hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
癌関連線維芽細胞に発現するTGF-β誘導性分子を標的とした新規大腸癌治療戦略構築

現在女性の死因第1位となっている大腸癌は悪性新生物の中でも高齢化や生活習慣の変化に伴いその罹患率,死亡率が増加傾向である.本研究課題ではこれまでに、細胞接着斑アダプター分子であるHic-5 (H2O2-inducible clone-5)がヒト大腸癌組織において癌細胞ではなく癌間質の線維芽細胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)に発現していること、およびHic-5ノックアウトマウスにおいて発癌物質を用いた大腸癌の発生がほぼ抑制されることを見出している。またCAFsの一般的な機能としてECMのリモデリングや炎症性微小環境形成の他に、隣接する癌細胞の遊走能促進が報告されている。本年度はCAF内のHic-5がこれらの癌細胞形質の制御に関与するか、Hic-5発現抑制CAFsと大腸癌細胞株(caco-2)を用い、caco-2の遊走能に及ぼす影響をボイデンチャンバー法を用いて調べた。またこれまでにTGF-β/ BMPシグナル経路の転写制御因子Smad4の変異により、MMP2やMMP9などのプロテアーゼの発現上昇を介して腫瘍浸潤が促されることが報告されている。そこでAPCΔ716/Smad4+/-マウスを用いて、Hic-5欠損によるマウス大腸癌発症率の評価を行った。大腸癌は悪性新生物の中でも高齢化や生活習慣の変化に伴いその罹患率,死亡率が増加傾向であり,現在女性の死因第1位となっている.細胞接着斑アダプター分子であるHic-5 (H2O2-inducible clone-5)はヒト大腸癌組織において癌細胞ではなく癌間質の線維芽細胞cancer-associated fibroblasts, CAFs)に発現していることがわかっている.Hic-5が大腸癌の発生過程に関与していると考えられ,我々が行った予備実験では発癌物質を用いた大腸癌モデルマウスを作成したところ,Hic-5ノックアウトマウスにおいて大腸癌の発生がほぼ抑制されていた.以上の背景に対して本年度はヒト大腸癌サンプルから得られたCAFsを用いてex vivoにおけるHic-5が癌細胞に与える影響の解析を行った.まず線維芽細胞にHic-5が誘導される条件の検索を行った.具体的には大腸癌細胞株との共培養や癌関連サイトカイン刺激で線維芽細胞中のHic-5の発現上昇することを確認している.次に線維芽細胞のHic-5が癌細胞に対してどのように作用しているか,shRNAを用いて線維芽細胞のHic-5発現を抑制した細胞を作成して実験を行った.野生型線維芽細胞もしくはHic-5抑制線維芽細胞と大腸癌細胞株を共培養したところ,Hic-5抑制線維芽細胞において癌細胞の増殖が抑制されることが判明した.またHic-5がECMのリモデリングに関与しているとする報告が近年あり,今後はリモデリングタンパク質とHic-5との関連を追求していく方針である.平成28年度はおおむねに計画通りに進んでおり、現在までにヒト大腸癌から分離した線維芽細胞の不死化およびHic-5発現抑制化が完了しており,引き続き発癌メカニズムの解析を行っている.大腸癌は悪性新生物の中でも高齢化や生活習慣の変化に伴いその罹患率,死亡率が増加傾向にある.我々は細胞接着斑アダプター分子であるHic-5 (H2O2-inducible clone-5)がヒト大腸癌組織において癌細胞ではなく癌間質線維芽細胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)に高発現していることを前年度明らかにした.さらにHic-5ノックアウトマウスにおいて大腸癌発生がほぼ完全に抑制されたことから,Hic-5が大腸癌の発生過程に関与していると考えられた.またヒト大腸癌サンプルから分離培養した線維芽細胞および大腸癌細胞株を用いた共培養実験からも,Hic-5抑制線維芽細胞において癌細胞の増殖が抑制されることが判明した.そこでその詳細なメカニズムとして,本年度はHic-5がECMリモデリングに関与するlysyloxidase(LOX)およびコラーゲンIの発現を促進することを明らかにした.さらにHic-5は線維芽細胞の核内に直接移行することでこれらECM関連分子の発現を制御することが示唆された.以上の結果より,CAFs中のHic-5が直接核内に移行しECM関連分子の遺伝子発現を制御し,腫瘍増殖を促がす癌微小環境を整備することで大腸癌の発生および増殖を制御していると考えられた.平成29年度は計画通りに進んでおり、これまでの結果が癌専門誌に掲載された。引き続きHic-5欠損による発癌抑制メカニズムの解析を行っている.現在女性の死因第1位となっている大腸癌は悪性新生物の中でも高齢化や生活習慣の変化に伴いその罹患率,死亡率が増加傾向である.本研究課題ではこれまでに、細胞接着斑アダプター分子であるHic-5 (H2O2-inducible clone-5)がヒト大腸癌組織において癌細胞ではなく癌間質の線維芽細胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)に発現していること、およびHic-5ノックアウトマウスにおいて発癌物質を用いた大腸癌の発生がほぼ抑制されることを見出している。本年度はCAF内のHic-5がこれらの癌細胞形質の制御に関与するか、Hic-5発現抑制CAFsと大腸癌細胞株(caco-2)を用い、caco-2の遊走能に及ぼす影響をボイデン

チャンバー法を用いて調べた。またこれまでにTGF-β/ BMPシグナル経路の転写制御因子Smad4の変異により、MMP2やMMP9などのプロテアーゼの発現上昇を介して腫瘍浸潤が促されることが報告されている。そこでAPCΔ716/Smad4+/-マウスを用いて、Hic-5欠損によるマウス大腸癌発症率の評価を行った。今後は免疫不全マウスNOD/Shi-scid,IL-2RγKO Jicを用いて異種移植実験を行い,Hic-5抑制線維芽細胞を用いた場合に癌腫形成を抑制できるか否かを評価する.またHic-5とECMリモデリングに関与するタンパク質との関連を調べると共にコラーゲンゲルなどを用いた実験系でリモデリング能を評価する予定である.CAFsの一般的な機能としてECMのリモデリングや炎症性微小環境形成の他に,隣接する癌細胞の遊走能促進が報告されている.CAF内のHic-5がこれらの癌細胞形質の制御に関与するか,Hic-5欠損CAFsと大腸癌細胞株(caco-2)を用い,caco-2の遊走能に及ぼす影響をボイデンチャンバー法を用いて調べる.またこれまでにTGF-β/ BMPシグナル経路の転写制御因子Smad4の変異により,MMP2やMMP9などのプロテアーゼの発現上昇を介して腫瘍浸潤が促されることが報告されている.そこでAPCΔ716/Smad4+/-マウスを用いて,Hic-5欠損によるマウス大腸癌発症率の評価を行う.
U仮設による吃音の類型的診断と予防に関する研究

