hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト生殖細胞系列におけるゲノムインプリンティング機構と生殖補助医療

哺乳類の発生・分化に必須な機構であるゲノムインプリンティング(GI)の確立には、配偶子形成過程におけるアレル特異的メチル化領域(DMR)のメチル化インプリントが主要な役割を果たす。本研究では生殖細胞系列のエピゲノム基盤として、メチル化インプリント領域(DMR)の系統的単離・同定を行い、ヒト生殖補助医療(ART)がゲノムインプリンティング(GI)機構に与える影響について明らかにすることを目的とした。まず、雌核発生胚由来幹細胞(PDS)および雄核発生胚由来幹細胞(ADS)を樹立し、抗メチル化シトシン抗体を用いたCHIP-on-chip法とwhole-genome Tiling arrayを組み合わせ、網羅的検索を行い、既知のDMRを含め、新規Gpr1およびZdbf2領域と300の候補領域を同定(NAR 2010)した。さらに本研究では、ヒト生殖補助医療に用いる精子のDNAを用い、メチル化インプリントについて、異常の頻度、程度、影響を受けやすい遺伝子について解析した。その結果、不妊症精子の約25%にインプリント異常があることが判明し、(Fertile Sterile 2010)、これが生殖補助医療出生児のインプリント異常症の頻度が高い原因となっていると推測した。同様に、流産例78例の17%にインプリント異常を認め、75%は顕微受精や体外授精後の症例で、また精子濃度、運動率、奇形率との相関を認めた。さらにメチル化酵素の解析を行ない、DNMT3L遺伝子多型(Exon5,10)にインプリント異常との相関が見られた。また、ヒトインプリント異常解析法を開発し、東北大学より特許出願した。近年、生殖補助医療(ART)技術の発達と伴に本来非常に稀であったゲノムインプリンティング(GI)異常を原因とする先天性疾患の発症頻度が増加しているとの報告が数多くみられる。GI機構の確立には配偶子形成過程におけるエピジェネティックな修飾としてアレル特異的メチル化領域(DMR)のDNAメチル化が主要な役割を果たす。このメチル化は配偶子の雄雌差を規定し、1次インプリントとして細胞に記憶され、維持される。またヒトGIの破綻は、先天性疾患に限らず、癌、生活習慣病などの後天性疾患に影響を及ぼす。本研究では生殖細胞系列のエピゲノム基盤として、DMRの系統的単離・同定を行い、ヒトARTがGI機構に与える影響について明らかにすることを目的とする。1)網羅的インプリント領域(DMR)の単離、同定:これまでに雌核発生胚由来幹細胞(PDS)および雄核発生胚由来幹細胞(ADS)を樹立し、抗メチル化シトシン抗体を用いたCHIP-on-chip法とwhole-genome Tiling arrayを組み合わせ、網羅的・系統的なDMRの検索を行ってきた。その結果、既知のDMRを含め、全ての染色体上におよそ300の候補領域をスクリーニングした。2)ヒト体外受精に用いる配偶子(精子)のインプリント異常に関する解析:ヒトインプリント異常解析法を開発し、東北大学より特許出願した。不妊症男性精子の約25%にインプリント異常があることを報告し、これがART出生児のGI異常症の頻度が高い原因となっていると推測した。
「映像メディアによる表現」の教育的効果に関する研究～日豪のシネリテラシーを基に～

本研究の目的は、「映像メディアによる表現」の教育的意義を明らかにすると共に、その成果を教育現場へ反映させることである。そのために、まず、オーストラリアの「シネリテラシー」という実践を調査して日本の実践へ反映させようとした。また、毎年全国公募による上映会やシンポジウム等の実践も並行して行った。これらの実践と研究により、「映像メディアによる表現」の意義について次の二つが明らかになった。一つ目は映像メディアのメディアとしての特質が子どもの学習意欲を喚起すること、二つ目は<学校・家庭・地域>を取り込んで学習環境を整備する効果があることである。また、本研究の推進により今後の日豪交流の基盤も形成された。当該年度は、シネリテラシーの教育的効果について、先行実践としての「本宮方式映画教室運動」の検証と「シネリテラシーフェスタ2013」の実践、そしてオーストラリアとの比較研究によって検証することを大きな目標として取り組んだ。まず、6月30日に福島県本宮市においてフォーラム「本宮方式映画教室運動青いえんぴつの会がもたらした奇跡」を開催した。そのシンポジウムでは昭和30年代の本運動に関わった当事者をパネラーに招聘して歴史的な事実と教育的意義について話し合いが行われた。本企画には、本宮市の住民を中心として200名を超える参加者があり地域の歴史的な教育文化を再認識することに大きく寄与したと思われる。具体的には、本企画を契機に地域の住民の意識が高まり、25年1月には自主的な組織が立ち上げられ、地域文化の継承に向けて活動を開始している。また、子どもたちの製作した映画を映画館で上映する「シネリテラシーフェスタ2013」を11月23日24日に新潟市と福島市の二カ所において開催した。講師にはオーストラリアの先行研究者ジェーン・ミルズ(ニューサウスウエルズ大学)を招聘して、講演とシンポジウムを行った。本企画には、福島、新潟、神奈川の三県から出品があり、特に福島からの出品校三校のうち二校は震災後の学校をテーマにした作品であった。その作品からは、困難な時期に現実を見つめ「映像メディアによる表現」を通して壁を乗り越えようとする姿勢を読み取ることができた。また、ジェーン・ミルズとの情報交換によって、オーストラリアとの比較分析から本企画の意義が明確にされると共に、25年度には日本とオーストラリアの作品の交換上映会へと進展する見込みとなった。最終年度は、オーストラリアの多文化主義政策の一環として実施された「シネリテラシー」が、日本においても社会の多様化という教育的課題の克服にどのような効力を持つのかについて、「映像メディアによる表現」の推奨を全国公募で「シネリテラシーフェスタ」の企画運営を通して実践的に研究を進めると共に、国際学会においてその成果を発表してきた。実践研究面では、新潟市と福島市の二箇所で上映会を開催し、それぞれの地元の中学生や高校生が保護者や学校関係者そして地域の人々と共に鑑賞し激励する状況を定例化することにより、映像メディアによる表現の教育的意義を広く発信することができた。特に、日本映画大学特任教授千葉茂樹氏を招聘しシンポジウムにて現場の実践者と協議することにより、現場へ広く普及させていくための足がかりとなった。千葉氏は、これまで並行して調査研究を進めてきた本宮方式映画教室運動の当事者でもあり、映像メディアによる表現の歴史的な検証にも大きな示唆を得た。また、シンポジウムでは福島大学の研究者とも情報交換を図り、今後の復興支援における可能性についても協議を深めることができた。さらに、11月に大阪で開催された国際学会「FilmAsia2013」において、オーストラリアのHane Millse、慶應義塾大学の塩原良和氏(他二名)と共に、オーストラリアの教育政策と日本の教育について、文化比較研究を基盤とした映像メディアに関する共同発表を行った。この機会を通して、これまで三ヶ年の研究の成果を国際的に公開することができたと同時に、日豪の交換上映会を中心とした今後の情報交流の見通しを立てることができた。まずは4月4日・5日にシドニーで開催されるシンポジウム「The New Uses of Literacy symposium」へパネラーとして招聘を受け、今後の交流と研究の深化へ向けての足がかりを得た。平成23年度は、「シネリテラシー」の意義についてオーストラリアの先行研究調査と日本における具体的実践を基に明らかにすることを目標として進めた。まず、オーストラリア訪問においてチャールズ・スチュアート大学のジェーンミルズの協力を得てネリテラシーの先行研究の経過を調査した。シネリテラシーは、ニューサウスウエルズ州の学力向上対策として2001年に開始されたPSFP(Priority Schools Funding Program)に指定され、そこで開発されたプログラムは2003年から2005年までに30以上の学校において取り組まれたこと、そして多民族国家として抱える諸問題を克服するために大きな効力を発揮してきたことを知ることができた。また今後の継続研究として、バサースト市主催の協議会に参加しシネリテラシーを通した日豪連携実践への提言を行うことにより交流具体化へ向けて行政の協力の手応えを得ることができた。

