hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
合成化学医療の開発：動物内での標的細胞、および臓器上での生理活性ペプチド合成

さらに報告者は、このエステルは生体内アミンの他にも、立体障害の少ない疎水性アミンと水中で効率的かつ選択的に反応することを見出した。塩基を必要としない温和な条件下での反応を発見した。このユニークな反応の機構を解析すると同時に、新規なペプチド合成法へと展開した。一方、平成26年度までに報告者は、生体テンプレート上に糖鎖クラスターを構築し、これら高分子の生体内動態や臓器選択的な集積が、付加した糖鎖に顕著に依存することを見出していた。糖鎖の構造に従って、肝臓や脾臓、あるいはがんに集積する。そこで、この糖鎖クラスターを特定の臓器(細胞)を認識するドラッグデリバリーシステムとして活用し、マウス内の特定の臓器周辺で合成研究を行うことを試みた。報告者が以前に見出したパラジウムやルテニウムを代表とする遷移金属触媒の存在下でのエステルの反応性を利用することにより、目的とする臓器上での蛍光標識化を実現した。生きている動物内で初めて遷移金属触媒反応を初めて実現した例となった。このように、「生体内合成化学治療」研究におけるブレークスルーとなる成果を得た。当初の計画に従って、動物内での選択的な動態や集積制御を実現し、さらに生体内で効率的、かつ選択的にアミドやペプチド形成を起こさせることのできる無触媒、あるいは遷移金属触媒反応を見出した。27年度が最終年度であるため、記入しない。平成27年度では、これまでの研究実績に基づいて、細胞内に報告者のエステルを導入することにより、特定のアミン選択的に修飾反応を行い、細胞機能を制御する。また、特定の臓器を認識する糖鎖高分子をドラッグデリバリーシステムとして活用し、報告者のエステルをマウス内の特定の臓器に運び、その周辺の細胞内で合成研究を行う。一方、糖鎖高分子に対して遷移金属触媒を担持し、これを動物モデルに静脈注射して特定の臓器上に触媒を担持させる。さらにこの上で触媒により活性化されるアミド化反応やペプチド形成反応を実施して、生体内ペプチド合成を検討する。研究開始から4ヶ月という非常に短い時間内であるので、本研究に関する発表はまだ行っていないが、水中で様々な有機合成反応を行うことのできる人工タンパク質を簡便に調製することに成功した。今後、様々な糖鎖を導入することができれば、生きている動物内で有機合成を実施することが可能となり、「合成化学治療」の実現に向けて大きな成果が得られた。本年度に実現した触媒や反応活性効果を持つ人工タンパク質に対して、報告者の方法を使用して様々な糖鎖を導入し、生きている動物内で特定の臓器への選択的なターゲティングを実現する。その後、試薬を随時導入することにより、生体内での特定の部分で求む有機合成反応を実施する。さらに今後、多種の反応が実現できるように反応系を設計し、目的の臓器や癌組織で時空間的に目的化合物の創製を行う。さらに、創製する生理活性物質による生物学的な効果を時空間的に発現させる。
MRIによる3次元頭部計測システムの開発

今回我々は、MRIによる3Dボリューム撮影法を用いて頭部の硬組織・軟組織を含めた3次元的な計測を行なうシステムを開発し、これによって正常咬合者の計測値の平均や標準偏差を求めることを目的とした。さらに本法を臨床応用しそれぞれの疾患群と基準値との相違・疾患群同士の比較検討を行なうことを研究目的とした。医局員・学生を中心としたボランティアを対象に、MRI装置を使用し、3Dボリューム法を用いて頭部を撮像した。各種シークエンスを変更させながら、従来のセファロで計測可能であった項目を最低網羅するような最適のシークエンスを決定した。また、軟組織のリファレンスとなるポイントを求め、再現性を確認した。得られた画像データをワークステーションに転送し、それぞれの距離・角度・三次元的座標等を計測した。また、軟組織の距離計測の精度を検討するため、三次元デジタイザを用いて実際の距離を測定し、MRIから得られたデータと比較した。今回使用したMRスキャナは磁場の乱れを自動的に補正する機能が装備されていたため、予想された磁場の乱れによる歪みは1.6%以内と無視できる程度であった。最適なシークエンスは、3DのSPGRを用いたGRE法であったが、歯への補綴物などで信号が欠損したり、画像に歪みを認めた症例があった。今後、金属によるArtifactが最も少ないFast SE法などの導入も検討している。また、正常咬合者のボランティアを対象に、第1次ボランティアスキャンで決定したシークエンスの下で3Dボリューム法を用いて頭部を撮像した。頭部X線規格写真と比較すると、ほとんどのポイントがMR画像でも描出可能であったが、N点など骨と骨の結合部位ではMR画像の欠点が指摘された。ただし、軟組織の描出については最適であると考えられた。・目的:今回我々は、MRIによる3Dボリューム撮影法を用いて頭部の硬組織・軟組織を含めた3次元的な計測を行なうシステムを開発し、これによって正常咬合者の計測値の平均や標準偏差を求めることを目的とした。さらに本法を臨床応用しそれぞれの疾患群と基準値との相違・疾患群同志の比較検討を行なうことを研究目的とした。1・方法:ボランティアスキャン(第1次)医局員を中心としたボランティアを対象に、今回導入のMRI装置を使用し、3Dボリューム法を用いて頭部を撮像した。またこれらから軟組織のリファレンスとなるポイントを求め、再現性を確認した。・結果:今回使用したMRスキャナは磁場の乱れを自動的に補正する機能が装備されていたため、予想された磁場の乱れによる歪みは無視できる程度であった。最適なシークエンスは3D撮影に有効とされているフィールドエコーを用いたものであったが、歯への補綴物などで信号が欠損する場合があった。・(現在進行中)ボランティアスキャン(第2次):正常咬合者のボランティアを対象に、第1次ボランティアスキャンで決定したシークエンスの下で3Dボリューム法を用いて頭部を撮像している。対象数は各年令層毎に30例とした。また先のスキャンで考察したリファレンスとなるポイントがすべてのボランティアで描出可能かどうかをまず判定し、可能であった項目の計測を施行している。これら計測データを統計学的に処理して日本人各年令層の基準値としたい。

