hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
てんかんモデルにおける神経幹細胞移植と内在性神経幹細胞活性化を用いた治療

神経細胞の新生は成体脳でも確認され、新しい神経回路付加に関与することが示されている。平成16年度も引き続き我々は、てんかんおよび神経可塑性のモデルであるキンドリングで、全般発作反復による神経幹細胞の活性化を、highly polysialylated neural cell adhesion molecule(PSA-NCAM)をマーカーとして検討した。その結果1.海馬歯状回と側脳室下帯でPSA-NCAM陽性細胞数が増加すること、2.海馬歯状回では顆粒細胞層深部に限局していた陽性細胞が顆粒細胞層内へ移動し、しかも陽性神経突起の伸長が顕著にみられること、が示された。これらより、新生神経細胞の発達や神経細胞の可塑的変化が、てんかん脳の機能や神経再構築に大きく寄与していると考えられた。本研究では、これらのてんかん脳の変化に対して、神経幹細胞移植と内在性神経幹細胞活性化を用いた新たな治療法を開発する目的で、神経幹細胞の培養と移植を始めている。まず、障害脳における神経幹細胞移植の試みとして、中大脳動脈閉塞による脳梗塞モデルを用いて、ラット骨髄から抽出した幹細胞を脳虚血巣に移植し、経時的に断頭して幹細胞の生存と発達を免疫組織学的に検討しているが移植した幹細胞の長期にわたる生着と神経への分化に更なる工夫を必要としている。我々は、てんかんおよび神経可塑性のモデルであるキンドリングで、全般発作反復による神経幹細胞の活性化を、highly polysialylated neural cell adhesion molecule (PSA-NCAM)をマーカーとして検討した。キンドリングでは、全般発作反復により海馬や嗅球の細胞脱落や神経回路の再構築がおこることが知られている。全般発作の反復に伴って、1.海馬歯状回と側脳室下帯でPSA-NCAM陽性細胞数が増加すること、2.海馬歯状回では顆粒細胞層深部に限局していた陽性細胞が顆粒細胞層内へ移動し、しかも陽性神経突起の伸長が顕著にみられること、が示された。このことは、新生神経細胞の発達や神経細胞の可塑的変化が、てんかん脳の機能や神経再構築に関与する可能性を示唆するものと考えられた。まず、障害脳における神経幹細胞移植の試みとして、中大脳動脈閉塞による脳梗塞モデルを用いて、ラット骨髄から抽出した幹細胞を脳虚血巣に移植し、経時的に断頭して幹細胞の生存と発達を免疫組織学的に検討している。
高濃度分散二相乱流における輸送現象の数理モデル

本研究課題は平成29年度で終了の予定であったが、研究成果に関する基調講演を行う予定であった日欧二相流専門家会議の開催が平成30年4月となったため、成果発表旅費と学会参加費を平成30年度に繰り越して使用した。したがって、5月以降、科研費を使用した研究は実施していない。しかし、当初の期間中に未達であった一部の項目を継続検討するとともに、上述の専門家会議での議論を踏まえた発展もあったので、その概要を以下に報告する。高濃度分散二相流に対する工学的に実用性の高い数値シミュレーション手法を確立するため、単相流体や低濃度分散二相流に対する従来の乱流モデルとは異なる概念の粒子輸送モデルに取りまとめることを想定し、粒子の並進と回転による運動量と熱の直接輸送を分析してモデル化することを試みた。そこで、大規模直接数値シミュレーション(DNS)により、特にミクロな相互作用がマクロな熱流動に及ぼす影響について系統的に調べた。ミクロな素過程としては粒子間の狭隘な流路における潤滑流れの問題を重点的に扱い、レイノルズの潤滑方程式を拡張し、粒子混相流に適用性の高い手法を構築した。これを用いたDNSの結果として、流体とは異なる熱伝導率をもつ固体粒子を高濃度で添加すると、単相の場合には見られない振動モード、対流の反転や逆温度勾配などの特徴的な熱流動場が見いだされた。研究期間内に開発した熱流束線による輸送現象の解析手法を発展させ、これを伝導と対流に分離して自然対流熱伝達のパターン変化の解明を行った。これまでに見出した分散二相系の流動および伝熱を網羅的に記述しうる粒子乱流モデルを構築するには、大スケールのフィルターにより粗視化して分析する必要があり、今後の課題として残っている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。高濃度分散二相乱流に対する工学的に実用性の高い数値シミュレーション手法を確立するため、低濃度系に対する従来の乱流変調モデルとは異なるサブグリッド粒子粘性モデル・サブグリッド粒子熱輸送モデルの構築を目的とした研究を開始した。本計画では、血液中の赤血球の体積率を目安として50%程度を目安に、高濃度で存在する粒子群とその間の狭隘な領域の流体による運動量、熱および物質移動の解析を実現することを目標としている。平成26年度は、分散二相乱流の直接数値シミュレーションを実施し、流れの中で非定常に並進および回転運動する粒子群と周囲流体の相互作用、乱流場での粒子による熱輸送に関するデータ解析を計画した。同時に、高濃度粒子群を扱うための固体間狭隘流路の流動モデル、高レイノルズ数二相流における粒子周りの境界層に対する高解像度解析の手法の検討に着手した。分散二相乱流に関しては、粒子間接触が粒子間力だけでなく伝熱に対する影響を加味して、平行平板間の自然対流による固液二相熱流動を対象に、まず二次元計算で粒子体積率や固体熱伝導率を変化させたときの傾向が適切に算出されることを確認し、三次元計算に拡張して大規模な分散二相流解析を実施するための計算の効率化を進めた。モデル化のための素過程の解析も同時に推進した。まず、乱流場における粒子運動のモデル化のため、球形粒子の周囲流による揚力・抗力およびモーメント、さらに粒子の後流の形状に対して、渦度だけでなく流線曲率の効果を明らかにした。また、非球形粒子や可変形粒子、高濃度や高レイノルズ数条件の扱いを可能とすべく、薄膜も含む柔軟構造物の計算領域への埋め込み、粒子間の狭隘部への潤滑方程式の解の埋め込み、任意多面体による非構造格子法、要素技術となる手法の開発もそれぞれ推進した。高濃度分散二相乱流に対する工学的に実用性の高い数値シミュレーション手法を確立するため、低濃度系に対する従来の乱流変調モデルとは異なるサブグリッド粒子粘性モデル・サブグリッド粒子熱輸送モデルの構築を目的とした研究を行っている。平成27年度は、4年計画の前半として平成26年度に引き続き、分散二相乱流の直接数値シミュレーションを実施し、流れの中で非定常に並進および回転運動する粒子群と周囲流体の相互作用、乱流場での粒子による熱輸送に関するデータ解析を計画した。同時に、高濃度粒子群を扱うための固体間狭隘流路の流動モデル、高レイノルズ数二相流における粒子周りの境界層に対する高解像度解析の手法の検討を進めた。分散二相乱流に関しては、平行平板間の自然対流による固液二相熱流動を対象に、平成26年度に開発した手法を三次元計算に拡張した上で計算の効率と安定性を改善し、単一分散球形粒子群については当初の目標(体積率50%)を上回る高濃度分散二相流解析を実現した。モデル化のための素過程の解析も同時に推進するとともに、単相乱流の解像度に近い径をもつ粒子の周りの流れをモデル化することを試み、4年計画の後半の推進のために有用な分散二相乱流の直接数値シミュレーションの支配方程式の確立の見通しを得た。

