hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
巨大複合クラスターによる高速・無損傷表面処理加工技術の開発

京都大学発の独創技術であるガスクラスター生成技術を活用し、材料ガスへのHe混合による巨大クラスター初期速度制御等による巨大複合クラスターイオンの形成と加速制御技術の開発を行った。これにより0.10.4eV/atom程度の範囲でエネルギー制御された巨大複合クラスタービーム形成技術の開発に成功した。ノズルから形成された中性クラスタービームをチョッパーによりパルス化し、ある距離をおいて設置された検出器により目的原子が到来した時間を計測する中性クラスター速度計測システムを構築し、材料ガスにAr及びCO2を用いた時のHe混合によるクラスター加速効果を調べた。これにより、Ar及びCO2ともにHeを混合することで2倍以上の速度にクラスターを加速可能であることを示し、0.10.4eV/atom程度の範囲でエネルギー制御可能であることを示した。また、OpenFoamを用いたノズル内ガス流体シミュレーションを行い、Ar-He混合ガス導入時のノズル出口における流速を計算したところ、測定されたクラスター速度と一致し、本シミュレーションが中性クラスター速度評価に有用であることを示した。一方、1eV/atomまで加速するためにはクラスターをイオン化し、静電加速する必要があるため、DCプラズマを利用したクラスターイオン源を開発し、DCプラズマを用いたクラスターイオン化法を試行した。このクラスターイオン源を用いることでサイズ数千から数万のクラスターイオンビームの形成に成功し、加速電圧8kVで加速することができた。このとき、サイズ8000のクラスターであれば、1eV/atomに加速できたことになり、加速電圧を制御すれば0.51eV/atom程度の範囲でエネルギー制御された巨大クラスタービーム形成に成功したといえる。平成27年度に予定していたDCプラズマを利用したクラスターイオン源及びクラスター速度評価装置の設計・製作を完了し、He混合によるクラスター加速及びDCプラズマを用いたクラスターのイオン化・加速を実施できている。He混合によるクラスター加速では、当初から予想していた0.5eV/atom以下の加速を実現し、DCプラズマを用いたクラスターのイオン化・加速では、0.5eV/atom1eV/atom程度の範囲でのクラスター加速を実現している。このことは、目標である0.11eV/atom程度の範囲でエネルギー制御されたクラスタービーム形成に成功したことを示しており、平成27年度の目標はおおむね達成されている。次年度は、DCプラズマを用いたクラスターイオン源の電極構造の最適化等によりDCプラズマによるイオン化効率増大を図ると同時に、材料ガスにCO2等のAr以外のガスを用いた時のDCプラズマを用いたクラスターイオン源によるビーム特性の評価を行い、0.11eV/atom程度の範囲でエネルギー制御されたクラスタービーム形成のための基礎データを引き続き収集する。さらに、DCプラズマを用いたクラスターイオン源を用いて、ClF3とArの複合クラスターイオンビームを形成し、複合クラスターの場合のクラスター加速等、ビーム特性の評価を行う。また、ノズルに材料ガスを供給する直前で材料ガスのイオン化を行い、そのイオンをクラスター生成段階でクラスターに取り込ませ、クラスターイオンを生成するイオン化ガス供給型イオン化法を試行する。イオンが取り込まれたクラスターを生成できれば、それらは通常のクラスターイオンとして扱うことができ、基板-ノズル間に電界をかけることにより容易に加速することが可能となる。イオンビーム工学
多発性骨髄腫治療用sgRNA薬の開発

私の研究の目的はTRUE gene silencing法を基盤とした多発生骨髄腫治療用small guide (sg)RNA薬を開発することに繋がる研究成果を残す事である。そのために私は、TRUE gene silencing法の原理に基づき、骨髄腫細胞の増殖に重要な役割を担っていると考えられるmRNAを標的にしたsgRNAライブラリーを作成し、多発性骨髄腫治療用sgRNA薬の候補を発見する事を試みた。私は、3年間に以下のような5種類の実験を計画し、研究を行った。実験に使用するsgRNAは2'-O-methyl RNAとして化学合成し、細胞は3種類のヒト骨髄腫細胞株(RPMI-8226、KMM-1、Oda)と、対照細胞としてのヒト白血病細胞株(HL60)および繊維芽細胞株(HEK293)を使用した。これらのsgRNAライブラリーを用いて、(1)MTT試験および(2)qRT-PCR解析(3)フローサイトメトリー解析、(4)DNAマイクロアレイ分析及び(5)マウスゼノグラフトモデル実験を行った。最終年度では、56種類からなるsgRNAライブラリーを用いて、(1)(5)の項目についての実験を行った。その結果、5種類のsgRNAは少なくとも1種類の血液がん細胞の増殖を約80%抑制することが示された。またこれらの中の4種類についてはマウスゼノグラフトモデル実験を行った。その結果、これら4種類のsgRNAのcocktailに関しては、KMM-1細胞をヌードマウスの皮下に移植したゼノグラフトモデルにおいても、腫瘍増殖抑制効果が観察された。また別の4種類のsgRNAに関しては標的mRNA量を有意に減少させることが示された。そして、1種類のsgRNAについてはAgilent Array発現解析によって、特異的に減少している、いくつかのmRNAを発見する事ができた。(抄録なし)本研究の目的はTRUE gene silencing法を基盤とした多発生骨髄腫治療用small guide RNA(sgRNA)薬を開発することである。そのために私は数多くのsgRNAをデザインし、これらのヒト骨髄腫細胞株に対する増殖抑制効果を調べ、効率よく骨髄腫細胞にアポトーシスを誘導するsgRNAを発見するための実験を行っている。より具体的には、本研究の予定期間3年間に以下のような5種類の実験を計画している。sgRNAは2'-O-methylRNAとして化学合成し、細胞は3種類のヒト骨髄腫細胞株(RPMI-8226,KMM-1,Oda)と、対照細胞としてのヒト白血病細胞株(HL60)および繊維芽細胞株(HEK293)を使用する。デザイン・合成されたsgRNAライブラリーを用いて、(1)MTT試験および(2)qRT-PCR解析を行う。そして、MTT試験によって著しい細胞の増殖抑制効果が確認されたものについては、さらに、(3)フローサイトメトリー解析、(4)DNAマイクロアレイ分析および(5)マウスゼノグラフトモデル実験を行う。平成23年度は、50種類からなるheptamer型sgRNAライブラリーを用いて、交付申請書の通りに、(1)、(2)、(3)、(5)の項日についての実験を行った。その結果、少なくとも1種類の骨髄腫細胞に効率よくアポトーシスを誘導するsgRNAを12種類見出した。このうちの3種類のsgRNAに関しては、ヒト骨髄腫細胞RPMI-8226をヌードマウスに皮下移植したゼノグラフトモデルにおいても腫瘍増殖抑制効果が観察された。また、11種類のsgRNAが標的mRNA量を有意に減少させることを示した。私の研究の目的はTRUE gene silencing法を基盤とした多発生骨髄腫治療用small guide(sg)RNA薬を開発することである。そのために私は、TRUE gene silencing法の原理に基づき、骨髄腫細胞の増殖に重要な役割を担っていると考えられるmRNAを標的にしたデザイン型sgRNAと、ランダムな配列からなるランダム型sgRNAから構成されたsgRNAライブラリーを作成し、多発性骨髄腫治療用sgRNA薬の候補を発見しようとしている。私は、本研究の予定期間3年間に以下のような5種類の実験を計画している。実験に使用するsgRNAは2'-O-methyl RNAとして化学合成し、細胞は3種類のヒト骨髄腫細胞株(RPMI-8226、KMM-1、Oda)と、対照細胞としてのヒト白血病細胞株(HL60)および繊維芽細胞株(HEK293)を使用する。平成24年度においては、さらに2種類のヒト骨髄腫細胞株(RPMI-1788、KMS-12-BM)を、実験に使用する細胞として追加した。最初に、デザイン・合成されたsgRNAライブラリーを用いて、(1)MTT試験および(2)qRT・PCR解析を行う。次に、MTT試験によって著しい細胞の増殖抑制効果が確認されたものについては、(3)フローサイトメトリー解析、(4)DNAマイクロアレイ分析及び(5)マウスゼノグラフトモデル実験を行う。平成24年度においては、50種類からなるheptamer型sgRNAライブラリーを用いて、計画書の通りに、(1)(5)の項目についての実験を行った。その結果、ヒト骨髄腫細胞に対して、アポトーシスを引き起こすsgRNAを18種類見いだして、このうち4種類のsgRNAについては、ヒト骨髄腫細胞株RPMI-8226をヌードマウスの皮下に移植したゼノグラフトモデルにおいても腫瘍増殖抑制効果を確認する事ができた。また7種類のsgRNAは標的mRNAを有意に減少させることが示された。

