hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
日本語と中国語の名詞句周縁部に関する統語研究

特に日本語の後置型の類別詞と中国語の類別詞が共に裸名詞句を補語として選択する機能範疇であるという本研究の主張点は、Chierchia (1998)による「決定詞(DP)言語vs.裸名詞句(bare NP)言語のパラメータ仮説」に対して重要な理論的示唆を含んでいるものと考えられる。本研究課題の成果が妥当であれば、上記のパラメータ仮説を文字通りの(強い)形で保持することは妥当でないということになるからである。ただし、本研究の結果は日本語や中国語等のいわゆる類別詞言語における項(argument)が場合によっては裸名詞句(bare NP)として具現化される理論的可能性を排除するものではない。従って当該パラメータの総合的な妥当性に関してはさらなる綿密な検証が必要であると考えられる。第二に、上記の研究成果及び昨年度の研究結果を基に、類別詞遊離の現象についての新たな仮説をまとめた。これは類別詞の遊離は名詞句内に後置型として生起する類別詞が遊離しているという仮説である。この仮説を検証するするために、類別詞と全量化子が名詞句領域内に共起する構文(Universal Numeric Quantifier構文)に関連する遊離現象を研究の対象とし、先行研究における知見を基にデータ収集を行った。その結果、この構文には統語的な遊離が関与していると仮定しなければ説明できないデータがあることを発見した。これら一連の研究成果を論文にまとめた。研究初年度と今年度にそれぞれ主要研究テーマを設定して研究を行ってきた。具体的には、「中国語と日本語の類別詞の統語的・意味的分析」(初年度)と「中国語と日本語の名詞領域における省略現象の分析」(今年度)であるが、研究テーマを設定した段階で想定していた研究成果がある程度達成できていると考えられる。25年度が最終年度であるため、記入しない。引き続き類別詞の統語的および意味的側面に焦点を当てることにより、類別詞言語の名詞句周縁部の統語構造の解明に寄与することを目指していく。具体的には、日本語で見られる類別詞の遊離現象を研究対象の一つとして、名詞句周縁部の構造を探る。その過程で、同じ類別詞言語である中国語においてなぜ同様の遊離現象が不可能であるのかを探っていく。
遺伝子改変による高効率化マゴットセラピー法の開発

マゴットセラピーは、主としてヒロズキンバエの幼虫が壊死組織を選択的に摂食する作用を用いた難治性創傷に対する治療法で、ヒル治療と並び数少ないバイオセラピーの一つである。主に1デブリードマン効果2抗菌効果3肉芽増生効果の3つの効果があり、糖尿病性壊疽や褥瘡等に効果を上げる。本研究では、蛹化・羽化の人為的制御、デブリードマン能力の向上等を目的とした医療用ウジ系統の改良を試みた。その結果、真菌由来の酵素での蛹化阻止、および野外採集による新規ヒロズキンバエ系統の確立に成功した。医療用ウジ治療(MDT)とは、ヒロズキンバエ幼虫が患者の壊死組織だけを摂取する性質を利用し、人体の難治性創傷を治療する方法である。本研究は、糖尿病壊死や褥瘡、外傷に起因する難治性創傷の効果的な治療法開発に向けた基盤として、(1)蛹化をコントロールできる遺伝子改変ウジ、および(2)血管新生因子bFGFおよびVEGFを発現する遺伝子組換えウジを作出し、その機能評価をおこなうものである。26年度は、人工飼料によるヒロズキンバエの大量飼育系を確立し、遺伝子等微量注入用の卵が安定して採取可能なシステムを構築した。加えて、エクジステロイド代謝酵素をコードするneverland遺伝子の部分欠損ヒロズキンバエを作成するための準備研究を実施した。RNA guided endonucleaseは、バクテリアの獲得免疫システムであるCRISPR/Cas9システム由来のRNA誘導型人工ヌクレアーゼで、ガイドRNA(gRNA)とCas9エンドヌクレアーゼにより標的DNA配列の認識とDNA二本鎖切断がおこなわれる。その修復の際に任意の配列を挿入するが可能であり、この仕組みにより遺伝子機能欠損個体を簡便に作成することができる。モデル実験系として、ショウジョウバエyellow遺伝子に対するgRNAと、Cas9 mRNAを作成し、ショウジョウバエ受精卵に微量注入をおこない、その効果を検証した。また、マイクロインジェクション装置を用いて、ヒロズキンバエ用遺伝子発現ベクター(EGFP発現)のヒロズキンバエ受精卵への微量注入を試み、その後の生存率等を検討した。マゴットセラピー(Maggot Debridement Therapy: MDT)は、主としてヒロズキンバエの幼虫が壊死組織を選択的に摂食する作用を用いた難治性創傷に対する治療法で、ヒル治療と並び数少ないバイオセラピーの一つである。コストが低く抑えられるため、欧米を中心に既存治療に対する代替え療法として用いられることがある。現在世界で治療に用いられている腐肉食性ハエは、ほぼ同じ種・系統で占められており、ハエ系統の改良は行われていない。MDTに用いられる医療用ウジは、4872時間で患部を脱し蛹(サナギ)になる性質があるため、23日に一回ウジとともにドレッシングを交換する必要がある。このような特徴から、稀ではあるがウジの逃亡および蛹からの成虫の羽化が起きる。エクジステロイドは昆虫の変態ホルモンでその増減は脱皮・蛹化に深く関わる。Ecdysteroid-22-oxidaze(E22O)は、真菌由来の酵素でエクジステロイドの作用を阻害する。このE22Oをヒロズキンバエ幼虫に微量注入することにより、ヒロズキンバエの幼虫の蛹化を止めることに成功したマゴットセラピーは、主としてヒロズキンバエの幼虫が壊死組織を選択的に摂食する作用を用いた難治性創傷に対する治療法で、ヒル治療と並び数少ないバイオセラピーの一つである。MDTの効果は上皮化の土台となる肉芽組織の増生速度に依存する。幼虫の分泌液が持つ線維芽細胞刺激作用や血管新生作用により、組織の再生が促進されている。幼虫期が延長されたウジ、および人為的にヒトbFGFおよびVEGFを発現する遺伝子組換えウジは、取り扱いが簡便で、より高い血管新生能を持つと推測され、この治療法そのものの付加価値を高める。26年度の研究成果により、遺伝子改変およびゲノム編集(CRISPR/Cas9)による改良型ヒロズキンバエ幼虫の作成基盤が構築されており、概ね順調に進展していると考える。衛生動物学(1)CRISPR/Casシステムによる、エクジステロイド代謝酵素遺伝子neverland部分欠損ヒロズキンバエの作出と蛹化コントロールの評価、および(2)piggyBacトランスポゾンベクターを用いたヒトVEGF/bFGF発現ヒロズキンバエの作出とin vitro機能評価について、研究計画通りに進める。ヒロズキンバエ等における遺伝子改変およびゲノム編集(CRISPR/Cas9)の技術開発が予想以上に進展し、それを主に据える研究計画細目を重点的に実施した。