また、非球形粒子や可変形粒子、高濃度や高レイノルズ数条件の扱いを可能とすべく、柔軟構造物の計算領域への埋め込み、粒子間の狭隘部への潤滑方程式の解の埋め込み、任意多面体による非構造格子法などの手法開発もそれぞれ推進し、高濃度分散二相流の解析コードに組み込むための要素技術を高度化した。高濃度分散二相流のモデリングに用いるデータを取得するための直接数値シミュレーション技術の確立という研究計画前半の課題に対しては、三次元で数千個(体積率54.7%)と、均一サイズの球形剛体粒子に関しては目標を達成した。これにより、流体と異なる熱伝導性をもつ固体の混入にともない、伝導効果による熱伝達制御、流動抵抗による熱伝達抑制の双方が発現する広範な条件での固液二相熱伝達の解析を可能とし、今後に向けての基盤技術を確立できた。また、固体粒子の混入率が高くなることにより、粒子どうしの接触や近接粒子間の流体膜を介した運動量および熱の伝達の影響が極めて大きくなり、本研究で着目するパラメーターの重要性を確認することができた。シミュレーションの高精度化・多機能化については、本研究グループ内で同時に推進されている研究と連携して以下の各項目を検討している。固体間の狭隘な領域での流体のふるまいに対する格子解像度不足に対処するため、潤滑方程式の解を粒子間の狭隘部に埋め込む方法を作成し、近接する一対の粒子の相互作用問題で検証を行った。また、任意多面体で構成される非構造格法を考案し、界面形状の再現性、移流による保存特性の検証を行い、大変形する柔軟構造物を扱う要素技術を発展させた。さらに、乱流場における粒子運動のモデル化のため、球形粒子の周囲流による揚力・抗力およびモーメントに対して、流線曲率をベースパラメーターとして統一的に整理できることを見いだし、粒子の後流の形状に対しては渦度だけでなく流線曲率の効果を明らかにした。さらに、単相乱流に必要とされる解像度に近い粒子径を扱う方法の検討が進み、大規模または複雑形状の流れ場に適用範囲を拡大できる見通しを得た。以上の成果は、本研究計画の後半において高濃度分散二相流のシミュレーションに適宜統合される予定であるが、各要素技術の開発は順調に進捗した。高濃度分散二相乱流に対する工学的に実用性の高い数値シミュレーション手法を確立するため、低濃度系に対する従来の乱流変調モデルとは異なるサブグリッド粒子粘性モデル・サブグリッド粒子熱輸送モデルの構築を目的とした研究を開始した。本計画では、血液中の赤血球の体積率を目安として50%程度を目安に、高濃度で存在する粒子群とその間の狭隘な領域の流体による運動量、熱および物質移動の解析を実現することを目標としている。4年計画の後半に入る平成28年度は、前年度前に開発した分散二相乱流の直接数値シミュレーションを発展させ、流れの中で非定常に並進および回転運動する粒子群と周囲流体の相互作用、乱流場での粒子による熱輸送に関するデータ解析を計画した。同時に、高濃度粒子群を扱うための固体間狭隘流路の流動モデル、高レイノルズ数二相流における粒子周りの境界層に対する高解像度解析の手法の検討を進めた。分散二相乱流に関しては、平行平板間の自然対流による固液二相熱流動を対象に、前半(平成2627年度)に開発した手法により、当初の目標(体積率50%)を上回る高濃度分散二相流の三次元解析を実現した。モデル化のための素過程の解析も同時に推進するとともに、full Euler的手法だけでなく、単相乱流の解像度に近い径をもつ粒子の周りの流れをモデル化することを試み、Euler-Lagrange的手法による分散二相乱流の直接数値シミュレーションの支配方程式の導出も推進した。
圧密方法が粘土の微視的構造変化に及ぼす影響とそれに伴うせん断特性に関する研究

実際の地盤の多くは一次元圧密、あるいはKo圧密状態であり、一方三軸圧縮試験は等方圧密後せん断試験を行うのが通常である。そこで、本研究は一次元圧密、Ko圧密、等方圧密などの圧密方法が圧密特性や微視的構造変化に及ぼす影響を応力レベルとの関係において究明するとともに、各圧密方法とせん断強度・変形特性との関係などを明らかにすることを目的とした。実験には5種類の再圧密粘土と乱さない粘性土約20種類を用いて、各種の圧密試験、初期状態や各圧密荷重で圧密後の試料の一軸圧縮試験、及び電子顕微鏡写真による構造測定を行った。さらに三軸圧縮と透水試験をKo圧密と等方圧密後に実施した。得られた研究成果の概要は以下のとおりである。一次元圧密とKo圧密の圧密特性や構造変化はほぼ同じであるが、側面摩擦の少いKo圧密の方がやや圧密量が多い。一方、等方圧密は一次元圧密に比べて平均主応力で整理すると体績ひずみが小さくなり、軸方向ひずみは主応力差に比例するが主応力差が増加するとひずみの増加率は低下する。一次元、Ko圧密は圧力の増加に伴い配向度は徐々に増加するが、等方圧密ではある程度配向性があったものがランダム化の方向に向い、ほぼ一定になる。等方圧密の一軸圧縮強さは一次元圧密のそれよりも小さく、特に等方圧密開始圧力が小さいほどその差は著しいが、間隙比が著しく小さくなると圧密方法によらず強度はほぼ同じになり、この領域では構造や応力レベルより間隙比が強度を大きく支配している。しかし、三軸圧縮試験の過圧密領域では等方とKo圧密の強度差はほぼ一定であり、両者のせん断特性は変形や間隙水圧挙動に顕著に現われる。以上の結果から透水係数と一軸圧縮強さについては構造、間隙比、圧密方法の関係を明らかにし、構造の寄与割合を明確にした。また、三軸圧縮試験からは正規圧密・過圧密・Ko圧密・等方圧密による強度異方性の関係図を作成した。
光化学的調整法による担持高分散金属の触媒特性

