hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
イヌ乳腺腫瘍細胞への新規分子標的薬投与による化学療法の臨床応用研究

本研究に使用した細胞株のうち、イヌ乳腺腫瘍株3対およびネコ乳腺腫瘍細胞株2対では同一患畜から原発巣および転移巣より細胞株を樹立していることより、同一患畜における原発巣由来および転移巣由来細胞株での感受性の相違を比較した。その結果、イヌ乳腺腫瘍株では、CHM株で6種類、CIP株4種類で、CNM株10種類での感受性の相違を認めた。一方、ネコ乳腺腫瘍株では、FMC株で16種類、FON株で11種類の抗癌剤で感受性の相違が認められた。上述の網羅的抗癌剤感受性試験の結果よりイヌおよびネコ乳腺腫瘍細胞株にて感受性を示す抗癌剤が見出されたことより、特に分子標的薬に着目してその抗癌作用の分子メカニズムを解析した。その結果、標的分子のタンパク量や活性の低下が認められたことより、標的分子への作用が抗癌メカニズムの一部を担うと考えられ、また、これらの分子標的薬は獣医学領域における乳腺腫瘍の化学療法での応用の可能性を示すことができた。さらに、DNAマイクロアレイを用いて各イヌ乳腺腫瘍細胞株での分子標的薬投与における網羅的遺伝子発現を解析し、分子標的薬投与により発現変化する遺伝子群の抽出を行った。平成23年度の予定として、"1.分子標的薬投与による細胞増殖抑制試験"、"2.分子標的薬投与による抗癌効果の分子生物学的解析"が予定されていた。1.の研究課題はほぼ完全に達成でき、さらに、分子標的薬以外にも既存の抗癌剤も合わせて増殖抑制効果を検討した結果、分子標的薬よりも増殖抑制効果を示す抗癌剤や、抗癌効果を示すホルモン剤などの有効性も見出すことができ、イヌおよびネコ乳腺腫瘍における網羅的抗癌剤投与による基礎研究における基盤的なデータを得ることができた。2.の研究課題では3種類の分子標的薬に着目してその抗癌効果の分子メカニズムを検討するために、実験により算出したIC50値を参考にして細胞株への抗癌剤投与を行い、タンパクおよびRNAの抽出を行った。抽出したタンパクを用いたアポトーシスマーカーや癌マーカー等の発現変化の詳細な検討は現在継続中であるが、各分子標的薬の標的分子のタンパク量や活性の変化の検討は終了し、実際に分子標的薬がイヌおよびネコ乳腺腫瘍細胞株においても標的分子を阻害することで抗癌作用を示していることが示唆された。また、DNAマイクロアレイを用いた分子標的薬投与による網羅的遺伝子発現変化の解析は一部終了しているが、全体の解析は継続中である。平成24年度は、"臨床サンプルを用いた分子標的薬の臨床応用への可能性の検討"という研究課題で本研究を遂行する予定である。平成23年度にて見出された、イヌおよびネコ乳腺腫瘍への感受性を示す抗癌剤が実際に臨床例にて効果を示すかを検討するために、"臨床乳腺腫瘍症例の初代培養細胞への分子標的薬投与による細胞増殖抑制効果の検討"、および、"乳腺腫瘍症例の切片作成による各分子標的薬の標的分子の免疫組織化学染色による抗癌剤効果の予測"、について実験を行い、イヌ・ネコの乳腺腫瘍細胞への化学療法の臨床応用へと貢献する。乳腺腫瘍の初代培養は東京大学農学生命科学研究科付属ベテリナリーメディカルセンターの協力を得て、外科手術サンプルの供与により遂行する予定であり、すでに供与体制は確立している。サンプルの供与と同時に凍結切片、ホルマリン固定材料、超低温冷凍保存も施し、東京大学農学生命科学研究科・獣医病理学教室の協力の元に、乳腺腫瘍細胞での各分子標的薬の標的分子タンパクやリン酸化を検討することで各分子標的薬の効果の有無を予測し、実際の細胞増殖抑制試験と比較する。
液体中の横波音波モード:X 線非弾性散乱法による観測

高校物理の教科書ではその存在が否定されている液体中の横波が、液体金属ではナノメートル・ピコ秒の空間・時間スケールでは一般的に存在することを、大型放射光を用いたX線非弾性散乱により実験的に立証した。その結果から得られたミクロな弾性的性質は、これまで求められてきたマクロな性質と大きく異なっており、液体中に短寿命で存在することが予言されている共有クラスターや正20面体クラスターなどの弾性的性質を反映している。高校物理の教科書に明確に書かれているように、液体中を伝播できる音波は縦波のみであり、横波は存在しないという考え方が一般的である。これは液体では「ずれ」応力が固体に比較して著しく小さく、横方向の復元力がない、とされてきたためである。しかしながらこまでの研究から、液体ガリウムにはナノメートル、ピコ秒の空間・時間スケールで、横波音波の存在を示唆するX線非弾性散乱スペクトルが得られている。本研究では、このような横波励起モードが、普遍的に液体金属に存在することを実験的に証明し、液体中に予想される固体的な「かご」状熊のミクロな弾性的性質を明らかにすることを目的とした。本年度はSPring-8のBL35XUビームラインにおいて、液体鉄、銅、およびスズについてX線非弾性散乱測定を行い、いずれの試料のスペクトルにも液体ガリウムと同じように、横波励起によると思われる信号を見いだした。そのミクロな弾性的性質は、特にポアソン比について解析を行い、鉄、銅に予想される正二十面体は、形状保全性の強い硬いクラスター、ガリラムやスズでは、短寿命の共有結合による柔軟性の高いクラスター、と元素による違いが見いだされた。現在、共同研究者によって第一原理分子動力学計算が行われており、暫定的には実験と良い一致が見られる。これらの結果については、X綿非弾性散乱についての国際会議に招待されて講演を行った。また、国内でも日本物理学会、日本放射光学会において口頭発表を行った。また、日本金属学会の機関誌に結果の一部が解説論文として掲載され、物理学の国際雑誌に論文2編を投稿中である。さらに、本研究テーマの拡張として、+イオンと-イオンが逆方向に振動する、光学モードが溶融塩中に存在することも、世界で初めて実験的に検出することに成功した。本年度の研究の目的は、研究代表者が世界で初めて実験的に示してきた、ナノスケール、短寿命の横波音波モードが、液体金属全般的に見いだされることを実験的に証明すること、およびそのモードの圧力依存性を測定するためにダイアモンドアンビルセルを用いた実験準備を行うことである。液体金属の高エネルギー分解能X線非弾性散乱実験は、SPring-8のビームラインBL35XUを用いて、水銀、スズ、アルミニウム、および鉛を対象として行った。実験は、高温で試料と反応を起こさず、バックグラウンドの少ない単結晶サファイア製の試料セルを自作し、コンパクトな昇温装置を用いて測定を行った。得られた非弾性散乱スペクトルのいずれにも、横波音波によると思われる信号を見いだした。これらは、一般的な解析方法である減衰調和振動子モデルを用いたデータ解析を行い、分散関係や寿命など横波および縦波フォノンの基本的な情報を得た。さらに詳細な、記憶関数を用いた一般化されたランジュバン形式によるデータ解析も進め、さまざまなミクロスコピックな熱力学的、弾性的諸量を得て、液体中の横波音波モードの本質を明らかにすることを試みている。これらの結果は、液体分野で最も重要な「第8回液体国際会議」で、口頭発表に採択されるとともに、2つの国際シンポジウムで招待講演を行った。また、結果は国際雑誌に1編、日本金属学会の雑誌に1編の論文として公表した。これらと平行して、高圧下の液体ガリウムを、外熱ヒーターを使ったダイアモンドアンビルセルを用いて試験的に作成することに成功しているので、次年度にはX線非弾性散乱測定を行いたい。高校物理の教科書に明確に記載されているように、液体中を伝搬する波は縦波だけであり、横波は存在しないと一般的には考えられている。しかしながら、波の波長がX線のように原子間距離と同じくらいになったときには、固体に準じた原子配列を持つクラスターが形成されると考えられている液体中に、非常に短寿命であるが、横波が存在できるであろうことは理論的に予測されてきた。本研究課題では、これまでに液体ガリウムのX線非弾性散乱実験から初めて存在が確認できた横波音波が、液体で一般的に存在し得るかどうかを、大型放射光施設SPring-8を用いて、さまざまな種類の液体金属で検証した。3年間の研究期間に、スズ、鉄、銅、水銀、亜鉛、鉛の測定を行い、ほぼ全ての液体金属に横波による非弾性シグナルが観測された。実験結果から求めたミクロな弾性的な性質は、元素によってかなり異なっており、それぞれの原子間の結合状態の違いによることが推察できる。この実験のため、科学研究費を使ってドイツより共同研究者をSPring-8に招聘した。

