hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高分解能バルク敏感光電子分光によるｄ電子系化合物の電子相関と準粒子状態の研究

また,原子モデルおよびクラスターモデルによりFe 2p-3d吸収スペクトルを理論的に求め,実験結果と比較することで,六方晶FeSeでは結晶場を考慮した原子モデル計算により実験スペクトルの形状を再現できるのに対して,正方晶FeSeでは配位子からの電荷移動を考慮しなければスペクトル形状を再現できないことを明らかにした.これは,六方晶FeSeではFe3d電子の局在性が高く,正方晶FeSeではSe原子の4p軌道とFe原子の3d軌道の混成がより重要になっていることを示している.また,おなじFeとSeを含む超伝導体であるにも関わらず,母体が絶縁体であるTlFe2Se2について軟X線,硬X線光電子分光実験を実施し,内殻スペクトルに対して同様にクラスターモデル計算による解析を行った.これについても,現在さらなる解析を進めている.また,これに加えて,TlFe2Se2単結晶に対する極低エネルギー励起角度分解光電子分光実験も実施しているが,さらに詳細な実験を引き続き行っていく必要がある.これまで,FeSeやTlFe2Se2などの鉄系超伝導体およびその母物質や,Sr2IrO4などスピン軌道相互作用が物性に支配的な物質など,3d,4d,5d電子系について,バルクでの準粒子構造を実験的に観測し,理論から予測されるスペクトルとの比較,議論を行ってきた.これらの進捗状況は,ほぼ計画通りであると判断できる.これまでにTlFe2Se2に対して,当初計画通り高エネルギー光電子分光実験を実施し,極低エネルギー励起光電子分光実験も進んでいる.また,併せて理論計算による実験結果の解釈も行っている.一方,Fe(Se,Te)については,結晶の質をさらに向上させる必要があるため,現段階ではいくつかの試行実験のみを行っている.2012年度には,本格的に極低エネルギー励起角度分解光電子分光実験を進めていく予定である.TlFe2Se2やSr2IrO4,Sr2Ir1-xRhxO4などのフェルミ準位近傍での電子(または準粒子)構造の温度変化をより詳細にまたは新たに調べ,絶縁体機構についての確定的知見を得るために高分解能光電子分光実験を行っていく.また,角度分解光電子分光による分散関係の観測や,薄膜化した試料による電子構造の変化についても調べてゆく.上記のことなどを含めて,これまでに得られた知見を包括的にまとめて普遍的なd電子系準粒子構造の抽出と異常物性との関連性の明確化,モデル化などをおこなってゆく.TlFe2Se2対して,これまでに高エネルギー光電子分光実験を進めてきており,いくつかの補完的なデータをとることで,この物質系の広域電子構造を明らかにすることができる.今後は,FeSeとともに低エネルギー励起光によりフェルミ準位近傍のより詳細な電子構造および分散や等エネルギー面(金属の場合にはフェルミ面)を明らかにする必要がある.Fe(Se,Te)の混晶系は,単結晶育成が容易であることから,かなり詳細なフェルミ面構造が明らかになっている.従って,現在報告例がないFeSeについてこの知見を得ることが重要である.また,4d,5d電子系化合物であるSr2RhO4とSr2IrO4についても実験をスタートさせ,これらの物質の詳細なバルク電子構造を明らかにしていくとともに,幅広い主量子数の変化に伴うd電子系準粒子構造の普遍性や相違点を明らかにする.光電子分光実験に必要な超高真空用消耗品(ガスケットなど)や光源に使用する希ガスの購入と放射光利用実験のための実験出張旅費,学会発表のための出張旅費などに充てる.光電子分光装置に必要な超高真空用消耗品(ガスケットなど)の購入と放射光利用実験のための実験出張旅費,学会発表のための出張旅費などに充てる.
発達期小脳のシナプス刈り込みにおけるPcdh10の役割の解明

本研究において、自閉スペクトラム症(ASD)関連遺伝子プロトカドヘリン10 (Pcdh10)の小脳における役割を解明する。Pcdh10がプルキンエ細胞の一部の集団で発現することに注目し、発達期小脳で起こる登上線維-プルキンエ細胞のシナプス刈り込みがそもそも小脳全体で均一に進むかを、小脳スライス標本で電気生理学的に明らかにする。プルキンエ細胞特異的Pcdh10ノックアウトマウス(Pcdh10-cKO)とPcdh10の過剰発現系を用いて、シナプス刈り込みへの影響を調べる。Pcdh10-cKOマウスの行動解析を行い、小脳のシナプス刈り込み異常とASD様行動との関連を探る。
PNA/DNAインベージョン複合体の固定化を利用したゲノムDNA高次構造の解析

人工核酸の一つであるペプチド核酸PNAは、他の核酸アナログとは一線を画す非常に高いDNAとの親和性を有しており、インベージョン(2本鎖DNA中に潜り込み、新たに2組のPNA/DNA2本鎖を形成する現象)という特徴的なDNA認識が可能となっている。本研究では、PNAによるインベージョンの生体内応用を志向し、化学的なアプローチからインベージョンをより効率的かつ、安定化するための新規修飾PNAの設計・開発を行った。ペプチド核酸(Peptide Nucleic Acid:PNA)は、DNAの主鎖骨格をペプチド結合に置き換えた人工核酸であり、リン酸の負電荷による反発がないことから、他の核酸アナログとは一線を画す非常に高いDNAとの親和性を有している。これによりPNAは、ストランド・インベージョン(2本鎖DNAに潜り込み新たに2組のPNA/DNA2本鎖を形成する現象)による他の核酸アナログでは不可能な「直接的な2本鎖DNA認識」が可能となっている。本研究では、PNAによるインベージョンの生体内応用を志向し、化学的なアプローチから「インベージョンをより効率的かつ、安定化するための新規修飾PNAの設計・開発」を行った。これが達成されれば、DNA高次構造を反映したインベージョン効率の変動を利用し、生体内でのDNA高次構造を直接的に観察するプローブの開発など、様々な応用が可能となる。具体的には、インベージョン複合体の安定化および、固定化という2つのアプローチから検討を進めた。まず、カチオニックペプチドとPNAとのコンジュゲーションによる静電引力を利用した安定化を試みた。この際、最終的な生体内応用を志向しカチオニックとしてNLS(核移行シグナル;PKKKRKV)を選択した。これに加え、PNA中にビオチン残基を導入し、ストレプトアビジンとの強固な相互作用を利用したインベージョン複合体の固定化についても検討を行った。その結果、いずれの場合でも目的とするインベージョン複合体の安定化を示唆する結果が得られた。最終的な生体内でのDNAの高次構造の直接観測までには至らなかったが、その前検討としてNLS導入PNAをヒト培養細胞内に導入し、蛍光顕微鏡観察による予備的検討も行った。その結果、期待通りにPNA-NLSの核内への局在が確認され、NLSがPNAにコンジュゲートした状態でもきちんと機能していることが確認できた。それに加え、反復配列をもつテロメア領域に対するインベージョンなども検討を行った。以上の結果は、今後細胞内PNAプローブを開発する上で非常に重要な知見である。
精子形成過程における核膜孔複合体の脱糖鎖と崩壊について

