hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
正常妊娠経過の初産婦における妊娠初期の睡眠の質と妊娠末期の血圧上昇との関連性

正常な妊娠経過をたどる妊婦を対象に、睡眠の質(睡眠マットを用いた客観的データによる睡眠の質と、睡眠日誌による自覚的睡眠の質の2種類)の測定と、家庭血圧測定法による血圧を妊娠初期・中期・末期における前向き縦断調査を行い、妊娠初期の睡眠の質が妊娠末期の血圧に与える効果を検証する。研究対象者は睡眠や血圧に影響を及ぼす合併症を持たない初産婦とする。
ストレスマイグレーションの熱制御増速機構の解明と金属ナノ・マイクロ材料の大量創製

応力勾配に起因する原子拡散現象であるストレスマイグレーション(Stress Migration:SM)を扱い、異なる金属薄膜試験片を用い、熱サイクル付与と雰囲気冷却なる条件を付加して表面形状の変化を観察し、原子を集積することへのこれら熱制御の効果を明らかにした。同時に熱制御による増速機構を解明することで、金属微細材料の大量創製に資する知見を得た。最終年度は計画した研究を遂行し、以下の研究実績を得た。1.原子排出への外部冷却の影響に関する調査実験金属薄膜サンプルの底面をセラミックヒータで加熱しながら、上面を外部空気で冷却できる装置(ペルチェ素子冷却装置)を構築した。これを用い、異なる加熱温度における雰囲気冷却の付与が与える、金属原子排出への影響を調査した。その結果、底面の加熱と上面の冷却を同時に行うことで、垂直方向に生じる温度差により応力勾配が誘起され、より多くの原子を排出させることが可能であることを見出した。また温度差が高くなると、原子の排出量が増加する傾向も見られた。2.原子排出への分布加熱の影響に関する検討規則的な温度勾配分布を作る目的で、微細穴配列(穴直径:75マイクロ,ピッチ:150マイクロ)を持つ金属マスクを設計し、ハロゲンランプと組み合わせて分布加熱装置を構築した。これを用い、金属薄膜サンプルを加熱して表面観察を行った。その結果、温度勾配分布を作り出すためには、穴とピッチの寸法をより大きくする等のさらなる検討を要することがわかった。3.効率的な原子排出制御金属薄膜構造と熱処理条件を制御することで、金属原子を効率的に排出することを実現した。まず異なる膜構造を持つSn薄膜において、加熱前後のSn薄膜の表面変化を観察することにより、独立した島状構造または明瞭な粒界を持つSn薄膜においてヒロックが多く生成し、一方、連続的な島状構造を持つSn薄膜においてウィスカが多く生成することを明らかにした。次に、Ag薄膜において加熱温度を増加させることにより、生成するヒロックの個数と体積が増加することを確認した。さらに表面保護膜に微細穴をあけ、保護膜のあるところとないところの境界(穴の縁)下のAgに応力勾配を付与することで、生成するヒロックの個数と体積が増加することを確認した。1.定温条件下と加速試験下における表面変化・断面実験観察Ag、Snの薄膜サンプルを作製し、微細ワイヤ生成と諸条件の関係を調べる目的で、事前熱サイクル付与の有無による影響、原子排出後の微細材料の形状形成に関与すると思われる雰囲気冷却の影響、および薄膜が多孔質のものと均一のものの場合の影響などに注目して試験前後の表面変化の観察を行った。2.表面変化・断面観察状況の定量的考察Agについての上記1の観察結果より、事前熱サイクル付与が多くの微細材料形成に有効であること、また雰囲気を冷却することが形成される微細材料のワイヤ状化に有効であること、さらにSnの結果より薄膜の水平方向に熱応力が伝達でき、原子が集積しやすい多孔質でない均一な膜状態のサンプルを作製することが重要であることを明らかにした。3.原子拡散の熱制御増速のメカニズム解明上記1、2の実験結果とAlにおける熱サイクル効果の実験結果についての考察を元に、原子拡散における熱制御による増速のメカニズムを解明した。原子の拡散量を示す原子流束は原子を拡散するための駆動力と原子拡散のしやすさを決める易動度の積によって決まる。一方、熱サイクルの付与回数の増加に伴い、結晶粒内に存在する空孔や欠陥が結晶粒界に徐々に集まる。その結果、結晶粒界における転位密度が増え、活性化エネルギーを低下させることにより易動度が大幅に向上する。この考察を踏まえた上で、原子流束の発散理論を用いて、易動度の向上はヒロックの体積の増加、個々の結晶粒における易動度の勾配の向上はヒロックの生成密度の増加につながることを初めて示した。実験により、ヒロックを元として形成される微細材料の形状(例えばワイヤ状や球状等)を制御するためには、薄膜サンプルの加熱温度に加えて、当該材料が形成する際の外気温度をも制御することが重要であることが判明した。また様々な条件を変えた試験の実施と観察、考察を行った上で、原子拡散における熱制御増速のメカニズムを解明した。この達成は当初の計画通りである。特に解明した熱制御増速のメカニズムによれば、熱サイクル試験の導入により、当初推測していた原子の易動度(原子拡散のしやすさ)の向上に加えて、易動度の勾配も金属微細材料の形成を促進する効果があることを初めて明らかにした。まず、金属微細材料を生成するために、適切な膜厚を持つ人工保護膜を付与した状態で、外気温度を意図的に変化させた場合に、ヒロックを元として形成される微細材料の形状をうまく制御できるか否かを検証する。次に23年度に解明した熱制御増速のメカニズムにおける易動度の勾配が金属材料の形成を促進する効果があることに着目して、易動度の勾配を意図的に作り出すために規則性の温度勾配分布を与える試験方法を提案する。以上より24年度は、23年度に得られた実績から顕著な効果が期待できる、

(4)外部冷却によるヒロックの形状制御、(5)規則性の温度勾配分布加熱によるワイヤアレーの生成、を推進することを踏まえて、最終的に(6)Al・Ag・Au微細材料の効率的人工創製の達成を図る。次年度使用額は、次の理由により生じたものである。当初計画していたAu薄膜サンプルの実験を、原子拡散がより活発でその基礎を追求し易いSn薄膜サンプルに変更して実施したことで、原料の購入費が減額となった。また旅費については、当初予定していた費用より少ない額で実施できた。これは研究代表者と研究分担者が研究進捗状況を随時把握し、必要最低限かつ効率の良い研究打合せを実施し、一方で調査研究のための旅費の支出を控えたためである。今年度の未使用額と平成24年度請求額をあわせ、次年度に計画している研究の遂行に使用する予定である。具体的には、実施予定の(4)外部冷却によるヒロックの形状制御実験では、薄膜サンプルをセラミックヒーターで加熱しながら外部空気を冷却できる装置が必要である。このような装置は市販されておらず、独自に設計し構築する必要がある。また(5)規則性の温度勾配分布加熱によるワイヤアレーの生成実験では、規則性のある温度勾配分布を作り出せる加熱機構を検討する必要がある。当初想定していなかったこれらの費用を平成23年度の未使用額で補い、(6)Al・Ag・Au微細材料の効率的人工創製の研究を推進していく。
実験用霊長類における血漿タンパク質の免疫学的研究

