hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
わが国年金財政の確率的予測の研究

このように研究の方向の変化はあったものの、もとの方向の研究も進めるべく、平成21年財政検証結果レポートの、年金数理計算基礎資料(第5章)にある、数式(モデル)を表計算ソフトに乗せる試みを始めたが、これは膨大な作業であるため、中断した。これまでは当面2004年の年金改革の線で進むと考えて基準のケースを作り、これに対していくつかのケースをシミュレーションすればよいと考えていたが、現在の政府の年金政策が流動的で、何を基準とすればよいかが揺らいでいる。このため、当初考えていた、年金財政についてのシミュレーションを行う、というねらいについては遅れが生じている。しかし、関連したテーマではかなりの研究成果を上げることができている。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後も年金財政のシミュレーションを行うというねらいを保持しつつも、場合によっては我が国での人口予測の精緻化や、諸外国での年金財政の将来の問題をとりあげていくことも必要となるかもしれない。
ポーションコントロールプレートを活用した教育効果の評価及び普及に関する研究

糖尿病、肥満、高血圧など慢性疾患を伴う患者の重症化予防を目的に、我々が開発したポーションコントロールプレート(ヘルシープレート)を用いた健康支援者育成プログラムを開発し有効性を確認した。また、プログラム体験者による糖尿病患者への栄養相談や健診後健康教室など様々な場面での活用を試み、比較検討を行った。結果、ヘルシープレートは、摂取量のイメージがつきやすく、栄養バランスも適切に取れることから、肥満者や、糖尿病患者だけでなく、単身赴任者や男性社員にとっても、適した方法であることを明らかにした。さらに、慢性腎臓病の重症化予防のための指導教材が完成した。今後は臨床における応用研究が必要である。欧米では肥満や肥満を伴う2型糖尿病患者に対し、ポーションコントロールプレートが用いられている。我々は、日本人の食生活に合わせた和製ポーションコントロールプレート「ヘルシープレート」を開発し、その妥当性やランダム化比較試験を実施し、減量の有効性と安全性を報告してきた。ヘルシープレートは、イラストにあわせ食材や料理を盛り付けることで、量とバランスを調整できるよう開発され、主食量を変えることで炭水化物を4060%に個人対応の調整ができる。また、さらに工夫を加え、一食でたんぱく質10gと十分なエネルギー確保ができるようなCKD対応のヘルシープレートを考案した。今年度の目標は、糖尿病患者や肥満および高血圧など慢性疾患を伴う患者の重症化予防を目的に、健康支援者(管理栄養士、保健師)の育成プログラムを開発することである。まず、研修会で使用する質問票の作成した(透析予防・たんぱく制限に対する態度スコア(10問、50点)、透析予防・たんぱく制限に関する知識スコア(20問、20点)、食事指導に関する自信(10問、100点)。CKD用ヘルシープレートおよび行動科学を用いた方法で2日間の教室開催では、ヘルシープレートを用いた指導ができる管理栄養士の育成を行うための指導計画及び内容の吟味し、基礎知識の十分な習得の他、わかりやすく、楽しくチャレンジできるように導くための方法を、ロールプレイを盛り込みながら行った。調査、分析の結果については、糖尿病学会、日本糖尿病療養指導学術集会等で発表する。さらに参加者のグループインタビューを行い、プログラムのよい所や改善点を聴取し、まとめるなど、次年度につなげる研修方法のマニュアルの作成、教材の作成を進行させている。1研修の効果を確認するための質問票を作成し、研修会前後にその変化を測定した。また研修会後にプログラムの満足度等を調査した。2CKD用プレートに絵柄のプリントを施すには、デザインの吟味や製作費がかかってしまうことから、プレートは従来の無地のものを用い、食事の盛り付け方を示す「ランチョンマット」を考案した。3CKD用ヘルシープレートおよび行動科学を用いた方法で2日間の教室を実施し、調査、分析をおこなった。4結果については、糖尿病学会、日本糖尿病療養指導学術集会等で発表する。慢性腎臓病の多くは加齢による動脈硬化症や、高血圧、糖尿病などの生活習慣病が関係していることから、高齢化が進むほど患者数は増加し、今日、慢性腎臓病の重症化予防は、新規透析導入者の減少実現、慰労費削減実現のために、大きな課題であるといえる。しかしながら、腎機能が低下した患者に対しての、低たんぱく食の食事指導はなかなかハードルが高く、低たんぱく食の理解に苦しみ、その実践どもあまり高くないのが現状であるといえる。また、患者自身も今までやってきた糖尿病食や、高血圧食などとの違いに戸惑い、低たんぱく食の理解に苦しみ、その実現度もあまり高くない平成28年度、我々は慢性腎臓病重症化予防のための指導者教育プログラムの開発に目標を掲げ、愛知県、静岡県において研修会を開催した。その結果、1.慢性腎臓病の重症化予防にたんぱく制限が重要であるという認知は当初より(41点/50点)と高かったが、たんぱく制限に関する知識スコア(7.3点/20点)、食事指導に関する自信度(3.6点/10点)は低かった。2.研修後の測定では、いずれの得点も認知47点・知識16.9点(正解率37%→85%)自信度5.8点へと有意に改善した。ヘルシープレートを用いた低たんぱく食は、イラストにあわせて盛り付けることで、たんぱく質10g、エネルギー500700kcalに管理できるよう考案されていることから、慢性腎臓病の低たんぱく食指導を行う知識や自信度を高め、指導者育成に役立つことが明らかとなった。117年度に準備した教材、質問票、CKD低たんぱく食対応のヘルシープレート専用ランチョンマットを用いた指導者育成セミナーの開催からいくつかの気づき、改善点が明らかとなり、望ましい形への修正を行いに至った。2研修会で得られた結果の報告として第59回日本糖尿病学会年次学術集会(2016年5月.京都)、第4回日本糖尿病療養指導学術集会(2016年7月.京都)、第28回日本糖尿病性腎症研究会(2016年11月.東京)にて、その成果の発表に至った。3次のスッテプである患者指導のための研究計画、必要書類、質問票等の準備が滞りなく行われた。我々は、日本人の食生活に合わせた和製ポーションコントロールプレート「ヘルシープレート」を開発し、その妥当性やランダム化比較試験を実施し、肥満及び肥満を伴う2型糖尿病患者の減量の有効性と安全性を報告してきた。そして、糖尿病や肥満および高血圧など慢性疾患を伴う患者の重症化予防を目的に、ポーションコントロールプレート(ヘルシープレート)を用いた健康支援者(管理栄養士、保健師)の育成プログラムの開発を目標に、各地で研修会を開催した。

