hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
がん化学療法における心筋オートファジーの制御による心筋保護と新規治療法の開発

また、心不全の進展においてあるミトコンドリア蛋白が減少することに着目し、この蛋白が心筋のアミノ酸代謝に関与することを発見、心筋代謝改善の新しいターゲットとしての可能性を示唆した。以上の2つの成果は、それぞれAm J Heart Circ PhysiolとSci Repに発表した。私達は、抗がん剤による心筋障害モデルマウスにおいて、Curcumineを投与すると心筋オートファジーが惹起されることで心筋アポトーシスや心機能の低下が抑えられ、死亡率を劇的に改善することを示した。また、自律神経過緊張状態では心筋オートファジーが心保護に働くと共に、その過程にはmTOR非依存性御のAktシグナルが関わることを発見した。さらに、心不全の進展においてミトコンドリアタンパクの関わる脂質代謝やアミノ酸代謝が変化することを見出した。以上の成果は、心筋のオートファジーやエネルギー代謝の制御が、心不全の発症を抑える新しいがん化学療法の開発につながることを示す。基礎研究については、複数の心不全モデルマウスやノックダウン法を用いた培養心筋細胞等を用意し、当初の計画より早く年度前半には一定の結果を得ることができ、そののち国内外の研究者らと議論を重ね、結果的に2本の国際雑誌掲載となった(J Clin Exp Cardiolog 2015、Biochem Biophys Res Commun. 2015)。一方で、臨床研究については、申請者の所属機関変更もあり、一から臨床研究グループを構築し、臨床研究方法の段取りをし直し、年度内に天理医療大学および天理よろづ相談所病院両方の倫理委員会承認となった。しかしながら患者のリクルートは平成27年度に持ち越されている。以上から、おおむね順調に進展しているとした。すでに、天理よろづ病院乳がん患者を対象に、酸化ストレスに関する観察型臨床研究を計画し、医の倫理委員会の承認を得た。これまでの基礎研究の成果をさらに進めるとともに、臨床における知見の蓄積に努める予定である。循環器内科学平成26年度に得られた結果を基にして、主に次のことを実施する方策である。(1)基礎研究についてすでに、クルクミンやG-CSFの心筋オートファジー惹起による心筋保護効果については一定の結果を得て2本の論文掲載となったが、それらの仕事の中で、特に心筋エネルギー代謝とオートファジーとの関係が心不全の進展に重要な役割を果たしていることが分かった。そこで今後は、in vivo、in vitro両方の実験系を用いて、主に心筋エネルギー代謝実験に軸足を置いて研究を進める方策である。(2)臨床研究について天理医療大学および天理よろづ相談所病院において倫理員会の承認を得、すでに10名から成る臨床研究グループを構築している。そこで今後は、この臨床グループを有効に動かし、患者のリクルート、観察型研究の実施、さらに研究成果の解析、と研究を進める方策である。当初計画よりも研究が進み、失敗なく動物や消耗品費の使用が少なくできたこと、かつ海外研究者とのうちあわせや情報交換のための旅費を算定していたが当該研究者が行くのではなく相手海外研究者に来邦願え本邦で会議をもてたことから、これらの研究費を次年度使用分とした。
DNAメチル化とH3K9me3の確立と維持の構造基盤

DNAメチル化やヒストンH3K9のメチル化(H3K9me3)は、クロマチンの構造変換を制御する遺伝子発現抑制的な非ゲノム情報である。これらの非ゲノム情報が発生・分化過程でどのように確立し、そして多細胞形質体を維持するために体細胞分裂後にどのように複製されていくのかは不明な点が多い。本研究では、非ゲノム情報による遺伝子発現抑制の確立と複製にかかる構造基盤として、ユビキチン化された複製因子PAF15とSETDB1によるDNA維持メチル化とH3K9me3の確立・複製に注目し、それぞれの分子機構を構造生物学的な観点から明らかにする。
腎疾患におけるオステオクリン／ＮＰＲ－Ｃ系に着目した筋・骨・腎連関の意義の解析

オステオクリン(Ostn)はナトリウム利尿ペプチド(NP)のクリアランス受容体Npr3の特異的なリガンドで、骨や骨格筋で発現・分泌される。OstnはNpr3に競合的結合することで、NPの作用を増強すると想定されている。慢性腎臓病(CKD)ではOstn発現が変化し腎障害に関与すると仮説を立て以下の検討を行った。1) Ostnの測定系の確立:自作抗体(国立循環器病研究センター望月直樹先生、南野先生から供与)と市販抗体(R&D社)の組み合わせて、化学発光酵素免疫測定系(CLEIA)を確立した。1a)ヒト検体の測定:非透析導入CKD患者(京大病院医の倫理委員会承認)における血中Ostn濃度の測定を行ったところ、年齢と弱い負の相関を(R2=0.142, P<0.0001)、eGFRと弱い正の相関を示した(R2=0.0432, P=0.0368)。さらに、Ostn低値群(<12.5 pg/mL)は高値群(≧45 pg/mL)と比較し優位に高齢であり(それぞれ、P=0.0005)、血中Ostn濃度には加齢による影響が大きいと推察された(論文準備中)。2)遺伝子改変マウスを用いた腎障害への影響の評価:Ostn-TgおよびNpr3のノックアウトマウス(Matsukawa, et al. PNAS 1999)に対し腎線維化モデルである片側尿管結紮(UUO)を施し腎障害を検討したところ、Ostn-TgはWTマウスと比較し線維化の程度に変化はなく、Npr3-KOは線維化が悪化することを確認した(論文準備中)。オステオクリン(OSTN)の腎疾患ならびに骨・骨格筋との臓器連関(骨腎連関、筋腎連関)における意義を解明する目的で、H29年度においてはマウス・ヒトのELISAによるOSTN測定系の確立し、測定を行った。血中に存在すると想定されているマウスOstn(80-130)あるいはヒトOSTN(83-133)のC端をそれぞれ認識するウサギポリクローナル抗体(研究協力者より供与)と両者のN端を共通して認識するラットモノクローナル抗体(R&D社)の組合せでマウス用あるいはヒト用のサンドイッチCLEIA(化学発光酵素免疫測定法)を作成した。研究協力者が開発したSAP-Ostnトランスジェニックマウス(ヒトアミロイド蛋白Pプロモーター下に全長マウスOstnを発現し、血中濃度が顕著に上昇)の血中濃度を測定したところ、野生型マウスは測定感度下限であったのに対し、Ostnのコピー数が少ないline33の血中濃度は1.2 ng/mLで、コピー数の多いline 51は52.2 ng/mLと上昇していた(Kanai et al. J Clin Invest 2017)。また、京都大学医学部附属病院に設置された医の倫理委員会の承認を得(申請番号G774)、慢性腎臓病患者の血漿を用いてOSTN血中濃度を測定している。平成30年4月1日時点で59検体を測定しており、CKDステージ毎に群分けすると、腎機能が高度に進行したstage4 (eGFR 15-30 mL/min/m2)、stage5 (eGFR <15)における血中濃度は腎機能が保たれたstage1 (eGFR >90)に比べ有意に血中濃度が低下していた。低下の原因を評価するためアデニン投与によるマウス腎不全モデルを作成したところ、骨や骨格筋におけるOstn発現が低下していた。研究協力者との共同研究により、予定していたマウスおよびヒトOSTN測定系に成功し、マウスおよびヒトの血中濃度を行った。マウスにおいては野生型マウスにおいては感度不足のため測定できなかったため、血中濃度が高度に上昇したSAP-Ostnトランスジェニックマウスにおいて定量を行った。ヒトに関しては、慢性腎臓病患者における血中濃度測定に成功し、腎機能障害が進行すると血中濃度が有意に低下することを見いだした。上記のように、当初の研究計画通りに進捗している。2)遺伝子改変マウスを用いた腎障害への影響の評価:Ostn-

