hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
言語間におけるライティング能力の双向性モデル:その応用と説明力

(2)研究者が文章を構築する時、最も強く意識するのは読み手であるが、この読み手は、専門分野、言語の違い、書く目的、トピックなど様々な要因と関連している。(3)特に、日本語と英語の読み手の違いは顕著に意識され、異なるテキストの特徴として表れている。日本語では緩和表現や質問スタイルが使用され、英語では主張を明確に、多様な語彙の使用が観察される。両言語の共通テキストの特徴としては、全体の構成やパラグラフの首尾一貫性等が見られる。過去の研究からL1とL2によるテキストの特徴がどのくらい重なるかは書き手によって異なることが分かっているが(2012)、本研究でも同じ傾向が見られる。結果は本研究者が提唱しているL1とL2テキスト構築モデルによって十分説明されることが確認された。think-aloud protocolsのデータ収集に多大な時間がかかるが、日本人多言語学習者2名から、フランス語、韓国語、英語のエッセイとライティングプロセスのデータを収集し、文字化した。(リサーチに適切な韓国人学習者が見つからなかったため韓国人からのデータ収集は次年度に持ち越すこととした)。さらに、データ分析を行うためにカテゴリーを確立し、詳細な分析を行った。テキスト分析については、日本人、カナダ人、中国人学生の3カ国語によるエッセイを分析し、その結果を二つの国際学会で発表した。さらにケーススタディとして2年間半観察してきた日本人多言語学習者についての論文をまとめ、学術誌に投稿している。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度の計画に沿って、研究者/英語教師を対象にインタビューデータを収集する予定である。過去のリサーチ参加者が中心になるが、新規に比較的研究期間が短い研究者も含めたいと考えている。一方、今年度は最後の研究年度になるので、前年度収集できなかった韓国人学習者からのテキストデータ収集やケーススタディ対象の日本人多言語学習者のフォローアップインタビューも行いたい。後者の場合、オーストラリアの大学院で経験を踏まえ、3カ国(英語、中国語、日本語)でのライティングの維持とアカデミックライティングにおける読み手の期待感についてインタビューし、上記の日本人研究者との比較も行いたいと考える。(この学生は現在オーストラアリアに滞在中であるため、学会での発表を兼ねてオーストラリアにてインタビューを行う計画である)。
サイクリン依存性キナーゼインヒビターp57^<KIP2>のWilms腫瘍への関与の検討

今までの研究により我々はサイクリンキナーゼインヒビターp57^<KIP2>遺伝子がBeckwith-Wiedemann症候群の原因であることを見いだした。今回さらにBeckwith-Wiedemann症候群患者の解析を国内でさらに15例行った。コーディング領域とイントロン-エクソン境界領域のシーケンスを行った。その結果、2名の患者に変異p57^<KIP2>が見い出された。今までの変異の結果をまとめると、患者ではC末付近に位置するグルタミン、スレオニンリッチなQTドメインが常に欠失しており、タンパクとしてこの領域が重要であることが示唆された。この事を細胞レベルで証明するために患者変異株を用いて機能解析を行なった。その結果、QTドメインの変異は細胞レベルでも核へ移行できないという形で正常に機能しないことが証明された。ついで、この中で変異を伴っていた4名のBeckwith-Wiedemann症候群患者について腫瘍の発生の有無を調べたところ、発生していないことがわかった。一方、ウィルムス腫瘍を発生したBeckwith-Wiedemann症侯群患者4名についてこの遺伝子に変異がないか調べたところ、変異は見いだされなかった。さらに、孤発例のウィルムス腫瘍においてもp57^<KIP2>遺伝子が関与しているか調べた。方法はサザーンによる方法と直接コーディング領域のシークエンスを行なって変異を探し、それがどういう種類のものか調べることである。ウィルムス腫瘍の30例についてサザーン解析を行った。用いた制限酵素はBamHI,TaqI,BglIIである。1例のみTaqIでバンドの欠失を認め、他のサンプルには欠失、再編等は見いだされなかった。しかし、この1例も確実な欠失であるか確定できなかった(埼玉がんセンター、金子安比古先生との共同)。さらに、ウィルムス腫瘍を初めとし、肝芽腫、横紋筋肉腫、副腎皮質腫瘍等を含む約50例についてコーディング領域の直接シーケンスを行った。その結果、意味のある変異を見いだすことはできなかった。ところが、mRNAの発現をRT-PCRで見たところ、少数例ではあるがほとんど発現していない例が半数以上を占めていることがわかった。
R.ヴァーグナーの「ロマン的オペラ」研究そのドラマトゥルギーと時間構造

