hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
日本語版心疾患の健康関連尺度の作成

そのため、平成2122年度には、成人の有職者や、急性心筋梗塞発症後の患者を含めた、心筋梗塞患者342名を合わせ、合計549名の心疾患患者のデータを基に、再度日本語版作成を試みた。その結果、原版と同様に、因子分析では3因子構造が確認された。また、MacNew総得点と3つの下位尺度間では高い相関が、SF36の各下位尺度との間では中程度の正の相関が、HADSの不安とでは負の相関が認められたことから、基準関連妥当性が確認された。心機能の分類(NYHA)によるMacNew平均得点の比較についても、NYHA I II群がIII群よりも1%水準で有意に得点が高かったことから、構成概念妥当性についても確認された。さらに、Cronbackα係数は0.9以上と高く、内的整合性も確認され、慢性心不全患者のみを対象とした結果よりも、より高い信頼性が確認された。以上から、心疾患に広く用いることのできる健康関連QOL尺度が使用可能となった。
主観的内部モデルを持つ多主体から構成される社会:数理的分析と応用

本研究の目的は、相互意思決定における意思決定主体の主観性の影響を扱う理論的枠組を構築すること、及びそれに基づき社会厚生に関する示唆を提供することである。方法論として、代表的な数理的意思決定理論のゲーム理論、特に主観性や認識の諸問題を扱うハイパーゲーム理論に基礎を置く。本年度の主要な成果は、以下の二点。一点目は、独自に発展した二つの不完備情報ゲームの理論であるハイパーゲーム理論とベイジアンゲームのモデルについて、互いの関連を厳密に整理したことである。具体的には、ハイパーゲームは自然にベイジアンゲームとしても再定式化でき、さらに各モデルにおいて用意されているいくつかの均衡概念は同じ分析結果をもたらすことを示した。また一方で、対象とする状況によってはハイパーゲームのみが対処できることを論じた。こうした理論的基礎の整備が、不完備情報ゲームに関する研究の今後の発展の一助となれば幸いである。二点目は、ハイパーゲームが繰り返しプレイされる状況において、主体の意思決定がゲームの長期的な結果にどのように影響するのかを分析する枠組みを提供したことである。具体的には、まず各期のプレイの結果が各主体の認識の更新にどのように影響するかを整理した上で(それまでこのような認識の更新を扱うハイパーゲームのモデルは存在しなかった)、主体の意思決定基準と長期的に達成される均衡との関連について調べた。その結果、例えば、ある状況では、短期的には非合理的な選択をすることが、長期的には社会厚生の増大に寄与することを示した。以上の成果から、本研究の目的をある程度は達成したものと考える。本研究の目的は、意思決定における人々の主観性、あるいは解釈的な側面の及ぼす影響について包括的かつ形式的に論じる理論的枠組を構築すること、及びこれに基づき社会厚生に関する示唆を提供することである。本年度の主要な成果は、ハイパーゲーム理論における均衡外選択の意義を、数理的及び概念的に明確化したことである。ハイパーゲームは、各主体が主観的に有するゲーム状況についての内部モデルに基づき意思決定を行うと想定する。従来提案されている均衡概念では、主体が「誤った」内部モデルを有するにも関わらずそれが認知的不協和をもたらさないために、社会厚生の観点から望ましくない(客観的にはパレート効率でない)結果が均衡となる場合がある。本研究では、あるクラスの均衡外選択は、この状況を打破し、パレート効率な結果を導くことを示した。均衡外選択のアイデアは、システム思考の一種であるシステムズ・インテリジェンスの哲学に深く関連する。すなわち、均衡外選択の動機は、常に自ら(そして他者)の主観が誤りである可能性を認めること、いわば「無知の知」を受け入れ、他者にとって「想定外」であろう選択の「試行」により状況の変革を図ることにある。本研究は、これまで数理的に厳密な議論を欠いていたシステムズ・インテリジェンスそれ自体への貢献ともなるだろう。これにより、上述の研究目的を、少なくともある側面から達成できたと考える。今後、より多様な問題、具体的には特に解釈の問題にアプローチし、より豊かな示唆を含む理論体系を構築したいと考えている。
機能性有機バルク材料としての超分子/高分子ハイブリッド

「超分子/高分子ハイブリッド材料」という新材料の創出を狙って、有機合成、高分子合成、およびそのフィルム材料化などを行った。超分子構造を高分子ネットワーク中に組み入れることによって、(1)光・電子機能性フィルムや(2)力学応答光捕集システムなど超分子の高機能性を付与した高分子材料の創製に成功した。超分子/高分子ハイブリッドの合成のために、超分子集合体ドメインを形成し得るビルディングブロックの有機合成を行なった。具体的には、ポルフィリン骨格に、アルキル鎖および水素結合部位を有したポルフィリン誘導体を7ステップの経路にて合成できた。また、超分子と高分子との連結部分として、反応性置換基を有したエンドキャップ型ポルフィリン誘導体を4ステップの経路で合成した。非常に有意義な結果として、この合成経路の最適化を行なう上で、ポルフィリン平面の両面が遮蔽された、いわゆる「ダブルストラップポルフィリン」誘導体の効率的な合成法を見いだした。この、ダブルストラップポルフィリン誘導体は、ポルフィリン平面の両面が覆われ、ポルフィリン分子そのものが外界から孤立化されているために、固体状態においても自己会合が抑制され、その結果、通常のポルフィリンと比較して、2倍以上の蛍光強度を示すことが明らかとなった。そこで、このダブルストラップポルフィリンにさらにビチオフェン分子を4つ修飾した電解重合モノマーの合成を行なった。得られたモノマーは電気化学的に重合可能であり、電極上に超分子/高分子ネットワーク構造を形成することが明らかになった。このような、孤立化した機能性色素を導電性高分子骨格中に組み込むことで、光活性種の失括過程を抑制することが可能となるため、無駄のない(すなわち効率の良い)太陽電池システムや、エレクトロルミネッセンス材料への応用が期待できる。本研究は、超分子集合体と高分子を複合化することにより(超分子/高分子ハイブリッド)、超分子集合体を加工するための方法論を確立し、既存の高分子材料に置き換わる機能性有機材料を開発することを目的とする。特に、超分子集合体に由来した光・電気化学的機能や、優れた機械的強度を有した新しいバルク有機材料の創製を行なう。具体的には、ポルラィリン骨格に、アルキル鎖と水素結合部位を有したポルフィリン誘導体を7ステップの経路にて合成した。これらのポルフィリン誘導体が有機溶媒中において自己集合し、一次元の擬似的高分子(超分子集合体)を生成することを確認した。この超分子集合体は直径が数十ナノメートル程度であることが原子間力顕微鏡観察より明らかになった。これは数分子が束なったサイズと考えられる。また、長さは数マイクロメートルにも及び、軸比は1001,000程度であった。このような電子顕微鏡観察に加え、吸収スペクトルやNMRスペクトル等を用いて多角的に超分子集合体の構造解析を行った。今後は、この超分子集合体と高分子とのハイブリッド材料化を行う。高分子の成形・加工性を利用することによって、超分子集合体の機能に異方性を付与することが出来ると期待される。超分子/高分子ハイブリッドの合成のために、超分子集合体ドメインを形成し得るビルディングブロックとして水素結合部位を有するポルフィリン誘導体を合成した。ポルフィリン誘導体が有機溶媒中において自己集合し、一次元の擬似的高分子(超分子集合体)を生成することを確認した。この超分子集合体は直径が数十ナノメートル程度の繊維状であることが原子間力顕微鏡観察より明らかになった。非常に興味深いことに、このポルフィリン誘導体の超分子集合体は、時間経過とともに構造変化して行くことを見いだした。具体的には、リング状の集合体が(サンプル調整初期)、ファイバー状へと構造転移する(数時間後)。この過程は、吸収スペクトルなどから、ポルフィリンの会合様式の変化を伴って進行することが明らかになった。この超分子集合体は、高分子の共存下でも形成されることを確認した。すなわち、添加する高分子は超分子集合体形成を阻害しない。これによって、超分子/高分子ハイブリッドの創製が可能になると期待される。
血液がんにおけるA・B抗原減弱とその他の血液型減弱との関連性の検証

