hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高度情報化社会における専門職制度及び職業意識の変容に関する研究

目的:11の医療技術職能団体(日本放射線技師会、日本臨床衛生検査技師会、日本栄養士会、日本理学療法士会、全国病院理学療法協会、日本作業療法士会、日本歯科士会、日本歯科技工士会、日本視能訓練士協会、日本義肢装具士協会、日本臨床工学技士会)を通じての医療技術者、および、他の6職種(弁護士、看護婦、介護福祉士、図書館司書、建築関連職種、情報処理関連職種)の実態と意識を職業社会学的観点から調査・分析することである。分析の焦点は専門職化の動向と特色である。調査研究法:医療技術者については上記の11の職能団体から各々200名づつを系統サンプリングで抽出し、共通の調査票を郵送で配布、回収した。他の6種類については地域会員名簿、施設、会員名簿により、サンプリング、あるいは、全数を調査対象として、各職種共通の設問と職種別に異なる設問が組み合わされた調査票を配布、回収した。それらの単純集計を終わった段階であり、今後、クロス集計、多変量分析、検定などを進める予定である。調査研究結果:医療技術職能については、医療技術の発展、専門分化やチーム医療の進展、教育水準の向上などにより、各職種の自主性、専門職化が進んでいることが見出された。他の6種類には弁護士のような伝統的専門職、専門職化を目指してきた看護職、新しい職種、古いが専門職化が必ずしも進んでいない職種などがあり、それらに共通な、あるいは、それぞれの職種に特徴的な専門職化に対するさまざまな障害があることが見出された。今回の報告は未だ単純集計に印象的解説を加えたものなので、今後、さらに、分析を進め、多くの新しい事実や特色が見出されると思われる。2年間連続の研究の第1年度である今年度は、(1)専門職研究についての内外の文献収集、(2)研究対象とする職種:医療、法律、図書館情報、教育、福祉、建築、諸関係職種に共通した調査研究項目:資格、学歴、技術・知識、創造性、報酬、職業倫理、就業の継続性、社会的評価、将来の見通し、性差等について検討、(3)調査票作成のプリテストを兼ね各職種の代表十数人を面接、(4)当研究班ですでに蓄積がある医療関係者対象の調査の第1歩として、医学部1年生を対象に国公私立6校で調査票による調査を実施した。約80項目から成るこの調査票の内容構成の概要は(a)医学選択の時期や動機、(b)医学選択の周囲の影響・親族の医師、(c)医師の職業像・適性、(d)医学部・医療界についての予備知識、(e)医学と他分野との比較:学部・職業、(f)医学部生活への期待と不安、(g)医師としての将来計画、(h)学習・生活時間、(i)住居・生計状況、(j)個人背景基本項目、である。単純集計を終了した段階であり、次年度3・5年生など上級生、卒後年代別医師、そして、コメディカル職種へ調査を拡大する。さらに他職種を対象にした調査を企画している。目的:本研究は大きく2つの職業グループの実態、意識、それらの変容を調査票による調査により明らかにするのが目的であった。調査対象:第1グループ:医療技術者:診療放射線技師・診療エックス線技師、臨床検査技師・衛生検査技師、病院栄養士、理学療法士、病院理学療法にたずさわるあん摩マッサージ指圧師・はり師・きゅう師・柔道整復師等、作業療法士、歯科衛生士、歯科技工士、視能訓練士、義肢装具士、臨床工学技師という第2次大戦後比較的早く資格化されたものから最近資格化されたものまで含む医療技術職いわゆるコ・メディカルと呼ばれる職種。第2グループ:専門職ないし準専門職6職種:看護関係職種、福祉関係職種、教育関係職種、法律関係職種、図書館情報関係職種、情報処理関係職種、建築関係職種。

調査方法:第1グループに対しては、11の全国的職能団体を通じ、一律に200名の会員をサンプリングにより調査対象として選び、全職種共通の調査票を郵送した。第2グループについては、東京都内および近郊の施設や地域を選んで、管理者や責任者を通じて調査票を各職種ごと200名の対象者に配付した。調査票は共通部分と各職種独自の部分から成っている。暫定的調査結果:第1グループの8職種については、約10年前に同様の調査を実施しており,それとの比較で、医学医療技術の進歩と専門分化、チーム医療の推進とそれらに応えるために医療技術者の大学教育への水準向上などによる自信と自律性の向上が顕著に認められる。第2グループについては専門職と思われる職種における意外な限界と準専門職における自律性を阻む諸問題が明らかになった。なお、今後もクロス集計等の解析を進める。
EMT/MET制御因子による細胞ダイバーシティー構築の原理を系統的に解析する

上皮・間葉細胞間の「Transdifferentiation」である上皮間葉移行(EMT)と間葉上皮移行(MET)は組織発生の過程で細胞系列のダイバーシティーを形成するメカニズムとして重要である。本研究の目的は、最近開発された画期的な機能的スクリーニング法(Perturb-seq法)を用いて、乳腺組織形成の過程において細胞のダイバーシティーを獲得していく際のEMT/MET制御因子の役割を系統的に理解することである。現在まで細胞株を用いたPerturb-seq法のシステムの条件検討、およびリファレンスデータとしてマウスの正常乳腺上皮細胞のシングルセルRNA-seqおよびATAC-seqを行った。まずPerturb-seq法に用いるためのベクターシステムとして既に報告されているバーコードシステムを用い、計93種類のgRNAを含むライブラリを構築した。このライブラリをマウス乳腺上皮細胞株に感染させ、Perturb-seqの予備実験を行った。しかしながら、各々のgRNA当たりの発現細胞数が十分でないため、有意義なデータは得られなかった。大きな原因として考えられるのはウィルスの力価が低いため十分な数の感染細胞が得られなかったことが挙げられる。マウスの移植実験ではより高力価のウィルスが要求されるため、大幅な改善が必要であるとの結論に至った。同時並行で、リファレンスデータを得るためにマウスの正常乳腺上皮細胞のシングルセルRNA-seqおよびATAC-seqを行った。トランスクリプトームおよびエピゲノムともに正常乳腺上皮細胞のサブタイプが検出され、リファレンスデータとして意義のあるデータであることが示された。今回Perturb-seq法に用いるウィルスベクターシステムの開発は初年度に完成する予定であったが、予想外にウィルスの力価が上がらなかったため、大幅な改善が必要となった。マウスの正常乳腺上皮細胞のリファレンスデータに関しては順調に結果が得られている。本年度は生体モデル(マウス)にEMT/MET制御因子を標的としたPerturb-seq法を応用することを第一の目標とする。1.シングルセル解析により、マウス乳腺上皮系統間でのEMT/MET制御因子の活性変化を同定する(平成30年度前半・後半)昨年度に得られたシングルセルRNA-seqおよびシングルセルATAC-seqのデータをより深く解析し、EMT/METに関連する転写因子の活性がそれぞれタイプの乳腺上皮細胞でどのように制御されているかを解析する。また、網羅的解析によりそれぞれの乳腺上皮リニエージにおける重要な制御因子を同定する。2.in vivoで使用するためのレンチウィルス発現システムの最適化(平成30年度前半)gRNAの発現効率を上げるため、異なったウィルス発現プラスミドによるgRNAの発現を試みる。また、ウィルスの力価を上げるためのプロトコルの最適化を行う。また最近、gRNAを直接検出する方法が確立されている(10XGenomics社)。この方法を用いれば通常のgRNA発現ウィルスシステムも使えるので高力価のウィルスが容易に得られると考えられる。バックアッププランとしてこちらも同時に行う。3.乳腺上皮細胞株におけるEMT制御機構の系統的機能解析(平成30年度後半)Perturb-seqシステムを単離したマウス乳腺上皮細胞に導入し、宿主に移植する。移植乳腺をシングルセル解析し、それぞれのEMT/MET制御因子が乳腺上皮幹細胞の分化に与える影響を試験する。