今回我々は、MRIによる3Dボリューム撮影法を用いて頭部の硬組織・軟組織を含めた3次元的な計測を行うシステムを開発し、これによって正常咬合者の計測値の平均や標準偏差を求めることを目的とした。さらに本法を臨床応用しそれぞれの疾患群と基準値との相違・疾患群同志の比較検討を行なうことを研究目的とした。医局員・学生を中心としたボランティアを対象に、MRI装置を使用し、3Dボリューム法を用いて頭部を撮像した。各種シークエンスを変更させながら、従来のセファロで計測可能であった項目を最低網羅するような最適のシークエンスを決定した。またこれらから軟組織のリファレンスとなるポイントを求め、再現性を確認した。得られた画像データをワークステーションに転送し、それぞれの距離・角度・三次元的座標等を計測した。また、軟組織の距離計測の精度を検討するため、三次元デジタイザを用いて実際の距離を測定し、MRIから得られたデータと比較した。今回使用したMRスキャナは磁場の乱れを自動的に補正する機能が装備されていたため、予想された磁場の乱れによる歪みは無視できる程度であった。最適なシークエンスは3D撮影に有効とされているフィールドエコーを用いたものであったが、歯への補綴物などで信号が欠損する場合があった。今後FastSEなどの導入も検討している。また、正常咬合者のボランティアを対象に、第1次ボランティアスキャンで決定したシークエンスの下で3Dボリューム法を用いて頭部を撮像してた。先のスキャンで考察したリファレンスとなるポイントがすべてのボランティアで描出可能であり、可能であった項目の計測を施行した。
実用化を目指した血液脳関門透過型高分子医薬デリバリーシステムの開発

中枢神経系を標的とする高分子タンパク医薬の開発が求められている。本研究では、血液脳関門(BBB)上の膜タンパク・受容体の分子認識機構を介して脳へ非浸襲的に送達可能な高分子タンパク医薬を創出するための技術開発を行った。In vitro BBBモデルを作成し、指向性進化工学的手法を用いてBBB上の膜タンパク・受容体に結合親和性・機能制御性を示すアミノ酸配列モチーフを探索した。現在までに機能モチーフの一つとして脳毛細血管内皮細胞の細胞膜に特徴的に作用する機能を示す配列候補を得た。現在さらに機能モチーフの創出を進めており、医薬候補タンパクへの応用および生体投与の準備を進めている。近年、抗体医薬や核酸などの高分子医薬が癌・癌関連疾患や自己免疫疾患をはじめとする種々の疾患の標的分子に対して創出され、リポソームや高分子ミセルといったDDSキャリアー・デバイスの発展と共に、これらの高分子特性を利用した薬物送達技術が急速に進歩してきている。しかしこれらは中枢神経系以外の組織を標的としたものが多い。本研究計画では、高分子医薬を脳へ非浸襲的に送達する新しいドラッグデリバリーシステムを開発することを目的とする。血液脳関門に発現している膜蛋白・受容体を介して脳へ送達することが可能な中枢標的型の蛋白医薬を、種々の指向性進化工学的手法を駆使して創出することを目指す。平成24年度は、血液脳関門上の受容体に特異的に結合するポリペプチドのアミノ酸配列のスクリーニングを、バクテリアディスプレイ法を応用して大腸菌内膜上に発現させた受容体とペリプラズム内に発現させたランダムペプチドライブラリーとの結合を指標に進める一方、in vitro血液脳関門モデルを透過するポリペプチドアミノ酸配列の探索をT7を用いたファージディスプレイ法を応用して行った。多孔質膜を挟んでマウス脳毛細血管内皮細胞とアストロサイトの共培養を行い、高い経上皮電気抵抗値(Trans epithelial electric resistance: TEER)を示すin vitro血液脳関門(BBB)モデルを作成した。高次構造に一定の束縛条件を付与したランダムペプチドファージライブラリーを作成して、これを上記in vitro BBBモデルに添加して内皮細胞とアストロサイトを透過してくるファージを採取、増幅し、このサイクルを繰り返すことにより、in vitro BBBモデル透過能を示すアミノ酸配列モチーフの創出を実施した。近年、抗体医薬や核酸などの高分子医薬が癌・癌関連疾患や自己免疫疾患等の標的分子に対して創出され、リポソームや高分子ミセルといったDDSキャリアーデバイスの発展と共に、これらの高分子特性を利用した薬物送達技術が急速に進歩してきている。これらの高分子医薬はその劇的な治療効果から世界の医薬市場で需要が急増しているが、中枢神経系以外の組織を標的としたものが多い。本研究計画では、脳へ非浸襲的に送達可能な高分子タンパク医薬を創出するための技術開発を目的としている。血液脳関門(BBB)上の膜蛋白・受容体に結合親和性を示すアミノ酸配列モチーフを指向性進化工学的手法を用いて創出し、その機能モチーフを医薬候補となる高分子・タンパク質に応用することによって、BBB上の受容体を介して脳へ送達できる新しい高分子医薬の開発へ貢献することを目指した。平成23年度からバクテリアディスプレイ法を応用してBBB上の既知の受容体に特異的に結合するペプチドアミノ酸配列の探索を進める一方、平成24年度からは、独自に作成したin vitro血液脳関門モデルを用いて、これを透過する機能を有するペプチドアミノ酸配列の探索をT7を用いたファージディスプレイ法を応用して行った。多孔質膜を挟んでマウス脳毛細血管内皮細胞とアストロサイトの共培養を行い、高い経上皮電気抵抗値(TEER)を示すin vitroBBBモデルを作成した。高次構造に一定の束縛条件を付与したランダムペプチドファージライブラリーを作成して、上記in vitro BBBモデルを用いて目的のアミノ酸配列モチーフの探索を行った。平成25年度はBBBモデルおよびパニング法の改良を行って引き続き進め、脳毛細血管内皮細胞の細胞膜に結合し特徴的に作用する機能モチーフの配列候補群を得た。現在、機能モチーフの更なる創出とこれを用いた医薬候補となる組換え機能タンパクの作製および生体投与の準備を進めている。近年、抗体医薬や核酸などの高分子医薬が癌・癌関連疾患や自己免疫疾患をはじめとする種々の疾患の標的分子に対して創出され、リポソームや高分子ミセルといったキャリアー・デバイスの開発と相まって、高分子特性を利用したターゲティング技術が急速に進歩してきている。しかし、これらは中枢神経系以外の組織を標的としたものが多い。本研究計画では、高分子医薬を脳へ非浸襲的に送達する新しいドラッグデリバリーシステム(DDS)を開発することを目的としている。血液脳関門に発現している膜蛋白・受容体を介して高分子医薬を脳へ送達するペプチド・蛋白質を、指向性進化工学的手法を用いて創出し、将来的な実用化・低コスト化に向けての貢献を目指す。

