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会社役員賠償責任保険の再検討

本研究は、会社法上の役員の地位・責任に係る規律と適合し、当該規律を適切にエンフォースできる、あるべき会社役員賠償責任保険の商品構成の提案を行うことを目的とする。以上の研究目的の達成に向けて、最終年度である平成30年度においては、第一に、日本法における会社役員の地位・責任および会社役員責任保険をめぐる議論を継続的にフォローした。特に平成26年以降の会社法改正やコーポレートガバナンス・コードの制定を含む一連のコーポレート・ガバナンス改革の内容・影響について検討した。第二に、ドイツ法の会社役員賠償責任保険に関する議論の調査・分析を行った。第三に、これまでの研究成果を総合的に整理し、分析を行った。本研究は、会社法上の役員の地位や責任に係る規律と適合し、当該規律を適切にエンフォースできる、あるべき会社役員賠償責任保険の商品構成を提示することを目的とする。以上の研究目的の達成に向けて、平成27年度においては、第一に、日本における会社役員賠償責任保険をめぐる既存の議論を調査・検討した。会社役員賠償責任保険については、近年様々な議論が行われている。とりわけ経済産業省「コーポレート・ガバナンス・システムの在り方に関する研究会」報告書(平成27年7月24日公表)は、実務に与える影響が大きいと考えられることから、その議論・内容の把握に努めた。そのほか、保険会社実務担当者と保険法研究者との共同研究会において、保険会社の実務担当者による会社役員賠償責任保険の現状に関する報告を聞く機会があり、その議論に参加して、保険実務の理解を深めた。第二に、アメリカ法における会社の役員の地位および責任に関する規律について、調査・検討した。第一の検討も第二の検討も次年度以降、会社役員賠償責任保険について具体的な検討を進めるための前提的知見を得ようとするものである。いずれもおおむね計画通り遂行できたと考えている。特に、第二の検討について、サーベンス・オクスリー法(2002年)やドッド・フランク法(2010年)による改正内容とその意義に関する議論をフォローでき、アメリカのコーポレート・ガバナンスに関する理解が深まったことは成果の一つである。当初の研究計画では、平成27年度に、ドイツ法における会社役員の地位・責任に関する規律の調査・検討をすることを予定していたが、着手できなかったこと、他方で、それ以外の事項についてはおおむね計画通り調査を進めることができたことから、「やや遅れている」との評価が妥当と考える。以上の研究目的の達成に向けて、平成28年度においては、第一に、平成27年度に引き続き、日本における会社役員の地位・責任および会社役員責任保険をめぐる議論の展開をフォローした。第二に、平成27年度に着手できなかったドイツ法における会社役員の地位・責任に関する規律の調査・検討を行った。第三に、平成27年度に引き続き、アメリカ法における会社役員の地位・責任に関する規律に関する議論の展開をフォローしつつ、平成28年度は会社役員賠償責任保険に関する議論の調査・検討を行った。第二に関しては、ドイツの会社法研究者が来日された際に、質問・議論する機会を得ることができ、有益な示唆が得られた。第三に関しては、平成28年7月に、米国・シカゴ大学ロースクールにおいて開催されたSummer Institute in Law and Economicsに参加し、シカゴ大学の教員および他の参加者との議論を通じて、有益な示唆が得られた。また、第二および第三に関して、平成29年3月に、オーストリア・ウィーン大学において開催された会社役員賠償責任および会社役員賠償責任保険に関するカンファレンスに参加した。同カンファレンスでは、世界主要国の総合的な比較法研究の成果の報告と保険会社担当者の実務的な観点からの報告、経済分析の観点からの報告などが行われた。このカンファレンスにおいて、様々な資料を得ることができるとともに、報告者・参加者との議論を通じて、有益な示唆が得られた。本研究は、4年間の研究期間を、基礎的調査期(1年目)、本格的調査期1(2年目)、本格的調査期2(3年目)、比較法的考察期(4年目)に分けて進めることとしている。本年度は、研究2年目であり、本格的調査期1に当たる。本年度は、昨年度に引き続き、日米独の会社役員に関する規律に関する議論の調査・検討を遂行・深化させるとともに、日米の会社役員賠償責任保険に関する議論の調査・検討を遂行・深化させることができた。これらはいずれも、ほぼ当初計画どおりの進捗状況であり、おおむね順調に進展していると評価できる。以上の研究目的の達成に向けて、平成29年度においては、第一に、日本法における会社役員の地位・責任および会社役員責任保険をめぐる議論を継続的にフォローし続けるとともに、非営利法人における役員の地位・責任について、営利法人である株式会社の役員の地位・責任との異同を中心に検討を行い、営利法人と非営利法人の性格の相違が役員の地位・責任ルールに与える影響を明らかにした。この検討を通じて、会社役員の地位・責任の特質をより深く理解できるようになり、この知見は、今後、比較法的考察を行うための前提的知見として役に立つものと思われる。第二に、アメリカ法における会社役員の地位・責任および会社役員責任保険をめぐる議論をより深掘りするとともに、アメリカ法律協会が現在策定中の責任保険リステイトメントの内容および損害賠償責任と責任保険との相互関係に関する議論を調査した。

これにより、特に損害賠償責任法・保険法の理論的前提を理解することができたので、今後、比較法的考察を行うための基盤となる知見を得ることができたと考えている。また、平成29年度後半は、アメリカ合衆国で長期在外研究をする機会が得られたため、上記各事項について現地の研究者に直接質問し、教示を受けることにより、議論状況をより深く理解することが可能になった。本研究は、4年間の研究期間を、基礎的調査期(1年目)、本格的調査期1(2年目)、本格的調査期2(3年目)、比較法的考察期(4年目)に分けて進めることとしている。本年度は3年目であり、本年度までで日米独の会社役員に関する規律・議論と会社役員賠償責任保険に関する規律・議論の調査・検討を終える予定であった。しかし、ドイツにおける会社役員賠償責任保険に関する調査・検討については終えることができなかったので、現状の進捗状況はやや遅れていると評価すべきであると考える。本研究は、会社法上の役員の地位・責任に係る規律と適合し、当該規律を適切にエンフォースできる、あるべき会社役員賠償責任保険の商品構成の提案を行うことを目的とする。以上の研究目的の達成に向けて、最終年度である平成30年度においては、第一に、日本法における会社役員の地位・責任および会社役員責任保険をめぐる議論を継続的にフォローした。特に平成26年以降の会社法改正やコーポレートガバナンス・コードの制定を含む一連のコーポレート・ガバナンス改革の内容・影響について検討した。第二に、ドイツ法の会社役員賠償責任保険に関する議論の調査・分析を行った。第三に、これまでの研究成果を総合的に整理し、分析を行った。今後は、平成27年度の成果を踏まえながら、平成27年度に未着手であったドイツ法における会社役員の地位・責任に関する規律の調査・検討を進めると共に、平成28年度研究計画に従い、アメリカ法における会社役員賠償責任保険に関する規律の調査・検討を進めることとする。平成29年度は、平成28年度までに検討した知見を踏まえて、従前の調査・検討をさらに深化させるとともに、新たにドイツ法における会社役員賠償責任保険に関する議論の調査・検討を行う予定である。平成28年度に、会社役員賠償責任保険のドイツ人研究者とコンタクトを取ることができたので、今後は、適宜現地の研究者や実務家の協力を得ながら、検討を進めることとしたい。平成30年度は、研究の最終年度である。調査・検討が不十分な点について、調査・検討を進めるとともに、今までに得られた知見を整理する。その上で、外国法と日本法との比較検討を行い、研究成果の取りまとめを行いたい。ドイツ法の調査に着手できなかったため、ドイツ法関係文献の購入が抑制されたことによる。平成28年度は、平成27年度に未着手となったドイツ法の調査に着手する予定であり、関係文献を購入する必要があると考えられ、平成28年度分の交付額と併せておおむね計画通りの支出を見込んでいる。
細胞を認識する材料表面の血漿,蛋白質層形勢過程に関する研究

