hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
機能性バイオポリマー創出とその利用による水環境からの病原ウイルス除去に関する研究

これに引き続いて本年度は,抽出タンパク質をアフィニティクロマトグラフィー(HiTrap NHS-activated)に注入することで,ウイルスと特に親和性の高いタンパク質(ウイルス吸着タンパク質)を分離した。このとき,アフィニティークロマトグラフィーカラムのリガンドには,ポリオウイルスI型の表面を覆うカプシドタンパク質のうち特にウイルス表面から突出し,ウイルスと細胞との抗原抗体反応に強く関与しているペブチド配列(VPIの93から104まで)を人工的に合成したものを固定した。したがって,ここで分離されたウイルス吸着タンパク質は,ウイルスの表面カプシドタンパク質と極めて特異的に吸着するタンパク質とみなすことができる。このタンパク質間の特異的結合による実際のウイルス粒子の吸着能力は,弱毒ポリオウイルスI型(ワクチン株)を用いたELISA法により確認された。また,SDS-PAGE(SE260 Mighty Small II)による電気泳動の結果から,ウイルス吸着タンパク質の分子量は10万Da程度であることが明らかとなった。活性汚泥中の病原ウイルスの大部分は,汚泥フロックに吸着された形態で存在する。この汚泥フロックによるウイルス吸着には,汚泥細菌が産出するタンパク質系のバイオポリマーが深く関与していると考えられている。病原ウイルスの表面はカプシドタンパク質によって構成されているため,汚泥フロックによるウイルス吸着はタンパク質問の相互作用に起因している可能性が高い。この吸着機構を応用した水環境からの新規な病原ウイルスの除去技術開発の手掛かりとして,ウイルス吸着能力を有する機能性バイオポリマーを活性汚泥中から検索し,その諸性質を解明することを目的として本研究は行われた。昨年度までに,活性汚泥中細菌を好気培養させた培養液から,細菌外膜上のタンパク質だけを有機溶媒(N-ブタノール)または界面活性剤(chaps)により抽出した後,アフィニティクロマトグラフィの技術を利用して,この抽出タンパク質の中からポリオウイルスI型と親和性の高いタンパク質(ウイルス吸着タンパク質)だけを分離するに至った。本年度は,このウイルス吸着タンパク質について,サイズエクスクルーションクロマトグラフィとSDS-PAGEによる分子量分布の推定を行い,ウイルス吸着タンパク質は分子量110KDa程度のグループおよび170kDaを超えるグループに大別した。これらのウイルス吸着タンパク質に対して,実際のポリオウイルスI型(ワクチン株)を用いたウイルス吸着試験を行ったところ,活性汚泥から抽出された雑多なタンパク質群に比べ,2倍以上もウイルス吸着性能に優れていることが分かった。
卵巣癌における免疫抑制分子PD-L1の発現制御機構と機能的意義の解明

卵巣癌臨床検体の免疫染色を行ったところ、腫瘍間質内のCD8陽性リンパ球と腫瘍のPD-L1発現が強く相関していた。マウス卵巣癌モデルにおいて、腫瘍細胞のIFN-γ受容体を発現抑制すると、腫瘍のPD-L1発現が減弱し、腫瘍内へのCD8陽性リンパ球浸潤が増え、腫瘍の増殖が抑えられ、マウスの生存期間が延長した。以上より、生体内では、腫瘍間質内リンパ球が分泌するIFN-γにより腫瘍のPD-L1発現がおこり、腫瘍上皮内へのリンパ球浸潤を妨げて腫瘍増殖が起こっていることが示唆された。免疫抑制分子PD-L1の卵巣癌細胞における発現と、免疫細胞浸潤を中心とした癌の微小環境との関係について、卵巣癌臨床サンプルを用いて免疫組織学的に検討した。すると原発巣よりも播種巣に間質内リンパ球が多く、腹膜播種においては、腫瘍間質内のCD8陽性リンパ球数と腫瘍のPD-L1発現との間に強い相関がみられた。以上より、腫瘍間質内浸潤CD8陽性リンパ球から分泌されるIFN-γが卵巣癌細胞のPD-L1発現を正に制御し、免疫逃避を通して腫瘍増殖に働いていると考えられた。卵巣癌細胞株HM-1の皮下腫瘍マウスモデルおよび腹膜播種マウスモデルの腫瘍を免役組織染色およびフローサイトメトリーにて検討したところ、腹膜播種には腫瘍内にCD8陽性T細胞やCD4陽性T細胞が多数浸潤していることがわかったが、皮下腫瘍にはいずれも浸潤はわずかであった。そこでIFN-γ受容体をshRNAで発現抑制したHM-1を用いて検討したところ、腹膜播種モデルにおいて、IFN-γ受容体を発現抑制すると、腫瘍増殖が抑制され、マウス生存期間が延長することがわかった。また、皮下腫瘍にIFN-γを腫瘍内投与したところ、腫瘍の増殖が促進されたが、腫瘍のPD-L1発現抑制によって、腫瘍増殖作用は打ち消された。以上の結果より、卵巣癌腹膜播種においては、腫瘍間質内浸潤CD8陽性リンパ球が分泌するIFN-γが卵巣癌細胞のPD-L1発現を誘導し、免疫逃避によって腫瘍の増殖につながっていることがわかった。一方、各種抗癌剤投与により、ヒトやマウスの卵巣癌細胞株のPD-L1発現が誘導されることをフローサイトメトリーやウェスタンブロット法で確認した。このPD-L1誘導は、NF-kB経路を介していることが、NF-kBのウェスタンブロットおよびsiRNAを用いたノックダウンの実験で明らかとなった。患者腹水中の卵巣癌細胞のフローサイトメトリー解析症例を増やし、癌細胞表面のPD-L1発現は、インターフェロンガンマ(IFNg)により促進されることを示した。臨床検体のマイクロアレイ解析を進め、IFNgシグネチャーと腫瘍内リンパ球数とが相関していることがわかった。卵巣癌臨床検体を用いた免疫染色では、腫瘍間質内のCD8陽性リンパ球数と腫瘍細胞のPD-L1発現が相関していることを見出した。マウス卵巣癌細胞株ID8およびHM-1の遺伝子改変を行い、IFNg受容体のノックダウンを行った。免疫正常マウス卵巣癌モデルを用いて、腫瘍にIFNgのシグナルが入らないようにするとPD-L1発現が抑えられ、腫瘍内にCTLが浸潤し、腹膜播種腫瘍の増大が抑えられることを示した。26年度が最終年度であるため、記入しない。婦人科腫瘍26年度が最終年度であるため、記入しない。卵巣癌におけるIFN-γ経路によるPD-L1発現亢進機構について、in vitroとin vivo双方で検討し、特にin vivoにおいて、卵巣癌微小環境での間質内CD8陽性リンパ球が分泌するIFN-γが癌細胞のPD-L1発現を誘導していることを示した。また、NF-kB経路によるPD-L1発現亢進機構についても、複数の抗がん剤によってin vitro双方で検討し、IFN-γによるPD-L1誘導とは独立した経路で発現誘導していることを見出した。以上より、当初の平成25年度の計画についてはほぼ達成できていると考えられる。平成26年度は、マウス卵巣癌腹膜播種モデルを用いて、chemo-immunotherapyの有用性の評価と、PD-1抗体療法の効果予測バイオマーカーを明らかにする。バイオマーカー候補が単一遺伝子として得られない場合、single sample gene set expression analysisの手法を用いて、IFN-γシグネチャーやNF-kBシグネチャーを同定し、特徴的な遺伝子群の変化としてのバイオマーカー探索も行う。
精神疾患患者の窒息事故を予測するための診断プロトコールの開発

