hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
甲状腺未分化癌に対する免疫チェックポイント阻害治療の有用性に関する検討

まず、甲状腺未分化癌患者の摘出標本中におけるPD-L1の発現状況を免疫染色法を用い調査した。甲状腺未分化癌では、甲状腺乳頭癌、甲状腺濾胞癌、腺腫様甲状腺腫などの組織型と比較して有意にPD-L1の発現が亢進している事が証明された。加えて甲状腺癌の中で、PD-L1の過剰発現は生存予後の短縮に関係していた。さらに、我々は甲状腺未分化癌モデルとなる細胞株でのPD-L1発現状況を調査した。ウェスタンブロット法と免疫細胞染色を用い、タンパクレベルにてPD-L1の過剰発現を確認する事ができた。また、PD-L1の上流に位置するHIF-1やMYCなどのタンパクの過剰発現も見られる事が判明した。これらのセルラインを用いて免疫不全マウスに移植し、甲状腺未分化癌・腫瘍モデルマウスを作成した。腫瘍を発育させた後、マウスを安楽死させ腫瘍組織片を摘出後に評価した。ウェスタンブロット法でPD-L1の過剰発現を確認した。ホルマリン固定後のパラフィンブロックから染色スライドを作成し、免疫染色法にてそれぞれPD-L1の過剰発現がvivoモデルにおいても見られることを証明した。さらに、組織の固定までの状況に応じて、PD-L1の発現量が変化することを副次的に見いだす事ができた。これらの結果から、甲状腺未分化癌においてPD-L1は予後予測因子となるだけでなく、治療ターゲットとなり得る事が証明された。また、PD-L1過剰発現した腫瘍モデル作成から、プレクリニカル研究への道筋をつける事が可能となった。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。PD-1 (programmed cell death-1)阻害薬を中心とした免疫チェックポイント阻害治療は、悪性黒色腫、腎癌、肺癌さらには頭頸部癌で臨床使用され、これまで予後不良であったこれらの悪性腫瘍の長期予後の改善が期待されている。一方、これまでに甲状腺癌に対して免疫チェックポイント阻害治療の有用性を評価した報告はない。我々は、MYC蛋白が甲状腺未分化癌の患者において亢進していることを見出しており、MYCの翻訳ターゲットの一つであるPD-L1(programed cell death-ligand 1)も過剰発現していることが予想される。そのため、甲状腺癌においてもPD-L1の過剰発現により腫瘍細胞が抗腫瘍免疫応答から逃れ、免疫チェックポイント阻害により抗腫瘍免疫応答を介した治療が奏功すると考えられている。まず、細胞株を用いた実験を進めるため、ウェスタンブロット法による定量にて甲状腺正常細胞株(Nthy-ori3-1)と甲状腺未分化癌(8305C, 8505C, ASH3, OCUT2, OCUT4)においてPD-L1の発現量を比較した。これら甲状腺未分化細胞では、正常細胞株と比較して、明らかなPD-L1の発現亢進を認めた。一方、TTF-1, TPO, TSH-Rなどの甲状腺分化マーカーは未分化癌セルラインにて発現が低下していることを証明した。加えて、ヒト臨床検体において甲状腺未分化癌とコントロール甲状腺組織(過形成)の免疫染色法によるPD-L1発現解析を行うため、条件設定等の予備実験を行なった。甲状腺未分化癌セルラインを用いたMYC -mRI翻訳-アミノ酸生合成- PD-L1発現解析の中で、アミノ酸生合成に関わる阻害剤を用いた発現制御実験では、細胞株のPD-L1発現を抑制することができなかった。よって、他の阻害剤によりPD-L1発現に影響があるか現在試みている。患者検体解析のための予備実験・共同研究の打ち合わせなどで、予想以上に時間を要したが、ほぼ条件が決まり、今後解析予定である。手術検体などの摘出物を免疫染色法を中心に病理学的に解析し、臨床経過と比較する。さらに、PD-L1阻害することで甲状腺未分化癌細胞の腫瘍制御が可能か、マウスセルライン移植モデルにて証明する予定である。
GroE依存基質タンパク質を用いたフォールディングスイッチの作製

近年、生物の材料を組み合わせて新しい機能の実現を目指す合成生物学が勃興し、生物の個々の機能を取り出して回路化する試みが行われてきている。この回路化にはスイッチによるタンパク質の発現制御が重要である。現在までに、リプレッサーのような転写因子を用いたスイッチの他、低分子化合物を結合するRNAを用いたリボスイッチ、RNAに結合するタンパク質を用いたRNPスイッチなどが報告されている。これらのスイッチから発現するタンパク質は、いずれもリボソームで翻訳された後、立体構造になる過程(フォールディング過程)を経る。したがって、タンパク質のフォールディングを制御すれば、既存のものとはターゲットは異なり、働く分子機械の機能を直前で制御可能なスイッチとなる。そこで、本研究ではフォールディングスイッチを作製する。本年度は、比較的小さなGroEが存在しないとフォールディングできないタンパク質(FtsE、YqaB)の下流に転写因子tetRやGFPを融合しGroE依存性を解析した。結果、これらの融合タンパク質はGroE存在下でも正常なフォールディングができないことが明らかになった。今後、この理由を解明することで、タンパク質のフォールディング機構に対する新たな知見が得られることが期待される。また、生体にそなわっているフォールディングスイッチを利用した合成生物学を展開した。GroE発現抑制状態では塩要求が強くなること、特定のプロモーターが活性化されることを利用し、培地中の塩濃度をGFPの蛍光に変換する『定量的な』塩濃度センサー大腸菌を作製することに成功した。本成果により、フォールディングスイッチが実用的なものであることを示した。
地殻流体の起源と化学