さらに、プログラム体験者による糖尿病患者への個別栄養相談や健診後健康教室など様々な場面での活用を試み、方法の比較検討を行った。結果、ポーションコントロール法は、摂取量のイメージがつきやすく、栄養バランスも適切に取れることから、肥満者や、肥満を伴う糖尿病患者だけでなく、単身赴任者や働く男性社員にとっても、適した方法であることを明らかにした。特に60分程度の簡単なランチタイム介入において持参した弁当をヘルシープレートに盛り付けて、食べて見て感じるワークでは6割の男性がプレートを活用し3か月後にー3.9kg、12か月後ー6.9kgと有意な減量効果および体脂肪や血圧、メンタル等の改善も認めることができた。現在2年後の追跡研究中である。さらに、加齢による動脈硬化症や、高血圧、糖尿病などの生活習慣病の重症化に伴い、慢性腎臓病患者数の増大にブレーキをかけることが重要課題であると考えた。したがって、ヘルシープレートを利用した慢性腎臓病の重症化予防のための指導者教育研修会を開催した。その結果、慢性腎臓病の重症化予防のためのたんぱく制限に関する知識スコア、食事指導に関する自信度が有意に改善したことから、次の研究に向けての指導教材の完成までに至り、今後は臨床における研究を計画している。糖尿病、肥満、高血圧など慢性疾患を伴う患者の重症化予防を目的に、我々が開発したポーションコントロールプレート(ヘルシープレート)を用いた健康支援者育成プログラムを開発し有効性を確認した。また、プログラム体験者による糖尿病患者への栄養相談や健診後健康教室など様々な場面での活用を試み、比較検討を行った。結果、ヘルシープレートは、摂取量のイメージがつきやすく、栄養バランスも適切に取れることから、肥満者や、糖尿病患者だけでなく、単身赴任者や男性社員にとっても、適した方法であることを明らかにした。さらに、慢性腎臓病の重症化予防のための指導教材が完成した。今後は臨床における応用研究が必要である。今日重症化予防は国あげての重要な対策課題となっており、CKDへの取り組みが必要であるといえる。しかしながら、腎機能が低下した患者に対しての、低たんぱく食の食事指導はなかなかハードルが高く患者は、低たんぱく食の理解に苦しみ、その実践度もあまり高くないのが現状である。我々は、低たんぱく食が簡単に実践できるヘルシープレートの開発に成功した。しかし、本プレートが本当に患者さんのためになるかどうかは不明である。従って、本プレートを用いた食事介入試験を実施し、プレートを活用した低たんぱく食栄養指導法の有用性を明らかにすることを次の目的とする。そのためには、参加者のグループインタビューを行い、プログラムのよい所や改善点を聴取し、まとめるなど、次年度につなげる研修方法のマニュアルの作成、教材の作成を進行させていること。さらに、育成した指導者から、介入研究協力者をリクルートし、患者介入研究を行い、CKDの低たんぱく食に対する有用性を検証することを計画している。指導者育成プログラム
「満洲国」のロシア人統治と亡命ロシア人社会の変容

本研究は、1932年に成立したいわゆる「満洲国」に居住した亡命ロシア人の生活世界の実態とその変容を、同時代の史料に基づいて実証的に考察した。その過程で、1934年末に日本軍特務機関の指導下で設立された満洲国白系露人事務局がロシア人亡命者の体制への統合に大きな役割を果たしたこと、ロシア人亡命者が同事務局を通じて満洲国において一定の凝集性を維持できたこと、を明らかにした。本研究は、1932年に成立したいわゆる「満洲国」に居住した亡命ロシア人の生活世界の実態および満洲国の統治政策と亡命ロシア人世界との相互関係を同時代の史料に基づいて分析し、当地の亡命ロシア世界が東アジアにおいて果たした機能とその歴史的な意義とを実証的に解明することを課題とした。本年度は、亡命ロシア人統合組織であった「白系露人事務局」の実態の解明を考察した。この研究課題の遂行を通じて、以下のような諸点を明らかにすることができた。(1)1934年12月に設立された白系露人事務局は、実質的には日本軍特務機関の指導下で組織され、ハルビンの亡命ロシア人社会は白系露人事務局の設立を「帝国政府の指令」によるものと理解していた。(2)白系露人事務局は、ハルビンを中心に居住したロシア人亡命者の生活のあらゆる領域を管理する実質的な行政機関ないし国家機関に準ずる組織として機能しており、満洲国当局がロシア人亡命者を統合していく上できわめて重要な役割を担う存在であったということができる。(3)日本軍部はこの白系露人事務局を、単に満洲国におけるロシア人の統合組織として利用するだけでなく、きたるべき対ソ戦争の際には極東で樹立する傀儡政権の担い手として利用する存在としても想定していたと推測される。この意味で白系露人事務局は、文字通り「亡命者の政府」としての機能を期待されていた。「五族協和」を謳った満洲国において、かかる特殊な統合組織がロシア人亡命者にのみ許容されたのは、それが日本軍当局の対ソ方針の重要な「持ち駒」と位置づけられていたためであると考えられる。本年度は、満洲国における亡命ロシア人統合組織であった白系露人事務局」の実態の解明と、満洲国形成に至る時期の東北アジアのロシア人社会の変容について考察した。(1)満洲国が成立すると、同国内のソ連勢力に対抗する必要だけでなく日本の対ソ戦略の観点からも、白系ロシア人の統合が目指された。しかし白系ロシア人は、伝統的なロシア文化を維持することを自らの「歴史的使命」と考え、当局による統合に容易には引き入れられなかった。(2)1935年の中東鉄道の満州国移管にむけて白系ロシア人の体制への統合が急速に本格化し、1934年12月末に「白系露人事務局」が組織され、さまざまな圧力の行使を通じて同事務局は白系ロシア人社会への統制力を次第に強化していった。(3)しかし満洲国においてソ連の影響力が完全に消滅したわけではなく、同国にはソ連のエージェントがさまざまな組織内で活動を続けた。白系ロシア人統合機関であった白系露人事務局もその例外ではなく、白系ロシア人の登録業務を管轄する事務局第3課の課長を務めたマトコフスキイもまた、ソ連のエージェントであった。こうした人々の活動によってソ連側は、満洲国の白系ロシア人の動向を的確に把握していたものと考えることができる。本年度は、満洲国における亡命ロシア人による学術団体の組織化の実態解明と、彼らロシア人研究者による学術研究活動の展開について考察した。(1)帝政末期にハルビンで初めて学術団体が組織されて以降、在満ロシア人学術団体は、異郷の地においてロシア科学の研究方法を満洲研究に適用して未知の領域の探査を遂行し、独自の満洲地域研究を切り開くことに成功した。(2)在満ロシア人研究者の組織化は、あらゆる領域での満洲研究を総合的に実施することを可能にし、彼らの研究を急速に発展させた。

