hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
患者中心医療に向けた口腔インプラント手術支援システムに関する研究

本研究は一人一人の患者の要求仕様にあった口腔インプラント手術を支援し,患者中心歯科医療の実現に向けた取り組みを支援するための基礎的研究を行った.インプラント治療に必要な治療ジグの症例別設計に基づく手術シミュレータの開発と,コンピュータ制御により正確な埋入前処理を可能とする口腔内装着型マイクロドリルシステムの開発を中心に取り組んだ.海外共同研究活動や教育プロジェクトにおいても有意義な結果が得られた.本研究は一人一人の患者の要求仕様にあった口腔インプラント手術を支援し,患者中心歯科医療の実現に向けた取り組みを支援するための基礎的研究を行った.インプラント治療に必要な治療ジグの症例別設計に基づく手術シミュレータの開発と,コンピュータ制御により正確な埋入前処理を可能とする口腔内装着型マイクロドリルシステムの開発を中心に取り組んだ.海外共同研究活動や教育プロジェクトにおいても有意義な結果が得られた.本研究は患者中心医療に向けた口腔インプラント手術支援を目的とする。研究活動では,仮想空間シミュレ-ションサブシステム(VIS : Virtual Implanter System)と口腔内装着型マイクロボール盤サブシステム(IDD : Intraoral Dental Drill System)の開発を行い,最終段階では2つのシステムが統合され,仮想空間を介した口腔インプラント手術支援システムとして完成される予定である.本研究補助金では,システム開発のための機器の導入を計画している。その用途は(1)インタフェース開発,(2)開発用加工処理システム,(3)口腔内加エシステムの3つに分類される.各用途に該当する機器を具体的に示すと,(1)としては,力覚提示装置開発システム,力覚提示装置制御用システム,仮想環境開発ソフト,3Dデータ処理ソフトとデータ制御用システム,(2)としては,3次元RP加工機システム,(3)としては,マイクロモーターシステムおよびインプラント用外科用ドリル一式等が該当する.以上の研究計画概要を踏まえて,平成18年度実績について以下に報告する。上述した導入予定機器のうち,(1)および(2)関連の機器がほぼ導入を完了した。そして,今回導入した機器に加えて,研究室に既存の設備を用いて本研究を遂行した結果,その一部を成果報告として出版することができた。つまり,VISシステムに関しては,その構築の基礎となるインプラント配置シミュレーションの開発を行い,その結果について学術論文で報告した。また,IDDシステムに関しては海外協力研究者との共同研究により基本設計仕様がほぼ出来上がり,試作品の開発を進めているところである。その内容についても学術論文に投稿し採択が決定しており,平成19年度中に出版の予定である。また,本研究に関連した技術を扱ったシミュレーションや教育関連の論文についても学術論文として採択されている。本研究は患者中心医療に向けた口腔インプラント手術支援を目的とする。研究活動では、仮想空間シミュレーションサブシステム(VIS:Virtual Implanter System)と口腔内装着型マイクロボール盤サブシステム(IDD:Intraoral Dental Drill System)の開発を行い、最終段階では2つのシステムが統合され、仮想空間を介した口腔インプラント手術支援システムとして完成される予定である。本研究補助金では、各サブシステムのための機器の導入とそれに伴う開発を行う。各サブシステム開発は、(1)インタフェース開発、(2)開発用加工処理システム、(3)口腔内加工システムの3つの分野において取り組む。各分野において用いられる機器を示すと、(1)としては、力覚提示装置開発システム、力覚提示装置制御用システム、仮想環境開発ソフト、3Dデータ処理ソフトとデータ制御用システム、(2)としては、3次元RP加工機システム、(3)としては、マイクロモーターシステムおよびインプラント用外科用ドリル一式等が該当する。主な設備導入に関する計画はほぼ予定通りに進んでおり、それに伴う開発を現在進めているところである。平成19年度は、IDDシステムの設計と開発およびインプラント治療に関する研究を中心として本研究に取り組んだ。特に、IDDシステムに関しては海外協力研究者との共同研究により基本設計仕様が出来上がり、試作品の開発に取り組むことができた。IDDシステムにおけるコンピュータ制御やユーザインタフェースなど未着手の部分については次年度で開発の予定である。本年度の研究活動の結果、試作品作成に関する海外研究協力者との協調活動や、設計データに基づく機械加工技術に関連した論文が採択となった。また、本研究で対象とするインプラント治療に関する研究論文などが学術論文として採択された。本研究は患者中心医療に向けた口腔インプラント手術支援を目的とし.そのための支援システムの研究開発に取り組んだ.研究活動内容としては,仮想空間シミュレーションサブシステム(VIS: Virt ual lmplanter System)と口腔内装着型マイクロボール盤サブシステム(IDD: Intraoral Dental Drill System)の開発を行い,最終段階では2つのシステムが統合され,仮想空間を介した口腔インプラント手術支援システムとして完成する.本研究補助金では,各サブシステムのための機器の導入とそれに伴う開発を行った.各サブシステム開発は,(1)インタフェース開発,(2)開発用加工処理システム,(3)口腔内加工システムの3つの分野において取り組むものとする.各分野において用いられる磯器は,(1)としては,力覚提示装置開発システム,力覚提示装置制御用システム,仮想環境開発ソフト,3Dデータ処理ソフトとデータ制御用システム,(2)としては,3次元RP加工機システム,(3)としては,マイクロモーターシステムおよびインプラント用外科用ドリルー式等が該当する.平成20年度は,前年度までに取り組んだIDDシステムに関して,本設計仕様に基づき試作品の開発を行った.また,IDDシステムにおけるコンピュータ制御やユーザインタフェースなどの部分についても研究開発を行い,プロトタイプシステムとして完成した.本年度の研究活動の結果,設計データに基づく機械加工技術に関連した論文などが採択となった.
月経が健常人と双極性障害の気分変動に与える影響：睡眠と対人関係を包括した作用機序

双極性障害に罹患する女性は、月経周期に伴い精神的/身体的症状が悪化しやすいことが知られているが、月経周期がどのような要因を介して双極性障害の抑うつ症状および躁症状に影響を与えているかについては十分に検討されていない。月経周期と抑うつ/躁症状との関連に影響する要因として睡眠リズムと対人関係上の困難が挙げられる。本研究では、生物学的な指標として女性ホルモン、心理社会的要因として批判を介した対人関係と睡眠リズムが抑うつ症状および躁症状に与える影響を包括的に検討し、女性ホルモンの変動に起因する気分の変化が睡眠と対人関係に与える影響とその悪循環を明らかにする。
糖原病の成因の解析

