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公共政策をめぐる政策ネットワーク-日本・韓国におけるDV防止法制定過程の比較研究

本研究の目的は、日本と韓国で成立したDV防止法の制定過程を、市民の関与する政策ネットワークに焦点を合わせて比較研究することである。両国のDV防止法は市民の力無しには成立し得ない法律であったこと、国連の取り組みが影響していることなど、共通点が顕著であると同時に、多くの違いがあることもわかった。韓国ではNGOの政策への影響力が強く、ジェンダー平等政策についてはそれが一層顕著である。日本では一般にNGO等市民の影響力は強くないが、DV防止法に関しては男女共同参画審議会暴力部会と、国会議員プロジェクトチームが議論のアリーナとなり、多くの被害者救済の専門家やNGO、研究者などから情報・要望と本格的な法律案が寄せられたことが制定の力となった。韓国の日本との違いは以下acのようにまとめられる。a.この法制定に関わったNGO「女性の電話」「韓国女性団体連合」が専門家と連携して政策提言を行っていく新しい社会運動としての性格と、全国規模の連合を形成し、年度計画で統一的な運動を展開するという旧型の社会運動の性格を併せ持っており、その背後には「圧縮された経済発展」があること、b.ともに民主化運動を行った人々が各方面で重要な地位についているために広い連携が可能であること、c.メディアを積極的に利用し強力な世論形成に成功したことなどである。このような違いには以下のような要因があると思われる。民主化を市民自身の手で成功させ、その時期が、環境や女性など国境を超える公共利益的課題が増大した時期と一致していたこと、民主化後の行政課題を担う人材とシステムが、軍事政権下では十分に発達してこなかったこと、民主政府が前代の政権との差別化を明確にし内外に印象づけるために、NGOを積極的に政権に組み込んだこと、などである。今後は両国の違いが、成立した法律とその後のDV防止政策にどのように影響したかが研究課題となる。今年度の研究は、公共政策における政策ネットワークという視点から、日本と韓国のDV防止法制定過程をとりあげ、女性NGOなどの市民的なネットワークが法制定にどこまで、どのように関与したか、関与するNGOの性格はどういうものか、政策形成の場における政府とNGOの距離はどのようなものか、などについて考察し、日韓の共通性と差異を析出する目的で取り組んだ。2005年度前半は韓国の市民運動・女性運動にかんする文献・資料の収集と分析を行い、2004年に準備段階として韓国と日本で行った関係者インタビュー調査と合わせて、6月にソウルで口頭発表を行った。(日韓国際ワークショップ報告「DV防止法制定過程-日本・韓国の比較」於ソウル韓国労働研究院)さらに2005年11月にはキム・ウンギョン(韓国女性開発院教授)、シン・ヘス(性暴力相談所所長)、パク・ドンヒョク(女性家族部事務官)、キム・ゼヨップ(延世大学教授)、ジ・ウンヒ(元女性部長官)、イ・ミギョン(国会議員)(書面インタビュー)、原ひろ子(放送大学教授・インタビュー当時)にインタビューを行い、DV防止法制定過程に関する文献・資料調査も合わせて行った。2006年2月に山口市に於いて得られた知見の中間報告を口頭発表の形で行った。(日韓国際ワークショップ報告「ドメスティック・バイオレンス防止法制定過程における政策ネットワーク-日韓比較の試み」於山口県婦人文化教育会館)両国とも法制定過程には女性NGOや現場の救済組織が深く関与しているが、NGOの性格と戦略、政府との距離・関係などは両国で大きく違っており、その背後には政体の違い、民主化を市民の手で実現した政治的な経緯の違い、経済発展の速度の違いなどがあることがわかった。

本研究の目的は、日本と韓国で成立したDV防止法の制定過程を、市民の関与する政策ネットワークに焦点を合わせて比較研究することである。両国のDV防止法は市民の力無しには成立し得ない法律であったこと、国連の取り組みが影響していることなど、共通点が顕著であると同時に、多くの違いがあることもわかった。韓国ではNGOの政策への影響力が強く、ジェンダー平等政策についてはそれが一層顕著である。日本では一般にNGO等市民の影響力は強くないが、DV防止法に関しては男女共同参画審議会暴力部会と、国会議員プロジェクトチームが議論のアリーナとなり、多くの被害者救済の専門家やNGO、研究者などから情報・要望と本格的な法律案が寄せられたことが制定の力となった。韓国の日本との違いは以下acのようにまとめられる。a.この法制定に関わったNGO「女性の電話」「韓国女性団体連合」が専門家と連携して政策提言を行っていく新しい社会運動としての性格と、全国規模の連合を形成し、年度計画で統一的な運動を展開するという旧型の社会運動の性格を併せ持っており、その背後には「圧縮された経済発展」があること、b.ともに民主化運動を行った人々が各方面で重要な地位についているために広い連携が可能であること、c.メディアを積極的に利用し強力な世論形成に成功したことなどである。このような違いには以下のような要因があると思われる。民主化を市民自身の手で成功させ、その時期が、環境や女性など国境を超える公共利益的課題が増大した時期と一致していたこと、民主化後の行政課題を担う人材とシステムが、軍事政権下では十分に発達してこなかったこと、民主政府が前代の政権との差別化を明確にし内外に印象づけるために、NGOを積極的に政権に組み込んだこと、などである。今後は両国の違いが、成立した法律とその後のDV防止政策にどのように影響したかが研究課題となる。
甲状腺細胞の各種情報伝達系とGTP結合蛋白質を介するその調整機構

本年度の研究は甲状腺におけるGタンパク質依存性膜情報伝達機構の内,特にリン脂質代謝-Ca系の詳細を知ることを目的とし,既に明らかにしたIAP感受性Gタンパク質の多様な役割についてもさらに追求した。1.ノルエピネフリン(NE)およびTSHによるリン脂質代謝-Ca系の活性化とアデノシン(Ado)の許容効果:培養ラット甲状腺FRTL-5のリン脂質代謝-Ca系が培養条件により,NEまたはTSHで活性化されることは既に報告したが,このNEとTSHの効果は,それ自体は非Ca動員シグナルであるAdoの存在により著しく増大する。このAdoの“許容効果"にはIAP感受性Gタンパク質の関与が必要である。既に報告した,ある種のプリナ-ジックアゴニストのCa動員作用に対するAdoの効果もあわせて考えると,この許容効果は甲状腺細胞のAdo受容体-IAP感受性Gタンパク質を介し,リン脂質代謝-Ca系の伝達機構一般に及ぶと思われる。Adoは神経細胞から分泌される他,甲状腺細胞からも分泌されるので,ホルモンとAdoとの共同作用は甲状腺の神経支配,あるいはオ-トクリン制御に重要な意味を持つ筈である。2.心房性利尿ペプチド(ANP)による甲状腺細胞の制御とGタンパク質の関与:ANPはFRTL-5内におけるcGMP濃度を著しく増大させる。その生理的役割は未確認であるが,チログロプリンの合成阻害が見られるという報告がある。興味あることは,このANPのcGMP合成促進作用がAdoで著しく阻害され,その阻害はIAP感受性であった。この結果は,IAP基質Gタンパク質が,その新しい役割として,グアニル酸シクラ-ゼの阻害へも関与している可能性を示すものと思われる。
電子移動方向制御を目的とする自己組織化海面の構築

