hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
英語リーディングにおける自ら学ぶ効果的学習法の脳科学的検証

本研究は、英語学習者の初級、中級学習者で脳活性状態が無活性型と過剰活性型の学習者(大石2006)を対象に、ER学習を試みた。その結果、学習後は、学習者の語彙力、読解力、読解速度が増強され、どちらの活性型も選択的活性型(最適型)に変化する傾向が見られた。次の研究の発展として、学習者のリーディング学習過程でどのような変化が生じるのかを明らかにするために視線行動の必要性が示唆された。上記に記した目的は、おおむね順調に進展している。次のステップとして、習熟度により、ER学習はどのような点に効果があるのかを明らかにする必要がある。そこで、現在、学習者のリーディングストラテジーに注目している。いわゆる、英文の読み方がER学習によって、どのように変化するかという点である。そこで、視線行動を計測することとした。視線行動を探ることで、読みのストラテジーを明らかにして、脳活性状態のデータの裏付けることを計画中である。英語教育・第二言語習得学習者の読みのストラテジーが脳活性状態に及ぼす影響を探るため、視線行動を調査し、脳活性状態のデータの裏付けることを計画中である。今後は、視線計測装置を利用し、学習者の習熟度別に、学習ストラテジーを探る。平成24年度は、1)先行研究レヴュー2)ER学習教材の検討、3)課題の作成4)ERの期間の検討と学習者の指示、5)学習者へのアンケート作成、6)実験参加者への同意書作成、7)実験補助者との打ち合わせをし、実験を開始することであった。当初の計画通り実験参加者の依頼と把握をし実験を開始した。平成25年度は、計画通りに実験を進めた。1)ER学習前に脳活性状態と英語力の測定2)ER学習開始、3)ER学習後に脳活性状態と英語力の測定、アンケート調査を行った。現在データ処理中である。平成24年度は、日本人英語学習者を対象に、ER学習前の脳活性状態を観測し、一定期間ER学習を実施することであった。当初の計画に沿って次のことを実施した。1)先行研究収集:第二言語習得、神経言語学の分野において先行研究のレビューを行い次のように実験準備をする。2)ER学習材料の検討3)課題(理解度測定用)の作成4)ERの期間や学習者への指示を検討、5)学習者へのアンケート作成6)実験参加者への同意書作成、7)実験補助者との事前打ち合わせ8)実験参加者の依頼と把握。おおむね計画は実行されたが、学習者に対する調査の段階で、学習開始時期において、学生の実習の関係で時期を遅らせた方が正確なデータが取れることが明らかになり、ER学習時期を延期した。大幅な変更ではなく時期的な若干の変更であるために3年間の計画に支障はなく、予定通り進められる見込みである。これまでの、脳活性状態測定では、その変化の原因が何であるか不明であった。その原因の一つの可能性として、学習者の視線行動が挙げられた。いわゆる、どのように文章を読んでいるのかを探ることで、脳活性状態のデータの裏付けをしようとするものである。そこで、視線行動に注目し、視線計測を行うことにした。視線計測装置を検討し購入することに加え、学習者の習熟度を正確に計測するために、期間を要した。次年度に延長し、視線計測装置の検討と学習者の習熟度を計測することとした。平成26年度は、これまでの研究の総まとめとして、データ分析をする。
自立活動の指導を担う教員の養成と現職研修の一体化に関する研究

自立活動については、指導の担い手が年々増加傾向にある一方で、自らが立案した個別の指導計画に不安を抱く教師や、自らが設定した指導目標・内容の不確実さから日々の授業やその他の職務に不安を抱く教師の実態が報告されている。このような現状において、全国の教育センターが実施する自立活動に関する研修内容は、特別支援学校の学習指導要領に示された自立活動の目標及び内容の解説にほぼ集約され、その背景には、教員養成のカリキュラムの現状も影響していると考えられる。特別支援学校の教員養成については、免許取得に際し、自立活動について何をどの水準まで修得させるのかを示すコアカリキュラムは存在しない。結果として、養成段階で自立活動の目標及び内容を学ぶ機会がないまま、特別支援学校の教員として赴任している現状も見受けられる。本研究の目的は以下の3点である。1自立活動の指導を担う教師を対象とした質的調査(新任教師の経年的変化を含む)及び量的調査(経験年数の異なる教師)を通して、「指標」の妥当性を検証し、改善を図る。2「指標」を踏まえて企画した研修による教師の変容に基づき研修内容及び方法の評価・改善に生かす、「指標」を活用した現職研修プログラムのPDCAシステムを提案する。3小学校等の教員養成における教職課程コアカリキュラムと自立活動の研修による教師の変容(2)に基づき、自立活動に関するコアカリキュラムの試案を作成する。2018年度は、特別支援学校教師を対象とした量的調査、教職経験5年未満の教師(初任教師を含む)を対象としたインタビュー調査を実施し、自立活動の指導を担う教師が直面する課題や課題への対処、各種研修の成果等について把握した。2019年度も引き続きデータ収集と分析を継続する。自立活動の指導を担う教師を対象とした調査や、「指標」を活用した研修の実施が概ね順調に実施できているため。提出した研究計画に沿って進める。教育センターや特別支援学校を訪問する機会を大学業務や他の出張との兼ね合いで確保できなかった分の旅費と、トナーカートリッジの購入を次年度に回したため。2019年度には、昨年度以上に早期に日程の調整を図り、出張を実行できるようにする。
多変量ガウス性・線形性検定にもとづく経済時系列の統計的モデリングとその応用