不慮の事故における死亡は,2015年度における我が国の死因別死亡率の第6位と高い.その内訳は窒息が9806人と一番多く,その約半分が食品であった.精神疾患には認知症,統合失調症,うつ病等があり,患者は年々増加傾向で,特に認知症やうつ病が増加している.精神疾患患者の窒息の頻度は一般健常人に比べて極めて高く,30倍以上であったとの報告がある.精神疾患と嚥下障害との関連は深いにも関わらず,窒息を予防する評価法や対処法はほとんどなく,明確な予防策はない.窒息を予測することが可能となれば,日本の死亡率も減少させることが可能となると考えられる.本研究は,精神疾患患者を対象とした,前向き調査による口腔内状態,摂食機能の関係を解析することで,窒息予測プロトコールの開発することを目的とした.昨年度昭和大学医の倫理委員会より研究にあたり,承諾を得たため,プロトコール開発の前段階として,患者の嚥下・機能の評価を行うアセスメントシートを作成し,評価する予定である.2018年5月より,産休育休を取得したため,今年度は研究を中断した.4,5月は育休明けにスムーズな研究再開するための準備を行った.産休育休を取得し,研究を中断していたため,研究が遅れている.今後アセスメントシートを実施していく.実施した患者のデータをもとに,窒息との関係が考えられる因子の抽出を行う.先行研究では精神疾患病棟の窒息患者と性差,原疾患,環境要因は分かっているが,口腔機能や摂食嚥下機能についてはまだわかっていないため,口腔機能や摂食嚥下機能については今後の検討課題である.アセスメントシートの結果をもとに窒息予測プロトコールを試作・実施し,再検討したうえでプロトコールの開発と導入を行う.不慮の事故における死亡は、2015年度における我が国の死因別死亡率の第6位と高い。その内訳は窒息が9806人と一番多く、4その約半分が食品であった。精神疾患には認知症、統合失調症、うつ病等があり、患者は年々増加傾向で、特に認知症やうつ病が増加している。精神疾患患者の窒息の頻度は一般健常人に比べて極めて高く、30倍以上であったとの報告がある。精神疾患と嚥下障害との関連は深いにも関わらず、窒息を予防する評価法や対処法はほとんどなく、明確な予防策はない。窒息を予測することが可能となれば、日本の死亡率も減少させることが可能となると考えられる。本研究は、精神疾患患者を対象とした、口腔内状態,摂食機能の関係を解析することで、窒息予測プロトコールの開発することを目的とした。まず、研究を行うにあたり、昭和大学医の倫理会より承認を得た。プロトコール開発の前段階として、患者の嚥下・機能を評価しうるアセスメントシートを作成することとした。窒息のリスク要因、食形態を決定するために評価する必要のある項目の検討を行い、抽出を行った。その評価項目をもとに、アセスメントシートを作成した。患者の精神状態も考慮し、長時間の診療は不可能なため、短時間で行えるよう評価項目を検討した。アセスメントシートの内容としては、既往歴・現病歴、精神状態、口腔機能状態(残存歯状態、義歯状態、口腔乾燥状態、舌苔の付着、義歯の管理状態等)、口腔周囲機能(舌運動、軟口蓋挙上、咽頭反射、振戦等)、摂食機能(ムセの有無、喉頭挙上力等)である。倫理委員会の承認を得るのに時間がかかり、当初の計画よりやや進行が遅れている。そのため、その期間は、研究をスムーズに始められるよう、機材の準備や論文や資料収集を行っていた。今後も、精神疾患患者を対象とするため、予定通りに研究が進まない可能性が考えられる。そのため、患者の負担軽減を考慮して、データ採取の時間を短くする等の工夫が必要であると考えている。不慮の事故における死亡は,2015年度における我が国の死因別死亡率の第6位と高い.その内訳は窒息が9806人と一番多く,その約半分が食品であった.精神疾患には認知症,統合失調症,うつ病等があり,患者は年々増加傾向で,特に認知症やうつ病が増加している.精神疾患患者の窒息の頻度は一般健常人に比べて極めて高く,30倍以上であったとの報告がある.精神疾患と嚥下障害との関連は深いにも関わらず,窒息を予防する評価法や対処法はほとんどなく,明確な予防策はない.窒息を予測することが可能となれば,日本の死亡率も減少させることが可能となると考えられる.本研究は,精神疾患患者を対象とした,前向き調査による口腔内状態,摂食機能の関係を解析することで,窒息予測プロトコールの開発することを目的とした.昨年度昭和大学医の倫理委員会より研究にあたり,承諾を得たため,プロトコール開発の前段階として,患者の嚥下・機能の評価を行うアセスメントシートを作成し,評価する予定である.2018年5月より,産休育休を取得したため,今年度は研究を中断した.4,5月は育休明けにスムーズな研究再開するための準備を行った.産休育休を取得し,研究を中断していたため,研究が遅れている.今後、アセスメントシートを実施していく。実施した患者のデータをもとに、窒息との関係が考えられる因子の抽出を行う。

先行研究では精神疾患病棟の窒息患者と性差、原疾患、環境要因等は分かっているが、口腔機能や摂食嚥下機能についてはまだあまりわかっていない。そのため、口腔機能や摂食嚥下機能については今後の検討課題である。アセスメントシートの結果をもとに、窒息予測プロトコールを試作・実施し、再検討したうえで、プロトコールの開発と導入を行う。今後アセスメントシートを実施していく.実施した患者のデータをもとに,窒息との関係が考えられる因子の抽出を行う.先行研究では精神疾患病棟の窒息患者と性差,原疾患,環境要因は分かっているが,口腔機能や摂食嚥下機能についてはまだわかっていないため,口腔機能や摂食嚥下機能については今後の検討課題である.アセスメントシートの結果をもとに窒息予測プロトコールを試作・実施し,再検討したうえでプロトコールの開発と導入を行う.倫理委員会の申請が通らず、当初の研究が遅れているため、物品の購入、成果発表等が遅れている。今後、舌圧測定器等の物品や研究成果の発表を行っていく計画である。産休育休取得のため,研究中断した.そのため,育休終了した際は,速やかに研究を再開する.
サーフィン文化の起源を探る-土器編年からのアプローチ-