<研究目的>血液がんにおけるA・B抗原減弱とその他の血液型減弱との関連性を検証する。<研究方法>A・B抗原減弱を認める血液がん患者を対象として、Rh系血液型とKidd血液型を対象としフローサイトメトリーを用いて発現率と蛍光強度の測定を行った。対象としてO型健常人を用いた。<研究成果>陽性対象の発現率と蛍光強度の測定を行い、被検血球はO型Rh(D)陽性を10例使用した。発現率の結果は平均でRh(C)抗原92%、Rh(c)抗原98%、Rh(E)抗原97%、Rh(e)抗原93%、Jk(a+)抗原84%、Jk(b+)抗原94%、Rh(D)抗原99%であった。蛍光強度(GMFI)の結果は平均でRh(C)抗原251、Rh(c)抗原613、Rh(E)抗原362、Rh(e)抗原143、Jk(a+)抗原52、Jk(b+)抗原87、Rh(D)抗原301であった。Rh(D)抗原を除き、抗原量に量的効果があるので陰性対照と比べ蛍光シフトが弱いものが存在し一部閾値として設定できないものが存在した。陽性対照でRh(D)が僅かに2峰性を示すのは、使用している抗D試薬がIgGの2量体構造が影響しているものと考えられた。これまで過去にA・B抗原に減弱を認めた患者5例に対し、Rh(D)抗原を測定したところ、発現率99%と減弱を認める症例は存在しなかった。次にJk(a+)抗原とJk(b+)抗原について抗原を測定したところ抗原ヒストグラムパターンがキメラ像を呈した。原因として、輸血による抗原陰性血球が混和していることにより2峰性を示したことが考えられ、減弱との判別を困難にした。これまでの検討から輸血の影響が検査結果に大きく影響を与えるため、今回は未輸血の3例に対して、測定を試みた。ABO血液型はA、B、O型それぞれ1例ずつであった。発現率はいずれもA型93%、B型94%と、A・B抗原減弱は認めなかった。併せてD、Kidd抗原も発現率はD抗原98%、Jk(a+)抗原98%、Jk(b+)抗原99%と減弱を認めなかった。以上より、各血液型との減弱減少に関する関連性は認めないが、解析症例を増やし検討する余地があろう。
Q熱の免疫学的、分子生物学的検査法による病態解析、疫学調査および治療法の確立

1996年4月より1998年12月までに、微熱、全身倦怠感、関節痛、筋肉痛や咳、痰、咽頭痛などの呼吸器症状、あるいは不定愁訴により日本大学板橋病院内科を受診した患者、および日本大学健診センターを受診した人間ドック受診者について、全血液中より抽出したDNAについて、岐阜大平井教授らにより設計されたQ熱の病原体であるCoxiella burnetii(Cb)のouter membrane Com I遺伝子を増幅するプライマーを用いてnested PCRによりCbの遺伝子を検出した。上記の患者58名のうち19名(33%)にCb遺伝子を検出し得た。また、19名の陽性患者のうち18名(94%)が飼育動物との密接な関わりをもっていた。一方、人間ドックを受診した健常対照群67名においても、患者群に比較しその割合は、有意に低かったが5名(約7.5%)にCb遺伝子を検出し得た。従って、これらの患者においてCb遺伝子の検出が健常対照者と比較して明らかに高率であり、上記の症状などを有するものや、不定愁訴があり動物の飼育経験のある原因不明の患者においては、人畜共通感染症としてのQ熱の病態を考慮にいれる必要があると考えられる。また、これらののCb遺伝子陽性患者の一部にミノサイクリン(ミノマイシン)を投与して、症状およびCb遺伝子の検出の推移を検討したところ、投与後1カ月頃より症状の一部改善とともにCb遺伝子の検出が認められなくなる所見が確認され、今後症例を重ねて検討する必要があると考えられた。一方、日本大学板橋病院および個人医院の産科において分娩を行った患者より採取した70の臍帯血について、同様にCb遺伝子の検索を行ったが、2例を除き大部分はCb遺伝子の検出を認めなかった。検索し得た限りでは、臍帯血におけるCb遺伝子の検出を試みた報告は我々が最初であったが、これらの結果より、Cb感染が後天的に獲得される可能性が高いことを示唆したのみならず、胎盤を介したCbの母児感染の可能性についても検討をする必要があることが示唆された。我々はQ熱患者の抗体価およびPCR法による経過観察、有効な薬剤の検討、治療方法の検討、原因動物の調査および検体採取等を行ってきた。1996年4月より1997年10月までに、微熱、全身倦怠感、関節痛、筋肉痛や咳、痰、咽頭痛などの呼吸器症状等を主訴に日本大学板橋病院内科を受診した患者52名、および日本大学駿河台病院健診センターを受診した人間ドック受診者52名を対象として、全血液中より抽出したDNAについて、岐阜大平井教授らにより設計されたCoxiella burnetii(Cb)outer membrane Com I遺伝子を増幅するプライマーを用いてnested PCRによりCbの遺伝子を検出した。患者群の背景因子は平均年齢41歳で男13名、女39名で、平均罹患年数は約5年で、上記の患者52名のうち17名(33%)にCb遺伝子を検出し得た。また、17名の陽性患者のうち16名(94%)が飼育動物との密接な関わりをもっており、そのうち6名がイヌを、7名がネコを3名が他の飼育動物を飼っていた。一方、人間ドックを受診した健常対照群52名(平均年齢52歳、男35名、女17名)においても、患者群に比較しその割合は、低かったが5名(約10%)にCb遺伝子を検出し得た。

