hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
禁煙によるヒト好中球遺伝子発現の変化

本研究の目的は、喫煙者が長期にわたって禁煙を行った際の経時的変化を、歯肉微小血管・歯肉溝滲出液の循環機能及び末梢血液中の好中球から発現する免疫系サイトカイン・歯周組織破壊酵素の遺伝子発現量を評価し禁煙がどのように歯周組織や全身に影響を与えるかについて調べることである。新潟大学歯学部学生で1日10本以上、5年以上の喫煙歴を有し禁煙を希望し十分なインフォームドコンセントが得られた全身疾患、歯周炎のないボランティア16名(男性22-39歳)を実験被験者とし、同条件を満たす非喫煙者11名(男性7名、女性4名、23-27歳)を対照群被験者として選定した。実験群被験者は8週間の禁煙プログラムに参加し、その間呼気中の一酸化炭素(CO)、上顎左側中切歯における歯肉血流(GBF)、歯肉溝滲出液(GCF)量を測定した。測定時期は、禁煙直前(0日)及び禁煙後1,3,5日目、1、2、4、8週目の計8回とした。その結果、16人の喫煙者中11人が8週間の禁煙を成し遂げた。禁煙1日後のCO濃度はベースラインに比べ有意に低かった。また、ニコチン、コチニン濃度は2回目の測定時に著しく低下した。喫煙者のGBF率はベースラインと比べて禁煙3日後に有意に上昇した。一方、GCF量はベースラインと比較して禁煙5日後に有意に増加し、禁煙後2週までは非喫煙者のGCF量よりも有意に少なかった。更に、喫煙者と非喫煙者の炎症性サイトカイン(IL-1β、IL-8、TNF-α)や血管内皮増殖因子、MMP-8のmRNA発現の変化を調べた結果、8週間の禁煙により喫煙者においてはいずれのmRNAレベルも有意に低く、禁煙8週後にMMP-8のmRNA発現のみが有意に回復することを報告した。本研究の結果は、歯肉微小循環が禁煙後早い段階で健常レベルまで回復し、それにより歯肉組織の代謝やリモデリングが活性化され、歯周組織の健康が促進され得ることを示すと共に、喫煙が好中球の遺伝子発現機能をも傷害しており、炎症性サイトカインにおけるその回復には少なくとも8週間以上かかることを示唆された。本研究は禁煙による歯肉微小循環能・好中球遺伝子発現の変化について調べた国際的にも初めての報告であり、以下の論文に掲載され、歯周炎と喫煙の関係に極めて貴重なエビデンスをもたらしたといえる。本研究の目的は、喫煙者が長期に渡って禁煙を行った際の経時的変化を、歯肉微小血管系の循環機能や末梢血中の好中球から発現する免疫系サイトカインのmRNAレベルで評価し、更にRAP-PCR法を用いて禁煙時の好中球において特異的に発現量が変化する関連遺伝子の特定を行うことである。今年度は、まず1日10本以上、5年以上の喫煙歴を有し全身性疾患および歯周炎がない16名のボランティア(男性、2239歳)を実験群被験者として、上記条件を満たす非喫煙者11名(男性7名・女性4名、2327歳)を対照群被験者として選定した。実験群被験者は8週間の禁煙プログラムに参加し、その間、呼気中一酸化炭素(CO)、上顎左側中切歯における歯肉血流(GBF)、歯肉溝滲出液(GCF)量を測定した。測定時期は禁煙直前(0日)および禁煙後1、3、5日目、1週、2週、4週、8週目の計8回とした。その結果、被験者16人中11人が8週間の禁煙を継続し、いずれも1日で呼気中CO濃度が有意に減少した。また、歯肉血流は禁煙前と比較して3日後に有意に増加した。GCF量は禁煙前と比較して5日後に有意に増加し、2週以降は非喫煙者とほとんど変わらなかった。本実験の結果は、禁煙により歯肉組織の代謝が活性化され、それにより免疫防御機能が回復しうることを示唆し、禁煙による歯肉微小循環の変化と歯周組織改善への効果が示された。上記内容については平成14年度秋期日本歯周病学会にて発表済みであり、現在は国際専門雑誌へ投稿中である。本研究の目的は、喫煙者が長期に渡って禁煙を行った際の経時的変化を、歯肉微小血管系の循環機能や末梢血中の好中球から発現する免疫系サイトカインのmRNAレベルで評価することである。これまでに我々は、1日10本以上、5年以上の喫煙歴を有し全身性疾患および歯周炎がない16名のボランティアを実験群被験者として、上記疾患と喫煙経験が全く無い非喫煙者11名を対照群被験者として選定し、実験群被験者は8週間の禁煙プログラムに参加した。歯肉溝滲出液量は禁煙前と比較して5日後に有意に増加し、2週以降は非喫煙者とほとんど変わらなかった(J Clin Periodontol, in press)。今年度は、実験群被験者より禁煙直前と禁煙1、4、8週後の計4回にわたって末梢血を採取し、好中球を分離した。

合成ペプチドfMLPによる刺激後、total RNAを抽出・精製し逆転写を行い、その後半定量RT-PCR法により各種mRNA(IL-1β、IL-8、TNF-α、VEGF、MMP-8)の発現量を定量し、比較検討した。コントロールは対照群被験者の好中球とした。その結果、非喫煙者の好中球に比べ喫煙者の好中球ではいずれのmRNAレベルも有意に低かった。本実験の結果は、喫煙(ニコチンやタバコ煙中の有毒な化学物質の刺激)により、好中球の遺伝子発現機能が傷害される可能性を示唆した。上記内容については2003年日本呼吸器学会、同年米国歯周病学会併催日本歯周病学会にて発表済みであり、現在は国際専門雑誌へ投稿中である。本研究の目的は、喫煙者が長期にわたって禁煙を行った際の経時的変化を、歯肉微小血管・歯肉溝滲出液の循環機能及び末梢血液中の好中球から発現する免疫系サイトカイン・歯周組織破壊酵素の遺伝子発現量を評価し禁煙がどのように歯周組織や全身に影響を与えるかについて調べることである。新潟大学歯学部学生で1日10本以上、5年以上の喫煙歴を有し禁煙を希望し十分なインフォームドコンセントが得られた全身疾患、歯周炎のないボランティア16名(男性22-39歳)を実験被験者とし、同条件を満たす非喫煙者11名(男性7名、女性4名、23-27歳)を対照群被験者として選定した。実験群被験者は8週間の禁煙プログラムに参加し、その間呼気中の一酸化炭素(CO)、上顎左側中切歯における歯肉血流(GBF)、歯肉溝滲出液(GCF)量を測定した。測定時期は、禁煙直前(0日)及び禁煙後1,3,5日目、1、2、4、8週目の計8回とした。その結果、16人の喫煙者中11人が8週間の禁煙を成し遂げた。禁煙1日後のCO濃度はベースラインに比べ有意に低かった。また、ニコチン、コチニン濃度は2回目の測定時に著しく低下した。喫煙者のGBF率はベースラインと比べて禁煙3日後に有意に上昇した。一方、GCF量はベースラインと比較して禁煙5日後に有意に増加し、禁煙後2週までは非喫煙者のGCF量よりも有意に少なかった。更に、喫煙者と非喫煙者の炎症性サイトカイン(IL-1β、IL-8、TNF-α)や血管内皮増殖因子、MMP-8のmRNA発現の変化を調べた結果、8週間の禁煙により喫煙者においてはいずれのmRNAレベルも有意に低く、禁煙8週後にMMP-8のmRNA発現のみが有意に回復することを報告した。本研究の結果は、歯肉微小循環が禁煙後早い段階で健常レベルまで回復し、それにより歯肉組織の代謝やリモデリングが活性化され、歯周組織の健康が促進され得ることを示すと共に、喫煙が好中球の遺伝子発現機能をも傷害しており、炎症性サイトカインにおけるその回復には少なくとも8週間以上かかることを示唆された。本研究は禁煙による歯肉微小循環能・好中球遺伝子発現の変化について調べた国際的にも初めての報告であり、以下の論文に掲載され、歯周炎と喫煙の関係に極めて貴重なエビデンスをもたらしたといえる。
結晶性分子集合体の選択的反応と構造研究