その結果、研究計画の実施順序を一部変更し、物品費(消耗品)および人件費の大部分を使用する他の研究計画細目を次年度以降に実施することにしたため。物品費(消耗品)および人件費を活用し、(1)CRISPR/Casシステムによる、エクジステロイド代謝酵素遺伝子neverland部分欠損ヒロズキンバエの作出と蛹化コントロールの評価、および(2)piggyBacトランスポゾンベクターを用いたヒトVEGF/bFGF発現ヒロズキンバエの作出とin vitro機能評価を実施する。
「生の現象学」における超越論的問題構制の展開と存在神論的構造の生成

今年度は、再び生の現象学とカントとの対決に注目し、特にカントの乗り越えをはかる内在理論の革新性が抱える古典的性格の意味について考察した。「忘却された」エゴの存在を「内在」によって回復する生の現象学の革新的試みは、超越と内在の関係規定に際して古典的困難に逢着するようにみえるだけでなく、生の現象学全体の運動が、伝統への回帰によって古典的現象学を刷新する過程であるようにもみえる。では、そこでどのような伝統が問題なのか。この回帰が生の現象学にとって本質的なものであるなら、この問いは生の現象学を密かに規定する重要な前提を明らかにするはずである。以上の問いを通じて、従来のアンリ研究によってたえず指摘されてきたアンリ哲学の根本アポリアについて、その原因を特定することを目指した。具体的な研究は、次の二つの点を軸に行った。第一に、生の現象学がその批判的対象を「超越」へと定めるとき、どのような伝統的な問題設定へと身を置くか、第二に、「超越」から「内在」への遡行において、革新性と復古性はどこに存するのかを明らかにする。(1)アンリによるハイデガーの超越概念の読解を分析し、特にサルトルの『存在と無』のハイデガー解釈やG. Varetのサルトル解釈との影響関係を明らかにし、「超越」の「意識」への還元過程を析出した。(2)次に自己触発概念を再検討し、特にラシエーズ=レイのカント解釈との関係を確認し、アンリにおけるカント的思惟からデカルト的コギトへの再転換の道筋を描出した。(3)これが単なるデカルト主義への回帰ではない点を確認すべく、アンリ自我論について改めて考察し、スピノザとの関連を配慮しつつ、アンリが採用する「実在性」概念に、初期シェリング自我論の残滓を見ることを試みた。以上の研究から、自我の背後にある実在性を存在一般に代替する生の現象学の反動的性格こそ、困難の原因の一つであると結論した。27年度が最終年度であるため、記入しない。本年度(平成25年度)は、ミシェル・アンリ(1922-2002)の主著『顕現の本質』に多大な影響を及ぼした、カント及びフィヒテについて取り上げ、アンリと両哲学者との関連を探る、以下の三っの研究を行った。1.『顕現の本質』におけるフィヒテ読解、特に『浄福なる生への導き』にっいての読解を取り上げ、フィヒテの存在概念、及び愛の概念から、いかにアンリが、自身の内在概念を彫琢していったのかを追跡した。特に、フィヒテの「曲解」がアンリの独創的思想の形成に役立った点を明らかにした点は、従来の研究にはない視点である。その成果は、ASPLF(フランス語圏哲学会)と日仏哲学会の共催大会にて発表し、2015年には、ベルギーのアンリ学会誌に掲載される予定である(仏語)。2.次に、遺稿「カントによる合理的心理学への批判の存在論的破壊」を取り上げ、初期アンリによるカント『純粋理性批判』の読解を詳細に分析した。超越論的統覚、特に「統覚の総合的統一」と「統覚の分析的統一」との対立を鮮明にしたアンリの読解を通じて、後者への依拠が、いかにアンリの生の現象学の生成に寄与したかを明らかにした。2009年に公刊されたこの資料を扱った研究はいまだなく、その意味で、アンリ研究史において重要な研究となる。この成果は、2013年に日本ミシェル・アンリ哲学会で発表された。3. 8月にはフランス国立図書館へ文献調査に赴き、アンリとカントとのより詳細な関連を調査した。特に、アンリによる、カント『実践理性批判』の読解に注目し、『顕現の本質』で展開された尊敬概念の分析の理論的背景を調査した。従来の研究では明らかにされてこなかった、尊敬概念のアンリ的読解の意味を、後期著作『われは真理なり』の「命令」概念の分析から照射することによって解明を試みた。特に、カント的「道徳法則」と旧約的「律法」との、アンリにおける親和性に注目した点は、これまでにない視点であり、関連文献の調査も踏まえた本研究は、アンリ研究に重要な寄与をするはずである。なお、この成果は、テンゲリ教授(独・ヴッパタール大)を迎えたルーヴァンカトリック大学における学会にて、発表された(仏語)。昨年度に引き続き、ミシェル・アンリにおける有限性の克服及び、超越論的主観性をめぐるカント主義との対決に光を当てた。今年度は特に、アンリによる主観性からの有限性の徹底した排除に対して、一貫して疑問を呈し続けてきたリクールの議論との比較研究を行った。まずアンリが、『顕現の本質』において、主観性を、自己触発、すなわち、媒介なき自己と自己との直接的合致として定義するのに対して、リクールは『意志の哲学』において、主観性を、身体と魂、感性的なものと知性的なもの、有限と無限等々、二つの極に引き裂かれた媒介、すなわち、自己と自己との不一致として定義する。本研究が注目するのは、アンリが還元する自己と自己との不一致が、リクールにおいては還元不可能とみなされている点、また両者の直接的な議論もたえずこの点を巡っている点である。リクールが自己と自己との隔たりを主観性の本質契機とみなすのは、この隔たりが、自己に由来する産物ではなく、打ち消しがたい事実性として自己に刻印されているからである。

