hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
溺死診断のための全自動プランクトン検査装置の開発

自動的にプランクトン(珪藻)検査を行うためには,壊機法の自動化とプランクトン検索の自動化と2つのステップが必要になる.研究期間内において,特にプランクトンの自動検索システムの構築について成果を得ることができた.自動検索システムは,電動ステージを装着した顕微鏡観察装置を用い,市販の画像連結ソフトウエア(e-Tiling)によるプレパラート標本からのサンプル情報の取り込み,連結画像より画像計測・統計ソフトウエア(WinROOF)により行うものである.システム導入により,改善の余地はあるもののプレパラート標本をデジタルデータとして永久保存できることや検索が瞬時に行えることなどの効果が明らかになった.本研究は壊機法の自動化とプランクトン検索の自動化という大きな2つのテーマからなる.今年度はプランクトン検索の自動化における自動顕微鏡観察装置ならびに画像解析ソフトウエア[画像連結ソフトウエア(e-Tiling),画像計測・統計ソフトウエア(WinROOF)]の有用性を検討した.前年度に構築した自動顕微鏡観察装置は,生物顕微鏡に,CCDカメラおよび電動ステージを装着し,これらをコンピューター上から操作・作動させるものであり,導入した画像解析ソフトウエアにより不都合無く動作している.画像解析ソフトウエアについては前年度の検討結果よりはさらに具体的事実が示された.すなわち,e-Tilingについては,有用性として1広範囲の拡大視野が得られる,2三次元画像を二次元画像に自動変換できる,問題点として1取り込みに時間が掛かる(対物レンズ20倍において1時間以上),2Z軸における画像のずれにより取り込めないプランクトンがある,3取り込んだ画像ファイルの圧縮が必要になる(解像度の低下),4作業量が大きくなるためPCのフリーズが頻発するなどが明らかになった.WinROOFについては,有用性として1検索時間が短い,2多様な検索プログラムを備えている,3微細珪藻でも検出が可能,4細かい検出条件の設定が可能,問題点として1プランクトンと類似した形状の物質との識別が困難,2プランクトン同士が重なったものの識別が困難,3形によって検索に困難なものがある(方形のもので顕著),4プランクトンの種別分類ができないなどが明示された.画像解析ソフトウエアについてはさらに検討すべき課題があり,e-Tilingについては1鮮明な連結画像の取り込み,2画像取り込み時間の短縮化,WinROOFについては1識別能を高めるプログラム設定,2プランクトン種の分類まで可能なものとするなどが挙げられる.自動的にプランクトン(珪藻)検査を行うためには,壊機法の自動化とプランクトン検索の自動化と2つのステップが必要になる.研究期間内において,特にプランクトンの自動検索システムの構築について成果を得ることができた.自動検索システムは,電動ステージを装着した顕微鏡観察装置を用い,市販の画像連結ソフトウエア(e-Tiling)によるプレパラート標本からのサンプル情報の取り込み,連結画像より画像計測・統計ソフトウエア(WinROOF)により行うものである.システム導入により,改善の余地はあるもののプレパラート標本をデジタルデータとして永久保存できることや検索が瞬時に行えることなどの効果が明らかになった.本研究は壊機法の自動化とプランクトン検索の自動化という大きな2つのテーマからなる.初年度はその1つである自動プランクトン検索・分析装置の開発に着手した.現有の生物顕微鏡(ECLIPSE 50i,Nikon社製)に,CCDカメラ(DSカメラコントロールユニットDS-U3:Nikon社製)および電動ステージ(ProScan III,Prior社製)を装着し,これらをコンピューター上から操作・作動させる装置を構築した.プランクトンの自動検索は,この装置を用い,まずプレパラート標本の部分画像を連結し全体画像を得るソフトウエア(画像タイリングシステム:e-Tiling MITANI CORPORATION社製)により,自動的にプレパラート標本の全情報を収集することを行った.つぎに得られた連結画像から画像計測・統計ソフト(WinROOF MITANI CORPORATION社製)により,プランクトン(主に珪藻)を自動的に識別し分析することを行った.このプロトタイプのプランクトン検索・分析装置の解析能を,淡水,海水を用いて作成したプランクトンのプレパラートを標準試料として検討した.この装置により自動化が図れる可能性が示された.本研究の目的の一つであるプランクトン検索の省力化,各検査機関間における手技の統一化,精度の画一化が図れる.また,今回構築された装置の不備な点も多々見いだされ,とくに当初から懸念されたプランクトンと混在するプランクトンではない不溶性沈渣との識別が不完全であるため,計測数が実数以上の値になる傾向がみられた.そこで,鮮明な画像を取り込むための最良な条件の検討,画像分析の際の形状分離.識別の条件の検討を行い,実数に近似する値が得られつつある.これまでに画像連結ソフトウエア(e-Tiling)によりプレパラート標本の連結画像を作成し,連結画像から画像計測・統計ソフトウエア(WinROOF)によりプランクトン検索を行うプランクトン自動検索システムを構築した.その導入の効果,問題点,改善点を明らかにしている.今年度はさらに実用化が可能なレベルまでのチューンアップを行った.1.e-Tilingについて:広範囲の連結画像が得られる反面,取り込みに時間が掛かり,併せてファイル容量が制限範囲の350MBを越え解像度の低下を伴うファイルの圧縮が必要になることを指摘した.取り込み範囲を狭めるためには,プレパラートへの試料の塗布範囲をできるだけ小さくすることが必要となる.そこで,ホットプレート上で加温(200°C前後)したカバーグラス(16×16mm)にサンプルのエタノール懸濁液を滴下することで塗布範囲を狭くすることが可能であった.

従来の方法では1時間以上の取り込み時間(対物×20)を要したが,新たな方法では45分程度まで短縮されることが示された.封入剤はソフトマウントなどのバルサム系のものではコントラストが低く,画像計測・統計ソフトウエアによる解析が困難であることから,マウントメディアなどの屈折率の高い封入剤が必須であることが示された.2.WinROOFについて:このソフトウエアの画像計測が2つのしきい値による2値処理に基づくものであることから,詳細な条件設定を行い,目的のプランクトンを抽出していく操作となる.そこで,プランクトンを形状から,円形,舟形,方形に分け,それぞれの詳細な条件設定を試みた.比較的正確に検出されることもあればあまり検出されないこともあり,結果にばらつきがみられた.クロージング,穴埋め,オープニングなどの処理を加えてみたが,改善はみられるものの実用レベルには至らなかった.ただ,検索は瞬時に終了することから,スクリーニングとしての利用価値は高いと考えられる.法医学研究の初年度に構築したコンピューター上から動作させる自動顕微鏡観察装置[現有の生物顕微鏡(ECLIPSE 50i,Nikon社製)に,CCDカメラ(DSカメラコントロールユニットDS-U3:Nikon社製)および電動ステージ(ProScan III,Prior社製)を装着したもの]は,プランクトン検索に応用可能であることが確認された.画像解析ソフトウエア(画像連結システムe-Tiling,MITANI CORPORATION社製),画像計測・統計システム(WinROOF,MITANI CORPORATION社製)の有用性を検討し,これらソフトウエアの有用性および問題点を明らかにし,今後の検討課題を提示することができた.得られた成果は第64回日本法医学会学術九州地方集会ならびに第99次日本法医学会学術全国集会において発表の予定である.研究の初年度は,壊機法の自動化に先駆け,プランクトン(主に珪藻)の自動検索システムの構築から着手した.部分画像から画像連結プログラムにより全体画像の作成を行う過程,全体画像より形状解析プログラムによりプランクトンを自動的に検出するシステムに関するプロトタイプの構築はできた.自動検索システムの評価については,操作の省力化,作業時間の短縮化,検出の精度等に関して検討を行っている.システム導入による得失,その可能性および限界について得られた成果は関連学会において発表の準備中である.平成25年度に提示された今後の検討課題である画像解析ソフトウエアの問題点についてさらに検討を加え,ソフトウエアの珪藻検索の限界点を明らかにするとともに,より改良されたプログラム利用方法を検索しシステムの完成をめざす.
移民とセクシュアリティのグローバル化

