hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アライン等価体の重合を鍵とするグラフェンナノリボンの自在合成

5員環および7員環を有するアイソメリックグラフェンナノリボンの合成を目指し、非対称ジベンゾ[a,e]ペンタレンの新規合成法の開発、および5員環および7員環を有するアイソメリックグラフェンナノリボンの部分構造の構築に取り組んだ。まずは、ロジウム触媒を用いた縫合反応による非対称ジベンゾ[a,e]ペンタレンの合成を検討した。本手法により、電子供与基および電子求引基を有するドナー/アクセプター型ジベンゾ[a,e]ペンタレンを含む様々な置換基を有する非対称ジベンゾ[a,e]ペンタレンや異なる複素環が縮環したジベンゾ[a,e]ペンタレン等の様々な誘導体の合成が可能となった。続いて、ポリ(ジベンゾ[a,e]ペンタレン-5,10-ジイル)のモデル化合物として5,5'-ビス(ジベンゾ[a,e]ペンタレニル)を合成し、平面化を検討した。ポリ(ジベンゾ[a,e]ペンタレン-5,10-ジイル)の平面化によって、5員環と7員環を有するアイソメリックグラフェンナノリボンが得られると期待される。ロジウム触媒を用いた縫合反応および脱シリルヨウ素化により、クロロ基とヨード基を適切な位置にもつジベンゾペンタレン誘導体を合成した。得られた誘導体のホモカップリングによって得られた、クロロ基を持つ5,5'-ビス(ジベンゾ[a,e]ペンタレニル)をパラジウム錯体と反応させたところ、望みの平面化された生成物がNMR収率0.36%で得られた。生成物の構造は1H NMRおよびMALDI-TOF-MSによって決定した。これにより、5員環と7員環を有するアイソメリックグラフェンナノリボンの部分骨格が安定に存在できることが確かめられた。本知見はポリ(ジベンゾ[a,e]ペンタレン-5,10-ジイル)がアイソメリックグラフェンナノリボンの前駆体となる可能性を示唆している。28年度が最終年度であるため、記入しない。ポリ(オルト-アリーレン)の平面化によるアームチェアーグラフェンナノリボンの合成を目指し,2つの戦略の検討を行った。まずは,1つ目のアプローチとして,ポリ(オルト-アリーレン)の溶液中での酸化剤との反応によるグラフェンナノリボン合成に取り組んだ。アライン等価体の重合により合成したポリ(6,7-ジオクチルナフタレン-2,3-ジイル)を7等量の塩化鉄(III)と反応させたところ,紫外可視吸光スペクトルの小さな長波長シフトが観測された。完全に酸化的平面化が進行すれば,より大きな長波長シフトが予測されるため,この結果は平面化が不十分であることを示唆している。塩化鉄との反応で何が起こっているかを明らかにするために,モデル化合物として,両末端に置換基を持たないナフタレン4量体および両末端にオクチル基を持つナフタレン4量体を合成し,塩化鉄との反応を行った。両末端に置換基を持たないナフタレン4量体の塩化鉄との反応の生成物は,質量分析において,完全に平面化が進行したものに対応するピークが観測されたものの,完全に平面化が進行していないものに対応するものも同時に観測された。構造の決定は溶解性が低く困難であった。両末端にオクチル基を持つナフタレン4量体の塩化鉄との反応の生成物は,完全に平面化が進行したものに対応するマスsペクトルが得られたが,1H NMR解析では,4種類の3置換ナフタレンに対応するシグナルが観測された。対称性の悪さから,部分的に脱水素環化が進行し,さらに転位が進行したと考えられる。ポリマーも同様の副反応により,平面化が完了していないと考えられる。2つ目のアプローチとして,基板上へのオリゴ(ナフタレン-2,3-ジイル)の蒸着および加熱によるグラフェンナノリボンの合成を検討した。しかし,ナフタレン2量体,4量体ともに,ポリマーを与えず,分子内環化により環状オリゴマーを与えた。アライン等価体の重合によって得られたポリ(オルト-アリーレン)の脱水素環化によるアームチェアーグラフェンナノリボンの合成を目指し,各種酸化剤を検討した結果,望みの化合物は得られなかった。望みの反応が進行しない原因を明らかにするために,オリゴマーを別途合成し,各種酸化剤による脱水素環化反応を検討したところ,転位等の副反応が進行するために,望みのナノグラフェンが得られないことを明らかにした。これにより,副反応を起こさない酸化剤の選択,もしくは副反応が進行しないような新たな戦略が求められることが明らかとなった。転位等の副反応が進行しないような新たな戦略として,基板上でのポリ(オルト-アリーレン)の成長,および引き続く脱水素環化によるグラフェンナノリボン合成を試みた。それにより,末端に臭素基を有するナフタレン2量体および4量体は基板上加熱により,ポリマーを与える分子間反応ではなく分子内環化が進行し,環状オリゴマーを与えることを明らかにした。これはオリゴ(ナフタレン-2,3-ジイル)が基板上への蒸着後,脱水素環化が進行できないようなコンフォメーションをとるためであると考えられる。これにより,基板上反応によるアームチェアーグラフェンナノリボンの合成のためには,基板上でポリマー伸長が進行しやすいようなコンフォメーションをとる分子のデザインが重要であることが明らかとなった。

置換基の導入や蒸着前に部分的に脱水素環化が進行したような分子を原料として用いた戦略が有効であると考えられる。以上のように,当初の戦略によるアームチェアーグラフェンナノリボンの合成が容易ではないことを明らかにし,打開策を見出すべく,種々の戦略を検討しつつ,目的化合物の合成達成にアプローチしており,今回のような進捗状況の区分を選択した。5員環および7員環を有するアイソメリックグラフェンナノリボンの合成を目指し、非対称ジベンゾ[a,e]ペンタレンの新規合成法の開発、および5員環および7員環を有するアイソメリックグラフェンナノリボンの部分構造の構築に取り組んだ。まずは、ロジウム触媒を用いた縫合反応による非対称ジベンゾ[a,e]ペンタレンの合成を検討した。本手法により、電子供与基および電子求引基を有するドナー/アクセプター型ジベンゾ[a,e]ペンタレンを含む様々な置換基を有する非対称ジベンゾ[a,e]ペンタレンや異なる複素環が縮環したジベンゾ[a,e]ペンタレン等の様々な誘導体の合成が可能となった。続いて、ポリ(ジベンゾ[a,e]ペンタレン-5,10-ジイル)のモデル化合物として5,5'-ビス(ジベンゾ[a,e]ペンタレニル)を合成し、平面化を検討した。ポリ(ジベンゾ[a,e]ペンタレン-5,10-ジイル)の平面化によって、5員環と7員環を有するアイソメリックグラフェンナノリボンが得られると期待される。ロジウム触媒を用いた縫合反応および脱シリルヨウ素化により、クロロ基とヨード基を適切な位置にもつジベンゾペンタレン誘導体を合成した。得られた誘導体のホモカップリングによって得られた、クロロ基を持つ5,5'-ビス(ジベンゾ[a,e]ペンタレニル)をパラジウム錯体と反応させたところ、望みの平面化された生成物がNMR収率0.36%で得られた。生成物の構造は1H NMRおよびMALDI-TOF-MSによって決定した。これにより、5員環と7員環を有するアイソメリックグラフェンナノリボンの部分骨格が安定に存在できることが確かめられた。本知見はポリ(ジベンゾ[a,e]ペンタレン-5,10-ジイル)がアイソメリックグラフェンナノリボンの前駆体となる可能性を示唆している。ポリ(オルト-アリーレン)の脱水素環化によるアームチェアーグラフェンナノリボンの合成を目指し,2つの戦略に取り組む。1つ目は,溶液中での酸化剤との反応による目的化合物の合成である。現在までに検討した条件では,脱水素環化による平面化が完全には進行せずに,転位等の副反応が進行している。これまでに既に合成している,両末端にオクチル基を有するナフタレン4量体を原料として用い,酸化剤をスクリーニングし酸化的平面化が完全に進行するような条件を発見する。また,副反応の抑制に,ナフタレンオリゴマー上の置換基が重要となることも考えられるため,置換基を導入したナフタレンオリゴマーの合成および酸化も並行して行う。2つ目は,基板上反応による目的化合物の合成である。現在までに検討した原料では,ポリマー鎖の伸長ではなく,分子内環化が進行して環状オリゴマーが得られた。これは,原料が基板上でポリマー伸長が進行しにくいようなコンフォメーションをとっていることが原因であると考えられる。そこで,ポリマー伸長および平面化が進行しやすいような原料を合成し,それの基板上への蒸着および加熱を試みる。具体的には,ナフタレン環の6,7位にコンフォメーションを制御する置換基を導入したオリゴマー,および部分的に脱水素環化が進行したヘリセン状の構造を持つナフタレン3量体を検討する。
カイコにおける脳神経 ペプチドホルモンの分泌機構