そして3種類のsgRNAはDNAマイクロアレイ解析によって、特異的に減少している、いくつかのmRNAを発見する事ができた。私の研究の目的はTRUE gene silencing法を基盤とした多発生骨髄腫治療用small guide (sg)RNA薬を開発することに繋がる研究成果を残す事である。そのために私は、TRUE gene silencing法の原理に基づき、骨髄腫細胞の増殖に重要な役割を担っていると考えられるmRNAを標的にしたsgRNAライブラリーを作成し、多発性骨髄腫治療用sgRNA薬の候補を発見する事を試みた。私は、3年間に以下のような5種類の実験を計画し、研究を行った。実験に使用するsgRNAは2'-O-methyl RNAとして化学合成し、細胞は3種類のヒト骨髄腫細胞株(RPMI-8226、KMM-1、Oda)と、対照細胞としてのヒト白血病細胞株(HL60)および繊維芽細胞株(HEK293)を使用した。これらのsgRNAライブラリーを用いて、(1)MTT試験および(2)qRT-PCR解析(3)フローサイトメトリー解析、(4)DNAマイクロアレイ分析及び(5)マウスゼノグラフトモデル実験を行った。最終年度では、56種類からなるsgRNAライブラリーを用いて、(1)(5)の項目についての実験を行った。その結果、5種類のsgRNAは少なくとも1種類の血液がん細胞の増殖を約80%抑制することが示された。またこれらの中の4種類についてはマウスゼノグラフトモデル実験を行った。その結果、これら4種類のsgRNAのcocktailに関しては、KMM-1細胞をヌードマウスの皮下に移植したゼノグラフトモデルにおいても、腫瘍増殖抑制効果が観察された。また別の4種類のsgRNAに関しては標的mRNA量を有意に減少させることが示された。そして、1種類のsgRNAについてはAgilent Array発現解析によって、特異的に減少している、いくつかのmRNAを発見する事ができた。研究実績の概要に示した結果は期待以上のものであり、そのうちの一部はデンマークで開催された国際学会において発表し、関連する以前のいくつかの研究成果も論文として公表または投稿中であることから、当初の計画以上に進展していると言える。平成24年度の研究実績に示した概要は、交付申請書に記載した2年目に計画した予定とほぼ同じであり、その関連する研究成果として、2つの論文を学術雑誌に発表できたことから、研究は、おおむね順調に進展していると判断する事ができると思われる。今後も、(1)MTT試験及び(2)qRT-PCRの実験を継続し、sgRNAをスクリーニングしていく。また、sgRNAによる骨髄腫細胞の増殖抑制効果がアポトーシスによるものか否かということを解析するために、(3)フローサイトメトリー解析を行い、それらがマウスに移植した骨髄腫細胞の増殖抑制効果を示すか否かということを解析するために、(5)マウスゼノグラフトモデル実験を行う。
中世連歌における文学的教育・学習の様相ー注釈の総合的研究

本年度は、連歌の注釈の中から連歌師宗牧の作品と注釈を中心に研究し、その成果を二つの学会で発表した。連歌師宗牧の注釈については、まず「連歌古注釈の叙述法ー宗牧注を中心にー」として口頭発表を行った。この発表では、連歌の注釈がどのように叙述され、それがどのように継承されていくかということを、具体的な注釈の記述から検証し、連歌の注釈が講釈等と密接な関わりを持つことを示した。次に、天文年間の連歌師宗牧の注釈について、「連歌作品と古注釈の成立についてー天文年間の宗牧注を起点としてー」という題で口頭発表を行った。連歌においては、旅の中という特殊な環境でも新たな作品が作られ、それに並行して講釈や注釈の執筆も行われているということを、宗牧の紀行『東国紀行』の記述と、現在に残るその旅の中で成立した作品・注釈によって示した。本年度「連歌古注釈と付合学習ー「一句」に注目させるということー」という題で『中世文学』63号に掲載された論文は、前年(2017年)の中世文学会秋季大会での口頭発表に基づいたものである。連歌の基本的な最小単位である連続する二つの連歌句ではなく、さらにその中の一句のみに注目させる、という特殊な注釈の書き方を指摘し、そこから連歌の注釈が、読者(連歌学習者)自身が句を詠めるようになることを目的として、実践的な書き方がされているということを明らかにした。この連歌特有の注の書き方は、上記の口頭発表の内容にも繋がる部分があり、通時的な注釈の方法の変遷などを今後さらに整理してまとめたいと考えている。また、安田女子大学に赴き、連歌師紹巴の千句の注釈をはじめとする連歌資料の調査を行った。その結果の精査・検討も来年度引き続き行っていく。分析の対象に翻刻のない作品も含まれるため、その資料調査・整理を中心に本年度は研究を進めていった。計画の段階では存在を確認できていなかった伝本の調査も行うことができたため、来年度の研究に繋げていきたい。本年度の口頭発表・資料調査結果をまとめ、論文化していく。また、未見の連歌注釈の伝本については資料調査・収集を継続していく。本年度は連歌師宗牧の連歌古注釈を中心に研究を進めたが、次年度は他の連歌師・他の作品の注釈にも目を向け、分析を深めていきたい。
次世代人工臓器を目指したストレス応答型リポソーム固定化分離膜・担体の開発