窒素原子などのヘテロ原子を含むヘテロ環化合物に水素移動に伴う平衡が存在するので、その構造研究は容易で無い。本研究者らは、スペインの研究者との共同研究によってこの問題を新しい手法で解決した。先ず、トリアゾールをホスト化合物と包接させて包接結晶を調整し、そのX線構造解析によって平衡凍結されたトリアゾールの構造研究に成功した。更に、この包接結晶中のトリアゾールのプロトン移動をNMRスペクトルで詳細に研究し、平衡の問題を解明した。更に精密な構造研究を行うため、窒素同位元素(^<15>N)を含むトリアゾールの包接結晶を調整し、その構造研究を行った。この研究によって、トリアゾール環の平衡の問題は完全に解明した。アスパラギン酸エステルの窒素原子が環内に含まれる、つまり、マロンエステルの炭素原子に窒素原子を含む環状化合物が窒素原子で結合しているキラルな化合物は、血中の水素イオン濃度をNMRで測定する場合に重要な化合物である。このキラルなマロン酸エステル誘導体の調整は極めて困難であるが、本研究者らはスペインの研究者と協力して光学分割法を開発した。上記マロン酸誘導体を、酒石酸から誘導したホスト化合物と包接させると、不斉選択的包接化が起こり光学分割が達成された。この分割の能率は極めて高く、その不斉認識能の原因を追究するため包接結晶のX線構造解析を行った。更に興味深いことに、マロン酸エステルに結合する置換基がモルホリル基の場合には不斉認識が溶媒分子によって微妙に制御された。例えば、トルエン分子が1分子包接されて、ホスト:ゲスト:溶媒分子が1:1:1の包接結晶を形成すると(+)-ゲスト分子が1:1の包接されるが、キシレンは包接されず(-)-ゲストとホスト分子が1:1の包接結晶を形成した。つまり、溶媒分子トルエンが存在すると不斉認識が逆転する。本研究者らは新しいホスト化合物の設計、合成に努力してきているが、本研究ではベンゼンやナフタレンなどの芳香環にプロパルギルアルコールが数個結合した新しいホスト化合物を合成し、それらの包接挙動を詳細に研究した。最も興味深いホストは、ベンゼン環に6個のプロパルギルアルコールの結合したホストである。このホストは多種多様の包接形態を示した。多くの場合6分子のゲストを包接したが、5個あるいは4個のゲスト分子を包接することもある。6分子のゲストを包接する場合でも、1個のプロパルギルアルコール部分が1個のゲスト分子を包接するという単純な包接挙動ではないことが判明した。その包接挙動はまさに多種多様であり、ゲストによって異なる。その様子はX線構造解析によって明らかにされた。ナフタレン環には最大8個のプロパルギルアルコールが結合可能であるが、6個しか結合しなかった。立体的要因のためペリ位置には結合しないものと考えられる。合成できた2種類の6置換ホスト、1、2、3、5、6、7-置換及び1、2、3、4、6、7-置換ともペリ位置の置換様式を持たない。又、対称性の良い前者がより優れた包接能を示した。この場合も、包接するゲストのモル数はゲストによって異なる。しかし、エチレンに4個のプロパロギルアルコールの置換したホストは例外なく4個のゲスト分子を包接したので、1個のプロパルギルアルコール部分が1分子のゲストを包接するものと考えられる。この場合にも、キラルなプロパルギルアルコールを置換すると興味深い包接挙動の変化が現れた。例えば、1、2、4、5-位に4個のプロパルギルアルコールが置換したホストには余り優れた包接能が無いが、キラルなプロパルギルアルコールを置換するとその包接能は増大した。キラルなプロパルギルアルコールが置換すると分子の秩序性が増大し、より安定な包接結晶格子を形成し易くなるため包接能が増大するものと考えられる。このことは、ベンゼンに6個のキラルなプロパルギルアルコールが置換したホストについても当てはまる。このホスト分子は合成も容易であり、包接能も高い。これらのキラル多置換ホスト化合物の包接結晶のX線構造解析及び熱力学的測定も南アフリカ連邦の研究者との共同研究で完成している。アンモニウム塩ホストを合成し、これらのホストがフェノール類に対して選択的な包接現象を示し、この現象を利用するとフェノール異性体の分離もできることを明らかにしてきた。

上記マロン酸誘導体を、酒石酸から誘導したホスト化合物と包接させると、不斉選択的包接化が起こり光学分割が達成された。この分割の能率は極めて高く、その不斉認識能の原因を追究するため包接結晶のX線構造解析を行った。更に興味深いことに、マロン酸エステルに結合する置換基がモルホリル基の場合には不斉認識が溶媒分子によって微妙に制御された。例えば、トルエン分子が1分子包接されて、ホスト:ゲスト:溶媒分子が1:1:1の包接結晶を形成すると(+)-ゲスト分子が1:1の包接されるが、キシレンは包接されず(-)-ゲストとホスト分子が1:1の包接結晶を形成した。つまり、溶媒分子トルエンが存在すると不斉認識が逆転する。本研究者らは新しいホスト化合物の設計、合成に努力してきているが、本研究ではベンゼンやナフタレンなどの芳香環にプロパルギルアルコールが数個結合した新しいホスト化合物を合成し、それらの包接挙動を詳細に研究した。最も興味深いホストは、ベンゼン環に6個のプロパルギルアルコールの結合したホストである。このホストは多種多様の包接形態を示した。多くの場合6分子のゲストを包接したが、5個あるいは4個のゲスト分子を包接することもある。6分子のゲストを包接する場合でも、1個のプロパルギルアルコール部分が1個のゲスト分子を包接するという単純な包接挙動ではないことが判明した。その包接挙動はまさに多種多様であり、ゲストによって異なる。その様子はX線構造解析によって明らかにされた。ナフタレン環には最大8個のプロパルギルアルコールが結合可能であるが、6個しか結合しなかった。立体的要因のためペリ位置には結合しないものと考えられる。合成できた2種類の6置換ホスト、1、2、3、5、6、7-置換及び1、2、3、4、6、7-置換ともペリ位置の置換様式を持たない。又、対称性の良い前者がより優れた包接能を示した。この場合も、包接するゲストのモル数はゲストによって異なる。しかし、エチレンに4個のプロパロギルアルコールの置換したホストは例外なく4個のゲスト分子を包接したので、1個のプロパルギルアルコール部分が1分子のゲストを包接するものと考えられる。この場合にも、キラルなプロパルギルアルコールを置換すると興味深い包接挙動の変化が現れた。例えば、1、2、4、5-位に4個のプロパルギルアルコールが置換したホストには余り優れた包接能が無いが、キラルなプロパルギルアルコールを置換するとその包接能は増大した。キラルなプロパルギルアルコールが置換すると分子の秩序性が増大し、より安定な包接結晶格子を形成し易くなるため包接能が増大するものと考えられる。このことは、ベンゼンに6個のキラルなプロパルギルアルコールが置換したホストについても当てはまる。このホスト分子は合成も容易であり、包接能も高い。これらのキラル多置換ホスト化合物の包接結晶のX線構造解析及び熱力学的測定も南アフリカ連邦の研究者との共同研究で完成している。アンモニウム塩ホストを合成し、これらのホストがフェノール類に対して選択的な包接現象を示し、この現象を利用するとフェノール異性体の分離もできることを明らかにしてきた。
発生工学的手法を応用IFN-γおよびIL-6の肝炎における役割の解析