核膜孔は、細胞内でO-GlcNAcにより糖鎖修飾される蛋白質複合体としてもよく知られている。しかし、その糖鎖修飾の意義については必ずしも明らかになっていない。我々は、先行実験よりショウジョウバエの精子形成過程では核膜孔上の糖修飾がダイナミックに制御されていることを見出した。すなわち、体細胞では、常に糖修飾を受けている核膜孔が、精子形成過程の減数分裂直後に一過的に糖修飾が失われることを見出した。さらに興味深いことに、糖修飾を失った核膜孔は徐々に消失することも見出した。これらの観察結果は、O-GlcNAcによる糖修飾が核膜孔の安定性に寄与している可能性を示唆している。そこで、我々は核膜孔上の糖鎖の役割を解析するために、O-GlcNAcを付加する酵素O-GlcNAc Transferase(OGT)およびO-GlcNAcを脱離させる酵素O-GlcNAc'aseのノックダウンや強制発現できる系を構築した。その系を用いてショウジョウバエの精巣でOGTをノックダウンしたところ、正常よりも早い段階から核膜孔が核膜から一部消失することを見出した。このことは、糖修飾が核膜孔の安定性に寄与していることを強く示唆している。そこで、O-GlcNAcによって糖修飾を受ける主要な核膜孔蛋白質であるNup62をノックダウンしたところ、一部の核膜孔が核膜から消失することも見出した。この結果は、Nup62が核膜孔の形成維持に重要な役割を果たしていることを示している。核膜孔複合体は、糖修飾を受ける蛋白質として古くから知られているが、その糖鎖の役割はいまだよくわかっていない。近年、その糖修飾を制御する糖転移酵素、糖鎖加水分解酵素が相次いで同定された。そこで、我々は、それらの糖修飾酵素の機能をRNAi法によって阻害し、核膜孔複合体上の糖鎖の役割を明らかにする。我々は、予備的実験からショウジョウバエの精子形成過程において、核膜孔複合体上の糖鎖が、核膜孔複合体の崩壊に先立って消失することを新たに発見した。これは、糖鎖が付加されていない核膜孔複合体が生体内に存在することをはじめて示す結果であった。この結果は、核膜孔複合体の糖修飾が、複合体の安定性に重要な役割を果たしている可能性を示唆している。そこで、我々は、ショウジョウバエの精子形成過程で、核膜孔複合体の糖修飾を制御する酵素をRNAiによって減少させ、核膜孔複合体の安定性を検証している。本年度は、精子形成過程でRNAiを誘導する系の立ち上げをおこなった。ショウジョウバエの誘導系であるgal4/UASTシステムは、精子形成を含めた生殖細胞分化過程では機能しないため、新たにgal4/UASPシステムの導入をおこなった。さらに、精子形成過程でRNAiを強く誘導するために、精子形成過程で高発現するエンハンサーを用いたgal4系統を新たに作製している。これらの系によって、生殖細胞分化過程でRNAiを誘導する系を新たに構築でき、我々独自の解析系の立ち上げができた。さらに、培養細胞を用いて、本来の核膜孔複合体の機能である核膜輸送の効率も検討している。本年度は、糖修飾酵素をRNAiによって機能阻害する系の立ち上げに成功した。
社会関係資本の創出を想定した生涯学習におけるジェロントロジー教育

本研究の目的は、地域社会において、人生90年時代の人生第4期というライフステージを想定した、生涯学習におけるジェロントロジー教育のプログラム開発を進め、生涯学習現場で役立てるための方法とそのシステムを構築・展開することであり、さらにその中で、柔軟で多様な社会関係資本を地域に創出することである。具体的には、University of Texas Health Science Center at San Antonio(UTSA)の協力を得て、最新のジェロントロジーに関わる情報を収集し、本学生活科学部教員の協力・共働の下、生涯学習場面でそれらを地域住民にわかりやすく翻訳・展開する手法を開発し、University of Pennsylvania(UPenn)等との研究協力で、多様な社会関係資本を地域に創出するための手法を開発することである。研究の実績概要は、今年度、以下に示した2)の実現に向けて研究・開発を行った。1).Edward Ansello(VCU)等の協力により作成された学校教育におけるジェロントロジー教育理論の知見から、生涯学習に関わる理論枠組みとそれに基づく教材開発を進める。2).知識の宝庫である大学・それを生み出す研究者、H市、その住民と共働し、その「知識」を蒸留し「情報」を抽出、地域住民のためにわかりやすく翻訳した教育プログラム研究開発を行う中で社会関係資源を創出する仕組みを考案し、Linuxの様なOpenSource的アプローチで展開する。3).さらに、教育に利用できるiPadのアプリ(Evernote、Paper、Goodreader、Bamboo Paper Notebook、iAWriter、SimpleMind、EasyBib)等を用いて、将来の生涯学習を見据えたジェロントロジーに関する教材開発を行う。平成30年度以降の計画と研究代表者及び研究分担者の具体的な役割は、平成29年度から進めていた下記の2)の内容をさらに展開すると同時に、3)の内容を進めていくことである。すなわち、2)の知識の宝庫である大学・それを生み出す研究者、H市、その住民と共働し、その「知識」を蒸留し「情報」を抽出、地域住民のためにわかりやすく翻訳した教育プログラムの研究開発を行う中で社会関係資源を創出する仕組みを考案し、Linuxの様なOpenSource的アプローチで展開することを想定することである。昨年度の進捗状況に示した様に、2)の生涯学習におけるジェロントロジー教育のプログラムとその教材をさらに発展させる点に関しては、H市の高齢者住民の抱える問題は、調査等を通じてその一部把握することが出来た。市との共同により本学において情報センターと共働によるLinuxの様なOpen Source的アプローチでの展開のための研究・開発を進めるためには、さらなる人的・物的資源が必要であり、少ない予算で進めるための工夫が必要であった。このため、平成30年度は、ウェブ展開を目指し、ウェブ活用を目的とした実践的セミナーの一部展開を企画した。地域高齢者住民を対象にサイバーシニアズジャパンとの共働により本学でのセミナー実施のための課題として、高齢者がパソコン等を利用するスキルが重要であることが調査等から示され、H市高齢者へのパソコン教室を実施した。さらに、3).教育に利用できるiPadのアプリ(Evernote、Paper、Goodreader、Bamboo Paper Notebook、iAWriter、SimpleMind、EasyBib)等を用いて、将来のネットを通じての生涯学習を見据えたジェロントロジーに関する教材開発を行うことで必要であるが、この部分に関しては、この領域に関しての研究開発に関わる十分な人材が得られず本来の目標には到達できていな状況である。今年度は、科学研究費申請メンバーの所属する生活文化学科生活心理専攻の立ち上がりから5年目という中で、国家資格の心理師養成科目の立ち上げのためのカリキュラム変更や国家資格認定心理師にかかわる認定申請等の業務があった。このこととも関連し、未使用額が生じたと考えられる。すなわち、1国家資格との関係での新たな講義の立ち上げ等での研究時間縮小の問題、2本研究とも関わる、10年ごとに実施している日本・台湾・韓国の高齢者イメージ調査に関する打ち合わせによる時間的問題、3学事日程において、UTSAとのセミナー、ワークショップへの参加が不可能になったこと、4日本の大学の夏季休暇、春季休暇が、UTSA,やUPennとの予定と合わずに、研究・教育が十分に行われなかったことなどがあげられる。次年度は、これまでの研究を基に研究の遅れを挽回し、研究費の取得が可能となったので、H市との共同・共働とメンバーの協力により、国際比較調査(日本、韓国、台湾とアメリカですでに一部実施)の実施と国際会議での研究報告、さらにこれまでの研究を発展させる中で、新たな科学研究費との関連でセミナー等も予定している。本研究の目的は、地域社会において、人生90年時代の人生第4期というライフステージを想定した、生涯学習におけるジェロントロジー教育のプログラム開発を進め、生涯学習現場で役立てるための方法とそのシステムを構築・展開することである。さらにその中で、柔軟で多様な社会関係資本を地域に創出することである。具体的には、University of Texas Health Science Center at San Antonio(UTSA)の協力を得て、最新のジェロントロジーに関わる情報を収集し、本学生活科学部教員の協力・共働の下、生涯学習場面でそれを地域住民にわかりやすく翻訳・展開する手法を開発・展開し、University of Pennsylvania(UPenn)との研究協力で、多様な社会関係資本を地域に創出するための手法を開発することである。平成28年度の主な目的は、Edward Ansello(VCU)等の協力により作成された学校教育におけるジェロントロジー教育理論の知見から、生涯学習に関わる理論枠組みの作成とそれに基づく教材開発の一部を進めることである。