これらの結果については、フランスで行われた「第7回X線非弾性散乱国際会議」で招待講演を行ったほか、国内で開かれた2つの国際ワークショップで招待講演、計5つの国際会議で口頭発表を行い、この研究が世界的な高い興味を持たれていることを示すことができた。また国内の会議でも、本年3月に、日本物理学会年会でシンポジウム講演を行ったほか、物理学会、放射光学会で3件の口頭発表を行うことができた。また、横波については原著論文を2編、国際会議抄録論文を1編、およびX線非弾性散乱に関連する原著論文5編を公表した。SPring-8の課題申請が順調に採択され、最初に見いだしたガリウム以外の液体金属にも、次々と横波音波モードが存在することを実験的に明らかにしている。本課題研究の結果は、専門分野のみならず、少し外れた分野の研究者の興味を引き、国際的なシンポジウムや国内の学術講演会でも広く招待講演として取り上げられ、また日本金属学会の機関誌である「まてりあ」にも特集記事を掲載することができた。現在、得られた結果を論文としてまとめるために、詳細なデータ解析を行っている。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は最終年度であるので、高圧下の液体金属ガリウムの実験を軌道に乗せ、横波モードの圧力変化のようすを実験的に明らかにしたいと考えている。また、これまで得られた実験結果について、さらに信頼できるモデルをもとにしたデータ解析を精力的に行い、液体中に存在するとされる「かご」クラスターのミクロな弾性的性質を求め、短寿命クラスターの本質を明瞭に示したい。得られた結果は、国際的な物理雑誌に投稿を重ね、結果を広く公表していきたい。
精神機能性を評価する総合的システムの構築

マウスの行動テストバッテリーを用いて、一般食品やその中に含まれる新規物質が精神に与える影響を探索し、その成果をヒトで検証することを試みた。その中で、鬱や不安傾向を低下させる食品由来ペプチドの効果を動物行動でスクリーニングすることができ、そのペプチドが神経新生を亢進させる結果が得られた。また、ヤマブシタケを含有する食品の効果をヒトで確認することができ、不安感を軽減する効果があることが示唆された。本研究は、精神機能に影響を与える機能性食品成分などをスクリーニングする総合的な実験システムを構築することを目的としている。その目的を達成するため、マウスの行動テストバッテリーを用いて、一般食品やその中に含まれる新規物質が精神に与える影響を探索し、その成果をヒトで検証することを試みている。本年度は、食品成分の標的となる遺伝子を発見し、鬱や不安傾向を低下させる食品由来ペプチドの効果を動物行動でスクリーニングすることができた。血管内皮細胞増殖因子(vascular endothelial growth factor、以下VEGFと略)を脳内に過剰発現したマウスの行動を解析したところ、鬱や不安行動が顕著に減少し、神経新生が向上するという結果を見いだした。この結果により、精神機能に影響を与える食品の標的遺伝子として、VEGFが有効であることが示唆された。また、コラーゲンを特定の酵素で分解したペプチドを継続的に摂取したマウスの行動を、同量のタンパク質を摂取したマウスと比較したところ、鬱や不安傾向が低下して、脳重量の増加や神経新生の促進が観察された。以上の結果より、精神機能に影響を与える食品の特性として、神経新生が重要な役割を果たしていることが考えられ、その機能性を動物行動でスクリーニングできることが示唆された。以上の結果は、Journal of Neuroscienceに掲載され、特許申請も行った。また、ペプチドの効果については、現在論文を執筆中である。本年度は、鬱や不安傾向を低下させる食品由来ペプチドの効果を動物行動でスクリーニングすることができ、そのペプチドが神経新生を亢進させる結果が得られた。コラーゲンを特定の酵素で分解したペプチドを継続的に摂取したマウスの行動を、同量のタンパク質を摂取したマウスと比較したところ、鬱や不安傾向が低下して、脳重量の増加や神経新生の促進が観察された。また、ペプチドのいくつかをPC12細胞培養液に添加してその影響を観察したところ、特定のペプチドが神経突起を伸長させる結果を得た。その他、NGF産生を向上させると言われるヤマブシタケを含有する食品について、含有しないプラセボ食との比較で検討したところ、摂取2週間後において有意に主観的な不安感を低下する結果が得られた。以上の結果より、動物行動実験系やヒトの主観的評価方法が、食品の機能性検出に効果的であることが示された。以上の結果は、現在論文作成をほぼ完了しており、ペプチドの効果についてはNutritional Neuroscienceへ、ヤマブシタケの効果についてはBiomedical Journalに投稿予定である。
戦後日本における知識人と論壇の思想史研究―桑原武夫と京都大学人文科学研究所の群像

