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9 世紀英国著作権法と戯曲出版の実践ー劇作家ディオン・ブシコーを中心にー

ヴィクトリア朝中期演劇を代表する人気劇作家Dion Boucicaultの200余の作品のうち、エリザベス・ギャスケルの小説『メアリー・バートン』の転用The Long Strike(1866)の分析に基づき、従来原本とされた当時の出版会社(Samuel French社)によるActing Editionsが、実際には作者の原稿(英国図書館及び、アイルランド国立図書館蔵)とは異なる異本であり、当時の英米2カ国間の特殊な法的環境から生じた海賊版であることを指摘した。さらに、実際の英国の上演を速記によって聞き書きし、脚本が作られた仮説の裏付けとなる出版社の書簡を入手した。本研究の目的は、19世紀英国の著作権に関わる法制度が当時の劇作にもたらした影響を明らかにすることにある。この研究を通じ、演劇の実践と印刷資本主義の間に揺れ動く「作者」とは何かを再考するための基礎的視角の構築を進めることとする。具体的には、19世紀の英米両国に渡って活躍した劇作家Dion Boucicaultの作品群を同じく英米2カ国間において出版を行ったSamuel French社による戯曲出版の実践を例に調査した。その結果、英国の著作権法の制度化にも関わらず、英国から米国の再販の通常の流通経路を通り英国初演ののち米国で出版されたことで、それらは不法とされなかったことが明らかとなった。さらに、必ずしも劇作家の本をコピーするだけでなく、戯曲が未出版の場合は、上演を介した速記使用がコピー法の1つであったことが明らかになった。また、当時のSamuel French社によるテクストの正統性について、作者とその出版された脚本の関係に当時の役者が懸念をもっていたことがSamuel French社のテクストに作者の原本に基づいて誤りを正す書き込みがなされているテクストを得たことから明らかになった。最近の著作法研究では各国ごとの制度史の視点から書かれているが、Boucicaultの訴訟の精読から19世紀戯曲出版において劇作の実践は多国間の法環境によって規定されたものであることが明らかになった。研究成果は口頭発表で発表したが、新たに19世紀英国大衆文化と出版に関する先行研究の内容を反映させ、近日中に論文として活字にする。平成23年度は、まず、英米の著作権法制度に関する理論構築作業の一環として、先行研究となるセビレやウッドマンシー氏らの著作物を入手し、精読を行った。そのなかで、本年度中に19世紀英国大衆文化と出版に関する新たな研究書が出版されたことを確認した。また、平成23年度は、英米における第一次資料調査(平成23年度8月14日-9月19日)を行った。訪問先は、申請の通り、英国図書館、英国国立公文書館、ヴィクトリア&アルバート博物館、米国ニューヨーク市公共図書館、米国議会図書館、米国ハーバード大学付属図書館(ロンドン市、ニューヨーク市、ワシントン市、ボストン市)である。さらに、申請の通り、劇作家ディオン・ブシコーの著作物について劇作品The Long Strikeを中心に資料収集を行った。明らかになったことは、劇作品The Long Strikeは、英米間の再販の通常の流通経路を通り、英国初演ののち米国で出版されたということである。必ずしも劇作家の本をコピーするだけでなく、戯曲が未出版の場合は、速記使用がコピー法の1つであったことが明らかになった。また、当時のフレンチ社のテクストの正統性について、当時の役者が懸念をもっていたことが明らかになった。米国に帰化した英国出身の役者がフレンチ社のテクストに作者の原本に基づき誤りを正す書き込みがなされているテクストを得た。研究結果をとりまとめ、口頭発表を行ったうえで、劇作品The Long Strikeの事例の資料をまとめ、近日中に論文として活字にする予定である。英米著作権法制度に関する理論構築作業、及び19世紀演劇出版の実践に関しては、研究目的の達成に向けて順調に進捗している。特に劇作家ディオン・ブシコーの劇作品The Long Strikeの事例を中心に、当初予期された通りのデータが得られた。一方、19世紀出版文化に関しては、戯曲出版も含め、本年度中に該当分野で新たな文献が多く出版されたため、さらなる作業が必要となった。全体としては、研究は順調に進展していると判断した。平成23年度に得られた結果を基にして、調査及び分析をまとめ、その成果を学会発表したうえで、論文投稿をすることが課題である。具体的には、Australasian Victorian Studies Association年次大会(於:豪州グリフィス大学平成24年度4月11日-14日)、及び日本知財学会年次大会(於:大阪工業大学平成24年度12月8日-9日)において研究発表を行う予定である。学会発表での質疑応答などの成果を踏まえた上で、発表に基づいた論文を最終年度となる24年度中に活字にする予定である。

平成24年度は、関連する学会において、研究成果を報告し、情報交換と研究交流を行うことで、今後の研究課題の明確化を図るものとする。そのために海外および国内の学会への参加旅費を計上した。これまで収集した文献の精読を通して成果をまとめたい。しかしながら、資料・文献を補足する必要も考えられるため、出版された文献の入手、他図書館所蔵の相互貸借・複写依頼費を計上した。また、学会発表に対するコメントを受けて、補足的な渡英調査を実施しなければならない可能性があるため、渡英調査を行うための海外旅費を計上した。
核酸医薬の革新的大量効率合成法