本研究課題は,ストレス応答型機能性リボソームを固定化するストレッサ制御型膜分離材料/担体を設計・開発する事を目的としている.平成18年度では,高機能性リボソームの開発,ならびに,リポソームの固定化担体の開発について検討した.特に,酸化ストレスの制御に着目して,リボソーム固定化担体のコア材料となる機能性リボソーム(LIPOzyme:酵素機能を有するリボソーム(Liposome+Enzyme))について検討した.Aβペプチド/酸化ストレス負荷SODなどのナンセンスペプチド,あるいは,Porphyrinなどの機能性リガンドを用いて,(i)One-Pot型人工SOD/CATLIPOzymeの開発に成功した.同時に,上記の酸化ストレス制御型LIPOzymeは,(流動性/ミクロドメイン形成挙動など)膜特性の制御により,(ii)分子構造の高度認識能,(iii)コレステロールなどの膜成分の酸化酵素様活性,および,(iv)モノオキシゲナーゼ様活性など,生体由来の肝臓細胞に類似した機能を保持する可能性が示唆された.さらに,上記のLIPOzymeの固定化ついて検討した.各種リボソームを,(a)デキストラン系ゲル担体,(b)固体電極表面,ならびに,(c)セルロース系分離膜に安定化できる事を示した.以上の様に,コア材料ならびに固定化材料,双方の材料開発の可能性について検討し,リボソーム(LIPOzyme)を核とする次世代人工臓器の開発のための基盤を創成した.また平行して,新研究領域「メンブレン・ストレスバイオテクノロジー」の開拓に協力し,脂質膜・(モデル)生体膜のストレス応答ダイナミクス((脂質)膜界面ダイナミクス)に立脚したリポソーム材料調製・機能発現・ストレス有効利用型プロセスの設計開発の有効性を示した.本研究課題は,ストレス応答型機能性リポソームを固定化するストレッサ制御型膜分離材料/担体を設計・開発する事を目的としている.平成16年度では,リポソームの高密度・高安定性固定化方法の確立を目標とする.まず,リポソームの熱的・化学的・酸化的ストレス応答に関して検討した結果,ストレッサとしてのROS(活性酸素種)を制御することで,脂質膜の酸化耐性が改善された.また,ストレス条件下でのタンパク質-リポソーム膜間相互作用の検討により,膜の不安定化が疎水的相互作用に支配されることが分かった.したがって,適切な脂質組成の選択ならびにリガンドを配向させる事によって,リポソームの高安定化を実現できる制御法確立の可能性を見出した.実際,リポソームをゲル担体に固定化した固定化リポソームクロマトグラフィーを用いた検討により,変性タンパク質との相互作用によるリポソームの脱離は見られなかった.これらの知見に基づき,脂質膜・(モデル)生体膜のストレス応答ダイナミクス((脂質)膜界面ダイナミクス)に立脚したリポソーム材料調製・機能発現・ストレス有効利用型プロセスの設計を目指した新領域「メンブレン・ストレスバイオテクノロジー」を提案した.この観点に基づき,酵素(トランスグルタミナーゼ)を利用したリポソーム膜と固定化担体との直接的な架橋法を検討し,熱ストレス負荷条件でのリポソーム/酵素の協同的なストレス応答ダイナミクスにより,トランスグルタミナーゼの架橋活性を制御可能であることが示唆された.本研究課題は,ストレス応答型機能性リポソームを固定化するストレッサ制御型膜分離材料/担体を設計・開発する事を目的としている.平成17年度では,特に,高機能リポソームの開発,ならびに,それに基づくリポソームの固定化方法の検討を目標とした.熱的・酸化的ストレス条件下における高機能リポソームの開発について検討した.特に,リポソーム固定化担体のコア材料となる人工酵素様に働く機能性リポソームについて検討し,(i)Aβペプチドが界面にて酸化還元酵素として機能する事,(ii)酸化ストレス負荷したSODのペプチド断片が界面で酸化活性を有する事,ならびに,(iii)酸化ストレス条件下においてTransglutaminaseのペプチド断片がアシル転移反応の触媒活性を有する事を明らかにした.このようなリポソーム表層の活性は,リポソーム表層の特性(膜流動性,ドメイン形成挙動など)と密接な関連性がある事を示した.上記の知見に基づき,適切な脂質組成の選択ならびに機能性リガンドを配向させる事によって,リポソームの高安定化・ストレス耐性化を実現できる固定化手法の確立できる事を見出した.さらには,新研究領域「メンブレン・ストレスバイオテクノロジー」の開拓に協力し,脂質膜・(モデル)生体膜のストレス応答ダイナミクス((脂質)膜界面ダイナミクス)に立脚したリポソーム材料調製・機能発現・ストレス有効利用型プロセスの設計開発の有効性を示した.本研究課題は,ストレス応答型機能性リボソームを固定化するストレッサ制御型膜分離材料/担体を設計・開発する事を目的としている.平成18年度では,高機能性リボソームの開発,ならびに,リポソームの固定化担体の開発について検討した.特に,酸化ストレスの制御に着目して,リボソーム固定化担体のコア材料となる機能性リボソーム(LIPOzyme:酵素機能を有するリボソーム(Liposome+Enzyme))について検討した.Aβペプチド/酸化ストレス負荷SODなどのナンセンスペプチド,あるいは,Porphyrinなどの機能性リガンドを用いて,(i)One-Pot型人工SOD/CAT

LIPOzymeの開発に成功した.同時に,上記の酸化ストレス制御型LIPOzymeは,(流動性/ミクロドメイン形成挙動など)膜特性の制御により,(ii)分子構造の高度認識能,(iii)コレステロールなどの膜成分の酸化酵素様活性,および,(iv)モノオキシゲナーゼ様活性など,生体由来の肝臓細胞に類似した機能を保持する可能性が示唆された.さらに,上記のLIPOzymeの固定化ついて検討した.各種リボソームを,(a)デキストラン系ゲル担体,(b)固体電極表面,ならびに,(c)セルロース系分離膜に安定化できる事を示した.以上の様に,コア材料ならびに固定化材料,双方の材料開発の可能性について検討し,リボソーム(LIPOzyme)を核とする次世代人工臓器の開発のための基盤を創成した.また平行して,新研究領域「メンブレン・ストレスバイオテクノロジー」の開拓に協力し,脂質膜・(モデル)生体膜のストレス応答ダイナミクス((脂質)膜界面ダイナミクス)に立脚したリポソーム材料調製・機能発現・ストレス有効利用型プロセスの設計開発の有効性を示した.
朝永・タッティンジャー流体の不安定性と繰り込み群