昨年の研究成果は、科学研究費申請書類、平成28年実施予定の1)に示した様に「学校教育におけるジェロントロジー教育構想」の理論枠組みを基にH市、その住民との共働により生涯学習のための枠組みを構築することである。それと同時に、生涯学習プロセスにおける社会関係資源創出のための教材開発を実施するための調査をH市で住民を対象に実施するため、そのチーフの水野いずみ氏らとの共同でプレテストを実施した。また、UTSAとの研究交流事業によりUTSAで開発された教育プログラムに関して、生涯学習での展開の可能性に関して現地での調査・研究を実施した。科学研究費申請書に示した平成28年度の計画と研究代表者及び研究分担者の具体的な役割の1)に関しては、「子どもの生活経験と学校教育をつなぐ学校教育におけるジェロントロジー教育構想」の枠組みを基にH市、その住民との共働により生涯学習のための枠組みを構築すると同時に、生涯学習プロセスにおける社会関係資源創出のための教材開発をH市での住民調査実施に関しては、その一部が実施された。2)の生涯学習におけるジェロントロジー教育のプログラムとその教材をさらに発展させる点に関しては、H市の高齢者住民の抱える問題はある程度把握できたが、市との共同により本学情報センターと共働でLinuxの様なOpen Source的アプローチでの展開のための研究・開発を行うためにはさらなる人的・物的資源が必要であり、少ない予算で進めるための工夫が不可欠である。本研究の目的は、地域社会において、人生90年時代の人生第4期というライフステージを想定した、生涯学習におけるジェロントロジー教育のプログラム開発を進め、生涯学習現場で役立てるための方法とそのシステムを構築・展開することであり、さらにその中で、柔軟で多様な社会関係資本を地域に創出することである。具体的には、University of Texas Health Science Center at San Antonio(UTSA)の協力を得て、最新のジェロントロジーに関わる情報を収集し、本学生活科学部教員の協力・共働の下、生涯学習場面でそれらを地域住民にわかりやすく翻訳・展開する手法を開発し、University of Pennsylvania(UPenn)等との研究協力で、多様な社会関係資本を地域に創出するための手法を開発することである。研究の具体的目的は以下の内容であり、平成29年度は2)の実現に向けて研究・開発を行った。1).Edward Ansello(VCU)等の協力により作成された学校教育におけるジェロントロジー教育理論の知見から、生涯学習に関わる理論枠組みとそれに基づく教材開発を進める。
カーネル法に基づく複雑な時系列の分析手法の開発

時系列は現在、ますます複雑化しています。それぞれのデータポイントは、構造化オブジェクト(例えば、画像またはグラフ)または非常に高い次元の特徴ベクトルを記述することが一般である。我々のプロジェクトの目的は、カーネル法と最適化法を介して複雑なデータの時系列を処理するための新しい方法を開発することである。カーネル法に基づく複雑な時系列の分析が行える様に、主に二つの新しい手法を発表しました。第一は、時系列は現在、ますます複雑化しています。機械学習の分野の中で、有力な国際会議で論文を発表しました。機械学習の分野の中で一番有力な雑誌で論文を提出して、高い評価を頂きまして、発表出来る可能性が高い。INRIA Grenoble(フランス)のZaid Harchaouiとの協力を強める。Ecole Polytechnique(フランス)のAlexandre d'Aspremontと半正定値計画法を持って新しいコインテグレーションの手法をNIPS会議に提出する。Oxford University(英国)のArnaud DoucetとAutoregressive Kernelについての研究を進ませる。
脳内の神経細胞位置決定分子リーリンの会合体形成機構の解明と神経疾患の治療への応用