本年度は,本研究課題でこれまで開発してきた核酸に新規合成手法をRNA類縁体合成に応用するため,RNA化学合の鍵となる,2'-水酸基保護基の開発を行った。2'-水酸基の保護基として、塩基性条件下脱保護が可能な1-(2-シアノエトキシ)エチル(CEE)基を用いるモノマーユニットの合成を検討し,4種類の核酸塩基を有するモノマーユニットの合成法を確立した。さらに,CEE基の脱保護条件について検討した結果,塩基としてTBAFを用いると、CEE基は迅速に脱保護されることを見いだした。合成したモノマーユニットを用い,2量体を合成し、その脱保護条件を検討した。2量体を用いたCEE基の脱保護にTBAFを用いることによって,目的とするRNA 2量体が得られるが,アデノシンとシチジンを含む2量体の場合,塩基部位に2-シアノエチル化が進行することを明らかにした。これは,CEE基脱保護反応の副生成物であるアクリロニトリルが塩基性条件下,Michael型の付加反応を引き起こしていることが原因であることが明らかとなり,この副反応を抑制するために,アクリロニトリルの捕捉剤を種々検討した結果,ニトロメタンを添加することによって,ほぼ完全に副反応を抑制することに成功した。最適化された条件を自動合成機をいた固相合成法に適用し,種々のオリゴヌクレオチドを合成した。CEE基で保護したモノマーユニットを用いる縮合反応収率は98-99%であり,長鎖RNAの合成に十分有効であることを示した。そこで,siRNA21量体の合成を行い,良好な収率で目的物を単離することに成功した。今後,本研究で開発した新しい保護基を種々のRNA類縁体合成に適することにより,効率的な核酸医薬の合成が可能になることが期待される。本年度は,ヌクレオシド5'-ホスファイトをモノマービルディングブロックとする新しい核酸合成法の開発を中心に行った。種々の嵩高い置換基を有するホスフィチル化剤を用いて,無保護の2'-デオキシリボヌクレオシドとの反応を詳細に検討し,5'-水酸基に対して高い位置及び官能基選択的なホスフィチル化反応を行える条件を見出した。当初,デオキシチチジンとデオキシグアノシンを用いた場合,原料であるヌクレオシドの反応溶媒に対する溶解度が低いため,5'-選択的なホスフィチル化反応は進行しなかったが,種々溶媒を検討したところ,N-メチルピロリドンを反応溶液に添加することでヌクレオシドの溶解度が飛躍的に向上し,高選択的な反応を実現できた。4種類の核酸塩基を有するヌクレオシド5'-ホスファイトモノマーの合成ができたので,次にホスファイトの保護基の除去条件を詳細に検討した。この反応は,オリゴマーを合成する際の延長鎖末端の脱保護反応のモデルとなる。ホスファイトの保護基として2つのt-ブチル基を用いた場合,トリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液で処理すると,1つのt-ブチル基は迅速に除去されるものの,2つめのt-ブチル基の除去反応には長時間を要した。そこで,強力なルイス酸として知られるトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートを用いてt-ブチル基の除去を試みたところ,極めて迅速に2つの保護基が除去可能なことがわかった。しかし,この反応はピリミジン塩基を有する誘導体には有効であるが,プリン塩基,特にアデニン塩基を有する誘導体に適用すると,グリコシル結合が開裂するデプリネーションの副反応が顕著に観察された。

そこで,次に臭化亜鉛を用いる脱保護反応を試みたところ,アデニン誘導体の場合もデプリネーションを伴うことなく,目的とする反応のみが迅速に進行することがわかった。さらに,反応条件の最適化を行い,4種類の核酸塩基を有する誘導体に適用可能な反応を確立した。本年度は,固相合成法に代わる新しい有機合成手法として注目されている,フルオラス合成法を用いるDNAの新規合成手法の開発を行った。現在確立されている固相法による核酸合成法は,少量かつ多様な塩基配列を有する目的物を迅速に合成するために最適化されており,アンチセンス核酸など,特定の塩基配列を有する比較的短鎖の核酸医薬を大量合成するには適さない。そこで,本研究では,化学量論的な反応が行える液相法の利点を生かしつつ,抽出操作のみで多段階反応を行うことのできるフルオラス合成法をDNAの化学合成に初めて適用することを検討した。まず,出発となるヌクレオシドを結合させる,高いフッ素含有率を有する担体として,多数のパーフルオロアルキル鎖を有する樹状分子である,フルオラスデンドロンを合成し,これにリンカーを介してヌクレオシドを固定化した。次に,核酸塩基部位にフルオラス保護基が導入されたモノマーの合成を検討し,4種類(T,C,A,G)のモノマーを得ることができた。得られたモノマーをフルオラスデンドロン上で逐次的に縮合反応を行い,オリゴヌクレオチド鎖を延長する反応および目的物のフルオラス抽出による精製法を詳細に検討し,オリゴマー鎖長延長工程を確立することができた。さらに,インターヌクレオチド結合の酸化反応,保護基の除去反応および目的物のフルオラス抽出条件を詳細に検討し,目的とするDNAフラグメントを良好な収率で得た。また,フルオラスデンドロン担体も高収率で回収することができた。このように,本合成法は,用いるフルオラス溶媒や担体を回収,再利用することが可能であり,グリーンケミストリーとしても極めて有効な手法であると言える。本研究によって新たに開発された核酸の新規フルオラス合成法は,今後,固相合成に代わる核酸の液相大量合成手法になり得るものと期待される。本年度は,液相法による核酸誘導体の大量合成法確立のための,新規脱水縮合剤の開発を重点的に行った。本研究課題で開発した新規核酸合成法は,ヌクレオシドホスホン酸誘導体を脱水縮合剤を用いて活性化し,遊離の水酸基を有するヌクレオシドと縮合する,いわゆるH-ボスホネート法と呼ばれる核酸合成法に分類される。従来,核酸合成に用いられてきたスルホン酸系,リン酸系,カルボン酸系の脱水縮合剤は,脱水縮合反応において,水酸基への副反応や核酸塩基部位への副反応が起るため,それらを用いる核酸合成反応の収率は満足できるものではなかった。また,従来の縮合剤を本研究で開発した液相法による新規核酸合成法に適用した場合,オリゴヌクレオチド鎖の延長とともに,顕著な縮合反応収率の低下が観察された。そこで,これらの問題を解決すべく,新しい効率的な脱水縮合剤の開発を行った。3-ニトロー1,2,4-トリアゾリル基を脱離基として有する,トリアミノホスホニウム型の化合物が,高い縮合活性,官能基選択性を有する優れた新規縮合剤であることを見出した。ボスホニウムリン原子の置換基を種々検討したところ,1,3-ジメチル-2-(3-ニトロ-1,2,4-トリアゾール-1-イル)-2-ピロリジン-1-イル-1,3,2-ジアザホスホリジニウムヘキサフルオロホスフェート(MNTP)が最も有効な脱水縮合剤であることがわかった。MNTPは,ホスホン酸エステル誘導体だけでなく,リン酸エステル,カルボン酸エステルや,対応するアミドの合成にも極めて有効であった。
プログラム自己理解のための受動的アニメーションシステムの構築と評価

