hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
太平洋戦争後の〈戦後文学〉に描かれたタイ表象の分析研究

3、タイについて言及した日本語雑誌・図書から、時代ごとの社会・文化をめぐる言説を時系列に従って抽出し、小説・紀行文・ルポルタージュなどのテクストと比較・照合することでタイ表象が構築された経緯をたどり、その歴史的意味について分析する。戦中・戦後を挟んで、小説・随筆・児童文学・教科書などのテクストの中のイメージの構築と流布の経緯について考察した。3、太平洋戦争後の〈戦後文学〉の作品として、〈観光小説〉〈バックパッカー小説〉として分類可能な作品について、トラベル・ライティングの系譜に連なる作品として分析した。4、研究成果について学会発表以外に、「福岡県高等学校国語部会」で高等学校教員を対象に講演を行い、研究成果を教育の領域においても発表した。(1)タイについて言及した日本語雑誌・図書から、社会・文化をめぐる言説について小説・紀行文・ルポルタージュなどのテクストと比較することでタイ表象が構築された経緯をたどり、その歴史的意味について分析した。(2)〈戦後文学〉の小説・随筆・児童文学・教科書などのテクストの中のイメージの構築と流布の経緯について考察した。(3)日本近代文学野中で、特に〈戦後文学〉の作品において、日本とタイ及びインドシナ半島の歴史・文化交流を背景とした作品について分析・考察した。(4)上記の(1)(3)までの研究成果報告として、本研究の研究協力者である、タイ人研究者2名(チュラーロンコーン大学のナムティップ・メータセート、チェンマイ大学のタナポーン・トリラッサクルチャイ)と共に、2017年度日本近代文学会国際研究集会「日本近代文学のインターセクション」におけるパネル発表「タイからのまなざし/タイへのまなざしー日本近代文学をめぐる受容状況」(11月26日、立教大学)において報告した。タナポーンの発表「タイで刊行された月刊誌「サンコムサート・パリタット(社会科学評論)」における日本文学の翻訳」、ナムティップの発表「タイにおける芥川文学の受容とアダプテーション」、久保田の発表「日本近代文学の中のタイ表象」を共同研究の成果として発表し、日本側とタイ側の双方向的な視点から共同研究の成果を報告した。また久保田の論文「戦争の中の観光ー松本清張『像の白い脚』ー」(『昭和文学研究』第75集)では、タイを含む地域へと研究範囲を拡大して考察し、タイ・ラオスを舞台とした1960年代のインドシナ半島を描いたテキストを分析した。以上のように平成27、28年度に調査・収集した資料に加えて平成29年度にタイのナショナル・ライブラリー等で調査した資料を基盤として、当初の研究計画にそって、成果を挙げることができた。本研究において、日本近代文学において描かれてきたタイ文化表象について分析するために、日本とタイの図書館において資料収集を行った。調査結果を基盤として、日タイ関係の歴史を通時的にたどり、太平洋戦争期、1960年代以後の高度経済成長期、1980年代以降のツーリズムの時代の中で、太平洋戦争後の〈戦後文学〉の作品に描かれたタイ表象について、構築と流通の過程を明らかにした。研究成果を日本・タイの国際シンポジウム・学会・共編著・学術雑誌を通して発表した。平成28年度の推進方策としては、以下の点を計画している。
性教育の体系化とエビデンスに基づいた実行可能な性教育モデルの開発に関する研究

本研究においては,エビデンスに基づいた性教育の体系化・開発にあたって以下の基礎的議論をおこなった。わが国では,バブル期(1985-1992)を前後して,十代の人工妊娠中絶率(現在は減少中)および性感染症罹患率の上昇がみられていた。性交開始年齢が高年齢化し,性行動・性意識が停滞化するなかで,それら指標の悪化が進んだことになる。これまでは,性交開始年齢が低年齢化しており,性行動が活発になっているがゆえに,性の問題(中絶やSTD)が増加している,というsimpleな見方(量的相関仮説と命名)が主たるものであった。それらの性の問題に対する対策(性対策)も,この仮説の上に成り立つものとして展開されてきた。バブル期以降,evidenceに基づけば,量的相関仮説は説得力を失った,もしくは誤りであることがわかった。われわれには,性交開始が遅くなり,かつ,性行動が停滞する中で,なぜ性の問題が増加したのかということを説明しうる新たな仮説が必要となった。これを説明する新しい仮説は「性の敷居」仮説と呼ぶもので,世界のあらゆる社会でみられる性の慎重さという事象(メタ事象)と整合性をもたせたものである。この仮説に従い,人工妊娠中絶は減少し,STDは増加か横ばいで推移するだろうという予測を打ち出した。この状況を改善するためには,性のプロモーションという視点が必要となる。すなわちそれは,思春期後期に<性のちから>が十分に育ちあがるような,生後十数年間の成育環境と支援が必要だということを意味している。これらの議論から,現代の思春期の子どもたちの性の諸相においては,非常に<格差>が大きくなり,その格差に対応しうる性教育プログラムが必要だと論じた。これらの議論に基づき,学校における性教育の新しい在り方として,カフェテリア方式をはじめとする各種の小集団方式を用いた性教育を確立した。学校におけるエビデンスに基づいた性教育の新しい実践モデルを開発するために,まず,学校現場の教職員における性教育および子どもたちの性の状況に関する認識について把握した。全国各地の保健主事,養護教諭を対象とした研修会等の集まりにおいて質問紙調査を実施したところ,対象者には「性教育をより早くからより多く,かつすべての子どもたちにするべきである」と考える傾向がみられた。その根拠として「性の低年齢化」があげられていた。この根拠のもと量的な性教育推進の必要性認識につながっていると考えられた。一方,学校外の専門家,たとえば地域保健師を対象とした同様の調査では,よりその傾向が強いことが把握された。つぎに,九州・沖縄の全中学校および高校の養護教諭を対象に,性教育を実践する際の工夫について質問紙調査をおこなった。その結果,現在の学校における性教育・性指導については,学内の教職員が指導する場合にはクラスを対象とした集団指導が,学外の専門家が指導する場合には学年・学校を対象とした集団指導が主流であることがわかった。必要な指導を必要な子どもたちへという考えから実践される小集団指導については,まだその実践割合は低いことがわかった。その一方,必要な場合には性別指導をおこなうという考えのものが過半数近くみられていた。性教育・性指導には子どもたちの保護者の理解と連携が不可欠であるが,保護者に実践の内容を伝えている割合や保護者に実践の内容を相談している割合は5%以下と,かなり難しい状況にあることが明らかになった。

