hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ツノナシオキアミをめぐる食物連鎖の再構築

北部北太平洋生態系で重要な動物プランクトンであるツノナシオキアミEuphausia pacificaは、従来植食性が強いと考えられていたが、著者らの研究により動物性餌料に対する依存度も高いことが指摘された。本研究はその仮説を検証し、三陸沖海洋生態系において本種をめぐる食物連鎖の再構築を行った。無殻繊毛虫を本種に与えたところ、摂食速度は本種1個体あたり1.01-3.24μgC/hであった。この最大値は一日あたり本種の体炭素の2.3%に相当しており、繊毛虫だけで本種の食物要求を満たすことができる。本種はバクテリアを直接食べることはできないが、繊毛虫を摂食することから、本種が微生物連鎖と生食食物連鎖を結ぶ役割を果たしていることを示唆するものである。胃内容物観察に基づく本種の食性を検証するため、本種の安定同位体比を測定した。その結果、E.pacficaのδ^<15>Nはネット動物プランクトンのδ^<15>Nよりも少し高いだけであり、POMのδ^<15>Nとの差の方が大きく、2‰程度であることから、POMの方が餌として重要であることが分がった。また、本種のδ^<15>Nがネット動物プランクトンのδ^<15>Nよりも常に高い値を示したことから、本種はネット動物プランクトンよりも高い食段階に位置していることが示唆された。今後POMの中身を吟味する必要がある。オキアミ類は一生の間、定期的に脱皮を続け、本種もほぼ5日ごとに脱皮する。これまで未解明だった本種における脱皮と昼夜鉛直移動、生殖周期、摂食活動との関係を調査した。昼夜鉛直移動において、脱皮個体の夜間の表層への移動は制限されていた。脱皮個体の割合は成熟雌で最も小さかったことから、成熟雌では脱皮間隔が長くなっていることが考えられる。非脱皮個体では摂食活動は夜間に活発に、日中は不活発になる摂食リズムが見られたが、脱皮個体の摂食活動は昼夜とも不活発だった。殻を持っていないため胃内容物として認められていなかったが、現存量が多いため海洋生態系で重さな無殻繊毛虫をツノナシオキアミが摂食するかどうかを実験的に確かめた。三陸海域を航海中に採取した現場海水をツノナシオキアミに与えて飼育前後のモ水中の無殻繊毛虫の密度変化から摂食量を求めた。また当研究室で培養していた無殻繊毛虫Strombidium conicumを様々な密度でツノナシオキアミに与え、その摂食量を求めた。S.conicumに対する摂食速度は日中より夜間の方が高く、夜間の方が摂食が活発だった。S.conicumを高密度で与えた場合の摂食速度はツノナシオキアミ1個体あたり1.01-3.24μgC/hであった。この最大値は一日あたりツノナシオキアミの体炭素の最大2.3%に相当しており、従来報告されていた本種のエネルギーさ求量から考えて、繊毛虫だけでツノナシオキアミの食物さ求を満たすことができる。

無殻繊毛虫に対する摂食率は植物プランクトンより高く、有鐘繊毛虫より低かった。有鐘繊毛虫の遊泳方法は、無殻繊毛虫より緩慢であり、捕食を受けやすいために被摂食率が高いものと考えられる。ツノナシオキアミはバクテリアのような小さな生物を食べることはできないが、繊毛虫を摂食することができることから、この結果は間接的ではあるが、本種が微生物連鎖を生食食物連鎖を結ぶ役割を果たしていることを示唆するものである。この結果はMarine Ecology Progress Seriesに発表した。殻を持たないため胃内容物として認められていなかったが、現存量が多い無殻繊毛虫をツノナシオキアミEuphausia pacificaが摂食するかどうかを検討した。その結果E.pacificaは無殻繊毛虫Strombidium conicumを積極的に摂食する事がわかった。摂食速度の最大値は一日あたりE.pacificaの体炭素の最大2.3%に相当しており、従来報告されていた本種のエネルギー要求量から考えて、繊毛虫だけでE.pacificaの食物要求を満たすことができる。E.pacificaはバクテリアのような小さな生物を食べることはできないが、繊毛虫を摂食することができることから、この結果は間接的ではあるが、本種が微生物連鎖と生食食物連鎖を結ぶ役割を果たしていることを示唆するものである。上記のようにE.pacificaは繊毛虫を摂食すること、また以前に報告者らが行った胃内容物調査から、本種は従来考えられていたように植食性ではなく、肉食性が強いことが示唆されたが、これを検証するために窒素安定同位体比を測定した。その結果、E.pacificaのδ^<15>Nはネット動物プランクトンのδ^<15>Nよりも少し高いだけであり、POM(粒状有機物)のδ^<15>Nより2‰程度高いことから、ネット動物プランクトンよりもPOMの方がE.pacificaにとっての餌として重要であることが分かった。また、E.pacificaのδ^<15>Nがネット動物プラングトンのδ^<15>Nよりも常に高い値を示したことから、E.pacificaはネット動物プランクトンよりも高い食段階に位置していることが示唆された。結論としてはE.pacificaはこれまで報告されていたように植食性ではなく、雑食性であり、時々カイアシ類のような中型動物プランクトンを食べているものと考えられる。このことはE.pacificaが優占する北部北太平洋の食物連鎖を考える上で重要である。
肝疾患に於ける抗肝細胞膜糖脂質抗体の臨床的並びに病態生理的意義

