hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
韓国・中国におけるWerner症候群の実態調査

成人型早老症として知られるWerner症候群は,骨軟部腫瘍や甲状腺癌などの比較的まれながんが多発することも知られており,老化と癌の関係を解明する上で興味あるモデルである.本症はこれまで,世界中で約1,100例の報告があるが,そのうち900例近くが日本人であり,人種的に近縁の韓国・中国では皆無である.本実態調査では,韓国・中国でWerner症候群の第1例を発見すること,および国民一般集団でのWerner症候群原因遺伝子(WRN)のヘテロでの変異頻度を調査することを目的とする.本年度は,韓国のソウル大学において,30才以上の骨軟部腫瘍患者,強皮症に白内障を合併した患者,および甲状腺癌の患者を中心に,Werner症候群の発見をめざして検索を開始した.開始に当たりソウル大学を訪問して,腫瘍外科のJae-Gahb Park教授,甲状腺外科のYK Eyoun教授,および整形外科のSang Hoon Lee教授と面会し,Werner症候群に関する講演を行った.また整形外科のSang Hoon Lee教授,臨床病理担当で以前よりWerner症候群に関心を持っているMyoung-Hee Park教授を日本に招聘して,Werner症候群に関する経験を深めた.一方,医師の間でWerner症候群がほとんど知られていないと考えられる中国では,知識の普及をめざして上海第二医科大学リウマチ科Chen Shun-Le教授と連絡を取り,同大学および関連学会で講演などを行った.一般人におけるWRN変異頻度調査では,Myoung-Hee Park教授が,ソウル大学医科大学付属病院において一般人の血液1,000例を収集し,わが国のWerner症候群で頻度の高い3種の変異(mutation4,6,1,わが国では各々62%,19%,10%)について検討した.その結果,変異は全く見られなかった.成人型早老症として知られるWerner症候群は,骨軟部腫瘍や甲状腺癌などの比較的まれながんが多発することも知られており,老化と癌の関係を解明する上で興味あるモデルである.本症はこれまで,世界中で約1,100例の報告があるが,そのうち900例近くが日本人であり,人種的に近縁の韓国・中国では皆無である.本実態調査では,韓国・中国でWerner症候群の第1例を発見すること,および国民一般集団でのWerner症候群原因遺伝子(WRN)のヘテロでの変異頻度を調査することを目的とする.本年度は,韓国のソウル大学において,30才以上の骨軟部腫瘍患者,強皮症に白内障を合併した患者,および甲状腺癌の患者を中心に,Werner症候群の発見をめざして検索を開始した.開始に当たりソウル大学を訪問して,腫瘍外科のJae-Gahb Park教授,甲状腺外科のYK Eyoun教授,および整形外科のSang Hoon Lee教授と面会し,Werner症候群に関する講演を行った.また整形外科のSang Hoon Lee教授,臨床病理担当で以前よりWerner症候群に関心を持っているMyoung-Hee Park教授を日本に招聘して,Werner症候群に関する経験を深めた.一方,医師の間でWerner症候群がほとんど知られていないと考えられる中国では,知識の普及をめざして上海第二医科大学リウマチ科Chen Shun-Le教授と連絡を取り,同大学および関連学会で講演などを行った.一般人におけるWRN変異頻度調査では,Myoung-Hee Park教授が,ソウル大学医科大学付属病院において一般人の血液1,000例を収集し,わが国のWerner症候群で頻度の高い3種の変異(mutation4,6,1,わが国では各々62%,19%,10%)について検討した.その結果,変異は全く見られなかった.
小児メタボリックシンドロームに対する新しい運動介入法に関する研究

本研究は肥満学童に対して低密度の集団運動療法を組み込んだ介入プログラム(週1回、3か月間)を行い、メタボリックシンドローム関連の血液指標、動脈硬化度、酸化ストレス値、心肺機能などの変化を包括的に解析し、その結果に基づき効果的かつ日常診療で実行可能な予防方法を確立することを目的とする。
プロテアーゼの機能異常による慢性炎症の発症機序の解明

アスパラギン酸プロテアーゼの比較遺伝学的解析と欠損マウス細胞の解析を行った。カテプシンE遺伝子を欠失している反芻動物等と、カテプシンEを発現している他の動物との生理学的相違点に着目すると、抗微生物ペプチド群の活性制御へのカテプシンEの関与が考えられた。生理的機能が明確でないナプシンでは、霊長類進化の過程で遺伝子重複、変異による酵素活性の減弱と偽遺伝子化が生じていると考えられた。カテプシンE欠損マウス由来マクロファージでオートファジーの低下と酸化ストレスの上昇が観察され、高脂肪食によって生じる欠損マウスの血中コレステロール高値と脂肪肝はマクロファージの白色脂肪への流入の減少との関連が示唆された。カテプシンE遺伝子を欠失しているウシとカテプシンEを発現している他種の動物との生理学的相違点に着目すると、消化管の抗微生物ペプチド群(AMPs)の作用発現への機構へのカテプシンEの関与が示唆される。すなわち消化管自然免疫の中心的役割を担うPaneth細胞はα-ディフェンシンなどのAMPsを腸管微生物由来の成分に反応するiNKT細胞からの刺激で分泌している。このうちiNKT細胞への微生物由来脂質の提示にはサポシンBが必要であるが、そのプロセッシングがアスパラギン酸プロテアーゼ阻害剤であるペプスタチンAにて阻害されることが報告されている。一方、カテプシンEを欠損しているウシではiNKT細胞、Paneth細胞、さらにα-ディフェンシンも欠損しており、Paneth細胞のAMPs放出機構へのカテプシンEの関与が強く示唆される。HEK293細胞へのカテプシンE遺伝子導入を行いサポシンのプロセッシングをウエスタンブロッティングにて検討したところ、カテプシンE発現により、内在性発現している前駆型サポシンの量が減少しており、その減少はペプスタチンA存在下の細胞培養にて抑制された。昨年度論文執筆した時点では一部のヒトにおいて遺伝子として発現するNapsin Bのアスパラギン酸プロテアーゼ活性の有無については明確ではなかった。FLAGタグ付加Napsin Bの精製法を改良したところ、ペプシンとカテプシンD、Eの合成基質を分解した。近年のシーケンス技術の爆発的な進歩につれ広く行われるようになった網羅的なゲノムシーケンシングにより、広い生物種における遺伝子の欠失や重複をデータベース中から見いだすことが可能になった。ある遺伝子がゲノムデータベース上の脊椎動物種すべてで見いだせるのであればそれは脊椎動物の生存に必須であり、逆に特定の種でのみ保存されている遺伝子は種特異的な生理機能を有していることが類推できる。すなわち比較遺伝学的アプローチは遺伝子ノックアウトマウス作成による研究に匹敵する洞察を得ることができる。カテプシンE遺伝子については、反芻動物とブタ、さらにカモノハシにおいて欠失していた。カテプシンEを発現している他種の動物との生理的相違点に着目すると、以下の2点が顕著であった。1.反芻動物特有の第一胃では常在微生物による食物発酵が行われ、後胃で分泌される酸とペプシンで微生物を消化・殺菌し、セルロースや微生物産物を栄養として用いている。2.カモノハシはカテプシンEやペプシン遺伝子群が欠失していると同時に解剖学的な胃が欠損している。一方で、特有の抗微生物ペプチド群による感染防御機能が発達している。すなわちカテプシンE欠失種の生理的な特異性より、消化管粘膜を主たる活躍の場とする抗微生物ペプチド群の活性化・分解へのカテプシンEの関与が示唆される。アスパラギン酸プロテアーゼファミリーは、酸性条件下でアミノ末端のプロペプチドが限定分解されて活性化することが知られているが、カルボキシル末端のプロセッシングは報告されていない。前年度の本研究で、Napsin AおよびBではカルボキシル末端の近くでプロセッシングが生じることを見出した。その切断機構と酵素活性に及ぼす影響を探るため、2次元電気泳動と質量分析により解析を行った。ローカルのMascot検索サーバーにFLAGタグを付加させたNapsin AおよびBの配列を登録することで、ペプチドフィンガープリントでリコンビナント配列も検索対象となるようにした。カルボキシル末端にDYKDDDDKタグ(FLAGタグ)を付加したNapsin AまたはNapsin Bを発現させた細胞と発現させていない対照の細胞との比較で増加する細胞抽出液の2次元電気泳動上のタンパク質スポットのペプチドフィンガープリント質量分析を行ったところ、Napsin AまたはBのトリプシン切断断片を検出したが、すべてFLAGタグを欠いていた。一方、発現細胞抽出液を抗FLAG抗体で免疫沈降して2次元電気泳動で展開したときのスポットはより高分子でPIが高いところに見出され、質量分析でFLAG配列を含むカルボキシル末端のm/zと一致するピークが検出された。