そしてその成果は、これら学術団体の機関誌や多様な刊行物という媒体を通じて、ロシア語圏はもとより世界に向けて精力的に発信され、世界的にも未開拓であった満洲研究の進展に著しく大きな貢献をなした。(3)在満ロシア人の学術研究活動は、帝政ロシアの影響下、ロシア革命後の混乱とソヴィエト勢力の管理下、中国東北政権さらには満洲国統治下と変転する満洲地方の激動の中で、形態を変えながらも一貫して維持されていった。本研究は、1932年に成立したいわゆる「満洲国」に居住した亡命ロシア人の生活世界の実態および満洲国の統治政策と亡命ロシア人世界との相互関係を同時代の史料に基づいて分析し、当地の亡命ロシア世界が東アジアにおいて果たした機能とその歴史的な意義とを実証的に解明することを課題とした。本年度は、ハルビンを中心とした亡命ロシア人による教育の組織化の実態解明とその歴史的意義について考察した。この研究課題の遂行を通じて、以下のような諸点を明らかにすることができた。(1)ハルビンでは、ロシア人が居住していた時期を通じて一貫して帝政ロシアに起源を有する教育機関が存在しており、異郷の地で若い世代をロシア語で教育し伝統文化を継承する上できわめて大きな役割を果たした。ヨーロッパ諸国の亡命ロシア人とは異なってハルビンのロシア人社会は、制度化された教育を通じて「ロシア性」の再生産を可能にした。(2)白系ロシア人教育機関は、1924年の中東鉄道の中ソ合弁企業化によってハルビンに登場したソ連系教育機関の圧力の下で、これに対抗して白系ロシア人の価値観を子弟に教育する課題を担うことになった。こうして白系ロシア人教育機関とソ連系教育機関が対抗しつつ拡大する状況が現れ、加えて独自の価値観を追求する宗教系教育機関も登場してきた。(3)1932年の満洲国成立後にも、ロシア語によるロシア人教育自体は維持された。白系ロシア人教育機関と宗教系教育機関は、満洲国の体制に組み込まれることによって、大きな制約を受けながらもロシア人教育の機能を維持することができた。平成21年度から23年度にかけて、本研究課題に関して、1)満洲国における亡命ロシア人統合組織の解明、2)亡命ロシア人の精神的支柱としてのロシア文化の維持活動の一環である学術活動の展開過程の解明、という領域で研究を進め、当該テーマに関する研究成果を公表することができた。24年度が最終年度であるため、記入しない。上記11に記したこれまでの研究成果をふまえて、本研究課題の最終年度となる本年度には、在外ロシア世界におけるロシア人亡命者の統合の核として機能したロシア文化の維持に不可欠であったロシア語による文化の再生産過程を研究の中心的課題に設定し、これに関連する史料の収集とその分析に従事する。この作業と併せて、昨年度までに達成された成果と本年度の研究の進展とを総合して、満洲国のロシア人統治と亡命ロシア人社会の変容に関する学術論文を執筆する。
ストレス刺激時におけるPKNを介する細胞内情報伝達経路の研究

ストレス刺激時におけるPKNの核移行のメカニズムを検討するため,前年度はPKNの欠失変異体のアミノ末端にタグを融合して培養細胞に発現させ、タグに対する抗体をもちいて免疫染色を行ったが、今年度はそれに加えて、PKNの全長、アミノ末端、カルボキシル末端、およびRhoA結合領域欠失変異体のカルボキシル末端に蛍光物質GFPを融合したかたちで、一過性、あるいは恒常的に培養細胞に発現を試み、それぞれのの細胞内局在を検討した。その結果アミノ末端の一部の領域が核移行に重要であることを示唆する結果を得ている。現在種々の変異体をもちいてさらに細かな検討を加えているところである。砂ネズミを用いた実験で、総頚動脈を一過性に結さつし虚血ストレスを与えると、海馬CAl領域の錐体細胞に遅発性細胞死をおこすことができるが、この際にPKNの断片化が生じていることが明らかになった。また、Jurkat細胞やU937細胞にエトポシドやスタウロスポリン、Fas抗体などのアポトーシス誘導ストレスを加えると、PKNがやはり断片化をおこすことが免疫化学的検討により明らかになった。この断片化はキャスパーゼ3に選択的な阻害剤によって抑制されることや、in vitroで組換体キャスパーゼ3がPKNを同様に断片化すること、また特定の部位のアスパラギン酸をアラニンに置換した変異体でその断片化が抑制されることから、キャスパーゼ3様のプロテアーゼによって触媒されていることが考えられる。また、in vitroにおけるキャスパーゼ3によるPKNの断片化の実験から、生じる分子量約50kDaの断片は、脂肪酸に非依存的に恒常的にリン酸化活性を有していることが明らかになり、アポトーシスの際にPKNが積極的に関与している可能性も示唆された。これらの結果はProc.Natl.Acad.Sci.USA誌に発表した。ストレス刺激時におけるPKNの核移行のメカニズムを検討するために、種々の組換体PKNをタグ付きで動物培養細胞に発現させ、その細胞内分布を共焦点レーザー顕微鏡をもちいて、免疫組織科学的に検討した。タグに対する抗体をもちいて、PKN全長、アミノ末端の活性調節領域およびカルボキシル末端の触媒領域をそれぞれ発現させたところ、通常の増殖状態ではいずれも細胞質に検出され、違いは認められなかった。また、血清飢餓や、熱ショックなどのストレスを細胞にあたえ、同様の実験を行ったが、やはり明らかな核への集積は認められなかった。蛍光物質GFPの融合蛋白質としてPKNを細胞に発現させ、固定操作を加えずに種々のストレス下でPKNの局在を検討したが、いずれも核への集積は認めなかった。PKNのタグ付き組換え蛋白質の立体構造や、絶対量の関係から核移行が観察できなかったことが考えられるので、今年度は新たな発現系を試みる予定である。また、内因性PKNの局在変化におよぼすボツリヌスC3酸素の影響を検討したが、C3による細胞の形態変化がはげしく、現在までのところはっきりした結果は得られていない。ストレス刺激時にPKNと相互作用する因子を検討するために、Rat-1細胞を大量培養し、PKNの制御領域をリガンドとして作成したアフィニティーカラムにかけ、熱ショックをかけた細胞のみで認められる結合蛋白質を探索したが、現在までに試した結合条件では明瞭なバンドを見つけるには至っていない。また、これらの細胞の抽出液からPKNの特異抗体をもちいて免疫沈降をおこない、沈降物中にみとめられる蛋白バンドのなかで熱ショック特異的に認められるものを、放射性ラベルによって検出を試みたが、これも現在までのところ成功していない。

