hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
地球表層における重金属酸素酸塩鉱物の生成機構

両山県高梁市備中町布賀鉱山産の含ホワ素脈の構成鉱物を検討し、世界で2例目となるjaquesdietrichite(含水銅ホウ酸塩)を発見した。これらは初生的に形成された銅の硫化物とスカルン化された時に多量のホウ素を含む熱水との反応により生成された二次鉱物で、同鉱山ですでに報告されているhenmilite, numanoiteと同じ過程によりできたもので、日本鉱物科学会で講演した。4中国内モンゴルのレアアース鉱床から2種類の新鉱物を発見(fluorokinoshitalite, fluorotetraferriphlogopite)し、ブタペストにおいて開催されたIMA総会で講演した。5含砒素および含燐鉱物など(erythrite, vivianite, phamacosiderite, cacoxenite)を選択し、日本地図上にプロットする簡単な万法を研究した。個々の鉱物種について、鉱山名(産地名)と緯度経度情報を入力すると、グーグル地図上にバルーン表示で示される。これで前回の5種類とあわせて9種類がプロットされることになる。1福島県郡山市中田町高倉愛宕山の超苦鉄質岩を貫く花崗岩ペグマタイト脈から産する、ウラン、トリウム、ニナブなどを含む鉱物を研究し、我が国初産となるsklodowskite(Mg(UO_2)_2Si_2O_7 6H_2O)とmasuyite(Pb(UO_2)_3O_3(OH)_2 3H_2O)と思われる種を発見した。これらのウラン二次鉱物は、oxycalciobetafite((Ca,U)_2(Ti,Nb)_2O_7)やその中に含まれているuraninite (UO_2)が分解して生成したもので、それらに含まれていたトリウムも一部が二次鉱物中に移動している。また、oxycalciobetafiteの外形を残したままthrogummite (Th(SiO_4)_<1-x>(OH)_<4x>)に変化しているがあり、これにはウランが含まれる。この産地のペグマタイトは、超苦鉄質岩を貫くため、全体的にマグネシウムに富むことが特徴で、通常このような花崗岩ペグマタイト中の電気石は鉄に富むか、ここではマグネシウムに富む。特異な花崗岩ペグマタイトの元素移動を考える上で重要な知見である。2三重県菰野町宗利谷の花崗岩ペグマタイト中のレアアースを主成分とする鉱物を研究し、rowlandite-(Y)(Y_4FeSi_4O_<14>F_2)のマグネシウム置換体とiftisite-(Y)((Y.Dy)_4(Ti,Al)(SiO_4)_2O(F,OH)_6)を発見した。前者は国際鉱物学連合に新鉱物として申請中である。また、後者はかつてロシアから新種として報告されたものの、科学組成の情報が不備であったため、国際鉱物連合では正式認定を取り消したものである。ところが、我々の研究でほぼ完璧な化学組成が明らかにされたことにより、新種としての再認定を申請する予定である。これらについては日本鉱物科学会で講演した。3岡山県高梁市備中町布賀鉱山産の含ホウ素脈の構成鉱物を検討し、新種であるshimazakiite(Ca_2B_<2-x>O_<5-3x>,x=0-0.06)を発見し、国際鉱物学連合より新種としての認定も受け、日本鉱物科学会で講演し、その研究結果を国際誌に投稿中である。4中国内モンゴルのレアアース鉱床から発見したfluorokinoshitaliteとfluorotetraferriphlogopiteの論文を、Clay Scienceで公表した。
自己充填コンクリート中の粗骨材粒子の沈降減少

自己充填コンクリートの材料・配合とモルタル中への粗骨材の沈降との関係を把握するための実験および検討を,モルタルの圧力伝達特性を左右する固体粒子の物理的特性,およびモルタルの流動性の2つの側面から行った。具体的には,モルタルのフロー値とロート流下速度と粗骨材の沈降度合いとの関係を求めた。その結果,個体間粒子間距離のみならず,高性能AE減水剤による粒子間反発力も粗骨材沈降に影響を及ぼすことが明らかとなった。最初に,フレッシュモルタルの流動性のうち,特に高性能AE減水剤による粒子分散作用のメカニズムについて,実験を行った。すなわち,高性能AE減水剤によるセメント粒子分散が,セメン粒子の凝集をほぐす作用,および粒子どうしの反発を行う2つから構成されていることを明らかにし,これが粗骨材粒子の沈降の度合に影響を及ぼしていることを見出し,新たに,粒子分散については,ブリージング量の測定,およびモルタルの初期強度試験からその違いを定量化する方法を見出した。次に,モルタル中の固体粒子の特性が沈降に及ぼす影響を把握するため,細骨材容積比を変えて流動性と粗骨材の沈降度合いとの関係を実験より求めた。細骨材容積比の大きい,すなわちフレッシュモルタルの圧力伝達特性の小さいものが,同じ流動性であっても粗骨材沈降の程度が小さいことが認められた。以上の成果を実際のコンクリートに適用することにより,粗骨材沈降,ひいてはフレッシュコンクリートの材料分離の予測が可能になると思われる。固体粒子の物理的特性については,今年度は細骨材について定量化を行った。粒子形状および粒径がフレッシュモルタルの圧力伝達特性に及ぼす影響を,粒径判定実積率および粗粒率の2つの値から見出し,定量予測する方法を開発した。次年度はさらに粉体粒子の影響,および細骨材粒子との相互作用の影響を取り扱う予定である。一方のモルタルの流動性と粗骨材沈降との関係を,固体粒子間距離および高性能AE減水剤による粒子間反発作用の影響に分けて考察し,変形性および粘性と粗骨材沈降との関係を実験により求めた。その結果,個体間粒子間距離のみならず,高性能AE減水剤による粒子間反発力も粗骨材沈降に影響を及ぼすことが明ちかとなった。次年度は,粉体粒子の物理的特性の影響も組み込んだフレッシュモルタルの圧力伝達特性が粗骨材粒子の沈降に及ぼす影響について重点的に取り扱う予定である。すなわち,モルタルを構成する固体粒子(細骨材,粉体)の物理的特性から決定される圧力伝達特性が,粗骨材が沈降する流動性の領域(=変形性と粘性の範囲)に及ぼす影響について,実験および解析を行う予定である。
DDS機能搭載型ナノファイバー足場材料の開発と再生医療への応用

