hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト創傷治療に適した高機能マゴットセラピー法の開発

ヒロズキンバエ幼虫(マゴット)が患者の壊死組織だけを選択的に摂取する性質を利用したマゴットセラピー(MDT)は、非侵襲的潰瘍治療法のひとつである。MDTは長い歴史をもつが、ヒトの創傷治療に適したマゴットの解析はこれまでおこなわれていない。そこで、本研究ではヒト創傷治療に短期間で高い効果を上げるマゴットセラピーの開発に向け、ヒト壊死組織に適応性の高いマゴット系統の樹立と解析を進めている。本年度は、前年度に樹立した新規ヒロズキンバエ4系統について、さらに詳細な解析を実施した。これらの新規ヒロズキンバエ系統は、現在の治療用標準系統と比較しヒト組織をより多く摂食することから、高いデブリードマン能力をもつと考えられる。一方、創傷治癒においては、効果的な肉芽形成もまた重要な要因である。そこで、これらの新規系統のうち特に摂食量が多い2系統を対象に、肉芽形成能に関わる各種解析をおこなった。これにより、新規系統の外分泌液を培養細胞に添加した群では、細胞増殖がより促進される結果が得られた。また、創傷治癒の重要な過程であるフィブリン塊の溶解に、マゴット外分泌液が直接作用している可能性についても考え、新規系統と標準系統のフィブリン溶解活性の比較をおこなった。この結果、フィブリン溶解度合いの比較においては、どの系統にも有意差は確認されなかった。さらに、新規系統がもつ高いデブリードマン能力と肉芽形成能を支える分子基盤を明らかにするため、新規系統と治療用標準系統について、RNAシーケンス解析による網羅的遺伝子発現比較解析を実施した。その結果、新規系統では1623個の遺伝子が高く発現しており、1370個の遺伝子発現量は低いことが明らかとなった。これらの研究から、新規樹立系統は、現在の治療用標準系統と異なる遺伝子発現パターンを持つこと、マゴット外分泌液による創傷治癒能力が高いことが示唆された。前年度に樹立した新規ヒロズキンバエ系統について、肉芽形成能の解析および網羅的な遺伝子発現解析を実施した。治療用標準系統との比較解析の結果から、新規系統はより創傷治癒に適していることが示唆され、また効果的なデブリードマンおよび創傷治癒に関与する遺伝的条件の候補遺伝子が得られた。従っておおむね順調に進展していると考える。本研究では、高い治癒効果をもつマゴットセラピーの現在の問題点に着目し、ヒト難治性創傷に適応性が高く、多くの壊死組織を積極的に消化、殺菌することのできるマゴットを作出することにより、効率的な難治性創傷治療への応用を目指している。これまでに、法医解剖検体からハエ幼虫を採取し、これらを羽化させて系統化することにより、ヒト嗜好性ヒロズキンバエ系統を複数樹立することに成功した。さらに、これらの新規系統の幼虫が、現在使用されている治療用標準系統よりも多くの壊死組織を摂食することを明らかにした。そこで今後、これら確立した新規ヒロズキンバエ系統について、遺伝子発現や行動解析を実施し、現在の治療用標準系統と比較することにより、その評価をおこなう。具体的には、RNAシーケンス解析により、ヒト嗜好性の高い野外系統と、実験室内で長年維持されている治療用標準系統について、網羅的な遺伝子発現の比較を実施する。この比較により、ヒト壊死組織の嗜好性に重要な遺伝的条件の同定を試みる。さらに、新規系統と治療用標準系統の組織形態の比較をおこない、摂食量と成長速度の評価をおこなう。
MMFを代謝活性化するエステラーゼの解明とその遺伝子多型による副作用発現への影響

免疫抑制剤ミコフェノール酸モフェチル(MMF)はエステル化プロドラックであり、体内でesteraseによる代謝的活性化を受ける。MMFの副作用の発現には個体差が知られ、血中濃度との相関性が示唆されていることから、副作用の個体差にはMMF加水分解酵素の遺伝子多型との関連について検討を行った。まず(1)カルボキシルエステラーゼ(CES)のMMF加水分解における関与を検討し、さらに(2)秋田大学医学部附属病院における腎移植患者80名を対象にCES2の遺伝子多型解析を行い、MMFの副作用発現またはMMF体内動態の個体差との関連性を検討した。(1) MMF加水分解におけるCESの関与は、ヒト肝ミクロソーム(HLM)を酵素源として同加水分解に対するCES阻害剤の効果から評価した。HLMによる水解反応はDiisopropyfluorophosphate、Bis-p-nitorophenylphosphate、Phenylmethylsulfonylfluorideにより強く阻害された(1C50は各々0.092、20、85μM)。(2)腎移植患者のCES2遺伝子多型(A4595G、C8721T、A-1548G)をPCR-RFLP法にて評価し、MMFの副作用である下痢発現との関連性を解析した。医師により下痢を診断されたのは対象の28.8%であるが、3種のCES2遺伝子多型とMMFによる下痢発現に関連性は認められなかった。またMPAの血中濃度プロファイル(Cmax、TmaxやAUC等)にもCES2遺伝子多型との関連は見出されなかった。以上より、MMF加水分解には肝ミクロソームに存在するCES分子種の関与が示唆され、さらにMMF服用の腎移植患者における体内動態の個体差にCES2遺伝子多型が関与しないことが示された。
天然由来ジペプチド様物質ネガマイシンを戦略分子とする創薬基盤研究