リーリンは脳の発生過程において神経細胞が規則的な層構造を形成する際の神経細胞の位置決定分子として同定されたが、その作用機構の詳細は不明であった。報告者はこれまでにリーリンの機能発現にはその会合体形成が極めて重要であることを示しており(PNAS, USA,97,9729-9734(2000))、その後、本科学研究費補助金を受けてさらに会合体形成の分子機構を解明するために、会合体形成に必要不可欠であるCR-50エピトープ部位の同定及び、その構造と物性の解析を中心に研究を進めてきた。リーリンはアミノ酸3461残基からなる巨大な蛋白質分子である。このうちN末端の370残基のアミノ酸がリーリンの機能阻害抗体CR-50のエピトープであり、その部位はα-helix 20%,β-sheet 40%という構造であり、この構造に基づき会合体形成能を示した。さらにCR-50エピトープ部位のすぐ上流に位置するF-spondinとのアミノ酸配列の相同性を有する部位(以下、F-spondin様部位と記す)について構造、物性の解析を行った。F-spondin様部位の2次構造を解析したところ、α-helix 20%,β-sheet 50%のβ型蛋白質であり、また、ゲルろ過カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー法により解析したところ、F-spondin様部位は多量体を形成していることも明らかになった。この結果からリーリンの機能発現に深く関わっている会合体の形成にはCR-50エピトープ部位のみならず、そのすぐ上流のF-spondin様部位も密接に関連していることが明らかになった。次にCR-50エピトープ部位の下流のリーリンリピート(リピートIVIII)と名付けられたアミノ酸配列の相同性の高い、くり返し8個存在するリピート部位に着目した。このうちの一つ、リーリンリピート1を選んで蛋白質大量発現系を構築し、リーリンリピートI蛋白質を精製した。このリーリンリピート1の2次構造を調べたところ、α-helix 40%,β-sheet 40%のα+β型蛋白質であることがわかった。また、今年度は核磁気共鳴分光法によるリーリン蛋白質の構造情報の収集を目的として、生体分子の構造解析に適用できる新たな観測技術の開発も行った。脳の高次機能は神経細胞が層構造を形成し、それらがさらに複雑なネットワークを形成することにより発揮される。神経細胞の層構造形成を制御するリーリンは機能を発現する際に、会合体を形成することを既に明らかにしたが、今年度はその会合体形成に関与する重要な部位を同定するために以下の研究を行った。まず全長のリーリンのうちの一部分を欠損した変異型リーリンを作製し、PSecTag2ベクターにインサートとして挿入した遺伝子発現系を構築した。次にこれらの遺伝子産物である変異型リーリン蛋白質の会合性の有無を検討するために、作製した変異型リーリンの遺伝子をヒト腎臓由来の培養細胞株293Tに導入した。それを培養し、その培養上清中に産生される変異型リーリンを回収し、非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけた。

その後、ウエスタンブロットを行い、天然状態での変異型リーリンの会合体形成能の有無を調べたところ、リーリンの会合体形成にはN末端の約370残基が極めて重要であることがわかった。続いて、293T細胞を用いて、細胞膜上に変異型リーリンを発現させる発現系を作製し、これと同様の変異型リーリンをコートしたデイッシュを用いて、細胞接着実験を行うことにより、変異型リーリン同士の相互作用を直接、観測、解析した。その結果、細胞接着実験においても、N末端370残基を欠損した変異型リーリンについては、相互作用が観測されなかった。これらの結果から、3461残基からなるリーリンのN末端370残基が、機能発現に直結したリーリン分子同士の相互作用に極めて重要であることが明らかになった。神経細胞はネットワークを形成して高次機能を発揮している。その基本構造は神経細胞の規則的な層構造よりなっている。秩序だった層構造形成を制御している分子として蛋白質分子リーリンが見いだされたが、その神経細胞への作用機構は不明である。そこでリーリンの物性や立体構造の解析を行うことにより、構造化学の立場から、リーリンの機能の分子機構を解明していく研究に取り組んだ。昨年度までの研究により、リーリンの機能阻害抗体CR-50のエピトープ部位を介して、リーリンは会合体を形成して機能を発揮していることを明らかにしたので、このエピトープ部位の構造について今年度は解析した。まず、大腸菌を用いたリーリンのCR-50エピトープの大量発現系を構築し、アフィニテイカラムクロマトグラフィーによりCR-50エピトープ蛋白質を分離、精製した。そして円偏光二色性分光法により、2次構造を解析した。その結果、生理的条件下ではCR-50エピトープはα-helix 20%,β-sheet 40%から成る規則構造をとっていることが分かった。塩濃度を0.15Mから1Mまで増大させると規則構造を壊れてランダムになり、会合体も解離した。またpHを7.4から11まで増大させると同様に規則構造が壊れて、会合体も形成できなくなった。以上より、生理的条件下においてCR-50エピトープはα-helix 20%,β-sheet 40%という規則構造をとることにより、会合体を形成することができ、機能を発揮するに至ることが明らかになった。さらに核磁気共鳴分光法を用いたリーリン蛋白質の構造、物性の解析を進めていくにあたり、蛋白質の主鎖を構成するアミド^<15>N核スピンの化学シフトの異方性に関する情報を得るための測定技術の研究を開始した。リーリンは脳の発生過程において規則的な層構造を形成する際の神経細胞の位置決定分子として同定されたが、その作用機構の詳細は不明であった。報告者はこれまでにリーリンの機能発現にはその会合体形成の過程が極めて重要であることを示しており(PNAS, USA,97,9729-9734(2000))、その後、本科学研究費補助金を受けてさらに会合体形成機構を解明するために、会合体形成に必要不可欠であるCR-50エピトープ部位の同定及び、その構造と物性の解析を中心に研究を進めてきた。リーリンはアミノ酸3461残基からなる巨大な蛋白質分子である。そこで今年度はさらに会合体形成に必須であることが判明しているCR-50エピトープ部位以外の部位について、構造、物性の解析を行った。まず、CR-50
ニアーフィールド光による一次元剛直高分子鎮における光プロセスの研究

