hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
超軽量新材料を用いた合成構造における機械接合部の力学特性と経年特性の解明

3次元有限要素解析,(3)締め付け後,時間経過した接合部引張載荷実験である。各項目について,(1)繊維強化樹脂材と鋼ガセットプレートとを用いた接合部に対して座金径・厚さを変数とした長期ボルト軸力モニタリングを行い,座金やボルト張力が長期のボルト張力変化に及ぼす影響を定性的に把握することができた。また,座金厚さやボルト張力を変数とした張力低下を定量的に評価する手法を提案した。(2)材料間の接触面を考慮した非線形3次元有限要素解析を行い,接合部周辺の応力性状を把握し,解析より得られる応力と実験により得られたボルト張力から,張力の低下傾向と応力との値を比較した。のように達成しており,順調に進展している。(3)締め付け後,時間経過した接合部引張載荷実験については平成27年度に実施する予定であり,これにより経年変化を考慮した繊維強化樹脂材の摩擦接合設計法に繋げられると考えている。本年度の予定であった大断面の繊維強化樹脂の調達がうまくいかず,最終年度の課題とする。これまで接合部の要素試験および解析を通して進めてきたが,実際の建築構造物を念頭に,平面トラス構造物の設計・試作・試験を進め,設計基礎データの有効性を確認する。合成構造(1)繊維強化樹脂材と鋼ガセットプレートとを用いた接合部の長期ボルト軸力モニタリングについては,現在10mm未満の板厚についてのみ分析しているが,大断面構造部材を想定して肉厚の大きい場合についての材料の調達を進め,分析を行う予定である。また,その結果とボルト張力の経時変化の予測実験式との対応を確認する。ただし,課題として大断面の繊維強化樹脂材料は入手が困難であることから,貼り合わせることで肉厚を増加させる方法,引抜材ではなく接触厚法(ハンドレイアップ法等の人の手による成形)等で製作することで対応する。併せて,(2)繊維強化樹脂材と鋼ガセットプレートとを用いた接合部の非線形3次元有限要素解析についても各種板厚,繊維強化樹脂の物性値を変数としたパラメトリックスタディを進める。(3)締め付け後,時間経過した接合部引張載荷実験については,本年度実施し,滑り係数に経時変化について考察する。
バラ科果樹におけるソルビトールの果実品質決定メカニズムの解明

スクロースとともにソルビトールを転流糖として用いるバラ科果樹には、一般的な植物と異なる、特有の糖による遺伝子発現制御機構が存在することが示唆された。また、ソルビトールの合成能が抑制されたリンゴの形質転換体の葉を材料に行ったマイクロアレイによる網羅的解析から、ソルビトールにより発現が調節される遺伝子群が同定され、バラ科果樹におけるソルビトールの役割を理解する上での新たな手掛かりが得られた。本年度は、バラ科果樹の転流糖の生合成調節機構の解明するために、ソース器官である葉における、光合成最終産物の合成の各キー酵素の糖による遺伝子発現制御について解析を行った。バラ科果樹であるビワの葉を切り取り、その葉柄を様々な濃度のソルビトール、スクロース及びポリエチレングリコール水溶液につけて、二日間、連続光の下、20°Cでインキュベートした。葉よりmRNAを抽出し、ソルビトール合成のキー酵素であるソルビトール-6-リン酸脱水素酵素(S6PDH)、スクロース合成のキー酵素であるスクロースリン酸合成酵素(SPS)及びデンプン合成のキー酵素であるADPグルコースピロホスホリラーゼ(ADPGPPase)のラージサブユニットの遺伝子発現をリアルタイムPCRで調べた。その結果、S6PDHはスクロースあるいは浸透圧により発現が正に制御されることが明らかとなった。また、ソルビトールにより負に制御される傾向が示されたことから、浸透圧により制御される場合にはソルビトールは浸透圧物質として関与しない可能性が示唆された。SPSはソルビトール、スクロースより発現が負に制御されたが、スクロースによる制御の方がより顕著であったことから、スクロースは直接的に、ソルビトールは間接的に関与していることが考えられた。ADPGPPaseは、糖により発現が正に制御される遺伝子と考えられているが、今回はいずれの処理によっても負に制御された。以上のことから、スクロースとともにソルビトールを転流糖として用いるバラ科果樹には、一般的な植物と異なる、特有の、糖による遺伝子発現制御機構が存在することが示唆された。
EML4-ALK陽性肺がんの病態解明

我々は2007年に肺がんの新規原因遺伝子EML4-ALKを発見したが、本遺伝子はinv(2)(p21p23)と言う染色体転座の結果EML4遺伝子とALK遺伝子とが融合したものである。ALKは本来受容体型チロシンキナーゼをコードするが、染色体転座によってその酵素活性領域が微小管会合タンパクEML4のアミノ末端側と融合したタンパクが産生され、恒常的に活性化されたチロシンキナーゼとして肺がんを導く。既にEML4-ALK陽性肺がんに対するALK酵素活性阻害剤の臨床試験が始まっており、その著明な臨床効果が報告された。今後のALK阻害剤の普及に際し、EML4-ALK陽性肺がんを正確かつ感度良く検出する診断技術の開発が重要になる。本研究計画においてはEML4-ALKcDNAの融合点を検出するマルチプレックスRT-PCR法が優れたEML4-ALK陽性肺がんの分子診断法となる事を確認した。EML4-ALK陽性肺がんの早期発見法の実用化ならびに実際の同遺伝子の頻度を確認することを目標に、全国の共同研究機関からなる大規模臨床試験ネットワーク「ALK肺がん研究会」を設立した。本ネットワークを通じて全国から集まる肺がん臨床検体をスクリーニングするプロジェクトを開始し、喀痰、胸水、気管支洗浄液、生検組織(肺や転移リンパ節など)、手術切除組織など既に500例を超える検体を収集した。これらの検体からそれぞれRNAを純化してcDNAを合成後、EML4-ALK cDNAの全バリアントの検出が可能なmultiplex RT-PCR法を用いて検査した結果、数十例に及ぶ陽性症例を検出することに成功した。いずれの陽性例もすべて病理組織型は腺がんでEGFR遺伝子変異を認めておらず、EGFR遺伝子変異陽性患者に効果が高いとされているイレッサ(R)やタルセバ(R)による治療の適応とならない肺がんの新たなサブグループとなることが中間解析ではあるが確認されている。我が国におけるEML4-ALK陽性肺がん治療の臨床試験も現実のものとなり、正確な同肺がんの分子診断および臨床病理学的特徴の解明はさらに重要になると考えられる。我々が発見したEML4-ALK融合型がん遺伝子はEML4 cDNAのエキソン13がALK cDNAのエキソン20に融合したものであったが、ALKのエキソン20に論理的にin-frameで融合しうるEML4のエキソンには13だけでなく2、6、18、20、21が存在する。そこでこれらのエキソンでALKに融合した新たなEML4-ALKバリアントcDNAも検出可能なように、EML4遺伝子のエクソン1、3、13、20上にそれぞれforward primerを設計した。また我々はALKの別の融合型がん遺伝子KIF5B-ALKも発見したが、上記と同様にKIF5Bのエクソン2、11、17、24それぞれにも別の4種類のforwardprimerを設計し、これら計8種類のprimerとALKのエクソン20上に設置したreverse primerとを混和したmultiplex RT-PCR法による検出プロトコールを開発した。さらに本法を用いて多数の肺がん検体(喀痰+生検標本)からRNAを取り出してPCRを行った。実際の解析は、我々のボランティア診断活動「ALK肺がん研究会:ALK Lung Cancer Study Group (ALCAS)」において、上記RT-PCR法を用いて前向き診断を行った。これらの活動を通して数十例のEML4-ALK陽性例を検出し、そのうち15名が韓国ソウル大学で行われたALK阻害剤(crizotinib)による第一相臨床試験に参加することができた。なお我々が検出したEML4-ALKには新規バリアントが存在しただけでなく、本ラインin-frameに融合しないエキソンからでもALKエキソン20の内部にスプライシングが飛ぶ形で最終的にin-frameの癒合キナーゼが産生される異型バリアントも2種類含まれていた。以上よりマルチプレックスRT-PCR法はEML4-ALK/KIF5B-ALKを感度・精度良く検出可能な分子診断法であると言える。
急性心筋梗塞の初療としての血栓溶解法の評価に耐える実験動物モデルの確立

