hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
炎症、腫瘍組織に存在する酸素ストレスが局所の免疫応答に与える影響

炎症、腫瘍組織における免疫細胞の活性化状態は、従来より研究されてきた抗原提示やサイトカインによる活性化制御に加えて、局所の好中球や組織の細胞から産生される酸化ストレスによる影響を受けると考えられる。本研究では酸化ストレスの免疫細胞のシグナル伝達機構に与える影響について検討を行った。生体内での免疫細胞に対する酸化ストレスの影響をin vitroの系においてmimicするために、末梢血リンパ球あるいはリンパ球細胞株に酸化ストレスとして過酸化水素、あるいは他の酸化剤を添加するという系を用いて解析した。Tリンパ球において抗原受容体(TCR/CD3)のco-receptorとなるCD4分子が抗原刺激によるT細胞の活性化に伴いT細胞表面からdown-regulateされるが、この際に酸化ストレスが共存するとCD4分子のdown-regulationが抑制されるという結果を得た。また、その結果、酸化ストレス存在下ではこの機構を介した抗原刺激によるT細胞活性化の増強が生ずることが判明した。更にchimera分子を用いての解析の結果、酸化ストレスによるT細胞活性化に伴うCD4 down-regulationの抑制作用にはCD4分子の細胞外ドメインが必須であることが明らかとなった。これらの解析結果は酸化ストレスによる免疫細胞活性化調節機構には、1)前年度に報告した酸化ストレスによるシグナル伝達分子の直接の活性化に加え、2)T細胞では酸化ストレスがCD4分子の発現をaberrantに制御することにより抗原受容体からのシグナルを増強させるという免疫応答の修飾・制御機構が存在することが明らかとなった。本研究では酸化ストレスの免疫細胞のシグナル伝達機構に与える影響について検討を行っている。生体内での免疫細胞に対する酸化ストレスの影響をin vitroの系においてmimicするために、末梢血リンパ球あるいはリンパ球細胞株に酸化ストレスとして過酸化水素、あるいは酸化剤を添加するという系を用いて、酸化ストレスが免疫細胞の細胞内シグナル伝達系に与える変化についての検討を行った。抗原提示やサイトカイン刺激による免疫細胞活性化においてごく初期に観察されることが知られている細胞内蛋白のチロシンリン酸化について、培養リンパ球への酸化剤添加による変化の有無を検討したところ、幾つかのタンパク質のチロシンリン酸化の誘導あるいは増強が観察された。また酸化剤添加後に抗原受容体を抗抗原受容体モノクローナル抗体を用いて刺激するという実験系においては、酸化剤非存在下で抗原受容体刺激時に観察される特定タンパク質のチロシンリン酸化の誘導が酸化剤の添加により増強される効果が認められた。これらの結果は酸化ストレスが単独で免疫細胞の活性化状態に影響を与えることを示すと共に、細胞内タンパク質のチロシンリン酸化の誘導の点において抗原提示やサイトカインによる免疫細胞の活性化機構に対して酸化ストレスが促進的に作用することが明らかとなった。
脳腫瘍特異抗原遺伝子のクローニングと免疫遺伝子治療への応用

悪性腫瘍は極めて治療困難な疾患であり、現在まで有効な治療法がない。そこで申請者らは新たなアプローチとして脳腫瘍に対する腫瘍抗原特異的な免疫遺伝子治療を提案した。初年度において、12症例のグリオーマ患者血清を用いてスクリーニングし、92個の陽性クローンを単離し、塩基配列を解析した結果、これらの抗原は52種の遺伝子をコードしていることを明らかにした。更に、これら抗原を様々な患者血清中IgGとの反応を解析し、グリオーマを含むガン患者にのみ反応する新規遺伝子KU-GB-1の全長を単離した。次年度は同様の手法を用い、更にグリオーマ患者血清にのみ反応する新規抗原KU-GB-2を同定し、KU-GB-1とともに遺伝子全長の塩基配列を決定した。最終年度にはグリオーマ細胞株2種および精巣組織から構築したcDNAライブラリーをグリオーマ患者血清を用いてスクリーニングし、陽性クローンを単離した後、塩基配列を決定し、新規のグリオーマ抗原としてKU-GB-3,KU-GB-4,KU-GB-5を同定し、それぞれ遺伝子全長の塩基配列を決定した。これら新規の抗原遺伝子は精巣を除く正常組織において明らかな発現は認められなかったが、グリオーマにおける発現が認められた。本研究により現在まで、グリオーマ患者においてIgG抗体反応を示す5種の新規抗原遺伝子が単離・同定され、今後、これらの抗原分子を用いた免疫治療への応用を進めていく。悪性脳腫瘍は極めて治療困難な疾患であり、現在まで有効な治療法がない。そこで申請者らは新たなアプローチとして、脳腫瘍に対する腫瘍抗原特異的な免疫遺伝子治療を提案している。本研究では第一に新規の脳腫瘍特異抗原遺伝子の単離を目的として、グリオーマ患者血清を用いてautologous typingに分子生物学的手法を取り入れたSEREX(Serological identification of antigens by recombinant expression cloning)法による解析を試みた。患者一症例につき5x10^5個のファージを12例のグリオーマ患者血清を用いてスクリーニングした結果、92個の陽性クローンを単離し、塩基配列解析により、それらの抗原は52種の遺伝子をコードしていることが明らかになった。さらに単離された抗原を、様々な患者(グリオーマ患者、他の癌患者、他の脳疾患患者、および健常人)血清中IgGとの反応を解析し、グリオーマを含む癌患者のみ反応する新規遺伝子KU-GB-1の全長を単離した。一方、癌ワクチンに用いるベクターとして、in situで遺伝子導入効率が高く、腫瘍細胞中でのみ選択的に複製するreplication-conditional HSV、G207をヘルパーウイルスとして用いて、サイトカイン遺伝子(GM-CSF及びIL-12)をamplicon vector組み込んだdefective HSV vectorシステムを作製した。本研究では新規の脳腫瘍抗原遺伝子の単離を目的として、グリオーマ患者血清を用いてautologous typingに分子生物学的手法を取り入れたSEREX(Serological identification of antigens by recombinant expression cloning)法による解析を試みた。12症例のグリオーマ患者血清をそれぞれスクリーニングして、陽性クローンを単離し、塩基配列を決定した。データベースを用いて検索した結果、14種の抗原は新規遺伝子由来であった。さらに単離された抗原の健常人、グリオーマ、脳疾患、癌患者血清に対する反応を解析した結果、グリオーマおよび癌患者血清のみに反応する新規抗原KU-GB-1、グリオーマ患者血清のみに反応する新規抗原KU-GB-2を同定し、それぞれ遺伝子全長の塩基配列を決定した。またこれら2種の抗原遺伝子は、testisを除く正常組織での明らかな発現は認められず、一方グリオーマにおける高い発現が認められた。本研究により現在まで、グリオーマ患者においてIgG抗体反応を示す2種の新規抗原遺伝子が単離された。