1.シングルセル解析により、マウス乳腺上皮系統間でのEMT/MET制御因子の活性変化を同定する(平成30年度前半・後半)昨年度に得られたシングルセルRNA-seqおよびシングルセルATAC-seqのデータをより深く解析し、EMT/METに関連する転写因子の活性がそれぞれタイプの乳腺上皮細胞でどのように制御されているかを解析する。また、網羅的解析によりそれぞれの乳腺上皮リニエージにおける重要な制御因子を同定する。2.in vivoで使用するためのレンチウィルス発現システムの最適化(平成30年度前半)gRNAの発現効率を上げるため、異なったウィルス発現プラスミドによるgRNAの発現を試みる。また、ウィルスの力価を上げるためのプロトコルの最適化を行う。また最近、gRNAを直接検出する方法が確立されている(10XGenomics社)。この方法を用いれば通常のgRNA発現ウィルスシステムも使えるので高力価のウィルスが容易に得られると考えられる。バックアッププランとしてこちらも同時に行う。3.乳腺上皮細胞株におけるEMT制御機構の系統的機能解析(平成30年度後半)Perturb-seqシステムを単離したマウス乳腺上皮細胞に導入し、宿主に移植する。移植乳腺をシングルセル解析し、それぞれのEMT/MET制御因子が乳腺上皮幹細胞の分化に与える影響を試験する。
Pump-Phase-Noise-Free Wavelength Conversion and Multicast for High-Order QAM Signals

将来のトランスペアレントな光ネットワークでは、波長資源のマネージメントにおける柔軟性やノンブロッキング容量を高めるものとして、波長変換やマルチキャスト(WCM)が重要な役割を果たす。一方、位相ノイズに敏感な高次の変調フォーマットに対しては特に、位相ノイズに対する耐性を有するWCMスキームは重要である。我々は、ポンプ光に由来する位相ノイズをキャンセルするために、WCMにおけるコヒーレントポンピングを提案した。高次の変調フォーマットに対してポンプ光位相ノイズフリーの波長変換やマルチキャスト、データ交換を実験的に示した。これらの成果は、当該分野において極めて著名な国際会議や論文誌において公表した。当初、光学モジュールの調達を予定していたが、それにあたって、次年度予定している実験をも見越して仕様を策定するとより効果的な予算の執行が可能と見込まれたため。次年度の予算と合算して、光学モジュール等の調達に充てる予定である。
ナノバブル化した生薬成分配合長期作用型口腔ケア剤の開発

本研究では義歯装着困難の解決、口腔内真菌感染症、義歯性口内炎、口腔乾燥症の予防、治療を可能とする生薬植物由来成分を配合する長期作用型抗菌性口腔ケア剤の開発を目的とした。本研究では組成成分が口腔ケア剤の理工学的性質および血管新生に及ぼす影響について検討を行った。その結果、組成成分の組み合わせにより、粘弾性の観点から口腔ケア剤の耐久性の改良が可能であり、材料の組成成分は血管新生に有意に影響を与えることが示唆された.以上のことから、生薬植物由来有効成分配合口腔ケア剤の作製が可能であり、義歯装着困難の解決、義歯性口内炎の改善、治療が可能となり、高齢者の口腔内QOLの向上に有意に働く可能性が示唆された。日本の高齢化率は23.1%で超高齢社会に突入している。高齢者人口が増加するにつれ、全部床義歯装着者の割合が増加する。総義歯装着者では口腔乾燥症が高い頻度で認められる。一方、義歯装着者のカンジダリスクは義歯非使用者の19.3倍である。また、義歯装着患者のほとんどが口臭の悩みを訴えている。漢方医学では古くから口腔乾燥症、口臭の治療に生薬を使っている。そこで本研究では、ナノテクノロジーに注目し、有効成分をナノバブル化することにより、効果が長期持続させることを考えた。口腔ケア剤に抗菌性を持たせ、口腔内カンジダ症、誤嚥性肺炎などの予防効果のみならず、口腔乾燥症予防および治療、口臭抑制、抗インフルエンザウイルスなどにも期待できる、高齢者のための口腔ケア剤の開発を目的とする。本剤の開発により、口腔乾燥症、口腔内真菌感染、口臭および義歯の不安定などの悩みをもつ高齢者のQOLの向上を目指す。本年度は、有効成分配合試作口腔ケア剤を作製し、それぞれ3種類の生薬エキスおよび茶カテキンを使用し、これらの成分の含有量、組合せなどが試作口腔ケア剤の理工学的性質、唾液分泌能および抗真菌性に及ぼす影響を検討するため、試作剤の粘度および操作性の測定、材料の保湿度、湿潤性、PH測定、床用レジンのぬれに及ぼす影響の測定、粘着力の測定、溶出成分の定性定量分析、溶出成分が老齢ラットの唾液分泌量および管腔膜でのAQP5量に及ぼす影響の測定、溶出成分が口腔内常在真菌に及ぼす影響の測定、溶出成分が人歯肉繊維芽細胞に及ぼす影響の測定を行った。その結果から、溶出成分のCVS分解能試験保湿・湿潤性の観点より、適切な材料組成の種類、含有量を決定し、さらに、抗真菌性、口臭抑制の観点より、適切な生薬および茶カテキンの種類および含有量を決定した。本年度は、ナノバブル化した各種生薬および各種茶カテキン抽出エキスの一般毒性動物実験を行い、生体に影響を与えないことが確認できた。また、各種生薬エキスの管腔膜でのAQP5量および老齢ラットの唾液分泌量に及ぼす影響および揮発性硫化合物(CVS)の分解能について検討を行い、有効成分の量的特定ができた。さらに、各種口腔内常在真菌を用い各種茶カテキンが抗真菌性に及ぼす影響、ヒト歯肉繊維芽細胞に及ぼす影響に関する検討を行い、有効成分の量的特定ができた。以上の結果をふまえ、次年度は、有効成分を用い、化学組成および構造因子が試作口腔ケア剤の理工学的性質(材料の粘度、操作性、保湿性、粘着力、pH、義歯のぬれ)に及ぼす影響、唾液分泌能および抗真菌性に及ぼす影響について検討を行う予定である。日本の高齢化率は25.1%で超高齢化社会に突入している。

