hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
吸入麻酔薬と静脈麻酔薬による免疫細胞アポトーシス誘導機序の解明及びその相違の解析

揮発性吸入麻酔薬セボフルランおよびイソフルランは用量依存性かつ時間依存性にマウス胸腺細胞にアポトーシスを誘導した。この胸腺細胞アポトーシス誘導では胸腺細胞内カスパーゼ3が活性化され、アポトーシス誘導に先行してミトコンドリア膜電位の低下が観察された。したがって揮発性吸入麻酔薬による免疫細胞アポトーシス誘導機序にミトコンドリア膜電位の低下とそれによるカスパーゼ経路活性化が関与していることが示唆された。『実験1』Balb/cマウス(5-7週齢、メス)の胸腺を摘出、浮遊胸腺細胞とし、密閉型アクリル樹脂製箱に静置後、揮発性吸入麻酔薬セボフルレンまたはイソフルレンがそれぞれOMAC、1MAC、3MACになるように設定し12時間、これら麻酔薬に曝露したのちにAnnexin Vと7-AADで染色し、Flow cytometry法にてアポトーシス細胞を観察した。また、同様にセボフルレンまたはイソフルレンがそれぞれ3MACになるように設定後、4、8、12時間、これら麻酔薬に曝露してアポトーシス細胞を観察した。『結果1』セボフルレンまたはイソフルレンはin vitroにおいてマウス胸腺細胞に容量依存的、時間依存的にアポトーシスを誘導した。『実験2』『実験1』と同様に浮遊胸腺細胞を得、これに30μMまたは60μMのプロポフォールを添加して4、8、12時間培養し、プロポフォールによる容量依存性、時間依存性アポトーシス誘導を観察した。『結果2』胸腺細胞はプロポフォールにより容量依存性、時間依存性ともにアポトーシスは誘導されなかった。『実験3』『実験1』と同様にイソフルレンを0MAC、1MAC、3MACになるように設定し、4、8、12時間、これら麻酔薬に浮遊胸腺細胞を曝露後、細胞内ATPのルシフェラーゼ蛍光作用を利用してルミネッセンスプレートリーダーを用いてATP量を測定した。『結果3』イソフルレン曝露群は非曝露群に比べ細胞内ATP量が時間依存性に減少した。しかし、イソフルレン1MAC群と3MAC群を比較すると両群間に統計的有意差はなかった。[実験1]揮発性吸入麻酔薬によるアポトーシス誘導時における胸腺細胞のミトコンドリア内膜電位の測定実騨:48週齢のBalb/cマウスをエーテル深麻酔下に安楽死させた後、胸腺を摘出、胸腺細胞の浮遊細胞とし、密閉型アクリル樹脂製箱に乾燥しないように静置する。密閉型アクリル樹脂製箱内をイソフルレンまたはセボフルレンがそれぞれ0MAC、1MAC,3MACの定常状態となるように設定した後、アクリル樹脂製箱を密閉した。その状態で培養時間として4時間、8時間、12時間、胸腺細胞を揮発性吸入麻酔薬に曝露したのち、フローサイトメトリー法による胸腺細胞のミトコンドリア内膜電位の容量依存・時間依存的変化を観察した。胸腺細胞のミトコンドリア内膜電位の変化はJC-1色素染色法によって行った。[結果1]イソフルランまたはセボフルランをin vitroにおいて胸腺細胞に暴露すると、容量依存性及び時間依存性にミトコンドリア内膜電位が低下した胸腺細胞が非暴露群に比べ有意に増加した。平成22年度に行った揮発性吸入麻酔薬による胸腺細胞アポトーシス誘導実験の結果と比較すると、興味深いことに胸腺細胞のアポトーシス誘導に先行して胸腺細胞のミトコンドリア内膜電位低下が観察された。[実験2]プロポフォールによるアポトーシス誘導時における胸腺細胞のミトコンドリア内膜電位の測定実験:48週齢のBalb/cマウスをエーテル深麻酔下に安楽死させた後、胸腺を摘出、胸腺細胞の浮遊細胞とし、30μMまたは60μMのプロポフォールを添加しCO2インキュベーター内にて4時間、8時間、12時間培養することにより胸腺細胞をプロポフォールに曝露したのちフローサイトメトリー法による胸腺細胞のミトコンドリア内膜電位の容量依存・時間依存的変化を観察した。[結果2]プロポフォール30μMまたは60μM存在下に胸腺細胞を培養しても胸腺細胞のミトコンドリア内膜電位はプロポフォール非暴露群に比較して有意な差は認められなかった。この結果は平成22年度に報告したプロポフォールによる胸腺細胞のアポトーシス非誘導性という結果に一致し、免疫細胞アポトーシス誘導における揮発性吸入麻酔薬との差が認められた。[実験]揮発性吸入麻酔薬およびプロポフォールによる胸腺細胞のアポトーシス誘導時における胸腺細胞内Caspase-3活性の測定実験: 48週齢のBalb/cマウスをエーテル深麻酔下に安楽死させた後、胸腺を摘出、胸腺細胞の浮遊細胞とし、密閉型アクリル樹脂製箱に乾燥しないように静置する。密閉型アクリル樹脂製箱内をイソフルレンまたはセボフルレンがそれぞれ0MAC、1MAC, 3MACとなるように設定した後、アクリル樹脂製箱を密閉する。

その状態で培養時間として8時間、胸腺細胞を揮発性吸入麻酔薬に曝露したのち、胸腺細胞内Caspas e-3活性をフローサイトメトリー法により測定する。また、上記と同様に胸腺細胞を浮遊細胞とし、30μMまたは60μMのプロポフォールを添加しCO2インキュベーター内にて8時間、培養することにより胸腺細胞をプロポフォールに曝露した後、胸腺細胞内Caspase-3活性を測定する。[結果1]セボフルランを0MAC、1MAC, 3MACとなるように設定した後に8時間、胸腺細胞に暴露したところ、用量依存性に胸腺細胞内Caspase-3活性は上昇し3MAC曝露群は0MACおよび1MAC曝露群に比し有意にCaspase-3活性が高かった。[結果2]イソフルラン曝露によっても胸腺細胞内Caspase-3活性は用量依存性に上昇し、1MAC群および3MAC群とも、0MAC群に比しそれぞれ有意にCaspase-3活性が上昇したが、1MAC群と3MAC群の群間に有意差は認められなかった。[結果3]胸腺細胞をプロポフォールに8時間曝露した後、胸腺細胞内Caspase-3活性を測定したところ30μMおよび60μMのプロポフォールともにプロポフォール非曝露群に比較し胸腺細胞内Caspase-3活性は有意な変化を認めなかった。揮発性吸入麻酔薬イソフルレン、セボフルレンによりin vitroにおいて胸腺細胞にアポトーシスが時間依存性かつ容量依存性に誘導されること、さらに胸腺細胞のミトコンドリア内膜電位低下がアポトーシス誘導に先行することからミトコンドリア内膜電位低下が揮発性吸入麻酔薬によるアポトーシス誘導の原因であることが示唆されるという新しい知見が得られ、さらに静脈麻酔薬プロポフォールにアポトーシス誘導作用がないことが判明したため。24年度が最終年度であるため、記入しない。一般的な機序として細胞にアポトーシスが誘導されるときは、最終的にアポトーシスを実行する蛋白分解酵素夢カスパーゼ系が活性化するため、イソフルレンまたはセボフルレンによる胸腺細胞アポトーシス誘導にカスパーゼ系酵素の活性化がともなっているかを解析する。これにより揮発性吸入麻酔薬による胸腺細胞のアポトーシス誘導メカニズムの全体像が明らかになると考えている。また、In vitroでの揮発性吸入麻酔薬による胸腺細胞アポトーシス誘導と同様のことがin vivoでもおこるか否かを観察するためにマウスにイソフルレンまたはセボフルレンを1MAC程度吸入させ、その後胸腺を摘出して、胸腺細胞のアポトーシス誘導とミトコンドリア膜電位の変化を解析する。この実験により吸入麻酔法が免疫系にあたえる影響を解析し、本研究をより臨床に近づけた内容としたい。
血球系幹細胞灌流培養系を用いた前胞状卵胞の体外成熟に関する研究