糖原病は現在ネルソンによると11型までに分類されているが、8型や11型のように原因不明のものもあり今後の研究が待たれている。我々は8型や11型を含め、この他にも原因不明の糖原病に遭遇している。このような糖原病の成因を明らかにするため、(1)原在測定の対象となっていない酵素あるいはモデュレイターの存在の有無、(2)試験管内では測定可能だが何らかの機序で活性が現われない酵素、の2つの可能性を考えた。(2)に関しては、東北大多田教授らの発見であるグルコース6燐酸の膜透過性の異常によって起こるIb型が知られている。膜との関係によっておこる糖原病がこの他にも存在するのではないかと考え、以下の研究を行った。まず精製の比較的簡単な骨格筋ホスホリラーゼキナーゼを用いた。ホスホリラーゼキナーゼを純化し、自動燐酸化反応による活性上昇について調べた。自動燐酸化反応により酵素1/4分子当り67分子の燐酸が取り込まれるが、膜に存在する燐脂質を添加すると自動燐酸化反応は著しく上昇し、1315分子の燐酸が取り込まれる。この際、最も効果的なのはホスファチジルセリンやホスファチジルイノシトール及びホスファチジル酸のような酸性燐脂質である。酵素活性(ホスホリラーゼbの燐酸化)はこれらの自動燐酸化反応によって著しく増加する。この反応は【Ca^(2+)】を必要とするが、膜燐脂質のない場合【10^(-4)】Mと高濃度の【Ca^(2+)】が必要であるのに比して、膜燐脂質が存在する場合は【10^(-7)】Mと生理的濃度の【Ca^(2+)】にて十分活性化される。これらの結果とこの酵素がミクロゾーム付近に存在するという電顕結果と考え合せて、膜成分による自動燐酸化反応が生理的に本酵素の活性化機構に重要な役割を演じていることが結論される。我々はさらに肝臓酵素の自動燐酸化反応を追求し、骨格筋と同様の機構が存在するか否か明らかにすると共に、この膜成分による活性化機構の異常も糖原病の一因をなしているかを明らかにしたい。
システムとしての「アフリカ現代美術」のダイナミズムに関する人類学的考察

平成14年度は、主に前年度の現地調査で得られたデータの整理と日本国内での資料収集を行った。前年度は2度にわたってセネガル国の首都ダカール、フランス国パリにてガラス絵というセネガルの工芸品に関する現地調査を行った。調査で収集したデータは、ガラス絵のバイヤー・ガラス絵作家・ガラス絵以外の造形作家を対象に行ったインタビュー、写真資料、参与観察、研究機関及び美術館等で収集した文書資料に及ぶ。ところで「アフリカの空洞化」といわれるほどアフリカからヨーロッパへの移民の流出問題が深刻になりつつある。現在セネガルからヨーロッパへの移民の行き先の第1位はフランスであるが、第2位はイタリアである。よって今年度は移民の流出先、またガラス絵のマーケットとしてのイタリアに関する文献を広く収集した。中心は移民問題に関するものであるが、セネガルのガラス絵の徒弟制との比較を行うための、イタリア・インダストリアル・デザインに関する文献も収集した。文書資料収集と平行して、東京でもデザイン関係者へのインタビューを行った。平成15年1月には1ヶ月に渡ってイタリアのミラノ市で文書資料の収集と来年度以降の更なる調査のための下調べを行った。本研究は最終的には文化人類学的な見地により、セネガルのガラス絵の制作の現場のミクロな記述、ヨーロッパを中心としたそのマーケットの機構の解明、美を生み出す組織としてのセネガルガラス絵の徒弟制とイタリア・インダストリアル・デザインのデザイナーの職業的社会化の過程の比較を含む論文に結実する予定である。
プルロニック・ゲルによるサイトカインの局所徐放効果に関する研究

[研究目的]サイトカインの抗腫瘍活性を十分発揮させるために、サイトカインをプルロニック・ゲルと混合し、サイトカインのがん組織局所あるいは局所リンパ節における徐放効果とそれによる治療効果の増強を検討する。[研究成果]1.混合サイトカインの徐放性が発揮される条件:(1)プルロニック(PLF-127,PLF-108)が低温(05°C)で液状で体温(37°C)でゲル化するのは2035%水溶液である。(2)サイトカインの活性が生体内で徐放性に放出されるのは30%以上のプルロニック水溶液に混合した場合である。2.PLF-127混合投与によるサイトカイン治療効果の増強:(1)ヒトリコンビナントインターロイキン2(IL-2)のラット線維肉腫KMT-17に対する治効果はPLF-127 30%水溶液に混合して癌組織局所に投与することによって増強された。しかしPLF-1276混合IL-2の全身的投与はIL-2単独投与に比較して増強されなかった。(2)PLF-127混合局所投与によるIL-2治療効果の増強はモルモットのLine10肝癌に対しても認められた。(3)ラットインターフェロン(IFN)のKMT-17に対する治療効果もPLF-127混合局所投与によって増強される傾向があった。3.PLF-127混合IL-2癌組織局所投与による抗腫瘍免疫応答性の増強:PLF-127混合IL-2によって治療されたKMT-17担癌ラットでは、局所リンパ節細胞の抗腫瘍中和活性および癌細胞応答性が著しく増強されていた。しかし、脾細胞の抗腫瘍活性は増強されていなかった。4.プルロニックの宿主生体に及ぼす影響:PLF-127はマウス・ラット・モルモットに致死的毒性を示すことはないが、病理組織学的に肝,脾,腎などに一時的空胞変性病変をおこすことが明らかになった。[考案および反省]サイトカインの癌治療効果は局所徐放性投与により増強される。しかし、今回徐放性基剤として用いたプルロニックの安全性については慎重に検討する必要がある。
X線結晶解析と電子顕微鏡法による筋収縮制御の研究