1次元量子多体系は朝永・ラッティンジャー流体で記述される。朝永・ラッテインジャー流体はUmklapp過程、後方散乱、引力等で不安定となるが、これを電子系と量子スピン系双方で研究した。主にBKT転移に対して開発したレベルスペクトロスコピー法を用いた。電子系では、t-Jモデルでの(超伝導相関を大幅に増大させる)スピンギャップ転移と、相分離について調べた。注意しなければならないのは、フェルミオンであることを反映して電荷密度自由度とスピン自由度との間に選択則の関係があり、周期的境界条件のみでは2つが分離できない。ひねり境界条件を併用することで2つの自由度を分離した。レベルスペクトロスコピーで解析した結果、スピンギャップ相は従来の予想よりずっと広い範囲で存在し、ユニバーサリティクラスはBKT転移であることが分かった。スピンギャップ転移の物理的解釈は、後方散乱が斥力から引力になることで引き起こされる。相分離についてはその近傍での物理量(圧縮率、伝導率)の漸近的振舞いをスピン系での強磁性転移との場合の類推から解析的に予想し、数値計算と比較した。量子スピン系では、ボンド交替のある場合と交替磁場のある場合について、S=1,3/2,2の相図を完成し、ユニバーサリティクラスを確かめた。ひねり境界条件を使うことで、(Haldane相の)隠れたZ_2×Z_2対称性の別の側面を明らかにした。また、ひねり境界条をBKT転移に使うことで、BKT転移の隠れたSU(2)対称性を明確にし、合わせて収束性を元のレベルスペクトロスコピーからさらに向上させた。S=1のスピン鎖でTakhatajan-Babujan模型は厳密解があるが、これにボンド交替を入れた場合、この点は多重臨界点として振舞い、2つのSU(2)c=lCFTの臨界線に分岐する。この多重臨界点近傍の様子を調べた。朝永・ラッティンジャー流体は、格子との相互作用によるUmklapp過程、後方散乱その他により不安定になるが、これらはBerezinskii-Kosterlitz-Thouless(BKT)転移で記述される。他に前方散乱の項の引力が十分強い時に起きる相分離がある。以上の不安定性は超伝導相関を大きく増大させることがあり、一方超伝導と競合することもあるので重要である。BKT転移ではmass-gapの発生が極めて緩やかで転移線上で対数補正が現れる為、相転移点を求めユニバーサリティクラスを同定するのが困難だった。これに関し最近私は繰り込み群と対称性を用いたレベルスペクトロスコピーという方法論を開発し、種々の問題に応用した。具体的成果としては、1)レベルスペクトロスコピーをS=1,3/2,2XXZ量子スピン鎖でボンド交替やstaggered fieldが入った場合のHaldane相、XY相、dimer相、large D相の相転移に応用し、興味ある結果を得た。またひねり境界条件を使うことにより、dimer-Haldane相間のガウシアン転移と隠れたZ_2×Z_2対称性の関連を明確にした。2)1次元強相関電子系でt-Jモデルに現れるスピンギャップの相転移とユニバーサリティクラスの同定にレベルスペクトロスコピーを用い、これまで予想されていたよりスピンギャップ相がずっと広い領域にあることを見い出した。これはBKT転移の1種であるので有限サイズスケーリングでは解析が困難だった。3)1次元のt-Jモデルに見られる相分離は、引力的相互作用が強くなり電子の多い部分とホールの多い部分に空間的に分離する現象である。相分離近傍の漸近的挙動について共形場理論の立場から解析的予想を立て、数値計算で有限サイズ効果を解析し予想を確認した。

S=1のスピン鎖でTakhatajan-Babujan模型は厳密解があるが、これにボンド交替を入れた場合、この点は多重臨界点として振舞い、2つのSU(2)c=lCFTの臨界線に分岐する。この多重臨界点近傍の様子を調べた。
アルカリ環境における鉄不働態被膜の破壊と水素吸蔵

電気化学的水素透過法、分極法及び走査振動電極法を用いて硫化水素並びに炭酸ガス環境における炭素鋼と低合金鋼の皮膜破壊と水素吸蔵との関係を調べ、以下のことが明らかになった。(1)NACE及びBP溶液では硫化水素の表面吸着により水素含有量が増加することがわかった。(2)硫化水素含有アルカリ溶液中において、水素含有量はほとんど観測されなかったが、KCNを添加すると水素吸蔵の急激な増加が生じた。これはKCNによる硫化鉄皮膜の破壊で生じることを明らかにした。(3)窒素環境下での中性・アルカリ溶液では水素含有量はpHの増加とともに減少し、アルカリ溶液ではほとんど検出することができなかった。しかしながら、炭酸ガス環境においてはpHに関係なく明瞭に水素含有量が観測され、その挙動は、pHに依存することがわかった。水素含有量のpH依存性は生成炭酸鉄の腐食抑制作用、炭酸鉄の錯イオン形成による溶解、炭酸イオンの表面吸着等から説明することができた。(4)走査振動電極法により、硫化水素環境下では局在化したアノード部は浸漬時間とともに移動していくことがわかった。しかしながら、炭酸ガス環境においては見掛け上アノード部の局在化はみとめられず、全面腐食の様子を呈した。(5)従来中性・アルカリ溶液において、材料の水素吸蔵は起こらないと考えられていたが、硫化水素環境にKCNが存在する場合あるいは炭酸ガス環境において、水素吸蔵が起こり、材料が水素脆性を生ずる可能性があることが明らかになった。走査振動電極と電気化学的水素透過法とを組合せた特殊な電解セルを作成し,以下の成果を得た。(1)走査振動電極を用いて硫化水素およびシアンイオンを含むアルカリ溶液中でアノードの位置を確認することができた。浸漬時間と共にアノード位置が変化していることが分った。被膜の破壊と修復が繰返し生じている。(2)アノード電流の積分値(全アノード電流)と水素透過速度の間に良い相関県警が見つかった。(3)アノード電流の積分値とカソード電流の積分値が一致しなかった。比較電極の選択も含め来年度以降の課題である。電気化学的水素透過法を用いてアルカリ環境における鉄不働態被膜の水素と水素吸蔵の関係を調べ、以下の成果を得た。(1)本年度はアルカリとして炭酸塩環境を選択した。(2)水素含有量はpHとともに低下したが、pHが7.5以上でむしろ増加した。このような異常な現象は炭酸塩が共存しないと生じない。(3)pHの増加とともにアノード分極は低下し、特にピーク電流は増加した。(4)pHの増加とともにカソード分極も低下し、その結果腐食速度が増加した。(5)腐食生成物は低角度X線回析での結果、炭酸鉄であり、その下にセメンタイトが認められた。また、被膜厚みはpHの増加とともに薄くなった。(6)(2)の異常現象はpHの増加に伴い、HCO_3-イオンが増加し、このイオンからの水素発生反応の促進で説明できる。(7)走査振動電極を用いた結果、昨年度のH_2S環境と異なり見掛け上全面腐食の様子を呈した。
口腔癌に対するHSVtk遺伝子とGCVを用いた自殺遺伝子治療に関する研究