甕棺葬を特徴とするベトナム中部のサーフィン文化の起源を探るべく、指標遺跡が所在するクアンガイ省での先サーフィン段階とされる遺物と起源に影響を与えたとされるバウチョー文化の遺物の観察と実測を行った。その結果、今まで確認できていた3系統の甕棺とは別の系統の甕棺が存在することが明らかになった。また、バウチョー文化の土器には、サーフィン文化との類似性を示唆する要素が少なく、むしろ差異性が顕著であることがわかった。以上より、ベトナムのサーフィン文化は中部中域の新石器時代を基礎としており、他の地域から影響を受けて成立した可能性は考えられにくいという結論に至った。当該年度では当初予定していた調査を実施することができなかった。そのため、研究の進度はやや遅れ気味である。しかし、新たに入手することが出来た資料及び実測図は型式編年を作成するにあたり有用であった。特に、今まで報告書や論文で発表されてこなかったゴークエ遺跡出土甕棺の実測図を手に入れることが出来た。合わせて、副葬土器の実測図も入手できた。以前、ゴークエ遺跡出土甕棺を展示室で実見したことがあったが、他の甕棺と異なる特徴を持つのではないかという推測を抱いていた。今回、詳細な図面を手に入れることが出来、今まで観察を行ってきたクァンナム省、ビンディン省、トゥアティエン=フエ省など他の遺跡の甕棺と比べて器面調整や形態の点で共通点が見いだせなかったため、新たな系統である可能性に気づくことが出来た。さらに、コンテクストに関する情報も入手したため、副葬品の共伴関係などもある程度把握することが出来た。目立つ副葬品の一つでもある耳飾に関しても新型式の個体の存在を確認できた。また、ほぼ同時期と思われ、未発表資料でもあるズォンクァン遺跡の資料に関する情報も得られた。そしてサーフィン文化の遺跡の中でも古い段階といわれるロンタイン遺跡に関しても、同じく情報を整理することが出来た。今回の成果は、最近、体系的な報告や議論が行われていないクァンガイ省のサーフィン文化の土器編年とその様相(他地域との関係性)を描く作業を前進させるだろう。家族の病気療養に伴う介護のため日本を離れることが出来ず、予定していた現地調査を遂行できなかったから。昨年度は、調査を行ったクアンガイ省にて甕棺及び副葬土器を観察・図化し、今までに認識していた3系統の甕棺とは異なる系統の存在を把握することができた。しかし、金属器時代に繁栄する甕棺を用いた埋葬方法がどのように出現したのか、その答えには辿り着くことができなかった。ベトナム考古学界ではサーフィン文化の起源について、新石器時代の甕棺墓を伴うベトナム中部高原の文化が、中部北域の新石器時代に比定されるバウチョー文化と融合しサーフィン文化が誕生したと提唱されている。特にバウチョー文化の遺跡で出土する黒色彩色が施される高坏の存在が、サーフィン文化とバウチョー文化を結びつける物証の一つとしてとらえられている。しかし、これらの説は遺物の詳細な比較に基づいた十分な議論が行われているとは評価できない。これに着目し、バウチョー文化に比定される遺跡から出土した土器の実見・図化・比較をベトナム中部北域の各省立博物館で行った。先行研究で提言されている黒色彩色土器の観察を試みたが、数が少ないせいか博物館で認識されておらず、実見は叶わなかった。しかし、ロンタイン段階・ビンチャウ段階・サーフィン文化の各時期の土器には見られない、口縁端を外面に折り返し肥厚させる土器が存在すること、また土器の表面に見られる縄蓆文(縄を巻きつけた道具で叩いて成形した跡)に粗と密なものの2種類が存在することが分かった。特に、粗い縄蓆文の方は上記3段階の遺跡では現時点で確認できていない。また、ハティン省で確認した土器・土製装飾品については、北部の新石器時代ホアロック文化との類似性を確認できた。上記の調査成果より、本年度はバウチョー文化とサーフィン文化を直接結びつけるような物証が乏しく、現在提唱されている論が説得力に欠けるという結論に至った。まず、28年度に収集した資料(報告書、実測図面、写真)などの整理を行う。また、データベースにトレースした完成図面と新規情報を登録しデータの保管を行う。さらに、GISソフトを用いて遺跡の位置情報整理し、地図の作成を行う。後期にはこれまでにデータベースに登録した資料をもとに編年案を構築。特に、初期段階の甕棺墓遺跡の土器編年に重点を置く。また、流域間で器種構成と土器制作技術を比較し、地域差の有無についても検討する。海外調査の余裕があるようならば、ビンディン省にて未発掘遺跡の踏査・土器の表採を行う。

新規収集した資料について整理し、データの保管を行う。また、作成した編年案に土器の情報を加え、補完を目指す。29年度が最終年度であるため、記入しない。ベトナム考古学29年度が最終年度であるため、記入しない。
トランスポーター発現変動を介した薬物毒性発症機構

