hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
尿管蠕動運動発生機構解明と腎盂型(自励素子等価配列型)ペースメーカーモデルの構築

本研究により,我々が既に共焦点顕微鏡を用いて確立しているラット尿管蠕動運動の組織内平滑筋細胞Ca^<2+>動態観察は,通常顕微鏡と高速CCDカメラの組み合わせにより,空間分解能は低下するももの,ペースメーカー細胞を容易に広範囲に探索することができ,より高い時間分解能で行うことが可能となった。高速反応性蛍光指示薬による膜電位測定に関しては,同装置とDi-4-ANEPSSを用いて可能であることが確認されたが,Ca^<2+>指示薬fluo-3と同時測定する場合,それぞれの色素の蛍光強度変化が著しく異なる(約100倍)ため,CCDカメラの感度調節が困難であることが判明した,この間題点については各色素専用の光路とCCDカメラを用意することで解決可能であると考えている。ペースメーカーモデルの構築に関しては,中林が腎孟尿管で観察されるCa^<2+>のふるまいをより簡単確実にシミュレートできる非線形素子の探索を行い,硫酸銅溶液申に鉄電極を電位固定した際に流れる電流を観察する手法に可能性を見いだした。この方法では,各電極の固定電位を一定閾値より小さくすることで自励条件に,大きくすることで外部からの刺激により興奮する条件に設定できる。そこで,同一溶液中に複数個の電極を並べることにより,一定部位の自励が伝播する現象を観察することができた。さらに,固定電位と電極の配置方法を調整することにより腎孟ペースメーカー領域のCa^<2+>濃度のふるまいをシミュレートすることに成功し,その成果を論文として発表した。また,この現象をコンピュータープログラムに置き換えることにより,より正確なシミュレーションを行うための固定電位と配置方法の推測が可能となった,現在このプログラムにより検討した実験条件での解析を遂行中である。本研究は,我々が既に共焦点顕微鏡を用いて確立しているラット尿管蠕動運動の組織内平滑筋細胞Ca^<2+>動態観察を,CCDカメラを用いて高速化し膜電位と同時測定することを目的として開始された。本年度はまず山下が,本学に配備されているAquacosmos(浜松ホトニクス)と新規購入した倒立蛍光顕微鏡(オリンパス)を組み合わせて,Ca^<2+>動態の観察を行った。通常顕微鏡を用いると空間分解能は低下するが,広範囲を観察することができるのでペースメーカー細胞の探索にはより適していることが判明した。さらに,CCDカメラにより共焦点顕微鏡より遙かに高速な観察が可能になった。膜電位の測定に関しては,上記の観察装置を用いて最適な高速反応性蛍光指示薬の検索を行い,4-Di-ANEPSSを用いて15フレーム/秒の観察を試みている。次年度にかけてCa^<2+>動態との同時観察に発展させる予定である。ペースメーカーモデルの構築に関しては,中林が腎孟尿管で観察されるCa^<2+>のふるまいをより簡単確実にシミュレートできる非線形素子の探索を行い,鉄の電気分解中に認められる現象を複数個組み合わせることに可能性を見いだした。現在この現象の詳細な解析を進めており,自励条件の決定に成功している。さらに複数の素子を興奮性および抑制性に結合する条件を決める作業を進めている。同時にこの現象をコンピュータープログラムに置き換える作業も進行中である。今後はプログラムを改良しCa^<2+>動態と膜電位観察をより精密にシミュレーションすることを目指す。

高速反応性蛍光指示薬による膜電位測定に関しては,同装置とDi-4-ANEPSSを用いて可能であることが確認されたが,Ca^<2+>指示薬fluo-3と同時測定する場合,それぞれの色素の蛍光強度変化が著しく異なる(約100倍)ため,CCDカメラの感度調節が困難であることが判明した。この問題点については各色素専用の光路とCCDカメラを用意することで解決可能であると考えている。ペースメーカーモデルの構築に関しては,中林が腎孟尿管で観察されるCa^<2+>のふるまいをより簡単確実にシミュレートできる非線形素子の探索を行い,硫酸銅溶液中に鉄電極を電位固定した際に流れる電流を観察する手法に可能性を見いだした。この方法では,各電極の固定電位を一定閾値より小さくすることで自励条件に,大きくすることで外部からの刺激により興奮する条件に設定できる。そこで,同一溶液中に複数個の電極を並べることにより,一定部位の自励が伝播する現象を観察することができた。さらに,固定電位と電極の配置方法を調整することにより腎孟ペースメーカー領域のCa^<2+>濃度のふるまいをシミュレートすることに成功し,その成果を論文として発表した。また,この現象をコンピュータープログラムに置き換えることにより,より正確なシミュレーションを行うための固定電位と配置方法の推測が可能となった。現在このプログラムにより検討した実験条件での解析を遂行中である。
電子制御による有機汚泥の浄化技術の開発