細いフィラメントの原子モデルの精密化を行った。これらの研究を行うための変異型アクチンのタンパク質は野口らによって開発されたシステム、即ち、アクチンのC端にヒスタグを付け精製し、その後、このタグを切除する方法で、ディクチオ型粘菌で大量発現し精製した。これらの構造データを統合するには,これまで目視によるドッキングが行ってきたが,精密化・客観化を目指して,分子動力学を用いて精密化した。しかし、蛍光共鳴エネルギー移動法(FRET)から得られる距離情報からイテラティブに蛍光団の三次元的位置を求めることができる距離幾何学法を使う必要はなかった。細いフィラメントの原子モデルを観察し、重合に対して重要な役割を果たすと考えられてアミノ酸に変異を導入したところ、実際に重合能が低下し、GFPを融合した変異型アクチンは細胞内での分布がより散漫であった。またATP分解に間接的に関与すると予測されたアミノ酸を変異させたところ、ATP分解活性が10倍以上となり、予測が裏付けられた。また同じアミノ酸を別のアミノ酸に変化させた際は、ATP分解活性が低下した。これらの変異体アクチンのX線結晶解析をおこなったところ、対応する構造変化が観察され、生化学的実験結果をよく説明出来た。ATP分解活性の増大の原因が分解反応速度の増大であって、ヌクレオチド交換の速度の増大ではないことを、ヌクレオチド交換速度を測定し、これが分解速度よりも数倍速いとの測定により確認した。ATP分解がマグネシウムを必要とする機構も示した。細いフィラメントの原子モデルの精密化を行う。これらの研究を行うためのタンパク質は大腸菌またはディクチオ型粘菌で大量発現し精製できる。これらの構造データを統合するには,これまで目視によるドッキングが行ってきたが,精密化・客観化を目指して,高速回転関数法によるシステマティックなドッキングも行い,通常の方法と比較するだけでなく,両者の長所を併せ持てるような方法を構築したい。この際に蛍光共鳴エネルギー移動法(FRET)から得られる距離情報からイテラティブに蛍光団の三次元的位置を求めることができる距離幾何学法を開発した経験を生かし, FRETデータも取り込めるような新しいドッキング法を案出する。アクチン・フィラメントの三次元構造の高分解能化を実現するために、冷電界放出型電子銃からの高コヒーレンス電子ビームを用いたクライオ電子顕微鏡法で得たアクチン・フィラメントの高品質の電顕像を多数集め、単粒子解析法を用いて三次元再構成を行った。これまでの画像解析では, 9Aを越えており,分子表面のαヘリックスを識別できるようになっていた。これを更に押し進めて,画像解析に解像度を向上させた結果分子内部のαヘリックスも一部識別できるようになった。像のフーリエ変換強度からは6Aに対応する子午線反射が観察されており、画像解析法の工夫により、7Aよりも細部が可視化されに至っている。アクチンの機能と関係あるアミノ酸を改変して,その結晶構造を解いた。
メサンギウム細胞の自然免疫反応におけるRNA認識受容体の意義と慢性腎臓病への関与

培養メサンギウム細胞において、Toll様受容体3シグナルを刺激すると、interferon (IFN)-beta / phosphorylated STAT1 / retinoic acid-inducible gene-I (RIG-I) / CCL5 axisが活性化されるが、IFN-stimulated genes (ISGs)ファミリーのメンバーである、ISG56, ISG54, ISG60はこの系を正に制御し、一方、ISG15はこの系を負に制御する、ということを明らかにした。このことは、慢性腎臓病の病態にISGsが関与していることを示唆している。ヒト正常メサンギウム細胞をLonza社より購入して培養し、実験を行った。培養ヒトメサンギウム細胞に、Toll-like receptor 3 (TLR3)のリガンドであるpoly ICを添加またはトランスフェクションすることにより、pseudoviral immunityの活性化を誘導すると、myxovirus resistance protein 1 (MX1)やinterferon-stimulated gene 56 (ISG56)の発現が亢進することや、ISG56はmelanoma differentiation-associated gene 5 (MDA5)と協調して、CXCL10の発現を高進させることにより炎症反応を制御していること、などが明らかになった。また、lipopolysaccharideによるTLR4シグナルの活性化により、retinoic acid-inducible gene-I (RIG-I)とMDA5の発現とシグナリングが亢進し、TLR4シグナリングにおける炎症反応にRIG-IやMDA5が関与していることも明らかになった。一方、生検腎組織を用いた検討により、ループス腎炎の組織において、RIG-I、MDA5、およびMX1の発現が亢進していることが明らかになった。IgA腎症の組織では、MDA5の発現が亢進していた。さらに、尿中のfractalkine (CX3CL1)およびmonocyte chemoattractant protein-1 (CCL2)の値は、小児における糸球体腎炎の病勢と関連があることが明らかになった。ヒト正常メサンギウム細胞をLonza社から購入して培養し、実験を行った。以前に、我々は、この実験系において、Toll-like receptor 3 (TLR3) / interferon (IFN)-beta / retinoic acid-inducible gene-I (RIG-I) / CCL5の経路を報告し、この経路が炎症性腎疾患の病態に関与していることを示した。今回は、培養ヒト正常メサンギウム細胞を、炎症性サイトカインであるtumor-necrosis factor (TNF)-alphaで前処理しておき、TLR3のリガンドであるpolyinosinic-polycytidylic acid (poly IC)を添加すると、TLR3 / IFN-beta / RIG-I / CCL5の経路が著明に増幅されることが明らかになった。このことは、炎症性腎疾患において、局所のTNF-alphaの産生が亢進しているところに、ウイルス感染やpsudoviral immunityの活性化が起こることが、炎症性腎疾患の増悪の機序に関与していることを示唆すると考えられた。また、プレリミナリーな実験において、メサンギウム細胞をpoly ICで刺激する系において、免疫・炎症応答に関わる幾つかの因子を同定した。また、それらについて、免疫蛍光染色にて、プレリミナリーな結果を得ている。培養ヒトメサンギウム細胞において、Toll様受容体3 (TLR3)/ interferon (IFN)-beta / phosphorylatedSTAT1 (p-STAT1) / retinoic acid-inducibel gene-I (RIG-I) / CCL5 axisによる炎症反応系が、tumor-necrosis factor-alpha処理により相乗的に増強すること(Clin Exp Nephrol, 2015)、この系で誘導されるユビキチン様タンパク質でISGのひとつでもあるISG15が、この系のnegative feedback loopの形成に関与していること(Nephron Exp Nephrol, 2016)を明らかにした。また、TLR3シグナリングは、ケモカインの一つであるCCL1の発現を誘導するが、この反応はIFN-betaに依存しないことも明らかにした(Clin Exp Nephrol, 2015)。以上より、培養ヒトメサンギウム細胞におけるinnate immunnityとそれに引き続く炎症応答に関与する新たな分子メカニズムの一端を明らかにし、また、臨床との関連も一部報告することができた。培養メサンギウム細胞における実験は、おおむね順調に進行している。培養メサンギウム細胞における実験においても、免疫蛍光染色においても、次年度につながるプレリミナリーな結果を得ている。病態生理学今年度のプレリミナリーな結果に基づいて、引き続き検討を進め、確かなデータを得て、論文として報告する予定である。症例はやや少ないが、生検腎組織における検討も進めている。

おおむね計画通りに執行できたが、端数が残ってしまった。培養メサンギウム細胞を用いた実験では、RIG-IやMDA5と相互作用する分子の解析を進める。並行して、生検腎標本における染色も引き続き行っていく。次年度と併せて物品費として使用する。免疫染色の実験が、予定より進まなかったため。免疫染色の実験をさらに追加していく予定である。
卵巣癌の発生・進展に関わる宿主免疫のゲノミクス解析と治療開発への基礎的検討