【目的】血球系幹細胞を持続灌流しながら卵巣組織を器官培養する系において,卵巣内の前胞状卵胞を体外発育させることができる至適条件を設定すること。【方法】排卵周期を有しホルモン動態がヒトに近いラット卵巣を用いて基礎実験を行なった。3週齢の近交系SHR雌ラットから片側卵巣を摘出し、ビブラトームを用いて薄切した。さらに骨髄を採取し,密度勾配遠心法で単核球を分取した。骨髄単核球はStemPro-34SFM mediumに浮遊させ,幹細胞の分化を抑制しながら冷蔵保存した。灌流培養の基本培養液としてはHAS, ITS, L-glutamine添加M-199を用い,これにrhFSH(Serono International, Geneva)を10 IU/Lの濃度で添加した。骨髄単核球灌流群と非灌流群の2群を設定し,それぞれパーフュージョンディッシュチェンバー(Ieda Trading, Japan)に薄切した卵巣組織を置き、上記基本培養液で持続灌流しながら培養した。持続的灌流には2台のペリスタルティックポンプを改造して用いた。冷蔵保存しておいた骨髄単核球は用時に基本培養液に再浮遊させ,灌流群ではパーフュージョンディッシュチェンバーの別のチャンネルから骨髄単核球浮遊液を灌流した。非灌流群では基本培養液のみを灌流した。【結果】7日間,骨髄単核球浮遊液を灌流培養することにより,卵胞径の増大と卵胞腔の形成が認められた。しかし,結果に再現性が得られておらず,至適条件の設定にはまだ時間を要するものと思われる。また,ペリスタルティックポンプの回路が閉塞するなど灌流方法にも問題が生じており,培養方法の再検討も必要である。灌流培養の基本培養液としてはHAS, ITS, L-glutamine添加M-199を用い,これにrhFSH (Serono International, Geneva)を10 IU/Lの濃度で添加した。
二重過程に基づく数量情報のリスクコミュニケーション手法の視線測定を用いた分析

本研究ではリスクコミュニケーション(以下リスコミ)に対する意思決定や判断への情動の関与を知るため、眼球運動測定器を用い視線の動きや瞳孔反応を測定して検討することを目的とした。初年度は測定機器を複数検討し、Tobii社の片眼用60HzののTobii X2-60眼球運動測定器を、分析ソフトとしてTobiiStudioプロフェッショナルを購入した。初年度は眼球運動測定器の操作とデータの分析に習熟する目的で、Webサイトに対する視線の動きの測定を試行的に行った。2年目は現実的で身近なリスコミの場面として特定可能な犠牲者効果(identifiable victim effect, Small, et al., 2007)での知見を基礎としたリスコミのポスターを検討し、最終的に特定可能な犠牲者効果での要因と恐怖喚起コミュニケーション(fear appeal)の程度との組み合わせで、恐怖の程度(高・中・低)と犠牲者(2人、1人、0人(単独事故:統計値有無の2種類))を組み合わせた事故場面の12枚のポスターを選定した。最終年度は前年度選定したポスターに対する眼球運動を測定した。実験参加者は男子学生15名(平均年齢21歳)で、測定時にはポスターだけでなく、対比として海外の恐怖喚起のポスターも用いた。結果として、1基本的には文字の有無や状況があってもポスター内に犠牲者の顔があるときにはほぼ表情に視線が集中、これが情動を生むと推測されること、2犠牲者ではなく加害者が描かれている場合、加害者の表情へも注視がかなりあること、3文字(例.「危険」)があれば視線は一定程度向くものの、ポスター内の人数が多いと文字への注視量は減ること、4ただし統計値(数値)が入っている場合には文字よりも数値に視線が向く傾向が見られることが明らかになった。平成28年度は研究の実施に不可欠な視線測定機器および分析ソフトウェアの購入、意思決定に関連するプロセストレーシングの現在の研究状況についての文献検討、および試行的にweb画面を見せる簡単な測定を行った。具体的には、2社から視線測定機器についてのデモを受けた上でtobii社のTobii X2-60(単眼、60Hz)を購入した。同機を購入した理由は、予算制約の下で最も精度が高く、calibrationも簡単で、また比較した他の機器に比べ、瞳孔反応も60Hzで測定できることから、感情を瞳孔反応で測定するという目的のある本研究ではこの精度が重要であると判断したためである。また同時に、眼球運動測定では分析ソフトウェアが非常に重要であることが明らかになったことから、データ取得及びデータ解析用ソフトウェアとして定評のあるTobiiStudioを導入した。これらの購入のため、平成29年度予算の一部を前倒しで使用した。なおこれらの導入に当たっては過去に眼球運動測定の実験の経験があり、生理指標の測定について知悉している分担研究者から十分なアドバイスを受けた。購入後には、試行的に、web上での旅行サイトに対する眼球運動の測定を複数行い、操作に習熟した。初年度は機器の導入と関連文献の検討、機器使用の習熟を計画していたので、現状はおおむね予定通りに進んでいる。本年度は特定できる犠牲者効果(以下IVE)の先行研究の検討と、予備研究としてIVEのポスターに対する眼球運動測定を行い注視点を検討した。IVEはリスクコミュニケーションの文脈ではSmall et al.(2007)が有名だが、現象自体は行動経済学で以前から知られていた。ただ実証研究として盛んになったのはSmallの研究前後からで、現在まで心理系学術誌に24本の論文があるが、むしろ意思決定研究や援助行動等の文脈で研究が行われている。例えばWiss et al.(2015)はトロッコ問題を用い特定できること(indentifiablitiy)と一人であること(singularity)の効果を独立に検討、前者が単純にpositiveな効果を持たず(グループの場合にはnegativeな場合も)、感情的リアクタンスの媒介の可能性に言及している。同様に近年の研究では感情との関係が検討され(Friedrich and McGuire 2010; Kogut and Ritov 2005a, 2005b; Ritov and Kogut 2011; Small et al. 2007;Lee & Feeley, 2017)3つで仮説が支持されているが、どれも感情状態の言語報告によるもので、視線による直接測定を用いた研究は依然ないことが明らかになった。実証研究として、本年度はIVEをベースとした感情喚起要素と数値情報を含む対象(ポスター6枚)と、従来使われている文字・数値情報のみのポスター1枚、それ以外に海外の恐怖喚起を生み出すような表現のポスター2枚に対する眼球運動測定を行なった。結果のうち、瞳孔反応は現在分析中であるが、視線の動きとしては文字・数値情報が対象内に含まれている場合には必ずまずそれらが注視されること、また「血」のような強い感情喚起要素はすぐに注視されることが明らかになった。研究代表者が学部教務委員長を平成28-29年度勤めることになり、また他の助成研究も並行して進むことになったこと、さらに研究代表者の体調不良(更年期障害)より実証研究が計画より遅れ気味である。

