hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
組織修復・再生における間葉系細胞のダイナミズム：統合型研究

本研究は、腹腔マクロファージ上の5HT3受容体を阻害することで物理的侵襲による平滑筋の炎症反応を抑制し、結果としてイレウスを治療または予防できる可能性をマウスモデルを用いてはじめて明らかにした(Maehara et al., Br J Pharmacol)。2NOS阻害剤の抗炎症作用:Interstitial cells of Cajal(ICC)は、消化管のペースメーカー機能を担う間葉系細胞であるが、筋層炎症によるこの細胞の障害が、術後イレウスに関与する可能性が予測できる。Ex vivoの系でIFN-γとLPS処置によりICCのペースメーカー機能は著しく抑止されたが、iNOS阻害剤である1400Wの処置はこのICC機能障害を有意に改善した。さらに抗酸化剤であるアポシニンもICC機能を有意に改善した。この成績は、ICCのTh1型炎症によるペースメーカー機能障害はNOを介した酸化ストレスにより発生することを示唆しており、治療薬・予防薬の候補として期待できると考えられる。(Kaji et al., Pharmacological Res投稿中)2015年に公表した論文リストは以下の通りである。いずれも定評ある学術誌であり、順調に進展しているものと考えている。なお、2015年のインパクトファクターの合計は34.349であった。中間評価コメントで、疾病治療を意識した研究に進展すべきという指摘を受けたことから、これを意識しつつ研究を継続した。論文発表に至った主な業績を以下に記す。1カハール介在細胞は消化管運動のペースメーカーを担う細胞であり、炎症病態時の運動機能低下にその変化がどのように関わるかかについての研究は重要である。本研究では、腸管微小クラスター標本を用い、機能低下の分子メカニズム(IFNgとLPSによる誘導型NO産生酵素iNOSの発現)を解明した。(Pharmacol Res. 2016 111:838-848)(IF:4.816)2IL-33は不明な点の多い新規炎症性サイトカインである。消化管炎症における役割について、上皮細胞における産生能に焦点をあて研究を行った。上皮細胞が炎症時にIL-33を産生すること、EMT変換に伴い分泌されるEGFがそのメディエーターであること、EGF受容体であるST2の発現も上昇させること等を明らかにした。(Br J Pharmacol. 2016 173(16):2532-2542)(IF:5.259).3腎線維化に伴うバイオマーカー研究として、今話題となっているエクソソームに着目して虚血再潅流腎障害モデルを用い検討し、尿中エクソソームに排出される水チャネル(aquaporin1,2)の有用性を明らかにした。(Nephrology Dialysis Transplantation, 2016, 31, 1623-1632, IF:4.085; Am J Physiol, 2017,印刷中, IF:3.611)4繰越し申請の理由とした脱リン酸化阻害因子CPI-17の機能研究についても、2報の論文を公表出来た。(FASEB J. 2018 32(4):2095-2109, IF:5.498; JVet Med Sci,IF:0.845)実質臓器に起こる線維化を治療する薬物は皆無と言ってよく、他の慢性疾患に比べて基礎研究も少ない。これまでの線維化研究は免疫反応とコラーゲン産生が中心であったが、本研究は、炎症・線維化反応に伴って筋線維芽
振動分光によるカルシウム結合タンパク質の構造活性相関の解明

本研究では、Ca2+結合タンパク質のCa2+配位構造と機能の相関について振動分光学的アプローチが有用であることを示した。EFハンドモチーフの合成ペプチドアナログに特異的に13Cラベル体を導入できれば、同位体シフトにより他のグルタミン酸と区別することも可能であることをトロポニンCサイトIIIの合成ペプチドアナログを用いて明らかにした。さらにCa2+結合ドメインの凝集がCa2+結合に与える影響について、タバコカルモジュリンの各結合部位やパルブアルブミンのCDサイト、EFサイト等に焦点を当てて、ペプチドの中には凝集によるCa2+結合能の低下が示唆されるものがあった。本研究では、Ca結合タンパク質ならびにそのCa結合部位の合成ペプチドアナログを用いて、赤外・ラマン分光測定によるカルボシキレート伸縮振動モード解析を行うことにより、金属イオン配位構造と振動スペクトルとの相関を解明することを目的にしている。平成26年度はカルモジュリン、カリウムチャネル、プラスティンの3つのテーマに絞って、Ca結合部位の配位構造解析を行った。(1)タバコ由来のカルモジュリンには3種類のアイソフォーム(NtCaM1, NtCaM3, NtCaM13)が存在し、正常のタバコの葉はNtCaM3を含んでいるが、傷を受けるとNtCaM1やNtCaM13が蓄積されることが知られている。これらのアイソフォームのCa結合ドメイン(Site IIV)に相当するペプチドアナログをそれぞれ合成して、赤外分光法によるCa配位構造解析を行った。ペプチド凝集により金属配位構造形成を阻害される場合が生じたので、合成ペプチドアナログによるアプローチの問題点を見出した。(2)NtTPK1はタバコ細胞の液胞膜に存在するTPK型カリウムチャネルである。NtTPK1のCa結合ドメインを含む85残基のタンパク質(NtTPK1-C)に焦点を当てて、赤外分光法による配位構造の解析を試みた。その結果、Ca結合部位12位のグルタミン側鎖カルボシキレート基はCaイオンと二座配位型で結合することが示された。(3)プラスティンは、N末端領域に2つのEFハンドモチーフを持つタンパク質である。T型およびL型プラスティンのN末端領域のEFハンドモチーフについて赤外分光法を用いてCa配位構造解析を行った。その結果、それぞれのプラスティンにおいてグルタミン酸側鎖のカルボシキレート基がCaイオンと二座配位型で結合することが確認された。L型プラスティンはEFハンドモチーフの合成ペプチドアナログのスペクトルに基づいて解釈できることが分かった。これらのアイソフォームのCa結合ドメイン(Site IIV)に相当するペプチドアナログをそれぞれ合成して、赤外分光法によるCa配位構造解析を行ったが、一部のペプチドで凝集により金属配位構造形成を阻害される場合が生じた。そのペプチドについて、一部のアミノ酸を置換することにより、金属配位構造形成に関する情報が得られた。(2)ノンラベル体のペプチドアナログでは、グルタミン酸、アスパラギン酸側鎖COO-基のCOO-逆対称伸縮振動は、Ca2+フリー状態ではそれぞれ1566 cm-1と1585 cm-1付近にバンドが現れる。13Cでラベルすれば、COO-逆対称伸縮振動は約40cm-1に低波数シフトするので、導入したアミノ酸だけの情報が期待できる。トロポニンC、パルブアルブミン、プラスティンのカルシウム結合サイトのモデルペプチドで13Cラベル体をグルタミン酸側鎖のカルボキシレート基に導入したところ、他のグルタミン酸と区別できることがわかった。二座配位型のバンドはフリー状態に比べて、バンド強度が強くなるとともに、バンド幅が狭くなった。グルタミン酸残基のモデル系について密度汎関数を用いて構造最適化を行い、振動計算を行ったところ、二座配位構造に伴うピーク位置の挙動が計算で説明できることを明らかにした。タンパク質のカルシウム配位構造解析に欠かせない合成ペプチドアナログの赤外スペクトルのデータが一通りそろった状態にあり、分析化学討論会、CABP2015、医用分光学研究会ならびに日本化学会春季年会等で口頭発表を行った。膜タンパク質などの複雑な系のモデルペプチドでは、水に対する溶解度が低いため、液中測定での解析が極めて困難であったが、固体フィルム法を用いることにより、赤外強度を稼ぐことが可能になり、配位構造に関する情報を得ることに成功した。さらに13Cラベル体の合成ペプチドの赤外測定も行われており、カルボキシレート伸縮振動バンド強度ならびにバンド幅に関する新しい知見が得られている。カルシウム結合タンパク質の構造機能相関を解明するために、合成ペプチドアナログの赤外分光によるアプローチに取り組んだ。合成ペプチドアナログの中には、不溶性のもの、凝集を起こすものがあり、本研究の目的である金属イオンの配位構造解析の障害になることが分かった。凝集問題を解決するために、まずEFハンドモチーフの出発点となるパルブアルブミンに着目して、CDサイトとEFサイトに相当するペプチド合成を行った。ドメイン構造はCD、EFいずれも30残基程度である。

