hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
抗ICAM-1抗体及び抗LFA-1抗体によるラット全層角膜移植拒絶反応の抑制効果

抗ICAM-1抗体(1A-29)と抗LFA-1抗体(WT-1)の7日間併用投与による、ラット角膜移植の拒絶反応の抑制効果と抗体投与による免疫寛容の導入の可能性につき検討した。さらにシクロスポリンA(CYA)との相乗効果について検討した。実験モデルはドナーにFisher 344ラット、レシピエントにLewisラットを用い、直径3mmの全層角膜移植を作製した。抗体非投与群は、術後10.5±2.5日で全例拒絶された。1A-29 1mg/kgとWT-1 2mg/kgの7日間連日併用投与(静注)で67%に拒絶反応を抑制でき、投与期間を短縮しても有効であることが示された。一方、透明性を得たモデルの反対眼にFisherラットの角膜を移植した群とDAラットの角膜を移植した群を作製した。DAラットの移植片は全て拒絶されたが、Fisherラットの移植片は6眼中2眼(33%)が透明性を保ち、免疫寛容の導入が示唆された。今後寛容にclonal anergyが関与しているかどうか脾細胞を用いた混合リンパ球培養反応により検討する予定である。CYA 5mg/kgを筋注で投与した群(n=5)は100%拒絶反応の抑制に有効であったが、2mg/kg投与群(n=4)は全て拒絶された。CYA 2mg/kgと1A-29 1mg/kg(静注)の併用投与及びCYA 2mg/kgとWT-1 1mg/kg(静注)の併用投与はいずれも無効であった。しかしCYA 2mg/kgと1A-29 1mg/kg+WT-1 1mg/kgの併用投与では、5眼中4眼(80%)が透明性を保ち有効であった。これら個々の薬剤の投与量を減量しても、併用投与による相乗効果で拒絶反応を抑制できることが示された。今後副作用の少ない局所投与(結膜下注射、点眼)の効果についても検討を要す。1モノクローナル抗体の精製BALB/cマウスに抗ICAM-1抗体及び抗LFA-1抗体産生のハイブリドーマを腹腔内に投与しWT-12週間後モノクローナル抗体の含まれる腹水を回収、精製。2ラット全層角膜移植モデルの作製DonorにFisher344ラット、recipientにLewisラットを用いる。麻酔はエーテルで導入しケタラール・セラクタールを混合筋注。3mmのトレパンを用いLewisラットから角膜移植編を作製しヒアルロン酸ナトリウムを使用し10-0ナイロン糸を用いてFisher344ラットに12針の結節縫合を行う。拒絶反応の反応の判定は細隙灯顕微鏡にて臨床的に行う。術直後より術後7日目まで抗ICAM-1抗体、抗LFA-1抗体をそれぞれ1mg/kg・2mg/kgの混合静注する。3投与時期の違いによる拒絶反応発症の検討抗体非投与モデルにおいては拒絶反応の発症は100%術後12±3日である。抗体15日投与群では83%で拒絶反応が抑制され、抗体投与期間を7日間に短縮したモデルでは67%で拒絶反応が抑制された。4特異的寛容の成立についての検討さらに最初の移植30日後にラットモデルの他眼に、前回と同種同系からの全層角膜移植を行った。

最初の移植片で拒絶反応が発症したラットモデルでは2回目の移植片は100%拒絶され、拒絶反応が抑制されたモデルでは2回目の移植片は33%生着し、特異的寛容成立の可能性が示唆された。BALB/Cマウスに抗ICM-1抗体及び抗LFA-1抗体のハイブリドーマを腹腔内に投与し12週後モノクローナル抗体の含まれる腹水を回収し抗体を精製した。DonorにFisher344ラット、レシピエントにLewisラットを用い、直径3mmの全層角膜移植モデルを作成した。細隙灯顕微鏡を用い移植片の透明性から拒絶を判定した。無処置群では術後8日から13日、平均10.5±2.5日で全例拒絶反応を発症した。CyclosporinA(サンディミュン注射液)を5mg/kg筋肉内注射を毎日14日間行った群(n=5)は、投与期間内中及び術後30日までの観察期間中全例透明性を維持し拒絶反応は発症しなかった。一方、CyclosporinA 2mg/kg投与群(n=4)では術後9日から14日で全例に拒絶反応が発症した。CyclosporinA 2mg/kg筋注と抗ICM-1抗体1mg/kgを静注した群(n=4)では1例が術後20日目まで透明性を維持したがその後拒絶反応を発症した。CyclosporinA2mg/kg、筋注と抗LFA-1抗体1mg/kgを静注した群はCyclosporinA 2mg/kg単独投与群と同様に拒絶反応を発症した。抗ICM-1抗体・抗LFA-1抗体各1mg/kg静注とCyclosporinA 2mg/kg筋注の併用投与群(n=5)では、1例は術後18日目に混濁を呈したが、4例は術後30日までの透明性を維持した。抗ICM-1抗体と抗LFA-1抗体及びCyclosporinAの併用投与により、個々の投与量を減量させて拒絶反応を抑制できる可能性を得た。
Sema3A阻害薬ビナキサントンによる角膜神経再生を介したドライアイ治療