初年度は眼球運動測定器の操作とデータの分析に習熟する目的で、Webサイトに対する視線の動きの測定を試行的に行った。2年目は現実的で身近なリスコミの場面として特定可能な犠牲者効果(identifiable victim effect, Small, et al., 2007)での知見を基礎としたリスコミのポスターを検討し、最終的に特定可能な犠牲者効果での要因と恐怖喚起コミュニケーション(fear appeal)の程度との組み合わせで、恐怖の程度(高・中・低)と犠牲者(2人、1人、0人(単独事故:統計値有無の2種類))を組み合わせた事故場面の12枚のポスターを選定した。最終年度は前年度選定したポスターに対する眼球運動を測定した。実験参加者は男子学生15名(平均年齢21歳)で、測定時にはポスターだけでなく、対比として海外の恐怖喚起のポスターも用いた。結果として、1基本的には文字の有無や状況があってもポスター内に犠牲者の顔があるときにはほぼ表情に視線が集中、これが情動を生むと推測されること、2犠牲者ではなく加害者が描かれている場合、加害者の表情へも注視がかなりあること、3文字(例.「危険」)があれば視線は一定程度向くものの、ポスター内の人数が多いと文字への注視量は減ること、4ただし統計値(数値)が入っている場合には文字よりも数値に視線が向く傾向が見られることが明らかになった。平成29年度は先行研究での意思決定課題(特定された犠牲者効果)が再現されるかを実験した上で、地震予測地図を見せる実験に進んでいく予定。30年度はそれらの成果を発表することを予定している。2年間で眼球運動測定器の使用とデータ処理にはある程度習熟したこと、また平成30年度は役務(教務委員長)を任期終了したこと、さらに半年間の在外研究で授業担当などを離れることになったことから、今後スピードアップが図れると考えている。眼球運動測定器及びソフトウェアを購入した際に、当初予定していた額よりも高くなることが見込まれたため、念のため次年度から前倒し請求を行った。実際、購入額は予定よりも高くなったものの、しかし、予定していた学会出張のうち、招待講演などで費用負担が他からあったり、また学内役務のため学会出張ができなかったりしたこともあり、結果として次年度使用額が生じた。実証研究が予定よりも遅れたため、実験参加者謝礼などの部分が未使用となった。平成30年度の実験遂行時にこれらを利用する。当初予定に加えた情報収集のための学会出張、および人件費で使用することを考えている。
分化抑制因子からみた発生分化統御システムに関する研究

bHLH型転写因子の機能抑制因子の一つであるId2は、細胞の分化と増殖の制御に深く係わっている。Id2欠損マウスが示す多彩な病態(行動異常、乳汁分泌不全、免疫担当細胞の分化など)の解析をとおして、細胞の増殖と分化がどのように制御されているのかを個体レベルであきらかにすることが本研究の目的である。1.中枢神経系:線条体と黒質を含む種々の脳の領域の組織学的解析行ったが、有意なId2欠損マウス所は検出できなかった。in situ hybridizationを用いてbHLH因子の発現解析を行い対照マウスとId2欠損マウスで比較ところ、11.5日齢胎仔ではMash1、neurogenin2に差は認めなかったが、Math2の発現はId2欠損マウスにおいて大脳皮質の広範囲にかつ強く認められた。11.5日齢胎仔の脳室帯での細胞増殖の程度をKi67抗体で検討したところ、対照に比しId2欠損マウスでは染色性が減弱していた。また、抗GAD抗体を用いてGABAニューロンの数と分布を検討したが、対照とId2欠損マウスの差は認めなかった。しかし、スライス切片を用いた黒質網様部GABAニューロンの解析では、対照に比しId2欠損マウスで、自然発火頻度が1.3倍程度亢進していた。2.乳腺:他の遺伝子改変マウスとの交配実験によりId2欠損マウスにみられる乳汁分泌不全の改善を試みたが、サイクリンD1トランスジェニックマウスおよびCDKインヒビターの一つであるp27の欠損マウスいずれでも改善されなかった。3.免疫系:Id2欠損マウスが鼻咽頭関連リンパ組織を欠損する唯一のマウスであることを報告した。また、Id2欠損マウスがCD8α陽性樹状細胞の選択的欠落を伴いTh2優位状態にあることを示した。さらに、B細胞の免疫グロブリンのクラススイッチにおいてId2がIgEへの過剰なスイッチを抑制していることを明らかにした。分化抑制因子IdはbHLH型転写因子の機能阻害因子であり、分化の阻害と増殖促進作用も合わせ持つが、生体における機能については不明な点が多い。申請者らは分化抑制因子の一つであるId2を欠損するマウスを作成し、その病態解析を行ってきた。このマウスはナチュラル・キラー(NK)細胞の分化障害、乳汁分泌不全、多動を中心とした行動異常など極めて多彩な病態を示す。本研究の目的は、これらの病態が生じる分子基盤を解明し、細胞増殖と分化の調節機構の中でId2が果たす役割を統合的に理解することにある。神経系1)in situ hybridizationを用いて線条体におけるサブスタンスP、エンケファリン、およびドーパミン受容体のD1、D2の発現を検討したところ、発現レベル、発現細胞数に著明な変化は見られなかった。3)Id2欠損マウスにおいて黒質および黒質からドーパミン作動性神経の投射を豊富に受ける線条体を構成する神経細胞の種類に異常がないかを免疫染色法などを用いて解析する。5)その他の成果として、培養系で誘導される小脳顆粒細胞のアポトーシスの過程にId2が係わっていること、また、神経芽細胞腫の予後とId2蛋白質の発現レベルが逆相関することを見出した。NK細胞1)Th2反応優位の原因の主たる要因としてCD8_α陽性樹状細胞の減少を見出した。2)Nk細胞の分化に係わるId2の領域解析は技術的な問題のために進展しなかった。乳腺上皮細胞

