hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
斜面崩壊の程度と崩壊速度の評価手法の開発

堆積過程や節理に沿った風化などの影響で砂礫分が多く含まれる斜面は、地震時に急激に崩壊し、これが多大な被害に繋がることが多い。本研究では崩壊速度の大きい粒状体斜面の崩壊過程を重点的な検討課題の一つに据えて研究を進めた。この研究を進める上で、粒状体斜面模型の内部の動的塑性変形過程の観測を、研究代表者によって開発された独自の可視化手法Laser-Aided Tomography(LAT)で実施するとともに、多角形要素を用いた個別要素法(DEM)で、粒子間相互作用を考慮した斜面の崩壊過程を検討した。これらの手法は、従来、直接的な観測や解析の困難であった変形の局所化およびその後の破壊の進展過程を可視化し、定量化された情報をもとに踏み込んだ検討を行うことを可能にした。これまでの一連の研究で、粗粒を含む破壊面がピーク強度を越えて発達する過程の正確な情報が得られ、さらにこれらの知見から斜面の大変形を支配する地震動のパラメータが明確になりつつある。これらの成果を踏まえ破壊にいたるまでに斜面が吸収するエネルギー、また破壊後の滑り量を合理的に評価する手法についての提案を報告書にまとめる。報告書の後半ではさらに斜面がブロックとしてではなく、全体的な強度低下で大きく変形する場合も含んだ状況の実験、および大変形解析にふれ、このような場合の耐地震設計、対策に関する課題をまとめている。
フラーレンを内包するリポソームのがん細胞に対する放射線増感効果

フラーレンの水溶性誘導体Polyhydroxy small gap fullerenes (SGFs)をDOPC/DOPS多重層リポソーム(Lpsm)に内包させ(LpsmSGFs),ヒトメラノーマ細胞に投与して放射線増感効果を調べた.LpsmSGFs投与後のX線照射により,細胞増殖度は低下し,ミトコンドリア膜電位と細胞内活性酸素が増加し,DNA酸化損傷も検出された.SGFs水溶液の酸化還元電位がX線照射により上昇した.リポソームに内包することで高濃度のフラーレンを細胞内に送達され,LpsmSGFsの放射線増感効果は,フラーレンが介在する酸化ストレスが寄与していることが示唆された.初年度は、フラーレンを内包するリポソームを調製し、これをヒトメラノーマ細胞に投与して、エックス線照射後の細胞増殖度を測定し放射線増感効果を調べた。まずフラーレン/γ-シクロデキストリン(1:2モル比)包接体[C60/CD2, C60含有量:約1000 1200 μM]を乳鉢を用いて手製で調製した。C60/CD2と逆相蒸発法により調製したDMPC/DMPS (7:3モル比)リポソームを混合して、電子レンジ処理(約80°C)し、透析(MWCO 20000)して、遊離のC60/CD2を除き、フラーレンを内包するリポソーム(DMPC/DMPS/C60 =700 μM:300 μM:127 μM)を調製した。リポソームは、エクストルーダー処理により粒子径調整(100 nm)を行った。ヒトメラノーマ細胞に対して、エックス線照射前の24時間(Before投与)または照射時のみ(During投与)にフラーレンを内包するリポソームまたはリポソームを投与した。エックス線照射後には培地交換を行い、フラーレンを内包するリポソームまたはリポソームを含まない通常培地で培養し、3日後ならびに5日後の細胞増殖度を測定し、顕微鏡観察を行った。その結果、エックス線照射後のヒトメラノーマ細胞の増殖は、フラーレンを含まないリポソームと比べてリポソームを内包するフラーレンのBefore投与では細胞死がやや抑制され、During投与ではわずかに抑制された。すなわちフラーレンを内包するリポソームはある程度の放射線防護の効果を示した。組成の異なるリポソームについて、ステアリルアミンを含むカチオン性リポソームやDMPGを含むアニオン性リポソームを用いて同様の実験を行ったが、これまでのところフラーレンによる効果は見られなかった。フラーレンは低毒性の放射線増感剤としての可能性があるが、ほぼ未開拓である。我々はフラーレンの水溶性誘導体Polyhydroxy small gap fullerenes (SGFs: Sigma-Aldrich Co.LLC.)を用いて、50 mM DOPC/DOPS (7:3)多重層リポソーム(Lpsm)に5 mM SGFsを内包させ(LpsmSGFs: 50 mM DOPC/DOPS = 7:3, 246 μM SGFs, Diameter = 141.2 nm, ζ-potential = -35.65mV)、ヒトメラノーマ細胞に投与して放射線増感効果を調べた。X線照射後の細胞増殖度を細胞内ミトコンドリア脱水素酵素の活性に基づくWST-8法により測定し、ミトコンドリア膜電位の変化をRhodamine123により評価した。細胞内活性酸素をDihydroethidiumの蛍光により検出するとともに、DNA酸化損傷を8-OHdG免疫染色により蛍光観察した。またSGFs水溶液にX線照射を行った場合の酸化還元電位(ORP)を測定した。LpsmSGFs投与後のX線照射により、ヒトメラノーマ細胞の細胞増殖度は投与量依存的に低下し、Lpsm単独投与ならびに遊離SGFsを有意に下回った。ミトコンドリア膜電位に対応する蛍光強度(Rhodamine123)は、X線照射なしではLpsmSGFs投与と無投与でほぼ同じであったが、X線照射後にはLpsmSGFs投与で蛍光強度が上がり、一方、無投与では低下した。またLpsmSGFs投与では、X線照射後の細胞内活性酸素を示す蛍光強度(Dihydroethidium)が増加し、またDNA酸化損傷も検出された。SGFs水溶液にX線照射を行った場合、8 GyまでORPは上昇し、それ以上の照射線量では低下した。リポソームに内包することで、高濃度のフラーレンを細胞内に送達することが可能となり、LpsmSGFsの放射線増感効果は、多数の-OHが結合した水酸化フラーレンで-OHの一部がラジカル化するなどフラーレンが介在する酸化ストレスが寄与している可能性が示唆される。フラーレンを内包するリポソームを調製し、その放射線増感効果を見出すことができた。水酸化フラーレンを内包するリポソームのヒトメラノーマ細胞に対する放射線増感効果について日本農芸化学会において発表した。次いで、その論文作成に着手した。また研究の方向性について、次のように検討した。すなわち、がん細胞に対する増殖抑制とならんで、正常細胞への影響についても確認することは大切である。しかしながら細胞においては、さまざまな抗酸化酵素や修復因子の働きがあり、特に低線量放射線の影響の定量的評価がむずかしい側面がある。放射線のターゲットは、DNA以外では細胞膜であると考えられており、放射線による細胞膜の損傷では、膜脂質の過酸化が重要である。