わが国では,バブル期(1985-1992)を前後して,十代の人工妊娠中絶率(現在は減少中)および性感染症罹患率の上昇がみられていた。性交開始年齢が高年齢化し,性行動・性意識が停滞化するなかで,それら指標の悪化が進んだことになる。これまでは,性交開始年齢が低年齢化しており,性行動が活発になっているがゆえに,性の問題(中絶やSTD)が増加している,というsimpleな見方(量的相関仮説と命名)が主たるものであった。それらの性の問題に対する対策(性対策)も,この仮説の上に成り立つものとして展開されてきた。バブル期以降,evidenceに基づけば,量的相関仮説は説得力を失った,もしくは誤りであることがわかった。われわれには,性交開始が遅くなり,かつ,性行動が停滞する中で,なぜ性の問題が増加したのかということを説明しうる新たな仮説が必要となった。これを説明する新しい仮説は「性の敷居」仮説と呼ぶもので,世界のあらゆる社会でみられる性の慎重さという事象(メタ事象)と整合性をもたせたものである。この仮説に従い,人工妊娠中絶は減少し,STDは増加か横ばいで推移するだろうという予測を打ち出した。この状況を改善するためには,性のプロモーションという視点が必要となる。すなわちそれは,思春期後期に<性のちから>が十分に育ちあがるような,生後十数年間の成育環境と支援が必要だということを意味している。これらの議論から,現代の思春期の子どもたちの性の諸相においては,非常に<格差>が大きくなり,その格差に対応しうる性教育プログラムが必要だと論じた。これらの議論に基づき,学校における性教育の新しい在り方として,カフェテリア方式をはじめとする各種の小集団方式を用いた性教育を確立した。
扁桃体形成におけるPax6の機能の解明

扁桃体は約15の神経核から成り立つ非常に複雑な組織である。そのため、その発生を制御するメカニズムはほとんど明らかになっていない。一方で、扁桃体の形成異常や機能異常により、PTSDや自閉症といった精神疾患の発症に至ると考えられている。そこで、扁桃体形成メカニズム、およびそのような精神疾患発症のメカニズム解明を目的とし、本研究を行った。本研究では、扁桃体形成におけるPax6陽性dLGE細胞の運命解析を目的とし、Pax6領域にCreER^T2をノックインしたマウス作成した。このマウスをレポーターマウスと交配をしたところ、dLGEより扁桃体の一部の細胞、および大脳基底核の一部の細胞が誕生している事が明らかとなった。扁桃体は終脳辺縁系に属する組織であり、約15の神経核から成り立つ。さらに、それぞれの神経核は形態や機能、そして発現するマーカー等が異なる複数の神経細胞より成り立つ非常に複雑な組織である。そのため、その発生を制御する分子メカニズムはほとんど明らかになっていない。一方で、扁桃体は情動行動の制御に必須である事が明らかとなっており、扁桃体の形成異常や機能異常により、PTSDや自閉症といった精神疾患の発症に至ると考えられている。そこで、扁桃体形成メカニズム、および扁桃体形成異常による精神疾患発症メカニズム解明を目的とし、本研究を行った。これまでの遺伝子発現解析などの研究より、扁桃体を構成する多くの神経細胞は終脳背側腹側境界領域より誕生していることが示唆されている。そこで本研究では特に終脳背側腹側境界領域の腹側、dorsal LGE (dLGE)に着目した。dLGEにはホメオボックス遺伝子Pax6が発現している事から、扁桃体形成におけるPax6陽性dLGE細胞の運命解析を目的とし、Pax6領域にCreERT2をノックインしたマウス作成した。このマウスをレポーターマウスと交配をし、ラベルされた細胞を追跡したところ、dLGEより扁桃体の一部の細胞、および大脳基底核の一部の細胞が誕生している事が明らかとなった。今後、これらラベルされた細胞の性質についてより詳細に検討を行うとともに、機能を同定するための解析を行なう。扁桃体は神経核より形成される複雑な構造体である。そのため、扁桃体の発生を制御するメカニズムについては、明らかになっていない。一方、扁桃体は情動行動の制御に重要な役割を担っている事が知られている。また、扁桃体異常により、自閉症等の精神疾患を発症すると考えられている。自閉症等は、興奮性神経細胞と抑制性神経細胞のバランスが破綻する事により発症するというメカニズムが提唱されており、扁桃体の神経細胞の発生を理解する事は、そのような精神疾患の原因解明にもつながると考えられている。申請者らは、扁桃体を構成する多くの神経細胞が誕生していると考えられている終脳背側腹側境界領域(PSB)に着目し研究を行っている。本研究では、PSBの腹側、dorsal LGE (dLGE)から誕生する扁桃体神経細胞の運命、および運命決定を制御する分子メカニズムの解明を目的とし研究を行っている。興味深い事に、終脳背側に強く発現し、終脳背側から誕生する興奮性神経前駆細胞の増殖、分化を制御している事が知られているホメオボックス遺伝子Pax6が、dLGEの一部にも発現が認められる。これは、Pax6陽性dLGE細胞が特別な運命を担っている事、そして運命決定に重要な役割を担っていると考えられる。そこで、遺伝学的手法を用いPax6陽性dLGE細胞の運命決定を行うため、Pax6-CreERノックインマウスの作成を試みた。そのためにまず、ターゲッティングベクターを構築し、それをES細胞に導入した。G418耐性ES細胞においてサザンハイブリダイゼーションを行う事により、9個の相同組み換え体ES細胞を単離した。そのうち3個をマウス胚盤胞に戻し、キメラマウスの作成を行った。現在、その全てのラインから、Pax6-CreERへテロマウスを確認しており、現在、レポーターマウスとの交配を行っている。我々は、dLGE由来細胞の運命決定のために新たにPax6-CreERノックインマウスの作成を行った。しかしながら、最初に単離した相同組み換えES細胞はどれもジャームライントランスミッションを確認する事ができなかった。そのため、もう一度組み換え体ES細胞の単離を行わなければならず、当初の計画より遅れる事となった。マウス作成に手間取り、研究計画より遅れは生じているものの、研究計画自体に変化はない。現在交配しているPax6-CreER,GFPレポーターマウスを使い、Pax6陽性dLGE由来細胞が正しくラベルされているか、発生の早い時期にまず確認を行う。

