hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アドホックネットワークサービス環境形成技術に関する研究

2.セキュリティ/プライバシー管理ネットワークセキュリティ/プライバシーの観点から,ユーザが自分の個人情報に対して自由にアクセス権限や匿名化を制御できるプライバシー保護システムアーキテクチャP3HRのプロトタイプシステムを構築した.また,無線アドホックネットワークの不安定な接続性の環境下で、end to endのルートを確保せずに、hop by hopでバッファリングとルーチングを繰り返しながら,最終宛先ノードにメッセージを届送りける2種類のDTNルーチング方式((1)移動端末用ルーチング方式PRMP、(2)DTN向きハンドオーバ型ルーチング方式HDRP)を提案した.さらに,あらかじめネットワークの幅輳状態を予測し,セキュアな経路制御を確立する方式の検討も行った.3.アプリケーション構築技術マルチホップワイヤレス環境では,品質の良い経路を発見するためにはより多くの経路制御メッセージを広告する必要がある.そこで,経路選択のための広告メッセージ数の抑制と通信路の品質確保の両立を目指すパラメータを導入した新しい経路選択アルゴリズムを提案した.また,アドホックアプリケーションにおいて重要となる位置測位に関して,無線LANの電波強度を用いた低コストな位置測位方式を提案し,実環境での実験により有効性を明らかにした.4.ネットワークモデリングと性能評価アドホックネットワーク環境において,ネットワーク構成の動的変化や端末多様化に対応する性能評価モデルとして,ユーザの単独行動ならびにユーザ間の関係性を考慮したモデルを構築し,ユーザ間の関係性や協調行動,利用アプリケーションがQoSに与える影響を検討した.アドホックネットワークサービス環境形成技術に関して,以下の四つの観点から研究を進めた1.アドホックネットワークの課金管理アドホックネットワークサービスにおいて中継に対する対価として謝金を支払うことが考えられる.しかし,ユーザの通信に対する支払意思額より中継に対する受取意思額の方が高い傾向にある.
自己白血病・リンパ腫細胞を障害するIL-2活性化リンパ球:臨床応用上の問題点

正常ドナーおよび患者末梢血単核細胞をインターロイキン2(IL-2)2,500U/mlで5日間培養すると強いLAK活性が誘導され, 90%以上の症例で自己の白血病細胞や悪性リンパ腫細胞に対する障害が認められた.しかし培養期間が長くなるにつれてLAK活性は低下した.2.LAK細胞による正常細胞の障害作用について.5日間培養した後収穫したLAK細胞に自己末梢血正常単核細胞障害作用を認めた. Bリンパ球と単球がTリンパ球やlarge granularlymphocyteよりもLAK感受性が高く,非刺激細胞よりも芽球の方が感受性が高い.IL-2で3日間培養したリンパ球には顆粒状/マイクロファージのコロニー形成を抑制する働きがある.4.抗体産生能に及ぼすIL-2活性化リンパ球の作用.pokeweed mitogenによる抗体産生系にIL-2で活性化したリンパ球を添加すると,少なくとも半数以上のドナーで抗体産生の抑制をみる.この実験は現在進行中ではあるが,サプレッサー能の誘導がIL-2で起こる可能性を示唆している.5.染色体異常について.IL-2で24週間培養したリンパ球の染色体を調べた所, 11人中1人で単クローン性の異常を認めた.以上の研究成果は, LAK細胞の臨床応用が十分慎重に進められねばならないことを強く示唆している.正常ドナーおよび患者末梢血単核細胞をインターロイキン2(IL-2)2,500U/mlで5日間培養すると強いLAK活性が誘導され, 90%以上の症例で自己の白血病細胞や悪性リンパ腫細胞に対する障害が認められた.しかし培養期間が長くなるにつれてLAK活性は低下した.2.LAK細胞による正常細胞の障害作用について.5日間培養した後収穫したLAK細胞に自己末梢血正常単核細胞障害作用を認めた. Bリンパ球と単球がTリンパ球やlarge granularlymphocyteよりもLAK感受性が高く,非刺激細胞よりも芽球の方が感受性が高い.IL-2で3日間培養したリンパ球には顆粒状/マイクロファージのコロニー形成を抑制する働きがある.4.抗体産生能に及ぼすIL-2活性化リンパ球の作用.pokeweed mitogenによる抗体産生系にIL-2で活性化したリンパ球を添加すると,少なくとも半数以上のドナーで抗体産生の抑制をみる.この実験は現在進行中ではあるが,サプレッサー能の誘導がIL-2で起こる可能性を示唆している.5.染色体異常について.IL-2で24週間培養したリンパ球の染色体を調べた所, 11人中1人で単クローン性の異常を認めた.以上の研究成果は, LAK細胞の臨床応用が十分慎重に進められねばならないことを強く示唆している.正常ドナーおよび患者末梢血単核細胞をインターロイキン2(IL-2)2,500U/mlで5日間培養すると強いLAK活性が示され、90%以上の症例で自己の白血病またはリンパ腫細胞に対する障害が認められた。しかし培養期間が長くなるにつれてLAK活性は低下した。2.IL-2で増殖した細胞の表面マーカーについて。IL-2で24週間培養した細胞の6080%はTリンパ球,2040%は、natural killer(NK)細胞であった。2重蛍光染色を行うと、CD【3^+】細胞の多くはCD【8^+】で、Leu-【15^+】細胞が多数を占めていたことから、このCD【3^+】【4^-】【8^+】【11^+】細胞がサプレッサー能を有している可能性が示唆された。サプレッサ一能の有無に関しては現在検討中である。たまたま、増殖している細胞の中で、CD【3^+】【4^-】【8^-】分画の細胞が多くを占める正常例を見出し、同様の実験を計10名の正常者で試みたところ、2名でCD【3^+】【4^-】【8^-】細胞の増殖を認めた。3.染色体異常についてIL-2で24週間培養したリンパ球の染色体異常の有無を調べたところ、11人中1人で単クローン性の異常を認めた。残りの5人で認められた異常はartifactの可能性も否定出来ない。4.LAK細胞による正常細胞の障害作用について。5日間培養した後収穫したLAK細胞に、自己末梢血正常単核細胞障害作用を認めた。このキラー活性のエフェクターはNK細胞ではなくキラーT細胞であり、標的細胞としてはB細胞と単球がT細胞NK細胞よりも感受性が高いことを見出した。以上の点は、LAK細胞の臨床応用が十分慎重に進められねばならないことを強く示唆している。
テキスト独立型筆者認識システムの研究

