hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
藻類利用可能懸濁態リンの藻類増殖試験と連続抽出による定量法開発と流出負荷量評価

M塩化水素溶液を用いて順次振とう抽出し、最後に過硫酸カリウム分解を行い全リンの抽出を行う手法を採用した。それぞれの抽出溶液は、リン酸態リン濃度を定量するとともに、過硫酸カリウム分解後のリン濃度も測定した。この連続抽出法によって、森林出口と水田地帯の下流で、降雨時に河川に流出する懸濁物質を分画したところ、水酸化ナトリウムで抽出されるA1結合無機リン、微生物体に含まれるリンやフミン酸リンの比率が高かった。また、降雨初期には、水田地帯下流においてBD溶液で抽出されるFe, Mn結合無機リンの比率が高くなった。流域の森林土壌、水田土壌等についても同様の分画を行った結果、Fe, Mn結合無機リンは水田から流出していることがわかった。懸濁態リンの連続抽出法を長良川の本川と支川の計6ヶ所で低流量時と降雨に伴う流量増大時に採水したサンプルに適用し、画分別の濃度と比率を求めた。また、流出源と考えられる流域内の森林と水田土壌及び培養藻類についても同様に連続抽出を行った。連続抽出法により懸濁態リンは8つに分画することができたが、それぞれの画分で抽出される代表的な性質から、高反応性吸着リン、低反応性吸着リン、Fe,Mn結合無機態リン、塩基可溶性無機態リン、易分解性有機態リン、Ca結合無機態リン、難分解性有機態リン、抽出不可能リンと名づけた。河川懸濁物、土壌、藻類ともCa結合無機態リン、難分解性有機態リン、抽出不可能リンの比率は低くなったが、比率の高い成分についてはそれぞれで特徴があった。森林土壌は、塩基可溶性無機態リン、易分解性有機態リンの比率が高く、水田土壌はFe,Mn結合無機態リンの比率が高くなった。また、藻類は、高反応性吸着リンと低反応性吸着リンの比率が高く、2つで全体の約70%を占めた。河川の低流量時の懸濁態リンの分画では、高反応性吸着リンと低反応性吸着リンの比率が降雨時に比べて高く、平水時の懸濁態リンは、流域内の土壌よりは藻類等の生物由来の比率が高いことがわかった。また、停滞域の長良川下流でこれらの比率が最も高くなり、藻類の増殖を反映する結果となった。降雨に伴う流量増大時には、これらの比率が低くなるが、支川によって森林土壌の比率に近くなるものと、水田土壌の比率に近くなるものに分かれて、河川によって降雨時の懸濁態リンの主要な流出源に違いが見られた。年間流出負荷量のうち、降雨時流出の占める比率を算定した。算定5年間の平均では、年間流出流量に対して流量の多い10日間の流出流量は21%であり、溶存態成分はほぼ流量と同じ比率であった。これに対して懸濁態成分は流量以上の比率を占め、懸濁態リンと懸濁態炭素は46%、懸濁態窒素は40%になった。20日間では流量の31%に対して懸濁態リンと懸濁態炭素は60%、懸濁態窒素は54%になり、全リンでは54%にもなった。このことは、高流量から20日間でリンについては年間の全流出負荷量の半分以上が流出することになり、降雨時の流出負荷量の大きさがわかる。河川流出懸濁態リンに連続抽出法を適用し8つに分画することができ、それぞれの画分で抽出される代表的な性質から、高反応性吸着リン、低反応性吸着リン、Fe,Mn結合無機態リン、塩基可溶性無機態リン、易分解性有機態リン、Ca結合無機態リン、難分解性有機態リン、抽出不可能リンと名づけた。森林土壌は、塩基可溶性無機態リン、易分解性有機態リンの比率が高く、水田土壌はFe,Mn結合無機態リンの比率が高くなったが、降雨時に流出する懸濁態リンは、塩基可溶性無機態リン、易分解性有機態リンの比率が高い場合と、Fe,Mn結合無機態リンの比率が高い場合に分かれた。降雨時に流出する懸濁態リンを、これら組成の違いにより、森林土壌と水田土壌に分けた場合、森林土壌の寄与率が5080%になった。
漆の植物資源としての持続的循環活用システム―調査と構築

漆(漆塗膜)は産地によって性能が大きく異なると言われているが、漆樹液に含まれる多糖類の生理活性や構造について詳細に研究した例はない。そこで本研究では、日本が多く輸入している中国湖北省、四川省、貴州省、およびそれらとは種類や性質が異なるが資源量の多いベトナム産漆樹液をそれぞれ実際に採取し、重合(乾燥)挙動や生成塗膜の評価を樹液に含まれるウルシオールモノマー、多糖類の構造と生理活性、ラッカーゼ酵素の含有量や構造などを基礎的に考察した。さらに産地による含有成分の違いや多糖類、ウルシオールの構造を明らかにし、最近、私どもが明らかにした漆多糖類の抗腫瘍活性など特異な生理活性について研究を行い、漆を循環型植物資源として次世代天然塗料や生理活性材料への応用も検討した。ベトナムのハノイ近郊、中国湖北省で漆樹液を採取し分析を行った。一般に漆多糖類のGPCでは採取後に空気で酸化され多糖類の主鎖が一部切断されて分子量の低下が起こるため2つのピークを示すが、ベトナムで採取した漆樹液から精製した漆多糖類のGPCではほぼ1つのピークを示した。一方でベトナム産の場合、採取後にすぐに処理しているために主鎖等の切断は少なくGPCでも1つのピークとして現れたと考えられる。NMRスペクトルでは中国産や日本産の漆多糖類とほぼ同じスペクトルを示し構造が似ていることが分かった。抗凝血作用、抗腫瘍作用、抗HIV作用など特異な生理活性が見出された。日本国内産で最も質の高い漆の1つである福島県会津産漆樹液を5月初旬(入梅前)に採取した。乾燥性、ウルシオール種類の定量、ラッカーゼ酵素活性測定、多糖類のNMRによる構造解析を行い、アジア産漆樹液の性質を解明するための比較試料とした。8月、日本が多くを輸入している漆産地のうち、乾燥性、漆感など性質の異なる中国南部およびベトナム産漆樹液を採取した。ベトナムは、アジアの主要な漆産地の1つであが、日本産や中国内陸部産より劣ると言われている。しかし詳細な成分分析や構造解析研究は報告されていない。そこで、中国、ベトナム産漆樹液数種類を採取し、成分分析、定量、構造解析、および重合性を調べた。樹液は、上海有機化学研究所で精製し日本に持ち帰り、多糖類の構造解析を行った。調査実施国:中国南部すなわち広西省の漆樹から樹液を採取し成分調査を行った。昨年度は中国江南地方およびベトナム産漆樹液を採取し多糖類の構造について調べ現在、国際専門誌に投稿し採択された。この結果からこれまでにあまり調査されていない中国南部の漆樹液について調査し東南アジア各国の漆樹液との比較試料とした。旅行経路:日本-上海-桂林(往復航空機)桂林からはバスを利用し東蘭まで乗車。中国・南部の漆は、東南アジア産と質的に似ていると言われているが、本格的な調査はされていない。そこで広西省で漆樹液を採取し、これまでと同じ方法による実験方法に従って、前年度採取した日本、ベトナムおよび中国南部産漆とNMRスペクトルや分子量など構造を比較検討した。基礎分析データとした。漆は、アジア原産の植物であり、私どもは、5年ほど前から各種研究助成金の援助によって漆樹液に含まれる多糖類に抗腫瘍活性、血液凝固促進作用、抗HIV活性など特異な生理活性があることを見出し、漆多糖類の構造と生理活性との関係を研究している。さらに中国の専門研究者(武漢大学・杜予民教授など)とのディスカッションを通じ、漆の資源循環活用システム構築の重要性を相互認識している。本研究では、これまでの研究を発展させて、研究例の少ないアジア産漆の生理活性や重合性、ウルシオール、ラッカーゼ酵素、漆多糖類などの成分を日本産漆(会津漆など)と比較することで性質の違いを明らかにして、循環型植物資源として持続的に高度有効利用することを目的とした。漆は、環境に敏感な植物であり社会的,経済的変化のために、現在、日本ではほとんど採取されず、需要の99%を中国などアジア諸国から輸入している。