平成23年度は、脳を標的とした高分子医薬DDS開発のための最初のステップとして、ペプチドの高次構造に一定の束縛条件を付与したデザインのオリジナルランダムペプチドライブラリーを作成し、大腸菌を用いたバクテリアディスプレイ法を応用して標的の膜蛋白受容体に結合するペプチドの探索を行った。大腸菌ペリプラズムにランダム配列のペプチドを発現させると同時に大腸菌内膜上に標的受容体を発現させ、受容体とペプチドとの結合反応をペリプラズム内で行うことにより、従来スクリーニングの際にビーズ等への安定な固定化が困難であった膜蛋白受容体を標的とするペプチド・蛋白質を効率よくスクリーニング・創出することが期待できる。総合領域血液脳関門(Blood-brain barrier: BBB)透過能を持つ中枢標的型蛋白医薬を作成するために、血液脳関門上の受容体に特異的に結合するポリペプチドアミノ酸配列のスクリーニングを、バクテリアディスプレイ法を応用して進めるとともに、in vitro血液脳関門(BBB)モデルを作成してこれを透過するアミノ酸配列モチーフの探索をT7を用いたファージディスプレイ法を応用して行った。多孔質膜を挟んでマウス脳毛細血管内皮細胞とアストロサイトの共培養を実施して高い経上皮電気抵抗値を示すin vitroBBBモデルを作成した。一方で、高次構造に一定の束縛条件を付与したランダムペプチドファージライブラリーを作成し、これを上記BBBモデルに添加して内皮細胞とアストロサイトを透過してくるファージを集めて増幅、このサイクルを繰り返すことにより、BBBモデル透過能を示すペプチドのアミノ酸配列モチーフの探索を行い、現在は目的とするモチーフのさらなる収束化を進めている。平成23年度は3月11日の東日本大震災の影響により実験施設の再開が8月になったため、当初の実験計画を一部変更して研究を実施した。抗体医薬および蛋白医薬はその劇的治療効果から世界の医薬市場で大きな位置を占めているが、ほとんどは末梢組織の癌や関節リウマチ等が標的であり、脳を標的とした蛋白医薬は世界的にも開発が遅れている。本研究では、静脈注射など患者にとってストレスの少ない方法で蛋白医薬を脳に非浸襲的に送達する新しい技術の開発を目指す。種々の指向性進化工学的手法を駆使してBBB透過機能を示すアミノ酸配列モチーフを創出し、これを種々の神経疾患に対する阻害抗体や組換え機能蛋白に組み込むことによりBBBを透過する革新的な中枢標的型蛋白医薬を作成すること、さらにそれらのin vivoでの効果を検証することを目標にする。種々の指向性進化工学的手法を統合的に用いて、タンパク質高分子医薬を脳へ非浸襲的に送達可能にするドラッグデリバリーシステム(DDS)を開発し、将来的な実用化・低コスト化への貢献を目指す。In vitro血液脳関門モデル透過能を示すアミノ酸配列の収束化をさらに進め、BBB透過モチーフをニューロトロフィン等の機能蛋白に組み込んだ融合蛋白を作成する。作成した蛋白質のin vitro
幕末明治期における日本漢学の基礎的研究-北部九州を中心として-

幕末明治期の日本漢学は,清朝考証学の強い影響をうけつつも,きわめて洗練された思想の学問水準を生み出しつつあった.文献考証学の安井息軒,音韻学の狩谷掖斎,思想家としての月田蒙斎,楠本端山・硯水,東沢瀉などがそれである.しかしながらこの学問的成果は,明治維新後の文明開化の波を蒙って正当に評価されることなく忘れ去られてしまった.日本が近代化していく基底には,これら日本漢学によって培養された柔軟で高度な思考力や論理性が深くかかわっていた.しかしこの事実はつねに見落とされている.そこで本研究は,この期間における日本漢学の実態を明らかにし,その功業を具体的に明らかにすることを目的とした.そこで町田は,安井息軒を中心にして,「安井息軒覚書」(東方学72輯),「安井息軒の『管子纂話』について」(台北国学文献館),「北潜日抄について」(研究成果報告書)及び「岡松甕谷のこと」(九大中哲論集13)を書いて,この時期における最高の知識人の学術上の到達点,また維新政府への見方,ヨーロッパ文明への対応等を摘訣し,荒木は九州の生んだ異才,亀井南冥の学問階梯を「亀井南冥の前半生」(研究成果報告書)にまとめ,菰口は,柳川藩士安東省菴の新出記録を「安東家旧蔵の朱舜水書簡について」(研究成果報告書)で紹介し,薄井は昨年一昨年と行なった豊後地方の儒学者探訪の次第を「佐伯文庫訪書記」(研究成果報告書)にまとめている.また福田は,明治中末期の陽明学系統の雑誌「道学遺書」の盛衰を辿って,その社会思想史的意義を闡明しつつある.いずれも研究が完結したとは言い難いが,以上の研究作業を通じて,幕末明治期の「漢学」関係試料を大いに蒐集し,次なる見通し,たとえば明治40年代における「叢書漢文大系」の編集作業こそこの期の「漢学」評価の秀れた指標であり,われわれの次に取り組むべき課題であるとの認識をえたことは,大きな成果であった.幕末明治期の日本漢学は,清朝考証学の強い影響をうけつつも,きわめて洗練された思想の学問水準を生み出しつつあった.文献考証学の安井息軒,音韻学の狩谷掖斎,思想家としての月田蒙斎,楠本端山・硯水,東沢瀉などがそれである.しかしながらこの学問的成果は,明治維新後の文明開化の波を蒙って正当に評価されることなく忘れ去られてしまった.日本が近代化していく基底には,これら日本漢学によって培養された柔軟で高度な思考力や論理性が深くかかわっていた.しかしこの事実はつねに見落とされている.そこで本研究は,この期間における日本漢学の実態を明らかにし,その功業を具体的に明らかにすることを目的とした.そこで町田は,安井息軒を中心にして,「安井息軒覚書」(東方学72輯),「安井息軒の『管子纂話』について」(台北国学文献館),「北潜日抄について」(研究成果報告書)及び「岡松甕谷のこと」(九大中哲論集13)を書いて,この時期における最高の知識人の学術上の到達点,また維新政府への見方,ヨーロッパ文明への対応等を摘訣し,荒木は九州の生んだ異才,亀井南冥の学問階梯を「亀井南冥の前半生」(研究成果報告書)にまとめ,菰口は,柳川藩士安東省菴の新出記録を「安東家旧蔵の朱舜水書簡について」(研究成果報告書)で紹介し,薄井は昨年一昨年と行なった豊後地方の儒学者探訪の次第を「佐伯文庫訪書記」(研究成果報告書)にまとめている.また福田は,明治中末期の陽明学系統の雑誌「道学遺書」の盛衰を辿って,その社会思想史的意義を闡明しつつある.いずれも研究が完結したとは言い難いが,以上の研究作業を通じて,幕末明治期の「漢学」関係試料を大いに蒐集し,次なる見通し,たとえば明治40年代における「叢書漢文大系」の編集作業こそこの期の「漢学」評価の秀れた指標であり,われわれの次に取り組むべき課題であるとの認識をえたことは,大きな成果であった.本研究の目的は、幕末明治期における日本漢学の実情を正確に洗い直し、それによって従来文明開化、欧化の波をこうむって必ずしも正当に評価されることのなかったこの期の漢学者たちを正しく評価し歴史に位置づけることにある。そのために、本年はまず最も基礎的な事項、たとえば各思想家の著作の目録,年譜の作成,書翰類の蒐集調査,主に活動した地方への実地調査等を分担者それぞれが課題に従って調査することを主とした。町田・菰田・薄井は、豊後竹田,大分,日出,杵築へ出張し、各地の高校図書館,市立図書館等を尋ね、また大分市郊外の鶴崎では岡松甕谷の子孫を訪問して、「高田村志」等貴重な資料を入手した。また町田・薄井は、竹鴻井々関係資料蒐集のため、東京、大阪の図書館、博物館を訪ね、福田は東京都立図書館にて井上哲次郎関係資料を検索し、あわせて「道学遺書」関係資料の蒐集につとめている。