ヒトの急性心筋梗塞の発症に類似した病態を動物モデルに再現する事を試みた。血栓溶解剤の治療効果を評価する為の基本的条件を明らかにする為血栓性冠閉塞モデルを開発し組み替え組織プラスミノ-ゲンアクティベ-タ-(rt-PA)の効果を検討した。(1)ミニ豚モデル:ゲッチンケン種ミニ豚をコレステロ-ルとコ-ル酸を含む半合成飼料で飼育し高コレステロ-ル血症を作製した。冠動脈の内膜を機械的に剥離した後、X線を照射することによって動脈硬化促進させ、且つ血管壁の反応性を強めた。このモデルにセロトニンを少量(110μg/kg)冠動脈内に注入すると高度の冠攣縮が生じた。急速に75%以上の攣縮を誘発すると壁内出血が生じ、内腔の狭窄が亢進し、長時間塞縮を持続すると心筋梗塞が発生した。壁内出血と血管壁の微小血管の構築との関係を明らかにする為、顕微X線撮影装置を導入した。(2)遺伝性高脂血症家兎(WHHL)モデル;1124か月令のWHHL家兎を麻酔下に冠動脈造影を行った所、右冠動脈と左冠動脈主幹部に局在性の病変を高頻度に認めた。本研究ではさらにX線を照射して冠動脈硬化の促進を試みた。(3)銅コイルによる血栓性冠閉塞モデル:麻酔非開胸下にカ-テル操作を作なって銅コイルを左冠動脈前下行枝に留置した。20分以内に血栓性の冠閉塞が生じ、心電図ST上昇と左室壁運動低下が生じた。成功率は82例で90%であった。冠閉塞完成後、90分と180分にrt-PAを静注した所20分前後で再疎通が生じ、24時間後の検索で梗塞サイズの縮小を認めた。90分群をバル-ンカテ-テルで冠閉塞を行った後再潅流した群と対比した所、梗塞サイズ縮小、壁運動の改善いずれもrt-PA群で顕著であった。以上の成績から、ヒトの急性心筋梗塞に類似したモデルの作製が可能であり、rt-PAによる再潅流は機械的再潅流以上に有効であった。目的:急性心筋梗塞症の発症早期に実施される血栓溶解療法の効果(梗塞巣の縮小、心機能の回復、延命効果)を適確に評価するにはヒトの病態に類似した実験動物モデルの確立が必要である。本研究では、(1)冠動脈攣縮と冠動脈閉塞あるいは心筋壊死との関連性、(2)遺伝性高脂血症家兎における心筋壊死巣の成立機転、(3)閉塞性血栓を溶解した場合の壊死巣縮小、心機能改善機序の解明を試みた。結果:(1)ゲッチンゲン種ミニ豚にコレステロールとコール酸を含む合成飼料で飼育し、冠動脈内腹をバルーンカテーテルで剥離した後、34か月目にX線を照射した。本法によって有意の器質的冠動脈硬化病変部に強い攣縮を誘発する事が出来た。セロトニンによる攣縮を繰り返すと粥腫内に出血が発生し、器質的冠狭窄が進展増悪し急性冠閉塞を生じ突然死した。

強い冠動脈攣縮を生じた血管の内皮細胞には立ち上がり現象等の不可逆性変化、白血球の粘着が認められ、血栓形成との関連性が示唆された。(2)遺伝性高脂血症家兎の心筋虚血の発生を超小型テレメーターでモニターした。心臓を摘出後軟X線装置を用いて冠動脈の器質的狭窄度を評価した。75%以上の限局性狭窄は主に右冠動脈に認められた。心筋壊死巣と主幹部病変との関連性は乏しかった。(3)コッパーコイルを犬冠動脈前下行枝に留置し血栓形成による冠動脈閉塞を行った。tーPA(組織プラスミノーゲンアクチベータ)は90分、180分の閉塞性血栓を溶解し、心筋壊死巣を有意に縮小し、心機能を改善した。考察:ヒトにおける急性心筋梗塞は冠動脈攣縮、器質的冠狭窄の進展、末梢循環障害が複雑に関与した病態と考えられる。本研究では冠動脈の器質的狭窄が急激に進展する動物モデルを作製し得た。別に犬に冠動脈血栓を作りtーPAの血栓溶解能を評価することが出来た。1.血栓性冠動脈閉塞モデルの開発と再潅流効果判定法の確立麻酔非開胸下にカテ-テルに操作を行い、銅コイルを左冠動脈前下行枝第1対角枝を分枝した末梢に挿入した。心電図ST変化と冠動脈造影でモニタ-した所、20分以内に冠動脈閉塞が生じた。成功率は82例中90%であった。冠閉塞を確認した後、90分(23頭)と180分(25頭)後に組み替え組織プラスミノ-ゲン(rt-PA)を静注した所、20分以内に再潅流を認めた。生理食塩水注入群では24時間も再疎通を認めなかった。TTCで梗塞サイズを測定し、冠動脈の解剖学的分布から評価したrisk areaで標準化した所、生食群63±3%、90分群10±3%、180分群±7%とrt-PA群で有意の縮小を認めた。バル-ンカテ-テルで90分間冠閉塞を行い機械的に再潅流し24時間に梗塞サイズを評価した群では27±5%であった。従ってrt-PAは機械的再潅流以上に梗塞サイズ縮小効果が大きいことが明らかになった。rt-PAの効果は壁運動の改善にも認められた。2.急性心筋梗塞発症モデルの開発ゲッチンゲン種ミニ豚をコレステロ-ルとコ-ル酸を含む半合成飼料で飼育した後、冠動脈の内膜を機械的に2回剥離した。次いで1.2か月後にX線を同部に限局性照射した所、冠動脈硬化病変を進行させることが出来た。この様な冠動脈は少量のセロトニンを冠動脈内に注入する事によって高度の冠攣縮を誘発する事が出来た。急速に75%以上の攣縮を誘発すると高頻度に冠攣縮部血管壁内に出血が生じた。これらの中には冠動脈造影や組織学的検索で明らかに内腔狭窄度が進展した例も認めた。長時間攣縮を持続すると、心電図上Q波が出現したり、壁運動低下が一週間以上低下していた事から心筋梗塞の発生が示唆された。このような動物モデルの開発によって、ヒトの心筋梗塞に類似した病態を再現できたので、急性心筋梗塞の治療法の確立は可能と思われる。
動的エルゴディックダイバータに対する有限ベータ効果の影響