本研究は、アンリとリクールの差異を見極めるべく、この事実性の哲学的文脈のひとつを、リクールのフィヒテ解釈のなかに探った。結果、隔たりの事実性に、主観性の実践的-倫理的意味の源泉を見ることこそ、自己と自己との不一致の還元不可能性の意味であること、そしてこの点に、絶対的生との媒介なき情感的合一に倫理的意味を見るアンリとの決定的違いがあることを結論した。以上の研究によって、アンリが、主観性における媒介の不可避性という道を自ら遮断したことによって、カントからフィヒテに至る主観性理論の発展の豊かさを手放した点が見えてくるはずである。今年度は、再び生の現象学とカントとの対決に注目し、特にカントの乗り越えをはかる内在理論の革新性が抱える古典的性格の意味について考察した。「忘却された」エゴの存在を「内在」によって回復する生の現象学の革新的試みは、超越と内在の関係規定に際して古典的困難に逢着するようにみえるだけでなく、生の現象学全体の運動が、伝統への回帰によって古典的現象学を刷新する過程であるようにもみえる。では、そこでどのような伝統が問題なのか。この回帰が生の現象学にとって本質的なものであるなら、この問いは生の現象学を密かに規定する重要な前提を明らかにするはずである。以上の問いを通じて、従来のアンリ研究によってたえず指摘されてきたアンリ哲学の根本アポリアについて、その原因を特定することを目指した。具体的な研究は、次の二つの点を軸に行った。第一に、生の現象学がその批判的対象を「超越」へと定めるとき、どのような伝統的な問題設定へと身を置くか、第二に、「超越」から「内在」への遡行において、革新性と復古性はどこに存するのかを明らかにする。(1)アンリによるハイデガーの超越概念の読解を分析し、特にサルトルの『存在と無』のハイデガー解釈やG. Varetのサルトル解釈との影響関係を明らかにし、「超越」の「意識」への還元過程を析出した。(2)次に自己触発概念を再検討し、特にラシエーズ=レイのカント解釈との関係を確認し、アンリにおけるカント的思惟からデカルト的コギトへの再転換の道筋を描出した。(3)これが単なるデカルト主義への回帰ではない点を確認すべく、アンリ自我論について改めて考察し、スピノザとの関連を配慮しつつ、アンリが採用する「実在性」概念に、初期シェリング自我論の残滓を見ることを試みた。以上の研究から、自我の背後にある実在性を存在一般に代替する生の現象学の反動的性格こそ、困難の原因の一つであると結論した。ミシェル・アンリにおけるドイツ観念論哲学との対決に光をあて、アンリ哲学とドイツ観念論哲学との錯綜した関係を解明する、という課題は、今回のリクールとの比較や、さらにはフィヒテ宗教論との比較研究を通じて、おおむね十分に解明されたと考えられる。また後期著作との関連についても、アンリのキリスト教解釈に連なる議論を整理できたことは、次年度の研究への足掛かりをえたと考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。後期アンリのキリスト教解釈を主題化し、特にフィヒテやヘーゲルの宗教論との関連を念頭におきつつ、現代フランス現象学者、リクール、レヴィナスと直接的・間接に行われた議論を分析対象とする。これによって、後期アンリにおけるロゴス解釈を中心とする神学的転回の真の意味が明らかになるはずである。特段の支障もなく計画書に沿って研究が行われ、順調に研究成果の発表も行われたため。今後も、研究計画に沿って研究を遂行する。
色語の習得が難しい理由――色語彙システム創発と発達過程の多言語比較研究

前年度までに、24歳児を対象にして、典型色である赤・黄・緑・青・紫・茶・オレンジ・ピンクの8色について、複数回同一児に対し理解課題と産出課題を実施した。理解課題は、8色の色チップの中から「〇〇色のチップを取って」と教示し、対象児が該当する色チップを選択できるかどうかを調査した。本年度は、そのうち理解課題に関する分析を進めた。理解課題において前の回に、8色のどの色語の正解パタンから次の回の特定の色(8色のうち1つ)の正解パタンをロジスティック回帰モデルで分析した。この際、説明変数を前の8色の正解/不正解0,1と切片とし、独立変数を次の1色の正解/不正解とした。前の回の調査で色語が正解の時に、次セッションで色点の色が正解であることと有意(t検定, 5%水準)に相関している。その結果、「赤」が「黄」に、「黄」が「青」に、「青」が「赤」に先行する形で、「赤」「青」「黄」の3色が相互に理解を助け合う形を形成している。さらに青を除く7色の色語については、前の回の理解課題においてその色を正解した場合に、次の回に有意に正解となった。このことは、「青」という色語だけが「青のチップ」を選択できることが必ずしも次の回も「青のチップ」を選択できる訳ではないことを示している。日本語においては、青信号・青菜・青い山を初めとする知覚的には「緑」のカテゴリーに属する知覚対象に対し「青」という色語が用いられる。これは、緑と青との混同を招くことが想像され、「青」と「緑」が相互に相関が高く、「青」の正答が「緑」の正答に先行するとともに、「緑」の正答が「青」の正答に先行し、混同から脱却するという過程が考えられる。この結果は、「青」という知覚的に顕著性が著しく、普遍性が高いと思われるような、初期に容易に獲得されうると思われる色語においてさえ、日本語の語彙特性が影響することを示す結果であったといえる。日本における幼児の色語彙に関する調査は終了しており、分析を進めている。日本語だけでなく、シダーマ語などの他の言語体系における色語彙に関するデータを収集済みである。分析および体系化をまとめ、随時論文として成果を公開する。24歳児を対象にして、典型色である赤・黄・緑・青・紫・茶・オレンジ・ピンクの8色について、理解・産出課程がどのように進むのかについて、継続調査を実施した。さらに、典型色を獲得した幼児がその後、どのような過程を経て大人の色語彙システムに近づいていくのか、その過程を明らかにするため、典型色について理解・産出ともに8色全問正解した幼児に対し、93色産出調査を継続して行った。その結果、多くの幼児が典型色を獲得した後に日本語特有といわれる色語である水色・黄緑・灰色・肌色といった色語を回答するようになっていく過程をデータとして集めることができた。また、これらの新たな色語が獲得される際には既知の色語が用いられていた色に対しても過剰に汎用するなどの現象が観られ、新しい色語が単に記憶・追加されるだけではなく、色語のシステム全体を再編成する形で編入されていくことを示しており、より詳細な分析によりその過程を明らかにすることができるデータがまとまりつつある。さらに、調査過程において、「わからない」という回答について個人ごとに頻度の違いや色ごとの差が見られると共に、性別による顕著な傾向があることも明らかとなり、自己の色語に対するメタ認知の問題としても興味深い結果が得られた。さらに、エチオピアのシダーマ語およびウガンダのクプサピニ語の両語圏において継続調査に用いたものと同様の93種類の色チップを用いた予備調査を行った。しかし、同チップを用いた調査では、得られる色語の種類が少なくかつ被験者への負担も大きいことから、典型色を含む形で39種類にチップの数を減らし本調査を行いデータを収集した。保育園における継続調査が順調に終了し、93色に対する回答をデータとして収集することができた。フィールドワーク調査については、エチオピアのシダーマ語、ウガンダのクプサピニ語、両語圏において色チップを用いた予備調査を踏まえ、より精緻に本調査をできるよう刺激セットを作成した。24歳児を対象にして、典型色である赤・黄・緑・青・紫・茶・オレンジ・ピンクの8色について、理解・産出課程がどのように進むのかについての継続調査を行い、それら典型色を獲得した幼児がその後、どのような過程を経て大人の色語彙システムに近づいていくのか、その過程を明らかにするため、典型色について理解・産出ともに8色全問正解した幼児に対し、93色産出調査を継続して行い、終了した。その結果、多くの幼児が典型色である青・赤・黄の3色獲得した後に、安定して他の緑やオレンジを用いることができるようになっていく過程をデータとして集めることができた。これは安定した色語のシステムを構築する際には、まず基礎となる3色が必要であり、それらの関係性が付置されたのちに、他の色語が再編成される形で編入されていくことを示した。また、色語の理解が産出に先行して安定するが、茶色・紫といった曖昧な語については必ずしも理解が先行するとは限らない事例も散見された。また、他の言語のgreenにあたる色に対して日本語の緑の獲得が遅く、(青信号や青葉などの)日本語の青と緑に関する影響が確認できた。

