hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
バイオグラスコーティングによるチタニウムインプラントの新開発

実験動物には日本猿を用い、抜歯後3ヶ月を経過した【(M_1,P_2,P_1,P_1,P_2,M_1,)】部に新開発のバイオグラスコーティングを施したチタニウムインプラントを埋入し、粘膜弁にて完全に被覆した。3ヶ月の治瘉期間終了後、同部粘膜を再び切開し、チタニウム合金製支台をインプラントに連結した。粘膜の治瘉後、同支台上に硬質レジン製の上部構造物を装着することによりインプラントに機能圧を負荷した。その後、良好な口腔衛生状熊を確保するため、口腔洗浄並びにブラッシングを週2回行った。観察期間は、インプラント埋入後9および15ヵ月(機能圧負荷6および12ヵ月)とした。観察方法としては、上部構造装着後週1回、歯肉溝滲出液量、プラークインデックス、ジンジバルインデックス、ポケットの深さの測定を行い臨床的に検討を加えた。併せて、各観察期間終了後動物を屠殺し、インプラント周囲組織のX線学的並びに組織学的な検討を行った。臨床的には、観察期間中インプラントの動揺、脱落は認められず、評価のために用いた各指標の値は、計測開始約2ヵ月後より対照天然歯における値とほぼ同様となった。X線学的には経時的な変化は認められず、対照天然歯周囲と変らね骨梁パターンを示す海綿状骨がインプラントに接していた。組織学的には、観察期間による差異はほとんど認められず、インプラント周囲歯肉における炎症細胞浸潤は軽微であった。また、骨・インプラント界面においては、多くの部位で骨が直接インプラントに接していたが、一部疎性結合組織の介在も認められた。以上、本試験研究により、新開発のバイオグラスコーティングを施したチタニウムインプラントは、長期間顎骨内で機能することが明らかとなり、臨床応用への可能性を有しているものと思われる。日本猿(成猿)を用い、抜歯後3カ月を経過した【M_1】【P_2】【P_1】【P_1】【P_2】【M_1】部にバイオグラスコーティングしたチタニウムインプラントを埋入し、粘膜弁にて口腔と遮断した。3カ月の治癒期間終了後、同部粘膜を再び切開し、アバットメントを装着した。粘膜の治癒後、機能圧を負荷するため、硬質レジン製の上部構造物を装着した。上部構造物装着後は、0.2%クロルヘキシジンによる口腔内洗浄とブラッシングを週2回併用し、口腔清掃を行った。観察期間は埋入後6カ月(機能圧負荷3カ月後)とし、期間終了後、動物を屠殺し、組織学的ならびにX線学的に検討を行った。組織学的にみると、多くの場合インプラントに骨が直接結合している像がみられたが、わずかの部位には、疎性結合織が接している所見も認められた。炎症細胞浸潤は認められなかった。インプラントに接する歯肉の炎症は全体的に軽度であった。X線学的には、インプラント周囲骨組織に特に異常は認めず、対照歯と変らぬ骨梁パターンを示す海綿状骨がインプラントに接していた。臨床的観察では、肉眼的には特に歯肉部に異常は認めなかった。またインプラントの動揺や脱落も認めなかった。現在さらに電顕的観察及び検討を行っている。以上、本年度の結果から、バイオグラスコーティングしたインプラントの臨床応用への可能性が示された。引き続き次年度では、咬合機能を負荷させた状態におけるインプラント周囲組織の変化を、6カ月から12カ月後まで観察し、長期間にわたるインプラント・組織界面のあり方について検索を進めていく予定である。
国際協力による補修部品生産・供給システムの開発

本研究は,自動車製造業の生産のグローバル化に伴う諸問題を明らかにし,特に,世界中に販売された製品に対して効率的にユーザのニーズを満たす国際協力による補修部品生産・供給システムを開発するため,(1)自動車の現地組立生産及び相互補完生産の実情と諸問題を明らかにする,(2)構成品・部品の調達システムを含めた現地生産方式の新しい管理技術を開発する.(3)自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにする,(4)グローバルシステムとして,在庫量を必要最小限に抑え,かつ,多種多様なユーザのニーズに対して効率的に補修部品を生産・供給する情報システムを設計・開発する,ことを目的とするものである.これらの目的を達成するために文献及び聞き取り調査により自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにするとともに,国際協力による補修部品生産・供給システムを数式モデルに定式化して,その挙動を解析した.主要な研究成果は,以下の通りである.(1)構成品・部品の相互補完生産の実情と諸問題を明らかにし,新しい生産・物流システムを提案した.(2)国際協力による補修部品生活・供給システムを,JIT生産方式の概念に基づく引張り型生産指示方式を用いて数式モデルに定式化してその動特性を解析した.(3)補修部品生産・供給システムをサプライチェーンプロセスとして把握し,在庫量を必要最小限に抑え,かつ,多種多様なユーザのニーズに効果的に応えるシステムの概念を示した.(4)以上の研究成果を,11.に示すとおり,学術雑誌に投稿し国内外の学会で報告した.本研究は,自動車製造業の生産のグローバル化に伴う諸問題を明らかにし,特に,世界中に販売された製品に対して効率的にユーザのニーズを満たす国際協力による補修部品生産・供給システムを開発するため,(1)自動車の現地組立生産及び相互補完生産の実情と諸問題を明らかにする,(2)構成品・部品の調達システムを含めた現地生産方式の新しい管理技術を開発する.(3)自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにする,(4)グローバルシステムとして,在庫量を必要最小限に抑え,かつ,多種多様なユーザのニーズに対して効率的に補修部品を生産・供給する情報システムを設計・開発する,ことを目的とするものである.これらの目的を達成するために文献及び聞き取り調査により自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにするとともに,国際協力による補修部品生産・供給システムを数式モデルに定式化して,その挙動を解析した.主要な研究成果は,以下の通りである.(1)構成品・部品の相互補完生産の実情と諸問題を明らかにし,新しい生産・物流システムを提案した.(2)国際協力による補修部品生活・供給システムを,JIT生産方式の概念に基づく引張り型生産指示方式を用いて数式モデルに定式化してその動特性を解析した.(3)補修部品生産・供給システムをサプライチェーンプロセスとして把握し,在庫量を必要最小限に抑え,かつ,多種多様なユーザのニーズに効果的に応えるシステムの概念を示した.(4)以上の研究成果を,11.に示すとおり,学術雑誌に投稿し国内外の学会で報告した.本研究は,自動車製造業の生産のグローバル化に伴う諸問題を明らかにし,特に,世界中に販売された製品に対して効率的にユーザのニーズを満たす補修部品生産・供給システムを開発するため,(1)自動車の現地組立生産及び相互補完生産の実情と諸問題を明らかにする,(2)構成品・部品の調達システムを含めた現地生産方式の新しい管理技術を開発する,(3)自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにする,(4)グローバルシステムとして,在庫量を必要最小限に抑え,かつ,多種多様なユーザのニーズに対して効率的に補修部品を生産・供給する情報システムを設計・開発する,ことを目的とするものである.今年度は,特に,自動車補修部品の販売データをもとに,ABC分析により部品を層別し,Aクラスに属する部品を対象に,国際協力による補修部品生産・供給システムを数式モデルに定式化して,その挙動を解析した.主要な研究成果は,以下の通りである.(1)文献及び聞き取り調査により自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにした.(2)構成品・部品の相互補完生産の実情と諸問題を明らかにし,新しい生産・物流システムを提案した.(3)国際協力による補修部品生産・供給システムの動特性を解析するために,多段階・販売・生産・在庫・物流システムと把握して,JIT生産方式の概念に基づく引張り型生産指示方式を用いた数式モデルを構築して,その理論的解析を試みた.(4)以上の研究成果を,11.に示すとおり,国際学会で報告した。本研究は,自動車製造業の生産のグローバル化に伴う諸問題を明らかにし,特に,世界中に販売された製品に対して効率的にユーザのニーズを満たす補修部品生産・供給システムを開発するため,(1)自動車の現地組立生産及び相互補完生産の実情と諸問題を明らかにする,(2)構成品・部品の調達システムを含めた現地生産方式の新しい管理技術を開発する,(3)自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにする,(4)グローバルシステムとして,在庫量を必要最小限に抑え,かつ,多種多様なユーザのニーズに対して効率的に補修部品を生産・供給する情報システムを設計・開発する,ことを目的とするものである.今年度は,前年度に引き続き文献及び聞き取り調査により自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにするとともに,国際協力による補修

