hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
HUVECワクチンの悪性脳腫瘍における免疫学的機序の解明と血管芽腫への適応拡大

しかし、腫瘍増大抑制に対して、どのようなサイトカインネットワークが誘導されているのかを解明するため、今回新たにLuminex法を用いて、計測しているが、1検体あたりにかかる費用が高額であり、販売業者から指導をしてもらいながら、少しずつ、慎重に行っている状況である。ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)ワクチンは、腫瘍血管新生を抑制することで、腫瘍増大抑制をすると考えられているが、その免疫学的機序は、不明瞭のままであった。当院では、HUVECワクチンの臨床試験を行い、再発膠芽腫に対しては、一定の腫瘍増大抑制および予後改善を認めている事(Tanaka M, et al Cancer Sci 2013)を、世界で初めて報告できた。平成27年度までは、臨床試験を継続し、対象患者さんから、ワクチン投与前後の血液、血清の収集を行い、今までに回収できた血清は、計30例近くとなった。これらの症例に対して、HUVEC特異的な液性、細胞性免疫が誘導されている事は確認された。また、すべての対象症例に関しての臨床経過を解析し、予後解析、上記の基礎的データとの統合、データベース化も行った。腫瘍血管新生が著明である血管芽腫に対しては、日本で初めて開設された当院VHL病専門外来(VHL病は、家族性腫瘍の1つで、血管芽腫が多発する疾患、研究代表者高柳が担当)や、摘出術症例を通して、本年度も、血管芽腫の腫瘍検体の収集を行い、さらに、その腫瘍DNAを用いて、網羅的遺伝子解析を行ってきた。その解析結果をまとめたものは、2016年、2017年のアメリカ脳腫瘍学会で報告し、『Neuro -oncology』誌(Takayanagi S,et al,2017)に掲載することができた。これまでの解析結果をまとめると、臨床試験の対象症例では、HUVECワクチンの特異的免疫は、ほぼきちんと誘導されている可能性が高いが、腫瘍増大抑制効果がほとんどない症例群と、腫瘍増大抑制効果が著明な群と2つに分かれる可能性がある事が判明した。また、血管芽腫では、腫瘍化のために、VHL遺伝子異常が、深く関与している可能性があるが、それ以外の遺伝子異常も関与している可能性がある事も判明した。ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)ワクチンは、腫瘍血管新生を抑制することで、腫瘍増大抑制をすると考えられ、我々東京大学医学部附属病院にて、HUVECワクチンの臨床試験を行ってきた。ワクチン治療にて、HUVEC特異的免疫が誘導されている事が確認され、悪性脳腫瘍においては、予後改善する可能性がある事が示された。また、ヒト血小板製剤でHUVECが培養できる可能性も示された。さらに、腫瘍血管新生が著明である血管芽腫に対しては、網羅的ゲノム解析を行い、VHL遺伝子異常の重要性がはっきりし、今後の新規血管新生機序解明とHUVECワクチン治療導入につなげる事ができた。今回、HUVECワクチンが有効な症例群と、無効な群がある事がわかり、それら2群で、HUVEC特異的免疫の誘導具合や、誘導されているサイトカインの違い、標的としている抗原の違いなどを解明していくことで、当初の目標である、HUVECワクチンの腫瘍増大抑制効果の免疫学的機序の解明を行っていく方針である。
隣接基関与をモチーフとする新しい選択的有機合成の研究

隣接基関与の概念は、特定の有機分子の異常な反応性や選択性の説明に援用されてきたが、有機合成反応の合理的設計のためのガイドラインとして合目的的用いられた例はほとんどない。本研究は、この効果を拡張した形で捕らえ直し、それをモチーフとして選択的有機合成反応の設計、開発を行うことを目的として行ったものである。その結果、以下の2項目について、有用な知見を得ることができた。アセチレン-コバルト錯体はそのα位のカチオンを強力に安定化する効果を持つ。この点に着目して、2-プロペンの2位にアルキン-コバルト錯体を導入したところ、予期したとおり、求核的な反応性の高いオレフィンとして挙動を示すことが分った。すなわち、ルイス酸条件のカルボニル-エン反応における良好なエン供与体となる他、分子内にあっては脱離基の反応性を上げる隣接基としてのふるまいを見せる。反応の立体経路を明らかにすべく、さらに検討を加えている。一方,天然有機化合物の中には、特異なシクロプロパン構造を有するものがあり、特異な生理活性と相俟って注目を集めている。これらの化合物の生合成では、ホモアリル型の隣接基関与に始まるシクロプロパン形成が含まれていることが多く、その観点から本研究では"生合成類似経路"による含シクロプロパン天然有機化合物の合成を検討した。その結果、ホモアリル型型骨格転位を制御できる反応基質の設計に成功し、立体選択性を含め、新たな特徴を有する合成反応として確立することができた。今後さらに、天然物合成への展開を図りたいと考えている。
「コロニアリズム」と「ナチズム」のあいだ

