hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
協創的構造設計法による新しい設計支援システム

本研究は、構造設計のさまざまな場面(フェーズ)における構造設計者の意思決定を真の意味で支援し、構造設計される架構のいっそうの高性能化をはかるための「協創的構造設計法」を構築することを最終目的としている。構造設計者が構造計画時にどのようなことを考えているのかという思考についての調査を行い、調査結果から構造計画時の思考の傾向を見つけることができた。本調査結果を元に、設計者の意思決定が必要となるさまざまな場面において、設計支援システムがその都度、設計者に対して種々の有用な情報を提供し、あたかもアドバイザのように振る舞うことができるようになり得る。建築構造物の構造設計において、構造計画・構造解析・構造計算・断面算定など、多くのフェーズにおいて構造設計者の意志決定がなされる。この構造設計者の意志決定プロセスの分析では、構造設計者の意志決定プロセスの分析を行い、構造設計者の意志決定の方式を明らかにするため、複数の構造設計事務所に所属する構造設計者に対して構造設計時に自らが意志決定している事項に対するプロセスに対するアンケートを実施することは不可欠であると考えている。前年度、ある構造設計事務所に所属する構造設計者に対して、アンケートのための準備作業を進めた。今年度はその項目選定について検討した。構造設計の流れは一般には次のようになる。まずは、構造計画を実施する。構造計画においては構造種別(RC造やS造等)、架構形式(ラーメン構造、ブレース構造等)の決定の他、柱や梁の設置位置、基礎形式、設計クライテリアの設定等をおこなう。次に、構造計算を実施するための設計荷重算定を行う。その後、2次部材の設計を行い、上部構造の柱・大梁等の主部材の部材設計を実施する。この部材設計のために一般には構造計算一貫プログラムが用いられることになる。上部構造の設計後、基礎の設計を実施する。計算ルートにもよるが、必要に応じて保有水平耐力の検討を実施する。構造図作成のための構造設計は上記の手順による。特に構造計画においては、構造種別の選定や柱位置の決定といった事項は、構造設計者のみで決定することは難しく、意匠設計者とも綿密な打合せが必要であり、構造設計者の意志決定がなされる重要な部分である。逆に、設計荷重算定後は設計クライテリアを満足する部材設計は、かなりの部分において構造設計一貫プログラムにまかせてよい。現在の建築構造設計の一般的かつほぼ唯一の方法は,構造設計者による構造計画と断面決定の後に,構造計算プログラムによってその構造計画と断面を有する架構が各種法規で要求される性能を満たしているかどうかを検定し,満足していない場合には,構造設計者の経験と技術に基づいて,断面を(場合によっては構造計画も)変更する,という過程の繰り返しであるといえる。これに対して本研究は,構造設計のさまざまな場面(フェーズ)における構造設計者の意思決定を真の意味で支援し,構造設計される架構のいっそうの高性能化をはかるための「協創的構造設計法」を構築することを最終目的としている。ここで「協創」とは,構造設計者(人)と設計支援システム(計算機)が「協力して創生する」ことを意味している。「協創的構造設計法」と上記の一般的構造設計法の根本的な相違は,一般的構造設計法においては,構造計算プログラムは,単に構造設計者によって決定された架構の性能検定をしているに過ぎないのに対し,協創的構造設計法においては,設計者の意思決定が必要となるさまざまな場面において,設計支援システムがその都度,設計者に対して種々の有用な情報を提供し,あたかもアドバイザのように振る舞う,という点にある。平成24年度には,構造設計事務所に所属する構造設計者に対して,構造設計時に自らが意志決定している事項に対するプロセスに対するアンケートを実施し,回答してもらうためのアンケート項目およびその方法について,大阪市内の構造設計事務所において打ち合わせを実施した。建築物の構造設計は構造計画と構造計算に分けることができる。現在、構造計算の部分はコンピュータを用いて、柱と梁の仮定断面が建築基準法に適合するかを検討する製品版のソフトや建築基準法に適合する柱と梁の仮定断面を探索するプログラムもある。対して、構造計画は構造設計者が考え判断を行っている部分である。協創的構造設計法とは人と計算機が協力して創生することでより良い性能とコストについて判断することを目指すことである。本研究での実績は、以下の2点である。第一は、構造設計者が構造計画時にどのようなことを考えているのかという思考についての調査を行い、調査結果から構造計画時の思考の傾向を見つけたことである。本調査では鋼構造建物の柱梁接合部、柱絞り部、柱脚部に対する好きな納まりについての質問項目を作成した。思考調査の対象者は一般社団法人日本建築構造技術者協会関西支部に所属する構造設計者と一般社団法人関西建築構造設計事務所協会に所属する構造設計者である。

第二は、思考調査の結果を用いて鋼構造建物の接合部と柱脚部の条件を変え、最小重量設計を行った解を比較し、最小重量設計解の傾向を見つけたことである。モデルは思考調査で用いた鋼構造建築物である。柱梁接合部、柱絞り部、柱脚部に対する思考調査の回答結果より、8つのケースを作成し、最小重量設計解を求めた。本調査結果より、最小重量設計解はどのケースも構造設計者が予測した値よりも鋼材重量が少ないことがわかった。最小重量設計解を構造設計者に示唆ことは有益であると考えられる。構造設計者の好きな接合部と柱脚部の納まり傾向は、梁段差あり、柱絞りあり、回転バネであった。構造設計者は性能とコスト以外にも考慮している部分がある。建築構造学今年度は関西建築構造設計事務所協会に所属する会員をアンケート対象として、構造設計者に対して構造設計時に自らが意志決定している事項に対するプロセスのアンケートを実施する予定であったが、より効果的なアンケートとなるべく項目選定のところまでの達成度となっているため。複数の構造設計事務所に所属する構造設計者に対して,構造設計時に自らが意志決定している事項に対するプロセスに対するアンケートを実施し,回答してもらう予定としていた。その結果を分析することにより,構造設計者が「如何に考え」「どのように判断し」「結果として構造設計をまとめているか」を総合的に分析することとしており,効果的な結果を得るためには,実施するアンケートが重要であると考えていた。そのため,実施に先立ち,アンケート内容に対するヒアリングを社団法人日本建築構造技術者協会に申し入れる予定としていた。この協会は,構造設計を業とする設計者の集団であり,日本における構造設計の概要を把握するには有効であると判断していたが,構造設計事務所におけるヒアリングによると,一般社団法人関西建築構造設計事務所協会の会員もアンケート対象とする方針とすることとした。実施アンケートの詳細については,引き続き検討し,構造設計事務所の方々とやり取りをしながら詰めていくこととしたため。構造設計者の意志決定プロセスを体系化した後、それらの事項をまとめ、実務設計者が「使える」ツールのための情報を整理する。建築構造物の構造設計結果を次のより良い設計へとフィードバックするには、画一的な最適解ではなく、望ましい設計解を設計者に提示することにより、意志決定の判断材料としてもらうことを前提として本年度の研究を推進することとする。構造設計事務所での打合せ内容に基づき,アンケート項目およびその内容を精査する。アンケート対象は,社団法人日本建築構造技術者協会の会員および一般社団法人関西建築構造設計事務所協会の会員とする。建築構造物の構造設計において,構造計画・構造解析・構造計算・断面算定など,多くのフェーズにおいて構造設計者の意志決定がなされる。この構造設計者の意志決定プロセスの分析では,構造設計者の意志決定プロセスの分析を行い,構造設計者の意志決定の方式を明らかにすることとする。プレゼンテーション用ノート型ワークステーション非線形動的応答解析用プログラム(リース)情報工学関連書籍調査・研究,研究打合せ,成果発表の国内旅費
光照射による溶液中のシリコン表面の原子レベルでの構造変化

