hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
クロマグロ産卵親群編成の為の、精度良い雌雄判別DNAマーカーの確立

完全養殖クロマグロ雄特徴的DNA多型を詳細に調査するため、F2世代雄の全血をより、ファージゲノムライブラリーを作成した。約6万のファージから雄特徴的配列を含む2つの独立のファージクローンを得た。2クローンの全塩基配列決定を行い、データベースを用いて他生物との相同解析を行った。その結果、2クローンは相同性が高いものの独立の配列である事、2クローン計34 kbpのゲノム配列にコーディングジーンがない事が明らかとなった。該当クローンには他生物で報告されているTRIM14遺伝子と相同性があった。該当領域を完全養殖F3雌雄で比較したところ、X染色体特徴的マーカー(97%雌陽性、n=32)を同定した。クロマグロ完全養殖第二世代雄の全血を100 ml以上採血し、ライブラリー作成に用いた。ライブラリー作成につまずくと当初予想したが、これに反し順調にライブラリー作成を終えた。ARMS-PCR法で雄に特徴的な6塩基欠損マーカーを含むファージの同定を行った。15,000ファージを寒天培養し、SM buffer重層後上澄み液を回収した。PCR法で目的のファージが含まれるか否か検査し、含まれた場合にはファージ液を希釈し、培養、PCR検査を繰り返し最終的に約6万のファージから2つの独立のファージクローンを得た。プライマーウォーキング法で、該当ファージの配列を読み進め、1クローンはインサート17 kbp全て解読した。もう1クローンについてはインサートの90%以上を解読し、間もなく解読を終える。塩基配列解析の結果、2つのクローンは配列が類似してはいるが、全く別の物である事が明らかとなった。つまり、クロマグロ雄に特徴的な6塩基欠損配列は雄Y染色体上に複数個所存在すると考えられた。得られた塩基配列のBLAST解析の結果、2013年に発表されたクロマグロゲノム配列の複数に高い相動性が認められた。大西洋クロマグロのcDNAデータベースに対しては明確に相動性の高いものが得られず、他魚類のマイクロサテライトとして登録されている物に相同性が認められた。25年度に実施した、雄クロマグロゲノムライブラリー作成と雄特徴的な配列のスクリーニングの結果得、2クローン(クローン#7, 9)のファージを単離した。26年度は2クローンの全塩基配列決定と分析を行った。クローン#7は17,195 bpの、クローン#9は17,293 bpのインサートを保有していた。ライブラリー作成時にゲノムの部分消化を行ったので、#7と#9は雄に特徴的な6塩基欠損配列近傍(スクリーニングに使ったプローブ部分)を含み、左右の取得配列の長さが違うと予想した。しかし詳細な配列解析の結果、この二つは相動性の高い部分もあるが、互いにゲノム上別の配列であると分かった。ゲノムEnsemble browserや、DDBJデータベースを駆使し解析を行い、この配列の特徴が分かりつつある。日々データベースが更新されているが、2015年2月までに得た情報を記述する。この配列はTRIM14(tripartile motif containing 14)遺伝子に部分的に相同性が高かったが、ORFを保有していなかった。TRIM14に相動性の高い場所はメダカゲノムに13か所、海産魚でしばしば参照されるイトヨには70か所報告されており、このことからクロマグロにおいてもTRIM14のシュードジーンがゲノムに複数散在していると考えられた。我々の見つけた6塩基欠損多型はY染色体上に少なくとも2か所あると結論した。クロマグロ雄特徴的6塩基欠損配列(Md6)より近傍のゲノム配列を雌雄で比較した。完全壅養殖F3クロマグロ全血標本より雌雄2尾ずつ選び、ゲノムDNAを調整した。次に、制限酵素DraI, EcoRI, PvuII, ScaI, StuIを用いてゲノムウォーキングライブラリーを作成した。該当ライブラリーより、Md6特異的PCRスクリーニングでMd6を含むゲノム断片をStuIライブラリーから単離成功した。該当配列を雌雄で精査したところ、Md6より1.5kbp離れた位置に、雌に特徴的な連続する210 bpの欠損多型を同定した。該当配列のF3浸透率を調査する目的で、210 bp欠損を挟み、検出するようPCRプライマーとPCR系を確立した。本手法でF3雌雄32尾ずつ、計64尾を調査したところ、F3雄32尾中28尾を210bp欠損無しと判別した(判別率88%)。F3雌では32尾中31の210 bp欠損を判別した(判別率97%)。F3雌を高精度で雌雄判別できる雌210 bp欠損マーカーを同定したが、これはX染色体上に位置すると予想されるので、雌雄判別を高精度で行えるのはF3世代に限るので使用には注意が必要であると考えられた。該当クローンには他生物で報告されているTRIM14

遺伝子と相同性があった。該当領域を完全養殖F3雌雄で比較したところ、X染色体特徴的マーカー(97%雌陽性、n=32)を同定した。2クローンのファージ同定と配列決定が終わった。得られたゲノム配列の解析を行ってみると、2つのクローンはゲノム上の別配列である事が分かった。インサート17kb中、11 kbpが互いに相同性が高かった。25年度の分析時よりもデータベースの拡充があり、取得配列はTRIM14遺伝子と相動性が高いことが分かったが、ORFは無かった。予備試験の段階ではあるが、拡充した雄特徴的配列近傍を雌雄で調査したところ、雌に特徴的な多型が見つかりつつある。分子生物学計画段階では、新たに分かった配列を頼りにさらに配列を拡張する事を予定したが、対象配列がユニークでは無く似通った繰り返し配列で、Y染色体上に複数、少なくとも2か所存在すると示唆された。よってさらにファージスクリーニングを行うのではなく、クロマグロ連鎖地図の情報活用を考えている。連鎖地図のどこにクロマグロ雄特徴的配列が位置するのか分析を行ってみたい。東京海洋大学坂本先生私信では、メダカとクロマグロの染色体比較の結果、例としてメダカ1番染色体に位置する遺伝子はクロマグロ7番連鎖群に位置し、逆位はあるものの染色体転座はとても少ない様子であるとの事。また坂本先生のグループはマイクロサテライトを多数同定済みであり、プライマー配列も公開予定との事。クロマグロ雄特徴的配列が連鎖地図のどこに位置するか明らかになれば、性決定遺伝子座の候補も視野に入り、精度高い雌雄判別マーカー同定に有益な情報となる。調査個体を増やし、この多型での雌雄判別正答率を見積もる予定。当初ライブラリーの作成につまずくと予想したが、順調に予定通りライブラリー作成を終えてファージ2クローンの同定に成功した。しかし、ファージの塩基配列を行ってみると類似した配列が17 kbにわたって散在し、ファージインサートの配列解読に手間取った。また雄複数尾の該当配列の解析には至らず、よっておおむね順調と判断した。1.ファージインサートの分析。2クローン目のファージインサートの残り3 kbp程度の配列を解読する。雄特徴的6塩基欠損配列は、雄Y染色体上に複数存在し、ベータアクチン遺伝子座コピー数よりも多いことが示唆された。よって、もう数クローンのファージ単離と配列分析を行う。2.計画段階では、新たに分かった配列を頼りにさらに配列を拡張する事を予定したが、対象配列がユニークでは無く似通った繰り返し配列で、Y染色体上に複数存在すると示唆された。25年度得られたファージインサート2クローン各17 kbpを調査した結果、コーディングジーンは見つから無かった。よって、さらにファージスクリーニングで配列の拡張を保留とし、25年度得られた配列の精査を行う。応募計画段階ではクロマグロゲノム配列がデータベースに無かったが、昨年データベースとして公開されたので、これを活用し得られたファージインサートの相同性解析を行う。3.現有の雄
ブラジル系移民の乳幼児における生育環境と認知機能の発達の疫学的関連探索研究

