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中国古典文学における罪の意識についての研究

1曹植の詩には、同じ愁いの表現でも「憂」の字の使用が多く、「愁」とは意識的に使い分けている可能性があること、2曹植の詩賦にみえる「愁思」の語は、本来「失志」と結びつく語であったのが、「長門賦」以降は女性の愁いを詠む語に変質し、その意味での使用がほとんどになっていくこと、3「愁思」を含む「愁」を曹植は賦の題材としつつ、若干異なる用法によって、「失志」の内容に転換しえていること、すなわち、罪を得た身の曹植にとって、「愁」という題材は安全にものを言う(無罪の主張)仕掛けであった。古代中国の家族観では、子は両親のそばにいて孝を尽くすことが重んじられ、孝を強調しすぎるとそれに対置される「不孝」がおのずと意識され、やむを得ない状況で離ればなれになった場合でも、「不孝」が「罪の意識」に結びついているようである。近世の家族の別離を描く白話小説・戯曲作品では、その多くが母子の感情を描き、より根本的で普遍的な肉親間の情愛をバックボーンとしながら、「不孝」や「罪」の意識が物語や登場人物たちをつき動かしていると考えられる。先秦から漢代にかけて、祖先の行動が子孫の禍福に影響を及ぼすという考えが広く存在した。後漢以降、罪の意識が希薄になるのと並行して、出処の問題を遇不遇の問題とする。曹植は詩歌に「私の罪」をも詠み込んで、直接「罪」の語を用いない作品においても、いわれなき「罪」に苦悩する自己を暗示している。白話小説で、家族の離散は悲劇的に描かれ、再会の場面で息子は両親に謝罪して慰めあうが、元雑劇「合汗記」などは、離散と再会の場でも、笑いの仕掛けがちりばめられている。すでに考察を行った内容については、論文等によって公開する予定である。それと同時に、新たに気づいたいくつかの問題についても考察を進めていく予定である。すでに考察を行った内容については、論文等によって公表するとともに、平成29年度に開催するシンポジウムで発表する予定である。中国古典文学中国古典文学関係図書の購入を予定していたが、年度内に発行されなかったり、輸入に時間を要したりして、年度内に購入することができなかった。中国発行書籍を注文したが、年度内に納入されなかった。発注済みの外国図書は、大部分が次年度初めに入荷することがすでに明らかになっている。注文書籍はすでに発行されていて、平成27年度初めに納入される予定である。
タンデムマス・新生児マススクリーニングでのMenkes病スクリーニング法の構築

Menkes病患者を新生児マススクリーニングのろ紙血でスクリーニングできる方法を3種類検討した。タンデムマス法によるカテコラミン分析では、ろ紙血からの抽出物ではカテコラミンは検出できなかった。第2の方法としてろ紙血のメタロチオネインを測定した。本症患者3名とoccipital horn症候群1例では平均529ng/mLで対照の585ng/mLと差はなかった。Menkes病6例の新生児ろ紙血の3-Oメチルドーパ(3-OMD)は平均111ng/mLで対照88±27と相違はなかった。以上の結果から、今回検討した3つの方法では、新生児ろ紙血を用いてMenkes病をスクリーニングすることが出来なかった。Menkes病は銅輸送ATPase異常による先天性銅欠乏症で、重篤な神経障害を特徴とする予後不良な疾患である。治療はヒスチジン銅の皮下注射が行われるが、血液脳関門が未熟な新生児期に治療を開始出来た場合のみ神経障害を軽症化できる。早期治療開始を可能にすべく本症を新生児期に診断するための検査方法確立が本研究の目的である。本症では、銅依存酵素であるドーパミンβヒドロキシダーゼ活性が低下し、ドパミン(DA)からノルアドレナリン(NE)への変換が障害され、DAの代謝産物であるdihydroxyphenylacetic acid (DOPAC)が増加、NEの代謝産物であるdihydroxyphenylglycol (DHPG)が減少する。これらカテコールアミン代謝産物の血中濃度とその比から新生児期に本症の診断が可能であることが報告されている。新生児マススクリーニング(MS)では、生後早期にろ紙血を用いて、タンデムマスシステムで先天性代謝異常症のスクリーニングが行われている。我々は、ろ紙血検体で上述の4種類のカテコールアミンおよびカテコールアミン代謝産物を測定できるか検討した。測定機器はタンデム質量分析計であるLCMS-8050(SHIMADZU)を用い、すでに血漿中カテコラミン定量分析で確立されている条件で、健常成人血液から作成したろ紙血より測定した。ろ紙血からの血液抽出には、新生児MSで用いられているメタノール7:アセトン7:水2の抽出溶媒を用いた。しかし、ろ紙血から抽出した上清では、いずれのカテコールアミン代謝産物も検出されなかった。そこで、ろ紙血にDA、DHPG、NE、DOPACを4段階の異なる濃度で添加して測定したが(1無添加、2上述の順に5、10、1.0、40(nmol/l)、325、50、5、200(nmol/l)、450、100、10、400(nmol/l))、検出することはできなかった。今のところ、ろ紙血からカテコールアミンおよびその代謝産物を検出することは出来ておらず、測定条件の検討が必要である。昨年度は、健常成人血液から作成したろ紙血、およびDA、DHPG、NE、DOPACを添加したろ紙からのカテコールアミン代謝産物の検出を試み、いずれも検出されなかったことを報告した。そこで今年度は、カテコールアミンが酸性条件で安定性がよいことを考慮し、ギ酸を含む抽出溶媒へ変更して同様の検討を行った。タンデム質量分析計であるLCMS-8050(SHIMADZU)を用い、すなわち、0.1%ギ酸を含むメタノール・アセトン・水(7:7:2)、1%ギ酸を含むメタノール・アセトン・水(7:7:2)、0.1%ギ酸を含む精製水、1%ギ酸を含む精製水、を抽出溶媒として用いる条件下で検討したが、いずれのカテコールアミン代謝産物も検出されなかった。今のところ、測定条件変更後もろ紙血からカテコールアミン代謝産物を検出することは出来ておらず、カテコールアミン代謝産物測定以外の診断方法の検討も考慮する必要がある。Menkes病患者のろ紙血を用いて、3つの方法でスクリーニングを検討した。第1の方法はろ紙血のタンデンマス法によるカテコラミン分析である。しかし、感度上の問題でろ紙血ではカテコラミンを検出できなかった。第2の方法は、ろ紙血のメタロチオネイン(MT)分析である。MTは金属結合タンパク質で、血液にも存在し、血清MTはELISAキットで測定できる。Menkes病患者3名とoccipital horn症候群(OHS)1名のろ紙血のMTをキットを用いて測定した。