本研究課題は、ドイツ植民地統治の歴史が、その後どのような影響を与えたのかについて、実際植民地を経験した人物の経歴を例に挙げながら考察することを目標としている。具体的には、植民地における形質人類学、熱帯医学研究に従事した生物学者や医学者が、その経歴を生かしワイマール期・ナチ期にどのような研究を行なったのかを考える。以上のような目的を達成するため、ベルリンの連邦文書館および国立図書館などで史料調査および収集を行なった。その結果、一部を除いて必要な史料を閲覧・複写することができた。今後は、交付期間中に充分にできなかった研究成果の発表(論文執筆や研究会・学会での発表)を積極的に行なっていきたい。2012年度は、ドイツにおける資史料調査および収集、そして関連書籍(二次文献)の購入、研究上必要なパソコン、プリンター、スキャナー等備品の購入を行なった。ドイツ滞在(2012年10月・11月)については、直接の渡航費や滞在費が、別枠(東京大学大学院総合文化研究科グローバルスタディーズ・プログラム)からの支出が認められたので、そちらを利用し、現地での史料収集(マイクロフィルム等からのコピー)および書籍購入にかかる費用については、科研費より執行した。このうち資史料調査に関しては、ドイツ連邦文書館に約一ヶ月半ほど通った。そこでは主に、クラウス・シリングやフリードリヒ・クライネがアフリカから本国に宛てた医療研究報告書、すなわちドイツ保健省や外務省所蔵の文書を多数閲覧、印字することができた。印字した史料はA4で300枚程度にのぼった。これにより彼らが第一次世界大戦後、アフリカでどのような医学研究に携わったのか、そしてその成果がドイツ本国でどのように受け止められたのかをかなりの程度把握することができた。また残りの滞在期間を利用して、同じベルリンにある国立図書館を訪れ、戦間期ドイツにおいて出版された医学や人類学に関する雑誌、すなわち『週刊ドイツ医学新聞』『形態学・人類学雑誌』等を閲覧することができた。これらの一部は紙の傷みが激しく、複写が禁止されていたため、やむなく持参のデジタルカメラにてデータを保存した。二次文献は、人種主義や植民地主義に関連するものや、広く「世界史」に関わるものも購入した。これはいわゆる人種主義が近代ドイツの問題にとどまらない「世界史的現象」だからである。こうした資史料の分析によって、戦間期ドイツの人種主義や人類学の動向、さらには植民地主義との関連、さらにはそうしたものの世界史的な位置や意味について、かなりの程度明らかになってきたと考えている。2013(平成25)年度は、ドイツにおける資史料調査及びその収集、関連書籍(二次文献)の購入、研究上必要なプリンターやコンピュータソフトなど備品の購入を行なった。上記ドイツにおける資史料の調査は、昨年に引き続きベルリンのドイツ連邦文書館で実施した。なお現地滞在費、マイクロフィルム印刷代、書籍購入にかかる費用は、科研費より支出した。調査では、昨年のドイツ滞在では充分に閲覧することができなかった、ワイマール期、ナチ期におけるいわゆる「眠り病」の医学研究に関する公文書を発見し、時間をかけて閲覧、複写することができた。具体的には「眠り病」の病理学的、細菌学的研究に関する同時代論文、また当時特効薬とされた「ゲルマーニン」に関する臨床実験や製造や出荷に関する帝国保健省、また外務省の公式文書である。これによって、ドイツが第一次世界大戦後、植民地を喪失した後も、「熱帯病」ひいてはそれが蔓延する現場=アフリカ(旧)植民地に関して大きな関心を寄せており、また国際連盟を中心とした国際機関においても、保健衛生分野で重要な役割を果たしていたことが確認できた。そしてその動きが、ドイツの植民地再獲得の動き、いわゆる「植民地修正主義」と密接に連動していることも分かった。昨年収集した史料と合わせ、研究を遂行する上で必要な一次史料に関しては、概ね手元に置くことができたと考えている。関連書籍(二次文献)の購入に関しては、広く医学、人種衛生学などの研究史や社会史的研究を扱ったものを選定した。こうした文献の研究成果と、ドイツにおける事例を比較検討することで、国際的な文脈において捉えることができ、ドイツの植民地主義や人種主義の何が「特有」なのか、また例えばイギリス、フランス、日本における同様の事例とどのような点において比較可能なのか、という知見が得られるものと考えている。上述の通り、ドイツ滞在中は研究対象である4人の医学者および形質人類学者たちの研究業績や、当時の公刊・未公刊史料などを数多く収集することができた。そればかりではない。彼らの研究業績に直接言及したものや、テーマとして関連が認められた同時代史料に関しても、ドイツで極力収集に努めた。また彼らのことについて扱っている先行研究(ほとんどがドイツ語で刊行)についても、おおむね現地で購入することができた。

こうした資史料の解読と分析にはすでに着手しているが、そこから言えることは、先行研究の多くが、本科研費助成事業が課題としている「植民地主義」と「ナチズム」との関連についての問題、すなわち上記4人がアフリカで何を研究し、その成果やキャリアがワイマール期やナチ期においてどのような意味を持ったのかについて、あまり関心を払っていないことである。その一方で収集した資史料が質的にも量的にも、そうした課題について、有意義な知見を提供できる可能性を秘めていることも、徐々に明らかになりつつある。それらの分析を通じて、本事業が設定した研究課題に対して応えることは充分可能であると考えられる。なお2012年10月・11月の研究滞在の成果を、ごく一部ではあるが研究会「歴史と人間」12月シンポジウムで発表する機会を得た(磯部裕幸「『文明化の使命』から『植民地修正主義』へーアフリカ『眠り病』と戦前ドイツの熱帯医学」:「歴史と人間」2012年12月シンポジウム「ドイツ帝国医療は「特有」だったかー中国ペストとアフリカ眠り病対策を中心に於一橋大学2012年12月16日)。幸いなことに、ドイツ史関係者や植民地研究者から活発な議論がなされ、研究の進展に対する期待が表明された。本研究課題を行なうことは、ドイツおよび日本における、植民地史研究やナチズム研究にとっても充分に意義のあることだと考えられる。25年度が最終年度であるため、記入しない。現在のところ、本研究課題を推進する上で特段に大きな支障はないといえる。当初の研究計画にしたがって遂行することが重要であると思われる。本年度は、本研究事業の最終年度にあたるため、収集した資史料の分析をさらに進めるとともに、その成果を広く公表していくことを心掛けて行きたいと考えている。具体的にはまず、「現代史研究会」や研究会「歴史と人間」などでの研究発表があるだろう。また2013年4月から専任教員として着任した秀明大学においても、「教員研究発表会」が定期的に開催され、新任教員は必ず報告することになっているので、そうした場を利用して研究成果を問うていきたい。研究成果を活字の形にすることも、今年度は積極的に行なっていきたいと考えている。具体的には『現代史研究』や『西洋史研究』あるいは『史学雑誌』等、学術雑誌への論文投稿がまず考えられるが、上述のように収集した資史料は量が膨大なため、またこの研究課題自体、先行研究が極めて少ないことに鑑み、ゆくゆくは成果を単著の形でまとめたいと考えている。そうすることで、本助成事業の成果について広く社会に問うことができ、また科学研究費という制度を広く国民に知ってもらう一助にもなると考えている。現在考えている、単著の構成は以下の通りである。まず「序論」では植民地主義とナチズムの「連続性」に関する昨今の議論を整理した上で、人種主義の世界史的展開からこれを批判的に継承する。そして本論では上記研究対象の4人について、その伝記的側面をただ並列するのではなく、時代ごとに各人の接点や関係性を、社会的背景などにも留意しながら叙述する。扱う時代はドイツ第二帝政期から第二次世界大戦後の「非ナチ化裁判」くらいまでの時期とする。
ドライプロセスによる多結晶炭化珪素薄膜の形成とその薄膜トランジスタへの応用