町田はさきに「安井息軒覚書」を東方学72輯に発表し、目下これを補足すべくさらに資料を蒐集するとともに、明治初年、針尾の楠本碩水に深い影響を与えた清国駐長崎領事余を、彼の現存する碩水宛書翰を通じて考察し近く発表予定である。なお竹添,岡松研究も順調に進行している。荒木は「雑誌陽明学」の思想史的意味を明治の全体像の中で位置づけるべく構想中であり、菰口は、豊後竹田藩の儒者を、従来のように田能村竹田一人に負わせるのではなく、藩全体のレヴェルで考察し、福田は「道学遺書」関係資料のカード化を鋭意試みている。薄井は、東沢潟の師弟関係を書翰類の整理を通じて解明しつつある。以上、各分担者は、それぞれの担当するテーマに即して資料蒐集,研究調査を続けつつ、次年度末には成果を論文化すべく鋭意努力している。
新規ワールブルグ効果制御物質の作用機序解明

ワールブルグ効果として知られるがん細胞の解糖系優位の代謝はがんの急速な増殖や悪性化に関わることが知られるが、その制御機構の全容は不明な点が多い。本研究ではがん細胞の代謝を制御する新規薬剤の作用機序を細胞内外の代謝解析・生化学・遺伝学の手法で解明した。その結果、がんの代謝を制御する新たな制御機構を見出すことができた。ワールブルグ効果として知られるがん細胞の解糖系優位の代謝はがんの急速な増殖や悪性化に関わり、ゲノム変異やエピゲノム異常によって引き起こされることがわかってきたが、その制御機構の全容は未解明である。がんを理解するためにがん代謝制御機構の解明が強く求められている。私はこれまで未知のワールブルグ効果制御因子を同定する目的で新規の代謝制御物質を探索し、その結果CG56618を取得した。本研究では、当該化合物の標的分子を同定し作用機序を明らかにすること、さらにその標的分子のがん治療のターゲットとしての有効性を検証することを目的とした。CG56618はがん細胞の解糖系流束を制限し、ミトコンドリアでの酸素消費速度を上昇させる。本化合物の細胞内標的を見出すため、メタボローム解析、およびリコンビナントタンパク質を用いたin vitroでの生化学的解析を行った結果、CG56618の標的分子を同定することに成功した。実際、標的タンパク質の遺伝子をゲノム編集でノックアウトすることにより、ワールブルグ効果のキャンセルが認められた。さらにノックアウト細胞ではCG56618を添加しても代謝変化が誘導されなかった。すなわち、CG56618は細胞内で当該標的タンパク質の機能阻害を介してワールブルグ効果を制御することが明らかになった。本研究により当初予想もしていなかった分子が解糖系とミトコンドリア呼吸を制御することが見出された。一年目の目標としていた化合物の標的分子同定ができた。ワールブルグ効果として知られるがん細胞の解糖系優位の代謝はがんの急速な増殖や悪性化に関わり、ゲノム変異やエピゲノム異常によって引き起こされることがわかってきたが、その制御機構の全容は不明であり解明が強く求められている。本課題研究では、新規代謝制御物質CG56618の標的分子を同定し作用機序を明らかにすること、さらにその標的分子のがん治療のターゲットとしての有効性を検証することを目的とした。前年度までにメタボローム解析、in vitroでの生化学的解析、ゲノム編集等遺伝学的解析によりCG56618は細胞内で解糖系代謝酵素を標的とすることが明らかになっていた。最終年度ではCG56618による酸素消費速度増加メカニズムを解析した。CG56618がミトコンドリア呼吸を制御しうるグルタミンの取り込みや呼吸鎖複合体タンパク質発現量、脂肪酸分解経路に与える影響を検討した。その結果、CG56618は脂肪酸合成を負に制御するAMPKを活性化することを見出した。さらにCG56618による酸素消費速度増加はAMPK阻害剤および脂肪酸分解阻害剤によりキャンセルされることからCG56618はAMPK活性化、脂肪酸分解を介してミトコンドリア呼吸を活性化することが明らかとなった。すなわちCG56618は解糖系酵素を阻害することで一時的にATP不足が起こり、その結果AMPKが活性化し脂肪酸分解が誘導されることで酸素消費速度が増加することが考えられた。一方、CG56618やその標的遺伝子のノックアウトは顕著な抗がん作用を示さないことからそれ単独をがん治療のターゲットとすることはできないことが示唆された。当初の計画通り、標的分子のワールブルグ効果制御における役割(標的分子をノックアウトするとなぜ細胞外酸性化速度が減少し、酸素消費速度が増加するのか)を細胞生物学の手法を用いて解析する。また当該標的分子のがん治療標的としての有効性検証も並行して行う。ケミカルバイオロジー代謝解析にかかる物品費が当初見込んでいた費用を下回ったため。この残額は次年度の物品費として使用する予定である。
一過性脳幹部虚血領域におけるグルタミン酸・GABA・5-HTについて

我々は今までに光凝固法(Watoson法)を用いて、前下小脳動脈を閉塞させ,ラット一過性脳幹部挙血モデルを作成し,その血流動態・神経細胞障害性を報告している。本年度も,このラット一過性脳幹部挙血モデルを用いて,serotonin recepter・glutamate recepter・GABA recepter・GABArelatingproteinにつき免疫組織学的検討を加え,結果が得られたものは以下のとうりであった。まず,glutamte recepterに関してであるが,AMPA subunitであるGluR-2は,AICA閉塞後2時間後にdown regulationしていた。次に,GABA relating proteinであるGAD-65・GAD-67,またGABA transpoter 1 (CAT-1)であるが,この3者ともに,AICA閉塞後30分後にはup regulationを起こしていたが,AICA閉塞後2時間後にはcontrol lebelに戻っていた。我々は今までに光凝固法(Watoson法)を用いて、前下小脳動脈を閉塞させ,ラット一過性脳幹部虚血モデルを作成し,その血流動態・神経細胞障害性を報告している。その結果,GLAST・GLT1・GFAP・NR1・NR2A・sgp-2・glapに関しては,mRNAのup regulationが認められた。GluR2・CB1・CB2に関しては,新たにmRNAの発現が認められた。GABA_A・GluR4に関しては,mRNAのdown regulationが認められた。しかし,GIuR1・GluR3・GABA_Bに関しては,mRNAの変化は認められなかった。
肥満時の薬物動態変動による医薬品副作用の回避戦略