これらのスポットは全抽出液の2次元電気泳動では確認できず、生合成後、大部分がカルボキシル末端のプロセッシングを受けていることを示している。カルボキシル末端のFLAGを含むペプチドは10 kDaより大きければ抗FLAG免疫沈降の2次元電気泳動でスポットとして観察されるはずであったが見出されなかった。Napsin AおよびBのカルボキシル末端近くにはトリプシン切断により5アミノ酸以下になるKRリッチ領域が20アミノ酸長ほど存在していて、この部位でのプロセッシングの可能性については、質量分析による確認が不可能であった。歯科薬理学Napsin AおよびBのリコンビナントタンパク質の生化学的解析のため発現量の増加を試みていたが、タグとして付加したFLAGが生合成の早期の段階で失われることが明らかとなった。当初計画のカテプシン欠損と野生型マウスとの比較において広汎網羅的な基質タンパク質のスクリーニングを行う、という実験アプローチから部分的に方向転換を図り、候補となる基質タンパクの絞り込みをすることができたため。サポシンは消化管粘膜のみならず広く発現している一方、カテプシンEの発現は限定しているので、カテプシンEが豊富な脾臓や胸腺についてウエスタンブロッティングにてサポシンの蓄積やプロセシング不良による減少の有無を野生型マウスと欠損マウスを用いて検討する。サポシン減少はiNKT細胞の減少をもたらすことが予想されるので、CD1d-alphaGalCerを用いて血中のiNKT細胞をフローサイトメトリーで計数する。さらにカテプシンE欠損マウスにおける慢性炎症の生じやすさがサポシンの減少→iNKT細胞の減少→Paneth細胞からのAMPs分泌の減少によるものであるか否かを細菌感染実験にて解析する。カテプシンCについては脊椎動物システインプロテアーゼスーパーファミリーメンバーをデータベース上から抽出して分子進化系統樹を作成し、比較遺伝学的に基質となるタンパク質や活性ペプチドの絞り込みを試みる。Napsin AおよびBリコンビナントタンパク質タグが失われる問題についてはプロテアーゼ阻害剤の細胞培養への添加実験を行い、分解されにくいタグの付加により精製効率を上げた上で、プロテアーゼ活性の詳細な検討を行なう。カテプシンEについては消化管の抗微生物ペプチド群(AMPs)に焦点を絞って研究を行なう。具体的には野生型マウスと欠損マウス由来のカテプシンEが豊富な組織についてウエスタンブロッティングにてAMPsの蓄積やプロセシング不良による減少の有無を検討する。さらにカテプシンE欠損マウスの慢性炎症の発生がAMPsの減少によるものでないかを細菌感染実験により解析する。翌年度以降に請求する研究費が生じたが、年度末に金額あわせのため調整的な発注をしなかったためであり、次年度以降の研究遂行に備えて意図的に残した金額ではない。次年度繰越額は、予算の1%以下の\
遺伝子導入メカニズムの解明とその臨床応用への新展開