第一に、現代日本社会のジェンダーとセクシュアリティに関する主要な秩序としてポストフェミニズム研究を進めた。英米のポストフェミニズム論を渉猟し、それに照らして日本社会の諸側面を検討した。とくに大きな話題となったテレビドラマ等を取り上げ、分析材料とした。その成果は学会で報告し、現在論文としてまとめている。また、理論的な考察に関しては著書として発表した。第二に、周縁的な現象・問題に対するアプローチとして、台湾調査に着手した。運動団体にヒアリング調査を行い、現地の社会のフェミニズムへの意識を探った。とくに性暴力とセックスワークに関して貴重な知見を得た。次に、国内のマージナルな場所として北海道のアイヌ民族をめぐる状況の調査に着手した。まずアイヌに関する博物館等の展示や市民活動との関連性について探った。道内の主な博物館及び資料館を訪問し、展示を実地見学した。及び所蔵資料も精査し、道内でのアイヌに関する一般的な認識を概観し、日本社会全体とのずれを確認した。さらに、現代日本のセクシュアリティとクィアをめぐる運動及び言説状況に関してインタビュー調査を行った。LGBTの可視化に関するプラスマイナス両面について市民活動家の知見を得た。以上から、現代日本のジェンダーとセクシュアリティについて、人種や民族、階級等多側面にわたる権力構造から探り、最終的に性と植民地主義に関する理論的歴史的実証的把握の必要性を痛感した。実地調査および文献調査を進め、一定程度発表を行っている。当初の研究目的、計画にもとづいてより確実に進めていく。社会的再生産理論の研究を行うため、英語文献の入手に努めた。ナンシー・フレイザーをはじめとするフェミニズム理論家の文献購読と下訳作業を行った。アンジェラ・マクロビーのポストフェミニズム研究の文献を購読した。また関連する研究会や学会に参加した。ほかに、背景となるセクシュアリティ理論やフェミニズム研究、移民研究の状況把握のため、多数文献購読や情報収集を行った。フィールド調査としては、日本の民族的マイノリティであるアイヌ民族の歴史を調査した。博物館や資料館を訪問した。可能なところでは、研究者と情報交換を行った。当事者とも質疑応答を行い、アイヌの運動やコミュニティの歴史を学んだ。また台湾調査を行い、ミュージアム等を訪問した。ミュージアムに所蔵されている映像・写真資料を調べた。また所蔵されている文献も検討した。ミュージアム関係者と簡単な意見交換を行い、台湾におけるフェミニズムの状況について知見を深めた。他にも日本の植民地支配および現在の台湾をめぐる複雑な環境の一端を探った。それによって、今後のより詳細な台湾調査の構想を練る材料とした。さらに、現在のセクシュアリティ秩序の調査の一環として、若者世代のアンケート調査をおこなった。「女子力」等流行語に対する意識調査を行い、背景にあるセクシュアリティやジェンダーに関する感覚の変容を探った。全体として、初年度としてテーマの背景となる研究状況の把握と調査準備、関連調査を行なった。先行研究の把握及び調査の下準備が概ね順調に進めることができた。先行研究の渉猟はさらに一層進める。その中での研究成果については順次研究会・学会等で発表していく。調査については準備が出来次第順次実施する。図書購入や物品が予定より納期が遅れたため。調査成果について継続して分析中であるため。
支台歯形成後の仮封処置にう蝕病巣無菌化療法を導入する試み

1.目的本研究は、抗菌剤を添加した仮着材を暫間被覆冠の仮着に応用し、仮着という短い作用期間で支台歯のう蝕病巣を殺菌する方法を考案し、補綴治療へ導入することを目的としている。昨年度までの研究で、混合抗菌剤(Metronidazole、Ciprofloxacin、Cefaclor、各2% w/w)を添加した仮着材がう蝕病巣細菌の殺菌に有効であることがin vitroで確認された。今年度は臨床治験を行い、本術式の臨床応用に対する評価を行った。2.方法本学歯学部附属病院補綴科を受診した患者のうち、象牙質に達するう蝕のある生活歯で、補綴処置が必要と診断された歯を有する患者6名を対象とした。本研究に関して十分な説明を行い、同意を得た上で、対象歯に混合抗菌剤添加仮着材を応用し、仮着の前後でう蝕病巣を採取し、試料中の細菌数から細菌効果を判定した。さらに、臨床症状を診査し、被験歯および歯周組織への影響を検討した。3.結果術前のう蝕病巣からは10^5CFU/mg以上の細菌が検出された。一方、術後では仮着期間が12週間であった5例からは細菌の検出を認めず、う蝕病巣が無菌化されていた。仮着が3週間に及んだ1例では、辺縁漏洩が認められ、10^3CFU/mgの細菌が検出された。いずれの症例においても、歯髄炎や歯周炎などの臨床症状は認めなかった。4.考察以上の結果より、本術式が臨床応用可能であることが明らかになった。また、その際には仮着期間を12週以内とし、辺縁漏洩への配慮が必要であることも示唆された。1.目的う触病巣細菌はメトロニダゾールを中心とする混合抗菌剤で完全に殺菌できることが報告され、歯科保存学領域では既にう触病巣の無菌化に成功している。しかし、この新しいう触病巣無菌化療法を捕綴分野の治療に応用した報告はない。そこで本研究は、抗菌剤を添加した仮着材を暫間被覆冠の仮着に応用し、仮着という短い作用期間で支台歯のう触病巣を殺菌する方法を考案し、補綴治療へ導入することを目的としている。今年度は、本仮着材のう触病巣細菌に対する殺菌効果を新鮮抜去歯を用いて細菌学的に検討した。2.方法象牙質に達するう触を有する新鮮抜去歯14歯に対し、う触病巣を残置したまま支台歯形成を行い、暫間被覆冠を製作した。実験群として9歯には混合抗菌剤(Metronidazole,Ciprofloxacin,Cefaclor,各2%w/w)を添加した仮着材を、コントロール群5歯には、抗菌剤を添加しない仮着材を使用して14日間、暫間被覆冠を仮着した。仮着の前後でう触病巣を採取し、細菌数を測定し、殺菌効果を検討した。う触病巣細菌の殆どが偏性嫌気性菌であることから、本研究では、厳密な嫌気条件下での培養を行った。3.結果術前試料からは、実験群、コントロール群いずれも10^410^7CFU/mgの多数の細菌が検出された。術後試料からは、コントロール群では細菌数の減少は認められたものの、いずれも10^3CFU/mg以上の細菌が検出された。一方、実験群では、6被験歯で細菌の検出を認めなかった。3被験歯でわずかの細菌が検出されたが、いずれも、本抗菌剤に対し感受性菌であることが確認され、無菌化が可能と考えられた。4.考察以上の結果より、混合抗菌剤を添加した仮着材により、新鮮抜去歯のう触病巣細菌をほぼ完全に殺菌できることが明らかになった。現在、本術式を臨床症例に応用し、効果を検討中である。

