hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
再生医学へむけての発生・細胞工学的造血研究

胚性幹細胞(ES細胞)をOP9ストロマ細胞と共生培養することにより、血液細胞へと分化誘導する方法(OP9システム)では、造血前駆細胞を産生することはできるが、自己複製能のある造血幹細胞を産生することはできない。そこで、造血前駆細胞において転写因子をコンディショナルに発現させることにより、造血能を改善することを目的とした研究をおこなった。未分化な造血細胞に発現するzincfinger型の転写因子であるGATA-2を、テトラサイクリンによるコンディショナルな遺伝子発現系(Tetシステム)を用いて、造血前駆細胞において強制発現させる実験をおこなった。その結果、造血前駆細胞のコロニー数、ならびに、コロニーあたりの造血細胞数が増加すること、さらに、より未分化な造血コロニーの比率が増加すること、が明らかとなった。このことは、GATA-2によりOP9システムによって発生する造血細胞の造血能を高めることができたことを示している。従来の研究から、GATA-2は血液細胞の終末分化を抑制するものと考えられていた。しかし、本研究の結果は、赤血球系・巨核球系への分化は抑制ではなく促進することを示していた。終末分化の抑制は、GATA-2ではなく、GATA-2とエストロゲン受容体のリガンド結合ドメイン(GATA-2/ER)の融合転写因子の研究から得られた結果であったので、OP9システムとTetシステムをあわせた我々の方法においてGATA-2とGATA-2/ERの機能解析をおこなったところ、両者は、ほぼ逆の機能を持つことがあきらかとなった。今後、本研究において有用性が明らかになった、OP9-Tetシステムを用いて、造血細胞の分化機序を明らかにできるとともに、よりいっそうの造血細胞の機能改善に用いることが期待できる。
脳腫瘍癌幹細胞の自己複製メカニズムの解明

腫瘍幹細胞における自己複製能の解明を目的として、本研究により患者手術検体よりグリオーマ細胞の初代培養を行いグリオーマ幹細胞株の樹立を目指した。培養条件は無血清、EGFやFGFなどの成長因子を加えて行い、これまでの結果4例で10継代以上の長期培養が可能であった。しかしこれらの培養細胞の腫瘍幹細胞能が現時点では証明できていないので自己複製能の解明には至っていない。グリオブラストーマは浸潤、増殖能が強い未分化な腫瘍細胞からなる脳原発の悪性腫瘍で,放射線、化学療法に抵抗性を示す。最近脳腫瘍幹細胞がこの治療抵抗性を規定していると考えられているため、脳腫瘍癌幹細胞をターゲットとした治療法の開発が重要である。そこで腫瘍幹細胞の自己複製のメカニズムを解明するべく本研究を開始した。まず本研究を行うためにグリオブラストーマの手術検体からEGFやFGFなどの成長因子を含んだ培地で初代培養を行い、脳腫瘍幹細胞の自己複製能を解析できるin vitroでのモデル作成を目指して、幹細胞能を持ったグリオブラストーマ細胞の長期培養を行うことを試みた。その結果現在までに5例のグリオブラストーマを成長因子培養下で長期培養を行うことに成功した。これらの培養細胞は複数のマイクロサテライトマーカーを用いたLOH解析により、もとの腫瘍細胞と同じgenotypeを保持していることが証明され、またSOX2やnestiなどの未分化な表面マーカーを発現しており、腫瘍幹細胞の性質を持つことが示唆された。次の段階としてこれら継代培養された脳腫瘍幹細胞における細胞分裂と非対称分裂関連蛋白の発現を解析した。解析する分子としてDrosophilaでの機能が解析されている遺伝子のhuman homologであるaspm, lgl-1, plk-1, Aura Akinasenなどを選択した。蛍光免疫染色やwestern blottingにより発現パターンと発現量を蛋白レベル検討しているが、現在までlgl-1の解析を行ったがはっきりとした発現は認められなかった。グリオーマ幹細胞は、多分化能と自己複製能を持ち放射線、化学療法に抵抗性を示すとされている。したがって治療成績向上のためにはこのグリオーマ幹細胞をターゲットにした治療法の開発が重要である。この幹細胞に対する標的療法を確立するべく本研究ではグリオーマ幹細胞の複製機序の解明を目的とした。神経幹細胞は非対称分裂をすることが知られているが、グリオーマ幹細胞では幹細胞の数を結果的に増やすことができる対称分裂をしているのではないかと仮定し、ショウジョウバエの神経幹細胞での分裂に関与するたんぱく質の発現に着目した。実験モデルとしてはグリオブラストーマの手術検体を無血清条件下でprimary cultureした培養細胞を用いた。具体的にはEGFやFGFなどの成長因子を含んだ培地でprimary cultureを行うことで幹細胞能を持つと推測される腫瘍細胞をneurosphereを分離し、長期に培養を行った。その結果これまでに10代以上の長期培養が可能であった4例において昨年度の段階で複数のマイクロサテライトマーカーを用いたLOH解析により、もとの腫瘍細胞と同じgenotypeを保持していることを証明し、またSOX2やnestinなどの未分化な表面マーカーを発現していることを確認した。次の段階としてこれらの培養細胞の腫瘍幹細胞のとしての自己複製能を確認するために、ヌードマウスへの移植実験を行った。しかし現時点では移植自体は成功しているものの、培養された腫瘍細胞の自己複製能を証明する段階には至っていない。したがってグリオーマ幹細胞そのものにおけるaspm,lg1-1,plk-1,Aura A kinaseなどの発現レベルは解析できておらず、継続的な研究が必要である。
上皮細胞膜上におけるプロテアーゼ活性調節とその異常による病態の解析