私達は昭和63年度・平成1年度の研究によって自己免疫性肝炎患者血清と反応する肝細胞膜糖脂質がスルファチドであること,また自己免疫性肝炎患者血清中には抗スルファチド抗体が高頻度に出現することを明らかにした。本抗体は血清を家兎肝細胞膜とインキュベ-トすることにより吸収される。しかし、家兎肝細胞膜に含まれるスルファチド量から期待されるよりはるかに少量の家兎肝細胞膜で吸収されることから本抗体は家兎肝細胞膜のスルファチド以外の成分とも反応する可能性が考えられた。そこで,種々の硫酸化グリコサミノグリカンを抗体アッセイ系に加え、その抗体活性に及ぼす影響をみた。その結果、ヘパリン,ヘパラン硫酸添加によって抗体活性は減少するのに対し,デルマタン,ケラタン,コンドロイチン硫酸添加によっては抗体活性の減少はなかった。すなわち、スルファチド抗体はヘパリン,ヘパラン硫酸とも交叉反応することが明らかとなった。更に抗スルファチド抗体が肝細胞膜抗体にどの程度寄与しているかを明らかにするために血清をスルファチドとインキュベ-トした後、スルファチド,家兎肝細胞膜、ラット肝細胞との反応性を検討した。スルファチドとの反応性は68.7%減少に対し、ラット肝細胞,家兎肝細胞膜との反応性はそれぞれ25.5%,14.8%減少した。すなわち、肝細胞膜抗体の2040%がスルファチド抗体に由来すると推定された。つづいて、抗スルファチド抗体の細胞障害性について検討した。ラット肝細胞に対しては抗体のみでは障害性は明らかではなかった。一方、本抗体が交叉反応を示すヘパリンは血管内皮細胞表面に豊富に存在することが知られている。そこで、抗スルファチド抗体陽性血清IgGのウシ血管内皮細胞に対する影響をみたところ,IgGはdosedependentに内皮細胞の増殖を阻害した。分離家兎肝細胞膜より脂質を抽出した後、DEAE-Sephadexカラムクロマトグラフィーにより中性脂質および酸性脂質に分画し、前者からはフロリジルカラムクロマトグラフィーにより中性糖脂質を、後者からはアルカリ加水方解により酸性リン脂質を除去して酸性糖脂質を得た。それぞれの糖脂質分画について固相ELISA法により慢性肝疾患々者血清との反応性を検索した。その結果、肝癌患者、特に肝動脈塞栓療法後の肝癌患者血清は中性糖脂質分画と反応し、一方、自己免疫性肝炎患者血清は酸性糖脂質と反応することが明らかとなった。本年度は後者に重点を置き研究をすすめた。すなわち、自己免疫性肝炎患者血清を用いて抗原糖脂質の分離・精製を試みた。酸性糖脂質をイアトロビーズカラムを用いて4つの分画に分け、それぞれについて固相ELISA法により自己免疫性患者血清との反応性をperoxidase標識抗ヒトlgG血清を用いて検索した。その結果、クロロフォルム-メタノール(4:1)で溶出される分画に抗原糖脂質が分離精製され、TLC、Negative ionFAB-MSの結果、本糖脂質はスルファチドであることが明らかとなった。スルファチドとの反応性は血清をスルファチドとインキュベートすることにより消失したが、Galcer,Galca-6-sulfate,cholesteiol-3-sulfateとのインキュベーションでは消失しなかった。これらの事実は自己免疫性肝炎患者がIgG型抗スルファチド抗体を持っていることを示している。本抗体は自己免疫性肝炎、慢性肝炎(活動性)、慢性肝炎(非活動性)、肝硬変、原発性胆汁性肝硬変患者のそれぞれ92.3、6.7、0.0、25.0、57.1%に見出された。本抗体陽性血清より分離されたIgGはdose-dependentにラミニンのスルファチドへの結合を阻害し、この阻害作用は自己免疫性肝炎における肝細胞障害の発現に何らかの関連を有するものと推定される。本年度の研究に於て二つのことが明らかとなった。まず、肝細胞癌患者の肝動脈塞栓療法(Transcatheter arterial emboliration,以下TAE)後に出現する家兎肝細胞膜と反応する抗体の標的抗原が家兎肝細胞膜の中性糖脂質分画にあることを明らかにし、本抗体陽性血清をプロ-ブとして本抗原糖質の精製をすすめた結果、TLC上単一のバンドが得られるまで精製することができた。精製抗原糖脂質はexoglycosidase処理、Negativeion FAB-MS、permethylation analysisによりN^3αGal-nLc_4Cerであることが明らかとなった。本糖脂質に対する抗体はTAE後の肝細胞癌患者の60%に抗体価の上昇がみられた。現在、本糖脂質に対するモノクロ-ナル抗体を作製し、肝癌細胞に於て本糖脂質の有無を検索中である。もう一つの抗体、すなわち、自己免疫性患者血清中の家兎肝細胞膜と反応する抗体の標的抗原についても検索をすすめた。その結果、硫酸を含む糖脂質eulfatideであることが明らかとなった。自己免疫性肝炎患者の90%以上に本糖脂質に対する抗体が陽性であり診断的有用性は極めて高い。しかし、本抗体はsulfatideのみならず、heparin、heparan sulfateなどのsulfated glycosaminoglycanとも反応した(しかし、chondroiton sulfate、dermatan sulfate、kerataneulfateとは反応しなかった)。heparin、heparansulfateは細胞表面成分として存在し、細胞外マトリックスと相互作用することにより細胞の分化、増殖に重要な役割を演じていると考えられている。

従って、これらのsulfated glycosaminoglycanと反応することによりsulfatide抗体は肝細胞障害の発現に関与している可能性が考えられる。私達は昭和63年度・平成1年度の研究によって自己免疫性肝炎患者血清と反応する肝細胞膜糖脂質がスルファチドであること,また自己免疫性肝炎患者血清中には抗スルファチド抗体が高頻度に出現することを明らかにした。本抗体は血清を家兎肝細胞膜とインキュベ-トすることにより吸収される。しかし、家兎肝細胞膜に含まれるスルファチド量から期待されるよりはるかに少量の家兎肝細胞膜で吸収されることから本抗体は家兎肝細胞膜のスルファチド以外の成分とも反応する可能性が考えられた。そこで,種々の硫酸化グリコサミノグリカンを抗体アッセイ系に加え、その抗体活性に及ぼす影響をみた。その結果、ヘパリン,ヘパラン硫酸添加によって抗体活性は減少するのに対し,デルマタン,ケラタン,コンドロイチン硫酸添加によっては抗体活性の減少はなかった。すなわち、スルファチド抗体はヘパリン,ヘパラン硫酸とも交叉反応することが明らかとなった。更に抗スルファチド抗体が肝細胞膜抗体にどの程度寄与しているかを明らかにするために血清をスルファチドとインキュベ-トした後、スルファチド,家兎肝細胞膜、ラット肝細胞との反応性を検討した。スルファチドとの反応性は68.7%減少に対し、ラット肝細胞,家兎肝細胞膜との反応性はそれぞれ25.5%,14.8%減少した。すなわち、肝細胞膜抗体の2040%がスルファチド抗体に由来すると推定された。つづいて、抗スルファチド抗体の細胞障害性について検討した。ラット肝細胞に対しては抗体のみでは障害性は明らかではなかった。一方、本抗体が交叉反応を示すヘパリンは血管内皮細胞表面に豊富に存在することが知られている。そこで、抗スルファチド抗体陽性血清IgGのウシ血管内皮細胞に対する影響をみたところ,IgGはdosedependentに内皮細胞の増殖を阻害した。
超音波照射による制がん剤の放出制御

制がん剤を必要な時に必要な量だけ供給できれば、より精密な化学療法の実現が可能となる。研究代表者らが新しく開発した徐放性システムからの制がん剤の放出を超音波照射により生体外からの制御することを試みた。超音波を照射すると高分子マトリックスが加熱され、制がん剤(5-フルオロウラシル)の放出速度が増加することが認められた。また超音波照射を停止すると元の放出速度に戻ることから、超音波照射により生体外から薬物の放出速度を制御させ得ることが示唆された。一方、アドリアマイシンの高分子マトリックスからの放出には、この超音波照射による効果が小さかった。このようなデリバリーシステムは、ペプチドホルモン(インシュリン)にとっても有効な手段となる可能性がある。本研究ではさらに、生体への適用を目的としてインシュリン徐放性システム(リザーバー型およびマトリックス型)を作成し、in vitroおよびin vivoにおける超音波照射効果を検討した。in vitroで、超音波照射条件とインシュリンの放出性との関係を詳細に検討した。何れのシステムにおいても超音波照射により放出速度が増加した。照射強度や照射時間により放出速度を調節し得た。照射を停止すると放出速度は元に戻った。インシュリンを含有したリザーバー型システムを糖尿病ラットに埋込み超音波を照射すると、ラットの血糖値が低下する傾向を示した。マトリックス型システムではインシュリン徐放効果により投与直後から血糖値が低下するため、超音波の効果は認められなかった。これらの結果、リザーバー型システムを体内に埋込むことにより、超音波を用いてインシュリンを血中に放出させ、血糖値を下げ得ることが示唆された。以上、超音波照射により制がん剤およびインシュリンの放出速度を制御するための基礎的研究を行ない、得られた結果の一部は日本薬学会第107年会(1987年4月、京都)で発表予定である。
遷移金属表面と吸着分子との相互作用のメカニズム、金属クラスターを用いた理論的解析