近年、ES細胞をはじめとする幹細胞を用いた再生医療に対する期待が日増しに高まっており、細胞分化に適した足場材料の開発が強く求められている。しかし、このような要望に応える細胞足場材料が開発されておらず、その原因として生体内での使用が認可されている材料が限定されており、更にそれらの材料を用いての細胞の分化・誘導に適した材料表面構造の構築が既存技術で対応できないことが挙げられる。本代表者らはこれらの問題をクリアする一つのアプローチとして、電界紡糸により生体材料として認可されているポリマーを複合化することで、新しい細胞足場材料を開発した。コラーゲンは細胞接着性等の役割を担うことができるが、単独での紡糸はコストがかさみ、更に得られるファイバーシートの力学強度が低いといった問題点がある。一方、ポリ乳酸は生体適合性、生体内吸収性を示す機械的強度を有する生体材料として頻繁に用いられるが、細胞接着力に乏しい。そこで電界紡糸によりゼラチンとポリ乳酸の複合ファイバーを開発した。ゼラチンとポリ乳酸の混合溶液を紡糸することで容易に複合化を行うことができ、更に両ポリマーの特徴を活かすことで複合材料中で細胞親和性と機械的特性を両立することが可能となる。ゼラチン/ポリ乳酸複合ファイバーシート上で、対応するフィルムと比較して間葉系幹細胞は良好に接着・増殖した。また、デキサメサゾンを添加することで間葉系幹細胞が分化し、良好な骨形成が確認された。本研究では電界紡糸法を用いてゼラチン/ポリ乳酸混合ナノファイバー不織布を作製し、間葉系幹細胞(MSC)の増殖及び骨芽細胞への分化実験を行った。細胞接着性、生体吸収性などに優れた特性を持つゼラチンに、力学強度を向上させるポリ乳酸を複合化したナノファイバーは、細胞足場材料として有望である。ラットの脚の骨の骨髄から採取したMSCは種々の細胞へと分化し、デキサメサゾン(DEX)の添加によりin vitroでMSCが骨芽細胞へ分化することが報告されている。MSCを骨芽細胞にまで分化させ、in vitroで構築した骨基質を生体内に移植することによって、骨再生が期待できる。混合比率の異なるゼラチン(pI=5.0,from bovine bone)とポリ乳酸のHFIP(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-isopropanol)溶液を電界紡糸することによってゼラチン/ポリ乳酸混合ナノファイバーを作製した。紡糸は溶液濃度812w/v%、18G針、印加電圧15kV、射出速度3mL/h、集積ドラムの回転数100rpmの条件下で行った。SEM像から、直径600±300nmのナノファイバーの形成が確認でき、混合比率によるファイバー径に大きな変化は観察されなかった。1週間のMSCの増殖実験から、比較例のシートよりナノファイバー上でMSCの増殖能が高かった。DEXの添加による4週間の骨分化実験では、骨芽細胞の指標としてアルカリフォスファターゼ活性、Caならびに骨特異的蛋白であるオステオカルシンの生成量の定量から、ファイバー上で骨形成が顕著で、特に混合比50/50のファイバー上での骨分化が著しかった。これらの結果からMSCが骨芽細胞への分化過程を経て、骨形成したことがわかり、本混合ナノファイバーの骨再生医療材料としての高い潜在性を明らかにした。
精神の健康に対するセルフケア看護モデルの開発とその臨床効果に関する研究

3年度は1,2年度の研究成果をふまえて作成したセルフケア調査票及びうつ尺度を用いて、一般成人男女450名を対象に郵送法による質問紙調査を行った。また精神疾患患者のセルフケア行動(対象者34名)の調査及びセルフケア看護モデルの評価を行った。3年間の研究成果の概要を以下に示す。1.一般成人のセルフケア行動と精神の健康との関係精神の安定が保たれていないと、セルフケア行動全般が気分に影響されやすく、身体に変調をきたすことが多く、日常生活がコントロールできにくい。特に、排せつ、睡眠は状況の変化で影響を受けやすく、コントロールできにくい。特に、排せつ、睡眠は情況の変化で影響を受けやすく、コントロールできにくく、満足度も低い。また不眠になりがちであり、仕事による疲労感が強い。つきあいの頻度が少なく、ソーシャルサポートの満足度も低い。このように精神の健康状態が日常生活のセルフケア行動とどのように関係しているのかということが明らかになった。2.精神疾患患者のセルフケア行動精神疾患患者は、急性期にはほぼ全てのセルフケア行動が乱れる。その中で食事は改善しやすいが、清潔やつきあいは改善しにくく、睡眠は服薬によるコントロールが必要である。疾患別では、分裂病やアルコール依存症は食事の崩れが大きく、そううつ病では排せつがコントロールしにくい。これは、セルフケア行動が精神病理と深く拘わっていることを示すものであろう。3.セルフケア看護モデルの評価及び今後の課題セルフケア看護モデルを用いて、1ケ月に2回精神障害者の事例検討を3年間行うと共に、日常生活行動の変革実験を13人の参加者が6ケ月行った。習慣化した日常生活を修正することは認識化への抵抗や自己契約の破棄等の問題を生じることが明らかになったが、そのことと精神の力動性の関係を追求する課題が残されている。本年度は、成人男女の精神の健康状態と日常生活行動(セルフケア行動)との関係およびその影響因子としてのソーシャルサポートのはたらきについて、実態を把握するために以下のような調査研究を行った。1.日常生活行動に関する文献を収集・検討し、本研究の概念枠組を組み立てるとともに、調査によって明らかにできる側面について検討した。2.収集した文献をもとに「精神の健康度」「ソーシャルサポート」に関する測定用具を選定し、検討・考察によって本調査用に一部を修正した。3.「飲食」「排泄」「清潔や身だしなみ」「睡眠」「仕事」「家事」「レジャー」「社会活動とつきあい」の8つの柱からなる「成人のセルフケア行動に関する面接調査票」を作成し、それを用いて3回にわたり、20名を対象にPre-testを実施した。その結果、日常生活は習慣として行っている面が多くあり、日常生活と健康との関連は、あまり意識していないことが明らかになった。また、対象者にとって、本調査が日頃、意識していない自分の生活行動を再認識する機会になることが明らかになり、看護援助の方向性を見い出すことができた。Pre-testの結果をもとに調査票の一部を修正するとともに、調査の方法についての検討を行った。4.作成した調査票を用いて「フェイスシート(調査票1)」「精神の健康度の測定(調査票2,3,4)」「ソーシャルサポート調査(調査票5)」は留置法で、「成人のセルフケア行動に関する調査(調査票6)」は面接法で調査を行うことにし、昭和62年3月1日より実施した。対象は30才55才までの男女で、3月24日までに78名を終了し、現在も継続中である。5.終了した調査票のコーディングを開始するとともに、分析の枠組について検討し、結果の分析をすすめている。