部品生産・供給システムを数式モデルに定式化して,その挙動を解析した.主要な研究成果は,以下の通りである.(1)構成品・部品の相互補完生産の実情と諸問題を明らかにし,新しい生産・物流システムを提案した.(2)国際協力による補修部品生産・供給システムを,JIT生産方式の概念に基づく引張り型生産指示方式を用いた数式モデルに定式化してその動特性を解析した.(3)補修部品生産・供給システムをサプライチェーンプロセスとして把握し,在庫量を必要最小限に抑え,かつ,多種多様なユーザのニーズに効果的に応えるシステムの概念を示した.(4)以上の研究成果を,11.に示すとおり,国際学会で報告し,研究紀要にまとめた.また,学術雑誌に投稿した.本研究は,自動車製造業の生産のグローバル化に伴う諸問題を明らかにし,特に,世界中に販売された製品に対して効率的にユーザのニーズを満たす国際協力による補修部品生産・供給システムを開発するため,(1)自動車の現地組立生産及び相互補完生産の実情と諸問題を明らかにする,(2)構成品・部品の調達システムを含めた現地生産方式の新しい管理技術を開発する,(3)自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにする,(4)グローバルシステムして,在庫量を必要最小限に抑え,かつ,多種多様なユーザのニーズに対して効率的に補修部品を生産・供給する情報システムを設計・開発する,ことを目的とするものである.これらの目的を達成するために文献及び聞き取り調査により自動車の補修部品生産・供給システムの実情と諸問題を明らかにするとともに,国際協力による補修部品生産・供給システムを数式モデルに定式化して,その挙動を解析した.主要な研究成果は,以下の通りである.(1)構成品・部品の相互補完生産の実情と諸問題を明らかにし,新しい生産・物流システムを提案した.(2)国際協力による補修部品生産・供給システムを,JIT生産方式の概念に基づく引張り型生産指示方式を用いた数式モデルに定式化してその動特性を解析した.(3)補修部品生産・供給システムをサプライチェーンプロセスとして把握し,在庫量を必要最小限に抑え,かつ,多種多様なユーザのニーズに効果的に応えるシステムの概念を示した.(4)以上の研究成果を,11.に示すとおり,,学術雑誌に投稿し国内外の学会で報告した.
組換え遺伝子拡散防止のための樹木の開花制御

モデル樹木として遺伝子情報や実験技術等が蓄積・整備されつつあるポプラ(セイヨウハコヤナギ)を研究対象とし、樹木全般に応用可能な花成抑制技術の開発に必要不可欠と考えられる、花成抑制に関わる遺伝子の単離とその発現特性及びポプラやシロイヌナズナの組換え実験系を利用した遺伝子ごとの花成抑制効果について解析した。さらに、ポプラから単離した減数分裂に関与するPnDmc1を抑制し、さらに、早期開花になるように組換えたポプラでは、胚珠の形成が異常になった花が観察された。近い将来に想定される、地球温暖化対策や地球環境の保全・修復を目的とした遺伝子組換え樹木の植栽によって生じると想定される組換え樹木の花粉や種子の飛散による遺伝子攪乱や生態系の破壊といった事案に対する対策手法の一つとして、組換え遺伝子拡散防止技術が必要であると考えられる。本研究では、モデル樹木として遺伝子情報や実験技術等が蓄積・整備されつつあるポプラ(セイヨウハコヤナギ)を研究対象とし、樹木全般に応用可能な花成抑制技術の開発に必要不可欠と考えられる、花成抑制に関わる遺伝子の単離とその発現特性及びポプラやシロイヌナズナの組換え実験系を利用した遺伝子ごとの花成抑制効果の2つの項目について解析することを目的とし、まず、ポプラの芽や花芽など複数の器官・組織からRNAを単離し、逆転写酵素等を利用したPCR法により花成抑制候補遺伝子として、シロイヌナズナの花成抑制因子Flowering locusCと4345%の相同性を持つ遺伝子PnFLC1、PnFLC2、PnFLC3を単離し、塩基配列を決定した。また、単離したこれら遺伝子の花成抑制効果等の機能を同定するために、シロイヌナズナ組換え体を作出した。本研究では、モデル樹木として遺伝子情報や実験技術等が蓄積・整備されつつあるポプラ(セイヨウハコヤナギ)を研究対象とし、樹木全般に応用可能な花成抑制技術の開発に必要不可欠と考えられる、花成抑制に関わる遺伝子の単離とその発現特性及びポプラやシロイヌナズナの組換え実験系を利用した遺伝子ごとの花成抑制効果の2つの項目について解析することを目的としてる。前年度までに得られた花成抑制候補遺伝子にっいてシロイヌナズナ組換え体を作出した。また、真核生物に広く存在する減数分裂に関与する遺伝子Dmc1のポプラでの相同遺伝子PnDmc1を単離した。この遺伝子は、シロイヌナズナのDmc1(AtDmc1)と比較すると、配列の同一性(identity)が87.5%、類似性が94.2%と非常に高いものであった。近い将来に想定される、地球温暖化対策や地球環境の保全・修復を目的とした遺伝子組換え樹木の植栽によって生じると想定される組換え樹木の花粉や種子の飛散による遺伝子擾乱や生態系の破壊といった事案に対する対策手法の一つとして、組換え遺伝子拡散防止技術が必要であると考えられる。本研究では、モデル樹木として遺伝子情報や実験技術等が蓄積・整備されつつあるポプラ(セイヨウハコヤナギ)を研究対象とし、樹木全般に応用可能な花成抑制技術の開発に必要不可欠と考えられる、花成抑制に関わる遺伝子の単離とその発現特性及びポプラやシロイヌナズナの組換え実験系を利用した遺伝子ごとの花成抑制効果の2つの項目について解析することを目的としている。まず、ポプラから単離した花成抑制遺伝子PnFLC1、PnFLC2、PnFLC3について、それぞれを過剰発現するシロイヌナズナ組換え体を作出したところ、一部で花成遅延を観察した。また、ポプラから単離した減数分裂に関与するPnDmc1を抑制し、さらに、早期開花になるように組換えたポプラでは、胚珠の形成が異常になった花が観察された。これらの結果については、今後、いくつか追加の試験を行い、その結果も含め、原著論文として公表していく予定である。
海産無脊椎動物に含まれる新規化合物N-メチル-D-アミノ酸の代謝および生理的役割