細胞周囲微小環境におけるプロテアーゼ活性は生命現象に深く関与する。本研究では上皮細胞の細胞膜結合型インヒビター(HAI-1)とその標的プロテアーゼの、生理活性物質活性化制御、上皮完全性維持、発癌そして癌進展における意義を検討した。その結果、HAI-1が表皮の正常角化と毛小皮形成に必須で、また腸管上皮完全性維持においても重要であることを明らかにした。更に、発癌や癌細胞浸潤における抑制因子として機能することも見出した。細胞周囲微小環境におけるプロテアーゼ活性は、細胞外基質の再構成や生理活性物質の活性調節を介して、多細胞生物の様々な生命現象に深く関与する。本研究では、上皮細胞に特異的に発現する細胞膜結合型インヒビター(HAI-1 : HGF activator inhibitor type 1)とその標的プロテアーゼ(HGF activator, matriptaseなど)による上皮細胞周囲微小環境での生理活性物質プロセッシング制御と、その破綻によって生じる上皮組織の病態を解析する。特に(1) HGF activatorの新規基質の探索、(2) HAI-1 knockout (KO)マウスおよび組織特異的conditionalKOマウスの作成とそれらを用いた諸臓器上皮組織における解析、(3)上皮系がんの進展におけるHAI-1の意義解析の3点に重点をおいて研究を行う。細胞膜結合型セリンプロテアーゼインヒビターHAI-1とその標的プロテアーゼによる細胞周囲微小環境での生理活性物質プロセッシング制御と、その破綻によって生じる病態を、遺伝子改変マウスを用いて解析し、以下の成果を得た。(2)HAI-1 KOマウスの表皮における魚鱗癬様病変について詳細に検討し、報告した(Am J Pathol,173:1464-75,2008)。さらに、HAI-1欠損表皮の超微形態像の検討を開始した。(3)HAI-1のプロモーター領域の解析を行い、HAI-1発現が低酸素刺激や酸化ストレスによって誘導されることを明らかにし、報告した(Virchows Archiv,453:347-57,2008)。(4)HAI-1抑制により、癌細胞の上皮・問葉転換現象が生じることをはじめて報告した(5)HAI-1の消化管および呼吸器上皮における機能を明らかにするための、conditional KOマウス作成を遂行し、平成20年度は以下の成果を得た。(1)Floxed HAI-1マウスの作成に成功した。今後は、このconditional KOマウスの解析を以下の2点に注目して進めたいと考えている。(1)炎症性腸疾患モデルを作成し、HAI-1欠損の影響をみる。(2)発がんに対する影響を検証する。発がんモデルとして(1)化学発癌モデル、(2)APC欠損マウスとの交配、を考えている。これらの解析を通じて、HAI-1の生体内機能の一端があきらかになると共に、臨床応用にむけた可能性探索が可能になる。(1) HGFactivator(HGFA)によって活性化されるHGF以外の生理活性物質として、macrophage stimulating proteinを同定した(FEBSJ276:3481-90,2009)。この成果をうけて、FEBSJ誌よりHGFAに関する総説を依頼され執筆した。(2) HAI-1KOマウスの表皮における魚鱗癬様病変について超微形態的検討を行い、HAI-1欠損に伴い表皮の細胞間微細構造が大きく変化することを明らかにした。(3) HAI-1の消化管および呼吸器上皮における機能を明らかにするための、条件付きHAI-1KOマウスの系を作成し、平成21年度は以下の成果を得た。(1)腸管特異的HAI-1KOマウスを世界に先駆け作成した。(2)腸管特異的HAI-1KOマウスを用いて、以下の成果を得た:(1) DSS投与による炎症性腸疾患モデルを作成し、HAI-1欠損によって腸管炎症が重症化することを明らかにした。(2)化学発癌モデルの作成し、化学発癌に対する、HAI-1欠損の影響を検討する実験を開始した。(3) APC欠損マウスとの交配を開始し、APC欠損に伴う発癌に対する、HAI-1欠損の影響を検討する実験を開始した。これらの研究を通じ、HGFAおよびHAI-1の生体内機能の一端が明らかになり、臨床応用に向けた可能性探索が可能となった。上皮細胞に特異的に発現している細胞膜結合型セリンプロテアーゼインヒビターHAI-1とその標的プロテアーゼによる生理活性物質プロセッシング制御と、その破綻によって生じる上皮組織・細胞の病態を、遺伝子改変マウスや培養上皮系癌細胞を用いて解析した。

(1)HAI-1の諸臓器上皮組織における機能を明らかにするため、条件付きHAI-1 KOマウスの系を世界に先駆け作成した。これを用いて平成22年度は以下の成果を得た。(1)腸管特異的HAI-1 KOマウスの組織を詳細に観察し、盲腸を含む近位大腸上皮に形態学的異常が生じ、粘膜透過性が亢進することを明らかにした。(2)DSS投与による炎症性腸疾患モデルを作成したところ、腸管HAI-1欠損マウスは有意に生存率が低下し、また、軽度傷害モデルにおいても傷害後の粘膜再生が遅れることを明らかにした。(3)化学発癌刺激による大腸発癌率が腸管HAI-1欠損マウスにおいて増加することを見出した。(4)APC変異マウスとの交配を行い、APC失活に伴う腸管腫瘍形成における腸管HAI-1欠損の影響を検討した。その結果小腸腫瘍形成率が明らかに亢進することを見出した。(5)肺気管支上皮特異的HAI-1欠損マウスを作製した。(2)上皮系癌細胞の進展におけるHAI-1の意義を解明するために、培養膵癌細胞株を用いてHAI-1遺伝子ノックダウンおよび強制発現を行い、以下の成果を得た。(1)一部の上皮系癌細胞株においてHAI-1欠失は上皮間葉移行をひきおこす。一方で、in vitroにおける増殖能はむしろ低下する。これらの結果は、HAI-1が上皮細胞の完全性維持において重要な役割を有することを示している。上皮細胞に発現する細胞膜結合型セリンプ旦テアーゼインヒビターHAI-1とその標的プロテアーゼによる生理活性物質活性化制御と、その破綻により生じる病態を、遺伝子改変マウスや培養細胞を用いて解析した。(1)HAI-1の諸臓器上皮組織における機能を明らかにするため、条件付きHAI-1 KOマウスの系を作成し、これを用いて、腸管特異的HAI-1 KOマウスを作成した。その結果、近位大腸粘膜における軽度の形態異常と上皮細胞アポトーシス亢進、粘膜透過性亢進を認め、HAI-1が大腸上皮完全性維持に関与することが示された。更に、DSS投与による炎症性腸疾患モデルにおける生存率が低下し、また軽度傷害モデルにおいても粘膜再生が遅れることを明らかにした(Am J Pathol, 2011)。(2)上記マウスをAPC変異マウスと交配し、APC失活に伴う腸管腫瘍形成におけるHAI-1欠損の影響を検討した。(3)癌細胞におけるHAI-1の意義を解明するために、切除された口腔扁平上皮癌(OSCC)組織と培養ヒトOSCC細胞株を用いた検討を行った。その結果、強い浸潤を示すOSCC浸潤先端においては膜結合HAI-1が顕著に減少し、これはリンパ節転移と相関すること、そして、培養OSCC細胞のHAI-1発現をノックダウンすると浸潤性が亢進することを明らかにした(J Pathol in press)。(4)気管支線毛上皮細胞において、線毛運動調節に関与するチロシンキナーゼ型受容体RONのリガンドであるMSPを活性化する酵素が、膜結合トリプシン様プロテアーゼHATであることを明らかにし、またHATがHAI-1によって制御されることを明らかにした(FEBS Lett, 2012 : J Biochem, 2012)。
血清中フッ素と骨粗鬆症の関連に関する研究