最近のトカマク実験では、ストカスティックな磁力線が周辺局在化モード(ELM)によるダイバータ板への熱負荷を低減することが注目されている。ストカスティックな磁力線構造は動的エルゴディックダイバータと呼ばれる外部摂動磁場コイルにより生成される。高ベータステラレータ物理の観点からは、3次元効果が非常に重要である。なぜなら、有限ベータ効果による圧力駆動摂動磁場がグローバル効果によりプラズマ周辺領域で磁力線構造のさらなるストカスティック化をもたらすからである。しかし、トカマクでは真空近似と呼ばれる2次元磁場に3次元真空摂動磁場を重畳した磁場配位がモデル磁場として使われている。このことは、モデル磁場にプラズマ応答が含まれていないことを意味しており、プラズマ応答の効果をモデル磁場に含めることとそのインパクトを考察することは緊急かつ重要な課題である。本研究では、プラズマ応答がストカスティックな磁力線構造に与える影響を考察する第1段階としてトカマクの完全3次元MHD平衡解析を行い、プラズマの平衡応答がストカスティックな磁力線構造に与える影響を考察した。その結果、有限ベータ効果が磁力線構造を変化させ、さらなるストカスティック化をもたらすことがわかった。このことは真空近似では表れない効果であり、3次元MHDモデリングの重要性を示した。トカマク実験においてEdge Localize mode(ELM)の発生により大規模な粒子束の吐き出しが起こった場合、ダイバータ部分に致命的な損傷をもたらすと予想されている。ELMによる大規模な粒子吐き出しを制御する目的で、動的エルゴディックダイバータ(DED)が提案され、中型・大型トカマク装置で実験がおこなわれている。しかし、DEDの理論的考察や実験データの解釈には、2次元MHD平衡計算コードから得られた有限ベータ平衡磁場に外部ヘリカルコイルが作る真空摂動磁場を重畳した「真空近似」のもとで、乱れた磁力線領域の輸送解析が行われている。従って、これらの研究では、有限ベータ効果がプラズマを変形させ、エルゴディシティの大きさそのものが変わることは想定されていない。本研究では3次元自由境界MHD平衡計算コードHINT2コードを用いてトカマクDED配位の3次元自由境界MHD平衡を考察し、3次元効果のDEDに与える影響とその熱・粒子輸送への影響を考察する。本年度の具体的成果は以下の通りである。1.本年度は3次元MHD平衡計算コードHINT2を改良し、現実的なコイル配位をもつトカマクプラズマを考察できるように改良した。その際、計算時間を短縮するために3次元MHD平衡計算の初期推量として収束した2次元MHD平衡を使用できるよう2次元MHD平衡計算コードとHINT2の接続プログラムを製作した。2.ドイツ・TEXTORトカマク装置を対象に完全3次元MHD平衡解析を行った。その結果、これまで動的エルゴディックダイバータの解析に用いられていた真空近似(2次元MHD平衡+3次元真空摂動磁場)と異なる結果が得られた。3.国際熱核融合実験炉ITERを模擬したプラズマの完全3次元MHD平衡解析を行い、次年度に実際のITERプラズマを解析するための検討を行った。1.昨年度に引き続き、ドイツ・TEXTORトカマク装置を対象に完全3次元MHD平衡解析を行った。共鳴摂動磁場によりストカスティックな振る舞いを示す磁力線構造を統計解析し、これまで用いられてきた真空近似と異なる結果になることを明らかにし、有限ベータ効果の影響を定量的に明らかにした。2. EU・JETトカマクの完全3次元MHD平衡解析を行い、上記、TEXTOR装置と同様の解析を行った。その結果、ダイバータ領域のセパラトリックス付近に磁力線構造の分岐が現れることがわかった。これは、実験結果が示唆していたことをシミュレーションにより再現したことになる。3.国際熱核融合実験炉ITERの完全3次元MHD平衡解析を行い、トロイダルリップルに対する有限ベータ効果の影響を考察した。次年度にモデルRMPコイルの外部摂動磁場を重畳する準備が完了した。本年度は、RMPが3次元MHD平衡に与える影響の考察として、磁気島を含むトカマクの3次元MHD平衡を考察した。トカマクの3次元MHD平衡において"

natural island"が出現する理由の一つとして、コイルの設置誤差等による誤差磁場が考えられる。また、実際の実験装置では加熱装置や計測装置が磁性体によって保護されるために、計測器や加熱装置が誤差磁場の発生源となり得る可能性が存在する。本年度は、フェライト鋼などの磁性体がITERの中に挿入された場合の3次元MHD平衡解析を行った。ITER実験では、後半にテストブランケットモジュール(TBM)が設置されることになっている。TBMはフェライト鋼で保護されている。TBMは合計3機、設置される計画であるが、トーラス方向に偏って設置されるため、全体として大きなn=1成分の摂動磁場をプラズマに重畳する可能性が示唆されている。これまで、入れ子の磁気面を仮定した3次元MHD平衡解析により、n=1の誤差磁場成分がプラズマ応答で変化する可能性が示唆されているが、δB/B_010^<-4>程度の誤差磁場が磁気島構造を出現させる可能性については、ほとんど考察されていない。そこで、本研究では入れ子の磁気面を仮定しない3次元MHD平衡計算コードHINT2を用いてITERの3次元MHD平衡解析を行った。その結果、TBMが作る誤差磁場成分がプラズマ内部に磁気島を出現させることがわかった。また、真空近似と3次元MHD平衡を比較するとプラズマ応答によりセパラトリックス付近の磁力線構造がストカスティックになることがわかった。今後は、得られた3次元MHD平衡を元に非線形MHD不安定性解析を行う予定である。本年度は、RMPが3次元MHD平衡に与える影響の考察として、ストカスティックな磁力線構造を含むトカマクの3次元MHD平衡を考察した。トカマクの3次元MHD平衡においてストカスティックな磁力線構造がが出現する理由の一つとして、外部コイルの設置による共鳴磁場摂動の印可が考えられる。本年度は、真空容器何設置された外部コイルにより駆動されるRMP磁場が重畳されたDIII-Dトカマクの3次元田D平衡解析を行った。DIII-DR実験では、周辺局在化モード(ELM)の抑制のため、Iコイルと呼ばれる真空容器内コイルが設置されている。Iコイルは合計12個、装置上部、中部、下部と設置され、全体として大きなn=3成分の摂動磁場をプラズマに重畳することができる。これまで、入れ子の磁気面を仮定した3次元田D平衡解析により、n=3のRMP磁場成分がプラズマ応答で変化する可能性が示唆されているが、δB/BO10-4程度の誤差磁場が磁気島構造を出現させる可能性については、ほとんど考察されていない。そこで、本研究では入れ子の磁気面を仮定しない3次元MHD平衡計算コードHINT2を用いてDIII-Dトカマクの3次元NHD平衡解析を行った。その結果、RMP磁場が作る共鳴磁場摂動がプラズマ内部にストカスティックな磁力線構造を出現させることがわかった。
慢性ストレスによる、脳血管性認知症発症促進機構の解析