1.ヒトデ生殖巣および神経、イソギンチャク生殖巣、ホヤ生殖巣及び神経に冊メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)が検出された。2.ヒトデに存在するD-アスパラギンオキシダーゼは、D-アスパラギン酸よりもN-メチル-D-アスパラギン酸に対してより高い活性を示すことが明らかとなった。3.N-メチル-D-アスパラギン酸の前駆体と考えられるD-アスパラギン酸の生合成を可能とするアスパラギン酸ラセマーゼ活性を、ヒトデ精巣に発見した。本酵素活性には、ピリドキサール-5'-リン酸が関与している可能性が示唆された。4.春に比べ繁殖期である夏にヒトデ精巣のD-アスパラギン酸オキシダーゼ活性が低下していたのに対し、アスパラギン酸ラセマーゼ活性は有意に上昇していた。その際、県メチル-D-アスパラギン酸含有量は増加する傾向が認められた。これまで神経関係の研究に盛んに用いられてきたN-メチル-D-アスパラギン酸が、近年、天然に広く存在することが明らかとなった。海産無脊椎動物体内にはこのN-メチル-D-アズパラギン酸のみならず、そのエナンチオマーであるN-メチル-L-アスパラギン酸、さらにはN-メチル-D-グルタミン酸およびN-メチル-L-グルタミン酸も存在する。本研究はほとんど知見のないこれらのN-メチル-D-アミノ酸およびそのエナンチオマーの代謝および生理的役割を解明することを目的とする。平成18年度は、代謝酵素探索の手がかりとするために様々な海産無脊椎動物の各組織におけるN-メチル-D-アスパラギン酸、N-メチル-D-グルタミン酸およびそれらのエナンチオマーの分布とその含有量について比較検討した。これまでの研究でN-メチル-D-アミノ酸およびそのエナンチオマーの存在が明らかになっている二枚貝以外の、刺胞動物のイソギンチャク、棘皮動物のウニやヒトデ、軟体動物のアメフラシなど様々な海産無脊椎動物について調査し、その存在を確認した。これらの生物の多くにはD-アスパラギン酸オキシダーゼ活性が存在していた。粗酵素抽出液を用いて本酵素の基質特異性を調べたところ、N-メチル-D-アスパラギン酸およびN-メチル-D-グルタミン酸も基質とすることが明らかとなった。現在、本酵素の精製を試みており、均一な酵素が得られたならば詳細に基質特異性を検討する予定である。一方、S-アデノシル-L-メチオニンをメチル基供与体としてD-アミノ酸からN-メチル-D-アミノ酸が生合成されている可能性について、これらの生物を用いて検討しているが今のところその経路は確認できていない。その他の化合物をメチル基供与体として生合成されている可能性についても併せて検討している。海産無脊椎動物体内にはこのN-メチル-D-アスパラギン酸のみならず、そのエナンチオマーN-メチル-L-アスパラギン酸、さらにはN-メチル-D-グルタミン酸およびN-メチル-L-グルタミン酸も存在する。平成19年度は、昨年度の研究でN-メチルアミノ酸の存在が明らかとなったヒトデを主に用いて、以下の事項について検討した。1.D-アスパラギン酸の生合成を可能とする酵素の発見と精製N-メチル-D-アスパラギン酸の前駆体と考えられるD-アスパラギン酸の生合成を可能とする酵素活性を発見した。現在、本酵素の精製が進行中である。2.N-メチル-D-アミノ酸の分解に関与する酵素の精製N-メチル-D-アスパラギン酸およびN-メチル-D-グルタミン酸も基質とすることが明らかとなったD-アミノ酸オキシダーゼの精製が進行中である。3.N-メチルアミノ酸含有量と各酵素活性との関係N-メチルアミノ酸の代謝や生理的役割の手がかりを得るため、それらの含有量と各酵素活性の変動について検討した。D-アスパラギン酸の生合成を可能とする酵素活性が高い時期には、D-アミノ酸オキシダーゼ活性は低下し、その際、N-メチル-D-アスパラギン酸含有量は増加することが明らかとなった。

これまで神経関係の研究に盛んに用いられてきたN-メチル-D-アスパラギン酸が、近年、天然に広く存在することが明らかとなった。海産無脊椎動物体内にはこのN-メチル-D-アスパラギン酸のみならず、そのエナンチオマーN-メチル-L-アスパラギン酸、さらにはN-メチル-D-グルタミン酸およびN-メチル-L-グルタミン酸も存在する。本研究はほとんど知見のないこれらのN-メチル-D-アミノ酸およびそのエナンチオマーの代謝および生理的役割を解明することを目的とする。平成20年度は、昨年度までの研究でN-メチルアミノ酸の存在が明らかとなったヒトデを用いて、以下の事項について検討した。1. D-アスパラギン酸の生合成を可能とする酵素アスパラギン酸ラセマーゼの精製: N-メチル-D-アスパラギン酸の前駆体と考えられるD-アスパラギン酸の生合成を可能とするアスパラギン酸ラセマーゼ活性がヒトデ組織に存在する。本酵素をヒトデ組織から単離精製することを試みたが、各種カラムクロマトグラフイーを用いても非常に困難であった。2.アスパラギン酸ラセマーゼ活性およびD-アスパラギン酸オキシダーゼ活性の季節変動:両酵素活性が季節とともにどのように変動するのかについて調べた。その結果、春に比べ繁殖期の夏では精巣のD-アスパラギン酸オキシダーゼ活性が低下していたのに対し、アスパラギン酸ラセマーゼ活性は有意に上昇していた。一方、卵巣の両酵素活性には季節変化が認められなかった。このことからD-アスパラギン酸代謝酵素系がオスのヒトデにおいて何らかの機能を持つ可能性が示唆されるとともに、N-メチルD-アスパラギン酸との関連にも興味が持たれた。3.神経組織におけるN-メチルD-アスパラギン酸の存在:神経組織においてN-メチルD-アスパラギン酸濃度は高く、その生合成活性の存在が示唆された。
ダイレクト・リプログラミングによる萎縮唾液腺の新しい細胞治療法の開発