TgおよびNpr3のノックアウトマウス(Matsukawa, et al. PNAS 1999)に対し腎線維化モデルである片側尿管結紮(UUO)を施し腎障害を検討したところ、Ostn-TgはWTマウスと比較し線維化の程度に変化はなく、Npr3-KOは線維化が悪化することを確認した(論文準備中)。慢性腎臓病患者の血中濃度測定を続け、慢性腎臓病におけるOSTNの重要性を明らかにする。現時点で明らかとなった腎機能以外の相関因子についても探索する。慢性腎障害におけるOSTNの意義について検討するために、血中濃度が高度に上昇したSAP-OstnトランスジェニックマウスもしくはOSTNの受容体であるNpr3ノックアウトマウスを研究協力者より入手した。腎機能障害は腎間質の線維化と並行して進行するため、線維化モデルである片側尿管結紮モデルを施行し、障害後の異なる時点での変化について評価する(着手済)。OSTNの細胞レベルの機能については、Npr3(NPR-C)の発現は足細胞に多いため当初の計画は足細胞株を用いた検討を予定していたが、腎機能障害の低下とOSTNの機能の関係にあらたに着目することにした。線維化に注目しているため、線維芽細胞株や上皮細胞株に対するOSTNやOSTNによりシグナルが増強するとされているCNPの添加を行って炎症関連もしくは線維化関連遺伝子の変化を評価する。
アラブのナフダ時代における専制批判とその継承

当研究は、19世紀後半から20世紀初頭のアラブ近代思想における専制批判と、それを取り巻く言説との関係、その実践を広い歴史的文脈において明らかにすることを目指す。当時の女性解放論や資本主義批判のテキストを中心に、専制批判とジェンダー問題との関係性や労働者擁護論の内実を検討。また現代への思想的継承を理解するために、現代シリア作家の諸テキストを中心に権威主義体制内での言論の自由の〈余白〉における芸術面での抵抗のあり方(表現の主題や技法、影響を受けた作品、記憶の〈表象〉)を検証する。従来のイスラーム還元主義や極端な世俗主義的アプローチではなく、「時代の共有精神」という新しい視点から分析を深める。
発芽種子の糖代謝プロファイリングに基づく根寄生雑草の新規防除法の開発

前年度までにヤセウツボ種子中の,三糖プランテオース代謝経路中のスクロースの分解がノジリマイシン亜硫酸付加物(NJ)の添加により抑制され,その結果,発芽が阻害されることを見出した.本年度は前年度に計画していた「スクロース分解抑制による発芽阻害の分子機構の解析」として,NJが及ぼすスクロース分解酵素インベルターゼへの影響の調査,及び,次世代シーケンサーを用いたトランスクリプトーム解析を実施した.インベルターゼの活性を試験するため,発芽種子より粗タンパク質を抽出し,粗酵素,NJおよび基質となるスクロースを混合し,NJ存在下でインベルターゼ活性が減少するかを検証した.しかしながら,NJが存在した場合でもインベルターゼ活性はコントロールと比較して変化がなかった.一方で,NJ処理処理種子から粗酵素を抽出しインベルターゼ活性を測定したところ,その活性は発芽種子の場合よりも低いという結果を得た.またその活性低下は液胞型酸性インベルターゼ,細胞壁型酸性インベルターゼで顕著であった.従って,NJはこれらのインベルターゼの転写,翻訳,翻訳後修飾のいずれかの過程を阻害しているものと考えられた.トランスクリプトーム解析では,発芽種子とNJ処理種子で各処理後時間における遺伝子発現の比較を行った結果,NJ処理によっていずれかの組み合わせで下方制御されたコンティグが122個,上方制御されたコンティグが33個見出された.特に下方制御されたコンティグ中には,糖輸送体であるSWEETやbeta-amylase, beta-1,4-xylosyltransferaseなど多糖の分解や細胞壁多糖の合成に関わる遺伝子が含まれていたことから,NJ処理が複数の糖質関連酵素遺伝子の発現に影響を与えることが明らかとなった.26年度が最終年度であるため、記入しない。26年度が最終年度であるため、記入しない。【ヤセウツボ発芽種子におけるプランテオース代謝経路の同定】ハマウツボ科の根寄生雑草は世界の農業に多大な被害を及ぼしている.本研究ではヤセウツボを用いてヤセウッボ種子発芽過程において特異的な代謝経路を同定し,その経路を抑制することで発芽を選択的に阻害することを目的とした.ヤセウツボ種子のメタボロミクス分析の結果を解析したこところ,発芽中に顕著に変動する代謝物として構造未知の三糖化合物が見出された.三糖化合物の構造解析の結果,その構造をプランテオースと同定した.さらに糖加水分解酵素阻害剤であるノジリマイシン(NJ)により宿主の発芽には影響を与えることなくヤセウツボの発芽が選択的に阻害されることが明らかとなった.NJの作用点を明らかとするために,ヤセウツボの発芽種子およびNJ処理により発芽抑制された種子(NJ-種子)を用いて種子中に含まれる糖の分析を行った.分析の結果,発芽種子においては三糖プランテオースが発芽の進行に伴い減少することが明らかとなった.プランテオースを構成する二糖スクロースはプランテオース減少の後に減少することが明らかとなった.プランテオース及びスクロースの構成単塘であるグルコース,フラクトースはプランテオース,スクロースの減少に伴い増加していくことが明らかとなった.ガラクトースはプランテオースを構成する単糖であるが,本分析では検出されなかった.このことから,プランテオースから遊離したガラクトースはガラクトキナーゼ等の作用により遊離後速やかに他の化合物に変換されたものと考えられる. NJ-種子ではプランテオース量は発芽種子同様に減少していたが,スクロースが種子中に大量に蓄積しており,その結果グルコース,フラクトース量は発芽種子と比較して減少していた.このことから, NJはプランテオース代謝経路中のスクロース分解を抑制し,単糖の供給を妨げることで発芽を抑制していると考えられた.本研究の結果,プランテオース代謝経路が根寄生雑草の発芽阻害のための新規なターゲットとして有効であることが示唆された.前年度までにヤセウツボ種子中の,三糖プランテオース代謝経路中のスクロースの分解がノジリマイシン亜硫酸付加物(NJ)の添加により抑制され,その結果,発芽が阻害されることを見出した.本年度は前年度に計画していた「スクロース分解抑制による発芽阻害の分子機構の解析」として,NJが及ぼすスクロース分解酵素インベルターゼへの影響の調査,及び,次世代シーケンサーを用いたトランスクリプトーム解析を実施した.インベルターゼの活性を試験するため,発芽種子より粗タンパク質を抽出し,粗酵素,NJおよび基質となるスクロースを混合し,NJ存在下でインベルターゼ活性が減少するかを検証した.しかしながら,NJが存在した場合でもインベルターゼ活性はコントロールと比較して変化がなかった.一方で,NJ処理処理種子から粗酵素を抽出しインベルターゼ活性を測定したところ,その活性は発芽種子の場合よりも低いという結果を得た.またその活性低下は液胞型酸性インベルターゼ,細胞壁型酸性インベルターゼで顕著であった.従って,NJはこれらのインベルターゼの転写,翻訳,翻訳後修飾のいずれかの過程を阻害しているものと考えられた.トランスクリプトーム解析では,発芽種子とNJ処理種子で各処理後時間における遺伝子発現の比較を行った結果,NJ処理によっていずれかの組み合わせで下方制御されたコンティグが122個,上方制御されたコンティグが33個見出された.特に下方制御されたコンティグ中には,糖輸送体であるSWEETやbeta-amylase, beta-1,4-xylosyltransferaseなど多糖の分解や細胞壁多糖の合成に関わる遺伝子が含まれていたことから,NJ処理が複数の糖質関連酵素遺伝子の発現に影響を与えることが明らかとなった.