19世紀オペラにおける時間構造は、大きく5種類に分類できる。基本的には、「レチタティーヴォ」(語りに近い歌:時間と筋が一定に進行)と「アリア」(楽曲としての歌:筋は中断、時間は不規則;物理的な時間は静止)が交互に用いられてドラマが構成される。本研究で注目したのは、こうしたオペラの基本的な時間構造とは別に存在する2種類の重唱(合唱が加わる場合もあり)のうち、19世紀オペラ特有の現象、すなわち時間の流れも筋の展開も静止する「タブロー化」の場面である。ヴァーグナーの「ロマン的オペラ」における「タブロー化」の意味のほか、「ロマン的オペラ」以後の「タブロー化」を否定した作品との関係、および「ライトモティーフ」技法との関係について研究・考察した。ヴァーグナーの3つの「ロマン的オペラ」--《さまよえるオランダ人》、《タンホイザー》、《ローエングリン》--は、作品を追うごとに様式的に楽劇に近づく。そのため3作品の内部でドラマが「タブロー化」する場面は少なくなるはずなのだが、結果は逆だった。つまり作品を追うごとに「タブロー化」の場面は増えていく。とりわけ3作目の《ローエングリン》は、フランス・グランド・オペラの特徴である「歴史」を題材にする一方で、ドイツ・オペラの特徴である「メルヘン」を題材にしている。前者の特徴である合唱の存在が、後者のメルヘン(白鳥に乗った騎士の伝説)に注釈をする。まさに古代ギリシャ悲劇における「コロス(合唱隊)」の機能だが、それが《ローエングリン》以後の楽劇の手法である「ライトモティーフ」技法と結びつくと考えられる。そして《ニーベルングの指環》では「ライトモティーフ」技法が、ドラマの「タブロー化」の現象を引き継いでいくとみなせるのである。それに関わって、「アリア」と「レチタティーヴォ」による対比的な時間構造が崩壊していくことが重要である。本年度の研究においては、R.ヴァーグナーおよび、彼と同年に生まれたイタリアの作曲家ヴェルディとの具体的な接点・比較から考察したほか、ヴァーグナーの楽劇に大きな影響を受けた後期ロマン派の作曲家フーゴ・ヴォルフと、逆にヴァーグナーの楽劇に距離を置きながらも、その「ライトモティーフ」技法と微妙な類似性をもつオペラを残した近代の作曲家レオシュ・ヤナーチェクに焦点を絞った考察を行った。また博士論文としてヴァーグナーの四部作《指環》の「ライトモティーフ」技法の徹底的分析による研究を行った。ヴァーグナーの「ロマン的オペラ」とそれ以後の楽劇、とりわけ《トリスタン》と《マイスタージンガー》との関連で重要なのは、19世紀のオペラ特有の時間構造であるドラマの「タブロー化」にある。しかしこの問題は、当時のイタリア・オペラやグランド・オペラの様式との結びつきが無視できない。ヴァーグナーとヴェルディはこれまで度々比較されてきたものの、両者の間に直接的な影響関係はほとんどなく、重要なのは両者の間を結ぶグランド・オペラの様式なのである。一方ヴォルフは歌曲において、ヴァーグナーの理論的著作『オペラとドラマ』の理念に則した創作を行った。ドイツ語の抑揚を重視し、かつ「ライトモティーフ」に似た音型をピアノに取り入れた。またヤナーチェクは、ヴァーグナー的な「ライトモティーフ」による音楽展開と「移行の技法」を、ヴァーグナーと無関係に実現したと考えられる。ヴァーグナーの《指環》における「ライトモティーフ」技法には、「旋律的因子」、「予感動機」、「回想動機」、「絶対メロディー」それぞれの機能が認められる。それらの観点から《指環》四部作の「ライトモティーフ」技法を分析した結果、《指環》にはさまざまな技法が多層的に重なり合いながら、漸次的な様式変遷が見られることが明らかになった。ヴァーグナーの全オペラ作品において「ロマン的オペラ」は、彼のオペラが「ロマン主義」から「リアリズム」に様式的変化を起こす臨界点を形成している。そこには、フランス・グランド・オペラからの影響、オペラ台本における題材と劇的構造の問題、題材と同時代文学との関係、劇的手法としての「ライトモティーフ」技法の導入とその様式的変化が絡んでいる。とりわけ注目すべきものとしては、フランスの作家オノレ・ド・バルザック(17991850)がみせる様式変化との照応関係がある。すなわち、バルザックの小説において「物語の語り手」の視点が「一人称視点」や「制限付全知視点」から完全な「全知視点」になること、題材が「歴史」上から「現代」に移ること、「人物再登場法」が徹底されることといった手法は、バルザックがロマン主義からリアリズムへと作風を変化させていく過程で取り入れていった手法だった。バルザックの小説からの影響をはじめ、ヴァーグナーのオペラは、19世紀の芸術的文化的潮流のなかで「小説」化していくのである。その「小説」化されたオペラこそが楽劇である。ヴァーグナーは楽劇のなかに「全知の語り手」を設定し、「ライトモティーフ」によって人物の内面を語る。そのとき「ライトモティーフ」では、予感動機、回想動機、旋律的因子、基本動機、オーケストラによる絶対メロディーといった諸機能を使い分ける。ただしヴァーグナーは、人間の根源的な姿を描く必要から、時代や国を超越した「神話」に題材を求めるのだった。以上の問題とフランス・グランド・オペラとの影響関係は一層複雑かつ大きな問題となる。オペラと文学の関係は、ヴァーグナー以後に影響を及ぼしていく。アルバン・ベルク(18851935)の2つのオペラはその最たる例である。

19世紀オペラにおける時間構造は、大きく5種類に分類できる。基本的には、「レチタティーヴォ」(語りに近い歌:時間と筋が一定に進行)と「アリア」(楽曲としての歌:筋は中断、時間は不規則;物理的な時間は静止)が交互に用いられてドラマが構成される。本研究で注目したのは、こうしたオペラの基本的な時間構造とは別に存在する2種類の重唱(合唱が加わる場合もあり)のうち、19世紀オペラ特有の現象、すなわち時間の流れも筋の展開も静止する「タブロー化」の場面である。ヴァーグナーの「ロマン的オペラ」における「タブロー化」の意味のほか、「ロマン的オペラ」以後の「タブロー化」を否定した作品との関係、および「ライトモティーフ」技法との関係について研究・考察した。ヴァーグナーの3つの「ロマン的オペラ」--《さまよえるオランダ人》、《タンホイザー》、《ローエングリン》--は、作品を追うごとに様式的に楽劇に近づく。そのため3作品の内部でドラマが「タブロー化」する場面は少なくなるはずなのだが、結果は逆だった。つまり作品を追うごとに「タブロー化」の場面は増えていく。とりわけ3作目の《ローエングリン》は、フランス・グランド・オペラの特徴である「歴史」を題材にする一方で、ドイツ・オペラの特徴である「メルヘン」を題材にしている。前者の特徴である合唱の存在が、後者のメルヘン(白鳥に乗った騎士の伝説)に注釈をする。まさに古代ギリシャ悲劇における「コロス(合唱隊)」の機能だが、それが《ローエングリン》以後の楽劇の手法である「ライトモティーフ」技法と結びつくと考えられる。そして《ニーベルングの指環》では「ライトモティーフ」技法が、ドラマの「タブロー化」の現象を引き継いでいくとみなせるのである。それに関わって、「アリア」と「レチタティーヴォ」による対比的な時間構造が崩壊していくことが重要である。
肥沃な三日月地帯とその周辺における新石器時代の人類行動を探る

本研究は、「肥沃な三日月地帯」の東半や周辺部における、獲得経済(狩猟採集)から生産経済(農耕牧畜)への移行プロセス(新石器化)の地域差の解明を目的とする。これまでの新石器化研究では良く分かっていなかった、東半のイラク・クルディスタン、南コーカサス、中央アジアなどの新石器遺跡の調査研究をすすめる。調査史の厚いシリア等の先行研究と比較しながら、農耕の伝播だけでなく、居住パターンや地域間の交易、情報伝達なども含めた人類行動とその地域差を明らかにし、「肥沃な三日月」西半に偏らない、新石器化の全体像を明らかにしたい。
T細胞の蛍光観察パラメータの最適スケジューリング

