hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
大量実テキストデータに潜む少量多品種な部分構造の統計的発見と利用に関する研究

テキストデータの大部分ではなく、相対的に少ない部分に対して成立するパターン発見手法を構築するためにパターン発見への写像導入とパターン発見への距離空間導入に分けて研究を行った。前者に対し、近似文字列照合を用いたパターン発見手法を提案し、実験によりその有効性を示した。この際、文字の写像が本質的であることを示した。後者はパターンの抽出基準であり、「普通」の部分構造を組み合わせたパターン発見の有効性をゲノム配列やWeb上の文書による実験で示した。本研究の目的は、与えられたデータの多くに対して成立する知識ではなく、相対的に少ない部分データに対して成立する粒度の細いパターンを発見する手法を構築することである。そのために、その着想となった2つの研究を「パターン発見への写像導入」と「パターン発見への距離空間導入」という観点で捉えなおす。「パターン発見への写像導入」に対し、本年度は主に以下の3つの成果が得られた。(1)近似文字列照合を行う乱択アルゴリズムの最適な写像の生成方法の提案(2)最適な写像により生成された写像の精度に関して、既存手法との実験的な評価(3)近似文字列照合を行う乱択アルゴリズムについて、従来高速フーリエ返還(FFT)を用いていた部分に実数値FFTを用いることによる高速化これらの成果は、従来から研究してきた写像による近似文字列照合の拡張であり、厳密には一致していないパターンの高速発見に役に立つ。「パターン発見への距離空間導入」に対し、本年度は主に以下の2つの成果が得られた。(1)背景集合を用いた例外的なテキストパターン発見手法の提案(2)提案手法と既存の例外的な指標(Zスコア)との実験的な比較これらの成果は背景集合との距離によりパターンを発見しようとする本研究の目的に合致したものであり、従来手法では得られなかったパターンを発見できることを示したものである。一方で、前者の「パターン発見への写像導入」で得られた結果は、見つけるパターンが与えられると想定しているため、今後自動的にパターンを発見する手法へと拡張する。同様に、後者の例外的なテキストパターン発見も、見つかるパターンがスコア化されていないため、距離空間の導入が今後2年間の課題である。本研究の目的は、与えられたデータの大部分ではなく、相対的に少ない部分に対して成立する粒度の細いパターンを発見する手法を構築することである。そのために、その着想となった2つの研究を「パターン発見への写像導入」と「パターン発見への距離空間導入」という観点で捉えなおしている。パターン発見への写像導入:昨年度までに、近似文字列照合を行う乱択アルゴリズムに対する最適な写像の生成方法の提案を行い、精度評価や高速フーリエ変換部分の高速化等を行ってきた。今年度は、文字列照合をパターン発見へと拡張するために、高速化に用いた高速フーリエ変換(FFT)に着想を得て、FFTによるパターン発見を試みた。しかし、FFTでは位置情報が失われ、パターン発見には不適当であるとの結論を得た。上述の文字列照合には、FFT全体ではなく、その中の畳み込み演算が重要であった。そこで、この演算を用いてパターン発見を行う着想を得て、予備的な実験を行い、良好な結果を得た。パターン発見への距離空間導入:この目的は「普通」と「そうでない」パターンとの峻別が目的であった。これに対し、エントロピーや相互情報量を元にした指標を検討中であり、より詳細な解析を行う予定である。一方で、一つの指標で峻別すると定型的なパターン(あいさつなど)も同時に得られることが分かり、これらのパターンを区別したいという要求が生じた。これに対し、昨年度提案した「背景集合を用いた例外的なパターン発見」をベースに、「普通」を構成する部分構造(語など)を自動的に発見し、「部分構造の組み合わせによるパターンの発見」を検討した。さらに、この枠組みを自動生成されたスパム検出や、遺伝子配列に適用し、特徴的なパターンが発見できた。「部分構造発見」は、テキストデータ以外にも適用可能であると考え、時系列データに対して適用し、突発的な事象(嵐や地震等)の予兆の発見が可能であることを示した。一般に予兆現象は微少であり、ノイズに埋もれやすく発見が困難である。そこで、データがオフラインで与えられると仮定し、大まかに突発現象の位置を特定してから、特異値分解を元にした手法により予兆を発見できることを示した。そのために、その着想となった従来の研究を「パターン発見への写像導入」と「パターン発見への距離空間導入」という観点で捉えなおした。パターン発見への写像導入:これまでに、近似文字列照合を行う乱択アルゴリズムに対する最適な写像の生成方法の提案を行い、精度評価や高速フーリエ変換部分の高速化等を行ってきた。

今年度は、昨年度に予備実験を行った畳み込み演算によるパターン発見を用いて、剽窃検出の実験を行い、低頻度でも剽窃が適切に発見できることを示した。また、この際、数文字を一つにまとめて写像する処理が本質的であることを示した。パターン発見への距離空間導入:この目的は「普通」と「そうでない」パターンとの峻別が目的であり、距離を導入することを想定していた。この目的に対し、昨年度までの成果により、距離ではなく、「普通」を構成する部分構造(語など)の自動的に発見し、「部分構造の組み合わせによるパターンの発見」が有効かもしれないとの知見を得ていた。今年度は、これをさらに進めゲノム配列やWeb上の文書でその有効性を確認した。一般に、個々のデータ間の近さを距離として厳密に定めることは困難だが、提案手法はよりシンプルで汎用性が高いと期待できる。実際、部分構造の発見をグラフデータのクラスタリングに適用し、従来手法よりノイズに強いことを示した。?写像によるパターン発見でも複数文字をまとめる、つまり、部分構造を求めることの重要性が確認された。部分構造の発見によるパターン発見は、当初の計画(距離空間によるパターンの識別)とは異なるが、萌芽研究として重要な知見を得られた。
自己会合により高い2光子吸収特性を示すベンゾチアジアゾール2光子吸収色素の創製