吃音児の発生予防を目的として計画された研究であるが、「U仮設の類型化診断」手続きを適用して吃音の進展を評価した場合に、果たして予測可能か検討した。U仮設による診断類型のうち、(1)U-1:A-1に該当する症例を発見し、自然治癒との関連を明らかにすること。(2)U-4:B-1,U-4:A-2,U-4:B-2に該当する症例が吃音の予防に関連することを明らかにすること。平成5年度の研究から、該当症例の入手が極めて困難なことが判明したので、少数例に絞ってようやく症例Aを獲得した。平成6年度の本研究から以下の結果が明らかとなった。1)症例Aには、U-4:B-2という類型化診断がなされ、現段階では、予防の可能性が見られた。しかし確定するには完全な治癒まで数年を必要とすること。2)従来、自験例として治癒した症例Pは、超早期発吃型女児で、類似症例として対比することができた。その結果、同じくU-4:B-2の診断類型であった。3)吃音の進展の速さ・改善の困難度から、理論的には、類型診断上、U-4:B-2>U-4:B-1>U-4:A-1の関係が想定されることから、これらの診断類型も同様に凡そ予防の可能性が予想された。しかし症例による実証は今後の課題である。4)診断過程で、(1)親子吃音関係診断テスト、(2)吃音児行動チェックリツト、(3)環境状況チェックリスト、(4)吃音児言語態度チェックリストは有効であった。先に提出した平成6年度研究計画調書(継続)の「当初計画の変更点」で指摘しておいたように、元々3年計画であったものを2年間に短縮したため、結果の分析用に使用する大型計算機に変えて、パーソナルコンピュター(Macintosh)に依存することになった。予算の大半をこれに充当した点と期待した症例入手の困難に遭遇した点に問題点を残した。本研究の重点は、“U"仮説にもとずく類型的診断のうち、U-1型を中心に比較的軽度の症例を収拾し、吃音の予防に係わる諸条件を抽出することにある。当初の計画では東京都内並びに周辺の諸県で“U"仮説による治療・指導を実施する施設やことばの教室に来訪する症例を想定したが、予防に役立つ症例は皆無に等しく、症例入手には寧ろ、広く一般家庭、幼稚園、保育園や3歳児検診の実施される保健所に求められる事が判明した。従って今後症例は長期的に且つ全国的に実施する必要がある。30症例を目標に考えた当初ののプランは大幅に変更されねばならないであろう。恐らく10年は必要と考えられる。上記の状況から平成56年度の計画では少数例のモデルに切り換えること。当分の間はコンピューターの整備と分析ソフトの開発に当てることの2点に絞ることにした。現在、コンピューターには、Macintosh Quadra 840 AV 24MB/HD500/CDと付属設備の設営が終了し、且つ移動用コンピューターとしてMacintosh Power Book 180 C 12MB/HD160漢を購入した。ソフトの開発は今後の課題で、既設のものとしてJMP,Aldus Persuation2.1とDelta GraphDroを入手した。
高齢者の咀嚼機能を考慮した食物の食べやすさの評価

高齢者にとって硬く、食べにくい食材であるゴボウや食肉の食べやすさについて検討した。ゴボウは酵素処理により、軟らかく、咀嚼時間も少なく、食べやすくなった。ミンチ食肉の一部をマッシュポテトなどで置換すると、軟らかくなり、しかも食塩添加により唾液分泌量が増加し,咀嚼時間なども減少した。この食塩添加したものは、高齢者では好ましいと評価され、高齢者向け食肉加工品への食塩添加効果は食べやすさの点から有効な手段といえる。高齢者は義歯を装着している比率が高く、口腔機能も低下しているので、線(繊)維の多い食肉やゴボウなどの根菜類は食べにくい食物といえる。そのため、高齢者施設では繊維の多い硬い食物は誤嚥の危険性が高い「きざみ食」にする場合が多い。そこで、咀嚼しやすく、しかも誤嚥の誘因となる口中の残渣を減少させるような、調理上の工夫を提案することが必要といえる。18年度は食肉の線維をミンチ状にして、ハンバーグ様の食肉加工品を調製し、テクスチャー測定を行った。さらには、若年者による食べ易さの評価を官能評価および筋電図測定による咀嚼試験によって行った。さらには、咀嚼し、嚥下直前の食塊について、唾液分泌量およびテクスチャー特性の測定を行った。ハンバーグ様の食肉加工品として、豚肉ひき肉に0.5%の塩を添加して調製した基準試料:Cと塩を添加していない試料CN、基準試料Cの一部をマッシュポテトおよびデンプンに置換した試料MSと、CNの一部をマッシュポテトおよびデンプンに置換したMSNの4種類を調製し、試料とした。その結果、試料肉CおよびCNは、マッシュポテトとデンプンに一部置換したMSおよびMSNに比べ有意に硬かった。しかし、食塩添加の影響は硬さには認められなかった。しかし、唾液分泌率についてみると、食塩を添加した試料CNおよびMSNの方が増加した。官能評価においても、試料肉C(あるいはMS)はCN(あるいはMSN)に比べ、有意に風味が好まれ、総合的にもおいしいと評価された。試料肉の咀嚼回数、総筋活動量について検討したところ、食塩を添加した試料肉Cが、添加していないCNに比べ、有意に低値を示した。高齢者は義歯を装着している比率が高く,口腔機能も低下しているので,線(繊)維の多い食肉やゴボウなどの根菜類は食べにくい食物といえる。そのため,高齢者施設では繊維の多い硬い食物は誤嚥の危険性が高い「きざみ食」にする場合が多い。そこで,咀嚼しやすく,しかも誤嚥の誘因となる口中の残渣を減少させるような,調理上の工夫を提案することが必要といえる。19年度は,高齢者向けに酵素を用いて調製したゴボウについて,破断測定を行い,さらには若年者による食べ易さの評価を官能評価および筋電図測定による咀嚼試験によって行った。ゴボウに0.5%セルラーゼ溶液,0.5%ペクチナーゼ溶液および0.5%セルラーゼ・ペクチナーゼ混合溶液(混合酵素溶液処理)を用い,含浸法により軟化処理を行い,試料とした。破断特性の測定を行った結果,コントロールである酵素未処理ゴボウ試料では破断点がひずみ80%で認められ,しかも破断力が大となった。一方,混合酵素溶液処理を行ったゴボウ試料には明確な破断点は認められず変曲点が存在したが,コントロールに比較し,有意に破断力が低下した。食べ易さの評価では,コントロールに比べ,混合酵素溶液処理を行ったゴボウ試料が明らかに軟らかいと評価された。咀嚼試験を行ったところ,破断力が大きいコントロールに比べ,咀嚼回数が少ない傾向にある混合酵素溶液処理を行ったゴボウ試料の咀嚼時間は有意に少ないことが認められた。また,最大振幅,筋活動量について検討したところ,混合酵素溶液処理を行ったゴボウ試料が有意に小さいことが認められ,酵素(セルラーゼ・ペクチナーゼ混合)処理を行うことにより,軟らかく,咀嚼しやすいことが明らかとなった。高齢者は義歯などを装着している比率が高く、口腔機能も低下しているので、繊(線)維の多い食肉や、ゴボウなどの根菜類は食べにくい食物といえる。そのため、高齢者施設では繊(線)維が多く、しかも硬い食物に対しては、誤嚥の危険性が高い「きざみ食」にする場合が多い。そこで、咀嚼しやすく、しかも誤嚥の誘因となる口中残渣を減少させるような調理上の工夫を提案することが必要といえる。18年度は食肉の線維をミンチ状にして、ハンバーグ様の食肉加工品を調製し、テクスチャー測定、若年者を対象とした食べ易さの官能評価および咀嚼筋活動量の測定を行った。