アデノウイルスを用いたウイルス治療が種々の化学療法と併用することで導入効率が増強することを示した。感受性膵癌細胞に比べ放射線耐性膵癌細胞でアデノウイルス遺伝子治療の効果が低く逆に抗癌剤耐性細胞で治療効果が高いことがわかった。また間質を構成する線維芽細胞がアデノウイルス遺伝子治療の効果を減弱させることも示した。さらにそのメカニズムを解明するとともにその際に働く分子の同定を行った。今後ウイルス感染とその取り込みに関わる責任分子の発現を症例ごとに評価し、適切な治療を行う個別化ウイルス遺伝子治療への進展の可能性を示した。膵臓癌は極めて予後不良で従来の手術・化学・放射線治療に抵抗性を示すため、次世代型の膵癌治療戦略としてウイルス治療が期待されている。本研究の目的は抗癌剤や放射線治療がウイルス治療に及ぼす影響とウイルス治療を増強するメカニズムを検討することである。我々はこれまで、アデノウイルスを用いたウイルス治療が放射線治療と併用することで導入効率が増強することを示した(Clin Can Res, 2008, Egami)。本年度以下の3点について検討した。1.抗癌剤のアデノウイルス遺伝子導入効率に与える影響2.抗癌剤の制限増殖型アデノウイルス効果に与える影響3.アデノウイルス取り込み過程で導入効率に関係する因子の同定。結果を以下に示す。1.CMVプロモーターをもち治療用蛋白を発現するアデノウイルス(AdNK4)を用い、5FU、CDDP、Etoposideといった抗癌剤を投与することでAdNK4の感染効率が増強した(Egami, Can Sci, 2009)。さらに、膵癌の第1選択薬であるゲムシタビンと併用するとCMVプロモーターが活性化し導入効率が増強した(Onimaru, Can Gene Ther, in press)。2.制限増殖型アデノウイルスAd5/3hTERTE1を用い、抗癌剤を併用することでその感染効率、殺傷効果ともに増強した(Onimaru, Can Let, in press)。3.ウイルスの取り込みに関わるCAR、ダイナミン2、インテグリンαv、β3、β5等の放射線感受性細胞と耐性細胞による発現をRT-PCRにて比較し、インテグリンβ3の発現を抑制するとアデノウイルス感染が増強した(Egami, Can Sci, 2009)。来年度は、ウイルス感染とその取り込みに関わる責任分子の発現変動を症例ごとに評価し、ウイルス治療増感剤として適切なものを選択するという、個別化ウイルス遺伝子治療の可能性を模索する予定である。膵臓癌は手術療法が長期予後を得る唯一の方法とされるが局所進展や遠隔転移のため手術可能な症例は少ない。従来の治療法である化学・放射線治療は近年改善されつつあるが化学・放射線療法の効果は依然として低く、膵臓癌は極めて予後不良である。従って新たな膵癌治療戦略が必要とされておりウイルス治療が期待されている。本研究の目的は抗癌剤や癌間質相互作用がウイルス治療に及ぼす髭響とウイルス治療を増強するメカニズムを検討することである。我々はこれまで、アデノウイルスを用いたウイルス治療が放射線治療(Clin Can Res,2008,Egami)やgemcitabine(Onimaru,Can Gene Ther,2010)5FU、CDDP、Etoposide (Egami,Can Sci,2009)といった化学療法と併用することで導入効率が増強することを示した。アデノウイルス治療は導入効率が不良であることが障害とあるため、本年度以下の2点について検討した。1.間質相互作用がアデノウイルス治療効果に与える影響。2.抗癌剤耐性がアデノウイルス治療効果に与える影響。結果を以下に示す。1.間質を構成する線維芽細胞の培養上清を添加して培養した膵癌細胞は添加していない膵癌細胞に比べてウイルスの導入効率が低下したが、癌間質相互作用を担うHGF/MET経路を阻害するとアデノウイルスの導入効率は改善した(Yasui,Can Sci 2011)。2、Gemcitabine感受性細胞と耐性細胞におけるアデノウイルスの導入効率と治療効果を、治療用蛋白を発現するアデノウイルス(AdNK4)を用い比較したところ、Gemcitabine耐性細胞で導入効率、治療効果ともに高いことがわかった(Yasui,投稿中)。研究の目的のうち(1)抗癌剤や周囲微小環境がウイルス遺伝子導入に及ぼす影響と機序の検討(2)Ad-NK4,Ad-GFPの遺伝子発現過程において感染の各段階における各種抗癌剤/放射線治療の影響の詳細な検討(3)抗癌剤や周囲微小環境がウイルス殺細胞療法に及ぼす影響の検討(4)制限増殖型ウイルスAd-hTERT-E1-5/3へ抗癌剤および微小環境の及ぼす影響の検討をこの2年間で行えたものと考える。
nonーcoding RNAの発現制御解析による発がん機構の解明

大腸がんで高頻度に認められるLIT1の発現異常は, β-cateninの相互作用により生じている可能性が示唆され,大腸がんの発生および進展に関わることを明らかにした.大腸がんで高頻度に認められるLIT1の発現異常は, β-cateninの相互作用により生じている可能性が示唆され,大腸がんの発生および進展に関わることを明らかにした.ゲノム刷り込み遺伝子LIT1/KCNQ10T1は、ヒト11p15.5領域に位置する父性発現の刷り込みを受けるnon-coding RNA遺伝子である。このLIT1の発現異常はBWSの発症や大腸がんなどのがん化と密接な関わりがあることが示されている。CpGアイランドの欠失によるLIT1の発現消失より、母性発現を呈する周辺刷り込み遺伝子(KvLQT1/KCNQ1、SMS4/KCNQ1DN、p57KIP2/CDKN1C)の発現低下を示した。これらのことより、LIT1はKvLQT1、SMS4、p57KIP2のサイレンシングに働き、クロマチンドメインレベルで遺伝子発現をシスに制御するインプリントセンター(IC)として機能する可能性が示唆された。本研究においては、non-coding RNA LIT1が関わる遺伝子発現制御機構を明らかにするために、Fluorescence in situ hybridization(FISH)法を利用してRNA分子を可視化させ、細胞内の発現動態を解析した。その結果、LIT1 RNAはヒト正常リンパ球由来細胞株、ヒト正常線維芽細胞において高頻度に間期核内で検出され、このRNA分子はLIT1 DNA近傍に局在していた。さらにLIT1 RNAは、周辺領域(SLC22Al8/IMPT1やp57KIP2/CDKN1C)を含むクロマチン上に集積することがFiber RNA-FISH解析およびRNA TRAP(tagging and recovery of associated proteins)法により観察された。一方、ヘテロクロマチン領域特異的に集積が認められるH3K9およびH3K27のトリメチル化などのエピジェネティクスの変化は見出せなかった。これらのことより、LIT1 RNAは細胞周期を通して安定にLIT1 DNA周辺領域に局在し、non-coding RNAによるクロマチン構造の変化がドメインレベルの遺伝子発現制御に重要な役割を担っていることが示唆された。これまで、LIT1 RNA分子は、細胞周期を通して安定にLIT1 DNA周辺領域に局在・集積することにより、ドメインレベルの遺伝子発現制御を行っていることを明らかにした。ゲノム刷り込みの消失( Loss of imprinting; LOI)は、がんで頻繁に観察される遺伝的な変異のひとつであり、刷り込み機構の破綻は、がんの発生や進展において重大な意味を持つ働きをしていると考えられている。とくにLIT1においては、Wnt signal pathwayの変異が数多く認められる大腸がん細胞株において高頻度のLOIをともなう発現異常が報告されている。本年度においては、大腸がんにおけるLIT1の役割を明らかにすることを目的に、Wnt signal pathwayに関わる主要な分子であるβ-catenin/TCFのLIT1発現制御に関与する可能性について、RNA-Fluorescence in situ hybridization (RNA-FISH)法およびクロマチン免疫沈降(ChIP: Chromatinimmuno precipitation)法により検討した。その結果、SW480、DLD-1、HCT15細胞の大腸がん細胞株において、LIT1のLOIやRNAシグナルの拡大が観察され、LIT1の発現異常(過剰発現)が認められた。さらに、LIT1プロモーター領域内においてβ-catenin/TCFの結合が認められた。これらのことより、大腸がん細胞株では、過剰なβ-cateninがLIT1プロモーター領域に相互作用することにより、LOIやRNAシグナルの拡大を含むLIT1の発現異常を引き起こす可能性が示唆された。
両生類における遺伝子ターゲティング法の開発