酸化チタン粉末に光照射すると電子と正孔が生成し、その際、正孔と反応する物質が共存すると電子は金属イオンを還元することができる。これを利用して酸化チタン上に塩化白金酸水溶液より白金を担持すると、白金の分散度の高い触媒が得られた。白金の分散度は酸化チタンの調製法によっても異なるが、犠性電子供与済を加えずに光照射した後にこれを加えて光照射するとよい結果が得られた。とくに、塩化白金酸水溶液のみを用いて光照射し、酸化チタン上に分解生成物を付着せしめ、これを通常の触媒調整法と同様に水素還元すると、極めて分散度の高いものが得られることがわかった。この触媒の白金分散度は水素および一酸化炭素の吸着量の測定からほゞ1に近いことが確かめられた。通常の含掃一還元法によって酸化チタン担持の高分散白金を得ることは困難であるので、光化学的調製法は省資源の点からも有用である。光化学的調製法によって作った酸化チタン担持白金触媒の一酸化炭素にたいする吸着特性を赤外分光法によって調べた。その結果、通常の調整法による触媒上への一酸化炭素の吸着では赤外吸収バンドが巾広いのにたいし、光化学的調整法によるものでは鋭い吸収バンドが観測された。これは担持された白金の吸着特性が均一であることを示唆している。また一酸化炭素の赤外吸収バンドは吸着量によって変るが、光化学的調整法による触媒に吸着した一酸化炭素の吸収波数一吸着量の関係は通常の調整法による触媒とは異なりむしろ単結晶に近いふるまいをすることが見出された。このこともまた担持された白金の触媒作用の均質性を示唆している。この触媒を半導体光触媒として用い、水-アルコール溶液からの光水素発生反応を行うと極めて高い吸率で水素が発生することがわかった。
ヘムタンパク質から構成されるユニークな超分子集合体構築法の開拓とその機能評価

タンパク質の人工的な集積化により得られる巨大集合体は電子移動媒体、効率的な光捕集系、高触媒活性膜や薬物輸送などの新規バイオマテリアルとしての可能性を有している。しかしながら、タンパク質集積法についての報告例は未だ少ない。以前に、我々は潜在的に機能を有するヘムタンパク質を基盤として、ヘムとタンパク質マトリクス間の特異的な相互作用で連なるヘムタンパク質の自己集積化を達成している。次なる展開として、複数種のタンパク質から構成される組織体を構築し、個々のタンパク質の機能の相乗効果による新しい性質の発現や高次の構造制御をめざしている。本年度は、二種のタンパク質から構成される超分子集合体について、原子間力顕微鏡による直接観察を試みた。この集合体は、酸素貯蔵ヘムタンパク質ミオグロビンの二量体とビオチン結合タンパク質ストレプトアビジンが、ビオチン修飾ヘムを介して一次元状に連なった構造体である。正電荷の表面を持つ基板にこの集合体を固定化し、溶液中で測定を行い、数百nmに達する繊維状組織体の観察を達成した。さらに乾燥状態では、より高分解能での評価が可能となり、二種のタンパク質が交互に並んでいることが明らかとなった。また合成化学的にヘムタンパク質二量体の構成要素を再設計し、同様の集積化法で集合体の構造制御を試みた。結果として、ヘムタンパク質を連結するリンカーの分子設計により構造制御が可能であることが示唆され、二次元、三次元のタンパク質集合体構築に関する一つの指針を示すことができた。近年、タンパク質を自由自在に集積化させ、得られる集合体を高触媒活性膜や薬物輸送などの生体材料として利用する試みが注目を集めている。しかしながら、タンパク質を集積化させる手法はまだ確立されておらず、機能を持つ集合体となると、ほとんど報告例がないというのが現状である。そこで我々は潜在的に機能を有するヘムタンパク質に着目し、以前に、ヘムとタンパク質マトリクスの特異的な相互作用を利用したヘムタンパク質の集積化に成功し、タンパク質集合体構築法の手法の一つとして提案している。本申請者は、本年度、タンパク質集合体の機能化をめざして、酸素貯蔵ヘムタンパク質であるミオグロビンを素材とし、その集合体の構築を試みた。以前に取り組んだヘムタンパク質に比べ、ミオグロビンは機能的に魅力のあるタンパク質である。結果として、ミオグロビンを単量体とする数百ナノメートル程(100量体程)の直鎖状集合体の構築に成功した。さらに本来の機能である酸素の貯蔵能について評価したところ、天然のミオグロビンの酸素貯蔵能を維持していることが明らかとなった。この機能の維持と適度なサイズは、人工血液としての可能性を示唆するものである。一方で、一酸化炭素やシアン化物イオンなどの小分子により集合体の構造を安定化させることができることも明らかとなり、薬物輸送などを実現する刺激応答性マテリアルへの展開も期待することができる。今後、この集合体を基盤とした実用的な生体材料の開発およびより高次のタンパク質集合体構築に向けて研究を進める予定である。近年、タンパク質を自由自在に集積化させ、得られる集合体を電子移動媒体、効率的な光捕集系、高触媒活性膜や薬物輸送などの材料として利用する試みが注目を集めている。しかしながら、タンパク質を集積化する手法はまだ確立されておらず、機能を持つ集合体については、ほとんど報告例がないというのが現状である。以前に、我々は潜在的に機能を有するヘムタンパク質に着目し、ヘムとタンパク質マトリクス間の特異的な相互作用で連なるヘムタンパク質の自己集積化を達成し、タンパク質集合体構築法の手法の一つとして提案した。次なる展開として、複数種のタンパク質から構成される組織体を構築し、個々のタンパク質機能の相乗効果による新しい性質の発現や高次な構造的制御をめざしている。本申請者は、本年度、二種のタンパク質から構成される新規のタンパク質集積体の構築を試みた。素材としては、以前から用いている酸素貯蔵ヘムタンパク質のミオグロビンと、取り扱いの容易なビオチン結合タンパク質であるストレプトアビジンを選択した。具体的には、新規に設計・合成したビオチン修飾ヘムをミオグロビンの二量体に挿入し、続いて、ストレプトアビジンとの複合化を検討した。結果として、種々の測定結果からそれぞれのタンパク質が交互に並んだ線状の共重合体の形成が示唆された。本手法は、タンパク質表面への共有結合的なヘムの導入という難易度の高い操作を必要としないため、より汎用性の高いヘムタンパク質自己集積体の構築が可能であり、緻密な設計に基づいた構造制御の可能と考えられる。

さらに乾燥状態では、より高分解能での評価が可能となり、二種のタンパク質が交互に並んでいることが明らかとなった。また合成化学的にヘムタンパク質二量体の構成要素を再設計し、同様の集積化法で集合体の構造制御を試みた。結果として、ヘムタンパク質を連結するリンカーの分子設計により構造制御が可能であることが示唆され、二次元、三次元のタンパク質集合体構築に関する一つの指針を示すことができた。
新地域支援事業に対応する老人クラブ活動の地域連携モデルの構築

