hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
褥瘡の予後予測に関する基礎研究－生体高分子マーカーを活用したツール開発に向けて－

現時点では分析段階で確定した結論とはなっていないが、MMP-9およびBMP-6の両者ともに低い群においては、治癒傾向にあるもしくは治癒直前にある創部であることが多く、平成24年度の結果を指示する可能性が高い結果となった。このことは、褥瘡の創部のアセスメントに生体高分子マーカーを活用できる可能性を示唆していること考える。今後も分析を進め、分析データと創部の質的状態の関連性を十分検討した後に、再度褥瘡創部から採取し、分析結果から得られたデータからその創部の治癒状況を予測し、その予測と実際の治癒状態との関連性を検討したいと考えている。本研究の目的は、褥瘡の治癒過程における創部アセスメントツールの開発に向け、生体高分子の活用を目指すものである。助成前半には研究協力者から採取した褥瘡創面の滲出液をもとにタンパク質を抽出し、マトリックス分解酵素であるMMP-9および骨形成因子であるBMP-6をターゲットに、ウエスタンブロッティングにて半定量を行ってきた。今年度は、MMP-9およびBMP-6のタンパク質検出量を、我が国で褥瘡創部のアセスメントツールとして広く使用されているDESIGN-Rの各得点との相関について検討した。その結果、MMP-9のタンパク質検出量と創底部の深さ(D)、滲出液(E)、肉芽(G)の3項目との間に正の相関を確認でき、BMP-6のタンパク質検出量と創縁部のポケット(P)の項目の間でも正の相関を確認できた。このことは、MMP-9およびBMP-6のタンパク質量を客観的な判断指標として、DESIGN-Rの採点基準が主観的判断に委ねられている部分を補完できる可能性を示すと考えている。研究者の教育・所属組織への運営に係る業務の増加と、幼児期にある子の養育に時間を要することで、新たな検証のための実験が滞っている。また、データの分析にあたり、計画当初よりも解釈の視点がふえ、より適切な視点での検討を行うために時間を要している。本研究の目的は、褥瘡の治癒過程における客観的創部アセスメントツールの開発に向け、創部の質的な評価に生体高分子の活用を検討することである。助成前半に採取した検体を用いたタンパク質の分析を進め、平成27年度には、褥瘡の浸出液中に存在するマトリックス分解酵素であるmatrix metalloprotease-9(MMP-9)および骨形成因子として知られているbone morphogenetic protein-6 (BMP-6)の検出量と、褥瘡創部の評価ツールであるDESIGN-Rの各項目の評価との関連性について明らかにした。今年度は、DESIGN-Rにおける評価を軽度と重度という2つの分け方(重症度別)で比較し、創底部の深さの項目及び創縁部のポケットの項目はそれぞれの生体分子の検出量による軽度・重度の判断が可能であることを明らかにした。27年度及び28年度の結果から、MMP-9およびBMP-6は褥瘡創部の状態を客観的に判断するために有効な高分子マーカーであり、DESIGN-Rの評価および重症度を客観的にアセスメントするツールとしても活用が可能であるといえる。また、定量的な分析をすすめるにあたり、計画の段階で採用した手法では条件設定が整わなく難渋したため、新たな方法での定量を試みた。その結果、MMP-9以外のMMP類が創部アセスメントの活用できる可能性も確認できた。
高機能セローム解析を実現するマイクロニードル搭載型バイオプローブの開発

本研究では,高度な細胞機能解析のためのキーデバイスとして,マイクロニードル搭載型バイオプローブを実現し,その性能を評価することを目的としている.本年度は,研究課題の最終目的であるセローム解析の実現に向けて,これまでに確立したバイオプローブプロトタイプを用いて細胞を使った評価実験を行った.まず,培養液中での生細胞(HeLa細胞)の形状イメージングを行った.液中において柔軟な生細胞の形状イメージングを行うため,バイオプローブカンチレバーを共振周波数近傍で振動させながら測定を行うタッピングモードで計測を行った。バイオプローブの液中での振動特性を明らかにすることで,作製したバイオプローブによって細胞表面の微細な凹凸を明瞭に観察することが可能となった.さらに,本デバイスの大きな特徴である,中空構造を有するSiO_2マイクロニードルによる細胞への極微量の生体分子の注入や細胞内での発現物質の採取を実現するための基礎的検討として,生細胞への穿刺実験を行った.この結果,先鋭化マイクロニードルによる細胞への穿刺が可能であり,穿刺後も細胞は生きた状態を維持していることを明らかとした.また,穿刺中の力を観察することによって,ニードルが細胞へ穿刺する際の細胞の力学的挙動を明らかにすることが可能となった.本研究では,高度な細胞機能解析のためのキーデバイスとして,マイクロニードル搭載型バイオプローブを実現し,その性能を評価することを目的としている.本年度は,研究課題であるバイオプローブの作製について,これまでに確立したシリコン(Si)ウエハの接合技術や不要な酸化シリコン膜を除去するプロセスなどの技術を全体的に最適化することで,プロトタイプの作製を実現した.さらに,原子間力顕微鏡(AFM)での計測時に問題点となった酸化シリコン製マイクロニードル根元部分の機械強度を,実験と有限要素法(FEM)によるシミュレーションにより評価し,補強のためにSi構造体をニードル根元部分に高精度に形成するプロセスを新規に開発した.その結果,作製したプローブプロトタイプによって,AFMの計測画像が取得できることを実証し,提案するデバイスの実用化の可能性を示すことができた.また,AFMの基本計測性能の向上として,集束イオンビーム加工を用いることでマイクロニードルの目標先端形状(<20nm)を達成し,さらに,プローブチップの機械的振動特性を明らかにすることでAFMの計測性能への影響を評価し,AFM計測画像の改善を行うことを可能とした.本プローブ特有の機能であるマイクロニードルの性能に関する基礎的検討としては,マイクロニードル先端からの液体吐出現象を実験とコンピュータシミュレーションによる解析により明らかにし,微小領域における液体の吐出挙動を明らかにした.今後は,実際の細胞を用いた実験・評価を行い,プロトタイプの総合的な最適化を行いながら,最終的なマイクロニードル搭載型バイオプローブを実現する.本研究では,高度な細胞機能解析のためのキーデバイスとして,マイクロニードル搭載型バイオプローブを実現し,その性能を評価することを目的としている.本年度は,研究課題の最終目的であるセローム解析の実現に向けて,これまでに確立したバイオプローブプロトタイプを用いて細胞を使った評価実験を行った.まず,培養液中での生細胞(HeLa細胞)の形状イメージングを行った.液中において柔軟な生細胞の形状イメージングを行うため,バイオプローブカンチレバーを共振周波数近傍で振動させながら測定を行うタッピングモードで計測を行った。バイオプローブの液中での振動特性を明らかにすることで,作製したバイオプローブによって細胞表面の微細な凹凸を明瞭に観察することが可能となった.さらに,本デバイスの大きな特徴である,中空構造を有するSiO_2マイクロニードルによる細胞への極微量の生体分子の注入や細胞内での発現物質の採取を実現するための基礎的検討として,生細胞への穿刺実験を行った.この結果,先鋭化マイクロニードルによる細胞への穿刺が可能であり,穿刺後も細胞は生きた状態を維持していることを明らかとした.また,穿刺中の力を観察することによって,ニードルが細胞へ穿刺する際の細胞の力学的挙動を明らかにすることが可能となった.
4次元変分同化手法の全球エアロゾル気候モデルへの導入と気候影響評価に関する研究