ドライアイは国内でも有病率が高い疾患であるが、現行の治療法では充分に治療できないことも多い。角膜は生体内でも神経密度が高い組織で、近年、ドライアイで角膜神経が障害されることが報告されてきている。角膜神経が障害されると、角膜知覚の低下や涙液量の低下を引き起こし、ドライアイが進行するという悪循環につながる。Semaphorin-3Aは神経の伸長に対して反発的に作用するため、Semaphorin-3A阻害薬は神経再生効果を示し、脊椎損傷モデルマウスの治療効果がある事も知られている。我々はSemaphorin-3A阻害薬であるビナキサントンが角膜神経の再生も促進することを見出しており、本研究は、ドライアイモデルマウスを用いて、ビナキサントンが新たなドライアイ治療薬となる可能性を検証することを目的としている。涙腺摘出により作出したドライアイモデルマウスを用いて検討を実施した結果、ビナキサントン点眼群ではビナキサントン非点眼群に比べ角膜知覚が保たれており、涙液量も保たれていることを確認できた。角膜上皮下神経叢を神経マーカーであるβIII tubulinに対する抗体を用いて免疫染色したところ、実際にビナキサントン点眼群で角膜上皮下神経が保たれている像を確認できた。また、フルオレセイン染色により、角膜上皮障害の程度を検証した結果、ビナキサントン点眼群では角膜上皮障害面積が少なく、びらん形成も抑制されることを確認できた。以上の結果は、Semaphorin-3A阻害薬であるビナキサントンの点眼が新たなドライアイ治療法となる可能性を示すものである。さらに、ビナキサントン点眼群ではビナキサントン非点眼群に比べ炎症細胞の浸潤が少ないことを示す結果も得られており、作用機序については角膜上皮との相互作用や抗炎症作用も含めた詳細な解析が引続き必要である。ドライアイは、国内患者数2200万人と推定される極めて有病率が高い疾患であり、重症例を含め現行の治療では不十分な例も多い。近年ドライアイ患者の角膜内の神経が障害されていることが注目されている。我々はSemaphorin-3A阻害薬ビナキサントンが角膜内の神経再生を促進することを見出しており、本研究は、涙腺摘出ドライアイモデルマウスを用いて、ビナキサントンが新たなドライアイ治療薬となる可能性を検証することを目的としている。ビナキサントン点眼投与による角膜上皮障害治癒作用をしらべるため、点眼有無での角膜上皮障害の程度を(1)フルオレセイン染色、(2)涙液量の測定、(3)角膜知覚の測定の3つの評価法を用いて比較した。角膜上皮フルオレセイン染色では、蛍光実態顕微鏡で撮像し、画像処理ソフトを用いて角膜上皮障害の範囲を%areaとして定量化し評価した結果、ビナキサントン点眼群で障害範囲が5.4%, control群で11%と、ビナキサントン点眼群で障害が軽減される傾向を認めた。また、無麻酔下でフェノールレッド糸(Zone-quick)を用いて行った涙液量の測定では、ビナキサントン点眼群で1.6mm, control群で2mmと、ビナキサントン点眼群で有意に涙液量が保たれた(p<0.01)。マウス用に改変したコシュボネ角膜知覚計を用いて評価した角膜知覚測定でも、ビナキサントン点眼群で3.7mm, control群で1.3mmとビナキサントン点眼群で有意に知覚障害が抑制された(p<0.01)。交付申請書に記載した平成28年度の実験計画は全て遂行することができている。角膜神経が障害されると、角膜知覚の低下や涙液量の低下を引き起こす。我々はSemaphorin-3A阻害薬であるビナキサントンが角膜神経の再生を促進することを見出しており、本研究は、ドライアイモデルマウスを用いて、ビナキサントンが新たなドライアイ治療薬となる可能性を検証することを目的としている。以上の結果は、Semaphorin-3A阻害薬であるビナキサントンの点眼が新たなドライアイ治療法となる可能性を示すものであるが、引続き詳細な解析を必要とする。一部の免疫染色による検討をのぞき、平成28年度の実験計画は全て遂行することができている。

ドライアイは国内でも有病率が高い疾患であるが、現行の治療法では充分に治療できないことも多い。角膜は生体内でも神経密度が高い組織で、近年、ドライアイで角膜神経が障害されることが報告されてきている。角膜神経が障害されると、角膜知覚の低下や涙液量の低下を引き起こし、ドライアイが進行するという悪循環につながる。Semaphorin-3Aは神経の伸長に対して反発的に作用するため、Semaphorin-3A阻害薬は神経再生効果を示し、脊椎損傷モデルマウスの治療効果がある事も知られている。我々はSemaphorin-3A阻害薬であるビナキサントンが角膜神経の再生も促進することを見出しており、本研究は、ドライアイモデルマウスを用いて、ビナキサントンが新たなドライアイ治療薬となる可能性を検証することを目的としている。涙腺摘出により作出したドライアイモデルマウスを用いて検討を実施した結果、ビナキサントン点眼群ではビナキサントン非点眼群に比べ角膜知覚が保たれており、涙液量も保たれていることを確認できた。角膜上皮下神経叢を神経マーカーであるβIII tubulinに対する抗体を用いて免疫染色したところ、実際にビナキサントン点眼群で角膜上皮下神経が保たれている像を確認できた。また、フルオレセイン染色により、角膜上皮障害の程度を検証した結果、ビナキサントン点眼群では角膜上皮障害面積が少なく、びらん形成も抑制されることを確認できた。以上の結果は、Semaphorin-3A阻害薬であるビナキサントンの点眼が新たなドライアイ治療法となる可能性を示すものである。さらに、ビナキサントン点眼群ではビナキサントン非点眼群に比べ炎症細胞の浸潤が少ないことを示す結果も得られており、作用機序については角膜上皮との相互作用や抗炎症作用も含めた詳細な解析が引続き必要である。これまでの研究進捗は順調であり、引き続き、交付申請書に記載した平成29年度の計画を進めていく。これまでの研究進捗は順調であり、引き続き、交付申請書に記載した平成30年度の計画を進めていく。今年度は、マウスの使用数が予定より少なかったため、残額を生じた。想定していたよりもマウスの使用数を少なくできたため。今年度の結果をもとに、来年度はより多くの動物実験を行い再現性を取る予定であるため、残額を来年度分のマウスおよび飼育費に繰り越して使用予定である。また、平成29年度より研究代表者の所属が変更になるが、マウスを用いた研究を引き続き慶應義塾で実施する必要があるため、新たに榛村重人(慶應義塾医学部准教授)を研究分担者として追加し、研究費を分担者に配分して研究を遂行する体制をとる計画である。
家畜由来腸内細菌における小型Rプラスミドの分布と相互関係に関する研究

家畜サルモネラに分布する数メガダルトン内外の小型Rプラスミドが他の腸内細菌にも認められるものと同じなのか否かを知るため以下の研究をした.大腸菌についてこれまでに得られた成績は以下の通りである.1.病馬及び正常馬由来大腸菌株の約40%は1剤以上に耐性で,耐性62株中53株(85.5%)は1株を除き耐性因子を一括接合伝達した.これらの接合性Rプラスミドの一部は不和合群IαとFIIに分類された.耐性62株のプラスミドプロフィールを探索したところ,半数は小型プラスミドを保有しないが保有株の中では2種のもの10, 1種8, 3種6, 4種3, 5種3, 6種1株の様に13種の保有株が多かった.非伝達株ではSm, Su, Tc, Apなどに耐性のものが多い.2.肥育子牛由来の26剤耐性大腸菌8株はすべて不和合群IαSmKmRプラスミドを保有し,そのうち4株ではFIIRプラスミドが共存していた.元株耐性型とRプラスミド耐性因子型が一致する4株では小型プラスミドは認められず,非伝達性のAp, Tc, Suなどの耐性株4株では14種の小型プラスミドを保有していた.3.単剤耐性の豚由来大腸菌3株,同じく2剤耐性2株から不和合群IαTcRプラスミドが得られたが, 5株共に24種の小型プラスミドを保有していた.また,非伝達性Su耐性が認められた.上記の馬,牛,豚由来大腸菌株が保有している各小型プラスミドについて今後,トランスフォーメーションなどによりRプラスミドか否かを検索したり,さらに馬や牛由来サルモネラの既知の小型Rプラスミドとの相同性をハイブリダイゼーション試験により確認する必要がある.家畜サルモネラに分布する数メガダルトン内外の小型Rプラスミドが他の腸内細菌にも認められるものと同じなのか否かを知るため以下の研究をした.大腸菌についてこれまでに得られた成績は以下の通りである.1.病馬及び正常馬由来大腸菌株の約40%は1剤以上に耐性で,耐性62株中53株(85.5%)は1株を除き耐性因子を一括接合伝達した.これらの接合性Rプラスミドの一部は不和合群IαとFIIに分類された.耐性62株のプラスミドプロフィールを探索したところ,半数は小型プラスミドを保有しないが保有株の中では2種のもの10, 1種8, 3種6, 4種3, 5種3, 6種1株の様に13種の保有株が多かった.非伝達株ではSm, Su, Tc, Apなどに耐性のものが多い.2.肥育子牛由来の26剤耐性大腸菌8株はすべて不和合群IαSmKmRプラスミドを保有し,そのうち4株ではFIIRプラスミドが共存していた.元株耐性型とRプラスミド耐性因子型が一致する4株では小型プラスミドは認められず,非伝達性のAp, Tc, Suなどの耐性株4株では14種の小型プラスミドを保有していた.3.単剤耐性の豚由来大腸菌3株,同じく2剤耐性2株から不和合群IαTcRプラスミドが得られたが, 5株共に24種の小型プラスミドを保有していた.また,非伝達性Su耐性が認められた.上記の馬,牛,豚由来大腸菌株が保有している各小型プラスミドについて今後,トランスフォーメーションなどによりRプラスミドか否かを検索したり,さらに馬や牛由来サルモネラの既知の小型Rプラスミドとの相同性をハイブリダイゼーション試験により確認する必要がある.
バイオターゲッティング素子としての抗体断片の高効率生産と構造機能解析