合成オピオイドのフェンタニルは、呼吸抑制等の重篤な副作用リスクを勘案しつつ、いかに早く除痛を得るかが臨床的に重要な課題である。本研究は、肥満時の体内動態変動による医薬品副作用の回避戦略を確立することにある。そこで、本研究は、肥満モデルラットおよび本院の入院患者を対象とした臨床試験により「経皮アベイラビリティーとその変動」という新たな概念を確立し、肥満の影響を考慮した迅速で安全な投与設計(増量法)により、オピオイド投与の有効性・安全性の確保と患者QOLの向上を目指して研究を行った。今年度は、フェンタニルの体内動態の個人差の要因として慢性炎症に着目し、アジュバント誘発関節炎モデルラット(AAラット)を用いてフェンタニルの経皮吸収に対する影響を検討した。AAラットは、体重減少、四肢の腫脹および肝臓の炎症性サイトカインmRNA発現レベルの上昇がみられたことから炎症モデルが作製できたと判断した。AAラットは、肝臓のCYP3A活性が有意に低下していたが、フェンタニル静脈内投与時のフェンタニルのAUC及びクリアランス、代謝比(ノルフェンタニル/フェンタニル)に有意差はなかった。この結果は、フェンタニルが血流律速型薬物であることと体重あたりの肝重量が対照群と比較し大きくなっていることが要因と考えられた。AAラットでは、皮膚での消失を免れた割合を示す皮膚アベイラビリティーが低下傾向を示した。これらのことから、慢性炎症は皮膚の代謝能に若干の影響を及ぼすもののフェンタニル消失過程全体に与える影響は小さいものと考えられた。本研究の目的は、肥満時の体内動態変動による医薬品副作用の回避戦略を確立することにある。応募者の予備的な研究により、患者のBMIによりフェンタニルの投与量や除痛までの日数が異なること、経皮投与後のアベイラビリティーが肥満の影響を受けていることを示唆する結果を得た。しかしながら、今日の薬物動態の教科書には、皮膚代謝の重要性やその変動に関する記述がないのが現状である。本研究は、肥満モデルラットおよび本院の入院患者を対象とした臨床試験により、「経皮アベイラビリティーとその変動」という新たな概念を確立し、肥満の影響を考慮した迅速で安全な投与設計(増量法)により、オピオイド投与の有効性・安全性の確保と患者QOLの向上を目指すものである。さらに、本研究の知見の他の病態時の薬物療法の最適化への応用も視野に入れて研究を展開している。平成27年度は、本院の入院患者を対象とした臨床試験「BMI値および体脂肪率によるフェンタニル経皮吸収製剤の薬物動態と鎮痛効果に及ぼす影響に関する検討」の症例組み込みを継続している。特に、尿中のコルチゾールの測定法について、測定条件最適化の検討を重ねている。また、免疫抑制剤のタクロリムスは、フェンタニルと同じく、CYP3A4の基質であり、TDM対象薬物であることから、本院入院患者を対象として、これまで定常状態における肥満度の体内動態変動に与える影響についてレトロスペクティブな検討してきたが、本年度は、特に臓器移植直後の静脈内投与から経口投与への切り替え時における投与量と血中濃度に着目してバイオアベイラビリティの変動に対する影響を検討したところ、定常状態とは一部異なる影響がみられることが明らかとなった。フェンタニルの臨床試験「BMI値および体脂肪率によるフェンタニル経皮吸収製剤の薬物動態と鎮痛効果に及ぼす影響に関する検討」の症例組み入れが継続的に進行中であり、タクロリムスについても併せて検討することで新たな展開も見られているため。免疫抑制剤であるタクロリムスは、個体間や個体内変動が大きいことからTDMにより次回投与量の設計を実施してる。血中濃度が安定しない要因としては、年齢、肝機能、薬物間相互作用、CYP3A5遺伝子多型など数多くの因子の関与が報告されている。これまでに、我々はBody Mass Index (BMI)が経口投与後のタクロリムスの血中濃度の変動要因の1つであり、肥満病態において、肝臓中のCYP3A2発現の減少および小腸のP-gp発現の上昇に伴い、タクロリムスの血中濃度が上昇することを示してきた。幹細胞移植後においてタクロリムスは静脈内投与から経口投与へ変更されるが、この切り替え時においてBMIがタクロリムスのバイオアベイラビリティにどのような影響を及ぼすかについての報告はない。そこで、本研究ではタクロリムスの投与経路切り替え時の投与設計の際に必要なパラメーターであるバイオアベイラビリティに注目し、BMIとの関連性についてレトロスペクティブに検討した。その結果、BMIは静脈内投与から経口投与への切り替え時においても重要な因子になることが示された。タクロリムスを静脈内投与から経口投与への変更する際の投与量換算比は、正常BMI患者に対して肥満患者では少なめに、痩せ型では多めにする必要があることが示唆された。以上のことから、骨髄移植後のタクロリムス投与経路の切り替え時において、BMIは投与設計を実施するにあたり考慮する因子になりうることが示唆された。フェンタニルの臨床試験は未だ症例組み入れを継続中であるが、フェンタニルと同様の動態変動要因が関与すると考えられるタクロリムスの患者データを用いて研究が進展しているため本研究の目的は、肥満時の体内動態による医薬品副作用の回避戦略を確立することにある。これまでの予備的な検討により、経皮投与後のアベイラビリティーが肥満の影響を受ける可能性が示唆されているが、メカニズムの詳細は不明である。

