hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
地域のケア拠点としての特養経営に関する日米比較研究

最終年度を迎えた今回の研究業績は、高齢者ケア施設経営の観点からみて、第1に、施設が地域のケア拠点としていかに機能しているか、第2に、施設入居者のQOL(生の質)のみならず死の質にとって施設ケア現場がいかに機能しているか、以上の2点について修正版グラウンデッドセオリーアプローチと日米比較の方法により探索したことである。まず前者についてだが、地域ケア拠点としての施設の役目についての相違点はつぎのようになる。米国における施設は多様なケアが受けられるという選択肢の存在に価値を置くため、入居者の「地域意識(Sense of Local Community)」の境界線は、行政的な「地域性を越えたもの(Beyond Locality)」であり、住民への選択肢の1つとして施設を機能させていた。他方で日本の施設は、ムラ社会的な歴史と風土に合ったケアに価値を置くため、行政的な「地域性に限定されたもの(Limited Locality)」であり、住民のケアを担うという使命感をともなうものとして機能していた。つぎに後者についてだが、米国は管理職のアドミニストレーションにより「徹底化された専門性(Super Professionalism)」が重視され、施設ケア現場で不足するリソースについては管理職が外部から調達していた。これに対し日本はケア職のインフォーマルな現場力により「拡大化された専門性(Extended Professionalism)」が重視され、管理職やケア職が内部の多大な工夫によりリソース不足を乗り切っていた。調査対象は、2015年度から断続的に訪問している日本国内の地方部に立地する2つの特養に加え、米国オレゴン州のマウント・エンジェルとシルバートン、米国中西部に位置するウィスコンシン州のミルウォーキーに立地している高齢者ケア施設である。いずれも相対的に見本となるような施設を選定した。初年度となる今回の研究実績の概要は、以下の2点にまとめられる。第1に、高齢者ケア施設に関する国際比較研究にあたり、前段として、日本の特養ホーム研究の集大成をおこなった。具体的には『特養ホームの社会学』(遅くとも2017年2月に北海道大学出版会から出版予定)と題して、15年以上にわたる日本国内の特養調査の研究成果をまとめた。これを踏まえて日米の施設を俯瞰した結果、日本の特養の同質性に比べて、米国の施設の多様性が確認された。日本の特養は、公的介護保険制度の下で、自治体ごとに社会福祉法人が運営しているのが一般的であるが、米国の施設には、経営形態とケア現場に相対的にみて多様性が存在していた。多様なタイプの施設は、選択肢の充実として、米国では肯定的に捉えられていることが確認されたが、他方で、支払い能力や地域性によって選択できない/選択させられるという側面も看取された。第2に、米国の高齢者ケア施設が地域のケア拠点として果たす役割とは何かを探るため、管理職とケア職へのインタビュー調査を実施した。対象はオレゴン州のマウント・エンジェルとシルバートン、ウィスコンシン州のミルウォーキーに立地する施設である。1地域からのリソースの調達、2地域へのリソースの提供、3他の専門機関との連携に着目したところ、地域におけるカフェや美術館等の文化的資源の調達、地域住民への雇用の提供、病院や地元幼稚園との連携等がみえてきた。とりわけ評判の高い高齢者ケア施設において、よいケアが提供できている理由を探索したところ、寄付活動の仕方と職員研修のあり方にトップマネジメントを機能させていることが示された。これらの研究成果の一部は、「高齢者ケア施設の広域地域への関わりー米国におけるカトリック型地域とプロテスタント型地域の比較」と題して、ウェルビーイング研究会にて報告された。まず、オレゴン州のマウント・エンジェルとシルバートンは、前者はカトリック文化が、後者はプロテスタント文化が根づく地域であったため、調査対象として選定した。前者に立地する施設は非営利であり、よいケアを提供する施設としての評判が高い。後者は営利であり、標準的な施設であると認識されている。これまで、前者については、新人職員研修のフィールドワーク、利用者との交流、管理職やケア職へのインタビュー調査を4度実施した。後者についても管理職や療法士へのインタビュー調査を2度おこなった。その結果、母語の異なる白人とラティーノの職員間の情報共有に力点を置くための試行錯誤が明らかになった。つぎに、ウィスコンシン州ミルウォーキーは、人種・宗教の多様性を有する地域であるため調査対象として選んだ。具体的には、中流階級以上の利用者を受け入れている施設ーユダヤ、カトリック、プロテスタントという3つの異なる宗教的カラーをもつCCRC(継続的ケア付き高齢者コミュニティ)ーの管理職を対象に設定し、リソースの出入と他機関との連携についてのインタビュー調査を2度にわたって実行した。その結果、利用料と寄付によって集めた資金を活用して、ソフト面では古いケア文化の打破、ハード面では高級感のあるスペースの提供を実行するとともに、職員研修を徹底的におこなっている実態がみえてきた。さらに本研究の理論的枠組みを定めるため、内省や創発という概念を自己論の立場から整理した。「活動的高齢女性の生きがい獲得とその変遷過程」と題して、学術雑誌『ソシオロゴス』(2016年10月発行・掲載決定)に投稿した。これは他者との関係のなかで、よりよく生きるためのメカニズムを解明したという点で、地域との関係のなかで、よりよい施設経営とは何かを探究する本研究に示唆を与える。ゆえに総合的にみて、達成度は「おおむね順調」であると判断した。

