hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
韻律の多様性とその定量的表現

日本語の韻律について,現象面から見た多様性と歌唱における韻律制御の自由度,韻律の個人性,社会的要因の影響,感情との関係,韻律情報の脳内処理に関する神経科学的検討,一般言語学からの考察を行った.(1)特殊な状況での韻律についてのデータから音響的特徴の変動幅を調査した.特殊な発声例として,幼児の矯声における高F_0,高校野球の選手宣誓における平坦F_0,母語との近さや状況による平均F_0の違いなどを調べた.また,制約付きの韻律としての歌唱におけるF_0の特にビブラートについて邦楽と洋楽(ベルカント唱法)を比較した.(2)基本周波数、ホルマント周波数等の音響的特徴と個人性との関係を物理的および知覚的に分析した.同時に,発声速度の異なる音声や,訛りなどに現われる特徴の変化についても研究した.個別音に関する研究としては,連続音声中に現れる鼻音化された/g/について,音響的ならびに知覚的な面から検討した.(3)社会的要因に由来する韻律の多様性.およびアクセント型以外の韻律の地域的多様性について,社会言語学的観点を加えつつ音響音声学的な手法を用いて調査した.具体的には,共通の台詞を種々の方言話者が発声した音声データについての知覚的な印象について検討した.(4)発話に含まれる感情と韻律の関係を多変量解析等の手法を用いて規則として抽出し,その規則に基づいた韻律で音声合成を行い,その有効性を評価した.また,百人一首の韻律やホーミーについても研究した.(5)物理量としての音のどのパラメタが韻律知覚に関与し,脳内のどのような処理によって,韻律知覚が生成されているかを,劣化音声を用いて聴覚神経科学の立場から追究し,韻律知覚生成機構の解明を試みた.(6)一般言語学の立場から,ピッチアクセント言語である日本語の韻律をストレスアクセント言語における韻律と比較することによって,音声におけるアクセント付与の普遍性について考察した.1.韻律の定量的記述a.ほぼ同時に立ち上がる2つの純音のピッチ知覚が時間差の影響を受けることを示した.b.皮肉発話と賞賛発話が,文末の終助詞の韻律によってある程度判別可能であることを示した.c.中国語と日本語から,言語に依存した韻律則と言語に依存しない韻律則があることを示した.2.韻律的・音韻的特徴における個人性の研究f_0の平均値だけを操作した合成音によって,f_0の個人性への貢献度を検討した結果,40%下げても個人性は70%保存されているが,40%上げると個人性は30%に下がることが明らかになった.3.韻律における場面差と地域的多様性の研究a.放送音声の発話スタイルは(1)ハイテンション・はしゃいで・楽しげ,(2)静粛・悲痛,(3)普通・丁寧・落ち着いて・ぞんざいの大きく3つにグループ分けされることを示した.b.イタリア語の韻律的特徴,特に発話速度とリズムについて,これまでの研究をまとめた.4.感情・感性的表現における韻律的特徴の解析a.韻律的特徴のうち,パワーに着目して,10人の話者の「怒り」音声について,音声パワー(最高音圧)を測定した結果,「平常」,「怒り」,「激怒」の順に増大していることがわかった.b.「ホーミー」の音響的特徴,ならびに咳の検出に関する基礎的な検討をまとめた.5.韻律知覚に関する神経科学的検討a.音声の帯域信号を対応する帯域雑音で置換した再合成音の了解度を日本語について調べた.母音の多い日本語では英語より了解度が落ちると予想されたが,そうはならないことがわかった.b.ピッチ知覚の訓練効果,およびピッチの継時的変化の知覚を,日本ザルを使って検討した.6.韻律に関する言語学からの検討京都方言と日本語共通語の語彙アクセントと句アクセントについて,特に属格・同格の「の」が関わる韻律,和語に助詞がつく場合の韻律,複合語の韻律などについて,言語学的観点から検討した.1.韻律の定量的記述a.皮肉/賞賛を文末の終助詞の韻律によって識別するに際し,基本周波数と振幅に代えて,韻律モデルに基づく韻律パラメータを用いて識別を試み,ほぼ同一の識別率を得た.b.日常生活における感情を含むホンモノの会話の収録を始めたが,まだ整理できていない.2.韻律的・音韻的特徴における個人性の研究音声の個人性は言語情報と並んで音声信号に含まれる重要な側面である。実験の結果、音韻性に比べて個人性情報の方が音声信号の種々の歪みに対してよく保存されている事が分かった。3.韻律における場面差と地域的多様性の研究アナウンサー9名が8つの放送スタイルで発音した文章を素材として,知覚評価実験と音響分析を行い,その結果の重回帰分析により各スタイルの音響的特徴を同定した.4.感情・感性的表現における韻律的特徴の解析「怒り」,「喜び」,「悲しみ」などの感情表現音声の韻律的特徴(パワー,発話速度,最高基本周波数,アクセント指令の大きさなど)を4段階の度合いに分けて解析して明らかにした.5.韻律知覚に関する神経科学的検討帯域雑音による合成音声を用いて,歌のメロデイー知覚の可能性を検討した.その結果,メロデイーが歌詞によって創成され,その逆は困難であることがあきらかとなった.6.韻律に関する言語学からの検討