卵巣癌発生やがん進展での局所免疫状態の経時的変化、特に卵巣癌の免疫抵抗性獲得因子の探索するためにがん(抑制)遺伝子変異を組合わせた細胞株をマウスに接種し、腫瘍局所の免疫細胞を解析し有意に変化する免疫細胞サブセットを同定した。一方で、OVAを発現するマウス卵巣癌細胞株を用いて免疫抵抗性獲得遺伝子の探索を行うために免疫抵抗性獲得能を有するOVA発現株を作成し、親株との遺伝子発現解析の比較にて、複数種の免疫抑制因子遺伝子を抽出した。上述の免疫関連遺伝子を、マウス卵巣癌細胞株に強制発現し、in vitro・in vivoモデルで免疫抑制機能を再確認し、卵巣癌治療の新たな治療標的になる可能性を示した。本研究では、卵巣癌の発生(発癌)やがん進展(浸潤・転移)における宿主免疫の作用メカニズムを解明し、がん免疫に関する新規の卵巣癌予防や治療戦略を開発することを目的として、卵巣癌発生やがん進展過程における局所免疫状態の経時的変化の解析をおこなった。まずマウス卵巣癌発癌モデルでの卵巣局所免疫の経時的解析については、卵巣癌細胞株から、がん遺伝子を発現あるいは、がん抑制遺伝子の発現抑制を行った細胞株を作成し、マウスに投与した結果、in vivoでの腹腔内での局所芽根期状態の経時的変化をとらえることができた。経時的に腹水、腹腔内腫瘍組織を摘出し、凍結切片や組織の発現マイクロアレイやメチル化アレイを行い、発癌過程に生じる局所の免疫細胞の分布や免疫関連遺伝子やシグナルの変化を中心に網羅的に解析を行い、それらの発現を免疫染色やフローサイトメトリーにて確認する。さらに網羅的遺伝子発現解析を用いて、卵巣癌の免疫抵抗性(免疫逃避能)獲得に関わる因子の探索を行っている。なおISIIRTgマウスについては現在なお提供依頼をしている。さらに、仮想抗原OVAを発現するマウス卵巣癌細胞株を作成し、OVA抗原を認識するT細胞をもつOT-1マウスへの繰り返し投与による免疫抵抗性(免疫逃避能)獲得能を有する細胞株を樹立と未知の免疫抑制因子の同定については、すでにマウス卵巣癌細胞株ID8-OVAの作成しており、OT-1マウスへの投与を始めている。1本研究では、卵巣癌の発生(発癌)やがん進展(浸潤・転移)における宿主免疫の作用メカニズムを解明し、がん免疫に関する新規の卵巣癌予防や治療戦略を開発することを目的として、卵巣癌発生やがん進展過程における局所免疫状態の経時的変化の解析をおこなった。まずマウス卵巣癌発癌モデルにおける腫瘍微小環境における各種免疫細胞の分布や関連遺伝子発現の経時変化を解析する目的で、p53などのがん抑制遺伝子発現抑制やMycなどのがん遺伝子の強制発現などを組み合わせた複数種の細胞株を入手できたため、それぞれを同種同系マウスに腹腔内に接種した。そのうち腫瘍が生着した細胞株について各種遺伝子変異に基づく腫瘍局所の免疫状態を解析している。また一方で、がん細胞株が生着していない(拒絶)マウスについては、脾臓細胞やリンパ節などの免疫細胞を抽出し、がんに対する免疫監視メカニズムを検討している。なおISIIRTgマウス以外の掛け合わせによる発癌マウスモデルについても入手を検討している。1遺伝子背景の異なる複数種のマウス卵巣癌細胞株を入手でき、免疫抵抗性(免疫逃避能)獲得と免疫監視(免疫監視)の間での免疫学的な相違について、免疫細胞分布に合わせて、網羅的遺伝子発現解析などで、免疫抑制(活性)化因子の探索は計画どおり進んでいる。1本研究では、卵巣癌の発生(発癌)やがん進展(浸潤・転移)における宿主免疫の作用メカニズムの解明と新規の卵巣癌治療を開発することを目的として、卵巣癌発生やがん進展過程における局所免疫状態の経時的変化の解析をおこなった。マウス卵巣癌腹膜播種モデルにおいて、p53, PTEN, c-MYCのがん(抑制)遺伝子変異を組み合わせた複数種の細胞株を同種同系マウスの腹腔内に接種した。そのうち腫瘍が生着した細胞株について各種遺伝子変異に基づく腫瘍局所の免疫細胞の局在を解析し、有意に変化する免疫細胞サブセットを同定した。さらに同モデルに対して抗PD-1(PD-L1)抗体投与による治療反応性および免疫反応を経時的に検討した。また一方で、がん細胞株が生着しなかった(拒絶)マウスについては、脾臓細胞やリンパ節などの免疫細胞(末梢血単核球:PBMC)を抽出し、上述の生着モデルと拒絶モデルとでの経時的な免疫サブセットおよび遺伝子発現比較解析を行い、有意に発現変化する複数の免疫因子を同定した。また一方で、仮想抗原OVAを発現するマウス卵巣癌細胞株を用いた免疫抵抗性(免疫逃避能)獲得に関わる免疫関連遺伝子探索を行った。OVA抗原を認識するT細胞をもつOT-1マウスへの繰り返し投与によって、免疫抵抗性(免疫逃避能)獲得能を有するOVA発現卵巣癌細胞株を樹立し、親株との網羅的遺伝子発現解析の比較の結果、複数種の免疫抑制因子遺伝子を抽出した。次に上述の免疫因子と相関する因子について、マウス卵巣癌細胞株に強制発現した細胞株を作成し、in vitroおよびin vivoモデルでの免疫抑制機能を再確認した。さらに卵巣癌臨床検体を用いて同因子の発現を確認でき、今後の卵巣癌治療の新たな治療標的になる可能性を示した。