今回検討した患者群の大部分は、内科、耳鼻科、神経科など他院での受診歴があるが、諸検査に異常が認められず、原因不明と診断されている。これらの患者においてCb遺伝子の検出が健常対照者と比較して明らかに高率であり、上記の症状などを有する診断不明の患者においては、Q熱の病態を考慮にいれる必要があると考えられる。またCb陽性の患者のほとんどが飼育動物との密接な関わりをもっていることより、平井らの報告のように、本邦において、愛玩動物を含む各種動物のCb抗体価の高い検出率(10-20%)を考慮すると、人畜共通感染症としてのQ熱リケッチアの重要性が示唆される。これらの概要は、第46回日本感染症学会東日本地方会総会(横浜)、第4回リケッチア研究会(東京)で報告し、現在FEMS Immunology and Medical Microbiologyへ投稿中である。平成9年に引き続き、微熱、全身倦怠感、関節痛、筋肉痛や咳、痰、咽頭痛などの呼吸器症状、あるいは不定愁訴により日本大学板橋病院内科を受診した患者、および板橋病院保健科、駿河台病院健診センターを受診した人間ドック受診者について、全血液中より抽出したDNAについて、Coxiella burnetii (Cb)outer membrane ComI遺伝子を増幅するプライマーを用いてnested PCRによりCbの遺伝子を検出した。上記の患者58名のうち19名(33%)にCb遺伝子を検出し得た。また、19名の陽性患者のうち18名(94%)が飼育動物との密接な関わりをもっていた。一方、人間ドックを受診した健常対照群67名においても、患者群に比較しその割合は、有意に低かったが5名(約7,5%)にCb遺伝子を検出し得た。従って、これらの患者においてCb遺伝子の検出が健常対照者と比較して明らかに高率であり、上記の症状などを有するものや、不定愁訴があり動物の飼育経験のある原因不明の患者においては、Q熱の病態を考慮にいれる必要があると考えられる。また、これらのCb遺伝子陽性患者の一部にミノサイクリン(ミノマイシン)を投与して、症状およびCb遺伝子の検出の推移を検討したところ、投与後1カ月頃より症状の一部改善とともにCb遺伝子の検出が認められなくなる所見が確認され、今後症例を重ねて検討する必要があると考えられた。一方、日本大学板橋病院および個人医院の産科において分娩を行った患者より採取した70の臍帯血について、同様にCb遺伝子の検索を行ったが、2例を除き大部分はCb遺伝子の検出を認めなかった。検索し得た限りでは、臍帯血におけるCb遺伝子の検出を試みた報告は我々が最初であったが、これらの結果より、Cb感染が後天的に獲得される可能性が高いことを示唆したのみならず、胎盤を介したCbの母児感染の可能性についても検討をする必要があることが示唆された。
スリランカの聴覚障害児教育における教員養成事業への国際協力の具体的方法の研究

スリランカの聴覚障害教育について全体像を把握するため、独立後のスリランカの障害児教育政策の歴史的変遷を収集資料を基に分析、整理した。新たな知見は以下に示す。1960年代後半より、すべての子どもが教育を等しく受ける権利の下に、就学率を高める政策がとられ障害をもつ子ども達も地域の学校で教育をうけることができるようになる。スリランカ教育省は障害児の地域の学校での就学を支援する体制として(1)障害児学級の設置(2)障害のニーズに応える教員養成制度の確立と充実(3)障害児学級の教材の開発と活用のための指導法の研究等を中心に推進してきた。しかし1980年代より「障害をもつ子どものニーズに見合う教育の充実」が教育省より問題提起された。そして(1)教員養成のカリキュラムの再編(2)通常学級教師の障害をもつ子どもへの教育と障害の認識(3)障害児学級教師と通常学級教師との協力体制等の具体的諸問題が指適された。1990年代、スエ-デンの国際機関の援助をうけ、新たな障害の概念に基づき、多様な教員養成を各地域で開始した。主な内容は(1)通常学級教師への障害をもつ子どものニーズに関する23週間の研修(2)各地での教員研修のための講師チームを養成する3年間の学士コースの設置(3)校長等への子どものニーズに対応する学校の組織化を目的とする研修等である。また、スリランカで現在、実施されている聴覚障害教育の教員養成の内容が通常学級のすべての子どもの聴えのニーズにも応えていく普遍性を志向していること.そして教育政策ガイドラインを作成して、子どもの教育的ニーズに対応する教育体制を再構築していることを調査した。「すべての子どものための教育」「新たな学校改革」の思想がスリランカでも具体化されつつあり、今後の国際協力の具体的課題について考察する基礎資料を得た。本年度の研究は国際協力の前提となるスリランカの教育政策、および教員養成の理念、制度の歴史的変遷を分析し、問題点と課題を明確化した。資料はスリランカ教育省、スリランカ国立教育研究所、スウェデンの国際機関(SIDA)日本の国立特殊教育総合研究所、国際協力事業団等より収集した。資料の分析で得た新たな知見は以下に示す。(1)1960年後半より開始された特殊教育の政策の基本構造としてa)すべての子供が教育を等しくうける権利を認めることを基本に地域の学校への就学を勧める。b)子供ニーズに応える教育を提供する教員養成の制度の確立と充実c)障害児学級(リソース・ユニット)の設置があげられる。(2)しかしながら1980年代には「通常学級で障害をもつ子供がニーズに見合う教育を受けているのか。」との問題の提起がされた。そして(a)教員養成のカリキュラムの再編(b)通常学級教員の障害の認識(C)障害児学級教員と通常学級教員との協力体制の諸問題が指摘された。(3)1991年よりSIDAの援助を受け、一人ひとりの多様なニーズに応えるための教員養成を各地域で開始した。主な内容は1)通常学級教員への2-3週間の研修2)研修のための講師チームを養成する3年間の学士コース3)校長等への学校の組織化のための研修等である。1スリランカにおける聴覚障害児教育に関する教員養成とオ-ジオロジーの普及(2)スリランカの新たな障害の概念に基づき(1)新たな教員養成の理念(2)多様な教員養成の制度(3)教員養成の研修内容