平成30年度は、三重県老人クラブ連合会に加盟している1,675単位老人クラブの代表者を対象に実施した実態調査結果(調査期間:2017年8月172018年2月28、有効回答数:1,081件、有効回答率:64.5%)を分析対象とし、これまで三重県内の単位老人クラブが実施してきた「支え合い」活動の内容、ならびに新地域支援事業への参画状況を明らかにするとともに、同事業において老人クラブが担いうる役割と課題について考察を行った。分析の結果、1老人クラブが実施している活動・事業の内容と実施率、2新地域支援事業の認知度、3新地域支援事業への参加に向けた働きかけの有無、4協議体への参加状況と不参加の理由、5新地域支援事業への参画状況等について明らかにした。そしてこれらの知見を踏まえ老人クラブが実施している「支え合い」活動のうち「交流サロン・喫茶室」が厚生労働省「介護予防・日常生活支援総合事業ガイドライン」で示されたサービス類型の「通所型サービスB」に、また「見守り活動(独居高齢者等)」、「声掛け・安否確認(電話訪問)」が「その他の生活支援サービス」に、そして「健康・介護予防教室、体力測定」が「介護予防普及啓発事業」にあてはまり実施率も高いことから、今後、新地域支援事業として老人クラブが広く担いうる活動であることを明らかにした。また、行政・社協ならびに市町老人クラブ連合会等からの単位老人クラブに対する働きかけが協議体への参加と新地域支援事業の実施に強く影響しているという結果が得られた。平成30年度は、研究計画で予定していた量的調査の分析を通じて活動実態の把握と老人クラブの役割の明確化、ならびに課題の析出まで進められたことから、おおむね順調に進展している。平成31年度は、量的調査の分析を通じて、地域連携状況の類型化を試みる。また併せて特色有る地域連携を実践している単位老人クラブ代表者へのヒアリング調査を実施し、本調査研究で得られた知見を最終報告書として纏める。研究計画初年度となる平成29年度は、第1に基礎データ・資料の収集・整理を通じて、これまで老人クラブが実施してきた「支え合い」活動の明確化ならびに新地域支援事業における老人クラブの役割と可能性について検討をおこなった。「支え合い」活動については、1歴史、2組織の状況・推移、3目的と具体的な活動内容、4全国三大運動の取り組み内容等を明確化した。また新地域支援事業については、制度創設の経緯と介護保険制度の具体的な改正内容および新制度が目指す地域包括ケアシステムについて整理した。そしてこれらの知見を踏まえた上で、新地域支援事業のうち「介護予防・生活支援サービス事業」では「訪問・通所型サービスB」ならびに「その他の生活支援サービス」が、他方「一般介護予防事業」では「地域介護予防活動支援事業」がこれまで老人クラブが実施してきた「支え合い」活動の内容と共通しており、支援対象をクラブ会員以外の地域の高齢者全体へ広げることにより生活支援ならびに介護予防の領域で老人クラブが一定の役割を果たすことが可能であることを明らかにした。第2に、現在実施されている老人クラブ活動の現状・課題、地域組織との連携状況、地域の特徴とニーズ、新地域支援事業への参画状況、ソーシャル・キャピタルの測定等を目的とした調査項目を検討・作成し、三重県老人クラブ連合会に加入している県内29市町内の1,675単位老人クラブ代表者を対象とした量的調査を実施し回収票のデータ化まで進めた。平成29年度は、研究計画で予定していた資料の収集整理ならびに三重県全域における量的調査を実施でき、回収票のデータ化まで進められたことから、おおむね順調に進展している。平成30年度は、初年度に実施した量的調査のデータ分析を実施し、単位老人クラブの活動実態と課題の析出ならびに地域連携状況の類型化を試みる。また併せて特色有る地域連携を実施している単位老人クラブ代表者へのヒアリング調査を実施する。

平成31年度は、量的調査の分析を通じて、地域連携状況の類型化を試みる。また併せて特色有る地域連携を実践している単位老人クラブ代表者へのヒアリング調査を実施し、本調査研究で得られた知見を最終報告書として纏める。次年度使用額は、翌年度分と合わせて単位老人クラブ代表者へのヒアリング調査ならびに成果発表に伴う旅費として使用する。次年度使用額が生じた理由は、当初計画していた旅費使用が発生しなかった為である。翌年度分と合わせて特色有る地域連携を実践している単位クラブ代表者へのヒアリング調査ならびに成果発表に伴う旅費として使用する。
日本語学習者におけることばの男女差の受容とジェンダー意識に関する基礎研究

本研究は、教材開発にむけた基礎的研究として、外国人日本語学習者が日本語のいわゆる「女ことば/男ことば」をどのように受け止め、運用しているかを、ジェンダー意識との関連において検討し、教育内容の改善に資するデータを提供することを目的とするものである。研究の第1段階として、母語が語形式に顕著な男女差が現れない言語である中国語話者と、文構造が日本語により近い韓国語話者の日本語学習者をおもな対象として調査研究をおこなった。当該研究期間においては、研究実施計画に沿って、おもに以下の4点をおこなった。(1)先行研究および中国・韓国の主要な日本語教材の「ことばの男女差」に関する記述を整理し、検討した。(2)中国・韓国の大学6機関において2種類の調査(親しい友人同士の条件付き会話文の作成/母語及び日本語の男女差に関する認識等のアンケート調査)を実施した。(3)調査結果をデータベース化し、収集したデータの分析・考察をおこなった。(4)研究成果の発表(論文発表、口頭発表、講演)および報告書のとりまとめをおこなった。アンケート調査の結果から、現段階でおもに以下の4点が明らかになった。(1)中国人学習者は、韓国人学習者よりも日本語の男女差を強く感じ、かつ肯定的に評価している。また、性差表現の学習にも韓国人学習者より意欲的であること(2)中国国内で学ぶ中国人日本語学習者の作成した会話文は、普通体と丁寧体を混用させたものが多く、中国人日本語学習者にとって聞き手との心的距離に配慮した適切な文体選択が困難であること(3)中国人学習者も韓国人学習者もメディアを通した日本語との接触度は比較的高いが、来日経験に大きな差が見られること(4)日本人との接触度は、韓国人学習者よりもむしろ中国人学習者のほうが高いが、普通体会話の運用には結びついていない。本年度は、おもに以下の3点の作業をおこなった。(1)先行研究および日本・中国の主要な日本語教材の「ことばの男女差」に関する記述を整理し、データベース化した。(2)中国・韓国の協力者にインタビューをおこない、情報収集および調査項目の見直し・確定作業をおこなった。(3)中国・大連外国語大学日本語学院および韓国・新羅大学日本語教育学科においてアンケート調査を実施し、データの入力作業をおこなった。アンケート調査の結果は、現在依頼中のものがすべて回収され次第、統計的な処理をおこない、本格的な分析に入る予定である。「中国データ」について現段階で見られる特徴は、中国国内で学ぶ日本語学習者にとって普通体会話の産出は困難であること、ことばの男女差に対する受容の程度が母語と学習言語とでは大きく異なること、日本人や日本語との接触程度によって、若年層のことばの男女差に対する認識も異なること、などである。「中国データ」に対して、「韓国データ」では、親しい友人同士の会話として普通体がかなり自然な形で産出されている。韓国入学習者は中国人学習者に比べメディアを通した日本語との接触程度が高く、このことが普通体の運用力の差を生み出す要因となっていると思われる。今後さらにデータ数を増やし、性別、母語別、接触頻度別にクロス集計をおこない、分析を進める予定である。平成15年度は、研究実施計画に沿って、おもに以下の5点をおこなった。(1)中国・大連の協力者に依頼しアンケート調査を実施した。(2)韓国・釜山において調査内容に関する日本語教育関係者との意見交換および授業見学、アンケート調査をおこなった。(3)アンケートの結果をデータベース化し、収集したデータの分析・考察を進めた。(4)「第6回日本研究・日本語教育国際シンポジウム」(於:香港城市大学)に参加し、研究発表および意見交換をおこなった。