一方で、OVAを発現するマウス卵巣癌細胞株を用いて免疫抵抗性獲得遺伝子の探索を行うために免疫抵抗性獲得能を有するOVA発現株を作成し、親株との遺伝子発現解析の比較にて、複数種の免疫抑制因子遺伝子を抽出した。上述の免疫関連遺伝子を、マウス卵巣癌細胞株に強制発現し、in vitro・in vivoモデルで免疫抑制機能を再確認し、卵巣癌治療の新たな治療標的になる可能性を示した。現在、卵巣癌細胞株を用いた免疫抵抗性(免疫逃避能)獲得における免疫因子の探索に向けて、予定通りにin vivo, in vitro実験が遂行できている。自然発癌マウス(米国から)の入手が遅れているが、上記実験が進行しており、進捗状況を鑑みて再依頼をする予定である。1平成26-27年度から進めている、上述の複数種のマウス卵巣癌細胞株接種モデルを用いた免疫抑制因子の同定とともに発癌モデルマウスを用いたがん微小環境での免疫学的経時変化を解析し、類似あるいは共通の免疫関連因子を抽出する予定である。さらに仮想抗原OVAを発現するマウス卵巣癌細胞株を用いて、OVA抗原を認識するT細胞をもつOT-1マウスへの繰り返し投与による免疫抵抗性(免疫逃避能)獲得能を有する細胞株を樹立と未知の免疫抑制因子の同定についても検討を開始している。28年度が最終年度であるため、記入しない。婦人科腫瘍学まずは、平成26年度に引き続いて、免疫抵抗性のマウス卵巣癌細胞株を樹立と未知の免疫抑制因子の同定するとともに、マウス卵巣癌発癌モデルでの卵巣局所免疫の経時的解析を行い、がん関連遺伝子改変卵巣癌細胞担持マウスでの免疫学的変化をフローサイトメトリーなどのタンパクレベルや遺伝子発現アレイ解析による網羅的比較解析を用いて、新規の免疫抑制因子を探索する予定である。さらに、免疫抵抗性細胞株ID8-OVA-IRを早急に樹立することで、近年度予定しているcDNAライブラリー作成に向けて実験が推進できる。マウスへの腫瘍接種モデル作成に時間を要しており、cDNAライブラリー作成の試薬等を購入できなかった為28年度が最終年度であるため、記入しない。現在実験計画中のマウス遺伝子DNAライブラリー作成資材の購入が、実験の進捗に従って延期しているため、その周辺の試薬、マウス等の購入含め次年度へ一部研究費を繰り越した。上記マウスモデルを早急に作成し、昨年度完結できていない検討内容【上記】を遂行する28年度が最終年度であるため、記入しない。今後、実験の進捗に応じて、マウス遺伝子ライブラリー作成準備およびスクリーニング等に用いる周辺の試薬やマウス購入等に活用する予定。
グローバル・ジャスティス運動が世界政治に与える影響に関する研究

本研究の成果は、類縁集団を基底としたグローバル・ジャスティス運動が世界政治に与えている影響を明らかにしたことである。本研究では、フローバル市民社会としてNGO以外にもオキュパイ・ウォールストリートや香港の抗議行動等、サイバースペースでの紐帯を活用した世界規模で見られる類縁集団ベースの運動を「社会運動2.0」と名付けて分析した。そこではグローバル・ジャスティス運動が、国際規範の形成と強化に寄与しており、これら新たな直接民主主義の波による国境のきわを越えた国際規範形成につき「社会運動のクラウド化」という概念を用いて説明し、現行のヘゲモニーや国際秩序への変更を求める同運動の特徴と動態を理論化した。25年度は、これまでの労働集約型で階級による古典的社会運動やA.メルッチやA.トゥレーヌらの「新しい社会運動」とも異なる、C. Mouffe, “Artistic Activism and Agonistic Spaces"(2007)やN. Klein, No Logo, new ed.(2009)に散発的に見られた、ダンスやサウンドシステム、仮装や広義の芸術表現といったシャリバリに近い現在の規範変容的文化からなる「ポスト-新しい社会運動」(S. Hall, 1999)とも呼ぶべき現象のグローバルな展開について、現在の世界的潮流を鳥瞰するとともに、実際の現場での定点的な参与観測を通じて、理論化を本格的に行った。また、過去の日本と世界の社会運動の系譜をたどることで、現代の社会運動論との連続性を見出すとともに、グローバル・ジャスティス運動の生成と規範のカスケードによる伝播と定着が、たんにリアルな条里空間という場のみならず、サイバー・スペースという平滑的・象徴的な場において主体化し媒介となっている現象についての分析を行った。これら本年度の研究実績は論文や学会報告、書籍等で発表することに成功し、当初の研究計画以上の成果を上げることができた。平成24年度は、本研究の特色の一つであるグローバル・ジャスティス運動の担い手たる類縁集団による、インターネット上のソーシャル・ネットワーキング・サービス(以下、SNS)を最大限に活用した今日の社会運動と国際規範の形成について、申請者は「社会運動のクラウド化」という新たな概念を提示し、その理論化を行った。反WTO運動や重債務救済運動などのグローバルな格差是正運動は、組織化に際しておもに参加者間でのeメールやインターネットサイトを活用したのに対して、近年、世界中に波及した「アラブの春」や「オキュパイ運動」、脱原発運動は同潮流の延長線上に、YouTubeやfacebook、twitterといったSNSを効果的に活用している。この「社会運動のクラウド化」によって既存の動員インフラをウェブ上にアップすることで、誰もが情報にアクセスできる交流の場を生成し、情報が並列化され格段に安いコストで動員が可能になるグローバルな動員の趨勢を「社会運動2.0」として理論的に説明した。また近年のグローバル・ジャスティス運動の主な担い手である類縁集団が、固定的な団体や党派性を放棄し一般市民への動員を拡大することで規範形成に寄与したプロセスのフィールドワークも行った。とりわけ本年度はグローバル・ジャスティス運動のなかでも、オキュパイ・ウォールストリート運動や先進諸国での脱原発運動の世界中への伝播、運動組織の運営と構造を明らかにすべく、それらへの参与観察によって運動のメカニズムを把握し、社会運動のクラウド化が可能にした政治表現にかんする、新たな知見を獲得した。くわえて多くの学会で報告を行う機会を得たとともに、グローバル・ジャスティス運動による国際規範形成の影響力と多様な性質を捉えつつ、類縁集団と非暴力直接行動による議会政治への接続を理論化した論文や著作の刊行にも成功し、研究計画以上の成果を上げた。最終年度であった本年度は、1989年にベルリンで開始されたNGOや労働組合等に依拠しない、文化を通じた政治動員によるグローバル・ジャスティス運動と国際規範形成の最大の形態であったラブ・パレードの25周年だったため、同運動が現代世界政治に与えた影響に関するフィールドワークを行うとともに、香港で発生した学生らを主体としたオキュパイ運動の現地調査にも成功し、多くの成果を上げた。フィールドワークを通じて、これまでのアラブの春、スペインのM15運動、ニューヨークのオキュパイ運動や台湾の立法院占拠抗議に共通する、サイバー・スペースを通じたアドボカシーと動員というグローバルな「社会運動のクラウド化」の実体把握につとめた。それとともに、一般市民からなる類縁集団ベースでの非NGO組織型の規範形成がブーメラン効果を用いて国際社会へ喚起し、反応が国内へ環流することで国内・国際の両規範が形成・強化される現象の動態分析を行った。一連の調査と分析の結果、既存の社会運動論の理論的な刷新をさらに洗練させるための手掛かりと現象面での裏づけも得ることができた。くわえて、これら調査研究を通じて、「非暴力」「公正」そして「民主主義」等のグローバル・ジャスティスにまつわる政治理論の規範が、現実の世界政治における具体的な現象と強い紐帯がある点を見出すことができた。