細胞膜の酸化損傷の程度によって細胞応答も異なり、過酸化脂質が軽度に生成された場合は、細胞の抗酸化作用が誘導され生存できるが、中程度では、プログラム細胞死(アポトーシス)が誘導され、非常に重度に過酸化脂質が生成されると細胞壊死(ネクローシス)が誘導される。この点に着目して、本研究では、発光色素(CLA)または蛍光色素(DPPP)を取りこませた脂質膜モデル(リポソーム)を調製し、放射線照射による影響を解析することを試みた。まずDOPC/DOPSリポソームの脂質膜に対して、発光色素(CLA)または蛍光色素(DPPP)を取りこませたものを調製方法について検討した。これまで実験から発光色素(CLA)を溶解させる溶媒としては、水やクロロホルムへの溶解性がほとんど認められず、メタノールが適当と思われた。DOPC/DOPS/CLA =7/3/0.2のリポソームを調製することができた。蛍光色素または発光色素を含む脂質膜モデル(リポソーム)の調製については、一定の目途をたてることができた。【目的】【方法・結果】X線照射後の細胞増殖度をWST-8法により測定し,ミトコンドリア膜電位の変化をRhodamine123により評価した.細胞内活性酸素をDihydroethidiumの蛍光により検出し,DNA酸化損傷を8-OHdG免疫染色により観察した.その結果,LpsmSGFs投与後のX線照射により,ヒトメラノーマ細胞の細胞増殖度は投与量依存的に低下し,Lpsm単独投与ならびに遊離SGFsを有意に下回った.ミトコンドリア膜電位は,X線照射なしではLpsmSGFs投与と無投与でほぼ同じであったが,X線照射後にはLpsmSGFs投与で蛍光強度が上がり,一方,無投与では低下した,またLpsmSGFs投与では,X線照射後の細胞内活性酸素が増加し,またDNA酸化損傷も検出された.またSGFs水溶液にX線照射を行った場合,8 Gyまで酸化還元電位は上昇した.以上より,リポソームに内包することで高濃度のフラーレンを細胞内に送達することが可能となり,LpsmSGFsの放射線増感効果は,多数の-OHが結合した水酸化フラーレンで-OHの一部がラジカル化するなどフラーレンが介在する酸化ストレスが寄与している可能性が示唆された.本研究を行う中でDOPC/DOPS多重層リポソームにX線照射を行うと,膜脂質過酸化が認められた.最終年度は、DOPC/DOPS多重層リポソームとタンパク質の混合系にX線照射を行い,膜脂質過酸化を介したタンパク質凝集が生じ得ることが示唆された.フラーレンの水溶性誘導体Polyhydroxy small gap fullerenes (SGFs)をDOPC/DOPS多重層リポソーム(Lpsm)に内包させ(LpsmSGFs),ヒトメラノーマ細胞に投与して放射線増感効果を調べた.LpsmSGFs投与後のX線照射により,細胞増殖度は低下し,ミトコンドリア膜電位と細胞内活性酸素が増加し,DNA酸化損傷も検出された.SGFs水溶液の酸化還元電位がX線照射により上昇した.リポソームに内包することで高濃度のフラーレンを細胞内に送達され,LpsmSGFsの放射線増感効果は,フラーレンが介在する酸化ストレスが寄与していることが示唆された.当初、以前の研究で有効であったステアリルアミンを含むカチオン性リポソームを用いてスタートしたが、フラーレンを内包させた場合には、いろいろ試したが有効ではないようだった。
PDGFRα(+)間葉系幹細胞誘導システムを用いた新規骨置換材料の開発

本研究では、新規骨置換材を開発するためのベースとなる材料の検討と選定実験を通じて決定し、さらに生体に内在する間葉系幹細胞を再生させたい場所に誘導する「間葉系幹細胞誘導システム」を付与することで、動物由来材料から脱却した骨代謝能を有する幹細胞誘導型硬組織温存・再建・再生材料の開発を目指す。外部から細胞移植を行うことなく骨再生治療を達成することによって、1次医療機関から3次医療機関で使用することが可能でありながら様々な骨欠損部位や骨欠損形態に対応でき、最終的には口腔領域に限らず骨疾患を扱う形成外科や整形外科での実用を可能にする基盤研究を行う予定である。
加齢による認知機能の低下に関与する線条体神経の機序解明

線条体アセチルコリン作動性介在ニューロンは、線条体内唯一のアセチルコリン修飾源であり、加齢に伴いニューロン数の減少が見られ、認知機能の低下にかかわることが指摘されている。加齢によるアセチルコリン作動性介在ニューロンの生理学的特性・神経ネットワークの変化は、認知機能低下の生理心理学的メカニズムを知る上で重要であるが不明な点が多い。本研究は、脳スライス標本を用いた電気生理実験から、線条体アセチルコリン作動性介在ニューロンの発火特性や静止膜電位の変化、シナプス伝達などの指標を介して線条体内アセチルコリン性修飾の加齢変化を解明することを目的とする。
優性遺伝形式をとる遺伝性難聴に対する次世代シークエンサーを用いた網羅的解析