CuCH_2の計算:前年度に続き電子構造を詳しく調べ、CH_2はCuとの結合によってCu^+CH_2^-の様に強く分極し、双極子モーメントは3、9デバイとなる。更にCH_2基は電子移行によってCH結合が弱まるという結果を得た。高温超伝導物質YBa_2Cu_3O_7:YとBaに対応する点電荷につつまれたCu_3O_<12>クラスターを取り出してab initio SCF、CI計算を行った。このクラスターのどの辺から電子が取れやすいかを調べる目的でイオン化エネルギーを求めた。1個の銅が4個の酸素に囲まれた2次元面の酸素P軌道からのイオン化エネルギーが最も低くて、O、2eVであった。そのP軌道はこの2次元面内にあってCuO軸に垂直な軌道(いわゆる2Pπ)である。超伝導発現の機構において酸素の2P空孔の重要性が指摘されているが、この結果は2Pπ空孔も考慮に入れる事が重要である事を示唆している。ここで取り上げたクラスターの安定な状態の電子構造は銅のd軌道に空孔が1個でき、更に(a)中間層CuO鎖の酸素P軌道又は(b)CuO_2面とCuO鎖とを橋渡しする酸素のP軌道に空孔ができる。超交換相互作用も記述できる簡単なCIによって種々のスピン状態のエネルギーを計算した結果上記a、bいずれの場合にも両端の2次元面と中間層CuO内のスピンの結合は弱く、スピン結合が変る事による励起エネルギーはa、b各々の場合ごとに約100cm^<-1>と25cm^<-1>である。この値は大変小さく、その絶対値は信頼できないが、両者間のスピンの結合はゆらぎやすい事を示している。多参照関数から出発したし1、2電子励起CI法に4電子励起効果を取り込む手法:計算法の定式化、計算機プログラムの作成を終え、小さい分子からテスト計算を行っている。
マウス生殖細胞の発生分化制御に関わる遺伝子機構の解析

(1)生殖顆粒構成分子の包括的解析:マウス成体精巣から半数体精子細胞をエルトリエーション法により分離し、細胞破砕のバッファー組成、分画遠心強度、密度勾配遠心等について細胞内構造染色とウェスタンブロット解析を指標に生殖顆粒の濃縮条件を設定した。抗TDRD抗体による免疫沈降、溶出条件を詳細に検討し、RNAはマイクロアレイ解析、蛋白質はショットガンLC-MS/MS解析を行った。その結果、既知の生殖顆粒構成分子の他にRNA代謝関連蛋白質が多数同定され、また多くのmRNAが生殖顆粒に存在する事が明らかとなった。蛍光及び電子顕微鏡免疫、RNA in situハイブリザイゼーション法により細胞内局在の確認を進めている。(2)哺乳類tudor関連遺伝子群の遺伝学的解析:Tdrd1、6、7に続いてTdrd9/spindle-Eの解析を進めた。Tdrd9遺伝子はTudorドメイン及びヘリケースドメインをコードし生殖細胞に特異的に発現するが、TDRD1、6、7とは異なり細胞質と核内にdiffuseに存在する。Tdrd9遺伝子改変マウスは雄生殖細胞の減数分裂期に異常を示し、レトロトランスポゾンのmRNA発現とゲノムDNAメチル化に異常が見られる。TDRD9蛋白質の生化学活性を探索した結果、RNA/DNAを基質とした3'-exonuclease活性を持つ事が分かった(投稿準備中)。この事からTDRD9は生殖細胞のRNA/DNA代謝を通じてレトロトランスポゾン制御とエピジェネティックスに関わる興味深い分子で有る事が明らかとなった。マウス雄生殖細胞の生殖顆粒構成分子をコードするtudor repeat1遺伝子欠損マウスの作製を完了した。同遺伝子ホモ欠損マウスは、雄は不妊、雌では妊性を示した。雄ホモ欠損マウスでは生殖顆粒構造は観察されるが、精母細胞から円形精子細胞で分化が停止し細胞死が起きる。tudor repeat1ホモ欠損マウスにおいてマウスvasa蛋白質の細胞内局在には異常が観察されない一方、マウスvasa遺伝子欠損マウスではtudor repeat 1蛋白質の生殖顆粒様の局在が確認されなかった。これらの結果からショウジョウバエ生殖顆粒の構成分子をコードするvasaとtudorと同様の相互関係がマウス関連遺伝子間でも成立している事が明らかになった。(2)ES細胞分化系を用いた生殖系列分化に関わる遺伝子探索マウスVasa遺伝子発現を指標にして、ES細胞から生殖細胞分化を検定する培養系を樹立している。このin vitro PGC分化誘導を制御する遺伝子を探索するため、誘導後13日目に派生するES由来Vasa陽性PGCと体細胞を精製し、その発現遺伝子からPGC分化に連動する発現遺伝子の探索を進めた。その結果、BMPシグナルの下流に位置するId因子の発現亢進などが認められた。(3)体細胞核移植に見られる再プログラム機構の解析生殖細胞特性の一つである再プログラム化機構の解明を目指し、核移植クローンによって誘発される遺伝子発現を解析し、初期化依存的発現を示すマウスVasaなどの既知遺伝子及び新規遺伝子を複数種特定した。(1)マウス雄生殖細胞においてハイスループットな遺伝子機能解析を行う為の実験系として、生体精巣を用いた外来遺伝子の一過性の強制発現、遺伝子機能抑制系の作出を行った。分化段階の異なる未成熟精巣の精細管内へ遺伝子溶液を注入し、電気穿孔法を行う事で体細胞分裂期の精原細胞、減数分裂期の精母細胞および半数体円形精子細胞へ外来遺伝子を特異性高く導入する実験条件を設定する事が出来た。同実験条件を用いてsiRNA発現ベクターを遺伝子導入する事で、雄生殖細胞の各分化段階でRNA干渉が機能し、レポーター遺伝子の発現抑制が起こる事を確認した。また、減数分裂組み換えに機能するDmc1遺伝子に対するsiRNA発現ベクターを導入する事で、精母細胞において減数分裂進行が阻害される表現型が得られた事から、これらの実験系が雄生殖細胞における内在性遺伝子の機能解析に使用可能である事が明らかとなった。(2)ES細胞からのin vitro培養下の生殖細胞分化、及び体細胞核移植クローン操作時に起こる体細胞核の初期化機構についての解析を進めた。前者については、Vasa発現GFPレポーティングマウス体細胞から核移植によって得たES細胞を培養分化系の素材として用い、その長期培養分化(3-4週)に生じる生殖細胞を選別して遺伝子発現プロファイルを検討した結果、雌雄の減数分裂以降の分化が混在して進行することが判明した。後者のアプローチからは、体細胞核移植時に発現誘導されるVasa遺伝子ほか新規の4種の遺伝子を特定し、その特異抗体を調製することによって、それぞれの蛋白産物の発現特異性および細胞内局在性を明らかにした。また、Vasa遺伝子プロモーター域については、分化や核移植クローン過程で特徴的なDNAメチル化修飾の変動を示す部位が特定された。(1)マウス生殖顆粒構成分子をコードするtudor関連遺伝子群の解析を進めた。Tdrd1/Mtr-1変異マウスの解析により、生殖顆粒の一つであるintermitochondrial cementがマウス卵子細胞の分化と妊性に必須では無い事、雄生殖細胞に特徴的な生殖顆粒であるchromatoidbodyがintermitochondrial cementとは独立した起源を持つ事が明らかとなった。また生体精巣に対する電気穿孔法を用いる事で、Tudorドメインが生殖顆粒の局在モジュールとして機能する一方、同ドメインの繰り返し構造が生理機能に必要である事を明らかにした。現在、Tdrd6、Tdrd7/TRAP

