hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
肝ストレスの動的解析による肝機能障害・予備能の評価

(1)生体レベルで肝へのストレス評価を種々のストレス・マーカーに対する分子機能プローブを作製した。1レドックスに感受性のあるGFPプローブを作製した。2小胞体ストレスにたいするプローブの作製を行った。3細胞死を示す新たなプローブの作製に成功した(ネクロプトーシス)。4生存能を示すプローブ(リン酸化Akt)の作製を試みた。5pH感受性プローブを示すプローブの作製に成功した。(2)それらを細胞実験により検討し、その有効性を確認した。(3)1、5に関しては、小動物実験も行い、生体レベルでの有効性を確認した。1)生体レベルで肝へのストレス評価を種々のストレス・マーカーに対する分子機能プローブを作製した。i)酸化的ストレスを示す発光プローブとして、レドックスに感受性のあるGFPプローブを作製し、さらにルシフェラーゼの基質であるルシフェリンを修飾するにより発光プローブの開発を試みた。ii)小胞体ストレスにたいするプローブ(CHOPあるいはPERKに対する発光による機能プローブ)の作製を行い、CHOPプローブは満足できるプローブが完成したが、PERKプローブに関してはin vitroでの使用に限られた。iii)細胞死を示す新たなプローブの作製に成功した。ネクロプトーシスに関連するRIP1/RIP3の結合に応答する光プローブを作製し、細胞レベルで機能することを確認した。iv)生存能を示すプローブ(リン酸化Aktに対する光プローブ)の作製を試みた。v)pH感受性プローブを示すプローブ(pHに依存してコンフォメーション変化を起こす分子に対して、ルシフェラーゼ再構成法を応用して作製することに成功した。2)細胞実験:細胞ストレス実験による上記プローブの機能の特異性およびシグナル強度の検証により、in vivo使用のためのスクリーニングを行った。1上記のプローブ作製後、マウス非腫瘍性肝細胞株(AML12細胞)をもちいて、プラスミドによりtransient transfectionにより細胞内に導入して、あるいは安定導入株を作製して、光プローブの有効性を確認した。生体レベルでは、刺激によりベースラインのシグナル強度の5ー10倍のシグナルを発する必要があり、細胞レベルでの検討により、必要に応じてプローブのデザインを評価・再検討した。3)小動物実験:GFPプローブ、pH感受性プローブに関しては、マウス肝におけるイメージングに成功した。1)生体レベルで肝へのストレス評価を種々のストレス・マーカーに対する分子機能プローブを作製している。i)酸化的ストレスを示す発光プローブとして、レドックスに感受性のあるGFPあるいはルシフェラーゼの基質であるルシフェリンを修飾するにより発光プローブの開発を試みた。ii)小胞体ストレスにたいするプローブ(CHOPあるいはPERKに対する発光による機能プローブ)を作製しているが、CHOPプローブは完成したが、PERKプローブは生体レベルでの十分なシグナルの確保が困難であり、試行錯誤により改善を試みている。iii)細胞死を示すプローブの作製に成功した。iv)生存能を示すプローブ(リン酸化Aktに対する光プローブ)を作製しているが、生体レベルで利用できる強度が得られていない。2)細胞実験:細胞ストレス実験による上記プローブの機能の特異性およびシグナル強度の検証を行なっている。1上記のプローブ作製後、マウス非腫瘍性肝細胞株(AML12細胞)をもちいて、プラスミドによりtransient transfectionにより細胞内に導入して、あるいは安定導入株を作製して、光プローブの有効性を確認している。生体レベルでは、刺激によりベースラインのシグナル強度の5ー10倍のシグナルを発する必要があり、細胞レベルでの検討により、上記の如く必要に応じてプローブのデザインを評価・再検討している。生体レベルで肝へのストレス評価を種々のストレス・マーカーに対する分子機能プローブを具体的に作製しているが、平成24年度にそのプロトタイプとなる光プローブの開発に成功した。i)レドックスに感受性のあるGFPに関しては、マウス生体レベルにて十分に機能しており、その有用性が確認された。ルシフェラーゼの基質であるルシフェリンを修飾するにより発光プローブの開発に関しては、基礎検討の段階である。ii)小胞体ストレスにたいするプローブ(CHOPあるいはPERKに対する発光による機能プローブ)を作製しているが、CHOPプローブはストレスに対して良好に反応し、ほぼ完成した。PERKプローブは生体レベルでの十分なシグナルの確保が困難であり、試行錯誤により改善を試みている。

ネクロプトーシスに関連するRIP1/RIP3の結合に応答する光プローブを作製し、細胞レベルで機能することを確認した。iv)生存能を示すプローブ(リン酸化Aktに対する光プローブ)を作製しているが、生体レベルで利用できる強度が得られていない。v)pH感受性プローブを示すプローブ(pHに依存してコンフォメーション変化を起こす分子に対して、ルシフェラーゼ再構成法を応用して作製することに成功した。細胞ストレス実験による上記プローブの機能の特異性およびシグナル強度の検証を行なっているが、平成24年度の研究としては予定通りあるいは予定以上の進捗を示したと考えている。細胞実験におけるストレスとしては、以下の実験を検討する。1)酸化的ストレス、2)低酸素、3)高グルコース・ストレス、4)senescence(細胞老化:細胞継代実験により行なう。)。2上記検証実験にて、十分な特異性とシグナル強度をもつプローブに対しては、小動物(肝臓)に導入するために、これらベクターをアデノウィルス・ベクターに組み込む。アデノウイルス・ベクターに組み込まれたプローブをマウス肝に一時的に導入することで、種々の病態における肝へのストレスを、生体イメージングにより生きたままの状態で経時的にフォローすることが可能となる。細胞実験:細胞ストレス実験による上記プローブの機能の特異性およびシグナル強度の検証。1上記プローブに関しては、随時マウス非腫瘍性肝細胞株(AML12細胞)をもちいて、プラスミドによりtransient transfectionにより細胞内に導入して、あるいは安定導入株を作製してプローブの有効性を確認する。生体レベルでは、刺激によりベースラインのシグナル強度の5ー10倍のシグナルを発する必要があり、細胞レベルでの検討により、上記の如く必要に応じてプローブのデザインを評価・再検討する。)。2上記検証実験にて、十分な特異性とシグナル強度をもつプローブに対しては、小動物(肝臓)に導入するために、これらベクターをアデノウイルス・ベクターに組み込む。アデノウイルス・ベクターに組み込まれたプローブをマウス肝に一時的に導入することで、種々の病態における肝へのストレスを、生体イメージングにより生きたままの状態で肝のストレスを経時的にフォローすることが可能となる。主として、細胞実験によるプローブ機能の検証・評価に関わる消耗品に使用する。細胞培養関連試薬、培養液、遺伝子導入試薬に関わる消耗品など。小動物によるプローブの有効性を示すために、マウス購入費用および飼育費用としても使用する。また、同時に研究打ち合わせのための旅費(札幌-東京間)の費用としても使用する。
戦前・戦時期における日本語教育史に関する調査研究