本研究の目的は、歯髄・歯根膜由来幹細胞と唾液腺導管細胞が発生学的相互作用を起こすことで、萎縮組織内で導管細胞から腺房細胞への分化増殖が促進される可能性を検討することである。導管にcommitした細胞から腺房細胞への直接分化を細胞移植より誘導できれば、唾液腺萎縮症への新しい細胞治療法の開発の基盤となり得る。当該研究期間では、まずヒト歯髄・歯根膜から単離し、増殖させた細胞を浮遊培養下でsphereを形成する細胞を増殖させると、神経堤細胞のマーカーを発現する幹細胞(歯牙由来神経堤様細胞;DNCC)が得られることを明らかにした。次に、このDNCCと唾液腺由来上皮細胞を共培養することで、唾液腺上皮細胞の腺房細胞への分化誘導を試みた。本実験では、唾液腺上皮細胞については、同じく浮遊培養にてsphereを形成する細胞を回収した後、無血清下で接着培養を行ない、増殖した細胞を使用した。この培養細胞には、導管系の特性を持った細胞を多く認めるが、腺房細胞へ分化した細胞は殆ど認められない。このような唾液腺細胞に対して、トランスウェルを介してDNCCと無血清下で共培養を行なったところ、いくつかnoduleの形成を唾液腺細胞に認めることが出来るようになった。しかしながら、これらの細胞の特性を解析しても明らかな腺房細胞のマーカーの発現を認めることが出来なかった。そこで、ヌードマウスにて作出した放射線性萎縮唾液腺モデルの顎下腺にDNCCを移植したところ、移植後8週にて唾液の分泌量の増加が認められ、唾液腺重量の低下の軽減も認められた。これらの効果が認められたため、現在そのメカニズムの解析を投与条件の検討と共に行なっているところである。本研究の目的は、神経堤由来である歯髄・歯根膜幹細胞から、さらに高い可塑性を持った幹細胞(歯牙由来神経堤様細胞;DNCC)の抽出・濃縮を行ない、DNCCと唾液腺の導管細胞の発生学的相互作用により、萎縮組織内で導管細胞から腺房細胞への分化増殖が誘導される可能性を検討することにある。導管にcommitした細胞から腺房細胞への直接分化を図るdirect reprogrammingを細胞移植より誘導できれば、唾液腺萎縮症への新しい細胞治療法の開発の基盤となり得る。昨年度までに、ヒト歯髄・歯根膜から単離し、増殖させた細胞を浮遊培養下でsphereを形成する細胞を増殖させると、神経堤細胞のマーカーを発現するDNCCが得られることを明らかにした。そこで、本年度はまず、このDNCCと唾液腺由来上皮細胞を共培養することで、唾液腺上皮細胞の腺房細胞への分化誘導を試みた。本実験では、唾液腺上皮細胞については、同じく浮遊培養にてsphereを形成する細胞を回収した後、無血清下で接着培養を行ない、増殖した細胞を使用している。しかしながら、これらの細胞の特性を解析しても明らかな腺房細胞のマーカの発現を認めることが出来なかった。本研究は、第一に神経堤由来である歯髄・歯根膜幹細胞から、さらに高い可塑性を持った幹細胞の抽出・濃縮を行なう。

幹細胞の様々な選択的条件を神経堤細胞の維持に用いる培養法に応用することで、神経堤の分化系譜に属する細胞への高い可塑性を持った神経堤由来幹細胞(NCSC)の抽出と濃縮を試み、その効率的な獲得法の開発を試みる。第二に、NCSCを応用して、放射線照射後の唾液腺萎縮組織に残存する導管細胞から、唾液分泌機能を持つ腺房細胞をin vivoにおいて直接誘導を行なう。NCSCと導管細胞が発生学的相互作用を起こすことで、萎縮組織内で導管細胞から腺房細胞への分化増殖が誘導される可能性を検討する。導管にcommitした細胞から腺房細胞への直接分化を図るdirect reprogrammingを細胞移植より誘導できれば、唾液腺萎縮症への新しい細胞治療法の開発の基盤となる。本年度は、まずヒト歯髄から単離した細胞を浮遊培養下でsphereを形成する細胞を増殖させた。sphereを形成する細胞塊の特性は、神経堤細胞のマーカーの1つであるp75NGFRや、Sox2、Stro-1といった幹細胞マーカーに陽性を示す細胞群を内部に含んでいることが分かった。そのため、浮遊培養にて得られたsphereを回収し、マウス顎下腺から単離した唾液腺上皮細胞と共に培養することとした。唾液腺上皮細胞については、同じく浮遊培養にてsphereを形成する細胞を回収した後、培養皿に播種した。培養皿に播種された唾液腺由来のsphere形成細胞は、無血清下で接着培養すると、増殖した細胞は導管系の特性を持った細胞を多く認め、腺房細胞への分化は認められない。そこで、現在トランスウェルを用いた歯髄由来のsphere形成細胞との共培養により、無血清下で培養を行なった唾液腺由来細胞の腺房細胞への分化誘導を様々の条件で試みているところである。現在、in vitroにおいて、培養唾液腺上皮細胞から腺房細胞への分化誘導に対する歯牙間葉系組織由来の幹細胞の影響を解析している。この実験にある程度の目途が立てば、放射線性の萎縮唾液腺モデル動物を使用したin vivo実験に移行することが出来、期間内に十分とは言えないが、ある程度のデータを蓄積することができると考えられる。上記したように、まずは現在行なっているin vitroの実験を継続する予定だが、ゲルを用いた共培養など他の培養法も試み、より腺房細胞への誘導性の高い条件を評価していく。又、放射線性の萎縮唾液腺モデルを免疫不全マウスにて作出する必要があり、in vitroの実験と併せて行なっていく。細胞培養と実験用動物の購入に加えて、細胞の特性を詳細に解析するための試薬や抗体が必要であり、さらに移植用器具や採取した障害組織の解析に関わる試薬、抗体や器具等も新たに必要である。
挿絵による仮名草子研究