沈み込み帯の地下で、どのような化学的特徴を持った流体が発生し、その流体が沈み込み帯の変動にどのような役割を果たしているかを明らかにするために、高温高圧実験による流体発生の再現と流体の化学分析、および、天然の変成岩試料の分析・解析を行った。その結果、沈み込み帯深部では、変成作用の進行にともなって高塩濃度の流体が発生しており、その流体が、島弧火成活動や沈み込むプレート内での地震発生に大きく寄与していることが明らかとなった。沈み込み帯で発生する流体の化学的特徴と発生条件を解明するための予備的な段階の研究として、以下の項目について実施した。(1)高温高圧状態でのH_2O流体-ケイ酸塩メルト間の微量元素分配係数を放射光蛍光X線その場分析によって決定する実験を、ダイヤモンドアンビルセル(DAC)装置とマルチアンビル(MA)装置用いて、大型放射光施設SPring-8(DACとMA)にて行った。DAC装置は、試料からの蛍光X線シグナルを効率的に検出できるように、ダイヤモンドのキュレット部分に改良を加えた。実験の結果、H_2O流体にはアルカリ元素が選択的に分配され、アルカリ土類・希土類元素はケイ酸塩メルトに選択的に分配されることが明らかになった。(2)沈み込むスラブ中でのH_2O流体-残存鉱物間の微量元素分配係数を決定するための予備実験として、マルチアンビル装置を用いて、サブソリダス条件で玄武岩-H_2O系の高圧実験を行い、H_2O流体を密封したまま高温高圧状態を保ことに成功した。(3)三波川変成帯に分布する高圧型変成岩を採集し、偏光顕微鏡による観察と電子線プローブ分析によって、変成条件を解析した。また、それらの変成岩の石英脈中に含まれる流体包有物をクラッシュリーチング法によって分離し、ICP-MS装置を用いて微量元素組成を分析し、変成条件との関係を調べた。その結果、流体包有物のLi/B比が変成岩の変成度にともなって系統的に変化することが分かった。(4)肥後変成帯に分布する変成岩の変成相と変形組織・石英脈の分布との分布関係を解析し、中部地殻の条件で放出されたH_2O流体が上昇して地震断層に侵入することで脆性破壊を引き起こす可能性を示した。沈み込み帯で発生する流体の化学的特徴と発生条件を解明することを目指して、以下の研究を行った。1.含水カンラン岩の部分融解実験を行い、流体存在下での融解相平衡関係を決定した。その結果、圧力および含水量の増加とともに、融け残り固体物質のSiO_2量とMg/(Mg+Fe)比が上昇することが明らかになった。2.マルチアンビル装置による高温高圧実験と放射光蛍光X線分析を組み合わせ、H_2O流体とケイ酸塩メルトを高温高圧状態で共存させた状態で両者の微量元素濃度をその場分析して、両者間での微量元素分配係数と圧力との関係を調べた。3.三波川変成岩に含まれる流体包有物のLi/B比を分析し、保存されている流体の組成とホストの変成岩の変成度の相関に、変成岩の原岩の種類が与える影響を明らかにした。4.中下部地殻条件で変成した肥後変成岩の地質調査と変成相解析を行った。その結果、下部地殻相当の圧力で生成された含水メルトが中部地殻まで上昇したこと、上昇したメルトの上部で、メルトからの流体放出にともなう塑性変形や脆性破壊が起こったことが明らかになった。5.カンラン石-H_2O系で高温高圧実験を行い、蛇紋石の形成速度を調べた。その結果、沈み込んだスラブの温度圧力条件では、カンラン石単独では蛇紋岩化の進行が極めて遅いことが明らかになった。6.角閃岩の脱水分解実験とレーザー照射ICP-MS分析によって固相-流体間の分配係数を決定することを目指して、レーザー照射で定量分析可能な粒径(30μm)まで固相を成長させるために必要な予備実験を行った。沈み込みスラブにおける流体発生条件・化学的特徴の解明を目指して、以下の項目についての研究を行った。1.ダイヤモンドアンビルセルおよびマルチアンビル装置と放射光蛍光X線その場分析によって、流体-ケイ酸塩メルト間の微量元素の分配係数を決定した。その結果、圧力および塩濃度の上昇とともに、アルカリ元素・アルカリ土類元素がより流体に濃集しやすくなることが明らかになった。2。三波川変成岩の精密な変成相解析を行い、変成度・変成岩の原岩と、含まれる流体包有物のLi/B比との関係を明らかにした。また、肥後変成岩の断層破砕帯付近に存在する岩脈の相解析を行い、断層破砕帯近傍でCO_2の脱ガスが起こったことを示す証拠を見いだした。

3.角閃岩の脱水分解実験とレーザー照射ICP-MS分析によって、沈み込むスラブ内での固相-流体間の微量元素分配係数を決定するため、マルチアンビル装置を用いた角閃岩の脱水分解実験を行い、固相の微量元素組成をレーザー照射で分析可能な粒径(30μm)まで成長させる実験条件を確定した。4.マントルウェッジ内で流体がカンラン岩を蛇紋岩化させるプロセスを反応速度論的に理解するため、カンラン石-輝石-H_20系で高温高圧実験を行った。その結果、出発物質における斜方輝石の存在が蛇紋岩化を促進するこどを示す証拠が得られた。また、地震波観測によって求められる弾性データをマントル中の含水鉱物の分布に対応させるために必要な、マントル物質の地震波速度減衰特性を実験的に決定するため、マルチアンビル装置と放射光X線を用いて、周期的微小軸応力下での標準物質との変位周期のズレを測定するための装置開発を行った。本研究では、高圧実験と変成岩の解析を主な手段として、沈み込むスラブにおける流体発生条件・化学的特徴の解明と、マントルウェッジおよび地殻内部プロセスに流体が果たす役割を読み解くことを目指した研究を進めてきた。本年度に行った研究のうち主な成果を以下に示す。高圧実験:高圧実験によって決定したメルトー流体間および固相ー流体間の微量元素分配係数を解析し、沈み込むスラブから放出される微量元素の分配に対する圧力・塩濃度の影響を明らかにした。また、沈み込み帯の代表的含水鉱物である蛇紋石の非弾性的性質を、マルチアンビル装置と放射光X線その場回折を利用した弾性波速度減衰実験によって決定した。変成岩の解析:世界各地の超高圧変成帯の脱水反応組織と複数相包有物の相平衡解析により、スラブから放出されたと考えられる流体の主成分元素組成と変成温度圧力との関係を明らかにした。また、三波川変成帯の蛇紋岩体の鉱物共生関係と変形構造との関係から、蛇紋岩の脱水分解による流体放出と変成岩帯の変形が沈み込むスラブの温度圧力条件で起こりうることを明らかにした。沈み込み帯における流体発生条件・化学的特徴の解明を目指して、以下の項目についての研究を行った。高圧実験:マルチアンビル装置と放射光その場蛍光X線分析によるマントルウェッジ条件でのメルトー流体間の微量元素分配係数を決定し、その岩石学的応用を考察した。北海道岩内岳超塩基性岩体の蛇紋岩化反応の岩石学的解析を行い、蛇紋岩化プロセスの詳細を明らかにした。蛇紋石とH2Oを共存させた高温高圧条件でその場観察を行い、蛇紋岩の脱水分解反応で生成される水流体の化学的性質を解明した。マルチアンビル装置を用いて、マントルウェッジ条件での含水カンラン岩の融解相平衡関係を決定する実験を行った。蛇紋石の弾性派速度速度の減衰を理解するために、周期的に試料に変形を与え、その応答具合を調べる高温高圧その場観察実験を行った。特に、微少な変位を観察するために、高圧試料部構成の最適化に重点をおいた。島弧地殻の代表的鉱物である斜長石の弾性定数を、マルチアンビル装置と放射光X線を組み合わせたパルス法で決定した。変成岩の解析:冷たい沈み込み場で形成された地下深部岩石の流体包有物をクラッシュリーチング法で濃集し、Li-B濃度を測定した。それとともに、LA-ICP-MSを用いた含水鉱物の微量成分分析システムを構築した。沈み込み帯における流体の関与した相平衡の酸化還元環境を議論するために,三価の鉄と水の酸化還元を考慮した相平衡図を作成する方法を検討した。この方法を用いて,沈み込み帯のマントルウェッジの加水・脱水時の,水の酸化還元状態と岩石中の三価の鉄を見積った。
トランスジェニックマウスを用いたヒトG-CSFの生体内機能の解析