有機汚泥の浄化技術を開発するために室内実験と現地実験を行い,電子制御による有機汚泥の浄化特性を明らかにした.(1)電子制御は有機汚泥の酸化還元状態を調整でき,有機物形態を変化させる.(2)有機汚泥から電子回収は有機汚泥の還元性を緩和させ,有機汚泥による水質悪化を改善できる.強い還元性を持つ有機汚泥に電子回収の適用により生物が生息可能となる.(3)有機汚泥への石炭灰造粒物の混合は電子回収に伴う有機汚泥の酸性化を緩和,有機汚泥の栄養循環を抑制できる.(4)実用化に向けた有機汚泥の浄化技術として,太陽光を併用した電子制御システムを開発した.本システムの効果が高いことを室内実験により明らかにした.電子制御による有機汚泥の浄化特性を室内実験により明らかにすること,流れや微生物等の自然条件を持つ沿岸域に分散した有機汚泥を浄化するための浄化技術を提案することを目的として研究を行った.本年度,電子制御(有機汚泥から電子回収と有機汚泥への電子供給)による有機汚泥の浄化特性を室内実験により明らかにした.電子制御の電荷量と有機汚泥性状の変化量との関係を検討し,具体的には,以下に示す電子制御による有機汚泥の浄化特性を明らかにした.(1)電子回収による有機汚泥の性状変化:1有機汚泥から電子を回収することにより,高い酸化還元電位の土壌に変えることや生物生息を阻害する硫化水素を除去できること等が確認され,電子回収は有機汚泥の還元環境を改善できる.2電子回収により泥層から水層へのイオン拡散を制限でき,泥層の還元環境を改善するとともに有機汚泥による水質悪化を低減させる効果がある.3有機汚泥の還元環境の改善は有機汚泥の燃焼特性を変化,間隙水中の鉄イオンを増加させることから,電子回収は結合された金属イオンと有機物を分裂(有機汚泥の有機物形態を変化)させる可能性が高い.(2)電子供給による有機汚泥の性状変化:有機汚泥へ電子を供給することにより有機汚泥のpHの上昇と間隙水内のCODの増加を誘発できることから,有機汚泥への電子供給は有機汚泥の酸性化を改善,有機物を低分子化を促進する技術として利用できる.(3)電子制御(繰り返しの電子回収・供給)による有機汚泥の性状変化:有機汚泥で電子回収→電子供給→電子回収の順に電子制御を行うことにより,有機汚泥の酸性化を低減,間隙水内のCODを増加させることができる.繰り返しの電子制御は微生物の活性化と有機物の分解を誘発できる可能性が高い.本研究では,沿岸域に分散した有機汚泥の浄化技術を開発することを目的として室内実験と現地実験を行った.有機汚泥から電子回収と有機汚泥への電子供給に伴う有機汚泥の性状(酸化還元状態,有機物形態等)を検討し,電子制御(電子回収と電子供給との併用)による有機汚泥の浄化特性を明らかにした.具体的には(1)有機汚泥に電子制御を行うことで最適な有機汚泥の酸化還元状態を調整できるとともに,有機汚泥内での分解しやすい・微生物が使用しやすい有機物の生成を促進させることを見出した.(2)有機汚泥から電子回収を行うことによりアノード電極で還元物質が酸化されるため,有機汚泥の還元性が緩和されるのみならず,有機汚泥からの物質拡散による水質悪化も改善されることが明らかになった.強い還元性を持つ有機汚泥に電子回収の適用により生物が生息できることを現地実験結果でわかった.(3)有機汚泥への石炭灰造粒物の混合は電子回収に伴う有機汚泥の酸性化を緩和,有機物分解の過程で生成される栄養塩類を固定する効果があり,電子制御における有機汚泥の栄養循環を抑制できることを見出した.さらに,石炭灰造粒物は成分の溶解により電極への電子伝達速度を向上させることがわかった.(4)実用化に向けた有機汚泥の浄化技術として太陽光を併用した電子制御システムを提案した.有機汚泥の浄化に対する本システムの効果が高いことが室内実験により明らかにされた.有機汚泥の浄化技術を開発するために室内実験と現地実験を行い,電子制御による有機汚泥の浄化特性を明らかにした.(1)電子制御は有機汚泥の酸化還元状態を調整でき,有機物形態を変化させる.(2)有機汚泥から電子回収は有機汚泥の還元性を緩和させ,有機汚泥による水質悪化を改善できる.強い還元性を持つ有機汚泥に電子回収の適用により生物が生息可能となる.(3)有機汚泥への石炭灰造粒物の混合は電子回収に伴う有機汚泥の酸性化を緩和,有機汚泥の栄養循環を抑制できる.(4)実用化に向けた有機汚泥の浄化技術として,太陽光を併用した電子制御システムを開発した.本システムの効果が高いことを室内実験により明らかにした.当初計画した室内実験により電子制御による有機汚泥の浄化特性を解明する目標がおおむね達成した.工学当初計画に基づき研究を進める.次年度に計画した火力発電の廃棄物を固めて造粒した石炭灰造粒物を併用したときの電子制御による有機汚泥の浄化特性を明らかにする.さらに,自然河岸に適した電子制御システムを開発し,本システムによる有機汚泥の浄化能力を評価するための実験を行う.
登校拒否と抑うつの関連についての研究

これまで3年間の間、不登校を示す事例のうちから登校拒否あるいはうつ病と診断される事例を取り出し、年齢、診断、CDI得点等の資料をもとに、登校拒否と診断される事例とうつ病と診断される事例の特徴を比較検討することを試みてきた。対象は1989年から1997年の間に直接治療的にかかわった不登校事例である。そのうち、登校拒否は44名(男子29名、女子15名)、うつ病は12名(男子5名、女子7名)、合計56名(男子34名、女子22名)であった。これらの事例について、CDI得点の分析を試みた。CDIの平均得点は、登校拒否群では20.9±7.07、うち病群では27.3±6.92、健常群では19.9±7.50であった。登校拒否群と健常群の間にはCDI得点に有意差は認められなかったが、うち病群は登校拒否群および健常群に比して有意にCDI得点が高かった。CDIは「対人的不適応感」尺度、「抑うつ中核」尺度、「自己嫌悪」尺度の3つの下位尺度から構成されている。CDI総得点と同様に各下位尺度においても登校拒否群と健常群の感に有意差は認められなかったが、これら2群とうつ病群の間には、「抑うつ中核」尺度と「対人的不適応感」尺度で、有意差が認められた。そして、この結果は臨床的診断の妥当性を支持するものと考えられた。また、登校拒否群で身体症状を有するものは34名、有しないものが8名であったのに対し、うつ病群では身体症状を有するものが4名、有しないものが8名で登校拒否に身体症状を有するものが有意に多いという興味深い結果が得られら。さらに、昨年度名古屋大学教育学部附属中学と高校において実施したCDI,登校回避感情、性格傾向に関する質問紙調査のデータを分析し、今後これらのデータを登校拒否群、うつ病群、健常児群について比較検討するための基礎資料を得た。そして、これらの結果を研究成果報告書として提出した。登校拒否と抑うつとの関連性を検討するために精神科クリニックを受診した不登校症例を対象に児童の抑うつを測定する尺度であるCDI(Children's Depression Inventory)をクライエントの同意を得て実施し、臨床症状、性格傾向、両親像などとの関連を検討するための資料の収集を行っている。現在の所30名あまりの資料が収集されており、資料の打ち込みが行われている。まだ、統計的な検討を行うには資料の数が少ないが、予備的な検討を行ってみる予定である。今回の研究では、児童の抑うつを測定する尺度として、CDIを使用しているが、これはアメリカの尺度を翻訳したものであり、必ずしも日本における抑うつを測定する尺度として適切であるとは言えない。そこで日本の抑うつ測定尺度としてより適切なものを作成することが有益ではないかと考えられる。そのためには、まず成人の抑うつ尺度を作成することが必要と考え、現在尺度項目の作成に取り組んでいる。今後、作成された尺度を正常群、抑うつ群を対象に実施し、データの収集を行う予定である。さらに、一般の児童生徒を対象に、抑うつと登校回避感情、両親像、性格傾向などの関連性を明らかにするために、質問紙調査を実施する予定で、質問紙の作成を行っている。以上、3項目について研究を進めているが、現在の所データが集まって来ているのは、最初に上げた臨床例に関するものである。