平成30年度は前年度までに引き続き、日本人難聴患者DNAデータベースより原因遺伝子が特定できていない優性遺伝形式をとる遺伝性難聴家系の患者のパネル解析を行った。具体的には、Ion AmpliSeq Designerを用いて、過去に難聴関連遺伝子として報告のある148遺伝子のエクソン領域を増幅するプライマーセットを設計する。AmpliSeqを用いたマルチプレックスPCR法により難聴の原因遺伝子の全エクソン領域を増幅し、エマルジョンPCRを行ってビーズを調整し、IonProtonシステムを用いて次世代シークエンス解析を行った。また、前年度同様、優性遺伝形式をとる遺伝性難聴の中で高頻度に見出されるKCNQ4のc.211delC変異は次世代シーケンスにて検出されないため、Taqman法を用いて変異の解析を行った。また、家系図からは母系遺伝と優性遺伝形式の判別がつきにくい場合もあるため、ミトコンドリア遺伝子変異(mit1555A>G、mit3243A>G)の解析もインベーダー法を用いて行っている。その結果、約40%の症例で原因遺伝子変異を同定することができた。原因遺伝子変異が同定された遺伝子には、TMC1遺伝子など日本人難聴患者では報告の無い原因遺伝子変異も見られた。また、日本人難聴患者2550例を対象にOTOF遺伝子変異のピックアップと直接シークエンス法による変異の確認を進めた。その結果、39例にOTOF遺伝子の変異を見出し、日本人難聴患者における頻度が1.7%であることを明らかにした。39例のうち31例は高度重度難聴であり、OTOF遺伝子変異による難聴の聴力像の典型例が高度重度難聴であることを東kにした。また、得られた成果を論文として取りまとめて報告を行った。当初の計画通り、優性遺伝形式をとる難聴の原因遺伝子解析を行い変異の種類と頻度を明らかにすることができた。平成31年度は、前年度までに実施した次世代シークエンサーを用いた網羅的遺伝子解析のデータ解析をさらに症例数を増やして行う。また、見出された遺伝子変異に関しては、シークエンスエラーの可能性があるため、従来の直接シークエンス法を用いた確認作業を行い変異の確認を行う。直接シークエンス法により遺伝子変異が確認された場合には、家系内のサンプルの遺伝子解析を行い、遺伝形式と矛盾が無いことを確かめる。難聴の原因遺伝子変異の種類ごとに、難聴の程度、難聴の型、めまいなどの症状の有無などの臨床像をとりまとめ詳細に検討を行う事により、遺伝子型と表現型の相関に関してその特徴を明らかにする。以上の研究の成果を取りまとめ論文として報告する。平成29年度は日本人難聴患者DNAデータベースより原因遺伝子が特定できていない優性遺伝形式をとる遺伝性難聴家系の患者207名に対する解析を行った。解析対象とする遺伝子は、hereditary hearing lossホームページ(http://hereditaryhearingloss.org/)を参照し、過去に優性遺伝形式をとる難聴との関連が報告されている27遺伝子を含む68遺伝子を対象にした。Ion AmpliSeq Customを用いて、上記68遺伝子の全エクソン領域を増幅するプライマーセットを設計する。AmpliSeqを用いたマルチプレックスPCR法により難聴の原因遺伝子の全エクソン領域を増幅し、エマルジョンPCRを行ってビーズを調整し、IonTorrentシステムを用いて次世代シークエンス解析を行った。優性遺伝形式をとる遺伝性難聴の中で高頻度に見出されるKCNQ4のc.211delC変異は次世代シーケンスにて検出されないため、Taqman法を用いて変異の解析を行った。その結果、今回変異検索を行った207人中86名(41.5%)に少なくとも一つの難聴の原因となりうる遺伝子変異を認めた。現在、得られた成果を論文として取りまとめているところである。優性遺伝形式をとる難聴の原因遺伝子解析を行い変異スペクトラムを明らかにすることができた。

原因遺伝子変異が同定された遺伝子には、TMC1遺伝子など日本人難聴患者では報告の無い原因遺伝子変異も見られた。また、日本人難聴患者2550例を対象にOTOF遺伝子変異のピックアップと直接シークエンス法による変異の確認を進めた。その結果、39例にOTOF遺伝子の変異を見出し、日本人難聴患者における頻度が1.7%であることを明らかにした。39例のうち31例は高度重度難聴であり、OTOF遺伝子変異による難聴の聴力像の典型例が高度重度難聴であることを東kにした。また、得られた成果を論文として取りまとめて報告を行った。当初の計画通り、優性遺伝形式をとる難聴の原因遺伝子解析を行い変異の種類と頻度を明らかにすることができた。平成30年度は、前年度までに実施した次世代シークエンサーを用いた網羅的遺伝子解析のデータ解析をさらに症例数を増やして行う。見出された遺伝子変異に関しては、シークエンスエラーの可能性があるため、従来の直接シークエンス法を用いた確認作業を行い、変異の有無をダブルチェックする。また、直接シークエンス法により遺伝子変異が確認された場合には、家系内のサンプルの遺伝子解析を行い、遺伝形式と矛盾が無いことを確かめる。次世代シークエンサーを用いた網羅的遺伝子解析により明らかとなった難聴の原因遺伝子変異の種類ごとに、難聴の程度、難聴の型、めまいなどの症状の有無などの臨床像をとりまとめ詳細に検討を行う事により、遺伝子型と表現型の相関に関してその特徴を明らかにする。特に難聴の程度とその進行度合いは、治療法の選択に関わる重要な要素であるため、詳細に検討を行う。平成31年度は、前年度までに実施した次世代シークエンサーを用いた網羅的遺伝子解析のデータ解析をさらに症例数を増やして行う。また、見出された遺伝子変異に関しては、シークエンスエラーの可能性があるため、従来の直接シークエンス法を用いた確認作業を行い変異の確認を行う。直接シークエンス法により遺伝子変異が確認された場合には、家系内のサンプルの遺伝子解析を行い、遺伝形式と矛盾が無いことを確かめる。難聴の原因遺伝子変異の種類ごとに、難聴の程度、難聴の型、めまいなどの症状の有無などの臨床像をとりまとめ詳細に検討を行う事により、遺伝子型と表現型の相関に関してその特徴を明らかにする。以上の研究の成果を取りまとめ論文として報告する。
地域差を考慮した空間疫学・地域診断のためのスキャン統計量の開発とその利用