(5)報告書のとりまとめをおこなった。アンケート調査の結果から、1)中国人学習者は、韓国人学習者よりも日本語の男女差を強く感じ、かつ肯定的に評価しており、また、性差表現の学習にも韓国人学習者より意欲的であること、2)中国国内で学ぶ中国人日本語学習者の作成した会話文は、普通体と丁寧体を混用させたものが多く、中国人日本語学習者にとって聞き手との心的距離に配慮した適切な文体選択が困難であること、3)日本人との接触度は、韓国人学習者よりもむしろ中国人学習者のほうが高いが、普通体会話の運用には結びついていないこと等が明らかになった。
水素分子輝線イメ-ジング観測による光解離領域の研究

本研究の目的は、平成2年度より開発を進めていた郵政省通信総合研究所(CRL)1.5m望遠鏡の赤外分光カメラシステム(イメ-ジング・ファブリペロ)を完成し、これを用いて赤外水素分子輝線の2次元イメ-ジング観測を行い、光解離領域の研究を行うことである。分光カメラシステムはほぼ完成し、1992年1月の観測で、HII領域、星形成領域、超新星残骸、及びスタ-バ-スト銀河での水素分子振動線及び水素原子再結合線の2次元イメ-ジが得られている。まだ詳細なデ-タ解析及び議論は進行中であるが、今年中には数編の論文として成果を公表できるものと考えている。いくつかの例をあげると、(1)オリオン大星雲の電離境界面でのH_2輝線はHI輝線のピ-クより30"ほど外側に平行に分布しており、これは、電波のCS分子線のピ-クとほぼ一致している。これらのデ-タより、電離領域から光解離領域への電離度、密度などの物理量の変化が明らかにできると考えられる。(2)オリオン星形成領域でのH_2輝線の高S/Nイメ-ジは、周辺へのびるフィラメント構造を鮮やかに写し出している。この方向にはHH天体なども分布しており、ショック現象の詳細な構造を知る上で貴重なデ-タとなるであろう。観測装置的には、次数除去に狭帯域フィルタ-を使用する方法をほぽ確立した。つまり、1-2μm帯においては狭帯域フィルタ-を常温部におき、この角度をかえることで、遠方の銀河の赤方偏移に対応することができる。2-2.5μm帯ではこれを冷却する必要があるが、冷却部でのシステムを現在設計中である。必要な性能を持つフィルタ-を国内で製作する目度もつき、低温での性能をテストする装置も開発した。これらによって、波長分解能10^3までのファブリペロシステムの次数除去方法確立の見通しがついたものと考えている。
経口糖尿病治療薬耐性と膵β細胞チャンネル分子異常の関連性追求およびモデル系の開発

グリベンクラミド(GB)やトルブタミドに代表されるスルホニルウレア(SU)剤耐性および不応答のメカニズムを分子レベルで明らかにするために、膵β細胞に発現するイオンチャンネル群に着目し、分子発現をタンパク質レベルで調べた。最近、我々が明らかにしたGB結合分子グルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)について、SU剤との相互作用についても調べた。1、SU剤長期投与による膵β細胞イオンチャンネル分子群の定量長期GB投与したインスリノーマ細胞HIT-T15におけるインスリン分泌に関与するイオンチャンネル群(Caチャンネル、ATP感受性Kチャンネル、リアノジン受容体、IP_3受容体)の発現量をウェスタンブロット法によって定量し、インスリン分泌量の変化と対比させて調べた。GB長期投与によりSU剤応答性インスリン分泌が低下した。しかし、いずれの分子もその発現量に顕著な変化は観察されなかった。この結果は、SU剤長期投与によるSU剤応答性低下の一因として、SU剤が作用する未知の分泌制御因子の関与を示唆している。2、SU剤の新規ターゲットGSTについての検討SU剤とGSTの相互作用については、現在までほとんど知られていない。そこで、種々のSU剤を用いて吸光度法によってGST活性に対する影響を調べた。その結果、ほとんどのSU剤に阻害作用が認められた。かつ、その阻害はグルタチオン(GSH)との拮抗であることが分かった。これまでGSHと拮抗する薬物はGSH誘導体以外知られていない。よって、本知見は非常に興味深いと思われる。また、本酵素は酸化ストレスとも密接に関与している。今後、SU剤によるGST発現量と細胞内GSHレベルの変化について解析を行い、インスリン分泌不全との関連性があるか否かを明らかにしたい。II型糖尿病治療において臨床上問題となっている経口糖尿病治療薬スルホニルウレア(SU)耐性メカニズムを明らかにするために、膵β細胞に発現するイオンチャンネル群に着目し、発現様式を遺伝子およびタンパク質レベルで調べることが本研究の目的である。本年度は、インスリン分泌に関与すると考えられているイオンチャンネル、L型Ca^<2+>チャンネル、ATP感受性K^+チャンネル(K-ATP)、リアノジン受容体とIP_3受容体に対する抗体を準備した。K-ATP以外は既に作製済みなので、モデル細胞として用いるハムスターインスリノーマ細胞HIT-T15に適用できるか調べた。その結果、いずれの抗体も動物種を越えてハムスターと反応することが確認され、発現確認に十分使用できることがわかった。一方、K-ATPに対しては部分配列ぺプチドの合成を行い、ペプチド抗体を作製した。K-ATPチャンネルはSU受容体(SUR)と内向き整流性チャンネル(Kir)の2つのサブユニットから構成されている。それぞれのサブユニットは、いくつかのアイソフォームが存在し、膵臓は主にSUR1とKir6.2からなっている。そこで、SUR1に対しては、N末および細胞内ATP結合部位領域近傍の2ヶ所の計3種、Kir6.2についてC末端細胞内領域に対して1つの抗体を作製した。いずれの抗体もWestern blotting法によってHIT細胞SUR1およびKir6.2を認識することが確認できた。さらに、マイナーであるが発現が確認されているSUR2AおよびSUR2B、KIr6.1についても、それぞれを特異的に認識しうる抗体を作製した。今後、作製した抗体を用いて、HIT細胞を用いて長期スルホニルウレア投与におけるイオンチャンネル発現変化をWestern blottiong法により調べる予定である。
人工血液を用いた常温肝灌流装置における一酸化窒素制御による肝障害抑制効果の検討