日本における実践として「シネリテラシーフェスタ2012」を全国公募し12月10日に新潟市、17日に福島市において上映会を開催した。制作した子どもたちのレッドカーペット入場や表彰などによって映画文化を体感させると同時に学校・社会・親という三者がこどもの表現を支える構図を構築した。参会者からは高い評価を得ると共に来年度継続の要望も得ることができた。福島市の上映会ではシンポジウムを開催し、本企画の意義を出品校の担当教師や行政、オーストラリア学会会員等によって協議し、本企画の教育的価値が共有化された。上記の他に、本宮方式映画教室運動の実地調査を並行して進めてきた。当時の関係者から聞き取り調査を行うことにより、この運動の歴史的・教育的価値が浮き彫りにされてきた。その研究成果について、24年の6月に本宮市において地元の関係者や有識者を招聘してシンポジウムを開催し公表する予定である。研究推進のためのシンポジウムを二回開催したが、その開催自体によって研究成果が一般にも共有され、地域を動かす力になり得たことは実質的な成果として大きな進展である。また、オーストラリアの研究者の招聘によって、先行研究と本企画の比較分析がなされたことや、日豪の作品交流への足がかりを得ることができたことも大きな成果と言える。本研究の実践的側面においては計画していた以上に進展し、本企画の目的である教育的意義を追究するためには最適な条件がそろったことになる。先行研究調査としてオーストラリアを訪問し、推進者であるジェーン・ミルズからの聞き取り調査によって、ニューサウスウエルズ州教育省の支援について多文化主義政策との関連から明らかにすることができた。また、連携協力を進めているバサーストハイスクールを訪問し担当教員と生徒から教育現場の実態を調査することができた。さらにバサースト市主催の日豪連携協議に参加し、シネリテラシーを通した日豪交流の具体的プランが固まってきたことは想定を大きく超えた進展であった。日本での「シネリテラシーフェスタ2012」の実践は、これまで新潟で三回実施してきたが、今回は福島市で第一回を開催することができた。このことは、震災後の福島における教育文化を活性化させると共に、本企画が全国へ展開する足がかりになると思われる。また、これまで参加した教師や子どもたちからの感想により、「映像メディアによる表現」の「メタ認知」をもたらす教育学的な意義や映画文化の観点から子どもの表現を支えるという社会学的な価値なども浮き彫りにされてきた。そして、「本宮方式映画教室運動」の研究では、当事者からの聞き取り調査を行うことによって当時の社会背景の影響を受けていた教育事情に果敢に立ち向かっていた母親達の姿を知ることができた。この歴史的事実には現代の日本の教育が回復すべき教育学的な意義が包含されており、今後全国へ発信する価値が認められる。
損傷脳におけるＰＥＤＦの神経保護作用、及び神経再生促進作用の解析

本研究では、種々の培養神経細胞に対して抗アポトーシス作用、グルタミン酸毒性軽減作用、酸化的ストレス軽減作用などが報告されているPEDF(色素上皮由来因子)に関して、これまで検討が行われてこなかったin vivoでの神経保護作用をPEDF組換えアデノウイルスを用いたPEDF脳内過剰発現系を用いて検討を行うとともに、グリア系細胞に対する効果をin vitro, in vivoの両面から検討を行った。色素上皮由来因子(pigment epithelium-derived factor; PEDF)は、様々なタイプのニューロンに対して神経保護作用を示すとともに、血管新生阻害作用を併せ持つことが明らかとされ、創薬標的としても注目を集めている。今年度は、治療薬開発の際の標的タンパク質としてのPEDFの可能性を検討するため、抗PEDFポリクローナル抗体を用いたELISA法によるPEDF高感度検出系の確立を行うとともに、PEDF産生能を制御しうる和漢薬の探索を行った。抗PEDF抗体には、ヒトPEDF遺伝子の全長よりN末端部分を1部欠損させたPEDF蛋白を(Asp44-Pro416)をウサギに免疫することにより調整した。得られた抗血清よりPEDF特異抗体をアフィニティーカラムにより精製し、各種実験に用いた。その結果、今回作成したPEDF特異抗体はげっ歯類のPEDFとも交差性があり、ウエスタンブロット、免疫組織学的解析などに応用可能であった。またPEDF産生を促進する薬物を探索するためにdirect ELISAの構築を行い、PEDF産生促進作用を有する和漢薬の探索を行った。3日間無血清培地で培養し分化させたhTERT-RPE1細胞に和漢薬熱水抽出エキス、漢方薬エキスを培地に添加し、24時間後の培養上清中のPEDF量をDirect ELISA法により測定した。その結果、数種の生薬エキス(黄ゴン、酸棗仁、芍薬、大黄など)にPEDF産生促進作用が認められた。色素上皮由来因子(Pigment Epithelium-derived Factor;PEDF)は、セリンプロテアーゼインヒビターファミリーに属する約50kDの分泌性糖蛋白質であり、脳を含む多くの組織で発現していることが明らかとされている。神経栄養因子様作用(Fig. 1)や血管新生抑制作用などを有することがこれまでに報告されており、脳虚血、筋萎縮症側索硬化症(ALS)、パーキンソン病などの神経変性疾患や、加齢性黄斑変性、糖尿病性失明などの血管新生を伴う眼科系疾患に対する臨床応用が期待されている。今年度は、グリア系細胞に対するPEDFの作用を解析する目的で、培養オリゴデンドロサイトやアストロサイトを用いて検討を行った。PEDFを作用させたオリゴデンドロサイトではグルタミン酸毒性による細胞死を抑制すること、アストロサイトのグルタミン酸取り込みを促進することなどを明らかとしたた。また作成したPEDFを用いて脳虚血負荷後の動物の脳神経系再生過程におけるPEDFの効果を検討したが、結果にバラつきがありPEDFの効果を証明するには至らなかった。こんごさらに例数を増やすなどして効果の検証に努めたい。PEDFのin vivoでの神経保護作用を、組み換えアデノウイルスを用いた脳内PEDF過剰発現系を用いて解析を行い、遺伝子治療や創薬の標的蛋白としてのPEDFの可能性について評価を行なっている。。現在までに、Ad.PEDFの前投与によりPEDFを過剰発現させた動物において、キノリン酸投与やMCAO(中大脳動脈閉塞)による神経細胞死が強く抑制されることを既に見いだしている。しかしながら、PEDFの臨床応用を考えた場合、その投与時期は、虚血が生じた後となることから、虚血負荷後にPEDF組換えアデノウイルス、あるいはリコンビナントPEDFを作用させた場合の有効性についての検討を行ない、Therapeutic time windowを明らかとすることを本研究課題の目的としている。平成23年度は、shRNAによるPEDFノックダウン系の構築を行い、現時点までにアデノウイルスベクターによるPEDFshRNAの導入により培養アストロサイトのPEDF産生をほぼ完全に消失させることを確認している。またPEDF産生促進作用を有する天然物由来化合物を見出すことを目的に検討を行い、漢方薬などに用いられるオンジという生薬に活性を見出した。2012年度より研究代表者の矢部が北里大学北里生命科学研究所から摂南大学薬学部に移動した。そのため研究室のセットアップ、学生への実験技術の指導などに時間と労力を割かれてしまい、課題の遂行に影響が出てしまった。また移動先の実験動物施設ではこれまでウイルスベクターの接種実験の前例がないため、今年度はウイルスベクターに関する実験を実施しなかった。これまでPEDFのin vivoでの神経保護作用の検討に頸動脈からのフィラメント挿入による中大動脈閉塞(MCAO)による虚血ー再灌流モデルを用いて検討を行なってきた。MCAOで得られる虚血像は臨床で見られる脳梗塞での病態と比較的類似しており、脳梗塞に対する治療法の検討には非常に有用なモデルとされている。しかしながらその実験手技は比較的難易度の高いものであり、安定した結果が得られる手技の習得にかかる時間は実験者によりかなり偏りが見られる。