19年度は、高齢者向けに酵素を用いて調製したゴボウについて、破断試験を行い、さらに、若年者による食べ易さの官能評価および咀嚼筋活動量の測定を行った。そこで、20年度は食肉加工品の食べ易さに関する官能評価および咀嚼筋活動量の測定を若年者および高齢者を対象として行い、比較検討した。食塩無添加のミンチ肉、食塩を添加したミンチ肉、酵豆粉を添加したミンチ肉を調製し、3種の食肉加工品についてテクスチャー測定、さらには、若年者と高齢者を対象とした官能評価および咀嚼筋活動量の測定を行った。その結果、テクスチャー特性については3種の試料間に有意な差は認められなかった。しかし、官能評価では、若年者は食塩および酵豆粉添加食肉加工品を好み、唾液分泌量が増加したが、高齢者では3試料間の嗜好および唾液分泌量に対して有意な差は認められなかった。また、咀嚼筋活動の測定結果からも、若年者に較べ、高齢者は咀嚼回数、咀嚼時間が増加し、1回あたりの筋活動量の減少傾向が見られた。
タンパク分泌におけるCaイオンチャンネルとアドレナリン性受容体の機能相関

Caイオンチャネルの阻害剤(Ca-阻害剤)4種類(CdCl_2,ベラパミル,ニフェジピン,ジルチアゼム)と各種の分泌刺激薬5群(A,コリン性;B,ペプチド性;C,α-アドレナリン性;D,β-アドレナリン性;E,バイオアミン性)の受容体刺激薬15種類を各種の投与量にて併用投与に用い、分泌唾液量およびタンパク質の分泌動態を検索した。用いた動物はSD系雄性ラツト(12-16週齢)で,顎下腺唾液をカニュレーション法にて1h採取し,タンパク成分はIEFおよび二次元電気泳動法で検索した。いずれのCa一阻害剤もアゴニストの組み合わせ方により阻害効果と促進効果の両作用を示した。これらの反応は非常に複雑で,一元的でなく阻害剤ごとに効果が異なつた。その中で,いずれの阻害剤によつても比較的共通の反応を示した組み合わせも見られた。すなわち、PlP_2系の細胞内情報伝達系に働くアゴニストや神経終末部よりノルアドレナリンを放出させる間接的刺激薬(チラミンなど)には抑制作用が顕著であつた。しかし,逆にバイオアミン(フェニレフリン、ノルアドレナリン,アドレナリン、6-および5-ヒドロキシドーパミンなど)に対しては促進作用が顕著であつた。このことから、Ca-阻害剤の投与はアドレナリン性α-およびβ-受容体を刺激するバイオアミンに対して、β-効果を抑制し、α-効果を増強させた。この理由を明らかにするために、神経終末部のノルアドレナリンを枯渇させるレセルビンとCa-阻害剤の作用を比較検討した。そしてレセルビンほどではないが、Ca-阻害剤(CdCl_2)は交感神経終末部よりノルアドレナリンを放出させるのではないかと考えられる効果を得た。このことを明らかにするために、唾液腺内のカテコラミン量の変動状態を測定する計画を進めている。また,in vitro実験(dispersed cells)を行い、神経終末部の電子顕微鏡観察を進めている。さらに、Ca-阻害剤はCaの分泌を顕著に抑制することが明らかになつたのでこれらの機構も明らかにしつつある。細胞内のCa量の測定や各種の細胞内情報伝達系阻害剤を用いてこれらの機序の解明を進めている。タンパク成分の方も二次元電気泳動法により興味ある結果を得ている。これらの成分の分析も進めている状態であるCaイオンチャネルの阻害剤(Ca-阻害剤)4種類(CdCl_2,ベラパミル,ニフェジピン,ジルチアゼム)と各種の分泌刺激薬5群(A,コリン性;B,ペプチド性;C,α-アドレナリン性;D,β-アドレナリン性;E,バイオアミン性)の受容体刺激薬15種類を各種の投与量にて併用投与に用い、分泌唾液量およびタンパク質の分泌動態を検索した。これらの成分の分析も進めている状態である第3世代のCaイオンチャンネル阻害剤(Ca拮抗薬)として,CdCl_2,ベラパミル,ニフェジピンおよびジルチアゼムを刺激薬投与の1530分前に腹腔内に用い,刺激薬にはバイオアミン類としてノルアドレナリン,アドレナリン,ドーパミン,フェニレフリン,チラミン,m-およびp-オクトパミン,6-および5-ヒドロキシドーパミンを,その他の刺激薬にはイソプロテレノール,ピロカルピン,フィサレミン,ベサネコール,クロニジンおよびメソキサミンを用いた。カテコールアミン類はアドレナリン性β_1-受容体(Re)を刺激する投与量を,フェノールアミン類はCa拮抗薬によりその作用が著しく抑制されるので抑制の解除される量を,その他の刺激薬は最適投与量を用いた。

Ca拮抗薬の作用の判定は顎下腺の分泌唾液量およびタンパク成分の分泌動態から行った。4種類のCa拮抗薬は各種の刺激薬に対し大筋ではほとんど類似の作用を示すと思われるが,各刺激薬に対するCa拮抗薬の対応の仕方は非常に複雑であった。すなわち,α_2-Re刺激薬に対してはタンパク成分の分泌型には影響を与えなかったが,α_1-およびβ_1-Re刺激作用をもつバイオアミン類に対してはβ_1-Re作用の抑制と,逆にα_1-Re作用の促進が観察され,タンパク成分はβ型からα型に完全に変換した。しかし,メソキサミン,チラミン,ドーパミン,m-およびp-オクトパミンの水分分泌作用およびα_1-Re刺激作用は抑制された。また,コリン性およびペプチド性Reの水分分泌機能も抑制された。以上のことから,Caチャンネルは水分分泌に重要な機能を果たしているだけでなく,α_1-とβ_1-Reの両方を刺激する作用をもつカテコールアミン類の細胞内情報伝達系の機能振り分けに重要な関わりをもつと考えられた。平成7年度も継続する研究なので,これに関わるタンパク成分を明らかにしたいと考えている。Caイオンチャネルの阻害剤(Ca-阻害剤)4種類(CdCl_2,ベラパミル,ニフェジピン,ジルチアゼム)と各種の分泌刺激薬5群(A,コリン性;B,ペプチド性;C,α-アドレナリン性;D,β-アドレナリン性;E,バイオアミン性)の受容体刺激薬15種類を各種の投与量にて併用投与に用い、分泌唾液量およびタンパク質の分泌動態を検索した。用いた動物はSD系雄性ラツト(12-16週齢)で,顎下腺唾液をカニュレーション法にてIh採取し、タンパク成分はIE_Fおよび二次元電気泳動法で検索した。いずれのCa-阻害剤もアゴニストの組み合わせ方により阻害効果と促進効果の両作用を示した。これらの反応は非常に複雑で、一元的でなく阻害剤ごとに効果が異なつた。その中で、いずれの阻害剤によつても比較的共通の反応を示した組み合わせも見られた。すなわち、pIP_2系の細胞内情報伝達系に働くアゴニストや神経終末部よりノルアドレナリンを放出させる間接的刺激薬(チラミンなど)には抑制作用が顕著であつた。しかし、逆にバイオアミン(フェニレフリン、ノルアドレナリン,アドレナリン、6-および5-ヒドロキシドーパミンなど)に対しては促進作用が顕著であつた。このことから、Ca-阻害剤の投与はアドレナリン性α-およびβ-受容体を刺激するバイオアミンに対して、β-効果を抑制し、α-効果を増強させた。この理由を明らかにするために、神経終末部のノルアドレナリンを枯渇させるレセルピンとCa-阻害剤の作用を比較検討した。そしてレセルピンほどではないが、Ca-阻害剤(CdCl_2)は交感神経終末部よりノルアドレナリンを放出させるのではないかと考えられる結果を得た。このことを明らかにするために、唾液腺内のカテコラミン量の変動状態を測定する計画を進めている。また,in vitro実験(dispersed cells)を行い、神経終末部の電子顕微鏡観察を進めている。さらに、Ca-阻害剤はCaの分泌を顕著に抑制することが明らかになつたのでこれらの機構も明らかにしつつある。細胞内のCa量の測定や各種の細胞内情報伝達系阻害剤を用いてこれらの機序の解明を進めている。タンパク成分の方も二次元電気泳動法により興味ある結果を得ている。
新たなワクモ制御技術の確立－実用化への新展開－