2モーラ和語の語彙アクセントの位置と5母音との共起関係を調査し,韻脚構造を考察したところ,ほぼ各母音の使用頻度と比例してアクセントとの共起が見られるが,eには希少であった.1.韻律の定量的記述日常生活における感情を含むホンモノの会話の収録をMDによって試み,得られた音声データから韻律解析が可能であることを確認した.また,文末の終助詞の韻律パラメータによる皮肉/賞賛の判別も進めたが,知覚的にも判断しにくいデータを加えると正判別率は下がってきた.2.韻律的・音韻的特徴における個人性の研究4人の男性に15文を3種の話速で発声させた連続音声中の音節の音響的特徴と知覚的特徴を調べた.音響的特徴としては,音節の持続時間およびフォルマント周波数が話速によって異なり,発話から切り取った音節の子音の知覚による同定率は速い発話ほど悪いことがわかった.3.韻律における場面差と地域的多様性の研究大阪方言における文末の終助詞類について,その機能と韻律的特性を調べた.順接は事態に対する感情的反応や相手への感情的配慮が少なく,低接はその逆であることがわかった.また,回答要求の強さによって内部音調のバリエーションが生じる様子が観察された.4.感情・感性的表現における韻律的特徴の解析男女各1名の声優が発声した「感謝」を表現する音声の韻律的特徴を時間構造および基本周波数から解析した.また,「悲しみ」についても,平均発話速度,フレーズ指令・アクセント指令の大きさ,最高基本周波数について解析した.並行して,ホーミーに関する音響的解析も行った.5.韻律知覚に関する神経科学的検討4チャンネルの雑音励振ボコーダによる合成音で,知覚的に話者識別ができるかの検討を行った結果,男声間ならびに女声間での判別はできなかったが,男女の判別は可能であった.第1,2帯域の境界は600Hzなので,基本周波数情報がなくても男女の判別が可能であることになる.6.韻律に関する言語学からの検討語彙アクセントと5母音の音韻性を共起関係から調査した.高母音という意味でiと同じuでは,語彙アクセントが語末に現れることは希であるという非対称性があることが明らかになった.日本語の韻律について,現象面から見た多様性と歌唱における韻律制御の自由度,韻律の個人性,社会的要因の影響,感情との関係,韻律情報の脳内処理に関する神経科学的検討,一般言語学からの考察を行った.(1)特殊な状況での韻律についてのデータから音響的特徴の変動幅を調査した.特殊な発声例として,幼児の矯声における高F_0,高校野球の選手宣誓における平坦F_0,母語との近さや状況による平均F_0の違いなどを調べた.また,制約付きの韻律としての歌唱におけるF_0の特にビブラートについて邦楽と洋楽(ベルカント唱法)を比較した.(2)基本周波数、ホルマント周波数等の音響的特徴と個人性との関係を物理的および知覚的に分析した.同時に,発声速度の異なる音声や,訛りなどに現われる特徴の変化についても研究した.個別音に関する研究としては,連続音声中に現れる鼻音化された/g/について,音響的ならびに知覚的な面から検討した.(3)社会的要因に由来する韻律の多様性.およびアクセント型以外の韻律の地域的多様性について,社会言語学的観点を加えつつ音響音声学的な手法を用いて調査した.具体的には,共通の台詞を種々の方言話者が発声した音声データについての知覚的な印象について検討した.(4)発話に含まれる感情と韻律の関係を多変量解析等の手法を用いて規則として抽出し,その規則に基づいた韻律で音声合成を行い,その有効性を評価した.また,百人一首の韻律やホーミーについても研究した.
脳神経細胞死に対するATP及びプリン類の保護作用

生後8-9日齢のWistar系ラットより嗅内皮質を含む海馬切片を切り出し、MEN50%,HBSS25%,馬血清25%の混合培地で2週間培養後実験に用いた。脳虚血のモデルとしてグルコース除去法及び興奮性アミノ酸添加法を用いた。前者ではグルコースの代わりに10mMの2-deoxyglucoseを含んだglucose-deficient HBSSに培地交換した。グルコース除去時間は1時間とした。グルコース除去後、48時間の回復期間をおいた後、プロピ二ウムイオダイド(PI,5μg/ml)により染色される死細胞を定量評価した。後者ではNMDA型グルタミン酸受容体の作動薬であるNMDAを短時間添加した(13-100μM,15min)。洗浄後24あるいは48時間後に、死細胞を定量した。1時間のグルコース除去により海馬CA1野選択的に顕著な細胞死が観察された。α,β-methylene ATP1mMをグルコース除去中、及び回復期間中共に添加しておくことによりCA1野における細胞死は抑制された。また、グルコース除去群に比べ、α、β-methyleneATP添加群では歯状回における蛍光強度がわずかに上昇しているものが観察された。なお、α、βーmethyleneATP1mM単独適用による影響は観察されなかった。NMDAへの15分間の暴露により、濃度依存的、また海馬内の部位特異的な神経細胞死が観察され、CA1野、CA3野、歯状回の順で重篤であった。そこで次に、このNMDA短時間暴露による神経毒性に対するATP及びプリン類(10μM-3mM)の神経保護作用を検討した。これらはNMDA暴露時間中のみ、NMDA処理後のみ、あるいはその両方の期間適用したが、これらプリン類はNMDAの適用による海馬神経細胞死に対して海馬内のどの部位においても抑制しなかった。本研究により海馬組織培養の系においてもプリンヌレオチドはグルコース除去による神経細胞死からの保護作用に重要な役割を担っていることが示唆された。生後8-9日齢のWistar系ラットより嗅内皮質を含む海馬切片を切り出しMillicell-CMに入れ,MEM50%,HBSS25%,馬血清25%の混合培地で2週間培養後実験に用いた。脳虚血のモデルとしてグルコース除去法を用いた。具体的には,グルコースの代わりに10mMの2-deoxyglucose(2-DG)を含んだglucose-deficient HBSSに培地交換した。対照群はglucose-deficient HBSSの代わりに6.5mg/mlのglucoseを含むHBSSを用いること以外はすべてグルコース除去群と同様の処置を施した。グルコース除去後,48時間の回復期間をおいた後,共焦点レーザー顕微鏡をもちいてPI蛍光強度を観察した。なお,プリンヌクレオチド添加群では,グルコース除去中,及び回復期間中全てにわたり,プリンヌクレオチドを共添加しておいた。α,β-methylene ATP 1mMをグルコース除去中,及び回復期間中共に添加しておくことによりCA1野における細胞死は抑制された。また,グルコース除去群に比べ,α,β-methylene ATP添加群では歯状回における蛍光強度がわずかに上昇しているものが観察された。なお,α,β-methylene ATP 1mM単独適用による影響は観察されなかった。

本研究により海馬組織培養の系においてもプリンヌクレオチドはグルコース除去による神経細胞死からの保護作用に重要な役割を担っていることが示唆された。今後プリンヌクレオチドの保護作用の更なるメカニズムの究明が期待される。一過性の前脳虚血により海馬においてはCAl野に選択的な神経細胞死が観察される。その神経細胞死は虚血負荷時に遊離される興奮性アミノ酸による興奮毒性によるものであると考えられている。そこで本研究の第一段階として,この現象を培養海馬切片を用いて再現,観察することを試みた。生後8日齢のウィスター系ラット脳より海馬を摘出し,厚さ300mmの切片を作成した。これをテフロン膜(ミリセルCM)上に置き,培養液(50%MEM,25%Hanks BBS,25%horse serum)にて培養した。2週間後,細胞死を誘導する目的でNMDA型グルタミン酸受容体の作動薬であるNMDAを短時間添加した(13-100μM,15min)。洗浄後24あるいは48時間後に,プロピニウムイオダイド(5μg/ml)により染色される死細胞を,共焦点レーザー顕微鏡を用いて蛍光強度を測定することにより評価した。NMDAへの15分間の暴露により,濃度依存的,また海馬内の部位特異的な神経細胞死が観察され,CAl野,CA3野,歯状回の順で重篤であった。これにより,前脳虚血による興奮性神経細胞死を培養海馬切片を用いて再現することが可能となった。そこで次に,このNMDA短時間暴露による神経毒性に対するATP及びプリン類の神経保護作用を海馬切片を用いて検討した。ATP及びプリン類(10μM-3mM)はグルタミン酸暴露時間中のみ,グルタミン酸処理後のみ,あるいはその両方の期間適用した。NMDAの適用による海馬神経細胞死に対して,ATPあるいはプリン類の保護作用を検討したが,神経細胞死は海馬内のどの部位においても抑制されなかった。今後は,用いる興奮性アミノ酸をグルタミン酸に代えて再度検討すること,実際のin vivoの前脳虚血実験系を用いてプリン類の作用を検討する予定である。
高齢者における慢性腎臓病の指標としてのＡＤＭＡと冠動脈石灰化進展に関する追跡研究

