hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
食生活による動脈硬化予防研究の新視点-HDL-レセプターとの関連-

高密度リポ蛋白質(HDL)は、心筋梗塞や動脈硬化を防ぐ重要な蛋白質である。HDLの動脈硬化予防に果たす役割を解明するためには、コレステロールの逆輸送による最終運搬場所の肝臓細胞膜のHDL-レセプターの同定とその分子解明が必要であるが、未だその実体は不明のままである。本研究では、種々の動物の肝臓細胞膜分画より分子量120kDaと95kDaのHDL-レセプターの精製とcDNAクローニングをめざした。95kDaHDL-レセプターを精製し、N-末端アミノ酸配列を分析した結果、DDEVDVDGTVと読め、ラットGRP-94と一致した。SDS-PAGEで単一な分子量120kDaのHDL-レセプターを得ることに成功した。N-末端のアミノ酸が検出されないことから、N-末端がブロックされていることが考えられた。今後、HDL-レセプターの内部のアミノ酸配列をペプチド分離精製後、検討する必要がある。HDL-レセプターのcDNAを単離するために、HDL-レセプターの抗体を調製した。ラット肝臓のtotalRNAを調製し、cDNAライブラリーを作製した。200,000個のプラークを得た。抗体スクリーニング法でcDNAライブラリーより、HDL-レセプターのcDNAの単離を行っている。ウサギ、ラットを高コレステロール食で飼育し、その時の肝臓の細胞膜の2つのHDL-レセプターの変動について検討した結果、120kDaのHDL-レセプターのバンドが明らかに濃くなっているのがわかった。以上のことから、HDL-レセプターは120kDaの蛋白質と思われる。今後、120kDaのHDL-レセプターのcDNAクローニングを成功させ、動脈硬化の予防に果たす本レセプターの役割を追究していきたい。高密度リポ蛋白質(HDL)は、末梢組織の余剰のコレステロールを肝臓に逆輸送し、異化させる働きを有し、心筋梗塞や動脈硬化を防ぐ重要な蛋白質である。HDLの動脈硬化予防に果たす役割を解明するためには、コレステロールの逆輸送による最終運搬場所の肝臓細胞膜のHDL-レセプター(レセプター)の同定とその分子解明が必要である。本研究では、レセプターの分子解明を行うとともに、その臨床診断への検討と食生活による動脈硬化予防評価法の開発をめざして、本年度以下のことを明らかにした。(1)ウサギ肝臓細胞膜分画より、レセプターの精製を試みた。細胞膜分画を0.5%トリトンX-100で可溶化したのち、DE-52カラムクロマトグラフィーを行った。レセプターは、0.2MKCl溶出画分に見い出された。これを、Wheat germ lectinセファロース6MBカラムにかけ、よく洗ったのちに、0.5MN-アセチルグルコサミンを含む緩衝液で溶出した。その精製蛋白質をSDS-PAGEにかけ、PVDF膜に転写させ、分子量12万のレセプターのバンドを切り取り、気相のアミノ酸シーケンサーで分析した。今後、レセプターを大量に精製できる方法をさらに検討し、レセプターのcDNA単離をめざしたい。(2)遺伝的高脂血症ウサ(WHHLウサギ)の肝臓、副腎のHDL-レセプターの含量を対照ウサギと比較した。WHHLウサギのレセプターの含量は対照の23倍に増加していた。(3)リンパ球でのレセプターの発現を調べる目的で、J774細胞膜のレセプターの検出をおこない、12万のバンドが検出された。

高密度リポ蛋白質(HDL)は、末梢組織の余剰のコレステロールを肝臓に逆輸送し、異化させる働きを有し、心筋梗塞や動脈硬化を防ぐ重要な蛋白質である。HDLの動脈硬化予防に果たす役割を解明するためには、コレステロールの逆輸送による最終運搬場所の肝臓細胞膜のHDL-レセプター(レセプター)の同定とその分子解明が必要である。本研究では、レセプターの分子解明を行うとともに、その臨床診断への検討と食生活による動脈硬化予防評価法の開発をめざして、本年度以下のことを明らかにした。(1)ウサギ肝臓細胞膜分画より、レセプターの精製を試みた。しかし、ウサギ肝臓細胞膜分画には、分子量120kDaのHDL-レセプターの含量は非常に少ないことがわかった。(2)次にラット肝臓細胞膜分画より、レセブターの精製を試みた。肝細胞膜分画の調製には従来ミクロソーム分画を用いていたが、核分画より調製する方法の方がHDL-レセプターの収量はよいことがわかった。そこで、ラット肝細胞膜分画を0.5%トリトンX-100で可溶化したのち、DE-52カラムクロマトグラフィーを行った。レセプターは、0.2MKCI溶出画分に見い出された。これを,Wheat germ lectinセファロース6MBカラムにかけ、よく洗ったのちに、0,5MN-アセチルグルコサミンを含む緩衝液で溶出した。その精製蛋白質をさらに調製用電気泳動装置を用いて精製を試みた。SDS-PAGEで単一な分子量120kDaの日DL-レ七プターを得ることに成功した。気相のアミノ酸シーケンサーで分析したが、N-末端のアミノ酸が検出されないことから、N一末端がブロツクされていることが考えられた。今後、HDL-レセプターの内部のアミノ酸配列をペプチド分離精製後、検討する必要がある。(3) HDL-レセプターのcDNAを単離するために、現在HDL-レセプターの抗体を調製中である。ラット肝臓のtotalRNAを調製し、cDNAライブラリーを作製した。125,000個のプラークを得た。強い抗体が作製できれば、抗体スクリーニング法でcDNAライブラーより、HDL-レセプターのcDNAを単離したい。HDLの動脈硬化予防に果たす役割を解明するためには、本研究では、コレステロールの逆輸送による最終運搬場所の肝臓細胞膜のHDL-レセプタ-(レセプタ-)の同定とその分子解明、その臨床診断への検討と食生活による動脈硬化予防評価法の開発をめざして、以下のことを明らかにした。(1)ラット肝細胞膜分画を0.5%トリトンX-100で可溶化したのち、DE-52、wheat germ lectinセファロース6MBカラムクロマトグラフィーによりレセプターを精製した。その精製蛋白質をさらにアガロースゲル二次元電気泳動装置を用いて精製を試みた。SDS-PAGEで単一なスポットの分子量120kDa、PI=4.9のHDL-レセプターを得ることに成功した。気相のアミノ酸シーケンサーで分析したが、N-末端のアミノ酸が検出されないことから、N-末端がブロックされていることが考えられた。
テロメア結合タンパク質群によるテロメアDNA長調節機構の解明