4.考察以上の結果より、本術式が臨床応用可能であることが明らかになった。また、その際には仮着期間を12週以内とし、辺縁漏洩への配慮が必要であることも示唆された。
ウメ葉縁えそ病を題材とした果樹ウイルス病害抵抗性に関与する遺伝的因子の同定

永年作物である果樹においては、ウイルス病害は致命的な問題となり得る。本研究では、ウメのウイルス病の一種である葉縁えそ病への抵抗性に関与する遺伝的因子の同定を通じて、果樹ウイルス抵抗性メカニズムの一端を理解することを目的とする。本年度は、ウメおよびその近縁種からなる遺伝資源を用いた研究基盤の構築および予備調査を中心に遂行した。2.LChV-2非感染性に関与する遺伝的因子の同定:予備調査でLChV-2への非感染性が確認された品種について、発芽直後の幼葉を用いたmRNA-seqを行い、ウイルスの接ぎ木接種の有無によって発現変動する遺伝子群の候補を抽出した。3.ウイルス感染性および発病程度の品種間差に関与する遺伝的因子の探索:ゲノムワイド関連解析(GWAS)の実施に向け、ウメおよび近縁種128系統からなる遺伝資源について約15,000座のエキソンをターゲットとしたシークエンシングを行い、SNPデータベースを構築した。本データベースおよびSSRマーカー遺伝子型を基に詳細な遺伝解析を行った結果、現存する日本と中国のウメとの間に明確な構造化が観察された。加えて、日本のウメ集団内に人間の志向性が関わったと推察される微弱な遺伝的構造が観察された。形質調査用の材料は、接ぎ木時期に留意し、生育旺盛な徒長枝に複数本の穂木を接ぐことで効率よく育成することができた。ゲノム解析では解析領域を選択的に濃縮する方法をとることで、遺伝的多様性やヘテロ性の高いウメ品種群を用いても高いジェノタイピング率を確保することができた。さらに追加の接ぎ木を行い、系統数を増加させた上で再度病徴およびウイルス保有濃度に関する調査を行う。また、構築したSNPデータベースを利用したゲノム解析を並行して行い、病徴が軽い、またはウイルス保有濃度の低い系統群に共通する遺伝的因子を探索する。既にLChV-2抵抗性が確認されている系統については、引き続き感受性品種の交配を行い、交雑後代の獲得を進める。
乾癬様皮膚炎マウスモデルにおける表皮ケラチノサイト上のCXCR4の役割

ヒト乾癬皮疹部と正常皮膚部の間の領域の表皮基底細胞部でCXCR4の発現が他の部分より強い傾向が認められた。野生型マウスの耳介にIL-23を局注したところ、表皮細胞のCXCR4の発現の強いところでは表皮の厚みは薄く、発現の弱いところでは厚い傾向が認められた。CXCR4を強発現した表皮ケラチノサイトをCXCL12とIL-22で共培養したところ、IL-22のみの場合より増殖が抑えられる傾向が認められた。まず、組織でのCXCR4の染色の方法を確立させることから開始した。CXCR4抗体を用いた免疫染色ではバックグラウンドが比較的高くなりやすく、バックグラウンドを抑えるため、様々な組織の固定法、ブロッキングバッファーなどを試み、最終的に安定的に染色が可能になった。この方法で乾癬患者の皮膚組織を染色したところ、乾癬皮疹部と周囲の正常皮膚部の間の領域の表皮基底細胞部でCXCR4の発現が他の部分より強い傾向が認められた。別の乾癬患者の組織を用いて染色を行ったが、同様の傾向が認められた。一般に乾癬の皮疹では皮疹の辺縁で様々な反応が起こり、結果乾癬の皮疹が形成されてくることが分かっている。このことより、乾癬の病変形成において表皮細胞のCXCR4が何らかの役割を果たしている可能性が示唆された。CXCR4は腫瘍などでは細胞増殖に関与しているため、乾癬の病態形成に重要な表皮細胞の増殖にCXCR4が関与している可能性をまず考えた。次いで野生型C57BL6/Jの耳介にIL-23を局注した乾癬のモデルマウスにて、表皮細胞におけるCXCR4の発現について検討した。IL-23を局注した野生型C57BL6/Jの耳介においてCXCR4の発現は均一ではなく、発現の強いところと弱いところが混在している状況であった。発現の強いところと弱いところで傾向を見てみると、発現の強いところでは表皮の厚みは比較的薄く、発現の弱いところでは表皮の厚みは比較的厚い傾向が認められた。この点は当初の仮説と異なる結果であり、今後の研究を通して検証を行っていくべき課題と考えている。CXCR4は腫瘍などでは細胞増殖に関与しているため、乾癬の病態形成に重要な表皮細胞の増殖にCXCR4が関与している可能性が示唆された。IL-23を局注されたマウス皮膚ではγδT細胞が誘導され、γδT細胞が分泌するIL-22により表皮ケラチノサイトが増殖することが知られている。そのためCXCR4を強発現した表皮ケラチノサイトを作成しCXCR4のリガンドであるCXCL12とIL-22で共培養したところ、IL-22のみで培養した場合と比較して増殖が抑えられる傾向が認められた。乾癬まず、すべての研究の基礎となる表皮細胞でのCXCR4の染色のプロトコールが確立したことにより、組織学的な検討が可能になった。次いで表皮細胞におけるCXCR4の発現が乾癬皮疹の辺縁部に強く発現していることが分かったことにより、表皮細胞におけるCXCR4が乾癬皮疹の形成に何らかの役割を果たしている可能性があることが示唆された。このことは乾癬の病態形成の解明において、表皮細胞におけるCXCR4が研究のターゲットになりうることを示唆すると考える。野生型C57BL6/Jの耳介にIL-23を局注した乾癬のモデルマウスでの結果は今後の研究の方向性を決める上で重要な知見であり、今までCXCR4で考えられてきた機能から予想される結果とは異なっている。今回の研究ではこの点が真実かどうか検証することが必要となると考える。

