hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
幼児の食塩摂取量調査と食塩摂取に影響する食環境要因の解析

宮城県内2市の一般家庭の3歳から5歳の幼児136名に対して24時間蓄尿による食塩摂取量の調査及び3歳児用の簡易型自記式食事歴法質問票を使用した食環境調査を行なった。136名のうち34名については連続しない3日間の蓄尿を試み、残りの102名については1日のみの蓄尿とした。対象者への協力依頼と説明は2市に所属する行政栄養士が行なった。倫理的な配慮として、拘束時間や心理面への配慮を含め各地域の担当栄養士が説明を行い保護者の承諾書の提出をもって同意とした。情報の入力および管理についてはコード化により個人情報保護を厳重に行なった。24時間蓄尿は1日目の朝の2回目の尿から2日目の朝の最初の尿までを基本に24時間行なった。蓄尿状況の確認は、取りこぼしの有無や服薬、下痢、発熱等の有無及び採尿時刻について保護者に記録してもらい、尿とあわせて提出する方法をとった。24時間蓄尿実施協力者延べ188人のうち107名(56.9%)が、蓄尿に成功した。連続しない3日間の蓄尿が成功した9名については、蓄尿日と被験児を変動要因とした2元の分散分析を行なった結果、有意な交互作用はなく蓄尿日間の有意差もなかったことから、独立したデータとして扱った。蓄尿成功者の24時間尿量の平均は536.7ml(標準偏差186.7)であった。体重当りの尿量の平均は31.8m1/kg(標準偏差11.9)であった。性別間、地域間及び年齢間の尿量の平均値には統計学的に有意な差はなかった。採取した尿は尿量を測定後低温保存し、検査機関にてNa、K、Ca、Cl、Mg、尿素窒素及びクレアチニン濃度を測定した。蓄尿成功者の尿中Na排泄量の平均は、78.2mEq/day(標準偏差24.6)で、これにより推定した尿中NaC1排泄量の平均は4.6g/day(標準偏差1.4)であった。連続しない3日間の蓄尿が成功した9名(変動係数20%未満)の尿中クレアチニンの平均は282mg/day(標準偏差66)であった。食環境要因については、統計学的に有意差は認められなかったが、食塩摂取量との関係が示唆された項目はめん類の汁の飲み方であった。今後幼児の秤量食事記録法による調査を実施し、検討に必要な基礎資料を収集したうえで更なる解析を進めていく。採尿には蓄尿びん及びスチロール樹脂製の透明プラカップを用いた。採尿後の尿は蓋付のポリエチレン製びんに溜め、保冷剤入りの蓋付の発泡スチロール容器に保存してもらった。体重当りの尿量の平均は31.8ml/kg(標準偏差11.9)であった。

蓄尿状況の確認は、取りこぼしの有無や服薬、下痢、発熱等の有無及び採尿時刻について保護者に記録してもらい、尿とあわせて提出する方法をとった。24時間蓄尿実施協力者延べ188人のうち107名(56.9%)が、蓄尿に成功した。連続しない3日間の蓄尿が成功した9名については、蓄尿日と被験児を変動要因とした2元の分散分析を行なった結果、有意な交互作用はなく蓄尿日間の有意差もなかったことから、独立したデータとして扱った。蓄尿成功者の24時間尿量の平均は536.7ml(標準偏差186.7)であった。体重当りの尿量の平均は31.8m1/kg(標準偏差11.9)であった。性別間、地域間及び年齢間の尿量の平均値には統計学的に有意な差はなかった。採取した尿は尿量を測定後低温保存し、検査機関にてNa、K、Ca、Cl、Mg、尿素窒素及びクレアチニン濃度を測定した。蓄尿成功者の尿中Na排泄量の平均は、78.2mEq/day(標準偏差24.6)で、これにより推定した尿中NaC1排泄量の平均は4.6g/day(標準偏差1.4)であった。連続しない3日間の蓄尿が成功した9名(変動係数20%未満)の尿中クレアチニンの平均は282mg/day(標準偏差66)であった。食環境要因については、統計学的に有意差は認められなかったが、食塩摂取量との関係が示唆された項目はめん類の汁の飲み方であった。今後幼児の秤量食事記録法による調査を実施し、検討に必要な基礎資料を収集したうえで更なる解析を進めていく。
海洋メタゲノムからの金属結合物質シデロフォアの生合成遺伝子探索と異宿主生産

これまでにメタゲノムライブラリから50以上のシデロフォア生産クローンを取得し、4つのクローンについてはその生合成遺伝子クラスター全長を決定した。また、取得した活性クローンのうち2つを解析しvibrioferrinとbisucaberinをその活性成分として同定した。Vibrioferrin生産クローンにおいては、本来の生産菌の40倍という高い生産量を示した。一方、bisucaberin生合成遺伝子はその配列から未解析微生物由来である事が示唆された。また、他のクローンからは遺伝子クラスター全長が25kbp以上という、機能ベースメタゲノム法で取得された生合成遺伝子クラスターとしては最大級のものを見出した。以上の成果は、機能性メタゲノム法による生合成遺伝子の探索と異宿主生産の実用性と応用性を示すものである。海洋メタゲノム由来生合成遺伝子を利用した物質生産技術の基礎を築くために、医薬品のリードにもなるシデロフォアを対象に検討を行った。その結果、これまでにメタゲノムライブラリから50以上のシデロフォア生産クローンを取得し、また4つのクローンについてはその生合成遺伝子クラスター全長を決定した。そのうちの一つは遺伝子クラスター全長が25 kbp以上あり、これは土壌および海洋メタゲノムを問わず、機能ベーススクリーニング法で取得された生合成遺伝子クラスターとしては最大級のものであり、その実用性の広さを示した。また、既知類縁遺伝子と比較した結果、新規化合物の生産が期待され、現在その生産物の解析を進めている。また、他のクローンからは2種のシデロフォアvibrioferrinとbisucaberinの生産と同定に成功しており、海洋メタゲノム法による生理活性物質の異宿主生産を実現するとともに、各種生物試験に対し試料の供給を行った。さらに、生合成遺伝子クラスターの一部を、他の遺伝子に置換した改変クラスターを構築したところ、最終産物の構造変換に成功し、生産物多様化の例を示した。一方、bisucaberin生合成酵素は未解明な点が多い酵素による大環状化反応の分子機構を解明するために有用であると考え、構造生物学的な解析を行うために結晶化を試みており、現在初期結晶の取得に成功している。この様に難培養微生物から有用遺伝子を取得するというメタゲノム法から始まり、取得した遺伝子を利用した多様な展開へと発展することができた。これまでに有明海の干潟砂泥から作成したメタゲノムライブラリからシデロフォア生合成遺伝子を取得し、その産物としてvibrioferrinを同定した。干潟砂泥由来のvibrioferrin生合成遺伝子は過去にvibrioferrinの生産が報告されている海洋細菌Vibrio parahaemolyticus由来の生合成遺伝子と99%の相同性を示すものであった。一方、新たな機能性遺伝子の探索を目指し天草諸島において採集した海綿やホヤなどの海洋無脊椎動物あるいは海藻などの海洋生物からメタゲノムライブラリを作成し、同様に金属結合物質であるシデロフォア生産の有無でスクリーニングを行ったところ、顕著な活性を示すクローンを複数取得した。そのうちの一つについて生合成遺伝子のDNA配列を決定したところ、干潟砂泥由来vivrioferrin生産クローンと70%程度の相同性を示すクローンであった。これまでにvibrioferrinの生産が確認されている遺伝子とは系統的に異なる事、また過去にvibrioferrinの類縁化合物は報告されていないことから、新規化合物を生産する遺伝子である可能性を考え、その生産物の解析を進めた。その結果、vibrioferrinと各種クロマトグラフィーにおける挙動が似ている活性化合物(化合物A)と、大きく異なる活性化合物(化合物B)が存在する事が明らかになった。化合物Aを精製しNMRを測定したところ、vibrioferrinに特徴的なシグナルを有するのの、異なる点も存在し、類縁化合物である可能性が示唆された。一方、化合物Bに関しては部分精製の段階であるが、vibrioferrinの生合成中間体の異性体のような化合物である可能性が考えられ、新しい反応性を有する生合成酵素を取得したことが期待される。本結果は日本薬学会第132年会で報告した。これまでに知られていない新規シデロフォア生合成遺伝子を取得し、その生産物の解析を行ったところ、類縁酵素とは異なる生産物である可能性が示唆された。このような新規遺伝子の取得と解析は、今後の変異株作成による生産化合物の構造変換、あるいは生合成メカニズムの解析において重要である。現在生産物の精製と同定を進める一方、既知酵素との違いの比較あるいは融合による変異株のデザインを進めており、これまでf名であったvibrioferrin生合成経路の解明や異性体の生合成につながると期待される。今回取得した海洋生物メタゲノム由来のシデロフォア生合成クローンの生産物を精製・同定する。

