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幕藩政アーカイブズの総合的調査・研究

本研究は、当初の計画調書に明示しているように、幕府・諸藩など領主組織が各部署において作成・授受し、管理・保存し、活用してきた文書記録やアーカイブズをアーカイブズ学に立脚した視点から、通算15回の研究会を開催し、44本の報告と議論を行った。具体的には、江戸幕府、旗本、弘前藩、秋田藩、米沢藩、高田藩、松代藩、尾張藩、京都町奉行、岡山藩、鳥取藩、萩藩、土佐藩、福岡藩、長崎奉行、熊本藩、対馬藩、鹿児島藩について、最新の研究成果を得ることができた。本年度は、初年度にあたるので、5月29日に研究代表者が所属する国文学研究資料館で科研メンバーによる全体会議を開催し、本研究の目的や具体的内容について説明し、かつ今後の具体的調査・研究に関する討議を行った。本年度の幕藩政関係文書の調査は、弘前市立図書館、秋田県立図書館、横手市立図書館、小浜市立図書館、真田宝物館、飯田市歴史研究所、江川文庫、京都府立総合資料館、都城島津史料館、沖縄県公文書館、韓国国史編纂委員会(対馬宗家文書)などを対象に実施した。全体の研究会は、5月29日「中近世アーカイブズ多国間比較、鳥取藩の文書管理」、8月27日「高田藩、黒羽藩の文書管理」、11月3日「対馬藩、米沢藩の文書管理」、2月19日「幕府老中の情報管理、藩政文書管理研究史」の4回開催し、それぞれ主として幕藩における文書管理をデーマとした合計8本の研究報告を行い、幅広い討論を行った。研究会の報告要旨や討議内容を含めた研究会記録を各研究会毎に作成し、研究メンバーで情報を共有する措置を講じた。また、本研究テーマに関係する幕藩政の記録史料管理及び史料論関係文献データ・ベースを作成した。一定の水準に達したならば、順次科研メンバーに配信し、共有文献情報の拡充を図りたい。2011年1月15日には、国文学研究史料館の基幹研究「近世地域アーカイブズの構造と特質」と共催で、研究集会「アーカイブズの構造を読み解く」を開催し、科研メンバー外の研究者との交流を図った。本年度の幕藩関係文書の調査は、弘前市立弘前図書館、秋田県立文書館、茨城県立歴史館、茨城県立歴史博物館、真田宝物館、彦根城博物館、元離宮二条城内築城400年記念展示・収蔵館、長崎市歴史博物館、天草市立天草アーカイブズ、鹿児島県歴史資料センター黎明館などを対象に実施した。全体研究会は、6月12日、10月8日、11月26日、1月21日の4回開催し、主として各藩における文書管理をテーマとして以下合計8本の研究報告及び討論がなされた。(1)高橋実(国文学研究資料館)「藩政アーカイブズの管理システム」、(2)山田哲好(同前)「弘前藩における記録管理」、(3)吉村豊雄(熊本大学)「藩政文書と地方文書の持続形態」、(4)林匡(鹿児島県立武岡高等学校)「薩摩藩の藩政文書管理について-法令集編纂、管理規定と筆者(書役)の検討を中心に-」、(5)中野達哉(駒澤大学)「弘前藩江戸日記の管理と日記役」、(6)江藤彰彦(久留米大学)「福岡藩の記録仕法と記録管理」、(7)加藤昌宏(秋田県公文書館)「「佐竹文庫」の資料構造と形成・伝来過程」、(8)林千寿(八代市立博物館)「松井家文書の伝来過程」個々の研究会の討議内容を含めた研究会記録も作成した。また、本研究テーマに関係する文献データベースも継続して作成中である。本(最終)年度の調査は、江戸幕府代官手代(京都大学大学院文学研究科図書館)、八戸藩(八戸市立図書館)、仙台藩(仙台市博物館)、館林藩(館林市立図書館)、沼田藩(群馬県立文書館)、鯖江藩(鯖江市まなべの館)、尾張藩(名古屋市逢左文庫)、松代藩(長野市立博物館)、大阪城代(大阪府公文書館)、岩国藩(岩国徴古館)、土佐藩(土佐山内家宝物資料館)、柳川藩(柳川古文書館)、平戸藩(松浦史料館)、松浦藩(島原図書館)、熊本藩(熊本大学文学部附属永青文庫)、人吉藩(人吉城歴史館)、対馬藩(大韓民国国史編纂委員会)関係の文書の伝来と作成・管理について実施した。研究会は1第13回(6月29・30日)、2第14回(10月5・6日)、3第15回(12月22・23日)の3回、代表者の所属する国文学研究資料館で1522名の参加を得て活発な討論が行われ、詳細な研究会記録も作成した。その内容は、1「岡山藩政資料のアーカイブズ化過程」(定兼学)、「近世後期地域社会の文書力と政策形成」(吉村豊雄)、「対馬藩における朝鮮関係記録の管理について」(山口華代)、「米沢藩記録方の機能」、2「京都町奉行所筆工について」(冨善一敏)、「萩藩における文書管理とその担い手について」

(山崎一郎)、「「藩政」の二元構造と記録体系ー福岡藩の事例ー」(江藤彰彦)、「慶応2年備中倉敷代官所襲撃事件後における代官役所文書と手附田中東蔵」(戸森麻衣子)、3「研究成果論文集の構成について」(高橋実)、「薩摩藩における藩政文書管理について(2)」(東匡)、「土佐藩の文書管理体制」(藤田雅子)、以上で個々の組織体による文書の作成とその管理体制の具体的究明が格段に進展した。平成26年度には本研究成果の刊行を予定している。本年度の幕藩関係文書の調査は、岩手県立図書館、秋田県公文書館、仙台市博物館、茨城県立文書館、茨城県立図書館、上田市立博物館、小浜市立図書館、広島県立文書館、丸亀市立資料館、長崎歴史文化博物館、長崎県立対馬歴史民俗資料館、韓国・国史編纂委員会などを対象に実施した。全体研究会は、7月14・15日、12月1・2日、1月12・13日の3回開催し、主として各藩における文書の伝来と管理をテーマとして以下合計11本の研究報告と討論がなされた。1種村威史(土佐山内家宝物資料館)「徳川将軍家の宝物管理について」、2来見田博基(鳥取県立博物館)「鳥取藩の藩校にみる情報管理と用紙統制」、3藤田雅子(土佐山内家宝物資料館)「土佐藩主山内伝来文書の構成」、4原田和彦(長野市立博物館)「松代藩における地方支配と文書ー善光寺地震を素材としてー」、5大石学(東京学芸大学)「徳川アーカイブスの研究」、6太田尚宏(国文学研究資料館)「尾張徳川家における記録史料の伝来と管理ー維新期から近代の動向を中心にー」、7渡辺浩一(国文学研究資料館)「水害対処先例集とマニュアルの成立ー江戸を事例としてー」、8戸森麻衣子(東京大学大学院・研究員)「幕府勘定所役人の職務と勘定所文書の取り扱いについて」、9高橋実(元国文学研究資料館)「長崎奉行所御用部屋の文書管理とその構造について」、10中野達哉(駒澤大学)「弘前藩日記役の基礎的研究」、11福田千鶴(九州産業大学)「藩政アーカイブスと家老文書群」以上の個々の研究会の討議内容を含めた研究会記録も作成するとともに、本研究テーマに関係する文献データベースも継続して作成中である。全体研究会は、平成22・23年度の2カ年で8回、合計18本の研究報告と討論の実績があり、最新の各藩における文書管理の実体の究明が進展している。25年度が最終年度であるため、記入しない。全体研究会は、平成2224年度の3カ年で11回、合計29本の研究報告と討論の実績があり、最新の各藩における文書管理の実体の究明が進展している。今後の2カ年も全体研究会を研究テーマに絞って開催することにより、対象事例の増加も期待できる。また計画当初から、それらを最終年度に成果報告書として刊行する予定に変更はない。あと1カ年も全体研究会を研究テーマに絞って開催することにより、対象事例の増加も期待できるし、また計画当初から、それらを最終年度に成果報告書として刊行する予定に変更はない。
人におけるsteroid sulfatase活性に関する研究