以上より、表皮細胞のCXCR4が乾癬の病態形成において何らかの役割を果たしている可能性があることが分かったこと、および乾癬の病態形成において当初の仮説とは異なり表皮細胞のCXCR4のシグナルが表皮細胞の増殖を抑制する方向に働いている可能性があることが示唆されたことにより、研究の方向性があきらかになってきたことから、おおむね順調に進展していると考えている。まずIL-23を局注した乾癬のモデルマウスにおいて見られた結果がありうる現象かどうかにつき、in vitroにて検証を行う。IL-23を局注した乾癬のモデルマウスでは、IL-23により誘導されたγδT細胞などの免疫細胞がIL-22を分泌し、IL-22が表皮細胞の増殖を誘導することが知られている。表皮細胞にCXCL12-CXCR4シグナルとIL-22シグナルが同時に入る場合のモデルとして、ヒトの表皮細胞由来のcell lineであるHaCaT細胞にCXCR4を強発現させ(CXCR4-HaCaT)CXCL12とIL-22で共刺激を行った場合、細胞増殖にどのような変化が認められるか確認する。もし、IL-23を局注した乾癬のモデルマウスの結果を支持する所見が得られた場合、どのようなシグナル経路が細胞増殖の抑制に関与しているかをCXCR4-HaCaTを用いて検証する。この検証によりターゲットとなる分子が特定できた段階で乾癬組織を用いた特殊染色にて当該分子の乾癬病変での発現分布とCXCR4の発現分布を比較し、当該分子が乾癬皮疹の辺縁部に強く発現しているようであれば、CXCR4のノックアウトマウスを用いて結果を確認する方針である。学会出張のための旅費として計上していた額が未使用になったことが理由である。今年度の旅費の繰り越しについては次年度の学会出張費として使用を予定しているが、全額使用できない場合は物品費や雑誌への投稿料などに適宜使用する予定である。
骨再生用高機能マイクロポーラス金属の創製と特性評価

本研究の目的は下記のとおりである.(1)オープンセル型骨再生用タンタル系多孔体の化学蒸着法(CVD)による製造条件を把握する.(2)得られた多孔体試料について,モルフォロジーを明らかにし,セル構造因子を定量化する.(3)圧縮試験と疲労試験により常温大気中で静的・動的力学特性を調べ,参照データを得る.(4)(3)と平行して,擬似体液中での力学挙動を把握する.(5)緻密体での破壊靭性試験に準じた方法で破壊靭性値を見積もる.(6)動物実験により試作した多孔質材料からの骨芽細胞の成長とその速度を確認する.(7)以上の成果を総合的に検討し,生体材料としての1次評価を下す.本研究は以下の特徴を有する.他に先駆けてTa系の骨再生用多孔質材料の創製を試みること.成果が多くの人の健康回復に資すること.条件制御しやすい製造方法(CVD)を採用するので,生産性・再現性・信頼性が高いこと.骨再生用としてはTaを使うのは初めての試みだが,その安全性は過去50年にわたる人体への移植手術で実証済みであること.NiもTiも(したがってNi-Ti合金も)人体内に存在しない金属元素だが,ともに化学的安定性に優れるので,移植による弊害の恐れが少ないこと.研究代表者が多孔質材料について豊かな情報と経験を有していること.共同研究者が医学専門家と継続的に接触しており,最終的に疫学調査が行えること.本年度は準備段階として文献ベースの予備的解析・検討を行った.その結果,ポリウレタンフォームを基材とするガラス状炭素のマイクロポーラスフォームにタンタル金属を蒸着させた材料が有望であること,この材料の機械的性質を最初に調べたZardiackasらの実験(特に疲労試験)は精度の点で改善を要する点が少なからずあることが明らかとなった.本研究の目的は下記のとおりである.(1)オープンセル型骨再生用タンタル系多孔体の化学蒸着法(CVD)による製造条件を把握する.(2)得られた多孔体試料について,モルフォロジーを明らかにし,セル構造因子を定量化する.(3)圧縮試験と疲労試験により常温大気中で静的・動的力学特性を調べ,参照データを得る.(4)(3)と平行して,擬似体液中での力学挙動を把握する.(5)緻密体での破壊靭性試験に準じた方法で破壊靭性値を見積もる.(6)動物実験により試作した多孔質材料からの骨芽細胞の成長とその速度を確認する.(7)以上の成果を総合的に検討し,生体材料としての1次評価を下す.本研究は以下の特徴を有する.他に先駆けてTa系の骨再生用多孔質材料の創製を試みること.成果が多くの人の健康回復に資すること.条件制御しやすい製造方法(CVD)を採用するので,生産性・再現性・信頼性が高いこと.骨再生用としてはTaを使うのは初めての試みだが,その安全性は過去50年にわたる人体への移植手術で実証済みであること.NiもTiも(したがってNi-Ti合金も)人体内に存在しない金属元素だが,ともに化学的安定性に優れるので,移植による弊害の恐れが少ないこと.研究代表者が多孔質材料について豊かな情報と経験を有していること.共同研究者が医学専門家と継続的に接触しており,最終的に疫学調査が行えること.本年度は準備段階として文献ベースの予備的解析・検討を行った.その結果,ポリウレタンフォームを基材とするガラス状炭素のマイクロポーラスフォームにタンタル金属を蒸着させた材料が有望であること,この材料の機械的性質を最初に調べたZardiackasらの実験(特に疲労試験)は精度の点で改善を要する点が少なからずあることが明らかとなった.
口腔癌細胞のアポトーシスにおける核内蛋白ダイナミクスと放射線感受性

蛋白質脱リン酸化酵素を阻害することにより、口腔癌細胞にアポトーシスが誘導される。このstimulatorにより誘導された口腔癌のアポトーシス細胞では増殖活性の指標となるAgNORsが消失することを突き止めた。それに伴って、110 kDaの分子量を持つ核内蛋白AgNOR proteinが消失し、80 kDaのAgNOR proteinが出現することを証明した。上記した口腔癌細胞内にてアポトーシス誘導に際し生じる核内蛋白の変化を蛋白レベルで解析するためceμ-freesystemを用いて検討した。その結果、110 kDaのAgNOR蛋白の消失及び80 kDa蛋白の出現はDNA ladder formationとリンクしていることが確認出来た。そこで、今回我々は口腔癌細胞を用いて抗癌剤投与及び紫外線照射により誘導されるアポトーシスにおいて同様の変化の有無を検討した。その結果、抗癌剤投与によりアポトーシスが誘導された細胞ではAgNORsの消失、110 kDaのAgNOR proteinの消失と80 kDaのAgNOR proteinの出現が認められた。しかも、ニュークレオリンモノクローナル抗体を用いたWestern blotting法及び免疫組織化学の結果から110 kDa及び80 kDaの蛋白はどちらともニュークレオリン蛋白であることが確認された。更にcell-freeapoptosissystemを用いた経時的Western blotting法での解析から、上記経過はDNA ladder formationが惹起する時間と極めてリンクしていることも突き止めた。我々はこの結果から上記所見がアポトーシス細胞における普遍的変化の指標となりうるものである可能性を報告した(Kito et. al.J Oral Pathol Med,2005)。この報告の中で、我々はニュークレオリン含む細胞内核内蛋白の変化がアポトーシス実効機構において、極めて重要な役割を示すことを考察した。これらの変化は紫外線照射により誘導されたアポトーシス細胞でも生じることが確認された(in preparation)。一方、in vivoにおける実験モデルとして、ヒト舌癌由来の細胞株(VX2)を兎の下顎歯肉に移植し下顎歯肉癌を惹起させる実験系を作成した。しかも、この歯肉癌に放射線を照射することでアポトーシスの惹起が生じることを確認した。培養細胞中で生じたニュークレオリンの分解は、in vivoの実験モデルから得られた組織抽出液でも検出された。以上の結果はニュークレオリンの分解がアポトーシス誘導を簡易に表す指標になりうることを意味するものである。蛋白質脱リン酸化酵素I型及びIIA型を阻害することにより、細胞内を高リン酸化状態にすると口腔癌細胞にアポトーシスが誘導される。このstimulatorにより誘導された口腔癌のアポトーシス細胞では増殖活性を示すAgNORsが消失する。同時に、110kDaの分子量を持つ核内蛋白AgNOR proteinが消失し、80kDa AgNOR proteinが出現することを発見した。更に、cell-freesystemにおける解析の結果、110kDa蛋白の消失及び80kDa蛋白の出現はDNA fragmentaionと関連性があることが示唆された。

