hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
移植肝障害発生機序の解明と新らしいviability判定法の検討(エネルギー産生能と脂質過酸化障害からの検討)

本法は再現性もよく全測定時間は40分で充分臨床応用が可能であると考えられた。1.保存ならびに移植血流再開による肝障害発生機序の解明についての研究成果;肝移植において、再潅流障害の発生機序を、ミトコンドリア電子伝達系ならびに好中球に焦点をあてラットを用いてフリーラジカルと脂質過酸化障害の面から検討した。その結果、1)ミトコンドリア電子伝達系からのラジカル発生量は、阻血、保存により減少し再潅流時の脂質過酸化障害の原因になり得ない。2)肝実質細胞は保存後再復温酸素化するとスパー・オキサイドを発生するが、非実質細胞はその発生を認めない。3)潅流液に好中球を添加した場合フリー・ラジカルの発生が観察され、脂質過酸化量も著名に増加した。脂質過酸化量は、保存時間の長い肝においてより高値を示した。一方、リンパ球や、血清を潅流液に添加した場合はフリーラジカルの発生や脂質過酸化量の増加は認めなかった。以上の結果から、肝の再潅流障害において好中球が活性酸素の発生源となり、脂質過酸化障害を惹起し、保存時間が長い場合ほどその障害は大きいと考えられるとの結論が得られた。しかし、クッパー細胞の役割についての検討は今後の課題とした。2.新しい肝viability判定法の開発についての研究成果;昨年度はミトコンドリアの膜電位を正しく測定できる蛍光色素の濃度、基質の濃度、pHなどの検討を行った。今年度は従来ミトコンドリアのATP産生能の指標として用いられている呼吸調節率(RCR)との比較ならびに、conventionalなATPase測定法で得られた結果と比較した。RCRならびに従来の測定法で得られたATPaseの結果と非常に良く相関したことから、ATP産生能がATPaseによって規定されること、および、蛍光色素を用いたミトコンドリアATPase測定法の信頼性が証明された。
中国の民族理論と民族間関係の動態-文化人類学的視点からの検証

費孝通の「中華民族多元一体構造論」にみられる民族認識を分析し、その諸特徴を明らかにした。その上で、広東のヤオ族、ショオ族、海南島のリー族、広西の蔗園人、広東、海南、福建、広西の客家、雲南のタイ族、南京の回族、貴州のトン族、ミャオ族、四川のチャン族等の現地調査を実施し、漢族を中心とするネットワークへの周辺民族の連接過程や、近代化の中での国家への組み込み、現代的社会状況の中での民族間関係の変化などを具体的に検証し、費孝通の立論の背景、学術的価値、そして限界について一定の理解に到達した。初年度である平成19年度は、国内における打ち合わせ会合、勉強会、ならびに分担研究者による海外調査を実施した。その概要は下記の通り:2007/07/16打ち合わせ会合(会場:武蔵大学)2007/08/25-09/05松岡正子・海外調査(雲南省シャングリラ市等)2007/09/13-20上野稔弘・海外調査(四川省成都市等)2007/12/09勉強会(会場:法政大学、講師:学習院大学・鶴間和幸先生)2007/12/23-29菊池秀明・海外調査(広西壮族自治区桂平県等)2008/02/29-03/09曽士才・海外調査(貴州省天柱県、錦屏県)2008/03/08-15西澤治彦・海外調査(江蘇省南京市)2008/03/17-27長谷川清・海外調査(雲南省路西県等)費孝通の「中華民族多元一体構造論」についての勉強会では、特にその古代史に関する部分についての学説を、批判的に検討するとともに、その学術的評価を行った。また、分担研究者による各地における実地調査を通じ、四川、広西、貴州、江蘇、雲南等における少数民族と漢族との文化社会的相互作用の実態、ならびにそれについての民族幹部・知識人等の認識についての資料収集を行った。少数民族と漢族の混在する地域での実地調査からは、文献等では直接知ることのできない民族間の接触の実態が明らかになるとともに、現地の少数民族出身の知識人が多元一体構造論を独自の立場から解釈しつつ、自らのアイデンティティーや社会的地位の補強に応用している点が明らかになった。2年度目である平成20年度は、主として研究代表者ならびに連携研究者による海外調査を実施した。その概要は下記の通り:2008/09/14-9/21松岡正子(四川省波川県・茂県等)2008/10/25-11/4曽士才(貴州省天柱県・錦屏県等)2008/12/5-12/7松岡正子(四川省成都・都江堰等)2009/1/19-2/5塚田誠之(広西壮族自治区柳城県等)2009/02/23-27上野稔弘(北京市)2009/02/24-02/26瀬川昌久(広東省広州市)2009/03/07-03/14松岡正子(北京・成都・波川県)2009/03/17-27長谷川清(雲南省景洪)費孝通の「中華民族多元一体構造論」については、2008年6月にその邦訳書である『中華民族多元一体構造』(東京、風響社)が出版されたのを期に、研究代表者ならびに連携研究者はその内容をあらためて分析し、現地調査と総括討論に備えた。また、研究代表者ならびに連携研究者による各地における実地調査を通じ、四川、広西、貴州、広東、雲南等における少数民族と漢族との文化社会的相互作用の実態、ならびにそれについての民族幹部・知識人等の認識についての資料収集を行った。昨年度に引き続き、少数民族と漢族の混在する地域での実地調査からは、文献等では直接知ることのできない民族間の接触の実態が明らかになるとともに、現地の少数民族出身の知識人の間での多元一体構造論の普及の度合いや、そのローカルな視点からの再解釈の実態が明らかになった。最終年度である平成21年度は、主として成果とりまとめのための研究集会と連携研究者による海外補充調査を実施した。

その概要は下記の通り:2009/05/16打ち合わせ会合(会場:東北大学東京分室)2009/09/07-09/16曽・海外調査(貴州省安順市・貴陽市等)2009/11/02-11/08塚田・海外調査(広西壮族自治区寧明県・靖西県等)2009/12/17打ち合わせ会合(会場:東北大学東北アジア研究センター)2010/02/11-02/21長谷川・海外調査(雲南省西双版納等)2010/01/02-01/04松岡・海外調査(四川省〓川県)また、費孝通の「中華民族多元一体構造論」について分析を行い、その民族認識の主要な特色を整理した。そして、これまでの海外調査や資料の分析検討をもとに、研究代表者ならびに研究分担者による研究成果報告論文集を完成させた。そこから得られる結論は以下の通り。費孝通の「中華民族多元一体構造論」の民族認識は、少なくとも今回の研究課題が直接の考察範囲とした中国南部の歴史的な民族動態を考える限り、個々の地域社会内部で展開されてきた具体的な過程をうまく説明し得る側面をもっており、その意味で充分な学術的な価値を有していることが確認される。他方、同時にそれが学術的見解の域を脱して政治的意図に結びついた拡大解釈をほどこされやすい側面もまた確認される。「多元一体構造」の持続性に関しては、費孝通が予測するように文化的・民族的多様性に対する価値付与が引き続きなされ得るのか、あるいはすべて一元化へ向かう「途上」に過ぎないのか、より長期的な視野での検討が必要である。同理論の学術的価値について、中国の民族政策の現場において人類学的手法で検証したものはこれまで存在せず、その意味でこれは画期的な研究成果である。
糖尿病における三叉神経刺激による自律神経系への影響

