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近現代日本における人形の創作およびその受容に関する研究

近代化の過程において「人形」が「女児文化」に位置づけられ、「女性にふさわしいもの」とみなされた歴史に着目し、ジェンダー論および身体論を援用しながら、現代における「人形」の創造とその受容の様相を解明を目指した。最終年度にあたり、これまでの収集した資料の調査分析のまとめとして論文を執筆し、学会誌に投稿・査読を経て採用された。当該論文「近代日本における女性と人形制作ー上村露子とその活動の再解釈」は、これまで女性史と人形研究という異なる研究領域において名前を知られていた和製フランス人形の創始者上村露子(かみむらつゆこ)を、女性運動家であり人形作家でもあるという上村の二つの側面を統合し、上村の再解釈を通じて、女性が人形を制作することの社会的意義とその受容についてジェンダーの視点から明らかにした。近代は人形の女性化(ジェンダー化)が達成された後、主に男性が携わる芸術的人形と主に女性が携わるアマチュア的人形を分離するという再ジェンダー化が行なわれた。その歴史的分岐点に立ち会った上村は、フランスに影響を受けた和製フランス人形を創出する。上村は女性に向けて普及活動を行ない材料の通信販売などを通じて経済的基盤を確立した。女性運動家としての上村は経済的基盤の確立を第一義とし、芸術的方向性は目指さなかった。それはジェンダーロールの受容という側面を持ちつつも、それに携わった女性たちの創造性の発露を促したという面もまた見逃すことはできない点を指摘した。近代化の過程において「人形」が「女児文化」に位置づけられ、「女性にふさわしいもの」とみなされた歴史に着目し、ジェンダー論および身体論を援用しながら、現代における「人形」の創造とその受容の様相を解明するため、本年度は、研究の基礎的資料の収集と分析をしつつ、「受容」に着目し考察を進めた。特に、近代から現代にかけて日本の少女たちに受容された人形とその身体性に焦点をあてた。今日、人形は女児に属する玩具とされているが、そのような概念は日本の近代化(ジェンダー化)によってもたらされた。「ままごと」などを通じて女児用人形は「良妻賢母教育」に使われてきた。女児たちが主に使用した人形は、「乳幼児的身体」でもって表わされ「妊娠」に結びつくような身体ではなかった。戦後、ソフトビニールやプラスチックなどの新素材を使用し、工場で大量生産された人形が開発された。特にティーンエイジャーを対象としたファッションドール(バービー人形、リカちゃん人形など)はセクシーな身体で作られた。成熟した女性身体をもつファッションドールは、「妊娠」可能な身体を所有しているともいえる。それらのファッションドールからは「妊娠」した人形も発売された。「マタニティドール」のさきがけである「マミー人形」(ハスブロ社製)、続く「ティーン・プリグナンシー・バービー」(マテル社製)、「妊娠した」日本のリカちゃん人形(タカラ製)などを取り上げながら、これらの「マタニティドール」に対する社会的評価を分析し、あるべき「女児用人形」とは何かを考察した。該当年度は初年度にあたり、文献の調査や講読に集中する予定であったが、他の研究者とともにシンポジウムを催すなど、中間報告的な研究発表の場も設けることができたため。近代化の過程において「人形」が「女児文化」に位置づけられ、「女性にふさわしいもの」とみなされた歴史に着目し、ジェンダー論および身体論を援用しながら、現代における「人形」の創造とその受容の様相の解明を目指した。本年度は、昨年度の研究報告「「あるべき」女児用人形とは何かー「妊娠」した女児用人形をめぐって」(イメージ&ジェンダー研究会ミニシンポジウム「孕む身体表象ーその身体は誰のものなのか?」於武蔵大学、2016年9月17日)での質疑応答を経て、ブラッシュアップし、論文化(「「あるべき」女児用人形とは何かー「妊娠」した女児用人形をめぐって」山崎明子・藤木直実編著『〈妊婦〉アート論ー孕む身体を奪取する』青弓社、2018年)した。本論文では、明治初期から現代までの人形表象を、「妊娠」をキーワードにジェンダーの視点から分析を行なった。前近代において必ずしも女性文化に位置づけられなかった人形は、国民国家形成において女性の国民化に必要だった良妻賢母主義と結びつき、その媒介として赤子的身体を持つ人形が、女児たちに与えられた。しかし戦後登場した女性的身体を持つファッションドールは、妊娠可能な身体を形成していた。妊娠可能な人形の身体と処女性を求められる少女との矛盾した関係性は、現代社会における不均衡なジェンダー構造を浮かび上がらせることを論じた。昨年度の口頭報告をさらに精緻に検討を行なった上で論文化できたため。

近代は人形の女性化(ジェンダー化)が達成された後、主に男性が携わる芸術的人形と主に女性が携わるアマチュア的人形を分離するという再ジェンダー化が行なわれた。その歴史的分岐点に立ち会った上村は、フランスに影響を受けた和製フランス人形を創出する。上村は女性に向けて普及活動を行ない材料の通信販売などを通じて経済的基盤を確立した。女性運動家としての上村は経済的基盤の確立を第一義とし、芸術的方向性は目指さなかった。それはジェンダーロールの受容という側面を持ちつつも、それに携わった女性たちの創造性の発露を促したという面もまた見逃すことはできない点を指摘した。「人形」にかかわる概念、教育、団体展、展覧会などの制度に関する考察を行なう。特に人形の近代「美術」からの排除/参入による「美術」の再編成に留意しながら、人形職人/人形作家の分離、アーティストとしての近代的人形作家養成制度の構築、人形制作教育におけるカリキュラムの実態、団体展および展覧会の開催状況、一般女性向けの人形創作講座についての考察などを行なう。女性の創作物が経済システムの中で不可視化・無価値化・低廉化されてきた可能性を探る。次に、ケーススタディとしての女性の作り手に関する考察を行なう。従来の評価や著名度にかかわらず、各時代を特徴づける活動を行ない、作品を残した女性の作り手(堀柳女[1897-1984]、野口園生[1907-1996]、高浜かの子[1911-1992]、天野可淡、恋月姫など)の作品画像資料や関連資料の分析を行ない、女性の私的・公的空間における創作活動が、認知・評価に到るまでのプロセスを明らかにする。また作り手としての女性は人形の身体と自らの身体の関係をどのように意識し、あるいは無意識のうちに制作をしてきたのかを考察する。本年度は、ケーススタディとして近代の女性人形作家に関する考察を行ないたい。「人形」に関わる今日的な概念は近代になってから構築されたものであることを念頭に、女性の創作物が経済システムの中で不可視化・無価値化・低廉化されてきた可能性を探る。文献講読や研究発表の準備、当該研究以外のテーマによるシンポジウムへの招待発表の登壇準備などにより、当初予定していたよりも文献購入や調査が少なかったため。本年度は未入手の文献購入はかなり行なったものの、遠方への調査よりも、近郊での調査が多くなったため次年度使用額が生じた。次年度は、遠方への調査を中心に取り組む予定である。次年度使用額は、未入手の文献購入や調査に当て、計画的な執行を予定している。
極性輸送の分子機構

