hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
舌癌PDXモデルの確立と前臨床応用に関する検討

E-cadheri nの発現も遠隔臓器に播種した癌細胞のcolonizationに必須であることを予期している。以上より、CAFsによりE-cadherinおよびZEB1陽性のpartial EMTを有した癌細胞が誘導され、転移形成能を顕著に亢進することが予期される。舌がん組織の確保ができ次第、すでに多臓器がんで成功している条件下でマウスへの移植実験および線維芽細胞の抽出を行う。
PEM燃料電池における触媒高効率利用のための電極3相界面モデル構築と数値解析

白金の高効率利用に適した触媒層を明らかにすることを目的として、3相界面モデルおよび触媒層モデルを作成し解析を行った。さらに異なる高分子電解質を用いて模擬触媒層を作成し簡易実験を行った。これより、高分子電解質量、空隙率などの触媒層構造が電池性能に及ぼす影響を定量的に明らかにするとともに、高分子電解質中への酸素の溶解度上昇が電池性能向上に著しく寄与し、少ない白金担持量でも高い電池性能を得られる可能性があることを示した。固体高分子形燃料電池(PEFC)の電極触媒層構造と白金利用率の関係を定量的に明らかにし、白金高効率利用のための電極触媒層構造の指針を得るために、簡単化した3相界面モデルおよび触媒層モデルの構築、解析コードの開発を行った。得られた主な知見は以下の通りである。1.白金粒子を担持したカーボン担体の周りを均一な厚みの高分子電解質が覆っている3相界面構造を想定し、高分子膜内の酸素移動およびカーボン担体表面での水生成反応を組み合わせた反応モデルを構築した。さらに、これらが均一に積層された触媒層モデルを作成し、触媒層厚み方向のプロトン、酸素移動も考慮した解析コードを開発した。2.本モデル解析により、白金担持量や触媒層内酸素濃度がカソード内電流、過電圧分布に及ぼす影響を定量的に評価可能であることを確認した。3.触媒層内の酸素および生成水蒸気の移動現象を考慮しない場合、カソード触媒層での過電圧はかなりの高電流密度までほぼ反応律速となっており、今後これらの移動現象を含めた解析が必要である。本解析では、触媒層内での酸素拡散や水の生成・拡散を考慮しておらず、拡散による過電圧の低下がかなりの高電流密度領域まで現れなかった。また、白金高効率利用のための触媒構造の最適化を行うにあたり、酸素、水蒸気の移動現象は触媒層構造の影響強く受けるため、これらの移動現象のさらなるモデル化が必要である。さらに、実際の触媒層をより適切に模擬できる3相界面のモデル化についての検討も重要であると考えられる。得られた主な成果を以下にまとめる。1.本研究で作成したモデルにより、カソード触媒層内のガス濃度、過電圧、電流密度分布を詳細に調べることができ、反応、分極、拡散分極による過電圧低下が評価、および分極曲線の取得が可能であることを確認した。2.触媒層を厚くすると、高分子電解質中の酸素拡散流束が小さくなることにより拡散分極がより高電流密度あらわれること、およびプロトン電導距離が長くなることにより抵抗分極が増大することの正負両面の電池性能に及ぼす影響を明らかにした。3.触媒層空隙率を大きくすると、酸素の触媒層中の有効拡散係数が大きくなることにより触媒層中酸素濃度低下が小さくなること、および有効プロトン電導度が大きくなることにより抵抗分極が増大すること、高分子電解質中の酸素拡散が増大することにより拡散分極が増大することの正負両面の電池性能に及ぼす影響を明らかにした。4.高分子電解質を厚くすると、プロトン屈曲度が小さくなり抵抗分極が小さくなること、および高分子電解質中での酸素拡散抵抗が大きくなることにより拡散分極がより低電流密度で現れることの正負両面の電池性能に及ぼす影響を明らかにした。5.高分子電解質中と触媒層空孔での酸素濃度比(酸素の高分子電解質への溶解度に相当)を大きくすることで反応分極と拡散分極が小さくなるため、少ない白金担持量でも高い電池性能を得られる可能性があることを示した。6.高分子電解質の性質が電池性能に及ぼす影響を調べるためのモデル実験を考案し、異なる高分子電解質を用いたPt網触媒層を作成し実験を行った。
内皮細胞由来過分極因子の精製・同定とその病態生理的意義

血管内皮細胞から、過分極因子(EDHF)が実際に産生されるか否かを検討し、さらにそれを同定することが目的である。種々の平滑筋細胞および血管内皮細胞を単離し、その電気的性質を調べるとともに、血管内皮細胞を種々のagonistで刺激した時の血管平滑筋の膜電位の変化を検討した。ラット大動脈平滑筋細胞(A7r5)は-45mVの静止膜電位を有し、L型Ca電流が同定された。Vasopressin(AVP)はA7r5においてV_1受容体を介して、K電流および非選択性陽イオンチャネルを活性化すること、前者は細胞内IP_3による細胞内Ca増加によるが、後者は別の機構によると考えられた。同様の作用がendothelinにおいても観察された。モルモット肺動脈をコラゲナーゼ処理することにより単離血管平滑筋細胞を作成した。細胞はnoradrenalineにより収縮し、-45--55mVであった。自発的な活動電位の発生は見られなかった。EDHFについての検討はウシ肺動脈内皮細胞のcell lineをまいた記録槽に単離したA7r5あるいはラット肺動脈平滑筋細胞をまき種々のagonist(acetylcholine,bradykinin)を投与し、平滑筋細胞の膜電位に及ぼす効果を検討した。さらにラットの内皮を含む大動脈を摘出し、管腔内に種々のagonistを潅流し、その潅流液を単離血管平滑筋細胞に投与した時の膜電位の変化を記録した。今回用いたagonistおよび平滑筋細胞などの実験条件では、内皮細胞の共存の有無により明らかなEDHFの存在を示唆する所見は得られなかった。今後、実験条件の変更などさらに詳細に検討する必要があると思われた。
政治的価値に関する時系列的研究