23年度よりMCAOの実験担当者が替わったことから、現在、手技の習得を行なっているところであるが、手技習得の進行状況が少々遅れているのが実情である。それ以外の項目に関しては、おおむね予定通り進行している。基本的には、平成24年度の実験計画の延長線上の研究を行うが、PEDFの神経新生に対する作用を明らかとすることを目的に、正常動物や脳虚血負荷動物などの海馬歯状回や側脳室にリコンビナントPEDFを投与し、神経系前駆細胞の増殖、分化に変化があるかどうかをBrdU標識法、及び蛍光免疫多重染色法を用いて解析をおこなう。また培養細胞を用いたin vitroでのスクリーニングにより見いだされたPEDF発現増強作用有する化合物やPEDF様の作用を有する化合物に関してin vivoでの解析を行い、神経変性疾患などに対する新規治療薬としての可能性を追求する。基本的には、平成23年度の実験計画の延長線上の研究を行うが、るPEDFの神経新生に対する作用を明らかとすることを目的に、正常動物や脳虚血負荷動物などの海馬歯状回や側脳室にPEDFを投与することによりPEDFを過剰発現させ、神経系前駆細胞の増殖、分化に変化があるかどうかをBrdU標識法、及び蛍光免疫多重染色法を用いて解析をおこなう。基本的に23年度の使用項目と同様である。以下に項目を記す。実験動物(SDラット、妊娠確定ラット、哺乳ラット、ddYマウスなど)各種抗体(細胞内情報伝達関連抗体、アポトーシス関連抗体、細胞マーカー蛋白関連抗体など、その他現有効帯の補充)培養関連試薬(培地、ウシ胎児血清、培地添加物など)その他の試薬(RT-PCR関連,免疫染色関連試薬、in situ hybridaizati on関連試薬、各種制限酵素補充、トランスフェクション関連試薬、レポータージーンアッセイ関連試薬、その他現有試薬の補充)各種消耗品類(ディスポーサブル・ピペット、培養プレート、培養フラスコ、チャンバースライド、スライドガラスなど)基本的に23年度の使用項目と同様である。以下に項目を記す。実験動物(SDラット、妊娠確定ラット、哺乳ラット、ddYマウスなど)各種抗体(細胞内情報伝達関連抗体、アポトーシス関連抗体、細胞マーカー蛋白関連抗体など、その他現有効帯の補充)培養関連試薬(培地、ウシ胎児血清、培地添加物など)その他の試薬(RT-PCR関連,免疫染色関連試薬、in situ hybridaization関連試薬、各種制限酵素補充、トランスフェクション関連試薬、レポータージーンアッセイ関連試薬、その他現有試薬の補充)各種消耗品類(ディスポーサブル・ピペット、培養プレート、培養フラスコ、チャンバースライド、スライドガラスなど)
乱流要素渦と組織構造の形成と発達