本研究では新規の脳腫瘍抗原遺伝子の単離を目的として、グリオーマ患者血清を用いてautologous typingに分子生物学的手法を取り入れたSEREX(Serological identification of antigens by recombinant expression cloning)法による解析を試みた。グリオーマ細胞株2種から構築したcDNAライブラリーおよび精巣組織から構築したcDNAライブラリーを、グリオーマ患者血清を用いてスクリーニングして、陽性クローンを単離し、塩基配列を決定した。さらに単離された抗原分子の健常人、グリオーマ、脳疾患、癌患者血清に対する反応を解析した結果、新規のグリオーマ抗原として、KU-GB-3,KU-GB-4,KU-GB-5を同定し、それぞれ遺伝子全長の塩基配列を決定した。これらの抗原遣伝子は、testisを除く正常組職での明らかな発現は認められず、一方グリオーマにおける発現が認められた。以上、本研究により現在まで、グリオーマ患者においてIgG抗体反応を示す5種(KU-GB-1,KU-GB-2,KU-GB-3,KU-GB-4,KU-GB-5)の新規抗原遺伝子が単離、同定された。現在、単離された抗原分子を組み込んだウイルスベクターの作製を進めている。
中世山城国久我荘の多層的復元研究

山城国久我荘はその故地に条里制遺構が現存している一方で、中世における土地利用・所有状況等を、条理ごとに記入した土地台帳もまた残されているという荘園である。かつて、杉山博氏ならびに私は、その中世土地台帳の記載内容を条里制の枠に描画し、中世久我荘を景観的に復元したことがある。しかしこれは手作業によるものであったため、多層的な表現を十分に行うことができなかった。本研究は、これをコンピュータによって行うことで、従来の研究の欠を補ってみたものである。補助金交付最終年度に当たる本年度は、まず京都市伏見区久我地方における農業用水の利用状況(水がかり)について、学生などによる研究補助を活用し現地調査を実施した。次に昨年度、本補助金で開発したソフトを用いて、中世土地台帳のデータをコンピュータグラフィック上に表示し、スキャナで画像入力した地図や空中写真などと重ね合わせる作業を行った。こうして画面上に表示された復元結果を、様々な組み合わせ表示で出力した結果、次のような新知見が得られた。第一に、久我荘を灌漑する最も主要な用水は、荘園領主久我家の屋敷の周囲を、堀のように流れて久我荘内に注いでおり、これは久我家が、久我荘の灌漑用水を管理する地位にあったためと推定されること。第二に、久我本荘と呼ばれる下久我荘の「散在」性に比べて、久我新荘と呼ばれる上久我荘の「一円」性が明確となり、これは「新荘」が、旧公田(国衙領)を囲い込む形で成立した荘園であるためと考えられること。以上の2点である。これらの新知見については、現在刊行準備中の拙著『中世久我家と久我家領荘園』(平成12年度科学研究費補助金研究成果公開促進費申請中)において発表する。なお雑誌論文としては、久我家領荘園の伝領に関する研究を、複次的な研究業績として発表した。山城国久我荘は、その故地である京都市伏見区久我地域に、古代以来の整然たる条里制の遺構が現存しており、一方で、中世におけるその一区画づつの土地利用・土地所有状況を、条里制の規則に従って記入した土地台帳もまた残されているという、好個の研究環境が整った荘園である。したがって、その中世土地台帳の記載内容を、条里制の枠に描画し、これを現存する条里制遺構に重ねて表示すれば、中世荘園の土地利用・土地所有状況を景観的に復元することが可能となるはずである。かつて杉山博氏は、この方法を用いて中世荘園の構造に関する研究を進め、私もこの方法で久我荘の集落景観を復元したことがある。しかしながらこれらの研究は、いずれも手作業によるものであったため、土地利用状況と土地所有状況、あるいは土地所有の重層的権利関係などといったものを十分に表現することができなかった。本研究は、この作業をコンピュータによって行うことで、従来の研究の欠を補おうとしたものである。補助金交付初年度にあたる本年度は、土地台帳の記載内容を表形式に入力することで、その内容を条里制の枠に描画し、これを地図や空中写真と重ね合わせることのできるコンピューターソフト(FindManor)の開発に力を注いだ。具体的には広島大学工学部の学生に同ソフトの開発を委託し、彼からの荘園史研究上の質問に答えることで、その開発を監修した。したがって、彼に対するソフト開発の謝金、ならびにコンピュータや荘園史研究に必要な図書、地図・空中写真の購入費などが補助金の主な支出先となった。また関連する荘園(丹波国山国荘)の灌漑や、久我家領荘園(池大納言家領)の伝領に関する研究が複次的な研究業績となった。以上の2点である。
浅い湖沼におけるハス群落拡大がメタン食物網へあたえる影響