研究成績正常月経周期婦人(12例)、正常妊婦(30例)[妊婦前期(9例)、妊婦後期(21例)]、胎児(臍帯)血15例、正常男子(18例)、小児(5例)、RXLI[recessive Xーlinked ichthyosis(RXLI)](7例)、RXLI carrier(6例)についての白血球細胞中のsterid sulfatase活性を測定し、以下の成績を得た。胎児(臍帯)血0.116±0.024 (n=15)正常成人男子0.088±0.014 (n=18)小児0.107±0.019 (n=5)Student's t testで正常婦人の値と妊婦後期妊婦の値に(P<0.01)、妊婦前期妊婦の値と後期妊婦の値に(P<0.01)、また、正常婦人の値と成人男子の値に(P<0.001)の有意差を認めた。さらに、RXLIでは0.005p mol/ml protein/8h以下で極めて低値であった。また、正常婦人とRXLI carrierとの間にも有意差(P<0.05)を認めた。1)研究計画:補助金の交付を受けた当初の研究計画、方法に大きな変更はない。2)研究設備、経過:3)研究成績:正常男子0.088±0.014 (n=18)student t testで正常婦人の値と妊娠後期妊婦の値に(P<0.01)妊娠前期妊婦の値と後期妊婦の値に(P<0.01)、また正常婦人の値と男子の値に(P<0.001)の有意差を認めた。2)研究成績:平成元年度の実績報告書に、正常月経周期婦人(12例)、正常妊婦[妊娠前期(9例)、妊娠後期(21例)]正常男子(18例)の白血球細胞中のsteroid sulfatase活性を測定し、報告した。平成2年度には、さらに小児、RXLI[recessive Xーlinked ichthyosis(RXLI)]、RXLI carrierについての成績を示す。正常成人男子0.088±0.014(n=18)小児0.107±0.019(n=5)Student's t testで正常婦人の値と妊娠後期妊婦の値に(P<0.01)妊娠前期妊婦の値と後期妊婦の値に(P<0.01)、また、正常婦人の値と男子の値に(P<0.001)の有意差を認めた。研究成績平成元年から平成2年度にかけて正常月経周期婦人、正常妊婦、正常男子、小児、RXLI[recessive Xーlinked ichthyosis(RXLI)]、RXLI carrierについての白血球細胞中のsteroid sulfatase活性を測定し、その成績を報告してきたが、平成3年度は胎児(臍帯)血15例について検討した。これまでの成績を以下の示す。胎児(臍帯)血0.116±0.024(n=15)正常成人男子0.088±0.014(n=18)小児0.107±0.019(n=5)Student's t testで正常婦人の値と妊娠後期妊婦の値に(P<0.01)、妊娠前期妊婦の値と後期妊婦の値に(P<0.01)、また、正常婦人の値と成人男子の値に(P<0.001)の有意差を認めた。さらに、RXLIでは0.005p mol/mg protein/8h以下で極めて低値であった。また、正常婦人とRXLI carrerとの間にも有意差(P<0.05)を認めた。さらに、本年度はこれらの成績を英文の論文としてまとめた。
洪水常襲地における21世紀型水環境社会の構築

洪水による被害は世界中で、とくにバングラデシュと日本において、毎年のように起こっている。本研究は洪水被害を最小限に食い止める新たな21世紀型水環境社会を構築することを目的とする。そのために次の4点に焦点をおいて調査を行った。1)バングラデシュの洪水常襲地域における住民の日常生活を記録した。2)防水・利水・遊水の三位一体の水環境3)社会的災害弱者である異教徒、女性、老人、貧困者の救済、そして4)バングラデシュと日本・ドイツとの防水対策についての相互学習を進展させた。本研究は、バングラデシュを実験的フィールドの地とし日欧の洪水経験・対策を活かして、洪水の被害を最小限にくい止ある新たな21世紀型水環境社会の構築を目指すことを目的とする。2009年9月に溝口と土屋はバングラデシュのタンガイル県バシャイル郡に赴き、雨期の農村生活を調査した。12月には溝口・土屋・村山が乾期の状況を調査した。また2010年3月には土屋がバングラデシュに、村山がドイツに赴き洪水関係の資料収集をおこなった。バングラデシュにおいては、タンガイル県バシャイル郡とミルジャプール郡を研究対象地域として、1)両郡内のヒンドゥー教徒とイスラム教徒の集落別世帯数・人口数の調査、2)イスラム教徒の村であるカジラッパラとヒンドゥー教徒の村であるポストカムリ(壼造りの村)およびコロモカール(鍛冶屋の村)での聞き取り調査をおこなった。そこでは、洪水時の生活状況、バリ(屋敷地)内での家族別の住み分け、家族の土地、家畜などの資産、グラミンバンク他からの借り入れ状況、家族構成員と彼らの性別、年齢、職業、婚姻、1日の行動、出稼ぎ経験などを聴きとった。また、GPSを使用し、詳細な住宅地図の作成を開始した。こうした基礎的な調査に加えて、洪水対策を考えつつ、4)グラム・バングラというNGOに参加して、住民にとってもっとも必要とされる農村開発とは何かを考え、チューブウエル(井戸)の提供、植林などの援助を行った。また、村山、土屋、溝口が全員が「水環境社会比較研究」シンポジウムで発表し、土屋と溝口は本研究の構想と調査結果の一部をダッカのBRAC大学とタンガイルの工科インスティチュートで報告した(2009.9)。村山はグラム・バングラと、氏がセンター長を勤める香川大学インターナショナルオフィッスとの間で国際交流協定を結んだ(2010.2)。本研究は、バングラデシュを実験的フィールドの地とし、洪水の被害を最小限にくい止める新たな21世紀型水環境社会の構築を目指すことを目的とする。4年計画の2年目にあたる平成22年度は、51月22日に広島大学で開催された経済地理学会で、前年度までの調査結果を報告した。その成果は半年後に『経済地理学年報』56-4に掲載された。現地調査は2010年8月と2011年3月にそれぞれ数日間タンガイル県カジラッパラ村に入り、洪水常襲地の日常生活を見聞した。定期市調査では、女性の買手が急増したことがこの10年の大きな変化であった。夫が中東への出稼ぎで不在となり、結婚後他人には顔を見せない習慣があるイスラム社会においても、女性が外出して買物に行かざるを得なくなったわけで、社会的に大きな問題となっている。家の防備と言う点でも洪水時に弱い社会になってきたと言わざるをえない。首都ダッカでのセミナー(3月5日)で、日本の木曽川下流の輪中地帯での「水屋」をバングラでも各屋敷地に建造すれば大洪水が襲来しても犠牲者は半減する、と述べたら賛同された。具体的な農村開発として、地元のNGOに協力する形で井戸掘り、植林を行っている。この為の基礎調査として、屋敷地での家族構成の聞き取りを行うと同時に、今回から屋敷地の全植物記録とその利用状況の聞き取りを始めた。大洪水で毎年犠牲者が出るが、目の前で自分の家が流されても助かった人が多い地区もあった。そこでの聞き取りによると、彼らには洪水予知能力があり、河岸に立った家が崩れ落ちるであろう時期の半年から1年前に、新たな土地を求め、家を解体し、主要な柱や塀を運び、新築の家の一部に使ったという。洪水常襲地の生活の知恵といってよかろう。本研究にはバングラデシュの洪水常襲地での生活改善に資するという目的があり、そのための比較研究として名古屋大学附属図書館所蔵の木曽川の絵図解読と川奉行日記の翻刻も行った。4年計画の3年目にあたる平成23年度は、雨期と乾期の2度現地に入り、定期市をとおしての農村生活の実態を調査した。定期市調査では、朝市を中心とした毎日市が増加していた。