B.brevis系において抗ヒトウロキナーゼIgG1Fabの生産量は100mg/lであり、単純なフラスコ培養の結果としては、他の系における生産量より高い。しかし、この量はB.brevisにおける原核生物由来のタンパク質の生産量と比較すると少ない。この原因を明らかにするため、抗体断片とBacillus lichenniformisのα-アミラーゼとの融合遺伝子を作製して、その発現について解析した。このアミラーゼはB.brevis系において大量(3.5g/l)に生産されることから、転写、翻訳、分泌過程における障害が殆どなく、分泌後のタンパク質としての安定性も非常に高いと考えられる。先ず抗ヒトウロキナーゼIgG1FabのL鎖遺伝子との融合遺伝子を作製して発現させたところ、α-アミラーゼ遺伝子を単独で発現させた場合とほぼ同量の融合遺伝子産物が培地中へ分泌された。この結果は抗ヒトウロキナーゼIgG1FabのL鎖にはB.brevisにおける転写、翻訳、分泌過程を阻害するアミノ酸配列が存在しないことを示している。現在H鎖のアミノ酸配列について同様な解析を行いつつある。19、32、43、53、および63個のアミノ酸からなるリンカーペプチドにより連結された抗ヒトウロキナーゼIgG1単鎖Fabの発現分泌ベクターを作製し、B.brevisに導入した。その結果、43個のアミノ酸からなるリンカーペプチドを用いた場合に最高生産量(10mg/l)が観察された。一方、抗ヒト白血球抗原IgGl単鎖Fabについては63個のアミノ酸からなるリンカーペプチドを用いて200mg/lに達する生産量が観察された。現在、二つの単鎖Fabのアミノ酸配列のどのような違いが生産効率の差の原因となっているかを解析しつつある。
高分子界面における極微構造形成およびその時間分解顕微分光

1.ブロック共重合体を用いた光機能性ナノサイズ構造体の構築ポリスチレン-ポリ(4-ビニルピリジン)ジブロック共重合体(PS-b-P4VP)が形成する海島構造中の島部位(P4VP)のみに、カルボキシル基を有する蛍光性ポリスチレンナノ粒子を位置特異的に導入することに成功した。またポルフィリン誘導体TCPPなども同様に水素結合により位置特異的に導入でき、その機構を考察した。2.レーザー光照射によるフィルム表面の極微構造変化とナノ粒子の生成ナノサイズの相分離構造を形成するPS-b-P4VPフィルムとTCPP又はATAを組み合わせた系について、空気中、メタノール蒸気中、メタノール中でYAGレーザー(532nm)を照射した。ドープされたP4VP部位が凸ではなく凹となっている系においても、メタノール中で選択的にアブレーションが誘起され、穴が更に深くなることを見出した。ポリスチレン-ポリメタクリル酸メチルジブロック共重合体(PS-b-PMMA)のスピンコート法により作成した薄膜は、同一薄膜内に同心円状に表面形状の異なる各種のナノサイズの構造を生成するという興味ある現象を見出した。有機トランジスタへの応用の可能性について注目されているペンタセンのナノ粒子が、エタノール中でのレーザー光照射により生成できることを明らかにし、その機構について議論した。3.有機ナノ結晶及び単一共役系高分子鎖の光アンチバンチングおよび発光特性ペリレンビスイミド系分子のナノ結晶が光アンチバンチングを示すことを見出した。共役系高分子としてMEH-PPVを、ホスト高分子としてPS及びPMMAを用い、MEH-PPVを一分子鎖として分散させた。光アンチバンチングを示す系と示さない系が存在し、MEH-PPVの分子量、ホスト高分子フィルム中におけるMEH-PPV鎖のコンフォメーションとの関連について考察した。◎ブロック共重合体フィルムへの機能性色素の位置特異的導入ポリスチレン-ポリ(4-ビニルピリジン)ジブロック共重合体(PS-b-P4VP)が形成する海島構造中の島部位(P4VP)のみに、ポルフィリン誘導体TCPPの外、aurin tricarboxylic acid(ATA)及び合成したペリレンビスイミド系化合物(DSBPI)を多点の水素結合により位置特異的に導入することに成功した。◎固液界面へのレーザー照射によるフィルム表面の極微構造変化海島構造以外のナノサイズの相分離構造を形成する分子量比の異なるPS-b-P4VPフィルムとTCPP又はATAを組み合わせた系について、空気中、メタノール蒸気中、メタノール中でYAGレーザー(532nm)を照射した。ドープされたP4VP部位のみの選択的アブレーションが誘起される系とされない系があった。メタノール中と同様に、ドープされたP4VP部位が膨潤した状態となるメタノール蒸気中では、全く選択的アブレーションが起こらなかった。◎ナノスケール相分離界面での光励起エネルギー移動P4VPに選択的にドープできる発光分子として合成したペリレン系分子DSBPIは、溶液中では蛍光性であったが、PS-b-P4VP薄膜の島部位に導入すると無蛍光性となったため、発光分子として不適切であることが分かった。◎固液界面での単一分子蛍光分光ガラス基板に共有結合により結合できる蛍光性ペリレンモノイミド系化合物を合成し、それをガラス基板へ単一分子レベルで分散し結合させることに成功した。
II-VI族希薄磁性半導体のタイプII量子井戸構造における光誘起強磁性の研究