その結果、上記したアポトーシス細胞におけるAgNORsの消失、110kDaのAgNOR proteinの消失と80kDaのAgNOR proteinの出現を確認した。しかも、ニュークレオリンモノクローナル抗体を用いたWestern blotting法及び免疫組織化学の結果から110kDa及び80kDaの蛋白は両者ともニュークレオリンであることが証明された。更にcell-freeapoptosissystemを用いた実験から、上記経過はDNA fragmentationが惹起する時間と極めて連動性を示した。我々はこの結果から上記所見がアポトーシス細胞における普遍的変化の指標となりうるものである可能性を報告した(Kito et al. J Oral Pathol Med, 2005)。更に、ニュークレオリンを含む細胞内核内蛋白の変化がアポトーシス実効機構において、極めて重要な役割を示すことを考察した。一方、in vivoにおける実験モデルとして、ヒト舌癌由来の細胞株(VX2)を兎の下顎歯肉に移植し下顎歯肉癌を惹起させる実験系を作成し、放射線照射によりアポトーシスの惹起に成功した。培養細胞中で生じたニュークレオリンの分解は、in vivoの実験モデルから得られた組織抽出液でも検出された。以上の結果は更にニュークレオリンの分解がアポトーシス誘導を簡易に表す指標になりうることを意味するものと考えている。今後は、患者から得た口腔癌細胞株でも同様の研究を行い症例数を増す予定である。蛋白質脱リン酸化酵素I型及びIIA型を阻害することにより、細胞内を高リン酸化状態にすると口腔癌細胞にアポトーシスが誘導される。このstimulatorにより誘導された口腔癌のアポトーシス細胞では増殖活性を示すAgNORsが消失した。それに伴って、110kDaの分子量を持つ核内蛋白AgNOR proteinが消失し、80kDa AgNOR proteinが出現することを発見した。この細胞内にて行われる核内蛋白の変化を蛋白レベルで解析するためcell-freesystemを用いて検討した。その結果、110kDaのAgNOR蛋白の消失及び80kDa蛋白の出現はDNA ladder formationとリンクしていることが示された。そこで、今回我々は口腔癌細胞を用いて抗癌剤投与及び紫外線照射により誘導されるアポトーシスにおいて同様の変化の有無を検討した。その結果、抗癌剤投与を行いアポトーシスを誘導させた細胞ではAgNORsの消失、110kDaのAgNOR proteinの消失と80kDaのAgNOR proteinの出現が認められた。
近世日本社会における「書物」移動の文化的機能に関する研究-19世紀の国学を端緒として-

本研究が課題としたのは、江戸時代の日本において「書物」はいかに「享受」されたのか、という問題であり、「享受」の実相を具体的に明示することであった。そして、この課題を解決するために検証のフィールドとして設定したのが福島県北部地域であり、そこに展開した国学者の群像であった。そのなかで主に扱ったのは「みちのく社中」という(文学中心の)学問組織を主催した内池永年(17621848)という人物である。その永年の歴史的な意義を考えるにあたって着目したのが、永年が長年にわたって形成した大規模な「書物」コレクションの存在である。「『書物』移動」とは、そのコレクションの形成手段、言い換えれば「書物」の「蓄積」方法の多面的なありかたを包括的に示す言葉として用いたものである。一方、「文化的機能」とは、コレクション形成が特定の社会や個人にもたらす種々の影響や意義(言うまでもなくその概要を解明することが目的)を指し示すものである。本研究をすすめてゆくなかでおこなった研究報告は、次のものである。(1)「『型紙』と『板本』と」(第1回「書物・出版と社会変容」研究会、2003年9月)(2)「『媒介』の思想史的意義-思想を『媒介』する『モノ』と『人』」(日本思想史学会2003年度大会シンポジウム、2003年10月)(3)「『板本』の『写本』を作るのはなぜか-東北の国学者内池永年を例に-」(第3回「東アジア出版文化に関する国際学術会議」2003年11月)(4)「代官手代-地域文化の媒介者たち-」(第14回「書物・出版と社会変容」研究会、2005年1月)本居宣長没後の学統・鈴屋門は養嗣子大平が継受したが、大平は宣長の実子春庭ともども学派の拡大を図った。その手段の一つとなったのが「出版」である。彼らは宣長の著作の普及を通じて「国学」の全国化を成したのである。そうした「出版」は自家蔵版としても存在したが、当時勃興してきた名古屋の書肆「風月堂」ならびに[永楽屋」と松坂の「柏屋」結びつくことによつて着実な進展を遂げた。こうした鈴屋学派の「出版」という媒体の利用については、従来、発信元の和歌山・松坂・名古屋の地方史の展開の一環として研究が推し進められ着実な研究成果があがっている。しかし、一方、「出版」されたモノ「書物」を受容し享受した全国の門人の実態、例えば書物の入手や蓄積の様子などについてに史料的な制限もあり未解明な部分が多い。本研究は、東北の国学の拠点の一つ「みちのく社中」(福島市)の主宰者内池永年の「蔵書」の入手と蓄積とを解明する中で、国学関連図書の流布と学派形成の実態とを明らかにすることを目的とした研究である。平成15年度の研究では(1)資料の収集と調査、資料のデータベース化、(2)各種関連文献の読解と検討、を主な作業として設定し、(3)研究方法の確立のための各種研究会への参加(発表を含む)にも心がけた。主な調査地は、福島県福島市、三重県松阪市であり、福島県歴史資料館、本居宣長資料館等で資料調査を行うとともに、関連資料を入手した。研究発表を行った主なものは「書物・出版と社会変容」研究会(2003年8月)、日本思想史学会シンポジウム(2003年10月)、第3回東アジア出版文化に関する国際学術会議(200年11月)である。(1)「『型紙』と『板本』と」(第1回「書物・出版と社会変容」研究会、2003年9月)(2)「『媒介』の思想史的意義-思想を『媒介』する『モノ』と『人』」(日本思想史学会2003年度大会シンポジウム、2003年10月)(3)「『板本』の『写本』を作るのはなぜか-東北の国学者内池永年を例に-」(第3回「東アジア出版文化に関する国際学術会議」2003年11月)(4)「代官手代-地域文化の媒介者たち-」(第14回「書物・出版と社会変容」研究会、2005年1月)
気仙地域の歴史・考古・民俗学的総合研究