Streptozotocin誘発糖尿病家兎を用い、定量化した電気刺激により口腔内疼痛刺激を加え、血中カテコールアミン、糖質系として血中グルコース、さらに脂質系として血中遊離脂肪酸、トリグリセリド、総コレステロール、遊離コレステロール、リン脂質について測定し、ストレス状況と糖質、脂質系代謝との関連性について対照(C)群と糖尿病(DM)群に分け、分析・検討した。DM群にはstreptozotocin(STZ)を投与し、血糖値が180mg/dl以上のものをDM群とした。採血方法は、両群とも16時間絶食後、ネンブタール静脈麻酔下にて、外頚静脈よりカテーテルを挿入し、上大静脈部から経時的に採血した。刺激方法は、ネンブタール静脈麻酔下に下顎下縁部より左側オトガイ神経を剖出し、同神経に正電極を接触させ、さらに同側下顎中切歯歯髄に針を刺入し、負電極とした。両電極に電気刺激を加え、刺激前、刺激直後、30分後、60分後に採血した。血中カテコールアミンでは、DM群にnorepinephrineの増加がみられた。血中グルコースは、DM群に刺激による増加がみられた。遊離脂肪酸は、C群に刺激による増加と刺激前からのDM群に有意な高い値がみられた。トリグリセリドは、DM群に緩徐な増加がみられた。総コレステロール(T-CHO)および遊離コレステロール(F-CHO)とリン脂質(PL)は、DM群で軽度増加した。また、各測定項目間の相関関係では、DM群でT-CHOとF-CHO、T-CHOとPLの間に、それぞれ有意な正の相関を認めた。なお、申請者らは、上記の追加実験として、家兎(場合によってはラット)のC群とDM群について下顎骨の体部中央にトレフィンバーにて一定の骨欠損を形成し、同部位の治癒過程(2日、5日、7日、14日)について病理組織学的な比較・検討を行う予定にしている。近年,高齢化や成人病の増加にともない,歯科臨床の場においても,糖尿病などの慢性疾患を有する患者の受診の増加がみられる。特に急性あるいは慢性の疼痛がストレスとして生体の自律神経系,特に内分泌・代謝系に及ぼす影響については未だ十分に解明されていない。そこで,報告者らは,動物実験としてstoreptozotosin誘発糖尿病家兎を用い,定量化した電気刺激により口腔内疼痛刺激を加え,ストレスの客観的指標として,血中カテコールアミン,糖質系として血中グルコース,さらに脂質系として血中遊離脂肪酸,トリグリセリド,総コレステロール,遊離コレステロール,リン脂質について測定し,ストレス状況と糖質、脂質系代謝との関連性について分析・検討した。日本白色種家兎(雄,体重23Kg)を用い,対照(C)群と糖尿病(DM)群に分け,DM群にはStreptozotocin(STZ)を投与し,血糖値が180mg/dl以上のものをDM群とした。採血方法は,両群とも16時間絶食後,ネンブタール静脈麻酔下にて,外頸静脈よりカテーテルを挿入し、上大静脈部から経時的に採血した。刺激方法は,ネンブタール静脈麻酔下に顎下縁部より左側オトガイ神経を剖出し,周囲組織と絶縁板により絶縁後,同神経に正電極を接触させ,さらに同側下顎中切歯を無菌的に露髄後,歯髄に針を刺入し,これを負電極とした。十分な安静状態の後,同部より採血し、これを安静時(刺激前)とした。両電極に電気刺激を加え,刺激直後,刺激開始30分後,刺激開始60分後にそれぞれ採血した。血中カテコールアミンでは,C群に比較してDM群にnorepinephrineの増加がみられた。血中グルコースは,DM群に刺激による増加がみられた。遊離脂肪酸は,C群に刺激による増加と刺激前からのDM群に有意な高い値がみられた。トリグリセリドは,DM群に緩徐な増加がみられた。総コレステロール(T-CHO)および遊離コレステロール(F-CHO)とリン脂質(PL)は,DM群で軽度増加した。また,各測定項目間の相関関係では,DM群でT-CHOとF-CHO,T-CHOとPLの間に,それぞれ有意な正の相関を認めた。日本白色家兎(雄、体重23Kg)を用い、対照(C)群、糖尿病(DM:Streptozotocin<STZ>投与後、血糖値180mg/dl以上を示したもの)群の2群を設定し、血中カテコラミン、血中脂質代謝等について検討し、2群間の違いについて検討を行った。しかしながら前年度においては、作成したDM実験動物の長期生存が難しく、慢性状況における検討が十分行えなかった。そのため、本年度はSTZ投与時のクエン酸緩衝液の調整やPHのコントロール、液調整後の投与までの時間短縮や投与法等を若干工夫することにより、前年度に比較すると長期にわたるDM動物観察が可能になった。

因みに、本年度結果は昨年度結果とほぼ同様であったが、(1)カテコラミン:epinephrine;C群で刺激直後に上昇変化あるも、DM群で著変なし、norepinephrine;C群で一過性の上昇変化あるも、DM群で30分後から急上昇・高値持続、dopamine;検出不能、(2)血清グルコース:C群で著変なく、DM群で刺激開始30分後に上昇後、高値持続、(3)脂質:中性脂肪;C群で著変なく、DM群で緩除な上昇変化、総コレステロール;C群で著変なく、DM群で30分後軽度上昇、(4)DM群で総コレステロールとリン脂質との間に有意な正の相関あり等の結果が得られた。なお、本年度は慢性実験動物が確立できたため、同動物について顎骨・口腔軟組織の採取が可能になり、次年度においては本年度得られた血中カテコラミンや脂質代謝および関連ホルモン等の結果も踏まえつつ同動物試料に関して病理組織学的検討を加えることが可能になった。Streptozotocin誘発糖尿病家兎を用い、定量化した電気刺激により口腔内疼痛刺激を加え、血中カテコールアミン、糖質系として血中グルコース、さらに脂質系として血中遊離脂肪酸、トリグリセリド、総コレステロール、遊離コレステロール、リン脂質について測定し、ストレス状況と糖質、脂質系代謝との関連性について対照(C)群と糖尿病(DM)群に分け、分析・検討した。DM群にはstreptozotocin(STZ)を投与し、血糖値が180mg/dl以上のものをDM群とした。採血方法は、両群とも16時間絶食後、ネンブタール静脈麻酔下にて、外頚静脈よりカテーテルを挿入し、上大静脈部から経時的に採血した。刺激方法は、ネンブタール静脈麻酔下に下顎下縁部より左側オトガイ神経を剖出し、同神経に正電極を接触させ、さらに同側下顎中切歯歯髄に針を刺入し、負電極とした。両電極に電気刺激を加え、刺激前、刺激直後、30分後、60分後に採血した。血中カテコールアミンでは、DM群にnorepinephrineの増加がみられた。血中グルコースは、DM群に刺激による増加がみられた。遊離脂肪酸は、C群に刺激による増加と刺激前からのDM群に有意な高い値がみられた。トリグリセリドは、DM群に緩徐な増加がみられた。総コレステロール(T-CHO)および遊離コレステロール(F-CHO)とリン脂質(PL)は、DM群で軽度増加した。また、各測定項目間の相関関係では、DM群でT-CHOとF-CHO、T-CHOとPLの間に、それぞれ有意な正の相関を認めた。なお、申請者らは、上記の追加実験として、家兎(場合によってはラット)のC群とDM群について下顎骨の体部中央にトレフィンバーにて一定の骨欠損を形成し、同部位の治癒過程(2日、5日、7日、14日)について病理組織学的な比較・検討を行う予定にしている。
T細胞レセプター複合体の構造とシグナル伝達の解析