空間疫学・地域診断のための統計手法において,各地域の人口規模の違いに起因する地域差を考慮した新たな疾病集積性の検定のためのスキャン統計量ならびにわが国における国民健康保険の地域比較のための指標のベイズ推定法を提案した。シミュレーションからいずれの方法も従来の方法よりも精度よい解析を行うことができることが確かめられた。保健医療・福祉の分野で広く用いられる空間疫学・地域診断のための統計手法において,市区町村単位のような小地域のデータを用いた解析では各地域の人口サイズの違いなどによる地域差の影響が大きく,統計学の基本となる同一分布からの標本に基づく理論が適用できない。そこで本研究では従来用いられている手法についてこれらの地域差の影響を詳細に検討することにより,どこに問題があるのかを明らかにし,その上でその改良を試み,より適切な解析が行えるような統計手法の開発を検討している。本年度はまず症候サーベイランスを目的とし,事象の発生時点からの立ち上がりをモデル化した新たなスキャン統計量を提案した。実際のデータへの適用とシミュレーション評価によってその妥当性が確認された。またスキャン統計量を用いた集積性検定の応用について,実際に難病の集積性の検出を行った。さらに遺伝子のゲノムワイドCNVデータへスキャン統計量の応用についても検討を行った。また,一般的なボアソンモデルに基づき,分散安定化変換を用いたスキャン統計量について,地域差の観点から理論的な検討を行った。従来の尤度比統計量に基づくスキャン統計量との比較をシミュレーションによってそれぞれの特徴を調べたところ,提案法がより精確な検出を行う様子が観察された。今後,引き続きこの提案法に関する理論的評価,数値的評価などを行っていく。さらに,これらのスキャン統計量による地域比較,ベイズ推定を用いたリスクの推定など,地域差を考慮した統計的手法とその利用についても検討を続ける。市町村や保健所管轄,二次医療圏などのような地域差のあると考えられる小地域データに基づいて,局地的な地域に疾病が集積しているかどうかを検討し,その地域を同定する方法として疾病集積性の検定があり,そのひとつとしてTango and Takahashi(2005)によるflexible scan statististicが提案されている。本年度はその方法を改良したスキャン統計量を提案し,実際にその検出の精度がどの程度よいか検討を行った。シミュレーションを行い,その結果,提案法は従来の方法や海外で標準的に用いられるcircular scan statisticと比較して検出力が高く,また検出すべき真の地域を精度よく検出できることが確かめられた。また従来の方法で問題となる計算時間についても大幅に改善できた。この結果は現在,専門学術誌に投稿中である。またその実際問題への適用として,わが国の特定疾患(難病)における医療受給者証所持者数を,集計されている保健所管轄のデータを用い,その地域差を検討した。この結果,従来行われている都道府県単位の解析では分からなかった細かい地域差をみることができ,疾患によってその地域分布が大きく異なっている様子を観察することができた。さらに疾患の発生と関連する遺伝子を検出するため,遺伝子間のマップを用いた検出方法にスキャン統計量の考え方を適用し,従来までとは全く異なった新たなスキャン統計量を提案した。実際,公開されているデータに適用したところ,従来の遺伝子分野の研究とも整合性もみられながら,より詳細な関連遺伝子の位置が示唆された。この結果は海外の学術専門誌BMJ Bioinformaticsに掲載された。
ルネサンス君主のイメージ戦略 ―『ボルソ・デステの聖書』の図像学的研究

おおむね平成15年度の研究実施計画に従い、順調に調査研究が遂行された。イタリアでは、ヴェネツィアの国立マルチャーナ図書館、フィレンツェのドイツ研究所図書館、ヴァティカン教皇庁図書館等において、関連写本の調査および資料収集を行った。また、『ボルソ・デステの聖書』のファクシミリ版を所蔵する東京大学、印刷博物館等において、写本の調査および撮影作業を行った。本年度は『ボルソ・デステの聖書』の挿絵においてボルソが旧約の王や聖ゲオルギウスのような聖人等に見立てて称揚されている様子を明らかにした。また同時代史料より、ボルソ在世中にフェッラーラやモーデナ、レッジョ・エミリアなどエステ家の領土内で執り行われた祝祭において、山車の装飾や活人画、行列の構成などに、同様の趣向が見られたことを検討し、宮廷祝祭と宮廷美術の密接な関係の考察に及んだ。これらの研究成果の一部は、第27回地中海学会大会のシンポジウム「地中海世界の祝祭」においてパネラーとして報告した(「ルネサンスの祝祭における行列について」、平成15年6月22日、金沢美術工芸大学)。平成14年度の研究実施計画に従い、順調に調査研究が遂行された。イタリアでの国外調査は別の資金によって行ったため、当初計上していた外国旅費は、国内調査のために国内旅費に代えた。イタリアではモーデナの市立エステンセ図書館、フェッラーラの市立アリオステア図書館等において資料調査を行い、また、当写本のファクシミリ版を所蔵する東京大学、印刷博物館等において、写本の詳細な調査および撮影作業を行った。本年度は、『ボルソ・デステの聖書』に描かれたボルソのインプレーザ(個人的な標章)の意味、および本写本に描かれたボルソの美徳を表すモチーフに関しての検討を行った。まずボルソは、「パラドゥーロ」、「水流に角を刺す一角獣」、「竜の尾と翼を有するヒョウ」、「生垣」など、彼が行ったポー河の治水および周囲の湿地帯の干拓工事を直接的に想起させるようなモチーフを自分のインプレーザに採用することにより、市民に有益なる君主のイメージを普及させようとしていたと考えられることを明らかにした。同時に、本写本のテクストたる聖書とは無関係に、正義の義人像等、君主の美徳を表すモチーフを諸所に配することによっても、良き君主としてのイメージ宣伝を行っていることを指摘した。これらの研究成果の一部は、エステンセ図書館蔵本ファクシミリ版『ボルソ・デステの聖書』日本版開設2(岩波書店、2002年)収載の論文、「良き君主ボルソ・デステー『ボルソ・デステの聖書』の機能と装飾」として発表した。
ネットワークを介した仮想リアルタイムメディアの環境構築に関する研究