26年度が最終年度であるため、記入しない。ヤセウツボ種子中でのプランテオース代謝という特徴的な代謝変動を明らかとした.さらに,ノジリマイシンが本代謝経路中のスクロース分解を阻害することで発芽を抑制していると強く示唆された.今回見出したノジリマイシンによるプランテオース代謝経路中のスクロース分解抑制による発芽阻害の分子機構を詳細に解析する.植物中でのスクロース分解にはインベルターゼおよびスクロースシンターゼが関わっているためノジリマイシンの作用点として上記2種類の酵素が考えられる.そこでノジリマイシンがこれらの酵素活性を阻害するか否かを検証する。さらに網羅的にノジリマイシンの作用点を探索するために,次世代シーケンサーを用いたトランスクリプトーム解析を検討する.本解析によりNJによって変動する遺伝子が明らかとなり,阻害作用部位の推定が可能になることが予想される.
介護保険施設における文化的感受性の向上を目指すケア管理ガイドラインの開発

経済連携協定による外国人看護師・介護士候補生の受け入れが開始され、医療保健福祉の現場における文化の多様性がより広まるなかで、互いの文化の違いを認識し尊重する文化的感受性をもつことが重要となる。本研究は、文化的感受性を高めることを目指し、文献検討と国内外の外国人職員受け入れ経験者、外国人職員からのインタビュー結果をもとに介護保険施設におけるケア管理ガイドラインを作成した。ガイドラインの構成は、共通項目、と職員別の項目(管理職、日本人職員、外国人職員)とした。ガイドラインは、エキスパートパネルを実施し実用性、汎用性の検討をおこないその結果をもとに修正と洗練に取り組んだ。今後は現場における試用とその効果を検討し、実用性を高めていく必要がある。平成21年度は、核となる知見を収集し高齢者施設において文化的感受性の向上を目指すための構成概念を抽出することを目的とし、文献を用いて日本の医療保健現場における外国人受け入れの現状や問題、また、経済連携協定による外国人看護職・介護福祉士候補生の受け入れの現状、教育内容を調査した。また、諸外国における外国人看護職・介護職への教育提供体制、それらに伴う問題について文献検討を行うとともに、異文化適応や高齢者長期ケア施設の看護管理、異文化における就労に関する学識者へのヒアリングを行った。さらに、看護協会のガイドラインのもと外国人看護職の適応教育を全国的に実施している英国ロンドンとその近郊において、外国人看護師の適応プログラムを提供している大学4大学を訪ねそのプログラム内容、使用教材、プログラムの視察による情報収集、そしてプログラム責任者へのヒアリングによる知見の収集を行った。以上により、外国人受け入れ側と外国人の文化的感受性、文化的コンピテンシー向上を目指すガイドラインの構成概念として、制度の理解、文化の多様性の理解、対人態度・ふるまいの相違の理解、コミュニケーション方法、語学力特に読み書き能力、が挙げられた。これらの構成概念を軸にし、次年度のガイドライン案作成と修練、実用可能性の検討、ガイドラインの完成を目指す。平成22年度は、インタビューとエキスパートパネル実施結果を基にし、介護保険施設における文化的感受性の向上を目指すケア管理ガイドラインの作成、実用可能性の検討をおこなった。文献検討と英国における外国人看護職教育体制に関するヒアリング内容をもとに形成した概念枠組みをもとに、外国人看護・介護職を受け入れた経験のある施設の看護介護管理者3名、日本人看護・介護職4名、在日外国人介護職10名、に対して文化的感受性の向上に必要と考える能力や支援についてインタビューを実施し、内容分析の結果をもとにガイドラインの構成要素と内容の検討を行った。次いで、WHOによるガイドライン作成ハンドブックを参照に、文化的コンピテンシー形成の段階である「文化の認識」「文化の知識」「文化的感受性」において、管理職・日本人スタッフ・外国人スタッフそれぞれの立場に対応するよう構成したガイドラインver.1の作成を行った。Ver.1に関して、文化看護に関する有識者へのエキスパートパネル、外国人看護職・介護職を受け入れた経験を持つ看護介護管理者、外国人介護職と働いた経験を持つ日本人介護職、外国人介護職に対し、ガイドラインの構成や内容、実践の場における実用可能性についてヒアリングを実施し得た意見から内容の検討、構成や文言・表現の修正によるガイドラインの洗練を行い、Ver.2を作成した。今後、実用可能性との向上のため、現場における導入と評価によるガイドラインの洗練、および介護保険施設の種類に応じたガイドラインの修正を継続して行う必要がある。
有害アラームによるプラント事故防止のための論理アラーム処理技術の開発