本研究ではH21年度に,細胞移動と蛍光観察のモデル定式化とパラメータ推定,評価関数の作成,及び最適スケジューリング手法の導出を行った.また,より良いパラメータ推定のために,顕微鏡画像のボケ除去技術を開発した.理論,シミュレーションは代表者の現所属である奈良先端科学技術大学院大学で行った.実験は,代表者の前所属であり実験機材がある東北大学で行った.<1>モデル作成と最滴スケジューリング手法導出の理論研究H21年度の前半では,細胞運動と蛍光観察のモデルを定式化した.次に,蛍光観察効率を,観察領域と観察細胞数を引数とする2次形式評価関数で定義した.そして,スケジューリング問題を,評価関数を最小化するモデル予測制御問題として定式化した.最後に,観測モデルの線形近似を利用することで,最適スケジューリング手法を解析的に導出した.制御対象は,蛍光観察領域の幅と中心位置,より具体的には細胞が載っているステージ位置の時間変化として与えた.<2>パラメータ推定の実験研究H21年度の後半では,<1>で作ったT細胞運動モデルのパラメータを顕微鏡実験で推定した.T細胞の直径は10μmの球と仮定した.最も重要な情報は,顕微鏡光軸上の細胞数分布パラメータの時間変化であった.分布は正規分布と仮定した.分布パラメータを求めるために,細胞の位置を認識する画像処理技術を開発した.顕微鏡画像では.実際には細胞が存在しない位置にも,その他の場所にある細胞のボケが入り込む.このボケは,予め測定していたボケ特性関数を用いて除去した.対物レンズは40倍,顕微鏡は倒立顕微鏡Ix71(オリンパス)を用いた.本研究ではH21年度に,細胞移動と蛍光観察のモデル定式化とパラメータ推定,評価関数の作成,及び最適スケジューリング手法の導出を行った.また,より良いパラメータ推定のために,顕微鏡画像のボケ除去技術を開発した.理論,シミュレーションは代表者の現所属である奈良先端科学技術大学院大学で行った.実験は,代表者の前所属であり実験機材がある東北大学で行った.<1>モデル作成と最滴スケジューリング手法導出の理論研究H21年度の前半では,細胞運動と蛍光観察のモデルを定式化した.次に,蛍光観察効率を,観察領域と観察細胞数を引数とする2次形式評価関数で定義した.そして,スケジューリング問題を,評価関数を最小化するモデル予測制御問題として定式化した.最後に,観測モデルの線形近似を利用することで,最適スケジューリング手法を解析的に導出した.制御対象は,蛍光観察領域の幅と中心位置,より具体的には細胞が載っているステージ位置の時間変化として与えた.<2>パラメータ推定の実験研究H21年度の後半では,<1>で作ったT細胞運動モデルのパラメータを顕微鏡実験で推定した.T細胞の直径は10μmの球と仮定した.最も重要な情報は,顕微鏡光軸上の細胞数分布パラメータの時間変化であった.分布は正規分布と仮定した.分布パラメータを求めるために,細胞の位置を認識する画像処理技術を開発した.顕微鏡画像では.実際には細胞が存在しない位置にも,その他の場所にある細胞のボケが入り込む.このボケは,予め測定していたボケ特性関数を用いて除去した.対物レンズは40倍,顕微鏡は倒立顕微鏡Ix71(オリンパス)を用いた.
手部の感覚情報を利用したバランス能力向上に繋がる方策の検討

姿勢を保持する際に,床面に固定された物へ身体を支えられない程度の力で軽く触れることにより姿勢動揺が低下する.本研究は,日常生活でも応用可能な触覚情報入力を利用した姿勢調節向上の新たな方策について検討を加えた.その結果,杖や自らの大腿部に接触することでも姿勢調節が向上し,動的な姿勢制御時においても認められることを明らかにした.また,触覚情報による姿勢調節への効果には一過的な学習効果があることや,受動的な接触によっても姿勢調節は向上することも明らかにした.これらの結果は,身の回りの物に軽く接触する,もしくは形状によっては衣服などの接触により,姿勢調節および動作が円滑になる可能性を示している.姿勢を保持する際に,床面に固定された物へ身体を支えられない程度の力で軽く触れることにより姿勢動揺が低下する.本研究は,日常生活でも応用可能な触覚情報入力を利用した姿勢調節向上の新たな方策について検討を加えた.その結果,杖や自らの大腿部に接触することでも姿勢調節が向上し,動的な姿勢制御時においても認められることを明らかにした.また,触覚情報による姿勢調節への効果には一過的な学習効果があることや,受動的な接触によっても姿勢調節は向上することも明らかにした.これらの結果は,身の回りの物に軽く接触する,もしくは形状によっては衣服などの接触により,姿勢調節および動作が円滑になる可能性を示している.本研究の目的は,杖など身体を支えるための道具を利用したバランス能力向上に繋がる新たな方策について検討することである.平成25年度は,杖などの道具を身体を支えない程度の力で触れることで得られる軽い触覚情報とバランス能力との関係について基本的な現象を確認し,そのメカニズムについて調べることを目的とした.まず,手部への触覚情報の入力が,様々な立位時において姿勢制御にどのような及ぼすかについて調べた.そして,それらの基本的なメカニズムについても検討を加えた.その結果,以下の4点を明らかにした.1.片脚立ち時において,実際の杖に身体を支えない程度の力で軽く触れるだけでも,身体動揺(足圧中心点平均移動速度,前後および左右方向の動揺最大レンジ)は小さくなる.2.さらに,この作用は,不安定面上での立位時でも認められた.そのため,ある程度,姿勢動揺が大きい場合でも,手部からの触覚情報はバランス能力向上に貢献する可能性を示している.3.これらのメカニズムについて,重心位置動揺(第三腰椎部の加速度により測定)の周波数解析を行った結果,閉眼立位時に手部から触覚情報を付加するより,主に1 Hzまたは8 Hz帯域の成分が大きく変化した.そのため,前庭系(1 Hz以下成分)や生理的振戦(8 Hz前後)の影響に起因している可能性を示した.4.さらに,両足立位時に手部からの触覚情報を付加したところ,主動筋であるヒラメ筋の筋活動に変化は認められなかったが,拮抗筋である前脛骨筋の筋活動が有意に低下した.この結果は,手部からの触覚情報により身体各部位の相対的な位置関係の変化が知覚できるため,共縮による足関節周りのstiffnessを高めずとも,姿勢を保持できている可能性を示している.本研究の目的は,杖など身体を支えるための道具を利用したバランス能力向上につながる新たな方策について検討することである.本年度は,平成25年度に行った基礎的な研究の日常生活における応用策について検討を加えた.その結果,以下の3点を明らかにした.1.立位時において,杖に身体を支えない程度の力で軽く握るだけでも,身体の動揺(足圧中心点の平均移動速度,前後および左右方向の最大レンジ)が小さくなることを認めた.2.この作用は杖に触れている時だけでなく,その後,杖に触れなくなった場合でも残存する(身体動揺は杖に触れる前よりも触れた直後で減少する)ことも明らかにした.しかし,杖で身体を支えるように使用した場合,これらの作用は認められなかった.3.また,静的な姿勢保持時のみでなく,動的な姿勢保持時においても認められ,姿勢保持のみでなく,動作へも応用できる可能性を示した.4.身体を支えるための道具だけでなく,普段身に纏っている衣服への応用を試みるため,姿勢保持に及ぼす布の接触への影響を調べた.その結果,上肢姿勢保持における生理的振戦は,前腕部への布の接触があることで減少することを明らかにした.健康・スポーツ科学平成25年度の目的であった手部からの軽い触覚情報がバランス能力に与える影響について,様々な立位時での変化を確認し,そのメカニズムについても一定の示唆が得られている.これらの結果については,現在,論文として投稿中であり,概ね順調に進展していると言える.平成25年度に得られた基礎的なデータを応用し,手部からの軽い触覚情報入力とバランス能力の変化について,縦断的な検討を加える.現在,手部からの触覚情報入力時にバランス能力が向上することを確認しており,今後は,その後の触覚情報がなくなった場合のバランス能力について検討する.また,平成25年度に不安定面上での立位時においても,手部からの触覚情報がバランス能力を向上させることが認められたため,この作用を動的な姿勢保持時においても応用する.
物体認知における特徴情報の統合過程の研究