実験用霊長類は医学領域の研究実験に多く供され、今後ますますその利用は増加するものと思われる.しかし、その動物資源は限りあるものであり、実験の倫理的問題をも含め、動物の有効な利用が一層計られなければならない。本研究は実験用サルとして一般的なカニクイザルに注目し、ヒトを含めたサル類およびその他の哺乳類との間の血漿タンパク質の分子遺伝学的差異を明確にし、また集団レベルでの成長および老化における各種血漿タンパク質の質的、量的血中動態を検討した。対象としてプレアルブミン、アルブミン(Alb)、al酸性糖タンパク、ハプトグロビン(Hp)、ヘモペキシン(Hx)、セルロプラミスミン(Cp)、トランスフェリン(Tf)、α2マクログロブリン(α2M)、フィブリノ-ゲン(Fib)、IgGおよびAなどの分離精製を行った。精製タンパクは家兎に免疫し、大部分で良好な抗血清を得た。これを用いて各種漿タンパク質の血漿中濃度を年齢をおって定量操作した。現在4ないし5歳例を中心としての測定を開始し、対象齢の巾をそれぞれ3もしくは7歳例にまでひろげている。ここではHxがヒトに比べ大幅に少ないことや代ってTfは約倍量を有する、また今回定量を行なった全てのタンパクについて漸減型の傾向が見られた。とくにヒトで漸減型をしめすしいわれるHp、IgGで漸減型の傾向が見られた。さらにHxでの漸減型の傾向はヒトでの日本人で得られた結界と同様のものであった。さらに妊娠期については分娩前後にAlb値が低下すること。また妊娠分娩の全期にわたってHp値の大きな変動が見られた。実験繁殖群個体の各種血漿タンパク質遺伝子座の表現型を観察した。89例の対象に於て、Hpで多型を示す1頭を、Tfでも3頭を見いだした。現在、免疫中で未だ充分な抗体価を示していないα2M、Cp、Fibなどについても、抗血清が得られた段階で測定を開始したい。今年度はまずカニクイザルの血漿タンパクの中からプレアルブミン、アルブミン、al酸性糖タンパク、ハプトグロビン、ヘモペキシン、セルロプラスミン、トランスフェリンなどのタンパクについて分離精製を行った。特に本研究のために作成した分離用ポリアクリルアミド電気泳動装置を用いてタンパクの分離精製作業を行ったため幾つかの蛋白質の分離については少量のサンプルから効率良く作業を進めることが出来た。プレアルブミン、アルブミン、トランスフェリン等についてはこの分取用電気泳動を数回繰り返すことで他の精製法をまったく用いずに分離精製が可能であった。本装置については技術報告を行いたいと考えている。精製後のタンパクについては家兎にFreund Adjubantとともに免疫を行い、充分な力価を有する免疫血清を得た。今年度中に分離し得なかった新たな血漿タンパクについては引続き分離精製作業を継続している。来年度は今年度に採取し得た血清を用いてカニクイザルの実験繁殖群固体の血漿タンパク質を高分解能アガロ-ス電気泳動および二次元電気泳動法により分画し、その後、ウエスタンブロッティング法およびポリクローナル抗体を用いた免疫学的固定法により、各種血漿タンパク質遺伝子座の表現型を観察する。また、ポリクローナル抗体を用いて一次元免疫拡散法、エレクトロイムノアッセイ法および酵素抗体法によりカニクイザル血漿を試料としての各種タンパク質の血漿中含有量を年齢をおって定量操作を行いたい。

本年度は前年度にカニクイザル血漿から分離・精製したプレアルブミン、アルブミン、α1酸性糖タンパク、ハプトグロビン、ヘモペキシン、セルロプラスミン、トランスフェリンについてのポリクロ-ナル抗体の抗血清採取、および新たなタンパクとしてフィブリノ-ゲンの精製を行なった。しかし抗血清採取を行なっていた家兎が疾病に罹患し、数頭を失った。この事故により実験に大幅な遅れが生じた。失ったアルブミン、ハプトグロビン、ヘモペキシン、トランスフェリンについては、再度血漿より精製作業を行ない、現在、アルブミン、トランスフェリンについては良好な抗血清採取を再開した。以上の理由により、今年度分離予定のタンパク質は、その対象を縮小せざるを得ず、新たなタンパクとしてはフィブリノ-ゲンの精製にとどまった。次にカニクイザルの実験繁殖群個体の血漿タンパク質の血漿中濃度については、単純免疫一次拡散法、ロケット電気泳動法などについての予備試験を実施した。その結果、単純免疫一次拡散法を用いて、カニクイザル血漿を試料としての各種タンパク質の血漿中含有量を、年齢をおって定量操作を開始した。現在、最も実験用として用いられることの多い3、4、5歳齢を中心に、より高齢の6、7歳齢の動物について測定を行なっている。試料としては生後0日例より12歳齢に至るものを、本年度確保し得たので、今後随時検討を行なう。さらに高圧アガロ-ス電気泳動および二次元電気泳動に続く、免疫固定によりカニクイザル血漿タンパク質の遺伝多型については、トランスフェリン、ハプトグロビンの2種について検討した。その結果、ハプトグロビンに於て移動度の早い、ヒトに於てファストタイプと思われる1個体を見いだした。今後さらに試料を追加して観察を続ける予定である。
テオドール・ド・バンヴィルにおける叙情の理論と実践