1.SiC薄膜の生成単結晶Siターゲットを用い、CH_4を反応ガスとした反応性スパッタリングにより、多結晶炭化珪素薄膜を作成した。高隔点材料である炭化珪素の良質な薄膜を得るためには、基板温度700°C以上の高温にする必要がある。本報告書では、装置に特殊な炭素ヒ-タを使用することでこれを達成できたことが示されている。2.SiC薄膜の結晶学的評価X線回折と反射電子線回折により、試料の結晶学的評価を行った。試料作成条件と結晶学的特性を比較検討しつつ、低基板温度化を試みた結果、最低700°Cから実用的な品位の多結晶炭化珪素薄膜を得る方法を見いだした。3.SiC薄膜の化学分析XPSにより組成と結合状態を解析した。作成条件との比較検討の結果、CH_4分圧でけでなく、作成時の全圧も試料の組成化に影響を与えることを見いだした。4.SiC薄膜の諸特性分光光度計による光吸収特性と、Hall効果による電気的特性評価を行った。このための設備は本補助金により導入したものである。結晶学的評価と併せて光吸収の基礎吸収端について検討することにより、作成した多結晶炭化珪素は3C-SiCであることが判明した。Hall効果の結果から、基板温度が750°Cで作成した薄膜が、TFTへの応用に適していることが判明した。5.SiCの伝導型制御不純物添加による伝導型制御を試みた。無添加の試料n形であったため、アクセプタとなるIII族元素のうち、BとAIについて試みた結果、本報告書の方法では、AIがより有効であることを見いだした。6.TFT等の素子への応用以上の成果に基づいて薄膜トランジスタの試作を行った。実用的な特性は実現出来なかった、基礎となる手がかりが得られた。さらに、本研究で作成した多結晶炭化珪素薄膜を用いて圧力センサや流量センサを試作した。平成5年度の研究実績の概要をまとめると、以下のようになる。1.スパッタ装置の改良と薄膜形成条件の最適化現有の装置を改良してデータの再現性を向上させるとともに、薄膜特性とプロセス条件の比較検討を行い、薄膜形成の最適条件を見いだした。炭素と珪素から成る複合ターゲットを用いたスパッタ法において、およそ800°Cという炭化珪素としては低い基板温度で多結晶薄膜が得られる条件を見いだし、実用化への手がかりとすることができた。この結果に関してはすでに電子情報通信学会の研究会や炭化珪素に関する国際会議で発表した。トランジスタのエミッタ接合と同じ条件でヘテロ接合を形成し、その電流輸送機構を解明するとともに、エミッタ接合としての有効性を調べた。ダイオードの電流電圧特性は、多結晶薄膜を用いているにもかかわらず、理想係数が1.6前後であり、市販の単結晶珪素を用いた素子に近い値が得られた。この結果に関しては、すでに炭化珪素に関する国際会議で報告している。3.炭化珪素薄膜トランジスタの試作薄膜トランジスタの構成要素であるゲート絶縁膜の形成、電極加工技術、チャンネル層である多結晶炭化珪素薄膜の加工技術を開発した。ゲート絶縁膜としては気相成長法により二酸化珪素薄膜を形成した。また、化学的に極めて安定な化合物である炭化珪素薄膜に対する加工方法として、プラズマを利用した反応性エッチング法を開発し、フォトリソグラフィー技術と併せて素子作成のための基本的な要件を満たすことができた。

4.その他関連する実績本研究において開発した技術を利用して小型流量センサを試作した。この結果については、第12回「センサの基礎と応用」シンポジウムにおいて発表する運びとなっている。(以上)平成6年度の研究実績の概要をまとめると、以下のようになる。1.多結晶炭化珪素薄膜の結晶学的評価X線回折、反射電子線回折により作成した多結晶炭化珪素薄膜の結晶学的特性を評価した。昨年度に比べ、更に低い700°Cという低温で多結晶薄膜が得られた。さらに、基板温度やCH_4ガス分圧、Arガス分圧、基板の種類などによる結晶学的特性の差異について検討し、それぞれに最適値があることを見いだした。2.多結晶炭化珪素薄膜の化学的評価XPSとEPMAにより組成と化学結合の状態について評価した。XPSによる評価の結果、表面付近には酸素が存在し、薄い表面酸化層が形成されていることがわかった。また、CH_4を過剰に加えて作成した試料では、グラファイト結合が認められ、過剰な炭素は炭素間で結合してそんざいしていることが示された。3.多結晶炭化珪素薄膜の電気的特性評価Hall効果により多結晶炭化珪素薄膜の電気的特性を評価した。また、光吸収特性から、基礎吸収端を求め、それぞれ作成条件との比較を行った。基礎吸収端の値から、700°C以上で作成した試料は多結晶の3C-SiCであることが示された。なお、この測定には今年度本補助金により設置した分光光度計が用いられた。4.薄膜トランジスタの試作薄膜トランジスタを試作して特性の評価を試みた。素子として十分なものは得られなかったが、作成工程の問題点などが明らかとなり、実用化のための基礎的な情報が得られた。5.その他の素子への応用得られた多結晶炭化珪素薄膜を流量センサや圧力センサなどに応用することを試み、基礎的な知見を得た。
自己抗原の翻訳後修飾異常を標的としたANCA関連血管炎の早期診断マーカーの開発

平成29年度に臨床検体(末梢血)から精製したミエロペルオキシダーゼ(MPO)をトリプシン消化した後に、質量分析計(MS)で解析し、キヌレニン化などの酸化修飾の度合いを定量する方法を確立した。そこで平成30年度は、平成29年度に確立した手法を用いて、数名のMPO-ANCA陽性患者と健常者から精製してきたMPOを同様に解析し、患者ー健常者間で翻訳後修飾に違いがあるかどうかを検討した。その結果、当初の目的であるトリプトファンのキヌレニン化が患者のみで検出されたのに加え、各種酸化修飾、脱アミド反応、脱水反応、脱アンモニア反応、脱チオメチル反応などのタンパク質の劣化に関わる修飾がMPO-ANCA陽性患者で多く検出されていることが示され、キヌレニン化に加え、これらの修飾がANCA関連血管炎の診断マーカーとして使用できる可能性が示された。来年度は、引き続き、ANCA陽性患者、健常者、その他炎症性疾患患者の検体数を増やし、これら修飾を受けたMPOの診断マーカーとしての価値を評価する予定である。また、昨年度に引き続き、酸化修飾したマウスタンパク質をマウスに免疫することで、自己抗体の産生機序を解明する実験も行った。まず、昨年度と同様に酸化したマウス血清アルブミン(oxMSA)をマウスに免疫することで、一時的に抗MSA抗体が生じることを再度確認し、実験に再現性がみられることを確認した。次に、酸化修飾を導入したMPO(oxMPO)をマウスに免疫した。この場合も抗MPO抗体の産生がみられたが、酸化修飾を導入しないMPOにおいても抗MPO抗体が産生され、有意な差がみられなかった。今後は、酸化修飾の導入法、導入量、マウスの系統などを検討し、酸化修飾と自己抗体産生の関係を探る。今年度は、ANCA関連血管炎の診断マーカーの開発という面では、(1)臨床検体から精製したMPOの翻訳後修飾を解析し、患者ー健常者間で比較できることを示した。(2)MPO中のトリプトファンのキヌレニン化が患者で増加していることを示し、診断マーカーとして利用できる可能性を示した。(3)酸化修飾、脱アミド化、脱アンモニアなど、キヌレニン化以外の修飾も、患者MPO中で増加していることが示され、これらが診断マーカーとして利用できる可能性を示した。以上3点の成果を挙げることができ、研究はおおむね順調に進展していると判断した。また、研究が順調に進行しなかった場合の保険の研究と位置づけていた酸化修飾導入マウスタンパク質のマウスへの免疫による自己抗体の産生機序の解明に関する研究においては、大きな進捗はなかったものの、酸化修飾アルブミンの免疫によって、自己抗体が一時的に産生されることが再度確認され、実験結果の信頼性を挙げることができた。以上のことから、(2)概ね順調に進展していると判断した。研究計画通りに、ANCA陽性血管炎患者、健常者、その他炎症性疾患患者の検体の数を増やし、検体から採取したMPOを質量分析計で解析して翻訳後修飾の解析を行う。特に、キヌレニン化MPOの量を定量し、診断マーカーとしての評価を行う。また、平成30年度に新たに見つかった、脱アミド化MPO、脱水MPO、脱アンモニアMPOなどについても定量を行い診断マーカーとして評価していく予定である。また、自己抗体の産生機序を解明する研究も続ける。酸化修飾アルブミンを用いた免疫実験によって、酸化修飾条件、免疫条件、使用するマウス種などの検討を行い、より自己抗体価が上昇する条件を検討する。見出した条件を用いて、酸化修飾マウスMPOを免疫する実験も行い、ANCAが産生するかどうか、ANCA関連血管炎様の症状が発症するかどうかを評価する予定である。平成29年度は、臨床検体中のキヌレニン化ミエロペルオキシダーゼ(MPO)量を質量分析計で定量する方法の確立を試みた。まず、市販されているヒトMPOをin vitroで過酸化水素処理し、酸化修飾を導入した。これをトリプシン消化した後に、質量分析計で測定し、キヌレニン化ペプチドを検出できることを示した。更にExtracted ion chromatography(XIC)法によって、キヌレニン化ペプチドを定量できることを示した。更に、健常者の末梢血多核球から、ConAカラムなどを用いて精製したMPOを、トリプシン消化した後に、同様に質量分析で測定した。その結果、80%近くのカバー率でMPOの断片を検出できた。キヌレニン化ペプチドは同定できなかったが、これは健常者の検体を使用しているために、もともとキヌレニン化MPOの量が少ないからであると思われた。このように、臨床検体から精製したMPOを検出することが可能となったので、来年度から血管炎の患者検体におけるMPOのキヌレニン化の定量を進めていく。また、酸化修飾したマウスタンパク質をマウスに免疫することで、自己抗体の産生機序を解明する実験も行った。今年度は、酸化修飾を導入したマウス血清アルブミン(MSA)をin vitroで過酸化水素処理し、酸化修飾を導入したもの(OxMSA)をマウスへ免疫した。一次免疫後はOxMSAに対する抗体が生じたがMSAに対する抗体は確認できなかったが、二次免疫後に、一時的にMSAに対する抗体が生じた。