コンカナバリンA(Con A)誘導肝炎は、ヒトウイルス性または自己免疫性肝炎のマウスモデルとして知られている。Con Aを投与するとIFN-γやIL-6をはじめとしてIL-1、IL-2、IL-4といった多くのサイトカインが誘導されるために、一般的な肝炎発症におけるIL-6やIFN-γの詳細な解析は難しい。IFN-γKOマウスを用いて、Con Aにより誘導されたIFN-γがFas-FasLシステムを活性化することによって肝臓細胞のアポトーシスを誘導し肝障害を起こすことがわかった。また、IL-6KOマウスや抗IL-6抗体投与実験により、Con A投与直後に誘導されるIL-6は肝炎に対して抑制的に働くが、Con A投与後後半のIL-6は肝炎を悪化させることもわかった。そこで次に、組織特異的誘導型IFN-γやIL-6過剰発現マウスを作成し、循環器系または肝臓特異的にIFN-γやIL-6を過剰発現させるシステムの開発を重点的におこなった。Con A刺激した脾臓細胞からマウスIFN-γおよびIL-6のcDNAをRT-PCRにより得た。これらのcDNAをテトラサイクリン誘導プロモータの下流に連結したレトロウイルスベクターを構築した。このベクターをエンベロープタンパク質産生細胞PT67細胞に導入し、培養上清中に感染性・非増殖性ウイルス粒子を得た。そして、これら外来遺伝子を持ったレトロウイルスをES細胞に感染させ、低コピーの遺伝子導入を行った。薬剤選別をおこない、これらの外来遺伝子が染色体DNAに組み込まれたESクローンを単離した。現在、これらのESクローンからキメラマウスを作成している。また、Con Aを投与する前にフルクトースキトサンや酸性糖タンパク質を投与すると、肝障害の誘導が抑えられることがわかった。これらの糖/糖タンパク質は、免疫細胞の活性化に関わっていることが知られており、サイトカイン産生と関わっているかどうかを検討している。Con Aにより誘導されたIFN-γがFas-FasLシステムを活性化することによって肝臓細胞のアポトーシスを誘導し肝障害を起こす。このとき、IFN-γがIL-6の発現を誘導することがIFN-γノックアウト(KO)マウスを用いてわかった。ところが、IFN-γKOマウスがCon Aに対し低感受性であったのに対して、IL-6KOマウスは野生型と比べても高感受性であった。この矛盾する結果を考察するために、時期特異的にIL-6レベルを制御できる抗IL-6抗体系を用いて、IL-6の詳細な役割を調べることにした。Con A投与後に抗IL-6抗体を投与すると、一時的に肝障害レベルが抑制された。一方、Con A投与前に抗IL-6抗体でマウスを前処理しておくと、コントロールに比べて肝障害レベルが上昇することがわかった。これらの結果は、Con A投与直後に誘導されるIL-6は肝炎に対して抑制的に働くが、Con A投与後後半のIL-6は肝炎を悪化させると考えられる。また、ノックアウトマウスの実験の限界と同時に抗体実験の有用性を示した。そこで、組織特異的誘導型IFN-γやIL-6過剰発現マウスを作成し、循環器系または肝臓特異的にIFN-γやIL-6を過剰発現させるシステムの開発を行っている。テトラサイクリン誘導プロモータの下流にRT-PCRにより得たマウスIFN-γcDNAを連結したレトロウイルスベクターを構築した。現在、ES細胞のこのベクター系を導入し、誘導剤に対する高感受性クローンの選択を行っている。

また、Con Aを投与する前にフルクトースキトサンや酸性糖タンパク質を投与すると、肝障害の誘導が抑えられることがわかった。これらの糖/糖タンパク質は、免疫細胞の活性化に関わっていることが知られており、サイトカイン産生と関わっているかどうかを検討している。
自己評価動機の顕現化が自己評価過程における他者選択と精神的適応に及ぼす影響

本研究は、自己評価動機の顕現化が、自己に関連した情報の収集行動としての他者選択に及ぼす影響と、その選択の結果として自己にどのような影響が生じるのかを、精神的適応感を指標として検討するものである。本年度は、ある状況下において顕現化する自己評価動機の種類と、実際に選択する他者の属性に、低自尊心者ではズレが生じることについて、マインドセット理論で用いられる考え方を基にして、検討を行った。とりわけ本年度は、マインドセット理論を用いた検討において、低自尊心者が適切に自己評価過程に従事できないことの解明を行った。その結果、低自尊心者は自己評価過程において、長時間の熟慮を行うと、自己を正確に知りたいという自己査定動機と、自分自身の悪い面に目を向けたくないという自己防衛動機が拮抗的に顕現化することが明らかとなった。しかしながら、その際に行う他者選択のパターンは、顕現化した全ての自己評価動機を満たすようなものではなく、自己防衛のバイアスの影響を強く受けた、客観性の乏しい人物の選択を主に行うことが明らかとなった。このことにより、判断の質の低下などの、低自尊心者が日常示す様々な社会的不適応状態を自己評価過程の観点から明らかにする事ができたといえる。これに加えて、日常生活における自己評価過程と他者選択との様相を明らかにするために、看護学校卒業後6年以内の看護師にアンケート調査を行い、学生時代からの対人資源である学校時代の友人との関係性が、卒業後どのよう変化するのかの検討も行った。なお、これらの研究成果は、2002年7月に開催された国際応用心理学会議(於:シンガポール)や2002年11月に開催された日本社会心理学会(於:一橋大学)等の諸学会で発表した。また、学位請求論文の一部として、その内容を広島大学大学院生物圏科学研究科に提出した。
動脈硬化におけるアポEの意義に関する研究