発生の過程で組織がダイナミックな形態形成運動を行う場合,それに伴って様々な膜蛋白質の局在もダイナミックに変化する。しかし,そのような膜蛋白質の移動を制御するメカニズムはよくわかっていない。私達は,様々な膜蛋白質がダイナミックに輸送されるショウジョウバエの翅形成過程に着目し,その分子メカニズムを解析している。特に,apical側の接着構造の形成に関わるE-cadherinやplanar cell polarityの形成に関わるFlamingo,そして,basal側の接着構造の形成に関わるIntegrinに着目し,様々な小胞輸送関連分子をスクリーニングしたところ,PI3Kinase classIIIと,それによって生成されるPI(3)Pに結合するFYVEdomainを持つ遺伝子が同定された。まず,PI3KinaseのノックダウンでE-cadherin,Flamingo,Integrinの局在を調べたところ,細胞内に異常な蓄積が観察された。ところが,FYVEdomainをもつRbsn-5のノックダウンでは,Integrinの局在に異常は観察できたが,E-cadherinとFlamingoの局在には異常は観察できなかった。この結果は,PI3Kinaseは膜蛋白質一般の輸送に関与しているが,その下流のFYVEdomainをもつ遺伝子において,輸送の選択性が制御されていることを示唆している。さらに,Rbsn-5の機能を解析するために,細胞内の輸送コンパートメントについて調べたところ,興味深いことに,Rbsn-5が局在するbasal側のエンドソームはapical側のエンドソームと比較して著しく大きいことがわかった。また,そのbasal側のエンドソームの形成にRbsn-5が必要であることもわかった。以上の結果より,極性細胞において,apical側とbasal側ではエンドソームが異なることによって,違う制御が可能になっており,それに関わる分子のひとつがRbsn-5であることがわかった。発生の過程で組織がダイナミックな形態形成運動を行う場合、それに伴って様々な膜蛋白質の局在もダイナミックに変化する。しかし、そのような膜蛋白質の移動を制御するメカニズムはよくわかっていない。私達は、様々な膜蛋白質がダイナミックに輸送されるショウジョウバエの翅形成過程に着目し、その分子メカニズムを解析している。特に、apical側の接着構造の形成に関わるE-cadherinやplanar cell polarityの形成に関わるFlamingo、そして、basal側の接着構造の形成に関わるIntegrinに着目し、様々な小胞輸送関連分子をスクリーニングしたところ、PI3Kinase classIIIと、それによって生成されるPI(3)Pに結合するFYVEdomainを持つ遺伝子が同定された。まず、PI3KinaseのノックダウンでE-cadherin、Flamingo、Integrinの局在を調べたところ、細胞内に異常な蓄積が観察された。ところが、FYVE domainをもつ遺伝子のノックダウンでは、Integrinの局在に異常は観察できたが、E-cadherinとFlamingoの局在には異常は観察できなかった。この結果は、PI3Kinaseは膜蛋白質一般の輸送に関与しているが、その下流のFUVE domainをもつ遺伝子において、輸送の選択性が制御されていることを示唆している。実際に、PI(3)Pに結合するFYVEdomainやPX domainをもつ蛋白質がゲノム上に多数存在しているので、それらの遺伝子ファミリーでカーゴ蛋白質の輸送選択性を制御していると考えられる。
抗原吸入誘発喘息反応および気道過敏性亢進における気道炎症細胞の

アスカリス自然感作緬羊に抗原を吸入暴露すると、約70%の緬羊では即時型の気道収縮反応(IAR)と遅発型の気道収縮反応(LAR)の両者がみられた(Dual Responder)が、残りの30%ではIARのみがみられた(Single Responder)。Dual Responderでは抗原吸入暴露8時間後にメサコリンに対する気道反応性亢進(AHR)と好中球および好酸球の気道への集積が認められたが、Single Responderでは軽度の気道反応性亢進と好中球の集積が認められたのみであり、LARおよびAHRの発現には好酸球の気道への集積が不可欠と考えられた。更に、Dual Responderに脂質酸化酵素阻害剤U-74006Fおよび特異的好酸球遊走阻止剤TAK-225を前投与すると、気道への好酸球の集積を阻害し、気道収縮反応、特にLARを顕著に抑制した。U-74006FはAHRを抑制しなかったが、TAK-225は抑制を示した。以上より、抗原吸入誘発喘息反応には脂質酸化がその反応経路に重要に関与しており、特に気道への好酸球浸潤と密接に関連して、LARの発現に寄与していると考えられた。また、抗原吸入暴露8時間後のAHRにも一部好酸球が関与していると考えられた。次に実際の気管支喘息患者において気道の炎症細胞、特に好酸球が病態にどの程度関与しているかについて誘発喀痰法を用いて検討した。気管支喘息患者では喀痰中の好酸球およびECPは重症度に応じて有意差をもって高値を示し、発作点数と有意な正の相関、起床時のピークフロー値と有意な負の相関がみられたことから、気管支喘息の重症度および気道収縮に活性化された好酸球が重要に関与していることが示唆された。Ascaris自然感作緬羊喘息モデルを用いて、Ascaris抗原吸入暴露にて2相性、すなわち即時型および遅発型の気道収縮反応を示す緬羊を用い、Lipid peroxidationの強力な阻害剤であり、好酸球の遊走を阻止する21-aminosteroid nonglucocorticoidの一つであるU74006F(Lazaroid)および詳細な機序は不明であるが、特異的に好酸球の遊走を阻止するTAK-225の抗原誘発喘息反応、抗原暴露8時間後のメサコリンに対する気道反応性および気管支肺胞洗浄液中の炎症細胞に対する効果について検討した。両薬剤の投与にて、抗原吸入暴露による好酸球の気道への集積を抑制し、遅発型の気道収縮反応を有意に抑制した。また、即時型の気道収縮反応も軽減させた。U74006Fは抗原暴露8時間後のメサコリンに対する気道収縮反応の亢進に対しては影響を及ぼさなかったが、TAK-225はこれを有意に軽減させた。以上より、抗原吸入誘発気道収縮反応、特に遅発型反応には好酸球が密接に関与していることが示唆された。しかしながら、遅発型反応時の気道反応性亢進に対してはその関与は疑問であると考えられた。アスカリス自然感作緬羊にアスラリス抗原を吸入暴露すると、約70%の緬羊では暴露15分後にピークとなる即時型の気道収縮反応(IAR)と暴露6時間後から認められる遅発型の気道収縮反応(LAR)の両者がみられた(Dual Responder)が、残りの30%ではIARのみがみられた(Single Responder)。