生合成酵素の相同性が70%程度ということから、類縁酵素が生産するvibrioferrinと大きく異なる化合物が生産される事は考えにくく、vibrioferrinと同様のしゅほうにより精製と構造決定が可能であると推測される。物性が大きく異なる化合物についても、生合成の途中において本来の基質とは異なるものをとりこみ、その後の変換が停止した中間体などのvibrioferrin関連化合物であることが推測されるため、その精製と同定は短期間により可能であると推測される。また生産物が既知酵素と異なる場合はその違いを生み出す機構について、変異株などの作成により解明を進めていく。またもしどちらもvibrioferrinを生産する場合は、生産効率の高い遺伝子を用いて、これまで全く未知であるvibrioferrin生合成経路の解明を進め、論理的な生合成的構造変換のための基盤情報を取得する計画である。平成23年度未使用額については、平成23年度中に納品し、支払いが次年度になった大型遠心機用ローター『Hitachi R10A3』の支払いに使用する。
在日ベトナム人の家族とその多国間ネットワークに関する文化人類学的研究

本研究は、1970年代後半より定住したきた在日ベトナム系住民の家族に関する文化人類学的調査を通じて、祖国ベトナムを含む海外に居住する分散家族とのトランスナショナルなネットワークの実態を把握することをねらいとした。調査は関東、関西地区に居住する在日ベトナム系住民への直接のインタビュー調査と彼らのコミュニティ活動への参与観察によって行った。平成10年度は彼らのコミュニティ活動のうち宗教的ネットワークについて調査を行った。その結果、カトリック系および仏教系信者の組織の実態や海外まで広がるネットワークが明らかになった。また平成11年度はそれに加え、家族・親族のネットワークを通じて、海外移動や情報交流が活発に行われている実態がインタビュー調査から明らかにした。平成12年度はそれまでの研究を踏まえ、これらのネットワークがどのような意味をなすかについて考察を行った。世代や家族によっても、ネットワークのトランスナショナルな広がりや情報の内容に多様性があることやそのことの家族への影響も多様化していることがわかった。いわゆる「難民一世」と幼少で来日し日本で成長した「難民一・五世」や二世との間で、祖国観、家族観、結婚観、将来への生活戦略、社会上昇への意欲、民族的アイデンティテイのとらえ方等に大きな差があることも明らかになった。今後は、トランスナショナルなネットワークが個人にどのような影響を与えていくか、特に成長する若い世代が日本に定住する各家族やコミュニティ全体にどのような影響を与えていくか、またそのような背景の中で、日本社会が彼らとどのような共生的関係を取り結んでいくかが課題となろう。本研究は、1970年代後半より定住してきた在日ベトナム人の家族に関する文化人類学的調査を通じて、祖国ベトナムを含む海外に居住する分散家族とのトランスナショナルなネットワークの実態を把握することがねらいである。本年度は、関東および関西地区に居住する在日ベトナム人へのインタビュー調査、および、彼らのコミュニティ活動への参与観察を行った。特に、ネットワークの上で重要な社会的機能を持つと考えられる宗教的ネットワークについて研究調査を行った。その結果、カトリック教徒共同体と仏教徒教会の実態が明らかになるとともに、ベトナム人家族と宗教施設のかかわり、また宗教儀礼を通じて見られる多国間の家族の交流が明らかになった。収集されたデータは、購入したパーソナル・コンピュータで処理され、保存された。さらに、成果の一部は、オーストラリアのシドニーで開催されたオーストラリア・アジア研究学会(ニュー・サウス・ウェールズ大学:1998年9月28日10月1日)で発表した。また、本年度の科学研究費による研究報告書として以下の報告書を作成し、発表した。本年度は昨年度に引き続き、関東地区および関西地区に居住する在日ベトナム人へのインタビュー調査、また彼らのコミュニティ活動への参与観察を行った。その結果、宗教的ネットワーク等を通じた家族・親族のネットワークによって人々が強く結びついており、彼らの生活世界では大きな位置を占めていることが明らかになった。特に、これらのネットワークは海外にいるベトナム人にとってエスニック・アイデンティティの形成や維持に極めて大きな要素になっており、国を越えた人的・物的交流による、新しいトランスナショナル・コミュニティを出現しつつある。今年度の研究成果の一部は、日本民族学会第33回研究大会(東京都立大学:1999年5月29日5月30日)およびオーストラリアのクイーンズランド州ロックハンプトン市で開催されたオーストラリア・日本研究学会(セントラル・クイーンズランド大学:1999年12月1日12月4日)で発表した。また、論文を日本民族学会学会誌『民族學研究』第63巻第4号等に発表した。本研究は、1970年代後半より定住したきた在日ベトナム人の家族に関する文化人類学的調査を通じて、祖国ベトナムを含む海外に居住する分散家族とのトランスナショナルなネットワークの実態を把握することがねらいである。本年度は、平成10年度、平成11年度の研究を基に、本研究のまとめを行った。