10年前までは市場には女性はほとんど姿を見せなかったが、今回の見聞で、女性客の増加、とくに朝市への女性の買手が急増したことが目立った。夫が中東への出稼ぎで不在となり、結婚後他人には顔を見せない習慣があるイスラム社会においても、女性が外出して買物に行かざるを得なくなったわけで、社会的に大きな問題となっている。家の防備と言う点でも洪水時に弱い社会になってきたと言わざるをえない。バングラデシュの農村部では地元のNGOグラムバングラで寄宿し、洪水時でも安全な水が確保できるようにとチューブウエル(井戸)の普及事業に参加している。また研究対象地域の2郡のいずれにおいてもいたるところで村道のアスファルト化が進められていた。この整備によって雨期が訪れるごとに孤立して船でした交通できない集落は少なくなってきている。洪水常襲地の中では比較的高所森林地帯を訪問したが、そこに多数のトライブが居住していた。一生自宅から数キロ圏外に出たことのない女性が多く、その生活圏は限られていた。彼らはかつて追いやられた側の人々であるが、洪水と無縁で、長命者も多く、幸せそうな生活を送っていた。本研究にはバングラデシュの洪水常襲地での生活改善に資するという目的があり、そのための比較研究として、輪中の知恵が詰まっている木曽三川地域を取り上げている。その1つとして名古屋大学附属図書館所蔵の木曽川の絵図解読と川奉行日記の翻刻も前年度に引き続いて行った。本研究は、バングラデシュの農村部を実験的フィールドの地とし、洪水の被害を最小限にくい止める新たな21世紀型水環境社会の構築を目指すことを目的とした。大洪水で毎年犠牲者が出るが、目の前で自分の家が流されても助かった人が多い地区もあった。洪水を予知して、河岸に立った家が崩れ落ちるであろう時期の半年から1年前に、新たな土地を求め、家を解体し、主要な柱や塀を運び、新築の家の一部に使ったという。洪水常襲地の知恵を学ぶことが出来た。首都ダッカでのセミナー(2010.3.5)で、日本の木曽川下流の輪中地帯での「水屋」をバングラでも各屋敷地に建造すれば大洪水が襲来しても犠牲者は半減する、と述べたら賛同された。また、現地への還元ということで、地元のNGOに協力する形で井戸掘り、植林を開始した。科研の最終年度は、洪水常襲地において、住民の買物行動がいかになされているかを定期市に焦点をあてて調査した。1986年に初めて調査した時からの25年間の変貌を言うと、1)週2回午後に開かれる定期市は規模を縮小しつつも存続しているが、常設店舗と朝市が増加していた。成人男性の海外出稼ぎが原因で、25年前にはほとんど見られなかった女性客が、特に朝市において、めだつようになった。また、大洪水時(1987、88、94年)に商人が生活必需品の値段を上げたため貧困者が購入できず、病死に見舞われることもあった。こうした調査結果を12年8月にチェコのプラハで開催された国際歴史地理学会で報告した。また2013年3月の日本地理学会(於、立正大学)で土屋純氏らと連名で報告した。村山は、新たな水環境社会構築に向けた調査研究ー研究資源の情報化推進と水資源環境の地域情報化ー、を開始した。年度末に、本研究代表者の溝口と分担者の村山・土屋の4年間の成果をリストアップし、その中で本研究に関する代表的な論文を集めて報告書を作成した。バングラデシュの洪水常習地の農村へ雨期と乾期の2回にわたって訪問し調査することができたこと。
精神疾患および嗜眠性脳炎、ナルコレプシーでの抗ＮＭＤＡ受容体抗体脳症の検索