フッ化アンモニウム水溶液はSi(111)面の平坦化のみならず、シリコンの処理行程において頻繁に用いられる。我々は水溶液中において、溶存酸素が平坦化に大きな影響を及ぼすことが見出されたことから、フッ化アンモニウム水溶液中の溶存酸素がSi(111)面の平坦化に及ぼす効果を調べた。その結果、亜硫酸アンモニウムを添加して溶存酸素を除去した系では、溶存酸素を含む溶液と比べて平坦化に要する時間が著しく短縮されることがわかった。例えば、0°Cの40%のフッ化アンモニウム水溶液中で15分間の処理を行った後の表面をAFM像を観察すると、酸素を除去した場合にのみ明瞭なステップ・テラス構造が見られた。この結果はフッ化アンモニウム水溶液中においても、表面平坦化に酸素の影響があることを初めて示したものである。我々はシリコンの平坦化過程が、その溶液中においてシリコン電極に観測される電気化学的なアノード電流と密接に関連していることを見出した。また、溶存酸素が存在する場合にはこのアノード電流が減少することを見出している。このことから、溶存酸素はシリコン表面をランダムに酸化攻撃して表面を乱す作用をするのではなく、ステップエッジやキンクを不活性化し、平坦化をもたらす溶解過程そのものを阻害することを示していると考えられる。以上の知見に基づいて、シリコン表面の平坦化に及ぼす光照射効果についての研究に着手した。これまでに、40%フッ化アンモニウム水溶液中において、弱い強度(0.2mW/cm^2程度)の可視光を照射すると平坦化が加速されること、また、それより強い光を照射するとかえって表面構造が乱れることを見出している。
塩(NaCl)環境と塩生植物の塩対応メカニズムに関する基礎的研究

現在、乾燥地域においては大規模灌漑農業が行われているが一方では土壌の塩害化により広大な農耕地の放棄が進んでいる。このような塩害化した農耕地での作物栽培を可能にするには、塩生植物の活用しか方法が見だせないのが現状である。しかし、その基礎的研究は緒についたばかりであることから比較的塩環境下においても生育の良いアブラナ科野菜を用いてその塩環境下での生育と植物の生理的応答の機構について検討した。1)方法:約150種の野菜類を中心に塩環境下(0ppm.300ppm,1000ppm,3000ppm,10,000ppm)での初期生育を検討した。その結果、特に上記条件下での生育の旺盛な7種を用いて栽培を行なった。栽培は、自然光ガラス温室で行った。栽培後の各植物体は精秤後、蒸留水とともにホモジナイズした。このホモジナイズ調製液の各種無機イオン、糖類および有機酸の同定と定量分布を行なった。2)結果:7種共に10003000ppm NaCl濃度においても対照区と同程度の収量を示した。植物内に取り込まれ蓄積されたイオン類は、栽培液中のNaCl濃度上昇にともないNa^+イオン及びCl^-イオンの吸収が増加し植物体内への蓄積濃度も増加していた。植物体内のNa/K比は、栽培液中のNaCl濃度上昇とともにその値も上昇した。浸透圧調節に関連している主な有機酸類は、シュウ酸とリンゴ酸が認められその濃度は植物体に分布したNaCl濃度との相関関係が認められたことからこれらの有機酸類が過剰に取り込まれたカチオン類と塩を形成中和し浸透圧調節していることが推察された。また、浸透圧調節に関わるとされる糖類も栽培環境の塩濃度上昇と共にその単糖類(ブドウ糖、果糖)また、ショ糖の濃度も上昇していた。植物細胞内での過剰吸収カチオン類への対応機構としてこれら糖類と有機酸類の生合成を促進しすることにより、供試した7種の野菜が塩環境下でも良い生育を示したことが推察された。
脱ユビキチン化酵素USP10が制御するDNA損傷応答機構の解析

ユビキチン化システムの異常は、癌および変性疾患を含む多くの疾病の根本原因となることが示されている。当研究室の樋口らは、蛋白質からユビキチンを切断する脱ユビキチン化酵素であるUbiquitin Specific Protease 10 (USP10)が、ストレスによって誘導される活性酸素(ROS)の産生を抑制する制御分子であること、さらに、USP10のノックアウト(KO)マウスは造血幹細胞(Hematopoietic Stem Cell: HSC)が維持されないことに起因する骨髄造血不全をともなう重度の貧血に陥ることを明らかにした。HSC維持に関わるストレス応答として、小胞体ストレス応答、オートファジー、DNA損傷応答(DNA damage response;DDR)などが知られているが、HSCのストレス応答時に、どのような蛋白質がUSP10により脱ユビキチン化され、いかにしてHSCの維持に寄与しているか、その作用機序は不明である。本研究に先立ち、USP10-KO細胞では、DDR過程に異常をきたし、染色体不安定性を呈していることが示唆された。そこで、本研究では、USP10-KOによって生じるDDRの異常個所を特定することで、DNAダメージ蓄積の分子メカニズムを解明し、HSCの消失、癌発生や老化との関連について検討することを目的とした。当該研究一年目の計画に従い、<染色体不安定性の定量と定性>を行い、USP10-KO MEFではgH2AX foci形成、comet assayによる染色体不安定化の定量を実施し、自発的DNA損傷が頻発していることを確認した。またCRISPR-cas9でUSP10をノックアウトしたヒト癌細胞においても同様の結果が得られた。またDNA損傷誘導後の経過を観察することでUSP10-KO細胞はDNA損傷修復が遷延化することが示唆された。またUSP10-KO細胞は様々なDNA損傷誘導剤へ感受性を示した。上記したDDR異常をきたす分子機構を明らかにするため、<USP10-KO細胞におけるDDR関連蛋白質の解析>を実施した。ATM、ATR阻害剤ではWT、KO間のgH2AX foci形成に差は認められなかった。一方で、DNA-PKcs阻害剤存在下では、USP10-KO細胞でのみDNA-PKcs阻害剤なしと同等のgH2AX foci形成を示した。これは、USP10-KO細胞ではDNA-PKcs活性が亢進している、もしくはDNA-PKcsによるATMの活性化が必要としなくなっている可能性が示唆された。当該研究一年目に、計画していたDDR経路の異常の分子メカニズムの一端を担う分子としてDNA-PKcsが新規候補分子として見出した。DNA-PKcsの欠失は免疫不全マウス(scid mouse)の作成として広く知られているが、そのリン酸化部位の変異マウスはUSP10と極めて酷似したHSCの減少を伴う貧血を呈することが報告されている。そこで今後は、DNA-PKcsを制御する翻訳後修飾と、DNA-PKcsによるリン酸化蛋白質について解析していく。またATMとDNA-PKcsはお互いにリン酸化することから、そのクロストークについても解析する。NHEJ/HR経路選択性が変化するだけでは、DNA修復がなされないことの説明はできない。またNHEJを誘導するEtoposide処理ではこのような遷延化は生じない。すなわち、HR経路で修復されるべきDNA損傷部位にHR及びNHEJ関連蛋白質が蓄積することでお互いの経路を阻害している可能性が考えられた。しかし、NHEJ factorは切断部位に1分子で働くため、一般的な蛍光抗体法ではNHEJ factorのfociを検出した例はなく、超解像度顕微鏡を必要とする。そのため、この仮説を立証するためには共同研究の開拓、もしくは新規方法を樹立する必要がある。その他、USP10コンディショナルノックアウトのためのERT2Cre発現マウスは、タモキシフェンの経口投与によるCre-loxPの実験系の効率が極めて低かったため、別のCre発現マウスを用いた実験系を再構築する必要がある。