総義歯装着者では口渇感、咽頭部の乾きや口腔内の粘着感などを訴えるものが多く、口腔乾燥症が高い頻度で認められ、義歯装着困難な患者が増え続けている。一方、義歯装着者は高い割合で口腔内真菌感染(口腔内カンジダ症)が認められ、カンジダリスクは義歯非使用者の19.3倍である。さらに、義歯装着患者のほとんどが口臭の悩みを訴えている。漢方医学では古くから口腔乾燥症、口臭の治療に生薬を使っていて、それらの効果は我々らによって、一部立証されている。そこでナノテクノロジーに注目し、有効成分をナノバブル化することにより、効果が長期持続させることを考えた。この成分を含有する口腔ケア剤を開発することにより、本剤に抗菌性を持たせ、口腔内カンジダ症、誤嚥性肺炎などの予防効果のみならず、口腔乾燥症予防および治療、口臭抑制、抗インフルエンザウイルスなどにも期待できる、高齢者のための口腔ケア剤の開発を目的とする。本剤の開発により、義歯装着困難の解決、口臭の抑制、口腔内真菌感染症、口腔乾燥症の予防、治療を可能とし、大災害時の高齢者口腔ケアを大幅に向上し、高齢者のQOLの向上を目指す。本年度は前年度の結果から選定した有効成分を用い、3種類の試作材料を作製し、本剤の動的粘弾性およびその耐久性、保湿性・湿潤性、毛細血管新生能力などについて検討を行った。その結果から、有効成分の濃度および配合量の特定ができ、保湿性・湿潤性、耐久性、血管再生などの観点から、ナノバブル化生薬成分配合長期作用型口腔ケア剤の試作が可能となった。歯科補綴学、歯科理工学実験から得られたデータは更なる解析および処理が必要だが、当初計画した研究計画のほとんどの項目が終了し、おおむね順調に進んでいる。実験から得られたデーターは更なる解析が必要だが、当初計画した研究計画のほとんどの項目が終了しており、おおむね順調に進んでいる。次年度は、本年度研究結果を基にし、有効成分含有、試作ナノバブル化した生薬成分配合長期作用型口腔ケア剤を2種類作製し、その臨床効果を確かめるため、総義歯装着者に本剤を用い、咬合力の測定、咀嚼能率の測定、義歯の口腔内維持力の測定、唾液分泌量の測定、口腔内抗真菌性の測定、筋電図計測、口臭測定およびVASによる患者の満足度(保湿性、義歯の維持力、におい、味)の評価を通じて、本剤の臨床的評価を行う。以上の結果から、総義歯装着高齢者に最も有効な口腔ケア剤を1種類選定し、ナノバブル化した生薬成分配合長期作用型口腔ケア剤を試作する。さらに、生薬エキス、茶カテキンの唾液分泌促進作用、抗真菌性、口臭抑制効果、口腔ケア剤の組成成分が材料の理工学的性質に及ぼす影響、保湿性および義歯のぬれに及ぼす影響などについて、得られた結果を取りまとめ、研究成果の発表を行う。今年度に得られた結果を基にして、有効成分配合試作口腔ケア剤を作製し、それぞれ3種類の生薬エキスおよび茶カテキンを使用し、これらの成分の含有量、組合せなどが試作口腔ケア剤の理工学的性質、唾液分泌能および抗真菌性に及ぼす影響を検討するため、試作剤の粘度および操作性の測定、材料の保湿度、湿潤性、PH測定、床用レジンのぬれに及ぼす影響の測定、粘着力の測定、溶出成分の定性定量分析、溶出成分が老齢ラットの唾液分泌量および管腔膜でのAQP5量に及ぼす影響の測定、溶出成分の急性毒性試験(動物実験)、溶出成分が口腔内常在真菌に及ぼす影響の測定、溶出成分が人歯肉繊維芽細胞に及ぼす影響の測定、溶出成分のCVS分解能試験を行う予定である。以上の結果から、保湿・湿潤性の観点より、適切な材料組成の種類、含有量を決定し、さらに、抗真菌性、口臭抑制の観点より、適切な生薬および茶カテキンの種類および含有量を決定する予定である。
有機イオントランスポータの分子的多様性と薬物腎排泄における役割