サイトカインは医療への応用が期待される生物活性物質であるが,その機能は当初予想されていたよりも多彩であると考えられている.われわれは,ヒト顆粒球コロニー刺激因子(hG-CSF)の生体内機能を明らかにする目的でhG-CSFを強制発現するトランスジェニックマウス(以下hGCSF-Tg)を作成し,その造血幹細胞増殖機構について解析した.われわれが樹立したhGCSF-Tg系では骨髄系,赤芽球系,巨核球系のみならずT,Bリンパ球系の過形成がみとめられた.これは最も未分化な造血幹細胞から各種の前駆細胞までの著明な増殖によるものであることが判明した.因みに、本hGCSF-Tg系ではhG-CSF遺伝子が造血細胞および造血環境の両方で発現していた.次に,幹細胞の増殖が血球あるいは造血環境のどちらに,より強く影響されているかを明らかにするために,対照マウスとの骨髄移植実験を行なった.その結果,幹細胞増殖には造血環境でのhG-CSF発現が重要であることが明らかとなった.また,hGCSF-Tgをレシピエントとした場合には,移植に最低必要とされる骨髄細胞数の1/5で骨髄が再構築された.この結果は,本hGCSF-Tgの造血環境がin vivoで有効に幹細胞の増殖分化を促進させ,骨髄抑制に拮抗しうることを示している.生体内での造血幹細胞増殖をプロモートしうる本hGCSF-Tgの脾臓よりストローマ細胞株GS細胞を樹立した.GS細胞は無血清培養で長期間にわたりマウス幹細胞を増殖させることが可能であり,さらにヒト芽球コロニー,混合コロニーを増殖させることが明らかとなった.以上の結果,われわれの確立したhGCSF-Tg系はマウスのみならず,ヒト造血機構の解析にも有用であることが明らかとなった.サイトカインは医療への応用が期待される生物活性物質であるが,その機能は当初予想されていたよりも多彩であると考えられている.われわれは,ヒト顆粒球コロニー刺激因子(hG-CSF)の生体内機能を明らかにする目的でhG-CSFを強制発現するトランスジェニックマウス(以下hGCSF-Tg)を作成し,その造血幹細胞増殖機構について解析した.われわれが樹立したhGCSF-Tg系では骨髄系,赤芽球系,巨核球系のみならずT,Bリンパ球系の過形成がみとめられた.これは最も未分化な造血幹細胞から各種の前駆細胞までの著明な増殖によるものであることが判明した.因みに、本hGCSF-Tg系ではhG-CSF遺伝子が造血細胞および造血環境の両方で発現していた.次に,幹細胞の増殖が血球あるいは造血環境のどちらに,より強く影響されているかを明らかにするために,対照マウスとの骨髄移植実験を行なった.その結果,幹細胞増殖には造血環境でのhG-CSF発現が重要であることが明らかとなった.また,hGCSF-Tgをレシピエントとした場合には,移植に最低必要とされる骨髄細胞数の1/5で骨髄が再構築された.この結果は,本hGCSF-Tgの造血環境がin vivoで有効に幹細胞の増殖分化を促進させ,骨髄抑制に拮抗しうることを示している.生体内での造血幹細胞増殖をプロモートしうる本hGCSF-Tgの脾臓よりストローマ細胞株GS細胞を樹立した.GS細胞は無血清培養で長期間にわたりマウス幹細胞を増殖させることが可能であり,さらにヒト芽球コロニー,混合コロニーを増殖させることが明らかとなった.以上の結果,われわれの確立したhGCSF-Tg系はマウスのみならず,ヒト造血機構の解析にも有用であることが明らかとなった.
日本統治下台湾・朝鮮の学校教育と周辺文化の研究