本年度は、これまでに収集された不登校を示す症例について年齢、診断、CDI得点等の資料をもとに、登校拒否と診断される事例とうつ病と診断される事例を比較検討した。対象とされた不登校事例は、男子31例、女子18例、合計49例である。そのうち、登校拒否は34例、うつ病圏の事例は10例、その他の神経症症状が顕著であった事例5例である。初診時の年齢は7歳から17歳に分布していた。これらの事例について、CDI得点の分析を試みた。CDIの平均得点は、対象児全体で21.8±7.23であった。各診断別に見てみると、登校拒否では20.5±6.77、うつ病圏の事例では27.0±7.53、その他の事例では19.6±5.81であった。登校拒否に比してうつ病圏の事例において有意にCDI得点が高かった。CDIは「対人的不適応感」尺度、「抗うつ中核」尺度、「自己嫌悪」尺度の3つの下位尺度から構成されているが、登校拒否とうつ病圏の事例の間に有意差の見られたのは、「抗うつ中核」尺度であり、登校拒否5.5±2.56に対して、うつ病圏の事例では、9.3±3.09であった。他の2下位尺度では2群間に有意な差は見られなかった。つまり、登校拒否とうつ病圏の事例の間に見られたCDIの有意な差は、抗うつの中核的症状からなる「抗うつ中核」尺度によるものであり、この結果は臨床的診断の妥当性を指示するものと考えられた。さらに本年度は、名古屋大学教育学部附属中学と高校においてCDI,登校回避感情、性格傾向に関する質問紙調査を実施し、現在これらのデータを整理し、分析中である。次年度は、さらにデータを収集するとともに、これまでの資料をまとめて、総合的な研究成果を提出する予定である。本年度も昨年度に引き続き、不登校を示す事例のうちから登校拒否あるいはうつ病と診断される事例を取り出し、年齢、診断、CDI得点等の資料をもとに、登校拒否と診断される事例とうつ病と診断される事例の特徴を比較検討することを試みた。対象は1989年から1997年の間に直接治療的にかかわった不登校事例である。そのうち、登校拒否は44名(男子29名、女子15名)、うつ病は12名(男子5名、女子7名)、合計56名(男子34名、女子22名)であった。GDIの平均得点は、登校拒否群では20.9±7.07、うつ病群では27.3±6.92、健常群では19.9±7.50であった。登校拒否群と健常群の間にはCDI得点に有意差は認められなかったが、うつ病群は登校拒否群および健常群に比して有意にCDI得点が高かった。CDIは「対人的不適応感」尺度、「抑うつ中核」尺度、「自己嫌悪」尺度の3つの下位尺度から構成されている。CDI総得点と同様に各下位尺度においても登校拒否群と健常群の間に有意差は認められなかったが、これら2群とうつ病群の間には、「抑うつ中核」尺度と「対人的不適応感」尺度で、有意差が認められた。そして、この結果は臨床的診断の妥当性を支持するものと考えられた。また、登校拒否群で身体症状を有するものは34名、有しないものが8名であったのに対し、うつ病群では身体症状を有するものが4名、有しないものが8名で登校拒否に身体症状を有するものが有意に多いという興味深い結果が得られら。さらに、昨年度名古屋大学教育学部附属中学と高校において実施したCDI、登校回避感情、性格傾向に関する質問
大環状ポリアミン希土類錯体による生体関連分子の認識および変換

本研究では、大環状配位子の特性を生かして、希土類イオンの配位環境を制御し、生体分子に対して重要な機能(認識・化学変換能、薬理活性)を付与することを目的とした。テルビウムイオンは、ヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと相互作用して蛍光強度の増大を示す。その蛍光強度はグアニン塩基を多く含む核酸に対して最も大きくなることが知られているが、その選択性は高くない。本研究では、新規のN_3O型12員環配位子およびこれのテルビウム錯体を合成し、そのX線結晶構造、pH滴定方による水溶液中での錯安定性などを明らかにした。また、核酸との相互作用を分光学的に調べた。その結果、アミドペンダントをもち、全体として3価の正電荷をもつN_3O型錯体の278nmで励起したときの蛍光強度は、poly(G)と共存するときのみ著しく増大することを見い出した。そこで、poly(A)、poly(U)、poly(C)、poly(G)の存在下、蛍光の極大波長(545nm)における励起スペクトルを測定した結果、いずれの場合も、核酸塩基が吸収した光エネルギーが、Tb^<III>イオンへ移動し、その結果蛍光を発することが強く示唆された。その程度は、蛍光量子収率の相対比を反映するものであった。現在、グアニン塩基を多く含むオリゴヌクレオチド(例えば、テロメアDNAに見られる(TTAGGG)_4や(TTGGGG)_4など)と本錯体との相互作用について、種々の分光学的手法(IR、CD、NMR、UV-vis、蛍光)により調べ、これらの溶液中での結合様式や結合の強さを検討中である。
0歳から5歳までの対人行動の発達プロセスの検討-保育園での観察-

保育園での自由遊びの観察から、1歳半ころに見られる視線を向けるものや接近行動などの個人差は、3歳でも継続してみられ、その頃形成され始める集団での仲間関係が保育園での5歳児クラスの仲間関係と一貫性があることが見出された。本研究は、平成18年度から平成20年度にかけて保育園の0歳児クラスの子どもたちの行動特徴を観察し、保育園で育つ子どもの行動特徴の変化を検討してきたものを基礎として、同一の子どもの4歳と5歳時点での対人行動を観察し、発達初期の行動特徴との関連を検討することを目的としている。視線行動、接触行動などの行動特徴が、4歳、5歳での保育園での遊び方や仲間とのかかわり方とどのように関係するのかを検討すると同時に、どのような行動特徴が安定しやすいのか、あるいは変化しやすいのか、また、変化する場合はその要因は何かを見出し、行動発達の複雑なプロセスに関する仮説を提起したい。本年度は、補助金交付決定が年度後半であったため、主に観察データの収集を中心に行った。週1回、観察対象児が所属する保育園に通い、4歳児クラスに所属している園児10名の行動を、自由遊びの時間に観察し仲間とのかかわり方などをビデオカメラで撮影した。行動分析は、遊びの種類、仲間への働きかけ、保育士への働きかけ、発話回数、表情など、行動面と感情面の両面からカテゴリーを設定して行った。本格的な分析は次年度から進める。あわせて、月1回、保育士への面接調査を実施した。調査内容としては、子どもの発達評価、子どもに関して気がついた特徴的な行動などである。また、本研究は縦断研究であるため、観察対象児の観察データがある程度蓄積された時点で分析し、その結果を随時論文としてまとめている。本年度は、観察対象児の2歳から3歳にかけての分析結果を外国の雑誌に投稿した。来年度は、3歳から4歳にかけての分析結果を幼児関連の国際学会に発表する予定である。本年度は、保育園の5歳児クラスに進級した子どもたちの観察データの収集を中心に行った。週1回、観察対象児が所属する保育園に通い、研究当初から対象にしている園児8名の行動を、自由遊びの時間に観察し仲間とのかかわり方などをビデオカメラで撮影した。加えて、年に数回、保育士への面接調査を実施した。本研究は縦断研究であるため、観察対象児の観察データがある程度蓄積された時点で分析し、その結果を随時論文としてまとめている。現在、審査中である。また、5歳児クラスの担任とのインタビューで、保育士から対人行動に問題があると考えられている子どもの2歳児クラスの後半の行動を分析し、クラスの担任と当該子どもとのやりとり、そのやりたりに対するクラスの子どもの反応に5歳時の行動と通じる点が見出された。その結果は国際幼児教育学会で発表した。本研究は、平成18年度から20年度の保育園における1,2歳代の乳幼児の行動に対して開発された個人差指標をもとに、それらの特徴が4、5歳時の自由遊びでの接近行動などの対人行動とどう関連するのかを検討することで、幼児期初期の行動特徴は変化するのか、また、変化する場合はその要因は何かを見出し、行動発達の複雑なプロセスに関する仮説を提起することが最終年度の目的であった。結果として、子どもの1歳半ころの行動、特に視線の向く先など個人差が表れ始め、3歳ころの保育士の対応が、子どもの仲間内での関係を作り始め、この関係は、5歳児クラスまで継続する様子が見られた。5歳児クラスでは、仲間間の関係が安定する一方で、3歳児クラスのころから仲間との社会的な交渉がうまくない子どもはそのままその行動が継続するという状況が生まれていた。このように、子どものもつ行動特徴と保育士との相互交渉により3歳前後で仲間への対人行動における個人差が形成されることが示唆された。平成24年度は、1歳児、2歳児クラスの分析と4,5歳児での行動分析を行い、これらの研究成果を国際心理学会(ICP)で発表した(Sagara & Murata,2012)。また、国内でも日本心理学会で成果を発表した(村田・相良, 2012)。なお、今年度、2歳代の子どもの行動観察についての成果が海外の専門雑誌に掲載された(Sagara, Murata, and Yamano, 2012)。今後も得られた成果について、内外の雑誌や学会で発表していく予定である。保育園での5歳児クラスでの観察を計画通り実施し、データを収集することができた。また、1事例について、2歳児クラスの保育場面と5歳児クラスでの行動との関連について分析した結果を国際学会で発表した。