本研究の対象者は年齢が60-70代の高齢男性約900人とし、そのうち732人について追跡調査を行った。頚部エコー検査による頚動脈内膜中膜肥厚・プラーク計測、マルチスライスCTによる冠動脈石灰化などを測定した。また初回調査時に採取し-70°Cに保存した血漿よりADMAを測定した。研究参加者には、動脈硬化精密検査結果を含め検査結果を郵送し、利益還元を行った。血漿ADMA値と潜在性動脈硬化指標との関連について、その研究成果を海外学会などにて発表した。本研究は、滋賀医科大学を研究母体として既に実施している本体研究の補完的なものである。本体研究は、平成17-20年度に潜在性動脈硬化関連指標を測定した対象者約1,200名に対して、既に平成22年度より追跡調査し開始されている。本研究の対象者は、その中でベースライン時に年齢が60-70代の高齢者約900人としている。追跡調査は、平成25年度までの予定で、追跡率は80%を見込んでいる。平成24年度は、平成23年度より引き続き本体研究の一部として、平成17-20年度に行ったベースライン時調査と同様に下記の問診、身体計測、検査を行っている。(生活習慣指標)生活習慣に関する詳細な問診、(身体計測)身長・体重・腹囲・腹腔径・血圧、(空腹時採血・採尿)一般的な血液生化学検査、血清脂質検査、血糖値など、(12誘導心電図)、(頚部エコー検査による頚動脈内膜中膜肥厚・プラーク計測)、(腹部CTによる内臓脂肪・皮下脂肪の測定)、(脈波伝播速度PWV、Ankle-brachial index)、(マルチスライスCTによる冠動脈石灰化)。糸球体濾過量GFRは、MDRD(Modification of Diet in Renal Disease)法を使い、血清クレアチニン値や年齢から推定値を計算している。また研究参加者本人には、動脈硬化精密検査結果を含め、検査結果を郵送し、利益還元を行っている。さらに平成24年度は、高齢者群について、初回調査時に採取し-70°Cに保存した血漿より、ADMAを測定した。そして、既存の初回調査データベースに血漿ADMA値を追加し、初回調査データベースを完成させた。平成24年度は、以上のような、追跡調査によるデータ集積、データ構築、および研究参加者への情報提供、さらにADMAの測定および初回調査データベースの完成などの実績を残した。本研究は滋賀医科大学を研究母体として既に実施している本体研究の補完的なものである。本体研究は平成17-20年度に潜在性動脈硬化関連指標を測定した対象者約1200名に対して、既に平成22年度より追跡調査が開始されている。本研究の対象者はその中でベースライン時に年齢が60-70代の高齢者約900人としている。平成25年度は、平成23年度より続けている追跡調査の最終年度であり、予定通り終了した。内容は下記の問診、身体計測、検査である。糸球体濾過量GFRについてはMDRD(Modification of Diet in Renal Disease)法を使い、血清クレアチニン値や年齢、身長、体重から推定値を計算した。また平成24年度には、ベースライン時に採取し-70°Cに保存した血漿よりADMAを測定し、初回調査データベースを完成させている。平成23年度は、本研究は本体研究の一部として、平成17-20年度に行ったベースライン時調査と同様に下記の問診、身体計測、検査を行っている。(生活習慣指標)生活習慣に関する詳細な問診、(身体計測)身長・体重・腹囲・腹腔径・血圧、(空腹時採血・採尿)

一般的な血液生化学検査、血清脂質検査、血糖値など、(12誘導心電図)、(頚部エコー検査による頚動脈内膜中膜肥厚・プラーク計測)、(腹部CTによる内臓脂肪・皮下脂肪の測定)、(脈波伝播速度PWV、Ankle-brachial index)、(マルチスライスCTによる冠動脈石灰化)。糸球体濾過量GFRは、MDRD(Modification of Diet in Renal Disease)法を使い、血清クレアチニン値や年齢、身長、体重から推定値を計算している。また研究参加者本人には、動脈硬化精密検査結果を含め、検査結果を郵送し、利益還元を行っている。平成23年度は、以上のような、追跡調査によるデータ集積、データ構築、および研究参加者への情報提供などの実績を残した。本研究は滋賀医科大学を研究母体として既に実施している本体研究の補完的なものである。本体研究は平成17-20年度に潜在性動脈硬化関連指標を測定した対象者約1200名に対して、既に平成22年度より追跡調査が開始されている。本研究の対象者はその中でベースライン時に年齢が60-70代の高齢者約900人としている。予定通り追跡調査は終了した。内容は下記の問診、身体計測、検査である。(生活習慣指標)生活習慣に関する詳細な問診、(身体計測)身長・体重・腹囲・腹腔径・血圧、(空腹時採血・採尿)一般的な血液生化学検査、血清脂質検査、血糖値など、(12誘導心電図)、(頚部エコー検査による頚動脈内膜中膜肥厚・プラーク計測)、(腹部CTによる内臓脂肪・皮下脂肪の測定)、(脈波伝播速度PWV、Ankle-brachial index)、(マルチスライスCTによる冠動脈石灰化)。糸球体濾過量GFRについてはMDRD(Modification of Diet in Renal Disease)法を使い、血清クレアチニン値や年齢、身長、体重から推定値を計算した。また平成24年度には、ベースライン時に採取し-70°Cに保存した血漿よりADMAを測定し、初回調査データベースを完成させている。研究参加者には、動脈硬化精密検査結果を含め検査結果を郵送し、利益還元を行った。平成26年度はさらに血漿ADMA値と潜在性動脈硬化指標の進展との関連について縦断的解析を行った。上記横断的解析結果の論文化を含めその研究成果を準備中である。循環器疫学平成23年度に研究母体である滋賀医科大学での研究計画の変更による遅れがあったため。しかし平成24年度は、学会発表はできなかったが、他の部分は予定通り進行したと考えている。論文化はまだだが、他は予定通り進んでいる。研究母体である滋賀医科大学での研究計画の変更による。完成した初回調査データベースより、血漿ADMA値と冠動脈石灰化との関連について横断的解析を行いその成果を海外及び国内の学会にて発表する。さらに引き続き研究対照である高齢者群の調査の継続を行う。平成22年-26年にフォローアップ調査に参加した高齢者群のデータをベースライン調査データベースと統合する。上記の統合データベースをもとに、ベースライン時の血漿ADMA値と、約5年の観察期間における潜在性動脈硬化指標の縦断的変化との関連について解析を行う。また、ベースライン時の推定GFR値との縦断的変化との関連と比較する。さらに以前構築した40代の若年群のデータとの統合も行い、年齢との交互作用や年代ごとの血漿ADMA値がもつ予測因子としての重要性について検討する。以上の研究成果を海外及び国内の学会にて発表する。
好熱菌の耐熱機構の解明-細胞融合法によるアプローチ-