脳血管性認知症は、アルツハイマー型認知症とならぶ老年性認知症の二大原因の一つであるが、原因や症状が多岐にわたるため、その発症機序の解析はあまり行われていない。本課題では、この脳血管性認知症の発症促進要因の一つとして、環境要因、特に現代社会において人が必ず直面するストレスに注目し、家族性脳血管性認知症(CADASIL)型の変異遺伝子を発現するマウスを用いて、ストレスとCADASIL発症との関連を解析した。本課題では、家族性脳血管性認知症(CADASIL)型の変異Notch3を発現するマウス(KI)を用いて、変異遺伝子と環境要因の相互作用による疾患発症促進という新たな視点から、脳血管性認知症の予防・治療に応用可能な情報を得ることを目的とする。抗Notch3抗体を作製し、イムノブロット法により、CADASIL患者同様Notch3蛋白の蓄積がKI脳にみられるか調べた。その結果、Notch3蛋白は野生型(WT)、KIともに発達に伴って減少したが、その量はKIで常にWTよりも多く、2年齢ではKIでのみ検出された。マイクロアレイ解析の結果、Notch3のmRNA発現量には変化がみられなかったことから、KIマウスではNotch3蛋白の分解が抑制され、血管に蓄積する可能性が示された(日本認知症学会発表)。組織学的解析では、2年齢のKI脳において、α-アクチン染色性の低下やコラーゲンIV分子の増加といったCADASIL様病理像が観察されたが、WTと比較してあまり劇的な変化はみられなかった。現在、CADASIL様の症状が環境要因によって若年から誘導・促進されるか検証するため、6ヶ月齢のKIとWTマウスに慢性不連続性拘束ストレス(Kunimoto et al. 2010)を負荷し、同様の解析を行っている。今後、質量分析装置を用いて発現タンパク質の網羅的な比較解析を行い、上記の結果とあわせ、CADASIL発症過程に関わる新規候補分子の探索を行う。CADASIL様の特徴を若年から呈する動物モデルを構築し、その経年変化を詳細に調べることで、CADASILの発症機序、およびストレスが脳血管性認知症発症に及ぼす影響を解明する。脳血管性認知症は原因や症状が多岐にわたるため、その発症機序の解析はあまり行われていない。本課題では、家族性脳血管性認知症(CADASIL)型の変異Notch3を発現するマウス(KI)を用いて、ストレスとCADASIL発症との関連を解析した。脳由来タンパク質の生化学的解析では、2年齢KIマウスにおいてNotch3タンパク質の蓄積が認められた。また、マイクロアレイ解析や質量分析から、Notch3遺伝子変異により発現変化のみられる遺伝子およびタンパク質を抽出し、脳および脳由来精製血管を用いて発現部位、および発現量の検証を行ったところ、KIマウスでWTと異なるパターンを示すタンパク質の候補が数種見いだされた。CADASIL患者では、脳組織以外に、末梢の動脈においてもNotch3タンパクの蓄積をはじめとする組織学的変化がみられること、皮膚生検が診断に用いられていることなどから、尾動脈の組織学的解析も行った。その結果、2年齢KIマウスにおいて、Notch3タンパク質の蓄積、血管平滑筋細胞(VSMC)マーカータンパク質染色性の低下などのCADASIL様特徴にくわえ、VSMC層の構造変化が観察された。さらに、若年齢のマウスを用いてストレスの影響を調べたところ、これらの尾動脈における変化は、慢性ストレスを負荷したKIマウスにおいて促進されることが見いだされた。慢性ストレスを負荷したKIマウスでは、若年でも老齢KIでみられたCADASIL様特徴を示したことから、変異遺伝子と環境要因の相互作用により脳血管性認知症の発症が促進される可能性が示唆された。今回構築したCADASILモデルマウスを、病理学的、生化学的、分子生物学的な手法によりさらに詳細に解析することで、CADASILの発症機序の解明のみならず、大脳細動脈病変や皮質下性認知症などの脳血管障害の病態解明に貢献できると思われる。
イタリア・スロベニア・クロアチア間国境地域の「国際協力と共生」可能性の質的調査

本研究は次の4つの研究課題を設定した。それらに対応させて当該年度の研究成果を述べる。1.【課題A実証研究:国境の歴史認識をめぐる団体・地方自治体間のネットワーク分析】「イタリア回想の記念日」は、その創設から10年が経過した。現地調査では、スロベニア・コペルで行われた「記念日」に関する歴史と記憶の書評会に参加した。スロベニア系の識者や研究者が主催した会では、イタリア国内の公共空間(道や広場、モニュメント)への国境の歴史認識の制度化が、イタリア国民の物語に適合するような解釈に回収されることへの強い危惧が存在することがわかった。2.【課題B質的調査:「国際協力と共生」を目指す団体の「私たち」の考察】トリエステの市民文化団体「チルコロ・イストリア」が企画運営する書評会に参加し、発表を行った。国境の歴史認識をめぐって、当事者には3つの異なった過去への向き合い方ー「終わらない過去」「鎮められた過去」「終わらせない過去」ーが現われている。国際協力と共生を目指す「私たち」を構築するためには、1「終わらない過去」をいかに「鎮められた過去」として受容できるか(痛苦を体験した個々人の内なる和解)、2いかに「終わらせない過去」の恣意性を明らかにし、「鎮められた過去」へとつくりかえていけるか(痛苦を体験した集団間の和解)が重要になるという知見を得た。3.【課題C理論研究:地域の社会運動に関する諸概念の検討】同研究の成果である『“境界領域"のフィールドワーク』(新原道信編、2014年)のリフレクションを行った。現代社会の「物理的限界」である惑星地球と身体を組み込んで社会理論を構築していく重要性が確認された。4.【課題D調査関係:〈調査する側〉と〈される側〉の関係のリフレクション】コペル沿海大学(スロベニア)の現代史家J.ピルイェビッチ教授の招聘により、成果報告を行い、現地との知見交換を行った。26年度が最終年度であるため、記入しない。1、【課題A】実証研究:国境の歴史認識をめぐる団体・地方自治体間のネットワーク分析2013年度イタリア「回想の記念日」を対象にした現地調査を行った。トリエステのイタリア人ディアスポラ団体が故国喪失を伴う離散の出来事をどう記憶し表現するかを参与観察と聞き取り調査により調べた。その結果、愛国主義的な団体が主導する公式行事が今年も実施され、犠牲ディアスポラを前面に押し出した動員がなされていた。しかしながら、こうした団体には属さない当事者個人からは、公的な記憶の仕方とは異なる証言が得られた。2、【課題B】質的調査:「国際協力と共生」を目指す団体の集合的アイデンティティ形成の考察トリエステの市民団体「チルコロ・イストリア文化会」に国境を越えた文化活動に関する実態調査を行った。その結果、2013年7月のクロアチアのEU加盟に向けて、イストリア半島の地域発展に関する共同研究、EUとの越境地域協力の事業が進んでいることがわかった。また多様なメンバーからなる当団体の「われわれ意識」がどう構築されるのかをA・メルッチの集合的アイデンティティから分析した。その結果、異なるネイションの間に平等な社会関係が一時的でも自然発生するような"共にあること"(コムニタスcomunitas)の創造が「共生」の"共"の内実としてあり得ることが示唆された。3、【課題C】理論研究:地域の社会運動に関する諸概念の検討当研究対象の間国境地域における社会運動について、「境界領域」をキーコンセプトに整理を試みた。4、【課題D】調査関係:<調査する側>と<される側>の関係のリフレクション現地のジャーナリストおよび政治学者と<外部者が見た国境の現実>と<生活者>のそれの知見の交換を行った。国外調査の文書・写真記録をすべてフィールドノーツにまとめ今後の考察の基礎資料とした。1.【課題A】実証研究:国境の歴史認識をめぐる団体・地方自治体間のネットワーク分析イタリア「回想の記念日」の法制化から10周年となる本年は、ほぼすべてのイストリア系ディアスポラ団体が「記念日」の企画に関与していた。「歴史認識」をめぐる各国の緊張は、少なくともローカルのレベルでは緩和されていた。この変化が何に由来するのかが今後の課題となった。2.【課題B】質的調査:「国際協力と共生」を目指す団体の「私たち」の考察クロアチアの炭坑の町ラビンにて、調査団体の「チルコロ・イストリア」文化会が現地の自治体と協働企画する「炭鉱事故74周年追悼会」に参加した。毎年行われてきた追悼会は、犠牲者への弔いだけでなく、〈これからこの町に生まれ来るものたち〉への継承を意図した活動を展開していた。炭坑の遺構を部分的に保存しながら現在の住民に必要な図書館へとつくりかえることに象徴される「メタモルフォーゼ」の力は、"境界領域"に暮らす人々の構想力を示していることがわかった。3.【課題C】理論研究:地域の社会運動に関する諸概念の検討共著『"境界領域"のフィールドワーク』にて成果発表した。