視覚系の物体認識に伴う特徴格報の統合・結合過程を脳イメージング法(MEG,fMRI )と心理物理学的測定法により解析した。1境界線知覚過程の解析(MEG測定と知覚反応測定による)境界線知覚過程の神経機構を種々の図形に対する脳磁反応を測定することにより解析し、「輪郭線の知覚形成は線刺激によって活性化される神経機構より高次の神経機構によって媒介されるか、高次神経機構からのフィードバックよって形成される」ことを明らかにした。。2コントラスト対比過程の解析(MEG測定と知覚反応測定による)コントラスト対比現象に寄与する脳内過程を分析するため、刺激に対する応答を脳磁図計と心理物理学的方法により測定し、脳磁反応と知覚的コントラストの関係を解析した。3空間周波数チャンネルの相互作用の解析(MEG測定と知覚反応測定による)視覚第1野に存在する空間周波数と方位に選択的な神経細胞の活動は、どのようにして空間的に統合されるのか?ここでは、この問題を脳磁反応を測定することによって検討し、「空間周波数チャンネルの相互作用明暗が急激に変化する条件でおこり、活動部位は視覚第1野である」ことを明らかにした。4色知覚過程の解析(fMRI測定と知覚反応測定による)色知覚に関与する複数の領野での情報処理の違いをfMRIで空間的側面から検討し、「色知覚に関与する領野は、Vl,V2,VP,V4v,V8である」、「脳活動と色知覚との関連度の脳部位依存性には個人差がある。しかし平均すると脳活動と色知覚との関連度は高次視覚野になるほど大きくなる」ことを示した。。
中世室生寺の復興

室生寺灌頂堂の建築史的評価昨年の検討から、室生寺灌頂堂(現本堂)は、後宇多法皇の帰依により、北京律僧である空智房忍空の建立となることが判明した。これにより、灌頂堂は鎌倉後期における天皇家の第1級の建築に近い形態とみられ、遺構が残らない当時の天皇家・公家の建築を具体的に知ることのできる資料になると考えられる。一方で造営主体が北京律僧であることは、これも具体的な建築遺構が明確でない北京律僧による建築を知る好資料となるであろう、灌頂堂の建築意匠・技術は、このような背景を反映したとみれば理解しやすい。灌頂堂には、奈良地方に希薄な禅宗様建築の細部様式が認められ、泉涌寺に禅宗様が採用されていた可能性が大きいことを勘案すれば、北京律僧が禅宗様を導入したと考えられる。また、内部の住宅的要素については、京都風の意匠というより、むしろ天皇家・公家の影響と理解できるだろう。派生する問題室生寺御影堂に用いられた木製礎盤は禅宗様の影響が及んだものであり、これも北京律僧が関与したためと推定される。このように、少なくとも南都における禅宗様系の細部形式の伝播には、北京律僧の影響を考慮しなければならなくなった。当時、北京律僧は東寺・東大寺の大勧進をつとめたほか、高野山・四天王寺・鎌倉などでも活躍しており、これらの寺院や地域における建築の様相を、禅宗様の伝播という観点も含めて、北京律僧の活動からとらえ直してみる必要がある。また、本例は遺構として残る建築の帰依者を特定できる好例であり、建築意匠・空間を考えるうえで、工匠や本寺-末寺の関係のほかに、帰依者について再考する必要性を再認識させた。北京律僧の特質をとらえるには、西大寺系律宗には明確でない、有力帰依者との関係をとらえることが重要である。空智房忍空の事績空智房忍空(12321318)は、北京律の中心寺院である泉涌寺に学び、また「泉涌戒光教律之窟」とよばれた戒光寺の長老になっていることから、北京律僧と考えてよい。忍空は律のほか真言密教に秀で、伝法灌頂の授受や聖教書写の事績が散見するものの、室生寺における事績はそれほど明確ではない。忍空が長老として活動していた延慶元年(1308)には、灌頂堂(現本堂)が建立されている。灌頂堂の建立年代は、『建内記』に載せる「後伏見天皇諷誦文」によってあきらかだが、「後宇多法皇御遺告」には、後宇多法皇が一律僧に帰依して室生寺灌頂堂を建立した記事がみえる。したがって、『建内記』の諷誦文は、後伏見天皇によるものでなく後宇多法皇の可能性が大きい。後宇多法皇が帰依した律僧とは、忍空とみて間違いないから、室生寺灌頂堂は忍空が天皇家の帰依を受けて建立したものといえる。これらによって、忍空の事績に新たな事実を加えることができたとともに、灌頂堂の造形を理解するうえで重要な視点が生まれた。鎌倉時代後期の室生寺舎利信仰が高揚するさなか、忍空らによる舎利発掘(文永9年=1272)以後に再興された室生寺は、正安元年(1299)に関東祈祷寺に任じられた。これは鎌倉における北京律の中心寺院である覚園寺の開山・智海心慧による推挙であり、ここで推挙された13ヵ寺は北京律に近い立場の寺院とみられる。先述したように忍空も北京律僧であり、関東を含めた北京律僧のネットワークのなかに、室生寺も含まれていたと考えられる。このころ室生寺に建てられた堂塔には、現存する灌頂堂(現本堂)や弥勒堂、御影堂のほか、寂静庵、東庵が文献から確認でき、長禄3年(1459)に焼失した、僧堂、庫裡、愛染堂、不動堂、護摩堂などのうち、いくつかも忍空長老時代に建てられていた可能性がある。

当時、北京律僧は東寺・東大寺の大勧進をつとめたほか、高野山・四天王寺・鎌倉などでも活躍しており、これらの寺院や地域における建築の様相を、禅宗様の伝播という観点も含めて、北京律僧の活動からとらえ直してみる必要がある。また、本例は遺構として残る建築の帰依者を特定できる好例であり、建築意匠・空間を考えるうえで、工匠や本寺-末寺の関係のほかに、帰依者について再考する必要性を再認識させた。北京律僧の特質をとらえるには、西大寺系律宗には明確でない、有力帰依者との関係をとらえることが重要である。
緑膿菌脱窒関連遺伝子群の構造と発現調節