本研究では、2次元平面内に配置された高分子超薄膜という新規な素材に対してニアフィールド分光法を適用し、単一高分子鎖の形態観察を行うとともに、高分子鎖に導入された色素が行う光物理過程、主に励起エネルギー移動現象を蛍光分光測定することを目的とした。界面で高度に配列した分子集合系における光物理化学素過程を集団平均ではなく単一分子鎖の固有値として明らかにする。このため次のような項目に沿って順次研究を行った。(1)気水界面における高分子単分子膜形態の直接観察高分子単分子膜とは気水界面で形成される厚さわずか1nmの超薄膜であり、分子固有の凝縮性や分子構造、水との相互作用により、結晶性固体膜、非晶性液体膜、さらに混合により様々な相分離構造をとりうる。光学的な臨界角を利用したブリュースター角顕微鏡を作製し、それらの形態観察を行うことにより、薄膜材料として有用な研究対象を探索するとともに、NSOM測定のために膜材料の蛍光標織化を行った。(2)蛍光法による高分子超薄膜内における分子鎖形態の評価ナノスケールでの分子形態を評価する方法として、蛍光プローブを用いたエネルギー移動法を採用した。2次元超薄膜中にドナー、アクセプター性色素でラベルされた高分子鎖を微量混合し、分子内エネルギー移動効率を測定することで、単一分子鎖の広がりを評価した。その結果、一分子鎖が擬縮して超薄膜を形成することが示され、またこれらの蛍光分光測定をNSOMに応用することにより、単一分子鎖の形態やその分散を分子レベルで明らかにできることを示した。(3)高分子鎖の蛍光分光測定による分子内一次元エネルギー移動過程の解明高分子単分子層膜・累積膜内で一次元配列性をもつポリペプチドの側鎖に蛍光色素を導入し、それらの累積配向性や分子鎖の形態をNSOMをはじめとする走査プローブ顕微鏡により調べる。本年度はカルバゾール基を側鎖にもつポリグルタミン酸エステルを合成し、これらが良好な累積性をもって超薄膜材料になることを確認した。さらに、高分子鎖に一次元的に導入された色素が行う光励起エネルギー移動現象を蛍光分光測定し、その光化学素過程についての基礎データを得た。
アメーバ運動を統御するアクチン構造多型マシナリー

(1)コフィリン結合によるアクチンフィラメント(AF)の構造変化がコフィリンの結合していない領域まで伝播し、それによってさらなるコフィリン結合が誘導されコフィリンクラスターが成長することを示した。(2) ATP存在下のミオシンS1とAFの過渡的な結合が、AFに協同的な構造変化をおこし、コフィリンと結合できなくなることを示した。これらの結果により、複数のアクチン結合タンパク質の結合が、AFの協同的構造変化を介して増強し合ったり阻害しあうメカニズムを実証した。(3)細胞内のAFも構造多型性をもつことを確認し、上記のin vitroの実験結果が生理的な意味を持つことが示唆された。コフィリンはアクチンフィラメントと協同的に結合し、らせんピッチを短くすることが知られていた。そこでわれわれは、コフィリン結合に伴うアクチンフィラメントのらせんピッチの変化を高速AFMによりライブ観察した。その結果、コフィリン結合によるらせんピッチの短縮はコフィリンが結合している領域に留まらず、隣接するP端側のbare zoneへ一方向的に伝播することが判明した。コフィリンクラスターの伸長も、P端方向へ一方向的であった。この結果は、アクチン結合タンパク質の結合によるアクチンフィラメントの構造変化を初めてライブ観察した成果であり、さらにそうした構造変化は協同的で、一方向的に伝播しうることを示し、アクチンフィラメントの協同的構造変化が長距離にわたってアクチン結合タンパク質の結合を制御し、新規の信号伝達系となる可能性を示唆した。またわれわれは、ミオシンモータードメインもアクチンフィラメントと協同的に結合することを示してきたが、蛍光顕微鏡により、コフィリンとミオシンモータードメインが相互排他的にアクチンフィラメントと協同的に結合することを実証した。相互排他的な協同的結合を定量的および経時的に解析するため、アクチンフィラメントのガラス基板等への固定化方法を検討し、コフィリン、ミオシンモータードメインの協同的結合を損なわない固定化条件を確立した。さらに、種々のアクチン結合タンパク質のアクチン結合ドメイン(ABD)をGFPと融合して発現し、細胞前部や後部に局在するものを見出した。ABDはアクチン結合活性をもった小さなタンパク質ドメインなので、ABDと細胞内の特定のアクチンフィラメントの結合は、アクチンフィラメントの構造の差異を認識している可能性が高く、詳細なin vitro観察を進める予定である。この目的のため、多色同時観察が可能なTIRF顕微鏡を構築した。昨年度に、高速AFM観察により、コフィリンがアクチンフィラメントに結合してコフィリンクラスターを形成しらせんピッチが短くなると、短くなったらせんピッチがフィラメントのP端方向に一方向的に伝播すること(一方向的な協同的構造変化)、さらに溶液中のコフィリンは、このらせんピッチが短くなった領域に優先的に結合することを見出した。今年度は、S1(ミオシンIIのモーター領域)とコフィリンが共存する際、両者がアクチンフィラメントとどのように結合するかを高速AFMで観察したところ、ATP存在下でS1アクチンフィラメントと相互作用している状況では、コフィリンのアクチンフィラメント結合が強く阻害されることを見出した。ATP存在下ではS1とアクチンフィラメントの結合は非常に短寿命であり、任意の時点において大半のアクチンプロトマーはS1と結合していないにもかかわらずコフィリン結合が強く阻害されたということは、S1によるアクチンフィラメントの構造変化に関して、強い距離的な協同性があるか、時間的なメモリー効果があることを示している。細胞内のアクチン結合ドメイン(ABD)の局在に関して、フィラミンのABDが前後極性をもったアメーバ細胞の後部に集積しやすいことが以前から報告されており、われわれはそのメカニズム解明を進めてきた。紫色の刺激光で蛍光が緑から赤に変化する蛍光タンパク質mKikGRとフィラミンABDの融合タンパク質を細胞性粘菌で発現し、前後極性をもった細胞の中央部のmKikGR-フィラミンABDを赤色に変換したところ、6秒以内に細胞後部が赤色蛍光を発するようになった。この結果は、フィラミンABDが細胞表層流れに依存してゆっくり細胞後部に集積するという従来のモデルを明確に否定するもので、細胞前後のアクチンフィラメントの構造が異なっているためにフィラミンが細胞後部に集積するという仮説が強く支持された。昨年度までの高速AFM観察により、コフィリンは協同的にアクチンフィラメントと結合するが、ATP存在下のミオシンS1は、アクチンフィラメントの協同的構造変化を介してアロステリックにコフィリン結合を阻害することが示唆されていた。今年度は、この成果を二つの方向でさらに展開した。(1)昨年度中に整備を完了した多色全反射蛍光顕微鏡を活用し、S1+ATPによるコフィリン結合阻害を広い視野で確認し、さらに半定量的に評価した。ATP存在下ではほとんどのアクチンプロトマーがS1と結合していない低濃度(1 uM)のS1でそうした阻害が起きることを示した。(ii)S1+ATPによるアクチンフィラメントの構造変化の解明を目指し、高速AFMによる詳細な観察を行ったところ、らせんピッチの伸長が起きることを初めて見出した。また、そうした構造変化がフィラメントに沿って一方向的に伝播するなら、フィラメントの構造変化がミオシンによる力発生を駆動するという仮説が現実的に想定されうるようになる。そこで、HMMがアクチンフィラメントと相互作用する様子の高速AFM観察に着手したところ、HMMがクラスターを形成してアクチンフィラメントに協同的に結合する様子が可視化され、クラスターの伸長方向が一方向的か双方向的かを明らかにする実験系が確立できた。