Dual Responderでは抗原吸入暴露8時間後にメサコリンに対する気道反応性亢進(AHR)と好中球および好酸球の気道への集積が認められたが、Single Responderでは軽度の気道反応性亢進と好中球の集積が認められたのみであり、LARおよびAHRの発現には好酸球の気道への集積が不可欠と考えられた。次に実際の気管支喘息患者において気道の炎症細胞、特に好酸球が病態にどの程度関与しているかについて高張食塩水吸入誘発喀痰法を用いて検討した。気管支喘息患者では健常人と比較して、誘発喀痰中の好酸球比率および活性化された好酸球から脱顆粒により遊離されたEosinophil cationic protein(ECP)は有意に高値を示し、更に、気管支喘息患者を臨床症状から軽症、中等症、重症の3群に分けると、誘発喀痰中ECP濃度は重症度に応じて有意差をもって高値を示し、発作点数と有意な正の相関、起床時のピークフロー値と有意な負の相関がみられたことから、気管支喘息の重症度および気道収縮に活性化された好酸球が重要に関与していることが示唆され、気道炎症細胞としての好酸球の重要性に関して、これまでの緬羊を用いた喘息モデルでの実験結果と一致すると考えられた。
遺伝子発現心筋L型Ca^<2+>チャネルに対する各種GTP接合蛋白質作用の電気生理学的研究

アフリカツメガエル卵母細胞に、invitro transcription法により作成したcRNAよりウサギ心筋L型Ca^<2+>チャンネルと各種G蛋白質並びに対応する受容体を発現させた。この卵母細胞を用い、発現させるCa^<2+>チャネルを通るBa^<2+>電流を二重微小電極膜電位固定法を用いて計測、各G蛋白質がBa^<2+>電流にどの様な影響を及ぼすかを観察した。G_<i1α>,G_<i2α>,G_<i3α>,G_<o1α>,G_<zα>,G_<βγ>,はδオピオイド受容体と共に発現させ、ロイシンエンケファリンによんり活性化させたが、観察した時間内(3分間)では、全てのG蛋白質はBa^<2+>電流に何ら作用を及ぼさなかった。G_<qα>はm_2アセチルコリン受容体とともに発現させ活性化を試みたが、膜電流の変化は一定の傾向を示さなかった。これは、同受容体の活性化に伴い卵母細胞の内在性Cl^-チャネルが活性化されたためと考えられた。また、G_<sα>とβ2アドレナリン受容体を発現させた卵母細胞にイソプロテレノールを作用させたが、この場合も膜電流の変化は認められなかった。以上より、アフリカツメガエル卵母細胞発現系では、各種G蛋白質はL型Ca^<2+>チャネルに、少なくとも直接的には、何ら影響を及ぼさないことが明らかとなった。特にG_εが作用を及ぼさなかったことは、これまでの報告とは異なっており、今後の詳細な検討を要すると考えられた。この実験結果は、別に行っているN型Ca^<2+>チャネルとG蛋白質の相互作用の研究とともに、今月中に投稿予定である。
チログロブリン分子内における甲状腺ホルモン合成反応とその制御

本研究では甲状腺の特異的タンパク質チログロブリン(Tg)分子のホルモン合成に関連する構造的特性を調べ,効率の高いホルモン合成機構を明らかにしようとした. Tgは330Kサブユニット2つからなる球状タンパク質である.チロシン残基のヨウ素化, 2個のヨウ素化チロシンのカップリングによりドナーヨードチロシン残基からヨードフェニル基がアクセプターヨードチロシン残基に移り,ホルモン残基となる.アクセプター残基はサブユニットあたり数個しかなく,数種の動物につき,一次構造上の位置が特定されている.我々はドナー残基がデヒドロアラニン(△Ala)残基としてペプチド中に保持されることを4アミノフェノールによる△Alaの特異的反応により証明したが,本研究では同じ反応を利用してウシTgの△Ala残基をラベルした後,リジルエンドペプチターゼによる部分水解物から,固定化反応試薬によって△Ala残基を含むペプチドのみを回収し精製した後,エドマン分解によりアミノ酸配列を調べた.その結果, 1)精製したペプチドの中3個はN末端から900-1500番に含まれる3ケ所のアミノ酸配列に, 2)1個はN端から始まるアミノ酸配列に相当した. 3)アミノ酸配列,あるいは組成の分析により, N端から5番のチロシンを含む4個のドナーチロシン残基が推定された.3)2次構造予測および親水性分析の結果,ドナー残基もアクセプター残基同様,分子表面付近に存在すると推定され,ホルモンが分子表面の特定の位置にあると言う電顕観察と符合した.一方,放射性ヨウ素でラベルしたマウスTg部分水解ペプチドのSDS-PAGE分析,およびヨードアミノ酸分析,さらに,培養ブタ甲状腺細胞を用いた実験で,これらアクセプター,ドナー残基が特にヨウ素化されやすいことが示され,ホルモン生成に必要な高次構造の存在,およびそれを維持する1次構造の特異性が推測された.本研究では甲状腺の特異的タンパク質チログロブリン(Tg)分子のホルモン合成に関連する構造的特性を調べ,効率の高いホルモン合成機構を明らかにしようとした. Tgは330Kサブユニット2つからなる球状タンパク質である.チロシン残基のヨウ素化, 2個のヨウ素化チロシンのカップリングによりドナーヨードチロシン残基からヨードフェニル基がアクセプターヨードチロシン残基に移り,ホルモン残基となる.アクセプター残基はサブユニットあたり数個しかなく,数種の動物につき,一次構造上の位置が特定されている.我々はドナー残基がデヒドロアラニン(△Ala)残基としてペプチド中に保持されることを4アミノフェノールによる△Alaの特異的反応により証明したが,本研究では同じ反応を利用してウシTgの△Ala残基をラベルした後,リジルエンドペプチターゼによる部分水解物から,固定化反応試薬によって△Ala残基を含むペプチドのみを回収し精製した後,エドマン分解によりアミノ酸配列を調べた.その結果, 1)精製したペプチドの中3個はN末端から900-1500番に含まれる3ケ所のアミノ酸配列に, 2)1個はN端から始まるアミノ酸配列に相当した. 3)アミノ酸配列,あるいは組成の分析により, N端から5番のチロシンを含む4個のドナーチロシン残基が推定された.3)2次構造予測および親水性分析の結果,ドナー残基もアクセプター残基同様,分子表面付近に存在すると推定され,ホルモンが分子表面の特定の位置にあると言う電顕観察と符合した.一方,放射性ヨウ素でラベルしたマウスTg部分水解ペプチドのSDS-PAGE分析,およびヨードアミノ酸分析,さらに,培養ブタ甲状腺細胞を用いた実験で,これらアクセプター,ドナー残基が特にヨウ素化されやすいことが示され,ホルモン生成に必要な高次構造の存在,およびそれを維持する1次構造の特異性が推測された.
網膜視細胞の形態分化にかかわる遺伝的背景の培養による解析

