hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細胞内イオン環境と小胞輸送におけるＶ－ＡＴＰａｓｅの機能

破骨細胞への分化に伴い、リソソームが形質膜に向かって移動、融合することで、骨吸収に必要な酵素が分泌される。我々は、リソソームに局在するV-ATPase(液胞型プロトンポンプ)を構成するa3イソフォームが、微小管に沿った小胞輸送を制御するGTP結合タンパク質と特異的に結合することを見出した。a3は活性型(GTP型)より不活性型(GDP型)の因子と強く結合した。また、リソソームの移動には、この因子が活性型であることが必要であった。a3遺伝子欠損マウスの破骨細胞では、この因子はリソソームに局在しなかった。a3は、不活性型の小胞輸送調節因子をリソソームにリクルートしていると考えられる。本研究は、酸性環境の形成や小胞輸送において、プロトンポンプV-ATPaseが果たす役割の解明を目的としている。V-ATPaseは、ATPの加水分解とプロトンの輸送をサブユニット間の相対的な回転により共役している。哺乳類では、細胞あるいはオルガネラによって構造が少しずつ異なっており、この多様性が多彩な酸性環境の形成を可能にしていると考えられる。我々は、構造の違いによるポンプとしての性質の違いを明らかにするため、まず、酵母のV-ATPaseを用いて、サブユニット回転を一分子で観察する実験系を構築し、基質が過剰な条件下での回転速度や回転時に生じるトルクの大きさを解析した。今年度は、時間を延長して観察したところ、V-ATPaseは停止することなく連続回転することが明らかとなった。一方、類似の構造を持ち、回転機構の詳細が明らかになっているF-ATPase(ATP合成酵素)は、1秒ごとに連続回転と停止を繰り返すことが知られている。したがって、V-ATPaseが停止しないことは、ポンプとしての大きな特徴のひとつである。現在、回転機構を詳細に解析するため、空間解像度の改善を目指してプローブを検討している。小胞輸送については、破骨細胞におけるリソソームの形質膜近傍への輸送に注目している。これまでに、a3(プロトン輸送路を形成するaサブユニットのリソソーム特異的なイソフォーム)が、リソソームの輸送と、破骨細胞に特徴的な微小管の配置に必須であることを示した。今年度は、リソソームの輸送には酸性環境が重要であることを明らかにした。さらに、微小管上の輸送を制御するGTP結合タンパク質であるRab7を、a3がリソソームにリクルートすることを示した。Rab7のリクルートにより、リソソームが微小管に結合していると考えられる。これは、破骨細胞におけるリソソーム輸送の分子機構の解明につながる成果である。本研究は、プロトンポンプV-ATPaseの構造的多様性によるポンプとしての性質の違いと、各V-ATPaseが特定の場所に局在する機構の解析により、酸性環境を形成する原理の解明を目的としている。V-ATPaseはATPを加水分解する触媒部分とプロトンの輸送路からなり、触媒活性とプロトン輸送はサブユニット間の相対的な回転により共役している。したがって、多様なV-ATPaseのポンプとしての性質は、ATPの加水分解に依存した回転触媒機構を解析することにより比較できる。我々は、酵母V-ATPaseについて確立した酵素1分子の回転を観察する実験系を用い、回転時に生じるトルクは約36 pN nmであり、類似の構造を持つF-ATPaseより小さいことを明らかにした。回転を詳細に解析すると、1回転以下の戻りがしばしば観察された。回転中に、サブユニット間の相互作用が生じているものと考えられる。また、構造の多様性が回転に及ぼす影響を検討するため、酵母のサブユニットの一部をマウスのものに置換えたハイブリッドV-ATPaseを作成し、回転観察に必要な変異を導入した。局在については、破骨細胞に特異的なV-ATPaseの形質膜への局在に注目している。これまでに、a3とd2イソフォームを持つV-ATPaseは破骨細胞のリソソームに特異的であり、分化に伴いリソソームが形質膜近傍へ移動し融合することでV-ATPaseが形質膜に局在することを示した。さらに、a3遺伝子欠損マウスを用いて、リソソームの形質膜への移動にはa3が必須であることを明らかにした。24年度は、a3遺伝子欠損マウスの破骨細胞ではアクチンの局在は正常であるが、チュブリンの形質膜近傍の局在が消失することを見出し、V-ATPaseの局在と細胞骨格との関係を明らかにした。今後は、リソソームの移動におけるチュブリンの役割の解明に着手する。本研究は、V(液胞型)-ATPaseによる酸性環境の形成や小胞輸送の分子機構の解明を目的としている。

これまでに、構造的に多様なV-ATPaseの「ポンプ」としての性質を比較するため、酵母のV-ATPaseを用い、サブユニットが回転する様子を酵素一分子で観察する実験系を構築した。回転速度やトルクを測定したが、僅かな性質の違いを解析するには、空間解像度を改善する必要があった。今年度、実験条件を検討したところ、サンプルに含まれる界面活性剤が回転観察に影響することがわかった。そこで、適した界面活性剤の種類と濃度を決定した。プローブの大きさや導入する位置、酵素の精製など、引き続き実験系の改善を図る。小胞輸送に関し、破骨細胞への分化に伴いリソソームが細胞膜に向かって移動する現象に注目した。これまでに、リソソームの輸送にはV-ATPaseのa3イソフォームが必須であること、a3がオルガネラ輸送調節因子であるRab7と結合することを見出した。また、a3は破骨細胞に特徴的な微小管の形成にも必須であった。今年度、a3は活性型Rab7より不活性型と強く結合すること、また、Rab7はa3に特異的に結合する(a1、a2とは殆ど結合しない)ことを見出した。さらに、a3欠損マウスの破骨細胞では、Rab7はリソソームに局在しないこと、リソソームの輸送にはRab7が活性型である必要があることを示した。また、阻害剤を用い、輸送には、この酵素が形成する酸性環境が重要なことを示唆した。しかし、a3とRab7の結合に酸性度は影響しなかった。以上の結果から、分化に伴いa3は不活性型Rab7をリソソームにリクルートし、その後、Rab7が活性化されてリソソームが移動するというオルガネラ輸送の分子機構を明らかにした。これは、破骨細胞による骨吸収のメカニズムを理解する上で重要な知見である。生化学、細胞生物学、生物物理学V-ATPaseによる酸性環境の形成機構に関しては、酵母の酵素を用いた一分子観察系が構築済みであり、既に、回転速度、トルクの大きさや、連続的に回転するなどのポンプとしての特徴を明らかにしている。今後は、構造が少しずつ異なるV-ATPaseの解析に着手する予定である。また、オルガネラ輸送におけるV-ATPaseの役割については、a3遺伝子欠損マウスなどを用いて、細胞骨格系との関連性、酸性環境の重要性、a3によるRab7のリソソームへのリクルートなど、分子機構の解明に向けた重要な発見をしている。今後は、Rab7の活性化によるリソソーム輸送の制御とV-ATPaseによる酸性化の関連性に注目して解析を進める。以上のように本研究課題は、おおむね順調に成果を上げている。本課題は、構造的に多様なV-ATPaseのポンプとしての性質の比較と、破骨細胞におけるV-ATPaseの形質膜への局在機構の解明に着目している。ポンプとしての性質を解析するための一分子回転観察系と、Eサブユニットのイソフォームを酵母のV-ATPaseに導入した酵素の調製は完了しており、これから解析に取りかかる段階にある。また、破骨細胞に特異的なV-ATPaseを持たないマウスの脾臓マクロファージから破骨細胞を分化させる実験系は既に確立できており、この系を用いてa3イソフォームやチュブリンなど形質膜への局在に関わる因子の候補を同定した。
「専門看護師の科学的根拠に基づく実践」のための教育プログラムの開発