これにより、本年度の研究目標はほぼ達成することができた。1.前年度に実施した男26名,女53名の「精神の健康度」「ソーシャルサポート」「セルフケア行動」に関するそれぞれの調査票のコーディングを終了し,パーソナルコンピュターを用いて集計を行った.調査票不備のため,最終的に女2名を除外し,男26名,女51名を分析の対象とした.2.日常生活行動の8領域のうち,最も重要なものとしては,仕事をもっている男女は「仕事」,主婦業の者は「家事」をあげ,次に男女とも「飲食」をあげている者が多かった.健康問題と密接に関係しているものとしては,「睡眠」「飲食」を,経済的な問題と関係しているものとしては,「仕事」「レジャー」をあげている者が多かった.この結果から, 8つの領域の関連を検討してみると,日常生活行動は「仕事」「家事」を中心に,それを支えるものとして「睡眠」「飲食」が考えられて営まれていることが明らかになった.また,「排泄」「清潔・身だしなみ」は,かなり習慣化されており,無意識になされていることが多い領域であること,これに対して「レジャー」「社会活動・つきあい」は,経済的な問題や仕事のしかたなどとの関連で,かなり意識的に制御されている領域であることが明らかになった.3.女性のなかには,日常生活行動を家族中心に考えているために,自分の意向と家族の意向とが混在し,自分自身のことが自覚できにくい者がいることが明らかになった.これについては"セルフの概念"の文化的な差異の問題として検討中である.4.本年度は「成人男女のセルフケア行動を測定する用具(調査票)」を作成し,健康な成人男女のセルフケア行動の基本的データを確立する計画であったが,「成人のセルフケア行動に関する面接調査」のコーディングと分析に時間を要したため,調査票の作成と対象者(成人男女400名)の選定作業をするに留まった.3年度は1、2年度の研究成果をふまえて作成したセルフケア調査票及びうつ尺度を用いて、成人450名を対象に郵送法による質問紙調査を行った。また精神疾患患者のセルフケア行動(対象者34名)の調査及びセルフケア看護モデルの評価を行った。研究実績の概要を以下に示す。1.一般成人のセルフケア行動と精神の健康との関係精神の安定が保たれいないと、セルフケア行動全般が気分に影響されやすくなり、日常生活のコントロールができにくくなる。それに伴い身体の変調をきたしやすい。特に排泄、睡眠のパターンがくずれ、不眠になり疲労感が強い。また、つきあいの頻度も少なくなるなど、精神の健康状態とセルフケア行動とがどう関係しているかが明らかになった。2.精神疾患患者のセルフケア行動精神疾患患者は、急性期にはほぼ全てのセルフケア行動が乱れる。その中で食事は改善しやすく、清潔やつきあいは改善しにくい。睡眠は服薬によるコントロールが必要となる。又疾患別では、分裂病やアルコール依存症は食事の崩れが大きく、躁うつ病は排泄がコントロールしにくい。セルフケア行動と精神病理との深い関連性が示唆された。3.セルフケア看護モデルの実施と評価セルフケア看護モデルを用いて、1ケ月に2回精神障害者の事例検討を3年間行うとともに、日常生活行動の変革実験を13人の参加者が6ケ月行った。
18世紀英国大衆数学・実用数学に関する総合的研究

1.17末から19世紀前半までの英国の数学愛好者は総称してphilomathとよばれるが、その総数は2-3万人であり、イングランドはもちろん、スコットランドやアイルランドにまで及ぶ。これは同時期のフランス、ドイツ、イタリアには見られない現象である。2.普及した原因はいくつかあげられる。英国では18世紀になると印刷公刊が制度的に容易になり多くの数学書が公刊され、また行商人が各地でそれを販売し、巡回講義が頻繁に行われそこで販売されたこと。海外進出に伴い航海術が盛んになり、そのための実用数学が広く要請されたこと。北部への開墾が進み、軍事的にも正確な測量術が要求されたこと。産業、商業が展開し、さまざまな計測法の実用書の需要が増大したこと。それらの実用数学を教える学校が設立され、そのための教科書が数多く印刷され、それが相乗効果になって数学愛好者が増えたこと。女性に娯楽としての数学という発想が普及し、女性にも数学が普及したこと、など。4.数学愛好者の数学は、ニュートン流の数学ではなく、もっぱら実用数学であった。5.実用数学のための数学器具がさまざま考案された。このことはフランスでも同じであるが、フランスの器具が豪華、大型、真鍮製で銘が彫られているのに対して、英国のものは小型、木製や象牙製で無名のものが多い。英国では実用器具として大衆に普及したことがわかる。17-18世紀英国ではフィロマスという数学愛好家が数多く誕生した。本研究では、まず、資料収集からはじめた。数学愛好家の利用した雑誌や著作物をマイクロフィルムで海外から収集した。また極めて珍しい現物自体も古書で入手した。ついで、それらを分析解読し、次のような方法で研究を行い、その成果は次のようになる。(1)18世紀英国の数学愛好者層の成立を、大衆文化、印刷文化、ロンドン書籍組合の利権問題、余暇の利用、そしてニュートン主義の普及などの視点から考察した。(2)大衆数学雑誌の代表格である『レディーズ・ダイアリー』の成立および発展を18世紀英国の文化・社会の文脈の中で考察し、その影響を調査し、またそこに登場するアマチュア数学者を何人か特定した。(3)『レディーズ・ダイアリー』含めて当時の大衆数学にみられる具体的数学問題を、その種類(数論、流率法など)、解法(微積分を使用かどうかなど)、作者(アマチュア、女性など)によって分類した。そしてデータベース化するために入力を行った。(4)18世紀後期から19世紀初めの英国数学を、大学ではなくウーリッジ王立軍事アカデミーなどの軍事・海軍関係の学校を中心に分析し、新しい英国数学史記述の可能性を見出した。(5)ウーリッジ王立軍事アカデミーの数学教師チャールズ・ハットンに注目し、その後の大衆数学への影響を調査した。その影響は日本にまでも及ぶことになった。(6)英国大衆数学はその後アメリカにも影響を与え、ニューヨークでも大衆雑誌『アニュアル・フィロゾフィカル・マガジン』などで数学問題が議論されたことを明らかにした。(7)この研究を通じて、何のための数学なのかという問題を文化史的に考察した。