実際に赤外スペクトルを解析したところ、CDサイトは予想通りにカルシウム有無によるスペクトル変化が観測されたが、EFサイトは凝集を起こして、カルシウム結合性がなくなった。まずCDサイト、EFサイトそれぞれについて、ループ-ヘリックス部位に相当する17残基ペプチドを合成し、赤外スペクトルを測定したところ、CDサイトでは金属イオンフリー状態では通常のプロファイルを示したが、カルシウム負荷状態で凝集を起こすことが分かった。また、EFサイトは金属イオンフリー状態、カルシウム負荷状態いずれも凝集したままで、カルシウム配位による情報を得ることができなかった。そこで、C端側のヘリックス部位の疎水性アミノ酸残基に凝集の原因があると考えて、アミノ酸を1つ置換したペプチドを合成した。15番目のロイシンもしくはアラニンをリジンに置換したもので、その赤外スペクトルを調べたところ、CDサイト、EFサイトいずれも凝集を起こさず、カルシウム配位構造解析に成功した。ペプチド凝集問題を解決するためには、カルシウムの有無に関係なくペプチド凝集が起こる場合と、カルシウムがペプチド凝集を起こす場合を分けて考える必要がある。現状では凝集問題を回避する統一的な方法は確立されていないが、少なくともアミノ酸鎖長の調節とアミノ酸置換が鍵を握る可能性が高いことが示された。本研究では、Ca2+結合タンパク質のCa2+配位構造と機能の相関について振動分光学的アプローチが有用であることを示した。EFハンドモチーフの合成ペプチドアナログに特異的に13Cラベル体を導入できれば、同位体シフトにより他のグルタミン酸と区別することも可能であることをトロポニンCサイトIIIの合成ペプチドアナログを用いて明らかにした。さらにCa2+結合ドメインの凝集がCa2+結合に与える影響について、タバコカルモジュリンの各結合部位やパルブアルブミンのCDサイト、EFサイト等に焦点を当てて、ペプチドの中には凝集によるCa2+結合能の低下が示唆されるものがあった。カルモジュリン、プラスティンをはじめ、タンパク質のカルシウム配位構造解析に欠かせない合成ペプチドアナログの赤外スペクトルのデータが一通りそろった状態にあり、生体分子科学討論会ならびに日本化学会春季年会等で口頭発表を行った。膜タンパク質などの複雑な系のモデルペプチドでは、水に対する溶解度が低いため、液中測定での解析が極めて困難であったが、固体フィルム法を用いることにより、赤外強度を稼ぐことが可能になり、配位構造に関する情報を得ることに成功した。さらにウサギ骨格筋トロポニンCサイトIIIの合成ペプチドアナログでは13Cラベル体の赤外測定も行われており、カルボキシレート伸縮振動バンドに関する新しい知見が得られている。平成27年度に引き続き、合成ペプチドアナログによる振動分光解析と複雑なタンパク質系の構造活性相関解析を行う。(1)カルボキシレート基と金属イオンの相互作用を理解するために、振動計算(密度半関数法)によるアスパラギン酸残基の計算化学的考察も合わせて行う。
ガベキセート・メシレートを利用した心停止下膵腎同時移植

(目的)分割膵移植、心停止ドナーからの膵腎同時移植の臨床応用を目指し、自己膵、腎の温阻血・再灌流障害に対するFR167653の効果を検討する。(方法)雑種成犬で腎虚血再潅流モデル、膵腎自己移植モデルを作成した。2群(FR投与群、無処置(C)群)に分け、FR群はFR167653:5mg/kg/hrを再潅流1時間前・3時間後まで持続静注した。腎機能、膵機能、腎・膵組織血流(TBF)、IL-1βmRNA、を経時的に測定し、72時間後に病理組織標本、TUNEL染色を行った。(結果)1)FR167653による腎虚血再潅流障害の軽減FR群ではCr, BUNともに上昇が有意に抑えられた(Cr(mg/dl);C群:4.58±0.73,FR群:2.12±0.44)。腎血流はFR群では再潅流3時間後には虚血前のレベルまで改善した(C群(ml/min/100g):12.9±1.7,FR群:17.5±1.4)。組織学的にはC群でFR群の7倍に及ぶTUNEL陽性細胞を認めた。またC群で中等度の尿細管細胞障害を認めたのに対し、FR群ではその程度は軽度であった。2)膵腎自己移植モデルにおけるFR167653の膵腎機能保護効果膵外分泌機能はAmylased(IU/L)がC群:2890,FR群:1950であった。末梢血単核球中OL-1β/GAPDHはC群:0.353±0.045,FR群:0.144±0.023で、膵組織中IL-1β/GAPDHはC群:0.476±0.009,FR群:0.202±0.006であった。病理組織学的にはFR群では、急性尿細管壊死、膵実質の炎症細胞浸潤が軽減されていた。以上、大動物実験モデルにおいて、FR167653が虚血再潅流障害を抑制し、膵腎機能を保護することを示した。以上の結果は日本移植学会、ASTSで発表し、現在英文論文として投稿中である。温疎血腎臓自己移植モデルにおけるガベキセート・メシレートの腎機能保護効果(目的)腎自己移植モデルにおける虚血再潅流障害に対する蛋白分解酵素阻害剤ガベキセート・メシレート(FOY)の効果を検討。(方法)雑種成犬を用いて左腎動静脈を1時間クランプし右腎摘出後に左腸骨に移植した。実験群は2群(FOY群、無処置(C)群各6頭)に分け、FOY群はFOY5mg/kg/hrを再潅流1時間前より3時間後まで持続静注した。腎機能(Cr、BUN)、腎組織血流(TBF)、腎血管抵抗(RI)、末梢血単核球IL-