アラームの洪水や連鎖アラームなどの有害アラームを原因とするプラント事故が、国内外で多発している。本研究では、このような有害アラームを原因とするプラント事故の削減を目的に、有害アラームによるオペレータの重要アラームの見落としや異常診断ミスなどが起こりにくいヒューマンエラー抑制効果の高い新しい論理アラーム処理法を提案する。平成30年度は、論理アラーム処理時の異常診断シミュレーションを行った。開発した論理アラーム処理アルゴリズムを用いて、有害アラームが発生したときの異常診断シミュレーションを行い、オペレータの異常診断データを収集した。収集データは、オペレータの認知情報処理プロセス、異常診断時間や成功率、発生したヒューマンエラーの種類などがある。つぎに、異常診断シミュレーションの結果を解析し、提案する論理アラーム処理がヒューマンエラー抑制に有効であるか、正しい異常診断が論理アラーム処理によってかえって妨げられるケースがないか調べた。効果がない場合は、なぜオペレータの異常診断ミスを防げなかったのか詳しく解析した。概ね研究は順調に進んでいるが、オペレータの異常診断ミスを妨げたケースの解析に時間がかかっている。豊富なプラント運転経験を有する研究協力者に助言を求め、課題の解決を急ぎたい。これまでに得られた知見に基づき、論理アラーム処理を組み込むことで、オペレータのヒューマンエラーを招きにくいアラームシステムを開発する。たとえば、関連するアラーム群を代表アラームに集約する仕組みや、アラームサプレッション実行時にアラーム設定を自動的に変更する仕組みをアラームシステムに組み込む。石油化学メーカーの現役オペレータに、開発したアラームシステムを使った異常診断実験の被験者を依頼する。実験結果に基づき、開発したアラームシステムの有効性を評価する。平成29年度は、有害アラーム発生時のオペレータの異常診断プロセスを認知情報処理のレベルで詳細に模擬できる異常診断シミュレーション環境を構築した。プラントダイナミックシミュレータとして実績のあるAspen HYSYS(アスペンテック社製)と科学技術計算ソフトウェアMATLAB(マスワークス社製)を用いた。つぎに、オペレータの操作履歴から異常診断ミスの発生を予測する異常診断ミス発生予測手法について検討した。過去の研究より、オペレータモデルにより導出した標準的な異常診断プロセスと実際のオペレータの操作履歴の乖離が大きくなったとき、異常診断ミスの発生を予測する方法が考えられた。しかし、どの程度の乖離が見られたときに異常診断ミス発生の可能性が高くなるかについては、引き続き検討課題として残った。最後に、論理アラーム処理アルゴリズムについて検討した。具体的には、短時間に多数のアラームが発報するアラームの洪水が発生した時に同じ種類のアラームを一つに集約したり、発報したアラームの中で重要度の低いものを一時的にオペレータから隠したりすることで、ヒューマンエラーの発生を防止するアルゴリズムが考えられた。本研究を進める上で基盤となる異常環境シミュレーション環境は予定通り構築できた。異常診断ミス発生予測手法については、プロトタイプは作成できたが、オペレータモデルにより導出した標準的な異常診断プロセスと実際のオペレータの操作履歴の乖離がどの程度大きくなったときに異常診断ミスの発生を予測するのかという課題が残った。今後、豊富なプラント運転経験を有する研究協力者に助言を求め、課題の解決を急ぎたい。本研究で検討する論理アラーム処理アルゴリズムを絞り込み、処理プログラムを作成する。異常環境シミュレーション環境で、有害アラームが発生したときの異常診断シミュレーションを行い、オペレータの異常診断データを収集する。収集データには、オペレータの認知情報処理プロセス、異常診断時間や成功率、発生したヒューマンエラーの種類などを予定している。

平成29年度に購入したパソコンの価格が当初の想定よりも安価であったため、次年度使用額が生じた。平成30年度の消耗品費の一部として使用する予定である。購入した備品の販売価格が下がったため、次年度使用額が発生した。次年度の消耗品費の一部として繰り越し有効活用する。
現代音楽劇における「間」の美学：トランスカルチュラリティの地平