両生類での遺伝子ターゲティング法の基盤技術として、多分化能のある細胞株の確立を目指した。始原生殖細胞(PGC)からの胚性生殖細胞(EG細胞)の樹立のために、蛍光標識を指標に幼生期の胚よりPGCを含む生殖原器組織をマニュピュレーションで単離し培養方法の検討をおこなった。また、初期胚と初代培養細胞を用いて、遺伝子導入による人工多能性幹細胞(iPS細胞)の作製と培養方法の検討も行った。この研究の目的は、両生類における遺伝子ターゲティング技術の確立のための基礎研究である。具体的な研究計画は以下のように細分化される。(1) Xenopus tropicalisのPGC(始原生殖細胞)の単離これらを通じて、個々の遺伝子の機能解析に欠かせない遺伝子ターゲティングの基盤技術やその土台となる細胞生物学的研究を行う。Xenopus tropicalisの始原生殖細胞(PGC)の単離についての検討を行った。実験動物としては、2倍体であり性成熟までの期間が短いXenopus tropicalisを用い、そのなかでも、以後の研究応用性を考え、ゲノムプロジェクトに供された系統であるNigerian系統を用いた。PGC(始原生殖細胞)の単離に先立ち、Xenopus laevisで報告されている胚のPGCの追跡方法を採用し、胚のPGCのマーキングを行った。Xenopus tropicalisの生殖細胞質蛋白質であるDEADSouthの遺伝子の3'UTRを蛍光蛋白質GFP遺伝子のコーディング領域につないだ融合mRNAを作製し、受精直後の植物極側にマイクロインジェクションすることでPGCを蛍光標識することを試みた。その結果、tropicalis後期胚で生殖原器近傍でGFPの蛍光が確認されることがわかった。この方法を用いて標識した後、生殖原器を含む組織を切り出して初代培養を行い、蛍光標識を指標に、EG細胞(胚性生殖細胞)としての株化を目指して、培養方法の検討を行った。また、一方で生体への移植を視野に入れ、Xenopus tropicalisにおいてどれだけ近交化が進んでいるかを調べるために、系統間での交換移植を行った。現在もっとも同系交配が進んでいるNigerian系を含む3系統について調べたが、どの系統についても組織交換移植に耐えるほど、近交系ではないことがわかった。Xenopus細胞への遺伝子の導入法についての検討を行った。NEPAGENEエレクトロポレーションシステムをもちいて、目的の細胞に遺伝子の導入が可能かどうか、また、導入した遺伝子が安定的に発現するかどうかを、蛍光蛋白質GFP遺伝子を用いて追跡、確認した。神経胚と尾芽胚期のXenopus胚に、GFP遺伝子をマーカー遺伝子としてエレクトロポレーションし蛍光標識することを試みた。その結果、神経胚と尾芽胚の両方でエレクトロポレーションした領域で高確率でGFP遺伝子が導入され蛍光が確認されることがわかった。さらに、精原細胞を含むと考えられる成体雄ガエルの精巣にダイレクトにGFP遺伝子をマーカー遺伝子としてエレクトロポレーションし蛍光標識することを試みた。その結果、エレクトロポレーションによってGFP遺伝子が導入されることがわかった。また、一方で昨年の生体への細胞移植を視野に入れた、Xenopus tropicalisにおける系統間での組織交換移植の結果より、現在の同系交配の系統では近交化が十分でないことから、成体カエルへの細胞移植は困難であると考え、免疫系が確立する前の胚や幼生の時期での細胞移植を試みた。卵原細胞が存在すると考えられるGFPトランスジェニックの成体雌ガエルから卵巣を摘出し、成長した卵を取り除いた後、コラゲナーゼ処理し得た細胞を、胞胚の胞胚腔へ移植し経時観察をおこなったが生存し定着した個体は観察されなかった。本年度は始原生殖細胞(PGC)や精原細胞への遺伝子導入についての検討と胚性細胞の培養方法の検討を行った。実験動物として研究に広く用いられており、Xenopus tropicalisよりも手術後の回復率が良く扱いやすいXenopus laevisを用いて、tropicalisでの実験に先立って条件検討を行った。Xenopus laevisを開腹しエレクトロポレーション法により、精巣の目的の細胞に遺伝子の導入が可能かどらか、また、導入した遺伝子が安定的に発現するかどうかを、蛍光蛋白質GFP遺伝子を用いて追跡、確認した。その結果、GFP遺伝子が導入きれ、短期間であるがGFPタンパタ質の蛍光が観察されたため、成体Xenopusの精巣において遺伝子導入が可能であることがわかった。また一方で、増殖しうるXenopusの胚性細胞の培養を目指し、初期発生期の胚から組織を切り取り培養方法の検討を行った。培養組織からの細胞の乖離方法については、Xenopus初期胚で一般的によく用いられているはカルシウム・マグネシウムフリーの系では、初代培養時の接着性が蓍しく低下し、細胞の生存率も低下することがわかった。そこで細胞の乖離方法の検討に合わせて、胚の発生段階や用いる組織の領域の検討や、マウスやヒト等のホ乳類胚性幹細胞で用いられる培養液の組成をもとに培養液の組成も検討し、細胞の接着性および生存率を向上させる培養条件の探索を行った。

本年度は、近年急速に技術が発展しているiPS細胞(Induced pluripotent stem cells ;人工多能性幹細胞)作製の手法も取り入れて、未分化細胞樹立の検討を行った。iPS細胞化を引き起こす因子として、哺乳類の知見からSox2, Oct3/4, Klf4, c-Mycの4因子を選択した。ツメガエル胚でこれらの4因子のオーソログのすべてが同定されているわけではないが、まず始めに文献情報よりホモログで機能も似ていると考えられるSox2, Sox3, Oct60, Klf4, c-Mycの5因子を検討した。ツメガエル胚へ、確実に一度に複数の因子が導入できる方法として、マイクロインジェクション法を用いて遺伝子導入を行った。実験動物としては研究に広く用いられており、Xenopus tropicalisよりも扱いやすいXenopus laevisを用いて、tropicalisでの実験に先立って条件検討を行った。5因子を導入した胚は、胞胚期で細胞を解離して播種し、樹立培養を試みた。その一方で、初代培養ツメガエル細胞に、ウイルスベクターを用いて、リプログラミング機能が分かっているヒトのSox2, Oct3/4, Klf4, c-Mycの4因子の遺伝子導入も行った。まず感染効率およびタンパク質発現効率のコントロールにGFP遺伝子を用いて、カエル細胞でのウイルスベクターの効率を検討した。この結果から高い導入効率になる条件を用いて4因子の遺伝子導入を行い、培養・継代をすることで未分化細胞樹立を試みた。
想像力に関する近代倫理思想史的研究