1βmRNAを経時的に測定した。72時間後、腎組織を採取し組織学的検討を行った。(結語)FOYは腎移植モデルにおいて有意に虚血再灌流傷害を抑制し、腎機能を改善した。以上の結果を第36回日本移植学会プレナリーシンポジウムにて発表した。現在、英文論文として投稿準備中である。温阻血後の膵腎自己移植モデルにおけるガベキセート・メシレートの膵腎機能保護効果(目的)自己膵、腎の温阻血・再潅流障害に対する蛋白分解酵素阻害剤ガベキセート・メシレート(FOY)の効果を検討すること(方法)雑種成犬を用いて膵体尾部を摘出潅流ののち頚部に自己移植、左腎を摘出潅流ののち腸骨窩に自己移植した。実験群は2群(FOY群、無処置群(C)群、各6頭)に分け、FOY群はFOY 5mg/kg/hrを再潅流1時間前より3時間後まで持続静注した。腎機能(Cr, BUN)、膵機能(Amylase, Lipase)、腎・膵組織血流(TBF)、末梢血単核球IL-1b mRM、を経時的に測定し、72時間後に犠牲死させ、病理組織標本、TUNEL染色を行い比較・検討した。(結果)Cr, BUNはFO群において有意に上昇が抑制された(72時間Cr C群:11.25±2.4mg/dl, FOY群:5.19±3.3mg/dl)。腎血流はTBF(C群:0.495±0.016,FOY群:0.411±0.014)でFOY群が良好であった。膵外分泌機能はAmylaseがC群vsFOY群が2890IU/Lvs1950IU/Lであった。末梢血単核球中のIL-1b/GAPDHはC群:0.353土0.045,FOY群:0.144±0.023、膵組織中のIL-1b/GAPDHはC群:0.476±0.009,FOY群:0.202±0.006であった。病理組織学的にはFOY群では、急性尿細管壊死、膵実質の炎症細胞浸潤が軽減されていた。(結語)FOYは膵・腎同時移植モデルにおいて虚血・再潅流障害を抑制し、腎機能・膵機能を改善した。以上の結果は日本移植学会、ASTSで発表し、現在、英文論文として投稿中である。
好熱性水素細菌の嫌気鉄呼吸による生育とその呼吸鎖に関する研究

今までに、pH1.2、80°CにおいてH_2を電子供与体、Fe^<3+>を電子受容体として独立栄養的に嫌気生育するAcidianus manzaensis NA-1株を単離した。本菌は鉄還元微生物として好熱性・好酸性を示す初めての例である。また、呼吸鎖末端酵素である鉄還元酵素Firを精製し、諸性質の解析をおこなった。以下、本年度の研究実績を報告する。(1)ヘム構造解析ピリジンフェロヘモクロム解析から、Firは新規ヘムを含むことが示唆された。そこで、ヘムの構造解析をおこなった。LC-MS/MSにより分子量および側鎖構造を推定した結果、分子量1008.5m/zを示すC_<59>H_4N_4O_7Feであることが示された。本分子量に合致するヘムは報告されておらず、新規ヘムであることが裏付けられた。MS/MS解析によりポルフィリン各側鎖がフラグメントとして検出され、ポルフィリン2位にhydroxyethylgeranylgeranyl基、8位に1,2-hydroxypropyl基を有することが明らかとなった。(2)鉄還元のメカニズムA.manzaensisにおける鉄還元のメカニズムを解明するために、Firの局在性と配向性を解析した。嫌気鉄呼吸により生育した菌体をトリプシン及びV8プロテアーゼにより処理した結果、Firの内部アミノ酸配列に合致する2つの消化断片を得た。各ペプチダーゼ処理後の上清画分には精製FIRと同様な吸収スペクトルが確認された。また、消化後の菌体の鉄還元活性は処理前と比較して約1/3であった。さらに精製したFIRはpH1.5において30-80°Cで安定に存在するが、pH7.0において70°Cでは容易に失活する。以上から、本菌においてFirが菌体膜表面に鉄還元活性中心(ヘム)を位置する形で鉄還元をおこなっていることが示唆された。これまでに、好熱性水素細菌Hydrogenobacter thermophilus TK-6株が嫌気鉄呼吸能を有し、呼吸鎖においてチトクロムc-552が鉄還元酵素として働いていることを示してきた。また、電子受容体である3価鉄を電気化学的に再生することにより、集積培養の10倍以上の高密度培養が可能である電気培養の開発に成功した。以下本年度の研究実績を報告する。(1)TK-6株の嫌気鉄呼吸鎖の解明TK-6株は嫌気鉄呼吸のほかに酸素呼吸によっても生育することが可能である。各呼吸時に発現するチトクロムをヘム分析により比較したところ、嫌気鉄呼吸時にはチトクロムc-552のみ発現するが、酸素呼吸時にはチトクロムc-552以外にチトクロムaも発現していることが明らかとなった。このことから呼吸鎖末端において異なる酵素が働いており、嫌気鉄呼吸鎖は酸素呼吸鎖よりも少ない因子で構成されていることが示唆された。(2)電気培養を利用した鉄還元微生物のスクリーニング電気培養を利用して自然界から鉄還元微生物を取得した。Proteobacteriaに属する6種類の新種の鉄還元細菌が培養された。このうち4種類はunculturebleとされていたものであり、電気培養法はそのような微生物の取得に有効であると考えた。さらに70-80°C、pH1.0において生育する鉄還元古細菌NA-1株を単離した。本菌は新属新種の古細菌であり、水素を有一電子供与体とし、3価鉄を電子受容体として絶対独立栄養的に生育する。(3)好熱性・好酸性古細菌NA-1株の嫌気鉄呼吸鎖に関する生化学的研究NA-1株の鉄呼吸鎖における鉄還元酵素を精製した。分子量65kDaのモノマーであり、スペクトル解析およびヘム解析から新規チトクロムであることが示唆された。さらにN末端アミノ酸20残基において相同性は見られなかった。今後は鉄還元遺伝子を解析する。微生物が有するエネルギー代謝の一つとして、近年嫌気鉄呼吸が発見された。電子受容体として3価鉄を利用する鉄呼吸は硫黄呼吸と並び、進化的に非常に早くに獲得された機能であることが考えられている。しかしながら現在報告されている鉄還元微生物において、酸性・高温環境下という原始環境下で生育するものは発見されていない。これまでに、新規好酸性・超高熱性古細菌NA-1株の分離に成功している。嫌気鉄呼吸により培養したNA-1から嫌気鉄呼吸における電子伝達系末端酵素を精製した。精製には3価鉄還元活性を指標とした。鉄還元酵素は細胞膜画分から精製され、分子量64,200Daのモノマーであり、スペクトル解析及びヘム解析からチトクロムであることが示唆された。さらに、活性中心を担うコファクターであるヘムを抽出・精製し、ピリジンフェロヘモクロムを作製した結果、新規ヘムである可能性が示唆された。現在、確認のためにMS分析及びNMR分析を行っている。また、N末端アミノ酸配列を解析した結果、Sulfolobus acidocaldarius由来のチトクロムb556/562のAサブユニットと60%の相同性を有していたが、各性質の差異から構造は似ていても機能は全く異なっていた。精製した鉄還元酵素のN末端アミノ酸配列からプライマーを作成して鉄還元酵素遺伝子のクローニングを行った。