1)転写因子であるC/EBPβの欠損マウスはId2欠損マウスと同様の乳汁分泌不全を呈するが、Id2のプロモーター解析からC/EBPβがId2の上流遺伝子であることを明らかにし、現在詳細を解析している。bHLH型転写因子の機能抑制因子の一つであるId2は、細胞の分化と増殖の制御に深く係わっている。Id2欠損マウスが示す多彩な病態(行動異常、乳汁分泌不全、免疫担当細胞の分化など)の解析をとおして、細胞の増殖と分化がどのように制御されているのかを個体レベルであきらかにすることが本研究の目的である。1.中枢神経系:線条体と黒質を含む種々の脳の領域の組織学的解析行ったが、有意なId2欠損マウス所は検出できなかった。in situ hybridizationを用いてbHLH因子の発現解析を行い対照マウスとId2欠損マウスで比較ところ、11.5日齢胎仔ではMash1、neurogenin2に差は認めなかったが、Math2の発現はId2欠損マウスにおいて大脳皮質の広範囲にかつ強く認められた。11.5日齢胎仔の脳室帯での細胞増殖の程度をKi67抗体で検討したところ、対照に比しId2欠損マウスでは染色性が減弱していた。また、抗GAD抗体を用いてGABAニューロンの数と分布を検討したが、対照とId2欠損マウスの差は認めなかった。しかし、スライス切片を用いた黒質網様部GABAニューロンの解析では、対照に比しId2欠損マウスで、自然発火頻度が1.3倍程度亢進していた。2.乳腺:他の遺伝子改変マウスとの交配実験によりId2欠損マウスにみられる乳汁分泌不全の改善を試みたが、サイクリンD1トランスジェニックマウスおよびCDKインヒビターの一つであるp27の欠損マウスいずれでも改善されなかった。3.免疫系:Id2欠損マウスが鼻咽頭関連リンパ組織を欠損する唯一のマウスであることを報告した。また、Id2欠損マウスがCD8α陽性樹状細胞の選択的欠落を伴いTh2優位状態にあることを示した。さらにB細胞の免疫グロブリンのクラススイッチにおいてId2がIgEへの過剰なスイッチを抑制していることを明らかにした。
配向化DNA薄膜の構築と電極反応

本研究は、DNA-脂質複合体を用いてDNA二重らせん鎖を一方向に配向させた薄膜を作製し、電極上でDNA鎖に沿った異方的な電子移動を実現することを目的として行い、以下の成果を得た。昨年度までの研究で、DNA-脂質複合体フィルムはDNA鎖方向に沿って電気が流れることが確認できた。今年度は、くし型電極上にDNAフィルムを圧着し、直流および交流電場をかけて、周波数や温度依存性を測定した。その結果、DNA鎖内は電子移動で電気を通していることが明らかになった。
近代都市の交通基盤整備と地域発展の相互関係に関する地理学的研究

本研究の目的は,近代以降における都市の発展過程を明らかにするさいに,交通基盤の建設や整備が果たした役割の重要性に着目し,交通発展と都市構造の形成の相互関係を明らかにする点にある。2年間にわたる研究の結果,名古屋市とその周辺地域において,鉄道敷設,港湾建設,道路建設など進められた結果,都市や地域の空間構造が段階的に変化していったことが明らかにされた。具体的には,東海道線をはじめとする幹線鉄道,これと連絡する私設鉄道が貨客輸送の面で重要な役割を担った。鉄道ルートの決定はその後の都市発展を左右するに十分であり,とくに名古屋駅の開設位置が市街地構造の形成に及ぼした影響は顕著である。鉄道交通とならんで特記されるのが港湾の建設・整備である。とりわけこの地域にとって重要なのは名古屋港の開港である。後背地域の経済発展に後押しされるかたちで開港したが,その後は港湾が産業発展の必須条件となり,両者は一体的に発展していった。さらに陸上部での道路建設は,名古屋市とその周辺地域を結ぶ役割を近世とは比べようもないレベルで果たすようになった。基本的には近世までの交通ルートを踏襲したといえるが,個々の道路が都市間の連絡や地域発展しに対して果たした役割は多様である。いずれにしても,近代都市・地域の空間的発展を考えるさいに交通が果たした役割の重要性は十分に検証されたといえる。本研究の目的は,わが国の近代化過程において,都市の交通基盤がいかに整備され,その効果が地域発展にどのような影響を与えたか,つまり交通基盤整備と地域発展の相互関係を明らかにする点にある。対象地域は明治22年(1889)に市制を施行した名古屋市及びその周辺地域であり,鉄道・電車の開業,道路の建設・改修,港湾・運河の建設,自動車・バス交通の導入といった一連の交通基盤整備が,都市の地域発展をどのように支えたかに注目する。本年度は,明治期から戦前昭和期までに行われた交通基盤の整備事業に関する原資料の収集を行った。名古屋市の市政資料館に収集されている各種の資料をはじめとして,名古屋商工会議所の図書館,名古屋市博物館,東京にある交通博物館,東京市政調査会図書館などで原資料の複写を行った。また,交通事業や企業活動の歴史を知るため,資料の購入および複写を行った。つぎに,それらの資料をもとに,明治初期から順に交通基盤整備がどのように展開されていったか,その概略を明らかにした。鉄道の導入からはじまり,港湾の建設,運河の開削,自動車交通の開始が次々に行われ,近世までの地域構造が大きく変化をしていく過程が明らかになった。この間,戦争や経済の好不況など,交通基盤整備を左右する出来事が起こり,そのたびに整備事業は影響を受けていった。それゆえ,今後はさらに,交通基盤の整備がどのような時代背景のもとでなされたか,その結果,産業,社会にいかなる影響を与えたかという点を中心に研究を行う予定である。

基本的には近世までの交通ルートを踏襲したといえるが,個々の道路が都市間の連絡や地域発展しに対して果たした役割は多様である。いずれにしても,近代都市・地域の空間的発展を考えるさいに交通が果たした役割の重要性は十分に検証されたといえる。
ヨーロッパ都市における社会的組帯-中・近世のドイツとフランス

当該年度の研究活動は、学内での勉強会と学外の研究者を招いた研究会を二つの核として進められた。まず月1度、魚住、高澤を中心に助手、大学院生、学生らと共に勉強会を開き、内外の基本的文献(喜安朗氏の諸著作、Maurice Agulhon,“Working class and sociability in France before 1848"など)の講読を行いつつ、ソシアビリテ(社会的紐帯)概念の理解を共有することを目指した。これに伴い、主として海外の文献の収集、整理も進めていった。その上で、11月以降は2度にわたり、二宮宏之氏(フランス近世史・東京外国語大学)、佐藤清隆氏(イギリス近世史・相模女子大学)、徳橋曜氏(イタリア中世史・富山大学)らと研究会を持った。ソシアビリテ論の成り立ちと現在について、また個別のフィールドにおける研究状況と具体的成果について各人から報告をおこなった。魚住は、ドイツの学界の研究状況を紹介し、高澤は16世紀、17世紀の民兵を取り上げ近世パリ社会のソシアビリテを考察した。東洋史、日本史の研究者の参加をあおいだ結果、個別領域にとどまらない広い視野から活発な意見交換を行い、方法概念としてのソシアビリテの有効性と問題性についても議論を深めることができたのは大きな成果であった。当該年度内にこれらの成果をまとめて発表するには至らなかったが、平成6年度には論文として公表される予定である。
リ-群におけるサメルソン積について