カイコの脳神経ペプチドホルモンである前胸腺刺激ホルモン(PTTH)の、脳-内分泌複合器官(脳-側心体-アラタ体:幼虫5令3日目摘出)による分泌に対する神経伝達物質の効果を検討し、特に、アセチルコリン(Ach)とセロトニン(Sero)がPTTHの分泌を顕著に促進することを見出した。このAchによる分泌は、Ach-agonistであるムスカリンによって特異的に促進され、ムスカリン性-antagonistであるAtropineにより抑制された。また、GTP-binding protein(G-protein),Phosphol ipase C,Protein kinase C及びカルモデュリンに対する特異的な各阻害剤によっても抑制されることが認められた。これらの実験結果から、Achにより誘導されるPTTH分泌に、ムスカリン性-Ach受容体→G-protein→Phosphol ipase C→Protein kinase C及びカルモデュリン依存性キナーゼの関与する細胞内情報伝達系が介在しているこが推定された。一方、Sero及びその主要代謝物質であるMelatonin,5-Hdroxyindole acetic acid,5-Metoxytryptopholeのうち、Sero以外は、PTTH分泌促進効果を示さなかったが、Seroに特異的なPTTH分泌促進は、上述のAtropineによって抑制されることを見出した。また、脳内のSero量は、体液中へのPTTH分泌が増大する時期と一致して増加することが認められた。これらの結果から、Seroは、脳内でAchの放出を刺激することによって、間接的にPTTHの分泌を調節していることが明らかになった。また、野蚕(サクサン)蛹の光周依存性休眠覚醒において、血中エクダイソン量の上昇に先立ち、脳内ドーバミン及びエピネフリンの量が一時的に増大することから、前胸腺によるエクダイソン分泌を上位支配するPTTHの分泌にカテコールアミンが関与していることが推定された。
初代培養脳神経細胞を用いた虚血モデルにおける麻酔薬物及び低温療法の神経保護効果

脳虚血における麻酔薬物及び低温療法の脳保護作用に関しては様々な考察がされているが、その脳保護作用に関しては一致した見解は出ていない。そこで我々はラット胎児大脳皮質神経細胞培養を用いて虚血モデルを作成し麻酔薬物及び低温療法の脳保護作用を調べた。まず、臨床に際して頻用される静脈麻酔薬、プロポフォールの脳保護作用をNMDA及び一酸化窒素供与体暴露下において調べたが有為な神経保護作用は認められなかった。次に低温療法の脳保護作用を調べた。通常温度37°C、軽度低温32°C、中等度低温27°C、高度低温22°C、超高度低温17°Cの5段階で温度設定を行い、培養神経細胞を無酸素状況下に6-48時間暴露した。通常温度での細胞生存率は低酸素時間が6時間以上でいずれの低体温群に比べて有為に低い一方で超高度低温群での細胞生存率は低酸素時間が12時間以上の条件下で他の低温群に比べ有為に低かった。軽、中等、高度低温群では低酸素暴露18時間以内では細胞生存率に有為差は見られなかったが、24時間では高度低温群の細胞生存率が有意に高かった。以上より低温療法による脳保護作用が確認された。注目すべきは超高度低温では神経細胞保護作用が他の低温群に比較して劣り、また低酸素状況が長時間に及んだ場合高度低温群が最も神経保護作用が強力であったという点である。次に現在、広く臨床使用されている麻酔薬であるチオペンタールナトリウム(TPS)を低温療法と組み合わせて使用し、その脳保護作用を調べたところ低温とTPSの複合療法はそれぞれの単独療法より効果が強く、24時間の低酸素暴露下では軽、高度低温療法に臨床使用量のTPSを投与することにより十分な神経細胞保護作用が得られた。また48時間の低酸素暴露では高度低温療法に臨床使用量のTPSを投与することにより十分な神経細胞保護作用が得られた。一方で超高度低温群では神経保護作用が不十分であった。本年度においては初代培養大脳皮質神経細胞を用いて、低酸素状態における細胞傷害モデルを作成し低温状態における細胞保護作用を調べることに成功した。妊娠16日目のウイスターラットより胎児を取り出し、大脳皮質を採取し脳神経細胞を分離し初代培養を行った。その後、通常のインキュベーターを用いて14日間培養を行った。14日目に培養液を破棄し、新しい培養液を加えた後に、窒素化された低酸素状態(酸素濃度3%未満)のインキュベーター内に培養細胞をそれぞれ6時間から24時間留置した。その際インキュベーターの温度を以下の5つの温度条件に設定した(1)正常体温群(37度)(2)低程度低体温群(33度)(3)中等度低体温群(27度)(4)高度低体温群(22度)(5)超高度低体温群(17度)。低酸素曝露開始24時間後の細胞生存率を判定はShibuta's methodに従い通常培養液破棄直前、および24時間後に位相差顕微鏡にて同一視野の神経細胞写真を撮影しトリパンブルー染色を行い判定した。その結果(1)群では低酸素曝露の時間が長くなるに連れて細胞生存率が低体温群に比較して有為に低下していった。または(5)群においても低酸素曝露時間が12時間以上の場合、他の低体温群よりも神経細胞生存率は有意に低かった。また(2)(3)(4)群間では低酸素曝露時間が18時間以下では生存率に有意差がなかったが24時間では(4)群の生存率が有意に高かった。以上の結果より低酸素状態における脳神経細胞の保護作用は高度低体温状態が最もすぐれている可能性が示唆された。次に現在、広く臨床使用されている麻酔薬であるチオペンタールナトリウム(TPS)を低温療法と組み合わせて使用し、その脳保護作用を調べたところ