目的外国籍の子どもたちの生活支援、特にメンタルヘルスに関する支援は往々にして不足しがちである。今回、浜松市内の外国人学校に在籍し、不登校もしくは何らかのメンタルヘルスの問題を抱える児童の実態を把握し、支援のための基礎資料とする。方法浜松市西区の南米系外国人学校(ムンド・デ・アレグリア)に在籍する417歳の児童・生徒(ブラジル・ペルー人)166名(うち女性76名)に対し、教員評定による「生活の困難さ評価尺度」であるSDQ(Strengths and Difficulties Questionnaire)を施行した。結果166名中、SDQに基づく評価で「要精査」に該当する児は20名、12%であった。「要精査」の割合は、男女、年齢ごとに大きく異なっていた。410歳では男児が女児より有意に「要精査」となる割合が高かったが、1114歳では男女とも10%を超す高い「要精査」率を示し、また男女差は有意ではなかった。困難の領域ごとに解析すると、情緒(不安・抑うつ)から「要精査」となった児において、教員の評価と実際の学習の困難度に開き(後者が高くなる傾向)が認められた。一方、不登校の9名はいずれもSDQによって「要精査」とは判定されなかった。彼らの不登校の背景にあったものは、それまでの日本人学校における不適応であり、SDQで評価されるメンタルヘルスの問題ではないことが示された。結語外国人学校の子どもたちには、低年齢からさまざまなメンタルヘルスの問題が高頻度に認められた(全体で12%が要精査)。児に対する支援の必要性は、教員の感ずる支援の必要性とずれが見られ、特に抑うつ・不安などの情緒の問題についてそのずれが大きくなる傾向が明らかであった。研究の概要(1)すでに運営を開始したコホート研究の枠組みを利用して、合計450名の妊婦がエントリーする出生コホートを準備し、22年度末まで運営を継続する。500名中、473名は日本人、30名はブラジル系移民である。これらの妊婦から生まれるすべての児を対象とし、胎児期、周産期の心理社会的要因に関する情報を収集したのち、18ヶ月まで追跡する。10、14、18ヶ月時に認知機能の発達に関する情報を直接観察によって収集し、22年度に、国籍と心理社会的諸要因、および交絡因子候補を独立変数とし、認知機能の発達を従属変数とする解析を行う。(2)外国籍の子どもたちの教育外の支援、特にメンタルヘルスに関する支援は往々にして不足しがちである。今回、浜松市内の外国人学校に在籍し、不登校もしくは何らかのメンタルヘルスの問題を抱える児童の実態を把握するとともに、それを踏まえた支援を行う。結果(1)コホート研究ブラジル人および日本人妊婦から生まれる乳幼児の追跡を行ったところ、運動発達・視覚受容発達に差は認められなかったが、前者で表出言語の発達に遅延が認められた。この傾向は、社会経済的諸因子、年齢、同胞数などを統制しても有意さとして認められた。また、ブラジル系の母親に産後抑うつが高率に認められた。(2)不登校児の実態と支援浜松市西区の南米系外国人学校(ムンド・デ・アレグリア)に在籍する516歳の小児約150名のうち、不登校もしくはそれに近い状態にある小児は10名(8%)であった。そのほとんどが、日本の公立校で不適応を起こした経歴を持っていた。また、このうち2名に、発達障害(広汎性発達障害および学習障害)が見出された。研究の概要外国籍の子どもたちの教育外の支援、特にメンタルヘルスに関する支援は往々にして不足しがちである。

今回、浜松市内の外国人学校に在籍し、不登校もしくは何らかのメンタルヘルスの問題を抱える児童の実態を把握し、支援のための基礎資料とする。方法浜松市西区の南米系外国人学校(ムンド・デ・アレグリア)に在籍する417歳の児童・生徒(ブラジル・ペルー人)166名(うち女性76名)に対し、教員評定による「生活の困難さ評価尺度」であるSDQ (Strengths and Difficulties Questionnaire)を施行した。結果166名中、SDQに基づく評価で「要精査」に該当する児は20名、12%であった。「要精査」の割合は、男女、年齢ごとに大きく異なっていた。410歳では男児が女児より有意に「要精査」となる割合が高かったが、1114歳では男女とも10%を超す高い「要精査」率を示し、また男女差は有意ではなかった。困難の領域ごとに解析すると、情緒(不安・抑うつ)から「要精査」となった児において、教員の評価と実際の学習の困難度に開き(後者が高くなる傾向)が認められた。一方、不登校の9名はいずれもSDQによって「要精査」とは判定されなかった。彼らの不登校の背景にあったものは、それまでの日本人学校における不適応であり、SDQで評価されるメンタルヘルスの問題ではないことが示された。結語外国人学校の子どもたちには、低年齢からさまざまなメンタルヘルスの問題が高頻度に認められた(全体で12%が要精査)。児に対する支援の必要性は、教員の感ずる支援の必要性とずれが見られ、特に抑うつ・不安などの情緒の問題についてそのずれが大きくなる傾向が明らかであった。
ドラッグデザインによる新しい抗がん剤の合成