本研究では、イオン性薬物の腎排泄機構を体系的に解明することを目的として、薬物腎排泄に関わる有機イオントランスポータ群における種々アイソフォームの構造・機能・尿細管分布特性の比較解析を実施し、以下の研究成果を得た。1.有機カチオントランスポータ、OCT1とOCT2の基質認識特性について検討したところ、多くのカチオン性薬物が類似した基質親和性を示すことが判明した。また、免疫組織化学的解析を行い、OCT1とOCT2が異なる尿細管分節の側底膜側に発現していることを明らかにした。さらにOCT2の発現に性差が存在し、雄性ラットにおいてその発現が亢進していることを見いだし、性ホルモンによる調節を受けていることを明らかにした。2.腎特異的有機アニオントランスポータOAT-K1の機能特性について解析し、OAT-K1の基質であるメトトレキサートが二方向性に輸送されること、細胞内のメトトレキサートは細胞外の葉酸誘導体と交換輸送されうることを明らかにした。さらに、OAT-K1のアイソフォームであるOAT-K2のクローニングに成功した。その機能特性について解析した結果、OAT-K2はOAT-K1と向様に多様な脂溶性有機アニオンを輸送することが判明した。また、OAT-Kファミリーとは機能特性の異なるOAT1の基質認識特性について解析し、フロセミドやアセタゾラミド等の利尿薬がOAT1を介して輸送されることを明らかにした。さらにメトトレキサートがOAT1を介して輸送されること、この輸送がインドメタシンなどの非ステロイド性抗炎症薬によって競合的に阻害されることを見いだし、OAT1がこれら薬物間の相互作用部位である可能性を示した。本研究で得られた成果は、薬物腎排泄の予測・評価や腎排泄過程における薬物間相互作用の予測に有用な基礎的情報を与えるものと考える。我々が従来より解析を進めてきた有機カチオントランスポータ(OCT1、OCT2)、有機アニオントランスポータ(OAT1、OAT-K1、OAT-K2)並びに一次性薬物輸送ポンプ(Pgp)を中心として特異抗体の作成に基づく免疫化学的解析並びに新規トランスポータの同定を実施し、以下の研究成果を得た。1.薬物トランスポータに対する特異抗体の作成と免疫化学的解析:腎局在性有機カチオントランスポータOCT2に対する特異抗体を作成し、OCT2の腎内分布について相同体OCT1との比較検討を行った結果、OCT1は近位曲尿細管側底膜に局在すること、一方OCT2は近位直尿細管側底膜に局在することが判明した。さらに、ラット腎粗膜画分におけるOCT2蛋白は、雌と比較して雄により強く発現すること、OCT2蛋白の発現は雄性ホルモンテストステロンにより誘導されることが明らかとなった。2.Caco2細胞における新規薬物トランスポータの同定:ヒト大腸癌由来培養上皮Caco2細胞を用いて新規薬物トランスポータの探索を行った結果、Caco2細胞の頂側膜にはジフェンヒドラミンなどの3級アミンを特異的に認識するH^+/3級アミン交換輸送系が発現しており、小腸を介した生体解毒機構の一部を担っていることが示唆された。さらに、Caco2細胞の側底膜には、βラクタム系抗生物質などのペプチド類似薬物を認識する促進拡散型ペプチドトランスポータが発現しており、頂側膜型ペプチドトランスポータPEPT1と連関して効率的なペプチド様薬物の腸管吸収に寄与することが示唆された。現在、これらトランスポータのcDNAクローニングの準備段階にある。

本年度は、有機イオントランスポータ群における種々アイソフォームの構造・機能・尿細管分布特性の比較解析を実施し、以下の研究成果を得た。1.有機カチオントランスポータ群我々が既にクローニングしたラット有機カチオントランスポータOCT1とOCT2に対する抗体を作成し、免疫組織化学的解析を行った結果、OCT1とOCT2が異なる尿細管分節の側底膜側に発現していることを明らかにした。さらにOCT2の発現が性ホルモンによる調節を受けていることを明らかにした。2.有機アニオントランスポータ群我々が既にクローニングした腎特異的有機アニオントランスポータOAT-K1の機能特性について、安定発現細胞を用いて解析し、細胞内のメトトレキサートは細胞外の葉酸誘導体と交換輸送されうることを明らかにした。更に、慢性腎不全モデルラットにおいてOAT-K1とOAT-K2の発現が低下し、メトトレキサートの体内動態変動に重要な役割を果たしていることを明らかにした。OAT-Kファミリーとは異なる有機アニオントランスポータであるOAT1の基質認識特性について、アフリカツメガエル卵母細胞発現系を用いて解析した結果、フロセミドやアセタゾラミド等の利尿薬がOAT1を介して輸送されることが判明した。さらに、メトトレキサートがOAT1を介して輸送されること、この輸送がインドメタシンなどの非ステロイド性抗炎症薬によって競合的に阻害されることを明らかにし、OAT1がこれら薬物間の相互作用部位である可能性を示した。
分子認識能を持つDNAを利用した一塩基多型(SNPs)の簡便検出法の開発

本研究では、three-way junction構造を含むDNAと胆汁酸類の一種であるコール酸が結合すること、three-way junctionの分岐点上の一塩基が別の塩基に置き換えられるとその親和性が減少・消失することを利用して、新しいSNPs検出法の開発を行ってきた。昨年度まではBIAcoreを用いたSNPs検出法を構築してきたが、BIAcoreでは多サンプル同時測定が不可能であるという欠点があった。そこで最終年度では、本検出系をマイクロプレート上に展開し蛍光強度測定を行うことにより、多サンプル同時測定の系を確立することを目的とした。初めに、一本鎖でthree-way junction構造を形成するビオチン標識CH-16-40-18Gを、ストレプトアビジンでコーティングした96穴マイクロプレートに固定化した。これとオレゴングリーン標識されたコール酸とを反応させることによって、SNPsのタイピングが行えるか評価した。その結果、まず緩衝液中の塩濃度を増加させることにより蛍光強度が増加することを確認した。また、この条件を用いてHLA多型における一塩基変異検出を行った結果、パーフェクトマッチとミスマッチとの間に蛍光強度の差があることを確認した。さらに、実試料からのSNPs検出を想定し、二本鎖target DNAを熱変性しプローブDNAとthree-way junction構造を形成させて一塩基変異検出を試みたところ、同様にパーフェクトマッチとミスマッチとの蛍光強度の差を認めることができた。本年度は、実際にヒトゲノムに存在するSNP配列として、臓器移植において拒否反応の原因となるヒト白血球抗原(human leucocyte antigen: HLA)に着目し、これをもとにプローブとターゲットを設計した。ターゲット配列(HLA-15C:5'-GCG GTG GAC ACC TAC TGC AGA CAC AAC TAC-3')は、DR座(DRB1^*0101)から選択した。それに対応する一塩基変異として、実際にゲノム上に存在するのは15番目のCがTに変異したHLA-15Tである。しかし、本検出系の性能を検証するために他の一塩基配列(HLA-G及びHLA-A)についても対照実験を行った。検出にはSPRセンサー(BIAcore)を用いて各DNAの長さ、濃度、流速、温度などの最適化を行った。各サンプルDNAの濃度はすべて50μMとなるように調製し、熱変性してthree-way junction構造を形成させた後、それぞれ20μlずつセンサーチップに注入した。流速は常に5μl/minとした。サンプルを注入する直前と注入後2分間経過時点のSPRシグナルの相対変化をSPR応答値(ΔRU)とした。昨年度は一塩基多型のモデルターゲットとしてヒト白血球抗原(HLA)の配列を用いて本検出系が有効であることを示した。今年度はさらに適用範囲を広げ、ApoE多型の一塩基変異検出を試みた。ApoE3(a.a.112)とApoE3(a.a.158)及び一塩基変異体であるApoE4(a.a.112)とApoE2(a.a.158)について、多型部分を中央に含む30塩基のDNAを合成し各ターゲットDNAとした。これらをそれぞれプローブDNAと混合し熱変性してthree-way junction構造を形成させた後、SPR測定装置によりSPR応答値の観察を行った。SPRのセンサーチップにはあらかじめコール酸を固定化させた。各DNAの濃度はどのオリゴヌクレオチドも50μMとなるように調製した。まずプローブに対してフルマッチとなるApoE3(a.a.112)とApoE3(a.a.158)に対してはSPR応答値は有意義な値を示さなかった。一塩基変異体であるApoE4(a.a.112)とApoE2(a.a.158)も同様に有意義な値を示さなかった。フルマッチ配列に対しても有意義なSPR応答値を示さなかったのは、G-Crichな配列のため他の部分でハイブリダイゼーションしてしまい、目的としているthree-way junction構造を形成しているものが非常に少ないためであると考えた。そこで、センサーチップ上に結合する分子の大きさに応じてSPR応答値が増強される現象を利用することにした。すなわち、2本あるプローブのうちの1本の5'末端にBiotin標識したものを用いてthree-way junction構造を形成させ、そこにStreptavidin(M.W.60,000)を結合させて分子の大きさを増加させた。その結果、Strepatavidin-Biotin結合probe DNAを用いることによってフルマッチとミスマッチのSPR応答値の差は飛躍的に顕著になり、G-Crichな配列に含まれているSNPsも本検出系によって検出可能であることが確認された。