薬物毒性は、薬効に優れた医薬品の市場からの撤退や臨床試験中の脱落など、医薬品開発における最重要課題である。薬物毒性に関わる因子は様々であり、一般的な毒性からidiosyncraticな毒性まで、そのメカニズムの解明が求められる。本研究では細胞内外の薬物移行に働くトランスポータータンパク質に着目し、それらの吸収、組織移行、腎・肝排泄との関わりについて、ならびにその活性変動因子についてなど多面的な解析を行った。対象とした組織は消化管、精巣、脳、肝臓、腎臓、血球、ならびに腫瘍組織である。消化管吸収に関与するトランスポーターとして薬物輸送活性を有した分子を含むOATPに着目した。その結果、OATP-Bがヒト小腸上皮細胞刷子縁膜に発現すること、及びpH依存的な活性を示し、薬物の消化管吸収に働いていることを明らかにできた。組織移行としては、血液脳関門ならびに血液精巣関門に着目し、両関門を構成する脳毛細血管内皮細胞ならびにセルトリ細胞における物質輸送機構を解析した。排泄組織として肝臓に着目し、アニオン性薬物の肝排泄に働くOATP-C(SLC1B1)について検討を行った。OATP-Cは肝毒性の問題により市場から撤退したトログリタゾンとその代謝物、あるいは代謝産物の胆汁中排泄による消化管毒性が問題となる抗癌剤のイリノテカンの代謝物など種々の薬物ならびに代謝物の膜輸送に働くことを見出した。さらに、遺伝子多型の一つであるOATP-C^*15は、一塩基変異により輸送活性が低下し、OATP-Cの基質においては遺伝子多型により肝移行性が変動するために薬効・毒性にも影響することが推測された。その他、腎臓、血球、ならびに腫瘍細胞におけるトランスポーター活性について検討を行い、薬効・毒性に対する影響について有用な情報を収集し、その論文化による一般への情報提供を行うことができた。薬物毒性に関わる因子は様々であるが、本研究では物質の細胞膜輸送に関わる膜タンパク質であるトランスポーターに着目した。トランスポーターを介した薬物毒性は、原因となる薬物自身の体内動態がトランスポーター活性の変動により変化してしまうこと、ならびに薬物が生理的トランスポーター活性を変動させてしまうことの二点のメカニズムがありうる。本研究では、トランスポーターとしてアニオン性化合物輸送に関わるOATPならびに主にカチオン輸送に関わるOCTNに着目した検討を行った。各トランスポーター分子がどのような化合物に対していずれの組織で働くか、さらに各分子の機能特性を明確にしなければ、トランスポーターを介する毒性効果を機構論的に解明できない。本年度は、OATPファミリーではOATP-BならびにOATP-Cを、OCTNファミリーではOCTN1を対象とした検討を行った。その結果、OCTN1は腎臓の尿細管上皮細胞頂側膜に発現しており、pH依存的な交換輸送によりカチオン性薬物の細胞内から管腔中への排泄に関与することが示された。OATPについては、OATP-Bが小腸上皮細胞の頂側膜に発現すること、さらにpH依存的にアニオン性薬物を認識・輸送することを見いだした。即ち、管腔内pHがトランスポーター活性に影響を与え、その結果薬物動態も変動することが示唆された。肝特異的に発現するOATP-Cについては、新たに鎖状の生理活性ペプチドの肝取り込みに働き、その高い肝クリアランスに関与することがわかった。また、最近極めて重篤な肝毒性が問題となっている糖尿病治療薬トログリタゾンとその代謝物の動態にも関与するとともに、それらがOATP活性に影響を及ぼすこともわかった。以上より、今後はOATPならびにOCTNトランスポーター分子の発現調節機構の詳細な解析が、薬物毒性を考える上で重要なことが示された。薬物毒性は、市場からの撤退や臨床試験中にドロップアウトなど、医薬品開発の大きな障害になっている。

特に稀でしかも重篤な毒性作用も見られる場合も多く、毒性発現機構や影響因子を明確にすることが求められている。細胞膜輸送に働くトランスポーターは薬物の吸収、組織蓄積性や消失に関与している。そのため、その活性変動は、薬物動態の変動に直結し、有効性・毒性にも影響する。本研究では特に薬物輸送に働き、しかも毒性が重篤な場合が多い、肝臓に発現するトランスポーターに着目し薬物毒性との関連について検討を行った。トログリタゾンはインスリン非依存性糖尿病治療薬として開発されたが、肝毒性により市場から撤退した。トログリタゾンは硫酸抱合体、グルクロン酸抱合体、酸化キノン体、及びグルタチオン抱合体の代謝物が現れるが、特に硫酸抱合体は肝細胞内ならびに血漿中とも高濃度に見られる。有機アニオントランスポーターのOATP-Cはこの硫酸抱合体を基質として認識することがわかった。硫酸抱合体は腸管循環を受けるが、門脈血中から肝細胞内への取り込みにOATP-Cが関与し、肝細胞内で蓄積した硫酸抱合体が胆汁酸やビリルビン動態に影響する可能性が示された。さらに臨床的な血漿中濃度でOATP-Cは硫酸抱合体によって阻害される可能性も示唆された。同様に抗癌剤イリノテカンの代謝物で消化管毒性が重篤なSN38についても同様にOATP-Cの関与が示された。以上の結果より、肝取り込みに働く有機アニオントランスポーターOATP-Cを介する薬物輸送は、親化合物のみならず代謝物も考慮した輸送にも働くため、その活性に注意すべきことが示された。
分子ポテンシャル理論に基づく筋収縮運動シミュレーション

筋収縮運動の発現メカニズムの解明のために以下の2点に関する数値解析を行った.(1)原子レベルの解析:1990年にNatureに公表されたHolmesらによるアクチン分子の3次元結晶構造実験観測データ,およびPDB(Protein Data Bank)に登録されているATPの3次元分子構造データを用いて分子力学・分子動力学計算を行った.まず,生体中に近い環境条件下を想定して水分子を配置し,つぎに3次元分子構造-コンフォーメーション:配座-を決定するためのポテンシャルエネルギ極小化探索,つまり緩和計算を行った.さらに,得られた3次元座標を用いて基準振動解析を行い,ゆらぎ特性と体積圧縮率を原子ごとに求めた.ここでの配座エネルギー極小座標決定にはタンパク質の分子力学計算プログラム“AMBER"を利用する.この場合にアクチンフィラメントへと構造形成する際に必要となるATPが欠落した場合,アミノ酸残基の主鎖切断が生じた場合との比較によって正常なアクチンが最もゆらぎの程度が大きく,圧縮率も大きい,つまり柔らかいことが分かった.このことは配座の変化が生じ易く,収縮運動機能が大きいことを意味しているといえる.つぎに,筋収縮運動の素過程としてのアクトミオシン相対滑り運動を律するATP分子の分子構造解析および分子動力学解析を行った.筋収縮を誘起するATP加水分解においてはマグネシウムイオンの存在が必要とされている。ここでは,マグネシウムイオンが存在しない場合には“りん"が消失し,運動機能が著しく損なわれることを確認した.(2)アクトミオシン分子単位の解析:アクチンおよびミオシン分子単位で定義された分子ポテンシャル理論に基づいてそれらの分子集合組織としてのサルコメアの収縮運動の解析を行った.神経終板への刺激からカルシウムイオンの増加,さらにはATP加水分解の発生という生化学反応プロセスに関する数値モデルの提案を行った.カエルの半腱筋を用いた電気刺激・等尺収縮実験結果とサルコメア単位の数値解析結果との比較を行い,興奮収縮連関の数値解析がかなりの精度で可能であることを示した.筋収縮運動の発現メカニズムの解明のために以下の2点に関する数値解析を行った.(1)原子レベルの解析:1990年にNatureに公表されたHolmesらによるアクチン分子の3次元結晶構造実験観測データ,およびPDB(Protein Data Bank)に登録されているATPの3次元分子構造データを用いて分子力学・分子動力学計算を行った.まず,生体中に近い環境条件下を想定して水分子を配置し,つぎに3次元分子構造-コンフォーメーション:配座-を決定するためのポテンシャルエネルギ極小化探索,つまり緩和計算を行った.さらに,得られた3次元座標を用いて基準振動解析を行い,ゆらぎ特性と体積圧縮率を原子ごとに求めた.ここでの配座エネルギー極小座標決定にはタンパク質の分子力学計算プログラム“AMBER"を利用する.この場合にアクチンフィラメントへと構造形成する際に必要となるATPが欠落した場合,アミノ酸残基の主鎖切断が生じた場合との比較によって正常なアクチンが最もゆらぎの程度が大きく,圧縮率も大きい,つまり柔らかいことが分かった.このことは配座の変化が生じ易く,収縮運動機能が大きいことを意味しているといえる.つぎに,筋収縮運動の素過程としてのアクトミオシン相対滑り運動を律するATP分子の分子構造解析および分子動力学解析を行った.筋収縮を誘起するATP加水分解においてはマグネシウムイオンの存在が必要とされている。ここでは,マグネシウムイオンが存在しない場合には“りん"が消失し,運動機能が著しく損なわれることを確認した.(2)アクトミオシン分子単位の解析:アクチンおよびミオシン分子単位で定義された分子ポテンシャル理論に基づいてそれらの分子集合組織としてのサルコメアの収縮運動の解析を行った.神経終板への刺激からカルシウムイオンの増加,さらにはATP加水分解の発生という生化学反応プロセスに関する数値モデルの提案を行った.カエルの半腱筋を用いた電気刺激・等尺収縮実験結果とサルコメア単位の数値解析結果との比較を行い,興奮収縮連関の数値解析がかなりの精度で可能であることを示した.
出入国管理政策の理論・実証的検討