1.研究に必要なハードウェア及びソフトウェアのマニュアルを購入した。2.汎用機で実現していた筆跡に基づく識別照合論理をワークステーションに移植した。3.「筆者情報の視覚化」プログラムを新たにワークステーション上にC言語で開発した。これはデータベース内の筆記者、文章を指定すると特徴次元の相対頻度分布を表示し、更に特徴番号を指定すると特徴パターン及びそれが現れる部分に色付けするものである。そこで次の点を検討確認した。1)同一筆者の同一文章に現れる特徴は同じか。:同一筆記具で書かれていれば殆ど同様に現れる。しかし筆記具が異なり太さが異なるような文字の文章にたいして円弧の頻度は一様に多くなる。2)同一筆者の異なる文章に現れる特徴は同じか。:同一筆者の異なる文章はひらがなやカタカナ、漢字などの字種の混ざり具合が同一程度なら同様な特徴頻度の分布になる。漢字が多く入っている場合は縦線部分や横線部分の特徴が多くなる。3)異なる筆者による同一文章に現れる特徴はどの程度異なるか。:異なる筆者による同一文章に現れる特徴は異なる特徴分布をする。即ち局所円弧特徴は、右上がり、左上がり、湾曲性などの個人性情報を把握している。これまで、局所円弧特徴による認識の結果を認識率で数値的に表しその有効性を主張してきたが、筆記具による違い、平仮名と漢字の混ざりかたの異なる文章による違いなどが視覚的に確認できるものとなった。その結果、問題点として太さ対策が不十分であることが分かった。
農業経営の事前的診断のための情報処理方法の開発

1.畑作と酪農からなる複合農業経営をモデルに、いわゆる事前的診断システムとしての経営ゲームを構想し、コンピュータシステムを試作開発した。不確実性を伴う事前情報には、過去20年に及ぶ収量分布を組み入れ、作物収量は発生型を確率的に定めるシミュレション技法を適用した。個別的な生産乳量の決定にはストキャステケション技法を採用した。実験的には農業経営の学習モデルとして利用可能なレベルのシュミュレーである。2.ファジィ概念を組み込んだ数理計画法は、曖昧さの設定如何によって変化する計画案を策定出来る事から、事前的な診断に利用できる。輪作条件をファジィとする畑作経営の線形計画分析から、通常の線形計画あるいは目標計画よりは、事前的診断のためのより豊富な情報が得られるという有利さが示された。3.ベースとする集団データを包絡する生産(あるいは費用)フロンティアをとらえ、これを基に個別経営の技術効率を計測する分析法も経営診断手法となる事に着目し、技術効率の測度に関する諸概念及び計測方法に関する課題を整理するとともに、北海道の酪農経営における粗飼料生産データに適用し、具体的に技術効率を計測するとともにフロンティア計測方法による技術効率間に微妙な差異の存在を吟味した。4.投入一産出の事前的診断においては、産出目標をどう定めるかが大切である。従来は投入一産出の確定的な関係を前提にしていたが、経営主の目的達成動機という要素を加味した目標収量決定モデルを検討する必要がある。そこで、方法論的な改善を意図して、ファジィ概念を包摂した線形回帰モデルを提案し、その計測方法を解明した。目標産出量の推計にはファジィ線形計画法が有効である事と、事前的診断では不可欠となる経営主の考え方をいろいろな段階で取り入れながら、目標産出量の計測が出来る事などが明かとなった。1.事前的診断のシステムの1種として、畑作と畜産からなる複合経営の経営ゲームを構想し、生産部門について投入と産出を確定的に関連させる為に基礎的な構造を設計し、プログラムを試作した。さらにこのモデルに不安定性をいかに導入した学習モデルとするかを検討している。2.酪農経営診断のエキスパートシステムを作成する予備的考察として、高野信雄氏による8項目に及ぶ技術評価基準について、指標標本に関する線形判別関数分析を行い、配点の妥当性を調べた。その結果、乳量に影響する技術評価項目では、土壌分析の寄与は殆ど無く、ボデイコンデションや乳牛ストレスの寄与が当初の配点以上に高い事が分かった。エキスパートシステムの構築には一部配点を修正し、それぞれの項目について、項目内での細かいチェックポイントを定める必要があり、これを研究し、利用可能なシステムの構築にかかる予定である。3.不確実性を伴う事前的診断の為の情報として、収量分布のデータにロジスティックを当てはめて、作目毎に第1次の統計的優位性を、また任意の2作目間で計測する第2次の統計的優位性を提示する手法を考案し、適用性のある事を確認した。またこのモデルの延長としてジニー指標をリスクとして評価する数学的な計画法の吟味を行った。なおこれは効用指標関数の制約を受けないモデルなので、事前的な診断方法として研究を深める意義が大きい事の感触を得た。1.畑作と酪農からなる複合農業経営をモデルに、不確実性を伴う事前情報には、過去20年に及ぶ収量分布を組み入れ、作物収量は発生型を確率的に定めるシミュレション技法を適用し、いわゆる事前的診断システムとしての経営ゲームをコンピュータシステムとして試作開発した。農業経営の学習モデルとして適用実験を行い利用可能性を確認した。

2.ファジィ概念を組み込んだ数理計画法は、曖昧さの設定如何によって変化する計画案を策定出来る事から、事前的な診断に利用できる。輪作条件をファジィとする畑作経営の線形計画分析から、通常の線形計画あるいは目標計画よりは、事前的診断のためのより豊富な情報が得られるという有利さが示された。3.経営の隘路を事前的に探るWHAT-IF型モデルよりも、集団データを包絡する生産(あるいは費用)フロンティアを基に個別経営の技術効率を計測する要領の経営診断手法を提案し、技術効率の測度に関する諸概念及び計測方法に関する課題を整理した。北海道の酪農経営における粗飼料生産データに適用し、具体的に技術効率を計測するとともにフロンティア計測方法による技術効率間に微妙な差異の存在を吟味した。4.投入-産出の事前的診断においては、産出目標をどう定めるかが大切である。投入-産出の確定的な関係を前提にしたエキスパートシステムの限界を痛感する所となり、経営主の目的達成動機という要素を加味した目標収量決定モデルを構想し、方法論的な改善として、ファジィ概念を包摂した線形回帰モデルを提案し、その計測方法を解明した。目標産出量の推計にはファジィ線形計画法が有効である事と、事前的診断では不可欠となる経営主の考え方をいろいろな段階で取り入れながら、目標産出量の計測が出来る事を明かにした。
アメリカ南部例外主義とニューディール政策下における元奴隷のナラティブ