また、今日の薬物動態学の教科書には、皮膚代謝の重要性やその変動に関する記述がみられないことから、貼付製剤の薬物動態における「経皮アベイラビリティー」という概念を確立し有効な薬物投与設計への応用を目指している。本年度は、フェンタニルの体内動態変動要因として炎症に着目し、アジュバント誘発関節炎モデルラット(AAラット)を用いてフェンタニルの体内動態への影響を検討した。AAラットは、生理食塩水を投与したコントロールラットと比較して体重あたりの肝重量が有意に増加し、脂肪量は有意に減少した。また、肝臓のCYP3A1の遺伝子およびタンパク発現レベル、活性は有意に低下していた。両モデルラットにフェンタニルを静脈内投与後の体内動態を検討したところ、AUC∞、CLtotに有意差はなかった。また、代謝物であるノルフェンタニルの血中濃度に有意差はなかった。AA群の肝臓におけるCYP3A活性が低下したもののフェンタニルのAUC∞やCLtotおよびノルフェンタニルの血中濃度に有意差が認められなかったことは、フェンタニルが肝血流律速型薬剤であること、体重あたりの肝重量がコントロールと比較し大きくなっていることが要因と考えられた。またAAラットにおいて有意なVdssの低下が認められたが、このことは脂肪量の減少によるものと考えられた。以上より、炎症はフェンタニル静注時の体内動態の個体差に与える寄与は小さいことが示唆された。フェンタニルの肥満による動態変動メカニズムについて炎症の影響を検討したが、フェンタニル静脈内投与後の体内動態変動に対する寄与は小さいことが示唆される結果となった。また、臨床試験の新規症例の組み入れが停滞しているが、学外共同研究者の協力により、ヒト皮膚におけるCYP3Aの発現の検討が進展したため。合成オピオイドのフェンタニルは、呼吸抑制等の重篤な副作用リスクを勘案しつつ、いかに早く除痛を得るかが臨床的に重要な課題である。本研究は、肥満時の体内動態変動による医薬品副作用の回避戦略を確立することにある。そこで、本研究は、肥満モデルラットおよび本院の入院患者を対象とした臨床試験により「経皮アベイラビリティーとその変動」という新たな概念を確立し、肥満の影響を考慮した迅速で安全な投与設計(増量法)により、オピオイド投与の有効性・安全性の確保と患者QOLの向上を目指して研究を行った。今年度は、フェンタニルの体内動態の個人差の要因として慢性炎症に着目し、アジュバント誘発関節炎モデルラット(AAラット)を用いてフェンタニルの経皮吸収に対する影響を検討した。AAラットは、体重減少、四肢の腫脹および肝臓の炎症性サイトカインmRNA発現レベルの上昇がみられたことから炎症モデルが作製できたと判断した。AAラットは、肝臓のCYP3A活性が有意に低下していたが、フェンタニル静脈内投与時のフェンタニルのAUC及びクリアランス、代謝比(ノルフェンタニル/フェンタニル)に有意差はなかった。この結果は、フェンタニルが血流律速型薬物であることと体重あたりの肝重量が対照群と比較し大きくなっていることが要因と考えられた。AAラットでは、皮膚での消失を免れた割合を示す皮膚アベイラビリティーが低下傾向を示した。
中性子星磁場の進化の研究

磁場が10^8-10^<10>Gとかなり弱いミリ秒パルサーの登場により、連星系における質量降着が中性子星の磁場を弱める原因ではないかと指摘されている。その理由は、降着物質が持ち込む角運動量により中性子星はスピン・アップされ、ミリ秒パルサーになったと考えられるためである。この研究の目的は、質量降着により中性子星の磁場が減衰するか否かを明らかにすることである。中性子星磁場の原因はその内部を流れる電流にあると私たちは考える。質量降着により中性子星内部の温度は高められ、内部の電気抵抗が大きくなる。電流のジュール損失が促進され、磁場は大幅に減衰する。これが質量降着による磁場減衰のシナリオである。一方、降着物質が中性子星表面にたまっていくと、その重みで電流層は徐々に電気伝導度の大きな内部へと押し込まれ、ジュール損失が抑制される。私たちは、質量降着による磁場減衰を正しく評価するために、ジュール損失に対するこれら促進と抑制2つの効果を取り入れて計算を行なった。これまでの研究でわかったことをまとめると次のようになる。・M【greater than or similar】10^<-8>M【of sun】/yになると、アドヴェクションの効果で磁場減衰はサプレス・最終的な磁場の強さは電流分布や質量降着の期間に依存する。ミリ秒パルサーの前身と考えられる低質量連星X線星は、X線光度が大きく準周期的振動を示すZ型ソースとX線光度が小さくバーストを示すAtoll型ソースに分類されている。そして準周期的振動やX線バーストから中性子星の磁場はZ型の方がAtoll型よりも強いと示唆される。この研究で明らかになったアドヴェクションの効果を考えると、この磁場の強さの違いがうまく説明されることがわかった。
地域振興に寄与する女性起業家のワークスタイル

本研究は起業動機が地域振興である女性たちのワークスタイルを、ネットワーク論の視点から検討し、そのモデル提示を目的とした。初年度は、労働市場から退出した女性たち4名に聞き取り調査を行った。いかに生涯にわたって活躍できる働き方が可能になるかという課題に対して、経済的自立を果たしている女性をモデルとすべく、50代、60代の女性一人ひとりの“生き方・働き方"をキャリアマトリックスの形で整理した。結果として3名は嫁として家業を継ぐ立場で家族従業員から発し、現在は経営者/経営者を補佐する立場でそれぞれ起業家精神を発揮しながら地域振興に寄与している。1名は早期退職して自宅を改装し、起業した事例であるが、4人とも業種は異なる。異なりながらも地域を盛り立てようということで、相互に連関している実態が明らかになった。そのネットワークのあり方は、従来の女性の“地縁・志縁"よりも組織的なプロジェクト型ネットワークであるが、寧ろ柔軟性に富む。それは、向老期の女性たちが既存のプロジェクトにそれぞれ参画して繋がったというよりも、自ら手を上げ、声を発してその都度同士を募る“この指とまれ"型のプロジェクトであるため、組織に縛られず、緩やかながら結果を出せる取組みであることが判明した。地域振興の合同会社を設立してもよい事業内容のものもあるが、敢えてビジネスにしない形で緩い紐帯を維持しながら地域振興を模索している事例である。当初5人ずつ3年間で15人の女性にインタビューを実施する予定であった。初年度は50代、60代の女性4人に聞き取り調査を行い、まとめることが出来た上、年度末には対照群として同市内の30代女性起業家2人にコンタクトを取ることができた。さらに、他県で専門職に従事する40代女性たちのネットワークに調査協力依頼済である。いずれも、本年夏までには調査を開始する。新たに2ないし3名の30代40代の女性起業家に聞き取り調査を行い、同市内の世代間比較を行う。また、異なる地域で地場産業の振興、後継者不足を解消するために立ち上がった女性の専門職集団に、組織としての取組みを参与観察のかたちで調査する。並行して個別に聞き取り調査を行い、初年度の調査結果と比較することにより、世代や地域性の違いを明らかにする予定である。消耗品の購入において見積もりより若干安く調達できたため。
走行中電気自動車への非接触給電に向けたパルス電力技術を利用した高効率パルス給電法