1.新規抗腫瘍性ヌクレオシドEcydは、注射薬として固形癌を対象に米国で第1相臨床試験に入った.2.種々のヒト腫瘍細胞のエチニルヌクレオシドに対するin vitro薬剤感受性を調べ,各細胞におけるp53の表現型との関連性を検討し,変異型p53遺伝子を有する腫瘍細胞は,野生p53遺伝子を有する腫瘍細胞に比較し有意に感受性が低いことを明らかにした.3.EcydおよびEurdは哺乳動物細胞内でEcyd 5'-triphosphate(ECTP),またはethynyluridine 5'-triphosphate(EUTP)に代謝され,これらがCTPまたはUTPとRNA polymeraseを競合的に強く阻害した(ECTP ; Ki=21nM、CTP ; Km=8μM、EUTP ; Ki=84nM、CTP ; Km=13μM).ヒト癌細胞でのECTPの細胞内滞留時間の半減期は1530時間であった.EcydはFM3A細胞の28SrRNAのfragmentationを引き起こし、3.2kb,3.0kb,および1.5kbに断片化した.その切断様式を解明した.さらに,Ecydによる作用機序の一つに内因性Rnase Lの活性化経路が関与している可能性が示唆された.4.Ecydの構造ー活性相関を調べる目的で,4'α-位に種々の炭素官能基を導入したdCydおよびCyd誘導体を合成した.これらの中で,4'α-Me,CN,およびC=CH体がL1210細胞に10^<-7>Mで増殖抑制活性を示したが,KB細胞には活性を示さなかった.しかし,こららの化合物は,強力な抗HIV作用を示した.5.蛋白合成阻害剤であるホスミドシンの脱メチル体とそのN-アセチル体を合成した.これらは,種々のヒト胃・大腸がん細胞の増殖をIC_<50>=6-190μMで抑制した.6.ハロゲン化オリゴピロール誘導体を合成し、それらのDNA切断活性と抗腫瘍活性を測定し活性物質を見いだした.1.ECTP(ECyd5′トリリン酸)は、FM3A細胞の単離核中でのRNA合成を著しく阻害することを明らかにした。この実験系でのECTPのKi値は、12.1nMであった。さらに、ECydはアポトーシスを誘導することを明らかにした。また、その誘導過程にcaspase、およびserine proteaseが関与していることを明らかにした。2.DNAおよびRNA合成両者を阻害する新規代謝拮抗剤としてヒドロキシルアミンを糖部に持つヌクレオシド、2′DHACを設計・合成した。2′DHACは、invitro,in vivoでL1210細胞に対して優れた抗がん性を示した。また、2′DHACはピリミジンリボヌクレオシドに対するサルベ-ジ酵素であるuridine/cytidinekinaseによりリン酸化を受け、DNA合成を阻害するユニークな作用機序を持っていることも明らかにした。3.核酸切断活性物質のモデルとして、DNAアルキル化部位を持つオリゴピロール誘導体を、また、ネオカルチノスタチンのモデルとして、ナフタレンカルボン酸の分子内関与により活性ラジカルを発生する物質を設計・合成した。4.核酸塩基部およびリン酸に保護基を導入しない新しいDNA合成法を開発し、この方法によってDNAのリン酸ジエステル結合を修飾した種々の新規アンチセンス核酸を合成した。5.新規血管斯生阻害性抗がん剤の開発を目的としてウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ-(u-PA)産生阻害活性を有する血管新生阻害剤の探索研究を行った。イルソグラジン誘導体4PyDATはin vitro u-PA産生阻害試験でHT-1080細胞に対する強いu-PA産生阻害作用を示し、in vivoでもイルソグラジンに比べより強力な血管新生阻害作用を示すことが明らかになった。さらに、マウス異種移植実験モデルを用いて抗腫瘍効果を検討した結果4PyDATの経口投与は有意な腫瘍増殖抑制作用を示した。1.新規抗腫瘍性ヌクレオシドDMDC,CNDACおよびEUrdのアポトーシス誘導作用と増殖抑制作用の関連について検討を行い、これらがヒト胃がん細胞に対してp53蛋白依存性のアポトーシス誘導作用を示すことを明らかにした。さらに、EUrdがヒト胃がん細胞MKN-45Pの腹膜播種モデルで著しい延命効果を示すと共に、in vivoにおいてもアポトーシスを誘導することを明らかにした。一方、p53タンパクの発現を免疫染色法により解析を行ったところ、p53蛋白発現の増強とともにアポトーシス細胞は増加したことから、in vivoにおいてもp53蛋白はアポトーシス誘導に重要な因子となることが明らかになった。2.ECTPおよびEUTPの、FM3A細胞から粗精製したRNA polymeraseに対するKi値は、それぞれ21nMおよび84nMであり、阻害様式は可逆的な競走阻害であった。ECydおよびEUrdをFM3A細胞に作用させると、caspase 3-likeプロテアーゼを介してアポトーシスを誘導し、その際に、細胞内は酸性化しなかった。一方、この過程でc-jun、c-myc、およびp53等のmRNAの発現量は減少したが、c-fosの発現量は増加した。更に、28S rRNAの特定の位置の切断が観察された。3.新規代謝拮抗剤としてカルバモイルメチル基を糖部3'β位に持つシチジン誘導体(CAMC)を合成した。

CAMC,は、in vitroでL1210細胞に対して優れた増殖抑制活性を示した。さらに、CAMCの構造ー活性相関を行い、この化合物がリン酸化を必要としないユニークな作用機序を持っていることを明らかにした。4.核酸切断活性物質のモデルとして、光照射により炭素ラジカルを発生し、DNAを切断するオリゴピロール誘導体および、DNAアルキル化部位を持つオリゴピロール誘導体を設計し合成した。これらの中にin vitroでμMレベルの増殖抑制活性示す化合物を見い出した。5.新しい遺伝子制御物質としてN-アセチルデオキシシチジンを含むDNAオリゴマーの合成法を開発した。その塩基対形成能および塩基識別能はN-アセチル基を含まない対象DNAオリゴマーに勝るとも劣らない結果を得た。1.新規抗腫瘍性ヌクレオシドEcydは、注射薬として固形癌を対象に米国で第1相臨床試験に入った.2.種々のヒト腫瘍細胞のエチニルヌクレオシドに対するin vitro薬剤感受性を調べ,各細胞におけるp53の表現型との関連性を検討し,変異型p53遺伝子を有する腫瘍細胞は,野生p53遺伝子を有する腫瘍細胞に比較し有意に感受性が低いことを明らかにした.3.EcydおよびEurdは哺乳動物細胞内でEcyd 5'-triphosphate(ECTP),またはethynyluridine 5'-triphosphate(EUTP)に代謝され,これらがCTPまたはUTPとRNA polymeraseを競合的に強く阻害した(ECTP ; Ki=21nM、CTP ; Km=8μM、EUTP ; Ki=84nM、CTP ; Km=13μM).ヒト癌細胞でのECTPの細胞内滞留時間の半減期は1530時間であった.EcydはFM3A細胞の28SrRNAのfragmentationを引き起こし、3.2kb,3.0kb,および1.5kbに断片化した.その切断様式を解明した.さらに,Ecydによる作用機序の一つに内因性Rnase Lの活性化経路が関与している可能性が示唆された.4.Ecydの構造ー活性相関を調べる目的で,4'α-位に種々の炭素官能基を導入したdCydおよびCyd誘導体を合成した.これらの中で,4'α-Me,CN,およびC=CH体がL1210細胞に10^<-7>Mで増殖抑制活性を示したが,KB細胞には活性を示さなかった.しかし,こららの化合物は,強力な抗HIV作用を示した.5.蛋白合成阻害剤であるホスミドシンの脱メチル体とそのN-アセチル体を合成した.これらは,種々のヒト胃・大腸がん細胞の増殖をIC_<50>=6-190μMで抑制した.6.ハロゲン化オリゴピロール誘導体を合成し、それらのDNA切断活性と抗腫瘍活性を測定し活性物質を見いだした.
Prader-Willi症候群における刷り込み遺伝子再活性化の研究

