hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ドイツの学校内各種会議における審議内容および審議過程に関する研究

今年度は次の2つの作業を進めることができた。第一に、昨年度のノルトライン・ヴェストファーレン州の場合と同様に、研究対象であるニーダーザクセン州における学校内の各種会議に関する規定を調べ、制度枠組みを把握した。具体的な作業としては、関係法令および研究論文をもとに、各種会議で審議されることになっている事項としてどのような項目があるのかを調べた上で、どのような構成員によって審議されているのか、その構成員はどのように選出されているのかについて明らかにした。昨年度のノルトライン・ヴェストファーレン州の場合と異なる点も数多く見られ、州ごとの独自性を確認することができた。第二に、約2週間にわたるドイツ滞在によって、ニーダーザクセン州の総合制学校(オルデンブルグ)およびドイツ国際教育研究所(フランクフルト)を訪問することができた。とりわけ、総合制学校においては、学校内の各種会議を傍聴するとともに、校長にインタビューする機会を得て、学校内各種会議における審議内容および審議過程の一端を見聞することができた。また、他の州の学校会議の議事録を入手することができ、こちらの分析も進めた。今年度は、主に以上のような作業を進めることができた。しかしながら他方、調査研究の進展が必ずしも十分ではなかった。今後、データを整理するとともに、できるだけ早い時期に研究成果を公表する予定である。第一に、調査対象であるノルトライン・ヴェストファーレン州における学校内の各種会議に関する規定を調べ、制度枠組みを把握した。関係法令および研究論文をもとに、各種会議で審議されることになっている事項としてどのような事項があるのかを調べた上で、どのような構成員によって審議されているのか、その構成員はどのように選出されているのかについて明らかにした。第二に、第一の作業と平行して、調査方法の検討および調査票の作成を進めた。調査方法としては、特定の学校種に限定する必要があるとの結論に達し、ギムナジウムを対象として校長宛に調査票を郵送することにした。その際、回答してもらった校長には、調査結果のフィード・バックを行うことを調査時に明記することで、回収率の向上を図ることにした。さらに、10日間にわたるドイツ滞在によって、ドイツ国際教育研究所(フランクフルト)および調査対象であるノルトライン・ヴェストファーレン州の文部省(デュッセルドルフ)を訪問する機会を得て、両機関の担当者から調査方法および調査票についてのアドバイスを得ることができた。本年度は上記の作業に加え、実際に調査票を送付するとともに関連資料を収集するという作業も予定していた。しかし、とりわけ第二の作業に十分な時間をかけ、作業を慎重に進めたため、この第三の作業は次年度に実施することになった。次年度は早急に調査対象校のリストアップを行うとともに、調査票を郵送する予定である。
ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルスの神経親和性決定機構と持続感染機序の解明

血球凝集性脳脊髄炎ウイルス(HEV)の神経親和性決定機構と持続感染機序の解明に関して下記のような成績を得た。1.マウスにおける各種接種経路によるHEVの神経親和性。HEVに対して週令の増加に伴い感受性が低下したが脳内、鼻腔内、皮内接種では8週令マウスで感染し、HEVの神経親和性は接種経路に大きく関与することが明らかとなった。後肢皮下接種によるHEVの末梢神経から背角神経節を介してウイルスは腰髄、大脳皮質II, IV層神経細胞、小脳プルキニエ細胞へ感染を広げることがウイルス学的、免疫組織化学的検索により証明された。2.神経組織内におけるウイルス輸送経路の解明では、狂犬病ウイルスが神経軸索内を、ヘルペスウイルスではじく先に加え、シュワン細胞内を経由して末梢からCNSへ感染を拡げることが知られている。ラットの坐骨神経の再生軸索実験系による解析では、軸索切断後再生軸索が接種部位に到達したと考えられる時期(手術20,30日後)のHEV接種ではウイルスがCNSに移行し、それ以前(手術直後、10日後)では感染発症しなかったことから、HEVはシュワン細胞を介することなく、狂犬病ウイルスと同様に神経軸索のみを介して感染を拡げることが解明された。3.HEVの標的細胞を同定するために、HEVを脳内、皮下接種したマウス、ラットのアストロサイト(GFAP)、ミクログリア細胞(TB4)に対する抗体とHEV抗体による2重、もしくは3重免疫組織化学法では、GFAP及びTB4陽性細胞にはHEV抗原が検出されず、HEVは神経細胞にのみ感染し増殖することが証明された。4.これらの成績から、1)HEVが軸索内移動すること。2)経シナプス的感染をすること、3)標的細胞が神経細胞であること、4)感染神経細胞に壊死的、融解敵感染が認められないこと、5)CNSに炎症性反応が認められないことが、神経親和性、持続感染成立に大きく関与していると考察された。ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス(HEV)のラット、マウス感染実験により下記の成績を得た。(1)マウス、ラット後肢皮下接種した中枢神経系(CNS)は大脳皮質錐体細胞、海馬錐体細胞、小脳プルキニエ細胞など大型神経細胞に免疫組織化学的染色によりHEV特異抗原が認められ、グリア系細胞には検出されなかった。これを免疫組織学的にアストロサイトを杭GFAP抗体、ミクログリアを杭TB-4抗体、HEV感染細胞を杭HEV抗体で染色し、これら抗体による2重若しくは3重染色によりHEV感染細胞を同定し解析した。その結果、HEV抗原はGFAP抗体陽性細胞、TB-4陽性細胞には検出されず、HEVが神経細胞に感染する事が示された。(2)末梢神経からCNSへの感染はHEVの後肢皮下接種後、直ちに坐骨神経を切断、もしくは切断した動物では感染が阻止されることから、ウイルスが経シナプス的に感染を拡げることを確認してきた。ウイルスが神経細胞の軸索若しくは髄鞘を介して感染することを明らかにするために、ラット左後肢坐骨神経を切断後、直ちに縫合し、手術後、0,10,20,30日後に同側膝皮下にウイルス接種した。手術0日、10日後の接種では全例発症せず、脳からウイルスが回収されなかった。