近年,口腔癌に対する新たな治療法として遺伝子治療が注目されている。そこで,今回,われわれは,遺伝子導入ベクターとしてアデノウイルスベクター(Ad)とアデノ随伴ウイルスベクター(AAV)を用いて単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子(HSVtk)とガンシクロビル(GCV)を用いた自殺遺伝子治療の基礎的研究を行った。まず,in vitroにおいて口腔扁平上皮癌由来の細胞株を用いAdおよびAAVの導入効率を検討した。その導入効率は、Adにおいて,MOI:1で1030%であり、MOI:10ではほぼ100%であった。また,AAVでは,MOI:1000において2040%であり、MOI:10000ではほぼ100%であった。次にHSVtk/GCV自殺遺伝子治療の殺細胞効果を検討した。Adにおいては,MOI:10においてほぼ100%であり、MOI:1においては7080%であった。また,AAVでは,MOI:10000においてほぼ100%であり、MOI:1000では7080%であった。ヌードマウス背部皮下移植モデルにおいて,AdおよびAAVを用いて導入効率を評価し,ウイルスベクター感染24時間後において針の刺入部位の周囲の腫瘍細胞は濃染色されIn vivoにおいて遺伝子導入が可能であることを確認した。つぎにAdおよびAAVによるHSVtk遺伝子導入とそれに引き続くGCVの投与による自殺遺伝子治療の抗腫瘍効果を評価した。Adにおいてコントロール群と比較して治療群では58.6%の腫瘍宿曜を認め,AAVでは,45.4%の腫瘍縮小を認めた。AAVは,それ自身病原性がないため反復投与が可能ある。AAVHSVtk/GCV2回治療群において1回治療群と比較して著明な抗腫瘍効果を認めた。これらのことより,AdおよびAAVを用いたHSVtk/GCV自殺遺伝子治療は,口腔扁平上皮癌に対して有効であることが示唆された。頭頚部癌の治療成績の向上を目的とした新たな治療法として遺伝子治療の開発研究が進められている。いくつかあるストラテジーの中で単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子(HSVtk)とガンシクロビル(GCV)を用いる自殺遺伝子治療はその臨床応用が比較的早期になされる可能性があり注目されている。そこで、我々はアデノウイルスベクター(Ad)、アデノ随伴ウイルスベクター(AAV)を用いてヒト口腔扁平上皮癌細胞に対する自殺遺伝子治療の効果を検討した。まず、ヒト扁平上皮癌由来細胞株にlacZ遺伝子を含むAd-LacZ、AAV-LacZを感染させ、それぞれのベクターの導入効率を評価した。その結果、Adにおいて、MOI:1で1530%、MOI:10でほぼ100%の細胞に遺伝子を導入することが可能であることを確認した。また、AAVの導入効率は、MOI:1000で2050%、MOI:100000でほぼ100%であった。続いて、HSVtkを含むAdおよびAAVを感染させ引き続いて抗ウイルス剤のGCVを添加し、その後、経時的に生細胞数を計測し殺細胞効果を検討した。その結果、Adにおいて、MOI:1で7080%、MOI:10でほぼ100%の殺細胞効果を確認した。また、AAVにおいては、殺細胞効果は、MOI:1000で約80%、MOI:10000でほぼ100%であった。

本年度は、in vitroにおける両ベクターの導入効率および殺細胞効果を検討しHSVtk/GCVを用いた自殺遺伝子治療が有用であることを確認した。平成12年度は、in vitroにおける抗腫瘍効果、導入効率などを確認する予定である。頭頚部癌の治療成績の向上を目的とした新たな治療法として遺伝子治療の開発研究が進められている。いくつかあるストラテジーの中で単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子(HSVtk)とガンシクロビル(GCV)を用いる自殺遺伝子治療はその臨床応用が比較的早期になされる可能性があり注目されている。これまでに、In vitroにおいてアデノウイルスベクター(Ad)およびアデノ随伴ウイルスベクター(AAV)両ベクターの導入効率および殺細胞効果を検討し、HSVtk/GCVを用いた自殺遺伝子治療が有用であることを確認した。そこで、われわれは、In vivoにおけるAd、AAVを用いてヒト口腔扁平上皮癌細胞に対する自殺遺伝子治療の効果を検討した。まず、Bulb/cヌードマウスの右側背側部にヒト口腔扁平上皮癌細胞株SASを移植し、直径約1cmの腫瘍塊を形成した。導入効率を評価するため、その腫瘍塊にlacZマーカー遺伝子を含むAd-lacZ,AAV-lacZを直接注入した。その結果、注入48時間後、針の周囲の腫瘍細胞に遺伝子が導入されていることをを確認した。次に、HSVtk/GCV自殺遺伝子治療の抗腫瘍効果を評価するためにHSVtk遺伝子を含むAdtkおよびAAVtkを感染させ、引き続いて抗ウイルス剤のGCVを添加し経時的に腫瘍経を測定した。その結果、感染36日後、Adtk感染群においてコントロール群と比較して58.6%の腫瘍縮小を認め、AAVtkにおいては、45.4%の腫瘍縮小を認めた。また、AAVtk二回投与群では70.9%の腫瘍縮小を認めた。これらのことより、AdおよびAAVを用いたHSVtk/GCV自殺遺伝子治療は、口腔扁平上皮癌に対して有用であることが示唆された。
宋元時代における「三国志伝説」の、『三国志平話』成立に与えた影響についての研究