(1)私たちは、戦前・戦時期の日本語教育史に関する研究の現状にかんがみて、従前共通知見となるべき基本文献・史料の調査・収集・整理にとくに重点をおいた。(2)上記の調査・収集に当って、下記のような柱を立てて、これを実施した。1.日本語教育政策の立案・施行に関する文書・文献2.旧植民地・占領統治機関編纂教科書、指導書等の教材文献3.民間編纂にかかわる日本語教科書・自習書・辞書類4.日本語教育の方法・内容に関する理論書・解談書類5.植民地・占領統治にかかわる教育関係文書・法令・文献6.戦前・戦時期日本語教育関係者の日記・回想録等7.同上の生在者についての聞きとり調査(3)上記の調査研究成果のうち、今後の研究の進展に関連してとくに重要と判断される教科書・指導書・自習書・辞典類について、データ・ベースを作成した。(4)上記データ・ベースに基づき、詳細な文献目録を編集刊行し、国内外の研究機関・研究者等に送付し、知見の共有化をはかるとともに、今後の完全な目録作成への基礎を固めることとした。(5)私たちの研究課題を2年間の短期をもって完成することは、困難であることが判明したので、今回の調査研究をステップとして今後下記の研究を企画している。1.日本語教育関係文献目録のさらなる充実化2.日本語教育史に関する研究のより深い展開(1)私たちは、戦前・戦時期の日本語教育史に関する研究の現状にかんがみて、従前共通知見となるべき基本文献・史料の調査・収集・整理にとくに重点をおいた。1.日本語教育関係文献目録のさらなる充実化2.日本語教育史に関する研究のより深い展開本年度は下記のような調査研究を実施した。(1)日本語教育政策史,日本語教育実践史、日本語教育理論史,日本語教育教材史の4研究班を組識し,年2回の全体会議と各班個別の研究会とをもって調査研究活動を展開することとした。(2)本年度は初年度であるので、各班ともに該課題に関する既往の研究論文および関連重要資料の収集と,その目録原稿の作成にまず力点をおくこととした。日本語教育の歴史に関する先行研究論文および基本史料の整備は従来ほとんど進められていなかったからである。(3)とくに,今年度では各研究班共同として,国立国会図書館政治資料部憲政資料室所蔵の植民地教育,日本語教育関係の個人文書史料を系訳的に収集することを実施した。各班共通の研究史料として活用するためである。(4)その他に,長野県内の旧満家・中国への移植民・日本語各教育関係史料,天理大学・京都府総合資料館・神戸外国語大学等所蔵の日本語教育関係史料,北海道大学・小樽商科大学等における日本語教育関係史料等の調査および収集につとめた。(5)明年度における研究のとりまとめについての準備検討のために、3月下旬全体会議を開催した。本年度は、研究計画の最終年度にあたるので、下記のように、2年間にわたる研究を総括した。(1)日本語教育政策史、日本語教育教材中、日本語教育実践史・日本語教育理論史の各班において、史料の調査・収集を精力的に進めた。(2)各班において収集史料を分析・検討し、従来の研究において欠落または不正確な判断を行っていたと考えられる部分に新たな知見を加えることに努力した。(3)各班における上記の研究成果を、2次にわたり開催した総会において報告し、全体の討議を深めて知見の共有化に努めた。(4)上記の研究成果に立脚して、『第二次大戦前・戦時期の日本語教育関係文献目録』を編集・刊行した。(5)上記『文献目録』を、国内研究機関・図書館・文書館・植民地教育または日本語教育に関心をもつ研究者等に送付し、われわれの研究成果を広く公開することとした。(6)さらに、中国、韓国、朝鮮民主主議人民共和国、台湾、香港、シンガポール、マラヤ、フィリピン、インドネシア、タイ、ポリネシアなど、かつて日本政府または日本軍の支配下で日本語教育を実施された国々、および米国、英国、オランダ、オーストラリア、インドなど日本語教育に関心をもつ国々の、各研究機関・図書館・個人研究者に送付し、われわれの調査研究の批判をあおぐとともに、研究の交流を進めることに努めた。
ナノ粒子化は脂質の酸化を遅延させる

ナノ粒子を調製する技術が進展し,粒子の微細化に伴って生起する現象の実験的な検討が可能となった.不飽和脂肪酸を含む液状脂質を油相とする水中油滴(O/W)型エマルションでは,一般的には,油滴の微細化により比表面積が増加するために酸化が促進されると考えられているが,微細化による相対的な界面活性剤疎水基の増加に伴う脂質濃度の低下およびラジカルによる連鎖の及ぶ脂質分子の確率的低下により,脂質の酸化は抑制されるとも予測できる.この推論の実験的な検証を主目的とした.まず,ミセル系からO/W型エマルション系にわたり分散粒子径が大きく異なる系での脂質酸化を測定し,粒子径が極めて微細なミセル系では粒子サイズが小さいほど酸化速度が遅くなることを見出した.この現象は,当初予測した界面活性剤の疎水基による脂質の希釈に基づいて説明できると考える.さらに,O/W型エマルションを食品高分子で被覆して調製した粉末化脂質においても油滴径が小さいほど酸化が遅延され,かつ酸化が実質的に停止するときの未酸化率が高いことを見出した.後者の現象を確率論的な浸透理論に基づいて合理的に解析した.また,油相への酸素の分配係数に及ぼす油滴径の影響を検討するための基礎的な知見として,脂肪酸組成の異なる各種の油脂への酸素の分配係数を簡便に測定する方法を開発し,油相への酸素の分配係数を温度の関数として詳細に測定した.また,油脂が液体から固体に変化しても分配係数の不連続的な変化は起きないと解釈できる結果を得た.攪拌式または高圧式ホモジナイザーの組合せおよび操作条件を適当に調整することにより,リノール酸メチルを油相として乳化剤などの組成が同一で油滴径のみが数10nmから数μmの範囲で異なるO/WI型エマルションを調製した.このエマルションを40°Cの恒温に保持し,リノール酸メチルの未酸化率,酸素の消費量および油滴径の経時変化を測定した.油滴径が小さいほど,酸化の誘導期が短くなったが,自触媒型速度式基づいて算出した速度定数は油滴が微細化すると小さくなった.これらの傾向は,油滴径が100nm以下の領域で顕著であった.油滴の微細化に伴って酸化速度定数が小さく酸化が遅延される現象は,当初の予想と合致し,乳化剤の疎水部が油相に投錨することによりリノール酸メチル(基質)が希釈される効果によると推測される.しかし,誘導期の短縮はこの効果では説明できず,今後解明すべき課題である.リノール酸メチルの酸化過程で消費される酸素の物質量は,酸化の前半ではほぼ1:1の量論関係であったが,酸化の後半では著量の酸素が消費された.この現象はバルク系におけるリノール酸メチルの酸化過程における挙動と同じであり,油滴径には依存しなかった.また,初期油滴径が数10nmの場合には,リノール酸メチルの酸化に伴って,油滴径は大きくは変化しなかった.一方,初期油滴径がサブミクロンからミクロンのときにはリノール酸メチルの酸化に伴い油滴の合一が進行し,油滴径が大きくなった.このように,酸化過程でのエマルションの分散安定性が初期油滴径に依存する現象を見出した.ナノ粒子を調製する技術が進展し,粒子の微細化に伴って生起する現象の実験的な検討が可能となった.不飽和脂肪酸を含む液状脂質を油相とする水中油滴(O/W)型エマルションでは,一般的には,油滴の微細化により比表面積が増加するために酸化が促進されると考えられているが,微細化による相対的な界面活性剤疎水基の増加に伴う脂質濃度の低下およびラジカルによる連鎖の及ぶ脂質分子の確率的低下により,脂質の酸化は抑制されるとも予測できる.この推論の実験的な検証を主目的とした.まず,ミセル系からO/W型エマルション系にわたり分散粒子径が大きく異なる系での脂質酸化を測定し,粒子径が極めて微細なミセル系では粒子サイズが小さいほど酸化速度が遅くなることを見出した.この現象は,当初予測した界面活性剤の疎水基による脂質の希釈に基づいて説明できると考える.さらに,O/W型エマルションを食品高分子で被覆して調製した粉末化脂質においても油滴径が小さいほど酸化が遅延され,かつ酸化が実質的に停止するときの未酸化率が高いことを見出した.後者の現象を確率論的な浸透理論に基づいて合理的に解析した.また,油相への酸素の分配係数に及ぼす油滴径の影響を検討するための基礎的な知見として,脂肪酸組成の異なる各種の油脂への酸素の分配係数を簡便に測定する方法を開発し,油相への酸素の分配係数を温度の関数として詳細に測定した.また,油脂が液体から固体に変化しても分配係数の不連続的な変化は起きないと解釈できる結果を得た.
気道平滑筋に及ぼす環境変化と麻酔薬との相互作用ならびに作用機序の解明