(実施計画1について)バチルス属の好熱菌と枯草菌を電気パルスを用いたプロトプラスト融合した融合微生物について検討した。融合前の好熱菌は生育温度範囲内ではその合成するタンパク質のパターンにはほとんど変化は見受けられなかった。しかし、融合株は70°Cにおいて菌体外タンパク質のパターンにマクロに変化が見られ、とくに25kDaタンパクが突出して合成分泌が見られた。(実施計画2について)そこで、このタンパク質の由来を調べるため、好熱菌に対する抗体でウエスタンブロットを行なった結果、好熱菌より持ち込まれたタンパクであった。さらに、活性を求めるとスーパーオキシドデスムターゼ活性が見られ、B.stearothermophilusのSODに対する抗体とも交差し、N末端20残基も一致したため、この25kDaタンパクは好熱菌由来の菌体外分泌SODであると結論づけられた。そして、この酵素は融合株が高温下でも枯草菌由来のタンパクを合成、分泌し続けることにおいて保護的作用を有していると示唆された。(実施計画3について)融合株中の遺伝子を直接解析する前にそれがもつプラミスドDNAの配列について検討した。一般的にプラスミドやゲノム中に認識部位の少ない制限酵素(NotI,ClaIなど数種)により分解したところ、はるかに多くの断片に分解されこの遺伝子の塩基配列に特異性がみられた。この方法をゲノムに応用すると組み込まれた枯草菌ゲノムが特定が簡便になることが、予想される。(総合)細胞融合により好熱菌に枯草菌の遺伝子が導入され、好熱菌は外来遺伝子の負荷が生じた。そのためSODの過剰発現が引き起こされたと考える。そして、これは各種耐熱保護機構の一つと考える。
タンパク質膜透過システムの一分子計測

バクテリアにおいて、細胞質中で合成されたタンパク質の膜透過反応は、モータ因子SecA ATPaseと膜透過チャネルSecY/E複合体が中心的な役割を果たす。これらの因子は、互いに相互作用し機能していると考えらえるが、機能時のオリゴマー状態に関しては明確な結論が出ておらず論争が続いている。本研究では、SecA, SecYあるいは基質タンパク質proOmpAを蛍光標識し、それらをprobeとして用いた一分子計測を行う事により、この基本的かつ重要な問題に取り組んだ。計測感度を高める為、共同研究者の阪大・産研・野地研の協力を得て、全反射顕微鏡視野下において、平面膜中に蛍光標識膜透過装置を組み込んだ実験系を構築し、膜透過装置の一分子計測に初めて成功した。具体的には、1)材料とした用いたSecA, SecY, proOmpA分子全てを高純度に精製し、定量的に蛍光標識する実験条件を確定させた。2)各蛍光標識タンパク質が、野性型タンパク質と同様のタンパク質膜透過活性を保持していることを確認した。3)SecYEを組み込んだlipoosomeを平面膜へ融合させ、平面膜上の膜透過装置の動きとオリゴマー状態を初めて観察した。得られた結果から、平面膜上では、SecYEは単量体として存在していることが示唆された。SecAの添加により、SecYEの蛍光強度は増加する事が明らかとなったが、消光のパターンより、オリゴマー状態が変化したと考えるよりむしろ、SecA結合に伴いSecYEの構造変化が誘起された可能性が考えられた。「平面膜上のSecYEが実際に機能を保持しているか?」等、検討しなければならない事項はあるが、有用な測定系が確立できたと考えている。現在、更なる詳細な解析を進めている。SecY/E膜透過チャネル、膜透過駆動モーターSecA ATPaseの機能単位に関しては激しい論争が続いており、未だに明確な解答は得られていない。本研究は、蛍光一分子計測系を駆使して、この問題を解明する事を目指している。研究材料としては、安定でサンプルの調製・取り扱いが容易な高度好熱菌由来の膜透過チャネルとそのモータ因子を利用することとした。測定は、平面膜の一分子計測の世界的権威である、大阪大学産業科学研究所の野地博行博士との共同研究で進めている。高度好熱菌由来のSecY/E複合体(TSecY/E)、並びにSecA ATPaseのシングルCys変異体を作製・高度に精製し、蛍光プローブCy3により定量的に標識した。標識TSecY/E, SecAが未標識酵素と同程度の活性を保持していることを、再構成proteoliposomeを用いたin vitro膜透過実験により確認した。これらの標識膜透過チャネルを再構成したproteoliposomeを顕微鏡視野下に張った平面膜と融合させ、蛍光プローブを指標に、膜透過チャネル、SecA ATPaseの挙動を一分子レベルで追跡する実験を進めている。現段階では、膜透過チャネルは、平面膜上では、monomerとして挙動し、SecAの結合により、そのオリゴマー状態に変化は見られないものの、蛍光強度が増加する傾向が観察された。SecAの結合により、膜透過チャネルが構造変化を起こしたものと考えられる。同時に、膜透過タンパク質基質の蛍光体も調製し、膜透過反応の一分子観察も試みている。
シクロヘキシルアミン骨格を有する生物活性物質の全合成