高密度光記録、微細加工、蛍光造影、光線力学療法で注目されている2光子吸収非線形光学現象において、その特性を向上させる新しい戦略を確立した。2光子吸収特性を示す色素分子に自己会合補助基を導入し、色素部位を集積化させることで、2光子吸収特性の向上が達成された。本年度は自己会合性2光子吸収色素の合成を目指し、アミノ置換ベンゾチアジアゾール誘導体への会合性補助基であるコレステロール部位及びウレア部位の導入を遂行した。まず、パラジウム触媒存在下でのジブロモベンゾチアジアゾールとトリフェニルアミンボロン酸とのカップリング反応により、対応する二置換体を合成した。次に、本誘導体のVilsmeierホルミル化反応を遂行し、モノ・ジ・トリ・テトラホルミル体を選択的に合成することに成功した。最後に、これらホルミル体を合成中間体として、会合性官能基を導入したアミノ置換ベンゾチアジアゾール誘導体を合成した。コレステロール部位の導入では還元的アミノ化反応を、ウレア部位の導入では、NaBH_4還元反応、光延反応、イソシアネートとの縮合反応を鍵反応とすることで、合成経路の確立に成功した。ゲル化会合テスト、各種スペクトル測定、及び顕微鏡観察の結果より、合成した誘導体が自己集合会合体を形成することが判明しつつある。2年目の研究では、自己集合の詳細な検討を行い、その結果を基に再度分子設計を行いより優れた自己会合系の構築を目指す。最終的には、会合条件と非会合条件での2光子吸収特性の評価・比較を行い、自己会合に基づく2光子吸収特性の向上について検討する予定である。本年度は、昨年度の合成知見に基づき自己会合性2光子吸収色素の合成を発展させ、最後にそれらの自己会合特性と2光子吸収特性について検討した。まず、会合性ベンゾチアジアゾール誘導体について、本年度は新たにスペーサー部位を変化した種々の誘導体を設計・合成した。昨年度合成したベンゾチアジアゾールのホルミル体を鍵合成中間体として、各種コレステロール誘導体との縮合反応及び還元的アミノ化反応により、カルバメート及びカルボネートスペーサー部位を有するベンゾチアジアゾール・コレステロール誘導体の合成に成功した。ゲル化会合テスト、各種スペクトル測定、及び顕微鏡観察の結果より、合成したベンゾチアジアゾール・コレステロール誘導体が自己集合会合体を形成することが判明した。特に、スペーサー部位としてエチレンカルバメート部位を有する誘導体が、最も高い自己会合能力を示した。最後に、本誘導体の2光子吸収特性を、会合条件及び非会合条件で測定した。その結果、会合条件での2光子吸収断面積は、非会合条件でのそれと比較して、2-3倍に変化した。この結果は、自己会合によりベンゾチアジアゾール2光子吸収色素部位が効果的に集積化し、2光子吸収特性が向上したことを示唆している。本研究の成功により、高密度3次元光記録・微細加工・蛍光造影・光線力学療法等で注目されている2光子吸収の特性向上において、従来の分子レベルの合成戦略に対し、自己会合を用いる新規戦略を提供できた。
糖鎖モジュール化法に基づく生理活性オリゴ糖鎖の効率的合成研究

生理活性オリゴ糖鎖の簡便なミミック合成法の開発として、糖鎖モジュールに分割(segmentation)して考え、共重合によって高分子上に並べる(regeneration)といった新しい手法「糖鎖モジュール化法」を提案した。セレクチンのリガンドとなる6-硫酸化シアリルルイスXに対して、この概念を利用して各糖鎖モジュールを側鎖に有するポリマーライブラリーを合成した。これらは特にL-セレクチンに対して強力な阻害活性(IC_<50>=3-10 μM)を示した。なかでも、6-硫酸化N-アセチルグルコサミン(6-sulfo-GlcNAc)の糖鎖高分子が、最も強い阻害活性を示し、L-セレクチンに対する鍵リガンド構造を明確にした。K.Sasaki et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,2002上の結果をうけて、6-sulfo-GlcNAcの構造を考察したところ、N-アセチルノイラミン酸(NeuAc)との高い構造類似性に気付き、その類似体としての可能性を予想した。GlcNAcを基本骨格とする硫酸化位置異性体として3-,4-硫酸化体を合成し、6-sulfo-Glcとともに、シアリダーゼに対する阻害活性を測定した。6-sulfo-GlcNAcのみが構造特異的に阻害活性を示すことを見いだした。我々は、これまでに生理活性オリゴ糖鎖の簡便なミミック合成法の開発として、シアリルルイスXを硫酸化ガラクトース(Gal)とα-L-フコース(Fuc)の二つの鍵因子(糖鎖モジュール)に分割(segmentation)して考え、それらをアクリルアミドとの共重合によって高分子上に並べる(regeneration)といった新しい手法「糖鎖モジュール化法」を提案してきた。L-セレクチンのリガンドとなる6-硫酸化シアリルルイスXに対して、この概念に従って、各糖鎖モジュールを側鎖に有するポリマーライブラリーを有機化学的に合成した。これらのポリマーは特にL-セレクチンに対して強力な阻害活性(IC_<50>=3-10μM)を示した。なかでも、6-硫酸化GlcNAcを側鎖に有する糖鎖高分子が、最も強い阻害活性を示すことを明らかとし、L-セレクチンに対する鍵となるリガンド構造を明確にした。K.Sasaki et al, Angew.Chem.Int.Ed., 2002上の結果をうけて、6-硫酸化GlcNAcの構造を考察したところ、N-アセチルノイラミン酸との高い構造類似性に気付き、その類似体としての可能性を予想した。そこでGlcNAcを基本骨格とする硫酸化位置異性体として3-,4-硫酸化体を合成し、6-硫酸化Glcとともに、シアリダーゼに対する阻害活性をそれぞれ測定した。その結果、構造特異的に6-硫酸化GlcNAcのみが阻害活性を示すことを見いだした。この結果は、簡単な構造を有する6-硫酸化GlcNAc骨格が、N-アセチルノイラミン酸の類似体になることを示す興味深い結果である。(投稿準備中)生理活性オリゴ糖鎖の簡便なミミック合成法の開発として、糖鎖モジュールに分割(segmentation)して考え、共重合によって高分子上に並べる(regeneration)といった新しい手法「糖鎖モジュール化法」を提案した。
細胞内脂肪蓄積量の増減が生活習慣病発症に及ぼす影響