結果:3名のMenkes患者およびOHS1名の血清MTは、68, 90, 1141, 120であり、対照の44と50に比べて高かった。しかし、ろ紙血MT (ng/mL)は、402, 586, 652、477ng/mLで対照の585ng/mLと有意差はなく、ろ紙血は血清に比べて著明に高値であった。その理由として、MTは血球に多く含まれているためと考えられた。また、ろ紙血を用いた本方法ではMenkes病をスクリーニング出来ないことが判明した。最後に検討した方法は、3-Oメチルドーパ(3-OMD)分析である。3OMDはドーパの代謝物である。芳香族アミノ酸デカルボキシダーゼ欠損症では高値になり、新生児マススクリーニングでスクリーニングされる。Menkes病患者では、ドパミンからノルアドレナリンの代謝を司るドパミンβヒドロキシダーゼ活性が低下していることから、ドパミン、ドーパおよび3-OMDが上昇していると推定された。結果:6例のMenkes病患者の新生児ろ紙血の3-OMDは110,121,93, 205, 100, 40 ng/mLであった。報告の基準値0259と比較すると、基準と有意な差は見られなかった。すなわち、新生児マススクリーニングろ紙血の3OMDもMenkes病のスクリーニングには使えないことがわかった。Menkes病患者を新生児マススクリーニングのろ紙血でスクリーニングできる方法を3種類検討した。タンデムマス法によるカテコラミン分析では、ろ紙血からの抽出物ではカテコラミンは検出できなかった。第2の方法としてろ紙血のメタロチオネインを測定した。本症患者3名とoccipital horn症候群1例では平均529ng/mLで対照の585ng/mLと差はなかった。Menkes病6例の新生児ろ紙血の3-Oメチルドーパ(3-OMD)は平均111ng/mLで対照88±27と相違はなかった。以上の結果から、今回検討した3つの方法では、新生児ろ紙血を用いてMenkes病をスクリーニングすることが出来なかった。現在の新生児MSで使用されている抽出溶媒では検出できなかったため、今後は、カテコールアミンが酸性条件で安定性がよいことを考慮し、ギ酸を加えた溶媒で抽出し、検討を進める予定である。現在、0.1%ギ酸を含むメタノール・アセトン・水(7:7:2)、1%ギ酸を含むメタノール・アセトン・水(7:7:2)、0.1%ギ酸を含む精製水、1%ギ酸を含む精製水、の抽出溶媒での検討を準備中である。現在の新生児MSで使用されている抽出溶媒、およびギ酸を含む酸性の抽出溶媒でも検出できなかった。引き続きカテコールアミン代謝産物条件の変更を検討するとともに、他の診断方法としてメタロチオネイン測定を考慮している。メタロチオネインは金属と結合する蛋白で、4種類のアイソフォームがあるが、その1と2の血中濃度比がMenkes病で増加することが報告されている。今後メタロチオネインをろ紙血で測定できるかどうかについても検討を進める。小児科当初購入予定であった消耗品は在庫を使用して進めることができたため。旅費、学会発表は今年度に使用予定のため。実験が進んでおらず、学会発表ができなかったため。人件費は29年度に使用予定のため。
有害金属の発達神経毒性におけるMARCKSタンパク質の関与とその役割

有害金属による健康被害は近年においても国際的な懸念事項であり、特に脳の発達期における暴露は中枢神経系疾患のリスクファクターとなることが示唆されている。本研究では、分化誘導した培養神経細胞およびラット新生仔暴露モデルを用いて、有害金属の毒性作用および中枢神経系の発達に必須のタンパク質であるMARCKSの関与とその制御機構について検討を行い、有害金属(ヒ素・鉛・水銀・カドミウム)による発達神経毒性作用の科学的背景を解明することを目的とする。
下水処理水の受容水域における指標微生物の挙動と生態系への影響評価

近年、下水処理手法については、多くの新しい手法が開発されてきており、下水処理において、定められた排水基準を満足させるような下水処理法を選択することは比較的容易になってきている。しかしながら、その選択には、下水処理放流水がその受容水域の水質や生態系にどのような影響を及ぼすかという観点が考慮されていない。下水処理水が将来の有力な水資源となる可能性を有することを考えると、下水処理放流水の排出基準の設定には下水処理水がその受容水域の水質や生態系にどのような影響を及ぼすかという点も考慮されるべきである。そこで、本研究では下水処理水がその受容河川の水質や生態系にどのような影響を及ぼすかを指標微生物を用いて検討を行った。下水処理放流水中に含まれる残留塩素は受容河川水中の大腸菌群数および腸球菌群数に影響を与え、放流口直後においては両細菌群数は著しく減少した。その後、流下するにつれて腸球菌群数は継続的に減少したが、大腸菌群数はほとんど減少せず抵抗性を示した。また、両細菌群数の統計的分布特性も大きな影響を受け、分布が正規分布を示さずに他の頻度分布特性へ変化することが明らかになった。底生動物の調査結果より、下水処理水の影響を受けていない状態に対し、下水処理水の影響を受けている地点では種数の明らかな減少が認められ、一方、現存量においては大量に出現したChironomidae(R-type)の影響で大きな値となった。底生動物の群集構造を検討するためのDI(N)とDI(W)の値は、群集構造の多様性、複雑性が増すほど高い値を示すが、下水処理水の影響を受ける地点においては小さな値となり多様度は小さくなった。底生動物相の類似性を調べるための共通種による類似度指数であるSimpson指数、正宗相関率およびJaccard指数の値から、下水処理水の影響を受けていない状態の地点間、下水処理水の影響を受けている地点間ではそれぞれ類似性が高くなり、逆に下水処理水の影響を受けていない状態の地点と下水処理水の影響を受けている地点とでは類似性が低くなった。これらの底生動物相に関する結果から、下水処理水の受容河川では、底生動物の群集構造が自然状態の河川より単純になり種数も減少する。しかし、その環境に適応できる種(Chironomidae(R-type))が大量に出現し、現存量がかなり増加することが明らかになった。
肺胞II型上皮細胞機能にもとづく摘出肺保存条件の検討