この結果は、MSAの酸化修飾部位に対する抗体(抗OxMSA抗体)が生じた後に、エピトープスプレッディングと呼ばれる現状が起き、MSAの通常構造に対する抗体が生じたことを意味していると考えられた。今後は、免疫方法の条件検討や、酸化導入したMPOを免疫する実験などを行いMPO-ANCAの産生機序の解明を試みる。研究計画では、今年度は臨床検体中のキヌレニン化MPOの定量法を確立する年度と位置付けていたが、その目的はおおむね達成することができた。更に、研究が順調に進行しなかった場合の保険の研究と位置づけていた酸化修飾導入マウスタンパク質のマウスへの免疫による自己抗体の産生機序の解明に関する研究が進展し、一時的ながら免疫したマウスの体内で自己抗体が産生されることが確認された。以上のことより、(1)当初の計画以上に進展していると判断した。平成29年度に臨床検体(末梢血)から精製したミエロペルオキシダーゼ(MPO)をトリプシン消化した後に、質量分析計(MS)で解析し、キヌレニン化などの酸化修飾の度合いを定量する方法を確立した。そこで平成30年度は、平成29年度に確立した手法を用いて、数名のMPO-ANCA陽性患者と健常者から精製してきたMPOを同様に解析し、患者ー健常者間で翻訳後修飾に違いがあるかどうかを検討した。その結果、当初の目的であるトリプトファンのキヌレニン化が患者のみで検出されたのに加え、各種酸化修飾、脱アミド反応、脱水反応、脱アンモニア反応、脱チオメチル反応などのタンパク質の劣化に関わる修飾がMPO-ANCA陽性患者で多く検出されていることが示され、キヌレニン化に加え、これらの修飾がANCA関連血管炎の診断マーカーとして使用できる可能性が示された。来年度は、引き続き、ANCA陽性患者、健常者、その他炎症性疾患患者の検体数を増やし、これら修飾を受けたMPOの診断マーカーとしての価値を評価する予定である。また、昨年度に引き続き、酸化修飾したマウスタンパク質をマウスに免疫することで、自己抗体の産生機序を解明する実験も行った。まず、昨年度と同様に酸化したマウス血清アルブミン(oxMSA)をマウスに免疫することで、一時的に抗MSA抗体が生じることを再度確認し、実験に再現性がみられることを確認した。次に、酸化修飾を導入したMPO(oxMPO)をマウスに免疫した。この場合も抗MPO抗体の産生がみられたが、酸化修飾を導入しないMPOにおいても抗MPO抗体が産生され、有意な差がみられなかった。今後は、酸化修飾の導入法、導入量、マウスの系統などを検討し、酸化修飾と自己抗体産生の関係を探る。今年度は、ANCA関連血管炎の診断マーカーの開発という面では、(1)臨床検体から精製したMPOの翻訳後修飾を解析し、患者ー健常者間で比較できることを示した。(2)MPO中のトリプトファンのキヌレニン化が患者で増加していることを示し、診断マーカーとして利用できる可能性を示した。(3)酸化修飾、脱アミド化、脱アンモニアなど、キヌレニン化以外の修飾も、患者MPO中で増加していることが示され、これらが診断マーカーとして利用できる可能性を示した。以上3点の成果を挙げることができ、研究はおおむね順調に進展していると判断した。
真正細菌の翻訳後アセチル化による翻訳制御機構の構成的な理解