染色体末端に存在する特殊な構造体であるテロメアは、ゲノム維持、減数分裂、細胞老化のタイミングなどの様々な生命現象において重要な役割を果たすことが知られている。これまでの解析より、分裂酵母のRap1タンパク質が様々なタンパク質と相互作用することにより、様々な機能を遂行していること、すなわち、Rap1がテロメア機能の中枢としての役割を果たしていることが明らかになりつつある。特に、テロメアDNA長制御においては、Rap1はTaz1およびPoz1と直接結合することにより、テロメラーゼ(テロメアDNA伸長酵素)のテロメア末端へのアクセスを負に制御することがわかっている。そこで、Rap1を中心とした複合体形成の分子メカニズムを探るべく、まずRap1のどの領域にTaz1やPoz1などが結合するのかをYeast two-hybrid法などによって調べた。その結果、Taz1はRap1のC未端領域、Poz1はそのややN未端側に結合することがわかった。この結果を元にして、まずTaz1-Rap1結合領域の立体構造解析を行ったところ、両者の相互作用に特に重要なアミノ酸残基が同定できた。それらのアミノ酸残基に変異を導入すると、テロメア機能の欠損が見られた。さらに、Rap1のTaz1相互作用ドメインに存在するセリン、スレオニン、チロシン残基の中で、リン酸化フォームになると両者の相互作用を阻害するものを同定した。現在、そのリン酸化の生理学的意義について解析している。染色体末端に存在する特殊な構造体であるテロメアは、ゲノム維持、減数分裂、細胞老化のタイミングなど、様々な生命現象において重要な役割を果たしていることが知られている。しかし、テロメア結合タンパク質の機能の詳細については、まだ明らかにされていない部分が多く残されている。そこで我々は、分裂酵母のテロメア結合タンパク質であるRap1およびPot1と相互作用する因子を質量分析によって同定した。様々な解析をした結果、Taz1-Rap1-Poz1/Ccq1-Tpz1-Pot1という複合体(シェルタリン複合体)を形成していることがわかった。poz1遺伝子破壊株は、rap1やtaz1破壊株と同様にテロメアDNAが異常に伸長する表現型を示した。一方、ccq1やtpz1破壊株は、pot1破壊株と同様にテロメアDNAが非常に短くなり、テロメア末端が不安定になった。このようなことから、テロメアDNAが長く、Taz1-Rap1-Poz1が十分相互作用をしている時には、テロメアDNAはそれ以上伸びないようにテロメラーゼの作用が負に制御され、逆にテロメアDNAが短く、これらが十分相互作用していない時にはテロメラーゼの作用が正に制御されているのではないかと考えられた。従って、テロメアDNAに結合しているTaz1-Rap1の分子数によってテロメアDNAが調節されるというモデルを提唱した。
人脳腫瘍におけるエンドセリンの血管新生に与える影響

開頭により摘出したglioblastoma(5例)と脳葉切除により得られた脳組織(5例)より、Brendelの方法を用いて微小血管を採取し、遠沈後、凍結したペレットから20mumの連続組織切片を作製した。1251-ET-1を放射性ligandとし、新しく開発されたコンピュータラジオルミノグラフイメージングプレートシステムによる定量的receptor autoradiographyにより画像解析を行ない結合特性を算出した。さらに、ET-1、ET-3、ET_Areceptorの特異的antagonistであるBQ-123およびET_BreceptorのagonistであるsarafotoxinS6cを用いた競合実験により、receptor subtypeの解析を行った。(結果)1)腫瘍ならびに周辺脳組織の微小血管に125I-ET-1の高親和性の特異結合部位が存在した。その解離定数(Kd)は、腫瘍血管0.8nM、脳血管0.2nMであり、最大結合能(Bmax)は、それぞれ160fmol/mg、140fmol/mgであった。2)ET-1は、いずれの血管においても高親和性の特異結合に125I-ET-1を抑制した。(IC50;4x10^<-10>M)が、ET-3は二相性の抑制効果を示した(IC50;2x10^<-10>M、1x10^<-6>M)。3)BQ-123により高親和性に抑制される部分は、腫瘍血管84%、脳血管58%であり(IC50;5x10^<-9>M)、S6C(10^<-5>M)で抑制されない部分に一致した。(結論)1)glioblastomaの微少血管には高親和性でET_Asubtype優位のET receptorが存在する。2)悪性神経膠腫における腫瘍内血流や血管透過性あるいは血管新生におけるETの役割が示唆される。
食品中ヒ素化合物の代謝と生体影響に関するメタロミクス解析