微生物による脱窒は、可溶性の硝酸イオンを最終的に窒素ガスに還元して大気中に放出する一連の反応で、地球上の窒素循環の重要なルートのひとつとなっている。Pseudomonas属細菌においては、脱窒に関連した遺伝子は染色体上の特定部分にクラスターを形成して存在し、酸素が無く硝酸、亜硝酸が存在するという条件でのみその遺伝子群の発現が見られると考えられている。本研究では、緑膿菌脱窒遺伝子群について、その遺伝子構造の全容を明らかにすること、およびその発現調節機構を解明することを目的として、以下の研究を行った。1.脱窒関連遺伝子群の構造の解明緑膿菌の亜硝酸還元酵素系遺伝子(nirSMC)の上流逆向きに、あらたに3つのORFからなるオペロン(nirQ operon)の存在を発見した。そのうち、最上流のnirQはPseudomonas hydrogenothermophila由来のRubisCO遺伝子cbbLSの下流に存在する機能未知の遺伝子cbbXと相同性が高かった。さらに下流の遺伝子と相同性の高い遺伝子の役割等から類推して、nirQオペロンは亜硝酸還元系酵素群のアセンブリまたは安定化に関与した蛋白をコードしていると考えられた。2.脱窒関連遺伝子群の発現制御ANRは、Pseudomonas属細菌において、嫌気状態における遺伝子の発現を正に制御している因子である。緑膿菌においても、nirSMCとnirQの間に、ANR認識部位と考えられるシーケンスが存在した。また、ANR欠損株およびクローン化されたanr遺伝子を用いた実験で、nirSMCおよびnirQが共にANRによって正の制御を受けていることを確認した。
有機ELデバイスの過渡発光過程の観測

有機ELデバイスの動作メカニズムの解明を目的とし、有機ELデバイスへの光キャリヤ発生層を導入し、色素レーザ照射によるキャリヤ生成に基づく直流特性および過渡応答特性の評価を行った。キャリヤ発生層およびデバイス構造の検討によって、直流特性において、レーザ光照射により明確な電流増加が観測された。また、発光過渡応答を得るには至らなかったが、界面のキャリヤ注入を示唆する電流過渡応答を得た。有機ELデバイスの動作メカニズムを解明することを目的とし、過渡光電流波形とともに、発光の過渡現象を捉えることによって、電流挙動と同時に発光挙動を観察し、キャリヤ注入障壁となる界面でのキャリヤ注入過程と発光過程を同時に評価する方法について検討を行っている。本年度は、キャリヤ発生材料の探索を中心にデバイス試作を行った。キャリヤ発生層(CGL)は本提案において、光励起によるキャリヤ発生と続く有機ELデバイス構成材料へのキャリヤ注入を行う必要があり、最も重要な層である。そこで、有機半導体分野で用いられるフタロシアニン系材料に注目し、銅フタロシアニン(CuPc)およびチタニルフタロシアニン(TiOPc)をキャリヤ発生層として用い、有機ELデバイス構成材料として広く用いられる取りナフチルアミン誘導体(α-NPD)およびアルミキノリノール錯体(Alq_3)とを組み合わせたGlass/ITO/α-NPD/Alq_3/CGL/Alデバイスの試作を行った。励起光源としては窒素レーザにより励起した色素レーザを用いた。α-NPDおよびAlq_3に吸収がなく、CuPcまたはTiOPcにのみ吸収する波長でのレーザ発振が可能なレーザ色素としてDCMを選択した。DCMの発振波長720nmにおける吸収係数から、CGLとしてTiOPcが有効であることがわかった。しかし、作製したデバイスにおいて、Alからの電子注入が大きく、レーザ光照射による電流増加分が明確に見られなかった。そこで、Alからの電子注入制御を目的として、CGL/Al界面にα-NPDの挿入を試みたところ、Alからの電子注入が減少し、レーザ光照射による光電流分の電流増加が見られ、CGLの膜厚最適化により過渡現象の観察が可能であると考えられる。これまで、キャリヤ発生材料の探索を中心にデバイス試作を行った。これまでフタロシアニン系の単一材料をCGL層として使用してきたが、安定した特性は得られていなかった。そこで、有機半導体分野で用いられるフタロシアニン系材料と有機太陽電池材料として用いられるフラーレン(C60)に注目し、チタニルフタロシアニン(TiOPc)とC60の混合層をキャリヤ発生層として用い、有機ELデバイス構成材料として広く用いられる取りナフチルアミン誘導体(α-NPD)およびアルミキノリノール錯体(Alq3)とを組み合わせたGlass/ITO/α-NPD/Alq3/CGL/α-NPD/Alデバイスの試作を行った。CGLとしてTiOPcとC60の1:1混合層を用いることで特性が安定し、レーザ光照射により明確な電流増加が見られた。次に、色素レーザのパルス光照射による過渡現象の観察し、過渡光電流が得られた。さらなるCGL層の最適化によりが過渡現象の観察が可能であると考えられる。有機ELデバイスの動作メカニズムを解明することを目的とし、過渡光電流波形とともに、発光の過渡現象を捉えることによって、電流挙動と同時に発光挙動を観察し、キャリヤ注入障壁となる界面でのキャリヤ注入過程と発光過程を同時に評価する方法についての検討を行った。本検討において、キャリヤ発生層(CGL)は光励起によるキャリヤ発生と、続く有機ELデバイス構成材料へのキャリヤ注入を行う必要があり、最も重要な層である。これまで光導電有機材料であるチタニルフタロシアニン(TiOPc)とフラーレン(C60)の混合層をキャリヤ発生層として用い、有機ELデバイス部として、ホール輸送材料であるナフチルアミン誘導体(α-NPD)および電子輸送性発光材料であるアルミキノリノール錯体(Alq3)とを組み合わせたGlass/ITO/α-NPD/Alq3/CGL/α-NPD/Alデバイスの試作を行い、安定な直流特性を得ることに成功し、レーザ光照射による明確な電流と発光強度の増加を得たが、発光強度が弱く、発光の過渡現象を捉えるまでに至らなかった。そこで電圧印加時での光照射の有無による発光強度の増加率向上を狙い、発光層へのりん光材料を導入と発光層/CGL界面へのキャリヤ注入層の導入など、種々のデバイス構造を検討し、発光強度の向上と発光強度の増加率向上を得た。さらなるデバイス構造の最適化によりが過渡現象の観察が可能であると考えられる。
筋小胞体カルシウムポンプ制御因子の作用機構の解析