遺伝子改変マウスの作製を進めている。また新たにTdrd9遺伝子の同定と発現、局在の解析を行い、TDRD9がRNAヘリケース複合体を形成する事を明らかにした。一方、哺乳類生殖顆粒の包括的な解析を行う為、成体精巣の細胞分取、細胞内構造分画、免疫沈降法によりTDRD複合体精製の詳細な条件検討を進めた。(2)新規作成したVasa-RFPBACベクターの遺伝子導入によって樹立したVasaレポーティングES細胞を用いた長期胚様体分化においても、RFP陽性の雌雄の減数分裂後生殖細胞の分化が再現された。このin vitro分化では、同時併行して雌雄性腺支持細胞の分化も見られること、及び減数分裂前の増殖性生殖細胞も共存することが確認された。また、生殖細胞系譜を可視化するVasa-REPとOct4-GFPのダブルトランスジェニックマウスの作成とこれに由来するES細胞の作成を行った結果、両者の陽性細胞には微妙な差異が存在することが判明した。核移植クローンに起こる体細胞核の初期化機構については、体細胞核移植時に発現誘導される遺伝子の機能解析を継続する一方、初期化時に活性化するVasa遺伝子プロモーターに結合する核蛋白質の特定を進めた。(1)生殖顆粒構成分子の包括的同定:マウス成体精巣から生殖顆粒を精製する為の実験条件の検討を進めた。減数分裂期の精母細胞、半数体精子細胞をエルトリエーションと密度勾配遠心により分離し、細胞破砕時のバッファー組成、分画遠心強度、密度勾配遠心等について抗TDRD特異抗体を用いた細胞内構造の染色とウェスタンブロット解析により、生殖顆粒が濃縮される条件を設定した。生殖顆粒濃縮分画から抗TDRD抗体を用いて免疫沈降を行い、同精製分画から複数の特異的な蛋白質バンドを得た。またマイクロアレイ解析により構成RNAの同定を進めた。(2)哺乳類tudor関連遺伝子群の遺伝学的解析:Tdrd1遺伝子改変マウスは雄性不妊であり雄生殖細胞の減数分裂および半数体成熟過程で異常を示す。興味深い事に同遺伝子改変マウスでは雌雄生殖細胞内のintermitochondrial cementが欠損する一方、雄生殖細胞に特徴的なchromatoid body構造は形成される事が明らかとなった。この事からintermitochondrial cementは雌生殖細胞の発生と妊性には必須では無い事、chromatoid bodyはintermitochondrial cementとは別の起源を持つ事が明らかとなった。本年度は新たにTdrd9/Spindle-Eの解析を行った。Tdrd9遺伝子は生殖細胞に発現する。同蛋白質はTDRD1、6、7とは異なり細胞質と核に検出され、TudorドメインおよびRNA helicaseドメインを持ちMVHと複合体を形成する。Tdrd9遺伝子改変マウスを作製した所、雄性不妊を示し雄生殖細胞の減数分裂期に異常を示した。
広視野図形の認知における弱視児への授業教授モデルの構築

1.研究目的本研究の目的は、弱視児が広い範囲にわたる視対象を認知するための適切な探索方略を整理し図や写真など視覚的教材をどのように見て授業場面へ応用すればよいかを検討することである。2.研究方法対象児:弱視児童5名(小2中1;盲学校在籍1名、小学校在籍2名、中学校在籍2名;視力は0.080.4)に協力をもとめた。方法:長方形および平行四辺形からなる図形教材をパーソナルコンピュータによりTFTディスプレイに提示し、対象児は提示された図形を見ながら記入用紙またはペンタブレットディスプレイに描画するように求められた。図形教材は四角形の上下二辺にドットを配置してそれらを頂点とする四角形を作成した。さらに対象児の一部に対して、植物の写真画像をTFTディスプレイに提示し、ペンタブレットで模写させた。それぞれ描画終了までの所要時間を測定し描画の様子を観察またはビデオにより記録した。3.研究成果図形描画では長方形よりも平行四辺形の描画に時間がかかり、描き間違いも多く見られた。描画の様子から、図形の左上の頂点から辺に沿って反時計回りに見ることが多く、上辺から下辺へと見る傾向もうかがえた。また、必ずしも見た順番に描画するのではないこと、描画する箇所を随時見る場合があり見方が描画の仕方に影響されることも示唆された。また、画像模写では花の輪郭を描きながら見ていくなど模写段階で部分的な認知を行っていることが示唆された。実際の授業場面では記録を伴う作業が多い。本実践により、見て探す作業ではドットのような視覚的手がかりを見つけたり想定したりすること、見て描く作業では見方が「描き方」に影響されるため、描き方をプランニングすることが重要であり、これらの方略を授業に取り入れる必要があることが分かった。この他、描画過程を再生するソフトウェアを作成し分析に役立てられるようになった。
子ども虐待予防：舌喉頭矯正術による児の育児困難症状改善と母親の疲労改善の評価

舌喉頭偏位症(ADEL)は、喉頭の前上方への偏位による呼吸抑制により、乳児では夜泣き、疳の虫など育児困難症状を呈する。オトガイ舌筋の一部を切除する舌喉頭矯正術(CGL)により上気道の抵抗が減少しADEL症状が改善する。CGL前後に母子の睡眠覚醒リズム、睡眠深度を測定、また母親の自律神経機能評価、育児ストレス・疲労度を測定評価によって、CGLが児の夜泣きを改善すること、母親の睡眠、育児ストレスを改善することを明らかにし、年々増加する虐待の直接的予防策として役立てる。
透析を受ける慢性腎不全患者への在宅メンタルヘルス看護に関する研究