ワクモのワクチン候補として、節足動物の中腸に分布し消化等に重要なperitrophic matrix protein(PMP)、およびセリンプロテアーゼ阻害を主な機能とし宿主血液の凝固抑制等に重要なserpinに着目し、ワクモのPMP様6遺伝子とserpin様5遺伝子を同定した。このうちPMP様2遺伝子(DgCBP1および2)およびserpin様1遺伝子(DgSp1)をクローン化し大腸菌で発現、マウスに免疫し抗血清を作出、ワクモの免疫染色に供した。同様にニワトリにも免疫し、抗血清を含む血液をワクモに吸血させワクチン効果の評価を行った。免疫染色で、DgCBP1および2は中腸上皮細胞、管腔側表面および管腔内に認められた。また、DgCBP2免疫ニワトリ3羽中1羽の血液を給与したワクモ群に生存率の有意な低下が認められ、ワクチンとしての可能性が示唆された。一方、同一抗原を免疫した他のニワトリ由来血液を給与したワクモ群に生存率の低下は認められずワクチン効果の確認には至らなかった。DgSp1は、免疫染色で成ダニ雌中腸の上皮細胞および管腔内容とシンガングリオンに分布した。免疫鶏の血液を給与したワクモ群に有意な生存率の低下は認められず、ワクチン効果の確認には至らなかった。この他、水分子の吸収に重要な役割を担うアクアポリン様分子の遺伝子を同定し、推定アミノ酸配列から一部ペプチドを合成、ウサギに免疫し抗血清を作出した。薬剤抵抗性の分子機構解析では、キチン合成阻害活性を持つ市販の昆虫成長制御剤に対する抵抗性化の分子機序解明に着手した。近年ナミハダニで報告された本剤の標的分子であるCHS1のオルソログをワクモで同定し、抵抗性化に関与する変異解明のため当該遺伝子の塩基配列解析に着手した。ワクモにおける薬剤抵抗性の遺伝子診断技術確立では、ピレスロイド系薬剤の標的分子であるNaチャネル遺伝子に認められた抵抗性および感受性ワクモに特異的な塩基配列の検出を試みた。しかし、当初期待したいずれの方法でも信頼性の高い1塩基多型の検出には至らなかった。Naチャネル遺伝子は、抵抗性および感受性特異的塩基の周辺に抵抗生とは無関係な変異が散在しており、このことが多型の特異的検出を困難にする要因の一つと考えられた。有機リン系薬剤については、標的分子であるコリンエステラーゼ遺伝子全領域の塩基配列を解読、抵抗性および感受性ワクモに特異的な塩基配列の存在を明らかにした。また、昆虫成長制御剤の標的分子であるキチン合成酵素を対象に抵抗性に関与する変異の解析を進めている。また、薬剤感受性に重要な代謝酵素であるGlutathione S-transferase(GST)およびシトクロムP450遺伝子に特徴的な機能ドメインを持つワクモのGSTおよびP450様分子を、それぞれ12および35同定した。ワクチンについては、候補となる3分子をクローン化し大腸菌で発現、ニワトリへの免疫を実施しワクチン効果の評価を行った。また、他の候補1分子について合成ペプチドをウサギに免疫し、抗血清を作出した。ワクチン候補分子のスクリーニングへの適用を予定していたRNAiによるノックダウンは、現在までに有効な手法の確立に至らず、ワクチン候補分子をニワトリに免疫し、その血液をin vitroでワクモに吸血させることでワクチン効果の評価を実施している。薬剤抵抗性および感受性の遺伝子診断確立のため、ピレスロイド系薬剤の標的であるNaチャネル遺伝子、有機リンおよびカーバメート系薬剤の標的であるコリンエテラーゼ遺伝子に認められた塩基配列多型について、簡便な1塩基多型の検出方法の確立を目指す。昆虫成長制御剤についても、標的分子であるワクモCHS1オルソローグの塩基配列を解読し、抵抗性の責任部位を特定、簡便な変異検出検出法の確立を目指す。ワクチンについては、既に作出したワクモアクアポリン様分子に対するペプチド抗体を添加したニワトリ血液をワクモに吸血させ、吸血後の生存率や脱皮等に対する効果からワクチン効果の評価を行う。ワクモの有機リン系薬剤抵抗性遺伝子診断技術確立のため、標的分子であるコリンエステラーゼコード領域の全塩基配列を明らかにし、これら薬剤に抵抗性および感受性ワクモ集団に特異的な塩基配列を明らかにした。ピレスロイド系薬剤については、標的分子のNaチャネル遺伝子に認められた抵抗性および感受性各ワクモ特異的塩基配列のコンベンショナルおよびリアルタイムPCR法による検出を試みた。現時点で両者を特異的に鑑別可能な検出技術の確立には至らず、国内ワクモの薬剤抵抗性に関する分子疫学についてはワクモサンプルの収集に留まっている。次に、薬剤代謝に重要な役割を担うGSTおよびシトクロムP450遺伝子のワクモにおける実態解明のためワクモのRNAseq解析データを検索した。推定アミノ酸配列にGSTおよびP450分子に特徴的な機能ドメインが予測されるGST様およびP450様配列が、それぞれ12および35認められた。ワクチン候補分子の探索では、ワクモのRNAseq解析データから血液消化などとの関与が推定される遺伝子を探索、これまでに4つの遺伝子とその全塩基配列を明らかにした。各遺伝子はクローン化し、一部は大腸菌での発現を確認した。また、ワクモの生存に重要な役割を担うと考えられるプロテインジスルフィドイソメラーゼ(PDI)遺伝子をクローン化し大腸菌で発現、発現PDIの機能をin vitroで確認後、免疫血清を作出した。PDIのワクチンとしての可能性を検討するため免疫血清による活性阻害試験を実施したが、抗血清にPDI阻害活性は認められなかった。