本計画研究は安定性理論に立脚して組織構造や要素渦の形成・発達・崩壊機構を調べ,乱流の要素的操作法を開拓することを目的とした.壁乱流の組織構造と要素渦の発生に関する研究では低速ストリークの発生・成長と不安定性に注目し実験的に調べた.まず乱流境界層の壁近くを壁面吸込で層流化した場合に強い残留乱流変動が低速ストリークの代数的増幅を促す様子を観察し,そのストリークの不安定で要素縦渦が生まれる過程を捉えた.次に単一および周期的配列の低速ストリークを層流境界層中に実現してストリーク不安定性を調べ,その不安定性が進行して壁乱流構造が発達する過程を明らかにした.要素渦成長の非線形過程に関する研究では回転系一様剪断乱流の秩序渦構造の発生過程を数値シミュレーションで調べ,平均絶対渦度がゼロの状態で,長時間持続する管状渦構造の生成・維持機構を見いだした.すなわち,背景一様渦度場と同じ方向の渦度を持つ渦層が比較的強い渦塊から発達し,すぐ巻き上がって管状構造へ発達する.この管状渦構造はそれ自身が誘起する圧力勾配とコリオリカの複合作用で強化されることにより長時間維持される.乱流要素渦と組織渦の要素的操作に関する研究では,まず縦渦による超音速混合促に焦点を合わせ,線形安定理論と数値シミュレーションにより中空縦渦の不安定特性と混合能を調べ,次に超音速縦渦混合場にキャビティ振動による小スケール渦を注入する実験を行い,超音速混合促進に有利な乱流場を実現して,超音速縦渦の渦レイノルズ数が約10^4に達すると,コルモゴロフの-5/3乗則スペクトル分布に従う変動が現れることを示した,渦度操作に関する研究では柔毛の空力効果を表すモデルを考案し,柔毛壁層流境界層や円柱周りの流れを境界層理論や数値シミュレーションで調べ,前者についてはTS波動に着目した安定性理論による計算や実験も行い,モデルの妥当性を確かめた.各研究分担者の研究成果を交付申請書に記載した課題順にまとめる.1壁乱流の組織渦と要素渦の発生に関する実験的研究(浅井雅人担当)壁乱流の低速ストリークを実験的に調べ,ストリークが2つの不安定モードをもつこと,すなわち,ヘアピン状渦に成長する対称モードと蛇行縦渦を生成する反対称モードがあることを明らかした.そして,低速ストリークの挙動をPIVで計測する研究を開始した.2壁乱流要素渦成長の非線形過程に関する数値実験(柳瀬眞一郎担当)要素渦構造を抽出するための数値計算コードの作成し,平板間乱流をスペクトル法で解き,定常解と進行波解を求め,さらに.平板間乱流の渦構造と比較するために,一様シアー下にある回転流体中の秩序構造を数値的に求めた.3乱流要素渦と組織渦の要素的操作に関する実験的研究(西岡通男担当)運動量厚さレイノルズ数約150の境界層に縦渦(循環値/動粘性=70程度)を導入した実験で壁乱流発生の初期過程を明らかにした.超音速混合・燃焼の促進制御の問題では,A)圧縮性縦渦の線形不安定性に着目して縦渦構造を操作する方法,B)縦渦場の混合・燃焼過程に特有のバロクリニックトルクを利用して乱流要素渦を迅速につくる方法,C)縦渦とキャビテイ流の干渉による混合促進などの研究を進め,実験に必要な超音速風洞を設計・製作した.柔毛による渦度操作に関する研究では,柔毛繊維の空力効果を表現するモデルを考案して運動方程式を導出し,柔毛壁層流境界層のTS波について実験や安定性理論による計算を行い,モデルの妥当性を確かめた.4乱流要素渦と組織渦の要素的操作に関する実験的解明(村上洋一担当)柔毛繊維が貼付された円柱周りの流れの数値シミュレーションを行い,時間平均流の特性を調べて柔毛の空力効果を明らかにした.本計画研究は安定性理論に立脚して組織構造や要素渦の形成・発達・崩壊機構を調べ,乱流の要素的操作法を開拓することを目的とした.壁乱流の組織構造と要素渦の発生に関する研究では低速ストリークの発生・成長と不安定性に注目し実験的に調べた.まず乱流境界層の壁近くを壁面吸込で層流化した場合に強い残留乱流変動が低速ストリークの代数的増幅を促す様子を観察し,そのストリークの不安定で要素縦渦が生まれる過程を捉えた.次に単一および周期的配列の低速ストリークを層流境界層中に実現してストリーク不安定性を調べ,その不安定性が進行して壁乱流構造が発達する過程を明らかにした.要素渦成長の非線形過程に関する研究では回転系一様剪断乱流の秩序渦構造の発生過程を数値シミュレーションで調べ,平均絶対渦度がゼロの状態で,長時間持続する管状渦構造の生成・維持機構を見いだした.すなわち,背景一様渦度場と同じ方向の渦度を持つ渦層が比較的強い渦塊から発達し,すぐ巻き上がって管状構造へ発達する.

この管状渦構造はそれ自身が誘起する圧力勾配とコリオリカの複合作用で強化されることにより長時間維持される.乱流要素渦と組織渦の要素的操作に関する研究では,まず縦渦による超音速混合促に焦点を合わせ,線形安定理論と数値シミュレーションにより中空縦渦の不安定特性と混合能を調べ,次に超音速縦渦混合場にキャビティ振動による小スケール渦を注入する実験を行い,超音速混合促進に有利な乱流場を実現して,超音速縦渦の渦レイノルズ数が約10^4に達すると,コルモゴロフの-5/3乗則スペクトル分布に従う変動が現れることを示した,渦度操作に関する研究では柔毛の空力効果を表すモデルを考案し,柔毛壁層流境界層や円柱周りの流れを境界層理論や数値シミュレーションで調べ,前者についてはTS波動に着目した安定性理論による計算や実験も行い,モデルの妥当性を確かめた.各研究分担者の研究成果を交付申請書に記載した課題順にまとめる.1壁乱流の組織構造と要素渦の発生に関する実験的研究(浅井雅人担当)スパン方向に周期的に並ぶ低速ストリークについて,ストリーク間隔が不安定モードの成長に及ぼす影響を調べ.ストリークの蛇行に導くsinuous不安定性においてストリーク間隔の2倍の波長をもつsubharmonicモードが卓越することを示した.次に,乱流境界層に局所吸い込みを行って一旦層流化した壁近傍に注目し,残留乱流変動による励起で低速ストリークが現れ,代数的増幅を経て,ストリーク不安定で崩壊する現象を捉えた.2壁乱流要素渦成長の非線形過程に関する数値実験(柳瀬眞一郎担当)一様シアー下にある回転液体中(絶対渦度零状態)で,流れ方向に引き延ばされた渦管が発達する現象に焦点を合わせ,この構造を成長させる物理機構として,乱流場の揺らぎに起因する局所的なシアー・コリオリ不安定が生じる初期過程と構造を維持する働きをもつ一連の非線形過程を明らかにした.3乱流要素渦と組織渦の要素的操作に関する実験的研究(西岡通男担当)縦渦による乱流遷移の実験では,周期的な流れが対数法則分布に導くことを示した.超音速混合促進制御の研究では,縦渦列間の干渉やそれによる縦渦列の乱流化について実験的に調べ,縦渦の誘起場による強い移流(対流)輸送が起き,対流速度が主流の20%に達することを示した.超音速混合促進にキャビティ振動を応用することを目指していて,実験と数値計算から振動機構を明らかにし,超音速画像流速計による計測にも挑戦した.4乱流要素渦と組織渦の要素的操作に関する実験的研究(村上洋一担当)柔毛の抵抗体モデルに基づき柔毛が貼付された円柱周りの流れの数値シミュレーションを行い,柔毛の空力騒音低減効果に直結する流れ場(変動場)を明らかにした.各研究分担者の研究成果を交付申請書に記載した課題順にまとめる.1壁乱流の組織構造と要素渦の発生に関する実験的研究(浅井雅人担当)層流境界層と乱流境界層を局所吸込みで層流化した境界層にスパン方向に周期的に並ぶ低速ストリークを導入して変動の成長を実験で調べた結果,前者の場合,ストリークの蛇行に導くSINUOUSモードとヘアピン渦をつくるVARICOSEモードのいずれについても,波長がストリーク間隔に等しい基本波数モードに比べ2倍波長の分調波数モードの増幅が大きいが,後者の場合は強い残留乱流変動の過渡的増幅に支配され,基本波数SINUOUSモードの出現率が最大となることが示された.2壁乱流要素渦成長の非線形過程に関する数値実験(柳瀬眞一郎担当)数値シミュレーションをもとに回転剪断乱流中の秩序渦構造の発生機構を明らかにした.局所的にケルビン・ヘルムホルツ不安定が起き,ロールアップで渦管が生まれ,一様剪断流の影響で流れ方向にそろった渦構造できる.この過程でコリオリ力が本質的な役割を果たし,平均絶対渦度がゼロの場では,渦管構造が安定に持続される.3.乱流要素渦と組織渦の要素的操作に関する実験的研究(西岡通男担当)縦渦による超音速混合促進に関する研究では,まず,中空縦渦の安定特性を線形安定理論から明らかした.次に,超音速キャビティ振動の機構を調べ,自励振動の周波数予測式を導出し,実験で妥当性を検証した.これらの成果に基づき,キャビティ振動による小スケール渦を超音速縦渦混合場に注入する実験を行い,超音速混合促進に有利な流れを得た.
ドセタキセル溶出性ビーズによる肝動脈化学塞栓療法の基礎的研究