その後、成体マウスにおいて、GFP陽性細胞がどのような神経核に存在しているのか、解剖学的解析を行うとともに、さまざまな神経マーカーと二重染色を行う事により、どのような性質の神経細胞へと分化しているのか、詳しく解析を行う。また、Pax6ノックアウトマウスを使い、dLGEにおいてのみPax6の機能を欠損させた場合に、扁桃体の発生、および機能にどのような影響が見られるのか、解析を行う。今年度は、マウス作成に時間がかかり、予定よりもマウスの数が少なく、また必要になると思われた抗体等の購入も見送ったため、約38万円の次年度繰越金が発生した。そのため、次年度は約188万円の予算がある。まず、共通機器として使用していたin situハイブリダイゼーション用のオーブンが5月より使用不可能となる。オーブンは研究の推進に必須であるため、1台購入する(約20万円)。また、genotyping用PCR酵素、in situハイブリダイゼーション用試薬、酵素類、抗体、実験用マウス等の購入に90万円、プラスチック製品やスライドグラスなどの消耗品に10万円を見込んでいる。研究成果報告を予定している神経科学学会および分子生物学会年会参加旅費として約18万円、また、約100ケージのマウスを維持(1ケージ、1ヶ月約400円)のため、そしてシークエンサー等の共通機器使用料としてその他の項目で約50万円を予定している。
細胞内および動物組織におけるαBクリスタリンのリン酸化の生理的意義の解明

今年度は、αBクリスタリンのリン酸化が持つ生理的な役割を明らかにすることを目的として、ヒトαBクリスタリンの野生型(wt-αB)および3カ所のリン酸化部位(Ser19,Ser45,Ser59)をアスパラギン酸残基に置換したリン酸化擬似変異体(3D-αB)のリコンビナント蛋白質を大腸菌に大量発現させた後に精製し、種々の蛋白質化学的な解析を行った。両蛋白質のCDスペクトルを測定したところ、farUVCDスペクトルは、両蛋白質共にβ-sheet構造を多く含むと推測されるスペクトルを示し、明らかな差は観察されなかった。このことから、wt-αBと3D-αBとでは、顕著な二次構造の変化は起こっていないことが示唆された。一方、nearUVCDスペクトルは有意に異なっており、変異導入によって三次構造の変化が起こっていることが示唆された。この結果は、蛍光スペクトルの測定によっても確認することができた。また、温度上昇に伴うfarUVCDスペクトルの変化を調べると、wt-αBよりも3D-αBの変化が大きいことがわかった。さらに、両蛋白質の疎水性をANS binding assayにより比較したところ、3D-αBは疎水性が低下していることがわかった。ショ糖密度勾配遠心法によって重合状態を調べたところ、3D-αBはwt-αBに比べて低分子量側に検出された。ゲルろ過法によってみかけの分子量を調べたところwt-αBは約550kDaの、3D-αBは約390kDaの重合体を作っていることがわかった。また、両蛋白質の分子シャペロン活性を蛋白質の凝集抑制作用、およびルシフェラーゼの活性回復で調べたところ、3D-αBはwt-αBよりもシャペロン活性が低下していることがわかった。今年度は、まず、ヒトαBクリスタリンの3ヵ所のリン酸化部位(Ser19、Ser45、Ser59)をアスパラギン酸残基に置換した変異体を作製した。各種変異体を遺伝子導入により培養哺乳動物細胞に一過性に発現させ、それらの細胞抽出液をショ糖密度勾配遠心法により分画し、αBクリスタリンの重合状態を調べた。その結果、野生型のαBクリスタリンは見かけの分子量で約500kDa程度の重合体を作っていた。それに対し3カ所のリン酸化部位をアスパラギン酸残基に置換した変異体(S19,45,59D)は、約100kDa程度の重合体を作っていた。また、2カ所を置換した変異体(S19,45D、S19,59D、S45,59D)は200-300kDa、1カ所を置換した変異体(S19D、S45D、S59D)は300-400kDaの重合体をそれぞれ作っていた。さらに、恒常的にαBクリスタリンを発現している細胞にストレスを負荷し、リン酸化を引き起こした場合にも重合体の大きさが変化していた。これらのことから、リン酸化によってαBクリスタリンの重合状態が変化することが分かった。また、ラットレンズにおける生後発達に伴うαBクリスタリンのリン酸化状態の変化を調べた。生後直後はリン酸化型αBクリスタリンは少なかったが成長するにつれてリン酸化型、特にSer45のリン酸化型が顕著に増加していた。Ser45をリン酸化するp44/42MAPキナーゼは、ラットレンズにおいて生後発達に伴い活性化型が増加していた。これらのことから、ラットレンズにおいては、生後発達に伴うp44/42MAPキナーゼの活性化を介してαBクリスタリンのSer45のリン酸化型が増加することが分かった。

また、両蛋白質の分子シャペロン活性を蛋白質の凝集抑制作用、およびルシフェラーゼの活性回復で調べたところ、3D-αBはwt-αBよりもシャペロン活性が低下していることがわかった。
新しい非侵襲モニターによる心臓再同期療法の遠隔期予後の予測

本年はクリアサイトによる心拍出量の測定値が、3D経食道エコー法、熱希釈法などの標準的な手法で測定された心拍出量とどの程度一致するのかを評価した。クリアサイトが心拍出量の変化を鋭敏に反映しうることはデータがあるものの、低心機能症例や大動脈クランプ前後、末梢血管抵抗上昇例などでのデータはほとんどない。術中に血行動態が大きく変化する心臓血管外科手術を受ける患者さんを対象とし、術中にクリアサイトを装着して経時的に心拍出量をモニターすると同時に、熱希釈法または3D経食道エコー法により心拍出量を計測し、両者を比較検討することでモニターの特性と限界を明らかにすることを目的とした。具体的には、心機能が障害されていると考えられる冠動脈バイパス手術を受ける患者および手術中に大動脈をクランプすることで末梢血管抵抗が大きく変動する腹部大動脈瘤置換術を受ける患者を対象に、クリアサイトによる心拍出量と熱希釈法や3D経食道エコーを用いた心拍出量との比較を行うことで、クリアサイトの特殊な状況下における正確性と追従性を評価した。20人を対象としたが、腹部大動脈瘤置換においては、3D経食道エコーによる心拍出量とクリアサイトによる心拍出量の間には%誤差で41.3%があり、interchagebleとは言い難いと考えられた。この研究はすでに英語論文として受理された(Journal of Anesthesia 2019 in press)。さらに、CRTが適応となるような重度の心機能低下症例を対象とし、CRTリード挿入術において、CRT開始前後でクリアサイトおよび3D経食道エコー法による心拍出量の変化を計測する研究を開始している。CRTが必要となる患者で、なおかつinclusion criteriaの僧帽弁逆流が中等度以下を満たす症例が少ないため、やや遅れている。しかし、昨年度の成果を論文化することもでき、それなりに進捗していると考える。LiDCOなど低侵襲モニターにおける心拍出量の正確性に関するデータについても論文化をめざし、さらにCRT患者における低侵襲モニターの正確性の研究も脱落ないように進める。心疾患は日本人の死因の中で第2位であるが、その中でも死亡数のトップは年間約7万人がなくなるとされる心不全である。この心不全に対する有効な治療として、心臓再同期療法(両心室ペーシング療法, cardiac resynchronization therapy: CRT)がある。CRTの血行動態改善の機序は、同期不全を両心室からのペーシングにより改善することにあり、患者の脳性ナトリウム利尿ペプチド(Brain natriuretic peptide: BNP)を低下させ、予後を改善する。しかし、CRTが無効な心機能非改善例がおよそ3人に1人存在し、予後不良因子となる。従って、この心機能非改善例をできるだけ早期に診断し、対応することが心不全治療の鍵となる。このため、低侵襲にかつ簡便に心拍出量を計測できるモニターの開発が試みられてきた。これらを生かし、CRT中での早期の心拍出量計測を考えた。まず、我々は低侵襲モニターがどの程度正確に患者心拍出量および患者予後を予測しうるかを検討することとした。CRTリード埋め込み術中に3D経食道エコー法で心拍出量をCRT前後で計測し、心拍出量の増加を認めた群においては術後6ヶ月におけるBNPが有意に低下していることを示した。また、2017年度には低侵襲モニターの代表格ともいえる、Flotrac/Vigileoが腹部大動脈手術のような術中に後負荷が大きく変動する場合には不正確であることを示した。引き続き、低侵襲モニターの正確性を検討する予定である。本来ならば、クリアサイトの腹部大動脈手術における正確性についての患者エントリーが終了しているはずであったが、予想よりも患者数が少なかったため、この点については計画が遅れている。しかしながら、他の低侵襲モニターについての上述のような成果もあげており、それなりに進行していると考えている。