計算機のプログラムアニメーションに関して,「プログラム作成者自身が自分のために利用する」という観点から,紙芝居インタフェースを利用した完全自動,受動的なソースコードアニメーションシステム「プログラム紙芝居」を作成・公開した.-操作性の向上一時停止,巻き戻しなどをサポートするために,ビデオデッキ風の再生制御ボタンを導入した.これは十分なじみのあるインタラクション形態であり,本研究の重点である「受動性」を損なわない.-プログラム理解への応用制御機能の拡張によって,教育目的だけでなくプログラム理解への利用など応用分野を広げることができ,Cプログラムの理解のためのツールとして実現した.この研究では,紙芝居による逐次アニメーションに加えてプログラム実行系列に対するランダムアクセスの重要性がわかった.-並列プログラムへの応用Javaプログラムを対象として,マルチスレッドプログラムの可視化の手段として複数の紙芝居の並列アニメーションをとりいれたシステムを構築した.その結果,粗粒度のマルチスレッドプログラムについて,同期に関連したバグの発見に効果があることがわかった.-評価実験学生を対象としてアンケートによる評価を実施した.その結果,特にプログラミング入門段階の学生に対する有効性を確かめられた.一方,ある程度進んだ利用者に対しては,現状のフレームワークとの整合性を保ちつつ高度なデバッグ機能を組み込む必要があることもはっきりした.-システムの公開2000年12月に,成果のシステムをウェブ上で公開した.その結果,約3カ月間に2300件のアクセスがあり,システムのダウンロード数も300件にのぼった.また,そのウェブページが商業誌で紹介され,システムが付録のCDROMに収録された.計算機のプログラムアニメーションに関して,「プログラム作成者自身が自分のために利用する」という観点から,紙芝居インタフェースを利用した完全自動,受動的なソースコードアニメーションシステム「プログラム紙芝居」を作成・公開した.-操作性の向上一時停止,巻き戻しなどをサポートするために,ビデオデッキ風の再生制御ボタンを導入した.これは十分なじみのあるインタラクション形態であり,本研究の重点である「受動性」を損なわない.-プログラム理解への応用制御機能の拡張によって,教育目的だけでなくプログラム理解への利用など応用分野を広げることができ,Cプログラムの理解のためのツールとして実現した.この研究では,紙芝居による逐次アニメーションに加えてプログラム実行系列に対するランダムアクセスの重要性がわかった.-並列プログラムへの応用Javaプログラムを対象として,マルチスレッドプログラムの可視化の手段として複数の紙芝居の並列アニメーションをとりいれたシステムを構築した.その結果,粗粒度のマルチスレッドプログラムについて,同期に関連したバグの発見に効果があることがわかった.-評価実験学生を対象としてアンケートによる評価を実施した.その結果,特にプログラミング入門段階の学生に対する有効性を確かめられた.一方,ある程度進んだ利用者に対しては,現状のフレームワークとの整合性を保ちつつ高度なデバッグ機能を組み込む必要があることもはっきりした.-システムの公開2000年12月に,成果のシステムをウェブ上で公開した.その結果,約3カ月間に2300件のアクセスがあり,システムのダウンロード数も300件にのぼった.また,そのウェブページが商業誌で紹介され,システムが付録のCDROMに収録された.プログラムアニメーションシステム「プログラム紙芝居」について,平成11年度は以下の項目を行なった。1.利用者の操作性の向上一時停止,巻き戻しなどをサポートするために,ビデオデッキ風の再生制御ボタンを導入した.こらは十分なじみのあるインタラクション形態であり,本研究の重点である「受動性」を損なわない.2.表示内容の強化プログラムソースのみならず,指定した変数の値も表示できるようにした.ただし,その指定は起動時に行なうこととし,複雑なインタラクションを避けた.3.プログラム実行との連動方式プログラムの進行とアニメーションの進行の関係について,非同期的,同期的の両方を選択可能とした.前者は実行時間にクリティカルなアプリケーションに適し,後者は入出力を含むアプリケーションに適する.4.評価実験学生を対象としてアンケートによる評価を実施した.その結果,特にプログラミング入門段階の学生に対する有効性を確かめられた一方,ある程度進んだ利用者に対しては,現状のフレームワークとの整合性を保ちつつ高度なデバッグ機能(たとえばブレークポイントなど)を組み込む必要があることもはっきりした.5.対外発表の準備コンピュータの教育に関する国際会議(ITiCSE2000)におけるポスタ発表と論文投稿を準備している.プログラムアニメーションシステム「プログラム紙芝居」について,平成12年度は以下の項目を行なった.1.評価実験に基づく機能拡張学生を対象とした評価実験により,受動的なアニメーションが入門段階での理解促進に効果が高いことが確かめられた.一方,中級段階の学生にとってはより能動的なインタラクションが必要であることがわかり,対象プログラムの逆実行再生を含むアニメーション制御機能の拡張を行なった.2.プログラム理解への応用制御機能の拡張によって,教育目的だけでなくプログラム理解への利用など応用分野を広げることができ,Cプログラムの理解のためのツールとして実現した.この研究では,紙芝居による逐次アニメーションに加えてプログラム実行系列に対するランダムアクセスの重要性がわかった.3.並列プログラムへの応用Javaプログラムを対象として,マルチスレッドプログラムの可視化の手段として複数の紙芝居の並列アニメーションをとりいれたシステムを構築した.その結果,粗粒度のマルチスレッドプログラムについて,同期に関連したバグの発見に効果があることがわかった.4.国際会議での発表2000年7月に計算機教育に関する国際会議でシステムに関して発表を行なった.インタラクションを重視するシステムが多い中で,入門者のための受動的アニメーションという観点が評価された.5.システムの公開2000年12月に,成果のシステムをウェブ上で公開した.

その結果,約3カ月間に2300件のアクセスがあり,ソースプログラムのダウンロード数も300件にのぼった.また,そのウェブページが商業誌で紹介され,システムが付録のCDROMに収録されたので,さらに多くの人に利用されていると思われる.
先天性横隔膜ヘルニア児肺機能改善療法の開発