本研究は、戦後日本における価値変容を時系列的に分析する。経済発展は、直接民主政の安定をもたらすものではなく、市民文化の発達を媒介変数として相互関係にある。また、経済安定は人々の価値観を変え、物質主義的な価値に重きを置かない社会は低経済成長時代を迎えるという意味で、市民社会の価値観と経済もまた、相互関係にある。価値観研究は、現在に至るまでNPCなど新しい概念も生みながら、各国で繰り返し大規模比較調査が行われている、国際的な関心の高い研究分野である。短期間で大きな経済発展を遂げ、また新聞購読率が伝統的に高く、社会調査開始前に遡及した研究が可能な日本は、研究対象・方法の両面でもっとも本テーマに貢献しうるポジションにある。上記の問題意識に立脚して、本年度は以下の各項目について研究を行った。1.従来のワーキングペーパーを大幅に改訂の上、「戦後日本の価値観変化19452000年--新聞社説を手がかりに」(小林良彰・任ヒョク=ひへん(火)に赤赤=伯編『市民社会における政治過程の日韓比較』慶應義塾大学出版会、2006年所収)として公刊した。同論文については、韓国語訳もまもなく刊行される予定である。3.学会発表・討論を通じて得られた知見をもとに、上記英語論文を改訂の上、現在海外の某学術雑誌に投稿中である。研究期間終了後速やかな公刊を期したい。以上の作業を通じ、国際比較を拡大させる一方で、研究開始時点以前に遡及できないという制約上従来不可能とされてきた時系列比較を可能ならしめたことにより、内外の価値観研究に新しい資料を提供できたものと思料する。また、経済安定は人々の価値観を変え、物質主義的な価値に重きを置きかない社会は低経済成長時代を迎えるという意味で、市民社会の価値観と経済もまた、相互関係にある。とくに上記の通り、短期間で大きな経済発展を遂げた日本は、もっとも貢献しうるポジションにある。国際比較を拡大させる一方で、研究開始時点以前に遡及できないという制約上、従来不可能とされてきた時系列比較を、日本について可能ならしめる本研究は、内外の価値観研究に貴重な資料を提供できるものと期している。●先行文献の渉猟を行った。●1945年8月16日から2000年3月31日までの朝日新聞(東京本社最終版)社説データ、約3万3千件をコード化した。●新聞各社の歴史を研究した結果、朝日と均衡を取るために当初予定していた読売社説は、長期時系列データとしては不適なことが分かった。●統計分析用ソフトSPSSを用いて、時系列分析を行った。●統計解析によって得られた知見を基に、ワーキング・ペーパーを作成した。来年度は、上記ワーキングペーパーを基にした学会・研究会報告を通じて、成果公表の準備を行う。●昨年度作成したワーキングペーパーは、現在慶應義塾大学出版会からの公刊プロセスに入っている。●上記ワーキングペーパーをもとに、研究成果報告を行った。主なものとしては、2004年11月13日に東京大学法学部にて開催された日本政治研究学会研究会における報告「戦後日本の価値観変化1945-2000年」がある。また、価値観研究の第一人者である米国・ミシガン大学のロナルド=イングルハート教授との意見交換も行った。●これらの研究成果報告及び意見交換を通じて得られた知見をもとに、英語論文を作成した。ワーキングペーパーからの主要な修正点は、論文構成を大きく変えたこと、新たにマスコミ関係者に対するインタビュー調査によって得られたデータを加えたこと、異なる統計処理手法を採用したこと、その他が挙げられる。来年度は、上記英語論文をもとに、海外での研究成果報告を行う予定である。

価値観研究は、現在に至るまでNPCなど新しい概念も生みながら、各国で繰り返し大規模比較調査が行われている、国際的な関心の高い研究分野である。短期間で大きな経済発展を遂げ、また新聞購読率が伝統的に高く、社会調査開始前に遡及した研究が可能な日本は、研究対象・方法の両面でもっとも本テーマに貢献しうるポジションにある。上記の問題意識に立脚して、本年度は以下の各項目について研究を行った。1.従来のワーキングペーパーを大幅に改訂の上、「戦後日本の価値観変化19452000年--新聞社説を手がかりに」(小林良彰・任ヒョク=ひへん(火)に赤赤=伯編『市民社会における政治過程の日韓比較』慶應義塾大学出版会、2006年所収)として公刊した。同論文については、韓国語訳もまもなく刊行される予定である。3.学会発表・討論を通じて得られた知見をもとに、上記英語論文を改訂の上、現在海外の某学術雑誌に投稿中である。研究期間終了後速やかな公刊を期したい。以上の作業を通じ、国際比較を拡大させる一方で、研究開始時点以前に遡及できないという制約上従来不可能とされてきた時系列比較を可能ならしめたことにより、内外の価値観研究に新しい資料を提供できたものと思料する。
ヒトデ胚の発生を選択的に阻害する海綿由来成分の探索と発生阻害機構

我々は初期胚発生メカニズムの解明に利用できる阻害剤の開発を目的として,棘皮動物の胚発生を特異的段階で選択的に阻害する物質の探索を行なっている。今回,奄美大島産の海綿Monotria japonicaのメタノール抽出物が,イトマキヒトデ未成熟卵の細胞質を溶解するが卵核胞(細胞核)には影響を与えないことを見出した。この活性を指標として,活性物質の分画・精製を行った結果,monotriajaponide A(1)と命名した新規α,β,γ,δ-不飽和カルボン酸とmonotriajaponides B-D(2-4)と命名した新規環状過酸化物が,既知の環状過酸化物(5)及びα,β-不飽和エステル(6)とともに単離された。これらの化合物の構造は各種スペクトルデータを解析することにより決定し,また化合物2-4のdioxane部分の絶対配置は差NOE及び改良MTPA法を用いることにより3R,4R,6Sと決定した。化合物1-5はそれぞれ50,6.3,6.3,6.3及び13μg/mLでイトマキヒトデの未成熟卵の細胞質を溶解したが,100μg/mLでも卵核胞には全く影響を及ぼさなかった。一方,化合物6は25μg/mL以上の濃度で細胞質及び卵核胞の双方を溶解した。また,化合物1-5のメチルエステル誘導体および化合物3,4のdiol誘導体では100μg/mLでも全く活性を示さなかった。このことから,特異的な発生の発現にはdioxane構造ならびにカルボン酸構造が重要であることが明らかとなった。次に,化合物3および4を用いて,イトマキヒトデ胚の核構造への影響を調べた。イトマキヒトデの未受精卵を核染色蛍光色素Hoechst33342で染色した後,受精させ,二細胞期まで発生させたところで化合物3および4で処理したところ,6.3μg/mL以上の濃度でイトマキヒトデ胚の発生はただちに停止し,細胞質は溶解したが,核の構造には全く変化がなく,鮮やかな蛍光を呈していた。このことから,monotriajaponides C(3)およびD(4)は核に影響を及ぼさない細胞溶解試薬とみなすことができる。この活性を指標として,本海綿(87g)のメタノール抽出物をヘキサン-水で配分した後,ヘキサン可溶性画分(2.4g)をODS及びシリカゲルカラムクロマトで分画したところ,monotriajaponide A(1; 1.0 mg)と命名した新規α,β,γ,δ-不飽和カルボン酸とmonotriajaponide B(2; 4.9 mg),C(3; 548 mg),D(4; 510 mg)と命名した新規環状過酸化物が,既知環状過酸化物5(25 mg)及び既知α,β-不飽和カルボンエステル6(90 mg)とともに単離された。以上のことから,minotriajaponide A-D(1-4)は核に影響を及ぼさない細胞溶解試薬として期待される。