平成27年度は、まず平成26年度に合成した光親和性標識(ベンゾフェノン)を導入した化学プローブが、ネガマイシン(1)と同等のリードスルー活性を示すことがわかった。今後、光親和性標識実験を実施したい。加えて、リードスルー機構解明に向けた当初計画では、RNA footprint法を用いる予定であったが、検討の結果、遺伝学的解析がより適していると考えた。即ち、今年度は筑波大学臼井健郎准教授らにより構築された多剤超感受性酵母株12geneΔHSRを用いた作用機構解明研究を試みた。先ず、遺伝学的解析に必要なナンセンス変異含有酵母株の獲得に向け、アデニン合成遺伝子ADE2中にPTC変異(TGA、TAG、TAA)を有する酵母株の構築を行った。野生株としてADE2(E64X)変異を有する酵母株YPH499をテンプレートとし、PCRにより作製したN末端欠損ADE2遺伝子断片を含む環状ベクターを酢酸リチウム法にて12geneΔHSRに導入した。続く、5-フルオロオロチン酸含有培地によるカウンターセレクションにより、ADE2遺伝子内にナンセンス変異を有する酵母株の取得に成功した。本酵母の獲得によりリードスルー活性発現を定性的に確認することが可能となった。即ち、リードスルー活性が無い場合、本変異酵母株は赤色を呈す一方で、リードスルー活性が有る場合、野生株と同様に変異酵母株は白色を呈する。実際に本変異酵母株を用いて誘導体を評価した結果、申請者らが見出した高活性ネガマイシン関連天然物および誘導体TCP-112を添加した酵母群はリードスルーにより白色を呈した。このことから、ネガマイシン耐性株の取得において重要なナンセンス変異含有酵母株の構築に成功した。今後、本酵母株を用いて、優勢耐性変異株の取得をおこない、その遺伝子解析により、誘導体の分子標的部位の同定をめざす予定である。27年度が最終年度であるため、記入しない。平成26年度は、未熟終止コドン読み飛ばし活性(リードスルー活性)を有する化学プローブの獲得をめざし、これまで獲得した高活性なネガマイシン誘導体を基盤とした構造活性相関研究(SAR)を展開した。即ち、本SAR研究によりリードスルー作用発現機構の解明に向け有効な化学プローブ創製の手がかりを模索した。実際には、天然物であるロイシル-3-epi-デオキシネガマイシンのロイシン部分に注目し、独自開発した高活性誘導体TCP-112の3位アミノ基に天然および非天然アミノ酸など種々のアシルユニットを重点的に導入した誘導体を合成した。これらの誘導体の活性を評価することで、高活性な誘導体の獲得をめざした。先ず、結合部位との水素結合の可能性を模索するため酸性および塩基性アミノ酸を導入したが、高活性誘導体は得られなかった。そこで次に、疎水性相互作用の向上を期待して脂肪族および芳香族アミノ酸を導入したところ、培養細胞での評価において、側鎖に長鎖アルキル基を有するアミノ酸を導入した誘導体がネガマイシンより約10倍強いリードスルー活性を示すことを見いだした。このことは、リボゾーム上には誘導体の3位アミノ基周辺を認識できる比較的大きな空間があり、側鎖に大きな構造を有する非天然型アミノ酸を3位アミノ部分に導入しても、活性を維持・向上できる可能性を示唆している。したがって、この結果に基づき当該部分に光親和性標識構造(ベンゾフェノン)を有するアミノ酸誘導体を導入した新規TCP-112誘導体を合成した。次年度において、培養細胞系または無細胞タンパク質合成系にて当該ケミカルプローブのリードスルー活性を評価し、プローブとしての有効性を確認したい。平成26年度は、2つの方向性をもって研究を遂行した。

ひとつは、リードスルー作用機構解明研究に利用可能な化学プローブ創製を目的とした構造活性相関研究(SAR)である。この研究では、ネガマイシン誘導体TCP-112の3位アミノ基に、側鎖に長鎖アルキル基を有するアミノ酸を導入した誘導体が、ネガマイシンより約10倍強いリードスルー活性を示すことを明らかとした。この結果から、TCP-112の3位アミノ基に非天然型アミノ酸を導入できることが解り、高活性を維持したケミカルプローブの創製の糸口を見出すことができた。したがって、本研究はおおむね順調に進んでいると言える。もうひとつは、TCP-112の化学プローブ化の検討である。上記知見に基づき当該3位アミノ基に光親和性標識基としてベンゾフェノ構造を有する非天然型アミノ酸を導入した誘導体を実際に合成した。本誘導体のリードスルー活性は現在評価できていないため、この点では若干の遅れが出ている。早急に培養細胞系または無細胞タンパク質合成系でリードスルー活性を評価し、化学プローブとしての有効性を確認することで、次年度に繋げていきたい。27年度が最終年度であるため、記入しない。平成27年度は、ネガマイシンケミカルプローブを用いた光親和性標識により、r-RNAもしくは関連蛋白質に対するネガマイシンの結合部位探索研究を行い、これを足がかりにリードスルー作用機構解明に挑戦する。方法としては、多剤耐性に関わる遺伝子を破壊した多剤超感受性出芽酵母や無細胞蛋白翻訳系を用い、リードスルー活性を定量化できる評価系を構築し、ネガマイシンケミカルプローブを用いた光親和性標識を実施する。クリックケミストリー等を活用し、標的分子(r-RNAまたは蛋白質)の同定、その結合部位の特定に挑戦する。光標識における分子標的が、リボソームを構成する蛋白質である場合は、標識体をアフィニティー精製等で単離し、質量分析により分子標的の同定を試みる。酵母の系で結合蛋白質が単離・同定できた場合は、当該結合蛋白質が、リードスルー活性の標的分子であるか否かを更に検証する。即ち遺伝子破壊や過剰発現、変異導入などの遺伝学的手法に基づいて検証することで、ネガマイシン誘導体結合蛋白質の特徴を明らかにする。一方、分子標的がr-RNAの場合は、RNA footprint法などでプローブで修飾された核酸同定を試みる。r-RNAのE-siteのモデルとなるオリゴRNAを合成し、ネガマイシン誘導体が2本鎖オリゴRNAに与える安定化効果を融解温度測定により評価する。また、単離リボソームとネガマイシン誘導体によるChemical footprintingも検討し、ネガマイシン誘導体の結合部位を同定する。生物活性を有する化学プローブを利用したケミカルバイオロジー展開により、ネガマイシンの分子標的、その結合部位およびリードスルー作用機構の解明を試みたい。また27年度も、作用機序解明に有効な化学プローブの創製も継続的に実施する予定である。
新規骨形成制御因子の探索