生後横隔膜修復を行っても肺の低形成が原因で予後が改善しないため、胎児期に手術を行う試みが研究されている。我々は術後も肺機能が長期間改善しない主因が肺サーファクタント欠乏にあるのではないかと考え、出生後の肺機能改善促進療法開発を目的に実験を行った。1.先天性横隔膜ヘルニアラットの作成妊娠ラットに妊娠12日目よりニトロフェンを経口投与し、全身麻酔手術に耐術可能な中等度の先天性横隔膜ヘルニアモデルを作成した。実験モデルラット作成に至適なニトロフェン経口投与量を100mg/kgと決定した。2.培養II型肺胞上皮細胞へのKGF遺伝子導入LacZを有するプラスミドにKGF, HGF遺伝子を組み込みLipofection法で培養ラットII型肺胞上皮細胞へ遺伝子導入を行った。In vitroにおける遺伝子導入効率は、約10-20%であった。またSDS-PAGEにて培養細胞からの導入遺伝子由来蛋白質の分泌を確認した。3.遺伝子導入細胞の肺内分布確認1x10^6個の遺伝子導入処理細胞を緩衝液に浮遊させ、末梢静脈より注入し肺へ移植した。X-Gal染色にて、移植後の遺伝子導入細胞の分布状況、経時的増殖状況を検討した。部分的に細胞が塊状となって存在するところが確認され、移植後に経時的に移植細胞が増殖した可能性も考えられた。4.横隔膜ヘルニア術後の細胞移植効果検討横隔膜ヘルニア修復手術時にKGF遺伝子導入細胞移植実施群と単独修復群で術後の血液ガス測定を行い、注入移植の効果を検討した。その結果、注入群で動脈血酸素飽和度が良好に維持されることが確認され、KGF遺伝子導入注入移植による治療効果が確認された。1.培養II型肺胞上皮細胞へのKGF遺伝子導入LacZを有するプラスミドにKGF,HGF遺伝子を組み込みLipofection法で培養ラットII型肺胞上皮細胞へ遺伝子導入を行った。2.遺伝子導入細胞の肺内分布確認1x10^<-6>個の遺伝子導入処理細胞を緩衝液に浮遊させ、末梢静脈より注入し肺へ移植した。1.先天性横隔膜ヘルニアラットの作成妊娠ラットに妊娠12日目よりニトロフェンを経口投与し、全身麻酔手術に耐術可能な中等度の先夫性横隔膜ヘルニアモデルを作成した。4.横隔膜ヘルニア術後の細胞移植効果検討

横隔膜ヘルニア修復手術時にKGF遺伝子導入細胞移植実施群と単独修復群で術後の血液ガス測定を行い、注入移植の劫果を検討した。その結果、注入群で動脈血酸素飽和度が良好に維持されることが確認され、KGF遺伝子導入注入移植による治療効果が確認された。
地域子育て支援活動における育児相談が保育者に及ぼす効果に関する実証的研究

地域子育て支援活動における育児相談が保育者に及ぼす効果を検討することを目的とした2年にわたる研究の2年目である。前年度の成果をふまえ、2年目の取り組みとして(1)保育所併設の支援センターの育児相談の内容と特徴を明らかにすること、(2)養育者が抱く育児不安の内容とそれが生起する要因を明らかにすること、(3)育児相談を通しての保育者の変化を明らかにし、子育て支援担当者の保育認識にどのような変化がもたらされたかを検討した。子育て支援センターに寄せられる育児相談は広範囲にわたっているが、健康に関する相談、深刻な虐待といった問題は比較的少なく、より小さな身近な問題が多く、子どものことに限らず、養育者自身の問題に関する相談が多い。また、養育者が抱く育児不安は自分の子どもをどのようにとらえているかという養育者の子ども観との関連が深いと考えられ、特に自分の子どもが「手のかかる子」であるととらえている場合、養育者自身が外界との関わりに消極的であることが明らかになった。育児相談を通して、保育者は養育者の悩みや不安についての共感性を高めていると思われるが、それには子どもをよりよく育てたいという願いから親に対する一方的な要求をするという段階から親の立場に立って子育てを考える段階へと移行していくように思われる。同時に、育児相談や子育て支援への取り組みを通して、学習の機会が広がり保育者の保育に対する見識を広め、保育者自身の主体的な職業生活への関与が促されている。今後の課題としては、こうした保育者の保育認識の変化は保育者個人の問題ではなく、保育者集団(保育所・幼稚園)や他機関との連携によっていっそう促される傾向があり、他機関との関わりが重要である。しかし、北海道の地域的特性などから他機関との関わりの機会が少ない地域もあり、こうした地域間のギャップをどのように埋めていくかを検討する必要がある。また、そのためのネットワークも考えられる必要があると思われる。育児相談の内容と特徴については19971998年度の電話による相談について分類した。分類は日本保育協会の「電話相談利用状況」の相談区分とあわせて検討し、分類項目の若干の変更を行った。その結果、現代の親に特徴的であると考えられる相談として、(1)遊び、(2)子ども受容、(3)見通しの持てない不安、(4)体罰(虐待)、(5)親同士の関係、(6)保育者・教師との関係、の6項目を新たに設定する必要があると考えられた。これらは現代の親の姿を明らかにすると共に、今後の子育て支援の方向を示唆するものである。相談窓口については、多くの機関が子育てに関する相談窓口を設けていることが明らかになった。ただ、これらの相談窓口は機関や行政組織などによって分断化されており、各機関がそれぞれの専門性を生かしながら相互に関与しあい機能しているとは言えない状況がある。これらの相談窓口、専門機関のネットワーク化の必要が感じられる。子育て支援の具体的取り組みでは、活動に対する養育者の参加形態によってその機能を分類することができると考えられるが、さらに詳細な検討が必要で、現在検討中である。また、現在、養育者の育児負担感に関する質問紙調査を子どもの気質に関する調査と合わせて実施し、質問紙を回収中である。
子どもの主体的な育ちを支える保育の「場」の在りように関する関係論的分析

本研究では、保育園や幼稚園などの保育現揚における子どもたちの発達過程を、その「場」を構成するさまざまな構成要素(その「場」に関与する多様な人々や物、その他空間的条件等)を含んだ活動システム全体の変化に着目しつつ分析していくことによって、その発達を支えている「場」の構造を明らかにし、子どもたちの主体的な育ちを生み出す可能性が埋め込まれた「場」の在りようや保育の営みについて考察することを目的とした。最終年度に当たる本年度は、これまでの幼稚園における長期的フィールドワークを通して得た資料を基に、子どもたちの活動の展開やかかわりの広がりを助ける「場」の構造を、「活動媒体」の持つ特性に着目しつつ、さらなる分析を行った。そこでは、昨年度までに明らかになってきた活動媒体となる「資源」の持っている読み替え可能性の他にも、それぞれの子どもたちの「読み替えJや、その発信を支える「共感的他者」の存在や、さらにその他者を支える共同体のもつ「対話的関係」が不可欠であることが見出された。また、そうした「他者」の共感的かかわりや「対話」が活性化されていくためには、「場」そのものが限定されたり単層化することなく、多様な「場」が交差し合う、多くの出会いや視点に開かれた重層的な「場」としてデザインされていく必要性についても示唆された。幼稚園や保育所などの保育現場における子どもたちの発達的変化について、その「場」を構成するさまざまな構成要素(そこに関与するあらゆる人々や物的環境、その他空間的条件など)を含んだ活動システム全体の変化に着目しつつ分析し、そうした変化を生み出す可能性が多様に埋め込まれた「場」の在りようを明らかにすることによって、子どもの主体的な育ちを支え得る保育の在りようについて考察することが本研究の目的である。幼稚園における継続的なフィールドワークを通して、入園当初、他児とのかかわりに難しさを抱えていた対象児A児の変容過程に関する縦断的観察を行い、ビデオ記録を基に分析及び考察を行ってきた。現在、そのかかわりの広がっていった過程とそれが阻害されていたケースとの分析を通して、子どもたちの活動の展開やそこでの多様な関係の広がりを助ける背景にあるものの探究を試みている。子どもたちの活動の展開を助ける「場」の構造の特徴の一つとしては、その活動を媒介とする「活動媒体」として活用される「資源」の持っている特性が挙げられており、その「資源」の持つ読替え可能性が、それぞれの子どもたちが自分なりの文脈で活用していくことのできる「活動媒体」としての活用を可能とすると考えられる。しかし、それだけではなく、それぞれの子どもたちの文脈の発信を支える多様な他者との関係構造やその他の環境条件等も大きくかかわっていることが見えてきており、今後は、それらの関係を持っている「対話性」とその対話を活性化させる「親密性」とに焦点を当てつつ、子どもたちの活動の広がりや関係の変容をより起こりやすくする「場」の在りようについて、理論的精緻化を図ることとする。また、最終年度となる今年度は、それらの研究成果について学会発表を行う予定である。
経済的価値の神経基盤の解明