しかし、20日後、30日後の接種では発症し、脳からウイルス抗原若しくはウイルスが検出された。これらの成績からHEVは再生した軸索を介して感染を拡げることを解明した。ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス(HEV)の神経親和性決定機構と持続感染機序の解明に関じて下記のような成績を得た。1.マウスにおける各種接種経路によるHEVの神経親和性を解明するために、週令の異なるマウスにHEVを各経路から接種した。マウスの週令増加に伴いHEVに対する感受性が低下したが、8週令マウスでは脳内、鼻腔内、皮内接種の順で感染し、静脈内、腹腔内、経口接種では全例生残した。これらの成績から、ウイルスは新経路を貸して末梢から中枢神経系(CNS)煮幹線を拡げることが明らかとなった。末梢からCNSへの感染を明らかにするために後肢皮下接種した。ウイルスは初めて脊髄から分離され、その後脳から分離された。CNS内ウイルス増殖に一致して、ウイルス抗原は腰髄神経節、腰髄、大脳皮質II, IV層神経細胞、小脳プルキニエ細胞に検出された。大変興味深いことは、脳内接種では大脳皮質全層の神経細胞に抗原が観察されたが、皮下接種ではIII, V層の神経細胞には抗原が検出されず、接種経路が異なると感染経路がことなることである。2.脳内、皮下接種した動物のHEV抗原陽性細胞では、細胞病理学的な変化が見られず、CNSにおける炎症性反応も観察されなかった。3.ラットの後肢筋肉内接種では、接種側の後肢が数日後麻痺を起こした。腰髄神経節、腰髄における抗原陽性細胞数は、皮下接種に比べ少ない傾向が見られた。
沖縄池間島の古謡の機能・構造論的研究

池間島の古謡を、機能・構造論的観点から研究するために、対象地点の池間島に数度臨地調査を実施して、50首ほどの古謡を収集することができた。これらの資料について国際音声記号およびかな文字を用いて翻字した。既刊の文献・音声資料とともに、歌詞の対訳をつけた。古謡を機能・構造論的観点から研究するためには、(1)場の構造、(2)歌唱主体、(3)歌詞の内容などについて、その実体を把握する作業が前提になる。歌謡を実現する場が宗教儀礼的であれば、歌詞の内容もそれにふさわしい主題の歌謡がうたわれるし、世俗的な場では、社会における人間関係を主題にした歌謡がうたわれる。また、宗教歌謡を実現するにはその歌唱主体は特定の宗教者に限定され、そこでは世俗の原理は排除される。世俗歌謡を実現するには歌唱主体に関する制約はなく、個人的な趣味や能力に応じて、自由に歌謡が人々に解放されている。池間島の古謡は、上記の三つの観点から、(1)宗教歌謡と(2)世俗歌謡に分類することができる。宗教歌謡の場は、ユ-クイ(世乞い)とよばれる、豊年祈願祭が主であり、そこでは、神に豊作を祈願する主題の歌謡がうたわれる。つまり、宗教的な場における、宗教的な主体による、宗教的な内容の歌謡がうたわれるのであり、ここに宗教歌謡の機能が存在する。また、世俗歌謡の場は、ミャ-クヅツや祝事や宴会の際に、人間関係を主題にした歌謡がうたわれる。このように、歌謡の場や歌唱主体や歌詞の内容などが緊密に相関しあっていて、歌謡は、それぞれの関係にふさわしい機能を実現しているのである。社会生活における、歌謡の機能・構造の厳格な存在は、琉球列島の他の島々でも散見できるものであるが、池間島のそれは、いちじるしく典型的である。今年度は池間島の臨地調査を数回実施して,約20首の古謡を収集することができた。これらの資料は国際音声記号およびかな文字を用いて翻字した。既刊の文献資料から収集したものとあわせて、歌形論的整理および対訳作業を進めている。この作業にはインフォーマントからの聞き取り調査の成果が反映されている。なお、現地のインフォーマントの説明によって、まだ数十首以上の古謡が伝承されていることが確認された。今年度は、予備調査的な性格をもたせて、古謡の存在状態を確認する作業を主にしたので、収集した古謡の数はかならずしも多いとはいえないが、今後の収集作業はそれほど困難な状況にはないという感触をえることができた。当初の研究目的・計画・方法どおりに、順調に進行している。しかし、池間島では宗教行事のもっとも中心になるツカサ(司、神職者)が現在欠員になっているために、宗教的な古謡を実現する際の状況を映像や音声によって記録することが不可能になっている。だが、ツカサ職を過去に経験した人々が健在なので、この点に関する聞き取り調査は十分可能であり、いくつかの事例については資料を収集することができた。歌詞の内容を主題・思想・構造論的な観点から分析する作業に関する着手もはじめた。その見通しによれば、池間島の古謡は、宗教的な内容から世俗的な内容にいたるまで、多岐にわたる主題を表現し、機能論的に多様な様相をしめしていて、たいへん興味ぶかいものがある。構造に関しても、他の琉球列島においては確認されていない事例が存在する。

池間島の古謡を、機能・構造論的観点から研究するために、対象地点の池間島に数度臨地調査を実施して、50首ほどの古謡を収集することができた。これらの資料について国際音声記号およびかな文字を用いて翻字した。既刊の文献・音声資料とともに、歌詞の対訳をつけた。故謡を機能・構造論的観点から研究するためには、(1)場の構造、(2)歌唱主体、(3)歌詞の内容などについて、その実体を把握する作業が前提になる。歌謡を実現する場が宗教儀礼的であれば、歌詞の内容もそれにふさわしい主題の歌謡がうたわれるし、世俗的な場では、社会における人間関係を主題にした歌謡がうたわれる。また、宗教歌謡を実現するにはその歌唱主体は特定の宗教者に限定され、そこでは世俗の原理は排除される。世俗歌揺を実現するには歌唱主体に関する制約はなく、個人的な趣味や能力に応じて、自由に歌揺が人々に解放されている。池間島の古謡は、上記の三つの観点から、(1)宗教歌謡と(2)世俗歌謡に分類することができる。宗教歌謡の場は、ユークイ(世乞い)とよばれる、豊年祈願祭が主であり、そこでは、紙に豊作を祈願する主題の歌謡がうたわれる。つまり、宗教的な場における、宗教的な主体による、宗教的な内容の歌謡がうたわれるのであり、ここに宗教歌謡の機能が存在する。また、世俗歌謡の場は、ミャークヅツや祝事や宴会の際に、人間関係を主題にした歌謡がうたわれる。このように、歌謡の場や歌唱主体や歌詞の内容などが緊密に相関しあっていて、歌謡は、それぞれの関係にふさわい機能を実現しているのである。社会生活における、歌謡の機能・構造の厳格な存在は、琉球列島の他の島々でも散見できるものであるが、池間島のそれは、いちじるしく典型的である。
星間塵上の化学反応シミュレーション

宇宙における化学進化において星間塵が果たす役割の重要性は十分認識されているが、これを確認する方法論はほとんど開発されていない。本研究は、星間塵上の化学反応シミュレーションを可能にする方法論の開発を目的とする。10Kの金属表面にN原子を含む窒素分子をプラズマ蒸着し、これをプラズマで生成したH原子と反応させ、生成物の昇温脱離質量スペクトル(TPMS)を測定した。TPMSより、膜中にアンモニアが生成することが分かった。また、CO分子薄膜とH原子の反応により、ホルムアルデヒドおよびメタノールが生成することを見いだした。また、反応時間の増加と共にホルムアルデヒドに対してメタノールの生成量が相対的に増加することが分かった。これは、COとH原子の逐次水添反応によってメタノールがホルムアルデヒドを経て生成することを示す。この実験結果は、星間空間に多く存在するアンモニア、ホルムアルデヒド、メタノールなどの星間分子の生成に星間塵が重要な役割を果たすことを示唆する。
オンチップ集積された光ナノ共振器間の結合形成と動的制御の実現