本研究活動は当初から計画していた「外国人に対する出入国管理政策が外国人の受入国にどのような影響をもたらすのか」という研究課題から大きく広がりを見せ、単に外国人に対する出入国管理政策だけでなく、政府の課す関税や外国法人への規制、また政府活動自体についての分析など様々な政策課題に関する研究活動を行っている。まず、当初からの研究課題である、外国人に対する出入国管理政策については、訪日外国人向けの査証政策と訪日外国人数・不法残留者数に関する実証分析の精緻化を進めており、学会での発表・学術誌への投稿に向けてさらなる研究を進めている。この研究では、訪日外国人向けの査証政策は不法残留者に影響が見られないという新たな結果を得た。また、これに関連し、税関施設への視察・ヒアリング調査の実施を行った。国内外の消費税の差額を利用した犯罪の取り締まり事例の紹介を受けるなど出入国管理の実態把握を行い、国内政策が人・ものを含めた出入国管理政策に大きく影響を及ぼすことが明らかとなった。このため、当初予定していた外国人に対する出入国管理政策に加え、関税や外国法人への規制、また、国内の政府活動についての研究を行うこととなった。具体的には出入国管理においてちぐはぐな政策実施がなされているとの指摘のあるように、政府は自己の目的と整合的な行動をするとは限らない上、自己の目的と整合的な行動をしているようであっても本来的な目的とは異なる選択を行っている場合が散見される。そのため、このような政府行動に関して、特に政府の債券発行についてのいくつかの研究も行った。これらの研究では、政府が自己の地域の効用最大化を図っても、コモンプール問題と呼ばれる問題によって、必ずしもそのような結果が得られないということがわかった。当初からの研究課題である、外国人に対する出入国管理政策について雑誌投稿が遅れている。現在は訪日外国人向けの査証政策と訪日外国人数・不法残留者数に関する実証分析の精緻化を進めている最中であり、学会での発表・学術誌への投稿に向けてさらなる研究を進めている。また税関施設への視察・ヒアリング調査の実施を行い、出入国管理の実態把握も進めている。ここで、国内政策が人・ものを含めた出入国管理政策に大きく影響を及ぼすことが明らかとなり、また、当初計画した研究計画については実施の困難性が明らかとなったため、現実の問題と沿うような新たな広がりのある研究課題に取り組むこととなった。今後は予定していた外国人に対する出入国管理政策に加え、関税や外国法人への規制、また、国内の政府活動についての研究を行うこととする。これは当初の研究計画の実施の困難性と実際のヒアリングなどを通した現場の問題意識との整合性を鑑みた推進方策である。外国法人と関税に関する研究については、従来の居住地主義・利益課税の原則的な法人課税を仕向地主義・キャッシュフロー課税にした場合の企業行動の理論分析を行う。どちらの課税方式も原則的には法人税であるが、それぞれの方式の違いによって関税のかかり方が異なる上、国内外の企業の海外市場への参入退出行動が変化することから、国際間の法人活動を適切に管理する法人税のあり方が模索されている。これは関税・企業の参入退出など財・企業の出入国管理とも言える分析であり、消費税などを巡る実際の関税の現場の問題意識とも整合的なものである。

ここで、国内政策が人・ものを含めた出入国管理政策に大きく影響を及ぼすことが明らかとなり、また、当初計画した研究計画については実施の困難性が明らかとなったため、現実の問題と沿うような新たな広がりのある研究課題に取り組むこととなった。今後は予定していた外国人に対する出入国管理政策に加え、関税や外国法人への規制、また、国内の政府活動についての研究を行うこととする。これは当初の研究計画の実施の困難性と実際のヒアリングなどを通した現場の問題意識との整合性を鑑みた推進方策である。外国法人と関税に関する研究については、従来の居住地主義・利益課税の原則的な法人課税を仕向地主義・キャッシュフロー課税にした場合の企業行動の理論分析を行う。どちらの課税方式も原則的には法人税であるが、それぞれの方式の違いによって関税のかかり方が異なる上、国内外の企業の海外市場への参入退出行動が変化することから、国際間の法人活動を適切に管理する法人税のあり方が模索されている。これは関税・企業の参入退出など財・企業の出入国管理とも言える分析であり、消費税などを巡る実際の関税の現場の問題意識とも整合的なものである。
細菌の細胞膜間糖輸送過程に関与する酵素フリッパーゼの実体の解明