I.ホモトピ-正規性についての研究。ホモトピ-正規性についてはこれまであまり研究されてなく、古典群に関してはJamesの研究がある。ここでは例外群を含む単純リ-群のCU(3)<G_2<Spin_7<Spin_8<Spin_9<F_4<E_6<E_7<E_8の部分群はそれを含む群に於てホモトピ-正規部分群にならないことを示した。これはリ-群のホモトピ-群の計算を用いて具体的に自明でないような相対サメルソン積を構成することによりなされる。2.Ex-ホモトピ-論の研究。Lusternik-Schnirelmannにより空間のカテゴリ-の概念が導入された。この不変量は空間のホモトピ-群の構造と密接に関連している。即ち、ある条件のもとでの写像のホモトピ-類のなす群、同じファイバ-空間の間のファイバ-ホモトピ-同値なファイバ-ホモトピ-類がなす群、またはex-写像のex-ホモトピ-類全体のなす群は巾零となり、その巾零の長さはこの空間(ファイバ-空間のときは底空間)のカテゴリ-より小さい。この研究はWhitehead、Jamesにより考察されてきた。空間のカテゴリ-についてのこれらの結果を写像のカテゴリ-またはファイバ-空間のカテゴリ-に関するものに拡張した。一方、同変トポロジ-がよく研究されてきたのに比べ、ファイバ-的トポロジ-は今、研究段階である。ファイバ-的ホモトピ-論における問題のうち特にファイバ-的ホワイトヘッド積について研究した。即ち、EをB上のファイバ-的空間とする。B上のファイバ-的懸垂Σ_BEからそれ自身への恒等写像のファイバ-的ホモトピ-類をιΣ_BEと記すときファイバ-的ホワイトヘッド積[ιΣB温E,ιΣ_BE]επ_B(Σ_B(EΛ_BE),Σ_BE)の計数は2^kとなると予想される(但しkは底空間Bのカテゴリ-を表す)。特にBが懸垂空間(k=2)のときについてJamesの結果を改良した。1.射影空間に埋め込まれた代数多様体が、線織面であるかどうかの判定法として、クラスを用いる方法が考えられる。今年度に行った研究によって、それに関する次の様な定理が得られた。代数曲面Sの次数dとクラスmに関して、mがd+19以下であれば、Sは線織面である。また、m=d+20ならば、Sは線織面または4次元射影空間に埋め込まれたアーベル曲面である。2.また、リボルニの1985年の論文において存在するかどうか確定されていなかった2種類の代数曲面(論文の2ページ目の分類表における(7)と(9))は存在しないとの証明が得ることが出来た。前年度に引き続き、代数多様体の構造について研究を行なった。代数多様体の分類において興味がある小平次元マイナス無限大の多様体は、3次元の場合単線織多様体として最終的に森によって特徴付けられた。2次元代数多様体つまり代数曲線の場合、線織面の判定法は古典的な場合を含めて多く知られていたが、前年度この研究課題の下で射影不変量を用いた一つの判定法が得られたが、今年度もそれに類似した判定法を一つ得ることが出来た。それ次の様な命題としてまとめることができる。「Sを複素数体上で定義された特異点のない2次元代数多様体とする。

Sが複素射影空間に埋め込まれているとき、次数及びクラスが定義することができる。Sのクラスをm、次数をdとおく。mが2d+9以下であれば、Sは線織面に限る。また、mが2d+10に等しければ、線織面が4次元複素射影空間に埋め込まれたア-ベル曲線に限る。」単有理代数多様体およびそれに近い性質を持つ代数多様体について判定法を得るために、エフェクティブな曲線によって生成される錐体ではなく、実数係数因子群におけるエフェクティブな因子類によって生成される錐体の生成元を調べた。それについて若干の結果が得られた。また、研究分担者による研究成果は、裏面の研究発表にある通り、各側面の関連で、それぞれの結果を得た。上記の結果を得るために、研究集会に参加、討論を行なったり、他大学の研究者と研究連絡等を行なった。
多量子コヒーレンスを利用したNMR測定法の開発と分子構造への応用

多量子コヒーレンスを利用した2次元NMRの測定法の開発と分子構造解析への応用を行った。1量子コヒーレンスは通常のNMRのF1Dシグナルそのものであるが、それぞれのスピンの1量子コヒーレンスを異なるスピン間に次々と移行させる多重リレーCOSY法(Multiple-Relay Correlation Spectroscopy)を開発し、最高4重にまでコヒーレンスを移行させることに成功した。JEOL-GXタイプのスペクトロメータで測定が行えるようパルスシーケンスをプログラムした。この方法をセロテトラオースの構造解析に応用し、全体のスペクトルの中から各糖残基のスペクトルを分離して、スペクトルを編集し直すことが可能であることを明らかにした。2量子コヒーレンスを利用した測定法ではDECSY法(Double Quantum Coherence Echo Correlated Spectroscopy)を開発した。この方法は2量子コヒーレンスが1量子コヒーレンスの2倍の周波数で振動することを考慮してエコーを測定することにより、2量子周波数軸の帯域を狭くできる利点がある。これを利用してポリビニルアルコールの立体規則性の帰属をおこなった。また、【^(13)C】-DECSYを利用してポリプロピレンオキサイドの【^(13)C】スペクトルの帰属、ポリブタジエンのトランス、シスの区別を行った。多量子コヒーレンスの利用としてフィルターの利用法がある。純位相のCOSYの対角ピークは分散型になるので、ピークの裾が広がり他の交差ピークを覆い隠してしまう。2量子フィルターを用いることにより両ピークとも吸収型にできる。これを利用して、アセチル化セロオリゴ糖、カルモデュリンの2次元NMRを測定した。更に3量子フィルターを用いたCOSYを開発し、2スピン系からのピークを除去することを試みた。これを利用してポリビニルアルコールの立体規則性によって異なるメチレンプロトンのうち等価なメチレンプロトンを区別した。昭和60年度においては低速で動作する0.1度きざみのデジタルフェーズシフターを検討し、ベンチテストをおこなった。その結果、低速での動作は良いもののフェーズ切り換えに要する時間がかなりかかり、実際にNMR測定としてオンラインで使用するには問題があることが判明した。また、現在のJEOL-GXタイプNMRスペクトロメーターに付属させて用いるとき、フェーズシフターをどのようにすばやく制御するかが問題になった。高速制御のためには、現在のパルスコントローラそのもの改造、更には、それを制御するためのプログラムの大幅な変更が必要であることがわかった。これらの問題を当面避けるため、4量子遷移相関二次元NMRの測定がF1軸方向にクアドラチュアーデテクション(QD)出来るようにディレイラインを用いて22.5度のフェーズシフターをつくり、それを現有のパルスコントローラーの空きポートを利用して制御することにした。現在そのための作業をおこなっており61年度において完成させるべく進行中である。【^(13)C】二量子遷移NMRであるINADEQUATE二次元NMRスペクトルのF1軸方向の折り返しを避けるために、現在簡便な方法として読みだしパルスを135度にしているが、感度の点で問題があるので、F1軸方向のQDを行うように45度フェーズシフターを用いたパルスシーケンスプログラムを作成した。読み出しパルスとして135度でなく90度であることによる有利さ、更にQDによる有利さによって感度が向上した。このプログラムを用いて、エチレンプロピレンコポリマー、ポリプロピレン、ポリビニルアルコールのINADEQVATE二次元スペクトルを測定し、立体規則性に依存するシグナルの帰属をおこない、60年8月ハーグで開かれたIUPAC高分子シンポジウム、9月京都で行われた高分子日米ジョイントセミナーで報告した。
極低温における多体相関と動的現象の理論的研究