MBE法により、Be(Mn)Te層にNをドープしたZnSe/Be(Mn)Te:Nおよびp型BeMnTeバルク薄膜を作製した。キャリヤ誘起の強磁性発現に必要なキャリヤ密度に相当する10^<18>から10^<19>cm^<-3>の正孔キャリヤ密度が室温から2Kの温度範囲で得られた。タイプII量子井戸構造では電子と正孔の再結合は界面で起こるので、キャリヤの寿命、波動関数の重なりの程度が界面状態に強く依存することになる。走査トンネル顕微鏡を用いて多重量子井戸構造のヘテロ界面の急峻性、合金化について調べた。ZnSe/BeTe界面の約2原子層近傍にZn-Te、Be-Seの結合が存在し、BeZnSeTeの4元混晶領域が形成されていることが初めてわかった。この遷移領域の組成は(ZnTe)_<0.52>(BeSe)_<0.42>である。3)異常ホール効果と強磁性転移の観測p型Be_<1-x>Mn_xTe(x=0.05,0.1)の異常ホール効果を測定し、10K以下で強磁性となることがわかった。さらに、負の磁気抵抗効果とそのヒステリシスがこの物質系で初めて観測され、強磁性発現が確認された。この負の磁気抵抗効果は束縛磁気ポーラロンが磁場の印加によって自由キャリヤになることに依ることが、強磁場下のホール効果測定からも明らかになった。ZnSe/Be(Mn)Te量子井戸構造の発光スペクトルに対する電場、磁場効果を調べ、タイプII量子井戸の界面発光が電場によって抑制・増強されることがわかった。しかし、Nを高ドープした量子井戸では界面構造の揺らぎなどにより鋭い発光帯を観測することができなかった。多重量子井戸構造のヘテロ界面の急峻性、合金化について断面走査トンネル顕微鏡(STM)によって調べた。4モノレイヤー(ML)程度の揺らぎとテラス構造が観測され、急峻な界面が形成されていることがわかった。3)発光、磁気光学効果の測定ZnSe/Be_<1-x>Mn_xTe多重量子井戸(x=0.0150.054)の発光スペクトルとその磁場依存性を測定した。発光は平均的な井戸厚の領域に存在する励起子、およびBe_<1-x>Mn_xTe層の厚さが2ML厚い領域に局在した正孔が関与する励起子に起因する。Mn組成の異なる発光スペクトルの比較から、Be_<1-x>Mn_xTe価電子帯上端のエネルギーはMn組成の増加に従って増加し、価電子帯オフセットが0.9+(1.8±0.3)x (eV)に従うことがわかった。磁場下において発光スペクトルを測定してBe_<1-x>Mn_xTeのp-d交換相互作用について調べた。巨大ゼーマンシフトの磁場依存性から、Be_<1-x>Mn_xTeのp-d交換定数をN_Oβ= -0.34±0.01eVと決定した。光注入されたキャリヤによる強磁性発現を検出する方法として異常ホール効果測定が有効である。そこで、ZnSe/Be(Cr)Te多重量子井戸構造の面内方向の光伝導を測定するためのオーミック接触作製条件を求める研究を行った。キャップ層がアンドープの場合には、金電極を310°C、100時間の熱処理を行うことによって量子井戸構造を壊すことなくオーミック接触が得られることがわかった。

また、n-ZnSeをキャップ層とする量子井戸構造の場合には、280°C、1時間の熱処理により確実なオーミック電極が形成された。これらの試料における光伝導特性は、ZnSe/Be(Cr)Te量子井戸の面内方向の伝導であることを示していることから、異常ホール効果を測定する準備が整った。多重量子井戸構造のヘテロ界面の急峻性、断面構造を断面走査トンネル顕微鏡(STM)によって調べた。ZnSe/BeTeタイプII量子井戸のバンドアライメントでは、伝導帯の底はZnSe層、価電子帯の頂上はBeTe層にあるので電子と正孔はそれぞれの層に分離して閉じ込められる。STMによってこのような量子井戸構造の断面を測定したところ、バイアス電圧が負の場合にはBeTe層が明るく観測されるのに対して、正の場合にはZnSe層が明るく観測された。このような明暗の反転はタイプII量子井戸のバンドアライメントを2次元的なマップとして示していることになり、これが最初の報告となる。Appliedこの結果はPhysics Letttersに掲載される予定である。ZnSe/Be(Mn)Te量子井戸構造の発光スペクトルの温度依存性を測定し、その詳細な解析を行った。界面には原子層を単位とする井戸層厚揺らぎがあると同時に、界面に4元の混晶層が存在することがわかった。この混晶層の存在により、発光スペクトルの幅が広がり、特異な温度依存性を示す。MBE法により、Be(Mn)Te層にNをドープしたZnSe/Be(Mn)Te:Nおよびp型BeMnTeバルク薄膜を作製した。キャリヤ誘起の強磁性発現に必要なキャリヤ密度に相当する10^<18>から10^<19>cm^<-3>の正孔キャリヤ密度が室温から2Kの温度範囲で得られた。タイプII量子井戸構造では電子と正孔の再結合は界面で起こるので、キャリヤの寿命、波動関数の重なりの程度が界面状態に強く依存することになる。走査トンネル顕微鏡を用いて多重量子井戸構造のヘテロ界面の急峻性、合金化について調べた。ZnSe/BeTe界面の約2原子層近傍にZn-Te、Be-Seの結合が存在し、BeZnSeTeの4元混晶領域が形成されていることが初めてわかった。この遷移領域の組成は(ZnTe)_<0.52>(BeSe)_<0.42>である。3)異常ホール効果と強磁性転移の観測p型Be_<1-x>Mn_xTe(x=0.05,0.1)の異常ホール効果を測定し、10K以下で強磁性となることがわかった。さらに、負の磁気抵抗効果とそのヒステリシスがこの物質系で初めて観測され、強磁性発現が確認された。この負の磁気抵抗効果は束縛磁気ポーラロンが磁場の印加によって自由キャリヤになることに依ることが、強磁場下のホール効果測定からも明らかになった。ZnSe/Be(Mn)Te量子井戸構造の発光スペクトルに対する電場、磁場効果を調べ、タイプII量子井戸の界面発光が電場によって抑制・増強されることがわかった。しかし、Nを高ドープした量子井戸では界面構造の揺らぎなどにより鋭い発光帯を観測することができなかった。
ダイサーおよび2本鎖RNA結合タンパク質を利用したウイルス抵抗性植物の作出