細菌の細胞壁の生合成は脂質中間体LiPid IIにおけるオリゴ糖鎖のコア構造が細胞質内で構築され、糖坦体リピドと結合したものが細胞内膜側から外膜側へ「フリップ-フロップ転移」されて、細胞表面でのペプチドグリカン層生合成に供給される。このオリゴ糖の膜間移送過程(フリップ-フロップ転移)は教科書レベルでも記述されているにも拘わらず、その過程に関与する酵素「フリッパーゼ」の実体は全く明らかになっていない。この過程に関与する糖坦体リピド、ウンデカプレニルリン酸の前駆体を合成する酵素、ウンデカプレニル二リン酸合成酵素(UPS)をシス型プレニル鎖延長酵素として初めてクローン化し、そのX線結晶構造解析に成功しているので、フリッパーゼの実態を解明し、その分子レベルでの解明の糸口を見出すことを本研究の目的とした。先ず、UPSの大量発現系を利用して、ウンデカプレニル二リン酸の大量合成系を確立し、UDP-MurNAc-pentapeptideをBacillus cereusの培養液から抽出し、Phospho-MurNAc-pentapeptide transferaseの発現系を構築して、LiPid Iの酵素的合成法の確立を試みたが、大量合成法は構築できなかった。そこで、ウンデカプレニルリン酸のリン酸基にアミノエチル基がジエステル結合した化合物を合成し、このアミノ基に蛍光発色団7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl基を導入した化合物を合成した。さらにこの化合物のプレニル基をファルネシル基、またはゲラニルゲラニル基に置換た化合物も合成し、ウンデカプレニルリン酸が細胞膜の外膜から内膜ヘフリップ-フロップ転移により回収される過程を追究することにした。現在、合成した化合物を大腸菌野生株W3110株より調整した細胞膜成分に効率よく導入する方法を検討中である。まず最初に手掛ける目標として、細菌の細胞壁生合成において細胞質側で合成されたオリゴ糖成分をフリップ-フロップ移送により細胞外膜側に輸送する動的な過程に関与するとされ、その存在が教科書にも予想され、記述されているにもかかわらず、全く実体が把握されていない酵素「フリッパーゼ」の酵素活性測定法の確立のために、蛍光プローブの合成法を検討した。まず、大量発現系を構築しているウンデカプレニルニリン酸合成酵素を用いてウンデカプレニルリン酸の大量合成系を確立した。次にウンデカプレニルリン酸にスペーサーを介して蛍光試示薬を付加させる条件検討を行い、一応目的とする蛍光プローブの合成ルートを見出すことが出来た。現在、さらにこのプローブの大量合成ルートの確立を検討中である。一方、ウンデカプレニルニリン酸合成酵素のX線結晶構造解析を進めた結果、2.2Åの分解能での立体構造解明に成功した。興味深いことにこの酵素は今までに例を見ない全く新規な折り畳み構造を有するタンパク質であることがわかった。この酵素の基質の結合部位を部位特異的変異導入実験と結晶構造の詳細な解析により決定した。ヒトのデヒドロドリキルニリン酸合成酵素をコードしていると予想されるcDNAをクローン化した。現在発現系の構築を行って、クローン化した遺伝子産物の酵素活性を確認することで、ヒトの糖タンパク生合成系のフリッパーゼの探索研究の糸口を見出そうと努力しているところである。
ラン藻ファージのベクターとしての応用性に関する研究

鹿児島湾において優占するラン藻についての生理生態学的研究を推進するうえで、ラン藻の異常増殖、いわゆる赤潮の消滅期においてファージが現存量の動態に関与する可能性を明らかにしたのが、本研究のきっかけである。本研究のねらいは、ラン藻赤潮などの植物プランクトンの異常増殖をファージ等で制御可能かどうかについて検討するとともに、得られたファージが遺伝子操作などのツールとして応用可能かどうかを検討することにあった。そこで、まず鹿児島湾におけるラン藻の現存量の変動を明らかにするとともに、現存量の変動に影響をおよぼすファージを分離することから開始した。はじめに宿主ラン藻の純粋分離とともにそれに感染するファージを分離した。そして得られたいくつかのファージについて、電子顕微鏡観察や遺伝子解析をおこなった結果、これらのファージは2本鎖のDNAタイプであることを明らかにした。また、それらの遺伝子の配列を明らかにするとともに、既存のファージとの系統関係を明らかにした。そして、ベクターとしての様々な生理試験をおこなったが、現時点ではこれらのファージをベクターとして応用するにはいくつかの問題点があることを明らかにした。すなわち、これらのファージのホストレンジや感染力ならびに保存性などについて調べた結果、ホストレンジについては他の細菌などには感染しないことがわかった。しかし、感染力については既存の物に比べるとそれほど強力ではなく、保存性については良い結果があられなかった。今後ベクターとして候補を検索する場合には、強力な感染力と安定して保存できるファージを見つける必要があることがわかった。今年度は、海洋性ラン藻ファージの安定性の測定と保存方法の検討を行った。具体的には、すでに分離しているラン藻ファージ(S-KM1)を用いて凍結乾燥やグリセリン凍結保存(グリセリン濃度や保存温度を変えて)を行った後、溶菌力を宿主菌Synechococcus sp.(strain KFM001)を用いてTiter測定(力価測定)した。その結果、もっとも安定した方法で保存する条件を明らかにした。また、今後のベクターとしてのレパートリーを広げるため、現在保有している株以外の新しい宿主とファージの分離を推進している。また、溶原化の確証を得るためPCR法によって、ファージと宿主の遺伝子の接合部分の特定を行う実験を行った。現在その配列を解析中である。さらに、ファージ(S-KM1)の全ゲノムを解読するためのファプライマーを設計中である。今年度は、昨年度に引き続いてベクターとしてのレパートリーを広げるため、現在保有している株以外の新しい宿主とファージの分離を行った。その後、この海洋性ラン藻ファージの安定性の測定と保存方法の検討を行った。具体的には、今回分離したラン藻ファージ(S-KM2)を用いて凍結乾燥やグリセリン凍結保存(グリセリン濃度や保存温度を変えて)を行った後、溶菌力を宿主菌synechococcus sp. (strain KFM002)を用いてTiter測定(力価測定)した。また、この株間の溶原化の確証を得るためPCR法によって、ファージと宿主の遺伝子の結合部分の特定を行う実験を行った。具体的には、沖縄黒島海域などラン藻ピコプランクトンが豊富に存在するところからファージの分離を試みた。その結果、沖縄黒島の表層海水中には宿主としてのラン藻ピコプランクトンが10000cell/ml以上現存しており、そのほとんどがSynechococcusに分類されることを16S-RNA遺伝子の系統解析から明らかにした。またそれに感染するウイルス群を分離した。また、沖縄黒島に特有の井戸海水についても同様のスクリーニングをおこなったところ、井戸海水にはラン藻ピコプランクトンもそのういるすも現存しないことがわかり、生態学的に興味ある事実を突き止めた。また、これまでに保有している株間の溶原化の確証を得るためPCR法によって、ファージと宿主の遺伝子の接合部分の特定を行う実験を実施中である。

鹿児島湾において優占するラン藻についての生理生態学的研究を推進するうえで、ラン藻の異常増殖、いわゆる赤潮の消滅期においてファージが現存量の動態に関与する可能性を明らかにしたのが、本研究のきっかけである。本研究のねらいは、ラン藻赤潮などの植物プランクトンの異常増殖をファージ等で制御可能かどうかについて検討するとともに、得られたファージが遺伝子操作などのツールとして応用可能かどうかを検討することにあった。そこで、まず鹿児島湾におけるラン藻の現存量の変動を明らかにするとともに、現存量の変動に影響をおよぼすファージを分離することから開始した。はじめに宿主ラン藻の純粋分離とともにそれに感染するファージを分離した。そして得られたいくつかのファージについて、電子顕微鏡観察や遺伝子解析をおこなった結果、これらのファージは2本鎖のDNAタイプであることを明らかにした。また、それらの遺伝子の配列を明らかにするとともに、既存のファージとの系統関係を明らかにした。そして、ベクターとしての様々な生理試験をおこなったが、現時点ではこれらのファージをベクターとして応用するにはいくつかの問題点があることを明らかにした。すなわち、これらのファージのホストレンジや感染力ならびに保存性などについて調べた結果、ホストレンジについては他の細菌などには感染しないことがわかった。しかし、感染力については既存の物に比べるとそれほど強力ではなく、保存性については良い結果があられなかった。今後ベクターとして候補を検索する場合には、強力な感染力と安定して保存できるファージを見つける必要があることがわかった。
腎微小循環調節機序におけるRho-Kinaseの生理的・病態生理学的意義の解明

