hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
離乳期口腔における摂食機能の発達にかかわる分子の組織学的解析

歯の生える時期にカルシニューリンという遺伝子の発現に関わる分子が歯の生える部位の歯肉と歯胚(顎の骨に埋まっている歯)の周囲に発現している事がマウスにおいて確認できた。カルシニューリンが歯の生える事に関わっている可能性が考えられた。仔マウスに吸啜(母乳を飲む)させるとc-fosという脳の神経の活動の指標となる分子が三叉神経主知覚核(顔や口の触覚に関与している)と運動核周囲の網様体に発現していた。聴覚に関連する部位にも、吸啜運動とは関係ないが、c-fosの発現がみられた。上口唇の知覚神経を切断し、吸啜させたが、c-fosの発現には変化がみられなかった。マウスを用いて歯の形成、萌出期(歯胚の硬組織形成期にあたる生後7日(P7)、生後10日(P10)、歯の萌出直前の生後14日(P14)、歯の萌出後の生後4週(4W))の歯の周囲の組織におけるカルシニューリンの発現を免疫組織化学法にて調べた。P7ではCNAalphaが歯肉上皮、エナメル器である、乳頭層に発現がみられ、CNAbeta、CNB1が歯肉上皮、エナメル器である、乳頭層、星状網、外エナメル上皮に発現がみられた。P10ではP7でみられたCNAalphaの発現に変化がみられなかったが、CNAbetaでは乳頭層、星状網での発現が低下し、CNB1では外エナメル上皮の発現が強くなった。P14の歯胚では、歯肉に近い咬頭の退縮エナメル上皮と歯胚に近い歯が萌出すると考えられる歯肉でのCNAalpha、CNAbeta、CNB1の発現が強くなった。4Wでは歯肉、付着上皮、歯根膜にCNAalpha、CNAbeta、CNB1の発現がみられた。歯の萌出期に歯胚の周囲の組織にカルシニューリンが発現し、かつ発現に変化がみられる事から歯の萌出にカルシニューリンが関与している可能性が考えられた。また、歯の萌出後の歯根膜にカルシニューリンが発現している事から、咀嚼の調節にカルシニューリンが関わっている可能性も考えられた。夜間に母子分離させ、その後吸啜させた、生後4日(P4)、生後8日(P8)の仔マウスの脳幹部におけるc-fosの発現を免疫組織化学法にて調べた。これまでの報告と同じように、吸啜させた仔マウスの弧束核、延髄網様体、三叉神経核にc-fosの発現がみられたが、発現部位や発現細胞の数にはP4とP8で違いがみられないようであった。c-fosの発現については解析に用いた個体数が少なく、また、適切な実験プロトコールを決定するために時間がかかったため、引き続き解析が必要と思われた。吸啜をさせた後の仔マウスの脳幹部でのc-fosの発現について調べた。生後4日、生後8日の仔マウスの三叉神経脊髄路核にc-fosの発現がみられた。生後2日に眼下窩神経切断を行い、吸啜をさせた生後4日、生後8日の仔マウスでは切断側の三叉神経脊髄路核のc-fosの発現が低下した。三叉神経脊髄路核はマウスのwhiskerの触覚刺激に反応するバレレット構造がみられれ、体性感覚野の中継核となっている。授乳期仔マウスのwhiskerへの触覚刺激は吸啜反射を誘発させるのに重要であり、今回の眼下窩神経切断によって発現が消失した部位の三叉神経が吸啜反射の制御に関与していると考えられたが、解析に用いた個体数が少ないため、さらなる検討が必要と思われた。さらに、マウスを用いて歯の萌出時期の萌出期の歯胚を含む顎骨領域のカルシニューリンの発現を免疫組織化学法を用いて調べた。歯の萌出時期になると歯の咬頭部の退縮エナメル上皮にCNAbetaの強い発現が見られるようになり、歯が萌出する部位の顎堤粘膜の結合組織部の細胞にCNAalphaの強い発現がみられるようになった。CNAalphaが発現している細胞の同定はできていない。CNB1はCNAalphaが発現している歯が萌出する部位の顎堤粘膜の結合組織部の細胞とCNAbetaが発現している歯の咬頭部の退縮エナメル上皮に発現がみられた。CNAサブユニットとCNBサブユニットが共に発現しているため、歯の萌出時の顎堤粘膜の形態変化にカルシニューリンが機能的に関与している可能性がある。吸啜をさせた後の生後4日、8日、12日の仔マウスの脳幹部でのc-fosの発現を三叉神経核を中心に引き続き調べた。脊髄路核では生後4日、8日、12日にc-fosの発現がみられ、主知覚核では生後8日、12日に発現がみられた。中脳路核にはc-fosの発現がみられなかった。運動核周囲の橋網様体では生後8日、12日にc-fosの発現がみられた。また、生後2日目に右側眼窩下神経を切断し、生後8日と生後12日に吸啜をさせた後の仔マウスと生後6日に右側眼窩下神経を切断し、生後8日に吸啜をさせた後の仔マウスと生後10日に右側眼窩下神経を切断し、生後12日に吸啜をさせた後の仔マウスの三叉神経核でのc-fosの発現変化についても調べた。