1)重い電子系の超伝導状態重い電子系の有効質量が,何故桁違いに大きいかは, f電子系と伝導電子系の間の強い相関の問題として重要であるが,本研究ではそれに立入らず,この系のもうひとつの重要な特性である超伝導状態について注目した.実際の系で,どの様なクーパー対が生成されているかを特定することは,超伝導状態の微視的理解の鍵をなす.種々の実験からは,対はBCS型ではなく,ギャップにO点あるいは,節のある非等的なもの,と推測されるが,未だ同定には到っていない.そこで本研究は,非等方性をもたらす自由度の増加に伴って出現する集団励起状態に注目した.例としては, p及びd波対生成によるいくつかの基底状態から出発したが,各状態とも,夫々に特徴的な集団モードを有することが判った.これらは,系の外場中での振舞を特徴づける.実際それらが,電磁場や音波に対する応答関数に,どの様に出現するかを,クーロン力及びゲージ不変性を正しく取りれた定式化を完成させ,例として,地場侵入長を計算した.これらは,今後の実験との対比によって,重い電子系の超伝導状態の解明に役立つに違いない.2)超流動^3He-B中の非線型音波伝播^3He-Bの超音波実験で見出された,ソリトン的非線型性は,光学的二準位系で成功した非線型方程式系をそのまま借用した現象論で解釈されている.ここでは, ^3Heの超流動状態を規程するオーダパラメタを,集団励起の固有関数を求めて,実験条件に合致するReal Sguashingモードへの射影が成す準スピンと音波の相互作用を求め,それらの方程式を求めて,現象の基礎を与えた.3)液体He表面上の2次元電子系電子間および電子-He面間の相互作用を正しく扱う定式化を行い,それを輸送現象・融解現象に応用した.1)重い電子系の超伝導状態重い電子系の有効質量が,何故桁違いに大きいかは, f電子系と伝導電子系の間の強い相関の問題として重要であるが,本研究ではそれに立入らず,この系のもうひとつの重要な特性である超伝導状態について注目した.実際の系で,どの様なクーパー対が生成されているかを特定することは,超伝導状態の微視的理解の鍵をなす.種々の実験からは,対はBCS型ではなく,ギャップにO点あるいは,節のある非等的なもの,と推測されるが,未だ同定には到っていない.そこで本研究は,非等方性をもたらす自由度の増加に伴って出現する集団励起状態に注目した.例としては, p及びd波対生成によるいくつかの基底状態から出発したが,各状態とも,夫々に特徴的な集団モードを有することが判った.これらは,系の外場中での振舞を特徴づける.実際それらが,電磁場や音波に対する応答関数に,どの様に出現するかを,クーロン力及びゲージ不変性を正しく取りれた定式化を完成させ,例として,地場侵入長を計算した.これらは,今後の実験との対比によって,重い電子系の超伝導状態の解明に役立つに違いない.2)超流動^3He-B中の非線型音波伝播^3He-Bの超音波実験で見出された,ソリトン的非線型性は,光学的二準位系で成功した非線型方程式系をそのまま借用した現象論で解釈されている.ここでは, ^3Heの超流動状態を規程するオーダパラメタを,集団励起の固有関数を求めて,実験条件に合致するReal Sguashingモードへの射影が成す準スピンと音波の相互作用を求め,それらの方程式を求めて,現象の基礎を与えた.3)液体He表面上の2次元電子系電子間および電子-He面間の相互作用を正しく扱う定式化を行い,それを輸送現象・融解現象に応用した.最近注目を集めている、いわゆる重い電子系の超伝導体は、従来の超伝導体とは異る機構によって超伝導性を示すものと考えられている。本研究では、その様な機構として、スピンが三重項で、角運動量がP波である様なクーパー対の凝縮による超伝導の可能性を探求した。この様なP波超伝導体の著しい特徴は、スピン及び軌道角運動量の自由度が多い事であり(全部で18個)、それに対応してオーダーパラメターも多く、従って、外場に対する応答も多様である。本研究では、まず、P波超伝導体のオーダーパラメターが、弱い外場の下で、どの様な運動をするかを、有限高度でのRPA近似によって調べ、適当な表示を選ぶことによって、P波対凝縮で可能な4つの状態=ポーラー、ABM、プラナー、BW=の全てに共通な統一的な方程式を得た。更に、超伝導状態を記述する上で重要な物理量である。電流についても統一的で、ゲージ不変な表式を得た。これらに基いて、クーロン相互作用、集団励起モードが、音波、電磁波等の外場に対して、どの様な効果を及ぼすかを、各状態毎に詳しく調べた。具体的な例として、静的な磁場の浸入長について詳述し、集団励起モードが、浸入長の温度依石にどの様に反映されるかを計算した。
「性差構築の分子基盤」の領域運営と支援活動