本研究は、仮名草子の挿絵に当時の世相や読者の嗜好がいかに反映されているかを、挿絵分析を通じて解明することを最終目的としている。従来の仮名草子研究では、本文異同や読解に主たる目的が置かれ、挿絵の分析や解釈は看過されてきた。しかし、近世初期の仮名草子では、本文は同一のまま、挿絵だけが改版の度に差替わる傾向がある。しかも挿絵は、刊行時期・場所によって異なる。これは、すでに流布した本文は容易に変更できないが、挿絵は変更可能なため、版元が読者の嗜好を先読みし、売るための挿絵を考案していた可能性が高い。ゆえに、挿絵がどう変遷したかを分析することは、作品の享受史を分析することでもある。その意味で、文学研究における挿絵解釈の研究は重要な意義と新規性を持つ。研究期間を1年延長した今年度は、これまで発表した挿絵研究の論文を取り纏め、著書刊行の準備を遂行した。すでに入稿済みで、初校待ちの状況である。また、国際的評価の高い英文の学術雑誌への投稿準備を進めた。それ以外の主たる成果は『近世初期文芸』第35号に掲載済みである。以下に研究内容と成果を示す。1、仮名草子『北条五代記』に着目し、『大坂物語』・『嶋原記』等の挿絵と比較し、それぞれの特質を分析した。寛文8年松会版『大坂物語』の挿絵が最も近いことが判明した。2、『北条五代記』は、万治2年の京都の刊記を持つが、挿絵の形態は明らかに江戸版のものである。本文内容と挿絵分析によって『北条五代記』がどのような経緯を経て挿絵を掲載するに至ったかを分析した。3、著書刊行のため、これまでに発表した『大坂物語』・『嶋原記』等の挿絵解釈研究の論文10数本を取り纏め、内容を精査・加筆修正し、新たに書き下ろしの章を加え、出版社に入稿した。現在初校待ちである。2019年秋に刊行の予定。今後も挿絵解釈の研究を継続し、より多くの仮名草子作品の挿絵分析をさらに推進する。本研究の目的は、仮名草子の挿絵の分析を通じ、挿絵の持つ働きや当時の読者の嗜好を解明することである。従来の文学研究では、本文読解に重きが置かれ、挿絵の解釈や特性の分析は看過される傾向があった。しかし挿絵には、本文に基づいて読者の想像をかき立て、物語世界に読者を引き込む重要な働きがある。ゆえに、挿絵の本文との整合性を確認し、どの挿絵が当時の読者に受け容れられたかを分析することは、文学研究において重要な要素を持つ。本研究はその空白を埋め、これまで解明できなかった挿絵の働きや読者の嗜好を新たに分析する。今年度の成果は『近世初期文芸』第32号に掲載済みである。1、本文は同一だが改版する度に挿絵が改訂される仮名草子『大坂物語』に着目し、全国に散見する『大坂物語』の挿絵の調査収集を行い、挿絵内容の整理・分類を行った。2、改版の度に挿絵が差し替えられる理由について、天理大学附属天理図書館所蔵の簡約版『大坂物語』を取りあげて分析した。天理大学本は、その内容から他版の簡約版であると判明した。3、簡約された内容を明白にするため本文比較を行った。最初に整版となり、以後もほぼ同一のまま継承される寛永無刊記版の本文と比較した。また、巻末にある頸帳について、他版の頸帳と比較した。挿絵は、簡約版となってどの場面が削除され、どの場面が残されたのかを分析した。その結果、天理大学本簡約版『大坂物語』の以下の3つの特徴が明らかとなった。[1]天理大学本簡約版『大坂物語』の本文は、寛永版の本文の一部を記載したものではなく、軍記物独特の言い回しを短縮・削除して、大坂冬の陣・夏の陣全体を記述したものである。[2]天理大学本簡約版『大坂物語』の頸帳は、寛文八年問屋版『大坂物語』の頸帳を元にしている。[3]天理大学本簡約版『大坂物語』の挿絵には、大坂方、特に真田贔屓の傾向が確認できた。所期の目的に対して、基礎段階の調査および関連研究などおおむね順調に進展し、次年度以降での更なる発展につながる感触を得ている。本研究の最終目的は、仮名草子の挿絵に当時の読者嗜好が反映されていることを、挿絵分析を通じて解明することである。従来の仮名草子研究では、本文異同や読解に主眼が置かれ、挿絵の解釈や特性の分析は看過される傾向があった。しかし本文は同じまま、改版の度に差替えられる仮名草子の挿絵には、刊行時期・場所によって異なる傾向があり、版元が読者の嗜好を先読みして、売るための挿絵を考案していた可能性が高い。ゆえに、仮名草子の挿絵変遷を分析することは、その作品の享受史を分析することでもある。その意味で、文学研究における挿絵分析は重要な要素を持っている。本研究では、これまで未解明であった挿絵の働きや読者嗜好を、新たに分析する。今年度の主たる成果は『近世初期文芸』第33号に掲載済みである。また、これまでに発表した挿絵研究を取り纏め、著書原稿の執筆にとりかかった。

1、昨年に引き続き仮名草子『大坂物語』に着目し、『大坂物語』の挿絵調査・収集を精力的に行い、挿絵内容の整理・分類を行った。2、従来未解明であった明暦四年松会版『大坂物語』を入手し、その内容を詳細に分析した。明暦四年松会版『大坂物語』が、その形態から上巻のみの刊行であったことを推察し、同書が黎明期の江戸版に当たることを明らかにした。3、従来の江戸版はごく限られた時期・版元のものを指すが、本研究はそれを狭義の江戸版と捉え、新たに広義の江戸版の概念を提議した。すなわち、明暦四年松会版『大坂物語』のように、まだ江戸版として特徴を完全に有していないものを黎明期の江戸版とする。また、松会・山本九左衛門・問屋らが活躍した時期の版を全盛期の江戸版とし、それが崩れていく時期の江戸版を混迷期の江戸版と名付け、3つを合わせて広義の江戸版と考える。最終年度に当たる平成29年度は、この広義の江戸版の観点で仮名草子の挿絵分析をさらに推進する。所期の目的に対して、基礎・拡張段階の調査および関連研究などおおむね順調に進展し、次年度以降での更なる発展につながる感触を得ている。1、前年に引き続き仮名草子『大坂物語』と『嶋原記』に着目し、両者の挿絵の相関性を分析した。2、とくに『嶋原記』の諸版の挿絵変遷に注目し、それぞれの版の特質について整理した。3、『嶋原記』の挿絵の中でも、最後に刊行された作品は『天草物語』と書名を変えている。この『天草物語』は貞享5年服部版のほかに、宝永5年萬屋版、刊年削除岩瀬文庫本の3種が現存する。この3種は、改版の度に一部の挿絵が削除されることがこの度の調査で確かめられた。3種の挿絵が、なぜ一部だけ削除されていくのか、その理由を削除された挿絵を比較しながら分析した。削除理由としては、本文内容との整合性がない、為政者側にとって不都合な挿絵である、の2つが挙げられる。最終年度を延長する平成30年度は、『大坂物語』『嶋原記』に留まらず、より多くの仮名草子作品の挿絵分析をさらに推進する。所期の目的に対して、調査および関連研究などはおおむね順調に進展しているものの、次年度において論文の投稿・刊行、著書の執筆等の成果発表を行う必要がある。本研究は、仮名草子の挿絵に当時の世相や読者の嗜好がいかに反映されているかを、挿絵分析を通じて解明することを最終目的としている。従来の仮名草子研究では、本文異同や読解に主たる目的が置かれ、挿絵の分析や解釈は看過されてきた。しかし、近世初期の仮名草子では、本文は同一のまま、挿絵だけが改版の度に差替わる傾向がある。しかも挿絵は、刊行時期・場所によって異なる。これは、すでに流布した本文は容易に変更できないが、挿絵は変更可能なため、版元が読者の嗜好を先読みし、売るための挿絵を考案していた可能性が高い。ゆえに、挿絵がどう変遷したかを分析することは、作品の享受史を分析することでもある。その意味で、文学研究における挿絵解釈の研究は重要な意義と新規性を持つ。研究期間を1年延長した今年度は、これまで発表した挿絵研究の論文を取り纏め、著書刊行の準備を遂行した。すでに入稿済みで、初校待ちの状況である。また、国際的評価の高い英文の学術雑誌への投稿準備を進めた。それ以外の主たる成果は『近世初期文芸』第35号に掲載済みである。以下に研究内容と成果を示す。1、仮名草子『北条五代記』に着目し、『大坂物語』・『嶋原記』等の挿絵と比較し、それぞれの特質を分析した。寛文8年松会版『大坂物語』の挿絵が最も近いことが判明した。2、『北条五代記』は、万治2年の京都の刊記を持つが、挿絵の形態は明らかに江戸版のものである。
大気微粒子の混合状態とその肺沈着の関係：次世代の健康影響評価に向けた解析