また,化合物1-5のメチルエステル誘導体および化合物3,4のdiol誘導体では100μg/mLでも全く活性を示さなかった。このことから,特異的な発生の発現にはdioxane構造ならびにカルボン酸構造が重要であることが明らかとなった。次に,化合物3および4を用いて,イトマキヒトデ胚の核構造への影響を調べた。イトマキヒトデの未受精卵を核染色蛍光色素Hoechst33342で染色した後,受精させ,二細胞期まで発生させたところで化合物3および4で処理したところ,6.3μg/mL以上の濃度でイトマキヒトデ胚の発生はただちに停止し,細胞質は溶解したが,核の構造には全く変化がなく,鮮やかな蛍光を呈していた。このことから,monotriajaponides C(3)およびD(4)は核に影響を及ぼさない細胞溶解試薬とみなすことができる。
ベンケイソウ科の新分類体系の構築にかかわる分類学的研究

マンネングサ亜科の多様化のひとつの中心であるアジア産の所属について初めて分子遺伝学的な解析を行ない、その結果にもとづく論文をSystematic Botany 29(3)(2004)に発表した。さらに、その後明らかになった東アジア特産属Kungiaの分子遺伝学的位置について、ハンブルクで行われた国際多肉植物学会で口述発表した。それらの成果は、まもなく刊行されるK.Kubitzki (ed.), The Families and Genera of Vascular Plantsに、J.Thiedeが書くことになっている。本研究によってベンケイソウ科は単系統群であり、クラスラ亜科とベンケイソウ亜科に2分され、リュウキュウベンケイソウ群を分った後に、東アジアに分布の中心をもつHylotelephium, Orostachysなどの属を含む一群が分れ、残りの一群から新旧両世界に分布する多様な属が派生分化したことが支持されることが判明した。分子系統樹を反映した分類体系を構築する過程で、イワレンゲ属Orostachysは3つの単系統群の複合産物であることが判明した。その1群はKungiaとして、独立の属とすることが適切である。他の2群のうちの1群はベンケイソウ属Hylotelephiumと単系統群となることが判った。この群にOrostachysのタイプを含むため、タイプを変更してOrostachysという属名を保留するか、発表年の新しいHylotelephiumをOrostachysの異名とするか、しなくてはならなくなり、国際植物分類学会連合誌Taxonにタイプ種の変更をともなう提案として発表を準備している。1)ベンケイソウ科マンネングサ亜科、特にTelephium Cladeについて、指導する大学院生黛新造と共に、葉緑体DNAのtranFとtranLのnoncoding region及び核DNAのnoncoding regionであるITSを解析して系統解析を行った。得られた成果は論文として国際学術誌に投稿し、受理された。2)中国・ヒマラヤに特産するマンネングサ属(Sedum)オレアデス節(Oreades)の諸形態、特に種子の断面構造及び種皮の微細形態を走査型電子顕微鏡やミクロトームにより作成した切片で観察し、比較した。3)マンネングサ属(Sedum)のうち、最も派生的な種が中心である北アメリカ産の種の分類学的妥当性を形態学的に検討中である。この検討の過程で明らかにすることができたコゴメマンネングザについては論文とし専門誌に発表した。4)マンネングサ属(Sedum)及びイワベンケイ属(Rhodiola)の染色体数の異数性と形態分化の関係を解析結果をまとめた論文を現在まとめている。5)アジア産ベンケイソウ科に属する分類学上問題のある種について、分類学上の位置を正すことを目的として、可能な限りの分析を行った。この研究の過程でリュウキュウベンケイソウ属について明らかにすることができた知見を論文として専門誌に発表した。また、Kungia属の正体と系統分類学上の位置については、日本植物分類学会にて口頭発表を行った。マンネングサ亜科の多様化のひとつの中心であるアジア産の所属について初めて分子遺伝学的な解析を行ない、その結果にもとづく論文をSystematic Botany29(3)(2004)に発表した。それらの成果は、まもなく刊行されるK.Kubitzki(ed.), The Families and Genera of Vascular Plantsに、J.Thiedeが書くことになっている。本研究によってベンケイソウ科は単系統群であり、クラスラ亜科と

ベンケイソウ亜科に2分され、リュウキュウベンケイソウ群を分った後に、東アジアに分布の中心をもつHylotelephium, Orostachysなどの属を含む一群が分れ、残りの一群から新旧両世界に分布する多様な属が派生分化したことが支持されることが判明した。分子系統樹を反映した分類体系を構築する過程で、イワレンゲ属Orostachysは3つの単系統群の複合産物であることが判明した。その1群はKungiaとして、独立の属とすることが適切である。他の2群のうちの1群はベンケイソウ属Hylotelephiumと単系統群となることが判った。この群にOrostachysのタイプを含むため、タイプを変更してOrostachysという属名を保留するか、発表年の新しいHylotelephiumをOrostachysの異名とするか、しなくてはならなくなり、国際植物分類学会連合誌Taxonにタイプ種の変更をともなう提案として発表を準備している。
前立腺癌の分子生物学的病期診断の研究

1.前立腺癌の前立腺外浸潤を予測する可能性を画像診断、血清PSA値、Gleason score、PCR法を用いて検討した結果、唯一PSM-PCR法のみが前立腺外浸潤を有意に予測できた。2.我々はPCRの条件を工夫し、偽陽性のないことと十分な再現性を確認し、従来の画像診断法に比較して高感度の検出法で、より正確に病期診断が可能であることを明らかにした。本法は、根治的前立腺摘除術の必要な患者の選択に有用な検査法となる可能性を示唆している。4.通常の病理学的に前立腺癌リンパ節転移を認めない23例において、4例にPSMmRNA、3例にPSAmRNAが検出された。病理組織学的に検出困難な前立腺癌のリンパ節転移への微小転移が存在することが示唆され、RT-PCR法による検索が、従来の病理組織学的検討よりもリンパ節転移の検出感度に優れていることが示された。5.リンパ節でのPSM-PCRの陽性患者は陰性患者に比較して有意にBiochemical recurrenceのない期間が短かった。病理学的に前立腺癌リンパ節転移を認めない症例でもPCR法で検出されるリンパ節微小転移のある患者は術後治療の必要性があることを示唆している。【対象】根治的前立腺全摘術を施行した29例の手術時に選択した210個のリンパ節とした。【結果】通常の病理学的に前立腺癌のリンパ節転移と診断した6例においてnested RT-PCBによりPSA,PSMmBNAが検出された。さらに病理学的に前立腺癌転移を認めない23例において、4例にPSMmRNA,3例にPSAmRNAが検出された。残りの19例においては、病理学組織学的検討とnested RT-PCRにてそれぞれ前立腺癌細胞とPSA,PSMmRNAの発現とを認めず、リンパ節転移なしと診断した。
使用依拠モデルに基づく萌芽的構文・橋渡し的構文の創発に関する文法研究