ラット摘出肺を用いたFluid-filled lung modelにより測定される肺胞水分クリアランスを指標として、これまでの摘出肺保存条件を検討した。その結果、これまでの研究から以下のことが明らかとなった。(1)われわれが開発したEP4液と従来用いられているEuro-Collins液で24時間保存を行った場合、肺胞水分クリアランスは前者で有意に良好に維持されていた。(2)テルブタリン刺激試験ではEP4液を用いたものでもNa-K-ATPaseの機能亢進は減弱し、酵素レベルでは肺胞上皮細胞機能は低下していた。(3)デキサメタゾン投与実験で、投与72時間後にNa+/K+-ATPaseの酵素活性が増加することが判明し、移植後の肺水腫の防止に副腎皮質ホルモンの有用性が酵素レベルで明らかにされた。(4)炎症性サイトカインの産生という観点から、EP4液を用いたものではEuro-Collins液を用いたものよりもインターロイキン8の産生が低く、再灌流傷害が軽い可能性が培養肺胞上皮細胞による保存のシミュレーションで明らかとなった。また、副腎皮質ホルモンがインターロイキン8の産生を抑制することも判明した。以上の結果から、これまでイヌやサルを用いた実験において示されてきたEP4液の肺保存液としての優位性が肺胞上皮細胞機能の温存という全く別の観点からも支持されたことになる。さらに臓器保護効果の向上を期待して添加している副腎皮質ホルモン剤の有用性も本研究の結果によって裏打ちされた。これらの基礎的な知見をもとにして、より細かく肺保存条件を改良していく予定である。[方法]II型肺胞上皮細胞機能はこれまで報告してきた肺胞水分クリアランスの測定により行い、保存時間は24時間、保存温度は4°C、保存液はEuro-Collins(EC)液とわれわれがこれまでその有効性を報告してきたEp4液とした。なお、保存しないで測定したものを対照とした。また、肺胞上皮細胞による水分の能動輸送に深く関与しているNa-Kポンプの機能を評価するために、β刺激によるNa-K-ATPaseの機能亢進の有無を各実験群で計測した。β刺激剤としてはテルブタリンを用いた。[結果] 24時間保存後の肺胞水分クリアランスは、対照に比してEp4液で保存したものではその低下は認められず、EC液で保存した場合は有意に低下した。しかし、テルブタリンの効果を見ると、対照群では見られたテルブタリンによる有意な肺胞水分クリアランスの増加はEp4、ECいずれの保存液を用いて24時間保存した場合でも認められなくなることがわかった。[考察と結論]肺胞上皮細胞の形態学的観察従来われわれが報告してきたEp4液の有効性が、肺胞上皮機能という側面から確認された。この結果からも肺保存においては細胞内液組成よりも細胞外液組成の保存液の方がより安全で有効であることがわかった。しかし、酵素レベルで見た場合、Ep4液を用いた保存でもその機能低下は明らかであり、このようなより感度の高い評価法を用いて保存条件を細かくチューニングしていくことが今後は必要であろう。ラット肺保存実験モデルを用いて、これまで肺胞上皮のイオントランスポート機構が肺保存の過程で受ける変化を検討し、これが、保存時間と保存液の組成により影響を受けることを明らかにし、肺胞水分吸収能の観点から、当研究室で開発された細胞外液類似のEP4液が、今日欧米で広く臨床応用されている細胞内液類似のEuro-ColIins液(EC)よりも優れていることを示す成績を得た。さらに、その原因を肺胞上皮のイオントランスポートに重要なNa+/K+-AIPaseに着目して検討し、肺保存の過程における肺胞水分吸収能の低下が、Na+/K+-ATPaseの酵素活性の変化と密接に関連していることを明らかにした。

本年度の研究では、肺保存の過程における肺胞水分吸収能の低下を防止するための手段を模索するため、グルココルチコイドによる肺胞上皮のイオントランスポート機構の活性化の可能性についてラットのモデルにおいて検討した。その結果、デキサメタゾン0.2mg/kgを皮下投与すると72時間後にNa+/K+-ATPascの酵素活性が増加し、肺胞水分吸収が有意に増強されることを見いだした。さらに、肺胞内水分貯留による低酸素血症からの回復も有意に早いことも明らかとなった。以上の成績は、肺胞上皮のイオントランスポート機構をステロイドホルモンを用いて活性化できる可能性を示唆しており、肺保存時にステロイドを用いることの妥当性を明らかにしたといえる。現在は、ヒト胎児から成人までの発達過程における肺のグルココルチコイドレセプター、ミネラロコルチコイドレセプターKント、およびその制御に重要な1lb-hydroxysteroid dehydrogenase type 2の局在検討中である.。・3年間のラット肺保存実験モデルを用いた基礎的な研究から、肺胞上皮細胞のイオントランスポート機構が保存時間と保存液の組成により影響を受けることを明らかにしてきた。すなわち、肺胞水分吸収能の観点から、当研究室で開発された細胞外液類似のEP4液が、今日欧米で広く臨床応用されている細胞内液類似のEuro-Collins液(EC)よりも優れていることを示す成績を得た。さらに肺保存の過程における肺胞水分吸収能の低下を防止するための手段を模索するため、グルココルチコイドによる肺胞上皮のイオントランスポート機構の活性化の可能性について同じくラット肺保存実験モデルを用いてその有用性を示した。本年度は培養肺胞上皮細胞を用いて保存環境をシミュレートし、保存液や副腎皮質ホルモンが与える影響を炎性サイトカインの産生という観点から検討した。検討に際しては再灌流傷害において重要な役割を担っていると考えられている過酸化物として過酸化水素を用い、保存から通常の環境に復帰した後に投与された過酸化水素がインターロイキン8の産生に及ぼす影響について保存液を変えて検討した。その結果、EP4液で保存したものでは過酸化水素の投与によるインターロイキン8の産生が最も低く、さらに通常の培養液で保存した場合も副腎皮質ホルモンの投与によってEP4液で保存した場合と同程度にインターロイキン8の産生が抑制されていた。以上の結果から、保存液としてのEP4液の有用性が裏付けられるとともに、副腎皮質ホルモンが肺胞上皮細胞機能の温存に有用であることが示された、といえる。
昆虫におけるNーアシルドーパアミン誘導体の種類と働らき

1.パピリオクロ-ムの構造と合成に関する研究.(1)IIa,IIbに関して,そのNーβーアラニルドーパアミン(NBAD)のβ炭素のまわりの立体構造を調べ,分解産物のNーβーアラニルノルエピネフリン(NBANE)のCD曲線がIIa,IIbともにプラスにかたよっていることを明らかにした。(2)IIa,IIbの生合成に関して,アゲハ蛹期間中のNBAD,Nーアセチルドーパアミン(NADA)の量的変化を調べ,NADAグルコシドを確認し,またNBAD合成活性が翅で高いことを明らかにした。(3)〓ーキヌレニンとNBADとをチロジナ-ゼとインキュベイトすると,パピリオクロ-ムIIa,IIbが合成されること,およびこのようにして合成されたIIa,IIbは天然のものと同様の光学活性を有することを確認した。(4)NBADおよびNBANEにチロジナ-ゼを作用させ,その際の吸収スペクトルの変化と酸素消費の測定,サイクリックボルタンメトリ分析を行った。その結果,NBAD,NBANEともに黒色メラニンを形成せず,橙色になることを確認した。これを蝶のA型赤色色素と比較した。2.クチクラタンパク質の架橋構造に関する研究。(1)キイロショウジョウバエのy,b,eの三つの突然変異系統の囲蛹殼のクチクラを用いて,その4%塩酸メタノ-ル抽出分画が架橋構造の研究に適した材料であることをβーアラニン,ケトカテコ-ル,酢酸の定量から確認した。この抽出分画において,βーアラニンとケトカテコ-ルとの量的に逆の関係,またβーアラニンと酢酸との量的に逆の関係が確認された。(2)アゲハの蛹期間中のβーアラニンを遊離型,70%エタノ-ル可溶性結合型,70%エタノ-ル不溶性塩酸メタノ-ル可溶型,1NNaOH可溶型,NaOH不溶性残渣に分けて定量,合わせてグルコサミン,タンパク質も定量した。その結果,クチクラの前硬化状態ですでにβーアラニンが塩酸メタノ-ル分画に存在することが分った。当初の研究計画の線に沿って実験が行なわれている。1.ナミアゲハの蛹期間中のN-アセチルドーパアミンとN-β-アラニルドーパアミン(NBAD)の量的変化を詳細に調べ、キヌレニンとNBADとがそれぞれ遊離の形で翅又は鱗粉に入り、そこで両者が結合してパピリオクロームIIが形成されることが分って来た(その結果は、札幌での動物学会大会で発表。現在論文作成中である)。2.パピリオクロームIIの酵素的合成を、キヌレニン、NBAD、チロジナーゼをインキュベートすることによって研究中である。確かにフェノールオキシダーゼによりキヌレニンとNBADが結合することが分った(この結果は63年度日本トリプトファン研究会で発表)。3.キアゲハの翅の濃黄色色素については、その化学的性質が詳細に調べられ、これがパピリオクロームIIと同様キヌレニンとNBADより成ることを明らかにした(その結果は、札幌での動物学会で発表。現在、Comp.Biochem.Physiol.に投稿中)。

