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初期経典に見られる出家に伴う信の研究

本研究の目的は、初期仏教経典に見られる「信」、特にこれまでの研究で注目されてこなかった「出家に伴う信」を整理検討することを通じて、信が有する固有の性格を明らかにする一助とすることであった。報告者は、前年度に続き初期経典中の出家に伴う信の用例を整理した上で、信を伴う出家者の中の第一人者とされる仏弟子ラッタパーラの、出家の動機とその背景を精査・考察した。ラッタパーラは両親の猛反対にも関わらず、断食を決行してまで出家を成功させており、こういった彼の態度は、諸欲の対象を享受する世俗生活を送る中で必然的に蒙る、苦の自覚を背景としている。用例を整理すると、出家に伴う信は、苦の自覚を背景としつつもその苦の終末を目指す目的志向性をもち、また、具体的な行動に現れ出るものでもあることが明らかとなる。ラッタパーラの出家のきっかけとなった断食は、彼の苦の自覚を背景とした、信の表出であったと考えられる。出家の信の検討と平行して、報告者は、初期経典中に用いられる信の動詞形の用例を整理した。初期仏教における信の動詞の対象は1:対格(人物/事物)と2:属格形(人物)に分類することが出来る。このうち中心となるのは1で、対格(人物/事物)を信じることは、対格(人物/事物)を「真実だと見なすこと」を意味する(実際に真実であると分かっているわけではない)。2の属格形(人物)を信じる場合、人はその人物当人を信じているわけではなく、実際上、その人物の対格(発言内容等)を信じることが意図されている。上の分類は仏教成立以前のテキストにも見受けられ、報告者は、初期仏教における信の動詞形が、仏教成立以前の用法や意味内容を受け継いでいることを確認した。以上2つの検討結果は、これまでの信の性格に関する議論に一石を投じるものと考えられ、いずれも学会にて口頭発表し、学会誌に掲載される予定である。27年度が最終年度であるため、記入しない。初年度の研究作業は、初期仏教経典中の出家の信の用例を抽出し大まかに把握する作業と、出家の信の特徴・性格に直接アプローチしていく作業の二つからなった。まず前者の作業として、報告者は、初期仏教教典及びその註釈文献における信の用例を、出家の信か否かに関わらず網羅的に抽出した。次に、その作業で抽出した出家の信及び出家の信と関わる用例を精査していった。検討の結果、「出家後に苦の週末(=解脱)が知られ得る」という信を伴って出家した者は、出家後必ず解脱に達するわけではなく、結果的に還俗してしまう場合もあり、出家の信は解脱を保障するものではないことが明らかとなった。次に、後者の出家の信そのものに関する考察として、報告者は、信を伴う出家者の第一人者であるラッタパーラの事跡を伝える『ラッタパーラ経』を、漢訳・サンスクリット語等のパラレル文献とも比較しながら読解した。『ラッタパーラ経』には出家の信が用いられないという問題点があるが、ラッタパーラの事績を伝える他の初期仏教経典やパラレル文献ではいずれも出家の信が言及されている。検討の結果、『ラッタパーラ経』中のラッタパーラの出家の信は、彼の出家の契機となった断食に表われているという結論に達した。この結論は、初期仏教経典における出家の信が、解脱を求めていく目的志向性をもち、さらに他者が確認出来るような具体的行動に表われるものとして扱われている点から導き出された。この考察結果は、2014年度第84回日本佛教学会(於種智院大学)の際、口頭にて発表した。以上に報告した、結果を見据える目的志向性・具体的行為を通じてその存在が示される出家の信の特徴は、これまでの信研究に新たな知見を提供するものであり、「信仰」の意味に止まらない信の性格を明らかにする上で重要な視点となり得ると考える。

このうち中心となるのは1で、対格(人物/事物)を信じることは、対格(人物/事物)を「真実だと見なすこと」を意味する(実際に真実であると分かっているわけではない)。2の属格形(人物)を信じる場合、人はその人物当人を信じているわけではなく、実際上、その人物の対格(発言内容等)を信じることが意図されている。上の分類は仏教成立以前のテキストにも見受けられ、報告者は、初期仏教における信の動詞形が、仏教成立以前の用法や意味内容を受け継いでいることを確認した。以上2つの検討結果は、これまでの信の性格に関する議論に一石を投じるものと考えられ、いずれも学会にて口頭発表し、学会誌に掲載される予定である。報告者は、既に初期仏教経典中の信の用例を網羅的に抽出する作業を終了させており、本作業で作成されたデータは、出家の信以外の信を検討する場合にもその基礎となることが期待される。また、当初の大目的であった『ラッタパーラ経』の検討とその検討を通じた出家の信の特徴の考察についても、一定の結論に達したと考えている(以上、詳細は上記「研究実績の概要」)。残る作業は還俗者の信と釈尊の信の検討、及び信の性格の考察となるが、前二者については、用例が少ない関係上、それほど時間を要しないものと予想する。最も重要な作業となる信の性格の考察については、出家の信に関する研究成果を再度熟考し、還俗者・釈尊の信の考察成果をふまえながら、出来るだけ多くの時間を割いて考えていきたい。27年度が最終年度であるため、記入しない。報告者は今後、還俗者の信及び釈尊の信について検討を進めていく。初年度の作業を通じて抽出出来た用例が当初の予想よりかなり少なく、出家の信の検討を通じて既に明らかになったこと以上の成果が出せるかどうかは不明であるが、信の性格の考察に資する何らかの視点を提供することを目指す。尚、2014年度に行った初期仏教経典中の信の用例整理作業の際、信の動詞形の格支配(目的語のとる格)に関して、ある程度の使い分けがなされていることが明らかになった。信の動詞形の用例整理・検討は、先行研究においてこれまで為されていない。名詞形の信の基礎である信の動詞形の検討は、信の性格を考える上でも中心的な視点を提示すると考える。残る還俗者の信・釈尊の信の検討作業に加え、本年度は信の動詞形の検討も行っていくこととする。
ポテンシャル論の応用