シクロヘキシルアミン骨格を有し、強力な生物活性を有する化合物としてインフルエンザ治療薬オセルタミビル及び糖尿病治療薬ABT-341の効率的全合成を行なった。本合成では工業的に応用可能な合成とするため、独自に開発した不斉有機触媒反応及びドミノ反応、ワンポット反応を応用した。近年、生物活性化合物の臨床的評価を得るための量的供給を目的とした高収率、短行程、高立体選択的な全合成、及び構造活性相関やプローブ分子を見据えた柔軟な全合成が重要な課題である。本研究では生物旨活性物質として重要なオセルタミビル,カナマイシンA,パンクラチスタチンを、所属研究室において開発された不斉有機触媒反応を用いることにより合成可能と考えられる光学活性シクロヘキシルアミン誘導体を共通中間体とし、これまでに無い短工程で、大量合成可能な全合成を達成すべく研究を行った。今年度は、インフルエンザ治療薬タミフルとして知られるオセルタミビルの工業化を視野に入れた全合成研究を行った。当研究室で開発された不斉マイケル反応の後、ドミノマイケル/ホーナーエモンス反応、さらに、トルエンチオールを求核種としたドミノマイケル/異性化反応をワンポットにて行い、基本骨格を構築した後、2つのワンポット反応でオセルタミビルの全合成を達成した。本合成は3つのワンポット反応、1回のカラム精製のみであり、また、総収率は57%とこれまでに無い効率的かつ簡便な合成である。また、本合成は3つのセグメントを収束的に連結させる合成手法である事から、誘導体合成が容易であり、タミフル耐性ウィルスの流行に備えた医薬品候補化合物ライブラリー構築に応用出来る。実際にすでに30種以上の誘導体を合成し、その薬理活性評価及び構造活性相関研究について検討を行っている。本研究ではシクロヘキシルアミン骨格を有する重要な生物活性物質を、所属研究室において開発された不斉有機触媒反応を用いることにより、これまでに無い短工程で、大量合成可能な全合成を達成すべく研究を行った。今年度は、昨年度達成したインフルエンザ治療薬タミフルとして知られるオセルタミビルの効率的全合成に続き、工業化を指向したカラムフリー、ハロゲン系溶媒を一切しない合成へと発展させた。さらに、潜在的な爆発性を有する中間体の危険性を回避するため、マイクロフローシステムを応用し、安全性の高い全合成へと発展させた。一方、同様にシクロヘキシルアミン骨格を有する新規糖尿病治療薬候補化合物であるABT-341の全合成を達成した。本化合物の全合成の鍵工程は当研究室で開発された不斉マイケル反応に続く、ドミノマイケル/ホーナーエモンス反応による基本骨格の構築であり、効率的にABT-341の不斉点及びすべての官能基を一挙に組み上げる事が出来る。また、本合成では効率化を図るべく、ワンポット反応へと展開、応用した。最終的に強力な生物活性を有する本化合物をワンポット反応(一つのフラスコ内)で合成する事に成功した。本合成は6段階、ワンポット、総収率は63%であり、非常に効率的な合成となっている。また、オセルタミビル、ABT-341共に、簡便に全合成出来る特徴を活かし、新規医薬品開発に向けた誘導体を種々合成した。現在、共同研究により生物活性試験を検討している。
モデル環境下での培養実験による亜硝酸動態の制御メカニズム解明

本研究では、森林土壌中での亜硝酸(NO2-)生成・消費速度、消費経路の制御要因を明らかにするために、NO2-生成活性が異なる3種類の土壌を3段階の重量含水率(20, 32.5, 45%)で培養した。培養期間を通じてNO2-生成速度と消費速度は連動して変化し、含水率は各土壌のNO2-生成及び消費速度の違いを部分的に説明した。また、NO2ー酸化(NO3-生成)ポテンシャルが、N2O放出量を制御することが示唆された。NO2-の生成は非生物的には生じなかったが、消費は顕著に生じた。滅菌土からのN2O生成は未滅菌土の7.1-41%に相当し、非生物的なN2O生成が相対的に重要な場合があることが示された。従来、土壌からの亜硝酸イオン(NO2-)の回収には、pHを調整したKCl溶液を用いる必要があることが指摘されている(Stevens and Laughlin, 1995)。ところが、近年あらたに、これまでのKClによる抽出はNO2-濃度を過小評価しており、水による抽出が少量の土壌からのNO2-の回収と測定に適するとの報告がなされた(Homyak et al., 2015)。これを受け、当初予定を変更し、森林表層土壌からの無機・有機態窒素(NO2-・NO3-・NH4+・溶存有機態窒素)の抽出溶媒と抽出時間の再検討を行った。抽出溶媒には水とKCl(pH調整あり・なしの2種)を用い、抽出は10, 30, 60分間行った。また、窒素安定同位体でラベルされたNO2-を抽出溶媒に添加することで抽出中のNO2-の生成と消費について評価した。抽出液中のNO2-濃度は水、pH調整済みKCl、KClの順に低下し、Homyakらの報告と矛盾しなかった。また、添加15NO2-の回収率は10分間の抽出では溶媒間で大きな差異が見られなかった。これらの結果は、NO2-測定において水抽出が有用であることを支持した。一方で、試供土壌を15NO2-を添加した水溶液で抽出した場合、抽出時間に依存したNO2-濃度の増加と同位体比の減少が見られたが、オートクレーブで滅菌処理を行った土壌を試料とした場合、濃度と同位体比の変化が見られなかった。このことから、水抽出の操作中に生物的なNO2-の生成と消費が同時に生じることが示された。速度論的な解析から、抽出操作中のNO2-プールの滞留時間は非常に短く、土壌中に元々存在するNO2-の回収は困難であると考えられた。KClを用いた場合、抽出中のNO2-生成速度はより小さいことが事前の研究で明らかになっており、低濃度のNO2-分析ではKCl抽出を行う必要がある。NO2-抽出法について年度中に重要な報告がなされたため、当初予定していた培養実験を変更し、NO2-抽出法の見直しを行った。NO2-は化学的・生物的に消費されやすい化学種であるために、抽出法自体が確立されていない。したがって、どのような手法を用いて抽出や測定を行うかが結果を解釈するうえで極めて重要である。本研究の目的を果たすうえで、土壌培養実験に先んじて最適な抽出条件を設定することが、科学的に重要であると判断した。亜硝酸(NO2ー)はあらゆる窒素異化反応によって生成/消費されることから窒素循環の中心に位置する物質であるが、その重要性にもかかわらず、ほとんど挙動が明らかになっていない。本研究の対象地としたスギ人工林では、斜面内の上部から下部にかけて、NO2-生成速度、NO2-消費速度及びNO2-消費経路が異なることが、本研究代表者らのこれまでの研究によって明らかになっている。NO2-の生成・消費速度および消費経路の制御メカニズムを明らかにするために、当該年度において、含水率を変化させた長期(約3ヶ月)の室内培養実験を行なった。斜面上・中・下部を代表する3種の土壌を調整し、各土壌を斜面上・中・下を模した重量含水率(それぞれ20%、32.5%、45%)に調整して、25°Cにて培養し、培養1, 22, 43, 63, 84日目に無機態窒素濃度の測定と15NO2-添加実験を行った。培養期間中のNO2-生成速度の変化から、斜面上下での硝化活性の違いは含水率によって制御される、という仮説を支持する結果を得た。一方で、斜面中部・下部のNO2-動態の違いについては、含水率以外の要素が支配的であることが示唆された。土壌呼吸速度は斜面下部より中部で高く、従属栄養微生物の活性の差が斜面中部と下部でのNO2-動態の差を生みだす可能性が示唆され、現在解析を進めている。オートクレーブ土を用いた実験から、NO2-生成活性の変化は微生物性の変化によることが支持されたが、土壌からのDNA抽出法の検討に想定以上の時間を要したことから、硝化微生物群の変遷についての実験については未着手である。申請時に想定していなかった研究代表者の産休等により、H27年度に実施予定であった長期培養をH28年度に行なったため、発表及び論文化が遅れているが、今夏までに実験を終え、年度内に論文としての情報公開に至るよう、実験と解析を進める所存である。