Prader-Willi症候群(PWS)責任領域であるヒト15番染色体q11-q13に位置する刷り込み遺伝子の再活性化の可能性を検討するために、PWS患者および対照から樹立したリンパ芽球様細胞株を用いて実験を行った.DNAメチル化阻害剤5-azadeoxycytidine(5-azadC)、ヒストン脱アセチル化阻害剤trichostatin A(TSA)を用いた実験の結果、代表的な刷り込み遺伝子であるSNURF-SNRPNはTSAでは再活性化を受けないが、5-azadCでは再活性化されることを見い出した。薬剤投与前後における、SNURF-SNRRPNが遺伝子の状態を検討したところ、5-azadC投与により、プロモーター領域のDNAメチル化レベルが低下することに加えて、ヒストンアセチル化レベルが増加することを見い出した.このことにより、15q11-q13における刷り込み遺伝子の発現調節において、DNAメチル化とヒストンアセチル化が関連して作用していることを示した。本研究はゲノム刷り込み関連疾患に対する薬物治療の可能性を世界に先駆けて示したものである。さらに、PWSモデルマウスから線維芽細胞を樹立し、マウス細胞における刷り込み遺伝子再活性化の実験を行った。マウス線維芽細胞では5-azadC処理によりMkrn3、Ndnは容易に再活性化されたが、Snurf-Snrpnの再活性化の程度はヒトのくらべるとわずかであった.この結果はヒトとマウスにおける刷り込み機構の相違を示唆する。マウスにおける検討を敷衍して、今後、個体レベルでの再活性化実験を予定している。Prader-Willi症候群(PWS)責任領域であるヒト15番染色体q11-q13に位置する刷り込み遺伝子の再活性化の可能性を検討するために、PWS患者および対照から樹立したリンパ芽球様細胞株を用いて実験を行った。薬剤としてDNAメチル化阻害剤として5-azadeoxycytidine(5-azadC)、ヒストン脱アセチル化阻害剤としてtrichostatin A(TSA)を用いて、細胞株を処理し、その前後で15q11-q13に位置する刷り込み遺伝子の発現の変化を観察した。その結果、代表的な刷り込み遺伝子であるSNURF-SNRPNはTSAでは再活性化を受けないが、5-azadCでは再活性化されることを見い出した。この、再活性化の分子機構を検討するために、さらに、詳しい実験を行い、薬剤投与前後における、SNURF-SNRPN遺伝子の状態を検討した。その結果、5-azadC投与により、プロモーター領域のDNAメチル化レベルが低下することに加えて、ヒストンアセチル化レベルが増加することを見い出した。このことは、15q11-q13における刷り込み遺伝子の発現調節において、DNAメチル化とヒストンアセチル化が関連して作用していることを示す。これらの結果は刷り込み遺伝子が薬剤により再活性化されることを直接証明し、PWSにおける薬物治療の可能性を示した点で、重要である。さらに、DNAメチル化とヒストンアセチル化との関連を知るために、SNURF-SNRPN遺伝子でのヒストンアセチル化の状態を詳細に検討した。その結果、刷り込み遺伝子におけるヒストンアセチル化の親由来による違いはプロモーター領域に限局することを世界に先駆けて見い出した。Prader-Willi症候群(PWS)責任領域であるヒト15番染色体q11-q13に位置する刷り込み遺伝子の再活性化が可能であることをこれまでの研究にて示したが、本年度は、DNAメチル化阻害剤5-azadeoxycytidine(5-azadC)、ヒストン脱アセチル化阻害剤trichostatin A(TSA)の再活性化における役割を詳しく検討した。代表的な刷り込み遺伝子であるSNURF-

SNRPNはTSA単独では再活性化されず、5-azadCとTSA両方を投与しても、再活性化の程度に変化はみられなかった。しかし、SNURF-SNRPNプロモーター領域のヒストンアセチル化はTSA単独よりも5-azadCとTSA両方を投与したときのほうが、増加していた。この結果は、SNURF-SNRPNの再活性化にはDNAメチル化が主要な役割を果たしていることを示唆すると考えた。さらに、PWSモデルマウスおよび対照マウス由来の線維芽細胞を入手し、マウス細胞を用いた再活性化実験を開始した。マウス線維芽細胞では5-azadC処理によりMkrn3、Ndnは容易に再活性化されたが、Snurf-Snrpnの再活性化の程度はヒトにおける場合とくらべるとわずかであった。この結果はヒトとマウスにおける刷り込み機構の相違を示唆する。さらに、ヒトおよびマウスを用いた研究の過程で、新しい母性発現遺伝子ATP10Cの同定に貢献した。本遺伝子は刷り込み中心により制御される第2の母性発現遺伝子であり、中枢神経系特異的刷り込みを示した。従って、Angelman症候群の発症機構における役割が示唆された。
中国上海市における生鮮食料の生産・流通システムの展開と都市農業の役割に関する研究

最終年度にあたる今年度の日中共同研究を通じて獲得された成果の概略は以下の通りである。<都市農業研究>日中共同による鎮・生産隊・請負農家の実態調査から以下を確認した。(1)都市開発等と農地保全との調整問題の顕在化、(2)農業経営の規模経営化、担い手の篤農家・集団・私企業家、農作業の出稼ぎ農民依存、農業服務隊(農業サービス組織)依存化、(3)郷鎮企業への就業による所得増大と生活向上、(4)農業的土地利用と都市的土地利用との共存による農地の確保・有効利用、基盤整備の必要性、(5)農業従事者の量的確保と質の向上、多様で魅力的な農業経営の追求、先端技術の導入普及、農業技術の向上、多元的流通システムの構築、都市農業の多面的な役割・機能活用プランの策定の重要性など。<生産・流通システム研究>各流通段階の構造変化のもとで、以下の課題解明の必要性を確認した。産地:(1)萌芽的集出荷組織の具体的把握、(2)市場経済化で発生している野菜の過剰問題、(3)集出荷組織・担い手、(4)「郊菜」産地の持続的発展の措置、施策。卸売市場:(1)「客菜」対応の広域流通型卸売市場と「郊菜」対応の地場流通型卸売市場との機能分化の実態把握、(2)政府機関の卸売市場管理の撤退、(3)「客菜」産地仲買人から代行・委託される販売代理人の組織化、(4)蔬菜公司の荷受業務に新たな流通主体の胎動の実態など、(5)卸売市場の開設者・卸売業者・仲卸業者に相当する担い手、効率的な取引方法、卸売市場の管理・運営システム、などの解明。小売:(1)畜産・水産加工品の需要増、中食・外食化など消費形態の多様化、スーパー(超市)やCVS(便民店)の伸長などの実態、(2)生鮮食料品の集市貿易市場(自由市場)・国営菜市場等依存の業態と、露天営業等安全・衛生問題の実態把握、(3)スーパー商品調達構造の分析と、産地直結なども含めて生鮮食料品の流通再編に与える影響の解明の重要性など。[生産・流通システム研究]これまでの調査研究(学術調査)を通じて獲得された産地・批発市場・小売の実態、並びに関連する「菜藍子工程」の内容が、中国側分担者とともに実施した上海市商業委員会等との議論を通じて、有機的に繋がってきたことが最大の成果である。また、批発市場の分析については、従来の公司レベルの概況把握から一歩進んで産地との結合関係[集荷構造]を分析する上で、(1)広域流通型市場における「客菜」入荷は主として域外産地市場で買付を行う産地証人によって担われていること、(2)しかし依然として「郊菜」取扱の多い「近郊型産地市場」的な性格を持つ緑苑公司管轄下の地場流通型市場が増加傾向をみせるなど、上海市への野菜の安定供給を考える上で重要な役割を果たしていること等が重要であることが明らかとなった。