ポテンシャル論の応用について研究代表者,分担者,協力者により,多くの研究成果があがった.以下に代表者による研究成果を記す.その他は研究発表の欄を参照.調和関数の境界値に関するFatouの定理に関連し,様々なポテンシャル論的アプローチを考察した.これは容量の仮似劣加法性から導かれることを発見した.さらに,容量と測度との関係をより深く考察し,Bessel容量とHausdorff測度,集合の拡大,Nagel-Rudin-Shapiro,Nagel-Stein型の接近領域等を総合的に研究した.この結果をアメリカ数学会誌,Hiroshima Math.J.などで発表した。正の優調和関数,劣調和関数の可積分性に関連し,調和関数の平均の性質を研究した.リプシッツ領域に於いて調和関数がある種の密度のついた重みつき平均で表されるかどうか,特にその密度が0から離れているかについて,詳しく調べた.リプシッツ領域については完全に決定する事が出来た.この結果はアメリカ数学会誌に発表予定である.Cranston-McConnellの不等式を一般化し,一般の関数に対してよく似た形の不等式を与え,更にはMartin境界への応用を行った.これは東工大の村田教授との共同研究であり,J.Analyse Math.に発表した.さらに,不連続な優調和関数に対する一般化されたCranston-McConnellの不等式を証明した.これには抽象ポテンシャル論のfine potential論を行いた。これはPotential Analysisに発表予定である。また,この研究の内容はSwedenのLinkoping大学における国際会議で発表した.Uppsala大学のEssen教授との共著でPotential論の基礎,および様々な話題に関するLecture Notesを著し,Springer Verlagより出版した.ポテンシャル論の応用について研究代表者,分担者,協力者により,多くの研究成果があがった.以下に代表者による研究成果を記す.その他は研究発表の欄を参照.調和関数の境界値に関するFatouの定理に関連し,様々なポテンシャル論的アプローチを考察した.これは容量の仮似劣加法性から導かれることを発見した.さらに,容量と測度との関係をより深く考察し,Bessel容量とHausdorff測度,集合の拡大,Nagel-Rudin-Shapiro,Nagel-Stein型の接近領域等を総合的に研究した.この結果をアメリカ数学会誌,Hiroshima Math.J.などで発表した。また,この研究の内容はSwedenのLinkoping大学における国際会議で発表した.Uppsala大学のEssen教授との共著でPotential論の基礎,および様々な話題に関するLecture Notesを著し,Springer Verlagより出版した.
セルオートマトンのアトラクタとGibbs測度

本年度は、一次元有限状態セルオートマトンのアトラクタと漸近挙動とを不変集合の安定性と関連付ける研究を行なった。概要を以下に述べる。1.セルオートマトンをn回作用したポテンシャル関数に対するゼータ関数の決定記号S={1,2,...、N}上のセルオートマトンのn回作用を与える局所写像に付随した構造行列M(n,a),a∈Sを次で定義する。ここで、n回局所写像をf:S^<np+1>→Sと書く。第0座標にのみ依存するポテンシャル関数V(x)=V(x_0)をとる。この時、シフト(X(n),σ)のゼータ関数はdet(I-=Σ_<a∈S>^e^<-V(a)>M(n,a))^<-1>と書けることがわかった。2.セルオートマトンをn回作用した後の配置空間X(n)の構造と、漸近挙動の評価上の構造行列から自然に定義されるsofic測度がJacobianを持つ条件を示した。このとき、Gibbs測度はGibbs測度に誘導され続けることがわかる。概要を以下に述べる。1.セルオートマトンをn回作用した後の配置空間X(n)の構造と、漸近挙動の評価アトラクタにおけるダイナミクスが恒等写像と同値になる場合を考える。数値実験から提唱された問題は、アトラクタへの収束の速さの評価である。X(n)の大きさをワードエントロピー(より一般には位相圧力)で与えると、そのnに関する漸近挙動は不変集合の安定性によって評価できることがわかった。実例として、エントロピーの減少がe^<-n>,e^-√<n>,n^<-1>に比例するものを具体的に構成している。この結果はCellular Automata Workshop Gargnano(ITALY)-Sept25-Sept27,1997において発表した。2.セルオートマトンをn回作用したポテンシャル関数に対するゼータ関数の決定記号S={1,2,...,N}上のセルオートマトンのn回作用を与える局所写像に付随した構造行列M(n,a),a∈Sを次で定義する。この時、シフト(X(n),σ)のゼータ関数はdet(I-zΣ_<a∈s>e^<-V(a)>M(n,a))^<-1>と書けることがわかった。概要を以下に述べる。
小階層性問題とstrong CP問題への斬新なアプローチ

素粒子標準模型は、ほぼ全ての加速器実験と精密測定の結果を正しく説明するが、2つの理論的問題を抱えている。1つは、ヒッグス場の質量項が、精密測定から予測されるカットオフに対応する量子補正に比べ、約1桁小さい点である。これの解決案として、標準模型のミラーコピーが存在して、この量子補正の大部分を打ち消す、という模型が注目されている。本研究は、重力波観測とLHC実験による、この模型の実験的検証を目指す。2つ目の問題は、荷電+パリティ対称性を破るθバー項が不自然に小さいことである。本研究は、高エネルギーでパリティが回復する理論によりこれを解決し、さらに同理論をニュートリノを通じて検証することを目指す。
日本統治未期の朝鮮における「国民総力」運動に関する史的考察

本年度は締め括りの年度として以下の研究を行った。(1):昨年度から引き続いて資料調査と関係者からの談話聴取(アンケート調査と電話による聴取含む)を実施した。資料調査は主に東京・名古屋・福岡・ソウルにおいて行い、関係史料の補完に努めた。関係者からの談話聴取は思いの外に進捗した。特に元・朝鮮総督府官僚(東京都在住)・京城帝大医学部小児科助教授の遺族(大阪府在住)・京城保護観察所長の遺族(神奈川県/愛知県/福岡県各在住)からは談話聴取とともに写真資料なども入手することが出来た。また、緑旗連盟が経営した「清和女塾の修了生に対してアンケート調査を実施し、基本的な人事動向に関する確認作業が大いに進捗した。(2):上記に併行させ、学会等でも研究報告を実施した。その題自・日時・学会名等は以下の通りである。1)「昭和戦前期の朝鮮における『右派』学生運動試論」(九州史学研究会・第20回近現代史部会報告、2001年5月19日、於:九州大学)2)「日本統治末期の朝鮮における転向者『善導』」(朝鮮史研究会・関西部会例会報告、2001年9月29日、於:河合塾大阪校セルスタ)3)「日本統治末期の朝鮮における文壇『新体制』」(近現代東北アジア地域史研究会・第11回研究会大会、2001年12月8日於:早稲田大学)(3):(1)(2)の成果をもとにして裏面の如くその研究成果の一部を公表し、また近日中に上記(2)における発表1)2)を学術誌上にて公表すべく目下作業中である。本年度はまず史料収集を重点的に行った。特に韓国においてはソウルを中心に各史料収蔵機関を訪問し、本研究の核となる戦時期発行にかかる図書・雑誌(特に『大和世界』、李泳根の著作、国民総力朝鮮連盟発行の各種パンフレットなど)を閲覧・複写した。一方で、日本国内においても引き続き関係史料の渉猟に努め、幸運にも国内の古書店よりいくつかの緑旗連盟関係の書籍(『緑旗』誌・『新女性』誌など)を購入する事が出来た。なお、現在進行中の作業としては、そうした史料の重要部分におけるテキストデータ化とともに、緑旗連盟関係者・京城保護観察所(大和塾など思想転向者団体を含む)・金融組合関係者・朝鮮総督府官僚・朝鮮文人報国会関係者などの著作目録を作成中であり、今後発表予定の論文における基礎的データとして利用していくべく、内容の補充と補完に務めている。森田文庫(故森田芳夫氏は緑旗連盟と国民総力朝鮮連盟に勤務、九州大学蔵)の整理、特にカード作成もほぼ終了し、来年度秋をめどに仮目録を作成すべく調整中である。また一方で、面談・電話・書信による関係者(および遺族)への聞き取り調査も進捗し、本年度は緑旗連盟(緑旗医院)の関係者・遺族、および国民総力朝鮮連盟での勤務経験者(3名)から証言を得た。またその総力連盟勤務経験者の一人(福岡市在住)に連盟発行書籍の複写物を提供したところ、それが福岡の地元紙(『西日本新聞』2000年8月15日付夕刊)にて紹介されるという思いがけない一幕もあった。よって以上の成果をもとに、来年度はそれを学会等での報告を踏まえて雑誌・紀要等にて順次公表していくことに注力したい。
マウスを用いた加齢性難聴原因遺伝子およびその修飾遺伝子の探索