血液透析患者の心理・行動傾向を探り、メンタルヘルスのためのアセスメント指針を開発することを目的に、横断的調査法(偶発的標本抽出)ならびに継続的インタビュー法による調査を行った。質問紙調査内容は、人格の主要な5つの次元を測定するNEO-FFI日本版の60項目(下仲ら、1998)と年齢、性別、透析期間、合併症の有無などの背景である。県内患者1700名に郵送し750部回収(44.1%)、有効608部を分析した。「神経症傾向」は一般成人と大差なく、透析患者が全体的に不安を強く抱き、抑うつ傾向があるとはいえないが、病状変化、家族の不理解、通院の困難などを強く感じる場合に得点が高く、背景要因への配慮が必要と思われた。「開放性」は一般成人に比べて低く、心理・行動的に控えめな傾向が認められた。また、65歳以上の「神経症傾向」と「開放性」が有意に低く、高齢透析患者の不安・抑うつの傾向は認められなかった。クラスター分析により、「神経症傾向」と「開放性」が他の因子に比べて低い"調和タイプ"(27.0%)、「神経症傾向」が他の因子に比べて特に高い"神経症傾向タイプ"(38.8%)、「神経症傾向」も含めて5因子全体的にバランスがとれている"均衡タイプ"(34.1%)の3類型に分かれた。65歳以上で"調和タイプ"の割合が多くなり、"均衡タイプ"の割合が減少する傾向があった。19名への継続的インタビューでは、適応の側面から一般精神健康質問紙、感情の側面からPOMS気分プロフィール、心理・行動傾向としてNEO-FFI人格検査(初回のみ)を併用した。タイプの3類型以外に、「外向性」と「開放性」の次元がともに低い"内向傾向タイプ"が類別された。語りデータからは、どのように病気に対処しているかのカテゴリーが導かれ、より具体的にタイプの説明が可能となり、相補的意義があった。今後はアセスメントツールに繋げる。血液透析を受ける患者の心理変化、闘病スタイルと患者背景との関連を明らかにすると共にアセスメントツールの開発を研究目的としている。第一段階として、NEO-FFI日本版ならびに患者背景について、青森県内の透析患者に郵送による質問紙調査を行った(回収率44.1%、有効608部)。透析患者は常に不安をかかえているとされているが、NEO-FFIの5次元平均値は一般成人平均値と比べて全体的に低く、特に「開放性」において成人の平均値との差が開いた。一般成人の平均値を基準にしたプロフィールに表すと、「神経症傾向」も含めて平均的範囲にあり、「開放性」が特に女性で低い範囲になった。年齢は1990歳(平均58.3±12.8歳)で、65歳以上で「神経症傾向」と「開放性」が有意に低い。性別では(男性56.3%、女性42.6%)男性の方が「調和性」が有意に低い。合併症の有無において有意差があったのは、糖尿病を有する者(25.3%)で「開放性」が低く、心臓病(20.4%)で「外向性」が低く、副甲状腺機能低下症(15.8%)で「開放性」が高くなった。社会的背景では、仕事をしていない人の方が「開放性」が有意に低い。

透析期間は0.127.6年(平均6.7±5.7年)で、長期になると「開放性」が高く「誠実性」が低い傾向であった。最近1年間に生活上の変化(35.4%)、病状の変化(38.6%)があると、双方とも「神経症傾向」が有意に高くなる。病状の悪化、気が休まらないこと、家族の不理解、通院の交通手段などがつらいと答えた者の「神経症傾向」が高くなった。これらから、積極的・活発に生活することをあきらめざるを得ない状況が多々あること、病状や生活の変化が不安・抑うつを強めると考えられ、エピソードに応じた時期相応の支援が必要であると示唆された。第二段階として、3・4か月間隔で20数名にインタビュー調査を継続中である。本研究では、血液透析を受ける患者の闘病スタイル、とりわけ心理・行動変化に焦点をあてており、個人の背景ならびに病状変化と関連づけることによって、アセスメントツールの項目開発を目的としている。研究方法は、質問紙法による県内透析患者の実態調査と、インタビュー法による3年間の追跡調査である。平成14年度には、県内透析患者を対象に、人格尺度(NEO-FFI)を用いた質問紙調査を行った(有効数608)。平成15年度にはこの分析結果を公表した。一般成人の先行結果と比べた透析患者の全体的人格傾向としては、「開放性」が低いことから、保守的・控えめ・静かな情緒表現の傾向が明らかになった。全体傾向での「神経症傾向」は平均的な結果であったが、病状あるいは生活の変化があったとする人の神経症傾向が高く、この結果から「神経症傾向」が闘病の質評価の指標になりうる可能性が示唆された。さらに、人格・行動傾向からみて、神経症傾向と開放性の得点が高いタイプとそうでないタイプとの2タイプに類別された。タイプの差異についても「神経症傾向」で特徴づけられ、この傾向が高いタイプは、心理的に敏感かつ開放的で、どちらかと言えば抑うつ的になりやすいが、神経症傾向が低いタイプでは、物事への対処がうまくできやすいと推察される。インタビューへの協力者20名の継続調査は、平成14年2月から半年1年間隔で行っている。半構成的インタビューを基調としているが、同尺度を用いて追跡するメリットを考え、精神健康尺度であるGHQ28ならびに気分尺度であるPOMSによる既存の心理テストも併用している。平成16年度春までに最終インタビューを終え、闘病の質に関連する要素の分析を進めていく予定である。質的データからは、質問紙調査で明らかになった闘病(人格・行動)のタイプ別に、具体レベルでの対処法を導くことができると考えている。最終年度にあたる今年度は、成人人格検査NEO-FFIを用いた質問紙調査の分析結果の公表と、継続インタビュー事例の語りの分析を行った。質問紙調査の結果からは、透析を受ける慢性腎不全患者の心理・行動傾向の3タイプが明らかになった。第一のタイプは"神経症傾向"と"開放性"が多次元と比べて低い「調和タイプ」、第二のタイプは、"神経症傾向"が特に高く、他の4次元が低く「神経症傾向タイプ」、第三のタイプは、"神経症傾向"も高いが5次元全体のバランスが取れている「均衡タイプ」とした。背景と3タイプとの関連では、性別ならびに透析期間で明らかな差は認められなかったが、仕事をしている人に「均衡タイプ」の割合が高く、仕事をしていない人や網膜症患者に「神経症傾向タイプ」が多かった。外的・社会的刺激の少ないことが「神経症傾向タイプ」に関連すると考えられた。年齢によるタイプ別比較では65歳以上で「調和タイプ」割合が多く、「均衡タイプ」の割合が減少する傾向があった。心理的鋭敏な「神経症傾向タイプ」と、神経症傾向も開放性も低く控えめで落ち着いている印象の「調和タイプ」の双方とも抑うつが危惧される。
末梢神経系におけるニューロンの相互認識機構に関する神経解剖学的研究