アポEは超低比重リポ蛋白(VLDL),VLDLレムナント(IDL)、カイロミクロンレムナントなどのいわゆるatherogenicリポ蛋白であるTG-richリポ蛋白の主要構成蛋白の1つである。TG-richリポ蛋白およびそのレムナントはアポEあるいはLDL(アポB,E)リセプターを介してマクロファージに取り込まれコレステロールエステル(CE)の蓄積を起こし動脈硬化の進展をもたらす。その際アポEがリガンドとして関与する。糖尿病のTG-richリポ蛋白は1分子あたりのアポEの数が多く、そのため、よりマクロファージに取り込まれやすくatherogenicであることを見出した。糖尿病のTG-richリポ蛋白のそのアポE/アポB比非糖尿病のそれに比べて有意に高値であった。糖尿病のTG-richリポ蛋白のatherogenicityが明らかとなり、糖尿病においてしばしば観察される高TG血症の治療の意義を示唆した。アポE2はリセプターへの親和性が弱くTG-richリポ蛋白が血中に蓄積しIII型高脂血症や高TG血症をもたらし、アポE4はその反対の作用により高LDL血症をもたらす。アポε2,ε4遺伝子頻度は虚血性心疾患において有意に高値であること、アポE2,E4はatherogenicであることを明らかとした。PCR-RFLP法によるアポE genotypingを確立した。高脂血症と関連したアポE mutantを現在検索中である。また、アポE2は血中RLP(remnant-like particles)を増加させ、atherogenicに作用していることも明らかにした。アポE2を有する者はpostprandial lipemiaを起こしやすく、高脂肪食負荷後にTG-richリポ蛋白が蓄積しやすいことも報告した。RLPやTG-richリポ蛋白のヒト単球由来マクロファージに対するCE取り込み能、すなわちそのatherogenicityを検討した結果、糖尿病やアポE2と関連した高脂血症患者のRLPやTG-richリポ蛋白はCE取り込み能が増加している、すなわちatherogenicであることが判明した。トリグリセライドのatherogenicityを示すものである。アポEは超低比重リポ蛋白(VLDL)、VLDLレムナント(IDL)、カイロミクロンレムナントなどのいわゆるatherogenicリポ蛋白であるTG-richリポ蛋白の主要構成蛋白の1つである。(1)糖尿病のTG-richリポ蛋白は1分子あたりのアポEの数が多く、そのため、よりマクロファージに取り込まれやすくatherogenicであることを見出した。糖尿病のTG-richリポ蛋白とそのアポE/アポB比非糖尿病のそれに比べて有意に高値であった。(2)アポE2はリセプターへの親和性が弱くTG-richリポ蛋白が血中に蓄積しIII型高脂血症や高TG血症をもたらし、アポE4はその反対の作用により高LDL血症をもたらす。PCRRFLP法によるアポE genotypingを確立した。

また、アポE2は血中RLP(remnant-like particles)を増加させ、atherogenicに作用していることも明らかにした。アポE2を有する者はpostprandial lipemiaを起こしやすく、高脂肪食負荷後にTG-richリポ蛋白が蓄積しやすいことも報告した。現在RLPや食後TG-richリポ蛋白のマクロファージに対するCE取り込み能、すなわちそのatherogenicityを検討中である。(3)糖尿病ではシアル化アポEが増加し、糖尿病における高TG血症と関連していることを明らかにした。アポEは超低比重リポ蛋白(VLDL)、VLDLレムナント(IDL)、カイロミクロンレムナントなどのいわゆるatherogenicリポ蛋白であるTG-richリポ蛋白の主要構成蛋白の1つである。TG-richリポ蛋白およびそのレムナントはアポEあるいはLDL(アポB,E)リセプターを介してマクロファージに取り込まれコレステロールエステル(CE)の蓄積を起こし動脈硬化の進展をもたらす。その際アポEがリガンドとして関与する。糖尿病のTG-richリポ蛋白は1分子あたりのアポEの数が多く、そのため、よりマクロファージに取り込まれやすくatherogenicであることを見出した。糖尿病のTG-richリポ蛋白のそのアポE/アポB比非糖尿病のそれに比べて有意に高値であった。糖尿病のTG-richリポ蛋白のatherogenicityが明らかとなり、糖尿病においてしばしば観察される高TG血症の治療の意義を示唆した。アポE2はリセプターへの親和性が弱くTG-richリポ蛋白が血中に蓄積しIII型高脂血症や高TG血症をもたらし、アポE4はその反対の作用により高LDL血症をもたらす。アポε2,ε4遺伝子頻度は虚血性心疾患において有意に高値であること、アポE2,E4はatherogenicであることを明らかとした。PCR-RFLP法によるアポE genotypingを確立した。高脂血症と関連したアポE mutantを現在検索中である。RLPやTG-richリポ蛋白のヒト単球由来マクロファージに対するCE取り込み能、すなわちそのatherogenicityを検討した結果、糖尿病やアポE2と関連した高脂血症患者のRLPやTG-richリポ蛋白はCE取り込み能が増加している、すなわちatherogenicであることが判明した。
触覚／嗅覚情報を提示する回想法を用いた音楽療法システムの研究