実験用マウスの汎用近交系であるC57BL/6J (B6)系統は、加齢に伴い約10-12か月齢で高度難聴を発症する。そこで、この加齢性難聴を引き起こす原因遺伝子およびその遺伝子と相互作用する修飾遺伝子の単離を目指し、本研究を行った。昨年度、報告したように、この加齢性難聴を引き起こす原因遺伝子座は第10番染色体上のahl (age-related hearing loss)遺伝子座であることが明らかとなり、第10番染色体を非加齢性難聴系統であるMSM系統由来の染色体に置換したコンソミックマウス(B6-MSM^<10>)を用いた解析結果から、第10番染色体のセントロメアから約22cMの位置に存在することが明らかとなった。そこでこれらの領域を詳細に解析するため、B6とB6-MSM^<10>間で104頭の戻し交配分離個体を作製し、マイクロサテライトマーカーを用いた詳細なマッピングを行った。その結果、原因遺伝子の存在する領域は約3.9cMの範囲に存在することが明らかとなり、さらに、この領域には難聴原因遺伝子であるcadherin 23 (cdh23)およびProtocadherin 15 (Pcdh15)が存在することが明らかとなった。一方、ahl遺伝子にはいくつかの修飾因子の存在が明らかとなっており、本研究においても難聴モデルマウスの1種、Jackson shaker (js)の原因遺伝子が相互作用することが明らかとなり、加えて、js遺伝子がスカフォールドタンパク質の種であるSans(Scaffold protein including ankyrin repeats and SAM domain)であることが解明された。そこで、Sansとahlの候補遺伝子であるCdh23またはPcdh15との間での相互作用を酵母2-hybrid法により検討した。その結果、Sansと両遺伝子間が結合する可能性が示唆された。さらに、Sans特異的なペプチド抗体を作成し、内耳蝸牛管の免疫染色を行った結果、SansはCdh23と内耳有毛細胞のクチクラ層で、Pcdh15と細胞体で共発現している可能性が示された。Sans、Cdh23およびPcdh15は、それぞれ同様の表現型を示す難聴モデルマウスであるjs, waltzerおよびAmes waltzer、およびそれらがすべてUsher症候群の原因遺伝子であることから、Sansと相互作用するCdh23およびPcdh15はahlの有力な候補遺伝子であると考えられた。汎用近交系であるC57BL/6J(B6)系統は加齢に伴い、約10-12ヶ月齢で高度難聴(平均75dB SPL)を発症する。この加齢性難聴を引き起こす原因遺伝子座(age-related hearing loss : ahl)が同定され、は第10番染色体にマップされた。本研究はahl遺伝子の同定、およびahlと相互作用する修飾遺伝子を探索するため遺伝学的な手法を用いて解析を行った。ahl遺伝子の詳細な染色体の位置を明らかにするためB6マウスに加齢性難聴を発症しない近交系であるMSM系統の第10番染色体を導入したコンソミックマウス(B6-MSM^<10>)を作製した。このマウスのABRにより聴力測定を行った結果、B6に認められるような加齢性難聴は完全にレスキューされ(平均25dB SPL)、さらに、B6系統に見られる蝸牛神経細胞節の減少やコルチ器の退縮も認められなかった。次にB6-MSM^<10>にB6マウスを戻し交配することによりahl近傍の染色体領域を組換えた12系統のコンジェニックマウス作製し、聴力測定を行った。その結果、ahl遺伝子は第10番染色体のセントロメアから約22cMの位置にマップすることが出来た。一方、内耳の神経上皮に異常を示す常染色体劣性遺伝のマウス突然変異体であるJackson shaker(js)マウスは通常ホモで先天性難聴および行動異常を示すことが明らかになっている。このjsアレルをヘテロの状態でB6および非加齢性難聴系統であるMSM、C3H/HeJに導入して聴力測定を行った。その結果、jsアレルを導入したMSM、C3M/HeJ系統にjsアレルを導入した個体では聴力に変化は認められず、野生型同様に約18ヶ月齢まで正常な聴力(平均22dB SPL)を維持していたが、jsアレルを導入したB6個体においては6ヶ月齢で高度難聴(70-90dB SPL)を発症し、B6系統より6ヶ月程度難聴の発症時期が促進された。さらに、B6-js/jsとB6-MSM^<10>を交配させることによりF_2個体を作製し、js遺伝子およびahl近傍のマイクロサテライトマーカーのPCRタイピングを行い、両者の相互作用を検討した。62頭のF_2個体を用いて解析を行った結果、js/+およびahl/ahlの状態でP=0.042の値で両者の相互作用が示唆され、さらにjs/+およびahl/+の状態においてもP=0.00026の値でjs遺伝子とahlの相互作用していることが統計学的に証明された。

昨年度、報告したように、この加齢性難聴を引き起こす原因遺伝子座は第10番染色体上のahl (age-related hearing loss)遺伝子座であることが明らかとなり、第10番染色体を非加齢性難聴系統であるMSM系統由来の染色体に置換したコンソミックマウス(B6-MSM^<10>)を用いた解析結果から、第10番染色体のセントロメアから約22cMの位置に存在することが明らかとなった。そこでこれらの領域を詳細に解析するため、B6とB6-MSM^<10>間で104頭の戻し交配分離個体を作製し、マイクロサテライトマーカーを用いた詳細なマッピングを行った。その結果、原因遺伝子の存在する領域は約3.9cMの範囲に存在することが明らかとなり、さらに、この領域には難聴原因遺伝子であるcadherin 23 (cdh23)およびProtocadherin 15 (Pcdh15)が存在することが明らかとなった。一方、ahl遺伝子にはいくつかの修飾因子の存在が明らかとなっており、本研究においても難聴モデルマウスの1種、Jackson shaker (js)の原因遺伝子が相互作用することが明らかとなり、加えて、js遺伝子がスカフォールドタンパク質の種であるSans(Scaffold protein including ankyrin repeats and SAM domain)であることが解明された。そこで、Sansとahlの候補遺伝子であるCdh23またはPcdh15との間での相互作用を酵母2-hybrid法により検討した。その結果、Sansと両遺伝子間が結合する可能性が示唆された。さらに、Sans特異的なペプチド抗体を作成し、内耳蝸牛管の免疫染色を行った結果、SansはCdh23と内耳有毛細胞のクチクラ層で、Pcdh15と細胞体で共発現している可能性が示された。Sans、Cdh23およびPcdh15は、それぞれ同様の表現型を示す難聴モデルマウスであるjs, waltzerおよびAmes waltzer、およびそれらがすべてUsher症候群の原因遺伝子であることから、Sansと相互作用するCdh23およびPcdh15はahlの有力な候補遺伝子であると考えられた。
精神疾患のプレシナプスエンドフェノタイプとその発現機構の解析