本研究は専門看護師14名を対象に「科学的根拠に基づく実践(Evidence-based practice(EBP))と文献の批判的吟味」に関するインタビューを行い、EBPの捉え方、文献の批判的吟味の阻害要因・促進要因を明らかにした。そして、科学的根拠に基づく実践のための文献の批判的吟味のための教育プログラムを開発し、9グループ26名(このうち本研究の対象となる専門看護師は11名)にプログラムを提供した。本研究の目的である「専門看護師(Certified nurse specialist(CNS))を対象とした科学的根拠に基づく実践(Evidence-based practice(EBP))のための教育プログラムの開発」について、今年度は1CNSへのインタビューを行い、EBPの阻害要因を取り除き、促進するための具体的なニーズを抽出、2「文献を批判的に吟味したうえで、実践にエビデンスを活かし、その実践を評価する」というプロセスまでを含み、個人のスキルと組織マネジメントを統合した体系的な教育プログラムの開発、について取り組んだ。1の「CNSへのインタビューを行い、EBPの阻害要因を取り除き、促進するための具体的なニーズを抽出」は、平成28年11月から平成29年2月までに、CNS・14名(CNSの専門分野:9分野、関東・東北地方在住)に対してインタビューを行った。このうち、平成29年1月までにインタビューを行った5名については、先行してデータ分析を行い、平成29年開催予定の学会への演題登録、および、ポスター発表の準備を進めた。2の「「文献を批判的に吟味したうえで、実践にエビデンスを活かし、その実践を評価する」というプロセスまでを含み、個人のスキルと組織マネジメントを統合した体系的な教育プログラムの開発」は、既存のEBP教育や先行研究のレビュー、研究協力者との検討を重ね、プログラム案の開発、プログラムで使用する教材・調査票・プログラム評価表のドラフト版を作成した。またプログラム案に従って、デモンストレーションを行った。そして、平成29年度実施予定のプログラムの実施(介入研究)のための研究計画書の作成および研究倫理審査の準備を行った。本研究は2年計画の1年目で、初年度は1CNSへのインタビューを行い、EBPの阻害要因を取り除き、促進するために求められる具体的なニーズを抽出する、2海外のEBP教育を参考に、日本の専門看護師を対象とした文献の批判的吟味と現場への実践・評価のための教育プログラムを構築する、3介入研究実施のための準備を行う、の3つを計画し、全てについて、概ね計画通りに進捗した。1のインタビューについては、インタビュー協力の同意とインタビューの実施は、当初予定していた対象者数を達することができた。なお、一部の対象者については、実際のインタビューは平成29年度中に実施する予定である。2のプログラム開発については、平成28年度中に教育プログラム、プログラムで使用する教材、評価で使用する調査票等のドラフト版が完成し、研究倫理審査の研究計画書とあわせて、当該分野の専門家のレビューを行っている最中である。3の介入研究の準備は、デモンストレーションの実施等を行いながら、現時点で可能な準備は進めている段階である。(1)CNSを対象としたインタビューの分析:平成29年1月までにインタビューを終えた5名について、EBPの捉え方、実践で文献を利用するときの例、EBPの過程における取組の実際、EBPの促進要因、文献の批判的吟味に関する養成校の環境を検討し、学会ポスター発表で報告した。協力が得られた14名の全データで、引き続き分析を行っている。(2)教育プログラムの実施:研究倫理審査の承認後、9グループ26名に対し、グループごとにワークショップを開催した(開催地は東京・広島・山形)。参加者の内訳は、本研究対象のCNSは11名(CNSの専門分野はがん、小児、慢性疾患、急性・重症患者、母性、感染)で、それ以外では大学教員・研究員のCNS、CNS候補生、認定看護師、スタッフナース(院卒含む)、臨床教員であった。参加の動機・目的は、「量的研究の文献の批判的吟味の知識・スキルの習得」や「参加メンバーへの学習機会の提供」であった。本プログラムはModule13で構成され、7グループで全プログラムを終了した。2グループは今後Module3を実施予定である。3ヵ月後フォローアップ調査終了は3グループで、今後順次フォローアップ調査を行う。(3)研究報告会等の開催:本研究の結果の一部について報告等を行った。大学教員・CNSを含む臨床看護師・大学院生等約25名が参加し、本テーマに関し参加者同士の意見交換を行った。また「臨床看護師のEBPに関する研究倫理セミナー」を開催した。平成29年度は、本研究の最終年度であり、当初の予定通り、1教育プログラムの対象者であるCNSを対象に、教育プログラムによる介入を行う、介入の前後で評価を行う(プレ・ポストデザイン)、2本研究の成果を実際に臨床現場で活用できるよう、本研究の成果をwebsiteで公開する予定である。

1の「教育プログラムの対象者であるCNSを対象に、教育プログラムによる介入」の症例数は、研究代表者が所属する組織の研究倫理審査において、本介入研究の承認が得られ次第、対象者の募集、介入研究(教育プログラム)の実施・評価を行う。また、この介入研究の対象者数について、平成28年度に実施したインタビュー対象者の調査結果を考慮して、サンプルサイズ設計を再度行った。その結果、研究計画当初は40名を予定していたが、対象となるCNSは15名前後に変更となる予定である。ただし、CNSの置かれている環境やプログラムの汎用性を鑑み、対象者の条件を「一定条件を満たすことができれば、CNS以外もこのプログラムへの参加自体は可」と変更する予定で、全体として40名程度が見込まれる。2の「本研究の成果をwebsiteで公開」については、平成28年度に開発した各種教材と連動する形で開発を進め、平成29年度に実施する教育プログラムの内容を、最終的にwebsiteへ反映させる予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。臨床疫学、看護情報学29年度が最終年度であるため、記入しない。
神経細胞の発現するNACP proteinの機能解析