日本の特養や米国のナーシングホームが地域のケア拠点としての役目を果たす際に、施設経営上、向き合わざるを得ないものが「矛盾・葛藤・コンフリクト」であることが、研究実績のエッセンスとして明確化された。これらを経営的にやりすごせば“現状維持"か“現状の悪化"に、そしてこれらに対処すると“現状改善"か“新たな「矛盾・葛藤・コンフリクト」の生起"となるため、日米の施設経営陣は、やりすごすか、対処するか、施設内外の状況を見極めて判断し続けていた。具体的な研究実績は、以下のようにまとめられる。第1に、本研究プロジェクトでみえてきた「矛盾・葛藤・コンフリクト」に関する理論的枠組みを明らかにした。具体的には、生涯発達理論と葛藤理論を融合させるアプローチによって生きがい獲得モデルとして精緻化した。この成果は「活動的高齢女性の生きがい獲得とその変遷過程ー内省と創発の概念に注目して」と題する学術論文にまとめられ、査読を経て『ソシオロゴス』に掲載された。第2に、米国の高齢者ケア施設が地域のケア拠点として役割を遂行しようとする際に、いかなる「矛盾・葛藤・コンフリクト」が生じ、いかにしてそれを乗り越えようとするのかを探るため、前年と同様、管理職とケア職への継続インタビュー調査を実施した。対象も、2015年度から断続的に訪問しているオレゴン州のマウント・エンジェルとシルバートン、中西部に位置するウィスコンシン州のミルウォーキーに立地している高齢者ケア施設である。まず、遅くとも2017年2月に出版する予定だった『特養ホームの社会学』の出版が遅れている。その理由は、申請していた出版助成に2つとも落選したためである。平成29年度は、大幅に書き直したうえで再度、出版助成に応募し、出版にメドをつける。つぎに、調査についても多少の軌道修正が必要となる。断続的にインタビュー調査とフィールドワークをおこなっている米国オレゴン州のシルバートンに立地する営利施設が閉鎖・移転されることとなった。これによりシルバートンのナーシングホームは地域のケア拠点としての機能を果たすどころか、施設そのものもが存在しなくなった。この移転は、予期せぬものであるが、逆に営利経営の観点から興味深い事実と捉え、移転先のセイラムに立地する施設の施設長や専門職にインタビュー調査をおこなうかどうか。これは地域のケア拠点としての高齢者ケア施設の経営の機能を検討するという本研究プロジェクトの問題意識からみて、研究対象として妥当とはいえないが、魅力的ではある。目下、検討中である。ウィスコンシン州のミルウォーキーでの調査は計画通りか、それ以上に進展している。研究対象は主に、ハイソサエティな東部エリアと、治安がよくない西部エリアというミルウォーキー川の両向かいの2つのエリアとしている。3つのCCRC(継続的ケア付き高齢者コミュニティ)は東部エリアに位置しており、他方で、営利による経営の2つのナーシングホームは、1つは東部エリア、もう1つは西部エリアに位置している。これら5つの施設について、フィールドワークとインタビュー調査を実施した。
側鎖修飾オリゴDNAのライゲーションによる高規則性高分子の合成と機能解析

近年、DNAの自己組織化により、ナノメーターサイズの超分子構造体を構築したり、DNA鎖に沿って機能原子団を並べたりする試みがなされている。一方、糖鎖は、集合体となることでより強くレクチンに認識されることが知られている。これまでに様々な糖クラスターモデルが開発されてきているが、糖クラスターを自己組織化により構築した例はあまり報告されていない。そこで本研究では、オリゴDNAに糖を任意の位置で結合したコンジュゲートを合成し、それを半分ずらした相補鎖とハイブリダイゼーションさせることにより、一定の空間配置をもつ糖クラスターをDNA鎖に沿って並べることを検討した。固相合成法にてガラクトースをもつオリゴDNA(20mer)を合成し、半分ずらし相補鎖とハイブリダイゼーションさせ、二重らせんを形成した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子サイズを見積もったところ、半分ずらし相補鎖とハイブリダイゼーションさせることでDNA鎖が集合体を形成していることがわかった。次に、蛍光法によりFITC-RCA_<120>レクチンとの相互作用を検討したところ、DNAが自己組織化され糖クラスターを形成している場合、FITC-RCA_<120>に対してシグモイド型の濃度依存性を示して結合することがわかった。これは、糖クラスターが自己組織的に形成されるため、糖がレクチンに対して協同的に結合するためではないかと考えられる。これをHill plotにより解析したところ、結合定数K_a=5.5×10^4M^<-1>、Hill係数n=2.4と求められた。つまり、一つのレクチンあたり平均2.4個の糖ユニットが協同的に強く結合しているものと思われる。DNAは、遺伝情報を担う物質としてだけでなく、非常に高い特異性で相補的な配列を認識することから、この特性を利用して機能性分子の超分子集合体の構築にも用いることができる。一方、細胞膜表面の認識素子として機能している糖鎖は、集合体となることで強い認識が発現される。これは「糖鎖クラスター効果」として知られており、これまでに糖鎖高分子をはじめとした様々な糖クラスターモデルが調製されている。しかしながら、これらの糖クラスターモデルにおいて、糖鎖間隔を厳密に制御された系は全くなく、いずれも平均的な糖鎖間隔の制御しか行われていない。そこで本研究では、オリゴDNA-糖コンジュゲートを合成し、半分ずらした相補鎖とハイブリダイゼーションさせることで糖を一定間隔で集積させることを考えた。5-ヨードデオキシウリジンを出発原料として、Heck反応により糖で塩基修飾されたデオキシウリジンを合成した。これを用いて、アミダイト法により固相合成し、任意の位置が糖で修飾されたオリゴDNAを合成した。コンジュゲートと半分ずらし相補鎖のハイブリダイゼーションによるクラスター形成をSECの溶出挙動によって検討したところ、完全相補鎖を用いた場合に比べ高分子量側にピークがシフトし、DNAが組織化されていることが示唆された。また、導入した糖鎖の認識能をレクチンを用いた蛍光スペクトル測定により検討したところ、オリゴDNA-Galコンジュゲート(20mer)は、半分ずらし相補鎖によってクラスター形成された場合のみ、β-Gal特異的であるRCA_<120>レクチンとアロステリックに結合することがわかった。
造血幹細胞移植後患者のライフコントロールについての研究