それらの実用数学を教える学校が設立され、そのための教科書が数多く印刷され、それが相乗効果になって数学愛好者が増えたこと。女性に娯楽としての数学という発想が普及し、女性にも数学が普及したこと、など。4.数学愛好者の数学は、ニュートン流の数学ではなく、もっぱら実用数学であった。5.実用数学のための数学器具がさまざま考案された。このことはフランスでも同じであるが、フランスの器具が豪華、大型、真鍮製で銘が彫られているのに対して、英国のものは小型、木製や象牙製で無名のものが多い。英国では実用器具として大衆に普及したことがわかる。
DNA損傷と活性酸素に適応するための大腸菌遺伝子群の発現と機能

活性酸素、特に過酸化水素による細胞の損傷を防ぐための応答と、DNAの損傷に対する大腸菌の応答機構を研究して以下の結果を得た。1.過酸化水素に対する適応応答のレギュロンのアクチベ-タ-遺伝子oxyRをクロ-ニングし、全塩基配列を決定した。更にkatGタンパクが、自分自身の発現にはレプレッサ-として機能し、KatGに代表されるレギュロンの遺伝子に対してはアクチベ-タ-として機能することを証明した。OxyRタンパクを精製し、oxyR及びkatG遺伝子上の結合領域を明らかにした。2.DNAの組換え修復に関与しているruvB遺伝子と共にオペロンを形成している遺伝子ruvAの欠失株を作成して、ruvAもDNA修復に関与していることを証明した。3.RuvBタンパクを大腸菌で多量に産生させる株をつくり、このタンパクを高度に精製することに成功した。RuvBタンパクはATPとADPに結合して、弱いATPase活性をもつことがわかった。4.紫外線や多くの化学物質による突然変異の誘発に関与するumuDおよびumuC遺伝子産物の多量生産株をつくることに成功した。現在これらのタンパク質を精製する作業を進めている。5.DNA損傷によって発現が誘導されるが機能がわかっていないdinA遺伝子をクロ-ニングした。現在その遺伝子の塩基配列の決定と、機能を研究している。
核、ミトコンドリア、ペルオキシソーム蛋白質局在化の分子機構

吉田:ラットミトコンドリア外膜と内膜のコンタクトサイトに存在し、マトリックス、外膜、膜間腔そして恐らくは内膜の蛋白質の輸送装置の一員である29kDa蛋白質のcDNAをクローニングした。その塩基配列の解析から本蛋白質はミトコンドリア蛋白質特有のプレ配列を有していることが判明した。森:動物におけるタンパク質のミトコンドリア移行におけるサイトソルのHsp70の役割を解析した。Hsp70ファミリーのうちHsc70が関与しており、前駆体タンパク質の膜透過の段階には必ずしも必要ではなく、合成途上の前駆体に結合して膜透過可能な状態に保つことが明らかとなった。伊藤:シトクロムb5の小胞体局在化にC端部での電荷数が、定着に膜挿入部の後半が関与していること、ミトコンドリアプロセシングペプチダーゼの基質認識に必要な共通構造として、切断部位から近位及び遠位に塩基性アミノ酸、、両者の間にグリシンやプロリンが存在することが必要であること、が解った。長谷:非光合成型のプラスチド蛋白質の葉緑体への輸送過程はストロマの酸化還元状態により調節されており、光照射下の還元状態では前駆体のままで蓄積することを明らかにした。また、この輸送経路は光合成型蛋白質とは異なることを、延長ペプチド領域の合成ペプチドを用いた輸送競合実験で示した。橋本:ペルオキシソーム膜タンパク質の局在化機構を明らかにするために、ペルオキシソームの内在性膜タンパク質の2つのABC輸送体ALDPとPMP70に関して、試験管内での膜へのインポート系を確立した。この系を用い、ALDPの種々の欠失変異体の膜へのインサーションを検討したところ、N-末端側の疎水性の領域が必要であることが明らかとなった。米田:核蛋白質輸送の最初のステップにおいて、核蛋白質を中心にして大きな複合体が細胞質で形成されて核膜にまで運ばれることを明らかにした。その複合体を構成する4つの因子のうち、必須の働きをする2つの因子について、蛋白質の完全精製に成功し、その部分アミノ酸配列から遺伝子クローニングした結果、1つは未知の分子であることがわかった。遠藤:アカパンカビMOM22のホモログとして、酵母ミトコンドリアでタンパク質の外膜透過に関与するMAS17を同定した。また、エンドウにおいてSecAホモログ遺伝子を同定し、その発現産物が葉緑体内部でタンパク質のチラコイドへの輸送に関与していることを証明した。吉田は、ミトコンドリアの膜間腔蛋白質前駆体のプレ配列には、細胞外分泌蛋白質一般に共通する特徴があることから、内膜にはラットのプレプロアルブミンを輸送する装置があると推定し実験を行った。その結果、内膜にはマトリックス側から膜間腔側へのみ一方的に輸送する装置があり、この装置が膜間腔蛋白質の輸送に重要な働きを持つ可能性を示した。橋本は、ペルオキシソーム主要蛋白であるカタラーゼの局在化シグナルを同定するために、ラット肝カタラーゼ遺伝子を導入したワクシニアウイルスを日本型無カタラーゼ血症患者皮膚繊維芽細胞に感染させ、発現したラット肝カタラーゼがペルオキシソームに局在していることを、イムノブロット法及び蛍光抗体法で確認した。伊藤は、シグナル認識粒子非依存・受容体依存経路による小胞体(シトクロムb_5)とミトコンドリア外膜(外膜シトクロムb、モノアミン酸化酵素)タンパク質の局在化シグナルはいずれもカルボキシ末端部に存在し、前者では特定のアミノ酸の並びではなく全体の構造が関与しているらしいが、後者では塩基性アミノ酸の存在が必須であることを明らかにした。森は、PBF(presequence binding factor)はオルニチントランスカルバミラーゼ前駆体を含む一群のタンパク質のミトコンドリア移行を促進するサイトソル因子であり、精製PBFの部分アミノ酸配列に基づいて合成したオリゴヌクレオチドをプローブとしてcDNAライブラリーをスクリーニングし、PBFcDNAをクローン化した。米田は、semi-intact細胞を用いたin vitro系において、hsc70が核タンパク質輸送に必要であることを明らかにした。また、この系を利用して、hsc70が核タンパク質と挙動をともにして核内にまで移行する可能性を示唆した。これとは別に核局在化シグナルを含む合成ペプチドで特異的に活性化されるキナーゼの存在を明らかにした。吉田:ミトコンドリア外膜と内膜のコンタクトサイトに存在し、マトリックスや膜間腔蛋白質の輸送装置の一員である29kDa蛋白質の抗体は、ポリンの輸送定着をも阻害した。従って、本輸送装置は外膜蛋白質の輸送にとっても必須であることが知られた。森:前駆体蛋白質のミトコンドリア移行を促進するサイトソル因子を大腸菌に発現させ、精製し、抗体作成と機能解析を進めている。更に、hps70が輸送に必要であることをin vitroの系で証明した。伊藤:シトクロムb5の部分融合蛋白質の細胞内分布の解析から、b5の小胞体残留シグナルは、膜挿入部に存在することが分かった。ミトコンドリアプロセシングペプチダーゼの基質認識機構を合成ペプチドを用いて解析し、-2位のアルギニン残基が必須であることを示した。長谷:非光合成型フェレドキシンの光エネルギー依存の葉緑体移行過程において、前駆体分子の大部分は膜透過しているが延長ペプチドの切断は受けていない中間状態の存在、を見い出した。この状態は、暗所でのATP依存の過程では検出されない新規なものである。