本研究は、不在、空白、余白、沈黙といった諸現象の上位概念として「間」を位置づけ、現代音楽劇においてそれがどのような形態をとって表れているかを明らかにしようとするものである。またそれらの現象が、グローバル化に伴って多様化するオペラ文化においていかなる意味を持ちうるのかを明らかにすることを目指している。2017年度には「間」の一形態として「待つ」ことに着目し、それが細川俊夫のオペラ《松風》において特有の音楽語法によって音響化されていること分析し、その成果を国際学会で発表したが、2018年度はこの論考に加筆修正を行い国際誌に発表した。さらに、「間」という現象にはポストドラマ性、つまり表面的な物語の静止、直線的な時間の消滅、そしてその静止状態において生じる特殊なダイナミズムについて考察を行った。「間」に内在するポストドラマ性の様相を演出美学的な観点から照らし出すために、クリストフ・シュリンゲンジーフの《パルジファル》演出を例に考察し、その成果を論文として発表した。今年度は「間」の美学をトランスカルチュラリティという観点から分析することに重点を置いた。具体的には、イタリアの作曲家サルヴァトーレ・シャリーノが『和泉式部日記』を題材として創作したオペラ《氷から氷へ》(2006年)を取り上げ、外的な出来事が不在な中でひたすら描かれる、「待つ」ことの言語的および音楽的な構造を分析した。「待つ」ことにおける時間的静止を喚起するのには、シャリーノの音楽語法を特徴づける執拗な反復の手法がとりわけ重要な役割を果たしていることが明らかになった。同様に、主人公が一貫して「待つ」状態を主題化した、シャリーノのオペラ《掟の門》(2009)の音楽構造について、現在分析を進めている。2018年度は4月1日より2019年1月20日まで諸事情により研究を中断することを余儀なくされ、当初計画していた学会発表や海外出張を見合わせる必要があったため。サルヴァトーレ・シャリーノのオペラ《掟の門》における、「待つ」ことの言語的・音楽的構造を分析し、2019年6月にライプツィヒ大学で開催される、国際ブレヒト学会で発表することが決定している。2019年8月には、シュリンゲンジーフの《さまよえるオランダ人》演出における不在性の美学について、アジアゲルマニスト会議で発表する。2019年12月あるいは2020年1月に、慶應義塾大学で開催予定の国際シンポジウムで、サルヴァトーレ・シャリーノのオペラ《氷から氷へ》における「間」とトランスカルチュラリティの関係について研究成果を発表する。さらに、サルヴァトーレ・シャリーノのオペラ《ローエングリーン》における沈黙の諸相についても学会で発表する予定である。本研究は、欠如、空白、余白、沈黙といった不在性の上位概念として「間」を位置づけ、現代の日欧のオペラ/音楽劇におけるその諸相を明らかにすることを目的としている。「間」の美学の変遷を明らかにするため、まずは、これまで行ってきた研究(ワーグナー研究)をふまえて、リヒャルト・シュトラウスやアルノルト・シェーンベルクなど20世紀以降のドイツ語圏のオペラ/音楽劇を事例として、「欠如」の一形態である「待つこと」を手掛かりに研究を進めた。その際に、「待つ」という状態のなかで顕在化する、言葉の不在と音楽および身体性との関係に焦点を絞り、その成果を日本独文学会中国四国支部学会で発表した。同時に、古今東西の文学や芸術に登場する「待つ女」のトポスに着目して、ホメロスの『オデュッセイア』のペネロペ像に始まり、ジェイムズ・ジョイスやイザベル・ムンドリーなどの作品におけるペネロペ像の受容を比較考察しつつ、「待つ女」の歴史的・美学的な変遷をたどった。また、日本の現代オペラの事例として細川俊夫の3つのオペラ作品を取り上げ、各作品での「待つこと」のドラマトゥルギー上の機能について考察した。さらに、各作品における「間」の音楽的構造を分析し、特に二つのトリトヌスから構成される和音(Mutterakkord)と、原初的な5度の音程ないし空虚5度が、「間」を喚起するうえで果たす機能について検討した。これらの作品美学上の分析をふまえ、待つこと、沈黙、静寂といった諸相を示す「間」が、現代の芸術のなかで新たに主題化されることの意味について、社会学者ハルトムート・ローザの加速化理論を援用して考察した。この研究成果は、2017年3月に開催された国際音楽学会東京大会で発表した。加えて、「間」のトランスカルチュラルな特性を浮き彫りにするため、まずは日本文化という文脈で構築されてきた「間」の概念の系譜について検証し、口頭で発表した。本年度は、「間」についての理論的基盤を確立することを目指したが、計画遂行の順を入れ替える必要が生じた。まず、作曲家の細川俊夫氏が音楽監督を務める武生国際音楽祭で講演の機会をいただいたため、本来ならば来年度の課題であった、細川氏のオペラ3作品における「間」の音楽分析および日本文化論に関する資料調査を、今年度に重点的に行った。その結果、本来ならば今年度にラカンとデリダを中心とした否定性の理論について考察を行う予定だったが、これを来年度の課題とせざるを得なくなった。また考察を進めていくなかで、現代の芸術における「間」の美学と、ハルトムート・ローザの加速化理論との関連づけが有意義であることが明らかになったため、この理論の分析を当初の計画よりも優先して行った。

本年度も引き続き、欠如、空白、余白、沈黙といった不在性の上位概念として「間」を位置づけ、その一形態として「待つ」という状態に焦点を当てた。リヒャルト・ワーグナーの楽劇《トリスタンとイゾルデ》では、主人公がひたすら「待つ」場面が大半を占めている点で画期的であり、20世紀の劇作品を先取りする劇的構造をもつ。「待つ」状態の中では、物語の外的な進行が静止し、客観的な時間はいわば停滞すると同時に、内的な時間が流れ始める。ここでアンリ・ベルクソンの時間論を援用しつつ、凝縮する時間、停滞する時間、異なる時間軸の交錯した多層的な時間など、さまざまに変容する主観的時間の具現化に、音型の反復進行とライトモティーフが重要な役割を果たしていることを明らかにした。音楽学的な観点からは、細川俊夫のオペラ作品における「間」の表象を分析した。細川作品の「間」は、静寂と音響の「間」、日本の能と西洋のコレオグラフィーの「間」、そして自然美という非同一性が潜在する余地としての「間」という重層的な機能を果たしている。それは、文化間のボーダーを越えていく「越境演劇」の重要な要素であり、音楽劇の新たな地平を開く可能性を内在させている。さらに、演劇学的な観点から現代音楽劇における「間」の可能性を探るため、クリストフ・シュリンゲンジーフのオペラ演出を取り上げ、そのポストドラマ的特性と作用について考察した。彼の演劇が試みているのは既存の枠組みの「超越」であり、オペラという伝統的な規範や制度の境界を越える、もしくは打ち破ることである。彼の演出は観客の主体を揺るがせ、自らの価値観やアイデンティティを問い直す契機となる。そうした上演の分析ツールとなるポストドラマ性は、現代における時間と空間をめぐる自己省察の場として機能している。ここに、ポストドラマ性と「間」の機能の共通項を見出すことができた。前年度に、音楽劇における「間」の一形態として「待つ」ことに着目し、シューベルト、ワーグナー、シェーエンベルクの作品の分析を行ったが、その段階で、ワーグナーの《トリスタンとイゾルデ》における「待つ」ことの表象の分析が不可欠であることが明らかになり、この課題を優先して行ったため、当初の計画を変更した。また、体調により、当初予定していた海外での調査と研究打ち合わせを見送らなければならなくなり、計画遂行の順を入れ替える必要が生じた。本研究は、不在、空白、余白、沈黙といった諸現象の上位概念として「間」を位置づけ、現代音楽劇においてそれがどのような形態をとって表れているかを明らかにしようとするものである。またそれらの現象が、グローバル化に伴って多様化するオペラ文化においていかなる意味を持ちうるのかを明らかにすることを目指している。2017年度には「間」の一形態として「待つ」ことに着目し、それが細川俊夫のオペラ《松風》において特有の音楽語法によって音響化されていること分析し、その成果を国際学会で発表したが、2018年度はこの論考に加筆修正を行い国際誌に発表した。さらに、「間」という現象にはポストドラマ性、つまり表面的な物語の静止、直線的な時間の消滅、そしてその静止状態において生じる特殊なダイナミズムについて考察を行った。「間」に内在するポストドラマ性の様相を演出美学的な観点から照らし出すために、クリストフ・シュリンゲンジーフの《パルジファル》演出を例に考察し、その成果を論文として発表した。今年度は「間」の美学をトランスカルチュラリティという観点から分析することに重点を置いた。
沖縄県離島における高齢者の活動的長寿と要介護長命に関する社会医学的縦断研究