初年度に開発したin vitroでの石灰化反応系を用いて、骨基質中の石灰化に関与するタンパク質を探索した。その結果、多数の基質タンパク質が骨の石灰化反応に関与することが示唆された。これらの基質タンパク質のうち、ある一種類のタンパク質Aに着目し、更なる研究を進めた。精製したタンパク質Aをin vitroでの石灰化反応系に供したところ、量依存的にリン酸カルシウム形成を誘導した。さらに、タンパク質Aの中の一部のドメインがリン酸カルシウム形成誘導活性に必須であることが示唆された。現在、このドメインを欠如した変異体タンパク質およびドメイン部分のみの組換えタンパク質を作製し、骨芽細胞による石灰化結節形成への影響を解析中である。さらに、タンパク質Aの生理的な条件での骨代謝における重要性を解析することを試みたが、タンパク質Aをコードする遺伝子のノックアウトマウスは胎生致死であったため、解析が不可能であった。そのため、現在コンディショナルノックアウトマウスを作製し、組織ならびに時期特異的にタンパク質Aを欠損させた個体について、骨形態計測ならびにμCT解析を行うことにより、タンパク質Aの骨代謝における重要性を解明する予定である。また、骨基質抽出液中に骨髄マクロファージから破骨細胞への誘導を活性化する活性が見られたことから、現在、アッセイ系を構築し、骨基質抽出液からの活性物質の精製を試みている。骨はI型コラーゲンを主体とする有機基質にリン酸カルシウムの一種であるハイドロキシアパタイトが沈着することによって石灰化している。有機基質がハイドロキシアパタイトの結晶化および結晶成長の制御に重要であると考えられているが、どのような因子が関与しているかも含めて、その分子機構については未だに不明な点が多い。骨の石灰化の分子機構の解明を目的として、今回、骨形成を制御する因子、特にリン酸カルシウムの結晶形成を誘導する因子を探索するためのin vitroでの検定系を確立した。マウスの大腿骨および脛骨を脱灰後、可溶性および不溶性画分から基質タンパク質を抽出した。得られたタンパク質をSDS-PAGEにて分離した後、ゲルをリン酸バッファーおよびカルシウムバッファー中でインキュベートすることにより、ゲル中でリン酸カルシウムを形成させた。リン酸カルシウムの結晶形成を誘導する因子が存在する位置には結晶化したリン酸カルシウムがバンドとして沈着した。バンドを切り出し、ゲル内消化およびpeptide mass fingerprinting解析を行った結果、複数のバンドについてタンパク質を同定することができた。その中には、以前にin vitroでのリン酸カルシウム結晶形成誘導活性が報告されているbone sialoproteinが含まれていたことから、今回確立した検定系はリン酸カルシウムの結晶形成を誘導する因子の探索には非常に有効であると考えられる。現在、検定系を用いたリン酸カルシウム結晶形成誘導因子の同定および同定されたタンパク質について機能解析を行っている。前年度に開発したin vitroでの石灰化反応系を用いて、骨基質中の石灰化に関与するタンパク質を探索した。これらの基質タンパク質をペプチドマスフィンガープリンティング法を用いて同定を行った結果、既にin vitroでのハイドロキシアパタイト誘導活性およびin vivoでの骨形成への関与が示されているbone sialoproteinをけじめとして、複数のタンパク質を同定することに成功した。これらのタンパク質の中で、ある一種類のタンパク質Aに着目し、更なる研究を進めた。
音楽デザイン的構想に基づく創作学習プログラムの開発と実践

本研究は、音楽表現活動のプロセス全体をさす「音楽デザイン」の概念や構想を取り入れ、誰もが音のイメージを具体化し、生活の中に「音の記憶」を根付かせることができる創造的な音楽表現活動の実現を目的とするものである。音楽デザイン的構想に基づいて創作活動を再考することにより創作活動の意義と留意点があきらかになった。創作学習支援システムの構築のためにタブレット端末を導入し,講習会やワークショップを通して,具体的な授業プランを広く提案した。また,愛媛県内の小・中・高等学校と連携して授業実践を行い,楽しい創作活動を展開した。ICTの有用性は実証できたが,教師の支援や評価方法についての課題も明確となった。その一方法として、ICTを活用した音楽学習プログラムの開発と実践を行う。1年次に創作指導を行うためのICT環境整備として、タブレット型PC(iPad)を生徒用に10台導入し、4人1組でグループ創作を行った。しかし、実際に授業実践を行ってみて、2人ペアや1人ずつの創作が望ましいと思われる場面や内容があったため、2年次は、iPad miniを追加購入した。これにより、本格的な創作学習支援システムの運用のための環境が充実し、学習形態に応じたICT活用の工夫が可能となった。2年次は附属学校との連携協力体制を強化し、創作学習を中心とした授業実践を継続的に行った。附属中学校の教育実習や附属小学校の研究大会における研究授業で、iPadを用いた実践を公開し、学校関係者から注目された。これらの実践研究の成果は、1年次に行った県立高校での授業実践と合わせて、愛媛大学教育実践総合センター紀要に論文として発表した。また、日本電子キーボード音楽学会全国大会における研究報告・発表は、教育関係者のみならず、楽器メーカーからの多くの賛辞を受け、あらためて、本研究の価値や妥当性を認識することができた。科研費補助金で購入したiPad等のICT備品は、学校教員や一般の音楽愛好家を招いた公開講座やワークショップを開催した折にも活用しており、研究成果を還元することに役立てている。24年度はICT活用のための環境整備として、タブレット端末であるiPad一式(生徒用10台、教師用3台)を購入した。また、愛媛大学教育学部附属小中学校の音楽室に、無線LANネットワークを導入した。創作活動や音楽づくりの実践研究については、小・中・高音楽科教員が参加する講習会やワークショップで授業プランを提示し、実践の可能性を探った。愛媛県立松山東高等学校の協力を得て、高校1年生を対象に、iPadと音声合成アプリを活用して、校内で撮影した写真に俳句と音楽をつける創作活動の授業を行った。この実践研究の概要は、愛媛大学教育実践総合センター紀要第30号(25年8月発行予定)で発表する予定である。他大学の音楽デザインに関するカリキュラムやICTを活用した音楽学習プログラムについて、日本電子キーボード学会の第8回全国大会に参加し、多くの情報を得た。電子キーボードとアコースティック楽器によるハイブリッドオーケストラの演奏とソルフェージュ能力の関連、iPadを用いた初等音楽科教材の開発等、大学をフィールドとする研究を知り、大学で行われている最新の動向を把握するとともに、本研究の参考となる貴重な資料を得ることもできた。研究者自身も、25年度中に、造形作家とのコラボーレーションによる作品発表を2件行い、音楽デザイン的構想に基づいた創作活動を行った。この成果は論文「空間を演出するための音楽ーギャラリーのための音楽をつくるー」(愛媛大学教育学部紀要第59巻)として発表した。1年次は、10台のiPadを購入し、愛媛県立松山東高校に協力を依頼し、4人1組でグループ創作を行う実践を試みた。2年次はiPadminiを追加購入し、1人1台で取り組む本格的な創作学習支援システムを整備した。さらに、愛媛大学教育学部附属小・中学校と連携し、学習指導要領に基づく音楽づくり・創作の授業実践を継続的に行った。附属小学校の研究大会では、iPadを用いた授業を公開し、学校関係者から注目された。