これまでに解析した多くの精神疾患モデルマウスにおいて、海馬歯状回-CA3シナプスにおける顕著なプレシナプス性の機能不全が見られた。本研究では、このプレシナプスエンドフェノタイプの発現機構と一般性を検討した。1.前年度までの解析によってNMDA型グルタミン酸受容体遮断薬が同様のプレシナプスエンドフェノタイプを誘導することを示唆する結果を得ていた。この誘導条件の検討と、誘導に伴う神経機能変化の解析を行った。さらに、プレシナプスエンドフェノタイプに対するNMDA受容体遮断薬の効果や、歯状回特異的なNMDA受容体変異導入の効果を解析し、プレシナプスエンドフェノタイプの発現及び維持とNMDA受容体の関係について詳細な解析を行った。2.プレシナプスエンドフェノタイプの一般性を検討するため、既存の複数の疾患モデルマウスを用いて、歯状回に対する入力シナプスなど、歯状回-CA3シナプス以外のシナプスにおけるプレシナプス機能の解析を行った。現時点では明確な共通点は観察されていない。3.電気痙攣刺激処置によるモデルを用いてプレシナプスエンドフェノタイプのレスキュー実験を行った。機能的変化に基づく予測と、各種向精神薬等のスクリーニングにより、神経興奮の制御によって部分的にレスキュー可能であることが示唆された(論文投稿中)。その際、このエンドフェノタイプを持つマウスに特徴的に見られる行動異常にも改善が見られた。26年度が最終年度であるため、記入しない。これまでに解析した精神疾患モデルマウスにおいて、海馬歯状回-CA3シナプスにおける顕著なプレシナプス性の機能不全を確認した。本研究では、このプレシナプス性エンドフェノタイプの発現機構と一般性を検討している。1.これまでに解析した精神疾患モデルマウスと共通するプレシナプスエンドフェノタイプを持つモデルを検出するため、マウスに対する各種薬物投与の効果を検討した。変化が検出された処置について、顕著な変化を示す条件を検討している。2.既に基本的な解析を終了している電気けいれん刺激(ECS)処置によるモデル(論文投稿中)を用いて、プレシナプス変化の発現機構を解析した。細胞内Ca濃度調節機構の変化を示唆する結果を得ており、その点を詳細に検討するための薬理学的解析を行っている。3.ECS処置によるモデルを用いて活動量、うつ様行動等の行動解析を行った。4.精神疾患様の行動異常を示すAPCがん抑制遺伝子変異マウスの生理学的解析を行った。これまでに用いたモデルマウスと共通する行動異常を示すが、歯状回-CA3シナプスにおけるプレシナプスエンドフェノタイプは観察されなかった。海馬の他の領域における詳細な解析の結果、CA1領域における長期増強とテタヌス後増強の低下が明らかになった。実施計画で予定した、新たなモデルのスクリーニング、エンドフェノタイプ発現機構の解析、行動解析は予定通り解析を開始し、結果が出始めている。バイオマーカーの探索のみ解析が進んでいないが、その可能性も想定した実験計画だったため、おおむね順調に進展していると言える。1.疾患モデルのスクリーニングを継続する。明らかな異常を持つモデルについて、その変化の発現機構の検討、関連するバイオマーカーの探索、行動との関係の解析を昨年度と同様に行う。2.プレシナプスエンドフェノタイプの一般性を解析する。疾患モデルマウスにおいて、歯状回-CA3シナプス以外のシナプスでのプレシナプス機能変化を解析する。上記の解析から得られたバイオマーカーの発現を脳全体で検討し、変化が予想されるシナプスにおいて電気生理学解析を行う。バイオマーカーが同定できていない場合は、海馬の他の領域や大脳皮質などの電気生理学的知見が豊富な領域で解析を行う。変化が見られたシナプスに関して、それが成熟度の変化である可能性を発達期の電気生理解析と成熟ステージマーカー発現の解析によって検討する。3.プレシナプスエンドフェノタイプの正常化を試みる。プレシナプス機能変化が薬物投与等によって正常な状態に回復するかどうかを検討する。

その際の行動、バイオマーカーの変化を解析し、これらとプレシナプス機能との関係を明らかにする。昨年度の解析によって、苔状線維シナプスにおけるプレシナプス機能変化に細胞内Ca濃度調節機構の変化が関与することが示唆されている。細胞内Ca動態に関与すチャネル、トランスポーターなどの関与を受容体拮抗薬、イオンチャネル修飾物質、酵素阻害薬などを用いて検討する。また、臨床で一般的に用いられる抗精神病薬、気分安定薬等がシナプス機能等に及ぼす効果を同様にして解析し、現在の薬物治療との関連を解析する。
快適性からみたキルティング布の設計法の検討

本研究はキルティング布の性質として重要な位置を占める快適性に着目し、キルティング布の構成因子と快適性に関わる保温性、通気性、透湿性との関係を検討し、併せてTH-PERMEABILITY TESTERによる測定結果も利用して、キルティング布の設計法を構築するための基礎的知見を得ることを目的としている。実験は、外生地として性状の異なる3種の織物と、中綿としてはポリエステルの中綿用不織布マットを使用した。試料は中綿の重ね枚数、ステッチ線の間隔を変えて、各種のキルティング試料を製作した。これらの試料を使用して、従来法に基づき保温性、通気性、透湿性を評価し、さらにTH-PERMEABILITY TESTERを用いて熱・水分の共存条件下における熱・水分の透過特性を測定した。ASTM法(恒温法)によるキルティンク布の保温率は中綿枚数、ステッチ線間隔の増加よって増大する傾向をもつが、カップ法による透湿率は保温率とは逆の傾向となった。しかしキルティング布の保温率と透湿率のいずれの場合も、構成した布の平均厚さを用いて整理できた。一方、キルティング布の通気量は、その充填率によって比較的きれいに整理できたが、常に透湿性と同傾向をもつわけではない。また保温性と異なり、透湿性と通気性は外生地の影響を強く受ける。TH-PERMEABILITY TESTERによる測定結果は、従来法による保温性、透湿性の測定結果と傾向は同様であったが、測定値にかなりのギャップを生じていた。これはこの測定法が潜熱を含めて評価するためと考えられるが、この場合も保温率、透過水分量に関しては平均厚さを用いてまとめることができた。以上の結果を利用すれば、キルティング布を製作する場合の条件設定に際して、有効な知見を得ることができるが、ここではその具体的考え方についても示した。キルティング布の外生地としては綿100%の織糸密度の大きい布地と粗い布地各1種とポリエステル100%の高密度織物1種の計3種を選択した。中綿にはポリエステル100%の不織布マットを用いた。試料は45×45cmのサイズで製作し、中綿の重ね枚数は15枚、ステッチ線間隔は3cmおよび5cmの2段階とし、合計19種類のキルティング布を製作した。ASTM法によるキルティング布の保温率は中綿の重ね枚数が増加し、ステッチ線間隔が大きくなるにしたがい増加した。カップ法による透湿率は保温率とは逆に、中綿枚数が増しステッチ線間隔が大きくなるにつれて低下した。保温率と透湿率に関しては、キルティング布の平均厚さを用いて整理できる。一方、キルティング布の通気量は、中綿枚数の増加およびステッチ線間隔の減少によって低下する。結果的にキルティング布の通気量は、中綿の圧縮状態の影響を大きく受けることが分かり、キルティング布の充填率により比較的きれいに整理できる。キルティング布における外生地の違いの影響については、保温性は外生地の種類の影響はほとんど受けず、中綿の厚さや圧縮状態の影響が大きく表れる。透湿性と通気性については、外生地の影響を受けており、外生地の特性がキルティング布の特性に反映されることが分かった。TH- PERMEABILITY TESTERで試験的に測定した保温率や透湿率の結果は、単独での保温性、透湿性の測定結果と傾向としては同様であったが、測定値にかなり大きなギャップを生じていた。また、布地の快適性を表すK値は、保温性と透湿性のバランスが整ったところで極大値を示す傾向がみられたが、詳細についてはさらに検討を加えたい。