海面での電子移動の方向制御を目的に、機能分子の固定表面上への高配向性の単分子層の構築を検討している。本年度は昨年度合成済の光感応性のポリフィリン基、電子伝達体として機能するキノン基及び電極結合能を持つチオール基を連結した分子(I)と生体内酸化還元物質として重要なキノン基を持つアルキルチオール誘導体分子(メルカプトウンデシルヒドロキノン)(II)についてそれぞれの修飾電極の特性評価を詳細に行った。分子(I)で修飾した電極について、電子受容体としてメチルビオローゲン(MV^<++>)、電子供与体としてEDTAを含む液体中でこの修飾電極を光照射するとキノン基の酸化還元電位より正電位側でアノード光電流が、負電位側でカソード光電流が観察されることは昨年度既に確認済であるが、さらにMV^<++>のみを含む溶液ではカソード光電流のみが、またEDTAのみを含む溶液ではアノード光電流のみが観測されることが明らかとなった。さらに、pHを変化させるとキノン基の酸化還元電位のソフトとともに光電流の符号が変化する電位もシフトし、キノン基が電子の授受を媒介していることが確認された。分子(II)で修飾した電極について表面反射IR測定を行い、電気化学反応に伴う構造変化を詳細に調べた。ヒドロキノン/キノン基の酸化還元に対応した明確なIRスペクトルが観測された。(II)修飾電極の電気化学特性は不可逆であり、電流ピークに大きな分離が観測されるが、それに対応して電位をパルス後、定常スペクトルになるまでの時間は、より可逆なシステムであるフェロセニルウンデカンチオール単分子層電極の場合に比べてかなり大きかった。さらにこのほかフェロセニル基をアゾベンゼン基や炭素二重結合とカップリングさせて分子を合成し、種々の刺激による電子移動方向の制御を試みた。
個人化する若者に対する社会化支援における暗黙知の解明

対象のベテランに対して、現場での言動の映像記録を細かく一時停止し、これを「証拠」として、「暗黙知インタビュー」を行うことによって、暗黙知の可視化を進めた。「インタビュー」においては、その言動(ときには表情)をインタビュアーが言語化してベテランに確認した上で、その言動の考え方、理由、判断基準、程度、他のケースの場合などを答えてもらい、その結果を技能分析表の右欄に書き込んでいった。そこで、若者のライフヒストリー、ライフスタイル、そこから生ずるニーズ、成長可能性を、適切に推察し、妥当性を確かめながら支援するという「暗黙知」を可視化し、「業務の概要と意義」、「特に難しい部分」と整合させながら右欄に書き込んだ。一方、個人化する若者に対する社会化支援のわれわれの視点からは、研究代表者の所属する青少年研究会における調査結果に対する社会学的な考察結果について、再検討の必要性が浮かび上がった。その基底には、「若者の自立にとって不可欠な要素としての個人化」、「現代社会におけるアイデンティティ追求」、「社会化阻害要因としてのコミュニケーション充実強迫症」などのわれわれの研究関心がある。青少年研究会データの再検討の結果、次の4パターンを想定した。1自己主張抑制型:周りからの同化圧力に合わせて、自分の言いたいことを我慢する。2自己発揮型:社会で自分を発揮する。3自己追求型:自己を主観的に把握する。4自己拡大型:自己の活動分野を広げる。各パターン10個の質問肢を設け、6種類(アイデンティティ、自己概念、生活に対する基本的考え、対他者関係、職業意識、社会意識)に振り分けた。分析においては、各パターンの支援ニーズの特徴を明らかにしたい。とりわけ、本研究において社会化支援、個人化支援のほかに、社会人か個人かを超えて、充実して生きるプロセスをたどるための「第3の支援」の存在を見出した意義は大きかった。今日の若者に対して、企業、行政、施設、団体等の社会の多様な教育機能が、人材育成、社会参画促進、就労支援、仲間づくりなどの多様な社会化支援活動を行っている。そこでは、流動化社会において個人化を深めつつある若者に対して、彼らのニーズとレディネスに対応した新たなカン・コツ(暗黙知)が求められる。本研究は、優れた支援者のもつ暗黙知の現代社会における妥当性を検証するものである。今日の個人化の進行する時代に、若者や社会が求める社会的能力育成のための教育機能について、その方法、とりわけ暗黙知を明らかにすることは、社会の幅広い教育機能を今日的、本質的にとらえるためには不可欠と考える。また、優れた暗黙知のもとに「指導活動」を行うならば、若者の主体性を尊重しつつ、彼らのものの見方、考え方や価値観にまで踏み込んだ、意図的、計画的な支援ができるようになると考える。そのため、本研究の対象を、青年期対象社会教育事業、民間団体活動、学校のキャリア教育、コミュニケーション教育、参画教育、就労支援、グループホーム、若手社員OffJT、その他ESD等における活動とし、これら諸活動における若者支援の課題を明らかにした上で、これに基づく優れた支援者の「指導活動」について「技能分析表」を作成する。その作成にあたって、「なぜ、どんな理由で、どの程度」という「暗黙知インタビュー」を行うことによって、支援者自身が言語化できていなかった「暗黙知」を、言語、画像、映像などによって可視化する。通常のマニュアルには、暗黙知の解明に至らない。また、ベテランに講演を依頼しても、臨床的な事項まで思い至って言及してくれることまでは期待できない。本研究の暗黙知インタビューによってこそ可視化できる。そのため、初年度は大学キャリア教育、コミュニケーション教育を対象に、教員の技能分析表を作成した。とくに支援対象者の理解と指導活動の課題の把握について、研究が進展した。第一に、個人化と社会化の一体的支援である。社会規範を重んじるという今日の若者は、個人規範としての内面化や、自己の主観においての本気になっての規範追求、すなわち個人としての深まりと結びついていないところに弱点があり、そのため、支援者はむしろ個人化を支援すると推察された。第二に、癒しによる原点回帰の促進である。1エスケープ:ストレッサーからの緊急避難、2オリジン:子ども心や原風景の回復等による自己確認、3ネットワーク:人的交流による心のふれあいの3機能が、次の個人化や社会化への「踏み台」となり、若者の自立を支えていくことをイメージして支援するものととらえられた。第三に、能力の獲得支援である。そこで必要になることは、到達すべき人間像とラダーの設定、そのための必要能力の構造化、能力獲得と評価・改善の方法論である。これは、職業能力開発手法であるCUDBASによる必要能力構造化や技能分析表による作業の科学化の成果例がすでに多く示されているが、支援者が、体験的に行っていることと軌を一にするということが推察された。これまで、上司など、若者の目上の人は、もし若者にとって不本意なら異議申し立てをしてくれると考え、彼らの行動に介入してきた。しかし、多くの若者は、目上の者とは議論してくれない。一般に、若者は、介入されればおとなしく言うことを聞き、そのとおりにするかわりに、失敗した場合も、目上の人のせいにしてしまう。支援者は、若者の思うとおりにやらせ、そのうえで安易に「寄り添わず」、対立関係も辞さないと推察された。このように、「寄り添って無条件肯定を与える」という過去の支援者像とは異なる今日の支援者像を本研究では設定しつつある。