24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、国際心理学会をはじめとする複数の学会で成果を発表し、また、論文の形で成果を発表する予定である。また、3月に発達心理学会で研究テーマについて、シンポジウムかラウンドテーブルで話題提供できるように成果をまとめることを目標としている。そのためには、月に1回、研究分担者と分析会議と研究会を兼ねた集まりを持ち、確実に分析をし、成果が論文の形になるように研究を推進させていく。
口腔扁平上皮癌の浸潤増殖動態に関する研究

1)臨床材科における浸潤像の免疫組織化学的検討IV型コラーゲン,ラミニン,ヘパラン硫酸プロテオグリカンより構成される基底膜成分の連続性と浸潤様式との関連を免疫組織化学的に検討したところ,浸潤傾向の弱い症例では連続性のものが多く見られたのに対し,浸潤傾向が強くなるにつれ不連続や広範囲消失のものが増加し,特に4D型の症例ではいずれも広範囲消失例であった。またデスモソームの構成成分であるデスモグレインIを用いて細胞間接着性を検討したところ浸潤傾向が強くなるほど,細胞間接着性が低下することが明らかになり,特に4D型の陽性細胞率ではわずか0.5%であった。さらにウロキナーゼ型ブラスミノーゲンアクチペーター(uPA),マトリックスメタロプロテテーゼ(MMP)と浸潤組織像との関連を観察したところ,浸潤傾向が強いほど,uPAやMMPが多く発現することが観察された。このように,4C型と4D型で明らかな相違があるものが多く認められた。2)浸潤と転移の機序に関する実験的研究in vitroでの細胞運動能実験において3型のOSC20,4C型のOSC19および4D型のHOC313の3種類の口腔癌細胞株を用いて,その自己運動能を金コロイド法を用いて検討したところ,4D型細胞株の運動能が他の細胞株に比べ有意に高かった.またゲルを用いたin vitro浸澗モデルでの研究ではOSC20とOSC19細胞では線維芽細胞の存在下でのみ原発巣に類似の癌浸潤像が形成され癌細胞と線維芽細胞の相互作用の必要性が示されたのに対し,HOC313では線維芽細胞が存在しなくても浸潤する強い浸種能が示され,臨床での4D側の強い浸潤性との相関性が示唆された。一方,ハムスター誘発舌癌における浸潤増殖像の検討では浸潤様式1から4C型まで観察されたが,4D型は認められなかった。さらにヌードマウス移植in vivo浸潤転移モデルによる検討では舌や口底にOSC19,OSC20細胞を生所性移植したところ,臨床に極めて類似の浸潤像が確実に形成されることを見いだし,本法が口腔癌の浸潤・転移モデルとして極めて有用であることが示唆された。現在,通常の方法では生着しない4D型細胞株の可移植化に向けて検討を行っている。3)浸潤増殖像と腫瘍血管構築像に関する検討臨床材料の免疫組織所見に加え,ハムスター実験系およびヌードマウス実験系について腫瘍血管構築像を生体墨汁を用いて検索したところ,浸潤傾向が強いほど,腫瘍深部の血管密度は低く,細い傾向にあるということが示された。この結果より,腫瘍血管は人癌や実験誘発癌の発生・増殖および移植癌の生着・増殖には必須であるが,浸潤や転移には直接的には必要としないものと推察された。