今後は、細胞種やサンプルの調整方法を検討しなおして、試みる予定である。ストレス刺激時におけるPKNの核移行のメカニズムを検討するため、前年度はPKNの欠失変異体のアミノ末端にタグを融合して培養細胞に発現させ、タグに対する抗体をもちいて免疫染色を行ったが、今年度はそれに加えて、PKNの全長、アミノ末端、カルボキシル末端、およびRhoA結合領域欠失変異体のカルボキシル末端に蛍光物質GFPを融合したかたちで、一過性、あるいは恒常的に培養細胞に発現を試み、それぞれのの細胞内局在を検討した。その結果アミノ末端の一部の領域が核移行に重要であることを示唆する結果を得ている。現在種々の変異体をもちいてさらに細かな検討を加えているところである。砂ネズミを用いた実験で、総頚動脈を一過性に結さつし虚血ストレスを与えると、海馬CA1領域の錐体細胞に遅発性細胞死をおこすことができるが、この際にPKNの断片化が生じていることが明らかになった。また、Jurkat細胞やU937細胞にエトポシドやスタウロスポリン、Fas抗体などのアポトーシス誘導ストレスを加えると、PKNがやはり断片化をおこすことが免疫化学的検討により明らかになった。この断片化はキャスパーゼ3に選択的な阻害剤によって抑制されることや、in vitroで組換体キャスパーゼ3がPKNを同様に断片化すること、また特定の部位のアスパラギン酸をアラニンに置換した変異体でその断片化が抑制されることから、キャスパーゼ3様のプロテアーゼによって触媒されていることが考えられる。また、in vitroにおけるキャスパーゼ3によるPKNの断片化の実験から、生じる分子量約50kDaの断片は、脂肪酸に非依存的に恒常的にリン酸化活性を有していることが明らかになり、アポトーシスの際にPKNが積極的に関与している可能性も示唆された。これらの結果はProc.Natl.Acad.Sci.USA誌に発表した。
コラーゲンゲル包埋培養軟骨細胞に対する低出力超音波パルスの影響

(方法)12週齢日本白色家兎の肩,股,膝関節より軟骨片を採取し,トリプシン,コラゲナーゼによる酵素処理により軟骨細胞を単離した,単離した軟骨細胞をアテロコラーゲンゲルに包埋し(2.0X10^6cell/ml),10%ウシ胎児血清,抗生物質を含んだ培地を用いて3週間培養することにより軟骨様組織を作製した.作製した軟骨様組織を家兎大腿骨膝蓋溝に作製した骨軟骨損傷部に移植した.低出力超音波パルス(超音波骨折治療器SAFHS2000)を膝前面から移植部に照射(週3回,1日20分)した群を実験群とし,同様の治療を行い低出力超音波パルスを照射しない群を対照群とした.術後3ヶ月時に両群の移植部を採取し,肉眼的また組織学的に観察するとともに,II型コラーゲンに対する免疫染色を行い,また移植部の硬度をBiosensorsystemを用いて測定した.(結果)実験群にて移植部は肉眼的に軟骨様組織で修復されていた.組織学的にも修復組織はサフラニンOにて濃染する細胞外基質よりなり,免疫染色にてもII型コラーゲンが陽性であった.硬度計を用いた修復部の硬度測定では,周囲の健常軟骨と同程度の硬度を呈していた.対照群にても同様の肉眼的,組織学的所見を得ており,実験群との間に有意差は認められなかった.II型コラーゲンの染色性,移植部の硬度にも両群間に差は認めなかった.低出力超音波パルスを、関節軟骨欠損に対して行ったコラーゲンゲル包埋自家培養軟骨細胞移植術の術後に体表面から照射することによって、in vivoにおける移植軟骨片の基質産生促進や軟骨片と移植母床間の接着促進効果を調べるのに先立ち、低出力超音波パルスによる細胞間シグナル伝達に関与する因子について調べた。機械的刺激の一つである低出力超音波パルスを軟骨細胞に加えると、細胞内Ca^<2+>濃度が上昇し、それが周囲の細胞に伝わる、いわゆるCa波を引き起こすことが知られている(Parvizi et al. J.Orthop Res,2002)。この細胞間シグナル伝達には、ATPが関与している。軟骨細胞増殖におけるATPの影響について検討した。家兎の膝から関節軟骨を採取後、軟骨細胞を単離し単層培養した。培養開始後2-6日目に1,10,100μMのATPを含んだ培地に1日当たり1分間浸し、その後正常培地で培養し、7日目に細胞数を計測した。また2日目にATPを1,10,100μMを加えたまま培養を続けた群も調べた。ATPを加えなかった群をControlとした。結果:細胞に1分程度ATPを作用させると、細胞増殖が促進された(10,100μMのATP群とControl群に有意差あり)。しかし数日間ATPを含む培地で培養すると増殖が抑制された(100μMのATP群とControl群に有意差あり)。数分程度のATP刺激により発生した一過性のCaイオン濃度の上昇が増殖を促進するが、長期間投与すると細胞内Caイオン濃度の上昇期間が長いため増殖抑制が起こると考えられた。(方法)12週齢日本白色家兎の肩,股,膝関節より軟骨片を採取し,トリプシン,コラゲナーゼによる酵素処理により軟骨細胞を単離した,単離した軟骨細胞をアテロコラーゲンゲルに包埋し(2.0X10^6cell/ml),10%ウシ胎児血清,抗生物質を含んだ培地を用いて3週間培養することにより軟骨様組織を作製した.作製した軟骨様組織を家兎大腿骨膝蓋溝に作製した骨軟骨損傷部に移植した.低出力超音波パルス(超音波骨折治療器SAFHS2000)を膝前面から移植部に照射(週3回,1日20分)した群を実験群とし,同様の治療を行い低出力超音波パルスを照射しない群を対照群とした.術後3ヶ月時に両群の移植部を採取し,肉眼的また組織学的に観察するとともに,II型コラーゲンに対する免疫染色を行い,また移植部の硬度をBiosensorsystemを用いて測定した.(結果)実験群にて移植部は肉眼的に軟骨様組織で修復されていた.組織学的にも修復組織はサフラニンOにて濃染する細胞外基質よりなり,免疫染色にてもII型コラーゲンが陽性であった.硬度計を用いた修復部の硬度測定では,周囲の健常軟骨と同程度の硬度を呈していた.対照群にても同様の肉眼的,組織学的所見を得ており,実験群との間に有意差は認められなかった.II型コラーゲンの染色性,移植部の硬度にも両群間に差は認めなかった.
源氏物語の新たな本文関係資料の整理とデータ化及び新提言に向けての共同研究