特別研究員申請時の年次計画(2年目)に鑑み、本年度は物質輸送モデルへのデータ同化手法の導入とその検証に重点を置き研究を行った。まず、全球エアロゾル気候モデルSPRINTARSに4次元変分法の導入を行った。SPRINTARSから気象計算を取り除き、外部データによって駆動するオフライン版のSPRINTARSを構築、そのオフライン版SPRINTARSを対象にアジョイントモデルを導出し、SPRINTARS/4D-Var同化システムを開発した。開発した同化システムに対して、理想的な仮想観測データを用いることによって、SPRINTARS/4D-Varの実行可能性を確認するとともに、本研究の最終目標の一つであるSPRINTARS/4D-Varを用いたエアロゾルの排出源逆推定が現実的に実行可能であることを確認した。また、実際の衛星観測データを用いた同化実験にも着手しており、東アジア域の土壌性粒子(黄砂)に適用し、発生源強度・分布の逆推定を行った。この結果は、日本気象学会2010年度春季大会にてポスター発表を行った。また、本年度は日本学術振興会優秀若手海外派遣事業を利用し、米国Harvard大学Daniel Jacob教授のグループと8ヶ月に及ぶ共同研究を行った。現地では、世界的に広く利用されているGEOS-Chemモデルにアンサンブルベースのデータ同化手法を導入したデータ同化システムを構築し、いくつかの同化実験を行った。打ち上げが計画されている静止地球観測衛星は従来の極軌道衛星に比べ、時空間に渡って高密度のデータの取得が期待されている新しい観測手段である。本研究では、静止地球観測衛星を仮想したデータと従来の観測を仮想したデータの同化実験の比較を行い、東アジア域の大気汚染を正確に予報するためには、静止地球観測衛星による観測データが非常に有効であることを確認した。この結果は、日本気象学会2010年度秋季大会にて発表済みである。最後に特筆する事項として、2010年度の日本気象学会山本正野論文賞を受賞した。受賞論文は本研究計画の基礎を担った研究である。特別研究員申請時の年次計画(1年目)を鑑み,本年度はタクラマカン砂漠を起源とした長距離輸送ダスト(Dust Veil)の様態解明と,全球エアロゾル輸送モデルへのデータ同化手法導入の二点に重点を置いて研究を行った.まず,長距離輸送ダスト(Dust Veil)の検出と輸送経路に関する研究であるが,当研究では領域物質輸送モデルRC4,全球エアロゾル輸送モデルSPRINTARS,CALIOP衛星搭載Lidar,国立環境研究所地上Lidarネットワークを統合させた解析を行い,その発生から輸送までの解析を行った.その結果,タクラマカン砂漠の位置するタリム盆地の特異な地形がDust Veilの生成と太平洋を横断する長距離輸送に重要な役割を果たしていることが解明された.また,タクラマカン砂漠から発生したダストは,高度6・10kmの高々度を大西洋まで輸送されていることがわかった.これらの結果は3つの国際ジャーナル誌の論文としてまとめられ,発表された.特にNature Geoscience(Uno et al.2009;申請者は第三著者)に発表された論文では,タクラマカン起源のダストが約二週間かけて地球を一周する様子を初めて明らかにした.さらに,中国西安で行われたInternational Symposium on Atmospheric Light Scattering and Remote Sensingにおいて,招待講演を行った.次に,全球エアロゾル輸送モデルへのデータ同化手法の導入であるが,本研究では全球エアロゾル輸送モデルSPRINTARSを用いた.同化手法には,現業気象予報に用いられているアンサンブルカルマンフィルタ(EnKF)と4次元変分法(4D-Var)の両者を選択した.研究初年度である本年度は,両同化手法の導入と同化実験を行った.EnKFについては,一ケ月の長期間同化実験に成功し,その成果を12月にSan Franciscoで行われたAGU Fall Meetingで発表した.今後より長期間の同化を行い,論文としてまとめる予定である.4D-Varの導入も適宜開始しており,来年度は両同化手法の比較,組み合わせた同化手法の開発に取り組む予定である.特別研究員申請時の年次計画(2年目)に鑑み、本年度は物質輸送モデルへのデータ同化手法の導入とその検証に重点を置き研究を行った。

本研究では、静止地球観測衛星を仮想したデータと従来の観測を仮想したデータの同化実験の比較を行い、東アジア域の大気汚染を正確に予報するためには、静止地球観測衛星による観測データが非常に有効であることを確認した。この結果は、日本気象学会2010年度秋季大会にて発表済みである。最後に特筆する事項として、2010年度の日本気象学会山本正野論文賞を受賞した。受賞論文は本研究計画の基礎を担った研究である。
数式を含む文書の検索・利用基盤の構築に関する研究