食品の中でも特にヒ素含有量の多い海産物中ヒ素化合物の分析方法を確立した。また、海産物中のヒ素化合物の中間代謝物で毒性の高いことで知られるジメチルモノチオアルシン酸(DMMTA)に着目し、細胞毒性試験および毒性発現機構の推定を行った結果、DMMTAの毒性発現にはGSHが深く関与しており、その機構にはGSHにより代謝生成する複数の化合物が関与している可能性を明らかにした。本研究の成果は、食品に由来するヒ素化合物のリスク評価に大変有用であると考えられる。海産物中のヒ素の大部分を占めるアルセノシュガー類とアルセノ脂質、ならびにその代謝物の化学形態については不明な点が多く、標準物質も得ることが難しいことから、その代謝・毒性に関する研究は遅れている。この状況を打開すべく、本研究ではLC-MALDI/TOFMSやLC-MS/MSを用いたメタロミクス解析による包括的検討から、標準品の合成、体内動態や培養細胞を用いた毒性試験など各分野の専門家と共に取り組むことを計画した。本研究により、様々な化学形態のメチル化ヒ素化合物の体内での挙動と細胞に対する影響を知ることは、ヒ素の毒性研究における最重要課題である発癌機序の解明に有用な知見となるとともに、食品中ヒ素化合物の安全性評価に有用な知見を得ることを目的とした。平成26年度は、in vitro代謝実験によるジメチルチオアルシン酸類の代謝機序ならびに毒性評価を中心に実施した。具体的には、代謝については肝臓ホモジネート、ヒト肝培養細胞、GSH共存化での無細胞系を用いて、代謝物の同定をHPLC-ICP-MSおよびHPLC-MS/MSなどメタロミクス解析を駆使した。具体的には、アルセノシュガー類の代謝物として知られるジメチルチオアルシン酸類の代謝物の解析を行うとともに、さらには毒性評価を実施した。特に、食品由来ジメチルヒ素化合物の代謝物として知られるジメチルモノチオアルシン酸(DMMTA)の毒性発現で、硫化水素や揮発性ヒ素化合物の代謝生成が大きく寄与するものと推定された。海産物からのヒ素抽出法の検討については、食用ワカメからの効率的なヒ素抽出法を開発した。昨年度の結果に基づき、再現性の確認のため合成したジメチルチオアルシン酸、ジメチル亜ヒ酸ーSG複合体を用いて、in vitro系での代謝活性化機構の推定を行った。HPLC-ICP-MS、HPLC-TOFMS、GC、GC-MSなどを用いて代謝物を推定した。その結果、海産食品中に含まれるアルセノシュガーの代謝物として知られるジメチルモノチオアルシン酸はGSHとの反応で、同代謝物として知られるジメチルアルシン酸とは大きく異なることが示唆された。すなわち、ジメチルアルシン酸はGSHと反応することでジメチル亜ヒ酸またはジメチル亜ヒ酸ーGSH抱合体を形成するが、ジメチルモノチオアルシン酸の場合では比較的安定した5価のジメチルヒ素としてジメチルモノチオアルシン酸-GSH抱合体を形成する。その後、経時的にジメチル亜ヒ酸またはジメチル亜ヒ酸ーGSH抱合体、硫化水素、ジメチルメルカプトアルシン、ジメチルジチオアルシン酸に変換されることを明らかにし、その代謝反応経路を推定することができた。昨年度に行った概略的な結果に基づき、食品中に含まれる有機ヒ素の二つの主要代謝物として知られるジメチルアルシン酸とジメチルモノチオアルシン酸に関して、その毒性発現機序の解明の一助として、代謝経路を比較検討しながら、今年度は詳細に検討し、ジメチルモノチオアルシン酸の今までに学術論文として報告がない、大変ユニークな代謝機序の詳細をin vitro実験ながら明らかにすることができた。前年に続き、食品中に含まれるメチルヒ素化合物の中間代謝物であるジメチルモノチオアルシン酸の代謝に着目し検討した。特に、その毒性発現への関与が疑われているGSHとの代謝機序について、他の中間代謝物として知られるジメチルアルシン酸の代謝機序と比較しながら、HPLC-ICPMS、HPLC-TOFMS、HPLC-PDA、GC-MS、GC-FPD等を駆使して、ジメチルモノチオアルシン酸の代謝機序の詳細をin vitroながら明らかにした。この成果はJournal of Trace Elements in Medicine and Biology. vol.33(2016)に掲載された。昨年度の結果に基づいて、海産物中の主要なヒ素化合物であるアルセノシュガーや無機ヒ素の代謝物のひとつであり、ジメチルアルシン酸(DMA)よりもその毒性の強さから、ヒ素発がんへの関与も示唆されているジメチルチオアルシン酸(DMMTA)の毒性機構を明らかにするために、ヒト肝細胞由来HepaRG細胞を用いた細胞毒性を検討した。細胞死の機構について検討するため、アポトーシス実行酵素であるカスパーゼの活性を測定した結果、BSO処理細胞ではカスパーゼ活性が顕著に低下した。さらに、毒性の本体と推定され強毒性として知られているジメチル亜ヒ酸(DMAIII)およびDMMTAを同程度の細胞毒性を示す曝露濃度で比較した結果、両者も同程度のカスパーゼ活性の増加が認められ、アポトーシスにともなうDNA断片化も検出された。この結果から、DMMTA曝露によりアポトーシスが誘発されることが明らかになった。加えて、DMMTAのGSHとの代謝反応によりジメチルメルカプトアルシン(DMAIII-SH)から同時に生成するDMAIIIおよび硫化水素の影響について検討した。その結果、DMAIIIによる細胞毒性は硫化水素の添加により抑制された。以上から、昨年度の代謝実験結果から示唆されたように、DMMTAの毒性発現にはGSHが深く関与しており、

細胞内でGSHにより代謝生成するDMAIII-SHを経て生ずるDMAIII、硫化水素など種々の活性代謝物が複合的に関与している可能性を明らかにすることができた。食品の中でも特にヒ素含有量の多い海産物中ヒ素化合物の分析方法を確立した。また、海産物中のヒ素化合物の中間代謝物で毒性の高いことで知られるジメチルモノチオアルシン酸(DMMTA)に着目し、細胞毒性試験および毒性発現機構の推定を行った結果、DMMTAの毒性発現にはGSHが深く関与しており、その機構にはGSHにより代謝生成する複数の化合物が関与している可能性を明らかにした。本研究の成果は、食品に由来するヒ素化合物のリスク評価に大変有用であると考えられる。海産食品中に含まれるメチルヒ素化合物の中間代謝物と考えられているジメチルチオヒ素化合物に焦点を当てて研究遂行することができた。特に当初の達成目的であるアルセノシュガー類の初発原料の合成ならびにそれら代謝物についてもHPLC-ICP-MSならびにHPLC-TOFMSを用いた分析法を確立し、平成26年度の計画はほぼ達成できたと考える。ジメチルモノチオアルシン酸の代謝活性化機構の検討の結果に基づきヒト肝腫瘍細胞株などを用いた細胞系での毒性発現における代謝活性化機序の検討を行う予定である。あわせて、ジメチルモノチオアルシン酸の代謝活性化における遺伝毒性の有無を検討する予定である。環境毒性学平成27年度以降は前年度の実績に基づいて、ジメチルチオアルシン酸類の代謝、毒性評価について申請時の計画どおり更なる検討を加えることで、食品に由来するヒ素化合物のリスク評価を検討していく予定である。研究分担者の学会出張が別の所用で行けなくなったこと、及び情報収集が当初の目標より速やかにできたことなどから、経費を使用しなかった。H28年度に繰り越し、学会発表の出張費として使用する予定である。
国連平和維持機能の多元的再構成とその実効性確保