大気汚染物質である微粒子(エアロゾル)の呼吸による体内への取り込みは、人の健康に悪影響をもたらす。大気中には様々な大きさと組成を持つエアロゾル粒子が存在し、呼吸器内の動力学的な過程に伴うその沈着の程度は、粒子の乾燥粒径と呼吸器内での吸湿成長に依存する。また、粒子の人体への作用も組成・沈着部位に依存する可能性が考えられる。このため、大気エアロゾルの健康影響のメカニズムを正確に把握するためには、エアロゾルの混合状態と呼吸器への沈着、さらにそれに引き続く生化学的な作用に至る関係の理解が重要だと考えられる。本研究では、吸湿成長測定用タンデムDMAと走査式モビリティパーティクルサイザによって得られる大気エアロゾルの乾燥粒径・吸湿性の情報などにもとづき、エアロゾルの混合状態と呼吸器沈着の関係を明らかにすることを目標としている。本年度は、本課題の実施に先立って解析を始めていた、2010年夏季に名古屋で取得した大気エアロゾルの粒径-吸湿性分布のデータ(Kawana et al., 2014)を用いた解析を続けるとともに、2009年秋季に名古屋で取得した粒径-吸湿性分布のデータ(Kawana et al., 2016)を用いた解析にも取り組んだ。2009年に実施した観測では一日あたりの粒径-吸湿性分布の測定頻度がより高く、胸郭内(気管支および肺胞)における沈着の時間変動に着目した解析を始めた。呼吸器に取り込むエアロゾルの粒径-吸湿性分布が呼吸器沈着にどのように影響しているのかについて、今後さらに検討を進めたい。過去に取得した観測データの解析に加えて、吸湿成長測定用タンデムDMA等を用いた新規の大気観測を行うことを計画していたが、次年度に持ち越すことにした。名古屋以外の地点において過去に取得した吸湿性データの解析も今後の課題となった。名古屋において過去に取得した観測データの解析で得られる結果を整理し、得られた知見を踏まえて他地点の観測データの解析方法や、新規に行う大気観測の手法の詳細を検討することで、効率的な研究の推進を目指したい。次年度の研究について考慮し、少額ではあるが繰り越して次年度に使用することが望ましいと判断した。人件費の補填に用いることができる。
風邪誘発気管支喘息の病態と治療法の研究

1.風邪誘発気管支喘息の病態を研究するため、minor groupに属する2型ライノウイルスの感染受容体と気道上皮細胞の炎症性サイトカインおよび受容体であるLDL受容体の合成に対する作用を調べた。培養ヒト気管上皮細胞を用いると、2型ライノウイルスおよびサイトカインIL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αの培養上清放出量は抗LDL受容体抗体で減少したため、minor groupライノウイルスはLDL受容体を介して感染することが明らかになった。また、ライノウイルス感染後LDL受容体合成が亢進した。ライノウイルスの反復感染との関係が示唆された。2.気道上皮透過性亢進は気管支喘息の主要な病態である。気道上皮透過性を電気生理およびマンニトール透過性で調べた。過酸化水素は培養ヒト気管上皮細胞の透過性を亢進したが、ライノウイルスを感染させた場合、透過性亢進が更に増加した。ライノウイルス感染が気道のバリヤー機能を低下させることが明らかになった。3.風邪誘発気管支喘息の治療法を研究するため、ライノウイルス感染抑制と炎症性サイトカイン合成抑制について調べた。グルココルチコイドおよびエリスロマイシンは培養ヒト気管上皮の接着分子ICAM-1合成を抑制してライノウイルス14型感染を阻害した。また、ライノウイルス感染後の炎症性サイトカイン合成も抑制した。更に、マクロライド系抗生物質に属するバフロマイシンは細胞膜のH^+ATP酵素活性を抑制してライノウイルスの細胞内侵入とその後のライノウイルス合成を抑制することが明らかになった。これらの薬品はライノウイルス感染阻止とそれに続く気道炎症を抑制して風邪誘発気管支喘息の治療法として期待できると考えられた。ライノウイルス感染に伴う気道上皮細胞のライノウイルス合成、炎症性サイトカイン合成および接着分子ICAM-1合成亢進の制御について研究を行った。研究実績は以下の通りである。1)ヒト剖検気管から上皮細胞を単離培養し、ライノウイルスを感染させた。ライノウイルス感染前後でデキサメサゾンを培養液中に加えた。デキサメサゾンは培養液中のライノウイルス量を減少させ、また、炎症性サイトカインのIL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αおよびICAM-1を減少した。感染成立に必要なライノウイルス量はデキサメサゾンを作用させた上皮細胞で増加した。デキサメサゾンはライノウイルス感染で増加した転写因子NF-κBの発現を抑制した。デキサメサゾンで代表されるグルココチコイドはライノウイルス受容体であるICAM-1と炎症性サイトカイン合成を抑制し、ライノウイルスの感染増殖を抑制することが明らかになった。2)同様に、マクロライド抗生剤のエリスロマイシンを培養中に加えた。エリスロマイシンは培養液中ライノウイルス量、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、接着分子ICAM-1合成を抑制した。エリスロマイシンは感染成立に必要なライノウイルス量を増殖させ、感染に対する抵抗性を示した。エリスロマイシンはNa^+-H^+チャンネルの働きを抑制し、またNa^+-H^+チャンネル阻害剤は培養液ライノウイルス量を減少した。RT-PCRでNa^+-H^+チャンネルが気管上皮細胞に存在することを明らかにした。気管支喘息憎悪の重要な因子である炎症性サイトカインとICAM-1合成およびライノウイルス感染に対してグルココルチコイドおよびエリスロマイシンが抑制効果を持つことが明らかになった。今後の治療において重要な基礎データと考えられる。1)ライノウイルスの大部分は接着分子ICAM-1を受容体とするが、ICAM-1を介さない感染経路を持つminor groupのライノウイルスの受容体を検索した。

2型ライノウイルスはヒト剖検気管上皮細胞に感染して培養液中にライノウイルスを放出した。また、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αの合成を亢進した。抗LDL受容体抗体を培養上皮細胞に作用させると2型ライノウイルスの感染が抑制され、培養液ライノウイルス、サイトカインが減少した。2型ライノウイルス感染は気道上皮細胞のLDL受容体合成を促進した。minor groupライノウイルスが気道上皮細胞のLDL受容体を介して感染する経路が明らかになった。ライノウイルス感染によるLDL受容体合成亢進はライノウイルス反復感染の1つの原因になると推測された。2)気道上皮透過性亢進は気管支喘息の主要な病態であり、ライノウイルス感染の作用を調べた。培養ヒト気管上皮細胞の透過性を電気生理および^3Hマンニトール通過量で調べた。気道上皮透過性は活性酸素の1つである過酸化水素で亢進するが、ライノウイルス感染によってこの作用が増加した。また、IL-1βでICAM-1を増やしてライノウイルスを感染させ同様の実験を行うと、透過性が更に亢進した。これらの結果より、ライノウイルス感染は気道上皮細胞のバリヤー機能を低下させる作用のあることが明らかになった。昨年度は治療方法を中心にグルココルチコイドとエリスロマイシンのライノウイルス感染抑制作用を明らかにし、本年度は気管支喘息の発症、増悪における病態を研究した。今後とも風邪誘発気管支喘息の病態と治療法について研究を進める予定である。
分子状酸素と酸素塩基による活性酸素種の生成