また、アメリカおよびドイツにおいても同一の刺激セットと人工太陽灯照明の条件下で調査を実施している。現在、データ分析を進めており、日本語以外の言語圏における色語彙の構造の分析についても併せて進めている。特に、青と緑にあたる色の領域において色語がどのように付置されるのかを中心に分析を進める。保育園による調査結果のデータ分析を行い、記述モデルの構築を進めている。前年度までに、24歳児を対象にして、典型色である赤・黄・緑・青・紫・茶・オレンジ・ピンクの8色について、複数回同一児に対し理解課題と産出課題を実施した。理解課題は、8色の色チップの中から「〇〇色のチップを取って」と教示し、対象児が該当する色チップを選択できるかどうかを調査した。本年度は、そのうち理解課題に関する分析を進めた。理解課題において前の回に、8色のどの色語の正解パタンから次の回の特定の色(8色のうち1つ)の正解パタンをロジスティック回帰モデルで分析した。この際、説明変数を前の8色の正解/不正解0,1と切片とし、独立変数を次の1色の正解/不正解とした。前の回の調査で色語が正解の時に、次セッションで色点の色が正解であることと有意(t検定, 5%水準)に相関している。その結果、「赤」が「黄」に、「黄」が「青」に、「青」が「赤」に先行する形で、「赤」「青」「黄」の3色が相互に理解を助け合う形を形成している。さらに青を除く7色の色語については、前の回の理解課題においてその色を正解した場合に、次の回に有意に正解となった。このことは、「青」という色語だけが「青のチップ」を選択できることが必ずしも次の回も「青のチップ」を選択できる訳ではないことを示している。日本語においては、青信号・青菜・青い山を初めとする知覚的には「緑」のカテゴリーに属する知覚対象に対し「青」という色語が用いられる。これは、緑と青との混同を招くことが想像され、「青」と「緑」が相互に相関が高く、「青」の正答が「緑」の正答に先行するとともに、「緑」の正答が「青」の正答に先行し、混同から脱却するという過程が考えられる。この結果は、「青」という知覚的に顕著性が著しく、普遍性が高いと思われるような、初期に容易に獲得されうると思われる色語においてさえ、日本語の語彙特性が影響することを示す結果であったといえる。日本における幼児の色語彙に関する調査は終了しており、分析を進めている。日本語だけでなく、シダーマ語などの他の言語体系における色語彙に関するデータを収集済みである。2017年度以降は2016年度保育園において集めた色語に関する継続調査のデータ整理およびそれらの分析を進める予定である。さらにシダーマ語、クプサピニ語両語の色語に関する調査結果の分析も併せて進める。保育園のデータを元にしたモデル構築と英語圏・ドイツ語圏における調査結果の分析も併せて行う。分析および体系化をまとめ、随時論文として成果を公開する。2016年度はデータ収集に注力したため、被験者への謝金等の人件費・謝金の支出が主であった。しかし、データ分析のための分析補助の人件費を使用しなかったため、今年度は使用する必要がなかった。追加で行う成人対象調査の謝金およびデータ分析補助のための謝金として次年度以降も使用する。データの収集は終了しており、データ分析と学会発表、論文執筆公開を順次進める準備をしている。次年度は主に成果公開のための旅費等に支出予定である。次年度2017年度は2016年度に集めたデータのデータ分析およびその成果報告を行うため、分析補助の人件費および旅費に使用予定である。
大腸癌発生に対する各種脂質の影響及びその修飾因子に関する検討

消化管粘膜の形態維持に脂肪等の食事は重要な因子のひとつであり,その種類も大腸癌の発癌・進展において重要である.n-3系多価不飽和脂肪酸やオリーブ油に多く含まれる一価不飽和脂肪酸は前癌病変であるACFの発生をおさえ,また腫瘍,癌の発生率,個数,転移等も抑制した.n-6系多価不飽和脂肪酸を多く含むコーン油あるいは飽和脂肪酸の長期摂取は非腫瘍部大腸粘膜の酸化ストレスの増加によるDNA傷害により大腸癌の誘導に関与しており,またWnt signaling pathwayの亢進による非腫瘍部大腸粘膜の増殖能亢進により大腸癌の誘導・進展に関与している可能性が示唆された。本年は,共役脂肪酸として抗肥満効果や発癌抑制効果,アポトーシス促進など多数の報告がある共役リノール酸(conjugated linoleic acid,以下CLA)を遊離脂肪酸型(free fatty acid,以下FFA)と中性脂肪型(triglyceride,以下TG)に分けて各々牛脂に添加し,腫瘍発生の変化を検討した.CLA・FFAおよびCLA-TGを摂取させたラットにおいて牛脂(飽和脂肪酸)単独群と比較して有意にACFの減少が認められた.腫瘍発生数も有意に抑制された。非腫瘍部粘膜組織においてcyclooxygenase-2(以下COX-2)の発現をwestern blottingにより評価したところ,両CLA添加群で有意に抑制された.また,prostag landin E2(以下PGE2)およびthromboxane B2(以下TXB2)の発現も両CLA添加群で抑制された.Wntシグナルについては,両CLA添加群において非腫瘍部粘膜組織では細胞増殖系シグナルであるβ-cateninおよびWnt2の発現が有意に低下した.非腫瘍部粘膜組織における細胞増殖能を評価したところ,両CLA添加群でBrdU陽性細胞の減少を認め,牛脂単独群では陰窩中部に多く分布したがCLA群では陰窩底部に多く分布するなどの変化がみられた.CLA-FEA添加群でのみ陽性細胞の増加およびcaspase-3活性の上昇がみられた.発癌促進作用のあるSFAの長期摂取においても,CLAを同時に投与することで大腸発癌が抑制されることが判明した.大腸癌は近年の日本において増加傾向にあり,高脂肪や低食物繊維の影響が考えられている.我々はこれまでにアゾキシメタン(AOM)によるラット大腸発癌モデルにおいて,牛脂の長期摂取が大腸発癌を促進することを報告した.今回,牛脂に共役リノール酸(CLA)を添加し大腸発癌に及ぼす影響を検討した.方法:6週齢雄性SDラットをAOM投与群と非投与群に分け,各群で10%牛脂混合食餌を標準食とし,コントロール群,中性脂肪型CLA添加群(TG),遊離脂肪酸型CLA添加群(FEA)の3群に割り付けた.AOM投与から12週後に大腸癌の前癌病変としてaberrant crypt foci(ACF),44週後に腫瘍発生および背景粘膜における細胞増殖能(BrdU)やアポトーシス,Wntシグナル,アラキドン酸カスケードの各関連タンパクの発現を検討した.結果:両CLA群でACFの発生が抑制され,44週後の腫瘍発生数も両CLA群で有意に抑制された.FEA群では半数のラットで腫瘍発生を認めなかった.両CLA群でBrdU陽性細胞数の減少を認め,陽性細胞の分布は牛脂単独と比較し腺窩底部に多く見られた.Wnt2,beta-catenin,cyclin D1などのWntシグナル関連タンパクおよびcyclooxygenase-2,prostaglandin E2,thromboxane B2などのアラキドン酸カスケード関連タンパクが抑制された.アポトーシスは牛脂単独群と比較し両CLA群でcaspase-3活性の上昇を認めたが,TUNEL陽性細胞数はFFA群で他の2群より有意に増加した.考察:CLAはTGおよびFFAとも牛脂長期摂取下においてラット大腸発癌を抑制した.抑制効果はFFA群でやや強い結果であり,一因として両CLA群のアポトーシスに及ぼす影響の違いが示唆された.これまでの研究で,発癌誘導物質アゾキシメタン(以下AOM)を投与したラットにおいて,牛脂およびコーン油を混合した食餌を摂取した群では発癌作用が増強され,対照的に魚油やオリーブ油を混合した食餌を摂取した群では発癌作用の抑制が見られることを突き止めた.一因としてWnt signalingの亢進に伴う増殖能亢進が考えられた.また,大腸粘膜の脂質酸化度,DNA障害の増加が促進作用の一因と考えられ,酸化ストレスの関与についても興味深い結果が得られた.そこで,発癌作用を増強させた牛脂を混合した食餌を摂取したラットに対し,共役脂肪酸や抗酸化剤,NSAIDなどを摂取させ発癌抑制効果を検討した.ラットを,(1)10%牛脂混合食餌,(2)10%