ドセタキセルは乳癌や非小細胞肺癌、胃癌などの悪性腫瘍の治療におけるキードラッグの一つであるが、浮腫、骨髄抑制、悪心嘔吐といった消化器障害、脱毛などの副作用が強い。薬剤溶出性ビーズを用いた肝動注化学塞栓療法は薬剤を腫瘍局所内で持続的に放出させることができるため、局所での高濃度および長時間の薬剤暴露を可能とし、一方で全身血中濃度は上昇しにくいことが予測され、副作用の低減が期待できる。本研究によりドセタキセル溶出性ビーズの薬剤動態や肝動注化学塞栓療法における安全性が明らかとなり、実際の臨床に応用する上で重要なデータとなることが期待される。本年度はin vitroにおけるドセタキセルの血管塞栓用ビーズ(SAP microsphere)への吸着含浸および放出能の検証を行う予定であったが、液体クロマトグラフィー質量分析法などを用いた薬剤料測定法の確立や、基本的に脂溶性であるドセタキセルを水に溶かす方法の検証といった予備実験を主に行った。現在は予備実験の結果を解析し、本実験に最適な条件、測定法について検討中である。予備実験については申請書への記載は行っていなかったが、ドセタキセルの吸着・放出量が微小である可能性があり、予備実験を行うことで、より高精度で信頼のおけるデータを得ることができるものと考えている。本年度は、申請時には1年次に施行する予定であったin vitroにおけるドセタキセルの血管塞栓用ビーズへの吸着含浸および放出能の検証を行う予定としている。申請時にはドセタキセルを溶解する分散媒を数種類作成し、血管塞栓用ビーズの膨張率や吸着含浸量、放出能を計測する予定であったが、予備実験の結果を基に分散媒の種類を限定することで資金の節約や実験期間の短縮を図っていく予定である。また、2年次以降の実験として申請しているVX2担癌ウサギを用いた動物実験においては自施設の他実験で使用中であるため、比較的速やかに実験を開始できるものと考えており、対照群の実験についてはin vitroの実験と平行して施行することで、実験期間の短縮を図る予定である。平成27年度はin vitroにおいて、ヘパスフィアのドセタキセル含浸・吸着能の計測を行った。ドセタキセルが粘性の高い溶液であるため、測定に苦慮したが、計測を行うことが出来た。結果については、論文に投稿予定であるが、再現性の確認が必要なため、本年度に追加実験が必要となる。このほか、最終年度は、作成したドセタキセル含浸ヘパスフィアをウサギ肝腫瘍モデルの肝動脈から動注し、その安全性や有効性を検討する予定である。平成27年度にも若干匹のウサギモデルを作成したが、手技中に動物が衰弱死してしまい、現時点では結果が得られていない。ウサギ肝腫瘍モデルが実験中に衰弱死してしまったため、若干の実験の遅れが生じている。転移性肝腫瘍の新たな治療法として、ドセタキセルを含浸させた薬剤溶出性ビーズによる肝動脈化学塞栓療法を確立することを目的として、その基礎研究を計画した。ドセタキセルは抗腫瘍効果の高い薬剤であるが、その効果は時間依存性であり、また全身投与による副作用も大きいことから、全身投与と比較して局所に高容量・持続的な投与を可能とする薬剤溶出性ビーズを用いるメリットは非常に大きい。本研究ではドセタキセル含浸ビーズの基礎的性質(含浸能など)の解析を行い、さらに動物実験を行うことで、生体内での薬物動態や安全性などを検討する。同治療の臨床応用に向けて重要な研究結果が得られるものと考えている。実際の研究としては、平成2627年度はヘパスフィアのドセタキセル含浸・放出能の計測を行った。結果はヘパスフィア(50-100μm)1Vに対し、20mgのドセタキセルを含浸させたところ、平均7.24mgのドセタキセルが含浸でき、そのうち約1/2の量が6時間以内に放出された。平成28年度は、前年度に作成したドセタキセル含浸ヘパスフィアをウサギVX2肝腫瘍モデルの肝動脈から動注を行う実験を施行した。腫瘍および肝実質のドセタキセルの薬剤濃度や細胞障害について病理学的に検討すると共に、経時的にウサギ全血の薬剤濃度も測定を行った。結果については現在解析中であり、論文への投稿を予定している。研究実績の概要に記載したごとく、予備実験の必要性が生じたため、申請した本実験がまだ開始できていない。計画通りに実験を進めていく。放射線医学研究実績の概要に記載したごとく、予備実験の結果を基に本実験の実験内容を一部省略することと、平行して動物実験も開始することで実験期間を短縮し、研究を推進していく。当初計画よりも実験が遅れており、当該年度の研究ででもっとも費用のかかる動物実験が予定よりも少なくなったため。

前年度の支出は主に予備実験によるものであり、当初計画していた本実験にかかる費用よりは少なくなったため。前年度に未達成である内容も含めて動物実験を行う。予備実験の結果をもとに、当初計画していた本実験の一部を省略することで、残る資金で可能な限り研究を推進したいと考えている。
レプトスピラの分類および免疫化学的研究