宮城県伊豆沼は、浅い湖のため近年ハス群落が拡大し湖水中で貧酸素状態が起きやすい状況になっている。ハス群落内においては堆積物中のメタンが湖水中へ拡散し、夏季にハス群落外より高濃度で蓄積していた。環境DNAを用いた細菌群集解析から、メタン酸化細菌群集は水中に特有な細菌が増殖し、種組成の季節変化はメタン濃度や水温に対応していた。動物プランクトンや魚類の炭素安定同位体比が夏季に低下することから、メタンやメタン酸化細菌を起源とするメタン食物連鎖系が、水中へも拡大していることが示唆された。宮城県北部に位置する水深の浅い伊豆沼においては、近年ハス群落の生育面積が急速に拡大し、湖水の攪拌の低下より低酸素や無酸素状態が起きやすくなり、これに伴い堆積物中で生成されたメタンの酸化が堆積物表面から水中へ移行している可能性が高くなってきている。そこで、メタン濃度などの環境要因と動物プランクトン等の安定同位体比を測定することによりハス群落の拡大によりメタン食物連鎖が堆積物中から水中へ移行しているか検討することを目的としている。伊豆沼の開放水面とハス群落内おいてサンプリングを毎月行ない、温度と溶存酸素濃度の鉛直分布を測定した結果、夏期に湖水下層で貧酸素になり、特にハス群落内の方が開放水面より低酸素になる傾向がみられた。湖水中のメタン濃度は夏期の低酸素状態時に高くなり、ハス群落内の方が開放水面に比べて有意に高かった。特にハス群落内では湖水表面までメタンが検出された。このようにハス群落内で溶存酸素濃度の低下とメタン濃度の上昇が確認できた。植物プランクトン、動物プランクトン、付着藻類、魚類などを採集して、乾燥サンプルを作成し、質量分析計を用いて炭素と窒素の安定同位体比を測定した結果、植物プランクトンや付着藻類の炭素安定同位体比は季節変化を示さなかったが、動物プランクトンの炭素安定同位体比は夏から秋にかけて大きく値が低下した。また、魚類の中でも小型の個体は夏から冬にかけて、炭素安定同位体比が低下するものがみられた。メタン酸化細菌に特異的なプライマーを数種類試したところ、堆積物中だけでなく湖水中からもメタン酸化細菌が検出できた。以上のことより、ハス群落の拡大は湖水中のメタン濃度を上昇し、その結果炭素安定同位体比の極めて低いメタン酸化細菌が湖水中でも増殖して、それを餌とする動物プランクトンや魚類の同位体比も低下したことにより、メタン食物連鎖の拡大が示唆された。宮城県北部に位置する浅い湖である伊豆沼においては、今までの炭素安定同位体比の分析から堆積物中のメタン食物連鎖系が重要であることが示されてきている。また、近年ハス群落の面積拡大に伴い湖水中で低酸素状態が起きやすい傾向があり、メタン食物連鎖が堆積物中のみならず湖水中にも拡大している可能性があり、これを検討することを目的としている。前年度に引き続き伊豆沼の開放水面とハス群落内の定点において、毎月1回現地調査を行い、水温と溶存酸素濃度を環境条件を測定し、メタン濃度測定用サンプル、生物のサンプルおよびメタン酸化細菌用のサンプルを採集した。夏期のハス群落内では開放水面にくらべて、溶存酸素濃度は低下し、湖水中のメタン濃度は有意に高く、堆積物中からのメタンが水中まで拡大していることが確認できた。夏期に増大したメタン生成の結果、動物プランクトンの炭素安定同位体比は春に比べ夏から秋にかけて低下し、メタン食物連鎖系の影響を受けていることが示唆された。しかし、ハス群落内と開放水面で採集された動物プランクトンの間では差は見られなかった。魚類に関しては今年度は主にブルーギルについて安定同位体分析を行ったが、秋に採集されたブルーギルは春から初夏に採集されたものと比べ、炭素安定同位体比が低い傾向がみられ、今後炭素安定同位体比の値が低下した動物プランクトンのエサとしての寄与を検討する必要がある。昨年度メタン酸化細菌に特異的なプライマーを用いて水中からもメタン酸化細菌が検出できたので、今年度はメタン細菌群集組成についてDNA分析による検討を行った結果、堆積物中では群集組成は変化が見られなかったが、水中では季節変動することが分かった。宮城県北部に位置する浅い湖である伊豆沼においては、堆積物中のメタン濃度と底生生物の安定同位体比の解析からメタン食物連鎖系の重要性が示されてきている。さらに、近年ハス群落が拡大することに伴い湖水中で低酸素濃度の状態が起きやすくなことから、メタン食物連鎖が堆積物中だけでなく湖水中へも拡大している可能性があり、これについて検討することを目的としている。今年度も昨年度までに引き続き伊豆沼の開放水域とハス群落内の定点において、水温と溶存酸素濃度を測定し、湖水中と堆積物中からメタン濃度測定用サンプルを採集し、ガスクロによってメタン濃度を測定した。今年度を含めた3年間のデータを解析したところ、溶存酸素濃度は夏期に湖水低層で貧酸素になり、この傾向は開放水域よりハス群落内の方が顕著であった。また、水中のメタン濃度はハス群落内の方が開放水域より有意に高く、特に夏期の低層では高濃度に蓄積していた。メタン酸化細菌群集については、環境DNAからメタン酸化細菌に特異的なプライマーを用いてDNAを増幅し、変性剤濃度勾配電気泳動法によって群集解析を行った結果、水中のメタン酸化細菌群集の組成は季節変化が見られ、ハス群落内の方が開放水域より組成の変動が大きく、メタン濃度や溶存酸素濃度との対応がみられた。

また、電気泳動のゲルからいくつかのバンドを切り出しジェネティックアナライザーによって配列を調べたところ、メタン酸化細菌Mathyloparacoccus属と相同性が高かった。動物プランクトンの炭素安定同体比の値は、春に比べ夏から秋にかけて低下したことから、ハスが生育する夏期に湖水中の高濃度のメタンがメタン酸化細菌に利用され、これらが動物プランクトンのエサとしての高く寄与したことが示唆された。宮城県伊豆沼は、浅い湖のため近年ハス群落が拡大し湖水中で貧酸素状態が起きやすい状況になっている。ハス群落内においては堆積物中のメタンが湖水中へ拡散し、夏季にハス群落外より高濃度で蓄積していた。環境DNAを用いた細菌群集解析から、メタン酸化細菌群集は水中に特有な細菌が増殖し、種組成の季節変化はメタン濃度や水温に対応していた。動物プランクトンや魚類の炭素安定同位体比が夏季に低下することから、メタンやメタン酸化細菌を起源とするメタン食物連鎖系が、水中へも拡大していることが示唆された。昨年度はハス群落内と開放水面に各1カ所の定点をもうけ、毎月溶存酸素濃度とメタン濃度の測定、プランクトンの安定同位体比の測定を行ったが、今年度はこれらのサンプリングに加えて、統計的な検討ができるようにハスの生育前の6月と生育期の8月にハス群落内と開放水面でそれぞれ3カ所ずつ地点を選び、これらの測定を行ない、地点の違いではなくハス群落の有無によって溶存酸素濃度やメタン濃度に差があることも確認できた。メタン酸化細菌については、系統分類から主にType IとType IIの二つのグループの存在が知られているが、伊豆沼においては両方のグループが環境DNAから増幅できた。動物プランクトンなどの安定同位体分析も秋までのサンプルについては測定が完了しているが、今後秋から冬にかけてのサンプルの分析を行う必要がある。生態学平成27年度は、今まで2年間の堆積物中と水中のメタン濃度のデータと動物プランクトンや魚類の炭素安定同位体比のデータの関係について解析し、ハス群落の生育によるメタン濃度と安定同位体比への影響とメタン食物連鎖の波及について検討を行う。また、春先からハス群落が生育するまでの期間のハス群落内と開放水面について、ハス生育前の堆積物と水中のメタン濃度のデータが初年度(25年度)は測定回数がすくなかったので、春先の補足調査測定を行う。メタン酸化細菌群集に関しては、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法による群集構造のパターンの違いだけでなく、ゲルよりバンドDNAを切り出し、シーケンサーで塩基配列を決定することにより、群集を構成しているメタン酸化細菌の種類を推定することも検討する。研究目的のひとつである水中のメタン濃度の測定のために、水深約1.6mの浅い湖水からポンプによる層別サンプリングを試みたところ、層別の採水がうまくでき、そのサンプルを用いてヘッドスペース法によるガスクロマトグラフィーを用いたメタン濃度の測定も可能となった。その結果、堆積物中だけでなく湖水中のメタン濃度の鉛直分布の季節変化を調べることができた。また、植物プランクトンや動物プランクトン、付着藻類などの毎月のサンプルについても、安定同位体比を測定するのに充分な量を採集することができたため、これらの安定同位体比についても5月から12月の間測定できた。
神経芽腫群腫瘍のアポトーシス誘発遺伝子及び抑制遺伝子と予後の関連