本研究はキルティング布の性質として重要な位置を占める快適性に着目し、キルティング布の構成因子と快適性に関わる保温性、通気性、透湿性との関係を検討し、併せてTH-PERMEABILITY TESTERによる測定結果も利用して、キルティング布の設計法を構築するための基礎的知見を得ることを目的としている。実験は、外生地として性状の異なる3種の織物と、中綿としてはポリエステルの中綿用不織布マットを使用した。試料は中綿の重ね枚数、ステッチ線の間隔を変えて、各種のキルティング試料を製作した。これらの試料を使用して、従来法に基づき保温性、通気性、透湿性を評価し、さらにTH-PERMEABILITY TESTERを用いて熱・水分の共存条件下における熱・水分の透過特性を測定した。ASTM法(恒温法)によるキルティング布の保温率は中綿枚数、ステッチ線間隔の増加よって増大する傾向をもつが、カップ法による透湿率は保温率とは逆の傾向となった。しかしキルティング布の保温率と透湿率のいずれの場合も、構成した布の平均厚さを用いて整理できた。一方、キルティング布の通気量は、その充填率によって比較的きれいに整理できたが、常に透湿性と同傾向をもつわけではない。また保温性と異なり、透湿性と通気性は外生地の影響を強く受ける。TH-PERMEABILITY TESTERによる測定結果は、従来法による保温性、透湿性の測定結果と傾向は同様であったが、測定値にかなりのギャップを生じていた。これはこの測定法が潜熟を含めて評価するためと考えられるが、この場合も保温率、透過水分量に関しては平均厚さを用いてまとめることができた。以上の結果を利用すれば、キルティング布を製作する場合の条件設定に際して、有効な知見を得ることができるが、ここではその具体的考え方についても示した。
ウルソデオキシコール酸より優れた肝細胞保護作用を持つ胆汁酸の探索と臨床応用

ウルソデオキシコール酸(UDCA)は肝保護作用を有し、一定の有効率と少ない副作用によって、消化器系の臨床には必須の薬剤である。しかし、原発性胆汁性胆管炎(PBC)での有効率は約70%に留まり、自己免疫性肝炎(AIH)、原発性硬化性胆管炎(PSC)、非アルコール性脂肪肝炎(NASH)に対する効果は不十分である。我々はUDCAの肝保護作用を高めることが、UDCA不応性病態改善の有効なツールになると考え、UDCAより肝保護作用が強い胆汁酸の探索を目的として研究を行っている。本研究の初年度である当該年度は、様々な胆汁酸のHPLCによる疎水性比較を行い、UDCA以上の肝保護作用を有する可能性があり、しかも入手可能な胆汁酸のスクリーニングを行った。また、別の研究課題の副産物として産生されたケノデオキシコール酸(CDCA)6β-水酸化酵素のノックアウトマウスが非常に良い肝障害モデルとして使えることが明らかになり、このマウスの維持繁殖に関する研究を行った。このノックアウトマウスでは通常のマウスに多く存在するミュリコール酸(MCA)を合成できず、通常のマウスにはほとんど存在しないCDCAが大量に存在する。恐らくそのCDCAの疎水性が原因と思われる強い肝障害が出現し、離乳後の死亡率が非常に高く、うまく成長できても繁殖能力が極めて低かった。しかし、このマウスに離乳時からUDCAを投与することによって、肝障害も繁殖能力も著明に改善した。UDCA中止時期を調節することにより、このマウスに好きな時に肝障害を出現させ、モデルとして使用することができるようになった。胆汁酸のHPLCによる疎水性比較によって、ウルソデオキシコール酸(UDCA)よりも強い肝保護作用を持つ可能性のある胆汁酸誘導体をスクリーニングできた。また、当初四塩化炭素投与による慢性肝障害モデル、アセトアミノフェン投与による急性肝障害モデル、リトコール酸投与による胆汁うっ滞モデルなどを作製することを考えていたが、これらの薬物を投与しなくても肝障害を自然発症するマウスモデルを予定外に確立することができた。昨年度までにスクリーニングした、ウルソデオキシコール酸(UDCA)よりも強い肝保護作用を持つ可能性のある胆汁酸誘導体の合成を行い、赤血球溶血反応、細胞傷害反応等の基礎的な検討を行う。また、前記の肝障害を自然発症するモデルマウスにおいて、肝障害が出現するメカニズムを明らかにする。既に年度末に「次年度使用額」以上の金額を使用している。会計手続き上、年度末の請求書の処理が次年度になっており、研究費は予定通り継続的に使用している。
VHL遺伝子導入とlavendustin A刺激神経幹細胞移殖による損傷脊髄回復