一方で、上記の成果とも関係して、市商業委員会が指摘する「産地における出荷の組織化」を政策目標に掲げることの現実性を検証する必要が生じていることは重要である。さらに、八仙集団食品公司・聯華超市有限公司の事例分析を通じて、スーパーの生鮮食品調達行動の典型例が解明され、さらに配送センター機能を独自に分析する必要性が明らかになった。[都市農業研究]都市農業研究の方向性に関して中日双方の研究者の間で以下の4つの共通認識が確認されたことは重要である。それは、(1)双方で「都市農業」に対する概念の違いはあるが、その役割の重要性を確認し、「都市農業」の概念及び今後のあり方について研究を進める、(2)食料供給と農地保全の2つの視点からのアプローチが不可欠である、(3)深刻化しつつある都市農業の担い手問題について考察する必要がある、(4)都市化・工業化のもとでの農民生活・農村の変化に関する考察が重要である等である。さらに、以上の成果を検証するための鎮レベルでの関係試料の入手、及び生産隊・請負農家への実態調査を実現できる見通しができたと共に、来年度調査に向けての共同研究の組織体制、及び分担体制が整った。〔都市農業班〕(1)都市農業研究に関して中日双方研究者の間で、以下の4つの共通認識ができた。1)双方の都市農業に対する概念の相違性はあるものの、共通項としてその重要性を確認しつつ研究を進めること、2)食糧供給と農地保全の2つの視点からのアプローチが必要なこと、3)都市農業の担い手について考察することが必要なこと、4)都市化・工業化の下での農民生活の変化に関する考察が重要なことである。これら4点を4つのテーマとして中日双方の研究分担者を決め、次年度に向けて共同研究を進める体制が整った。(2)これらの共同研究を進めるにあたり、鎮レベルでの関係資料の入手、及び生産隊・請負農家への実態調査が実現できる見通しができた。(3)前年度に設定した調査結果の一次集計が中国サイドから提供されたことから、とりわけ3)、4)についてこの分析が重要な手掛かりとなることが期待できる。〔生産流通システム班〕批発市場の分析については、従来の公司レベルの分析から一歩進んで産地との結合関係〔集荷構造〕を分析する上で、以下の2つの手がかりを得た。(1)広域流通型市場の場合、「客菜」の入荷は主として域外産地市場で買い付けを行う産地商人によって担われていること、(2)しかし依然として「郊菜」の取り扱いが多い「近郊型産地市場」的性格を持つ緑苑公司管轄下の地場流通型市場が増加傾向をみせるなど、上海市への野菜の安定供給を考える上で重要な役割を果たしていることである。また、八仙集団食品公司・聯華超市有限公司の事例分析を通じて、スーパーの生鮮食品調達行動の典型例が解明できた。最終年度にあたる今年度の日中共同研究を通じて獲得された成果の概略は以下の通りである。<都市農業研究>日中共同による鎮・生産隊・請負農家の実態調査から以下を確認した。(1)都市開発等と農地保全との調整問題の顕在化、(2)農業経営の規模経営化、担い手の篤農家・集団・私企業化、農作業の出稼ぎ農民依存、農業服務隊(農業サービス組織)依存化、(3)郷鎮企業への就業による所得増大と生活向上、(4)農業的土地利用と都市的土地利用との共存による農地の確保・有効利用、基盤整備の必要性、(5)農業従事者の量的確保と質の向上、多様で魅力的な農業経営の追求、先端技術の導入普及、農業技術の向上、多元的流通システムの構築、都市農業の多面的な役割・機能活用プランの策定の重要性など。<生産・流通システム研究>各流通段階の構造変化のもとで、以下の課題解明の必要性を確認した。産地:
ソーシャルワーク実践における新しいペアレント・トレーニング・プログラムの構築