(4)教員養成の課題を分析し、さらに今後の教員養成に関するスリランカとの国際協力の課題とその具体的援助方法を考察した。2スリランカにおける障害をもつこどもの教育と教員養成スリランカの障害児教育に関する教育改革の背景にある思想、特に国際連合ユネスコを中心として構築した「すべてのこどもの教育(Education for All)」「新たな学校改革(インクルジョン)」の思想をスリランカの現状と合わせ考察して今後の教員養成に関する国際協力の具体的課題について提起した。
ディザリングを用いた分散協調システムのフォールトトレラント制御

複数のサブシステムがネットワークを構成するマルチエージェントシステムの制御に対し,本来の信号に意図的にノイズのような信号を付加するディザリング技術を用いることで,システムを構成要素が互いに異常を監視・検出するための理論の構築を行なう.また,異常発生下においても,そのことが判別でき,かつ,安全にシステムを稼働し続けられるための制御方法について考える.さらに,マルチロボットによる実機実験を行ない,様々なシナリオの下で,構築したシステム設計理論,制御方法について正しく運用できるかを検証する.複数のサブシステムがネットワークを構成するマルチエージェントシステムの制御に対し,本来の信号に意図的にノイズのような信号を付加するディザリング技術を用いることで,システムを構成要素が互いに異常を監視・検出するための理論の構築を行なう.また,異常発生下においても,そのことが判別でき,かつ,安全にシステムを稼働し続けられるための制御方法について考える.さらに,マルチロボットによる実機実験を行ない,様々なシナリオの下で,構築したシステム設計理論,制御方法について正しく運用できるかを検証する.
新規アミロイド前駆体蛋白遺伝子変異による家族性アルツハイマー病の発症機序の解析

最近,我々は新たなアミロイド前駆体蛋白(APP)遺伝子変異を日本人家族性アルツハイマー病(FAD)家系において見出した(APP D678N変異,以下本変異).この変異はアミロイドβ蛋白(Aβ)内部にアミノ酸置換を引き起こす(Asn7-Aβ).これまでAβ内部の変異でアルツハイマー病を呈する家系の報告は稀であり,本変異によるAD発症のメカニズムを解析することは,多くの孤発性ADの発症メカニズムの解明や治療法の開発に役立つものと考えられる.1.トランスジェニックマウス作成に用いるコンストラクトの作成mouse Thy-1 promoterを入手し,コンストラクトを作成した.mouse Thy-1 promoter正常型APPcDNAを組み込みこんだ後,oligo nucleotide directed mutagenesisを用いてAPP D678Nを導入した.また,Swedish変異(KM670/671NL)のみ,あるいはSwedish変異および本変異を同時に導入したコンストラクトも作成した.しかし,Thy-1 promoterでは,過剰発現系の作成がこんなんであったため,現在,InPro Biotechnology社製のCosSHa.Tet cosmidvectorを用いて,コンストラクトの作成およびトランスジェニックマウス確立を目指している.APP D678Nトランスジェニックマウスの脳で発現(あるいは沈着)したAβが,マウスのendogenousなAβではなくAPP D678N変異由来のAsn7-Aβであることを証明するために,Asn7-Aβ特異的抗体の作成が必須であるため,変異Asn7-AβのN末側のペプチド(DAEFRHNSGYEVHHQC)に対するポリクロナール抗体を作成した.この抗体を用いて,合成した正常Aβペプチドと変異Aβペプチドに対してウエスタンブロットを行い,抗体の特異度を確認した.最近,我々は新たなアミロイド前駆体蛋白(APP)遺伝子変異を日本人家族性アルツハイマー病(FAD)家系において見出した(APP D678N変異,以下本変異).この変異はアミロイドβ蛋白(Aβ)内部にアミノ酸置換を引き起こす(Asn7-Aβ).これまでAβ内部の変異でアルツハイマー病を呈する家系の報告は稀であり,本変異によるAD発症のメカニズムを解析することは,多くの孤発性ADの発症メカニズムの解明や治療法の開発に役立つものと考えられる.1.トランスジェニックマウス作成に用いるコンストラクトの作成トランスジェニックマウス作成用のprion protein promoterの入手が困難であったため,mouse Thy-1 promoterを入手し,コンストラクトを作成した.mouse Thy-1 promoter正常型APPcDNAを組み込みこんだ後,oligo nucleotide directed mutagenesisを用いてAPP D678Nを導入した.また,Swedish変異(KM670/671NL)のみ,あるいはSwedish変異および本変異を同時に導入したコンストラクトも作成した.今後,マウス受精卵へのコンストラクトの注入・トランスジーンの確認およびトランスジェニックマウスの系統確立を目指す.APP D678Nトランスジェニックマウスの脳で発現(あるいは沈着)したAβが,マウスのendogenousなAβではなくAPP D678N変異由来のAsn7-Aβであることを証明するために,Asn7-Aβ特異的抗体の作成が必須であるため,変異Asn7-AβのN末側のペプチド(DAEFRHNSGYEVHHQC)に対するポリクロナール抗体を作成した.最近,我々は新たなアミロイド前駆体蛋白(APP)遺伝子変異を日本人家族性アルツハイマー病(FAD)家系において見出した(APP D678N変異,以下本変異).この変異はアミロイドβ蛋白(Aβ)内部にアミノ酸置換を引き起こす(Asn7-Aβ).これまでAβ内部の変異でアルツハイマー病を呈する家系の報告は稀であり,本変異によるAD発症のメカニズムを解析することは,多くの孤発性ADの発症メカニズムの解明や治療法の開発に役立つものと考えられる.1.トランスジェニックマウス作成に用いるコンストラクトの作成mouse Thy-1 promoterを入手し,コンストラクトを作成した.mouse Thy-1 promoter正常型APPcDNAを組み込みこんだ後,oligo nucleotide directed mutagenesisを用いてAPP D678Nを導入した.また,Swedish変異(KM670/671NL)のみ,あるいはSwedish変異および本変異を同時に導入したコンストラクトも作成した.しかし,Thy-1 promoterでは,過剰発現系の作成がこんなんであったため,現在,InPro Biotechnology社製のCosSHa.Tet cosmidvectorを用いて,コンストラクトの作成およびトランスジェニックマウス確立を目指している.APP D678Nトランスジェニックマウスの脳で発現(あるいは沈着)したAβが,マウスのendogenousなAβではなくAPP D678N変異由来のAsn7-Aβであることを証明するために,Asn7-Aβ特異的抗体の作成が必須であるため,変異Asn7-AβのN末側のペプチド(DAEFRHNSGYEVHHQC)に対するポリクロナール抗体を作成した.この抗体を用いて,合成した正常Aβペプチドと変異Aβペプチドに対してウエスタンブロットを行い,抗体の特異度を確認した.
光照射自己形成プロセスによる固体有機レーザの作製と導波路集積型光デバイスへの応用