開発したフッ素子イオン電極を検出器とするフローインジェクション分析装置を用いた、血清中微量フッ素イオン濃度の測定法を確立した。すなわち、本装置を用いて血清試料の微量フッ素イオンの測定を行って、最も重大な障害となったのは燐酸イオンの干渉であった。わずか1mM/L存在しても大きな疑似ピークが出現して、測定上大きな障害となった。このため、緩衝溶液に適量の燐酸イオンを加えて検討した結果、加える燐酸量に応じて試料に共存する燐酸イオンの干渉を抑制できることが確認された。一方で、緩衝溶液中の燐酸イオン添加量に応じて電極の応答が悪くなるため、添加量をあまり多くすることはできない。実際の測定においては、燐酸イオンの添加量を0.1M/Lとした。カルシウムイオンの干渉は0.03M/LのCyDTAを緩衝溶液に添加することで抑制できた。緩衝溶液のpHを5.3とし、血清試料を蒸留水で希釈して測定した結果、20倍まで希釈しても良好な回収率が得られなかった。電位差/時間プロファイルを検討した結果、血清試料のpHの影響と考えられたので、血清を希釈してpHを5.05.3の範囲内にして測定した結果、10倍希釈で96.5%の良好な回収率が得られた。本法を用いて、食事やコーヒー、お茶等の影響の無いと考えられ、DEXA装置による骨密度測定を実施した健康な女性72名について、血清中フッ素濃度を測定した。血清中フッ素濃度の平均値±標準偏差は9.36±2.66であった。年齢とともに濃度が上昇する傾向が認められ、年齢との間には有為な相関関係が認められた。また、DEXA装置で測定した骨密度(BMD)とは、BMD値が増大に伴って低下する傾向が認められたが、有為な相関関係は認められなかった。さらに、BMD値のZスコアとの比較においても有意な相関は認められなかった。さらに例数を増やして検討する必要がある。:空腹時の血清を約350人の健康な女性から採取することができた。同時に,DEXA装置による骨塩量の測定も行った。さらに、血液採取時に飲料水、食事の摂取時間及びコーヒー、紅茶、緑茶等の摂取量と時間に関する聞き取りを行い、血清中フッ素測定結果からフッ素摂取の影響を検証できるようにした。これらのデータの解析はまだ行っていない。また、血清中フッ素の通常値の検討のための骨塩量の測定データのない、空腹時の血清試料も約100例集めた。全ての血清試料は-80°Cで凍結保存した。我々が開発した方法を用いて、血清中フッ素の測定法について検討した。本年度の予算で購入したデータ取り込み用のデータボード(Mac ADIOS II)、及び取り込んだデータを解析するソフト(GSI-SS2)を手持ちのパソコンに組み込んで、正確な血清中フッ素濃度の測定を行うべく、シグナルの解析から測定干渉などについて細かく検討を行った。その結果、標準溶液と血清試料でシグナル形状に差異が認められ、血清マトリックスによる干渉の存在が認められた。このため、蛋白質、脂質、数種のカチオン及びアニオン等の血清マトリックスの干渉について検討を加えた。その結果、燐酸イオンの干渉が最も大きい事が判明した。この燐酸イオンの干渉は緩衝溶液に少量の燐酸イオンを添加し、血清を数倍に希釈することで抑制できた。また、カルシウムイオン等のカチオンの影響は、やはり緩衝溶液中にキレート剤を添加することで抑制できた。

蛋白質や脂質は、電極表面への付着により徐々に感度及び応答の低下と遅延をもたらすため、非イオン系の界面活性剤の添加が効果的であった。緩衝溶液のpHが血清中のフッ素の測定に及ぼす影響については、来年度検討を行う。来年度は、測定方法の確立し、全ての血清試料についてフッ素イオン濃度測定を行い、その通常値と骨密度との関連について検討する。開発したフッ素イオン電極を検出器とするフローインジェクション分析装置を用いて、血清中のフッ素イオン濃度を測定した。測定条件は、燐酸イオンの干渉を抑制するための燐酸イオンの添加量を0.1M/L、カルシウムイオンの干渉を防止するため0.003M/LのCyDTAをそれぞれ緩衝溶液に添加した。緩衝溶液のpHについて検討した結果、pHが低いほど電極の感度が増大した。一方で、試料のpHが5.0を下回ると、フッ素がHFとなって電極に応答しない。そのため、緩衝溶液のpHは5.3とした。血清試料を蒸留水で希釈して測定した結果、20倍まで希釈しても良好な回収率が得られなかった。電位差/時間プロファイルを検討した結果、血清試料のpHの影響と考えられたので、血清を希釈してpHを5.05.3の範囲内にして測定した結果、10倍希釈で96.5%の良好な回収率が得られた。本法を用いて、食事やコーヒー、お茶等の影響の無いと考えられ、DEXA装置による骨密度測定を実施した32歳から67歳の健康な女性72名について、血清中フッ素濃度を測定した。血清中フッ素濃度は4.4から16.8μg/Lの範囲内にあり、平均値±標準偏差は9.36±2.66μg/Lであった。年齢とともに濃度が上昇する傾向が認められ、年齢との間には有為な相関関係が認められた。また、DEXA装置で測定した骨密度(BMD)とは、BMD値が増大に伴って低下する傾向が認められたが、有為な相関関係は認められなかった。さらに、BMD値のZスコアとの比較においても有意な相関は認められなかった。さらに例数を増やして検討する必要がある。
表情ジワの画像解析による皮下組織構造推定と応用

本研究は、医学及び歯学の専門家と連携し、携帯端末に搭載されているカメラで撮影された顔のシワを画像解析によって検出し、皮下組織の構造を間接的に明らかにすることによって加齢や顎顔面外科施術による顔貌変化の定量評価といった応用を行う初めての先進的な試みである。シワは、社会的関心度は高いのにも関わらず、これまで定量評価に関する研究は小ジワのみの限定的なものであった。本研究では、カメラ画像と断層画像の組を多様な被験者で撮影しデータベースを作成する。そして、被験者の顔を撮影したカメラ画像に対して顔面のシワのうち特に表情ジワに着目し、画像解析によるシワの検出とシワ位置に基づく皮下組織構造の推定を行う。
経済的採餌行動の細胞・分子機構

ニワトリの雛は、孵化直後から精確な視覚弁別に基づく選択行動を示す。この特性を利用して、採餌選択の脳内機構、特に利潤率予期の計算過程について実験的検討を加えた。行動学的解析・局所脳破壊実験などに加え、覚醒自由行動下・課題遂行中における大脳単一ニューロン活動の解析を総合的に行うことにより、以下の知見を得た。1基底核(側坐核相同領域):予期報酬の時間的接近遅延報酬によって強化された色弁別オペラント課題を、孵化後1-2週齢の雛は数時間のトレーニングによって速やかに学習する。線条体内側部の破壊によって、時間的・空間的に近い報酬を選び取ろうとする衝動的選択へのシフトが見出された。報酬の量に基づく選択は正常だった。ニューロン活動の解析の結果、予期報酬の接近と量とを特異的に符号化する2群のニューロンが同定された。さらに比較解剖学的検討の結果、この領域は哺乳類の側坐核(コア)と完全に相同とみなしうることが判明した。2弓外套連合野(大脳皮質前頭前野相同領域):予期労働コスト単一ニューロン解析によって、弁別記憶の細胞表現と共に、餌の音源定位に関する作業記憶と考えられる活動を見出した。この領域の選択的な破壊によって、処理コストを嫌うcost-averseな行為選択へのシフトが見出された。3収益逓減と喪失機会:実験的再構成系の開発最適採餌理論(最適パッチ利用モデル)を実験室内で再構成する行動課題を新たに開発した。特に、喪失機会に対する選択の感受性を定量的に計ることが可能となった。
新規不飽和脂肪酸n-1DHA, n-1EPAの化学構造の決定