本研究では,音楽療法において,触覚/嗅覚情報を利用する回想法を取り入れることで,個人でも継続的に使用できるシステムを提案し,日常生活の自立を促すことを目指す.23年度は,本研究で開発した演奏支援システムを認知症患者(協力者)に試用してもらった.本システムは,ユーザが歌いながら,椅子の肘掛に装備されたタッチパッドを叩くと,システムは歌っている箇所に合う伴奏を,叩くタイミングに合わせて奏でる.しかし,協力者には失語の症状があるため,音楽療法の専門家や実験者とともに,システムを利用したピアノ連弾を行った.協力者は指1本で任意の鍵を叩くことで,共演者のメロディに合わせた伴奏を奏でることができた.認知症患者を対象とした斉楽療法では,一般的に回想に導きやすい唱歌を利用することが多い.しかし,本実験の協力者はピアノ演奏の経験があったため,現在は指1本で打鍵することで精一杯であっても,ショパン作曲のピアノ曲において,意欲的に打鍵した.触覚の提示に関する研究では,触覚情報の連信遅延に関する心理物理実験の結果に基づき,触覚提示デバイスの改良に取り組んだ.また,携帯型の触覚提示デバイスを,設置型(卓上型)の触覚提示デバイスに接続し,空中に浮かぶ球をつかんで割るというデモ機を製作した.この方式により,触覚提示デバイスの体感質量を軽減させた.嗅覚の提示に関する研究では,アロマセラピーインストラクターに,認知症患者に対する香りの利用効果についてインタビューした.認知症患者は症状の進行とともに,香りを感じなくなることが知られているが,回想とのコラボレーションにより,香りを患者の誘導に対して有効に使える可能性が示された.上述とは別に開発した音楽療法システムについて,国際会議(ICOST)で発表し,BEST MULTI-DISCIPLINARYPAPERAWARDを受賞した.このシステムは,認知症患者などが示す常同言語(同じ言葉を繰り返す)の症状に対して,適切な音楽を奏でることで患者を静穏化することを目的としている.高齢者介護施設で行われる音楽療法では,その効果を高めるために,高齢者の演奏意欲を引き出し,個人でも日常的に音楽との関わりを継続する仕組みが重要である.本研究では,音楽療法において,触覚/嗅覚情報を提示する回想法(過去の回想を行う療法の一種)を取り入れることで高齢者の演奏意欲を増大させ,個人でも継続的に使用できるシステムを提案し,日常生活の自立を促す.今年度は,連携研究者であり認知症患者のリハビリを専門とする安田清博士の指導の下,回想法事業が盛んな北名古屋市の回想法センターや歴史民俗資料館で資料収集を行い,回想法の第一人者である先生を訪問した.また,音楽療法における民族音楽の楽器の有用性を探るため,楽器博物館で資料収集を行った.これらの資料をもとに,回想法に使用される道具への香りの付与を目的に,香りと画像との関係について検討した.その結果,香り単独からは,何らかの物を想起しにくい場合でも,香りを画像とともに提示すると,その画像に含まれる物の香りとして判定されることがあった.ここから,道具ごとに香りを準備しなくても,複数の道具の本物らしさを強調できる香りを突き止めることで,香りの道具への付与が容易になることが示唆された.来年度は,回想法に使われる道具への付与に適した香りの種類を示し,さらに回想法で香りを使用することの有用性を示すことを目指す.また今年度は,高齢者の回想法に使用する楽器のインタフェースについて検討を行った.来年度は,合奏支援楽器を製作し,認知症患者に使ってもらいながら,さらにインタフェースの改良を行う.本研究では,音楽療法において,触覚/嗅覚情報を利用する回想法を取り入れることで,高齢者の演奏意欲を増大させ,個人でも継続的に使用できるシステムを提案し,日常生活の自立を促すことを目指す.今年度は,音楽に関する2つのシステムを製作した.1つは,高齢者を対象とした演奏支援システムである。ユーザが歌いながら,椅子の肘掛に装備されたタッチパッドを叩くと,システムは歌っている箇所に合う伴奏を,叩くタイミングに合わせて奏でる.各高齢者の馴染みのある歌で容易に演奏できるため,演奏の開始意欲を引き出すことができる.2つめのシステムでは,重度の認知症者が精神的な症状により叫びや発話を繰り返す状況において,ユーザが鍵盤またはパソコンのキーを1つ押すと,認知症者の気持ちに寄り添い,徐々に静穏化するカデンツ(終止に向かう和声進行の音楽)を奏でることができる.認知症者の不安定な気持ちに寄り添うために,カデンツは不協和音から始まり,協和音で終わる.さらに,認知症者の叫びや発話をリアルタイムに音高(ドレミなど)へ変換する技術を利用し,カデンツはその変換された音高を最高音とする和音から始まる.システムは,ユーザの押鍵によりカデンツをすぐに何度でも奏でることができる.よって,音楽知識の乏しい介護者でもシステムを容易に利用できる点に意義があるまた,触覚情報を利用する(高齢者に提示する)方法を明らかにするために,2台の触覚提示デバイスを利用した触覚情報の通信に関する心理物理実験を行った.実験のために,通信遅延を操作できるように触覚提示デバイスの制御装置を改良した本研究では,音楽療法において,触覚/嗅覚情報を利用する回想法を取り入れることで,個人でも継続的に使用できるシステムを提案し,日常生活の自立を促すことを目指す.23年度は,本研究で開発した演奏支援システムを認知症患者(協力者)に試用してもらった.本システムは,ユーザが歌いながら,椅子の肘掛に装備されたタッチパッドを叩くと,システムは歌っている箇所に合う伴奏を,叩くタイミングに合わせて奏でる.しかし,協力者には失語の症状があるため,音楽療法の専門家や実験者とともに,システムを利用したピアノ連弾を行った.

協力者は指1本で任意の鍵を叩くことで,共演者のメロディに合わせた伴奏を奏でることができた.認知症患者を対象とした斉楽療法では,一般的に回想に導きやすい唱歌を利用することが多い.しかし,本実験の協力者はピアノ演奏の経験があったため,現在は指1本で打鍵することで精一杯であっても,ショパン作曲のピアノ曲において,意欲的に打鍵した.触覚の提示に関する研究では,触覚情報の連信遅延に関する心理物理実験の結果に基づき,触覚提示デバイスの改良に取り組んだ.また,携帯型の触覚提示デバイスを,設置型(卓上型)の触覚提示デバイスに接続し,空中に浮かぶ球をつかんで割るというデモ機を製作した.この方式により,触覚提示デバイスの体感質量を軽減させた.嗅覚の提示に関する研究では,アロマセラピーインストラクターに,認知症患者に対する香りの利用効果についてインタビューした.認知症患者は症状の進行とともに,香りを感じなくなることが知られているが,回想とのコラボレーションにより,香りを患者の誘導に対して有効に使える可能性が示された.上述とは別に開発した音楽療法システムについて,国際会議(ICOST)で発表し,BEST MULTI-DISCIPLINARYPAPERAWARDを受賞した.このシステムは,認知症患者などが示す常同言語(同じ言葉を繰り返す)の症状に対して,適切な音楽を奏でることで患者を静穏化することを目的としている.
キラルな活性カチオン種を利用する不斉合成反応の開発研究

キラルなカチオン反応種を利用する不斉反応の開発研究を目的として、Pummerer型反応およびC_2対称光学活性ジオールを利用する反応について研究を行い、以下の成果を得た。1.最近、我々はO-シリルケテンアセタールとスルホキシド自身に不斉点を有する非環状キラルスルホキシドとの反応で、高エナンチオ選択的な不斉Pummerer反応が進行し、光学活性α-シロキシスルフィドを与えることを見出した。本年度はさらにα位およびスルホキシド上の2点に不斉点を有する非環状の系での反応を検討した結果、100%の不斉誘導率で不斉Pummerer反応が進行することを見出し、またその立体化学は、α位のキラリティに支配されることを明らかにすると共に、その反応機構を明らかにした。また、平成7年度以降に計画していたペニシリン生合成機構に関する研究を行い、Arnsteinトリペプチド(LLD-ACV)類縁体より、cis-b-ラクタムの生成に成功し、本反応を用いてペニシリン生合成機構を考察した。2.C_2対称光学活性ジオールを利用する不斉合成として、キラルなヒドロベンゾイン由来のγ,δ-不飽和アセタールを、求核種(ROH,RCOOH)の存在下に親電子反応剤と反応させると、まず親電子反応剤がオレフィンと反応し、生じたカルボカチオンに対しアセタールの酸素原子が求核攻撃し、オキソニウムイオン中間体を経て、アセタールの開裂と求核種(ROH,RCOOH)の攻撃が同時に進行し、8員環アセタールが高ジアステレオ選択的に得られることを見出した。
肝星細胞オートファジーの癌微小環境を通じた肝癌細胞増殖機序の解明