本研究は固体型有機レーザ素子の新規開発に関するものである。このレーザ素子は光照射による光導波路の自己形成技術によって作製され、レーザ発振に必要な共振器構造も簡便に作りこむことができる。また、周辺の光導波路ポートとの本質的に結合されているため、光導波回路中の集積型レーザ光源素子としての応用が期待できる。研究期間内では、これまでに開発してきたレーザ素子の発振低閾値化と発振波長制御、及び多機能集積型ポリマー光アクティブデバイス一括作製技術の開発を行った。光照射自己形成プロセスにより作製される固体有機レーザ(SWA導波路レーザ)について、今年度はレーザデバイス単体の動作特性をコントロールすることを目的とし、その作製方法と動作特性解析に重点を置いて研究を実施した。まずレーザ発振閾値を低減することを目的とし、SWA導波路レーザのキャビティ構造として誘電体多層膜ミラーを適用した。動作波長帯である700-800nm領域において反射率99,9%以上の共振器キャビティを有するデバイスを作製することに成功した。そのデバイスにおいて得られたレーザ発振閾値は、従来のハーフミラーを用いたサンプルと比較しておおよそ30分の1にまで低減することができた。誘電体多層膜ミラーの適用は単にレーザ発振動作状態での高効率の光フィードバックを与えるだけではなく、その作製過程において導波路書き込み光の光損失を低減することにも効果的であり、このことにより活性媒体色素濃度が高い場合においても良質な導波構造を得ることができる。次に、従来は800-850nmであったレーザ動作波長を拡大することを目的とし、ドープする活性媒体色素を変化させてSWA導波路レーザを試作した。従来と同じ波長405nmのダイオードレーザを導波路書き込み光源としたケースでは、スチリル11を活性媒体とした750nmでレーザ発振が可能であることを新たに示した。さらに書き込み光源波長を375nmなどとした場合でも試作を行った結果、書き込み波長を上手く調整することにより、ローダミンやクマリンといった可視領域に発光帯を持つ色素を活性媒体とした場合においてもSWA導波路レーザの作製が可能であることを示した。光照射自己形成プロセスにより作製される固体色素レーザ素子について、異なった動作波長を有する導波路発光デバイスが直列に結合された多機能集積型素子の試作を行った。動作波長の異なる導波路の作製には、異なった色素がドープされた光硬化性樹脂を使用することとし、ある一つのポートからの露光によりそれらを一括で硬化、作製することを試みた。デバイス作製のためのプラットフォームとして複数の混合液を充填できる微細管スロットが隣接された構造が必要であり、厚膜レジストであるSU-8を使用することによりこれを実現した。具体的には、パターニングされたSU-8基板上に光ファイバ端を設置し、ポリジメチルシロキサンの薄膜で上部から固定してモジュールとした。導波路材料には、光硬化性のモノマーとしてペンタエリスリトールトリアクリレートとベンジルアクリレートの混合樹脂を、活性媒体としては有機色素であるクマリン47、クマリン153、ローダミン640を使用した。コア直径50umの光ファイバポートからの375nmのレーザ光による一括露光により、これらの色素がドープされたポリマー導波路の直列接続構造を実現した。さらに、UVライト照射下において波長400nmから700nmの広帯域な発光スペクトルがファイバ中の導波光として得られ、これは集積型の広帯域光源として有望であると考えられる。また、光通信用のシングルモードファイバ用いても同様の試作を行い、10um程度のコア直径を持つ光導波路構造においても広帯域な白色光源の集積作製に成功した。
微小ディスクレーザー結合による、集積デバイスに関する研究

固体ソースMBE法では、SiO2マスク上にGa原子が付着しやすいために多結晶が形成されやすく、選択成長は困難とされていたが、これまで我々はMEE法を用いた極めて制御性の良い選択成長法を確立してきた。今年度は、そのMEE法を用いた選択成長により、サブミクロン光導波路の作製に成功した。まず、電子ビームリソグラフィーを用いて、膜厚30nmのSiO2マスクで面を覆ったGaAs(001)基板上の[110]方向に沿った、長さ1μm、幅が200nmのサブミクロンチャネルパターンを作製した。その後、固体ソースMBE装置を使用し、SiドープGaAsの選択成長を行った。基板温度は590°Cとし、GaとSiを1.0秒供給後2.0秒のアニール時間を取り入れ、その後As4を2.0秒供給し(成長速度0.2ML/cycle)、選択成長を行った。このチャネル周囲のSiO2マスク幅は約400nmとした。この成長層周囲のサブミクロンマスクにより、SiO2マスク上に供給されるGa原子の拡散による成長層への寄与が小さくなり、チャネル部分と電極との接続部分における膜厚の不均一性が改善された。また、SiO2マスク幅をGa原子の拡散長に近づけることで、完全なる選択性を得ることができ、成長速度の改善がされた。また、従来困難であったAIGaAs選択成長が可能となった。チャネル部分のPL発光強度の二次元パターンを観察したところ、成長層での発光はマスク下の基板からの発光に比べ極めて強く、均質であることが確認され、良質なチャネル構造が形成できたことが分かる。今後、基板面、チャネル方向、チャネルの幅、成長条件等を最適化するとともに光導波路としての特性調べる。さちに低次元の電気伝導特性も検討する。また、ゲート電極で制御することにより、バリスティック伝導および1次元伝導特性の観測が期待され、低消費電力FETへの応用も考えられる。【研究目的】量子ドット網構造の作製は近年おおいに注目されている。量子ドットの作製は主に自己形成法により行われるが、この方法ではドットのサイズ及び配列の均一性を得るのが容易ではない。そこで、今回我々は整然としたドット網の実現を目指して、リソグラフィーに基づくドット網の製作技術を検討した。損傷や原子スケールの精度を保つために、本研究ではエッチングの手法を用いず選択成長法を適用した。具体的な成長技術としては分子線エピタキシャル成長法(MBE)を用いた。【GaAs及びAIGaAs選択成長】これまで、GaAsのドット網構造について、直径30nmのホールを配列したアンチドット格子の製作に成功した。このような構造は、InAs/GaAsヘテロ構造においても形成できたが、高電子移動度材料であるAlGaAs/GaAs系では、未だ実現していない。そこで、このような系についても選択エピタキシャル成長によるドット形成の可能性をしらべた。その結果、AlAsは再蒸発しにくいためマスク上で多結晶を形成しやすく、AlGaAsの選択成長は困難であることが判明した。そこで、マスク上に付着した多結晶をリフトオフすることによりAlGaAs/GaAsヘテロ構造の選択成長を行った。300nmの厚さのSiO2にマスクパターンを形成し、AlGaAs/GaAsヘテロ構造をMEE法により成長した。成長後、フッ化水素中でSiO2のエッチングを行った。これによってAlGaAs微結晶のリフトオフが、ほほ完全にでき、AlGaAs/GaAsヘテロ構造の選択成長に成功した。今後Hプラズマを導入し、より高精度なAlGaAs/GaAsヘテロ構造の選択成長法の検討を行う。それにより、AlGaAs/GaAsヘテロ構造を持つドット網構造を作製し、微小ディスクレーザーをはじめ、量子デバイスの作製を目指す。