快楽財/機能財の経済価値判断が共通した脳領域で行われていることを明らかにする.快楽財とは,感情面(楽しさ等)を理由に購買する商品である.一方で,機能財とは機能面(有用性等)を理由に購買する商品である.しかしながら,快楽財/機能財の経済価値判断が共通した脳領域かはわかっていない.昨年度は,東北大学加齢医学研究所ブレインイメージング棟にてfMRI実験を実施した.そして,データ解析を行い,楽しいから買う快楽財と役に立つから買う機能財は,共通した脳領域で処理されていることがわかった.この成果を日本消費者行動研究学会にて発表した。本年度は,解析をより進めて,報酬に敏感な人ほど自動的に快楽財の価値を処理しているという新たな知見を得た.現在は論文を投稿中である.この成果を用いてアウトリーチ活動も行った.日本心理学会主催の消費者の心理をさぐる、という一般向けシンポジウムで、脳科学による消費者行動研究についてレクチャーをした.約300名の方が参加され,普段交流が少ないアカデミア以外の方と質疑を交わすことができた.また,購買意向とは異なる別の経済的価値(シェア行動)についての神経基盤をさぐる研究(脳データからシェア行動を予測する)も行った.行政・医療機関・企業では,広告をシェアしてもらい,多くの人に広告を見てもらうことが必要である。多くシェアしてもらうことで,実際にキャンペーンを見ていない人にまで,情報を伝えることができる。しかしながら,シェア行動が脳データから予測できるかはわかっていなかった。本研究では,他者の心情を推測する脳領域の活動から,多くの人にシェアされる広告が予測できることを明らかにした.いくつか学会発表を行い,今年度中には投稿を予定している.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は、快楽財/機能財の経済価値判断が処理されている脳領域を明らかにすることである。快楽財とは、感情面(楽しさ等)を理由に購買する商品である。一方で、機能財とは機能面(有用性等)を理由に購買する商品である。しかしながら、快楽財/機能財の経済価値判断の脳領域はわかっていない。さらに、それが意識的・自動的価値判断で異なるかどうかもわかっていない。オンライン予備実験を行い、快楽財・機能財を選定した。快楽財として主にコミック、機能財として主に実用書を選定した。予備実験で選定した刺激を用いて、機能的磁気共鳴画像法(fMRI)実験を行った。fMRI実験は、予定通り、東北大学加齢医学研究所ブレインイメージング棟のMRI装置を使用して行った。実験参加者は、意識的な経済価値として、MRIの中で快楽財/機能財の支払意思額を回答した。結果として、快楽財/機能財の意識的経済価値は、共に前頭前野腹内側部と線条体で処理されていることがわかった。また、自動的な価値判断を測定するために、実験参加者はMRIの中で、快楽財/機能財の知覚判断(本のタイトル行/人物の合計数を回答)を行った。自動的な価値判断の際には、快楽財の価値が前頭前野腹内側部で処理されていた。なお、この自動的価値の結果は、報酬感受性が高い個人のみ見られた。これらの成果は、生物学的な基盤に立脚した新しい消費者行動理論につながると期待できる。当初想定された研究計画より前倒しで、実験結果が得られた。また、成果を学会で発表することができた。本研究では,他者の心情を推測する脳領域の活動から,多くの人にシェアされる広告が予測できることを明らかにした.いくつか学会発表を行い,今年度中には投稿を予定している.論文として国際学術雑誌に投稿・発表する。また、経済価値判断に関連する新たな実験を行う予定である。
身体的音空間知覚を可能にする広帯域三次元音場再現システム