さらに、CRTが適応となるような重度の心機能低下症例を対象とし、CRTリード挿入術において、CRT開始前後でクリアサイトおよび3D経食道エコー法による心拍出量の変化を計測する研究を開始している。CRTが必要となる患者で、なおかつinclusion criteriaの僧帽弁逆流が中等度以下を満たす症例が少ないため、やや遅れている。しかし、昨年度の成果を論文化することもでき、それなりに進捗していると考える。本年度は、クリアサイトの腹部大動脈手術における正確性の研究については論文投稿を目指す。さらに冠動脈バイパス手術中の中程度低心機能患者におけるクリアサイトの正確性についての研究を開始する計画である。LiDCOなど低侵襲モニターにおける心拍出量の正確性に関するデータについても論文化をめざし、さらにCRT患者における低侵襲モニターの正確性の研究も脱落ないように進める。登録された患者が予想より少なく、クリアサイトの心拍出量モニターの購入が少なかったため。
傷害胃粘膜における胃酸分泌変化とその調節機構に関する研究:Nitric Oxideの役割

胆汁酸(20mMタウロコール酸:TC)を胃内に30分間適用することにより作製された傷害胃の酸分泌変化に着目し、その調節機序の解明について、内因性一酸化窒素(NO)の役割を中心に検討し、以下の成績を得た。1.20mMTCを30分間胃粘膜に適用することにより、粘膜電位差(PD)の減少と共に著明な胃内pHの上昇が観察された。このpH上昇は主として酸分泌減少に起因するものであり、矛めオメプラゾールで酸分泌を抑制した場合には殆ど認められなかった。20mMTC適用前にNO合成阻害薬であるN^G-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME)を静脈内に投与することにより、20mMTC処理後に認められる酸分泌減少(胃内pHの上昇)は制御された。しかし、L-NAME処置は20mMTC適用によるPD低下に対しては全く影響を与えなかった。同様な現象はシクロオキシゲナーゼ阻害薬のインドメタシン前処置でも認められたが、誘導型NOSの抑制薬であるアミノグアニジンの前処理では観察されなかった。2.1)の実験において、L-NAME処理は20mMTC適用による酸分泌減少を完全に抑制し、むしろ酸分泌を有意に増大させることが判明した。L-NAMEによるこの酸分泌の上昇はL-arginineの併用投与により有意に拮抗されたが、D-arginineの投与では全く影響を受けなかった。3.L-NAMEの存在下に傷害胃粘膜で認められる酸分泌促進は、L-arginine以外にH_2拮抗薬であるシメチジン、あるいはヒスタミン遊離抑制薬であるDSCGによっても有意に拮抗された。また、カプサイシン感受性知覚神経の麻痺、およびサブスタンスPの拮抗薬であるスパンタイドによっても一部制御された。これらの処置はいずれも20mMTC適用によるPD減少に対しては影響を与えなかった。4.20mMTCの胃粘膜適用中および適用後において、管腔内ヒスタミン量の有意な増大と胃粘膜内ヒスタミン含有細胞数の減少(メタクロマジ-染色細胞数)が観察された。また、これらの変化はL-NAME処理により増強し、逆にDSCGあるいは知覚神経麻痺により有意に抑制された。以上の結果より、1)胃粘膜に傷害が発生した場合、適応性反応の一つとして胃酸分泌の抑制が認められるが、この現象には酸分泌の抑制系と促進系の両者における活性化が推察される;2)このような酸分泌の抑制系は、少なくとも一部、傷害発生に伴い遊離される内因性NOによって仲介されており、この場合のNOはconstitutive typeのNO合成酵素に依存するものであると考えられる;3)一方、傷害胃における酸分泌の促進は粘膜内ヒスタミンによって仲介されており、この物質の遊離過程には恐らくサブスタンスPを神経伝達物質とした知覚神経の関与が推察される;4)NOは酸分泌促進系におけるヒスタミン遊離に対し抑制的に作用しており、恐らく傷害胃では酸分泌の抑制系と促進系の両者に影響を与えることにより、傷害発生後の酸分泌調節において極めて重要な役割を演じているものと推測される。以上の結果より、1)胃粘膜に傷害が発生した場合、適応性反応の一つとして胃酸分泌の抑制が認められるが、この現象には酸分泌の抑制系と促進系の両者における活性化が推察される;

2)このような酸分泌の抑制系は、少なくとも一部、傷害発生に伴い遊離される内因性NOによって仲介されており、この場合のNOはconstitutive typeのNO合成酵素に依存するものであると考えられる;3)一方、傷害胃における酸分泌の促進は粘膜内ヒスタミンによって仲介されており、この物質の遊離過程には恐らくサブスタンスPを神経伝達物質とした知覚神経の関与が推察される;4)NOは酸分泌促進系におけるヒスタミン遊離に対し抑制的に作用しており、恐らく傷害胃では酸分泌の抑制系と促進系の両者に影響を与えることにより、傷害発生後の酸分泌調節において極めて重要な役割を演じているものと推測される。
高密度シートプラズマを用いた非セシウム型大電流負イオン源の開発