NMDAR抗体は,緊張病7/11,精神症状を伴うナルコレプシー3/5,無い例2/10,反復性過眠症で1/10.非定型精神病で8/120,修正型電気けいれん療法の施行例の中で2/70を認めてた.総計25/180が陽性であった.陽性と陰性例での比較検討を行っている.ヒスタミンに関してはパーキンソン症候群のMSA(59例),PSP(4例),CBD(3例)を検討した. MSAが2600pg/mlであったのに比べてPSPは351pg/ml,CBDは306pg/mlと低値であった.シノクレイノパチーであるMSAとタウオパチーであるPSP, CBDでの差異を認めており,鑑別検査の一助になりうる.(1)NMDA受容体抗体が陽性な症例は、現在のところで、緊張病で11例中の7例、精神症状を伴うナルコレプシーで5例中の3例、非定型精神病で71例中の7例、修正型電気けいれん療法を施行されてきた症例の中で70例中2例を認めている。総計で157例中の23例が陽性であった(一部はTsutsui2012)。国立精神神経センターで構築しつつある髄液バンクから検体を提供して頂いて、検索を行ったが、統合失調症群の33例中の6例で疑陽性、コントロール群の34例中の2例で疑陽性であった。本来であれば、再検査を行って陽性か陰性を確定させるべきところであるが、髄液の用量に限りがあり、再検査を行うことは出来なかったために、確定診断には至らなかった。(2)ヒスタミンに関しては、パーキンソン症候群に含まれる、MSA(多系統萎縮症:59例)、PSP(進行性核上性麻痺:4例)、CBD(大脳皮質基底核変性症:3例)を検討した。オレキシン値は199-345pg/mlと正常範囲内であったが、ヒスタミン値はMSAが平均で2600pg/mlであったのに比べて、PSPは351pg/ml、CBDは306pg/mlと低値であった。またオレキシン値とヒスタミン値に相関は認められなかった。パーキンソン症候群に含まれる、MSA、PSP、CBDであるが、MSAはシヌクレオパチーであるのに対して、PSPとCBDはタウオパチーであり、その違いがヒスタミン値の差となって現れているのでは無いかと考えて現在検討を進めている。NMDAR抗体は,緊張病7/11,精神症状を伴うナルコレプシー3/5,無い例2/10,反復性過眠症で1/10.非定型精神病で8/120,修正型電気けいれん療法の施行例の中で2/70を認めてた.総計25/180が陽性であった.陽性と陰性例での比較検討を行っている.ヒスタミンに関してはパーキンソン症候群のMSA(59例),PSP(4例),CBD(3例)を検討した. MSAが2600pg/mlであったのに比べてPSPは351pg/ml,CBDは306pg/mlと低値であった.シノクレイノパチーであるMSAとタウオパチーであるPSP, CBDでの差異を認めており,鑑別検査の一助になりうる.研究目標(1)これまでに緊張病性昏迷として診断・加療されてきた症例や、てんかんと精神症状の合併した症例、難治例の統合失調症として修正型電気けいれん療法を施行されてきた症例の中に抗NMDA受容体脳炎に原因がある場合を考えており、その仮説を検証する。またナルコレプシーや嗜眠性脳炎でも抗NMDA受容体抗体が陽性の群があるとの報告があり、検証する。(2)視床下部に病変がある2次性の過眠症での髄液ヒスタミン値を検討し、過眠症状の指標となり得るか検討する。研究実績(1)NMDA受容体抗体が陽性な症例は、現在のところで、緊張病で11例中の7例、精神症状を伴うナルコレプシーで5例中の3例、非定型精神病で71例中の7例、修正型電気けいれん療法を施行されてきた症例の中で70例中2例を認めている。総計で157例中の23例が陽性であった。(一部はTsutsui2012)今後は国立精神神経センターで構築されつつある髄液バンクから検体を提供して頂いて、検索を行う予定である。MSAに比べるとPSPの過眠症状は強いことを反映している可能性を考えている。研究目標

(1)これまでに緊張病性昏迷として診断・加療されてきた症例や、てんかんと精神症状の合併した症例、難治例の統合失調症として修正型電気けいれん療法を施行されてきた症例の中に抗NMDA受容体脳炎に原因がある場合を考えており、その仮説を検証する。(2)視床下部に病変がある2次性の過眠症での髄液ヒスタミン値を検討し、過眠症状の指標となり得るか検討する。研究結果(1)NMDA受容体抗体が陽性な症例は、現在のところで、緊張病で11例中の7例、精神症状を伴うナルコレプシーで5例中の3例、精神症状の無いナルコレプシーで10例中2例が陽性、反復性過眠症で10例中1例が陽性であった。非定型精神病で120例中の8例、修正型電気けいれん療法を施行されてきた症例の中で70例中2例を認めている(他のグループと症例の重複あり)。総計で180例中の25例が陽性であった。(一部はTsutsui2012)また研究連携を行っている金沢医大では、精神科の医療機関から計482検体の検査依頼があり、うち187検体が髄液で、陽性例が19例であった。血清では296検体の依頼があり、26例が陽性であった。現在は陽性例と陰性例での症状や病歴の比較検討を行っている。(2)ヒスタミンに関しては、パーキンソン症候群に含まれる、MSA(多系統萎縮症:59例)、PSP(進行性核上性麻痺:4例)、CBD(大脳皮質基底核変性症:3例)を検討した。オレキシン値は199-345pg/mlと正常範囲内であったが、ヒスタミン値はMSAが平均で2600pg/mlであったのに比べて、PSPは351pg/ml、CBDは306pg/mlと低値であった。またオレキシン値とヒスタミン値に相関は認められなかった。MSAに比べるとPSPの過眠症状は強いことを反映している可能性を考えている。またシヌクレイノパチーであるMSAとタウオパチーであるPSP, CBDでの差異を認めており、パーキンソン症候群の中でも鑑別診断が困難である両群の鑑別検査の一助になる可能性検討している。精神医学、睡眠障害抗NMDA受容体抗体の検索では157例で検討を行い23例で陽性例を見いだしている。ヒスタミンに関しては66例の検討を行えている。抗NMDA受容体抗体の検索では157例で検討を行い23例で陽性例を見いだしている。NMDA受容体抗体に関しては、秋田大も測定系を立ち上げて、自前で測定実験を行う予定である。測定数もさらに多数例の検討を行いたいと考えている。NMDA受容体抗体に関しては、国立精神神経センターで構築されつつある髄液バンクから検体を提供して頂いて、検索を行う予定である。26年度は、測定検体の数を増やして、より検討を進めるとともに、解析作業にも力を入れたいと考えている。また学会にも26年度は例年通りに参加を予定している。測定実験を秋田大で行う予定である。そのために実験の備品等での経費が必要と考えている。集積した症例数としては、ほぼ当初の予定通りに近い数を集める事が出来たが、測定の為の実験キット等の消費が今回は想定よりも少なめで済んだために、消耗品代に予算が残った.また出張の回数も少なかったために、予算を消化しきれなかった.25年度は、測定検体の数を増やして、より検討を進めるとともに、解析作業にも力を入れたいと考えている。また学会にも25年度は例年通りに参加を予定している。
脳腸連関の統合的理解に基づく新しい創薬標的探索を指向した萌芽的研究