初めに、一本鎖でthree-way junction構造を形成するビオチン標識CH-16-40-18Gを、ストレプトアビジンでコーティングした96穴マイクロプレートに固定化した。これとオレゴングリーン標識されたコール酸とを反応させることによって、SNPsのタイピングが行えるか評価した。その結果、まず緩衝液中の塩濃度を増加させることにより蛍光強度が増加することを確認した。また、この条件を用いてHLA多型における一塩基変異検出を行った結果、パーフェクトマッチとミスマッチとの間に蛍光強度の差があることを確認した。さらに、実試料からのSNPs検出を想定し、二本鎖target DNAを熱変性しプローブDNAとthree-way junction構造を形成させて一塩基変異検出を試みたところ、同様にパーフェクトマッチとミスマッチとの蛍光強度の差を認めることができた。
溶湯選択酸化法による高強度・高導電性銅合金の開発

溶湯選択酸化法は,酸化物生成自由エネルギーの大きな合金元素を含んだ金属溶湯中に, CO_2ガスを主体とする弱酸化性のガスを吹込んで,合金元素を選択的に酸化させる.酸化物分散強化型合金の製造法である.酸化物を微細に多数均一に分散させることが出来れば,高い強度と耐熱性が得られ,地の国溶元素量が減るため,導電性が同時に改善できる.本研究では添加アルミニウム量,ガスの塑性,圧力と吹込量,ガス吹出口の構造,加熱方法等を変化させ,最適の製造条件を調査して,以下の結果を得た.1.肉厚の黒鉛パイプのせんたん薄いポーラスカーボンを埋込み,高い圧力でガスをルツボ壁に吹付ける吹出口を設計し,抵抗炉に代えて高周波炉を用いて加熱するなど,溶湯が十分に攪拌するよう工夫した.2.溶湯選択酸化法は実験条件の制御が難しく,再現性の高い結果を得ることが困難であった.3.CO_2ガスを吹込むと,導電性と硬さが上昇した.ガスの吹込量は,合金元素を全て酸化させる理論的必要量の23倍で最もよい特性が得られた.4.アルミニウムの添加量が0.5%の場合には,導電率が低い割りには硬さの上昇が小さかった.5.アルミニウムの添加量が0.10.2%の場合には,導電率は高いが,硬さは未処理の合金に比べて十分高いとは言えなかった.また耐熱性の改善は見られなかった.6.25倍の結果から, CO_2ガスのみを吹込む方法では,溶湯選択酸化法の実用化は問題がある. CO_2とCOの混合ガスを用いることにより,銅の酸化を抑制し,アルミニウム,シリコン等の合金元素の酸化物をより微細でかつ均一に分散させ得る再現性の高い方法を開発することが今後の課題である.溶湯選択酸化法は,酸化物生成自由エネルギーの大きな合金元素を含んだ金属溶湯中に, CO_2ガスを主体とする弱酸化性のガスを吹込んで,合金元素を選択的に酸化させる.酸化物分散強化型合金の製造法である.酸化物を微細に多数均一に分散させることが出来れば,高い強度と耐熱性が得られ,地の国溶元素量が減るため,導電性が同時に改善できる.本研究では添加アルミニウム量,ガスの塑性,圧力と吹込量,ガス吹出口の構造,加熱方法等を変化させ,最適の製造条件を調査して,以下の結果を得た.1.肉厚の黒鉛パイプのせんたん薄いポーラスカーボンを埋込み,高い圧力でガスをルツボ壁に吹付ける吹出口を設計し,抵抗炉に代えて高周波炉を用いて加熱するなど,溶湯が十分に攪拌するよう工夫した.2.溶湯選択酸化法は実験条件の制御が難しく,再現性の高い結果を得ることが困難であった.3.CO_2ガスを吹込むと,導電性と硬さが上昇した.ガスの吹込量は,合金元素を全て酸化させる理論的必要量の23倍で最もよい特性が得られた.4.アルミニウムの添加量が0.5%の場合には,導電率が低い割りには硬さの上昇が小さかった.5.アルミニウムの添加量が0.10.2%の場合には,導電率は高いが,硬さは未処理の合金に比べて十分高いとは言えなかった.また耐熱性の改善は見られなかった.6.25倍の結果から, CO_2ガスのみを吹込む方法では,溶湯選択酸化法の実用化は問題がある. CO_2とCOの混合ガスを用いることにより,銅の酸化を抑制し,アルミニウム,シリコン等の合金元素の酸化物をより微細でかつ均一に分散させ得る再現性の高い方法を開発することが今後の課題である.高い導電率と高温強度を有する銅合金を開発することを目的として、溶湯選沢酸化法によって酸化物分散強化型合金の製造を試み、以下の知見を得た。1.銅に酸素との親和力の強い元素として少量のアルミニウムを添加した合金溶湯中に、【CO_2】および【CO_2】とアルゴンの混合ガスを吹込んだ所、導電率の向上が見られた。これから【CO_2】ガスによりアルミニウムが選沢酸化されることがわかった。2.溶湯中のアルミニウムを全部酸化するのに必要なガス量を計算し吹込んだが、導電率は純銅のそれよりかなり低かった。これはガスの吹出力が弱く、溶湯の撹拌が不十分であったためと考えられる。3.ガス吹出口にはポーラスカーボンを用いたので、その全体からガスが細かい気泡となって浮き上った。それゆえ、一方向に強く吹出させ、気泡がるつぼ壁に沿って浮上するように改善すれば、湯の撹拌が十分に行われ、ガスとアルミニウム原子の接触の機会が増すと考えられる。その際ガスの吹出速度を十分高める必要がある。4.【CO_2】ガスのみでは銅の酸化が同時に起こるので、それを防止するためCOガスを適量混合したガスが吹込めるように装置を改善することが最も重要である。5.来年度は【CO_2】とCOガスの混合比,吹出速度,ガス量等を変え、酸化物が細かく均一に分酸する製造条件を求める。6.電顕による組織観察を詳細に行い、製造条件と機械的性質の間の関係を明らかにして、析出硬化型より優れた分散強化型銅合金を開発する。
車上マニピュレータの運動を考慮した車両部の姿勢制御