今後、基板面、チャネル方向、チャネルの幅、成長条件等を最適化するとともに光導波路としての特性調べる。さちに低次元の電気伝導特性も検討する。また、ゲート電極で制御することにより、バリスティック伝導および1次元伝導特性の観測が期待され、低消費電力FETへの応用も考えられる。
サイトメガロウイルス角膜内皮炎の発症機序に対する免疫学的機能解析

サイトメガロウイルス(CMV)角膜内皮炎の前房水中のサイトカインをBio-Plexを用いて解析した。単球を遊走させるケモカインであるIP-10,MCP-1などの上昇を認めた。これらの結果はCMV角膜内皮炎の発症および再発の機序にマクロファージの関与を疑わせるものであった。鑑別疾患であるHSV角膜炎,VZV角膜炎,角膜移植後拒絶反応についても前房水の解析を行った。これらの疾患でもIP-10やMCP-1の上昇を認め,CMV角膜内皮炎よりも高い傾向にあった。このことは,CMV角膜内皮炎は鑑別疾患に比し炎症は強くないことを示唆するものであった。サイトメガロウイルス角膜内皮炎の症例について前房水を計7例採取した。また,正常眼コントロールとして白内障以外に眼疾患の無い症例に対して白内障手術時に前房水を計5例採取した。本研究は「山口大学医学部附属病院医薬品等治験・臨床研究等審査委員会」において臨床研究として既に承認されている。患者からは臨床研究の同意書を取得した。それぞれの前房水についてBio-PlexTMを用いて検体中のサイトカインの発現を評価した。サイトメガロウイルス角膜内皮炎の前房水では正常コントロールと比して,IP-10やMCP-1の濃度が上昇していた。このことはサイトメガロウイルス角膜内皮炎の発症に関してマクロファージの関与を積極的に示唆するものであった。本年度はサイトメガロウイルス角膜内皮炎の鑑別疾患と考える単純ヘルペスウイルス角膜炎,帯状疱疹ウイルス角膜炎,角膜移植後拒絶反応について前房水の解析を行った。単純ヘルペスウイルス角膜炎の症例について前房水を計4例採取した。また,帯状疱疹ウイルス角膜炎の症例について前房水を計2例採取した。また,角膜移植後拒絶反応の症例について前房水を計8例採取した。これら3疾患の前房水では正常コントロールと比して,IL-6やIP-10やMCP-1の濃度が顕著に上昇していた。IL-6については角膜移植後拒絶反応,単純ヘルペスウイルス角膜炎,帯状疱疹ウイルス角膜炎の順に濃度が上昇していた。特に角膜移植後拒絶反応では顕著にその値が上昇していた。IP-10については帯状疱疹ウイルス角膜炎,単純ヘルペスウイルス角膜炎,角膜移植後拒絶反応の順に濃度が上昇していた。MCP-1については単純ヘルペスウイルス角膜炎,角膜移植後拒絶反応,帯状疱疹ウイルス角膜炎の順に濃度が上昇していた。しかしながら,疾患間での差は顕著なものではなかった。以上からIL-6が顕著に上昇している時は角膜移植後拒絶反応の可能性が高いと考えた。これら3疾患について,3つのサイトカインはいずれもサイトメガロウイルス角膜内皮炎での上昇よりも大幅に上昇していた。このことはサイトメガロウイルス角膜内皮炎そのものの炎症は鑑別疾患に比して強くないことを示唆するものであった。サイトメガロウイルス角膜内皮炎の主な鑑別疾患に該当する単純ヘルペスウイルス角膜炎,帯状疱疹ウイルス角膜炎,角膜移植後拒絶反応という比較的稀な疾患においてサンプル数が計14眼得られたため。また,複数回PCRを行えるだけのサンプル量も同時に確保できた。本年度は従来施行したサイトメガロウイルス角膜内皮炎(CMV)およびその鑑別疾患と考える単純ヘルペスウイルス角膜炎(HSV),帯状疱疹ウイルス角膜炎(VZV),拒絶反応に加えて,ぶどう膜炎,眼内炎,緑内障についても前房水の解析を行った。CMV,その既往,HSV,VZV,拒絶反応,ぶどう膜炎,眼内炎,緑内障についてそれぞれ4例,3例,4例,1例,3例,6例,1例,1例の前房水の解析を行った。特に,IL-6やIP-10やMCP-1について著明に濃度が高かった。IL-6の濃度についてはVZV,拒絶反応,眼内炎,ぶどう膜炎,CMV,HSV,CMV既往,緑内障の順であった。特にVZVでは顕著にその値が上昇していた。IP-10についてはVZV,眼内炎,HSV,拒絶反応, CMV, CMV既往,ぶどう膜炎,緑内障の順であった。MCP-1についてはVZV,眼内炎,HSV,緑内障,CMV,ぶどう膜炎,拒絶反応,CMV既往の順であった。今回の解析結果からはVZVでいずれの値も一番上昇していた。また,CMVとCMVの既往ではいずれもCMVの方が高かった。また,眼内炎症疾患と考えにくい緑内障の値はいずれでも低かった。ぶどう膜炎ではIL-6は高かったがIP-10は低かった。