この結果より,腫瘍血管は人癌や実験誘発癌の発生・増殖および移植癌の生着・増殖には必須であるが,浸潤や転移には直接的には必要としないものと推察された。研究代表者の山本は1983年に新しい浸潤様式分類を発表して以来、口腔扁平上皮癌の浸潤機序の解明を目的とした実験的研究を系統的に行い、in vitroモデルやin vivoモデルについての成果の一端を既に発表してきた。本研究では5種類のヒト口腔扁平上皮癌細胞を用い、ヌードマウスの口腔内に正所性移植し、その浸潤像について免疫組織学的ならびに基質分解酵素の活性をゼラチンザイモグラフィにて詳細に検討したので報告する。移植を行った癌細胞は4種類のヒト口腔扁平上皮癌細胞で、OSC-19、OSC-20、FA、TT細胞を使用した。移植方法は癌細胞を培養液中で8×10^6個/mlの濃度に調製し、ヌードマウスの口腔内に移植した。口腔内移植腫瘍の組織像は各々の細胞の由来する原発腫瘍でのものと類似していた。また、頸部リンパ節転移はOSC-19細胞が81%、TT細胞が50%に認められ、この2つの細胞は浸潤様式が4C型を呈してした。IV型コラーゲンの免疫染色の結果では、リンパ節転移がみられなかったFA細胞では胞巣周囲に連続線状に認められたが、その他の転移のみられた細胞では基底膜の断裂や消失が観察された。デスモグレイン(DG)の免疫染色の結果では、FA細胞では腫瘍細胞間にDG陽性部分を認めたが、その他の細胞ではDGの減弱が観察された。しかし、浸潤先進部のPCNA陽性率の検討を行ったが、浸潤像との明らかな相関は認められなかった。マトリックスメタロプメテナーゼ(MMP)の染色結果では、最も高浸潤・高転移性のOSC-19細胞のみがMMP-1,MMP-2とMMP-9のすべてが陽性であった。また、ゼラチンザイモグラムで培養上清に含まれる酵素を調べると、4種類の癌細胞のすべてに72kDaと92kDaの位置にゼラチン分解活性を示すバンドが見られたが、このバンドの強度はOSC-20、FA細胞に比較して浸潤様式4C型を示したOSC-19、TT細胞が明らかに強く観察された。以上の結果より、口腔扁平上皮癌における個々の浸潤像は癌細胞と間質あるいは癌細胞同士の相互関係が重要な因子として影響を及ぼしている可能性が示唆された。9年度は、in vitroにおける癌細胞の培養液中に放出される基質分解酵素、特にマトリックスメタロプロテナーゼ(MMP)の産生状態について、電気泳動法を利用し検討した。また、in vivo浸潤モデル(正所性移植モデル)において得られた腫瘍をin vitro中で24時間培養し、その培養液中に放出される酵素についての検討も併せて行った。その結果、ゼラチンザイモグラフィーでは、in vitroにおける癌細胞の培養液中にはMMP-2、9が観察された。また,MMP-2はいずれの癌細胞株にも産生がみられたが、MMP-9では高度浸潤癌の浸潤様式4C型の細胞においてのみ観察された。さらに、正所性移植モデルにおいて得られた腫瘍においても同様にMMP-2、9が観察され、高頻度にリンパ節転移を認めるOSC-19細胞とTT細胞では強いMMP-9の産生がみられた。また、これらの腫瘍の免疫組織染色の結果においても腫瘍組織や間質組織におけるMMP-2、9の局在を認め、ゼラチンザイモグラフィーにおける所見と一致した。従って、これらの結果から、口腔癌の基質破壊においてはMMP-2やMMP-9の産生が重要であること。また、高浸潤・高転移性の腫瘍でMMP-9の産生がみられることから、浸潤や転移にはMMP-9が重要な役割を担っていることが考えられた。
悪性黒色腫に対するトレハロースの増殖抑制作用に関する基礎的研究

ヌードラットの結膜下にヒト皮膚由来悪性黒色腫を移植し、各種濃度のトレハロースを点眼し、トレハロースの腫瘍抑制効果を組織計測法にて確認するとともに、悪性黒色腫を各種濃度のトレハロース存在下で培養し、MTTアッセイによる細胞増殖活性の変化とフローサイトメトリーによる細胞周期に関与する転写因子の発現量の定量的な観察を行った。その結果トレハロースは濃度依存的に腫瘍細胞増殖を抑制し、かつ細胞周期に関与する転写因子を介して腫瘍細胞をアポトーシスに誘導する働きがある事を明らかにした。申請者の研究グループでは最近トレハロースが結膜下線維芽細胞や血管内皮細胞に対してアポトーシスを誘導することにより増殖抑制効果を示すことを発見した。そこで申請者はトレハロースが悪性腫瘍細胞に対して同様に増殖抑制効果を発揮できるか否かを明らかにするために本研究計画を立案した。本研究では悪性腫瘍細胞としてヒト皮膚悪性黒色腫由来細胞株を使用し、細胞培養系でのin vitro条件下とヌードラットを利用して結膜下に腫瘍細胞を移植したin vivoでの環境下でのトレハロースの増殖抑制作用の有無とその分子機構について解析し、結膜悪性腫瘍に対するトレハロース点眼治療へ展開するための基盤研究とすることを目的とした。実際の研究ではヌードラットの結膜下にヒト皮膚由来悪性黒色腫細胞を移植し、各種濃度のトレハロースを点眼し、トレハロースの腫瘍細胞増殖抑制効果を組織計測法にて確認するとともに、悪性黒色腫細胞を各種濃度のトレハロース存在下で培養し、MTTアッセイによる細胞増殖活性の変化とフローサイトメトリーによる細胞周期に関与する転写因子の発現量の定量的な観察を行った。その結果、トレハロースは濃度依存的に腫瘍細胞増殖を抑制し、かつ細胞周期に関与する転写因子を介して腫瘍細胞をアポトーシスに誘導する働きがあることを明らかにした。研究の最終年度では、初年度の研究成果を確認する作業を行った。ラット結膜下に移植したヒト悪性黒色腫細胞がトレハロースによってその増殖が抑制されたことがin vivo実験によって確認されたことと、その細胞レベルでの裏付けが分子レベルである程度なされたことによって本研究の目的は当該年度については達成されたものと考えられる。該当なし
フルカラーチューニングを指向した固体蛍光色素の合成，　構造，　新機能の開拓