シロウリガイ(Calyptogena spp.)類の脂質を調べ、n-1、n-4不飽和脂肪酸の解明を試みた。シロウリガイ(Calyptogena soyoae)、シマイシロウリガイ(Calyptogena okutanii)、スルガシロウリガイ(Calyptogena fausta)、など試験したすべてのシロウリガイで、類似する脂肪酸を有し、光合成由来のn-3、n-6不飽和脂肪酸を持たないことが明らかになった。生息水深など環境が大きく異なるにもかかわらず、4種ともに類似するn-1、n-4不飽和脂肪酸を有することから、4種それぞれと共生する微生物の高い相同性と柔軟な環境適応性が示唆された。27年度は、まず課題3の「種々のシロウリガイ類(Calyptogena soyoae、C. okutanii、C. fausta)脂質の脂肪酸解明を進める」を遂行した。Calyotogena属シロウリガイ類それぞれの個体軟体部を、えら、筋肉(閉殻筋及び足)、その他内臓に分離後、Folchの変法(クロロホルムーメタノール混液)で脂質を抽出し粗製脂質を得た。得られた脂質をカラムクロマトグラフィーで分離精製し、リン脂質などの各脂質クラスを得た。次に脂肪酸組成を調べたところ、全ての二枚貝でn-3やn-6不飽和脂肪酸をまったく持たず、浅海部の植物プランクトン依存の二枚貝と全く異なる脂質を持つことが明らかとなった。また、すべてのCalyptogena属二枚貝は、ナギナタシロウリガイの脂肪酸と酷似していた。化学構造を決定するため、ジメチルオキサゾリン誘導体(DMOX)を合成したところ、いずれの二枚貝もナギナタシロウリガイと同じく、n-1、n-4、n-7多不飽和脂肪酸が主成分であることが分かった。これらの二枚貝はすべて1,0002,000mに生息していることから、水深6,500mのナギナタシロウリガイと大きく異なる圧環境だが、その共生細菌は同じ脂肪酸を産生していることが分かった。また、課題1,2の「n-1DHAやn-1EPAなどの新規脂肪酸を見出す」「超長鎖不飽和脂肪酸(24炭素鎖のn-1/n-4/n-7脂肪酸)や新規脂肪酸を明らかにする」を試み、それぞれの脂肪酸組成から長鎖脂肪酸を探索したところ、24:6n-7と推定されうるピークを見出した。27年度は課題1、2を完了できなかったものの、課題3をほぼ完了し、課題1、2の鍵脂肪酸の化学構造解析の手がかりをつかむことができた。28年度は課題3を達成するとともに、課題1、2の24:6n-4などの超長鎖脂肪酸の構造決定を行う。課題1,2の「n-1DHAやn-1EPAなどの新規脂肪酸を見出す」「超長鎖不飽和脂肪酸(24炭素鎖のn-1/n-4/n-7脂肪酸)や新規脂肪酸を明らかにする」について、24:6n-7と推定されうるピークを見出し、課題1、2の鍵脂肪酸の化学構造解析の手がかりをつかむことができた。以上の結果、課題1、2は若干遅れているものの、当初の目的である鍵脂肪酸の手がかりをつかむことができた。課題3は、28年度計画としていたが、前倒しして遂行することができ、ほぼ完了という当初計画以上に進展を見た。その結果、課題3については、国内学会、国際学会で口頭発表することができた。これらの成果から、全体としては概ね順調に進展していると評価できる。本研究は、課題1.n-1ドコサヘキサエン酸(n-1DHA)等の同定、課題2.超長鎖不飽和脂肪酸(VLCーPUFA)の同定、課題3.種々のシロウリガイ脂質成分の解明、の3課題が目的であるが、課題3は27年度に種々のシロウリガイ類(シロウリガイ、スルガシロウリガイ、シマイシロウリガイなど)の主要脂質クラスおよび主要脂肪酸解明の目途がつき、28年度にすべての主成分脂肪酸類が分かった。28年度の結果、水深1,000m前後に生息する種々のシロウリガイ類の主要PUFAは、水深6,300mに生息するナギナタシロウリガイと酷似するn-1、n-4非メチレン中断型PUFAのみであった。このことから、試みたすべてのシロウリガイ類は、化学合成細菌のみに栄養を依存することが分かった。さらに、水圧や水温など大きく環境の異なるシロウリガイで、類似するPUFAのみが主成分として見出されたことから、共生微生物(化学合成細菌)の共通性が示唆された。28年度には、それらの成果について学会発表を行った。また、28年度は課題2に取りかかり、n-1ドコサヘキサエン酸生合成の中間体であるn-4、n-7超長鎖脂肪酸類の探索と化学構造の解明を行った。ナギナタシロウリガイやシンカイヒバリガイ(Bathymodiolus japonicus)、ヘイトウシンカイヒバリガイ(Bathymodiolus platifrons)に含まれるマイナー脂質成分中の、微量24炭素鎖脂肪酸をガスクロマトグラフィーマススペクトル装置(GCーMS)で長時間測定を行い、新規n-1、n-4超長鎖不飽和脂肪酸類の、24:5n-7、24:6n-4など目的の微量超長鎖脂肪酸と推定される脂肪酸を見出した。

化学構造を一部明らかにでき、シロウリガイやシンカイヒバリガイなどがn-1PUFAやn-4PUFAの長鎖化を行っていることが示唆された。平成28年度に得られたデータから、生息深度・水温など環境の異なる種々のシロウリガイと化学合成細菌の有する脂肪酸類やそれらの共生系に関する新たな知見が得られた。課題3に関しては、28年度完了し、その成果について学会発表を行った。ついで、ナギナタシロウリガイやシンカイヒバリガイ(Bathymodiolus japonicus)、ヘイトウシンカイヒバリガイ(Bathymodiolus platifrons)に含まれるマイナー脂質成分中の微量な24炭素鎖の新規n-1、n-4超長鎖不飽和脂肪酸類の、有機機器分析による探索を開始した。炭素鎖24の超長鎖脂肪酸を目的にGC-MS長時間測定を行い、微量の超長鎖脂肪酸類を見出し、一部であるが化学構造が推定された。これらの成果や進捗状況から、一部滞っているものの、おおむね順調に進展している。本研究では、ナギナタシロウリガイ(Calyptogena. phaseoliformis)脂質中のn-1、n-4長鎖脂肪酸(22:4n-1、22:4n-4、21:5n-4など)に関連する、以下の3課題の解明を目的とした。課題1.シロウリガイ類に含まれる未知n-1、n-4長鎖不飽和脂肪酸の化学構造の解明。課題2. n-1ドコサヘキサエン酸生合成の中間体のn-4、n-7超長鎖脂肪酸類の探索。課題3.化学合成生態系に属する種々のシロウリガイ類の脂質成分の解明。29年度では、シロウリガイ類に含まれる微量な24炭素鎖の新規n-1、n-4超長鎖不飽和脂肪酸類について検討した。GC-MS長時間測定を行い、微量超長鎖脂肪酸として24:5n-7などの化学構造を明らかにできた。2728年度では、課題3.「種々のシロウリガイ類脂質の脂肪酸解明」をおこなった結果、ナギナタシロウリガイをはじめ、生息深度・水温など環境の大きく異なる他のシロウリガイ(Calyptogena soyoae)、スルガシロウリガイ(Calyptogena fausuta)、シマイシロウリガイ(Calyptogena okutanii)など検討したすべてのシロウリガイで、不飽和酸はn-1、n-4、n-7不飽和脂肪酸のみで構成されることを見出した。n-3やn-6不飽和脂肪酸が皆無で、4種とも脂肪酸組成が一致し、化学合成細菌とその共生系が酷似することを明らかにした。2829年度では、これらのシロウリガイ類脂質中の24炭素鎖の新規n-1、n-4超長鎖不飽和脂肪酸を探索し、24:5n-7などの化学構造を明らかにできた。全期間を通じ、一部の脂肪酸は明らかに出来なかったものの種々の超長鎖脂肪酸類を見出し、化学構造を明らかにでき、課題の多くの部分を達成できた。今後は残された、n-1DHAやn-1EPAの探索を行う。シロウリガイ(Calyptogena spp.)類の脂質を調べ、n-1、n-4不飽和脂肪酸の解明を試みた。シロウリガイ(Calyptogena soyoae)、シマイシロウリガイ(Calyptogena okutanii)、スルガシロウリガイ(Calyptogena fausta)、など試験したすべてのシロウリガイで、類似する脂肪酸を有し、光合成由来のn-3、n-6不飽和脂肪酸を持たないことが明らかになった。生息水深など環境が大きく異なるにもかかわらず、4種ともに類似するn-1、n-4不飽和脂肪酸を有することから、4種それぞれと共生する微生物の高い相同性と柔軟な環境適応性が示唆された。28年度は、ほぼ完了した課題
線形論理を用いた新しいプログラミング言語理論について