フォトニック結晶は、光波長程度の微細構造によって光場を制御し、光を自在に操作することが可能と期待される人工結晶である。フォトニック結晶中に点欠陥を導入すると、その欠陥領域に光を強く閉じ込める光ナノ共振器が形成できる。光ナノ共振器は光を物質中に強く局在させることが可能であるため、光バッファメモリや、光と物質との相互作用を利用した量子デバイス等への応用が期待される。このような多彩な応用をもつ光ナノ共振器をチップ上に複数形成し、それらの間での光のやりとりを自在に制御できれば、複数ビットをもつ光バッファメモリや光パルスのルーティング等の新規光機能の実現が期待される。本研究では昨年度までに、物質内波長の100倍以上離れた光ナノ共振器間で自在なタイミングかつ高効率に光を転送する操作の提案および実証を行った。このような光操作を応用へと結びつけるためには、1より多彩な光操作の実現、および2多数共振器の同時制御が可能な方式の実現が必要となる。そこで本年度は、1より多彩な光操作の例として、光ナノ共振器に捕捉した光の時間反転操作の実証を行い、また2多数共振器の同時操作が可能な方式として、共振器結合系に対して面内p-i-n構造を導入し、電気パルスの印加による電気的な光操作を実証した。まず、13つの共振器(A, C, B)を直列に結合させ、共振器Cに任意のタイミングで制御光パルスを照射することで、A, Bの間で行き来する光に対する時間反転操作を世界に先駆けて実証した。本成果により、光ナノ共振器を用いた多彩な光操作の一例を示すことができた。次に、2共振器Cに対して面内p-i-n構造を導入したデバイスを作製し、電圧パルス(3.5V, 3ns)の印加によりA, B間を行き来する光の遷移周波数(結合強度)を動的制御することに成功した。本成果により大規模な応用に向けた基礎技術を実証することができた。28年度が最終年度であるため、記入しない。フォトニック結晶上に形成した微小共振器(光ナノ共振器)は、光をその波長の3乗程度の微小領域に強く閉じ込めることができるため、光を蓄積する光バッファメモリや、光と物質との相互作用を利用した量子情報処理デバイス等への応用が期待されている。これまで、単一の光ナノ共振器に対して光パルスを動的に捕捉/解放するといった1ビットの光機能が実現されてきたが、一方で複数の光ナノ共振器を自在な位置に形成し、それらの間で自在な光のやりとりを実現できれば、複数ビットを持つ光バッファメモリや、光パルスのルーティング等の新規光デバイスの実現が期待される。今年度においては、その第一段階として、複数の光ナノ共振器を結合させ、それらの間で任意のタイミングで光を転送するといった操作の実証を行った。具体的には、まずチップ上で光の波長の50倍以上離れた位置に2つの光ナノ共振器(共振器A, Bとする)を形成し、またそれらを相互に接続するための光導波路を形成したフォトニック結晶構造を設計・作製した。共振器A, Bの共振周波数は互いに異なる状態に設定した。次に、片側の共振器(共振器A)に光を捕捉させ、共振器の光寿命以内の任意のタイミングで共振器Aに対して制御光パルスを照射した。この制御光パルスにより共振器Aの共振周波数が変調され、共振器Bの共振周波数と交差することで、共振器A内に捕捉されていた光はモードの断熱的変化の影響を受け、共振器Bへと転送される。実験においては、時間分解測定から、およそ60%の効率で共振器AからBへと光が転送される様子が確認され、また制御光パルスの照射タイミングを変化させることで任意タイミングでの光転送操作が可能であることも確認した。本成果により、光ナノ共振器間の結合状態に対して簡便な操作を行うことで光転送が可能であることが実証でき、大規模な結合系に対する光操作への展開も期待できる。光の波長程度の微細な周期構造をもつフォトニック結晶は、光場の制御により光の自在な操作が可能と期待されている。フォトニック結晶中に点欠陥領域を形成すると、その微小領域に光を閉じ込める光ナノ共振器が形成できる。光ナノ共振器においては光が強く局在するため、光バッファメモリや、光と物質との相互作用を利用した量子情報処理デバイス等への応用が期待される。これまで、本研究室においては単一の光ナノ共振器を用いた光操作を実証してきたが、一方で複数の光ナノ共振器をチップ上に形成し、それらの間で自在な光のやり取りを実現できれば、複数ビットを持つ光バッファメモリや、光パルスのルーティング等の新規光デバイスの実現が期待される。昨年度(平成26年度)において、チップ上に形成した2つの光ナノ共振器を結合させ、片側の光ナノ共振器に捕捉した光を、外部制御により任意のタイミングで他方へと転送する操作を実証した。一方で、本実証においては転送の効率が60%程度に制限されていた。転送効率を制限する要因として、共振器に捕捉された光が、外部制御に伴う自由キャリアによって吸収されることが挙げられる。そこで今年度(平成27年度)においては、2つの光ナノ共振器の間を、第3の共振器(制御用共振器)を介して結合させ、制御用共振器に外部制御を加える事で、光の吸収を大幅に抑制する方式を実証した。