シロイヌナズナのダイサー遺伝子(DCL1-4)および2本鎖RNA結合タンパク質遺伝子(DRB1-5)を過剰発現した系統について、カブモザイクウイルスを用いてウイルス接種実験を行った。その結果、DRB2, DRB3, DRB4遺伝子を過剰発現した系統では、病徴がマイルドになるといった傾向が見られた。さらに、シロイヌナズナの芽生え由来の粗抽出液を用いてダイサー活性(2本鎖RNA切断活性)を簡便に評価する実験系を確立した。ダイサー遺伝子(DCL1-4)、RNaseIII遺伝子(RTL2)、2本鎖RNA結合タンパク質遺伝子(DRB1-5)を過剰発現しているシロイヌナズナの系統およびそれら遺伝子の変異系統について、ウイルス抵抗性能を評価する実験を行った。緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子を組み込んだカブモザイクウイルス(TuMV-GFP)を接種したタバコの感染葉を接種源としてウイルス接種実験を行った。接種葉でのウイルスの増殖、全身へのウイルス感染の広がりをGFP蛍光で評価する評価系を確立した。これら過剰発現系統のRNA干渉能が強化されていることを評価するために、緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子およびカロテノイド合成に関与する遺伝子に人工的にRNA干渉を誘導し、GFPの蓄積量(緑色蛍光強度)および光脱色の程度(葉の白色化)を指標に視覚的にRNA干渉の程度を評価できる植物を試験に用いた。ダイサー、RNaseIII、DRB遺伝子の突然変異および過剰発現した系統と、これらRNA干渉誘導系統を交配し、そのF1、F2世代でRNA干渉の程度を評価し、これらの遺伝子のRNA干渉能への寄与を評価したが、明確にRNA干渉能を強化しうると結論づけられる結果は得られなかった。しかし、ダイサー活性(2本鎖RNA切断活性)を直接生化学的手法で試験しRNA干渉能を評価する系を確立し、4種類のダイサー(DCL1-4)の中で、DCL4の2本鎖RNA切断活性が最も強いこと、2本鎖RNA結合タンパク質DRB4がDCL4の2本鎖RNA切断活性に必須であることを明らかにした。ダイサー遺伝子(DCL1-4)、リボヌクレアーゼ遺伝子(RTL2)、2本鎖RNA結合タンパク質遺伝子(DRB1-5)を過剰発現しているシロイヌナズナの系統およびそれら遺伝子の変異系統について、ウイルス抵抗性能を評価する実験を行った。緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子を組み込んだカブモザイクウイルス(TuMV-GFP)およびキュウリモザイクウイルス(CMV)を用いてウイルス接種実験を行ったが、これまでのところ明確にウイルス抵抗性が向上した系統は見つかっていない。これら遺伝子の過剰発現系統および突然変異系統のRNA干渉能を評価するために、カロテノイド合成酵素遺伝子に対して人工的にRNA干渉を誘導し、光脱色の程度(葉の白色化)を指標に視覚的にRNA干渉能を評価できる植物を試験に用いた。ダイサー、DRB遺伝子の突然変異および過剰発現系統とRNA干渉誘導系統を交配し、そのF2世代でRNA干渉の程度を評価した結果、DRB3遺伝子がRNA干渉シグナルの細胞間の広がりに関与するという予備的な研究結果を得た。昨年度確立したダイサー活性(2本鎖RNA切断活性)を直接評価する実験系を用いて、DCL4のダイサー活性におけるDRB4の役割を生化学的に解析した結果、DRB4の2本鎖RNA結合活性およびタンパク質間相互作用活性が、DRB4のDCL4のダイサー活性を促進する活性に必須であり、その活性はDRB4のN末端領域に存在する2本鎖RNA結合ドメインに由来することを明らかにした。この成果は、国際的に評価の高い"RNA"誌に発表した。2本鎖RNA結合タンパク質遺伝子(DRBI-5)を過剰発現しているシロイヌナズナの系統およびそれら遺伝子の変異系統について、ウイルス抵抗性能を評価する実験を行った。緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子を組み込んだカブモザイクウイルス(TuMV,ポティウイルス属)を接種したタバコの感染葉を接種源としてウイルス接種実験を行った。DRB2,DRB3,DRB4遺伝子を過剰発現した系統では、病徴がマイルドになるといった傾向が見られ、GFP蛍光観察によるウイルス増殖の評価においても、増殖が抑えられているといった傾向が見られた。また、これらの系統に、トマトモザイクウイルス(ToMV,トバモウイルス属)を摂取した場合にも、同様に病徴が軽減される傾向が見られた。このようなDRB遺伝子を過剰発現した植物に対してウイルスを接種する実験と並行して、シロイヌナズナを用いてダイサー活性(2本鎖RNA切断活性)を直接生化学的手法で評価する実験系を確立した。シロイナズナには、4種類のダイサー(DCL1-4)が存在することが知られているが、その中でDCL3およびDCL4の活性を簡便に検出する実験系を確立した。DCL3とDCL4は、長鎖2本鎖RNAを切断した際の生成物が、それぞれ24塩基および21塩基と異なることからくシロイヌナズナの粗抽出液を用いてそれぞれの酵素活性を分けて検出することができた。また、それぞれの特異抗体を用いた免疫沈降法による粗精製画分を用いても、それぞれのダイサー活性を検出することができた。

DCL3とDCL4の酵素活性を比較すると、基質となる2本鎖RNAの鎖長により酵素活性が異なることが明らかとなった。また、至適塩濃度も異なるという結果が得られた。
「海洋の歴史」研究の構築──領海主権・海洋権益・海洋社会をめぐって

本研究では、従来の歴史学ではほとんど検討されることのなかった「海洋」問題を正面から取り上げ、新たな学問領域を構築することを目的とする。これまでも「海域アジア史」「海の帝国史」など「海(海洋)」を標榜した研究は少なくなく、興味深い歴史像が提出されてきたが、「海」それ自体、すなわち国家権力が「海洋」を囲い込む「領海主権」、そこで確保・利用される「海洋権益」、そこに形成される「海洋社会」を意識的に中心に据えたものはほとんどなかった。従って本研究では、歴史学・国際政治・海洋法・軍事・社会学・文化史などの諸方面から学問横断的に分析し、近代から現代までをも視野に入れた総合的な「海洋の歴史」研究を切り開く。従来、海洋の歴史研究の多くは、海上貿易を中心とした経済史的なアプローチであった。本研究では、19世紀末から20世紀半ばに限定して、国家による領海主権、海洋権益、海洋社会を対象に据え、歴史学・国際政治・海洋法・軍事・社会学・文化史などの分野から学問横断的に分析を加える。総合的な「海の歴史」研究の新しい分野の構築を目指している。従来は海上における経済的な取引や交通路として着目されてきた海洋について、「領海主権」「海洋権益」「海洋社会」という視点から、アジア世界を中心として総合的に考察しようとするもので、現代的な課題とリンクする部分も大きく、独自性・創造性の点で高く評価できる。
超音波応答性マイクロバブルを用いた脳腫瘍への薬物送達技術の開発と治療戦略の構築

本研究では、脳腫瘍モデル動物の血液脳関門を亢進し効率的に薬物送達可能な超音波造影剤(超音波応答性マイクロバブル)を開発し、超音波エネルギーを組み合わせた脳腫瘍への抗がん剤送達技術を構築する。さらに、複数のがん細胞と抗がん剤を用いて脳腫瘍治療効果を評価し、超音波とマイクロバブルによる脳腫瘍治療戦略の構築を行う。
チェックポイント制御機構による発がん防御の分子解明(モデル生物・線虫を用いた基礎的研究)