T細胞抗原受容体(TCR)-CD3複合体のなかで、TCRダイマーおよびCD3ζダイマーの相異に基づく複合体の多様性が存在し、生体内ではT細胞の分化段階や異なるサブセット間で構造的に異なる。TCR構造とシグナル伝達系との関係を解析した。(1)未熟胸腺細胞株KKFは、TCRβのみをCD3と共に細胞表面に発現していた。このβ鎖には特殊な構造はなく、異なるβ鎖を導入しても同様に細胞表面に発現した。βダイマーはCD3複合体、特にζと弱く会合しているが、TCRα鎖を導入するとαβダイマーとなり、CD3とも強く会合し、成熱T細胞と同様になったことから、βダイマーを持つ胸腺細胞は分化の前駆細胞と思われる。(2)CD3ζファミリーダイマー(ζ,η,FcRγ)の異なる、TCR複合体アイソフォームによりシグナル伝達を比較した。ζ,η,FcRγのどの複合体も抗原刺激によってIL-2産生を誘導できたが、FcRγ^+細胞では、刺激に伴う増殖抑制が起こらず、一方、η^+細胞においては、Thy-1を介する活性化が起こらなかった。初期チロシンリン酸化においてもFcRγやηを介する刺激ではζとは異なるパターンを示した。即ち、ζファミリーの相異により、形成されるシグナルに相異がある。(3)CD3に共通して存在するシグナルモチーフの活性化における役割を調べるため、モチーフを欠損した変異ζ鎖を持つTCR複合体を解析した。ζモチーフを欠損してもIL-2産生は正常に起こるが、Thy-1を介する活性化は誘導されなかった。チロシンリン酸化も異なる事から、TCR刺激は、各CD3の共通モチーフを介するシグナルと、ζファミリー特異的なシグナルを形成することが示された。(4)PDGFレセプターを発現させたT細胞の解析より、PLCγおよびPI代謝系の活性化のみではIL-2産生には至らず、TCRからのチロシンリン酸化シグナルとの相互作用が不可欠であることが判明した。1。異なるTCR isoformによるシグナル伝達の相異:FcεRIγダイマーを有するTCRは異なる機能を発現するが、チロシンキナーゼとの会合においても異なることが判明した。ζダイマーはfynキナーゼと直接会合するが、FcεRIγダイマーとfynは会合せず、異なるキナーゼが会合している。一方、CD3ηダイマーを有するTCRにおいては抗原刺激は起こるが、Thy-1を介する刺激では活性化されず、η鎖自体が活性化に伴うチロシンリン酸化を受けないことともあわせて、η鎖はある種の活性化を抑制するように働くことが示唆された。2。CD3ζ鎖の細胞内領域のシグナルモチーフの役割:ζ鎖の有するシグナルモチーフは、シグナル伝達に重要な役割を果たすが、CD3ζ鎖の有する3個のシグナルモチーフが実際にTCR複合体中において抗原認識に果たす役割を明らかにするため、各モチーフを欠損した変異ζ鎖を作成し、ζT細胞株に発現させ、機能を調べた。ζ鎖が全くないと、抗原認識できないが、細胞内モチーフを全て欠損したζ鎖があれば抗原に反応することから、ζ鎖ダイマーの膜貫通領域は抗原認識できるT細胞レセプター複合体の形成に重要であることが判明した。

逆に、ζ鎖シグナルモチーフがなくとも他のCD3分子を介して抗原刺激のシグナルは伝達される。しかし、Thy-1を介する活性化にはζ鎖モチーフが不可欠であり、他のζファミリー分子であるη鎖やFCεRIγ鎖では置換できない。これらよりζ鎖ファミリーの有するシグナルモチーフは各々異なる機能を有することが示唆された。3。TCRβ鎖単独発現の機序:TCRβ鎖のみがダイマーとして発現している未熱胸腺細胞株において、その発現機構を解析した。cDNAの解析より、β鎖は、通常のVDJ領域および膜貫通部を有し、特殊な構造はなかった。成熱T細胞由来のβ鎖を遺伝子導入すると発現し、β鎖によらずβダイマーが発現することが判明した。βダイマーはCD3ζ鎖は会合していない。α鎖を導入すると、αβダイマーのみが発現し、CD3ζとも会合し、通常のαβTCRとなることよりβダイマー発現は胸腺でのある分化段階に特異的であると思われた。1.CD3シグナルモチーフの役割:昨年度作製した、CD3ζモチーフを欠損させた変異ζ鎖(Zn)を有するTCR複合体の介する初期シグナル伝達系を解析した。抗原刺激によるIL-2産生にはZn細胞の変化がなかった事と相関して、IL-2産生に重要であるチロシンキナーゼZAP70やPLCγの活性化は同じように誘導された。この事はζシグナルモチーフが欠損していても他のCD3分子のモチーフでもIL-2産生系には、十分であることを示した。しかし、チロシンリン酸化蛋白については、90kd分子に代表される蛋白のリン酸化がZn細胞には欠損していた。Zn細胞がThy-1分子を介する刺激にも反応しない事実と共に、TCRシグナルにはζモチーフ依存性のものと、全てのCD3モチーフに共通なシグナルとが存在することが示された。2.T細胞活性化におけるPI代謝系の役割:PLCγを直接活性化することのできるPDGFレセプターをT細胞に発現させて、そのシグナル伝達系の変化を解析した。発現されたPDGFRは、PDGF結合により、自己リン酸化を起こすと共に、多くの基質のリン酸化を誘導した。PLCγもチロシンリン酸化され、活性化され、結果として細胞内Ca^<2+>上昇が起こったが、IL-2産生は誘導しなかった。しかし、抗原刺激に伴うIL-2産生を著名に増強した。これらより、PI代謝系を活性化しただけではIL-2産生に至らず、TCRからのチロシンリン酸化シグナルとの相互作用が必要であることが判明した。3.ζ鎖とダイマーを形成する新たな分子:正常T細胞にも存在して、分子量薬12kdでζ鎖とヘテロダイマーを形成している分子を同定した。ペプチドマップでは、ζ鎖と類似しているが異なっており、T細胞ハイブリドーマ5×10^<10>から蛋白を精製した。最終的なアミノ酸配列は成功しなかったがN末端がブロックされていなかったことからも、ζ鎖ににた新たなファミリー分子であることが推測された。
トリパノソーマ感染宿主細胞におけるオートファジーとアポトーシス制御解析