本方式においては光の分布と自由キャリアの分布の空間重なりを低減し、90%程度の高効率な光転送操作の実証に成功した。本成果においては外部制御としてレーザーパルス光による自由キャリア生成を用いた。一方で、制御機能の集積化の観点からはシリコンフォトニック結晶上に面内p-i-n構造を形成し、電気的な制御を行うことが望ましい。そこで今年度においては、フォトニック結晶と面内p-i-n構造の形成プロセスを確立し、その基礎特性の評価も行った。本年度は次の3点での進展があったと考えている。1.オンチップに形成した複数の光ナノ共振器の共振波長を、フォトニック結晶作製後に熱光学効果によって調整するためのマイクロヒータの形成プロセスの確立。2.波長の100倍以上離れた光ナノ共振器間での、任意タイミングかつ高効率(90%)な光転送操作の実証。3.フォトニック結晶構造と面内p-i-n構造の同時形成プロセスの確立と、基礎特性の評価。この中で、特に1.の項目は当初予想していなかった成果であり、これによりチップ上に多数の光ナノ共振器を形成した際にも各共振器の共振波長を正確に調整することが可能となった。また、この成果により2.のような高効率な光転送操作を世界で初めて実証することに成功している。以上の成果により、現在までの進捗は当初の計画以上に進展していると考えている。フォトニック結晶は、光波長程度の微細構造によって光場を制御し、光を自在に操作することが可能と期待される人工結晶である。フォトニック結晶中に点欠陥を導入すると、その欠陥領域に光を強く閉じ込める光ナノ共振器が形成できる。光ナノ共振器は光を物質中に強く局在させることが可能であるため、光バッファメモリや、光と物質との相互作用を利用した量子デバイス等への応用が期待される。このような多彩な応用をもつ光ナノ共振器をチップ上に複数形成し、それらの間での光のやりとりを自在に制御できれば、複数ビットをもつ光バッファメモリや光パルスのルーティング等の新規光機能の実現が期待される。本研究では昨年度までに、物質内波長の100倍以上離れた光ナノ共振器間で自在なタイミングかつ高効率に光を転送する操作の提案および実証を行った。このような光操作を応用へと結びつけるためには、1より多彩な光操作の実現、および2多数共振器の同時制御が可能な方式の実現が必要となる。そこで本年度は、1より多彩な光操作の例として、光ナノ共振器に捕捉した光の時間反転操作の実証を行い、また2多数共振器の同時操作が可能な方式として、共振器結合系に対して面内p-i-n構造を導入し、電気パルスの印加による電気的な光操作を実証した。まず、13つの共振器(A, C, B)を直列に結合させ、共振器Cに任意のタイミングで制御光パルスを照射することで、A, Bの間で行き来する光に対する時間反転操作を世界に先駆けて実証した。本成果により、光ナノ共振器を用いた多彩な光操作の一例を示すことができた。次に、2共振器Cに対して面内p-i-n構造を導入したデバイスを作製し、電圧パルス(3.5V, 3ns)の印加によりA, B間を行き来する光の遷移周波数(結合強度)を動的制御することに成功した。本成果により大規模な応用に向けた基礎技術を実証することができた。当初の計画においては、本年度は、光ナノ共振器間の結合の強度に対する動的な制御方法の実証を行った後に、光ナノ共振器間の任意タイミングでの光転送の実証を行うことを予定していた。
大都市公共空間の空中浮遊インフルエンザウイルスの動態とその制御要因

空気中ウイルスの検出にも応用が試みられているnested RT-PCR法を用いた空中浮遊インフルエンザウイルスの検出法の確立をめざしたが、これまでのところ、安定して空中のインフルエンザウイルスを検出できる条件が得られなかった。原因としては、ウイルスの捕集方法に関する問題、PCRの感度の問題などが考えられた。したがって、大都市公共空間における空中浮遊インフルエンザウイルスの動態、インフルエンザウイルスの検出状況と浮遊粒子状物質、浮遊細菌、検出される細菌種、その他気温、湿度、人の密度、換気条件といった指標との関連については十分な統計学的検証をすることができなかった。しかしながら、大都市地下公共空間(公共地下通路、地下鉄車両内)において、浮遊粒子状物質および空気中浮遊細菌の動態を明らかにした。通行者、粒径5.0μmの浮遊粒子状物質数と空気中浮遊細菌間に正の相関が認められることを明らかにした。空気中浮遊細菌の同定を行った結果、前回の調査同様、空気中の浮遊細菌はグラム陽性菌がやや優勢であり、属レベルでStaphylococcus属、Micrococcus属、Pseudomonas属が優位であった。病原性が示唆される黄色ブドウ球菌、連鎖球菌も同定された。空気中浮遊ウイルスに関する文献調査と上記結果より、インフルエンザ流行期には、粒径5.0μmの浮遊粒子状物質数を空中浮遊病原体のリスク指標として使用できる可能性が示唆された。今後は、空中浮遊病原性ウイルスを安定して検出法を確立できるよう、鋭意努力していく所存である。Myattらが報告している空中浮遊ウイルスの検出法ならびに、臨床検体で用いられているnested RT-PCR法により、実験室の生物学的安全キャビネット中で、実験的に発生させたインフルエンザウイルスを含むエアロゾルを用い、空中浮遊インフルエンザウイルスの検出法を検証した。上記の検出法を用い、実験的に空中浮遊インフルエンザウイルスの検出率が最も高くなるサンプリングの条件について検証した。インフルエンザの流行がみられた平成18年23月に大都市公共空間においてフィールド調査を実施した。地下通路、地下鉄車両内、病院ホール、公園(対照)の各空間を調査対象公共空間とし、気温、湿度、気流(風速)、浮遊粒子状物質(粒径:0.1μm、0.5μm、1.0μm、5.0μm)、人の密度(1m2あたりの人数、乗車率)を計測し、空調・換気設備の特徴を記録した。空中浮遊インフルエンザウイルスの検出は空中微生物サンプラーセット(柴田科学ABB-2型)を用い、サンプリング後のメンブレンフィルターを試料として上記方法により検出を行った。同時に空中浮遊細菌の検出、分析を行った。上記の結果をもとに、公共空間における空中浮遊インフルエンザウイルスのモデル検出法、インフルエンザウイルスが検出された場合の他の条件の特徴について検討した。上記の実験・調査と併行して、空中浮遊インフルエンザの検出法、浮遊粒子状物質や浮遊細菌との関連、インフルエンザウイルスの伝播様式、等に関する最新の知見について文献調査を行った。昨年度実施した、Myattらが報告している空中浮遊ウイルスの検出法ならびに、臨床検体で用いられているnested RT-PCR法により、実験室の生物学的安全キャビネット中で、実験的に発生させたインフルエンザウイルスを含むエアロゾルを用いた、空中浮遊インフルエンザウイルスの検出法について、再現性等を検証し、方法論について整理した。初年度のフィールド調査の結果について、a)各公共空間における空中浮遊インフルエンザウイルスの検出率、浮遊粒子状物質数、浮遊細菌数、同定された細菌相の違い、b)サンプリングを実施した高さ(80cmと150cm)による測定結果違い、c)インフルエンザウイルス検出率と気温、湿度、気流(風速)、浮遊粒子状物質数、浮遊細菌数、同定された細菌相、換気条件との関連について統計学的に分析した。インフルエンザウイルスの検出と浮遊粒子状物質数、浮遊細菌数との関連が推定されたが、更なる検証が必要と考えられた。今年度のフィールド調査として、夏季に調査を実施した(negative control)。また、インフルエンザ流行期の調査は、今年度のインフルエンザ流行の始まりが例年よりかなり遅かったため、これまでのところ十分なサンプル数に達しておらず、引き続き調査を継続中である。空中浮遊インフルエンザの検出法、浮遊粒子状物質や浮遊細菌との関連、インフルエンザウイルスの伝播様式、等に関する最新の知見について文献調査を行った。