本研究は外来通院する造血幹細胞移植後患者のライフコントロールはどのようなものなのかを明らかにすることを目的とした。研究デザインは質的記述的研究であり、データ収集方法は半構成的面接法を行い、分析は現象学的方法を用いた。対象者である18名の患者を分析した結果、患者のライフコントロールとして【これからの生活に目安をつける】【他者との隔たりのなかで生活する】【生活していくために気持ちの均衡を保つ】【病気になる前の自分でいようとする】の4つの大テーマを見出した。患者のライフコントロールは、患者が不確かな状況を理解したうえで、これからの生活がどうなるのかを予測していたことが特徴的であった。本研究は療養生活をする造血幹細胞移植後患者のライフコントロールはどのようなものか探究することを目的としている。平成24年に造血幹細胞移植の件数が多い施設に研究の依頼を行い、倫理審査を受けた。審査の結果インタビューガイドの修正、音声データの管理方法などの修正を条件に承認を受けた。同時に研究施設のフィールドワークを行い、関係病棟、関係外来の診察、ケアを見学、一部ケアを実施した。移植後およそ1年経過した療養生活をする患者に研究対象候補者として、研究参加を依頼した。23名の患者が研究参加を承諾し1回30-60分のインタビューを40回程度行った。インタビューで得た音声データを逐語録におこした。平成25年度4月から現象学的方法のひとつであるジオロジーの分析方法を基に分析を行った。(全体の意味を捉えるために逐語録全体を通してよく読む。逐語録からライフコントロールに関連する重要な陳述を抜粋する。抜粋した重要な陳述に基づいて本質的な意味を持つと考えられる単位ごとに分類する。ライフコントロールに関する意味の単位を経時的、感情の流れに沿って並べ、対象者の体験世界を1つのストーリーとしてまとめる。ライフコントロールについて各対象者比較することを通して現象の全体構造を統合する)。また同時に研究対象者の基礎的な情報(移植の種類、移植後の治療など)を整理した。分析には質的研究の専門家(研究協力者)に適宜意見を求め、分析結果の信頼性の確保に努め分析を進めた。さらに現象学的視点に基づいた分析を行うために、現象学に関する研究会、学会に参加し現象学的について知識を深めた。分析により得られた結果の一部を平成26年2月学会(17th East Asia Forum Of Nursing scholars)で発表した。造血幹細胞移植患者のライフコントロールを探求するために、造血幹細胞移植の件数が多く、研究者の関係者が多い、神奈川県立がんセンターを研究フィールドとした。研究対象者は造血幹細胞移植を行い1年未満で、30-60分のインタビューによる身体的、心理的にも影響の少ない患者とした。平成24年4月より当該施設に連絡、調整を行い、6月に当該倫理委員会の審査を受けた。その結果インタビューガイドの内容の表現を修正すること、音声データの管理方法を変更することで倫理委員会の承認を得た。7月より当該施設の関係外来、無菌病棟のフィールドワークを行った。その後、外来担当医、看護師と外来事務員、看護局と連携し患者選定を行い、データ収集を行った。データ収集は院内外来の空きスペースで行い、1回3060分行い録音した。平成24年8月9月末までデータ収集を行ったが、当該施設での移植件数が多く、研究対象者の候補者が多かったため、平成24年12月、平成25年2月に22名の患者から40回インタビューを行った。データ収集と並行して、録音した音声データを逐語録にした。また研究対象者の基礎的な情報(移植の種類、移植日、移植前の治療内容、移植後の治療内容、病状経過)の整理を行った。平成25年3月からデータ分析を始めている。なお、データ収集、データ分析に必要な理論的な視点を得るために、研究会、学会に参加した。さらに、研究協力者と会いデータ収集、データ分析の方向性を検討した。本研究は造血幹細胞移植後患者のライフコントロールはどのようなものか探究することを目的にしている。平成24年に研究施設に依頼を行い、倫理審査の承認を受けた。同時に依頼した医療機関でフィールドワークを行った。移植後おおよそ1年経過した外来通院を行う造血幹後患者を対象として研究参加を依頼した。18名の患者が研究を承諾し1回30-60分のインタビューを40回程度行い、音声データを逐語録におこした。平成25年より現象学的方法であるジオロジーの方法で分析を行った。質的研究の専門家(研究協力者)に適宜意見を求め、分析結果の信憑性の確保に努め分析を進めた。分析の結果、21のテーマ、6の中テーマ、4つの大テーマが抽出された。

大テーマである【これからの生活に目安をつける】は患者が弱った身体を実感することから、重症感染症による状態悪化への強い危機感を持ち、医師の指示を固く守り生存しようとする。それと同時に情報を集め、具体的な生活の仕方を理解し、先を見越して慎重に生活することであった。【他者との隔たりのなかで生活する】は、他者との間に隔たりを感じながらも、わだかまりを我慢し、自分なりに他者と共に生活することであった。【生活していくために気持ちの均衡を保つ】は、患者が厳しい予後を生きる状況で、気持ちのバランスをとるために強い信念を持ち、これからの経過を考え込まず楽しみ、生活することであった。【病気になる前の自分でいようとする】は患者が病気をする前の自分とのギャップに困惑する状況で、他者に病人として見られることを避け、失った機能を取り戻し、本来の自分でいようとすることであった。研究結果の1部を、平成26年2月、17th EAFONSで発表した。平成26年度より研究結果の1部を再度分析しまとめた。平成27年11月に結果の一部をAONS Conference2015で表する予定である。がん看護予定していたデータ収集は達成でき、分析をすすめられているため。研究フィールドとした施設に予想していたより、研究対象者がいた。そのためデータ収集を平成2425年度で行うことを計画していたが、おおむね24年度で行えたため。なお、データ収集を計画より多く行ったため研究施設への旅費が不足し、年度途中で予算を変更した。引き続き、研究協力者とともに分析をすすめるため、旅費に研究費を使用する。また分析、結果をまとめるうえで必要な視点をえるために研究学会に参加する旅費を使用する。そのほか、インクなど消耗品に研究費を使用する。分析を行う上で必要な視点を得るために研究会に参加し、データ分析をすすめる。研究の信頼性を高めるため、研究協力者の意見をもらうことを予定していたが、計画していた旅行が都合のため中止したことがあったため。研究の信頼性を高めるために継続して研究協力者の意見をもらうことを予定しており、旅行を計画している。研究協力者とともに分析を進めるため、その旅費に研究費を使用する。また分析をするうえで必要な視点を得るための研究会参加にも旅費を使用する。その他、分析を行うために、インクなどの消耗品に使用する。
歯髄疾患に伴う難治性の痛みに関する臨床的ならびに基礎的研究