3年次は、附属小・中学校に加え、愛媛県立東温高校、川之石高校において授業実践を行い、学年や授業の目的に応じて、アプリの使い分けを試みた。これらの授業実践研究から「音楽デザイン」の概念や構想は、音楽づくり・創作指導に十分生かすことができ、ICT活用はさらに効果を高めるものであることが明らかになった。研究成果は、愛媛大学教育実践総合センター紀要、日本電子キーボード音楽学会全国大会において発表している。教育関係者のみならず、楽器メーカーからの関心も高く、全国紙(経済紙)に取り上げられた。また、学校教員対象の音楽づくり・創作指導法の実技講習、一般作曲愛好家対象の愛媛作曲協議会主催「えらべる作曲教室」、附属小学校主催「土曜学習」等を通して広く還元している。本研究で得た知見は、実際に導入を計画している現場からの要請もあり、音楽教育におけるICT環境整備の在り方、授業内容や目的に応じたタブレット端末やアプリの選び方等の提言に役立てるとともに、高等教育における教員養成カリキュラムの開発でも活用を図りたい。(2)は児童・本人の同意を得て公開している。(3)は研究者が所属する愛媛作曲協議会の公式サイトである。実践として行った一般向け講座の模様の動画にリンクされている。音楽デザイン(作曲)2年次の計画は、ICT活用のための環境整備・充実を行いながら本格的な創作学習支援システムの運用を図ることであった。これについては、科研補助金で購入したiPadと、大学の備品の共通備品を合わせて、児童・生徒用、一人一台のiPadを用いた授業実践を行うことができ、また、音楽室内の無線LANネットワーク環境が整備できたことにより、ハード面で急速に進展した。また、附属学校の音楽科教員との連携協力体制も確立し、学習指導案の作成やティーチングアシスタントとして大学教員も小学校の授業に参加するなど、ソフト面でも順調に進展していると言える。しかし、子どもたちの作品、授業の感想等の保管、データベース化、テキストマイニングの手法によって「音の記憶」に関する子どもの反応・変容の分析等行うという授業評価に関する研究については、テキストマイニング手法を用いるためのアンケートやテストの作成にまで着手できていない状況であり、評価研究の方法も含めて見直しが必要である。創作指導を行うためのICT環境整備として、生徒用iPadを10台導入し、4人1組でグループ創作を行った。しかし、実際に授業実践を行ってみて、2人ペアや1人ずつの創作が望ましいと思われる場面や内容があり、iPadの追加購入や学習形態に応じたICT活用法の再検討が必要と感じた。今後、学校現場での実践研究をより推進していかなければならないが、ICTの活用やコンテンツ作成には、実際の指導にあたる教師のスキル向上も必要である。そのためにも、研究者からの現場へのサポートも重要な研究内容である。附属小中学校での実践では、音楽室に無線LANの環境もあり、研究室で作成したコンテンツを附属小中学校の音楽室と共有することが比較的容易であった。
振動触覚情報を用いたバランストレーニング方式の研究

姿勢動揺の様子やバランスの不安定な状態について振動触覚刺激を用いて教示するシステムを用いて,高齢者や障害者のバランストレーニングにおける効果的な感覚フィードバック方法を見出すための基礎的な研究活動を行った.(1)身体動作解析装置と重心動揺計を同時に運用するシステムを構築した.これを用いて健康若年者の身体動揺実験を行い重心動揺軌跡と身体各部の運動データを測定した.(2)振動刺激によって被験者に姿勢変化を起こさせバランストレーニングを行うソフトウエアを改良した.(3)バランストレーニング時に能動的な身体運動を被験者に教示するために,複数の振動子を身体各部に装着し,振動刺激を経時的に切替えて移動感覚を表現する方法を改良し,バランストレーニングを効果的に行える可能性を示した.(4)起立歩行時の姿勢バランスの状態を身体動作解析装置を用いて計測する際の適切な装着方法を検討した.姿勢の安定/不安定の状態の推定精度の向上を図った.(5)姿勢の安定性の注意喚起の情報,および,姿勢を安定にするための身体運動の方向と大きさの情報を,使用者の身体特性や個人の臨床課題に応じて決定する方法を考案した.(6)理学療法分野の臨床上有用なバランストレーニングの実践方法とバランスコントロール能力の評価方法を提案した.本研究活動によって一定の研究実績をあげることができたが,これらを踏まえ以下について研究を継続したい.(a)歩行時の姿勢の安定性の評価:重心位置データからは起立時の安定性しか判断できないが,上体の傾斜角度の時間変化などの三次元位置情報は歩行時でも測定可能である.両者を組み合わせて歩行時の姿勢の安定性を評価する手段を検討する.(b)振動触覚による情報の表現手段の展開:姿勢を安定にする手掛かりばかりでなく,身体機能のリハビリテーションの手段として振動触覚がどのように活かせるかを実用性を踏まえて検討する.姿勢動揺の様子やバランスの不安定な状態について振動触覚刺激を用いて教示するシステムを用いて,高齢者や障害者のバランストレーニングにおける効果的な感覚フィードバック方法を見出すための基礎的な研究活動を行った.(1)身体動作解析装置と重心動揺計を同時に運用するシステムを構築した.これを用いて健康若年者の身体動揺実験を行い重心動揺軌跡と身体各部の運動データを測定した.(2)振動刺激によって被験者に姿勢変化を起こさせバランストレーニングを行うソフトウエアを改良した.(3)バランストレーニング時に能動的な身体運動を被験者に教示するために,複数の振動子を身体各部に装着し,振動刺激を経時的に切替えて移動感覚を表現する方法を改良し,バランストレーニングを効果的に行える可能性を示した.(4)起立歩行時の姿勢バランスの状態を身体動作解析装置を用いて計測する際の適切な装着方法を検討した.姿勢の安定/不安定の状態の推定精度の向上を図った.(5)姿勢の安定性の注意喚起の情報,および,姿勢を安定にするための身体運動の方向と大きさの情報を,使用者の身体特性や個人の臨床課題に応じて決定する方法を考案した.(6)理学療法分野の臨床上有用なバランストレーニングの実践方法とバランスコントロール能力の評価方法を提案した.本研究活動によって一定の研究実績をあげることができたが,これらを踏まえ以下について研究を継続したい.(a)歩行時の姿勢の安定性の評価:重心位置データからは起立時の安定性しか判断できないが,上体の傾斜角度の時間変化などの三次元位置情報は歩行時でも測定可能である.両者を組み合わせて歩行時の姿勢の安定性を評価する手段を検討する.(b)振動触覚による情報の表現手段の展開:姿勢を安定にする手掛かりばかりでなく,身体機能のリハビリテーションの手段として振動触覚がどのように活かせるかを実用性を踏まえて検討する.平成18年度は,姿勢動揺の様子やバランスの不安定な状態について振動触覚刺激を用いて注意喚起し姿勢を修正する方法を教えるシステムを試作し,高齢者や障害者に適用してバランストレーニングを行い定量的な測定を行うための以下のような研究活動を行った.(1)被験者の姿勢変化を客観的に測定する方法として,身体各部の三次元計測と床反力計測を同時に行う手段を開発するために,上肢・体幹・下肢の各部の変位を計測する身体動作解析装置を導入した.(2)振動刺激によって被験者に姿勢変化を惹起させ,バランストレーニングを行うために,専用のソフトウエアを開発した.例えば,姿勢動揺の大きさが一定の範囲を超えた場合に振動触覚刺激を提示するなどの方法を実現している.(3)バランストレーニング時の能動的な運動の様態を被験者に教示するために,複数の振動子を身体各部に装着し,振動刺激を経時的に切替えて表現する方法を開発した.振動触覚刺激の与え方を適宜調整することで,被験者はバランストレーニングを容易に行えるようになる.以上の準備を踏まえて,次の項目について調査研究を始めている.(a)姿勢動揺に関して情報提示する内容の明確化:バランストレーニングを効果的に行うためには,どのような情報を本人に提示するのが本質的であるかを実験的に明らかにする.(b)大きな姿勢変化を伴う際の姿勢の安定性の評価:床反力測定を通じた重心位置データは起立時しか測定できないが,上体の傾斜角度などの三次元位置情報は歩行時でも測定可能である.両者を比較することで,歩行時など姿勢動揺が大きい場合の姿勢の安定性を評価する手段を検討する.

