hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
オールスパイスの抗酸化特性とその活性発現因子の解明

DPPHラジカル捕捉活性、油系での抗酸化活性がともに高かった酢酸エチル可溶部を各種クロマトグラフィに繰り返し供し、16種の化合物を単離した。各種機器分析を行った結果、フェニルプロパノイド1種、没食子酸およびその関連化合物、フラボノイド11種およびガロイルグルコサイド2種を構造決定した。これらのうち、5-galloyloxy-3,4-dihydroxypentanoic acid、5-(5-carboxymethyl-2-oxccyclopentyl)-3Z-pentenyl 6-O-galloyl-β-D-glucosideは新規化合物であった。今回単離した16種の化合物および以前にオールスパイスより単離した化合物21種をあわせて各種抗酸化試験に供した。その結果、DPPHラジカル捕捉活性は1分子中のオルトジフェノールの数が大きく活性に寄与しており、O_2^-ラジカル捕捉活性は3,4-dihydroxyphenyl基を有する化合物が3,4,5-trihydroxyphenyl基を有する化合物より高い活性を示した。油系における抗酸化性はオルトジフェノール構造が活性に寄与したが、配糖体など高極性の物質では活性が低下した。また、リポソーム膜酸化に対する抑制活性を測定した結果、タンニンの1種であるcactalaginおよびquercetin関連化合物の活性がとくに強く、オルトジフェノールを有していても化合物の構造によって活性が異なった。以上、オールスパイスの抗酸化性にはオルトジフェノール構造を有する化合物が大きく関与しており、さらに脂質を基質として抗酸化性を測定した場合、その活性は物質のもつ極性、すなわち基質である油脂との親和性が関わっていることが示唆された。本研究は、フトモモ科の香辛料であるオールスパイスに含まれる成分を単離、構造決定してその抗酸化特性を明らかにするとともに、活性発現因子を解明することを目的としている。昨年度オールスパイスの成分の抽出、精製を行い、16種の化合物を単離し、各種機器分析によりその化学構造を明らかにした。このうち2種は新規化合物であった。本年度、ひきつづきオールスパイス成分の精製をすすめ、3種の化合物を新たに単離した。各種機器分析やタンナーゼによる酵素分解を手段とし、これらの化合物を(4S)-α-terpineol 8-O-β-D-(2-O-galloyl)-α-L-arabinofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside, (4R)-α-terpineol8-O-β-D-(2-O-galloyl)-α-L-arabinofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside,3-(3,4-dihydroxy-5-methoxyphenyl)-propane 3-O-β-D-(6-O-sinapoyl)glucopyranosideと構造決定した。これらの3種の化合物はいずれも新規化合物であった。これまでに単離した化合物を化学構造の特徴から分類するとフェニルプロパノイド、安息香酸関連化合物、フラボノイド、没食子酸配糖体、タンニンに分類できる。これらのなかで比較的オールスパイス中の含有量が多い11種を選抜し、油脂に対する抗酸化試験を行った。リノール酸メチルを基質とし、40°C暗所に保存し、油均一系における自動酸化抑制効果を調べた結果、オルトジフェノール構造を有する化合物はいずれも抗酸化性を示した。
対面対話進行における探索と調整機構の解明：カウンセリング場面を中心に

対話の流れの変化がいつ起こっているかを同定し,それが調整的な働きかけによるものか,探索的な働きかけによるものかを判別したい.そのために,カウンセリング場面のデータを収集し,人手による対話の流れのアノテーションを効果的に行う手法を開発する.カウンセリングの進行状況を画面上の二次元平面上で連続的にアノテーションするツールを利用し,得られた対話状態の時系列データの変化点から,カウンセリング対話が質的に変容する様子を確認した.何らかの目標を達成しようとする対話においては,対話を適切に進行させるための調整が必要となる.効果的な対話においては,「次の話題に移りましょう」といった発話などでの明示的な調整が行われるだけではなく,対話の状態が自律的に変化する状態を待つといった,探索の過程も伴っている.対話技能の訓練や対話システムの改善において,専門家がいかに対話を進行させているかについての知見が有用であるが,無意識的でもある調整の機構には,不明な点が多い.本研究では特にカウンセリング対話を取り上げて,言語的なモダリティーと非言語的なモダリティーを統合的に分析し,対話の進行における探索と調整の巧みな使い分けの実態を明らかにする.実験的な場面においては,言語的・非言語的モダリティー間に相互作用があることが分かっており,実対話においても同様であると予想されるため,初年度で考察した発話内容と頷きという行為種別に加え,身振りや発話の音響特徴といった他の特徴を分析対象に追加してゆき,より包括的な対話の把握を目指した.特に,発話内容と身振りとが,話題分割において果たす役割を,自動話題分割アルゴリズムの観点から検討した.カウンセリングにおいて様々なモダリティーがいかに統合的に使用され,対話の流れが構成されているかを明らかにするには至らなかったため,引き続き利用可能性を検討していく.複数のモダリティを統合する上で問題点となるのが,データを計算機で利用可能とするために,人手によって行われる発話内容の書き起こしや発話内の事象のコーディングにアノテータ(作業者)毎にずれが生じることである.そこで,適切な基準を設定する手がかりとするために,まず身振りを見た人間がどのように意味を想起するかを,深度情報付きカメラ映像を用いて,実験的に検討した.対話の流れの変化がいつ起こっているかを同定し,それが調整的な働きかけによるものか,探索的な働きかけによるものかを判別したい.そのために,カウンセリング場面のデータを収集し,人手による対話の流れのアノテーションを効果的に行う手法を開発する.カウンセリングの進行状況を画面上の二次元平面上で連続的にアノテーションするツールを利用し,得られた対話状態の時系列データの変化点から,カウンセリング対話が質的に変容する様子を確認した.対話を通じた問題解決においては,対話がしばしば目標と異なる方向に進行してしまうため,調整が欠かせない.しかし,専門家として対話を行う者であっても,常に調整に成功するわけではなく,成功する対話進行機構の理解が求められている.本研究では専門的対話として,カウンセリング対話を取り上げる.そこでは,クライエントの話をきちんと聞かなければと意識するあまり対話の調整を全く行わず,問題解決に向けた具体的な取り組みに話題を進めることができないといった問題や,対話の進行を調整するための心理臨床技法を過剰に使用してしまい,クライエントとの関係構築が不十分になる問題が存在する.これらは初心セラピストにしばしばみられる問題であり,経験を積むことで自然に適切な調整技能を身に着けることが期待されている.しかし,熟練者が対話中にどのように調整を行っているかが知識化されていれば,効率よくかつ個人差の少ない訓練が可能となる.本年度は,臨床対話コーパス収録におけるコーディングスキーマおよび対話ステージ定義について発表するとともに,データ利用にまつわるプライバシーや倫理といった問題について論議した.また,カウンセリング対話ジェスチャー空間においてクライエントの問題の把握がどのように位置づけられているかについても検討した.次年度に向けて,データ収録環境を改善し,新規データの収録を開始した.特に,同一のクライエントに対して異なるセラピストが対応する場合に着目し,専門家の対話戦略の差異が,言語・非言語行動にどのように表れるかについて検討を開始している.対話を通じた問題解決においては,対話がしばしば目標と異なる方向に進行してしまうため,調整が欠かせない.しかし,専門家として対話を行う者であっても,常に調整に成功するわけではなく,成功する対話進行機構の理解が求められている.本研究では専門的対話として,カウンセリング対話を取り上げる.そこでは,クライエントの話をきちんと聞かなければと意識するあまり対話の調整を全く行わず,問題解決に向けた具体的な取り組みに話題を進めることができないといった問題や,対話の進行を調整するための心理臨床技法を過剰に使用してしまい,クライエントとの関係構築が不十分になる問題が存在する.これらは初心セラピストにしばしばみられる問題であり,経験を積むことで自然に適切な調整技能を身に着けることが期待されている.しかし,熟練者が対話中にどのように調整を行っているかが知識化されていれば,効率よくかつ個人差の少ない訓練が可能となる.本年度は,コーパスに収録されたカウンセリング対話に対して,対話の状態をアノテーションするためのツールの活用に取り組んだ.カウンセリングの進行状況を画面上の二次元の空間内で連続的にアノテーションするツールを利用し,アノテーションの結果得られた時系列データの変化点から,カウンセリング対話が質的に変容する様子を見出す方法について予備的分析を行った.