本研究は真正細菌におけるリジンのアセチル化による翻訳制御を理解することを目的とした。大腸菌アラニル-tRNA合成酵素(AlaRS)の74番目のリジンのアセチル化は活性を大きく減弱させた。大腸菌の脱アセチル化酵素(CobB)はin vivoではこのアセチル化を除去できたが、in vitroではわずかであった。CobBがリボソームと相互作用するという報告に基づき、「AlaRS K74Acはリボソーム上で脱アセチル化される」という仮説を立てた。しかし、リボソームと相互作用しないCobB変異体の解析から仮説とは異なる結果が得られ、脱アセチル化に関わる新たな分子の存在が示唆された。近年、真正細菌においてもタンパク質中のリジンのアセチル化が数多く発見され、重要なシグナルとして機能していることが推測されているが、その役割の多くは分かっていない。本研究は大腸菌内でアセチル化されることが報告されたアミノアシル-tRNA合成酵素に注目して解析し、真正細菌のアセチル化による翻訳制御やアセチル化ネットワークの理解へと展開するための分子基盤研究を行うことを目的としている。大腸菌AlaRS、TyrRS、ThrRSの活性に影響を及ぼすと推測されるリジン残基に導入されるアセチル化に注目した。アセチル化タンパク質再構成システムを用いて、それらのアセチル化の再構成を試みアセチル化AlaRS、TyrRS、ThrRSを得ることに成功した。この時アセチル化の導入による酵素の不安定化は起こらず、活性測定に十分な量の酵素が得られた。AlaRSはアセチル化の導入によって活性が大きく減弱することが分かった。この現象がアセチル化の導入によるAlaRSの構造変化に由来するかどうかを調べるため、CDスペクトル解析を行った。アセチル化AlaRSのスペクトルは野生型のそれと同様であったことから、アセチル化が直接的にAlaRSの活性を減弱させることが示唆された。更に、脱アセチル化酵素(CobB)がAlaRSの脱アセチル化に関わっていることを、CobBの阻害剤であるニコチンアミドやCobB破壊大腸菌を用いて明らかにした。これらの結果から、AlaRSに導入されるアセチル化はタンパク質翻訳でブレーキとして働き、CobBがそれを解除していると考えられる。予定してたアセチル化AlaRS、TyrRS、ThrRSを得ることに成功し、AlaRSについては先行して解析が進んでいるため。本研究は真正細菌におけるリジンの翻訳後アセチル化修飾とタンパク質翻訳制御の関係をアミノアシル-tRNA合成酵素(aaRS)に注目して解析し、真正細菌のアセチル化による翻訳制御やアセチル化ネットワークの理解へと展開するための分子基盤研究を行うことを目的としている。アラニル-tRNA合成酵素(AlaRS)に注目して、アセチル化が導入される条件を解析した。まず、通常の発現レベルでのAlaRSに導入されるアセチル化の解析を行うため、大腸菌DH10B株および脱アセチル化酵素(CobB)欠損株のゲノム上のAlaRS遺伝子の3'末端側にヒスチジンタグ遺伝子配列を挿入した。これらの株はC末端ヒスチジンタグ融合AlaRSを発現することを抗ヒスチジンタグ抗体で確認した。次に、これらの大腸菌をTB7培地やグルコースを含むTB7培地で培養し、NiアフィニティーカラムでAlaRSを精製した。このAlaRSに対して抗アセチルリジン抗体を用いてアセチル化の導入を調べた結果、グルコース存在下で培養したAlaRSにはアセチル化が検出され、CobB欠損株はDH10B株よりも、アセチル化AlaRSの量が上昇していた。このことから、AlaRSのアセチル化は過剰グルコースによるオーバーフロー代謝が原因で、CobBがそのアセチル化を除去していることが示唆された。AlaRSがアセチル化される条件の一つを発見できたため。本研究は真正細菌におけるリジンの翻訳後アセチル化による翻訳制御機構を理解することを目的としている。前年度までにアセチル化タンパク質再構成システムを用いて、大腸菌アラニル-tRNA合成酵素(AlaRS)の74番目のリジンをアセチルリジンに置換した変異体AlaRS K74Acを調製し、アセチル化がAlaRSの活性を大きく減弱させること、このアセチル化がin vivoでは脱アセチル化酵素(CobB)によって除去されAlaRSの活性が復元することを明らかにした。本年度はAlaRS K74Acが翻訳後に脱アセチル化されるかどうかを確かめるため、in vitroでの脱アセチル化反応を行なった。大腸菌でN末端の長さが異なる2種のCobBが発現していることを確認し、全長のCobBと短いCobB-Sをそれぞれ調製した。AlaRS K74Acの脱アセチル化反応をCobBおよびCobB-Sを用いて行ったが、両者で脱アセチル化は見られずin vivoとは異なる結果を得た。この違いを明らかにしなければCobBによるAlaRSの活性制御機構を明らかにできないと考え、CobBの解析を進めた。これまでの結果から「1AlaRS K74Acはリボソーム上で折りたたまれる前にCobBにより脱アセチル化された。」、「2再構成システムのアセチリルリジル-tRNAがCobBやCobB-Sの基質となった。」という仮説を立てた。今回は1の解析を中心に進めた結果、CobBとCobB-Sでは細胞内局在が異なり、CobBがリボソームと相互作用することを発見した。

AlaRS K74Acの脱アセチル化がCobBに由来するものかどうかを調べるため、CobB-Sのみを発現する大腸菌株を用いて、AlaRS K74Acを調製した。このAlaRS K74Acの活性は復元したことから、1の仮説には当てはまらないことが分かった。本研究は真正細菌におけるリジンのアセチル化による翻訳制御を理解することを目的とした。大腸菌アラニル-tRNA合成酵素(AlaRS)の74番目のリジンのアセチル化は活性を大きく減弱させた。大腸菌の脱アセチル化酵素(CobB)はin vivoではこのアセチル化を除去できたが、in vitroではわずかであった。CobBがリボソームと相互作用するという報告に基づき、「AlaRS K74Acはリボソーム上で脱アセチル化される」という仮説を立てた。しかし、リボソームと相互作用しないCobB変異体の解析から仮説とは異なる結果が得られ、脱アセチル化に関わる新たな分子の存在が示唆された。AlaRSと同様に、TyrRS、ThrRSの活性に対するアセチル化の影響、およびCobBの基質となるかどうかを調べる。また、どのような条件でそれらのaaRSにアセチル化が導入されるかを調べるため、種々の培養条件で発現させた各酵素を精製し、抗アセチルリジン抗体や質量分析により解析する。アセチル化AlaRSの活性を調べる。アセチル化AlaRSの質量分析を行い、アセチル化の場所を特定する。得られた結果をもとにAlaRSのアセチル化を再構成し、活性への影響を調べる。CobBのN末端による制御について変異体を作成し、AlaRSの脱アセチル化によって解析する。チロシルtRNA合成酵素とトレオニルtRNA合成酵素についても解析を進める予定である。タンパク質翻訳設備品や消耗品の購に関して、キャンペーン等を利用して節約しながら研究を進めたため、当初予定額より安価に済ませることができた。概ね、予定通り使用した。繰り越し金は研究計画をスムーズかつ迅速に進めるための消耗品購入費に充てる予定である。消耗品の購入に充てる予定である。
結石を対象とする非侵襲性超音波診断・治療統合システムの開発