(c)振動触覚による情報の表現方法の可能性の追求:姿勢動揺の状態をどのように表現すると理解しやすいか,姿勢を安定化させる手がかりとしてはどのような振動触覚が適当か等の実用性を踏まえた技術的な検討を行う.平成19年度は、姿勢動揺の様子やバランスの不安定な状態について振動触覚刺激を用いて教示するシステムを用いて、高齢者や障害者のバランストレーニングにおける効果的な感覚フィードバック方法を見出すための基礎的な研究活動を進めた.(1)被験者の姿勢変化を客観的に測定するために、身体各部の三次元計測を行う手段として既に導入している身体動作解析装置と、重心動揺を測定する重心動揺計を同時に運用するシステムを構築した.これを用いて健康若年者をモデルに様々な身体動揺実験を行い、そのときの重心動揺軌跡と身体各部の運動のデータを測定した.(2)振動刺激によって被験者に姿勢変化を起こさせバランストレーニングを行うためのソフトウエアを改良した.例えば、姿勢動揺の大きさが一定限界を超えた場合に強い触覚刺激を呈示する等の具体的な方法を実現している.(3)バランストレーニング時に能動的な身体運動を被験者に教示するために、複数の振動子を身体各部に装着し、振動刺激を経時的に切替えて移動感覚を表現する方法を改良した.振動触覚刺激の与え方を調整することで、被験者がバランストレーニングを効果的に行える可能性が示された.以上の様に本研究活動によって一定の研究実績をあげることができたが、これらを踏まえ以下の項目について研究を継続したい.(a)歩行時の姿勢の安定性の評価:重心位置データからは起立時の安定性しか判断できないが、上体の傾斜角度の時間変化などの三次元位置情報は歩行時でも測定可能である.両者を組み合わせて歩行時の姿勢の安定性を評価する手段を検討する.(b)振動触覚による情報の表現手段の展開:姿勢を安定にする手掛かりばかりでなく、身体機能のリハビリテーションの手段として振動触覚がどのように活かせるかを実用性を踏まえて検討する.
大腸癌腹膜播種に関与するmicroRNAの網羅的解析と治療戦略

大腸癌腹膜播種進展ひいては転移進展の診断マーカーとその機序を解明するために、大腸癌腹膜播種患者の原発組織ならびに、血清microRNAの網羅的解析を行った。とくに大腸癌患者血清と健常人血清の比較において大腸癌患者血清で有意に発現上昇するmiR-1290が、癌進展にかかわるoncogenic miRNAであることを確認するとともに、組織においてのみならず血清において大腸癌患者で有意に発現上昇し、有用な早期診断・予後マーカーであった。さらに血清miR-1290は腹膜播種転移陽性患者群で有意に発現上昇をし、腹膜播種診断マーカーとして有用である可能性が示唆された。本研究は、大腸癌腹膜播種患者の血清中ならびに腹水中microRNAの網羅的解析を行い、腹膜播種と密に関与するmicroRNA関連候補を同定し、予後との関連を検討する。これは、大腸癌腹膜播種の新たな診断法を確立することにより、腹膜播種高リスク群を抽出し、新たな治療戦略の構築、腹膜播種患者の予後・QOLの向上をめざすことを目的とする。本年度は網羅的解析により転移巣で発現が高いmicroRNAを同定している。さらに同定したmicroRNAの血清中の発現を検討した。その結果、転移巣で発現しているmicroRNAが血清中に分泌していることを確認した。また、上皮間葉移行に関わるmicroRNAの一つであるmiR203は肝転移巣で原発巣に比べ有意に発現が高く、in situ hybridisationでその再現性を確認している。次に大腸癌患者の血清を用いて血清中miR203の発現を検討した。その結果、StageIV大腸癌患者ではStageI-IIIの大腸癌患者に比べ有意に血清miR203が高値を示した。とりわけ術前血清miR203レベルは各種転移(肝転移、腹膜播種、リンパ節転移)を有する患者を高率に識別可能であった。さらにマウスを用いた肝転移、全身転移モデルでの検証では転移を有するマウスはコントロールのマウスに比べ血清中miR203発現が有意に高く、その発現レベルは転移腫瘍ボリュームと有意に正の相関を示した。以上より転移巣由来の血清miR203は腹膜播種を含む遠隔転移診断マーカとなり得ることを示した。転移巣由来の血清miR203は腹膜播種を含む遠隔転移診断マーカとなり得ることを示しており論文報告しており計画通り研究は進行していると考えている。本研究は、大腸癌腹膜播種患者の血清ならびに腹水中microRNAの網羅的解析を行い、腹膜播種と密に関与するmicroRNA関連候補を同定し、予後との関連を検討する。これは、大腸癌腹膜播種の新たな診断法を確立することにより、腹膜播種高リスク群を抽出し、新たな治療戦略の構築、腹膜播種患者の予後・QOLの向上を目指すことを目的とする。昨年度は上皮間葉移行に関わるmicroRNAのひとつであるmiR203は肝転移巣で原発巣に比べて有意に発現が高く、in situ hybridisationでその再現性を確認した。術前血清miR203レベルは各種転移(肝転移、腹膜播種、リンパ節転移)を有する患者を高率に識別可能であった。さらにマウスを用いた肝転移、全身転移モデルでの検証において転移を有するマウスはコントロールのマウスに比べて血清中miR203の発現が有意に高く、その発現レベルは転移腫瘍ボリュームと有意に正の相関を示した。以上より、転移巣由来の血清miR203は腹膜播種を含む遠隔転移マーカーとなり得ることを示した。本年度はmicroRNAarrayならびに公共データーベースを用いて転移巣で有意に発現の高いmiR-139-5pに着目して、大腸癌組織、大腸癌患者血清、ならびにmiR-139-5pのin vivoにおける機能解析を行った。その結果、大腸癌組織のmiR-139-5pの発現は予後を規定し血清においてもその発現は高く再発ならびに予後を規定する因子であった。また、miR-139-5p高発現大腸癌細胞株はマウスモデルにおいて腹膜播種を形成した。本年度の研究においては転移巣で発現の高い網羅的microRNA解析からmiR-139-5pを同定し、臨床サンプル(大腸癌組織、大腸癌患者血清)ならびにマウスモデルにてmiR-139-5pが有望な転移関連遺伝子、特に腹膜播種に重要な遺伝子であることを示したことを論文報告しており計画通り研究は進行していると考える。一昨年度は上皮間葉移行に関わるmicroRNAのひとつであるmiR203は肝転移巣で原発巣に比べて有意に発現が高く、in situ hybridisationでその再現性を確認した。