しかし、採取後の処理や時間経過が不明であり、ラッカーゼ酵素の失活、ウルシオールモノマーや多糖類の含有量や生理活性の低下等の問題があり研究用としては使えない。漆は5月から9月にかけて採取される。漆(漆塗膜)は産地によって性能が大きく異なると言われているが、同じ基準によって客観的に評価した研究はない。そこで本研究では、日本が多く輸入している中国湖北省、四川省、貴州省、およびそれらとは種類や性質が異なるが資源量の多いベトナム産漆,樹夜をそれぞれ数種類ずつ実際に採取し、重合(乾燥)挙動や生成塗膜の評価を樹液に含まれるウルシオールモノマー、多糖類の構造と生理活性、ラッカーゼ酵素の含有量や構造などを基礎的に考察することを目的とする。さらに産地による含有成分の違いや多糖類、ウルシオールの構造を明らかにし、最近、私どもが明らかにした漆多糖類の抗腫瘍活性など特異な生理活性について研究を行い、漆を循環型植物資源として次世代天然塗料や生理活性材料への応用を調べた。
中世後期の都市と異端－フリブールのヴァルド派をめぐって－

今年度は、フリブールの市民登録簿IIを主な研究史料とし、1市民登録簿IからIIへの移行に関する研究成果の学会発表、2その研究成果についての論文の投稿、3都市外に居住しながら市民権を取得した、いわゆる市外市民の研究に取り組んだ。1申請者の史料分析により、文書の移行の際に転記された部分については、都市の有力者からヒエラルキー順に記録されたことが明らかとなった。さらに、市民登録簿に記された市民の職業からは、市民の身分や職業が市参事会選出や市民加入に影響していたことが明らかとなった。中世後期のフリブールにおける市民層は、都市貴族を中心とした閉鎖的な支配層と都市の発展に重要な役割を果たす多くの基幹産業従事者によって構成されていたと結論づけた。この研究成果を、2014年5月31日、6月1日に立教大学で行われた第64回日本西洋史学会ポスターセッションにおいて発表した。2また、この研究については、昨年度にドイツ語で論文を執筆したが、さらに修正を加え、スイスの学術雑誌Freiburger Geschichtsblaetterに提出した(回答待ち)。3市民登録簿IIに記録された市外市民に関する考察については、2015年3月6日フリブール大学において、Extraburgenses im spaetmittelalterlichen Freiburg (中世後期フリブールにおける市外市民)という題目で研究発表を行った。フリブールの市外市民の受け入れは非常に僅少ではあったが、領域支配と結びつきがあることを示唆した。26年度が最終年度であるため、記入しない。今年度の課題は、これまでの研究で取り上げた(1)ヴァルド派裁判の再考と(2)フリブールの都市文書に関する未刊行史料の収集、分析であった。(1)フリブールで二度にわたって行われたヴァルド派裁判については、法制史的観点から裁判の手続きを改めて考察した。異端は商人や市政の役職者を含む都市の広範な社会層から成り、とりわけフリブールの新興市民層を多数含んでいた。裁判手続きから、彼らが都市にとって排除すべき集団ではなく、むしろ都市の経済・市政にとって重要な役割を担い、都市にとっては保護すべき市民層であったことが明らかとなった。この研究成果を法制史学会中部部会第67回例会(9月29日)において、「中世後期西スイス地域における異端審問ーフリブールのヴァルド派裁判を中心にしてー」として発表した。(2)未刊行史料の分析結果から、第17回ワークショップ西洋史・大阪(5月26日)において、「中世後期スイスにおける都市社会の変容ーブリブールの市政と市民加入をめぐってー」という題目で発表を行った。この発表ではとりわけ15世紀初頭の都市役人選出に関するフェナー(旗頭)文書と未刊行である都市の市民登録簿から、経済的、政治的指導者層を形成する市民層は、中世後期には、より排他的な社会層へと変化する転換期を迎えていたことを明らかにした。さらに、未刊行史料を収集、分析するために8月にフリブール国立文書館を訪問した。非市民名簿や市民登録簿に関する目録等の未刊行史料を新たな史料として加え、市民登録簿の史料群を網羅的に分析することで中世後期の都市社会を明らかにしたいと考えている。この課題に取り組むため、市民登録簿1,2の史料と史料群の写真撮影、マイクロフィルムの分析、複写、関連する文献の収集にあたった。今年度の課題は、1フリブールの市民登録簿に関する史料論的考察、2市民登録簿IからIIへの移行の際に転記された部分についての考察であった。1史料論については、市民登録簿という史料類型の特徴、文書の作成と利用、その機能について考察を試み、「紙から羊皮紙へー中世後期フリブールの市民登録簿に関する史料論的考察ー」という題目で論文を執筆した。プリプールにおいては、神聖ローマ帝国の領域内で作成されたドイツ的な都市文書として位置づけられる市民登録簿に、フランス語圏に由来する公証人制度が融合し、正確で詳細な、スイスのドイツ語圏に類を見ない、より近代的な市民登録簿が生み出されたと結論づけた。2今年度は市民登録簿IIのフォリオ1から30までの考察を行った。この未刊行の史料を読解し、活字化するとともに情報のデータ化、分析を試みた。これまで、市民登録簿IIからIへの移行の際に、それまでの地区ごとの記録から年代順の記録方法への転換が行われたとされてきたが、申請者の調査によって、転記部分については都市の有力者からヒエラルキー順に記録されたことが明らかになった。この考察については、「Die Einführung des Zweiten Bürgerbuchs in Freiburg (1416) ; Die Analyse der Übertragungseinträge im Folio 1-30r.(フリブールにおける市民登録簿IIの導入ーフォリオ1から30r.における転記記録の分析ー)」という題目で論文を執筆した。この史料分析については、2014年5月31日6月旧に立教大学で行われる第64回日本西洋史学会においてポスター発表を行う予定である。8月初旬にはスイスのベルンとフリブールにおいて史料調査を行った。ベルンとフリプールの専門家の間で、上記の史料分析を報告し、この研究によって新たな知見が示されたと評価を得ることができた。現在は、12の論文を学術雑誌に投稿する準備を進めている。今年度は、フリブールの市民登録簿IIを主な研究史料とし、1市民登録簿