担癌患者における末梢血中の顆粒球数リンパ球数比のバランスを調節すること、患者の腫瘍免疫能を増強させる試みは、体外循環的手法を用いた顆粒球選択吸着除去により治療が行われた。治療そのものについての評価は他の研究者の報告で明らかになる予定。本研究の目的は、その際に顆粒球吸着材料として用いられる材料表面で生じた現象の知見を得ることにある。まず、吸着材料として用いたセルロースビーズの表面付着たんぱく質の同定を行った。担癌患者に対し血流量50ml/minにて30分間体外循環治療を行った樹脂(札幌北楡病院米川博士より提供)をSDS処理したものとヘパリン添加生理食塩水処理して抽出したたんぱく質を、電気泳動にて分析した結果フィブロネクチンが多量に付着していたことがわかった。特にヘパリンによる抽出ではフィブロネクチンの付着の時間経緯が、顆粒球の付着と関連が予想された。ただし実際の治療と顆粒球数およびフィブロネクチン自体の除去についての関係は明確にはできなかった。今回の研究では、そうした標的となるたんぱく質の同定とその存在比についての情報が得られたことで、今後はとくにフィブロネクチンの材料付着の時間経緯を細胞成分を混合させた系で測定することにより、その相関関係を明らかにすることが可能になったと考える。
数論的多様体の代数的K理論の研究

本研究の目的は、キューブや代数サイクルといった幾何的な対象を用いて、代数的K理論の元を構成する方法を確立することであった。得られた結果は次のとおりである。(1)楕円曲面上の一次や二次のキューブで、そのBott-Chern形式がKronecker-Eisenstein級数を用いて表されるものを構成した。(2)Goncharovにより定義された代数的サイクル上の積分が、レギュレーター写像に一致することの証明を考案した。(3)Goncharovによる代数的サイクル上の積分をBlochのポリログサイクルに対して計算して、それがポリログ関数を用いて表わされることを示した。本研究の目的は、キューブとそのボット・チャーン形式という幾何的な対象を用いてレギュレーター写像を計算することであった。本年度は特に、楕円曲線のレギュレーター写像を研究した。楕円曲線の2次のK群からのレギュレーター写像の像が、2次のクロネッカー・アイゼンシュタイン級数の値を用いて表示できることは、研究を始める前から知られていた。そこで、単独の楕円曲線を考えるのではなく、楕円曲線の族である楕円曲面の幾何を使って、この結果の別証明を得ることを目標に研究した。より具体的に言うと、楕円曲面上の次数2のキューブで、そのボット・チャーン形式が2次のクロネッカー・アイゼンシュタイン級数で表されるものを構成することを目標に研究した。まず初めに、楕円曲面のパラメーター空間上の次数1のキューブで、そのボット・チャーン形式が1次のクロネッカー・アイゼンシュタイン級数で表されるものを構成した。これは、楕円曲面上の直線束のドリーニュ・ペアリングを使って定義される。次に、特別な次数1のキューブのボット・チャーン形式は完全な微分形式であり、その積分として得られる微分形式が2次のクロネッカー・アイゼンシュタイン級数を用いて表されることを発見した。それから、楕円曲面が有理曲面であるときは、その特別な次数1のキューブがある次数2のキューブの境界になることを証明した。昨年度は、有理楕円曲面上の1次のキューブと、それを境界とする2次のキューブが存在することを示した。本年度はそれに引き続いて、次の結果を得ることを目標に研究を進めた。(1)これらの楕円曲面上の2次のキューブの中で、そのポット・チャーン形式が2次のアイゼンシュタイン・クロネッカー級数を用いて表されるものが存在することを示す。(2)これらの2次のキューブをファイバーである楕円曲線に制限することによって、楕円曲線上の2次の代数的K群の元を構成する。(1)については、ある程度満足できる結果を得ることができた。つまり、例えば有理楕円曲面の特異ファイバーのコンフィギュレーション・グラフが可縮ならば、条件をみたすキューブが存在することが示せた。(2)については、楕円曲面に付随するモーデル・ベイユ格子の理論を用いての研究を試みた。ここで得られた有理楕円曲面上の2次のキューブは、楕円曲面のセクション、つまりモーデル・ベイユ群の元のある一次結合に付随して与えられる。したがって、実際に例を研究して2次の代数的$K$群の元を構成するためには、有理楕円曲面のモーデル・ベイユ群の情報が必要である。モーデル・ベイユ格子が計算されている有理楕円曲面を例にとって、それに本研究で得られた2次のキューブの構成を適用することによって、ごく限られた場合ではあるが、楕円曲線の2次の代数的K群の元を構成した。昨年度までは、キューブとそのポット・チャーン形式を用いてレギュレーター写像を研究していたが、その方法では計算可能な具体例を構成することが困難であるということがわかった。したがって、今年度から、代数的サイクルを用いたレギュレーター写像の研究を開始した。Goncharovは、代数的サイクル上の積分を用いて、高次チャウ群からDeligneコホモロジーへの写像を構成したが、それがレギュレーター写像に一致することは証明しなかった。代数サイクル上の積分を具体的に計算することによってレギュレーター写像を研究する、という本研究の目的のためには、あらかじめこの一致を証明しておくことは必要不可欠である。したがって筆者は、その一致を証明することを目標に研究した。そして、高次チャウ群に関するLevineの研究にアラケロフ幾何学の手法を組み合わせることにより、その証明の枠組みを作った。だが、その証明は大変長く、その詳細に関して調べるべきことがたくさんあるので、完全な証明を完成させることはできなかった。来年度にはそれが完成すると思われる。また、Goncharovによる代数的サイクル上の積分を特別なサイクルに対して計算することによって、ポリログ関数が現れることがわかった。この結果は、これまでに指摘されてきたレギュレーター写像とポリログ関数との関係を、新しく説明するものであり、また、Goncharovの写像が本当にレギュレーター写像を与えることの状況証拠にもなっている。