ラット神経細胞(大脳皮質、脳幹および海馬)が培養過程で、αsynucleinとβsynucleinのmRNAを発現し、この発現は培養初期から確認されたが、培養6日目以降その発現は急増されることがわかった(1999年10月、Neuroscience発表)。しかしsynaptophysinの発現とは異なっていた。これらを免疫染色の結果と照らし合わせると、6日目以降の急激な発現の上昇は神経細胞周囲の神経突起のネットワーク構築にαsynucleinとβsynucleinが強くかかわっていることを示唆するものであった。さらに、この高発現は何によって促されるのかを見いだすためにまず、培養系にAstrocyteを用いた。生後0日目のラット海馬のGlial cellを抽出し、3継代後99%純粋なAstrocyteの培養系を作り、そのうえから神経細胞を培養(Co-culture)し、再びmRNAの発現経過を観察した。すると形態学的にはAstrocyteのいない時より急速に突起伸展をするにもかかわらず、やはり培養6日目以降に発現の上昇が確認された。次に、高発現のされていない培養4日目に神経栄養因子と言われているNGFβ、aFGF、bFGF、TNFα、IL-1βなどのサイトカインを直接反応させ、αsynuclein、βsynucleinそしてsynaptophysinのmRNAの発現経過を観察した。するとIL-1βとTNFαを一緒に反応させた培養系では、それぞれの量的な差はあるものの高発現を認めた。現在このサイトカインの刺激による高発現が、Astrocyteの存在下でどの様に変化するかについて実験を重ねている。ラット神経細胞(大脳皮質、脳幹、中隔野、海馬、および脊髄)が培養課程で、一定量のαsynucleinとβsynucleinのmRNAを発現していることを見いだした。(1999年10月、Neuroscience発表)。しかしラットのglialcellsの培養系では発現されなかった。さらにこれらは免疫染色でも証明された。しかし、mRNAの発現量は培養課程の各ステージで変化する事がなかった。培養神経細胞が培養シャーレ上で生着し、神経突起を進展、細胞同士でsynaptogenesisを行う課程で明らかなmRNAのregulationをしていないとすれば、presynaptic proteinとして局在のわかっている同proteinが実際どの様な機能をしているかについての解明は、今後各サイトカイン(aFGF,bFGF,NGF,TNF,EGF,IL-1βなど)の刺激による発現変化をmRNAレベルと蛋白レベルでと言う方向の変わってくる。またastrocyteなどのglial cellsが発現する神経栄養因子がそれらの蛋白に対しどの様な影響を与え神経細胞の変性や死、分化、生存維持や再生にどの様な関係をもたらすかを明らかにすることでこの蛋白の機能の解析につながると信じている。神経細胞死にこの蛋白が何らかの関係を持っているとすれば、この機能の解明は、Alzheimer病のみならず、Perkinson病やその他の一見症状として表現型は異なるものの、多くの神経変性疾患の根底にある神経細胞死と言うレベルでの基本的分子機構の解明につながり、これら一連の疾患の原因の解明そして、治療へつながることと信じている。1、各サイトカイン下での培養神経細胞の影響。2、astrocyteの出す神経栄養因子の培養ラット神経細胞への影響。
ピロ硫酸塩の特異な触媒性能とピルビン酸合成への応用研究

各種の固体酸触媒によりエチレングリコ-ルの分子内脱水の挙動を比較し,nーAl_2O_3とシリカ担持ピル硫酸カリを選定して洒石酸エチルの脱水脱炭酸によるピルビン酸合成に応用した。nーAl_2O_3では、アルコ-ルの脱水とともにエステルの加水分解にも高活性を示すので、ピルビン酸が生成しても脱炭酸により分解してしまう。これに対して、K_2S_2O_7/SiO_2では,洒石酸エチルから60%,グルセリン酸メチルから50%の好収率でピルビン酸エステルを収得できた。担持ピロ塩による脱水量論をはるかに超える量のピルビン酸エチルが定常的に得られることは,ピロ硫酸塩によりグリコ-ルの脱水と酸性硫酸塩の生成、その脱水によるピロ塩の再生を繰返して触媒機能を発揮していることがわかる。洒石酸エチルの分子内脱水で生成するピルビン酸の前駆中間体、オギザロ酢酸エチルをK_2S_2O_7/SiO_2に供給したところ、通塔直後にはピルビン酸エチルの収率50%で,ーCOOH基1個の脱炭酸に相当するCO_2を与えるが,経時的にピルビン酸エチルが増大して85ー90%に達した。酸性硫酸カリを窒素中で昇温すると180°C付近から重量の減少が始まり、300°Cに保つと緩やかにピロ塩レベルに到達する。ここで洒石酸エチルの脱水で生成する水に相当する水蒸気を共存させると速やかに水を吸収するが,酸性塩に戻らず、モル比67%ピロ塩の組成で平衡に達することがわかった。水の供給を停止すると再び緩やかにピロ塩に戻る。この触媒はピロ塩67%組成の融液としてシリカ細孔に保持されており、脱水は速やかであるがエステルへの攻撃はおそく,生成ピルビン酸エチルの安定捕集に寄与していると結論貞きる。酸性塩を300°Cで5hr焼成してもSO_3は検出されず,粉末X蜻によりピロ塩を生成していることが確かめられたが,シリカ担持ピロ塩は直径120Åの円筒内面に厚さ7Åの薄層として担持されていると計算され,X線的にも無定形であった。
ホリスティックな立場からの教材・授業開発に関する研究