細胞内寄生原虫Trypanosomacruziは宿主のオートファジー機構で排除されない。原虫感染により、オートファジーの初期過程が活性化され、LC3の局在変化、隔離膜形成が起こることが明らかとなった。しかし、オートリソソーム形成はみられず、成熟したオートファゴソームが形成されないと考えられた。LC3-Atg3までは進行するが、LC3の脂質化のステップが阻害されていることが示唆された。真核生物でオートファジーは病原体排除機構として機能し、オートリソソームによって実行される。Trypanosomacruzi感染細胞ではオートファゴソームとその前駆体である隔離膜の形成はされたが、原虫が排除されていないことから、宿主オートファジーが正常に機能していない可能性が考えられた。そこで原虫感染によりオートファゴソーム形成の抑制を解析することを目的として、本研究を行った。【方法】ヒト繊維肉腫細胞HT 1080にT. cruziを感染させ、48時間後に固定した。隔離膜のマーカーとして抗LC 3抗体、オートファゴソームのマーカーとして抗syntaxin (Stx) 17抗体を用いて免疫蛍光染色し、蛍光顕微鏡による画像解析を行った。また感染細胞におけるオートリソソーム形成について解析するため、GFP-RFP-LC 3 Bキットを用いて実験を行った。【結果と考察】非感染細胞をコントロールとし、LC 3とStx 17の蛍光強度を定量、比較したところ、感染細胞ではLC 3の蛍光強度は約2倍に増加したがStx 17はほとんど増加しなかった。Stx 17は隔離膜には局在せずオートファゴソームのみに局在することから、感染細胞では隔離膜は増加するが、オートファゴソーム形成は抑制されている可能性が示された。またGFP-RFP-LC 3 Bキットを用いた場合、感染細胞ではLC 3の輝点が観察されたがオートファゴソームの酸性化はみられず、オートリソソームの形成は認められなかった。以上の結果から感染細胞ではオートファゴソーム形成の過程が抑制され、オートリソソーム形成に至らないことが示唆された。Trypanosomacruzi感染細胞でオートファジーを誘導するとオートファゴソームが増加することを見出した。しかし感染細胞内で原虫が増殖していることから、宿主のオートファジーが正常に誘導され機能しているかどうかは不明である。そこで、ヒトのオートファジー関連タンパク質Atg3と相同性のある原虫由来TcAtg3を用いて、T. cruziが宿主オートファジーにどのように関係しているかを解析した。ヒト由来培養細胞HT1080にTcAtg3遺伝子を導入し、mycタグ付きタンパク質を強制発現させたHT/TcAtg3細胞を樹立した。TcAtg3と相互作用するタンパク質を探索するため、この細胞にT. cruziを感染させ、UV photocrosslinking法によりTcAtg3と共有結合させた。その後、細胞を回収してライセートを作製し、抗myc抗体を用いてpull downアッセイを行い、ウエスタンブロットで共有結合したタンパク質を検出した。HT/TcAtg3細胞では29 kDa付近にTcAtg3のバンドが確認され、目的とする発現細胞が樹立できたと考えられた。この細胞にT. cruziを感染させたところ、29 kDaのバンドに加え、37 kDa付近にもバンドが観察された。このバンドは非感染細胞では確認できなかった。これより、TcAtg3に約8 kDaのタンパク質が結合している可能性が示唆された。現在TcAtg3に結合したタンパク質の同定を行うため、LC/MS/MS法による解析を行っている。また一方で、感染細胞では、オートファゴソーム膜は誘導されるが、細胞内リソソームと融合する過程が進んでいない可能性が考えられた。そこで、オートリソソームのマーカータンパク質であるシンタキシン17を用いて細胞をケイ光染色したところ、T. cruzi感染細胞では非感染細胞に比べ、ケイ光強度が低かった。細胞内寄生原虫Trypanosomacruzi感染細胞では、病原体排除機構の一つであるオートファジーが抑制されることを昨年度報告した。その経路のオートファゴソーム形成過程には、オートファジー関連タンパク質(Atg)の一つLC3の脂質化が重要であり、反応の場であるAtg12-Atg5複合体や実行に関わるAtg3, Atg7が必須である。そこで、Atg5, Atg3, Atg7の発現解析を行い、原虫感染によるオートファゴソーム形成抑制機構の解明を目的とした。【方法】ヒト線維肉腫細胞HT1080細胞にT.cruziを感染させ、経時的に細胞を採取した。Atg5, 3, 7遺伝子及びタンパク質発現を調べる為に、qPCR、ウエスタンブロット法を行った。【結果と考察】Atg5遺伝子発現は、感染後6hで最大(1.8倍)となり、感染後12h以降は減少した。また、Atg5タンパク質は感染後12, 24 hに発現が増加しており、グルコース飢餓刺激によるオートファジー誘導と比較し、発現量が高いことが分かった。Atg7タンパク質は感染6h後から発現が上昇するが、9h後に減少し始め、24h後まで発現量が低かった。一方、グルコース飢餓刺激による発現量は常に高いレベルを維持していた。また、Atg3タンパク質発現は感染後上昇しており、グルコース飢餓刺激と同様の結果となった。

以上の結果から、オートファゴソーム形成抑制の原因の一つとしてAtg7の発現低下が示唆された。しかし、その他に各Atgの細胞内局在変化あるいは機能的阻害の可能性が示唆された。現在、LC3遺伝子をGFPの下流に連結したプラスミドが作製できたので、HT1080細胞にトランスフェクションしLC3高発現細胞株の樹立を行っている。これまでに、細胞内寄生原虫であるTrypanosomacruziは、感染宿主細胞のオートファジーを抑制することを明らかにした。原虫感染によりオートファジー経路の隔離膜形成はおこるが、隔離膜が伸長しオートファゴソーム形成過程が抑制されている可能性が示唆された。オートファゴソーム形成にはオートファジー関連タンパク質(Atg)の一つであるLC3のLC3-IからLC3-IIへの脂質化が重要であり、その過程にAtg7, Atg3が必須である。そこでAtg7, Atg3タンパク質に着目し、T. cruzi感染によるオートファゴソーム形成抑制について検討することを目的とした。ヒト線維肉腫細胞HT1080細胞に、LC3にGFPを融合した遺伝子(GFP-LC3)をトランスフェクションしたGFP-LC3発現細胞を樹立した。T. cruzi感染またはグルコース飢餓によりオートファジーを誘導したGFP-LC3発現細胞を用い、Atgタンパク質の発現、局在を調べた。グルコース飢餓12h後ではLC3-IからLC3-IIへの変換がみられたがT. cruzi感染ではみられなかった。感染細胞におけるAtg7, Atg3タンパク質の発現はコントロールと比較すると増加していたがグルコース飢餓細胞と比較すると低かった。また、細胞染色の結果Atg7, Atg3はともに感染6h後から蛍光強度が増加しLC3との共局在がみられた。また、抗GFP抗体によるpull downアッセイの結果、LC3-Atg3複合体が検出された。以上の結果から、原虫感染細胞では、LC3-Atg複合体は形成されるがその後の脂質化のステップが抑制されることによりLC3-IからLC3-IIへの変換が起こらず、オートファゴソーム形成が抑制される可能性が示唆された。細胞内寄生原虫Trypanosomacruziは宿主のオートファジー機構で排除されない。原虫感染により、オートファジーの初期過程が活性化され、LC3の局在変化、隔離膜形成が起こることが明らかとなった。しかし、オートリソソーム形成はみられず、成熟したオートファゴソームが形成されないと考えられた。LC3-Atg3までは進行するが、LC3の脂質化のステップが阻害されていることが示唆された。Trypanosomacruzi感染により、宿主オートファジー経路のオートファゴソーム形成が阻害されることが明らかとなり、さらにオートファゴソーム形成に関わるタンパク質の発現に大きな変化がないことが示唆された。当初計画していた研究は概ね順調に進んでいる。分子寄生虫学オートファゴソーム形成にはLC3タンパク質の脂質化が必要である。
先天盲の開眼手術後における視覚的定位活動と空間内行動調整活動