腎糸球体輸入細動脈と輸出細動脈は腎微小循環(糸球体血行動態)の調節に重要な血管部位であり、それらの血管抵抗バランスは糸球体血行動態の決定因子の1つである。各種腎疾患の発症・維持および進行には糸球体血行動態異常に基づく腎血管抵抗の異常や体液量調節機能障害が深く関与していることから、これらの血管抵抗調節機序およびその細胞内シグナル伝達機構を解明することは、各種腎疾患の病態を理解するうえで重要である。我々は昨年度、アンジオテンシンII(AII)による輸出入細動脈の収縮がRho-kinaseの選択的阻害薬により有意に減弱することを報告した。AIIによる輸出細動脈の収縮は糸球体高血圧を引き起こし、腎疾患における尿蛋白の増加や腎障害の進行に直接関与することが明らかにされている。したがって、Rho-kinaseを阻害することにより糸球体高血圧が改善されて腎機能障害の進行が抑制される可能性が示唆される。そこで我々は今年度、慢性腎不全のモデルにRho-kinaseの阻害薬を投与することで腎機能障害の進行が抑制できるかどうかをin vivoの実験系を用いて検討した。自然発症高血圧ラットに5/6腎摘を施行して作成した重症高血圧合併慢性腎不全モデルラットに経口投与可能なRho-kinase阻害薬であるFasudilを投与したところ、非投与群に比して尿蛋白が有意に減少するとともに血清クレアチニンの増加速度が抑制された。これらの効果は腎保護作用を有することが既に知られているAII受容体拮抗薬と同等であった。したがって、Rho-kinaseを阻害することにより腎障害の進行を有意に抑制し得ると考えられ、慢性腎疾患における新たな治療法の可能性が示唆された。しかしながら、これらの細動脈の血管抵抗調節機序における細胞内シグナル伝達機構の詳細は未だ不明である。そこで、アンジオテンシンIIやノルエピネフリンにょる輸出入細動脈の収縮に低分子量G蛋白の一つであるRhoおよびその標的蛋白であるRho-kinaseがいかに関与しているかを糸球体微小単離灌流実験系を用いて検討した。アンジオテンシンIIとノルエピネフリンはいずれもウサギの輸出入細動脈を濃度依存性に収縮させたが、この収縮はRho-kinaseの選択的阻害剤であるY-27632によって有意に減弱した。興味深いことに、アンジオテンシンIIによる収縮はノルエピネフリンによる収縮よりも強く抑制される傾向にあり、これらの血管作動物質による細胞内カルシウムシグナル伝達機構が異なっている可能性が示唆された。また、輸出細動脈は従来のカルシウム拮抗薬が作用しない血管であるが、Y-27632が有意に血管収縮反応を抑制したことより、この細動脈においてもカルシウム感受性の抑制により血管抵抗の低下が得られることが明らかとなり、糸球体高血圧を呈する病態における新たな治療法の可能性が示唆された。現在、高血圧動物モデルの輸入細動脈における血管反応性あ異常にRho-kinaseがいかに関与しているか検討するとともに、Rho-kinaseを阻害しておくことで高血圧性腎障害の進展を抑制できるか否かをin vivoの実験系でも検討する予定にしている。
時間的・空間的に相互作用をもつ格子確率モデルに関する精密な極限定理

グリム童話「ヘンゼルとグレーテル」では道しるべとしてパンくずを落として歩いたが,それを鳥が......ついばまなかったらどうなっただろうか?本研究計画は,このような『自己の軌跡が推移確率に影響を与えるランダムウォーク』の挙動を数学的に解析することを目的とする.過去の行動がどの程度影響を与えるかによってウォーカーの長時間挙動に大きな違いが生じる点に特徴があるが,これをスポンジのような多孔質媒質への流体の浸透における相転移現象との関連性を重視しながら調べてゆく.グリム童話「ヘンゼルとグレーテル」では道しるべとしてパンくずを落として歩いたが,それを鳥が......ついばまなかったらどうなっただろうか?本研究計画は,このような『自己の軌跡が推移確率に影響を与えるランダムウォーク』の挙動を数学的に解析することを目的とする.過去の行動がどの程度影響を与えるかによってウォーカーの長時間挙動に大きな違いが生じる点に特徴があるが,これをスポンジのような多孔質媒質への流体の浸透における相転移現象との関連性を重視しながら調べてゆく.
BPSD緩和を目的とした生活リズムの調整に着目した看護－介護協同介入モデルの作成

日々の看護-介護で実践されている「活動-休息パターンの安定化」に関する介入に着目し、『認知症高齢者のBPSD(認知症高齢者の心理・行動症状)を予防・改善するための“活動-休息パターンの安定化"に特化した看護-介護協同介入モデル』を作成することにした。本研究では、これまで培われてきた実践のノウハウを1可視化・類型化し、2実践の重要度や頻度、条件を模索し、3実用可能な介入モデルを作成する。
現代日本社会におけるリスナーシップの役割：世代・ジェンダー・異文化との交差