なお、初年度は大学キャリア教育、コミュニケーション教育を対象に撮影と教員の技能分析を行った。対象のベテランに対して、現場での言動の映像記録を細かく一時停止し、これを「証拠」として、「暗黙知インタビュー」を行うことによって、暗黙知の可視化を進めた。「インタビュー」においては、その言動(ときには表情)をインタビュアーが言語化してベテランに確認した上で、その言動の考え方、理由、判断基準、程度、他のケースの場合などを答えてもらい、その結果を技能分析表の右欄に書き込んでいった。そこで、若者のライフヒストリー、ライフスタイル、そこから生ずるニーズ、成長可能性を、適切に推察し、妥当性を確かめながら支援するという「暗黙知」を可視化し、「業務の概要と意義」、「特に難しい部分」と整合させながら右欄に書き込んだ。一方、個人化する若者に対する社会化支援のわれわれの視点からは、研究代表者の所属する青少年研究会における調査結果に対する社会学的な考察結果について、再検討の必要性が浮かび上がった。その基底には、「若者の自立にとって不可欠な要素としての個人化」、「現代社会におけるアイデンティティ追求」、「社会化阻害要因としてのコミュニケーション充実強迫症」などのわれわれの研究関心がある。青少年研究会データの再検討の結果、次の4パターンを想定した。1自己主張抑制型:周りからの同化圧力に合わせて、自分の言いたいことを我慢する。2自己発揮型:社会で自分を発揮する。3自己追求型:自己を主観的に把握する。4自己拡大型:自己の活動分野を広げる。各パターン10個の質問肢を設け、6種類(アイデンティティ、自己概念、生活に対する基本的考え、対他者関係、職業意識、社会意識)に振り分けた。分析においては、各パターンの支援ニーズの特徴を明らかにしたい。とりわけ、本研究において社会化支援、個人化支援のほかに、社会人か個人かを超えて、充実して生きるプロセスをたどるための「第3の支援」の存在を見出した意義は大きかった。2年次以降は、流動化社会において個人化を深めつつある若者に関する初年次の検討に基づいて、「寄り添って無条件肯定を与える」という過去の一面的な支援活動とは異なる「あの手この手」の支援方策の暗黙知を、映像記録の分析と、暗黙知インタビュー、支援活動に関する技能分析表の作成によって可視化する。具体的には支援の「かんどころ」に当たる部分について、「なぜ、どんな理由で、どの程度」という「暗黙知インタビュー」を行うことによって、支援者自身が言語化できていなかった「暗黙知」を、言語、画像、映像などによって形式知化する。その根源は臨床知であり、可視化は帰納法的なアプローチによるものである。その結果と、これまで主に演繹法的なアプローチによって明らかにされてきた「支援対象者の理解と指導活動の課題の把握」の結果とを照合し、仮説として、普遍的、一般的な「解」を求める。個人化と社会化の一体的支援については、個人規範としての内面化や、自己の主観においての本気になっての規範追求、すなわち個人としての深まりと結びついていないところに弱点がある若者に対して、ベテランの支援者はむしろ個人化を支援するのではないか。
高濃度溶解気体を用いた微生物の対象を選ばない塩素代替殺菌技術に関する研究開発

本研究では、薬品を用いないため安全・安心であり、低コストで殺菌が行える代替塩素殺菌技術として高濃度気体溶解装置を用いた高濃度気体溶解水による殺菌技術の開発を最終的な目標とする。本研究の目的は、この技術を実用化するにあたり、高濃度気体溶解水を用いた微生物への殺菌効果を把握することである。本研究では溶解させる気体として二酸化炭素を用いた。これは、その溶解度の大きさと無害性を考慮してのことである。また、温室効果ガスである二酸化炭素に付加価値を与えられれば、その有効利用が可能となり二酸化炭素排出抑制に効果があると考えられるためである。研究室においてクリプトスポリディウム原虫を直接扱うことは大変危険であるため、その代替として同様に塩素耐性を持つ枯草菌を対象に殺菌実験を実施した。またウィルスについても感染性の危険性のない大腸菌ファージT4(このウィルスも塩素耐性を持つとされる)を対象として殺菌実験を実施した。さらに、発展途上国への本法の適用可能性の評価を目的に、タイの首都バンコクにおける種々の環境水(河川水、運河水)、消毒前下水処理水を対象とした実証試験を行った。実験結果から、枯草菌は大腸菌と比較すると消毒に時間をやや要するものの、高濃度二酸化炭素溶解水による殺菌が可能であることが明らかとなった。また、大腸菌ファージT4については、大腸菌より短時間で殺菌が可能であることが明らかとなった。以上の結果から本法により微生物のサイズによらず、しかも塩素耐性を持つものの殺菌が可能であることが明らかとなった。さらにバンコクにおける実証実験、すなわち種々の環境水及び消毒前下水処理水を用いた実験結果から、糞便性大腸菌が十分に殺菌できることが示され、本法の実効性が明らかになったと考えられる。
化学反応課程の動力学理論