本課題は、電気自動車の問題点である航続距離の短さ、充電時間などを解決するため、電気自動車への新たな給電法として、低結合トランスによる電磁誘導を利用した走行中電気自動車へのパルス給電法を提案し、実験を通して検証を行った。空心トランスやケイ素鋼板コアを用いたトランスで給電システムを試作し、実験を行った結果、提案した給電法はエネルギー伝送が可能であることが実証でき、転送効率のトランス結合係数や回路素子の依存性を測定し、各結合係数に対して最大になる回路素子の組み合わせがあることがわかった。また、コイルの位置ずれに対する転送効率の評価やケイ素鋼板トランスの磁気応答性や動作パラメータの評価も行った。本研究は、電気自動車の問題点を解決するため、走行中電気自動車への新たな非接触給電法として、重共振法と容量移行を組み合わせたパルス給電を利用した“低結合トランスによる電磁誘導を用いた走行中電気自動車へのパルス給電"を実験を通して検証することを目的とする。まず、空芯トランスを用いて重共振と容量移行を利用した給電システムを製作し、回路素子パラメータによる動作特性を解析する基礎実験を行った。この結果、給電システムはエネルギー伝送が可能であることが実証できたので、高効率エネルギー転送の実現に向けて重共振条件を満たす結合係数(k=0.6)を有するトランスが必要であるので、鉄心として用いるケイ素鋼板の周波数応答性を評価して10 cm程度の磁気ギャップを有するトランスを開発するとともに、基礎実験データをもとに実証用装置の設計・試作を行った。この後、容量移行によるパルス給電を行う回路にトランスを組み込んでエネルギー転送実験を行い、提案した回路の動作を評価やトランスの位置ずれに対するエネルギー転送効率の評価や転送された静電エネルギーを車載蓄電池へ充電するための回路の検討など給電システム全体の評価も行う予定であったが、諸事情により行うことができなかったので、次年度以降に行う予定である。本課題以外の仕事へのエフォートが増加し、研究に取り組むことができる時間が少なくなってしまった。そのため基礎実験の結果をもとに実証用装置を試作する計画が大幅に遅れてしまったことと装置に必要な高電圧大容量コンデンサの納期が約4ヶ月であったことも重なり、実験実施の計画が大幅に遅れてしまったため本課題の目的を達成することができなかった。本研究は、電気自動車の普及に向けて問題点を解決するため新しい給電法として、電磁誘導と容量移行を組み合わせたパルス給電を利用する走行中電気自動車への非接触給電法を実験を通して検証することを目的としている。空心トランスやケイ素鋼板のコアを用いてトランスを用いて給電システムを製作し、回路パラメータによる動作特性の評価を行った。この結果、提案した給電法はエネルギー伝送が可能であることが実証でき、エネルギー転送効率は回路素子であるコイルとコンデンサの組み合わせに依存し、エネルギー転送効率が最大になる組み合わせがあることがわかった。また、回路抵抗の影響でエネルギー転送効率が低下してしまうため、コイルにリッツ線などを用いて回路抵抗の低減を行った結果、効率が改善された。今後、さらなる抵抗低減の工夫が必要である。さらに、コアを使用した装置は空心コイルを使用したときよりもヒステリシス損などの影響でエネルギー転送効率が低くなってしまったので、トランスの製作にも工夫が必要であることがわかった。静的な状態でコイルの位置ずれによるエネルギー転送効率の評価を行った結果、コイル直径の約8%の位置ずれまでは効率はほぼ変化はなかったが、それ以上の大きくなると効率は低下した。この結果、本システムはパルス給電なので、転送タイミングが重要となり、位置ずれの許容範囲で本システムが動作するように制御する必要がある。今後、現実に近い動的なシステムで実証実験を行うことが重要である。補助事業期間延長を申請した結果、1年間の研究期間延長が承認されたので、製作した実証用実験装置を用いて実施予定であった実験を行い、本課題の目的達成を目指すとともに、その目的より先の計画を立案しながら、研究を推進する予定である。電力応用工学本課題以外の仕事へのエフォートが増加し、研究に取り組める時間が少なくなってしまった。そのため実証用装置を試作する計画が大幅に遅れてしまったことと装置に必要な高電圧大容量コンデンサの納期が約4ヶ月であったことも重なり、実験装置開発や測定装置などの必要な備品の購入を行えなかったためである。未実施だった研究計画に沿って必要な装置備品や測定器などを購入する予定である。
のれんの会計処理をめぐる国際的駆け引きと会計基準設定における説得の探究

平成30年度は、国際会計基準審議会(IASB)及び各国会計基準セッターによるのれんの会計基準設定に関する動向や意向に関する意見収集を進めた。特にIASBによる関連会計基準の事後的レビュー(Post Implementation Review: PIR)のプロセスに関する調査を行うとともに、FASB(米国会計基準審議会)による非上場企業に対するのれんの会計処理簡素化の動きも検討材料とした。また、わが国におけるIFRS(国際財務報告基準)任意適用企業が、現行ののれんに対するアプローチ(非償却及び減損)をいかに捉えているかに関する探索的調査も行った。さらに、のれんの処理に関する各利害関係者の主張を理論化する目的から、言説分析やレトリカル分析に関する先行研究のレビュー及び比較分析を行い、いかに会計研究に適用するかという視点から考察を深めた。具体的には、コミュニケーション研究における主張の類型化(categorization)の視点を援用し、上記ののれんの会計処理に関する国際的政治の側面にいかに適用し得るかを考察した。当該考察を早速英語論文として纏め、2019年7月にニュージーランドのオークランドで開催予定の学際的会計研究学会(The 9th Asia-Pacific Interdisciplinary Research in Accounting (APIRA) Conference)に投稿した。その後に査読を経て報告がアクセプトされたため、学会報告で得たフィードバックやコメントを参考にさらに論文の推敲を進め、2020年以降の出来るだけ早い時期に海外ジャーナルへ投稿したいと考えている。現在まで米国会計基準審議会(FASB)によるのれんの会計処理に関する動きや、国際会計基準審議会(IASB)の動きを追跡し、企業会計基準委員会(ASBJ)によるこれまでの取り組み等とも併せて検討することができている。加えて上記のように、国際学会における報告論文を纏めて次年度における報告がアクセプトされており、一定の成果があったと考えられる。さらにそれと並行して、関連する研究方法論に関する洞察も深め、編著書における分担執筆や雑誌のコラム記事としてのアウトプットが得られたため、研究自体は順調に進展していると考えている。今後は会計基準設定において権力を有する各基準セッターや国際的組織及び特定の個人が、のれんの会計基準設定に関する局面において、いかなる意図を持ってどのように行動したのか、またそれがどのような影響を及ぼしたのかを詳細に分析すべく、関連する重要アクターに接近して情報やデータを収集したいと考えている。それと並行して、会計基準設定に関する「説得」を中心としたコミニュケーション論に関する理論的考察も深めていきたい。
分子系超構造の設計・創成