この他にもワクモ乳剤から得たセリンプロテアーゼ画分の鶏への免疫試験を実施したが、ワクチン効果を示唆する成績は得られていない。ワクモにおける薬剤抵抗性の遺伝子診断技術確立では、ピレスロイド系薬剤の標的分子であるNaチャネル遺伝子を標的に、抵抗性および感受性各ワクモ特異的に認められる塩基配列の検出を試みた。しかし、当初期待したいずれの方法でも特異的検出に至らなかった。Naチャネル遺伝子は、抵抗性および感受性特異的塩基の周辺にワクモ集団によっては抵抗生と無関係な変異が散在しており、このことが特異的配列の検出を困難にする要因の一つと考えられた。有機リン系薬剤の標的であるコリンエステラーゼ遺伝子については全領域の塩基配列を解読し、抵抗性および感受性ワクモに特異的な塩基配列の存在を明らかにした。またワクモの薬剤感受性解明のため実施している薬剤代謝酵素の解明については計画通りに進んでいる。ワクチン候補分子の探索では、これまでに候補となる4分子を明らかにし、免疫試験に向けた遺伝子のクローン化を終えた。一部は大腸菌での発現を確認したが封入体を形成していたことから免疫試験に至らず、当該分子の可溶化およびリフォールディングに時間を要している。また、ワクチン候補分子のスクリーニングにRNAiによるノックダウンの影響評価を実施する予定で、浸漬法およびマイクロインジェクション法によるノックダウンを試みたが、現時点で有効な手法の確立には至っていない。しかし、RNAiによるワクチン候補分子のスクリーニングは必ずしも必須工程ではないことから、このまま発現抗原の精製と免疫の実施を予定している。ワクモのワクチン候補として、節足動物の中腸に分布し消化等に重要なperitrophic matrix protein(PMP)、およびセリンプロテアーゼ阻害を主な機能とし宿主血液の凝固抑制等に重要なserpinに着目し、ワクモのPMP様6遺伝子とserpin様5遺伝子を同定した。このうちPMP様2遺伝子(DgCBP1および2)およびserpin様1遺伝子(DgSp1)をクローン化し大腸菌で発現、マウスに免疫し抗血清を作出、ワクモの免疫染色に供した。同様にニワトリにも免疫し、抗血清を含む血液をワクモに吸血させワクチン効果の評価を行った。免疫染色で、DgCBP1および2は中腸上皮細胞、管腔側表面および管腔内に認められた。また、DgCBP2免疫ニワトリ3羽中1羽の血液を給与したワクモ群に生存率の有意な低下が認められ、ワクチンとしての可能性が示唆された。一方、同一抗原を免疫した他のニワトリ由来血液を給与したワクモ群に生存率の低下は認められずワクチン効果の確認には至らなかった。DgSp1は、免疫染色で成ダニ雌中腸の上皮細胞および管腔内容とシンガングリオンに分布した。免疫鶏の血液を給与したワクモ群に有意な生存率の低下は認められず、ワクチン効果の確認には至らなかった。この他、水分子の吸収に重要な役割を担うアクアポリン様分子の遺伝子を同定し、推定アミノ酸配列から一部ペプチドを合成、ウサギに免疫し抗血清を作出した。薬剤抵抗性の分子機構解析では、キチン合成阻害活性を持つ市販の昆虫成長制御剤に対する抵抗性化の分子機序解明に着手した。
高双極子モーメントの有機物を用いた有機半導体の分子配向制御とキャリア伝導度の向上

高双極子モーメントの有機物により液晶分子が配向制御され、π電子相互作用により導電率が向上することを実証した。特に4デバイ以上の双極子モーメントを持つものが有効だった。ダークインジェクション法の装置は、(株)沖田製作所製のNWG-104型高速水銀リレーを用いたものがうまく動作した。電流測定ではブリッジバランスが重要であり、高速アンプの採用は期待したほどの効果が得られなかった。特に浮遊容量の打消しは重要で、ポリバリコンの採用により合わせ込みの高精度化が可能となった。いずれにしても、高誘電率なC=O基を有する材料はπ電子相互作用が大きく、電流増加に効果的であった。高双極子モーメントの有機物ドープにより液晶分子が配向制御され、π電子相互作用によりトンネルホッピング確率が増加し、導電率が向上することを実証した。ドーパントはやはり4デバイ以上の双極子モーメントを有するものが有効であったが、その分子構造との相関を整理するまでには至らなかった。現在、分子動力学計算ソフトを用いてのデータ整理を試みている。Dark Injection法用パルス電源・電流測定系構築の鍵は、パルス電源部に使用する水銀リレーだが、製造中止となっているため、手持ちのNEC製高速水銀リレーを流用した。本研究終了間際に(株)沖田製作所が水銀リレーを製造していることを知り、MWG-104型を購入して試したが、問題なく使用することができた。差動アンプはAD8130やLMH6654等の高性能アンプやLMH6559バッファーに変更し、回路の最適化を行った。実際に動作確認を行ったところ、高速測定の肝は電流計測用のブリッジのバランスにあり、従来使用していたHA-5033-5バッファーやEL2142高速オペアンプでも改良版でもほとんど差がないことが分かった。100ns以下の時間域への改良は、電流計測部のブリッジバランスが支配的で、計測セル個々によって条件が変わるため、一般化した対応は不可能であると考えられる。ここでは、インダクタンス分をバランスさせるため、肺尖部の長さを極力同じにし、容量バランスにはラジオ用のポリバリコンを採用することでバランスをとることの精度と時間短縮を可能とした。有機半導体への応用に関しては、Dark Injection法による計測では分子層の厚さが100nm程度の薄膜にする必要があり、10μm程度の厚さの液晶セルでは無理があった。いずれにしても、高誘電率な官能基、特にC=O基を有する材料はπ電子相互作用が大きく、漏れ電流増加に効果的であった。
東南アジア・イスラーム世界の相互扶助制度：その次世代型再構築と多元的発展径路