歯髄疾患に伴う難治性疼痛の発症機構を解明する基礎的研究として,歯髄を化学的に刺激した際の中枢神経系の早期応答(neuron活性, mRNAの発現状況)を解明する神経科学的研究を行い, neuronのみならずgliaも早期から活性化されていることを示した。歯髄疾患に伴う難治性疼痛の臨床的研究では,患者の治療前の疼痛状態を客観的に測定する方法として日本語版McGill疼痛質問表とVAS法による解析の確立を試み,各々のスコアが有意に高い値を示すことが判明した。歯髄疾患に伴う難治性疼痛の病謡に関する中枢機構についての基礎的研究として,SD系ラットを実験動物として用いて視床内側背側(MD)核内に見出した臼歯歯髄駆動ニューロンの応答性の変化に,NMDA型Glutamate受容体が関与している可能性について検討した。NMDA受容体非競合拮抗薬MK-801(200nM/0.5μl)をMD核内歯髄駆動ニューロンの近傍(間隔:0.35mm)に微小注入した動物とこの処理を行わなかった対照動物で,同ニューロンの歯髄電気刺激に対する応答性の変化を,mustard oilを適用した化学的条件刺激下で検索した。その結果,NK-801の微小注入はMD核内歯髄駆動ニューロンの応答性を対照群に比較して有意に減少させることが示された。このことは,mustard oilによる歯髄化学的条件刺激は中枢内のNMDA型Glutamate受容体を介したシナプス伝達系を賦活化していることを示唆している。また,歯髄疾患に伴う中枢神経伝達物質の動態に関する神経科学的研究は本年度は予備実験を開始したところである。歯髄疾患に伴う難治性癖痛の臨床的研究として,歯髄疾患処置後あるいは根尖性歯周炎に伴う歯原性慢性疼痛と診断された患者の訴える痛みについて,日本語版McGill疼痛質問表並びにVAS法を用いた解析を通常の慢性根尖性歯周炎患者を対照に実施した。その結果,歯原性慢性疼痛を訴える患者ではMcGill疼痛質問表の質問事項で感覚的因子および評価的因子に関して有意に高いスコアを示すこと,またVAS値も有意に大きい値を示した。この研究は継続中であり,来年度中間発表を予定している。歯髄疾患に伴う難治性疼痛の発症の機構を解明する基礎的研究として,SDラットを用いた動物実験にて歯髄を細神経興奮性物質かつ起炎性物質であるmustardoilにて化学的に刺激した際の中枢神経系の早期の神経科学的解析として,三叉神経脊髄路核及び視床内のp38MAPK,GFAP及びNMDARのmRNAの発現状况をRT-PCR分析にて解析した。刺激側と同側の三叉神経脊髄路核と対側視床でこれらのmRNAの発現が確認された。前2者はglia細胞の活性状態を,また後者はneuronの活性状態を示しているので,歯髄神経の興奮は中枢においてneuronのみならずgliaも早期から活性化していることが示唆された。現在,この研究は継続実行中であり,これまでに実施してきたneuron活動記録の実験との融合を進める予定である。歯髄疾患に伴う難治性疼痛の発症の機構を解明する臨床的研究として,広義の歯髄疾患に罹患している患者で,疼痛を訴えて紹介されて本学歯学部附属病院を受診した患者の治療前の疼痛状態を,客観的に測定する方法の確立を試みた。日本語版McGill疼痛質問表とVAS法による解析を実施したところ,頑強な疼痛に罹患していた患者(OCP)群と通常の慢性根尖性歯周炎の患者群との間には,有意差をもって前者の方がMcGill疼痛質問表の感覚的痛み指標,評価的痛み指標,及び総合的痛み指標のスコアが高いことが示され,またVAS値においても前者の方が有意に高い値を呈することが判明した。これらの事実から,本研究で行ったMcGill疼痛質問表とVAS法に加えて,X線検査の画像診断を的確に行うことにより,OCPの診断が的確に行える可能性が示唆された。歯髄疾患に伴う難治性疼痛の発症機構を解明する基礎的研究として, SDラットを用いた動物実験にて細神経興奮性物質かつ起炎性物質であるmustard oilにて歯髄を化学的に刺激した際の中枢神経系の早期応答を,歯髄神経の投射経路である三叉神経脊髄路核中間亜核尾側亜核境界部(Vi/Vc部)及び視床内のp38MAPK, GFAP及びNMDARのmRNAの発現状況を指標としてRT-PCR分析にて神経科学的に解析した。刺激と同側三叉神経脊髄路核Vi/Vc部と対側視床でこれらのmRNAの発現が確認された。

前2者はそれぞれmicroglia及びastrocyteというglia細胞の活性状態と,また後者は歯髄神経からの求心性情報を上位中枢に中継するneuronの活性状態と関係していると考えられるので,歯髄神経の興奮は中枢においてneuronのみならずgliaも早期から活性化していることが示唆された。これまでに実施してきた歯髄駆動neuron活動記録の分析結果を加えて,これらのgliaの活性化が神経因性疼痛(neuropathic pain)の発生と存続に重要な役割を担っているとの最近の報告を考慮すると,歯髄の炎症性変化に伴う歯髄求心神経の興奮は顎顔面領域のneuropathic painの誘発因子となる可能性が示唆された。歯髄疾患に伴う難治性疼痛の発症の機構を解明する臨床的研究として,広義の歯髄疾患に罹患している患者で,疼痛を訴えて紹介により本学歯学部附属病院を受診した患者の治療前の疼痛状態を,客観的に測定する方法の確立を試みた。日本語版McGill疼痛質問表とVAS法による解析を実施したところ,頑強な疼痛に罹患していた患者(OCP)群が通常の慢性根尖性歯周炎の患者群よりも, McGill疼痛質問表の感覚的痛み指標,評価的痛み指標,及び総合的痛み指標の各々のスコアにおいて有意に高い値を示すこと,またVAS値においても前者の方が有意に高い値を呈することが判明した。これらの事実から,本研究で行ったMcGill疼痛質問表とVAS法に加えて, X線検査の画像診断を正確に行うことにより, OCPの診断が的確に行える可能性が示唆された。
体細胞超変異関連因子の解析による皮膚B細胞リンパ腫の早期診断法の確立