生後2日目に右側眼窩下神経を切断し、生後8日と生後12日に吸啜をさせた後の仔マウスでは切断側の主知覚核でのc-fosの発現が低下していたが、生後6日に右側眼窩下神経を切断し、生後8日に吸啜をさせた後の仔マウスと生後10日に右側眼窩下神経を切断し、生後12日に吸啜をさせた後の仔マウスでは切断側のc-fosの発現が多くなっていた。この事から眼窩下神経を切断すると摂食機能をつかさどる神経回路に変化が起きる可能性が考えられた。また、吸啜をさせた仔マウスでは青斑核にc-fosの発現がみられた。さらに直接、摂食機能に関連がないと思われるが、吸啜をさせる、させないに関わらず、生後4日と生後8日の仔マウスの下丘、外側毛帯にはc-fosの発現がみられ、特に下丘では発現量が多かった。歯の生える時期にカルシニューリンという遺伝子の発現に関わる分子が歯の生える部位の歯肉と歯胚(顎の骨に埋まっている歯)の周囲に発現している事がマウスにおいて確認できた。カルシニューリンが歯の生える事に関わっている可能性が考えられた。仔マウスに吸啜(母乳を飲む)させるとc-fosという脳の神経の活動の指標となる分子が三叉神経主知覚核(顔や口の触覚に関与している)と運動核周囲の網様体に発現していた。聴覚に関連する部位にも、吸啜運動とは関係ないが、c-fosの発現がみられた。上口唇の知覚神経を切断し、吸啜させたが、c-fosの発現には変化がみられなかった。歯胚の器官培養については技術的な問題で達成が困難であると思われるが、培養ではなく生体のマウスを用いて解析を進めている。離乳期の吸啜運動時のマウス脳幹におけるc-fosの発現変化の解析については使用していた抗体が製造中止になる事があり、実験のプロトロールの再確立に時間がかかっているが、眼下窩神経を切断した際の吸啜運動時の脳幹におけるc-fosの発現変化の解析も同時に進行させている。以上を総合的に考慮すると計画はやや遅れていると判断する。小児・障害者歯科学器官培養については残念ながら確立を断念し、生体マウスでの解析を進めていく予定である。離乳期の吸啜運動時のマウス脳幹におけるc-fosの発現変化の解析についてもこのまま計画とおりに解析を進めていく予定である。当初の計画では平成25年度に、1)歯胚の器官培養、2)歯の萌出時の歯周組織におけるカルシニューリンの発現解析、3)離乳期マウスの摂食時の脳幹におけるc-fosの発現変化について研究を進める予定であった。このうち2)については、研究は順調に進行しており、3)についても解析をすすめており、さらに平成27年度に行う予定であった、感覚神経切断後の離乳期マウスの摂食時の脳幹におけるc-fosの発現変化についても研究をすすめている。ただし、1)については研究がうまく進んでおらず、技術的に歯胚の器官培養が困難になる可能性も考えられる。また、3)については当初予定していた試薬が製造中止になるなど、安定した実験プロトコールの確立に時間が必要になっている。さらに今年度は研究室の耐震補強工事による仮移転があり、研究室の立ち上げに時間を要した経緯もあった。以上を総合的に考慮すると研究の達成度としてはやや遅れていると思われる。今年度は消耗品の費用が当初計画していたより、少なくなったため、次年度使用額が発生した。歯胚の器官培養については引き続き確立をめざして研究を継続するが、器官培養がうまく行かない場合も考えられる。その際にはシクロスポリン投与によるカルシニューリンの機能抑制が歯の形成、発育に及ぼす影響について研究を進めるために、マウス生体に直接シクロスポリンを投与して、歯の形成、萌出時に形態的に変化がみられるか解析をおこない、発現の変化する分子についても探索を行う。摂食時における摂食時の脳幹におけるc-fosの発現変化についても研究を進める。まずは試薬の変更があったために、安定した実験プロトコールを確立させる。その後、解析を行う発達段階の時期を増やし、研究を進める。
美術に即した文化的・国家的自己同一性の追求・形成の研究―シンガポールの場合

美術は、絵画・彫刻・建築・工芸を含むヨーロッパ的な概念である。近代に至るまで、アジアにおいては、この概念がなく、東アジアでは書画、南アジアでは彫刻、西アジアでは建築が造形芸術の中心をなし、その枠組をなしていた。美術概念の受容は、その意味で、近代化と一体であり、文化的・国家的アイデンティティーの形成と不即不離である。絵画・彫刻班は、平成14年11月11日から16日に、建築班は、平成15年2月14日から21日ないし23日に、シンガポールとマレーにおいて概括的調査を行った。前者の絵画・彫刻班は、シンガポール国立大学NUS博物館所蔵作品のうち、伝統中国絵画とインド・東南アジア彫刻を中心に、その調査・撮影を実施した。また、改装中であった亜州文明博物館エンプレス・プレイス本館については、ギャラリーの配置などを実地調査し、東アジアは日本・韓国美術を除く中国美術のみ、他は東南アジア・南アジア・西アジアの美術を対象とする、シンガポールにおけるアジア美術収集の国家的な方針の実態を把握することができた。また、新たな亜州文明博物館エンプレス・プレイス本館は、旧国会議事堂や最高裁判所に隣接する旧政府庁舎を改装したものであり、中国的かつヨーロッパ的な文化的アイデンティティーを基礎として、ASEANの中核都市たらんとする都市国家としてのアイデンティティーを築こうとしている点を読みとることができた。後者の建築班は、シンガポール国立文書館などで資料収集に努めたほか、マラッカに赴き、オランダ・イギリス時代の建築物やマラヤ華人建築家の作品等の実地調査を行った。その結果、華人建築家の中国的表現などについて、新たな知見を得ることができた。今後は、今回の研究成果を基礎として、東南アジアからアジア全域へと研究対象を拡大しつつ、現地調査を継続してゆく方針である。
感性工学の基礎的デザインデータベースの構築とそのシステム化に関する研究

研究内容は以下の3点となる。1.感性工学によるネーミングシステムの構築と応用デザインデータベースの構築の一環として,もののネーミングを支援するシステムを構築した。これは橋やトンネルなど土木建造物の命名を支援することが当初の目的である。風土に関する資料や百科事典での記述をシードとする。日本語の意味概念階層辞書をデータベースに用いて,階層の上下,同一階層内での類似概念を調べ,シードから発想をふくらませた名前を提案するシステムである。これについては,感性工学会論文誌に掲載した。2.感性工学の基礎的デザインデータベースの構築とJavaベースのシステムの作成感性工学データの分析結果をWebで共有できるようにするために,角の丸み,直方体の辺の比率(これはヒューマンインターフェイス学会論文誌に発表),自動車インテリア,ヘアトリートメント容器の分析結果をデータベースにした。さらに,Javaで缶ビールの感性工学システムを作成した。3.デザインコラボレーションの実験とコラボレーションプロセスの分析スウェーデンリンシェピン大学と広島国際大学の学生間で,缶ビールを題材としてデザインのコラボレーションを行ない,そのプロセスを分析した。上で挙げたデータベースを用い,電子掲示板システムによるスケッチやCGデータの共有と意見交換,インターネットビデオフォンを使ったリアルタイムコミュニケーションを用いた。コラボレーションのプロセスを分析した結果,次のことが分かった。A.感性工学システムを使って,デザインと感性との関係をつかむことにより,互いに一度もあったことのない被験者どうしでもデザインの意図が互いに誤解無くやりとりすることができた。感性工学システムをネットでつかうことにより,国際的なデザインプロセスが促進されることが分かった。B.単に感性工学システムにある知識を使うだけでなく,それを土台として発展的にデザインプロセスが進んだ。システムにあるデザインと感性の関係を無批判に使うのではなく(例:もっとふさわしい色は別にないのか,など),議論とアイディアを出しあうことで創造性を引き出す触媒として使用された。C.文化間の差を刺激として創造的な発展を見せた。日本ではあまりないが,北欧では飲料メーカーがさまざまな冬季スポーツを援助している。この意見のやりとりから,"スポーティ"な要素を加味するためのアイディアが双方から活発にだされ,統合されて試作品が完成した。平成15年度の研究内容は以下の2点になる。1.感性工学の基礎的デザインデータベースの構築これまでに研究してきた、感性工学データの分析結果を広く使えるようにWebサイトの形でデータベース化した。その際、国際的に共有できるように英語を併記するものとした。具体的には、缶ビール、自動車インテリア、角の丸み、直方体の辺の比率の分析結果をデータベース化した。分析結果の索引をHTML化しただけでなく、ダウンロードして使用できる感性工学システムをJavaで作成した。2.スウェーデンリンシェピン大学との感性デザインのコラボレーションの研究上のようにして作成した感性工学のデザインデータベースは、実際のデザインプロセスでどのように活用できるかを、実際のデザイン活動の中で検証した。リンシェピン大学Eklund教授の研究室の学生と、国立呉高専および広島国際大学の学生との間でインターネットを活用したデザインのコラボレーションを行なった。実験では、ビール缶のデザインを題材として、どのような感性に適合するものを目的とするかをネットを介してまず話し合い、意思決定を行なった。次に双方でスケッチをしておおまかなデザインの形にした。最終的に、双方の案のすり合わせを行ない、当初の目的に合致するデザインをコンピュータグラフィックを使って作成した。