この間、「想像力」の問題をめぐる倫理学の現代的状況の把握を基礎に、「想像力」をめぐる肯定と否定が対立するアンチノミーというべき問題の由来を、近代から現代に至る欧米の倫理学の歴史のなかに探る作業を行なった。今回、報告書としてとりまとめたのは、そのうち、ルネサンスから十八世紀のルソー、スミスまでの歴史である。その概要を述べれば、まずルネサンスにおいて、特に、フィチーノに代表される新プラトン主義によって、善と美と愛の一致を基礎に、「想像力」は倫理的にも高く評価され、すべての徳を支えるものとさえされる。これが、近代の出発点であったが、次の十七世紀において、デカルト、パスカル、ホッブズによって「想像力」は否定的に評価されるようになる。それは、ルネサンス的「想像力」の問題点が表面化したことと考えられる。この否定的態度は、ルソーによってさらに発展させられ、近代の文明社会に対する批判にまで拡大される。それに対して、イギリスにおいては、シャフツベリから始まり、スミスに至る過程でしだいに「想像力」の再評価が行なわれ、最後にスミスにおいて、「同感」と「想像力」が結びつけられることによって、再び、「想像力」が倫理の基礎とされる。けれども、それは、出発点にあったルネサンス的「想像力」を受け継ぎながら、十八世紀の市民社会の発展に照応した変容をこうむったのである。しかし、このスミスの倫理学でさえ、その内部に「亀裂」「分裂」を抱えたものであった。とれが、次の十九世紀における「想像力」の問題の変容につながる。以上のような今回の成果を基礎に、今後は、十九世紀から現代に至る「想像力」の歴史をさぐってみたい。10月に追加採択の内定通知を受け、実際に予算執行が可能になったのは12月であったため、それ以後の期間内には、来年度以降の本格的な研究のための文献収集および予備的研究を行なうことしか出来なかった。しかし、内定通知以前に今年度執筆発表した論文「戸坂潤における『文学』の意味をめぐって-現代の『カルチュラル・スタディーズ』との関係で」では、「文学」における想像力の問題を戸坂がなぜ重視したのかを、科学と文学の関係を中心に戸坂の思想全体の構造からとらえ、概念と対比される表象や想像力の扱いに、戸坂が道徳・モラルの中心問題を見い出すに至った経緯を解明した。また、戸坂と同様な問題意識が、現在、「カルチュラル・スタディーズ」などを通じて現代思想によって再発見されていることも確認した。これによって、主に近代ヨーロッパを対象とした本研究を実施するにあたって、まず、近代日本における、また現代思想における「想像力」問題の位相を確かめて、その研究の今日的意味を明らかにすることがある程度できた。この問題については、さらに三木清の『構想力の論理』などと対比して発展させてゆくつもりである。12月以降においては、R.Kearney,The Wake of Imaginationを中心として「想像力」についての一般的な問題を確認しながら、特に18世紀において、両極をなすと考えられるアダム・スミスとルソーにおける「想像力」の扱いについて対比的に研究をすすめるための予備調査を行なった。また特に、ハイデガーを通じて明らかにされたカントの「超越論的構想力」をめぐる問題が、19世紀から現代までの「想像力」問題の一つの中心と考えられるため、これについても文献を収集し、問題の輪郭を確認することにつとめた。これらが、来年度の研究の中心となる。今年度は、(1)「想像力」をめぐる一般的問題状況(2)スミスおよびルソーに至る17,18世紀の「想像力論」と近代市民社会の発展との関連(3)カント、フィヒテからドイツ・ロマン派に至る「想像力」論の新展開(4)フッサールにはじまる現象学を中心とした「想像力」論の現代的位相、について資料収集と分析を行った。

その結果、特に浮かび上がってきた論点(仮説)として以下のものが挙げられる。1、「想像力」を総合の能力とするか、分解・分裂の能力とするかの対立(ジジェク)、象徴主義的に豊饒化とするか、サルトルのように貧困化とするかの対立が重要である。2、スミスに典型をみる、市民社会の倫理的基礎としての「想像力」は、19世紀にはロマン主義によって芸術的天才的な「創造的想像力」に主役を譲ってしまったが、フッサールの他者論は、スミス的問題設定を再評価する視点を与える。しかも、フッサール他者論についての現代の論争をみれぱ、そこにスミス対ルソーの問題がより複雑化されて再現されているとも考えられる(例えぱデリダのレヴィナス批判)。3、想像力」に生きる日常的視点と、「(神の)見えざる手」としての超越的視点というスミス的分裂と、フィヒテの「想像力」論から発展した「ロマン主義的イロニー」における有限と無限の分裂との連続性と差異性の問題が、18世紀と19世紀の「想像力」論の関係を把握する上で重要である。4、この分裂をはらんだロマン主義的「想像力」は、19世紀後半にはディルタイの解釈学によって、「象徴主義」的なものへと回収されてしまう。サルトルの「想像力」論は、それに対する批判であると考えられる。来年度は、以上のような論点(のいくつか)を深め、論文化を図りたい。14年度は、これまでに引き続き(1)「想像力」をめぐる一般的問題状況(2)スミスおよびルソーに至る17,18世紀の「想像力論」と近代市民社会の発展との関連(3)カント、フィヒテからドイツ・ロマン派に至る「想像力」論の新展開(4)20世紀の現象学と精神分析における「想像力」論の現代的位相、について資料収集と分析を行った。その結果得られた、13年度の研究実績報告書に記載の論点以外の新たな論点は、次のようなものである。1、スミスに典型をみる、近代市民社会の倫理的基礎としての「想像力」論が成立するにあたっては、エリアスのいう「文明化」の理論の進展が必要であった。その中で、ルネサンスからシャフツベリ、マンデヴィル等を経由し、最初に美と善との一体化の能力と考えられていた「想像力」が、スミスによって、美と切り離されて、倫理的想像力に純化された。ここには、近代消費社会の発展に伴う、美の相対性の認識が大きく作用した。2、ロマン主義的想像力は、美の相対性を前提としながら、「天才」「個性」論を全面に押し出すことによって、想像力と美の関係を回復し、一種の「個性」の倫理学を、スミス的な、日常的市民の倫理に対置しようとしたものと理解される。しかし、スミスの「見えざる手」の議論からの連続性も無視されるべきではない。3、20世紀における想像力論としては、フッサールからサルトルにいたる現象学的「想像力論」の他に、精神分析における「想像力」(=「空想」)の理論が重要であり、この二つの想像力論の対立、あるいは、それぞれの内部における対立が鍵となる。しかしさらにごく最近においては、「想像力」の問題は、その根底にあると考えられた「記憶」「想起」の問題に集約されつつあるが、これは19世紀的なロマン主義的想像力に徹底的に対立するものであり、それに対する反省の上になりたっているものと考えられる。
分子認識型NHC触媒の創製に基づくアルデヒドの高選択的分子変換反応の開発