また,アノテーションを物理的な装置を用いて直線的に入力する方法を検討し,ソフトウェアによる二次元平面上での入力方法と比較した.対話内容の分析については,昨年度までの非言語行動に着目した分析に加えて,言語行動に着目した分析を行うために,特に発話の内容(用いられる語)の分布の観点から,対話の変化点を自動的に決定する手法を開発した.さらに,発話内容のみに基づく自動分割に,身振りの情報を加えることで,分割誤りが削除可能であることを確認した.認知科学複数のモダリティを統合的に取り扱う技術及びアノテーションの設計については進展しているが,カウンセリング対話への適用のために検討すべき事項が多く出てきたため,今年度に集中的に取り組む必要がある.対話データの収集は,さまざまな改良を加えつつ進行している.また,新たな分析の観点についての検討も始まっており,順調と言える.一方,対外発表については今後増加を図るべき段階にある.これまで研究分担者の下でカウンセリングデータを収録してきたが,異動に伴い収録環境が使用できなくなる.対話データの量を増やすのではなく,収集済みのデータのより深い分析を中心に進めていく計画である.また,研究代表者の研究室においても,データ収録環境を構築し,異なる対話データを対比させることも検討する.今年度に実施したデータ収集を改善しつつ継続するとともに,事例研究という形で,定性的な分析を行う.また,一定量のデータが利用可能になった段階で,定量的な分析を行う.本研究のような実データに基づくデータ駆動型の研究と,実験的な研究との接続をにらんで,非言語行動に関する実験的な研究成果をとりまとめる.さらに,得られた知見の情報技術への展開を目指して,対話システム研究との接続可能性についても検討していく.3月の研究打合せが中止され,旅費相当分が未使用額となった.これまで使用していた東京の打ち合わせ会場が利用できなくなったため,京都で研究打合せを行う予定であり,そのための追加の旅費として使用する.該当なし
慢性疾患患児と家族のライフスタイルの形成過程と看護援助方法に関する研究

平成8年度から、小児糖尿病と気管支喘息の子どもとその家族をとりあげ療養行動(医療的管理行動)と生岳習慣、ライフスタイルの研究を行ってきた。本年度は次の事が明らかになった。1)「小児糖尿病患者の日常生活習慣・療養行動と親のライフスタイル」:千葉大学病院、千葉県こども病院、長野県の総合病院の6-20歳の患児とその親36組についての分析は、平成9年度の日本看護科学学会に発表したが、さらに長野県の13組のデータを加えて分析した結果、子どもの日常生活習慣には親の健康に対する考えや信念より親が実際に行っている生活習慣特に就寝時間が大きな影響を与えていること、ストレスの高い親は日常生活にも疾患に関してもストレスが高く子どもに統制的に関わる事等が明らかになり、親のストレスを軽減し子どもに支持的に関わることができるような援助が必要である事が明らかになった。2)「小児糖尿病患児及び気管支喘息患児と親のライフスタイル」:糖尿病患児と親49組と気管支喘息児と親.88組について比較した。子どもの健康習慣では入浴の頻度:好き嫌いの有無において糖尿病児のほうが、就寝時間において気管支喘息児の方が有意に健康的であった。親の健康習慣で信塩分を控える、栄養のバランスに気をつける、テレビの視聴時間において糖尿病児の親の方が有意に健康的であった。親が朝すっきり起きられることが、両疾患において親のストレスや自己実現と有意の関係を示した。3)糖尿病患児と家族が療養行動を含めた生活スタイルを形成する過程と看護援助について:平成8・9年度に発症した10例の小児糖尿病患児と家族に初期の入院中から退院後毎月の受診時に看護的関わりを持ち、経過を記述し分析した。また、発症後数年を経過しているが血糖コントロールが非常に悪い対象について生活スタイル改善の観点から指導を試み経過を観察した。本研究は(1)慢性疾患患児と家族が疾患の治療・管理のために実施していく行動を組み入れたライフスタイルを形成していく過程と、影響因子を明らかにする、(2)慢性疾患患児と家族が適切なライフスタイルを形成し、維持していくための看護援助方法を明らかにすることを目的とする。本年度は次のように実施した。(1)018歳の外来通院中の糖尿病患児と母親についての調査:10歳以上の患児については研究者らがこれまでに作成し、使用してきた健康行動質問紙と療養行動質問紙により調査した。09歳児の健康行動と療養行動は、母親に聞く方法で把握する質問紙を作成し使用した。母親については母親の健康習慣とライフスタイルを把握する質問紙を作成し使用した。10歳以上の49組の子どもと母親の回答を分析した結果、子どもの療養行動と健康行動に深い関係があり、さらに子どもと親の健康行動には関係がある事が明らかになった。年少児についての調査を一部続行しており、総合的な分析は9年度に行う。(2)018歳の外来通院中の気管支喘息患児と母親についての調査:子どもの療養行動について10歳以上の対象用と母親に聞く年少児用を作成した。子どもの健康行動、母親の健康行動とライフスタイルは糖尿病児の母親に対するものと同じものとした。学童が受診することの多い春休み中に調査を実施するよう調査施設の承諾を得ている。約100名の調査となる見込みである。(3)小児糖尿病を発症し入院中の3人の患児と家族に毎日昼食前の血糖測定、注射、食事について看護的関わりを持ち、発症に対する反応と適応の過程を把握した。退院後は外来において経過を把握した。平成9年度は(1)前年度から今年度の初めにかけて行った調査の分析と発表、(2)初発糖尿病患児と家族の糖尿病の治療・管理行動とライフスタイルを縦断的に調査した。(1)について、(1)慢性疾患患児の親のライフスタイルに関する研究1-小児糖尿病患児の親のストレス、自己実現、子育てに焦点をあてて、慢性疾患患児の親のライフスタイルに関する研究2-気管支喘息児の親のストレス、自己実現、子育てに焦点をあてて、第44回日本小児保健学会(京都)平成9年11月、(2)糖尿病患者の療養行動、血糖コントロールと親のライフスタイル、第3回小児・思春期糖尿病研究会(東京)平成9年8月、(3)小児糖尿病患者の日常生活習慣、療養行動と親のライフスタイル:第17回日本看護科学学会(神戸)平成9年12月、(4)気管支喘息患児発作予防行動との親のライフスタイルに関する研究、第4回日本家族看護学会(愛知)平成9年9月、(5)気管支喘息患児の親のライフスタイルに関する研究、千葉大学看護学部紀要20に投稿。(2)について、平成8年度と9年度に発症した10名のインスリン依存型糖尿病患児と親に入院中から看護的関わりを持ち、退院後は毎月外来受診時に面接して療養行動と生活状態を把握し指導する中で、患児と家族のライフスタイルの形成過程を把握するようつとめた。以上の他に、小型HbA_<lc>アナライザー(測定時間6分)(DCA2000)の外来での活用について、中学・高校生の部活動・学習塾出席とインスリン調節の実態について調査した。