1.平成34年度に行われた4名の先天盲開眼者の視覚的定位活動と空間内行動調整活動に関する実践研究の主な成果は次のとおりである。(1)開眼少女MO:(a)色の識別実験では、最も好調なときには180cm離れても90100%の対応率を示すまでになった。(b)定位活動に関しては、白紙上の特定領域内に色を塗る課題を通してその錬成を図ることができた。(c)複数の図領域の定位も可能となり、その位置の記憶も確実になった。(d)自己鏡映像については、当初の鏡の背後に定位しようとする段階から、後の空間にいる人物や事物とその鏡映像との対応がつく段階へと進み、次いで自己と鏡面の間に置かれた事物に関して実物と映像の2種を見ることが出来る、との認識に到達した。最終段階では自己鏡映像について、服の色などを手掛かりにすることによって、自分であるとの認識に到達した。(e)顔を写したカラー写真について、肌や唇の色などを手掛かりとして、それが顔であることがわかり始めた。(2)開眼者ToM:(a)3年に亘る実験を通して、その視空間は著しく拡大した。(b)歩行の際、当初検出困難であった下りの階段に対しても、種々の手掛かりを通して探索・発見することが可能になりつつある。2.晴眼成人に視野制限を課した実験で、次のことが明らかになった。(1)身体に近い空間、とくに下方向の空間における奥行距離判断が著しく困難になり、距離の過小視傾向が現われる。(2)路上の投影された樹木などの影を障害物と見誤り、行動に停滞を来すことがしばしばある。(3)通行人が多い場面や「下りの階段」がある所では、歩行行動が停滞し、それへの対処が困難になる。1.平成3年度に行われた2名の開眼者(MO,ToM)の視覚的定位活動と空間内行動調整活動に関する実践研究の成果は、次の通りである。(1)開眼少女MO:(a)13種類の色紙(A4版またはその1/2の大きさ)を用いた単独提示識別実験では、色紙の提示距離を独立変数としてその対応率を調べてきたが、錬成試行を重ねるとともに識別可能な距離が次第に延び、最も好調なときには180cmの距離からでも90100%の対応率が得られるまでになった。(b)数種の白台紙上の黒色面図形による単独提示識別実績でも、90%以上の対応率が得られる距離が、当社の顔に接する位の段階から10cm前後にまで延びている。(c)定位活動に関しては、台紙上の特定領域(輪郭で囲まれた領域)内に色を塗る課題を通じて、手の活動を眼で調整する活動の錬成を図ることに成功した。(d)手に持つことができる台紙上の複数の図領域の定位活動を反復した結果、それらを確実に眼で探し、短期記憶に留めることも出来るようになった。(e)自己鏡想像について、当初の、鏡の背後に定位して手を伸ばす状態からは脱したものの、それを自己であると認識するまでには至っていない。(2)開眼少女Tom:(a)透視図的線画の立体視が可能かどうかの実験を2年半近くにわたって試みてきたが、まだ確実に立体視するまでに至っていない。(b)日常熟知した空間内(仙台駅構内など)では、白杖なしに眼で障害物や通行者を避けて歩行することができるようになった。

しかし、不慣れな空間内(東京駅の構内など)では、歩行に支障をきたすことがあるため、「行動図(歩行のための認識地図」)を作成して錬成を図るようにしている。(c)日常歩行場面で「上りの階段」は眼で検出できるようになったが「下りの階段」は難しい。これはtexture gradientの密度差をまだ「深さ」の情報として抽出できないことを意味する。2.晴眼成人がアイマスクを着用して歩行する際の行動を記録した。1.平成4年度に行われた4名の先天盲開眼者の視覚的定位活動と空間内行動調整活動に関する実践研究によって得られた成果のうちの、主なもの(開眼者MOとToMに関する結果)は、次の通りである。(1)開眼少女MO:(a)色紙と色名との対応率は、移植角膜の混渇い伴って、一旦は低下したものの、錬成試行を重ねた結果、左眼では1m以上離れても90-100%のレベルに復帰した。(b)定位活動に関しては、台紙上の特定領域内に色を塗る課題を通じて、その錬成を図ることができ、さらに複数の図領域の探索・定位も可能になった。(c)自己鏡映像については、当初の、鏡の背後を探る行動は消失して、自分の背後の対象(人物や木など)とその鏡映像との対応がつけられる段階へと移行した。次いで、自己と鏡面との間に置かれた事物に関して、実物と映像の2種を鏡によって見ることができるとの認識に到達した。最終的には、自己鏡映像の認識が成立しているが、まだ、自分の顔を認知するまでには至っていない。自己であるとの手掛りは洋服の毛などである。(2)開眼女性ToM:(a)視空間が拡大し、23m離れたところから他人の洋服の色などが分かるようになった。(b)行動図(歩行のための認知地図)により、未知の場所の空間構造が分かり始めている。(c)「下りの階段」についても、種々の手掛りにより発見することが可能になり始めた。2.晴眼成人を被験者とする視野制限実験により、以下のことが明らかになった。(1)身体に近接した空間、とくに下方向の空間の把握が制約を受け、歩行行動などの空間内行動調整活動に大きな妨害効果が現われる。(2)身体に近い空間での距離知覚が困難になり、距離評定を行わせると、著しい過小視が生じる。(3)路上に映った樹木などの陰影を障害物と確認し、歩行行動に停止や停滞をもたらすことが少なくなかった。
カルコゲン原子を含む高度拡張型キノン類の合成と性質