テオドール・ド・バンヴィルの「抒情」に大して、その理論と実践を比較することで明らかにすることを目指した当研究は、理論面についてはその『フランス詩小論』の詳細な分析によって、一定の成果を得、ボルドー第三大学の論文集『モデルニテ』に寄稿することを得た。その他の理論的テクスト、批評的テクストについては、作家の50年分にも及ぶ膨大な量の問題から、十分には収集することができず、その点では不満が残る。一方、実践に関しては、バンヴィルが抒情詩のみならず詩の最上の形とする「オード」を特徴づける、「詩節「について、今までのどの先行研究よりも充実した資料体を設定し、詩集、演劇を含む全ての韻文作品の詩節の構造について記述を行った。そして、それらの記述をまず、おおまかにクロノロジックな順序で詩集、上演順で演劇作品において行い、バンヴィルにおける詩節にかかわる展開を詳細に記述することに成功した。また、詩節のフォルムを分析の規準とし、それぞれの形式の全体に占める割合を明らかにすることに成功した。これらの分析の成果は、Theorie etpratique du lyrisme chez Théodore de Banvilleのタイトルリヨン第二大学に受理され、2015年4月16日に博士号を取得した。また、新たに詩句の構成の際の音楽の役割に注目し、バンヴィルと作曲家のコラボレーションの結果であるシャンソンや演劇の伴奏の音楽を比較し、2014年10月広島大学での日本仏語仏文学会秋季全国大会で研究発表を行っている。26年度が最終年度であるため、記入しない。初年度計画においてまず目指した、19世紀フランスにおける「叙情」Lyrismeの概念の定義についてはシルヴァン・ルマジュールSylvain LemajeurのLe Lyrisme dansl'oeuvrepoetique de Stephane Mallarmeが新たな重要文献として加わり、ジェネラルな先行研究を基礎としつつもさらに今回の研究の対象であるテオドール・ド・バンヴィルの活動した19世紀後半に特化した研究として大きな貢献をなした。バンヴィルにおける叙情は19世紀ロマン主義からの反古典主義的態度の中に位置づけられるものであり、特に風刺的で滑稽なテクストにおいても共存しうるオリジナルなものである。叙情概念の定義と平行して行われた、バンヴィルの叙情の理論面の把握には、多くは定期刊行物に発表されたままになっている批評文の存在を無視することはできない。本年度はバンヴィルの活動の前半から中盤まで(1848-1869)の劇評、時評の収集を終えたが、1869年から彼の1891年の死までに残されている文章の量は少なくなく、二年目においても、理論と実践面から詩人の叙情概念の総合を目指す作業と並行しつつ収集を続行する必要がある。バンヴィルの生前に出版された理論的テクストの中で最も重要な『フランス詩小論』については、概説的な論文を一本執筆することができた。バンヴィルの詩的実践における叙情の諸相をさぐるべく、彼の韻文作品は全て検討分析の対象となる。まず彼が生前に編んだ詩集から外されたもの、生前詩集に収録されなかった一連の作品を分析し、その韻律的特徴を全て記述することができた。また、昨年度中に2011年より刊行の始まっていたシャンピオンのバンヴィル戯曲全集が完結し、そこには多くの未発表の作品が含まれている。それらの作品の詩句についてもすでに記述・分析をすませた。これにより、バンヴィルの韻文コーパスは、ドゥヴォシェルDevauchelleによる先行研究よりも相当に大きなものとなった。19世紀フランスおよびバンヴィルについての重要な研究が複数発表され、バンヴィルにおける叙情の概念の規定には大きく貢献した。

一方、バンヴィルの理論的テクストの収集については彼のキャリアの前半部が終了した。量的には後半部に比して大きくはないが、二年目は初年度に得たノウハウによってより速やかな収集が可能になるものと思われる。2015年2月提出、2015年4月審査修了合格。叙情についての先行研究を踏まえ、バンヴィルの叙情について、彼の詩的実践と理論的テクストから読み取れるものの総合を測る。バンヴィルの詩的実践の分析については、ほぼ全ての詩句の記述が終わっており、それらのデータの総合を行う。理論面でのコーパスの完成、およびそこからバンヴィルの理論的立場をよりはっきりしたものとする。そのためにはバンヴィルの未発表理論的テクストの収集をいち早く終えなければならない。
多様なニュースサイトの比較による報道スタンスの分析と可視化の研究

本年度は、本研究の分析の基盤となる報道スタンスについて、特定のスタンスに属するサイトにおける特徴語について検討するとともに、単純な賛否のみに注目した分析だけでなく、ニュース記事の分類に基づいたスタンスの詳細化を行う方法を提案した。本手法では、ニュース記事の分類と賛否の情報を組み合わせることで、外交には賛成だが、経済では反対といった、より、詳細なスタンス分析が可能となる。本手法は、ユーザの興味(経済には興味はあるが外交には興味がない)と組み合わせることにより、興味に応じたスタンスの分析などに発展することが期待できる。また、ニュース記事の賛否情報を含むメタデータのデータベースであるGDELTにおいて、不足している本文の情報について、可能な限り収集する枠組を構築し、本研究で用いるデータベースの拡充も行なっている。さらに、GDELTについている賛否情報について、その妥当性を検証するとともに、必要に応じた、再評価を行うために、深層学習による意見分析システムについても実装をはじめ、その有用性を検討している。また、ニュース記事中の固有名詞とそのタイプを扱うために、Wikipediaのカテゴリ情報に注目した名前付き実体の分類のためのオントロジー構築についても、並行して研究を行なっている。このオントロジーとWikipediaのページのリダイレクトの情報を利用した異表記に関する知識を作成することで、名前付き実体の異表記を取りまとめて扱う方法についても検討を行なっている。本年度は、本研究の分析の基盤となる報道スタンスについて、単純な賛否のみに注目した分析だけでなく、ニュース記事の分類に基づいたスタンスの詳細化を行う方法を提案するとともに、その特徴語を収集する方法を提案した。これは、本研究で用いる基盤技術であり、今後のユーザインタフェースの構築や利用実験を行なって行く際の基盤となる。また、本研究で利用するGDELTのデータの品質向上のための研究として、オピニオンマイニングやオントロジー構築についても検討しており、今後のデータの洗練化につなげていきたいと考えている。今後は、ユーザインタフェースや利用実験のための環境を整えていくとともに、この基盤技術の洗練化も並行して行なっていく予定である。本年度は、昨年度までに検討を進めてきたニュースのカテゴリを用いた報道スタンスの詳細化の結果として得られたカテゴリに特徴付けられたスタンス(外交には賛成だが、経済では反対といった、記事のカテゴリを考慮した詳細化したスタンス)の考え方に基づいた可視化システムを構築する。具体的には、ユーザの興味のあるカテゴリを考慮して、興味のあるカテゴリで類似したスタンスを持つものを近くに配置するといったインタラクティブな操作を可能とすることで、ユーザの興味に応じたニュースサイトの俯瞰的な分析を可能とする。また、前年度に行なった報道スタンスの詳細化に用いるニュース記事のカテゴリ分類についても、より大規模なデータを利用することで、精度の高い記事のカテゴリ推定が行える方法についても検討を行う。これらの枠組みについて、特定の話題(大統領選挙期間中のニュース記事)を題材として、簡単な動作検証を行う。並行して、オピニオンマイニングの結果や、名前付き実体に関するオントロジー構築の結果を考慮した名寄せ(異表記の取りまとめ)などのデータの洗練化の手法についても検討する。また、前年度に行なった報道スタンスの詳細化に用いるニュース記事のカテゴリ

分類についても、より大規模なデータを利用することで、精度の高い記事のカテゴリ推定が行える方法についても検討を行う。これらの枠組みについて、特定の話題(大統領選挙期間中のニュース記事)を題材として、簡単な動作検証を行う。並行して、オピニオンマイニングの結果や、名前付き実体に関するオントロジー構築の結果を考慮した名寄せ(異表記の取りまとめ)などのデータの洗練化の手法についても検討する。
メンタルクローニングに基づく知的インタラクションシステムの構築