日本統治下の台湾や朝鮮では、学校教育を受けることのできる子どもたちは限られていた。その機会に恵まれた子どもたちでさえも、その期間は限定されていたが、子どもたちは学校以外でもさまざまな学びを経験したはずである。そこで私たちは学校教育以外の場で、子どもたちがどのような学びを経験したのか、その様相に焦点を当て多様性を明らかにした。例えば、社会教育(伝統教育機関、夜学や国語保育園など)、サブカルチャー(児童文学、紙芝居、ラジオ、労働、遊び)の中での彼らの学びである。資料としては、当時の政策文書や新聞雑誌、インタビュー調査の記録を用いた。研究の目的は日本統治下の台湾・朝鮮社会のなかで、学校教育と周辺文化がどのような関係・構造で機能していたかを明らかにすることにある。初年度の研究実施計画は、(1)資料調査及内容分析、(2)聞き取り調査、(3)合宿研究会、(4)拡大合宿研究会、(5)グループ研究会をそれぞれ行うことであった。(1)はメンバー各自で進められた。資料調査は台湾(中央図書館台湾分館、台南図書館、台湾大学図書館他)、大韓民国(国立国会図書館、慶北大学校、済州大学校他)、中華人民共和国(上海図書館他)、国内(国立国会図書館、国際子ども図書館、日本女性学習財団他)で行われ、現在、内容分析中である。(2)はメンバー中5名が台湾(台北、梅山)、大韓民国(済州島)で個別に実施した。また、メンバー中4名が在日朝鮮人画家呉炳学氏の「呉炳学88歳大回顧展」(豊橋美術館)を見学し、講演会に参加、または個別に話を伺った。(3)、(4)については、第1回目の合宿研究会(東アジア教育文化史研究会)を7月2日、3日にホテルアウィーナ大阪にて行った。研究代表が科研の全体計画について説明した後、メンバー各自(11名全員参加)がこれまでの研究を紹介するとともに、本科研でのテーマや研究計画を発表し、意見交換の時間をもった。第2回目の合宿研究会(東アジア教育文化史研究会)は1月7日、8日に大阪経済法科大学麻布台セミナーハウス(東京)で行った。メンバー各自(11名全員参加)による進捗状況報告のほか、李正連、宮崎聖子、弘谷多喜夫、佐野通夫、佐藤由美の5名が研究発表を行った。(5)ではフィールドワークを兼ねた研究会が2度行われた。1回目は玄善允の企画により大韓民国済州島にて(8月24日29日、メンバー5名が参加)、2回目は佐藤由美の企画により台湾(台北・梅山・台南)にて(12月22日25日、メンバー3名が参加)で実施している。最終年度を迎え、11月に「日本統治下台湾・朝鮮の学校教育と周辺文化」をテーマに公開のワークショップを行った。4本の報告「植民地朝鮮における不就学児童と夜学」、「植民地期台湾における幼児と日本文化ー国語保育園を中心にー」、「ラジオが教えた日本語ー学校教育の周辺での日本語教育ー」、「日本統治下台湾における書房と公学校ー1933年1945年までを中心にー」があり、それぞれにコメンテーターによる論点の整理や関連事項の補足などが行なわれた。全体討論では、「学校教育」と「周辺文化」の関係性について議論になった。本共同研究では、学校教育の周辺にあり、子どもたちが日常の中で遭遇する紙芝居、ラジオ、児童雑誌、音楽、さらには漢文教育などを周辺文化と位置づけていた。その周辺文化と学校教育はどのような関係にあったかということなのだが、学校教育に取り込まれる周辺文化があったのではないかという視点が示され、その諸相が見えて来た。1月には最後の全体研究会を行った。3年間の研究活動の成果を各自が論文にして持ち寄り発表し合った。ここでの議論をもとに各自が加筆・修正を行い論文を完成させた。3月に研究成果報告書『日本統治下台湾・朝鮮の学校教育と周辺文化の研究』(221頁)を発行した。報告書の構成は「論文」、「資料」、「活動記録」となっており、資料には、学校教育と周辺文化に関するインタビュー記録を収録した。5名の方にインタビューに応じていただいたが、都市と農村の違い、日本人のいる地域とそうでない地域の違いなどが浮き彫りになってきた。報告書巻頭の佐藤由美「<序説>日本統治下台湾・朝鮮の学校教育と周辺文化」がそれぞれの論文の本共同研究における位置づけを説明している。本共同研究からは、学校教育や社会教育という研究上の枠組みを優先するのではなく、子どもの日常的な生活空間全体を包括的に捉える眼差しの重要性を学んだ。平成24年度の研究計画は、1初年度の資料調査や聞き取り調査を継続して行うこと。2前半期の合宿研究会では、学校教育及び社会教育を担当するメンバーによる研究発表を行うこと。

3後半期の合宿研究会では、周辺文化を担当するメンバーによる研究発表を行うとともに、近接領域の研究者(海外を含む)を招いて勉強会を行うこと。4聞き取り調査のテープ起こしや記録の作成作業を行うこと。の4点にあった。1については、メンバー11名のうち10名が台湾、大韓民国、国内に資料調査及び聞き取り調査に複数回出かけている。主な資料調査先は台湾の中央図書館台湾分館、大韓民国の国会図書館、国立中央図書館等である。聞き取り調査については、大韓民国で夜学経験者、元教員、高齢女性にそれぞれの学校や労働、遊びの経験を聞くインタビューをメンバーが行った。台湾では高齢者が集う機関を訪ね、約30名の高齢者に少年少女時代の経験を語ってもらう機会をもった。同時に個別のインタビューも行っている。また、国語保育所の教員経験のある日本人や少年時代を朝鮮で過ごした日本人へのインタビューも行った。12月にはメンバーのうち4名が台湾に出かけ、近接領域の研究者を訪問し交流の機会をもった。2については、メンバー各自が進捗状況報告を行うとともに、学校教育、社会教育を担当するメンバーの報告に多くの時間を割き、意見交換を行った。近接領域の研究者(台湾をフィルドにし、資料調査、聞き取り調査を精力的に行っている教育史研究者)をこの時に招き、お話を伺うと同時に資料の提供を受けた。3については、メンバー各自が進捗状況報告を行うとともに、周辺文化を担当するメンバーの報告に多くの時間を割き、意見交換を行った。最終年度の研究計画や報告書の作成についての話し合った。4については、各自がインタビュー記録を作成している。テープ起こし(日本人への聞き取り・朝鮮)も1本ある。研究の進捗状況については研究実績の概要で述べたとおりおおむね順調に進展していると言える。研究計画に示しながらも実現できなかったのは、拡大合宿研究会にゲストを招き、専門的な知見を得ることができなかったことである。これは日程調整が難しかったためで、次年度には実施の予定である。また、聞き取り調査も難航している。これは、インタビューに応じてくださる対象者が高齢化していることに依るためだが、次年度も引き続き努力したい。25年度が最終年度であるため、記入しない。上記の研究実績の概要で研究計画に照らし合わせた実績を述べたとおり、自己点検の結果、研究計画はおおむね順調に進展していると判断している。その理由として、まず年に2回の合宿研究会にメンバー全員が集まり情報交換を行っていることが挙げられる。メンバーの専門領域が多岐に亘っているため、資料調査のうえでも、聞き取り調査のうえでも新たな情報、視点に出会うことができ、それぞれの研究を進めるうえで役立っている。また、関係領域の研究者と交流することで貴重な知見を得ることができた点も大きい。例えば、夏の合宿研究会では台湾で数多くのインタビューを行っている研究者を招いたことで、インタビューの手法についても学ぶことができた。12月にはメンバーの一部が訪台したが、児童文学の専門家からはインタビューの対象者や紙芝居の研究者の紹介を受け、その後の研究交流が活発になった。(当初は1月の研究会でも児童文化に関する研究者も招く予定であったが日程調整ができず断念した。)さらに、メンバーの一人が関係領域の研究会情報をメンバー全員に流している。関係資料やテレビ番組の紹介なども発信されるため大変役立っている。
「モアレ」を利用した物性制御の第一原理的研究