ホリスティックな立場からの教材・授業開発の視点を研究した。垣内松三の形象と自証体系の理論とそれを授業で具体化した青木照明の「融合読み」の研究を行った。垣内松三は、文字の連なりの奥にある人間の相(象徴)の存在を強調した。読むとは、この象徴を直観し、それを言葉という形で記号化する行為である。ここから垣内は、直観ー自証ー証自証、という読みの理論を体系化した。この理論を授業場面で具体化したのが芦田恵之助である。また、最近では、小学校国語の文学教材の読みの授業で、青木照明が行っている。青木の授業では、児童が物語文を読んで、直観したことを自分の言葉で解釈し、自証していく様子を確認できた。ホリスティック教育が人間の思考と直観をつなぐ教育であることを確認した。この直観に迫る教育の方法は、垣内松三が形象理論に基づく、直観ー自証ー証自証、の研究がある。垣内松三の形象理論は言語の奥に潜む人間の相(精神)を指摘するものである。人間は文章を読み、直観したものを表現していく。その際、自己の相(精神)にぴったりあった言葉を探していく。こうした読みの過程を垣内は、直観ー自証ー証自証明、と言う言葉で説明した。これが垣内の形象理論であり、読みの自証体系である。論理的に思考を重視する解釈学とは異なり、直観や感性を大事にするものである。垣内の形象理論、自証体系は、直観と思考、自我と自己をつなぐもので、形象という全体性を重視するものであった。そうした意味で垣内の形象理論はホリスティックな視点にたったものであると言えよう。この垣内の理論を小学校国語の文学的文章の授業に適用して実践を行ったのが青木照明である。青木照明は垣内の理論を初発の感想(直観)ー対話による読みの交流(自証)ーまとめの感想(証自証)として捉え、授業実践を行っている。この授業実践を下田は「授業の形象性」というカテゴリーを設定し、授業の解釈を行った。その結果、青木の授業を受けた児童は、自己の直観を言葉で説明し、自己の形象を明らかにしていくことができた。この実践からは、自己の直観と思考をつなぎ、自己の形象を明らかにする全体性にたつものであることも分かった。こうした垣内の形象理論、青木の瞑想読みは、ホリスティックな視点にたったものであるということができよう。ホリスティックな立場からの教材・授業開発を研究した。ホリスティックを思考と直観とのつながり、自己と社会とのつながり、自己の表面意識と霊性(宇宙意識)とのつながりと捉えた。具体的な研究の形としては、思考と直観とのつながりは、垣内松三の自証体系とその授業実践の研究、シュタイナーの人智学思想を色濃く反映したシュタイナー学校の教材・授業開発の研究、法華経の宇宙観に彩られた宮澤賢治の教育観・授業観の研究を通して行った。垣内松三は文字の連なりの奥にある人間の相(象徴)の存在を強調する形象理論を提唱した。そして、自己の直観を自分で証明する自証体系を読みの理論とした。これを教育実践として具体化したのが芦田恵之助であり、最近では青木照明である。青木照明の小学校国語の読みの実践(やまなし)では、児童が自己の直観に言葉を与え、自分の直観に自分の解釈を与えていく様子を確認できた。ルドルフ・シュタイナーの人智学思想の影響を受けた教材・授業開発としては、ベルリンのシュタイナー幼稚園での保育参観、シュタイナー学校の授業参観から研究を行った。シュタイナー幼稚園では、子どもの内面の深層にある意識がどう顕現していくかを重視しており、そのために保育の観察も教師や大人が子どもに影響を与えないように留意されていた。この部分が人間を体・魂・霊で捉える、シュタイナーの人智学思想の表れであると考える。宮澤賢治の教育観・授業観では、教科書を使わない授業、学問を実際的な問題に置き換え、日常現実社会に引き寄せて解釈を行うこと、体験や実習を重んじ体にしみこませる授業を行う。演劇と音楽による芸術の表現を通して教育を行ったことなどが抽出できた。これらはの授業観・教材観の背景には、賢治の信仰する法華経の思想が根本にあることも確認できた。ホリスティックな視点にた立った授業開発の研究を追究するにあたり、ホリスティックという言葉の吟味を行った。また、ホリスティック教育の研究動向についても概観した。ホリスティックはJ.C.スマッツのホーリズムが起源であることが分かった。

そこから教育の分野ではホリスティック教育が発展していった。現在のホリスティック教育は、心とのつながりの一面が強調されているということが分かった。ここからも心とのつながりをも包括する視点が必要になってきた。このような視点はどのようなものか、今度追究することにした。学習者の状況文脈に即した授業開発をどのようにするか。また、日常現実社会で活用できる授業として、学習者が日常や社会のコミュニケーション場面で使用できる場面を学習過程にどのように組み込むかを問題としたい。さらに、授業では授業者自体がエンパワーメントする必要があることを確認し、そのためには学習者が暗黙知的に持っている知識・技能を顕在化し、それを共有し合うことによって、イノベーションのある授業開発を行うことができるようにした。ホリスティックな視点に立った教材・授業開発を追究している。初年度はホリスティック教育とその実践の流れを概観した。そのなかで特に合流教育に着目した。合流教育では、思考と内面をつなぎ、合流しようとする。この内面は直観や感性・意思であると言える。こうした直観や感性・意思の重要性を強調したのがシュタイナーである。また、日本においては、垣内松三の形象理論とそれを具体化した読みの理論である、自証体系がある。そこで2年目は、垣内松三の自証体系とそれを具体化した授業実践を追究した。垣内松三は、人間がテキストを読む際に、直観ー自証ー証自証、を行っていることを強調した。これは言葉による論理的思考を超えた直観や感性に迫る読みの方法である。この方法を授業実践の中で具体化したのが芦田恵之助である。芦田の授業理論は綴り方教授においては、随意選題の中に直観や感性を重視する傾向が確認できる。しかし、読みの理論では芦田教式に傾斜してしまい、児童の読みの主体性を保障するものではなかった。その点、青木照明の「瞑想読み」は垣内松三の自証体系を具体化した授業実践を行った。このことを理論的に整理し、青木照明の授業実践を授業参観し、実証的に明らかにしたのが本年度の研究であった。そうした意味で本年度の研究成果は当初の目標に迫ったものと評価できる。今後は、もう一つのホリスティック教育の代表的な言説であるシュタイナー教育を追究する事が課題として残された。ホリスティックな立場に立つ授業開発をするにあたって、ホリスティック教育の研究動向を概観した。その結果、日本のホリスティック研究が個々とのつながりに傾いていることを確認できた。おおむね順調な達成度である。ホリスティックな視点にたつ海外の授業研究の動向に関する調査が課題であるが、これは今年度行う予定である。シュタイナー教育の言説を整理するとともに、シュタイナー学校の授業実践を調査・研究し、そこからホリスティックな視点にたった教材・授業開発のあり方を追究したい。特にシュタイナーの人間観・世界観も整理し、その人間観・世界観が授業実践にどのように活かされているかを明らかにしたい。こうした宇宙的な世界観・人間観をもつ人物として、日本では宮澤賢治があげられる。宮澤賢治は児童文学者や農業指導者であると同時に優れた教師でもあった。そこにはホリスティックな視点にたった宮澤賢治の授業実践があった。最終年度は教師としての宮澤賢治の教材・授業開発のあり方にも調査・研究の範囲を広げたいと考えている。授業者をエンパワーメントし、イノベーションのある授業を開発するために、授業者の暗黙知を顕在化し共有化する研究を行う。
遺伝子導入ES細胞を用いたマウス胚初期発生におけるサイトカインの役割の研究