平成8年度から、小児糖尿病と気管支喘息の子どもとその家族をとりあげ療養行動(医療的管理行動)と生岳習慣、ライフスタイルの研究を行ってきた。本年度は次の事が明らかになった。1)「小児糖尿病患者の日常生活習慣・療養行動と親のライフスタイル」:千葉大学病院、千葉県こども病院、長野県の総合病院の6-20歳の患児とその親36組についての分析は、平成9年度の日本看護科学学会に発表したが、さらに長野県の13組のデータを加えて分析した結果、子どもの日常生活習慣には親の健康に対する考えや信念より親が実際に行っている生活習慣特に就寝時間が大きな影響を与えていること、ストレスの高い親は日常生活にも疾患に関してもストレスが高く子どもに統制的に関わる事等が明らかになり、親のストレスを軽減し子どもに支持的に関わることができるような援助が必要である事が明らかになった。2)「小児糖尿病患児及び気管支喘息患児と親のライフスタイル」:糖尿病患児と親49組と気管支喘息児と親.88組について比較した。子どもの健康習慣では入浴の頻度:好き嫌いの有無において糖尿病児のほうが、就寝時間において気管支喘息児の方が有意に健康的であった。親の健康習慣で信塩分を控える、栄養のバランスに気をつける、テレビの視聴時間において糖尿病児の親の方が有意に健康的であった。親が朝すっきり起きられることが、両疾患において親のストレスや自己実現と有意の関係を示した。3)糖尿病患児と家族が療養行動を含めた生活スタイルを形成する過程と看護援助について:平成8・9年度に発症した10例の小児糖尿病患児と家族に初期の入院中から退院後毎月の受診時に看護的関わりを持ち、経過を記述し分析した。また、発症後数年を経過しているが血糖コントロールが非常に悪い対象について生活スタイル改善の観点から指導を試み経過を観察した。
成人T細胞白血病の発症、進展に関わる遺伝子の同定及び解析

1)成人T細胞白血病の進展、発症に関わる遺伝子の同定のために慢性型ATL細胞と非腫瘍の感染細胞のmRNAを用いてDifferential display法により腫瘍細胞で発現が亢進、抑制している遺伝子群を単離しHoxA10などに遺伝子が慢性型ATLで発現亢進していることを見出した。未報告の遺伝子も単離されており、今後、解析を進めていく予定である。2) Fas抗原陰性のATL症例における遺伝子の変異の解析から異常なaltemativesplicing産物が多く検出された。正常では認められないexon4,6,exon6,7,exon4,6,7のskippingがあるためframe shiftが起こり、immature terminationのため膜型Fasが産生されないものと考えられる。doxorubicinによるアポトーシス誘導をin vitroでこの細胞を用いて検討した。アポトーシスはpropidium iodideの取り込みをフローサイトメトリーで測定しアポトーシスを起こした細胞の割合でみた。Fas抗原陽性のATL細胞ではdoxorubicin(4μM)の添加によって12時間後に52%のアポトーシスが観察されたのに対してFas陰性のATL細胞ではアポトーシス細胞は10%であり、このATL細胞はin vitroでdoxorubicinに耐性であることが示された。Fas遺伝子の変異が腫瘍の進展に関わっており薬剤耐性とも関連していることを示している。3) p16遺伝子は癌抑制遺伝子であるが様々な癌での欠失、変異が報告されている。一方、メチル化などのepigeneticな変化もp16遺伝子の抑制を起こす。methylation-specific PCR(MSPCR)による解析でATL細胞での高率なメチル化の存在が示された。さらにsodium bisulfite処理DNAを用いてPCRを行いdirect sequenceによって塩基配列を決定することによってメチル化を検討した。p16遺伝子は成人T細胞白血病細胞で高率に(86%)メチル化を受けていることを見出した。またメチル化の程度は臨床的に悪性度が増すに従い増強し、それに伴い転写産物量も減少した。脱メチル化を起こす5-aza-2′-deoxycytidineによってp16遺伝子転写は再活性化され確かにメチル化が転写抑制に関わっていることが明かとなった。1)成人T細胞白血病の進展、発症に関わる遺伝子の同定のために慢性型ATL細胞と非腫瘍の感染細胞のmRNAを用いてDifferential display法で解析を進めた。腫瘍細胞で発現が亢進、減弱している遺伝子群を単離し40クローンを得た。このcDNAを再増幅した後、pCR2に組み込んだ。白血病細胞、感染細胞から分離したRNAを用いて逆転写の際に^<32>Pでラベルしたプローブを作成し各クローンの選別を行なっている。来年度は、これらのクローンの塩基配列の決定、発現のパターンを解析する予定である。2)p16遺伝子は細胞周期調節因子であるがATLでは約30%に欠失、再構成が存在することが明かとなっている。われわれはp16のプロモーター領域のメチル化をサザン法、Methylation specific PCR (MSPCR)で検討し欠失や再構成の存在しない症例にもメチル化が存在しp16遺伝子の転写を抑制していることを明らかにした。3)Fas抗原陰性のATL症例における遺伝子の変異を証明した。