今年度は、証明網の研究をさらに深めるため、J.-Y.Girard"Locus Solum"を研究し、さらにケンブリッジ大のM.Hyland,エジンバラ大のG.Plotkin,J.Power及びパリ大のP.-L.Gurienとの共同研究を行った。その結果まず論理式の役割が(1)証明の構成要素として位置(ロケーション)を表す(証明論的役割)(2)証明の推論プロセスを表す半順序構造を表す(ドメイン理論的役割)(3)証明を真とする空間(通常To-分離公理を満たす)(型理論的役割)となることがわかった。また。計算の意味論を深める上で、論理学におけるドモルガン性をゲームセマンティクスにより新解釈を与えることが重要であると認識した。今後、並列計算のモデルとして評価されてきた証明網の意味論の研究に、型理論的"Fully-Abstract"であるCurry-Howard同型対応とドメイン理論的"Fully-Abstract"であるBohmの定理がどのように反映され、さらに発展する方向を定めていくのか大変興味深い。昨年度までの研究を踏まえて今年は証明探索との関連を通いてproofnetの特徴付け定理の意義を吟味した。線形論理ではparaproofと呼はれる証明より広い概念を用い、paraproofの中で特徴付け定理による条件を満たすものが証明であると評定される。また、プログラシング言語理論において重要な関数の性質である合流性を保証する論理学的な性質が特徴付け定理ということもできるのではないか。また証明に関する研究を論理体系(構文的)に対する分析的アプローチと一貫性空間(意味的)に対する大域主義的アプローチの観点から行い、証明探索における2大要素として、分解と分割を得るに到った。今後線形論理を発展させたlocative logicに関する様様な研究がなされるであろうが少なくとも以下の観点は注目に値するであろう。1.対話型証明探索はサーバクライコントモデルの理論となりうるか2.論理学から"記憶機能"を提供できるか3.論理はソフトウェア工学の基礎となりうるかアブストラクション(描象)...オブジュクト指向リプリゼンテーション(表現)...効率的なメモリ管理に適切な型(共用型)の理論今年度は、証明網の研究をさらに深めるため、J.-Y.Girard"Locus Solum"を研究し、さらにケンブリッジ大のM.Hyland,エジンバラ大のG.Plotkin,J.Power及びパリ大のP.-L.Gurienとの共同研究を行った。また。
脊髄損傷の病態における分子生物学的解明と治療法の確立

脊髄損傷は,重篤な運動・知覚障害を引き起こす難治性疾患のひとつで,病態の解明および的確な治療法の確立が急務である.本年度は,1)脊髄損傷後の二次的障害要因の鍵を握るグルタメート毒性,ラジカル発生の果たす役割を明らかにし,本病態の細胞傷害過程とその修復,再生の可能性についての理解を得るとともに,また,2)有用な薬剤の臨床応用に向け基礎的基盤を得ることを目的に検討を行った.雄SDラット(300-350g)を用い,1)脊髄圧迫,および,2)脊髄虚血モデルにおける病態生化学的,分子病理学的検討を行った.その結果,1)脊髄圧迫(腰部硬膜外バルーンの1分間膨張)後,脊髄マイクロダイアリシスによりCSF-グルタメートが著明に増加することが明かとなり,これは観察した4時間まで持続した.脊髄圧迫後4時間で灌流固定すると,損傷周辺部(脊髄介在ニューロンと運動ニューロン周辺の小型細胞)でapoptosis(TUNEL染色)がみられ,また一部では細胞の早期変性(Nauta染色)が認められた.これらの障害は,ラジカル捕捉剤(アストログリアへの再吸収機構の改善)および軽度低体温(低酸素性脱分極の軽減,NMDA受容体活性の抑制など)で抑制された.したがって,脊髄の機械的あるいは虚血性損傷後には,刺激あるいは低酸素に起因した細胞脱分極によると思われる過剰な興奮性アミノ酸放出が起き,細胞内シグナリング-核内プロセス変調からDNAの断片化をもたらし,機能障害を引き起こすものと考えられる.このことは,ラジカル捕捉剤および軽度低体温がこれらの病態に有効であったことからも,脊髄損傷後の二次的障害因子に興奮性アミノ酸の過剰亢奮を引き金とする生化学カスケードが重要に関与するものと示唆される.一方,2)脊髄虚血後の細胞障害の治療に1)で検討したラジカル捕捉剤および軽度低体温のほか,胎児脳幹部の脊髄移植術による機能回復の可能性を検討している.まだ結果は得られていないが,仮説として,モノアミンを豊富に含有する脳幹部組織には栄養因子合成誘導作用が期待される.したがって,神経-免疫回路,すなわちマイクログリア,アストロサイト,サイトカイン変動の免疫組織学的追跡により,その可能性を明らかにすることを目的に展開している.今後,昨年度の研究成果を考え合わせ,1)脊髄損傷後のapoptosis(関連遺伝子の変動も調べより詳細にする)の時間変化の治療閾との関連は如何に?,2)これらが神経栄養因子や支持細胞の増殖などとどのような相互関係にあるか(グリア反応と隣接部位でのシナプス再構築など)?,を検討し,脊髄障害の病態の理解とその適確な治療法の確立をめざしたい.脊髄損傷は,重篤な運動・知覚障害を引き起こす難治性疾患のひとつで,病態の解明および的確な治療法の確立が急務とされる.本研究では,脊髄損傷後の細胞傷害過程を詳細に理解するため,グルタメート毒性,ラジカル発生の関与のほか,神経再生・修復能を高める神経栄養因子の果たす役割を明らかにし,また,有用な薬剤の臨床応用に向け基礎的基盤を得ることを目的とする.初年度では,雄Sprauge-Dawleyラット(300-350g)を用い,1)脊柱管狭窄症,および,2)脊髄虚血モデルにおける病態生理学的検討を中心に行った.その結果,1)では腰部馬尾神経圧迫により運動抑制と合わせ,知覚過敏が起き長期的に持続し,ヒトにおける馬尾神経性間欠跛行,腰痛の臨床症状を良く反映することを確認した.この場合,損傷周辺部(とくに脊髄介在ニューロンと運動ニューロン周辺の小型細胞)でapoptosis(TUNEL染色)がみられ,また一部では細胞の早期変性を示す銀沈着(Nauta法)が認められた.これらの障害は,PGE1誘導体投与により著しく改善された.したがって,脊髄圧迫により循環障害に起因したとみられる運動,知覚障害が,特定細胞(介在ニューロン,前角小型ニューロン)のapoptosisに伴い発現する可能性が初めて明らかになった.2)では胸部下行大動脈にバルーンカテーテルを挿入し,バルーン膨張で大動脈を閉塞した.低血圧を負荷し閉塞時間は5,8,10分間,あるいは閉塞のみ20分間群に分けた.その後バルーン膨張を解除し,再灌流した.その結果,5分群ではapoptosisは再灌流1時間で介在ニューロンに発現した後,消失し,8分群では1,4時間で発現し,また10分群ではapoptosisはほとんどみられず,8時間で銀沈着が著しかった.20分間群では,8時間で一部の介在ニューロンにapoptosisが起き,他は銀沈着が散在的に認められた.以上のことから,脊髄の虚血性病態は,1)選択的脆弱細胞群が存在すること,2)細胞の傷害過程は,虚血性侵襲に依存すること,3)necrosisのみでなく,核内プロセスの変調からapoptosisが発現し,知覚,運動機能の障害を引き起こすものと理解される.今後,apoptosisと関連したc-fos遺伝子発現があるか否か,さらにこれらが神経栄養困子,ラジカルやサイトカインとどのような相互関係にあるかをそれぞれの阻害薬投与で検討し,また神経栄養因子がapoptosisを含めた損傷隣接部の神経細胞死を抑止できるかどうか,グリア反応と隣接部位でのシナプス再構築,および運動・知覚機能の修復を評価する.脊髄損傷は,重篤な運動・知覚障害を引き起こす難治性疾患のひとつで,病態の解明および的確な治療法の確立が急務である.