牛脂混合食餌+0.12%COX-1選択的阻害剤(Mofezolac),(3)10%牛脂混合食餌+1%還元型グルタチオン(以下GSH)水,(4)10%牛脂混合食餌+1%G-80(共役リノール酸中性脂肪タイプ),(5)10%牛脂混合食餌+1%80HGR(共役リノール酸遊離脂肪酸タイプ)の5群に分け,それぞれにAOMを投与した.ACF数は(1)群では平均185個のACFを認めたのに対し,(2)で96個,(3)で98個,(4)で114個,(5)で49個といずれの群でも牛脂単独群と比較して有意にACFの発生を抑制することができ,遊離脂肪酸投与群では特に顕著であった.また,12週時における血清TBARSによる酸化ストレスの検討では,グルタチオン投与群で牛脂単独群と比較して有意に酸化ストレスが軽減されており,発癌との関係が示唆された.AOM投与から44週間飼育を続けたラットにおける大腸癌や腫瘍発生数の検討では10%牛脂混合食餌群では多数の腫瘍発生を確認され,Mofezolac群ではAOMを投与した6匹中2匹,80HGR群では6匹中3匹で発癌を認めず,腫瘍の増殖進展において有意な抑制効果が確認できた
ヘッジホッグシグナリングにおける分子調節機構の解明

ヘッジホッグ経路は形態形成や細胞増殖において高度に保存された経路であり、その阻害薬は抗腫瘍薬として既に臨床応用されている。Gorlin症候群はヘッジホッグ受容体のPTCH1変異により発症するが、シグナルを亢進させて奇形形成・高発癌性を示す。我々はマウス胎児間葉系細胞(C3H10T1/2)を用いて酸化ストレスはリン酸化JNK1によるGLI1の抑制を介してヘッジホッグ経路依存性の骨芽細胞分化を抑制すること、またPTCH1変異が同定されているGorlin症候群患者の皮膚線維芽細胞を用いてヘッジホッグ経路は定常的に亢進しており刺激薬・阻害薬に対する反応が皮膚線維芽細胞でも保持されていることを見出した。本研究の目的はヒト線維芽細胞を用いてヘッジホッグシグナルの解析を行うことである。ヘッジホッグ経路はリガンドのHedgehog、受容体のPTCH1、隣接タンパクのSMO、転写因子のGLIからなる高度に保存されたPTCH1抑制性の細胞増殖経路である。ショウジョウバエおよびマウスでの検討は数多いが、ヒト細胞を用いた研究は極めて少ない。本研究ではヒトの形態形成および腫瘍発生に深く関与するヘッジホッグ経路についてヒト線維芽細胞を用いて解析することとした。実験にはGorlin症候群でPTCH1変異を持つ皮膚線維芽細胞と正常コントロール線維芽細胞についてGLIのRT-PCR解析を行った。その結果PTCH変異を持つ複数のヒト細胞でSMO, GLIの転写が亢進していることを初めて見出した。中でもGLIの亢進は高度であり、かつこの転写亢進は栄養飢餓状態下においてリガンドであるヘッジホッグを加えたときに最大となり、SMO阻害剤であるcyclopamineによって抑制された。このことからこの栄養飢餓状態におけるGLIの亢進はヘッジホッグ経路依存性であることが確かめられた。またこれらヒト線維芽細胞を用いてRNAパスウエイ解析を施行し、Wntシグナルの亢進が付随することを見出した。これらはヒト細胞においてもヘッジホッグ経路は刺激に応じた細胞応答に重要な役割を果たしており、それに伴って別経路の関連タンパクも協働して発現していることが明らかになった。ヘッジホッグは細胞アンテナとしてのprimary ciliaを経由することが近年知られており、現在ヒト皮膚線維芽細胞におけるprimary ciliaの役割についてさらに解析を進めている。ヘッジホッグシグナリングはリガンドのHedgehog、受容体のPTCH1、隣接タンパクのSMO、転写因子のGLIからなる高度に保存された細胞増殖経路である。本研究ではこの経路異常で発生するGorlin症候群の遺伝学的検査を進めるとともに、骨代謝における本経路の果たす役割を細胞死との関連について解析を行った。1.Gorlin症候群の遺伝子解析では主要責任遺伝子であるPTCH1の解析を継続するとともにそのhomologueであるPTCH2変異を新たに同定し報告した。2.形態形成と発癌を制御するヘッジホッグ経路における骨代謝調節の分子機構を解明するために、マウス胎児間葉系細胞(C3H10T1/2)を用いてrecombinant sonic hedgehog (shh)による骨芽細胞分化誘導を行い,過酸化水素による酸化ストレスの影響を検討した。ヘッジホッグ経路の活性はReal time RT-PCR及びGLI特異的結合部位をプロモーター領域にもつレポータープラスミドを用いたルシフェラーゼアッセイにより定量化した。その結果、shhによりGli1及び骨芽細胞関連遺伝子であるAlp,Bspの転写及び石灰化が誘導される一方で,これらは酸化ストレスにより抑制された。同時に酸化ストレスはJNK1のリン酸化も誘導し,酸化ストレスによるヘッジホッグ経路及び骨芽細胞分化に対する抑制効果はJNK阻害剤で阻害可能であった。またヘッジホッグ経路活性はJNK活性作用を持つアニソマイシンやJNK1の一過性強制発現によっても抑制された。このことからGLI1とJNK1の相互作用がヘッジホッグ抑制の機序と考えられた。これらによりshhはGLI1の発現亢進を介して骨芽細胞分化を誘導すること、酸化ストレスはリン酸化JNK1によるGLI1の抑制を介してヘッジホッグ経路依存性の骨芽細胞分化を抑制することを見出した。【目的】ヘッジホッグ経路は、形態形成や細胞増殖、腫瘍形成において重要な経路である。その経路阻害薬は抗腫瘍薬として開発・使用されている。Gorlin症候群はヘッジホッグ受容体であるPTCH1変異を有するため、ヘッジホッグシグナル伝達が亢進し、奇形形成・高発癌性を示す。Gorlin症候群患者におけるヘッジホッグシグナル伝達の解明、経路阻害薬の効果を確認することを目的とした。【方法】PTCH1変異が同定されているGorlin症候群患者の皮膚