網膜視細胞の特異な構造がどの様な分子機構によって成立するかを知る事を目的として、ラット網膜の細胞培養を行ない、視細胞の分化過程を異なるラットの系統で比較、解析した。まず、ラットの2系統で生後発生を組織化学的手法により調査した結果、生後発生中のラット網膜には異所性杆状体視細胞が存在することが明らかになり、この細胞の形態はWistar系アルビノラット(WIS)とLong-Evans系ラット(LE)で質的に異なることがわかった。LEでは、異所性視細胞に外節や終末構造が認められ、ロドプシンは外節に一致して局在するが、WISでは、外節や神経終末など細胞の形態的極性は見られず、より未分化である。この2系統の新生仔網膜を細胞培養して比較すると、培養視細胞はそれぞれの系統の異所性視細胞の分化度にきわめてよく対応して培養下でも分化することが明らかになり、これによって視細胞分化の系統による違いが遺伝的な背景をもつものであり、これを培養系で解析する可能性が開けた。これらの違いが、視細胞そのものの差であるのか、あるいはこれに作用する細胞の差によるのか、さらに培養系で解析を進めている。網膜の培養と並行して松果体の培養を行ない、これまで哺乳類松果体には存在しないとされていた視物質ロドプシンを産生する細胞が培養条件下では出現することを発見した。また、ロドプシン産生細胞の出現は微量の神経伝達物質ノルエピネフリン(NE)の添加によって特異的に抑制されることが明らかになった。同じ現象が網膜視細胞の場合に見られるかどうかを培養系で調べた結果、GABA性網膜神経細胞は影響を受けないような濃度のNE存在下で視細胞の出現が抑制されることが明らかになり、松果体と共通の視細胞の分化調節機構の存在が示唆された。これらの研究成果によって、アミン性伝達物質による視細胞分化の分子調節機構を解析する実験系がほぼ整ったといえよう。視細胞には光受容細胞として特殊な形態の分化がみられ、組織内では明らかな極性をもっている。視細胞が発生の過程でこの極性を獲得するメカニズムを知る目的で、発生中のラットの視細胞を免疫組織化学的に観察するとともに、細胞培養系のさまざまな条件下で視細胞がどのような形態を示すかを調べた。その結果、1.Wistar系とLong-Evans系では培養された視細胞の形態に違いがある。オプシン抗体をもちいた免疫電顕の結果、Long-Evansでは層板構造をもつ未熟な外節が形成されオプシンはこれに一致して局在するが、Wistarではこのような構造はなく多数の長い神経様突起をもち、またオプシンの分布にも局在がみられず細胞体や突起全体に認められた。2.以上のような培養系での差異が果して発生中の網膜にもあるのかどうかを調べるために、2つの系統のラット網膜の生後発生過程を視細胞のマーカーであるオプシンの免疫電顕と5'ーヌクレオチダーゼ活性の酵素電顕によって調べた。その結果、発生中の網膜にみられる異所性の視細胞(内顆粒層に迷入した視細胞)に明らかな違いを認めた。すなわち、Long-Evansでは異所性視細胞は不完全ながら外節を有し、オプシンがこれに一致して局在するのに対して、Wistarでは外節様構造はなく、またオプシンも細胞膜全体にみられた。3.視細胞は支持細胞であるMuller細胞に包まれているが、Muller細胞のマーカーであるSー100タンパクの抗体で生後発生を調べたところ、両系統のラットで染色性や細胞の形態に全く差異はなかった。

4.オプシン抗体によるImmunoblottingで調べた結果でも両系統で差はなかった。5.ラット網膜と平行してニワトリ網膜の正常発生を、視物質イオドプシンの免疫電顕及び視細胞とシナプスを形成する水平細胞のマーカーであるGABAの抗体で調べ、多くの新知見を得た。前年度の研究実績をもとに、網膜視細胞分化のラット系統による違いを、特に、グリア細胞の関与について、また神経伝達物質にも注目して検討を行なった。2系統のラットで正常視細胞と異所性視細胞の形態を分析し、さらに網膜グリア細胞であるミュ-ラ細胞の形態に関しても特異抗体(S-100タンパク)による染色を行なって両系統で比較した。発生過程のミュ-ラ細胞の形態と分布に関しては、特に目立った差は認められなかった。また、細胞培養系で視細胞分化の因子を解析するためには、細胞タイプを選別して培養することが重要であるので、これまでのコラ-ゲン基質に替えてPoly-L-Lysineを用い、グリア細胞をほとんど含まない培養系を得た。この培養系では、系統による違いが視細胞そのものに起因するのか、あるいはグリア細胞など他のタイプの細胞の違いによる2次的な結果によるのかを知る事ができよう。現在の培養条件では1週間以上視細胞を維持することが困難であり、培地の改良などを含めて実験条件の検討を続けている。網膜の培養と並行して松果体の培養を行ない、これまで哺乳類松果体には存在しないとされていた視物質ロドプシンを産生する細胞が培養条件下で出現することを発見した。また、ロドプシン産生細胞(「松果体性視細胞」)の出現は微量の神経伝達物質ノルエピネフリン(NE)の添加によって特異的に抑制されることが明らかになった。同じ現象が網膜の視細胞の場合に見られるかどうかを培養系で調べた結果、GABA性網膜神経細胞は影響を受けないような濃度のNE存在下で視細胞の出現が抑制されることが明らかになり、松果体と共通の視細胞の分化調節機構の存在が示唆された。2系統のラットの網膜で、カテコ-ルアミン性神経の分布を調査したところ、発生の初期でその分布にわずかな違いがあることがわかったので、さらにその詳細を電顕で調査しつつある。
熱帯林とともに住む住民のヒューマンセキュリティーに関する研究