皮膚B細胞リンパ腫の早期診断法を確立するために,皮膚B細胞リンパ腫,特にリンパ濾胞構造を伴うものおよび皮膚B細胞性偽リンパ腫症例において,体細胞超変異(somatic hypermutation)に関与する分子の発現を解析して2者間の差異を同定することを試みた.B細胞のマーカーとの2重染色を施行して,共焦点レーザー顕微鏡にて確認を行って複数の分子に免疫組織学的には差が認められ.しかしながら,その後の遺伝子変異の有無の検索ではpolymorphismはあったが変異が見つからず,リンパ腫か偽リンパ腫かを決定づける可能性のある分子の同定はできなかった.皮膚B細胞リンパ腫の早期診断法を確立するために,皮膚B細胞リンパ腫,特にリンパ濾胞構造を伴うものおよび皮膚B細胞性偽リンパ腫症例において,体細胞超変異(somatic hypermutation)に関与する分子の発現を解析して2者間の差異を同定することを試みた.B細胞のマーカーとの2重染色を施行して,共焦点レーザー顕微鏡にて確認を行って複数の分子に免疫組織学的には差が認められ.しかしながら,その後の遺伝子変異の有無の検索ではpolymorphismはあったが変異が見つからず,リンパ腫か偽リンパ腫かを決定づける可能性のある分子の同定はできなかった.皮膚B細胞リンパ腫の早期診断法を確立するため,特にリンパ濾胞構造を伴うものおよび皮膚B細胞性偽リンパ腫症例を比較して差異を同定することを目的に,両疾患の症例の選定,臨床学的及び病理組織学的検討,免疫組織化学的検索,症例の再分類を行った.1.症例の準備および症例組織からのB細胞の培養22例の皮膚B細胞リンパ腫および皮膚B細胞性偽リンパ腫症例のパラフィンブロックあるいは凍結検体を用意した.さらに当科通院中の10例の皮膚B細胞リンパ腫および皮膚B細胞性偽リンパ腫症例から通常のパラフィン切片,凍結切片を採取するとともに,生切片から腫瘍B細胞を抽出して継代培養を行った.2.選定症例の臨床学的検討と病理組織学的検討および免疫組織化学による症例の浸潤細胞のphenotypeの検討選定した32例症例の臨床経過(発症年齢,性,病期,予後)を詳細に検討し,またHE染色プレパラートを光学顕微鏡を用いて,病理組織学的に濾胞構造の様式,浸潤細胞の種類,周囲の正常組織の変化等について詳細に検討した.次に,浸潤細胞のphenotypeとその浸潤パターンをCD3,CD20,Bcl-6,CD10,MIB-1,kappa,lambda,Bcl-2,MUM-1を用いた免疫組織化学的手法で解析した.3.症例の再診断およびグループ分け2で得られた結果を基に症例の再診断を行い,さらにはリンパ腫はWHO/EORTCの皮膚リンパ腫の分類に基づいて分けた.また,偽リンパ腫も単発あるいは多発か,再発性か否か,濾胞構造を伴うものか否か,浸潤様式がtop heavyかbottomheavyかによってグループ分けを行った.その結果,10例が濾胞中心細胞性リンパ腫,9例が濾胞辺縁細胞性リンパ腫,8例が濾胞形成型偽リンパ腫,5例が非濾胞形成型偽リンパ腫と分類できた.皮膚B細胞リンパ腫の早期診断法を確立するために,皮膚B細胞リンパ腫,特にリンパ濾胞構造を伴うものおよび皮膚B細胞性偽リンパ腫症例において,体細胞超変異(somatic hypermutation)に関与する分子の発現を解析して2者間の差異を同定することを試みた。本年度は研究計画に基づいてhypersomatic hypermutation関連分子について免疫組織学的検索を施行した。蛍光抗体法、ならびに酵素抗体法を利用してリンパ腫と偽リンパ腫症例の間に発現強度に差が見られるものの検出を試みた。また検出された関連分子についてB細胞特異的か否かを確認するために,共焦点レーザー顕微鏡を用いてB細胞のマーカーとの二重染色を施行した。上記2者間において免疫組織学的な差が認められて、B細胞特異的である複数の分子を同定した。引き続き患者末梢血より、もしくはマイクロダイセクション法を用いて組織腫瘍細胞よりDNAを抽出し、これらの分子についての遺伝子変異検索を行った。現在のところ、すべてのエクソンを検索し得た分子についてはpolymorphism変異を認めるもののみであった。平成20年度はさらなる症例の蓄積と免疫組織学的な差として同定したすべての分子のすべてのエクソンに関して遺伝子変異検索を行って、リンパ腫か偽リンパ腫かを決定づける可能性のある体細胞超変異分子を同定する。また、この分子を用いて他の皮膚B細胞リンパ腫についても検討して早期診断法を確立する。本研究の目的である、皮膚B細胞リンパ腫の早期診断法を確立するために、皮膚B細胞リンパ腫、特にリンパ濾胞構造を伴うものおよび皮膚B細胞性偽リンパ腫症例において、体細胞超変異(somatic hypermutation)に関与する分子の発現を解析して2者間の差異を同定することを試みた。平成20年度は平成19年度に引き続き,hypersomatic hypermutation関連分子について免疫組織学的検索を行った。酵素抗体法(SAB法)を利用してリンパ腫と偽リンパ腫症例の間に発現強度に差が見られる分子の検出を試みた。また平成19年度と同様にB細胞に特異的にみられるか否かを確認するために、B細胞の特異的マーカーとの2重染色を施行して、共焦点レーザー顕微鏡にて確認を行った。結果、免疫組織学的に差が認が認められる複数の分子を同定することができた。さらに、これら差が認められた分子について遺伝子発現においても差が生じているか、分子生物学的検索によって解析を行った。免疫組織学的に差のある分子のうちの一つを遺伝子解析装置によって解析した結果、いくつかの変異を確認したが、全てpolymorphismであることを確認した。

平成20年度ではリンパ腫か偽リンパ腫かを決定づける可能性のある分子の同定には至っていないが、免疫組織科学的検索から分子生物学的検索による確認の手法を確立することができた。また、さらなる症例の蓄積を進めることができた。
急性膵炎に対する膵外分泌抑制効果の検討

1.目的:重症急性膵炎は、死亡率50%を超え、その治療法の確立が急務とされている。そこでSomatostatinの誘導体薬の一つであるSMS201-995の膵外分泌抑制作用に注目し急性膵炎犬に本剤を投与し膵の循環動態および組織学的変化を検討した。2.方法:雑種成犬に対し自家胆汁を高圧で注入することにより急性膵炎犬を作成した。実験群はI群:急性膵炎SMS非投与,II群:急性膵炎SMS投与(10μg/kg静注後,10μg/kg/hr持続点滴),III群:Sham Operationとし、大腿動脈圧、門脈血流量および膵組織血流量を測定した。膵組織血流量はレーザードップラー血流計を用いて測定した。3.結果(1)平均血圧:経過中有意の変動を示さず各群間にも差はなかった。(2)門脈血流量:前値はI群272±24ml/min,II群299±17,III群256±17であった。前値を100とすると、I群では1時間後より有意の低下が見られ、5時間後には59.3%であった。II群では15分後より低下し5時間後に44.3%であった。III群は有意の変動を示さず5時間後に%であった。III群に比しI・II群は門脈血流が低下したが、I・II群間に差はなかった。(3)膵組織血流量I群は一過性の上昇後、2時間以降は有意に低下し5時間後前値の57.3%となった。II群は15分以降有意に低下し5時間後40.1%となった。有意の変動のないIII群に比しI II群は有意に低下し、I II群間ではI群の低下が有意であった。(4)組織像:光顕下での間質浮腫、出血、細胞浸潤はI II群間に差はなく、II群での間質出血が強かった。4.まとめ:胆汁注入モデルの急性膵炎犬において、膵組織血流の低下がみとめられた。これはSMS投与群で更に著明であった。一方膵炎時の門脈血流低下も併存し、SMS投与群の方がより強い傾向もあり、肝を始めとする逸脱酵素処理臓器の機能低下による微小循環障害の助長の可能性もあり、急性膵炎に対するSMS201-995の投与には慎重であるべきと思われた。
NK1受容体とGα14は内臓痛治療の新たな標的分子となるのか？