癌細胞は微小環境を自身の増殖に有利に変化させて発育進展する。肝癌では星細胞が存在し、微小環境形成に寄与している可能性がある。最近申請者は、肝癌細胞と共培養した星細胞ではオートファジーが促進することを見出した。このオートファジー亢進を抑制すると、共培養した肝癌細胞の増殖速度が低下するという予備的結果を得ている。そのため、肝星細胞のオートファジーが肝細胞癌に対する新規治療標的となる可能性がある。本申請課題では、肝星細胞におけるオートファジーが癌微小環境を通じて肝癌細胞にあたえる細胞間コミュニケーションの分子基盤を解明し、肝癌細胞増殖にあたえる新規メカニズムの解明を目的として研究を行う。
異なる錯イオンが共存した新規錯体水素化物の創製とエネルギー関連機能の評価

本研究では、5重量%以上の高水素密度を有し、室温付近にて可逆的な水素吸蔵・放出が可能な革新的水素貯蔵材料の創製を目指し、熱力学的安定性と水素の結合状態との相関に着目した基礎研究を推進した。具体的には、リチウムやマグネシウムなどの軽金属を陽イオンとし、ホウ素系錯イオンBH4と、遷移金属元素からなるFeH6、NiH4など、水素の結合状態が異なる複数の錯イオンが共存した新規錯体水素化物群を合成し、圧力-組成等温線測定などの手法を用いて合成試料の水素吸蔵・放出特性を評価、水素放出温度や吸蔵性能における水素の結合状態の影響を調査した。代表的な成果としては、高い水素貯蔵密度を有する一方で、水素放出温度の低下ならびに繰り返し水素吸蔵・放出特性の改善が課題であったホウ素系錯体水素化物LiBH4に、遷移金属系錯体水素化物Mg2FeH6を添加した複合材料において、錯体水素化物同士の複合化反応(LiBH4 + Mg2FeH6 →LiH + 2Mg +(FeB,Fe)+H2)によってLiBH4単体の分解反応における高い熱力学的安定性が改善され、150°Cも低い温度領域にて水素放出が可能であることを実証した。また、600 °C、35 MPaの高温高圧下においても部分的にしか水素吸蔵反応が進行しないと報告されているLiBH4に対し、本研究にて合成した複合材料では、400 °C、20 MPaにおいて顕著な水素貯蔵量の減少を伴わずに4回以上の繰り返し水素吸蔵・放出が可能であることも見出した。本研究の結果より、水素の結合状態が異なる錯イオンの複合化が新たな高密度水素貯蔵材料の合成手法として有望であることが示され、今後は効果的な錯イオン種の組み合わせの選定や、複合化比の最適化により、優れた繰り返し水素吸蔵・放出特性を有する高密度水素貯蔵材料の創製が進むものと大いに期待される。
地球GISに基づく土地被覆変動の監視

本研究ではNOAA(米国海洋大気庁)が提供しているNOAA Weekly GVI(Global Vegetation Index)画像を用いて、アジア全域をテスト地域とし、グロ-バルな土地被覆モニタリングの可能性を調べた。研究の結果つぎのことがわかった。1.Weekly GVI画像に含まれる雲を除去するために約4枚のWeekly GVI画像から作っ他MonthlyGVI画像の1年分12枚を用いることにより、そのGVI季節変動パタ-ンから土地被覆を716グル-プに分けて把握できることがわかった。本研究では対象をアジア地域に限ったが、NOAA GVI賀層は地球のほぼ全域を覆っているため、グロ-バルな土地被覆の把握も可能である。2.異なる年の24枚のMonthlyGVI画像を用いることにより、GVI季節変動パタ-ンの年による変化から、土地被覆が変化した可能性のある地域を抽出できることがわかった。ただし抽出した地域が全て土地被覆が変化したとは言い切れない。なぜならGVI季節変動パタ-ンの変化は、年による季節(例えば雨期)のずれ、Monthly GVIに残存している雲、雪の影響などによっても起こるからである。しかし逆に、GVI季節変動パタ-ンが年により変化していない地域は土地被覆が変化していないということができる。今後の課題としてつぎのことがあげられる。1.雲の存在を示す気象デ-タを用いることにより、GVI画像から地表面を表現している部分を抽出する。雲の部分は内挿するかデ-タ欠落地域として残す。2.GVI画像以外にAVHRRチャネルデ-タ、標高デ-タ、緯度の情報、雪の存在を示すデ-タなどを併用し、より詳しく土地被覆モニタリングを行う。
乾癬病変のエピジェネティック制御機構解明による新規治療戦略の開発

本研究では、乾癬ケラチノサイトにおいて転写活性化因子LEDGFが媒介するエピジェネティクス異常による病態形成機序を検討した。乾癬ケラチノサイトではLEDGFが核内に移行し、そこでトリメチル化されたヒストン蛋白(H3K36me3)と結合し、MLL等の重要なクロマチン修飾複合体を同部に誘導する。その結果として同部位のH3K4me3という転写活性化に関わる修飾パターンの亢進をもたらし、乾癬関連遺伝子の転写の安定化に至る機序の存在が示唆された。近年、様々な疾患で、クロマチン修飾などのエピジェネティクス異常が疾患形成に重要な役割を果たすことが判明している。乾癬病変での表皮ケラチノサイトにおけるエピジェネティクスの変化については、未だ殆ど解明されていない。転写活性化因子Lens epithelium delived growthfactor (LEDGF/DFS70)は、転写が活性化したゲノム領域に結合することで知られる、転写活性化因子である。LEDGFはそのC末に位置するPWWPドメインで、特定のヒストン修飾モチーフを認識する事が予想される。ゲノム上でLEDGFは、クロマチン修飾複合体や、細胞周期調節因子をリクルートし、エピジェネティックな転写調節、および細胞増殖に関与するため、乾癬病変の形成に関わっている可能性が考えられる。我々は先に、LEDGFは皮膚表皮では基底層を除き核外に局在するが、乾癬表皮内では特徴的な核内局在を示し、さらにはLEDGFの過剰発現は、表皮角化細胞に乾癬類似の表現型の変化をもたらす事を示した。今回、新たに、培養表皮細胞内においては、LEDGFは血清飢餓により誘導されたG0/G1期には核外に局在するが、血清刺激を与えるとMEK、PI3Kなどの増殖シグナル依存性に核内に移行する事を確認した。また、LEDGFのPWWPドメインはトリメチル化したH3K36に結合する事が判明した。クロマチン免疫沈降法の結果からは、LEDGFの過剰活性により転写が亢進した乾癬関連遺伝子のゲノム上で、H3K4のトリメチル化が亢進する傾向が認められた。これらの結果はoncogeneとしてのLEDGFの性格、およびその予測されるエピジェネティックな機能と一致し、乾癬病変の形成にLEDGFが寄与している可能性を示唆している。LEDGFをマウス表皮内で過剰に発現させるため、ケラチンK5のプロモーター下にLEDGFのcDNAをクローニングした発現ベクターを作成する。HaCaT細胞、ヒト正常角化細胞での発現を確認した後に、ICRマウスをバックグラウンドとして、トランスジェニックマウスを作成した。ゲノミックPCRを行い、トランスジェニック化されたマウスを樹立する。表皮のウエスタンブロッティングと免疫組織染色でLEDGFの過剰発現を確認した。トランスジェニックマウスが予想外の攻撃的性格を示し、新生仔マウスの食殺、離乳期前仔マウスの殺戮行動等が続いた。このため、病態モデルを確立するための実験を行えるだけのトランスジェニックマウスの確保に、想定した以上の日数を要した。テープによるストリッピング、12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)の塗布、などによる皮膚病変の抽出を試みたが、安定した結果が得られなかった。このため、外来性LEDGFの発現を再建したところ、低下していた為、再度、外来性LEDGFを高発現するマウスの樹立を行った。今後は、発現がより改善されたマウスを用いて皮膚病変の誘発を行っていく。また、一方で、新規治療薬のリードコンパウンドを探索するため、化合物スクリーニング系の開発を行った。申請者らの樹立したLEDGF-HaCaTと目的化合物の存在下で培養し、上清中のIL-6をに定量することにより、ケラチノサイトの活性化を測定することができる。この性質を利用して、乾癬病変抑制効果をもつ化合物をすスクリーニング系の作成を試みた。実験系のコントロールとしてはp38阻害剤であるSB203580を使用した。アッセイ系のための予備実験を行った。本研究では、乾癬の皮膚病変において、エピジェネティック的変化が病態形成の一環を担っているという作業仮説の証明と、それによる新規治療戦略の開発を目的とした。これを可能にするモデル系として、我々の過去の研究成果より、転写活性化因子LEDGFの過剰発現モデルが最適であると考え、モデル細胞およびマウスを作製し、解析をおこなうことを基本戦略とした。昨年度までの研究により、モデル細胞を作製し、乾癬関連遺伝子のプロモーター領域でヒストン修飾状態、具体的にはH3K4me3とH3K36me3修飾の亢進が生じ、これら遺伝子の転写活性化が起きる事を示した。また、このモデル細胞において、外部からの増殖シグナル依存的に、LEDGFが核内移行し、その機能を発揮する事、この過程でMEK1とPI3Kが協同的に作用する事、を示した。今年度はこの成果を基盤として、モデルマウスの作成と解析、及び有用化合物のスクリーニングを行った。ヒトLEDGFをケラチンK5