西アフリカ・ギニアにおいて森林からの薪と木炭の利用は日常の生活エネルギーを得るための重要な資源である。薪や木炭の利用を首都コナクリからセリンバラまでの約1000kmについて調べた。その結果、村人は全ての樹種を薪や木炭として利用していた。薪は自家消費だけでなく、生業分業した村(どの村も)で一束1000FGから2000FGで売られていた。世帯では1日に直径5cm-10cmの薪を5本から10本消費している。また、木炭は家計にとっての重要な副収入で20Kgの袋が5000FGから18000FGの価格でギニア全土に売られていた。薪の消費量は19.59m3/年/世帯に消費される。この薪を1ヘクタールの森林から採取するとしたら、持続的な薪の供給は対象の森林の成長量が19.59m3でなければならず、普通の森林の成長量は10m3/year以下であり、より広い森林が必要となる。生活の安全保障をかなえるためにな、荒廃した森林を修復し、持続的に薪・木炭の利用を可能としなければならない。また、ラオスでの研究では人類は自然とともに暮らしており、その環境から切離して健康や生存を考えても意味がない。Human Securityとは、Human and his environmental securityである、熱帯モンスーン地域に住む人たちは、その環境を改変し、熱帯モンスーン林を利用して焼畑をするか、あるいは、開墾して天水田に依存し、近年では灌漑水田を作り生活している。しかし、それらは原風景である熱帯モンスーン林とは切っても切れない関係にある。そのような環境と生業の中で熱帯アジアのモンスーン地域に住む人びとの健康と疾病のプロフィールが形成される。この地域は近年、急激に変化しており、その中での健康と生存への影響をみる視点が大切である。以上から生態資源を持続的に利用することにおいて地域住民の人間安全保障が確立される。ギニア南部の森林地域に点在する中・小規模の森林保護区を訪れ、森林・野生生物の保全状況と、近隣での人々の資源利用の相互関係についての概要を把握した。そのうちの数ヶ所で、人々の歴史的な森林利用と現在の森林構成とのあいだにバオバブとセイバなど樹種選択に象徴的植林の関連が見られ、今後の集中調査の可能性を認識することが出来た。森林資源に対して地域住民が盗伐を行い、燃材として利用することによる過度の伐採が見られ、森林の荒廃が顕在化しつつあることが認められた。東チモールではコーヒー栽培の現状とその歴史に関する調査をおこない、独立後の地域住民の生活にとって重要な生業の一つとなっていることが明らかになった。ラオスのサバナケット周辺地域ならびにタイのコンケン地域在住高齢者それぞれ約300名について、疾病の既往、日常生活機能、ライフスタイル、生活価値観、神経行動機能、血液検査を実施した。その結果、当該周辺地域では、アジアの他の地域以上に糖尿病の有病率が高いことが明らかとなり、その原因と生態学的関連について引き続き調査を継続する。ラオス・サバナケット県・ソンコン郡・ラハナム地区全6村(人口約4000名)について村人を集め、ここ20年間の土地利用の変化、森林の減少、人口増加、人口移動、保健問題、環境問題にかかわる迅速調査を実施した。1990年以降、生活水準は上昇し、人口も増加していたが、森林は減少していた。また、1村について各世帯の水容器中の蚊の幼虫調査を実施し、デング熱の発生リスクを検討した。

アフリカにおいてはケニア(ナイロビ・中央医学研究所とタベタ>とタンザニア(モシ・キリマンジャロクリスチャン医療センター、ダルエスサラーム・アムレフ、モロゴロ・JICA保健強化プロジェクト・イファカラ保健研究センター)を訪問し、来年度以降の共同研究(住血吸虫、マラリア、HIV/AIDS)について協議した。ラオス・ナムター県のナムハー村において生活エネルギー源としての薪炭材の採取・利用状況と家計との関係を調査した。薪炭材は共用林や焼畑跡地から採取するため購入する必要が無く、現在では村民間での採取に関して問題は生じていない。しかし、人口の増加が消費量に影響し、今後無料の生活エネルギー源量の低下が家計に及ばす影響が危倶された。ナムター県からウドンサイ県にかけて、移動焼畑が広く分布し、森林の荒廃が顕著になるに従い、生活水の問題が生じている。サワナケット県の6つの村でDemographic Surveillancc Systemを用いて人口と世帯の変化、生活環境、インフラストラクチャー資源管理などを継続調査している。現在、もっとも問題となっている現象は村人のタイへの移動が頻繁に認められることで、それに伴う村単位のDSSが正確に把握できないため、システムの改良を行っている。ちなみに、既婚女性が産む子供の数は3.2人ほどでこの20年間で一人が生む人数は減少してきている。さらに、ドンバン村では農閑期における成人の栄養状態、時間利用、身体活動量を13世帯の夫婦について調査した。これは身体を中心としてエネルギーと現金の流れを解析する目的である。この村では市場経済との接合が進む中でさまざまな生活財の購入や医療費・学費など公的サービスを受けるためどの世帯も現金収入を得る必要に迫られていることが明らかになった。西アフリカ・ギニアではチンパンジーと地域住民との関係に生態研究所が加わり、研究・保全が研究所の管理下に置かれ、地域住民の抵抗(生息場所の焼畑化)を招く原因となった。地域住民の生活と生物保全の問題として、社会生態学的検討を行った。マダガスカルではワオキツネザルの生態とエコツアリズムとの関係の調査を行った。ワオキツネザルの食料であるタマリンドが枯死してゆく中でエコツアーのための劣化森林の修復が行われ、導入樹木としてルーカエナが植林されたが、これを食したワオキツネザルに脱毛症が起こり、人間が野生動物に病気をもたらせたことが明らかになった。ラオス・ナムター県のルアンナムター市(41戸)とナムハー村(19戸)で家計を調査した。収入の主たるものはルアンナムター市では商業について農業(水稲)であった。ナムハー村では農業(陸稲)と非木材生産物であった。支出ではルアンナムター市では食料についで衣服類で、特徴的な支出は生活水・電気・教育・貯金であった。ナムハー村では衣服類と食料であった。最近ではソーラーパネル利用の家電の購入に支出が増加していた。最近この村では中国からの仲買人が多量の非木材生産物を購入することによって、陸稲の生産量の増加ででなく、森林から過度の非木材生産物採取が行われた結果である。ニューギニア島の固有の疾病はクルー、脳嚢虫症、そして神経難病である。2006-2007年に同地域の調査を行い、神経変性疾患の実態と高齢者の健康度を、本邦高齢者との比較のもとに明らかにした。
NSAIDsによるクロージンファミリーの発現変化とその抗癌作用における役割

我々はNSAIDsの抗癌メカニズムの解明を目指し、DNAチップを用いて、NSAIDsにより誘導される遺伝子を網羅的に同定し、様々な新しいメカニズムを見出してきた。この一連の研究の中で我々は、NSAIDsがクロージン4を誘導すること、及びこの誘導が癌の転移・浸潤の抑制を介して、NSAIDsの抗癌作用に寄与していることを示唆した。クロージン4はタイトジャンクション(TJ)を構成するクロージンファミリーの一つである。TJが癌細胞の浸潤に対するバリアになっていること、及び癌細胞で各クロージンの発現が変化していることなどから、TJが細胞の癌化、及び悪性化と深い関連があることは知られていたが、NSAIDsとTJとの関連を示したのはこれが初めてである。またこれまで癌との関連については、TJの機能面(バリア機能など)に関する研究が多く、クロージンの発現との関連を示した点でも本研究は新しい。一方最近我々は、NSAIDsがクロージン2の発現を逆に抑制すること、及びこの抑制も癌の転移・浸潤の抑制を介して、NSAIDsの抗癌作用に寄与していることを示唆した。今後は、全てのクロージン(24種)を対象に、NSAIDsにより発現が変化するのか、その発現変化が浸潤性、運動性、足場非依存的な増殖など癌の特性、及びTJの機能(癌細胞の浸潤に対するバリア機能など)をどのように影響するのか、及びこれらの癌の特性変化がin vivoにおける癌の増殖、浸潤、転移にどのような影響を及ぼすのかを解析し、NSAIDs、癌の特性、クロージン、3者の関係の全体像を明らかにする。アスピリンに代表される非ステロイド系抗炎症薬(NSAIDs)の長期使用により、多くの癌(大腸癌、胃癌など)の発症リスクが大きく低下することが知られているが、その分子機構は充分に理解されていない。本研究の目的は、クロージン(タイトジャンクション(TJ)を構成する蛋白質群で全部で24種存在する)に着目し、NSAIDsの抗癌作用機構を分子レベルで解析すること、及びクロージンと癌との関連を明らかにすることである。本年度は特にクロージン2について解析した。まず我々は種々のNSAIDsによりクロージン2の発現が強く抑制されることを見出した。この抑制はプロスタグランジン添加により影響を受けなかったので、NSAIDsによるシクロオキシゲナーゼ(COX)阻害非依存の反応である。我々はNSAIDsがAKTのリン酸化を阻害すること、AKTのリン酸化依存に不活性化されるGSK-3betaの阻害剤により、このNSAIDsによるクロージン2の発現抑制が解除されること、GSK-3betaにより分解が促進され、かつクロージン2の遺伝子発現に必要なβカテニンが、NSAIDs依存に減少することを見出し、NSAIDsによるクロージン2の発現抑制が、AKTのリン酸化を阻害、GSK-3betaの活性化、及びβカテニンの分解を介することを示唆した。来年度は、他のクロージン遺伝子に関しても同様の解析を行い、NSAIDsによるクロージン遺伝子制御の全体像を明らかにしたい。
三葉虫の稜線構造と行動特性の関係: 接触感知機能による外界情報認識システムの解明