細胞内アクチンの構造多型性を検出する試みにも進捗があった。分子内FRET用にラベルした精製アクチンを細胞に導入し、FRET蛍光顕微鏡観察を行ったところ、PtK2細胞において、葉状仮足は高FRET状態、ストレスファイバーは低FRET状態であった。外力により変形した部位でも過渡的にFRET強度が上昇した。さらに高速で運動するケラトサイトにおいては、葉状仮足内でFRET強度に顕著な不均一性が認められ、細胞内アクチンフィラメントに何らかの構造多型性があることが証明された。アクチン結合タンパク質によるアクチンフィラメントの構造変化を高速AFMで観察するという分野では、昨年度までに引き続き顕著で当初想定を超える成果がでている。また、これと関連した手法であるが、多色全反射蛍光顕微鏡を使った観察系も立ち上がり、当初予定より遅れているが、成果が出つつある。細胞内アクチンフィラメントの構造多型性の検出を目指した分子内FRETアクチンを用いた研究も、細胞自体のFRET観察は想定以上の成果を上げている。今後、分子内FRET強度の変化と、実際の分子構造の変化の関連が確立できれば、きわめてインパクトの高い成果となるだろう。中間評価でご指摘のあった、アクチンフィラメントの構造多型によるアクチン結合タンパク質の制御の生理的機能の解明を目指した研究については、細胞生物学的なアプローチで取り組んでいる。本年度内にはまとまった成果は得られていないが、おおむね順調に進捗している。昨年度までに、ATP存在下のS1(ミオシンIIのモータードメイン)とアクチンフィラメントの結合は一過的でありながら、コフィリンの結合を強く阻害することから、S1+ATPによるアクチンフィラメントの構造変化の強い協同性が示唆されていた。本年度は、詳細な高速AFM観察を行ったところ、半分強の部分において、フィラメントの半らせんピッチが8%伸びることが分かったが、ADPやATPgS存在下では、半らせんピッチは全く伸びなかった。このことから、ATP加水分解サイクルを回っているS1のみがアクチンフィラメントの構造変化を起こすことが示された。興味深いことに、筋肉由来のトロポミオシン存在下では、S1+ATPはコフィリン結合を強く阻害したものの、らせんピッチの伸長は起きなかった。この結果は、収縮中の筋肉でアクチンフィラメントのらせんピッチの変化が観察されていないことと符合し、らせんピッチの変化はアクチンフィラメントの機能制御にとって必須ではなく付随的な現象であることを示唆する。平行してRng2とよばれる細胞質分裂に係わるタンパク質のアクチン結合ドメイン(Rng2-CHD)の解析を進めたところ、フィラメント中のアクチンプロトマー14分子にRng2-CHDが1分子しか結合していない状態で、高速non-processiveモーターであるミオシンIIによる運動が50%阻害された。しかしprocessiveモーターであるミオシンVの運動は全く阻害されなかった。
細胞接着装置タイトジャンクションの再編成と分解制御

多細胞生物の体は、上皮細胞シートによって覆われ異なる環境に分けられる。タイトジャンクションと呼ばれる細胞接着装置がバリアを構築し、様々な異なるコンパートメントの維持に機能している。発生過程や組織のターンオーバー、細胞分裂時など上皮細胞がダイナミックに動く際には、タイトジャンクションは崩壊および再編成されるが、そのメカニズムは不明であった。本研究では、タイトジャンクションがいかにバリアを維持しつつ分解及び再編成されるのか、そのメカニズムを明らかにした。多細胞生物の発生過程や個体の組織のターンオーバー、また細胞分裂などの際、上皮細胞シートの中で細胞が動く。この時、細胞接着装置はダイナミックに崩壊と再構築される。細胞間隙のバリア機能を担う細胞接着構造であるタイトジャンクション(以下TJと呼ぶ)は、このような接着の再編成をしながらもバリア機能を維持しなければならず、そのためにTJの崩壊と再編成は巧妙に制御されているはずである。しかしながら、その分子メカニズムは不明である。体研究では、TJの分解制御機構の解明を目指している。これまでTJ構成分子であるクローディンに結合するタンパク質として、ユビキチンリガーゼCBPRを同定していた。今年度、ユビキチンリガーゼCBPRが細胞内で本当にクローディンのユビキチンと分解に機能するかを詳細に検討した。クローディンを発現している細胞にCBPRを過剰発現すると、クローディンのユビキチン化および分解が増強されていることを見出した。また、クローディンとの結合部位を削ったCBPR及びユビキチンリガーゼのドミナントネガティブ型CBPRではユビキチン化の増強が見られなくなっていた。また、クローディンの分解経路に関しては、プロテアソーム系ではなく、エンドサイトーシスされた後リソソームで分解されることを示唆するデータが得られている。今後、CBPRをノックダウンした際にクローディンに対する影響を検討した後、これらの結果をまとめ論文投稿準備する予定である。本研究では、TJの分解制御機構の解明を目指している。これまでTJ構成分子であるクローディンに結合するタンパク質として、ユビキチンリガーゼLNXを同定していた。今年度、ユビキチンリガーゼLNXが細胞内で本当にクローディンのユビキチン化と分解に機能するかを検討した。クローディンを発現している細胞にLNXを過剰発現すると、クローディンのユビキチン化および分解が増強されていることを見出した。また、ドミナントネガティブ型LNXはクローディンの分解やユビキチン化に影響しないことを示した。さらにクローディンの分解機構を詳細に検討した結果、クローディンはプロテアソーム系ではなく、エンドサイトーシスされた後にリソソームで分解されること見出した。これらの結果は、タイトジャンクションの分解制御機構を初めて明らかにしたものであり、J Cell Sci.2009,122,985-994に報告した。
膜蛋白質の新しい結晶化方法の開発とその大腸菌膜結合型ホスホリパーゼAへの応用