肥満が生活習慣病を引き起こす原因として内臓組織(筋肉、脂肪組織、肝臓)への脂肪の蓄積増加が推測されている。これまでに申請者は、脂肪組織に熱産生蛋白質(UCP2)を軽度過剰発現させ、脂肪蓄積量を減少させたトランスジェニックマウスを作成し、高脂肪食によって発症する肥満/インスリン抵抗性が改善することを認めている。しかし、実際にはどの組織の脂肪蓄積が引き金となって生活習慣病を惹起するのかは不明である。本研究では、筋肉にUCP3を2倍程度過剰発現させたトランスジェニックマウスを作成し、高脂肪食を6ヶ月間摂取させた。トランスジェニックマウスは野生型マウスと同程度に体脂肪率の増大、インスリン抵抗性を発症し、高脂肪食によって発症する肥満/インスリン抵抗性を改善できなかった。また、血中脂質、酸素消費量にも変化は見られず、筋肉にわけるUCP3の軽度増加は生活習慣病の改善効果が少ない可能性が示唆された。さらに現在、肝臓特異的にUCP2を過剰発現させたトランスジェニックマウスを作成し、表現型を解析中である。したがって、UCPを用いた生活習慣病の予防には筋肉よりも脂肪が有用であることが示唆された。そこで、脂肪組織においてUCP2を増加させる食事成分を探索し、共役リノール酸(CLA)を見い出した。しかし、高用量のCLA摂取はUCP2を極端に増加させ、体脂肪を極端に減少させるため、副作用(脂肪肝、高インスリン血症)を生じた。一方、低用量のCLA摂取は軽度に体脂肪を減少させ、副作用を生じない事が明らかとなった。また、高用量のCLA添加でも高脂肪食にCLAを添加した場合には体脂肪の減少が少なく、副作用は発症しなかった。以上の結果から、生活習慣病の改善にはUCP2を脂肪組織で軽度増加させ、極端に体脂肪を減少させないことが重要であることが示された。肥満は糖尿病等の生活習慣病を引き起こすことが知られており、その原因として内臓組織(筋肉、脂肪組織、肝臓)への脂肪の蓄積増加が推測されている。しかし、どの組織の脂肪蓄積が引き金となって生活習慣病を惹起するのかは不明である。これまでに、脂肪組織でUCP2を軽度過剰発現させたところ、高脂肪食誘導性の肥満/糖尿病/高脂血症の発症を有意に改善する事を認めている。本研究では、筋肉特異的に熱産生を増加させ脂肪の蓄積量を減少させたトランスジェニックマウスを作成し、生活習慣病の発症機序を検討した。エネルギー消費/熱産生を高める可能性が考えられている脱共役蛋白質(UCP3)を筋肉特異的に軽度過剰発現(約2倍)させたトランスジェニックマウスを作成した(Muscle-UCP3)。Muscle-UCP3トランスジェニックマウスおよび野生型マウスに高脂肪食を摂取させたが、Muscle-UCP3トランスジェニックマウスは野生型マウスと同程度に肥満を発症し、糖尿病、高脂血症の改善は全く認められなかった。また、脂肪組織でUCP2を増加させる食事成分として共役リノール酸(CLA)を見い出したが、CLAは体脂肪を極端に減少させるため、脂肪肝や高インスリン血症等の副作用を生じる。そこで、副作用を生じずに効率良く体脂肪を減少させる食事条件を検討する目的で、CLA含量および食事中の脂肪含量の影響を検討した。低用量のCLA摂取は効果的に体脂肪を減少させ、脂肪肝やインスリン抵抗性を生じない事が明らかとなった。また、高用量のCLA添加でも高脂肪食にCLAを添加した場合には脂肪肝や高インスリン血症は発症しなかった。以上の結果から、生活習慣病の予防には筋肉よりも脂肪組織のエネルギー消費の亢進が効果的である可能性が示唆された。
母体への環境的ストレスによる胎仔脳GABAシステムの発達異常

母体への環境的ストレスが胎仔脳のGABAシステムをどのように撹乱し、正常な脳の発達にどのような影響を与えるのかを明らかにすることを目的とした。胎仔大脳新皮質における皮質板細胞(将来の錐体細胞:グルタミン酸作動性興奮性細胞)の発生と移動は母体ストレスによる影響を全く受けなかった。しかし、胎仔の内側基底核原基におけるGABA細胞の前駆細胞の発生のみが特異的に障害されていた。1.胎仔大脳皮質のGABAシステム発達過程の解析:GABAの酵素反応法によるイメージングで胎仔大脳皮質の細胞外GABAの空間的分布を解析した。GABA放出部位は脳室下帯/中間帯、辺縁帯、皮質板で多く、これは、GABA細胞の分布とよく一致しており、細胞外GABAはtangential移動GABA細胞からのparacrineであることが示唆された。2. Cl^-ホメオスタシス破綻モデルの作製:ラット子宮内胎仔の脳に、活性型変異KCC2遺伝子をIUEP法で導入し[Cl-^]_iを強制的に低下させたところ細胞移動は著しく抑制され、細胞移動に高[Cl^-]_iが必須であることを証明した。また、ラットNKCClのshRNAを作製しIUEPを行った。マウスでは移動中の細胞のCa^<2+>振動が部位により変化し、細胞外GABAやタウリンの空間的分布との関連が示唆された。3.母体タウリン合成阻害による胎仔脳内タウリン欠乏の胎仔GABAシステムへの影響:D-システインスルフィン酸を、妊娠13-15日のマウス腹腔内に24時間毎に投与して母体のタウリンの合成を阻害すると胎仔脳の細胞外タウリン量は50%減少し、トニックGABAA受容体作動性脱分極も減少した。radial migrationはGAD67-GFP knock-inで促進されたが、特にヘテロとホモで有意であったことから、GABAがタウリンと相補的に働く可能性が示唆された。4.母体拘束ストレスが胎仔脳GABAシステムに与える影響:GAD67-GFP knock-in野生型母体に妊娠15日目から3日間、毎日45分の拘束・光刺激ストレスを一日3回与えた。ヘテロ型胎仔大脳皮質のGABA含量に変化はなかったが、GABA細胞数は減少し、逆にGABA放出量は増加傾向であった。以上から胎仔脳GABAシステムの変調が示唆された。1.胎仔大脳皮質のGABAシステム発達過程の解析:放出されたGABAの酵素反応法によるイメージングで、細胞外GABAが辺縁帯、中間帯下部-脳室下帯上部で多く、傍分泌的に容積感受性陰イオンチャネルから放出されることを証明した。2.拘束ストレスとタウリン欠乏の相互作用の評価:これまで報告されている母体ストレスによる出生仔の行動学的異常の背景に、胎仔脳内のタウリン含量の変化による神経回路の発達異常がある可能性がある。そこでまず、拘束ストレス時の胎仔脳内タウリン含有量をHPLC法を用いて検討した結果、有意差はないが減少傾向はあった。今回の方法では細胞内外の区別がつかず、環流法の必要性が示された。タウリンは胎仔期にはKCC2蛋白のリン酸化を介して機能を抑制しているが、生後すみやかに抑制が解除されることを証明した。これはタウリン含量の発達変化と必ずしも矛盾しないが、その他の因子(例:リン酸化酵素)の関与も示唆された。3.遺伝的ストレス(GAD67ヘテロ欠損)の影響:遺伝的要因(GAD67ヘテロ欠損)と環境的要因の相互作用については、野生型のメスとヘテロ型の雄の交配に加えて、ヘテロ型のメスと野生型のオスを交配して得られる妊娠マウスを拘束ストレスにさらす実験を行った。ストレスに対する応答(コルチコステロン量)を母仔双方で遺伝型で比較した結果、GAD67ヘテロ欠損は母体においては妊娠そのものもストレスとなっており、拘束ストレスへの応答も上昇していた。ヘテロ欠損母体の胎仔は野生型でも成長は有意に低下した。野生型母胎におけるヘテロ欠損胎仔のストレス脆弱性も野生型より高く、特に胎盤のコルチコステロン不活化作用の低下が示唆された。また、胎仔期ストレスによるGABA細胞減少は生後も持続していた。母体への環境的ストレスが胎仔脳のGABAシステムをどのように撹乱し、正常な脳の発達にどのような影響を与えるのかを明らかにすることを目的とし、22ー23年度の成果をもとに、さらに以下の研究実績を得ることができた。【1.母体ストレス暴露胎仔の成長後の行動学的評価】社会的行動評価:生後812週齢マウスをストレスの有無とGAD67の野生型とヘテロで4群(各群4-18匹)に分けた。2匹ずつオープンフィールド内に置き、5分の観察時間内に見られた社会的行動に費やす時間を測定し、社会的行動の障害を評価した。【2.母体ストレス暴露胎仔の成長後における脳の細胞・組織学的評価】