また研究成果の一部については日本政治学会の英文年報雑誌であるJapanese Political Science Reviewの2014年号での巻頭掲載をはじめとして、数多くの学術雑誌等で公表した。さらに日本記者クラブ、国際公共政策学会、ヴェネチア建築ビエンナーレのワークショップ「ヨーロッパの未來」でも報告等を行う機会を得た。日本弁護士連合会や各種新聞メディア、NHK等のテレビ番組でも公表し、アウトリーチにもつとめた。なお同成果の一部はさらに研究を深め、来年度に角川インターネット講座等に寄稿予定である。国際社会論平成25年度も当初の計画以上に研究が進展した。海外での学会報告が出来たのみならず、雑誌への査読も含む論文投稿や書籍への論文掲載も叶い、研究計画で示した研究内容を広く江湖に問うことが出来た。投稿した英文雑誌の査読を通過し、26年度に掲載予定である。並行して引き続き類縁集団の動態把握のための資料収集とフィールドワークを行い、日本の脱原発運動のレパートリー分析に成功するとともに、海外でネオナチなどのファシズムの復活やヘイトスピーチ、ヘイトクライム等のいわゆる右傾化に対抗してなされている草の根のアンティファ(ANTIFA:Anti-facism)運動やLGBT運動の国内外での連環とフォーマットの伝播と議会政治への影響力行使に関する動態把握も成功した。なお、グローバル・ジャスティス運動の日本への伝播の例として、日本の脱原発運動における組織の脱中心的な傾向を明らかにするとともに、日本での排外主義やヘイトスピーチの蔓延に対抗する反レイシズムのカウンター運動の生成とレパートリーの獲得、文化的な宣伝手法の洗練などを分析することができた。それらの分析にかんする研究成果の一部いんついても、国際学会と国内学会での研究発表、投稿論文、ウォールストリートジャーナルやNHKなどの国内外メディアや全国紙の新聞論説への寄稿など順次公表し、社会への還元も行うことが出来た。なお分析に使用した「ヘイトスピーチ」という語彙が、2013年度の現代用語の基礎知識でトップテンに選出され、申請者が受賞した。平成24年度は当初の計画以上の研究の進展が可能となった。グローバル市民社会論とグローバル・ジャスティス運動の理論枠組みを発展深化させるという、平成24年度の当初の研究計画にくわえて、類縁集団ベースでのグローバル・ジャスティス運動の生成過程を、歴史的・理論的な双方の視座から分析と史料収集、フィールドワークを積極的に行うことで、ソーシャル・ネットワーキング・サービスを媒介としたグローバル・ジャスティス運動の理論化をさらに進めることが出来た。とりわけ先進諸国におけるグローバル・ジャスティス運動の展開例である脱原発運動のフィールドワークを行い、旧来の党派や労働組合ベースの社会運動やクラスターが固定的な「新しい社会運動」とは異なり「社会運動のクラウド化」によって可能になった類縁集団ベースでの「ポスト-新しい社会運動」である旨を分析し、「社会運動2.0」として理論化を行うことが出来た。
MAGEファミリーに属するグリオーマ特異的な新規遺伝子の臨床応用と機能解析

MAGE-E1a cDNAの塩基配列から予想される蛋白のアミノ酸配列のうち、MAGE-conserved domainを含まないようにしてN末端側、C末端側に14merのペプチドを作成した。これをウサギに免疫してペプチド抗体を作成した。これらの抗体はともに58kDaの単一のバンドを認識した。RT-PCRでMAGE-E1遺伝子が発現していないことが確認できた正常肺組織ではこのバンドは認められなかった。以上の結果より、この58kDaのバンドがMAGE-E1蛋白であると判断した。U87MG細胞より抽出した蛋白分画を用いたウェスタンブロット解析や同細胞を用いた免疫染色の結果、MAGE-E1蛋白は細胞質、特に核の周辺に局在していることが明らかとなった。MAGE-E1とGFPの癒合蛋白をHIH3T3,HEK293細胞に強制発現させて機能解析を試みた。MAGE-E1遺伝子を強制発現させると細胞が死滅したため、MAGE-E1の過剰な発現は細胞障害性があると考えられた。MAGE-E1が悪性グリオーマの増殖に関わっていることを示すために以下の実験を行った。T98G細胞を無血清培地で72時間培養することによって細胞をG0期に入るようにすると、通常の10%FBSで培養したもとと比較してMAGE-E1蛋白の発現は減少した。これらの細胞の免疫染色の結果、蛋白レベルの減少は特定の細胞に起因するものではなく、すべての細胞で一様に減少していた。グリオーマの摘出標本を用いたウェスタンブロット解析の結果、膠芽腫では星細胞腫に比べて蛋白レベルが高かった。また、免疫染色の結果も膠芽種では蛋白発現が高い細胞がびまん性に存在していたが、星細胞腫では発現が比較的高い細胞が散在していた。以上の結果より、MAGE-E1蛋白は悪性グリオーマで発現が上昇しており、グリオーマ細胞の増殖に関与していることが示唆された。MAGEは当初メラノーマの抗原をコードする遺伝子ファミリーとして同定されたが、メラノーマ以外の癌種でも広く発現していることが確認されている。私どもは、グリオーマに強く発現していて、MAGE familyに高いホモロジーを示す新規遺伝子MAGE-E1を見いだした。今回の研究の目的は、1)MAGE-E1蛋白が診断や免疫治療に応用できることの確認とそのシステムの確立2)グリオーマにおけるMAGE-E1タンパク質の機能解析である。[結果]cDNAの塩基配列から予想されるMAGE-E1蛋白の構造は、MAGE familyの中でもMAGE-D1と最も高いホモロジーを示したが、遺伝子の構造もMAGE-E1はMAGE-D1と非常に似ており、座位もX染色体上の近い領域にあることが明らかとなった。この結果から、MAGE-E1はMAGE-D1と同じancestral gene由来であることが示唆され、MAGE-D1がp75 neurotrophin receptorを介したアポトーシスを誘導する機能があることから、MAGE-E1も細胞周期に関係する機能があるのではと考えられる。また、MAGE-E1抗体を用いた解析の結果、他のMAGE蛋白と同様に細胞質に局在しており、悪性グリオーマではほとんどの細胞に強く発現しているが、悪性度の低いグリオーマでは一部の細胞でしか発現していないことが明らかとなった。以上より、MAGE-E1蛋白はグリオーマの増殖に関与している可能性が考えられる。MAGE-E1