結果、約1,500b.p.のORFが得られ、その遺伝子配列中に鉄還元酵素内部アミノ酸配列を有する事から鉄還元酵素遺伝子である事が示された。しかしながら、遺伝子からの推定分子量は約50,000Daであり、生化学分析の結果と異なる。N末端側にAspが多く存在している事、酵素量末端が疎水性アミノ酸で構築されている事から考えると、糖鎖付加の可能性が考えられた。今までに、pH1.2、80°CにおいてH_2を電子供与体、Fe^<3+>を電子受容体として独立栄養的に嫌気生育するAcidianus manzaensis NA-1株を単離した。本菌は鉄還元微生物として好熱性・好酸性を示す初めての例である。また、呼吸鎖末端酵素である鉄還元酵素Firを精製し、諸性質の解析をおこなった。以下、本年度の研究実績を報告する。(1)ヘム構造解析ピリジンフェロヘモクロム解析から、Firは新規ヘムを含むことが示唆された。そこで、ヘムの構造解析をおこなった。LC-MS/MSにより分子量および側鎖構造を推定した結果、分子量1008.5m/zを示すC_<59>H_4N_4O_7Feであることが示された。本分子量に合致するヘムは報告されておらず、新規ヘムであることが裏付けられた。MS/MS解析によりポルフィリン各側鎖がフラグメントとして検出され、ポルフィリン2位にhydroxyethylgeranylgeranyl基、8位に1,2-hydroxypropyl基を有することが明らかとなった。(2)鉄還元のメカニズムA.manzaensisにおける鉄還元のメカニズムを解明するために、Firの局在性と配向性を解析した。嫌気鉄呼吸により生育した菌体をトリプシン及びV8プロテアーゼにより処理した結果、Firの内部アミノ酸配列に合致する2つの消化断片を得た。各ペプチダーゼ処理後の上清画分には精製FIRと同様な吸収スペクトルが確認された。また、消化後の菌体の鉄還元活性は処理前と比較して約1/3であった。さらに精製したFIRはpH1.5において30-80°Cで安定に存在するが、pH7.0において70°Cでは容易に失活する。以上から、本菌においてFirが菌体膜表面に鉄還元活性中心(ヘム)を位置する形で鉄還元をおこなっていることが示唆された。
自己免疫性精子形成障害における自己抗原の同定～種を越えた共通抗原の同定～

精子細胞・精子は自身の免疫系により異物として認識されるが、血液-精巣関門によって免疫系から完全に守られていると考えられている。しかし、ヒト特発性精子形成障害の精巣生検では、免疫グロブリン・補体沈着が認められる症例も多く、自己免疫機序が関与している可能性が高い。本研究では、[1]自己免疫性精子形成障害を惹起する自己抗原分子は何なのか?[2]同定された自己抗原分子は種を越えて自己免疫性精子形成障害を引き起こすのか?という自己免疫性精子形成障害発症の機序とその原因分子という疾患の核心に迫る。本研究の結果は、ヒト男性不妊症の「検査法の開発」および「予防法の確立」に大きな進歩をもたらす。
ほふく茎による繁殖を制御する遺伝子の解明

ほふく茎による栄養繁殖は、芝草類・牧草類や園芸作物をはじめ多くの植物に見られる増殖様式として重要だが、その生物学的メカニズムについてはまだ研究が少ない。本研究ではシバ(Zoysia japonica Steud.)のほふく茎による繁殖に優れた品種「朝駆」「朝萌」を主な研究材料として、ほふく茎繁殖に関わる遺伝子を単離・解明することを目的とする。昨年度において、予備調査としてシバのほふく茎の伸長様式を詳細に調査した。密植またはポット植のシバから周辺の裸地へ伸長するほふく茎の節間長を約1週間間隔で測定した結果、シバのほふく茎は第1・2節間で伸長しており、第3節間以降はほとんど伸長を終えていることが明らかになった(ここでは外部から判別可能な最も先端の節群を第1節群とし、第1節群より先端側を第1節間、第1節群第2節群の節間を第2節間、などと呼ぶこととした)。この結果を元に、第1節間(伸長期)と第3節間(静止期)、および直立茎を比較対象として、Differential Display (DD)法により、発現に差のある遺伝子の探索を試みた。また分枝に関わる遺伝子の探索を目的として、節群の組織もDD法の対象に加えた。シバの「朝駆」「朝萌」両品種のほふく茎の先端約3節を採取し、節や直立茎などの部位別に分けて液体窒素凍結後、これらからRNA抽出とcDNA合成を行い、Operon社の10mer RAPDP Primerを用いてDD法を行った。これまでのところ、第1節間(伸長期)や直立茎で特異的なPCR断片が複数ずつ得られており、これらのクローニングを進めている。今後さらに部位特異的なDNA断片の探索を進めるとともに、得られた遺伝子の特定と全長の単離、形質転換などによる機能解析に順次取り組む。本年度はまず予備調査として、シバのほふく茎の伸長様式を詳細に調査した。密植またはポット植のシバから周辺の裸地へ伸長するほふく茎の節間長を約1週間間隔で測定した。この結果、シバのほふく茎は第1・2節間で伸長しており、第3節間以降はほとんど伸長を終えていることを明らかにした(ここでは第1節群より先端側を第1節間と呼ぶ)。このことから第1節間(伸長期)と第3節間(静止期)、および第1節間と直立茎をDD法で比較する対象とすることにした。シバの「朝駆」「朝萌」両品種を圃場で育成し、ほふく茎の先端約3節を採取し、節や直立茎などの部位別に分けて液体窒素凍結した。ここからRNAを抽出し、cDNA合成後、Operon社の10mer RAPD Primerを用いてDifferential Display(DD)法を行った。しかしこれまでのところ、部位特異的で再現性のあるPCR断片はまだ得られていない。今後はPCRの条件検討も含め、DDを反復して特異的なDNA断片を探索するとともに、続いて予定している遺伝子の単離、形質転換などに順次取り組む。
考える力の育成を図る実験の個別化と授業実践ー呈色板によるマイクロスケール実験ー