国境で区切られた領域単位を横断する前近代の「歴史的地域」を、地域固有の知覚・歴史・伝統に根ざしながら再創造していく一端をフィールドワークから描いた。「歴史的地域」を表象する際に、「国民」の分類単位を前提にした社会的構築が行われる場合、国境を越える地域の運動の制約になることも指摘した。4.【課題D】調査関係:〈調査する側〉と〈される側〉の関係のリフレクショントリエステの政治学者でチルコロ・イストリア文化会の協力者であるビアジョ・マニーノは、今年刊行した単著("Sono andato via")のなかで、申請者との対話を第5章に所収した。本研究は次の4つの研究課題を設定した。それらに対応させて当該年度の研究成果を述べる。1.【課題A実証研究:国境の歴史認識をめぐる団体・地方自治体間のネットワーク分析】「イタリア回想の記念日」は、その創設から10年が経過した。現地調査では、スロベニア・コペルで行われた「記念日」に関する歴史と記憶の書評会に参加した。スロベニア系の識者や研究者が主催した会では、イタリア国内の公共空間(道や広場、モニュメント)への国境の歴史認識の制度化が、イタリア国民の物語に適合するような解釈に回収されることへの強い危惧が存在することがわかった。2.【課題B質的調査:「国際協力と共生」を目指す団体の「私たち」の考察】トリエステの市民文化団体「チルコロ・イストリア」が企画運営する書評会に参加し、発表を行った。国境の歴史認識をめぐって、当事者には3つの異なった過去への向き合い方ー「終わらない過去」「鎮められた過去」「終わらせない過去」ーが現われている。国際協力と共生を目指す「私たち」を構築するためには、1「終わらない過去」をいかに「鎮められた過去」として受容できるか(痛苦を体験した個々人の内なる和解)、2いかに「終わらせない過去」の恣意性を明らかにし、「鎮められた過去」へとつくりかえていけるか(痛苦を体験した集団間の和解)が重要になるという知見を得た。3.【課題C理論研究:地域の社会運動に関する諸概念の検討】同研究の成果である『“境界領域"のフィールドワーク』(新原道信編、2014年)のリフレクションを行った。現代社会の「物理的限界」である惑星地球と身体を組み込んで社会理論を構築していく重要性が確認された。4.【課題D調査関係:〈調査する側〉と〈される側〉の関係のリフレクション】コペル沿海大学(スロベニア)の現代史家J.ピルイェビッチ教授の招聘により、成果報告を行い、現地との知見交換を行った。26年度が最終年度であるため、記入しない。先述の【課題A】について、ディアスポラ経験を団体活動に関与しない普通の人から聞き取ることができた。【課題B】について、「共生」の"共"の内実をフィールド・ワークの質的データに即して明らかにした。【課題C】について、理論のキーコンセプトである「境界領域」を実証に即して深める必要がある。【課題D】について、随時現地の調査協力者とメール等で連絡を取り合い、現地調査時には円滑に互いの知見を交換することができた。
インクジェットによるセルロース・キチンナノクリスタルのデジタル成形と機能創出