Fas陰性のATL細胞はin vitroでアドリアマイシンによって誘導されるアポトーシスに抵抗性であるだけでなくin vivoにおいても抗癌剤に抵抗性であった。Fas遺伝子の変異が腫瘍の進展に関わっており薬剤耐性とも関連していることを示している。またFas抗原陽性のATLのいても2例Fas抗原遺伝子の変異を同定しFas遺伝子の変異がさらに多い可能性が示唆された。1) p16遺伝子は様々な癌での欠失、変異が報告されている癌抑制遺伝子である。一方、メチル化などのepigeneticな変化もp16遺伝子の抑制を起こす。methylation-specific PCR(MSPCR)による解析でATL細胞での高率なメチル化の存在が示された。さらにsodiumbisulfite処理DNAを用いてPCRを行いdirect sequenceによって塩基配列を決定することによってメチル化を検討した。p16遺伝子は成人T細胞白血病細胞で高率に(89%)メチル化を受けていることを見出した。またメチル化の程度は臨床的に悪性度が増すに従い増強し、それに伴い転写産物量も減少した。脱メチル化を起こす5-aza-2'-deoxycytidineによってp16遺伝子転写は再活性化され確かにメチル化が転写抑制に関わっていることが明かとなった。2) Fas抗原陰性のATL症例における遺伝子の変異の解析から異常なaltemativesplicing産物が多く検出された。正常では認められないexon4,6,exon6,7,exon4,6,7のskippingがあるためframe shiftが起こり、immature terminationのため膜型Fasが産生されないものと考えられる。doxorubicinによるアポトーシス誘導をin vitroでこの細胞を用いて検討した。アポトーシスはpropidium iodideの取り込みをフローサイトメトリーで測定しアポトーシスを起こした細胞の割合でみた。Fas抗原陽性のATL細胞ではdoxorubicin(4μM)の添加によって12時間後に52%のアポトーシスが観察されたのに対してFas陰性のATL細胞ではアポトーシス細胞は10%であり、このATL細胞はin vitroでdoxorubicinに耐性であることが示された。3)成人T細胞白血病の進展、発症に関わる遺伝子の同定のために慢性型ATL細胞と非腫瘍の感染細胞のmRNAを用いてDifferential display法により腫瘍細胞で発現が亢進、抑制している遺伝子群を単離しHoxA10などに遺伝子が慢性型ATLで発現亢進していることを見出した。未報告の遺伝子も単離されており、今後、解析を進めていく予定である。
PCB分解土壌細菌のカタボライト調節メカニズムの解明

2)KKS102のビフェニルPCB分解代謝オペロンのpEプロモーターのカタボライト調節メカニズムの解明を引き続き行った。昨年度までの研究によりカタボライト調節に関与する遺伝子として二成分制御系のセンサーキナーゼ(BphP)およびレスポンスレギュレーター(BphQ)をコードする遺伝子が取得され、その遺伝子破壊株が作製されていた。またpEプロモーターのカタボライト調節はBphQによる転写活性化を各種炭素源が阻害することがその本質であることが明らかにされていたが、どのようにしてBphQの活性が調節されているかについては未解明であった。BphQの転写レベルがコハク酸によって変化しないことがLacZをレポーターとしたアッセイ系により明らかとなったこと、人工的なプロモーター下でbphQを発現させてもカタボライト調節が見られることから、bphQが何らかの転写後制御を受けていることが示唆された。レスポンスレギュレーターはそのおよそ55番目付近に存在するアスパラギン酸のリン酸化によってその活性が制御される例が広く知られている。そこでこの残基(実際は58番目のアスパラギン酸残基)に変異を入れたbphQ遺伝子をbphPQの破壊株に導入した株を作製し解析したところ、通常のカタボライト調節が観察されこのアミノ酸残基がカタボライト調節に関与していることが否定された。以上、pEプロモーターのBphQによるカタボライト調節にはbphQの転写後制御が関わることが示唆されるとともに、BphQが従来知られているレスポンスレギュレーターと異なり、その活性調節にアスパラギン酸55が関与しないことが明らかとなった。1)Pseudomonas sp. KKS102株においてカタボライト調節に関わることが推定されていた二成分制御系のセンサーキナーゼ(CcrS ; catabolite control regulatorと命名)およびレスポンスレギュレーター(CcrTと命名)をコードする遺伝子の破壊株をそれぞれ作製し解析したところ、ccrSはカタボライト調節に必ずしも必要ではないこと、ccrTがカタボライト調節に重要な機能を持つことが明らかとなった。このことは他の菌株にccrTのみを導入することで標的プロモーターのカタボライト調節がおきたことからも支持された。2)多くの転写制御因子は自身の発現を調節する例が多いが、LacZをレポーターとしたアッセイ系による解析により、ccrT、ccrSは自己の発現を調節していないこと、ccrS、ccrTはタンデムに並んでいるにもかかわらずccrTに固有の転写開始地点がccrSのコーディング領域に存在していることが示唆された。3)KKS102株で抑制炭素源となる物質について今までの解析に加え、28種類の基質について詳細な解析を行った。その結果KKSのビフェニル代謝系オペロンのプロモーターが、フマル酸によって強く抑制されること、イソクエン酸、乳酸、グリセロール、フルクトース、マンニトール、によって弱く抑制されることを見いだすなど、各種炭素源の抑制効果について明らかした。4)CcrTを大腸菌で高発現させるための系を構築し、精製を行った。すでに明らかとなっていたカタボライト調節に関わるDNA部位との結合をゲルシフトアッセイにより検討したが有意と思われる結合は見いだされなかった。そこでCcrTをKKS株で発現させる系を構築した。
遷移確率に基づく第二言語処理能力発達理論構築のための基礎的研究