酸素運搬物質として人工血液を使用した灌流液を作成し、肝を体外において機能を維持しながら灌流させることが可能であるか検討してきた。灌流肝のvaibilityを維持させるために、iNOS阻害剤を投与によって灌流肝のvaibilityを底下させることなく維持できるのか検討した。また、NO donorとして作用するarginineを投与し、その効果も検討した。方法:実験には20kgの雌豚を使用した。豚の肝臓を冷却したラクテック液を門脈より灌流することで摘出した。摘出した肝の門脈に流入用チューブを、下大静脈に流出用チューブを挿入した。灌流液は酸素運搬物質としてテルモ社より供給された人工血液(Neo Red Cell)を使用した。灌流液を人工肺で酸素化し約300ml/minの流速で門脈に挿入したチューブより流入させた。iNOS阻害剤としてONO1714を灌流直後に10mgを灌流液に注入した。Arginineは10mg/hrの用量で持続的に灌流液に注入した。結果:誘導型NO合成酵素阻害剤(ONO1714)投与実験ONO1714投与によって灌流液中に産生されるNOxは抑制され、ASTとLDHは有意に低値であった。しかし、酸素消費量は対照群より低く、lactateは高値であった。アミノ酸代謝においては、Urea産生は対照群と差はなかったが、tyrosine、cystine、serineは対照群より高値であった。組織学的検討では、肝細胞壊死が灌流5時間まで対照群と比較して抑制されていた。免疫組織学的検討では、iNOSの発現を肝組織に認めた。細胞毒性の強いperoxynitriteの発現は対照群より低下していた。Arginine投与実験:AST、LDH、lactateは対照群とほぼ同等であった。アミノ酸代謝においてはureaとornithineが経時的に著明に上昇した。Fisher比の改善傾向も認めた。細胞毒性のあるserine, methionineは低値であった。組織学的検討では、肝細胞壊死とperoxynitriteの発現は対照群と差はなかった。われわれは酸素運搬物質として人工血液を使用した肝灌流液を作成し、肝臓を体外で機能を維持しながら常温で灌流させる装置の開発に成功した。今回、灌流肝のvaibilityを維持させるために、細胞障害性に作用する誘導型NO合成酵素(iNOS)に注目し、iNOS阻害剤投与による灌流肝のvaibilityを低下抑制について検討した。方法20kgの雌豚の肝臓を冷却したラクテック液で灌流することで摘出した。摘出肝の門脈に流入用チューブを、下大静脈に流出用チューブを挿入し、灌流回路に設置した。灌流液を人工肺で酸素化しながら約300ml/minの流速で灌流した。灌流液の酸素運搬物質はテルモ社より供給された人工血液(Neo Red Cell)を使用した。灌流液はNRCに肝細胞用培養液Ll5、アルブミン、ブドウ糖、インスリン、デキサメサゾなどを加えて作成した。ONO1714をiNOS阻害剤として使用し、0.3μg/mlの濃度で灌流液に投与した。

結果灌流液のASTは灌流6時間目で、対照群で6000IU/L、iNOS投与群で2000IU/Lで、iNOS投与群で有意に低値であった。iNOS投与群で組織学的に肝壊死が抑制されていた。免疫組織学検討で灌流肝にiNOSの発現を認めた。iNOS投与群の灌流液中のNOxは対照群より低値であった。しかしながら、iNOS投与群の酸素消費量は対照群より低く、乳酸値は高値であった。考察人工血液を用いた常温肝灌流においてiNOSは発現し、灌流中の組織障害発生にiNOSが関与していることが判明した。しかし、iNOS阻害剤投与によって酸素消費量低下と乳酸値上昇を認めた。これらの現象はiNOS阻害剤投与によってcNOSも阻害され、微少循環不全、酸素供給阻害が起きたためと考えられた。今後はiNOS阻害剤の投与量などをさらに検討する必要がある。酸素運搬物質として人工血液を使用した灌流液を作成し、肝を体外において機能を維持しながら灌流させることが可能であるか検討してきた。灌流肝のvaibilityを維持させるために、iNOS阻害剤を投与によって灌流肝のvaibilityを低下させることなく維持できるのか検討した。また、NO donorとして作用するarginineを投与し、その効果も検討した。方法:実験には20kgの雌豚を使用した。豚の肝臓を冷却したラクテック液を門脈より灌流することで摘出した。摘出した肝の門脈に流入用チューブを、下大静脈に流出用チューブを挿入した。灌流液は酸素運搬物質としてテルモ社より供給された人工血液(Neo Red Cell)を使用した。灌流液を人工肺で酸素化し約300ml/minの流速で門脈に挿入したチューブより流入させた。iNOS阻害剤としてONO1714を灌流直後に10mgを灌流液に注入した。Arginineは10mg/hrの用量で持続的に灌流液に注入した。結果:誘導型NO合成酵素阻害剤(ONO1714)投与実験ONO1714投与によって灌流液中に産生されるNOxは抑制され、ASTとLDHは有意に低値であった。しかし、酸素消費量は対照群より低く、lactateは高値であった。アミノ酸代謝においては、Urea産生は対照群と差はなかったが、tyrosine、cystine、serineは対照群より高値であった。組織学的検討では、肝細胞壊死が灌流5時間まで対照群と比較して抑制されていた。免疫組織学的検討では、iNOSの発現を肝組織に認めた。細胞毒性の強いperoxynitriteの発現は対照群より低下していた。Arginine投与実験:AST、LDH、lactateは対照群とほぼ同等であった。アミノ酸代謝においてはureaとornithineが経時的に著明に上昇した。Fisher比の改善傾向も認めた。細胞毒性のあるserine, methionineは低値であった。組織学的検討では、肝細胞壊死とperoxynitriteの発現は対照群と差はなかった。
微分解析における同値関係の研究

微分解析の分野における基本的問題は滑らかな写像の特異点の囲りでの振舞いや零点集合の形状を研究することである。そのためには、写像の間に“自然な同値関係"を導入することが重要になる。この流れの中で、数年来、解析関数に対する自然な同値関係として、blow-analycityに関する研究が盛んになって来ている。裏面の論文1において、blow-analycityの中で最も弱いと思われるstrong C^0 equivalenceの概念を導入し、そのための必要条件を与えた。それによって、今迄、blow-analyticに同値と思われたBrianζon-Speden族がstrongly C^0 equivalentでさえないことがわかった。更に、strong C^0 equivalenceに対する十分条件の研究を進めていく中で、多項式写像の零点集合族に対して、最も自然と思われるtrivialityとして、modified Nash trivalityという概念を導入するに至った。裏面論文3においては、孤立特異点を持つ擬斉次多項式写像の零点集合族は、modified Nash trivializationを許容することを示した。また、それ以外にも、現在プリプリントの段階であるが、modified Nash trivialityの局所理論に関して、いくつかの結果を得ている。それらは、昨年11月の実特異点論研究集会において報告した。本研究に関連して、代数的側面より柳原弘志が論文発表を行い、幾何的側面より野村泰敏が、解析的側面より藤原司が論文発表の予定である。
口腔内常在細菌に対する免疫応答の調節とその感染防御への影響の検討