本研究では、森林土壌中での亜硝酸(NO2-)生成・消費速度、消費経路の制御要因を明らかにするために、NO2-生成活性が異なる3種類の土壌を3段階の重量含水率(20, 32.5, 45%)で培養した。培養期間を通じてNO2-生成速度と消費速度は連動して変化し、含水率は各土壌のNO2-生成及び消費速度の違いを部分的に説明した。また、NO2ー酸化(NO3-生成)ポテンシャルが、N2O放出量を制御することが示唆された。NO2-の生成は非生物的には生じなかったが、消費は顕著に生じた。滅菌土からのN2O生成は未滅菌土の7.1-41%に相当し、非生物的なN2O生成が相対的に重要な場合があることが示された。27年度に実施を予定していた、含水率を変化させた土壌培養実験に着手する。東京大学千葉演習林にて試料の採取を8月に行うことを予定している。全長100mの斜面プロットにおいて、斜面の上部、中部・下部に分け、それぞれから表層土壌(0-10cm)を採取し、培養実験の試料とする。8-11月にかけて培養実験を行い、2週間ごとに15NO2-添加実験と土壌理化学性・遺伝子解析のための試料の回収を行う。土壌化学分析は培養実験と並行して行い、硝化微生物(AOA, AOB, NOB)の硝化反応を触媒する酵素遺伝子の定量を培養実験終了後に行う。12-3月にかけて、データの取りまとめを行う。28年度が最終年度であるため、記入しない。農学28年度が最終年度であるため、記入しない。
口腔ケアによる高齢者の認知脳機能回路の賦活と再生

高齢者の認知機能向上に「口腔ケア」を活用するために、ヒトの脳機能計測により口腔ケアを施した場合と施さない場合の前頭前野の活動を検討した。高齢者において、2種類の神経認知検査(MMSEとかな拾いテスト)を行った時、両検査の正答率は口腔ケアを行うことにより高まることがわかった。さらに、口腔ケアにより、かな拾いテスト遂行時の前頭前野の賦活化が増強されることから、口腔ケアは前頭前野を介して認知機能を向上する有力なツールであることが見出された。介護予防プログラムに口腔ケアが導入されて以来、口腔ケアと全身機能との関係が強く指摘されるようなった。本研究では、一般健常高齢者と老人保健施設に収容されている高齢者において、ブラッシングしない時とブラッシング直後に2種類の認知機能検査(MMSE、かな拾いテスト)および2種類の先端医療技術(磁気共鳴機能画像法(fMRI)と光トポグラフィ)を用い、ブラッシングによる前頭前野の賦活と再生及び認知機能の向上を世界に先駆けて解明し、口腔ケアの神経科学的意義を社会にアピールすることをゴールとする。本研究は高齢者ボランティア(60-75歳)を用い、3ヵ年計画で行う。本年度では、社会活動を営んでいるか或いは家庭で健常に生活している高齢者ボランティアにMini-Mental-State Examination(MMSE;国際的に使用されている認知検査)及びかな拾いテスト(わが国で近年広く使われるようになった認知検査)をブラッシングしないときとブラッシングした直後に実施し、高齢健常者の認知機能に及ぼすブラッシングの効果を定量解析した。その結果、以下の成績が得られた。(i)MMSEとかな拾いテストのスコアが、口腔ケアによって、統計学的に有意な上昇を示した。(ii)この2つのテストのスコアの上昇を年齢別に解析したところ、年齢が高まるほどスコアの上昇率が拡大した。したがって、高齢者の場合、歯磨きや舌苔の清掃といった「口腔ケア」を施すことにより、神経認知機能の維持、あるいは改善にきわめて有用であることが判明した。本研究では、一般健常高齢者と老人保健施設に収容されている高齢者において、ブラッシングしない時とブラッシング直後に2種類の神経認知機能検査(MMSE、かな拾いテスト)および2種類の先端医療技術(磁気共鳴機能画像法(fMRI)と光トポグラフィ)を用い、ブラッシングによる前頭前野の賦活と再生及び認知機能の向上を世界に先駆けて解明し、口腔ケアの神経科学的意義を社会にアピールすることをゴールとする。本年度は、老人保健施設に収容されている高齢者(寝たきり老人を含む)を対象に前年度と同様の実験を行い、施設高齢者の認知機能に及ぼすブラッシングの効果を検索した。そして、神経認知機能に及ぼすブラッシングの効果が健常者と寝たきり患者で違いが認められるか解析した。その結果、以下の成果が得られた。(i)老人保健施設に収容されている高齢者にブラッシングを施すことにより、MMSE (Mini-Mental Status Examination)とかな拾いテストのスコアが上昇することがわかった。(ii)前年度と同様に、この2つのテストのスコアの上昇を年齢別に解析したところ、年齢が高まるほどブラッシングの効果が大きかった。(iii)さらに、寝たきり患者ではブラッシングの効果が著名であった。以上の結果より、寝たきり老人を含む施設高齢者に「ブラッシング」を施すことにより、神経認知機能が向上することが示唆された。本研究では、一般健常高齢者と老人保健施設に収容されている高齢者において、ブラッシングしない時とブラッシング直後に2種類の認知機能検査(MMSE、かな拾いテスト)および2種類の先端医療技術(磁気共鳴機能画像法(fMRI)と光トポグラフィ)を用い、ブラッシングによる前頭前野の賦活と再生及び認知機能の向上を世界に先駆けて解明し、口腔ケアの神経科学的意義を社会にアピールすることをゴールとした。本研究目的を達成するために、本年度(平成23年度>は、高齢ボランティアにおいて、かな拾いテスト時の前頭前野のfMRIシグナルを計測し、ブラッシング前とブラッシング後で比較した。また、光トポグラフィを用い、ブラッシング前とブラッシング後において、かな拾いテスト時のヘモグロビン濃度の変化を比較した。1.高齢者にブラッシングを施すことにより、これまでと同様に。MRSE(Mini-Mental Status Examination)とかな拾いテストのスコアが上昇した。2.高齢ボランティアにかな拾いテストを提示した際の前頭前野のfMRIシグナ強度は、ブラッシングを行った後の方が増強されることがわかった。

3.高齢者に同様のタスクを提示したときの光トポグラフィでの酸化ヘモグロビン濃度は、ブラッシング前に比べブラッシング後の方が高まる傾向を示した。以上の結果より、高齢者に「ブラッシング」を施すことにより前頭前野が賦活され、神経認知機能が向上することが示唆された。
多層膜望遠鏡気球観測による隠された硬X線天体の探索