(1)反応の量子動力学:水素原子移行の反応動力学においてポテンシャルリッジ概念を定義することに成功し、反応機構を解明した。更に、電子的に非断熱な反応を解明する為のプログラム開発を行いDH_2^+系の計算を実行し、反応機構を解明した。他の電子的非断熱反応の研究を系統的に始められる状況となった。O(^1D)HClがその一例である。(2)Zhu-Nakamura理論に基づく半古典論の開発:Trajectory Sufrace Hopping法に我々の理論を組み込み、電子的非断熱反応を簡便に取り扱える処方を開発した。DH_<2^+>系に応用し、上記の量子力学的厳密計算と比較して理論の有効性を実証した。従来の理論では、取り扱えない過程をも見事に扱うことが出来る。(3)レーザーによる分子過程の制御:光の衣を着た状態の間の非断熱遷移を制御することによって分子過程を制御するという我々の新しい理論(Teranshi-Nakamura理論)を更に発展させ、線形チャ・プのパルスを用いて同じ事が出来ることを示した。近接準位間の選択的励起や分子の電子励起状態の完全励起等に応用し有用性を示した。(4)多次元トンネルの新理論:インスタントン理論を基礎として任意自由度の二重井戸におけるエネルギー分裂に適用出来る一般論を構築した。21自由度のマロンアルデヒドに適用してその有効性を実証した。1.電子状態変化を伴う化学反応の動力学研究現在既に完成し活用している電子的断熱反応のプログラムを拡張し電子的非断熱反応の計算を3原子系の3次元反応に対して実行可能となる様にし、DH_2^<+]>の計算を実行した。同時に、IVR法及び我々の非断熱遷移理論に基づいた半古典力学的手法を開発しその計算用プログラムを作成している。3原子系3次元反応に対して、上記の量子論及び半古典論での計算を予備的に実行し、反応機構の解明を進めるとともに、精度良い半古典論の構築を目指している。2.反応過程の時間依存外場による制御提唱した新しい理論(Y.Teranishi and H.Nakamura,Phys.Rev.Lett.81,2032(1998))の各種問題への反応を進めるとともに、化学反応を含む動的過程に適した理論の拡充を行っている。これらには、超球座標とSVD法及びFloquet状態表示を併用している。一方、波束伝播とその動力学の制御を我々の基本的考えを利用しながら数値的に実行する為のプログラムを作成し、解離過程に応用した。(1)電子的に断熱な化学反応の量子動力学我々独自の超球楕円座標を用いて軽原子(水素原子)移行反応の量子動力学の機構解明を進めた。ポテンシャルリッジの概念を導入し、反応過程を振動非断熱遷移として概念化することに成功した。0(^3P)HCl系については古典力学との詳細な比較を行い同近似の意味づけを議論した。また、全反応確率に対する正しい理論を構築することに成功した。(2)電子的に非断熱な反応の量子動力学と半古典論の開発同過程に対する量子動力学計算の為のコードを開発した。典型例としてDH_2^+系を取り上げ状態から状態への遷移から全反応確率までを詳細に評価し反応機構を議論した。現在、大きな系にも適用出来る半古典論をも開発しており、本量子計算はその精度を調べる為の基準として用いられる。(3)多次元トンネル現象の理論トロポロン分子のエネルギー分裂を評価する為、ポテンシャルエネルギー曲面のab initio計算を行い3次元モデルを用いて解析した。更に、インスタントン理論を実現性高い形に書直すことに成功し、マロンアルデヒドにおける水素移動を21次元問題として正しく取扱うことに成功した。理論の更なる一般化を進めている。(4)レーザーによる分子過程の制御レーザーを操作することによって非断熱遷移を従って分子過程を制御する我々独自の理論に基づいた光分解過程や多準位系の選択的制御の研究を行った。半古典論との合体により、更に具体的過程への応用が期待される(1)反応の量子動力学:水素原子移行の反応

動力学においてポテンシャルリッジ概念を定義することに成功し、反応機構を解明した。更に、電子的に非断熱な反応を解明する為のプログラム開発を行いDH_2^+系の計算を実行し、反応機構を解明した。他の電子的非断熱反応の研究を系統的に始められる状況となった。O(^1D)HClがその一例である。(2)Zhu-Nakamura理論に基づく半古典論の開発:Trajectory Surface Hopping法に我々の理論を組み込み、電子的非断熱反応を簡便に取り扱える処方を開発した。DH_2^+系に応用し、上記の量子力学的厳密計算と比較して理論の有効性を実証した。従来の理論では、取り扱えない過程をも見事に扱うことが出来る。(3)レーザーによる分子過程の制御:光の衣を着た状態の間の非断熱遷移を制御することによって分子過程を制御するという我々の新しい理論(Teranshi-Nakamura理論)を更に発展させ、線形チャ・プのパルスを用いて同じ事が出来ることを示した。近接準位間の選択的励起や分子の電子励起状態の完全励起等に応用し有用性を示した。(4)多次元トンネルの新理論:インスタントン理論を基礎として任意自由度の二重井戸におけるエネルギー分裂に適用出来る一般論を構築した。21自由度のマロンアルデヒドに適用してその有効性を実証した。
家族性アミロイドーシスの分子遺伝学的研究

正常プレアルブミン(PA)と1アミノ酸置換がある異型PAの沈着する家族性アミロイドーシス(FAP)の病態を遺伝子レベルで解明するために研究をすすめ、以下の結果を得た。1)異型PA遺伝子とFAPとの関連、先に確立したFAPのDNA診断法を用い、FAP家系14例(FAP患者11例、無症状者3例)と正常対照者10例につき検索した。この結果正常者全例には異型PA遺伝子を認めなかった。またFAP患者全てが正常及び異型PA遺伝子をもつヘテロ接合体であった。さらにFAP家系の無症状者3例中1例はヘテロ接合体で32才であった。FAPの平均発症年令は33才で、この1例は将来発症する可能性が高いと考えられる。2)異型PA遺伝子の構造、患者肝DNAより作成した遺伝子ライブラリーよりヒトPAcDNAをプローブに異型PA遺伝子を単離した。この異型PA遺伝子の5′上流600bpを含む全エクソン、エクソン・イントロン境界領域、イントロン内オープンリーディングフレームの塩基配列構造を決定し、上記1アミノ酸置換の原因となる1塩基置換部のみが正常PA遺伝子と異なることを見出した。3)マウスPAcDNAの構造解析、FAPの実験モデルマウスを作成するため、マウス肝cDNAライブラリーを作成し、マウスPAcDNAを単離した。構造解析の結果、ヒトとマウスのPAはどちらも127コのアミノ酸残基から成り、基本的に同一構造をもつことが明らかとなった。4)マウスPA遺伝子の構造、マウス肝由来の遺伝子ライブラリーからPA遺伝子を運ぶクローンを単離した。マウスPA遺伝子は、8.5Kb大でヒトと同じく4コのエクソンから成る。また5′上流約190bp及びヒトPA遺伝子の第1イントロン内のオープンリーディングフレームに相当する第1イントロン3′端、約460bpの塩基配列には、ヒト遺伝子と高い相同性が認められた。さらにマウスPA遺伝子の発現を調べ、肝、腎、脳にPAmRnAを見出した。
発癌に関与するユビキチンリガーゼBRCA1の機能解析