本研究において筆者らは、1)遅延のある通信環境での視覚情報と力覚情報の提示方法,2)立体視覚における輻輳と調節による影響,3)ネットワークを介した実時間対話と通信遅延,4)予測による実時間対話性確保の応用事例,の4点について考察した.ここで1)では視覚と力覚の両感覚チャネルを統合したインターネット上の実時間対話環境を想定し、通信効率を考慮したうえで視覚情報よりも力覚情報を優先的に送信するプロトコルを考案し、タスクパフォーマンス効率の向上を確認した.次に2)ではよりリアルな仮想環境を構築するための3次元視覚提示手法について検討した.すなわち輻輳と調節を独立に制御できるHMDを用いて仮想スポーツ環境を構築し、そこで輻輳と調節の一致/不一致とスポーツ環境のリアリティ(具体的には捕球タスク)との関係を調査した.その結果輻輳と調節の一致が動的対象の視覚提示に必要であることを示した.更に3)では筆者らが提案した予測による実時間インタラクション手法:PFL(Predictive Feedback Loop)を実装し、模擬遅延のあるネットワーク環境での技能効率の評価実験を行った.実験で採用した協調作業においてはユーザーどうしが互いに協力しあうことから位置、速度ならびに加速度のみをパラメータとする上記の力学モデルなどの単純な予測でも技能向上が見込める(実験の結果では有意な差が認められ、50%の向上が示された)ことを確認した.最後に4)では3)の応用例として、ネットウーク対戦型のレーシングゲームに着目し、そこでの遅延感覚の調査とこの緩和を目的とした、対戦相手状態の予測手法を考案した.そこで得られた知見は,適応型誤差修正モデルの有効性である.従来の安定加速度を仮定したものと比較して「動きの滑らかさ」「相対位置の安定性」の点で優位であることが確認された.今後はこのモデルの幾何学的性質の調査が課題となろう.本研究において筆者らは、1)遅延のある通信環境での視覚情報と力覚情報の提示方法,2)立体視覚における輻輳と調節による影響,3)ネットワークを介した実時間対話と通信遅延,4)予測による実時間対話性確保の応用事例,の4点について考察した.ここで1)では視覚と力覚の両感覚チャネルを統合したインターネット上の実時間対話環境を想定し、通信効率を考慮したうえで視覚情報よりも力覚情報を優先的に送信するプロトコルを考案し、タスクパフォーマンス効率の向上を確認した.次に2)ではよりリアルな仮想環境を構築するための3次元視覚提示手法について検討した.すなわち輻輳と調節を独立に制御できるHMDを用いて仮想スポーツ環境を構築し、そこで輻輳と調節の一致/不一致とスポーツ環境のリアリティ(具体的には捕球タスク)との関係を調査した.その結果輻輳と調節の一致が動的対象の視覚提示に必要であることを示した.更に3)では筆者らが提案した予測による実時間インタラクション手法:PFL(Predictive Feedback Loop)を実装し、模擬遅延のあるネットワーク環境での技能効率の評価実験を行った.実験で採用した協調作業においてはユーザーどうしが互いに協力しあうことから位置、速度ならびに加速度のみをパラメータとする上記の力学モデルなどの単純な予測でも技能向上が見込める(実験の結果では有意な差が認められ、50%の向上が示された)ことを確認した.最後に4)では3)の応用例として、ネットウーク対戦型のレーシングゲームに着目し、そこでの遅延感覚の調査とこの緩和を目的とした、対戦相手状態の予測手法を考案した.そこで得られた知見は,適応型誤差修正モデルの有効性である.従来の安定加速度を仮定したものと比較して「動きの滑らかさ」「相対位置の安定性」の点で優位であることが確認された.今後はこのモデルの幾何学的性質の調査が課題となろう.本研究の一環として、申請者らは今年度、1.視覚情報と触覚情報の提示順序ならびにその時間的ずれとマンマシンインタフェース効率の関係2.情報提示に遅延を内在する場合のネットワーク対話性への影響3.立体視覚における輻輳と調節の不一致がマンマシンインタフェース効率に与える影響の3点を調査した。すなわち1.では視覚提示と力覚提示の順序と時間差に着目し、いわゆるプレゼンスとインタラクションのリアリティを損なわないための条件を調査した。具体的には、ユーザーがその仮身(アバター)を自由に操ることができるように設定し、アバターの位置と動き(および他のオブジェクトとの衝突や接触)をグラフィックスによる視覚提示とフォースフィードバック型ジョイスティックによる力覚提示によりユーザーに伝える。そこでその視覚提示と力覚提示の時間を調整し、(1)前者を後者より早く提示する(2)前者と後者を同時刻に提示する(3)後者を前者より早く提示する、などの実験を行い、ユーザーの作業効率と(作業を遂行するうえでの)操作感・現実感がどのように変化するか、また許容範囲などについて調査した^<(1)>。次に2.では昨年度申請者らが提案した予測を用いた対戦相手との実時間インタラクション手法:PFL(Predictive Feedback Loop)を実装し^<(2)>模擬遅延のあるネットワーク環境でのタスクパフォーマンス評価実験を行った。実験で採用した協調作業においてはユーザーどうしが互いに協力的に作業を遂行することから、位置、速度ならびに加速度のみをパラメータとする上記の力学モデルなどの単純な予測手法でもパフォーマンス向上が見込める(実験の結果では有意な差が認められ、約20%程度のパフォーマンス向上が示された)ことを確認した^<(3)(4)>。最後に3.ではよりリアルな仮想環境を構築するための3次元視覚表示手法を検討した。

すなわち、輻輳と調節を独立に制御できるHMD(Head Mounted Display)を用いて仮想スポーツ環境を構築し、そこで輻輳と調節の一致/不一致とスポーツ環境のリアリティ(具体的には捕球タスク)との関係を調査した^<(5)(6)>。その結果輻輳と調節の一致が動的対象の視覚提示に重要であることが示された。今年度は下記4点を調査した.1.遅延のある通信環境での視覚情報とカ覚情報の提示方法2.立体視覚における輻輳と調節による影響3.ネットワークを介した実時間対話と通信遅延4.予測による実時間対話性確保の応用事例ここで1.では視覚とカ覚の両感覚チャネルを統合したインターネット上の実時間対話環境を想定し、通信効率を考慮したうえで視覚情報よりも力覚情報を優先的に送信するプロトコルを考案し,タスクパフォーマンス効率の向上を確認した.次に2.ではよりリアルな仮想環境を構築するための3次元視覚提示手法を検討した.すなわち、輻輳と調節を独立に制御できるHMD(Head Mounted Display)を用いて仮想スポーツ環境を構築し、そこで輻輳と調節の一致/不一致とスポーツ環境のリアリティ(具体的には捕球タスク)との関係を調査した.その結果輻輳と調節の一致が動的対象の視覚提示に重要であることを示した.更に3.では昨年度筆者らが提案した予測を用いた通信相手との実時間インタラクション手法:PFL(Predictive Feedback Loop)を実装し,模擬遅延のあるネットワーク環境でのタスクパフォーマンス評価実験を行った.実験で採用した協調作業においてはユーザーどうしが互いに協力的に作業を遂行することから、位置、速度ならびに加速度のみをパラメータとする上記の力学モデルなどの単純な予測手法でもパフォーマンス向上が見込める(実験の結果では有意な差が認められ、約数十%のパフォーマンス向上が示された)ことを確認した.最後に4,では3,の応用例として、ネットワーク対戦型のレーシングゲームに着目し、そこでの遅延感覚の調査とこの緩和を目的とした、対戦相手状態の予測手法を考案した.そこで得られた知見は,対戦中の両サイトで提示される互いの相対位置情報のずれを誤差とし、この誤差を最小化すべく予測モデルを修正する適応型誤差修正モデルの有効性である.従来の安定加速度を仮定したものと比較して「動きの滑らかさ」「相対位置の安定性」の点で優位であることが確認された.今後はこのモデルの幾何学的性質の調査が課題となろう.
象牙質・歯髄複合体の創傷治癒メカニズムの解明と再生医療への応用