お互いに直接会ったことの無い学生の間であったが、全ての段階においてデータベース化した感性工学データを参照することにより、デザインのアイディアや目的を交換することができた。この実験結果から、感性工学での分析結果をデータベース化しデザインのコラボレーションに活用することは、デザインプロセスにおけるいわば共通言語を提供することになり、全体のプロセスを活性化し促進するものであることがわかった。これにより、目標とする感性を満たす製品作りに大きく貢献することが期待できる。研究内容は以下の3点となる。1.感性工学によるネーミングシステムの構築と応用デザインデータベースの構築の一環として,もののネーミングを支援するシステムを構築した。これは橋やトンネルなど土木建造物の命名を支援することが当初の目的である。風土に関する資料や百科事典での記述をシードとする。日本語の意味概念階層辞書をデータベースに用いて,階層の上下,同一階層内での類似概念を調べ,シードから発想をふくらませた名前を提案するシステムである。これについては,感性工学会論文誌に掲載した。2.感性工学の基礎的デザインデータベースの構築とJavaベースのシステムの作成感性工学データの分析結果をWebで共有できるようにするために,角の丸み,直方体の辺の比率(これはヒューマンインターフェイス学会論文誌に発表),自動車インテリア,ヘアトリートメント容器の分析結果をデータベースにした。さらに,Javaで缶ビールの感性工学システムを作成した。3.デザインコラボレーションの実験とコラボレーションプロセスの分析スウェーデンリンシェピン大学と広島国際大学の学生間で,缶ビールを題材としてデザインのコラボレーションを行ない,そのプロセスを分析した。上で挙げたデータベースを用い,電子掲示板システムによるスケッチやCGデータの共有と意見交換,インターネットビデオフォンを使ったリアルタイムコミュニケーションを用いた。コラボレーションのプロセスを分析した結果,次のことが分かった。A.感性工学システムを使って,デザインと感性との関係をつかむことにより,互いに一度もあったことのない被験者どうしでもデザインの意図が互いに誤解無くやりとりすることができた。感性工学システムをネットでつかうことにより,国際的なデザインプロセスが促進されることが分かった。
光照射固体ＮＭＲによる光受容体膜タンパク質の活性中間体の構造機能相関の解明

1)(In-situ光照射固体NMRシステムの構築)これまでに開発してきた光照射固体NMR装置の光照射効率を格段に上げることを試みた。同時にLED光源から複数の波長での光照射を可能にした。2)(ppR-pHtrII複合体における光中間体の捕捉と光反応サイクルの解明)負の光走性を示すppR-pHtrII複合体は光信号を伝達するM-中間体の寿命が1.7秒と他の中間体に比べて格段に長いことから、in-situ光照射固体NMRにおいて、520 nmの光を照射することで、標識した[13C-20]retinalのNMR信号を観測し、M-中間体の捕捉を確認することが出来た。その結果、M-中間体には少なくとも3種類の区別できる中間体が共存していることが明らかになった。次にM-中間体が捕捉された状態で365 nmの青色光を照射した。この結果、3種類の中間体の内1つは紫外線光活性のないことが分かったのでこの中間体がM-中間体ではなくN-中間体であることが判明した。3)(SRIにおける光中間体の捕捉と光反応サイクルの解明)SrSRI(Salinibacter ruber sensaryrhodopsin I)は真正細菌由来のロドプシンであり、正と負の両方の光走性機能をもつ光受容膜タンパク質である。光を照射することにより、K,L,M-中間体を経て元に戻る光反応回路に加えて、2光子吸収により、M-からP-中間体を経て元に戻る光反応過程が存在する。SrSRIは大腸菌発現系で発現し、PG膜に再構成して測定試料とした。光照射固体NMRの測定はLEDから発生した2波長の光(365 nm, 520 nm)を照射した条件で固体CP-MAS-NMRスペクトルを観測した。この結果、520 nmの光照射でM-中間体が、365 nmの光照射でP-中間体が捕捉され、波長に依存して中間体が入れ替わる現象を観測した25年度が最終年度であるため、記入しない。25年度が最終年度であるため、記入しない。この結果、520 nmの光照射でM-中間体が、365 nmの光照射でP-中間体が捕捉され、波長に依存して中間体が入れ替わる現象を観測したPharaonis Phoborhodopsin (ppRあるいはSRII)は高度好塩好アルカリ性菌Natronomonus Pharaonisに存在する光受容膜タンパク質であり、負の走光性を制御する光受容体である。ppRは固有のトランスデューサー、pHtrIIと2:2複合体を形成して存在し、信号伝達機能を有している。本研究ではppRおよびppR-pHtrII複合体を用いて、光中間体の構造・運動性の変化を観測した。本実験では光照射装置を組み込んだ固体NMR装置を開発し、光照射光源にはLED(520 nm, 50 mW)を用いた。試料管に試料を入れた後、光散乱を起こすことが可能なガラスキャップを試料管に挿入した。これにより、高効率の光照射が可能になった。ppRのM-中間体の寿命は1.7 sと長いので、520 nmの光を連続照射すれば、M-中間体が捕捉される。実際ppR-pHtrII複合体ではM-中間体の捕捉に成功した。さらにこのM中間体は一種類ではなく少なくとも3種類のM中間体の存在が確認された。