含窒素複素環式カルベン(以下NHC)は、アルデヒドや活性カルボン酸誘導体を選択的に活性化できる有機分子として種々の反応に利用されてきたが、カルベンとして単離が困難であるゆえ、一般に前駆体であるアゾリウム塩から反応系内で調整される。著者は、異なる手法によりNHCを発生させることが出来れば、NHCの利用法が更に拡大するのではないかと期待し、C2位にハロゲンの置換したアゾリウム塩に着目した。2-ハロアゾリウム塩に対し求核剤を作用させることで、基質の酸化と共にNHCを発生できると考え、アミンのα-C-H官能基化反応を考案した。基質のアミンが2-フルオロアゾリウム塩により酸化され発生するNHCがBrφnsted塩基として機能し、イミニウム塩を形成できると考えた。続いて脱離したフッ化物イオンが有機シリル化合物を活性化することで、アミンのα位C-H結合が求核剤により置換された生成物が一挙に得られるのではないかと期待し、検討を行った。初めに、2-フルオロアゾリウム塩の合成法の探索を行い、市販の2-クロロイミダゾリニウム塩に対する対アニオンを交換と、続くフッ化カリウムによるハロゲン交換を行うことで2-フルオロイミダゾリニウム塩を良好な収率で得ることに成功した。続いて、得られた2-フルオロイミダゾリニウム塩を用い、テトラヒドロイソキノリンの酸化について検討したところ、期待通り目的のイミニウム塩及びN-フルオロアンモニウム塩の生成を確認することに成功した。続いて、求核剤の導入について検討した。2-フルオロイミダゾリニウム塩を用いてイミニウム塩を形成後、反応系内にTMSCNを滴下したところ、所望の生成物が得られることが分かった。見出した反応条件を用いて求核剤の検討を行った結果、本反応を利用することで、CN基の他にCF3基やアリル基もC1位に対して選択的に導入できることが分かった。本研究課題は平成26年度が最終年度のため、記入しない。外部酸化剤存在下、光学活性なNHC触媒とα位分岐型脂肪族アルデヒドより反応系内で生じるアシルアゾリウム中間体のジアステレオ混合物に対し、求核剤であるアルコールがジアステレオ選択的に付加することで、光学活性なエステルを高い立体選択性で与えると考えた。また中間体のカルボニルα位プロトンは生成物よりも活性であると考えられるので、適切な塩基で処理することで、生成物のラセミ化を抑制しながら中間体のみを選択的にエピメリ化することで、全体としてはアルデヒドの直接的なエステル化と動的速度論的光学分割が達成できると期待した。はじめに、電子豊富なキラルNHC触媒存在下、α-フェニルプロピオンアルデヒドの不斉エステル化を、種々の塩基及び求核剤を用いて初期検討を行った。その結果、塩基や求核剤が立体選択性に大きく影響することを見出し、特に塩基としてm-クロロ安息香酸カリウム、求核剤としてm-メトキシフェノールを用いる条件で、κ体のエステルを88%収率、82%eeで得ることに成功した。本反応条件は様々なα-アリールプロピオンアルデヒドに適用可能であり、良好な収率及び高いエナンチオ選択性で対応するα-アリールプロピオン酸エステルが最高88%eeで得られることを明らかにした。なお、本反応で得られる光学活性なエステルは、加水分解することで非ステロイド性抗炎症薬(NSAIDs)に含まれるα-アリールプロピオン酸へと誘導可能であり、その一例として(R)-イブプロフェンエステルを過酸化リチウム水溶液に付すことで、(R)イブプロフェンが不斉収率を損なうことなく得られることを明らかにしている。エナンチオ選択性に関しては依然改善の余地があるものの、本反応はアルデヒドの酸化的分子変換と触媒的動的速度論的光学分割を組み合わせた初めての例である。また、解熱鎮痛薬として広く用いられているNSAIDsへと容易に変換可能なα-アリールプロピオン酸エステルを、高い立体選択性で得られる点で有用である。

続いて、得られた2-フルオロイミダゾリニウム塩を用い、テトラヒドロイソキノリンの酸化について検討したところ、期待通り目的のイミニウム塩及びN-フルオロアンモニウム塩の生成を確認することに成功した。続いて、求核剤の導入について検討した。2-フルオロイミダゾリニウム塩を用いてイミニウム塩を形成後、反応系内にTMSCNを滴下したところ、所望の生成物が得られることが分かった。見出した反応条件を用いて求核剤の検討を行った結果、本反応を利用することで、CN基の他にCF3基やアリル基もC1位に対して選択的に導入できることが分かった。本研究課題は平成26年度が最終年度のため、記入しない。当初想定していた通り、光学活性なNHC触媒を用いることで、α位分岐型脂肪族アルデヒドの動的速度論的光学分割が進行すること、NHC触媒や酸化剤の電子密度が立体選択性の制御に重要であることを明らかにすることができた。しかしながら、推定される反応機構に基づいた分子認識型の新規NHC触媒の創製及び反応のタンデム化には、未だ成功していない。塩基や求核剤、溶媒、温度などについて詳細に検討を行った結果、反応の立体選択性は最高88%eeまで向上することができたが、NSAIDs合成への展開を視野に入れると充分な選択性とは言えない。そこで、さらに選択性を改善させるためには、反応機構に基づいた新規NHC触媒の創製が必要と考えている。推定される反応機構において、安息香酸イオン、フェノール及びアシルアゾリウム中間体の三成分が関与する遷移状態を経て生成物の立体化学が決定されていると推察しており、カルボン酸部位をNHC触媒内部の適切な位置に配置することで、反応遷移状態の安定化と立体選択性の向上が期待できる。そこで量子計算化学的手法を用いて反応遷移状態を推定しながら分子認識型NHC触媒の設計・合成を行い、エナンチオ選択性の改善と基質適用性の拡大を目指す。続いて、中間体を求電子剤により捕捉することで、四置換不斉炭素構築へと展開する。中間体における反応点の近傍に求電子剤を配置することで所望の炭素-炭素結合形成を促進することができると考えており、触媒の分子内部に求電子剤を認識できる官能基を有する不斉NHC触媒を創製し、イミンやマイケル受容体を求電子剤として用いる種々の検討を行い、触媒活性の評価と二連続不斉中心を有するカルボン酸誘導体の一挙構築を目指す。
セマフォリン分子Sema4AのTh1/Th2反応制御機構の解明