それから、その結果を用いて、代数体のレギュレーター写像に関するZagier予想の別証明を与えることができた。今年度は、昨年度に引き続き代数サイクルを用いたレギュレーター写像の研究を行った。Goncharovは、代数サイクル上の積分を用いて、高次チャウ群からDeligneコホモロジーへの写像を構成したが、それがレギュレーター写像に一致することは証明しなかった。代数サイクル上の積分を具体的に計算することによってレギュレーター写像を研究する、という本研究の目的のためには、あらかじめこの一致を証明しておくことは必要不可欠である。したがって筆者は、その一致を証明することを目標に研究した。昨年度はこの証明の枠組みを作ったが、本年度はその証明の詳細について研究した。具体的には、iterated doubleとよばれる既約でない代数多様体(球面の代数幾何における類似物)上のチャーン類写像の理論を、ホモトピー代数を用いて構成することを目指した。しかし、その構成の詳細を調べて、その結果を論文にまとめるまでには至らなかった。また、2009年2月に鹿児島大で行われた研究集会で、本研究の概要を発表した。また、Goncharovの定義した写像がレギュレーター写像と一致することの別証明を見つけた。これはFeliu氏の学位論文の結果と筆者自身が上記の証明の詳細を研究している中で得られたある考察を組み合わせることによってなされる。このことを代表者は、本年度の初めに行ったBarcelona大学のBurgos教授との討論の中で確認した。現在、共著の論文を作成中である。
村落社会の生活様式にみる豊かさの社会理論

平成5年度は『地域社会と住民生活』というタイトルで離島生活に関するアンケート調査を実施した。1.調査場所沖縄県石垣市2.調査内容石垣市民の家や地域社会に対する意識および消費生活や消費行動について3.調査対象市内の20才69才の男女300名4.調査時期平成6年3月5.調査結果現在回収中で未だ結果を出す段階でない平成5年度は『地域社会と住民生活』というタイトルで離島生活に関するアンケート調査を実施した。1.調査場所沖縄県石垣市2.調査内容石垣市民の家や地域社会に対する意識および消費生活や消費行動について3.調査対象市内の20才69才の男女300名4.調査時期平成6年3月5.調査結果現在回収中で未だ結果を出す段階でない
ビデオ画像の三次元的動的解析による顔面表情運動障害の診断・治療支援システムの開発

顔面神経麻痺などを原因とした顔表情運動障害に対し、麻痺診断、治療方針や形成再建治療などの手術計画の決定、治療経過や術後評価などの支援などを目的として、「ビデオ画像の三次元的動的解析による顔面表情運動障害の診断・治療支援システム」を構築して、この支援システムを臨床に応用し、システムの有効性の検証と改良を行ない、さらには標準的な評価システムとして国内外への普及を行なった。本研究の内容や開発したシステムの詳細、また顔面表情運動障害への応用の詳細につき、論文や学会発表、ホームページで公開した。1、治療・手術支援システムの改良とシステム実験(1)鏡利用の3次元撮影装置・頭部固定装置の検証や表情撮影法の改良を行い、また被験者への撮影表情指導のビデオ作成を進めた。(2)現行の日本語表示より全英語表示へのシステム表示法の改良を進め、より普遍性の高い部位別ウインドウ設定法を検討した。(3)開発した3次元表情運動解析のアルゴリズムのシステム実装を検討し、移動量測定のキャリブレーション機能の検証を進めた。(4)撮影時の体動による測定誤差対策として、解析ソフトでの体動移動量の処理法を検討した。(5)3台のビデオカメラによる3次元撮影装置を製作し、健常者での試用と患者での臨床応用を進め、その3次元表情運動解析のアルゴリズムの検討を進めた。2、治療・手術支援システムの臨床応用と評価顔面神経麻痺の保存療法や再建手術、顔面神経麻痺による病的共同運動・拘縮や顔面痙攣に対するボツリヌストキシン治療を対象として、治療や手術前後に各種表情運動のビデオ撮影を3次元撮影装置(頭部固定装置あるいは3台のビデオカメラ利用)も利用して行った。これらのビデオ撮影データをシステムにより表情運動解析し、解析結果の臨床的意味付け及びこれに基づいた手術・治療計画の検討や治療評価を行った。また、顔面運動障害の患者アンケートによる自覚症状の改善度、機能的検討(兎眼、食事のもれ・言語の口唇機能)、柳原法やHB法による評価、などと解析結果を比較・検討し、開発したシステムの有効性につき検討した。筋移植や神経再建例では筋電図(誘発電位や干渉波形)検査を行い、筋電図検査による表情運動評価と比較・検討した。3、研究成果の発表、システムの普及本研究の内容や開発したシステムの詳細、また顔面表情運動障害への応用の詳細につき、インターネットでの配信を目指してホームページの作成を完成させ、ホームページを公開した。1、治療・手術支援システムの改良とシステム実験表情撮影法の検討として被験者への撮影表情指導のビデオ作成、現行の日本語表示より全英語表示へのシステム表示法の改良、開発した3次元表情運動解析のアルゴリズムのシステム実装、撮影時の体動による測定誤差対策については予定まで進んでいないが、3台のビデオカメラによる3次元撮影装置については製作・健常者への試用から臨床応用にまで進めることができた。2、治療・手術支援システムの臨床応用と評価治療や手術前後に各種表情運動のビデオ撮影を行って、システムにより表情運動解析し、解析結果の臨床的意味付け及びこれに基づいた手術・治療計画の検討や治療評価は予定通り進行した。3、研究成果の発表、システムの普及本研究や開発したシステムの詳細について、また顔面表情運動障害への応用の詳細についてのホームページ作成を進めたが、ホームページ掲載まで達成した。1、治療・手術支援システムの改良とシステム実験:(1)鏡利用の3次元撮影装置・頭部固定装置の検証や表情撮影法の改良を行い、また被験者への撮影表情指導のビデオ作成を進めた。