本研究は、活性酸素種の生成機構の解明とその検出が、単に化学の領域にとどまらず、生化学や医学に於いても極めて重要な問題であるという見地から行われた。本研究で明らかになった事柄を以下列記する。1.酸素化学の最も基本的化学種である分子状酸素と水酸化物アニオンは、γ線でも照射しない限り反応しないと考えられていた。然し、OH^ーがフォスフォリックトリアシドの様にOH^ーに溶媒和し難い系ではOH^ーが強い一電子還元作用を示し、分子状酸素を一電子還元し、自らは・OHに分子状酸素はス-パ-オキシドアニオンラジカル(O^ー_2)に変化する可能性があると考え実験を行った。水酸化物アニオンを^<18>Oで標識したものを用いて実験したところ、分子状酵素に^<18>Oがとり込まれていることが質量分析により明かにした。この事実は、・OHの共後塩基である酸化物アニオンラジカル(O^ー)は分子状酸素オゾンアニオンラジカル(O^ー_3)を中間体とする反応で酸素交換反応をすることが知られているので、予想した水酸化物アニオンと分子状酸素の反応が起ったことの証明になるであろう。2.上記の成果の延長上の研究として、もし、上の反応が真ん起こるものならば水酸化物アニオンより更に優れた一電子還元剤になり得るであろうtーブトキシドアニオンと分子状酸素の反応について検討した。新しく金属カリウムとtーブタノ-ルから調整したカリウムtーブトキシドは過酸化水素を10^<ー3>モル%しか含まないのに対して、乾燥空気中放置されたtーBuOKや市販品は10^<ー1>10^<ー2>をモル%のH_2O_2を含むことが明かになった。このH_2O_2は予想した反応で生じたO^ー_2が不均化して生じたものと考えられる。3.ス-パ-オキシドアニオンラジカルの生化学的な系における定常濃度の簡便な測定法を開発した。活性酸素種の研究は、その化学的重要性は勿論の事、生化学的、医学的にも重要である。酸素化学の最も基本的な化学種は分子状酸素と水酸アニオンであるが、この両者は水溶液中反応しないと報告されている。然しながら、、水酸アニオンの酸化還元電位は溶媒和によって大きく変化し、非プロトン性溶媒中ではかなり強い一電子還元剤として作用し得る。水酸アニオンに対して親和力の小さな溶媒を対イオンを選択するならば、水酸アニオンが分子状酸素に対いて一電子還元剤として作用し、eq1に示す反応が起ってス-パ-オキンドアニオンラジカルと、酸素原子アニオンを生成するものと期待して研究を行った。この目的のために、対イオンとしてセシウムイオン、溶媒としてヘキサンメチルフォスフォリックトリアミド(HMPA)を用いた。E.J.Hartらの研究により、アルアリ水溶液中酸素原子アニオンラジカルが生じると、水酸アニオンと酸素分子の間にeq24に示す連鎖反応による酸素交換反応がおこる事がすでにわかっている。そこで、^<18>Oで標識したCs^<18>OMを無水HMPA中1気圧酸素を含む封管中、25°Cおよび80°Cで暗所反応させた。一定時間毎の封管中の分子状酸素を質量分析計でm/e32と34にピ-ク比を求めた。期待した通り酸素ガス中の^<18>

O含量は時間と共に増大した。この事実は、溶液中に^<18>O^ーが生成した事を意味する。^<18>O^ーの生成は当初期待したeqへの反応であろうと考えているが、今後その確認を得る実験を検討する。いずれにしても温和な条件で酸素原子アニオンが生成した事は非常に興味深かい結果である。本研究は、活性酸素種研究の重要性が化学の領域のみならず、生化学や医学の分野に於いても極めて大きいという立場で行われており、昨年は分子状酸素と溶媒和を受けていないnaked水酸アニオンの反応でス-パ-オキシドアニオンラジカルと水酸ラジカルが生成することを示唆する^<18>oートレ-サ-実験結果を得た。もし、この様に酸素アニオン種が分子状酸素と反応するのであれば、固体状態のアルコキシアニオンと分子状酸素が反応し、アルコキシラジカルと、O_2^-ラジカルが生成する可能性がある。然し、この反応の逆反応速度の方がはるかに大きく、ほとんどがもとのアルコキシアニオンと分子状酸素を再生するであろう。もし、この反応で生じた酸素ラジカル種が反応して過酸化水素を生じる方向に進むことは十分考えられる。その検証をtーブケルアルコキシドを用いて行った。tーブタノ-ルと金属カリウムから新しく調整したtーB_uOKは5.6×10^<-3>モル%のH_2O_2を含むのみであったが、これを空気中(乾燥条件下)放置したもの、および3つの試薬メ-カ-から購入したものは、いずれも2×10^<-2>10^<-1>モル%の過酸化水素を含んでいることが明らかになった。これは予想通り、分子状酸素の一電子還元で生じたO_2^-ラジカルが微量含まれているであろうtーB_uOH存在下不均化して過酸化水素を与えたものと考えられる。これらの事実は酸素塩基が分子状酸素の一電子還元剤として作用することを示唆している。一方,ス-パ-オキシドアニオンラジカルの生化学的系における検出方法として、ジヒドロニコチンアミドアデニンジヌクレオチド燐実(NADPH)のヒドロペルオキシラジカル(O_2^-の共役酸)開始自働酸化反応を見出した。これはNADPHの340nmの吸収強度の減少速度をス-パ-オキシドディスムタ-ゼ存在下とそれが存在しない場合の二つの条件で測定し、両者の比較から系中のO_2^-濃度を算出する簡便法である。
乾乳期における組換え牛サイトカイン乳房内投与による難治性乳房炎治療技術の開発