平成30年度、私は「アメリカ南部例外主義とニューディール政策下における元奴隷のナラティブ」という課題名のもと、以下の研究を行った。2018年5月出版の『フォークナー』誌において書評を発表した。これは、Faulkner and Print Culture: Faulkner and Yoknapatawpha, 2015(2017年)は、アメリカ南部例外主義による影響によって危機に瀕した南部(文学)研究を背景としたときに最も光彩を話すという趣旨の書評である。8月31日のテクスト研究学会第18回大会では、「アメリカ南部のオルタナティヴーシムズ,ポー,フォークナーのデジタル・アーカイヴー」という題で研究発表を行った。19世紀から20世紀における南部作家をめぐるデジタル・ヒューマニティの現在を論じたものである。そして、3月15日発行のFLC言語文化論集『ポリフォニア』第3号において、"Echoes of Silence: Old Bayard's Disability in Sartoris/Flags in the Dust"という査読付き論文を発表した。ウィリアム・フォークナーの初期作品と身体障がい理論との接続である。30年度の研究は、南部例外主義をプリントカルチャー論として論じた。この新しい視覚は、ニューディール期の議論にとっても重要になるだろう。おおむね順調に進展していると述べたのは、プリントカルチャー論という新しい視角を獲得し、それをもって国際学会での発表に成功したからだ。一方、おおむね、と述べざるを得なかった理由は、元奴隷のナラティブに関するフレームワークについては確立できたが(プリントカルチャー論の一端として)、その議論についてはまだ発表できてきないからだ。最終年度では、その部分を学術論文として発表する予定である。今後の研究については、アメリカ南部例外主義をプリントカルチャーという視座から論じることである。その手始めとして、5月の日本英文学会全国大会におけるシンポジウムに登壇し、いかなる文化的構造においてヒルビリーという南部山岳住民像が形成されていったかを明らかにする。次に10月の日本アメリカ文学会では、戦後日本のアメリカ文学研究者が南部をどのように扱っていたかを検証する。3月には、前述の通りニューディール期の元奴隷のナラティブに関する論文を発表する予定である。平成29年度、私は「アメリカ南部例外主義とニューディール政策下における元奴隷のナラティブ」という課題名のもと、以下の研究を行った。先ず2017年11月、アメリカのシカゴで開催されたAmerican Studies Association(ASA)の年次大会にて、“William Gilmore Simms asa Node: Social Network of Antebellum Southern Exceptionalism"というタイトルで研究発表を行った。これは、上記課題名のうち、とりわけアメリカ南部例外主義に焦点をあてながら、19世紀の南部作家William Gilmore Simmsを論じたものである。2016年から立ち上げた読書会のメンバーで構成されたパネルで、それぞれの視角からこの地域の例外主義の問題を照射した。国際学会での発表は30年度以降行う予定であったが、読書会メンバーとの議論が予想以上に発展していったため、29年度で実行するに至った。29年度の研究はアメリカ南部例外主義研究についてのフレイムワーク、意義付けに費やされた。というのも、このトピックの包括する作家、作品は多岐に渡ることが分かったからだ。今後は、ニューディール政策、そしてその時期の元奴隷のナラティブについてより踏み込んで議論することになろう。順調に進展していると述べた理由は、何よりもまず、国際学会での研究発表にまでこぎつけることに成功したからだ。アメリカ研究の最高峰、American Studies Associationでの経験は、今後の研究を方向付けるのに十分なインパクトを持っていた。さらに、アメリカ南部例外主義の読書会では、多角的アプローチの可能性を探ることに成功した。研究計画の段階では見えてこなった通時的、共時的な問題を取り扱うことで、より元奴隷のナラティブというトピックを深化させることができる。一方、おおむね、と述べざるを得なかった理由は、19世紀、20世紀の作家たちの研究に労力を割いたぶん、元奴隷のナラティブそれ自体の深い研究にまでは至らなかったからだ。今後は、更にこの研究を推し進めるため、これまで以上に資料収集に邁進する必要を感じている。

おおむね順調に進展していると述べたのは、プリントカルチャー論という新しい視角を獲得し、それをもって国際学会での発表に成功したからだ。一方、おおむね、と述べざるを得なかった理由は、元奴隷のナラティブに関するフレームワークについては確立できたが(プリントカルチャー論の一端として)、その議論についてはまだ発表できてきないからだ。最終年度では、その部分を学術論文として発表する予定である。本研究課題の今後の推進方策については、以下の二つの方向から考えることとする。一つ目の方向は、研究計画通り、南部諸州に散らばった元奴隷のナラティブの収集と分析を継続することである。そしてもう一つは、有名な南部作家たちとのかかわりのもとで文献収集等を行っていくと同時に、その作家たちについての議論も深めていくことである。昨年度はWilliam Gilmore Simmsについての研究発表を行ったが、今年度はSimmsとEdgar Allan Poeとの関係について、同トピック(アメリカ南部例外主義)を視座として議論する予定である。その舞台は、今年6月21日から4日間京都で開催される国際学会、International Poe and Hawthorne Conference(の二日目、22日)である。さらに、フォークナーについても、論集での執筆依頼があるので、それを8月(予定)頃に提出する予定となっている。Simms,Faulknerという南部を代表する作家たちの研究をさらに推し進めながら、元奴隷のナラティブの研究をより洗練させていく計画である。以上は30年度の研究計画であるが、その後も同様に、国際学会での発表や論文投稿を視野に入れつつ、多角的に研究課題に挑む。今後の研究については、アメリカ南部例外主義をプリントカルチャーという視座から論じることである。その手始めとして、5月の日本英文学会全国大会におけるシンポジウムに登壇し、いかなる文化的構造においてヒルビリーという南部山岳住民像が形成されていったかを明らかにする。次に10月の日本アメリカ文学会では、戦後日本のアメリカ文学研究者が南部をどのように扱っていたかを検証する。3月には、前述の通りニューディール期の元奴隷のナラティブに関する論文を発表する予定である。次年度使用額が0より大きい理由は、旅費の金額が予想よりも低かったことと、ホームページ作成のためのソフトを購入しなかったことである。前者については、旅行した季節が比較的安価になりやすい冬であったことに起因するが、後者については、30年度の成果を待ってから作成したほうが、より洗練されたものになると考えたからである。6月に参加予定の国際学会での反応をもとに、今年の夏に始動させる予定である。
学校週5日制への移行を目指した小学校算数科のカリキュラム開発研究