人と機械のインタフェースを深化するために、メンタルクローニングと呼ぶメンタルモデルを活用するシステムを提案した。これは感情が行動決定に影響を及ぼすという考えに基づき、ユーザとシステム間の最良協調実現を試みる。具体的には、映像と音声から感情抽出に必要な情報を獲得する。さらに推論を行い、適切な行動決定を試みる。またユーザとの相互交流を行う役割も果たし、医療サービスなどを向上させることが目標である。顔画像からの感情認識においては、従来手法における「同じ表情が持つ意味が状況によって異なる」「表情を構成する顔の動作が個人差を持つ」という問題点の解決を目指し、状況情報を利用した新たな表情認識手法を提案している。ここでは、状況情報としてシステムが対面している利用者の「文化」「年齢」「性別」「顔の形状」といったユーザプロファイルを導入し、これにより利用者を分類することで表情認識の精度の向上を図っている。すなわち、上記問題点の特に後者の解決を図った手法を提案している。さらに,複数名の被験者による実験により本手法が有効に機能する可能性を示している。音声からの感情認識については、従来手法に加え、音声認識技術を活用する手法を提案した。音声認識技術は、音声から発話内容(主に単語)を抽出するための技術であり、その過程で音声を音素に分割する。本手法ではこの点に着目し、音素ごとの特徴を抽出し、それを用いて感情推定を行う。また、音素を組み合わせることによって音節が構築できる。その点から、音節ごとの特徴を抽出し、それを用いた感情推定も行う。さらに従来の手法では、特徴は、発話単位であったのに対し、音素や音節ごとの特徴の変化に着目した。これらの手法により、幾つかの感情に対しては、従来よりも精度を高めることができる可能性を示した。メンタルクローニング実現手法の確立のため、表情(画像)および音声に着目し、人出力それぞれに対し、新しい手法を提案、検証を行った。表情からの感情推定では、一つ目のアプローチとして、自然な表情に基づく表情からの感情推定手法を提案した。この手法は、特定の感情を示したと判断される表情をシステムのモデルとなる人物の主観により抽出し、同一感情として抽出された表情に共通する顔動作に着目する手法である。本手法によりこれまで困難であった真の笑顔と演技の笑顔を識別できる可能性を示した。二つ目のアプローチとして、ユーザの姿勢、視線を検出し、利用者のシステムへの関心を推定するための手法開発を進めた。またCG表情による感情伝達においては、既存のCGアニメーションによる感情伝達を参考に顔モデルの再構築を行った。本モデルを用いた一般人に対する実験においては、感情伝達能力の向上が見受けられた。その一方で、人との相互作用の自然さに関しては、顔モデルの再構築を行う前後で評価結果に明確な差は見受けられなかった。音声からの感情推定に関しては、学習データをその特徴量から事前に細分化することにより、学習データの質の向上を図った。これにより、学習データが洗練化され、学習精度や感情推定精度が上がることが期待できる。実際にテストデータを用いた評価の結果、従来手法より精度の向上が見られた。また音声合成による感情伝達については、音楽理論に基づき話し方を変える方法に着手した。これは、音楽が聞き手の感情に与える変化に着目し、それを音声合成に援用することを試みるものである。現在、いくつかの限定をしているが、基本的な考えをまとめ、簡単な実験システムを作成し、評価実験を行った。結果、感情種類による差はあるが、表出を試みた感情と実験参加者の答えた感情と30%程度一致した。画像班では、知的インタラクションシステム構築に必要なユーザの性格モデルを、顔画像から抽出する顔特徴と人相学の知見を関連付けることで、心理学で利用されるエゴグラムとして推定する手法を提案した。評価実験により、手法の有用性を示した。また、カメラで捉えることができるユーザとシステムの距離、顔の傾きをもとにどの程度没入して回答しているかの推定を試みる枠組みを提案した。プロトタイプを用いた実証実験の結果、一定レベルの推定が可能であることを示した。音声班では、従来の音声からの感情推定に対し、クラスタ分析を用いた訓練データ細分化による精度向上手法を提案した。評価実験により、従来の推定結果よりも精度向上が図れることを確認した。また、音楽と感情に関して得られている知見に基づき、音楽理論に基づいた感情表現音声合成による手法を提案した。評価実験を通し、本手法の有用性を示すとともに、音声では、音楽理論とは異なる調整が必要となることを明らかにした。推論班では、過去のインタラクション事例を基に構築するベイジアンネットワークを活用した推論エンジンの基本アルゴリズムを策定した。さらに本アルゴリズムに基づきプロトタイプシステムを構築した。本プロトタイプでは、医師へのインタビュー結果に基づき構築した狭心症に対するベイジアンネットワークによって、ユーザの回答から、「診断必要」「検査必要」「経過観察」の3毅階の評価を行う。このシステムを使い、評価実験を行った。評価の結果、有用である可能性を示すとともに、新たな課題を見出した。
臨床応用可能な新たな人工赤血球・人工酸素供与体の開発と応用に関する研究

人工赤血球として用いるヘモグロビン(Hb)修飾体では、一酸化窒素(NO)消去による血圧上昇、血小板活性化・凝集亢進が惹起され、臨床応用上問題となる。これはHb分子中のヘムが、血管内皮細胞や神経終末より分泌されるNOを消去するためと考えられる。本研究では臨床応用可能な人工赤血球として、Hb修飾体のSH基をS-ニトロソ(SNO)化し、NO供与能を有するHb修飾体を開発した。また、新たな人工酸素供与体創製を企図した。1.分子サイズの大きくすべくHbをPEG化したPEG-Hb、さらにそれをSNO化したSNO-PEG-Hbを作製した。2.ラットヘアルブミン、無修飾Hb、PEG-HbおよびSNO-PEG-Hbを静注し、その肝・腎への影響・毒性を経時的に14日後までに観察した結果、SNO-PEG-Hbで最も影響が少なかった。4.PEG-Hbの臨床応用としてイヌの寄生虫性(バベシア)急性貧血に応用し、ある程度の有用性を確認した。6.新規乳化機を用い、PFC用エマルジョンを開発し、新たなPFC製剤を創製した。7.新規PFCを小児で人工心肺を行う際の血漿補助液として用い得るかに関し、イヌを用いたシュミレーション実験を行い、その有用性とアルブミン併用の必要性を確認した。8.新規PFCを肝移植時の肝保護液としての可能性を検索すべくシュミレーション実験を行い、その有用性を確認した。9.新規PFCの急性毒性実験を行った。人工赤血球として現在まで開発されたヘモグロビン(Hb)修飾体では、一酸化窒素(NO)の消去による血圧上昇、血小板の活性化・凝集亢進が惹起され、臨床応用上副作用として問題となる。これはHb分子中のヘムが、血管内皮細胞や神経終末より分泌されるNOの作用を消去するためと考えられる。本研究では臨床応用可能な新たな人工赤血球として、Hb修飾体のSH基をS-ニトロソ(SNO)化し、NO供与能を有するSNO-Hb修飾体を開発すること、また、新たな人工酸素供与体の創製することを企図した。1.新たな分子サイズの大きなHb修飾体(新たなPEGを導入したPEG-Hb)を作製し、さらにそれをSNO化したSNO-PEG-Hbを合成した(研究分担者仲井)。2.ラットへの静注後のPEG-HbおよびSNO-PEG-HbのNO部分の血中半減期を計測した(研究分担者仲井)。また、PEG-HbおよびSNO-PEG-Hb静注後の循環動態への影響を計測し、血中・脳内NO濃度をマイクロダイアリシス法で経時測定した(研究分担者富樫)。さらに脳内ミトコンドリア内酸素濃度を特殊色素を用い、脳への酸素供与能を検索した(研究代表者佐久間および研究協力者坂野上)。3.ラットへのHb、SNO-Hb、PEG-HbおよびSNO-PEG-Hb静注後の各種Hb修飾体の血小板活性化を比較した(レーザー散乱光を用いた血小板凝集能の解析)(研究分担者藤井)。また、血中セロトニンへの影響を検索した(研究分担者富樫)。5.新規乳化機を用い、パーフルオロカーボン用のエマルジョンを開発し、その物性を検索した(研究代表者佐久間、研究分担者仲井および研究分担者福島)。人工赤血球として用いるヘモグロビン(Hb)修飾体では、一酸化窒素(NO)の消去による血圧上昇、血小板の活性化・凝集亢進が惹起され、臨床応用上副作用として問題となる。