前年度のまでの面接調査と参与観察、文献調査を踏まえ、さらに補足調査を行うとともに、在日ベトナム人家族およびコミュニティ内に見られるネットワークを通じて、どのような情報の交流が行われているか、またそのことが在日ベトナム人の生活世界にどのような影響を与えているかについて考察した。その結果、世代や家族によっても、ネットワークの広がりや情報の内容に多様性があることやそのことの家族への影響も多様化していることがわかった。具体的には、いわゆる「難民一世」と幼少で来日し日本で成長した「難民一・五世」や二世との間で、祖国観、家族観、結婚観、将来への生活戦略、社会上昇への意欲、民族的アイデンティティのとらえ方等に大きな差があった。詳細な研究は「報告書」にまとめた。なお、今年度の成果の一部は、第21回異文化間教育学会(青山学院大学:2000年5月27日28日)およびオーストラリア・アジア研究学会(メルボルン大学:2000年7月3日6日)で発表した。
細菌の細胞分裂装置の制御メカニズムの解明

細菌の細胞分裂はFtsZが中心となり行われるが、FtsZは細胞膜に結合できないので、細胞膜に繋ぎとめる蛋白質が必須である。大腸菌ではFtsAが、シアノバクテリアではSepFがその役割を担うと考えられるが、増殖に必須である。枯草菌は両方の因子を備え、さらに同様の役割をすると考えられるEzrAも有するので、各々が破壊可能である。本研究では、酵母2ハブリッド解析、結晶構造、電子顕微鏡観察など多面的に調べ、SepFがFtsZを膜につなぎとめるメカニズムを解明した。また、EzrAがFtsZと直接結合せず、FtsAとの結合を介してZ-ringのダイナミズムを促進している、というモデルを提案した。細菌の細胞分裂は、FtsZが細胞中央でZ-ringを形成し、収縮することにより細胞膜を内側に引っ張り込むことによりおこる。FtsZには細胞膜に結合する領域が無いため、FtsZと細胞膜を繋ぐ蛋白質が必要である。大腸菌では、FtsAがその役割を果たすことが知られている。細胞分裂は細胞の増殖に必須であるために、大腸菌ではFtsZ欠損に加えて、FtsA欠損も致死となる。一方、枯草菌ではFtsAは必須ではない。我々はこれまで、枯草菌にはFtsAの機能的ホモログのSepFが存在するため、両方を欠損させてはじめて致死となることを明らかにしてきた。本年度の研究では、SepFの機能の分子メカニズムを解明することを目的とした。酵母2ハイブリッド解析によりFtsZ、およびSepF自身とのの相互作用領域を決定した結果、いずれもC末端ドメインであることがわかった。さらにJan Lowe博士とLeendert Hamoen博士らとの共同研究の結果から、C末端ドメインだけでもin vitroで巨大なチューブ状の構造体を形成すること、さらにC末端ドメインの結晶構造解析の結果からは、C末端ドメインはdimerを基本単位としてポリマー化することがわかった。さらに、全長のSepFはリポソームへ結合することができるが、C末端ドメインだけではリポソームに結合できないこと、SepFのC末端ドメインだけではFtsA欠損との合成致死を相補できないが、C末端ドメインに別の蛋白質の膜結合領域を付加すると、合成致死性を相補できるということがわかり、N末端領域が膜結合領域であることも証明できた。このように、SepFがFtsZを細胞膜にアンカーするメカニズムを解明することができ、その論文は2013年Proceedings of the National Academy of Sciencesに掲載された。細菌の細胞分裂はFtsZがリング構造を形成し、分裂が進行する。しかし、細胞分裂装置として働くためにはFtsZを細胞膜に繋ぎとめる蛋白質が必須である。枯草菌では、FtsA、SepF、EzrAがその役割を担っていると考えられているが、どの因子がどの程度寄与しているかは不明である。本年度では、1「FtsA、SepF、EzrAで細胞分裂装置として働くために最低限必要な因子の特定と評価」、2「EzrAはFtsAに直接結合し、Z-ring形成を制御するというモデルの検証」を行った。1申請者らは「EzrAはFtsAに直接結合しZ-ring形成を制御する」というモデルを提唱してきたが、これが正しければ、これまで破壊できないとされてきたsepF-ezrAの2重破壊や、ftsA-sepF-ezrAの3重破壊株は、FtsAを過剰生産すると可能である。今回、この仮説を立証することができた。2pull-down assayによりEzrA複合体を精製するとFtsZ、FtsA、SepFが共精製される。これまで、ftsA破壊株ではFtsZが共精製されないことを発見し、EzrA-FtsZ間の結合はFtsAを介したものでるという仮説を立てるきっかけとなった。しかし、FtsZが共精製できないのは、ftsA破壊株では細胞分裂が強く阻害されることが原因である可能性も考えられる。そこで、SepFを過剰発現させ、Z-ring形成効率を野生株レベルまで回復させたうえでEzrAの複合体解析を行った。その結果、この条件でも同様にFtsZは共精製されなかった。EzrAの細胞内局在に関して、仮説がただしければFtsAが存在しない場合にはEzrAはZ-ringに局在できないはずである。そこで免疫蛍光顕微鏡により検証した。その結果、FtsAが存在しないとEzrAはFtsZが局在する細胞分裂面に局在できないことを証明できた。