橋本:カタラーゼのペルオキシソームへの局在化機構を、変異体タンパク質を無カタラーゼ血症患者細胞内で発現させることにより検討した。局在化シグナルは他のマトリックス酵素と異なりペプチド内部に存在していた。また、ヘムの結合および、4量体形成はペルオキシソーム内で起こることを示唆する結果を得た。米田:セミインタクト細胞を用いたin vitro系において、精製核蛋白質であるヌクレオプラスミンが尿素処理してはじめて効率良く核内に移行することが明らかとなり、その移行効率にhsc70が関与していることを証明した。また、このin vitro系を利用して、hsc70以外の核蛋白質輸送に必要な因子の精製を進め、その候補分子を複数見つけている。吉田:ラットミトコンドリア外膜と内膜のコンタクトサイトに存在し、マトリックス、外膜、膜間腔そして恐らくは内膜の蛋白質の輸送装置の一員である29kDa蛋白質のcDNAをクローニングした。その塩基配列の解析から本蛋白質はミトコンドリア蛋白質特有のプレ配列を有していることが判明した。森:動物におけるタンパク質のミトコンドリア移行におけるサイトソルのHsp70の役割を解析した。Hsp70ファミリーのうちHsc70が関与しており、前駆体タンパク質の膜透過の段階には必ずしも必要ではなく、合成途上の前駆体に結合して膜透過可能な状態に保つことが明らかとなった。伊藤:シトクロムb5の小胞体局在化にC端部での電荷数が、定着に膜挿入部の後半が関与していること、ミトコンドリアプロセシングペプチダーゼの基質認識に必要な共通構造として、切断部位から近位及び遠位に塩基性アミノ酸、、両者の間にグリシンやプロリンが存在することが必要であること、が解った。長谷:非光合成型のプラスチド蛋白質の葉緑体への輸送過程はストロマの酸化還元状態により調節されており、光照射下の還元状態では前駆体のままで蓄積することを明らかにした。また、この輸送経路は光合成型蛋白質とは異なることを、延長ペプチド領域の合成ペプチドを用いた輸送競合実験で示した。橋本:ペルオキシソーム膜タンパク質の局在化機構を明らかにするために、ペルオキシソームの内在性膜タンパク質の2つのABC輸送体ALDPとPMP70に関して、試験管内での膜へのインポート系を確立した。この系を用い、ALDPの種々の欠失変異体の膜へのインサーションを検討したところ、N-末端側の疎水性の領域が必要であることが明らかとなった。米田:核蛋白質輸送の最初のステップにおいて、核蛋白質を中心にして大きな複合体が細胞質で形成されて核膜にまで運ばれることを明らかにした。その複合体を構成する4つの因子のうち、必須の働きをする2つの因子について、蛋白質の完全精製に成功し、その部分アミノ酸配列から遺伝子クローニングした結果、1つは未知の分子であることがわかった。遠藤:アカパンカビMOM22のホモログとして、酵母ミトコンドリアでタンパク質の外膜透過に関与するMAS17を同定した。また、エンドウにおいてSecAホモログ遺伝子を同定し、その発現産物が葉緑体内部でタンパク質のチラコイドへの輸送に関与していることを証明した。
ソフト油圧ロボティクスによるヒューマノイドの手足の実現

やわらかいロボットを作る方法は「ロボットの構造をやわらかい材料で作る方法」と「関節のアクチュエータをやわらかくする方法」に大別される。後者について、これまでに油圧アクチュエータを用いた等身大ヒューマノイドを開発してきた。やわらかさ/硬さを変化させられる関節駆動機構が実現した一方、ロボットの手や足部などを「構造をやわらかい材料で作る」ことで接触の安定性を向上させることが期待できる。本研究課題では、やわらかい弾性体に基づくソフトロボティクスの方法論に油圧アクチュエータとそれを用いたヒューマノイドの制御を結びつけることにより、やわらかさと力制御性を両立する新しいヒューマノイドの開発を目指す。
筋芽細胞最終分化における小胞体ストレス応答シグナルの役割