本課題において、象牙質再生治療法およびその技術の開発を目指して種々のin vitroおよびin vivo実験を実施して以下の結果を得た。in vitro実験では、アルギン酸ゲルが象牙質再生のためのscaffoldとして有用なこと、神経栄養因子が歯髄細胞の分化・石灰化に影響を与えること、歯髄細胞においてテネイシンが細胞接着を阻害し、成長因子によるテネイシン発現の増減を介して細胞接着が調節されること、歯髄細胞にBMP-2を添加するとDSPP mRNAの発現が強くなり、基質形成量が増加すること、PDGFが歯髄の創傷治癒過程において象牙質形成に関与していること等が明らかになった。in vivo実験では、phosphophoryn/collagen複合体がBMP-2の効果的なcarrierとなること、直接覆罩におけるCO_2レーザーと接着性コンポジットレジンの併用が効果的であること、歯髄は硬組織誘導活性を有する物質および細胞を含む組織であるため、再生工学に応用できること、骨置換性硬化型リン酸カルシウムセメントは生体親和性に優れ、覆髄材、断髄材として応用できること、創傷歯髄でrFIP-2B mRNA発現が高まっており、この遺伝子のプロモーターは創傷の刺激により活性化される可能性が示唆されること、BMP-2を用いた歯髄幹細胞導入法により歯髄・象牙質再生が可能なこと、EMDは組織刺激性が少なく歯髄創傷部の微小環境を整備することにより、硬組織形成を誘導し治癒を促進すること、Metallothioneinは窩洞形成後の歯髄の創傷治癒において歯髄細胞の増殖・分化に関与していること、歯髄創傷治癒過程では、細胞死制御が重要な役割を果たしていることなどが明らかになった。本研究課題終了後も継続して、効果的な再生を誘導するような技術を開発するための実験を行う予定である。本年度は、象牙質の石灰化に重要な役割を果たしていると思われるホスホホリンの機能に関してin vitro実験を行い,結合型ホスホホリンのリン酸基が重要な役割を占めているが,脱リン酸をうけた場合には,カルボキシル基とリン酸基の共同作用が重要となることが明らかになった.また,結合型に対して遊離型ホスホホリンは石灰化制御に働くことが明らかになった.また,支持体となるコラーゲンに関しては,コラーゲン線維の安定化がホスホホリンの共有結合の安定化につながり,石灰化誘導能を増強させることが明かとなった.また、骨髄細胞をホスホホリン・コラーゲン複合体上で三次元培養してハイブリッド人工骨を作成して、ラットの骨人工欠損部に移植したところ、旺盛な骨、骨髄形成が誘導され、これらは、BMPの効果的な担体となることが予想された。さらに、in vitro歯胚間葉組織にBMPプラスミドを電気的に導入すると、器官培養7日後、DSPのmRNA発現がみられた。また、イヌの生活歯髄切断面の歯髄組織にBMPプラスミドを導入すると、1ヶ月で、切断面下の歯髄組織は骨様象牙質に変化した。以上のことから、BMPプラスミド遺伝子導入は象牙芽細胞分化誘導に有効であることが示唆された。上述したようなタンパク質を用いた方法および遺伝子導入法を用いて今後、象牙質再生のメカニズムを解明し、効果的な再生を誘導するような技術を開発するための実験を行う予定である。本年度は、象牙質再生治療法およびその技術の開発を目指して種々の実験を実施して以下の結果を得た。最初に、象牙質の石灰化に重要な役割を果たしていると思われるホスホホリンの機能に関してさらにin vitro実験を行い,硅素イオンが結合型ホスホホリンによる石灰化誘導を促進することを明らかにした。

また、ホスホホリン以外のリンタンパク質としてオステオポンチンを用いて石灰化誘導実験を行い、界面張力測定によりオステオポンチンが高い石灰化誘導活性を示すことを明らかにした。また、骨髄細胞をホスホホリン・コラーゲン複合体上で三次元培養してハイブリッド人工骨を作成して、ラットの骨人工欠損部に移植したところ、旺盛な骨、骨髄形成が誘導された。そこで、さらにBMP・ホスホホリン・コラーゲン複合体を骨髄細胞分化のscaffoldとして使用してラット頭蓋骨骨膜下に移植したところ、旺盛な骨形成が確認され、象牙質再生治療に本複合体を使用することにより良好な結果が得られることが示唆された。さらに、in vitro歯胚間葉組織にBMPプラスミドを電気的に導入すると、器官培養7日後、DSPのmRNA発現がみられた。また、イヌの生活歯髄切断面の歯髄組織にBMPプラスミドを導入すると、1ヶ月で、切断面下の歯髄組織は骨様象牙質に変化した。以上のことから、BMPプラスミド遺伝子導入は象牙芽細胞分化誘導に有効であることが示唆された。上述したようなタンパク質を用いた方法および遺伝子導入法を用いて今後、効果的な再生を誘導するような技術を開発するための実験を行う予定である。象牙質再生治療法およびその技術の開発を目指して種々の実験を実施して以下の結果を得た。最初に、象牙質の石灰化に重要な役割を果たしていると思われるホスホホリンの機能に関してさらにin vitro実験を行い,硅素イオンが結合型ホスホホリンによる石灰化誘導を促進することを明らかにした。さらに、リン酸カルシウムセメント、アルギン酸ゲルや炭酸ガスレーザーの直接覆髄への応用を試み、どれも良好な結果を得た。本研究課題終了後も継続して、効果的な再生を誘導するような技術を開発するための実験を行う予定である。
天然超分子化学の総合的研究