本年度の研究により、アミノベンゾピラのキサンテン系(ABPX)色素の光刺激による分子構造の変化のメカニズム、および光刺激によって生成した分子種の安定性に影響する因子を明らかにした。以下にその詳細を示す。まずABPXの分子化学種(スピロラクトン型分子種:SL、双性イオン型分子種:Z)を光刺激で切り替えることを目的とし、フタリド部位(光刺激により化学構造が変化する光駆動部位)のC-O結合部位をC-X(X = N, S)結合に変化させた誘導体を合成し、その光応答性を評価した。しかしながら、誘導体化により光駆動部位の構造変化の効率が著しく低下することがわかった、そこでまず、光駆動部位の構造変化のメカニズムの解明が先決と考え、C-O結合を有するcis-ABPX-N-ethylのスピロラクトン型分子種(SL)を用いて光異性化過程の解明を試みた。その結果、SLは光刺激により生成した励起状態で、電子供与部位(キサンテン環部位)と電子求引性部位(フタリド部位)で電荷分離(CS)状態を形成することがわかった。そして、このCS状態から双性イオン型分子種(Z)を生成する過程と、ラジカル性中間体(R)を経由してZを生成する過程が存在することを明らかにした。さらに加熱実験から、生成したZはSLへ熱異性化することがわかった。続いて、これらの知見を元に、SLの構造変化には光駆動部であるフタリド部位よりも、むしろ光アンテナ部位であるキサンテン環部位の電子供与性を高めることが重要であると考えた。そこで、キサンテン環部位の電子供与性の異なる4種類の誘導体を合成し、その光異性化特性を調べた結果、電子供与性が高いほどSLからZへの光異性化速度が速いことが示唆され、また、Zが安定に存在できることがわかった。これらの研究成果は、光化学協会と日本薬学会が主催する3件の学会で発表し、2件の受賞につながった。29年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は,アミノベンゾピラノキサンテン系(ABPX)色素が有する3種類の分子種(SL,Z1,Z2)の光物性を解明することで,フルカラー調光が可能なABPXの創製を指向した研究を行った.具体的な研究成果としては,スピロラクトン型分子種(SL)の光物性を精査した結果,SLが溶媒極性に依存して蛍光波長が大きく変化するソルバトフルオロクロミズムを示すことを明らかにした.そこで,SLの基底状態と励起状態の永久双極子モーメントを算出した結果,励起状態では基底状態に比べ8 D(デバイ)以上大きな永久双極子モーメントを有していることがわかった.さらに理論計算により,この永久双極子モーメントは,励起状態で分子内で形成される分極構造に由来することがわかった.この結果より,SLのソルバトフルオロクロミズムは,励起状態の分極構造と溶媒分子が相互作用を起こし,励起状態が安定化したために生じたと結論づけた.これらの研究成果は,光化学討論会を始めとした3件の学会で発表し,また本成果は学術論文として英国王立化学会が発行するPhysical Chemistry Chemical Physics誌に投稿し掲載を受理された.続いてSLへの光照射による分子構造変化を調べた結果,一分子レベルで分子構造変化がおこり,双性イオン型分子種であるZ1およびZ2が生成することがわかった.さらに,SLは溶液中では光照射によりZ1に選択的に構造変化する一方で,ポリメタクリル酸メチルやポリスチレンなどの有機ガラス中ではZ2に選択的に構造変化するなど,SLの光照射による構造変化は色素周囲の環境に依存することがわかった.本研究成果は日本薬学会第137年会にて発表した.前年度は,フルカラー調光が可能なABPXの化学構造の探索および合成に関して, ABPXの3つの分子種(SL,Z1,Z2)が光の三原色である,青色・緑色・赤色蛍光を示す誘導体を探索し合成することを目的としていた.この目的の達成に向けて,まずこれまで研究が行われていなかったSLの溶液中での光物性を解析した結果,SLが溶媒の極性に依存して蛍光波長が変化するソルバトフルオロクロミズムを示すことを発見し,さらにトルエンやベンゼンなどの低極性溶媒中において青色蛍光を示すことを見出した.次にZ1の緑色蛍光および,Z2の赤色蛍光に関しては,実験および計算化学を用いた解析から,ABPXのキサンテン環部位のアミノ基の電子供与性をプロトタイプであるジエチル体より低下させることで得られることがわかった.また,予備検討において,SL,Z1,Z2の調光は本年度に実施するスピロ環部位の構造修飾によっても可能であることがわかった.このように,光の三原色を示すABPXは実験的にも計算的にも得られることが確認できたため,研究はおおむね順調に進行していると考えている.本年度の研究により、アミノベンゾピラのキサンテン系(ABPX)色素の光刺激による分子構造の変化のメカニズム、および光刺激によって生成した分子種の安定性に影響する因子を明らかにした。

しかしながら、誘導体化により光駆動部位の構造変化の効率が著しく低下することがわかった、そこでまず、光駆動部位の構造変化のメカニズムの解明が先決と考え、C-O結合を有するcis-ABPX-N-ethylのスピロラクトン型分子種(SL)を用いて光異性化過程の解明を試みた。その結果、SLは光刺激により生成した励起状態で、電子供与部位(キサンテン環部位)と電子求引性部位(フタリド部位)で電荷分離(CS)状態を形成することがわかった。そして、このCS状態から双性イオン型分子種(Z)を生成する過程と、ラジカル性中間体(R)を経由してZを生成する過程が存在することを明らかにした。さらに加熱実験から、生成したZはSLへ熱異性化することがわかった。続いて、これらの知見を元に、SLの構造変化には光駆動部であるフタリド部位よりも、むしろ光アンテナ部位であるキサンテン環部位の電子供与性を高めることが重要であると考えた。そこで、キサンテン環部位の電子供与性の異なる4種類の誘導体を合成し、その光異性化特性を調べた結果、電子供与性が高いほどSLからZへの光異性化速度が速いことが示唆され、また、Zが安定に存在できることがわかった。これらの研究成果は、光化学協会と日本薬学会が主催する3件の学会で発表し、2件の受賞につながった。本年度はまず,各種溶液中においてSLへの光照射によって生成する双性イオン型分子種である,Z1およびZ2の光物性や熱力学的安定性の解明を引き続き行う.続いて,光の波長や強度による,SL, Z1, Z2の構造変換の意図的な制御に向けて,化学構造変換に関与するスピロ環の開閉機構を明らかにする.ローダミン色素をはじめとした類似化合物の光異性化研究から, ABPXの双性イオン型(Z1, Z2)の生成には,スピロ環部位のC-X結合をイオン開裂により効率的に切断することが求められる.そこで, C-X結合の結合距離並びに,電子遷移状態の結合解離エネルギーを考慮し, X部位(X = O, N, S, Se)を系統的に改変した誘導体を合成した後,誘導体間での光化学過程の比較検討を行う.次に,Z1とZ2の生成量や安定性に関与する照射光の波長や強度の特定を行うとともに,開閉の可逆性も調査する.上記の結果を基に,合成した誘導体を用いて固体状態での集積構造と蛍光特性の関係の解明を行う.具体的には,誘導体のX線結晶構造解析から,キサンテン環部位の配列・配向や分子間相互作用を調査し,固体蛍光性との相関性を解明する.また同時に,分光学的手法や計算化学的手法を駆使した複合的な解析と組み合わせ,集積構造変化と固体蛍光色変化の連動・制御に向けた指針を得る.29年度が最終年度であるため、記入しない。29年度が最終年度であるため、記入しない。
変形性関節症による慢性疼痛に関する、末梢神経の可塑的変化について