本研究は、東南アジア・イスラーム世界で取り組みが始まっているザカート(イスラームにおける喜捨)実践の次世代型再構築の試みに着目するものである。事例としてインドネシアを取り上げ、世帯調査をはじめ、フィールド調査の実証的分析及び両国の比較分析により、ザカート実践の次世代型再構築のあり方には様々なアプローチがあるという多元的発展径路の視座から、現代的要請に対応したイスラーム型相互扶助制度の再構築の具体的取り組みの実態とその特徴および歴史的・現代的意義を探究することを目的とするものであった。この目的を達成するために、昨年までの二年間に(1)1年3か月の長期フィールド調査による事例的研究の遂行、(2)インドネシア・ムスリム知識人による言説分析について知見を深めてきた。本年度は、本研究課題の最終年度として、イスラームにおけるザカート制度をめぐる理論的視座と、インドネシアのザカート管理団体(NGO)の類型化、地理的分布に加えて、聞き取り調査と世帯調査を合わせた事例分析をまとめた。研究成果の発表としては、国内で2つ、国外で3つの口頭学会発表を行い、一部をブックレットという形で執筆した(次年度発行予定)。第一として、フィールド調査の事例分析を、第一回インドネシア研究懇話会で発表した。第二に、その理論的補助線としてイスラームにおける社会福祉という主題について、英語論文を執筆した。これまでの二年間の研究成果に加え、上記の成果をもとに、研究成果の総まとめとして博士論文を完成させ、2019年3月25日に京都大学博士(地域研究)を取得した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。報告者の研究は、東南アジア・イスラーム世界で取り組みが始まっているザカート(喜捨)実践の次世代型再構築の試みに着目するものである。ザカートはイスラーム社会における相互扶助や慈善、所得再分配の理念を携えている。ザカート制度の現代的再構築に関する従来の研究では、マレーシアが志向しているような一元的徴収・管理にもとづいた再構築が高く評価されてきており、他方、多様性を包含するインドネシアのザカート実践もマレーシアに倣うべきだと評価されてきた。本研究では、事例としてインドネシアを取り上げ、世帯調査をはじめ、フィールド調査の実証的分析及び両国の比較分析により、ザカート実践の次世代型再構築のあり方には様々なアプローチがあるという多元的発展径路の視座から、現代的要請に対応したイスラーム型相互扶助制度の再構築の具体的取り組みの実態とその特徴および歴史的・現代的意義を探究している。イスラーム経済の中で注目される、生産的ザカートという概念についての探求、現代インドネシア社会においてどの程度認知され、管理団体でプログラムが組まれているのか、解明する。平成28年度は、上記の研究課題の解明にむけて文献講読と長期的なフィールドワークを実施、およびこれまでの研究成果について積極的に発表を行った。研究成果の発表としては、東南アジア学会の関西例会での口頭発表、2度の国際会議における口頭発表を行った。3月にはジャカルタで行われた世界ザカートフォーラム(World Zakat Forum)では、世界中の研究者と知り合い、知的ネットワークを広げることができた。3月にはジャカルタで行われた世界ザカートフォーラム(World Zakat Forum)では、博士予備論文(修士論文に相当)およびフィールドワークに基づく研究報告を実施した。自らの研究成果の公表だけでなく、世界中の研究者と知り合い、積極的に知的研究ネットワークを構築することができた。またプロシーディングも出版されたことで、様々な研究者からフィードバックも得ることができた。フィールドワークについては、インドネシアのマラン(ジャワ島)に長期滞在し、現地語を使用した綿密な聞き取り調査と資料収集を実施した。調査対象のサンプリングにあたり、十分な資料が日本では得られていなかったため、当初予定していたクリテリアの変更を余儀なくされ、研究計画の練り直しも必要であったが、これもより射程を絞った研究をする上での進展であったと言える。総じて、これらの研究活動は、おおむね順調に進展しているといえる。平成30年度は、上記の研究課題の解明にむけて、1年間のフィールド調査を行い、そこで得たデータの分析の実施、およびこれまでの研究成果について積極的に発表を行った。臨地調査では140名から参与観察聞き取り調査をした結果を、ザカート管理団体(ZIS団体)の「生産的プログラム」に着目して分析した。その中で、ZIS団体の形態管理別分布図を作成し、そも戦略的分担や積極的意義を明らかにした。

研究成果の発表としては、7月にインドネシア・ロンボク島のマタラム大学での国際会議にて、マラン市のZIS団体の事例研究について口頭発表を行った。下半期には、今までの成果のまとめを、英語論文にし、国際ザカートジャーナルに応募し、アクセプトされた。平成30年度は、1年間のフィールド調査を行い、そこで得たデータの分析の実施、およびこれまでの研究成果について積極的に発表を行った。臨地調査では140名から参与観察聞き取り調査をした結果を、ザカート管理団体(ZIS団体)の「生産的プログラム」に着目して分析した。その中で、ZIS団体の形態管理別分布図を作成し、そも戦略的分担や積極的意義を明らかにしたことも、これまでの先行研究に欠けていた実証研究として貢献できたと考える。研究成果の発表としては、国際会議で、マラン市のZIS団体の事例研究について口頭発表を行い、下半期には今までの成果のまとめを、英語論文として国際ザカートジャーナルに応募し、アクセプトされた。インドネシア現地で、研究制かを発表することにより、当該地の研究者から有益なフィードバックを多く得られた。本研究は、東南アジア・イスラーム世界で取り組みが始まっているザカート(イスラームにおける喜捨)実践の次世代型再構築の試みに着目するものである。事例としてインドネシアを取り上げ、世帯調査をはじめ、フィールド調査の実証的分析及び両国の比較分析により、ザカート実践の次世代型再構築のあり方には様々なアプローチがあるという多元的発展径路の視座から、現代的要請に対応したイスラーム型相互扶助制度の再構築の具体的取り組みの実態とその特徴および歴史的・現代的意義を探究することを目的とするものであった。この目的を達成するために、昨年までの二年間に(1)1年3か月の長期フィールド調査による事例的研究の遂行、(2)インドネシア・ムスリム知識人による言説分析について知見を深めてきた。本年度は、本研究課題の最終年度として、イスラームにおけるザカート制度をめぐる理論的視座と、インドネシアのザカート管理団体(NGO)の類型化、地理的分布に加えて、聞き取り調査と世帯調査を合わせた事例分析をまとめた。研究成果の発表としては、国内で2つ、国外で3つの口頭学会発表を行い、一部をブックレットという形で執筆した(次年度発行予定)。第一として、フィールド調査の事例分析を、第一回インドネシア研究懇話会で発表した。第二に、その理論的補助線としてイスラームにおける社会福祉という主題について、英語論文を執筆した。これまでの二年間の研究成果に加え、上記の成果をもとに、研究成果の総まとめとして博士論文を完成させ、2019年3月25日に京都大学博士(地域研究)を取得した。次年度は、本年度に引き続き行っている長期フィールドワークを精力的に実施していく。イスラーム的喜捨制度が現代インドネシア社会においてどの程度認知され、管理団体でプログラムが組まれているのか、特にその生産的使用について、東ジャワのマラン市をケースに解明を試みる。
メカニカル・アロイング法によって作製したアルミニウム合金の高温強化機構