マウス筋芽細胞株において活性化型ATF6を強制発現させると、活性化型ATF6は核に局在し、筋芽細胞のアポトーシスを引き起こした。活性化型ATF6の効果はその転写調節活性に依存しており、ATF6によってその発現が上昇するWWドメイン結合タンパク質1(WBP1)がアポトーシス誘導活性を持つことが分かった。WBP1の発現上昇はアポトーシス抑制タンパク質Mcl-1を特異的に減少させ、アポトーシスを誘導することが示された。これらの現象は小胞体ストレス誘導剤による筋芽細胞のアポトーシスにおいても再現された。哺乳類骨格筋形成の最終分化過程では筋芽細胞の融合による筋繊維形成が起こる一方で、多くの筋芽細胞は筋繊維形成に加わることなくアポトーシスを起こして消滅していく。一般に分化過程に伴うアポトーシスは不要細胞の除去のために起こると理解される場合が多いが、筋繊維形成と同時に起こるアポトーシスがどのような意義を持つのかは不明である上、これが起こる仕組みも明らかではない。私たちは筋芽細胞最終分化過程に小胞体ストレスが関与していることを見出し、小胞体ストレス応答システムに焦点を当ててアポトーシスが起こる意義やその制御機構を明らかにしていくことを目指している。この応答には、小胞体ストレスの存在下で小胞体ストレスセンサーから転写因子に変換するATF6が関わることから、転写因子型ATF6による転写調節がアポトーシスの引き金になる可能性を検討した。マウス筋芽細胞株において転写因子型ATF6を強制発現させる条件を確立し、細胞の生死に与える影響を解析した。転写因子型ATF6は核に局在し、筋芽細胞の細胞死を引き起こした。このとき小胞体上ではカスパーゼ12が活性化し、さらにエフェクター型カスパーゼが活性化してタンパク質の切断を起こしていることを確認した。Bcl-xLの共発現はこのATF6依存性の細胞死を抑制した。これらの結果はここで見られる細胞死がアポトーシスであること、カスパーゼファミリーとBcl-2ファミリーによってそれぞれ正負に制御されていることを示唆する。転写因子型ATF6の転写活性を抑制する優性阻害性ATF6断片を共発現させるとアポトーシスが阻害されることから、転写因子型ATF6のアポトーシス誘導活性はその転写調節機能に依存していることが示唆された。私たちは筋芽細胞最終分化過程に小胞体ストレスが関与していることを見出し、小胞体ストレス応答システムに焦点を当ててこの過程の制御機構を明らかにしていくことを目指している。この応答には小胞体ストレスセンサーであり転写因子でもあるATF6の活性化型が関わることを既に明らかにした。本年度は活性化型ATF6がその転写活性調節能によってアポトーシスを起こすことを確認し、活性化型ATF6によって発現が誘導される遺伝子の中にアポトーシスの引き金となる可能性を持つものを見出した。マウス筋芽細胞株において活性化型ATF6を強制発現させると活性化型ATF6は核に局在し、筋芽細胞のアポトーシスを引き起こした。活性化型ATF6の働きによって発現が誘導される遺伝子の探索をDNAマイクロアレイ解析によって行ない、発現誘導が顕著な44遺伝子を同定した。44遺伝子の中には細胞防御に関わることが知られているものが含まれていたが、それ以外の機能未知の遺伝子を選んで筋芽細胞に発現させ、細胞死を引き起こす能力を持つものを一つ見出した。この遺伝子の発現誘導とアポトーシス制御、実行因子群の挙動との関わりについて検討を開始した。哺乳類骨格筋形成の最終分化過程では筋芽細胞の融合による筋繊維形成が起こる一方で、一部の筋芽細胞は筋繊維形成に加わることなくアポトーシスを起こして消滅していく。私たちは以前、筋繊維形成とアポトーシスの両過程に小胞体ストレス応答が関与していることを見出した。この応答には小胞体ストレスセンサーであり転写因子でもあるATF6の活性化が重要であることを示唆するデータを得ている。今年度は、ATF6がどのようにして細胞のアポトーシスを起こすのかという点に焦点を当てて研究を実施し、ATF6によって誘導されるタンパク質がアポトーシス制御タンパク質の量的変動を介してアポトーシスを誘導することを見出した。マウス筋芽細胞株において活性化型ATF6を強制発現させると活性化型ATF6は核に局在し、筋芽細胞のアポトーシスを引き起こす。このとき活性化型ATF6の働きによって発現が誘導される遺伝子の探索をDNAマイクロアレイ解析によって行ない、発現誘導が顕著な44遺伝子を同定した。この44

遺伝子に含まれるWWドメイン結合タンパク質1(WBP1)遺伝子の産物が筋芽細胞においてアポトーシス誘導活性を示すことが分かった。WBP1の細胞内機能はこれまで解明されていない。活性化型ATF6はWBP1の転写を2.5倍以上増加させた。WBP1タンパク質は生細胞中ではウエスタンブロットによる検出限界程度しか存在しないが、活性化型ATF6の強制発現や小胞体ストレス誘導剤によってアポトーシスが引き起こされるときに顕著に増加した。従って、小胞体ストレスによって活性化されるATF6はWBP1の発現誘導を介してアポトーシスを起こすことが示唆された。また、WBP1の出現に依存してアポトーシス抑制タンパク質であるMcl-1が特異的に消失することから、Mcl-1レベルの低下がアポトーシスの開始にとって決定的であることも示唆された。
ES細胞のDNAメチル化プロファイル制御機構の解明

ES、iPS細胞を代表とする分化多能性幹細胞と分化多能性を持たない体細胞との違いは、「同じゲノムからどの情報を使うか」が異なっていることに起因する。この違いを規定するのが、細胞ごとのエピジェネティック情報である。今後、分化多能性細胞を利用した再生医療の基礎情報として、分化多能性細胞と体細胞のエピジェネティック情報の違いを明らかにすることは重要である。本年度は、ES細胞、体細胞を用いて、染色体全域を対象としたDNAメチル化解析を行い、ES細胞でのみメチル化状態の異なるゲノム領域の特徴を明らかにすることを目的とした。染色体上におけるES細胞特異的なメチル化修飾の分布遺伝子領域だけでなく遺伝子間領域にもES細胞特異的なメチル化修飾を受ける領域があることが明らかになった。これらのメチル化修飾は、遺伝子領域では遺伝子発現・ヒストン修飾と相関が認められ、遺伝子の発現制御に関与することが示唆された。また、遺伝子間領域のES細胞特異的なメチル化修飾も、ヒストン修飾と相関を示し、エンハンサーとして機能することが考えられた。ES細胞で特異的にメチル化修飾を受けない(非メチル化)領域の特徴ES細胞特異的な非メチル化領域は、染色体上のSINE配列(トランスポゾンの一種)が多く分布する領域に集中して存在する傾向を持つことが分かった。これらの領域には、ES細胞において転写が活発な領域にみられるヒストン修飾が認められた。また核膜との相互作用頻度の解析から、ES細胞特異的な非メチル化領域は、分化細胞に較べES細胞において核の内部に位置していることが分かった。興味深いことに、これらのヒストン修飾と核内位置の傾向は、SINE配列が多い領域に存在するES細胞特異的な非メチル化領域ほど顕著であった。これらの結果は、染色体の配列構造とES細胞特異的なエピジェノム情報の間に相関関係があることを意味している。近年の人工多能性幹(iPS)細胞の樹立以後、胚性幹(ES)細胞に代表される分化多能性細胞が大きく関心を集めている。そのなかで、分化多能性細胞のエピジェネティック情報の重要性が浮かび上がってきた。DNAメチル化修飾については、ES細胞は特有のメチル化プロファイルを持つこと、Oct4やNaongなどの分化多能性に必須な遺伝子がメチル化による発現制御を受けることが明らかにされていることから、ES細胞のメチル化プロファイルはES細胞の性質を規定する重要な情報であると考えられている。しかし、網羅的な解析手法が存在しなかったために、分化多能性細胞のメチル化プロファイルの情報は限られており、その制御機構の解明は進んでいない。本年度は、ES細胞に特有のメチル化状態を示すゲノム領域を網羅的に同定することを目標とした。分化多能性細胞のメチル化プロファイルの応用を考え、iPS細胞を解析対象に加えた。ES細胞、iPS細胞、体細胞(肝臓)を用いて、全ゲノム領域を対象とした網羅的なメチル化解析を行った。その結果、数千ものゲノム領域が、分化多能性細胞に固有のメチル化状態を示すことが明らかになった。分化多能性の維持に必須な遺伝子が存在するゲノム領域に着目し、メチル化状態と他のエピジェネティック修飾状況との関係を調べたところ、分化多能性細胞で固有のメチル化状態を示す領域は、ヒストン修飾、ノンコーディングRNAの発現も分化多能性細胞に特有であることが明らかになった。興味深いことに、これらの領域の中には、iPS細胞では、エピジェネティック修飾状態がES細胞と異なるものが存在した。
マクロフアージ.破骨細胞を標的にした関節リウマチの新たな治療法の開発