またCRISPR-cas9でUSP10をノックアウトしたヒト癌細胞においても同様の結果が得られた。またDNA損傷誘導後の経過を観察することでUSP10-KO細胞はDNA損傷修復が遷延化することが示唆された。またUSP10-KO細胞は様々なDNA損傷誘導剤へ感受性を示した。上記したDDR異常をきたす分子機構を明らかにするため、<USP10-KO細胞におけるDDR関連蛋白質の解析>を実施した。ATM、ATR阻害剤ではWT、KO間のgH2AX foci形成に差は認められなかった。一方で、DNA-PKcs阻害剤存在下では、USP10-KO細胞でのみDNA-PKcs阻害剤なしと同等のgH2AX foci形成を示した。これは、USP10-KO細胞ではDNA-PKcs活性が亢進している、もしくはDNA-PKcsによるATMの活性化が必要としなくなっている可能性が示唆された。当該研究一年目に、計画していたDDR経路の異常の分子メカニズムの一端を担う分子としてDNA-PKcsが新規候補分子として見出した。DNA-PKcsの欠失は免疫不全マウス(scid mouse)の作成として広く知られているが、そのリン酸化部位の変異マウスはUSP10と極めて酷似したHSCの減少を伴う貧血を呈することが報告されている。そこで今後は、DNA-PKcsを制御する翻訳後修飾と、DNA-PKcsによるリン酸化蛋白質について解析していく。またATMとDNA-PKcsはお互いにリン酸化することから、そのクロストークについても解析する。NHEJ/HR経路選択性が変化するだけでは、DNA修復がなされないことの説明はできない。またNHEJを誘導するEtoposide処理ではこのような遷延化は生じない。すなわち、HR経路で修復されるべきDNA損傷部位にHR及びNHEJ関連蛋白質が蓄積することでお互いの経路を阻害している可能性が考えられた。しかし、NHEJ factorは切断部位に1分子で働くため、一般的な蛍光抗体法ではNHEJ factorのfociを検出した例はなく、超解像度顕微鏡を必要とする。そのため、この仮説を立証するためには共同研究の開拓、もしくは新規方法を樹立する必要がある。その他、USP10コンディショナルノックアウトのためのERT2Cre発現マウスは、タモキシフェンの経口投与によるCre-loxPの実験系の効率が極めて低かったため、別のCre発現マウスを用いた実験系を再構築する必要がある。平成30年度は使用予定額の99%を使用した。大きな変更はなく、繰越し金は研究計画に則って使用する。
自閉症児に対する初期社会性発達アセスメントと支援プログラムの開発に関する研究

自閉症児の「初期社会性の発達アセスメント(Assessment of EarlySocial development : AES)」と、支援・教育のための「初期社会性発達支援課題(Tasks of EarlySocialdevelopment:TES)」を開発し、図書として刊行した。幼児期・児童期の自閉症児を対象に、初期社会性の発達アセスメントに基づいて社会性の指導課題を選択し、家庭や教室など子どもが生活する場で支援を行い、社会性の発達支援の可能性が示された。<研究I-1>「初期社会性の発達アセスメント(AES)」質問紙の作成(a)「初期社会性の発達アセスメント(AES)」の作成:Tomaselloら(2005)の「共同行為の発達段階理論」I、II、IIIレベルについて、以下の4領域35項目によって作成した。(1)模倣・役割交代(2)共同注意(3)情動共有(4)コミュニケーション。(b)アセスメントの手続きの設定:(i)各レベル毎に、4領域全ての達成数を数え、「レベル達成項目数欄」に記入する。(ii)全項目数に対する達成項目数の比率である「レベルの達成率」を算出する。(iii)各レベルの小項目の達成率が80%以上のレベルを、「現在の発達レベル」とする。(iv)「発達レベル」の次のレベルを「発達支援レベル」とする。<研究I-2>「初期社会性の発達アセスメント(AES)」の妥当性・信頼性の検討【目的】生後6ヶ月から24ヶ月の健常乳幼児、各月齢10名に縦断的観察を開始した。行動観察との比較から質問項目の妥当性を検討し、更に他の発達尺度との関係の分析から信頼性等を検討した。【方法】1)対象児:健常乳幼児10名。6ヵ月から24ヵ月まで月に1度観察を行った。2)手続き:(A)質問紙の記入;原則的に家庭訪問を行い、質問紙の各項目について、養育者に尋ねチェックした。通過率の分析から、項目の妥当性を検討した(分析中)。(B)行動観察;30分間の日常生活場面、20分間の観察者が用意した15種類の玩具を用いた養育者との遊びをビデオに録音し、その後、(1)模倣・役割交代、(2)共同注意、(3)情動共有、(4)コミュニケーションの計35項目について、行動コーディングシステムによって分析した。その結果、役割反転模倣の出現が、1歳半ばから確認された。<研究II-1>「初期社会性発達支援課題(TES)」の構成「初期社会性の発達アセスメント(AES)」のレベルI、レベルII、レベルIIIに対応する「初期社会性発達支援課題(TES)」を作成した。各ステップは1015個の課題からなり、計44課題である。<研究I-2>「初期社会性の発達アセスメント(AES)」の妥当性・信頼性の検討(継続)生後6ヶ月から24ヶ月の健常乳幼児、各月齢10名に縦断的に適用し、質問項目の妥当性を検討し、更に他の発達尺度との関係の分析から信頼性等を検討した。<研究I-3>「初期社会性の発達アセスメント(AES)」の自閉症児への適用「初期社会性の発達アセスメント(AES)」を特別支援学校の幼稚部・小学部の50名の自閉症児に適用し、その妥当性を検討するとともに、プロフィール特性を分析し、共同注意、情動共有の困難性、レベルIIIの困難性が示された。日本発達心理学会第22回大会で発表した。<研究II-1>「初期社会性発達支援課題(TES)」の構成(継続)「初期社会性の発達アセスメント(AES)」のレベルI(6-9ヶ月相当)、レベルII(9-12ヶ月相当)、レベルIII(12-24ヶ月相当)に対応する「初期社会性発達支援課題(TES)」を構成し、その妥当性を検討した。<研究II-2,3>「初期社会性発達支援課題(TES)」レベルI、II。IIIの自閉症児への実験的支援「初期社会性の発達アセスメント(AES)」によって、支援レベルがI(行動と情動の共有)、レベルII(物を媒介とした目標の共有)と評価された、特別支援学校幼稚部・小学部自閉症児5名程度に「初期社会性発達支援課題(TES)」を適用した支援を15回20回行い、その妥当性を検討し、日本特教育学会第48回大会、日本発達心理学会第22回大会等で発表した。<研究I-3>「初期社会性の発達アセスメント(AES)」の自閉症児への適用「初期社会性の発達アセスメント(AES)」を特別支援学校の幼稚部・小学部の56名の自閉症児に適用し、その妥当性を検討するとともに、プロフィール特性を分析し、項目間の関連性の検討した。その結果、模倣と共同注意、情動共有などの間に有意な相関が認められた。