総括班は「性差構築の分子基盤」の研究推進を支援し、その成果を広く社会に発信するための活動を行った。その目的達成に向け、総括班には集会担当、若手支援担当、広報担当、評価担当、技術担当、実験動物担当を配置した。集会担当と若手支援担当ならびに評価担当は領域会議や若手シンポジウムを通じ、領域研究の進展状況の確認ならびに共同研究の推進に努力した。広報担当はホームページを通じ、研究成果を発信、また集会担当との協力のもとに市民公開講座を開催し、成果の公表に務めた。技術担当と実験動物担当は、特に次世代シークエンサーによるデータ収集とその解析、マウスやメダカ遺伝子改変動物を用いた実験の支援を行った。新学術領域研究「性差構築の分子基盤」においては脊椎動物を対象に、性差構築の分子メカニズムを明らかにすることを目的に、計画研究と来年度より参加する公募研究によって研究を推進する。総括班では、本領域がその研究目的を達成するために、以下の担当を設置し、それぞれが分担して総括班業務を遂行した。1、技術支援担当は次世代シークエンサーの稼働から得られたデータの解析を可能とするサポート体制を構築した。現在、シークエンス業務を開始しており、既にデータが得られている。2、実験動物担当は、マウスとメダカについて、遺伝子改変動物の作製と解析に関するサポートを開始した。3、広報担当は領域のホームページを開設し、領域の活動内容や研究業績を発信している。4、集会担当は若手支援担当とともに、領域会議と若手の研究会を合同で開催した。来年度は公募研究を迎えるため、これらのサポート体制が確実に稼働させることで、若手研究者の支援を拡充してゆく予定である。新学術領域研究「性差構築の分子基盤」の総括班では、本領域の研究推進の支援、広報活動、若手支援等を行うこととしている。本年度は8月31日から9月2日にかけて佐賀県唐津市において、第3回領域会議を開催した。計画研究代表者7名と本年度より採択された公募研究代表者12名が研究成果の発表を行った。また、領域会議においては若手を中心にポスター発表が行われるなど、熱のこもった議論が展開された。9月24日には日本動物学会、NHK並びに札幌市男女共同参画センターとの共催により、札幌市にて市民公開シンポジウム「性の不思議」を開催した。この市民公開シンポジウムに先立ち、新聞紙上や札幌市の広報誌上で広く宣伝したため、秋の連休中にも関わらず150名を越える参加者があり、本領域研究の意義を広く国民に伝えることができた。また、参加者の理解度を確かめる目的でアンケート調査を行ったが、その結果は概ね良好であり、研究者以外の人々に理解してもらえることを念頭に、かなりの準備を行ってきたことの結果であると思われた。1月30日には「ステロイド産生とその機能」に関する研究会を九州大学で開催した。領域内の研究者を中心に30名ほどが参加し、ステロイドホルモンに関する最近の話題を中心に議論した。研究支援については、次世代シークエンサーの利用とデータ解析を中心に行っているが、領域内の研究者は既にこれらの支援を受けながらデータを収集している段階である。以上のように、総括班で計画した業務を遂行した。領域研究では、「性差構築の分子基盤」の解明に向けた新たな学術領域の確立を目指す。このために、分子生物学、発生学、基礎・臨床医学、畜水産学、情報生物学などの多様な分野の研究者が結集し、性差構築機序を、その要諦である遺伝的制御系と内分泌制御系の観点から解析する。そこで総括班では、以下の領域運営活動と研究支援活動を通じ、本領域研究の目的達成に向けた活動を行ってきた。平成25年度は、9月5ー7日に佐賀県唐津市にて領域会議を開催した。領域会議では研究の進捗状況の報告と討議を行った。また、6日には総括班会議を開催し、昨年度の総括班活動実施報告を行った後に、領域研究の進捗状況、ならびに本領域の社会貢献などについての討議を行った。本領域では次世代シークエンサーを活用したデータの収集と解析を主要な手段と位置づけており、領域内には生物情報学を専門とする研究者を擁している。昨年度は領域内で「性差研究における大規模データ解析」に関する研究会を開催したが、本年度は対象を領域外に広げ、ワークショップ「よく分かる次世代シークエンサー解析」を本領域が後援する形で、九州大学病院キャンパスにて実施した。3月17ー19日にかけて国内各地から講師と受講者を迎え、盛況のうちに実施された。また、一般市民を対象とする市民公開シンポジウム「性の不思議ー女と男ー」を12月21日に九州大学病院キャンパスにて開催した。

前回、平成23年に札幌にて開催した市民公開シンポジウムでは残念ながら高校生の参加が無かったことから、福岡での開催にあたり、前年度より福岡県の高校の理科部会の先生方と連絡をとり、今回のシンポジウムでは300名近くの高校生の参加を得ることができた。また、これらの活動は領域ホームページにて逐次公開してきた。領域研究では、「性差構築の分子基盤」の解明に向けた新たな学術領域の確立を目指す。このために、分子生物学、発生学、基礎・臨床医学、畜水産学、情報生物学などの多様な分野の研究者が結集し、性差構築機序を、その要諦である遺伝的制御系と内分泌制御系の観点から解析する。そこで総括班では、以下の領域運営活動と研究支援活動を通じ、本領域研究の目的達成に向けた活動を行ってきた。平成26年度においては、10月9ー11日に静岡県浜松市にて領域会議を開催し、研究の進捗状況の報告と討議を行った。期間中に総括班会議を開催し、昨年度の総括班活動報告を行った後に、領域研究の進捗状況、ならびに本領域の社会貢献、若手の育成などについて討議した。また、当該年度は領域研究の最終年度にあたるため、本領域研究の総括と今後の展望について、8月27-28日(東京)、10月8日(浜松)、3月20日(岡崎)、計画研究代表者が集まり、討論した。その結果、当初は期待していなかった新たな成果が複数の研究室で得られ始めていることを確認した。本領域では若手研究者の支援を目的に、若手研究者主催の研究会をこれまでに2回、開催してきた。当該年度においては12月9-10日、熱海市において開催した。この研究会は領域の若手が周辺研究領域の若手を取り込むことで、性研究とその周辺の研究発表によって構成される興味深いものであると同時に、今後の性研究の方向性に関する若手研究者の視点が示された点で意義深いものであった。また、外国人研究者を演者に招いていたため、本研究会の発表と質疑応答は全て英語で行われたが、非常にスムーズな発表と討論が行われた。次世代シークエンサーを活用したデータの収集と解析を主要な手段と位置づけており、前年度に続き、九州大学の支援を受け、領域のシークエンス支援を継続した。これらの活動は領域ホームページにて逐次公開してきた。そこで総括班では、以下の領域運営活動と研究支援活動を通じ、本領域研究の目的達成に向けた活動を行う。24年度は中間評価の取りまとめを行った。また、領域会議を通じ研究の進捗状況の確認、領域内外の若手研究によるシンポジウムの開催、ならびに領域内に大規模データが蓄積されてきたことを受け、大規模データに関する研究会を開催した。これらの会議・研究会を通じ、領域内での連携を強化した。領域内の成果は主にホームページ上で公開している。本領期総括班では、次世代シークエンサーと遺伝子改変動物による解析の支援体制を整え、実施してきた。この活動も順調に推移しており、特に次世代シークエンサーによる解析とそこから得られる大規模データの解析を領域内で構築・支援しており、多くのグループが利用するに至った。
肝細胞癌及び前癌病変血洞の微細形態と血流の変化