〔目的〕神経幹細胞移植は中枢神経損傷に対する新しい治療法として現在様々な研究がなされている。この神経幹細胞は様々な神経系の細胞に分化する能力があるが、neuronへ分化するものは小数である。これに対し菅野らはvon Hippel-Lindau病の原因遺伝子であるVHL遺伝子を神経幹細胞に導入することにより、neuronへの分化誘導が可能であることを報告した。今回はこのVHL遺伝子導入神経幹細胞に対しneuronの軸索延伸を促進するLavendustinAを投与し分化への影響及び移植医療への応用性を調査した。〔方法〕Fisherラット由来の神経幹細胞にVHL遺伝子を導入した2群を作成した。1群にLavendustinAを40μg/ml投与した。またGFP遺伝子を導入した群を対照とした。48時間後にこの3群間でneuronのマーカーであるGAP43で染色した際の陽性率、及び軸索のマーカーであるNeurofilamentで染色した際の軸索の長さを比較した〔結果〕LavendustinA投与群と非投与群の間でGAP43陽性率は差を認めず分化への関与は認められなかった。しかし軸索の長さはLavendustinA投与群で有意に延伸を認めた。そしてその傾向は時間の経過と共に顕著となった。〔考察〕VHL遺伝子導入神経幹細胞に対して行ったLavendustinA処理により、neuronと同様にVHL遺伝子導入神経幹細胞の軸索の延伸を認めた。これにより脊髄損傷などのこれまで不可逆的とされていた病態にVHL遺伝子導入神経幹細胞とLavendustinA処理が有用である可能性が示唆された。LavendustinAの神経幹細胞への作用を知る目的で以下のin vitro実験を施行した.アデノウィルスベクターを用いてVHL遺伝子を導入したFisherラット由来の神経幹細胞と、また対象群としてGFP遺伝子導入細胞をFGF2含有無血清培地中で培養した.VHL遺伝子導入神経幹細胞をLavendustinA添加培地で培養し、NeurofilamentとGAP43に対する抗体を用い蛍光免疫染色を行い,GAP43陽性細胞の割合と軸索の伸展の程度を無添加細胞群と比較した.VHL遺伝子導入神経幹細胞群では,GAP43陽性率に対するLavendustin A刺激による影響は認めなかったが,GFP遺伝子細胞群でのGAP43陽性率は有意に低値であった.Neurofilament抗体染色標本による軸索長計測結果では、VHL導入細胞群よりLavendustin A刺激VHL遺伝子導入神経幹細胞群で有意に軸索は延伸し,その伸展傾向は時間の経過と共に頭著であった.GFP導入細胞では軸索の形成を認めず,時間が経過しても延伸を認めなかった.GAP43陽性率の結果から,神経幹細胞へのVHL遺伝子導入は、神経幹細胞のNeuronへの分化を促進する効果が期待できることを確認した.しかし,LavendustinA処理を施行し.てもGAP43陽性率の変化は認めず、LavendustinAは神経幹細胞の分化には作用せず、神経幹細胞から分化したNueronの軸索の延伸に非常に効果的であると考えられた.In vivoでは6週齢のFisherラットを使用し,脊髄損傷モデルの作成を試み、重錘落下法による脊髄不全損傷モデルを確立した.今後,LavendustinA処理をしたVHL遺伝子導入神経幹細胞の移植実験を開始し、回転ケージとBBS scaleによる運動機能の回復評価と灌流固定後に脊髄を摘出し組織学的に検討する.〔目的〕神経幹細胞移植は中枢神経損傷に対する新しい治療法として現在様々な研究がなされている。
肝疾患における小胞体ストレスならびにそれに対する肝細胞の防御反応に関する検討

非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)、ウイルス性肝炎やウイルソン病などの病態には肝細胞での小胞体ストレス(ER stress)が関与していた。飽和脂肪酸によるER stressによってオートファジーが障害されており、不飽和脂肪酸や分子シャペロンが治療となると考えられた。銅による酸化ストレスとER stressを介した細胞障害があり、これは、亜鉛、抗酸化剤や分子シャペロンにより回避された。小胞体ストレスや酸化ストレスは、様々な慢性肝疾患に重要である。培養細胞にプロテアソーム阻害剤負荷、銅負荷ならびにそれらの組み合わせを行い、小胞体ストレス、酸化ストレス、細胞内ユビキチン化蛋白の蓄積、オートファジー、細胞増殖ならびにアポプトーシスの状態を検索した。プロテアソーム阻害による小胞体ストレス誘導も銅負荷も小胞体ストレス、酸化ストレス、ユビキチン化蛋白の蓄積、オートファジーと細胞死を誘導した。それぞれ単独では細胞死を起こさない濃度でも併用にて細胞死を引き起こすことを見出した。培養細胞に遊離脂肪酸を負荷すると、飽和脂肪酸において小胞体ストレスが起こり、さらにオートファジーの後期段階であるautophagosomeとライソゾームの癒合が障害されるを見出した。これはオートファジーによる異常蛋白、障害された細胞内小器官ならびに脂肪滴の分解が飽和脂肪酸により阻害される可能性を示している。B型慢性肝炎(CHB)、C型慢性肝炎(CHC)、脂肪性肝疾患(NAFLD)の診断のために用いた肝生検組織を用いて小胞体ストレス、酸化ストレス、Mallory-Denk体形成(MDB)、オートファジーならびに細胞死の状態を免疫染色にて観察した。CHCとNAFLDでは酸化ストレスの強い部にMDBが形成され、MDBが形成された細胞では酸化ストレスが軽減された。CHBではMDBが形成されることはなかった。MDBの検出にはp62もしくはケラチン8による免疫組織化学的検討が有用であった。またCHCとNAFLDにおいて酸化ストレスに応じてオートファジーが亢進した症例では肝障害が軽かった。以上よりCHBとCHCは同じウイルス性肝炎でも病態が異なる。またMDB形成とオートファジーは酸化ストレス軽減に重要である。以上の結果からMDBの形成やオートファジーの調節はこれらの疾患の治療となる可能性が示された。脂質に関する検討では、C57BL/6Jマウスに高脂肪食を投与し、12週後の小胞体ストレスとオートファジーを評価した。高脂肪食投与マウスでは小胞体ストレスマーカーであるeIF2αのリン酸化、spliced XBP1の発現上昇とともに、オートファゴソームの指標となるLC3-IIの増加をウエスタンブロットで認めた。また、LC3の免疫染色や電子顕微鏡による評価においても高脂肪食投与マウスの肝においては有意にオートファゴソームが増加していた。培養肝細胞を用いた脂質に関連する検討では、飽和脂肪酸と不飽和脂肪酸で処理し、小胞体ストレスとオートファジーを評価したところ、飽和脂肪酸でのみ小胞体ストレスの誘導、LC3-IIの増加を認めた。飽和脂肪酸負荷で認められたオートファゴソームの増加を詳細に検討したところ、飽和脂肪酸は小胞体ストレスを介してオートファゴソームとライソゾームの融合を障害した。以上のことより小胞体ストレスを軽減することが脂肪性肝疾患の異常蛋白蓄積を防ぐと考えられた。また、ヒトの組織での検討では非アルコール性脂肪性肝疾患で酸化ストレスとMallory-Denk体(MDB)形成が関与しておりMDBが形成された肝細胞では酸化ストレスが軽減しており細胞の保護反応と考えられた。肝細胞での銅と酸化ストレスや小胞体ストレスとの関連も明らかなり、銅により酸化ストレスと小胞体ストレスを介して異常蛋白の蓄積が起こり細胞障害に関与することを明らかとした。銅キレート剤のみならず抗酸化剤や化学シャペロンがその軽減に有用であることを明らかとした。また亜鉛は従来腸管上皮の銅吸収抑制のみがその作用と考えられていたが直接肝細胞保護に働く事も明らかとした。培養細胞における検討は脂質代謝異常、銅負荷、プロテアソーム阻害ともほぼ順調に進行しており飽和脂肪酸負荷にて小胞体ストレスが生じ、小胞体ストレスがさらに脂肪化を起こしたりすること、その時にオートファジーの途中の段階が障害され異常蛋白が蓄積することなどが明らかとなった。銅負荷に関しては銅が従来言われていた酸化ストレスのみでなく、小胞体ストレスや異常蛋白の蓄積をきたして肝障害を起こすことが明らかとなった。またこれらは銅キレート剤のみならず、抗酸化剤や化学シャペロンにても軽減されることが分かった。また、亜鉛は従来腸管上皮の銅吸収抑制のみがその作用と考えられていたが直接肝細胞保護に働く事も明らかとした。ただ高脂肪食負荷マウス、DDC負荷マウスならびに高脂肪食・DDC負荷マウスでのラパマイシン等の薬物による効果で予想外の結果が出ており、現在マウスを増やしたり、解析をやり直したりして結果の解釈を考察中である。肝細胞に小胞体ストレスをきたす疾患として非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)、ウイルソン病ならびにC型肝炎ウイルス感染症を想定して検討を行った。脂肪性肝疾患に関しては培養細胞、マウスならびにヒト肝生検組織にて検討を行った。マウスに高脂肪食を負荷した検討では小胞体ストレスが惹起された(splicerd XBP1、phosho-eIF2α)。電子顕微鏡による検討でも小胞体の形態変化を認め、オートファゴゾームの増加を認めた。オートファジーのマーカーであるLC3-IIとp62の蓄積を認めた。Atg7やbeclin 1の発現に変化はなかった。