平成29年度に引き続き、モアレを利用した熱伝導性の制御を研究するために、必要なコードの開発を続けた。熱伝導性を知るには、モアレが生じた系における原子の運動について、詳しく調べる必要が有る。最終的には、第一原理的な電子状態計算を用いて各原子に働く力を正確に計算し、その力が働いた場合の運動方程式を解く計画である。しかしながら、第一原理的な電子状態計算は、特にモアレが生じているような巨大な系において、電子の個数があまりにも多く、莫大な時間と計算機資源を消耗してしまう。そこでまず、経験ポテンシャル法に基づく古典的、半定量的な分子動力学法を用いてモアレを生じた系における原子の運動を調べ、研究の見通しをたてることが必要だと考え、現在も、面内の原子間相互作用(共有結合)と面間の原子間相互作用(ファンデルワールス力)の両方を、半定量的に記述することのできる経験ポテンシャルと、超多原子の運動を効率的に解くための超並列計算プログラムの開発を進めている。この内、面間の原子間相互作用(ファンデルワールス力)の計算部分は、ほぼコードを完成した。平成31年度は、面内の相互作用(共有結合)を記述するコードの作成を進めること、面間の原子間相互作用を記述するコードと面内の原子間相互作用を記述するコードを融合すること、さらにコード全体を並列計算プログラムに書き直す作業を進めたい。また平成30年度の計画では、分散関係のアンフォールドについても調査研究を進める予定であったが、進捗が遅れている。これについても並行して研究を進めて行く計画である。モアレを利用した熱伝導性の制御の研究を進める上で避けることのできない、経験ポテンシャルの作成と、分子動力学計算プログラムの作成が、未だ途上であることから「やや遅れている」と判断する。約1年前、Nature誌にモアレを生じた系で、ねじれ角に依存して超伝導が現れるという実験報告が初めてなされ、研究当初には想定していなかった側面(超伝導)からも「モアレを利用した物性制御」を調べる必要が生じている。この件に関して、現在も情報収集の段階であり、研究が進んでいない。Nature論文においては、非フォノン機構による超伝導であろうという示唆がなされている。しかしながらモアレを生じた系の運動方程式を解き、フォノンを調ベることは、超伝導の機構をはっきりと特定する為にも不可欠な情報であると考えている。引き続き、面内の原子間相互作用(共有結合)と面間の原子間相互作用(ファンデルワールス力)の両方を、半定量的に記述することが出来る経験ポテンシャルの作成を進める。原子数の比較的には少ない系で第一原理計算および実験の結果を再現するように経験ポテンシャルを作成し、作成したポテンシャルを原子数の多い系に適用し、結果を検討する。ポテンシャルを確立した後、まずモアレを生じた系におけるフォノン分散について調べる。この時に、実験との比較の為にはフォノン分散のバンドをアンフォールドする理論とプログラムを作成する必要がある。次に、モアレを生じた系における熱伝導の分子動力学シミュレーションを行う。得られた結果を、フォノン分散に関する知見を利用しつつ解析する。このような古典分子動力学によって、モアレを生じた系における熱伝導性の物理について見通しを立てておけば、第一原理計算による分子動力学法を使ってその信頼性を確保する時のコストを必要最小限に抑えることができる。研究初年の本年度は、「物質のスピン構造(磁性)が、物質のモアレ模様をどのように反映するのか」を調べる為、グラフェン2枚を互いに逆方向へとねじって積層した系から帯状に切り出した「ねじれ積層した2層グラフェン-ナノリボン」のスピン構造を第一原理計算の局所スピン密度近似(LSDA)で調べた。1枚のグラフェン-ナノリボンにおいてはzigzag型の端に特異な局在電子状態(以下、端状態と表記)が現れ、端状態がスピン分極する(磁性を発現する)事が知られている。2枚のグラフェン-ナノリボンを積層した場合、リボン間の相互作用によって両リボンの端状態同士が再混成し、端状態のスピン分極も影響を受ける。リボン同士の積層がAA型の場合には混成が大で磁性が抑制され、AB型の場合には混成が小で磁性が抑制されにくいことが知られているが、リボン同士の積層がねじれを伴う場合のスピン構造計算はこれまでになされていない。その理由の1つは、ねじれを伴うグラフェン-ナノリボンの第一原理計算はコストが大きく、通常の平面波法では現実的な時間で計算を実行する事ができないからである。今回、我々がこれまで独自に開発してきた実空間法による第一原理計算を適用する事で「ねじれ積層した2層グラフェン-ナノリボン」の大規模スピン構造計算に成功した。ねじれ積層はモアレ模様を生み出し、リボンの中でも場所によってリボン同士の積層構造が異なる。結果、AA積層した箇所では磁性が抑制され、AB積層した箇所では磁性が発現するという予想通りの結論を得た。今回の計算により「物質のモアレ模様が、物質のスピン構造に反映する」という具体例が初めて発見された。尚、研究上のデータを保存しておく為の大規模な外付けハードディスクを購入する必要がなくなった為、未使用金が発生した。しかし、研究の遂行上には支障はない(それを代替するサーバを利用する事ができた)。全体として、研究課題はおおむね順調に進展している。

ただし、申請時の計画では初年度および2年目には「モアレの物質科学」(さまざまな物質種の原子レベル薄膜物質を、モアレが生じる形で積層した時の電子構造と原子構造を調べて、比較対照すること)を目標としていたが、実際には「スピン自由度とモアレの相関」(申請時には3年目以降に計画していた)を先に調べ始めている。グラフェン-ナノリボンにおいては端状態のスピン自由度とモアレが強く関係するであろうという、申請時には想定していなかった新しい着想を早期に研究へと移し結果を報告することが、学術の発展上、より重要な事だと判断したからである。本年度は、グラフェンを2枚重ねた場合のエネルギーが、2枚を互いに逆方向へとねじる角度の関数としてどのように振る舞うのかを調べた。先行研究は複数例ある。ある研究はエネルギーがねじれ角の関数として振動すると報告している。また別のある研究データには、そのような振動が見られない。両者の違いが何に起因するのか、対応する実験では何が予測されるのかといった考察が、一切なされていなかった。本年度の研究では、まずは前者の先行研究を再現すべく「グラフェン円盤を2枚重ねてから互いに逆方向へとねじった系を,経験ポテンシャルで調べた計算」を開始した。必要なプログラムのコーディングからスタートして先行研究のデータを再現し、確かにエネルギー振動があることを確かめた。続いて得られた結果を解析することによって、次のような新しい知見を見いだした:エネルギー振動の起源は、モアレ模様である。グラフェン2枚を重ねて互いに逆方向へとねじった系では、2枚の原子層の重なりが「ある場所では局所的にAA積層」「別のある場所では局所的にAB積層」のように、場所に応じて異なる。つまり積層にモアレがある。グラフェン2枚のモアレ模様は、全体として三角格子をなす。この三角格子のスケールが、ねじれ角に応じて変化する。2枚のグラフェンの重なり方の中で、AA積層だけが特異的に高エネルギー、他の積層たちはそれほどエネルギー差が無い。グラフェン円盤2枚を重ねた系からにおいては、ねじれ角を変化させるとモアレ模様のスケールが変化し、対応してAA積層の箇所が占める割合が変化する。AA積層の割合が少ないほど安定、多いほど不安定なのであるから、ねじれ角の関数としてエネルギーが振動することになるのである。この効果は系に端がある限り、系のサイズとは無関係に存在する。先行研究の結果が様々であるのは、計算モデルに端が有るか無いかを反映すると考えられる。申請時の計画で初年度および2年目に計画していた「モアレの物質科学」(さまざまな物質種の原子レベル薄膜物質を、モアレが生じる形で積層した時の電子構造と原子構造を調べて、比較対照すること)はおおむね順調に進んでいる。しかしながら、来年度(3年目)以降に計画していた「モアレと熱伝導性」「モアレと磁性」「モアレと電気伝導性」の研究を開始するための準備(必要なプログラムの開発)が当初の想定よりは遅れている。その為に、全体としては「やや遅れている」と報告する。モアレを利用した熱伝導性の制御を研究するために、必要なコードの開発を続けている。熱伝導性を知るには、モアレを生じた系における原子の運動について、詳しく調べる必要が有る。最終的には、第一原理的な電子状態計算を用いて各原子に働く力を正確に計算し、その力が働いた場合の運動式を解く計画である。
新規Ａｋｔ基質Ｇｉｒｄｉｎファミリー分子の制御による動脈硬化抑制の試み