腎結石に対するより侵襲の低い治療として強力集束超音波(HIFU)を用いた治療機構の開発にあたり、課題となる腎臓の呼吸性移動の補正に必要となる画像追従システムおよび、照射試験に必要となる結石動物モデルを確立した。平成21年度は主に(1)生体内の結石を高精度に追従・破砕できるシステムの開発に関する研究と(2)結石モデル動物の作成を中心に行ってきた。(1)現時点での課題として、HIFUによる気泡群や機構部の振動発生が患部に対する追従誤差の増大をもたらし、これが超音波画像を変化させ、追従誤差をさらに悪化させること挙げられ、この追従誤差の解決策としては、以下の3手法を用いて検討してきた。(1)患者の呼吸による臓器運動の周期性に着目した追従制御手法の開発。(2)振動除去フィルタのシステム組み込み。(3)気泡群による像の変化の影響を受けていない部分の形状を認識することにより、気泡群に対してロバストにターゲットの位置を認識する方法を開発。上記手法について個別にin vitroでの実験を行ってきたが、それぞれによる追従誤差の縮小が図れてきた。平成22年度はこれらの手法を統合し、さらに総合的に追従誤差を縮小することを目指す。(2)臓器内における結石に対するHIFUによる砕石効果を確認するために、まず摘出動物腎に結石サンプルを埋め込み、これに対するHIFU照射試験を行ってきた。現在は、効率よく結石を砕石できるHIFUの照射条件を検討しているところである。また、生体内における結石の砕石試験を今後予定しているが、それに備えて現在結石のモデル動物(ラット)を作成中である。現時点でラット膀胱に高率に膀胱結石を発生するモデルが完成しつつあり、この膀胱結石に対するHIFU照射が近いうちに可能となると期待される。今後、このモデルについては特許申請も検討している。平成22年度は引き続き(1)生体内の結石を高精度に追従・破砕できるシステムの開発に関する研究と(2)結石モデル動物の作成を中心に行ってきた。上記手法について平成21年度は個別にin vitroでの実験を行ってきたが、それぞれによる追従誤差の縮小が図れてきた。平成22年度はこれらの手法を統合し、呼吸性移動を模したターゲットの追従誤差の縮小を確認できた。現在は、結石を取り巻く各種条件を設定し、効率よく結石を砕石できるHIFUの照射条件を検討しているところである。また、今後予定している生体内における結石の砕石試験に備えて結石のモデル動物(ラット)を作成を行ってきたが、膀胱に高率に膀胱結石を発生するモデルが確立しつつあり、この膀胱結石に対するHIFU照射が今年度中に可能となると期待される。また、このモデルについては23年度中に特許申請を行えるように準備中である。平成23年度は引き続き(1)生体内の結石を高精度に追従・破砕できるシステムの開発に関する研究と(2)結石モデル動物の作成および、モデル動物膀胱内の結石に対する照射試験を中心に行ってきた。上記手法について平成21年度から研究を開始し、現在呼吸性移動を模したターゲットを99%の確率で追従できることを確認できた。(2)平成22年度までに完成した結石のモデル動物(ラット)を作成を用いて平成23年度はモデル動物の膀胱結石に対するHIFU照射を開始し、超音波画像上は砕石を確認できた。ただし、もともとの結石形状がわかりにくく、HIFUで砕石された形跡を鑑別しにくい、ラットが小動物であるがゆえにプローブのサイズがラットに合わない、被毛によって鮮明な超音波画像を得にくい、モデル動物の作成時の致死率が高いなど、今後の研究で克服すべき課題は多い。今後は、ラットモデルに対する照射方法、動物種選定の再検討を行いつつ、研究を進めていく予定である。
ニホンナシの花芽分化を誘導する要因の特定に向けた基盤の構築

ニホンナシでは花芽分化期にFTの発現が誘導されずTFL1の発現低下が鍵であると示唆された。TFL1の発現低下の原因を明らかにすることで花芽分化要因を解明するため、花芽分化期の発現遺伝子を網羅的に解析した。その結果、TFL1-1の発現低下に伴いApetala1、Fruitful 1、Leafy 1、サイトカイニン合成やアブシジン酸(ABA)の分解に関わる遺伝子は花芽分化に伴い発現が誘導され、エチレンやオーキシン合成に関する遺伝子は発現が低下した。以上から、花芽分化に伴い、サイトカイニンの合成が高まり、ABAの分解が促進され、エチレンとオーキシンの合成活性の低下する様相が明らかとなった。今回のRNA-seqに用いたサンプルは2012年度と2014年度の2カ年の芽で、花芽分化ステージは、分化前(0)、分化始まり(0.2)、分化中(2.0)に相当する。各ステージとも、年度に関わらず1から10 Reads Per Kilobase of exon per Million mapped reads(RPKM)の発現量を示す遺伝子が最も多く、これに10から100 RPKMの発現量を示す遺伝子が続いた。わずかであるが、ADF3 (Acting depolymerizing factor)のように100 RPKM以上の発現量を示す遺伝子もあった。ステージ0で特異的に発現している遺伝子の数が1764と最も多く、続いてステージ2.0であった。特徴的にはステージ特異的に発現している遺伝子よりも全てのステージで共通して発現している遺伝子の数が54059と非常に多いことであった。各ステージに特異的な遺伝子の数をより具体的示すと、全体的にステージ0で発現している遺伝子数が他の2ステージよりも多かった。また、ステージ0.2や2.0で特異的に発現した遺伝子と特異的でない遺伝子数はほぼ同数であったが、ステージ0に特異的でない遺伝子数が特異的に発現した遺伝子数よりも明らかに多いことが特徴的であった。また、ステージ0、0.2、2.0にそれぞれ特異的な遺伝子として、例えばMYB113やACS(ステージ0)TCP9やNAC42(ステージ0.2)、AP1やCUC3(ステージ2.0)などが同定できた。3つの花芽分化ステージ、分化前(0)、分化始まり(0.2)、分化中(2.0)に相当するニホンナシの花芽について、2カ年分のサンプルを解析し、アノテーションすることが出来たことからおおむね順調に研究が進捗していると判断した。2015年度にニホンナシの分化前、分化始まり、分化中の3ステージの花芽を用いて発現遺伝子の網羅的解析(RNA-seq)を行った。2016年にはそのRNA-seqと、モデル植物で花芽分化に関わるとされている遺伝子の発現解析から、転写TERMINAL FLOWER1(TFL1)の発現低下がナシの花芽分化の鍵要因であると判明した。TFL1と共調した発現パターンを示す植物ホルモン代謝関連遺伝子や転写因子について詳細な解析を行った(投稿中)。さらに、同じサンプルでDNAのメチル化などに関与するsmall RNAの網羅的な解析を行った。当初の解析手法では花芽分化ステージの変化に対応して有意に発現が変化するsmall RNAを効率的に検出することができなかったため、期間を延長して、2017年も引き続いて解析手法を色々と変えて有意に変化するsmall RNAの検出を試みているところである。当初の予定は終了し、結果を取りまとめて論文投稿中の段階である。現在はsmall RNAの解析まで計画を拡げて解析しているところである。そのため、順調に研究が推進していると判断する。2015年のナシの花芽分化前、開始期、分化中の3ステージの資料での発現遺伝子の網羅的な解析(RNA-seq)から、転写因子TERMINAL FLOWER1 (TFL1)が鍵因子であることを示すとともに、花芽分化ステージにおけるTFL1の発現パターンと同調する他の転写因子などの同定を行い、世界的にも評価の高い植物関係の学術雑誌に公表した。さらに、花芽分化機構を解明するために、研究期間を延長して、特にTFL1の発現制御にかかるsmall RNAを明らかにすべくsmall RNA-seqにより解析を行った。得られた生データについて、複数の解析手法を適用して有意に変動するsmall RNAの検出を試みたが、見出すことはできなかった。同定した遺伝子から花成関係の遺伝子、植物ホルモンの代謝に関わる遺伝子を選抜して花芽分化期間中の発現解析を行う。また、遠赤色光により人為的に花芽を誘導する形を活用して、誘導をかけた芽での選抜した遺伝子の発現解析を行い、これら選抜した遺伝子の花芽化への関与の可能性について再検証する。