ユビキチン・プロテアソーム系はエネルギー依存的に細胞内タンパク質の分解を行うシステムであり、小さなポリペプチドであるユビキチンが基質分子に鎖状に付加され、これがプロテアソームによって認識されることで特異的な基質分子の分解が可能である。本研究では発癌に関与するBRCA1などのユビキチンリガーゼの基質分子の探索を通しでユビキチン化と発癌との関係を理解することを目的とする。タンパク質のユビキチン化反応は非常に複雑なため、いくつかのモデル基質を用いたin vitroユビキチン化反応系の構築を試みた。いくつかのモデル基質の中で神経変性疾患との関連が示されているタンパク質Ataxic-3が非常に効率よくユビキチン化を受けることを見出した。そこで、Ataxin-3をモデル基質としてin vitroユビキチン化反応系を用いてAtaxin-3に対するユビキチン化関連酵素の同定を試み、VCP/E4BがAtaxin-3のユビキチン化および分解に関与することを示し、本研究内容をEMBO J.に投稿し受理された。また、BRCA1などのユビキチンリガーゼに対する基質分子を探索する手段として、細胞内でユビキチン化しているタンパク質の網羅的探索法を構築している。細胞内から抗ユビキチン化抗体を用いたユビキチン化タンパク質を濃縮し、オンラインLC-タンデム質量分析計によるショットガン解析によってユビキチン化タンパク質(およびその結合タンパク質)を数百種類同定することに成功している。現在、本方法と遺伝子ノックダウンなどを併用して基質分子の探索を行っている。ユビキチン・プロテアソーム系はエネルギー依存的な細胞内タンパク質分解機構である。ユビキチン分子が複数個付加された基質分子はプロテアソームによって認識され迅速に分解を受ける。基質分子へのユビキチン鎖の付加はE1,E2,およびE3と呼ばれる複合酵素系によって行われるが、この中で基質分子の認識を行うのがE3(ユビキチンリガーゼ)である。本研究ではE3の一つである癌抑制遺伝子産物BRCA1の基質分子の同定が最終目的の一つである。しかしながら、ユビキチン化は複雑な酵素系によって行われるため通常の方法では困難であった。そこで、細胞内に認められるユビキチン化基質の網羅的同定を最新のプロテオミクス技術を用いて行うことを試みた。ユビキチン化タンパク質はプロテアソームによる分解によって不安定であるため、培養細胞をプロテアソーム阻害剤にて処理することでユビキチン化タンパク質を細胞内に蓄積させた。これらの細胞から細胞抽出液を得た。細胞抽出液からユビキチン化タンパク質を回収するために抗ユビキチン抗体を固定したカラムを作製しアフィニティークロマトグラフィーを行った。抗ユビキチン抗体カラムに濃縮されたタンパク質はSDS-PAGE後in-gel消化後質量分析計によるタンパク質の同定を行った。その結果、約100種類のタンパク質を同定することが可能であった。またより効率的にタンパク質の同定を行うために多次元クロマトグラフィーと質量分析計を組み合わせたショットガンプロテオミクス法により約200種類のタンパク質の同定を行った。これらの方法で得られたタンパク質はユビキチン結合タンパク質が多く含まれていたのでこれらを除去する目的でタンパク質複合体が解離する条件にて同様のアフィニティークロマトグラフィーを行った。この条件においてはユビキチン結合タンパク質はほとんど認められず、効率的にユビキチン化タンパク質の濃縮が可能になったことが示された。現在、これらの網羅的タンパク質同定システムに定量情報を付加するための技術開発も行っている。
作用素環におけるエントロピーの研究

力学系の理論において、最も重要な問題の一つはエントロピーが正の自己同型写像を特徴付けることである。私はこの問題を作用素環論の設定において研究している。最初の結果では、作用素環でVoiculescu-Brownエントロピーを考える場合には、それが正になるための十分条件として、その作用素環の状態の空間の上に導かれる同相写像の位相的エントロピーが正になるという条件を得た。この結果は、作用素環論におけるVoiculescu-Brownエントロピーと、Banach空間の幾何学との関係を明らかにしたものである。この結果は作用素環の構造論、位相力学系の双方において応用がある。たとえばこれによって位相Pinsker環の幾何学的記述が得られた。次に非可換トーラス上のある種の自己同型について、Voiculescu-Brownエントロピーを計算した。その結果は、常に少なくとも、対応する古典的な場合の同相写像のエントロピーの値の半分以上になるというものである。さらに、位相力学系の有限次元近似理論について研究した。これに現れる作用素環の構造論との関係、たとえば行列有限性や、擬対角性との関連についても研究を行った。また、K-理論の行列近似を用いた計算のために、非可換距離の理論も研究した。
電子線偏向の定点観測によるマイクロ秒磁気ダイナミクスの観測

本年度は走査透過型電子顕微鏡(STEM)において収束した電子線プローブを試料上の定点で静止し、多分割環状(SAAF)検出器を利用して電子線の強度の時間変化を検出する具体的な実現方法と、その無磁場下での測定感度について検討した。装置に詳しい企業や研究者との議論などを行った結果、利用している電子顕微鏡については、電子線のスキャン範囲を調節するパラメータを利用して電子線プローブの動きを制御する方法が有効であることが分かった。実際に、ナノ粒子を対象としたSTEM観察を行ったところ、パラメータに比例してスキャン範囲が狭くできることが確認でき、パラメータを適切に調節することでプローブサイズに対して十分にスキャン範囲を狭くし、実効的に電子線を停止した状態で多分割環状検出器でシグナルを取得することができる見込みが立った。また、マグネタイトナノ粒子について得られたSAAF検出器のシグナルと、球体を仮定してシミュレートした静電ポテンシャルの微分位相分布を比較して、検出感度について見積もった。見積もられた検出感度は典型的なスキルミオン物質であるFeGeにおいての面内磁化から計算される磁化を検出可能なレベルであることが確認できたため、今後はFeGeにこの観測手法を適用することで磁気ダイナミクスの検出を試みたい。一方で、予定していた磁性体の冷却観察については冷却試料ホルダーの故障とその修理が長期間にわたったため、Feのナノ粒子やスキルミオン物質についての観察を行うことができなかった。代替として転移温度が室温以上のヘキサフェライトでの磁気ダイナミクス観察を試みたが、磁気シグナルを検出することができなかった。研究課題の基盤となる定点観測のための準備と評価に留まり、実際の物理現象への適用が行えなかった。具体的には予定していた磁性体の冷却観察について冷却試料ホルダーの故障とその修理が長期間にわたったため、Feのナノ粒子などの観察を行うことができなかった。また、予備として用意していた転移温度が室温以上の磁性体でも観察を行うことで磁気シグナルの検出を試みたが、磁気シグナルを検出することができなかった。定点での電子線偏向の検出を実際の磁気ダイナミクスに適用する。具体的には、冷却試料ホルダーを利用してマグネタイトのナノ粒子の磁気ダイナミクスの周期の温度依存性や、定常電流を印加した状態での磁気スキルミオンなどへの適用を試みる。試料冷却ホルダーの故障とその修理に時間がかかり、研究計画に大幅な遅れが生じたため、予定していた電流印加実験を行うことが困難になった。さらに、研究代表者が新年度から別の所属研究機関に異動することになり、年度内に購入した場合に装置の移管などに時間や手間がかかることが想定された。そのため、電流印加実験用に購入を計画していた大型機器であるマルチメータとオシロスコープなどについては購入を見送った。また、研究計画の遅れから研究成果発表のための旅費などの支出も予想を下回った。令和元年度においては、試料冷却ホルダーの通電実験の目途が立ったため、電流印加実験用の大型機器や実験試料の購入などに使用する。
移動ロボットを用いた遠隔地間散歩パートナーシステムの研究