近年の国連の平和維持機能はその内容面と実施の面の双方において多様な展開を示している。本研究は、国連平和維持活動(PKO)が様々な機能を組み込んでいく一方、海賊問題への対応のように、新たな国連平和維持機能が出現していることを指摘しつつ、こうした内容面での充実に伴い、平和維持機能の実現手段もまた、「強化された」PKOの登場や、加盟国グループならびに地域的機関と国連との有機的な接合関係も生じていることを実証的に明らかにした。本年度は主として以下の3つの角度から国連の平和維持機能を中心に考察を行った。第一に、21世紀に入ってからの国連安全保障理事会(安保理)の機能の拡大と、国連平和維持活動(PKO)における活動原則の規範的展開をあらためて確認するとともに、とりわけ2008年に国連より公表された「キャップストーン・ドクトリン」と呼ばれる報告書の検討を通じて、現在のPKOの問題点の指摘と評価を行った。この検討は、近々、村瀬信也編『国連安保理の機能変化(仮題)』(東信堂)所収の論文として公表されることになる。第二に、平和維持機能をめぐる国連と地域的機関の間の関係について、資料収集とともにその検討を開始した。この点では、国連とアフリカの地域的機関(主としてアフリカ連合(AU)と西アフリカ諸国経済共同体(ECOWAS))の関係についてリソースなどの面での検討を行った国連報告書が2008年末に公表され、引き続き安保理でも議論がなされていることから、そのフォローを行っているところである。それと平行して、国連と欧州連合(EU)の権限関係等についても、スーダンやチャドの事例などを調査しつつ、検討している。この作業は次年度以降も継続される。第三に、今年度に新たに国際社会の問題として(再)登場した海賊問題を国連の平和維持機能の観点から考察した。具体的にはソマリア沖の海賊問題をとりあげ、関連する安保理決議の内容ととその採択の際の安保理での議論、さらには海洋法規則等に照らした規範的側面と、国連加盟国やEUなど地域的機関によるその実施の側面を関連付けながら、ここでの国連の平和維持機能の内実に光を当てた。その成果は、次年度に、坂元茂樹編『国際立法の最前線(仮題)』(有信堂)所収の論文として公表予定である。第一に、平和維持機能をめぐる国連と地域的機関の間の関係について、資料収集とともにその検討を前年度に引き続き行った。この点では、国連とアフリカの地域的機関(主としてアフリカ連合(AU)と西アフリカ諸国経済共同体(ECOWAS))の関係についてリソースなどの面について安保理でも議論がなされていることから、そのフォローを行っているところである。なお、シエラレオネにおける国連PKOについて簡単にまとめたものを落合雄彦編『シエラレオネの紛争と平和構築』(仮題)(昭和堂)のI章として来年度に公表することを予定している。第三に、日本のPKOへの参加問題につき、具体的事例として国連ハイチ安定化ミッション(MINUSTAH)への自衛隊派遣問題を取り上げ、本来のMINUSTAHの任務と大地震後の復興作業との関連や、自衛隊派遣に関連する国内法との整合性等についての検討を行っている。この考察の成果については、近いうちに『法学論叢』で公表する予定である。本年度は作業の最終年度ということもあり、大きく分けて、これまでの研究のまとめを含む検討と、本研究によって得られた知見に基づく今後の展望についての考察を行った。前者については、国連の平和維持機能と地域的機関によるその実践という観点から、国連の権限の伸長を素材に、シエラレオネ内戦における国連の実行を検討した論稿(「国連の介入」落合雄彦編『アフリカの紛争解決と平和構築シエラレオネの経験』所収)を発表した。この作業により、内戦に関与するアクターや関連国際機構と、国連がその活動において有機的に連関していることが確認された。また、国連とアフリカ連合との権限関係については、"New Relationship between the United Nations and Regional Organizations in Peace and Security : A Case of the African Union"という論稿を準備中であり、ここで広く国連と地域的機関の関係の再定位を行うことを予定している。後者については、国連の任務遂行の展開により他のアクターが影響を受けることも多くなったこと、とりわけ私人との関係では人権や人道に関する国際法規範の適用により国連の活動に対する一定の規範的制約も生まれてきていることが明らかにされたことから、こうした国連の平和維持機能の「光」と「影」の部分をそれぞれ詳細に検証・分析するとともに、両者の関係を明らかにすることを通じて、国連平和維持機能の正統性と実効性を強化する法的理論的枠組みを構築する作業の準備を行っている。
脳腫瘍幹細胞におけるLAT１の幹細胞性維持機構への関与の検討

メチオニンのuptakeに関与すると考えられるアミノ酸トランスポーターLAT1がglioma stem-like cellの維持に関与しているのではないかと仮定した。gliomaの手術サンプルにおいて、LAT1、SOX2、HIF-1αの発現を免疫染色にて解析した。WHO grade 3/4のgliomaを比較したが、LAT1、HIF-1α、SOX2発現に差は認めなかった。また全サンプルにおいてLAT1陽性率は5%未満と低く、メチオニンPETの集積と3つのタンパク質発現に相関は見られなかった。以上より、gliomaにおけるLAT1タンパク質発現は低く、研究仮説を支持する結果は得られなかった。アミノ酸トランスポーターLAT1(L-type amino acid transportor 1)はがん細胞において発現が上昇していることが知られ、これにより神経膠腫でもメチオニンPETの高集積がみられると考えられている。近年、LAT-1発現にc-mycが関与していること、またLAT1の細胞内シグナル伝達の下流にmTORが存在することが明かとなってきた。c-myc, mTORともにがん幹細胞の幹細胞性維持に関与していることが考えられることから、本研究ではLAT1の脳腫瘍幹細胞性維持機構への関与につき明らかにすることとした。神経膠腫33例(男性14例、女性19例、年齢5歳81歳を対象とした。術前メチオニンPET検査を行い、ニューロナビゲーションシステムに術前3T MRI画像とfusionして手術に用いた。必要時には術中MRIシステムを用いてupdate navigationを行い解剖学的な位置情報を再確認した。ナビゲーションシステムのスクリーンショット機能を使用し、メチオニンの集積程度、MRIガドリニウム造影の有無を記録した後、標本を分取しホルマリン固定を行った。今後は、それらのタンパク質の発現の相関、メチオニンPETの集積、腫瘍の悪性度との相関を検討する予定である。アミノ酸トランスポーターLAT1(L-type amino acid transporter 1)は、がんにおいて発現が上昇していることが知られ、これにより神経膠腫でもメチオニンPETの高集積がみられると考えられている。近年、LAT1発現にc-mycが関与していること、またLAT1の細胞内シグナル伝達の下流にmTORが存在することが明かとなってきた。c-myc, mTORともに幹細胞性維持への関与が知られていることからLAT1もがん幹細胞の幹細胞性維持に関与している可能性が考えられる。そこで、本研究では、LAT1の幹細胞性維持機構への関与を明らかとすることとし、治療への可能性につなげることを目的とした。H26年度は神経膠腫手術患者33例について、ニューロナビゲーションシステムを用いて術前メチオニンPEのT集積の高い部分と低い部分を採取した。H26年度はこれらの標本についてWHO grade, p53, MGMT, mIDH1について検討した。H27年度は主要幹細胞に関連するc-myc, HIF-1α、mTOR、CD133とアミノ酸トランスポーターLAT1, LAT2の発現について免疫染色を行った。CD133の免疫染色が安定しなかったため、CD133と同様に幹細胞マーカーとしてよく用いられるSOX-2についても検討を行い安定して綺麗な免疫染色を行える条件が確定した。現在10例の染色が終わっており、今後症例を増やすとともにこれらのタンパク質の発現の相関、またT/N比との相関、腫瘍の悪性度との相関を検討する。使用する抗体が多く染色の条件検討に時間を要し、代替となる抗体についても条件検討が必要となったため。そこでLAT1の幹細胞性維持機構への関与を明らかとすることを目的に研究をおこなった。低酸素環境は腫瘍幹細胞の維持に関与していることが報告されているため、HIF-1αについても追加検討をおこなった。術前にメチオニンPET(MET PET)を施行の後に手術摘出をおこなった悪性神経膠腫を対象とした。MET PET集積は対側の正常皮質との比Tmax/Nmeanを算出して用いた。LAT1、HIF-1α、sox-2のタンパク質発現については免疫染色を行い、10視野の陽性細胞の割合の平均を用いて検討した。grade3,4においてLAT-1、HIF-1α、sox-2の発現に差は認められなかった。いずれの標本でもLAT1陽性細胞の割合は5%未満であり、grade3よりもgrade4の方が陽性率が低い傾向が見られた。MET集積と3つのタンパク質の発現にも相関は認められなかった。また、LAT1の発現と腫瘍幹細胞のマーカーとして用いたsox-2の発現にも相関は認められなかった。以上より、アミノ酸トランスポーターLAT1の神経膠腫における発現レベルは低く、LAT1が腫瘍幹細胞の維持、増殖に関与しているのではないかという今回の作業仮説を支持する結果は得られなかった。

