hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
先天多発奇形におけるDNA複製酵素遺伝子およびホメオティック遺伝子の解析

heterozygosityの頻度は健康人では53%であるのに対して、重要先天奇形では7%であった。この結果は染色体2q33ー35にマップされるγークリスタリン遺伝子と連鎖する先天奇形関連遺伝子の存在を示唆している。以上のことから重度先天奇形には、DNA合成酵素の遺伝子異常と関連する症例とホメオボックスあるいはその近傍の遺伝子異常と連鎖していると推測される症例とがあると考えられた。1.DNAポリメラ-ゼδ補助蛋白(PCNA)とホメオボックス蛋白に関する研究:我々がクロ-ニングしたラットPCNAのcDNAをプロ-ブにして高等植物のイネのPCNA遺伝子をクロ-ニングし、そのアミノ酸配列が動植物界でよく保存されていることを証明した。さらにショウジョウバウのPCNA遺伝子をクロ-ニングし、大腸菌で産生させたショウジョウバエのホメオボックス蛋白(eve,zen)と反応させ、DNaseーI footprint法で解析したところ、5'上流の三つの領域にこれらの蛋白が結合することが証明された。この成果をヒトに応用する目的でヒトのPCNAおよびホメオボックス4A遺伝子をクロ-ニングした。2.先天奇形におけるDNA複製遺伝子およびホメオボックス(Hox)遺伝子の異常に関する研究:重症先天奇形15例のDNAにおいてPCNA、DNAポリメラ-ゼαおよびβ遺伝子の遺伝子異常を検索した。DNAを10種類以上の制限酵素で消化してそれぞれをサザンブロット解析を行なった結果、PCNA、DNAポリメラ-ゼβおよびα遺伝子の対立遺伝子の一方に異常のある先天奇形の1症例を見出した。健常人95例中の1例にDNAポリメラ-ゼβとγークリスタリン遺伝子に異常のある1例を見出した。次にDNAを10種類の制限酵素で消化して、Hox4AとHox4Bプロ-ブでサザンブロット解析を行なったが異常なバンドも多型性も全く検出されなかった。Hox4の近傍の多型性DNAマ-カ-(γークリスタリン遺伝子)をプロ-ブとして、先天奇形15例と健常人95例をPstI消化のDNAについて検索した。正常DNAでは2.1kbと1.7kbのヘテロ接合性のバンドの頻度は53%で、1.7kbのホモ接合性のバンドの頻度は27%であるのに対し、重症先天奇形ではそれぞれ7%と73%であった。この結果は重症先天奇形の遺伝子座がγークリスタリンの遺伝子座と連鎖していることを示していると考えられる。
胚の操作技術を用いたSCIDマウスの生産供給システムの開発に関する研究

平成3年度の本研究は、主にSCIDマウスの特性と有用性について検討した。特性については、平成2年5月生まれのCB-17-scid(SCID)♀13匹と♂124匹、CB-17♀114匹と♂111匹をSPF飼育環境下で長期飼育し、その生存日数ならびに総免疫グロブリン量を定期的に調べた。4年3月現在(22カ月齢)、SCID♀72匹(55.0%)♂79匹(63.7%)、CB-17♀28匹(24.6%)♂32匹(28.8%)が死亡し、死亡率はSCIDが♀♂共にCB-17を大きく上回った。死亡個体の剖検ではSCIDにはリンパ腫または胸腺腫の認められるものが多く、SCIDマウスの特性である免疫不全によるものと推察された。また生後2カ月と3カ月、以後3カ月毎に血清中のIgG、IgA、IgM量を測定しこれらを合わせて総免疫グロブリン量とした。SCIDでは総免疫グロブリン量が月齢と共に増加する傾向が認められた。SCIDの指標となる5μg/ml以下の個体は、2カ月齢では♀99.24%、♂99.21%であったが、21カ月齢の検査では♀0.76%、♂7.92%となり、今後検討すべき問題となった。有用性については、ヒト腫瘍の初代移植成績をヌ-ドマウスと比較した。同じ腫瘍を移植した140例についてみると、生着率はヌ-ドマウスが14/140(10.0%)であるのに対し、SCIDマウスは26/140(18.6%)と高かった。また正常組織であるヒト皮膚の移植を試みたところ、ヌ-ドマウスに比べて極めて良く生着することが確認された。以上のことからSCIDマウスは腫瘍学のみならず皮膚科学にも有用であることが期待された。SCIDマウスの改良については、既存近交系ならびにミュ-タント系へのscid遺伝子の導入をcross-intercrossによる戻し交配により行っている。現在、BALB/cA-scid、BALB/cA-scid nu、BALB/cA-scid bgがいずれもN5に達し、特性の検査に用いるまでに至っている。これらの検討は、本研究で確立した生産・供給システムによって生産されたSCIDマウスを用いて行われた。平成元年度は、本研究の基礎となるSCIDマウスの確保(繁殖)に努めた。主な研究経過(成果)は以下のようである。1.生産、供給システムの研究SCIDマウスは複合免疫不全を呈するため、感染症に弱く極めて繁殖力が悪いものと予想された。平成元年度、我々はビニ-ルアイソレ-タを用い、無菌飼育技術ならびに体外受精技術を応用して静浄化を試みたところ比較的すみやかに清浄化(カリニ肺炎の排除)することができた。この清浄SCIDマウスを基に、大型ビニ-ルアイソレ-タ内で繁殖したところ、カリニ肺炎を排除したためか、繁殖力は通常マウスと同等であった。そして年度末には基礎となるSICDマウスの繁殖群(月産100以上)を確立した。2.品質検査方法の研究従来の実験動物モニタリング検査によりSCIDマウスの遺伝子プロファイルを作成した。また、前述の微生物的清浄度に伴いSCIDマウスの清浄度を確認した。そして、これら成績を基に、維持並びに繁殖群の定期的モニタリングを開始した。また、SCIDマウスの最も重要な特性である総Ig量については、維持、繁殖群の総Ig量を確認するとともに大量生産の対応した測定方法について検討しその方式を確立した。現在、繁殖群に応用している。3.特性と有用性の検討1、2で生産されたSCIDマウスを班員ならびに協力者へ頒布し基礎的研究に着手した。平成2年度は、本研究の主たる目的である凍結保存胚からSCIDマウスを生産供給するシステムを作る為に、清浄の高い胚移植用クリ-ンル-ムを作製した。また、前年度帝王切開・里仔法によりP.cariniiを排除したSCIDマウスによるベ-スライン・デ-タの作成を試みた。主な研究経過(成績)は以下のようである。清浄度の高い胚移植用クリ-ンル-ムに関しては、凍結保存胚を個体まで戻す場合凍結胚の融解・胚移植等の操作は、通常コンベンショナルな環境で行れる。微生物的清浄なSPFの個体を得るには、仮親の出産直前に無菌的帝王切開による胎仔を摘出、無菌又はSPFの里親に里仔し育成する方法を採っている。この方法では里親の準備ならびに帝王切開など多くの労力・時間を必要とする。そこで、凍結胚の融解・胚移植等の操作を清浄に行い、容易にSPFの個体を得るためのクリ-ンル-ムを作製した。縦2.7横3.0高と2.2メ-トルの機密性を配慮した小部屋に、HEPAフィルタ-を通した空気を1時間に55.5回の割合で給気し清浄度をクラス100に維持した。無菌的に動物、滅菌資材を搬出入を工夫し壁面に5個のアイソレ-タ用ステリ-ルロックを取りつけた。現在、SPF仮親への胚移植を試験的に行っている。SCIDおよびCBー17マウスの体重、臓器重量および血液性状値に関しては、012週齢までの体重測定ではSCIDはCBー17に比べやや低い値を示した。