キノン類は電子移動媒体として、また機能性色素として、また医薬品として極めて重要な化合物群である。しかし従来までに拡張型キノン類の化学は殆ど研究されていなかった。本研究ではヘテロ原子を含む拡張共役キノン類を分子設計し、合成し、酸化還元挙動や光吸収発光特性を解明した。1.含酸素タ-フェノキノン1を合成し、酸化還元特性やX-線結晶構造解析をし、分子構造を決定した。2.含酸素クオーターフェノキノン2を合成し、結晶状態でビフラン環がs-cis構造をとっていることを確かめた。3.架橋ビチエニル構造を有するキノン3と4を合成し、3と4は近赤外部(668691 nm: logε=5.085.09)に強い吸収を示し、平面で安定な分子であることや酸化還元電位と両性度の関係を明きらかにした。4.架橋型ビチエニルに1分子の4-アルキルヨードベンゼンをpd〈0〉触媒で作用させ、得られた生成物を二量化したのち、加水分解し、酸化して、5を合成した。5は第一酸化電位(+0.32 V)が著しく低下し、Esum=0.66 Vを与えた。このことから5は閉殻構造を有する有機化合物の中で最も高い両性度を持つことが明きらかになった。5.キノン類15はNa還元によりそれぞれアニオンラジカルやジアニオンを与えた。ジアニオンは強い蛍光発光体であり、中でも2のジアニオンの蛍光量子収率は0.81であり、非常に高いものであった。今後はこれらのキノン類の電子・光機能特性を評価してデバイス化する為の基礎物性をさらに究明する必要がある。
多孔質層を用いた超高感度表面プラズモン共鳴センサーの開発とDNA検出への応用

表面プラズモン共鳴(SPR)分光法は,金属薄膜表面にセンシングレイヤーを形成し,検体試料の吸着に伴う金属薄膜表面の屈折率変化をSPR角度(反射率が最小となる入射角度)シフトとして観測する手法である。SPR分光法では無色・無発光の検体試料のセンシングが可能であることから,ラベルフリーのin-situバイオセンシング手法としてポストゲノム研究におけるキーテクノロジーと位置づけられている。しかしながら,DNAや代謝物など生体小分子の吸着に伴うSPR角度シフトは微小であり,従来の蛍光法やラジオアイソトープ方に比べてSPR分光法の感度は低く,SPR応答の高感度化はバイオセンシング開発における最も重要な課題の一つである。そこで、本研究では,「多孔質層をセンシングレイヤーとしたSPR分光法の超高感度化」を目的とし,超高度化へ向けた多孔質層形成手法の確立とDNAセンシングへの応用を行った。本年度は、陽極酸化による多孔質アルミナとアルミ積層膜の形成条件を確立し、自作のSPR測定系を用いてその反射スペクトル測定を行った。グリーンヘリウムネオンレーザーを光源とした測定では、フレネル計算で予測されたとおりに反射率減少ディップが現れること、屈折率変化に対して鋭敏に応答することを確認した。さらに、光源を白色光とした測定系を用いることで、反射率減少ディップの出現波長と入射角度についての理論的・実験的検証を行った。得られた結果は、目的とする手法が高感度検出手法として機能しうることを示した。表面プラズモン共鳴(SPR)分光法は,金属薄膜表面にセンシングレイヤーを形成し,検体試料の吸着に伴う金属薄膜表面の屈折率変化をSPR角度(反射率が最小となる入射角度)シフトとして観測する手法である(図1)。本研究では,「多孔質層をセンシングレイヤーとしたSPR分光法の超高感度化」を目的とし,超高感度化へ向けた多孔質層形成手法の確立とDNAセンシングへの応用を行った。従来のSPR分光法では,金薄膜表面に形成したレセプター分子単分子膜をセンシングレイヤーとし,SPR角度シフトを検出する。SPR分光法の高感度化においてはSPR角度周辺での反射率減少ディップが鋭いこと,SPR角度が低入射角度であることが必要不可欠であり,光学系の最適化により現在では入射波長が800nm程度であり高屈折率プリズムを用いることで高感度化を達成している。一方,光学的に透明な多孔質層を金薄膜上に形成すると鋭い反射率減少ディップが通常のSPR角度より低角度側に現れることを,フレネル式による理論解析の結果見出した。この現象を実証すべく,ガラス基板上にアルミ/多孔質アルミナの積層膜を形成する手法を開発し,自作のSPR測定系で検証した。その結果,計算通りに鋭い反射率減少ディップが出現することを確認し,さらに,センシングへの応用が可能であることを見出した。
古典期ギリシア哲学の変容-新ブラトン主義による文献的・思想的改竄問題-

(1)まず、古典期においてそれまでの魂(ψυxη)に対する見方を集約しその後の魂や心の理解に対して最も影響を与えたアリストテレスの著作『魂について』(De Anima)について、テキストの校訂、翻訳、注釈の作業を進め、アリストテレスの魂の捉え方を明確化するとともに、長い伝統をもつ従来の校訂や注釈、諸解釈に多くの問題が存在することを確認した。このうち校訂及び翻訳については、ほぼ作業を終え、翻訳は、ある程度の注釈と解説とともに、近く刊行される予定である。(2)さらにこのアリストテレスの魂論の伝承と受容の過程できわめて影響力ある役割を果たした新プラトン主義について、新プラトン主義者たちがアリストテレスのテキストの読解の特徴とその基本思想をどのように変容させているのかを、個々のパッセージの解釈の分析を通じて具体的に解明した。さらに近現代において、このような新プラトン主義者による変容あるいは改作が近現代哲学の主要な議論にどのように影響しているのかを検証した。とりわけ、認知の「対象」objectというきわめて一般的な概念や、現代の心の哲学において問題的なキー・コンセプトである「志向性」intentionalityの概念なども、以上の伝承過程と関連した歴史的経緯と思想的背景を通じて成立していることを確認し、これに関連した発表をおこなった。(3)また他方で、以上のような思想の受容と変容の問題を、より広い社会的コンテキストから考察することを進めつつある。とくに、新プラトン主義者たちが、哲学の研究と教育において、具体的にどのような教育と研究のプログラムを組織し、そのなかでプラトン及びアリストテレスの著作をどのように教育し研究したのかを考察する発表をおこなった。((2)(3)の成果については、来年度に刊行される雑誌に記載される予定である。)本年度は、この研究課題の遂行のために最も基礎となる作業を行った。(i)まず、古典期において、それまでの魂(ψυχη')に対する見方を集約し、その後の魂や心の理解に対して最も影響を与えたアリストテレスの著作De Animaについて、テキストの校訂、翻訳、注釈の作業を進めた。この作業を通じて、アリストテレス自身の魂の捉え方を解明するとともに、新プラトン主義者をはじめとした古代後期からイスラムさらには中世スコラ期のさまざまな注釈に見られる独特の視点を、個々のパッセージにの具体的解釈の分析を通じて、明らかにしつつある。このうち校訂及び翻訳については、ほぼ作業を終え、翻訳は、2000年度中に刊行される予定である。(ii)また、古代ギリシアのテキストと思想の受容を考えるとき、そもそもわれわれが古代哲学者のテキストや「断片」として受け取っているものがいかにして成立しているのか、という問題をつねに念頭においておくことが必要である。この点について本年度は、とくにソクラテス以前の哲学者たちについての根本資料とされるH.Dielsの研究が、やはりある時代的制約を免れていないことを、Mansfeldらの研究成果をもとにして明らかにした。さらに、そもそも古代における「哲学史的記述」をはじめて試みたアリストテレス自身はどのような視点をもってそうしたのかということを解明し、人間の思考活動が成立するうえでの言語の規範的役割の重要性に対する彼の評価が、その基盤となっていることを明らかにした。)
ポリイミドを出発物質とした新規表面多孔性分離媒体の創製