提出した研究計画に従い,本年度は気道平滑筋収縮に対する環境変化,とくに低温暴露の影響について観察した.研究費は低温環境を作製するためにバイオウォーマー(ナリシゲ)を購入したほか,単離細胞等を作製する際に必要な消耗品等に充当した.本年度は前年度の平滑筋張力と[Ca^<2+>]iの同時測定の結果を踏まえてパッチクランプ法による電位依存性カルシウムチャンネル(VDC)活性の測定を行った.材料として雑種成犬およびブタの気管平滑筋組織を用いた.平滑筋組織をコラゲナーゼなどの酵素でインキュベートし,気管平滑筋の単離細胞を得た.得られた気管平滑筋細胞を用いて,倒立顕微鏡下で細胞をパッチし,パッチクランプアンプで膜電位固定した.ホールセルモードにてVDCを介して流入するカルシウムの内向き電流を得た.温度変化は37°C,31°Cとし,一定の変化を得た後吸入麻酔薬イソフルランとセボフルランを暴露し,カルシウム電流の変化を観察した.低温暴露はカルシウムの内向き電流を有意に抑制した.この効果は吸入麻酔薬暴露時でも同様であった.不活性化曲線も有意に左方にシフトした.つまり,前年度に得られた低温暴露による[Ca^<2+>]iの低下の結果と一致する結果が得られた.低温暴露による[Ca^<2+>]iの低下の原因として,細胞膜電位依存性カルシウムチャネルの抑制が関与していることが考えられた.その効果は活性化ならびに不活性化状態でも観察された.受容体刺激薬による収縮の際に低温暴露が収縮を増強させるのは,カルシウムイオンに関与しない因子が考えられた.この結果は,喘息患者が低温暴露時に喘息発作を引き起こしやすいことと一致する.提出した研究計画に従い,本年度は気道平滑筋収縮に対する環境変化,とくに低温暴露の影響について観察した.研究費は低温環境を作製するためにバイオウォーマー(ナリシゲ)を購入したほか,単離細胞等を作製する際に必要な消耗品等に充当した.気道平滑筋張力および細胞内カルシウムイオン濃度([Ca^<2+>]i)を同時に測定することにより,低温暴露がどのような作用動態を示すのかを明らかにした.材料として雑種成犬の気管平滑筋組織を用い,Ca^<2+>感受性蛍光指示薬としてfura-2を用いた.[Ca^<2+>]iと平滑筋張力との同時測定は恒温バスユニットを備えた蛍光光度計専用装置(CAF-100)で測定した.高カリウム(72.7mM)ならびにカルバコール(1μM)で刺激し,組織を低温(32°C,27°C)に暴露した.変化が一定したところで吸入麻酔薬ハロタンを暴露し,平滑筋張力と[Ca^<2+>]iの変化を観察した.高カリウム収縮時の低温暴露は収縮および[Ca^<2+>]iの上昇を有意に低下させた.カルバコール収縮時の低温暴露は気道平滑筋収縮をより増強させたが,[Ca^<2+>]iは有意に低下させた.カルバコール収縮時にみられた低温暴露の影響はハロタンによる収縮抑制時にも観察された.低温暴露は電位依存性カルシウムチャンネルなどの抑制を介して[Ca^<2+>]iの上昇を抑制したと考えられる.受容体刺激時の低温暴露はCa^<2+>に対する感受性を亢進するなどして[Ca^<2+>]iの低下にもかかわらず収縮力を増強したと考えられる.ハロタンによる収縮力抑制時にも低温暴露による増強作用が認められたことから.治療上少なくとも気道平滑筋そのものにとって低温暴露は不都合である.現在,バッチクランプ法を応用し,[Ca^<2+>]iの調節に重要なチャンネルである電位依存性Ca^<2+>チャンネルに対する影響を観察し,チャンネルレベルでの作用機序を明らかにしようと試みている.提出した研究計画に従い,本年度は気道平滑筋収縮に対する環境変化,とくに低温暴露の影響について観察した.研究費は低温環境を作製するためにバイオウォーマー(ナリシゲ)を購入したほか,単離細胞等を作製する際に必要な消耗品等に充当した.本年度は前年度の平滑筋張力と[Ca^<2+>]iの同時測定の結果を踏まえてパッチクランプ法による電位依存性カルシウムチャンネル(VDC)活性の測定を行った.材料として雑種成犬およびブタの気管平滑筋組織を用いた.平滑筋組織をコラゲナーゼなどの酵素でインキュベートし,気管平滑筋の単離細胞を得た.得られた気管平滑筋細胞を用いて,倒立顕微鏡下で細胞をパッチし,パッチクランプアンプで膜電位固定した.ホールセルモードにてVDCを介して流入するカルシウムの内向き電流を得た.温度変化は37°C,31°Cとし,一定の変化を得た後吸入麻酔薬イソフルランとセボフルランを暴露し,カルシウム電流の変化を観察した.低温暴露はカルシウムの内向き電流を有意に抑制した.この効果は吸入麻酔薬暴露時でも同様であった.不活性化曲線も有意に左方にシフトした.つまり,前年度に得られた低温暴露による[Ca^<2+>]iの低下の結果と一致する結果が得られた.低温暴露による[Ca^<2+>]iの低下の原因として,細胞膜電位依存性カルシウムチャネルの抑制が関与していることが考えられた.その効果は活性化ならびに不活性化状態でも観察された.受容体刺激薬による収縮の際に低温暴露が収縮を増強させるのは,カルシウムイオンに関与しない因子が考えられた.この結果は,喘息患者が低温暴露時に喘息発作を引き起こしやすいことと一致する.
量子計算機開発のための新しいイオントラップ法