平成30年度は研究課題として、橋渡し的構文としての「無生物主語構文」を考察対象とし、創発の仕組みの解明を中心に行った。本年度の研究計画として、(1)構文ネットワークの観点から、使役構文から無生物主語構文を経てセッティング主語構文までが勾配を示す連続体であることを実証すること、(2)これらの構文の仮定される創発順序にしたがって、無生物主語構文の創発のプロセスはどのような認知操作によって動機付けられているのかを明らかにすること、以上2点の解明を目指した。本年度の研究成果は以下の通りである。研究計画(1)について、無生物主語構文は使役構文とセッティング主語構文の間を結ぶ「橋渡し的構文」として機能することが明らかとなり、これら3つの構文は1つの「構文的家族体」を形成していることも明らかとなった。この成果の一部は10th International Conference on Construction Grammar(第10回国際構文文法会議)の研究発表にて公表し、その後、加筆・修正をして論文化し、国内の研究書の論文として投稿中である。他方、研究計画(2)について、これら3つの構文は複数の部分からなる概略的フレーム知識を共有しつつも、構文ごとに活性化させる部分が少しずつ異なることで、構文ネットワーク上、連続したカテゴリーを形成しているが、無生物主語構文はこの活性度に関して「隠喩」や「換喩」という認知操作が関与することで創発したものであることが明らかとなった。この成果の一部は日本認知言語学会第19回全国大会の研究発表にて公表し、その後、加筆・修正をして論文化し、同学会の論文集に投稿、印刷中である。また、前年度の研究として、主題非明示型結果構文の初出時期の特定が遅れていたが、本年度の調査により明らかとなった。この成果は国内学会の雑誌(査読付き)に投稿し、平成31年3月に公刊された。研究実績の概要でも報告した当該年度の2点の研究計画は、おおむね順調に進展し、研究成果の一部を国際学会、国内学会の研究発表で公表した。また、これらは既に論文として投稿中である。また、前年度から積み残しとなっていた研究課題は、本年度の研究の遂行により、解明された。これに関する研究成果は平成31年3月に論文として公刊された。次年度は本研究課題の最終年度に当たるため、前年度と本年度の研究成果を基に、萌芽的構文・橋渡し的構文の創発の認知メカニズムについて、使用依拠モデルの観点から構文ネットワークと関連づけて検証し、総括する。この研究成果は国際学会・国内学会での研究発表や論文投稿などを通じて広く公開できるように目指す。初年度である平成29年度の研究課題として、萌芽的構文・橋渡し的構文である「主題非明示型結果構文(Implicit Theme Resultative Construction)」を考察対象とし、創発の仕組みの解明を中心に取り組んだ。当該年度の研究計画として、(1)この構文の初出時期を特定するということ、(2)この構文は萌芽的構文として結果構文と中間構文の特性の一部を継承する生産性の低いものであるが、両構文が融合することによって創発した可能性が指摘されており、結果として橋渡し的構文となるこの構文の融合過程にはどのような認知操作が関与しているのかを明らかにすること、(3)この構文が独立した萌芽的構文だとすれば、どのような独自の認知操作が関与しているのかを明らかにすること、以上3点の解明を目指した。これに対する研究実績として、研究計画(2)及び(3)の観点については、まず、主題明示型結果構文が萌芽的構文であることを確認した上で、この構文は、Langacker (2009)の認知文法のカテゴリー化の枠組みに基づいて、隣接しているより大きく確立した言語単位である結果構文と中間構文から換喩(metonymy)という認知操作を通じて増幅的(augmentative)拡張により創発し、橋渡し的構文となったものであることを明らかにした。また、その拡張によって自ずから生じるこの構文独自の認知操作について、認知ドメインのシフトなどが関与していることを明らかにした。この研究実績の中間報告として、14th International Cognitive Linguistics Conferenceの研究発表にて公表した。一方、計画(1)の主題非明示型結果構文の初出時期の特定については、やや遅れている。目安はついているものの、確実な経験的証拠を得てから報告する必要があると考えているからである。研究実績の概要でも報告したように、3点掲げた当該年度の研究計画のうち、研究課題(2)及び(3)は順調に進み、研究成果の一部を国際学会で発表した。さらに研究成果を広く公開するために、論文投稿などによる公表が必要であるが、この点は今後行う予定である。また、研究課題(1)はやや遅れている。研究実績の概要でも述べたように、目安はついているものの、確証を得てから報告する必要があると考えているからである。この研究課題についても、結果が出次第、公表が必要であると考えている。研究計画(1)について、無生物主語

構文は使役構文とセッティング主語構文の間を結ぶ「橋渡し的構文」として機能することが明らかとなり、これら3つの構文は1つの「構文的家族体」を形成していることも明らかとなった。この成果の一部は10th International Conference on Construction Grammar(第10回国際構文文法会議)の研究発表にて公表し、その後、加筆・修正をして論文化し、国内の研究書の論文として投稿中である。他方、研究計画(2)について、これら3つの構文は複数の部分からなる概略的フレーム知識を共有しつつも、構文ごとに活性化させる部分が少しずつ異なることで、構文ネットワーク上、連続したカテゴリーを形成しているが、無生物主語構文はこの活性度に関して「隠喩」や「換喩」という認知操作が関与することで創発したものであることが明らかとなった。この成果の一部は日本認知言語学会第19回全国大会の研究発表にて公表し、その後、加筆・修正をして論文化し、同学会の論文集に投稿、印刷中である。また、前年度の研究として、主題非明示型結果構文の初出時期の特定が遅れていたが、本年度の調査により明らかとなった。この成果は国内学会の雑誌(査読付き)に投稿し、平成31年3月に公刊された。研究実績の概要でも報告した当該年度の2点の研究計画は、おおむね順調に進展し、研究成果の一部を国際学会、国内学会の研究発表で公表した。また、これらは既に論文として投稿中である。また、前年度から積み残しとなっていた研究課題は、本年度の研究の遂行により、解明された。これに関する研究成果は平成31年3月に論文として公刊された。平成30年度の新たな研究課題として「橋渡し的構文としての「無生物主語構文」の創発の仕組みの解明」に取りかかる。また、これと並行して、平成29年度中に終えるはずだったやや遅れいてる研究課題(1)については、研究を速やかに遂行し、成果をまとめられるように努める。研究成果が上がっている研究課題(2), (3)についは、より広く成果を公表できるよう務める。次年度は本研究課題の最終年度に当たるため、前年度と本年度の研究成果を基に、萌芽的構文・橋渡し的構文の創発の認知メカニズムについて、使用依拠モデルの観点から構文ネットワークと関連づけて検証し、総括する。この研究成果は国際学会・国内学会での研究発表や論文投稿などを通じて広く公開できるように目指す。研究計画の若干の遅れに伴い、当該年度の経費を次年度使用額として繰越すこととなった。この繰越し金はやや遅れている研究計画の遂行のために使用する予定である。また、次年度分として請求した助成金は、主として次年度の研究計画の遂行のために使用する計画である。当該年度の研究は順調に遂行され、研究経費も研究遂行のために適正に使用されているが、次年度使用額として242円が生じた。この額は最終年度となる次年度の研究遂行の物品費として使用することを計画している。
インフルエンザ治療薬のシアリダーゼ阻害効果に着目した腎細胞癌の新規治療法の開発