本研究では、ポリイミドを出発物質として、表面多孔性を有する新規な試料抽出媒体ならびにクロマトグラフィー用の分離固定相を開発した。コアとなる粒子表面を、ポリイミドを重合させながら被覆することにより、均一な粒子径を有する球状微粒子を合成するとともに、その後の加熱処理による縮合反応を利用して表面に架橋ポリイミドの薄層を形成させた。これにより、芳香族化合物に対して、従来の固定相とは異なる分子形状選択性を示す液体クロマトグラフィー用固定相ならびに試料前処理媒体を作製することに成功した。本研究では、各種ポリイミドの合成条件を最適化することにより、粒径が均一な各種球状ポリイミド微粒子の合成方法を確立し、このポリイミド微粒子の試料前処理媒体ならびに分離媒体としての応用を検討することを主たる目的としている。本研究初年度である平成27年度は、当初の研究計画に沿って、ポリイミド粒子媒体の合成条件の評価ならびにその試料前処理媒体としての基本性能を中心に検討した。1 [合成条件の評価ならびに最適化]本研究で第一選択としたPMDA-ODAを用いて、粒子径がほぼ均一な球状微粒子の重合条件の検討を行った。また、作製したポリイミド微粒子の耐熱性・耐薬品性および機械的強度等について評価した。2 [ポリイミド微粒子の抽出性能評価]合成した各種ポリイミド微粒子を内部に充填した小型の抽出デバイスを作製し、モデル水試料からの抽出性能を評価した。試料溶質として種々の極性・化学構造を有する芳香族化合物群を用いることにより、その抽出選択性と試料溶質の分子構造および物性との関連についても検討した。3 [耐久性の評価]合成したポリイミドの化学構造・粒子径・粒子形状等と、有機溶媒中での使用ならびに高温条件下での長時間使用における耐久性についても検討した。これまでの本研究の進捗状況は順調である。研究計画に従って、最も一般的であり、かつ有機溶媒あるいは高温条件でも安定してその化学構造を長期間維持できると想定されたポリイミド(PMDA-ODA)を合成した。粒子径がほぼ均一な球状微粒子の重合条件の検討を行うとともに、実際に合成したポリイミド微粒子の耐熱性・耐薬品性および機械的強度等についても確認した。その結果、本研究で想定している抽出条件ならびにその後の脱着条件下では、十分な耐久性を有するポリイミド微粒子の合成を確認した。また、モデル試料として導入した各種化学構造ならびに物性を有する芳香族化合物群に対する、抽出性能についても確認し、合成したポリイミド微粒子が希薄な水試料、特に環境水等の試料中に含まれれる微量有機化合物の抽出および回収に利用できることが確認できた。本研究2年目である平成28年度は、当初の研究計画に沿って、ポリイミド被覆粒子の合成条件の評価ならびにその試料前処理媒体としての基本性能を中心に検討した。1 [架橋型ポリイミドの導入]前年度の結果を受けて、最適なポリイミド骨格構造を決定するとともに、各種架橋反応を導入することにより、更なる耐熱性・耐薬品性を有する網目状ポリイミドを合成した。2 [ポリイミド被覆微粒子の開発と抽出性能評価]抽出媒体として期待できる化学構造を有する架橋ポリイミドを、コアとなる微粒子表面に被覆することにより、ポリイミド被覆粒子を作製した。また、抽出媒体としての性能を維持したまま、効率よく薄膜状に被覆し得る作製条件を確認するとともに、その抽出選択性と微粒子構造(膜厚、粒子径、コア粒子の材料等)について系統的に検討し、条件の最適化を行った。3 [クロマトグラフィー固定相としての可能性評価]ポリイミド被覆微粒子を液体クロマトグラフィーならびにガスクロマトグラフィーの分離固定相としても使用し、その分離選択性とポリイミド化学構造との関係について検討するとともに、従来の固定相との差異について確認した。合成したポリイミド被覆微粒子の化学構造・粒子径・粒子形状等と、有機溶媒中での使用ならびに高温条件下での長時間使用における耐久性についても検討した。研究計画に従って、最も一般的であり、かつ有機溶媒あるいは高温条件でも安定してその化学構造を長期間維持できると想定されたポリイミド(PMDA-ODA)を合成し、その後、架橋構造を有する化学構造へ展開し、表面被覆型のポリイミド粒子を作製した。重合条件等の検討を行うとともに、実際に合成したポリイミド被覆微粒子の耐熱性・耐薬品性および機械的強度等についても確認した。その結果、本研究で想定している抽出条件ならびにその後の脱着条件下では、十分な耐久性を有するポリイミド被覆微粒子の合成を確認した。また、モデル試料として導入した各種化学構造ならびに物性を有する芳香族化合物群に対する、抽出性能についても確認し、合成したポリイミド被覆微粒子が希薄な水試料に含まれる微量有機化合物の抽出および回収に利用できることが確認できた。本研究では、ポリイミドを出発物質として、新規な選択性を有する試料抽出媒体ならびにクロマトグラフィー用の分離固定相を開発した。抽出媒体・固定相のコアとなる粒子表面を、ポリイミドを重合させながら被覆することにより、均一な粒子径を有する球状微粒子を合成し、その後の加熱処理による縮合反応を利用して表面に芳香環を有する微粒子を作製し、その新規分離媒体・抽出媒体としての性能評価を行った。