CMVではその既往も含めて低い傾向にあり,このことはサイトメガロウイルス角膜内皮炎そのものの炎症は鑑別疾患に比してmildであることを示唆するものであった。サイトメガロウイルス(CMV)角膜内皮炎の前房水中のサイトカインをBio-Plexを用いて解析した。単球を遊走させるケモカインであるIP-10,MCP-1などの上昇を認めた。これらの結果はCMV角膜内皮炎の発症および再発の機序にマクロファージの関与を疑わせるものであった。鑑別疾患であるHSV角膜炎,VZV角膜炎,角膜移植後拒絶反応についても前房水の解析を行った。これらの疾患でもIP-10やMCP-1の上昇を認め,CMV角膜内皮炎よりも高い傾向にあった。このことは,CMV角膜内皮炎は鑑別疾患に比し炎症は強くないことを示唆するものであった。サイトメガロウイルス角膜内皮炎という比較的稀な疾患においてサンプル数が7眼と統計的処理を行うことができるだけのサンプル数が得られたため。また,複数回PCRを行えるだけのサンプル量も同時に確保できた。また,次年度以降に解析予定の角膜移植後拒絶反応や他のウイルス性疾患の前房水についてもエントリーを始めることができたため。今までのエントリー症例において臨床所見と前房水サイトカイン発現パターンの相関について解析を行う。解析を行うことでこれらの疾患の鑑別が容易となり,それを裏付けるサイトカイン発現パターンで説明できるようになることを目標とする。サイトメガロウイルス角膜内皮炎,単純ヘルペスウイルス角膜炎,帯状疱疹ウイルス角膜炎,角膜移植後拒絶反応症例については引き続き該当症例があればエントリーを継続する。同様に,検体の採取後, Bio-PlexTMを用いて検体中のサイトカインの発現を評価する。眼科学本研究の鑑別疾患である単純ヘルペスウイルス角膜炎,帯状疱疹ウイルス角膜炎,角膜移植後拒絶反応,その他の前眼部炎症性疾患の症例を中心にエントリーする。予想される症例数は2030である。サイトメガロウイルス角膜内皮炎症例については引き続き該当症例があればエントリーを継続する。これらの分析によりこれらの鑑別疾患がサイトメガロウイルス角膜内皮炎と異なるサイトカインの発現パターンが得られるかどうかを検討する。サイトメガロウイルス角膜内皮炎,単純ヘルペスウイルス角膜炎,帯状疱疹ウイルス角膜炎,角膜移植後拒絶反応,その他の前眼部炎症性疾患の症例についても,検体の採取後, Bio-PlexTMを用いて検体中のサイトカインの発現を評価するため。単純ヘルペスウイルス角膜炎,帯状疱疹ウイルス角膜炎,角膜移植後拒絶反応,その他の前眼部炎症性疾患の症例についても,検体の採取後, Bio-PlexTMを用いて検体中のサイトカインの発現を評価するため。Bio-PlexTMのアッセイパネルの購入費に多くの経費が必要である。それぞれのサイトカイン発現の解析に必要なプレートを購入する必要がある。アッセイパネルは高額で,10枚前後が期間中に必要になると考える。また,PCR法による前房水中のCMV,単純ヘルペスウイルス,帯状疱疹ウイルスDNAの有無を調べる外注検査も症例毎に施行に必要があり,多くの経費が必要となる。前房水解析の補助をする研究助手(テクニシャン)の人件費,成果発表に関わる経費が必要となる。
漸近解析的手法による反応拡散系の縮約とその数学的正当化

昨年度に引き続き、解の漸近展開の高次の項を利用して、さまざまな自然現象の数理モデルとして提案されている反応拡散方程式系の界面方程式の導出を数学的に正当化し、解の漸近挙動の解析を行った。以下、今年度の研究成果を具体的に述べる。1.興奮系に現れるスパイラル波の形状および角周波数の解析Belousov-Zhabotinsky反応に代表される興奮系と呼ばれる化学反応に現れるスパイラルパターンを解析するために、キネマティックモデルと呼ばれる曲線の発展方程式の解析を行った。従来知られていた凸の定常回転スパイラル解だけでなく、凹凸が変化する定常回転スパイラル解の構造を完全に決定し、それをもとにスパイラルの形状と角周波数との関係を数値シミュレーションにより詳細に調べた。2.走化性生物の増殖・拡散を記述するchemotaxis-growthモデルの界面ダイナミクスの解析ある化学物質の濃度勾配を感知して移動する生物の個体数密度の時間変化を記述する、chemotaxis-growthモデルの界面ダイナミクスの解析を漸近展開により行った.この方程式は2種連立系であり、通常の意味での比較定理は成立しないが、特殊な形の比較定理が成立する。これを利用して、解の漸近展開の最初の2項を正確に求め、その情報を利用して適切な比較関数(優解・劣解)を構成することで、これまで知られていた優解・劣解よりもより精密な比較関数を構成することに成功した。従来の手法では、特異極限下で得られる界面方程式の解を長時間にわたって捉えることはできなかったが、新しい比較関数ではより長時間の比較による評価が可能になった。これをさらに発展させると、界面方程式の平衡解の線形安定性を利用して,もとの反応拡散方程式系の平衡解の安定性が導かれることが期待される。さまざまな自然現象の数理モデルとして提案されている反応拡散方程式系に現れる複雑なダイナミクスを解明するために、従来の特異極限法では考慮の対象外だった解の漸近展開の高次の項を利用して、界面方程式の導出を数学的に正当化し、界面方程式の解の漸近挙動を解析した。以下、研究成果を具体的に述べる。無限に長い管状領域において双安定型の非線形項をもつ反応拡散方程式には、形を変えずに一定速度で伝播する進行フロント波とよばれる解が存在することが知られている。領域の境界が空間周期的な構造をもつ場合には、一定波形・一定速度で伝播するフロント波は存在し得ないが、時間周期的な波形および速度をもつフロント波の存在が知られており、数値シミュレーションと形式的解析により、そのフロント波の平均伝播速度が一様な場合よりも遅くなることが示唆されていた。この問題に対し、まず管状領域が非常に細いと仮定して1次元問題へのリダクションを行い、さらに方程式に含まれる微小パラメータを0にする特異極限をとることで、フロントの位置が満たす常微分方程式への縮約を行った。その常微分方程式の解析を行うことで、フロント波の平均伝播速度が一様な場合よりも遅くなることが形式的に確かめられる。そこで、解の漸近展開の最初の3項を正確に求め、その情報を利用して適切な比較関数(優解・劣解)を構成することで、常微分方程式への縮約を数学的に正当化し、1次元問題のフロント波の平均伝播速度が一様な場合よりも真に遅くなることを証明した。さらに、1次元問題の比較関数を利用して、もとの高次元問題の比較関数を構成し、管状領域が非常に細い場合には進行フロント波の平均伝播速度が一様な場合よりも遅くなることを示した。結果はプレプリントにまとめており、現在投稿準備中である。
銀染色レベルに対応できる糖タンパク質糖鎖の網羅的解析法の開発