1.種々の血清型のレプトスピラに対する単クローン抗体を作りその特異性を調べたところ,完全ではないにしても,かなり血清型特異的なものもあり,適当にえらぶことにより,レプトスピラの分類に役立つことが判明した.これに関連して,研究代表者が副委員長をつとめる国際レプトスピラ分類委員会では,国際ワークショップを近く開催してこれを検討する予定である.2.単クローン抗体を用いる際,主要血清反応である顕微鏡凝集反応とELISの間で成績が一致しないことがあり,その原因の一つとして,接合親和性の強弱が関与することが見出され,単クローン抗体を分類に用いるに当たって留意するべきことと考えられる.3.血清型特異抗原決定基解明の出発材料として,これまで抗原性に関して調べられたことのなかった糖脂質に注目し, canicola TM抗原に対する単クローン抗体CT抗体CT3が認識する抗原決定基を含む糖脂質抗原を分離精製し,ガスクロマト,ガスマス分析の結果, 2つの末同定単糖が検出された.このうち,末同定単糖IIは,されまで我々により分離された抗原活性オリゴ糖の主要構成糖であることも明らかとなり,これがcanicolaの型特異抗原決定基関与する可能性が示された.またこの末同定単糖は新しい糖と考えられる.4.レプトスピラの主要血清型について構成酵素を比較し,それが現行の分類とかなり関連することを認めた.5.canicolaに対する単クローン抗体CT3存在のもとで発育可能な変異株を分離することを試み,それが新強い血清型に分類されること,変異株の選択と単クローン抗体存在下では, one-stepで短時日で可能なことを示した.6.日本で世界で最初に分離されたレプトスピラ株(Ictero No, I)がtyep strainと認められるように,同株に関するデーターをまとめた.1.種々の血清型のレプトスピラに対する単クローン抗体を作りその特異性を調べたところ,完全ではないにしても,かなり血清型特異的なものもあり,適当にえらぶことにより,レプトスピラの分類に役立つことが判明した.これに関連して,研究代表者が副委員長をつとめる国際レプトスピラ分類委員会では,国際ワークショップを近く開催してこれを検討する予定である.2.単クローン抗体を用いる際,主要血清反応である顕微鏡凝集反応とELISの間で成績が一致しないことがあり,その原因の一つとして,接合親和性の強弱が関与することが見出され,単クローン抗体を分類に用いるに当たって留意するべきことと考えられる.3.血清型特異抗原決定基解明の出発材料として,これまで抗原性に関して調べられたことのなかった糖脂質に注目し, canicola TM抗原に対する単クローン抗体CT抗体CT3が認識する抗原決定基を含む糖脂質抗原を分離精製し,ガスクロマト,ガスマス分析の結果, 2つの末同定単糖が検出された.このうち,末同定単糖IIは,されまで我々により分離された抗原活性オリゴ糖の主要構成糖であることも明らかとなり,これがcanicolaの型特異抗原決定基関与する可能性が示された.またこの末同定単糖は新しい糖と考えられる.4.レプトスピラの主要血清型について構成酵素を比較し,それが現行の分類とかなり関連することを認めた.5.canicolaに対する単クローン抗体CT3存在のもとで発育可能な変異株を分離することを試み,それが新強い血清型に分類されること,変異株の選択と単クローン抗体存在下では, one-stepで短時日で可能なことを示した.6.日本で世界で最初に分離されたレプトスピラ株(Ictero No, I)がtyep strainと認められるように,同株に関するデーターをまとめた.1.血清群カニコーラに対する因子血清をイタリーのCacciapuoti教授と共同に作成した。2.カニコーラに対する単クローン性抗体はすでに作成したが、更にそれ以外のカニコーラ血清群の血清型に対する単クローン性抗体も目下作成をすすめていめ。3.因子血清と単クローン性抗体の比較では、カニコーラの型特異抗原に対する単クローン性抗体CT3と、カニコーラに特異的とよれる因子血清Ca-3を比較した。カニコーラ血清群に属する11血清型に対する反応性では両者は略似ていた。しかし単クローン性抗体で選択された変異株を凝集した点でCa-3はCT3と異っていた。この点を含め、さらに検討中である。4.血清型カニコーラに対する単クローン性抗体CT-3存在のもとで発育可能な変異株CV(CT3)-1を分離した。その抗原性を凝集素吸収試験等で調べた結果、変異株はbroomiと極めて近いことが判った。変異頻度は【10^(-4)】で、免疫血清や因子血清を選択に用いた場合に比べ単クローン性抗体による変異株の選択は短期間で行われ、しかもただ1回の選択で効率よく選択された。5.血清型カニコーラの型特異抗原を抽出し、これを蟻酸加水分解し、ゲル瀘過をくりかえすことにより、抗原活性多糖画分からオリゴ糖を分離した。この際、単クローン性抗体を用いて活性画分をモニターした。最終的に分子量1500程度のオリゴ糖を分離し、糖組成をしらべ、この中の未同定(新しい?)糖の存在と、その抗原決定基への関与が明らかにされた。6.レプトスピラの主要血清型について、約70種の構成酵素をしらべた。その結果、種、および属の区別に有用な酵素が明らかにされた。しかし血清型の区別は酵素では不可能と考えられる。

1)レプトスピラHebdomadis血清群の各血清型に対する単クローン抗体を作製し、その反応性を調べた。その結果、いくつもの血清型と反応するような広い反応性をもつものと、限られた血清型とのみ反応するような狭い反応性をもつものが認められた。しかし、狭い反応性をもつものといえども、単一の血清型とのみ反応する血清型特異的な単クローン抗体は無かった。このことから、レプトスピラの特徴として、その血清型を規定する抗原は複数の抗原決定基からなり、その組み合わせによって血清型特異性が規定されると考えられるに至った。目下、スキャッチャード・プロット法により抗原決定基の数を理論的に求め、量的に比較検討している。2)DNAの制限酵素切断パターンによりレプトスピラ株の比較を行っているが、まず単クローン抗体による選択で得られた抗原変異株は、その抗原性が親株と異るものも同じものも切断パターンは同じであった。そして、抗原的に近縁となった血清型の株とは切断パターンが異なっていることが判明した。Hebdomadis及びCanicola血清群の各血清型の間の比較も行っているが、これまでの結果をまとめると、同じ切断パターンを示しても血清学的に異る場合があることから、切断パターンをただちに分類の規準とすることには慎重であるべきで、むしろ疫学的に利用価値が大きいと思われる。CanicolaTM抗原に対する単クローン抗体CT3が認識する抗原決定基を含む分子量約1,000の抗原活性オリゴ糖を分離した。ガスクロマトグラフィーにより、このオリゴ糖の構成糖として、ラムノースおよび未同定単糖が主に検出され、そのモル比はおよそ3:1であった。また、劾磁器共鳴スペクトル分析からこのオリゴ糖には、5個のO-あるいはN-アセチル基、2個のメチル基および1個のO-メチル基が存在することが明らかとなった。
表皮角化細胞による血小板由来増殖因子産生機構の研究