ヒトATM(ataxia telangectasia mutated gene)遺伝子の変異疾患においては、免疫不全、生殖不全の他、高頻度に悪性腫瘍を発症することが知られている。本遺伝子は、細胞周期のチェックポイント制御に関わり、酵母からヒトに至る真核生物で広く保存されていることが近年明らかにされてきた。そこで本研究では、モデル生物の一つである線虫(Caenorhabditis elegans)を用いて、ATM様遺伝子とその下流に位置するとされるCHK2様遺伝子を単離し機能解析を行い、DNA損傷時の細胞周期チェックポイント制御機構を個体レベルで解明し、発ガン防御の基礎的な知見を得ることを目的とした。その結果、線虫Ce-atl-1(C.elegans ATM/ATR like 1)が、体細胞分裂ならびに減数分裂時の染色体の維持・安定性に重要な役割を担うこと、本遺伝子の発現抑制個体においては、紫外線などのgenotoxinに高感受性となること、一方、線虫Ce-chk-2は、減数分裂期の相同染色体間の対合の制御に必須で、体細胞分裂時のチェックポイント制御機構には関与しないことを見出した。またこれら研究を行った際に、線虫の減数分裂パキテン期の核が、体細胞分裂を行っている核に比べ、放射線に対して大変強い抵抗性を示し、この原因が相同的遺伝子組換え酵素(Ce-rdh-1:C.elegans RAD51,DMC1/LIM15 homolog 1)の高発現に起因することを見出した。
キラーT細胞誘導におけるケモカイン受容体CCR5の役割の確立とその分子機序の解析

1:免疫シナプスに集積し、抗原認識の感受性を制御するケモカイン受容体CCR5/CXCR3の低分子アンタゴニストは、CD3刺激によるmemory CD8+T細胞の増殖を抑制し、CCR5やRANTES granulesも免疫シナプスに集積し、BRET法を用いてCCR5が実際に活性化されることを明らかにした。また免疫シナプスにおけるLFA-1の活性化には、少なくとも一部は、免疫シナプスに存在するCCR5の活性化に伴うRap1の活性化が重要であることを示した。次に、CCR5/CXCR3ダブル遺伝子欠損マウスを作製することにより、CD8+T細胞増殖におけるケモカイン受容体の重要性をin vivoで確認した。このLFA-1を介したメカニズムは、臓器移植拒絶反応の制御を説明する分子基盤を与え、最近報告された、ヒト腎臓移植におけるCCR5delta32をもつレシピエントの長期予後改善の理論的根拠の一つを与えるものである。2:ケモカインを標的としたGVHDの回避と選択的GVL/T誘導法の開発急性腸管GVHDモデルで、ドナーCD8T細胞は、早期に2次リンパ組織で増殖、分化し、後期に腸管浸潤を開始し、陰窩部上皮細胞のアポトーシスが誘導されるが、Fractalkine/MAdCAM-1の中和抗体をGVHD後期に投与する事により、腸管選択的に軽減できた。次に腫瘍細胞P815(H-2^d)をBDF1(H-2^<bd>)マウスに移入し、1日後にB6(H-2^b)マウス脾細胞を移入すると、有意な生存延長を示し、このGVL効果はFractalkine/MAdCAM-1の中和抗体投与により腸管GVHDを軽減した群においても保存された。以上よりCX3CR1-Fractalkine、α4β7-MAdCAM-1を分子標的とした、GVL/T効果を保存したまま選択的にGVHDを軽減する新規な予防、治療法の可能性が示された。AIDSにおけるHIV-1感染の主要なコレセプターであるCCR5の生理機能は、細胞走化性以外では詳細には明らかにされていない。しかし我々はこれまでに、ヒトCCR5阻害剤:TAK-779が固相化したCD3刺激によるmemory CD8+T細胞の増殖を抑制したことから、CCR5がT細胞受容体(TCR)刺激の副刺激としての機能も有することを示してきた。そこでCCR5の局在を調べると、TCR刺激後にCCR5が免疫シナプスに集積することを見い出した。次にCCR5の活性化状態を調べるために、RANTESのTCR刺激後における動態を解析した。CD3/CD28抗体をコートしたビーズによりヒトCD8+T細胞を刺激しRANTESvesiclesの移動を共焦点レーザー顕微鏡により観察すると、15分後にRANTESがビーズ接触面に集積した。またBRET(Bioluminescence Resonance Energy Transfer)法により、b-arrestinがCCR5に近接することを見い出した。このことからRANTESによりCCR5が活性化されたことが示された。次にTCR刺激によるインテグリンLFA-1の活性化の過程で、CCR5に依存する相の存在することをCCR5阻害剤:TAK-779を用いることにより示した。以上よりヒトmemory CD8+T細胞では、免疫シナプスを構成するTCRの活性化からLFA-1の(inside-outの)活性化までの間に少なくとも一部はCCR5の活性化が重要な役割を果たしていることが示唆された。

また我々が作成したCCR5欠損マウスでアロ反応が抑制されたことなどは最近報告されたヒト腎移植におけるCCR5delta32をもつレシピエントの長期予後の改善の理論的根拠の1つを与えるものである。またAIDS治療を目的として開発されたヒトCCR5阻害剤の副作用の可能性とそれを克服するための研究の方向性を示すことになる。免疫シナプスに集積し、抗原認識の感受性を制御するケモカイン受容体CCR5/CXCR3ケモカイン/ケモカイン受容体の新たな機能を見出すために、AIDSの共受容体の一つであるCCR5に焦点を絞り、特にT細胞受容体(TCR)刺激とのクロストークの解明とそれらの生理学的かつ病理学的意義を明らかにすることを目的とした。まずCCR5はTCR刺激に伴って、そのリガンドであるRANTESと共に免疫シナプスに集積することを見出した。そしてTCR刺激でCCR5が実際に活性化されることをBRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfer)法を用いて明らかにした。またTCR刺激に伴うLFA-1の活性化には、CCR5の活性化に伴うRap1の活性化が重要であることを示した。そこでCCR5/CXCR3ダブル遺伝子欠損マウスを作製することにより、ケモカイン受容体CCR5とCXCR3がCD8+T細胞の増殖へのコミットメントに重要であることをin vivoで確認した。以上よりTCR刺激後に、免疫シナプス腔にRANTESなどのケモカインが分泌され濃縮されたRANTESは、免疫シナプスに集積してきたCCR5を活性化させるだけの有効な濃度を保持することが可能であり、これが少なくともLFA-1の活性制御を介してT細胞の抗原認識の感受性を制御し、TCR刺激におけるboosting signalあるいはsustained signalの候補の一つとしてシグナルの持続に貢献し、T細胞が増殖するかどうかのコミットメントに重要なステップであることが推測された。このLFA-1を介したメカニズムが臓器移植拒絶反応の制御を説明する分子基盤を与えるものであり、また最近報告されたヒト腎臓移植におけるCCR5delta32をもつレシピエントの長期予後の改善の理論的根拠の一つを与えるものである。
ppbレベルの低濃度標準ガス(有機ハロゲン化合物)保存のための容器材質の検討と評価