本研究プロジェクトでは「銀染色レベルに対応できる糖タンパク質糖鎖の網羅的解析法の開発」の目的で銀染色により検出された糖タンパク質をゲルから抽出し、酵素あるいは化学的な方法により糖鎖を切り離したのち、レーザー励起蛍光検出法によりアトモルレベルで糖鎖を分析するため、生体成分中からの複合糖質の分離精製法および糖タンパク質糖鎖の高速糖鎖構造解析について基盤的な研究を行った。以下に開発した技術とその概要を列挙する。(1)生体成分中の複合糖質の選択的捕捉:複合糖質を認識する分子を結合させた温度応答性ポリマーを用いて、血液や組織抽出液などから標的複合糖質を簡便かつ迅速に捕捉する技術を開発した。本技術を利用して、ポリリジンを結合した温度応答性ポリマーによるガン細胞由来プロテオグリカンの捕捉に成功した。(2)糖鎖-タンパク質間相互作用解析を利用する高速糖鎖解析法:細胞表面や糖タンパク質などから切り離された糖鎖の混合物は通常極めて複雑な混合物であり、混合物中の個々の糖鎖の構造を解析することは現在の技術をもってしても困難である。我々は糖鎖と糖鎖結合性タンパク質の特異性の高い相互作用を利用して、溶液中分離しながら糖鎖の構造を解析するという一石二鳥の方法を開発した。この方法は糖鎖アレーの基礎的データを得る方法としても非常に有用である。(3)糖タンパク質からの超高速糖鎖切り離し:糖タンパク質から糖鎖を切り離す方法として、化学的な方法や酵素を用いる方法などの多くの方法が開発されているが、我々は従来の方法の革新的な改良に取り組み、糖鎖の切り離しから解析までをほぼ1日で完了する方法の開発に目処をつけた。(4)複合糖質由来糖鎖の超高速分析:最近、キャピラリー電気泳動法のミクロ化ならびに高速化を目指したチップ電気泳動法の技術が進展し、高い実用性が期待できる装置も市販されるようになった。従来、生体中のグリコサミノグリカン類をセルロースアセテート膜電気泳動法により23時間をかけて分析する方法が臨床化学の分野で適用されていたが、チップ電気泳動法とインターカレーター試薬を使用するin-situ蛍光標識法を利用して、秒単位の分析を可能とした。本プロジェクトにより開発した技術は各技術それぞれでも有効であるが、各技術をシステムとして統合すれば、従来少なくとも「週」「月」単位の作業を必要とした複合糖質中の糖鎖構造解析を「3時間」「4時間」程度にまで短縮可能であり、糖鎖解析技術に習熟していない技術者でも対応できるレベルにまで自動化するための基盤技術の開発に成功した。銀染色レベルに対応できる糖タンパク質の高感度分析法の達成のために、(1)糖タンパク質のグライコフォーム分析法および(2)分離された各グライコフォームの糖鎖分析法について検討した。糖タンパク質のグライコフォーム分離については、レクチンアフィニティークロマトグラフィーとキャピラリー電気泳動あるいは二次元ゲル電気泳動を組み合わせる方法を開発した。

(2)については分離された各グライコフォームの糖タンパク質量が極めて微量(フェムトモル)であるため、N-グリコシダーゼ消化により得られた糖鎖混合物を蛍光標識しレーザー励起蛍光検出を利用するキャピラリー電気泳動法により超高感度分析する方法に成功した。本法を利用して、生体中の炎症マーカーの一つであるα1-酸性糖タンパク質(AGP)のグライコフォーム分析に利用し、AGPのグライコフォームは主としてシアル酸残基の数、すなわちシアル酸の電荷に依存していることを見出した。しかし、AGP分子中のシアル酸残基の数はAGP分子内の二本鎖、三本鎖および四本鎖の糖鎖の比率だけに依存するのではなく、シアリルルイスX型糖鎖をもつ三本鎖および四本鎖糖鎖の関与が無視できないことを見出した。現在までに達成された糖タンパク質の分析法は銀染色レベルにほぼ対応できる感度であるといえるが、現在までに達成された方法で得られた糖タンパク質分子種はMALDI TOF質量分析法で幅広いピークを与え、糖タンパク質の不均一性に基づく分析法としては、なお未完成であり、さらに高分解能分離に挑戦する必要がある。銀染色レベルに対応できる糖タンパク質糖鎖の高感度分析法の達成のために、(1)糖タンパク質糖鎖の網羅的解析法および(2)細胞表面糖鎖の網羅的解析法について検討した。(1)については銀染色レベルで検出される微量の糖タンパク質糖鎖の構造解析を目指し、レーザー励起蛍光検出を利用するキャピラリー電気泳動と数種のレクチン含有電気泳動用緩衝液を組合せ、網羅的かつ高感度な分析法を開発し、試料として数百ng数μgの糖タンパク質より得られる糖鎖混合物中の糖鎖を分離精製することなく一斉解析することに成功した。(2)については細胞表面に存在する糖タンパク質糖鎖についてN-グリコシダーゼ消化により得られる糖鎖混合物を蛍光標識し、(1)の方法を利用して網羅的に解析する方法について開発した。本法を利用して、ヒト血清糖タンパク質であるα1酸性糖タンパク質(AGP)、ウシ胎児血清由来フェツイン、ヒト及びウシ血清IgGならびにブタチログロブリン中のN-結合型糖鎖の糖鎖構造解析を行った結果、各糖タンパク質あたり3時間以内に全ての糖鎖成分を分類・推定することができた。また種々の癌患者血清由来AGP中の糖鎖分析へ応用し、癌の種類や臨床ステージにおいて含まれる糖鎖成分が著しく異なることを見出し、特に複合型3本鎖および4本鎖糖鎖にフコースが2残基以上結合した過フコシル化糖鎖を多く含むことを見出した。さらに種々の癌細胞表面に存在する糖タンパク質についてN-グリコシダーゼ消化により得られる糖鎖混合物を蛍光標識後、同様に解析を行った結果、全ての細胞についてマンノース59残基からなるハイマンノース型の糖鎖を共通の糖鎖成分として含むことがわかった。現在までに達成された糖タンパク質糖鎖の分析法は銀染色レベルに十分対応可能な感度であるが、炎症や癌などの病態変化に基づき変化する微量の糖鎖成分を追跡する方法としてなお未完成であり、質量分析法との組合せを視野に入れた分析法についても検討を行う必要がある。「銀染色レベルに対応できる糖タンパク質糖鎖の網羅的解析法の開発」の目的でピコモルフェムトモルレベルの糖タンパク質から切り離された糖鎖の解析法について、生体成分中からの複合糖質の分離精製法および糖タンパク質糖鎖の高速糖鎖構造解析について基盤的な研究を行った。