ES細胞3A-1にmouse LIF cDNAを安定導入し、LIF高発現クローンおよび低発現クローンを得た。高発現クローンはLIF非添加で培養してもES細胞の分化は起こらなかったが、低発現クローンはLIF非添加で培養することにより分化が誘導された。これはLIFがオートクラインに働いてES細胞の分化を阻害しうることを示している。LIF低発現および高発現クローンをblastocystにインジェクションしキメラマウスの作成を試みた。高発現クローンからはキメラマウスは得られなかったが、低発現クローンからはキメラマウスが得られ、LIFはin vivoでも初期胚の分化を阻害しないことが示唆された。このキメラマウスは下腹部に高頻度に腫瘍を発生し、生後数週間で死に至った。病理学的解析により、腫瘍はテラトーマであることが明らかになった。2)ヒトGM-CSFレセプター遺伝子導入ES細胞ヒトGM-CSFレセプターα,β鎖cDNAを導入し、発現するES細胞を構築した。このES細胞はヒトGM-CSFによりわずかに細胞増殖が促進され、MAPキナーゼリン酸化が誘導された。しかしヒトGM-CSFによりLIFのような分化抑制効果は認められなかった。現在これらのクローンを用いてGM-CSFとLIFの細胞内シグナル伝達経路の解析を行なっている。Idはb-HLHタンパク質と相互作用をすることにより分化抑制に関与していることがいくつかの系で報告されている。ES細胞の分化調節に対するIdの影響を検討した。LIF非添加培地で分化誘導するとId1,2,3いずれのmRNAレベルも一過性の低下を示し、その後もとのレベルに復した。次いでId1 cDNAを導入し、高発現したES細胞を作成した。これらのES細胞はLIF非添加培地で分化が誘導された。現在、これらのクローンを用いてLIFの分化抑制シグナルとIdの関連を解析している。
単年性作物の不耕起栽培や永年的栽培による線虫寄生の抑制と天敵生物の検出

l,供試作物の選定ネコブセンチュウ(ネコブ)が寄生しやすく、圃場で栽培しやすい作物種を選ぶため、ネコブの接種試験を温室で行うとともに、圃場での栽培試験を行った。接種試験ではナス科のホオズキ類及びピーマンを用いた。圃場での発生が期待されるサツマイモネコブセンチュウを接種したところ、食用ホオズキの2品種とピーマンの1品種で特にネコブの卵のう形成数が多く、感受性品種だと判断した。これらの品種を圃場で栽培したところ、ホオズキの2品種は生育が早いが枯死する時期も早かった。ピーマンの感受性品種は着果後も長期間生育を続け、圃場試験に適していると判断した。2 ,作物を越冬させる条件の検討越冬させやすい作物種(品種)を選定するため、供試作物の候補を圃場に定植し、越冬栽培を試みた。ビニルトンネルで3重に覆い、小型の電気ヒーターを内部に設置して保温したところ、ピーマン及び食用ホオズキの各1品種が全株越冬した。一方ナスの1品種は1株が3月中旬まで生存したものの、4月まで生存した株はなかった。以上より、ピーマンの感受性品種が圃場試験に適していると判断した。接種試験によりネコブセンチュウがよく寄生する作物品種を選定することができた上、その品種を実際に圃場で栽培させることができた。さらにその作物を圃場で越冬させることにも成功し、越冬に必要な栽培管理のノウハウを蓄積することができたため。H29年度は、圃場に、(1)定植、栽培した植物を越冬させて次年度以降も生育させる(圃場は不耕起管理)、(2)毎年植物を定植する(圃場は不耕起管理)、(3)毎年植物を定植する(圃場は耕起する)試験区を設定する。ナス科の植物株を全試験区に春に定植し、秋まで常法に従って栽培する。H29年度は栽培開始1年目なので、いずれの試験区でも秋には主茎を切断した後、トンネルで覆って保温する。翌春、降霜の時期を過ぎたら全試験区のビニールトンネルを除去し、(2)と(3)の区では植物株を更新する。試験開始前の土壌生物相について明らかにするため、植物定植の前に土壊を採取し、ネコブ及び捕食性の線虫等を分離して密度を測定する。土壊から分離後、主なグループごとに個体数をカウントし、サンプルを固定・保存し、後に詳細に種を同定する。天敵微生物についてDNAベースで評価するため、土壌を回収、凍結保存し、後の分析用とする。次年度使用額771,328円は、園芸資材(種子、肥料、加温機材等)や動物標本保存機材(ホルマリン、ガラス管ビン等)に20万円、研究補助員の雇用に30万円、土壌理化学性の外注分析に10万円、成果の学会発表旅費に10万円等、研究計画遂行のために使用する。

土壊から分離後、主なグループごとに個体数をカウントし、サンプルを固定・保存し、後に詳細に種を同定する。天敵微生物についてDNAベースで評価するため、土壌を回収、凍結保存し、後の分析用とする。交付決定がH28年10月で、すでに圃場で作物を栽培できる時期を過ぎており、予備試験の実施及びH29年度試験の準備にとどまったため、発生した残額である。次年度使用額771,328円は、園芸資材(種子、肥料、加温機材等)や動物標本保存機材(ホルマリン、ガラス管ビン等)に20万円、研究補助員の雇用に30万円、土壌理化学性の外注分析に10万円、成果の学会発表旅費に10万円等、研究計画遂行のために使用する。
ネットワークシステム上の分散型空間フィルタリング