このM中間体が捕捉された後、520 nmから365 nmの光照射に切り替えたところ、M3のみ減衰が遅かったので、M3中間体は380 nmに吸収極大をもつM中間体ではなくN中間体と考えられる。M-中間体ではThr204とTyr174で形成する水素結合の変化が信号伝達機能に重要であることが示されている。そこで、[1-13C]Tyr,[15N]Pro-ppR-pHtrII複合体の暗状態(G-状態)におけるTyr174由来の信号を観測したところ、174.6 ppmに信号が現れた。次に光照射状態(Mー中間体)で信号を観測したところ、174.6 ppmの信号に広幅化が起こった。この結果はM中間体が複数存在することに対応して、タンパク質も複数の構造が存在することを示唆している。1)ローターに試料を入れた後、光散乱を起こすことが可能なガラスキャップをローターに挿入した。これにより、ローター内で高効率の光照射が可能になった。2) D96N-bRにおいて、in-situ光照射固体NMRを用いてM-中間体の捕捉に成功した。またタンパク質側の構造変化についてもかなり変化することを観測した。3) WT-bRについては緑色光を照射することにより、13-cis*なる新規の中間体を捕捉することに成功した。この中間体はこれまでに報告されていない新規の中間体であった。4) In-situ光照射固体NMRを用いて、ppRおよびppR/pHtrII複合体についてM-中間体の捕捉に成功した。これによりM-中間体には複数の成分があることが判明した。1)ローター内での高効率の光照射が可能になったので、今後は多波長の光照射が可能なシステムに拡張する計画を立てている。2) D96N-bRにおいてM-中間体の捕捉に成功したので、今後はタンパク質側の構造変化について詳細な情報を収集し、レチナールの光異性化に続くタンパク質の構造変化についての知見を得る。3) WT-bRについて13-cis, 15-syn型レチナールは13-cis*なる中間体を形成することが明らかになったので、今後は子の中間体状態でのタンパク質側の変化についての知見を得る実験を行う。4) ppRおよびppR/pHtrII複合体についてもM-中間体の捕捉に成功したので、今後はこの中間体状態でのタンパク質側の構造変化についての知見を得る実験を行う。25年度が最終年度であるため、記入しない。
日本近代のイタリア旅行記に見る西洋文化移入の総合的研究

日本近代におけるイタリア関係の旅行記事の一覧、およびPDFファイル化されたデータベースを作成した。これらの記事の通覧から、近代日本における日本人旅行者たちのイタリア諸都市への訪問が、近代日本のヨーロッパ理解の一つの特徴を形成していることが明らかになった。例えば、諸都市をめぐるツアー形式の観光旅行という形が、表層的な西洋理解に影響及ぼした点や、ホテルに宿泊することにより、他国の文化の身体的理解を行う点、また食文化の相違の体験による文化理解の困難さへの直面などである。これらが日本近代の異文化理解の一つの類型を形成したものと考えられる。本研究は、あらゆる職業や立場で西洋に渡った日本人たちの西洋紀行文・西洋案内記を対象に、その西洋に対する視線を探究することを目的とする。「留学」や「視察」とは別に、「観光」という新たな他国訪問の型の創出が、日本人の西洋移入について、重要な一面を担うものと推察される中で、この「観光」という型の性格を強く持つ特徴的な例として、都市国家であり、訪れるべき古代ローマ以来のさまざまな文化遺産を持つイタリアを対象としている。本年度においては、日本の近代、具体的には、1860年から1945年の間に書籍として出版されたイタリア旅行記を含む書籍の現物所在を図書館等において確認し、その中から、イタリア関係記事を収集することから始めた。それらを、西洋紀行文・西洋案内記関係書籍一覧としてデータベース化し、イタリア関係記事の頁については、PDFファイル化をも進めた。さらに、イタリアのローマおよびその近郊における、日本人旅行者の足跡を探った。その際、イタリア東方学研究所所長のシルヴィオ・ヴィータ氏に現地での案内を請い、また、ローマの観光地の特徴について、さまざまな情報の提供を受けた。これらを通して、日本人旅行者のイタリア訪問記の特徴を論文化する作業をも、並行して始めている。本年度は、文学者の表現と女性の視線について論考を公表した。また「イタリア「観光」の性格とホテル--イタリア旅行関係記事のPDFファイル化を通じて--」と題して口頭発表を行った(シンポジウム「海外における日本文学の時空間--比較文化研究とデジタル・ヒューマニティーズ--」、2009年3月14日、於立命館大学)。日本の近代、具体的には、1860年から1945年の間に書籍として出版されたイタリア旅行記を含む書籍の現物所在を図書館等において確認し、その中から、イタリア関係記事を収集することを本年度も継続して行った。また、それらを、西洋紀行文・西洋案内記関係書籍一覧としてデータベース化し、イタリア関係記事の頁について、PDFファイル化する作業をも継続して進めた。さらに、イタリアのローマ、ナポリおよびその近郊において、実地に日本人旅行者の足跡を探った。その際、ナポリ東洋大学のジョルジュ・アミトラーノ氏およびジュセッペ・ジョルダーノ氏に現地での案内を請い、また、ローマとナポリの観光地の特徴について、さまざまな情報の提供を受けた。これらを通して、日本人旅行者のイタリア訪問記の特徴を論文化する作業をも、継続して行った。本年度は、画家の描写について論考を公表した。また「世界一周旅行記の中のイタリア--日本人旅行者の見たイタリア--」と題して、京都大学人文科学研究所共同研究班の「近代日本と異文化接触--「同時代化」を生きた人々の記録--」の例会で、2月1日に京都大学人文科学研究所で口頭発表を行った。本研究は、あらゆる職業や立場で西洋に渡った日本人旅行者たちの、西洋紀行文や西洋案内記、日記などを対象に、その西洋に対する視線を総合的に探究することを目的としている。イタリアは、ローマという古都および、ローマ法王を中心にキリスト教文化の中心としての長い歴史を持ち、さらに、イタリア諸都市のイメージが、ローマという一都市に集約されず、それぞれ個性に富み、旅行者に多彩な印象をもたらす土地であったことが特徴的である。本年度の具体的作業としては、書籍として出版されたイタリア旅行記に含まれるイタリア関係記事を収集する作業を継続した。また書籍の現物所在を図書館等において確認し、記事を複写し、それらを西洋紀行文・西洋案内記関係書籍一覧としてデータベース化した。さらにこれらイタリア関係記事複写を、PDFファイル化する作業をも継続した。最終年度の本年は、これらを完成させることができた。そのデータベースに基づいた、イタリアの特殊性と共通性とを明らかにする作業として、「学者の観察-日本人旅行者の見たイタリア(5)-」(『人文学』第186号、pp101-124)として公表した。