研究2:研究1により神経芽腫では何らかの非Fasシグナルがcaspase3を活性化しapoptosisを誘発するもとの推察されたことから、Fas非依存性のapoptosis発生機序について、caspase9およびapoptosis実行分子であるcaspase3の発現を調べて検討した。またcaspase阻害因子Iniibitor of apoptosis protein(IAP)のうち、XIAP(X-Iinked IAP)発現について検索した。凍結組織20例のウエスタンブロット解析では全例に前駆型caspasc9がみられ、その9例(45%)に活性型蛋白質(p37/p35)が検出された、前駆型caspase3も全腫瘍組織に発現し、13例(65%)に活性型蛋白質(p24/p17)を認めた。このうち7例(54%)ではp37/p35が同時にみられ、caspase9依存性にcaspase3が活性化を受けたと考えられた。XIAPは全腫瘍に発現したが、9例(45%)で発現量の低下を認めた。さらにそのうちの6例(67%)にはP37/P55が検出された。まとめ:神経芽腫の自然退縮にはその一部にFas非依存性のapoptpsisが関与することの結論が得られた。そのapoptosis発現機序は、内在するcaspase9の活性化と、XIAPの発現抑制状態下において、活性化されたcaspase3によってより効率的に実行されるものと推察された。平成9年度まで行ってきた神経芽腫群腫瘍におけるapoptosis現象と予後との関連に関する一連の研究の延長である今年度の成果は以下のごとくである.今年度の研究では当初の計画どおり、神経芽腫のin vivoでのapoptosisのメカニズムを理解するために無治療神経芽腫腫瘍組織中のapoptosis制御蛋白の発現状態を観察した.またそれらによって発現する神経芽腫のapoptosis現象の程度と予後との関連を検討した.免疫組織染色による腫瘍中Fas発現は予想に反し87%の神経芽腫でほとんど認められなかった.これに反しおよそ70%の腫瘍にFas Ligand、caspase-3両蛋白の明瞭な発現を認めた.10腫瘍で行ったウエスタンブロット法による分析では全腫瘍中にFasの発現は認めず、Fas Ligand、caspase-3は種々の程度で発現した.Ac-DEVD-Hpeptideを用いたcaspase-3に対するinhibition assayにより、10例中4例の腫瘍でcaspase-3様活性の約90%におよぶ抑制効果を認めた.以上、神経芽腫の腫瘍組織ではapoptosisに関連したFas蛋白そのものの発現はきわめて乏しいという結果を得た.これに反しcaspase-3の発現は旺盛であり、したがっておそらく神経芽腫のapoptosis誘発にはFas-independentの誘導経路の存在が示唆された.神経芽腫の自然消退機構を理解するために、同腫瘍におけるアポトーシス誘導性シティンプロテアーゼ、ガスパーゼ8/FLICEの発現様式を検討した。腫瘍凍結材料10例を用いたウェスタンブロット分析では、9例に種々の強度を呈する特異バンドが検出された。このうち4例では、分子量約55kDa、5例は分子量約53kDaの蛋白バンドを示し、各々splicing variantであるカスパーゼ8aおよびカスパーゼ8bを発現すると考えられた。ホルマリン固定パラフィン包埋材料42例を用いたカスパーゼ8免疫染色では、32例(76.2%)の腫瘍がこの蛋白を強発現(陽性細胞率:≦50%)し、弱発現例<(同:50%)は10例にとどまった。また、臨床病理学的因子との関連では、ガスパーゼ8強発現と予後良好臨床病期(1、2、4s期)群およびShimada組織分類のfavorable群との間に有為な相関を認めた。これらの結果から、カスパーゼ8は予後良好腫瘍の増殖抑制あるいは自然消滅に関与すると考えられた。これまでの研究成果を踏まえ、本年度の研究は神経芽腫群腫瘍におけるアポトーシス発生機構を理解するため、以下の実験を行った。

すなわち昨年報告したように、神経芽腫の予後良好群においてはアポトーシス誘発性システインプロテアーゼ、カスパーゼ8aおよびカスパーゼ8bの発現を認めたが、カスパーゼ8発現だけではアポトーシス誘導の説明がつかない症例も当然存在する。そこで今回さらにチトクロームCにより活性化されるカスパーゼ9の発現様式を検討しアポトーシス発現への関与、すなわち患児の予後との関連を見た。【方法】神経芽腫凍結組織18検体を用い、それより蛋白を抽出し,ウエスタンブロット法によりカスパーゼ9の発現を検索した。また,ホルマリン固定パラフィン包埋材料を用い,免疫ペルオキシダーゼ染色により活性型カスパーゼ9の局在を検索した。【結果】1.ウエスタンブロット法では全例に前駆型カスパーゼ9の発現がみられ,うち7例に活性型蛋白であるp37バンドが検出された。免疫染色では,腫瘍内アポトーシス細胞の一部に活性型カスパーゼ9の局在が確認された。【結論】NBには前駆型カスパーゼ9が恒常的に発現し,一部の腫瘍のアポトーシス誘導に関与していると思われた。以上の結果、1)さらに他のアポトーシス関連遺伝子と神経芽腫との関わりを明らかにすることと、2)個々の腫瘍でのアポトーシス関連遺伝子の発現の差異があるか、および3)臨床情報と遺伝子との関係で予後予測が可能か、を検討することへ研究を展開させる予定である。神経芽腫における自然褪縮機構を理解するため、平成10年度から引き続き、今年度はapoptosis誘発の細胞内シグナルであるカスパーゼ-3、-9とその抑制遺伝子(XIAP)について検索した。対象と方法:19882001年までの間に摘出した神経芽腫の腫瘍凍結組織20例を用いた。患児の臨床的特徴と臨床予後因子(年齢、病期、組織型、腫瘍分化度、N-myc増幅)をそれぞれ分析した。それらの凍結標本を用いWentern blot法により、カスパーゼ3、9およびXIAPの発現状態を解析した。これらの対象症例については腫瘍組織提供患児家族へ文書によるInformed Concentを行った。結果:検索した腫瘍組織全例に前駆型カスパーゼ9が発現し、9例(45%)に活性型蛋白質(p37/p35)が検出された。前駆型カスパーゼ3も全腫瘍組織に発現し、13例(65%)に活性型蛋白質(p24/p17)が認められた。このうち7例(54%)ではp37/p35が同時にみられ、カスパーゼ9依存性にカスパーゼ3が活性化を受けたと考えられた。XIAPも全腫瘍に存在したが、9例(45%)で発現量の低下を認めた。さらにこのうち6例(67%)にはP37/P35が検出され、活性型カスパーゼ9を有する神経芽腫では、何らかの機序によりXIAP発現が低下し、より効率的にapoptosisが発生する可能性が示唆された。しかしながら臨床病理学的予後因子とカスパーゼ3活性との関連は低かった。したがって実際の腫瘍褪縮には、apoptosisに加えて細胞成熟の要因も不可欠な因子と考えられた。
ホップガロア対応の新たな展開に関する研究