(4)撮影時の体動による測定誤差対策として、解析ソフトでの体動移動量の処理法を検討した。(5)3台のビデオカメラによる3次元撮影装置を製作し、健常者での試用と患者での臨床応用を進め、その3次元表情運動解析のアルゴリズムの検討を進めた。2、治療・手術支援システムの臨床応用と評価:顔面神経麻痺の保存療法や再建手術、顔面神経麻痺による病的共同運動・拘縮や顔面痙攣に対するボツリヌストキシン治療を対象として、治療や手術前後に各種表情運動のビデオ撮影を3次元撮影装置(頭部固定装置あるいは3台のビデオカメラ利用)も利用して行った。これらのビデオ撮影データをシステムにより表情運動解析し、解析結果の臨床的意味付け及びこれに基づいた手術・治療計画の検討や治療評価を行った。また、顔面運動障害の患者アンケートによる自覚症状の改善度、機能的検討(兎眼、食事のもれ・言語の口唇機能)、柳原法やHB法による評価、などと解析結果を比較・検討し、開発したシステムの有効性につき検討した。筋移植や神経再建例では筋電図(誘発電位や干渉波形)検査を行い、筋電図検査による表情運動評価と比較・検討した。3、研究成果の発表、システムの普及:本研究の内容や開発したシステムの詳細、また顔面表情運動障害への応用の詳細につき、論文投稿や学会発表を行い、ホームページの作成を完成させ公開した。顔面表情運動障害の診断・治療支援システム開発のための臨床応用データ取得数が研究計画で予定した人数に達せず、充分なデータ解析ができなかった。また主研究連携者の異動による研究体制の変更があり、かつ小人数の所属診療科の私以外の専門医が育児のため充分な診療活動ができず、診療活動に当てる私の時間割合が大きくなり研究にさける時間が減少したことなどで、研究遂行が遅延した。1、治療・手術支援システムの改良とシステム実験:(1)鏡利用の3次元撮影装置・頭部固定装置の検証や表情撮影法の改良を行い、また被験者への撮影表情指導のビデオ作成を進めた。(2)現行の日本語表示より全英語表示へのシステム表示法の改良を進め、より普遍性の高い部位別ウインドウ設定法を検討した。(3)開発した3次元表情運動解析のアルゴリズムのシステム実装を検討し、移動量測定のキャリブレーション機能の検証を進めた。
アクションリサーチ(SSM)による看護師教育支援:災害看護への動機づけ

本研究の目的は、アクションリサーチ(SSM)を用いて、災害看護への動機づけを相互支援するプロセスを明示することであり、有事の際に貢献できる看護師育成を目指す。ワークショップと実践を通して、「災害看護に対する思い」と「変化」を明確にし、ミニプロジェクトを計画し実践した。その結果、災害に関する仲間が身近にいることに気づき、相互支援となる仲間作りが可能となった。なお、2011年3月の東日本大震災では、被災地支援・後方支援として、研究参加者が自ら率先して活動している。従って、本研究は有事の際に活動できる看護師育成に寄与できたと確信している。本研究の目的は、SSMワークショップを通して、看護師が災害看護に継続して取り組む際に生じる現実問題を、参加者の実感を基に明確にする。災害への動機づけを維持するための実践活動を行ない、参加者の"思い"の変化を「思いのモデル」を用いて明らかにすることである。平成21年度は、施設の種別、規模、機能に関わらず、災害看護に興味を持っている12名を研究協働者として参加してもらい、SSMワークショップ(1)「思い」を表現し、思いのモデルを用いて「思い」のアコモデーション(2日間)(2)比較表を用いて訓練ポイントの導出(1日間)(3)エマルゴトレーニング(災害訓練)1日、(4)災害看護訓練実践による気づきの振り返り、「思い」のアコモデーション(2日間)を行った。参加した人々の思いの変化、それぞれのステージでの学びを明らかにした。その結果、参加者が災害看護への思いを具現化でき、日常の看護と災害看護を連動して考えられる教育の重要性、SSMは学習者のニーズを基にした教育を実践することに寄与し、看護師の災害看護への動機づけに役立つ可能性が明らかになった。またワークショップを通して、本音で議論することにより、日常業務以外で関わりを持つ仲間の存在やネットワークの重要性も示唆された。災害に常時関わることは困難であり、今年度の結果が日常業務の中で、どのように変化するか6ヶ月以上経過した後のワークショップを通して、「思いの変化」を明確にしていく。H22年度は、H21年度に実施したSSMワークショップで学んだ「災害看護を意識することの大切さ」を、どのようにすれば臨床現場で意識できるのかを明確にする。また、災害看護に対する「思い」が一定期間を経た後に、どのように変化するかを明確にし、災害看護への動機づけを維持するためのプロセスを評価し明示することを目的とし、H21年度に参加した6名と今年度から参加した3名を加えた9名でワークショップを展開した。(1)昨年から一定期間経た後の災害看護への「思い」を絵(リッチピクチャー:RP)で表し、この1年間の振り返り(2)災害看護への「思い」のアコモデーション(3)ミニプロジェクトの構想と発表(4)ミニプロジェクトの実践(5)実践内容の発表(6)災害看護への思いRP作成(7)学びと課題というプロセスで実践した。その結果、昨年度のワークショップ終了時には、個々の災害看護への動機づけが強まっていたにも関わらず、職場内に災害看護に興味を示す人がいないなどの状況下から、「孤独感」を感じて意欲が減退している人が多くいた。それぞれ自己の「災害看護への思い」を踏まえ、実践可能な範囲で災害看護を日常看護と連動していけるミニプロジェクト計画し、実践した。実際にプロジェクトを展開することにより、参加者全員が「災害看護」を「日常看護」の中でも意識し、職場内外で「災害看護」について語り合う機会を設けることができた。参加者は「行動してみることで、近くに多くの仲間がいることに気づく」ことができ、職場内での災害看護への動機づけを維持する第一歩につながったと考えられる。なお、2011年3月11日の東日本大震災の被災現場・後方支援に研究参加者が自ら率先して活動している。本研究は有事の際に活動できる看護師育成に寄与できたといえる。
分裂病偽常染色体領域仮説の細胞遺伝学的・分子遺伝子学的検討