13週齢時の臓器重量14項目の測定では、脾臓の体重比で、SCID♀0.23±0.11%・♂0.18±0.08%、CBー17♀0.45±0.08%・♂0.36±0.04%とSCIDが低値を示した。しかし、他の項目では顕著な差は認められなかった。13週齢時の血液性状値が8項目の測定では、白血球数が、SCID♀15.7±13.9×10^2/μ1・♂21.0±14.2×10^2/μ1、CBー17♀43.6±8.6×10^2μ1・♂38.8±8.2×10^2/μ1とSCIDで低い値を示した。平成3年度の本研究は、主にSCIDマウスの特性と有用性について検討した。特性については、平成2年5月生まれのCB-17-scid(SCID)♀13匹と♂124匹、CB-17♀114匹と♂111匹をSPF飼育環境下で長期飼育し、その生存日数ならびに総免疫グロブリン量を定期的に調べた。4年3月現在(22カ月齢)、SCID♀72匹(55.0%)♂79匹(63.7%)、CB-17♀28匹(24.6%)♂32匹(28.8%)が死亡し、死亡率はSCIDが♀♂共にCB-17を大きく上回った。死亡個体の剖検ではSCIDにはリンパ腫または胸腺腫の認められるものが多く、SCIDマウスの特性である免疫不全によるものと推察された。また生後2カ月と3カ月、以後3カ月毎に血清中のIgG、IgA、IgM量を測定しこれらを合わせて総免疫グロブリン量とした。SCIDでは総免疫グロブリン量が月齢と共に増加する傾向が認められた。SCIDの指標となる5μg/ml以下の個体は、2カ月齢では♀99.24%、♂99.21%であったが、21カ月齢の検査では♀0.76%、♂7.92%となり、今後検討すべき問題となった。有用性については、ヒト腫瘍の初代移植成績をヌ-ドマウスと比較した。同じ腫瘍を移植した140例についてみると、生着率はヌ-ドマウスが14/140(10.0%)であるのに対し、SCIDマウスは26/140(18.6%)と高かった。また正常組織であるヒト皮膚の移植を試みたところ、ヌ-ドマウスに比べて極めて良く生着することが確認された。以上のことからSCIDマウスは腫瘍学のみならず皮膚科学にも有用であることが期待された。SCIDマウスの改良については、既存近交系ならびにミュ-タント系へのscid遺伝子の導入をcross-intercrossによる戻し交配により行っている。現在、BALB/cA-scid、BALB/cA-scid nu、BALB/cA-scid bgがいずれもN5に達し、特性の検査に用いるまでに至っている。これらの検討は、本研究で確立した生産・供給システムによって生産されたSCIDマウスを用いて行われた。
大規模電磁場擾乱の極冠域から赤道域への侵入・伝播過程

本研究の目的は、極域から赤道域にわたる地球大気遷移圏(電離大気と中性大気が混合する80kmから数100kmの領域)での大規模な電磁気的な力学・作用過程を解明するために、WIND衛星やIPS衛星の太陽風や粒子観測データと地上で観測された大規模な変動電磁場との総合的な比較解析をすることによって、太陽風擾乱現象の空間・時間スケールと地上の磁気赤道域まで侵入できる大規模な変動電磁場との因果関係を明らかにし、更に、これらの地上・衛星の総合的なデータ解析結果を踏まえ、特に、極冠域と磁気赤道域における太陽風、磁気圏、電離圏、大気圏、地下を含めた電磁力学的な結合・作用過程を理論的に明らかにすることである。上記の研究目的に対し、平成10年度から平成13年度にかけて、以下の研究成果を得ることができた。(1)極冠域と磁気赤道域での大規模変動電磁場観測210°磁気子午線と磁気赤道に沿った観測ネットワークの特に、アラスカ、ロシア域と磁気赤道域の磁力計、電場計、オーロラ分光計等の機器の保守点検を行い、赤道域の観測点間との絶対時刻精度を1秒以内に保った同時観測の高精度のデータを確保した。また、グローバルな電場変動に対応する電離層変動を観測する為に、福岡県篠栗にFW-CWレーダーを設置し、イオノゾンデモード、ドップラーモードでの定常運用を実現し、前述のネットワーク観測との比較研究を可能にした。2)総合的データ解析研究アラスカやシベリアのオーロラ帯とカナダの極冠域で観測される太陽風変動に伴うオーロラ、大気電場・降下粒子・大規模変動電磁場の諸特性について時間・空間的な相関解析研究を行った。その結果、極域の変動の形態や諸特性などを確立する、一方、WIND衛星やDMSP衛星の太陽風や粒子観測データとも比較解析することにより、太陽風の変動の空間・時間スケールと極冠域の地上の電磁場変動との相関性に関する手懸かり得られた。(3)理論的な電磁気結合の考察極域で得られた高精度の総合的なデータ解析結果を踏まえ、太陽風領域から極冠域への電磁気擾乱の侵入、更に、磁気圏、電離圏、大気圏、地下の電磁的な結合系の中の磁気赤道域への伝播過程についての理論的な考察がなされた。本研究の目的は、極域から赤道域にわたる地球大気遷移圏(電離大気と中性大気が混合する80kmから数100kmの領域)での大規模な電磁気的な力学・作用過程を解明するために、次に、WIND衛星やIPS衛星の太陽風や粒子観測データと地上で観測された大規模な変動電磁場との総合的な比較解析をすることによって、太陽風擾乱現象の空間・時間スケールと地上の磁気赤道域まで侵入できる大規模な変動電磁場との因果関係をあきらかにする。更に、これらの地上・衛星の総合的なデータ解析結果を踏まえ、特に、極冠域と磁気赤道域における太陽風、磁気圏、電離圏、大気圏、地下を含めた電磁力学的な結合・作用過程を理論的に明らかにすることである。平成10年度は、以下の計画に従って実施し、当初の目的の成果を得ることができた。1.極冠域と磁気赤道域での大規模変動電磁場観測210゚