2012年度の研究成果は、「戦後京都学派」研究、戸坂潤研究、単著『戦後『中央公論』と「風流夢課」事件』の出版に大きく分けられる。「戦後京都学派」研究では、「多田道太郎の思想形成--戦後思想の萌芽」(『社会科学』第42巻第1号、同志社大学人文科学研究所、2012年5月)を発表し、続く「多田道太郎における非・反アカデミズムの視座」(『社会科学』第42巻第4号、2013年2月)では多田を中心として桑原武夫との相互作用を含めて「戦後京都学派」の知識人の位相を意味づけた。桑原武夫に関しては日本現代思想史研究会で「戦後総合雑誌における桑原武夫の社会批評」を報告した。桑原武夫の長男である桑原文吉氏に面会し、桑原武夫の生地である福井県敦賀市を調査して親族の方にも聞書きを行うことができた。また桑原武夫の関係者である富永茂樹氏(京都大学人文科学研究所教授)や黒田憲治氏の長男である黒田徹氏に聞書きを実施した。その他、多田道太郎の秘書を務めた岩城万里子氏から多田道太郎関係の文献を多数閲覧複写することができた。アカデミズムとジャーナリズムの相互作用の解明を目指す本研究において課題を原理的に掘り下げるために、この問題に最も早くから取り組んだ戸坂潤の研究も行い、日本思想史学会大会での個別報告を経て、「戸坂潤」(安田常雄〔編〕『講座東アジアの知識人』第4巻、有志舎、2013年刊行予定)の掲載が決まっている。最大の成果は、『戦後『中央公論』と「風流夢譚」事件--「論壇」・編集者の思想史』(日本経済評論社、2013年)の刊行である。これは2012年度科学研究費補助金(研究成果公開促進費)の採択をも受けて出版したものである。刊行の過程で、元『中央公論』編集者の春名徹氏(作家)にも聞書きを行うことができた。本書は戦後日本における知識人と「論壇」の思想史研究を進展させ、これまでの先行研究に大きなインパクトを与えるものと位置づけることができる。2010年度は、全体的な年次計画に先行する形も含みつつ、桑原武夫の関係者への聞書き調査を重点的に行った。本山幸彦(京都大学名誉教授)、沖津敦子(桑原武夫研究室元秘書)、沖津文雄(京都大学探検部OB会会長)、山田稔(作家、元京都大学教授)、作田啓一(京都大学名誉教授)、西村勇(元朝日新聞学芸部記者)、佐々木康之(立命館大学名誉教授)、高橋利子(元京都大学人文科学研究所図書室司書)の各氏である。これらによる最大の成果は、多くの関係者の紹介を得ることができた点にある。桑原武夫の子息子女、京都大学人文科学研究所あるいは共同研究班ならびに京都大学山岳部の関係者の連絡先の教示を多数得ることができた。それに加えて京都大学人文科学研究所にあった職階にとらわれず自由に議論できた雰囲気に象徴される人間関係のコミュニケーションに関する多くの証言を集められたことで、ジャーナリズム史だけではわからない思想の生成現場へのアプローチを深めることができた。また京都大学人文科学研究所と対比される、東京大学新聞研究所のキーパーソンの一人であった荒瀬豊の研究を行うことで、ジャーナリズム史と思想史の架橋を試み、論壇と知識人が位置するジャーナリズムそのものの固有の理念と役割を掘り下げた。本年度の奨励費で収集した『多田道太郎著作集』全6巻を始めとして次年度以降は、桑原武夫と関わりの深かった同じ仏文学者である多田道太郎も一つの参照軸にして研究を展開したい。2011年度は、研究実施計画通り、桑原武夫と比較する上でも京都大学人文科学研究所の群像の中で最も重要な知識人の一人である多田道太郎(19242007年)の思想史研究を行った。最大の成果は、「多田道太郎の思想形成-戦後思想の萌芽」として論文(同志社大学人文科学研究所『社会科学』に掲載決定)にまとめたことである。『多田道太郎著作集』全6巻(筑摩書房)はもとより、論壇で発表した膨大な多田の文献を読み込み、多田の学生時代までの思想形成を明らかにした。この研究の途上、富士正晴記念館、武庫川女子大学生活美学研究所にある多田道太郎記念文庫、京都大学大学文書館、三高記念館設置準備室、国立民族学博物館、桑原武夫が初代所長であった京都市生涯学習総合センター(京都アスニー)で資料収集を行った。特に富士正晴記念館では、多田道太郎、桑原武夫、杉本秀太郎の書簡を閲覧・複写した。また「多田道太郎著作目録」(『武庫川女子大学生活美学研究所紀要』第4号)を入手したことで、飛躍的に研究を進展させることができた。2011年12月には生前の多田道太郎と京都大学や日本小説を読む会で親密な交流があった作家の山田稔氏(元京都大学教授)に聞書きを行った。以上の結果、先行研究なき状況から多田道太郎の思想史研究を開拓し、京都大学人文科学研究所の群像と、「戦後京都学派」と『思想の科学』の相互作用に迫る基盤を築きあげた。2011年度内には、さらに「多田道太郎における非・反アカデミズムの視座」の論文を完成させ、現在投稿中である。なお戦後日本の論壇に迫るジャーナリズム史研究のアプローチでは、松田浩氏(元立命館大学教授)に聞書きを行い、松田氏が日本経済新聞社に勤務していた時代に中心となって作成した日本ジャーナリスト会議日経支部『ジャーナリスト』の貴重な資料を入手することができた。

2012年度の研究成果は、「戦後京都学派」研究、戸坂潤研究、単著『戦後『中央公論』と「風流夢課」事件』の出版に大きく分けられる。「戦後京都学派」研究では、「多田道太郎の思想形成--戦後思想の萌芽」(『社会科学』第42巻第1号、同志社大学人文科学研究所、2012年5月)を発表し、続く「多田道太郎における非・反アカデミズムの視座」(『社会科学』第42巻第4号、2013年2月)では多田を中心として桑原武夫との相互作用を含めて「戦後京都学派」の知識人の位相を意味づけた。桑原武夫に関しては日本現代思想史研究会で「戦後総合雑誌における桑原武夫の社会批評」を報告した。桑原武夫の長男である桑原文吉氏に面会し、桑原武夫の生地である福井県敦賀市を調査して親族の方にも聞書きを行うことができた。また桑原武夫の関係者である富永茂樹氏(京都大学人文科学研究所教授)や黒田憲治氏の長男である黒田徹氏に聞書きを実施した。その他、多田道太郎の秘書を務めた岩城万里子氏から多田道太郎関係の文献を多数閲覧複写することができた。アカデミズムとジャーナリズムの相互作用の解明を目指す本研究において課題を原理的に掘り下げるために、この問題に最も早くから取り組んだ戸坂潤の研究も行い、日本思想史学会大会での個別報告を経て、「戸坂潤」(安田常雄〔編〕『講座東アジアの知識人』第4巻、有志舎、2013年刊行予定)の掲載が決まっている。最大の成果は、『戦後『中央公論』と「風流夢譚」事件--「論壇」・編集者の思想史』(日本経済評論社、2013年)の刊行である。これは2012年度科学研究費補助金(研究成果公開促進費)の採択をも受けて出版したものである。刊行の過程で、元『中央公論』編集者の春名徹氏(作家)にも聞書きを行うことができた。本書は戦後日本における知識人と「論壇」の思想史研究を進展させ、これまでの先行研究に大きなインパクトを与えるものと位置づけることができる。研究目的に掲げた思想・学問の形成史、「戦後京都学派」と「論壇」、共同研究の「学際性」分析、桑原グループの群像という課題は、投稿中の「多田道太郎における非・反アカデミズムの視座」の内容を含めて、全てにおいて研究を進展することができたからである。京都大学人文科学研究所の群像のキーパーソンである桑原武夫の戦後思想研究をまとめることが今後考えられる最大の推進方策である。具体的な対応策として、筆者が進めてきた「論壇」の思想史・ジャーナリズム史研究で対象としてきた総合雑誌の分析が挙げられる。そこで中心と目される『世界』『中央公論』『文藝春秋』に発表した桑原武夫の文献を集め、分析することで、「戦後京都学派」からアプローチする戦後日本の知識人と論壇の思想史研究を明らかにする。同時にアカデミズムとジャーナリズムの相互作用の解明を目指す本研究において課題を原理的に掘り下げるために、この問題に最も早くから取り組んだ戸坂潤の研究も行う必要がある。
日中悪性リンパ腫の比較研究