本研究では、イオントラップにおいて共同冷却された原子イオンを量子計算機へ応用するための基礎的実験を行うことを目的としている。本年度の主な目標は、イオントラップ装置の組立およびレーザー冷却用光源の製作である。平成16年度中に設計、作成したイオントラップ電極を、原子源や電子源とそれらへ電流や電圧を供給する導線とともに真空チェンバー内に設置し、超高真空状態にした。現在のところ5×10^<-8>Pa程度の真空度となっている。この真空度はイオンをトラップし、レーザー冷却するには十分良い真空度である。しかしながら、量子計算機への応用にはもう1桁ほど良い真空度を得る必要がある。より良い真空度を得るには、時間をかけて排気する必要があるので、本研究期間で達成することは不可能と思われる。もう1つの目的であるレーザー冷却用レーザーの製作については以下のような実績が得られた。前年度から引き続きマグネシウムイオン冷却用レーザーの開発を行っている。これにはまだ時間と費用を要すると思われるので、本年度はより安価で簡単に製作できるバリウムイオン冷却用のレーザーを同時に製作した。バリウムイオン用には493.5nmと650nmのレーザーを必要とする。493.5nmで発振するレーザーは、987nmの半導体レーザーの第2次高調波発生により得る。987nmの半導体レーザーは外部共振器型とし、現在20mW程度の出力が得られている。この第2次高調波を、周期分極形ニオブ酸リチウム(PPLN)を使用して得る予定である。一方、650nmのレーザーは、外部共振器型半導体レーザーにより直接得られるので、これを作成した。出力は約5mWである。本年度の主な目標は、イオントラップ装置の設計・組立である。量子計算機への応用には、複数のイオンを極低温にできることからリニアトラップが適しているので、本研究でもリニアトラップを製作することとした。トラップ電極は、従来は4本の金属ロッドからなるもののみが考えられていたが、本研究では空間的に非線形なポテンシャルや回転するポテンシャルを加えられるようにするため、12本の金属ロッドを使用することとした。また、超高真空中に入れるため、絶縁体はセラミックのみで構成されるように設計した。本年度は以上の考えに基づき、イオントラップの製作・組立を行った。超高真空中への封入は、来年度行う予定である。また、冷却用レーザー装置の整備も行う必要があった。マグネシウムイオン冷却用レーザー(波長280nm)は、840nm半導体レーザーの第2次高調波を行い、得られた420nm光と元の840nm光の和周波発生を行うことにより、第3次高調波を利用する。しかし、波長変換効率が悪く、効果的に強度が十分な280nmの光が得られなかった。これを改善する目的で、第2次高調波発生の段階で利用していたLiB_3O_5結晶をKNbO_3結晶に交換する。これにより、変換効率は10倍程度よくなると期待できる。KNbO_3結晶は約-35°Cで使用するので、冷却用の結晶マウントを製作した。
環境磁気をランドマークとした自律移動法における磁気伝播解析及び磁気マップの作成

本研究では,環境中の磁場変化パターンをランドマークとして地図化し,それに基づいて移動ロボットの自律ナビゲーションを実現することを目的としている.磁場は環境からだけでなく,ロボットの電子機器からも発せられる.そこで,電子機器の磁場の影響を調査し,センサの配置基準を示し,ロボット自体の磁場の影響を明らかにした.さらに,環境中の磁気測定を行い,2次元および3次元の磁気マップを作成する方法を開発した.実用上,磁気の測定点は疎らになってしまう.そこで,ガウス過程を参考に非測定領域を補間して地図化する方法を開発した.自律走行における磁気マップの可用性は,ロボット実験特区などの実証試験で確認されている.本研究の目的は,(1)磁気ナビゲーション法の実装技術の開発,(2)磁気マップの共有化手法の開発,(3)磁気マップの自動作成法の開発である.平成25年度の実績は,目的(1)を達成するために,ハードウエアに関する部分を重視して研究を進めた.以下に本研究の成果を示す.(1)現有のつくばチャレンジ用ロボットの磁気分布を測定し,これに基づいて磁気センサの配置方法を明確に調べた.その結果,磁場伝達の理論式とほぼ近似できることがわかった.この成果は,日本ロボット学会に投稿し,採択に至った.(2)上記の成果に基づいて,つくばチャレンジ2013に向けの移動ロボットの改良を行った.当初は磁気シールドなノイズ源を隔離する必要性が見込まれたが,解析の結果,ノイズ源(主に制御PC)から一定距離話すだけで十分にノイズを回避できた.その結果,ロボットの自己位置推定の安定性が飛躍的に向上し,なおかつ,つくばチャレンジ2013では2.4km以上の自律走行を行い,すべての課題を達成することに成功した.(3)つくばモビリティロボット特区で実験するための搭乗可能型移動ロボットを制作した.本ロボットは,特区エリアでの磁気マップを作成するために必須のロボットであるが,実験に参加するには実験ナンバー(自動車と同様,国交省認可のナンバー登録)が必須である.本研究とは直接関係しないが,安全性を確保する製作上の課題がいくつも指摘され,当初予定よりナンバー登録が遅れたものの,11月にナンバー登録,さらに自賠責保険等の学内手続きもあり,平成26年3月に正式に実験に参加できるようになった.最初の実験では,移動ロボットが正常かつ安全に操縦走行ができるのを確認するとともに,磁気センサによるデータ記録が可能なことも確認した.本研究の目的は,(1)磁気ナビゲーション法の実装技術の開発,(2)磁気マップの共有化手法の開発,(3)磁気マップの自動作成法の開発である.平成26年度の実績としては,昨年度に引き続き(1)を重視しながら(2)および(3)について着手した.本研究の流れとしては「つくば実験特区」および「つくばチャレンジ」を題材にしており,この2つの流れで概要を述べる.1つくば実験特区向け搭乗型ロボットによる実証試験:ナンバー登録にともない当年4月から原則月1回の頻度で実験を実施した.当年前半は,ハードウエアの安全性検証(特区で求められた課題)を行いながら,磁気経路登録および磁気ナビゲーション法による自律走行実験を実施した.この結果,安全かつ安定に走行できることを確認した.後半に入っては,レーザ測域センサを用いたSLAMによる幾何マップを作成しながら,そのマップ上に磁気情報を配置する方法を試行的に行った.2つくばチャレンジによる磁気ナビゲーションの実装技術の向上と地図共有化試験:当年においては評価用のロボットを1台新たに開発し,部品配置等の構成の異る2台のロボットを用いて,つくばチャレンジの課題に取り組んだ.地図情報共有化については,あるロボットで磁気経路を記録し,別のロボットでこの磁気経路情報に基づいて走行させるなどの磁気経路の共有化を試したが,完全な共有化には至らなかった.その理由は経路情報がトポロジ構成で記録されているためで,例えば方向制御での回転速度の違いが位置誤差となる場合がある.もちろん,磁気ランドマークが見つかれば位置修正は可能であるが,経路上(1次元の探索)の情報だけでは十分な位置推定を行うことはできない.ただし,磁気情報の共有化については,磁気センサの配置基準,例えば制御PCから磁気センサをある程度隔離して設置するなどの基準を設けることで共有化が可能であることを確認した.平成27年度の主な目標は,(1)磁気マップの作成(自動作成)および(2)共有化(地図化)である.(1)については,環境全体を網羅的・捜査的に磁気を測定する必要がある.しかしながら全体測定にはどの程度の分解能が必要かを知る必要がある.そこで,ガウス分布による測定点間の補間を検討し,実験的にも補間の効果を確かめた.その結果,ある程度まばらな測定点であっても実測とほぼ変わらない程度の測定分解能を突き止めた.その結果に基づき,(a)移動ロボット前面に並列的に磁気センサ3点配置した場合の磁気マップ作成法と,(b)2簡便な2軸マニピュレータの先端および中間に磁気センサを2つを取り付けた磁気計測用のロボットを製作し,3次元的な地図を作成方法を開発した.(a)は移動ロボットに特化した方法であり,比較的簡便に磁気マップを作成することが可能となった.(b)も同様に磁気マップを作成できるが,3次元地図は高さ方向に磁気強度の違いがあることがわかった.これは磁気センサの配置において高さ方向を合わせることが重要なポイントであることが明確に認識することができた.