前年度の研究成果である「月2回土曜休業とした場合の小学校算数科カリキュラム」の開発を踏まえて、本年度は完全な学校週5日制へ移行した場合の算数科カリキュラムの開発を行った。その際、(1)小・中・高校一貫した算数・数学科のカリキュラムを作成する。(2)スパイラル方式の見直しを行い、集約化を図る。(3)授業時数は、学校5日制に対応して、大幅に削減する。(4)重要度を吟味し、必修と選択とに区分する。(5)離散数学や応用数学の導入、電卓・コンピュータの活用、現代化の再評価などを検討し、新たに魅力的な内容を取り入れる。というカリキュラム編成方針の下で、13名の小学校教諭の共同研究者と共に、指導内容だけでなく、各項目毎の具体的内容及び指導時数についても検討を行った。さらに、大幅な変更を伴う内容項目の主要なものについては、実践例も示し、改訂の趣旨が理解しやすいよう配慮した。なお、詳細については、研究報告書(A4版、129ページ)を参照していただきたい。17名の研究協力者を得て、新しい算数科「カリキュラム開発研究委員会」を組織し、月例研究会を開き、1年間熱心に協議を重ねた。平成3年度5年度にわたる3カ年間の私たちの研究「小学校算数科における計算及び見積もり指導の問題点とその改善について」から得られた研究成果を踏まえて、その他の領域である「量と測定」「図形」「数量関係」の指導内容について、徹底した内容の重点化と指導の効率化を行った。これにより、月2回の土曜休業とした場合の時数削減(全体に比例配分した場合、算数科の時数減は、1年11時間、2年13時間、3年6年12時間)に対応したカリキュラムを開発した。このとき、電卓・コンピュータの活用等による指導の効率化を併せ行うこととし、現行の内容水準を維持するようにした。詳細については、「第1年次・中間報告書」(A4判、67ページ)を参照していただきたい。前年度の研究成果である「月2回土曜休業とした場合の小学校算数科カリキュラム」の開発を踏まえて、本年度は完全な学校週5日制へ移行した場合の算教科カリキュラムの開発を行った。
検査・処置を受ける幼児後期の子どもの調整能力発揮への支援プログラム開発と効果測定

本研究は、検査・処置を受ける幼児後期の子どもの調整能力発揮への支援プログラムを開発し、その効果を明らかにすることを目的とした。文献検討および、医療処置のなかでも点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能とその発揮に向けた関わりに対する看護師への面接調査結果を基にプログラムを作成した。プログラム研修を看護師に実施し、研修前後の看護師のケア実践について調査した。その結果、研修後の看護師は、幼児後期の子どもの自己調整機能の発揮に向けた意図的な観察や実践をし、子どもと共にケアを探求する姿勢へと変化していく一方、多忙な中でのプログラム活用方法への検討の必要性が示唆された。本研究の目的は、検査・処置を受ける幼児後期の子どもの調整能力発揮への支援プログラムを開発し、その効果を測定することにある。平成24年度は、「点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの調整能力発揮への支援プログラム」の試案を作成し検討することを目的とし、平成23年度に行った『「幼児の自己調整機能」の概念分析』および『看護師が捉える「幼児後期の子どもの自己調整機能の発揮」への関わり』の結果を基に、「点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能の発揮」に向けた看護介入プログラムを作成した。プログラム内容の作成では、処置時期を、処置前、処置前リハーサル、処置開始直前、処置中穿刺迄、穿刺から抜針または固定まで、処置後の6段階に分け、『看護師が捉える「点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能の発揮」への関わり』で抽出された10サブカテゴリーを処置の経過に沿った項目として設定した。また、処置前から処置後まで常時必要とする4サブカテゴリーを基盤となる関わりの項目として設定した。その上で、概念分析および看護師が語った関わりから具体的な支援内容を抽出しプログラムの手引書を作成した。さらに、合計20項目のプログラム骨子を作成した。プログラム説明のためのツールについては、看護師へのプログラム説明用資料、子どもへの説明用絵本、看護師携帯用資料を作成した。評価指標は、処置前から処置終了までの子どもの行動275コードから、最終44項目を『点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能』の評価項目とし質問紙を作成した。また、介入プログラム骨子の20項目を『「点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能の発揮」に向けた看護師の関わり』の評価項目とし質問紙を作成した。作成した看護介入プログラムと評価指標に対しては、研究者間で内容および表現について検討した。平成25年度は、「点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの調整能力発揮への支援プログラム」の試案の実践とその評価をすることを目的とした。平成25年度は、平成24年度に作成したプログラム試案を適用し、「点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能の発揮」に向けた看護師の実践の内実を明らかにするために、研究への協力を得られた医療機関の小児病棟の看護師11名を対象に調査を行った。調査方法は、研究参加者の看護師が3歳半就学前までの子どもの点滴あるいは採血に関わっている場面の参加観察、観察後の面接調査、子どもの保護者に対する子どもの基礎情報の記述である。また、プログラムの効果を明らかにするために、プログラム試案適用前の通常ケア、プログラム説明後1・2回目の3回の点滴・採血場面を調査する。平成25年度は、研究参加者全員の通常ケアの調査を終了した。その後、プログラム説明用資料、プログラム内容を必要時すぐに確認できる看護師のための携帯用リマインダーを用いてプログラムの説明を行った。また、2名の看護師に対してプログラム試案を適用した実践の調査を行った。プログラム説明後の参加観察と面接から、看護師には、処置を受ける子どもの反応を意識して捉える変化が見られ、嫌だけれども頑張ろうと気持ちが揺れる子どもに出来るだけ寄り添おうとする姿勢が生じていた。また、プログラム実施により、看護師は自分が思う以上に頑張れる力を持つ子どもに気づいていった。現在、調査した参加観察および面接内容を逐語録に起こし質的に分析しつつ、9名のプログラム試案を適用した実践の調査を継続中である。平成23年度は、第1段階として、幼児後期の子どもの自己調整機能の概念を明らかにすること、第2段階として、看護支援プログラムの試案作成に向けて、点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能に注目し、看護師の捉えた子どもの自己調整機能および、子どもの自己調整機能発揮への看護師の関わりを明らかにすることを目的に調査した。第1段階では、国内外文献28件を対象に分析した。