マイクロスケール実験による個別実験は生徒の「考える力の育成」に有効な方法である。学校現場にマイクロスケール実験を普及させるには,安全かつ安価で、操作性にすぐれた実験器具が必要であり,教員側の課題である準備や後片付けの負担を軽減できる器具が求められる。これらの課題に適した器具として呈色板を使用し,開発した教材を用いて、教員研修や授業実践を行った。生徒は主体的に短時間で実験を行い、以前よりも考える余裕が生まれた。アンケート調査から,呈色板を用いた現在の教材実験は,学校現場に取り入れやすく,また「考える力の育成」につながる主体的な個別実験が可能になることが確認された。研究目的であるマイクロスケール実験を活用した、「考える力の育成を図る実験の個別化と授業実践」に向けて教材開発と授業実践を行い、その成果を学会発表、論文などの執筆をとおして公表することに取り組んできた。特に「考える力の育成」には、実験結果の詳細な観察が重要であり、結果をまとめる技能、発表能力などの表現力の育成も不可欠である。そのため、研究経費で購入したタブレットを各班に配置し、学習者が主体となる授業展開を積極的に実施するため、ホワイトボードやいろいろなICTを活用することで「考える力の育成」につなげる試みを行った。また、実験に一人ひとりが主体的能動的に取り組み、実感できるように個別化すること、授業者が可能な限り短時間に準備と片付けができることを念頭に、器具の小型化、操作の簡略化、器具の扱いやすさ、利便性などを優先した実験器具の開発に重点をおいて、呈色板を用いた教材開発と授業実践を行ってきた。研究成果については、学会発表や論文投稿を行い、学校現場におけるマイクロスケール実験の普及のため、マイクロスケール実験の入門的、解説記事の執筆も行った。また、研究成果の社会還元の一環として、中学生を対象とした「ひらめきときめきサイエンス」を実施した。さらに、地域への貢献として、科学館や科学の祭典等では小学生だけでなく、親子で参加できる実験教室も実施した。多くの方が実験に参加し、科学の楽しさを体験できる活動を行った。H27年度は研究初年度として、おおむね計画通りに遂行していた。「考える力の育成」をはかる実験教材の開発、授業実践の一部、研究成果の公表(論文、著書、学会発表、解説書の執筆等)も、当初の目標に沿ってすすめることができた。本年度においても、研究目的であるマイクロスケール実験を活用した、「考える力の育成を図る実験の個別化と授業実践」に向けて教材開発と授業実践を行い、その成果を学会発表、論文などの執筆をとおして公表することに取り組んできた。そのため、個別実験を可能にする教材開発およびそれらを使った授業実践を行ってきた。昨年度経費で購入したタブレット等のICTの活用も継続して行った。具体的にはタブレットを各班に配置し、学習者が主体となる授業展開を積極的に実施し、「考える力の育成」につなげる試みを行った。また、実験の個別化にあたっては、児童・生徒の一人ひとりが主体的に取り組み、かつ授業者が可能な限り短時間に準備と片付けができるように、器具の小型化、操作の簡略化、器具の扱いやすさなどを優先した実験器具の開発に重点をおいた。具体的には、昨年度から継続して、呈色板を用いた教材開発と授業実践を積極的に行い、本年度は小学校3年理科、中学校3年理科の学習事項に関連して「導通テストキット」の作製を含む教材開発に積極的に取り組んだ。研究成果については、学会発表や論文投稿を行い、学校現場におけるマイクロスケール実験の普及のため、兵庫県加古川市立中学校科学教育推進部会や神戸市立中学校の理科部会などにおいてマイクロスケール実験の入門的、解説記事の執筆も行った。また、研究成果の社会還元の一環として、「ひらめきときめきサイエンス」や科学館での実験教室や、男女共同参画主宰による実験教室など、いろいろな場で考える力を育成する取り組みとして、マイクロスケール実験を紹介し、活動を実施した。H28年度は研究2年目として、計画通りに遂行していた。特に本年度は、開発した実験方法の普及に取り組み、実験の紹介をいろいろな場で行うことができた。また、アンケート集計と分析の方法を検討し、より児童・生徒の実態を把握できるように努力をした。研究期間3年の最終年度として、当初の研究目標に沿った継続的な取り組みとまとめを中心に実施した。特にマイクロスケール実験の特徴を生かした「考える力の育成を図る実験の個別化と授業実践」に向けて教材開発と授業実践を行い、継続的な学会発表、論文などの執筆をとおして公表し,同時に研究のまとめを行った。また新学習指導要領の実施を間近に控え、児童・生徒の一人ひとりが主体的に取り組む活動により深い学びにつながるマイクロスケール実験の活用についても検討した。経費で購入したタブレット等のICTの活用も継続して行った。以上の研究経緯の一環として、継続的なテーマである「電気の通りみち」(小学校3年理科)に関連して「導通テストキット」の作製を含む教材開発と実践に取り組んだ。