子ども家庭福祉においては、子どもたちとその保護者たちが自らの家庭を再構築できる能力(コンピテンス)を身につけることができるようサポートしていくことが重要視されている。ペアレント・トレーニング・プログラムは、その有効な手段である。本研究では、とくにノーバディーズ・パーフェクト・プログラムを実践し、その結果をふまえてプログラムの再検討を行った。さらにそこから改良を加え、ラップアラウンド・アプローチ的な手法を取り入れて、子どもたちやその家族みずからが主体となって自己の力(ストレングス)をエンパワーできるソーシャルワーク的なペアレント・トレーニング・プログラムを新たに開発した。子ども虐待の問題についてペアレント・トレーニング・プログラムのうち、コモンセンス・ペアレンティングとMY TREEペアレンツプログラムは心理学的ケア、行動療法的ケアに重心があり、寄り添いサポートするソーシャルワーク的な色彩がうすい。ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムはソーシャルワーク的な色彩は強いものの、深刻な虐待ケースには対応できないでいる。本研究では、多様な既存のプログラムを再検討することを通して、子どもたちやその家族がみずから主体となって、地域をまきこんだ形で自己の力(strength)をエンパワーできるソーシャルワーク的なペアレント・トレーニング・プログラムを新たに構築する。研究代表者は現在、ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムのファシリテーターとして実践を積み重ねつつあるが、本研究を通して、子どもたちやその家族がみずから主体となって獲得し、地域をまきこんだ(ラップアラウンドした)形で自己の力(strength)をエンパワーできるペアレント・トレーニング・プログラムを新たに構築していく。子どもたちやその家族がみずから主体となって獲得し、地域をまきこんだ(ラップアラウンドした)形で自己の力(strength)をエンパワーできるペアレント・トレーニング・プログラムを新たに構築していくためには、これまでのペアレント・トレーニング・プログラムの効果、長所、課題、問題点等について明確にしていくことが不可欠である。2012(平成24)年度においては、これらの効果測定の調査方法の適切性、指標の妥当性や信頼性等を確認し、他の実践事例にも適用していけるような評価測定の手法を検討した。これをふまえて、文献研究、資料分析、ヒアリングと併せて、効果測定を行っていく準備を整えた。これまで、コモンセンス・ペアレンティング、MY TREEペアレンティング、ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムをはじめ、数多くのペアレント・トレーニング・プログラムが実践に移されてきた。そのことには、非常に大きな意義があったものの、それらの効果が一体どれくらいあったのか、その問題点はどこにあるのか等に関する調査研究はあまり行われてこなかった。しかし、子どもたちやその家族がみずから主体となって獲得し、地域をまきこんだ(ラップアラウンドした)形で自己の力(strength)をエンパワーできるペアレント・トレーニング・プログラムを新たに構築していくためには、これまでのペアレント・トレーニング・プログラムの効果、長所、課題、問題点等について明確にしていくことが不可欠となる。最終年度(平成25年度)前半には、文献研究、資料分析、ヒアリング、効果測定など、これまでの成果をふまえつつ、前年度までの成果を継承しソーシャルワーク的な新たなペアレント・トレーニング・プログラムづくりを行った。さらに後半には、前年度に確立した手法、指標を用いて効果測定を行い、改善を図った。以上の年度を通してプログラムの「既存プログラムの検討・評価・改善ー新しいプログラムの計画ー実施ー評価ー改善」といったサイクルを経た後、その成果を広く「普及」させていくために、研究成果のかたちにして、学会等で研究報告を行ったり、報告書をまとめたりした。本研究では、多様な既存のプログラムを再検討することを通して、子どもたちやその家族がみずから主体となって、地域をまきこんだ形で自己の力(strength)をエンパワーできるソーシャルワーク的なペアレント・トレーニング・プログラムを新たに構築していく。申請者は現在、ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムのファシリテーターとして実践を積み重ねつつあるが、本研究を通して今後は、子どもたちやその家族がみずから主体となって獲得し、地域をまきこんだ(ラップアラウンドした)形で自己の力(strength)をエンパワーできるペアレント・トレーニング・プログラムを新たに構築する。2011(平成23)年度前半においては、「ソーシャルワーク的な新たなペアレント・トレーニング・プログラムの構築」を行っていく上で特に注目したいと思われる3つのプログラムについて、文献研究と資料分析を行った。それは、コモンセンス・ペアレンティング、MY TREEペアレンティング、ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムである。以上の作業と併行し、2011(平成23)年度8月頃から、プログラム関係者へのヒアリングを実施した。さらに、大阪にある児童家庭支援センターにおいて、ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムを数回にわたり実践した。

2012(平成24)年度においては、これらの効果測定の調査方法の適切性、指標の妥当性や信頼性等を確認し、他の実践事例にも適用していけるような評価測定の手法を検討した。これをふまえて、文献研究、資料分析、ヒアリングと併せて、効果測定を行っていく準備を整えた。2011(平成23)年度前半においては、「ソーシャルワーク的な新たなペアレント・トレーニング・プログラムの構築」を行っていく上で特に注目したいと思われる3つのプログラムについて、文献研究と資料分析を行った。それは、コモンセンス・ペアレンティング、MY TREEペアレンティング、ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムである。これらに関する文献を体系的に収集し整理し考察を加えていくことは、ペアレント・トレーニング・プログラムに関する社会福祉的研究を展開していくうえで必要不可欠な作業となる。また研究文献、報告書ではなく、パンフレットやリーフレットなど資料についても、体系的な収集や整理を行った。以上の作業と併行し、2011(平成23)年度8月から、プログラム関係者へのヒアリングを実施した。具体的には、コモンセンス・ペアレンティング、MY TREEペアレンティング、ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムなどのペアレント・トレーニング・プログラムを推進する事務局などにアプローチし、インタビューを行った。さらに申請者は、大阪にある児童家庭支援センターにおいて、ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムを数回にわたり実践した。2013(平成25)年度前半では、前年度に不可避的な理由でどうしても実施することがかなわなかった効果測定調査を実施する。この年度では、前年度までに作成した新たなペアレント・トレーニング・プログラムをとくに虐待ケースを対象として実践に移す。実践の場所については、申請者が現在ノーバディーズ・パーフェクト・プログラムを行っている児童家庭支援センターを予定している。ここには、このセンターを附設している児童養護施設や、児童相談所、保健センターから、多くの深刻な虐待ケースが寄せられてくる可能性が高い。これらのケースを対象に、新たなペアレント・トレーニング・プログラムを実施していこうと思う。それだけではなく、前年度に確立した手法、指標を用いて効果測定を行い、改善を図っていく。以上の年度を通してプログラムの「既存プログラムの検討・評価・改善ー新しいプログラムの計画ー実施ー評価ー改善」といったサイクルを経た後、その成果を広く「普及」させていくために、研究成果のかたちにして、学会で研究報告を行ったり、学会誌に投稿したりする。
液体クロマトグラフィーを高性能化する多孔性シリカロッドカラムの開発

液体クロマトグラフィーの高速化と高性能化を目的として、シリカ連続体について(1)PEEKコートカラムの試作、(2)ドメインサイズ(シリカ骨格サイズ+骨格間隙の流路サイズ)と流路サイズ/シリカ骨格サイズ比の効果、及び(3)キャピラリー型シリカモノリスカラムの調製を検討した。(1)PEEKによって包埋されたシリカ連続体は、粒子充填カラムの1/2以下の圧力で1.5倍の理論段数をもたりし実用化を可能とした。また、ポリペプチド分離において3倍以上速い分離を実証した。(2)ドメインサイズの小さなシリカ連続体はより高い理論段数を与え、また流路/骨格比の大きなシリカ連続体は低いカラム圧力を与えた。(3)シリカキャピラリー中のシリカ連続体は、従来のカラムの20分の1のカラム圧力で同等の理論段数を発生し、次世代に必要とされる10万段の理論段数/カラムの発生を可能とした。キャピラリー型シリカ連続体を電気クロマトグラフィーに適用したとき、25cmのカラムが8万段の理論段数を与えたが、さらに高性能の発現のためには電気浸透流の増大が必要である。以上のようにネットワーク構造の二重細孔性シリカ連続体は、液体クロマトグラフィーおよび電気クロマトグラフィーにおいて、1本のカラムにより現在より1桁高い10万段の理論段数の発生を可能とする。一層の高性能化と汎用カラムの開発のために(1)キャピラリー管壁へのシリカ骨格の結合、(2)骨格の収縮を避ける調整法、および(3)多様な選択性をもたらす化学修飾のためのオンカラム反応の開発等が今後の課題である。同時に、粒子充填構造とネットワーク構造との差を考慮して、カラム性能の流速依存性を表す新規な性能-流速関係式の理論的、実験的解明が次の基礎的な課題である。これによりシリカ連続体は、超高性能クロマトグラフィーシステムを実現し、分離能力の向上に大きな寄与をするものと考えられる。液体クロマトグラフィーにおいて現在より1桁高い理論段数の発生と、それを利用するクロマトグラフィー分離の高性能化を目的とする本研究の始めに、分離媒体となるシリカ連続体の調製と、シリカ骨格サイズならびに骨格間隙の流路のサイズの効果を検討した。骨格サイズの小さなシリカ連続体はより高い理論段数を与え、また大きな流路は、低いカラム圧力を与えた。ここで合成したシリカ連続体は、従来の10分の1程度のカラム圧力で、従来型のカラムと同等の理論段数を発生した。したがって理論的に10倍速い分離が可能となる。実際ポリペプチドについて、グラジエント溶出を用いて非常に速い高性能分離が可能となった。このカラムは従来2μm程度の微粒子充填剤を充填した短いカラムを用いて行われてきた分離を、さらに高性能のカラムを用いて、より速く実行することを可能とする。現在の課題は、骨格サイズを最小限として、流路サイズを最大限として、圧力あたり、時間あたりの理論段数を最大限とする努力の限界を見極めることである。骨格サイズの減少と流路サイズの拡大の極限はオープンチューブであるが、機械的強度を保ちながら限界まで空隙率を高めることを試みている。また、多孔性シリカ連続体を電気クロマトグラフィーのためのカラムとして用いたとき、圧力送液によって得られる理論段数の数倍の理論段数が得られた。