kを基礎体とし,Aをkを含む体K上のクロスKホップ代数,すなわちアンチポードを持つクロスK双代数とする.Aは左K空間として有限次で,さらにK余代数として分裂であるとする.このとき,Aの右K空間としての次元は左K空間としての次元と一致することが得られた.RがKを対称的商代数Qの中心に持つ素代数で,AがQに連続かつ外部的に作用するとき,Aが零でない左積分を持てば,ホップガロア対応と同様に,Rの不変元からなる部分代数を含むRの有理的完備部分代数は,ある対応写像によってAの右余イデアル部分代数と対応する.Aの群的元の作用でRが安定であれば,この対応写像は単射であることが示された.群的元の作用での安定性の条件を仮定せずに単射であることを示すことが今後の課題となる.A^*をAからKへの右K写像の全体とする.Aの任意の右余イデアル部分代数Bが零でない左積分を持ち,さらに,Bが左A^*加群としてBの左積分で生成されていれば,対応写像の全射性も成立する.従って,Bの左積分についての上記性質の検証が今後の課題となる.ホップ代数の環への作用に関する新たな特徴付けへの応用については,Hが素代数Rに外部的に作用する体k上の有限次分裂ホップ代数のとき,Hが群環である場合の結果の一般化のための次の2つの問題を具体的な例で検証した.1.RのHによる不変部分代数を含む部分代数の自己同型写像で,不変部分代数を固定するものはRの自己同型写像に拡張するか.2.Rの対称的商代数の中心がkと一致する場合,Hの正規右余イデアル部分代数Iによる商ホップ代数をH'とするとき,RのIによる不変部分代数へのH'の作用は外部的か.検証した例ではこれらの問題については肯定的な答を得たが,一般的にこれらの問題が肯定的な答を持つか,あるいは反例が存在するかについては今後の課題となる.kを基礎体とし,Aをkを含む体K上のクロスKホップ代数,すなわちアンチポードを持つクロスK双代数とする.Aは左K空間として有限次で,さらにK余代数として分裂であるとする.このとき,Aの右K空間としての次元は左K空間としての次元と一致することが得られた.RがKを対称的商代数Qの中心に持つ素代数で,AがQに連続かつ外部的に作用するとき,Aが零でない左積分を持てば,ホップガロア対応と同様に,Rの不変元からなる部分代数を含むRの有理的完備部分代数は,ある対応写像によってAの右余イデアル部分代数と対応する.Aの群的元の作用でRが安定であれば,この対応写像は単射であることが示された.群的元の作用での安定性の条件を仮定せずに単射であることを示すことが今後の課題となる.A^*をAからKへの右K写像の全体とする.Aの任意の右余イデアル部分代数Bが零でない左積分を持ち,さらに,Bが左A^*加群としてBの左積分で生成されていれば,対応写像の全射性も成立する.従って,Bの左積分についての上記性質の検証が今後の課題となる.ホップ代数の環への作用に関する新たな特徴付けへの応用については,Hが素代数Rに外部的に作用する体k上の有限次分裂ホップ代数のとき,Hが群環である場合の結果の一般化のための次の2つの問題を具体的な例で検証した.1.RのHによる不変部分代数を含む部分代数の自己同型写像で,不変部分代数を固定するものはRの自己同型写像に拡張するか.2.Rの対称的商代数の中心がkと一致する場合,Hの正規右余イデアル部分代数Iによる商ホップ代数をH'とするとき,RのIによる不変部分代数へのH'の作用は外部的か.検証した例ではこれらの問題については肯定的な答を得たが,一般的にこれらの問題が肯定的な答を持つか,あるいは反例が存在するかについては今後の課題となる.クロスKホップ代数(量子亜群)に関する近年の様々な研究結果に取材しながら,ホップガロア対応定理に関連するホップ代数の環への作用における諸性質が,ホップ代数より一般的な代数系であるクロスKホップ代数に拡張できるかどうかを調べ,ホップガロア対応定理のクロスKホップ代数への一般化が可能かどうかを検証した.kを基礎体とし,kを含む体K上のクロスKホップ代数,すなわちアンチポードを持つクロスK双代数,Aを考える.Aは左K空間として有限次で,さらにK余代数として分裂であるとする.このとき,Aの右K空間としての次元は左K空間としての次元と一致することが確認された.また,ホップガロア対応定理の証明で用いられた,分裂ホップ代数の素代数への作用の特性に関するA.Milinskiの結果(1995年)は,Aが素代数Rの左マルチンデール商代数Qに作用する場合でも示せることが確かめられた.このことをもとに,クロスKホップ代数のガロア対応について検証し,Aが零でない左積分を持つ場合,AのQへの作用が連続かつ外部的であれば,ホップ代数の場合と同様,Rの不変元からなる部分代数を含むRの有理的完備部分代数は,対応写像によって,Aの右余イデアル部分代数と対応することが分かった.

更に,Aが余代数として既約であるか,または,RがAの群的元の作用によって安定しているときは,対応写像は単射であることが確認された.対応写像が全射であるかどうかの検証は,今後の課題となる.また,より弱い条件での対応写像の単射性の証明,Aにおける零でない左積分の存在についての検証,ホップ加群の双対性についての調査,更に,ホップガロア対応定理のホップ代数の新たな特徴づけへの応用を探ることも,今後の課題となる.ホップガロア対応定理のクロスKホップ代数への一般化,およびホップ代数の作用に関する新たな特徴付けへの応用について研究した.Rを体上の素代数,QをRの対称的マルチンデール商代数,KをQの中心,Aを有限次分裂クロスKホップ代数とし,AがQに連続かつ外部的に作用するとする。A^*をAからKへの右K写像の全体とするとき,Aの任意の右余イデアル部分代数Bが零でない左積分を持ち,さらに,Bが左A^*加群としてBの左積分で生成されていれば,ホップガロア対応定理の対応写像の全射性が得られる。このことから,有限次分裂クロスKホップ代数の右余イデアル部分代数が,左積分に関する上記の性質を持つかどうかの検証が今後の課題となることが確認された.なお,Aに零でない左積分が存在し,Aの群的元の作用でRが安定であるという仮定の下では,対応写像の単射性が成り立つことが前年度の研究で明らかになり,安定性の条件を仮定せずに単射性を示すことが目標となっていたが,これについては継続した課題となった.ホップ代数の作用の特徴付けについては,素環のX外部的自己同型写像のなす有限群における結果の一般化を試みた.Rを体k上の素代数とし,HをRに外部的に作用する有限次分裂ホップ代数とする.Hによる不変部分代数を含むRの部分代数の自己同型写像で,不変部分代数を固定するものはRの自己同型写像に拡張するかどうか,また,Rのマルチンデール商代数の中心がkと一致する場合,Hの正規右余イデアル部分代数をI, HのIによる商ホップ代数をH'とするとき,IによるRの不変部分代数へのH'の作用は外部的かという2つの課題を,ある具体的な例で検証し,その場合には答は肯定的であることが判明した,これらの問題が一般的にも肯定的な答を持つか,あるいは反例が存在するかについては今後の課題となる.
高分子超薄膜のガラス転移ダイナミクスの非弾性中性子散乱研究