本研究課題は、高速1bit信号を用いた超多チャンネル没入型3次元音場再現システムの構築とそれを用いた物理音場制御技術の確立を目指している。前年度に開発した高速1bit音場再生用の基幹システムをベースとし,聴取者の頭部の位置に追従して局所音場を制御する動的局所音場再現システムの提案を行い,その構築を進めた。これに伴い,リアルタイム信号処理の必要性に関する検討を実施,前年度に実施したスピーカアレイ形状やスピーカユニットの検討に基づいたスピーカアレイの設計・製作を実施し,その製作がおおむね完了した。また,スピーカの駆動関数に関する検討を数値シミュレーションで実施し,広帯域/高精度な三次元音場再現を目的とした焦点音源を仮想スピーカとして用いた局所音場再現手法を中心に,複数の局所音場再現手法の比較検討を進めた。特に,局所音場再現手法では,一般的に再現領域が聴取者一人分程度まで狭まり,同時に聴取体験が可能な人数が少なくなってしまうという問題がある。そこで,複数人に対して高精度な音場制御を行うことを目的とした複数局所音場合成手法の提案を行い,他の制御手法と再現精度の比較検討を進めた。また,局所音場合成の多くは再現領域内に音響反射する頭部が存在することを想定していないが,実施に聴取者がその場にいる以上,聴取者自身の頭部が音響反射することの影響が存在するが,その影響が再現精度に与える程度の詳細は明らかでない。そこで,複数の局所音場再現手法について,頭部の音響反射による再現精度への影響に関して,剛球モデルを用いた数値シミュレーションを実施し,音源の方向や位置に応じた影響の違いを明らかにした。また,次年度に実施予定である音声の音空間情報が与える心理的影響を検討を行うのに先立って,ヘッドホンを用いた動的バイノーラルシステムを簡易的に構築し,心理実験の予備的検討を実施した。本年度は,昨年度に構築した小型多チャンネルシステムを拡張した動的局所音場合成システムを提案し,その構築を進めている。動的局所音場合成システムにおける切り替え手法に関する検討や,数値シミュレーションによる局所音場合成手法における頭部の影響に関する検討,仮想スピーカを用いた2領域音場再現手法に関する検討や,ヘッドホンを用いた音空間情報の提示が情動に与える影響に関する予備的検討などが進んだことから,概ね順調に推移していると判断した。今後は,広範囲で広帯域/高精度な三次元音場再現を実現する目的で,高速1bit信号を用いた動的局所音場再現システムの構築を加速する。これまでにスピーカアレイなどやFPGA/ARM基盤等のハードウェアの構築はおおむね終了していることから,頭部位置の検出システムとの連動,頭部の位置に応じた局所音場制御等ソフトウェア側の設計・実装を実施する。構築したシステムを用いた実験を実施し,シミュレーション結果と物理的な計測結果の比較を実施する。また,指向性の動的な変化含む音声を対象とした心理実験によるシステムの有効性の検証を実施し,本年度中の論文化を目指す。また,これまで,数値シミュレーションによる局所音場再現手法の比較検討や,複数領域の局所音場制御手法に関する提案等を実施したが,特に聴取者頭部の音響反射が再現精度に及ぼす影響に関しては,より詳細な検討を進め,論文化を行う。また,前回の報告でも懸念材料として挙げていたが,音場再現手法の実装にあたって問題となる高コストな多点インパルス応答計測に関して,数値シミュレーションによる計測効率化手法の検討が進んでおり,次年度はその計測・モデリング手法の確立を目的として,2.5次元,3次元音場へと順に問題を複雑化して検討を進める。特に最終的に実測したインパルス応答を用いて手法の検討を行い,その後,提案手法を局所音場再現手法への適用および実際のシステムへの実装を進める予定である。平成29年度は、音場再生システムの設計と基幹部の構築、シミュレーションによる音場再現手法の検討と没入型スピーカアレイ形状とスピーカ配置密度の検討を行った。音場再現システムの設計と基幹部の構築では、高速1bitを用いることで大規模多チャンネル再生システムへと拡張可能なシステムを提案・設計し、FPGAとARMを用いてクロックレベルですべてのオーディオ信号の同期再生が可能なシステムを提案した。また、提案システムを用いて駆動する没入型スピーカアレイの設計と構築を進めた。音声音場の再現を目的として軽量かつ充分に小型なスピーカユニットの選定を実施した。スピーカアレイの拡張・配置の変更あるいは移動・運搬が容易となるように分解可能なスピーカアレイを想定し、エンクロージャの設計を進めた。また、提案システムを用いた高速1bit信号によるスピーカユニットの直接駆動を実施し、インパルス応答の計測やレーザ振動計を用いたスピーカ表面の振動計測を行い、再生音に対して量子化ノイズの影響が充分に小さいことを確認した。また、スピーカユニット自体の物理的制約によって、スピーカアレイの実音源密度を上げることには限界があり、このため高周波数までの音場再現が困難となる。そこで、頭部周辺の領域を取り囲むように仮想的なスピーカを高密度に生成することで、実スピーカの物理的制約を越えた高周波数の音場再現が可能な局所音場再現手法を用いた物理音場再現技術について数値シミュレーションによる検討を進めた。自由音場を仮定した3次元音場再現の数値シミュレーションによって実スピーカアレイの形状・配置による3次元音場の再現精度への影響を物理音場再現手法ごとに評価し、構築するスピーカアレイの形状を検討した。

高速1bit信号を用いた超多チャンネルシステムの構築においては、スピーカの直近までデジタル信号のまま伝送が可能で、軽量かつ小型な多チャンネル再生システムを提案した。提案システムをFPGAとCPUを併用し基幹システムとして構築を行い、多チャンネル化への見通しを得た。さらに、数値シミュレーションによる局所音場再現手法の検討を行い、没入型スピーカアレイのスピーカ配置が再現精度に与える影響について再現手法ごとに比較を行い、没入型スピーカアレイの形状の検討が進んだことから、概ね順調に推移していると判断した。本研究課題は、高速1bit信号を用いた超多チャンネル没入型3次元音場再現システムの構築とそれを用いた物理音場制御技術の確立を目指している。前年度に開発した高速1bit音場再生用の基幹システムをベースとし,聴取者の頭部の位置に追従して局所音場を制御する動的局所音場再現システムの提案を行い,その構築を進めた。これに伴い,リアルタイム信号処理の必要性に関する検討を実施,前年度に実施したスピーカアレイ形状やスピーカユニットの検討に基づいたスピーカアレイの設計・製作を実施し,その製作がおおむね完了した。また,スピーカの駆動関数に関する検討を数値シミュレーションで実施し,広帯域/高精度な三次元音場再現を目的とした焦点音源を仮想スピーカとして用いた局所音場再現手法を中心に,複数の局所音場再現手法の比較検討を進めた。特に,局所音場再現手法では,一般的に再現領域が聴取者一人分程度まで狭まり,同時に聴取体験が可能な人数が少なくなってしまうという問題がある。そこで,複数人に対して高精度な音場制御を行うことを目的とした複数局所音場合成手法の提案を行い,他の制御手法と再現精度の比較検討を進めた。また,局所音場合成の多くは再現領域内に音響反射する頭部が存在することを想定していないが,実施に聴取者がその場にいる以上,聴取者自身の頭部が音響反射することの影響が存在するが,その影響が再現精度に与える程度の詳細は明らかでない。そこで,複数の局所音場再現手法について,頭部の音響反射による再現精度への影響に関して,剛球モデルを用いた数値シミュレーションを実施し,音源の方向や位置に応じた影響の違いを明らかにした。また,次年度に実施予定である音声の音空間情報が与える心理的影響を検討を行うのに先立って,ヘッドホンを用いた動的バイノーラルシステムを簡易的に構築し,心理実験の予備的検討を実施した。本年度は,昨年度に構築した小型多チャンネルシステムを拡張した動的局所音場合成システムを提案し,その構築を進めている。動的局所音場合成システムにおける切り替え手法に関する検討や,数値シミュレーションによる局所音場合成手法における頭部の影響に関する検討,仮想スピーカを用いた2領域音場再現手法に関する検討や,ヘッドホンを用いた音空間情報の提示が情動に与える影響に関する予備的検討などが進んだことから,概ね順調に推移していると判断した。
培養細胞から産生される一酸化窒素を指標とした環境汚染物質および食品成分の評価