線維芽細胞を用い、ヘッジホッグ経路刺激薬・阻害薬、臨床使用されているビスモデギブによる刺激を行い、細胞内シグナル伝達の変化をGLI1のmRNAを定量的に測定し確認した。また、Gorlin症候群患者皮膚線維芽細胞において、ヘッジホッグ経路の伝達に必須である一次線毛を免疫染色し、飢餓時、経路刺激時の一次繊毛保持細胞の割合を検討した。【結果・考察】Gorlin症候群患者では、非刺激状態においてもGLI1の上昇を認め、定常状態におけるヘッジホッグ経路の亢進が示された。また、ヘッジホッグ刺激時では、細胞を飢餓状態にすることでより著明にGLI1が亢進した。一次線毛を有する細胞の割合は細胞を飢餓状態にすることで上昇したが、Gorlin症候群患者と非疾患ヒト線維芽細胞では差は認めなかった。抗腫瘍薬であるビスモデギブ刺激では、ヘッジホッグにより亢進したGLI1が著明に減少し、その抑制効果はシクロパミンと比較し顕著であった。またヘッジホッグ関連遺伝子の網羅的解析では、シグナル亢進状態でZIC1、ZIC2が上昇、BMP4が著明に低下していた。【結論】Gorlin症候群患者線維芽細胞において、Hh経路は定常的に亢進しており、刺激薬・阻害薬に対する反応が保持されている。また、血清飢餓状態で薬剤の効果が相乗的に亢進することが確認された。今後、治療薬への反応性や抵抗性、副作用の確認において、ヒト皮膚線維芽細胞の使用が有用であると考えられる。小児神経学当初目的とした5項目のうち3項目について研究は進展し、一部論文化を行った。骨芽細胞系におけるヘッジホッグシグナリングについてはMAPKカスケードとの相互作用を明らかにし現在英文誌にin pressの状態である。放射線照射後のタンパク質プロファイリングも順調に進んでおり、解析の最終段階にある。ヘッジホッグ経路阻害剤であるcyclopamineの細胞学的作用については皮膚線維芽細胞を用いた解析でヒト細胞でも同様に阻害効果を持つことを証明した。またNBCCS患者の骨密度の定量評価もすでに20名を超え、現在メタ解析を行って有意差の有無を検討している。ヘッジホッグシグナリングとWntシグナリングのクロストークについては、ヒト線維芽細胞においてRNAプロファイリングを行い、そのクロストークが存在することを確認した。これらの研究状況を鑑みるとき交付申請書に記載した「研究の目的」の達成度についてはおおむね順調に進捗していると考えられる。1.PTCH1遺伝学的検査は北里大学分子遺伝学教室宮下教授のご協力により順調に解析が進行している。2.ヒト線維芽細胞を用いた実験は放射線照射後のmRNA解析を現在行っている。経路遮断剤を用いてその変化についても解析中である。3.マウス胎児間葉系細胞(C3H10T1/2)を用いたシグナル調節機構もMAPKシグナルとクロストークさせることでその生理学的意義を解析し、上記のような具体的成果が成し遂げられてきている。現在まで交付申請書に記載した「研究の目的」の達成度についてはおおむね順調に進捗している。
難聴理解を促進するための模擬難聴システムの開発と教育への応用

難聴者の聞こえの理解を促進するため、言語聴覚士の養成課程からプロフェッショナルまで一貫して使用できる模擬難聴システムの完成と提供を目指すことが本研究課題の目的である。この最終目的に向けて、本年度はまず模擬難聴システムのインタフェース調整、ネットワークを介して利用できるシステムへの移行を行った。その過程において、ウェブブラウザ上での録音と音の再生時にオートゲインコントロール機能が我々の意図に反して働き、音圧の校正ができないことが明らかになった。現段階でこの問題は解決できないため、MATLAB版模擬難聴を整備し、Windows用およびmacOS用にスタンドアロン化した上で配布する方向に切り替えた。システムとそのマニュアルは日本語と英語の両対応版を用意した。現段階で最新の模擬難聴システムを用いて、言語聴覚士養成課程におけるテスト運用と評価も実施した。そのテスト運用で、「老人性難聴によって、人の音声に加えて環境音から受ける印象が大きく異なる」という意見がユーザの学生から得られた。老人性難聴者にとって聞き取りやすいと良いのは人の音声だけではなく、環境音についても同様である。そこで、環境音の知覚認知に関する実験を追加・実施した。その結果、老人性難聴の特性によって、環境音に含まれる危険性が大きく損なわれるという新しい知見を得た。老人性難聴者にとって、音声に含まれる言語以外の要素(感情、意図等)がどのように聞こえているか、という問題へ発展させることが可能だと考えられる。2018年度より新しい研究室を立ち上げたため、実際に実験を実施するまでに半年が必要であった。ただし、実験が開始してからのデータ収集は順調に進んでいる。また、対象を音声以外に環境音にも広げることで、難聴により伝達されない情報の実態をより詳しく実験的に調べられる可能性が出てきた。当初の研究計画に記載した3つの課題それぞれについて以下のように進める。【1】模擬難聴システムのベースとなる聴覚モデルの更新:模擬難聴システムそれ自体の評価を、高齢者を対象とした聴取実験により実施する。結果によっては、模擬難聴システムのベースとなっている聴覚モデルを、高齢者対象の実験により得たデータで更新することを検討する。【2】言語聴覚士養成課程で模擬難聴システムのテスト運用・評価:ここ数年のテスト運用によって実際のユーザのデータが蓄積されてきた。このデータに基づいて模擬難聴システムの最終調整を行い、広く一般に配布できる状態にする。【3】難聴者が聞きとりやすい音声発話の収集と分析によって、発話訓練用素材と教示の提案:これも言語聴覚士養成コースで実施してきたテスト運用により、模擬難聴システムを通した音声発話において何が聞き取りにくいのかという点はあきらかになりつつある。この知見に基づいて配布可能な「教材」として一度完成させることを目標とする。ウェブブラウザ版模擬