空気中ウイルスの検出にも応用が試みられているnested RT-PCR法を用いた空中浮遊インフルエンザウイルスの検出法の確立をめざしたが、これまでのところ、安定して空中のインフルエンザウイルスを検出できる条件が得られなかった。原因としては、ウイルスの捕集方法に関する問題、PCRの感度の問題などが考えられた。したがって、大都市公共空間における空中浮遊インフルエンザウイルスの動態、インフルエンザウイルスの検出状況と浮遊粒子状物質、浮遊細菌、検出される細菌種、その他気温、湿度、人の密度、換気条件といった指標との関連については十分な統計学的検証をすることができなかった。しかしながら、大都市地下公共空間(公共地下通路、地下鉄車両内)において、浮遊粒子状物質および空気中浮遊細菌の動態を明らかにした。通行者/乗客数、粒径5.0μmの浮遊粒子状物質数と空気中浮遊細菌間に正の相関が認められることを明らかにした。空気中浮遊細菌の同定を行った結果、前回の調査同様、空気中の浮遊細菌はグラム陽性菌がやや優勢であると考えられ、属レベルでStaphylococcus属、Micrococcus属、Pseudomonas属が優位であった。病原性が示唆される黄色ブドウ球菌、連鎖球菌も同定された。空気中浮遊ウイルスに関する文献調査と上記結果より、インフルエンザ流行期には、粒径5.0μmの浮遊粒子状物質数を空中浮遊インフルエンザウイルスのリスク指標として使用できる可能性が示唆された。
好熱菌の熱ショックタンパク質によるタンパク質の再活性化と膜輸送

好熱菌PS3の上清分画より,実験計画のように主要な熱ショックタンパク質61K,12Kおよび69Kを精製した。主要な分離手段は、これらのタンパク質がATP結合性を持つことを予想し、ATPアガロ-スカラムを用い、吸着、溶離した。さらに各種のクロマトグラフィ-を併用して、それぞれ単一バンドとなるまで精製した。アミノ酸配列を決定したところ、これらはそれぞれ大腸菌のGroEL,GroES,Dnakに、また真核細胞のシャペロニン60、10、70に相同性を示した.次にこれらのアミノ酸配列に対応したオリゴヌクレオチドをプロ-ブとして、好熱菌熱ショックタンパク質のDNA構造を決定した。61Kと12Kの遺伝子はオペロンを形成していた。一方、本研究の過程で,生体膜のエネルギ-変換の中心であるATP合成酵素のαサブユニットが61Kと相同性を持つことが示された。この研究の申請段階ではまだこれらタンパク質の持つタンパク質の再活性化能と膜輸送の研究は未知であったが、数多くの酵素学的、遺伝学的研究が諸外国で行われ、これらの再構成能を持つタンパク質にはシャペロニンと云う総称が与えられた。αサブユニットは、最も著しい熱ショックタンパク質であることがショウジョウバエで示されただけではなく、アフリカツメガエルの受精卵ではそのmRNAが動物極に最も多いmRNAであることも示された。そこで、シャペロニン活性研究の中心を好熱菌のαサブユニットに置いた。好熱菌PS3の遺伝子ライブラリ-より得たαサブユニット遺伝子を大量発現させて、その再活性化能を検討した。ATP合成酵素の膜輸送能とそのプロトン電流の実測については既に本研究室で多くの研究で行われている。そこで好熱菌αサブユニットを用いて初めてα3β3及びα1β1複合体の再構成に成功しこの分野に大きな進展をもたらすことができた。その再構成の過程はシンクロトロン放射光によって解析された。(特許:特願平2ー73664号,名称:熱ショック蛋白質、出願人:香川靖雄)好熱菌PS3の上清分画より,実験計画のように主要な熱ショックタンパク質61K,12Kおよび69Kを精製した。(特許:特願平2ー73664号,名称:熱ショック蛋白質、出願人:香川靖雄)[目的]大部分の蛋白質は一度変性されると活性の再現は不可能である。ところが、熱ショック蛋白質(hsp)の中でもシャペロニンと呼ばれる一群の蛋白質を加えると、活性を持った高次構造が形成されることが遺伝学的にも、またガラス器内でも成功した。ところが常温菌のhsp60は14量体を構成しており不安定である。好熱菌の蛋白質はすべて安定であるから好熱菌に熱ショック蛋白質があればきわめて有用である活性を持つ高次構造の人為的形成も可能となる。[結果]本試験研究によって初めて好熱菌にも各種の熱ショック蛋白質が存在することが証明された。好熱菌PS3の上清をATPアガロ-スカラムによるアフィニティ-クロマトグラフィ-で部分精製したタンパク質はATP存在下で変性酵素を再活性化した。そこでヒドロキシアパタイト、Qカラム、逆相カラム等を利用して常温生物のhsp70,hsp60,hsp10の各々に相同性の蛋白質として69K,61K,12Kの好熱性hspの3種をSDSゲル電気泳動で単一のバンドにまで精製した。そしてその3種の好熱性hspのアミノ酸配列はそれぞれに対応する常温生物のhspときわめて高い相同性をしめした。

熱ショック蛋白質(hsp)は細胞が亜致死的な熱を受けた際に一時的に発現されるが本試験研究では好熱菌PS3に60°Cから72°Cまで培地温度を上げて熱ショックをあたえてELISA法を用いてhsp61の形成を見たところ、僅か10分間にその量が全上清タンパク質の1.5%から3%へと増加した。[成果の発表と特許の申請]本研究の成果は既に特許として出願中であり、またhspの国際学会や日本生化学会で発表された。実用化にはhspの固定化などを行って回収すること、何等かの工業化ではATPをADPからアセチルリン酸とアセチルキナ-ゼで再生する系も必要となろう。生体を構成している生体膜や各種の超高分子構造を人工的に形成するために、安定な好熱菌の熱ショックタンパク質(hsp61,hsp69,hsp12)を精製した。これらは熱ショックタンパク質の中でもシャペロニンと呼ばれる群に属し、いずれもATP結合能とATPase活性を持つため、ATPーアガロ-スカラムクロマトグラフィ-に吸着され、ATPによって溶離された。好熱菌と常温菌のシャペロニンの構造を比較すると、hsp61はrefoldase(GroEL)、hsp12はGroES、hsp69はunfoldaseにそれぞれ相同であった。これらのアミノ酸配列に対応するDNA探索子を合成し、好熱菌遺伝子からその遺伝子のヌクレオチド配列を決定した。hsp61とhsp12はオペロンを形成していた。常温菌のシャペロニンは変性し易いだけでなく、その高次構造回復活性はシャペロニン1分子当り1分子の変性タンパク質に限られるので、応用はほとんど望めない。しかし、好熱菌のシャペロニンは尿素の存在下でも活性を示すため、何回も使用できる。また、有用タンパク質の細菌内で遺伝子の大量発現を行う場合、不溶性の凝集物を作るのを好熱菌シャペロニンが防止して、遺伝子操作産物の収率を上げることが出来る。さらに遺伝疾患の細胞内でこのシャペロニンを発現させれば、遺伝子の点変異の約半数をサプレス出来ることが期待されている。特許出願と成果の公表を見合わせる理由及び差し控え期間:以上の成果は遺伝子工学、タンパク質工学の国際的な重要戦略技術となる事から、本研究の内容の一部は現在特許出願中(特願平2ー73664号、平成2年3月23日)である。このために上記の記述を除く具体的な好熱菌のシャペロニンの構造、製法などについては平成3年度中は未公開としたい。概要は分子生物学会シンポジウム、国際会議等で発表されている。生体内の各種の超高分子構造を人工的に形成する技術は生物の諸活性の再現に不可欠である。そこで細胞内で構造形成と変性後の構造復元を促進している熱ショックタンパク質のシャペロニン群の使用を試みた。この目的のために、タンパク質の安定な好熱菌よりこれらのタンパク質としてhsp61,hsp12を精製し、その遺伝子や機能を研究し、さらにhsp69も精製した。好熱菌と常温菌の対応タンパク質の構造を比較するとhsp61はrefoldase(GroEL)、hsp12はGroES、hsp69はunfoldaseにそれぞれ相同であった。これらのアミノ酸配列に対応するDNA探索子を合成し、hsp61とhsp12の遺伝子を決定したところ両者はオペロンを形成していた.熱
可視光応答性酸化チタン光触媒による水とメタンからの水素製造