また、役割の模倣と能動的共同注意、能動的共同注意と情動共有などの間にも有意な相関が見られた(吉井・長崎,2012)。<研究II-2,3>「初期社会性発達支援課題(TES)」レベルI、IIの自閉症児への実験的支援「初期社会性の発達アセスメント(AES)」によって、支援レベルがI(行動と情動の共有)、レベルII(物を媒介とした目標の共有)と評価された、特別支援学校幼稚部・小学部自閉症児に「初期社会性発達支援課題(TES)」を適用した支援を15回20回行い、その妥当性を検討した。1.若井・中村・吉井・長崎(2011)では特別支援学校小学部自閉症児童に身体ゲーム活動(「忍者教室」スクリプト)の指導過程における視線・情動を分析した結果、情動共有から視線共有の獲得という過程が認められた。2.吉井・若井・長崎(2011)では、特別支援学校幼稚部自閉症幼児に、電車あそびゲームにおける指導者と自閉症幼児との協同活動の指導過程を分析した結果、初めは指導者が幼児の動きに合わせることから徐々に幼児が指導者の動きに合わせることができるようになる過程が見いだされた。3.竹内・長崎(2011)では、レベルが特定できない特別支援学校小学部自閉症児童に、AESとTESを適応してアセスメントと支援を行った結果、AESの達成率が40%台から70%近くへと増加して、一定の効果が認められた。自閉症児の社会的認知障害が明らかとなり、また発達研究によって初期社会性の発達過程が理論的に明らかにされてきたため、これらのデーターと理論を背景にした、初期の社会性発達についての科学的なアセスメントと支援方法の開発の基盤ができてきた状況である。しかし、わが国では、自閉症児の初期社会性について包括的・体系的にアセスメントする方法や発達支援プログラムはまだなく、その開発が急がれている。そこで、社会性の発達が0歳2・3歳前後までの自閉症児を対象にした「自閉症児のための初期社会性発達支援プログラム・パッケージ(Early Social Program for Autism:ESPA)を開発した。1模倣・役割交代2共同注意3情動共有4コミュニケーションの4領域35項目からなる評価門である「初期社会性の発達アセスメント(Assessment of Early Socialdevelopment:AES)」を開発した。また支援・教育部門である「初期社会性発達支援課題(Tasks of Early Socialdevelopment:TES)」を構成し、これらを図書として刊行した。健常乳幼児・自閉症児を対象に、評価方法の妥当性の検討を行った。また、幼児期・児童期の自閉症児に対し、初期社会性の発達アセスメントに基づいて社会性の指導課題を選択し、家庭や教室など子どもが生活する場で支援した。その結果、発達水準の向上が見られ、社会性の発達支援の可能性が示された。23年度の目的は、「初期社会性の発達アセスメント(AES)」の自閉症児への適用と「初期社会性発達支援課題(TES)」レベルI、IIの自閉症児への実験的支援であったが、それぞれデーター収集、分析、また日本発達心理学会、日本特殊教育学会で学会発表を行い、成果の公表まで行うことができた。24年度が最終年度であるため、記入しない。
アサガオにおける形態形成突然変異体の解析および原因遺伝子の単離