わが国の平均寿命は世界でもトップと推測されている。今日の日本では単なる長命だけでなく活動的長寿が望まれている。本研究では、沖縄県の離島における高齢者が社会医学的に活動的長寿かどうかを調査した。まず社会学的調査から始めた。1975年の国勢調査時65歳以上であった高齢者718人をcohortとして、20年後には死亡者、転出者を除くと107人であった。そのうち調査できた98人において、各種の日常生活機能評価を行った。98人のうち29人は入院しており、ベッド上で非活動的と判断した。残りの69人(男性21人、女性48人,、平均年齢92歳)を自宅に訪問して厚生省の寝たきり判定基準から自立度を判定したところ、66人は概ね自立している者(ランクJ、A)と分類された。すなわち98人のなかで自立しているものは67%となった。この活動的と考えられている高齢者のうち調査可能であった49人(男性14人、女性35人、平均年齢92歳)を医学的に訪問診査した。大きな病気は持っていないが、半数近くの47%は高血圧を中心とした、不整脈、浮腫、心雑音など循環器系の異常をもっていた。この循環器系異常に対する上手なコントロールが、さらに重篤な疾患の予防と寝たきりの予防に役立つものと思われた。末梢血、血液生化学、免疫グロブリンなどの血液検査では、ごく少人数に異常値が認められたに過ぎなかった。結論として、在宅の高齢者の約70%は活動的な日常生活を送っており、大きな病気は保有していなかった。【目的】わが国の平均寿命の伸展と65歳以上高齢者の総人口に占める割合は年々漸増し、一方では、要介護高齢者の増加を惹起している。健康長寿を得るためにはより高度な生活の質すなわちQOLを求めることが個人レベルだけでなく、社会的レベルで重要となってきた。今回、沖縄県-離島において自立した高齢者群とdisability群の医療・福祉の実態を調べるとともに、理想的なactive高齢者を対象に将来予想されるday careやday serviceへの要望と生きがいについて調査した。また、successful agingの自助・公助・共助の在り方を考究した。【対象・方法】本研究は当該離島における1975年の国勢調査時の65歳以上高齢者718人をcohortとし、20年後をターゲットとしてNested prospective studyを行った。これらの中から死亡者、転出者を除いた107人を対象として悉皆調査を試みた。調査方法は日常生活の自立性について、身体面は厚生省寝たきり判定基準、井上等及びKatz等のADL指標、老研式活動能力指標、FillenbaumのIADL、バ-セル指標を用い、精神面については、改訂長谷川式簡易知能評価スケール(HDS-R)を使用した。また、社会的背景調査も同時に実施した。【結果】調査対象者のうち、拒否1人、調査不在8人を除くと約92%の調査実施率であった。調査の結果bed disabilityの者が29人(27.1%)であり、厚生省寝たきり判定基準による概ね生活が自立している者(ランクJ・A)は66人(95.6%)、寝たきり者(ランクB,C)3人(4.3%)であった。井上等のADL平均スコアは全体で47.7点、男性49.7点、女性46.8点で、全数の4分の3が概ね自立しており、Katz等のADL指標では、総合評定でAランク(6項目すべてが自立)を示した者は約8割を占めたが、社会的環境適応能力を加味した老研式活動能力指標及びIADL尺度の結果では、自立者の割合が56割と低率であった。

精神面の自立性ではHDS-Rスコアから概ね自立している者が75%を占めた。【考案】bed disabilityの者と在宅のdisabilityであった者を除くと、全体のおよそ7割8割がactiveな高齢者といえる。しかしながら、身近な日常生活の自立度は高いが、Lawtonが最も高度で複雑な活動能力であるとした「社会的役割」の要素を加えると、自立可能な割合が5割6割に低下した。ことにmobilityのうち交通機関等の利用による移動能力の低下があげられられる。日常生活自立を維持することはsuccessful agingの必須要件であるが、地域の中での社会的役割を考えるならば、mobilityを中心としたsocial support systemの必要性が、また、disabilityな高齢者に対しては福祉面からのsupportの必要性が示唆された。仲里村在住の85歳以上の高齢者をcohortとして、自宅に居住しactiveと考えられている49名(女性35名、男性14名、平均92歳)の健康調査を行った。結果:現病歴では高血圧症が17例(35%)、既往歴では骨折が16例(33%)認められた。理学的には、平均身長は男性153.1cm、女性139.8cm、体重は男性47.0kg、女性43.6kgで、BMIは男性19.9、女性22.2と正常であった。現症では不整脈が7例、心雑音が8例、下腿浮腫が6例、高血圧が12例認められた。ADLは49名中ランクJとAは42名(86%)であった。末梢血では赤血球数(10^4/μl)は男性397、女性381、Hb(g/dl)は男性12.4、女性11.5と若年層よりやや低値であった。Hbの10g/dl未満は女性に3例認められた。白血球数と血小板数は正常範囲内であった。脂質検査では、総コレステロール(mg/dl)は男性181.7、女性207.4で、240mg/dl以上は男性1例、女性6例であった。HDLコレステロールの40mg/dl以下は男性2例、女性1例に認められた。中性脂肪は女性の1例が300mg/dl以上であった。生化学検査でGOT、GPTは正常であり、男性1例のみクレアチニンが2.2mg/dlと高値であった。尿酸値は男性に8mg/dl超が1例、女性に7mg/dl超が3例認められた。血糖値は食後200mg/dl超が女性に1例認められた。血清総蛋白濃度は男女とも正常範囲内で、血清アルブミン濃度は正常範囲の下限であった。血清蛋白分画ではα2-G分画(%)は正常範囲内で、al-G、β-G、γ-G分画は正常範囲の上限であった。免疫グロブリン定量ではIgG、IgAは正常範囲の上限で、IgMは正常範囲内であった。電気泳動上monoclonalバンドが女性の1例に認められIgAが762mg/dlと高値であった。心電図ではST、Tの低下が8例、Q・QS型が1例認められた。調律異常として伝導障害が6例、期外収縮が6例認められた。以上、activeと思われる対象高齢者の医学的所見を分析した。
局所体上の簡約代数群のスーパーカスピダル表現に関する研究