電気クロマトグラフィーにおける電場による高速送液によれば従来より1桁高い理論段数の発生は容易であり、電気クロマトグラフィー用カラムとして最適の特徴を備えているシリカ連続体の開発は、圧力送液によるクロマトグラフィーの高性能化だけでなく、クロマトグラフィー全般の分離能力の向上に大きな要素となるものと考えられる。液体クロマトグラフィーにおける高理論段数の発生を目的として、分離媒体となるシリカ連続体の構造についてドメインサイズ(シリカ骨格サイズ+骨格間隙の流路サイズ)と(骨格間隙の流路サイズ/シリカ骨格サイズ)比の効果を検討した。ドメインサイズの小さなシリカ連続体はより高い理論段数を与え、また流路/骨格比の大きなシリカ連続体は、低いカラム圧力を与えた。最高性能のシリカ連続体は、従来のカラムの10分の1のカラム圧力で、同等の理論段数を発生した。シリカ連続体力ラムをグラジエント溶出に用いて、広い分子量範囲のポリペプチドに対し、粒子充填型カラムより3倍以上速い高速、高性能分離を実証した。実用的なカラムの調製は今後の課題である。次の基礎的な課題は、骨格サイズを最小限とし、流路サイズを最大限として、圧力あたり、時間あたりの理論段数を最大限とする努力の限界を見極めることである。骨格サイズの減少と流路サイズの拡大の極限はオープンチューブであるが、シリカキャピラリー中にシリカ連続体の調製を試み、シリカ骨格量を非常に少なくしたときキャピラリー内に一様に分布した空隙率95%以上のシリカ連続体が得られた。このキャピラリー内シリカ連続体は、通常の粒子充填型力ラムと比較して1/10以下の分離インピーダンスを示し、理論的には粒子充填型カラムの10倍以上の性能をもたらす。移動相の流速の増加にともなって、顕著な理論段数の降下が見られたが、これは大きな流路に起因するものと考えられる。また、キャピラリー内の多孔性シリカ連続体を電気クロマトグラフィーのためのカラムとして用いたとき、圧力送液によって得られる理論段数の数倍の理論段数が得られた。シリカ連続体の開発は、圧力送液によるクロマトグラフィーの高性能化だけでなく、液体クロマトグラフィー全般の分離能力の向上に大きな要素となるものと考えられる。液体クロマトグラフィーの高速化と高性能化を目的として、粒子充填型カラムより高い性能をもたらすシリカ連続体について、ドメインサイズ(シリカ骨格サイズ+骨格間隙の流路サイズ)と流路サイズ/シリカ骨格サイズ比の効果を検討した。ドメインサイズの小さなシリカ連続体はより高い理論段数を与え、また流路/骨格比の大きなシリカ連続体は低いカラム圧力を与えた。シリカキャピラリ一中のシリカ連続体は、従来のカラムの20分の1のカラム圧力で、同等の理論段数を発生した。キャピラリー型シリカ連続体は、次世代に必要とされる10万段の理論段数の発生を可能としたが、(1)シリカ管壁へのシリカ骨格の結合、(2)骨格の収縮を避ける調製法、および(3)多様な選択性をもたらす化学修飾のためのオンカラム反応の開発等が、実用のための今後の課題である。同時に、粒子充填構造とネットワーク構造との差を考慮して、カラム性能の流速依存性を表す新規な性能-流速関係式の理論的、実験的解明が、次の基礎的な課題である。キャピラリー内シリカ連続体を電気クロマトグラフィーに適用したとき、25cmのカラムが8万段の理論段数を与えたが、さらなる高性能の発現のためには電気浸透流の増大が必要である。これらのアプローチにより、ミクロ液体クロマトグラフィーおよび電気クロマトグラフィーにおいて、1本のカラムにより現在より1桁高い10万段の理論段数の発生が可能となるものと考えられる。
多自由度モデルに基づく重い電子系超伝導の理論的研究

今年度は主に重い電子系超伝導体CeColn5におけるFFLO超伝導と反強磁性の共存相の可能性について研究を行った。超伝導の標準理論であるBCS理論では、クーパー対が運動量を持たないことが仮定されている。それに対して、有限の運動量を持つクーパー対の量子凝縮による超伝導相がFFLO超伝導である。CeCoIn5の低温高磁場において新しく見つかった超伝導相がFFLO超伝導相であるという指摘があったが、その相において反強磁性秩序が見つかったため、その正体は混迷を深めていた。この新しい超伝導相の正体を探るため、スイス連邦工科大学のManfred Sigrist教授と共同で理論研究を行った。d波超伝導と反強磁性の多重量子臨界点を記述する有効モデルを平均場近似によって解析した結果、この新しい超伝導相の正体がFFLO超伝導と反強磁性の共存相であることが分かった。我々の計算結果は相図の特徴をよく再現し、中性子散乱や核磁気共鳴の実験結果から得られた磁性の特徴とも一致した。理論的提案から40年以上を経たFFLO超伝導が重い電子系において初めて実現したことを強く示唆する研究成果となった。この研究成果に関する解説記事が科学雑誌「パリティ」に掲載された。他に、多軌道系超伝導体におけるスピン軌道相互作用と電子相関効果の協奏現象について研究を行った。ルテニウム酸化物超伝導体を念頭において構成した3軌道ハバード模型を動的平均場理論に基づいて解析した結果により、パウリ帯磁率とヴァン・ブレック帯磁率に対する繰りこみ効果を調べた。また、京都大学の実験グループとの共同研究により、重い電子系超伝導体URu2Si2における隠れた秩序下で起こる超伝導について研究を行った。4回対称性の破れに伴う超伝導2段転移の可能性を提案した。今年度は主に重い電子系超伝導体CeCoIn5におけるFFLO超伝導の可能性について研究を行った。この成果はJ.Phys. Soc. Jpn.の注目論文に選ばれるとともに、科学新聞において報道された。また、このように反強磁性臨界点近傍においてFFLO超伝導が起こる場合にランダムネスが及ぼす影響を調べた。不純物ポテンシャルを含む微視的モデルをボゴリウボフ-ド・ジャン方程式に基づいて解析した結果、新しいタイプのグラス相が現れることを見出し、これをFFLOグラス相と名付けた。その相において期待される磁気的性質を調べ、その空間分布と統計性に現れる特徴を見出した。
人口高齢化等の変化に対応した医療保険者の編成に関する国際比較研究