メタンの光水蒸気改質触媒の開発を行い、それらの水素生成活性および活性発現等について検討した。まず、光触媒として代表的な酸化チタンを用い、メタンと水の存在下水の光分解反応を試みたが、この場合全く活性を示さないことがわかった。一方、この酸化チタンに銀やニッケル、銅、鉄などを担持することで、この反応において水素が生成し、特に銀を担持したときに最も初期活性が高く、メタンが効率的に水の還元剤として寄与していることも明らかとなった。しかし、この銀担持酸化チタン光触媒においては、反応開始とともに活性が著しく低下し、反応開始4時間後にはほとんど活性を示さなくなることがわかった。一方、次に活性の高かったニッケルを担持した酸化チタン光触媒でも反応経過とともに失活は観測されたが、銀担持触媒ほどの著しい失活ではなく、この触媒系ではニッケルを担持した触媒の方がより効果的であることが明らかとなった。次に、酸化チタン以外の光触媒(ZnO,ZrO_2,WO_3,KTaO_3)を用い、上記と同条件下でメタンの光水蒸気改質反応を試みたところ、KTaO_3のみで水素生成が観測された。さらに、これら触媒にNiを担持して反応を行ったところ、Ni担持KTaO_3で、無担持のKTaO_3に比べて著しい活性の向上が観測された。この触媒では、前述の酸化チタン系光触媒で観測された、反応経過とともに生じる活性の低下はほとんど観測されず、また酸化チタン系光触媒と比べても水素生成量は同程度であった。このNi担持KTaO_3光触媒を用い、メタンのみを供給した場合と、水のみを流した場合、メタンと水を両方とも供給した場合の水素生成活性を比較したところ、メタンのみでは反応が進行せず、水のみではある程度の水素生成が観測されるものの、メタンを同時に供給することによりその水素生成量は約4倍程度向上することが明らかとなった。したがって、このNi担持KTaO_3触媒でもメタンが効率的に水の還元剤として機能していることが明らかとなった。種々の金属担持酸化チタンによる、固定床流通式反応器でのメタンの光水蒸気改質反応を行った。その結果、Ag,Cu,Ni,FeをTiO_2に担持した触媒で、光照射開始とともに水素が生成し、酸化生成物として一酸化炭素および二酸化炭素が生成した。そこで、最も反応効率の高かったAg担持酸化チタン光触媒を用い、最適空間速度、最適メタン濃度、最適供給水濃度を調べ、さらに触媒の水素還元温度依存性、Agの担持量依存性について詳細を検討した。Ag担持酸化チタン光触媒によりメタンのみを供給した反応では水素が若干生成するものの、メタンの二量化反応による水素生成であることが分かり、水を加えた場合の反応とは全く違う機構で水素が生成していることが明らかとなった。メタンの光水蒸気改質反応では、空間速度、メタン濃度、水の供給濃度で反応活性が大きく代わり、さらに水素還元温度やAgの担持量を変えることでも発生する水素の生成量に著しい違いが現れることが明らかとなった。このメタンの光水蒸気改質反応の最適条件は空間速度1500ml/h・g-cat、メタン濃度20%、水の供給濃度3.13%、水素還元温度673K、Agの担持量0.5wt%であった。これらの触媒の状態を調べるために紫外可視拡散反射スペクトル測定を行い、キャラクタリゼーションを行ったところ、Ag^0メタルが本反応の活性に大きく影響を与えているものと推測された。また、反応経持変化の実験結果より反応開始とともに活性が著しく低下し続けることが明らかとなったが、この失活原因は供給原料である水の吸着と考えられ、活性点に水が覆うことで還元剤であるメタンの吸着活性化が妨げられると推測された。さらに、反応後の触媒を再度、酸素焼成しその後還元処理を施すことで、若干落ちた水素生成活性がほぼ回復することがわかり、触媒を再処理することで再使用することが可能であることが明らかとなった。

このNi担持KTaO_3光触媒を用い、メタンのみを供給した場合と、水のみを流した場合、メタンと水を両方とも供給した場合の水素生成活性を比較したところ、メタンのみでは反応が進行せず、水のみではある程度の水素生成が観測されるものの、メタンを同時に供給することによりその水素生成量は約4倍程度向上することが明らかとなった。したがって、このNi担持KTaO_3触媒でもメタンが効率的に水の還元剤として機能していることが明らかとなった。
高齢者の日常認知・記憶における主観的な側面を測定するための質問紙の開発