プローモーター下で過剰発現するトランスジェニックマウスを作製し、RTーPCRとタグ付けされたFLAGエピトープの免疫染色により表皮内でのトランスジーンの発現を確認した。テープによるストリッピング、TPAの局注等の方法で病変誘発を試みたが、野生型マウスと有為な差は認められなかった。モデルマウスでのLEDGFの発現量が低い事が疑われた為、再度新たな系統のマウスを樹立したが、明らかに野生型に対して有為な差を認めることができなかった。モデル細胞を用いた、有用化合物のスクリーニングのため、細胞の培養上清中のIL-6をELISAで測定するアッセイ系を作成した。米国FDAで認可された化合物と既知のクロマチン修飾因子阻害剤についてスクリーニングを試みたが、該当する薬剤を見いだす事はできなかった。アッセイ系の感度が不足した事が原因の一つとして考えられた。26年度が最終年度であるため、記入しない。皮膚科学26年度が最終年度であるため、記入しない。LEDGFのエピジェネティックな転写制御機能を、in vitroの実験で検討し、KCが乾癬様のフェノタイプを形成する機構を解明するという目的に沿って実験を行った。その過程で、LEDGFがクロマチン上のH3K36me36を認識し、クロマチン修飾因子をリクルートする事で、更なる修飾を誘導し、標的遺伝子の転写活性を維持する事が示唆された。また、LEDGFの活性が、その細胞内局在の制御により行われている事を示し、細胞外の増殖シグナルを受けて、MEK、PI3K等のタンパク質リン酸化酵素依存性に制御されている事を確認した。この発見は現在提唱されている乾癬表皮形成の病理メカニズムとも整合的である。これらは、LEDGFが乾癬病変の形成に寄与するという、当初の仮説を支持する結果であり、今後の他の実験系の結果と併せて、乾癬の病理機序の理解、新たな治療標的の開発につながる、重要な成果である。また、次年度以降の研究に用いる表皮特異的LEDGF過剰発現マウスの作成を開始している。トランスジェニックマウスが当初攻撃的性格を示し、繁殖が困難であった事、また、その後、匹数を増やしていく中で、導入したLEDGFの発現が低下したため、動物実験の進捗が遅れてしまった。1)LEDGFをケラチンK5プロモーター下で構成的に過剰発現するトランスジェニックマウスを作製している。このマウスでLEDGFの過剰発現が表皮ケラチノサイトで起きている事を確認し、a)テープによるストリッピング、b) 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)の塗布、c)リコンビナントIL-22の皮内投与、などの各種刺激を皮膚に与える事で乾癬様病変の誘発を行う。組織学的、免疫組織学的な検討と、遺伝子発現パターンの解析から、乾癬モデルとしての妥当性を検証する。2) LEDGF-HaCaTはIL-6を過剰産生するため、培養液のIL-6を測定し、細胞生存数と比較する事で、低分子化合物のスクリーニングを行う。LEDGFの過剰発現によって惹起されるKCの乾癬様変化を回復しうる低分子化合物を探索するため、複数の化合物ライブラリーを準備する。
血中に存在するリポタンパク質の異所利用：加齢黄斑変性の点眼治療法開発に向けて

加齢黄斑変性(AMD)は加齢が最大のリスクファクターの難治疾患であり、我が国で第4番目の失明原因である(欧米では第1位)。本研究では、AMDの点眼治療薬を開発することを目指している。2016年に報告した、パゾパニブ内包HDL変異体を正常ラットに点眼し、パゾパニブの眼内分布をLC-MS/MSにより調べた。薬物濃度は、後眼部強膜>後眼部脈絡膜>後眼部網膜の順となった。硝子体からはほとんど検出されなかった。以上の結果から、点眼されたHDL変異体による後眼部網膜への主要な薬物輸送ルートは経強膜と推察される。また凍結切片を用いて質量イメージングを行い、後眼部にパゾパニブが存在することを直接可視化した。コール酸透析法に代わる、新たなHDL作製法に取り組んだ。当初マイクロ流路デバイスを利用する予定であったが、予想に反して、リン脂質エタノール溶液とapoA-Iタンパク質水溶液をマイクロチューブ内で混合・静置するだけでHDLが生成することを発見したため、この生成反応を最適化することにした。この結果、リン脂質:apoA-I混合モル比、混合温度、混合後静置時間について最適値を決定した。さらに本方法では、タンパク質変性剤である尿素が適度に存在することが決定的に重要であることもわかった。具体的には、0, 1, 2, 4 M尿素存在下で収率を調べると、2 Mの時が最大となった。収率は、既存の方法(コール酸透析法)と同等であった。本手法をurea-assisted reconstitutionと名付けた。計画通り、LC-MS/MS分析系を立ち上げることに成功し、薬物移行ルートに関する知見も得ることができた。また期せずしてHDL作製新手法を確立することができた。Urea-assisted reconstitution法で薬物を同時内包できるかどうか、できる場合は、その適用範囲を調べる。再構成したHDLと薬物を混合して得られる薬物搭載HDLと、薬物搭載量、安定性などについて比較する。Urea-assisted reconstitution法では、穏和な混合(ピペッティングおよび転倒混和)で十分であり、ボルテックス混合すると生成収率が低下する。この点を考慮してマイクロ流路デバイス用チップを設計する。In vitro評価系の構築について、まずtranswell内に角膜単層培養系を立ち上げる。次にさまざまな厚みを持つコラーゲン線維層を作製し、その上で角膜細胞単層を形成させる。上部に薬物搭載HDLを添加し、HDL変異体間で薬物透過性を比較する。研究分担者が担当する動物実験が予想ほど行われなかったことにともない、物品購入費(実験動物購入費)の使用額が減少したため。
知覚学習時の情報統合メカニズムの解明