その結果、幼児の自己調整機能は、欲求や意志が他者(社会)のそれらと拮抗・葛藤した時に生じ、自発的・自覚的な目標や意志により自己の行動、感情、心身の状態などを監視し、適切な方向に導くものだった。第2段階では、看護師が捉える点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能、および、看護師が捉える自己調整機能の発揮への看護師の関わりを明らかにするために、小児看護に3年以上従事する看護師13名を研究参加者とし半構成的面接を行い、質的記述的研究方法を用いて分析した。その結果、看護師は、点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能として、子どもが気持ちを主張している姿、葛藤しながらも気持ちを納めようとしている姿、頑張ろうと処置に向かう姿、他者からの評価を受けて頑張れた自己を認識している姿を捉えていた。また、看護師は、点滴・採血を受ける幼児後期の子どもの自己調整機能の発揮に繋がった関わりとして、子どもの自発性の発揮に向けての関わり、子どもを尊重し足場を提供する共同活動としての関わり、共感的フィードバックへの関わりを捉えていた。そして、看護師は、このような幼児後期の子どもの自己調整機能や自己調整機能発揮への関わりを、個々の経験から感覚的に判断しケアに繋げていた。今回明らかになった看護師の経験知から捉えられた自己調整機能を発揮している子どもの姿や看護師の関わりを自覚し、意図的に子どもに関わることの必要性が示唆された。平成26年度は、平成25年度に継続し、「調整能力発揮への支援プログラム」試案の実施とその評価を目的とした。研究の同意が得られた小児病棟・小児外来の看護師に対する点滴・採血場面の参加観察、面接調査、保護者に対する子どもの基礎情報に関する調査を行い、得られたデータを質的記述的研究方法を用いて分析した。研究参加者の看護師は12名であり、その内、複数回の調査を実施できたのは8名であった。また、看護師の小児看護経験年数は平均6.6年であった。プログラム研修前後の看護師の実践は以下の結果であった。1プログラム研修前のケアでは、看護師は子どもを表面的に捉え、言葉で説明して処置への理解を得ようとしていた。また、看護師は、子どもから表出される恐れに囚われたり、医療者主導に流された処置行動などをしていた。2プログラム研修初期の実践では、プログラム内容を失念して普段どおりの実践に終わる看護師がいる一方、プログラム実践へと踏み出せた看護師もいた。しかし、プログラム実施への戸惑いやマニュアル的な実施もみられた。3プログラム研修複数回の実践では、全ての看護師がプログラム内容を意識し実践していた。看護師は、嫌だけれども頑張る子どもの姿を見出し、それぞれの子どもの処置に向かう様子に気づいていった。また、試行錯誤しながらも子どもと応答的に関わったり、子どもの安心の拠り所になるよう関わる看護師もいた。その一方で、子どもの頑張りを支える難しさを感じている看護師もいた。以上のことから、支援プログラムにより、看護師は、幼児後期の子どもの自己調整機能の発揮に向けた意図的な実践へと導かれるとともに、子どもと共にケアを探求する姿勢へと変化していくことが明らかになった。今後は、プログラムの複数回実施に至らなかった研究参加者に対する継続的なデータ収集とともに、多忙な中でのプログラム活用方法への検討の必要性が示唆された。
新規免疫学的バイオマーカーを用いた画期的免疫チェックポイント阻害治療の開発

新規免疫学的バイオマーカーを用いた画期的免疫チェックポイント阻害薬治療の開発を行う本研究では、当初以下の研究計画を立てていた。1.については、平成29年度に既治療非小細胞肺癌を対象としたニボルマブ第II相臨床試験を実施した。平成30年度には、PBMC解析と臨床情報を統計学的に解析した。この結果、多施設前向き研究に於いても良好なPBMC検体を用いることで、CD4 Teff/Tregは抗PD-1抗体奏効のバイオマーカーとなりうることを明らかにした。この結果は、2019 ESMOにて発表予定。2.については、約1年の経過観察を行うことで、CD4 Teffの減少が獲得耐性に繋がることが明らかとなった。長期奏効を得る肺がん患者では、治療前からCD4 Teffが有意に多く、長期生存バイオマーカーと成り得ることを明らかとした。この結果は、特許出願している。3.については、手術前後のearly stage検体、根治的化学放射線治療前後の局所進行肺癌症例検体、EGFR-TKIなどの従来治療前後の検体などの蓄積が進んでいる。当初計画していたPBMCバイオマーカーを用いた第二相臨床試験の統計学的解析を終了することができ、国際学会発表を待つ状態に至っている。免疫チェックポイント阻害薬長期奏効・生存のバイオマーカーとしての意義を明らかにすることができている。CyTOFを用いた解析を加えることで、CD4 Teffとして本研究で用いているCD62LlowCD4+ T細胞は、メラノーマ局所に浸潤し抗腫瘍効果を担っていることが報告されている、CD27- T-bet+ CD62LlowCD4+ T細胞をほぼ正確に示していることが明らかになった。放射線治療によりCD4 Teffが誘導され良好な免疫状態に変化させることが可能であることを証明できている(特許出願中)。本研究の手法により、EGFR-TKI,手術、細胞障害性抗がん剤などの免疫学的影響を解析できることを明らかにできている。stageIIVの肺がん患者末梢血検体を良好なクオリティで凍結保存できている(総数2000検体以上)。irAEとCD4 Teff数の関係について明らかとできている。18色FCM機器を用いたT細胞サブセット解析に加え、mass cytometry(最大40色)での解析が可能となっている。今後は、T細胞間関連解析と臨床効果因果解析など数理学的解析を加えることで、抗腫瘍免疫を表現する指数化を目指す。また、リン酸化アレイを用いたT細胞サブセット毎のシグナル解析、RNAseq解析、メチローム解析による分化評価などを加えることで、免疫を形作るSystem Immunityとしての解析を進める。新たな課題として、分子標的治療薬効果における抗腫瘍免疫の役割を明らかにすることを目指している。新規免疫学的バイオマーカーを用いた画期的免疫チェックポイント阻害治療の開発を行う本研究では、当初以下の研究計画を立てていた。平成29年度に予定通り、既治療非小細胞肺癌を対象としたニボルマブ第二相臨床試験を企画、実施した。この臨床試験において多施設から収集した末梢血単核球(PBMC)検体を用いて新規免疫学的バイオマーカーのバリデーションを行う予定としている。現在までに95名の症例集積を終了しており、平成30年度に解析を行う予定としている。ニボルマブ、ペンブロリツマブ治療を受けている非小細胞肺癌患者を対象として、PBMCを用いたT細胞monitoringを行うコホート研究を実施している。これに加え、放射線治療前後、細胞傷害性抗癌剤治療前後、EGFR-TKI治療前後といった既存肺癌治療がT細胞免疫に及ぼす影響を解析するコホート研究も実施している。PBMCバイオバンク化はすでに進んでいる。TCRレパトア解析、がん抗原エピトープ解析は平成30年度以降に行う予定としている。当初計画していたPBMCバイオマーカー検証を目的とする第二相臨床試験の症例集積は、臨床試験開始後5ヶ月という予測を遥かに上回る短期間に終了している。平成30年度に全体の解析が終了し、平成31年ASCOにおいて研究成果発表を予定している。免疫チェックポイント阻害薬のみでPBMC解析を行う予定としていたが、今後III期非小細胞肺癌化学放射線療法後抗PD-L1抗体治療が保険適応となる予定であることを鑑み、胸部放射線治療により生じるT細胞免疫状態変化を末梢血検体から評価する臨床研究を開始することができた。この解析結果により、放射線治療がT細胞プライミング相に影響を与え、本研究テーマである新規免疫学的バイオマーカーにより評価可能であることが明らかとなってきた。これは、当初予測した以上の成果である。平成30年下半期からは、放射線化学療法後抗PD-L1抗体治療における免疫学的バイオマーカーの性能を検証する臨床試験を行う予定となっている。免疫チェックポイント阻害薬における、長期無増悪生存マーカー開発に着手している。1年以上の検体集積により、長期病勢増悪を認めない患者と末梢血T細胞免疫の相関を評価できる環境が整いつつある。MHC classII拘束性がん抗原エピトープ解析研究についても、手術検体の集積などが進んでいる。