本年度は,1)脊髄損傷後の二次的障害要因の鍵を握るグルタメート毒性,ラジカル発生の果たす役割を明らかにし,本病態の細胞傷害過程とその修復,再生の可能性についての理解を得るとともに,また,2)有用な薬剤の臨床応用に向け基礎的基盤を得ることを目的に検討を行った.雄SDラット(300-350g)を用い,1)脊髄圧迫,および,2)脊髄虚血モデルにおける病態生化学的,分子病理学的検討を行った.その結果,1)脊髄圧迫(腰部硬膜外バルーンの1分間膨張)後,脊髄マイクロダイアリシスによりCSF-グルタメートが著明に増加することが明かとなり,これは観察した4時間まで持続した.脊髄圧迫後4時間で灌流固定すると,損傷周辺部(脊髄介在ニューロンと運動ニューロン周辺の小型細胞)でapoptosis(TUNEL染色)がみられ,また一部では細胞の早期変性(Nauta染色)が認められた.これらの障害は,ラジカル捕捉剤(アストログリアへの再吸収機構の改善)および軽度低体温(低酸素性脱分極の軽減,NMDA受容体活性の抑制など)で抑制された.したがって,脊髄の機械的あるいは虚血性損傷後には,刺激あるいは低酸素に起因した細胞脱分極によると思われる過剰な興奮性アミノ酸放出が起き,細胞内シグナリング-核内プロセス変調からDNAの断片化をもたらし,機能障害を引き起こすものと考えられる.このことは,ラジカル捕捉剤および軽度低体温がこれらの病態に有効であったことからも,脊髄損傷後の二次的障害因子に興奮性アミノ酸の過剰亢奮を引き金とする生化学カスケードが重要に関与するものと示唆される.一方,2)脊髄虚血後の細胞障害の治療に1)で検討したラジカル捕捉剤および軽度低体温のほか,胎児脳幹部の脊髄移植術による機能回復の可能性を検討している.まだ結果は得られていないが,仮説として,モノアミンを豊富に含有する脳幹部組織には栄養因子合成誘導作用が期待される.したがって,神経-免疫回路,すなわちマイクログリア,アストロサイト,サイトカイン変動の免疫組織学的追跡により,その可能性を明らかにすることを目的に展開している.今後,昨年度の研究成果を考え合わせ,1)脊髄損傷後のapoptosis(関連遺伝子の変動も調べより詳細にする)の時間変化の治療閾との関連は如何に?,2)これらが神経栄養因子や支持細胞の増殖などとどのような相互関係にあるか(グリア反応と隣接部位でのシナプス再構築など)?,を検討し,脊髄障害の病態の理解とその適確な治療法の確立をめざしたい.
希釈式自己血輸血における代用血漿投与が血液凝固線溶系および腎機能に及ぼす影響

目的および方法:股関節手術時に希釈式自己血輸血を行った8名(希釈群)と行わなかった9名(対照群)を対象として検討を行った。希釈は血液希釈液としてハイドロキシエチルスターチを用い、ヘマトクリット24%を目標に行った。1:手術前2-3日以内、2:希釈30分後、3:手術終了30分後、4:術後1日目、5:術後3日目の5測定点において検体採取を行い、トロンボエラストグラフィー、ヘマトクリット(Ht)、血小板数、フィブリノーゲン量、PAI-1(1:、4:、5:のみ)、Dダイマー(1:、4:、5:のみ)、クレアチニンクリアランス(CCr)、尿中N-Acethyl-beta-d-Glucosaminidase(NAG)等の測定を行った。結果ならびに考察:Htは希釈群37,23,30,31、対照群35,30,29,30,31と変化して2:において希釈群は対照群に比較して有意な低下を認めた。凝血塊強度の指標であるMA(mm)は希釈群44.9,37.8,43.7,45.3,55.0、対照群45.2,45.3,47.5,47.3,54.0と変化して希釈群は2:において対照群に比較して有意な低下を認めた。血栓性合併症の指標であるDダイマー(ng/ml)は希釈群113,928,395、対照群116,939,438と変化したが両群間に有意差はなかった。糸球体濾過量の指標であるCCr(ml/min)は希釈群95.1,62.5,78.99,115、対照群74.9,51.1,105,118,118と変化したが両群間に有意差はなかった。尿細管障害の指標であるNAGインデックス(U/I)は希釈群4.6,13.4,31.1,10.1,16.6、対照群4.3,12.4,16.8,10.4,17.0と変化したが有意差はなかった。結論:以上の結果より希釈式自己血輸血は術中の凝固能を有意に低下させるが術後の凝固能には有意な影響を与えなかった。また血栓性合併症を低下させる作用はなかった。腎機能に対する悪影響はなかった。
コミュニティに基づく在日外国人妊産婦への支援プログラムの開発