4.ナミアゲハの蛹期間中の不溶性結合型β-アラニンについては、後翅赤斑出現期より漸次増加すること、そしてこの時期にはグルコサミンがすでに多量に体壁および翅に入り込んでいることを明らかにした。キチンはクチクラの硬化とは関係なく、その以前よりクチクラに入っていると考えられる。5.キイロショウジョウバエの囲蛹殻クチクラにおけるタンパク質の硬化については、ずっとy,b,eを使って調べており、yでβ-アラニンのアミノ基は45%しか遊離しておらず、残りは何らかの結合をしていることが分った。またyとeを比較すると、β-硬化の割合がeで多いことを更に正確に確認しており、一方キチンはyとeでは量的に差のないことも確かめた。6.ベニモンアゲハの赤色色素の研究については、N-β-アラニルノルエピネフリンの合成を引続き行なっている。昆虫のN-アシルド-パアミンに関して、大きく分けて二つの分野で研究が進められた。その一つはパピリオクロ-ムに関するもので、他の一つはキイロショウジョウバエの囲蛹殻クチクラのクロスリンクに関するものである。前者のパピリオクロ-ムについては、次の三つについて研究が行なわれた。(1)ナミアゲハの蛹期間中のド-パアミン、N-β-アラニルド-パアミン(NBAD)およびN-アセチルド-パアミン(NADA)の存在様式について調らべ、NADAグルコンドの増減を明らかにし、またパピリオクロ-ムIIの前駆物質はNBADであることを確実にした。(2)L-キヌレニンとNBADとにマッシュル-ムチロジナ-ゼを働らかせるとパピリオクロ-ムIIが酵素的に合成されることを明らかにした。そして天然のパピリオクロ-ムIIa、IIbと酵素的に合成されたIIa、IIbを比較検討した。(3)パピリオクロ-ムIIの立体構造を解明するために、その分解様式を詳細に調らべている。パピリオクロ-ムIIはその水溶液を80°C、30分加熱するとL-キヌレニンとN-β-アラニルノルエピネフリンとに分解し、後者はさらに1NHCl、100°C、60分でβ-アラニンと(土)ノルエピネフリンとに分解することを確実にした。次に第2のテ-マであるクチクラの問題については、クチクラタンパク質の架橋剤としてのNBADとNADAの結合様式を解明するために、その材料としてキイロショウジョウバエのyellowとebonyの囲蛹殻の4%塩酸メタノ-ル抽出分画が適していることを確実にした。この分画は、クチクラの加水分解によるβ-アラニンとケトカチコ-ルの放出に関して、もとのクチクラと同様の性質を有している。β-アラニンではy》eであり、ケトカテコ-ルではy<eである。また放出酢酸の量はy<eである。さらにyで、この分画中のβ-アラニンの末端NH_2の約55%は他に結合していることを明らかにした。以上の研究はさらに続行中である。昆虫のNーアシルドーパアミンに関して,大きく分けて二つの分野で研究が進められた。その一つはパピリオクロ-ムに関するもので,他の一つはクチクラタンパク貭の架橋構造に関するものである。前者のパピリオクロ-ムについては,次の三つについて研究がおこなわれた。(1)パピリオクロ-ムIIa,IIbの立体構造について,IIaとIIbは両者とも,その水溶液を80°Cで30分加熱するとLーキヌレニンとNーβーアラニルノルエピネフリンとに分解するが,後者の円二色性スペクトルを取ると,IIaからのものもIIbからのものも共に+にかたよっていることが分った。(2)LーキヌレニンとNーβーアラニルドーパアミンとをフェノ-ルオキシダ-ゼとインキュベイトするとパピリオクロ-ムIIa,IIbが酵素的に合成されるが,このIIa,IIbも天然のものと同様の光学活性を有することが確認された。(3)ナミアゲハ
亜寒帯汽水域の二次生産は何故高いのか?ー底生系の卓越とその維持機構の解明ー