なお,磁気マップ作成には,幾何的な地図の上に磁気強度をプロットする必要があり,マップの自動作成時には,場合によってはレーザ測域センサによる一般的なマップ作成(SLAM)を行う必要がある.(2)については,ロボット自体が磁気を発している問題と,磁気センサの設置位置をどのようにするかがポイントであった.前者についてはすでに解決している.後者については3D磁気マップを得たことで,高さ方向に影響を受けることがわかった.すなわち,高さ方向でのセンサ配置が重要であることがわかった.上記については大学内の室内環境,屋外環境,つくば市のモビリティロボット特区において実施試験を行った.さらに,採択率の厳しい2つの国際会議に論文投稿し採択された.本研究では,環境中の磁場変化パターンをランドマークとして地図化し,それに基づいて移動ロボットの自律ナビゲーションを実現することを目的としている.磁場は環境からだけでなく,ロボットの電子機器からも発せられる.そこで,電子機器の磁場の影響を調査し,センサの配置基準を示し,ロボット自体の磁場の影響を明らかにした.さらに,環境中の磁気測定を行い,2次元および3次元の磁気マップを作成する方法を開発した.実用上,磁気の測定点は疎らになってしまう.そこで,ガウス過程を参考に非測定領域を補間して地図化する方法を開発した.自律走行における磁気マップの可用性は,ロボット実験特区などの実証試験で確認されている.本研究の目的は,(1)磁気ナビゲーション法の実装技術の開発,(2)磁気マップの共有化手法の開発,(3)磁気マップの自動作成法の開発である.(1)についてはほぼ達成できたと言える.つくばチャレンジ2014においても課題達成を果たしており,その点でも十分な実装技術が積み上がったといえる.(2)についてはセンサの配置方法に基準を設定することで磁気情報の共有化が可能であることがわかった.(3)については,今後の課題である.なお,(1)(2)の成果については,査読付き論文4編,査読付き国際会議論文1編を発表した.ロボティクス平成27年度はまとめの年と位置付け,以下を研究推進の方策とする.(1)磁気ナビゲーション法の実装に関しては,現在保有のロボットでは高いレベルで安定して自律走行するレベルまでに完成したと判断できる.平成27年度においては,オープンキャンパスでの実演など,いろいろな機会にロボットを自律走行させ,その際の安定性やトラブルが発生した際の状況調査を行う.これによって磁気ナビゲーション方法のロバスト性を実験的に解析できる.(2)磁気マップの自動作成法についてはSLAM(Simultaneous Localization And Mapping:移動しながらの位置認識と地図作成法)の実装が一つの課題となる.磁気マップが広く利用されるには,幾何マップ上に磁気情報が配置された表現形式が望ましいと考えている.したがって,正確な幾何マップを得るためにもSLAMの実装を欠かすことはできない.簡易的な手法であってもSLAMを実装し,磁気マップの自動作成法を開発する.そして,磁気マップによって移動ロボットがどの程度ロバストに自律走行を達成できるか,その有用性を評価する.
酸化ストレス関連遺伝子多型の集積が糖尿病大血管症の発症・進展に及ぼす影響の検討