低温とTPSの複合療法はそれぞれの単独療法より効果が強く、24時間の低酸素暴露下では軽、高度低温療法に臨床使用量のTPSを投与することにより十分な神経細胞保護作用が得られた。また48時間の低酸素暴露では高度低温療法に臨床使用量のTPSを投与することにより十分な神経細胞保護作用が得られた。一方で超高度低温群では神経保護作用が不十分であった。
cDNAアレイを用いた慢性関節リウマチ滑膜発現遺伝子プロファイルの解析

1.モデル系として、培養末梢血単球に種々のサイトカインを加えて分化し、その前後におけるmRNA発現を、cDNAアレイを用いて検出した。従来放射性同位元素標識のプローブが用いられていたが、今回の研究により蛍光標識プローブを用いる検出系を確立し得た。3.現在、滑膜より精製したpoly A+ RNAを用い、上述の蛍光標識プローブを用いたcDNAアレイによる解析を施行中である。今後、上述の定量的RT-PCRの結果との対応を確認した上で、全ての滑膜検体についてcDNAアレイを用いた解析を進める予定である。
奈良県「飛鳥・藤原」地域における「方格地割」創出過程の考古学的新研究

七世紀に首都がおかれた奈良県「飛鳥・藤原」地域には、多くの宮殿や寺院が造られているが、それらの配置を律した都市計画(方格地割)は存在しないとするのが学界の通説である。しかし道路遺構などの関連する発掘資料を再検討すると、106mと132mの2種の基準寸法を用いて設計された都市計画が復元できる。おまけにそれは基準・基点を変えて3回以上も変転しているのだ。これまでは計画線の複雑な重複が読み解けず、方格地割が無いように見えただけなのだ。「飛鳥に方格地割は存在する。それも複数!」これが本研究の成果であり、結論である。6世紀末から8世紀初頭にかけてわが国の政治・文化の中心地だった「飛鳥・藤原」地域には、数多くの宮跡や寺院跡が残されている。さほど広くない範囲に造営されたこれらの宮や寺の配置を律した「都市計画」、すなわち「方格地割」を復元しようというのが本研究の主たる目的である。この点に関して現状では「方格地割は存在しない」というのが学界の主流であるが、発掘された「道路遺構」や「区画施設(塀や築地など)」の位置情報を整理すると、「飛鳥」地域には1/5里(約106m)と1/4里(約132m)を基準寸法とする2種類の「方格地割」が時期と範囲を違えて施工された可能性が高いのだ。今年度は、検討の範囲を「飛鳥」から「藤原」へと広げ、藤原京の設定にも大きく関わっている「下ツ道」「中ツ道」「横大路」ら古道の位置情報、藤原京条坊関連の位置情報を収集しその分析に努めた。その結果、飛鳥地域で指摘できた地割計画との深い関連性がうかがわれ、飛鳥寺の伽藍と上記3つの古道が有機的に配置されていることが確認できた。ただし反面、古道の一つである「阿倍山田道」に関しては、その位置関係や存続年代などになお不明な点が残されている。今後さらに関連する遺跡などの位置情報を収集しながら、飛鳥地域と藤原地域を統一する地割計画の様相に迫っていきたい。なお飛鳥から一時期、都が遷された「近江大津宮」周辺の地割計画についても、飛鳥の地割を考える上で大いに参考となるので、その関連資料の調査・収集にも着手した。7世紀代を中心にわが国の政治・文化の中心地だった奈良県「飛鳥・藤原」地域には、多くの宮跡や寺跡が残されている。さほど広くもない範囲にこれらの宮や寺を配置するには一定の「都市計画(方格地割)」が不可欠と考えられるが、「存在しない」というのが学界の現状である。そこで「道路遺構」や「区画施設(塀や築地)」などの発掘資料を再整理すると、「飛鳥」地域には1/5里(約106m)と1/4里(約132m)を基準寸法とする2種類の「方格地割」が時期を違えて施工されていた。2種類の方眼が重なって見つけにくかったのだ。昨年度は、検討の範囲を「飛鳥」から「藤原地域へと広げるとともに、大阪市に所在する「前期難波宮跡」の地割について検討した。今年度はこれらの成果を引き継ぎ、飛鳥地域では位置や年代等で問題の多い「山田道」を再検討するとともに、飛鳥から一時的に都が遷された「近江大津宮」についても地割りの有無を検証した。結果、「山田道」は7世紀中頃の斉明朝に現道位置に施工されたことが確認できたが、それ以前(7世紀前半)は湿地の状況を示すので道路の位置は未だ確定できない。別の場所を通過していた可能性も大きく、その位置の決定が課題である。一方「大津官」に関しては、1/4里方眼による地割が中心部から「南滋賀廃寺」付近まで広く認められ、さらには北方の「穴太廃寺」付近まで広がる可能性も皆無でない。「大津京」の存在も絡めて、さらなる検討が必要である。6世紀末から8世紀初頭の期間、政治・文化の中心地だった「飛鳥・藤原」地域には、数多くの宮跡や寺跡が残されている。さほど広くない地域に造営されたこれら宮や寺の配置を律した「都市計画」=「方格地割」を発掘資料から復元するのが本研究の主たる目的である。「方格地割は存在しない」とするのが学界の現状である。しかし、発掘された「道路」や「区画施設(塀や築地)」の位置情報を再評価すると、飛鳥には「1/5里」(約106m)と「1/4里」(約132m)を基準寸法とする2種類の「方格地割」が時期と範囲を違えて施工された可能性が高い。

これまでは複数の方眼が重なりもつれて、見つけ出せなかったようだ。今年度は計画の最終年として、これまでに調査・収集した発掘遺構データを総合すると共に、その位置データを「国土座標値」に統一しながら遺構の年代や性格などを再検討した。あわせて古代の測地尺や地割に関する研究史についても再評価し、当該地域における方格地割の変遷過程を以下のように復元した。すなわち「飛鳥・藤原」地域では、7世紀前半に1/5里を基準寸法とする方格地割が幹線道路の設置と共に計画・施工され、ついで7世紀中頃には1/4里の方格地割へと変更される。さらに7世紀後半には藤原京条坊(1/4里)が新たに施工されたが、それも平城遷都後には条里制(1/5里)へと転換する。この地域では、実に4度も土地区画が変転したのだ。一方、この地割の基点は6世紀末に創建された飛鳥寺伽藍にある。「飛鳥には方格地割が存在した。それも複数!」。これが本研究の結論の一つ。わが国の方格地割は1/5里を基準寸法とする「代制」から始まり、それが「条里制」へと発展する一方で、1/4里の基準寸法をもつ方格地割が斉明朝から登場。それが後の藤原京や平城京の「条坊制」へと展開していく。正方位にのった1/4里方眼こそ、わが国の首都にのみ施工が許された地割で、まさしく「王権の地」としての表示である。その意味で、大宰府や多賀城、斎宮で確認されている「方格地割」は、基準寸法・方位などの点で相違する。ただし飛鳥ともども、関連の発掘データは微少である。その増加が今後への大きな課題である。
乳蛋白ラクトフェリンの水痘帯状疱疹ウイルス感染に伴う疼痛の発生予防効果