将来の代替エネルギー源として開発が進められている国際熱核融合装置用の負イオン源として、セシウムを用いた高周波型大電流負イオン源の開発が行われている。しかし、この負イオン源では、長パルス時でのビームの安定性、導入するセシウム量の最小化、負イオン源内壁温度の制御等、解決しなければならない課題が存在する。本研究で提案している高密度シートプラズマを用いた、長寿命・大電流・メンテナンスの容易な非セシウム型の負イオン源を開発することにより、現在開発がすすめられているセシウム型負イオン源の数多くの課題を根本的に解決することだけでなく、DEMO級核融合装置の定常化運転にも大きく貢献することができる。
逆問題解決型特異的因子・属性分類特徴量計量システムの実現

近年、生体物質から数値的情報を抽出できる機器の発達により、公開済み測定データが増え、ビックデータを対象とした網羅的な解析技術が求められている。特に、個人化医療の実現には、1)医療データのデータベースの構築、2)被験者など調査対象の個体差を踏まえた分析手法の確立が必要である。本研究は、解釈に専門的な知識が必要なデータベースと分析手法を構築し、属性分類の特徴量を発見するアルゴリズム研究を行い、対象データの意味抽出(属性分類に有意な部分空間抽出)を可能とするシステムを実現する。分析対象への専門知識が不十分でもシステムを活用して医療データの包括的な理解・利用ができるシステムと方法論の開発を行う。
ホットキャリア生成機構の理解に基づくプラズモンケミストリーの深化

本研究の目的は,金属ナノ構造体における時々刻々の電子正孔対のエネルギーおよび空間分布を明らかにし,その近傍で起こるプラズモンケミストリー諸過程の定量的な予言を可能とすることである.今年度は以下の3点について研究を進めた.(1)表面系などの半無限系へも展開可能なジェリウムモデルについての基底電子状態,光学応答が計算可能なコードの作成を行い,ナノ粒子系および特異な光応答が知られるIr(111)/Cs/graphene系についての計算を行い,その実効性を示した.(2)電子正孔対のダイナミクスにおける電子相関の影響を調べるために,基底状態とプラズモン励起状態からなる波束に対応する「サウレス表示のフロケ擬固有状態波動関数」を構成し,サウレスパラメータの時間発展を通じてダイナミクスを解析する新たな手法を提案した.本手法を環状のナトリウムクラスターの分子面垂直方向のプラズモン励起に付随する電子正孔対のダイナミクスに適用し,次のことが明らかになった.(a)電子相関により,ある軌道を占める電子対は避けあって互いに面の反対側に存在するようになる.(b)互いに避けあった位置に電子はトラップされ,光励起による集団運動の励起には,ある閾強度よりも強い光が必要となる.(c)クラスターサイズの増大に伴って,より電子正孔対の運動の集団性は高まり,また,閾強度も低くなる.(3)Au, Ag, Cuの8量体クラスターの超短パルス励起で生じる波束の位相緩和に関連して自己相関関数の解析を行い,Ag, Cuにおける集団励起の緩和の時定数がAuに比べて大きいことを明らかにした.従来よりAgが理想的なプラズモン励起を示すことは知られていたが,Cuの集団励起の遅い緩和は興味深い発見であると言える.本研究では,構成原子数が数個から数百個程度の金属クラスターおよびより大きなナノ構造体を扱うことのできるジェリウムモデルに対して,電子正孔対ダイナミクスの追跡を可能とする計算コードの開発を行い,プラズモン励起後の電子正孔対ダイナミクを明らかにすることを目的としている.初年度において,半無限系へも展開可能なジェリウムモデルについての基底電子状態,光学応答が計算可能なコードの作成が完了し,Ir(111)/Cs/graphene系をはじめとする実験的に興味深い系でその実効性を示すことができた.電子正孔対ダイナミクスのシミュレーションコードについてはこれからであるが,電子正孔対ダイナミクスに与える電子相関の役割,位相緩和ダイナミクスの解析を行うための新たな解析手法の開発も進んでおり,進捗は概ね順調であると判断できる.今年度開発した計算コードに基づいて,位相緩和およびフォノンとの相互作用による緩和を考慮した電子正孔対ダイナミクスの実時間発展が可能となるような拡張を行い,典型的な系においてテスト計算を行う.本研究の目的は,金属ナノ構造体における時々刻々の電子正孔対のエネルギーおよび空間分布を明らかにし,その近傍で起こるプラズモンケミストリー諸過程の定量的な予言を可能とすることである.今年度は以下の3点について研究を進めた.(1)表面系などの半無限系へも展開可能なジェリウムモデルについての基底電子状態,光学応答が計算可能なコードの作成を行い,ナノ粒子系および特異な光応答が知られるIr(111)/Cs/graphene系についての計算を行い,その実効性を示した.(2)電子正孔対のダイナミクスにおける電子相関の影響を調べるために,基底状態とプラズモン励起状態からなる波束に対応する「サウレス表示のフロケ擬固有状態波動関数」を構成し,サウレスパラメータの時間発展を通じてダイナミクスを解析する新たな手法を提案した.本手法を環状のナトリウムクラスターの分子面垂直方向のプラズモン励起に付随する電子正孔対のダイナミクスに適用し,次のことが明らかになった.(a)電子相関により,ある軌道を占める電子対は避けあって互いに面の反対側に存在するようになる.(b)互いに避けあった位置に電子はトラップされ,光励起による集団運動の励起には,ある閾強度よりも強い光が必要となる.(c)クラスターサイズの増大に伴って,より電子正孔対の運動の集団性は高まり,また,閾強度も低くなる.(3)Au, Ag, Cuの8量体クラスターの超短パルス励起で生じる波束の位相緩和に関連して自己相関関数の解析を行い,Ag, Cuにおける集団励起の緩和の時定数がAuに比べて大きいことを明らかにした.従来よりAgが理想的なプラズモン励起を示すことは知られていたが,Cuの集団励起の遅い緩和は興味深い発見であると言える.本研究では,構成原子数が数個から数百個程度の金属クラスターおよびより大きなナノ構造体を扱うことのできるジェリウムモデルに対して,電子正孔対ダイナミクスの追跡を可能とする計算コードの開発を行い,プラズモン励起後の電子正孔対ダイナミクを明らかにすることを目的としている.初年度において,半無限系へも展開可能なジェリウムモデルについての基底電子状態,光学応答が計算可能なコードの作成が完了し,Ir(111)/Cs/graphene系をはじめとする実験的に興味深い系でその実効性を示すことができた.