知覚学習など学習時の可塑的変化には興奮性シナプス結合の変化が重要であると考えられる。これまで、大脳皮質感覚野において同一の方位選択制を持つ神経細胞同士はシナプス結合の形成確率が高いなど、同一の感覚情報を担っていると考えられる興奮性神経細胞間で機能的なシナプスの形成確率が高いことが明らかとなってきている。一方で知覚学習に伴って個々の興奮性神経細胞のモダリティーに対する応答性が変化することが知られている。しかしながら、個々の神経細胞の活動変化とシナプス結合の変化の関連性については明らかとなっていない。そこで、本研究課題ではヒゲ感覚を用いた学習課題をマウスに行わせ、学習過程における神経細胞の活動変化とシナプス結合の変化を生体内カルシウムイメージング法及び光遺伝学的手法を用いて検討することを目的とした。学習過程における一次体性感覚野2/3層における興奮性神経細胞の神経活動とヒゲの動きを数値化したトレース及び接触タイミングを示すトレースとの相互相関を算出したところ接触に関しては学習に伴って相関が減少し、ヒゲの動き(whisking)に対しては相関が増加する結果が得られたことから、一次体性感覚野においても学習に伴い知覚に関連した神経細胞の活動が変化することを確認できたと考えられる。また、whiskingに対する相関の増加は学習課題の成功率が上昇してくる直前で増加していることから成功率の上昇に関与している可能性が示唆された。当初の予定としては前年度中にカルシウムイメージングによる学習課題中の神経活動の変化と光遺伝学的手法を用いたシナプス結合の変化を明らかにする予定であったが、シナプス結合の変化を明らかにするまでには至っていないため、当初の予定よりも遅れていると考えられる。一方で、学習過程における神経活動の変化の結果から学習課題の成功率が上昇してくる直前にwhiskingとの相関が上昇するという結果から、whisking情報の入力が成功率の上昇に影響を与えている可能性が示唆された。そこで、今年度行う予定であった「Whisking入力が一次体性感覚野において生じる学習に対して重要かどうか」検討するための予備実験を前年度に並行して行った。光遺伝学的手法を用いてシナプス結合の変化を抽出するためには、適した光刺激の系の探索や高速でのイメージングを可能とするための機器を設置する必要があり時間が必要となることが予想される。その間に得られた神経活動のデータを詳細に解析し、ある程度生じているシナプス結合の変化を推定したうえで実験を進めていく予定である。当初購入を予定していた設備備品を別の予算で購入したために予定よりも使用額が減り、次年度使用額が生じた。次年度使用額は翌年度分と合わせて光遺伝学的手法を用いたシナプス結合変化の検出を行うために必要な備品・消耗品の購入および研究成果報告の際に必要となる印刷費・旅費として使用する予定である。
明清交替期における朝鮮王朝の外交政策－特に対後金外交を中心に

最終年度においては、朝鮮国と後金国の外交関係の構築期(1627ー1632)、後金(清)が志向する外交体制への朝鮮の強制的編入期(1633ー1637)における両国問の外交交渉の実態解明に取り組んだ。構築期については、まず後金(清)の第一次朝鮮侵略(1627)時の外交交渉を双方の基礎史料に基づいて分析し、講和に際して結ばれた盟約の暫定性と、当時の両国関係の流動性を指摘した。続いて、朝鮮の対後金使節が作成した報告書中、特に重要と判断された魏廷喆『藩陽往還日記』を精査した。当該史料により、外交交渉や使者の迎接儀礼を検討した結果、魏廷喆一行が派遣された1631年においては、関係継続という点で双方の認識は一致していたことが明らかになり、通説とは異なる実態が示された。編入期については、後金(清)の第二次朝鮮侵略(1636ー1637)時の外交交渉について史料研究を行った。まず従来の研究で主として参照されてきた羅万甲『丙子録』を検討したが、当時の外交交渉の経過については十分な情報を有していなかった。このため朝鮮側基礎史料を改めて精査したところ、国王の秘書官庁の公的記録である『承政院日記』に外交文書の作成過程や外交交渉の経過が比較的詳細に記されていることが判明した。その他関連史料もあわせて検討した結果、後金(清)の第二次朝鮮侵略の原因は、従来いわれていた朝鮮側の反後金(清)感情によって説明されるべきではなく、後金から清への体制変化と、その背景でもあり帰結でもあった国際関係の変化という観点から理解され説明されるべきであることが明らかになった。以上の研究から、明清交替に際して、朝鮮が後金への使節派遣を中心に外交的対応を模索していたことは明白となったが、当初の想定以上に関連史料が存在することが分かり、朝鮮の外交的対応の全容を解明するには至らなかった。今後は新出史料の検討を中心に研究を進めていく必要がある。(抄録なし)清朝の前身である後金国と朝鮮王朝の外交交渉過程を、後金国成立(1616)の前後から検討する作業に着手した。朝鮮側の漢文史料と後金側の満文史料という異なる言語で記された史料を対照し、多くの史実の確定に努めるとともに、両国認識の差異についても検討を行った。まず、朝鮮側に詳細な記録がありながら、従来の研究では等閑に付されてきた1621年の朝鮮使節鄭忠信の活動を検討することで、当時の両国関係を交渉の局面に即して具体的に明らかにした。当時の両国関係は稲葉岩吉『光海君時代の満鮮関係』(大阪屋号書店、1933年)が示した、非常に友好的な関係であったとする見解が定説であったが、本研究により、当時の両国の間に国交は結ばれておらず、鄭忠信派遣以降も明朝の地方勢力の台頭により、両国の交渉も満足に行われていなかった実態が明らかになった。また、それ以後の両国関係の展開として、1627年の後金による朝鮮侵略である丁卯胡乱時の外交交渉過程を、侵略に至るまでの経緯も含めて考察し、この戦乱が両国関係構築の起点となったことを指摘した。この戦乱以降、1636年に清朝が朝鮮を侵略するまでの期間は研究史上の空白期間であるが、朝鮮と後金の間に密接な交渉があったと考えられることもあわせて指摘した。そして、その実態の一端として、1628年の朝鮮使節鄭文翼が記した報告書を分析し、朝鮮人捕虜の買い戻しや開市の延期に関する活発な交渉活動の存在を明らかにした。以上の研究により、明清交替という国際変動に対する朝鮮王朝の具体的な対応と、その成果の一端が明らかとなり、その後の朝鮮・後金関係、朝清関係全体を再考する必要性が指摘された。