13年度の実績を基礎にして、本年度は『三国志平話』の成立に関する問題を明らかにした。まず『三国志平話』と「三国志」物語を題材にした元雑劇との関係を検討した。その結果、物語上の設定が共通することがきわめて多く、両者に深い関係があることがわかった。さらに『三国志平話』の文章中に見られる固有名詞の表記の誤りに着目し検討を行った。その結果、表記の誤りは、単に字形の相似によるもののみならず、北方方言の発音の影響を受けていることが分かった。これらのことから、『三国志平話』は福建地方、すなわち南方地域において出版されたものであるが、その内容は北方文化の影響を強く受けていることが明らかとなった。続いて『三国志平話』と『三分事略』を詳細に比較検討した。その結果、版式は同じであっても、文字の異同はとても多いこと、それは単純に正字が俗字に、あるいは俗字が別の俗字になっているだけではなく、時に文意の変わる文字の異同があること、さらに『三国志平話』より『三分事略』の方が優れていると思われる個所もあることが分かった。このことから、『三分事略』は別のテキストの覆刻本であることには違いないが、単純に『三国志平話』の覆刻本ではないこと、同様の版式の本がたくさんあって、その一つが『三国志平話』となり、また別の一つが『三分事略』となって、現代に伝わったのであることが明らかになった。以上のことをふまえて、「『三国志平話』と『三分事略』」というタイトルで論文を執筆中であり、まもなく公刊予定である。本年度一年間の研究を通して、以下のような知見が得られた。宋代になって講談・演芸の中で「三国志もの」が取り上げられる中で、唐代までには存在しなかった三国志伝説が新たに発生する。これは歴史事実とは大きく食い違いを見せたり、間違った話であったりする。そしてそのことを指摘する文章も書かれ、歴史事実とは異なる伝説は批判の対象となる。しかし一般大衆に受け入れられた三国志伝説は、元代・明代・清代とさらに発展していく。こうしたことを背景にして、「三国志物語」を取り上げた元雑劇の作品や『三国志平話』が書かれることになる。そして『三国志演義』が編纂されるに当たり、こうした伝説を物語としてより面白くなるように改編され、そして『三国志演義』の中に組み込まれていく。しかし「歴史事実」という観点から見れば誤りであることには違いなく、この点は批判の対象とされ、清代になってからの刊本である毛宗崗批評本では削られることになる。また、大衆に受け入れられた伝説が、レベルの高い読書人・教養人たちの間にも浸透し、彼らの作る詩文の中に現れることもある。一方『三国志演義』の毛宗崗本のなどの影響から、一般庶民のための文芸作品の中から「伝説」が削られることもある。すなわち本来「雅」であったものと「俗」であったものの間で交流が起こり、読書人・教養人たちの読書に変化が起こる。こうして、明清時代になると、宋代までに確立された「雅俗認識」に変化が起こり、両者の間の協会が小さくなっていく。以上のことを、「漢の寿亭侯」と題する論文にまとめ、公表する予定である。
トポロジカル絶縁体を用いた新規熱電素子の創成

トポロジカル絶縁体の熱電特性では熱により生成した電流をトポロジカル絶縁体の表面状態においてスピン流に変換する.即ち,表面状態に注入される電流からスピン流へ変換する効率が極めて重要なパラメータとなる.本年度はスピンバルブ素子を用いて,トポロジカル絶縁体におけるスピン流ー電流相互変換効率を定量的に評価した.表面状態では2次元電流が3次元スピン流に変換されるか,又はその逆過程となるため,変換効率は長さの単位を有する.トポロジカル絶縁体の表面状態ではその長さが10nm以上と他の二次元材料と比較して極めて長いことが判明した.熱から電流を生成しスピン流へと変換する際にも極めて高いゼーベック係数と極めて高いスピン流ー電流変換効率が期待されることから極めて高い熱ースピン流変換効率が期待できる.実際に熱からスピン流への変換を実証する際,一般的にはロックイン法が用いられる.その場合,電流を印加しジュール熱を発生させ,その熱勾配により生成された電流を表面状態に注入し変換実験を行う.本手法は幅広く用いられているが,大きな欠点があることが判明した.それは電流ー電圧特性に非線形性がある場合には印加した電流の影響が変換後の信号に重畳し,熱からスピン流への変換の精密評価を阻害することである.実際,トポロジカル絶縁体では電流ー電圧特性が非線形性を示しており,本問題が顕在化していることが判明した.そこで直流測定とロックイン法を組み合わせた手法を開発し,これにより電流の非線形性の影響を排除できることを示した.本年度は熱スピン変換素子に関する基礎学理の理解を中心に行った.トポロジカル絶縁体材料として,BiSbTeSe,BiSeなどのビスマスセレン系材料,BixSb1-xなどのビスマスアンチモン系材料,SnTeなどのトポロジカル結晶絶縁体を対象として,表面状態におけるスピン流電流変換機能を検討した.本機能の良し悪しが熱スピン変換素子の特性を決めることが予想される.特にBiSb系については,Sb組成を0%(純ビスマス,非トポロジカル相,半金属)から30%程度まで変調し,スピン流電流変換効率を検討した.半導体のトポロジカル相はSb組成7%から22%で出現する.Sb組成の増加とともにスピン流電流変換効率は向上したが,非トポロジカル相からトポロジカル相へと変化する領域においても変換効率の顕著な変化は得られなかった.2キャリアモデルを用いてキャリアの移動度を評価したところ,Sb組成の増加と共に移動度は減少していることが確認された.従ってSb組成の上昇に伴うスピン流電流変換効率の緩やかな向上はトポロジカル表面状態の寄与より,キャリアの運動量緩和時間の減少に起因することが示唆された.Biでは強いスピン軌道相互作用に起因し,D'yakonov-Perel'機構によるスピン散乱が支配的であることが分かっている.この場合,キャリアが運動量緩和の前にスピンのコヒーレンスが失われてしまい,スピン流電流変換の大きな向上は望めない.Sbがランダムに配置されることにより,キャリアの散乱機会が増え,その結果としてスピン流電流変換が増えたものと解釈される.即ちトポロジカル表面状態でのスピン流電流変換よりはバルクの逆スピンホール効果が支配的と言える.バルクの変換の極性は表面とは反対であることが知られている.より効率的な熱スピン流変換では,バルクの寄与の抑制が重要であることが明らかとなった.研究初期では実験装置の改造立ち上げが必要であり,それらに多くの時間を割いた.今後必要となる装置はほぼ立ち上げが完了しており,来年度,再来年度に必要となる改造はほとんどない.熱スピン流変換実験自体は若干の遅れがあるが,装置の立ち上げが前もって完了していること,および今後の熱電変換でも重要となる設計指針を得ることができたことなどを総合的に鑑みると,概ね順調であるといえる.トポロジカル絶縁体における熱ースピン流,熱ー電流変換効率の解明を目指し,研究を行っている.本年度は微小領域に局所的な発熱・吸熱を印加するための機構を確立した.当初,銅とニッケルの合金であるコンスタンタンと銅を組み合わせた熱電対を作製し,発熱,吸熱機構を形成する予定であった.電子線蒸着措置を用いて銅の薄膜を成膜した後,コンスタンタンを成膜し,微小熱電対を作製した.しかし,電子線蒸着で作製した薄膜では均質なコンスタンタン膜が形成できず,一部ニッケルの微結晶が存在していることが,マイクロ波吸収を用いた発熱実験から明らかとなった.これはニッケルと銅の蒸気圧の違いに起因するものであると考えられる.そこでコンスタンタンの成膜をスパッタ膜に変えて実験を行った.この場合にも同様に一部ニッケルの微結晶が存在していることが判明した.そこで強磁性体元素を含まない熱電対を作製することを目的として,銅アンチモン熱電対を作製してその動作性能を調査した.当該熱電素子も十分な熱電性能を示すことが明らかとなった.トポロジカル絶縁体の場合,強磁性原子は時間反転対称性を破る可能性があり,正確な物性が評価できない可能性があったが,本研究で作製した熱電対ではその心配がなく,より正確な評価が可能であると期待できる.また同様にスピン流を検出する為の強磁性体電極もトポロジカル絶縁体との直接接合は避けた方が良いという考えから,間に銅の薄膜の挿入を検討した.