また、2010年9月16日に、イタリア・ナポリで開催されたAISTUGIA(伊日研究学会)において、基調講演「食通文学の記号学-日本人が、見て、食べて、飲んだイタリア-」を招待講演として行った。その際ナポリ東洋大学、ヴェネツィア大学等の日本研究者たちとも交流を深めた。結果として、当初の目的である日本近代におけるヨーロッパ・イメージの形成について、ヨーロッパの代表都市と目されるロンドンやパリ、ベルリンとの対照から、留学とは別に、観光というもう一つ別の重要な源泉があったことを確認することができた。また、文献研究資料としてのヨーロッパ旅行記の重要性を改めて確認することができた。
重金属ストレスによる群特異的遺伝子転写調節機構の解明

細胞内のヘムは一般にP-450やヘム結合蛋白質などのような蛋白質結合ヘムとしてヘムプールを構成しており、フリーの形でのヘムはほとんど存在しないと言われている。ヘムの細胞内存在量は合成系と分解系の律速酵素遺伝子をヘム自身が制御する形で厳密に保たれている。しかしながらその意義はほとんど知られていない。仮説としては、熱ショックや紫外線、また重金属や有機化合物などの外的ストレスに細胞が晒された時、ヘムオキシゲナーゼの転写を増加させ、ヘムの分解物であるビリルビンの増大による還元力により、フリーラジカルを掃討するという考え方がある。だがこの仮説だけでは、ヘム自身によって厳密に細胞内存在量の制御を受けているヘムの意義は見えてこない。私供は、各種ストレスによって転写制御されるヘムオキシゲナーゼの生理的意義を解明するために研究を進めてきた。すなわちストレス源として重金属のカドミウムを使い、ラットヘムオキシゲナーゼ遺伝子の転写制御を研究している。カドミウムを投与したラット肝から調製した核抽出液を使用した場合、ヘムオキシゲナーゼの基本転写調節部位であるUSF結合領域への転写因子の結合に変化が生じた。調べてみると、カドミウムにより転写因子USFに何らかの構造変化を引き起こしていることが示唆された。そこで今回はC6ラットグリオーマ細胞から調製したcDNAライブラリーからUSFに対するcDNAの単離を試みた。現在ほぼ90%の配列を得ることに成功している。今後は完全長の配列を得るとともに、USFを過剰発現させた細胞を用いカドミウムの影響を詳細に検討することにしている。
Ｃ型肝炎ウイルスの持続感染化、生体防御応答による慢性炎症発症機序の解明

【目的】C型肝炎ウイルス(HCV)は200万人と感染者が多く、予後も悪い。HCV感染の大きな特徴として感染後8090%の高率で持続感染化し、慢性肝炎、さらに肝細胞癌を発症することがあげられる。HCV感染ヒト肝臓組織ではHCVが持続的に複製し、ウイルスが完全には排除されず免疫寛容状態になっている。この免疫寛容獲得から破綻に至る機序を解明することを目的とする。【研究内容】、HCV遺伝子をスイッチング発現するトランスジェニック(HCV-Tg)マウスを作製し、急性肝炎から慢性肝炎状態に移行し、肝細胞がんを発症させることに成功した。この慢性肝炎に対する治療ワクチンとしてHCV蛋白質組み換えワクチニアウイルス(HCV-rVV)を作製し、慢性肝炎状態のHCV-Tgマウスを用いてHCV-rVVの治療効果を検討した。その結果、HCV-rVV接種後1週で慢性肝炎の病態が改善し、肝細胞の膨化、索状配列の乱れ、脂肪変性、グリコーゲン変性といった組織異常の正常化がみられた。rVV接種後4週でrVV-N25接種群のみで肝臓HCV蛋白量が減少しており、肝臓内のNS2特異的CTL数の増加が認められた。そこで抗CD8抗体および抗CD4抗体を予め投与した状態のマウスにrVV-N25を接種すると、どちらもHCV蛋白の減少はみられなくなった。このことから、rVV-N25のHCV蛋白の排除にはCD4およびCD8+T細胞が重要であることが示唆された。rVV-N25接種によりHCV蛋白の減少および慢性肝炎の組織像が著明に改善し、これは抗原特異的CTLの誘導のみならず肝臓内へのマクロファージの浸潤が抑制されTNF-aやIL-6の産生が低下したことに起因していると考えられた。これらの知見はrVV-N25が抗ウイルス作用だけでなく抗炎症作用も有することを認め慢性肝炎に対する治療的ワクチンとしての可能性が示された。24年度が最終年度であるため、記入しない。難治性のウイルス疾患の中でも200万人と感染者が多く、予後も悪いC型肝炎ウイルス(HCV)疾患の征圧を研究の基軸とした。本研究では1)HCVがいかにして免疫監視機構を回避しているか、2)さらにワクチニアウイルス組換えワクチン(HCV-RVV)を接種し、その治療効果を解析した。Cre/loxPシステムでHCV遺伝子を導入したTgマウス(Cre/loxP/HCV-MxCre Tg)を作製した。宿主の免疫応答を活性化するために、ナイーブな脾細胞をTgマウスに投与し、肝臓におけるHCV蛋白の発現や肝臓、脾臓リンパ球の解析を行った。次に、HCV-RVVはHCVの構造蛋白質を主に発現するCN2、非構造蛋白質を発現するN25、全蛋白質を発現するCN5を用いた。Tgマウスに単回皮内接種し、1)肝臓におけるHCV蛋白の発現量、2)サイトカイン、3)肝臓、脾臓リンパ球での抗原特異的CTLsの検出などの解析を行った。脾細胞をTgマウスに投与後、一過性のHCV蛋白量発現の低下を認めた。肝臓内のリンパ球の解析から、ドナーの細胞ではなく宿主のNK細胞の活性化が認められた。また、HCV-RVV接種後4週ではN25接種群でHCV蛋白が減少していた。またN25接種群では接種後1週で肝臓の索状構造や肝細胞のsteatosisなど、HCV特有の形態学的な異常の正常化が認められた。さらにN25接種群では、他群と比較し血清中の炎症性サイトカインが抑制されていた。N25接種群においてTgマウスのCD4またはCD8を欠損させるとHCV蛋白減少効果はみられなかったが、HCV特有の形態学的な異常の改善が認められた。我々が樹立したHCV持続発現モデルは、HCVの持続感染と宿主の免疫応答の関係を解析することを可能にした。さらに、HCV-RVV(N25)接種によりマウス肝臓におけるHCV蛋白の減少及び慢性肝炎症状の正常化が認められた。これらの知見は今後のHCVワクチンの実用化の可能性が示唆された。