牛乳中に含まれる鉄結合性の糖蛋白であるラクトフェリンは多機能生理活性物質として、その抗炎症作用、抗ウイルス作用、疼痛制御作用等の機序が次第に明らかとなってきた。しかし、ヒトのウイルス感染症である帯状庖疹におけるラクトフェリンの作用についてはほとんど未知といってよい。本研究は帯状疱疹発症2週間以内のヒト新鮮例を対象にした無作為二重盲検比較試験である。プラセボあるいはラクトフェリン含有錠菓をいずれも一日18錠、8週間経口摂取させ、次の4週間は摂取しない観察期間とした。計12週間にわたり皮疹治癒程度、水痘帯状疱疹ウイルス抗体価、血中炎症性サイトカイン値、血中ラクトフェリン濃度、疼痛のVisual Analogue Scale (VAS)の変化、副作用の有無等により効果を判定をするものである。発症2週間以内の症例はこれまで11例あったが、エントリー時点での疼痛のVASが基準値30mm以上に満たない症例が多く対象とならなかった。しかし現在までに5例を終了した。いずれの被検者においても治療を必要とするような副作用は認めず、安全性に問題はないと考える。現在、水痘ワクチンの高齢者帯状庖疹発症予防が検討されているように、高齢者の帯状庖疹の予防、治療は極めて重要である。ラクトフェリンによる帯状疱疹に伴う疼痛予防効果が判明すれば、帯状庖疹後神経痛への移行防止についての新知見も期待され、本研究の遂行は重要であると考える。今後とも院内、院外皮膚科に症例の紹介を依頼する等、本研究の目標数獲得に鋭意努力したいと考える。本研究は、牛乳中に含まれる鉄結合性の糖タンパク質であるラクトフェリン(以下ウシラクトフェリン)の抗ウイルス作用、鎮痛作用、免疫活性化作用、抗不安作用等に着目し、ラクトフェリンによる水痘帯状庖疹ウイルス感染症である帯状庖疹に伴う疼痛の発生予防効果を検討するものである。平成15年後は、発症後2週間以内の新鮮帯状庖疹患者を対象にして、1錠中にウシラクトフェリン100mgを含有する錠果を、一日18錠摂取させて、ウシラクトフェリンと抗水痘帯状庖疹ウイルス薬併用の効果および副作用発現に関して検索した。効果は痛みの変化、皮疹の程度により判定した。その結果、痛みの軽減、皮疹治癒促進効果が得られる可能性が認められた。赤血球数、白血球数、ヘモグロビン値、ヘマトクリット値、血小板数、AST、ALT、Al-P、BUN、Cre値には特別な変化を認めず、また短期間の軽度下痢、便秘以外に特記すべき副作用症状は発生しなかった。抗水痘帯状庖疹ウイルス薬投与中の患者にウシラクトフェリンの併用は安全であることが確認された。次に、抗水痘帯状庖疹ウイルス薬服用中の患者集団においてプラセボを用いた無作為化二重盲検比較試験により疼痛予防効果の検討を開始した。急性期疼痛はウイルス感染症による神経・血管炎であり、局所で放出される炎症性サイトカイン(IL-6、IL-8、IL-18、TNF-α)を測定し炎症性サイトカイン放出抑制効果が期待される。さらに水痘帯状萢疹ウィルス抗体価、皮疹治癒程度、VASによる疼痛評価により、ウシラクトフェリンの疼痛予防作用が判明すれば、帯状庖疹後神経痛への移行防止について新知見が期待される。以上のように、ラクトフェリン錠果(食品)摂取により帯状庖疹痛の軽減、帯状庖疹後神経移行予防の可能性が確認できれば、新たな研究への萌芽的な機能を十分に果たせると考える。今回の無作為二重盲検比較試験に先立ち、発症14日以内の成人帯状疱疹患者5名を対象に、抗ウイルス薬に加えて1錠中にウシラクトフェリン100mgを含有する錠菓を1日18粒(ウシラクトフェリンとして1日1.8グラム相当)を8週間摂取して続く4週間は摂取しないで、計12週問について抗ウイルス薬との併用効果および副作用発現を観察した。その結果、痛みの軽減、皮疹治癒促進効果が得られる可能性を認めた。血液検査値に特別な変化はなく、軽度の便秘、下痢以外に問題となる副作用症状は発生しなかった。そこで、プラセボを用いた無作為二重盲検比較試験による疼痛予防効果の検討に着手した。プラセボおよびラクトフェリン含有錠菓のいずれも一日18錠、8週間経口摂取させ、次の4週間は摂取しない観察期間とした。計12週間にわたり症状およびウイルス抗体価の変化、疼痛に関与する血中サイトカイン値の変化、visual analogue scale(VAS)により判定する疼痛の変化などにより総合的に評価を行っている。現在エントリー患者3名において試験中である。いずれの被検者においても副作用は認められていない。院内皮膚科、他院皮膚科および開業医に患者紹介を依頼し、対象を広く募り試験を鋭意続行中である。

プラセボあるいはラクトフェリン含有錠菓をいずれも一日18錠、8週間経口摂取させ、次の4週間は摂取しない観察期間とした。計12週間にわたり皮疹治癒程度、水痘帯状疱疹ウイルス抗体価、血中炎症性サイトカイン値、血中ラクトフェリン濃度、疼痛のVisual Analogue Scale (VAS)の変化、副作用の有無等により効果を判定をするものである。発症2週間以内の症例はこれまで11例あったが、エントリー時点での疼痛のVASが基準値30mm以上に満たない症例が多く対象とならなかった。しかし現在までに5例を終了した。いずれの被検者においても治療を必要とするような副作用は認めず、安全性に問題はないと考える。現在、水痘ワクチンの高齢者帯状庖疹発症予防が検討されているように、高齢者の帯状庖疹の予防、治療は極めて重要である。ラクトフェリンによる帯状疱疹に伴う疼痛予防効果が判明すれば、帯状庖疹後神経痛への移行防止についての新知見も期待され、本研究の遂行は重要であると考える。今後とも院内、院外皮膚科に症例の紹介を依頼する等、本研究の目標数獲得に鋭意努力したいと考える。
鳥類進化～形態と大きさから進化的戦略を探る～