気仙地域は、海・陸域の複合生態系が豊富な資源を生み出し、縄文時代から現代までそれらを活用した人類営為が展開した。本研究は、当地域の歴史文化を歴史・考古・民俗学の手法で研究し、地域の方々と行政に提供する。これは甚大な東日本大震災被害から復興する当地域の方々を支援する取組でもある。調査は多岐に亙る。考古学では、古代・中世の漁撈関係遺物・集落遺跡データの集成、被災地域石碑の所在調査、中世塚・板碑群調査、中世城館群の縄張図作成等。歴史学では、中世遺跡群と文献史料との比較、熊谷家近世文書群の調査、大島正隆論文の公開等。民俗学では横田・小友地区で民俗慣行の調査と実施。3か年市民向け報告会を開催した。本科研では,気仙地域がもつ歴史・文化の魅力を学術的に研究し、その基礎情報を関係自治体の文化財担当部局に提供して、今後の文化資源の保全と活用に資する条件を整えること、および研究成果の要点を市民に還元して、地域と生活文化の復興に資することを目的としている。その意味から、今年度は、1近世石碑調査と、2市民向け報告会開催が特筆される。1では、陸前高田市内に1685基所在する近世石碑の悉皆調査を進め、うち728基を詳細調査し、同市教育委員会が設置する文化財調査委員会に報告・情報提供した。2の市民向け報告会「歴史・考古・民俗学から気仙地域の魅力を語る」を同市立横田基幹集落センターで開催し、この種の科研事業としては前例のない、約170名の市民が聴講した。地域の歴史・文化の魅力を発信・活性化する本科研に対する市民と地域からの期待の大きさと責務の重さを痛感した。以上2点が初年度もっとも重要な成果であるが、次のような調査・研究活動も行った。3小友地区で民俗学的調査を実施し、生業の特色と行屋の使われ方の相関、1933年三陸地震津波と1960年のチリ地震津波の前後で生業のあり方に変化があること、出稼ぎの卓越による女性のネットワークが強いこと、祭礼と集落間関係、などに関する知見を得た。4三陸における縄文時代の生業活動を知る要点となる貝塚遺跡調査データの集約、5三陸における古代の竪穴住居跡の集成、6古代東北における気仙地域の位置づけの検討、7中世城館群の地表調査と三日市城跡の縄張図作成、および中世気仙地域の景観復元に向けて板碑・塚の分布等の調査を行い、各調査データに基づく研究を進めた。ただし、近世の気仙地域を知る上でもっとも重要な史料である吉田家文書については、所蔵館独自の事業となったため、デジタル撮影済データのみ整理・検討、目録作成、気仙郡と隣接地域で関連資料の所在調査と撮影を実施した。本研究では、気仙地域が持つ歴史・文化の魅力を学術的に研究し、その基礎情報を関係自治体に提供して、今後の文化資源の保全と活用に資する条件を整えること、および研究成果の要点を市民に還元し、地域と生活文化の復興に資することを目的としている。今年度の調査研究は、1津波被災石碑の現状調査を終了し、周辺地域の関連石碑のデータ収集と入力を進めた点、2古代中世集落・貝塚遺跡(東北北海道)データベース作成に向けたデータ収集・入力を進めた点、3中世城館群・板碑群の現状調査およびその分布と文献資料調査成果との比較検討を進めた点、4横田地区において生業・社会構成・信仰・行屋慣行などの民俗調査を実施した点、5戦前に中近世の気仙地域の研究を行っていた大島正隆氏の未発表論文の活字化作業の実施(刊行は来年度)、6市民向け本科研報告会(歴史・考古・民俗学3分野の報告5件)および研究集会「奥州藤原氏平泉政権と気仙地域」(歴史・考古2分野の報告5件)を開催、7市民向け報告会を、岩手県立博物館のミニ展示・講演会「海に生きた歴史」と連携して開催し、かつ陸前高田市歴史文化研究会の全面的支援を得たこと、など実に多岐にわたった。特に、2回目となる市民向け科研報告会は前回と同様170名を超える参加者があり、確かな学術的な裏付けのある地域の歴史と文化への理解は、地域の人々にとって重要な意味があることをあらためて痛感させられた。また、県立博物館との連携は、本科研のような取り組みを単独ではなく、より組織的・継続的に発展させるための好事例になるであろう。今年度は、3か年の調査研究計画の2年次に当たっており、歴史・考古・民俗学的調査およびデータの収集を積極的に推進した。もちろん今年度内に集約を済ませるまでには至っておらず、次年度の補足調査を経て集約・編集・公開へと向かう。1現地調査を要する被災石碑調査は終了し、板碑・城館の調査も順調に進んだこと(評価A)、2古代中世の集落・貝塚遺跡のデータベース作成作業が宮城北海道で順調に進んだこと(評価A)、3歴史・考古・民俗学3分野の調査研究成果の市民向け報告会が多数の方々のご来場を得たこと(評価S)、および陸前高田市歴史文化研究会・岩手県立博物館と連携して開催できたこと(評価A)、4未公開であった戦前の大島正隆氏による気仙地域研究の刊行準備が整ったこと(評価B)、5歴史・考古・民俗学的研究成果を、著書・論文・口頭発表等で社会発信を活発に行えたこと(評価A)などにより、上記の自己評価とした。