高分子薄膜野物性はバルク状態と大きく異なることが知られている。特に最も興味深い現象としてガラス転移温度の膜厚依存性が挙げられる。様々な測定手法を用いた精力的な研究にもかかわらずその具体的なメカニズムは提出されておらず未解決問題として位置づけられている。その一因としてガラス転移現象そのものがあまり理解されていないことが挙がられる。現在の理解としては旧来考えられてきた熱力学相転移ではなくむしろ緩和現象として捕らえる方が妥当である。そのため、ガラス転移現象を理解するためにはダイナミクスの観点からの研究が必須である。そこで本年度は高分子薄膜のガラス転移現象を理解するためにダイナミクス測定を行った。なお、特にミクロスケールのダイナミクス重要であると考え、その目的のために非弾性中性子散乱測定を行った。サンプルとしては薄膜での物性が良く理解されているポリスチレンを用いた。最初に平均二乗変位の温度依存性に注目したが、薄膜が低下すると平均二乗変位が低下する様子が確認できた。更に温度が上昇するに伴い急激な平均二乗変位の増大が二点観測された。この事実は少なくとも観測している時間スケールに二つの緩和過程が発見していることを示している。低温側では200K付近で観測され、高温側では370K付近に観測された。低温で発現した緩和過程は局所的な緩和過程であるいわゆる速い過程が発現したことを示している。また、高温で発見した緩和過程の物理的な起源はまだ不明な点が多いが、バルクの場合緩和過程が発現する温度とDSCなどで測定されたガラス転移温度と非常によく一致したため高温で発現する緩和過程の発現温度を非弾性中性子散乱から見積もったガラス転移温度と定義することにした。この定義を用いて、薄膜のガラス転移温度も見積もったが我々の予想と反して膜厚が低下するとガラス転移温度が上昇する傾向が確認された。同条件のサンプルを用いてエリプソメトリーによりガラス転移温度の膜厚依存性も調べたが膜厚が低下するに伴いガラス転移温度が減少する事が確認された。つまり同じサンプルを用いたにもかかわらず測定手法の相違によりガすら転移温度の膜厚依存性に関して逆転現象が得られたと言える。現在この逆転現象の原因について考察しているが、緩和時間の分布、測定空間スケールの相違、エネルギー分解能不足などが関連していると考えている。高分子薄膜の熱的及び力学物性はバルク状態と大きく異なることが知られている。特にガラス転移温度の膜厚依存性は非常に興味深い現象の一つと考えられており、一般的に基盤との相互作用が比較的小さいような系では膜厚が減少するとガラス転移温度も低下することが知られている。しかしながら、そのメカニズムに関してはあまり多く知られていないため、今なお高分子薄膜の未解決問題として位置づけられている。ガラス転移現象は緩和現象であるためダイナミクスからの研究が必要とされる。そこで、我々は非弾性中性子散乱法によりダイナミクスの観点から高分子薄膜の研究を行った。本年度は特にガラスに普遍的な性質である低エネルギー励起(ボソンピーク)及び速い過程と呼ばれる比較的時間スケールの速い運動過程に注目した。その結果、弾性散乱の膜厚依存から膜厚が低下すると運動性に対応する量である平均自乗変位の低下が観測され、それに応じて非弾性散乱強度及び準弾性散乱強度も膜厚低下に伴い減少する事も確認された。より詳細に非弾性及び準弾性散乱の膜厚依存を調べると、ボソンピークのピーク位置及び速い過程の半値幅即ち特性周波数に対応する物理量には膜厚依存性を確認することが出来なかった。つまり膜厚が低下しても運動モードそのものには変化が見られずに、両運動に関係するモード数の低下にのみつながった可能性を示唆している。このような現象が観測された原因として幾つかの可能性が挙げられるが、分子量効果の実験結果から高分子薄膜と基盤との界面での分子鎖の配向が起こったために運動性の低下が見られたと考えられる。以上の研究により、今まで知られていなかった早い時間スケールでの高分子薄膜の運動性に対してより深い知見を得ることができたと同時に、ガラスに普遍的な性質であるボソンピーク及び速い過程に対しても新たなる観点を得ることが出来たと思われる。高分子薄膜の熱的・力学物性はバルク状態と比較して大きく異なることが近年の精力的な研究により明らかになってきている。その特異性の中で最も興味深い現象として高分子薄膜のガラス転移温度(Tg)の膜厚依存性が挙げられる。一般的に膜厚が減少するに伴いTgが減少することが知られているおり、その減少の一因として高分子薄膜の多層構造性すなわち運動性やTgが異なる幾つかの層によって形成されていると考えられている。しかしながら、その具体的な高分子薄膜のTg挙動のメカニズムについては完全には理解されていない。そこで、我々はこの問題解決にはダイナミクス測定を行うことが不可欠だと考え今まで高分子薄膜のダイナミクスを非弾性・準弾性中性子散乱により研究してきた。特に高分子薄膜のTg挙動の解明のために高分子薄膜の不均一性に関して本年度は研究を行った。その結果、膜厚が低下するに伴い平均二乗変位が低下することが観測された。またそれと同時に非ガウス性の増大が確認された。この非ガウス性の物理的起源は色々と考えられるが、過去のバルク系の研究から動的な不均一性を反映した物理量であることが知られている。つまり膜厚が低下するに伴い動的な不均一性が増大したことを示している。

我々は通常のバルクが有する動的不均一性に加えて運動性の低い界面層の存在を仮定することにより得られた実験結果をうまく表現することに成功した。つまりダイナミクスの観点から考察しても高分子薄膜の多層構造性を表現することが出来たと言え、高分子薄膜が有するTg現象に対して新たな解釈を与えることが出来た。更に薄膜基盤界面の運動性を初めて定量的に評価できた。(685文字)高分子薄膜野物性はバルク状態と大きく異なることが知られている。特に最も興味深い現象としてガラス転移温度の膜厚依存性が挙げられる。様々な測定手法を用いた精力的な研究にもかかわらずその具体的なメカニズムは提出されておらず未解決問題として位置づけられている。その一因としてガラス転移現象そのものがあまり理解されていないことが挙がられる。現在の理解としては旧来考えられてきた熱力学相転移ではなくむしろ緩和現象として捕らえる方が妥当である。そのため、ガラス転移現象を理解するためにはダイナミクスの観点からの研究が必須である。そこで本年度は高分子薄膜のガラス転移現象を理解するためにダイナミクス測定を行った。なお、特にミクロスケールのダイナミクス重要であると考え、その目的のために非弾性中性子散乱測定を行った。サンプルとしては薄膜での物性が良く理解されているポリスチレンを用いた。最初に平均二乗変位の温度依存性に注目したが、薄膜が低下すると平均二乗変位が低下する様子が確認できた。更に温度が上昇するに伴い急激な平均二乗変位の増大が二点観測された。この事実は少なくとも観測している時間スケールに二つの緩和過程が発見していることを示している。低温側では200K付近で観測され、高温側では370K付近に観測された。低温で発現した緩和過程は局所的な緩和過程であるいわゆる速い過程が発現したことを示している。また、高温で発見した緩和過程の物理的な起源はまだ不明な点が多いが、バルクの場合緩和過程が発現する温度とDSCなどで測定されたガラス転移温度と非常によく一致したため高温で発現する緩和過程の発現温度を非弾性中性子散乱から見積もったガラス転移温度と定義することにした。この定義を用いて、薄膜のガラス転移温度も見積もったが我々の予想と反して膜厚が低下するとガラス転移温度が上昇する傾向が確認された。同条件のサンプルを用いてエリプソメトリーによりガラス転移温度の膜厚依存性も調べたが膜厚が低下するに伴いガラス転移温度が減少する事が確認された。つまり同じサンプルを用いたにもかかわらず測定手法の相違によりガすら転移温度の膜厚依存性に関して逆転現象が得られたと言える。現在この逆転現象の原因について考察しているが、緩和時間の分布、測定空間スケールの相違、エネルギー分解能不足などが関連していると考えている。
哲学と日本思想史研究ー文献学・解釈学の方法的摂取を中心にー