昨年度は、上部消化管刺激により分界条床核内ノルアドレナリン遊離が亢進することを報告した。今年度は、下部消化管刺激について検討した。直腸・結腸内にバルーンを留置しバロスタット装置により所定の圧で伸展させたところ、下部消化管刺激によっても分界条床核内ノルアドレナリン遊離が亢進することが明らかとなった。我々は、これまでに、分界条床核内βアドレナリン受容体の活性化により不安・嫌悪情動が惹起されることを報告しており、上部および下部消化管刺激による不安・嫌悪情動の惹起に分界条床核内ノルアドレナリン遊離亢進が関与している可能性が示唆された。さらに、分界条床核内βアドレナリン受容体の活性化が消化管機能に及ぼす影響を検討するため、βアドレナリン受容体アゴニストであるイソプロテレノールの分界条床核内投与が消化管運動に及ぼす影響を検討した。昨年度の研究において胃排出能が低下することを報告していたが、今年度は、分界条床核へのイソプロテレノール注入により下部消化管輸送能が亢進することを明らかにした。これらの結果より、分界条床核内ノルアドレナリン神経情報伝達亢進は、上部消化管運動を抑制する一方、下部消化管運動については促進することが示された。分界条床核と下部消化管の機能連関について、論文としてまとめ学術雑誌において発表した。以上の研究成果は、脳腸連関における分界条床核の重要性を示すものであり、日常的にも経験する「心配なことがあるとお腹の調子が悪くなる」、あるいは、「お腹の調子が悪いと不安やうつになる」という脳と消化管の間の機能連関のメカニズムの一端を明らかにしたものである。消化管刺激が不安および嫌悪情動を惹起する神経機構を明らかにするため、消化管刺激が脳内神経伝達物質遊離に及ぼす影響を検討した。これまでに、分界条床核へのβ受容体アゴニスト投与により不安・嫌悪情動が惹起されることを明らかにしているため、分界条床核内ノルアドレナリン遊離に対する上部消化管刺激の効果を検討した。胃内にバルーンを留置しバロスタット装置により所定の圧で胃を進展させたところ、分界条床核内ノルアドレナリン遊離が圧依存的に増加した。分界条床核内β受容体の活性化が消化管機能に及ぼす影響を検討するため、β受容体アゴニストであるイソプロテレノールを分界条床核内に注入し、胃排出能および小腸輸送能に及ぼす影響を検討したところ、胃排出能および小腸輸送能いずれもが有意に低下した。以上の結果は、上部消化管刺激により分界条床核内ノルアドレナリン神経情報伝達が亢進し不安・嫌悪情動が惹起されること、また、分界条床核内ノルアドレナリン神経情報伝達亢進が上部消化管機能を抑制することを示唆しており、脳腸連関における分界条床核の重要性を示すものである。これらの新知見は論文としてまとめ、学術雑誌において発表した。さらに、下部消化管刺激による分界条床核内ノルアドレナリン遊離亢進、および、分界条床核内β受容体アゴニスト注入による大腸輸送能亢進についてもデータを得ている。また、消化管刺激時の脳内神経活動をリアルタイムで計測するため、ファイバーフォトメトリーによるインビボ神経活動計測の実験系を確立した。上部消化管刺激により分界条床核内ノルアドレナリン神経情報伝達が亢進すること、また、分界条床核内ノルアドレナリン神経情報伝達亢進が上部消化管機能を抑制することを見出し学術雑誌において発表した。また、下部消化管に焦点をあてた脳腸連関の研究についてもデータを得てまとめつつある。さらに、消化管刺激時の脳内神経活動をリアルタイムで計測するため、ファイバーフォトメトリーによるインビボ神経活動計測の実験系を確立した。以上より、本研究はおおむね順調に進展している。

以上の研究成果は、脳腸連関における分界条床核の重要性を示すものであり、日常的にも経験する「心配なことがあるとお腹の調子が悪くなる」、あるいは、「お腹の調子が悪いと不安やうつになる」という脳と消化管の間の機能連関のメカニズムの一端を明らかにしたものである。下部消化管に焦点をあてた脳腸連関の研究については、データを取りまとめ論文として学術雑誌に投稿する。ファイバーフォトメトリーによるインビボ神経活動計測により消化管刺激時の脳内神経活動計測を行うとともに、小型蛍光顕微鏡を用いたインビボ神経活動イメージングによる詳細な解析を試みる。以上により、脳腸連関による不安・嫌悪情動にかかわる脳領域および神経機構を明らかにする。
顎関節症患者の滑液中の抗体が認識する抗酸菌由来44KDa抗原の解析

昨年までの研究で、顎関節症患者の関節滑液中の抗体がBCG菌のElongation Factor Tu(BCG EF-Tu)と反応することが明らかになった。本年度はBCG EF-Tuと顎関節症の病態との関与を検討した。Elongation Factorは真核生物、原核生物ともに保存されている転写に必要な因子である。そこでBCG EF-Tuのみが顎関節症と関連するのかどうかを検討した。ヒトのEF-Tu類似蛋白質EF-1αの遺伝子をクローニングし、リコビナント蛋白質を発現精製し、顎関節疾患者の滑液の抗体と反応させた。顎関節症患者の関節滑液中の抗体はヒトEF-1αへの反応を示さなかった。これにより、顎関節症患者の抗体は、BCG EF-TuのヒトEF-1αと相同性をもたない領域を認識していることが示唆された。また顎関節症患者の関節滑液中の抗BCG EF-Tu抗体の量が、治療によってどのように推移するのかを調べた。6人の顎関節症の患者から治療のために関節穿刺治療時に採取した関節滑液を検体として、BCG EF-Tu抗体の量を経時的に測定した。6人のうち4人が治療前に抗BCG EF-Tu抗体が検出された。その4人のうち治療により症状が改善した2人の患者の関節滑液中抗BCG EF-Tu抗体の量は経時的に減少していた。また治療により症状の改善が見られなかった2人の患者のの関節滑液中の抗BCG EF-Tu抗体の量は常に高いレベルを示していた。よって関節滑液中の抗BCG EF-Tu抗体の量は症状の推移に関連していることが示唆された。本研究の結果はEF-Tuの顎関節疾患への関与を示すだけでなく、本疾患の発症の機序の解明に寄与すると考えられる。顎関節症患者の関節滑液中の抗体が認識する抗酸菌の44kDa蛋白質を分離精製、さらにその遺伝子を解析し構造を決定した。二次元電気泳動で分離したBCG歯体蛋白質(分子量44kDa、等電点5)のN末端のアミノ酸配列分析を試みたが成功しなかった。この蛋白質のN末端に何らかの修飾がされていると推測された。そこで目的蛋白質をBCG歯破砕液から遠心分画と逆相クロマトグラフィーを用いて分離精製した。顎関節症患者の関節滑液中の抗体が認識する蛋白質は、精製品として40kDaの大きさを示した。これは試料中の何らかの酵素もしくは実験操作により切断されたと考えられる。精製蛋白質のN末端アミノ酸配列分析を行い、N末端側の14個のアミノ酸配列を決定した。得られたアミノ酸配列をもとに、コンピューター検索により既知のアミノ酸配列との相同性を検討したところ、結核菌のElongation factor Tu(EF-Tu)の内部配列の一部と(3043番目のアミノ酸)と100%一致した。そこで、BCGの染色体からEF-Tuをコードする遺伝子をクローニングし、全塩基配列を決定したところ結核菌由来のものと同一であった。これを融合蛋白質として大腸菌を用いて発現させ、さらに精製した。得られたBCGのEF-TuはウエスタンブロットによりBCGの44kDa蛋白質に反応する患者滑液中の抗体と反応することを確認した。BCGのEF-Tuを用いてELISAにて滑液の抗体価を測定したところ、検討した顎関節症患者の滑液のうち半数が高い値を示した。よって顎関節症患者滑液のIgGの主要ターゲットがEF-Tuであることが明らかになった。今後この抗体が病態とどのように関与しているのか検討していく。
Clostridium属細菌を用いた未利用バイオマスからのブタノール生産系の開発