平成9年度に南京大学から借用したリンパ腫59症例と藤田保健衛生大学病院の同数症例との比較について第一回血液病理研究会で発表(平成10年1月、福岡)、第38回日本リンパ網内系学会(平成10年5月、熊本)では特にEBウイルスの関与について発表した。平成10年南京大学訪問の折りその詳細について特別講演をした。さらに101症例を借用することができ現在検討中であり、日韓リンパ網内系ワークショップでの発表(平成11年4月、倉敷)・論文作成に取りかかっている。さらに、平成11年2月上海に出張し、上海医科大学付属腫瘍医院、上海第二軍医大学付属長海医院、上海第二医科大学付属瑞金医院を訪問することができ、いずれもリンパ腫症例の借用が可能となった。これから連絡を緊密にして研究結果については共同で公表することにしている。日本(藤田保健衛生大学病院)のリンパ腫と比較すると、中国では瀰漫性リンパ腫に比べ、濾胞性リンパ腫が圧倒的に多い。腸、鼻咽、睾丸、後腹膜などの節外性リンパ腫の発生比率が高いことが大きな相違点であった。しかし、節外性リンパ腫の一つである胃原発リンパ腫については日本の方が中国に比べ多かった。EBウイルスの感染については南京地区についてはやや低い傾向にあったが、中国全土についてはその傾向は不明であり今回上海地区との交流を希望した理由である。南九州や四国の一部に特異的に発症する成人T細胞リンパ腫は、南京地方には全く存在しなかったが、古くより深い交流のあった上海地区に稀ながら成人T細胞リンパ腫症例が認められた点は注目すべきであり、今後の検討課題の一つである。中国来訪の折、中国の59症例について中国の共同研究者と十分に悪性リンパ腫の新分類と、その予後について討議した。また、中国研究者の訪日の際、日本における症例について検討、南京地方には発症が認められていない成人T細胞リンパ腫については特に詳細な検討を加えた。中国症例では、日本に比べ圧倒的に男性症例が多かった(57:2)。組織型ではBリンパ腫の占める比率が高く、Bリンパ腫においても瀰漫性リンパ腫に比べ濾胞性リンパ腫が極めて少なかった。また、節外性リンパ腫が多いことも特徴であったが、これらの点は中国における経済的、及びその背景も考慮するべきと考えざるを得ない。即ち、患者が病院を訪れる時期には既に悪性リンパ腫がかなり進行し状態にあることや、女性が病院を訪れることが少ないのではないかとの疑問をいだかせた。本年は更に南京大学の新しい症例についての検索、また南京地方以外の症例についても検討ができればと考えている。中国症例についてはHE標本が作製されているのみであり、現在の新しい悪性リンパ腫分類-REAL分類、及び新WHO分類-では分類不可能な症例が含まれていたため、南京大学で検討した症例のパラフィンブロックを借用してきた。これらの症例について種々の免疫組織化学的検索を実施し、リンパ腫分類を試みると共にEBウイルスの関与の有無についても検索した。当大学の症例と比較した結果について第1回血液病理研究会(1998年1月、福岡)で発表、さらに中国症例の特徴について第38回日本リンパ網内系学会(1998年5月、熊本)、EBウイルスとの関連性について日中合同分子病理学会議(1998年8月、敦煌)での発表を予定している。また、更に症例を増やし、その結果についての執筆も予定している。平成9年度に南京大学から借用したリンパ腫59症例と藤田保健衛生大学病院の同数症との比較について第一回血液病理研究会で発表(平成10年1月、福岡)、第38回日リンパ網内系学会(平成10年5月、熊本)では特にEBウイルスの関与について発表した。

さらに101症を借用することができ現在検討中であり、日韓リンパ網内系ワークショップでの発表(平11年4月、倉敷)・論文作成に取りかかっている。さらに、平成11年2月上海に出張し、上海医科大学付属腫瘍医院、上海第二軍医大学付属長海医院、上海第二医科大学付金医院を訪問することができ、いずれもリンパ腫症例の借用が可能となった。これから連絡を緊密にして研究結果については共同で公表することにしている。日本(藤田保健衛生大学病院)のリンパ腫と比較すると、中国では瀰漫性リンパ腫に比べ、濾胞性リンパ腫が圧倒的に多い。腸、鼻咽、睾丸、後腹膜などの節外性リンパ腫の発生比率が高いことが大きな相違点であった。しかし、節外性リンパ腫の一つである胃原発リンパ腫については日本の方が中国に比べ多かった。EBウイルスの感染については南京地区についてはやや低い傾向にあったが、中国全土についてはその傾向は不明であり今回上海地区との交流を希望した理由である。南九州や四国の一部に特異的に発症する成人T細胞リンパ腫は、南京地方には全く存在しなかったが、古くより深い交流のあった上区に稀ながら成人T細胞リンパ腫症例が認められた点は注目すべきであり、今後の検討題の一つである。
コア/クラッド形高屈折率光共振用微小球