引き続いてsmall RNAの網羅的な発現解析のデータに対して、解析手法を色々と変えて花芽分化ステージの変化に対応して有意に変化するsmall RNAの検出を試みる。果樹園芸生理論文での公表を見越して投稿料として確保していたが、さらにデータを付け加え、レベルを上げて公表することとしたため。当初予定していた解析手法でsmall RNAが効率的に解析できれば学会等で情報を収集して論文化を目指す予定であったが、検出精度が予想していたよりも低く、論文化を一時的に見合わせざるを得なくなったため、残額が生じた。追加データを効果的に得るため、契約職員を期間限定で雇用し、研究を加速化させる予定である。繰り越し金をその賃金に充当する。small RNAの網羅的な解析を行い、現在、解析手法を変えて花芽分化ステージの変化と対応して有意に発現変化するsmall RNAの検出を再度試みている。本実験がうまくいけば、論文化を目指すが、その論文化のために学会等に参加して関連情報の収集と論文公表のコストのために、今回生じた予算を充当する予定である。
慢性心不全患者に対する、下肢陽圧負荷心エコー図検査による予後予測効果に関する検討

近年の心不全治療の進歩はめざましく、アンジオテンシン変換酵素阻害剤やβ遮断薬などの内科的薬物療法、植込み型除細動器やペースメーカーを使用した心臓再同期療法などのデバイス治療、在宅酸素療法や順応性自動制御換気などの呼吸補助療法、さらには心室補助装置の改良や究極的には心臓移植により心不全患者の予後は劇的に改善してきている。他方で、これらの濃厚で包括的な心不全治療をすべての心不全患者に行うことは、医療資源的にも医療経済的にも困難であり、その意味で個々の心不全患者のリスク層別化をおこない、見積もられたリスクに応じて、医療費や医療資源を効果的に投入することが求められている。近年“前負荷増大負荷心エコー図検査"が有望な負荷検査として知られるようになってきた。下肢陽圧負荷によってもたらされる静脈還流量の増加は、心不全の病態生理を考慮した場合、極めて合理的かつ病態生理に忠実に準拠した心負荷検査と考えることができる。しかしながら、これまで前負荷増大に対する左室予備能評価は全くなされておらず、したがって前負荷増大に対する左室予備能と予後との関係は現在のところ明らかになっていなかった。この度我々は120名の収縮能の低下した心不全患者と20名の正常者を対象に下肢陽圧負荷エコー検査を行い、心不全例ではFrank-Starling機序が破綻し、前負荷予備能が有意に低下していることが判明した。さらに心不全群を二群に分け、前負荷予備能が保たれているものとそうでないものに分け、予後を検討した。結果、前負荷予備能が認められない心不全群では、他群に比較し、有意に予後が悪いことも同時に判明した。つまり、今回我々が用いた下肢陽圧負荷法は、心不全患者の予後層別化に有用であることが証明された。これまで左室収縮不全患者92名(平均駆出率35±9%)と年齢および性別をマッチさせた20名の正常対象者を前向きに登録し、下肢陽圧負荷装置を用いた急性前負荷増大負荷心エコー図検査を施行した。前方駆出の指標として一回拍出量(SV)を、左室充満圧の指標として経僧帽弁通過血流拡張早期波(E)と僧帽弁輪移動速度(E')の比(E/e')をそれぞれ測定し、負荷の前後でその値の変化を計測した。なお、負荷検査後の心血管イベントを280日間観察した。その結果、正常対象者では下肢陽圧負荷にて、左室拡張期充満圧の上昇を伴わない前方駆出量の有意な増大反応が認められたのに対し、収縮不全患者では左室充満圧の有意な上昇を伴ったわずかな前方駆出量の増大反応が認められるのみであった。観察期間中11名の患者において心血管イベントが観察されたが、イベントを起こさなかった患者では、左室充満圧のごくわずかな変化と前方駆出量の有意な増大反応が認められた。一方、イベント群では前負荷増大に対して左室充満圧の著明な上昇とフランクスターリング機構の破綻が観察された。下肢陽圧負荷心エコー中の前方駆出量(ΔSV)及び左室充満圧(ΔE/e')の増大反応をもとに患者を2群に分けると、収縮予備能の乏しい患者(ΔSV<5ml)の予後は有意に悪いことが確認された(log-rank p<0.01)。同様に、拡張予備能の乏しい患者(ΔE/E' ratio >3)では有意に無事故生存率が低かった(log rank p<0.01)。この様に、今回の検討では下肢陽圧負荷装置を用いた急性前負荷増大負荷エコー図検査による前負荷予備能を観察することにより、心不全患者の予後を層別化できる可能性が示された。患者リクリルートが予想以上に順調に進行し、これが研究の推進に大きく貢献した。なお、今回の研究で得られた結果は慢性心不全患者の予後を予想以上に正確に予測できることができると判明し、これらの事実が研究の進行に影響した。この度の研究では、連続120名の心不全患者に対して下肢陽圧負荷エコー図検査を施行し、その後平均20ヶ月間にわたり心血管イベントを観察した。この時心血管イベントは、心血管死亡、心不全死、心臓突然死、および心不全による入院の複合エンドポイントと設定し経過観察したところ、観察期間中に30名の患者において心血管イベントが認められた。イベントが認められなかった患者群においては、下肢陽圧負荷中にstroke work indexが有意に増加し(3280±1371から3857±1581 mm Hg・mL/m2へ; P<0.001)、そのとき左室拡張期充満圧はごく軽度の上昇にとどまった(E/e′, 16±10から17±9へ; P<0.05)。一方、心血管イベントを生じた患者群においては、Frank Starling機序が適切に働かず(stroke work index, 2863±969から2903±1084 mmHg・mL/m2へ; n.s.)、同時に拡張期左室充満圧の著明な上昇所見が認められた(E/e′, 19±11から25±14へ; P<0.001)。このとき、収縮予備能の認められなかった患者群および拡張予備能の認められなかった患者群ともに、そうでなかった群に比べ心血管予後は有意に悪かった(P<0.001). Coxproportional-hazards解析を用いた多変量解析では、下肢右往圧負荷中のstroke work indexおよびE/e′の変化量が、それぞれ心血管イベントの独立した規定因子であることが証明された。