難聴システムの動作が予想外であったことから、模擬難聴システムのテスト運用の協力者を探すための学会参加が何件かキャンセルとなった。このため、今年度使用分に残額が生じた。
海洋植物プランクトンの光学特性の日周変動量による基礎生産量の推定

細胞に光が透過する際に光が減衰する割合を消散係数といい、消散係数の増加の要因は屈折率nと細胞直径dの増加による。屈折率nの増加は細胞内密度の増加により起こり、細胞直径dの増加は細胞に当たる入射光に対する反射光の割合を高める。細胞当たりの消散係数も日周変化を示す。植物プランクトンの細胞は日の入りにかけて二倍体になり夜間に細胞分裂を起こす。二倍体になったときの屈折率n、細胞直径dの増加により、細胞当たりの消散係数は大きくなる。又、細胞の主な構成物質である炭素は屈折率nの変動要因と考えられる。よって細胞内炭素量と屈折率nと細胞直径dとの関係を明らかにすることにより細胞当たりの消散係数と細胞内炭素量との関係を明らかにすることができると考えられる。そこで本研究では(1)明暗サイクル下におけるプリムネシウム藻I.galbanaの細胞内炭素量と屈折率、また細胞直径との関係を調べることと、(2)細胞当たりの消散係数と細胞内炭素量の関係を日周の時間レベルで調べることを目的とする。培養はf/2培地で水温25°C、塩分35PSU、光強度45μmol m^<-2>s^<-1>、明暗周期12L:12Dのもと連続培養を行った。試料採集は2時間ごと50時間行い、細胞数、細胞直径、消散係数、細胞内炭素量を測定した。これより細胞当たりの消散係数は日中に増加し夜間に減少する日周変化が見られ、その変動量は32%だった。細胞内炭素量と屈折率n、細胞直径dとの間には屈折率n、細胞直径dの増加に対し細胞内炭素量が増加する有意な比例関係が得られた。細胞当たりの消散係数と細胞内炭素量の間には細胞内炭素量の増加に対し、細胞当たりの消散係数が増加する有意な比例関係が得られた。細胞当たりの消散係数から細胞内炭素量が求められることが明らかとなったため次のことが考えられる。細胞内炭素量は日周変化を示し、細胞の一日の炭素量の変動は生産量に相当する。ピコプランクトンの優占する外洋域でも消散係数の日周変化が観測されている。よって細胞当たりの消散係数と細胞内炭素量の関係を調べることは現場の基礎生産量の推定に応用できる可能性が示唆され、今後海洋中での検証が必要であると考えられる。
角度分解光電子分光及びフェムト秒時間分解電子線回折による高温超伝導起源の解明

銅酸化物高温超伝導体は、長い超伝導の歴史の中でも最も高い超伝導転移温度(Tc)を示す物質の一つであり世界中で研究されている。しかし、その超伝導機構は未だ解明されていない。そこで、最もTcが高い物質の一つである3層系銅酸化物Bi2Sr2Ca2Cu3O10+deltaに着目し、角度分解光電子分光を行い今まで観測されなかった新しいバンド分散を世界に先駆けて観測した。これは、3枚あるCuO2面のうち、外側2枚のCuO2面間の相互作用が重要なことを示唆しており、高いTcを示す超伝導の理解において重要な鍵となる可能性がある。また格子応答を観測できる時間分解電子線回折法で超伝導解明に向けて研究を続けている。銅酸化物高温超伝導体は,長い超伝導の歴史で最も高い超伝導転移温度(Tc)をもつ物質であり世界中で精力的に研究がなされている。しかしながら,その高いTcを示すメカニズムは未だ解明されておらず,更なる詳細な研究で必要である。そこで,銅酸化物で最も高いTcを示す三層系銅酸化物高温超伝導体Bi2Sr2Ca2Cu3O10+delta(Bi2223)の電子構造を明らかにすることを目的とし,分子科学研究所極端紫外光研究施設(UVSOR)のBL7Uにおいて角度分解光電子分光(ARPES)を行った。BL7Uエンドステーションの波数分解能を向上させる改良を行い,また直線偏光及びバルク敏感な低エネルギー励起光を用いることで,今まで観測されなかった新しいバンド分散を世界に先駆けて観測した。これは,3枚あるCuO2面のうち,外側2枚のCuO2面間の相互作用が重要なことを示唆しており,Bi2223が高いTcを持つ起源を探るための新しい知見である。本研究成果は,投稿論文としてまとめる予定である。申請者はフェムト秒時間分解電子線回折(FED)による光誘起した超高速格子ダイナミクスから電子格子相互作用を調べてきた。FEDは,ポンプ・プローブ法によりレーザーパルスで励起された非平衡状態での格子系が電子系の影響を受けながら緩和してく様子を約200フェムト秒の時間分解能で調べることできる。現在では,前所属のドイツ・マックスプランク研究所のR. J. Dwayne Miller研究室との共同研究により,キャリアを供給することで超伝導を発現し,また構造相転移をもつIrTe2のFEDを行い,今まで遷移金属ダイカルコゲナイドで観測されていない超高速格子ダイナミクスを観測した。これは,電子と格子との強い相互作用を示唆しており,構造相転移の起源を理解する上で重要な知見であると考えられる。現在,投稿論文を執筆中である。Bi2223のARPESによる研究では,超伝導機構に関わる重要な知見を得ることに成功した。また,遷移金属ダイカルコゲナイドIrTe2では,従来の物質系とは異なる振舞いをFEDにより観測し,その結果をまとめ論文として発表する段階まできている。銅酸化物高温超伝導体は,長い超伝導の歴史で最も高い超伝導転移温度(Tc)をもつ物質であり応用化が期待され,盛んに研究されている。しかし,その高いTcを示すメカニズムは未だ解明されておらず,更なる研究が必要である。銅酸化物で最も高いTcを示す三層系銅酸化物高温超伝導体Bi2Sr2Ca2Cu3O10+delta(Bi2223)の電子構造を明らかにすることを目的とし,角度分解光電子分光(ARPES)を行った。その結果,今まで観測されなかった新しいバンド分散を世界に先駆けて観測した。これは,3枚あるCuO2面間における相互作用が重要であることを示唆し,Bi2223が高いTcを持つ起源を探るための新しい知見である。本研究成果は,国際学会及び日本物理学会にて口頭発表し,投稿論文として現在執筆中である。更に電子と強く相関する格子のダイナミクスに注目し,それを詳細に調べることを目的に,フェムト秒時間分解電子線回折(FED)による光誘起した超高速格子ダイナミクスから電子格子相互作用を調べてきた。現在では,前所属のドイツ・マックスプランク研究所との共同研究により,キャリアを供給することで超伝導を発現し,また構造相転移をもつIrTe2のFEDを行い,今まで遷移金属ダイカルコゲナイドで観測されていない電子と格子との強い相互作用を示唆する結果が得られ,構造相転移の起源を理解する上で重要な知見であると考えられる。現在,論文を投稿中である。今までのFED装置は,高真空中での位置変化や極低温にすることが難しかった。そこで,これらの問題を克服したFED装置を建設することを目的とし,更にスピン偏極電子線源とFED装置を融合させた新しい装置開発を目指している。現在では,FED装置の建設に向けた真空ポンプ,部品等の購入や超高真空チェンバーの設計を行っている。