ストレス暴露時にBrdUを母体腹腔内投与しておき、生後21日齢になった時点で脳を灌流固定し、脳の各部位の切片についてGABA細胞の分類に用いられるマーカーの抗体を用いて免疫染色し、錐体細胞および各種GABA細胞の分布密度と細胞発生時期(ストレス暴露時期=BrdU陽性)との相関を求めた。ストレス中に発生したGABA細胞数(GFP/BrdU両陽性)が内側前頭皮質で有意に減少していた。さらにPV陽性GABA細胞(GFP/PV両陽性)は、内側前頭皮質の全層、体性感覚皮質III層、海馬CA1で有意に減少し、対照的にPV陰性GABA細胞(GFP陽性/PV陰性)は、いずれの部位でも有意な減少を認めなかった。【3.母体ストレス暴露胎仔の成長後における脳の生理学的評価】胎生期における細胞発生の異常が、成長後のGABA神経回路機能に与える影響を解析した。シナプス外GABAA受容体を介するトニック抑制、小胞性GABA放出による自発性および微小シナプス後電流を海馬CA1で記録したが、劇的な差はなかった。したがって、例数を増やしての統計的解析と、入力路の電気刺激で誘発されるシナプス後電流の解析が必要なことが明らかとなった。前年度、今年度ともに当初の計画を実行でき、実験数も増えて結果が信頼できるものとなってきた。母体への拘束ストレスという環境的ストレスとGAD67ヘテロ欠損という遺伝的要因の交互作用が、胎仔脳GABAシステムの発達異常をきたすことがほぼ明らかとなり、その結果として脳の発達に影響を与える可能性が強く示唆された。24年度が最終年度であるため、記入しない。環境的ストレスのみならずGAD67ヘテロ欠損が母仔双方においてストレス脆弱性を高めることが明らかとなったので、今後はその交互作用に着目し、得られたモデルでこれまで以上に詳細な検討を行う。特に、生後発達がどのように変化するかを、生理学、細胞組織的に解析し、行動学的な異常も検討していく。
健康障害をもつ子どものきょうだいの適応を促すための介入プログラムの開発と評価

健康障害をもつ子どものきょうだいが経験する生活パターンや家族関係の変化への適応を促す介入プログラムを開発することを目的とし、きょうだいが経験する生活や家族関係の変化の状況を明らかにし、その内容を基に、きょうだいと親を対象とした援助指針の作成を試みた。その結果、きょうだいに対しては、健康障害をもつ子どもの疾患や治療に関して情報を得ることが可能なツールの整備、きょうだいの居場所作り、ピアサポートの場や機会つくり、きょうだいの頑張りが周囲から認められることを目指した支援などが挙げられた。さらに親に対しては、きょうだいに生じている生活の変化に気づくことを目指した支援などが挙げられた。健康障害をもつ子どものきょうだい(以下、きょうだい)が経験する生活上の変化や家族関係の変化への適応を促す介入プログラムを開発することを目的に、平成25年度は介入プログラム開発のための情報収集として、1対象への調査と2実践における取り組みの視察を行った。1対象への調査は、アレルギー疾患の子どもの患者会に所属する親12名を対象とし、子どものアレルギー疾患に伴うきょうだいの生活上の変化、行動の変化について半構成的面接を実施した。食物アレルギーの診断・治療に伴い、きょうだいは家庭での食事やおやつ内容の変化、外食の機会の減少、アレルギー疾患の子どもの世話や食事の配慮に親が時間をとられること、アレルゲン除去のためにきょうだい自身が手洗いを促されること、それまで行っていた食器洗いの手伝いをやめること等を体験していた。このような体験のなかできょうだいは、買い物の際にアレルゲン表示を気にして食べ物を選ぶ、きょうだいで共に食べられるものであるかを親に確認する、食べたいものを我慢する、食べることの我慢に対する不満を言動で表すといった行動を示していた。アレルギー疾患の子どもの治療や配慮に伴い、ともに生活を送るきょうだい自身も様々な影響を受けており、きょうだいへの支援を検討していく必要性が考えられた。2実践での取り組みについては、きょうだい支援の実情について知見を深めることを目的に、英国の2つの病院・1施設を訪問し、支援の場の見学や担当スタッフとの情報交換を行った。各病院・施設では、きょうだいも援助の対象として位置づけられており、病院・施設内で各専門職が関わっていた。またきょうだいに向けたパンフレット等のツールや援助プログラムが整備・実施されていることも明らかとなった。健康障害をもつ子どものきょうだい(以下、きょうだい)が経験する生活上の変化や家族関係の変化への適応を促す介入プログラムを開発することを目的に、平成24年度は介入プログラム開発のための情報収集・整理、対象への面接調査に関する準備を行った。1.介入プログラムのための情報整理・情報収集健康障害をもつ子どものきょうだいに対し、家族はきょうだいにどのような説明を行っているのか、そのことに対する家族の思いに関する調査を整理し、「入院中の子どものきょうだいに対する情報提供の実態と家族の思い」として、第43回日本看護学会(小児看護)で発表を行った。また、健康障害をもつ子どものきょうだいが抱えている問題や、きょうだいに対して行われている支援の実態を把握するため、国内の文献や関連施設より情報収集を行った。その結果、きょうだいは多様なストレス反応(情緒・行動面、体調面、学校生活面)を呈していること、小児医療における先進的な取り組みを行っている専門施設でも半数程度しかきょうだいへの支援は展開されていない現状が明らかとなった。2.対象への面接調査の準備きょうだいが経験する生活上の変化や家族関係の変化の実際とその影響要因、受けてきた支援を明らかにすることを目的とした調査を平成25年度に実施するため、所属施設での倫理審査を受け、承認を得た。また、調査対象者としてアレルギー疾患の子どもの患者会(家族会)に調査協力を依頼し、承諾を得た。健康障害をもつ子どものきょうだい(以下、きょうだい)が経験する生活上の変化や家族関係の変化への適応をうながす介入プログラムを開発することを目的に、平成26年度は介入プログラムの試作に取り組んだ。前年度までに収集した情報、対象への調査結果、国内外における実践の場での取り組みの状況を整理し、専門家会議を重ねた。その結果、きょうだいに生じている生活の変化の適応に向けた支援として、きょうだいへの直接的な支援の必要性があると同時に、健康障害をもつ子どもとそのきょうだいを育てる親や家庭も対象に含めた支援の重要性があげられた。以上を踏まえた支援指針として、きょうだいに対しては、健康障害をもつ子どもの健康障害やその治療に関して情報を得たいと感じた時に活用可能なツールの整備、きょうだいの居場所を作ることを目指した支援、ピアサポートの場や機会を作っていくこと、きょうだいのがんばりが周囲から認められることを目指した支援があげられた。また、きょうだいが健康障害をもつ子どもより年長の場合、状況に応じて、親ときょうだいで過ごすことができる機会作りの必要性も上げられた。