稲わら等の植物バイオマスからの高効率ブタノール生産系の開発を目的とし、より高温域でブタノール生産が行えるようClostridium saccharoperbutylacetonicumの熱感受性機構の解明、耐熱性ブタノール生産菌への育種、育種株を用いた培養条件の検討を行った。熱感受性機構は細胞内のATP量の低下や胞子形成によることを明らかとした。また、より高温域でブタノール発酵可能な変異株を取得しその特性を解明した。本年度は、セルロース系未利用バイオマスからの高効率ブタノール生産系の開発を目的とし、以下の研究を行った。まず、セルロース分解に関与する各種セルラーゼを発現させるためのプロモーターを探索した。ゲノム情報より構成的な発現を制御するsigma Aプロモーターコンセンサス配列と相同性を高い相同性を示すプロモーター12種類を選別し、GFPをレポーター遺伝子として発現量を測定した。その結果、Phosphotransferase system II C-component、acetyl-CoA acetyltransferaseのプロモーターが培養を通じて高発現するプロモーターであることを見出し、このプロモーターを用いた発現ベクターを構築した。構築した高発現ベクターを用いて次年度からセルラーゼ等各種遺伝子の発現を行うことが可能となった。セルロース分解は高温域が至適温度であるが、ブタノール生産菌は37°C以上ではブタノール生産性が顕著に低下する。そこで、メタボローム解析により、高温培養時のブタノール発酵阻害経路の推定を試みた。その結果、解糖系・ペントースリン酸経路・核酸・アミノ酸・ピリジンヌクレオチドなど菌体の生育や増殖の必須物質も減少していた。不足していた代謝物の内特にアデニンを添加することで37°Cでもブタノール生産が可能であることを見出した。このことから、特に高温培養時に不足する代謝物はアデニンであることを明らかにすることができた。中温性セルロース分解菌のスクリーニングも行い、嫌気性中温性のセルロース分解菌も取得した。本年度は、セルロース系未利用バイオマスからの高効率ブタノール生産系の開発を目的とし、より高温域でブタノール発酵可能な菌株への育種と中温性セルロース分解菌の単離を試みた。UV照射により変異を誘発し高温域でもブタノール生産可能な変異株(RIFR91)を取得した。30°Cにおいて親株は40g/Lのグルコースから11.0g/Lのブタノールを生産可能であるが、32°C、34°C、36°C、38°Cと培養温度を上昇させるとそれぞれ6.9g/L、3.3g/L、1.7g/L、0g/Lへと減少した。一方、RIFR91の30°C、32°C、34°C、36°C、38°Cでのブタノール生産はそれぞれ11.2g/L、11.9g/L、10.8g/L、9.5g/L、2.3g/Lと36°Cという高温域でもブタノール生産が可能であった。興味深いことに、ブタノール生産速度もRIFR91では高く、親株では至適温度である30°Cで0.18g/L/hであったのに対し、RIFR91では34°Cにおいて0.39g/L/hと2倍以上高い生成速度を示した。さらには、セルロース分解菌であるC. thermocellumと混合培養した結果、34°Cにおいても親株と比較して1.5倍高い生成量を示し40g/Lの稲わらから6.2 g/Lのブタノールを生産し、その生産速度も向上していた。以上の様に、高温域で高効率にブタノール生産可能な変異株を取得することができた。一方、土壌中からの中温性セルロース分解菌のスクリーニングも行い、37°C3日間の培養でろ紙を高効率に分解する嫌気性中温性セルロース分解菌を含むコンソーシアを取得した。セルロース分解に寄与する微生物の単離を試み、当初10種類以上の微生物種が存在していたものから3種類の微生物からなるコンソーシアまで単離できた。本コンソーシアを用いて混合培養したところ、ブタノール生産を確認できた。本年度は、セルロース系未利用バイオマスからの高効率ブタノール生産系の開発を目的とし、昨年度取得した耐熱性変異株(RIFR91)の諸性質を調べるとともに、ブタノール生産菌の熱感受性機構についてメタボローム解析とRNA-Seq法を用いて網羅的に解析した。RIFR91はタンパク分泌量が向上しており、さらにはxylanseとXyloglucanase活性が親株よりも約1.5倍向上していた。このRIFR91を用いて稲わらからブタノール生産すると親株よりも生産量が向上するが、この原因はこれらヘミセルラーゼ活性の上昇であることが示唆された。ブタノール生産菌は37°Cで培養すると生育はするものの発酵能が著しく低下する。昨年度までのメタボローム解析ではアデニン添加によって発酵能が改善することを見出しているが、生理的な解析の結果より37°Cでは胞子形成が促進していること、アデニン添加によって胞子形成が遅延しその結果発酵能が改善することを見出した。さらには網羅的な転写解析の結果、37°Cでは胞子形成に関与する遺伝子群の発現量が向上していること、アデニン添加時には胞子形成を抑制する遺伝子の発現が誘導されていることを明らかにした。セルラーゼ高発現プラスミドを構築しブタノール生産菌に導入し、セルラーゼ高発現株の取得も試みたが、高いセルラーゼ活性を示す形質転換体の取得には至らなかった。

一方、昨年度までに取得している中温性セルロース分解菌群に対して変異処理を行い、37°Cで効率的にろ紙を分解する変異株を取得した。セルロース系バイオマスを基質とした高効率ブタノール生産系の開発を目的とし、昨年度までにブタノール生産菌における耐熱化変異株を取得した。この変異株は耐熱性の他にヘミセルロース分解に関与する酵素の分泌も向上しており、稲わらを基質とした際に生産量の向上も見出された。この変異株を宿主とし、昨年度までに構築した宿主ベクター計を用いることでセルラーゼ高発現株の取得を試みており今後の成果が期待される。さらには、熱感受性機構の解明をきっかけとし、胞子形成機構について新規な知見を得ることができた。一方、中温性のセルロース分解菌の単離には至っていないが、中温性セルロース分解コンソーシアは取得している。以上の様に、ブタノール生産系の開発とともに学術的な知見を得ており、ほぼ当初の計画通り進展している。本年度は、セルロース系未利用バイオマスからの高効率ブタノール生産系の開発を目的とし、昨年度までに取得した高効率ブタノール生産変異株(RIFR91)を用いて1Lジャーファーメンターを用いて高効率な培養条件を探索した。窒素を供給しながら500 mLの培地を張り込み撹拌をせずセルロース分解菌Clostridum thermocellumNBRC103400とブタノール生産変異株Clostridium saccharoperbutylacetonicum RIFR91を混合培養に供し、セルロース基質であるろ紙を基質として混合培養に供したところ、5.0 g/Lのブタノールを生産した。撹拌の回転数を100 rpmと1,000 rpmに変更した結果、それぞれ1.2 g/Lと0.8 g/Lしかブタノールを生産しなかった。一方、撹拌に使用していた羽を外して剪断応力を低下させ、80 rpmで回転し混合培養に供したところ、4.2 g/Lのブタノール生産をしたことから、撹拌がブタノール生成に大きく関与していることが示唆された。RIFR91培養時のpHを5.0、5.5、6.0に制御し混合培養に供したところ、pH 6.0においてはpH無調整の条件と比較して1.4倍高く酪酸を生産したが(3.3 g/L)、ブタノール生産量は1.8、5.0、3.2 g/Lしか生産せず、いずれの条件においてもpH無調整の条件よりも高ブタノールはみられなかった。以上の結果から、500 mLスケールの混合培養において撹拌はブタノール生産量を低下させる原因であること、RIFR91培養時のpHの固定化ではブタノール生産に対して有意的な効果を与えることができないことが示唆された。このことは、撹拌やpH調製のコストがかからないことを示しており、低コストなブタノール生産が可能であることが明らかとなった。稲わら等の植物バイオマスからの高効率ブタノール生産系の開発を目的とし、より高温域でブタノール生産が行えるようClostridium saccharoperbutylacetonicumの熱感受性機構の解明、耐熱性ブタノール生産菌への育種、育種株を用いた培養条件の検討を行った。熱感受性機構は細胞内のATP量の低下や胞子形成によることを明らかとした。また、より高温域でブタノール発酵可能な変異株を取得しその特性を解明した。
六次産業化における事業の評価指標の開発とその応用可能性