細胞表面を覆う多くの糖鎖の末端はシアル酸が占めており、その生理機能はシアル酸転移酵素とシアリダーゼによるシアル酸脱離によって制御される。これまでの解析から、シアリダーゼは癌の増殖・転移の促進に働き、癌細胞の制御に重要な分子であることが明らかになっている。また、我々の解析から、このシアリダーゼは腎癌患者組織で増加・活性化しており、シアリダーゼが新たな治療標的になり得ると考えられた。そこで、本研究では腎細胞癌のシアリダーゼを標的とした抗腫瘍効果を明らかにすることを目的とし、インフルエンザ治療薬のシアリダーゼ阻害作用に着目した解析を進めている。これまでに、二種類のシアリダーゼ阻害剤を用いた、種々の腎癌細胞株における細胞毒性試験を行った。その結果、高濃度シアリダーゼ阻害剤の添加培養条件下においてのみ細胞毒性を示し、低濃度の添加条件では増殖および形態的変化を認めず、阻害活性は低いことが明らかになった。この原因の一つとして、単層培養による癌細胞の増殖抑制試験ではその阻害効果が得られにくいことが示唆され、移植モデルによる解析を行う必要が考えられた。そこで他機関にもご協力頂き、腎癌細胞株のマウス皮下移植モデルを用いたシアリダーゼ阻害剤による腫瘍縮小効果の解析を検討している。また、シアリダーゼ阻害剤による増殖阻害活性が低い原因として、シアリダーゼ阻害剤の活性を阻害する機構の存在も考えられた。そこで現在、シアリダーゼ阻害効果を上げる方法も検討している。高濃度のシアリダーゼ阻害剤添加時においてのみ誘導される細胞障害は、単層培養の解析による影響が示唆され、マウス皮下移植モデルの解析により解決できる可能性が得られた。また、シアリダーゼ阻害剤による増殖抑制効果の解析から、シアリダーゼ阻害剤の効果を減弱させる機構の存在が示唆され、この機構の解明は次年度解析計画のシアリダーゼ阻害剤の特異性と効果を高める研究へとつながり、順調に進展しているものと考えた。引き続き、マウス皮下移植モデルによるシアリダーゼ阻害効果の解析およびシアリダーゼ阻害剤阻害因子の解明を行う。その後、当初の計画に従い、シアリダーゼ阻害剤の細胞増殖抑制を高める方法の開発へと展開する。また、シアリダーゼ阻害剤に反応するシグナル経路とそのメカニズムを解明し、シアリダーゼの内因性基質を明らかにする。これらの解析から、シアリダーゼおよびその関連分子の診断・治療への有用性を評価する予定である。これまでの解析から、シアリダーゼは癌細胞を制御する重要な分子であることが明らかとなり、癌の新たな治療標的になり得ると考えられた。そこで、本研究においてインフルエンザ治療薬のシアリダーゼ阻害作用に着目し、腎細胞癌のシアリダーゼを標的とした抗腫瘍効果を明らかにする。本年度はまず、2種類のシアリダーゼ阻害剤を用い、腎癌細胞株に対する増殖抑制能を解析した。各シアリダーゼ阻害剤の阻害濃度を明らかにするため、種々の腎癌細胞株における毒性試験を行った結果、1シアリダーゼ阻害剤は全く細胞毒性を示さず、高濃度による細胞障害も生じなかった。もう一方のシアリダーゼ阻害剤は、高濃度かつ短期間の培養条件下において細胞毒性を示し、低濃度ではアポトーシス様形態を示す細胞が認められなかった。更に、この現象は血清の有無に影響を受けないことも明らかとなった。次に、これらの現象が腎癌細胞株特有の現象であるのか明らかにするため、前立腺癌細胞株を用いて同様の細胞毒性試験を行った。その結果、やはりシアリダーゼ阻害剤高濃度かつ短期間の培養条件において細胞毒性を示し、癌細胞を速やかにアポトーシスへ誘導するためには高濃度シアリダーゼ阻害剤下の環境が必要であることを明らかにした。一方、本解析では増殖抑制能を評価することがでないため、現在、低濃度シアリダーゼ阻害剤下における長期培養条件において増殖抑制能とそのシグナル伝達経路の解析を行っている。シアリダーゼ阻害剤の阻害効果の有無とその細胞障害濃度を明らかにすることが出来た。種々の癌細胞株にける細胞障害は、あらかじめ予想された阻害濃度を大きく上回る濃度においてのみ誘導されたため、マウス皮下移植モデル作成等のin vivoにおける解析へと進むことが出来なかった。一方、当該阻害剤の効果は腎細胞癌のみならず、前立腺癌にも応用出来る可能性がみとめられ、順調に進展しているものと考えた。