1.はじめに:1987年ロンドンのDr.T.Crowは性別による同胞一致率など臨床遺伝学的所見にもとづいて、機能性精神障害の責任遺伝子座位が、性染色体の偽常染色体領域にあると主張した。この偽常染色体仮説はたちまち注目を集め、現在の生物学的精神医学界のもっともホットな話題となっている。しかしながら本仮説は、もっぱら臨床遺伝学的所見にもとづいて提起されている。われわれは、この領域が含まれる、きわめて稀な性染色体異常症例を用いて細胞遺伝学的・分子遺伝学的に、この仮説を検討した。2.対象.:精神分裂病をともなうXX男性2例およびX/Y転座の1例である。3.方法:これらに対して採血を行い、(1)リンパ球培養の後高精度分染法による、break pointおよび転座部位の同定をおこなった。(2)同様に採血を行い、DNAを抽出し、偽常染色体領域近位部に存在するプロ-ブをもちいて、3症例の偽常染色体の重複領域を検討した。4.結果:XX男性2例について切断点は、1例はいずれもTDF領域以下での交叉あり、1例はDXYS14とMIC2の中間領域とTDF領域以下の交叉であった。したがって偽常染色体領域仮説を示唆するMIC2領域の重複は1例では見られなかった。またX/Y転座の1例では切断点はXp22とYq11であったが、これは偽常染色体のモノソミ-の所見であり、仮説を支持しないと考えられた。5.考察:以上の結果から偽常染色体仮説は否定的である。
脳原発悪性リンパ腫におけるMTX単独療法に対する感受性バイオマーカーの探索

ヒト中枢神経原発悪性リンパ腫(Primary central nervous systemlymphoma:以下PCNSLと表記)は中枢神経系に限局した節外性リンパ腫で、同疾患に対してはロイコボリン救援療法を前提としたメソトレキセート大量化学療法(High dose methotrexate:以下HD-MTXと表記)を3クール実施した後に、全脳に3040 Gyの放射線治療(whole brain radiation therapy:以下WBRTと表記)を実施するのが現行の標準的治療法である。しかしながらPCNSLの再発率は依然高く、最終的には腫瘍死あるいは遅発性治療関連中枢神経毒性(白質脳症)による高次脳機能の低下を余儀なくされる症例は多く、脳機能を良好に維持しつつ治癒に至る症例の割合は非常に少ないのが現状である。PCNSL症例の半数を占める60歳以上の患者では、HD-MTXとWBRTを併用することで白質脳症による高次脳機能障害を生じるリスクは上昇することが知られており、QOLを高い状態に維持しつつ如何に生存期間を延ばせるかが臨床的課題である。もしHD-MTXのみで長期間CRを維持できる症例を事前に予測し、個々の患者に対して最適なテイラーメード医療を提供するための分子マーカーが判明すれば、WBRTの回避や照射線量の低減を試みる臨床試験を検討することも可能となる。本研究では「HD-MTX単独治療」によってCRが得られた患者群(以下「CR群」)と、HD-MTXへの反応が乏しく同治療を3回終了した時点でPDと判定されWBRTを実施した患者群(以下「PD群」)を比較することにより、HD-MTX療法に対する感受性を高い精度で事前予測できる「遺伝子マーカー」を探索中である。研究は概ね当初の計画通りに進行中である。Training cohort(CR群:10症例・PD群:10症例)である

20症例のPCNSLに由来するDNA標本を対象に、ゲノムシーケンスならびにゲノムメチル化解析を実施し、相関解析・連鎖不均衡解析等の統計学的手法を用いてHD-MTX療法の感受性に関わるジェノタイプ・マーカーおよびエピジェノタイプ・マーカーを抽出し、最終的にCR群とPD群間のχ2検定のP-valueが0.00165未満(=判別精度の期待値が85%以上)のものを分子マーカーの候補として同定する。Sangersequenceおよびbisulfite pylosequencingによってその存在をvalidationした後、独立した“validation cohort"を対象として検証実験を行い、「HD-MTX療法単独治療」でCRとなることを事前予測する精度(感度・特異度)を求め、臨床的な有用性が期待できる分子マーカーを絞り込む予定である。研究に使用した消耗品の購入価格(海外からの輸入品)が為替の関係で当初の見積もりよりも安くなったため、332円が次年度使用額として残っています。研究に使用した消耗品が当初の見積もりよりも安く購入できたため、23361円が次年度使用額として残っている。次年度に物品費として使用予定である。
リンパ組織における遊走性マクロファ-ジの動態と免疫学的意義

近年マクロファ-ジは抗原情報を免疫担当細胞に与える細胞として注目されている。従って、1)リンパ組織内でのマクロファ-ジの動態を研究すること、2)抗原摂取マクロファ-ジがリンパ組織で抗体産生細胞の分化増殖にどう関与するかを研究することは、いづれも免疫学的に極めて重要な意義をもつ。1)墨摂取マクロファ-ジの動態。(1)脾臓---墨静注後のラット脾臓から採集した墨摂取マクロファ-ジを同系ラットの脾動脈に移入し、脾内での動態を経時的に観察した。マクロファ-ジは脾辺縁洞から一方白脾髄へ、他方赤脾髄へ遊走する。白脾髄に向かったマクロファ-ジは好んでリンパ濾胞に集まる(Miyakawa et al.,Anat.Rec.,1990)。ここは抗体産生、あるいは免疫学的記憶細胞産生の場として知られたところである。さらに、マイクロファ-ジに対するモノクロ-ナル抗体で染色すると、白脾髄を遊走し、リンパ濾胞に入るマクロファ-ジは、赤脾髄などに分布するものと違った特定のマイクロファ-ジ亜群に属することが分かった。(2)胸線--自己免疫を自然発症するマウス胸線の血管は墨の透過性が高進するだけでなく、マクロファ-ジの透過性高進が認められる(Kotani et al.,J.Anat.,1988)。このことは、さらに墨摂取腹腔マクロファ-ジの静注によって確かめられ(0hmori et al.,J.Anat.,1989)、自己免疫発症と密接な関係が推察された。1.墨摂取マクロファージの追跡:(1)墨静注後コラゲナーゼ処理によって得られた墨摂取脾マクロファージを脾動脈に投与した後の経時的脾切片の観察によって,墨摂取脾マクロファージは脾辺縁帯から赤および白脾髄の2方向に遊走し,白脾髄に侵入したマクロファージはリンパろ胞に好んで入ることが分った(観察継続中).(2)自己免疫病を自然発症するNZBWF_1マウスに墨を静注した後,経時的に胸腺を観察すると,胸腺実質内に墨摂取マクロファージが認められるので,血管の透過性高進によって墨が直接胸腺実質内に入ることが分ったが,面白いのは墨摂取遊走性マクロファージが血管壁を通って実質内に入る所見が得られたことである.他系のマウスにはこのような現象が認められなかったことから,自己免疫の発症機序と関連して大変興味深い(J.Anat.印刷中).2.抗原摂取マクロファージの意義:FITC標識フイコールを抗原としてラットに投与すると,抗原は脾辺縁帯マクロファージとmarginalmetallophil(MM)に限って取りこまれ,他の脾マクロファージには摂取されないこと,抗原保有細胞と抗FITC抗体産生細胞(AFC)を二重蛍光法で同時に観察すると,AFCはMMと密接な位置関係において出現すること,BrdUを投与すると,AFC前駆細胞およびAFCはMMとやはり密接な位置関係において分裂増殖することから,これら抗原摂取マクロファージが抗体産生細胞の分化増殖と調節している可能性が強く示唆される結果が得られた(細胞20,1988).近年マクロファ-ジは抗原情報を免疫担当細胞に与える細胞として注目されている。1.墨摂取マクロファージの動態:(1)採集した墨摂取マクロファージを脾動脈に投与した後の経時的脾切片の観察から、マクロファージは脾辺縁帯から赤及び白脾髄の2方向に遊走するが、白脾髄に進入したマクロファージはリンパろ胞に好んで入ることを確認した(論文作成中)