そのためオートファジーの変化の詳細を培養細胞にて検討した。肝由来の培養細胞を用いて飽和脂肪酸と不飽和脂肪酸の影響を検討した。飽和脂肪酸であるパルミチン酸で小胞体ストレスが惹起され、マウスと同様にLC3-IIとp62の蓄積を認めた。この原因を詳細に検討するとオートファゴゾームとライソゾームの癒合を小胞体ストレスが阻害していることが明らかとなった。そのため小胞体ストレスの解除がこの病態の治療となると考えられた。ヒト肝組織でもp62とLC3の発現亢進をNAFLDで確認した。ウイルソン病患者の肝組織の電子顕微鏡による観察で小胞体の形態変化を認めた。また培養細胞に硫酸銅を負荷すると酸化ストレスと小胞体ストレスが確認された。これにプロテアソーム阻害剤で軽度の小胞体ストレスを負荷するとアポトーシスが誘導された。これらの変化は銅キレート剤、亜鉛、抗酸化ストレス薬ならびに分子シャペロンで改善された。このことから銅の細胞障害により酸化ストレスと小胞体ストレスが関与しており、これらの解除が治療に有用であることが示された。さらに亜鉛による肝細胞の直接的な保護作用も示された。C型肝炎感染細胞でも同様な検討を行い、脂肪負荷と類似な変化を認めている。非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)、ウイルス性肝炎やウイルソン病などの病態には肝細胞での小胞体ストレス(ER stress)が関与していた。飽和脂肪酸によるER stressによってオートファジーが障害されており、不飽和脂肪酸や分子シャペロンが治療となると考えられた。銅による酸化ストレスとER stressを介した細胞障害があり、これは、亜鉛、抗酸化剤や分子シャペロンにより回避された。培養細胞を用いたプロテアソーム阻害、遊離脂肪酸負荷ならびに銅負荷の仕事は順調に進行していると思います。マウスの実験が予想と異なったデータが出ており、少し進行が遅れています。今後、実験方法を変更して行う必要があるかもしれません。B型慢性肝炎(CHB)、C型慢性肝炎(CHC)、脂肪性肝疾患(NAFLD)の診断のために用いた肝生検組織を用いた仕事は結果は少し地味になったが、予想と似た結果となり、ある程度満足している。脂質に関する研究では培養細胞を用いて飽和脂肪酸負荷を行い、それに小胞体ストレスを誘導するタプシガルジンやプロテアソーム阻害剤を加えた状態でトレハロース等でオートファジーを亢進させた状態での細胞でのストレス、細胞死、細胞増殖ならびにDNA損傷の状態を観察する。またマウスの高脂肪食モデルのらびに高脂肪食とDDC同時投与マウスの作成を続けており、絶食、ラパマイシンとトレハロースの状態を検討する予定である。銅に関してはウイルソン病での発癌が少ないことや急性肝不全の予後が不良であることなどから銅の細胞増殖やDNA損傷への影響を検討する。また銅のみで小胞体ストレスが生じたことからオートファジーが銅による細胞障害を軽減するか否かを検討する。さらにウイルソン病患者での小胞体の状態ならびにDNA損傷も検討する予定である。
滑膜線維芽細胞のアポトーシスにおけるCalpainの発現

calpainは細胞内中性システインプロテアーゼとして発見され様々な機能を果たすことが近年明らかとなってきている。我々のグループでは90年代前半よりcalpainのマトリクスプロテアーゼとしての働きにつき研究をすすめてきた。コラーゲン誘発マウス関節炎(CIA)モデルにcalpainが発現していること、m-calpain抗体を用いた免疫組織染色では関節炎急性期にcalpainの発現と関節炎や軟骨破壊の組織学的スコアとの間に明らかな正の相関が認められたこと。関節炎におけるcalpainは関節内の炎症細胞(主として多核白血球、滑膜表層細胞、滑膜下線維芽細胞)でもっともよく染色されたが、このほかに軟骨や滑膜の表面、関節軟骨基質、軟骨細胞窩では細胞外にcalpainが存在することを報告してきた。今回の実験では手術の際採取した培養リウマチ滑膜細胞をカルパイン阻害剤の一種であるN-acetyl-leucyl-leucyl-methionina(ALLM)で前処置すると単独では細胞死が誘導されないH202の濃度にてアポトーシスが誘導された。更にこの細胞死情報伝達機構を調べるとマップキナーゼの一種であるc-Jun N-terminal kinase(JNK)の活性化を伴うこと、その下流に細胞死誘導の転写因子として広く知られているp53およびその基質であるサイクリン依存性キナーゼ抑制因子p21の発現の増強を伴うことが示された。しかしながらこの系はカルペプチンやN-acetyl-leucl-leucyl-norleucinal(ALLN)等、他のカルパイン阻害剤では誘導されなかったことよりALLMの副次的作用であるプロテアソーム阻害作用によりリウマチ滑膜細胞の細胞死が誘導されていると考えられた。慢性関節リウマチでは滑膜の異常増殖が病状の悪化の指標となることは広く知られており、この研究によりプロテアソームの機能を調節することがRAの新たなる治療のターゲットとなる可能性が示唆された。目的)リウマチ滑膜線維芽細胞(以後SFC)を用い酸化的刺激として過酸化水素および,apoptosiカルシイウムイオノフォアとしてA23187を中心にnecrosis,necrosiss等の細胞死が誘導されるかどうかを、またその際のcalpainを中心としたシグナル伝達経路を調べた。結果)38代継代したSFCにA231871uM,H_2O_210^<-3>M,Tapsigargin 1uM,Cisplatin 10ug/ml,Fas ligand 100nMの濃度にて投与し12時間後に形態学的観察を行う。controlと比較しA23187、H_2O_2、Fas ligand 100nMでは細胞質の収縮、一部の細胞で核の凝縮らしき像を認めた。またそれぞれの刺激に対し12時間後にanti α-fodrin抗体を用いてウエスタンブロッティングを行うとA23187,H_2O_2,Tapsigargin,Fas ligandでは230kDのα-fodrinの分解が起こっていた。また同時期でのcaspase3の抗体を用いてウエスタンブロッティングではFasligandにてcaspase3の分解が生じた。H_2O_2に注目し10^<-5-3>Mの濃度にて投与し12時間後に形態学的観察を行なった顕微鏡下にて10^<-5>,10^<-4>Mではcontrolに比して変化を認めなかったものの10^<-3>M投与後において細胞質の収縮を認めた。H_2O_210^<-3>M刺激にて炎症性シグナル伝達の示標となる転写因子であNFkappaBをゲルシフトアッセイにより調べた。