視線計測等の実験で、英語学習者も構文レベルでの文構成要素の生起位置の順序に関して確率的な知識を有している可能性が示唆された。連語表現レベルでも学習者はその自然さや使用頻度に敏感であることが確認された。文法形態素の実験では学習者はあまり敏感ではなくむしろ直前の表面的な形式に影響を受けることが確認された。統語や連語表現の処理については学習者もある程度母語話者に似た処理を行えるようになることが示唆された。また、多読の実験により大量のインプットの頻度効果によると思われる読解速度の向上が確認された。学習者コーパスの分析では、遷移確率を見ることで学習者独特の言語使用を観察することができることが確認できた。本研究は、遷移確率(ある単語の次にどの単語が生起しやすいか)という概念を用いて、語彙・文法・コロケーションの習得過程を包括的にとらえ、第二言語処理能力の発達を説明する理論を構築するための基礎的研究を行うことを目的としている。第二言語の習得を、個別の言語単位(単語や文法形態素)の習得ととらえるのではなく、言語単位が連続する確率的な知識の習得ととらえ、学習者コーパスと視線計測装置を使い包括的かつ精緻に観察・分析することにより、語彙・文法・コロケーションという三種類の知識が、どのように関連しながら中間言語体系を作りあげていくのかというメカニズムを、統一的に説明できる理論の構築を目指す。平成20年よりオンラインにて一般公開している学習者コーパスNICEの拡充改良版構築のために再設計を行った。「NICE Symposium 2013」というシンポジウムを開催(公開・無料)し、東京外国語大学の投野氏および神戸大学の石川氏による講演と7件の研究事例報告をふまえて全体討論会を行い、これまでの学習者コーパス研究の成果と最新の研究の知見をいかして、学習者コーパスNICEの改良版の構築準備を行った。現有の視線計測装置(EyeLink CL)を使用し、連語表現を含む視線計測実験を行いデータを収集した。3単語以上の連語表現の分析方法に関する計測手法を探索的に検証した。また、データの分析方法として一般化線形混合モデルによる分析方法を検討し分析手順を確立した。また米国メリーランド大学で英語母語話者データを来年度から収集するために現地で打ち合わせを行い実験の準備を整えた。本年度は、学習者コーパスのデータ収集方法の修正・試行データ収集・オンラインデータ収集システムの公開準備と、連語及び文法処理に関する視線計測データの収集および分析を行った。学習者コーパスデータについては、テーマの設定方法等を変更し、英語学習者および英語母語話者に英文エッセイを書いてもらい今回修正したデータ収集方法と実行手順を確認した。この修正に基づき、オンラインでのデータ収集が出来るように収集システムの公開準備を行った。また、既存の学習者データと大規模コーパスであるBNCについて2語の連語表現の遷移確率を計算した。視線計測実験については、連語表現のデータを追加収集した。また、文法処理については、予備的な実験とコーパスデータの分析から、第二言語においては文法形態素と文構成要素のかかわる統語的な文処理とでは敏感さや習得過程に違いがある可能性が明らかになったため、計画を一部修正し、観察しやすい文処理における視線計測データの分析を先に試み、そこまでの成果を研究発表した。平成26年度は、学習者コーパスデータの追加収集とその分析、および、文法形態素と文構成要素に関する視線計測実験を行う計画であった。まず、学習者コーパスのデータについては、昨年度確認した収集方法に従い、学習者データおよび英語母語話者データの追加収集を行った。前年度開発したオンラインで学習者コーパスデータを収集できるシステムの運用開始に向けて、データフォーマット、サーバー上のプログラム、データの収集手順を調整し、実際にオンラインでのデータ収集に利用できるようにシステムを公開した。これらのデータの収集作業と並行して、既存の学習者コーパスデータを使っての英語学習者データと英語母語話者データの分析作業を進め、2語から6語の連語表現における遷移確率を計算するプログラムを開発し、連語表現の頻度と遷移確率との関係の分析に着手した。昨年度と本年度で新規に収集したデータについても分析をはじめ、分析結果を確認中である。視線計測実験については、文法形態素に関して三人称単数現在の「-s」に関する実験と、文構成要素に関して与格交代に関する実験を行いデータ収集をし分析中である。昨年度からすでに分析を始めている連語表現に関する実験は、前半部分の頻度効果に関する反応時間の分析結果を先にまとめ国際学会で発表した。英語学習者および英語母語話者コーパスのデータの追加収集をした。

平成25・26年度に収集したデータを整理し、平成27年7月にNICE 3.0として一般公開した。さらに、学内に加え、学外で研究協力を得てデータの追加収集を行い、学習者データ185ファイル(約5万7千語)、母語話者データ36ファイル(約3万5千語)をコーパス化した。これらのデータは、NICE 3.1として一般公開する予定である。NICE3.1の学習者データについて26グラムの遷移確率を計算したが、観察結果から3グラム表現を分析対象とすることとした。また、低頻度語による分布の偏りが見られたため、頻度5回以上の表現に限って分析することとした。母語話者データについては、収集ファイル数が少なかったため直接の比較を断念し、一般的な英語表現の傾向と比較するためにBNCの書き言葉データとの比較を行った。学習者データ中で5回以上出現した3グラム表現をBNCデータから検索し、各表現の遷移確率を計算し、各表現の遷移確率の差を計算し、その差が大きい表現と少ない表現とを比較分析した。視線計測による分析については、追加のデータ収集を行い、以下の分析を行った。まず、構文レベルで、二重目的語を取ることのできる動詞のうち前置詞句を使う傾向の違いによる影響を調べたところ、英語学習者において差が見られ、英語学習者も文の要素の生起位置の順序に関する確率的知識を有している可能性が示唆された。また、句レベルの連語表現の自然・不自然さに関する分析でも、学習者はその差に敏感であるという結果が得られた。次に、形態素レベルで、主語と動詞の数の一致に関して、主語の名詞と動詞直前の名詞の複数のsの有無による影響の差を分析した結果、学習者はそれほど敏感ではなく、むしろ、直前の単語との表面的な一致・不一致に影響を受ける傾向が示唆された。視線計測等の実験で、英語学習者も構文レベルでの文構成要素の生起位置の順序に関して確率的な知識を有している可能性が示唆された。連語表現レベルでも学習者はその自然さや使用頻度に敏感であることが確認された。文法形態素の実験では学習者はあまり敏感ではなくむしろ直前の表面的な形式に影響を受けることが確認された。統語や連語表現の処理については学習者もある程度母語話者に似た処理を行えるようになることが示唆された。また、多読の実験により大量のインプットの頻度効果によると思われる読解速度の向上が確認された。学習者コーパスの分析では、遷移確率を見ることで学習者独特の言語使用を観察することができることが確認できた。学習者コーパスデータの収集について、オンラインでのデータ収集プログラムの基幹部分は完成していたが、その運用方法に関し、本研究の代表者に限らず、他の研究者も独自にコーパスを構築できるような、より汎用性の高いオープンなシステムの方が望ましいと判断し、一部設計を途中で変更し、プログラムの修正およびサイトの整備に時間がかかったため、公開が予定より遅れ、研究協力者を募ってのデータ収集の開始を先延べすることとなった。視線計測データの収集については、英語学習者のデータは十分収集できたが、英語母語話者のデータがまだ足りないため、全体の比較分析の開始が遅れている。
新しい直接覆髄剤リン酸四カルシウム-クエン酸セメントに関する研究