現生鳥類の翼の形態データを各目レベルを網羅するよう収集し,それらと足跡の形態データとの間に統計解析を行い関係を見出した.その関係性を白亜紀鳥足跡化石へ演繹し,翼の形態と大きさを推定した.昨年度に確立した鳥足跡化石からその形成者の体重推定と生息環境の推定手法と,鳥足跡化石の大きさと形態から,鳥体重,翼形態,生息環境を定量的に推定する事が可能となり,これらの推定値を現生鳥類のそれらと比較する事で,大まかにどの現生種に似ている可能性が高いか特定する事が出来た.さらに,鳥足跡形態と翼形態との関係についてさらに解析を加え,両者の関係はそれぞれが反映している歩行と飛翔という行動様式が生息環境を介して関係したものである事が明らかになった.この成果を,国内学会(日本古生物学会,日本鳥学会)で発表し,内容をまとめて英国古生物学会誌に発表した.鳥類の歩行進化の詳細な解明を目指すため,基礎研究として大型水鳥のコウノトリ足跡を収集し統計解析を行った.雄雌一羽ずつのコウノトリが陶土上を歩行するのを待ち足跡を収集した.ここで,コウノトリ足跡には他の大型水鳥とは異なり中足骨跡が残りにくい事がわかった.個々の足跡を形態解析した結果,コウノトリは歩行時に足の外側(lateral side)に力をのせている事がわかり,これは他の鳥の傾向と整合的である.さらに,足跡の縦横比と歩行スピードとの関係から歩行スピードが速いと指が内転し,一方で,遅いと指が外転している事がわかった,これはコウノトリ目が第一指と足裏が強固な筋肉構造を持っている事と整合的である.この内容について,地球惑星連合大会で発表し,現在,国際誌へ投稿査読中である.鳥の模様について,人間の視覚が直観的に模様を把握する際に重要な要因である"対称性"に客観的な立場から着目し,模様と生息戦略と関係を明らかにした.この内容について,論文公表済みである.28年度が最終年度であるため、記入しない。28年度が最終年度であるため、記入しない。『鳥の足跡から体重と翼が推定できる旨の研究を行い,その成果を学会(地球惑星連合大会,日本古生物学会,日本鳥学会)で発表し,内容をまとめて国際誌に発表した.』鳥の行動様式である歩行と飛行を反映する,足跡と翼を生息環境を介して関連付けるために,鳥の系統関係を考慮する解析手法を学んだ.鳥の足跡データとあわせて,ヒトと哺乳類の足跡データも収集した.足跡から体重を推定できる研究について,その精度の善し悪しを識別するために,数理解析の証拠に加え,動物が踏んだ堆積物についてもその構造を顕微鏡や古地磁気的手法を用いて詳細に調べた.足跡が明瞭に残るとされる構造と含水率の陶土を鳥飼育部屋に敷き,その上を鳥が歩行するのを待つという手法により足跡形態データの差異を収集した.『鳥の模様と生息環境についての理論解析研究を行い,その内容をまとめて国際誌に発表した.』自然界に見られる様々な幾何学模様を人間がかたちを認識する際の直感的な知覚である対称性という概念に着目し解析してきた.模様に対してコンピュータシミュレーションを用いて,形態と構造の複合体の模様の複雑な構造の規則性を調べて生息環境(生存戦略)との関係を見出した.指標として,人間の視覚が直観的に模様を把握する際に重要な"対称性"に着目した.このような対称性の観点からセルオートマタモデルを用いて模様を解析した研究例はほぼないが,鳥模様はじめ様々な現象に適用可能な基礎研究である.鳥足跡について,ドイツの複数の古生物博物館と大学とフィールドサイト,北九州市立博物館,琵琶湖周辺,をめぐり化石データの収集を行った.その地域をメインに研究している研究者と学芸員とも知識交流し,より詳細な地質と時代の情報を得る事ができた.次年度も上述の一部の博物館に主張予定である.この成果については次年度にまとめて,学会(地球惑星連合大会,日本古生物学会)で成果を発表し,内容をまとめて論文を国際誌で発表する予定である.鳥体模様のシミュレーション研究についても,生息環境と体模様との関係性を見出したので,この内容をまとめて近く論文を国際誌で発表する予定である.現生鳥類の翼の形態データを各目レベルを網羅するよう収集し,それらと足跡の形態データとの間に統計解析を行い関係を見出した.その関係性を白亜紀鳥足跡化石へ演繹し,翼の形態と大きさを推定した.昨年度に確立した鳥足跡化石からその形成者の体重推定と生息環境の推定手法と,鳥足跡化石の大きさと形態から,鳥体重,翼形態,生息環境を定量的に推定する事が可能となり,これらの推定値を現生鳥類のそれらと比較する事で,大まかにどの現生種に似ている可能性が高いか特定する事が出来た.さらに,鳥足跡形態と翼形態との関係についてさらに解析を加え,両者の関係はそれぞれが反映している歩行と飛翔という行動様式が生息環境を介して関係したものである事が明らかになった.この成果を,国内学会(日本古生物学会,日本鳥学会)で発表し,内容をまとめて英国古生物学会誌に発表した.鳥類の歩行進化の詳細な解明を目指すため,基礎研究として大型水鳥のコウノトリ足跡を収集し統計解析を行った.雄雌一羽ずつのコウノトリが陶土上を歩行するのを待ち足跡を収集した.ここで,コウノトリ足跡には他の大型水鳥とは異なり中足骨跡が残りにくい事がわかった.

個々の足跡を形態解析した結果,コウノトリは歩行時に足の外側(lateral side)に力をのせている事がわかり,これは他の鳥の傾向と整合的である.さらに,足跡の縦横比と歩行スピードとの関係から歩行スピードが速いと指が内転し,一方で,遅いと指が外転している事がわかった,これはコウノトリ目が第一指と足裏が強固な筋肉構造を持っている事と整合的である.この内容について,地球惑星連合大会で発表し,現在,国際誌へ投稿査読中である.鳥の模様について,人間の視覚が直観的に模様を把握する際に重要な要因である"対称性"に客観的な立場から着目し,模様と生息戦略と関係を明らかにした.この内容について,論文公表済みである.上述の研究で鳥足跡と身体データとの関係を見つけたので,それを白亜紀から新生代の鳥足跡化石に演繹し,鳥の体サイズの進化史を明らかにする.そのために,まず白亜紀から新生代の鳥足跡化石のデータのコンパイルを論文やフィールド調査により収集する.足跡面積以外に使用できる足跡を定量化可能な指標を確かめるため,種数をしぼって,詳細に足跡の形質での誤差が大きいもの、誤差が小さいものとを識別するために研究を行う.足について知見を深めるために筋肉の解剖も率先して行う.体模様と生存戦略の関係を上述の研究で確立した手法により明らかに出来る可能性があるので,その手法を鳥類のみでなく哺乳類・爬虫類・昆虫類などに適用することで,それらの生存戦略が明らかになる可能性がある.一方で,その理論を用いる際には体模様のどの部分を使用するかが結果を左右するため,使用する部位の基準を明確にする必要がある.まず手始めに体模様が濃くコントラストがはっきりしたものから研究を行う.28年度が最終年度であるため、記入しない。28年度が最終年度であるため、記入しない。
魚類免疫強化剤の迅速効果判定法の開発