セルロースやキチンのナノクリスタル(NC)や誘導体のインクジェット印刷法を構築し,新たな機能を創出することを目的とした。キチン系NCマイクロパターンとセルロース誘導体液晶性微細造形体を作製し,それぞれ細胞培養足場材と光学機能材料としての適用性を評価した。前者では,多糖分解酵素で細胞剥離が可能なマイクロパターニング足場材を創出することに成功した。この成果を基にバイオメディカル応用に関するさらなる基盤研究の立案に発展した。緒言:本研究では,細胞親和性を有するキチンのナノクリスタル(ChNC,10 nm幅・100 nm長の棒状)が一般的なインク顔料と同等サイズであることに着目して,ChNCから成るμmオーダーの微細構造を構築(印刷)し,細胞培養足場材としての適用性を評価することを目的とした。足場材のマイクロパターニングにより,細胞の増殖・伸展方向や形態を制御できることが期待される。一方,細胞種によって成長に適切な足場材の表面形状が異なることも知られており,随意に表面形状を設計できるインクジェット技術は,巨視的な細胞の成長挙動の制御にも有用と考えられる。今年度は,主に研究用インクジェット装置でChNCの微細なドットとラインをパターニングし,それらの形状を定量的に評価した。方法:キチンを塩酸で加水分解して0.96 wt%のChNC水分散液を得た。これをインクジェット卓上実験装置Labojet-1000((株)マイクロジェット製)で種々の基板上に吐出・パターニングし,ドットとラインを形成させた。ChNC吐出物の表面粗さと形状を,白色干渉計(WLI)によって測定した。結果と考察:本研究で使用した口径80 μmのインクジェットノズルから吐出される液滴1発分の量は500550 pL程度で,直径≧170 μmのドットならびに幅≧150 μmのラインを形成できた。ドット・ラインはともに厚みが凹状で,縁が中央部よりそれぞれ740および540 nm程度高かった。これはコーヒーステイン現象によるものである。縁を除いた中央部の算術平均粗さ(Ra)はドットで57 nm,ラインで11 nmと小さかったため,本質的には滑らかな面が形成されたといえる。したがって,これらのChNC吐出物は,滑らかな表面に接着しやすい線維芽細胞などにとって有効な足場材となり得ることが期待される。【緒言】本研究では,主にキチンのナノクリスタル(ChNC,10 nm幅・100 nm長の棒状)が一般的なインク顔料と同等サイズであることに着目し,インクジェットによる微細成形を検討している。得られる成形物の細胞培養足場材としての適用性を評価するとともに,足場材のマイクロパターニングにより細胞の増殖・伸展方向や形態を制御すること等を目指している。前年度に,ChNCのインクジェット条件を確立した。キチンの生体親和性は脱アセチル化度(DD)に依存するため,今年度は新たにChNC脱アセチル化物(dChNC)を調製してインクジェットで成形し,DDの細胞接着性への影響を主に調査した。【実験方法】キチンを塩酸で加水分解してChNC水分散液を得た。このChNC水分散液を濃アルカリ中150°Cで処理して脱アセチル化した。得られたdChNCを各種機器分析に供した。各水分散液をインクジェット卓上実験装置Labojet-1000((株)マイクロジェット製)からセロハンフィルム上に吐出・パターニングした。得られた微細成形体にマウス線維芽細胞L929を播種し,細胞接着性試験を行った。【結果と考察】dChNCは,原子間力顕微鏡観察によりChNCと同様なナノクリスタル状を保っていること,広角X線回折ではキトサン結晶のプロファイルを有することがわかった。赤外分光によりDDを求めたところ60 %程度であった。dChNCのインクジェット成形は,ChNCと同様に良好に行えた。細胞試験の結果,ChNC上には細胞が接着しなかったのに対し,dChNCのμmオーダーのラインやドット状成形物の上に選択的に細胞が接着している様子が観られた。すなわち,選択的に酵素で分解可能なオール構造多糖(dChNCとセロハン)で構成されるマイクロパターン細胞足場材の構築に成功した。当初の計画通り,キチン系ナノクリスタルのインクジェットによる微細成形が可能となり,得られるマイクロパターン上に選択的に細胞接着することを見出したばかりでなく,ベース基材としてセロハンを用いることにより,足場材の全てが酵素を用いて高度に選択的に分解し得るという新たなコンセプトを考案するに至ったため。【はじめに】前年度までに,キチンナノクリスタル(CNC)水分散液を調製し,インクジェット装置で吐出することでマイクロパターニング細胞培養足場材の調製に成功している。さらに,CNCを脱アセチル化することによってマウス線維芽細胞の接着性向上も達成した。そこで,今年度は,キチンを脱アセチル化したキトサンから調製された市販のキトサンナノファイバー(CtsNF)をインクとして吐出することで,より簡便なマイクロパターニング足場材の調製を目指した。また,取り扱う細胞を拡張して,細胞の生理学的機能の発現誘導の調査にも着手している。【実験方法】CtsNF水分散液((株)スギノマシン製,BiNFi-sキトサン)を希釈し,0.1 wt%-CtsNF水分散液を得た。

調製した水分散液をそのままインクとして,インクジェット卓上実験装置Labojet-1000((株)マイクロジェット製)で種々の形状に微細成形した。成形物は白色干渉計(WLI)と電界放出形走査電子顕微鏡(FE-SEM)を用いて表面形状を観察した。マウス線維芽細胞L929などを微細成形物上に播種し,蛍光顕微鏡観察を行った。【結果】インクジェットでの吐出回数を変えて,種々の厚さのドット状微細成形物を調製し,細胞接着挙動を調査した。その結果,厚い成形体にはminオーダーで迅速に細胞が接着・伸展する様子が再現性良く観察された。別途,ヒト肝癌由来細胞株HepG2やマウスマクロファージ細胞株の微細成形物上への播種も試み,生理学的機能の発現誘導を調査している。セルロースやキチンのナノクリスタル(NC)や誘導体のインクジェット印刷法を構築し,新たな機能を創出することを目的とした。キチン系NCマイクロパターンとセルロース誘導体液晶性微細造形体を作製し,それぞれ細胞培養足場材と光学機能材料としての適用性を評価した。前者では,多糖分解酵素で細胞剥離が可能なマイクロパターニング足場材を創出することに成功した。この成果を基にバイオメディカル応用に関するさらなる基盤研究の立案に発展した。当初の計画通り,ナノクリスタルを研究用インクジェット装置を用いて種々の形状にパターニングすることができたため。細胞足場材としての適用性評価を,パターニングの精度向上と接着細胞の生化学的評価の両面から行う。新たにバイオナノファイバーの微細成形に着手し,足場材以外の機能を発現する材料の構築も図る。28年度が最終年度であるため、記入しない。バイオマス材料化学キチンの脱アセチル化度を種々変化させた試料をインクとし,それをインクジェット成形して,細胞親和性を評価する。セルロース系分子のインクジェット成形も試み,光学機能材料への展開も視野に入れたい。細胞培養関連試薬の購入量が想定を下回ったため。主に物品購入費として有効に使用する。
プラズマ酸化障壁を用いたTHz帯電磁波検出用窒化物超伝導接合の開発