本研究では,ネットワークシステム(複数のサブシステムがネットワークで結ばれたもの)に対する「分散型空間フィルタリング」技術の開発を目的とする.分散型空間フィルタリングとは,各サブシステムが与えられた信号値を近傍のサブシステムと交換し,所望の空間周波数特性をもつ信号値を得るというものである.このような技術が確立されれば,各サブシステムがもつ超短時間のデータだけでフィルタリングを行えるため,従来の時系列データに対するフィルタリングと比べ,扱うデータ量を大幅に削減できる.本研究では,ネットワークシステム(複数のサブシステムがネットワークで結ばれたもの)に対する「分散型空間フィルタリング」技術の開発を目的とする.分散型空間フィルタリングとは,各サブシステムが与えられた信号値を近傍のサブシステムと交換し,所望の空間周波数特性をもつ信号値を得るというものである.このような技術が確立されれば,各サブシステムがもつ超短時間のデータだけでフィルタリングを行えるため,従来の時系列データに対するフィルタリングと比べ,扱うデータ量を大幅に削減できる.
テネシン-C 由来新規ペプチドを用いた造血幹細胞由来の輸血製剤の開発

臍帯血由来の造血幹細胞(CD34陽性細胞)からin vitroで分化・増幅させた赤芽球系および巨核球系前駆細胞をテネシン-C由来新規ペプチド(TNIIIA2)と可溶性フィブロネクチンを用いて効率的に最終分化させ、短期間に大量の赤血球および血小板を作製する培養システムを開発した。平成21年度に作成した本研究の研究計画調書の則り、研究が順調に進展しているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度の研究も、平成21年度に作成した本研究の研究計画調書の則り進める予定である。具体的には、まず平成23年度に作製したPLTの機能(活性化能と凝集能)が健常人PLT及び濃厚PLT製剤と同等であることを確認する。次に、高密度細胞培養系を用いて妊婦1人分の臍帯血から、より高単位のRBC及びPLT輸血製剤を得ることを試みる。更に、siRNArandom libraryを用いて、stromaが有する新規HSC増幅遺伝子を網羅的に探索する予定である。
関節動態の直接計測による詳細解析とモデル化

本研究では、生態条件に近い防腐処置技術(改良されたエンバーミング法)を用い、ヒトの遺体における主要な関節で靱帯の運動動態を計測した。その結果、運動に伴い、靱帯は各測定部位で伸張や短縮するが、この変動はとても僅かであった。すなわち、生理的運動条件下においては、靱帯動態が僅かであった。過去の研究で得られたひずみデータから、標準化された関節動態をモデル化することを目的に、実際の生体における関節可動域の計測を行った。目標とした生体からの関節可動域計測は、上下肢の主要な関節で、肩関節、肘関節、股関節、膝関節、足関節を主として、その他の関節においても計測を行った。計測は関節角度計を用い、肢位や計測法は日本整形外科学会と日本リハビリテーション学会が制定する関節可動域表示並びに測定法を用いた。ひずみデータ計測はご遺体から関節を剖出したうえで、靭帯の特徴的な線維方向(関節の靭帯のセミマクロ的研究で取得)に沿って超小型のひずみ測定装置を設置し、ひずみの計測値(応力値)から微小の運動動態を計測する。ひずみデータだけでは実際の生体での運動動態と異なることが予測されるために、生体の正確な関節可動域とひずみデータの照合を試行している。これにより、線維方向に応じたひずみと実際の関節可動から、詳細な靭帯運動動態が明らかとなりつつある。関節のバイオメカニズムとして、靭帯の走行・量的な特徴から靭帯固有の静的な強度が再現され、靭帯に生じるひずみ値から関節角度による応力の変化が得られ、両者を統合することにより動的な運動動態特性とその強度が明らかとなる。従来までの線と点で行うバイオメカニクスよりも詳細で再現性・信頼性の高い研究を目指す。また、旧来の関節バイオメカニクスとの相互関係の検討も行う。本年度は継続して、靭帯部でのひずみ計測データ、セミマクロ的関節靭帯の線維方向と強度に関するデータを蓄積・分析した。正常人における関節可動域を実際に計測する一方で、計測された靭帯の微小なひずみデータからダイナミック生体データを見立てられるような検討を行った。これにより、元来行われた体表からの観察と、実際得られた内部のデータとの相互関係の検討を現在も継続している。生体からの関節可動域計測は、上下肢の主要な関節で、肩関節、肘関節、股関節、膝関節、足関節を主として、その他の関節においても計測を行った。関節靭帯と同時に、関節を構成する骨と骨格筋の動態についての検討も行った。ラットの下肢を用いて、膝関節における構造と筋の収縮特性を見出すために、今年度は萎縮筋のモデルラットを用いた。実験的に萎縮モデルの筋の量的縮小と骨重量変化から、膝関節に対する負荷を計算し、コントロールラットとの比較を行った。次年度は引き続き、肥大筋とコントロールラットとの比較検討を行う予定としている。本年度までの成果として、運動時における関節局所である靭帯の動態がある程度明確となり、さらに関節構成組織である骨と筋の関係を総合的に分析した関節のバイオメカニクスが徐々に明らかとなってきた。以上の研究により、従来までの線と点で行うバイオメカニクスよりも詳細で再現性・信頼性の高い研究をさらに検討しより複雑な関節可動の個体的なモデル化を試みる。20年度までに行われた関節の運動動態基本データをさらに増やした。特に、前年度までにエンバーミング法を改良することによって確立されたご遺体の関節を用い、主要関節の靭帯内に直接、ひずみゲージを挿入することでデータ計測を行った。本研究において、計測されたひずみデータは、胸鎖関節で7体13例、肘関節9体14例、仙腸関節10体20例、膝関節14体25例となった。さらにそれぞれの大型の靭帯部位においては、さらに詳細な靭帯の運動動態を分析するために、複数の計測点を増設・設置した。これにより主要4関節における運動動態のモデル化をまとめた。ひずみデータを解析した結果、4関節で共通した特徴として、先行研究等によって既知されていた通りに、関節靭帯は関節の安定性のための保護的な要素を持ち合わせていた。研究結果からは、生理的な運動条件下での靭帯動態は、比較的、一定範囲内の変動に過ぎなかった。しかしながら、関節可動域が広がるにつれて、ひずみデータが増加し、可動域上限に至ってはデータ値が大きく上昇し、靭帯機能としての安定性貢献度が高まったことが考えられた。個々の関節における詳細については論文にて発表予定である。生理的条件下における運動動態分析が終了する一方で、非生理的条件下における関節動態の計測方法を確立するために、動物実験でラット筋萎縮モデルを利用した。ラットの右後脚にギブスを装着することで、下肢筋の萎縮を誘導し、骨と筋量の分析から、筋萎縮モデルによる非生理的条件下における運動動態計測モデルを構築した。この筋萎縮モデルでは、10日間のギブス固定脚で骨は約5%弱、筋においてはヒラメ筋で約40%強の萎縮が認められた。今後、このモデルを用いた非生理的状態下における運動動態メカニズム分析を継続研究として続けていきたいと考えている。
炎症から見た早産、妊娠高血圧症候群の新たな治療戦略