平成5年度の本研究において、試作セメントであるリン酸四カルシウム-クエン酸複合セメント(4CPC)をイヌ歯牙に直接覆髄した実験で、4CPCは対照として用いた水酸化カリウム製剤Dycal^<TM>よりも早期に、より高い確率で修復象牙質が形成させることがわかった。また、この修復象牙質形成過程は歯の発生時における正常な象牙質形成過程と同様であると思われた。さらに、修復象牙質が形成されている部分は勿論のこと、形成されていないセメントの部分にもハイドロキシアパタイト(HAP)の出現が認められ、セメント自身もHAPに転換しているものと思われた。平成6年度は実験期間が6ヵ月、1年のものに対し同様な実験を行い、4CPCの直接覆髄剤としての最終的な予後を観察した結果、非常に予後良好であった。また、この4CPCに対して細胞毒性試験を行ったところ、4CPCは全く毒性がないことが判明し、4CPCで直接覆髄してもなおかつ修復象牙質の形成が認めれない場合に出現する炎症細胞浸潤の原因は覆髄中の細菌感染によるものと考えられた。そこで、さらに抗菌剤を添加した3種類の4CPCについて同様の動物実験を行ったが、どの実験結果の予後は不良であった。この原因として考えられるのは抗菌剤自体に化学的刺激性及び細胞毒性があるためと考えられた。以上の結果より、4CPCは直接覆髄剤として非常に有望な材料であることがわかった。今後は、4CPCに添加する抗菌剤についてさらなる検討をする必要があると思われる。近年、各種のリン酸カルシウムがその生体親和性と材料学的性質より、歯科の広い範囲での応用が試みられている。そこで、我々はリン酸カルシウムの一つであるリン酸四カルシウムに注目し、その生体親和性と材料学的性質を利用して直接覆髄剤としての応用を検討した。平成5年度の本研究において、試作セメントであるリン酸四カルシウム-クエン酸複合セメント(4CPC)をイヌ歯牙に直接覆髄し、3日、1週、2週、4週、8週後に潅流固定し、パラフィン標本、凍結標本、非脱灰標本を作製した。そして、パラフィン標本にはトルイジンブルー染色、アザン染色、プロテオグリカン糖鎖の免疫組織化学的染色を施し、凍結標本にはアルカリフォスファターゼ活性染色を行った。また、非脱灰標本は微小部X線回折を行った後、SEMを用いてセメントの変化を観察した。その結果、イヌ歯牙には対照として用いた水酸化カルシウム製剤Dycal^<TM>よりも早期に、より高い確率で修復象牙質が形成されることがわかった。平成6年度は実験期間が6ヵ月、1年のものに対し同様な実験を行い、4CPCの直接覆髄剤としての最終的な予後を観察し、4CPCで直接覆髄してもなおかつ修復象牙質の形成が認められない場合に出現する炎症細胞浸潤の原因について検討を加えるため、細胞毒性試験も行う予定である。平成5年度の本研究において、試作セメントであるリン酸四カルシウム-クエン酸複合セメント(4CPC)を直接覆髄剤として用いた場合、4CPCは対照として用いた水酸化カルシウム製剤Dycal^<TM>よりも早期に、より高い確率で修復象牙質が形成させ、この修復象牙質形成過程は歯の発生時における正常な象牙質形成過程と同様であると思われた。

さらに、修復象牙質が形成されている部分は勿論のこと、形成されていないセメントの部分にもハイドロキシアパタイト(HAP)の出現が認められ、セメント自身もHAPに転換しているものと思われた。この結果を踏まえて、平成6年度は実験期間が6カ月、1年のものに対し同様な実験を行い、4CPCの直接覆髄剤としての最終的な予後を観察した結果、非常に予後良好であった。また、この4CPCに対して細胞毒性試験を行ったところ、4CPCは全く毒性がないことが判明し、4CPCで直接覆髄してもなおかつ修復象牙質の形成が認められない場合に出現する炎症細胞浸潤の原因は覆髄中の細菌感染によるものと考えられた。そこで、さらに抗菌剤を添加した3種類の4CPCについて同様の動物実験を行ったが、どの実験結果も予後は不良であった。この原因として考えられるのは抗菌剤自体に化学的刺激性及び細胞毒性があるためと考えられた。以上の結果より、4CPCは直接覆髄剤として非常に有望な材料であることがわかった。今後は、4CPCに添加する抗菌剤についてさらなる検討をする必要があると思われる。
遺伝子導入動物による発症の研究

細胞増殖や分化にかかわる分子、細胞の維持に関与する分子、又はウイルス遺伝子産物が個体発癌においてどのような実際上の役割を果たすのかについてトランスジェニックマウス作製や相同遺伝子組換え技術を用いて研究を行った。また、標的組換え技術の開発も行った。neo耐性遺伝子とHSV-tkをセットにしたベクターを用いることにより、点突然変異の導入やヒト遺伝子と完全置換する新しい標的組換え法が開発された。効率の良い遺伝子トラップ法を開発した。p53ホモ欠失マウスでは3-6カ月に全ての個体において腫瘍が発生すること、ヘテロ欠損マウスでも腫瘍の発生頻度の増加が見られ、調べたかぎりにおいてヘテロ接合性の喪失が生じていた。CSKホモ欠失マウスでは胚性致死であること、ヘテロ欠失マウスでは期待されたような発癌の頻度上昇は認められなかった。c-mos欠失マウスでは排卵時第2時減数分裂の中期にあるが受精能を欠くこと、培養すると高頻度に単為発生することがわかった。Bリンパ球のシグナル伝達に関与すると考えられるHS-1はLynによりリン酸化されること、その欠失マウスではリンパ球の分化は一見正常であるが、sIgM架橋による腹腔B細胞のアポプトーシスが起こらなかった。細胞表面機能分子の一つであるMB-1の下流に位置する新しい分子であるp52遺伝子の単離に成功し、これがPKCの活性化によってリン酸化されることが明かとなった。DNA修復酵素であるO^6-メチルトランスフェラーゼ遺伝子導入マウスでは化学発癌剤のみならず自然発生の肝癌に対し抵抗性となることが明かとなった。インターフェロンガンマ遺伝子を肝臓特異的に発現させることにより、慢性肝炎モデルマウスの作製に成功した。HTLV-1のenv-pX遺伝子を導入すると関節炎が生じるが、それはTaxによる種々のサイトカインの発現増強によると考えられた。
サイトカインをバイオマーカーにした新たな糖尿病黄斑浮腫評価法の創出と治療戦略