表皮角化細胞は,通常は無血清増殖培地で培養されるが,この培養系では増殖した表皮角化細胞の抽出蛋白・培養上清ともウエスタンブロットではPDGFは検出されず,培地にEGFないしbasicFGFを添加したときに培養上清のみからPDGFのバンドが検出された。さらに抗PGDF-AA抗体,抗PDGF-BB抗体を用いて,検出されるPDGFのアイソフォームを検討したところ,表皮角化細胞は主としてPGDF-AAを産生していることが明らかとなった。次に,モルモットの皮膚欠損モデルを用いて,免疫組織化学とin situ hybridizationによって,表皮角化細胞のPDGFの発現とそのアイソフォームを検討したところ,創辺縁部と再生表皮に限局してPDGF-AAの蛋白およびmRNAが発現しており,前述の培養系と一致する結果が得られた。以上の結果から,表皮角化細胞は通常PDGFを発現していないが,サイトカインなどの刺激により増殖期に入ると主としてPDGF-AAを発現するようになり,産生されたPDGF-AAは速やかに分泌されるものと考えられた。創傷治癒過程においては,サイトカインなどにより刺激された表皮角化細胞がPDGFを産生し,分泌されたPDGFが創傷治癒を促進することが示唆された。このような,PDGFを介したサイトカインネットワークが皮膚において,様々な生理的意義を有するものと推測される。これまでの研究の結果,通常の増殖培地では表皮角化細胞の抽出蛋白・培養上清ともPDGFは検出されず,EGF,basicFGFを添加したとき,培養上清のみからウエスタンブロットでPDGFのバンドが検出された。さらに抗PDGF-AA抗体,抗PDGF-BB抗体を用いて検討したところ,表皮角化細胞が主として産生するのはPDGF-AAが明らかとなった。同様にモルモットの皮膚欠損モデルで免疫組織化学とin situ hybridizationにより表皮角化細胞の発現するPDGFの型を検討したところ,創辺縁部と再生表皮にPDGF-AAの蛋白およびmRNAが発現しており,培養系と一致する結果が得られた。すなわち表皮角化細胞は通常PDGFを発現していないが,サイトカインなどの刺激により増殖期に入ると主としてPDGF-AAを産生するようになり,産生されたPDGF-AAは速やかに分泌されるものと推測された。PDGFを介した皮膚のサイトカインネットワークの,特に創傷治癒過程における作用機序の解明のため,今後さらに(1)表皮角化細胞にPDGFを産生させるサイトカインやそのほかの因子,(2)分泌されたPDGFの近接組織に対する作用について検討する予定である。
腫瘍血管新生の機序解明と新規治療開発を目的とした血管芽腫原因遺伝子の探索

本研究は、著明な腫瘍血管新生を認める血管芽腫のゲノム解析を通して、その血管新生に関わる原因遺伝子同定などを目標とした。我々が収集した全32例の血管芽腫のVHL遺伝子を中心とした遺伝子変異、メチル化解析の結果、VHL病患者、孤発性患者のいずれの検体においても、VHLの2-hitによる不活化が多い事が判明した。但し、孤発例では、メチル化によるVHL不活化や染色体6番、10番の欠失が多いことが特徴的であった。VHL病の好発腫瘍である腎癌においては、VHLだけでなく、PBRM1やBAP1などの遺伝子異常が多い事が知られているが、我々のHB症例には、これらの遺伝子変異は認められなかった。これまで収集した、全32例の血管芽腫の臨床検体に加えて、東京大学脳神経外科のVHL病外来患者を中心とした、新たな血管芽腫摘出術施行症例において、さらなる腫瘍検体(凍結検体など)の収集を、正常血液収集とともに行った。腫瘍検体については、遺伝子解析のためのDNA抽出を行い、また、VHL病患者においては、遺伝カウンセリングの施行をもとに、血液DNAのVHL関連の遺伝子異常の有無の検査を施行した。これまでの検討で、特に、弧発性のVHL病患者においては、VHL遺伝子の変異や欠損の同定される割合が低かった。VHL遺伝子異常のない症例をさらに絞り込むため、VHL遺伝子プロモーターの有無を、methylation-specific PCR法及び、bisulfite sequence法を用いることで確認したところ、7例程度でメチル化が疑われたが、このメチル化とVHL発現の関連を明らかにするため、real-time PCRによるVHL遺伝子の発現との相関の観察を試みた。しかし、プロモーターメチル化と遺伝子発現との有意な相関は認められなかった。そこで、免疫染色によりVHL蛋白の発現を確認したが、メチル化の有無に関わらずVHL蛋白の発現はいずれの症例においても低いことが確認された。しかし、bisulfite sequence法で確認したVHLプロモーターのメチル化は、Infinium beadchip解析の結果とほぼ相関していることが明らかとなった。昨年度に引き続き、これまで収集した全32例の血管芽腫(以下、HBと略)の臨床検体に加えて、東京大学脳神経外科のVHL病外来患者や、新たなHB摘出術施行症例に対して、さらなる正常血液検体や、腫瘍検体(凍結検体など)の収集を行った。腫瘍検体については、遺伝子解析のためのDNA抽出を行い、また、VHL病が疑われる患者においては、遺伝カウンセリングを施行後、本人の承諾を得た後、正常血液からDNA抽出を行い、VHL病の遺伝子診断を、主に、direct sequencing法とMLPA法を用いて行った。昨年度までの我々の検討では、特に、VHL病でない孤発性の患者のHB腫瘍検体では、VHL遺伝子の変異や欠損の同定される割合が低かった。その為、VHL遺伝子異常以外の機序が、孤発性HBの腫瘍化には必要と考えられた。しかし、2014年12月、アメリカのMGHの研究グループによって、次世代シークエンサを用いた解析で、孤発性HBであっても、VHL遺伝子異常が多い事が報告された。そこで、当科の腫瘍検体に対しても、Ion Torentを用いたtarget sequenceを行ったところ、孤発性HB検体でも、VHL遺伝子異常が多い事を確認した。しかし、target sequenceを行ってもVHL遺伝子異常がない症例はあり、それらの症例の中には、VHL遺伝子プロモーターのメチル化を認める症例があることが、methylation-specific PCR法及び、bisulfite sequence法を用いることで確認された。従って、これまでの我々の研究実績をまとめると、VHL病患者のHB検体でも、孤発性のHB検体であっても、VHL遺伝子異常と不活化が半分以上の検体で認められており、改めて、HBの腫瘍化には、VHL遺伝子異常が重要な働きをしている可能性が出てきた。VHL病では、HBだけでなく、腎がんも起こりやすい事が知られている。最近のゲノム解析データでは、腎がんでは、VHLだけでなく、PBRM1やBAP1などの遺伝子異常が多い事が知られている。そこで、当科のHB検体においても、腎がんで遺伝子異常の頻度が高い遺伝子に対して、target sequenceを行ったが、現時点では、有意な遺伝子異常を伴う遺伝子は判明していない。本研究の第1目標であった、HB腫瘍化に対する、VHL遺伝子以外の新規原因遺伝子の同定に関しては、遅れているのが現状である。本研究において、当科と京都大学iPS研究所と連携研究を行っていたが、平成27年度には、当科より、2検体、VHL病症例の正常皮膚と正常血液をiPS研究所に提供し、いずれもVHL病特異的iPS細胞の樹立に成功している。また、本研究のもうひとつの連携先である、京都大学中村研究室では、現在、VHL病特異的iPS細胞に対して、VHL遺伝子異常を導入して、血管芽腫細胞株の樹立を試みているところである。本研究では、腫瘍血管新生が著明である血管芽腫の網羅的ゲノム解析を通して、血管芽腫の原因遺伝子同定、腫瘍血管新生抑制による新規癌治療構築を目標としてきた。そこで、当科で収集した全32例の血管芽腫の、腫瘍DNAを用いて、direct sequencing、MLPA、Ion Torrentによるtarget sequencing、bisulfite sequencingなどを行ってきた。その解析結果をまとめたものは、2016年のアメリカ脳腫瘍学会で学会発表を行い、さらに、Neuro-oncology誌(2017)に掲載することができた。