この場合にもスピン信号は十分に検出できることが判明し最大で1マイクロメートル程度トポロジカル絶縁体と鉄の距離を取っても十分に測定可能であることが判明した.研究当初より,必要な要素技術は増えているが,それらの技術を着実に確立してきている.トポロジカル絶縁体における熱ースピン流,熱ー電流変換効率の解明を達成することは十分に可能であると考えられる.また熱ースピン流の測定技術も新たな物理現象の解明等が進み十分な技術確立が進んでいる.これらを鑑みると研究はおおむね順調に進展していると評価できる.トポロジカル絶縁体の熱電特性では熱により生成した電流をトポロジカル絶縁体の表面状態においてスピン流に変換する.即ち,表面状態に注入される電流からスピン流へ変換する効率が極めて重要なパラメータとなる.本年度はスピンバルブ素子を用いて,トポロジカル絶縁体におけるスピン流ー電流相互変換効率を定量的に評価した.表面状態では2次元電流が3次元スピン流に変換されるか,又はその逆過程となるため,変換効率は長さの単位を有する.トポロジカル絶縁体の表面状態ではその長さが10nm以上と他の二次元材料と比較して極めて長いことが判明した.熱から電流を生成しスピン流へと変換する際にも極めて高いゼーベック係数と極めて高いスピン流ー電流変換効率が期待されることから極めて高い熱ースピン流変換効率が期待できる.実際に熱からスピン流への変換を実証する際,一般的にはロックイン法が用いられる.その場合,電流を印加しジュール熱を発生させ,その熱勾配により生成された電流を表面状態に注入し変換実験を行う.本手法は幅広く用いられているが,大きな欠点があることが判明した.それは電流ー電圧特性に非線形性がある場合には印加した電流の影響が変換後の信号に重畳し,熱からスピン流への変換の精密評価を阻害することである.実際,トポロジカル絶縁体では電流ー電圧特性が非線形性を示しており,本問題が顕在化していることが判明した.そこで直流測定とロックイン法を組み合わせた手法を開発し,これにより電流の非線形性の影響を排除できることを示した.今年度得られた設計指針をもとに,トポロジカル絶縁体を選定し,熱スピン流変換の実証実験およびヘテロ接合熱電変換素子の実験へと移行する.熱スピン変換については強磁性体とトポロジカル絶縁体の界面にトンネル絶縁膜を挿入し,検出感度の向上を図る.来年度はこれまでに確立した要素技術を集結し,トポロジカル絶縁体における熱ースピン流,熱ー電流変換効率の解明を目指す.
育児放棄/うつ病モデルとしてのアトピー性皮膚炎モデルNC/Tndマウスの有用性

アトピー性皮膚炎モデルNC/Tndマウスは、環境の変化で母親が養育放棄・食殺行動する傾向があり、特に冬季繁殖においてその傾向が強くなる。我々は、この原因は環境温度のわずかな低下に起因すると仮説を立て、軽度低温環境でNC/Tndマウスの母性行動を観察した。軽度低温環境において、養育放棄・食殺を行った母親が著しく増加した。一方、養育を行った母親の養育行動は、積極的かつ優れていた。ところが、適切な養育を受けたはずの子に著しい発育不良と生存率の低下がみられた。今後さらなる解明が必要であるが、NC/Tndマウスは母性行動異常の解明に極めて有用であり、新たな発見を提供してくれるものと考える。本研究の目的は、アトピー性皮膚炎モデルNC/Tnd(以下NC)マウスの母親マウスに見られる母性行動異常が、近年深刻な社会問題となっている育児放棄・幼児虐待のモデルとなり得るかを検証し、さらに、NCマウスの母性行動異常が起こりやすい状態を究明し、ストレス/うつ病およびアトピー性皮膚炎との関連性を探ることである。本年度は、NCマウスに対して、他系統のマウスでは問題とならない程度の軽いストレスを与えただけで、有意に育児放棄(子マウスの食殺行動)を引き起こすかどうか検証した。我々の研究室で観察された冬季繁殖におけるNCマウスの育児放棄の増加は、わずかな室温の低下(軽度寒冷ストレス)が原因であるという仮説のもと、室温19°Cおよび23°Cにおいて、NCマウスおよびコントロールとしてBALB/C(以下BALB)マウスの繁殖を行い、育児放棄した母親マウスの個体数(全出産数に対する割合)を比較した。室温23°Cでは、NCマウスとBALBマウスとの間で育児放棄個体数に有意な差はみられなかった(15.0%および4.5%)。室温19°Cでは、両マウスともに室温23°Cに比べ育児放棄個体数は増加した(50.0%および14.3%)。しかし、BALBマウスではその増加の程度は小さく、室温23°Cにおける同マウスとの間で育児放棄個体数に有意差は認められなかった。一方、NCマウスではその増加の程度が大きく、同室温におけるBALBマウスおよび室温23°CにおけるNCマウスに比べ有意な育児放棄個体数の増加がみられた。この実験結果は、夏季冬季どちらにおいても観察された。この結果から、NCマウスにわずかなストレスを与えるだけで、効率的に育児放棄モデルを得ることができると考えられた。平成26年度の研究において、NC/Tndマウスの養育放棄は、わずかな室温低下が原因であることがわかった。平成27年度より、NC/Tndマウスの母性行動を観察したところ、以下の3つの問題点を検証する必要があると考えた。1)実験に使用したNC/Tndマウスは、ごく軽度であるが、アトピー性皮膚炎(AD)の症状が現れていたことから、養育放棄に対するADの影響が除外しなければならない。2)NC/Tndマウスは、BALB/cマウスに比べ、有意に養育放棄を示した一方で、養育行動そのものは、より積極的であった。BALB/cマウスは養育行動について積極的ではないという報告があることから、母性行動研究のスタンダードであるC57BL/6マウスとの比較する必要がある。3)2011年Karasawaらによって、NC/Tndマウスは遺伝子異常による視覚障害があることが報告された。視覚障害による影響を検証するため、同じ遺伝子異常による視覚障害を示すC3H/HeNマウスとの比較が必要である。そこで、平成27年度後半から、NC/Tndマウスをアイソレーター内で飼育・継代をされたADの症状が現れていない個体を用いて、養育放棄・食殺行動および母性行動についてC57BL/6マウスおよびC3H/HeNマウスと比較検証を行うこととなった。NC/TndマウスのADの発症を抑えるため、アイソレーター内で飼育・繁殖を1世代行ったため、約3ヶ月の遅れが生じているが、来年度には遅れを取り戻すことは可能である。冬季繁殖で観察されたアトピー性皮膚炎(以下AD)モデルNC/Tndマウスの養育放棄・食殺行動は、わずかな室温の低下が原因であり、同じ環境下で飼育されたBALB/cマウスに比べ養育放棄・食殺行動を示す個体が有意に多いことがわかった。一方、養育放棄・食殺行動を行わなかったNC/Tndマウスは、BALB/cマウスに比べ積極的な養育行動を有意に行うことがわかった。次に、母性行動研究のスタンダードとして使用されるC57BL/6マウス、および、NC/Tndマウスと同じ遺伝子異常による視覚障害(網膜変性症)を示すC3H/HeNマウスとの比較を行ったところ、室温19°Cにおける養育放棄・食殺行動について、NC/Tndマウスは、C3H/HeNマウスに比べ有意に多く、C57BL/6マウスに比べ多い傾向があった。BALB/cマウスとの比較に使用したNC/TndマウスのClinical Skin Severity Scores(以下CSSS)は、養育放棄・食殺行動の有無にかかわらず約1.5(皮膚炎症状はごく軽度で激しいかゆみはない)であった。さらにADの症状による影響を除外するため、上記のC57BL/6マウスおよびC3H/HeNマウスとの比較実験では、抗原暴露を軽減してADの症状を抑えたCSSS 0の個体を使用した。