『源氏物語』には、大きく青表紙本と河内本の二系統の本文が存在する。だが市販されている『源氏物語』の本文は藤原定家の手を経た青表紙本系統が殆どである。一方の河内本の本文の実態が充分に理解されていないことに原因がある。そこで、未公開の河内本の本文を翻刻し、別本を含めた三系統の重要な十数本の伝本を、5巻に渡り、巻ごとに比較可能な対校一覧を作成して公開してきた。平成19年度から25年度までの基盤研究(A)と(C)での7年間を含めると、巻数は15巻を越える。併せて、時期が来ればそれらをウェブ上で公開するためのデータベース化の作業も進めてきている。研究課題の「源氏物語の新たな本文関係資料の整理とデータ化及び新提言に向けての共同研究」に即して、「研究目標」の「1.新たな本文の翻刻」、「2.主要な本文13本の視覚的に容易に比較・確認が可能な本文対校の作成と、そのデータ化」を、「若紫」巻を対象におこなった。さらに、連携研究者などによる「源氏物語の本文資料に関する共同研究」として、それぞれが課題としている研究内容について、平成26年12月13日に、國學院大學において、公開の共同研究会を開催し、以下の発表をおこなった。豊島秀範(國學院大學教授)「河内本の本文の特徴ー「夕顔」巻を中心にー」、田坂憲二(慶應義塾大学教授)「『紫明抄』伝本再考」、伊藤鉄也(国文学研究資料館教授)「ハーバード大学本「須磨・蜻蛉」の字母に関する一考察」、上野英子(実践女子大学教授)「源氏物語(三条西家書本)の表記法について」、上原作和(桃源文庫日本学研究所)「阿仏尼本「帚木」巻本文の宗本的性格」、菅原郁子(専修大学大學院生)「米国議会図書館本についてー五辻諸仲筆本との関係ー」。もう一つ「研究目標」である、「3.対校本文のデータ化」についても、いわゆる河内本5本(平瀬家本・七毫源氏・中京大本・尾州家本・吉川家本)、青表紙本4本(大島本・明融本・三条西家本・吉川家本)、別本4本(陽明文庫本・飯島本・国冬本・米国議会図書館本)の、計13本について、データ化は済んでおり、いつでも公開できる情況にある。公開が認められる環境が整えば、対校本文の異同が容易に確認できることになる。研究課題の「源氏物語の新たな本文関係資料の整理とデータ化及び新提言に向けての共同研究」に即して、「末摘花」と「紅葉賀」の両巻を対象に、「1.新たな本文の翻刻」、「2.主要な本文10本を視覚的に容易に比較・確認の可能な本文対校の作成と、そのデータ化」をおこなった。さらに、連携研究者などと共に「源氏物語の本文資料に関する共同研究」として、それぞれが研究課題としている研究について、平成27年12月19日に、國學院大學において公開の共同研究会を開催し、以下の題目で発表した。豊島秀範(國學院大學教授)「河内本の本文の特徴ー「若紫」巻を中心にー」、神田久義(田園調布学園大学兼任講師)「「おぼす」と「おもほす」の偏向」、中村一夫(国士舘大学教授)「類義語と本文異同」、伊藤鉄也(国文学研究資料館教授)「字母から見たハーバード本「須磨・蜻蛉」と歴博本「鈴虫」」、上野英子(実践女子大学教授)「三条西家源氏学における本文と注釈の形成史」、上原作和(桃源文庫日本学研究所)「東海大学桃園文庫蔵零本「浮舟」巻本文の位置」。もう一つの研究目標である「3.対校本文のデータ化」についても、いわゆる河内本3本(平瀬本家・七毫源氏・河内本吉川家本)、青表紙本4本(吉川家本・大島本・明融本・榊原本)、別本3本(陽明文庫本・飯島本・米国議会図書館本)の計10本についてデータ化は済んでおり、公開可能な情況にある。連携研究者などと行なう本文研究は、本年度もそれぞれの研究者が順当に研究をすすめていて問題はない。「対校本文のデータ化とその公開」に関しては、対校本文のデータ化は毎年ほぼ予定通り進めている。ただし、それらデータの公開にはまだ至っていない。その原因は、それぞれの伝本の所有者の了解が完全には得られていないことによる。ただし、それらのデータも写本そのものではなく翻刻し活字化したものであるので、やがて公開も可能になると想われる。「基盤研究(C)」の当該年度の研究テーマは「源氏物語の新たな本文関係資料の整理とデータ化及び新提言に向けての共同研究」である。基礎作業として「花宴」「葵」両巻の十数本の写本を翻刻し、いわゆる青表紙本・河内本・別本の本文を、比較検討が可能な対校一覧表にまとめてデータ化した。10年間の科研費による二十巻に及ぶ同様の本文比較作業を通して、源氏物語本文の特質を見定めており、本文に関する新たな提言を行ってきている。また、研究代表者・連携研究者などによる「源氏物語の本文関係資料に関する共同研究会」を毎年開催しており、当該年度は12月24日に、國學院大學を会場として、以下の研究発表を公開で行った。

「河内本の本文の特徴ー「紅葉賀」を中心にー」豊島秀範(國學院大學・研究代表者)、「『源氏物語』蓬生巻の末摘花像の違いについてー十四の伝本からー」太田美知子(國學院大學)、「三条西家本源氏物語の形成過程に関する一考察」上野英子(実践女子大学)、「大島本『源氏物語』の本文史と注釈史再考」上原作和(桃源文庫日本学研究所)、「明融臨模本の和歌書写様式」神田久義(田園調布学園大学)、「『源氏釈』古筆切拾遺」田坂憲二(慶應義塾大学)、「本文と外部徴表の相関性」中村一夫(国士舘大学)、「国文研蔵橋本本「絵合」「松風」「藤袴」について」伊藤鉄也(国文学研究資料館)。なお、ここでの口頭発表の内容は、『源氏物語本文のデータ化と新提言VI』の『報告書』に掲載して発行する作業を進めている。〔基盤研究A〕平成1922年度、〔基盤研究C〕平成2325年度、〔基盤研究C〕平成2628年度と、計10年間にわたり、「源氏物語の本文資料に関する研究」を継続し得たことは、従来の『源氏物語』本文に関する青表紙本・河内本・別本という呼称を初めとする本文に関わる研究の行き詰まりを乗り越えて、新たな提言を為る上に、貴重な研究機会であり、当初の目標に近い成果を上げることができた。だが、まだ道半ばである。この方向の研究作業には、膨大な時間と作業量を伴うが、今後とも継続すべき研究である。ただ、平成26年に研究代表者(豊島秀範)が、胃癌による胃の全摘手術を受けるなど、体調を崩したことにより、研究作業に遅れが生じて、平成28年度で完成すべき『報告書』などを、平成29年度の今も、作成作業を継続しているという、予想外の事態が生じた。しかし、〔基盤研究C〕ということから、1年間の延期を認めていただき、最後まで研究作業ができることに感謝したい。ひとまず、10年間の科研費による研究作業を終えたいが、体勢を立て直して、残りの巻々についての研究へと向かいたいと思っている。平成26年度に開始した「基盤研究(C)」(研究テーマ「源氏物語の新たな本文関係資料の整理とデータ化及び新提言に向けての共同研究」(課題番号26370212))は、3年目の平成28年度で終了の予定で作業を進め、当該年度の12月24日には國學院大學を会場として合同研究発表会を開き、以下の研究発表を公開で行った。「河内本の本文の特徴ー「紅葉賀」を中心にー」豊島秀範(國學院大學・研究代表者)、「『源氏物語』蓬生巻の末摘花像についてー十四本の伝本からー」太田美知子(國學院大學)、「三条西家本源氏物語の形成過程に関する一考察」上野英子(実践女子大学)、「大島本『源氏物語』の本文史と註釈史再考」上原作和(桃源文庫日本学研究所)、「明融臨模本と和歌書写様式」神田久義(田園調布学園大学)、「『源氏釈』古筆切拾遺」田坂憲二(慶應義塾大学)、「本文と外部徴表の相関性」中村一夫(国士舘大学)、「国文研蔵橋本本「絵合」「松風」「藤袴」について」伊藤鉄也(国文学研究資料館)。さらに、基礎作業として「花宴」「葵」両巻について、各々十数本の写本を翻刻し、いわゆる青表紙本・河内本・別本の本文を、比較検討が可能な対抗一覧表にまとめるデータ化を進めてきた。そして、都合10年間に及ぶ科研費による二十巻に及ぶ同様の本文比較作業を通して、源氏物語本文の特質を見定め、本文に関する新たな提言を行ってきた。ところが、研究代表者(豊島秀範)の身体の不調により、翻刻作業その他に大幅な遅れが生じたことから、一年間の補助事業期間延長を願い出て、四年目の平成29年度をもって、当初の計画を遂行し、『報告書V』と『報告書VI』を作成し、都合10冊の『報告書』をもって、『源氏物語』の本文に関する新提言を、各研究者が論文の形で発表することができた。ご配慮に感謝したい。『源氏物語』には、大きく青表紙本と河内本の二系統の本文が存在する。だが市販されている『源氏物語』の本文は藤原定家の手を経た青表紙本系統が殆どである。
双生児研究による睡眠時ブラキシズムの発現に関与する遺伝要因・環境要因の解明