アサリは全生活史を通して、二次生産は温度に依存していることを明らかにした。密度および生物量が安定し、個体群が多くのコホートによって形成されるため、高い二次生産量を記録した。そのため、生産が活発化する夏季においては、餌となる底生微細藻の現存量を大きく減少させることが確認された。その一方で、生物活性の上昇に伴う、栄養塩類の再生産によって、底生微細藻増殖速度を増加させる可能性が示された。定量的推定によると、アサリにより再生産された栄養塩の多くが底生微細藻によって利用されている可能性が示され、二枚貝による栄養塩の再生産過程と底生微細藻による栄養塩取り込み過程を浮き彫りにした。亜寒帯汽水湖の代表例として、北海道東部に位置する火散布沼にて、潮位、流速などの物理環境を調査するとともに、水温、塩分、栄養塩、クロロフィルa濃度の時空間分布を詳しく調査し、火散布沼の水理構造と、その生物過程の基盤となる栄養塩の起源について考察した。一日に供給される淡水量は沼容積の0.98.0%であったのに対し、一潮汐周期にて沼に流入する外海水は沼容積の3459%であったことから、火散布沼は淡水供給よりも潮汐による外海水の流出入の方が卓越した系であることが確認できた。また、試料中の窒素/リン(N/P)比、ケイ素/窒素(Si/N)比は、火散布沼はNが制限的に作用しやすい環境であることを示していた。塩分と栄養塩類の相関関係、および潮汐による栄養塩類の流出入フラックスから、火散布沼への無機態Nの供給源として外海水及び沼内生物による再生産の重要性が示唆された。河川(淡水)からの栄養塩供給が汽水域の基礎生産を支えるという報告例がこれまで多数なされていたが、淡水供給量が小さい火散布沼のような汽水域においては、その基礎生産は外海水や再生産によって供給される栄養塩に支えられていることを実証的に明らかにした。また、同時に沼内の基礎生産者から二次消費者までの安定同位体比を詳細に比較して、空間的に見て基礎生産者とその消費者の関係が、きわめて整合的である事を見いだした。火散布沼では、周年水中の植物プランクトンに比べて、堆積物表層に生息する底生微細藻類の現存量がきわめて大きい事を示し、主要漁獲種であるアサリは、潮汐によって再懸濁するこれらの微細藻類を餌資源として積極的に利用している事も、安定同位体比の解析を行う事により明らかにした。本研究では、火散布沼における底生微細藻群集の塩分・温度変化に対する応答、比生長速渡から潜在的な生産能力の推定を試みた。具体的には、泥表面から5mmに含まれる微細藻類を試料とし、塩分・温度に対する反応を別々の実験系にて調査した。塩分依存性についてみると、塩分変化に対する応答は各ステーション内・間において明瞭な差はみることが出来なかった。しかし塩分22.10と比較的低塩分であっても他と遜色ない生産が行われることがわかった。また底生微細藻類の生産には塩分より水温のほうが、影響が大きいことが示唆された。温度依存性と比生長速度についてみると、ほとんどの培養条件でクロロフィル極大に達した後、急速に減少した。高温度ほど生長速度が速く、クロロフィル極大値が大きくなる傾向がみられた。クロロフィル極大値は25°Cでそれぞれ沼口で385mg/m^2、中央で249mg/m^2、最奥部で211mg/m^2となった。これらの数値は現場海域の各ステーションにおいて同程度の水温値における堆積物表層のChl-a量とほぼ同程度であり、室内実験で得られたChl-a最大収量、またその時の比生長速度を用いた現場海域における潜在的な生産能力の推定に役立つものと考えられた。クロロフィル極大に達するまでの比生長速度は、沼中央部の25°Cで最大のμ=1.21(day)であり、最奥部の5°C,10°Cで最小となりμ=0.29(day)であった。また15°Cを境に高温度(25°C,20°C)と低温度(10°C,5°C)では生長速度に差がみられた。これは種組成の違いによるものとも考えられた。一般に比生長速度は適正な水温以上または以下になるにつれ減衰していく。しかし本研究の温度帯で得られた比生長速度には減衰傾向はみられなかった。このことから、火散布沼における底生微細藻群集はより高水温に対する適応力を持っていることが示唆された。

アサリの浮遊幼生は、秋季に出現し,干潟直上で最大密度(14,400 inds./m2)に達し、数週間で着底期に入った。この時、浮遊幼生の分布には物理的作用と生物的要因の両方が重要であり、餌としては、植物プランクトン、その細胞外代謝物などである可能性が示唆された。着底後の死亡率については低く、安定期に入ると死亡率が低下することから、産卵サイズまで到達し易いことが示された。このような過程を経て、アサリの生物量の年間平均は8,700 gWW/m2という、高い生物量が維持されていた。密度および生物量が安定し、個体群が多くのコホートによって形成されるため、高い二次生産量を記録した。そのため、二次生産が活発化する夏季においては、底生珪藻の現存量を減少させていた。その一方で、生物活性の上昇に伴う、栄養塩類の再生産によって、底生珪藻の分裂速度を増加させていた。定量的推定によると、アサリにより再生産された栄養塩の5292%が底生珪藻によって利用されている可能性が示され、埋在性二枚貝類による栄養塩類の再生産過程と底生珪藻による栄養塩類の取り込み過程を浮き彫りにした。このように、夏季においては沼内部における栄養塩の再生産過程が卓越することにより、その生物生産が維持されていることが示された。夏季においては表層水が暖められることにより、海水が成層構造を発達させるために表層水中の栄養塩類は枯渇状態に近い。そのため、冬季、外海水の鉛直混合が卓越することにより、沼内に高濃度の栄養塩が供給されることが明らかになった。この時期は、水温が0°Cを下回る環境であるにも関わらず,低温適応した底生珪藻が栄養塩を取り込む可能性が示唆された。年間の親生物元素の収支に着目すると、この冬季における底生珪藻による取り込みが重要な位置を占めることが示された。浮遊生態系と底生生態系のカップリングが、濃密である事が生産性の高さを保証している可能性が高いが、これまでの研究に置いて、基礎生産者やその消費者である底生動物群集の生物量の時空間分布と、生産性の推定をおおよそもてメルコとができた。これらの情報を総合する事により、亜寒帯汽水域における底生系の卓越が持続する理由を明らかに出来る。24年度が最終年度であるため、記入しない。汽水域における物質収支の定量化と他の生態系での同様の知見を比較し、他の生態系と比べてどのように位置づけられるかを明らかにする。これらの結果と、現場の様々な環境因子や生物量の観測値より物質循環過程を定量的に明らかにすることにより、汽水域の持つ生物生産構造の理解を深めるとともに、汽水域環境制御法の開発を指向する。
新しい食用水産動物としてのミネフジツボの増養殖に関する基礎的研究

1.付着水深および天然海域での成長:陸奥湾青森沖定点での1994、1995年の付着板調査の結果、水深10mで最も付着が多い傾向が認められた。陸奥湾における成長を5、10、20mの水深で1994年5月から18ヶ月追跡調査した結果、10、20mで殻底長径がほぼ同じ37mmに成長したが、水深5mではこれよりやや成長が劣った。越喜来湾に移植した当歳フジツボは、1年後には殻底長径(SL)が25mm、2年後には32mmに達した。1歳群(約34mm)は1年後にはSL39mm、2年後には42mmに達した。2.成長に及ぼす水温の影響:SLが約7mmの当歳フジツボは、25、20、15、10°Cの水温の順に成長速度が増大した。25°Cでは180日後には生残率が15%に低下した。SL23mmの1歳フジツボでも同様に低水温ほど成長が速かった。10、15°Cでは600日後でも生残率が95%以上であったが、20°Cでは45%に低下した。本種には15°C以下が適していると判断された。3.陸奥湾における幼生の出現:表層プランクトン調査では、キプリス幼生は1月中旬にはすでに出現し、3月にはほとんど採集されなかった。キプリス幼生は西湾よりも東湾に多く出現する傾向が認められた。4.幼生の飼育と摂餌速度:幼生の餌料には珪藻のAsterionella japonicaとThalassiosira nordenskioeldiigが適していた。飼育水温は1012°C、飼育密度は12個体/lが適当で、キプリス幼生までの所要発生日数は最低18日であった。明および暗条件での飼育結果に差異はみられなかった。2l規模以下での飼育には通気攪拌が適していたが、20l規模の飼育ではプロペラ攪拌が適していた。A.japonicaを与えた幼生の植食速度は発生段階とともに増加し、II期では300細胞/個体/時間、最も植食速度が大きかったVI期では1700細胞/個体/時間を摂餌した。付着基質:人工基質に対する付着選択性を調べた結果、ゴム、塩化ビニルに付着が認められ、廃タイヤ再利用の可能性が考えられた。1.陸奥湾における生殖サイクルの解明:1994年6月から経月的に入手した標本の生殖巣について組織観察を行っている。現在までの結果では、卵巣は9月から発達を開始し、11月末頃には卵巣に成熟卵と退化した卵が認められ、この時期から外套腔に受精卵塊の抱卵が認められるようになる。抱卵個体は2月まで認められた。