これは、3枚あるCuO2面のうち、外側2枚のCuO2面間の相互作用が重要なことを示唆しており、高いTcを示す超伝導の理解において重要な鍵となる可能性がある。また格子応答を観測できる時間分解電子線回折法で超伝導解明に向けて研究を続けている。銅酸化物,及び鉄系高温超伝導体の電子構造研究をARPESにより引き続き行う。また,測定ビームラインに導入するための6軸マニピュレータを開発する予定である。これにより,高エネルギー分解能で測定を行えるだけでなく,励起光の向きに対する試料の方向を大きく超高真空中で変化させることができるため,Tcが低い超伝導体の超伝導ギャップ等の測定が可能になる。FEDを利用した研究では,ドイツマックスプランク研究所との共同研究を続ける。現在,半導体物質であるIn2Se3をFEDで調べており,その研究を引き続き行う予定である。物性物理学
界面活性剤を用いた多連続多孔質構造の形成

本研究では、数学より提案される多連続構造をマイクロメートルスケールで実現することを目的とする。これを実現するため、本研究ではマイクロメートルサイズの枠を形成し、この上に石けん水など界面活性能を持つ液体を用いて極小曲面を形成する。本年度は、まずシリコンの結晶を加工して枠を形成した。収束イオンビームを用いて1辺が10ミクロンメートルで、太さが1ミクロンメートルの立方体の枠を形成した。次に、オレイン酸カリウムなど界面活性能を持つ分子の水溶液を調製し、これを滴下することで極小曲面を形成した。これらの構造を低温下で電子顕微鏡を用いて観察した結果、マクロスケールで観察される石けん膜と同様の構造を形成できることが明らかとなった。これより、マイクロメートルスケールの枠を作成し、この上に石けん膜を貼ることでマイクロスケールの膜を形成できることを確認した。一方、ここで用いた収束イオンビームでは立方体の枠など、単純な構造しか作製することができない。そこで、来年度以降、自由な形状を持つ枠を形成するため、3次元リソグラフィーを用いた枠の形成に挑戦した。基板上にレジストをスピンコートし、2光子を用いたリソグラフィーシステムを用いることで、高さ数十マイクロメートル、幅数百マイクロメートル程度の自由な構造ができることを確認した。リソグラフィーで用いるパラメータによっては目的した構造が形成できなかったため、今後、さらに自由に構造を形成するためのパラメータ設定方法を検討する。さらに、ここで用いる界面活性能を持つ液体として、水溶液系以外の溶液の可能性についても、検討を行った。目的としていた、マイクロスケールでの極小曲面、多連続構造を形成することができ、その形状を制御するために、3次元リソグラフィーを用いてある程度自由に枠の構造を制御できることを可能にした。また、ここに貼る界面活性能を持つ液体として、オレイン酸カリウムなどの水溶液を利用できることを確認し、さらに、他の溶液の可能性について調査を開始しているため。今後は、自由な形状の極小曲面をマイクロメートルで作製するため、数学との連携を通じて枠の設計を行い、これを3次元リソグラフィーを用いて形成する。続いて、ここに界面活性能を持つ液体を滴下して、石けん膜として極小曲面を形成する。
ヒト試料を用いたアバタセプト（ＣＴＬＡ４－Ｉｇ）のリウマチ治療効果発現機序の解明

アバタセプト(CTLA4-Ig)は、CD28共刺激シグナルを阻害し、T細胞の活性化を抑制する抗リウマチ薬である。しかしながら、その作用機構は十分に理解されていない。本研究では、アバタセプトの作用機序を明らかにするため、生物学的製剤未治療のRA患者に対するアバタセプトの有効性と安全性の検討(ABROAD試験)登録患者のT細胞サブセットおよびサイトカイン量を治療前後で比較検討した。アバタセプト治療前、治療後24週のRA患者の全血より末梢血単核球を単離し、T細胞およびB細胞の細胞表面マーカーとそれらの活性化の程度をFACS解析により調べた。さらに、リンパ球サブセットである制御性T細胞(CD4+CD25+Foxp3+)、Th1(CD4+IFNγ+)、Th2(CD4+IL-4+)およびTh17(CD4+IL-17+)の変化を明らかにした。同時に、血漿中のサイトカイン(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNFおよびIFNγ)を定量した。健常人においても同様にリンパ球サブセットとサイトカインプロファイルを調べた。その結果、アバタセプト治療はCD4+T細胞中の活性化したCD25+ T細胞の割合とその発現を低下させることが分かった。制御性T細胞の割合も治療後低下していた。Th2およびTh17細胞の割合はいずれも健常人に比較して治療前に有意に増加していた。Th1およびTh2細胞は治療前後で差がなく、一方でTh17細胞は治療後有意に減少した。治療前の血漿中IL-6量は健常人と比較して有意に高く、他のサイトカイン量も高い傾向を示した。アバタセプト治療後24週では、IL-4、IL-6、IL-10およびTNFが低下した。これらの結果から、アバタセプトはT細胞の活性化を抑制し、IL-6とTh17細胞を低下させることが明らかになった。生物学的製剤未使用のRA患者に対するアバタセプトの有効性と安全性の検討試験(ABROAD STUDY)に登録された31例の患者のアバタセプト治療前、治療後24週において、全血よりフィコール遠心分離により末梢血単核球を分離して、T細胞表面マーカー(CD3、CD4、CD8)、B細胞表面マーカー(CD19、CD20、CD80)、活性化マーカー(CD25、CD69、CD62L)をFACS解析により調べた。さらに、制御性T細胞(CD4+CD25+Foxp3+)、Th1(CD4+IFNγ)、Th2(CD4+IL-4)およびTh17(CD4+IL-17)の変化を明らかにした。同時に血漿を分離し、IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNFおよびIFNγ量を定量してサイトカインプロファイルを明らかにした。また、同意を得た健常人より同様にしてリンパ球サブセットとサイトカインプロファイルを明らかにした。その結果から、アバタセプト治療後24週において、CD4+T細胞におけるCD25+細胞の割合とその発現が有意に低下することが明らかになった。制御性T細胞の割合は、低下傾向を示したが治療前後で差は見られなかった。Th1、Th2およびTh17細胞の割合はいずれも治療前に増加しており、治療後24週時点でTh1およびTh2細胞は高値を持続し、一方でTh17細胞は治療後24週で有意に減少した。