睡眠時ブラキシズムは,近年,睡眠障害との関連から,健康状態に及ぼす影響が注目されている.双生児研究法を用いることにより,遺伝要因と環境要因の相対的な重要度を調査することを目的とし,研究参加への承認が得られた84名(42ペア,年齢22.3 ±6.8歳)を選択し,被験者の自宅で連続3日間,片側側頭筋の睡眠時筋電図活動を測定した.単変量遺伝分析の結果,相加的遺伝効果および非共有環境効果は,各々42%, 58%であり,遺伝子が睡眠時ブラキシズムの発現に影響を及ぼしている可能性があることが示唆された.また,非共有環境効果の詳細についても今後検討を進める必要性が高いことが明らかとなった.睡眠時ブラキシズムは,近年,睡眠障害との関連から,健康状態に及ぼす影響が注目されている.双生児研究法を用いることにより,遺伝要因と環境要因の相対的な重要度を調査することを目的とし,研究参加への承認が得られた84名(42ペア,年齢22.3 ±6.8歳)を選択し,被験者の自宅で連続3日間,片側側頭筋の睡眠時筋電図活動を測定した.単変量遺伝分析の結果,相加的遺伝効果および非共有環境効果は,各々42%, 58%であり,遺伝子が睡眠時ブラキシズムの発現に影響を及ぼしている可能性があることが示唆された.また,非共有環境効果の詳細についても今後検討を進める必要性が高いことが明らかとなった.本研究では、全国的な成人双生児集団を対象として、睡眠時ブラキシズムと遺伝的因子およびライフスタイルや社会経済的要因を含めた環境的因子との関連を、量的遺伝学の視点から明らかにすることを目的としている。すなわち、一卵性双生児と二卵性双生児の類似度の差を利用することによって、遺伝要因と環境要因のそれぞれの影響度を推定する。次に、一卵性双生児のペアを比較することによって、それまでの人生の過程における環境要因による影響について検討を行う。このため、本研究の開始にあたっては、まず、成人双生児集団から、本研究の対象として適切な、双生児のうち、1名以上が睡眠時ブラキシズムを認めるペアのサンプル抽出が必要となる。平成22年度には、まず、研究分担者であり、本学大学院医学系研究科ツインリサーチセンター長である早川先生のご協力をいただき、母集団として双生児の母親の全国組織であるツインマザーズクラブとの研究協力体制を整えた。次に、集団を対象とした質問票による大規模調査を行い、双生児の一方あるいは両方に睡眠時ブラキシズムの存在が疑われるサンプルの抽出を行い、本研究への協力を依頼し、約100組の双生児集団(約200名)から、研究参加に対する文書による同意を得た。引き続き、平成22年度に設備備品費として申請したポータブル睡眠時ブラキシズム自動解析装置を用い、抽出されたペアを対象に、自宅という普段の環境下で夜間咀嚼筋活動を測定・解析することにより、睡眠時ブラキシズムの確定診断を行っており、現在継続中である。また、同時に、双生児の精神心理状態、性格特性およびライフスタイルに関する質問票を用いた調査も行っている。本研究では、全国的な成人双生児集団を対象として、睡眠時ブラキシズムと遺伝的因子およびライフスタイルや社会経済的要因を含めた環境的因子との関連を、量的遺伝学の視点から明らかにすることを目的としている。平成23年度には、平成22年度に引き続き、研究分担者であり、本学大学院医学系研究科ツインリサーチセンター長である早川先生のご協力を得て母集団とした双生児の母親の全国組織であるツインマザーズクラブ会員に対する質問票による大規模調査を行い、双生児の一方あるいは両方に睡眠時ブラキシズムの存在が疑われるサンプルの抽出を行い、ポータブル睡眠時ブラキシズム自動解析装置を用い、抽出されたペアを対象に、自宅という普段の環境下で夜間咀嚼筋活動を測定・解析することにより、睡眠時ブラキシズムの確定診断を行っており、現在継続中である。現在40組80名の双生児を対象としたデータが得られ、大阪大学大学院医学系研究科ツインリサーチセンターの協力を得て、データの量的遺伝学的解析を進めている。これら40組の双生児のうち、24組は一卵性、16組は2卵生である。睡眠時ブラキシズム(SB)は,近年,睡眠障害との関連から,全身の健康状態に及ぼす影響も注目されている.とくに歯科においては,SBが咬耗,歯や補綴装置の破壊,あるいは顎口腔機能の異常を引き起こすことが問題視されている.本研究の目的は,双生児研究法を用いることにより,SBの遺伝要因と環境要因との相対的な重要度を調査することである.被験者は,ツインマザーズクラブ会員に郵送調査による聞き取り調査を行い,研究参加への承認が得られた84名(42ペア,年齢の平均値22.3±6.8歳を選択した.被験者の自宅にポータブル