本研究では、科学や教育のための数学知識共有基盤の構築を目的としている。具体的には、数式の構造を解析し、さらに数式と説明テキストを対応づけることにより、現在の検索エンジンでは限定的な扱いしかできない数式の高度な検索機能の実現を目指すものである。研究期間では、(1)MathMLやlatexなどの標準形式で表現された数式の検索、(2)数式の近くにある説明文の解析、(3)両者の活用による数式意味のコンピュータによる理解、の3つの要素技術を中心に、数式の異なる利用環境にあわせて、以下の2通りのアプローチによる研究開発を行った。第1は、数式を含む文書の理解支援環境の構築である。論文誌に掲載された科学技術論文を解析して、数式で使われている変数や関数の名前を抽出する手法を提案するとともに、数式の木構造に基づく類似数式検索を実現した。これに基づき、数式ごとに変数や関数の名前一覧を提示したり、他論文や外部の数式データベース上の類似数式を提示したりするシステムを開発した。情報処理分野の104論文を対象に変数・関数名抽出および数式検索の性能評価を行い、実際に支援環境を構築して理解支援における有用性を調べた。第2は、拡張キーワードを用いた数式検索機能の強化である。索引対象となる数式と同一段落にある説明文から、その数式を参照する名前や記述を抽出することで、通常の検索エンジンによる数式の検索機能を高める手法を提案し、wikipediaの数学カテゴリ文書に含まれるlatex形式の数式を用いて実験による評価を行った。以上に基づき本研究では、数式と周辺の説明テキストを組み合わせてアクセス支援に用いる枠組みを新たに提案し、有用性を示した。実験で作成したアノテーションや評価用データについては、今後整備して公開する予定である。本研究では、科学や教育のための数学知識共有基盤の構築手法を検討する。具体的には、数式の構造を解析し、さらに数式と説明テキストを対応づけることにより、現在の検索エンジンでは限定的な扱いしかできない数式の高度な検索機能の実現を目指す。数式を中心とした知識基盤の構築に関する研究は過去にあまり行われていないことから、初年度は、研究基盤となるデータの収集と整備を中心に検討を進めた。ここで、数式の検索法としては、XML形式で表現された数式木構造の類似度を計算する方法と、数式をキーワードに対応付けて類似度を計算する方法の2通りが考えられる。各々について独立に検討を進めるため、以下の2つのデータセットについて研究を進めた。第1は、論文誌に掲載された科学技術論文(情報処理学会論文誌)であり、サンプリングした104論文について、PDF形式で表現された文書を専用ソフトおよび人手により変換し、MathML/Content Markupと呼ばれる形式にしたがって、数式の意味構造を記述した。また、木構造マッチングに基づく数式の類似度の計算法を提案し、数式検索システムのプロトタイプを試作した。第2は、wikipediaの数学カテゴリ文書である。各数式に対して付与されたlatex形式の記述を抽出し、数学記号をキーワードに変換する対応表を適用してキーワードベクトルを生成することで、既存の検索方式の適用を可能にして課題を整理した。以上により、各方式を用いた数式の検索法の提案とベースラインとなる検索システムの試作を行った。現在、数式周辺の自然言語テキストから関連情報を抽出する手法、および評価用データの作成法について検討しており、次年度も継続して研究を進める予定である。
幕末・維新期の権力関係一軍役動員と拝借金・貸付金を中心に

本研究の概要は以下のとうりである。幕末期の幕藩権力関係および明治初期の維新政権と藩権力の関係について、次の観点と内容に関する研究をおこなった。1.幕藩権力関係を公儀の「御恩」としての知行権と藩権力の「奉公」としての軍役の観点から、まず幕末期の公儀知行権の特質を検討した。そのうち加封は、(1)外様大名に対する新潟の外警強化・転嫁、政治的引き付けや、(2)幕閣などの昇進を内容とすること、除封は、(1)井伊政権による一橋派若年寄の処罰、(2)井伊政権、久世・安藤政権担当者の処罰、(3)家臣の天狗党の乱加担に対する処罰、(4)禁門の変の責任を理由とする長州藩の処罰を内容とすること、つまり幕末の政治的潮流と対抗が除封の特質となっていることを明らかにした。2.幕府の軍役動員については江戸湾警衛について検討し、江戸湾陸地・台場の警衛の推移の特質として、公儀および関東旧付庸藩を主体・中核とし、外様大名へ拡大していったことと軍役奉仕の内容と矛盾を川越藩、二本松藩などについて検討した。そこにも幕末の政治的対抗の反映がみられることを明らかにした。3.幕藩権力のなかで、公儀の義務であり、「恩貸」として機能した公儀拝借金の性格は、弘化期以降、譜代大名の幕府の役職就任、譜代・外様大名への軍役動員、政治的対抗にかわる貸し付けに変化することを明らかにした。4.明治元年から二年にかけての明治政府の金札石高割貸し付けについて、諸藩は藩権力の維持と軍事動員・武備確保のための恩貸として認識し、天皇政府を幕府=公儀に代る「公」権力として位置づけたことを明らかにした。本研究初年度の研究概要は以下のようである。I第1に、幕藩権力関係における公儀権力にたいする「奉公」としての軍役、その中における江戸湾警衛軍役の変遷と性格を検討した。それは、(1)当初の化政期は、徳川「家」ときわめて近い会津・白河両藩、文化天保期は幕府・関東旧付庸藩、天保弘化期は関東旧付庸藩が警衛を担当し、弘化4年に譜代雄藩と関東旧付庸藩に拡大したこと、(2)ペリ-来航以後元治期は長州藩を含む外様藩雄と幕府に拡大し、一方、江府を直接守衛する台場警衛は、関東旧付庸藩を主体とする譜代藩と一部外様藩が担当したことである。この江戸湾警衛の特長は、公儀およびそれを守衛する権力を主体とし、外様大名への軍役動員という拡大した公儀権の発動(同時に弱体化)を内容としていたをことを確認した。II次に具体的に外警軍役を負担した川越藩・二本松藩の軍役負担を検討した。さらに、公儀の恩貸である大名への公儀拝借金の性格について一定のまとめを行なった。その中で、(1)公儀拝借金は、全般的には弘化期以降、大名の幕府の役職就任・軍役動員・政局にかかわる「奉公」などへの貸し付けへ変化したこと、(2)川越藩の場合もこれに沿った形で幕藩関係が展開するが、安政期以後軍役奉公の続行にも拘らず、拝借金の貸与が外様藩へのそれと比し減少することを検証した。III明治元年から2年にかけての、明治政府の金札石高割貸し付けの性格について、諸藩にとっては藩支配維持と戌辰戦争の軍事動員・武備確保のための恩貸として受け止めており、天皇政府は幕府=公儀に代わる「公」権力と位置づけているのではないかと検討中である。
細胞接着斑裏打ちタンパク質による細胞運動制御機構の解明とその可視化技術への応用