特に、児童のもつ金属及び非金属に対する誤概念の調査と分析を行い、誤概念の原因や学習上の問題点について考察し、その成果を学会発表、学会誌に公表した。また、マイクロスケール実験の普及と、児童・生徒の科学リテラシー向上のため、通常授業における実践だけでなく、地域における実験教室等にも積極的に参加するなど社会的な活動も並行して行った。一方で、継続的に行っていた電気分解実験の教材開発と授業実践も行った。呈色板を用いたより安価で安全な教材の開発の一環として、その成果を公表することもできた。1年間における主な研究成果は、論文等による公表が2件、日本理科教育学会における発表が3件、著書(共著)が1件、実験教室等における活動が5件である。マイクロスケール実験による個別実験は生徒の「考える力の育成」に有効な方法である。学校現場にマイクロスケール実験を普及させるには,安全かつ安価で、操作性にすぐれた実験器具が必要であり,教員側の課題である準備や後片付けの負担を軽減できる器具が求められる。これらの課題に適した器具として呈色板を使用し,開発した教材を用いて、教員研修や授業実践を行った。生徒は主体的に短時間で実験を行い、以前よりも考える余裕が生まれた。アンケート調査から,呈色板を用いた現在の教材実験は,学校現場に取り入れやすく,また「考える力の育成」につながる主体的な個別実験が可能になることが確認された。次年度(H28年度)は、研究期間の中期として、特に授業実践の機会を増やし、開発した教材や考える力を培う授業方法についてさらに改善し、検討していく予定である。授業実践においては、当初の計画であったICTを活用した授業展開を積極的に推進する予定である。マイクロスケール実験にICTを活用して、アクティブラーニングの手法も取り入れながら、「考える力の育成」につながる授業を開発し、研究目的への達成度をあげ、次々年度の研究成果のまとめにつなげたい。また「ひらめきときめきサイエンス」や科学館等での実験教室も積極的に取り組み、研究成果の社会還元として、科学の楽しさを伝える活動も継続したい。次年度(H29年度)は、研究期間の最終年度として、特に授業実践の機会を増やし、アンケート調査と分析に取り組む予定である。開発した教材や考える力を培う授業方法についてもさらに改善し、検討していく予定である。授業実践においては、児童・生徒の持つ科学的な概念が、個別実験によってどのように変容していくかに注目して授業実践に取り組む。さらにマイクロスケール実験にICTを活用したアクティブラーニングの手法も取り入れながら、「考える力の育成」につながる授業を開発し、研究目的への達成度をあげ、最終年度としての研究成果のまとめにつなげたい。また、授業実践だけでなく科学館等での実験教室も積極的に取り組み、研究成果の社会還元も図りたい。科学教育本年度、使用金額が少なかった理由は、器具の購入が少なかったためである。研究中の呈色板を用いた教材開発は昨年度よりスタートさせていたため、材料のストックがあったことと、予想していたよりも順調に開発が進み、試行段階に使用する器具が少なく済んだことが大きな理由として、挙げられる。次に検討すべき理由は、協力者による実践が進まず、器具の使用量が増大しなかったことである。
TIMによるマスト細胞の活性化機構の解析

Timファミリー分子「Tim-3」に対する刺激抗体は、Tim-3を発現するマスト細胞の活性化を誘導する。本研究ではTim-3結合分子「ガレクチン9(Gal-9)」がTim-3刺激抗体と同様にマスト細胞の活性化を促進するのか評価を行った。その結果、Gal-9は野生型マウスのマスト細胞だけでなく、Tim-3欠損マウスのマスト細胞の活性化も誘導した。したがって、Gal-9によるマスト細胞の活性化はTim-3非依存的な新規の機構によることが初めて明らかになった。マスト細胞で発現するT cell immunoglobulin mucin (TIM)の役割を細胞-分子-個体レベルで明らかにすることを目的とし、本年度は、TIM-3のリガンドであるGalection-9をマスト細胞に作用させ、その影響(脱顆粒、サイトカイン産生、生存率)を評価した。Galectin-9は、TIM-3を発現するTh1細胞に対してアポトーシスを誘導することが知られているが、マウスマスト細胞ではアポトーシスを誘導せず、マウスマスト細胞の生存率には影響を与えないことが明らかになった。Galectin-9単独では、ヒトおよびマウスマスト細胞の脱顆粒(β-hexosaminidase分泌活性定量法)を誘導しないが、PMA/Ionomycin刺激、あるいは、IgE受容体の架橋刺激によるマウスマスト細胞の脱顆粒を阻害することが明らかになった。また、Galectin-9は、ヒトおよびマウスマスト細胞に直接作用してサイトカイン産生を誘導することはできないが、LPSやIL-33によるマウスマスト細胞のサイトカイン(IL-6,IL-13およびTNF)産生を増強する働きがあることが明らかになった。したがって、Galectin-9は、TIM-3を介してマスト細胞の脱顆粒を抑制することにより、IgE依存的なアレルギー応答を抑制する可能性を持つ一方、LPSやIL-33依存的な免疫応答(例えば、感染症など)においてはサイトカイン産生を増強させることにより、炎症を促進させる作用を持つことが示唆された。マスト細胞で発現するT cell immunoglobulin mucin(TIM)の役割を細胞-分子-個体レベルで明らかにすることを目的とし、本年度は、TIM-3のリガンドであるGalection-9をマスト細胞に作用させ、その影響(脱顆粒、サイトカイン産生、生存率)を評価した。Galectin-9単独では、ヒトおよびマウスマスト細胞の脱顆粒(β-hexosaminidase分泌活性定量法)を誘導しないが、PMA/Ionomycin刺激、あるいは、IgE受容体の架橋によるマウスマスト細胞の脱顆粒を阻害することが明らかになった。高濃度のGalectin-9はマウスマスト細胞からサイトカイン産生を直接誘導できることが明らかになった。また、この作用は、市販の抗マウスTIM-3抗体を添加し、Galectin-9とマスト細胞上のTIM-3の相互作用の阻害条件下でも観察され、Galectin-9によるマスト細胞の活性化は、TIM-3を介さない分子機構で担われていることが示唆された。この抗体による結果をTIM-3欠損マウスのマスト細胞を用いて再現性の確認を行うために、TIM-3欠損マウスを入手した。マスト細胞で発現するT cell immunoglobulin mucin(TIM)の役割を細胞-分子-個体レベルで明らかにすることを目的とし、本年度は、Tim-3欠損マウスから骨髄由来培養マスト細胞(BMCMC)を作成し、Gal-9刺激によるマスト細胞の活性化を検討した。昨年度までの成果で、Gal-9によるBMCMCのサイトカイン産生はTim-3-Igによって抑制されたが、抗Tim-3阻害抗体によるTim-3阻害では抑制されず、Gal-9はTim-3非依存的にマスト細胞からサイトカイン産生を誘導していることが示唆されていた。今年度はTim-3欠損マウスのBMCMCを使用し検討した。Tim-3欠損マウスのBMCMCにおいても、Gal-9刺激後のサイトカイン産生量は野生型マウスのBMCMCと同程度であった。したがって、Gal-9は、Tim-3以外の分子を介してマスト細胞からのサイトカイン産生を誘導していることが明らかになった。また、その活性化機構の解析として、細胞内シグナル経路も検討した。BMCMCをGal-9で刺激後、MAPKp38のリン酸化が誘導された。BMCMCをMAPKp38リン酸化阻害剤の存在下で、Gal-9を添加して培養を行った場合、阻害剤の非存在下の培養条件と比較して、培養上清中のIL-6およびIL-13の産生量が低下していた。したがって、Gal-9がBMCMCの細胞膜上のTim-3以外の分子に結合した後、細胞内のMAPKp38経路を介してサイトカイン産生を誘導していることが示唆された。

当初の計画していた3つの研究項目中で1項目は研究終了し、残り2項目は追加研究中であるため。本研究を応募時点の研究計画のうち6割型の研究は終了しており、残り1年で残りの研究が終了できる予定である。研究を遂行する上での問題点はない。
描画材作りを通した色と豊かに関わる教材の開発