上頚神経節に神経標識物質であるWGA-HRP溶液を注入して、そこに存在している交感神経細胞を強く標識した。3、4日経過後、頭頚部の14種類の神経節について逆行性に標識された神経細胞を調べた。この逆行性標識は交感神経細胞の線維(軸索)の末端まで運ばれたWGA-HRPが交感神経線維から放出され、その近傍の神経線維に取り込まれ、その線維の中を今度は細胞体に向かって逆行性に輸送され、細胞体に蓄積したものと解釈される。これを順行性-逆行性神経越え標識と呼ぶ。本研究はこの神経越え標識を利用して各種末梢神経線維の間の絡まり合いを調べた。交感神経系の反対側の上頚神経節や星状神経節では大量の陽性細胞が認められたことから、交感神経同士はWGA-HRPを良く交換することが分かった。しかし、同じ自律神経系に属する副交換性の毛様体神経節、翼口蓋神経節、耳神経節では陽性細胞の数は少なく、蓄積度も低かった。知覚神経系の三叉神経節や脊髄神経節でも数も少なく標識度も高くなかった。以上の結果から、左右の交感神経線維は互いに密に絡まり合い、標識物質を良く取り込んだことになる。副交感神経の神経細胞は交感神経線維と同じ組織を拮抗的に支配しているにもかかわらず、標識物質の交換という点では密な関係ではないことが予想された。同様に知覚神経細胞についても交感神経とは密な関係とはいえない。以上、末梢神経系の交換、副交換、知覚の各種神経細胞(線維)の間で標識物質の授受があったことは、各神経細胞において特有の物質の授受(交換)をしている可能性が高く、神経細胞間の相互認識のため機構の存在が確認できた。今後、その物質がどのようなものなのか、また、それが神経機能にどのような影響を及ぼしているのかを研究していく新しい足がかりができた。[神経トレーサーの注入について]3%WGA-HRP溶液を右側上頸神経節にガラス電極を用いて注入することで、交感神経節後ニューロンを順行性に標識した。2-3後、灌流固定後、頸髄の高さにある両側で14個の知覚神経節(C2-C8)、および両側の上頸神経節と星状神経節を採取。さらに、頭部の毛様体神経節、耳神経節、三叉神経節なども摘出。各種神経節の中における、WGA-HRP逆行性標識ニューロンを探した。[標識細胞とその分布について]各種の神経節にWGA-HRP標識細胞が観察さされたが、多くの場合、標識の程度は微弱なものから中程度まで、さまざまであった。ほとんどの細胞は、樹状突起まで染まることはまれで、核周部に貯留を認める程度であった。しかし、上頸神経節に投与した例で、反対側の上頸神経節にはかなり強い逆行性標識ニューロンが観察された。[各種神経節での逆行性標識ニューロンの出現頻度]反対側の上頸神経節+++同側の頭部神経節星状神経節+++毛様体神経節++同側の脊髄神経節翼口蓋神経節+C2-C4 -耳神経節+C5-C6 +/-三叉神経節+++反対側の神経節一般的にいずれも-[まとめ]同じ交感神経系での逆行性標識率は高い。しかし、知覚と副交感性の神経節での標準率は低くなることが分かった。神経軸索の末梢での絡み具合に差があるものと考えられる。

[神経追跡物質による末梢ニューロンの標識]3%WGA-HRP溶液を10匹の雄性ラットの右側上頚神経節に注入し、交感神経節後ニューロンを順行性に標識した。頭頚部の各種神経節のうち、(1)交感神経節として対側の上頸神経節、星状神経節、(2)知覚神経節として両側のC2-C8の脊髄神経節と両側の三叉神経節、(3)自律神経節として両側の翼口蓋神経節と耳神経節を摘出した。65μの連続クリオスタット切片を作製、HRPの発色にはTMB反応を行って、逆行性に標識されてくるニューロンを観察した。[所見](1)対側の上頚神経節と星状神経節では多数の逆行性標識細胞が観察できた。時には逆行性標識された軸索や樹状突起の中にまでWGA-HRPが蓄積している強い逆行性標識の像を観察できた。(2)同側の脊髄神経節では、C_5、C_6、C_7、C_8の神経節において、少量の逆行性標識ニューロンを認めた。しかし、対側の脊髄神経節においてほとんど発見できなかった。(3)同側の三叉神経節では少数の標識ニューロンが見つかったが、対側ではまったく見つからなかった。(4)同側の耳神経節と翼口蓋神経節では少量ながら弱い逆行性標識ニューロンが見つかったが、対側では認められなかった。以上から、交感神経節後ニューロンの軸索中を順行性に終末に向かって送られたWGA-HRPが終末より放出され、それを取り込んで逆行性に細胞体が標識されたニューロンは、もっとも明瞭であったのは同じ交感神経節の体側の上頚、星状神経節においてであり、ついで、明瞭であったのが、同側の三叉神経節と脊髄神経節、および同側の副交感性の耳神経節と翼口蓋神経節であった。[結論]対側における逆行性標識は交感神経ニューロンに強く認められた。したがって、交感神経神経は正中線をわたって左右のものが密度高く絡まり合うことが分かった。それに対して、知覚線維や副交感神経は、同側性にのみ交感神経線維と少量のみ絡まり合うが、対側のものは交感神経と絡まりあうことがほとんど無いことが分かった。同じ末梢性の神経ではあるが、交感神経には正中線を越えて対側に深く進入する性質があることが判明した。
20世紀ドイツ文化のイメージ研究-ベンヤミン研究の文化史的展開