(2)マウスに墨を静注した後の経時的胸腺切片の観察から、自己免疫病を自然発症するNZBWF,マウスに限って、胸腺の血管に透過性高進が認められ、墨が直接胸腺実質内に漏出するだけでなく、墨摂取遊走性マクロファージが血管壁を通過した胸腺実質に入ることが示唆された(J.Anat.161,83-93,1988)。(3)そこで墨摂取腹腔マクロファージをマウスに静注して、胸腺の経時的観察を行うと、やはりNZBWF_1マウスに限って、血管壁を通過して胸腺実質に入るマクロファージが確認された(J.Anat.投稿中)。これらの所見は、NZBWF_1マウスにおいて抗原摂取マクロファージが一般循環系から胸腺内に侵入する可能性を示唆しており、自己免疫の発症機序解明に新たな所見を提供するものと思われる。2.抗原摂取マクロファージの動態と抗体産生細胞の検出:FITC標識フィコールを抗原としてラットに静注すると、抗原は脾辺縁帯マクロファージとmarginal matallophil(MM)に限って取り込まれ、他の脾マクロファージには摂取されないこと、抗原保有細胞と抗FITC抗体産生細胞(AFC)を二重蛍光法で同時に観察すると、AFCはMMと密接な位置関係において出現すること、BrdUを投与すると、AFCはMMとやはり密接な位置関係において分裂増殖することなど得られた所見から、抗原摂取マクロファージ抗体産生細胞の分化増殖との関連性についてさらに研究を進めている(細胞20,23-28,1983)。1)墨接種マクロファ-ジの動態。(1)脾臓ー墨を静注したラットの脾臓から墨接種マクロファ-ジを採集し、同系ラットの脾動脈に移入。経時的に脾の連続切片を作成し、脾内における墨マクロファ-ジの動態を観察した。マクロファ-ジはまず脾辺縁洞に現れ、一方白脾髄に向かって、他方赤脾髄に向かって遊走する。白脾髄に向かったマクロファ-ジは白脾髄の周辺部から、また動脈周囲リンパ鞘を通って深部に入り、好んでリンパ濾胞に集まる。こゝは抗体産生、あるいは免疫学的記憶細胞産生の場として知られている所なので、遊走するマクロファ-ジと免疫応答の間に密接な亜関係のあることが推察された。赤脾髄に向かったマクロファ-ジの一部は辺縁帯架橋を通って白脾髄に入り、リンパ濾胞に入り、リンパ濾胞に集まる。赤脾髄に達したマクロファ-ジの一部は、一般循環系に放出される。(2)胸腺ー自己免疫を自然発祥するマウスに、微摂取腹腔マクロファ-ジを移入。経時的に胸腺の連続切片を作成し観察した。マクロファ-ジは胸腺血管を透過し実質内に出現。胸腺血管の透過性高進と自己免疫発症との密接な関連性が推察された。2)抗原接種マクロファ-ジの動態と抗体産生細胞の検出。我々が開発した抗原特異的抗体産生細胞その分裂細胞、マクロファ-ジの亜集団(ED1,2,3モノクロ-ナル抗体)を同時に観察できる三重染色法を用いて観察した結果、FITC標識フイコ-ル抗原を投与したラットの白脾髄の中心動脈周囲リンパ鞘の周辺領域において、分裂する抗体産生細胞が特定のマクロファ-ジが抗原特異的抗体産生細胞の分化増殖の微小環境作りに重要な役割を果たすことを強く示唆した。
ケージド脂肪酸油滴が示す内部応答と連動した走光性