磁気子午線と磁気赤道に沿った観測ネットワークの特に、アラスカ、ロシア域と磁気赤道域の磁力計、電場計、オーロラ分光計等の機器の保守点検を行い、赤道域の観測点間との絶対時刻精度を1秒以内に保った同時観測の高精度のデータを確保した。2.総合的データ解析研究アラスカやシベリアのオーロラ帯とカナダの極冠域で観測される太陽風変動に伴うオーロラ、大気電場、降下粒子、大規模変動電磁場の諸特性について時間・空間的な相関解析研究を行った.その結果、極域の変動の形態や諸特性などを確立する、一方、WIND衛星やDMSP衛星の太陽風や粒子観測データとも比較解析することにより、太陽風の変動の空間・時間スケールと極冠域の地上の電磁場変動との相関性に関する手懸かり得られた。3.理論的な電磁気結合の考察極域で得られた高精度の総合的なデータ解析結果を踏まえ、太陽風領域から極冠域への電磁気擾乱の侵入、更に、磁気圏、電離圏、大気圏、地下の電磁的な結合系の中の磁気赤道域への伝播過程についての理論的な考察がなされた。4.成果のまとめと公表総合的なデータ解析や理論解析結果の研究成果は、1998年7月に台湾で催されたWPGM(西太平洋地球物理国際会議)、11月のコスタリカで開かれた第5回ラテンアメリカ地球物理学会、更に、12月のサンフランシスコで開かれたアメリカ地球物理学会等の国際学会や国内学会で発表され、高い評価が得られた。本研究の目的は、極域から赤道域にわたる地球大気遷移圏(電離大気と中性大気が混合する80kmから数100kmの領域)での大規模な電磁気的な力学・作用過程を解明するために、次に、WIND衛星やIPS衛星の太陽風や粒子観測データと地上で観測された大規模な変動電磁場との総合的な比較解析をすることによって、太陽風擾乱現象の空間・時間スケールと地上の磁気赤道域まで侵入できる大規模な変動電磁場との因果関係をあきらかにする。更に、これらの地上・衛星の総合的なデータ解析結果を踏まえ、特に、極冠域と磁気赤道域における太陽風、磁気圏、電離圏、大気圏、地下を含めた電磁力学的な結合・作用過程を理論的に明らかにすることであった。平成11年度は、以下の計画に従って実施し、当初の目的の成果を得ることができた。1.極冠域と磁気赤道域での大規模変動電磁場観測平成11年度の基盤研究(A)(2)(代表:湯元)の旅費を用いて、210゚磁気子午線と磁気赤道に沿った観測ネットワークの特に、アラスカ、ロシア域と磁気赤道域の磁力計、電場計、オーロラ分光計等の機器の保守点検を行い、赤道域の観測点間との絶対時刻精度を1秒以内に保った同時観測の高精度のデータを確保した。2.総合的データ解析研究アラスカやシベリアのオーロラ帯とカナダの極冠域で観測される太陽風変動に伴うオーロラ、大気電場、降下粒子、大規模変動電磁場の諸特性について時間・空間的な相関解析研究を行った。その結果、極域の変動の形態や諸特性などを確立する、一方、WIND衛星やDMSP衛星の太陽風や粒子観測データとも比較解析することにより、太陽風の変動の空間・時間スケールと極冠域の地上の電磁場変動との相関性に関する手懸かり得られた。4.成果のまとめと公表総合的なデータ解析や理論解析結果の研究成果は、1999年7月に英国で催されたIUGG、12月のサンフランシスコで開かれたアメリカ地球物理学会等の国際学会や国内学会で発表され、高い評価が得られた。
教育成果評価のための新しいQOL尺度の開発

本研究では、学校において用いることのできる教育成果の評価指標として、児童生徒の学校生活を評価するための新たなQOL尺度を開発し、信頼性および構成概念妥当性を検証することを目的とする。項目収集の観点として、既存のQOL尺度や学校教育における教育目標などから学齢期の児童生徒の学校生活の評価を行うことのできる項目を収集・研究チームにより検討し、QOL尺度を作成する。また、小中学校に在籍する児童生徒のQOLの評価データを収集し、尺度の信頼性および構成概念妥当性の検証を行い、45の自治体において尺度の標準化を行う。
感性機能側性化と視覚系機能分化との関連

平成30年度はまず,皮質レベルにおける視覚機能側性化を行動的に評価するために,方位刺激に対する感度の大脳半球差の有無を検討した。そのために年度当初は輝度コントラストならびに色度コントラストによる格子縞刺激の作成を行なった。そして,視覚Magno系の処理機能を評価するためには輝度コントラストを,Parvo系処理機能を評価するためには色度コントラストを用いて刺激検出閾の測定を行なった。その結果,輝度コントラスト感度に左右視野差は見られなかった。色度コントラストによる格子縞の作成にはminimun-flicker法およびminimum-motion法を用いて輝度コントラストを最小にする等輝度条件を求め,その左右視野差を検討した。その結果, flickerでは左右視野差は見られなかったが,motionでの等輝度感度は,左視野での方が運動を感じなくなるために高輝度を要する結果を得た。しかし,この等輝度条件の結果はParvo系反応の感度を表していると考えられる一方で,矩形波刺激を用いたこの古典的方法による等輝度条件計測では,Magno系による過渡的(transient)反応が混在している可能性が考えられた。先の計測の問題を解消するために,年度後半は矩形波刺激ではなくガボール刺激を用いて等輝度条件を求め,その感度の左右視野差を更に詳しく調べた。先ずガボール関数状の刺激を複数の観察者に対して呈示し,各自の等輝度の色度コントラスト刺激条件を求めた。そして次にそれぞれの等輝度条件における色度コントラスト刺激を作成し,そのフリッカー検出閾と運動検出閾を左右視野において計測し比較検討した。計測の結果,刺激に対する感度の傾向/特性は観察者によって大きく異なるものの,一貫して色度コントラスト感度は左右視野によって大きく異なることが明らかになった。平成30年度は,大脳機能側性化の視覚における神経基盤の検討を行うために視覚対象の検出感度を計測する刺激作成を行い,その検出閾や知覚同定判断などに関わる処理機能の左右半球差を半視野呈示法によって検討することを計画した。特に,本研究ではMagno系情報処理と,Parvo系情報処理の流れから大脳左右半球機能差を検討するために,感度レベルの計測検討を行うことが必要であり,このため本年度は,単純な空間周波数コントラスト刺激の検出/弁別,続いて重畳空間周波数弁別,線画などの単純図形や対象の弁別の課題から開始し,1次・2次運動弁別などの処理課題をテストして,それらの処理に半球機能差があるか否かの検証を行う計画を立てた。視覚情報処理経路では,背側系は主にMagno系から情報を受けて輝度情報および低空間周波数に感度が良く,腹側系は主に色情報を扱うParvo系情報処理を担い,帯域型感度を持つことが知られている。また,背側系機能は空間情報処理機能に長けているとともに右半球優位であるのに対し,一方腹側系は対象認識処理を行ない,言語化情報処理は左半球優位であることが知られている。このため,本研究では,Magno系情報とParvo系情報の処理を別々にテストする形で半球処理差の検討を進めている。しかし,平成30年度の研究では,Parvo系/色情報刺激作成のための等輝度条件計測に多くの時間を要した。また, Parvo系の感度の左右視野差の程度が観察者によって大きく異なり,非常に不安定であることが明らかになり,そのような刺激を用いてさらに高次レベルの視覚処理(図形や対象の弁別処理課題)の検討まで進むことができなかった。今後,等輝度条件の計測の進行により研究全体の進捗が影響を受けると考えられるが,計測を効率化するなどして研究計画に沿った進行に少しでも近づけたい。昨年度の研究結果から,Parvo系刺激処理には視覚処理の初期段階において何らかの左右視野差が存在すると考えられるが,昨年度の計測ではその違いのエビデンスを十分に示すことができなかった。計測における判断基準の難しさや個人差などがあり,この問題の解決には何らかの技術的ブレイクスルーが必要である。しかし今年度も,この等輝度刺激処理に関わる左右視野での違いの有無を明確に示す方法について検討を継続したいと考えている。また一方で,今年度は前年度に行うことのできなかった問題の検証を行いたい。その一つは,対象刺激を空間周波数フィルターで刺激成分を変調することによってParvo/Magno系(腹側系/背側系)をそれぞれ刺激する画像を作成し,それによって対象弁別/認知機能の大脳半球機能差を検討することである。そして,それらの処理課題実施中において脳活動計測を行い,腹側系/背側系処理の成績に対応する脳神経基盤を比較検討する。特に, Vannucci, Gori, Kojima (2014, Cog.Neuroci.)は,建築物の絵画およびその絵画の空間周波数成分をもつテクスチャー刺激を作成して美的判断課題を行った。その結果,我々が対象情報を持たないテクスチャーに対しても何らかの空間的判断を行なっていることが明らかにされた。本研究においても,研究協力者のVannucci博士らと共同でこの研究を展開し,低次レベルの刺激成分を含む視覚刺激の美的判断/感性評価において,行動計測ならびに脳イメージングの両面から処理の側性化の有無を調べる。このために,先行研究で用いられた刺激画像に加えて新たな視覚情報成分を含む刺激画像を作成して感性評価を行い,その際の脳活動計測を行うことで,視覚処理と脳機能の側性化との関係を研究してゆく方策を考えている。平成29年度はまず,大脳側性化機能の行動的評価を行うための視覚刺激の作成を行い,つづいて実験的検討を行った。