申請者は「歯周病(いわゆる歯槽膿漏)を、外来細菌の感染症ではなく、常在細菌による内因感染症である」と考え、同仮説を証明する動物モデルの構築を試みた。マウスの新生児に他の細菌が棲みついてしまう前に、ヒトの歯周病原因菌だけに暴露すれば、その菌が常在菌となったモデルマウスができると考え実験を試みたが、再現性のあるモデルはできなかった。ヒトの身体の表面には常在細菌と言われる細菌が生息し、とりわけ口腔や腸管の粘膜の表面には多くの細菌が我々と共存している。通常、これらの細菌は我々に病気を引き起こさず、むしろ病原菌が体内に侵入するのを防いでいるとも考えられている。本研究では、歯槽膿漏(歯周病)の原因菌と目されている細菌も、歯周病ではない人の口腔内にも存在する常在細菌であることに注目した。マウスロ腔内常在細菌については詳細が明らかにされていない。そこでヒト歯周病の原因菌の一つとして良く調べられているAggregatibacter actinomycetemcomitansY4株(以後A.a.菌とする)をマウス常在細菌として組み込む動物モデルの作製を試みた。ヒトもマウスも生まれた時は無菌の状態で生まれてくるが、その後いろいろな細菌に暴露されることによってそれらを常在細菌として取り込むと考えられている。そこで、マウスが生まれる直前から分娩後3週間目に離乳するまで、A.a.菌を浮遊させた飲料水を自由に飲ませ、A.a.菌の定着を試みた。ヒトやマウスなど免疫系が良く発達している生物では、体内に侵入する能力を有する病原菌に対しては、その菌を特異的に認識して結合するIgG抗体が主に産生されて防御が行われる。一方、体内に入り込まずに身体の表面に棲息する常在細菌対しては、病原菌に対する免疫反応とは異なり、粘膜面に分泌されるIgA抗体が多く作られ、常在細菌が体内に入ってくるのを粘膜のレベルで未然に防いでいる。上記の方法を用いたこれまでの研究では、A.a.菌がマウスに常在細菌として定着したことを確認するには至らなかったが、A.a.菌特異的なIgA抗体のレベルが上昇するという、常在細菌と類似した免疫応答を示すことを確認した。我々はこの成果を2009年4月の国際学会で発表する。Aggregatibacter actinomycetemcomitans(以後Aaとする)は、ヒトにおける歯周病原性細菌と考えられている。我々は、Aaが歯周病に罹患していない個人の口腔内にも存在する常在細菌であることに注目した。宿主と常在細菌との関係は、一過性に感染する外来菌に対するものとは大きく異なると言われている。本研究では、新生児マウスの常在細菌叢形成時にAaを組み込ませた動物モデルを作製することによって、常在菌としてのAaの病原性の解析を試みている。初年度には、Aaの組込み処置後の新生児仔マウスの免疫学的解析で、母マウスと仔マウスの両方において、常在菌に対するものと同様の反応が認められ、動物モデル作成の成功が示唆された。しかしながら口腔内サンプルからのPCR実験ではAaの検出ができない場合もあった。そこで計画2年目の今年度は、より信頼性の高いTaqMan probeを用いたReal-time PCR法を導入した。この方法では、Aaの16s rRNA特異的配列を検出するPCRの反応系に、陽性対照となる第二の反応系を共存させる。これによって、PCR産物が検出されない場合に、反応阻害の有無を確認することができる。その結果、いくつかの文献において簡便に阻害物質を除去できると報告されていた方法では、我々の実験系では充分に阻害物質を除去できないことが明らかになった。さらに詳細な実験の結果、煮沸やmicrowave処理等の従来の方法にエタノール沈澱法を加えたサンプル処理を行うことで、阻害物質除去の効率が高まることが示された。これらの成果からAaの常在細菌叢への組込みを確認するシステムの信頼性が向上した。次年度は、構築した動物モデルと精度を高めたAa検出系を用いて、最終目標である常在菌としてのAaの病原性の検索へと研究を進める。Aggregatibacter actinomycetemcomitans(以後Aaとする)は、ヒトの歯周病原性細菌と考えられているが、健常人の口腔内にも存在する常在細菌でもある。本研究では、「外来菌」ではなく、常在菌としての仔マウスの常在細菌形成期に、母および仔マウスを飲料水に懸濁したAa生菌に暴露して、Aaを仔マウスの常在細菌として取り込ませることを試みた。計画初年度において、仔マウスの口腔内から回収した細菌サンプルをPCR法で解析した結果、Aaがしばしば検出された。さらに、マウスの唾液中および血清中からは、それぞれAa特異的IgA抗体およびIgG抗体が検出された。ところが、計画二年目以降は口腔内細菌叢からAaが検出されなくなった。

また、母マウスは唾液IgA、血清IgGともに高いAa特異的抗体価を示すにも関わらず、仔マウスでは両抗体価が検出限界以下に留まるようになった。以上の経緯を踏まえ、本年度はAa検出PCR法の精度と感度を高めることにした。マウスの唾液中にPCRの阻害物質が存在うることから、PCRのテンプレートとなる口腔内細菌DNAの精製方法について検討を重ねた。その結果、Whatman社のFTA Elute Cardを用いる方法が、精製過程でのDNAの損失を抑えて、効率的に阻害物質を除去できるという結論に至った。しかし、この方法でも仔マウスの口腔内細菌サンプルからはAaが検出されず、Aaの常在菌としての定着が再現されたAa特異的抗体が仔マウスに移行したり、乳汁中に分泌されたりすることにより、Aaの仔マウスへの定着が妨げられたと推察している。
ヒトB細胞抗原受容体構造の研究

昨年度までの研究でマウスB細胞に発現し、lgMレセプターと結合する52kDaの分子p52を認識するモノクローナル抗体19-14を作製した。本年度は19-14をプローブとしてlambdagt11cDNAライブラリーをスクリーニングして、p52をコードする候補cDNAを得た。得られた600bpのcDNAをシークエンスしたところ未知の分子であることがわかった。p52をコードする完全長のcDNAクローンを得るためにこの600bpのcDNAクローンをプローブとして、別のcDNAライブラリーをスクリーニングした。2×10^5クローンのサイズのライブラリーから17クローンのcDNAを選択してシークエンスしたところ、全て同じ配列を含むことがわかった。このうち最長のcDNAクローンは1.4kbpであった。このcDNAクローンがコードするタンパクの大きさ、性状を解析するためにグルタチオンSトランスフェラーゼとの融合タンパクを合成する発現ベクターにこのcDNAを組み込み、大腸菌で発現させた。合成された融合タンパクを精製してウエスタンブロットを行ったところ、p52を認識するモノクローナル抗体19-14はこの融合タンパクと特異的に反応した。従ってこのcDNAクローンは、p52をコードする可能性が高いことが示された。今後はこの融合タンパクをウサギに免疫して抗血清を得てこの血清が19-14と同じくp52を免疫沈降できるかを調べこのcDNAがp52をコードするかどうかを明らかにする。このcDNAクローンをプローブとしてヒトB細胞株mRNAのノザンブロット、ゲノムDNAのサザンブロットを行い、クロスハイブリダイゼーションの条件を決定し、ヒトB細胞株cDNAライブラリーをスクリーニングしてヒトp52cDNAのクローニングを試みる。
OCSTAMPを分子標的とした病的破骨細胞誘導の制御による骨吸収性疾患の再生治療