Aktによりリン酸化を受け、アクチン細胞骨格のリモデリングを制御すると報告されている分子Girdinと、そのファミリー分子であるGipieの血管系の制御機能に関して検討を行った。まず、Girdinの血管透過性調節機構における役割を検討した。HUVECを培養して形成した血管内皮細胞のmonolayerでVEGF刺激を行ったところ、Girdinをノックダウンした細胞では、adherens junctionの乖離が抑制されていることを発見した。また、Girdinのノックダウンでは、VEGF刺激後のp120-cateninとVE-cadherinの乖離が抑制されていた。これに伴い、GirdinをノックダウンしたHUVECでは、VEGF刺激により誘導されるFITC-dextranの透過性が低下していた。これらのことから、Girdinは血管内皮の透過性の制御に関与していると考えられた。そのメカニズムとして、我々は、small GTPaseであるR-RasがVEGF刺激で活性化され、Girdin、およびVE-cadherinと複合体を形成し、VE-cadherinのrecyclingを制御していることを発見した。さらに、我々は、Girdinのファミリー分子であるGipieの血管損傷後の新生内膜形成過程における機能を解析した。Gipieは分泌型の血管平滑筋細胞に発現を認め、ゴルジ体とERに局在していた。Gipieは新鋭内膜形成にともなうER stressにより、発現が上昇し、新生内膜細胞の産生するコラーゲンの正常な成熟化、細胞死の制御に関与することが明らかとなった。ラット頸動脈バルーン擦過モデルでは、Gipieのノックダウンにより、新生内膜厚は、アポトーシスの増加を伴い、有意に減少した。新規小胞体ストレス制御分子であるGipieの血管平滑筋細胞での機能解析を中心に研究を行った。Gipieは増殖能と旺盛なタンパク分泌能を有している分泌型の血管平滑筋細胞で発現を認め、細胞内では小胞体とゴルジ体に局在していた。しかし、増殖能、タンパク分泌能に乏しい収縮型の血管平滑筋細胞では発現を認めなかった。分泌型の血管平滑筋細胞にタプシガルギンで小胞体ストレスを惹起するとGipieは経時的に発現が増加していった。GipieをsiRNAを用いてノックダウンすることで、血管平滑筋細胞での機能を解析した。GipieのノックダウンによりJNKのリン酸化の増強を生じることが判明した。XBP-1のスプライシングやeIF2αのリン酸化、CHOPの発現量には有意な変化は認められなかった。これらの結果から、Gipieは小胞体ストレスに際して発現が誘導されるタンパクであり、IRE1αの下流のシグナル伝達に関与して、JNKの活性化を調節していると考えられた。次に血管平滑筋細胞でGipieの生物学的意義について検討した。血管平滑筋細胞にアスコルビン酸を作用させるとコラーゲンの産生・成熟が促進される。この過程ではコラーゲンの前駆体が小胞体で適切な修飾を受けたのちに切断されることが必要であることが知られている。Gipieのノックダウンにより、アスコルビン酸で誘導される成熟したコラーゲン産生が低下していた。また、Gipieのノックダウンにより、血管平滑筋の増殖が低下し、タプシガルギン負荷で誘導されるアポトーシスが亢進していることも判明した。これらの結果から、Gipieは分泌型の血管平滑筋細胞に選択的に発現していて、小胞体機能、細胞増殖、アポトーシスに関与していると思われた。血管平滑筋細胞におけるGipieの生物学的意義は順調に検討することができ、一定の結果を得ることができた。GipieはIRE1の下流でJNKの活性化を制御することが判明したが、同じくIRE1の下流にあるXBP-1のスプライシングは影響を受けなかった。この再現性を確認するために予想よりも時間がかかった。

いくつかのIRE1のリン酸化抗体でGipieのノックダウンによりIRE1のリン酸化に違いを生じないか検討したが、明確な差は認められなかった。この再現性も確認するために予想よりも時間を要した。ラット頸動脈のバルーン擦過モデルでのGipieによる遺伝子治療の効果も検討する予定であったが、疾患モデル作成に関していくつか問題が生じ、解決に時間を要した。現在判明している事実からは、GipieがIRE1の下流でJNKの制御にのみ選択的に作用しているメカニズムは解明するのが困難と思われた。今後は、予定通りin vivoでのGipieのノックダウンが、血管損傷後の新生内膜形成に及ぼす影響を検討していきたい。本年度はラットの頸動脈バルーン擦過モデルでの、Gipieのノックダウン、過剰発現が新生内膜形成に与える影響も評価する予定だった。ラット頸動脈バルーン擦過モデルで安定した新生内膜形成が得られるまでに当初予定より時間を要した。また、アデノウイルスベクター注入後の血管で、コントロール、Gipieノックダウン群の両者で血栓を生じる問題が発生した。注入するアデノウイルスベクター溶液の量を調節することで解決し、最終的には良好なノックダウン効率、Gipieの発現量を維持したモデルを作成できた。これらの問題のために、当初予定より研究が遅延した。現状ではラット頸動脈バルーン擦過モデルに関する諸問題も解決している。前述の問題により当初予定より遅延は認めているものの、現在は順調に研究は進んでいる。26年度はバルーン擦過モデルの作成、新生内膜厚の評価、細胞のアポトーシス、増殖能を検討するためのTUNEL染色やPCNAの免疫染色などを進めていく予定である。25年度未使用分の助成金はこのために必要になるラット、フォガティバルーンカテーテル、各種試薬の購入に充てる予定である。
読字障害児のためのイラスト漢字を用いた漢字読み習得支援プログラムの開発