一般的に高齢者の認知・記憶機能は,加齢の影響によって低下していくといわれている.そこで,認知・記憶のどのような側面において支障をきたしていると自覚しているかを明らかにすることを目的とし,検討を重ねてきた.結果は専ら因子分析によって因子を抽出し,項目の整理を行ってきた.2回の予備調査を行い,質問項目の検討を行った。それらの予備調査の結果に基づき,東京都世田谷区において訪問悉皆による本調査を行い,2332名のデータを解析した。さらに,尺度の妥当性,確認を行なうためにも調査を行なう新たな必然性が生じた.また,首都圏都市部のみのサンプリングでは偏りあったことなども考えられた.そこで宮城県気仙沼市大島地区において訪問悉皆調査を再度行い,927名の健常な高齢者のデータを解析した。これらの調査により,「人の喜びの表情がわかりにくいですか.」などの項目から「表情認知」,「コンピュータを使えるようになりたいですか.」などの項目から「情報機器への期待」,「楽しみにしていた予定や約束を忘れますか.」などの項目から「展望的記憶」,「公衆トイレの男女の標識がわかりにくいですか.」などの項目から「環境認知」,「20歳代の頃のことがはっきりと思い出せますか.」などの項目から「自伝的記憶」,「忘れないよう,メモやカレンダーを利用していますか.」などの項目から「記憶補助」と命名した6因子の再現性が確認された。サンプリング方法や調査対象者数などからも,これらの因子の頑強であることが考えられる。さらに,都市部において抽出された「記憶」に関する因子の再現性は,地方都市では確認できなかった。しかし,新たに「言おうとしたことを忘れてしまったことがありますか.」などの項目からなる「忘却」および「覚えていることが難しいですか.」などの項目からなる「保持」と命名可能である新たな2因子が抽出された。一般的に中高年者の認知・記憶機能は,加齢の影響によって低下していくといわれている.しかしながら,高齢者が日常生活を営む上で,加齢の影響によって認知・記憶のどういった側面に関し,衰退しているかをどのように感じているかに関する研究は,老年心理学の分野では行われていない.そこで,高齢者自身が日常生活を営むうえで,認知・記憶のどのような側面において支障をきたしていると感じているかを明らかにすることを目的とし,質問項目124個を作成し,高齢者を対象として調査を行った.対象者として栃木県老人大学校受講者450名を用いた.郵送によって回収された366名が分析の対象であった(回収率81.3%).年齢は6188歳であり,男性225名の平均年齢は68.5歳(SD 5.0),女性141名の平均年齢は67.7歳(SD 4.8)であった.日常認知・記憶の調査項目には合計72項目を用いた.評価項目には「まったくない」「いつもある」までの5件法を用い,15点を付与した.因子分析を行ない結果を整理した.因子名は以下のとおりであった.(1)第1因子:符号化・貯蔵・検索に関する記憶(2)第2因子:履望的記憶(3)第3因子:表情認知(4)第4因子:環境認知(5)第5因子:自伝的記憶(6)第6因子:最新情報機器の使用(7)第7因子:記憶補助因子得点に及ぼす加齢の影響について検討した.前期・後期高齢者群の2群それぞれを男女に分け,因子得点の平均を算出した.因子得点について,年齢,性を要因とする分散分析を7因子ごとに行った.

その結果,(2)展望的記憶,(4)環境認知,(6)最新情報機器,(7)記憶補助で年齢の主効果が得られ,加齢の影響が示唆れた.一般的に中高年者の認知・記憶機能は,加齢の影響によって低下していく.しかしながら,高齢者が日常生活を営む上で,加齢の影響によって認知・記憶のどういった側面に関し,衰退しているかをどのように感じているかに関する研究は,老年心理学の分野では行われていない.そこで,高齢者自身が日常生活を営むうえで,認知・記憶のどのような側面において支障をきたしていると感じているかを明らかにすることを目的とし,質問項目を作成し,高齢者を対象として調査を行ってきた.本年度は,宮城県気仙沼市大島の島民を対象者として,55歳以上の悉皆訪問調査を実施した.テストバッテリーには日常記憶・認知に関する質問紙も含まれていた.数年間の筆者の研究結果の知見に基づき,表情認知,最新情報機器の使用,展望的記憶,環境認知,自伝的記憶,記憶補助,注意の因子を反映すると考えられる最適な項目をそれぞれ2項目ずつ再度選出した.さらに,記憶に関しては,符号化,検索などの具体的な8項目も選出した.合計22項目であった.回答には「はい」「いいえ」の2件法を用いた.1134名の回答が得られたが,改訂長谷川式簡易知能評価スケールが20点以下の痴呆の疑いのある者および介護認定を受けている207名は分析から除外し,927名の健常な高齢者のみを対象者とした.因子分析を行った結果,最適解として8因子が抽出された.それら8因子は,(1)最新情報機,(2)表情認知,(3)忘却,(4)貯蔵・符号化,(5)自伝的記憶,(6)環境認知,(7)記憶補助,(8)展望的記憶と命名した.また,927名の対象者のなかから,65歳以上80歳以下の高齢者546名の因子分析を行ったが,因子構造がほとんどおなじ結果が得られた.これらの結果によって因子の再現性がほぼ確認されたと考えられる.一般的に中高年者の認知・記憶機能は,加齢の影響によって低下していくといわれている.高齢者が認知・記憶のどのような側面において支障をきたしていると自覚しているかを明らかにし,質問紙の開発を最終的な目的とし,検討を重ねてきた.結果は専ら因子分析によって因子を抽出し,質問紙の項目の整理を行ってきた.平成13年は,東京都世田谷区で2332名の訪問悉皆面接調査を行い,平成14年も,宮城県気仙沼市大島地区で1134名のデータを収集した.いわば,都市部と地方都市という2つの地域のデータを収集した.そこで,本年度は,都市部と地方都市という在住する高齢者の主観的な日常記憶・認知に対する地域差を検討するための解析を行なった.都市部の因子分析を行った結果,最適解として7因子を抽出した.地方都市では,最適解として8因子を抽出した.両者において共通の6因子が抽出され,それらはあらかじめ想定した因子であり,因子構造に大きな違いはみられなかった.高齢者の主観的な日常記憶・認知に対して地域による差がないことが示唆された.つぎに,加齢の影響を検討するために,都市部と地方都市それぞれの地域ごとに5歳刻みで因子ごとに合成得点を算出した.その結果,年齢が高くなるにつれて,得点に顕著な変化がみられなかった.年齢と合成得点の間に高い相関係数も得られなかった.主観的な日常記憶・認知に加齢が顕著に影響しないことが示唆された.年齢以外の影響の可能性が示された.
神経内分泌細胞のアミン・ペプチド性神経支配と細胞内シグナル伝達機構