セマフォリンクラス4型に分類されるSema4Aは樹状細胞のcDNAライブラリーからクローニングさた膜型のセマフォリン分子であり、これまでT細胞の活性化に関与することが明らかとなっている。申請者によるSema4A欠損マウスを用いた解析から、Sema4A欠損下での抗原特異的T細胞の産生障害とTh1反応低下が見出され、Sema4AのTh1/Th2反応制御への関与が示唆されている。また申請者らはSema4Aの発現が従来知られてきた樹状細胞に加えTh1細胞特異的にT細胞においても発現誘導されること、また樹状細胞に発現するSema4AとTh1細胞に発現誘導されるSema4Aが、それぞれ抗原特異的T細胞の活性化とTh1/Th2反応制御という異なる免疫応答の局面で機能するとの知見も得ている。しかしながら、Sema4Aがどのような分子的メカニズムでTh1/Th2反応制御に関与するかについては未だ明らかではなく、Th1/Th2バランスの破綻に起因するアレルギー疾患などの病態へのSema4Aの関与も明らかではない。このような観点から、本研究ではSema4AのTh1/Th2反応制御機構の分子メカニズムを明らかにするとともに、Sema4Aをターゲットとした自己免疫疾患及びアレルギー疾患制御の検討を行い、Sema4Aによる効果的なTh1/Th2反応制御法の確立を目的とした。今年度の研究では、昨年度に引き続きリコンビナントSema4Aタンパク投与により、Sema4A欠損マウスで発症するアトピー性皮膚炎様症状及びアトピー性皮膚炎モデルマウスとして知られるNC/Ngaマウスの皮膚炎症状の改善を確認するとともに、発症のどの時期に投与するのが効果的なついて検討した。またヘルパーT細胞分化異常が関与する自己免疫性心筋炎モデルにおいてもSema4Aがその発症に関与するとの知見が新たに得られた。ヘルパーT細胞はそのサイトカイン産生能によって大きく1型ヘルパーT細胞(Th1)と2型ヘルパーT細胞(Th2)の二つのサブセットに分類されているが、このTh1/Th2のバランスが破綻した場合には自己免疫疾患やアレルギー疾患の発症につながることから、Th1/Th2反応制御機構の詳細を明らかにすることは生体防御及び免疫系ホメオスターシス維持において非常に重要である。本研究ではSema4AのTh1/Th2反応制御機構の分子メカニズムを明らかにするとともに、Sema4Aをターゲットとした自己免疫疾患及びアレルギー疾患制御の検討を行い、Sema4Aによる効果的なTh1/Th2反応制御法の確立を目的としている。今年度の研究では、リコンビナントSema4Aタンパク投与により、Sema4A欠損マウスで発症するアトピー性皮膚炎様症状のみならず、アトピー性皮膚炎モデルマウスとして知られるNC/Ngaマウスの皮膚炎症状も改善することができることを示した。またリコンビナントSema4A投与により、T細胞のTh2サイトカイン産生能を抑制できることも明らかとなった。一方、セマフォリンシグナル阻害により、Th1優位な自己免疫疾患発症を阻止しうることが、種々の疾患モデルマウスを用いた系により確認された(Nat Cell Biol.8,615-622,2006,J. Immunol.177,3406-3412,2006)。セマフォリンクラス4型に分類されるSema4Aは樹状細胞のcDNAライブラリーからクローニングされた膜型のセマフォリン分子であり、これまでT細胞の活性化に関与することが明らかとなっている。申請者によるSema4A欠損マウスを用いた解析から、Sema4A欠損下での抗原特異的T細胞の産生

障害とTh1反応低下が見出され、Sema4AのTh1/Th2反応制御への関与が示唆されている。また申請者らはSema4Aの発現が従来知られてきた樹状細胞に加えTh1細胞特異的にT細胞においても発現誘導されること、また樹状細胞に発現するSema4AとTh1細胞に発現誘導されるSema4Aが、それぞれ抗原特異的T細胞の活性化とTh1/Th2反応制御という異なる免疫応答の局面で機能するとの知見も得ている。しかしながら、Sema4Aがどのような分子的メカニズムでTh1/Th2反応制御に関与するかについては未だ明らかではなく、Th1/Th2バランスの破綻に起因するアレルギー疾患などの病態へのSema4Aの関与も明らかではない。このような観点から、本研究ではSema4AのTh1/Th2反応制御機構の分子メカニズムを明らかにするとともに、Sema4Aをターゲットとした自己免疫疾患及びアレルギー疾患制御の検討を行い、Sema4Aによる効果的なTh1/Th2反応制御法の確立を目的とした。今年度の研究では、昨年度に引き続きリコンビナントSema4Aタンパク投与により、Sema4A欠損マウスで発症するアトピー性皮膚炎様症状及びアトピー性皮膚炎モデルマウスとして知られるNC/Ngaマウスの皮膚炎症状の改善を確認するとともに、発症のどの時期に投与するのが効果的なついて検討した。またヘルパーT細胞分化異常が関与する自己免疫性心筋炎モデルにおいてもSema4Aがその発症に関与するとの知見が新たに得られた。
結合組織成長因子(CTGF)の制御による臓器線維症治療のための基礎的研究