細胞分裂装置を構成するEzrAは、膜貫通領域を持つこと、さらにFtsZと直接結合するという報告があることから、FtsAやSepFのようなFtsZを細胞膜につなぎとめる役割を担っている可能性が示唆されてきた。しかし我々は、「EzrAがFtsZと直接結合せず、FtsAと直接結合する」ことを前年度までに示してきた。しかし、このデータだけでは過去のデータの否定に終始してしまうので、EzrAとFtsAの結合の生物学的な意義を提示する必要があった。そこで、今年度は、EzrAと結合しなくなる変異を、酵母2ハイブリッド解析によりスクリーニングし、解析した。FtsZとの結合は保持しつつもEzrAとの結合を特異的に失った変異型FtsAを3つ取得したが、全てFtsZとの結合部位とは異なるサブドメインに存在していた。実際の枯草菌細胞内でも、変異型FtsAはEzrAとの結合能が大幅に減少していたが(細胞分裂装置の複合体解析に基づく)、その変異株は、SepFを枯渇させても増殖することができた。EzrAとSepFの二重欠損は、理由は不明であるが合成致死となることが知られている。このことを考慮すると、変異型FtsAは、SepFが無い状態でも、EzrAの欠損を相補できる形質を獲得したと考えられる。EzrA欠損はZ-ringを安定化させ、Z-ringの収縮速度を低下せせることが知られている。このことを考慮すると、EzrAは、我々が見出したFtsAとの結合を介してZ-ringのダイナミズムを促進している可能性が考えられる。微生物学SepFの分子メカニズムを解明することができ、成果も論文として発表することができた。また、EzrAにかんしても当初計画していた以下の研究を実施した。1FtsA-EzrA間の相互作用を失う変異を酵母2ハイブリッド解析により特定した。2「FtsZ-GFP発現株は温度感受性となるが、ezrA欠損により相補できる。この理由は、EzrAが直接FtsZをと相互作用し、ポリマー化を阻害するためである」という定説がある。我々は、EzrAはFtsZと直接相互作用するのではなく、FtsAを介してFtsZを制御しているという結果を得ている。我々の結果を証明するためには、この定説の出発点となった温度感受性となるFtsZ-GFP発現株における現象を説明することが重要である。そこで、FtsZ-GFPにHis-tagを付加して、in vivo複合体解析を行うのに必要な全ての株を準備した。この様に計画通り、おおむね順調に進展している。24年度の計画が早くに結論が出たので、25年度に計画していた「FtsZ-SepF間の相互作用を失う変異を酵母2ハイブリッド解析(Y2H)によりスクリーニングする」を行った。その結果、FtsZと相互作用を失う変異型SepFは、すべて保存されたC末端領域にみられた。また、SepFをドメインに分けたY2Hの結果から、C末端はFtsZとの相互作用領域であるとともに、SepFと相互作用する領域であることを明らかにした。また、イギリス・ニューキャッスル大学のLeendert W. Hamoenらと協力し、SepFの立体構造、細胞膜への結合能も詳細に解析した。これらのデータに基づき、SepFがFtsZを膜へアンカーするモデルを提唱することができた。我々は、EzrAがFtsZと直接相互作用するのではなく、FtsAと直接相互作用することを、in vivoの複合体解析、酵母2ハイブリッド解析、免疫顕微鏡の結果から示してきた。
「大気化学・燃焼化学における新規ラジカル連鎖反応」の成果取りまとめ

21世紀の社会において人類が科学に最も期待することの一つは、科学的知識の総動員による正確な未来予測である。既によく知られているように、近年、オゾン層破壊、地球温暖化、対流圏汚染などに対してモデルによる様々な将来予測が試みられているが、必ずしも信頼に足るだけの予測が行われている訳ではない。これらの不一致の原因の一つとして、多種多様な分子からなる大気圏での化学反応において多くの見落としがあることが考えられる。予測をより精度の高いものにするためには、大気化学に係わる精緻な基礎的データをより多く蓄積することが極めて重要である。本研究領域の目的は大気化学や燃焼化学において、従来あまり考慮されなかったフリーラジカルや不安定分子に係わる新しい化学過程に注目して、それらの化学過程を物理化学・反応の研究者が集約的に研究を行い、得られた基礎的成果の重要性を評価し、さらに大気化学や燃焼化学に係わる新しいラジカル連鎖反応の提案に結びつけようとするものである。行われた主な研究と成果は(1)ペルオキシラジカルの対流圏大気化学や燃焼化学における新しい役割の発見。特に大気中に放出された硫黄化合物が硫酸に酸化される新しい連鎖酸化反応の提案。(2)オゾンの光解離における励起酸素原子生成の量子収率の広い波長領域で厳密に測定と成層圏オゾン濃度の再評価。(3)水-酸素分子の錯体のマイクロ波分光による検出とミリ波との二重共鳴を用いた錯体の回転定数と錯体の構造の決定。(4)高精度量子化学・振動計算による錯体の平衡構造と平衡定数の決定。(5)平衡定数からシミュレーション計算によって求めた錯体濃度の全球分布とその温暖化に対する評価。(6)ペルオキシラジカルの純回転スペクトルが測定とラジカルの衛星を用いたリモートセンシングの可能性の評価。(7)大気中のエアロゾルに関しての理論的研究及び、光化学チャンバーを用いた実験的研究。など多数の優れた研究が行われ、それらは200を越える原著論文において発表された。本年度はこれらの研究の総まとめを行い、最終報告書の作成と公表を行った。10月には文部科学省において最終成果ヒヤリングを受けた。10月15日から17日にかけて神奈川県湘南国際村、生産性国際交流センターにおいて最終研究集会を開催した。ニュースレターの発行とそのインターネットによる情報公開をひきつづき行なった。21世紀の社会において人類が科学に最も期待することの一つは、科学的知識の総動員による正確な未来予測と、最適な未来の実現のため現状を正確に認識しつつ現在の人間活動の修正、フィードフォワードあるいはフィードバックの指針を人類に示すことにある。そのためには科学的知識の精緻化、基礎科学のより強い推進が必要である。本研究の目的は大気化学や燃焼の化学において従来あまり考慮されなかったフリーラジカルに係わる化学過程に注目し、それらの化学過程を物理化学・反応の研究者の集約された基礎的研究によってその重要性の評価を行い、新しいラジカル連鎖反応の提案を行うものである。展開されるべき研究は、(1)ラジカル錯体の生成と反応の研究、(2)大気・燃焼化学に係わる不均一反応の研究とその役割の評価、(3)長寿命ラジカル間の反応、(4)振動・回転励起分子の反応と大気、燃焼化学における役割の評価、(5)反応速度、反応機構データのより広い温度域への拡大、(6)以上の新しい反応過程を含むラジカル連鎖反応の提案がその中味となる。本年度は総括班会議を2回(9月、1月)、全体会議(1月)、公開シンポジウム(1月)、ニュースレターの発行とそのインターネットによる情報公開、初年度研究成果報告書のとりまとめと発行などを総括班として行った。また評価委員からの意見や各班間の意見交換が随時、活発に行われた。展開されるべき研究は、(1)ラジカル錯体の生成と反応の研究、(2)大気・燃焼化学に係わる不均一反応の研究とその役割の評価、(3)長寿命ラジカル間の反応、(4)振動・回転励起分子の反応と大気、燃焼化学における役割の評価、(5)反応速度、反応機構データのより広い温度域への拡大、(6)以上の新しい反応過程を含むラジカル連鎖反応機構の提案がその中味となる。本年度は総括班会議を3回(7月、10月、1月)、全体会議(7月、1月)、中間成果報告書の発行(7月)、公開シンポジウム(1月)、ニュースレターの発行とそのインターネットによる情報公開、初年度研究成果報告書のとりまとめと発行などを総括班として行った。なお、9月には中間ヒヤリングを受けた。