本研究課題における主な検討項目は以下の通りである。1 [ポリイミド微粒子の抽出性能評価]合成した各種ポリイミド微粒子を内部に充填した小型の抽出デバイスを作製し、モデル水試料からの抽出性能を評価した。試料溶質として種々の極性・化学構造を有する芳香族化合物群を用いることにより、その抽出選択性と試料溶質の分子構造および物性との関連についても検討した。2 [ポリイミド被覆微粒子の開発と抽出性能評価]抽出媒体として期待できる化学構造を有する架橋ポリイミドを、コアとなる微粒子表面に被覆することにより、ポリイミド被覆粒子を作製した。また、抽出媒体としての性能を維持したまま、効率よく薄膜状に被覆し得る作製条件を確認するとともに、その抽出選択性と微粒子構造(膜厚、粒子径、コア粒子の材料等)について系統的に検討し、条件の最適化を行った。3 [クロマトグラフィー固定相としての可能性評価]ポリイミド被覆微粒子を液体クロマトグラフィーならびにガスクロマトグラフィーの分離固定相としても使用し、その分離選択性とポリイミド化学構造との関係について検討するとともに、従来の固定相との差異について確認した。合成したポリイミド被覆微粒子の化学構造・粒子径・粒子形状等と、有機溶媒中での使用ならびに高温条件下での長時間使用における耐久性についても検討した。またその溶質に対する分離選択性についても従来の固定相と比較した。本研究では、ポリイミドを出発物質として、表面多孔性を有する新規な試料抽出媒体ならびにクロマトグラフィー用の分離固定相を開発した。コアとなる粒子表面を、ポリイミドを重合させながら被覆することにより、均一な粒子径を有する球状微粒子を合成するとともに、その後の加熱処理による縮合反応を利用して表面に架橋ポリイミドの薄層を形成させた。これにより、芳香族化合物に対して、従来の固定相とは異なる分子形状選択性を示す液体クロマトグラフィー用固定相ならびに試料前処理媒体を作製することに成功した。本研究計画2年目である次年度も、当初の研究計画に沿って研究を推進する。特に、シリカゲル等のコアとなる粒子表面にポリイミドを重合させながら被覆し、ポリイミド被覆微粒子を合成し、その試料前処理法における抽出媒体としての応用、また、液体クロマトグラフィーならびにガスクロマトグラフィーの固定相としての応用も想定して抽出性能ならびに分離性能評価を行う。更に、上記で合成したポリイミド被覆微粒子を加熱処理し、有機溶媒中ならびに高温条件下においても高い耐久性を有する新規な表面多孔性型粒子の創製も試みる。本研究計画最終年度である次年度も、当初の研究計画に沿って研究を推進する。特に、シリカゲル等のコアとなる粒子表面にポリイミドを重合させながら被覆し、ポリイミド被覆微粒子を合成した後に、加熱処理等によって表面の化学構造を変化させることを試みる。試料前処理法における抽出媒体としての応用、また、液体クロマトグラフィーならびにガスクロマトグラフィーの固定相としての応用も想定して抽出性能ならびに分離性能評価についても継続して検討する。マイクロ分離科学
日本語史資料としての古文書の研究─仮名文書の文体の成立と資料的価値について─

平成30年度は、前年度に整備したテキストについて1文書内容と背景の調査を実施し、2仮名の多寡による文書分類(漢字専用文書、漢字主体文書、仮名半分文書、仮名主体文書)に基づいて用例調査を行い、3新たに一文の述語に着目した分析を試み、品詞による述語文の分類を実施し、4中古・中世の文学資料(広義の物語類)との比較を行った。5その結果、5-1漢字専用文書では動詞述語文の割合が低いが、物語類では高い。5-2仮名文書では漢字専用文書よりも動詞述語文の割合が高い。仮名が多い文書ほど割合が高く、物語類の割合に近づく。という2点が明らかになった。これを前年度に実施した「によりて」節内の述語の傾向と比較・分析した結果、仮名が多く使用されている仮名文書は、文章表現における具体性・個別性が強いこと、それが鎌倉時代の広い階層にわたる人々の口頭での表現に基づく可能性が高いことが明確になった。1の文書の内容と背景の調査については日本史関係の研究成果を収集して実施し、23の用例調査と分析については収集した原本の写真に依拠し、文章を分析して文を認定し、一文の述語の分類を行った。4については、平成29年度の調査対象文献に「日本霊異記」「将門記」「延慶本平家物語」等を新たに加え、平安・院政鎌倉時代の王朝物語・説話・軍記の各ジャンルの作品について、冒頭の文章を抽出して、古文書と同様の方法で分析し、それを古文書と対比した。5の結論については、次年度に雑誌論文として公開予定であり、仮名文書の文体研究の成果の一部は30年度10月刊行の『日本語学大辞典』の「口語体」「書状(日本語史資料)」の項目記述において公開した。平成30年度の計画としては、129年度に整備した古文書テキストについて原本の表記を調査し、2文体をはかるのに適した語句・語法を選定して、仮名文書・漢字専用文書におけるそれぞれの用法を比較検討する、3文書内容と背景の調査について、対象とした文書の内容、ならびに差出人・宛名人の身分・居住地域・性別・教養などについて日本史学による研究成果も利用しつつ調査を行う、4仮名文書は、仮名書き部分の多寡で三種に分類して用例採取を行い、漢字専用文書では仮名文書の用例に相当する内容の表現を採取する、という4項目を予定していた。実際には12と4は、計画通りに実施し、仮名文書において一文の述語に着目した分類・分析方法が有効であることを示す材料がそろい、進展があった。3の文書背景の調査については、おおまかな把握はできたが、まだ途上であり、差出人の教養について、新たに中世文学作品の需要・影響の度合いに着目して調査する必要が認識された。以上を総合的に勘案して、おおむね計画通りに進展していると考える。平成31年度も、仮名文書の資料性解明のための新たな分析方法の検討・開発を推進していく。1前年度までに分析した結果を論文として公開し、2前年度までに整備したテキスト(場合によっては対象の仮名文書を追加)を対象とし、3文書内容と背景の調査とともに、あらたな着眼点から4用例調査を行い、分析方法の検討・開発をしつつ、5用例の整理分析を行い、仮名文書の表現の特色をつかみ、古文書以外の資料と比較する。平成29年度は、1古文書の調査テキスト整備に着手し、2応募者がこれまでに漢字専用文書の表現と対比して〈仮名文書の特色〉として指摘した事項について〈鎌倉時代以前の古文書以外の文献の調査〉を行い、3古文書以外の資料のうち、とくに鎌倉時代の説話について古文書と比較・検討を行って、結果を論文として公開した。1の古文書の調査テキストについては、『鎌倉遺文古文書編』により、鎌倉時代の古文書の証文類の原本の利用の可否について調査を行った。その上で、原本の所在が明確で、写真版が参照できる文書を選定した。選定した古文書について、活字テキストを使って漢字専用文書、仮名主体文書、仮名半分文書、漢字主体文書に分類した。2の古文書以外の文献の調査については、応募者がこれまで明らかにした仮名文書の表現の特色のうち、とくに「によりて」節の構造に着目して調査を実施した。平安・鎌倉時代の説話、軍記、紀行の各ジャンルの資料から、それぞれテキストが参照しやすく、仮名が使用されている複数の作品を選定し、「によりて」節の全数調査を行った。3の説話については、「今昔物語集」「十訓抄」「宇治拾遺物語」を調査し、和文系説話、漢文系説話に分類した上で、採取した用例について述語を中心に分析し、漢字専用文書、仮名主体文書、仮名半分文書、漢字主体文書の「によりて」節の構造と比較・検討した。その結果、<理由の「によりて」の多用>と<「名詞述語」「有り無し述語」の多用>は説話ならびにこれまで検討した物語にも見られない古文書ならではの文体の特色であることを明確にし、<理由の内容の具体的な記述><「によりて」節内の動詞述語の多さ>は仮名文書と鎌倉時代の仮名使用の説話・物語に共通して見られる特色であることを指摘した。当初の計画では、平成29年度には、1古文書の調査テキストを整備し、2応募者がこれまでに漢字専用文書の表現と対比して〈仮名文書の特色〉として指摘した事項について〈鎌倉時代以前の古文書以外の文献の調査〉を行うことにしていた。実際には、1では、調査対象の古文書を選定し、活字テキストの整備ができた。ただし一部の文書については出張による原本調査ができずに翌年に持ち越すこととなった。