生物活性天然有機化合物が示す多様な作用は、いずれもそれらの化合物がまず生体側の分子によって特異的に構造を認識され、超分子というべき複合体を形成することに始まる。本研究は天然有機化合物による生物機能発現の最初の段階にあたる超分子の形成過程と機能発現の機構を有機化学的に明らかにすることを目指して平成68年度の3年間にわたって実施した重点領域研究「天然超分子の化学」の研究成果を取りまとめるために行ったものである。比較的低分子量の有機分子から核酸、脂質、糖質、蛋白質にいたる広範な天然有機化合物を対象とした研究成果を整理し、領域研究に参画した多数の研究者の今後の研究の展開に活用するとともに、これを広く公表して関連分野の発展に資することを目指して以下の活動を行った。すなわち、6月に大阪で「成果取りまとめシンポジウム」を公開で開催し、各班から選ばれた6名が領域を代表して3年間の研究を中心に講演した。この際、できるだけ全班員の参加を得るために、交付を受けた予算から班員の旅費を支出した。このシンポジウムの機会に各班長がそれぞれの研究成果の概要を集め、取りまとめの方針を検討する資料とした。またこの資料を中心として研究終了ヒアリングの説明資料およびその際に提出する報告書を作成した。そこには新聞報道などを通じて社会的に与えたインパクトも紹介するよう務めた。この報告書は各班の主な成果の概要をわかりやすくまとめ、各研究者の主な発表論文を収録して情報源としての価値を高めたもので、これを領域ニュースとしても全員に配付した。続いて個々の3年間の研究成果について各班員から和文4、英文2ページの要旨を集めて、和英の研究成果報告書を印刷し、これを広く配付した。有機化合物は炭素をはじめとする限られた種類の元素から構成されているにもかかわらず、その構造はきわめて多様であり、それを反映して多彩な生物機能を有している。それらの活性が発現する際には、有機化合物は生体側の分子によって極めて特異的に構造を認識されて複合体を形成する。本研究では比較的低分子量の有機分子から核酸、脂質、糖質、蛋白質を対象にして、生物機能の発現に当たっての第一段階であるこの認識の過程を、超分子の形成として捉え、その形成機構と機能発現にいたる経過を化学的に明らかにすることを目指した。本研究領域全体の計画の円滑な進行を図るために、各計画研究班の班長からなる実施グループと、当該研究領域の学識経験者から成る評価グループを組織し、この領域研究に属する幅広い分野の研究者の密接な協力と、情報交換を促進することに留意した。この目的を達成するため、初年度はまず6月に2日間にわたる全体会議を開催して、組織の全体像の周知を図った。さらに班員名簿、領域ニュースの発行によって領域内の情報交換を活発にするとともに、12月には公開シンポジウムを開催して、成果を領域内に発表する機会を設けた。この間に機会あるごとに開いた総括班会議(2回)および班長集会(計4回)を中心に重要な問題を協議して、意見の集約を図った。全体の集会の際には各班の集会を開いて、班内の研究情報の交換に成果を挙げた。超分子研究を促進するために必須の高分解能FT-NMR装置と核酸、蛋白質の構造変化を解析するための高性能円二色性分散計を購入して班員の共用に供したが、これらも有効に利用されて次第に成果を出しはじめている。本年度に得られた成果は、成果報告書としてまとめて印刷公表した。天然に存在する多彩な生物活性有機化合物がその作用を発現する際には、まず生体側の分子によって極めて特異的に構造を認識されて複合体を形成する。この複合体は共有結合で形成される通常の分子の概念を越えるものであるので、これを超分子とみなすことができる。本研究では比較的低分子量の有機分子から核酸、脂質、糖質、蛋白質を対象にして、生物機能の発現に当たっての第一段階であるこの認識過程を、超分子の形成として捉え、その形成機構と機能発現にいたる経過を化学的に明らかにすることを目指した。本研究領域全体の計画の円滑な進行を図るために、各計画研究班の班長からなる実施グループと、当該研究領域の学識経験者から成る評価グループを組織し、昨年度に続いてこの領域研究に属する幅広い分野の研究者の密接な協力と情報交換の促進とともに、全体の研究を有効に推進することに留意した。この目的の達成のため、6月(名古屋)と12月(京都)に公開シンポジウムを開催して、班員相互間の情報交換とともに成果を領域外にも発表する機会を設けた。昨年同様に領域の名簿を作成したほか、第2年目の中間ヒヤリングの年に当たって、9月に班員の研究成果と発表状況をまとめた冊子を作成し、これを領域ニュースとして全員に配付して研究内容の周知を図った。さらに2回の総括班会議および班長集会(計4回)を中心に重要な問題を協議して、運営の方針を協議した。シンポジウムの際には各班の集会を開いて、研究情報の交換に成果を挙げた。昨年度購入した高分解能FT-NMR装置と高性能円二色性分散計は班員の共用に供し、次第に成果を出し始めている。本年度に得られた成果は成果報告書としてまとめて印刷公表した。

本研究では比較的低分子量の有機分子から核酸、脂質、糖質、蛋白質にいたる広範な天然有機化合物を対象にして、生物機能の発現に当たっての最初の段階であるこの超分子の形成過程と機能発現の機構を有機化学的に明らかにすることを目指した。本年度もこれまでの2年間と同様に各計画研究班の班長からなる実施グループと、当該研究領域の学識経験者から成る評価グループを組織して総括班とし、領域全体の研究計画の一層の円滑な進行を目指すとともに、最終年度に当たって可能なかぎり有効な成果を挙げることを念頭において幅広い領域の研究者間の情報交換と協力を図った。この目的を達成するために、6月(大阪)と12月(東京)の2回の公開シンポジウムを開催して、研究成果を広く一般に発表すると同時に領域内における最新の情報を全員が共有するための機会とした。シンポジウムの際には各班の班会議を開いて、それぞれの班に固有の問題の協議と情報交換を図った。このほかに総括班会議および班長会議をそれぞれ2回開いて、今年度の運営に関する重要事項を協議するとともに、次年度にむかって成果取りまとめの方針についても十分に検討した。追加配分を受けた予算については、各班長に配分してそれぞれの班の研究に最も有効な形で支出した。設備備品として総括班で初年度に購入した高分解能FT-NMR装置と高性能円二色性分散計は班員の共用に供し、糖鎖のコンホメーション解析などに有効に役立てることができた。生物活性天然有機化合物が示す多様な作用は、いずれもそれらの化合物がまず生体側の分子によって特異的に構造を認識され、超分子というべき複合体を形成することに始まる。本研究は天然有機化合物による生物機能発現の最初の段階にあたる超分子の形成過程と機能発現の機構を有機化学的に明らかにすることを目指して平成68年度の3年間にわたって実施した重点領域研究「天然超分子の化学」の研究成果を取りまとめるために行ったものである。比較的低分子量の有機分子から核酸、脂質、糖質、蛋白質にいたる広範な天然有機化合物を対象とした研究成果を整理し、領域研究に参画した多数の研究者の今後の研究の展開に活用するとともに、これを広く公表して関連分野の発展に資することを目指して以下の活動を行った。すなわち、6月に大阪で「成果取りまとめシンポジウム」を公開で開催し、各班から選ばれた6名が領域を代表して3年間の研究を中心に講演した。この際、できるだけ全班員の参加を得るために、交付を受けた予算から班員の旅費を支出した。このシンポジウムの機会に各班長がそれぞれの研究成果の概要を集め、取りまとめの方針を検討する資料とした。またこの資料を中心として研究終了ヒアリングの説明資料およびその際に提出する報告書を作成した。そこには新聞報道などを通じて社会的に与えたインパクトも紹介するよう務めた。この報告書は各班の主な成果の概要をわかりやすくまとめ、各研究者の主な発表論文を収録して情報源としての価値を高めたもので、これを領域ニュースとしても全員に配付した。続いて個々の3年間の研究成果について各班員から和文4、英文2ページの要旨を集めて、和英の研究成果報告書を印刷し、これを広く配付した。
一塩基多型(SNPs)領域の法医分子生物学的応用