本研究では臨床応用可能な新たな人工赤血球として、Hb修飾体のSH基をS-ニトロソ(SNO)化し、NO供与能を有するHb修飾体を開発すること、また、新たな人工酸素供与体を創製することを企図した。1.分子サイズの大きなHb修飾体(PEGを導入したPEG-Hb)を作製し、さらにそれをSNO化したSNO-PEG-Hbを合成して研究者に供給した(研究分担者仲井)。2.ラットヘアルブミン、無修飾Hb、PEG-HbおよびSNO-PEG-Hbを静注し、その肝・腎への影響・毒性を経時的に14日後までに観察した(研究分担者仲井、富樫、吉岡、佐久間)。3.Hb、SNO-Hb、PEG-HbおよびSNO-PEG-Hb、さらに新規PFC製剤の血小板活性化への影響をフローサイトメトリーで接着因子やllbllla抗原発現、ガラス板法で血小板粘着能、およびレーザー散乱型凝集計で血小板凝集能を評価した(研究分担者藤井)。4.新規乳化機を用い、パーフルオロカーボン(PEC)用エマルジョンを開発し、新たなPFC製剤を創製して研究者に供給した(研究分担者福島)。5.新規PFCを小児で人工心肺を行う際の血漿補助液として用い得るか否かに関し、イヌを用いたシュミレーション実験を開始した(研究分担者佐久間)。6.新規PFCを肝移植時の肝保護液としての可能性を検索すべくシュミレーション実験を開始した(研究分担者佐久間)。7.SNO-PEG-Hbの臨床応用としてイヌの寄生虫性急性貧血に応用を開始した(研究分担者仲井)。人工赤血球として用いるヘモグロビン(Hb)修飾体では、一酸化窒素(NO)の消去による血圧上昇、血小板の活性化・凝集亢進が惹起され、臨床応用上副作用として問題となる。これはHb分子中のヘムが、血管内皮細胞や神経終末より分泌されるNOの作用を消去するためと考えられる。1.分子サイズの大きくすべくHbをPEG化したPEG-Hb、さらにそれをSNO化したSNO-PEG-Hbを作製した。2.ラットヘアルブミン、無修飾Hb、PEG-HbおよびSNO-PEG-Hbを静注し、その肝・腎への影響・毒性を経時的に14日後までに観察した結果、SNO-PEG-Hbで最も影響が少なかった。4.新規乳化機を用い、PFC用エマルジョンを開発し、新たなPFC製剤を創製した。5.新規PFCを小児で人工心肺を行う際の血漿補助液として用い得るか否かに関し、イヌを用いたシュミレーション実験を行い、その有用性とアルブミン併用の必要性を確認した。6.新規PFCを肝移植時の肝保護液としての可能性を検索すべくシュミレーション実験を行い、その有用性を確認した。7.SNO-PEG-Hbの臨床応用としてイヌの寄生虫性(バベシア)急性貧血に応用し、ある程度の有用性を確認した。
就学前後の文章産出能力の発達ー文章産出における知識と感情の役割ー

文章を産出する過程でどのような知識が必要か、また、どのように発達するかについて幼児期児童期の入門期前後の子どもを対象に明らかにすることを目的にして、実験研究と観察研究を実施した。(1)実験研究;1昨年から開始した縦断研究の2年目を実施した。幼児期年長組5月、2月時点で行なった口頭作文と書字作文の資料の揃っている小学校1年生の児童を対象に、5月と9月の2時点に、特定のテ-マを与えて、口頭様式と書字様式で物語作文、説明作文を産出させ、産出過程を観察した。これらのデ-タと視写テストや読書力テスト等で測定した読み書き能力や文字の道具的価値についてのインタビュ-デ-タとを比較し、関連を検討することにより、作文産出に関わる知識と、その発達過程について一定の関連を明らかにした。その結果、幼児期の終わりには口頭での文章表現力はかなり整ってくるが、書字能力の個人差はきわめて大きく、口頭作文に比べて書字作文能力は極めて低い。しかし、5月ごろにはかなり書字力が出てきて、文字の道具的価値も認識しはじめる。産出過程では外言を随伴させ、1字ずつ書く書き方もかなり観察され、外言による制御が必要である。しかし、9月には、読み書き能力が格段と進歩するに従って、句読点などの基本技能が習得され、書字速度は短縮され、誤字率は低くなる。また、書字過程に外言の随伴も見られなくなるに呼応して、自発的に誤字や文の修正ができるようになり、読み書き能力の個人差は少なくなる。口頭作文では、幼児期の終わりに半数が会話体から文章体に移行し、書字作文では、1年生の9月に半数が文章体に移行することが明らかになった。(2)観察研究;1年生1学期3学期までに週に1度の割合で、国語の授業を観察し、担当教師にインタビュ-を行った。(1)の結果と対応させて、教授法と読み書き能力の発達の関連を検討した。
脂質異常症の質的な評価と動脈硬化性疾患の関連についての地域疫学研究