電子正孔対ダイナミクスのシミュレーションコードについてはこれからであるが,電子正孔対ダイナミクスに与える電子相関の役割,位相緩和ダイナミクスの解析を行うための新たな解析手法の開発も進んでおり,進捗は概ね順調であると判断できる.今年度開発した計算コードに基づいて,位相緩和およびフォノンとの相互作用による緩和を考慮した電子正孔対ダイナミクスの実時間発展が可能となるような拡張を行い,典型的な系においてテスト計算を行う.
発達期小脳における過剰な登上線維-プルキンエ細胞シナプスの選別と除去のメカニズム

成熟動物の小脳プルキンエ細胞は一本の登上線維によってのみ支配を受けるが、発達初期には一時的に複数の登上線維による支配を受けている。シナプス形成直後の多重支配している登上線維は、それぞれ同じような強さのシナプスを形成しているが、生後一週目までに一つのプルキンエ細胞上で、一本の最大振幅を発生する強力な登上線維入力(multi-L)と、それ以外の弱い登上線維入力(multi-S)が混在して見られるようになる。multi-Lは将来残存すると考えられる入力線維、multi-Sは排除される線維ではないかと考えられるので、これらの間の機能的な差に関して電気生理学的手法を用いて解析した。低親和性AMPA受容体阻害剤であるPDAの効果を比較したところ、multi-Lはmulti-Sに比べて阻害効果が弱く、シナプス間隙のグルタミン酸濃度が高いことが示唆された。さらに、細胞外カルシウム濃度を下げて膜融合するシナプス小胞の数を減らした状態でPDAの阻害効果を比較したところ、その阻害効果が増大した。これは、シナプス小胞の放出確率が下がると、シナプス間隙の伝達物質濃度が下がることを意味している。もし一つのシナプス間隙に単一のシナプス小胞が放出されるならば、放出確率が下がってもシナプス間隙のグルタミン酸濃度は変化しないはずであるため、この結果はシナプス間隙の比較的狭い領域に複数のシナプス小胞から伝達物質が放出されていることを示している。この放出確率減少によるPDAの効果の増大が、multi-Sでは顕著に見られなかった。これは、multi-Sでは、シナプス間隙に伝達物質を放出するシナプス小胞の数が、multi-Lに比べて少ないことを示唆する。以上の結果より、将来残存する登上線維の選別に伴い、シナプス前終末の機能的な性質に変化が生じていることが示唆された。
エストロゲンの心血管病に対する作用機構解明および新たな治療戦略の構築

本研究の予備的検討として、野生型マウスの頸動脈にワイヤーで血管損傷を加えた際の遺伝子発現の変化をDNAマイクロアレイを用いて網羅的に探索した。その結果、最も大きく遺伝子発現が変化したのは予想外にも脂質代謝経路に属する遺伝子群であり、特に褐色脂肪のマーカーで大きな変化を認めた。さらに、これら褐色脂肪マーカーの発現は、抗動脈硬化作用を持つエストロゲン投与によって強く抑制されることが分かった。この結果は、血管傷害後の血管においては褐色脂肪の性質が誘導され、エストロゲンによってそれが抑制されることを示唆しており、血管の褐色化が血管リモデリングに関わっているのではないかという仮説が想起された。本研究では、分子生物学的手法を用いて、血管の褐色化という現象の意義と、エストロゲンシグナルとの関わりについて多角的に検討し、新規動脈硬化治療薬の開発につなげたいと考えている。上記網羅的解析で得た結果をリアルタイムPCR、ウェスタンブロット、免疫組織染色において確認を行うとともに、血管の褐色化という現象の主座が血管周囲脂肪であることも同定することができた。今後はマウス血管周囲脂肪組織由来細胞株を用いて、褐色化と炎症サイトカイン産生の直接的な因果関係を導き出し、上記動物実験の結果と統合することを目指す。また、エストロゲンの血管リモデリング抑制効果は上記で見出した経路のどこに作用しているのかを、動物実験および細胞実験の両面から明らかにする。網羅的解析で得た結果をリアルタイムPCR、ウェスタンブロット、免疫組織染色において確認でき、また血管の褐色化という現象の主座が血管周囲脂肪であることも同定することができたため。マウス血管周囲脂肪組織由来細胞株を用いて、褐色化と炎症サイトカイン産生の直接的な因果関係を導き出す。また、エストロゲンの血管リモデリング抑制効果の分子生物学的機序に関しても明らかにすることを目指す。
脂肪前駆細胞の移植と分化誘導による軟部組織の再建術の開発

結合組織は可変性に富んだ組織であり、状況に応じて既成組織を更新、修復、代償する能力を持っている。この性質を利用すると、「任意の部位に」「任意の分量の」脂肪組織を誘導できることを我々は本研究ではじめて明らかにした。本研究で挙げた主要な研究成果を概説すると次のようである。Kawaguchi et al.がcytotechnologyに発表した論文では、培養下で脂肪に分化する3T3-F442A株の前駆細胞を大量培養してヌードマウスの胸部皮下に注入移植すると、4週間後には脂肪細胞が整然と配列した脂肪組織が形成されることを報告した。鳥山和宏ら(1998),組織培養工学,24,143-146に発表した論文では、培養用のマイクロキャリアービーズ表面に前駆細胞を着生させて皮下注入すると、間葉系幹細胞が周辺に遊走してビーズを包み込む結節を形成するが、ビーズがbFGFを含まないと脂肪分化は見られないが、含むと間隙に脂肪が分化することを報告した。Kawaguchi et al.(1998)De novoadipogenesis in mice at the site of injection of basement membrane and basicfibroblast growthfactor.Proc Natl Acad Sci USA.95,1062-1066として発表した論文では、マトリゲル(可溶化基底膜)とbFGFを混合注入するだけで、内在性脂肪前駆細胞がマトリゲルに侵入して健全な脂肪細胞に分化することを報告した。本研究で明らかにしたマトリゲルによる軟部結合織の誘導形成は、外傷によって皮下軟部組織を失った患者や、顔面の半側の皮下結合織だけが特異的に萎縮する顔面半側萎縮症の患者などの治療に大いに役立つものと期待される。脂肪組織を形成している細胞は間葉系幹細胞の分化系列に属している。これらの前駆細胞は結合織に広く分布して臨機応変に既成の組織を更新、修復、代償する。この前駆細胞を任意の部位に誘導して増殖・分化させる手法は、軟部結合織の新しい再建術として重要である。結合織に大量に含まれる細胞外マトリックスは、各種コラーゲン、ラミニンやフィブロネクチンなどの糖タンパク質、高分子糖であるグリコサミノグリカン及びこれがコアタンパク質と結合したプロテオグリカンなどの主要成分が網目状のネットワークを形成した構造体で、組織の物性を左右しているだけでなく、細胞の遊走、増殖や分化の場を作って結合織の構築に中心的な役割を果たしている。このネットワーク構造は、尿素処理などで構成タンパク質を変性させると可溶化できる。この溶液から尿素を低温下で透析除去した後に動物に注入することで加温すると、構成タンパク質の立体構造が部分的に回復したネットワーク構造が体内で再構成される。我々は、この可溶化マトリックスに線維芽細胞増殖因子(bFGF)を添加してマウスに皮下注射すると、任意の部位の結合織に任意の大きさの脂肪パッドを誘導できることを発見した。このことは、注入部位に形成された再構成マトリックス領域に内在性の前駆細胞が進入して健全な脂肪細胞に分化することをしめす。この可溶化マトリックスによる軟部結合織の誘導形成は、外傷によって皮下軟部組織を失った患者や、顔面の半側の皮下結合織だけが特異的に萎縮する顔面半側萎縮症の患者などの治療に大いに役立つと期待される。