本研究の目的は、六次産業化における事業の評価指標を開発し、財務面での自立を促進する評価指標の応用可能性を探ることである。生産物の高付加価値化をはかる第一次産業従事者(主に農業従事者)に関する資料調査と聞取調査を行うことで、つぎの二点を明らかにした。第一に、会計情報をさらに活用する余地が残されていることである。第二に、自然栽培は結果として高付加価値化をはかる栽培方法となりうることである。さらに、事業化に関する発展的な研究を行うための調査対象を合理的に選出する予備的な調査も行った。東北地域における六次産業化の現状と、青森県における六次産業化・地産地消法に基づく事業計画の認定状況を踏まえて調査を行った。農業の総合産業化のことである六次産業化は、農林漁業者等による事業の多角化及び高度化であり、収入の向上及び就業機会の増大を狙ったものであるとされている。すなわち、生産のプロである農林漁業者が単独で直接的に加工や販売をすることに限定されていない。地域の強みを理解した機関等の協力を得ながら、加工技術・衛生管理技術・流通販売等に関する専門業者と農林漁業者が連携をはかることが重要である。地産地消等は、日本国全体での食料自給率の向上を目指したものなので、県内部で生産されたものを県内部でのみ消費するといった地域に限定された消費を意味するものではない。高付加価値の生産物が国内外に広く流通することが期待されていると考えられる。青森県の総合化事業計画の認定件数のうち、多くがりんごなどの農畜産物関係である。調査を行うことで、六次産業化の中核となるべき農作物の生産者が、会計情報を十分に活用していない現状が明らかになった。そのひとつに挙げられるのが、農作物の生産者における費用計算が不明確なことである。今後は、給料といった労働に関する費用の計算を、評価指標における鍵のひとつとして研究をすすめていきたい。さらに行政の協力、加工・販売設備の整備及び広域ネットワーク化が六次産業化を行う上でいかなる影響を及ぼすのかを明らかにしたい。評価指標の開発にあたって、主に二つの調査を遂行した。第一に、日本国内における第一次産業の現状と活用可能なデータについて、第二に国際的な財務指標に関する統合の動向についてである。第一次産業の従事者は、生産を生業としており、経営費をはじめとする費用の把握については二の次となっているのが現状である。本研究で必要とされる網羅性のあるデータの収集は難しい。このような現状を踏まえると、営農類型別といったデータより活用可能なものを今後は探索すると研究の目的により適うと考えられる。非財務情報といった、強制開示にはなじまない性質とされている情報まで強制開示の対象とされる動向が国際的に強まってきている。日本においては、非財務情報の強制開示は行われていない。しかし、業界別に重要なKPI(Key Performance Indicator)等の非財務指標の強制開示を目指し、財務情報と非財務情報の統合化における国際的な方向性を考慮することは、国際的な競争力をもつ産業を生み出すための評価指標を開発するうえで重要である。本研究は、資料を整理し、データをまとめる段階にあることから、順調に進展しているといえる。しかし、当該データについての問題も明らかになった。研究発表を行ったところ、データそのものについて網羅性に問題があることが指摘されたからである。分析をするうえで、有効なデータを再度まとめないと、本研究の問題意識から離れてしまう。本研究の問題意識をカバーしたデータを扱う必要があるものの、限定的な問題の解決を行っていることから、現在、おおむね順調に進展しているといる。本年度は、六次産業化の基本に立ち返って一次産業従事者への聞取調査を行った。当該従事者のうち、とくに農産物そのものについて付加価値をつける工夫に注力している農業従事者にたいして行った聞取調査を基礎として、現状の把握と収益化のプロセスについて検討を行った。農業従事者が行っている栽培方法に関する工夫として、自然栽培があげられる。自然栽培を行うと、当該生産物から得られる生産量は慣行栽培によるものより低下する。そのために、販売可能な数量についても慣行栽培によるものと比較して低下する。一方で、販売価格の面では、慣行栽培によるものより高い価格で販売されている。加工品についても、自然栽培の農産物によるものは、一般的な慣行栽培のものよりも高い価格で販売されている。慣行栽培よりも手間がかかるため、高価格で販売しないと利益がでない。しかし、高価格でもなお購入希望者がいる。六次産業化に積極的に取り組む農業従事者への聞き取りによると、農業従事者はあくまで農業従事者であるという意識が高く、加工による高付加価値化というより生産についての工夫を行っていることがわかった。さらに、六次産業化がはかられている地域の特産物のうち、比較的に酒類は利益率が高く、成功事例が多いことについても検討を行った。酒税法との関連からさらなる検討を事業規模等について行う必要性はある。しかしながら、酒類に関連するメーカーを調査対象として選出する合理性に関する予備的な調査を行うことが結果としてできたといえる。

第一に、会計情報をさらに活用する余地が残されていることである。第二に、自然栽培は結果として高付加価値化をはかる栽培方法となりうることである。さらに、事業化に関する発展的な研究を行うための調査対象を合理的に選出する予備的な調査も行った。現地に調査を行うことで現状を把握できたが、思うように調査対象に接触できなかったことから、研究の目的の達成度はやや遅れていると考えられる。これまで本研究の限定的な問題を解決するために有効なデータを扱ってきた。すなわち、本研究の課題にたいしては、限定的な解決を行っているにすぎないのが現状である。今後は、本研究において目的としている測定指標を開発するために、さらに理論を精緻化する必要がある。収集ができる利用可能なデータと、理論との整合性をとるために、調査などで得た資料等を再度、整理を行って、誤りがあれば直すことから始める必要がある。以上のような手順で、これまでよりも分析に有効な網羅性のあるデータを探索して研究を推進する予定である。会計学今後は、六次産業化の中核となる一次生産者が、会計情報を十分に活用していない現状を踏まえて、調査を今後行う必要がある。次年度使用額が生じたのは、旅費が予定したよりもかからなかったからであると考えられる。現地調査が計画通り行えなかったため、次年度使用額が生じた。比較的近距離である場合には、当初に予定していたレンタカーではなく、タクシーを利用したことも今年度使用額が少なくなった理由と考えられる。次年度で、調査・学会報告を行うための旅費として使用する計画である。次年度では、比較的遠方への調査や、学会に行くことを計画しているので、前年度に生じた差額を使用できると考えられる。
一滴試料中のヘモグロビンの簡易目視定量法の開発と貧血診断への適用