刺激後10分後に発現の増強が認められた。同時期に得られた細胞質分画と濃縮したメディウムのそれぞれでm-calpainの発現をウエスタンブロッティング法にて検出した。細胞質分画より90Kバンドが検出されたが経時的な発現の変化を認めなかった。calpainは細胞内中性システインプロテアーゼとして発見され様々な機能を果たすことが近年明らかとなってきている。我々のグループでは90年代前半よりcalpainのマトリクスプロテアーゼとしての働きにつき研究をすすめてきた。コラーゲン誘発マウス関節炎(CIA)モデルにcalpainが発現していること、m-calpain抗体を用いた免疫組織染色では関節炎急性期にcalpainの発現と関節炎や軟骨破壊の組織学的スコアとの間に明らかな正の相関が認められたこと。関節炎におけるcalpainは関節内の炎症細胞(主として多核白血球、滑膜表層細胞、滑膜下線維芽細胞)でもっともよく染色されたが、このほかに軟骨や滑膜の表面、関節軟骨基質、軟骨細胞窩では細胞外にcalpainが存在することを報告してきた。今回の実験では手術の際採取した培養リウマチ滑膜細胞をカルパイン阻害剤の一種であるN-acetyl-leucyl-leucyl-methionina(ALLM)で前処置すると単独では細胞死が誘導されないH202の濃度にてアポトーシスが誘導された。更にこの細胞死情報伝達機構を調べるとマップキナーゼの一種であるc-Jun N-terminal kinase(JNK)の活性化を伴うこと、その下流に細胞死誘導の転写因子として広く知られているp53およびその基質であるサイクリン依存性キナーゼ抑制因子p21の発現の増強を伴うことが示された。しかしながらこの系はカルペプチンやN-acetyl-leucyl-leucyl-norleucinal(ALLN)等、他のカルパイン阻害剤では誘導されなかったことよりALLMの副次的作用であるプロテアソーム阻害作用によりリウマチ滑膜細胞の細胞死が誘導されていると考えられた。慢性関節リウマチでは滑膜の異常増殖が病状の悪化の指標となることは広く知られており、この研究によりプロテアソームの機能を調節することがRAの新たなる治療のターゲットとなる可能性が示唆された。
カソードルミネッセンスによる流体生産フラクチャーの簡易検出法の開発

葛根田、森、松川地熱地域の地熱貯留層中の熱水性鉱物および生産井内のスケールとして産する硬石膏と方解石について、ルミノスコープによるCL像観察、およびCL-SEMによるCLスペクトル分析を実施した。これら3地域の地熱貯留層に分布する熱水性硬石膏には無発光、茶色、薄緑色のCL像が観察される。このうち、茶色のCLはSm^<3+>とDy^<3+>、薄緑色のCLはMn^<2+>の励起にそれぞれ起因し、無発光の硬石膏はこれらの元素を微量含む程度である。森地域産硬石膏スケールはこれらの元素をまったく含まず、CL像は無発光を呈する。葛根田地域における3種類の硬石膏の3次元分布と地下温度の関係は、硬石膏のCLが結晶化する時の流体温度に強く規制されていることを示唆する。一方、森地域に産する石灰岩、熱水性鉱物、スケールという起源ないし生成時期の異なる方解石の間には若干濃度差を有するものの、いずれも赤色のCL像を発し、この発光はMn^<2+>の励起によるものである。石灰岩に見られるCLのMnスペクトル強度は熱水性方解石や方解石スケールよりも弱く、石灰岩のMn含有量が少ないことを反映している。本研究では、さらにCLによる流体生産フラクチャーの簡易検出法の有効性を検討した。葛根田地域では茶色のCLを発する硬石膏が最新の生成物であり、この種の硬石膏が逸泥付近に分布することから、流体生産フラクチャーは茶色のCL像を示す硬石膏の存在によって特定できることが明らかとなった。また、森地域ではCL像の観察だけで起源ないし生成時期の異なる方解石や硬石膏を判別するのは難しいものの、CLスペクトル強度の併用によって判別できることが明らかとなった。以上の結果から、CL法は、(1)起源や生成時期の異なる方解石や硬石膏の判別(2)流体生産フラクチャーの検出に有効であると結論付けられる。流体生産フラクチャーには現在の地熱流体から生成したと推定される石英や硬石膏などの熱水性鉱物が分布する傾向にある。このことは,複数の地熱系発達史のなかで生成した同一種の熱水性鉱物のうちから現地熱系で生成したものを特定できるならば,その熱水性鉱物はフラクチャーの指示鉱物と成り得ることを示唆する。このような観点にたち,地熱井の掘削現場におけるリアルタイムな坑井調査に適したカソードルミネッセンス(CL)簡便法を用いて,生成時期の異なる方解石と硬石膏を判別することが可能か否かを明らかにすることを目的として,森,葛根田,松川地熱地域を対象に,複数の生成時期をもつ硬石膏と方解石のCL像観察を実施した。森地域では,上磯層群の石灰岩を構成する方解石、熱水性鉱物脈の方解石,および方解石スケールの3者はいずれも赤色のCL像を示し,生成時期による差は認められない。一方,熱水性鉱物脈の硬石膏および硬石膏スケールのCLは無発光が支配的であるが,無色/青緑色のCL像が一部試料で観察される。葛根田地域では、浅部貯留層産硬石膏は無発光であるが,深部貯留層産硬石膏は青緑色ないし赤茶色を呈し,赤茶色のCL像を示す硬石膏が最新の晶出であると推定される。現地熱系および古地熱系(第三紀)で生成した硬石膏間にCL像の違いは認められない。