また全サンプルにおいてLAT1陽性率は5%未満と低く、メチオニンPETの集積と3つのタンパク質発現に相関は見られなかった。以上より、gliomaにおけるLAT1タンパク質発現は低く、研究仮説を支持する結果は得られなかった。使用する抗体の種類が多く、免疫染色およびウエスタンブロットの条件検討に時間を要しています。本年度より山形大学医学部がんセンター病理解析センターおよび病理学講座の協力を頂いており、条件検討は予定よりも速やかに完了できた。今後は症例数を増やし実際のデータを速やかに解析し、たんぱく質発現の相関、メチオニンPETのT/N比との相関、悪性度との相関について検討を行う。またグリオーマ細胞株およびグリオーマ幹細胞の培養を並行して行いLAT1阻害剤の細胞への影響についても検討を開始する。脳腫瘍山形大学医学部病理診断科および山形大学がんセンター病理解析センターにもご協力頂けることとなったため、今後は研究の速やかな推進が可能になるものと考えています。実験に用いる抗体の条件検討に時間を費やしたため、予定されていた細胞培養の開始時期が次年度になった。このため細胞培養用の試薬の購入も先送りとなり次年度使用額が生じた。H28年度は速やかに培養細胞を用いる実験系を立ち上げ、予算を有効に使用する予定である。
肉芽腫性肺疾患の病変形成におけるコロニ-刺激因子の役割に関する分子生物学的研究

サルコイド-シスでは肺局所に多数の肺胞マクロファ-ジが集積するが、その機序を明らかにするために、各種のコロニ-刺激因子のmRNA発現を検討することを目的とした。気管支肺胞洗浄によって得た。主として肺胞マクロファ-ジとリンパ球からなる炎症細胞からRNAを抽出した。次いでMーCSF,ILー3,GMーCSF3種のCSFのprimerを合成し、reverseーtranscription polymerase chainーreaction(RTーPCR)法にて、目的のCSFのmRNAの検出を試みた。その結果、MーCSFは健常者、サルコイド-シス患者、農夫肺症患者のいずれにおいても検出された。一方、ILー3についてはすべての群で検出されなかった。またGMーCSFについては、サルコイド-シス患者20人中15人において発現を認めたが、健常者、農夫肺症患者では1例も認められなかった。GMーCSFは単球の活性化、分化、増殖を介して、サルコイド-シス肺局所での肺胞マクロファ-ジの集積に関与すると推測される。また肺胞マクロファ-ジの細胞融合作用もあり、肉芽腫内の多核巨細胞の形成にも関係していると考えられる。一方、同じ肉芽腫性肺疾患でもサルコイド-シスと農夫肺症では、GMーCSFmRNAの発現状況が異なっており、病態の差異を示唆していると考えられ、興味深い知見と言える。次に本研究では、サルコイド-シスにおけるGMーCSFmRNA発現と、その臨床的意義について検討を加えた。その結果、GMーCSFmRNA発現群では気管支肺胞洗浄液中のリンパ球比率、CD4/8比率、血清ACE値、肺外病変を有する比率などは、非発現群に比して有意に高かった。またGMーCSFmRNAの発現を調査した時から、retrospectiveに臨床経過とmRNAの発現の関係を検討したところ、胸部X線写真上不変ないし増悪傾向にある例が発現群に多かった。さらにprospectiveな検討でも同様な関係を認め、GMーCSFが実際に病態に深くかかわっていることが裏付けられた。以上より本研究では、RTーPCR法を用いることにより、微量のmRNAの検出に成功しサルコイド-シスの病態の一端を解明するとともに、その発現と臨床像の関連を世界に先駆けて報告することができた。肉芽腫性肺疾患の形成機序を明らかにするために、気管支肺胞洗浄によって得られる肺の炎症細胞のサイトカイン産成をmRNAレベルで検討した。対象は健常者5人、サルコイド-シス患者20人、農夫肺症患者5人。これらの対象者において気管支肺胞洗浄を行い、主として肺胞マクロファ-ジとリンパ球からなる炎症細胞よりmRNAを抽出した。これにILー3,GMーCSF,あるいはMーCSF遺伝子の3'プライマ-を添加し、reverse transcriptaseによってmRNAとcDNAとハイブリッドを形成した。ついで1本鎖にした。次いで5'プライマ-を用いて2本鎖DNAを合成した後、再び1本鎖にした。これにまた、3'側と5'側のプライマ-を作用させ増幅するというサイクルを30回繰り返し、もとのmRNAを約100万倍に増幅した。

次いで電気泳動後、サザンブロットハイブリダイゼ-ションを行い、目的のバンドをそれぞれのサイトカインに対するアイソトープラベルしたプロ-ブにて検出した。その結果、サルコイド-シス患者では20人中15人でGMーCSFmRNAが検出された。一方健常者、農夫肺症患者では1例も検出されなかった。またIL3は3群のいずれにおいても検出されず、MーCSFはすべての群で認められた。サルコイド-シスにおいてGMーCSF産生と疾患の活動性の関連を検討したところ、GMーCSF産生群では血清ACE値が非産ACE値が非産生群に比して有意に高く、BALFのリンパ球比率、CD4/8比も有意に高値を示した。また、産生群は肺外病変が多く、臨床経過も悪化ないし不変である例が多かった。以上よりGMーCSFがサルコイドーシス病の形成、維持に密接なかかわりを有していることが示唆された。本年度はサルコイド-シス患者の気管支肺胞洗浄細胞のGMーCSFmRNA発現と臨床経過の関連について特に検討を加えた。GMーCSFmRNAの発現を測定した時点より、過去一年前に逆上って臨床経過を検討することができた16例では、発現群では胸部X線写真に所見がありそれが不変であったか、ないし悪化した例は11人であり、逆に改善した例はひとりに過ぎなかった。一方非発現群では悪化した例はなく、改善したかあるいは無所見のまま落ち着いていた例が5人であった。これらの結果は有意にGMーCSFmRNA発現群での経過の悪さを証明しており、昨年度の研究で明らかにされた臨床的活動度の高いことと符合する結果であった。一方これらの結果はretrospectiveな検討結果であり、真の臨床的有用性はprospectiveに、GMーCSFmRNAの発現から、予後をうかがうことができるか否かにあると言える。そこでGMーCSFmRNAを測定後、1年間経過を追跡できた19人について、その後1年間の臨床経過を検討すると、やはり発現患者では有意に遷延例が多く、retrospectiveな検討と同様な結果を得た。また本研究ではGMーCSFmRNA発現細胞の帰属を決定することも大きな目的のひとつであり、本年度も方法を変更してin situ hybridizationを試みたが、はっきりした結果を得ることができなかった。今後の検討に期待をつなぎたいと考える。
肺異型腺腫様過形成から細気管支肺胞癌への発育進展における分子生物学的解析