本課題では、疎水的なケージドオレイン酸から油滴が、紫外線照射下で、界面活性のあるオレイン酸を生じる反応を利用して実現する自走性ダイナミクスに関する研究を行ってきた。研究全体を通じて1.光分解反応が油滴の紫外線照射面で優先的に進行することで、油滴表面に生じた表面張力差が、油滴の駆動を引き起こしていること。2.駆動開始と同時に出現する油滴内部の対流が、油滴表面の表面張力差を維持する役割を担っていること。3.結果として、紫外線照射方向にのみ駆動する走光性ダイナミクスが実現されることが明らかとなった。さらに、従来の自己駆動油滴にはない、駆動の開始/停止制御や方向制御や、外界から物理的に切り離された微少空間内での駆動にも成功した。走光性油滴に代表される、ケージド化合物を利用した本系の特徴は、光照射によってその反応性を制御できることにある。そこで、本研究期間中に開発した二重ベシクルの調整に用いた方法を拡張し、光感受性のないベシクルの内部に、走光性油滴を封入した「油滴封入ベシクル」を作製し、ベシクルに封入された油滴が駆動体となって、ベシクル全体の動きを誘起する系の構築を目指した。少数個の油滴が封入されたベシクルに紫外線を照射したところ、約8割に何らかの駆動が確認された。これは、光分解反応によって生じたオレイン酸が内水相を介してベシクル膜へと達し、これがベシクル外側に不均一な表面張力勾配を作り出した結果であると推測される。動きを持たない対象に、駆動体を付与することで実現されたこの駆動現象は、分子モータの動きを利用して全体的な動きを作り出す微生物の運動実現機構と類似性があり意義深い。本課題は、紫外線を照射されることによりオレイン酸へと変化するケージドオレイン酸を主成分とする油滴が、紫外線下で示す走光性ダイナミクスにおいて、1)走光性ダイナミクスを引き起こす油滴を構築するケージドオレイン酸分子の最適化2)油滴のマクロな運動ダイナミクスと内部のダイナミクスとの関連性の解明、3)紫外線の非侵襲性を利用した微小空間内での駆動の実現と活用を目的とした研究を行う。研究初年度となる28年度は研究計画に基づき、駆動を引き起こす光の波長の変調や、光感受性の向上を目的に、新しいケージドオレイン酸の合成を行う。また、油滴のダイナミクスを観察するのに最適な実験系を構築し、紫外線照射中の油滴のマクロなうごきや、その内部の状態の詳細な観察を通じて、油滴のダイナミクスの発現機構の解明を目指した研究を行った。その結果、高い紫外線感受性を有するケージドオレイン酸や、可視光で光分解反応を示すケージドオレイン酸などを新たに合成し、従来型の油滴系とは異なる特徴を持った紫外線応答性を確認するとともに、次年度以降で計画している微小空間内部で駆動可能な油滴系の構築に成功した。また、従来用いてきたオレイン酸ニトロベンジルからなる油滴の紫外線照射下でのダイナミクスの観察から、本油滴系に見られる走光性や非線形の加速現象は、紫外線照射面で優先的に進む光分解反応や、光分解反応で生じたオレイン酸の表面濃度、および、一定以上の紫外線照射時間以降に油滴内部に出現する対流の効果を明らかにした。28年度の研究計画に則り、新しいケージドオレイン酸の合成と、自己駆動油滴の走光性ダイナミクスの観察を行った。分子の合成では、従来の分子と比較して紫外線に対して高い感受性を持つ4,5-ジメトキシ-2-ニトロベンジル基を保護基とする分子や、可視光で光分解反応が可能なクマリニルメチル型保護基を持った分子を合成した。得意に、前者からなる油滴では、吸光係数の増大に伴い、紫外線の油滴への透過性が大きく減少することで、従来型の分子では走光性を示し得なかった10 μm付近の油滴でも駆動性を示すことを確認した。このことは、次年度以降計画している、ベシクルやw/oエマルション中への油滴封入を行う上で、極めて有用である。また、本年度構築した新しい観察系を利用して、従来型の油滴が示す走光性や非線形加速が生じる機構の解明を行った。一定以上の紫外線照射時間により出現する油滴内部の対流が、駆動する油滴後方表面のオレイン酸濃度を低下させ、油滴に駆動をもたらす油滴前後の表面張力差を増大させると解釈された。本課題は、紫外線を照射されることによりオレイン酸へと変化するケージドオレイン酸からなる油滴を利用して、1)走光性ダイナミクスを引き起こす油滴を構築するケージドオレイン酸分子の最適化、2)油滴のマクロな運動ダイナミクスと内部のダイナミクスとの関連性の解明、3)紫外線の非侵襲性を利用した微小空間内での駆動の実現と活用を目的とした研究を行う。29年度は研究計画に基づき、前年に引き続き、光吸収特性の異なる新しいケージドオレイン酸の合成を行うとともに、油滴の運動を別の物体に作用させ、これにより物質輸送を行うための研究を行った。より高い紫外線応答性を持ったケージドオレイン酸として、吸光係数の増大を目的にニトロベンジル基の4,5位に二つのメトキシ基を導入した分子の合成を行い、従来分子と比較して、30倍程度の吸光係数を持たせることに成功した。

ただし、本分子の融点は室温以上にあり、純粋な状態での油滴形成が困難だったため、デシルオキシ基を持った分子の合成を行い、従来分子より高い吸光係数を持ちながら、室温で液体状態を取れる分子を得ることに成功した。この油滴上で起こる化学反応を利用して、油滴を包み混んだベシクルが駆動する系の構築を目指し、遠心沈降法を利用した、油滴封入ベシクルの構築に成功し、本ベシクルが紫外線照射下で、破裂や変形と言った特徴あるダイナミクスが実現されることを確認した。また、本系と同じ方法論で、光開孔性の小ベシクルが封入された二重ベシクルを調整し、紫外線照射によってベシクル内部状態を変調させることに成功した。研究計画に合わせ、いくつかの新しいケージドオレイン酸を設計合成した。新たに合成した、ジメトキシ体については、融点が室温以上であるため、常温下で油滴を形成できないという欠点はあった。これに対し、二つのアプローチを試みた。ひとつは20%程度の流動パラフィンを混入することにより、融点を下げ、室温下でも安定な油滴を作ることに成功した。もう一方は、分子設計を見直し、融点を下げる目的で長鎖アルキル基を導入した分子を新たに設計し合成した。本分子は単独でも液体であり、油滴形成に対する問題がない。ここで合成した分子は、従来の分子と比較して、近紫外線から可視領域にかけての吸収が大きいため、高い紫外線感受性とともに、可視光に対する応答性も期待される。また、油滴の運動を利用して、別の物体に動きを与えるための研究として、二種類のベシクル(油滴封入ベシクルと二重ベシクル)の構築に成功した。後者に関しては、ベシクル内部へのDNA放出に成功し、これら成果をまとめて論文として上梓した。前者については、紫外線照射下のダイナミクスを確認したところ、油滴表面で起こる光化学反応が、外側のベシクルに影響を与え、巨視的な変調を引き起こしうることが確認された。本課題では、疎水的なケージドオレイン酸から油滴が、紫外線照射下で、界面活性のあるオレイン酸を生じる反応を利用して実現する自走性ダイナミクスに関する研究を行ってきた。研究全体を通じて1.光分解反応が油滴の紫外線照射面で優先的に進行することで、油滴表面に生じた表面張力差が、油滴の駆動を引き起こしていること。2.駆動開始と同時に出現する油滴内部の対流が、油滴表面の表面張力差を維持する役割を担っていること。3.結果として、紫外線照射方向にのみ駆動する走光性ダイナミクスが実現されることが明らかとなった。さらに、従来の自己駆動油滴にはない、駆動の開始/停止制御や方向制御や、外界から物理的に切り離された微少空間内での駆動にも成功した。走光性油滴に代表される、ケージド化合物を利用した本系の特徴は、光照射によってその反応性を制御できることにある。そこで、本研究期間中に開発した二重ベシクルの調整に用いた方法を拡張し、光感受性のないベシクルの内部に、走光性油滴を封入した「油滴封入ベシクル」を作製し、ベシクルに封入された油滴が駆動体となって、ベシクル全体の動きを誘起する系の構築を目指した。少数個の油滴が封入されたベシクルに紫外線を照射したところ、約8割に何らかの駆動が確認された。これは、光分解反応によって生じたオレイン酸が内水相を介してベシクル膜へと達し、これがベシクル外側に不均一な表面張力勾配を作り出した結果であると推測される。動きを持たない対象に、駆動体を付与することで実現されたこの駆動現象は、分子モータの動きを利用して全体的な動きを作り出す微生物の運動実現機構と類似性があり意義深い。次年度以降は、研究計画に則って研究を進めていく。1)紫外線吸収効率(吸光係数)や吸収波長の異なる新しいケージドオレイン酸類の合成を進め、それらからなる油滴を構築し、照射された紫外線に対する応答性の違いを対応付けする。
C型肝炎ウイルスによる細胞のインターフェロン耐性の機構解析-IFNで誘導される二本鎖RNA活性化プロテインキナーゼの活性調節-