臓器線維症の治療を目標として、酵母two-hybrid法を用いてconnective tissuegrowthfactor(CTGF)と結合するタンパク質を探索した。ヒト肺線維芽細胞由来cDNAライブラリーをスクリーニングし、preyタンパク質としてfibronectin(FN)が同定された。複数のFN遺伝子が同定されたが、いずれもFNタンパク質のC末端側に存在するtype I repeat(F1)領域に相当する部分であった。さらにCTGFはFNのN末端側に存在するF1領域とも結合したが、F1配列を含まないその他の領域とは結合しなかった。このことから、FNのF1領域はCTGFと結合するモチーフをもつことが示唆された。CTGFは4つのドメインから構成されているので、各ドメインごとにFNとの結合を検討したところ、C-terminal(CT)domainのみが単独でもFNと結合し、このドメインがFNとの結合に重要であることが推定された。baitとpreyを入れ替えて行ったtwo-hybrid実験でもF1領域とCT domainとの結合が確認された。さらに、表面プラズモン法、ELISA法などの実験結果もCTGFとFNが結合することを示した。なお、本実験で用いたrecombinant CTGFが生理的活性を保持していることも、培ヒト肺線維芽細胞を用いた実験で確認した。FNのF1領域はfibrinと結合することが報告されているので、CTGFがFNとfibrinの結合に及ぼす影響についてELISA法を用いて検討した。その結果、CTGFは濃度依存的にFNのfibrinへの結合量を増加させた。このことからCTGFが組織修復や線維化を促進する機序のひとつとして、FNとfibrinの結合増強作用が考えられた。すでに報告されているCTGF mRNA塩基配列を参考にして、PCRによるクローニングのためのprimerを設計し、ヒト肝臓cDNAライブラリー(市販品)からCTGF cDNAをクローニングした。DNAシークエンスにより、このcDNAがCTGFであることを確認して以下の実験に進んだ。(1)上記のようにクローニングしたヒトCTGFの全長をbaitとした。これとreporter plasmidで酵母EGY48を形質転換し、さらにprey vectorに組み込んだヒト肝臓cDNAライブラリーで形質転換した(一次スクリーニング)。ここで得たクローンをβ-ガラクトシダーゼ活性とロイシン要求性を併用して二次スクリーニングを行い、両方のアッセイで陽性になったもののみを最終的な陽性クローンとした。(3)上記のpreyタンパク質以外にもCTGFと結合するタンパク質が存在する可能性があるため、ライブラリーの種類を代えて(肺線維芽細胞cDNAライブラリー)さらにスクリーニングを進めているところである。昨年度とは異なるcDNAライブラリーを使用して酵母two-hybrid法を行った。baitはCTGF全長で昨年と同様である。すなわち、cDNAライブラリーの種類を肺線維芽細胞由来のものに変え、酵母two-hybrid法により、約3×10^6個の形質転換体をスクリーニングしたところ、preyタンパク質のひとつとしてfibronectinが同定された。複数のfibronectin遺伝子が同定されたが、いずれもfibronectinタンパク質のC末端側のtype I repeat領域に相当する部分であった。さらにCTGFはfibronectinのN末端側に存在するtype I repeat領域とも結合した。このことから、fibronectinのtype I repeat領域はCTGFと結合するモチーフを持つことが示唆される。また、fibronectinがCTGFと強固に結合するためにはtype I repeatの繰り返しが3回以上必要とすることが判明した。そして、fibronectinとCTGFの結合が特異的であることを確かめるために、CTGFの各ドメインについて、bait plasmid vector constructを作製し、CTGFのどのドメインがfibronectinとの結合に必須であるかを検討した。

その結果、CTGFのC-terminal domainは単独でもfibronectinのtype I repeat領域と結合し、このドメインが、fibronectinとの結合に重要であることが明らかとなった。baitとpreyの入れ替え実験でも両者の結合は確認された。CTGF全長とFN全長が結合することを表面プラズモン法で解析したところ、全長同士でも結合した。このことから、生体内においてCTGFとfibronectinは結合し、何らかの生理的役割を果たしていると推定される。結合組織成長因子(CTGF)をbaitとして酵母two-hybrid法を行い、CTGFとfibronectin(FN)が結合することを見出した。その結合に必須な領域はCTGFのC-terminal domain(CT)とFNのtype I repeat(F1)領域であった。CTGFのCT以外の領域とFNのF3領域は両者の結合にほとんど関与していないようであった。全長CTGFと全長FNの結合を表面プラズモン法、ELISA法でも確認した。全長タンパク質同士の解離定数は64nMであった。今回の実験で用いたrecombinant CTGF(rCTGF)タンパク質が生理的活性をもつことをヒト肺線維芽細胞(MRC-5)を使って検討した。すなわち、血清存在下あるいはTGF-β刺激後にrCTGFをMRC-5に作用させたところ、rCTGFは濃度依存的に臓器線維化の指標であるα-smooth muscle actin(SMA)の発現を誘導し、rCTGFが生理的活性をもつことをことがわかった。しかし、血清が存在しない状態でMRC-5細胞を48時間培養した後、CTGFを作用させてもSMAの発現は誘導されなかった。この結果は、CTGFがTGF-βの下流に位置し線維化を持続させる作用をもつという従来の知見に一致する。また、F1領域はfibrinと結合することが知られているので、CTGFがFNとfibrinの結合に及ぼす影響についてELISA法により検討した。CTGFは濃度依存的にFNのfibrinへの結合を増加させた。このことからCTGFが組織修復や線維化を促進する作用機序のひとつとして、FNとfibrinの結合増強作用が示唆された。
アモルファス、結晶クラスター集合体のナノ尺度構造と熱的安定性

アモルファスやナノ結晶集合体等の非平衡材料は、結晶材料にはみられない磁気特性、光学特性を示し、強度、耐触性にも優れている。本研究計画では、東北大学金属材料研究所とエジプト・アシウト大学物理学教室の研究者が研究交流、共同研究を行い、アモルファスやナノ結晶集合体材料の熱的安定性、磁気的緩和現象について検討した。1)液体急冷法により作製した2元系As_xSe_<1-x>、Bi_xSe_<1-x>合金薄膜、3元系Ge_<20>Se_<60>Sb_<20>、As_<46>Te_<46>In_8合金薄膜についてX線回折測定した結果、2元系薄膜はアモルファス相と結晶相が混在すること、3元系薄膜はアモルファス単相であり、示差熱分析の結果は何れも結晶化温度が500Kであることがわかった。本計画の目的に適した3元系薄膜について、透過電子顕微鏡により結晶化過程における薄膜の組織変化を観測し、500K以上の温度で急速に結晶粒が成長することがわかった。現在これら3元系薄膜について、アモルファス-結晶変態にともなう、光学反射・吸収スペクトルの変化を測定している。2)イオンクラスタービーム法により、Fe/Auグラニュラー膜を作製し、磁化率およびメスバウアースペクトルを測定した。Feクラスターは超常磁性的な性質を有し、磁化率の周波数依存性から外挿した緩和時間の温度依存性と室温のメスバウアースペクトルの特性時間(10^<-8>S)とがほぼ対応することが見出された。3)メカニカルミリング法により作製した化合物、TiN、Al/SiCをプラズマ焼結し、真密度がほぼ100%で、機械的強度や硬度の高いナノ結晶耐熱材料の作製に成功した。アモルファスやナノ結晶集合体等の非平衡材料は、結晶材料にはみられない磁気特性、光学特性を示し、強度、耐蝕性にも優れている。1)液体急冷法により作成した2元系As^xSe^<1-x>、Bi^xSe^<1-x>合金薄膜、3元系Ge^<20>Se^<60>Sb^<20>、As^<46>Te^<46>IN^8合金薄膜についてX線回折測定した結果、2元系薄膜はアモルファス相と結晶相が混在すること、3元系薄膜はアモルファス単相であり、示差熱分析の結果は何れも結晶化温度が500Kであることがわかった。Feクラスターは超常磁性的な性質を有し、磁化率の周波数依存性から外挿した緩和時間の温度依存性と室温のメスバウァースペクトルの特性時間(10^<-8>_s)とがほぼ対応することが見出された。