そこで他機関にもご協力頂き、腎癌細胞株のマウス皮下移植モデルを用いたシアリダーゼ阻害剤による腫瘍縮小効果の解析を検討している。また、シアリダーゼ阻害剤による増殖阻害活性が低い原因として、シアリダーゼ阻害剤の活性を阻害する機構の存在も考えられた。そこで現在、シアリダーゼ阻害効果を上げる方法も検討している。高濃度のシアリダーゼ阻害剤添加時においてのみ誘導される細胞障害は、単層培養の解析による影響が示唆され、マウス皮下移植モデルの解析により解決できる可能性が得られた。また、シアリダーゼ阻害剤による増殖抑制効果の解析から、シアリダーゼ阻害剤の効果を減弱させる機構の存在が示唆され、この機構の解明は次年度解析計画のシアリダーゼ阻害剤の特異性と効果を高める研究へとつながり、順調に進展しているものと考えた。引き続き、低濃度において増殖抑制効果を示す至適濃度を明らかにするとともに、まだ未解析のシアリダーゼ阻害剤においても同様に解析し、当該薬剤の有用性を明らかにしていく。その後は、当初の計画に従い、シアリダーゼ阻害剤に反応するシグナル経路の同定および増殖抑制メカニズムを解明し、シアリダーゼの内因性基質候補を絞り込む予定である。また、腎細胞癌におけるシアリダーゼ量と臨床病理学的所見との関連性を解析し、当該分子の診断補助因子としての有用性を評価する予定である。引き続き、マウス皮下移植モデルによるシアリダーゼ阻害効果の解析およびシアリダーゼ阻害剤阻害因子の解明を行う。その後、当初の計画に従い、シアリダーゼ阻害剤の細胞増殖抑制を高める方法の開発へと展開する。また、シアリダーゼ阻害剤に反応するシグナル経路とそのメカニズムを解明し、シアリダーゼの内因性基質を明らかにする。これらの解析から、シアリダーゼおよびその関連分子の診断・治療への有用性を評価する予定である。(理由)本年度検討したシアリダーゼ阻害剤の使用条件は、動物実験に不向きであり、動物実験に使用予定の物品を購入しなかったため。(使用計画)次年度、使用条件を変更した後、動物実験を行う際の物品購入に充足する。(理由)本年度の使用を予定していたマウス皮下移植モデルの作成を他機関との共同研究として進める計画とし、動物実験に使用予定の物品を購入しなかったため。(使用計画)次年度、動物実験を行う際の物品購入および本年度より継続して解析する実験の試薬購入に充足する。
コルク組織形成に伴うスベリンの沈着機構と化学構造

外樹皮コルク組織に特異的に沈着するスベリンは、フェルラ酸等のp-ヒドロキシケイ皮酸類と、長鎖脂肪酸類やグリセロール等が架橋した構造である。そのスベリンの生合成はフェルラ酸等のp-ヒドロキシケイ皮酸類が長鎖脂肪酸類とエステル結合後、ペルオキシダーゼにより脱水素重合し、・-O-4'エノールエーテル型等の結合様式で存在していることが示唆された。スベリンは芳香族部分と脂肪族部分から構成されているが、前者の構造は後者に比べ不明な点が多く、その生合成は不明である。スベリン芳香族部分の構造を予測するために、細胞内生合成を模倣したモデル化合物の重合実験を行った。基質であるフェルラ酸メチルと16-0-フェルロイルオキシヘキサデカン酸は、フェルラ酸とメタノール、フェルラ酸と16-ヒドロ1キシヘキサデカン酸をそれぞれエステル化して合成した。これらを西洋ワサビペルオキシダーゼにより脱水素重合し、生成物を各種クロマトグラフィーにより分離・精製し、MS及びNMRにより構造解析を行った。フェルラ酸メチルニ量体のうち、最も収量の多い成分は、β-5'フェニルクマラン型2量体であった。また、16-0-フェルロイルオキシヘキサデカン酸の脱水素重合物にもβ-5'フェニルクマラン型2量体が含まれることが示された。このことからスベリン芳香族部分には、これまでの研究で示されたβ-0-4'型以外にも、β-5'型も結合様式として存在することが示唆された。また、抽出成分を除いた外樹皮粉にスベリンの高分子エステル結合を分解する塩基性メタノリシス処理を行い、分解物の分析を行った。アベマキ及びコルクのメタノリシス生成物をゲル浸透クロマトグラフィーにより分子量分布を測定した結果、両樹種ともにポリスチレン換算で、約2500、1200、1000、600、300の5つの物質の存在が示された。また、蛍光検出器によるクロマトグラムから、分子量約2500の物質は非常に強い蛍光を発する物質であることが示された。これまでに樹皮の分解物から、このような強い蛍光を発する物質の存在は報告されていない。この物質の解明は、樹皮に特異的に含まれるスベリンの化学構造の解明、及び樹皮の応用利用を確立する上で、重要な物質であると考えている。1.抽出成分を除いたコルクガシ外樹皮粉に塩基性メタノリシス処理を行い、分解物の分析を行った。この反応物を中圧カラムクロマトグラフィー、Sep-Pak、TLC及びHPLCで分離・精製し、主要成分をNMR及びMSにより構造解析した。メタノリシス生成物から、フェルラ酸メチル、フェルロイルオキシ脂肪酸メチルを単離・同定した。また、強い蛍光を発するフェルラ酸二量体と予想される物質を単離した。外樹皮コルク質は紫外線を照射すると強い蛍光が観察されることから、この物質の解明は樹皮に特異的に含まれるスベリンの化学構造の解明につながると考えている。2.樹皮ペルオキシダーゼ活性の生化学的緒性質を調べるために、樹皮粗酵素のNative PAGEを行い、ペルオキシダーゼ活性のグアイアコールによる染色を行なった。この結果、5つのペルオキシダーゼ活性を示すバンドが認められた。このことから、樹皮ペルオキシダーゼには少なくとも5種のアイソザイムが含まれることが分かった。また、これら樹皮ペルオキシダーゼの至適pHは4-6であり、4-23°Cまでは酵素活性はほとんど低下しないことが分かった。今後、これらのアイソザイムのクローニングを行なう。3.フィーデング実験: ^<14>Cで標識したp-ヒドロキシケイヒ酸をアベマキ若枝に投与した。現在、この基質がスベリン芳香族部分にどのように取り込まれるのかについて分析を進めている。また、他の基質を用いたフィーデング実験も行っている。1.メタノリシス生成物の分析:アベマキ及びコルクガシ外樹皮は、ソックスレー抽出器を用いて抽出成分を除去し、塩基性メタノリシスを行った。メタノリシス生成物を各種クロマトグラフィーにより分離・精製し、NMRにより構造解析を行い、コルクガシ外樹皮のメタノリシス生成物からフェルラ酸メチル、フェルロイルオキシ脂肪酸メチルを単離・同定した。2.前駆体重合物の分析:フェルラ酸と16-ヒドロキシヘキサデカン酸をp-トルエンスルホン酸とDCCを用いてエステル化した。生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、16-0-フェルロイルオキシヘキサデカン酸を得た。これを西洋ワサビペルオキシダーゼと過酸化水素により重合させた。得られた重合物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分画し、NMRにより構造解析をおこなったところ、8-5'フェニルクマラン型と5-0-4'型二量体、および縮合型三量体フェルラ酸重合物を単離・同定した。3.固体13CNMR及びFT-IRによる解析:スベリン