術前血清miR203レベルは各種転移(肝転移、腹膜播種、リンパ節転移)を有する患者を高率に識別可能であった。さらにマウスを用いた肝転移、全身転移モデルでの検証において転移を有するマウスはコントロールのマウスに比べて血清中miR203の発現が有意に高く、その発現レベルは転移腫瘍ボリュームと有意に正の相関を示した。以上より、転移巣由来の血清miR203は腹膜播種を含む遠隔転移マーカーとなり得ることを示した。さらに本年度はsmall RNA網羅的解析を行い、抽出したmiRNA群の中から癌組織で有意に発現増加をきたすいくつかのmicroRNAに着目し、その発現解析を行ったところ、miR-549aが複数のコホートで有意に発現増加をきたすほか、全生存期間、無再発生存期間における独立予後不良因子となり、またリンパ節転移、遠隔転移、腹膜播種と有意に相関することが明らかとした。さらにその機能解析をin vitro/in vivoでおこなうとmiR-549aは増殖能、遊走能、浸潤能を促進し、腹膜播種形成に深く関与するアノイキス抑制性を更新することが明らかとなり、そのmiR-549aに発現調節されるがん抑制遺伝子を同定した。大腸癌腹膜播種進展ひいては転移進展の診断マーカーとその機序を解明するために、大腸癌腹膜播種患者の原発組織ならびに、血清microRNAの網羅的解析を行った。とくに大腸癌患者血清と健常人血清の比較において大腸癌患者血清で有意に発現上昇するmiR-1290が、癌進展にかかわるoncogenic miRNAであることを確認するとともに、組織においてのみならず血清において大腸癌患者で有意に発現上昇し、有用な早期診断・予後マーカーであった。さらに血清miR-1290は腹膜播種転移陽性患者群で有意に発現上昇をし、腹膜播種診断マーカーとして有用である可能性が示唆された。前年度に検討した結果を用いて大腸癌患者の腫瘍組織、術前血清を用いた候補miRNAs発現の検証を進める。また、未知のmicroRNAが同定された場合、その機能解析についても追加検証する。複数の同定した腹膜転移関連microRNAを利用した前向きな腹膜播種同定能を今後検証していく予定である。研究計画通りに実験が進み結果が得られたため残高が生じた。次年度の大腸癌患者の腫瘍組織、術前血清を用いた候補miRNAs発現の検証の試薬購入費にあてる。次年度の候補microRNAの腹膜播種転移同定能を前向きに評価するために、試薬購入費として利用する。
日本人の英語母音発音習得上の困難性の音響分析による解明ー主として母音の長短と二重母音

当研究は、英語母音発音指導の一つの側面として、英語母音の長さという観点から日本人学習者とnativeとの発音の違いを客観的に明らかにすることを目的としている。研究成果は次の通りである。1.研究方法1).発音素材=母音および二重母音計16個について、CVCCV,VCという音声環境に立つ単語を選んだ。Cは無声閉鎖音〔p〕または〔k〕としたが、後の子音として閉鎖音以外についても見るため摩擦音〔s〕も用いた。2).発音者=日本人学習者とnative各数名。日本人は良い発音の代表者と良くない発音の代表者を選んだ。3).収録方法=単語一個ずつカードに書き数十個一組とし、順序を変えた数組を発音して貰い収録した。4).音響分析とその処理=収録した発音材料をAD変換し、コンピュータによって波形をとった。波形を子音部、母音部、無音部にわけ、定規によって測定、平均を出し長さを時間に換算した。鼻音やその他の有声音の前の母音については、スペクトログラフをとり、フォルマントの変化を見た。2.分析結果=上記の英語単語の母音部、無音部の長さの平均値を日本人とnative別々にグラフにした。そこから次のことが明らかになった。1).いわゆる短母音を含む単語も、長母音または二重母音を含む単語も、単語、全体の長さでは日本人とnativeで余り差がない。2).母音部に限ってみると、日本人では長母音や二重母音、また母音+rが短母音より長い。3).母音〔〕はnativeでは最も長い母音であるが日本人では短い。4).日本人学習者の発音では、後ろに閉鎖音が来る場合、いわゆる短母音の後に長い無音部があるが、それは促音の影響とみられる。5).日本人の発音では鼻音の前で撥音の影響が見られる。6).日本人発音する母音の長さは後が有声、無声に関係ない。7).二重母音では、前の母音から後の母音への移行の仕方が日本人とnativeとでは違う。本研究は,日本人学習者の英語発音習得上の困難性の中で,英語母音について日本人学習者の発音がnativeの発音とどう違うかを比較によって明かにし,発音指導法の改善の根拠とすることを目的としている.昨年度に続き今年度は主としいわゆる長母音と二重母音を対象とした.1.発音素材は,音声環境p-t, p-d, p-無声のものに関しては昨年すでに収録したものがあったが,違う環境のものを使用することの適否を調べるためにp-s, k-t等にある単語も選び素材として収録.2.1で作成した分析試料をコンピュータによって波形を取り,その図形上の子音,母音,無音の部分を測定することによって時間を割だした.3.二重母音の前部から後部への移り変りを明らかに見るため,コンピュータによってスペクトログラフを取り,フォルマントの比較によりnativeと日本人学習者との違いを明らかにした.これらの分析と比較研究から次のことが明らかになった.いわゆる長母音,二重母音と短母音を比較した場合,1).CVCという構造の単語において子音の始まりから後の子音の始まりまでの持続時間はnativeと日本人学習者において有意差はない.2).有声部分だけについては,日本人学習者はいわゆる長母音,二重母音が長いが, nativeは短母音と余り違いがない.日本人学習者の内良い発音の代表者はnativeに近い.3).日本人学習者の短母音の発音では有声部分と後続子音の間の無音の部分が長いが,それは日本語の促音の発音の影響らしい.4).同様に鼻音の前の母音の長さに関し,日本人の発音に撥音の影響が見られる.5).後の子音が無声の場合より有声の場合長くなることは日本人学習者にも見られるが,二重母音の前部から後部への移り変わり方が明らかにnativeと違う.無声子音の前で, nativeは速く移るのに対し,日本人の悪い発音の代表者では遅い.当研究は、英語母音発音指導の一つの側面として、英語母音の長さという観点から日本人学習者とnativeとの発音の違いを客観的に明らかにすることを目的としている。