この結果、多施設前向き研究に於いても良好なPBMC検体を用いることで、CD4 Teff/Tregは抗PD-1抗体奏効のバイオマーカーとなりうることを明らかにした。この結果は、2019 ESMOにて発表予定。2.については、約1年の経過観察を行うことで、CD4 Teffの減少が獲得耐性に繋がることが明らかとなった。長期奏効を得る肺がん患者では、治療前からCD4 Teffが有意に多く、長期生存バイオマーカーと成り得ることを明らかとした。この結果は、特許出願している。3.については、手術前後のearly stage検体、根治的化学放射線治療前後の局所進行肺癌症例検体、EGFR-TKIなどの従来治療前後の検体などの蓄積が進んでいる。当初計画していたPBMCバイオマーカーを用いた第二相臨床試験の統計学的解析を終了することができ、国際学会発表を待つ状態に至っている。免疫チェックポイント阻害薬長期奏効・生存のバイオマーカーとしての意義を明らかにすることができている。CyTOFを用いた解析を加えることで、CD4 Teffとして本研究で用いているCD62LlowCD4+ T細胞は、メラノーマ局所に浸潤し抗腫瘍効果を担っていることが報告されている、CD27- T-bet+ CD62LlowCD4+ T細胞をほぼ正確に示していることが明らかになった。放射線治療によりCD4 Teffが誘導され良好な免疫状態に変化させることが可能であることを証明できている(特許出願中)。本研究の手法により、EGFR-TKI,手術、細胞障害性抗がん剤などの免疫学的影響を解析できることを明らかにできている。stageIIVの肺がん患者末梢血検体を良好なクオリティで凍結保存できている(総数2000検体以上)。irAEとCD4 Teff数の関係について明らかとできている。免疫チェックポイント阻害薬治療を受けた患者に特徴的な、無効群、長期無増悪生存群をそれぞれ層別化可能なバイオマーカーとして、PBMCから得られたT細胞分画比率、その細胞群に表出される分子を因子を用いたT細胞免疫評価式の構築を進めている。臨床試験において得られた早期病勢増悪イベント、長期無増悪生存イベントを予測する回帰式としてこれを得ている。この無効群、長期無増悪生存群を示す因子となるT細胞分画及び分子は、抗腫瘍T細胞免疫のクリティカルポイントであると考えられる。上記細胞分画、分子メカニズムをリン酸化シグナルアレイ、メチル化アレイ、ゲノム解析などを用いて明らかにするとともに、これらのクリティカルポイントを制御し、無効型を長期無増悪生存型に変容させることを目的とする治療法について検討をすすめる。長期無増悪生存群を示すT細胞分画が認識するがん抗原エピトープを明らかとし、個別化がんワクチン療法に結びつける。18色FCM機器を用いたT細胞サブセット解析に加え、mass cytometry(最大40色)での解析が可能となっている。今後は、T細胞間関連解析と臨床効果因果解析など数理学的解析を加えることで、抗腫瘍免疫を表現する指数化を目指す。
超親水から超撥水まで濡れ性を制御した高温面上の相変化現象の学理と技術

本研究では,高温面上の液滴の蒸発に及ぼす濡れ性や表面性状の効果を調べるために,濡れ性の制御技術の開発と液滴蒸発に及ぼす濡れ性や表面性状の影響評価実験を実施した.濡れ性と密接な関係がある表面粗さの異なる試料を用いて,液滴蒸発試験を行い,液滴が加熱面と接触する時間は,衝突速度の減少および液滴直径の増加とともに増加すること,液滴の最大広がり直径は,衝突速度とともに増加すること,冷却速度は表面粗さとともに増加することなどが明らかになった.本研究では,高温面上の液滴の蒸発に及ぼす濡れ性や表面性状の効果を調べるために,濡れ性の制御技術の開発と液滴蒸発に及ぼす濡れ性や表面性状の影響評価実験を実施した.濡れ性と密接な関係がある表面粗さの異なる試料を用いて,液滴蒸発試験を行い,液滴が加熱面と接触する時間は,衝突速度の減少および液滴直径の増加とともに増加すること,液滴の最大広がり直径は,衝突速度とともに増加すること,冷却速度は表面粗さとともに増加することなどが明らかになった.本研究では(1)濡れの制御技術の開発と(2)相変化伝熱に及ぼす濡れ性の効果について,集中的に研究を実施している.平成21年度は,(1)については加熱・冷却サイクルによる接触角の変化とそのメカニズムの解明に着手した.常温で予め接触角を測定したステンレスのサンプル板を加熱炉に入れ,窒素雰囲気で600°C程度まで加熱し,常温まで徐冷した後に再度接触角を測定した.加熱前は80°程度あった接触角が加熱・冷却後には3゚程度まで親水化していることを確認した.この表面について,ラマン分光器でスペクトルを調べたところ,加熱・冷却前後で明らかにスペクトル分布が異なることが分かった.次年度以降はXRDやXPSにより表面から数nmの深さ方向の元素分析によりどの物質が濡れを支配しているのかを明らかにする予定である.(2)については,種々の粗さの金属表面を650°Cまで加熱し,マイクロジェットディスペンサーより射出される300700μmの液滴が衝突する挙動を高速度カメラで観察した.そして,固液接触時間と最大広がり直径と加熱面温度,衝突速度,液滴直径との関係を画像解析により求めた.その結果,液滴の衝突速度が増加すると,最大広がり直径は増加するが,固液接触時間は減少することが分かった.ただし,これらの結果は濡れ限界温度付近を境に傾向が異なることが明らかになった.今後は液滴1個が奪う熱量の測定を実施するとともに,伝熱整理式の作成を行う予定である.本年度は当初計画通り,以下の2項目を中心に研究を実施した1.濡れの制御技術の開発いくつかの手法により濡れ性の制御技術を開発しているが,加熱・冷却サイクルによる濡れ性の変化を測定し,重要な知見を得た.SUSの試験片を高温まで加熱して,常温まで戻すと接触角がゼロになる超親水状態が得られる.これを大気中に放置すると20時間ほどで元の接触角まで回復する.試験片を500°C以上に加熱した場合にこの現象が起きること,接触角回復過程でラマン分光によるピークが徐々にシフトし,それと接触角が対応することが明らかになった2.液滴蒸発に及ぼす濡れ性の影響評価8つのノズルを有する液滴噴射系を構築し,600°Cまで加熱したSUS試験片の冷却試験を行った.この噴射装置では,液滴直径,液滴速度,射出頻度を独立に変化させることが可能であり,これまで2次的な因子として,傾向が不明であった液滴径,液滴衝突速度の影響が明らかになった.同じ噴霧流量の場合は,液滴直径が小さい方が伝熱特性が優れている.また,単一液滴が加熱麺に衝突する際の伝熱量を求めることができた.さらに,資料の表面粗さを変えて実験を行ったところ,粗い面の方が伝熱特性が優れていることが明らかになった.また高速度カメラによる衝突時の観察から,表面粗さが大きい面では,液滴の最大広がり直径が小さくなること,衝突時の接触時間も長くなることだどの知見も得られた本年度は,以下の2項目を中心に研究を実施した.1.濡れの制御技術の開発撥水と親水の組み合わせにより,核沸騰を促進する伝熱面の開発を行った.具体的には,酸化チタンコーティング面上に,PTFEの撥水領域を斑点状に作成することにより,撥水領域を良好な発泡点として作用させ,親水領域には液体供給性の向上を担わせるという機能分離を行った.これにより,低過熱度で沸騰が開始し,高熱流束域でも核沸騰の維持が可能となり,沸騰が開始しやすく,限界熱流束(CHF)が従来比で2倍程度まで上昇する理想的な沸騰伝熱面開発の目途が達成できた.2.液滴蒸発に及ぼす濡れ性の影響評価前年度に引き続き,8本のノズルによるマイクロ液滴噴射系により,00°Cまで加熱したSUS試験片の冷却試験を行った.この噴射装置では,液滴直径,液滴速度,射出頻度を独立に変化させることが可能であり,今回の伝熱試験により,これまで2次的な因子として,傾向が不明であった液滴径,液滴衝突速度の影響が明らかになった.同じ噴霧流量の場合は,液滴直径が小さい方が伝熱特性は優れていることが分かった.噴射した液滴の総数を把握できるので,1個の液滴が加熱面に衝突する際の伝熱量を求めることが可能である.