さらに、健康障害をもつ子どもときょうだいを育てる親に対しては、きょうだいに生じている生活の変化に気付くことを目指した支援、家族が活用可能な資源を用いて健康障害をもつ子どもときょうだいの育児を行うことを目指した支援があげられた。小児看護学収集した情報を基に、介入プログラムの開発を予定していたが、情報収集・整理が遅れたため、25年度は開発に至らなかった。介入プログラムの開発のための情報収集として、先進的な支援を行っているイギリスの小児専門病院での実践の視察を予定していたが、訪問施設との日程調整がつかず、24年度は実施できなかった。健康障害をもつ子どものきょうだい(以下、きょうだい)が経験する生活上の変化や家族関係の変化への適応を促す介入プログラムを開発することを目的に、平成26年度は介入プログラムの試作と妥当性の検討、対象者への介入の試行および評価を行う。1.介入プログラムの試作と妥当性の検討前年度までに収集した情報を基に、介入プログラムを開発する。介入プログラムには、きょうだいと親への援助指針ときょうだいへの情報提供ツールを含めた内容を計画している。さらに、試作した介入プログラムの妥当性を検討するため、小児看護学・チャイルドライフ・子どもを対象とした感性工学・心理学の専門家と専門家会議を実施する。2.対象者への介入プログラムの試行と評価介入プログラムに基づき、きょうだいへの援助を実施する。実施後、対象への面接調査を行い、介入プログラムの短期的な効果を調査する。分析結果より、介入プログラムの評価を行い、今後の臨床での活用について検討する。健康障害をもつ子どものきょうだい(以下、きょうだい)が経験する生活上の変化や家族関係の変化への適応を促す介入プログラムを開発することを目的に、平成25年度は、健康障害をもつ子どものきょうだいの親を対象とした面接調査の実施、きょうだいへの実践的な支援を行っている国外の専門施設・専門家からの情報収集、データ分析による介入プログラムの試作および妥当性の検討を行う。1.面接調査の実施:きょうだいが経験する生活上の変化や家族関係の変化の実際とその影響要因、受けてきた支援を明らかにすることを目的に、きょうだいの親10名程度を対象とした面接調査を行う。2.国外の専門施設・専門家からの情報収集:きょうだいへのケアのガイドラインに基づき、多様な視点から支援を実践しているイギリスの小児専門病院や関連施設で、以下(1)(3)の内容についての視察と情報収集を行う。(1)きょうだいへの援助指針や援助に用いているツール、(2)親への援助指針や用いているツール、(3)きょうだいにかかわる専門職間の連携の実際3.介入プログラムの試作と妥当性の検討:(1)の面接調査のデータ分析内容、および(2)で収集した情報から、きょうだいと親を対象とした介入プログラムを試作する。プログラムには、(1)きょうだいへの情報提供に関するアセスメント指標、(2)きょうだいと親への援助指針、(3)きょうだいへの情報提供ツール、を含めた内容を計画している。
下総国一宮香取社の神宮寺・寺院関係資料に関する基礎的研究

香取神宮における仏教的な資料を多数収集し、鈴木哲雄「香取神宮の神宮寺・寺院関係資料一覧(稿)」(『史流』46号、2016年)として刊行した。また、収集した諸資料にもとづいて、香取神宮境内に存在した愛染堂や経堂(経蔵)のあり方、かつて経蔵にあった大蔵経の散佚と一部の伝来状況、神宮寺における正月修正会の幕末までの存続、七人の供僧体制や諸寺院の存在について明らかにした。平成25年度の研究実施計画にしたがって、次のような調査を実施した。1平成25年9月、千葉県立中央図書館にて、下総国一宮香取社の神宮寺・寺院関係資料に関する文献調査を実施。「香取」で検索できる関係文献を順次、閲覧、調査し、『香取郡誌』(合巻)などの文献の一部を複写した。2平成25年12月、神奈川県藤沢市羽鳥の御霊神社において、旧香取神宮寺所蔵の梵鐘の確認調査を実施するとともに、周辺の地域調査も行った。3平成26年2月、国士舘大学梅ヶ丘校舎で開催された第4回東国古代遺跡研究会大会に参加し、関東周辺の古代・中世の祭祀遺跡などで出土する墨書土器や墨書木簡などについての基礎な知見を深める努力をした。近年、関東周辺の古代・中世の遺跡からは墨書土器や墨書木簡などが多数出土しており、本研究との関係も深いものであった。なかでも、多くの祭祀遺跡に関する調査事例は、本研究にとって重要であった。4平成26年3月、奈良国立博物館および六孫王神社・東寺(京都)を見学し、出品物の墨書や金石文などの調査や、香取神宮と深い関わりがあった千葉氏や源氏に関する調査を行った。寺院資料のあり方や六孫王神社と源氏のとの関係などについて、理解を深めることができた。以上のような調査とともに、『千葉県史料金石編二・三(補遺)』(千葉県、1978・80年)などに収録されている、香取関係の銘文の整理を実施した。若干遅れているが、ほぼ予定通りに調査を進めることができた。平成26年度の研究実施計画にしたがって、次のような調査を実施した。1平成26年4月より平成27年3月までに、数回にわたって、千葉県香取市の香取神宮周辺の板碑調査を実施した。主な調査箇所は、香取市香取の新福寺墓地・惣持院跡・追野共同墓地、同市多田の光明院および同墓地、同市新市場の地蔵院境内および墓地などであり、多数の写真撮影をおこなった。これによって、ほぼ板碑などの寺院関係の金石文資料の収集は終了した。ただし、香取神宮周辺の板碑などの石塔類は、膨大な数に及ぶものであり、金石文資料の精選が必要となっている。2関連する調査として、平成26年4月には、香取神宮の御船木山口祭および神幸祭の実地調査、同年9月には、鹿島神宮御船祭の実地調査を実施した。また、この実地調査に付随して、茨城県潮来市の長勝寺や同県鹿嶋市の鎌足神社・根本寺などを調査することができた。さらに、千葉県の印旛郡市文化財センターにおいて、印旛郡市での古代集落遺跡の発掘状況および墨書土器などについて調査し、その後、尾上・木見津遺跡周辺の現地調査を実施した。3同様に香取大宮司家旧蔵「大江山絵詞(酒呑童子絵巻)」に関係する調査として、平成26年10月には、京都府福知山市周辺の「大江山酒呑童子」関係遺跡の調査や大阪市の渡辺津に関係する地域調査を行った。さらに11月には、渡辺綱の関連する東京都港区三田周辺の調査、平成27年2月には、埼玉県鴻巣市周辺の地域調査を実施した。平成27年度の研究実施計画にしたがって、次のような補足調査を実施した。1千葉県立中央図書館での文献調査(関連資料の複写と貴重書の部分的写真撮影)を8月と12月に実施した。2センチュリーミュージアム(9月)・国立歴史民俗博物館(9月)・東京国立博物館(2月)などで展示された懸仏や板碑などの調査を実施した。また、千葉県立中央博物館での「新指定文化財展」に展示された香取神宮近くの「吉原山王遺跡出土の墨書土器資料群」などを実検した。3香取神宮周辺の板碑などの補足調査(旧不断所跡・香取祖霊社の手水鉢・多田の光明院・分飯司堂跡)を実施するともに、香取市教育委員会生涯学習課および香取神宮において、補足的な聞取調査を実施した。4また、付随した調査として、香取神宮および神宮寺との景観比較のため、神奈川県遊行寺・神奈川県立金沢文庫・同歴史博物館などでの特別展「国宝一遍聖絵」での調査を実施したほか、宮内庁尚蔵館の展示会「絵巻を愉しむ」において、「酒伝童子絵巻」などの調査も実施した。こうした一連の調査にもとづいて、香取神宮の神宮寺関係資料の全体像がほぼ明らかとなり、平成28年3月には、「香取神宮の神宮寺・寺院関係資料一覧(稿)」(北海道教育大学史学会『史流』46号)を発表することができた。ただし、研究論文「香取神宮の神宮寺及び供僧についての基礎的考察」は、他の研究者との共著のため、まだ出版にいたっておらず、平成28年度にかけて、補足的な調査を続ける予定である。研究論文「香取神宮の神宮寺及び供僧についての基礎的考察」が、他の研究者との共著のために、まだ出版にいたっていない。