21世紀の社会において人類が科学に最も期待することの一つは、科学的知識の総動員による正確な未来予測と、最適な未来の実現のため現状を正確に認識しつつ現在の人間活動の修正、フィードフォワードあるいはフィードバックの指針を人類に示すことにある。そのためには科学的知識の精緻化、基礎科学のより強い推進が必要である。本研究の目的は大気化学や燃焼の化学において従来あまり考慮されなかったフリーラジカルに係わる化学過程に注目し、それらの化学過程を物理化学・反応の研究者の集約された基礎的研究によってその重要性の評価を行い、新レいラジカル連鎖反応の提案を行うものである。展開されるべき研究は、(1)ラジカル錯体の生成と反応の研究、(2)大気・燃焼化学に係わる不均一反応の研究とその役割の評価、(3)長寿命ラジカル間の反応、(4)振動・回転励起分子の反応と大気、燃焼化学における役割の評価、(5)反応速度、反応機構データのより広い温度域への拡大、(6)以上の新しい反応過程を含むラジカル連鎖反応機構の提案がその中味となる。本年度は総括班会議を4回(6月、7月、10月、1月)、全体会議4回(6月、7月、10月、1月)、成果報告書の発行、公開シンポジウム(1月)、大気光化学国際シンポジウム(奈良、7月)、化学反応に関する研究会(八王子、10月)ニュースレターの発行とそのインターネットによる情報公開、などを総括班として行った。また評価委員からの意見や各班間の意見交換が随時、活発に行われた。21世紀の社会において人類が科学に最も期待することの一つは、科学的知識の総動員による正確な未来予測である。既によく知られているように、近年、オゾン層破壊、地球温暖化、対流圏汚染などに対してモデルによる様々な将来予測が試みられているが、必ずしも信頼に足るだけの予測が行われている訳ではない。これらの不一致の原因の一つとして、多種多様な分子からなる大気圏での化学反応において多くの見落としがあることが考えられる。予測をより精度の高いものにするためには、大気化学に係わる精緻な基礎的データをより多く蓄積することが極めて重要である。本研究領域の目的は大気化学や燃焼化学において、従来あまり考慮されなかったフリーラジカルや不安定分子に係わる新しい化学過程に注目して、それらの化学過程を物理化学・反応の研究者が集約的に研究を行い、得られた基礎的成果の重要性を評価し、さらに大気化学や燃焼化学に係わる新しいラジカル連鎖反応の提案に結びつけようとするものである。行われた主な研究と成果は(1)ペルオキシラジカルの対流圏大気化学や燃焼化学における新しい役割の発見。特に大気中に放出された硫黄化合物が硫酸に酸化される新しい連鎖酸化反応の提案。(2)オゾンの光解離における励起酸素原子生成の量子収率の広い波長領域で厳密に測定と成層圏オゾン濃度の再評価。(3)水-酸素分子の錯体のマイクロ波分光による検出とミリ波との二重共鳴を用いた錯体の回転定数と錯体の構造の決定。(4)高精度量子化学・振動計算による錯体の平衡構造と平衡定数の決定。(5)平衡定数からシミュレーション計算によって求めた錯体濃度の全球分布とその温暖化に対する評価。(6)ペルオキシラジカルの純回転スペクトルが測定とラジカルの衛星を用いたリモートセンシングの可能性の評価。(7)大気中のエアロゾルに関しての理論的研究及び、光化学チャンバーを用いた実験的研究。など
ヒト腸管粘膜固有層のCD14陰性マクロファージの機能解析

大腸癌症例非癌部腸管において細分化した後、May-Giemsa染色をしたところ、CD14+MφおよびCD14-Mφともに形態学的には内部に小胞を有するN/C比が比較的大きい細胞であった。Phagocytosis assayではCD14+Mφ、CD14-Mφともに末梢血単球に比較し貪食能が軽微であったが、CD14-MφはCD14+Mφに比較し貪食能は低かった。クローン病ではCD14-Mφは炎症状態の腸管では減少し、CD14+Mφは炎症状態の腸管では増加していた。上記結果よりCD14-Mφは貪食能が弱く炎症性腸疾患において減弱していることから、免疫寛容の働きを持っている可能性が示唆された。Lin-HLADR+細胞に占めるCD14-MΦとCD14+MΦのpopulationはそれぞれ約30%および10%であり、CD14-MΦの方が多い結果であった。これらの細胞をMay-Giemsa染色をしたところ、CD14+MΦおよびCD14-MΦともに形態学的には内部に小胞を有するN/C比が比較的大きい細胞であり、両者ともに貪食能を持っていることが示唆された。また、sortingした細胞のcDNAライブラリを作成した。当初、当研究室で行われているプロトコールで抗原提示細胞を採取し、FACSを行っていたが、本研究で対象とするCD14-MΦの採取が一定しないことが問題となった。原因としてはサンプルサイズにより採取できる腸管粘膜固有層の単核球の数が限られており、採取できる細胞数が少ないためと考えられた。また、CD13による細分化を行う際にうまくFACSで細胞群を展開できず、実験系を確立するのに時間を要した。細胞数が少なければsort後の実験に支障をきたし十分な解析が行えない。特にmRNA抽出においては細胞数が少なすぎqualityのよい十分なmRNAが抽出できず、cDNAライブラリの作成は困難を極めた。検体入手が手術症例であるため手術の有無及び切除腸管の大きさ、術前の腸内環境が実験施行及び実験結果に大きく影響している。また、大腸の部位や術前の患者の栄養状態を含めた全身状態、基礎疾患によっても抗原提示細胞のpopulationに違いがあり、十分な症例数を用いて解析する必要があると考えられる。今後、炎症性腸疾患においても同様の細胞を採取し、解析する必要があるが、炎症性腸疾患の手術症例は大腸癌の症例数に比し少なく検体入手はさらに困難を極めると考えられる。上記の制約下でも検体の酵素処理およびsorting方法の見直しにより上記の実験実績を挙げることができていることは評価すべきことであると考える。大腸癌症例非癌部腸管におけるCD13によるCD14-CD11cのlow細胞の細分化して大腸癌非癌部腸管より腸管粘膜固有層の抗原提示細胞を単離した。採取細胞を表面抗原マーカー(lineage marker(CD3, CD16,CD19,CD20,CD56), CD11c, CD13, HLA-DR)で染色しFACSにより展開し、Lin-HLA-DR+CD11clowCD14+ (CD14+マクロファージ)、Lin-HLA-DR+CD11cのlowかつCD14-CD13+(CD14-マクロファージ)をsortingした。Lin-HLADR+細胞に占めるCD14-マクロファージとCD14+マクロファージのpopulationはそれぞれ約30%および10%であった。これらの細胞をMay-Giemsa染色をしたところ、CD14+マクロファージおよびCD14-マクロファージともに形態学的には内部に小胞を有するN/C比が比較的大きい細胞であった。末梢血の単球(CD45+CD14+)をコントロールに用いて、AlexaFluor488Rに標識された大腸菌を用いてPhagocytosis assayを行った。CD14+マクロファージ、CD14-マクロファージともに末梢血単球に比較し貪食能が軽微であったが、CD14-マクロファージはCD14+マクロファージに比較し貪食能は低かった。クローン病で腸管切除を行った3例の切除検体を用いて非炎症部および炎症部より上記と同様の方法でCD14+マクロファージとCD14-マクロファージを回収した。CD14-マクロファージは炎症状態の腸管では減少し、CD14+マクロファージは炎症状態の腸管では増加していた。上記結果よりCD14-マクロファージは貪食能が弱く炎症性腸疾患において減弱していることから、免疫寛容の働きを持っている可能性が示唆された。【正常腸管におけるCD14-MΦとCD14+MΦの機能解析】