サイトカインのシグナル抑制分子であるSOCS1およびSOCS3は破骨細胞分化においてRANKLの刺激によって発現誘導されることが知られているがその役割は不明であった。SOCS1についてはIFNg-/-マウス、SOCS1-/-IFNγ-/-マウス由来の骨髄マクロファージをM-CSFとRANKLで破骨細胞へと分化させた。その際IFNγを投与し分化抑制効果を比較したところ後者においてより低濃度のIFNγで分化抑制を認めた。更に野生型骨髄マクロファージにレトロウイルスベクターを用いてSOCS1を強発現させるとIFNγによる分化抑制を免れた。SOCS1+/+マウスとSOCS1+/-マウスでLPS頭蓋注を行い骨破壊度を比較したところ後者において骨破壊の程度が弱かった。次にSOCS3がマクロファージ系の細胞で特異的に欠損したマウスを用いて実験を行った。野生型骨髄細胞をMCSF,RANKLおよびIL6の存在下で培養したところ高濃度のIL6は破骨細胞の分化を抑制したが低濃度のIL6は破骨細胞分化をむしろ促進した。一方SOCS3欠損骨髄前駆細胞を同様に培養したところ低濃度でもIL6は破骨細胞の分化を抑制した。双方の骨髄前駆細胞をRANKLで刺激するとIkBのリン酸化を認めた。野生型前駆細胞では、IL6の投与はIκBのリン酸化には影響がほとんどないのに対し、SOCS3欠損前駆細胞ではIL6の存在下ではIκBのリン酸化が強力に抑えられていた。更に、SOCS3欠損前駆細胞ではIL6刺激によるSTAT1及びSTAT3のリン酸化が野生型前期細胞と比べ遷延していた。以上の結果より、炎症性骨破壊時に未熟な単球、マクロファージが破骨細胞系譜に分化していく際、IFNgの存在下でもその分化抑制を免れるのにSOCS1を発現することが重要であることが示された。またSOCS3の発現により破骨細胞前駆細胞はIL6による破骨細胞分化抑抑制を免れていると考えられた。野生型骨髄細胞をMCSF, RANKLおよびIL6の存在下で培養したところ高濃度のIL6は破骨細胞の分化を抑制したが低濃度のIL6は破骨細胞分化をむしろ促進した。更にSOCS3欠損前駆細胞ではIL6刺激によるSTAT1及びSTAT3のリン酸化が野生型前期細胞と比べ遷延していた。以上の結果より炎症性骨破壊時に未熟な単球、マクロファージが破骨細胞系譜に分化していく際、IFNgの存在下でもその分化抑制を免れるのにSOCS1を発現することが重要であると思われた。

野生型前駆細胞では、IL6の投与はIκBのリン酸化には影響がほとんどないのに対し、SOCS3欠損前駆細胞ではIL6の存在下ではIκBのリン酸化が強力に抑えられていた。更に、SOCS3欠損前駆細胞ではIL6刺激によるSTAT1及びSTAT3のリン酸化が野生型前期細胞と比べ遷延していた。以上の結果より、炎症性骨破壊時に未熟な単球、マクロファージが破骨細胞系譜に分化していく際、IFNgの存在下でもその分化抑制を免れるのにSOCS1を発現することが重要であることが示された。またSOCS3の発現により破骨細胞前駆細胞はIL6による破骨細胞分化抑抑制を免れていると考えられた。
胎児脊髄移植による神経再構築の実験的研究

生後約68週,体重150250gのS-D系ラットの坐骨神経を切断し,その末梢部神経約20mmを切除した。神経末梢側中枢端に約10mmの自家大腿動脈を盲管として縫着し,その内部に胎生14日目の胎児脊髄を注入した。術後約3か月で移植部末梢を電気刺激すると、全例において前脛骨筋と腓腹筋の誘発筋電図が確認できた。また、脊髄移植ラットに対して術側の前脛骨筋と腓腹筋にCTB0.5mgを蒸留水100μlに溶解したものをmicrosyringeでそれぞれ50μlずつ注入した。約48時間後,経心臓的に0.01M phosphate bufferにて潅流後1.0%paraformaldehyde,1.25%glutaraldehydeを含む0.1M phosphate bufferにて固定した。移植部を摘出後,凍結しcryostatで13μmの薄切切片を作成し,B励起にて落射式蛍光顕微鏡で観察した。蛍光標識にてcryostatで13μmの薄切切片を作成し,B励起にて落射式蛍光顕微鏡で観察した。この神経細胞は楕円体型および多角体型を呈していた。一方CTB非注入ラットには同様の蛍光を一切認めなかった。CTB注入群,CTB非注入群,各群内で個々の所見は同等であった。in vitroにてfetal spinal neuronとmuscle fiberの再結合による新たなneuromuscular junction形成の報告はあるが,これまでin vivoにて移植された脊髄神経細胞が機能的再建に貢献したという報告はない。筋に投与された蛍光標識物質が軸索流によって逆行性に移植部細胞に取り込まれたことより,筋と移植部神経細胞間に直接の線維連絡が証明された。この神経細胞は,移植した胎児脊髄にはdorsal root gangliaおよびsympathetic gangliaを含まないことと,muscleとneuromuscular junctionを形成したことよりanterior horn motoneuronまたはpreganglionic sympathetic neuron[1]であることが考えられる。今後の展望としてはいかにこの運動単位をcontrolするかであるが,電気的刺激や化学的刺激により興奮させることが考えられる。以上より末梢神経レベルで静脈を用いた盲管を作成することにより神経断端に位置する脊髄神経細胞から再生した軸索が脱神経筋を再支配したと考えられる。すなわちこの手法により運動単位再建が成功したといえる。神経末梢側中枢端に約10mmの自家大腿静脈を盲管として縫着し,その内部に胎生14日目の胎児脊髄を注入した。約48時間後,経