IからIIへの移行に関する研究成果の学会発表、2その研究成果についての論文の投稿、3都市外に居住しながら市民権を取得した、いわゆる市外市民の研究に取り組んだ。1申請者の史料分析により、文書の移行の際に転記された部分については、都市の有力者からヒエラルキー順に記録されたことが明らかとなった。さらに、市民登録簿に記された市民の職業からは、市民の身分や職業が市参事会選出や市民加入に影響していたことが明らかとなった。中世後期のフリブールにおける市民層は、都市貴族を中心とした閉鎖的な支配層と都市の発展に重要な役割を果たす多くの基幹産業従事者によって構成されていたと結論づけた。この研究成果を、2014年5月31日、6月1日に立教大学で行われた第64回日本西洋史学会ポスターセッションにおいて発表した。2また、この研究については、昨年度にドイツ語で論文を執筆したが、さらに修正を加え、スイスの学術雑誌Freiburger Geschichtsblaetterに提出した(回答待ち)。3市民登録簿IIに記録された市外市民に関する考察については、2015年3月6日フリブール大学において、Extraburgenses im spaetmittelalterlichen Freiburg (中世後期フリブールにおける市外市民)という題目で研究発表を行った。フリブールの市外市民の受け入れは非常に僅少ではあったが、領域支配と結びつきがあることを示唆した。26年度が最終年度であるため、記入しない。今年度の課題に着実に取り組み、その成果を発表することができた。また、8月の文書館訪問の際は、中世史家Kathrin Utz hemp氏とDavid Blanck氏に面会する機会を得た。これまでの未刊行史料の分析結果を報告し、とりわけ中世後期の市民権継承の変容に関する研究成果に一定の評価を得ることができた。先行研究の問題点や今後の課題について議論したことは、今後の研究に活かしていきたい。今年度の課題に着実に取り組み、2本の論文にまとめることができた。この研究成果については、スイスの専門家の間で報告し、一定の評価を得ることができた。また、2014年5月に日本西洋史学会でも研究成果を発表する予定である。さらに今年度は、この研究成果を雑誌に投稿を積極的に行っていきたいと考えている。非市民登録簿等の新たに加えた史料を含めて、プリブールの市民登録簿に関する史料群を網羅的に研究することが当面の課題である。未刊行史料を解読・データ化し、都市市政、職業地誌、社会地誌等様々な側面から検討し、中世後期の市民層を明らかにしたい。ブリブールの事例だけでなく、近隣諸都市の市民登録簿や都市文書についても比較検討すべきであると考えている。今後まず取り組むべき課題は、市民登録簿IIフォリオ30以降の史料の活字化と分析、市民に関する情報のデータ化を進めることである。さらに、市民登録簿の史料群や他の都市文書と照らし合わせて考察し、中世後期のフリブールにおける市民層とはいかなるものであったかを明らかにしたいと考えている。
刑事裁判における準備手続の研究

本年度は、当初の研究計画の通り、1)刑事裁判の準備手続に関する日本のこれまでの議論の流れを分析するとともに、2)アメリカの刑事手続きにおける公判前会議(Pretrial Conference)についての研究に従事した。合わせて、昨年度に調査研究を実施した、3)イングランド・ウェールズの刑事手続きにおける答弁指示聴聞(Plea and Directions Hearings)の研究をさらに進める作業を行った。具体的には、まず1)については、主に現在進行中の司法改革で議論されている準備手続創設の動向の把握と196070年代に議論された集中審理論について、主に研究した。さらに、日本の刑事裁判において当事者主義が導入される過程での、1950年代初期頃の邦文文献についても、調査を開始した。2)については、アメリカ連邦刑事手続について、刑事手続規則、判例の分析を行うとともに、当事者主義訴訟における公判前会議の機能について判事、研究者による論文を収集、分析した。さらに、今年度3月にアメリカ・ワシントンDCに赴き、連邦裁判所判事をヒアリングするとともに、Federal Judicial Centerで資料、情報等を収集した。また、ジョージタウン大学刑事法臨床プログラムのエーブ・スミス(Abbe Smith)教授からヒアリングを行い、手続上の性格、弁護士実務の実際を調査した。3)については、イングランド・ウェールズの公設弁護人オフィスの創設についての研究ノートをまとめた。また、実際のヒアリングをもとに、答弁指示手続のこれまでの歴史、具体的手続をまとめ、2年ほど前に出されたオールド報告書において、答弁指示手続がどのように扱われているのか、それについての各方面からの評価等を分析した。なお、3)の成果については、10月に日本刑法学会名古屋部会にて「刑事裁判の準備手続について-イギリスにおけるPlea and directions Hearingsを素材として-」のタイトルで報告した。2003年度は、主に、資料収集とイギリスにおける答弁指示審判(Plea and Directions Hearimg、以下PDHと略す)の研究に従事した。資料収集においては、日本から取り寄せられる文献をイギリスを中心に収集するとともに、日本における刑事裁判の準備手続に関する議論を分析するための論文を収集するように努めた。また、裁判員制度に関わる研究会や学会に積極的に参加した。年度末には、イギリス(イングランド)に渡り、現地にてPDHに関する調査を1週間ほどの日程にて行った。まず、ロンドン中心部にある王立裁判所を傍聴し、PDHの審理状況を観察するとともに、PDHと証拠開示の研究で著名な研究者と面会し、具体的な研究上のアドバイスやPDHに関する知見を得た。さらに、ロンドン郊外にあるスネアーブルック王立裁判所にて、判事に面会し、PDHの審理に関する実務についてインタビューを試みた。さらには、同裁判所にて、別の判事が審理するPDHに裁判官席の横にて傍聴し、10ケースほどの審理を観察することができた。同裁判所においては、PDHに関する実務上の資料や、PDHを含めた裁判官のケースマネージメントについて調査することもできた。一方で、イングランドで近年設立された公設弁護事務所を尋ね、ソリシターから弁護士実務からのPDHについてもインタビューすることができた。引き続き、次年度はアメリカ合衆国の手続を調査し、具体的な研究論文をも分析しながら、刑事裁判の準備手続の在り方、性格等についての研究を公表したいと考えている。
新しい物理教材「アドバンシング物理」を用いた授業実践による高大連携の試み