最近、疼痛が、疾患が起こった部位の変化だけではなく、それを感知する末梢神経のレベルにおける変化によっても影響されることが明らかにされている。本研究の目的は、変形性関節症における疼痛の機序を明らかにする為に、関節症モデル動物を作製し、末梢神経レベルにおける変化について調べることである。昨年度以下のことを行った。1.動物モデルにおける疼痛に関する行動評価方法の確立変形性関節症モデルを作成し、後肢荷重の左右差を測定する方法に習熟し、再現性良く行えるようになった。2.末梢神経変化に関する評価方法の検討行動評価にて変化をきたした時期で、末梢神経変化に関する検討を行った。まだ、予備的実験結果ではあるが、逆行性トレーサーを関節内に注入し後根神経節や脊髄後角にある膝関節を支配する神経細胞を染色・同定することができた。来年度は同実験を繰り返すとともに、電気生理学的手技を用いた、同神経細胞の可塑的変化についての評価方法も検討していく。本研究は九州大学大学院医学研究院統合生理学との共同研究にて行った。連携研究者:九州大学大学院医学研究院統合生理学教授吉村恵九州大学大学院医学研究院整形外科学助教岡崎賢本研究の目的は、関節症モデル動物を作製し、変形性関節症における慢性疼痛の機序を明らかにすることである。本年度は変形性関節症動物モデルを確立し、同モデル動物を用いた、疼痛に関する行動学的評価方法を検討した。関節症モデルは、7-8週齢のSprague-Dawley系成熟雄性ラット(以下、ラットとする)を用いて、mono-iodoacetate(MIA)を膝関節内注入する方法を用いることにした。まず、膝関節内注入する手技を確認する為に、50μl染色液を注入し、関節内注射を再現性良く行えることを数回の手技にて評価し、確認した。次にpentobarbital sodium(40mg/kg)腹腔内投与による麻酔下に、25μlMIA(80mg/ml)を左膝関節内注入し、2週後に安楽死させ関節を観察した。関節軟骨の変性や消失などの関節症様所見を認めた。行動学的評価については、incapacitance testerを用いることにした。再現性のある結果を得る為にはラットを器械に慣れさせる必要があり、3週齢からラットを購入し2,3日に1度器械に乗せ、関節内注入が予定される、7週齢になるまで行った。その結果比較的正確な測定が可能となっている。また両膝周囲径の左右差も評価項目に加えた。予備実験において、shamラット(生理食塩水膝関節内注入)に比べて、MIA注入し、関節症を起こしたラットが、後肢荷重や膝関節周囲径に明らかに左右差を認めていた。来年度は、は逆行性トレーサーを関節内に注入し後根神経節や脊髄後角にある膝関節を支配する神経細胞を染色・同定し電気生理学的手技を用いて可塑的変化についての評価方法も検討していく予定である。連携研究者:九州大学大学院医学研究院統合生理学教授吉村恵九州大学大学院医学研究院整形外科学助教岡崎賢
新しいSー脱保護試薬を用いるエンドセリンおよび関連ペプチドの合成研究

柳沢らにより発見された血管収縮ペプチド、エンドセリンに関して、エンドセリン1、エンドセリン2、エンドセリン3の3種類のアイソペプチドの存在が明らかになった。またエンドセリンの産生について、翻訳後のビックエンドセリンから変換酵素によりエンドセリンプロセッシングされる知見も出された。本研究は下記に示すように新しく開発したトリフルオロメタンスルホン酸銀を用いるシステインSー脱保護法及び二段階階ハ-ド酸脱保護法を用いてこれら一連のペプチドを化学合成し、エンドセリンの生理的意義の解明に寄与した。1.エンドセリン1の合成システインの側鎖保護基にトリフルオロメタンスルホン酸銀で除去可能なアセトアミドメチル基を用い、Boc固相合成法で合成した。2.エンドセリン2、エンドセリン3、ビックエンドセリン1の合成システインの側鎖保護基にトリメチルシリルブロマイド法で除去可能なメトキシベンジル基を用い、Fmoc固相合成法で合成した。3.ビッグエンドセリン1及びエンドセリン1のC末端をいろいろな長さ延長した誘導体の合成システインの側鎖保護基にメトキシベンジル基を用い、Boc固相合成法で合成した。これらの合成品のラットへ反復投与したところ、どのペプチドもエンドセリン1とほぼ同程度の容量依存性の血圧上昇効果を示した。この結果により、ビッグエンドセリン1及びエンドセリン1のC末端を延長した誘導体は動物体内で直接エンドセリン1にプロセッシングされる可能性が示唆された。1988年、柳沢らはブタ血管内皮細胞培養上清より、強い昇圧血管収縮活性を有するペプチド、エンドセリン(分子内に2個のS-S結合を有するアミノ酸21残基ペプチド)を単離構造決定した。また、エドセリン遺伝子の構造解析により、この遺伝子内にさらにエンドセリン様ペプチドの存在が示唆された。続いてヒト、ラットとエンドセリンの構造も明らかとなり、さらに蛇毒中よりもエンドセリンと構造類似の3つのペプチドsarafotoxin(a、b、c)が単離構造決定された。本研究は最近我々が開発したトリフルオロメタンスルフォン酸銀を用いるシステイのS-脱保護法を用いてこれら一連のペプチドを化学合成し、その有用性を検討すると共に、これら物質の構造と活性相関性に検討を加え、Caイオンチャンネルのアゴニストと考えられている本物質の作用機作を明らかにすることを目的とする。本年度は、まずトリフルオロメタンスルフォン酸銀によるシステインの各種保護基に対する除去性及び他の問題となるアミノ酸(特にエンドセリン分子内に含まれているアミノ酸)への影響を詳細に検討する計画であった。その結果、トルプトファン、メチオニン、チロシン等のアミノ酸存在下においても、副反応なくシステインの保護基を除去出来ることがわかった。そこで、上記脱保護反応を利用して、各種エンドセリンをFmoc型固相法により合成し、実際のペプチド合成にも応用出来ることが明かとなった。今後、上記脱保護反応を利用して各種エンドセリンの合成を行なうとともに、構造活性相関研究の結果を基に、重要なペプチドを液相法により大量合成する計画である。エンドセリンの構造柳沢らにより発見された血管収縮ペプチド、エンドセリンの産生機構に関して、最近翻訳後のビッグエンドセリンから変換酵素によりエンドセリンへプロセッシングされる知見が出された。今年度我々は、エンドセリンの生理的意義解明に役立てるために、ヒトビッグエンドセリンー1を2種類の方法により化学合成した。ヒトビッグエンドセリンー1は、ヒトエンドセリンー1のC末端にアミノ酸17残基延長した分子内に2個のジスルフィド結合を有するアミノ酸38残基よりなるペプチドである。第一の合成方法は、システインの側鎖保護基にメトキシベンジル基を用い、Fmoc固相合成法でペプチド鎖を構築し、トリメチルシリルブロマイドーチオアニソ-ル法で全保護基の除去とペプチドの樹脂よりの脱離を同時に行ない、空気酸化法でジスルフィド形成し、目的ペプチドを得る方法である。収率は2.7%であった。第二の方法は、システインの側鎖保護基にメトキシベンジル基を用い、Boc固相合成法でペプチド鎖を構築し、トリメチルシリルブロマイド-チオアニソ-ル法で全保護基の除去、フッ化水素法で樹脂よりのペプチドの脱離を行ない、空気酸化法でジスルフィド形成し、目的ペプチドを得る方法である。