心臓的に0.01M phosphate bufferにて潅流後1.0%paraformaldehyde,1.25%glutaraldehydeを含む0.1M phosphate bufferにて固定した。移植部を摘出後,凍結しcryostatで13μmの薄切切片を作成し,B励起にて落射式蛍光顕微鏡で観察した。蛍光標識にてCTB注入ラットの移植部にB励起により緑色の蛍光を発する神経細胞を認めた。この神経細胞は楕円体型および多角体型を呈していた。一方CTB非注入ラットには同様の蛍光を一切認めなかった。CTB注入群,CTB非注入群,各群内で個々の所見は同等であった。in vitroにてfetal spinal neuronとmuscle fiberの再結合による新たなneuromuscular junction形成の報告はあるが,これまでin vivoにて移植された脊髄神経細胞が機能的再建に貢献したという報告はない。筋に投与された蛍光標識物質が軸索流によって逆行性に移植部細胞に取り込まれたことにより,筋と移植部神経細胞間に直接の線維連結が証明された。この神経細胞は,移植した胎児脊髄にはdorsal root gangliaおよびsympathetic gangliaを含まないことと,muscleとneuromuscular junctionを形成したことよりanterior horn motoneuronまたはpreganglionic sympathetic neuron[1]であることが考えられる。今後の展望としてはいかにこの運動単位をcontrolするかであるが,電気的刺激や化学的刺激により興奮させることが考えられる。以上より末梢神経レベルで静脈を用いた盲管を作成することにより神経断端に位置する脊髄神経細胞から再生した軸索が脱神経筋を再支配したと考えられる。すなわちこの手法により運動単位再建が成功したといえる。生後約68週,体重150250gのS-D系ラットの坐骨神経を切断し,その末梢部神経約20mmを切除した。神経末梢側中枢端に約10mmの自家大腿静脈を盲管として縫着し,その内部に胎生14日目の胎児脊髄を注入した。術後約3か月で移植部末梢を電気刺激すると、全例において前脛骨筋と腓腹筋の誘発筋電図が確認できた。また、脊髄移植ラットに対して術側の前脛骨筋と腓腹筋にCTB0.5mgを蒸留水100μlに溶解したものをmicrosyringeでそれぞれ50μlずつ注入した。約48時間後,経心臓的に0.01M phosphate bufferにて潅流後1.0%paraformaldehyde,1.25%glutaraldehydeを含む0.1M phosphate bufferにて固定した。
保護基フリー液相セグメント連結法によるＡＤＰリボシル化ペプチド高効率合成

アデノシン二リン酸(ADP)リボシル化はタンパク質の翻訳後修飾であり、様々な生命現象に関与していることが細胞の発現レベルで明らかになってきた。しかしながら、研究試料となるADPリボシル化分子の精密化学合成法が確立されていないため、それらメカニズムは分子レベルで未だ解明されていない。そこで本研究では、ADPリボースを中心に捉えた生命現象メカニズムの分子レベル解明を可能にするため、ADPリボシル化分子の高効率合成に挑戦する。本研究の標的分子をADPリボースがアスパラギンおよびグルタミン側鎖にα結合したN-アミドグリコシド型(N結合型)ADPリボシル化ペプチドに設定した。標的分子の高効率合成を達成するため、効率的なADP骨格構築およびペプチド鎖の直接的かつ立体選択的なADPリボシル化を達成できる、二つの保護基フリー液相セグメント連結法を確立する。これにより、保護基を必要としない斬新なADPリボシル化分子の合成戦略が開拓される。本研究目的を達成すれば、N結合型ADPリボシル化修飾を受ける生体内タンパク質、例えば、細胞内シグナル伝達のダイナミック制御に関わる低分子Gタンパク質Rhoファミリーの機能解明に貢献できる。加えて、天然型だけでなく、非天然型のN結合型ADPリボシル化ペプチドを供給できるため、ADPリボース結合タンパク質の分子認識能解析にも貢献できる。平成30年度は、効率的なADP骨格構築を達成する新規リン酸活性化剤の開発を試みた。当初予定していた通り、以下の3項目を実施した。(1)対陰イオンの交換によるImIm塩の水に対する安定性の変化:申請者が過去に報告したリン酸活性化剤(ImIm-Cl: Angew. Chem. Int. Ed. 2012)の対陰イオンを塩化物イオンから他の陰イオンへ交換したところ、対陰イオンの種類により加水分解耐性に大きな違いが確認できた。(2)置換基導入によるImIm塩の水に対する安定性の変化:置換基を導入したImIm塩を各種調製し、NMRによる重水存在下での加水分解率を調べた。無置換のImIm塩と比較して、加水分解耐性が著しく向上した置換基導入型ImIm塩を見出した。(3)置換基導入型ImIm塩を用いたADPリボースの無保護合成:上述で見出した置換基導入型ImIm塩を用いてAMP無保護体のリン基を活性し、5位リン酸化リボース無保護体との縮合反応を行った。円滑にピロリン酸結合形成が進行し、中程度の収率で目的とするADPリボース合成を達成した。以下の2項目を実施する。(1)効率的なADP骨格形成を達成する新規リン酸活性化剤の開発:平成30年度の結果を基にファインチューニングした新規リン酸活性化剤を創製し、効率的なADP骨格形成が達成できるかを検証する。(2)無保護ADPリボシル化の開発:ADPリボース無保護体を直接ぺプチドへ導入する革新的なセグメント連結法を開発する。今年度はアスパラギン酸およびグルタミン酸を基質として検討を行う。

円滑にピロリン酸結合形成が進行し、中程度の収率で目的とするADPリボース合成を達成した。以下の2項目を実施する。(1)効率的なADP骨格形成を達成する新規リン酸活性化剤の開発:平成30年度の結果を基にファインチューニングした新規リン酸活性化剤を創製し、効率的なADP骨格形成が達成できるかを検証する。(2)無保護ADPリボシル化の開発:ADPリボース無保護体を直接ぺプチドへ導入する革新的なセグメント連結法を開発する。今年度はアスパラギン酸およびグルタミン酸を基質として検討を行う。使用するはずであったHPLCが不調で再現性のあるデータが得られなかったため、平成30年度に計上していたHPLC関連物品の購入を控えた。そのため、次年度繰越金が生じた。今年度はメーカーによる調整でHPLCを使用できる状態にし、予定していた関連物品の購入を進める。