実験的研究においては,これまで側性化に関して「大域的処理は右半球優位であり,局所的処理は左半球優位」であるとする報告(Van Kleeck, 1989, Neuropsychol.; Evans et al, 2000, Neuropsychol.)や,芸術的機能は右半球機能が優勢であるとする通説(e.g. Sperry, 1975; Schwartz, Davidson, Maer, 1975)があることなどから,大域処理による芸術的機能の検討として,図形の美的判断に半球処理差があるか否かを実験的に調べた。実験では,まず,建築物,カバン,車のシルエットを刺激図形として,その縦横比を黄金比や白銀比など1:1から1:2の縦横比に伸縮した形態を刺激として用意した。そして,それらを半視野呈示法によって観察者に短時間(100ms)呈示して美しさの評価,そして次に図形のバランス評価を行ってもらい,その評価値に呈示視野による違いが見られるかを検討した。その結果,形態刺激の美しさ評価の平均値は,右視野呈示した場合の方が左視野呈示した場合より優位に高かった(p<.05)。また,同じ図形を使ってバランス評価も行ったが,その評価値もやはり右視野呈示した場合の方が左視野呈示した場合よりも優位に高かった(p<.01)。この結果は,左半球処理の場合の評価の方が右半球処理の場合より評価値が高いという,いわば当初の仮説とは逆の結果である。これは,課題が1から7の七段階の言語評価を求めたことによる可能性や,反応する手を右手とし,カウンターバランスを取らなかったためである可能性などが考えられる。これらの問題は,今後の研究において注意すべき点であると考えられる。本研究では,視覚情報処理における側性化の機序を明らかにすることを目的としている。このため,様々な視覚処理レベルを刺激する視覚刺激を用いて,その左右大脳半球処理差の始まる処理レベルの解明を目指している。そのような処理レベルを発見するためには二つの研究の方向性,すなわち,高次な視覚処理レベルから低次レベル処理へと調べてゆく研究の方向性と,低次視覚処理機能から高次レベル処理の機能へと調べてゆく方向性がある。視覚情報処理には点の抽出から線,面の抽出などといった階層性が存在する反面,処理の性質によっては,それらの処理レベルが明確でなかったり,あるいは処理モジュールの関係性が明確でなかったりする処理も含まれる。特に,皮質下の抹消レベルでは処理の階層性は明確だが,有線皮質以降の視覚野にあたる中程度レベルや高次レベルの視覚処理機能においては,想定される処理モジュールがParvo/Magno系情報のどちらからの情報を含むのかを推定し,そこでの処理がどのような情報を利用しているかを推定しながら検証を進める必要がある。研究初年度においては,刺激処理レベルとしては中程度レベルの複雑さをもつ刺激を用いて課題処理の側性化を検討した。中程度から高次レベル処理機能はその階層性が明確でないため,検討においてはこのような仮定的な方法を取らざるを得ない。このようにして行った初年度の研究は,作業仮説とは異なる結果となったものの,本研究を進める上で,方法における有用な確認を行うことができた。
東洋の伝統をいかした〈生の技法〉の学習と教育に関する比較研究－「食」を手始めに－