本研究は膜蛋白質を結晶化する一般的な方法の開発を目指した。その方法は先ず膜蛋白質の2次元結晶を水の表面上に生成した脂質単分子膜を利用して作ることである。次にこの2次元結晶から3次元結晶を得る。この結晶化の材料として大腸菌外膜に存在するホスホリパーゼAを取り上げた。実験は2段階に分かれ、第一段階では純粋なDRPLAを大量に調製し、第二段階ではDRPLAの2次元および3次元結晶を作製する。20倍の活性をもつ大腸菌のDRPLA過剰産生菌から出発し、Sepharose Qカラムクロマトグラフィーを通してDRPLA粗精製品を予定通り得た。次に抗体カラムクロマトによって一段階でDRPLAを精製しようと試みた。DRPLAに対する家兎の抗血清からIgG画分(ポリクローナル抗体)を精製し、抗体カラムの作製を行った。DRPLAの抗体カラムへの吸着、脱離の実験条件を検討したところ、DRPLAを可溶化するために加える界面活性剤はDRPLAの抗体への結合を妨げることが判明した。DRPLAが可溶化し、且つ、抗体と結合する一連のバッファーを検討したところトリス塩酸バッファーにエタノール等の有機溶媒を含む系においてDRPLAは抗体へ結合した。しかし溶出蛋白を調べたところ、DRPLAは精製されておらず、電気泳動精製法に切り替えた。大型電気泳動装置を使い、大量の試料のSDS PAGEを行い、ゲルからDRPLAのバンドを切り出した。バンドのゲルから本酵素を電気的に回収する装置を作製し、これらによってDRPLA精製品を得た。予備実験の結果によるとこの電気泳動精製によりDRPLAのほぼ単一バンドを示す試料が得られる見通しがついた。この方法は基本的には他の蛋白にも適用でき、その応用範囲は広いと考えている。今後の予定としてはDRPLAの二次元および三次元結晶の作製を計画の手順に従って行う。蛋白質のX線結晶解析のために、膜蛋白質の良好な結晶を得る確実な方法の開発を本研究では目指している。実験計画は3段階に分かれ、第一段階は大腸菌の膜結合型ホスホリパーゼA(DRPLA)の純粋酵素試料を大量に調製すること、第二段階では水の表面に作った脂質単分子層膜を利用して、DRPLAの2次元結晶を作製すること、第三段階では水の表面に作られたDRPLAの2次元結晶をガラスプレート上に累積したり、あるいは、2次元結晶の自然成長によってDRPLAの3次元結晶を得ることから成っている。平成4年度では第一段階のDRPLAの精製を行なった。DRPLA活性が40倍の過剰産生菌を出発材料とし、破菌し、SDS界面活性剤で可溶化した菌ホモジネートから膜画分を調製し、アセトン沈澱、バッチ方式のセファロースQ吸着精製、セファロースQカラム分離にてDRPLAの粗画分を得た。これはまだ多くの不純物蛋白を含んでおり、純粋酵素の調製のため、抗体カラムの作製を試みた。即ち、粗DRPLAを電気泳動し、DRPLAに対応したバンドを切り取って抗原とし、家兎に免疫し抗血清を得た。アフィゲルプロテインAカラムを用い、抗血清からIgG画分を得た。これがDRPLAのポリクローナル抗体であることはウエスタンブロッティングで確認した。抗体カラムの予備的検討によると、界面活性剤によって可溶化されたDRPLAは抗体カラムとの結合が界面活性剤自身によって妨げられることが判明した。DRPLAを可溶化する一連のバッファー系を検討したところ、トリス塩酸バッファーに40%のエタノールを含む系が適当であることを見い出した。

現在、この系を使って抗体カラムによるDRPLAの最終精製を検討している段階である。私共は膜蛋白質を2段階によって結晶化する方法の開発を目指している。第一は膜蛋白質の2次元結晶を水の表面上に生成した脂質単分子膜を利用して作り、第二はこの2次元結晶か3次元結晶を得る方法で、この結晶化の材料として大腸菌外膜に存在するホスホリパーゼA(DRPLA)を取り上げた。当初、簡単に考えた本酵素の大量精製の問題で、現在大変苦労している。大腸菌のDRPLA過剰産生菌から出発し、フレンチプレスによる破菌、SDS界面活性剤による可溶化、SepharoseQカラムクロマトグラフィーを通してDRPLA粗精製品を得た。これを更に精製するためにDRPLAの抗体カラムを作って精製を試みたところ、本酵素を可溶化するために加えた界面活性剤によってDRPLAの抗体への結合が妨げられることが判明した。本酵素を可溶化し、且つ水相に多くの表面を露出させ、抗体と結合できるような系を求めて各種のバッファー系を調べたところ40%エタノール含有トリス緩衝液、ブタンスルホン酸又はペンタンスルホン酸含有緩衝液においてDRPLAは抗体へ結合した。しかし吸着した蛋白を抗体カラムから溶出して調べたところ、DRPLA以外に23の疎水性蛋白が混入し、抗体カラムによる精製はこれ以上は難しいと考えた。そこで、大型電気泳動精製に切り替えて、DRPLAの精製を開始した。すでに、大型電気泳動装置を使い、大量の試料のSDSPAGEを行い、SDSPAGEゲルからDRPLAのバンドを切り出している。ゲルから本酵素を電気的に回収する装置を工夫して作製しており、これらによってDRPLA精製品を得る予定である。この方法が成功すれば、他の蛋白にも適用でき、簡便な蛋白の大量精製法へつながると考えている。当初計画より大分遅れているがさらに本酵素に2次元、3次元結晶化へと進みたい。私共は膜蛋白質を結晶化する方法の開発を目指している。本実験は2段階に分かれ、第一段階では大腸菌の膜結合型ホスホリパーゼA(DRPLA)の純粋酵素試料を大量に調製し、第二段階では水の表面を利用して、DRPLAの二次元結晶を作製し、それから三次元結晶を得る。大腸菌のDRPLA過剰産生菌から出発し、SepharoseQカラムクロマトグラフィーを通してDRPLA粗精製品を予定通り得た。これを更に精製するために抗体カラムを作製した。家兎の抗血清からIgG画分を精製した。抗体カラムによる精製を試みたところ、本酵素を可溶化するために加えた界面活性剤によってDRPLAの抗体への結合が妨げられることが判明した。各種のバッファー系を調べたところ40%エタノール含有トリス緩衝液においてはDRPLAの抗体への結合が起こった。しかし吸着した蛋白を抗体カラムから溶出して調べたところ、DRPLA以外にまだ23の疎水性蛋白が混入しており、また、DRPLAの回収率も低いことから、抗体カラム精製法は不適切であると結論した。そこでポリアクリルアミドゲル電気泳動によるDRPLAの精製を試みた。大量の試料を泳動するため先ず大型電気泳動装置を作製した。
西洋古典文学における写本伝承史と本文校訂論の実証的研究