糖尿病黄斑浮腫など糖尿病眼合併症の病態には、炎症など種々のサイトカインが重要な役割を果たしているが、これらの発現レベルを評価するには前房水や硝子体液を侵襲的に採取するしかなかった。本研究では非侵襲かつ容易に採取できる涙液を用いてサイトカイン量を計測することで、病勢のモニタリングを行うことができる可能性に着目し検討を行った。その結果、糖尿病黄斑浮腫の患者涙液中で数種の炎症性サイトカイン濃度が上昇していることを見出した。また増殖糖尿病網膜症患者の涙液で、MMP濃度が高いことが明らかとなった。さらに硝子体術後の涙液中MMP-10値が高いことが、硝子体術後の角膜上皮障害に関連していることが示唆された。申請者は、これらの患者涙液中で種々のサイトカインが上昇していることに注目した。これは涙液に眼内環境を反映するバイオマーカーとして利用可能なデータが多数含まれていることを示唆している。本研究では、非侵襲的に採取が可能な涙液を試料として眼内サイトカイン濃度をモニタリングすることで、糖尿病黄斑浮腫など糖尿病眼合併症の病勢に応じた最適な治療を可能とする、新たな病態解析・治療戦略の確立を試みている。申請者は、これらの患者涙液中で種々のサイトカインが上昇していることに着目した。本研究では、非侵襲的に採取が可能な涙液を試料としてサイトカイン濃度を測定、モニタリングすることで、糖尿病眼合併症の病勢把握を試みている。糖尿病患者から涙液採取を行い、サイトカイン濃度を測定し、結果をまとめた。おおむね順調に進展している。申請者は、これらの患者涙液中で種々のサイトカインが上昇していることを見いだした。これは涙液に眼環境を反映するバイオマーカーとして利用可能なデータが多数含まれていることを示している。本研究では、非侵襲的に採取が可能な涙液を試料としてサイトカイン濃度を測定、モニタリングすることで、糖尿病眼合併症の病勢把握を試みた。その結果、増殖糖尿病網膜症患者の涙液では、硝子体手術後にMMPの濃度が健常者と比較し有意に上昇することが明らかとなった。また術後の角膜上皮障害は糖尿病患者群でのみ観察され、それらの症例では角膜上皮障害がなかった症例と比較してMMP-10の値が有意に高値であった。これらのことから、術後の涙液中MMP-10値が高いことが、硝子体手術後の角膜上皮障害に関連していることが示唆された。糖尿病患者から涙液採取を行い、サイトカイン量を測定しており、達成度はおおむね順調に進展している。糖尿病患者から涙液採取を行い、サイトカイン濃度を測定し、結果をまとめたが、今後はデータの考察、さらなる応用性の検討を行う予定である。眼科学糖尿病患者から涙液採取を行い、サイトカイン量を測定した。今後はデータ解析と結果のまとめ、考察を行う予定である。研究がおおむね順調に進んでいるので、物品費が少なくすんでいるため。研究がおおむね順調にすすんでいるので、物品費が少なくすんだため。本モニタリング法のさらなる応用性の検討などに費用を使用する予定である。結果をまとめて発表するための費用に使用する予定である。(学会参加、論文投稿関係費など)
帝国の遺産と東アジア共同体

東アジア共同体をめぐる研究に、史料・歴史認識・方法論の面から貢献した。まず、早稲田大学所蔵の旧社会党文書のデータベース化を進め、戦後民主主義思想におけるアジア認識の特質を明らかにした。また、韓国成均館大学と共同で、東アジアにおける歴史認識の共有を主題とする国際シンポジウムを開催し、その報告集を作成した。最後に変動するアジアをとらえるための方法論に関して共同研究を進め、その成果を『アジア学のすすめ』として出版した。東アジア共同体の構築など、現在アジアに寄せられる期待は大きい。しかし一方で、東アジアについて語る場が、日本・中国・韓国・台湾のナショナル・インタレストの衝突の場となり、議論のための共通の土俵を設定することすら困難になることも決してまれではない。本研究では、日本・中国・韓国・台湾の過去と現在に大きな影響を受けた「帝国」という問題を、東アジアの研究者共同の研究領域として設定し、そこでえられた共同の知見に基づき、新しい東アジア共同体構想を提言することをその目的とする。具体的には、(1)国際的なネットワークを通じた共同研究を通じてアジア共通の歴史認識の構築を進めるとともに、(2)「草の根からのアジア」の構築を目指し、日本とアジアとの社会運動を通じた連携を明らかにする基礎資料の収集ならびに整備を進める。・研究体制の整備:研究分担者、研究協力者全員をカバーするメーリング・リストを整備し、メンバー間で、知識・情報を共有する仕組みを作った。・アーカイブの整備:「草の根からのアジア」の可能性を探る目的で、日本の社会運動とアジアとの関連を体系的に明らかにするプロジェクトを開始した。その第一段階として、早稲田大学に所蔵されていた未整理の旧社会党関係文書のアーカイブ化に着手した。80箱ほどのうち、初年度終了時に10箱ほどの資料のデータベース入力が完了した。また、その作業と平行して、アジア関連の資料を抜き出し集中的に検討する研究を開始した。また篠田は、社会運動のオーラルヒストリーのためのインタビューを行った。・ワークショップの開催:各研究チームの主催するワークショップを開催した。ハリー・ハルトゥーニアン(ニューヨーク大学教授)、イヴ・シュメール(パリ政治学院)、アンドレイ・シドロフ(モスクワ国際関係学院)、チャリダポーン・ソンサンパン(タマサート大学)、ティティナン・ポンスヒラ(チュラーロンコーン大学)が本年度に実施したワークショップの主要な講師陣である。・国際共同研究の展開:坪井は、2007年3月に、フランスへ出張し、パリ大学、パリ政治学院教授等の研究者と、植民地主義、帝国主義に関わる共同研究をすすめる打ち合わせを行った。その結果、2007年11月にパリで開催される国際カンファレンス、「植民地と抑圧」に、本研究グループから坪井と梅森が参加し、研究報告を行うことになった。李は、2007年3月に、韓国の成均館大学へ出張し、日韓の歴史認識に関する交流プロジェクトについての打ち合わせを行った。その結果、2007年秋に日本または韓国で共同シンポジウムを開催する運びとなった。・アーカイブの整備と公開:「草の根からのアジア」の可能性を探る目的で、日本の社会運動とアジアとの関連を体系的に明らかにするプロジェクトとして、早稲田大学に所蔵されている未整理の旧社会党関係文書のアーカイブ化を昨年度に引き続き行った。80箱ほどのうち、初年度と二年度を合わせて20箱の資料のデータベース入力が完了した。また、本資料の意義と重要性を広く一般社会にフィードバックする試みとして、2007年7月25日に、同資料をテーマとする公開講演会「社会党文書を開くーグローバル化時代の社会運動の可能性」を開催、さらに早稲田大学中央図書館二階展示室にて「旧社会党関係資料展」を7月16日から8月2日にわたり開催した。その他、「同資料に関しては、2010年度の本資料の目録化と公開を前提に作業を進めた。・国際共同研究の展開:現代アジア研究チームが中心となり、韓国政治思想学会との共催で、韓国より8人の研究者を招聘し、2007年6月、国際シンポジウム「日本と韓国における憲法と民主主義-理論・歴史・展望」を開催した。本シンポジウムを通じて、両社会の差異だけでなく、とりわけ民主主義や福祉をめぐる共通の課題が浮き彫りとなり、その共同の解決に向けたロードマップのあり方についての議論を行った。・東アジア共通の歴史認識の構築:歴史認識チームは、韓国の歴史学者と共同で行う東アジア歴史認識国際プロジェクトを具体的にスタートさせた。本件に直接関係する事項として、2008年1月31日に梅森直之が漢陽大学にて東アジアの近代経験に関する研究報告を行い、さらに2月1目に李成市がオーガナイザーとなって成均館大学にて国際シンポジウム「東アジア史研究方法論の拡大」を実施した。またこのシンポの席上で、2008年度以降の共同研究の進め方に関しても活発な議論を行った。研究分担者が分担する個別の研究テーマについて研究を進めたのに加え、本フロジェクト全体で取り組んだ成果としては下記のようなものがある。1.アーカイブの整備:日本の社会運動とアジアとの関連を体系的に明らかにする試みのひとつとして早稲田大学所蔵の旧社会党関係文書のアーカイブ化を進めた。