芳香族部分の構造を直接的に解析するために、アベマキ脱脂外樹皮粉を遊星型ボールミルで微粉砕し、その細胞壁多糖類を酵素分解し、メタノリシス処理で脂肪族部分を分解後、固体13C NMR及びFT-IR測定した。酵素処理によって分解させなかった多糖類由来のピークがメタノリシス処理により消失したことから、外樹皮中で多糖類は、スベリン・リグニンの芳香族部分に結合しているものよりスベリンの脂肪族部分に結合しているものの方が多いと推定した。
ゲノム配列の高次圧縮・索引構築と高次幾何構造解析による知識発見

ゲノムデータベースからの知識発見のためのアルゴリズムとデータ構造に関する研究を行った.まず,ゲノム配列データベースからの高速パタン検索のアルゴリズムとデータ構造を開発した.索引としては既存の圧縮接尾辞配列を用いたが,新しいアルゴリズムにより従来の30倍の速度での検索が可能になった.次に,2つの長いゲノム配列のアラインメントを計算するための手法である,MUM(Maximal Unique Match)を列挙する省スペースなアルゴリズムを開発した.配列の長さをnとすると,既存手法ではO(n log n)ビットのスペースが必要であったが,本研究ではこれをO(n)ビットに圧縮した.これにより,ヒトの全DNA配列2つのMUMの計算がメモリ4GBのPC1台を用いて約6時間で計算できた.また,ヒトとマウスの間の共通部分については約24時間で計算できた.データベースからの知識発見のために,データベース中の複数の属性間の最適相関ルールを求める高速アルゴリズムを開発した.最適とは,支持率を固定した場合の最大確信度ルールまたは確信度を固定したときの最大支持率ルールを表す.従来手法では2値属性のみしか効率良く扱えなかったが,本研究の手法では数値属性に対して効率良く動作する.また,数値属性間の最適相関ルールを拡張し,様々な確信度に対する最適領域をピラミッド型の図形で表現する方法を提案し,その効率の良い計算法を提案した.これを最適ピラミッドによる相関ルール表現と呼ぶ.これを用いることでデータベースから抽出した知識を簡潔に表現することができ,過学習の回避もできる.また,ピラミッドを用いてデータの可視化を行うこともできる.ゲノムデータベースからの知識発見のためのアルゴリズムとデータ構造に関する研究を行った.まず,ゲノム配列データベースからの高速パタン検索のアルゴリズムとデータ構造を開発した.索引としては既存の圧縮接尾辞配列を用いたが,新しいアルゴリズムにより従来の30倍の速度での検索が可能になった.次に,2つの長いゲノム配列のアラインメントを計算するための手法である,MUM(Maximal Unique Match)を列挙する省スペースなアルゴリズムを開発した.配列の長さをnとすると,既存手法ではO(n log n)ビットのスペースが必要であったが,本研究ではこれをO(n)ビットに圧縮した.これにより,ヒトの全DNA配列2つのMUMの計算がメモリ4GBのPC1台を用いて約6時間で計算できた.また,ヒトとマウスの間の共通部分については約24時間で計算できた.データベースからの知識発見のために,データベース中の複数の属性間の最適相関ルールを求める高速アルゴリズムを開発した.最適とは,支持率を固定した場合の最大確信度ルールまたは確信度を固定したときの最大支持率ルールを表す.従来手法では2値属性のみしか効率良く扱えなかったが,本研究の手法では数値属性に対して効率良く動作する.また,数値属性間の最適相関ルールを拡張し,様々な確信度に対する最適領域をピラミッド型の図形で表現する方法を提案し,その効率の良い計算法を提案した.これを最適ピラミッドによる相関ルール表現と呼ぶ.これを用いることでデータベースから抽出した知識を簡潔に表現することができ,過学習の回避もできる.また,ピラミッドを用いてデータの可視化を行うこともできる.
変異型イソクエン酸デヒドロゲナーゼの分子生物学的解析とその臨床応用

イソクエン酸デヒドロゲナーゼ(IDH)1/2は、low grade gliomaにおいて高頻度に変異が生じ、予後診断マーカーとして注目されている。これまで、変異型IDH1/2を検出する手段としては遺伝子検査が主であるが、本研究ではモノクローナル抗体による診断法の確立を目指した。その結果、複数の変異型IDH1/2に交差反応性を示し、野生型IDH1/2には反応しないマウスモノクローナル抗体(クローン:MsMab-1)の作製に成功した。免疫組織染色での有用性を明らかにした。イソクエン酸デヒドロゲナーゼ1/2(IDH1/2)は、low grade gliomaにおいて高頻度に変異が生じ、α-ケトグルタル酸をoncometaboliteの2-ヒドロキシグルタル酸(2-HG)に変換する。一方、野生型IDH1/2と比べ、変異型IDH1/2を保持するgliomaの予後は格段に良い。本研究において、すべての変異型IDH1/2に対する特異的モノクローナル抗体(multi-specific mAb)を樹立し、gliomaの臨床診断に応用することを目的とした。まず、IDH1-R132Gの合成ペプチドをBalb/cマウスに免疫し、常法によりハイブリドーマの作製、ELISA法による選択を行った。さらにウェスタンブロット法、免疫組織染色法にて、樹立した抗体の評価を行った。イソクエン酸デヒドロゲナーゼ(IDH)1/2は、low grade gliomaにおいて高頻度に変異が生じ、α-ケトグルタル酸を2-ヒドロキシグルタル酸(D2-HG)に変換する。一方、野生型IDH1/2と比べ、変異型IDH1/2を保持するgliomaの予後は格段に良いため、予後診断マーカーとして注目されている。これまで、変異型IDH1/2を検出する手段としては遺伝子検査が主であるが、本研究ではモノクローナル抗体による診断法の確立を目指している。昨年度までに、複数の変異型IDH1/2に交差反応性を示し、野生型IDH1/2には反応しないマウスモノクローナル抗体のMsMab-1抗体の樹立に成功した。また、我々はこれまで、gliomaで検出されるIDH変異の中で最も多いIDH1-R132Hに対する新規モノクローナル抗体を2クローン作製しているが、特異性は高いものの、感度が足りないことが問題となっていた。そこで、今年度はさらに感度の高い抗IDH1-R132H抗体の作製を試みた。樹立した新規抗IDH1-R132H抗体(クローン:HMab-2)は、以前に開発したクローンHMab-1と比べ、免疫組織染色法やウェスタンブロット法において、10倍以上の感度であった。HMab-1を使った免疫組織染色法では、1次抗体の反応時間が18時間程度だったのに対し、HMab-2では1時間に短縮でき、病理診断において格段に有用性が上がった。変異型IDHに対する阻害剤の開発が進んでおり、HMab-2がその診断薬として利用できるように、さらに開発を進めて行く予定である。腫瘍生物学次年度使用額は、今年度の研究を効率的に推進したことに伴い発生した未使用額である。平成26年度請求額と合わせ、平成26年度の研究遂行に使用する予定である。
脂質滴蛋白質の生理的機能と細胞内脂質動態制御