メカニカル・アロイング(MA)法によって作製したAl合金の機械的性質と微視的組織との関連性を明かにするため、各種合金についてその応力ーひずみ挙動、クリ-プ挙動、疲労挙動および被削性について調べるとともに組織観察を行った。主な結果と結果と結論は以下のとおりである。(1)最終的に押出されたMA合金は高密度の転位を含み、それらはMA中に形成された微細粒子にピン止めされた、安定な状態で存在する。(2)MA合金の降伏強度は、転位の微細粒子からの離脱応力によって支配される。この強度は低温(〈423K)ではオロワン応力にほぼ等しく、高温域では温度上昇とともに低下する。(3)MA合金のクリ-プ挙動は、クリ-プ応力が転位の微細粒子からの離脱応力に比べて高いか低いかによって決まる。高い場合には離脱後の転位の運動と消滅が変形を律速するのに対し、低い場合には変形は主として粒界すべりによって起こる。(4)疲労破断強度は従来のI/Mアルミニウム合金と比べて遜色無い。疲労破壊の起点は試料表面近傍に存在する.添加したセラミック粒子の凝集部あるいはMAされずに残った純Al部であり、MA合金の製造過程には改良の余地が残されている。(5)粒界すべりが起こる高温低速変形時の延性は極めて小さい(断面減少率RA=1%)。しかし、変形速度を10^1/s以上にするとRAは90%以上となり、MA合金が十分な塑性変形能を有することが判った。(6)硬質セラミック粒子を添加したMA合金を超硬合金で切削した時の工具摩耗は極めて激しく、その機構は“機械的すり減り摩耗"である。しかし、工具材料として焼結ダイヤモンドまたはアルミナを用いれば、MAアルミニウム合金の切削は十分に可能である。メカニカル・アロイング(MA)法によって作製したアルミニウム合金の高強度がどのような組織学的因子に起因するのかを明らかにするため、各種のMAアルミニウム合金についてその応力-ひずみ挙動とクリ-プ挙動を調べるとともに、TEMおよびSEMを用いた解析を行なった。現時点で以下のような結果と結論を得ている。(1)MA過程に形成される微細な粒子(Alの酸化物と炭化物)の均一分散は、MA中に転位を蓄えるのに極めて有効であり、MA合金は強く加工硬化された状態にある。また、転位は微細粒子によってピン止めされた、安定化された状態にあり、したがってMA合金は静的回復に対して大きな抵抗を示す。(2)MA合金の降伏強度は、転位の微細粒子がうらの離脱応力によって支配される。この応力は低温(<423K)ではオロワン応力にほぼ等しく、高温では温度上昇とともに低下する。すなわち、高温応力下での動的回復は、静的回復の場合ほど有効には微細粒子の分散によって抑えられず、したがってMA合金は高温で加工軟化を示す。(3)MA合金のクリ-プ挙動は、クリ-プ応力が転位の微細粒子からの離脱応力より高いか低いかに大きく依存する。高い場合には離脱後の転位の運動と消滅が変形を律速していると考えられるのに対し、低い場合には、変形は主として粒界すべりによって起こる。(4)MA合金の引張変形時の破断伸びは、通常の変形速度(10^<-4>/S)の下では温度の上昇とともに低下する(室温で10%、773Kで1%)。これは、高温の場合ほど局所的な加工軟化による朔性不安定が起こりやすいためと理解される。しかし、変形速度を10°/Sまで大きくすると、破断伸びが数10%まで上昇することが確かめられた。このことは、MA合金の高速超朔性発現の可能性を示唆する。
乳癌におけるホルモン依存性関連遺伝子の選別および機能解析

現在までにマイクロアレイ、エストロゲン受容体転写共役因子のなかから、ホルモン応答遺伝子の候補としてERα、ERβwt、ERβcx、PgR、AIB1、NcoR1、HDAC6,HDAC1,IGFBP4、IGFBP5が上げられている。これらの因子をmRNAレベルもしくは蛋白発現レベルで検討し、乳癌臨床例について臨床的重要性について検討した。1)mRNA/cDNAの調整、マイクロダイセクション再発乳癌のホルモン療法施行例で効果判定が確実に行われている症例、あるいは術前ホルモン療法を行い効果判定が確実に行われている症例の腫瘍からマイクロダイセクションにて腫瘍細胞のmRNAを抽出している。現在まで、前者で18例、後者で17例の抽出が済んでいる。将来的にはさらに症例を積み重ねたいと望んでいる。また、培養細胞としてはMCF-7、BT-20、BT-474、MDA-MB231のさまざまなホルモン状況に応じてストックされている、mRNAの抽出が行われている。2)候補遺伝子のmRNA発現定量的解析ホルモン受容体(ERα、ERβwt、ERβcx、PgR):ERα、PgRは免疫染色法により発現を検討し、ホルモン療法との効果では半定量による量的評価が重要であることが判明した。ERαはwt(wild type)もcx(c-terminal splicing variant)も予後良好であることが判明したが、ホルモン療法の効果との検討は不十分であった。HER2陽性、p53過剰発現例、Ki-67高発現例ではホルモン療法の効果が乏しい傾向であったが、とくにp53では統計学的に有意に反応性が乏しかった。ホルモン転写共役因子(AIB1、NcoR1、HDAC1)ではNCoR1やHDAC1のようなERの転写に直接関わる因子が予後良好でホルモン依存性が高いと評価できたが、AIB1はHER2などの膜型増殖因子からの転写刺激も受けて発現するため単独での評価は困難であった。エストロゲン反応性cDNAアレイにより得られた候補遺伝子のなかでHDAC6は、予後因子として重要であることが判明し、さらに現在ホルモン療法反応性との間で検討しているが、有望な結果を得ている。また、以前から16番染色体長腕に位置する癌抑制遺伝子の検索を進めていたが、ATBF1-A遺伝子がその候補遺伝子として臨床的価値を持っていることが示唆された。cDNAマイクロアレイはカスタム化したアレイを共同研究者とともに作成中であり、培養細胞系での基礎的な発現確認を行っている。ただし、既知のホルモン依存性関連遺伝子の候補として、ERα、ERβ(wild type, variant type)、AIB1、などについては、臨床乳癌の多数例について検討している。1)mRNA/cDNAの調整、マイクロダイセクション再発乳癌のホルモン療法施行例で効果判定が確実に行われている症例、あるいは術前ホルモン療法を行い効果判定が確実に行われている症例の腫瘍からマイクロダイセクションにて腫瘍細胞のmRNAを抽出する。現在まで、前者で8例の後者で6例の抽出がすんでいる。さらに症例を積み重ねるつもりである。また、培養細胞としてはMCF-7、BT-20、BT-474、MDA-MB231のさまざまなホルモン状況に応じてストックされ、mRNAの抽出が行われている。