睡眠時筋活動自動解析装置を郵送し,自宅という普段の環境下で連続3日間,片側側頭筋の睡眠時筋電図活動(EMG活動)を測定した.遺伝と環境の解析方法には“OpenMx"による構造方程式モデリングに基づく量的遺伝分析を用いた.1時間当たりの睡眠時EMG活動の回数には,男女間に有意差を認めなかった(P=.261, Mann-Whitney test).1時間当たりのEMG活動回数を20回以上認めた被験者は,全体の8%であった.単変量遺伝分析(共分散構造分析およびモデルフィッティング)の結果,最適モデルは非相加的遺伝効果を仮定しないAEモデルであった.相加的遺伝効果および非共有環境効果は,各々42%,58%であった. SBに性差はないとの報告が過去にあるが,本研究においても睡眠時EMG活動に関して性差は認めなかった.現在,SBの病因が多因子性であるとの仮説が提唱される傾向にあり,その1つとして遺伝子がリスク要因であるとの報告がある.今回の結果でも相加的遺伝効果が42%と,遺伝子がSBの発現に影響を及ぼしている可能性があることが示唆された.睡眠時筋活動の測定と同時に,様々な性格,気質に関わる質問票に対する回答も得ているため,今後より詳細な分析を行いたい.現時点において、予定していた被験者を対象としたデータ収集はほぼ予定通り進んでおり、平成24年度にも引き続き協力が得られる被験者を確保しているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度には、引き続き被験者からのデータ収集作業を進め、同時にRおよびOpenMxを用いて、遺伝効果、共有環境効果、不共有環境効果に関する共分散解析を行うことを予定している。平成22年度に開始した双生児被験者のリクルート作業は、東日本大震災等の影響で、東北地方や関東地方の被験者を収集することが困難であったが、今後当該地域の状況を十分に配慮した上で、追加要請を行うことを予定している。
褐色脂肪機能を活性化する新規栄養素としてのテトラヒドロビオプテリンの役割の解明

褐色脂肪組織(BAT)は、熱産生の増大を介しエネルギーおよび糖代謝を制御する臓器として注目されている。テトラヒドロビオプテリン(BH4)は、チロシン水酸化酵素(TH)や一酸化窒素合成酵素(NOS)の酵素反応に必須の共因子であり、ノルアドレナリン(NA)やNOといったBATの制御因子の産生に関与している。研究代表者らはBH4産生量の減少が確認されているhph-1 mutantマウスの解析を行い、BH4の欠乏が熱産生能の低下をはじめとするBATの機能障害を誘発し、肥満の助長、インスリン抵抗性ならびに耐糖能異常の発症に関与することを明らかにした。一連の研究成果より、BH4はNAならびにNOに協奏的に作用し、BAT機能の活性化を介して全身の糖・エネルギー代謝を制御することが示唆された。BH4は肥満症および糖尿病の治療に寄与する新たな栄養素としての可能性が考えられる。29年度が最終年度であるため、記入しない。テトラヒドロビオプテリン(BH4)は、生体内においてチロシン水酸化酵素ならびに一酸化窒素合成酵素(NOS)等の必須の共因子として働く。今回我々は、BH4合成律速酵素の発現が減損し、BH4産生量の減少が確認されているhph-1 mutantマウスを用いて、BH4がBATならびに全身のエネルギー・糖代謝制御機構に与える影響について検討を行った。hph-1 mutantマウスおよびバックグラウンドマウスに通常食または高脂肪食負荷を行った結果、通常食飼育下では両マウスの体重に差異はみられなかったが、高脂肪食負荷によりhph-1 mutantマウスでは体重ならびに脂肪量の顕著な増加が観察された。hph-1 mutantマウスでは深部体温の低下が観察され、エネルギー消費量測定の結果、食事誘発性熱産生の低下を示唆する所見が得られた。hph-1 mutantマウスはBATにおける熱産生関連遺伝子発現の低下がみられ、BATの機能障害が示された。またhph-1 mutantマウスは、耐糖能異常ならびにインスリン抵抗性を呈していた。BH4による直接的なBAT制御機構を検討するために、マウスより単離した褐色脂肪細胞を培養し、BH4を曝露したところ、UCP1等の遺伝子発現ならびにNO産生量の増大を認めた。本条件下において、ミトコンドリア機能を反映する酸素消費速度(OCR)を評価すると、BH4の曝露によりOCRの上昇が観察された。本年度の研究結果より、BH4の欠乏がBATの機能障害を誘発し、肥満の進展、インスリン抵抗性ならびに耐糖能異常の発症に関与することが示唆された。BH4は肥満症および糖尿病の治療標的となる新たな栄養素としての可能性が考えられる。BH4が褐色脂肪機能ならびに全身のエネルギー・糖代謝に及ぼす影響を多面的に評価することが出来た。加えて、BH4の直接作用について、単離褐色脂肪細胞を用いた酸素消費速度の測定により生理的に証明することができた。研究は順調に進んでおり、モデル動物や単離褐色脂肪細胞を用いることにより、BH4による褐色脂肪脂肪機能ならびに全身の代謝制御機構について更なる検討を行う。
持続可能な土地利用のための農林地土壌の生物多様性指標