最終年度は、香取社の神宮寺・寺院関係資料に関する補足調査を進めるとともに、予定通り、研究成果の一部として「香取神宮の神宮寺及び供僧についての基礎的考察」(佐藤博信編『中世東国の社会と文化』平成28年12月、岩田書院)を刊行した。研究期間全体を通じた成果としては、研究の主なる目的であった、下総国一宮香取社における中・近世の神宮寺や関係寺院等の諸資料を蒐集・整理することは、「香取神宮の神宮寺・寺院関係資料一覧(稿)」(『史流』46号、平成28年3月)として実現できた。また、地域調査をくり返すことで、香取神宮周辺での関係寺院跡の確定が多くできたことも貴重な成果であった。蒐集資料を整理するなかで、明治初年の廃仏毀釈の実態が明らかになると共に、激しい廃仏毀釈運動のなかで、いったん廃棄処分された仏教・寺院関係の諸資料を「購入」することなどで守る活動が他方で行われていたことがおぼろげながら明らかになったことも成果である。なお、「香取神宮の神宮寺及び供僧についての基礎的考察」では、中世以来の修正会や追な会などの正月行事が、神宮寺が破壊される幕末までは、神宮寺で行われていたことが明らかになったことも大きな成果であった。なお、廃仏毀釈の実態やその歴史的な意味については、他地域での事例との比較研究も必要となるが、今回の研究において、部分的に研究できたことも成果の一部である。比叡山(延暦寺=日吉大社)での廃仏毀釈は、あまりにも有名であるが、そうした事例との比較研究をさらに続けていきたいと考えている。香取神宮における仏教的な資料を多数収集し、鈴木哲雄「香取神宮の神宮寺・寺院関係資料一覧(稿)」(『史流』46号、2016年)として刊行した。また、収集した諸資料にもとづいて、香取神宮境内に存在した愛染堂や経堂(経蔵)のあり方、かつて経蔵にあった大蔵経の散佚と一部の伝来状況、神宮寺における正月修正会の幕末までの存続、七人の供僧体制や諸寺院の存在について明らかにした。香取神宮周辺の板碑や石塔類の調査は、ほぼ終了し、金石文資料の精選段階にいたっている。また、関連する香取大宮司家旧蔵「大江山絵詞(酒呑童子絵巻)」についての調査が進んだことは、評価すべきことであった。さらに補足的な調査を実施するとともに、研究論文の刊行をめざす。なお、共著出版の目途が平成28年度中に立たない場合には、平成28年度末締切の大学紀要に投稿することにしたい。日本史最終年度の平成28年度には、金石文資料の精選をおこない、「資料集」を作成したと考えている。平成25年度中に、香取神宮周辺の板碑などの金石文の確認調査を始める予定であったが、日程調整がうまくいかず、実際には平成26年4月初旬いずれ込んでいるため。研究成果の一部である共著の出版が遅れており、補足調査が必要なため。金石文資料の精選作業が若干遅れているため、それに関わる諸費用に差額が生じた。香取神宮周辺での補足調査と文献調査をすすめる予定である。すでに香取神宮周辺の板碑などの金石文の確認調査を開始しており、平成26年度中には作業が進むものと思われる。また、平成26年4月には、香取神宮において12年に一度の神幸祭が開催されるので、合わせて調査する予定である。平成27年度より、至急に金石文資料の精選作業を進めていく予定である。日程調整がうまくいかず、香取神宮周辺での板碑などの金石文の確認調査が平成26年4月初旬にずれ込むなどしたため。平成26年4月より、積極的に香取神宮周辺での板碑などの金石文の確認調査をすすめる予定である。
転写因子FKHRL1の正常造血における機能解析

我々は、エリスロポエチン依存性細胞株、UT-7/EPOにForkhead familyの一員である転写因子、FKHRL1の恒常活性型(FKHRL1-TM)及び優位抑制型(FKHRL1-DN)を遺伝子導入し、遺伝子導入株を樹立した。それらと親株であるUT-7/EPOを比較する手法を用いて、FKHRL1-TM導入株では、EPO存在下でも、細胞周期が停止することを見い出した。また、UT-7/EPOは、EPOを除去後約24時間で細胞周期が停止し、その後アポトーシスを起こすのに対して、FKHRL1-DN導入株では、細胞周期は停止せずにより早期にアポトーシスを起こすことを確認した。UT-7/EPOにおいて、内因性のFKHRL1は、EPOを除去すると核内へ移行し活性化されることから、転写因子FKHRL1は、細胞の生存にとって不利な環境下での細胞の生存に必要な因子であることが示唆された。換言すると、細胞がアポトーシスを起こすのを阻止する方向に働く遺伝子ではないかと考えた。FKHRL1-DNの結果をさらに確かめる目的で、FKHRL1のsiRNAを用いて、同様に細胞周期、アポトーシスの解析を行ったところ、同様の結果が得られた。これらの細胞株で得られた結果を動物モデルで確認する目的で、FKHRL1-TM及びFKHRL1-DNをGATA-1 promoterの下流に繋げた遺伝子を用いて、トランスジェニックマウスを作成した。外観は野生型と変わりなく、また、赤芽球、巨核球系に何らかの異常を持つことを期待したが、末梢血所見、骨髄所見、脾臓の所見も特に差異を認めなかった。臍帯血からマグネティックビーズ法を用いてCD34陽性細胞を純化し、インターロイキン3、stem cell factor、EPO存在下に7日間培養し、CFU-Eレベルに分化させた細胞を得た。その細胞にGFP発現ベクターを種々の条件で遺伝子導入し、導入効率と遺伝子導入細胞の生存率を蛍光顕微鏡及びフローサイトメトリーにて解析し、至適条件を検討中である。条件決定後、GFP発現ベクターに組み込んだFKHRL1の恒常活性型、優位抑制型変異体を遺伝子導入し、細胞周期、アポトーシスの相違を検討する。同時に、GATA-1のプロモーターの下流に、FKHRL1の恒常活性型、優位抑制型変異体を組み込んだトランスジーンを構築し、トランスジェニックマウスを作製中である。優位抑制型トランスジェニックマウスは、正常分娩にて産出され、野生型と比して、体重と発育状態は著変なかった。今後、母数を増やし、定常状態、及び抗癌剤負荷後の末梢血液、骨髄所見の差異について、解析を進める予定である。一方で、恒常活性型を発現させたマウスは、正常に産出されず、帝王切開を施行したところ、蘇生不可能な、小型の胎児にトランスジーンの発現を認めた。各臓器でのトランスジーンの発現の程度については未確認である。現在使用している恒常活性型は、Aktによるリン酸化部位を3塩基ともにアラニンに置換しているが、置換部位を1-2カ所にした、恒常活性化能を調節した変異体を用いて比較することも検討している。
発展途上国における都市貧困層のコミュニティ形成に関する国際比較研究