平成28年度では、上記の32例に加えて、当科のVHL病外来患者や、新たな血管芽腫摘出術施行症例に対して、更なる正常血液検体や、腫瘍検体の収集、そして、遺伝子解析を行った。VHL病が疑われる患者においては、遺伝カウンセリング施行後、本人の承諾を得て、VHL病の遺伝子診断を行った。これまでの我々の検討により、VHL病患者の血管芽腫検体でも、孤発性の検体であっても、VHLの2hitによる不活化が多い事が判明した。また、VHL病の好発腫瘍である腎癌においては、VHLだけでなく、PBRM1やBAP1などの遺伝子異常が多い事が知られているが、当科の血管芽腫検体において、これらの遺伝子に対するtarget sequenceを行ったが、有意な遺伝子異常を伴う遺伝子は判明しなかった。さらに、本研究の連携先である京都大学中村研究室では、VHL病特異的iPS細胞に対して、VHLの2hitによる不活化を導入して、血管芽腫細胞株の樹立が進行中である。以上より、血管芽腫腫瘍化には、VHL不活化が、改めて重要である事が判明した。従って、VHLが関与するシグナル回路異常の解明と、その修正を行う事が、腫瘍血管新生抑制による新規癌治療構築につながる可能性があると考えられた。本研究は、著明な腫瘍血管新生を認める血管芽腫のゲノム解析を通して、その血管新生に関わる原因遺伝子同定などを目標とした。我々が収集した全32例の血管芽腫のVHL遺伝子を中心とした遺伝子変異、メチル化解析の結果、VHL病患者、孤発性患者のいずれの検体においても、VHLの2-hitによる不活化が多い事が判明した。但し、孤発例では、メチル化によるVHL不活化や染色体6番、10番の欠失が多いことが特徴的であった。VHL病の好発腫瘍である腎癌においては、VHLだけでなく、PBRM1やBAP1などの遺伝子異常が多い事が知られているが、我々のHB症例には、これらの遺伝子変異は認められなかった。これまでの研究結果をもとに、VHL遺伝子異常を有さない血管芽腫の症例について、エクソーム解析を予定していたが、他の研究グループからの報告により、VHL遺伝子異常の同定にはサンガーシークエンス法では不十分な可能性がでてきた。このため、VHL遺伝子を有さない症例の絞り込み法の検討をし直す必要がでており、これにより遺伝子解析の進行が遅れている。また、血管芽腫細胞株の樹立などにつき、その方法などを、他の腫瘍モデルなどを使用しながら検討しているが、現在のところ、細胞株樹立にはいたっていない。前述のように、HBにおける新規原因遺伝子異常の同定に関しては、困難をきたしている状態である。実際、前述した、MGHが報告した論文においても、HBに対して、exome解析をしているが、VHL遺伝子異常以外、有意な遺伝子異常はなかったと報告されている。従って、今後は、検体数を増やし、再度、target sequenceを行うだけでなく、網羅的メチル化解析やRNA-seqなどの発現解析を行う事で、新規原因遺伝子の同定を試みる。また、iPS細胞などから樹立された血管芽腫細胞株ができた場合、VHL遺伝子異常が、HBの腫瘍化にどのように関与するのかを解析していく方針である。
ボランティア活動に対する文化的阻害要因の分析-ボランティアに関する文化社会学の構築のために

本研究プロジェクトの目的は、(1)日本の若者たちの「ボランティア」に対するイメージの全体像を把握すること、(2)そうした質的調査にもとづき、「ボランティア」を志向する若者と忌避する若者の差がいかなる社会的要因に規定されているか、また、ボランティアたちがその活動を通じて、いかなる困難に直面しているかなどを分析すること、そのうえで、(3)アンケート調査形式による数量的分析の手法によって、日本における若者のボランティア活動に対する意識の特徴を捉えることである。1)ボランティア体験を有する学生20名抽出し、経年的に面接調査を行ってきた。調査内容としては、(1)「ボランティア」に対するイメージ、(2)自己・他者イメージ、(3)「大学という場」・「社会」に対するイメージ、(4)自らの幸福に対するイメージなどの経年的変化について、さらに、(5)ライフヒストリーについての聞き取りとボランティアキャリアの詳細とそれに伴い彼らが直面した問題におけるパーソナルな側面と社会的な側面についての聞き取りである。これら調査の研究成果ついては、今年度中に報告書を公表する。2)「ボランティア」に否定的イメージを持つボランティア活動未体験学生に対する調査は、このような調査が面接対象者自身の自己対象化を前提とするため、十分なデータが得られていない。引き続き、調査を継続する。3)立命館大学の在学生から2000名程度の調査対象を描出、「ボランティア」に関する意識調査を実施した。これについては、現在、分析中であり、2000年度中をめどに調査報告を論文等で公表する予定である。今後は、これらの成果を基盤として、国際的な文化比較について研究を展開し、「ボランティア」に関する文化社会学の構築に向け、研究を発展させていく所存である。本研究プロジェクトの目的は、日本社会におけるボランティア活動に対する文化的阻害要因を明らかにすることにある。具体的には、(1)大学生に対する面接調査を通じて、ボランティアに対する否定的イメージの全体像を把握すること、(2)そうした質的調査にもとづき、ボランティアを志向する若者と忌避する若者の差がいかなる社会的要因に規定されているかを把握すること、そのうえで、(3)日本における若者のボランティア活動に対する動機形成の特徴を文化社会学的に捉えていくことを目指している。今年度は、過日提出した研究計画に則して、まず第1に、なんらかボランティア体験を有する学生を20名抽出し、各人2回にわたって面接調査を行った。調査内容としては、(1)ボランティア(活動と活動主体)に対するイメージ、(2)自己イメージ・他者イメージ、(3)「大学という場」に対するイメージ、(4)社会に対するイメージ、および、それらの変遷について、(5)ボランティアキャリアの詳細とそれに伴い彼らが直面した問題におけるパーソナルな側面と社会的な側面の調査などである。また第2に、これに加え、ボランティアに否定的イメージを持つ学生20名を抽出し、ほぼ同様のイメージ調査とともに、ボランティアに対してネガティブな印象を与えた経験を生活史のなかから深くたどる面接調査を行った。これらの調査から、ボランティア=自己発展と認識する少数の活発なボランティア活動家がいる一方、多くの活動家やまた被活動家は、「ボランティア活動=偽善的」という意識に強く囚われており、そうした意識に悩まされるていることが明らかになりつつある。今後、このような質的調査を継続するとともに、数量的調査を設計し、日本の若者におけるボランティア活動に対する動機形成の理論仮説を構築していきたい。