収率は1.0%であった。また、この方法でエンドセリンー1のC末端をいろいろな長さ延長したエンドセリンー1誘導体5種類を合成した。合成したビッグエンドセリンー1及び5種類のエンドセリンー1誘導体のラットへの反復投与による動脈昇圧効果を試験したところ、どのペプチドもエンドセリンー1とほぼ同程度の容量依存性の血圧上昇効果を示した。この結果より、ビッグエンドセリンー1及びエンドセリンー1のC末端を延長した誘導体は動物体内で直接エンドセリンー1にプロセッシングされる可能性が示唆された。
中世「下人」の研究

他人に自己のサービス・労働を提供して生活を営む人の理念型として, (1)身分を原理とするもの,(2)契約を原理とするものが考えられる.(1)は日本中世の譜代下人のように,生まれながら他人に従属し,他人のために終日労働するタイプで,主人とは法的に平等ではない.これに対し後者は,現代の八時間労働制のように,他人のための労働の後に,自分のための時間があり,主人と労働者が法的に同一身分に属しているタイプである.この身分と契約の両タイプを両極に置いたとき,近世の奉公人は主従関係は有期限の契約によりながら,主人とは法的に平等でないので,両者の中間に位することになる.中世の下人の場合,主人と下人とが同一身分でないことから,主従関係はもっぱら〈対外道徳〉によって説明され,下人のルーツは説経節や謡曲のように"恐ろしい人買いにだまされる物語"として人々に伝えられているが,売主が年季売りした下人の手間料を定めた文書や,一月二十日間の宮仕えを定めた借状(共に香取文書)などから,労働契約的なあり方も存在したのである.勿論,近世の口入屋・人宿や民俗学が明らかにした奉公人市は,契約を原理とする事例である.これらの場合,主人と下人・奉公人の間には,一定の信頼関係が前提とされているのである.「てんこう(=癲狂)」文言のある人身売買文書は,秀村選三氏の紹介した五例の外,更に一例を加えることができる.これらはいずれも近隣間の信頼関係を前提としたもので,「てんこう」とはホームシックをいい,「大根てんこうは三月九十日」とあるのは,一年の内三ヶ月・九十日間は親元に帰ってもよいとの特約である.つまりこれは,日本中世においても〈対内道徳〉による労働契約的なあり方が存在したことを示したことを示しているのである.他人に自己のサービス・労働を提供して生活を営む人の理念型として, (1)身分を原理とするもの,(2)契約を原理とするものが考えられる.(1)は日本中世の譜代下人のように,生まれながら他人に従属し,他人のために終日労働するタイプで,主人とは法的に平等ではない.これに対し後者は,現代の八時間労働制のように,他人のための労働の後に,自分のための時間があり,主人と労働者が法的に同一身分に属しているタイプである.この身分と契約の両タイプを両極に置いたとき,近世の奉公人は主従関係は有期限の契約によりながら,主人とは法的に平等でないので,両者の中間に位することになる.中世の下人の場合,主人と下人とが同一身分でないことから,主従関係はもっぱら〈対外道徳〉によって説明され,下人のルーツは説経節や謡曲のように"恐ろしい人買いにだまされる物語"として人々に伝えられているが,売主が年季売りした下人の手間料を定めた文書や,一月二十日間の宮仕えを定めた借状(共に香取文書)などから,労働契約的なあり方も存在したのである.勿論,近世の口入屋・人宿や民俗学が明らかにした奉公人市は,契約を原理とする事例である.これらの場合,主人と下人・奉公人の間には,一定の信頼関係が前提とされているのである.「てんこう(=癲狂)」文言のある人身売買文書は,秀村選三氏の紹介した五例の外,更に一例を加えることができる.これらはいずれも近隣間の信頼関係を前提としたもので,「てんこう」とはホームシックをいい,「大根てんこうは三月九十日」とあるのは,一年の内三ヶ月・九十日間は親元に帰ってもよいとの特約である.つまりこれは,日本中世においても〈対内道徳〉による労働契約的なあり方が存在したことを示したことを示しているのである.
脊椎動物四肢リズム運動形成機構のプロトタイプの解析

仮想遊泳中には、(i)外転筋運動ニューロン、(ii)体幹運動ニューロン、(iii)内転筋運動ニューロンの順に、リズミックに活動することが分かった。この胸びれ運動ニューロンの神経活動がどのようなシナプス入力を受けて作り上げられるかを調べるため、外転筋運動ニューロン、内転筋運動ニューロンの膜電位固定法による全細胞記録を行った。その結果、双方とも、それらの細胞が発火するフェーズにリズミックな興奮性入力を受けており、それ以外のフェーズでは、抑制性の入力を受けていることが明らかとなった。すなわち、リズミックに興奮性入力と抑制性入力が交互にが入ることが、胸びれ運動ニューロンのリズミックな神経活動の主たる原因と考えられる。この運動ニューロンへシナプス入力を与える介在ニューロンを明らかにするため、さまざまなクラスの介在ニューロンから電気生理学記録を行った。その結果、転写因子、En1, Chx10, Gata3, Evx1, Dmrt3を発現する神経細胞が、胸びれリズム運動の際にリズミックに発火活動することが明らかとなった。現在、光遺伝学手法と電気生理学手法を組み合わせることにより、介在ニューロンと運動ニューロンとのシナプス結合様式を調べている。27年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、脊髄神経回路の重要な研究素材となっているゼブラフィッシュを用い、外転筋と内転筋の左右交互のシンプルな運動からなる、遊泳中の胸びれリズム運動の神経回路の完全解明を目指す。そして、その神経回路の構成因子を、進化的に保存された脊椎動物脊髄神経発生の基本スキームの中に位置づける。胸びれは哺乳動物前肢の相同器官であり、シンプルな胸びれの運動は、陸上脊椎動物四肢の運動のプロトタイプと考えることができる。すなわち、本研究は、脊椎動物四肢のリズム運動を司る神経回路の基本的成立過程を明らかにする研究である。3日目のゼブラフィッシュ幼魚を用い、仮想遊泳運動中の外転筋運動神経の活動と内転筋運動神経の活動を、体幹運動神経の活動と同時にモニターした。その結果、仮想遊泳中には、(i)外転筋運動ニューロン、(ii)体幹運動ニューロン、(iii)内転筋運動ニューロンの順に、リズミックに活動することが分かった。この胸びれ運動ニューロンの神経活動がどのようなシナプス入力を受けて作り上げられるかを調べるため、外転筋運動ニューロン、内転筋運動ニューロンの全細胞記録を行った。その結果、双方とも、それらの細胞が発火するフェーズにリズミックな興奮性入力を受けていることが明らかとなった。すなわち、リズミックに興奮性入力を受けることが、胸びれ運動ニューロンのリズミックな神経活動の主たる原因と考えられる。大きなトラブルはなく、研究はおおむね順調に伸展している。今後、運動ニューロンの活動を直接制御する介在ニューロンの活動様式と、運動ニューロンとの結合様式を詳細に調べていく。