妊娠高血圧腎症(PE)70例において免疫の指標となるTh1/Th2比をフローサイトメトリーで求めた。正常妊娠59例でも同様にTh1/Th2比を求め、正常妊娠の75%タイル値以上をTh1優位、2575%タイルをTh1/Th2比正常、25%タイル以下をTh2優位と規定した。その結果3群間で臨床症状を比較したところ、重症型の蛋白尿はTh2優位型PEで75%とTh1優位型PEの32.6%に比し有意に高率であり、重度の蛋白尿を呈する症例ではTh2優位型PEが多いことを初めて明らかにした。1.頚管長短縮例に対する治療法の確立これまでに報告した、頚管長短縮例でも頚管炎を有する症例では早産率が高く、そのような早産ハイリスク症例に対する頚管縫縮術はむしろ早産率を増加させるという我々の結果から、現在は他大学との多施設研究で頸管炎のない頸管長短縮例に頸管縫縮術が有効か否かについてのRandomized controlled trial(RCT)が進行中である。また同時に、頸管炎のない頸管長短縮例に対して頚管縫縮術は施行せず、ウリナスタチン膣錠(1万単位)による抗炎症療法が有効か否かについてのRCTも進行中である。2.妊娠中期血清中のGranulysin値測定による妊娠高血圧症候群の予知現在、血清マーカーから妊娠高血圧症候群を予知することは困難である。我々は,妊娠高血圧症候群50例、正常妊婦50例の血清中Granulysin値を測定したところ、妊娠高血圧症候群の血清中Granulysin値では正常妊婦の値に比して妊娠中期から高値となっていることが判明した。すなわち妊娠高血圧症候群では発症前からTh1免疫が優位となることが明らかとなり、血清中Granulysin値は妊娠高血圧症候群の発症予知マーカーとして期待される。今後さらにデータを蓄積し、妊娠中期の血清中Granulysin値により妊娠高血圧症候群の予知が可能かを検討中である。3.妊娠高血圧症候群のplacental bedbiopsy検体におけるTh1細胞の集族の有無、ならびに炎症の有無の確認1.頸管中顆粒球数増加(頸管炎)症例の治療で早産を予防できるかについての検討2006年に報告したように、頸管長短縮例でも頸管炎を有する症例では早産率が高く、そのような早産ハイリスク症例に対する頸管縫縮術はむしろ早産率を増加させるという我々の結果から、現在は他大学との他施設共同研究で頸管炎のない頸管短縮例に頸管縫縮術が有効か否かについてのRandomized Controlled Tria(RCT)が進行中である。頸管炎のある頸管長短縮例に対して頸管縫縮術は施行せず、ウリナスタチン腟錠(1万単位)による抗炎症療法が有効であるか否かについてのRCTも現在進行中である。2.頚管長短縮例に対する治療法の確立頸管炎のある頸管長短縮例に対して頸管縫縮術は施行ぜず、ウリナスタチン腟錠(1万単位)による抗炎症療法を行い、縫縮群と比較して早産率が改善されたか否かについてのRCTも現在進行中である。3.妊娠中期血清中のGranulysin値測定による妊娠高血圧症候群の予知現在、血清マーカーから妊娠高血圧症候群を予知することは困難である。2004年に我々は妊娠高血圧症候群の血清中Granulysin値では、正常妊婦の値に比して妊娠中期から高値になることを報告している。すなわち妊娠高血圧症候群では発症前からTh1免疫が優位となることが明らかとなり、血清Granulysin値は妊娠高血圧症候群の発症予知マーカーとして期待される。今後さらにデータを蓄積し、妊娠中期の血清Granulysin値により、妊娠高血圧症候群の予知が可能であるか否かを検討中である。4.妊娠高血圧症候群の胎盤床検体におけるTh1細胞集族の有無の確認1.妊娠高血圧腎症(PE)70例において免疫の指標となるTh1/Th2比をflow cytometry(FCM)で求めた。正常妊娠59例でも同様にTh1/Th2比を求め、正常妊娠の75%タイル値以上をTh1優位、2575%タイルをTh1/Th2正常、25%タイル以下をTh2優位と規定した。その結果PE群ではTh1優位が46例と大半を占め従来の報告と一致したが、Th1/Th2比正常のものが16例、Th2優位型PEも8例に認められた。3群間で臨床症状を比較したところ、初産率、BMI、血圧、発症週数には差を認めなかったが、重症型の蛋白尿はTh2優位型で75%とTh1優位型の32.6%に比し有意に高率であり、重度の蛋白尿を呈する症例ではTh2優位のPEが多いことが判明した。またTh1/Th2比正常群では肝機能異常、血小板異常を呈する症例は皆無であり、臨床症状がTh1/Th2比により差を認めることを初めて証明した。

2. PE症例の頸管粘液中のIL-8値を測定したところ、14/24(58.3%)が陽性であり、正常妊娠例の値(113/865 : 13.2%)に比し有意に高値を示し、PEと頸管内の炎症が関与することを初めて認めた(投稿準備中)。3.切迫早産154例にIC取得の上、羊水中のサイトカインを測定したところ、絨毛膜羊膜炎(CAM)II度以上でIL-8、TNFαが上昇し、CAMIII度でIL-17が高値となった。IL-17は主としてCD4陽性のT細胞から産生されることをFCM、免疫組織染色で確認した。さらに羊膜間質細胞にはIL-17受容体が発現しており、TNFαとIL-17を羊膜間質細胞内に同時添加するとIL-8産生が相乗的に増加する現象を見出した。この反応系にIKK、p38、Map kinaseが関与することも明らかとなった。T細胞から産生されるIL-17がCAMの要因となっていることを初めて証明した。
消化管粘膜における神経・内分泌系と免疫系のクロストークとその病態に関する研究