1.ビネキシンによるERK2活性化の足場依存性制御機構の解明当研究員はこれまでにビネキシンがERK2活性化の足場依存性制御に関与していること(JBC,2002)、逆に増殖因子刺激依存的にビネキシンとERK2が直接結合し、リン酸化されること(JBC,2004)を明らかとしている。そこで、この制御機構に関して解析を行った。その結果、ビネキシンはERK2活性化の上流因子には影響せず、ERK2に直接結合することで、ERK2の不活性化を抑制し活性化状態を持続することを明らかとした。この持続効果は、ビネキシンによる足場非依存的なERK2の活性化にも重要であることを明らかとした。また、ERK2の足場依存性制御には足場依存的なフォスファターゼの活性制御も重要であり、ビネキシンはそのフォスファターゼを阻害することでERK2の足場非依存的活性化を誘導する事を明らかとした。以上の結果を、Experimental Cell Research誌(2007;in press)において発表した。2.ビネキシンよるEGF受容体活性化機構の解析これまでに、ビネキシンはEGF刺激によるMAPキナーゼ、JNK、ERKの活性化制御に関与する事を明らかとしている。そこで、ビネキシンがEGF経路における役割を検討した。ビネキシンを発現させると細胞膜上でのEGF受容体のリン酸化が持続される事を見出した。この効果には、ビネキシンの3番目のSH3ドメインが重要であった。さらに、EGF受容体のリン酸化にはビネキシンの3番目のSH3ドメインを介したc-Cb1との結合が重要である事を明らかとした。つまり、ビネキシンはEGF受容体のリン酸化を細胞膜上で特異的に持続させ何らかのシグナル伝達を制御していることが示唆された。以上の結果を、Genes to Cells誌(2006;11971-982)において発表した。3.原癌遺伝子産物c-Ablによるビネキシンのリン酸化の解析当研究員は前年までに、ビネキシンが細胞運動制御に密接に関与するアクチン重合促進因子であるN-WASP、WAVE1/2と相互作用し、その量的な制御に関与する事を示してきた。近年WAVEの機能制御に現癌遺伝子産物c-Ablが関与することが報告された。そこでc-Ablとビネキシンの関係を検討した。ビネキシンとc-Ablはラッフル膜で共局在した。さらに、ビネキシンはAblと3番目のSH3ドメインを介して相互作用すること、その相互作用にはアクチン繊維が重要である事を明らかとした。また、ビネキシンαの127番目のチロシンがAblによってリン酸化されること、そのリン酸化にはAblとの相互作用が重要であ1.ビネキシンによるERK2活性化の足場依存性制御機構の解明当研究員はこれまでにビネキシンがERK2活性化の足場依存性制御に関与し、増殖因子刺激依存的にビネキシンとERK2が結合し、リン酸化される事を明らかとしている。その結果、ビネキシンはERK2に結合し、ERK2の活性化状態を持続する事を明らかとした。この効果は、ビネキシンによる足場非依存的なERK2の活性化にも重要である事を明らかとした。2.ビネキシン-ビンキュリン結合によるアクチン骨格制御機構の解析ビネキシンはアクチン細胞骨格制御に関与する事が示されている。そこで、ビネキシンとアクチン束化因子であるビンキュリンの相互作用介したアクチン細胞骨格に与える影響について解析した。ビネキシンは活性化状態のビンキュリンに強く結合する事をin vitro、in vivoの解析により明らかとした。ビネキシンβはビンキュリンの結合依存的に接着斑に局在するが、ビネキシンαはビンキュリンとの結合非依存的にも接着斑に局在できる事を明らかとした。更に、ビネキシンのアクチンに与える影響はビネキシンαで強く、ビネキシンの接着斑への局在が重要である事を明らかとした。3.ビネキシンによるアクチン重合核形成促進因子WASPファミリータンパク質の制御機構の解析当研究員は前年までに、ビネキシンが細胞運動制御に関与するアクチン重合促進因子であるWASPファミリータンパク質と結合しそのリン酸化を促進する事を見出していた。更なる解析から結合を介し、WAVE2のプロテアソーム依存的なタンパク質分解を抑制し、安定化する事を明らかとした。阻害剤を用いてこのWAVE2安定化に関与する因子を検討したところ、PKAの活性が重要である事を見出した。また、WAVE2およびビネキシンがPKAと複合体を形成する事を見出した。

この持続効果は、ビネキシンによる足場非依存的なERK2の活性化にも重要であることを明らかとした。また、ERK2の足場依存性制御には足場依存的なフォスファターゼの活性制御も重要であり、ビネキシンはそのフォスファターゼを阻害することでERK2の足場非依存的活性化を誘導する事を明らかとした。以上の結果を、Experimental Cell Research誌(2007;in press)において発表した。2.ビネキシンよるEGF受容体活性化機構の解析これまでに、ビネキシンはEGF刺激によるMAPキナーゼ、JNK、ERKの活性化制御に関与する事を明らかとしている。そこで、ビネキシンがEGF経路における役割を検討した。ビネキシンを発現させると細胞膜上でのEGF受容体のリン酸化が持続される事を見出した。この効果には、ビネキシンの3番目のSH3ドメインが重要であった。さらに、EGF受容体のリン酸化にはビネキシンの3番目のSH3ドメインを介したc-Cb1との結合が重要である事を明らかとした。つまり、ビネキシンはEGF受容体のリン酸化を細胞膜上で特異的に持続させ何らかのシグナル伝達を制御していることが示唆された。以上の結果を、Genes to Cells誌(2006;11971-982)において発表した。3.原癌遺伝子産物c-Ablによるビネキシンのリン酸化の解析当研究員は前年までに、ビネキシンが細胞運動制御に密接に関与するアクチン重合促進因子であるN-WASP、WAVE1/2と相互作用し、その量的な制御に関与する事を示してきた。近年WAVEの機能制御に現癌遺伝子産物c-Ablが関与することが報告された。そこでc-Ablとビネキシンの関係を検討した。ビネキシンとc-Ablはラッフル膜で共局在した。さらに、ビネキシンはAblと3番目のSH3ドメインを介して相互作用すること、その相互作用にはアクチン繊維が重要である事を明らかとした。また、ビネキシンαの127番目のチロシンがAblによってリン酸化されること、そのリン酸化にはAblとの相互作用が重要であ
ハイデッガーと「翻訳」:30-40年代の思想とそのフランスにおける受容