イギリス物理学協会(Institute of Physics, IoP)が開発したAレベル(1718歳)用の新しい物理カリキュラム「アドバンシング物理」の問題点や日本の教育への適用の可能性などを検討するため、京都と和歌山の教育学部大学教員と高校教員とで、「アドバンシング物理研究会(京都・和歌山)」を組織して研究活動を行った。研究会では、京都で公開講座の形で授業実践を行うことを計画した。公開講座では、第2章「センシング」について、通常の教室ではできない授業を試みることをめざし、実験書などの試訳、予備実験や回路部品の調達、教材の印刷、アンケートづくり、参加の生徒募集などを準備した。公開講座は、8月22日から24日まで、京都市左京区の同志社高校理科館において、公立、私立の高校生24名と京都教育大学などの大学生8名、合計32名の受講者を集めて実施し、大学と高校の教員20名が講師として参加した。内容は、グループ実験、センサーメーカーの技術者による「センサー入門」の講演、種々の物質の電流電圧特性の測定、センサーを利用して温度や光量を測定する実験、各班ごとにセンサーシステムをつくり、その結果の発表などである。またアンケート調査を実施して、物理履修の有無を含めて比較対照も行った。高大連携としては、大学と公私立高校の教員が学校の枠を越えて継続的な研究会を持ち、新しい物理カリキュラムと教材の研究を行ったことや、科研費を利用して、実験器具、ソフトウェアを1クラス以上の規模の数量を教材キットとして揃え、地域の高校への貸し出しを行う体制を作ったこと、高校、大学教員双方にとって、公開講座が「アドバンシング物理」の授業を実際に行うための研修にもなったこと、などの特徴がある。今後も研究会活動は継続し、「アドバンシング物理」の理解を深めることに努め、平成15年度にも公開講座を開くことを計画している。
二次性能動輸送蛋白の反応機構の研究

生物におけるエネルギ-変換過程は、生物が熱力学的非平衡系として存在するために、細胞の生命活動に普遍的に深く関わっている。エネルギ-変換利用系の中でとりわけシステムとして簡単である二次性能動輸送系について反応機構を解明することは、他のより複雑なエネルギ-変換過程を理解するための基本的概念を提供する。二次性能動輸送系は、熱力学的には共役イオンの電気化学ポテンシャル差を物質の能動輸送のエネルギ-に変換するシステムとして理解されているが、化学反応論的なメカニズムに付いてはまだ議論の分かれている状態であった。本研究においては、研究計画に従って順調に成果をあげることができた。反応機構の研究では、大腸菌プロリン・ラクト-ス・グルタミン酸各輸送タンパク質ともに、共役イオンが輸送タンパク質に結合することにより、タンパク質のコンフォメ-ション変化を促して基質への親和性を増大せしめることがわかり、親和性モデルの成立することが示された。輸送タンパク質の構造と機能の研究では、グルタミン酸/ナトリウムイオン共輸送タンパク質遺伝子のクロ-ニングと塩基配列決定により、5つのアミノ酸の並びをナトリウムイオン結合モチ-フとして相同性検索により発見することができた。一方、プロリン輸送タンパク質についての遺伝生化学・生化学・分子生物学的研究により、基質結合・共役イオン結合に関係するアミノ酸部位を特定することができ、さらに輸送タンパク質の膜内における配向性についても同定することができた。今後、エネルギ-変換系の一つである二次性能動輸送系で、こうした親和性モデルが成り立たねばならない必然性についての研究、裏返せば、親和性モデルでなくランダムモデルが成立するような二次性能動輸送タンパク質の設計が可能かという問題意識を持って本研究を発展させ、輸送タンパク質の構造と機能の関係を明らかにする必要がある。二次性能動輸送系は、共役イオンの電気化学ポテンシャル差を物質の能動輸送のエネルギ-に変換するシステムとして理解されているが、化学反応論あるいは機械論的なメカニズムに付いてはまだ議論の分かれている状態であった。私は従来から基質結合反応の性質に着目し、結合反応を解析した上で、そこから必然的に導出される性質を輸送反応においても成立すると考え、輸送反応速度論を独自に展開してきた。本研究においてはこうした反応論的メカニズムの解明を目標とし、その実施計画に従って、大腸菌の糖・アミノ酸二次性能動輸送系のカチオン濃度依存性を詳しく検討した。その結果、ラクト-ス・プロリン輸送反応についてもグルタミン酸輸送同様、輸送系のカチオン依存性が輸送蛋白への基質結合のカチオン依存性で定性的に説明できることが判明した(論文発表済及び印刷中)。これらの結果を踏まえて、輸送反応のエネルギ-共役機構を記述する統一的なモデルを考案した。このモデルが、次年度の計算機シュミレ-ションを含めた輸送反応解析の基礎となると考えている。また輸送蛋白の一次構造と共役機構との相関を自然及び人工突然変異遺伝子を解析することにより研究した。つまり、プロリン輸送系について数株のカチオン依存性変異株が得られ、上記輸送反応モデルを解析手段に用いて取り込み反応を調べた結果、共役カチオンであるNa^+に対する親和性が低下した変異蛋白であることが判明した。その変異遺伝子のDNA上の変異部位を解析した結果、3カ所のカチオン結合部位が同定された(論文印刷中)。一方グルタミン酸輸送蛋白遺伝子のクロ-ニングを行い(論文発表済)、その遺伝子の塩基配列を決定し、他の二次性能動輸送蛋白遺伝子とのホモロジ-を解析した結果、Na^+結合部位のコンセンサス配列が同定された(論文準備中)。