1.ベンヤミン研究(1)「物語」と「メルヘン」の意味-神話、メルヘン、物語等、ジャンルの意味を整理し、現代のアニメや子ども向けテレビ番組と比較した。現代のメディアの中の「お話」の基本構造を見ると、かつてのメルヘンと共通するところが多く、いわば、魔法のかわりにテクノロジーを使ったメルヘンという趣を呈している。しかし、そこで決定的に欠落しているのが、声による語り、目や手、息づかいによる共同作業としての「語り」である。しかし、このような「語り」を回復しようとする欲求と力を、実は子どもたち自身、本来もっている。(2)「弁証法的イメージ」としての過去の像-「生きている者」の想起の力を喚起する歴史概念として、それも、圧倒的な敗者、倒れ伏した者の救済を目指すイメージとして考察した.2.20世紀イメージ研究(1)物のフェティッシュ化と女性のフェティッシュ化のプロセス-アール・ヌーヴォーからアール・デコへと至る物の「かたち」に「フェティッシユ」化の流れを見い出したが、他方、それと並行して進行しつつあった女性の「フェティッシュ」化の流れを女の顔の変化に注目して分析した。(2)gendered Nation-19世紀半ば以降のルイーゼ・オットーの新聞・小説における女性像を分析し、ドイツ国民国家形成期に、女性の解放と連携を訴えるテクストの中に、以下に強力に女性をジェンダー化し国民化する力が働いているか、gendered nationの形成に女性の側からもいかに自発的に参加していったか、それは20世紀においてどのように展開したかを考察した。(3)戦時総動員俸制下のプロバガンダと抵抗-日本とドイツの193040年代のプロバガンダについて研究し、大衆の無意識を集団へと収斂させていく時の心情、論理、技法が、日本とドイツ、さらにはアメリカにおいては大きな違いがあること、また、作品を細部にわたって見ていくと、ブロパガンダ映画や雑誌の中にも、公式的扇動からすり抜けていく感情の流露や抵抗、サポタージュなどが含まれていることが分かった.1.ベンヤミン研究(1)「物語」と「メルヘン」の意味-神話、メルヘン、物語等、ジャンルの意味を整理し、現代のアニメや子ども向けテレビ番組と比較した。(3)戦時総動員俸制下のプロバガンダと抵抗-日本とドイツの193040年代のプロバガンダについて研究し、大衆の無意識を集団へと収斂させていく時の心情、論理、技法が、日本とドイツ、さらにはアメリカにおいては大きな違いがあること、また、作品を細部にわたって見ていくと、ブロパガンダ映画や雑誌の中にも、公式的扇動からすり抜けていく感情の流露や抵抗、サポタージュなどが含まれていることが分かった.まず、データベース作成のための環境整備(ハード面とソフト面)を行いつつ、以下のような研究を行った。1.ベンヤミン研究に関しては、内外のベンヤミン研究を調査しつつ、(1)「物語」と「メルヘン」の意味、(2)「弁証法的イメージ」としての過去の像について研究を行った。(1)については、神話、メルヘン、物語等、ジャンルの意味を整理し、現代のアニメや子ども向けテレビ番組と比較した。しかし、そこで決定的に欠落しているのが、声による語り、いや声だけではなくて、目や手、息づかいによる共同作業としての「語り」である。そこでこそ、話し手と聞き手の間で経験と物語が共に紡がれ、織られ、手渡されていくのだ。このような「語り」を回復しようとする欲求と力を、実は子どもたち自身、本来もっているのではないか、というのが現在のところ私の推論である。この問題について考えるために、児童文学者であり作家である石井桃子氏にもインタビューを行った。(2)については、ベンヤミン思想の核として、そしてまた現代における歴史的認識の可能性として今後も研究を続けていく予定である。2.20世紀イメージ研究としては、日本とドイツの193040年代のプロパガンダに関する資料を多く収集し、特に、この間の映画やラジオについて研究した。

その結果、大衆の無意識を集団へと収斂させていく時の心情、論理、技法が、日本とドイツ、さらにはアメリカにおいては大きな違いがあること、また、実際の作品を細部にわたって見ていくと、プロパガンダ映画や雑誌の中にも、公式的扇動からすり抜けていく感情の流露や抵抗、サボタ-ジュなどが含まれていることが分かった。論文「アール・デコへと至るモダンの径路」(「武蔵野美術」特集「モダニズムのかたち」1999年1月)を執筆した。本論文ではアール・ヌーヴォーからアール・デコへと至る物の「かたち」に「フェティッシュ」化の流れを見い出したが、他方、それと並行して進行しつつあった女性の「フェティッシュ」化の流れを、ラファエル前派の女性像(抑圧と陶酔の美化)、ミュシャのポスターの女性像(物神としての商品の戴冠式を執り行う女神)、アール・デコの女の顔(「無機的なもののセックスアピールに参ってしまうフェティシズム」-ベンヤミン-の表徴)を中心に分析した。アール・デコの抽象化・無機物化されたかたちは、まさに「記号」である。そしてその記号の能記は「流行」であり、所記は「消費世界は美しい」という不在のユートピアである。ここで行ったモダニズム分析は、今後、「公共性の転換」」という観点から、ファシズム、コミュニズム、後期資本主義が突入した総力戦体制の分析を行っていく上で重要な基礎となる部分である。前年度に引き続き、戦争をテーマにした資料(図書、ヴィデオ、CD-ROM、CD等)を収集した。戦争と人権、ジェンダーの問題について研究を深めるため「戦争・女性・人権」学会に入会し、ディスカッションや情報交換を行った。戦争・国家・女性の問題が集約的に現われている「慰安婦」問題については、生活クラブ連合会「本の花束」編集部主催による学習会で口頭発表し,その後、元「慰安婦」ハルモニたちの共同生活の記録「ナヌムの家のハルモニたち」の書評を行った。また、この問題を含めて生と政治、表現の問題を深く考察した「つぶやきの政治思想」(1988、青土社)の著者李静和氏にインタビューを行った。ベンヤミンの著作のデータベース化を続行し、理論的整備を進めた。今年度行った研究は、以下のとおり。1 20世紀イメージ研究のための資料収集2民族、国家、ジェンダー、メディアに関する研究(1)国民国家論の研究B・アンダーソン『想像の共同体』、モッセ『大衆の国民化』等の理論的研究を行い、ドイツ、オーストラリアにおける国民国家と民族、言語について歴史研究を行った。具体的な作品分析としては「戦意昴揚映画『5人の斥候兵』における「君が代」」を執筆し、戦時下の民衆心理において国歌が果たした役割について論じた。(2)国家とジェンダー政治思想研究会において(1999年4月成城大学)、李静和『つぶやきの政治思想』に関する口頭発表を行った。イメージ&ジェンダー研究会において(1999年12月東京女性フォーラム)、セクシュアル・ハラスメントの思想と現実について口頭発表を行った。
RNAポリメラーゼII系遺伝子の転写制御におけるタンパク質修飾反応の役割

1 GAL4-VP16による転写活性化でのERCC3ヘリカーゼ活性の役割ERCC3ヘリカーゼは基本転写ではpromoter openingとpromoter escapeの段階で作用しているが、GAL4-VP16による転写活性化ではどこで作用しているこかを検討した。まず、premeltした鋳型を用いて転写活性化反応を行いTFIIHの変異体の影響を検討した。この結果、転写活性化の際にTFIIHが関与するのはpromoter escapeの段階であることが分かった。またこの作用は基本転写で見られるTFIHの役割とは異なり、転写活性化に特異的である。実際、種々の変異プロモーターを用いて、転写をごく初期の段階で止め、promote escapeの段階で転写活性化の効果が見られるかどうかを調べると、転写のごく初期に転写活性化因子が作用していることが分かった。この、作用には転写活性化因子のみならず、転写補助因子PC4も必要である。この転写のごく初期の段階では、RNA polymerse IIはまだ安定に転写を行っていないようであり、abortiveな転写に終わることが多い。実際、ATPのアナログを用いて、転写のごく初期の段階でERCC3の活性を止めると、RNA polymerse IIはpromoterから離れてしまう。以上のことより、転写の活性化にはpreinitiation complexの形成を促進するだけではなく、promoter escapeを促進することが重要であることが分かった。また、転写のごく初期反応のkineteicsを検討した結果、promoter escapeは転写活性化の際も基本転写の際と同じようにrate limitingであることが明らかとなり、転写活性化でpromoter escapeが促進されていても、この段階の反応速度は変化しない。2転写とキャッピング反応のカップリングにおけるTFIIHの役割我々は、水本博士との共同研究にて転写とキャッピングが同時に起こる再構成系を開発した。この系では、RNA polymerse II以外はすべて組換え体因子を用いている。この系を用いると転写開始とキャッピング反応がカップリングして起こり、通常のキャッピング反応に比べて非常に効率よくRNA末端へのGTPの付加と塩基のメチル化が起こることが観察された。現在この系を用いてTFIIH特にそのキナーゼ活性とキャッピングの関係およびその分子メカニズムを鋭意検討中である。転写におけるリン酸化反応の役割を検討するために、バキュロウイルスの発現系を用いて組換え体TFIIHを再構成する系を開発した。得られた組換え体TFIIHはHeLa細胞由来のTFIIHと同等の転写活性を持つことが示された。この組換え体TFIIHの再構成系を用いて、TFIIHのリン酸化の転写における役割を検討した。まず、MO15のキナーゼ活性をそれぞれ欠損したTFIIH変異体を、バキュロウイルスの系を用いて作成した。in vitro転写系を用いて解析を行ったところ、MO15のキナーゼ活性は基本転写や転写活性化には必要でないことが明かとなった。CTDのリン酸化は、転写反応には関わって無いことが示唆される。また、転写伸長因子との機能的相互作用を検討すると、pTEFb/FACTがDSIF/NELFの伸長抑制反応に拮抗して伸長反応を促進する際に、TFIIHが必要であることが分かった。この際、TFIIHのキナーゼ活性は関与していないようである。また、in vitroのリン酸化実験によりpTEFbとTFIIHのCTDリン酸化は、お互いに拮抗することが分かった。以上より、TFIIHのリン酸化活性は、転写の開始および伸長反応には関与していないことが強く示唆される。CTDのリン酸化反応は、転写開始や伸長反応そのものよりもむしろ転写後の反応に関与していると考えられる。とくに、キャッピング、スプライシング、ポリ(A)付加反応と深く関係している可能性がたかく、今後はこの点を中心に解析を進める必要がある。2転写とキャッピング反応のカップリングにおけるTFIIHの役割