本研究では、美術に触れる機会の提供として体験型のアウトリーチ活動に取り組むため、大学教員と学芸員が連携した色と豊かに関わる教材の開発を目的とする。大学と美術館の二機関の連携による相乗効果を目指しながら、次の三つの観点から教材の開発に取り組む。一つ目は、教材に適した色の素材を身近な自然物から選定すること。二つ目は、色と豊かに関わるための描画材づくりの方法と内容を構築すること。三つ目に、開発した教材の実践と検証に取り組むことである。美術の特色である色との関わりに重点を置いて、美術館の活用、大学開放事業、小・中学校への出前授業といった多方面・多年齢層へのアウトリーチ活動により研究を進める。
計画的人工透析と透析時間の短縮に用いられる人工透析患者監視装置に関する研究

(1)限外濾過セルに関する研究:昨年までの濾過セルの構造を変え、2個の円形のプラスチックプレ-ト(直径約8.5cm)のspiral channelの巻数を同じ面積内で増やし、且つ血液側および濾液側の溝の形状を、溝の幅2mm、深さ2mmのU字形に削り、表面を平滑にした。この改造により血液流路と濾液流路の面積を広げることが可能となった。その結果、濾過効率を上げることが可能となった。(2)吸引マイクロポンプの検討:中央理化社のマイクロポンプから東亜電波社のロ-リングポンプに切り換わり、濾液の滞留量が多く、濾液を速やかに計測装置に送る障害となっていた点が解決した。吸引マイクロポンプの改良が不要となった。(3)これらのシステムを使用したinvitro及びinvivoの実験:濾過セルを改良することにより濾液採取量が0.3ml1.0ml/minとなる。電解質(Na,K,Cl)とBUNを測定するのに東亜電波社のNAKL-2およびBUN測定装置BUN-1を使用すれば、必要サンプル量の0.26ml/minを十分維持できる。濾液を、これらの装置に連続して送ることにより、人工透析のinvitroの実験でも、慢性腎不全患者の人工透析治療時でも、電解質(Na,K,Cl)とBUNは連続して測定することが可能となった。Na,K,ClおよびBUNは最初、ダイアライザ-と血液回路内の生食のプライミングによって一定値に達するまで時間が必要となる。一定になった時点で人工透析と濾液の採取が開始される。invitroでは各soluteは急激に低下し、約3040分で一定値に達する。invivoではBUNの濃度の低下と電解質の濃度の低下は、その様子が異なる。老廃物の除去は3時間内に低下させ、電解質は血液と透析液間の差小さい。電解質の動きを少なくしている。この患者監視装置を透析中に使用することにより、血中の老廃物の除去の状態や電解質(Na,K,Cl)の血液中からの動きを知り、計画透析が行える。アルカリ水溶液中でインド-ルとクロロホルムを反応させ,インド-ルー3ーアルデヒドを合成する反応において、βーシクロデキストリンを添加してインド-ルおよびクロロホルムと分子錯体を形成させることにより,3ークロロキノリンの副生を抑制し,インド-ルー3ーアルデヒドの収率を高め,また,クロロホルムの反応効率を高めることを目的とした.アルカリ濃度,クロロホルムの添加方法,βーシクロデキストリン濃度,反応温度などのインド-ルー3ーアルデヒドの収率および選択率への効果を調べた.クロロホルムの添加法は,反応開始時に全量を添加する“初期添加法"および反応進行に伴いクロロホルムを逐次添加する“連続添加法"について検討した.60°C,10時間の反応において,初期添加法では,インド-ルー3ーアルデヒドの収率が8.7mol%であったが,これにβーシクロデキストリンを添加すると収率が16.2mol%に増加した.連続添加法では収率がさらに向上し21.9%に達した.反応に最適なアルカル濃度を見出し,反応過程で水酸化ナトリウム水溶液を滴下補給して,最適アルカリ濃度を保つことにより,インド-ルー3ーアルデヒドを収率45.8mol%,選択率82.0%で合成することに成功した.クロロホルムと水酸化ナトリウムの反応により生じるジクロロカルベンは水酸イオンおよび水と反応して消費されるが,βーシクロデキストリンはクロロホルムと分分錯体を形成して,この副反応を抑制しており,その効果は40°Cで最大となることがわかった.また,βーシクロデキストリンはクロロホルムおよびインド-ルと分子錯体を形成することにより,アルカリ水溶液の対するクロロホルムおよびインド-ルの溶解度を高めて反応を促進しており,また,3ークロロキノリンの生成を抑制することが見出された.(1)限外濾過セルに関する研究:昨年までの濾過セルの構造を変え、2個の円形のプラスチックプレ-ト(直径約8.5cm)のspiral channelの巻数を同じ面積内で増やし、且つ血液側および濾液側の溝の形状を、溝の幅2mm、深さ2mmのU字形に削り、表面を平滑にした。

invivoではBUNの濃度の低下と電解質の濃度の低下は、その様子が異なる。老廃物の除去は3時間内に低下させ、電解質は血液と透析液間の差小さい。電解質の動きを少なくしている。この患者監視装置を透析中に使用することにより、血中の老廃物の除去の状態や電解質(Na,K,Cl)の血液中からの動きを知り、計画透析が行える。βーシクロデキストリング触媒として、インド-ルをアルカリ水溶液中でクロロホルムと反応させ、得られた生成物を分析して、インド-ルー3ーアルデヒドと3ークロロキノリンの収率を求めた。アルカリ濃度、クロロホルムの添加方法、βーシクロデキストリン濃度、反応温度などのインド-ルー3ーアルデヒドの収率および選択率への効果を調べた。クロロホルムの添加法は、反応開始時に全量を添加する“初期添加法"および反応進行に伴いクロロホルムを逐次添加する“連続添加法"について検討した。2.6Nー水酸化ナトリウムを用いて両法によるインド-ルー3ーアルデヒドの収率を比較したところ、初期添加法では12.2mol%(選択率76.3%)であるのに対し、連続添加法では21.1mol%(選択率77.9%)であった。次にアルカリ濃度の収率への影響を調べるために、初期添加法により、2.6Nと5.8Nの場合を比較したところ、2.6Nでは収率12.2mol%(選択率76.3%)、5.8Nでは収率5.4mol%(選択率42.2%)であった。さらに低いアルカリ濃度では1.11.4Nの範囲で最も効率よくインド-ルー3ーアルデヒドが合成できることを見いだした。以上の結果より、反応温度60°Cで、連続添加法によりクロロホルムを加え、反応溶液中の水酸化ナトリウム濃度を1.11.4Nに保つように水酸化ナトリウム水溶液を滴下補給することにより、インド-ルー3ーアルデヒドを収率45.8mol%(選択率82.0%)で合成することに成功した。また、αーシクロデキストリンを添加するとインド-ルー3ーアルデヒドの選択性が94.1%に向上することを見出した。しかし、反応中のクロロホルム消費経路を詳細に検討した結果、クロロホルムの反応中間体は目的の反応(インド-ルー3ーアルデヒドと3ークロロキノリンの生成)以外に、水や水酸イオンと反応し、必ずしも効率よく消費されていないことがわかった。今後はこの反応中間体の水や水酸イオンとの反応を抑制する条件を見出す必要がある。さらに、クロロホルムの反応性を生じる塩化ナトリウムに抑制されている可能性のあることを見出した。アルカリ水溶液中でインド-ルとクロロホルムを反応させ,インド-ルー3ーアルデヒドを合成する反応において,βーシクロデキストリンを添加してインド-ルと分子錯体を形成させることにより,3ークロロキノリンの副生を抑制し,インド-ルー3ーアルデヒドの収率を高めることに成功しているが,クロロホルムから生じるジクロロカルベンが水酸イオンおよび水と反応して消費されるため,クロロホルムの利用効率が低いことがわかった.この対策として,βーシクロデキストリンとクロロホルムの分子錯体を形成させ,クロロホルムを保護することにより反応効率の向上をはかった.反応温度を低くすると,ジクロロカルベンの生成速度が小さくなるが,βーシクロデキストリンとインド-ルおよびクロロホルムの分子錯体の形成は促進され,βーシクロデキストリンによるクロロホルムの保護効果は40°Cで最大となることを見出した.
17-19世紀南米ラプラタ地域イエズス会布教区の住民名簿に関する歴史人類学的研究