数十ミクロンの高屈折率ガラス球に、有機・無機ハイブリッド材料からなる被覆を設ける手法を開発した。まず、液状の被覆層を設け、それが固化するまでの時間の調整により、設置面のみ平坦となる特殊形状(テラス構造と名づけた)の付与を行い、テラス部からの光導入により、誘導ラマンレーザーとして機能することを確認し、以下の検討結果を得た。(1)テラス構造の最適化ゾル供給用のキャピラリーをマニピュレータで操作することにより、寸法の異なるテラス微小球を作製した。ラマンレーザーとして発振させる実験から、最適な構造を明らかにした。最も低い閾値は、2mWである。(2)高屈折率微小球のカップラーによる光励起光回路上での動作を実現するため、シングルモード光ファイバーを研磨・加工して「光カップラー」を作製し、光励起と読み出し実験を実施した。研磨によりコア部を露出させ、高屈折率被覆を施したカップラーにより高屈折率ガラス微小球の励起が可能であり、テラス微小球と同様に数mWの閾値でラマンレーザーとして発振することを確認した。(3)希土類添加ガラス微小球の作製と発振実験希土類イオン(N_d)添加ガラス微小球(n_D=1.5)を作製し、共振光、レーザー発振実験を実施した。マイクロメータサイズの球状光共振器は優れた光閉じ込め効率(Q値)で知られるが、低屈折(n_D=1.5)なシリカガラスやプラスチックを材料としていたため、共振条件を満足する屈折率差を実現できず被覆層を設けることが不可能であった。安定的に動作する光素子とするためには、被覆層の形成が不可欠であり、同時にどのようにして効率的な励起光導入を満足するかを明らかにすることが最大の課題である。本年度の研究の成果は以下の通りである。(1)数十ミクロンの高屈折率ガラス球(組成:BaO-SiO_2-TiO_2、屈折率n_D=1.93)に、有機・無機ハイブリッド材料(n_D=1.49)からなる被覆を設ける手法(エアースプレー法)を開発した。まず、液状の被覆層を設け、それが固化するまでの時間の調整により、設置面のみ平坦となる特殊形状(テラス構造と名づけた)の付与を可能にした。(2)高屈折率ガラス球に設けたテラス部からのレーザー励起光の導入(スポットサイズ、1μm)により、特異的に強く共振状態にあるラマン散乱光が生じるスポットが存在することを明らかにした。Arイオンレーザーの励起光強度を変化させる実験により、約4mWにしきい値が存在し、誘導ラマンレーザーとして機能することを確認した。(3)比較的相対屈折率の低いガラス球((a)ガラス球n_D=1.93、被覆1.72、(b)ガラス球n_D=1.52、被覆層1.49)に対して同様の被覆と励起実験を実施した。上記(1)のガラス球と被覆層の組み合わせのみにレーザー発振が確認され、他の場合は、ブロードなピークのみが観測された。微小球が高屈折率であり、被覆との間の相対屈折率が1.3程度は必要であることが判明した。(1)高屈折率微小球の励起・読み出し方法の検討光回路上での動作を実現するため、シングルモード光ファイバーを研磨・加工して「光カプラー」を作製し、光励起と読み出し実験を実施した。研磨によりコア部を露出させた光ファイバーカップラーにより高屈折率ガラス微小球の励起が可能であり、テラス微小球と同様に数mWの閾値でラマンレーザーとして発振することを確認した。(2)希土類添加ガラス微小球の作製希土類イオン(N_d)

添加ガラス微小球(n_D=1.5)を作製し、共振光の測定を実施した。(3)ハイブリッド材料によるコア/クラッド形光共振用微小球ガラスよりもさらに幅広い物性と形状を可能とするため、ハイブリッド材料により、10ミクロンを越える粒径のコア用微小球(n_D=2.0)を作製した。均質性や再現性に問題を残しているが、作製法を改良することにより、原理的には作製可能であることを明らかにした。
前立腺局所療法のためのがん病巣および治療範囲の双方向性マッピング法の開発

前立腺ファントムを使ったMRI-US fusion imagingの精度は高く、前立腺局所治療における穿刺針の正確な刺入が可能である。さらにMRIの情報から得られた癌病巣の疑わしい部位に対して正確なTargetingが行われると、ほぼ間違いなく癌が検出されることがわかった。3次元的な生検経路の記録と病理組織診断の照合によって、小さな前立腺癌に対する局所療法が可能になると考えられた。前立腺ファントムを使って前立腺癌モデルを作成し、MRIと超音波のFusion Imageをガイドにして前立腺ファントムの腫瘍部位を穿刺しその精度の検討を行った。昨年度は、治療機器の前に前立腺生検で用いられる穿刺針で、小さなTargetを正確に穿刺できるかどうかの実験を行った。結果腫瘍の中心と生検針先端とのずれを計測したところ(10回)、いずれも1 mm以内の範囲であった。このことからMRI-US Fusion Imageガイド下穿刺の精度が非常に高いことが証明された。また、MRI上で前立腺癌病巣の疑われる症例に対してMRI-US Fusion Imageガイド下生検を施行し、前立腺癌の検出率を検証した。その結果前立腺癌は80例中72例(90%)から検出され、癌が検出されたすべての症例においてTarget Coreが陽性であった。すなわちMRIの情報から得られた癌病巣の疑わしい部位に対して正確なTargetingが行われると、ほぼ間違いなく癌が検出されることがわかった。これらのことから、3次元的な生検経路の記録と病理組織診断の照合によって、小さな前立腺癌に対する局所療法が可能になると考えられた。昨年度開発を依頼していた経会陰的穿刺ユニットは、当システムで使用する超音波プローブの限界によって困難であることが確認された。従って、当該ユニットを使った治療ではなく、3次元的な癌病巣のMappingからテンプレートを使って経会陰的に穿刺して治療を行うことがよいと考えられた。本年度は開始した小線源留置による局所療法を進展させ、凍結局所療法も開始することを目標とする。初年度は前立腺ファントムを使って前立腺癌モデルを作成し、MRIと超音波のFusion Imageをガイドにして前立腺ファントムの腫瘍部位を穿刺しその精度の検討を行った。これによってMRI-US Fusion Imageガイド下穿刺の精度が十分に高い(誤差1mm以内)ことが証明された。その結果前立腺癌は126例中121例(96%)から検出され、癌が検出されたすべての症例においてTarget Coreが陽性であった。さらに、MRI情報と3次元的な生検経路の記録および病理組織診断の照合によって、3次元癌病巣マップを作製し、前立腺全摘標本と比較したところ、従来の生検法に比べて明らかに正確に臨床的に有意義な前立腺癌の部位と個数、病理学的悪性度を予測していた。このことから、限局性前立腺癌に対する局所療法が可能になると考えられた。昨年度開始した小線源留置による局所療法は、PSA低下を主要アウトカムとする評価で短期的には良好な結果が得られた。本年度は、治療機器の前に前立腺生検で用いられる穿刺針で、小さなTargetを正確に穿刺できるかどうかの実験を行った。その結果前立腺癌は20例中19例から検出され、癌が検出されたすべての症例においてTarget Coreが陽性であった。現在使用可能な穿刺ユニットは経直腸的な穿刺経路のみである。治療用小線源の留置や凍結プローブの挿入のためにはより清潔操作で行える経会陰的な穿刺経路が望ましい。そこで新しい経会陰的穿刺ユニットを開発中である。本年度はこのユニットを用いた穿刺精度の検証を行う予定である。経会陰的アプローチが可能な穿刺ユニットは、実用化が困難であったため、正確な癌病巣の3D-Mappingを用いてテンプレートを使った経会陰的治療を開始している。新しい

経会陰的アプローチが可能な穿刺ユニットを作成中で、使用が可能になり次第、穿刺精度および治療範囲精度の判定を行う。現在の穿刺ユニットを用いて、さらに癌病巣のTargetingの精度検証を行う。また、正確な癌病巣の3D-Mappingがどこまで可能か、前立腺全摘除標本との比較で検証を行う。テンプレートを使った小線源留置または凍結プローブによる局所療法を開始し、治療効果を検証する。また、新しい穿刺ユニット作成のための情報収集、具体的には、仮想穿刺ラインに前立腺全体がカバーされるかどうかの検証を行い、理想的な穿刺ラインを設定する。前立腺癌局所療法を正確に行うために、MRIと生検結果から得られる情報で臨床的に有意義な癌病巣をすべて3次元的にMappingするソフトウェアの開発に主に用いる。主に新しい穿刺ユニットの作成とその精度検証のために使用する。
敗血症ラット大動脈における交感神経β受容体を介する反応の変化とその機序の解明