感染試験(生菌攻撃試験)に代わる、免疫強化剤の迅速な効果判定法を開発するために、魚類免疫強化剤の作用機構を解析した。真菌由来のβ-1,3-グルカンと褐藻由来のアルギン酸ナトリウムを免疫強化剤のモデルとして、コイを実験魚として用いた。その結果、β-1,3-グルカンは補体系を活性化し、さらに頭腎食細胞上のCR3様補体レセプターの発現量を上昇させた。これによる食細胞の貧食活性の亢進が感染防御能の獲得に重要な役割を果たすと推察された。以上の知見を基に、補体の活性化度の指標となる補体C3aフラグメントについて、その精製とウエスタンブロッティングによる検出法、および補体レセプターのロゼット試験による検出法を開発した。これらの測定法は、免疫強化剤の効果を評価するin vitro試験として有効であると考えられた。一方、β-1,3-グルカンと異なり、アルギン酸ナトリウムは補体活性化能を示さず、食細胞の貧食活性および殺菌活性を全く上昇させなかったが、頭腎白血球の腹腔内への遊走を強く刺激した。このことは、アルギン酸ナトリウムが腹腔内の常在細胞を刺激して走化性因子を放出させたことを示唆している。すなわち、同じ多糖類の免疫強化剤でもその作用機構には大きな多様性が存在することが明らかとなった。しかしながら、魚類のサイトカインについてはほとんど同定が進んでおらず、その測定法も開発されていない。免疫強化剤の投与に特異的な発現遺伝子の解析が、この問題を解決する上で重要であると考えられる。我々は、コイやブリの腹腔内にスクレログルカンなどのβ-1,3-グルカンを投与すると、頭腎白血球の貪食活性が有意に上昇し、実験的細菌感染症に対する防御効果を示すことを報告してきた。また、コイ頭腎の顆粒球やマクロファージには哺乳類のCR3に相同な補体レセプターが存在することから、免疫強化剤の作用機構にこの補体レセプターが関与することが示唆された。そこで本研究では、このレセプターに対するモノクローナル抗体を作成し、スクレログルカンによるコイ頭腎白血球のC3レセプター発現量の変動を調べた。スクレログルカン投与されたコイの頭腎顆粒球画分で免疫したBALB/cマウスから得た脾臓細胞をPEG法によってP3U1と融合させた。HATで選択したハイブリドーマから、頭腎白血球のプラスチック面への接着やEsAC(抗体および補体で感作したヒツジ赤血球)とのロゼット形成に対する阻害作用などを指標としてスクリーニングを行なった後、限界希釈法でクローニングして、3クローンのモノクローナル抗体を得た。スクレログルカン投与および非投与のコイ頭腎から上記白血球画分を分離し、各モノクローナル抗体およびFITC標識2次抗体で処理した後、フローサイトメトリーによってコイ補体レセプターの発現量を調べたところ、いずれの抗原もスクレログルカン投与によって顆粒球および単球/マクロファージ上での発現量が増大することが判明した。このことから、補体レセプター発現量をin vitroで測定することが、免疫強化剤の効果を推定するために有効であると考えられる。前年度までに、魚類の免疫強化剤のモデルとして用いたβ-1,3-グルカンは、補体第2経路を強く活性化すること、頭腎白血球上の補体C3レセプター発現量を増加させることを解明し、これによる貧食活性の上昇が感染防御の亢進に重要な役割を果たすことを明らかにした。本年度は、褐藻由来のアルギン酸ナトリウムにも感染防御効果が認められたので、この作用機構の解明を試みた。注目すべきことに、アルギン酸ナトリウムは補体を活性化せず、またこれを腹腔内投与しても食細胞の貧食活性および殺菌活性を全く上昇させず、代わりに、多数の白血球が頭腎から腹腔内に遊走してきた。

これは、アルギン酸ナトリウムが腹腔内の常在細胞を刺激して走化性因子を放出させたことを示唆している。すなわち、同じ多糖類の免疫強化剤でもその作用機構には大きな多様性が存在することが明らかとなった。したがって、免疫強化剤の効果を迅速に判定するためのin vitro試験にも、補体活性化能、C3レセプター発現量、走化性因子の産生量など多様なものが求められる。補体活性化能については、補体C3の活性化フラグメントであるC3aをウエスタンブロッティングで検出する方法を開発した。また、C3レセプター発現量については、従来のロゼット法よりも定量性に優れたフローサイトメトリーによる方法を確立した。ただし、これらの方法は現在のところコイにのみ適用可能である。走化性因子などのサイトカインについては、これまで魚類ではほとんど同定が進んでおらず、再現性のあるアッセイ法の開発が困難であった。そこで本研究では、遺伝子の発現パターンによる免疫強化剤の作用機構の推定法にも着手した。この方法の確立は今後の問題であるが、現在のところ、免疫強化剤の投与によって発現が上昇する56種の生体防御関連遺伝子が同定されており、このアプローチの妥当性が証明された。
マイクロビームX線応力評価に基づく微小疲労き裂進展機構のマイクロ破壊力学的研究

1.強力X線発生装置を使用し,X線の検出器として位置敏感型検出器を併用することからマイクロビームX線応力測定システムを構築し,100ミクロンオーダの領域の応力測定が可能であることを確認した.さらに,サブミクロンオーダの薄膜に対しても,低角入射X線回折法を用いてIn-Planeのひずみ測定を可能にした.2.放射光Spring-8において,鉄鋼、セラミックス、複合材料における鋭い切欠き近傍の微小領域の応力測定を行い,高精度の応力測定が可能であることを実証し,微小な領域の応力測定法の開発への基礎を築いた.3.超微細粒鋼の微小疲労き裂の発生個所に関して、電子線後方散乱(EBSP)および原子間力顕微鏡(AFM)の観察より、微小き裂発生の結晶学的条件を明らかにした.また、微小き裂の進展初期では,き裂の偏向や分岐によりき裂進展速度の低下が引起こされていることが明らかとなった.4.超微細粒鋼はき裂の分岐と屈曲によりき裂進展抵抗が大きくなる.この場合き裂閉口を測定し有効応力拡大係数で整理すると,通常粒鋼の場合のき裂進展速度とほぼ一致したことから,き裂分岐・屈曲によるき裂閉口が進展抵抗の増大の主な要因である.5.微小疲労き裂の進展および停留に対する結晶粒界などの微視構造の影響を阻止すべり帯でモデル化したが,このマイクロマカニックスモデルにき裂閉口の影響を組み入れ,発展させたることから,超微細粒のき裂進展のシュミュレーションを行い,疲労限度における微視き裂の停留の要因として,微視的障害およびき裂閉口の相対的な重要性が明らかにした.6.予き裂に混合モード負荷したときのき裂進展挙動を検討することから、混合モード下においては、疲労き裂の閉口を考慮したときの最大接線応力幅クライテリオンに沿って進展していることが明らかになった.1.強力X線発生装置を使用し,X線の検出器として位置敏感型検出器を併用することからマイクロビームX線応力測定システムを構築し,100ミクロンオーダの領域の応力測定が可能であることを確認した.さらに,サブミクロンオーダの薄膜に対しても,低角入射X線回折法を用いてIn-Planeのひずみ測定を可能にした.2.放射光Spring-8において,鉄鋼、セラミックス、複合材料における鋭い切欠き近傍の微小領域の応力測定を行い,高精度の応力測定が可能であることを実証し,微小な領域の応力測定法の開発への基礎を築いた.3.超微細粒鋼の微小疲労き裂の発生個所に関して、電子線後方散乱(EBSP)および原子間力顕微鏡(AFM)の観察より、微小き裂発生の結晶学的条件を明らかにした.また、微小き裂の進展初期では,き裂の偏向や分岐によりき裂進展速度の低下が引起こされていることが明らかとなった.4.超微細粒鋼はき裂の分岐と屈曲によりき裂進展抵抗が大きくなる.この場合き裂閉口を測定し有効応力拡大係数で整理すると,通常粒鋼の場合のき裂進展速度とほぼ一致したことから,き裂分岐・屈曲によるき裂閉口が進展抵抗の増大の主な要因である.5.微小疲労き裂の進展および停留に対する結晶粒界などの微視構造の影響を阻止すべり帯でモデル化したが,このマイクロマカニックスモデルにき裂閉口の影響を組み入れ,発展させたることから,超微細粒のき裂進展のシュミュレーションを行い,疲労限度における微視き裂の停留の要因として,微視的障害およびき裂閉口の相対的な重要性が明らかにした.6.予き裂に混合モード負荷したときのき裂進展挙動を検討することから、混合モード下においては、疲労き裂の閉口を考慮したときの最大接線応力幅クライテリオンに沿って進展していることが明らかになった.1.強力X線発生装置を使用し,X線の検出器として位置敏感型検出器を併用することからマイクロビームX線応力測定システムを構築し,100ミクロンオーダの領域の応力測定が高精度に測定可能であることを確認した.さらに,サブミクロンオーダの薄膜に対しても,低角入射X線回折法を用いてIn-Planeのひずみ測定を可能にした.2.放射光Spring-8において,鋭い切欠き近傍の微小領域の応力測定を行い,高精度の応力測定が可能であることを実証し,微小な領域の応力測定法の開発への基礎を築いた.3.種々の結晶粒径の鉄鋼材料における疲労き裂発生の微視的過程を,電子線後方散乱(EBSP)による結晶方位の同定,および原子間力顕微鏡による表面のナノオーダでの凹凸の変化を検出した.これより,1ミクロン程度の超微細粒の場合は,10数ミクロンの通常の結晶粒の場合とは異なり,複雑なすべり変形を伴った結晶粒界がき裂発生起点となることが明らかとなった.4.超微細粒における疲労において,き裂は結晶粒界の当たったときにき裂分岐を起こし,き裂閉口の増大をもたらすことを明らかにし,このことがこのことが微細粒であるにもかかわらずき裂進展抵抗が高いことの原因であることを示した.5.微小疲労き裂の進展および停留に対する材料の結晶粒界などの微視構造の影響を阻止すべり帯でモデル化したが,このモデルにき裂閉口の影響を組み入れることに成功した.この発展させたモデルを基に,き裂進展のシュミュレーションを行い,疲労限度における微視き裂の停留の要因として,微視的障害およびき裂閉口の相対的な重要性が明らかとなった.