今後はsortingしたCD14-MΦとCD14+MΦにTLR ligandによる刺激を加え、サイトカイン産生をELISAにより解析する。CD14-MΦとCD14+MΦの局在を評価するため切除標本のパラフィンブロックを作製し、免疫染色により評価する。CD14-MΦとCD14+MΦの貪食能をPhagocytosis assayを用いて評価する【IBD症例におけるCD14-MφとCD14+Mφの機能解析】炎症性腸疾患の手術症例を用いて炎症状態におけるCD14-MΦとCD14+MΦの機能解析を行う。方法としては正常腸管と同様にsortingを行いCD14-MΦとCD14+MΦのcDNAライブラリを作成し、qRT-PCRによりサイトカインとTLRのmRNAの発現解析を行う。さらにTLRリガンドによる刺激によるサイトカイン産生をELISAにより解析し、Nagative T cellとの共培養によりT細胞の分化誘導能を評価する。また、CD14-MΦとCD14+MΦの細胞の局在を免疫染色により評価する。上記解析の結果を正常腸管における解析と比較検討し、炎症性腸疾患におけるCD14-MΦとCD14+MΦの機能を明らかにする。ただし、炎症性腸疾患の症例は限られており、検体入手に難渋することが予想される。そのため他施設から検体入手が可能となるよう手配を進めているところである。抗原提示細胞研究費の経費削減を念頭に相見積もりを取って発注を行っており、研究費の削減が可能であった為。今後、細胞機能解析を行っていく予定である
プラズマによる血液浄化のための蛍光退色現象を活用したラジカル計測法の確立

本研究では、液中プラズマの発生に伴い生成するラジカルを微小空間に作用させ、ラジカルの局所的な作用を明らかにすることを目指し、細管中気泡内での放電計測を行った。キャピラリー放電法を応用し、細管中の微小気泡内の放電現象計測を行った。異径細管の組み合わせにより、生成される気泡の位置を制御し周囲流体やラジカルと共に一方向に流動できることを明らかにした。電流波形と気泡挙動の同時計測から流動を表す理論モデルを構築した。本理論モデルにより各電圧印加条件における関係および管長さの最適化が可能である。さらに、応用を目指し、生成したラジカルの分光計測による同定およびメチレンブルーを用いて分解性能を明らかにした。本研究では、蛍光退色現象を活用する手法により液中気泡放電において発生するラジカル拡散反応の計測法を確立することを目的としている。以下に本年度得られた結果を示す。1.微小空間における放電現象計測として、細管を用いたキャピラリー放電法を応用し、微小気泡内の放電現象を観察した。細管内に直流電圧を印加すると、細管内を流れる電流により発生するジュール熱により蒸気気泡を生成できる。この時さらに電圧を印加し続けることで、気泡内で放電を発生させ、それに伴い生成したラジカルを溶液に作用させることができる。また、直径の異なる管を接続することにより管内で局所的に電流密度を増加させ、管内の特定の場所に気泡を発生させることに成功した。さらに、ハイスピードカメラを用いた計測により、気泡内の放電現象を捉えた。これにより、ラジカル作用を詳細に計測するための実験系が確立された。2.放電時の電流電圧波形の電気的計測およびハイスピードカメラを用いた可視化計測を同時に行うことで、両者の対応を明らかにした。これにより、電気的計測を行うことで、気泡挙動を伴なう現象の中から、放電に関する情報を抽出することが可能になった。3.放電で生成したラジカルの拡散特性を明らかにするために、吸収分光計測により難分解性物質の指標であるMethylenblueの分解計測を行った。管径を変更した計測により、Methylenblueの分解効率が変化することが分かった。キャピラリー放電を用いた管内放電現象について、放電特性だけでなく、それに伴う気泡挙動を同時観察することに成功した。特に、ハイスピードカメラを用いた計測により、放電の状態と気泡界面の挙動が詳細に捉えられ、その関連性を詳細に明らかにするための実験系が確立された。本研究では,液中プラズマの発生に伴い生成するラジカルを微小空間に作用させることを目指し、細管中気泡内で放電を起こし計測を行った。以下に得られた結果を示す。1.ラジカルの局所的な作用として、細管を用いたキャピラリー放電法を応用し、細管中の微小気泡内の放電現象計測を行った。微小気泡内でのプラズマの生成およびそれに伴う流動を計測し、異径細管の組み合わせにより一方向の流動を生成できることを明らかにした。大小二種類の細管を接続し電圧を印加した場合、ジュール加熱による気泡核は管の接続部近傍で生成される。その後の加熱による気泡膨張で気泡は、関係の異なる管にまたがるため、それぞれの界面が受ける力に偏りができ、気泡は一方向に駆動される。2.非線形ベルヌーイの式を基に液体流動を記述する理論モデルを構築した。さらに、放電による電気信号と気泡挙動の同時計測から、理論モデルの妥当性を示した。本理論モデルにより各電圧印加条件における管径および管長さの最適化が可能である。3.細管内の放電部で分光計測を行いOHラジカルの発生を検出した。当初予定していた可視化計測の研究に留まらず、プラズマ水質浄化法を家庭用および携帯用の小型デバイスとして応用できる可能性を示した。メチレンブルーの分解実験では微小量を取り出した溶液に局所的にプラズマが作用するため、従来より高い分解効率が示されている。さらに液体の流動に伴う分解量の変化を明らかにし、高効率プラズマ処理法への応用可能性を示した。気泡内で生成したラジカルの作用をミクロなレベルで明らかにするため、導入したデジタルCMOSカメラを用い、蛍光粒子を用いた放電および流動計測を行う。本カメラを用いることにより、気泡界面近傍に着目した計測が可能になる。さらに、電流電圧波形の同時計測により、放電との関連性を明らかにする。今年度までに、電流電圧波形から、放電の情報を抽出できることが分かったので、ミクロなレベルでの同時計測により、デバイス応用のために有益なラジカルの作用と放電および気泡界面挙動の関係を明らかにする。流体工学予定よりも少ない量の消耗品により条件出しが完了したため。デバイス応用に有益な最適データの導出のために、管形状を変更した実験も行うための消耗品購入に使用予定である。
ハイデッガー「黒ノート」の研究――「計算的思考」の分析を中心に