血管平滑筋の弛緩作用に血管内皮細胞の機能が大きく影響することが広く知られている.しかし,内皮依存性血管拡張因子である一酸化窒素(NO)による血管拡張作用に対して,吸入麻酔薬がどのような影響をするかについては未だ議論の多いところである.また,血管内皮細胞が障害される敗血症時に,内皮依存性および非依存性の拡張がどのような影響を受けるかについても,あまり知られていないというのが現状である.そこで本研究はラット胸部大動脈を用い,内皮依存性の血管拡張を抑制すると考えられている麻酔薬や敗血症がどのような影響を与えるかを検討することとした.本研究の目的の第1は,内皮依存性拡張の代わりにNOを放出して血管拡張を引き起こすニトログリセリンを用い,ニトログリセリンによる血管平滑筋弛緩作用に吸入麻酔薬ハロタンがどのような影響を及ぼすかを細胞内カルシウム濃度とともに検討することである.また,内皮依存性血管拡張を起こすカルバコールを用い,内皮依存性拡張にハロタンがどのような影響を及ぼすかについても検討した.さらに本研究の目的の第2は,β刺激薬による内皮依存性拡張と内皮非依存性拡張が,敗血症性時にどう変化するかを検討することである.その結果,吸入麻酔薬のハロタンはカルバコール投与による内皮細胞内カルシウム濃度上昇を抑制し,平滑筋弛緩を抑制していることが推察された.またハロタンは,NOを産生するニトログリセリンによる平滑筋弛緩を,細胞内カルシウム濃度に一部依存し,一部依存しない状態で抑制することも明らかとなった.すなわちハロタンは,NOの産生およびNOによる血管拡張のいずれにも作用して,内皮依存性の拡張を抑制することが強く推察された.また,敗血症時には交感神経α作動薬による血管収縮作用が抑制されるだけでなく,β受容体を介した内皮依存性および内皮非依存性の血管拡張作用がいずれも抑制されることが分かった.血管平滑筋の弛緩作用に血管内皮細胞の機能が大きく影響することが広く知られている.しかし,内皮依存性血管拡張因子である一酸化窒素(NO)による血管拡張作用に対して,吸入麻酔薬がどのような影響をするかについては未だ議論の多いところである.また,血管内皮細胞が障害される敗血症時に,内皮依存性および非依存性の拡張がどのような影響を受けるかについても,あまり知られていないというのが現状である.そこで本研究はラット胸部大動脈を用い,内皮依存性の血管拡張を抑制すると考えられている麻酔薬や敗血症がどのような影響を与えるかを検討することとした.本研究の目的の第1は,内皮依存性拡張の代わりにNOを放出して血管拡張を引き起こすニトログリセリンを用い,ニトログリセリンによる血管平滑筋弛緩作用に吸入麻酔薬ハロタンがどのような影響を及ぼすかを細胞内カルシウム濃度とともに検討することである.また,内皮依存性血管拡張を起こすカルバコールを用い,内皮依存性拡張にハロタンがどのような影響を及ぼすかについても検討した.さらに本研究の目的の第2は,β刺激薬による内皮依存性拡張と内皮非依存性拡張が,敗血症性時にどう変化するかを検討することである.その結果,吸入麻酔薬のハロタンはカルバコール投与による内皮細胞内カルシウム濃度上昇を抑制し,平滑筋弛緩を抑制していることが推察された.またハロタンは,NOを産生するニトログリセリンによる平滑筋弛緩を,細胞内カルシウム濃度に一部依存し,一部依存しない状態で抑制することも明らかとなった.すなわちハロタンは,NOの産生およびNOによる血管拡張のいずれにも作用して,内皮依存性の拡張を抑制することが強く推察された.また,敗血症時には交感神経α作動薬による血管収縮作用が抑制されるだけでなく,β受容体を介した内皮依存性および内皮非依存性の血管拡張作用がいずれも抑制されることが分かった.今年度は正常ラットで,内皮細胞における細胞内カルシウム濃度の上昇,すなわち内皮依存性血管拡張物質(一酸化窒素,NO)の産生と,血管平滑筋の弛緩および細胞内カルシウム濃度の減少の相関について検討した.正常ラットの内皮細胞温存大動脈血管条片にカルシウム指示薬fura-2を負荷し,これをノルアドレナリンで収縮させた後、NOの産生を誘導するアセチルコリンで拡張させた.その結果,アセチルリンの濃度依存性に細胞内カルシウム濃度の上昇と血管条片の弛緩が生じることが明らかとなった.ラット大動脈血管平滑筋細胞にはムスカリン受容体がないため,内皮細胞を除去した血管条片ではアセチルコリンによる拡張は起こらなかった.また,細胞内カルシウム濃度測定のための紫外光をあてる部分のみ,内皮細胞を除去した標本では,細胞内カルシウム濃度の減少と血管条片の弛緩が同時に起こった.すなわち内皮細胞を温存した標本で観察された細胞内カルシウム濃度の上昇は,内皮細胞内のカルシウム濃度の上昇と平滑筋細胞内のカルシウム濃度の減少を総合したものであると推察された.これを確かめるため,NO合成酵素の阻害薬であるL-nitroarginine methyl esterを前投与しておくと,アセチルコリン投与による血管条片の弛緩は抑制されたものの,細胞内カルシウム濃度の上昇はより明瞭となった.