前年度、向背軸形成に関わる、アサガオの獅子(FEATHERD ; FE)遺伝子の単離に成功し、より詳細な解析を行った。現在維持されている強いfe系統を野生型と交配して分離実験を行ったところ、弱いものから元の系統同様に強い変異体、またその中間型が分離した。この分離比から、葉と花に関わる主要な修飾変異がそれぞれ1つ存在すると推定した。また、他の実験植物で明らかになっている向背軸の形成に関与する遺伝子のfe変異体における転写量を解析したところ、CRC(CRABS CROW)転写量が顕著に減少していたため、修飾変異の1つがこのCRCに対応する可能性があると考えて、引き続き解析を行っている。pt(petaloid;八重咲)変異体は、雄しべが花弁に転換する変異体であり江戸時代後期から知られているが、原因遺伝子はもとより、連鎖地図上の位置も明らかになっていなかった。Pt変異体と、強い生殖器官の花被への変換を示すdp(duplicated;牡丹)変異体と交配実験を行った結果、ptはよわいDP遺伝子の対立遺伝子であることが明らかになり、突然変異遺伝子の構造を解析した結果、完全な形のTpn109トランスポゾンがDP遺伝子の第2イントロンに挿入しており、これが離脱する際にまわりのゲノムを欠失させることで、強いdp変異体になっていることが明らかになった。また鈴木らによって単離されたブラシノステロイドの生合成に関わる、渦小人変異体の原因遺伝子kbt(PnDET2)について、s(star;桔梗渦)系統の塩基置換を解析した結果、解析した全系統に同一の突然変異が見られた。つまり渦小人とは、ct(contracted;渦)とsの2重変異体であり、ct遺伝子もブラシノステロイドの生合成に関わっていることが示された。(1)突然変異系統の遺伝学および形態学的解析:アサガオの獅子(FEATHERED ; FE)遺伝子の突然変異体は葉は裏側を表にしたように抱え、花冠は裂けて強い変異体では先端が折り返したチューブ状の花弁となる。形態学的にその原因を探るため、葉の表皮組織を観察したところ、野生型では気孔は主に葉の裏側(背軸側)に分布しているのに対して、獅子変異体では裏側の気孔数が減少しており、他の組織も含めて裏(背軸)側が表(向軸)側化していることが明らかになった。花弁についても表現型から同様の傾向が見られると予想している。他にも立田(MAPLE)遺伝子のクローニングに向けて、交配によってバックグラウンドを置換した系統の作製や、マルバアサガオの八重咲き変異体(fp)の解析に向けての交配・分離実験を行った。(2)トランスポゾンタギング系を利用した原因遺伝子のクローニング:獅子変異体は比較的安定であるが、体細胞突然変異を起こし、途中から野生型に復帰した株を見いだした。アサガオの変異体のほとんどに挿入していると予想されるトランスポゾンTpn1ファミリーの末端配列を利用し、AFLP法を改変したSTD法によって獅子突然変異体と復帰した野生型のTpnコピーの差がある部分を検出し、獅子遺伝子のクローニングに成功した。獅子遺伝子は、シロイヌナズナのKAN1遺伝子ともっとも高い相同性を持っており、KAN1と同様に側生器官の裏側で発現し、背軸側の特徴を決定していると予想される。獅子変異体での転写量の増加や、長い転写産物は獅子変異体が優性であることの原因かもしれない。ゲノム構造の解析や交配実験から強い表現型を示す系統は獅子変異に加えて別の突然変異による多重変異体である証拠が得られた。今後より詳細にこの獅子遺伝子の機能について解析を行っていきたい。

前年度、向背軸形成に関わる、アサガオの獅子(FEATHERD ; FE)遺伝子の単離に成功し、より詳細な解析を行った。現在維持されている強いfe系統を野生型と交配して分離実験を行ったところ、弱いものから元の系統同様に強い変異体、またその中間型が分離した。この分離比から、葉と花に関わる主要な修飾変異がそれぞれ1つ存在すると推定した。また、他の実験動物で明らかになっている向背軸の形成に関与する遺伝子のfe変異体における転写量を解析したところ、CRC(CRABS CROW)転写量が顕著に減少しているため、修飾変異の1つがこのCRCに対応する可能性があると考えて、引き続き解析を行っている。pt(petaloid;八重咲)変異体は、雄しべが花弁に転換する変異体であり江戸時代後期から知られているが、原因遺伝子はもとより、連鎖地図上の位置も明らかになっていなかった。Pt変異体と、強い生殖器官の花被への変換を示すdp(duplicated;牡丹)変異体と交配実験を行った結果、ptはよわいDP遺伝子の対立遺伝子であることが明らかになり、突然変異遺伝子の構造を解析した結果、完全な形のTpn109トランスポソンがDP遺伝子の第2イントロンに挿入しており、これが離脱する際にまわりのゲノムを欠失させることで、強いdp変異体になっていることが明らかになった。また鈴木らによって単離されたブラシノステロイドの生合成に関わる、渦小人変異体の原因遺伝子kbt(PnDET2)について、s(star;桔梗渦)系統の塩基置換を解析した結果、解析した全系統に同一の突然変異が見られた。つまり渦小人とは、ct(contracted;渦)とsの2重変異体であり、ct遺伝子もブラシノステロイドの生合成に関わっていることが示された。
アジア太平洋地域における日本侵略の記憶とアジア系アメリカ文学

本研究は、アジア系アメリカ文学における日本の侵略統治の表象を歴史記憶の観点から分析考察するものであり、戦争の記憶と表象に主眼点を置いて研究を進めている。3年目は中国における日本統治に焦点を当て、歴史文献の研究と文学作品の分析を中心に研究を進めた。ことに日中関係の積み残しの問題とされている南京事件に焦点を当て、南京事件の本質に迫るべく多方面に及ぶ数多くの文献の調査に時間を使った。そのうえで、文学作品における南京事件がどのような問題意識が示されているのかに関して分析を試みた。これらを踏まえて米国ロサンゼルスに赴き、アジア系アメリカ文学研究の中心であるUCLAやエスニックコミュニティなどにおいて中国系アメリカ人の研究者や運動家に聞き取り調査を行った。昨年取り上げた慰安婦問題同様、南京事件に関してもアメリカで日本植民地批判がある一定の広がりを持ち、慰安婦問題との連帯した運動展開もあることが確認できた。こうした日本批判の姿勢は政治的に日本に対する厳しい視線を醸造しているのは間違いない。とりわけ中国系アメリカ文学作品にはそれが如実に示されている。そこで南京事件に焦点を当てた世代の異なる作家の作品を取り上げ、展開されている思考が継続する日本批判を示していると分析し、歴史記憶が世代を越えて受け継がれしかもグローバルに展開されることを検証し論文に著した。当初予定した通りに概ね進展しているが、研究の広がりの可能性が出ており時間的に可能かどうか考慮中である。最終年度にフィリピン系に立ち戻り、日本植民の総括を行いたいと考えている。ただしその他の歴史事項でまだ触れるべきことが残っていると思われるので、今後どのように取り組むか思案している。本研究は、アジア系アメリカ文学における日本の侵略統治の表象を歴史記憶の観点から分析考察するものである。90年代以降、帝国主義や植民地主義などの視座をもつ米国関連の戦争に関するアジア系文学の研究は数多くされてきたが、日本のアジア太平洋地域での侵略や統治の表象に焦点を当てた包括的研究は未だない。ところがこの地域における日本統治を何らかの形で取り上げるアジア系文学は近年増加傾向にある。そこで本研究では日本統治関連の文学に記憶がどう表象されているかを学際的見地から分析する。研究で明らかにしたいのは、日本統治に関する1歴史の記憶の表象のあり方、2民衆視点の記憶を再現する意味、3トラウマ体験を米国から発信する意味と意義などであり、暴力、ジェンダー、ポストコロニアリズムなどの視点から分析する。なおこの研究は、アジア系アメリカ文学にみる日本植民地主義批判をテーマとする科研費研究を継続したものであるが、戦争の記憶と表象に主眼点を置く。研究初年度は、関連文献の調査により、アジア系アメリカ文学における日本統治の分析視点の構築と概念の設定に取り掛かった。さらにロサンゼルス、ニューヨークに赴き主に韓国系と中国系アメリカ人に関する現地調査を行った。現地において作家や研究者からインフォーマルなインタビューは出来たが、次回は時間をかけてじっくりと聞き取りをしたいと考える。真珠湾攻撃75周年の2016年はこの研究に関する多くの情報収集を可能としたが、今後その整理と分析は研究をより深めると考える。本研究の契機となったこの前の科研費研究「アジア系アメリカ文学にみる日本植民地主義批判」の完成が1年遅れたことを受け、少々遅れ気味である。両者には重なる内容もあるため、この遅れを取り戻すことは十分可能ではないかと考えている。本研究は、アジア系アメリカ文学における日本の侵略統治の表象を歴史記憶の観点から分析考察するものであり、戦争の記憶と表象に主眼点を置く。2年目は朝鮮における日本統治に焦点を当て、歴史文献の研究と文学作品の分析を中心に研究を進めた。ことに日韓関係を困難な状況にしている元凶ともいえる慰安婦問題をどのように位置づけるか、歴史文献を中心に社会学等にも目を向けて調査した。さらに作家の慰安婦問題の取り上げ方の背景にはどのような問題意識があるかに関しても、さまざまな方向から検討した。これらの研究を踏まえて米国ロサンゼルスに赴き、韓国系アメリカ人の運動家や韓国系を中心としたアジア系アメリカ研究の学者たちへの聞き取り調査を行った。それにより、近年慰安婦問題に関して韓国がいわば過激な運動を展開しているが、同様な動きは他の東および東南アジアや米国などグローバルに広がっており、政治的には日本が厳しい位置に置かれていることが理解できた。これらの動向はアジア系アメリカ文学に如実に表れており、慰安婦問題が多様に表現されているのはそれを示すものに他ならない。こうした作品を作家の出身国の広がりから、最新の思考である環太平洋アジア系アメリカ文学の枠組みから論じるのは最も適切であるといえる。この思考を枠組みとして、慰安婦を扱うアジア系アメリカ文学を可能な限り網羅して分析を試み、その成果を慰安婦文学ともいえる一連の文学系列の提示とその個別分析と統合的傾向を論じた論文「「慰安婦」問題とアジア系アメリカ文学ー環太平洋から見る戦争記憶の表象」(『リベラル・アーツの挑戦』収蔵)に表した。予定通り、当初の遅れを取り戻すことができたといえる。これは昨年記した通り、これ以前に受理した科研費の研究と重複した部分によるものである。