a cDNAの塩基配列から予想される蛋白のアミノ酸配列のうち、MAGE-conserved domainを含まないようにしてN末端側、C末端側に14merのペプチドを作成した。これをウサギに免疫してペプチド抗体を作成した。これらの抗体はともに58kDaの単一のバンドを認識した。RT-PCRでMAGE-E1遺伝子が発現していないことが確認できた正常肺組織ではこのバンドは認められなかった。以上の結果より、この58kDaのバンドがMAGE-E1蛋白であると判断した。U87MG細胞より抽出した蛋白分画を用いたウェスタンブロット解析や同細胞を用いた免疫染色の結果、MAGE-E1蛋白は細胞質、特に核の周辺に局在していることが明らかとなった。MAGE-E1とGFPの癒合蛋白をHIH3T3,HEK293細胞に強制発現させて機能解析を試みた。MAGE-E1遺伝子を強制発現させると細胞が死滅したため、MAGE-E1の過剰な発現は細胞障害性があると考えられた。MAGE-E1が悪性グリオーマの増殖に関わっていることを示すために以下の実験を行った。T98G細胞を無血清培地で72時間培養することによって細胞をG0期に入るようにすると、通常の10%FBSで培養したもとと比較してMAGE-E1蛋白の発現は減少した。これらの細胞の免疫染色の結果、蛋白レベルの減少は特定の細胞に起因するものではなく、すべての細胞で一様に減少していた。グリオーマの摘出標本を用いたウェスタンブロット解析の結果、膠芽腫では星細胞腫に比べて蛋白レベルが高かった。また、免疫染色の結果も膠芽腫では蛋白発現が高い細胞がびまん性に存在していたが、星細胞腫では発現が比較的高い細胞が散在していた。以上の結果より、MAGE-E1蛋白は悪性グリオーマで発現が上昇しており、グリオーマ細胞の増殖に関与していることが示唆された。
膝状体外視覚系に属する線維連絡の光顕及び電子顕微鏡的解析

本研究はネコの膝状体外視覚系に関係する神経回路の全貌を解明する事を目的としている。この神経回路中、視床膝上核(Sg)、上丘(SC)、及び小脳室頂核(Ft)の相互線維連絡を検索するため、トレーサーとしてWGA-HRPおよび蛍光色素を用い形態学的(光顕・電顕)に研究を進めた。1.WGA-HRPを用いた逆行性実験により、(1)膝上核へ投射するSC-Sg投射神経細胞は上丘のII、VI、III、V、IV層の順に多数存在し、形態学的に星状・垂直・顆粒・三角・水平細胞の5タイプに分類された。また、SC-Sg投射神経細胞数の約2.0%が反対側の膝上核に投射していた。(2)室頂核神経細胞が両側の膝上核へ投射する事を確認し、そのFt-Sg投射神経細胞を形態学的に星状・三角・紡錘・顆粒細胞の4タイプに分類した。2.WGA-HRPを用いた順行性実験により、(1)上丘神経細胞から膝上核への投射終末は大型の終末で、膝上核神経細胞の樹状突起と非対称性のシナプスを形成していた。(2)室頂核神経細胞から膝上核への投射終末は大型の終末で、しばしばシナプス複合体を形成していた。3.蛍光色素(fast blue,nuclear yellow)を用いた二重蛍光標識法により、(1)Ft-Sg投射神経細胞数の約20%の神経細胞が、またFt-SC投射神経細胞数の約10%の神経細胞が二重に標識された。その結果、一つのFt投射神経細胞が側副枝を出して、同側の膝上核と上丘に投射線維を出すことが明らかとなった。(2)SC-Sg投射神経細胞の大多数は同側性に投射しており、この中で主に上丘吻側部に観察される神経細胞は反対側の膝上核にも投射していた。更に、反対側の膝上核に投射するSC-Sg投射神経細胞数の約8.5%が側副枝を出して、両側の膝上核に投射線維を送っている事が明らかとなった。以上によって、視床膝上核(Sg)、上丘(SC)、及び小脳室頂核(Ft)間の線維投射様式はほぼ解明された。最近、光刺激に応答する視床膝上核(Sg)と小脳室頂核(Ft)の間に線維連絡のあることを報告した。そこで今回、膝上核に投射線維を送る室頂核神経細胞がどの様な形態をしているかをWGA-西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)の逆行性軸索輸送を利用して検索した。実験には成熟ネコ(体重2.53.5kg)10匹を用いた。動物をケタミン(筋肉内注入)および、ネンブタール(腹腔内注入)麻酔下で、WGA-HRPを膝上核に0.01μ1圧注入した。このネコを2日間生存させた後、深麻酔下で灌流固定した。