心筋の機能に重要な働きをしている筋小胞体カルシウムポンプ(SERCA)の制御因子を通して心不全の病態、さらに治療に結びつく研究を、ラットアダルト心筋細胞を単離してその機能変化を観察することにより検討した。その中で、喫煙や糖尿病で血中に増加するといわれるアルデヒドであるアクロレインが、心筋細胞機能を低下させ、細胞死を起こすことを見出した。このアクロレインは、タンパク質のシステイン、リジン、ヒスチジン残基と結合しそのタンパク質の機能を変化させ、細胞機能に影響すると考えられている。また、血管内皮細胞を用いた実験でも、アクロレインは、細胞死(アポトーシス)を起こし、動脈硬化との関連もあることが判明した。我々はまた、SERCAと同様に、カルシウムシグナルタンパク質であるリアノジンレセプターの制御因子として、プレセナリン2を見出し、カルシウム依存性にリアノジンレセプターと結合し、その機能をコントロールすることにより心機能に関与していることを証明した。さらに、重要なSERCAの制御因子であるサルコリピンに関しては、現在トロント大学との共同研究で、解析中であるが、心筋型カルシウムポンプ(SERCA2a)の内因性制御因子であるホスホランバンが、O型糖鎖の一つであるO-GlcNAcによって修飾され、SERCAの阻害活性を変化させることを見出し、糖尿病性心筋症の病態と関わりがあることが示唆された。以上が成果であるが、今後もこのO型糖鎖による制御機構を中心に心機能の制御、心不全の病態解明に向けた研究を遂行する予定である。心筋の機能に重要な働きをしている筋小胞体カルシウムポンプ(SERCA)の制御因子を通して心不全の病態、さらに治療に結びつく研究を、ラットアダルト心筋細胞を単離してその機能変化を観察することにより行っている。その中で、喫煙や糖尿病で血中に増加するといわれるアルデヒドであるアクロレインが、心筋細胞機能を低下させ、細胞死を起こすことを見出した(未発表)。また、血管内皮細胞を用いた実験で、その細胞死(アポトーシス)を起こし、動脈硬化との関連もあることが判明した。重要なSERCAの制御因子であるサルコリピンに関しては、現在トロント大学との共同研究で、解析中である。FRET(蛍光エネルギー移動)によるSERCA/PLN, SERCA/SLNのダイナミクスの研究は、ラットアダルト心筋を用いるため、レンチウィルス発現系を用いる予定で、現在それに必要なコンストラクトを作成中である。現在、SERCAのその他の制御因子として、熱ショックタンパク質であるHSP70などの制御機能を解析している一方、酸素ラジカルや窒素ラジカルのよるSERCA機能の低下およびそれらラジカルの消去系、特に抗酸化酵素による活性の保持のメカニズムを明らかにし、心不全の治療を、さまざまな分子から模索していく予定である。心筋の機能に重要な働きをしている筋小胞体カルシウムポンプ(SERCA)の制御因子を通して心不全の病態、さらに治療に結びつく研究を、ラットアダルト心筋細胞を単離してその機能変化を観察することにより行った。

またトロント大学との共同研究で、重要なSERCAの制御因子であるサルコリピンの解析を行い、FRET(蛍光エネルギー移動)によるSERCA/PLN, SERCA/SLNのダイナミクスの研究でラットアダルト心筋を用いるため、レンチウィルス発現系に必要なコンストラクトを作成し、その解析を行った。さらに、SERCAのその他の制御因子として、酸素ラジカルや窒素ラジカルのよるSERCA機能の低下およびそれらラジカルの消去系、特に抗酸化酵素による活性の保持のメカニズムを明らかにするともに、最近注目されている細胞内に存在する糖鎖であるO-GlcNAcによるSERCAの制御機構についても解析したが、これらの研究が心不全の治療の開発につながると考えている。
味受容機構を利用したバイオセンサの開発と製剤設計への応用

平成28年度においてヒト苦味受容体cDNAをHEK293細胞に導入し、平成29年度においてはhTAS2RおよびVSOP1をそれぞれ強制発現した細胞系を作製した。更に細胞培養用シャーレにDioctylphenyl phosphateを可塑剤として加えたPhosphoric acid didodecyl esterをコーティングした上にコラーゲンを重層し、乾燥させた。このシャーレにヒト苦味受容体hTAS2Rと膜電位依存性プロトンチャネルVSOP1を共発現した細胞を播種、培養しセンチップに固定した。苦味を呈する医薬品との定量的な結合を、苦味を呈する医薬品溶液と接触する前と接触後の膜電位の変化で評価する。これは、苦味を呈する医薬品を口に含んだ時に感じる苦味(先味)として評価する。苦味を呈する医薬品溶液を洗浄した後もさらに膜電位変化を評価した。苦味受容体および電位依存性プロトンチャネルを共発現させた細胞を用いたバイオセンサによる医薬品の苦味評価方法の確立を目的として、既知の苦味を呈する医薬品について、バイオセンサの出力値より、先味と洗浄後10、20、30、60、120、180、240、300秒後の後味を評価し、先味と各時間における後味の比から吸着性の時間依存的変化を検討した。平成30年度は、バイオセンサとしての測定方法の確立のための第一段階として、基準物質としては、キニーネ塩酸塩を用いて時間依存的苦味受容反応の評価を行った。平成30年は、バイオセンサとしての測定方法の確立のための第一段階として、基準物質としては、キニーネ塩酸塩を用いて時間依存的苦味受容反応の評価を行ったが、値のバラつきが大きく、バイオセンサの測定方法の確立までには至らなかった。バイオセンサの出力は確認できているが、バラつきが大きいため、安定した出力が得られる細胞を厳選する。苦味受容体hTAS2Rと苦味を呈する医薬品との結合によるものであることを明らかにする必要があるため、SPRを用いてHEK293細胞上に発現した苦味受容体hTAS2Rと苦味を呈する医薬品の結合性を評価する。医薬品の苦味は患者にとって苦痛であり、コンプライアンス、QOLの低下につながる。多くの製剤で医薬品の苦味を抑制する技術(苦味マスキング)が施されているが、苦味を抑制できていない製剤や、処方の都合上、粉砕した医薬品を服用する場合などには強い苦味を伴うことになる。また、低含量製剤の液剤化や小児用製剤、口腔内崩壊錠において、医薬品の苦味が問題になることがある。苦味物質によっては、味覚センサに反応しにくい物質もあり、測定結果に関しては、ヒト官能試験との相関性を考慮することが必要となってくる。従って、麻薬性鎮痛薬や向精神薬などヒト官能試験を行い難い医薬品に関しては、苦味の評価が困難であるという問題がある。また、現在多くの施設に導入されている味覚センサは、味蕾細胞に見立てた細胞膜成分と苦味物質との結合をin vitroで評価した系である。味蕾細胞中の味受容体と呈味物質と結合によって味受容が行われているため、全ての味受容反応を厳密に評価しているとは言い難いのが現状である。研究代表者は、これまでに苦味受容体と苦味物質との結合性を利用した苦味評価方法を確立した。この方法を用いると、従来の細胞膜成分と苦味物質との結合をin vitroで評価した味覚センサと比べると感度が上がり、従来の味覚センサでは測定できなかった医薬品の苦味も測定可能となった。しかしながら、味覚味蕾細胞を用いる場合、動物から味蕾細胞を摘出し、培養し、苦味測定可能な状態とするまでに時間およびコストがかかり、汎用性が低いことが難点として挙げられる。また、そこで本研究では、より簡便な味覚評価系の確立を目的として、苦味受容体および電位依存性プロトンチャネルを共発現させた細胞を用いたバイオセンサによる医薬品の定量的苦味受容反応および時間依存的苦味受容反応の評価方法の確立を行っている。研究期間(平成28年度30年度の3年間)のうち、前半の2年間において、苦味受容体および電位依存性プロトンチャネルを共発現させた細胞を用いたバイオセンサによる医薬品の定量的苦味受容反応および時間依存的苦味受容反応の評価方法の確立を行う。cDNAの作製苦味受容体hTAS2Rおよび膜電位依存性プロトンチャネルVSOP1(Voltage-sensordomain only protein1)の遺伝子に関してヒト腎臓cDNA(クロンテック社)を鋳型にPCRにて全長鎖cDNAを得た。さらにcDNAをHEK293細胞に導入し、hTAS2RおよびVSOP1をそれぞれ強制発現した細胞系を作製している。平成28年度において苦味受容体cDNAをHEK293細胞に導入し、平成29年度においては、hTAS2RおよびVSOP1をそれぞれ強制発現した細胞系を作製した。このシャーレに苦味受容体hTAS2Rと膜電位依存性プロトンチャネルVSOP1を共発現した細胞を播種、培養しセンサチップに固定した。