rVV接種後4週でrVV-N25接種群のみで肝臓HCV蛋白量が減少しており、肝臓内のNS2特異的CTL数の増加が認められた。そこで抗CD8抗体および抗CD4抗体を予め投与した状態のマウスにrVV-N25を接種すると、どちらもHCV蛋白の減少はみられなくなった。このことから、rVV-N25のHCV蛋白の排除にはCD4およびCD8+T細胞が重要であることが示唆された。rVV-N25接種によりHCV蛋白の減少および慢性肝炎の組織像が著明に改善し、これは抗原特異的CTLの誘導のみならず肝臓内へのマクロファージの浸潤が抑制されTNF-aやIL-6の産生が低下したことに起因していると考えられた。これらの知見はrVV-N25が抗ウイルス作用だけでなく抗炎症作用も有することを認め慢性肝炎に対する治療的ワクチンとしての可能性が示された。24年度が最終年度であるため、記入しない。HCVトランスジェニック(Cre/loxP/HCV-MxCreTg)マウスを作製した。Poly(I:C)投与により発現させた肝臓内のHCV蛋白は、完全に排除されることなく、600日以上の持続的な発現が確認された。形態学的には遺伝子発現後67日で壊死を伴う比較的高度の炎症細胞浸潤が認められ、その後、門脈域を中心とした弱い炎症反応が持続的にみられた。他の病態としては肝細胞の膨化、脂肪変性、グリコーゲン変性、肝細胞索の乱れ、線維化、肝細胞癌およびリンパ腫などがみられた。脂肪変性に関しては遺伝子発現後21日から認められ、HCV持続感染時に似た免疫反応状態をつくることができた。Cre/loxP/HCV-MxCreTgマウスが完全にHCV蛋白を排除できない理由として、宿主の免疫系が機能不全にあることが考えられる。そこで我々は持続発現している肝臓内のHCV蛋白を排除する目的で、Wild-typeマウスから調整したナイーブ脾細胞を慢性肝炎状態のCre/loxP/HCV-MxCreTgマウスに移入した。その結果、移入後2日目で肝臓内のHCV蛋白が一過性に減少し、IFNg産生NK細胞が増加していることがわかった。また、移入後6日ではドナーおよびレシピエント側のNK細胞、NKT細胞、CD8+T細胞の増加が認められた。さらに、6日目ではALTの上昇もみられた。しかしながら、HCV蛋白の発現量に変化はみられなかった。このことから、移入後6日目では免疫応答を惹起できるが、HCV蛋白に対する免疫応答が不十分なため、HCV蛋白の排除には至らなかったことが考えられ、持続発現状態におけるCre/loxP/HCV-MxCreTgマウスの免疫系はHCV蛋白に対し、可逆的な機能不全状態にあることが示唆された。我々はより効果的に宿主の免疫応答を惹起する目的で、哺乳動物細胞において複製可能な弱毒ワクチニアウイルス「LC16m8株」を母体としたHCV遺伝子組換えワクチニアウイルス(HCV-rVV)株を作製した。HCV-rVVはHCVの構造蛋白質を主に発現するrVV-CN2、非構造蛋白質を発現するrVV-N25、全蛋白質を発現するrVV-CN5を用いた。これらHCV-rVVの治療効果を評価するために、HCV蛋白を持続的に発現した慢性肝炎状態のCre/loxP/HCV-MxCreTgマウスに単回皮内接種し、接種後1週および4週のマウス肝臓におけるHCV蛋白の発現量と形態学的、生化学的および免疫学的検索を行った。
金属フタロシアニン添加ナノコンポジット高分子絶縁材料の耐トリーイング性の向上