平成12年度に行った検討は以下の通りである。1.病理学的検討:当研究所に蓄積された1390例の肺切除例のデータベースから選び出された粘膜内に限局した腺系腫瘍は、異型腺腫様過形成529病変、細気管支肺胞癌89病変であった。これらの組織像を再検討した結果、異型腺腫様過形成、異型腺腫様過形成-細気管支肺胞癌移行型、細気管支肺胞癌がそれぞれ、525病変(85%)、36(5.9%)、57(9.1%)認められた。この結果から、異型腺腫様過形成は肺腺癌の前癌病変であると考えられる。2.LOHの解析:本研究の標的である異型腺腫様過形成-細気管支肺胞癌の検討を行う前に、早期非浸潤腺癌におけるPCR-based LOHの解析を行い、どの様なマイクロサテライトマーカーが有用かをまず明らかにすることを試みた。検討に当たって、材料は当部に保管されているメタノール固定パラフィン包埋標本を用いた。LOHの有無を検索する遺伝子座の存在する染色体は3p(FHIT),5q(APC),9p(p16),13q(Rb),17p(p53),18q(Smad4),22q(Band M)であり、それぞれの遺伝子座特異的なアイクロサテライトマーカーを複数用いて行った。また、病変細胞のDNAを検討するためにlaser capture microdissection法を用いた。至適条件の条件設定をまず行い、早期非浸潤腺癌の解析を行った。その結果、40症例を対象に検索したところ5q,9p,13qにLOHが認められた。3.今後の研究の展開:早期非浸潤腺癌で得られた結果を用い、3カ所の遺伝子座を対象に異型腺腫様過形成-細気管支肺胞癌移行型の各部位ごとにおけるLOHの有無を検索する。なお、9q(TSC-1),16p(TSC-2)が早期肺腺癌においてLOHの頻度が高いことが最近知られてきており、これらのマイクロサテライトマーカーの検討も今後行う予定である。
緑藻ハネモの自然プロトプラスト形成誘導物質の同定と応用

前年度内に緑藻ハネモBryopsisplumosaの自然サブプロトプラスト形成誘導物質の検出アッセイ系として洗浄オルガネラ画分と細胞内液(検液)の再混合実験系を確立し、同物質は耐熱性の高分子物質であることを認めた。そこで、本年度研究では、同アッセイ系を用いてプロトプラスト形成誘導物質の精製を試み、以下の結果を得た。同形成誘導物質はハネモ培養藻体から緩衝液で抽出され、主に20-60%飽和硫安沈殿として回収されることを認めた。同画分をゲルろ過に供したところ、サブプロトプラスト誘導活性はボイドボリュームあたりの高分子領域(>MW、550kDa)に溶出した。一方、分画した各溶出液の加熱処理液では、本海藻のレクチン(MW、55kDa)の溶出ピークで高い活性が認められた。そこで、本レクチンをアフィニティーカラムで単離し、その加熱処理液が同誘導活性をもつことを認めた。この加熱処理液の添加により生じたプロトプラストは細胞壁を形成し、糸状体へと生長することも認めた。そこで、先のゲルろ過での各溶出画分を抗レクチン血清を用いるウェスタンブロットで検討したところ、高分子画分の非加熱液およびレクチン画分の加熱液では、抗レクチン抗体に陽性なバンドがスタッキングゲル内に認められた。また、精製レクチンを用いて種々温度で加熱後のプロトプラスト誘導活性、同レクチン蛋白質の表面疎水度、およびSDS-電気泳動での挙動を調べ、加熱温度の上昇に比例して同誘導活性、レクチン蛋白質の表面疎水度および会合体化が上昇することを認めた。以上の結果から、自然(生理)条件下では、何らかの機構でレクチン蛋白質の表面疎水度の上昇を伴う構造変化が起こり、その表面疎水性をとおして会合体が形成され、この会合体がプロトプラスト形成に関与することが強く示唆される。生理条件下での会合体形成機構が今後の興味深い課題である。緑藻ハネモBryopsisplumosaは単細胞性の多核管状体を体制とする雌雄異株の海藻で、特異な再生機能を有することが知られている。すなわち、海水中に絞り出された細胞内容物が自然凝集し、細胞膜を形成してプロトプラスト化し、細胞壁を合成後、成熟体となる。この特異な生物現象の科学的側面に関する情報は得られていない。そこで、本年度研究では、プロトプラスト形成誘導物質を固定することを目的とし、以下の結果を得た。細胞内容物を直ちに遠心分離し、細胞内液とオルガネラ画分に分別した。まず、十分に洗浄したオルガネラ懸濁液はそのままでは凝集しないが、これに予め分離した細胞内液を再添加すると凝集し、やがてプロトプラストを形成することを認めた。この結果から、細胞内液にプロトプラスト形成誘導物質が存在することが実証された。次に、細胞内液のクロロプラスト凝集能を指標として、同誘導物質の性状を予備的に調べた。その結果、同物質は非透析性で、加熱処理で失活せず、プロテアーゼ処理で失活することから、ペプチド含有の耐熱性高分子物質であることがわかった。本誘導物質は耐熱性であることで、同細胞内液中の易熱性のレクチンとは異なると推定される。この物質は細胞内液から20-60%飽和硫酸アンモニウム沈殿画分に回収された。その精製は現在進行中である。なお、雌雄株の各細胞内液はそれぞれ異性株のオルガネラを凝集したことから、この凝集物質は性の違いに関係なく存在することがわかった。今後、クロロプラスト凝集物質を単離し、その科学的性質を明らかにするとともに、プロトプラスト形成の誘導が同凝集物質単独でも行われるのか、あるいは複合系を伴うのか明らかにする予定である。

また、精製レクチンを用いて種々温度で加熱後のプロトプラスト誘導活性、同レクチン蛋白質の表面疎水度、およびSDS-電気泳動での挙動を調べ、加熱温度の上昇に比例して同誘導活性、レクチン蛋白質の表面疎水度および会合体化が上昇することを認めた。以上の結果から、自然(生理)条件下では、何らかの機構でレクチン蛋白質の表面疎水度の上昇を伴う構造変化が起こり、その表面疎水性をとおして会合体が形成され、この会合体がプロトプラスト形成に関与することが強く示唆される。生理条件下での会合体形成機構が今後の興味深い課題である。
転位配列制御による導電性量子細線の形成技術とその高密度化技術の開発