本研究では,最も普遍的な疾病の一つである貧血症の簡便な診断を目的として,表題の目視テスト法の開発を行った.従来,全血中のヘモグロビン濃度は,繁用法であるシアノメトヘモグロビン吸光光度法によって測定されているが,測定装置を必要とする点,またシアンを含む廃液の処理等に問題があり,検診や診療の現場における簡便なスクリーニングヘの適用は不可能であった.このため,機器や熟練の技術を必要としない迅速な簡易測定法の開発が望まれていた.本法は,特定の色素が水溶液ドロップからC18修飾(ODS)シリカ薄相プレート上へ,リング状に分配する現象に基づくものである.液滴からのリング形成に関しては,物理化学分野で金属などの固体粒子がドロップの乾燥によってリングを形成することが報告されているが,溶質については我々の一連の分析化学的研究が最初の事例である.さらに本研究では,乾燥に依らず,特定の溶質がリング状の濃度勾配をもって液滴円周部(固相-液滴-空気から成る三相界面)に分配する新現象が見出され,ヘモグロビンの目視テストヘ応用された.具体的な操作の概要は次の通りである.全血2μlに,3.5×10^<-6>mol dm^<-3>ローダミンB水溶液58μlを加える.この溶液50μlをODSプレート上へ滴下し,5分間静置した後,暗所でUVランプ照射下,黒色を呈する液滴内を肉眼で観察する.底部に蛍光リングが透視された場合,貧血試料と判定する.本法は,少量(2μl)の採血で,装置や特殊な器具を必要とせず,貧血診断のためのスクリーニング法としての実用性を有している.本研究では,最も普遍的な疾病の一つである貧血症の簡便な診断を目的として,表題の目視テスト法の開発を行った.従来,全血中のヘモグロビン濃度は,繁用法であるシアノメトヘモグロビン吸光光度法によって測定されているが,測定装置を必要とする点,またシアンを含む廃液の処理等に問題があり,検診や診療の現場における簡便なスクリーニングヘの適用は不可能であった.このため,機器や熟練の技術を必要としない迅速な簡易測定法の開発が望まれていた.本法は,特定の色素が水溶液ドロップからC18修飾(ODS)シリカ薄相プレート上へ,リング状に分配する現象に基づくものである.液滴からのリング形成に関しては,物理化学分野で金属などの固体粒子がドロップの乾燥によってリングを形成することが報告されているが,溶質については我々の一連の分析化学的研究が最初の事例である.さらに本研究では,乾燥に依らず,特定の溶質がリング状の濃度勾配をもって液滴円周部(固相-液滴-空気から成る三相界面)に分配する新現象が見出され,ヘモグロビンの目視テストヘ応用された.具体的な操作の概要は次の通りである.全血2μlに,3.5×10^<-6>mol dm^<-3>ローダミンB水溶液58μlを加える.この溶液50μlをODSプレート上へ滴下し,5分間静置した後,暗所でUVランプ照射下,黒色を呈する液滴内を肉眼で観察する.底部に蛍光リングが透視された場合,貧血試料と判定する.本法は,少量(2μl)の採血で,装置や特殊な器具を必要とせず,貧血診断のためのスクリーニング法としての実用性を有している.本研究は,近年の貧血症の増加に伴って重要な課題とされている全血中のヘモグロビン濃度の迅速・簡便な計測を目的とし,初年度は下記の方式のドロップテスト法を発案し,これを具体化するために基礎的な研究を行った.本方式では,特定の色素が水溶液ドロップからC18修飾(ODS)シリカ薄相プレート上へ,リング状の濃度勾配をもって液滴円周部へ高濃度に分配する現象を利用する.操作は,全血2μlを色素水溶液で30倍希釈し,その50μlをODSプレート上へ滴下し,静置後,暗所でUVランプ照射下,黒色を呈する液滴内を肉眼で観察する.テスト結果は,底部に蛍光リングが透視された場合,貧血試料と判定する.この方式を実現するためにリング形成色素の探索研究を行った結果,蛍光色素ローダミンBが優れていることを知った.肉眼の識別感度を確保するためには,色素がリング状に分配する現象が不可欠である.ODSプレートへ分配した蛍光色素ローダミンBに対して,液滴中のヘモグロビンがその濃度に応じて,UV光による励起ならびに蛍光の透過を遮蔽する結果,正常/貧血のヘモグロビン濃度の少差が増幅され,肉眼識別を可能とする.なお,水溶性タンパク質であるヘモグロビンはODSプレートへ分配されない.今後の計画としては,色素のリング状分配の機構について詳細な研究を行うとともに,応用面では,本テスト法を成人女性の正常値である120gL^<-1>と貧血の場合の100gL^<-1>との識別へ適用し,貧血診断のためのスクリーニング法としての確立を行う.本研究における本年度の成果として,特定の溶質が液滴からリング状に分配する現象を利用して,全血中のヘモグロビンの目視テスト法の開発に成功した.具体的な操作の概要は次の通りである.全血2μlに,3.5×10-6mol dm-3ローダミンB水溶液58μlを加える.

この溶液50μlをODSプレート上へ滴下し,5分間静置した後,暗所でUVランプ照射下,黒色を呈する液滴内を肉眼で観察する.底部に蛍光リングが透視された場合,貧血試料と判定する.このテスト法で,成人女性の正常値である120gL-1と貧血の場合の100gL-1とを明瞭に識別できる.これは,ODSプレートへ分配した蛍光色素ローダミンBに対して,液滴中のヘモグロビンがその濃度に応じて,UV光による励起ならびに蛍光の透過を遮蔽する結果である.水溶性タンパク質であるヘモグロビンは固相へ分配されない.ここで肉眼の識別感度を確保するためには,本研究で見出された色素がリング状の濃度勾配をもって液滴円周部(固相表面ー液滴ー空気から成る三相界面)に分配する現象が不可欠である.これを有効に利用して,正常/貧血のヘモグロビン濃度の小差を増幅して視認性を高め,迅速・簡便な目視テスト法が開発された.本法は,少量(2μl)の採血で,装置や特殊な器具を必要とせず,貧血診断のためのスクリーニング法としての実用性を有している.