本研究では、窒化物超伝導体トンネル接合の障壁層として窒化物との反応性が低いことが予想されるHfに着目、Hf酸化膜を用いた電磁波検出器用窒化物超伝導トンネル接合の開発を目的としている。29年度は、前年度に得られたHf成膜条件の知見から、早い速度で成膜したHf膜の熱酸化HfOxトンネル障壁層を用い、検出器応用上重要となる接合の準粒子トンネル特性の改善、特にギャップ電圧近傍におけるサブギャップリーク電流の低減を目指した。まず、接合下部NbTiN電極の結晶性及び表面粗さの影響を調べるため、Si基板からMgO単結晶基板上に変更して接合を作製した。下部電極層の結晶性・表面粗さの効果は、以前実施した科研費研究のNbNトンネル接合の開発時の知見によるものである。この基板変更により、下部NbTiN層は、(111)(200)配向膜から(200)配向エピタキシャル膜へとかわるとともに表面平坦性が大幅に改善し、自乗平均荒さが0.2nmとなるものが得られたものの、接合特性に大きな違いが生じないことが明らかとなった。また、HfOx膜の他にこれまでに十分実績のあるAl窒化(AlNx)膜をトンネル障壁層に用いても、同様な結果であることがわかった。これらの結果から、ギャップ電圧近傍のサブギャップリーク電流の増大は、トンネル障壁層に起因するものではなく、超伝導電極内の超伝導特性に起因するものと考えられた。以上の結果を踏まえ、MgO基板上に成膜したエピタキシャルNbN薄膜を用いて、HfOxトンネル障壁層接合を作製し、特性評価を行った。その結果、接合品質パラメータが21以上であり、ギャップ電圧近傍までサブギャップリーク電流の非常に少ない接合の作製に成功した。また、この特性はAlNxトンネル障壁を用いた接合とほぼ同等であり、トンネル障壁層として比較的良好なものをHfOxで実現できることを明らかにした。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、窒化物超伝導体を用いたトンネル接合の障壁層として窒化物との反応性が低いことが予想されるハフニウム(Hf)に着目し、Hf酸化膜を用いた窒化物超伝導トンネル接合検出器の開発を行うことを目的としている。平成28年度は、これまでに構築した接合作製プロセスに基づき、窒化物超伝導体NbTiNを用いたHfOx障壁を持つトンネル接合を作製した。まずは、ラジカル酸化によるHfOx障壁を用いた。4.2Kにおける電流ー電圧特性の評価の結果、サブギャップ電圧領域内の1mV程度以下の小さな電圧領域のみサブギャップリーク電流を小さく抑えることができたが、1mV以上ではリーク電流が急激に増大する特性となった。また、4mV程度のギャップ電圧近傍においても、電圧遷移幅が非常に大きくなった。一方、従来の熱酸化によるHfOx障壁を用いた接合では、サブギャップ領域において、リーク電流はラジカル酸化障壁に比べて大きいものの、電圧遷移幅は小さかった。そこで、熱酸化HfOx障壁を持つ接合を中心として、サブギャップリーク電流の低減を試みた。着目したのは、障壁層となるHf薄膜の性質である。成膜条件の制御・調整により、4Kでの抵抗率を従来の薄膜の2/3程度に小さくしたものを用いて接合を作製、評価した。その結果、最も薄いものでHf膜厚2nmまで、サブギャップリーク電流の大きな低減が見られ、接合特性の改善に成功した。これは、原子間力顕微鏡による表面平坦性の評価から、高抵抗率Hf膜は下部NbTiN電極表面の凹凸を平坦にするように被覆するのに対し、低抵抗率Hf膜は下部NbTiN電極表面を良好に被覆し、膜厚の均一なHfOx障壁層が形成されたことによるものと思われる。一方、ギャップ電圧における立上りの部分に丸みが残っており、この原因について29年度に調査する予定である。抵抗率の小さなHf層を用いることにより、熱酸化HfOxトンネル障壁によるサブギャップリーク電流の小さな超伝導トンネル接合の作製に成功したため。

これらの結果から、ギャップ電圧近傍のサブギャップリーク電流の増大は、トンネル障壁層に起因するものではなく、超伝導電極内の超伝導特性に起因するものと考えられた。以上の結果を踏まえ、MgO基板上に成膜したエピタキシャルNbN薄膜を用いて、HfOxトンネル障壁層接合を作製し、特性評価を行った。その結果、接合品質パラメータが21以上であり、ギャップ電圧近傍までサブギャップリーク電流の非常に少ない接合の作製に成功した。また、この特性はAlNxトンネル障壁を用いた接合とほぼ同等であり、トンネル障壁層として比較的良好なものをHfOxで実現できることを明らかにした。ギャップ電圧における立上りの部分の改善に向け、トンネル障壁層及び超伝導電極層に着目して検討を行う。ギャップ電圧近傍の特性はトンネル障壁層近傍の超伝導電極内エネルギーギャップの分布を反映していると考えられる。これは、NbTiN/Hf界面の乱れや原子の拡散によるものや、あるいは超伝導層そのものの特性に分布が生じている可能性を示唆している。そこで、下部超伝導層にエピタキシャル膜を用いたり、NbNなどの窒化物超伝導体を用いたりして効果を調べる。以上のことから、サブギャップリーク電流が小さく角型性の優れた準粒子トンネル特性を持つ接合を実現する。また、本トンネル接合の検出器への応用を検討する。29年度が最終年度であるため、記入しない。
メニンによるエストロゲンレセプター転写調節機構の解明

メニンは多発性内分泌腺腫症1型の責任遺伝子men1の遺伝子産物で、副腎腫瘍や副甲状腺腫瘍を構成する腺腫細胞の核内に存在する。メニンはproto-oncogeneであるJun Dや転写因子NF-kappa Bに結合し、その機能を阻害することが報告されている。一方、乳癌細胞の増殖や蛋白合成に強く関与しているエストロゲンレセプター(ER)はその転写機構が各種核内蛋白により制御されている。今回我々は、核内蛋白であるメニンが乳癌細胞におけるERの転写活性を調節する可能性を検討した。【方法】(1)乳癌細胞におけるメニンの発現解析:摘出乳癌組織5例におけるmen1-mRNAの発現をRT-PCR法で、またエストロゲン依存性乳癌細胞株MCF-7におけるメニン蛋白の発現をwestern blot法で解析した。(2)Reporter gene assay:MCF-7にERE-lucおよびwild type(wt)-men1あるいはmutant(mu)-men1を遺伝子導入し、ルシフェラーゼ活性を測定した。(3)GST-pull downassay:GSTとER-alphaとの融合蛋白を作成し、グルタチオンが結合したレジンに^<35>S-メチオニンでラベルしたメニンを添加後10分間反応させ、レジンを洗浄後煮沸、上清をSDS-PAGEにて展開後、autoradiographyを施行した。【結果】(1)RT-PCT法では5例の乳癌組織においてメニンmRNAの発現を認めた。またwestern blot法ではMCF-7各種亜株においてメニン蛋白の発現を認めた。(2)Reporter gene assayでは、wt-men1導入株はmu-men1導入株より3倍以上強いルシフェラーゼ活性を示した。またその活性はTamoxifenで阻害されなかった。(3)GST-pull downassayではメニンとERが物理的に結合する可能性が示唆された。【総括】メニンはNF-kappa Bに対する機能とは逆に、ERに結合してその転写活性を促進することが示唆された。今後、メニンのエストロゲン転写活性促進機構の詳細、細胞周期との関連、men1遺伝子の変異を明らかにすると共に、乳癌ホルモン療法症例におけるメニン発現とTamoxifenの効果との関連を解析する臨床試験を準備中である。乳がんのホルモン治療では抗エストロゲンレセプター阻害剤タモキシフェンの投与が主流であるが、エストロゲン合成そのものを阻害する薬剤も開発、販売され、既に多くの臨床試験で有用性が証明されている。しかし骨粗鬆症などの副作用もあり、従来からあるタモキシフェンとの使い分けが問題として挙げられるが、2005年国際乳がん術後補助療法カンファレンスでもその使い分けに関しては結論が得られず、タモキシフェンが依然標準治療という結論となった。現状ではエストロゲンレセプター陽性乳がん患者にタモキシフェンを投与する場合5年間投与が推奨されているが、それでも再発患者数はタモキシフェン非投与患者の53%までしか改善しない。もしエストロゲンレセプター陽性患者におけるタモキシフェン効果予知因子が発見され、タモキシフェン無効例が手術直後に抽出できれば、エストロゲン合成阻害剤を選択することで治療効果の向上が期待できる。メニンは多発性内分泌腺腫症I型の責任遺伝子men1の遺伝子産物で、核内に存在し、内分泌腺の腫瘍化に深く関係している。乳がん細胞におけるメニンの発現を検討したところ約半数の乳がん摘出標本でエストロゲンレセプターと同様に核に存在した。そこで乳がん細胞におけるメニンとエストロゲンレセプターとの機能上の関連をまずreporter gene assayで調べたところ、メニンを強制発現させたmen1遺伝子導入乳がん細胞においてはエストロゲンレセプターの転写活性は約5倍増強しており、さらにタモキシフェンによる転写抑制機能は阻害された。またGST-pull down assayではメニンはエストロゲンレセプターと結合しており、mammalian two-hybrid assayではその結合部位はエストロエゲンやタモキシフェンと同じくAF2ドメインであった。以上よりメニンはエストロゲンのエストロゲンレセプターとの結合を強固にすることでタモキシフェンの効果を阻害する可能性があり、タモキシフェン効果予知因子となりうることが示唆された。(3)GST-pull downassay:GSTとER-alphaとの融合蛋白を作成し、グルタチオンが結合したレジンに^<35>S-メチオニンでラベルしたメニンを添加後10分間反応させ、レジンを洗浄後