2).母音部に限ってみると、日本人では長母音や二重母音、また母音+rが短母音より長い。3).母音〔〕はnativeでは最も長い母音であるが日本人では短い。4).日本人学習者の発音では、後ろに閉鎖音が来る場合、いわゆる短母音の後に長い無音部があるが、それは促音の影響とみられる。5).日本人の発音では鼻音の前で撥音の影響が見られる。6).日本人発音する母音の長さは後が有声、無声に関係ない。7).二重母音では、前の母音から後の母音への移行の仕方が日本人とnativeとでは違う。本研究は、日本人学習者の英語発音習得上の困難性を解明するため、日本人学習者とnative speakerの発音でちがいが顕著な母音の長短と二重母音について音響分析によりそのちがいを明らかにすることを目的としているもので61年度の研究実績は以下の通りである。1.発音素材の設定1).native speakerと日本人学習者の発音が著しく異なる幾つかの点に的をしぼり、それぞれの目的に適した音声環境に母音がある英語単語を選んで検討した結果、p-t,p-d,p-無声等の-上に母音を有するものを主として選んだ。2).1)の単語が文頭、文中、文末に立つような、さらに文末の場合は感嘆文や疑問文というようにイントネーションの異なる短文を作成。2.収録方法の検討=発音者の平常の発音を正確に知るため収録の際の素材提示方法を検討。1項目ごと書いたカードを提示することにした。3.試験的収録とその試料分析=1の素材と2の収録方法の適否を知るため、1人のnative speakerの発音を収録。FFTアナライザーによる分析から今後の大量の試料分析の方法について検討。素材についても検討。4.録音素材と収録方法の確定=3つの実験から録音素材と収録方法を改善。5.発声者の選定=1).日本人学習者の英語母音発音の上手な代表者を倍賞が発音演習の授業で録音させた資料を参考に選定。2).下手な代表省は音声学の知識のない62年度新入生の中から選ぶ予定。3).native speakerは方言別にアメリカ、イギリス、カナダ、オーストラリア各35名。日本人学習者との比較のため同じように若い女性を選んだ。6.収録=日本人学習者の下手な発音の代表を除いて素材の発音収録進行中。7.分析=収録済みのものからFFTアナライザー、コンピューターによる音響分析も並行的に進行中。
家庭訪問における看護職の専門的・技術的な援助実践能力に関する研究

本研究は、継続的な支援を必要とする対象本人・家族に対して、より専門的・技術的な機能でもって援助提供する家庭訪問援助の特質と、その実践能力の明確化に取り組むものである。調査項骨は、看護職の意図、看護職の行為である。看護職の意図は、家庭訪問援助再現記録をもとに記述する。看護職の行為は、看護職の意図が方向づける看護職の行為を看護職の意図に対応させて記述する。研究対象は、熟練看護職による家庭訪問援助過程とし、特に精神保健・難病対策・虐待への家庭訪問援助過程5事例から情報収集・調査・分析した。より専門的・技術的な家庭訪問援助の特質として、以下のものを確認した。すなわち1)必要時本人と連絡が取り合え、看護職に相談できる関係を形成する、2)生活状況・病状悪化の可能性も視野に入れて、援助ニーズ分析・援助提供する、3)対象の介護・育児・療養生活能力に見合ったサポート体制の組み方を検討する、4)対象自身の存在とこれまでの人生を肯定的に受け止められるようにする、5)対象の保健事業の利用可能性から、地域の保健医療サービス提供システムを構築する、6)対象の援助ニーズ・生活状況・病状悪化の可能性について、他職種の判断・意見を取り入れ、保健師の援助目標・方法の適切性と修正の必要性について検討する、であった。そして「対象本人・家族の思いや希望を把握し、家庭や地域社会の中で対象がその人らしく生活し、その人の価値観に見合うように看護援助の優先度を判断する」という特質はより随所に現れていた。また看護職に求められる実践能力としては、1)対象を理解し、その援助ニーズを適確に判断できる、2)生活状況・病状悪化の可能性を予測し、早期対応できる方略を検討できる、3)対象の介護・育児・療養生活能力に見合ったサポート体制の組み方を検討し、そこから地域の保健医療サービス提供システムを構築できる、ことが必要であると考えられた。本研究は、精神保健・難病対策・感染症・虐待など、継続的な支援を必要とする対象本人・家族に対して、より専門的・技術的な機能でもって援助提供する家庭訪問援助の特質と、その実践能力の明確化に取り組むものである。調査項目は、(1)看護職の意図、(2)看護職の行為である。研究対象は、熟練看護職による家庭訪問援助過程を研究対象とする。本年度は、より専門的・技術的な機能による家庭訪問援助事例として、特に精神保健1事例・難病1事例・児童虐待2事例の対象本人・家族に対して行われた家庭訪問援助過程の記述を、保健所及び市町村保健師から収集した。家庭訪問の対象者に対して看護援助を提供した熟練看護職に、自身の看護援助再現記録を記述してもらった。現在、研究者がその記述内容を理解するために、4名の看護職にインタビューを重ねているところである。研究者が加筆・修正したデータは、情報提供看護職と研究補助者に文章推敲・調整をしてもらい、さらに研究者が確認するというやりとりを重ねる。これら4事例の分析については、この分析段階にある。児童虐待の事例分析から、家庭訪問の対象者と関係形成し可能性を見出すこと、関係機関・職種との情報共有を志向し巻き込もうとすること、予防的な観点で養育者・家族の持っ育児能力を見極めながら、セルフケア能力を高められるよう支援することの重要性が示唆された。