鳥山和宏ら(1998),組織培養工学,24,143-146に発表した論文では、培養用のマイクロキャリアービーズ表面に前駆細胞を着生させて皮下注入すると、間葉系幹細胞が周辺に遊走してビーズを包み込む結節を形成するが、ビーズがbFGFを含まないと脂肪分化は見られないが、含むと間隙に脂肪が分化することを報告した。Kawaguchi et al.(1998)De novoadipogenesis inmice at the site of injection of basement membrane and basicfibroblast growthfactor.ProcNatI Acad Sci USA.95,1062-1066として発表した論文では、マトリゲル(可溶化基底膜)とbFGFを混合注入するだけで、内在性脂肪前駆細胞がマトリゲルに侵入して健全な脂肪細胞に分化することを報告した。これらの結果は、日本農芸化学会、日本組織工学会、日本形成外科基礎学術集会、アディポサイエンス研究会で報告した。また、1998年7月24日に日刊工業新聞に掲載された。
脂肪細胞が関与する胃癌腹膜播種の分子機構の解明と新たな診断薬の開発応用

腹膜播種性転移は、最も多い胃癌の転移形式で予後不良であるが、発症メカニズムについては未だ不明な点が多い。我々はこれまでに、癌から放出される細胞外小胞(Extracellular Vesicles; EV)が腹膜中皮細胞の発現を変化させ、播種形成に関与する可能性を報告した。また、近年脂肪組織が癌の浸潤能獲得や転移エネルギー源としての可能性も報告され、治療標的としての可能性も期待されている。本研究では、腹腔内に豊富に存在する脂肪細胞と胃癌細胞や腹膜中皮細胞との、EVを介した細胞間情報伝達に着眼し、その分子機序解明により脂肪細胞を標的とした新規治療の可能性を検討するとともに、腹膜播種形成予測に有用な新規バイオマーカーとしての意義を検証することを目的とする。まず、間葉系幹細胞から脂肪細胞に分化させ、oil red染色でその分化を確認した。胃癌細胞株MKN7と脂肪細胞を共培養させることで胃癌細胞株の遊走能が有意に上昇した。次に脂肪細胞を介した腹膜播種形成における関連分子を探索するため、癌細胞由来EVの脂肪細胞への取り込みの確認、及び脂肪細胞の発現変化の検討を行った。胃癌細胞株の培養液中のexosomeを、超遠心法により分離し、PKHによるexosomeの蛍光ラベリングを行った後、分化させた脂肪細胞に添加し、細胞内へのexosome顆粒の取りこみの有無を蛍光顕微鏡で確認した。共培養前後の脂肪細胞のmRNAの発現変化についてmicroarray解析を行った。炎症に関与する分子群の上昇を認めた。候補分子に関してreal-time PCRを用いた検討においても、胃癌細胞と共培養した脂肪細胞で、炎症に関与する分子群が上昇していることを確認した。また、胃癌細胞と共培養した脂肪細胞から放出されるEV内にこれらの分子が内包されていることを確認した。脂肪細胞と共培養することで胃癌細胞の遊走能が上昇していることを確認した。また、脂肪細胞を介した胃癌細胞悪性化関連分子の同定をmicroarrayを用いて同定し、real time PCRを用いた検討でも確認可能であった。中皮細胞の発現変化においては検討中であるが概ね計画通りに進行していると思われる。前向きにサンプリングを行なっている臨床検体を用いて腹膜播種周囲の脂肪細胞発現検討、及び腹膜播種予測マーカーの開発を行う。また腹膜播種予測マーカーとしての腹水中microRNAの有用性の検証も同時に推進していく予定である。
ロタウイルスサーベイランスを目指したグライコタイピング法の開発