本研究では、遠隔地にいる人間同士の動作を含めた相互コミュニケーションの一例として、遠隔地にいる人間同士が移動ロボットを相手に見立てて一緒に歩いているかのような感覚で散歩を体験できるシステムの構築を目指した。まず、歩行する人間の位置を逐次計測するセンサシステムを構築した。光走査型の距離センサから得られる二次元平面上の計測データから人間の存在位置を算出し、結果に含まれる誤差の影響を考慮して、カルマンフィルタの枠組みにより人間の位置推定を行う方法を構築した。次に、計測した人間の位置を遠隔地にいるもう一台のロボットに送信するための通信方式と、互いに遠隔地にいる人間の歩行動作を再現するためのロボットの走行制御方式の検討を行った。走行制御方式としては、まず互いの走行環境が同一であるような状況において遠隔地間で歩行動作を実現するために、人間の移動ベクトルをロボットの目標走行ベクトルとして与える方法(1)を構築した。次に、互いの経路形状や障害物等の状況が異なるような複雑な環境を対象とするために、人間とロボットの相対位置を遠隔地間で保存する方法(2)を構築した。そして、開発したセンサシステムを移動ロボットに搭載し、実験を行って本方式の実現可能性を検証した。ロボットと人間のペアを二組並べて配置し、人間とロボットの軌跡をとりながら動作を検証した結果、それぞれが直進して歩行する場合には、上記の(1)の方法により実現が可能であることが確認できた。さらに、(2)の方法により互いに経路の異なる通路、例えば一方が直進路で他方がカーブしている場合にも対応可能であることが確認できた。本研究では、遠隔地にいる人間同士の動作を含めた相互コミュニケーションの一例として、遠隔地にいる人間同士が移動ロボットを相手に見立てて一緒に歩いているかのような感覚で散歩を体験できるシステムの構築を目指している。本年度においては、実際にシステムを構築し、本システムの実現可能性と有用性を実験的に検証するために、以下の項目について研究を行った。1.実験用移動ロボットプラットフォームの整備統括制御用可搬型PCを移動ロボット台車に搭載し、ロボットの走行制御モジュールと接続した。また、それぞれのロボットが人間の位置情報を相互に交換するための通信手段をハードウエア、ソフトウエア両面から整備した。2.人間の位置を計測するためのセンサシステムの構築歩行する人間の位置を逐次計測するシステムを構築した。ロボットに搭載した光走査型の距離センサで得られる二次元平面上の計測データから、人間の位置を算出するソフトウエアを作成した。3.人間の位置推定方法の構築センサの計測データから求めた人間の存在位置に対して、算出結果に含まれる誤差の影響を提言するために、人間の動きのモデルをもとにして人間の位置推定を行うアルゴリズムを検討した。4.移動ロボットの行動制御方式の検討計測した人間の位置を遠隔地にいるもう一台のロボットに送信し、互いに遠隔地にいる人間の歩行動作を再現するように走行した。そのための走行制御方式の検討を行った。5.基礎実験上述した実験用移動ロボットにセンサシステムを搭載し、二台のロボットと二人の人間による基礎的な実験を行って本方式の実現可能性を検証した。本研究では、遠隔地にいる人間同士の行動や動作を交換、提示することにより、散歩に代表されるような動作を含めた相互コミュニケーションの手段を実現するシステムを提案した。具体的には、遠隔地にいる人間同士が移動ロボットを相手に見立てて散歩を体験できるシステムを構築した。遠く離れた場所にいる二人の人間が、移動ロボットを介することで遠くにいる相手と一緒に歩いているかのような感覚で散歩できるようにする。今年度は、本システムの実現可能性を実験的に検証するために、以下の項目について研究を行った。・単純な環境中での遠隔地散歩の実験前年度までに構築した実験システムを用いて、互いの走行環境が同一であるような状況において遠隔地散歩の実験を行った。

ロボットと人間のペアを二組並べて配置して人間とロボットの軌跡をとりつつ動作を検証した結果、人間の移動ベクトルをロボットの目標走行ベクトルとして与える方法により、それぞれが直進歩行する場合について動作を実現することができた。・複雑な環境に対応するための走行方式の検討より複雑な環境中で行えるように、走行制御方式拡張した。互いの経路形状や障害物等の状況が異なるような複雑な環境を対象とするために、人間とロボットの相対位置を遠隔地間で保存するように走行する方法を構築した。・複雑な環境中での遠隔地間散歩の実験前述した走行方式の有効性を評価するために、実システムを用いた実験を行った結果、互いに経路の異なる通路、例えば一方が直進路で他方がカーブしている場合にも対応可能であることが確認できた。
植物触媒を用いた薬品生産