本研究の目的は、人間的・社会的な生活を送るのに必要な実践知である〈生の技法〉を習得するための学習と教育についてその過程と構造を解明し、東洋の伝統をいかした学習論・教育論のフレームワークを創成することにある。文献講読による国際比較研究および日韓におけるフィールド調査研究を通して、次の3点が研究成果として導出された。1東洋の伝統では、ことば・文字のみならず音律、色、形、空間構成など多様な教育メディアが駆使されている。2それらは、先行世代の身体の動きと連動して初めて教育的機能を発揮する。3それらは、後続世代の身体活動を規制する一方で、後続世代の思考と意味解釈の自由と自律を保証するという機能を果たす。昨年度立ち上げた共同研究組織のなかから実質的に活動可能なメンバーで調査チームを組織し、文献比較調査とフィールド調査とを実施するとともに、調査結果の分析と考察を進めた。調査チームのメンバーは、研究代表者の岡部美香、研究分担者の鈴木晶子のほか、池田華子(天理大学)、森(高松)みどり(H25年4月より滋賀短期大学)、高橋舞(立教大学)、韓炫精(東京大学大学院)である。池田と森(高松)は、H24年11月から研究分担者となっている。具体的な活動としては、まず、H24年4月11月にかけて日本・韓国・ドイツそれぞれの文献および先行研究の調査とその比較分析を行い、それらの成果を論文と図書にまとめた(研究発表の項を参照)。次に、H25年2月9日13日まで韓国におけるフィールド調査を行った。調査においては、李ハジョン氏(九州大学大学院)と朴宰永氏(釜山大学校・教育発展研究所・研究員)に協力していただき、李氏の家庭における旧正月の儀礼(チャレ)と仏教寺院における旧正月の儀礼(チェサ)と病院の葬儀に関して参与観察とインタビューとを行った。また、2月23日には兵庫県・豊岡におけるフィールド調査を行った。調査においては、松井温子氏に協力していただき、松井家および豊岡地方の葬儀・法要の儀礼についてインタビューを実施した。これらの調査結果を分析・考察し、その成果を3月20日、21日に京都大学で行われた「卓越した大学院拠点形成支援国際フォーラム実践知と教育研究の未来」で発表した(研究発表の項を参照)。以上の研究過程を経て、日本と韓国が近代化の影響などから〈生の技法〉の世代継承に大きな問題を抱えていること、その問題に対峙するには教育メディアに着目する必要のあることが判明し、世代継承のメディアとそこに働く実践知の研究が今後の課題として示された。本研究の目的は、人間的・社会的な生活を送るのに必要な実践知である〈生の技法〉を習得するための学習と教育について、その過程と構造を解明し、東洋の伝統をいかした学習論・教育論のフレームワークを創成することにある。研究期間の最終年度である25年度は、まず、初年度(23年度)の文献講読を中心とする調査、次年度(24年度)のフィールドワークを中心とする調査を通して導出された結果を総括し、研究成果をまとめた。主な研究成果としては、次の3点が明らかになった。1〈生の技法〉の学習と教育に際して、東洋の伝統においては、ことば・文字のみならず、それら以外のモノ、例えば音律、色、形、空間構成など多様なメディアが駆使されている。2ことば・文字以外のモノであるメディアは、モノ自体では機能せず、先行世代の身体の動きと連動して提示されることによって初めて教育的機能を発揮する。3身体の動きと連動して提示されるメディアは、先行世代にとっては、自分の意図を後続世代に伝達し、後続世代の身体の活動を規制するという機能を果たすが、他方で後続世代に対しては、言語による思考への規制をあまり伴わないことによって、文化内容の意味解釈の自由と自律を保証するという機能を果たす。以上の成果を、韓国教育思想史研究会の夏季大会と年次大会で、また日本においては教育思想史学会で口頭発表した。教育思想史学会においては、韓国における研究協力者である釜山大学の安京植教授・朴宰永研究員を招聘し、〈生の技法〉の学習と教育のメディアに関する国際比較をディスカッションの柱にした。これらの口頭発表およびディスカッションを論文としてまとめ、その論文をそれぞれの学会機関誌に投稿し、掲載ないしは掲載が予定されている。まず、日本と韓国の若手研究者を中心に研究協力者を募り、共同研究のための組織を立ち上げた。共同研究組織は、研究代表者の岡部と研究分担者の鈴木のほか、池田華子(天理大学)、高橋舞(立教大学大学院)、高松みどり(大阪国際大学短期大学部)、谷村千絵(鳴門教育大学)、森岡次郎(大阪府立大学)、河兌煕(奈良女子大学大学院)、韓炫精(東京大学大学院)の9名から構成されている。

岡部・森岡が日本の民俗学の先行研究を、鈴木・高松・谷村が西洋の教育人類学・文化人類学・社会学における先行研究を、高橋・韓が韓国の民俗学の先行研究を、池田・河がホリスティック教育における先行研究をまとめ、次年度の日本・韓国における調査研究とドイツとの比較研究の準備を行った。研究会ではまた、「食」のなかでもとりわけ「人の誕生と葬送に際しての「食」の作法」に注目して研究を進めることが確認された。というのも、人の誕生と葬送における作法は、共同体内部の生活にかかわるとともに共同体を超えた生命のあり様ともかかわる作法であり、目の前に(まだ・もう)いない不在の「人」に対する作法でもあるがゆえに、ここから日常の〈生きる技法〉を逆照射することができると考えられるからである。研究成果としては、岡部が韓国・ソウルで行われた東アジア教員養成国際コンソーシアムの第6回シンポジウムで、この研究について発表した。この発表をきっかけとして、次年度の調査研究に関して、研究会メンバーの河、韓のほかに、ソウル永新初等学校で国際理解教育を担当している韓国在住の日本人・成田真美氏の協力が得られることになった。また、パフォーマンス研究・教育人類学研究で著名なベルリン自由大学のChristoph Wulf氏の思想を援用しつつ論じた著作を鈴木が発表している。なお、研究会の他のメンバーとの共同執筆論文が平成24年度に公表される予定である。交付申請書に記載した「研究実施計画」の平成2324年度に挙げていた6つの項目はほぼすべてクリアできている。6つの項目とは、すなわち、1)日本・韓国の若手研究者との共同研究組織の立ち上げ、2)「食」に関する東西の比較思想研究の推進、3)研究会の開催と調査研究の打ち合わせ、4)東アジア教員養成国際コンソーシアムのシンポジウムにおける発表(以上が平成23年度計画)、5)ドイツの研究協力者による1)4)までの中間成果の検討、6)日本と韓国における参与観察とインタビュー調査(5)と6)が平成24年度計画)である。経費の都合上、訪問が困難なドイツに関する研究については、昨年度の実施状況報告書に記載しているように、鈴木と高松がこれまでの蓄積を生かしつつ、またドイツの研究協力者と連絡を緊密にとりながら進めている。また、2年にわたる研究の成果を、雑誌論文、図書、学会等発表を通して公にした。今後は、国内のみならず海外に向けて成果を発信していくことが課題であるが、そのための準備もすでに進行中である。交付申請書に記載した「研究実施計画」の平成23年度分に挙げていた4つの項目、すなわち、1)日本・韓国の若手研究者との共同研究組織の立ち上げ、2)「食」に関する東西の比較思想研究の推進、3)研究会の開催と次年度の調査研究の打ち合わせ、4)東アジア教員養成国際コンソーシアムのシンポジウムにおける発表、はすべてクリアできている。岡部と鈴木以外の共同研究組織のメンバーによる研究成果はまだ公には出ていないが、それも平成24年度には公表される予定である。ただし、調査研究の打ち合わせについてはまだ十分であるとはいえないため、次年度の夏季長期休暇までには、調査計画をより具体化していく必要がある。平成25年度は、平成24年度に実施した文献研究および日本と韓国におけるフィールド調査研究の結果をさらに詳細に分析・考察し、その成果を国内外の学会で発表する。また、論文にもまとめ、学会等の機関誌や紀要に投稿する。
細胞外基質による組織形成の制御