漢字の読みにおいては、音韻を処理するプロセスのみならず意味を処理するプロセスでも情報が処理されるといわれる。そのような漢字の特徴を読字障害の治療教育において最大限に活用するために、本研究は、小学校に配当された1006個の漢字すべてについて、漢字とそれに関連するイラストを重ねた「イラスト漢字」を考案・作成し、それを教材として読字障害をもつ子どもたちに読みの訓練を実施し、その教材と訓練法の効果を明らかにすることを目的とした。訓練では、漢字部分とイラスト部分をトレースした後にその漢字を口頭で命名し、漢字の下に読みをひらがなで書く練習を数回繰り返した。ある読字障害児における結果は、漢字のみのトレーシング練習での8セッションに渡る読みの平均正答率が10.3%、「イラスト漢字」のトレーシング練習での読みの平均正答率が75.9%であった。このことは、「イラスト漢字」でトレーシング練習を行ったことのある漢字の形態を視覚的に知覚したときに、関連するイラスト部分をイメージし、対応する表象的意味が想起され、その意味に対応する音韻が喚起されやすくなる可能性を示唆した。また、書字障害児における結果も、「イラスト漢字」トレーシング練習による書きの平均正答率が漢字のみのトレーシング練習よりも数倍高く示された。このことは、書きにおいても音韻に対して表象的意味とイメージが喚起され、それに対応する漢字の形態が想起されやすくなる可能性を示唆した。最終年度は、本方法による訓練プログラムを完成させ、出版の目途を立て、具体的に読字障害の漢字読み習得の訓練法、ならびに書字障害の漢字書き習得の訓練法に確かな選択肢を加える段階に至った。そのような漢字の特徴を読字障害の治療教育において最大限に活用するために、本研究は、小学校に配当された1006個の漢字すべてについて、漢字とそれに関連するイラストを重ねた「イラスト漢字」を考案・作成し(当該年度に、うち半数以上を完成している)、それを教材として読字障害をもつ子どもたちに読みの訓練を実施し、その教材と訓練法の効果を明らかにすることを目的とする。訓練では、漢字部分とイラスト部分をトレースした後にその漢字を口頭で命名し、漢字の下に読みをひらがなで書く練習を数回繰り返す。漢字の形態を見ただけでイラスト部分をイメージし、対応する表象的意味を想起してその意味に対応する音韻が喚起されることが期待される。論文として発表したある読字障害児における結果は、漢字のみのトレーシング練習での8セッションに渡る読みの平均正答率が10.3%、「イラスト漢字」のトレーシング練習での読みの平均正答率が75.9%であった。このような効果は臨床レベルでは経験されることがあるが、学術的研究としては確立されていない。本方法による訓練効果が明らかにされて訓練プログラムが完成すれば、読字障害の漢字読み習得の訓練法に確かな選択肢を加えるという意義が得られる。また、本研究の成果には、読字障害をもつ人の意欲や自尊感情を十分に維持しながら、漢字読みの習得を飛躍的に向上させるにあたっての重要性が存すると考えられる。
脳切片培養系を用いた依存性薬物誘発精神障害の分子-神経機構の解明

依存性薬物による精神障害に重要なドパミン神経を、ラットの脳切片を培養することで再現し、覚醒剤、コカイン、モルヒネなど異なるタイプの依存性薬物の反復処置によって、共通してドパミン神経の活動が異常に高まることを明らかにした。また、違法ドラッグMDMAの主な作用点であるセロトニン神経を、同じく脳切片を用いて再現し、MDMAを長期間処置しておくと、急性処置時とは異なるメカニズムでセロトニンの遊離が顕著に高まることを発見し、そのメカニズムを明らかにした。研究代表者らが作製した腹側被蓋野/側坐核/前頭前皮質切片からなる中脳皮質辺縁脳切片共培養系を用いて、覚醒剤メタンフェタミン(METH)の他、他のタイプの依存性薬物であるコカイン、モルヒネの反復処置によっても、同様にドパミン遊離の増強現象(ドパミン神経感作)が惹起され、体現象が多くの依存性薬物に共通する現象であることを明らかにした。また、METH反復処置によるドパミン神経感作の形成が、NMDA受容体拮抗薬や、ドパミンD1/D2受容体拮抗薬の同時処置によって抑制され、これまでの行動実験等によって明らかにされてきたメカニズムと共通の性質を有していることを明らかにした。一方、縫線核セロトニン神経を含む中脳切片培養系において、MDMA急性処置による5-HT遊離は主にセロトニントランスポーター(SERT)の逆輸送(efflux)に起因するものであったのに対し、MDMA長期処置後の5-HT遊離増強現象(セロトニン神経感作)は、Ca2+非存在下あるいはCa2+チャネル阻害薬により抑制されたこと、培養切片から調整したシナプトソームを用いた[3H]5-HT efflux実験においては増強現象が認められなかったこと、さらにシナプス小胞に存在するVMAT2の形質膜に融合する割合が増加していたことから、SERTを介したeffluxよりもCa2+依存性のシナプス小胞からの開口放出の増加が関与していることを明らかにした。さらに、Na+チャネル阻害薬テトロドトキシンやAMPAグルタミン酸受容体拮抗薬によって、セロトニン遊離増強現象が抑制されたことから、興奮性グルタミン酸神経を介したtrans-synapticなセロトニン神経活動の増強が関与することを明らかにした。一方、免疫沈降実験において、MDMA長期処置後にSERT,と相互作用するタンパク質を探索したが、今回の検討ではそのような候補は見つからなかった。本年度は、まず、縫線核セロトニン神経含有脳切片培養系を用いて、依存性薬物MDMAの持続的処置によるセロトニン遊離増強現象のメカニズムについて検討した。その結果、MDMA長期処置後の増強されたセロトニン遊離は、P/QタイプCa^<2+>チャネル阻害薬、テトロドトキシンやAMPA受容体阻害薬CNQXで阻害されるが、セロトニントランスポーター(SERT)阻害薬のシタロプラムでは阻害されなかった。またこの時、グルタミン酸の遊離量、AMPA受容体GluR1、GluR2の細胞膜上での発現量、リン酸化に変化は認められなかったが、AMPA受容体脱感作抑制薬シクロチアジドにより、セロトニン遊離は顕著に増強された。これらの結果から、MDMA持続的処置後には、AMPA受容体の早い脱感作が阻害され、刺激が持続した結果、活動電位/Ca^<2+>依存的なセロトニン開口放出が促進されたのではないかと考えられる。また、SERT阻害作用を有するSSRI(シタロプラム、パロキセチン、フロキセチン)や三環系抗うつ薬(デシプラミン、イミプラミン)、SNRI(ミルナシプラン、ベンラファキシン)等でも同様のセロトニン遊離増強現象が惹起され、この作用はセロトニン自己受容体の5-HT_<1A>や5-HT_<1B>受容体の脱感作には起因せず、MDMAと同様にAMPA受容体刺激により引き起こされていることを明らかにした。一方、セロトニンそのものや幾つかの選択的セロトニン受容体作動薬、あるいは四環系抗うつ薬(ミアンセリン)やNaSSA(ミルタザピン)などではこのような現象は認められなかった。これらの結果を総合して考え合わせると、SERTはトランスポーターであるにもかかわらず、何らかのシグナル分子として機能し、細胞内外のセロトニン動態を制御するだけでなく、セロトニン神経そのものに対してAMPA受容体の機能亢進等の機能変化をもたらした可能性が考えられる。
骨盤内リンパ管トレースシステムを用いた下部直腸肛門管リンパ管マップの開発