本研究では、絶縁体中の転位に沿って金属を拡散させ、導電性量子細線を自己形成させること、またその物性を調べることを目的とした。MgOバイクリスタルの粒界を利用し、熱処理で不純物元素を拡散させた。STEM像観察及びEELSによる原子分解組成マッピングを行った結果、粒界には格子ミスマッチに対応した構造ユニットが形成され、不純物のCaとTiが構造ユニット内に偏析していた。第一原理計算によると、粒界に形成されたTi局在層によって伝導チャンネルが形成され、半導体的挙動を示すことがわかった。このように転位と拡散現象を活用し、固体中に低次元量子構造を自己形成させ、特異な電子状態を創生させることに成功した。セラミックス焼結体は、電子回路の基板、プラグなど自動車部品、電子材料のコンデンサーやバリスター、碍子など、様々な用途で使用されている。その諸特性は粒界における格子整合性と密接に関係すると考えられているが、その詳細は不明である。そのため、粒界諸特性の発現挙動が遷移する対応方位関係(Σ粒界)から僅かに傾角させたNear-Σ粒界について、粒界局所構造を詳細に調べる必要がある。高純度(99.9%)酸化マグネシウム(MgO)のΣ5(310)[001]対応粒界(Σ粒界)および対応方位関係から僅かに傾角させたNear-Σ粒界をモデル系として比較する。汎用型透過型電子顕微鏡(CTEM)、球面収差補正走査透過型電子顕微鏡(STEM)と第一原理計算を駆使して、残留不純物が偏析しやすい結晶粒界近傍における極微量不純物の所在と形成される微細構造を原子レベルで観察、さらに安定構造をシミュレーションした。Σ粒界について、高角環状暗視野(HAADF)像と原子分解EELSマッピングより、極微量の不純物であるカルシウム(Ca)原子とチタン(Ti)原子が同時に結晶粒界に偏析し、原子スケールで規則配列した自然には存在しない三次元構造(超構造)を形成していることが観察された。さらに理論計算によると、それらが複数の欠陥や電荷と強く結びついて、複雑な安定構造及び特有の電子状態を形成していることが明らかにされた。Near-Σ粒界の暗視野像では、等間隔で配列する直線状の刃状転位に起因するコントラストが観察された。対応方位関係からの僅かなずれによるミスマッチを補正するために、バーガースベクトルが非常に小さいDisplacement Shift Complete(DSC)転位を導入して、ミスマッチ領域を局在化していることがわかった。セラミックス焼結体は、電子回路の基板、プラグなど自動車部品、電子材料のコンデンサーやバリスター、碍子など、様々な用途で使用されているが、特にその電気的特性および機械的強度のばらつきが大きな問題点になっている。そのような諸特性は、粒界における格子整合性と密接に関係するということと、原料中に混在している微量な不純物の存在の影響と考えられているが、その詳細は不明である。高純度酸化マグネシウムのΣ5対応粒界および対応方位関係から僅かに傾角させたNear-Σ粒界をモデル系として比較する。汎用型透過型電子顕微鏡、球面収差補正走査透過型電子顕微鏡と第一原理計算を駆使して、残留不純物が偏析しやすい結晶粒界近傍における極微量不純物の所在と形成される微細構造を原子レベルで観察、さらに安定構造をシミュレーションした。Σ粒界について、高角環状暗視野像と原子分解EELSマッピングより、極微量の不純物であるカルシウム原子とチタン原子が同時に結晶粒界に偏析し、原子スケールで規則配列した自然には存在しない三次元構造(超構造)を形成していることが観察された。対応方位関係からの僅かなずれによるミスマッチを補正するために、バーガースベクトルが非常に小さいDSC転位を導入して、ミスマッチ領域を局在化していることがわかった。量子細線や量子ドットなどの低次元量子構造は、バルクとは完全に異なる物性を所有することから古くから注目されている。我々は半導体や絶縁体などの結晶内部に導電性量子細線を形成させる媒体として、結晶の線欠陥、すなわち「転位」に注目する。

転位は、結晶中の原子配列が不連続になった線欠陥であり、その周囲に生じる弾性ひずみ場においては、ひずみ緩和のためにしばしば溶質元素の偏析が起こる(コットレル効果)。また、弾性ひずみ場では、溶質元素の拡散速度が完全結晶領域と比べて速くなる(パイプ拡散)ことが知られている。このような転位特有の性質を利用して、添加元素を転位に沿って拡散させて転位芯近傍に偏析させることができれば、溶質元素を1次元的に配列した量子細線構造を創出することが期待される。絶縁体結晶内部に量子細線を形成させる媒体として、転位を提案した。転位を1次元的に配列させる条件を最適化した。転位導入法は、バイクリスタル法を用いた。酸化マグネシウム(MgO)のΣ5(310)[001]対称傾角粒界をモデル系として、球面収差補正走査透過型電子顕微鏡(STEM)を駆使して、結晶粒界近傍における形成される微細構造を原子レベルで観察及した。高角環状暗視野(HAADF)像と原子分解EELSマッピングより、極微量の不純物であるカルシウム(Ca)原子とチタン(Ti)原子が同時に結晶粒界に偏析し、原子スケールで規則配列した自然には存在しない三次元構造(超構造)を形成していることが観察された。セラミックス粒界における極微量の残留不純物が、規則的な超構造を自己組織化し、物性に大きく影響することがわかった。このような自己組織化メカニズムを積極的に活用することで、量子細線の自己形成や原子レベルでの不純物制御によるセラミックス材料の高性能化が期待されるだけでなく、量産面などのエンジニアリングの観点でも応用が可能である。転位導入法は、(1)高温圧縮変形法、(2)バイクリスタル法、(3)配向薄膜粒界を予定していた。しかしながら、(1)高温圧縮変形法による転位導入は困難を極めたため、中止している。現在、引き続き、(2)のバイクリスタル法を用いて成功している。現在、(2)のバイクリスタル法を用いて成功した。引き続き、成功しているバイクリスタル法をさらに活用して導電性細線の配列を試みる。様々な小傾角粒界や安定なΣ粒界が形成すると予測される接合結晶方位関係を用いる。直線的な転位配列が形成されているか、汎用透過型電子顕微鏡の暗視野像で評価する。さらに、転位を直立させるような方向で、約10μmまで機械研磨された後、イオンミリング処理によってさらに薄片化を行い、転位が貫通している状態で、試料表面に金属を蒸着する。Ar雰囲気下での熱処理で金属を転位に沿ってパイプ拡散させ、導電性量子細線を形成させる。第一原理計算に基づく、電子状態計算、電子輸送特性のシミュレーションにより、導電性量子細線の電流輸送機構の本質を解明する。計算の中で金属を変更して物性の改善を予測する。成功しているバイクリスタル法をさらに活用して導電性細線の配列を試みる。
高エネルギー・ハドロン反応によるチャーム及びビューティ粒子崩壊の研究