乾乳時における組換え牛顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(rbGM-CSF)の乳房内注入が、乳房炎治療あるいは予防効果を有する可能性について検証した。乾乳時に、乳房炎罹患牛(治療試験)ならびに健常牛(予防試験)の乳房内にrbGM-CSF(400μg/乳房)を注入し、分娩後1ヶ月間の乳汁体細胞数及び総菌数等の変化について調査した。治療試験では乳汁総菌数及び体細胞数は乾乳時に比べ分娩後に低値となり、予防試験では分娩後の新規感染は見られなかった。乾乳時のrbGM-CSF乳房内投与は、既存の乳房内感染菌の減少及び新規感染の阻止に関連しており、乳房炎治療あるいは予防効果を有することが示唆された。牛乳房炎に対して、泌乳期治療で効果を確認している組換え牛顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(rbGM-CSF)の、乾乳期治療剤としての有効性評価および作用機序の解明を行い、rbGM-CSF乾乳期治療技術を確立することを目的とした。今年度は、健康乳房に対する乾乳時rbGM-CSF乳房内投与が、分娩後の乳性状及び血液性状に与える影響を調査した。乾乳1週間前に4分房の乳汁細菌検査ならびに体細胞数で罹患程度を確認し、乳汁中から細菌が検出されず、体細胞数が10万個/ml以下の牛の乳房を健常乳房として供試した。乾乳時に供試乳房内にrbGM-CSF(400μg/5ml/乳房)を投与し、投与後1、2、3日及び投与後1週間において分娩時まで一般症状の観察及び血液検査を実施した。分娩後は分娩直後から1週間隔で4週目まで乳汁及び血液を採取し、細菌ならびに一般性状検査を行った。分娩後1から4週目までの乳性状検査結果(細菌数及び体細胞数)から、乾乳時におけるrbGM-CSFの乳房内投与効果を評価した。供試乳房は、rbGM-CSF投与後に顕著な変化は見られず、供試牛は概ね60日前後の乾乳期間を経て、正常分娩を行った。分娩直後の初乳は軽度の血乳であったが、それ以降は正常乳の状態に回復した。供試乳房からは、1例を除いて分娩後も病原微生物は検出されず、体細胞数も10万個/ml以下の正常値を示した。検出された1例の乳汁からは、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌(CNS)が143cfu/ml検出されたが分娩後漸減し、体細胞数に関しても同様に減少し、正常乳となった。健康牛が乾乳する際に、rbGM-CSFを乳房内投与したところ、乾乳期間中ならびに分娩後4週目までにおいて、臨床症状、乳性状および血液性状に著変はみられなかった。牛乳房炎に対して、泌乳期治療で効果を確認した組換え牛顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(rbGM-CSF)の乾乳期治療剤としての有効性評価および作用機序の解明を行い、rbGM-CSF乾乳期治療技術を確立することを目的とした。今年度は、健康分房および乳房炎罹患分房に対する乾乳導入時rbGM-CSF乳房内投与が、分娩後の乳性状及び血液性状に与える影響を調査し、その治療及び予防効果を検証した。乾乳導入時に健康分房(体細胞数(SCC):6.3±3.0万個/mL、n=4)及び乳房炎分房(SCC:67.7±27.8万個/mL、n=4)にrbGM-CSF(400μg/5ml/分房)を乳房内投与し、投与後1、2、3日及び投与後1週間において分娩時まで一般症状の観察及び血液検査を実施した。分娩後は分娩直後から1週間隔で4週目まで乳汁及び血液を採取し、細菌並びに一般性状検査を行った。分娩後、0から4週目までの乳性状検査結果(細菌数及び体細胞数)から、乾乳導入時におけるrbGM-CSF乳房内投与による治療及び予防効果を評価した。乾乳時において健康分房及び乳房炎罹患分房にrbGM-CSFを注入した場合、1頭を除いて分娩後714日以降は体細胞数が30万個/mL未満となった。乳房炎の乾乳期治療及び予防にboGM-CSFが有効となる可能性があるが、更なるデータの蓄積が必要と考えられる。また、rbGM-CSF投与の対照試験として乾乳期軟膏(抗生剤)投与試験の必要性が考えられるため、次年度に実施する。乳用牛は乾乳時に抗菌剤を投与することによって、泌乳期の難治性乳房炎の治療あるいは乾乳時の新規乳房内感染の予防を行っている。そのため、乾乳時処置において多量の抗菌剤が使用されており、薬剤耐性菌出現の観点から抗菌剤に替わる新規治療・予防技術の開発が求められている。我々は遺伝子組換えカイコ発現系で作出した牛顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(TGrbGM-CSF)の乳房内投与が泌乳期乳房炎に治療効果を示すことを報告したが、乾乳時処置の効果については未検討であった。本研究では、乾乳時における乳房炎乳房並びに健常乳房へのTGrbGM-CSF注入が、乳房炎治療あるいは予防効果を有する可能性について検証した。乳房炎罹患牛5頭(治療試験)ならびに健常牛4頭(予防試験)を用い、各供試牛の乳房内にTGrbGM-CSF(0.4mg/乳房)を注入した。

乳汁検体は、乾乳後0日、分娩後0、7、14及び21日に採取し、CMT試験、体細胞数測定及び細菌学的検査を実施した。血液検体は、乾乳後0、1、2、3及び7日、分娩後0、7、14及び21日に採取し、一般および生化学的検査を実施した。得られた結果は、乾乳後0日と分娩後0、7、14及び21日について比較した。各供試牛において、TGrbGM-CSF注入後の臨床症状並びに血液指標に変化は見られなかった。治療試験では、TGrbGM-CSF注入後に原因菌であるCNS、SAG、OSが乳中から消失し、乳中菌数は乾乳時に比べ分娩後7、14、21日で低値となった。体細胞数も乾乳時に比べ分娩後0、7、14、21日と漸減した。予防試験では、分娩後の新規感染はなかった。以上から、乾乳時のTGrbGM-CSF乳房内投与は、乳房内感染菌の減少および新規感染の阻止に関連しており、乳房炎治療あるいは予防効果を有することが示唆され、新たな乳房炎防除技術となる可能性が考えられた。乾乳時における組換え牛顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(rbGM-CSF)の乳房内注入が、乳房炎治療あるいは予防効果を有する可能性について検証した。乾乳時に、乳房炎罹患牛(治療試験)ならびに健常牛(予防試験)の乳房内にrbGM-CSF(400μg/乳房)を注入し、分娩後1ヶ月間の乳汁体細胞数及び総菌数等の変化について調査した。治療試験では乳汁総菌数及び体細胞数は乾乳時に比べ分娩後に低値となり、予防試験では分娩後の新規感染は見られなかった。乾乳時のrbGM-CSF乳房内投与は、既存の乳房内感染菌の減少及び新規感染の阻止に関連しており、乳房炎治療あるいは予防効果を有することが示唆された。当初の予定では、平成26年度に牛乳房炎に対する乾乳期抗生剤治療の実施の予定であったが、供試牛確保の都合から、平成27年度に実施予定の健常牛に対するrbGM-CSF投与試験を行った。試験順序を変更したが、本課題(3年間)を遂行する上で治療試験の実施は順調であり、当初の予定通り終了できると考えられるため。臨床獣医学、獣医免疫学乾乳中の供試牛(供試分房)の血液並びに乳汁検査を引き続き実施し、乳汁及び血液サンプルが揃い次第、生化学及び免疫機能検査を行う。次年度においても、今年度と同様の試験を実施し、統計学的処理が必要な供試頭数を確保する。rbGM-CSF投与の対照として乾乳期軟膏(抗生剤)投与試験も併せて実施する。乾乳期にrbGM-CSFを乳房内に投与する手技を確立することができた。その技術を用いて、健康牛の健康乳房内にrbGM-CSFを投与したところ、当初の予想通り副作用は見られず、予定した試験を終えることができたため。当該年度は、乳房炎罹患牛および健常牛に対してrbGM-CSF治療試験を行ったが、牛の状態が良く、当初の想定よりも牛の管理や治療に関する経費を少なく抑えることができたため。また、当初の予定では市販の抗生剤治療試験も行う予定であったが、rbGM-CSF治療に変更したため、抗生剤の購入費が想定よりも少なくなったため。健康牛へのrbGM-CSF投与試験を引き続き実施し、一般状態の変化の有無について観察を行う。また、それらの乳汁及び血液サンプルが揃い次第、生化学及び免疫機能検査を実施する。また、乳房炎罹患牛が現れた場合は、rbGM-CSF投与を行い治療効果の判定を行う。平成27年度は、平成26年度に予定していた乳房炎罹患牛に対する市販の抗生剤治療を行うため、今回生じた差額をその購入に充てる。当該年度は、供試牛として健康牛を用いたため、当初の想定よりも牛の管理や治療に関する経費を少なく抑えることができたため。また、健康牛のサンプルを用いたので、実験処理もスムーズに効率よく行うことができたため。