(+)ーメントール,(-)-ボルネオールはツキヌキユーカリ培養細胞により主変換物としてゲンチオビオサイドへ,その他水酸化・配糖化された8種の化合物へと変換された。また,基質の分割投与とグルコースの添加による変換の効率化,水酸化酵素阻害剤による生成物の単純化に成功した。それに対して,配糖化可能な水酸基をもたない双環性モノテルペン[1,8-シネオール,(+)-および(-)-カンファー]は同培養細胞により水酸化され,新たに導入された水酸基にグルコースが配糖化した化合物へと変換され,それぞれ5,7,8種の新規変換物を得た。特に,これまで得られたツキヌキユーカリ培養細胞による双環性モノテルペンの変換結果を総合すると,最初の水酸化位置は基質がもつ酸素官能基に対してendoの方向からおこると考えられる。また,その位置選択性についてはR-体,S-体で違いが認められた。カリオフィレンオキサイドの変換では酸化・還元・異性化・配糖化された7種の変換物を単離・構造決定した。ステビオールは3種のグルコース配糖体に変換され,それらは甘味を示した。オノゲイール,イソオイゲノールは,主変換物としてそのゲンチオビオサイドに変換された。ニチニチソウ培養細胞によるtabersonineの変換では,14,15の二重結合のエポキシ化と11-メトキシル化が認められた。薬用ニンジン毛状根を利用したバイオリアクターによる(RS)-2-フェニルプロオピン酸の変換では,グルコースをはじめとした糖のエステル型配糖体4種が得られ,2ヶ月以上の長期連続変換にも成功した。ジギトキシゲニンは各種ストロファンツス属植物培養細胞により配糖化・異性化・水酸化を受け,計17種の化合物に変換された。同カルスからの再分化植物体の育成にも成功し,原植物から報告のある7種の強心配糖体のほか,2種の新規強心配糖体を得た。変換実験に用いる培養細胞株としては,新たにギムネマ・シルベスタ,ナツメを,また毛状根としては各種カンゾウからAgrobacterium rhizogenes直接感染法により,それぞれ誘導した。モノテルペン(メント-ル,ボルネオ-ル)はツキヌキユ-カリ培養細胞により水酸化・配糖化・酸化・還元された化合物へと変換され,それぞれ10,8個の新規変換物を得た。甘味ジテルペン配糖体ステビオサイドのアグリコンであるステビオ-ルはツキヌキユ-カリ,コ-ヒ-培養細胞によりグルコ-ス配糖体に変換された。甘味トリテルペン配糖体グリチルリチンのアグリコンであるグリチルレチン酸はツキヌキユ-カリ,コ-ヒ-培養細胞さらに薬用ニンジン毛状根により配糖化された。強心配糖体ジギトキシンのアグリコンであるジギトキシゲニンは各種ストロファンツス属植物培養細胞により配糖化,異性化,水酸化を受け,計17種の変換物が得られた。その変換反応の様式には,通有性と特異性が認められた。茶の旨味物質テアニンのアミン部分であるエチルアミンは培養条件を工夫することによりチャ培養細胞によりγーグルタミル化されテアニンを生じた。特にモノテルペンの変換反応では主変換物の他に多様な変換物が得られた。変換物の多様性は変換反応それ自身としてみれば非常に興味深いものであるが,薬品生産という観点からはあまり好ましいものではない。

また,基質の毒性が強いものは通常の濃度ではその毒性のために細胞死を引き起こし,変換反応が進行しないものがあった。また,基質によっては試みたすべての培養細胞で変換されないものもあった。しかし,それは基質の毒性によるものではなく,おそらく細胞への取り込みに問題があるためと考えられる。(-)-メントールの変換により得られた変換物のアグリコンであるp-menthane-3,8-diolは蚊忌避活性をもつが,その配糖体である変換物それ自身には忌避効果は認められなかった。しかし,グルコシダーゼと共に製剤化すれば,わずかずつ分解され,徐放性の蚊忌避剤として使える可能性も示された。ジギトキシゲニンに対する変換能力の異なる2種のストロファンツス細胞株の雑種細胞が電気融合により得られた。配糖化可能な水酸基をもたないモノテルペン(1,8-シネオール,カンファー),セスキテルペン(カリオフィレンオキサイド)はツキヌキユーカリ培養細胞により水酸化され,新たに導入された水酸基にグルコースが配糖化した化合物へと変換され,それぞれ5,7,7個の新規変換物を得た。また,モノテルペンの変換において,基質の分割投与とグルコースの添加による変換の効率化,水酸化酵素阻害剤のよる生成物の単純化に成功した。ニチニチソウ培養細胞によるtabersonineの変換では,14,15の二重結合のエポキシ化と11-メトキシル化が観察された。芳香族化合物であるオイゲノール,イソオイゲノールを基質とした変換反応では,主変換物としてそのゲンチオビオサイドを生成したが,そのほかに,グルコース,ラムノースが配糖化したrutinosideを微量生成した。植物変換によるラムノースの配糖化は初めての例である。各種アミンを基質としてチャ培養細胞によるγ-グルタミル化反応を行ったところ,メチルアミン,ブチルアミン,エタノールアミン,アミノプロピオニトリル等の1級アミンが良好な基質となり,γ-グルタミル化物を生成した。配糖化可能な水酸基をもたないモノテルペン[(+)-および(-)-フェンコン]はツキヌキユーカリ培養細胞により水酸化され、新たに導入された水酸基にグルコースが配糖化した化合物へと変換され、それぞれ6,3種の新規変換物を得た。また、(+)-および(-)-カンファーの変換で得られたそれぞれ7,8種の変換物については、その変換経路を中間体の投与により明らかにした。特に、これまで得られたツキヌキユーカリ培養細胞による双環性モノテルペンの変換結果を総合すると、最初の水酸化位置は基質がもつ酸素官能基に対してendoの方向からおこると考えられる。また、その位置選択性についてはR-体、S-体で違いが認められた。薬用ニンジン毛状根を利用したバイオリアクターによる(RS)-2-フェニルプロピオン酸の変換について検討した。グルコースをはじめとした糖のエステル型配糖体4種が得られ、その約50%を培地中に放出した。さらに、2ヶ月以上の長期連続変換にも成功した。イネの倒伏軽減剤として開発されたイナベンフィドの活性体(S-体)を合成するために、イナベンフィドケトンの立体選択的還元を各種植物培養細胞を用いて検討した。試みた細胞の中では、ダイズ培養細胞が一番高い変換率を示した。ストロファンツス属植物カルスからの再分化植物体の育成に成功した。その成分について検討したところ、原植物から報告のある7種の強心配糖体のほか、2種の新規強心配糖体を得た。キバナオウギ(Astragalus membranaceus)の毛状根を新たに誘導した。
胎盤特異的マイクロRNAの機能解析と異常妊娠早期診断への臨床応用のための基盤研究