平成8年度には、ハロカーボン類(塩化メチル、臭化メチル、ヨウ化メチル、クロロホルム、四塩化炭素、テトラクロロエチレン)の低濃度標準ガス充填容器(100気圧)として、5種類の容器について保存試験を行い、アルミニウム1s容器とマンガン鋼1s容器について良好な結果を得た。本年度はこの2種類の容器について新しく1ppb,100pptの標準ガスを重量法によって作製し、長期間の保存性、容器の個体差によるバラツキについて検討を行った。これら標準ガス濃度の定量は数年間の安定性が保証されている1ppmレベルの標準ガスを高精度の流量比希釈システムにより1ppbレベルの標準ガスを発生させて、それとの比較により行った。アルミニウム1s及びマンガン鋼1s容器のいずれの場合も6種のハロカーボンの内、臭化メチルとヨウ化メチルは時間と共に減少傾向を示した。この減少速度は大きな個体差を示し、100pptヨウ化メチルの場合2ヶ月後の減少率は最大100%最小10%以下であった(試験数8本)。そこで、特に研磨石を選定して磨いたアルミニウム容器を用いて調べた結果、3ヶ月後のヨウ化メチル減少率は10%以内であった(試験数2本)。しかし、その後同様の処理をした容器でも減少率が40%以上の場合もあり、条件の再現性に問題のあることが分かった。このように高圧容器内の保存性に問題のある成分について、その減少率を時間に対してプロットしてみるといずれの場合も非常によい直線性を示すことが分かった。従って、大気微量成分の高精度分析には低濃度標準ガスをワーキングスタンダードとして使い、これを1ppm標準ガスの希釈ガスによって定期的にキャリブレーションするのが現時点における最良の方法として提案される。1.重量法による低濃度標準ガスの作製と試験用容器への充填:塩化メチル、臭化メチル、ヨウ化メチル、四塩化炭素、トリクロロエチレン、テトラクロロエチレンの7種類の有機ハロゲン化合物の混合標準ガス(希釈ガス:高純度窒素)をそれぞれ3段階の濃度レベル(1ppm,1ppb,100ppt)で調整した。1ppbの標準ガスについては、5種類の容器(汎用アルミニウム容器、アルミニウム1s容器、汎用マンガン鋼容器、マンガン鋼1s容器、ニッケルメッキマンガン鋼容器)に加圧(100気圧)充填して、保存試験に供した。100ppt標準ガスはマンガン鋼1s容器のみで試験を行った。1sとは表面粗度が1μm以下に研磨されたものを指す。2.1ヶ月3ヶ月の保存性:5種類の容器に充填した1ppbの標準ガスについて、充填後1ヶ月後と3ヶ月後に濃度測定を行った。ここで、汎用Al容器詰めのガスについては何らかの汚染を示すデータが得られたので以下の議論から除外する。汎用Mn鋼容器とNiメッキMn鋼容器ではいずれの化合物についてもAl1s容器とMn鋼1s容器充填のものより低濃度であった。特に、臭化メチル、ヨウ化メチルの減少が顕著で3ヶ月後には検出限界以下となった。Al1s容器とMn鋼1s容器では四塩化炭素を除くガス濃度に顕著な差は見られなかったが、Mn鋼1s容器中の四塩化炭素は大きな減少を示した。以上の点から、表面が滑らかな1s容器が低濃度ハロカーボン標準ガスの保存に優れ、アルミニウム1s容器が四塩化炭素も含めて最もよい成績であった。平成9年度には、新たに重量法によって1ppb及び100pptの標準ガスを作製し、これを8年度作製のものと比較することによって、1年間の濃度変動を定量的に把握し、極低濃度標準ガスの高圧ガス容器中における保存の可能性について結論を得る予定である。

ハロカーボン標準ガスの高圧保存容器として最適なものを選定するため、5種類の容器(汎用アルミニウム、アルミニウム1s、汎用マンガン鋼、マンガン鋼1s、ニッケルメッキマンガン鋼)について、1ppb標準ガス(塩化メチル、臭化メチル、ヨウ化メチル、クロロホルム、四塩化炭素、テトラクロロエチレン)の保存試験を行った。内面研磨度が低い1s以外の3種類の容器では3ケ月後に臭化メチルとヨウ化メチルの著しい減少を示した。マンガン鋼とアルミニウムの1s容器については良好な結果が得られたが、鉄表面における反応性が高い四塩化炭素についてはマンガン鋼1s容器で減少が見られた。アルミニウム1sとマンガン鋼1sの容器についてさらに低濃度の100ppt標準ガスを用いた長期保存試験、容器の個体差によるバラツキ試験を実施した。その結果、いずれの容器でも臭化メチルとヨウ化メチルは時間と共に減少する傾向を示した。しかし、この減少速度は大きな個体差を示し、100pptヨウ化メチルの場合2ケ月後の減少率は最大100%最小10%以下であった(試験数8本)。このように高圧容器内による低濃度標準ガスの保存性は内壁が滑らかな容器では、多くのハロカーボンが安定であるが、100pptレベルになると臭化メチルとヨウ化メチルの多少の減少は逃れられない。しかし、これら問題のある成分の減少率は時間に対してよい直線性を示すことが分かったので、大気微量成分の高精度分析には低濃度標準ガスをワーキングスタンダードとして使い、これを1ppm標準ガスの希釈ガスによって定期的にキャリブレーションするのが現時点における最良の方法として提案される。
タンパク質立体構造の非経験的高速シミュレーション法の開発

既知情報に依存しない非経験的なタンパク質立体構造の高速シミュレーション技術を開発することを目的に,タンパク質立体構造の動的側面と静的側面を有機化学的な視点(即ち,原子レベルの相互作用)から解析した。まず,(1)量子化学計算の結果に基づいた非経験的分子力場(SAAP)の開発では,新たに購入した高速コンピュータシステム(15CPUのクラスターマシン)を用いてセリンのSAAP力場パラメータを作成した。セリンには内部回転可能な結合が4つ存在する。全ての二面体角を15度ずつ変化させながら,セリンの4次元ポテンシャルマップの作成を計画した。計算はほぼ終了し,真空中,エーテル中,水中のポテシシャルの解析を進めている。このように網羅的な単一アミノ酸ポテンシャルの解析は以前には例がない。分子シミュレーション用のプログラム開発も同時に進めており,現在,単一アミノ酸のポテンシャルを主鎖の部分と側鎖の部分に分離する手法の開発を進めている。これが可能となれば,20種類全てのアミノ酸に対応したSAAP力場を2年以内に完成させることができる。次に,(2)タンパク質構造データベース(PDB)の解析による原子レベルの相互作用の解析では,研究代表者が最近発見したS...O相互作用について,タンパク質の機能や進化との関係を解析した。モデルとして,リボヌクレアーゼA,リゾチーム,ホスフォリパーゼA,インスリンの4つのタンパク質を用いた。その結果,S...O相互作用がタンパク質の基質認識に関与している例を1つ見出し,また,全ての場合においてS...O相互作用がタンパク質の進化(系統樹)と相関をもつことが明らかになった。S...O相互作用の進化的な保存性が確認されれば,ゲノム科学的にも大変意義深い。
後期ヴィクトリア朝小説とジャーナリズムに見る労働者階級の子供像

本研究は、第一に労働者階級の子供たちに対する中流階級の姿勢を小説と新聞雑誌記事における彼らの表象に探り、その意義及び役割を帝国と国家のアイデンティティとの関係の中で明らかにしようとする。そして第二に、単一的な言説から漏れ出た異質な言説を掬い上げ、階級間の調和という表層に隠された軋みを浮かび上がらせようとする。資料収集と資料の分析という2つの作業を通して、労働者階級の子供の救済と教育の目的と限界、イングリッシュネス/ブリティッシュネス構築という理想と現実の乖離に迫り、最終的には、矛盾を抱えたまま第一次世界大戦に突入した英国の戦後の姿を提示する。
隣接面齲蝕抑制材(Fコート材)の基礎的研究