われわれは、平成11年度にラットから単離した肝臓星細胞と肝実質細胞を種類の異なる細胞外マトリックス上つまりポリスチレン培養皿上、I型コラーゲンゲル上、I型コラーゲンゲル内、およびマトリゲル上に組織形成を促進する長期活性持続型ビタミンC存在下で共培養し形成された肝組織の形態を走査型および透過型電子顕微鏡で解析した。その結果、I型コラーゲンゲル内に共培養し形成された肝組織で、実質細胞間に毛細胆管様構造、tight junction, adherens junction, desmosome,およびgap junctionが形成され、他のマトリックス上で共培養されたものに比較して、生体内でみられるの肝細胞索に最も良く類似した三次元培養肝組織を形成した。つまり細胞外マトリックスが、細胞間接着および培養肝組織形成を制御している可能性が示唆された。しかし、この培養肝組織形成における、星細胞間接着装置形成については不明であった。そこで平成12年度では星細胞間接着装置形成における細胞外マトリックスの働きを知る目的で、性質の異なる細胞外マトリックス上に星細胞を単独培養し、細胞間接着に着目し透過型電子顕微鏡で詳しく解析した。その結果、マトリゲル上で培養した星細胞に比較して、ポリスチレン培養皿上あるいはI型コラーゲンゲル上に培養された星細胞間には、より多数の細胞間接着が形成された。これら星細胞間の接着装置はその微細形態の特徴よりadherens junctionである可能性が示唆された。そこで平成13年度では、この細胞間接着装置の構成分子を明らかにするため、培養星細胞をI型コラーゲンゲル上に単独培養し、adherens junctionの構成要素である分子cadherinとcateninの局在を共焦点レーザー顕微鏡をもちいた免疫蛍光顕微鏡法により解析した。その結果、cadherinと、α-およびβ-cateninがこの接着に関与していることを明らかにした。これにより星細胞間の接着装置はadherens junctionであることが分子レベルで確認された。これらのデーターより、細胞外マトリックスは細胞間接着装置形成を介して組織形成を制御する可能性が示された。また本研究で哺乳類の星細胞間に接着装置が形成されることがはじめて微細構造および分子レベルで実証された。正常ラット肝臓を門脈からコラゲナーゼで灌流し、低速遠心、Percoll密度勾配遠心法により、肝臓星細胞と肝実質細胞を単離し、性質の異なる種類の細胞外基質上、つまり、(A)なにも被覆しないポリスチレン培養皿の上、(B)I型コラーゲンゲルの上、および(C)マトリゲルの上に播種し2日間共培養した。細胞培養に際し、コラーゲンの合成と蓄積、細胞の増殖、および三次元組織構築を促進する目的で活性持続型ビタミンCであるL-アスコルビン酸2-リン酸(2×10^<-4>M)を培養液に添加した。これらの培養で形成された組織の三次元形態を走査型および透過型電子顕微鏡で解析した。ポリスチレン上とI型コラーゲンゲル上では平面に広がる組織を形成した。この組織内では肝実質細胞が互いにその側面で接着し単層の肝細胞索様の構造を形成した。しかしマトリゲル上ではさまざまな大きさで不規則な形の細胞塊をゲル上に形成した。この細胞塊の内部の細胞は壊死していた。

I型コラーゲンゲル上の組織の電子顕微鏡解析では、実質細胞間に毛細胆管様の構造とtight junctionおよびdesmosomeの形成もみられた。星細胞は平板状に広がる実質細胞層の上面と下面にみとめられた。これらの細胞層間にはディッセ腔で見られるようにコラーゲン線維が介在し両細胞層の細胞はこれらのコラーゲン線維に接着していた。そこでポリスチレン培養皿上の培養系とI型コラーゲンゲル上培養系において、ビタミンCを添加した培養液と添加しない培養液をもちいて16日間共培養しその組織構築を比較した。その結果、ポリスチレン上ではビタミンCを添加した培養系でも塊状組織を形成し肝細胞索様構造は形成しなかった。またこの組織は培養皿底面との接着が弱く電顕用試料作成過程で培養皿底面から剥離し崩壊した。コラーゲンゲル上の組織は、ビタミンCを添加した培養系で、添加しない場合に比較してより広い面積の肝組織が形成された。この組織内の両細胞は細胞外マトリックス成分であるI型コラーゲン線維と接着構造を形成していた。これらの結果は細胞外マトリックス成分が組織構築過程を制御している可能性を示している。我々は11年度に、ラットから単離した肝臓星細胞と肝実質細胞を性質の異なる細胞外マトリックス、つまり(A)ポリスチレン培養皿の上、(B)I型コラーゲンゲルの上、および(C)マトリゲルの上に播種し、組織形成を促進する活性持続型ビタミンCを培養メディウムに添加し16日間共培養し、形成された肝組織の三次元形態を走査型および透過型電子顕微鏡で解析した。その結果、I型コラーゲンゲル上の肝組織では実質細胞間に毛細胆管様の構造とtight junctionおよびdesmosomeの形成がみられ、他の基質上で培養した肝組織に比べ、生体内の肝細胞索に最もよく類似した組織を形成した。この結果は細胞外マトリックス成分が細胞間接着装置の形成を介して、組織構築過程を制御している可能性を示した。しかし、この培養肝組織形成過程における星細胞間接着装置の形成はいまだ不明である。そこで本年度は、星細胞間接着構造形成における細胞外マトリックスの働きを知る目的で、前述の(A)(C)の異なる細胞外マトリックス上に星細胞を培養し、その細胞間接着形態を透過型電子顕微鏡で詳しく観察した。その結果、星細胞はI型コラーゲンゲル上とポリスチレン上で、より多くの接着構造を形成し、マトリゲル上では少なかった。これら星細胞間に形成された接着構造は、細胞間間隙がほぼ10nm、ひとつの接着部の広がりは、超薄切片上で200nm以上あり、接着部細胞膜直下には直径10nm以下の微細線維の集積が存在した。これらの星細胞間にみられる接着装置は、その微細形態の特徴よりadherens junctionである可能性が示された。これら結果は、細胞外マトリックスが実質細胞および星細胞間の接着装置形成を介して、培養肝組織形成を制御している可能性を示した。またこの結果は、哺乳動物星細胞間における、接着装置の形成を初めて電子顕微鏡レベルで明らかにした。
腎臓特異的遺伝子の転写制御機構

AQP-2プロモーター解析は、シスエレメントのうち、CRE、GATAがAQP-2promoterでは重要な働きをしていることを明らかにした。また、in vitroで発現細胞がないことなどから、きわめて厳格に発現調節をうけていることを明らかにし、いくつものrepressive elementがその機能を担っていることを示した。in vivoではトランスジェニック動物を用い、腎集合管特異的発現能をAQP-2プロモーターが持つかどうかを検討したが、少なくとも600bp上流側だけでは、集合管に遺伝子発現させなかった。AQP-3プロモーター解析は上流2.6bpまで行ったが、AQP-3発現細胞を用いてプロモーター活性の検討の結果、細胞特異的発現に関与する配列を同定することはできず、第一イントロンの解析を行った.腎特異的クロライドチャネルの遺伝子発現調節機能解析もCLC-K1.K2遺伝子上流側を単離する事で、解析を始めた。これらはTATAboxを持たないプロモーターで、転写開始点近傍にGリッチエレメントが存在し、この部分がこれら遺伝子の転写活性に必須であることを明らかにした。またこの部分の活性は細胞特異的であることから、腎臓特異的な発現にも関与している可能性が示唆された。さらにこのシスエレメントに結合する転写因子のクローニングを行った。AQP2,AQP3,ClC-K1,ClC-K2の遺伝子上流域の解析とpromoter活性の解析を行った。AQP2については、通常の腎由来の培養細胞ではAQP2は発現しておらず、reporter gene assayが難しかったが、上流域を短縮していくとreporter活性が認められるようになり、basic promoter活性やいくつかのシスエレメントの機能を確認した。またフットプリント法により、腎臓特異的なシスエレメントを検出し、このシスエレメントの特異性はゲルシフトアッセイ法によって確認された。またAQP2の遺伝子上流域をラットとマウスでクローニングし比較も行った。ClC-K1とClC-K2についても遺伝子上流域の解析を行い、また染色体上に極めて近接して存在していることも明らかにした。Luciferaseをrepoter geneとして用い、各々の遺伝子上流およそ-1Kbまでのpromoter活性を測定した。さらに上流側より約100bp間隔で短縮したフラグメントの活性を検討し、発現に最も関与している部分を同定した。このシスエレメントの腎特異性は、われわれが確立した腎由来の培養細胞、そして腎とそれ以外の臓器よりの核抽出液を用いたゲルシフトアッセイ法によって確認した。AQP-3プロモーター解析は上流2.6bpまで行ったが、AQP-3発現細胞を用いてプロモーター活性の検討の結果、細胞特異的発現に関与する配列を同定することはできず、第一イントロンの解析を行っている.腎特異的クロライドチャネルの遺伝子発現調節機能解析もCLC-K1.K2遺伝子上流側を単離する事で、解析を始めた。現在、このシスエレメントに結合する転写因子のクローニングを進めている。in vivoではトランスジェニック動物を用い、腎集合管特異的発現能をAQP-