現在、整理済資料の概要は、I各種通達類・活動報告・調査資料など党本部関係の資料(480点、13箱)、IIアジア社会党会議・国際社会主義運動関連資料を含む外国語資料(231点、7箱)である。こうした作業を通じて、敗戦から1950年代にかけての日本の革新勢力とアジア各国との具体的な連携を論ずるための基礎資料が整った。2.日韓共同歴史シンポジウムの開催:日本とアジア諸国とのコミュニケーションは、しばしば歴史認識をめぐる論争により阻害されてきた。お互いの歴史認識について共通理解を深め、その問題点を討議することを目的として、前年度に引き続き、韓国成均館大学をパートナーとし、2008年7月26日に早稲田大学において、第二回目となる日韓歴史シンポジウムを開催した(第一回目は、前年度ソウルで開催)。日韓双方から3名、計6名の報告者が、「近代東アジアに置ける他者認識と他者構築」という共通テーマのもと、報告を行い、また全報告者による総括討論が行われた。3.国際シンポジウムの開催:アメリカの著名な日本研究者であるハリー・ハルートゥニアン教授(ニューヨーク大学)を招聘し、2008年6月27日と7月4日の二日間、早稲田大学において、日本の歴史とアメリカならびにアジアとの関係を考えるシンポジウムを開催した(タイトルは、それぞれ.Reading "Overccme by Modernity"ならびにGlobalism and Anti-Aericanism)。本年度は、4年間の研究プロジェクトの最終年度にあたり、個別研究の推進に加え、とりわけ共同研究の発展的継続ならびにその集大成を強く意識しつつ、下記のような研究活動を行った。1.アーカイブの整備:本プロジェクトでは、篠田徹を中心とする研究グループにより日本の社会運動とアジアとの関連を体系的に明らかにする試みのひとつとして早稲田大学所蔵の旧社会党関係文書のアーカイブ化を進めてきた。本年度をもって、当該文書のうち、重要資料およそ800件の目録化ならびに基本情報のコンピューターへの入力を完了することができた。なお、当該資料は、平成22年度科学研究費補助金(研究成果公開促進)の交付内定を受けており、今後は、成果公開へ向けた本格的な取り組みが開始される予定である。2.日韓共同歴史シンポジウムの開催:本プロジェクトでは、李成市を中心とする研究グループにより、日韓両国の歴史認識について共通理解を深め、その問題点を討議することを目的とする国際シンポジウムを毎年行ってきた。本年度のシンポジウムは、2010年3月1日と2日に、韓国成均館大学で行なわれた。研究代表者の梅森直之が基調報告を行ったほか、日本側から李成市ら6名が研究報告を行い、10名の韓国側報告者・討論者と討議を行った。また今後の国際交流のあり方について議論を行い、大学間交流のかたちで共同研究を継続していくことに関しての意思確認が行われた。3.『アジア学のすすめ』全3巻の刊行:本プロジェクトの研究代表者ならびに研究分担者と中核とするメンバーにより、『アジア学のすすめ』が企画・準備された(弘文堂より5月下旬より出版予定)。
食の安全のためのアジア条虫と無鉤条虫の迅速診断法の開発と宿主特異性遺伝子の解析

ヒトから採集された無鉤条虫またはアジア条虫のおもわれるテニア属条虫について、ミトコンドリアのcox1遺伝子と三つの核の遺伝子(ef1、elp、pold)の塩基配列を決定し、系統解析をおこなった。その結果、いずれの遺伝子も明確に二つのクラスターに分かれたことから、これらは一度は二つの集団に分かれたと考えられた。一方で、一部の虫体でミcox1遺伝子と核の遺伝子の系統関係に不一致がみられたことから、両者の間で交雑が起こっていることが明らかとなった。無鉤条虫とアジア条虫については実験室レベルでの遺伝子・免疫診断法は開発しているが、実際に流行地で応用する段階には至っていない。本研究課題の第1の目的は、流行地で活用できる、ウシ無鉤嚢虫症とブタアジア嚢虫症に対する迅速検査法を開発することにある。また、これまでの研究の課程で、無鉤条虫とアジア条虫の交雑体が複数個体発見されており、単純な検査法では両者の適確な診断が不可能であることが判明している。第2の目的は、次世代シーケンサーを用いた遺伝子解析により、両種の宿主特異性を規定している遺伝子を同定し、交雑の問題を解決することにある。H24年度は、タイ・バリ島で疫学調査を実施した。バリ島には、無鉤条虫と有鉤条虫が分布していることがこれまで我々が実施したヒトの疫学調査の結果から明らかとなっている。そこでテニア症の流行地のヒト、及び同地で飼育されているブタおよびウシから血清を分離し、我々が開発した有鉤条虫、無鉤条虫、アジア条虫を鑑別することができる免疫検査法で抗条虫抗体の有無を調べた。抗体が陽性だった家畜について、購入後剖検したところ、一部の個体で有鉤嚢虫の多数寄生が認められた。このことから、バリ島北部のKarangasem地区では、広い範囲で有鉤条虫の生活環が維持されていることが明らかとなった。採取した虫体について、ミトコンドリアと核の遺伝子をできるだけ網羅的に調べた。また、一昨年度までに開発したL州[P法がフィールドでの診断に利用できることを確認した。また、当該地域でのテニア症のコントロールのため、海外共同研究者であるGiraudoux博士とともに、GISのデータを用いた感染のリスク評価を実施した。平成25年度は、インドネシア・バリ島において疫学調査を実施し、ブタおよびウシから血清を分離し、我々が開発した免疫診断方の有効性を確認した。その結果、我々が新規に開発した精製法により、ウシの無鉤条虫感染の診断に利用できる抗原を作製できることが明らかとなった。中国に関しては、社会情勢を考慮して日本側研究者の派遣は行わなかったが、中国側の共同研究者が四川省において疫学調査を実施し、ヒト由来の虫体を得た。現在その結果について、論文を作成している。また、次世代シーケンサーを用いて、アジア条虫1匹、無鉤条虫1匹の遺伝子解析を実施した。現在、その結果を解析中である。研究代表者らのグループは、長年にわたりヒトを終宿主とする3種のテニア属条虫についての研究を実施してきた。この中で、有鉤条虫については、ヒトおよび家畜の感染を確実に検出できる遺伝子・免疫検査系を確立し、現在実際の流行地におけるリスク評価を行う段階に達している。これに対して、無鉤条虫とアジア条虫については実験室レベルでの遺伝子・免疫診断法は開発しているが、実際に流行地で応用する段階には至っていない。H26年度は、インドネシアバリ島での疫学調査を実施し、ヒトより新たに無鉤条虫の成虫を得た。また、インドネシアの共同研究者と共に、アジア条虫の中間宿主であるブタの遺伝子解析を行った。