本教室ではFコート材の基礎的研究ならびに臨床的研究を行い、さらに2年間の臨床成績を調べた。2年間にわたる臨床的研究からFコート材の理工学的性状に幾つかの問題点が指摘された。本研究はFコート材の理工学的性状を改善することを目的に、Fコート材のフッ素ポリマーと分散させたNaF量を変化させた新たな材料を作成し、それらがFコート材塗布周囲の酸処理エナメル質のフッ素取り込み量にどのような影響を及ぼすかを分析化学的に検討した。組成を変化させたFコート材(1.Fポリマー100%、NaF100%(従来品)、2.Fポリマー100%、NaF0%、3.Fポリマー50%、NaF50%、4.Fポリマー0%、NaF0%、5.Fポリマー0%、NaF100%)をウシエナメル質に塗布し、石灰化液に30分間浸漬させた試料についてFコート材塗布周囲のエナメル質のフッ素取り込み量を調べた。フッ素取り込み量の定量にはエナメル質生検法を用い、1N過塩素酸10μl中に溶出したカルシウム量、フッ素量を測定した。カルシウム量の測定は原子吸光法、フッ素量はフッ素イオン電極を用いて測定し、フッ素濃度を算出した。結果を表に示す。酸処理エナメル質に取り込まれたフッ素濃度はFコート材の中のFポリマーの含有量よりもFコート材中に分散させたNaF量の影響をうけているものと考えられるが、さらに耐酸性試験などを行い検討していく。結果を表に示す。
大規模通時コーパスを用いた発見的研究方法の開拓

1通時的研究の新手法の開拓動詞の格表示の通時変化研究の新しい手法を提案した。多数の漢語サ変動詞について、主に国会会議録を用いて挌表示の変化を探索し、ニ挌からヲ格に変化したと思われるもの、その反対のものの存在を発見した。Ngramの頻度順位変化や文法的パターンの頻度比の分析に基づき、「可能性」や「てございます」の用法変化を記述した。2新しい通時コーパスの利用環境の構築と利用可能性の検討画像として公開されている「帝国議会会議録」「日本外交文書」の文字認識処理と検証を行った。特に前者は認識精度が低く厳密な統計分析には使えないが、特定表現の出現の有無や時期を検証するには使えることが分かった。・研究基盤の整備のため、既に作成した参議院議員の生年データに出身地のデータを加え、それらの情報と発言を結び付けて検索するプログラムの開発を行った。データベースは、公開を予定している。また新聞記事約25年分のn-gram化プログラムを作成した。・「青空文庫」「太陽コーパス」「話し言葉コーパス」「現代日本語書き言葉均衡コーパス」などの通時変化研究への利用可能性の検討のため、話者の生年分布・公刊年代分布などの基本的特性を調査した。・主としてコロケーションに関わるコーパスデータの統計的分析手法を文献によって調査し、通時的研究に応用できる方法を検討した。・語の用法変化を特徴づける環境のうち、形式的な指標化が可能なものを検討し、その指標化のため調査を行った。特に漢語動詞の目的語の格表示に関わる通時変化に注目し、分析のための枠組みの検討と予備調査のためのプログラム・データ作成を行った。・「可能性」という語の意味用法変化の解明のため、青空文庫データの検討を行った。1研究基盤の整備新たに利用可能となった国会会議録検索用APIを利用し、衆議院の会議録の発言者別取得を行い、議員総覧などに記載された生年・出身地情報との結びつけを行った。生年・出身地情報のデータはウェブ上で公開の予定である。新たに『神戸大学新聞記事文庫』の記事の取得を行い、mecab,unidicを用いてn-gramデータを作成した。2「気づきにくい言語変化」の発見のための分析の試行(A)『神戸大学新聞記事文庫』『国会会議録』などのコーパスを用い、漢語サ変動詞における格支配の交替(ニ→ヲ、ヲ→ニ)の例を抽出し、変化傾向の分析を行った。従来説とは反対に、ヲ格からニ格へと交替したように見える動詞の存在を指摘した。(B)『神戸大学新聞記事文庫』『国会会議録』『新聞記事データベース』などのコーパスを用い、「可能性」という語の大正期から平成期にかけての意味用法の変化を分析し、実現性から確実性への意味変化、程度を表す形容詞の変化、帰属性に関わる変化、の三つを指摘した。3言語変異分析の試行国会会議録での発言者の出身地情報を用いた言語変異分析の試行を行った。移動動詞に対するニとヘの選択に関する出身県別の相違を分析したところ、『日本語言語地図』記載の傾向とある程度の相関が見られた。当初予定しなかった『神戸大学新聞記事文庫』のデータ利用環境を整備したことにより、分析の期間を大正期まで拡大することができるようになった。これを活用して、漢語動詞の格交替の問題、「可能性」の意味変化の多角的検討など、新たな研究対象を開拓し、成果をあげることができた。1新データの整備・利用試行ウェブ上で公開されている日本外交文書・帝国議会議事録のデータのすべてをダウンロードし、OCR認識と認識結果の修正処理を行い、コーパスとして利用できるようにした。また、コピュラ表現などに関して試験的な利用を行い、本格的な研究利用可能性の見極めを行った。2格表示変化の研究新聞記事データベースを用い、ほぼ同様な意味を表すのにニ格とヲ格の両方の用例のある動詞の洗い出しを行い、どちらかの格の使用が増加する傾向にある動詞を発見し、先に行った国会会議録での事実と対照分析した。さらに、意味的な面を考慮して用例の傾向を分析すると、変化には何種類かの型があることが分かった。3「可能性」の意味・統語パターン変化の研究「可能性」という語については従来から研究しているが、今回は研究の対象を大正・昭和前期にまで広げ、神戸大学新聞記事文庫、および、明治以前の生まれの著者の全集類を利用した調査に基づいて、この語のとる統語パターンの上に生じた変化を3点発見した。そのような変化とこの語の意味的な特徴の変化との関連を分析した。また「可能」「不可能」についても、新たに利用可能になった帝国議会議事録を利用して、明治・大正期の用例傾向の分析を行い、明白な変化傾向を発見した。4大正期から現代までのデータを用い、漢語で形容動詞・名詞の両用法を持つものについて、その用法分布の変遷を分析するとともに、統語的に例外的な環境を分析した。帝国議会議事録・日本外交文書のコーパスとしての利用のため整備を行い、神戸大学新聞記事文庫とあわせて用いることで、明治大正期にまで分析の対象を広げることが可能になった。これにより、従来から継続しているテーマに関してもより大きな観点からの分析が可能になり、また、当初は考えていなかった新たな研究テーマの開拓が可能になった。方法的な面でも、格表示変化の現象について、意味を考慮することで型を整理する手法を開拓した。また、いわゆる品詞兼務の語(形容動詞・名詞)の性質の変遷に関して、新たな研究手法を模索している。