現在はホルモン依存性増殖機構から絞られた候補遺伝子(ERα、ERβ、PgR、AIB1、TIF2、SRC-1)に関して各乳癌組織や細胞系から抽出したmRNAを用いて、Realtime RT-PCR法を用いてホルモン療法効果との関連、あるいは生物学的予後因子との関連、健存率や生存率などの予後との関連について調査中である。3)ERα、ERβwt、ERβcx、PgR、AIB1の蛋白発現解析汎用性の高い免疫組織化学を用いて多数例により乳癌の予後因子あるいは効果予測因子としての重要性について検討している。特にERβwtは予後良好因子として認められつつある。現在までにマイクロアレイ、エストロゲン受容体転写共役因子のなかから、ホルモン応答遺伝子の候補としてERα、ERβwt、ERβcx、PgR、AIB1、NcoR1、HDAC6,IGFBP4が上げられている。これらの因子をmRNAレベルもしくは蛋白発現レベルで検討し、乳癌臨床例について臨床的重要性について検討している。1)mRNA/cDNAの調整、マイクロダイセクション再発乳癌のホルモン療法施行例で効果判定が確実に行われている症例、あるいは術前ホルモン療法を行い効果判定が確実に行われている症例の腫瘍からマイクロダイセクションにて腫瘍細胞のmRNAを抽出している。現在まで、前者で18例の後者で17例の抽出が済んでいる。さらに症例を積み重ねるつもりである。また、培養細胞としてはMCF-7、BT-20、BT-474、MDA-MB231のさまざまなホルモン状況に応じてストックされている、mRNAの抽出が行われている。現在はホルモン依存性増殖機構から絞られた候補遺伝子に関して各乳癌組織や細胞系から抽出したmRNAを用いて、Realtime RT-PCR法を用いてホルモン療法効果との関連、あるいは生物学的予後因子との関連、健存率や生存率などの予後との関連について調査中である。既知のホルモン依存性因子であるERα、PgRを除いて、ERβwt、ERβcx、AIB1、NcoR1、HDAC6などの定量が行われ、各因子における臨床乳癌症例でのホルモン療法の効果との関連についての差別化が示唆されており、有用性が指摘されている。汎用性の高い免疫組織化学を用いて多数例により乳癌の予後因子あるいは効果予測因子としての重要性について検討している。現在までに上記の因子において蛋白発現解析がなされ、特にERβwt、HDAC6、ATBF1は予後良好因子としての証拠が得られている。現在までにマイクロアレイ、エストロゲン受容体転写共役因子のなかから、ホルモン応答遺伝子の候補としてERα、ERβwt、ERβcx、PgR、AIB1、NcoR1、HDAC6,HDAC1,IGFBP4、IGFBP5が上げられている。
高分解能電子顕微鏡法の定量化によるゼオライトの結晶構造解析

スロースキャンCCDカメラを装着した400kV透過電子顕微鏡を用いて、有機分子TPAをゲストとして包接したゼオライトMFIの高分解能電顕像及び電子回折パターンを撮影し、それらの定量的解析結果を報告されている構造モデルと共に比較検討した。高分解能電顕像からは、ゼオライトチャンネル中に存在するTPAと考えられるコントラストが観察された。この種のコントラストは従来装置に起因するartifactとの識別が困難であり、ごく限られた観察結果が報告されるのみであったが、本研究では電子線強度を定量的に評価することにより、チャンネル中に確かにTPAが存在していることを示すことができた。また、高分解能像の解析から得られたTPAの占有率は電子回折強度の解析から求められた値にほぼ一致した。電子回折強度の評価にはR因子を適用し、構造モデルとの定量的比較を行った。次に、最も低密度のフレームワーク構造を持ったゼオライトの一つであるFAUについて動力学的回折強度の計算と実験値との比較を行った。加速電圧400kVの場合について、フレームワークのみの場合、ゲスト物質を導入した場合などについて回折強度の厚さ依存性を計算した結果、低散乱角領域(<0.5Å^<-1>)の反射では厚さ300Å付近まで運動学的近似がよく成り立つことがわかった。このことは、ゲスト物質の配置や2Å程度の分解能での構造については、運動学的近似に基づく解析が特に有効であることを示している。これらの解析結果をもとに、未知試料への応用例としてFAUにMoS_2クラスターを導入した試料について導入前後の試料で回折強度の解析を行った。両者の強度分布には明らかな差異が見られ、フーリエ解析により結晶空隙内部にゲスト物質と考えられるポテンシャル分布が得られた。その分布は粉末X線回折パターンのリ-トベルト解析結果と定性的に一致することがわかった。スロースキャンCCDカメラを装着した400kV透過電子顕微鏡を用いて、有機分子TPA(tetraropylammonium)をゲストとして包接したゼオライトMFIの高分解能電顕像及び電子回析パターンを撮影し、それぞれについての定量的解析結果を報告されている構造モデルと共に比較検討した。この種のコントラストは電子光学的な結像条件によって現れる「為物」との識別が困難であることが知られており、これまでごく限られた観察結果が報告されるのみであったが、本研究ではコントラストを形成する電子線強度を定量的に評価することにより、為のコントラストとの識別を行い、チャンネル中に確かにTPAが存在していることを示すことができた。高分解能電顕像の解析からゼオライトチャンネル中の有機分子を捉えたのはこれが最初である。TPAの占有率は約50%と見積ることができたが、これは電子回析強度の定量解析から求められた値にほぼ一致した。電子解析強度の評価にはR因子を適用し、構造モデルとの定量的比較を行った。これらの結果をまとめ、学術誌に投稿した。また、測定、解析用のコンピュータに改良(メモリーの増設など)を行い、連続的な画像取り込みやイメージングプレートからの大容量の画像取り込みに対応できるよう改善した。更に、現在本研究を遂行するうえでのひとつの課題となっている回析波の位相決定の問題に関し、汎用型の直接法プログラムを用いた予備的な解析(計算強度によるシミュレーション)を行った。その結果、複数方向からの入射による回析強度をうまく統合することができれば、直接法の適用が可能であることが示唆された。

前年度の研究に引き続き、既知の結晶構造を有する各種のゼオライトフレームワークについて、電子回折強度のフーリエ解析を行い、X線構造解析によって得られた結晶構造との比較検討を行った。回折強度の測定には前年度から使用しているスロースキャンCCDカメラを装着した400kV透過電子顕微鏡に加え、超高圧電子顕微鏡(1250kV)を用いて、イメージングプレートによる回折強度・高分解能像の記録を行った。これまでの研究経過から、解析精度を向上させるためには動力学的回折の寄与を検討する必要性が生じたことから、動力学的効果についても検討を行った。特に、典型的なゼオライトの一つであり、最も低密度のフレームワーク構造を持った部類に属するFAUについて動力学的回折強度の計算と実験値との比較を行った。その結果、加速電圧400kVを仮定し、フレームワークのみの場合、ゲスト物質を導入した場合などについて回折強度の厚さ依存性を計算すると、低散乱角領域(<0.5Å^<-1>)の反射では厚さ300Å付近まで相対強度に大きな変化(厚さによる効果)は見られなかった。実空間においては、この領域の反射はちょうどフレームワークの「高次の」構造(結晶空隙の規則配列など)に相当することがわかった。一方、フレームワーク中にゲスト物質を導入した場合にはこの低散乱角領域の回折強度分布は顕著に変化する。従ってゲスト物質の配置やこの空間周波数(<0.5Å^<-1>)に相当する分解能での構造については、ゲスト導入前後の回折強度を運動学的近似に基づいて解析し、差フーリエ合成を行うことによって決定することが可能となる。これに対して、>0.5Å^<-1>の高散乱角側、すなわちSi-O結合などの「低次の」構造に相当する部分は回折強度の厚さによる変化が大きく、厚い試料での解析には注意を要する。これらの解析結果をもとに、未知試料への応用例としてFAUにMoS_2クラスターを導入した試料について導入前後の試料で回折強度の解析を行った。両者の強度分布には明らかな差異が見られた。フレームワークのみの構造モデルから移相を仮定してフーリエ合成を試みると、結晶空隙内部にポテンシャル分布の差が現れた。その分布は粉末X線回折パターンのリ-トベルト解析結果と定性的に一致することがわかった。