表面の粗さの影響としては,粗いほど伝熱特性が優れていること,衝突時の液滴の広がりも最大となり,その際の接触時間も長くなることなどが高速度カメラによる撮影画像を援用した分析により明らかになった.
ラベル付き・ラベル無しデータを統合的活用する共学習システムの構築方法に関する研究

研究実績は以下のとおり.1.初年度,次年度に検討した,グラフ構造データを対象とする学習アルゴリズム(ラベル付きデータに対するDecision Tree Graph-based Induction (DT-GBI)法,および,ラベル無しデータに対するBeam-wise Graph-based Induction (B-GBI法))実問題に適用した場合,抽出される知識(部分グラフ)は例外を多く含み,正確性に欠けるという問題があった.この問題を解決するため,学習アルゴリズムで抽出した部分グラフを制約として更に活用し,得られた知識(部分グラフ)の精緻化を行う方法を考案し,実装した.2.1.を実現する際,制約として活用する部分グラフの包含関係を確認するために部分グラフの同型問題を解く必要があるが,この問題はNP完全であり,大規模なデータを対象とする場合に計算時間が問題となる.この問題に対し,GBI法はもともとGreedy探索に基づく手法あることを考慮し,正確性よりも高速性を重視し,GBI法を活用した部分グラフ同型問題の近似解法を考案し,実装し,1.の手法に導入した.3.次年度に引き続き,実問題への適用例として,千葉大学医学部付属病院から提供いただいた肝炎データに適用した.各患者の肝臓の線維化程度,肝炎の型(B・C)に加え,新たにインターフェロンの効用予測問題に適用した.DT-GBI法により構築した決定木の分類精度を評価し,また,DTGBI法およびB-GBI法で抽出した部分グラフを1.の手法を用いて精緻化した知識(部分グラフ)の妥当性を,専門家(医師)により評価いただいた.4.本研究課題を通じて開発した手法および得られた知見(UCIのpromoterデータと3.の肝炎データを対象)を整理して海外の学術論文に投稿し,受理された.研究実績は以下のとおり.1.共学習システムを構築する際に用いる学習アルゴリズムとして,グラフ構造データを対象とし,ラベル付きデータに対してグラフ構造に対する決定木構築アルゴリズム,ラベル無しデータに対してグラフクラスタリングアルゴリズムを検討した.2.決定木構築アルゴリズムに対して,データに含まれる部分グラフの特徴に基づいて分類に効果的な部分構造(部分グラフ)を再帰的に抽出し,抽出した部分構造を属性として利用して決定木を構築する手法を検討した.検討した手法は分類に使用する属性をオンラインで構築するため,属性構築の一手法とみますことができる.3. 2.で検討したアルゴリズムを計算機上にプログラムとして実装し,実データ(DNA promoterデータセット)を対象としてその基本性能(分類制度)を検証した.その結果,領域知識を用いて構築した分類器と同等の分類制度を持つ分類器(決定木)が構築されることを確認し,事前に領域知識が得られないデータに対しても分類精度の高い分類器を構築する可能性を示唆した.4. 3.で実装したプログラムが抽出する部分構造(部分グラフ)をラベル無しデータとみなし,部分グラフの構造的類似性に基づくグラフクラスタリング手法を検討した.グラフに含まれる部分グラフの頻度をスペクトルとして表現し,スペクトル間の類似度に基づいてグラフ間の類似度を計測してクラスタリングを行う手法を検討した.人工データを用いた評価実験を通じ,グラフの頂点数や辺数に関して有効であることを確認したが,形状の類似性に対して課題が残ることも確認した.研究実績は以下のとおり.2.1.で実施した性能評価に基づき,DT-GBI法のアルゴリズムを下記の3点に対して改良した.A:DT-GBI法のアルゴリズムにおいて部分構造をボトムアップに成長させるチャンキング操作の適用回数を可変にし,決定木の各ノードで成長させるパターンのサイズを制御可能とする.B:部分構造探索にビーム探索を導入して探索能力を改善する.C:決定木の枝刈り操作を導入し,分類精度向上を実現する.3.2.で実施した3種類の改良を思索したプロトタイプシステムに実装し,それぞれをパラメータとして1.と同じDNAデータベースに適用し,グラフ構造データに対して構築する決定木の精度向上への効果を評価した.また,データ分割のために抽出するパターン(部分構造)と領域知識との整合性を評価し,領域知識に合致した部分構造が抽出されることを確認した.4.さらに,DT-GBI法の実問題への適用例として,千葉大学医学部付属病院から提供いただいた肝炎データに適用した.各患者の肝臓の線維化程度の分類と肝炎の型の分類問題に適用し,3.と同様,DT-GBI法により構築した決定木の分類精度を評価し,良好な予測精度が得られることを確認した.また,抽出したパターンを専門家(医師)により評価いただき,領域知識に合致したパターンが抽出されることも多いが,解釈しにくいパターンもデータの分類に用いられているという課題が残ることを確認した.研究実績は以下のとおり.1.初年度,次年度に検討した,グラフ構造データを対象とする学習アルゴリズム(ラベル付きデータに対するDecision Tree Graph-based Induction (DT-GBI)法,および,ラベル無しデータに対するBeam-wise Graph-based Induction (B-GBI法))実問題に適用した場合,抽出される知識(部分グラフ)は例外を多く含み,正確性に欠けるという問題があった.この問題を解決するため,学習アルゴリズムで抽出した部分グラフを制約として更に活用し,得られた知識(部分グラフ)の精緻化を行う方法を考案し,実装した.2.1.を実現する際,制約として活用する部分グラフの包含関係を確認するために部分グラフの同型問題を解く必要があるが,この問題はNP完全であり,大規模なデータを対象とする場合に計算時間が問題となる.この問題に対し,GBI法はもともとGreedy探索に基づく手法あることを考慮し,正確性よりも高速性を重視し,GBI法を活用した部分グラフ同型問題の近似解法を考案し,実装し,1.の手法に導入した.