三葉虫の外骨格上に分布する「稜線構造」について,神経行動学的知見を踏まえて現生甲殻類(イワガニ)の形態および行動観察との比較検討を行い,機能的な役割が接触刺激の配向性の発現であることを明らかにした.イワガニはこの感知機構にもとづいて,動作もしくは静止状況の適・不適を判断している.三葉虫においても,同様の機構にもとづいて,海底面との接触状況の適・不適の監視を行っていたと強く示唆される.三葉虫の外骨格上に分布する外界情報の認知機構「稜線構造」について,神経行動学的知見やアナロジーをもとに,絶滅生物である三葉虫の姿勢や行動生態的側面を,接触感知機能の点から明らかにしてゆくことが本研究の目的である.アナロジーとなる現生甲殻類の「稜線構造」と感覚剛毛の組み合わせが,どのような効果を接触感知機構にもたらすのか,岩礁に生息するイワガニを題材にして感覚剛毛の配列様式と密度分布と行動時の接触刺激との関係を検討した.その結果、骨格へ加わる刺激の方向性を水平もしくは鉛直方向のものとして分画受容する効果があることを見出した.この刺激分画受容は,40μm前後の高さをもつ「稜線構造」に対して,麓に位置する感覚剛毛が屹立して毛先が尾根より突出することで水平成分の接触刺激を受容し、一方では横臥した状態となることで,水平成分の刺激が受容できずに鉛直成分の刺激受容に限定される仕組みとなっていた.水平刺激受容の感覚剛毛の密度分布は偏在性が高く,高い密度の部分は岩礁への隠遁時に接触する外骨格領域と合致する.一方の鉛直刺激受容の感覚剛毛はほぼ一様の密度で分布する.これらの結果を総合すると,水平刺激方向の受容は,逃避中などの動作中における外部周辺物との接触状況をもとに逃避ルートの適不適の判断を,一方の鉛直刺激方向については隠遁姿勢など静止状態の適不適の判断を行っていると示唆される.三葉虫については,ダビュラー(腹側への外骨格折り返し領域)における稜線構造の分布様式が系統分類学的位置に関わらず高い共通性を示すことが知られている.現生アナロジー例を踏まえると,底質などの周囲状況と接触することによって姿勢などの自己受容を行い,呼吸や採餌などの生命維持に不可欠な行動の適不適を判断していることが示唆されることとなる.三葉虫の外骨格上に分布する「稜線構造」について,神経行動学的知見を踏まえて現生甲殻類(イワガニ)の形態および行動観察との比較検討を行い,機能的な役割が接触刺激の配向性の発現であることを明らかにした.イワガニはこの感知機構にもとづいて,動作もしくは静止状況の適・不適を判断している.三葉虫においても,同様の機構にもとづいて,海底面との接触状況の適・不適の監視を行っていたと強く示唆される.三葉虫の外骨格上に分布する外界情報の認知機構「稜線構造」について,神経行動学的知見やアナロジーをもとに,絶滅生物である三葉虫の姿勢や行動生態的側面を,接触感知機能の点から明らかにしてゆくことが本研究の目的である.アナロジーとなる現生甲殻類の「稜線構造」と感覚剛毛の組み合わせが,どのような効果を接触感知機構にもたらすのか,配列様式や密度分布検討を行ったところ,骨格に対して水平,または鉛直方向のみの接触刺激をうけるように差別化する効果があることが明らかとなった.鉛直方向のみの刺激を受容する感覚剛毛は,「稜線構造」の尾根に隠れる配置となり,密度もほぼ一様であるが,水平成分の刺激も受容する感覚剛毛は,「稜線構造」の尾根の高さ超えて斜面上に屹立し,骨格の特定部位に密集する傾向がある.これらの接触受容の差別化を岩礁の隙間への隠遁行動と照合すると,水平成分は逃避中など動作中の外部周辺物と骨格上の局所的に密集する特定部位との接触で逃避ルートの判断を,鉛直成分は隠遁姿勢などの静止状態を骨格上ほぼ一様に分布する感覚剛毛群を介してモニタリングしていることが示唆される.行動中に接触する骨格上の特定部位は,表面形状の突出や強い曲率が認められる.このような部位の「稜線構造」の高さは3050μmで平坦部の数倍となる.三葉虫の外骨格上においても,表面形状の曲率が強い領域では「稜線構造」の高さがほぼ同等の値となり,平坦な領域では低い稜線のみで占められることが,研磨断層の立体復元から明らかとなった.このことは,三葉虫が行動様式において行動中と静止状態において,底質などと自らの姿勢を常に把握し,呼吸や採餌の水流をモニタリングできる機構が備わっていたことを強く示唆していることを意味する.この内容を平成24年度の国際学会で発表する.三葉虫化石に認められる骨格上のみの形質と照らし合わせるアナロジーについては,生物学領域での先行研究による知見に加えて,今回の研究結果をもとに古生物との比較が可能となるレベルに押し進められたことから,今後のスムーズな研究の進行と展開が期待できる結果となっている.