これまでわれわれは科研費の補助を受ける前までに獲得したデータを基盤に,データ解析を進め,分担者と海外の共同研究者と一緒に研究成果を早期に発表することができた.研究で得た知見は腹腔神経節ニューロンではタキキニン受容体はGα14と共役していることが判明したことである.また同時にタキキニン受容体はGs,Gi,Gq/11と共役していないことも判った.とくにGq/11は他の組織ではタキキニン受容体と共役しているとの報告が多く,本研究は腹腔神経節での特性が明らかになる実験結果であった.われわれの測定系は電気生理学実験であるパッチクランプ記録であるが,本研究ではダブルパルス法によるカルシウムチャネル電流記録とカリウムチャネル記録を行った.タキキニン受容体刺激によるGα14とGβγの放出により,ホールセルカルシウムチャネル電流が抑制され,さらにGα14を媒介するカリウムチャネル電流も抑制することが判った.またわれわれはパッチクランプ記録をした細胞の細胞内溶液を回収し,全量RNA溶液を抽出して,シングルセルレベルで遺伝発現プロファイルを解明する技術の開発に取り組んだ.10ng以下のRNA量であったが,全トランスクリプトーム増幅の併用で,候補遺伝子(われわれの検討ではGRK2遺伝子)のRT-PCRによる増幅に成功した.さらにシングルセルレベルでcDNAライブラリを合成してRNA-seqを試みたが,原因不明の非特異的な増幅がいくつかのサンプルで確認された.コンタミネーションが最も疑わしかったが,研究期間内では原因の解明に至らなかった.科研費による補助は終了するが,今後はパッチクランプ記録後の細胞でのシングルセルRNA-seq技術の確立を実現したい.前年度までに共同研究者の研究室で電気生理学実験によるプロジェクトの基盤となる実験データは収集できた.興味深いことに腹腔神経節ニューロンではタキキニン受容体はGα14と共役していることが判った.同時にGs,Gi,Gq/11とは共役していないことも判った.とくにGq/11は他の組織ではタキキニン受容体と共役しているとの報告が多く,本研究は腹腔神経節での特性が明らかになる実験結果であった.われわれはカルシウムチャネル電流をパッチクランプ記録している.ダブルパルス法によるカルシウムチャネル電流記録が主体であるが,本研究ではタキキニン受容体刺激によるGα14とGβγの放出によりカルシウムチャネル電流が電位依存性に抑制されることが明らかになった.しかしGα14が細胞内情報伝達をどのように変化させるかは判らなかった.以上の観察結果はプロジェクトの初年度として十分な知見であると思われた.また当学の研究室でもパッチクランプ実験を継続すべく,機器購入などのセットアップを並行して,取り組んでいる.自施設で電気生理実験を継続して行うため,パッチクランプシステムを構築する予定であるが,セットアップに時間を要している.これまでに共同研究者の研究室で電気生理学実験による本プロジェクトの基盤となる実験データは収集できた.興味深いことに腹腔神経節ニューロンではタキキニン受容体はGα14と共役していることがわかった.同時にGs,Gi,Gq/11とは共役していないこともわかった.とくにGq/11は他の組織ではタキキニン受容体と共役しているとの報告が多く,本研究は腹腔神経節での特性が明らかになる実験結果であった.次にわれわれはsiRNAを腹腔神経節ニューロンに遺伝子導入したうえで,ダブルパルス法によるカルシウムチャネル電流をパッチクランプ記録した.タキキニン受容体刺激で誘発されるカルシウムチャネル電流の電位依存性抑制が減弱することを見出した.さらにわれわれはタキキニン受容体刺激で誘発されるカリウム電流(M-current)の抑制とGα14の共役について観察した.siRNAによるGα14のノックダウンを行うと,タキキニン受容体刺激で誘発されるM-curentの抑制は減弱した.Oxo-MによるGq/11を介したM-currentの抑制はノックダウン後も減弱しなかった.これまでの観察結果から腹腔神経節ニューロンのタキキニン受容体シグナル伝達ではタキキニン受容体にはGα14βγが共役しており,タキキニン受容体刺激で電位依存性カルシウムチャネル(Cav2.2)とカリウムチャネル(KCNQ)が調節されることが明らかになった.電位依存性のカルシウムチャネル電流抑制はGβγ放出によるもので,カリウムチャネル電流抑制はGTP結合により活性化したGα14によるものであることが明らかになった.内臓痛に関与する腹腔神経節ニューロンのシグナル伝達機構の一部が徐々に明らかになりつつある.これまでわれわれは科研費の補助を受ける前までに獲得したデータを基盤に,データ解析を進め,分担者と海外の共同研究者と一緒に研究成果を早期に発表することができた.研究で得た知見は腹腔神経節ニューロンではタキキニン受容体はGα14と共役していることが判明したことである.また同時にタキキニン受容体はGs,Gi,Gq/11と共役していないことも判った.とくにGq/11は他の組織ではタキキニン受容体と共役しているとの報告が多く,本研究は腹腔神経節での特性が明らかになる実験結果であった.われわれの測定系は電気生理学実験であるパッチクランプ記録であるが,本研究ではダブルパルス法によるカルシウムチャネル電流記録とカリウムチャネル記録を行った.タキキニン受容体刺激によるGα14とGβγの放出により,ホールセルカルシウムチャネル電流が抑制され,さらにGα14を媒介するカリウムチャネル電流も抑制することが判った.

またわれわれはパッチクランプ記録をした細胞の細胞内溶液を回収し,全量RNA溶液を抽出して,シングルセルレベルで遺伝発現プロファイルを解明する技術の開発に取り組んだ.10ng以下のRNA量であったが,全トランスクリプトーム増幅の併用で,候補遺伝子(われわれの検討ではGRK2遺伝子)のRT-PCRによる増幅に成功した.さらにシングルセルレベルでcDNAライブラリを合成してRNA-seqを試みたが,原因不明の非特異的な増幅がいくつかのサンプルで確認された.コンタミネーションが最も疑わしかったが,研究期間内では原因の解明に至らなかった.科研費による補助は終了するが,今後はパッチクランプ記録後の細胞でのシングルセルRNA-seq技術の確立を実現したい.今年度の前半はパッチクランプシステムの構築と記録開始を目指す.後半は遺伝子ノックダウンさせたニューロンでパッチクランプ記録を行いたい.次年度は内臓痛治療に繋がる創薬にむけてさらなる研究を計画中である.計上した予算のほぼすべてを使用したが,わずかな余剰が生じたのみである.(理由)予想以上に研究が順調で消耗品の購入が少なく済んだ.(使用計画)来年度の研究消耗品の購入に充てる予定である.次年度の物品購入に充てる予定である.
パーリ語およびタイ語写本による東南アジア撰述仏典の研究