3.次年度に引き続き,実問題への適用例として,千葉大学医学部付属病院から提供いただいた肝炎データに適用した.各患者の肝臓の線維化程度,肝炎の型(B・C)に加え,新たにインターフェロンの効用予測問題に適用した.DT-GBI法により構築した決定木の分類精度を評価し,また,DTGBI法およびB-GBI法で抽出した部分グラフを1.の手法を用いて精緻化した知識(部分グラフ)の妥当性を,専門家(医師)により評価いただいた.4.本研究課題を通じて開発した手法および得られた知見(UCIのpromoterデータと3.の肝炎データを対象)を整理して海外の学術論文に投稿し,受理された.
大腸癌における転移制御因子の同定

最近,CXCR4が大腸癌の肝転移にも重要な役割を果たしていることが示唆された.折しも,我々は食道癌細胞を用いて癌の浸潤と転移に重要な遺伝子をマイクロアレイ法で検討したところ,CXCR4を候補遺伝子として同定した(Cancer Sci 94:699-706,2003).そこで本研究では,CXCR4の癌転移に関するメカニズムを解明することを目的とした.ヒト大腸癌培養細胞におけるCXCR4の発現をRT-PCR法でスクリーニングした後,免疫染色法で細胞内発現局在を確認した.CXCR4は7回膜貫通型の受容体であり細胞膜での発現を予測したが,実際には,DLD-1細胞のようにCXCR4が膜発現するものと,HT29細胞のように核発現する細胞があることを見出した.我々は食道癌組織におけるCXCR4の発現も検討しているが,CXCR4が核発現する食道癌は予後が悪いという結果を得ている.したがって,癌細胞におけるCXCR4の核発現を規定する因子を明らかにすることが重要であると考えた.近年,低酸素状態の細胞に誘導される転写因子HIF-1がCXCR4の発現に関与するとの報告がある.そこでHT29細胞を低酸素刺激し,CXCR4の発現を免疫染色法およびFACS法を用いて検討したところ,細胞膜および細胞質のCXCR4発現は増強し,逆に核発現は減弱した.さらに低酸素刺激後のHT29細胞より蛋白質を細胞質成分と核成分に分画抽出し,CXCR4の発現をwestern法で確認したところ,結果は同様であった.他方,細胞過密接触によるCXCR4の細胞内発現局在の変化を検討したところ,HT29細胞におけるCXCR4の核発現は細胞接触が過密になるに従い減弱し,FACS法および核蛋白に対するwestern法でも同様の結果を得た.これらのことより,細胞過密接触または低酸素環境下にある癌細胞はCXCR4を膜に発現させることによりその場での生存を維持し,浸潤の際にはCXCR4を膜に表出せず,細胞接着を解除して転移している可能性が示唆された.現在,ヒト大腸癌組織におけるCXCR4の発現パターンと臨床病理学的因子との関連およびsiRNAを用いたCXCR4の機能解析を継続中である.ケモカインレセプターが癌の転移過程で重要な役割を演じるものと仮定し,(1)早期大腸癌の簇出像に関する病理学的検討,(2)臨床検体におけるCXCR4蛋白発現に関する免疫組織化学を行った.早期大腸癌の臨床病理学的検討からは,簇出と脈管侵襲が重要な因子であることが確認された.しかし癌の明白な転移には,簇出・脈管侵襲・微小転移後のみならず,異所環境での生き残りとその環境への適応が重要である.癌細胞の異所環境への適応をサポートする因子として,炎症・免疫反応に関与する分子(chemokine/chemokine receptor)が深く関っていると考え,CXCR4を標的とした解析を開始した.まず,ヒトCXCR4と蛍光蛋白質GFPの融合蛋白質を発現させるベクターを構築した(pIRES2-EGFP-CXCR4).そのベクターが導入されたヒト培養癌細胞では,蛍光顕微鏡でGFPが確認された.さらにCXCR4が導入された細胞はSDF-1シグナルにより活性化されることをインベーションチャンバーにて確認した.また,抗CXCR4抗体(CXCR4 fusin ; Clone 12G5, BD Biosciences)を用いた予備的検討を免疫組織化学的に行ったところ,食道扁平上皮癌症例の腫瘍細胞や非癌部扁平上皮の傍基底層がCXCR-4陽性を示した.Clone12G5による染色では細胞質と核のいずれかないしは両方に顆粒状の陽性所見を認めたが,CXCR-4の核内陽性像に関する意義は明らかでない.現在,3社からAnti-human CXCR4 fusin monoclonal antibodyが販売されている.大腸癌の簇出像やリンパ管侵襲局所におけるCXCR4蛋白発現の変化を解析するため,アセトンパウダーを用いた免疫沈降にて特異性の高い抗体を選別中である.最近,CXCR4が大腸癌の肝転移にも重要な役割を果たしていることが示唆された.折しも,我々は食道癌細胞を用いて癌の浸潤と転移に重要な遺伝子をマイクロアレイ法で検討したところ,CXCR4を候補遺伝子として同定した(Cancer Sci 94:699-706,2003).そこで本研究では,CXCR4の癌転移に関するメカニズムを解明することを目的とした.ヒト大腸癌培養細胞におけるCXCR4の発現をRT-PCR法でスクリーニングした後,免疫染色法で細胞内発現局在を確認した.CXCR4は7回膜貫通型の受容体であり細胞膜での発現を予測したが,実際には,DLD-1細胞のようにCXCR4が膜発現するものと,HT29細胞のように核発現する細胞があることを見出した.我々は食道癌組織におけるCXCR4の発現も検討しているが,CXCR4が核発現する食道癌は予後が悪いという結果を得ている.したがって,癌細胞におけるCXCR4の核発現を規定する因子を明らかにすることが重要であると考えた.近年,低酸素状態の細胞に誘導される転写因子HIF-1がCXCR4の発現に関与するとの報告がある.そこでHT29細胞を低酸素刺激し,CXCR4の発現を免疫染色法およびFACS法を用いて検討したところ,細胞膜および細胞質のCXCR4発現は増強し,逆に核発現は減弱した.