人口高齢化等の変化を背景として、医療保険の持続可能性を高めることが喫緊の政策課題となっているが、多数の保険者によって運営される日本の医療保険にとって、この課題への対応は容易ではない。日本と類似した医療保険制度を持つフランスとドイツでは、近年、保険者の編成をめぐる重要な改革が実施され、財政的安定や効率性・公平性の向上が図られている。そこで本研究は、フランス・ドイツとの比較考察に基づいて日本の医療保険者の編成の「あるべき姿」を示すことを目的とする。
中世末・近世初頭における農民逃亡について

従来の研究においては、中世農民の逃亡(逃散など)が領主に対する抵抗運動として認識されているのに対して、近世農民のそれ(「走り」者など)は、過重な負担にあえぐ彼らが没落して逃亡(走る)とされてきた。文禄2年(1593)大友吉統(義統)は、朝鮮侵略中に明軍の来襲を前に退去したとして、豊臣秀吉より豊後国と没収された。現存する同年の検地帳には「失人(うせにん)」の記載が多くみられ、逃亡百姓が多発し、耕作者のいない土地が多く出ていたことがよくわかる。大友吉統の豊後除国・秀吉による直轄領化という政治的要因が逃亡の要因となったのである。もちろん挑戦侵略にともなう過重な負担も考慮に入れなければならない。豊臣秀吉は薩摩・大隅・日向・筑後・長門国等に対して、豊後から逃亡した百姓の返還を命じ肥後には豊後から買われていった百姓を元の様に返すように命じている。これらの事例からして、没落して走る場合と前から計画をたてて行き先きを決めた移住者としての性格を有する場合もあったことがわかる。彼らのうちでいわゆる本百姓として自立する者も少なくなかったと思われる。領主層にとっては、年貢・夫役の徴収を増加させるためには他領からの流入者(逃亡者)を歓迎したと思われる。「無主」地(=荒地化)を少くするために、「走り」者を招き入れたと思われる。
肥満による慢性炎症が急性心筋梗塞に与えるインパクト：病態解明から治療への応用

肥満状態は代謝機能不全、多臓器不全を来たし様々な疾患において病態を複雑なものにすることが知られている。今回我々は高脂肪食を負荷した肥満マウスにおいて冠動脈結紮心筋梗塞モデルを作成、病態やメカニズムに関して検討を行った。肥満心筋梗塞マウスは死亡率が上昇し、マイクロアレイ解析によりPAI-1が予後悪化因子として考えられた。PAI-1阻害薬は肥満状態における心筋梗塞後の予後を改善した。また、PAI-1ヘテロ遺伝子欠損マウスにおいては梗塞後の心拡大抑制、心不全の軽減が見られた。PAI-1を抑制することにより肥満状態において重症化する心筋梗塞後リモデリングを制御、治療として介入できる可能性が示唆された。肥満では、まず脂肪組織に慢性炎症が誘導されるが、次第に全身性の慢性炎症を誘起し、心臓、肝臓、骨格筋などの臓器にインスリン抵抗性や脂肪毒性といわれる機能障害をきたす。急性心筋梗塞では、心筋壊死による急性炎症が起こるが、背景に肥満による慢性炎症状態が存在した場合、炎症が相互に波及し、過剰な炎症が各臓器に惹起される可能性がある。炎症は心臓リモデリングや心筋修復過程に影響を与える重要な因子であるが、肥満状態での過剰な炎症が心筋梗塞後の病態に与える影響は明らかではない。本研究では、心筋梗塞モデルマウスを用い、高脂肪食負荷による肥満状態が1心筋梗塞後の病態に与える影響、2心筋梗塞後-臓器間を介在する炎症のメカニズムを明らかにし、3炎症調節による心筋梗塞への治療応用の可能性を探求する。本研究計画では高脂肪食による肥満状態での心筋梗塞に対して、以下のテーマで研究を行う。(1)肥満による慢性炎症が心筋梗塞の病態に与える影響の検討(2)心筋梗塞発症後-臓器間連関メカニズムの解明(3)治療応用とそのメカニズムの解明本研究では野生型、遺伝子欠損マウスに対して肥満心筋梗塞モデルを用い、慢性炎症を背景とした心筋梗塞発症後の病態進展のメカニズムを明らかにし、治療への応用を検討する。平成25年度においては、遺伝子欠損マウスにおける検討を中心に行った。高脂肪食負荷により肥満状態とし、心筋梗塞モデルを作成、遺伝子欠損の有無で予後が変わるかを検討した。心エコー・臓器重量の測定を行い心不全状態・心筋梗塞後リモデリングの評価を行った。また、RNA・タンパク抽出用のサンプル、パラフィン切片用のサンプルを心筋梗塞後4日、7日、14日、28日において採取した。(1)肥満による慢性炎症が心筋梗塞の病態に与える影響の検討(2)心筋梗塞発症後-臓器間連関メカニズムの解明(3)治療応用とそのメカニズムの解明本研究では野生型、遺伝子欠損マウスに対して肥満心筋梗塞モデルを用い、慢性炎症を背景とした心筋梗塞発症後の病態進展のメカニズムを明らかにし、治療への応用を検討した。高脂肪食負荷により肥満状態とし、心筋梗塞モデルを作成し、検討を行った。全身性遺伝子欠損マウスを用いた検討を行ったが、十分な予後改善効果は得らなかったが、臓器特異的に発現を調節することにより、予後を改善する可能性が示唆された。平成26年度においては高脂肪食負荷肥満心筋梗塞モデルに、アデノ随伴ウイルスを用いた臓器特異的な遺伝子ノックダウンを行り、予後、心筋梗塞後リモデリングの評価を行った。また、RNA・タンパク抽出用のサンプル、パラフィン切片用のサンプルを心筋梗塞後、4日、7日、14日、28日において採取した。循環器内科高脂肪食負荷肥満モデルが心筋梗塞となった際に、予後に影響を与えると考えられる因子に関しては、遺伝子欠損マウスの自家繁殖を行っている。自家繁殖も順調であり、必要数の遺伝子欠損マウスを確保できている。また、心臓・肝臓・内臓脂肪・骨格筋といった対象臓器のサンプルを順調に採取できている。次年度に関しては採取したサンプルを元に発現遺伝子・蛋白の解析を行い、病態のメカニズムに関する考察ができるものと考えている。当初計画していた実験試薬が変更となり、未使用額が生じた。