地域別に重要なネットワークを抽出し,発展途上国の都市貧困層のコミュニティ形成の国際比較分析を行い,東アジアでは,近年の社会変動の中で構成単位である家族におけるジェンダー関係の相違が決定的役割を持つのに対して,コロンビアでは,市政府,市議会議員とコミュニティ住民の間のネットワーク・コーディネーションがコミュニティ資源を深化させ,フィリピンでは二者間関係の連鎖が広域コミュニティの形成を促進しているという発見を得た。本研究は,様々な初期条件の下にある発展途上国における都市貧困層の居住地区(locality)が有機的なコミュニティに成長する論理を提示することを目的としている。すなわち,フィリピン,韓国,ベトナム,ウズベキスタン,およびコロンビアの都市貧困層を対象として,長期の参与観察と質問票調査によって収集したデータを用い,社会ネットワーク分析(social network analysis)の手法を駆使して,地域固有のコミュニティの出現と展開という動態を理解するに足る新しい枠組みを構築することが本研究の目標である。それは,従来の開発経済学では十分に解明することのできなかった,発展途上国の都市貧困層が形成するコミュニティの実体的理解への到達を意図している。今年度は,多様な対象地域の比較研究のため,個々人のこれまでの研究蓄積の上に,家族など社会ネットワークやコミュニティの視点を導入し,次年度以降の研究の基礎を固あることに専念した。研究代表者瀬地山は,家族にまつわる規範が就労パターンなどに影響を及ぼす点に着目し,就業が決しで一意的経経済合里性にしたがっ行動ではなく,背後にあるジェンダー規範や年齢規範に深く影響されていることを東アジア諸社会をべースに論じた研究を,学術雑誌および台湾社会学会において発表した上で,ベトナムとの比較研究をスタートさせた。研究分担者中西は,フィリピンの都市低所得層が職業選択にあたって,コミュニティ内の「強い紐帯」を適切に活用しているという観察を得,親族姻族関係,隣近所関係,儀礼親族関係およびその他の社会関係がどのように効いているかについての質問票調査を実施し,コロンビアとの比較においてPolitecnico Grancolombiano主催の学術会議において速報を発表した。研究分担者幡谷は,ヘゴタ市の貧困地区と都市貧困層の出身母村における社会ネットワークの聞き取り調査を行い,次年度以降の橋頭堡を築いた。成果の一部は,博士論文The illusion of community participation:experience in the irregular settlements of Bogota(University College London,2007)においても論じられでいる。研究分担者後藤は,研究協力者樋渡とともに実施する次年度のウズベキスタンにおける社会ネットワークの聞き取り調査の準備に万全を期した.研協力者樋渡は東京大学出版会から『慣習経済と市場,開発-ウズベキスタンの共同体にみる機能と構造』(単著)を出版した.平成20年度の調査では,瀬地山,中西,幡谷(在外のためコロンビアに長期出張)は,平成19年度の成果にもとづき,それぞれ,ベトナム,フィリピン,コロンビアにおいて,属性別に首都圏における複数の調査対象地区を選定し,地区内外の複雑な社会ネットワークについて調査を行った。さらに,後藤,中西,樋渡は,中央アジアのソビエト社会主義体制下にあったウズベキスタンに赴き,移行期の経済において,コミュニティがどのような役割を果たしているのか,また,どのような影響を体制から受け発展してきたのかについて,2つの都市近郊のマハッラを対象としてインタビュー調査とデータ収集を行った。最後に,後藤は,得られた一次資料による定性・定量分析によって社会ネットワークの特徴を抽出し,そのネットワークを活用した場合の開発プロジェクトの効果についてのシミュレーション分析のための準備を行った。以上の調査におけるポイントは,経済体制,社会構造の違いがどのように,社会ネットワーク,ひいては社会変容に影響するかであった。フィリピンとコロンビアは典型的な二階層社会であり,社会的流動性の観点から都市貧困層に社会的排除が生じやすく,族内婚による貧困層地区内ネットワークが緊密になる傾向が確認できた。コミュニティはある程度まで貧困緩和に寄与するものの,他方で貧困を慢性化させる。これにたいして,ベトナムとウズベキスタンは父系制親族制度の下で緊密な親族・姻族制度が展開されいるため,貧困問題は社会ネットワークの中で包摂されてきた可能性が確認できた。しかしながら,他方で旧社会主義社会固有の問題として,コミュニティ自体が中央政府介入の装置として機能し続けてきたという背景もあり,その社会ネットワークは固有の複雑性を有している。今回の調査では,こうした経済体制の違いがコミュニティ開発にどのような影響を及ぼすかの基本データを収集した。平21年は,親族・姻族ネットワーク以外に重要な意味を有する社会ネットワークを抽出するための調査を実施した。すなわち,研究代表者瀬地山がベトナム,連携研究者中西がフィリピン,研究協力者樋渡がウズベキスタンのそれぞれの調査地において,豊富な親族・姻族関係を有する複数の調査地間の親族・姻族ネットワークにかんする調査を集中的に実施した。この場合の調査対象地区は,まず基準調査地との間に豊富な親族・姻族を有する地区であることが必要条件であり,その中から,地理的距離,生活水準と土地所有権の有無などの属性別に選定を行った。その上で,(1)親族集団毎の家系図を作成し,通婚圏と親族・姻族圏を理解するに足るデータの収集,(2)ネットワーク分析では抜け落ちてしまう定性データについてのインタビュー調査による収集を実施した。