苦味受容体および電位依存性プロトンチャネルを共発現させた細胞を用いたバイオセンサによる医薬品の苦味評価方法の確立を目的として、既知の苦味を呈する医薬品について、バイオセンサの出力値より、先味と洗浄後10、20、30、60、120、180、240、300秒後の後味を評価し、先味と各時間における後味の比から吸着性の時間依存的変化を検討した。平成30年度は、基準物質としては、キニーネ塩酸塩を用いて時間依存的苦味受容反応の評価における濃度等の測定条件を確立し、同時に官能試験も行い、本評価系と官能試験との時間依存性の相関を検討する。測定条件を確立し、医薬品を網羅的に測定する必要がある。平成28年度におけるhTAS2RおよびVSOP1をそれぞれ強制発現した細胞系の作製に時間を要したことから、その遅れの影響を受けている。平成28年度においてヒト苦味受容体cDNAをHEK293細胞に導入し、平成29年度においてはhTAS2RおよびVSOP1をそれぞれ強制発現した細胞系を作製した。更に細胞培養用シャーレにDioctylphenyl phosphateを可塑剤として加えたPhosphoric acid didodecyl esterをコーティングした上にコラーゲンを重層し、乾燥させた。このシャーレにヒト苦味受容体hTAS2Rと膜電位依存性プロトンチャネルVSOP1を共発現した細胞を播種、培養しセンチップに固定した。苦味を呈する医薬品との定量的な結合を、苦味を呈する医薬品溶液と接触する前と接触後の膜電位の変化で評価する。これは、苦味を呈する医薬品を口に含んだ時に感じる苦味(先味)として評価する。苦味を呈する医薬品溶液を洗浄した後もさらに膜電位変化を評価した。平成30年度は、バイオセンサとしての測定方法の確立のための第一段階として、基準物質としては、キニーネ塩酸塩を用いて時間依存的苦味受容反応の評価を行った。平成30年は、バイオセンサとしての測定方法の確立のための第一段階として、基準物質としては、キニーネ塩酸塩を用いて時間依存的苦味受容反応の評価を行ったが、値のバラつきが大きく、バイオセンサの測定方法の確立までには至らなかった。hTAS2RおよびVSOP1をそれぞれ強制発現した細胞系の作製さえ完了すれば、バイオセンサ膜の作製とそれを用いた膜電位変化の測定、時間依存的苦味受容反応の評価方法の確立等を行うが、こちらの条件設定は現状の味覚センサと類似しており、時間がかかり過ぎることはないと思われる。苦味受容体および電位依存性プロトンチャネルを共発現させた細胞を用いたバイオセンサによる医薬品の苦味評価方法として、バイオセンサの出力は確認できているので、後は測定条件の確立と医薬品の網羅的測定を行う。測定条件の確立と医薬品の網羅的測定に関しては、予測される研究の遅延要素はない。
造血幹細胞疾患における異常幹細胞のクローナルな拡大メカニズム

発作性夜間血色素尿症(PNH)は、PIG-Aの異常によりGPIアンカーを欠損した造血幹細胞がクローナルに拡大する疾患である。PNHが、再生不良性貧血を合併することやHLA DRB1^*15をもつ再生不良性貧血には高頻度でGPI欠損細胞を認めることより、その拡大には自己免疫的な機序が考えられている。しかし、再生不良性貧血で見つかるGPI欠損細胞の比率はきわめて低く、末梢血のほとんどすべてをGPI欠損異常細胞で占めるような症例では、さらなる異常の関与が考えられる。本研究で、我々は、GPI欠損細胞に12番染色体異常をもつ症例を経験し、その異常を同定した。その染色体異常のDNA切断点には、脂肪腫などの良性間葉系腫瘍の発症に関与することが知られているHMGA2遺伝子が局在していた。以上より、異常なHMGA2遺伝子の発現誘導により、この染色体異常を持つ異常造血幹細胞が良性腫瘍的に増加しているのではないかと考えられる。そこで、患者骨髄におけるHMGA2遺伝子の発現をリアルタイムPCR法により解析したところ、正常ではほとんど検出できなかったが、本症例では有意に上昇していた。我々は、末梢血のすべてを異常細胞で占めるようなPNHの発症には、3つのステップが関わっている事を提唱している。最初のステップでは、造血幹細胞において、PIG-Aに異常が起こり、GPIアンカーが欠損する(ステップ1)。第2のステップで、免疫的な機序によりGPIアンカー欠損細胞が選択される。GPIアンカーを欠損すると免疫的な攻撃に抵抗性となることにより異常細胞は選択的に増加する(ステップ2)。しかし、さらなる増加には、今回我々が同定したHMGA2等の遺伝子に異常が起こり、PNHが発症すると考えている(ステップ3)。今後、本症例だけでなく、どのくらいのPNH症例でHMGA2遺伝子の発現異常があるかどうかを検討していくつもりである。発作性夜間血色素尿症(PNH)は、Glycosylphosphatidylinositol(GPI)アンカーを欠損した造血幹細胞がクローナルに拡大する疾患である。PNHが、再生不良性貧血を合併することやHLADRB1^*15をもつ再生不良性貧血には高頻度でGPI欠損細胞を認めることより、その拡大には自己免疫的な機序が考えられている。我々は、GPI欠損細胞に12番染色体異常をもつ症例を経験し、その異常の同定を試みた。患者J20の染色体異常は、一方の12番染色体のq13-q15領域の約9.3Mbpが欠失し、その断片のセントロメア端、テロメア端をそれぞれ2.6kbp、9.5kbp失った断片が、もう一方の12番染色体のq15領域に15kbpの欠失を伴い挿入していた。12q15領域の挿入部位には、HMGA2(HMGI-C)遺伝子が存在し、HMGA2遺伝子の3'UTR3kbpのうち、3'側1.8kbpが欠失していることがわかった。HMGA2は、胎児期には高発現しているが、大人ではほとんど発現していない転写促進因子である。HMGA2のC末領域の酸性アミノ酸に富む領域を欠損した異常蛋白が、脂肪腫、子宮筋腫、過誤腫などの良性の間葉系腫瘍の発症に関与することが知られている。間葉系腫瘍では、3'UTRを失うことによりHMGA2の発現が誘導されていると考えられている。