しかし、研究代表者・分担者の学内要職就任によりいくつか予定した調査が十分に進められない部分も生じた点については、やむを得ない事由とはいえ、厳しく評価した(評価C)。以上により総合評価A-Bと判断し、(2)と評価した。本研究では、気仙地域がもつ歴史・文化の魅力を、歴史学・考古学・民俗学の3分野から学術的に研究し、その基礎情報を関係自治体に提供して今後の文化資源の保全と活用に資すること、および研究成果の要点を地域の方々に還元することにより地域と生活文化の復興に資することを目的とする。今年度は、(1)各研究分野におけるフィールド調査、(2)考古学部門における古代史関係資料のデータベース作成、(3)フィールド調査やデータベース作成および既知のデータ・資料の分析による研究、(4)研究成果を市民に還元するため報告会の実施、(5)報告書の作成、の大きく5つの活動を行った。(1)では次のフィールド調査を行った。1前年度実施した陸前高田市内津波被災石碑の補足調査を行い終了した。2気仙川流域の中世城館群の縄張図作成を継続し、住田町世田米城・上原城を対象とし、過年度と合わせて11城館の図を作成した。3本吉郡大肝入熊谷家に関する資料(熊谷公男文書)の系図の調査を行った。4民俗調査は小友地区と横田地区で実施し従来の調査の補足を行った。(2)では東北地方太平洋側沿岸部の古代社会の研究基礎資料として、北海道までを含む古代集落と古代の貝塚・漁撈関係資料のデータベースを作成した。(3)では考古学(縄文時代中・近世)、歴史学(古代近・現代)、民俗学3分野の研究により当地域の歴史・文化的特色の把握に努めた。(4)として2017年2月11日に住田町で3分野5本の研究成果を報告した。(5)として歴史・考古分野と民俗学分野の2冊の報告書を作成した。これらにより、気仙地域は、海域と内陸森林域とが複合する生態系の中で、漁撈と船運による交易・交流を活発に行う様子が明らかになった。また、報告会で地域の方々から研究の魅力について、むしろ私たち研究者が教えられる場面があり、本研究の重要性を再確認させられたことは特に印象的であった。気仙地域は、海・陸域の複合生態系が豊富な資源を生み出し、縄文時代から現代までそれらを活用した人類営為が展開した。本研究は、当地域の歴史文化を歴史・考古・民俗学の手法で研究し、地域の方々と行政に提供する。これは甚大な東日本大震災被害から復興する当地域の方々を支援する取組でもある。調査は多岐に亙る。考古学では、古代・中世の漁撈関係遺物・集落遺跡データの集成、被災地域石碑の所在調査、中世塚・板碑群調査、中世城館群の縄張図作成等。歴史学では、中世遺跡群と文献史料との比較、熊谷家近世文書群の調査、大島正隆論文の公開等。民俗学では横田・小友地区で民俗慣行の調査と実施。3か年市民向け報告会を開催した。下記の(1)高く評価できる調査成果、(2)おおむね順調な調査成果、(3)当初計画より進展が遅いか変更を要した点の3点から「おおむね順調に進展」と自己評価する。(1)高く評価できる調査成果: 1本科研の市民向け報告会に約170名もの参加者があり、市民から気仙地域の歴史・文化的魅力への共感が表明された。2陸前高田市内所在石碑の悉皆調査が、当初の計画以上に進捗した(前掲)。この調査成果を陸前高田市文化財調査委員会に報告し、被災石碑の保全と今後の指定に向けた基礎情報として活かされた。3小友地区で民俗学的調査を実施し、生業の特色と行屋の使われ方の相関、1933年三陸地震津波と1960年のチリ地震津波の前後で生業のあり方に変化があることなどに関する知見が得られた。(2)おおむね順調な調査成果:1陸前高田市内所在
加齢に伴う総義歯床下粘膜の変化に関する総義歯学的見地からの検討

[目的]高齢化社会の需要に応ずべく高齢者に対しての総義歯補綴の術式の確立を目的として、加齢に伴う歯槽堤粘膜の性状の変化を種々な面から検索するための基礎的な調査を計測方法を含めて検討する。[検討内容]1.歯槽堤の形態の表現方法について:画一的な義歯床周縁部の印象を採得できる印象材の流動性を選択し義歯床周縁部の印象に関する術式を検討した。2.歯槽堤粘膜の厚径計測装置について:超音波断層撮像装置による画像をB&Wフィルムに撮影した上で粘膜の厚径計測時の計測精度を検討した。3.歯槽堤粘膜の厚径と被圧変位性について:ストレインゲージを応用した被圧変位量計測装置と超音波断層撮像装置を使用し被圧変位量と厚径の関係を調査する方法を検討した。4.荷重除去後の歯槽堤粘膜の復元時間ついて:小型非接触型の変位計測装置を応用し加圧変形された粘膜が復元に要する時間を計測し、粘膜の厚径との関係を調査する方法を検討した。5.歯槽堤粘膜の圧感覚値について:部分的に歯牙の欠如した部位についてFreyの刺激毛を用いての圧感覚値および圧感覚値と刺激の強度および刺激速度との関係を調査する方法を検討し実際の計測をした。(1)歯槽堤の圧感覚値は、0.03g10gの範囲にあった。全計測点の中で3gより大きい圧感覚値の占める割合は大変少なかった。(2)刺激速さが速い程圧刺激に対する感受性が高くなる傾向があった。(3)歯槽堤の前歯部と臼歯部および不動部と可動部とを比較すると、圧感覚値は前歯部および不動部が小さかった。6.歯槽堤粘膜の圧負担能について:印象方法と圧負担能との関係を調査する際の適切な荷重条件および印象採得の条件と圧負担能との関係を調査した。(1)荷重時間を0.3秒、荷重持統時間を0.8秒、荷重休止時間を3秒付近が適切であった。(2)印象圧の増加に伴い圧負担能が一般的にみて増大する。1目的:義歯床下粘膜は加齢に伴って変化するが、これに直接的に対応する補綴学的な検討は行なわれていない。我々は高齢者に対しての総義歯補綴の術式の確立を目的とし、加齢に伴う粘膜の変化を検討するために、圧感覚の変化、圧負担能の変化、厚径の変化およびその物理的性状の変化の調査をする。昭和61年度には粘膜の厚径を計測するための超音波診断装置について探触子形態の検討と精度の検討をし、物理的性状に関しては粘膜の緊張度の計測を試みた。2方法:(1)探触子形態について;有歯顎者3名に対して計測点を口蓋部粘膜に設定し、探触子が各計測点に正確に設定できるかを検討した。(2)精度について;寒天印象材で製作した試料の厚径について超音波診断装置による計測値と万能投影器によって拡大した計測値とから検討した。(3)粘膜の緊張度について;有歯顎者を対象に粘膜の厚径と被圧変位量との関係から検討した。3成績および考察:(1)探触子形態について