革新的材料の創成が先端技術の発展の鍵を握っているとの認識は、広く定着するようになった。これはひとえに、材料の基礎研究において発見された新しいシ-ズが革新的な技術へと花開き、一方、革新的材料の創出によって技術が飛躍的に進展するなどの成果が現れ始めたのからにほかならない。本総合研究は、「分子系超構造」という研究を新材料の基盤研究として重要な分野と位置付け、従来行われてきた個別的あるいは散発的な「分子系超構造」に関する研究成果を系統的に整理し、「分子系超構造」に関する知見を集積すると共に、将来に向けた研究指針の確立をはかることを目的として、次に列挙する会合を行った。1.平成6年9月16、17日に福岡リ-セントホテルで分担者による講演会を開催した。各分担者は、従来の研究成果と平成7年発足の重点領域研究「分子系超構造」に対して研究計画を述べ、討議した。2.平成7年1月23日に学士会別館で重点領域研究の総括班予定者の会合を行い、重点領域研究「分子系超構造」の運営法・日程・研究計画について討議した。3.平成7年1月23二つに学士会別館で重点領域研究「分子系超構造」の計画班予定者による研究会を開催し、今後の研究方針を中心に討議を行った。4.平成7年3月2日に文部省で平成7年発足の重点領域研究「分子系超構造」に対する公募研究の計画調書の審査を行った。
タンパク質相互作用に基づくペプチドリガンドの設計とプロテインノックダウンへの応用

標的タンパク質に結合するヘリカルペプチド(PERM3、SAHM1)をリガンドとしてSNIPERに導入し、エストロゲン受容体及びNotch1を分解するペプチド型SNIPERを開発した。これらのSNIPERはプロテアソームによる標的タンパク質の分解を誘導し、SNIPER(Notch)ではNotch下流のc-myc遺伝子発現を阻害した。これらの結果から、ヘリカルペプチドを標的リガンドとしても標的タンパク質を分解するSNIPERを開発できる事が示された。これまでの研究で、エストロゲン受容体に対して強い親和性(Kd値:13nM)で結合するヘリカルペプチド(PERM3)を開発した。膜透過性を高めるためにPERM3のC末に膜透過ペプチド(R7)を結合し、さらにN末には各種リンカーを介してIAPリガンド(MV1)を結合したペプチド型SNIPERを各種合成した。これらのペプチド型SNIPERをin vitroでMCF7ヒト乳がん細胞に6時間作用させてエストロゲン受容体の発現量の変化をWesternブロット法で評価した結果、PEGリンカー(n=2)を介してMV1とPERM3-R7を結合したペプチド型SNIPER(peptide4)、及びAlaリンカーを介してMV1とPERM3-R7を結合したペプチド型SNIPER(peptide5)がエストロゲン受容体の減少活性を示す事を見出した。PERM3はアンドロゲン受容体にも結合活性を示す事から、アンドロゲン受容体の減少活性を同様にして調べたところ、これらのペプチド型SNIPERはアンドロゲン受容体の減少活性も示す事がわかった。またこれらの核内受容体減少活性は、プロテアソーム阻害剤であるMG132で抑制された事から、これらのペプチド型SNIPERはユビキチン・プロテアソーム系による標的タンパク質の分解を誘導している事が示唆された。これらの結果から、ヘリカルペプチドを標的リガンドとして利用したペプチド型SNIPERによって標的タンパク質の分解を誘導できることが示された。しかし小分子リガンドを利用したSNIPERに比べて活性が弱いことから、細胞への透過性などを改善する必要があると思われた。エストロゲン受容体及びアンドロゲン受容体の分解誘導活性を持つペプチド型SNIPERの開発に成功した。Notchシグナルは細胞分化、細胞増殖、細胞死等に細胞の様々な機能に関与する重要なシグナル系であり、急性Tリンパ性白血病などのがん細胞ではNotchシグナルの異常な活性化が報告されている。Notch受容体にリガンドが結合すると、細胞表面のNotch受容体はプロテアーゼによって切断され、細胞内ドメインが細胞質に遊離して転写因子CSL及び転写Co-activator因子MAML1と結合して転写活性化を起こす。MAML1のN末からデザインされたヘリカルペプチドSAHM1はNotch1/CSL複合体に結合する事が報告されているため、SAHM1とMV1(IAP antagonist)をリンカーで繋いだSNIPER(Notch)を合成して、その標的タンパク質分解活性を調べた。その結果、SHAM1ペプチドやPEGリンカーの短いSNIPER(Notch)ではNotchタンパク質を分解しなかったが、PEGリンカーの長いSNIPER(Nocth)はNotch1タンパク質を分解する活性を示し、Notch下流のcーMycの発現を抑制した。またSNIPER(Notch)によるNotch1タンパク質の分解はプロテアソーム阻害剤MG132で阻害された。一方CSLタンパク質はいずれのSNIPER(Notch)でも分解されなかった。これらの結果から、ヘリカルペプチドを標的リガンドとして組み込んだSNIPERは、標的タンパク質Notch1の分解活性を示す事が明らかになった。しかし結合するすべてのタンパク質を分解するわけではなく、個々のSNIPERによってユビキチン化を受けやすい標的タンパク質とそうでない標的タンパク質が存在することが示唆された。また標的タンパク質の分解にはリンカーの長さが重要であり、リンカー長を最適化する必要があることが示された。ペプチド型SNIPERによって標的タンパク質に形成されたユビキチン鎖の性状をTUBE(Tandem Ubiquitin Biding Entity)を利用してMSで解析すると共に、siRNAによってIAPを発現抑制した細胞で標的タンパク質のユビキチン化とプロテアソームによる分解が阻害されているかどうかを調べ、標的タンパク質のプロテインノックダウンが想定通りIAPによるユビキチン化を介しているかどうか検討する。さらにこれらタンパク質の分解が下流のシグナル経路に与える影響を検討する為に、エストロゲン受容体によって転写活性化される事が知られているサイクリンD、Myc、pS2等の遺伝子発現を定量的RT-PCRで解析する。また乳がん細胞、前立腺がん細胞の増殖阻害活性をMTTアッセイで測定し、細胞死誘導活性をフローサイトメーター及びカスパーゼ活性化等の方法で測定する。ケミカルバイオロジー当該年度の研究計画を主に年度の後半に実施したが、第4四半期に執行した経費の支払いが遅れているため。当初の予定通り、物品費(試薬及び消耗品等の購入)、及び研究成果発表のための旅費等に研究費を使用する予定である。