2.好適水温と成長速度:当歳フジツボをアルテミア孵化幼生を餌料として10、15、20、25°Cの水温で水槽飼育した結果、25°Cでは6カ月後には約90%が死亡した。その他の水温では、低水温ほど成長が速く、18カ月後には10°Cが殻底長径が平均28mmに達したのに対し、20°Cでは平均25mmであった。3.孵化幼生の大量飼育に関する基礎研究:1994年末に孵化した幼生を用い、幼生の飼育餌料と発生速度について検討を行った。その結果、121の小規模飼育の場合、キプリス幼生への変態率が高い餌料藻種および発生速度(キプリスへの最短到達日)は、幼生密度が1個体/mlでは、Asterionellajaponica:83%:19日、Thalassiosira nordenskioeldii:11%18日、Skeletonema costatum:0.5%:25日となり、Chaetoceros calcitransでは幼生がVI期に達せずに死亡した。以上の結果から、本種幼生の餌料としてはA.japonicaまたはT.nordenskioeldiiが適していることが明らかとなった。4.付着期幼生の付着条件の検討:陸奥湾にウェブロン(耐水紙)、塩化ビニル、シリコン、ゴム、FRP,ポリエステルおよびテフロンの付着試験板を垂下した結果、塩化ビニル板、ゴム板にだけ付着が認められ、その他の付着板には付着はみられなかった。光、塩分濃度、水温、などの条件については現在実験中である。5.生活史制御を目的とした繁殖条件の検討:低水温経験時間の異なる3つの実験条件下で10カ月間飼育を行い、幼生の孵化の生起を継続して観察した。その結果、本条件下では幼生の孵化は認められなかったが、1995年1月に取りあげた個体には過塾受精卵が認められた。今後、水温条件について再検討し、再実験を行う予定である。1.Asterionella japonicaを用いて20lの規模の幼生の大量飼育を行ったところ、幼生密度1個体/ml、プロペラ撹拌法により初期幼生数の約22%がキプリス幼生に変態し、3900個体のキプリス幼生が得られた。最短発生日数は22日であった。Skeletonema costatumとA.japonicaを与えた幼生の植食速度(cells/h)は発生段階とともに増加した。ただし、6日齢のVI期幼生は1日齢のそれに較べ4倍ちかく植食速度が減少し、IV期と同様の値となった。S. costatumとA. japonicaでは植食速度は異なったが、同化率はほぼ同様の値を示し、各発生段階で必要とされる炭素量は一定と考えられた。2.水温を自然条件より早めて変化させ、ペニス長の変化を調べるとともに繁殖活動の生起を調べたところ、ペニス長は水温の低下とともに増加する傾向が認められたが、幼生の孵化時期を天然に較べ早めることはできなかった。今後、日長などを考慮する必要があると思われる。3.幼生の分布と出現時期を調べたところ、キプリス幼生は1月中旬にはすでに出現しており、3月にはほとんどみられなかった。また、西湾よりも東湾にキプリス幼生が多く出現している傾向が認められた。幼生の付着水深を調べた結果、水深10mで最も付着が多い傾向が認められた。今後鉛直曳きによる幼生調査を行うことにより詳細な幼生の分布や付着時期を明らかにできるものと考えられた。4.陸奥湾と越喜来湾における当歳フジツボの成長を比較すると、陸奥湾のフジツボで成長速度が早い傾向がみられた。越喜来湾の場合、殻底長径が40mmに達するのに約3年を要した。10、15、20°Cの異なる水温条件下において1歳フジツボの成長を追跡した結果、10°Cのフジツボで成長、生残率ともに最も優れ、20°Cでは600日後には生残率は約50%に低下した。
格子上の場の理論による標準理論の研究

格子QCDを用いたハドコン行列要素の計算をCP非保存の研究に応用した。重いクォークの物理に対しては、我々筑波大グループによって提唱された重いクォークの相対論的定式化の有効性を数値的に確認し、アップ、ダウン、ストレンジクォークの真空偏極効果を取り入れたより現実的な計算に移行した。中性子電気双極子能率に関しては、定電場法を用いてクェンチ近似とアップ、ダウンの真空偏極効果を取り入れた計算を行い両者を比較した。強い相互作用における最も特徴的な現象はクォーク・グルーオンの閉じ込めである。これは非摂動的な効果であり、量子色力学(QCD)を用いてクォーク間の相互作用を摂動的に計算しても閉じ込めの効果を定量的に正しく評価することは困難である。そこで強い相互作用の非摂動的研究を行うために格子QCDが必要となる。1981年初めて格子QCDによってハドロン質量が計算されてから今日に至るまで、様々な物理量に対して格子QCDによる計算が試みられ我々の強い相互作用に対する理解は着実に深まってきている。特に近年は様々なハドロン行列要素の計算が試みられ、その計算手法も確立しつつある。そこで格子QCDを用いたハドロン行列要素の計算によってCP非保存の研究を行うことを考える。過去数十年間にわたり中性子電気双極子能率(NEDM)測定の実験か行われているが、未だその存在の確証は得られておらず、現時点での最も精密な上限値は2.9×10^0x(5E)-26e・cmである。この小さなNEDMの値は、θと呼はれる強い相互作用のCPの破れの度合いを表すパラメータか非常に小さいことを示唆しているが、なぜそれが小さいのかという問いに対する明確な解答はない。(実は、実験結果から得られるθの値にはCabibbo-小林-益川行列からの寄与も存在するが、それも含めてθの値が小さいことは不自然であると考えられている。)ここでNEDMの実験値からθの値を定量的に決めようとすれば、電磁カレントを中性子の状態で挟んだハドロン行列要素の形状因子を知らなければならない。今日までこの量はモデルを使って推測されていただけであるが、モデル依存性も大きく信頼できる評価方法とは言い難い。我々の目的はこのハドロン行列要素を格子QCDを用いてQCDの第一原理から計算することである。それによって、θパラメータの値をNEDMの実験結果から精密に決めることが初めて可能となる。我々の最終目標は3フレーバー(アップ、ダウン、ストレンジ)の動的クォークの効果を取り入れた中性子電気双極子能率の計算であるが、そのための第一ステップとして先ずクェンチ近似の範囲内で計算方法のテストを行った。具体的には、格子上に定電場を入れ、上向きスピンの中性子と下向きスピンの中性子のエネルギー差を求め、そこから電気双極子能率を求めることを試みた。この計算方法の主な利点は、(i)中性子の2点グリーン関数を計算するだけなので比較的小規模の計算で可能なこと、(ii)定電場の値を自由に変えることが出来るので電場に対する中性子の応答性を解析しやすいこと、が挙げられる。我々は有望なテスト結果を得ることが出来たので、次のステップとしてこの方法を2フレーバーの動的クォークの効果を取り入れた計算に応用することを考えている。過去数十年間にわたり中性子電気双極子能率(NEDM)測定の実験が行われているが、未だその存在の確証は得られておらず、現時点での最も精密な上限値は2.9×10^-26e・cmである。この小さなNEDMの値は、θと呼ばれる強い相互作用のCPの破れの度合いを表すパラメータが非常に小さいことを示唆しているが、なぜそれが小さいのかという問いに対する明確な解答はない。我々の最終目標は3フレーバー(アップ、ダウン、ストレンジ)の動的クォークの効果を取り入れた中性子電気双極子能率の計算である。そのための第一ステップとしてこれまでクェンチ近似の範囲内で計算方法のテストを行ってきたが、平成19年度は次のステップとして2フレーバーの動的クォークの効果を取り入れた計算を行なった。結果に関しては、クェンチ近似との差異が明確には確認できなかったが、これは2フレーバーの動的クォークの質量が重すぎたためだろうと考えている。現在論文にまとめ投稿中である。