糖尿病等で惹起される酸化ストレスは、糖尿病大血管症の発症に重要な役割を担う。われわれは、3819人の日本人2型糖尿病患者を対象に、酸化ストレスに関連する5つの機能的な遺伝子多型と心筋梗塞との関連を評価した。各多型は単独では心筋梗塞と有意な関連はなかったが、酸化ストレスを促進させるアレルを多く有する患者ほど心筋梗塞の有病率が高く、酸化ストレス促進アレル保有数は心筋梗塞の独立した説明因子であった。心筋梗塞のリスク評価において、酸化ストレス関連遺伝子多型の集積効果を評価することの有用性が示唆された。糖尿病等で惹起される酸化ストレスは、心筋梗塞発症に重要な役割を担う。われわれは、酸化ストレスに関連する5つの遺伝子多型に注目し、これらの遺伝子多型が心筋梗塞に及ぼす影響について横断的に検討した。各多型は単独では心筋梗塞と有意な関連はなかった。一方、酸化ストレスを促進させるアレル(pro-oxidant allele)を多く有する患者ほど心筋梗塞の有病率が高かった(p for trend=0.018)。古典的危険因子を調整しても、保有するpro- oxidant alleleの総数が心筋梗塞の独立した説明因子であった(オッズ比=1.16, 95%CI 1.01-1.34, p=0.034)。上記の結果から、2型糖尿病患者において、酸化ストレスに関連する5つの遺伝子多型の集積は、心筋梗塞と関連すること、心筋梗塞のリスク評価にはこれらの遺伝子多型の集積効果を評価すべきことの有用性が示唆される。われわれは、酸化ストレスに関連する5つの遺伝子多型に注目し、これらの遺伝子多型が冠動脈イベント発症に及ぼす影響について検討した。観察期間(平均6.0年)中に24件の冠動脈イベントが発生した。各多型は、単独では冠動脈イベント発症と有意な関連はなかった。一方、酸化ストレスを促進させるアレル(pro-oxidant allele)を多く有する患者ほど冠動脈イベントの発症リスクが高かった(p for trend=0.032)。Cox比例ハザードモデルを用いた解析の結果、性別、年齢、高血圧の有無、脂質異常症の有無、喫煙等の古典的危険因子を調整後のpro-oxidant allele 1個当たりのハザード比は1.54(95%CI;1.01-2.35,p=0.047)であった。上記の結果から、2型糖尿病患者において、酸化ストレスに関連する5つの遺伝子多型の集積は、冠動脈イベントの発症と関連すること、冠動脈イベント発症のリスク評価にはこれらの遺伝子多型の集積効果を評価することの有用性が示唆された。糖尿病等で惹起される酸化ストレスは心筋梗塞発症に重要な役割を担う。我々は、酸化ストレスに関連する5つの遺伝子多型に注目し、これらの遺伝子多型が心筋梗塞に及ぼす影響について検討した。上記の結果から、2型糖尿病患者において、酸化ストレスに関連する5つの遺伝子多型の集積は、心筋梗塞と関連すること、心筋梗塞のリスク評価にはこれらの遺伝子多型の集積効果を評価すべきことの有用性が示唆された。現在、上記対象者を前向きに追跡中であり、酸化ストレス関連多型と心血管イベント発症との関連を検討する予定であるが、中間解析の結果では、pro-oxidant alleleを多く持つ患者ほど冠動脈イベントの発症リスクが高いことが示唆されている。一部の研究協力施設が東日本大震災で甚大な被害を受け、データ収集が遅れているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、既に収集済みのデータを用いた中間解析の結果、酸化ストレスに関連する遺伝子多型の集積が冠動脈イベント発症のリスクとなることを示唆するデータを得た。今後は、全登録症例のデータを収集し、より多数例を対象とした解析を行うことによって、仮説の検証に努めたい。このため、データ収集が遅れている研究協力施設に人員を派遣し、データ収集の促進を図ることを考慮中である。
量子差分モノドロミー保存系,量子タイヒミュラー理論,可解格子模型の類似の追求

量子タイヒミュラー理論、量子差分モノドロミー保存系と可解格子模型の類似を追求することが目標であった。量子差分ガルニエ系の対称性やτ関数の量子化を幾何および格子模型の観点から研究すること、量子差分モノドロミー保存系における合流操作の量子化を可解格子模型のfusionを参考に定式化すること、量子タイヒミュラー理論としての理解を追求しつつ量子群から構成される可解格子模型にリーマン面の幾何の視点を導入すること、量子差分モノドロミー保存系のヤン・バクスター方程式の楕円関数解に対応する拡張を考えること、などを視野に入れている。これらについて基本的と考えられるラックス表示の幾何的理解に努め部分的成果を得た。モノドロミー保存変形の量子差分化という問題について、可解格子模型との類似から考察を行うのが本研究課題である。1次元あるいは2次元可解格子模型における各サイトおよびそこに置く自由度を、リーマン球面上の接続の極及び留数の類似と考える。この視点から、主としてパンルヴェVI型方程式のq差分化を量子化(非可換化)する量子q差分パンルヴェVI型方程式について、その表現論的考察を行いつつ、格子模型における対称性を逆に考察したい。一般化の方向としては、サイトあるいは特異点の数を増やす多点化、1サイトの自由度を増す高階化、パラメータq依存性に関する楕円化などが主な課題である。今年度はとくに、従来の量子群で把握できる三角関数的な場合について、高階化に必要な構造を(改めて)考察した。この場合は対応するアフィン量子群の普遍R行列について積公式が知られている。これは唯一でないがその由来について理解を深めることができた。積公式の構造とベックルンド変換には密接な関係が期待される。また楕円化について予備的考察を行った。G.Ip氏の楕円的ダブル代数(量子群)の表現の構成に準拠するような、楕円的な量子q差分パンルヴェVI型方程式の拡張の可能性について考察したが、楕円版の代数についてはとくにその普遍R行列にまだ十分な理解がなく、時間をかけて考えてゆくべき段階であると考えられた。これに関しては、Kuznetsov-Sklyaninにより知られている楕円的量子Ruijsenaars作用素におけるベックルント変換(離散時間発展)の構成が参考になるかもしれない。昨年度にひきつづき、高階化についての考察を、その幾何的側面についても含めて行った。とくに、Lamらによって、その場合のベックルント変換と関連すると思われる変換がquiver algebraとそのmutationの言葉を用いて導入する論文が現れたので、対応について考察を行った。詳細について引き続き検討中であるが、Kashaevの研究との対応をつける場合と同じく、接続の変形問題に初めからあるLax行列を彼らの構成からどう復元するかは問題である。また、普遍R行列の像としてLax行列を作った場合に自然に現れる無限個の極を彼らの幾何的扱いにおいてはどう解釈すべきかも問題であると思われる。なお考察を要するが、解決がつけば量子差分版の幾何的見方について一定の進歩になると考えられる。タウ変数を適切に、well-definedであることとともに幾何的な見方とも両立するよう定義することが具体的問題として残っており、これが解決しないと先に進みにくい状況にある。モノドロミー保存変形の量子差分という問題について、可解格子模型との類似から考察を行うのが本研究課題である。1次元あるいは2次元可解格子模型における各サイトおよびそこに置く自由度を、リーマン球面上の接続の極及び留数の類似と見ることが自然である。この視点から、主としてパンルヴェVI型方程式について、その表現論的考察を行いつつ、逆に格子模型における幾何学的視点や対称性についても考えたい。一般化の方向として、サイト数すなわち特異点の数を増やす多点化、1サイトにおける自由度を増す高階化、差分化パラメータ依存性に関する楕円関数化などが主な課題である。これまでの考察を踏まえ、高階化の考察を幾何的側面も含めて行った。とくにLamらによって、その場合のベックルンド変換と関連する変換がquiver algebraとそのmutationの言葉を用いて導入する論文が現れたので、対応について考察を行った。詳細について引き続き検討中であるが、Kashaevらの研究との対応関係においてと同じく、接続の変形問題においては初めからあるLax行列を彼らの構成からどう復元するかは問題である。またLax行列については普遍R行列の像として得ることができるが、連続極限においてリーマン面のブランチカットにあたると考えられる極の列について、どのような幾何学的な言葉を用意すべきか大きな問題と思われるが解決を見ていない。我々の構成の普遍性から、この問題は今後も中心的課題と考えるべきと思われ、解決がつけば量子差分版の幾何的な見方について一定の進歩になると思われる。今年度はまた、Faddeevがmodular doubleと呼んだ構造について、モノドロミー保存系の量子差分化におけるこの種の対称性の可能性について予備的考察を行った。