本研究は、粘膜免疫系と神経・内分泌系の基本的現象を組織細胞レベルから遺伝子・機能分子レベルで解析し、それぞれの独立性と相互制御機構を解明するとともに、その成果に基づき消化管粘膜の炎症性病変の発症を病態、細胞増殖やアポトーシスによる粘膜上皮細胞の動態の異常による萎縮や腫瘍化、ならびに組織形成や発育障害の成り立ちを明らかにすることを目的に行われた。1)視床下部-下垂体-副腎(PHA)axisのホルモンカスケードを誘導するホルモンとして知られているCRFと45%のhomologyを有し、ACTH分泌をCRFと同様に促進するurocortinが腸管粘膜固有層のマクロファージにそのmRNAと抗原活性が確認された。粘膜の炎症とともにそのマクロファージは有意に増加していた。すなわち、PHA系のホルモンが炎症局所においてもサイトカインと同様に炎症免疫反応の調節因子として働いていることがわかった。2)腸管で水分泌を促進するとともに、マクロファージの免疫機能を抑制するVIPは視床下部の神経核のほか、腸管粘膜固有層の神経線維網に免疫活性が、そのmRNAが腸上皮間の内分泌細胞に観察された。炎症性腸疾患では炎症の増強と組織の破壊に伴い、VIP神経線維が激減消失し、小児食物アレルギーの関与が示唆されるアトピー性皮膚炎の患者の腸管ではVIPの受容体の発現が遅延していた。3)細胞内のcortisolを分解しaldosteroneの、mineralodcorticoid receptor結合性を維持する11βHSD2が水分再吸収機能を有する大腸上皮、殊に管腔側に強く発現しており、潰瘍性大腸炎粘膜等の炎症に伴った幼若な再生上皮では消失しており、当該疾患における下痢や水代謝異常に重大なかかわりがあることが証明された。4)ヘリコバクター感染慢性活動性胃炎において、マクロファージと好中球浸潤に随伴して上皮細胞の遺伝子異常とアポトーシスの誘導の促進がみられ、またVIP神経分布の減少と不規則性が観察された。本研究は消化管粘膜のおける免疫系と神経・内分泌系との相互制御機構とその破錠に基づく消化管病変の病因病態の解明に関する研究を、本年度は以下の2つの腫瘍研究項目を設定し実行した。(1)免疫系と神経・内分泌系の発生分化とその異常に基づく小児・新生児疾患の病因病態に関する研究を実施した。(2)免疫系と神経・内分泌系の相互制御機構の粘膜組織における解析とその異常に関する研究を炎症性腸疾患を中心に展開した。健常の新生児および成人間では消化管粘膜のVIP含有神経線維の分布にはほとんど差はなかったが、そのmRNAは成人腸管内分泌細胞にも確認された。VIP受容体は、IgA形質細胞の出現と一致して生後2ヵ月以内の乳児ならびに成人の粘膜固有層Nφやパイエル板濾胞樹状細胞に発現していたが、アトピー性皮膚炎はじめ食物アレルギーが示唆される小児の腸管ではVIP含有神経の分布に異常はなくても、VIP受容体の発現は遅延していた。逆に先天性胆道閉鎖症では門脈域での神経線維分布の減少、欠損が観察された。また潰瘍性大腸等で炎症病態が進展し、組織破壊に伴うとVIP神経は激減、消失していた。分離Mφーリンパ球では、サイトカインのうち形質細胞への分化を司るIL-6産生がVIPにより選択的に制御され、それもMφの活性化の程度によって影響されることが明らかとなった。このように消化器における免疫系の神経・内分泌系の異常がさまざまな消化管粘膜はじめ消化器系の異常を惹起させることがわかった。これらの研究成果は、第8回国際粘膜免疫学会のPlenary Sessionでも招待講演として発表され、高い評価を受けた。

本研究を推進する目的は、粘膜免疫系と神経・内分泌系をそれぞれ独立した系としてではなく、それらの相互作用に研究方向を定め、それぞれの系の基本的現象を組織細胞レベルから遺伝子・機能分子レベルで解析し、それぞれの独立性と相互制御機構を解明するとともに、その成果に基づき消化管粘膜の炎症性病変の発症と病態、悪性腫瘍の浸潤や転移機構、ならびに組織形成や発育障害の成り立ちを明らかにすることにある。昨年度までに我々は神経ペプチド、殊にVIPの受容体が消化管粘膜固有層のマクロファージ及びバイエル板の濾胞樹状細胞に存在し、粘膜免疫反応の制御機構に主要な役割を果たしていることを明らかにした。そして、粘膜免疫機構の異常が病因病態に関与している腫瘍性大腸炎では浸潤マクロファージの受容体発現には異常がないが、VIP含有神経分布異常が,小児植物アレルギーの関与が示唆されるアトピー性皮膚炎や腸管出血ではその受体発現の遅延を証明した。さらにcAMPを指標とした腸管上皮細胞機能もVIP添加により、温度依存性に調節されることが明らかとなった。消化管粘膜上皮による電解質代謝を司どるminerocorticoid receptorと11β-hydroxssteroid hydrogenaase type II (11β-HSD2)が、腫瘍性大腸炎の粘膜上皮でその発現が欠損しており、粘膜炎症巣における水、電顕質代謝の異常機構の一端が解明された。また視床下部で産生されるCRFと45%のhomologyを有し、ACTHの産生茂樹作用を有するurocortinが消化管粘膜固有層のマクロファージに局在することを証明し、VIPと同様、中枢神経系からの直接的な粘膜免疫反応制御ペプチドであることを始めて明らかにした。このように、免疫系と神経・内分泌系で多数の機能分子が共通することから、免疫系が神経・内分泌系と密接に連携してさまざまな生体の調節機能を果たし、その調節機構の異常や破綻が消化管のさまざまな炎症免疫疾患を惹起させることが明確となった。本研究は、粘膜免疫系と神経・内分泌系の基本的現象を組織細胞レベルから遺伝子・機能分子レベルで解析し、それぞれの独立性と相互制御機構を解明するとともに、その成果に基づき消化管粘膜の炎症性病変の発症と病態、細胞増殖やアポトーシスによる粘膜上皮細胞の動態の異常による萎縮や腫瘍化、ならびに組織形成や発育障害の成り立ちを明らかにすることを目的に行われた。1)視床下部-下垂体-副腎(PHA)axisのホルモンカスケードを誘導するホルモンとして知られているCRFと45%のhomologyを有し、ACTH分泌をCRFと同様に促進するurocortinが視床下部室傍核部の血管および下垂体前葉細胞のその局在が認められるとともに、腸管粘膜固有層のマクロファージにそのmRNAと抗原活性が確認された。粘膜の炎症とともにそのマクロファージは有意に増加していた。すなわち、PHA系のホルモンが炎症局所においてもサイトカインと同様に炎症免疫反応の調節因子として働いていることがわかった。2)腸管で水分泌を促進するとともに、マクロファージの免疫機能を抑制するVIPは視床下部の神経核のほか、腸管粘膜固有層の神経線維網に免疫活性が、そのmRNAが腸上皮間の内分泌細胞に観察された。