当該研究「下部直腸肛門管リンパ管マップの開発」に関し、2018年度は下部直腸肛門管のリンパ管に関し、インドシアニングリーン(ICG)蛍光法による術中リンパ管観察および顕微鏡での微細解剖観察を行った。術中ICG蛍光法による術中リンパ管観察は、術直前に肛門管粘膜下層にICGを注入し、腹腔鏡手術の術中にICGの流れを観察することができる赤外観察機能付きの腹腔鏡で観察した。下部直腸と肛門挙筋の接着部が確認できる視野でICGの観察を行ったところ、下部直腸の筋層から肛門挙筋表面に広がるリンパ管を認めたため、下部直腸と肛門挙筋の間にリンパ管の交通が存在する可能性が考えられた。顕微鏡での下部直腸肛門管領域リンパ管観察は、解剖献体および下部直腸癌の手術切除標本を研究に用い行った。リンパ管は免疫染色という方法で顕微鏡で観察した。免疫染色には、ポドプラニンという、リンパ管内皮に染色性を有する抗体を用いた。ICGで観察した部位を顕微鏡下に観察したところ、下部直腸の縦走筋という筋の筋層から連続して肛門挙筋の表面に広がる線維を認め、同線維内にポドプラニンに染色性を有するリンパ管を認めた。また、肛門挙筋や外肛門括約筋内には、縦走筋から線維が入り込んでおり、入り込んだ線維内にリンパ管が確認された。ICG蛍光法と顕微鏡下観察から、下部直腸から肛門挙筋表面に連続するリンパ流の存在が確認された。この情報から、下部直腸癌に対する適切な術式について考察することが可能になると考えられる。現在、当該研究「下部直腸肛門管リンパ管マップの開発」に関し、以下の実験を行っている。実験内容および進捗状況は以下の通りである。1手術切除標本および死後早期解剖献体に対する免疫組織化学法およびリンパ管トレーサー注入による下部直腸肛門管機能的リンパ流の検討:現在、トレーサーとして墨汁(Indian Ink)を肛門管粘膜下層に注入し実験を行っている。免疫組織化学法での同部のリンパ管配置の確認は順調にできているが、トレーサーに関しては、顕微鏡下で確認したところ、墨汁は主に血管への移行性が高いため、現在トレーサーを再検討中である。墨汁より粒子が小さい微粒子活性炭がリンパ管移行性が高いとする報告があり、今後微粒子活性炭をトレーサーとして再度実験を行う。2インドシアニングリーン肛門管注入による術中肛門管周囲リンパ流の検討:下部直腸癌手術症例において、倫理委員会での承認を得た上で患者の同意を得て、術直前に肛門管粘膜下層にインドシアニングリーンを注入し、術中に肛門管および肛門挙筋周囲のリンパ流を近赤外観察が可能な腹腔鏡で観察した。有害事象はなく、同部のリンパ流を確認することが可能であった。引き続き解剖献体を用いた下部直腸肛門管周囲の構造検討および手術切除標本・死後早期解剖献体に対する免疫組織化学法およびトレーサー注入による下部直腸肛門管リンパ管マッピングおよび機能的リンパ流に関する検討を行う。また2018年度にデータ収集を行ったインドシアニングリーン肛門管注入による術中肛門管周囲リンパ流評価のデータと合わせ、イラストレーティングソフトを用いて下部直腸肛門管周囲リンパ管配置に関し図示する。上記のデータを文献的考察を加え、学会発表および学術誌への投稿を行う。現状の問題点として、リンパ管特異的な移行性を有するトレーサーが確定できていない点がある。過去文献より、微粒子活性炭が候補に挙がるため、今後微粒子活性炭をトレーサーとしたリンパ流の検討を行う予定である。

免疫組織化学法での同部のリンパ管配置の確認は順調にできているが、トレーサーに関しては、顕微鏡下で確認したところ、墨汁は主に血管への移行性が高いため、現在トレーサーを再検討中である。墨汁より粒子が小さい微粒子活性炭がリンパ管移行性が高いとする報告があり、今後微粒子活性炭をトレーサーとして再度実験を行う。2インドシアニングリーン肛門管注入による術中肛門管周囲リンパ流の検討:下部直腸癌手術症例において、倫理委員会での承認を得た上で患者の同意を得て、術直前に肛門管粘膜下層にインドシアニングリーンを注入し、術中に肛門管および肛門挙筋周囲のリンパ流を近赤外観察が可能な腹腔鏡で観察した。有害事象はなく、同部のリンパ流を確認することが可能であった。引き続き解剖献体を用いた下部直腸肛門管周囲の構造検討および手術切除標本・死後早期解剖献体に対する免疫組織化学法およびトレーサー注入による下部直腸肛門管リンパ管マッピングおよび機能的リンパ流に関する検討を行う。また2018年度にデータ収集を行ったインドシアニングリーン肛門管注入による術中肛門管周囲リンパ流評価のデータと合わせ、イラストレーティングソフトを用いて下部直腸肛門管周囲リンパ管配置に関し図示する。上記のデータを文献的考察を加え、学会発表および学術誌への投稿を行う。現状の問題点として、リンパ管特異的な移行性を有するトレーサーが確定できていない点がある。過去文献より、微粒子活性炭が候補に挙がるため、今後微粒子活性炭をトレーサーとしたリンパ流の検討を行う予定である。インドシアニングリーン観察用の赤外観察システムに関し、弘前大学医学部附属病院手術室の腹腔鏡システムを使用し代用可能であったため、次年度への繰り越しが可能となった。抗体購入費等物品費として次年度以降に使用する予定である。