非アルキメデス的局所体F上の簡約代数群、特に、n次一般線形群GLn(F)の既約スーパーカスピダル表環についての研究を行い、以下の問題に対して結果を得た。1.GL_1(F)×GL_1(F)のε-ファクターの計算GL_2(F)×GL_3(F)のε-ファクターの計算の手法を発展させて、1,1'が互いに異なる素数のときのペアのε-ファクターについて計算することを試みた。その結果、Bushnell-Henniart対応と局所Langlands対応の具体的な関係を示すことにより、素数1,1'とFに条件をつけることなく、全ての場合にGL_1(F)×GL_1(F)既約スーパーカスピダル表現のペアのε-ファクターの公式を得ることに成功した。2.GL_1(F)の全ての既約スーパーカスピダル表現の詣標の計算(1が素数でFの剩余標数が1でないとき)1が素数のときのGL_1(F)の尖点的不分岐系列の指標の計算の時とは異なりdivsion algebraを経由せずに直接GL_1(F)の既約スーパーカスピダル表現の指標を計算する。これは、Kutzkoの結果により既約very cuspidal表現の指標の計算に帰着されるガ、1が素数のときは、very cuspidal表現の共約類が簡単な形をしていることかの1の巾根の部分(ある種のガウス和)を除いて、指標の値を決定することは比較的容易である。1=3の場合の証明を大輻に簡略化した一般的な証開を見いだし、Bushnell-HenniartのTame Base Changeを利用することによりnon-Galois caseも含めて指標公式を与えた。非アルキメデス的局所体F上のn次一般線形群GL(n,F)の既約スーパーカスピダル表現についての研究を行った。今年度はpとp'が互いに異なる素数のときに、GL(p,F)×GL(p',F)のε因子の公式を求めて、それを証明した。証明の大枠は、局所Langlands対応を用いて、ガロア群の表現のテンサー積のε因子の計算に持ち込み、base change liftの議論を使って、再度、GLの表現に持ち込んで、1次元の表現によるtwistとなって計算が可能となるというものである。この議論のために、必要であったのは、局所Langlands対応がHowe-Moyの具体的な対応と一致すること、Arthur-Clozelのbase change liftとBushnell-Henniartのbase change liftが一致し、そのliftの具体的な形を与えること、base change liftと局所Langlands対応の可換性を示すことであった。これらを最新のBushnell-Henniartの結果を用い、すべての項を具体的に計算することで解決した。この結果は、局所Langladns予想から得られる本当の目的、「Galois群の表現が難しいので対応するGLの表現を調べることでGalois群のことを知ろう」といった方向への貴重な一歩となる。また、Langlands progaramから示唆されるGL(m,F)×GL(n.F)からGLmnへのリフトの構成などへの応用も考えられる。更に、今回の結果からConverse Theoremの精密化についても期待できる。昨年度にpとp'が互いに異なる素数のときに、GL(p,F)×GL(p',F)のε因子の公式を証明したが、この結果を用いてConverse Theoremの精密化についての考察を行った。Converse TheoremはGL(n,F)の既約admissible表現πをGL(m,F)の既約

admissible表現π'に対するε(π×π',s,ψ)によって特徴づけるものであるが,現在は、m=n-2までが必要であった。今年度はn=5のときに、m=5-3=2まででよいことをπとFの剰余標数に関するある条件下で証明した。目下、このπとFの剰余標数に関する条件を外すことに取り組んでいる。また、Langlands progaramから示唆されるGL(m,F)×GL(n.F)からGL(mn,F)へのリフトの候補をm,nが相異なる素数のときに構成した。構成には、Lanlands対応を用いて、ガロア群の表現で考え、ガロア群でのテンサー表現をもう一度Langldands対応で引き戻すことにより構成している。ただし、現状では、1次元表現によるツイストの曖昧さが残っている。まず、m=2,n=3のときにリフトがLanglads funtorialityを満たすことを示すことが目下の課題である。非アルキメデス的局所体F上のn次一般線形群GL(n, F)の既約スーパーカスピダル表現についての研究を行った。昨年度にpとp'が互いに異なる素数のときに、GL(p, F)×GL(p',F)のε因子の公式を証明したが、この結果を用いてConverse Theoremの精密化についての考察を行った。Converse TheoremはGL(n, F)の既約admissible表現πをGL(m, F)の既約admissible表現π'に対するε(π×π',s,ψ)によって特徴づけるものであるが、従来は、m=n-2までが必要であった。目標としては、nが素数のときには、m=1だけで良いことを示すことであるが、πのコンダクターが小さいときは証明に成功した。また、n=5のときは、一般にm=1,2に対してのみε因子の一致を示すことが、表現の同値性に必要であることを示したが、m=1だけで良いことは一般のコンダクターの表現に対しては成功していない。また、Langlands progaramから示唆されるGL(m, F)×GL(n.F)からGL(mn, F)へのリフトの候補をm, nが相異なる素数のときに構成した。まず、m=2,n=3のときにリフトがLanglands funtorialityを満たすことを示すことが目下の課題である。非アルキメデス的局所体F上のn次一般線形群GL(n、F)の既約スーパーカスピダル表現についての研究を行った。pとp'が互いに異なる素数のときに、GL(p、F)×GL(p'、F)のε因子の公式を証明したが、この結果を用いてConverse Theoremの精密化についての考察を引き続き行った。Converse TheoremはGL(n、F)の既約admissible表現πをGL(m、F)の既約admissible表現π'に対するε(π×π'、s、φ)によって特徴づけるものであるが、従来は、m=n-2までが必要であった。目標としては、nが素数のときには、m=1だけで良いことを示すことであるが、πのコンダクターが小さいときは証明に成功している。
新規遺伝子改変マウス作出による性ステロイドホルモンの骨組織分子基盤の解析