比較対象として設定した三葉虫種3種Eobronteus laticauda(膨らみ弱:弱膨型),Nileus armadillo(中膨型),Stenopareia oviformis(強膨型)の高精度三次元形態立体構築について,比較可能な精度を得るためには想定以上の時間を要したため,現状で完了したものは強膨型種のみである.現在比較可能なものが1件のみであるが,その検討結果は申請時の予測を上回る事象が明らかになり,また極めて判り易い結果となったことから,研究の達成度はおおむね順調に進展していると判断した.室内作業として未完成のEobronteus laticauda(膨らみ弱:弱膨型),Nileus armadillo(中膨型)の高精度三次元形態立体構築の完成を目指してゆく.また,節足動物の行動と接触刺激受容の関係性について,さらに文献調査を行い,外界状況ー刺激受容ー行動発現の関係性の理解を押し進める.これらを平行的に進めることで,予定した化石データとアナロジーデータが完成後,三葉虫の姿勢や行動生態的側面を,接触感知機能の点から明らかにする考察段階へと進む方策である.高精度三次元形態立体構築が未完成のEobronteus laticauda(膨らみ弱:弱膨型),Nileus armadillo(中膨型)については,試料の保存状態が不適当であったという問題があった.立体構築の作業プロトコルについては確立済みである.そこで,三葉虫における骨格形態フォルムと「稜線構造」の対応関係を完成させるべく,試料を補完するために夏期に再度スウェーデンで野外調査を行い予定である.次年度の研究費使用の主眼は,この点を重視してゆく計画である.
中枢神経系におけるCRTH2シグナル系の機能解明

当研究室では、プロスタグランジン(PG)D_2の2型受容体(CRTH2)がPACAPの下流で日内行動リズムの調節に関わることを示し、脳内CRTH2の生理機能を実証した。本研究では中枢神経系におけるCRTH2の機能解明を目的とし、本年度は、主として前年度に得られたLPS誘発性sickness behaviorモデルでの知見をもとに検討を進め、以下の結果を得た。1.LPSによる扁桃体中心核(CeA)の活性化に対するCRTH2の関与は、迷走神経を介した神経経路に非依存的かつ(おそらく)神経細胞等で産生されたPGを介した液性経路に依存的であることを示した。以上の結果から、炎症病態下における脳内CRTH2を介したCeAの活性化機構が初めて明らかになった。2.Sickness behavior発現が知られる担ガンマウスで検討した結果、LPSモデルと同様、強制水泳試験での無動時間の増加や、新奇物体探索行動/社会性行動が減少することを見出した。またCRTH2遺伝子欠損(KO)マウスではこれら情動機能障害が消失することを見出し、特定のsickness behaviorの発現におけるCRTH2の普遍的関与を実証した。3.コルチコステロン(CORT)の慢性投与によるうつ病モデル動物において、強制水泳試験での無動時間の増加に加え、社会性行動の減少も認められることを見出した。またCRTH2-KOマウスでは、他のモデルと同様にこれら情動機能障害が消失することを見出し、CRTH2がうつ病病態の発現にも関わる可能性を示した。4.担ガンモデルにおいて、腫瘍の拡大が進行した後にラマトロバンを腹腔内に単回投与すると情動機能障害が抑制されることを見出した。すなわち、ガン病態下での情動機能障害に対するCRTH2拮抗薬の有用性を実証した。以上、これまでの研究により、CRTH2は炎症やガン、さらにはうつ病などの病態下での"抑うつ性症状の発現"に普遍的に関与する分子であることが示され、本分子がこれら情動機能障害の新たな創薬標的となる可能性が示された。研究代表者が所属する研究室では、神経ペプチドPACAPの遺伝子欠損(KO)マウスにおける日内行動リズム調節障害の分子基盤研究から、本行動制御へのPGD_2のII型受容体(CRTH2)の関与を示し、脳内CRTH2の生理機能をはじめて明らかにした。本研究では中枢神経系におけるCRTH2の機能解明を目的とし、本年度は、以下の結果を得た。1)CRTH2作動薬(15d-PGJ_2、DK-PGD_2)の脳室内投与により自発運動量が減少することを見出したが、DK-PGD_2の作用は溶媒中のDMSO濃度が10%以上の場合に認められることが示された。以上、DK-PGD_2による自発運動量抑制作用は、(DMSOにより影響を受ける)他のシグナル系と協調した結果である可能性が考えられた。2)SHIRPAプロトコルに基づく網羅的行動解析の結果、CRTH2-KOマウスの自発運動活性、運動・感覚機能などは野生型マウスと同様であることが示された。また、本マウスを用いて強制水泳試験を行った結果、無動時間が減少、swimming時間が増加しており、CRTH2とうつ様行動の発現との関連が示唆された。3)CRTH2-KOマウスを用いてlipopolysaccharide(LPS)誘発sickness behaviorの発現を解析した結果、本マウスではLPS誘発の自発運動量、摂食量の減少は保持されていたが、他のマウスとの社会的相互作用の減少が消失していた。さらに、本マウスではLPSで誘発される新奇物体への探索行動の減少も消失していたことから、新奇なモノに対する探索行動の制御におけるCRTH2の重要性が示された。4)神経分化のモデルであるPC12細胞において、15d-PGJ_2がCRTH2を介してNGF誘発のp38 MAPKのリン酸化、神経突起伸展を増強することを示し、神経系細胞におけるCRTH2の機能的発現を実証した。研究代表者が所属する研究室では、神経ペプチドPACAPの遺伝子欠損(KO)マウスが示す日内行動リズム調節障害の分子基盤研究から、本行動調節へのPGD_2のII型受容体(CRTH2)の関与を示し、脳内CRTH2の生理機能を初めて実証した。本研究では中枢神経系におけるCRTH2の機能解明を目的とし、本年度は以下の結果を得た。1.CRTH2-KOマウスは強制水泳試験で無動時間の減少(抗うつ様行動)を示す、という前年度の成果に着目し、尾懸垂試験など4種のうつ/不安様行動評価系による表現型解析を行った。いずれも有意な表現型変化が検出されなかったことから、CRTH2は強制水泳試験で検出可能な特定の情動機能発現に選択的に関与する可能性を示した。2.CRTH2拮抗薬(ラマトロバン等)の末梢あるいは中枢投与がlipopolysaccharide(LPS)末梢投与で誘発される新奇物体探索行動の減少作用に対して完全な拮抗作用を示すこと、CRTH2-KOあるいはラマトロバン投与マウスではLPSによる扁桃体中心核や視床下部室傍核の活性化が障害される一方で延髄孤束核(末梢炎症反応を脳内に伝える中継核)の活性化は保持されることを見出し、LPSで誘発される物体探索行動減少や扁桃体中心核などの活性化における中枢CRTH2の関与(脳内CRTH2の病態的役割)を初めて明らかにした。