本研究の目的は、マルティン・ハイデガー(1889-1976)の翻訳論を体系的に検討し((1))、同時にハイデガー哲学のフランスにおける受容を翻訳論の観点から考察する((2))ことにある。本年度は(2)を重点的に調査し、『フランス哲学・思想研究』および『未来』に成果を発表した。『フランス哲学・思想研究』の発表論文「『無化する無』について:アレクサンドル・コジェーヴによる否定性の構想」では、フランスのハイデガー受容に多大な影響を与えたA・コジェーヴの思想に注目し、彼によってハイデガー思想がどのようにフランスの文脈に導入されたかを検討した。フランスでのハイデガー受容が本格化するのはH・コルバンによる『形而上学とは何か』の翻訳刊行(1937)以降であるが、この翻訳とコジェーヴの関係に関しては従来詳細が明らかにされてこなかった。とりわけコルバンが編集に携わっていた雑誌『哲学研究』誌(1931-36)においてコジェーヴが発表した数々の書評記事は、国内外を問わずほとんど検討が行われていない。『フランス哲学・思想研究』の論文では、コジェーヴの記事群のなかからハイデガーを扱ったものを選び、最近刊行された草稿を参照しつつフランスの初期ハイデガー受容におけるコジェーヴの役割を検討した。フランスにおける初期のハイデガー受容の研究を通じて、思想の脱コンテクスト化と再コンテクスト化の関係が明らかにされた。思想の受容者は、自由な書き換えを行うとともに受容された思想を新たなコンテクストにおいて規範として確立する作業を行う。『未来』の発表論文「フランスのハイデガー主義、ひとつの終焉」では、このような自由な書き換えと規範化の総体としての「フランスのハイデガー主義」をめぐり、その成果と問題点とを現在的な視点から検討した。この論文は2004年12月にストラスブールで行われたハイデガー・コロキウムの報告も兼ねている。本研究の目的は、マルティン・ハイデッガー(1889-1976)の翻訳論を体系的に検討し((1))、同時に、ハイデッガー哲学のフランスにおける受容を翻訳論の観点から考察する((2))ことにある。本年度はハイデッガーとドイツ古典主義・ロマン主義期の詩人フリードリヒ・ヘルダーリン(1770-1843)との関わりに注目することで、(1)の研究を重点的に遂行し、三本の論文を発表した。『レゾナンス』誌に発表した論文、「必要なる響き合い:マルティン・ハイデッガー『人間主義書簡』への導入」では、ハイデッガーがヘルダーリンを論じつつ構築した「転換」の理論に注目し、両者の翻訳論(ヘルダーリンは数々の翻訳を行い、独自の翻訳理論を構想したことでも知られている)を接合するための手がかりを導き出した。『学術総合誌・環』に発表した論文、「ハイデッガー、宗教そして革命:講演「貧しさ」を読む」では、『レゾナンス』誌に発表した論文で分析した「転換」の構造をより詳細に検討するために、ハイデッガーの1945年の講演論文を集中的に読解した。この講演論文は、ハイデッガー全集にも収められておらず、現時点では一部の研究者にしか存在が知られていない稀少文献である。この文献の読解を通じて、ハイデッガーがヘルダーリンと共有した転換の理論および翻訳の理論が、近代ドイツの歴史的コンテクスト、すなわち宗教改革とフランス革命からの影響というコンテクストにいかに深く根ざしていたかが検証された。以上の研究の成果を踏まえたうえで、ごの分野の先駆的研究者であるフィリップ・ラクー=ラバルトの著作『ハイデッガー:詩の政治』(拙訳、2003年刊)に関する考察を、『機』に発表した。『未来』の発表論文

「フランスのハイデガー主義、ひとつの終焉」では、このような自由な書き換えと規範化の総体としての「フランスのハイデガー主義」をめぐり、その成果と問題点とを現在的な視点から検討した。この論文は2004年12月にストラスブールで行われたハイデガー・コロキウムの報告も兼ねている。
有機金属化合物による細胞内Caイオン濃度の持続的上昇の解析

ラット脳から酵素処理により単離した神経細胞と胸腺から分離した胸腺細胞に蛍光プローブを連用して、細胞集団レベルではフローサイトメーターにて、単一細胞レベルではレーザー共焦点顕微鏡・画像解析装置で細胞から得られる蛍光を測定し、その蛍光から細胞機能、細胞内動態を測定した。この方法を用いて有機金属化合物の細胞に対する影響を評価した。サイトグラム上の細胞集団を解析すると、トリブチル錫およびイオノマイシン処理により、トリブチル錫処理群ではethidiumに染まった細胞集団が増加しているが、イオノマイシン処理群ではethidium蛍光とfluo-3蛍光の両方を呈して中間の位置に細胞集団ができている。トリブチル錫により細胞内Caイオン濃度上昇に伴い、細胞生存率は低下していった。細胞内Caイオン濃度上昇と細胞生存率の低下は相関が有るように考えられるが、イオノマイシン処理群ではfluo-3蛍光増強(すなわち、細胞内Caイオン濃度上昇)はより著しいにも関わらず、生存率は逆にトリブチル錫処理群よりも高い。よって、トリブチル錫による細胞死への細胞内Caイオン濃度の関与を検討する目的で、細胞外Caイオン濃度を変化させた状態でトリブチル錫の作用を検討した。細胞外Caイオン濃度上昇に伴い、トリブチル錫処理群では細胞内Caイオン濃度上昇と細胞生存率んぼ低下は起こるが、Ca-freeの状態でも細胞死は起こっており、トリブチル錫による細胞死が必ずしも細胞内Caイオン濃度には依存しない事が示されたさらに、胸腺細胞はトリブチル錫に中枢神経細胞よりも影響を受けない事が解り、細胞レベルでも作用に差異が観察された。メチル水銀でも同様に評価できた。(1)マウス胸腺細胞に対するメチル水銀の作用を膜電位感受性蛍光色素および細胞内カルシウム蛍光指示薬を用いて検討した。メチル水銀は1μM-30μMの濃度で用量依存性に胸腺細胞を過分極させた。この過分極反応は、カルシウム依存性カリウムコンダクタンス阻害薬であるカリブドトキシンやキニ-ネにより抑制されたが、電位依存性カリウムコンダクタンス阻害薬のテトラエチルアンモニウムや4-アミノピリジンでは抑制されなかった。細胞外カルシウムイオンの除去はメチル水銀による過分極反応を減弱させた。外液カルシウムイオン除去下にA23187で前処理した胸腺細胞では、メチル水銀による過分極反応は消滅した。正常液でも、カルシウム除去液でも、メチル水銀は細胞内カルシウムイオン濃度を上昇させた。これらの結果から、メチル水銀は細胞内カルシウムイオン濃度を上昇させ、これがカルシウムイオン依存性カリウムコンダクタンスを活性化させ、過分極を起こす事が示唆された。細胞膜電位の変化がリンパ球の生理的な機能と結び付いている事は知られており、環境汚染物質による細胞膜電位の変化は細胞に対する毒性機序の一つと考えられる。(2)ラット小脳顆粒細胞の酸化的代謝に対するメチル水銀の作用を過酸化水素感受性の蛍光色素および細胞内カルシウムイオン蛍光指示薬で検討した。メチル水銀は細胞内カルシウムイオン上昇させ、その結果として酸化的代謝を促進させる可能性が示唆された。(1)Methlymercuryを小脳顆粒細胞に適用すると、1μM以上の濃度からfluo-3蛍光の増強(細胞内Caイオン濃度上昇)が観察された。Methylmercury3μM添加により、2相性のfluo-3蛍光強度の増強を示す細胞と1相性の細胞が観察された。これらの細胞の蛍光変化を同じ細胞でethidium蛍光の変化として観察すると、2相性変化を示した細胞ではethidium蛍光の増強を起こした。一方、1相性の細胞ではethidium蛍光は観察されなかった。よって、2相性の細胞では、膜透過性の変化が起こっている事が予想された。現時点では、細胞内Caイオンの持続的上昇が二次的に細胞膜の透過性変化を起こしているのか、あるいはmethylmercury自体が細胞膜の透過性変化を起こすのか、不明である。