HDLの上昇をターゲットとした多くの臨床試験では動脈硬化性疾患の予防効果が得られていない。近年、HDLの抗動脈硬化作用については単なる血中濃度ではなくその質的・機能的な評価が重要であることが指摘されている。本研究ではHDLの酸化・変性修飾に焦点を当てて日本人集団の脂質異常症の特徴を明らかにする。リポ蛋白の酸化・変性修飾については内皮のLectin-like oxidized LDL Receptor (LOX-1)の結合能で評価し、そして複数のコホート集団においてこれらの指標と動脈硬化性疾患の発症、頸動脈内膜中膜複合体や冠動脈石灰化、大動脈の弾性など様々なアウトカムとの関連を検証し、同時にHDLの質的な側面に影響を与える生活習慣指標も明らかにする。過去3年間で1変性HDLの測定系の確立と民間検査機関への技術移転(測定手法について論文公表)、2滋賀県草津市の男性1009人、神戸市の男女1011人の変性HDLの測定、3飲酒、喫煙と変性HDLの関連の検討、4変性HDLと冠動脈石灰化との関連の検討、5変性HDLとCAVI(大動脈弾性機能の指標)、6脳・心血管疾患発症者127人と対照群381人の変性HDLの比較、と順次検討した。その結果、喫煙が変性HDLを増加させること、変性HDLは冠動脈石灰化やCAVIの上昇と関連するが冠動脈石灰化との関連がより明瞭であること、コホート内症例対照研究で変性HDLが脳・心血管疾患の発症と関連する可能性が示された。最終年度は冠動脈石灰化、喫煙との関連についての論文公表の準備を進めると同時に、コホート内症例対照研究を進めて変性HDLの意義を明らかにする。初年度は血中ApoA1含有LOX-1リガンドを変性HDLとして測定する新しい測定手法を開発し、民間検査機関への技術移転を進めた。そして滋賀県草津市のコホート集団男性1009人の変性HDLを測定した。変性HDLの平均値は204±89.7 ng/mlであり、喫煙はHDLコレステロールと負の相関を認めたが、変性HDLとは正の相関を認めた。昨年度(2年目)は変性HDLと冠動脈石灰化との関連をみた。その結果、変性HDLが一標準偏差(89.7 ng/ml)高いと冠動脈石灰化有病率オッズ比は1.22(95%信頼区間:1.05-1.42)であった。また神戸研究参加者男性301人、女性699人の凍結血清を用いて変性HDLを測定した。このうち大動脈弾性機能の指標であるCAVI(Cardio Ankle Vascular Index)を測定した女性413人について変性HDLとの関連をみた。変性HDLの4分位群内の高CAVI者の割合(9.0以上)は、7%、6%、15%、17%であったが(P= 0.013)、この関連は交絡要因を調整すると消失した。今年度(3年目)は変性HDLの測定系について論文公表を行った。また山形県鶴岡市住民のコホートにおいてコホート内症例対照研究を実施した。約4.0年の追跡期間中に127人の脳・心血管疾患が新規に発症し、性・年齢等をマッチさせた健常対照群381人を選定した。ベースライン調査時の凍結血清を用いて変性HDLを測定すると、脳・心血管疾患群で175 ng/ml、対照群で151 ng/mlであった(P<0.001)。脳・心血管疾患発症の年齢調整オッズ比は、対数変換した変性HDL1単位あたり1.89(95%信頼区間: 1.11-3.21)であった。今後、病型別の解析や交絡要因の調整を実施する。神戸研究や滋賀のデータの解析を進めて、栄養や運動などより詳細な生活習慣要因と変性HDLの関連を検討してその規定要因をより明確にする。また変性HDLとCAVIの関連についても論文公表を行い、さらにシスタチンCで評価した腎機能(eGFR)との関連なども明らかにする。冠動脈石灰化と変性HDLの関連については現在、論文作成中であり年度内に公表する。さらに山形県鶴岡市(鶴岡メタボロームコホート研究)等で測定した変性HDLの値を用いてコホート内症例対照研究を完了させ、変性HDLと冠動脈疾患、脳卒中の発症との関連を明らかにする。この検討では、高血圧や糖尿病、喫煙、LDLやHDLを調整した条件付きロジステック回帰分析を行う。また他の地域フィールドにおいてもコホート内症例対象研究を検討する。酸化HDLの測定系については、研究期間中も順次改良を進めて行き、より安定して再現性が高い簡便な測定法の確立を目指す。また過去に変性LDLの測定を行っている集団では、変性LDLと変性HDLの積等と動脈硬化指標の関連について明らかにする。また公衆衛生的な視点での研究成果の公表と普及を行っていく。HDLを上昇させる臨床試験では動脈硬化性疾患の予防効果が得られていない。LDLの動脈硬化惹起作用については単なる血中濃度ではなくその質的な評価が重要であることが指摘されており、これはHDLでも同様と考えられる。

本研究ではリポ蛋白の酸化・変性修飾については内皮のLectin-like oxidized LDL Receptor (LOX-1)の結合能で評価する。そして複数のコホート集団においてこれらの指標と動脈硬化性疾患の発症、頸動脈内膜中膜複合体や冠動脈石灰化、大動脈の弾性など様々なアウトカムとの関連を検証し、同時にHDLの質的な側面に影響を与える生活習慣指標も明らかにする。過去2年間で1変性HDLの測定系の確立と民間検査機関への技術移転(変動係数はintra CVで7%、inter CVで15%程度)、2滋賀県草津市の男性1009人、神戸市の男女1011人の変性HDLの測定、3飲酒、喫煙と変性HDLの関連の検討、4変性HDLと冠動脈石灰化との関連の検討、5変性HDLとCAVI(大動脈弾性機能の指標)、との関連を順次検討した。その結果、喫煙が変性HDLを増加させること、変性HDLは冠動脈石灰化やCAVIの上昇と関連するが冠動脈石灰化との関連がより明瞭である可能性などが明らかとなった。今年度はCVAIとの関連についての詳細な解析、冠動脈石灰化や喫煙との関連についての論文作成を進めると同時に、複数の地域コホート集団で脳・心血管疾患との関連についてコホート内症例対照研究を進め、ハードエンドポイントと変性HDLの関連について検証する。初年度は血中ApoA1含有LOX-1リガンドを変性HDLとして測定する新しい測定手法を開発し、民間検査機関への技術移転を進めた。そして滋賀県草津市のコホート集団男性1009人の変性HDLの測定を実施した。この測定の変動係数はintra CVが7.1% (n=16)、inter CVが14.1% (n=15)であった。変性HDLの平均値は204±89.7 ng/mlであり、喫煙はHDLコレステロールと負の相関を認めたが、変性HDLとは正の相関を認めた。昨年度(2年目)はその解析を進めてMDCT等で計測した冠動脈石化化との関連をみた。その結果、変性HDLが一標準偏差(89.7 ng/ml)高いと冠動脈石灰化の有病率オッズ比は1.22(95%信頼区間: 1.05-1.42)であった(年齢、喫煙、BMI、高血圧、糖尿病、Non-HDL、HDL、脂質異常症の治療の有無を調整)。神戸研究参加者男性301人、女性699人の凍結血清を用いて変性HDLを測定した。この測定の変動係数はintra CVが7.5% (n=16)、inter CVが15.2% (n=13)であり、変性HDLの平均値は男性161±120、女性は149±124 ng/mlであった。このうち大動脈弾性機能の指標であるCAVI(Cardio Ankle Vascular Index)を測定した女性413人について変性HDLとの関連を検討した。変性HDLの4分位(-83, 84-112, 113-176, 177-)それぞれのCAVIの平均値は、7.4、7.7、7.9、8.0(P<0.001)、高CAVI者の割合(9.0以上)は、7%、6%、15%、17%であった(P= 0.013)。しかしながらこの関連は交絡要因を調整すると消失した。今年度(3年目)は複数の地域コホートにおいてコホート内症例対照研究を実施する。HDLの上昇をターゲットとした多くの臨床試験では動脈硬化性疾患の予防効果が得られていない。近年、HDLの抗動脈硬化作用については単なる血中濃度ではなくその質的・機能的な評価が重要であることが指摘されている。本研究ではHDLの酸化・変性修飾に焦点を当てて日本人集団の脂質異常症の特徴を明らかにする。
タクロリムスのバイオアベイラビリティーに与える遺伝子多型の影響