内分泌かく乱物質(endocrine disrupting chemicals, EDCs)は主に食品を介して体内に蓄積し、生体に様々な影響を与えることが知られている。そこで今回、EDCsが免疫機能に与える影響を、リポポリサッカライド(LPS)刺激によって産生される一酸化窒素(NO)の産生量を指標として解析した。EDCs(ビスフェノールA(BPA)、ノニルフェノール(NP)、オクチルフェノール(OP)、2,4-ジクロロフェノール(DCP)、ペンタクロロフェノール(PCP))がRAW264細胞のNO産生に与える影響を調べるために、LPS刺激開始12時間後における単位時間当たりのNO産生量を測定した結果、全てのEDCsにおいて濃度依存的なNO産生の抑制が認められた。さらにエストロゲン受容体阻害剤(ICI182780)の処理により、BPA、NP、OPで処理した系でNO産生量の回復が認められたが、PCP、DCPではNO産生量の回復が認められなかった。iNOSの転写因子であるNF-κB(p65)の活性化をELISA法によって評価したところ、LPS刺激によるNF-κB活性化はEDCs処理によって減弱した。加えて免疫細胞学的解析から、NOシグナルの特徴的なメディエーターとして近年注目される、8-ニトログアノシンの形成量がEDCs処理することで減少することが示された。これらの結果は、フェノール含有EDCsによるLPS誘導NO産生およびNF-κB活性化の抑制にはエストロゲン受容体依存的・非依存的な経路の両方が存在すること、さらにEDCsは8-ニトログアノシン形成阻害を介してNO由来のシグナルに間接的に干渉し、炎症進展に影響を与える可能性を示唆している。生体は異物の侵入や組織の障害に対する局所的な防御策として炎症反応を利用している。また、主に食品を介して体内に蓄積した内分泌かく乱物質(EDCs)は、個体発生や免疫機能の異常などの影響を与えることが知られている。本研究では、EDCsが免疫機能に与える効果を、マクロファージのリポポリサッカライド(LPS)刺激によって産生される一酸化窒素(NO)産生量を指標として解析した。さらに近年、NO由来のグアニンニトロ化の新しいシグナル機能として注目されている、8-ニトログアノシン(NO_2-Guo.)の産生に着目した解析もあわせて行った。[方法]LPS刺激を施したマウスマクロファージ由来のRAW264細胞に5種類のEDCs(ビスフェノールA、ノニルフェノール、オクチルフェノール、2,4-ジクロロフェノール(DCP)、ペンタクロロフェノール)処理12時間後に培養液中のNO_2^-/NO_3^-濃度と生細胞数を、それぞれHPLC-グリース法とトリパンブルー染色法を用いて測定し単位時間・単位細胞当たりのNO産生量として解析した。また、細胞内のNO_2-Guo.生成は、抗NO_2-Guo.モノクローナル抗体を用いて組織免疫化学的に解析した。[結果]DCP以外の4種類のEDCs処理により、コントロールと比較して有意なNO産生量の低下および弱いNO_2-Guo.染色像が得られた。これに対してDCP処理ではNO産生量やNO_2-Guo.染色像に差は認められなかった。[考察]EDCsは核内受容体のリガンドとして作用し標的遺伝子群の発現制御のみならず、各種の転写制御因子と核内で会合することで、多様なシグナルとクロストークすることが知られている。今回の知見より、EDCsは核内受容体を介した標的遺伝子発現への直接的な影響のみならず、NOやNO_2-Guo.を介して、間接的にシグナル伝達系に影響を与えることが示唆された。

内分泌かく乱物質(endocrine disrupting chemicals, EDCs)は主に食品を介して体内に蓄積し、生体に様々な影響を与えることが知られている。そこで今回、EDCsが免疫機能に与える影響を、リポポリサッカライド(LPS)刺激によって産生される一酸化窒素(NO)の産生量を指標として解析した。マウスマクロファージ由来のRAW264細胞をLPS処理後、培養上清中の硝酸・亜硝酸イオン濃度を経時的に測定した結果、刺激開始後3時間目よりNOの産生が開始され、12時間後に最大に達することが確認された。また、刺激開始12時間後における単位時間当たりのNO産生量を測定した結果、NO産生量はLPS濃度が100ng/mlでフラットに達することが確認された。EDCs(ビスフェノールA(BPA)、ノニルフェノール(NP)、オクチルフェノール(OP)、2,4-ジクロロフェノール(DCP)、ペンタクロロフェノール(PCP))がRAW264細胞のNO産生に与える影響を調べるために、LPS刺激開始12時間後における単位時間当たりのNO産生量を測定した結果、全てのEDCsにおいて濃度依存的なNO産生の抑制が認められた。さらにエストロゲン受容体阻害剤(ICI182780)を用いた解析より、BPAで処理した時のみNO産生量の回復が認められたことから、BPAのNO産生抑制効果はエストロゲン受容体を介して起こることが示された。内分泌かく乱物質(endocrine disrupting chemicals,EDCs)は主に食品を介して体内に蓄積し、生体に様々な影響を与えることが知られている。さらにエストロゲン受容体阻害剤(ICI182780)の処理により、BPA、NP、OPで処理した系でNO産生量の回復が認められたが、PCP、DCPではNO産生量の回復が認められなかった。iNOSの転写因子であるNF-κB(p65)の活性化をELISA法によって評価したところ、LPS刺激によるNF-κB活性化はEDCs処理によって減弱した。加えて免疫細胞学的解析から、NOシグナルの特徴的なメディエーターとして近年注目される、8-ニトログアノシンの形成量がEDCs処理することで減少することが示された。これらの結果は、フェノール含有EDCsによるLPS誘導NO産生およびNF-κB活性化の抑制にはエストロゲン受容体依存的・非依存的な経路の両方が存在すること、さらにEDCsは8-ニトログアノシン形成阻害を介してNO由来のシグナルに間接的に干渉し、炎症進展に影響を与える可能性を示唆している。
子宮内膜症による鉄過剰に起因する卵巣癌発症の分子メカニズムの解明とその予後予測