(2)methylmercuryによる細胞内Caイオン濃度上昇は細胞外のCaイオンを除去した場合でも起こるので、細胞内Caストアからの遊離と考えられた。(3)2相性の細胞内Caイオン上昇を起こした細胞では、水泡形成が起こった。この水泡形成もethidium蛍光の増強の後に起こっており、細胞膜の透過性亢進を契機にしている可能性が考えられた。特に、細胞内と水泡内ではfluo-3蛍光に蛍光強度の差が観察され、細胞内と水泡内部ではfluo-3の濃度差ができている事が示唆され、これは細胞内と水泡内は何らかの膜により区分されていると考えられた。(4)tri-n-butyltinでは、2相性の蛍光変化は観察されなかった。ラット脳から酵素処理により単離した神経細胞と胸腺から分離した胸腺細胞に蛍光プローブを適用して、細胞集団レベルではフローサイトメーターにて、単一細胞レベルではレーザー共焦点顕微鏡・画像解析装置で細胞から得られる蛍光を測定し、その蛍光から細胞機能、細胞内動態を測定した。この方法を用いて有機金属化合物の細胞に対する影響を評価した。サイトグラム上の細胞集団を解析すると、トリブチル錫およびイオノマイシン処理により、トリブチル錫処理群ではethidiumに染まった細胞集団が増加しているが、イオノマイシン処理群ではethidium蛍光とfluo-3蛍光の両方を呈して中間の位置に細胞集団ができている。トリブチル錫により細胞内Caイオン濃度上昇に伴い、細胞生存率は低下していった。細胞内Caイオン濃度上昇と細胞生存率の低下は相関が有るように考えられるが、イオノマイシン処理群ではfluo-3蛍光増強(すなわち、細胞内Caイオン濃度上昇)はより著しいにも関わらず、生存率は逆にトリブチル錫処理群よりも高い。よって、トリブチル錫による細胞死への細胞内Caイオン濃度の関与を検討する目的で、細胞外Caイオン濃度を変化させた状態でトリブチル錫の作用を検討した。細胞外Caイオン濃度上昇に伴い、トリブチル錫処理群では細胞内Caイオン濃度上昇と細胞生存率んぼ低下は起こるが、Ca-freeの状態でも細胞死は起こっており、トリブチル錫による細胞死が必ずしも細胞内Caイオン濃度には依存しない事が示された。さらに、胸腺細胞はトリブチル錫に中枢神経細胞よりも影響を受けない事が解り、細胞レベルでも作用に差異が観察された。
網膜神経節細胞の分子多様性の解明による細胞死阻止の研究

細胞死を誘導するとされるHrkと、神経細胞の成熟に関わると考えられるC38分子の網膜神経節細胞、及び他種の網膜神経細胞におけるmRNA発現、及びタンパク分子の局在の質的量的な多様性が明らかになった。さらに網膜変性疾患に対する細胞治療のソースとしての色素上皮細胞の脱分化のしくみの一端が明らかになった。いずれも、将来の臨床応用につながる重要な基礎研究の成果である。初年度は、網膜神経節細胞のα型、β型機能分化がより明瞭なフェレットの網膜において、細胞死を促進するpro-apoptotic geneであるBimELと、Hrkの詳細な網膜内分布解析を行った。これまでの研究で、フェレット網膜内では黄斑部と網膜周辺部で視神経切断に抗して生き残る細胞の割合、生き残った細胞のうち視神経軸索を再生する細胞の割合に著しい差があること、また双方とも軸索再生する細胞は細胞体が大きいことが明らかになっている。まず、市販のBimELの抗体が、フェレット網膜で使用可能であることを確かめた。次に、その抗体を用いてフェレット網膜伸展標本を染色した。その結果、正常網膜では、黄斑部、周辺部でBimEL陽性細胞の数、細胞体直径の違いに明瞭な差は見られなかった。現在、視神経切断後網膜での染色を行っている。我々が単離した網膜神経節細胞特異的モノクローン抗体C38の認識抗原分子C38の詳細な組織分布と、生理機能が明らかとなりつつある。NMDA等の細胞死刺激により、その局在がダイナミックに変化することが明らかになってきており、C38分子と細胞死との関連性に注目して研究を進めている。一方、遺伝子産物の絶対量の定量化法の改良を進めた。リアルタイムRT-PCR法、及び比色法を原理とした市販のmRNA定量キットを用いて、ヒト癌由来の細胞株SW620とHelaにおける癌抑制遺伝子p53 mRNAの定量化を行った。この2つの方法による定量結果には、強い相関関係が認められた。この結果は、切片上の定量化データの検証を行う上で必要不可欠なデータである。さらに、私たちが行っている切片のin situ hybridization法は、計算上1細胞あたり1 copyのmRNAを検出する感度を備えていることも検証できた。最終年度は、主としてラット網膜と培養細胞において、細胞死を促進するpro-apoptotic geneであるHrkの詳細な発現パターンと細胞死誘導機能との関連性が明らかになった。Hrkノックアウトマウスの組織標本を用いて、まず複数の市販の抗Hrk抗体の品質を評価したところ、特異性が高く使用に耐えうる製品が見出されたので、免疫組織化学染色を行った。その結果、網膜神経節細胞では、その局在する蛋白質の絶対量は低かった。このことは、Hrkを発現しない神経系培養細胞にHrk-cDNAをtransfectionして免疫染色した結果が、高い染色性を示すことからも支持された。この培養細胞の実験では、抗体の染色性が高く、発現量の多い細胞ほど細胞死に至る傾向が見られたので、Hrkの発現上昇により網膜神経節細胞が細胞死に至るという我々の仮説を裏付ける結果となった。我々が単離した網膜神経節細胞特異的モノクローン抗体C38の認識抗原分子C38の網膜における詳細な組織分布と、網膜神経細胞の成熟に関与するという機能が明らかになった。視神経切断後に、その発現量が減少することが明らかになっているので、細胞死との関連性について引き続き解析を進めている。一方、組織切片上の遺伝子産物の絶対量の定量化法の実用化に向けた改良を進めた。これまでに、陰性対照用に行う、組織切片のRNase処理について、標本中の標的RNAを完全に消化分解できる条件を決定することが出来た。その条件は、臓器によって異なることが明らかになり、定量化の条件設定において、組織別、細胞別に、詳細な条件検討が必要であり、注意を要することが示唆された。
母体運動負荷による胎児Well beingの評価(胎児循環制御機構からの検討)