下肢陽圧負荷検査中における収縮予備能および拡張予備能の評価は、収縮能の低下して慢性心不全における予後を予測するツールとして非常に有用であることが判明した。近年の心不全治療の進歩はめざましく、アンジオテンシン変換酵素阻害剤やβ遮断薬などの内科的薬物療法、植込み型除細動器やペースメーカーを使用した心臓再同期療法などのデバイス治療、在宅酸素療法や順応性自動制御換気などの呼吸補助療法、さらには心室補助装置の改良や究極的には心臓移植により心不全患者の予後は劇的に改善してきている。他方で、これらの濃厚で包括的な心不全治療をすべての心不全患者に行うことは、医療資源的にも医療経済的にも困難であり、その意味で個々の心不全患者のリスク層別化をおこない、見積もられたリスクに応じて、医療費や医療資源を効果的に投入することが求められている。近年“前負荷増大負荷心エコー図検査"が有望な負荷検査として知られるようになってきた。下肢陽圧負荷によってもたらされる静脈還流量の増加は、心不全の病態生理を考慮した場合、極めて合理的かつ病態生理に忠実に準拠した心負荷検査と考えることができる。しかしながら、これまで前負荷増大に対する左室予備能評価は全くなされておらず、したがって前負荷増大に対する左室予備能と予後との関係は現在のところ明らかになっていなかった。この度我々は120名の収縮能の低下した心不全患者と20名の正常者を対象に下肢陽圧負荷エコー検査を行い、心不全例ではFrank-Starling機序が破綻し、前負荷予備能が有意に低下していることが判明した。さらに心不全群を二群に分け、前負荷予備能が保たれているものとそうでないものに分け、予後を検討した。結果、前負荷予備能が認められない心不全群では、他群に比較し、有意に予後が悪いことも同時に判明した。つまり、今回我々が用いた下肢陽圧負荷法は、心不全患者の予後層別化に有用であることが証明された。今年度はさらに多くの患者をリクルートし、予備研究で得られた結果の正統性を再検討するつもりである。また観察期間を延長し、得られた研究成果を論文化する予定である。論文として受理されたため、本研究は一旦の結論が出たものと考えている。今後はこの度の結果をさらに発展させるべく、肺高血圧症、収縮能の保たれた心不全、あるいは先天性心疾患患者などを対象にしてこの度の知見を応用してゆきたいと考えている。最終的には多施設共同研究を立ち上げ、本法の有用性を広く世に問いたいと考えている。今回の科学研究費獲得は年度途中に発表になったため、研究費獲得から実験のセットアップまで時間的な猶予があまりなかった。そのため、予定していた予算を十分に消化することができなかった。ただし現在研究自体は順調に進捗しているため、次年度移行は予定通りの予算消化が可能になると予想される。次年度使用額が生じた理由としましては、今夏にヨーロッパ心臓病学会への出席を予定しており、同学会出席のための経費として計上していたためでございます。したがいまして、次年度使用額に関しましては学会出張日に当てるつもりです。次年度以降は、今年度に得られた研究成果を世に問う年になると考えている。そのため、次年度は学会発表や論文作成関連のために予算を使用させていただく予定としている。
固定的な見方の解消を通じた問題解決の促進

本年度は共通点の探索が固定的な見方の解消に有効であることを検討する2つの研究を行った。研究2では,共通点を探索による固定的な見方の解消を別のアプローチから検討した。具体的には,固定的な見方の解消,すなわち,物事の目立たない特徴への着目が促進されるのであれば,共通するプロセスを有する別の課題との間に相関関係が見られると予想した。共通点探索課題と類似したプロセスを有すると考えられる課題として,カテゴリ列挙課題との関連を検討した。実験参加者による共通点探索課題およびカテゴリ列挙課題の回答数の相関係数を算出したところ,有意な正の相関が見られた。この結果は,共通点発見課題において共通点を多く列挙できる人ほど,カテゴリ列挙課題においてもカテゴリを多く列挙できることを示している。このことから,共通点探索課題とカテゴリ列挙課題は,目立たない特徴への着目を共通するプロセスとして有していることが示唆された。これら2つの研究から,共通点の探索が固定的な見方の解消につながることを示唆する知見が得られた。当初の計画では,固定的な見方の解消による創造的アイデア生成の促進を検討する予定であったが,その背景にある認知プロセスとして,物事の目立たない特徴に着目することが重要であることを確認しておくことが必要であると判断し,そのための2つの研究を優先して行った。これら2つの研究により,関連性の低い2つの対象間の共通点の探索により,対象の目立たない特徴への着目が促進されることが確認できた。このことから,当初の予定からは一部変更があったものの,関連性の低い2つの対象間の共通点の探索が創造的アイデア生成に有効であることを裏付ける知見を得ることができたため,おおむね順調に進展していると判断した。第1に本年度得られた2つの研究の成果を論文化する。第2に,固定的な見方の解消による創造的アイデア生成の促進について検討するための実験を実施し,分析等を進める。第3に,固定的な見方の解消が失敗などのネガティブな出来事の捉え方の変容に及ぼす影響を検討するための実験の準備および実施を進める。
ＥｒｂＢ２導入マウスによる新規バレット腺癌モデルの確立と化学的発癌予防への応用

本研究は、申請者の独自のモデル系であるBK5.erbB2マウスを用いて、1)erbB2の高発現と胆汁との相互作用が食道癌の発生に与える影響を明らかにするため、新規の胆汁誘発性食道癌マウスモデルを確立すること。2)バレット食道に対する治療薬剤あるいは癌化を予防する薬剤の評価における、申請者が提案する新規食道癌マウスモデルの有用性を検証すること。の2点を目的としている。本マウスは胆嚢内に乳頭状腺癌を高頻度で自然発生し、ヒト胆嚢癌モデルとして知られている。本マウスはウシケラチン5プロモーターにより食道をはじめ、すべての扁平上皮基底層にerbB2を高発現しているのにもかかわらず、胆道以外での腫瘍発生はこれまで確認されていない。本研究では食道上皮においてもerbB2高発現と、胆汁の逆流.停滞による胆汁酸の暴露との相互作用が腫瘍発生率を高め悪性度を増強する、という仮説を立て、それを明らかにするため、本マウスをモデルとして検討した。本年度は、本マウスおよび野生型マウスに対し食道胃接合部-十二指腸吻合術による実験的逆流性食道炎モデル作成を行い、術後経時的に胆汁誘発性食道病変の病理学的および生化学的評価を行った。術後16週時点で、吻合部付近の扁平上皮組織におけるバレット食道様変化は本マウスおよび野生型マウスの両者に認められたが、dysplasia及び腺癌への組織変化は本マウスでのみ確認された。また、吻合部付近の扁平上皮組織において、バレット食道マーカーであるCDX2の高発現を認めた他に、p44/42 MAPKの活性化、癌幹細胞マーカータンパクの発現などがBK5.erbB2マウスで認められた。このことはerbB2の発現が、十二指腸内容物による逆流性食道炎モデルにおいて、バレット食道からdysplasia及び腺癌への進行に対して重要な役割を果たしていることが示唆する所見と考える。