卵巣の内膜症性嚢胞内への繰り返す出血に伴う鉄の過剰沈着によって起こる酸化ストレスによって類内膜腺癌と明細胞腺癌が発症することが近年報告された。本研究期間において、我々が卵巣明細胞腺癌の遺伝子変化についてアレイCGH法を用いて解析すると、Met遺伝子の増幅が高頻度に起こっており、予後不良因子であることを報告した。また、子宮内膜症患者との関連が報告されたANRIL遺伝子と共同して作用するCBX7の発現が卵巣明細胞腺癌の予後不良因子であることについても報告した。さらに、内膜症の間質細胞の役割についても検討し、報告した。卵巣明細胞腺癌は化学療法に抵抗性であり、同病期の卵巣腺癌のなかでも予後が悪い。明細胞腺癌と類内膜腺癌では子宮内膜症による出血に伴う鉄沈着による慢性的な酸化ストレスが発癌の重要な因子であると考えられているが、詳細なメカニズムは不明である。当該年度中に我々はまずアレイCGHを行い、PI3キナーゼ/ AKTの経路の上流の受容体型チロシンキナーゼであるMetの遺伝子増幅が卵巣明細胞腺癌のおよそ30%に認められることを発見した。またMetの遺伝子増幅は蛋白レベルでの過剰発現を伴っており、Met遺伝子増幅群は卵巣明細胞腺癌の予後不良因子であることが明らかとなった。さらに、Met遺伝子のノックダウンを行ったところ、Metの増幅を有する細胞株において細胞増殖の有意な低下が認められた。これらの成果がPLoSONEに掲載された(Yamashita Y et al. PLoSOne. 2013;8(3):e57724)また、当該年度において我々はFe-NTA投与ラット酸化ストレス発がんモデルにおいてもヒト卵巣癌と同様に高頻度でMet遺伝子の増幅が認められることをあわせて報告した(Akatsuka S et al. PLoSOne. 2012;7(8):e43403.)。当該年度で子宮内膜症の詳細な発癌メカニズムをゲノム、RNA及び蛋白レベルでの網羅的解析を行い、明らかにすることができた。次年度は、卵巣明細胞腺癌においてもっとも重要と考えられるMetの下流シグナルの同定とMetおよび下流シグナルの阻害を利用した卵巣明細胞腺癌の治療法の開発に着手して行きたい。この成果をヨーロッパ癌学会で発表した(Yamashita Y etal; European Journal of Cancer 47(1)S529,2011)。また、当該年度において我々は日本人の子宮内膜症と強い関連があるとされるnon-coding RNA(ncRNA)であるANRIL (CDKN2BAS)の発現を子宮内膜症組織、内膜症症例の不死化内膜上皮細胞及び間質細胞、卵巣明細胞腺癌細胞株で調べ、内膜症関連癌及び上皮細胞で核内に発現しているという結果が得られた。さらに、子宮内膜症の異所性間質細胞に酸化ストレスを与え、発現アレイと質量分析装置を用いて、mRNAと蛋白の両者について網羅的に調べ、pentraxin 3などいくつかの特異的因子を同定した(Kobayashi H et al; Fertility & Sterility, in press)。当該年度で子宮内膜症の詳細な発癌メカニズムをゲノム、RNA及び蛋白レベルでの網羅的解析を行うことで少しずつ明らかにすることができた。本研究の成果が将来的には子宮内膜症関連卵巣癌の発生の予防と治療法の開発に直結するものであると考える。子宮内膜症関連卵巣がん、特に卵巣明細胞腺癌におけるMet遺伝子の増幅について、特に酸化ストレス発がんモデルとの類似点に着目し、解析を進めることができた。さらに、Met遺伝子の増幅が卵巣明細胞腺癌の予後不良因子であることを解明し、これらの成果を2本の論文にまとめることができた(Akatsuka S, Yamashita Y et al. PLoSONE 2012, Yamashita Y et al. PLoSONE 2013)。

さらに、子宮内膜症における異所性間質細胞の発がんにおける役割についての解析を行い、その成果を一本の論文にまとめることができた(Kobayashi H, Yamashita Y etal. Fertil & Steril 2012)。また子宮内膜症と関連の深いnon-coding RNA, ANRILの子宮内膜症由来の上皮や間質細胞での発現について検討し、日本病理学会総会で発表した。以上より、研究の目的についてはおおむね順調に達成しているといえる。平成23年度は子宮内膜症に関連する卵巣明細胞腺癌における特異的分子の探索を行う予定であったが、計画通り、ゲノム、RNA、タンパクの各レベルにおける特異的分子を同定することができた。さらに、年度内には同定された特異的分子の実際の臨床検体における発現についても検証することができた。また、得られた結果の一部を論文にまとめ、受理された。したがって当該年度は当初の計画以上に進展したと考える。これまでの研究によってMet遺伝子の増幅が卵巣明細胞腺癌において重要な因子であることが明らかとなった。したがって今後はMetの下流のシグナル系、特にAKTに注目し、卵巣明細胞腺癌においてはどのアイソフォームがもっとも重要であるのかを中心に研究を進めて行く。また、MetおよびMetの下流のシグナルを阻害することによる新たな治療法の開発を目指し、培養細胞、マウスなどの生体実験の両方向で有効な阻害剤の探索を行う予定である。さらに、多数症例もしくは明細胞腺癌以外の卵巣腫瘍について次世代シークエンサー等の新しい方法を用いて網羅的に解析し、Metを含む遺伝子異常の有無を検討する。酸化ストレスから発癌に至る分子経路を同定するために、次世代シークエンサーを用いたRNAシークエンシングによって、明細胞腺癌の細胞株において発現しているnoncoding RNAの網羅的解析を行う。特に最近マイクロRNA以外のnon coding RNA (ncRNA)、例えばANRILのイントロンに存在するSNPが子宮内膜症と関連があるという報告がされているので、このような酸化ストレスと関連する新たなlarge ncRNAを中心にスクリーニングする。明らかになった特異的分子について不死化チョコレート嚢胞上皮に遺伝子導入し、その機能について解析を行う。具体的には、不死化子宮内膜症上皮細胞に遺伝子導入したものをヌードマウスに移植する発癌実験を行う。また特異的分子をノックダウンすることによる逆向きの機能解析も並行して行う。ノックダウンの際にはmRFP1で蛍光標識されたshRNA発現ウイルスベクターを用い、移植にはGFPヌードマウスを用いてin vivoイメージング装置で解析し、腫瘍の増殖能、浸潤能、転移能、特に間質との関係や血管新生について明らかにする予定である。さらに、チョコレート嚢胞における正常上皮及び異型上皮、卵巣明細胞腺癌あるいはチョコレート嚢胞合併明細胞腺癌などの組織を用いて特異的分子の局在の組み合わせの詳細について解析するために、FISH, RNA-ISH,免疫染色などの種々の方法を駆使する予定である。培養細胞株、移植用のヌードマウスおよびその継代や維持を行う。