6.疲労き裂のすべり変形を,離散転位モデルを使用することによりき裂進展シミュレーションを行い,進展下限界近傍のき裂の停留現象をより物理的根拠に基づいて導出することに成功した.また,このモデルをさらに,強化粒子含む複合材料に適用するための端緒を得ることが出来た.1.結晶粒径が非常に小さくなった超微細粒鋼における疲労微小き裂の発生過程の原子間力顕微鏡,走査型電子顕微鏡,後方電子線回折法,X線法の3方法をハイブリッドした手法による微小疲労き裂の発生過程の微視的観察を基に,超微細粒でのき裂発生にいたるすべり変形の挙動は,通常粒鋼とは異なり,複雑な3種の交差すべりの複合して作用しその結果として粒界き裂発生にいたることが明らかとなった。2.疲労初期における微小き裂の進展に対して,超微細粒鋼ではき裂の偏向あるいは分岐によりき裂進展速度の低下が引き起こされていることが明らかとなった。微視き裂の分岐は2種類のパターンで生じ,主き裂が停留した後分岐するものと,分岐したき裂が同時に進展していくものである。微視分岐は結晶粒内と粒界の半々であり,その結晶学的条件を検討した。3.超微細粒鋼はき裂の分岐と屈曲によりき裂進展抵抗が大きくなる。この場合き裂閉口を測定し有効応力拡大係数で整理すると,通常粒鋼の場合のき裂進展速度とほぼ一致したことから,き裂分岐・屈曲によるき裂閉口が支点抵抗の増大の主な要因である。4.微小疲労き裂の進展および停留に対する結晶粒界などの微視構造の影響を阻止すべり帯でモデル化したが,このマイクロマカニックスモデルにき裂閉口の影響を組み入れ,発展させたることから,超微細粒のき裂進展のシュミュレーションを行い,疲労限度における微視き裂の停留の要因として,微視的障害およびき裂閉口の相対的な重要性が明らかにした。5.放射光における超強力X線を使用して,微小領域の応力測定を行い,入射角-定法による侵入深さ-定法による応力分布の高精度測定法を開発した。6.破断繰返し数がギガサイクルとなる超長寿命領域での疲労過程では,試験片内部で介在物墓発生した数十ミクロン程度の寸法の微小疲労き裂の進展によって大部分の寿命が費やされる。この進展法則をS-N曲線から求める破壊力学的手法を提案し,X線で測定される残留応力などの表面加工の効果,負荷応力形式の影響を予測する手法を提案した。1.セラミックスの繰返し荷重下でのき裂進展に大きな役割を有するき裂先端近傍の応力分布を、放射光を利用して鋭い切欠き応力集中部の応力マッピングの計測に成功した。2.長繊維強化複合材料(SiC繊維強化チタニウム合金)の疲労き裂に対して、き裂近傍のき裂架橋応力の測定を放射光X線を利用してすることに成功した。この架橋応力測定を基に疲労き裂進展を予測することが可能であった。3.予き裂に混合モード負荷したときのき裂進展挙動を検討することから、混合モード下においては、疲労き裂の閉口を考慮したときの最大接線応力幅クライテリオンに沿って進展していることが明らかになった。4.微小疲労き裂近傍の微視組織の観察手段として、原子間力顕微鏡(AFM)および電子線後方散乱(EBSP)を導入した。AFM観察により、疲労に伴う表面の凹凸の変化挙動の変曲点としてき裂の発生が観察された。また、EBSPによってき裂近傍の結晶方位を明らかにして、結晶学的な点から疲労き裂の発生条件の検討を行い、き裂発生に対する結晶学的条件を明らかにした。上記の研究において、EBSPが従来のように結晶単位での方位だけではなく、数ミクロンオーダーでの領域の方位差(ミスオリエンテーション)を検出する手段としても、非常に有力であることが判明した。5.形状
医療や医療サービスにまつわる倫理的,社会的,法的見解から国際比較を行う。