[研究目的]免疫抑制剤タクロリムス(TAC)は、体内動態の個人差が大きいため血中濃度モニタリングが必要不可欠な薬物である。体内動態に関与するCYP3A4/5遺伝子多型は、薬物動態パラメータの中で、特に最高血中濃度(C_<max>)に影響を及ぼすことから、吸収過程の個体差を説明するための重要な要因と考えられる。しかし、C_<max>の有意差から、小腸および肝臓のCYP3A4/5遺伝子多型がタクロリムスのバイオアベイラビリティー(F)にどの程度関与しているか推定することはできない。また、TACのFを指標として、薬物代謝酵素やトランスポーターの遺伝子多型の影響を検討した研究はこれまで報告されていない。TAC経口投与および静注投与時の体内動態解析結果に基づきFを算出し、小腸および肝臓におけるTAC体内動態に及ぼす遺伝子多型の影響を比較検討する。[研究方法]賢移植患者25名を対象に、移植前の経口投与時における経時的採血(投与直前、服用後1,2,3,4,6,9,12および24時間後:計9点)および術後点滴静注時の定常状態における血中濃度をARCHITECT^[○!R]アナライザーi1000SR(アボットジャパン)を用いて測定し、TAC術前経口投与時および術後点滴静注時の体内動態投与時における体内動態を解析した。Fの算出は、移植直後開始となる点滴持続静注(CIV)最終日(3日目)のAUC_<0-24>を1日投与量で補正した値(AUC_<0-24>/D)と経口投与(PO)切り替え後の定常状態時(28日目)のAUC_<0-24>/Dを用いて、以下の式で算出した(F(%);PO AUC_<0-24>/D÷CIV AUC_<0-24>/D)。CYP3A5*1アレル群(n=10)、*3/*3群(n=15)におけるCIV AUC_<0-24>/D、PO AUC_<0-24>/DおよびFを各々比較した。[研究結果]CYP3A5遺伝子多型*1アレル群および*3/*3群間で比較したところ、CIV AUC_<0-24>/Dの中央値に有意差は観察されなかった(194.2および180.2ng・h/mL/mg、P=0.428)が、PO AUC_<0-24>/Dの中央値に関して有意差が観察された(32.5および51.2ng・h/mL/mg、P<0,001)。同様に、Fの中央値に関しても有意差が観察された(12.6および19.2%、P=0.001)。CTP3A5*1アレル群でTACのFは*3/*3群と比較し有意に低下した。CIV AUC_<0-24>/Dは、両群において差が認められなかったことから、本遺伝子多型は主にTACの吸収相に影響を及ぼすと考えられ、TAC投与設計時の有用な指標になると考えられる.[研究目的]免疫抑制剤タクロリムス(TAC)は、体内動態の個人差が大きいため血中濃度モニタリングが必要不可欠な薬物である。[研究結果]CYP3A5遺伝子多型*1アレル群および*3/*

3群間で比較したところ、CIV AUC_<0-24>/Dの中央値に有意差は観察されなかった(194.2および180.2ng・h/mL/mg、P=0.428)が、PO AUC_<0-24>/Dの中央値に関して有意差が観察された(32.5および51.2ng・h/mL/mg、P<0,001)。同様に、Fの中央値に関しても有意差が観察された(12.6および19.2%、P=0.001)。CTP3A5*1アレル群でTACのFは*3/*3群と比較し有意に低下した。CIV AUC_<0-24>/Dは、両群において差が認められなかったことから、本遺伝子多型は主にTACの吸収相に影響を及ぼすと考えられ、TAC投与設計時の有用な指標になると考えられる.
助数詞の獲得を支える言語的環境―母親との対話、大人他者との対話

仲は、母子対話における助数詞の使用を検討し、大人が子供の発話を拡張し、語彙(助数詞)の習得を促していることを示した(19921998年度)。こういった、大人によって提供される言語的環境は、語彙獲得だけでなく、子どもの様々な認知活動に影響を及ぼすと予想される。本年度は、助数詞からは離れ、大人他者によって提供される言語的環境(質問)が、子どもの「見たことを語る」という認知活動に及ぼす影響を調べた。被験者:小学校2年生112人と5年生142人。手続き:手続きは以下の通りである。1.5分程度のビデオを視聴させる。2.ビデオ視聴後、以下の3条件のいずれかで内容を想起してもらう。(a)自由再生群:「内容を思い出してください」とだけ教示し自由再生を促す。(b)イメージ喚起群:思い出す前に内容を1分間イメージさせ、繰り返し思い出すよう促す。(c)誘導質問群:登場人物の少女は赤い服を着ていたが「少女は白い服を着ていたかな?」など、15項目について誘導情報を含む質問を行う。3.すべての条件の児童に対し、20の質問項目(うち15項目は虚項目)について「見たか否か」で答えるよう求める。結果と考察:2.の想起が、3.の20項目への回答にどのような影響を及ぼすかを検討したところ、2年生のイメージ条件、質問条件において、実際にはなかった項目を「見た」とする反応が有意に多かった。クローズドクエスチョンや誘導質問等の不適切な質問だけでなく、「イメージして」、「繰り返しよく思い出して」といった教示を与えるだけでも、低学年の児童は虚項目を「見た」と判断しやすくなる。出来事を想起するという認知活動にも、言語的環境の影響があることが示唆される。
miRNAノックダウン住血吸虫を用いた細胞外小胞における性成熟への機能解析