本研究は、「計算的思考」という概念の分析を軸に、ハイデッガーの遺稿「黒ノート」を、前期から後期へ向かう彼の思想動向に即して読み解くことで、そこで語られる特異なユダヤ論の真意とその背景の解明に取り組んだ。主な研究成果は、以下の3点である。1現在「反ユダヤ主義的」とみなされているユダヤ論の背景には、「計算可能性」の問題に依拠した、ユダヤ-キリスト教批判が存している。2この批判はまた、「存在の思索」による信仰の間接的な擁護を担いうるものとして特徴づけられる。3この観点から、計算的思考に対して信仰的心情を重んじたパスカルの護教論が積極的に評価される。平成27年度は、「黒ノート」をハイデッガーの思想動向のうちに位置づけることを通じて、彼のユダヤ論の要をなす「計算的思考」の背景を解明することに専念した。研究の結果得られた主な成果として以下の4点が挙げられる。1.「存在史」や「本質現成」「性起」など、従来は中・後期思想と考えられていた思想が1931-32年の「黒ノートII」のなかで確認できる。2.ユダヤ論は「黒ノートVIII」(1938/39年)以降に登場するが、その重要な要素となる「計算」の問題は、それに先立つ「考察VI」(1938年末)のなかでユダヤ-キリスト教の神と結びつけられて語られている。3.「計算できる神」と捉えられたユダヤ-キリスト教の神に対して、ハイデッガーは自身の依拠する神(最後の神、既在の神々)を「算定不可能なもの」として対置する。4.計算可能なユダヤ-キリスト教の神は近代的世界、とりわけ科学技術的世界観と親和性をもち、他方で算定不可能な神は後の「四方界」の思想に発展していく。成果1により、従来のハイデッガー解釈が修正される。成果2により、「黒ノート」のユダヤ論の背景にある種の宗教批判を読み取ることが可能となる。成果3と4により、これまで不明瞭であったハイデッガーの神理解・宗教観の解明が進む。なお研究の一環として、当初の計画にはなかったが、現在指摘されているハイデッガー全集の改竄問題に関しても調査した。マールバッハにあるドイツ文書館で直筆原稿を確認したところ、全集第69巻に収録された1938年頃の文章(一段落)が削除されていた。そこには「反ユダヤ主義的」とみなしうる文言が書かれている。この改竄が編者の独断なのか、誰かの指示によるのかは現時点で判然としない。いずれにせよこのことは、クロスターマン社版ハイデッガー全集の信頼性にかかわる重大な問題であり、引き続き調査・研究を必要とする。平成27年度の研究において最も重要なことは、ハイデッガーのユダヤ論を性格づける「計算的思考」の問題をハイデッガー哲学のうちに位置づけることであった。計画では、この問題を同時期の「作為性」の問題や前期の「被制作性」との関係から明らかにするとともに、「計算」と対置される「算定不可能な神」を前期の神話問題の後継として捉える予定であった。だが研究が進むにつれて、計算的思考の問題の背景にはユダヤ-キリスト教の神観念(根本原因としての創造主)に対するある種の宗教批判があり、そこに後の技術論や四方界へと発展していく思想の萌芽があることを突きとめた。このことは、「黒ノート」のユダヤ論だけでなく、従来は必ずしも明瞭ではなかった彼の神理解や宗教観を考えるうえで重要な論点であると考えられる。そのため予定を変更して、この問題に関する研究成果を先に発表した。もちろん、当初計画していた計算的思考と作為性や被制作性との関係、および算定不可能な神と神話問題との関係を解明することは引き続き重要な研究課題であり、平成28年度中にはその成果を発表できるものと思われる。ただしこの間、計算的思考と作為性の関係に関しては、すでにいくつかの研究が発表されている。本研究では、それらの先行研究を踏まえたうえで、いまだ十分に解明されていない論点、すなわち計算的思考の問題が被制作性や神話問題といった前期思想とどのような関係にあるのかについて明らかにしていく。平成27年度の研究を通じて、「黒ノート」のユダヤ論の背景には、「計算的思考」の問題に依拠したユダヤ-キリスト教批判があり、またそこに科学技術批判も関係していることが明らかになった。これを受け平成28年度の研究では、科学技術批判とユダヤ論とのつながりを解明したうえで、いわゆる「反ユダヤ主義」には限定されない、「黒ノート」の解釈可能性を提起する計画を立てた。しかし研究を進めるにつれて、「黒ノート」のユダヤ-キリスト教批判が単純なものではなく、そこには宗教と哲学、信仰と思索をめぐる込み入った諸問題が存していることがわかってきた。ユダヤ-キリスト教批判を「黒ノート」のユダヤ論の核心に捉える以上、本研究は、新しく浮上したこれらの問題を整理し、分析する必要がある。そのため平成28年度では、当初の計画を変更し、1.「黒ノート」に記された信仰と思索の関係性、およびそれと関連する、2.ハイデッガーのパスカル解釈の分析に取り組んだ。1.の主な研究成果として、次の3点が挙げられる。(1)ハイデッガーは信仰と思索の間に「裂目」を見ている。(2)この裂目において両者の「相互承認」という関係性が成立する。(3)「黒ノート」に特徴的なキリスト教(神学)批判は、間接的な信仰擁護にもなりうる。