本研究では、個人識別や親子鑑定などの法医学的検査法に適した1塩基多型(SNPs)の検査法の開発を試みた。まずはいくつかの検出法の比較を行い、どの方法がよいかを検討した。その結果、ローカスの選定のためにはアレル特異的PCR法が適当であり、多座位同時検出法にはSnaPshot法が適していることがわかった。そして、我々はThe SNP Consortiumにおいて新たに公表されたデータベースから、東洋人で多型性が高く、遺伝子あるいは候補遺伝子の領域外にある51ローカスを選択した。それらのローカスについて、日本人32名のDNA試料を用い、カイ二乗検定によりハーディ・ワインベルグ平衡からの乖離を見たところ、乖離の見られない、すなわち安定した頻度分布を示すローカスは39ローカスであった。これらのローカスは、小さい方のアレル頻度が0.4以上のものが22あり、0.3以上のものが14といずれも多型性が高かった。これらの法医学的検査に適したローカスから異なる染色体上に分布する12ローカスを対象に、我々がこれまでSTRで開発してきた多座位同時増幅・型判定システムを応用し、一度のPCRで多くのローカスの型判定を行う方法の開発を進めている。我々は、さらに、DNAが高度に低分子化している陳旧で微量な試料のための高感度検査法の確立を試みた。我々は、そのような試料では、汎用されているSTRでは増幅が不十分なため検査不能の例をしばしば経験している。ほとんどのSTRは、PCRの増幅産物が150から300塩基と長いが、SNPの増幅産物は、100塩基以下に短くすることが可能である。従って、SNPは、低分子化したDNAの効率的な増幅ができるという大きな利点を持っている。この利点を最大限に発揮するためには、できるだけ増幅産物長を短くする試みが重要であるが、この方向でもいくつかのローカスで開発がほぼ終わっている。本年度より開始した本研究において、現在、Genetic Research社のSNPpairプライマーセット3300ローカスの中から各常染色体における短腕及び長腕上からそれぞれ5ローカスほどを選び、計約200ローカスについて、日本人の各アレル頻度を算定している。現在、蛍光標識SSCP法、PCR-RFLP法、アレル特異的PCR法、SnaPShot法などを駆使して、できるだけハイスループットの方法を模索している段階である。また、効率の良いSNPタイピング方法として、モWAVEモDNAフラグメント解析装置、Luminex蛍光ビーズ解析法、READ-IT発光分析法などを用いて行うことを考え、それらの基礎実験を行いつつある。また、偶然ではあるが、親子のトリオのDNA資料について、マルチプレックスSTRタイピングキットを用いて十数種類のローカスのタイピングを行ったところ、5例の突然変異を疑わせる例を発見し、そのうち3例は、STRの突然変異ではなく、プライマー3ユ末端部部位のSNPによるアレルドロップアウトであることが判明した。現在、この部位の日本人及びコーカシア人におけるアレル頻度を算出している。なお、この成果の一部は、平成12年12月7日に開催された日本DNA多型学会第9回学術集会で発表され、DNA多型Vol.9に掲載される予定であり、この成果は第85次日本法医学会総会で発表予定である。今後も、継続して、日本人に適したSNPローカスの選定と効率の良いタイピング方法を策定していく予定である。昨年度から継続して、Genetic Research社のSNPpairプライマーセット3300ローカスの中から各常染色体における短腕及び長腕上からそれぞれ5ローカスほどを選び、計約200ローカスについて、アレル特異的PCR法により日本人の各アレル頻度を算定し、現在までにほぼ1/3の染色体で終了している。

また、The SNP Consortiumのデータベースから東洋人で頻度ができるだけ50:50に近いローカスを24ローカス選んだ。それらのローカスについてアレル特異的PCR法により日本人32名からアレル頻度を算出した。今までに我々が多種DNAマーカーを型判定する蛍光標識やマルチプレックスの技術を通じて得た経験を生かして、現在、これらのローカスの中から3ローカスを選び超微量資料からも型判定できるマルチプレックス法や、また一度に10ローカスを同時増幅・型判定できる方法を、SnaPShot法などを駆使して、開発しつつある。他の方法についてもできるだけハイスループットの方法を模索している段階である。また、効率の良いSNPタイピング方法として、WAVEフラグメント解析装置やREAD-IT発光分析法の基礎実験を行ったが、余り有効な結果が得られなかった。今後、Pyrosequncing法やLuminex蛍光ビーズ解析法などについても検討していく予定である。さらに、マルチプレックスSTRタイピングキットのプライマー3'末端部部位のSNPによるアレルドロップアウトを観察した事例について、平成13年9月に開催されたインド-太平洋法医・法科学会議で発表され、日本DNA多型学会第9回学術集会で発表された。今後も、継続して、日本人に適したSNPローカスの選定と効率の良いタイピング方法を策定していく予定である。昨年度から継続して、ローカスの選定を行った。The SNP Consortiumの新たに公表されたデータベースから東洋人で2つのアレルの頻度ができるだけ同じに近いローカスを200ほど選択し、そのうち、ゲノムデータベースのマップ上で遺伝子あるいは候補遺伝子領域外にある51ローカスを選んだ。それらのローカスについて、日本人32名のDNA試料を用いてアレル特異的PCR法を行った。そのうちアレル特異的PCRがうまく反応しなかった7ローカスを除く44ローカスでアレル頻度を算出した。これらについて、カイ二乗検定によりハーディ・ワインベルグ平衡(HWE)からの乖離を検定したところ、5つのローカスで有意差(P < 0.05)が多くみられた。(HWE)からの乖離がみられなかった39ローカス中で、ほぼ同じ頻度(片一方のアレル頻度が0.4以上)のものは22ローカスであった。また、やや偏りのある頻度(片一方のアレル頻度が0.3以上)のものは14ローカスであった。今までに我々が多種DNAマーカーを型判定する蛍光標識マルチプレックスの技術を通じて得た経験を生かして、多座位同時増幅・型判定できる方法を開発しつつある。他の方法についてもできるだけハイスループットの方法を模索している段階で、効率の良いSNPタイピング方法として、Pyrosequencing法やLuminex蛍光ビーズ解析法などについても検討していく予定である。また、現在のローカス数では充分ではないので、今後も、継続して日本人に適したSNPローカスの選定をし、併せて、ヒト集団の違いを区別できるローカスの選定も行い、法医学的応用をしていく予定である。