煮沸、上清をSDS-PAGEにて展開後、autoradiographyを施行した。【結果】(1)RT-PCT法では5例の乳癌組織においてメニンmRNAの発現を認めた。またwestern blot法ではMCF-7各種亜株においてメニン蛋白の発現を認めた。(2)Reporter gene assayでは、wt-men1導入株はmu-men1導入株より3倍以上強いルシフェラーゼ活性を示した。またその活性はTamoxifenで阻害されなかった。(3)GST-pull downassayではメニンとERが物理的に結合する可能性が示唆された。【総括】メニンはNF-kappa Bに対する機能とは逆に、ERに結合してその転写活性を促進することが示唆された。今後、メニンのエストロゲン転写活性促進機構の詳細、細胞周期との関連、men1遺伝子の変異を明らかにすると共に、乳癌ホルモン療法症例におけるメニン発現とTamoxifenの効果との関連を解析する臨床試験を準備中である。
ＷＯ３膜を用いた車載型ＮＯ２センサの実用化に関する研究

これまでの研究結果を踏まえ、25年度はまずWO_3薄膜センサの長期安定性とNO_2センサ応答の安定性について検討を行った。次に、純度と結晶性に優れるキュービック状単斜晶WO_3と六角形状六方晶WO_3粒子を合成し、FE-SEM、XRD、TEM、BET測定によりキャラクタリゼーションを行った。また、単斜晶と六方晶WO_3粒子用いた薄膜センサのNO_2応答特性について考察し、WO_3結晶構造の解析とガス吸着機構について検討した。25年度には以下に示す研究成果が得られた。1.自動車排ガスの湿度条件を考慮したセンサの長期安定性とNO_2測定におけるセンサ感度の安定性について検討した。湿潤雰囲気でNO_2に対するWO_3センサの応答が低下するが、一定の水分濃度における応答の安定性を保っていることが分かった。2.沈殿法と水熱合成の反応条件を調整することによって、純度と結晶性に優れるキュービック状と六角形状WO_3の合成に成功した。キュービック状(単斜晶)と六角形状(六方晶)WO_3粒子用いた薄膜センサのNO_2応答特性を調査し、WO_3の粒子形態及び結晶系の違いとNO_2応答特性の関連性について検討した。3. XPS測定及び^1H_2MAS NMR測定より、単斜晶と六方晶WO_3の結晶構造の違いを明らかにした。異なる結晶構造のWO_3粒子のガス吸着機構について理論的検討を行った。(抄録なし)種々のWO_3結晶を用いて車載型NO_2ガスセンサの実用化研究を行っている。今年度は、プロジェクトの初年度として、WO_3膜NO_2センサの作製条件の確立を目的とし、以下に示す二点を中心に研究を実施した。1.WO_3検知膜の作製条件の確立粒子形態の異なるWO_3(球状、ディスク状、キューボイド状、六角形状)結晶粉体の調製条件を確立した。また、マイクロインジェクターを用いてWO_3薄膜を形成するため、各種WO_3粒子の懸濁液の調製条件、成膜法、膜厚の制御手法について検討を行った。2.WO_3マイクロセンサの試作と基本性能の評価小型で十分な安定性・測定精度が得られるため、マイクロギャップ櫛型Au電極を作製し、WO_3マイクロセンサの電極基板とした。上記1で得られた各種WO_3粉体の懸濁液を用いてWO_3膜マイクロセンサの試作を行った。試作したWO_3マイクロセンサは、センサ特性評価装置にセットし、各種WO_3粉体と被検ガスNO_2に対するセンサ感度、応答特性の関連について検討した。23年度において以下に示す研究成果が得られた。1.四種のWO_3結晶を合成する際の反応温度、水熱処理温度・時間、界面活性剤濃度、PH値などの調製条件を確立し、WO_3粒子の生成条件を明らかにした。2.各種WO_3結晶の製膜法を確立し、均質なWO_3薄膜の形成に成功した。3.マイクロギャップ櫛型電極基板を作製し、膜厚1.53.0μmの各種WO_3薄膜センサを試作した。NO_2ガスに対して各種WO_3結晶とセンサ感度、応答特性の関連について評価を行った。最も優れたセンサ応答特性を示したキューボイドWO_3センサの基本特性を解明し、NO_2の連続測定の可能性について検証を行った。23年度の研究結果を踏まえ、24年度はキューボイドWO_3結晶を主に採用し、薄膜センサの車載用実用化研究において以下に示す研究内容を実施した。1.キューボイドWO_3薄膜センサの作製条件の最適化・キューボイドWO_3懸濁液の分散度・検知膜の焼成温度によるセンサ応答特性への影響2.WO_3センサの最適膜厚と排気ガス測定に適した動作温度の検討・WO_3の結晶形態とセンサ膜厚によるNO_2応答感度、応答特性の変化・キューボイドWO_3薄膜センサ応答特性の温度依存性と実用性能検討3.車載応用における干渉ガスによるNO_2センサ応答への影響24年度には以下に示す研究成果が得られた。1.キューボイドWO_3検知膜を作製する際に使用する懸濁液の分散度、及び形成した検知膜の焼成温度によるセンサ応答特性の影響について検討した結果、センサ膜厚を再現性よく制御することができ、高感度WO_3薄膜センサの作製条件を最適化した。2.各種WO_3センサにおける膜厚によるセンサ応答特性の変化について検証した結果、最も優れたセンサ応答特性を示すWO_3センサの粒子形態、膜厚を見出した。また、自動車排気ガス中のNO_2濃度測定に適したセンサの動作温度と実用性能について検討し、排気ガス計測におけるWO_3センサの適切な動作条件を確立した。3.NO_2センサの車載設置を検討したうえ、試験用排ガスの発生装置の構築を行い、混合ガス成分によるNO_2応答の干渉影響の検証実験を行った。排出ガスに含まれる様々なガス成分によるNO_2センサへの干渉影響度について検証した結果、キューボイドWO_3センサが優れたNO_2検出選択性を示した。