エネルギ-変換利用系の中でとりわけシステムとして簡単である二次性能動輸送系について反応機構を解明することは、他のより複雑なエネルギ-変換過程を理解するための基本的概念を提供する。二次性能動輸送系は、熱力学的には共役イオンの電気化学ポテンシャル差を物質の能動輸送のエネルギ-に変換するシステムとして理解されているが、化学反応論的なメカニズムに付いてはまで議論の分かれている状態であった。本研究においては、研究計画に従って順調に成果をあげることができた。反応機構の研究では、大腸菌プロリン・ラクト-ス・グルタミン酸各輸送タンパク質とともに、共役イオンが輸送タンパク質に結合することにより、タンパク質のコンフォメ-ション変化を促して基質への親和性を増大せしめることがわかり、親和性モデルの成立することが示された。輸送タンパク質の構造と機能の研究では、グルタミン酸/ナトリウムイオン共輸送タンパク質遺伝子クロ-ニングと塩基配列決定により、5つのアミノ酸の並びをナトリウムイオン結合モチ-フとして相同性検索により発見することができた。一方、プロリン輸送タンパク質についての遺伝生化学・生化学・分子生物学的研究により、基質結合・共役イオン結合に関係するアミノ酸部位を特定することができ、さらに輸送タンパク質の膜内における配向性についても同定することができた。今後、エネルギ-変換系の一つである二次性能動輸送系で、こうした親和性モデルが成り立たねばならない必然性について研究、裏返せば、親和性モデルでなくランダムモデルが成立するような二次性能動輸送タンパク質の設計が可能かという問題意識を持って本研究を発展させ、輸送タンパク質の構造と機能の関係を明らかにする必要がある。
Redox理論に基づく異所性肝移植の実験的研究

現在行われている肝移植は、患者の全肝摘除後にDonor肝を移植しているが、この術式は手術侵襲が大きく、また移植肝の機能不全時には必ずDonor肝が緊急に供給されるというProcurement systemに依存している。日本での肝移植は肝機能が著しく低下した症例に対して行うことが要求され、また移植肝の機能不全時に別の新しいDonor肝が供給されるsystemはない。そこで、別の肝移植手技であるheterotopic(auxiliary)の肝移植手技の確立が急務である。この手技は手術侵襲が少なく、かつ移植肝が機能不全に陥っても早期に診断し、これを摘出することにより患者の肝は存在しているので直ちには死に直結しない利点がある。このauxiliary肝移植の手術手技の確立と移植肝のViabilityの判定手段の確立を目的にブタを使用して本研究を行った。1.ブタの血中ケトン体比の測定方法の確立。肝不全動物のエネルギー代謝障害、不全の推移の数量時評価と移植肝のViabilityの評価には、ブタ血中におけるケトン対比(Acetoacetate/B-hydroxybutyrate比)の正確な測定が必須である。脂肪酸酸化によるケント体への影響を除外するため充分なブドウ糖を投与した場合ブタのケトン体量はヒト、ウサギ、ネズミに比較して少量であることが判明した。従って、acetoacetateあるいはB-hydroxybutyrateがketorexの測定限界以下の場合には、ケトン体比は測定不能と判断すべきことが判明した。糖負荷後の正常ブタでの動脈血中ケトン対比は(2.44±0.38、mean±se,n=6)であった。2.肝部分切除ブタをRecipientとした場合の異所性肝移植。90%肝切除ブタを肝不全モデルとし、全肝の異所性肝移植を行った。しかし肝切除に伴う出血量の差異等が原因と考えられる血行動態の不安定が肝移植前に存在しRecipientの動脈血中ケトン対比も、Donor肝の肝静脈ケトン対比もいずれも低値であり、安定した、肝不全モデル及び異所性肝移植モデルの確立ができなかった。次に70%肝切除ブタをRecipientとしてこれに異所性肝移植を試みたが輸血を行わないモデルでRedox stateや血行動態よりみて安定した70%肝切除モデルは得られず、異所性肝移植後のRecipient、及び移植肝のRedox stateの推移を統計時に処理し得る、再現性のあるデータが得られなかった。3.肝虚血による肝不全モデルの確立。部分肝切除への異所性肝移植の実験モデルが再現性に乏しいため、肝虚血による肝不全モデルを作製した。肝下部下大静脈と門脈と吻合後、胆管を除き肝門部で肝動脈、門脈の血流を遮断し、6時間の肝虚血モデルとした。本肝不全モデル作製に際しての出血は、肝切除モデルに較べ少なく、安定した、再現性のある肝不全モデルが得られた。本モデルにおいて、肝不全ブタ(Recipient)の動脈血中ケトン対比(Redox state)の低下と肝組織のenergy chargeが相関することが判明した。