【背景】肝細胞癌(肝癌)は一般に動脈血支配であるが、それらの中には、動脈血優位でないもの、グリソン域を腫瘍内に有しているもの、血洞が類洞構造を残存しているもの等が知られている。今回我々は、2cm以下の肝癌におけるVEGFの産生と臨床病理像の相関を検討し、発生初期の肝癌の血管獲得機序について考察した。【対象と方法】直径2cm以下の肝癌(肝内転移を除く)74結節を対象とした。切除標本は10%ホルマリンで固定、LSAB法による抗VEGF抗体、抗第VIII因子関連抗原(F-VIII)抗体による免疫組織化学で発現を観察した。また、臨床病理学的事項として1)動脈造影像、2)分化度、3)腫瘍被膜の有無、4)周辺組織への浸潤形態(置換型と膨張型)をHE標本にて観察しVEGF発現との相関を検討した。【結果】小肝癌全体中、動脈造影陽性結節は46%、分化度は高分化型55%、中分化型23%、低分化型22%であった。被膜を有する結節は54%、類洞型ないしは置換型の浸潤形態を呈する結節は54%であった。F-VIII陽性血洞を有する肝癌は61%、VEGFの発現は43%であった。VEGFとF-VIII、他の臨床病理学的因子との相関を検討すると、動脈造影陽性像(p<0.05)、血洞内皮F-VIII発現(p<0.05)、膨張型浸潤形態(p<0.05)にVEGFと正の相関の統計学的有意差を認めた。また、分化度において高分化型にVEGFの発現が弱い傾向を認めた。【考察】上記結果を換言すれば、VEGFは富動脈血で血洞が毛細血管である小肝癌に発現が多く、これはVEGFの作用による血管新生により毛細血管-動脈血機構を獲得したことを推察させる。しかし、周辺組織への浸潤形態が置換型である肝癌や高分化型肝癌ではVEGFの発現は弱く、腫瘍自体の動脈血需要は低いために類洞-門脈血機構で生存していることが示唆される。肝細胞癌(HCC)は動脈より栄養され、門脈-肝静脈は流出血管とされてきた。またHCC内血洞はKupffer細胞、伊東細胞などを有さず、構造的にも毛細血管であるとされ、血管新生により動脈血を獲得するものと考えられてきた。しかし、近年診断技術の進歩によりに伴い、動脈造影で描出されないHCCが近年報告されている。今回我々はHCC症例の切除標本を用いて更にその支配血流やHCC内血管構造を臨床病理学的に観察し、腫瘍発生時の血管獲得の新しい機序について以下のように考察した。【方法】(実験1)2cm以下のHCC57例、腺腫様過形成(AH)8例の血洞において、毛細血管の指標である第VIII因子関連抗原(F-VIII)発現の有無を、腫瘍分化度、腫瘍被膜の有無、肝動脈造影時の腫瘍像と比較検討した。(実験2)HCC切除中に採取したHCC標本27例の類洞構造を透過電顕で観察し、腫瘍径、分化度、腫瘍被膜の有無、肝動脈造影像と比較検討した。【結果】(実験1)2cm以下のHCCでF-VIII陰性群は32.3%であった。動脈造影像陰性群は42.9%、腫瘍被膜のないものは38.6%であった。これらの因子はいずれもF-VIII陰性群と正の相関を示した。またAHではF-VIII陰性群は75%、動脈造影像陰性群は85.7%、腫瘍被膜のないものは100%であった。(実験2)腫瘍平均径は3.8cmで全体の40.7%に類洞構造を認めた。他の因子と検討したところ、腫瘍被膜を有さないもの、動脈造影陰性群と相関の傾向を認め、腫瘍径とは統計学的に有意な相関関係を認めた。【考察】HCC血洞は必ずしも毛細血管構造ではなく、肝特有の類洞構造のものもあり、それらは高分化で小さいHCCに多くみられ、門脈血流の残存するものが多かった。以上のことより、血管新生による血管獲得の機序のみならず、類洞を利用し徐々に類洞を形態的に毛細血管に変化させていく、毛細血管化による獲得機序が示唆された。

【結果】小肝癌全体中、動脈造影陽性結節は46%、分化度は高分化型55%、中分化型23%、低分化型22%であった。被膜を有する結節は54%、類洞型ないしは置換型の浸潤形態を呈する結節は54%であった。F-VIII陽性血洞を有する肝癌は61%、VEGFの発現は43%であった。VEGFとF-VIII、他の臨床病理学的因子との相関を検討すると、動脈造影陽性像(p<0.05)、血洞内皮F-VIII発現(p<0.05)、膨張型浸潤形態(p<0.05)にVEGFと正の相関の統計学的有意差を認めた。また、分化度において高分化型にVEGFの発現が弱い傾向を認めた。【考察】上記結果を換言すれば、VEGFは富動脈血で血洞が毛細血管である小肝癌に発現が多く、これはVEGFの作用による血管新生により毛細血管-動脈血機構を獲得したことを推察させる。しかし、周辺組織への浸潤形態が置換型である肝癌や高分化型肝癌ではVEGFの発現は弱く、腫瘍自体の動脈血需要は低いために類洞-門脈血機構で生存していることが示唆される。
表皮角化細胞の分化・角化制御機構の解明:プラキン・ファミリーの機能解析

表皮角化細胞におけるプラキン・ファミリーの機能解析をおこなった。申請者らは表皮角化細胞の細胞分化・角化過程においてプラキン・ファミリーが関与している可能性をすでに見い出した。その関与をさらに検討する目的で以下の検討をおこなった。1.プラキン・ファミリーの発現誘導によって、培養細胞レベルでの表皮角化細胞の分化が起こるかどうか。その際のTGase活性の測定と各種角化・分化のマーカーの発現について、現在主にペリプラキン・エンボプラキンに関して検討を試みた。現在まだ解析中であるため、それらの詳細や結果を述べるには早すぎる段階ではあるが、いくつかの興味深い現象が観察された。すなわちエンボプラキンを単独で表皮角化細胞に強制発現させた場合、マウス表皮角化細胞において分化の誘導が認められた。ペリプラキンのみの強制発現では、分化の誘導は認められなかった。また、本来の研究テーマとは別に興味ある現象が見られた。すなわち、基底細胞に発現するプラキン・ファミリーのひとつである、類天疱瘡抗原(BP230;BPAG1)を各種細胞株に強制発現させた場合、今までの他施設からの報告とは異なる細胞内局在を示した。類天疱瘡抗原BPAG1の強制発現系における細胞内局在には類天疱瘡抗原BPAG1タンパク質のリン酸化・脱リン酸化が関与している可能性が示唆された。さらに、類天疱瘡抗原BPAG1とケラチン中間径線維との結合に関しても、類天疱瘡抗原BPAG1タンパク質のリン酸化・脱リン酸化が関与している可能性が示唆された。2.未分化上皮系細胞株にプラキン・ファミリーおよびTGaseを強制発現させることにより、分化が誘導されるかどうか。さらに、癌細胞株においてこれらのタンパク質を発現させることにより、癌細胞の強制分化が誘導されうるかどうか。これらの実験については一連の必要な角化細胞安定発現細胞株の樹立をおこなっている。その際のTGase活性の測定と各種角化・分化のマーカーの発現について、現在主にペリプラキン・エンボプラキンに関して解析中である。まだ解析中であるため、詳細を述べることには早すぎる段階ではあるが、エンボプラキンを単独で強制発現させた場合、マウス表皮角化細胞の分化の誘導が認められた。また、本研究のテーマとは離れた観点の話ではあるが、本来の研究テーマとは別に興味ある現象が見られた。また、その細胞内局在には、類天疱瘡抗原タンパク質のリン酸化・脱リン酸化が関与している可能性が示唆された。さらに、類天疱瘡抗原とケラチン中間径線維との結合に関しても、類天疱瘡抗原タンパク質のリン酸化・脱リン酸化が関与している可能性が示唆された。これらの実験についても現在進行中である。目下一連の実験に必要な細胞株の樹立や、必要な予備実験をおこなっている。1.プラキン・ファミリーの発現誘導によって、培養細胞レベルでの表皮角化細胞の分化に影響が起こるかどうかを検討した。