今後は,腹膜炎ラット作成後の時間経過による血管反応の違いを確認するとともに,内皮依存性拡張をアセチルコリン,β受容体作動薬であるドブタミン(β_1),サルブタモール(β_2)で比較検討する.同時にこの反応を正常ラット(コントロール群),シャム手術群と比較することにより,β受容体を介する血管拡張作用に及ぼす敗血症の影響を検討する.正常ラット大動脈(コントロール)を深麻酔下に摘出し,幅約3mmのリング標本を作製した.一部の血管では内皮細胞を除去した.これらの血管をα1刺激であるフェニレフリンで,最大収縮の6080%となるように収縮させた.次いでムスカリン受容体アゴニストであるアセチルコリン,β_1受容体アゴニストであるドブタミン,およびβ_2受容体アゴニストであるサルブタモールによる拡張反応を検討した.また,フェニレフリンの代わりにプロスタグランジンF_2αで収縮させた後にも,同様の拡張反応を検討した.その結果,フェニレフリンで収縮させた血管において,アセチルコリンは濃度依存性に内皮依存性の拡張反応を引き起こした.ドブタミンも内皮存在下で濃度依存性の拡張反応を起こしたが,高濃度では内皮の存否にかかわらず血管を拡張させた.サルブタモールの血管拡張作用は内皮非依存性であった.プロスタグランジンF_2αで収縮させた血管において,アセチルコリンは濃度依存性の内皮依存性拡張反応を示した.これに対してドブタミンは,プロスタグランジンF_2αで収縮させた血管を拡張さなかった.したがって以下の実験では,血管収縮はフェニレフリンのみを用いることとした.腹膜炎ラットでも上記と同様の反応を検討した.腹膜炎は12時間絶食としたラットをイソフルラン麻酔下に開腹し,虫垂を取り出して結紮するとともに19ゲージ針で2カ所に穿孔を開けた後に閉腹した.腹膜炎作成後24時間を経過したラットに対し,深麻酔下に腹部大動脈から採血し血中サイトカイン濃度測定用とした後,大動脈を摘出した.大動脈は幅約3mmのリング標本とし,フェニレフリンで最大収縮の6080%となるように収縮させた.その後に内皮依存性血管拡張薬であるアセチルコリン,ドブタミンを投与した.その結果,腹膜炎ラットでは,内皮依存性血管拡張反応が有意に抑制されていることが明らかとなった.正常ラット大動脈(コントロール)を深麻酔下に摘出し,幅約3mmのリング標本を作製した.一部の血管では内皮細胞を除去した.これらの血管をα_1刺激であるフェニレフリンで,最大収縮の6080%となるように収縮させた.次いでムスカリン受容体アゴニストであるアセチルコリン,β_1受容体アゴニストであるドブタミン,およびβ_2受容体アゴニストであるサルブタモールによる拡張反応を検討した.また,フェニレフリンの代わりにプロスタグランジンF_2αで収縮させた後にも,同様の拡張反応を検討した.その結果,フェニレフリンで収縮させた血管において,アセチルコリンは濃度依存性に内皮依存性の拡張反応を引き起こした.ドブタミンも内皮存在下で濃度依存性の拡張反応を起こしたが,高濃度では内皮の存否にかかわらず血管を拡張させた.サルブタモールの血管拡張作用は内皮非依存性であった.プロスタグランジンF_2αで収縮させた血管において,アセチルコリンは濃度依存性の内皮依存性拡張反応を示した.これに対してドブタミンは,プロスタグランジンF_2αで収縮させた血管を拡張さなかった.
キリンの社会形成における子育て集団の役割の解明

本研究期間ではキリンの子育て集団に着目し、その集団を形成することが彼らの1社会関係、2卒業後の行動圏の決定に及ぼす影響を明らかにしたい。その目的のために、以下のデータを収集する。1.子育て集団を形成期間、子育て集団のメンバー構成、2.子育て集団卒業個体が所属する集団のメンバー構成、3.近接が起こる場面状況、4.子育て集団の個体および卒業個体、それぞれが観察された位置情報およびその場所での行動上記の13の結果を用いて、子育て集団がキリンの1社会関係に及ぼす影響を検討する。また、4の結果を用いて、子育て集団が卒業個体の2行動圏の決定に及ぼす影響を検討する。
母子相互作用の神経基盤と新生児集中治療室入院の影響

母子相互作用の機能的な証拠を明らかにするために、乳児と母親の脳活動を、近赤外線分光法(NIRS)を用いて同時計測した。寝ている乳児を抱いて母親が安静にしている時に、両者の脳活動の変動の相関が高いことがわかり、これは母子相互作用を示唆していると考えられた。また未熟児を対象にNIRSを用いて脳活動を測定し、異なる脳部位間で脳活動の変動の相関が、児の成熟や障害により影響を受けることを確認した。当院の新生児集中治療室(NICU)入室中の児について、月齢・在胎週数・出生体重・基礎疾患などのプロフィールを収集した。大学病院では比較的重症の児が入室することが多いため対象の選別が重要と考えた。対象としては、新生児一過性過呼吸など中枢神経に異常がなく全身状態が比較的早く改善しやすい成熟児、低出生体重児、極低出生体重児、超低出生体重児を調査対象とすることにした。また、1年以上など長期入室児については、先天奇形症候群・染色体異常・中枢神経奇形など重篤な異常を持つものが多く、対象から外すことを決定した。また、児の母親についても、てんかんなどの基礎疾患をもつ場合は、脳機能に影響を及ぼしている可能性があるため対象から外すこととした。近赤外線分光法(NIRS)については、既存のプローブでも測定は可能であるが、より精度の高い測定を行なうための新しいプローブについて、島津製作所と積極的に意見交換を行ない使用できることを確認した。NIRSの最大の問題点である光路長について、それに依存しない新しい解析法は我々が既に見出しているが、幼少児でもそれが同様に有効あることを確立するために、幼少児でのデータを解析し、発表して活発に意見交換を行なった(現在、投稿中)。さらに、低出生体重児と並んで虐待のリスクが高い広汎性発達障害児(自閉症児を含む)について、当院子どものこころの診療部(児童精神科)と連携して、小児期の食行動の異常について詳細な検討を行い、幼児期に摂食障害を伴いやすいことを見出し、発表した。これは、広汎性発達障害児については、その脳活動が、低出生体重児の幼児期の脳活動の対照となる可能性があるため、基礎的なデータ収集を行う必要があるためである。NIRSを用いて母子の相互作用をみるために、眠っている乳児とその児を抱いた母親に同時に近赤外線分光法(NIRS)を装着し、母親が、(1)安静にしている条件、(2)ビデオ鑑賞している条件、(3)音楽鑑賞している条件での両者の前頭部の脳血流を計測した。母親が安静の条件では、児と母親の前頭部の血流変化に高い相関関係(r>0.7,p<0.01)が見られたが、他の条件では相関関係は見られなかった。また母親ではない同世代の女性がその児を抱いた場合には、児と母親の血流変化には相関関係は見られなかった。このことより、母親が児を抱っこしている時に両者の血流変化が同期していることは、何らかの母子相互作用が行なわれていることが示唆された。我々はこの結果を踏まえて、更に月齢・週齢が少ない児でも検査ができるかどうかを検証することとした。島津製作所から提供された新生児・乳児用の新しいNIRSプローブを用いて、成熟児、低出生体重児、極低出生体重児、超低出生体重児を対象とし、脳血流変化を高い精度で測定できることを確認した。一方、NIRSの最大の問題点である光路長について、それに依存しない新しい解析法(Sanefuji et al.Neurosci Res,2007)は我々が既に見出しているが、幼少児でもそれが同様に有効あることを確認し発表した(Sanefuji et al.Neuroimage,2011)。この方法を利用して、乳児・新生児でも同様に、この光路長に依存しない解析法を適用できるかどうかを検証中である。また、新生児集中治療室入院の既往のある児については、NIRSで得られた脳血流の結果とその後の発達や母子の愛着形成との関連を検討する必要があり、総合周産期母子医療センター新生児内科部門、小児科、子どものこころの診療部で合同カンファランスを開き、密な情報交換を行なっている。我々は、NIRSを用いて、安静時に母親が我が児を抱いている時に、母子の前頭葉の血流変化が同期していることを見出し、母子相互作用が行われていることを既に見出していた。本年度、我々は、この手法を更に発展させて、月齢・週齢が少ない新生児でも同様の測定ができるかどうかを検証した。島津製作所から提供された新生児・乳児用の新しいNIRSプローブを用いて、成熟児のみならず、低出生体重児、極低出生体重児、超低出生体重児30人以上を対象とし、脳血流変化を高い精度で測定できることを確認した。低出生体重児、特に、極または超低出生体重児は、児への侵襲を考慮しクベース内での測定が必要と考えられたため、母親が児を抱いての測定は困難であった。