3.肝虚血による肝不全モデルの確立。部分肝切除への異所性肝移植の実験モデルが再現性に乏しいため、肝虚血による肝不全モデルを作製した。肝下部下大静脈と門脈と吻合後、胆管を除き肝門部で肝動脈、門脈の血流を遮断し、6時間の肝虚血モデルとした。本肝不全モデル作製に際しての出血は、肝切除モデルに較べ少なく、安定した、再現性のある肝不全モデルが得られた。本モデルにおいて、肝不全ブタ(Recipient)の動脈血中ケトン対比(Redox state)の低下と肝組織のenergy chargeが相関することが判明した。1.ブタにおける部分肝切除術の確立。異所性肝移植においてはrecipientの肝が残存しており、これにdonor肝を加えることによるrecipient肝のRedox stateの上昇の確認が必要である。このためrecipient動物においてまず肝切除を行ない、これにdonor肝を移植する必要がある。このための第1段階として肝切除ブタの作製を行なった。ブタ肝の左外側、左内側、右内側の各葉を切除することにより、70%肝切除ブタを作製した。加えて左外側葉を切除し、尾状葉のみ残存せしめた肝切除ブタ(90%肝切除)に異所性肝移植を行なった。しかし、90%肝切除モデルでは手術侵襲が著しく、代謝的、循環的側面の検討の結果、安定した異所性肝移植モデルとしては確立し得なかった。2.肝切除後の動脈血中ケトン体比の推移。肝切除後、動脈血中ケトン体比は経時的に低下し、合併症のない動物では肝切除前値に回復した。3.異所性肝移植動物の動脈血中ケトン体比及び移植肝肝静脈血中ケトン体比の推移。今回の実験例では異所性移植肝の肝静脈血中ケトン体比(donor肝のredox state)の低下が移植時に存在し、次いで移植後recipientの動脈血中ケトン体比(recipient肝とdonor肝のredox stateの平均)の低下が起こり、動物は死亡した。この実験ではdonor肝のredox stateの低下がrecipient肝のredox stateを低下させたと考えられる。臨床を想定する時、donor肝のredox stateの低下は移植の失敗を意味し、直ちに異所性移植肝を摘除すべき場合と考えられる。4.研究結果よりみた問題点。当初90%肝切除ブタに対する異所性肝移植を計画していたが、90%肝切除では循環動態、代謝動態が不安定で、これに異所性肝移植を行なう実験モデルは安定性再現性が少ないことが判明した。5.今後の実験計画。今後は循環動態が安定している70%肝切除動物に異所性肝移植を行ない、recipientのredox state、donor肝のredox stateを経時的に測定する予定である。1異所性肝移植においてはrecipientの肝が残存しており、これにdonor肝を加えることによるrecipientの肝のRedox stateの上昇の確認が必要である。このためrecipient動物においてまず肝切除を行い、これにdonor肝を移植する必要があった。このための第1段階として(90%)肝切除ブタの作製を行った。
てんかん症例のバルプロン酸誘導多嚢胞性卵巣症候群のエピジェネティクス研究

本研究では、てんかん合併女性においては、抗てんかん薬でかつHistoneの脱アセチル化阻害剤でもあるVPAを幼小児期から投与された場合、卵巣形態はPCOSになっていた。また胎児期にVPAに暴露されたラットの場合も同様の卵巣形態だった。インスリン抵抗性を合併するZucker fa/faラットの卵巣がDNAのmethylationが報告されているが、そのPCO形態がPioglitazone投与で改善した。また胎児期にアンドロゲンに暴露された場合、生まれてからのDNAのhypermethylationが起こっていることが報告されているが、今回の研究では雌仔の卵巣がPCO形態だった。1)本研究では妊娠SD系ラットにdehydroepiandrosterone(DHEA)を投与し、生まれて来た雌ラットのラットの性周期、卵巣の遺伝子発現の変化を検討した。性周期の乱れが確認された。摘出した卵巣をマイクロアレイで網羅的にmRNAの発現を検討し、DHEA非投与ラットから生まれた雌ラットの卵巣をコントロールと比較した。DHEA投与ラットでは、著明な増加が認められたのは、vascular endothelial growthfactor(VEGF)B、claudin-12などである。VEGFBは心臓や骨格筋への脂肪酸の取り込み、脂肪蓄積と関連していることが報告されている。胎児期にアンドロゲンに曝露された雌ラットは、生後卵巣局所の脂質代謝に異常が起こっていることが示唆された。2)VPA投与によるてんかん症例では、PCOS様賞状が報告されているため、29症例のPCOSについて、BMI、内分泌学的検査(下垂体ホルモン、性ステロイド、抗ミューラー管ホルモン(AMH))、インスリン抵抗性関連因子を検討した。またVPAを離脱できた症例のホルモン値の変化を追跡した。PCOSの診断基準の一つである高アンドロゲンを満たした症例は85%に及んだ。高アンドロゲン症例では、全例がandrostenedioneが高値を示し、一方free Teststerone高値は14%と低頻度だった。また、多嚢胞に一致して高AMHも認められた。さらに60%の症例にインスリン抵抗性がみとめられた。また、VPAを中止できた症例では、月経周期改善、LHやandrostenedioneの低下、インスリン抵抗性の改善が認められた。今回の結果、またVPA減量によりホルモン値、月経周期が改善した症例もあり、VPAが二次的なPCOS発症の原因であることが示唆された1)本研究では妊娠SD系ラットにdehydroepiandrosterone(DHEA)を投与し、生まれて来た雌ラットのラットの性周期、卵巣の遺伝子発現の変化を検討した。今回の結果、またVPA減量によりホルモン値、月経周期が改善した症例もあり、VPAが二次的なPCOS発症の原因であることが示唆された妊娠ラットのVPAを投与し、生まれた雌ラット卵巣のepigeneticsの観点からの研究が、研究者の臨床業務が多忙となったため中断していたため、研究が進まなかった。研究期間を1年間延長せざるをえなかった。多嚢胞性卵巣症候群polycystic ovary syndrome(PCOS)は生殖年齢女性の510%に認められる頻度の高い疾患である。しかし、その病因は不明なため、様々なアプローチがなされている。その一つは、アンドロゲン暴露である。われわれは、幼若雌ラットにdehydroepiandrosterone(DHEA)を投与し、卵巣のPCOの再現をした。また、妊娠ラットにDHEAを投与し、生まれた雌ラットの卵巣がPCO化することにも成功した。このことは、ラットの場合性周期開始前にアンドロゲンに暴露することが、成獣になったときの卵巣がPCOになることの原因の一つであることを確認した。また我々は臨床データから、幼少時からてんかんのためにバルプロ酸valproic acid(VPA)の投与を受けていた女児が初経初来後、高頻度にPCOSになることを確認し報告した。VPAはヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)阻害活性があり、遺伝子がエピジェネティックな修飾を受けることにより多彩な兆候を誘発することが知られるようになった。