本研究では、近代日本において日本の伝統的思想から近代までを統一的に捉える哲学的立場に立つ思想史研究を対象に、そのいくつかの流れを方法論の違いから、概観し分類することを先ずはこころみた。その流れを六つに分類整理したが、そのながれの多くに見られるドイツ文献学およびディルタイ解釈学の方法の受け止め方を、単に方法論的考察のみではなく、それらの方法が描き出す思想史像に内在的に踏み込むことで、その方法論の意味を考察した。それによって哲学分野の学として始まった日本思想史研究の方法論の知見が、近代日本哲学倫理学史において、どのような位置をしめるかを明らかにした。初年度の知見をもとにその欠を補う調査をつづけ、一方、総合的なまとめに着手した。文献学・解釈学受容の典型である和辻倫理学と倫理思想史との関係を、その原理性の側から解く従来の研究の総覧をこころみ、その成果を比較思想学会での発表、論文等で、公表した。また、思想史研究の展開において、唯物論・マルクス主義的立場は、いわば「社会的存在論」ともいうべき傾向を示すが、その影響関係を、土田杏村の社会哲学の方向、政策論、経済論などの哲学的原理的志向と彼の精神史の構図との連関に集約して考察し、方法論的な視点からの唯物論、和辻倫理学との対抗関係を明らかにした。ドイツ文献学、解釈学の受容についても、引き続き、調査検討をつづけ、次年度に考察すべき論点を明らかにして、主要な課題として明確化できたと考える。以上の考察を基盤にして、哲学的原理と思想史研究の解釈学的な手法との不可分な関係をめぐる思索,方法、思想史像の構築の歴史を、あらためて近代日本の哲学史・倫理学史の一表象として、全体的なかにどう配置するかの手がかりをえられるとともに、さらに考察を深めた。日本思想史の方法的考察は、近代の哲学的倫理学的方法の摂取という問題にとどまらない。思想史的方法は、自らの伝統との対峙をともなっていた。その点でも中国での国際学会、台湾での発表、討論を通じて、さらに、その考察を、東アジアでの、伝統思想と近代哲学、倫理学のありかたを問うという当初の予定通り、考察をつづけ成果を得たと考える。本研究は近代日本での哲学的分科としての思想史研究を主たる対象としてきたが、戦後の思想史研究など、それ以降の思想史的営みのなかで生起した問題、とくに1972年の丸山眞男論文等にむけられた(「歴史の古層」論文批判等)、相対主義・脱構築の側からの批判への、あらたな思想史像、思想史方法論の検討などもほぼ視野に入れることができたと考える。本研究は、近代日本において哲学的観点からの日本思想史研究が成立するにあたって、大きな影響をあたえたドイツ文献学・解釈学の受容と、それをめぐる思索および受容自体の変容を、倫理思想史的に振り返り、日本思想史研究の方法的意義と可能性を探るものである。最終年にあたり、初年度、二年度の知見をもとにその欠を補う調査をつづけ、一方、総合的なまとめに着手した。文献学・解釈学受容の典型である和辻倫理学と倫理思想史との関係を、その原理性の側から解く従来の研究の総覧をこころみ、その成果を発表、論文等で、公表した。また、思想史研究の展開において、唯物論・マルクス主義的立場、そしてそれに影響をうけた他の解釈学的立場も、いわば「社会的存在論」ともいうべき傾向を示すが、その影響関係を、土田杏村の社会哲学の方向、政策論、経済論などの哲学的原理的志向と彼の精神史の構図との連関に集約して明らかにして、方法論的な視点からの唯物論、和辻倫理学との対抗関係をあきらかにした。ドイツ文献学、解釈学の受容についての総合的考察も、調査検討をつづけ、主要な諸点を明確化できたと考える。以上の考察を基盤にして、哲学的原理と思想史研究の解釈学的な手法との不可分な関係をめぐる思索,方法、思想史像の構築の歴史を、近代日本の哲学史・倫理学史の一表象として考察を深めることができた。また日本思想史の方法的考察は、近代の哲学的倫理学的方法の摂取という問題にとどまらない。その点でも3年間の研究期間を通じて中国での国際学会、台湾での研究発表討論会によって、東アジアでの、伝統思想と近代哲学、倫理学の関係を問うという、当初の予定の通り成果を得た。本研究によって戦後の思想史研究のなかで生起した問題、あらたな思想史像、思想史方法論の検討の方向性などについても、ほぼ視野に入れることができた。当研究は、近代学問として成立した日本思想史研究という領域が、ベックらのドイツ文献学の摂取によって成立したこと、さらにその後もドイツ文献学の影響をうけつつ新たな形成がおこなわれたこと、その過程と展開を研究対象とするものである。