我々は、水本博士との共同研究にて転写とキャッピングが同時に起こる再構成系を開発した。この系では、RNA polymerse II以外はすべて組換え体因子を用いている。この系を用いると転写開始とキャッピング反応がカップリングして起こり、通常のキャッピング反応に比べて非常に効率よくRNA末端へのGTPの付加と塩基のメチル化が起こることが観察された。現在この系を用いてTFIIH特にそのキナーゼ活性とキャッピングの関係およびその分子メカニズムを鋭意検討中である。1 GAL4-VP16による転写活性化でのERCC3ヘリカーゼ活性の役割ERCC3ヘリカーゼは基本転写ではpromoter openingとpromoter escapeの段階で作用しているが、GAL4-VP16による転写活性化ではどこで作用しているこかを検討した。まず、premeltした鋳型を用いて転写活性化反応を行いTFIIHの変異体の影響を検討した。この結果、転写活性化の際にTFIIHが関与するのはpromoter escapeの段階であることが分かった。またこの作用は基本転写で見られるTFIHの役割とは異なり、転写活性化に特異的である。実際、種々の変異プロモーターを用いて、転写をごく初期の段階で止め、promote escapeの段階で転写活性化の効果が見られるかどうかを調べると、転写のごく初期に転写活性化因子が作用していることが分かった。この、作用には転写活性化因子のみならず、転写補助因子PC4も必要である。この転写のごく初期の段階では、RNA polymerse IIはまだ安定に転写を行っていないようであり、abortiveな転写に終わることが多い。実際、ATPのアナログを用いて、転写のごく初期の段階でERCC3の活性を止めると、RNA polymerse IIはpromoterから離れてしまう。以上のことより、転写の活性化にはpreinitiation complexの形成を促進するだけではなく、promoter escapeを促進することが重要であることが分かった。また、転写のごく初期反応のkineteicsを検討した結果、promoter escapeは転写活性化の際も基本転写の際と同じようにrate limitingであることが明らかとなり、転写活性化でpromoter escapeが促進されていても、この段階の反応速度は変化しない。2転写とキャッピング反応のカップリングにおけるTFIIHの役割我々は、水本博士との共同研究にて転写とキャッピングが同時に起こる再構成系を開発した。
コンクリート構造曲げ部材の終局限界状態を与える主筋の座屈性状に関する基礎研究

本研究は、震害例や実験例でも数多く観察されている、また繰り返し荷重下での軸筋の引張破断や横補強筋の破断という非常に危険な終局破壊を引き起こす、コンクリート曲げ部材の主筋の座屈性状を系統的に明らかにすることを目指すものである、すなわち、コンクリートを3水準(300、600、900kg/cm^2)、横補強筋の形状を4水準(口、田、囲、○)および降伏強度を3水準(4000、8000.13000kg/cm^2)に変化させた、コンファインドコンクリート内の配筋されたD19の軸筋の座屈性状を調べ、それら要因が座屈時ひずみにおよぼす影響を調べた。その結果、次のようなことがわかった。(1)座屈時ひずみはコンクリート強度が大となるほど小となった。とくに、コンクリート強度が300kg/cm^2から600kg/cm^2級に変化すると急激に低下した。(2)座屈時ひずみは、同じ横補強筋量を用いるとき、コンファインドコンクリートの性能がより向上する形状が、口、田、囲、○の順に大きくなっった。(3)同じ横補強筋量の場合、降伏強度が大で細い横補強筋の時ほど座屈時ひずみは小となった。(4)軸筋の位置(横補強筋一辺の隅部か中央部)が座屈時ひずみの及ぼす影響は、形状が口形の場合には見られたが、サブタイのある場合には見られなかった。また以上のことは、軸筋の座屈時ひずみが、現行の設計諸コード等で考えられているように、横補強筋の間隔と軸筋の太さとの相対関係で決まるものではなく、コンファインドコンクリートの性能と密接に関連するものであることを示している。
酸素原子のスピン軌道状態の緩和と反応選択性に関する研究

本研究では、スピン軌道状態を区別した酸素原子の高感度検出手法を確立し、スピン軌道状態間の緩和速度の測定、反応選択性の検討を行った。1.酸素原子の検出手法の確立:本研究ではスピン軌道状態を区別した酸素原子(^3P_J)の高感度検出手法として真空紫外レーザ誘起蛍光法を用いた。真空紫外光源はKr中での共鳴四波混合法を用いて発生した。発生した真空紫外光の線幅は1cm^<-1>と、スピン軌道状態(エネルギー差:158cm^<-1>[^3P_2-^3P_1],68cm^<-1>[^3P_1-^3P_0]を区別して検出するために十分であった。また検出限界として1×10^9atoms cm^<-3>と十分な検出感度が得られた。スピン軌道状態間の反応選択性の検討:酸素原子による水素原子引抜反応において3原子近似の断熱ポテンシャル上ではスピン軌道状態間の反応性に違いがあることが予想される。本研究では酸素原子とシクロヘキサンの反応で、297K,344Kにおいて反応選択性の検討を試みが、反応速度に明確な違いを確認することはできなかった。しかしながら、2.で測定したようにスピン軌道状態間の緩和が速いためこの結果から反応選択性を否定することはできない。この問題に関しては将来、分子線のような希釈気体との衝突が無視できるような実験によって解明されるべきであろう。