2プロモーターが持つかどうかを検討したが、少なくとも600bp上流側だけでは、集合管に遺伝子発現させなかった。AQP-3プロモーター解析は上流2.6bpまで行ったが、AQP-3発現細胞を用いてプロモーター活性の検討の結果、細胞特異的発現に関与する配列を同定することはできず、第一イントロンの解析を行った.腎特異的クロライドチャネルの遺伝子発現調節機能解析もCLC-K1.K2遺伝子上流側を単離する事で、解析を始めた。これらはTATAboxを持たないプロモーターで、転写開始点近傍にGリッチエレメントが存在し、この部分がこれら遺伝子の転写活性に必須であることを明らかにした。またこの部分の活性は細胞特異的であることから、腎臓特異的な発現にも関与している可能性が示唆された。さらにこのシスエレメントに結合する転写因子のクローニングを行った。
放射線治療抵抗性脳腫瘍細胞の代謝と遊走を電子スピン共鳴でライブイメージングする

平成26年度は脳腫瘍幹細胞のレッドックスバランスと遊走浸潤能の解析を行った。さらに細胞の還元能を電子スピン共鳴(ESR)によるin vitroイメージングする為の水平共鳴管の開発を試みた。放射線照射により腫瘍細胞は還元能が亢進することが明らかになったが、予想に反して脳腫瘍幹細胞では還元能が低下していた。また放射線照射後に脳腫瘍幹細胞は非幹細胞よりも浸潤能が亢進した。ESR共鳴管をイメージング用に改造し動作確認を行った。悪性脳腫瘍の示す放射線治療抵抗性の原因として、脳腫瘍幹細胞が酸化的リン酸化と解糖系による代謝を使い分けるスイッチ現象や、照射を契機として細胞の遊走による照射野外への逃避の関与が報告されている。そこで電子スピン共鳴(ESR)によるin vitroライブイメージング法の開発により細胞の代謝を解析する。本年度は細胞観察用水平型共振器の開発を行った。通常ESRの共振器は地面に対して垂直に試料を挿入する設計になっているが、スライドグラス上に培養した細胞を観察する際は、細胞が重力で下方に移動することを避けなければならない。そこで少量の水分を残し細胞を湿潤状態のまま観察出来るように共振器部分を改造した。具体的には(a)磁場勾配コイルの位置変更、(b)共振器の向きの変更、(c)マイクロ波導入経路を変更した新たな導波管の設計を実施完了した。また、予備実験としてバルクの細胞を用いて細胞周期、幹細胞性質による代謝の違いを解析した。悪性脳腫瘍の示す放射線治療抵抗性の原因として、脳腫瘍幹細胞が酸化的リン酸化と解糖系によるエネルギー代謝を使い分けるスイッチング現象や照射を契機とした細胞遊走により細胞が照射野外へ逃避する可能性が報告されている。本研究では脳腫瘍幹細胞のエネルギー代謝解析や遊走浸潤能解析を行うと共に、細胞の還元能を電子スピン共鳴(ESR)によるin vitroイメージングする為の手法の開発を試みた。我々が独自に樹立した放射線抵抗性脳腫瘍幹細胞ONS-F8とその親株であるONS-76のエネルギー代謝機構を比較したところ、ONS-F8では解糖系の亢進が観察された。また、Matrigel invasion assayを用いて、ONS-F8およびONS-76細胞の浸潤能を解析したところ、ONS-F8はONS-76より有意に浸潤能が亢進しているばかりか、低中線量放射線照射によって浸潤能が亢進した。また従来からあるESRスピンラベル法を用いて細胞の還元能を評価したところ、X線照射により、Tempol還元速度が上昇した。これはX線照射によって抗酸化物質の合成が亢進し還元能が亢進することを示唆している可能性が考えられる。一方、予想に反して、ONS-F8はONS-76より還元能が低いことがわかった。ESRイメージングの開発としては、まず地面に対して垂直に試料を挿入する設計になっていて細胞の観察には適さない共振器を改造し試料を挿入・観察できる様に改造した。具体的には共振器の向きを変更し、それに伴い磁場勾配コイルの位置の変更、マイクロ波導入経路を変更した。さらに実際に細胞を用いてシグナルを検出することに成功した。1)電子スピン共鳴の共振器の改良を実施し、磁場勾配コイル位置変更、共振器向き変更、マイクロ波導入経路変更を完了できた。2)細胞イメージングの予備実験として、細胞周期依存的放射線抵抗性の評価と、電子スピン共鳴による細胞還元能の評価を実施し、電子スピンサイエンス学会(2013)に成果の一部を発表し、優秀発表賞を受賞した。3)幹細胞性質を有した髄芽腫培養細胞株の放射線抵抗性と細胞の持つ抗酸化能の相関を解析し、国際フリーラジカル学会(2014)で成果の一部を発表し、Young Investigator Awardを受賞した。H26年度は改造した水平共振器型電子スピン共鳴による培養細胞の観察を実施し、放射線によるDNA損傷を蛍光・電子スピン共鳴の二つの同時解析を実施することを目指す。また、細胞の遊走能を解析し代謝と転移のモデルを確立したい。9月1日付けで研究代表者が産業医大に異動、5月1日付けで分担研究者が筑波大に異動となり、会計の締め、示達までの時間差などが生じ、若干予算の消化が遅れた。研究内容に遅滞は無く、H26年度は順調に成果を重ね、併せて予算を消化できる見込みである。
C型肝炎発症機序の分子免疫学的研究