ヒト胎盤において特異的に発現しているmicroRNAを同定した。妊娠高血圧腎症の胎盤でmicroRNAの発現異常が起きており、それによって胎盤の機能障害(estradiol合成酵素HSD17B1の調節不全)が引き起こされていることをはじめて明らかにした。さらに、血漿中のHSD17B1の低下はPE発症前に起きていることを見出し、従来にない新規の予知因子を同定した。本研究は、ゲノム機能科学の先端技術を駆使して、microRNA(miRNA)が胎盤でどの様な特異的機能を有しているのか、また、miRNAが異常妊娠[妊娠高血圧症候群胎盤(PIH)など]の分子病態にどの様に関与しているのか解明を行う。さらに、miRNAを新規ツールとした、周産期医学への臨床応用(診断・予後判定・治療)のための基盤研究を行う。具体的には下記の目的で研究を行う。(1)正常、および異常胎盤におけるmiRNAのプロファイル解析、標的mRNAの同定、および機能解析を行い、胎盤におけるmiRNAの機能解明を行う。(2)同時に、臨床疫学研究により、妊娠期間を通して正常、異常妊娠における妊婦さんの血液(血漿)と分娩後の胎盤からmiRNAの発現量を定量的にデータ解析し、早期診断ツールとしてのmiRNAの有用性を検討する。胎盤におけるmicroRNA (miRNA)の特異的機能の解明をおこなうと共に、miRNAによる転写後遺伝子発現調節の仕組みから異常妊娠(妊娠高血圧症候群等)の分子病態を解析し、胎盤に発現している疾患特異的miRNAを臨床ツールとして用いた早期診断・治療開発につながる基盤研究を行うことを目的に研究を開始した。A)正常胎盤絨毛組織由来のmiRNAのクローニングとシークエンス結果を詳細にバイオインフォマティクス解析し、胎盤特異的miRNAの多くは第19染色体上の霊長類特異的miRNA遺伝子クラスターから発現していることを見出した。胎盤特異的miRNAが標的としているmRNAやシグナル伝達経路を同定するために、胎盤特異的miRNA (MIR517A)を過剰発現させた培養細胞(BeWo)を用いてプロテオミクス解析を行った。直接増減の変動をきたした蛋白スポットを2次元電気泳動により抽出し、質量分析を行い、58個の蛋白分子を同定した。その中で、in silico予測されるMIR517Aの直接の標的分子(標的mRNAから翻訳された分子)は含まれていなかったが、ingenuity pathway analysisから、栄養膜のアポトーシス、合胞体化抑制、ホルモン産生等に関与しているtumor necrosis factor (TNF)シグナル伝達経路の調節にMIR517Aが関与している新知見を見出した。さらに、第19染色体上のクラスターに存在する他の胎盤特異的miRNAの培養細胞を用いたプロテオミクスによる機能解析も進めた。B)妊娠高血圧症候群のサンプル採取をおこなった。さらに、サンプルからsmallRNAライブラリーを作製し、疾患特異的miRNAプロファイル解析として大量クローニングとシークエンス解析、PCRアレイ解析を進めた。胎盤におけるmicroRNA(miRNA)の特異的機能の解明を行うと共に、miRNAによる転写後遺伝子発現調節の仕組みから異常妊娠[妊娠高血圧症候群(PIH)等]の分子病態を解析し、胎盤に発現している疾患特異的miRNAを臨床ツールとして用いた早期診断・治療開発につながる基盤研究を目的に研究を行った。A)胎盤特異的miRNAの機能解析:胎盤特異的miRNA(MIR517等)を過剰発現、または抑制させた培養細胞系(BeWo細胞等)を用いて、マイクロアレイ解析を行った。優位に変動しているmRNAから、バイオインフォマティクス解析により、胎盤特異的miRNAの標的mRNA候補を抽出した。さらに標的mRNAであること検証するために、real-time PCR等の解析を進めた。B)異常妊娠胎盤(PIH)の網羅的miRNAプロファイル解析:大量クローニングとシークエンス解析法と、real-time PCRを用いた先端の定量的アレイ解析法を用いて、PIH胎盤におけるmiRNA発現を、正常胎盤と比較解析した。この解析により、正常胎盤と比較し、PIH胎盤では、第19番染色体上のmiRNAクラスター由来であるmiRNA(MIR519等)の発現が優位に上昇している新知見を見出した。さらに、in situ hybridization解析法により、見出されたmiRNAが胎盤絨毛組織内でどの細胞に由来するのか解析を進めた。A)胎盤特異的miRNAの機能

解析:前年度から継続して研究を行い、胎盤特異的miRNAの過剰発現させた培養細胞系のマイクロアレイ解析から、栄養膜のモデルであるBeWo細胞において胎盤特異的miRNAの標的mRNA候補(タンパク質ボスファターゼなど)を見出し、標的mRNAの3'-非翻訳領域を含むレポータープラスミドを構築し、ルシフェラーゼアッセイにより、標的mRNAであることを証明した。さらに標的mRNAの機能解析を進めた。B)異常妊娠胎盤(PIH)の網羅的mRNAプロファイル解析:大量シークエンス解析と、real-time PCRを用いた定量的アレイ解析を行い、両方の解析結果に共通してPIH胎盤で発現が優位に上昇しているmiRNA(PIH関連miRNA)を同定した。レーザーマイクロダイセクションによる胎盤組織解析から、そのPm関連miRNAは絨毛栄養膜に由来していることを見出した。さらに、PIH関連miRNAに共通する有力な標的miRNA候補(水酸化酵素)を見出した。この標的分子候補は、過去にPIHの予知因子として報告されていない新規の分子である。C)臨床疫学解析:pIHおよび正常妊婦さんからの血液よりRNAを抽出し、real-tirne PCRアレイ解析を行い、血液中miRNAの網羅的解析を行った。また、Bより見出された標的分子候補が、血中で検出可能であるか予備解析を行い、検出のためのELISA測定システムを確立した。胎盤におけるmicroRNA(miRNA)の特異的機能の解明を行うと共に、miRNAによる転写後遺伝子発現調節の仕組みから異常妊娠[妊娠高血圧症候群等]の分子病態を解析し、胎盤に発現している疾患特異的miRNAを臨床ツールとして用いた早期診断・治療開発につながる基盤研究を目的に研究を行った。1)異常妊娠胎盤の網羅的miRNAプロファイル解析:妊娠高血圧症候群における主要な病型である妊娠高血圧腎症の胎盤で大規模miRNA発現プロファイル解析を行い、妊娠高血圧腎症の胎盤で発現が上昇している22個のmiRNAを見出した。コンピュータによる標的遺伝子候補解析から、胎盤に特異的に発現し、機能している標的遺伝子候補として、胎盤特異的E2合成酵素遺伝子HSD17B1を見出した。妊娠高血圧腎症の胎盤ではmRNAおよび蛋白質の両方のレベルでHSD17B1の発現が有意に低下していた。HSD17B13'-UTRルシフェラーゼアッセイにより、妊娠高血圧腎症の胎盤で発現が上昇したmiRNAのうちmiR-210とmiR-518cは、直接結合し抑制的に作用することが示された。妊娠高血圧腎症の胎盤でmiRNAの発現異常が起きており、それによって胎盤で特異的に機能している酵素の調節不全が引き起こされていることをはじめて明らかにした。2)臨床疫学解析:HSD17B1蛋白質は、妊婦血液でHSD17B1が検出可能であり、妊娠高血圧腎症発症の妊婦血液では、血漿HSD17B1値が有意に低下していることを見出した。さらに、前向きコホート研究により、妊娠高血圧腎症発症前の血漿検体で動態解析を行い、発症前に血漿HSD17B1値が有意に低下していることを突き止めた。さらに、受信者動作特性曲線の解析から、血漿HSD17B1値が優れた妊娠高血圧腎症の予知マーカーとなり得ることが示された。