産科的に異常のない妊娠20週から36週のボランティア妊婦48例を対象に、自転車ergometerによる運動負荷ならびにVibrory acoustic stimulation test(VAST)を行い、胎児循環変化を観察した。運動強度は4070%maximal HR(≒%VO_2 max)まで段階毎に検討し、胎児循環動態の指標には臍帯動脈、胎児中大脳動脈、胎児下行大動脈、胎児外腸骨動脈の血流速度波形の測定より算出したresistance index(RI)、胎児心拍数(FHR)ならびにB-modeによる胎児心機能計測から、ejectiontime(ET)、filling time(FT)、stroke volume(SV)、cardiac output(CO)を算出し使用した。その結果、運動負荷により、FHRは妊娠中期(2032週)で平均5.2bpm、後期(3236週)で平均17.7bpm増加し、VASTではそれぞれ平均3.4bpm、14.6bpm増加した。また、50%maximal HR以下の運動負荷ではFHRに有意な変動を認めなかった。両者の刺激に対しETは変動せず、FTはいずれも妊娠後期で有意に短縮した。運動負荷ではSV、COはそれぞれ増加傾向を示し、運動強度とCOの運動による変化率には正の相関が認められた。VASTでは妊娠後期の対象でFHRの増加、FTの短縮に伴いSVが低下し、COは一定に保たれたが、中期の対象では有意な変動を認めなかった。妊娠後期の対象では、運動中のCOと中大脳動脈RIには正、外腸骨動脈RIには負の相関が認められた。以上の結果、運動負荷では、胎児心臓は陽性の変力作用を受け、妊娠後期の胎児では、運動による増加した心拍出量に対し、末梢循環では血流量が増加し、脳循環では血管抵抗が亢進することから、autoregulationの作動が示唆された。また、妊娠中期では胎児responceは低く、胎児内の血流分配からもその循環制御機能の未熟性が推察された。母体運動負荷はVASTと異なり胎児血流再分配からそのwell beingを評価することが可能で、かつ、妊娠中期における循環制御の未熟性をも指摘し得た。(1)運動負荷、VASTによりFHRは約15bpm増加し、ETは変動せず、FTは有意に短縮した(p<0.05)。(2)VASTではFTの短縮により左室で拡張末期心室径、ならびにSVが低下したが(p<0.05)、運動負荷ではFT短縮にもかかわらず、拡張末期心室径は不変で、両心室ともSVは増加傾向を示した。(3)COは運動負荷により約150ml/min増加したが(p<0.05)、VAST前後では有意な変化を認めなかった。また、50%VO_2 max未満の運動負荷ではCOに有意な変化を認めなかった。(4)母体運動強度とCO増加率には正の相関を認め、運動中増加したCOと中大脳動脈RIには正、外腸骨動脈RIには負の相関が認められた(p<0.05)。VAST後の胎児ではFHR増加に対しSVが減少し、COが一定に保たれた。一方、運動負荷ではSVが変動せず、FHR増加に伴いCOが増加し、運動負荷により胎児心臓が陽性の変力作用を受けることが推察された。また、40%から70%VO_

2 maxの運動負荷では、増加した胎児心拍出量に対し、胎児末梢循環では血流量が増加し、脳循環では血管抵抗が亢進することから、auto regulationの作動が示唆された。産科的に異常のない妊娠20週から32週のボランティア妊娠18例を対象に、自転車ergometerによる運動負荷を行い、胎児循環変化を平成7年度に行った妊娠32週以降の胎児と比較した。なお、運動強度は平成7年度の検討から60%maximal HR(≒60%VO_2 max)を目標とし、同一条件を設定した。胎児循環動態の指標には臍帯動脈、胎児中大脳動脈、胎児下行大動脈、胎児外腸骨動脈の血流速度波形の測定より算出したresistance index(RI)、胎児心拍数(FHR)ならびにB-modeによる胎児心機能計測から、ejectiontime(ET)、filling time(FT)、stroke volume(SV)、cardiac output(CO)を算出し使用した。(1)妊娠32週以降の母体運動強度が平均58.5%maximal HRに至った運動条件では、平均64.1%maximal HRとなり、妊娠週数が若いほど、運動強度が増加する傾向であった。(2)FHRは平均150.3bpmから運動負荷により平均152.5bpmと変動なく、ET、FTも変動を認めなかった。(3)妊娠32週以降の胎児ではSV、COが運動負荷により増加したが(p<0.05)、今回の対象ではいずれも有意な変化を認めなかった。しかし、母体運動強度とCOの運動による変化率には正の相関が認められ、わずかな変化でも母体運動と胎児循環が関連していることが推察された。(4)妊娠32週以降の胎児では運動中のCOと中大脳動脈RIには正、外腸骨動脈RIには負の相関が認められたが(p<0.05)、今回の対象では有意な関係は認められなかった。妊娠中期(20週から32週)では後期(32週以降)に比べ、同一運動を行った場合、母体運動強度は増加する傾向であった。しかし、胎児responceは低く、胎児内の血流分配からもその循環制御機構の未熟性が推察された。産科的に異常のない妊娠20週から36週のボランティア妊婦48例を対象に、自転車ergometerによる運動負荷ならびにVibrory acoustic stimulation test(VAST)を行い、胎児循環変化を観察した。運動強度は4070%maximal HR(≒%VO_2 max)まで段階毎に検討し、胎児循環動態の指標には臍帯動脈、胎児中大脳動脈、胎児下行大動脈、胎児外腸骨動脈の血流速度波形の測定より算出したresistance index(RI)、胎児心拍数(FHR)ならびにB-modeによる胎児心機能計測から、ejectiontime(ET)、filling time(FT)、stroke volume(SV)、cardiac output(CO)を算出し使用した。その結果、運動負荷により、FHRは妊娠中期(2032週)で平均5.2bpm、後期(3236週)で平均17.7bpm増加し、VASTではそれぞれ平均3.4bpm、14.6bpm増加した。また、50%maximal HR以下の運動負荷ではFHRに有意な変動を認めなかった。両者の刺激に対しETは変動せず、FTはいずれも妊娠後期で有意に短縮した。運動負荷ではSV、COはそれぞれ増加傾向を示し、運動強度とCOの運動による変化率には正の相関が認められた。
新しい機能性材料創生をめざした希土類の総合的研究

近年、酸化物高温超伝導体の発見等により希土類の知名度は高まって来ているが、今なおこれらの元素群の本質の理解には程遠く、用途も限られた分野にのみ散見される。そこで、本研究では希土類の持つこれまでに知られていない側面を整理すると共にこれらを活用した新しい材料を生み出す第一歩となることを目指す。希土類が重要な役割を担っている分野について現状を調査し、新たに進むべき方向を見い出し、さらに研究を実施すべき具体的な課題を明らかにするため、それぞれの分野の専門家21名とアドバイザ-2名による全体会議が開催された。希土類元素の高純度化と新しい分離プロセスの開発に関しては、液体アンモニアによる金属の精製、協同効果抽出剤としてのカルボン酸の利用、および新規な乾式分離法等が提案された。新しい希土類無機化合物の探索においては、スカンジウム錯体、2価状態の化合物、および異核二核錯体の合成の可能性が示唆された。希土類有機金属化合物の合成については、種々の希土類反応剤を用いる新しい反応の発見や新規な合成手段の開発の可能性が示された。希土類を含む複合酸化物の合成と物性に関しては話題となっている高温超伝導体開発の基礎となったペロブスカイト類縁化合物の構造、希土類添加ジルコニアの物性、人工歯根材料への応用、希土類リン酸塩鉱物の性質等に関する報告がなされた。新しい希土類合金系の開発においては、希土類添加アルミニウム合金および耐熱合金の合成・物性について紹介されると共に、アモルファス希土類合金薄膜の機能性材料への応用の可能性についても示された。また、希土類を用いた触媒として、天然ガス機能化触媒および低原子価化合物を含む金属系触媒の将来性について説明がなされた。本研究グル-プは本総合研究遂行のために結成されたものであるが、より組織を強化し、重点領域研究等へ発展させることを目指す。
癌における転写ネットワーク変異の体系的解明