これまで雌特異的なmiRNAであるBantamの機能を解明するために、miRNA特異的にノックダウンするmiRNA-Tough-Decoyをレンチウイルスを使って作成してきた。本年度は、実際に作成したレンチウイルスを使って、日本住血吸虫の成虫、並びに、幼虫であるシストソミュラを用いて実際にmiRNA-Bantamのノックダウンを行なった。その結果、成虫において、コントロール群において顕著なmiRNA-Bantamの発現抑制が見られた。このことから、miRNA Tough-Decoyシステムが上手く機能していると考え、miRNA-Bantam標的候補遺伝子の発現変動について検証してみた。その結果、成虫においては、miRNA Tough-Decoyは標的候補遺伝子の発現に影響を与えなかった。一方で、幼虫であるシストソミュラについて、同様の実験を行ったところ、標的候補遺伝子であるSerine-arginine repressor、FUS-interacting serine-arginine-rich protein 1、ATP synthaseのそれぞれで発現が上昇していた。これはmiRNAによる発現抑制を解除したためと考えられる。しかし、シストソミュラの表現型に変化を及ぼすことは無かった。これらのことから、幼虫期では候補遺伝子である上記の遺伝子群がBantamにより制御を受けているが、性成熟の起こる成虫期では、未だ知られていないmiRNA-Bantamの標的遺伝子がある可能性が考えられた。今回の実験では、miRNA-Bantamノックダウン成虫における大きな変化は確認できていないが、産卵数や性成熟への影響については、今後確認していく必要があると考えられた。当該年度の目的の一つは、日本住血吸虫のmiRNA(miR-SjBantam)を標的としたノックダウンシステムの開発である。今回、miRNAの機能・発現を阻害する"Tough Decoy miRNA blocking system"を採用した。この方法は、標的となるmiRNAに結合可能だが機能を競合する配列を人工的に作成し、細胞内で発現させることで、標的となるmiRNAの機能を阻害し恒常的なノックダウン状態にする方法である。今回、この方法を導入するにあたり、以下の作業を行った。1)日本住血吸虫の小分子RNA発現用プロモーター領域(U6プロモーター)の同定、2)miR-SjBantamを標的としたTough DecoymiRNAの設計と作成、3)作成した遺伝子領域のレンチウイルスへの挿入とウイルス作成。当該年度の成果としては、初めに導入するTough Decoy miRNAを発現させるためのプロモーターを導入することが必要であり、そのために既知のマンソン住血吸虫のU6プロモーター配列を元に日本住血吸虫での該当配列をデータベースから見つけた。この配列をベクター中にクローニングを行なった。次に、miR-SjBantamの配列を元にTough Decoy配列を設計し、これをプライマー伸長法により合成し、PCRで増幅した該当配列をベクターにクローニングした。これらの2つのベクターの挿入配列を結合させ、レンチウイルスベクターに挿入することで完成させた。このベクターは293T細胞に導入し、上清よりレンチウイルスを回収した。ウイルス力価はリアルタイムPCR法により測定し、十分量のウイルスが回収できた。本年度は本研究課題の準備段階としての、miRNAノックダウンのためのツールの開発がメインであった。今回、その一つであるmiR-SjBantamに対するTough Decoy配列を有するレンチウイルスを作成できたのは、本目的の一つの到達点であった。昨年度、日本住血吸虫特異的なmiRNAを標的としたTough Decoy miRNA knockdownシステムを構築した。このシステムではレンチウイルス発現型の特異miRNAノックダウンベクターであり、標的となるmiRNAの配列にギャップを持った相同配列を発現させ、miRNA複合体の形成を競合的に阻害することで、miRNAの機能を抑制する。今回、成虫がペアリングの後の性成熟に関係するmiRNAの一つであるmiR-Bantamを標的としたTough Decoy miRNA発現ベクターを使って、実際に日本住血吸虫に遺伝子導入を行った。昨年度作成したTough Decoy miR-Bantamレンチベクターが実際に日本住血吸虫の中で機能するかについての検討を行った。レンチウイルスを導入させた住血吸虫シストソミュラの中では、U6プロモーターを介した小分子RNAとしての発現が確認され、実際にベクターが機能していることがわかった。しかし、直接的なmiR-Bantamの発現には影響していなかった。しかし、miR-Bantamの標的候補遺伝子を検索し、その遺伝子発現を調べたところ発現が増加しており、実際に発現を抑制する標的miRNAの機能を阻害していることが考えられた。このことからも、今回作成したベクターはmiRNA抑制に機能していると考えられた。このように今年度の目標であるTough Decoy miRNAレンチウイルスベクターの機能を評価できたと考えている。

一方で、幼虫であるシストソミュラについて、同様の実験を行ったところ、標的候補遺伝子であるSerine-arginine repressor、FUS-interacting serine-arginine-rich protein 1、ATP synthaseのそれぞれで発現が上昇していた。これはmiRNAによる発現抑制を解除したためと考えられる。しかし、シストソミュラの表現型に変化を及ぼすことは無かった。これらのことから、幼虫期では候補遺伝子である上記の遺伝子群がBantamにより制御を受けているが、性成熟の起こる成虫期では、未だ知られていないmiRNA-Bantamの標的遺伝子がある可能性が考えられた。今回の実験では、miRNA-Bantamノックダウン成虫における大きな変化は確認できていないが、産卵数や性成熟への影響については、今後確認していく必要があると考えられた。今後は作成したレンチウイルスを用いて、実際に日本住血吸虫の幼虫にウイルスを感染させ、遺伝子導入についての検討を行う。まず、培養下において、日本住血吸虫の幼虫に作成したTough Decoy miRNAを含んだレンチウイルスを感染させ、ゲノムへの遺伝子導入、導入遺伝子の発現確認を行う。その後、実際に標的となるmiRNAの発現調整への関与、miRNAの標的となる既知遺伝子の発現変動についての確認を行い、どのような形態変化が起こるのかや、同時に性成熟・産卵への影響について観察を行う。また、同時に、幼虫だけではなく、成虫への遺伝子導入も行い、ペアリングへの影響やmiRNAの発現状況についても同様の確認を行う。また、これまで調べられていない虫卵やその中の幼虫についても同様の検討を行い、多角的なアプローチによってmiRNAの機能について検討を行う予定である。現在、ベクターの作製、実際の発現、標的miRNAの機能阻害が観察されたが、まだシストソミュラという幼虫でしか実験を行えていない、今後は、成虫を標的としたmiRNA阻害を誘導し、実際にmiR-Bantamが阻害されることで、どのような表現型が観察されるか、細胞外小胞の中のmiR-Bantamに影響が出るのか、細胞外小胞中のmiRNAの機能についてもさらに形態観察等を通して調べていく予定である。今年度、維持している住血吸虫のライフサイクルが何度かストップし、成虫を使った実験を行うことができず、その分使用するはずだった消耗品費用等に残額が生じたため。
π-d相互作用による分子性磁性伝導体の構築

まず既存のπ-d相互作用系の研究として、ヨウ素置換DCNQI銅塩の磁性と低温電子比熱の間に相関があって、この系でπ-d混成による遍歴電子磁性が生じていることをほぼ確立した。次に、π伝導電子系とd電子(または局在性の強い電子系)との相互作用をもつ新しい系の開発を目的として、TCNQおよびその類縁体などの有機分子と希土類金属イオンの組合せによる伝導性物質の探索を開始し、現在は種々の組合せのスクリーニングをおこなっている。一方、局在スピン磁性と伝導電子の関わりという観点から、DEDと呼ばれる新しい有機分子のPF_6塩が低温領域で異常な電子物性を示すことを見出し、磁化率や磁場中の電気伝導と比熱の測定によって希薄近藤効果が起こっている可能性を検討している。また、π-d相互作用の強さやd電子の局在性を制御して新規物性を発現させる手段としての光照射の役割に着目し、低温高圧下での使用を目的とする光伝導測定系を製作した。