1.目的ほ場での重量野菜の収穫作業を目的とした農業ロボットの開発を行っている。このロボットは、収穫ハンド、油圧マニピュレータ及び走行車両で構成される。収穫作業を行う場合、マニピュレータの運動により、車両の姿勢が変化する。このため、マニピュレータが正確な位置決め動作を実現するには、マニピュレータの運動によって生じる車両の振動を検出し、姿勢を制御する必要がある。今年度の研究では、このための基礎研究としてマニピュレータの運動によって生じる車両の姿勢変化を計測し、そのデータを基に解析を行った。2.実験方法及び実験実験では、マニピュレータに軸道追従運動させ、マニピュレータが車両に与えるトルクを計測すると同時に車両の挙動を現有の加速度計・角速度系及びレーザー変位計で計測した。制御と計測のために設備品とし購入したエムティティ社製DSPボードを使用した。3.実験結果及び考察まず、マニピュレータの運動によって生ずるトルクの作用により振動する車両の姿勢について、動力学的なシステムを導出し、計測データから各パラメータを同定した。次に、マニピュレータが収穫動作を行った場合の車両の姿勢変化について、実際の計測値と同定したパラメータを用いてシュミレーションした結果と比較し、作成したモデルが適切であることを確認した。このモデルを用いて、パソコン上でマニピュレータの運動を制御することで、車両の姿勢を一定に保つための方法を検討した。4.まとめ今年度の研究では、実機のモデル科とシステム同定及びパソコン上での制御シュミレーションまでを行った。今後は、シュミレーションで得た制御アルゴリズムの有効性を実験により証明し、制御上の問題点を明らかにしていきたいと考えている。
最高エネルギーのコライダー実験によるBSM物理の新展開

最高エネルギーのコライダーであるLHC加速器が運転を始め、ILC計画が具体化しようとする時期に、素粒子実験と素粒子理論の研究者が協力して標準理論を超える(BSM=Beyond the Standard Model)物理の検討を行った。LHC実験開始は遅れたものの、BSM物理で期待される新粒子・新現象に対する最初の成果が出始めた。またILCで行うBSM物理のために、測定器の最適化を行った。素粒子の標準理論(SM)は大成功をおさめているが、究極の理論ではありえない。すなわち、「素粒子の自然さの問題、階層性の問題」、「相互作用の大統一、超統一の問題」、「宇宙のダークマター・ダークエネルギーの問題」などの本質的な問題が未解決である。標準模型を超える(BSM)物理は必ず存在し、それはダークマターとなる新粒子を必ず含んでいるはずである。しかも、それはTeVスケールのエネルギー領域で発見できる可能性が大きい。本研究では、まもなく本格的に稼動する大型ハドロンコライダー(LHC)におけるアトラス実験と、その後に続くと期待される国際リニアコライダー(ILC)など、最高エネルギーのコライダー型加速器実験におけるBSM物理を、素粒子実験と素粒子理論の研究者が協力して解明していく。LHC,ILCなど最高エネルギーのコライダー実験における標準理論を超える(BSM)物理について、実験・理論の共同研究を行っている。今年度の主な成果は以下の通り。1. BSM物理では新しい重いゲージボソンZ'やグラビトンのカルツアークライン励起状態が予言されている。これらの新粒子がμ粒子対に崩壊する場合について、LHC計画アトラス実験における発見能力について研究を行った。2. LHCで生成されるグルイーノやスクォークの質量をhemisphere methodを用いてstransversemassの分布を作ることで決定できる可能性がある。シミュレーションデータを使って検討を行い、新しい解析手法を提案した。3. LHCで発見が期待される超対称性について、低エネルギーゲージ伝搬模型の現象論を行った。A=B=0となる最小のゲージ伝搬模型はSUSY CP問題を解決する模型として知られている。μの(g-2)、b→sγ等の実験結果から軽いグラビティーノを予言する最小のゲージ伝搬模型が望ましいことを示した。また、軽いグラビティーノを予言する模型として準安定真空を用いた模型が提案されているが、その真空の安定性と宇宙論からのグラビティーノの質量への上限からスクォークの質量に上限を与えた。4. ILCにおけるBSM物理のための測定器の最適化を行っている。特に、究極のハドロンジェットのエネルギー分解能を得るための解析手法Particle Flow Algorithmの開発と、それを実現するためのカロリメータ検出器の検討を行った。LHC、ILCなど最高エネルギーの衝突型加速器(コライダー)実験における標準理論を超える(BSM)物理について、もっとも有力な超対称性だけでなく、その他のモデルについても、実験・理論の共同研究を行っている。今年度の主な成果は以下の通りである。1.陽電子、電子宇宙線観測で異常がみつかり、ダークマター対消滅起源の可能性がさかんに議論されており、コライダー実験におけるBSM物理に対して示唆を与えている。我々は、宇宙の元素合成、銀河中心からのニュートリノの流量から暗黒物質対消滅断面積に対する制限を求めた。また、超対称性の破れのゲージ伝搬模型の構築、超対称模型におけるフレーバーの破れ起源の電気双極子能率の評価を行った。2,T-Parityを持つLittlest Higgs模型では、トップクォークのパートナーとなる重い新粒子が予言されており、LHCで対生成される可能性がある。これらの粒子が崩壊してトップクォーク対となる事象について、m(T2)という観測量の分布を用いてトップパートナーの質量を決定する手法を提案した。3.LHC実験初期に超対称性粒子(スカラークォーク、グルイーノ)が発見された場合に、m(T2)という観測量を用いて両新粒子の質量を同時に決定する手法を提案した。4.ILCにおけるBSM物理のための測定器の最適化を行っている。特に、ハドロンジェットの究極のエネルギー分解能を得るための解析手法(Particle Flow Algorithm)と、それに最適化されたカロリメータの検討を行っている。カロリメータについては、プロトタイプを使ったテストビーム実験によって性能評価を行った。1.ATIC/PPB-BETSなどの宇宙線中に観測された(陽)電子スペクトルの異常が、新しく提唱されたsplit-UEDで説明可能であることを示した。このモデルで予言されるKK粒子のコライダー実験における信号事象の検討を行った。2.宇宙ダークマターの直接探索を目指したCDMS-II実験でダークマター事象の候補として2例が報告されている。