本研究では、複数のロタウイルスが発現するウイルス結合糖鎖を解析し、ウイルス株の種類によって、結合糖鎖が大きく異なることを明らかにした。さらに、ウイルス発現糖鎖の解析に取り組み、ウイルス発現糖鎖プロファイルが従来報告されているものに比べて、複雑であることを明らかにした。この結果は、ロタウイルス表面糖鎖が変化に富むものであることを示唆している。また、ウイルス結合糖鎖及び発現糖鎖の解析は、ウイルスの識別に有用であることを示すものであると考えられる。さらに、ウイルスサーベイランスへの応用を期待し、ウイルス結合糖鎖とウイルス発現糖鎖の情報を簡易に且つ、同時に取得できるデバイスの開発を行った。ロタウイルス高感受性細胞(MA104細胞)の表面糖鎖プロファイルをもとに、20種類の糖鎖を選択し、それらを固定化した糖鎖アレイを作成した。作成した糖鎖アレイを用いて、2種類のヒトロタウイルス(MO株と及びHAL1166株)と1種のサルロタウイルス(RRV株)の認識糖鎖をスクリーニングした。いずれのロタウイルスも、Galactoseの6位が硫酸化された糖鎖及び、N-glycolylneuraminic acid(NeuGc)に強い親和性を示した。この結果から、この2種類の糖鎖に対する親和性は多くのロタウイルス株で保存されており、ロタウイルスの感染、増殖において極めて重要な役割を担っていると考えられる。一方各ウイルス株に特徴的な認識糖鎖も観察された。サル由来のRRV株では、他の2種類のヒト由来ウイルスでは観察されないN-acetylneuraminic acid(NeuAc)との強い相互作用が観察された。ロタウイルス高感受性細胞をNeuraminidaseで消化した場合、ヒト以外の動物種から単離されたにロタウイルスの宿主細胞への感染効率が低下することが報告されている。したがってRRV株の感染においては、NeuAcとウイルスの相互作用も非常に重要になると考えられる。一方、HAL1166株では、他の2種類のウイルスで観察されなかったA型抗原と強い相互作用を示した。Huらは、HAL1166株由来のリコンビナントスパイクタンパク質(VP8)の認識糖鎖を解析した結果、A抗原と反応することを見出しており(Nature. 2012年)、今回の我々の結果と相関している。また、MO株ウイルスでは、αGalNAcと相互作用が見られている事が特徴であった。以上の検討結果から、20種類の糖鎖を固定化したアレイを使用することで、3種類のウイルスを識別できることが明らかになった。一昨年の検討で、ロタウイルス認識糖鎖を解析することで、ウイルス株の識別が可能であることを見出した。本年度は、ウイルス株の種類の違いがウイルス表面糖鎖プロファイルに与える影響を評価するため、ヒトロタウイルスMO株、HAL1166株並びにサルロタウイルスRRV株の3種類のロタウイルス表面糖鎖の構造を解析した。MA104細胞を用いて前述の3種類のロタウイルスを増殖させた。初期の検討では、培養上清中のロタウイルスを精製操作なしに解析したが、MA104細胞に由来する糖タンパク質成分が培養上清に混入していたため、解析結果を複雑にし、ウイルス株間の糖鎖プロファイルの比較が困難であった。そこで、培養上清からロタウイルスの単離法について検討した。種々の方法を検討した結果、塩化セシウムを用いた密度勾配遠心法によって、ウイルス粒子の精製に成功した。精製したウイルス粒子をN-グリカナーゼで消化し、遊離したN-結合型糖鎖を蛍光標識後、順相HPLCと質量分析法を用いて解析した。順相HPLCの解析では、3種類のウイルス株ではいずれもハイマンノース型糖鎖に由来すると考えられるピークが明瞭に観察され、共通の糖鎖プロファイルを持つことが明になった。一方マイナー成分については、3種類のウイルス間でのプロファイルが異なっていた。マイナー成分の糖鎖構造の同定には至っていないが、来年度で詳細な構造解析を達成し、ウイルス株の違いによる糖鎖プロファイルの差を明らかにする。ロタウイルス粒子の精製とウイルスタンパク質の単離に時間を要したため、ウイルス表面糖鎖の詳細な構造解析には至らなかった。しかしながら、単離方法の確立を達成したため、今後はスムーズに検討を進めることが可能であると考えられる。前年度で確立した、塩化セシウムを用いた密度勾配法により新たにウイルス精製を実施しアスパラギン結合型糖鎖の解析を試みたが、糖鎖プロファイルの再現性が得られず、ウイルス株の違いによる糖鎖発現のパターンを識別することが困難であった。この理由として当初から問題となっていたウイルス培養時に使用する培地成分の混入が考えられる。また、ロタウイルスの発現する糖鎖は主に高マンノース型糖鎖のみと考えられているが、本検討では複合型糖鎖も確認される。これは新規の発見となるが、ウイルス以外の成分の混入の可能性が排除できないため、データを慎重に判断する必要があると考えられる。そこで、追加検討として、精製ロタウイルスを主成分とするロタウイルスワクチン中に含まれるウイルス粒子の糖鎖解析を行った。その結果、高マンノース型糖鎖が主要な糖鎖として観察されるが、アガラクトの複合型2本鎖糖鎖やシアロ糖鎖が観察された。この結果は、ロタウイルス表面糖鎖プロファイルが既存の報告に比べて複雑であることを示すものである。また、本年度ではウイルス発現糖鎖構造とウイルス認識糖鎖構造情報の同時取得を可能とするハイブリットアレイの作成の検討を進めた。

ハイブリットアレイで問題となる、レクチンの基盤への固定化法を検討に取り組み、糖鎖アレイ用の基盤上へのレクチンの固定化並びに標準糖タンパク質糖鎖の相互作用解を達成した。この検討によって、糖鎖とレクチンを一枚の基板上に固定化したハイブリットアレイの作成が可能になった。また、レクチンの固定化が達成されたことで、本法を用いたウイルス表面糖鎖プロファイルの測定も可能になる。さらに、ウイルス抗体を利用したサンドイッチ法を用いることで、培地成分等の影響を受けないロタウイルス発現糖鎖の解析が可能になると考えられる。今後、本法を使用した複数のロタウイルス表面糖鎖解析を進める予定である。本研究では、複数のロタウイルスが発現するウイルス結合糖鎖を解析し、ウイルス株の種類によって、結合糖鎖が大きく異なることを明らかにした。さらに、ウイルス発現糖鎖の解析に取り組み、ウイルス発現糖鎖プロファイルが従来報告されているものに比べて、複雑であることを明らかにした。この結果は、ロタウイルス表面糖鎖が変化に富むものであることを示唆している。また、ウイルス結合糖鎖及び発現糖鎖の解析は、ウイルスの識別に有用であることを示すものであると考えられる。さらに、ウイルスサーベイランスへの応用を期待し、ウイルス結合糖鎖とウイルス発現糖鎖の情報を簡易に且つ、同時に取得できるデバイスの開発を行った。当初は10種類以上のロタウイルスの認識糖鎖の解析を予定していたが、ロタウイルスの供給法がうまく確立できなかったため、3種類のウイルス株しか解析できていない。現在、ロタウイルスの効率的な増殖法について検討しており、供給法の確立を行っている。この点が改善できれば、研究計画を迅速に進めることが可能になる。引き続き、ウイルス表面糖鎖の構造解析を進め、ウイルス株の違いによる糖鎖プロファイルの変化を解析する。また、現在ウイルスの培養には宿主細胞として、MA104細胞を使用しているが、Caco-2細胞や、HepG2細胞で培養したウイルス株についても解析し、宿主細胞の違いがウイルス表面糖鎖プロファイルに与える影響を評価したい。また、これらの検討と共に、ウイルス認識糖鎖とウイルス表面糖鎖の構造情報を同時に取得できる、糖鎖アレイとレクチンアレイを組み合わせたハイブリットアレイを開発する予定行である。分析化学まずは、昨年の遅れを取り戻すため、ロタウイルス供給法を確立し、ウイルス認識糖鎖解析を進める。また同時に、ウイルス粒子上に発現する糖鎖の構造解析を行う。特に、今年度認識糖鎖の解析を行ったMO株、HAL1166株、RRV株の表面糖鎖の構造解析を行い、ウイルス発現糖鎖プロファイルを比較することで、ウイルス株の識別が可能か評価する予定である。本年度計画していた糖鎖構造解析が年度末までに完了しなかったため、糖鎖解析を進めるにあたり必要となる消耗品の購入を行うことができなかった。これにより、71618円の未使用金額が発生した。次年度の前半では、本年度に完了していない糖鎖解析を進めるため、それに伴い本年度未使用分の71618円を使用する予定である。