HLA B44を有する慢性C型肝炎患者の検討で,HCVコア抗原アミノ酸残基88-96を抗原エピトープとするHLAB44拘束性CTL応答が認められる症例では末梢血HCV RNA量が低値であり,CTLがHCVの増殖に対して抑制的に作用していることを示唆する結果が得られた.また,同一患者において異なった抗原エピトープを認識する2種類以上のCTLが存在することも明らかになった.CTL応答が認められるにも関わらずHCVが存在することは,HCV感染においてはCTL応答が不十分であることが考えられる.抗原エピトープの変異が認められたのは27例中3例と多くはなかったが,その3例のHCVコア抗原アミノ酸残基88-96のアミノ酸配列のペプチドを作製し,HCV特異的CTLに認識されるか,あるいはCTLを効率良く誘導できるかを検討したところ2例では変異エピトープは野生型エピトープと同様に認識されるものの,CTL誘導能は低いことが判明した.他の1例ではむしろ変異エピトープの方が抗原性が強いという結果が得られた.このなかのエピトープの一つを用いて,変異ウイルスが野生型ウイルスと混在した場合にどのような影響がCTL応答に生じるかを検討したところ変異ウイルスは野生型ウイルスと混在した場合には,CTLのウイルス感染細胞障害が抑制されるとともに,変異ウイルスを認識するCTLの増殖も抑制されることが明らかになった.HCVコア抗原アミノ酸残基88-96をHLAB44拘束性に認識するCTLクローンを用いた検討より,C型肝炎においてはCTLはHCV感染細胞を認識しパーフォリン,Fasリガンド,TNFにより認識した細胞を障害すると共に,抗原を認識し活性化したCTLは炎症などにより感受性を獲得した肝細胞をFasリガンド,TNFにより障害し,肝炎の拡大に関与していることが明らかになった.HLA B44を有する慢性C型肝炎患者の検討で,HCVコア抗原アミノ酸残基88-96を抗原エピトープとするHLAB44拘束性CTL応答が認められる症例では末梢血HCV RNA量が低値であり,CTLがHCVの増殖に対して抑制的に作用していることを示唆する結果が得られた.また,同一患者において異なった抗原エピトープを認識する2種類以上のCTLが存在することも明らかになった.CTL応答が認められるにも関わらずHCVが存在することは,HCV感染においてはCTL応答が不十分であることが考えられる.抗原エピトープの変異が認められたのは27例中3例と多くはなかったが,その3例のHCVコア抗原アミノ酸残基88-96のアミノ酸配列のペプチドを作製し,HCV特異的CTLに認識されるか,あるいはCTLを効率良く誘導できるかを検討したところ2例では変異エピトープは野生型エピトープと同様に認識されるものの,CTL誘導能は低いことが判明した.他の1例ではむしろ変異エピトープの方が抗原性が強いという結果が得られた.このなかのエピトープの一つを用いて,変異ウイルスが野生型ウイルスと混在した場合にどのような影響がCTL応答に生じるかを検討したところ変異ウイルスは野生型ウイルスと混在した場合には,CTLのウイルス感染細胞障害が抑制されるとともに,変異ウイルスを認識するCTLの増殖も抑制されることが明らかになった.HCVコア抗原アミノ酸残基88-96をHLAB44拘束性に認識するCTLクローンを用いた検討より,C型肝炎においてはCTLはHCV感染細胞を認識しパーフォリン,Fasリガンド,TNFにより認識した細胞を障害すると共に,抗原を認識し活性化したCTLは炎症などにより感受性を獲得した肝細胞をFasリガンド,TNFにより障害し,肝炎の拡大に関与していることが明らかになった.C型肝炎ウイルス感染における特異的細胞障害T細胞の役割を明らかにする目的で、HLAB44を有する慢性C型肝炎患者末梢血リンパ球のC肝炎ウイルスに対する細胞障害性T細胞応答を検討した。HLAB44拘束性C型肝炎ウイルス特異的細胞障害性T細胞がHLAB44を有する慢性C型肝炎患者末梢血中に存在し、そのような細胞障害性T細胞はC型肝炎ウイルスコア蛋白アミノ酸残基88-96を最小エピトープとして認識することは既に明らかにした。今回は、まずHLAB44を有する慢性C型肝炎患者30例の血中C型肝炎ウイルスの遺伝子型の検討を行い、上記が細胞障害性T細胞が存在しうると考えられる1b型および2a型のC型肝炎ウイルスに感染している患者の選択を行った。1b型および2a型のC型肝炎ウイルスに感染している患者は26例存在し、C型肝炎ウイルスコア蛋白81-100のアミノ酸配列の解析を行ったところ、内3例ではエピトープ内にアミノ酸変異が見られ、1例はエピトープの近傍にアミノ酸変異が存在した。そこで、アミノ酸変異のない22例について、末梢血C型肝炎ウイルスRNA量と細胞障害性T細胞応答との関係を検討した。細胞障害性T細胞は患者末梢血リンパ球をC型肝炎ウイルスコア蛋白81-100アミノ酸の20アミノ酸のペプチドで2回刺激することにより誘導した。細胞障害性T細胞の誘導は22例中6例の患者で認められた。血中C型肝炎ウイルスRNA量との関係を検討すると、細胞障害性T細胞が誘導できた6例中5例で血中ウイルス量は低値であり、血中ウイルス量の多かった15例で細胞障害性T細胞が誘導できたのは1例のみであった。この結果より、C型肝炎ウイルス感染においてはヒト免疫不全症候群ウイルスの感染の場合と同様に、細胞障害性T細胞がウイルスの増殖を抑制している可能性が考えられる。また、ウイルス量が増加すると細胞障害性T細胞応答は抑制される可能性がある。

我々はHLAB44拘束性C型肝炎ウイルス特異的細胞障害性T細胞がHLAB44を有する慢性C型肝炎患者末梢血中に存在し,そのような細胞障害性T細胞はC型肝炎ウイルスコア蛋白アミノ酸残基88-96を最小エピトープとして認識することを先に明らかにした.更に昨年度は,HLAB44を有する慢性C型肝炎患者において,末梢血C型肝炎ウイルスRNA量とC型肝炎ウイルスコア抗原88-96に対する細胞障害性T細胞応答との関係を検討し,C型肝炎ウイルス感染においては細胞障害性T細胞がウイルスの増殖を抑制している可能性が高いことを明らかにした。本年度はどのような分子機構によりC型肝炎ウイルス特異的細胞障害性T細胞がウイルス感染細胞を傷害するか検討を行った.まず,HLAB44拘束性にC型肝炎ウイルスコア抗原88-96を認識する細胞障害性T細胞株,HLAB44遺伝子をトランスフェクトしたTNF及びFas抗体に抵抗性の肝癌細胞株(正常肝細胞の代用),TNF及び抗Fas抗体に感受性の高いTリンパ球腫瘍株(肝炎組織の肝細胞の代用)を樹立した.細胞障害性T細胞とHLAB44上に抗原を提示させた肝癌細胞株,Tリンパ球腫瘍株を種々の細胞比でインキュベートし細胞障害性を検討した.また,インキュベートの際に同時にパ-フォリンの阻害薬であるコンカナマイシンA,あるいは抗TNF抗体,あるいは抗Fasリンガンド抗体を添加し,C型肝炎ウイルス特異的細胞障害性T細胞がどのような分子を用いて標的細胞を傷害するかを検討した.その結果,通常の肝炎で見られる細胞障害性T細胞の数では,パ-フォリンの系がウイルス感染細胞の障害に最も重要な役割を果たしており,Fas/Fasリガンドを介する系とTNFはウイルス非感染ではあるが肝炎そのものの影響でFasの発現が増加した肝細胞の障害に関与していることが明らかになった.私達はHLA B44拘束性C型肝炎ウイルス特異的細胞障害性T細胞がHLA-B44を有する慣性C型肝炎患者末梢血中に存在し,そのような細胞障害性T細胞はC型肝炎