテペケ川中流域のモスキート平原に分布する遺跡群が、流域最古の神殿群であるとの見通しを得ていた。本研究は測量・発掘・年代測定・景観分析によって、その編年および居住域などを含めた地域社会の動態を包括的に解明し、さらに他の河谷との長距離交易システムに着目することで、アンデス文明の形成過程の特徴を明らかにする計画である。平成25年度にモスキート平原の地形・遺構を測量し、その成果をふまえて平成26年度に平原の東端「Z区」を発掘した。ここには5基の基壇から成る「モスキートZ神殿」が展開しているが、うち最大規模のZ1基壇の中核部を主対象とし、その傍らに並立するZ2、Z3基壇を含めてトレンチ発掘を実施した。これにより3基の基壇は接続して十字形を成すこと、Z1基壇中央部は少なくとも2回大規模に更新されていたことなど、建築形態について多くの知見が得られた。また年代測定に有効な炭化物や有機遺物試料が複数採取された。並行して平原中央部の「F区」にて小規模な発掘を実施し、土壌サンプルを理化学分析したところ、古代において耕作地であったとの見通しを得た。また長距離交易システムをめぐる仮説を検証すべくペルー北部の他の河谷にて踏査を実施し、有効なデータを集めることができた。

本研究は測量・発掘・年代測定・景観分析によって、その編年および居住域などを含めた地域社会の動態を包括的に解明し、さらに他の河谷との長距離交易システムに着目することで、アンデス文明の形成過程の特徴を明らかにする計画である。平成26年の発掘で、平原東端の「モスキートZ」神殿の基壇の形態を把握し、平原中央部では耕作地らしいテラス群を確認した。平成27年は、平原東端のその他のマウンド群が先土器神殿であるか確認すること、中央部・西部の耕作テラスの配置と編年を解明することを目的に、810月に調査を実施した。まず5週間の測量で、新規発見のものを含め平原内の遺構の図化を完了した。続く6週間に平原内の26地点で発掘を展開した。耕作テラス群に12m2規模の試掘を重ねて土壌サンプルを採取、用水路と見られる遺構群はトレンチ発掘し、取水口や流向の推定のみならず、流路の変更や支線水路の封鎖などを確認した。神殿については、モスキートZ中央部の発掘にて先土器神殿に特徴的な炉と壁がんを持つ祭祀空間を検出したほか、「ラマダ平原A」、Y、Pのマウンド群が神殿であるとの見込みを得て、それぞれ年代測定用の炭化物サンプルを採った。上述のとおり平成27年度には、合計26地点という大がかりな発掘計画を完遂し、モスキート平原の全域から必要なデータを集めることができた。必要なフィールドワークを完了したという点で研究は順調である。またペルー国内で進めている耕作地土壌の分析については、土壌サンプルの理化学分析と花粉分析が完了し、土中の微細遺物の分析を待つだけとなっている。しかし、ペルー文化省内において分析サンプルの輸出許可の手順が変わり、時間がかかるようになったため、28年4月時点でまだ年代測定用の炭化物の日本への輸出許可が得られていない。そのため年代測定が遅れているが、平成28年度内に完了させることに支障はない。ペルー中部・北部の諸河谷流域にて紀元前300050年頃にかけて、神殿建築を中核とする定住村落群が登場した。これがアンデス文明の始まりの画期とされる。近年とくに土器の導入に先立つ「先土器神殿」の発見が相次ぎ、各河谷の「最初の神殿」への関心が高まっている。しかし発掘規模の小ささや絶対年代測定の不徹底により、先土器神殿の編年の遺跡間・地域間比較が遅れており、また「神殿はなぜ最初にその地点に成立したのか」という根源的な問いに対する実証的研究が不十分であった。研究代表者は本研究に先立って、ペルー北部ヘケテペケ川中流域のモスキート平原に分布する遺跡群が、流域最古の神殿群であるとの見通しを得ていた。同じく代表者をつとめる「ペルー、ワヌコ市の遺跡発掘:神殿の起源を巡る編年研究と、その成果への現代的関心」(課題番号15H00713)によって、ペルー中部山地ワヌコ盆地にて先土器期に始まる神殿遺跡群を調査しており、双方を比較する視点から成果を発表してきた。平成26年と平成27年の発掘で、「モスキートZ」をはじめ多数の神殿建築群と、用水路と見られる遺構群や耕作地と考えられるテラス群を発掘し、放射性炭素絶対年代測定に必要なサンプルを採取した。平成28年はそれらのサンプルを日本に持ち帰り、年度内に年代測定を行い、研究を完了させる計画であった。