1.研究実施計画に基づいて、まず前年度までに行われた原資料の特定ならびに収集の作業状況と結果を反省し、二次的文献を含めた諸資料の分類・整理の状況に関しても確認を行った。2.前年度までに収集された原資料ならびに二次的文献、それらに基づいて整備されたカ-ド目録の記述等を随時利用しつつ、各研究分担者ごとに引きつづき個別の研究を進めた。本年度に重点的に研究された課題は次の通りである。(1)前年度に引きつづき、悲劇詩人アイスキュロスおよびエウリ-ピデ-スの作品断片ならびに本文校訂に関して、古代作家による引用とパピルス断片の両者を含めた総合的な検討を行う。(2)断片の形でのみ残るいわゆる叙事詩圏の叙事詩(『キュプリア』等)の伝承に関して同様にその本文校訂論上の諸問題を検討するとともに、内容的にもこれと関連するピンダロス等の詩作品の伝承についても考察する。(3)前年度に行ったロ-マ詩人コルネ-リウス・ガルルスの新発見のパピルス資料に関して引きつづきその古文書学的検討を含めた総合的考察を行い、あわせてその影響下に詩作した他のロ-マ詩人の諸作品に関してもその写本伝承と本文の校訂の問題を中心として考察を進めた。3.以上の研究を各研究分担者ごとに相互の調整を取りつつ進め、随時会合を開いて各々の進捗状況と成果を報告する機会を持った。4.以上の作業の成果を各研究分担者はそれぞれ論文の形にまとめ、これらを取りまとめて印刷し小冊子として研究成果報告書を作成した。5.本研究全体を反省し、また今後の研究課題への展望と方針を検討した。1.研究実施計画に基づいて,まず原資料の特定と収集の作業に着手した.これに伴い国内の研究機関における資料の保有状況調査として京都大学における関連資料・文献の調査を実施した.また二次的文献資料についても,本文校合報告図書,古文書学関連図書等を始めとしてその特定と収集を行った.これら資料の一部については調査段階では入手可能と思われたにも拘らず,予算的・時間的制約から断念せざる得ぬものもあったが,本研究遂行上特に支障のないだけの十分な資料を収集し得た.2.次いで,大学院生等他の研究掫者の協力をも得て,収集された資料の分類整理の内容の予備的記述を行い,詳細なカード目録を整備した. 3.以上の作業の結果をもとに,本年度は特に次の三点に重点を置いて研究を進めた.(1)アイスキュロスの作品断片の伝承ならびに本文校訂に関して,古代作家による引用とパピルス断片として発見されたものの両者を含めた総合的検討を行うことにより,古代におけるギリシア悲劇作品の伝承の実態を把握することに努める.(2)ソポクレースの主要写本人およびAを取り上げて両写本を比較校合しつつ各々の読みの確認を行い,また近現代における校訂版と対照してビザンチン中世の小文字写本の代表というべきこれら両写本の異読の意義とその修訂の根拠を考察する.(3)ウェルギリウスの主要写本のうち最古のものに属する4ー5世紀の大文字写本A,F,Rを対象としてその読みの確定と校合の作業を行い,ラテン文学作品の本文伝承史上における大文字本の位置づけの問題に配慮しながら,優れた伝承の歴史を有するウェルギリウス作品にすら早期から生じている異読の由来と影響を古文書学的観点から孝察する. 4.以上の作業を各研究分担者ごとに作業手順等の調整を行いつつ進め,研究の最終段階においては特に会合を開いて各々の進捗状況と成果を報告し,また今後の方針を検討した.1.研究実施計画に基づいて、まず原資料の特定と収集の作業状況への反省と再検討を行い、パピルス文書資料の重視ならびに古写本伝承史全般と個別の研究課題との関連に留意すべきことを再確認し、それに応じて資料の収集方法に若干の修正を施した。2.この新たな方針に基づいて引き続き原資料ならびに関連する二次的文献の特定と収集を行なった。またこれに伴って国内の他の研究期間における資料と関連文献の保有状況を調査として、改めて京都大学における当該調査を実施した。資料・文献の収集については、その一部は予算及び出版事情等により所期の成果に至らぬものもあったが、全般的には本研究遂行上重大な障害とはならなかった。3.次いで大学院生等の協力をも得て資料の分類整理と内容の予備的記述を行い、詳細なカード目録を整備した。4.以上の作業の成果をもとに、本年度は特に次の4点に重点を置いて研究を進めた。(1)前年度に引き続いてアイスキュロスの作品断片の伝承ならびに本文校訂に関して、古代作家による引用とパピルス断片の両者を含めた総合的検討を行なう。(2)それと並行してエウリーピデースの作品断片に関してもアイスキュロスと同様の検討を行い、これによって古代悲劇作品の伝承の実情に関する視野の拡大を図った。(3)スゴリアを含むアポロニオス・ロディオスの有力写本Pを取り上げ、これを近現代の校訂本を比較対照することにより、ビザンチン中世の小文字写本における異読の意義とその修訂の根拠を考察する。(4)紀元前1世紀のローマ詩人コルネーリウス・ガルルスの新発見のパピルス資料に関して、作者と同時代と推定される古代大文字写本の実例として、その古文書学的検討を含めた総合的考察を行なう。5.以上の作業を各研究分担者ごとに相互の調整を取りつつ進め、研究の最終段階においては特に会合を開いて各々の進捗状況と成果を報告し、また年度に向けての今後の方針を検討した。

1.研究実施計画に基づいて、まず前年度までに行われた原資料の特定ならびに収集の作業状況と結果を反省し、二次的文献を含めた諸資料の分類・整理の状況に関しても確認を行った。2.前年度までに収集された原資料ならびに二次的文献、それらに基づいて整備されたカ-ド目録の記述等を随時利用しつつ、各研究分担者ごとに引きつづき個別の研究を進めた。本年度に重点的に研究された課題は次の通りである。(1)前年度に引きつづき、悲劇詩人アイスキュロスおよびエウリ-ピデ-スの作品断片ならびに本文校訂に関して、古代作家による引用とパピルス断片の両者を含めた総合的な検討を行う。(2)断片の形でのみ残るいわゆる叙事詩圏の叙事詩(『キュプリア』等)の伝承に関して同様にその本文校訂論上の諸問題を検討するとともに、内容的にもこれと関連するピンダロス等の詩作品の伝承についても考察する。(3)前年度に行ったロ-マ詩人コルネ-リウス・ガルルスの新発見のパピルス資料に関して引きつづきその古文書学的検討を含めた総合的考察を行い、あわせてその影響下に詩作した他のロ-マ詩人の諸作品に関してもその写本伝承と本文の校訂の問題を中心として考察を進めた。3.以上の研究を各研究分担者ごとに相互の調整を取りつつ進め、随時会合を開いて各々の進捗状況と成果を報告する機会を持った。4.以上の作業の成果を各研究分担者はそれぞれ論文の形にまとめ、これらを取りまとめて印刷し小冊子として研究成果報告書を作成した。5.本研究全体を反省し、また今後の研究課題への展望と方針を検討した。