本邦で妊娠、出産、育児を経験する外国人女性が増加している中、飛び込み分娩や、未受診妊婦など母子共にハイリスクな実態がある。これまでに在日外国人妊産婦を対象に行った研究では、妊娠、出産、育児は文化の影響が強く、コミュニティ内部の情報が最重要視されることが明らかとなった。このような現状より、コミュニティと看護職双方の視点からの在日外国人の周産期の安全、安心な医療支援が喫緊の課題である。本研究では在日外国人妊産婦のコミュニティ内の情報ネットワークや問題解決の実態を明らかにし、コミュニティを対象とした支援プログラムを開発すると同時に、コミュニティに基づく看護職向けの支援プログラムを開発する。
NMR化学シフト計算法を用いる構造解析

化合物の詳細な構造を解明することは、その化合物がもつ特異な機能を理解する上で不可欠である。機能と構造との相関が解明できれば、より高次の新しい機能をもった分子を設計することが可能となる。このように構造の知見は機能の理解、予測、設計などに重要である。我々はNMR化学シフト計算法を確立し、任意の構造に対する理論的な化学シフト値を正しく求め、それを用いてフレキシブルな化合物の動的な配座平衡の解析を行うため、化学シフトを用いる解析法を開発した。われわれは化学シフト値の構造依存性は分子内に存在する芳香環、多重結合やヘテロ原子を含む官能基などからの誘起遮蔽効果を見積もる方法により求めている。今回,以前に求めたエーテルの場合と同様な手法を用いて、2級アミンとナフタレンの磁気異方性効果を求めた。それにより,ナフタレンの磁気異方性効果は周辺10π電子系に起因することを明らかにした.さらにキラルな二級アルコールの絶対配置の決定に化学シフト計算法を適用した.インダン骨格を含む堅固なキラルなカルボン酸を新規に合成し,メントールをはじめとする各種のキラルな二級アルコール体とのエステルを合成し,新規不斉補助基がキラルな二級アルコール体に及ぼす誘起磁気遮蔽効果を求めた。この誘起磁気遮蔽効果を再現すべく,新規不斉補助基をもつエステル体について分子動力学計算を行い、そこから得られる動的構造を用いて化学シフト計算法により誘起シフトを計算したところ,実測の誘起磁気遮蔽効果をよく再現し,計算法によるキラルな三級アルコール体の絶対配置を決定することに成功した。その他,動的構造を用いて化学シフト計算法により誘起シフトを計算する手法で,超分子の溶液中における動的構造解析に成功した.化合物の詳細な構造を解明することは、その化合物がもつ特異な機能を理解する上で不可欠である。その他,動的構造を用いて化学シフト計算法により誘起シフトを計算する手法で,超分子の溶液中における動的構造解析に成功した.NMRの最も基本的なデータである化学シフトは立体化学の議論や配座解析に用いられることは少ない。しかし、化学シフト値にも分子の三次元情報は豊富に含まれており、立体化学の議論や立体配座解析にこれを利用し得るはずである。そこで本研究ではそれを用いてフレキシブルな化合物の動的な配座平衡の解析をおこなった。一般に複数の立体配座が速い動的な平衡にある場合の化学シフト値は、多数の配座の過重平均として観測される。ここではフレキシブルな化合物の一例として芳香環を架橋鎖で連結したシクロファンの解析を行った。特に架橋鎖にエーテル基をもつ1,4,11,14-テトラオキサ[4.4]メタシクロファンは結合定数やNOEからの情報が得られないことと、鏡像体への環反転があることから従来法ではまったく解析出来なかった。しかし芳香環の環電流と架橋鎖のエーテル基による誘起シフトの計算と分子力学計算法を併用してこの化合物の溶液中における安定配座を決定することに成功した。続いて縮合多環芳香族化合物における芳香環の環電流による磁気異方性効果を求めるため、溶液中でも構造が変化しない堅固な骨格をもつステロイド化合物にナフタレンを二つ縮合した7,8-ジヒドロジベンゾフェナントレン骨格をエチレンケタールで結合した化合物を合成し、それらの化学シフトと対照化合物のそれの比較からナフタレン環の磁気異方性効果を求めることに成功した。このようにして求めた、ナフタレン環の磁気異方性効果からナフタレン環の環電流はベンゼン環のそれを単純に二つ加算することにより再現することができることを明らかにすることができた。我々は,NMRの化学シフト値を用いて,フレキシブルな化合物の溶液中の立体配座を求める手法の開発を行ってきた。この手法では、分子内の各種の官能基が近傍のプロトンに及ぼす誘起化学シフトの値から,問題とするプロトンと官能基の相対的な配置を決めることができることを利用している。

すでにエーテル,カルボニル基やベンゼン環の磁気遮蔽効果を見積もるためのパラメータを求めることに成功しているが,本研究では含硫黄官能基について磁気遮蔽効果を見積もった。実際には構造が堅くプロトンの位置の特定が容易な,ステロイド骨格のA環に硫黄原子を含むアンドロスタン誘導体を合成し、スルフィド結合に関する磁気異方性パラメータの決定を行った。さらに化学シフト計算法の有用性を拡張するため,この手法を第2級アルコールの絶対配置決定に適用した。不斉補助試薬としてインデン骨格をもつキラルなカルボン酸を合成し、メントールとエステル化した。得られたエステルについてそのプロトンの化学シフトの帰属を行い,比較対照化合物との化学シフト変化量を求めたところ,イソプロピル基のシグナルにおいて最も大きな差が見られた。また分子動力学計算による計算から得られたそれぞれの計算構造に基づき、化学シフト変化量の計算値を算出した。これらの数値の比較からこの不斉補助試薬の導入による化学シフトの変化量と分子動力学計算を用いて、第2級アルコールの絶対配置を決定することに成功した。最終年度においては、化学シフト計算法をキラルな二級アルコールの絶対配置の決定に適用した。キラルな二級アルコールの絶対配置の決定に化学シフトを用いる手法はMosher法がその基本であるが、楠見らの改良法をはじめ多くの手法が提案されている。この手法はキラルなカルボン酸(例えばmethoxytrifluoromethylphenylacetic acid (MTPA)のエステル体における化学シフト値と、絶対配置を決定すべきに二級アルコールのそれとの差に基づいて絶対配置を決定する手法である。この手法は化学的な変換により絶対配置の既知な化合物に誘導する手法に比較して簡便であることから、多くの研究者に利用されているが、定量的な取り扱いは少ない。しかし、我々の手法は理論的な計算に基づく化学シフトの変化量の絶対値が算出できるため、信頼性の高い定量的な手法と成り得る。キラルなカルボン酸として、芳香環の回転を考慮する必要のないインダン骨格を含む堅固なものを選び、磁気異方性発色団とも言うべき芳香環にベンゼンとナフタレンを用いた。これらのキラルなカルボン酸と光学活性な市販の1-メントールとのエステル形成による化学シフト差を求めた。さらにこれらのエステルについて分子動力学計算を行い、そこから得られる動的構造を用いて、芳香環の環電流効果に基づく誘起シフトを計算したところ実測値を良く再現したことから、二級アルコールの絶対配置の決定に化学シフト計算法が有効であることを示せた。
子宮頸部腺癌の免疫組織学的検討