ことに日中関係の積み残しの問題とされている南京事件に焦点を当て、南京事件の本質に迫るべく多方面に及ぶ数多くの文献の調査に時間を使った。そのうえで、文学作品における南京事件がどのような問題意識が示されているのかに関して分析を試みた。これらを踏まえて米国ロサンゼルスに赴き、アジア系アメリカ文学研究の中心であるUCLAやエスニックコミュニティなどにおいて中国系アメリカ人の研究者や運動家に聞き取り調査を行った。昨年取り上げた慰安婦問題同様、南京事件に関してもアメリカで日本植民地批判がある一定の広がりを持ち、慰安婦問題との連帯した運動展開もあることが確認できた。こうした日本批判の姿勢は政治的に日本に対する厳しい視線を醸造しているのは間違いない。とりわけ中国系アメリカ文学作品にはそれが如実に示されている。そこで南京事件に焦点を当てた世代の異なる作家の作品を取り上げ、展開されている思考が継続する日本批判を示していると分析し、歴史記憶が世代を越えて受け継がれしかもグローバルに展開されることを検証し論文に著した。当初予定した通りに概ね進展しているが、研究の広がりの可能性が出ており時間的に可能かどうか考慮中である。次年度も文献調査および現地調査を継続して推進する予定である。また作家や批評家へのインタヴューをより活発に行いたいが、時間的制約が大きくどこまで可能か予測不能である。少なくともUCLAに赴き、最新情報を手に入れる努力はする予定である。また現地調査としては、韓国や中国、グアムなど太平洋諸島の調査に取り掛かりたいと考える。2017年度は慰安婦問題、2018年度は南京事件に集中して調査を進める予定だが、政治的展開などで方向が変わる可能性もある。次年度は南京事件に集中して、同方向の調査研究を進める予定である。引き続き文献調査および現地調査を継続して推進する。また作家や批評家へのインタヴューをより活発に行いたいが、大学業務による時間的制約のためにどこまで可能かわからない。UCLAに赴いて最新情報を手に入れる努力も継続したいと考えている。できればアジアの現地調査も行いたいが、時間的に可能かどうかは流動的である。最終年度にフィリピン系に立ち戻り、日本植民の総括を行いたいと考えている。ただしその他の歴史事項でまだ触れるべきことが残っていると思われるので、今後どのように取り組むか思案している。物品費でコンピュータを購入する予定であったが、次年度の新製品の発売を待つこととした。書籍購入の予定が遅れていること、アジアへの調査ができなかったことなどで初年度から次年度使用額が生じており、次年度にはこの部分を修正すべく計画を立てているところである。これまで中国、韓国などの学会参加や現地視察に赴く予定が大学および家庭の事情(介護)で出来なかったが、この部分を修正すべく予定を立てているところである。2017年度にコンピュータを購入する予定である。
血糖低下作用を示す食品成分のスクリーニングと作用機構の解明

平成29年国民健康・栄養調査によると、糖尿病が強く疑われる人は、1,500万人と推定されている。これは、国民の約7人に1人にあたるため、公衆衛生上大きな課題となっている。糖尿病の原因は、肥満によるインスリン抵抗性(インスリンが効きにくい状態)にあると考えられる。我々は、インスリン作用を模倣する様々な食品成分から検索し、血糖低下作用を示す最も有効な化合物を同定し、糖尿病の発症予防に貢献する機能性食品を提示したい。さらに、様々なデータより血糖低下作用を示す化合物の構造上の特異性を同定し、将来的には糖尿病治療薬の創出にも貢献したいと考えている。
ムコリピド-シスで欠損するリソゾ-ム酵素糖鎖リン酸化酵素蛋白の性状解析の研究