硬X線撮像観測により、強い吸収体に隠された活動的銀河核を探査するのが、本研究課題の目的である。本年度の目標は、10-60keVの硬X線で集光結像する硬X線望遠鏡を開発して、米国NASAとの共同気球実験に備えることと、独自気球のためのシステム構築の準備にあった。(1)多層膜スーパーミラー硬X線望遠鏡の開発気球搭載に最適化したスーパーミラーのデザインの開発を進め、それに合わせた反射鏡の成膜を行った。これにより前回の気球実験で用いた多層膜より高いエネルギーで高い反射率を実現できた。これを実証するため、個々の反射鏡の測定実験に続き、組上げた望遠鏡を、高輝度光科学研究センターSPring-8(兵庫県三日月町)の硬X線ビームラインに持ち込み、測定を行った。その結果、30keVで1.3倍、50keVで1.6倍に向上していることが確認された。これに続き、更に硬X線望遠鏡の開発を進め、2004年5月のInFOCuS第二回飛翔実験に向けて反射鏡の量産が進められた。その結果2004年3月には新しい1/4鏡が完成し、これまでの1/4鏡3台と組み合わせて特性測定をした上で、飛翔実験の行われる米国へ発送された。(2)独自気球のシステム開発構造系では、ゴンドラ部分の試作を行い、構造の問題点が明らかになった。8mの焦点距離を確保するための鏡筒の設計を行い、CFRPの成形を発注した。この他、ジャイロスコープなどの姿勢検出系、モーメンタムホイールなどの姿勢制御系を購入、特性測定を行った。なお、本研究(基盤研究(s))は同じ研究代表者の特別推進研究「硬X線撮像観測による非熱的宇宙の研究」課題番号15001002に引き継がれることになった。
体細胞相同染色体組換えた係る遺伝子の機能の解明と育種への利用

1.イネのモチ、ウルチの遺伝子解析で、培養細胞において体細胞相同染色体組換えが認められたことから、DNA相同組換え遺伝子の関与が推察された。そこで、イネの減数分裂期特異的相同組換え遺伝子RiLIM15の培養細胞内での発現を中心に解析をおこなった。2.日本型イネのBAC libraryより同遺伝子の単離を試みたところ、2種類のRilILM15遺伝子RiLIM15A,RiLIM15Bを単離することができた。これら遺伝子の塩基配列を比較したところ、これらの間でコード領域内のエクソン領域では相同性が極めて高いが(95.3%)、イントロン領域では相同性が比較的低い(76.1%)ことが明らかとなった。一方、両遺伝子の推定アミノ酸配列を比較した結果、それらの相同性は極めて高く(98.2%)、両遺伝子は機能的に類似していることが示唆された。したがって、RILIM15は機能的に類似した多重遺伝子族であることが明らかになった。3.これまで、イネRiLIM15遺伝子が体細胞分裂期相同組換えのために,減数分裂期幼穂だけでなく体細胞培養細胞でも特異的に発現することを明らかにしてきたが、同遺伝子の発現は、mRNA in situ hybridization法でも確認された。またRiLIM15の転写産物であるmRNAのcDNAを調べたところ、alternative splicingによると考えられる長さの異なる8種類のcDNAが発見された。これらのことよりRiLIM15タンパクのアミノ酸配列に、フレームシフトによるアミノ酸残基の置換が生じ、それぞれ異なる機能を有しているものと推定された。4.バーズフット・トレフォイルとアルファルファの属間体細胞融合カルスにおいて、全DNAをBamHIで処理し、pRR217をプローブとしたサザンブロット分析の結果、バーズフット・トレフォイルの9本のバンドのうち1本のバンドが欠失し、その部分に9本のアルファルファのうちの1本のバンドが挿入されていた。これは異種間の体細胞染色体組換えによると考えられる。遠縁間でも染色体に相同部分があれば組換えを起こすことを示唆し、育種上重要な手段となりうることを示している。1.これまでのRT-PCRの解析の結果、RiLIM15の相同配列がイネゲノム内にRiLIM15AとRiLIM15Bの2コピー存在しRiLIM15が2つの相同性遺伝子から構成される多重遺伝子族であることが明らかとなった。植物において複数の相同遺伝子から構成される遺伝子族の例は比較的多いが、LIM15/DMC1タイプの遺伝子の場合ではこれが初めてである。これら遺伝子は減数分裂期の幼穂だけでなく体細胞である培養細胞にも特異的に発現するが、完全展開葉では発現しなかった。その原因として、培養細胞は細胞活性が高いために、本来、正常な組織において組織特異的や発生時期特異的発現を示す遺伝子のプロモーターの発現制御がなんらかの原因で外れ、それらの遺伝子が培養細胞で発現することが推定される。オーキシン処理を行ったArabidopsisの根においてAtDMC1が発現誘導されることが確認されているので、培養細胞におけるこれら遺伝子の発現は、培養細胞を維持している培地に含まれているオーキシンが原因となっている可能性が示唆される。OsRAD51も2コピー存在することが報告されているが、私の研究室では1コピーしか確認されていない。