量子タイヒミュラー理論、量子差分モノドロミー保存系と可解格子模型の類似を追求することが目標であった。量子差分ガルニエ系の対称性やτ関数の量子化を幾何および格子模型の観点から研究すること、量子差分モノドロミー保存系における合流操作の量子化を可解格子模型のfusionを参考に定式化すること、量子タイヒミュラー理論としての理解を追求しつつ量子群から構成される可解格子模型にリーマン面の幾何の視点を導入すること、量子差分モノドロミー保存系のヤン・バクスター方程式の楕円関数解に対応する拡張を考えること、などを視野に入れている。これらについて基本的と考えられるラックス表示の幾何的理解に努め部分的成果を得た。Ip氏の楕円的ダブルの表現の構成に準拠した量子qP6の拡張について考察したが、楕円版の代数について、とくにその普遍R行列にまだ十分な理解がなく、時間をかけて考えてゆくべき段階であると考えられた。これに対し、従来の量子群で把握できる三角関数的な場合については、普遍R行列の積公式が知られている。これは唯一でないがその由来について理解を深めることができた。引き続きタウ変数の理解に努めるとともに、格子模型あるいはquiver mutationにおける有限周期性の変形理論としての意味を考察することで、当初の研究課題の一端を明らかにしてゆきたい。編集した論文集数学楕円版はやや困難もあるため、量子qP6を含む三角関数版について、そのベックルンド変換とR行列の積公式の関連をさらに考察したい。
不安定プラーク検出法の確立

動脈硬化症を来たすプロセスでは、特に酸化変性LDLがMфに際限なく取り込まれて動脈硬化の初期病変である泡沫細胞の集積をもたらし、ついには多量の脂質を含む不安定なプラークとなる。すなわち、不安定プラークでは多量の脂質と共に活性化したMфが観察されることから、生体内におけるMф活性の測定が不安定プラークの検出に有用と考えられる。血漿sFcgbуRIIIa^Mфは、頸動脈エコー検査施行患者では低エコープラーク群で最も高く、sFcуRIIIa^Mф測定が新しい不安定プラーク検出法になる可能性が示唆された。IgGレセプターIII(FcγRIII : CD16)には、NK細胞とマクロファージ(Mφ)に発現しているIIIa型と、好中球に発現しているIIIb型があり、両者とも細胞の活性化によって細胞表面から放出され、可溶型(sFcγRIII)として血漿中に存在している。すなわち、これら可溶型を個々に測定することにより、生体内での好中球,NK細胞あるいはMφの活性化を知ることができる。そこでIIIa型およびMφ由来のIIIa型に特異的なモノクロナル抗体を作成し、血漿中のsFcγRIIIaおよびsFcγRIIIa^<Mφ>測定法を構築した。さらに、化学発光系を利用して、約80倍の高感度化に成功した。3種のsFcγRIIIs測定系の感度差より、正常プール血漿に含まれるsFcγRIIIaは大部分がNK細胞由来、総sFcγRIIIは大部分が好中球由来であった。現在、これら可溶型の絶対値を算出するために、リコンビナントsFcγRIIIaを精製中である。動脈硬化症を来たすプロセスでは、特に酸化変性LDLがMφに際限なく取り込まれて動脈硬化の初期病変である泡沫細胞の集積をもたらし、ついには多量の脂質を含む不安定なプラークとなる。sFcγRIIIa^<Mφ>測定が生体内におけるMφ活性を表すことに着目し、血漿sFcγRIIIa^<Mφ>を測定したところ、健常者では加齢とともに増加した。成人病検診症例では動脈硬化症のリスクファクターが増すに従い増加し、頸動脈エコー検査の結果と非常によく相関した。頸動脈エコー検査施行患者では低エコープラーク群が最も高値を示し、石灰化の進んだ高エコープラーク群は両プラーク混合型、プラーク無し、異常所見無しの群よりも低値を示した。虚血性心疾患(CAD)症例では明らかな高値を示し,冠動脈の有意狭窄数が増すに従い増加した。lgGレセプターIII(Fc γRIII:CD16)には、NK細胞とマクロファージ(Mφ)に発現しているIIIa型と,好中球に発現しているIIIb型があり、両者とも細胞の活性化によって細胞表面から放出され、可溶型(sFc γRIII)として血漿中に存在している。すなわち、これら可溶型を個々に測定することにより、生体内での好中球,MK細胞あるいはMφの活性化を知ることができる。そこでIIIa型、およびMφ由来のIIIa型に特異的なモノクロナル抗体を作成し、血漿中のsFc γRIIIaおよびsFc γRIIIaMφを構築した。さらに、科学発光系を利用して約80倍の高感度化に成功した。3種のsFC γRIIIS測定系の感度差より、正常プール血漿に含まれるsFcγRIIIaは大部分がNK細胞由来、総sFC γRIIIは大部分が好中球由来であった。現在、これら可溶型の絶対値を算出するために、リコンビナントsFc γRIIIaを精製中である。動脈硬化症をきたすプロセスでは、特に酸化変性LDLがMφに際限なく取り込まれて動脈硬化の初期病変である泡沫細胞の集積をもたらし、ついには多量の脂質を含む不安定なプラークとなる。sFc γRIIIaMφ測定が生体内におけるMφ活性を表すことに着目し、血漿sFc γRIIIaMφを測定したところ、健常者では加齢とともに増加した。虚血性心疾患(CAD)症例では明らかな高値を示し、冠動脈の有意狭窄症数が増すに従い増加した。また、糖尿病併発例では、非酸素的糖化反応の影響によりsFc γRIIIaMφ量が見かけ上低めに出る傾向が認められた。IgG