過去数十年間にわたり中性子電気双極子能率(NEDM)測定の実験が行われているが、未だその存在の確証は得られておらず、現時点での最も精密な上限値は2.9×10-26e・cmである。この小さなNEDMの値は、θと呼ばれる強い相互作用のCPの破れの度合いを表すパラメータが非常に小さいことを示唆しているが、なぜそれが小さいのかという問いに対する明確な解答はない。(実は、実験結果から得られるθの値にはCabibbo-小林-益川行列からの寄与も存在するが、それも含めてθの値が小さいことは不自然であると考えられている。)ここでNEDMの実験値からθの値を定量的に決めようとすれば、電磁カレントを中性子の状態で挟んだハドロン行列要素の形状因子を知らなければならない。今日までこの量はモデルを使って推測されていただけであるが、モデル依存性も大きく信頼できる評価方法とは言い難い。我々の目的はこのハドロン行列要素を格子QCDを用いてQCDの第一原理から計算することである。それによって、θパラメータの値をNEDMの実験結果から精密に決めること力弐初めて可能となる。我々の最終目標は3フレーバー(アップ、ダウン、ストレンジ)の動的クォークの効果を取り入れた中性子電気双極子能率の計算である。そのための第一ステップとしてこれまでクェンチ近似の範囲内で計算方法のテストを行ってきた力弐、次のステジプとして2フレーバーの動的クォークの効果を取り入れた計算を行なった。結果に関しては、クェンチ近似との差異が明確には確認できなかったが、これは2フレーバーの動的クォークの質量が重すぎたためだろうと考えている。この結果は既に論文として発表済みである。また、本年度は3フレーバーの動的クォークの効果を取り入れた相対論的な重いクォーク作用に基づくチャームクォークシステムの研究に着手した。具体的な物理量としてクォーコニウムのスペクトラムやDメソンの崩壊定数、チャームクォーク質量などを計算中である。今後これらの計算をボトムクォークシステムに応用していく予定である。格子QCDを用いて弱い相互作用における重いハドロン(チャーム、ボトムクォークを含むハドロン)の行列要素を精度良く計算することはCPの破れの研究にとって非常に重要であるが、重いクォークを格子上で扱う場合はそれ固有の困難がある。問題は、現在の計算機性能では格子QCDのカットオフ、即ち格子間隔の逆数(1/a)は重いクォークの質量(m_Q)より小さく取らざる得ないことである。近年我々筑波大グループはm_Qが1/aよりも大きい条件下における格子上の重いクォークの相対論的定式化を提唱した。これによって、重いクォークを含んだ物理量の連続極限を考えることが可能となり、現在広く行われている非相対論的近似を超えた計算が実現できる。本年度は、昨年度に引き続き相対論的な重いクォークの作用を用いた計算を、PACS-CS Collaborationによって生成された2+1フレーバーの動的クォークを含む配位を用いて行った。この配位の格子間隔は0.09fm程度であり、物理的な空間格子サイズは約3fmである。また、アップ、ダウン、ストレンジクォークのうち、アップとダウンクォーク質量は近似的に縮退させている。本計算において特に着目した物理量はチャームクォークを含むHeavy-Lightメソン系のスペクトラムと崩壊定数である。
炎症性疾患の診断・生化学的解析を目的とするニトロ化アミノ酸とペプチド分析法の開発

昨年度までの研究で、還元応答型HPLC/ECD分析システムにイオン対分離モードを採用することで、3-ニトロチロシン(3-NT)を良好に検出できることを見い出し、さらに尿中3-NT分析のような実分析への応用を指向したサンプル前処理の基本的条件を確立していた。またさらに、還元応答型HPLC/ECD分析システムに組み込まれているカラムスイッチングシステムを3-NTのオンライン・プレ濃縮法として活用し、本分析システムを用いた3-NT分析法の大容量化および高感度化にも成功している。そこで本年度の研究では、還元応答型HPLC/ECD分析システムを用いたヒト尿試料中3-NT分析を試みた。Waters社製のODS系固相抽出カートリッジを用いた尿試料の前処理を採用し、処理済尿試料の500μLを還元応答型HPLC/ECD分析することで、尿中3-NTが尿中夾雑物に妨害されること無く良好に検出されることが明らかとなった。また本分析法を血漿中3-NT分析に適用したところ、タンパク質除去の条件を吟味せねばならないが、血中3-NTを検出できることも確認できた。ODS固相抽出カートリッジを用いた固相抽出法はごく一般的に用いられている前処理法であり操作も非常に簡便である。またオンライン溶存酸素除去-還元応答型HPLC/ECD分析システムは高選択的かつ高感度な自動化分析システムである。さらに本研究で本分析法の生体分析への適用性も確認されたことは意義深い。今後、本分析法を用いた3-NT分析が臨床診断等への分野で展開されることが期待される。還元応答型HPLC/ECD分析システムにイオン対分離モードを採用することで3-ニトロチロシン(3-NT)を良好に検出できることを見出した。また本分析システムに用いる最適なイオン対試薬は、1mM1-デカンスルホン酸ナトリウムであることが判明した。さらに本分析システムにおける3-NTの分析特性を検討したところ、定量濃度範囲は0.7550μM、検出下限濃度は0.5μMであった。ところが3-NTの血中濃度は健常人で0.030.05μMであり、疾患患者ではその数百倍にまで上昇すると考えられている。従って還元応答型HPLC/ECD分析システムを3-NTの生体分析に適用する場合、本分析法のさらなる高感度化が必要である。そこで還元応答型HPLC/ECD分析システムに組み込まれているカラムスイッチングシステムを3-NTのオンライン・プレ濃縮法として活用し、本分析システムを用いた3-NT分析法の大容量化および高感度化を試みた。その結果、10500μLの範囲内で分析試料容量を変化させることのできる容量可変型3-NT分析法の開発に成功した。また、改良した分析法の分析特性を検討したところ、定量濃度範囲は25nM50μM、検出下限範囲は10nMであり3-NTの分析濃度範囲を大幅に拡大させることに成功した。次にヒト尿試料を用いて、還元応答型HPLC/ECDシステムを用いた3-NT分析法の生体適合性を検討した結果、ヒト尿中に存在する多種・多量の夾雑物が本分析法を妨害することが明らかとなった。そこで逆相系充填剤が充填された固相抽出法を用いたヒト尿試料の前処理条件を検討したところ、Waters社およびPiatech社製の固相抽出カートリッジを用いた前処理を実施することで、本分析システムを用いた3-NTの尿試料分析法の開発に成功した。昨年度の研究で、還元応答型HPLC/ECD分析システムにイオン対分離モードを採用することで3-ニトロチロシン(3-NT)を良好に検出できることを既に見出していた。また本分析システムに用いる最適なイオン対試薬および本分析システムにおける3-NTの定量濃度範囲や検出下限濃度などの分析特性も既に明らかとしていた。さらに、還元応答型HPLC/ECD分析システムに組み込まれているカラムスイッチングシステムを3-NTのオンライン・プレ濃縮法として活用し、本分析システムを用いた3-NT分析法の大容量化および高感度化を試み、10500μLの範囲内で分析試料容量を変化させることのできる容量可変型3-NT分析法の開発にも成功していた。しかしながら、ヒト尿試料を用いて、還元応答型HPLC/ECDシステムを用いた3-NT分析法の生体適合性を検討した結果、ヒト尿中に存在する多種・多量の夾雑物が本分析法を妨害することが明らかとなった。そこで、逆相系充填剤が充填された固相抽出法を用いたヒト尿試料の前処理条件を検討したが、実分析のためには検討の余地を残した状態であった。そこで本年度では、実分析を志向した3-NTのヒト尿試料分析のためのサンプル前処理条件のさらに詳細な検討を実施した。その結果、Waters社およびPiatech社製の固相抽出カートリッジを用いたサンプル前処理において、まずまず満足できる処理条件が確立できた。また本処理条件を用いることでヒト尿試料中の3-NTを良好に分析できることを確認した。