また、培養細胞で発現するかどうかや、その機能についてはこれからの研究にまたれる。2.RiLIM15遺伝子が減数分裂時同様培養細胞でも発現されることが明らかになったが、減数分裂期と同じように相同染色体間の組換えに関与しているかどうか確認する必要がある。そこで、イネ培養細胞での体細胞分裂期相同換えの有無や発生頻度を調べるために、培養細胞のwaxy座近傍で生じる相同染色体組換えについて調べた。モチ系統A58とウルチ品種のむつほまれF_1種子由来のカルスを約5ケ月間培養し、その各再分化体のR_1種子胚乳のウルチ、モチ形質の分離比についてX^2検定を行った結果、期待される分離比(ウルチ:モチ=3:1)に適合しない再分化体は全体の44.2%もあったが、このなかに、1粒を除き他は全てウルチ形質の胚乳である種子を持つものが1個体認められ、この再分化体は、Wxwxの遺伝子型の培養細胞がwaxy座近傍での相同染色体の組換えの結果、WxWxとwxwxの遺伝子型を持つ娘細胞が分離し、その中のWxWxを持つ細胞が再分化したことが示唆された。しかし、その個体で1粒のみモチの形質を示したが原因は不明である。以上の結果から、イネ培養細胞でwaxy座において相同組換えが生じたことが示唆された。イネ減数分裂期特異的相同組換え遺伝子RiLIM15の培養細胞における発現解析前年、モチ、ウルチの遺伝子解析から、イネの培養細胞において体細胞相同組換えが認められたことから、DNA相同組換え遺伝子の関与が推察された。そこで、イネの減数分裂期特異的相同組換え遺伝子RiLIM15の培養細胞内での発現を中心に解析を行った。また、インド型イネ系統IR36より単離された同遺伝子について、その特徴に関してはほとんど知られていないためその基本的構造や発現に関する解析も同時に行った。サザンブロット解析の結果、RiLIM15の内部構造は、日本型、インド型イネの間において保存性が高いことが示唆された。さらに、先に単離されたIR36 RiLIM15の制限酵素地図とは異なる構造を持つRiLIM15の相同配列が、イネゲノム内においてもう1コピー存在することが示唆された。そこで、日本型イネのBAC libraryより同遺伝子の単離を試みたところ、2種類のRiLIM15遺伝子RiLIM15A、RiLIM15Bを単離することができた。これら遺伝子の塩基配列を比較したところ、これらの間でコード領域内のエクソン領域では相同性が極めて高いが(95.3%)、イントロン領域では相同性が比較的低い(76.1%)ことが明らかとなった。一方、両遺伝子の推定アミノ酸配列を比較した結果、それらの相同性は極めて高く(98.2%)、両遺伝子は機能的に類似していることが示唆された。以上の結果から、RiLIM15は機能的に類似した2つの遺伝子から構成される多重遺伝子族であることが明らかとなった。1.これまで、イネRiLIM15遺伝子が体細胞分裂期相同組換えのために、減数分裂期幼穂だけでなく体細胞培養細胞でも特異的に発現することを明らかにしてきたが、同遺伝子の発現は、mRNA in situ hybridization法でも確認された。
高等学校教師のライフコース研究－北海道の郡部・離島を対象として－

本研究は、北海道の郡部・離島に所在する高等学校の教師を対象として、彼らのライフコースを聴き取りやアンケートによって明らかにし、高等学校教師としての職能成長の具体的過程を解明しようとする一環である。本研究期間においては、北海道の郡部にある高等学校の教師へのインタビューや北海道内全域の初任期にある高等学校教師およびその高等学校に勤務する経験年数の長い同僚教師へのアンケートなど、主に初任期に焦点をあて調査を行なった。本年度の研究概要は次のようにまとめられる。北海道東部のある地域を対象として文献調査、現地調査を行なった。その地域の各種統計、市町村史、高等学校・中学校の記念誌(五十周年誌等)、その他関連研究などの基礎調査により、地域のなかでの高等学校をとらえる試みをした。あわせて学校見学および聴き取り調査を行なった。ただしその成果発表としては、ある村の地域調査において行なったこれから高等学校に進学する中学校3年生を対象とした聴き取り調査をもととしたものにとどまり、学校(史)調査を含む教師のライフコースに関する発表は研究最終年度に持ち越さざるを得なかった。高等学校の設置されていない村の中学校3年生に対して、彼らの学校生活をはじめとした生活と進路志向、将来志向についてインタビュー調査を行なった。あわせて学校教員や教育委員会に対して教育実践に関するインタビュー調査を行なった。この村の中学生たちは、村の主要な職業である福祉や酪農について、親がその職に就いている場合を除いてあまり知らないこととともに、都市での暮らしと比較して遊ぶ場所や買い物をする場所がないと自らの生活環境をとらえていることを確認した。このようなこれから高校生になっていく生徒の立場からの高等学校教育への視点をふまえて、高等学校教師たちの教育へのまなざしをそれとの重なりと離れに留意しながら、そのライフヒストリー、さらにライフコースを明らかにしていくことが研究最終年度の課題となる。本年度は、以下の2点において進展することができた。(1)2010年度に北海道大学を卒業・修了したのち高等学校および中学校の教員となった方全員(38名)を対象とする聴き取りおよびアンケート調査を実施し、初任期教員が直面する困難について明らかにした。それにより、郡部・離島の小規模校に赴任した初任者は、授業に関して相談できる同一教科の教員がいない(少ない)ため、自分一人でも授業を計画、実施しなければならない状況にあることを改めて明らかにできた。しかし、北海道内外の中規模校以上の学校に勤務している場合においても11名中7名が同一校内において先輩同僚からアドバイスを受けることなく、自分一人で日常の授業準備をしていることもわかった。この結果から、授業を自分一人で計画、実施しなくてはならないのは、必ずしも郡部・離島の小規模校に赴任した初任期教員だけではなく、ひろく初任期教員一般であると考えられる。ライフコース研究からすれば初任期という入口に過ぎないが、それでも北海道の郡部・離島の高等学校教員のライフコースを明らかにすることが、決して地域限定の課題ではなく、波及性をもつものとしてとらえうるという展望を具体的にもつことができた。(2)そのような見通しが得られた一方で、郡部・離島に所在する高等学校に勤務する教員を対象としてライフコースを主に聴き取りにより解明するという課題設定について、北海道内のいくつかの高等学校を訪問させていただいたことにより現実的な困難に直面するとともに、対象者をどのように把握するかという方法上の困難も明らかとなった。現在、教師のライフコースの代表的な研究成果の読書会をふまえた仮調査票の作成とあわせて、調査に協力していただく高等学校および地域を模索しているところである。本年度の研究実績は、以下の三点にまとめられる。1)北海道の郡部(オホーツク管内)にある高等学校、中学校、小学校および教育委員会を訪問し、それぞれの校長また教育長から学校や地域の状況について伺うとともに、先生方へのインタビューを実施した。インタビューでは、なぜ教師をめざしたか、教師となってから今までのこと、これまで直面した困難、教師としての喜びややりがい、さらに現在の状況とこれからの希望などを伺った。それらは、当事者の合意のもと、テープ起こしにより文字記録とした。現時点ではそれらを公表していないが、今後研究をまとめていく際の具体像を描くものとしていく予定である。2)北海道全域の高等学校教員のうち、名簿調査により教職歴15年目と思われる方々およびその先生方の勤務する高等学校の経験の長い先生方へのアンケート調査を試みた。初任期の勤務状況、直面している課題や困難を当該の先生方から聴き取るにとどまらず、その先生方と同僚教員との相互関係を見ようとする調査である。現在、アンケートを集計中であり、今後論文として発表していく予定である。3)上記の調査も含めて、これまで実施してきたインタビューやアンケート調査をふまえて、初任期教員の状況や直面している課題や困難などを整理し、それらに基づいて教員養成の課題、とくに北海道大学が直面する課題を考察した。これについては、高等学校の先生方の研究会で報告する機会を得、報告要旨を活字化した。教育学高等学校教師に対するインタビュー調査などを成果として発表できるに至っていないため。現時点において本調査に協力いただく高等学校および地域を決定できておらず、事前の文献調査等にとどまっている点で、やや遅れていると言わざるを得ない。