従来,脂質滴は過剰な脂質をエステルとして貯蔵するための静的なコンパートメントであると考えられてきた.しかし我々の研究などにより,脂質滴が種々の細胞機能により積極的に関与するオルガネラであることが明らかになってきた.今回の研究により以下の成果を得た.1)脂質滴の質量分析で同定したRab18は脂質滴に特異的に局在した.Rab18を過剰発現させるとADRPが脂質滴から脱落し,脂質滴と小胞体の密着構造の顕著な増加が認められた.同様の構造はADRPのノックダウン,BrefeldinA処理でも認められた.これらの結果より,Rab18はADRPの脂質滴局在を減少させることにより,脂質滴と小胞体の密着構造(LD-associated membrane)形成を誘導することが示唆された.2)Huh7,HepG2など肝細胞由来株において,ApoBが脂質滴周囲に半月状の構造(ApoB-crescent)を形成することを見出した.ApoB-crescentはproteasomeまたはautophagyを阻害すると著明に増加した.脂質滴周囲にはproteasomeのサブユニットの集中が認められ,脂質滴画分に回収されるApoBはユビキチン化を受けていた.これらの結果は,ApoBがproteasome, autophagyで処理される際に脂質滴がプラットフォームとしての役割を果たすことを示した.3)PAT蛋白質の一つであるTIP47は,細胞に脂肪酸などを負荷すると急速に脂質滴にリクルートされた.脂質滴への局在にはTIP47のN末が必須であり,また疎水性ポケットを形成すると予測されるC末部分を変異させると刺激なしでも脂質滴への局在が認められるようになった.これらの結果は脂質滴が細胞内の脂質ホメオスタシスに関する多彩な機能を担う可能性を明らかにした.従来,脂質滴は過剰な脂質をエステルとして貯蔵するための静的なコンパートメントであると考えられてきた.しかし我々の研究などにより,脂質滴が種々の細胞機能により積極的に関与するオルガネラであることが明らかになってきた.今回の研究により以下の成果を得た.1)脂質滴の質量分析で同定したRab18は脂質滴に特異的に局在した.Rab18を過剰発現させるとADRPが脂質滴から脱落し,脂質滴と小胞体の密着構造の顕著な増加が認められた.同様の構造はADRPのノックダウン,BrefeldinA処理でも認められた.これらの結果より,Rab18はADRPの脂質滴局在を減少させることにより,脂質滴と小胞体の密着構造(LD-associated membrane)形成を誘導することが示唆された.2)Huh7,HepG2など肝細胞由来株において,ApoBが脂質滴周囲に半月状の構造(ApoB-crescent)を形成することを見出した.ApoB-crescentはproteasomeまたはautophagyを阻害すると著明に増加した.脂質滴周囲にはproteasomeのサブユニットの集中が認められ,脂質滴画分に回収されるApoBはユビキチン化を受けていた.これらの結果は,ApoBがproteasome, autophagyで処理される際に脂質滴がプラットフォームとしての役割を果たすことを示した.3)PAT蛋白質の一つであるTIP47は,細胞に脂肪酸などを負荷すると急速に脂質滴にリクルートされた.脂質滴への局在にはTIP47のN末が必須であり,また疎水性ポケットを形成すると予測されるC末部分を変異させると刺激なしでも脂質滴への局在が認められるようになった.これらの結果は脂質滴が細胞内の脂質ホメオスタシスに関する多彩な機能を担う可能性を明らかにした.脂質滴は哺乳類の細胞に普遍的に見られる.トリグリセリドやコレステロールエステルなどがコアとなり,コレステロールを含む燐脂質一重層が周囲を覆う構造である.脂質滴表層にはADRP,TIP47の他,我々が昨年度までの研究で同定したRab18などが局在する.1.脂質滴は他のオルガネラと異なる性質を持ち,その構成蛋白質を免疫組織化学的に検出するためには固定,透過性処理などの条件に特別な注意が必要であることを明らかにした.2.肝細胞のリポ蛋白質形成過程では,脂質滴に由来する脂質がApoBに付加され,過剰なApoBは複数の経路で分解される.我々は肝由来のHuh7細胞などで,脂質滴を三日月状に囲むApoB(ApoB-crescent)を発見した.ApoB-crescentはプロテアソームあるいはオートファジーの阻害で顕著に増加した.脂質滴画分にはApoB,プロテアソーム,ポリユビキチン,ポリユビキチン化ApoBが見られ,プロテアソーム阻害で増加した.免疫電顕によりApoB-crescentは脂質滴に近接した脂質性顆粒の集積であることが分かった.これらの結果は,脂質滴表層は分解を受けるApoBが貯留する場であること,貯留したApoBはプロテアソーム系,オートファゴソーム/リソゾーム系の両方によって分解を受けることを示唆した.3.TIP47はADRPと異なり,脂肪酸負荷時などに顕著に脂質滴に集中する.変異体の解析により,TIP47のC末部分で形成される疎水性ポケットが脂肪酸に対する反応に係わることを明らかにした.脂質滴は過剰な脂質をエステルとして貯蔵するだけでなく,種々の細胞機能に積極的に関与するオルガネラであることが明らかになってきた。

我々はHuh7,HepG2などの肝細胞由来株ではApolipoprotein B100 (ApoB)が脂質滴周囲に半月状の構造(ApoB-crescent)を形成することを見出した.ApoB-crescentはALLN,MG132,lactacystinでproteasomeを阻害した場合,あるいは3-MAなどでautophagyを阻害すると著明に増加するため,ApoBの分解処理に関わる構造であると考えられた.精製した脂質滴にはproteasomeの複数のサブユニットが回収され,また蛍光抗体標識により脂質滴周囲にproteasomeの存在が認められた.またproteasome阻害時の脂質滴画分に回収されるApoBは高度にユビキチン化されていることが確認された.一方,proteasome阻害によりautophagic vacuoleのマーカーであるLC3陽性の構造が顕著に増加し,一部はApoB-crescentの近傍に認められた.leupeptinなどでリソソームの加水分解酵素を阻害した細胞ではlamp1陽性の構造に含まれたApoB-crescentを認めた.肝細胞のリポ蛋白質形成過程では,脂質滴に由来する脂質がApoBに付加され,過剰なApoBが複数の経路で分解されることが知られている.我々の上記の結果は,細胞内で分解処理されるApoBの少なくとも一部が脂質滴近傍1に集積し,proteasome,autophagyの両方で処理されることを示唆した.