;計測点のうち正中で後方の計測点の全ておよび側方で後方の計測点の一部では現存の探触子を正確に設定できなかった。今後その寸法や設置状態についての検討が必要である。特に探触子の角度あるいは粘膜との接触部の形態の改良が必要である。(2)精度について;2mm以上の厚径をもつ試料では0.1mm程度大きい計測値が得られた。この原因は探触子の手指による固定あるいは装置の構造によるものか不明であるが、対処の方法については62年度に検討する。(3)口蓋粘膜の厚径と被圧変位性について;口蓋粘膜の厚径と当該部の被圧変位量を計測した結果、厚径の大小と被圧変位量の大小とが一致するとはかぎらず両者の関係は粘膜の緊張度を握む一つの手段となると思われる。本調査の結果は昭和62年6月の東京歯科大学学会で発表の予定である。1.目的:加齢に対応した総義歯補綴のありかたの検討を目的として,加齢にともなう粘膜の変代を検討するために,圧感覚の変代,圧負担能の変代,厚径の変化および物理的性状の変代の調査を行なッている. 62年度は探触子の形態についての検討および顎粘膜の緊張度の検討を行なった.2.実験方法:(1)探触子の形態について:改良した探触子が有歯顎者の口蓋に設定した計測点に正確に設定できるかを検討した.(2)顎粘膜の緊張度について:有歯顎者の口蓋部に正中線と第二小飼臼歯および第二大臼歯のそれぞれの距離を三分割する新たな6点の計測部位を設定し,改良を加えていた粘膜の変位の計測装置を応用して粘膜の緊張度の一つの目安として100g荷重除去後の粘膜の状態を観察した.3.成績および考察:(1)探触子の形態について:61年度の調査で探触子が正確に設定できない計測部位があったが,探触子の機構を変更できなかったので探触子と粘膜との距離を1mm程度調節し設定を正確にした.(2)顎粘膜の緊指度について:荷重除去後の歯牙側の計測部位における変位量は第二小臼歯部,第一大臼歯部,第二大臼歯部はそれぞれ400μ,726μ,350μであった.粘膜がもとにもどるまでに必要な時間はそれぞれ77sec,102sec,390secであった.正中部では変位量は1117μ,990μ,983μ,粘膜がもとにもどるまでに必要な時間は37sec,127sec,57secであった.粘膜の厚径が最も大きい部位では粘膜がもどるまでに必要な時間は最も少なく,粘膜の厚径が最も小さい部位では,粘膜がもとにもどるまでに必要な時間は最も多かったが,厚径が中等度の部位では粘膜がもとにもどるまでに必要な時間は様々であった.その理由については超音波診断装置による計測結果ともあわせ次年度以降の研究課題とする.また顎粘膜の緊張度の検討結果については本年度の東京歯科大学学会において発表する予定である.[目的]加齢に対応した総義歯補綴のありかたの検討を目的として、加齢に伴なう歯槽粘膜の変化を検討するために、歯槽堤の表面形態、歯槽粘膜の厚さ、緊張度、圧感覚閾値、圧負担能を、これらの計測方法を含めて検討してきた。しかし実際に多数の症例を分析するにあたり、粘膜の厚径計測には超音波断層撮像装置のディスプレーでなく写真撮影した断層像を用いる必要があるために、写真上での計測精度の検討を行うことにした。[実験方法]使用した計測装置は松下技研株式会社製20MHz超音波断層撮像装置本体MG-DD62X12、超音波探触子MG-SS62X12である。精度検定のためターゲットとして直径0.3mmの円柱状の炭素棒11本を植立した較正用規格板を製作した。炭素棒の設定位置は超音波振動子の走査角を考慮し、振動子に近い第1列は走査角の中央およびその両側3mmの位置に1本ずつ植立した。第2列は第1列から3mmはなれた位置に、第3列は6mmはなれた位置にそれぞれ第1列と平行に4本ずつ植立した。計測にあたっては探触子と較正用規格板を水中に入れた。
温度感受性を利用した新たな創傷治療薬の開発

口腔は身体の他の部位に比べ、多様な化学・機械・温度刺激に曝されている。ゆえに粘膜が損なわれ傷ができることも少なくないが口腔粘膜は再生能力が高く速やかに治癒し、瘢痕も生じにくいことが知られている。私たちは、口腔内の温度が皮膚表面よりも高いことに着目し、温かい温度で活性化されるイオンチャネルであるTRPV3 (transient receptor potential vanilloid channel)に着目した。マウス臼歯を抜歯する創傷モデルで治癒期間の比較したところ、TRPV3遺伝子欠失マウスでは野生型マウスよりも創部の治癒が遅延していたことからTRPV3が創傷治癒に関わる事を見出した。ゆえに粘膜が損なわれ、傷ができることも少なくない。その一方で口腔粘膜は再生能力が高く速やかに治癒し、瘢痕も生じにくいことが知られているが、その理由は明らかとはいえない。私たちは、口腔内の温度が皮膚表面よりも高いことに着目し、33°C以上の温度で活性化されることが知られているカルシウム透過性イオンチャネルであるTRPV3チャネル(transient receptor potential vanilloid channel)に着目した。マウス口腔上皮細胞は温度感受性を示すことがわかり、さらに、TRPV3遺伝子欠失マウスおよびTRPV4遺伝子欠失マウスでは温度感受が抑制されることから、口腔上皮細胞の温度の感受にはTRPV3およびTRPV4チャネルが関与していることを確認した。TRPV3遺伝子欠失マウスから採取した細胞でより温度感受の抑制が大きかったことから、口腔上皮での温かい温度の感受にはTRPV3の関与が強いことが示唆された。さらに、生理的な意義をあきらかにするために、マウス臼歯を抜歯する創傷モデルで治癒期間の比較を行った。TRPV3遺伝子欠失マウスでは野生型マウスよりも創部の治癒が遅延していたことからTRPV3が創傷治癒に関わる事を見出した。さらに、口腔上皮細胞を異なる温度で培養したところ、37°C培養時では31°C培養時よりも増殖が活発になった。また、TRPV3の活性化薬であるcarvacrolを培養時に添加すると増殖が活発になった。これらの反応はTRPV3遺伝子欠失マウスから採取した細胞では認められなかったことから口腔上皮の増殖にTRPV3が関与していることもわかった。これらのことより、口腔上皮はTRPV3を介して細胞増殖および創傷の治癒を促進していることが示唆された。皮膚や粘膜の治癒には、上皮が創部を被覆する「再上皮化」および上皮が極性を失い、周囲の細胞との細胞間接着様式を変化させ遊走や浸潤する能力を得る「上皮間葉転換」が重要な鍵を握る。前年度までの研究で、TRPV3 (transient receptor potential channel vanilloid 3)が口腔上皮細胞において他の温度感受性TRPチャネルよりも多く発現し、温度刺激により細胞内へのカルシウム濃度上昇が起こることを示した。さらに、TRPV3遺伝子欠損マウスでは野生型に比べ、抜歯創の上皮の被覆が遅れることを発見した。そこで、今年度は、口腔粘膜の創傷治癒モデルにおいて、上皮化あるいは上皮間葉転換がどのように起こるのかを明らかにする事を目的として、口蓋粘膜に円形の傷を付け経時的に観察を行い、治癒の状態の変化を明らかにした。また、TRPV3の関与を明らかにするために、野生型マウスおよびTRPV3遺伝子欠失マウスとを比較した。口蓋の円形パンチモデルにおいても、TRPV3遺伝子欠損マウスでは野生型に比べ、治癒が遅延しており、抜歯モデルにおける結果と一致していた。口蓋モデルの方が抜歯モデルに比べ、創の上皮形態のばらつきが少ないことから、粘膜治癒のモデルとして評価がしやすいこともわかった。組織学的な観察では、口蓋モデルと抜歯モデルでは、上皮の伸展移動形態が異なっていた。教科書的な分類では、歯肉は被覆粘膜、口蓋は咀嚼粘膜とされることから、粘膜の特徴による差や創による欠損の大きさによるのかもしれない。次に、免疫組織学的にN-Cadherin, Vimentinの発現増加,β-Cateninの核移行, E-Cadherinなど上皮間葉転換のマーカー群の発現変化を調べた。治癒過程組織の上皮がそれらの分子マーカーの発現を多様に変化させていることがわかった。ほぼ計画通りに進み、論文を発表した。形態系基礎歯科学創傷治癒促進の温度条件および薬剤の投与方法を検討する予定である