金属フタロシアニン(M_Pc)とAl_2O_3ナノ粒子とをLDPEに混入して、耐トリーイング性に優れた材料の創製について検討を行った。Ni_Pcを1.5wt%およびAl_2O_3ナノ粒子を5wt%混入したLDPE試料のトリー発生電圧はLDPE単体試料と比較して約2倍上昇した。また、絶縁破壊までの印加時間は、LDPE単体試料と比べて約8倍長くなり、トリー進展速度の抑制効果が顕著に現れることがわかった。また、上記のNi_PcとAl_2O_3の両方を混入した試料はAl_2O_3ナノ粒子のみを混入した試験試料よりも耐トリーイング性が向上していることが示された。本年度の目的は,LDPE(低密度ポリエチレン)とエポキシ樹脂(EP)に金属フタロシアニン(Ph_M)と無機ナノフィラーを添加して作成した芳香属添加ナノコンポジット絶縁材料に関して,耐トリーイング性の向上効果が発揮できる作製条件(金属フタロシアニン金属および無機ナノフィラーの種類,添加量等)を確立することにあった。以下に本年度の研究によって明らかになった事項を示す。1.LDPEにおける金属フタロシアニン添加効果について,フタロシアニンの中心金属の違いおよび添加濃度の影響を中心に検討を行った。フタロシアニンの中心金属としては,Mg, Ni, FeおよびCuを用いた。実験の結果,Ph-NiとPh_cuがトリー発生電圧の上昇に効果があることがわかった。LDPEに対して0.5wt%1wt%のPh_Niの添加でトリー発生電圧は1.21.5倍上昇する。Ph_Cuの添加では同様の濃度で1.52倍程度上昇する。2.EPにおける金属フタロシアニン添加効果も,中心金属の違いによって異なることがわかった。トリー発生電圧の上昇効果はLDPEより高く,Ph Cuの0.5wt%添加において無添加より23倍程度の上昇が見られた。3.上記したトリー発生電圧の添加剤依存性(フタロシアニン中心金属の種類への依存性)は,LDPEあるいはEP中に析出する添加剤の形状と大きさに対応している。添加剤が針状あるいは帯状に析出する試料の場合は,トリー発生電圧の上昇はみられない。4.無機ナノフィラーについては,実験の結果,Al2O3のlwt%添加として,それにph_cuあるいはPh-Niを添加すると,トリー発生電圧は1.512倍程度上昇する。5.Ph_CuとAl2O3の両方をLDPEに添加すると,トリー発生電圧は2倍以上の上昇が見られ,なおかつ測定値のばらつきがそれぞれを単独に添加した試料と比べて50%程度にまで減少する。耐トリーイング性に優れた芳香族添加ナノコンポジットLDPEの設計指針を確立させることを目標に、前年度に引き続き、耐トリーイング性に優れたナノコンポジットLDPE(LDPE;低密度ポリエチレン)に焦点を当て、金属フタロシアニンとナノフィラーが耐トリーイング性向上に果たす機能について検証を行った。本年度に得られた成果を以下に番号順に示す。1.金属フタロシアニン(M-Pc)として4種類(Mg, Cu, Fe, Ni)の中心金属のものそれぞれを添加した試料について耐トリーイング性を評価した。評価を行った項目は、トリー進展速度である。最も安定的に高いトリー発生電圧を示すNi-PcをLDPEに添加したもの、およびそれにさらにAl_2O_3ナノ粒子を添加したものを用いて、交流印加電圧とトリー発生開始時間(電圧印加からトリー発生までの時間)との関係を測定し、その結果をワイプル確率紙上にプロットして評価を行った。その結果、最も効果のあった添加濃度においては、トリー発生開始時間は無添加試料と比較して約78倍に伸びた。すなわち、トリーの進展を抑制する効果が認められた。3.Al_2O_3ナノ粒子のみの添加試料の場合のトリー発生開始時間は、無添加試料と比較して、トリー発生開始時間が約6倍程度長くなることがわかった。4.1000倍程度の高倍率の光学顕微鏡により、試験試料をフィルム状にして透過光にて観測したところ、(Ni-Pc+Al_2O_3)試料の場合は、(Ni-Pc)試料と比較して、試料内部でのNi-Pc微結晶の析出量が少ないことがわかった。このことは、ナノ粒子が存在する試料においては、ナノ粒子表面がNi-Pcを吸着する効果があることを示している。またLDPE中に分散しているNi-Pcの微結晶自体はトリーの発生自体を抑制する効果はあるが、発生したトリーの進展を遅らせる効果はなく、Al_2O_3ナノ粒子の表面にNi-Pcが吸着して初めて効果を発揮するものと理解できる。
エピタキシャル弗化物ヘテロ構造による集積化量子効果素子の研究

これまで単体レベルで研究されてきたCdF_2/CaF_2/Siのヘテロ構造を用いた共鳴トンネルダイオード(RTD)を、Siのプレーナプロセスに適合した構造と方法で製作し、同一基板上に通常のMOSFETと集積化することを実現し、回路動作を示すことを目的として行ってきた。まず、これを実現するために、Si基板表面の酸化膜に開けたコンタクトホール内にCaF_2/CdF_2/CaF_2の二重障壁共鳴トンネル構造を成長し、RTD動作を確認した。続いて、高濃度イオン注入層上への弗化物ヘテロ構造を成長するために、イオン注入プロセスとSi基板の原子層レベルでのラフネスの関係を調べた。その結果、リン(P^+)イオンを注入した後にSi表面を酸化するとラフネスが増大し、注入後の熱処理を真空中など非酸化性雰囲気で行えばラフネス発生が抑制できることを明らかにした。また、超高真空中の熱処理の場合も、注入量が1×10^<16>cm^<-2>を超えるとラフネスは顕著に増える。一方、注入層に対するAlのノンアロイオーミックコンタクトの接触抵抗評価から、注入量は1×10^<15>cm^<-2>以上必要であることがわかった。両者の条件を兼ね合わせて、注入量を3×10^<15>cm^<-2>に決定した。プロセスおよびその条件を明らかにしたところで、2個の弗化物RTDと1個のMOSFETからなる試験回路を実際に製作した。その結果、同一基板上に両デバイスを製作し、それぞれ正常動作を得た。また、RTDを直列接続した回路では、ラッチ動作も確認できた。Si基板表面にエピタキシャル成長するCdF_2/CaF_2系の弗化物超薄膜へテロ構造を用いてSiデバイスと量子効果デバイスを直接集積化することを目的としている。今年度は、実験系としてCdF_2のn形導電化を可能とする専用の超高真空成長チェンバーを導入し、これの立ち上げを行った。その過程で平行して得た主な研究成果を以下にまとめる。1.イオン注入層上に弗化物超薄膜ダイオード構造を形成するブレーナプロセス従来はバルクのSi基板表面に縦型で形成していた弗化物へテロ素子をSiのMOS-FETと集積化するために、フィールド酸化膜(SiO_2)による素子分離と高濃度イオン注入層表面上への直接成長によるプレーナプロセスを構築した。2.イオン注入層上のCaF_2超薄膜成長弗化物超薄膜の成長特性の検証のために、上記のプレーナプロセスによって12nmのCaF_2の単層膜によるMISダイオードを製作し、その透過電流特性を評価した。その結果、高濃度イオン注入層の表面に現れるラフネスのためにCaF_2超薄膜の絶縁特性が劣化する問題が明らかになった。これに対し、CaF_2の成長方法として用いている二段階成長法における成長温度の再検討を行い、初期の0.4nmを700°Cで成長してから残りの第2層を従来の500°Cから250°Cまで低減して成長することでCaF_2層の平坦性を向上し、漏れ電流を低減できることを明らかにした。CdF_2/CaF_2ヘテロ構造による共鳴トンネルダイオードをn-チャネルSi-MOSFETのコンタクトホールに直接埋込成長し、Si集積回路へ集積化することを最終目的として研究を行った。具体的には、Si基板表面の熱酸化によるフィールド酸化膜にフォトリソグラフィでコンタクトホールを形成し、そこにリンを高濃度に選択イオン注入して活性化し、CaF_2/CdF_2/CaF_2の二重障壁共鳴トンネル構造を分子線エピタキシー法で成長した。これをAl電極で埋め込み、プレーナプロセスによる弗化物共鳴トンネルダイオードを形成した。