本研究ではアイデンティティ形成に大きな影響を与えるジェンダー、世代、異文化といった社会的要素に着目しながら、会話の共創に向けた「リスナーシップ」行動のメカニズム解明を目指してきた。大学生の世代の会話データでは、男性同士、女性同士、男女間の会話を通じて男女の聞き手の役割とアイデンティティとの関係性を調査してきた。「会話のコンテクスト化の合図」(Gumperz 1982)の枠組みから分析した結果、女性同士では共感の共有、男性同士では仲間意識の構築、男女混合では参与者同士の連携などが、様々なリスナーシップ行動を通じて観察された。これらの行動は会話のコンテクスト化の合図として会話の盛り上がりがみられる状況で特に機能していた。同調現象はリスナーシップ行動の顕著な特徴として観察された。会話のコンテクスト化が促進されると話し手と聞き手の区別は無くなり参与者同士の一体化がみられる。この「会話の一体感」をもたらす同調現象について、「場の理論」(清水2004)から解釈を試みた。会話の一体感を共有する過程には会話の開始部から、ターニングポイント、クライマックスといった段階があり、それぞれの段階では複数の言語及び非言語によるリスナーシップ行動が用いられ、それらによる参与者同士の同調が大きな役割を果たしていることが分かった。これらの研究結果をまとめた論文が書籍の2章分としてすでに出版されている。また、現在同調現象についての論文を書籍の1章分として書き上げ、出版に向けて最終の編集段階にある。6月に開催される国際語用論学会でも同調現象に関するパネル発表を予定しており、今後も同調現象についての成果を提示していく。最後に異文化については研究計画に従ってデータ収集を重ねていくことを目標とし、今年度長期留学を予定する大学生5名と長期留学から帰国した学生4名へのインタビューとアンケート調査を完了した。平成26年度は(1)新たな会話データの収集、(2)既存の家族会話データの分析、(3)国内外の学会への参加、の3つの研究活動を中心に行った。(1)3つの社会的要素(世代・ジェンダー・異文化)とリスナーシップの関係を探るため、本研究のキーワードの「世代」を手がかりに、新たに10代後半から20代前半の世代に焦点をあて、日本人同士の会話収集を行った。具体的には、大学生同士の自然会話を3つのグループ(女性同士・男性同士・男女混合)に分けて各グループ1時間ほどビデオ収録を行った。合計12組(女性同士4組・男性同士4組・男女混合4組)、720分のデータを収集し、当初のデータ収集計画(合計6組)を上回ることができた。(2)(3)既存の「家族会話データ」の分析では、相互行為社会言語学の枠組み「会話スタイル」(Tannen,1984/2005))を用いながら、家族会話における家族メンバーのリスナーシップの示し方を、会話上の役割と各家族メンバーの社会的な役割の両面から考察した。この分析結果の成果として、日本認知言語学会のワークショップで研究発表を行った。また、参与枠組み(Goffman, 1981)を用いながら、既存の「聞き手」の在り方では外れてしまうような「聞き手行動」にも着目し、聞き手の振舞の多様性についても分析を深めた。その研究成果として、ラウンドテーブル『参与(関与)枠組みの不均衡を考える』(主催者片岡邦好)にて、研究発表を行った。さらに、リスナーシップの多様性について、多角的に考察していく必要があるため、聞き手行動に関連付けながら研究を行っている国内研究者7名を招聘し、ワークショップを主催した。リスナーシップの柔軟性や特質について活発な議論を行うことができた。最後に、イギリスで国外の連携研究者と会議を開き、当該研究の枠組みや分析について有益な助言が得られた。平成27年度は(1)新たなデータの収集、(2)既存の若い世代の会話データの分析、(3)国内の学会への参加及びラウンドテーブルの共催、そして論文執筆の3つの研究活動中心に行った。(1)3つの社会的要素(世代・ジェンダー・異文化)とリスナーシップの関係を探るために、本研究のキーワードの「異文化」を手がかりに、本学の日本人学生で海外の大学に長期留学する予定の学生に向けて、異文化に対する意識や態度の変化についてインタビューとフォローアップアンケートを行った。インタビューは留学前後の両方で行う予定で、まずは留学予定者4名に調査を行った。また、平成26年度から長期留学に出で帰国した学生5名についても帰国後の調査を行った。当初は、日本での暮らしが長い外国人同士の会話収集を予定していたが、会話参加者の収集が難しい状況にあり、上記のような学生の異文化意識の調査に変更し、データを収集した経緯がある。(2)平成26年度に収集した若い世代の会話データの分析を中心に行った。本データは男女間の会話が含まれていることから、若い世代(10代後半から20代前半)におけるジェンダーと聞き手行動の役割を探る分析を中心に行った。(3)当初2016年7月に開催された第14回国際語用論学会(ベルギー)にて口頭発表を予定していたが、本務校の授業スケジュールにより急遽出席をキャンセルすることとなり、国内での活動に焦点をあてて、学会でのワークショップを主催した(ワークショップ「リスナーシップとアイデンティティージェンダーと異文化の視点」)。また、リスナーシップに関連した研究を行っている国内の研究者12名を招集し、昨年度に続いて第2回目のラウンドテーブルも共催した。さらに、若い世代やジェンダーに関連した日本語用論学会論文集と本の1章(くろしお出版)を執筆した。平成27年度の主な研究実施計画であった「異文化」に関する新たなデータ収集について順調に進めている。

データ収集の予定に変更が生じたが、10名ほどのデータ収集を行うことができ、継続的に収集を行っていきたい。また、既存の若い世代の会話データについても、若い世代全体の聞き手行動の役割に関する調査を進めると共に、ジェンダーと聞き手の役割についても考察を深めることができた。その研究成果として、第一に、学会でワークショップを主催し、リスナーシップと、ジェンダーと異文化といった社会的要素との接点を見出し、会話参与者のアイデンティティについて、共同発表者と考察を深める事が出来た(ワークショップ:「リスナーシップとアイデンティティージェンダーと異文化の視点」(発表者:難波彩子、植野貴志子、山口征孝、司会者:村田和代)。第二に、12名の国内の研究者を招集し、聞き手行動の再考を行う第2回のラウンドテーブルを共催し(共催者:村田和代、植野貴志子、難波彩子)、聞き手の役割の多様性について議論を深めることができたこともプロジェクト全体の大きな躍進となった。論文では、上記の日本語用論学会論文集の執筆と「若い世代」に関わるデータを用いて聞き手行動を「フッティング」(Goffman, 1981)や「関与」(Tannen, 1987)と関連づけた本の執筆を行った(『コミュニケーションを枠づけるー参与・関与の不均衡と多様性』(仮)(編者:片岡邦好,池田佳子,秦かおり、難波彩子担当:「日本語会話における聞き手のフッティングと積極的な関与」)。平成28年度は(1)データ収集の継続、(2)既存の若い世代の会話データの分析、(3)論文執筆の3つの研究活動中心に行った。(1)本研究のキーワードのうちの一つである「異文化」に関するデータ収集を継続的に行った。前年度にすでにインタビューをした4名の学生が長期海外留学を終えて帰国したため、当該学生に対する留学後のインタビューを行った。また、平成28年度9月から留学予定の学生4名へのインタビューを行った。(2)前年度から行っている、平成26年度に収集した若い世代の会話データの分析に引き続き従事した。分析は、(i)聞き手による会話への積極的な関与や、(ii)場の言語学の視点からみた聞き手の同調現象、(iii)「コンテクスト化の合図」による聞き手行動とジェンダー、の3点について行った。(3)今年度は研究代表者の妊娠で安静にする必要があったため、国内外の学会における研究発表は控えた。代わりに論文執筆に焦点をあてて活動し、論文3本を公表し(『コミュニケーションを枠づけるー参与・関与の不均衡と多様性』(編者:片岡邦好、池田佳子、秦かおり、難波彩子担当:「日本語会話における聞き手のフッティングと積極的な関与」、日本語用論学会第18回大会発表論文集、Papers on and around the Linguistics of“BA" 2017)、論文2本については現在編集中である。前年度の主な研究実施計画であった「異文化」に関するデータ収集を継続的に行っている。その結果、前年度留学した学生4名、そして今年度新たに留学予定の学生4名にインタビュー調査を行うことができた。