この作業によって,親族・姻族ネットワークのグラフを導出することができ,様々なネットワークの特徴を分析することが可能になる。さらに,(3)調査地間には,どのような人・モノ・金・情報の流れが,社会ネットワークの上に存在するかを,参与観察とインフォーマントへの集約的なインタビュー調査によって把握することができた。以上のデータは,次年度に,連携研究者後藤則行を中心として行われる各都市圏におけるシミュレーション分析の基礎となる。本年度の研究業績については,研究代表者瀬地山は英文著書発行の準備に追われたが,連携研究者中西はフィリピンにおける招待講演を通して,アテネオ・デ・マニラ大学のバウティスタ教授他と有益な討論を行い,近々,その内容は出版予定である。連携研究者幡谷も英文報告書を上梓した。翻訳作業を手伝うアメリカ側の研究者の病気のために、遅れていた研究代表者瀬地山の英文著書執筆作業については、繰り越した助成金を使うことで、順調に進めることができた。本年度は,成果とりまとめのための作業が主体であり,現地調査については,連繋研究者幡谷,中西がそれぞれ,コロンビアとフィリピンにおいて,これまでに不足したデータを補うための補足調査を実施した。その結果,都市居住者の社会ネットワークが彼らの社会経済状況に与えた影響について,コミュニティ形成過程を踏まえた検討を終え,東アジア(瀬地山),フィリピン(中西),コロンビア(幡谷)について,最終報告書をすでに提出するか,提出する準備を整えるに至った。すなわち,瀬地山については,東アジアにおけるジェンダーの問題に,経済発展過程におけるコミュニティ機能の脆弱化が与えた影響を,家族制度の特異性を重視し,行った分析を終えた。その成果については,邦文報告書2冊として2011年度中に発行されることが確定している。また,英文書籍1冊(Gender and Female Labor in East Asia)についても発行最終段階に到達している。連繋研究者幡谷は,コロンビアのエスターナド大学kらスペイン語による単著を公刊した。それは,1992年かfら2003年までの調査地におけるコミュニティの長期間の自立的発展を住民間のネットワークに着目しつつ分析したものであり,すでにコロンビアにおいて高い評価を得ている。
内軟骨性骨形成に関与する制御因子についての分子細胞生物学的研究

軟骨に特典的に存在する膜蛋白(膜結合型トランスフェリン様蛋白、MTF=コンドロトランスフェリン)を精製してそのcDNAをクローニングした。さらにこの蛋白のゲノム遺伝子の構造を、promoter領域を含めて決定した。promoter領域にはsox9など軟骨特異的発現に関与する転写因子結合部位が存在した。現在、軟骨特異的発現に関与するエンハンサー領域を決定するために、この遺伝子上流2kbをルシフェラーゼと連結したキメラ遺伝子を作成して研究を進めている。またマウスのコンドロトランスフェリンcDNAをクローニングして、その構造を決定し、MTFの系統進化上における位置づけが、他のトランスフェリン遺伝子ファミリーとは明らかに異なることを明らかにした。さらにコンドロトランスフェリン遺伝子が他の軟骨特異的遺伝子であるアグリカンおよびII型コラーゲンと平行して軟骨分化の過程で発現することを証明した。興味深いことに、コンドロトランスフェリンのアンチセンスオリゴマーを軟骨細胞培養系に添加すると、軟骨分化が遅延した。しかも予備実験で、コンドロトランスフェリン遺伝子を過剰発現した細胞株では軟骨分化が亢進した。これらの知見から、コンドロトランスフェリンは軟骨細胞の分化に重要な役割を果たす新規シグナル物質であり、既知のトランスフェリンファミリーとは異なる役割を果たしていることが明らかとなった。またこれまて作用が不明であったPTH-C端ペプチドが、MMP以外に、オステオポンチン、X型コラーゲン、PTHrp.PTH受容体mRNAレベルを上昇または減少させることを見いだした。その他、PTHとPTHrpの作用機構にRBP(レチノール結合蛋白)が関与していることを発見した。これらの知見は、内軟骨性骨形成におけるPTHとPTHrpおよび軟骨細胞膜蛋白の役割を理解するために役立つ。1大腸菌で全長の組み替えコンドロトランスフェリン蛋白の発現:大腸菌で全長の組み替えコンドロトランスフェリン蛋白を発現して、これを精製した。2抗コンドロトランスフェリン抗体の作製:この組み替えコンドロトランスフェリンを抗原としてELISA plateを作製することにより、抗コンドロトランスフェリンモノルロ-ナル抗体をスクリーニングして、6種類のハイブリドーマをクローニングした。そして、腹水より、Protein G-columnを用いて抗体を精製した。さらにポリクローナル抗体も4種類作製した。3軟骨細胞培養系での抗コンドロトランスフェリン抗体の作用:6種類のモノクローナル抗体のなかで、mAb-2は、軟骨細胞に対するコンカナバリンAによる細胞の球形化、プロテオグリカン合成の促進を阻止した。一方、コントロール抗体は影響しなかった。4マウス軟骨細胞のcDNAたんライブラリーより、マウス・コンドロトランスフェリンcDNAをクローニングした。5コンドロトランスフェリンの合成機構:イムノブロット法およびノーザンブロット法にて、all-tranレチノイン酸,9-cisレチノイン酸がコンドロトランスフェリンの合成を14時間以内に抑制することを見いだした。またdibutyryl cyclic AMPも長期作用させると、コンドロトランスフェリンの発現をfree-back inhibitionした(生化学会などのシンポジウムで発表予定)。6成長板軟骨細胞培養系で、PTHおよびPTH-rpがMMP-2,MMP-9およびMMP-3を強く誘導することが判明した(投稿中)。1マウスのゲノムライブラリーよりコンドロトランスフェリンの遺伝子の全構造(5prime上流および第一イントロンの配列を含む)を決定した。興味深いことに、軟骨特異的発現に関与すると示唆されているII型コラーゲンのサプレッサー(CIIS)およびX型コラーゲンのサプレッサー(CXS)と100%一致する配列が5prime上流域に存在した。また5prime上流にはII型コラーゲンの軟骨特異的発現に関与するSOX9認識配列と類似した配列が複数個存在することが判明した(97年、生化学会)。

2マウス軟骨細胞株ATDC5を用いて、軟骨分化以前にはコンドロトランスフェリンmRNAはほとんど存在せず、軟骨分化とともに出現した。またその出現はII型コラーゲンmRNAよりもわずかに早かった(97年、生化学会)。私たちは軟骨細胞に特異的に存在して、かつConAと結合する膜蛋白(膜結合型トランスフェリン様蛋白、MTF=コンドロトランスフェリン)を精製してそのcDNAをクローニングした。これについては本年度に公表した(Kawamoto T.et al.Eur.J.Biochem.1998)。さらにこの蛋白のゲノム遺伝子の構造を、promoter域を含めて決定した(中舛ら、基礎歯科医学会1998)。現在、軟骨特異的発現に関与するエンハンサー領域を決定するために、この遺伝子上流2kbをルシフェラーゼと連結したキメラ遺伝子を作成して、研究を進めている。またマウスのコンドロトランスフェリンcDNAをクローニングして、その構造を決定し、MTFの系統進化上におけや位置づけが、他のトランスフェリン遺伝子ファミリーとは明らかに異なることを明らかにした(中舛ら、基礎歯科医学会1998)。さらにマウスコンドロトランスフェリンをプローベとして、コンドロトランスフェリン遺伝子が他の軟骨特異的遺伝子であるアグリカンおよびII型コラーゲンと平行して発現することを証明した(中舛ら、基礎歯科医学会1998、Nakamasu et al.,論文作成中)。興味深いことに、コンドロトランスフェリンのアンチセンスオリゴマーを軟骨細胞培養系に添加すると、軟骨分化が遅延した(中舛ら、基礎歯料医学会1998)。さらにPTH-C端ペプチドが、MMP以外に、オステオポンチン、X型コラーゲン、PTHrp、PTH受容体mRNAレベルを上昇または減少させることを見いだして報告した(吉田ら、日本軟骨代謝学会発表1999)。