2.の主な研究成果として、次の3点が挙げられる。(1)ハイデッガーはパスカルの護教論を信仰による理性(計算的思考)の基礎づけとして評価する。(2)しかしそこに最高度の「存在忘却」が指摘される。(3)他方でパスカルの「心情の論理」と「理性の論理」の区別には、存在の思索にかかわる「ある本質的な痕跡の予感」が認められている。研究期間内に成果を公表できなかった研究課題に関しては、すでに関連する研究もいくつか発表されているので、それらを踏まえつつ引き続き取り組んでいく。本研究は、「計算的思考」という概念の分析を軸に、ハイデッガーの遺稿「黒ノート」を、前期から後期へ向かう彼の思想動向に即して読み解くことで、そこで語られる特異なユダヤ論の真意とその背景の解明に取り組んだ。主な研究成果は、以下の3点である。1現在「反ユダヤ主義的」とみなされているユダヤ論の背景には、「計算可能性」の問題に依拠した、ユダヤ-キリスト教批判が存している。2この批判はまた、「存在の思索」による信仰の間接的な擁護を担いうるものとして特徴づけられる。3この観点から、計算的思考に対して信仰的心情を重んじたパスカルの護教論が積極的に評価される。平成28年度は、昨年度の研究成果をもとに、「黒ノート=反ユダヤ主義」という断定の脱構築を目指す。これを遂行するために、以下の2つの研究方策を立てる。1「黒ノート」でのユダヤ論の本質が科学技術批判にあることを突きとめる。昨年度の研究を通じて明らかにしたように、ハイデッガーは、ユダヤ-キリスト教の神の特徴として計算可能性を指摘し、そこに科学技術的世界観とのいわば相互癒着の構造を見ている。ここから、計算的思考に特化したユダヤ論が、ユダヤ-キリスト教批判を背景にしつつ、科学技術批判と本質的な関係にあるという見通しが立つ。これを裏づけるために本年度は、「黒ノート」のユダヤ論と科学技術批判との関係性の解明に取り組む。具体的には、両者に共通する「故郷喪失性」や「存在忘却」といった実存規定に注目することで、両者の本質的な共属性をさぐる。2「反ユダヤ主義」とは異なる「黒ノート」の解釈可能性を提起する。だがユダヤ人(ないしはユダヤ教)を「計算的」とか「故郷喪失」などと形容することは、やはりステレオタイプの反ユダヤ主義ではなかろうか。なぜハイデッガーは「反ユダヤ主義とは関係ない」と言い切れるのか。この問題を考えるうえで本研究が注目するのは、ハイデッガーと関係のあったユダヤ思想家たち、とりわけH・コーヘンとE・レヴィナスである。ユダヤ人としての明確な自覚のもとで展開された彼らのユダヤ思想は、合理主義や〈場所〉からの離脱を特徴としており、計算的思考や故郷喪失性に依拠したハイデッガーのユダヤ論と多くの点で重なり合う。本研究ではその理由を万物の根本原因としてのユダヤ-キリスト教の神観念のうちに探ることで、ハイデッガーのユダヤ論が同時代のユダヤ思想を批判的に補完しうるものであることを示す。なお当初の計画ではコーヘンは研究対象ではなかったが、本研究にとって有益であると判断したため研究テーマとした。28年度が最終年度であるため、記入しない。宗教哲学28年度が最終年度であるため、記入しない。
DMH誘発ラット大腸癌肝転移モデルにおける免疫化学療法の転移抑制効果に関する研究

前年度はDMH誘発ラット大腸癌の皮下継代株より細胞培養株RCN-9を樹立し検討したが、本年度は15代皮下継代株を培養材料とし、細胞分散法により初代培養を行い、現在までに75代にわたって継代維持されている細胞培養株ACL-15について検討した。この細胞培養株ACL-15は約24時間の倍加時間をもち、細胞飽和密度は5.6×10^5個/cm^2で、染色体モ-ドは89(8491)で、多角形細胞が単層敷石状に増殖し、組織学的には印環細胞を有する低分化腺癌である。これを2×10^6個/mlの細胞浮遊液にして脾臓内に注入すると、21日目には7匹中全例に平均転移結節数が64個(34100)の肝転移を認める。これは言わば門脈内注入と同様に人工的肝転移と称されるべきものである。そこで5×10^6個/0.1mlの細胞浮遊液を盲腸漿膜下に移植して、その後の肝転移の有無を検討すると、7匹中2匹に(65日後)認められ、これは自然転移能を示すものと思われる。一方、2×10^6個/mlの細胞浮遊液を尾静脈から注入すると、21日目には5匹すべてに平均転移結節数11.4個(419)の肺転移が認められる(人工肺転移)。1×10^7個/mlのものを右前胸部皮下に移植すると、70日目には7匹すべてに腫瘍が生着し、全例とも肺転移を認める(自然肺転移)。以上の実験より、自然転移能(肝及び肺転移)を有する細胞株が樹立され、さらに追加実験を行っているが本邦ではいまだ報告がないことより、統計学的処理のできるまで実験を継続する予定である。DMH誘発ラット大腸癌皮下継代株である分化型腺癌株,粘液癌株の2系につき皮下継代を重ね維持している.このうち粘液癌株については初代培養に成功し,現在40代にわたって継代,維持されている.この細胞系は一定した増殖速度を保っており,これらを同系ラットの皮下に移植することにより,由来する皮下継代株と同じ組織型を示す腫瘍を形成することが明らかとなっている.電子顕微鏡的形態,染色体分析等については現在検索中である.転移に関する実験では,上記で得られた培養細胞の1×10^2個を同系ラットに皮下移植した場合,移植後60日で全例に多発性の肺転移を形成し,約90日の経過で死亡することが明らかとなった.また,同細胞1×10^7個の門脈内注入実験では,全例に肝での着床,増殖がみられている.さらに,本研究の主たるモデルとなるべき,培養細胞の同系ラット盲腸漿膜下移植では,同細胞1×10^7個を盲腸漿膜下に移植した場合,同部で腫瘍が全例で発育し,約60日後の開腹所見では,5匹中,2匹に肝転移を認めた.現在,この転移巣を再度,培養細胞とし,漿膜下移植をくり返すことにより,肝への高転移性クローンを作製すべく実験中である.肝転移抑制に関する免疫化学療法については,63年度に研究を進めている予定である.DMH誘発ラット大腸癌皮下継代株より細胞培養株RCN-9を樹立した。原腫瘍、継代移植腫瘍の組織像はともに一部に印環細胞を有する低分化型腺癌で、電顕的には、核・細胞質比が大で、細胞内小器官の乏しい小型の細胞より構成されていた。RCN-9は、多角形細胞が単層敷石状に増殖し、その倍加時間は約32時間、細胞飽和密度は5.6×10^6/cm^2、染色体モードは42(3479)であった。RCN-9を同系F344ラットの皮下に1×10^7個移植した場合の生着率は100%で、これを約2ヵ月間観察した場合の肺転移率は64%であった。RCN-9を盲腸漿膜下に移植した場合に同様に腫瘍を形成し、その肝転移率は約40%であるが、未だ安定したデータが得られていない。この肝転移巣を再度培養細胞化し、漿膜下移植→肝転移形成の過程を4回繰り返して得られたクローンは、皮下移植にて、RCN-9に比し、高率に肺転移を形成することが明らかとなり、これを高転移性クローンとして、その転移能につき検討中である。また、もう一つの皮下継代株である分化型腺癌株よりの初代培養にも成功しており、近日中にこの細胞株も樹立できる見込みである。今後、この二種の細胞株を用いての転移実験を進める計画である。

これは言わば門脈内注入と同様に人工的肝転移と称されるべきものである。そこで5×10^6個/0.1mlの細胞浮遊液を盲腸漿膜下に移植して、その後の肝転移の有無を検討すると、7匹中2匹に(65日後)認められ、これは自然転移能を示すものと思われる。一方、2×10^6個/mlの細胞浮遊液を尾静脈から注入すると、21日目には5匹すべてに平均転移結節数11.4個(419)の肺転移が認められる(人工肺転移)。1×10^7個/mlのものを右前胸部皮下に移植すると、70日目には7匹すべてに腫瘍が生着し、全例とも肺転移を認める(自然肺転移)。以上の実験より、自然転移能(肝及び肺転移)を有する細胞株が樹立され、さらに追加実験を行っているが本邦ではいまだ報告がないことより、統計学的処理のできるまで実験を継続する予定である。