硬組織中に多数存在する骨細胞は、メカニカルストレス伝達やCa/P代謝に関与するタンパクの分泌などにより、骨代謝に深く関与していると考えられる。そこで本研究では、骨細胞でのエストロゲン作用を明らかにするために、Dmp1-CreマウスとERαfloxマウスの交配により骨細胞特異的ERα欠損マウス(Dmp1-ERαKO)を作出し解析した。前年度の結果より、Dmp1-ERαKOは対照群と比べ、骨形成低下による骨量低下が認められた。すなわち、エストロゲンが骨細胞のERαを介して、骨芽細胞数を正に制御している可能性が示唆された。そこで本年度はこのメカニズムを明らかにすべく、フローサイトメトリーによるDmp1-ERαKOの骨細胞の単離を試みた。骨細胞は硬組織に埋まっており単純な酵素処理のみでは単離が不可能であるため、まずフローサイトメトリーによりDmp1-GFPマウスから骨細胞を単離する方法を確立した。本単離法は、マーカー遺伝子の発現を確認した限りでは、酵素処理によるフラクションの分取に比べ、骨細胞が骨表面の骨芽細胞から純度の高く単離できることが確認された。系の確立後は、Dmp1-GFPマウスとDmp1-ERαKOや対照群を交配することにより、Dmp1-ERαKO・対照群の骨細胞を単離し、マイクロアレイによりそれらの遺伝子発現プロファイルを比較した。その結果、いくつかの標的遺伝子候補群を取得することに成功した。また、ERαは過剰荷重による骨量増加に関与することが報告されているため、メカニカルストレスに対する骨細胞のERαの機能を明らかにするために、尾部懸垂により4週間の非荷重実験を施行したところ、Dmp1-ERαKOの大腿骨骨幹部の骨量は、対照群の同部位と比較して有意に減少した。このことから、骨細胞のERαは非荷重状態においても骨量維持に寄与していることが示唆された。以上、本年度は骨細胞のERαの標的遺伝子候補群を取得することに成功した。また、非荷重状態においても骨細胞のERαが骨防御作用を担っていることを明らかにした。3年間で当初の目的通り、骨細胞特異的なERα欠損マウスを作出し、その表現型解析を終えた。更に、その分子メカニズムを明らかにするため、本年度は骨細胞の単離系を立ち上げ、標的遺伝子候補群を取得することに成功したため、当初の目的は概ね果たすことができたと考えている。本年度で終了なので特になし。本年度は、(1)これまでに作出した骨芽細胞特異的なERα欠損マウス(Ob-ERαKO)の解析、(2)オリジナルの骨細胞特異的なknock-in Creマウスの作出、(3)骨細胞特異的な核内受容体欠損マウスの作出、(4)骨芽細胞から骨細胞への分化関連因子の探索を行なった。以下にそれらの進捗状況を記す。(1)昨年度中に雄Ob-ERαKOが骨形成・骨吸収の低下した、低回転型骨粗鬆症を示すことを観察した。そこで、雄性において骨芽細胞のERαが機能していることを再確認するため、Ob-ERαKOと対照群でホルモン補充実験を行なったところ、対照群では骨量が有意に回復するが、Ob-ERαKOでは骨量の有意な回復が見られないことから、雄性において、骨芽細胞のERαを介した骨量維持作用があることを再確認した。更に、骨芽細胞におけるERαの標的遺伝子を明らかにするために、Ob-ERαKOと対照群の頭蓋骨でマイクロアレイ解析を行なった。結果、有意な発現差のある遺伝子を242個見出した。今後それら遺伝子について詳細に解析する予定である。(2)アグリゲーション法によりキメラマウス作出を試みた結果、骨細胞特異的なknock-in Creマウスのキメラが3月初旬に誕生した。(3)(2)に記したオリジナルのCreマウスに先行して、他研究室から分与してもらった骨細胞特異的トランスジェニックCre発現マウスと核内受容体floxマウスを交配し、骨細胞特異的な核内受容体欠損マウスを順調に作出している。(2)のオリジナルのCre発現マウスを用いた骨細胞特異的な核内受容体欠損マウスも順次作出し、両者のCreマウスで骨組織の変化を評価する予定である。(4)骨芽細胞から骨細胞への分化過程に関与する因子取得を、骨細胞のマーカー遺伝子であるDmplのプロモーターを用いたExpression Cloning法により試みている。現在、ベクター作製の一部が完了している状況である。本年度は骨細胞特異的ERα欠損マウスと骨細胞特異的AR欠損マウスを作出し、その骨解析を行なった。これらのマウスは全身性欠損マウスとは異なり、対照群と同様の体重を示した。また、骨芽細胞、破骨細胞ではERα(もしくはAR)の欠損を認めず、骨細胞のみで欠損が認められることを確認した。まず、骨細胞特異的ERα欠損マウス(Dmp1-ERαKO)の骨密度をDXA法により測定したところ、脛骨近位部で有意な骨量減少を示した。さらにその骨量減少が骨形成・骨吸収いずれの異常に起因するかを明らかにするため骨形態計測を行なったところ、Dmp1-ERαKOでは対照群と比較して、骨形成パラメータ(骨芽細胞数、骨芽細胞面、骨形成率)の有意な低下を認めた。

このことから、通常の重力環境下でも骨細胞のERαが骨形成を正に制御する機能を発揮していることが示唆された。現在、骨細胞が骨細管を通じて骨芽細胞へ骨形成を正に制御するシグナルを伝達している可能性を考え、それを証明するために、Dmp1-ERαKOと対照群からFACSにより骨細胞を単離し、マイクロアレイにより骨芽細胞増殖作用を持つ遺伝子の探索を試みているところである。一方で、骨細胞特異的なAR欠損マウスも有意な骨密度減少を呈した。現在その骨量減少が骨形成・骨吸収いずれの異常に起因するかを骨形態計測により明らかにしている。手法的な面では、本年度はコラゲナーゼ処理による簡易的な骨細胞単離法に加え、Dmp1-GFPマウスをDr.David W-Roweのラボ(University of Connecticut,USA)から供与いただき、そのマウスとDmp1-ERαKO(Dmp1-ARKO)を交配することで、FACSにより骨細胞を単離する方法を開始した。これに成功すれば、骨細胞におけるERαの標的遺伝子を明らかにすることが出来ると考えている。これまで骨細胞のERαが荷重下における骨形成に寄与していることは報告されてきたが、本年度の研究により通常の重力環境下においても骨細胞におけるERα、ARが骨量維持に寄与していることを新たに提唱することができた。硬組織中に多数存在する骨細胞は、メカニカルストレス伝達やCa/P代謝に関与するタンパクの分泌などにより、骨代謝に深く関与していると考えられる。そこで本研究では、骨細胞でのエストロゲン作用を明らかにするために、Dmp1-CreマウスとERαfloxマウスの交配により骨細胞特異的ERα欠損マウス(Dmp1-ERαKO)を作出し解析した。前年度の結果より、Dmp1-ERαKOは対照群と比べ、骨形成低下による骨量低下が認められた。すなわち、エストロゲンが骨細胞のERαを介して、骨芽細胞数を正に制御している可能性が示唆された。そこで本年度はこのメカニズムを明らかにすべく、フローサイトメトリーによるDmp1-ERαKOの骨細胞の単離を試みた。骨細胞は硬組織に埋まっており単純な酵素処理のみでは単離が不可能であるため、まずフローサイトメトリーによりDmp1-GFPマウスから骨細胞を単離する方法を確立した。本単離法は、マーカー遺伝子の発現を確認した限りでは、酵素処理によるフラクションの分取に比べ、骨細胞が骨表面の骨芽細胞から純度の高く単離できることが確認された。系の確立後は、Dmp1-GFPマウスとDmp1-ERαKOや対照群を交配することにより、Dmp1-ERαKO・対照群の骨細胞を単離し、マイクロアレイによりそれらの遺伝子発現プロファイルを比較した。その結果、いくつかの標的遺伝子候補群を取得することに成功した。また、ERαは過剰荷重による骨量増加に関与することが報告されているため、メカニカルストレスに対する骨細胞のERαの機能を明らかにするために、尾部懸垂により4週間の非荷重実験を施行したところ、Dmp1-ERαKOの大腿骨骨幹部の骨量は、対照群の同部位と比較して有意に減少した。このことから、骨細胞のERαは非荷重状態においても骨量維持に寄与していることが示唆された。以上、本年度は骨細胞のERαの標的遺伝子候補群を取得することに成功した。また、非荷重状態においても骨細胞のERαが骨防御作用を担っていることを明らかにした。3年間で当初の目的通り、骨細胞特異的なERα欠損マウスを作出し、その表現型解析を終えた。