難病の事例については、市町村保健師による短期間(1年間12回)の事例であったので、保健所保健師による、少なぐとも23年の経過にある対象本人・家族に対して行われた家庭訪問援助という研究対象を選定しなければならない。結核など感染症の事例と共に、情報提供保健師を探し、さらにデータ収集する。本研究は、継続的な支援を必要とする対象本人・家族に対して、より専門的・技術的な機能でもって援助提供する家庭訪問援助の特質と、その実践能力の明確化に取り組むものである。調査項目は、1看護職の意図、2看護職の行為である。看護職の意図は、家庭訪問援助再現記録をもとに記述する。看護職の行為は、看護職の意図が方向づける看護職の行為を看護職の意図に対応させて記述する。研究対象は、熟練看護職による家庭訪問援助過程とし、特に精神保健・難病対策・虐待などへの家庭訪問援助過程5事例から情報収集・調査・分析した。より専門的・技術的な家庭訪問援助の特質として、以下のものを確認した。すなわち1必要時本人と連絡が取り合え、保健師に相談できる関係を形成する、2生活状況・病状悪化の可能性も視野に入れて、援助ニーズ分析・援助提供する、3対象の介護・育児・療養生活能力に見合ったサポート体制の組み方を検討する、4対象自身の存在とこれまでの人生を肯定的に受け止められるようにする、5対象の保健事業の利用可能性から、地域の保健医療サービス提供システムを構築する、6対象の援助ニーズ・生活状況・病状悪化の可能性について、他職種の判断・意見を取り入れ、保健師の援助目標・方法の適切性と修正の必要性について検討する、であった。そして「対象本人・家族の思いや希望を把握し、家庭や地域社会の中で対象がその人らしく生活し、その人の価値観に見合うように看護援助の優先度を判断する」という特質はより随所に現れていた。また看護職に求められる実践能力としては、1対象を理解し、その援助ニーズを適確に判断できる、2生活状況・病状悪化の可能性を予測し、早期対応できる方略を検討できる、3対象の介護・育児・療養生活能力に見合ったサポート体制の組み方を検討し、そこから地域の保健医療サービス提供システムを構築できる、ことが必要であると考えられた。
地域福祉の推進における地域拠点の役割と機能に関する研究

本研究では、地域福祉(地域が抱える課題を住民をはじめとするさまざまな主体の手によって解決しようとする取り組み)を推進していくうえで、人びとが交流し、地域について対話を行う場(地域拠点)が不可欠になると捉え、その役割と機能について検討する。具体的には、文献調査による地域福祉の推進における交流と対話の意義および諸領域における地域拠点の存立意義についての検討(2019,2020年度)と、地域におけるアクション・リサーチおよび参与観察、インタビュー調査を通じた地域拠点における対話と交流の様相についての整理(20192022年度)に基づき、地域拠点の役割と機能についてのあらたな知見の獲得を目指す。
肝障害判定の新しい指標-血中酵素活性及び顕著な減少を示す肝細胞質中蛋白質の同定

肝機能の新たな、かつ肝特有のより鋭敏な指標を見つけだすために、四塩化炭素腹腔内投与により急性肝障害を誘発させたラットを用い、投与24時間後における血中および肝臓中Cystathi onine γ-lyase(γ-lyase)とGOTおよびGPT活性値の変化を比較し、さらに、肝細胞障害によって変動する肝蛋白質の検出を試み、1).γ-lyase活性は、コントロールラットの血中には全く検出されず、四塩化炭素投与ラットの血中濃度は極めて高く、かつ投与直後の時間から検出されること2).有機リン剤投与により運動失調と麻痺を伴う中間症候群を誘発したウズラでは、肝障害が見られないにもかかわらず血中GOT値の上昇が認められたが、血中γ-lyase活性はほとんど認められなかったことより、肝臓以外の臓器疾患ではGOT値の上昇が認められることもあるが、γ-lyase活性値はほとんど認められず、γ-lyase活性値の上昇は肝疾患特有の有用な指標になりうること3).リソゾーム酵素の一つであるArilsulphatase活性を見てみると、コントロールラット肝臓よりも四塩化炭素投与ラット肝臓では約25%の増加が見られ、また肝臓中遊離アミノ酸濃度では70%の増加が見られたことより、四塩化炭素投与ラットの肝臓では蛋白質分解能が亢進していること4).四塩化炭素投与により肝臓において観察された現象が、エチオニン投与により誘発された肝障害でも認められること以上の4点が立証され、肝細胞障害を研究する上で新たなアプローチが開かれた。肝機能の新たな、かつ肝特有のより鋭敏な指標を見つけだすために、四塩化炭素腹控内投与により急性肝障害を誘発した動物を用いて、血中γ-lyase活性変化が肝特有の変化を示す鋭敏な指標であることを次の結果より証明した。すなわち、有機リン慢性中毒を起こした動物(ウズラ)では、肝障害が認められないにもかかわらず血中GOTおよびGPT活性の増加が見られるが、血中γ-lyase活性の上昇は認められないことより、γ-lyase活性変化が肝に特有な指標だということを証明した。また、四塩化炭素投与により急性肝障害を誘発したラット肝可溶性蛋白質中で観察された28KDa蛋白質の消失という著しい変化に対応し、尿中の同蛋白質の動態を検討し、同様の減少を観察した。このラットで認められた尿中蛋白質の変化がヒトでも認められるかどうかを検討するために、種々の条件を違えた人(例えば、運動量や食事摂取状況など)を対照にして同様蛋白質尿中で同定されるかどうかを観察中である。そのためには、正常人尿の濃縮方法(正常人では尿中に極わずかの蛋白質しか認められない)や電気泳動による蛋白質のパターンを検討することが必要であり、今年度は人尿の濃縮方法を検討した。その結果、300mlの尿をあまり時間をかけず(約30分)100倍に濃縮する方法(メンブランを用いた濾過法)を見いだしている。さらに効率の良い濾過法を検討していく予定である。肝機能の新たな、かつ肝特有のより鋭敏な指標を見つけだすために、四塩化炭素腹腔内投与により急性肝障害を誘発させたラットを用い、投与24時間後における血中および肝臓中Cystathionine γ-lyase(γ-lyase)とGOTおよびGPT活性値の変化を比較し、さらに、肝細胞障害によって変動する肝蛋白質の検出を試み、1).γ-lyase活性は、コントロールラットの血中には全く検出されず、四塩化炭素投与ラットの血中濃度は極めて高く、かつ投与直後の時間から検出されること2).有機リン剤投与により運動失調と麻痺を伴う中間症候群を誘発したウズラでは、肝障害が見られないにもかかわらず血中GOT値の上昇が認められたが、血中γ-lyase活性はほとんど認められなかったことより、肝臓以外の臓器疾患ではGOT値の上昇が認められることもあるが、γ-lyase活性値はほとんど認められず、γ-lyase活性値の上昇は肝疾患特有の有用な指標になりうること3).

リソゾーム酵素の一つであるArilsulphatase活性を見てみると、コントロールラット肝臓よりも四塩化炭素投与ラット肝臓では約25%の増加が見られ.また肝臓中遊離アミノ酸濃度では70%の増加が見られたことより、四塩化炭素投与ラットの肝臓では蛋白質分解能が亢進していること4).四塩化炭素投与により肝臓において観察された現象が、エチオニン投与により誘発された肝障害でも認められること以上の4点が立証され、肝細胞障害を研究する上で新たなアプローチが開かれた。