60数種の存在が知られているリソゾ-ムマトリックス酵素群は、その糖鎖上にマンノ-ス6リン酸の標識を獲得することによって生合成後細胞内を転送され、リソゾ-ムに局在化することが可能となる。糖鎖のリン酸化はゴルジ膜に存在するUDP-GlcNAc:リソゾ-ム酵素GlcNAclリン酸転移酵素(GPTFと略す)によって触媒されるが、マンノ-ス6リン酸残基が移送標識として機能するには同じゴルジ膜に存在するGlcNAcホスホジエステルα-N-アセチルグルコサミダ-ゼによるGlcNAcの除去が必要である。ムコリピド-シスII型ではGPTF活性が欠損しており、III型では部分的に観測される。これら病態における活性不全の要因は未だ解明されていない。その原因の一つはGPTFの精製の困難さと本酵素の蛋白化学的性状の未解析にある。本酵素活性の測定には[β-^<32>P]UDP-GlcNAcの合成が必須であり、このことも上記解析を困難にしている。本研究課題である、GPTFの性状はおもにラット肝酵素で明らかにした。本酵素はゴルジ膜を組織より分画した後精製するか、ヒト臓器(おもに肝臓)はおもに剖検より得ることが多く、組織の新鮮さに欠けるためか本酵素の回収率はきわめて低かった。現在ヒト肝より部分精製した酵素標品を用いてモノクロ-ナル抗体を作製中である。また、従来本酵素はリンパ球系細胞で高活性を示すことが知られていたが、ALL細胞では更に高値を示した。同様に、正常ヒト果粒球に比べてAML細胞でも高値を示し、癌におけるリソゾ-ム酵素の細胞内代謝回転の亢進を裏づけた(Blood,1989)。同様の現象はヒト肝細胞癌組織でも観測された(J.Natl.Cancer Inst.,投稿中)。ムコリピド-シスIIとIII型の診断では、従来患者皮膚培養繊維芽細胞あるいは白血球で行ってきたが、絨毛上皮でも可能なことが明らかになった。
脳アミロイドアンギオパチー関連炎症の発症機構の解明

孤発性のアミロイドβ蛋白(Aβ)が髄膜および脳内の血管壁に沈着して生じる脳アミロイドアンギオパチー(CAA)では炎症・血管炎(CAA関連炎症)を生じるが、炎症を生じるメカニズムの詳細は不明である。本研究ではCAAおよびCAA関連炎症の症例について、当教室で保存されている検体と全国多施設より新たに収集した脳脊髄液、病理組織標本、DNAを用いて、炎症の発症に関する蛋白質やサイトカインの検討を行った。脳脊髄液では特定のサイトカインの増加を生じていることを明らかとし、CAAに関連した炎症を生じる機序の一端を明らかにした。本研究の初年度では、研究を遂行するための金沢大学倫理委員会への申請と検体の収集、解析を行うための染色条件の検討を行った。脳組織でのTREM2やTGFβ1の発現量の解析研究および脳脊髄液における炎症性サイトカインの解析研究、TREM2およびTGFβ1の遺伝子多型の解析研究について、金沢大学医学倫理審査委員会およびヒトゲノム・遺伝子解析研究倫理審査委員会の承認を得た。検体の収集に関して、これまでに金沢大学に保存されている試料に加えて、脳アミロイドアンギオパチー(CAA)関連炎症の症例とCAAのみの症例について、解析を行うための脳組織、血液(DNA)、脳脊髄液の追加収集を行った。それぞれ30例を目標としていたが、これまでに収集できている検体数はCAA症例では脳脊髄液4例、凍結脳3例、パラフィン標本11例、DNA 11例で、CAA関連炎症の症例については脳脊髄液5例、凍結脳1例、パラフィン標本3例である。CAA関連炎症の症例は非常に稀少であるため、検体の収集に難渋しているのが現状である。しかしながら、検体の提供について、研究計画では当初予定していなかった愛知医科大学加齢医学研究所に病理検体の提供を依頼済みであり、同大学において検体提供のための倫理委員会への申請を行っている。脳組織におけるTREM2の発現量の定量的な解析について、免疫組織化学染色用の一次抗体を入手し、最適な染色条件の検討を開始している。本研究の2年目では予定された研究遂行のための検体の収集を継続して行った。また、脳脊髄液サイトカインの検討を行うため、検討を行うために使用を予定しているBioPlexシステムについて機器の更新と使用法に関する講習を受け、条件設定に関する予備実験を行った。その他に、TREM2およびTGFβ1遺伝子の多型の解析についてのプライマーの設定と条件設定を行った。検体については、CAA関連炎症の症例について新たに1症例の脳脊髄液、2症例のDNAについて他施設からの提供を受けた。また、遺伝子多型解析用の症例や脳組織におけるTREM2やTGFβ1の発現量の解析を行う症例について、新潟大学脳研究所病理学分野との共同研究を行うこととした。本研究における検体の利用について新潟大学への倫理委員会への申請を行い、承認後に症例を選定した。現時点で検体の提供が開始されている。現時点で解析可能な検体数について、DNAについてはCAAは11例、CAA関連炎症は4例を収集し、脳脊髄液についてはCAA関連炎症で6例の使用が可能となっている。CAAの症例については金沢大学神経内科においてCAAと診断された症例の検体を使用することとし、検体の利用について金沢大学倫理委員会での承認を得た。よって、CAAについては十分な症例数の検体を本研究に利用可能な状況である。凍結脳については、CAA 12例、CAA関連炎症の2例が利用可能な状態である。パラフィン標本については、CAAが23例、CAA関連炎症が9例で利用可能である。CAA関連炎症の検体について、全国の多施設に検体提供を呼びかけているが、目標数を下回っている。また、TREM2の免疫染色の条件検討について、過去の文献報告を参考にして購入を予定していた一次抗体の生産が中止され、入手ができなかったため。本研究の3年目では、予定していた研究遂行のための検体収集を継続した。脳脊髄液サイトカインの検討について、BioPlexシステムを用いて一部の項目について解析を行った。検体については、最終的にBoston criteria possible以上の脳アミロイドアンギオパチー(CAA)について、脳脊髄液20例、凍結脳3例、paraffin標本11例、DNA 11例を収集した。新潟大学脳研究所からはBoston criteriaのdefiniteまたはprobable CAA with supporting pathologyの症例について、12例について凍結脳またはparaffin標本が利用可能であることを確認した。CAA関連炎症については、脳脊髄液9例、paraffin標本2例(2例とも脳脊髄液あり)、DNA 2例を収集し、新潟大学脳研究所からは剖検2例(凍結及びparaffin標本)と生検7例(paraffin標本)の利用が可能であることを確認した。TGFβ1およびTREM2の遺伝子多型の解析については、採取されたDNA等を用いて多型の評価を行った。脳脊髄液中のサイトカインについては、CAA関連炎症の症例についてBioPlexシステムを用いて解析を行い、一部の炎症関連サイトカインについて上昇していることを確認した。治療前後での比較が行えた症例については、治療に伴って炎症関連サイトカインの低下が認められた。これらの結果から、ある種の炎症性サイトカインがCAA関連炎症では上昇していることが明らかになった。