当該研究期間に行った研究の成果をまとめた研究報告書は3部構成となっている。第1部はパンニャーサ・ジャータカ編として、昨年度までにローマ字転写を公表した第19話第21話に対し、テキスト校訂および翻訳を行った。東南アジアの文献で用いられているパーリ語は「標準的」なものとは言い難く、そのこともあって、世界的に見ても未だテキストの校訂方針すら確立されていない。今回の研究により東南アジア撰述のパーリ語文献のテキスト校訂のためのひな形を提示できたと考える。直接的なテキスト研究以外にも、校訂した3話の内容や背景を紹介して東南アジア撰述仏典研究の意義を明確にした論考、現在利用できる計6本のパンニャーサ・ジャータカ写本の内容目次、これまでの日本におけるパンニャーサジャータカ研究文献目録を収録し、今後の当該文献の研究に資する成果をあげることができた。第2部はプラ・マーライ写本研究編である。日本の各地に所蔵されている計6本の写本に関し基礎資料を収集しその書誌情報をまとめた。さらに写本前半のパーリ三蔵抄録部分に関しては、ローマ字転写を行って分析を進め、また、写本挿絵の図像学的分析も行った。さらに、タイ語で記されたコロフォンが存在している場合には和訳を行った。これによって従来全く等閑視されてきたタイの仏教写本研究に新局面を開くことができたと考える。第3部はその他の資料を提示したが、写真挿絵、寺院壁画などを資料とした学会発表の資料も収録しており、文献研究と合わせたフィールド調査の重要性を示すことができた。本年度は、初年度であるので、まず基礎資料と研究環境の整備、および、研究の基礎方針の確定を行った。『パンニャーサ・ジャータカ』に関しては、東方研究会研究員同茨田通俊氏を研究代表者とする科研費による研究プロジェクト主催の研究会に研究代表者が三度に渡って参加し、協力・分担関係を確立した。我々のグループが、三話について、そのローマ字転写テキストならびに校訂作業を担当することを確定した。我々が主催する研究会も行ったが、特に7月には、名古屋大学にFragile Palm LeavesのPeter Skilling博士を講師に招いて、パーリ語写本ワークショップを開催し、そこで得られた知見を活かして、茨田氏の主催する研究会において、ローマ字転写テキスト作成、ならびに校訂の方針の作定に当たった。また、先行する諸研究からの資料の引き継ぎや複写を行い、さらに、タイで著された入手困難な『パンニャーサ・ジャータカ』部分校訂本も入手し、基礎資料に関してはほぼ整備することができた。ロンドンにおける9月の国際仏教学会への参加し、多くの研究者と意見交換を行ったが、『プラ・マライ』や他のタイ写本(「コーイ」と呼ばれる種類の紙に書かれた写本類)に関しては、大英図書館に所蔵される多くの同種の紙折り写本の調査を行った。また、オックスフォード大のボードリアン図書館も訪問し、資料複写を依頼した。これらのタイ写本研究に関しては、他にも、EFFEOのジャクリーン・フィリオザ研究員からの協力も得ることができ、多くの文献情報を提供していただき、意見交換も行った。初年度の成果として、当該研究遂行のために重要な、研究者間の国際的ネットワークを構築できたことが挙げられる。また、名古屋覚王山日泰寺所蔵の『プラ・マライ』写本の再調査も行い、同種の写本の国内の所蔵情報についても調査を行った。本年度の研究成果として、まず『パンニャーサ・ジャータカ』に関しては、東方研究会研究員同茨田通俊氏の科研費による研究プロジェクトに研究代表者が参加し、ローマ字転写テキスト作成の方針を確定した。そして、それに基づき、名古屋大学において三話のローマナイズ転写を作成し、Journal of the School of Letters, Nagoya University 3, 2007において公表した。

平成19年2月に、バンコク、シャム・ソサエティにおいて、EFFEOのジャクリーン・フィリオザ研究員ならびにピーター・メースフィールド教授とテキスト校訂方法をめぐって意見交換をし、続く校訂作業、翻訳研究の準備を進めた。一部に関しては既にその作業を開始している。『プラ・マライ』に関しては、国立民族学博物館所蔵写本のコピーを入手し、また18年9月、19年2月の横浜のアジア民族造形文化研究所調査により、さらにもう一本の写本を入手した。2月のタイ調査においては、現地の貴重な資料をフィリオザ研究員および現地留学中の名古屋大学大学院川口洋史氏の協力により収集し、次年度以降の文献学的研究の資料はほぼ整えることができた。『パタマ・サンボーディ』およびその図像表象に関しては、2月のタイ調査によって、寺院壁画の撮影などを含む、相当量の資料収集を遂行できた。これに基づき、東方研究会田辺和子研究員と共同で、シンポジウム「仏教美術史・考古学と仏教文献学の出会い」(平成19年2月23日、於創価大学)において「タイの写本挿絵・寺院壁画に描かれる仏伝より」と題する研究発表を行った。なお、研究分担者加藤久美子、佐久間留理子は、『プラ・マライ』タイ語テキストの文献学的、図像学的研究に着手するとともに、平成19年2月から3月にかけて、加藤は北東北タイの上記資料をめぐる現地の現状の調査、佐久間は西インドを中心に、東南アジアの宗教美術の源泉に関する調査を行った。本年度は最終年度であり、これまでの研究成果を総括して、200余頁よりなる研究成果報告書としてまとめた。まずはパンニャーサ・ジャータカに関し、テキスト校訂の方針を確定し、昨年度までにローマ字転写を公表した第19話第21話に対し、テキスト校訂および翻訳を行った。直接的なテキスト研究以外にも、研究代表者が「パンニャーサ・ジャータカ研究報告-大谷大学写本欠損部分の三話をめぐって-」と題する研究発表を行い、各話の内容や背景を紹介し、東南アジア撰述仏典研究の意義を明確にした。プラ・マーライ写本に関しては、国立民族学博物館および龍谷大学大宮図書館所蔵写本の調査を行い、前年度までに調査を行ったものと合わせ、日本の各地に所蔵されている計6本の写本に関し基礎資料を収集した。さらに写本前半のパーリ語部分の内容に関しては、ローマ字転写を行って分析を進め、また、写本挿絵の図像学的分析も行った。また、タイ語で記されたコロフォンが存在している場合には、研究分担者加藤久美子が中心となって解読を進め、和訳を行った。サムット・コーイと呼ばれるタイの装飾紙折写本一般、およびプラ・マーライ写本の内容全般に関しては研究代表者が「タイ仏教写本『プラ・マライ』について-説話とその図像表現-」と題する研究発表を行った。研究分担者佐久間留理子は日本に存在するプラ・マーライ写本全てにわたって挿絵の主題と文化史的背景にっいての研究を行った。(研究成果は『アジア民族造形学会誌』に投稿済)。以上の研究成果は、研究協力者等による他の幾つかの研究成果と合わせ、すべて研究成果報告書に収録した。これについては名古屋大学レポジトリなどにより、WEB上でも公開する予定としている。
環境で攻撃性を司る神経回路はどの程度変化するか？：遺伝と環境の交点を探る