今年度は最終年度である。IAS-UNUとの共同採用であるため、11月末に終了となった。前年度からの蓄積により、発展途上国を主体とした各国の伝統的医療の専門家や大学等の研究者のネットワークの構築を得て,基本医療へのアクセス、伝統医療やバイオテクノロジー等最先端技術の関する情報の体系的収集を7月まで行った。約1ヶ月をかけて、これらを整理し,現況の把握を行い、共通問題点やさらなる調査課題のあらいだしを行った。日本国内の医療関係者や研究者と面談し、収集した情報についての意見を整理し、データーベースの構築基盤を作った。9月にこれら活動を踏まえて、バンコックでのUNESCO主催のアジア太平洋洲生命倫理会議に参加し,データーベースについての意見の収集を行った。また、データベースについての利用と要素のモダリティーについての事例研究としてバンコック会議と合わせて発展途上国での現状視察確認と情報の確認を、少数民族の伝統医療知見を課題としてタイ北部について行った。このような、事例による適正検討に基づき、データーベースの利用の可能性を見極め、研究全体の最終報告書を作成した。また、研究論文ではない著作を開始し、研究者以外からの情報収集ができるような一般雑文の配布を検討し、端緒としてウェッブサイトを立ち上げることを最後に検討した。独自のウェッブサイトを立ち上げ、関連研究者の情報収集を支援するシステムを構築し、またこのシステムによりさらなる研究資産の拡大を図った。以下がサイト情報3点である。http://www.who.int/features/qa/20/en/伝統的知識、知識財産権による伝統的知識の保護、そして、特に医療分野において固有の伝統的コミュニティーでのアクセスと利益配分を容易にするためにこれらのシステムを改善する可能性について国連大学高等研究所のバイオ研究グループとともに分析した。これらは、UNU Work in Progressに掲載した。さらに、ヒトのクローニングの倫理的側面について文献研究を行い、2004年10月の国連総会での討論に向け、「国連はクローニングを禁ずるべきか?多様化する世界でガバナンスのオプション」というペーパーを作成した。また、世界各地の伝統的医療、それらの有効性と安全性に関する科学的根拠、公的医療システムにおける伝統的医療に対する認識の向上及びそれらの統合についても追求した。ヒトのクローニングの科学的開発と環境や医療へのアクセスの論点を含む地球規模の生命倫理における優先領域に関する論文をパキスタン、韓国、スリランカ、インド(アッサム)から入手するとともに、様々な地域における協力者に対して「伝統的医療の公的医療システムへの統合に関する研究」に関する質問書を送付し、ラオス、ナイジェリア、インド(アッサム、アンドゥラ・プラデシュ)、コロンビア、ネパール、スリランカ、ペルー、ケニアから積極的な回答を入手した。さらに、ルーマニアを訪れ、公的医療システムへの伝統医療の統合等について、セネガル、コートジボアール、ナイジェリアを訪れ、伝統的医療の施術者、研究者について聞き取り調査を行った。http://www.who.int/features/qa/20/en/
ＲＯＣＫ２による血管内皮機能調節機構の解明

低分子GタンパクRhoとそのエフェクターであるROCKはアクチン系細胞骨格の再構築を介した細胞の収縮や遺伝子発現の調節などを行う。ROCKにはROCK1とROCK2の2つのアイソフォームが存在する。本研究ではROCK2による血管内皮機能調節機構について検討した。培養血管内皮細胞において、ROCKの特異的阻害剤は血管内皮の炎症を抑制したが、ROCK2のノックダウンによっても同様の結果が得られた。さらにROCK2ノックアウトマウス由来のマクロファージではLPS刺激によるMCP-1の発現が抑制された。以上の結果から、ROCK2は血管内皮やマクロファージの機能調節に重要な役割を有することが示された。平成24年度は血管内皮機能調節におけるROCKの新たな機能を明らかにすることを目的として小胞体ストレスに着目し、ROCKの機能解析を行った。小胞体ストレスは糖尿病をはじめとする様々な病態の形成に重要な役割を果たしている。血管内皮においては小胞体ストレスは炎症機転を惹起し動脈硬化形成に働くことが知られている。しかしながら、これまでにRho/ROCKが小胞体ストレスにおいてどのような役割を果たしているのかは明らかではなかった。培養血管内皮細胞に小胞体ストレスを惹起したところ低分子G蛋白Rhoの活性化が誘導されることをPull-downアッセイによって確認した。同様にROCK活性も上昇した。さらにROCK阻害剤であるFasudilは小胞体ストレスによって惹起される接着分子VCAM-1をはじめとする動脈硬化関連遺伝子の発現を抑制することを見出した。さらに詳細なメカニズムの検討を行ったところFasudilが小胞体ストレスによって誘導されるUPR(unfolded protein response)を調節することが明らかになった。すなわち、Fasudilは小胞体ストレスによって誘導されるactivating transcription factor (ATF)4やその下流に存在するCEB/P homologus protein (CHOP)の発現を抑制した。このことにより、血管内皮の炎症機転を制御していることが明らかとなった。以上より、小胞体ストレスによってRho/ROCKが活性化され、血管内皮機能障害の形成に重要な役割を有することが示された。今年度はROCK2による血管内皮機能調節機構を前年に引き続き解析するとともに、動脈硬化の発症機転に果たす意義を検討した。小胞体ストレスは血管内皮機能を惹起し、動脈硬化形成を促進することが報告されている。ROCKがこの過程にどのような役割を有するのかを検討した。HUVECをツニカマイシンで刺激して小胞体ストレスを惹起したところROCK活性が亢進し、これに伴い接着分子であるVCAM-1の発現が亢進した。ROCK阻害剤であるファスジルを用いたところ、このVCAM-1の発現が抑制された。メカニズムの検討を行ったところ、ファスジルがATF4依存性のシグナルを抑制することが示された。以上のことから、ROCKが小胞体ストレスによる血管内皮機能障害の形成に重要な役割を果たすことが明らかとなった。よりアイソフォーム特異的な検討を行うために、ROCK2ノックアウトマウスを用いた解析を行った。動脈硬化形成にマクロファージの活性化が重要な役割を有する。そこで、ROCK2ノックアウトマウスおよび野生型マウスから腹腔マクロファージを抽出し、これらの細胞を用いた検討を行った。ROCK2ホモ欠損マウスは成獣になることが出来ないため、ROCK2ヘテロ欠損マウスを用いた。その結果、ROCK2ヘテロ欠損マウス由来の細胞では、野生型マウス由来の細胞に比べてLPSで刺激した際にMCP-1の発現が低下していた。これらの結果から、ROCK2が血管内皮やマクロファージでの炎症を正に制御し、動脈硬化の進展に寄与しているものと考えられた。平成23年度はROCKの血管内皮機能調節機構について検討をおこなった。糖尿病モデルであるdb/dbマウスでは血管内皮機能障害が惹起されていることが明らかになっているが、この機序としてROCK活性亢進の関与が示されている。そこで、ROCK阻害剤ファスジルがdb/dbマウスの大動脈における動脈硬化マーカーに及ぼす影響を検討した。その結果、db/dbマウスの大動脈ではケモカインであるMCP-1の発現が亢進していたが、ファスジル経口投与によりこのMCP-1発現が抑制されることが明らかとなった。さらに詳細なメカニズムを検討するため、培養血管内皮細胞(HUVEC)を用いた検討を行った。トロンビンは糖尿病をはじめとして、動脈硬化の形成に重要な働きを有することが知られている。そこで、トロンビンによる血管内皮障害にROCKが果たす役割を検討した。HUVECをトロンビンで刺激したところMCP-1の発現が誘導されることを確認した。トロンビン刺激によってHUVECのRho/ROCK活性が亢進していたことから、ROCKがトロンビンによるMCP-1発現に関与しているものと考えられた。