チャーム及びビューティ粒子の崩壊現象の研究において,第1回原子核乾板照射実験で,カウンター側のデータと乾板中で見出された800GeVー陽子ー原子核反応中の約120例のチャーム粒子崩壊現象候補について,解析され,カウンター側のオフ・ライン・プログラムの改良,乾板側のチャーム粒子探索の方法が完成した.第2回原子核乾板照射実験では, 650GeV負パイ粒子が照射され,カウンターにおいては,シリコン固体検出器の精度を2倍上げ,ミューオントリガーの性能を増加したことの改良がなされ,乾板標的においては,その直後に現象探索の能率を上げるために,原子核乾板テープを設置するという改良がなされ, 47lの乾板の現像が完了した.米国々立加速器研究所において,原子核乾板標的と電子カウンターを複合させた照射実験は2回に亘って行われ,カウンター・データの収集及び,原子核乾板の現像は完了した.これらの成果を次に述べる.第1回実験,乾板容量30l, 800GeV陽子に照射,ミューオン・トリガーによる陽子-核反応数5.4×10^6を収録,反応点とミューオン飛跡との接近距離により選別した現象中薬120ケのチャーチ粒子候補発生現象を見つけた.選別現象数と候補現象数との比は25対1である.測定器とプログラミングの開発により,チャーム粒子対候補が見つかるのは, 1ケ月約50ケである.約半年後に,チャーム粒子対発生機構の解析が可能となる.第2回実験,乾板容量47l, 650GeV負パイ粒子に照射,ミューオントリガーによる反応数9.6×10^6を収録,乾板に結合するカウンター・データの質をあげるために次の点が改良された.シリコン固体検出器上の位置決定精度を2倍にあげた.更に,ミューオン・トリガーに対して,カウンターを一層増やし,鉄吸収層の厚さを増加させた.候補現象発見効率を上げるために時間的にビーム照射位置がすばやく変化する乾板テープが開発された.第2回実験においては,かなりの数のビューティ粒子崩壊が期待される.チャーム及びビューティ粒子の崩壊現象の研究において,第1回原子核乾板照射実験で,カウンター側のデータと乾板中で見出された800GeVー陽子ー原子核反応中の約120例のチャーム粒子崩壊現象候補について,解析され,カウンター側のオフ・ライン・プログラムの改良,乾板側のチャーム粒子探索の方法が完成した.第2回原子核乾板照射実験では, 650GeV負パイ粒子が照射され,カウンターにおいては,シリコン固体検出器の精度を2倍上げ,ミューオントリガーの性能を増加したことの改良がなされ,乾板標的においては,その直後に現象探索の能率を上げるために,原子核乾板テープを設置するという改良がなされ, 47lの乾板の現像が完了した.800GeV陽子一原子核衝突でミューオン・トリガーされたカウンターにおける現象数(ミューオンの運動量で8GeV以上、垂直運動量で0.2GeV以上のトリガー条件)5×【10^4】個が得られた。このうち、約1%にあたる約500個が、61年11月よりテープ化されたデーターとして送られて来た。これを、もとにして測定解析した結果カウンターからの予期された乾板中の現象の位置に対して、ビーム方向に垂直な面の縦横の座標の巾を、各々±160μ、進行方向に対して、±2mmの区域を探索し、発生した2次粒子のビームとのなす角とカウンターの知らせた角を、10ミリラジアン以上について、比較し、合っているものが半分以上であると、それを眞なりとして発見率を求めた所、約90%であった。これ等の現象について、面積スキヤン及びカウンターに合っていない飛跡を追い下ってチャーム崩壊現象を求めた所、約20個のチャーム粒子崩壊現象の候補が見つかっている。従って、約25分の1の割合で、ミューオン・トリガー現象の中にチャーム候補が存在している。残りのデータは、順次送られる予定であり、これらについて測定解析が続行される。米国よりのカウンター・データが当初予定より、一年以上遅れたので、その間、ハドロン反応によって得られるチャーム粒子崩壊のデータに、補足、対照させる為に、従来より、行われていたニュートリノ反応によって得られたチャーム粒子のデータを増加させ、チャーム粒子崩壊測定の統計上の精密化を行った。
精神発達遅滞児および自閉的傾向児における運動学習に関する研究

精神構造の未分化性を特徴とする精神発達遅滞児や自閉的傾向児の早期において,感覚と運動の訓練は,彼らの自己身体感覚を分化させたり,自己受容的感覚を豊かにさせたり,さらには行動の主体である自分の身体というものの把握をより確かにさせたりするなどきわめて重要である.本研究は, 5名の対象児に対して10種目からなる運動課題(サーキット課題)や手遊びなどの身体運動模倣課題を遂行させ,各課題に対する遂行時間,介助度,模倣度などを時系列的に記録し,検討した.サーキット課題においては,後半になるにつれて遂行時間や介助度が安定してきた.このことは,行動そのものの変動性が時系列の中で修正化されたものと捉えることができる.また,言語指示による理解ができ,見通しがもてるかどうかは,課題遂行時間や介助度に大きく影響を与える.自閉的傾向が強く,疎通性が悪い対象児は,遂行時間に若干の減少が見られたが,介助度においては全く変化が見られなかった.課題の難易度の点からは,手がかりが少なく,また運動のイメージが浮びにくい課題では,介助度が大であった.身体運動模倣課題は,動作が刻々と変化するので対象児にとっては困難な課題であると言える.動作の違いによる模倣度の比較において,両側性運動,正中線交差運動,片側性運動,対側性運動の順に模倣度が高かった.空間および身体部位の違いによる模倣度は,上部,中部,下部の順に高かった.つまり,対象児にとって目に近い空間での動きがより模倣され易いと言える.今後は,彼らが課題に対してどのように見通しをもつのか,課題ごとの関連性をどのように学ぶのか,そのための運動課題はどのようなものが良いのか.どのような介助が望ましいのかなどを検討していきたい.精神構造の未分化性を特徴とする精神発達遅滞児や自閉的傾向児の早期において,感覚と運動の訓練は,彼らの自己身体感覚を分化させたり,自己受容的感覚を豊かにさせたり,さらには行動の主体である自分の身体というものの把握をより確かにさせたりするなどきわめて重要である.本研究は, 5名の対象児に対して10種目からなる運動課題(サーキット課題)や手遊びなどの身体運動模倣課題を遂行させ,各課題に対する遂行時間,介助度,模倣度などを時系列的に記録し,検討した.サーキット課題においては,後半になるにつれて遂行時間や介助度が安定してきた.このことは,行動そのものの変動性が時系列の中で修正化されたものと捉えることができる.また,言語指示による理解ができ,見通しがもてるかどうかは,課題遂行時間や介助度に大きく影響を与える.自閉的傾向が強く,疎通性が悪い対象児は,遂行時間に若干の減少が見られたが,介助度においては全く変化が見られなかった.課題の難易度の点からは,手がかりが少なく,また運動のイメージが浮びにくい課題では,介助度が大であった.身体運動模倣課題は,動作が刻々と変化するので対象児にとっては困難な課題であると言える.動作の違いによる模倣度の比較において,両側性運動,正中線交差運動,片側性運動,対側性運動の順に模倣度が高かった.空間および身体部位の違いによる模倣度は,上部,中部,下部の順に高かった.つまり,対象児にとって目に近い空間での動きがより模倣され易いと言える.今後は,彼らが課題に対してどのように見通しをもつのか,課題ごとの関連性をどのように学ぶのか,そのための運動課題はどのようなものが良いのか.どのような介助が望ましいのかなどを検討していきたい.