本研究では、1609年から1768年にかけてのスペイン統治時代の南米ラプラタ地域(現在のパラグアイ南東部、アルゼンチン北東部、ブラジル南部、ウルグアイからなる領域)でイエズス会士が運営した、総数30の布教区と呼ばれた居住地の住民名簿の通時的な分析を行った。本研究が主たる分析対象としたのが布教区住民名簿であり、名簿は1656年から1801年にかけての特定時期にスペイン人官吏が布教区を巡察した際に作成された。その数はおよそ250、30箇所の布教区すべてを網羅している。名簿の分析を通じて、イエズス会士が約160年にわたり実践したキリスト教布教政策が先住民に与えた社会文化的インパクトを解明できた。本年度はスペイン、セビリアにおいて在外研究の年に相当した。この機会を利用して、主として、インディアス文書館(セビリア)、スペイン国立図書館(マドリード)、フランス国立図書館(パリ)、イベロアメリカ研究所(ベルリン)において、史料ならびに文献調査を実施した。インディアス文書館には、アルゼンチン、ブエノスアイレスの国立文書館が所蔵するイエズス会グアラニ布教区住民名簿の欠損部分(特に18世紀前半)が収められており、この在外研究期間中に、アルゼンチンの史料の不足分を補うことができた。また、その他の機関においては、住民名簿の分析を補完する諸文献、具体的には、グアラニ先住民の在来の首長制度についてイエズス会宣教師が17世紀前半に言及した史料や、17世紀後半に軍事役職に就いていたグアラニに言及した、19世紀中葉の刊行史料を入手することができた。本年度は先行研究を通じて把握できていたブラジル、リオグランデドスル州の歴史文書館が所蔵するグアラニ先住民名簿の調査・分析に研究の主眼を置いた。これは18世紀中葉のグアラニ戦争時に強制・自発双方の理由でブラジルに移ったグアラニがポルトガル人の指導のもとで建設した居住地の住民に関する名簿で、彼らの氏名や年齢を記されている。スペイン領アメリカでイエズス会士が設立・運営したレドゥクシオンと呼ばれる先住民布教区では、個々のグアラニは、氏名や年齢に加えて、カシカスゴと呼ばれる先住民首長が統括する社会組織の一員として名簿に登録されていた。つまり全ての住民はいずれのカシカスゴに所属していたのか、名簿を見ればひと目でわかる仕組みになっていた。こうした名簿のフォーマットはすべてのレドゥクシオンで踏襲され、これがおよそ150年続いていた。これに対して、リオグランデドスル州歴史文書館が有する名簿にはカシカスゴに関する記述は存在せず、またほとんどのグアラニの氏名はポルトガル風に変更されて記載された。名簿上のこうした異なる特徴は、おそらくスペインとポルトガル双方の植民地政策の根幹の違いを示唆するのだろう。前者では先住民の在来の慣習、制度、社会組織等の中でも、植民地体制の維持と補完に役立つとみなされた要素は巧みに活用されていた。この事実は、J. Rappaport and T. Cummins, Beyond the Lettered City (Durham, 2012); J. R. Mumford, Vertical Empire (Durham, 2012)により近年明らかにされた。これに対してポルトガル領ブラジルではいかなる方針のもとで先住民の統治が実践されていたのか、18世紀中葉・後半のポンバル侯爵の植民地政策を視野に入れながら、今後さらに研究を進めていく方針である。本年度は本科研の最終年度であり、論文の執筆に力点をおき、2本のスペイン語論文をまとめた。1本目は「イエズス会グアラニ布教区における集住政策の社会文化的作用」(Efectos socioculturales de lapolitica dereduccion en las misiones jesuitico-guaranies)である。ペルー・カトリック大学より2016年度中に出版予定である。本稿では、布教区編入以前のグアラニの在来の社会組織とカシカスゴとの関連をまず論じた。(1)編入以前のカシケの支配権は、家、村、領域など、様々なレベルに及んでいた。しかし編入以後、その支配権は家に限定され、このレベルの人的まとまりがイエズス会士によりカシカスゴと同定された。(2)次に、複数のカシカスゴがまとまってバリオと呼ばれる居住区域が布教区内に存在したことを指摘した。2本目は、「グアラニ先住民名簿(1656-1801)」(Los padrones de indios guaranies (1656-1801))である。現在アルゼンチンの学術雑誌『スルアンディーノ・モノグラフィコ』(Surandino Monografico)編集委員会が査読中である。本稿では、主にコンセプシオン布教区住民名簿の分析結果をもとに、(1)住民名簿におけるカシカスゴの登場順序がそれぞれの社会的威信の高さを視覚的に表していたこと、(2)コンセプシオンの元住民を主体に17世紀後半に新設された布教区サン・フアンでは、元々コンセプシオンに存在していた一つのカシカスゴがサン・フアンに移る際に複数に分裂して定着したこと、(3)カシカスゴの社会的威信は布教区内での所属バリオに対応していたが、下位バリオに属するカシカスゴから布教区内での重職に相当する軍事役職に就くグアラニが輩出されていたことが珍しくなく、この事実は、カシカスゴ同士の権力バランスを保とうとするイエズス会士の政策の表れである可能性を指摘した。