その結果、BALB/cマウスと比較したCSSS 1.5の個体の方が、CSSS 0の個体よりも、養育放棄・食殺行動の割合が高くなる傾向があることがわかった。これらの結果から、NC/Tndマウスは、他の系統マウスよりも、ストレス(室温低下)で養育放棄・食殺行動が誘発されやすいことがわかった。さらに、抗原に暴露されることによって起こるアレルギー反応が、皮膚症状とは無関係に脳に何らかの変化を与え、その変化が養育放棄・食殺行動の誘発に何らかの影響を与えているのではないかと考えられた。アトピー性皮膚炎モデルNC/Tndマウスは、環境の変化で母親が養育放棄・食殺行動する傾向があり、特に冬季繁殖においてその傾向が強くなる。我々は、この原因は環境温度のわずかな低下に起因すると仮説を立て、軽度低温環境でNC/Tndマウスの母性行動を観察した。軽度低温環境において、養育放棄・食殺を行った母親が著しく増加した。一方、養育を行った母親の養育行動は、積極的かつ優れていた。ところが、適切な養育を受けたはずの子に著しい発育不良と生存率の低下がみられた。今後さらなる解明が必要であるが、NC/Tndマウスは母性行動異常の解明に極めて有用であり、新たな発見を提供してくれるものと考える。本実験で使用するNC/Tndマウスは、我々研究室にて自家繁殖させている。今年度の実験開始を5月に予定していたが、前年度のNC/Tndマウスの育児放棄個体数多く、実験可能な匹数を実験開始予定の5月に準備することができず、実験開始が9月に延期になったことが、予定よりやや進行が遅れている理由としてあげられる。しかし、この実験の遅れはわずかであり、来年度には遅れを取り戻すことは可能である。平成26年度の研究結果を受け、NC/Tndマウスを養育放棄モデルとしての有用性を検証するためには、NC/Tndマウスの養育放棄・食殺行動および母性行動の特性について、さらなる検証が必要であると判断した。そこで、研究推進方策をストレス関連ホルモン等の測定からC57BL/6マウスおよびC3H/HeNマウスとの比較検証へ変更することとした。母性行動異常およびアレルギー性皮膚炎本年度の冬季繁殖実験において、NCマウスとBALBマウスの母性行動を詳細に比較するため、授乳行動・グルーミング・巣作り行動・母性攻撃行動などの観察を行った。さらに、母親マウスの精神的不安状態を比較するため、高架式十字迷路試験などを行った。現在、データの統計学的解析中である。同実験において各個体から24時間蓄尿、血清および脳組織を採取した。これらの組織を用いて、ストレス負荷状態の評価として、コルチコステロン・ACTHおよびカテコルアミンの測定ならびに甲状腺ホルモンの測定を行う。さらに、母性行動において重要な役割を果たすホルモン(エストロゲン・プロゲステロン・プロラクチンおよびオキシトシン)の測定も実施する。寒冷ストレス以外の他のストレスを負荷した場合においても、NCマウスの育児放棄個体数が増加するかどうかの検証を行う。本年度、予備実験として出産時に飼育室の移動を行ったところ、多くのNCマウスの母親が育児放棄をしたことから、飼育室の不定期な移動をストレスとして繁殖実験を行う予定である。次年度使用額である15円で購入可能かつ必要物品がなかったため。本年度は、予定よりやや実験の進捗が遅れたため、マウスの繁殖実験および、行動観察や組織採取が主な実施内容となったため、高価な実験試薬および用具の使用がほとんどなかったため、予定よりも使用額が下回った。
破骨細胞および破歯細胞に及ぼすTIMP(Tissue inhibitor of Metalloprotenase)

TIMPはこのコラゲナーゼをはじめとするマトリックスメタロプロテイナーゼ群に対する特異的インヒビターであり、骨吸収のイニシエーションに関与すると考えられている。本研究の目的は成長因子としての破骨細胞の骨吸収活性に対するTIMPの影響を検討することである。培養ウサギ破骨細胞をウシ骨片上に播種し、培養後に骨片上に形成された吸収窩を測定する実験系を用いて、培地中に含まれるTIMPの影響を検討した。まずFCSに含まれるTIMPを除くために抗TIMP抗体を用いたアフィニティカラムを用いてTIMP-1フリー、TIMP-2フリー培地を精製した。またTIMP-1、-2フリー培地にリコンビナントTIMP-1、リコンビナントTIMP-2を種々の濃度で加えることによる培地の影響を検討した。その結果破骨細胞に骨吸収活性はTIMP-2フリー培地中で優位に低下し、リコンビナントTIMP-2を加えることにより回復した。またTIMP-1フリー培地でも同様の傾向が見られたが、TIMP-2フリー培地よりも影響は少なかった。これらの結果から破骨細胞の骨吸収活性にはTIMP-2が関与する可能性が示唆された。そこでこの破骨細胞の骨吸収活性に対するTIMPの影響が、直接関与するのかあるいは間接的に関与するのかを確認する目的で破骨細胞のTIMPを産生の可能性やTIMPレセプターの存在やそのmRNAの発現性を免疫組織化学、ノザンブロッティングやハイブリダイゼーション法により検討を行っている。抗TIMP抗体を用いた免疫組織染色の結果からは破骨細胞の細胞内に陽性像が認められた。