本研究では、OC-Stamp siRNAを病的骨吸収部位に導入し、OC-stamp発現を特異的に抑制してその効果を解析することで、OC-stamp抑制療法の有用性を検証する。さらに、骨芽細胞移植を併用し、病的骨吸収の抑制と骨形成促進を併用する新規骨再生治療の基盤技術を確立することを目的とする。
大規模光通信システムのための磁性フォトニックデバイスの開拓

データセンター通信用の大規模通信システムの革新のため、磁性体による独特の機能を有する二つの新しい光制御デバイスを開発する。一つめは、新構造を導入した低損失な導波路型光アイソレータを実現し高性能の光トランシーバ開発に貢献する。二つめは、磁気不揮発性により超低消費電力駆動が可能な自己保持型光スイッチを実現する。これら二つのデバイス研究を通じて光回路と磁性体を融合した磁性フォトニクスという未開拓分野を切り開く。
脊髄虚血後の遅発性対麻痺の病態と炎症性メディエータの関与

近年注目されている炎症性サイトカインであるhigh mobility group box 1(HMGB1)蛋白を阻害することで脊髄虚血による神経損傷が軽減するかどうか検討した。家兎を対照群(C群、生理食塩水投与)、低用量抗HMGB1抗体投与群(L群、総量1000μg)、高用量抗HMGB1抗体投与群(H群、総量2000μg)の3群に分けた。家兎の腹部大動脈を13分間遮断することで脊髄虚血を作成した。再還流後、7日間後肢運動機能(5段階評価、4:正常、0:麻痺)を評価し、病理組織標本で脊髄前角の正常細胞数を測定した。3群間に後肢運動機能のスコア並びに脊髄前角の正常細胞数の差はみられなかった。抗HMGB1抗体単独での脊髄虚血保護効果は認められなかった。脊髄虚血・対麻痺は、胸腹部大動脈瘤手術における最も重篤な合併症であるが、未だその予防、治療法が確立されていない。遅発性対麻痺(遅発性神経細胞死)の病態に炎症反応が関与する可能性に着目し、近年炎症反応後期に増加するといわれるサイトカインとしてhigh mobility group box 1(HMGB 1)蛋白の存在が遅発性神経細胞死の病態進行に関与するという仮説をたて検討した。全身麻酔下に家兎(23kg)の側腹部を切開し、後腹膜アプローチによる腎動脈下大動脈遮断(13分間)を行い、脊髄虚血を作成した(SEPで確認)。HMGB 1を中和するために、ニワトリ抗HMGB 1ポリクローナル抗体(SHINO-TEST Co. Sagamihara, Japan)を脊髄虚血直前(400μg)、虚血再灌流12時間後(300μg)、虚血再灌流24時間後(300μg)に静注し、対照群には同タイミングで生理食塩水0.4ml、0.3ml、0.3ml(投与容積は同じ)を静注した(静注は全身麻酔下に耳静脈をルート確保し投与)。虚血後7日間経過観察し、後肢運動機能と感覚障害の程度を記録し、灌流固定後脊髄を取り出し、病理組織学的に検討した。対照群と比較し、抗HMGB 1ポリクローナル抗体投与群で虚血後の後肢運動機能と感覚障害の程度や脊髄の残存運動神経細胞数に差を認めなかった。遅発性神経細胞死の病態にHMGB 1の関与が少ないか、投与量が少なかった可能性が考えられる。遅発性対麻痺(遅発性神経細胞死)の病態に炎症反応が関与する可能性に着目し、近年炎症反応後期に増加するといわれるhigh mobility group box 1 (HMGB1)蛋白の存在が遅発性神経細胞死の病態進行に関与するという仮説をたて検討した。全身麻酔下に家兎(23kg)の側腹部を切開し、後腹膜アプローチによる腎動脈下大動脈遮断(13分間)を行い、脊髄虚血を作成した(SEPの振幅低下で確認)。HMGB1を中和するために、ニワトリ抗HMGB1ポリクローナル抗体(SHINO-TEST Co. Sagamihara, Japan)を用いた。家兎を対照群(C群)、抗HMGB1抗体低用量群(L群)、高用量群(H群)の3群に分け、抗HMGB1抗体を脊髄虚血直前(L群400μg、H群800μg)、虚血再灌流6、18時間後(L群300μg、H群600μg)に静注し、対照群には同タイミングで生理食塩水0.8ml、0.6ml、0.6ml(H群と投与容積は同じ)を静注した。虚血後7日間経過観察し、後肢運動機能(5段階:4正常、3ジャンプ出来るが、ぎこちない、2下肢を折りたためるが、ジャンプ不可、1下肢伸展だが、大腿に力が入る、0下肢伸展し、大腿に力が入らない)と感覚障害(3段階:2正常、1鈍麻、0麻痺)の程度を記録し、灌流固定後脊髄を取り出し、病理組織学的に第5腰髄レベルの前角・運動神経細胞数を評価した。後肢運動機能に関して、C群(3:1羽、0:5羽)に対し、L群(0:3羽)、H群(2:1羽、1:1羽、0:1羽)と差を認めなかった。感覚障害は全てで麻痺を認めた。また脊髄の残存運動神経細胞数に差を認めなかった。遅発性神経細胞死の病態にHMGB1の関与が少ない可能性が考えられる。
アミノ酸代謝異常モデルとしての遺伝性高K赤血球犬

1.アミノ酸代謝異常赤血球を保有する犬の調査:合計85頭の柴犬の血液を採取して、細胞内Na,Kおよびグルタチオン(GSH)を測定し、11頭の高K、高GSH犬(HK/HG)、28頭の高K、低GSH犬(HK/LG)を発見した。柴犬の中に、高頻度で、これらの犬が存在することが明かとなった。3.Na-依存性グルタミン酸、アスパラギン酸輸送体の精製:赤血球ゴ-スト抽出物をリポソームに組み込み、グルタミン酸取り込みを予備的に測定した。今後、このリポソーム系を精製のマーカーとして精製を進める。4.グルタミナーゼ、グルタミンシンセターゼの解析:グルタミナーゼはHK群ではLKの約1.5倍の活性を示したが、これは細胞内基質濃度による差であった。グルタミンシンセターゼ活性には差はなかった。5.アミノ酸代謝の細胞容積への影響および細胞内情報伝達系との関係:グルタミン酸、GSH濃度が、細胞容積の変化とパラレルに変動することを見いだした。細胞内cAMP、Ca、Mgとアミノ酸濃度変化は現在検討中である。