この結果と他の実験の観測結果やストレンジクォークを含む核子のシミュレーション結果から、MSSM模型でのヒッグスセクターに対する制限を評価し、今後のダークマター直接探索実験やコライダー実験での検出可能性を検討した。3.GMSB SUSYモデルで二重項および一重項の場を加えた場合を検討した。この場合、一番軽い奇パリティ粒子がダークマターの候補になり、ダークマター直接探索実験とコライダー実験による生成実験による発見可能性を議論した。4.ILCにおけるBSM物理のための測定器の最適化を行っている。特に、ハドロンジェットの究極のエネルギー分解能を実現するための解析手法と、それに最適化されたカロリメータの検討を行っている。これまでに行ったテストビーム実験などの研究成果を取り入れてILC測定器の提案を行い(ILDLoI)、次のステップに進んでよいとの評価を受けた。LHC加速器は平成20年に起きた事故を乗り越え、平成22年3月に、ついに重心系エネルギー7TeVでの陽子陽子衝突実験を開始した。このエネルギーは設計値の半分であり、衝突輝度(ルミノシティ)もまだ設計値に及ばないものの、アトラス実験は順調に進行し、積分ルミノシティ約45pb^<-1>に相当する実験データを収集した。まだ実験開始直後でありデータ量は少ないものの、世界最高エネルギーというLHC最大の強みを生かして、すでに多くの新粒子探索の分野で、これまでのコライダー(LEP,Tevatron)で得られたリミットを大きく超える新しいリミットを得ることに成功している。本研究の主題である、素粒子の標準模型(SM)を超える(BSM)物理の探索が精力的に行われた。現在も多くの物理解析が進行中であるが、これまでに論文として発表したものを以下にあげる。1.ジェット対に崩壊する、励起クォークなど重い新粒子の探索。ジェット対の不変質量分布から共鳴状態を探すことで、質量の下限を決めた。2.ジェット生成事象の角分布の測定による新しい接触相互作用の探索。3.余剰次元のUEDモデルなどで期待される光子対と横方向のエネルギー欠損を持つ事象の探索。レプトンと横方向のエネルギー欠損を持つ事象の研究。これらの不変質量分布から、素粒子の複合模型などで予言される重いW粒子の探索を行った。これらの素粒子の複合模型や余剰次元など標準理論を超える物理に対して、従来のものを大きく超えるリミットが得られている。また、理論・実験の合同研究会を開催し、これらの実験結果について、議論を重ね、今後の解析方針の検討を行った。
デートDVの発生メカニズムの解明と個人特性に基づく予防教育プログラムの検討

本研究では,デートDVの予防教育プログラムを作成するために,デートDVのメカニズムを明らかにする。デートDVの予防教育は,DVと同等のメカニズムを仮定し実施されているが,デートDV固有のメカニズムを明らかにしない限り,有効な予防プログラムはできないと考えられる。本研究では,デートDVの特性を明らかにするために,項目反応理論に基づく尺度を開発し,分布や他の心理特性との関連性を明らかにする。明らかにされたデートDVの特性を踏えて,デートDVの予防教育プログラムを作成し,実施及び評価をおこなう。集団や個人の特性を考慮することで,より効果的な予防教育プログラムを作成することが可能となる。
昆虫の交尾に伴う生理・行動の変化の生理学的解析-行動異常カイコガを用いて

カイコガのフェロモン合成を抑制する交尾のシグナルは2種あることが確かめられた。すなわち、雄との交接による機械的刺激と精液中の精子または精巣山来物質による(化学的)刺激である。機械的刺激(射精能力の無い雄との交尾)のみでも交尾中はフェロモン合成は抑制されるが、割愛後フェロモン合成は再開される(一時的抑制)。雌の交尾嚢から精液を取り出し人工的に未交尾雌の交尾嚢に注入する方法(人工受精)による化学的刺激のみでは抑制されないが、未交尾雌に予め上記の機械的刺激を加え、人工受精を行うと長期的抑制が起こった。これらのことから、機械的刺激によるPBAN分泌細胞の一時的抑制を化学的刺激によるシグナルが持続的な抑制にするという2段階の抑制機構が示唆された。PBAN分泌細胞の活動の停止が正常雄との交尾によっても起きないことがしばしばあったので、その原因を探るため交尾中あるいは交尾後、拘束状態においた個体のフェロモン量をHPLCで測定したところ、正常雄との交尾後、自由に放置した雌では、その後のフェロモン合成の再開はほとんどなかったが、拘束状態(縛る、吊す)に置かれた雌では50%以上の個体でフェロモン合成が再開されることが確かめられた。同様な交尾後のフェロモン合成の再開は交尾後に15分間、2酸化炭素で麻酔することやエーテルで1-2分間麻酔することでも見られた。このような処理を施すことによって、脳内の生体アミン量などが変わり、長期的な抑制を解除すると予想される。産卵行動異常系統(XU 20)は未交尾でも産卵を行うが、フェロモン濃度の低かったことおよび食道下神経節のPBAN活性は正常系統と変わらなかったことから、この系統ではPBAN分泌細胞の停止が起きていると示唆される。平成9年度に行う予定であったPBAN分泌細胞の電気的活動の長期的記録に成功し、昆虫のペプチドホルモン分泌細胞の動態の驚くべき側面が初めて明らかになたので、主にその解析を行った。神経分泌細胞の活動の特徴は以下のとうりである。(1)数秒に一回の割合で活動電位を出し、この周期的発火はコーリング行動リズムとほぼ同期していた。(2)数分に1回の割合で発火頻度の増減があり、心臓が血液を頭部から尾部方向に送る期間である逆行性拍動期に増加し、その逆の順行性拍動期に低下していた。(3)電気的活動は概日リズム(明期に上昇、暗期に低下)を示すと共に、環境の明暗周期(16L8D)にも応答し、明期および暗期の開始10-60分後か一時的に上昇した。(4)活動電位の発生は、正常オスとの交尾あるいは去勢オスとの交尾の際の機械的刺激によってほぼ完全に抑制された。(5)交尾終了後、電気的活動は去勢オスと交尾した場合では再開された。一方、正常オスと交尾した場合では約半数の個体で電気的活動は停止したままであったが、残りの半数の個体では再開した。以上の結果より次のことが示唆された。(1)神経分泌細胞はコーリングリズム発生機構および心拍逆転機構からの支配がある。(2)交尾の際の機械的刺激によって分泌細胞は一時的に抑制され、精液中の精子または精巣由来物質による(化学的?)刺激によって長期的な抑制(交尾経験の記憶)になる。(3)本研究のような電気生理的実験では昆虫を固定する必要があるが、このような拘束条件下では、おそらく、第3の刺激として一種のストレスが加わり、長期的な抑制が消去(忘却)されるのであろう。