今回、妊娠ラットにVPAを投与し、生まれた雌ラットが3週齢になったときの卵巣への影響を検討した。雌ラットの体重はコントロールと差がなく、卵巣重量も差がなかった。ところが、卵巣組織を組織学的検討をしてみると、コントロール卵巣では、目立つのはほとんどが、前胞状卵胞であったが、胎児期にVPAに暴露した雌ラットでは、明らかに初期胞状卵胞の数が増え、PCO形態をとっていた。これはPCOSのもう一つの原因が、胎児期に何らかの遺伝子がエピジェネティクな修飾を受けることであること示唆され画期的な研究成果となった。本研究では、てんかん合併女性においては、抗てんかん薬でかつHistoneの脱アセチル化阻害剤でもあるVPAを幼小児期から投与された場合、卵巣形態はPCOSになっていた。また胎児期にVPAに暴露されたラットの場合も同様の卵巣形態だった。インスリン抵抗性を合併するZucker fa/faラットの卵巣がDNAのmethylationが報告されているが、そのPCO形態がPioglitazone投与で改善した。また胎児期にアンドロゲンに暴露された場合、生まれてからのDNAのhypermethylationが起こっていることが報告されているが、今回の研究では雌仔の卵巣がPCO形態だった。研究の遅延の原因が、研究者の臨床業務の多忙が主なものであったが、研究環境が改善したた。そのため当初の妊娠ラットのVPAを投与し、生まれた雌ラットの卵巣のepigeneticsな観点からの研究が実施出来る見込みとなったため、平成28年度中の研究完了が可能な見込みとなった。産婦人科妊娠ラットにアンドロゲンを投与し、PCOSモデルを作成し、卵巣中の分子発現の変化を検討したところ、vascular endothelial growth factor B(VEGFB)とclaudin-12の発現が有意に増加していることを見出したのは、今後のエピジェネティクス研究につながる。また、てんかん症例に、小児期からバルプロ酸を投与したときに、思春期以降に2次性PCOSを発症することを国内では例が無いほど多数例で検証し、またバルプロ酸服用中止することにより、症状の軽減があることを見出したのは、臨床上極めて有用な発見であり、今後の研究の発展につながると考えられれる。(理由)1)アンドロゲン投与妊娠ラットから生まれた雌ラットの卵巣に有意な分子発現の増加がみとめられたため、それに関与するepigenticsの観点から研究する必要がある。2)バルプロ酸を投与されたてんかん症例の、内分泌学的特徴を明らかにする必要がある。3)幼若ラットにバルプロ酸を投与し、2)の状態を再現し、そのメカニズムを検討する計画である。(使用計画)下記の研究計画を平成28年度に、一気に完遂するために、研究費を残した。
ガングリオシドによる神経系の機能調節

ガングリオシドが神経機能をどのように修飾、活性化するかを明らかにする研究を行ってきた。おもな4つの方向、すなわちシナプス機能の可塑性、シナプス蛋白質のリン酸化、神経線維の伸展と接着現象、ニューロンの分化調節の問題にアプローチした。シナプス機能がガングリオシドによって促進されることは2つの系で明らかにされた。おもに前シナプスから由来するシナプトソームを調製して、アセチルコリン放出とNa/K-ATPase活性への効果をみた。アセチルコリン放出はガングリオシドによって200-250%促進された。Na/K-ATPase活性も上昇した。これらの知見は老齢脳のアセチルコリン放出の低下、および静止膜電位の減少を改善するうえで役立つものと考えられる。一方、海馬切片を用いるシナプスの長期増強の系では、ガングリオシド添加によって平均500%増大することが示された。これらのことから、ガングリオシドがシナプス機能の可塑性を賦活することがわかった。第2点の蛋白質リン酸化の研究では、ガングリオシド依存性キナーゼでリン酸化されるシナプス蛋白質72kDaを単離してcDNAクローニングを行った。cAMPキナーゼに対する新しいフォスフォノ糖脂質の活性化効果を見出した。第3の神経線維伸展の面では、生長円錐の解析と、タイプIIアストロサイトにおけるA2B5反応性ガングリオシドと細胞接着分子NCAM発現との関連の分析を行った、細胞接触阻止と細胞表面ガングリオシドの関係も一部明らかになった。第4のニューロンの分化の問題では、ニューロブラストーマの系で特にC系列ガングリオシドの軸索成長効果を見出した。新しく同定された0-アセチル化ガングリオシドが分化に関連して発現することも嗅細胞の系で明らかにした。一方、レチノイン酸でニューロンに分化するP19細胞において、ガングリオシドを増加させる遺伝子としてc-junとB-HLHを同定した。
有機反応の活性化-固体担体と超音波の利用

この研究の目的は、固相-液相不均一反応において、固体担体や超音波を利用してその反応を活性化し、有機合成に有用な手段とすることである。特に、シアン化カリウムおよびフッ化カリウムて有機基質の不均一反応について活性化を行った。その結果、実用的な方法を開発することができた。シアン化カリウムを求核体とする有機反応としては、臭化ベンジルとの求核置換反応、アルデヒドやイミンはの求核付加反応を選んだ。求核置換では固体担体としてアルミナを用い、さらに適量の水の添加や、超音波照射を利用すると、界面活性剤を用いる場合よりも活性化が大きくなった。シアンヒドリン生成では、超音波照射によって反応が著しく加速され、生成物の単離や精製も容易で有った。この方法は、ピレスロイド系農薬の合成に応用された。シアン化物とアンモニウム塩にアルデヒドを不均一系で反応させ、α-アミノニトリルを生じる反応では、固体担体としてのアルミナの共存と超音波照射の相乗効果によって、目的物が高収率で得られた。シアン化物のイミンへの付加反応では、天然高分子のキチンが固体担体として有効で、反応を促進するだけでなく、エナンチオ面区別反応が不斉収率約30%で進行した。フッ化カリウムは、アルミナと混合すると、ハロゲン化アルキルによるアルコールやアミドのアルキル化反応において固体塩基として働くことを見出した。この固体塩基について、走査電子顕微鏡や粉末X線回析による表面観察や、【^(19)Fnmr】スピクトルの測定などを行い、水和されたフッ化物イオンや水酸化物イオンの存在を認めた。フッ化カリウムと粉末フッ化カルシウムを混合すると、塩化ベンゾイルや臭化ベンジルとの不均一系の置換反応が活性化され、有機フッ素化合物を合成する実用的な手段となることを見出した。本研究課題は、この補助金のおかげでこれらの成果を挙げることができた。ここに厚く感謝する。ここに厚く感謝する。
根尖性歯周炎関連細菌の薬剤耐性遺伝子の分子生物学的研究