新規神経ペプチドPACAPの含有ニューロン終末は視床下部の視索上核や室傍核に密に分布し、その神経終末が神経内分泌細胞にシナプスを形成しているのを我々は免疫電顕的に観察・報告している。免疫組織化学法とIn situハイプリダイゼーション法の組み合わせ法を用いて視索上核をしらべたところ、バソブレシンニューロンが特異的にこのレセプターを発現しているのが明らかになった。バソプレシンニューロンはノルアドレナリン性ニューロンの神経支配も受けており、ノルアドレナリンおよびPACAPはcAMP-プロテインキナーゼA系を介して細胞内のカルシウム濃度を上昇させることが単離神経分泌細胞を用いた実験で明らかになった(Shioda et al.,1998)。特異的なカルシウムチャンネル阻害剤を用いて上記と同様の実験を行った結果、PACAP/ノルアドレナリンは共調して細胞膜のT-,L-型のカルシウムチャネルをリン酸化し、細胞内に大量のカルシウムを流入させ、最終的に分泌果粒の放出が起きることが明らかになった。免疫組織化学法を用いてラット脳内を検索した結果、神経ペプチドPACAPの含有ニューロンは視床下部の視索上核や室傍核に密に分布し、多数のPACAP性神経終末が神経内分泌細胞にシナプスを形成しているのを免疫電顕的に観察・報告した(Shioda et al.,1997a)。さらにこのペプチドレセプターの脳内分布をin situハイブリダイゼーション法とレセプターに特異的な抗体(Li et al.,1997b)による免疫組織化学法を用いてしらべたところ、このレセプターは視床下部のみならず、嗅球、海馬、小脳など脳内にも広く発現しているのをみとめた(Shioda et al.,1997c)。免疫組織化学法とin situハイブリダイゼーション法の組み合わせ法を用いて視索上核をしらべたところ、バソプレシンニューロンが特異的にこのレセプターを発現しているのが明らかになった(Shioda et al.,1997a)。一方、バソプレシンニューロンはノルアドレナリン性ニューロンの神経支配も受けており、単離した神経内分泌細胞はα-レセプターを介して細胞内の情報伝達を行っていることが明らかになった(Shioda et al.,1997c)。種々の試薬類を用いてこれらアミン・ペプチド性ニューロンによる細胞内シグナル伝達機構をしらべた結果、ノルアドレナリンおよびPACAPはcAMP-プロテインキナーゼAを介して細胞内のカルシウム濃度を上昇させていることが明らかになった(Shioda et al.,1997a,d)。現在、このプロテインキナーゼAがどのタイプのカルシウムチャネルをリン酸化して細胞内のカルシウム濃度を上昇させ、ひいては神経分泌ニューロンの興奮・分泌果粒の放出につながるのかをしらべている。免疫組織化学法とIn situハイブリダイゼーション法の組み合わせ法を用いて視索上核をしらべたところ、バソプレシンニューロンが特異的にこのレセプターを発現しているのか明らかになった。
機能未知の喘息関連遺伝子ＨＡＳ２による喘息難治化メカニズムの解明

本研究はHAS2及びその合成産物である高分子量ヒアルロン酸の機能異常が気道リモデリング形成に及ぼす影響を、HAS2ヘテロ欠損マウスを使用し解明することを目的とする。具体的にはBalbc系に8世代以上戻し交配したHAS2ヘテロ欠損マウス(HAS2+/-)群および野生型(WT)群を併用し、卵白アルブミン(OVA)の長期暴露により慢性好酸球性気道炎症による気道リモデリング病態を作成する。病態モデル作成後、HAS2+/-群における気道リモデリング重症化の有無を検証し病態解明を図る方針である。初年度である2018年度は、まずOVA長期暴露実施後のHAS2+/-群における気道リモデリング重症化の有無を組織学的に明らかにするため、1肺組織切片でPeriodic acid Schiff(PAS)染色・Masson's Trichrome(MT)染色を行い形態計測実施、並行して2気管支肺胞洗浄液中の細胞数および分画の測定を行い、好酸球性気道炎症評価した。この結果、当初の仮説通り、HAS2+/-群において有意な慢性好酸球性気道炎症の悪化と杯細胞の過形成を認めた。一方、急性期モデルで認められたような好中球性気道炎症の増強は確認できず、気管支肺胞洗浄液(BALF)中のサイトカインは一部の炎症性由来の成分を除いて有意差を認めなかった。また、肺における病態評価のためRNA-seq解析を施行した。上記研究成果については、中間報告としてデータを取りまとめ、2019年度の日本呼吸器学会、米国胸部疾患学会に演題を登録、既に演題採択の連絡を受けており、学会での成果報告。同分野の研究者と意見交換等を行う予定としている。当初計画していた。野生型マウス・HAS2ヘテロ欠損マウスでのリモデリング病態の確認、表現型の評価は予定通り施行できている。今後、気道平滑筋肥厚の有無や気道過敏性の評価を行いつつ、病態解明を進めるうえでの基礎データ・検体は集積されており、概ね計画通りに進められているものと判断した。研究に伴う中間成果については平成31年度に日本呼吸器学会等で成果報告を行った。計画2年目である2019年度は、2018年度の成果を踏まえ、気道リモデリングの他の構成要因である、1基底膜下の線維化、2気道平滑筋の肥厚、3気道過敏性の亢進といった表現型の検証。および、さらなる病態解明を図る。具体的にはHAS2+/-および野生型マウスは本学筑波大学生命科学動物資源センターにて、定期的に野生型マウスを交配し今年度も継続して維持・繁殖・供給を行い、OVA長期暴露をイソフルラン麻酔下で実施する。1基底膜下の線維化、2気道平滑筋の肥厚については、これまでに作成したMT染色およびPAS染色の切片を画像解析ソフトで解析し定量的に評価を継続する。形態計測と並行し生化学的評価のため、肺実質破砕液により、サイトカイン・ケモカイン測定をMillipex Map kit (Merck Co.)を用いて実施する。また、別途採取した血清についてはtotal IgE, OVA特異的IgE,等の免疫グロブリン測定を施行し全身性の変化の有無を検証する。またさらなる病態解明のため、RNA-seq解析・免疫染色・糖鎖解析の実施を考慮する。また、中間成果報告として次年度の米国胸部疾患学会や日本呼吸器学会総会、日本アレルギー学会への演題登録を目指す。当初計画していた。

研究に伴う中間成果については平成31年度に日本呼吸器学会等で成果報告を行った。計画2年目である2019年度は、2018年度の成果を踏まえ、気道リモデリングの他の構成要因である、1基底膜下の線維化、2気道平滑筋の肥厚、3気道過敏性の亢進といった表現型の検証。および、さらなる病態解明を図る。具体的にはHAS2+/-および野生型マウスは本学筑波大学生命科学動物資源センターにて、定期的に野生型マウスを交配し今年度も継続して維持・繁殖・供給を行い、OVA長期暴露をイソフルラン麻酔下で実施する。1基底膜下の線維化、2気道平滑筋の肥厚については、これまでに作成したMT染色およびPAS染色の切片を画像解析ソフトで解析し定量的に評価を継続する。形態計測と並行し生化学的評価のため、肺実質破砕液により、サイトカイン・ケモカイン測定をMillipex Map kit (Merck Co.)を用いて実施する。また、別途採取した血清についてはtotal IgE, OVA特異的IgE,等の免疫グロブリン測定を施行し全身性の変化の有無を検証する。またさらなる病態解明のため、RNA-seq解析・免疫染色・糖鎖解析の実施を考慮する。また、中間成果報告として次年度の米国胸部疾患学会や日本呼吸器学会総会、日本アレルギー学会への演題登録を目指す。