そこで、新生児個人内の異なる脳部位の血流変化の相関関係をみるconnectivity analysisを用いて解析を行うことにした。その解析を行うための基礎データとして、当院総合周産期母子医療センター新生児内科部門の医師の協力により、児の詳細なプロフィールを収集した。それらのデータを基に、児の出生後の週数によりそのパターンがどう経時的に変化するか、中枢神経に重篤な脳障害を持つ場合はどのようなパターンになるかについて検討した。その結果、児の週数が増すにつれて、異なる脳部位間のconnectivityが徐々に増加していくことを確認することができた。また重篤な脳障害を持つ場合に、connectivityは著しく低下することをも見出すことができた。このように、NIRSを用いたconnectivityanalysisは、たとえ超低出生体重児であっても、脳の状態を、児に負担をかけることなく完全に非侵襲的に観察・評価する有用なツールであることを証明することができた。
黄色腫発症におけるサイトカイン・成長因子の役割

ウサギ実験的黄色腫組織から抽出したLDLは黄色腫病変部に存在しうるLDLであり、ウサギ黄色腫とインキュベーションしたLDL(m-LDL)は病変部で血管外に漏出したLDLが修飾を受けたものと見なすことができ、いずれも酸化的修飾を受けたLDLであることはすでに確認している。末梢血単球あるいは単球性白血病細胞株であるU-937細胞から分化させたマクロファジ-をこれらLDLを含む培地中でインキュベーションした後、培地中のIL-1β,IFN-γ,TNF-αおよびGM-CSFの濃度をEASIA法キットを用いて測定した。2種のマクロファージは同様の結果を示し,IL-1βの産生は抑制され,IFN-γの産生は増強され,TNF-αの産生には影響がみられなかったことは、これら酸化LDLはマクロファージに対しては黄色腫病変形成を促進的に作用するサイトカインの産生を刺激していないか、むしろ抑制していることを示唆した。一方,GM-CSFの産生が増強したことは黄色腫病変促進的に作用することが示唆された。ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)をm-LDLで刺激した後、ICAM-1,VCAM-1およびELAM-1を免疫組織化学により染色し、その発現をFACScanで解析した。泡沫細胞浸潤性病変発症には,VCAM-1が重視されており,ICAM-1の役割については賛否両論がある。今回の実験ではICAM-1の発現誘導は認めらず、VCAM-1とELAM-1はLDLの濃度依存性に、また経時的に発現誘導が増強されたが、いずれが主役を果たすかという点は明らかにできなかった。この接着分子発現へのNF_κBの関与をP65を抗原決定基とする抗体を用いて蛍光抗体法により検討したが,m-LDLによる刺激によってHUVECでの特異蛍光の細胞質から核への移行は認められなかった。このことは,m-LDLによる内皮細胞の接着分子発現には,transcriptional factorであるNF_κBは関与していないことを示唆する。実験1:ヒトLDLをウサギ黄色腫組織で処理して得た酸化LDL(OX-LDL)によるヒト単球由来マクロファージ、U-937(ヒト単球性白血病cell line)由来マクロファージおよびヒト血管内皮細胞(HUBEC)からのサイトカイン・成長因子産生誘導をEASIAにより測定した。Native LDLをnegative controlとし、positive controlとしてacetyl-LDLを用いた。結果:マクロファージによるIL-1β産生はいづれのLDLも抑制した。TNF-α産生に影響はなかったが、一定濃度までdose-dependentにIFN-γおよびGM-CSFの産生を増強した。HUBECのサイトカイン産生への直接の影響は認められなかった。考察:黄色腫発症における単球の病変部への浸潤および単球のマクロファージへの分化にはOX-LDLによってマクロファージから産生されるIFN-γやGM-CSFが関与すると考えられる。内皮細胞への単球の接着に関与する接着分子の発現には、OX-LDLによる直接の作用というよりは、マクロファージ由来のサイトカインが重要であるが、IL-1βやTNF-αの関与はないと考えられる。実験2:ヒト培養線維芽細胞によるコラーゲン合成に対するacetyl-LDLおよびOX-LDLの影響を観察した。

結果:LDL非存在下よりもOX-LDLあるいはacetyl-LDL存在下でコラーゲン合成は増強したが、native LDLとは相違を認めなかった。マクロファージをOX-LDLとインキュベーションしたconditioned mediumでも同様の結果であった。考察:黄色腫の形態は病変部でのコラーゲン合成能も一要因として決定される。今回の実験ではOX-LDLはコラーゲン合成を促進したが、native LDLでも同様の効果が認められたことは、native LDLが実験操作中に変性を受けた結果とも考えられる。Conditioned mediumでの効果が認められなかったことは、マクロファージ由来の成長分子の関与を否定するものであるが、OX-LDLの細胞障害性によるとも考えられ、この点については再検討を要する。ウサギ実験的黄色腫組織から抽出したLDLは黄色腫病変部に存在しうるLDLであり、ウサギ黄色腫とインキュベーションしたLDL(m-LDL)は病変部で血管外とに漏出したLDLが修飾を受けたものと見なすことができ、いずれも酸化的修飾を受けたLDLであることはすでに確認している。末梢血単球あるいは単球性白血病細胞株であるU-937細胞から分化させたマクロファージをこれらLDLを含む培地中でインキュベーションした後、培地中のIL-1β,IFN-γ,TNF-αおよびGM-CSFの濃度をEASIA法キットを用いて測定した。2種のマクロファージは同様の結果を示し,IL-1βの産生は抑制され,IFN-γの産生は増強され,TNF-α産生には影響がみられなかったことは、これら酸化LDLはマクロファージに対しては黄色腫病変形成を促進的に作用するサイトカインの産生を刺激していないか、むしろ抑制していることを示唆した。一方,GM-CSFの産生が増強したことは黄色腫病変促進的に作用することが示唆された。ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)をm-LDLで刺激した後,ICAM-1,VCAM-1およびELAM-1を免疫組織化学により染色し、その発現をFACScanで解析した。泡沫細胞浸潤性病変発症には,VCAM-1が重視されており,ICAM-1の役割については賛否両論がある。今回の実験ではICAM-1の発現誘導は認められず、VCAM-1とELAM-1はLDLの濃度依存性に、また経時的に発現誘導が増強されたが、いずれが主役を果たすかという点は明らかにできなかった。この接着分子発現へのNFκBの関与をP65を抗原決定基とする抗体を用いて蛍光抗体法により検討したが,m-LDLによる刺激によってHUVECでの特異蛍光の細胞質から核への移行は認められなかった。このことは,m-LDLによる内皮細胞の接着分子発現には,transcriptional factorであるNFκBは関与していないことを示唆する。