その後、膝上核を含む視床および小脳について厚さ50μmの前頭断連続切片を作製し、テトラメチルベンチジン(TMB)反応を行って、HRPを可視化し光学顕微鏡を用いて観察した。小脳連続切片を観察した結果、小脳核のうち室頂核の尾側半部の領域に逆行性軸索輸送によるHRP陽性標識細胞を認めた。両側室頂核における陽性細胞総数814を樹状突起の形態から分類すると、以下の4タイプに分けられた。4つ以上の突起をもつ星状細胞(10.1%)、3つの突起が三方向に伸びている三角細胞(13.0%)、2つの突起が両極に伸びる紡錐細胞(2.0%)、および突起をほとんど有しない小型の顆粒細胞(1.5%)が認められた。その他にWGA-HRPの反応陽性産物が細胞質内に確認されるものの、突起にまで満たされていない神経細胞(73.4%)が多数観察された。上記のように膝上核に投射する室頂核神経細胞を4タイプに分類したが、これは以前の研究者により報告された室頂核内のすべてのタイプの神経細胞と類似している。よって、分類されなかった陽性神経細胞も、樹状突起まで反応産物が満たされれば4タイプのどれかに所属し、室頂核内の全てのタイプの神経細胞が膝上核に投射線維を送っているの考えられる。視覚に関係した部位である小脳室頂(Ft)尾側半部と視床膝上核(Sg)間、Ftと上丘(SC)間の線維連絡のあることは既に報告されている。前回Ft-Sg投射神経細胞とFt-SC投射神経細胞がFt尾側半部の同一部位に共存しており、SgとSCの両者へ投射する二重標識神経細胞の存在することを報告した。しかし、Ft神経細胞が側副枝を出して、両側のSgに投射しているか否か、いまだ不明である。本研究は、両例Sgに異なる蛍光色素を注入し、逆行性軸索輸送により、Ft-Sg神経細胞の投射様式を検索した。実験には成熟ネコ5匹を用い、ケタミンおよびネンブタール麻酔下で、脳定位固定装置に固定し、先ず左側のSgにfast blue(FB)を0.5μl圧注入し、その3日後に、再麻酔し、右側のSgにnuclear yellow(NY)を0.5μl圧注入した。その後、このネコを2日間生存させ、ネンブタール深麻酔下で、10%ホルマリン溶液にて潅流固定した。次に、脳を取り出して小脳および脳幹を分離し、これについて厚さ50μmの前頭断連続凍結切片を作製し、蛍光顕微鏡を用いて両側Sgへ線維を投射する神経細胞をFt内で追究した。その結果、逆行性標識細胞が両側のFt尾側半部に観察された。fast blueで標識されたFt-Sg投射神経細胞はその細胞核を除き、細胞質および樹状突起が青色に標識されていた。また、nuclear yellowで標識されたFt-SC投射神経細胞はその細胞の核のみが黄緑色に標識されていた。それぞれの蛍光色素により標識される標識神経細胞はFtの尾側半部に散在して観察された。その中で、両者の色素により同時に標識される二重標識神経細胞が観察された。二重標識神経細胞は主に中型で、円形から楕円形の細胞体により数個の突起を出す多極神経細胞であった。視覚に関係した部位である小脳室頂核(Ft)尾側半部と上丘(SC)間の線維連絡のあることは既に報告されている。以前に、Ft-Sg投射神経細胞とFt-SC投射神経細胞がFt尾側半部の同一部位に共存しており、同側のSgとSCの両者へ、また両側のSgに投射する二重標識神経細胞の存在することを報告した。しかし、Ft神経細胞が側副枝を出して、両側のSCに投射しているか否か、いまだ不明である。本研究は、両側SCに異なる蛍光色素を注入し、逆行性軸索輸送により、Ft-SC神経細胞の投射様式を検索した。実験には成熟ネコ7匹を用い、ケタミンおよびネンブタール麻酔下で、脳定位固定装置に固定し、先ず左側のSCにfast blue(FB)を0.5μl圧注入し、その3日後に、再麻酔し、右側のSCにnuclear yellow(NY)を0.5μl圧注入した。その後、このネコを1日間生存させ、ネンブタール深麻酔下で、10%ホルマリン溶液にて灌流固定した。
歯牙交換期の歯髄歯胚神経の侵入へのNGFの関与について

本研究では齲蝕以外の理由により抜歯されたヒト幼若永久歯を用いてその歯根完成程度と歯髄内の神経線維分布。また,固定法や,切片作成法の違いによる染色性の比較を行った。研究に用いた歯牙は交換期に矯正治療を目的に抜歯された幼若永久歯,または,齲蝕以外の理由で抜歯された第3大臼歯を用いた。歯牙を通法に従いパラフォルムアルデヒド保存液で固定し,1)EDTA脱灰液中で脱灰し,パラフィン包埋を行いパラフィン切片を作成する。2)歯冠の切断を行い,歯髄を取り出し,凍結切片を作成する。の2法により染色性の比較を行った。連続切片を作成し,Neuro Fillament ProteinのABCキットを用いた免疫染色を行なった結果,パラフィン切片ではCli,R1/4に比べR1/2,R3/4ではNeuro FillamentProteinの染色性が劣っていた。また,凍結切片では歯根の完成度に関わらず,良好な染色性を示したが,象牙質直下の歯牙硬組織との剥離部では組織に,剥離による損傷が見られ,同部の検鏡には適さないものも多かった。連続切片標本を作成し,連続的に検鏡した画像を画像処理用専用ソフトウエアーにて神経線維をト-レスし,立体再構成を行なう場合均一な染色性をもって標識されることは大変重要であるが,そのための条件である組織内の抗原性の保存のためには,歯牙硬組織内の歯髄組織の固定に通法の浸漬固定では浸透性に問題があることが明らかとなった。
神経発達障害モデル動物の行動変化における機能解析

昨年度の実験結果より、神経発達障害仮説に基づいた統合失調症の動物モデルである幼若期両側腹側海馬(neonatal ventral hippocampus: NVH)障害ラットの異常行動(特に認知障害)は、思春期後(生後56日目以降)に前頭前皮質のセロトニン(5-HT)_<2A>受容体の機能亢進が関与することを行動薬理学的に証明した。従って本年度は行動薬理学的に証明した5-HT_<2A>受容体の機能亢進をオートラジオグラフィー(神経化学的手法)により様々な脳領域における5-HT_<2A>受容体及びセロトニン取り込み(SERT)結合部位の変化を測定した。その結果、脳内5-HT_<2A>受容体結合部位は思春期前においてコントロール群及びNVH障害群間で有意な差は認められなかった。思春期後においては、コントロール群と比較しNVH障害群の前頭前皮質、扁桃体において5-HT_<2A>受容体結合部位は有意に増加した。脳内SERT結合部位に関しては思春期前後においてコントロール群と比較し、NVH障害群の前頭前皮質、線条体及び背側海馬で有意に増加していた。以上のことによりNVH障害ラットにおける認知障害の発現には特に前頭前皮質における5-HT神経機能亢進の可能性が神経化学的な手法によっても証明された。したがって、今後の抗精神病薬開発には抗5-HT作用が必要であることが示唆された。また、NVH障害ラットの5-HT神経機能亢進の原因を究明することは、統合失調症の危険因子を同定する可能性があるため今後検討していく予定である。神経発達障害の疾患の一つとして統合失調症が知られている。この神経発達障害説にもとづいた動物モデルが幼若期両側腹側海馬(neonatal ventral hippocampal : NVH)障害ラットであり、この動物は統合失調症患者と似た異常が思春期後に発現することから、最近注目されている。今年度はNVH障害ラットが示す異常行動の一つであるprepulse inhibition(PPI)の障害に対する抗精神病薬及びセロトニン(5-HT)アンタゴニストの効果を行動薬理学的に検討した。その結果NVH障害ラットのPPI障害は、定型抗精神病薬のハロペリドールではなく非定型抗精神病薬のリスペリドン及びクロザピンの投与によって改善した。このことからPPIの障害はドパミン神経ではなく5-HT神経の関与が推察されたことから、5-HT_<2A>アンタゴニストのketanserine及びMDL100907を用いNVH障害ラットのPPI障害に対する影響を観察したところ、これらアンタゴニストによって改善した。このことからNVH障害ラットのPPI障害の改善には5-HT_<2A>受容体が重要な役割を果たしていることを証明した。さらにNVH障害ラットに5-HT_<2A>アゴニストを投与したところ前頭前皮質の5-HT_<2A>受容体が作用点であるwet dog shakes responseという行動がコントロールと比べ有意に増加した。このことからNVH障害ラットは前頭前皮質の5-HT_<2A>受容体の機能が亢進している可能性も示唆された。