そののち思想史研究はさらに解釈学への関心によって、研究の領域と問題関心を深化させることとなった。当研究は、これらの過程で、思想史研究の創設に寄与した村岡典嗣や和辻哲郎・土田杏村らの文献学・解釈学の摂取と受容を、日本近代の哲学史・倫理学史の見取りのなかに再配置して、その意義を考察することを主な目的としている。そのために、ドイツ文献学と解釈学の間の連関および相違点そのものの問題の考察の深化もはかる。またあわせて、東アジア、とくに韓国、中国、台湾では、これまであまり関心が寄せられてこなかった文献学・解釈学に、昨今あらためて関心が寄せられ、伝統的思想の再解釈と連関づけるという気運が生じていることも、この研究課題の視野にいれるものである。初年度は、あらためて全体の計画の進展をはかるべくその細部を検討し、その上で、実際に芳賀矢一がウーゼナーらの一国文献学を採用した経緯の調査、村岡典嗣の文献学受容、唯物論的立場からの思想史研究のディルタイへの関心の検討、土田杏村の思想史像および東アジア哲学史の構想の検討等を、段階的に調査、考察することを目指した。芳賀の文献学受容、土田の思想史像については、ディルタイ協会での講演、論文、あるいは中外日報での連載記事等で公けにし、またとくにその東アジア哲学史の構想については、台湾中央研究院での土田をめぐる発表.論文であきらかにした。研究の途中経過は、ほぼ予定通り達成し、成果として発表できた。本研究は、哲学的分科として考えられた、近代に展開した日本思想史研究の哲学的方法を対象にして、その方法論的立場を総覧しつつ、その思想史像にも立ち入ってその可能性と限界を見極め、今後の思想史研究の可能性を考察することを目的としてきた。とくに思想史的方法は、ドイツ文献学から解釈学の摂取と展開してきたが、その流れの内実に着目すると、そこには共通点と差異が存在する。その点をあきらかにすることは、ほぼ達成できたと考える。とくに和辻の倫理思想史像に顕著である文献学と解釈学の関連という問題について、和辻とは異なる思想史像を描いた土田杏村、あるいは唯物論的方法をとる思想史研究に於いて、文献学から解釈学の摂取の道程と、そこに横たわる困難さをめぐる哲学的方法の思索が、次第に社会存在論へと形をとり、思想史研究の文献学的傾向を、哲学的に越えようとする傾向に至りつくことを指摘できたことは、大きな成果であると考える。他方、マルクス主義、唯物論的立場の思想史研究との相互関係、および両者に影響を与えたディルタイ野解釈学の摂取と影響については、なお、考察の余地を残した点は、今後の課題として残っていると考える。また、東アジアの近代哲学史およびそのなかでの思想史方法論野考察も、なお上記の問題をさらに精緻に考察してからの課題といてなお残っている。戦後の新たな思想史的方法論、思想史像の検討も最終年度に向け、残した課題である。初年度は、芳賀矢一のドイツ文献学の受容の経緯と内実、芳賀があえてウーゼナーらの一国文献学を採用した経緯の調査、村岡の継承と深化、唯物論的立場からの思想史研究のディルタイへの関心の検討、土田杏村の思想史像、東アジア哲学史の構想、等を段階的に調査、考察することを目指した。芳賀・村岡の文献学受容、土田の思想史像については、ディルタイ協会での講演、論文、あるいは中外日報での連載記事等で公けにし、またとくにその東アジア哲学史の構想については、台湾中央研究院での土田をめぐる発表.論文であきらかにした。
PCRによるレンサ球菌感染症の迅速診断法

口腔内連鎖球菌による敗血症,心内膜炎,嚥下性肺炎などの重篤な感染症を予防するため,主要な菌種の正確かつ迅速な検出法の開発を試みた.特に齲蝕原性菌として重要なS.mutansについて血液中より検出する方法としてPCR診断法を検討した.S.mutans菌体表層抗原AgI/IIの構造遺伝子spaPの塩基配列を基に本菌種特異的と推定されるオリゴヌクレオチドプローブを作成し,mutans group,その他の連鎖球菌,他の口腔内細菌標準株および歯垢由来のS.mutans臨床分離株,mutans groupについてDNA粗標品を鋳型としてPCRを行ったところ,S.mutansのみ菌種特異的な約200bpのPCR産物が得られた.本反応における検出感度は粗DNA標品の場合440菌浮遊液および精製DNA標品0.3pgであり,きわめて感度は高いことがわかった.さらに,実験的に菌血症を発症させたS.mutans感染マウスより血液を採取,本反応による検出を行ったところ,本菌投与3日後までPCR産物が得られた.以上の結果から,口腔内連鎖球菌の中で,S.mutansについては極めて高感度にかつ特異的に検出できることから,本菌による敗血症,心内膜炎などの迅速診断法として有用であることが明らかとなった.他の口腔内連鎖球菌に中で特に心内膜炎あるいは肺炎患者等において検出頻度の高いS.sanguis,S.oraris,S.milleri等についても特異的プローブの検索中であり,これらの混合プローブによりさらに簡便な複数菌の診断が可能になることが期待される.口腔内連鎖球菌による敗血症,心内膜炎,嚥下性肺炎などの重篤な感染症を予防するため,主要な菌種の正確かつ迅速な検出法の開発を試みた.特に齲蝕原性菌として重要なS.mutansについて血液中より検出する方法としてPCR診断法を検討した.S.mutans菌体表層抗原AgI/IIの構造遺伝子spaPの塩基配列を基に本菌種特異的と推定されるオリゴヌクレオチドプローブを作成し,mutans group,その他の連鎖球菌,他の口腔内細菌標準株および歯垢由来のS.mutans臨床分離株,mutans groupについてDNA粗標品を鋳型としてPCRを行ったところ,S.mutansのみ菌種特異的な約200bpのPCR産物が得られた.本反応における検出感度は粗DNA標品の場合440菌浮遊液および精製DNA標品0.3pgであり,きわめて感度は高いことがわかった.さらに,実験的に菌血症を発症させたS.mutans感染マウスより血液を採取,本反応による検出を行ったところ,本菌投与3日後までPCR産物が得られた.以上の結果から,口腔内連鎖球菌の中で,S.mutansについては極めて高感度にかつ特異的に検出できることから,本菌による敗血症,心内膜炎などの迅速診断法として有用であることが明らかとなった.他の口腔内連鎖球菌に中で特に心内膜炎あるいは肺炎患者等において検出頻度の高いS.sanguis,S.oraris,S.milleri等についても特異的プローブの検索中であり,これらの混合プローブによりさらに簡便な複数菌の診断が可能になることが期待される.齲蝕原性細菌S.mutansは、口腔より血中に流入し、敗血症や心内膜炎等の疾患を惹起する。その発症のメカニズムを明らかにするためまた本菌感染症の予防を目的として、S.mutans菌体表層抗原AgI/IIの構造遺伝子spaPのDNA配列より特異的oligonucleotide probeを作成し、PCRによる本菌の血流中よりの正確かつ迅速な検出法について検討した。spaP遺伝子塩基配列に基づくoligonucleotide probeを用いたPCR反応によってS.mutans標準株および臨床分離株は全て約190bpの増幅産物が得られた。一方mutans streptococciの他菌種および他の口腔内レンサ球菌は使用した標準株および臨床分離株はいずれもいかなるPCR産物も得られなかった。したがって、本研究に使用したprimer setによって認識され増幅されるPCR反応はS.mutansに特異的であることが示唆された。また、本反応の検出感度は菌浮遊液の粗DNA標品においては440CFUであり、精製DNAを鋳型とした場合は0.3pgであった。さらに実験的に菌血症を発症させた感染マウスより血液を採取し、上記PCR反応を行ったところ、本菌投与3日後の菌数は100CFU/mlであったが約190bpのPCR増幅産物が認められた。以上の結果より、口腔レンサ球菌の中で、S.mutansについては、spaP遺伝子内の塩基配列に基づくoligonucleotide primerにより迅速かつ高感度に検出、診断が可能であることが明らかになった。前年度に引き続き,口腔内連鎖球菌による敗血症,心内膜炎,嚥下性肺炎等の重篤な感染症を予防するため,主要な菌種の正確かつ迅速な検出法について検討した.特に齲蝕原性細菌として重要なS.mutansについて血液中より検出する方法としてPCR診断法を検討した.S.mutans菌体表層抗原AgI/IIの構造