黒色色素産生性グラム陰性偏性嫌気性桿菌Porphyromonas endodontalis (P.e.)は根尖性歯周炎に関連していると考えられている。申請者らが臨床分離したP.e.の自然突然変異株KSEW01は、ベージュ色の集落を形成し、抗生物質vancomycin(VCM)に対して耐性を示す。そこで、この株を利用してP.e.のVCM耐性に関与する菌体成分を明らかにする。また、部位特異的変異株を作製し、同定された成分の機能を実験的に検討することを目指した。その手始めとして、KSEW01をVCMの存在下および非存在下で培養し、その菌体成分に差があるか否かを2次元電気泳動法を用いて調べたところ、VCM(5μg/ml)を添加した液体培地で嫌気培養したKSEW01の全菌体成分には、等電点5.2、分子量50kDa付近に、VCM非存在下の菌体成分には存在しない明瞭なスポットを見出した。しかし、再現性に問題があり、結局N末端のアミノ酸配列を決定できなかった。また、VCM耐性にかかわる遺伝子をクローニングするため、P.gingivalis(P.g.)で開発されたtransposon(Tn4351)mutagenesis法をP.e.に応用してVCM耐性変異株を作製・分離することを種々の条件下で試みたが変異株は分離できなかった。そこで、KSEW01の親株KSE105、P.e.標準株ATCC35406、さらにP.g.標準株ATCC33277から、VCM耐性変異株をVCM含有培地上で単離することを試み、46株を得た。それら全株のVCMに対する最小発育阻止濃度を測定したところ、KSEW01に匹敵する程耐性(200μg/ml)な株を得ることができた。また、これらの株は黒色色素を産生しておりVCM感受性と色素産生能とはカップルしていないことが判明した。今後は、得られた変異株と親株とで菌体成分を比較して、VCM耐性に関与する成分を明らかにしていきたいと考えている。黒色色素産生性グラム陰性偏性嫌気性桿菌Porphyromonas endodontalis(P.e.)は根尖性歯周炎に関連していると考えられている。申請者らが臨床分離したP.e.の自然突然変異株KSEWO1は、ベ-ジュ色の集落を形成し、しかも抗生物質vancomycin(VCM)に対して耐性を示す。そこで、この株を利用して、P.e.菌体のVCM耐性に関与する成分を同定し、その遺伝子をクローニングする。さらに、その成分のアミノ酸配列を明らかにした上で、相同な蛋白質を検索することにより機能を推測する。それと同時に、変異株を作製し、同定された成分の機能を実験的に検討することを目指す。その手始めとして、KSEWO1をVCMの存在下および非存在下で培養し、その菌体成分に差があるかどうかを2次元電気泳動法を用いて調べた。すると、VCM(5μg/ml)を添加した液体培地で嫌気培養したKSEWO1の全菌体成分には、等電点5.2、分子量50kDa付近に、VCM非存在下の菌体成分には存在しない明瞭なスポットを生じた。

現在、その成分およびそのトリプシン分解産物のN末端のアミノ酸配列を明らかにする実験を進行中である。今後、このデータをホモロジー検索にかけ相同な蛋白質を見出すと共に、混合プライマーを作製しPCRにより遺伝子の一部を増幅して全遺伝子のクローニングに使用する。また、この成分以外のVCM耐性にかかわる遺伝子をクローニングするため、P.e.と同属のP.gingivalisで開発されたtransposon(Tn4351)mutagenesis法を応用してVCM耐性変異株を作製・分離することを試みた。KSEWO1に付随して検出されその親株と考えられているKSE105と、P.e.の標準株ATCC35406に対してまずTn4351の導入を試みたが、現在のところ成功していない。さらに諸条件を検討する必要があると思われる。黒色色素産生性グラム陰性偏性嫌気性桿菌Porphyromonas endodontalis(P.e.)は根尖性歯周炎に関連していると考えられている。申請者らが分離したP.e.の自然突然変異株KSEW01は、ベージュ色の集落を形成し、抗生物質vancomycin(VCM)に対して耐性を示す。そこで、この株を利用してP.e.菌体のVCM耐性に関与する成分を同定し、その遺伝子をクローニングする。さらに、ホモロジー検索により機能を推測する。それと同時に部位特異的変異株を作製し、同定された成分の機能を実験的に検討することを目指した。その手始めとして、KSEW01をVCMの存在下および非存在下で培養し、その菌体成分に差があるか否かを2次元電気泳動法を用いて調べたところ、VCM(5μg/ml)を添加した液体培地で嫌気培養したKSEW01の全菌体成分には、等電点5.2、分子量50kDa付近に、VCM非存在下の菌体成分には存在しない明瞭なスポットを見出した。しかし、再現性に問題があり、結局N末端のアミノ酸配列を決定できなかった。また、VCM耐性にかかわる遺伝子をクローニングするため、P.gingivalis(p.g.)で開発されたtransposon(Tn4351)mutagenesis法をP.e.に応用してVCM耐性変異株を作製・分離することを種々の条件下で試みたが変異株は分離できなかった。そこでKSEW01の親株と考えられるKSE105、P.e.標準株ATCC35406、さらにP.g.標準株ATCC33277から、VCM含有培地上で生育できる変異株を単離することを試み、得られた46株全てに対するVCMの最小発育阻止濃度を測定したところ、KSEW01に匹敵する程耐性(200μg/ml)な株を得ることができた。また、これら株は黒色色素を産生しておりVCM感受性と色素産生能とはカップルしていないことが判明した。今後は、得られた変異株と親株とで電気泳動パターンを比較することにより、VCM耐性に関与する成分を明らかにしていきたいと考えている。
ソルフィットを用いたイソフルラン希釈麻酔法の検討

【目的】イソフルランによる吸入麻酔法は安全性が高く、安定した維持麻酔を行うことが可能である一方、専用の気化装置や酸素ボンベなどの設備を必要とする。そのため、これらの設備がない場合には、注射麻酔に頼らざるを得ないが、保定や注射手技の習熟が必要となることや、動物自体の覚醒までに時間がかかるなどの問題がある。そのため、一時的に簡易な処置を必要とする場合に用いることができる、安全で簡易な吸入麻酔法の確立が望まれる。そこで本研究では、簡便でより安定性のある簡易麻酔法を確立することを目的として、イソフルランをソルフィットで希釈し、気化器なしで小動物に吸入させて麻酔が可能な最適値を検討することを研究の目的とした。【方法】イソフルランはソルフィットを用いて希釈し、開放型容器へ適量注ぎ入れる。ガス濃度計(光波干渉式ガスモニター)で経時的な気化濃度測定を行い、導入麻酔と維持麻酔で用いる5.0%、3.0%となる希釈濃度を検討した。気化濃度が5.0%、3.0%となるソルフィットで希釈した麻酔液を、開放型容器の底に注ぎ、その上に金網の台を置き、ラットを乗せ吸入させる。痛覚反射による導入時間や持続時間、回復時間を計測し、ソルフィット希釈イソフルラン法と、現在使用しているイソフルラン吸入麻酔器における結果を比較した。【結果】既存のイソフルラン吸入麻酔器に等しい導入時間や持続時間、回復時間の希釈濃度を見つけだした。