そこで本年度の研究では、還元応答型HPLC/ECD分析システムを用いたヒト尿試料中3-NT分析を試みた。Waters社製のODS系固相抽出カートリッジを用いた尿試料の前処理を採用し、処理済尿試料の500μLを還元応答型HPLC/ECD分析することで、尿中3-NTが尿中夾雑物に妨害されること無く良好に検出されることが明らかとなった。また本分析法を血漿中3-NT分析に適用したところ、タンパク質除去の条件を吟味せねばならないが、血中3-NTを検出できることも確認できた。ODS固相抽出カートリッジを用いた固相抽出法はごく一般的に用いられている前処理法であり操作も非常に簡便である。またオンライン溶存酸素除去-還元応答型HPLC/ECD分析システムは高選択的かつ高感度な自動化分析システムである。さらに本研究で本分析法の生体分析への適用性も確認されたことは意義深い。今後、本分析法を用いた3-NT分析が臨床診断等への分野で展開されることが期待される。
断乳ケアのエビデンスに関する研究

断乳を意思決定した、分娩後6カ月を過ぎた母親をリクルートし、断乳期間に発症しやすい乳房痛や乳腺炎を予防するためのセルフケア手技である"おにぎり搾り"の有効性を実証することを目的とした研究である。現在、所属大学の研究倫理委員会に申請中であり、予備研究として下記の内容について取り組んでいる。おにぎり搾りの手技に関するプロトコールの作成については、乳頭刺激を回避するための方法として、乳体部の間質部全体を圧迫すること、乳管内のうっ滞した乳汁の排乳する方法として、乳管を軽くずらすように、乳房全体をおにぎりを搾るように左右にずらすように圧迫する。おにぎり搾りの手技による乳腺の変化に関する画像診断については、研究協力施設に依頼をし、助産師外来の乳房ケアの日程に合わせて超音波画像にておにぎり搾りによる乳腺への侵襲の影響について予備研究を実施している。特に、乳腺は深度が深いため、おにぎり搾りの支点をずらす支点を考慮しながら、プローベの装着方法について実験を行っている。さらに、すでに母乳哺乳を終了した母親の乳腺の退縮画像を撮影することで、退縮画像の解読を習得している。研究プロトコールの作成、研究倫理委員会への申請、おにぎり搾りの乳腺への影響に関する画像診断の検証までで、滞っている。研究協力施設での対象者のリクルートを行っていくこと、十分な研究説明を行い研究協力者との連携を深めて、縦断的なデータ収集を行う。断乳を意思決定した母親が母乳哺育を中断するときに生じやすい、乳房痛や乳腺炎の発症を予防するためのセルフケア手技の有効性を検証することを目的とした研究である。平成29年度は、所属大学の研究倫理審査委員会への申請を承認を得ること、そして、授乳前後(乳汁産生前後)の乳腺内にある腺房腔の状態を画像診断にて正確に判断できる診断技術をマスターするために、USB超音波診断装置を購入し、積極的に乳房外来に出向き、乳体部からのプローベの装着方法や画像診断方法の習得に取り組んでいる。【研究倫理審査委員会への申請】現在、研究倫理審査委員会の承認にむけて申請中である。学内の複数委員からのブラッシュアップを終え、2回目の申請にて審議待ちである。特に、断乳する女性のリクルート方法や乳汁うっ滞が生じた際の補償、催乳ホルモン濃度測定のための採血を実施することによる身体的侵襲への対応について、倫理的側面での被検者保護の視点についての意見が出されており修正中である。また、セルフケア技術として考案している"おにぎり搾り"の手技に関する根拠と、対照群としての用手搾乳方法についてプロトコールの作成を行っている。【乳腺の画像診断の技術的鍛錬】研究協力施設に依頼をし、助産師外来の乳房ケアの日程に合わせて、超音波画像の診断技術習得に向けて、訓練をしている。特に深度が深いためプローベの装着方法の適合度について検証を積み重ねており、今後、乳腺内の腺房腔の退縮状態について、乳腺の厚みの測定方法を確立していく。研究倫理審査委員会への申請において、多くの倫理的手続きが生じたこと、学内での申請前にブラッシュアップ委員のチェックに多くの時間を要したことが大きな理由である。また、乳腺の肥厚状態の測定と乳腺退縮との相関の根拠や超音波画像の診断技術の習得において、慎重にそのエビデンスを反復し確認作業を行っているためである。1研究倫理審査委員会からの承認を得ることとし、できるだけ早く多施設共同研究としての手続きを研究協力施設である産科クリニックに対応していく。2乳腺の肥厚測定計を確立する。3セルフケア手技と対照群の手技に関するプロトコールの作成を完成する研究協力施設での対象者のリクルートを行っていくこと、十分な研究説明を行い研究協力者との連携を深めて、縦断的なデータ収集を行う。今年度実施予定であった、研究協力施設でのデータ収集が実施できず次年度に繰り越したため。