1.1972年から87年までの16年間に治療された頸部腺癌111例について組織学的再分類を含む臨床病理学的検討を行った。この間に腺癌の頻度が子宮頸癌中の5%から10%へと上昇した。これは扁平上皮癌の減少による相対的な上昇であった。臨床進行期では早期癌症例数が少なく、進行癌の予後は扁平上皮癌に比較して不良であった。予後を左右する因子として、原発巣の大きさ、浸潤の深さ、リンパ節転移、腹水細胞診の結果等が考えられた。2.基底膜の成分であるラミニンとIV型コラ-ゲンの免疫組織染色を行ない、その結果基底膜が強く厚く染色されるTypeI、基底膜が弱く薄く一部欠如するTypeII、基底膜が弱く断片的に染色されるTypeIIIに分類した。高分化型腺癌はTypeIが17例(71%)で残りはTypeIIであったのに対して、低分化型では5例中4例(80%)がTypeIIIであった。上皮内腺癌はすべてTypeIであったが、悪性腺腫は組織学的に極めて高分化であるにもかかわらず、TypeIIIが83%であった。Type別の予後はTypeI,TypeIIに比較してIIIが悪く、組織分化度別の予後でもTypeIIIが多い未分化型や悪性腺腫が悪かった。基底膜の染色性と予後の間に関連が見られた。3.腺癌のhigh iron diamine(HID),Alcian blue(AB)による粘液染色を行ないその結果をそれぞれに対する染色態度で検討した。純粋腺癌は両者陰性、正常細胞はAB陰性、HID陽性、そして悪性腺腫は両者陽性となった。腺癌と悪性腺腫は正常細胞を中心にして癌では機能を失う方向に、悪性腺腫では新たな分泌能を獲得する方向にと、反対の方向に脱分化していると考えられた。こりより、悪性腺腫を腺癌の最も分化した癌と考えるより、通常の腺癌とは機能的に全く違う腫瘍と考えた方が、その治療成績の悪さとも合致すると考えられた。子宮頸部腺癌症例についての臨床病理学的検証を行った。症例は当科において1972年から87年の16年間に治療された腺癌69例、腺扁平上皮癌37例、カルチノイド5例、未分化癌1例の計111例であった。検討の結果は、(1)頻度:子宮頸癌の中で腺癌の占める割合は5%から10%へ増加しているが扁平上皮癌の減少による比較的なものと思われた。(2)年令・素因:平均年令49.8才、閉経前の患者が61.3%で、体癌と同様の素因は認めなかった。(3)主訴は84%が不正出血であった。(4)検討歴:頸癌検診歴を有するものは26%と少なかった。(5)細胞診で陰性であったものは4.5%と低いので、細胞診は腺癌のスクリーニングとして有用である。(6)臨床進行期は0期、Ia期の割合が扁平上皮癌に比べて少ない。(7)組織分類は、生検、手術摘出標本を再度、検鏡して行った。カルチノイド、未分化癌6例中4例は腺癌成分が混在しており、その予後が悪く、悪性腺腫と共に要注意群である。(8)組織型と予後との関連をみると、内頸部型腺癌と類内膜腺癌との両者間に有意差は認めず、両者を分類する意義があるかどうか再検討の余地があると思われた。(9)予後因子としては、リンパ節転移、浸潤の深さ、腫瘍の占拠範囲、腹水細胞診が重要であった。以上の内容は、第27回日本臨床細胞学会秋期大会のシンポジウムで発表された。また、免疫組織学的検討として、基底膜の成分であるラミニンとIV型コラーゲンを腺癌症例38例で染色を行ない、高分化腺癌では基底膜が厚く強く染まる傾向があったが、低分化腺癌では基底膜が断片的に染まる傾向であった。悪性腺腫も基底膜が断片的に染まり、基底膜が断片的に染まるものは予後不良の傾向があった。以上から基底膜の染色パターンと分化度および予後との関連が示唆された。この内容については、平成元年4月第41回日本産科婦人科学会で発表の予定である。

上皮内腺癌はすべてTypeIであったが、悪性腺腫は組織学的に極めて高分化であるにもかかわらず、TypeIIIが83%であった。Type別の予後はTypeI,TypeIIに比較してIIIが悪く、組織分化度別の予後でもTypeIIIが多い未分化型や悪性腺腫が悪かった。基底膜の染色性と予後の間に関連が見られた。3.腺癌のhigh iron diamine(HID),Alcian blue(AB)による粘液染色を行ないその結果をそれぞれに対する染色態度で検討した。純粋腺癌は両者陰性、正常細胞はAB陰性、HID陽性、そして悪性腺腫は両者陽性となった。腺癌と悪性腺腫は正常細胞を中心にして癌では機能を失う方向に、悪性腺腫では新たな分泌能を獲得する方向にと、反対の方向に脱分化していると考えられた。こりより、悪性腺腫を腺癌の最も分化した癌と考えるより、通常の腺癌とは機能的に全く違う腫瘍と考えた方が、その治療成績の悪さとも合致すると考えられた。昨年度に引き続き、基底膜の成分であるラミニンとIV型コラ-ゲンの免疫組織染色を行ないその結果を3つのTypeに分類した。すなわち、基底膜が強く厚く染色されるTypeI、基底膜が弱く薄く一部欠如するTypeII、基底膜が弱く断片的に染色されるTypeIIIである。高分化型腺癌はTypeIが17例(71%)で残りはtypeIIであったのに対して、低分化型では5例中4例(80%)がTypeIIIであった。Type別の予後はTypeI、IIに比較してIIIが悪く、組織分化度別の予後でもTypeIIIが多い未分化型や悪性腺腫が悪かった。これより悪性腺腫の予後が不良であることの一原因として基底膜の性質が関係しているのではないかと推測した。一方、腺癌をhigh iron diamine(HID)およびAlcian blue(AB)粘液染色により検討した結果でも、悪性腺腫が他の腺癌と異なった粘液分泌機能を示していた。結果をHID、ABそれぞれに対する染色態度として表してみると、純粋腺癌は両者陰性、正常細胞はAB陰性、HID陽性、そして悪性腺腫は両者陽性となった。腺癌と悪性腺腫は正常細胞を中心にして癌では機能を失う方向に、悪性腺腫では新たな分泌能を獲得する方向にと、反対の方向に脱分化していると考えられる。これより、悪性腺腫を腺癌の最も分化した癌と考えるより、通常の腺癌とは機能的に全く違う癌と考えたほうが、その治療成績の悪さとも合致すると考えられた。