C型肝炎ウイルス(HCV)がインターフェロン(IFN)抵抗性を発揮する上で非構造タンパク質NS5Aと構造タンパク質であるコアタンパク質の両方が重要な役割を果たしている結果を得た.1.複数のINF抵抗性HCV株からコアタンパク質とNS5A部分をコードするcDNAを得た.2. NS5Aタンパク質を餌にした酵母two hybrid systemによるスクリーニングにより,IFNで誘導される二本鎖RNA活性化プロテインキナーゼ(PKR)を見つけた.大腸菌発現PKRを作製し,これを用いて試験管内でのPKRによる自己リン酸化活性の影響を調べたところNS5Aによる阻害効果を認めた.3.しかしながら,NS5Aだけではインターフェロン抵抗性は説明できないため,コアタンパク質に着目し,活性ゲル法とゲルシフトアッセイによりコアタンパク質のRNA結合能を解析してみた.するとコアタンパク質は一本鎖RNAに対する結合は弱く,二本鎖RNAに強く結合することがわかった.またその結合様式は塩基配列非依存性であった.4.コアタンパク質の二本鎖RNAに対する親和性を組み換え体PKRのそれと比較したところ,コアタンパク質の親和性はPKRとほぼ同程度で,定数はPKRの1/21/4倍程度であった.5.このことからPKRに対するコアタンパク質の影響を調べるた.そのために二本鎖RNAに依存してリン酸化活性を示すPKRを作製した.試験管内でコアタンパク質のPKR活性化活性に対する阻害効果を,二本鎖RNA存在下で調べたところ,コアが強くPKRの活性を抑制しすることを見つけた.このことは,HCVがIFN抵抗性を示す上でウイルスがコードするNS5Aとコアタンパクが重要な役割を果たしている.C型肝炎ウイルス(HCV)がインターフェロン(IFN)抵抗性を発揮する上で非構造タンパク質NS5Aと構造タンパク質であるコアタンパク質の両方が重要な役割を果たしている結果を得た.1.複数のINF抵抗性HCV株からコアタンパク質とNS5A部分をコードするcDNAを得た.2. NS5Aタンパク質を餌にした酵母two hybrid systemによるスクリーニングにより,IFNで誘導される二本鎖RNA活性化プロテインキナーゼ(PKR)を見つけた.大腸菌発現PKRを作製し,これを用いて試験管内でのPKRによる自己リン酸化活性の影響を調べたところNS5Aによる阻害効果を認めた.3.しかしながら,NS5Aだけではインターフェロン抵抗性は説明できないため,コアタンパク質に着目し,活性ゲル法とゲルシフトアッセイによりコアタンパク質のRNA結合能を解析してみた.するとコアタンパク質は一本鎖RNAに対する結合は弱く,二本鎖RNAに強く結合することがわかった.またその結合様式は塩基配列非依存性であった.4.コアタンパク質の二本鎖RNAに対する親和性を組み換え体PKRのそれと比較したところ,コアタンパク質の親和性はPKRとほぼ同程度で,定数はPKRの1/21/4倍程度であった.5.このことからPKRに対するコアタンパク質の影響を調べるた.そのために二本鎖RNAに依存してリン酸化活性を示すPKRを作製した.試験管内でコアタンパク質のPKR活性化活性に対する阻害効果を,二本鎖RNA存在下で調べたところ,コアが強くPKRの活性を抑制しすることを見つけた.このことは,HCVがIFN抵抗性を示す上でウイルスがコードするNS5Aとコアタンパクが重要な役割を果たしている.インターフェロン(IFN)に対する感受性(ISDR)を決めるといわれるC型肝炎ウイルス(HCV)の非構造タンパク質NS5Aに結合するタンパク質として日本鎖RNA依存性プロテインキナーゼ(PKR)を見つけ,これまでに次のような知見を得た.1.IFN治療してもウイルスタイタ-が下がらないIFN超抵抗性HCV株二種を得て,全領域をカバーするcDNAをlong RT-PCRで得た.NS5AのISDRのアミノ酸配列を調べたところ,一つは典型的な抵抗性型,もう一つは1アミノ酸の変異が見られた.3.NS5AのPKRに対する結合,およびそれによる酵素活性の影響を調べるために,組換え型GST-PKRを作成した.この組換え体は二本鎖RNA非存在下でも自己リン酸化活性を示したので,PKR自己リン酸化活性に対するNS5Aの阻害効果を調べところ,阻害効果は観察されなかった.4.またNS5A全長の組換え体を,GST融合タンパク質として,あるいはHis-tagを付加して発現し精製行ったところ,構造変化と半不溶性のために困難であったが,界面活性剤を用い,精製することができた.5.NS5Aは中央部に塩基性アミノ酸を多く含むことから,RNA結合活性を持っている可能性がある.そこでActivitygel法でcore,NS3,NS5Bをコントロールに精製NS5AのRNA結合を調べたところ,NS5AはRNA結合活性を全く示さなかった.C型肝炎ウイルス(HCV)がインターフェロン(IFN)抵抗性を発揮する上で非構造タンパク質NS5Aと構造タンパク質であるコアタンパク質の両方が重要な役割を果たしている結果を得た.1. INFで誘導される二本鎖RNA(dsRNA)活性化PKRを精製できた.大腸菌発馴PKRを精製し,ホスファターゼを作用させると,PKRはdsRNA依存的な自己リン酸化活性を示した.2.この組換え体PKRの自己リン酸化とeIF-2αを基質にしたリン酸化活性を指標に,NS5AのPKR活性化に及ぼす影響を試験管内で見たところNS5AはPKRの活性化を抑制した.3. HCVのウイルスタイターが高いとIFN耐性となる.その原因としてRNA結合タンパク質であるコアタンパクに着目した.コアタンパク質のRNA結合能を解析してみると,コアは塩基配列非依存的にdsRNAに強く結合することがわかった.

ゲルシフトアッセイによりコアタンパク質のdsRNA結合能を組み換え体PKRと比較すると,コアタンパク質の親和性定数はPKRの1/41/8倍程度を示した.すなわちコアタンパク質が高発現の場合,コアが複製中の二本鎖RNAに結合してPKRの活性化を抑制する可能性が考えられる.4.そこで組換え体PKRを用い,試験管内でPKR活性化の阻害効果をPKRの自己リン酸化とeIF2αのリン酸化で見たところ,コアが濃度依存的にPKRの活性を抑制した.このことはHCVのインターフェロン抵抗性が幾つかの異なる経路で発揮されていることを示唆している.