本研究ではCAAおよびCAA関連炎症の症例について、当教室で保存されている検体と全国多施設より新たに収集した脳脊髄液、病理組織標本、DNAを用いて、炎症の発症に関する蛋白質やサイトカインの検討を行った。脳脊髄液では特定のサイトカインの増加を生じていることを明らかとし、CAAに関連した炎症を生じる機序の一端を明らかにした。CAA関連炎症について、30例の検体収集を予定していたが、現時点では目標を下回っている。CAA関連炎症は脳生検や病理解剖といった組織学的検索が必須の疾患であり、疾患自体が稀少であるためと考えている。TREM2の免疫染色の条件検討について、購入を予定していた一次抗体を予定通り入手できなかったため。CAAおよびCAA関連炎症の症例の検体収集を継続する。論文や学会発表された症例についての検体について、個別に依頼を行っていく。また、厚生労働省厚生労働科学研究費補助金難治性疾患政策研究事業のアミロイドーシスに関する調査研究班によるCAAやCAA関連炎症を含めた全国疫学調査が現在進行中であり、同研究の研究協力者として収集された疫学情報を利用して検体収集を行うことを計画している。収集した検体を利用して、計画していたCAAおよびCAA関連炎症の症例について、遺伝子多型の解析、TGFβ1の発現解析、脳脊髄液のサイトカインの解析を行う。神経病理学CAAおよびCAA関連炎症の症例について、検体の収集を継続して行う。検体の収集に関して、厚生労働省厚生労働科学研究費補助金難治性疾患政策研究事業のアミロイドーシスに関する調査研究班が中心となり、金沢大学神経内科も関与してCAAおよびCAA関連炎症についての全国疫学調査が現在行われている。今後、全国疫学調査で得られた情報を利用し、検体収集を促進させることを考えており、アミロイドーシスに関する調査研究班と調整を行っている。また、神経病理関係の学会における報告症例や論文発表症例について個別に検体の提供依頼も行っていく。脳組織におけるTGFβ1の解析について、mRNAでの定量的な解析についての条件設定や遺伝子多型の解析についての予備実験も開始する予定である。購入予定であった一次抗体の生産が中止されたため、本年度に購入ができなかった。検体収集について、予定数を下回っているため、予定していたサイトカイン測定試薬の購入を次年度に行うこととした。平成26年度に試料の提供施設を訪問し、検体内容の確認を行う予定であったが、訪問予定施設での倫理委員会での承認などの手続きを先に行う必要があるため、提供施設訪問に関する経費は繰り越しとした。また、試料の収集が予想より遅れているため、予備実験のためのプライマーの作成やサイトカイン測定試薬の購入のための費用が本年度は不要となった。測定試薬を購入して脳脊髄液の解析を行う。購入を予定していたものとは別の一次抗体を購入して解析を行う。解析結果について国際学会での発表や論文報告を予定している。試料の収集と確認を継続して行うための旅費として次年度以降に繰り越して使用する。
テロメレースを標的としたマイクロRNAによる白血病幹細胞薬剤耐性の克服

miRNAのマイクロアレイを行い、テロメレースに的を絞った機能解析を目的とした。その結果やメチレーション解析の結果等を基にして、癌幹細胞を標的とした新たな薬剤耐性克服の治療戦略を開発することを目指した。テロメレース遺伝子(hTERT)、MDR1遺伝子のプロモーターのメチル化は薬剤耐性獲得前後で特に変化は無く、STAT5の活性化によるhTERT, MDR1の蛋白発現増強が起こっていることが示唆された。テロメレースはテロメア伸長作用の他に、抗癌剤の耐性機構に関与することを見出し、テロメレース活性の誘導にSTAT5が関与していることを報告した。ABCトランスポーターに属するP糖蛋白のMDR1はATP依存性に細胞内から細胞外へ異物を汲み出すポンプであり、化学療法抵抗性の白血病細胞ではP糖蛋白の発現亢進があることが報告されている。今回科学研究費の支援により、P糖蛋白(Pgp)が強発現している白血病細胞ではテロメレース蛋白の発現増加も見られ、いずれも転写因子STAT5が関与していることを見出し報告した(Activation of STAT5 confers imatinib resistance on leukemic cells through the transcription of hTERT and MDR-1. Cellular Signalling in press)。すなわちP糖蛋白発現とテロメレース蛋白発現の増強がSTAT5を介して薬剤耐性に関与する可能性が考えられる。マイクロRNA(miRNA)はメッセンジャーRNAの翻訳制御に働き、細胞増殖、アポトーシスの調節に関わっている。薬剤耐性獲得前後の白血病細胞株を用い、miRNAのマイクロアレイを行い、テロメレースに的を絞った機能解析を行った。この結果やメチレーション解析の結果等を基にして、癌幹細胞を標的とした新たな薬剤耐性克服の治療戦略を開発することを目指している。白血病幹細胞の性質を持ったK562細胞で薬剤耐性獲得前後の細胞を利用し、免疫ビーズ法でCD34陽性、CD38陰性細胞の白血病幹細胞を濃縮して使用した。AGPC法で全RNAを抽出後2分し、半分はcDNAアレイ用に保存し残りをスモールRNA特異的抽出キット(Ambion社flashPAGEシステム)で40nts以下の成熟miRNAを抽出した。遺伝子発現の調節機序の一つとしてエピゲノムによる調節が考えられる。薬剤耐性獲得前後の白血病幹細胞の遺伝子メチレーションの違いをアレイ解析により、テロメレース遺伝子、MDR1遺伝子を含めて網羅的な解析を行った。今回科学研究費の支援により、P糖蛋白(Pgp)が強発現している白血病細胞ではテロメレース蛋白の発現増加も見られ、いずれも転写因子STAT5が関与していることを見出し報告した(Activation of STAT5 confers imatinib resistance on leukemic cells through the transcription of hTERT and MDR-1.Cellular Signalling,23:1119-1127,2011)。AGPC法で全RNAを抽出後2分し、半分はcDNAアレイ用に保存し,残りをスモールRNA特異的抽出キット(Ambion社flashPAGEシステム)で40nts以下の成熟miRNAを抽出した。良好なmRNAの抽出を確認後、cDNAを合成して保存した。薬剤耐性獲得前後の白血病幹細胞の遺伝子メチレーションの違いをアレイ解析により、テロメレース遺伝子、MDR1遺伝子を含めて網羅的な解析を行い、解析中である。良好なmRNAの抽出が得られにくかった。メチル化シトシンを認識する抗体で免疫沈降を行う条件検討に時間がかかった。24年度が最終年度であるため、記入しない。条件検討に必要以上に時間がかかる場合で、かつその技術が今後も定常的に行う予定がないと判断する場合、研究費のコストパフォーマンスを考慮してアウトソースにすることも考慮中である。