土壌の劣化を引き起こさない農林業における土地利用について,生物多様性とそれがもたらす機能について解析した.森林施業において多様性と土壌構造の変化は少なく,林齢とともに粒度の細かい土壌粒子とミクロ団粒が表層に増えた.農地の耕起は,生物多様性と,団粒に大きな負の影響を与え,不耕起・草生栽培では短期間で土壌が変化し,炭素隔離が観測された.生物が作り出す土壌団粒が土壌の機能を評価する重要な指標である.土壌の劣化を引き起こさない農林業における土地利用について,生物多様性とそれがもたらす機能について解析した.森林施業において多様性と土壌構造の変化は少なく,林齢とともに粒度の細かい土壌粒子とミクロ団粒が表層に増えた.農地の耕起は,生物多様性と,団粒に大きな負の影響を与え,不耕起・草生栽培では短期間で土壌が変化し,炭素隔離が観測された.生物が作り出す土壌団粒が土壌の機能を評価する重要な指標である.土壌には多様な生物が生息し、一次生産や物質循環の維持に大きく寄与しているが、土地利用を行うに当たってこのような生態系サービスは評価されてこなかった。本研究では、耕地と森林土壌において、持続可能な土地利用の指標にできる生物多様性の評価を行うことを目的とした。まず、耕地の調査では、茨城大学農学部附属阿見農場において、不耕起実験圃場を新たに設定し、耕起の有無とカバークロップ(草生)の有無の2要因実験を開始した。森林の調査では、茨城県北茨城市の伐採・造林後の年数が異なるスギ人工林で土壌構造とミミズ群集を調べた。さらに、島根県雲南市の火入れ焼き畑造林地でも造林からの年数が異なる森林を選び、土壌構造と土壌の理化学性を調べた。また、土壌構造の破壊が植物の成長に与える影響について、モデル栽培実験を行った。採取した土壌の解析のために、備品として島根大学に粒度分析計を導入した。本装置の使用法を検討し、新たに構成鉱物の粒度組成だけでなく、生物によって形成された耐水性団粒の粒度組成を測定する方法を開発した。森林土壌の団粒は、農地に比べて伐採や火入れによる変化が少ないことがわかった。土壌の団粒化は、透水性と保水性を両立させるだけでなく、炭素を土壌に貯留し、メタン酸化を促進することが知られている。本年度の成果から、土地利用と生物作用によって維持されている土壌の団粒構造を定量的に評価する手法を整理することができた。土壌には多様な生物が生息し、一次生産や物質循環の維持に大きく寄与しているが、これまで土地利用を行うに当たって土壌が提供するこれらの生態系サービスは評価されてこなかった。まず、耕地の調査では、茨城大学農学部附属阿見農場において、不耕起実験圃場を新たに設定し、耕起の有無とカバークロップ(草生)の有無の2要因実験を2009年から開始した。森林の調査では、茨城県常陸太田市の伐採・造林後の年数が異なるスギ人工林で土壌構造とミミズ群集を調べた。また、土壌構造の破壌が植物の成長に与える影響について、モデル栽培実験を行った。耕起や伐採、火入れといった撹乱で土壌構造が変化するが、不耕起化や森林では植生の回復により、土壌構造が回復していた。耕地と森林で土壌の指標として耐水性土壌団粒を統一的に評価し、ミミズが団粒形成に寄与しており、そのことが土壌炭素量の増加をもたらしていることを明らかにできた。さらに土壌構造の変化は、微生物や小型節足動物の活動を規定していた。本年度の成果から、土地利用と生物作用によって維持されている土壌の団粒構造と生態系機能とを定量的に評価する手法を整理することができた。土壌に生息する多様な生物がもつ、一次生産や物質循環の維持に大きく寄与している生態系サービスが土地利用との関係でどのように変化するかを知るために、持続可能な土地利用の指標の開発を行った。耕地め調査では、横浜国立大学と茨城大学農学部附属阿見農場において、不耕起実験圃場を新たに設定し、耕起の有無と施肥(横浜)カバークロップ(草生)の有無(阿見)のそれぞれ2要因実験を行った。農地と森林という土地利用において、耕起や伐採、火入れといった撹乱で土壌構造が変化するが、農地の不耕起化や、森林植生の回復により、土壌構造が回復していた。土壌構造の変化は、土壌微生物や小型節足動物の活動を規定しており、二酸化炭素やメタンの土壌からのフラックスに影響していた。土壌の生物多様性指標としては、生物相そのものではなく、生物起源の耐水性団粒を指標とすることが妥当であると結論した。
細胞膜受容体ノックアウトマウスを用いた生理活性リゾリン脂質の生理機能の解析

S1P2ホモ欠損マウスの遺伝的背景をC57BL/6Nに近づけていった結果、3週齢から5週齢にかけて自発的散発的なてんかん発作が観察され、おそらくその結果としての35%のホモ欠損マウスの個体死が観察された。8週齢以降まで生き残るホモ欠損マウスにおいては、4週齢以降に顕著な成長遅延が観察されたが、これはてんかん発作が観察され始める時期と一致する。この時期の神経系の正常な発達にS1P2が関与していると考えられる。したがって8週齢以降まで生き残るS1P2ホモ欠損マウスも、おそらくは死に至らずともその時期にてんかん発作や神経細胞の異常興奮を示しており、それにより蓄積されたストレスの影響による成長遅延が起こると考えられる。マイクロアレイ法、Taqman PCR法、免疫染色法により、頻発する神経異常興奮による神経細胞死を示唆するAP-1転写因子遺伝子群(c-fos, fosb, junb)の発現減少や、それに付随するGliosisを反映するGFAPの発現増大が、大脳皮質あるいは海馬で検出された。これら遺伝子の発現変化は、マウスてんかん誘導モデルとして汎用されているカイニン酸によるてんかん発症後にも観察されるものである。観察したS1P2ホモ欠損マウスの大脳皮質・海馬における遺伝子発現の変化は、脳内の大きな可塑的な変化といえる。今回調べた範囲では、S1P2ホモ欠損マウスに運動協調性、学習能力などの行動に異常は見られなかった。しかしながら、S1P受容体作働薬の臨床応用への期待が高まっている今、S1P2受容体の機能欠損がてんかん発症や神経興奮などの作用を起こしうることは重篤な副作用につながる可能性を示唆する点で極めて重要であり、今後さらに詳細な行動解析を続け、てんかん発症メカニズムを探る。スフィンゴシン1リン酸(S1P)は、単純な構造を持つ生理活性リゾホスホリン脂質であるが、ほとんどすべての細胞・臓器・組織に対して強力かつ多彩な作用(細胞増殖・分化・細胞死・形態変化・遊走・浸潤など)を示し、各種疾患・病態に関与することが知られている。その生理作用は細胞膜に存在するG蛋白質共役型受容体を介するが、現在までに哺乳動物において互いに相同的な5種類のS1P高親和性受容体(S1P_<1-5>)の存在が明らかとなっている。S1P受容体の一つS1P_2受容体の遺伝子欠損マウスは、米国MacLennanらのグループと我々のグループにより互いに独立して作製・解析・発表された。MacLennanらはS1P_2受容体欠損マウスに神経細胞の異常興奮とてんかん発作を確認した。我々が作製したS1P_2受容体欠損マウスにはこれらのはっきりとした徴候を確認できなかったが、最近我々もS1P_2欠損マウスの遺伝的背景をC57BL/6Nへと純化させていく過程でてんかん発作を観察した。S1P_2欠損マウスの脳神経系の異常を調べる目的で、今回S1P_2欠損マウスの大脳・海馬における遺伝子発現をマイクロアレイにより解析した。11週齢から15週齢までのS1P_2欠損マウス(♂3匹♀3匹)とコントロールである野生型マウス(♂5匹♀5匹)から大脳皮質と海馬を単離し、それぞれからトータルRNAを調製した。アフィメトリックス社のGene Chipを用いて、発現する遺伝子を解析した。約6,000種類のマウス完全長既知遺伝子から、すべてのサンプルにおいて有効なシグナルが得られた(DetectionがPresent)プローブセットのうち、S1P_2欠損マウス群と対照野生型マウス群において発現差のある遺伝子を探索した。その結果、S1P_2欠損マウスの両組織においては、酸化的ストレスによる誘導されるメタロチオネインや神経細胞死に伴うグリオーシスを反映するGFAP遺伝子の高発現、アルツハイマー病で発現が下がる転写因子GIFの低発現などが観察された。

しかしながら、S1P受容体作働薬の臨床応用への期待が高まっている今、S1P2受容体の機能欠損がてんかん発症や神経興奮などの作用を起こしうることは重篤な副作用につながる可能性を示唆する点で極めて重要であり、今後さらに詳細な行動解析を続け、てんかん発症メカニズムを探る。