他者との関係性構築が困難な発達障害の急増が社会問題となっており、一部の児童・生徒の表現型として起こる行為障害・暴力といった問題行動増加の原因究明が求められている。攻撃行動発現は遺伝要因・環境要因の双方で制御されるが、近年の問題行動増加の背景には環境要因が強く関わると推測される。ところが、(1)遺伝要因と環境要因は各々攻撃性の形成にどの程度寄与するのか?(2)各々の要因に影響を受ける神経回路はどの程度独立/重複しているのか?といった基本的な点が未解明であり、環境要因が問題行動増加の原因となるプロセスを理解するための学術基盤が不足している。本研究では遺伝的に異なる攻撃性を示す2系統の鳥類を用いて、攻撃関連遺伝子群が環境影響でどのように変化するか検討し、遺伝要因に影響をうけず「環境要因に高い感受性を示す攻撃関連神経回路」を同定することで、環境要因による問題行動増加を生物学的に理解する糸口を見出す。今年度は、攻撃性の異なる鳥類2系統間の視床下部から抽出したRNAサンプルを用いて系統間で異なる発現量を示す遺伝子の網羅的探索を行った。既に攻撃性との関連が指摘されている各種遺伝子(GnIH (Ubuka et al. Gen. Comp. Endocrinol. 2013)、ステロイド合成酵素(Schlinger et al. Endocrinology 1989))に特に着目して、関連した一連の遺伝子発現との相関を検討した。また環境の影響を受けやすいと考えられる視床下部ー下垂体ー性腺軸を構成する神経内分泌経路や視床下部ー下垂体ー副腎系を構成する神経内分泌経路に存在する遺伝子群に関しても同様に相関を検討した。その結果、いくつかの神経ペプチドの遺伝子に攻撃性の異なる2系統で異なる発現量を示すものを見出すことができた。予定していた遺伝子発現解析を行うことができ、また攻撃性に関連すると考えられる遺伝子発現変化も見出すことができた。今年度見出した攻撃行動に伴って変化すると考えらえる遺伝子情報に基づき、さらにその遺伝子がどのような働きを示すかなど詳細解析を行っていく。遺伝子発現解析に係る経費のうち、今年度基盤的な研究方法の開発を行い、その成果を応用して次年度に一括して行うことでより効率的かつハイスループットに実施できる可能性が高い研究内容があり、次年度使用させていただくことにした。
迅速なDNA多型解析システムの開発

本研究では、次世代シークエンサーやポータブル型DNAシークエンサーに対応した新たな情報解析技術を考案し、迅速なDNA多型解析システムを構築する。本研究の内容は、フィールドワークでの簡易的なDNA検査や生物種判定、災害時における迅速な身元判定、医療現場におけるDNA検査、実験試料におけるDNA汚染の検出等、様々な分野での活用に繋がると考えている。
ＮＩＭＡ関連キナーゼによる形態形成と環境応答の協調機構の解析

本研究では、植物のNIMA関連キナーゼ(NEK)に着目し、形態形成と環境応答の協調機構を解析した。本年度は以下の課題について研究を進めた。1シロイヌナズナNEK6の機能:nek6変異体の表現型の再検討から、NEK6が細胞伸長の促進と方向制御の両方に関わること、様々な器官の伸長に必要なことを示した。NEK6の発現誘導株と細胞内動態の解析から、NEK6が微小管の脱重合を引き起こすことがわかった。微小管脱重合の分子機構を明らかにするため、チューブリンのリン酸化部位を同定し、これらの部位のリン酸化が脱重合に関わることが示唆された。以上のことから、NEK6はチューブリンリン酸化を介して微小管を脱重合し、細胞伸長を制御することが明らかになった(論文準備中)。2シロイヌナズナNEKファミリーの機能:シロイヌナズナNEK1-7の機能解析を進めた。NEK4-7は維管束で発現しており、変異体の表現型からNEK6,7が維管束形成に必要であることがわかった。nek6やnek多重変異体の表現型から、NEKファミリーが細胞分裂に関与すること、葉や根などの器官伸長を制御することがわかった(論文投稿中)。3NEKのストレス応答における機能:nek6やnek多重変異体ではストレス応答遺伝子の発現が変化し、ストレス耐性が低下する。nek6変異体において発現が増加している遺伝子を見出した。また、アブシジン酸がnek6変異体に類似した突起形成を引き起こし、この過程に微小管脱重合が関わることが示された(論文投稿中)。3ゼニゴケNEKの機能解析:コケにはNEKが1つしかないため機能解析が容易で、NEKの進化を考える上でも重要である。ゼニゴケとヒメツリガネゴケからNEK遺伝子を単離した。ゼニゴケMpNEK1の発現パターンと遺伝子破壊株の表現型から、MpNEK1が細胞伸長を制御することが明らかになった。26年度が最終年度であるため、記入しない。植物は生育環境の変化を敏感に感じとり、形態形成に反映させるが、その分子機構の理解は未だ不十分である。本研究では、植物のNIMA関連キナーゼ(NEK)ファミリーに着目し、形態形成と環境応答の協調機構を明らかにする。1.シロイヌナズナNEKファミリーの機能解析:シロイヌナズナNEK1NEK7の発現パターン、多重変異体の表現型を解析した。シロイヌナズナNEKファミリーは分裂組織などで特徴的な発現パターンを示した。nek多重変異体では、細胞分裂や細胞列が乱れること、葉や根などの器官成長が欠損することがわかった。また、NEK6の発現を効率よく誘導できる株を新たに確立した。NEK6の誘導株では、チューブリンがリン酸化され、細胞の伸長などに顕著な欠損が見られた。また、NEK6によるチューブリンのリン酸化部位を同定した。2. NEKのストレス応答における機能:nek6やnek多重変異体ではストレス応答遺伝子の発現が低下し、ストレス耐性が低下することを示した。一方、nek6変異体で発現が増加するユニークな遺伝子郡を見出した。また、アブシジン酸がnek6変異体に類似した突起形成を引き起こし、この過程にアブシジン酸情報伝達経路や微小管制御因子が関わることが示された。3.コケNEKの機能解析:ゼニゴケとヒメツリガネゴケのNEK遺伝子をクローニングし、系統解析から、シロイヌナズナNEK6と最もよく似ていること、コケにはNEKが1つしかないことを示した。ゼニゴケMpNEK1過剰発現体の作出と解析を行い、MpNEK1が細胞分裂に関わることが示唆された。4. NEKと花成制御因子FT, TFL1の相互作用: NEKとFT, TFL1の結合解析を行った。また、nek ft, nek tfl1多重変異体を作出し、解析を進めた。