本症例においても、3'UTRを失うことにより、HMGA2の発現が誘導され、この染色体異常を持つ異常造血幹細胞が良性腫瘍的に増加しているのではないかと考えられる。我々は、発作性夜間血色素尿症(PNH)において、GPIアンカー欠損造血幹細胞がクローナルに拡大するメカニズムを解明するために、GPIアンカー欠損細胞のみが12番染色体異常をもつPNH症例に注目し、その切断部位に存在するHMGA2を同定した。HMGA2は、間葉系良性腫瘍において高頻度に異常となる遺伝子である。我々は、患者骨髄におけるHMGA2遺伝子の発現をTaqMan probeを用いたリアルタイムPCR法により解析した。βActinを内部標準遺伝子としてHMGA2遺伝子の発現を5人の正常骨髄細胞と比較したところ、正常ではほとんど検出できなかったが、患者J20では、有意に上昇していた。また、どのような転写産物が発現しているかを明らかにするために、3'RACE-PCRを行い、予想される転写産物の領域をプローブにしてサザンブロティングをしたところ、患者では、すでに脂肪腫で報告のあるInton 4のcryptic exonをもつ転写産物が特異的に発現していたが、exon 5をもつ転写産物は、検出されなかった。さらに、5' UTRに存在する多型マーカーを用いたRT-PCRにより、HMGA2の転写産物が異常アレルから発現していることが明らかになった。それ故、本症例では、異常なHMGA2が、GPIアンカー欠損細胞のクローナルな拡大に関与している可能性が強く示唆された。最近、PNHにおいてEGR1やRhoAの発現の上昇が報告されている。また、RhoAによりEGR1とHMGA2の発現が調節されているという報告もされていることから、この経路の異常が、PNHにおけるクローナルな拡大に関与することが想像される。
慢性蕁麻疹病態における好塩基球と血液凝固反応の役割解明

慢性蕁麻疹の病態と血液凝固異常の関係が指摘されているが、局所における血液凝固反応の亢進とそれに次ぐ膨疹形成機構は明らかでない。本研究では、血管内皮細胞が発現する組織因子(TF)に着目し、ヒスタミン、微生物由来成分(LPS)によるTF発現機構の解明と血管透過性への影響を検討した。その結果、血管内皮細胞であるHUVECをヒスタミン、LPSで同時に刺激すると、相乗的にTF発現が増加することを見出した。また、発現したTFは、外因系凝固反応を駆動し、活性化凝固因子を産生すること、さらに、産生された活性化凝固因子は、血管内皮細胞のPAR1受容体に作用し、血管透過性を亢進することを明らかにした。本研究では、慢性蕁麻疹病態における好塩基球と血液凝固系の関わりを明らかにするため、血管内での好塩基球の活性化から蕁麻疹の発症までを「A.好塩基球活性化による単球・血管内皮細胞のTF発現と血液凝固系の駆動」「B. TFまたは産生された活性化凝固因子の血管外への漏出」と「C.血管外に漏出した活性化凝固因子によるマスト細胞等の免疫担当細胞の活性化」の3つの段階に分け、下記の手法によりそれぞれの過程を明らかにすることで、好塩基球活性化を引き金とする新しい慢性蕁麻疹発症モデルを確立することを目的とする。26年度は、当初の計画通り、好塩基球活性化による単球・血管内皮細胞のTF発現と血液凝固系の駆動について検討した。その結果、ヒスタミンとLPSが相乗的に血管内皮細胞(Huvec)のTF発現を増強していることが明らかとなった(mRNA、膜発発現レベルで確認)。さらに、ヒト正常皮膚微小血管内皮細胞においても同様の結果を得た。また、阻害薬を使用した実験から、上記反応は、ヒスタミン1受容体(H1受容体)とTLR4受容体を介して引き起こされ、それぞれの受容体の下流における重要な細胞内シグナル伝達分子、NF-kBとPKCの働きが重要であることを明らかにした。また、ヒト末梢血由来好塩基球と血管内皮細胞を共培養し、好塩基球を活性化させると、血管内皮細胞からのTF発現が認められ、その発現はH1受容体拮抗薬によって抑制されることを明らかにした。また、上記刺激により血管内皮細胞上に発現したTFは、外因系血液凝固反応を駆動し活性化VII因子、活性化X因子、活性化トロンビンを生成することを明らかにした。27年度は、当初の計画通り、単球・血管内皮細胞に発現したTFが血漿成分の血管外漏出に寄与するかどうか検討した。26年度報告の通り、単球はLPS等のTLRリガンドによりTFの発現を増加され、また、血管内皮細胞はLPSとヒスタミン(好塩基球由来のものでも)によって相乗的にTFの発現が増加される。本年度は、これらの細胞に発現したTFが、外因系凝固反応を駆動し、その結果、血管透過性亢進が誘導されるかどうかを、血管内皮細胞の蛍光染色解析、及び細胞の接着状態を無標識・リアルタイムにモニタリングできるインピーダンス法により評価した。その結果、LPS・ヒスタミン等の刺激により発現した単球・血管内皮細胞上のTFは、外因系血液凝固反応を強く駆動し、さらに、凝固反応により産生された活性化血液凝固因子は血管内皮細胞上のPAR1を介して血管透過性の亢進を誘導し、血漿成分の漏出に寄与する可能性を明らかにした。計画書通り、27年度までに「A.好塩基球活性化による単球・血管内皮細胞のTF発現と血液凝固系の駆動」「B. TFまたは産生された活性化凝固因子の血管外への漏出」機構を解明した。慢性蕁麻疹の病態と血液凝固異常の関係が指摘されているが、局所における血液凝固反応の亢進と、それに次ぐ膨疹形成機構は明らかではない。本研究では、局所で血液凝固反応を駆動する要因として、血管内皮細胞が発現する組織因子(TF)に着目し、ヒスタミン、微生物由来成分(LPS)によるTF発現制御機構の解明と血管透過性への影響を検討した。血管内皮細胞(HUVEC)のTFの発現はRT-PCR法、フローサイトメトリ法により測定した。発現したTFの外因系凝固反応駆動脳はActochrome TF activity assay kitを利用し評価した。HUVECの細胞間接着状態は免疫蛍光法、インピーダンス法により評価した。その結果、LPS前処理によりHUVECのヒスタミンに対する感受性が増大し、ヒスタミン刺激によるTF発現が増強された。また、細胞上に発現したTFは外因系凝固反応を駆動し、活性化凝固因子を産生し得ることを明らかにした。