まず、高濃度イオン注入を行ったSi表面の原子層オーダーの荒れについて検討し、イオン注入後の表面酸化が顕著な荒れを引き起こすことを明らかにした。これに対応するプロセスとして、イオン注入後に窒素雰囲気中でプレアニールをしてから、超高真空中で活性化を兼ねた加熱クリーニングを行ってから弗化物ヘテロ構造を続けて成長するプロセスを考案した。以上の結果、コンタクトホール中に埋め込まれたAl/CaF_2/CdF_2/CaF_2/n^+-Si構造の共鳴トンネルダイオードで室温でピーク電流/バレー電流比が2.5の動作を得ることができた。また、基板面および第1層のCaF_2層の平坦化の条件を明らかにした結果、素子の歩留まりも従来より飛躍的に向上した。これらの結果から、目的としたSiデバイスとの集積化を可能とした。
Immuno-PCR法による生体内微量サイトカインの高感度検出系の確立と臨床応用

生体内には微量しか存在せず、現在の測定法では必ずしも満足できる感度が得られないため、基準値の設定や臨床的意義を充分検討できていないサイトカインも多い。これまで我々は、ELISA法の感度を、定量性を損なうことなく向上させるために、Immuno-PCR法によるTNFの高感度検出系を開発し、従来のEUSA法に比べ約50,000倍の検出感度を持つこと、基準値が従来法における測定下限(数十pg)より約1/1,000低い範囲にあることを、それぞれ明らかにしてきた。本測定系を用いてDuchenne型筋ジストロフィー(DMD)患者における血清TNFα濃度を解析したところ、平均27.8ng/Lと、健常者の平均値(0.027ng/L)に比べ約1,000倍高値を示した。しかし、ELISA法で測定可能であった症例は、12.3%にすぎなかった。次に、筋組織の崩壊が完成する20歳未満と20歳以上の2群に分け、血清TNFα濃度を比較検討した。両群で陽性率には大きな差はみられなかったが、20歳未満の群における平均血清TNFα濃度が、20歳以上の群に比べ約5倍高値であったことから、TNFαの病態形成への密接な関与が示唆された。そこで、血清TNFα濃度とCKおよびMb濃度との関係について調べたところ、両者の間には相関関係がみられず、血清TNFα濃度の上昇は単に筋崩壊の結果とは考えられなかった。(2)潰瘍性大腸炎(UC)およびクローン病(CD)患者の血清TNFα濃度を測定したところ、36例中ELISA法で測定可能であったのはわずか4検体(11.1%)にすぎなかった。平均血清TNFα濃度は、健常者に比べUCで約1,100倍、CDで約7,700倍高値であった。また、臨床経過の観察が可能であったUC患者6例の血清TNFα濃度を測定したところ、活動期に比べ非活動期では明らかに低下し、その推移は病態を良く反映していた。さらに、炎症マーカーとしてよく用いられているCRPとTNFαとの陽性率を比較検討した。その結果、CRPが検出感度以下でもTNFαが陽性となった検体が、UCおよびCDでそれぞれ63%、12%存在した。すなわち、Immuno-PCR法を用いたTNFαの測定は、高感度CRPに比べより鋭敏なマーカーとなり得ることが示唆された。(3)さらに、TNFのみならず、IL-18やosteoprotegerinなど他のサイトカインについてもimmuno-PCR法の開発が可能であった。炎症性疾患をはじめとする種々の病態形成において、各種サイトカインが重要な役割を担っていることが、次第に明らかに成りつつある。しかし、生体内には微量しか存在せず、現在の測定法では必ずしも満足できる感度が得られないため、基準値の設定や臨床的意義を充分検討できていないサイトカインも多い。これまで我々は、ELISA法の感度を、定量性を損なうことなく向上させるために、Immuno-PCR法によるTNFの高感度検出系を開発し、従来のELISA法に比べ約50,000倍の検出感度を持つこと、基準値が従来法における測定下限(数十pg)より約1/1,000低い範囲にあることを、それぞれ明らかにしてきた。そこで本年度は、(1)筋ジストロフィー(DMD)患者における血清TNF-α濃度を測定した。その結果、DMD患者の平均血清TNFα濃度は27.8±113.4pg/mlと、健常者の基準値(0.027±0.054pg/ml)に比べ著明な高値を示した。そこで、筋組織の崩壊が完成する20歳未満と20歳以上の2群に分け、血清TNFα濃度を比較検討した。その結果、20歳以上の群では12.9pg/mlであったのに対し、20歳未満では60.7pg/mlと約5倍高値を示した。すなわち、TNFαがDMDの病態形成に密接に関与していることが示唆された。(2)潰瘍性大腸炎およびクローン病患者における平均血清TNFα濃度は、健常者に比べそれぞれ約1,100倍、7,700倍高値であった。また、血清TNFα濃度は、活動期に比べ非活動期では明らかに低下し、その推移は病態を良く反映していた。(3)IL-18についても、ELISA法に比べ約15,000倍の感度上昇が可能であった。今後、担癌患者やAIDSを含む免疫不全症など、IL18の低下が病態形成に重要な役割を果たしていると推測される疾患を対象に、病態生理学的意義を調べる予定である。

しかし、ELISA法で測定可能であった症例は、12.3%にすぎなかった。次に、筋組織の崩壊が完成する20歳未満と20歳以上の2群に分け、血清TNFα濃度を比較検討した。両群で陽性率には大きな差はみられなかったが、20歳未満の群における平均血清TNFα濃度が、20歳以上の群に比べ約5倍高値であったことから、TNFαの病態形成への密接な関与が示唆された。そこで、血清TNFα濃度とCKおよびMb濃度との関係について調べたところ、両者の間には相関関係がみられず、血清TNFα濃度の上昇は単に筋崩壊の結果とは考えられなかった。(2)潰瘍性大腸炎(UC)およびクローン病(CD)患者の血清TNFα濃度を測定したところ、36例中ELISA法で測定可能であったのはわずか4検体(11.1%)にすぎなかった。平均血清TNFα濃度は、健常者に比べUCで約1,100倍、CDで約7,700倍高値であった。また、臨床経過の観察が可能であったUC患者6例の血清TNFα濃度を測定したところ、活動期に比べ非活動期では明らかに低下し、その推移は病態を良く反映していた。さらに、炎症マーカーとしてよく用いられているCRPとTNFαとの陽性率を比較検討した。その結果、CRPが検出感度以下でもTNFαが陽性となった検体が、UCおよびCDでそれぞれ63%、12%存在した。すなわち、Immuno-PCR法を用いたTNFαの測定は、高感度CRPに比べより鋭敏なマーカーとなり得ることが示唆された。(3)さらに、TNFのみならず、IL-18やosteoprotegerinなど他のサイトカインについてもimmuno-PCR法の開発が可能であった。