3.上記LPSによる新奇物体探索行動の減少の詳細を解析したところ、本表現型は他のLPS誘発行動変化と比較して最もLPSに対する感受性が高く、また持続的な表現型であること、さらにこの行動変化は物体に対する興味・好奇心の減少を反映した表現型であることを示唆する知見を得た。当研究室では、プロスタグランジン(PG)D_2の2型受容体(CRTH2)がPACAPの下流で日内行動リズムの調節に関わることを示し、脳内CRTH2の生理機能を実証した。本研究では中枢神経系におけるCRTH2の機能解明を目的とし、本年度は、主として前年度に得られたLPS誘発性sickness behaviorモデルでの知見をもとに検討を進め、以下の結果を得た。1.LPSによる扁桃体中心核(CeA)の活性化に対するCRTH2の関与は、迷走神経を介した神経経路に非依存的かつ(おそらく)神経細胞等で産生されたPGを介した液性経路に依存的であることを示した。以上の結果から、炎症病態下における脳内CRTH2を介したCeAの活性化機構が初めて明らかになった。2.Sickness behavior発現が知られる担ガンマウスで検討した結果、LPSモデルと同様、強制水泳試験での無動時間の増加や、新奇物体探索行動/社会性行動が減少することを見出した。またCRTH2遺伝子欠損(KO)マウスではこれら情動機能障害が消失することを見出し、特定のsickness behaviorの発現におけるCRTH2の普遍的関与を実証した。3.コルチコステロン(CORT)の慢性投与によるうつ病モデル動物において、強制水泳試験での無動時間の増加に加え、社会性行動の減少も認められることを見出した。またCRTH2-KOマウスでは、他のモデルと同様にこれら情動機能障害が消失することを見出し、CRTH2がうつ病病態の発現にも関わる可能性を示した。4.担ガンモデルにおいて、腫瘍の拡大が進行した後にラマトロバンを腹腔内に単回投与すると情動機能障害が抑制されることを見出した。すなわち、ガン病態下での情動機能障害に対するCRTH2拮抗薬の有用性を実証した。以上、これまでの研究により、CRTH2は炎症やガン、さらにはうつ病などの病態下での"抑うつ性症状の発現"に普遍的に関与する分子であることが示され、本分子がこれら情動機能障害の新たな創薬標的となる可能性が示された。
細胞特異性を規定する転写制御因子研究の推進

「転写制御因子」研究を,より質の高いものとするために,総括班を組織し,以下の活動を行なった。1.公開シンポジウムの開催(名大・豊田講堂.1991年6月22日)長田重一(大阪バイオ),近藤寿人(名大),佐竹正延(京大),高橋直樹(名大),田村隆明(埼玉医大)の代表的演者から,最新デ-タに基づく講演があり,100名を超える聴衆との間で熱のこもった討議が行なわれた。本研究領域のレベルの高さが示された。2.名簿の作製・配布およびニュ-スの編集発行班員間の有効な情報交換,共同研究の実施などを円滑に行なえるよう実施した。ニュ-スは8月,12月,3月に発行され,タイミングのよい情報交換の場として活用された。3.研究中心センタ-の機器整備東北大,九大および基生研に,卓上型超遠心機,DNAサ-マルサイクラ-,顕微鏡などを設置して,センタ-としての充実を図った。4.コンファランスの開催(遠刈田.1991年9月1921日)計画・公募全班員,総括班員に加えて若手の任意出席者多数を加え,総勢60名をこえる出席者によって,日本のトップレベルの研究成果についての発表と討議を行なった。5.若手研究者によるシンポジウム(妙高,1992年2月1921日)班員外の若手任意参加者を含め,40数名が集い,徹底的討議を実施。6.研究成果報告集の編集・発行各班員からの成果報告,publication list並びに代表的論文各1編を印刷・公開した。原著論文は130編をこえる。7.1991年度研究成果の評価および1992年度活動計画の検討総括班会議・幹事会によって討議を行なった。
毛髪を指標試料とし高毒性ダイオキシン類の人体汚染評価法の開発

ダイオキシン類はいずれも強毒性であり、現在の環境レベルの汚染で人体にホルモン的影響を及ぼし、また、生殖障害や免疫抑制などの生体影響を及ぼす可能性があるために、近年、欧米諸国においては積極的に汚染軽減対策が進められている塩素系環境汚染物質である。本研究ではアイソトープ希釈法を組み込んだ毛髪中ダイオキシン類の新規分析法を開発した。本法は毛髪の洗浄・細切、アルカリ分解、ヘキサン抽出、多層シリカゲルカラム精製、アルミナカラム精製および高分解能ガスクロマトグラム・質量分析計による解析から構成されており、pptオーダーの微量分析が可能であり、再現性が良好な方法である。本手法を用いて、一般健常者80名および主要な発生源であるごみ焼却施設の従事者60名から採取した毛髪試料についてダイオキン類汚染状況を調査すると共に、アンケート調査を実施し、これらの結果を踏まえて汚染実態を明らかにした。その結果、毛髪は生活媒体、特に、住居や職場環境の大気汚染を極めて良く反映することが判明した。ごみ焼却施設からダイオキシン類が発生していることは既に明らかにされていたが、施設内環境に関しては全く不明であった。しかし、本研究の成果により施設内環境が一般環境よりも重度に汚染されていること、および職場により汚染が相違することが初めて究明できた。ヒトは毎日多種類の生活媒体を移動しながら生活活動をしており、これらの媒体を通してダイオキシン類汚染を受ける。毛髪はこれらの媒体からの汚染を総合的に評価するための最適な汚染評価試料となる。本研究の成果は今後のダイオキシン類環境汚染対策に極めて有意な基礎的知見となるものと判断される。また、本手法がダイオキシン類以外の環境汚染物質についても適用可能であり、今後の環境汚染研究に貢献できるものと考えられる。ダイオキシン類のポリ塩化ジベンゾ-p-ジオキシン(PCDD)、ポリ塩化ジベンゾフラン(PCDF)およびコプラナーPCB(Co-PCB)は、いずれも強い毒性を有し、現在、世界的に汚染削減が強調されている環境汚染物質である。本研究は広範囲の人から容易に採取可能な毛髪に着目し、これを指標試料としてダイオキシン類による人体汚染評価の確立を目的とした。まず、毛髪洗浄→細切→トエン環流抽出→多層カラム精製→アルミナカラム精製→高分解能ガスクロマトグラフ・質量分析計から構成される毛髪中ダイオキシン類の微量分析法を開発した。この方法により検討した結果、1)毛髪に付着したダイオキシン類は一回の洗浄で十分除去可能である、2)毛髪の断面面よりダイオキシン類は抽出可能であるために細切度より分析値が大きく相違する、3)PCDFの分析妨害物としてシロアリ防除剤のクロルデン類の分離・除去が必要であることが判明した。従って、これらの問題点を考慮して、検討した結果、毛髪一回洗浄→細切→アルカリ分解・抽出→多層カラム精製→黒煙活性炭カラム・HPLC精製→高分解能ガスクロマトグラフ・質量分析計からなるppt(pg/g、10^<-12>g/g)レベルの再現性良好な分析法を確立した。大阪府下在住一般健常者から採取した毛髪中のPCDD、PCDFおよびCo-PCB濃度は、人体脂肪組織中よりも約1オーダー低いものであった。各成分組成を詳細に検討した結果、毛髪中のダイオキシン類は体内経由と生活環境大気経由から由来するものであることが推測された。一方、ダイオキシン類の主要な発生源である一般固形廃棄物焼却場従事者は、一般健常者よりも毛髪中濃度が顕著に高く、発生源職場における汚染実体を初めて明らかにすることが出来た。