レセプターIII(FcγRIII: CD16)には、NK細胞とマクロファージ(Mφ)に発現しているIIIa型と、好中球に発現しているIIIb型があり、両者とも細胞の活性化によって細胞表面から放出され、可溶型(sFcγRIII)として血漿中に存在している。すなわち、これら可溶型を個々に測定することにより、生体内での好中球,NK細胞あるいはMφの活性化を知ることができる。そこでIIIa型およびMφ由来のIIIa型に特異的なモノクロナル抗体を作成し、血漿中のsFcγRIIIaおよびsFcγRIIIaMφ測定法を構築した。さらに、化学発光系を利用して、約80倍の高感度化に成功した。動脈硬化症を来たすプロセスでは、特に酸化変性LDLがMφに際限なく取り込まれて動脈硬化の初期病変である泡沫細胞の集積をもたらし、ついには多量の脂質を含む不安定なプラークとなる。sFcγRIIIaMφ測定が生体内におけるMφ活性を表すことに着目し、血漿sFcγRIIIaMφを測定したところ、健常者では加齢とともに増加した。成人病検診症例では動脈硬化症のリスクファクターが増すに従い増加し、頸動脈エコー検査の結果と非常によく相関した。頸動脈エコー検査施行患者では低エコープラーク群が最も高値を示し、石灰化の進んだ高エコープラーク群は両プラーク混合型、プラーク無し、異常所見無しの群よりも低値を示した。また、血圧脈波検査施行患者では足関節/上腕血圧比(ABI)が高値の動脈硬化疑い群で高値を示し、ABIが低値の閉塞疑い群はABI正常群と同程度であった。虚血性心疾患(CAD)症例では明らかな高値を示し、冠動脈の有意狭窄数が増すに従い増加した。一方、糖尿病併発例では、非酵素的糖化反応の影響によりsFcγRIIIaMφ量が見かけ上低めに出る傾向が認められた。順調に、心筋梗塞発症前の虚血性心疾患や脳梗塞疑いで頸動脈エコー検査受診および下肢動脈エコー検査受診の患者血漿が集まり.その中の3種のsFc γRIII量が測定出来いる。引き続き、例数の増加に勤めたい。標準物質のリコンビナントsFc γRIIIaφの作製に関しては苦戦しているが,予め予想の出来たことであり,引き続き挑戦を続ける。24年度が最終年度であるため、記入しない。昨年度も引き続き、心筋梗塞発症前の虚血性心疾患や脳梗塞疑いで頸動脈エコー検査および下肢動脈エコー検査受診の患者血漿中の3種のsFc γRIII量を測定する。これらの値とエコー検査の結果と比較検討することにより、sFc γRIIIaMφ測定の不安定プラーク検出における有効性を検討する。また、腎生検施行により採取した腎組織の一部を用い、MKGR14にて免疫染色し、病理組織学的に種々の程度の動脈硬化病変部におけるsFc γRIIIaMφ発現量の変化を検討する。
体液中の可溶性HLA抗原の検出同定とその法医学的応用

上記の研究課題のもとで、主として可溶性HLA抗原の検出同定に用いるELISAの検討を加えたところ以下のような成績が得られた。1.ポリスチレン製マイクロプレートにヒト由来HLA抗体(第一抗体,【A_2】【A_(24)】,【B_5】,【B_(40)】)を結合させ、次にマウスモノクローナル抗ヒトHLA-A,B,C抗体(第二抗体)を反応させ、つづいてビオチン化抗マウスIgGとアビジン・ビオチン複合体(ABC)試薬を反応させる発色系を用いた。この系で第一抗体と対応する可溶性HLA抗原(例えば血清)が存在すると、発色がみられるはずである。しかし、この反応系でどの第一抗体を使用してもまた血清が存在しなくても発色した。2.マイクロプレートに抗ヒトHLA-A,B,C抗体を吸着させ、次に試料のHLA抗原を加え、つづいてヒト由来HLA抗体,ビオチン化抗ヒトIgG,ABC試薬を順次反応させる発色系を用いた。この反応系でも対応する可溶性HLA抗原(血清)が存在すれば、発色するはずであるが、血清がなくとも発色した。これら1,2の結果から、ヒト由来HLA抗体中に存在しているHLA抗原が反応してしまうことと、非特異的反応が全体の反応系の妨害になっていることが明らかになった。3.そこでヒト由来HLA抗体から、HLA抗体のみをアフィテークロマトグラフィーで精製し、1の反応を試みたところ、それぞれの精製HLA抗体に対応する抗原をもった血清と反応した。しかし、この精製操作にはかなり大量のHLA抗血清を必要とすることと、操作が煩雑であるという欠点がある。従って、HLAモノクローナル抗体が容易に入手できることが、ELISAによる可溶性HLA抗原の判定を容易に可能にし得るものと考えられる。
主要海産養殖魚のノカルディア症原因菌に対する高分子抗菌構造体の抗菌活性とその応用

昨年度、ブリのノカルディア症原因菌Nocardiaseriolaeに対する抗菌ナノ粒子(粒子サイズ170nmのものと35nmのものについて)の抗菌活性の確認についてMIC法により調べた結果、粒子サイズ35nmのものでは、50.0mg<の抗菌活性を確認した。本年度もその再現性について確認し、ほぼ同様に結果が得られた。また、経口投与による安全性試験では、昨年度、試験途期間中ブリに寄生虫感染症が発生し、2週間までしか安全性を確認できなかったが、本年度は当初予定どおり3か月までの安全性を確認した。浸漬法による安全性試験では、ナノ粒子生成時の分散剤が界面活性剤系のものを用いていることから、一部に毒性が確認された。現在、分散剤を変えることによって、この問題を解決する実験を開始している。最後に、実験感染モデルを用いた本ナノ粒子の治療効果と予防効果について確認したが、一定期間の餌にナノ粒子を染み込ませて投与する経口投与法により、治療効果は明確に確認され、予防効果についても今後、条件について詳細に検討することで期待される結果が得られることが予測された。当初の研究計画通り、ほぼ推移している。in vitro試験においても再現性を確認し、昨年度問題になって実験魚の寄生虫感染症も発生しなかったことから、おおむね順調に研究は進展している。また、本症の実験感染を実施し、餌にナノ粒子を混合した場合には、感染防御効果が認められたことから、今後さらに再現性ついて検討する必要がある。当初の計画通りほぼ研究は推移しているが、ナノ粒子の浸漬法による予防と治療効果については、一定の濃度で毒性が確認されたことから、ナノ粒子生成時の分散剤の検討をさらに進める必要がある。また、経口投与により、本症に対する予防効果が確認されたことから、本年度は再現性について確認するとともに、ナノ粒子の効果的な利用の条件を明確にしていきたい。昨年度、ブリのノカルディア症原因菌Nocardia seriolaeに対する抗菌ナノ粒子(粒子サイズ170nmのものと35nmのものについて)の抗菌活性の確認についてMIC法により調べた結果、粒子サイズ35nmのものでは、50.0mg<の抗菌活性を確認した。実験動物を用いた感染実験が予定よりも順調に進んだことにより、予定していた実験魚の購入が1回にとどまったことに起因する。平成30年度の結果を踏まえて、最終年度に実験感染試験を集中的に実施する場合、実験魚を多く購入する必要があり、次年度使用に予算を移動させた。