すなわち、雄との交接による機械的刺激と精液中の精子または精巣由来物質による(化学的)刺激である。機微的刺激(射精能力の無い雄との交尾)のみでも交尾中はフェロモン合成は抑制されるが、割愛後フェロモン合成は再開される(一時的抑制)。雌の交尾嚢から精液を取り出し人工的に未交尾雌の交尾嚢に注入する方法(人工受精)による化学的刺激のみでは抑制されないが、未交尾雌に予め上記の機械的刺激を加え、人工受精を行うと長則的抑制が起こった。これらのことから、機械的刺激によるPBAN分泌細胞の一時的抑制を化学的刺激によるシグナルが持続的な抑制にするという2段階の抑制機構が示唆された。PBAN分泌細胞の活動の停止が正常雄との交尾によっても起きないことがしばしばあったので、その原因を探るため交尾中あるいは交尾後、拘束状態においた個体のフェロモン量をHPLCで測定したところ、正常雄との交尾後、自由に放置した雌では、その後のフェロモン合成の再開はほとんどなかったが、拘束状態(縛る、吊す)に置かれた雌では50%以上の個体でフェロモン合成が再開されることが確かめられた。同様な交尾後のフェロモン合成の再開は交尾後に15分間、2酸化炭索で麻酔することやエーテルで1-2分間麻酔することでも見られた。このような処理を施すことによって、脳内の生体アミン量などが変わり、長期的な抑制を解除すると予想される。産卵行動異常系統(XU20)は未交尾でも産卵を行うが、フェロモン濃度の低かったことおよび食道下神経節のPBAN活性は正常系統と変わらなかったことから、この系統ではPBAN分泌細胞の停止が起きていると示唆される。
遅発性脳血管攣縮病態下での攣縮動脈周囲のsuperoxide anionの局在

今年度は,Mn^<++>・DAB混合溶液がsuperoxide anion(O_2^-・)と特異的に反応しosmiophilic polymerを形成する新しいフリーラジカル検出法に着目し,遅発性VSを誘発したイヌクモ膜下出血モデルにて、攣縮血管周囲のO_2^-・の局在を明らかにした.実験には,クモ膜下出血を誘発させたbeagle成犬14頭を用いた.Mn^<++>/DAB灌流群(n=6),Mn^<++>/DAB/SOD灌流群(n=4),灌流溶液よりMn^<++>(n=2)/DAB(n=2)を除いた灌流群の各4群に分け実験を行った.自家血注入後2日目及び7日目の各時点にて脳血管撮影による血管攣縮を確認した後,各群の動物を各灌流溶液30ml/15分で点滴脳槽灌流した.さらに,O_2^-・反応産物とFe^<++>及びFe^<+++>との共存を調べるため,Mn^<++>/DAB灌流群の標本を同時にターンブル青染色/ベルリン青染色した.Mn^<++>/DAB灌流群において,自家血注入後2日目では,クモ膜下腔に注入された変性赤血球の周囲と,クモ膜下腔に浸潤しているマクロファージ/好中球の細胞質内及び隣接部位に茶褐色微細顆粒状のO_2^-・反応産物が観察された.自家血注入後7日目では,基本的に注入後2日目と反応産物の局在及び反応産物量に違いはなかったが,攣縮血管壁外膜に浸潤したマクロファージに隣接して僅かなO_2^-・反応産物が観察された.これらO_2^-・反応産物は,Mn^<++>/DAB/SOD灌流群では観察されなかった.同様に,Mn^<++>またはDABを除いた灌流溶液群においても同様の結果を得た.Mn^<++>/DAB灌流群の自家血注入後2及び7日目の標本で,同時にFe^<++>を染め出すターンブル青染色,Fe^<+++>を染め出すベルリン青染色を行った結果,攣縮動脈周囲でO_2^-・反応産物とFe^<++>/Fe^<+++>の共存像が観察された.今回の検討より,実験的遅発性脳血管攣縮病態下の攣縮血管周囲(クモ膜下腔)でO_2^-・が少なくとも自家血注入後2日目そして7日目の各時点にて産出されていることをin situで直接証明した.以上,今回の検討は,脳血管攣縮の発生メカニズムにおけるフリーラジカルの関与を改めて支持するデータと考えている.実験には,クモ膜下出血を誘発させたbeagle成犬14頭を用いた.Mn^<++>/DAB灌流群(n=6),Mn^<++>/DAB/SOD灌流群(n=4),灌流溶液よりMn^<++>(n=2)/DAB(n=2)を除いた灌流群の各4群に分け実験を行った.自家血注入後2日目及び7日目の各時点にて脳血管撮影による血管攣縮を確認した後,各群の動物を各灌流溶液30ml/15分で点滴脳槽灌流した.さらに,O_2^-・反応産物とFe^<++>及びFe^<+++>との共存を調べるため,Mn^<++>/DAB灌流群の標本を同時にターンブル青染色/ベルリン青染色した.Mn^<++>/DAB灌流群において,自家血注入後2日目では,クモ膜下腔に注入された変性赤血球の周囲と,クモ膜下腔に浸潤しているマクロファージ/好中球の細胞質内及び隣接部位に茶褐色微細顆粒状のO_2^-・反応産物が観察された.自家血注入後7日目では,基本的に注入後2日目と反応産物の局在及び反応産物量に違いはなかったが,攣縮血管壁外膜に浸潤したマクロファージに隣接して僅かなO_2^-・反応産物が観察された.これらO_2^-・反応産物は,Mn^<++>/DAB/SOD灌流群では観察されなかった.同様に,Mn^<++>またはDABを除いた灌流溶液群においても同様の結果を得た.Mn^<++>/DAB灌流群の自家血注入後2及び7日目の標本で,同時にFe^<++>を染め出すターンブル青染色,Fe^<+++>を染め出すベルリン青染色を行った結果,攣縮動脈周囲でO_2^-・反応産物とFe^<++>/Fe^<+++>の共存像が観察された.今回の検討より,実験的遅発性脳血管攣縮病態下の攣縮血管周囲(クモ膜下腔)でO_2^-・が少なくとも自家血注入後2日目そして7日目の各時点にて産出されていることをin situで直接証明した.以上,今回の検討は,脳血管攣縮の発生メカニズムにおけるフリーラジカルの関与を改めて支持するデータと考えている.