癌における転写調節異常の体系的解明を行うために、SNPアレイ、タイリングアレイなどのゲノム解析技術を応用した。1)ゲノムコピー数解析SNPタイピングアレイを応用してアレル別にコピー数を測定する手法GenomeImbalance Mapを開発した(Ishikawa, 2005)。ヘテロ接合性の消失(LOH)や片親性ダイソミー(UPD)を判定するために有効であり、1アレル分のシグナル差を検出できるので正常組織の混入が避けられない臨床材料からでも効率よくホモ欠失領域を検出できた。肝細胞癌で8p23領域にあるCSMD1遺伝子のホモ欠失が検出された。また、本技術を健常者のコピー数多型(CNV)の解析に応用して初のCNVマップを報告した(Redon, Ishikawa, Nature 2006)。2) DNAメチル化解析DNAメチル化は遺伝子の不活性化機構として注目されていたが、ゲノムワイドに検出する手法の確立が望まれていた。抗メチルシトシン抗体を用いてメチル化CpGを含むDNA断片を捕捉し、ゲノムタイリングアレイを用いて検出する手法を開発した。高CpG領域はPCR増幅のバイアスが顕著であるため、in vitro転写法による増幅を行うことによって再現性の高いシグナルが得られた。メチル化領域はヒストンアセチル化と排他的であることを観察できた(Hayashi, 2007)。3)転写ネットワークの解析遺伝子発現プロファイルデータから共発現する遺伝子を抽出して活性化されたネットワークを推定した(Agg arwal, 2006)。さらにタイリングアレイを用いて転写因子が結合部位を検出し、直接標的となる遺伝子を同定した。また、ヒストンアセチル化やメチル化修飾をゲノムワイドに検出することが可能となった。染色体のインスレーターといわれるCTCFがコヒーシンと共局在することを発見し、クロマチンループ形成にかかわると推定さた(Wendt, Nature 2008)。がんの発生、進展過程についての解明、とりわけ転写ネットワークに生じた変異の体系的解明するために、遺伝子発現プロファイル、メチル化、染色体増幅および欠失についてそれぞれを個別に解析るのではなく、これらの解析を体系的に行ってデータを統合することにより、がん化のプロセスを明らかにすることを進めた。1.臨床ゲノム学的解析1)発現プロファイル解析脳腫瘍、肝細胞癌、前立腺癌、肺腺癌、膵癌について合成オリゴヌクレオチドアレイ解析Affymetrix社GeneChip、GE杜CodeLinkアレイを用いて最大4万を越える遺伝子の発現プロファイル解析を行った。必要に応じてマイクダイセクションを行った。2)ゲノムコピー数の解析アレル別コピー数の測定法を開発し、10万箇所(平均25kb間隔の解像度)のプローブを測定可能である。肝細胞癌、肺小細胞癌について合成オリゴヌクレオチドアレイを用いてゲノムコピー数の異常について解析を行い、染色体増幅、欠失を容易に同定した。3)メチル化解析大腸癌細胞株HCT116を用いて抗メチル化シトシン抗体によりメチル化されたDNA断片のみを回したのち、ゲノムタイリングアレイを用いて由来する領域を同定する手法をほぼ確立できた。バイサルファイト処理によりメチル化の存在を実際に確認した。2.転写調節遺伝子の同定と機能解析1)共発現する遺伝子群の調節領域配列の解析共通の発現制御を受ける遺伝子群において、転写開始点前後のゲノム配列中においての結合配列の出現頻度の超幾何分布を求めることにより、特定の転写因子による制御の関与を推定した。2)クロマチン免疫沈降転写因子結合配列の同定するためにChIP on Chip解析の実験手法の確立に着手した。

がんの発生、進展過程についての解明、とりわけ転写ネットワークに生じた変異の体系的解明するために、遺伝子発現、メチル化、染色体変異、さらに転写因子の結合及びクロマチン修飾を体系的に行ってデータを統合することにより、測定法及びデータ統合法の開発を進めた。1.臨床ゲノム学的解析1)発現プロファイルとアレル別ゲノムコピー数の解析脳腫瘍、肝細胞癌、子宮体癌、肺小細胞癌について遺伝子発現解析およびアレル別コピー数解析を行った。染色体コピー数と遺伝子発現量には正の相関が認められ、発現プロファイルの解釈にはコピー数を考慮することの必要性を示した。肝細胞癌、肺小細胞癌、グリオーマの臨床検体において染色体ホモ欠失領域も同定され、当該領域に存在する癌抑制遺伝子候補分子の機能解析に着手した。2)網羅的メチル化解析大腸癌細胞株HCT116、SW480、DLD1を用いてメチル化されたゲノムDM断片のみを抗メチル化シトシン抗体により沈降、回収し、増幅、biotin標識後、ゲノムタイリングアレイを用いてメチル化されたゲノム領域を同定する手法を確立した。バイサルファイト処理によりCpGメチル化を実際に確認した。同時にヒストンH3およびH4のアセチル化を測定したところ、DNAメチル化とは逆の分布が認められた。HCT116細胞を5-azaC処理後に発現上昇した遺伝子について、その上位10遺伝子中9遺伝子の転写開始点近傍に高度のメチル化が検出された。2.転写調節遺伝子の同定と機能解析1)共発現する遺伝子群の解析データベースから抽出された組織特異的発現遺伝子セット情報を用いて、腫瘍の細胞系譜あるいは組織由来についての推定に成功した。2)転写因子結合とクロマチン修飾転写因子結合とヒストン修飾の関係を明らかにするために、ChIP(クロマチン免疫沈降)on chip解析によりp53結合とヒストンH3/H4のアセチル化、H3のメチル化を検討した。1.臨床ゲノム学的解析発現プロファイルとアレル別ゲノムコピーの解析肝細胞癌で高発現するSp5がβ-catenin標的遺伝子であること(Chen,BBRC)、CCHCジンクフィンガー遺伝子であるLIN28Bがlet-7の標的であること(Guo,Gene)を報告した。脳腫瘍、肝細胞癌、子宮体癌、肺小細胞癌についてのアレル別コピー数解析により、染色体ホモ欠失領域が同定され、当該領域に存在する癌抑制遺伝子候補分子の機能解析に着手した。