本研究では、経済時系列分析において様々なモデル分析の基礎となるガウス性ならびに線形性の統計的検定法を多変量時系列の枠組みへ拡張した結果に基づいて,多変量時系列の統計的モデリングについて研究し,多変量経済時系列に対する統計モデルの体系的構築を目指し、さらにその応用として、マクロ計量経済モデルや景気循環モデルを始めとして,その他ファイナンスやマーケティングなどの領域で展開される様々な経済・経営動学分析へ応用することを目的として下記の研究を実施した。1.検定統計量の周辺時系列および相互関係のガウス性・線形性検定への分割に伴う検定統計量の有限標本特性の改良について、周辺時系列(自己相関構造)と相互関係(交差自己相関構造)のガウス性検定に共通する特性である検定統計量の漸近分布への収束スピードの緩慢さに関し,ブートストラップ法を用いてこれを改善する研究を実施した。2.線形モデルといくつかの非線形モデルのよる予測量を結合して新たな予測量を構成し、結合係数を時変として局所的に線形モデルと各非線形モデルの役割を変えるモデリングを多変量へ拡張する研究を実施した。3.非ガウス多変量時系列の問題として、多項分布やポアソン分布などにしたがう非ガウスのカウント・データの時系列モデルとそのモデリングについて研究し、状態空間を用いた動学線形ベイズモデルの適用とそのマルコフ連鎖モンテカルロ法のアルゴリズムを検討し、このモデルをマーケティングの売上数量予測モデルとして応用することで、市場全体の拡張・縮小を考慮しながら各ブランドの数量予測するモデリングが可能であることを示した。4.非対称な市場反応を表現する2変量非線形時系列モデルを閾値型の関数系で与え、実際のPOSデータへ適用して実証研究を行い、その有効性を実証した。その際、売上げ時系列に対して店舗レベルの参照価格が非線形性を駆動する働きをしていることを見出した。本研究では、経済時系列分析において様々なモデル分析の基礎となるガウス性ならびに線形性の統計的検定法を多変量時系列の枠組みへ拡張した結果に基づいて,多変量時系列の統計的モデリングについて研究し,多変量経済時系列に対する統計モデルの体系的構築を目指す.またその応用として,マクロ計量経済モデルや景気循環モデルを始めとして,その他ファイナンスやマーケティングなどの領域で展開される様々な経済・経営動学分析へ応用することも目的とする.多変量時系列を扱う本質は変数間の相互関係であり,周辺時系列だけをみてモデル化を考えるアプローチは,基本的に相互関係で決定される経済・経営時系列については適切ではない.平成15年度は,周辺時系列(自己相関構造)と相互関係(交差自己相関構造)のガウス性検定のための検定統計量に関し,その有限標本特性の改良を中心に研究を行った.具体的研究事項と実績は下記のとおり「検定統計量の周辺時系列および相互関係のガウス性・線形性検定への分割に伴う検定統計量の有限標本特性の改良」周辺時系列(自己相関構造)と相互関係(交差自己相関構造)のガウス性検定に共通する特性である検定統計量の漸近分布への収束スピードの緩慢さに関し,これを改善する研究を実施した.まずリサンプリング法を用いた有限標本特性の改良を目指し,ブートストラップ法による有限標本特性の改良を図る研究を実施した.具体的には,時系列データの時間領域でのリサンプリング法としてブロックサンプリング・ブートストラップ法を応用し,多変量ガウス性検定の検定統計量に有限標本バイアスの除去を試み,その有効性が限定的であることを確認し,さらに周波数領域での新しいリサンプリング法であるサロゲートデータについてもその適用可能性に関する研究を実施した.非ガウス多変量経済時系列の統計的モデリングに関し下記の項目について研究を実施した。

1.多変量時系列を扱うことから生じる2つの現象として「周辺(自己相関構造)では非ガウス・非線形,多変量(交差自己相関構造)ではガウス・線形」となるモデル(共ガウス・共線形性モデル)および「周辺(自己相関構造)ではガウス・線形,多変量(交差自己相関構造)では非ガウス・非線形」となるモデル(共非ガウス・共非線形性モデル)が考えられるという前年度までの研究を進め、前者の"共通非ガウス成分を含む時系列モデル"について、統計的仮説検定によってこれを検出する方法の改善を研究し、ブートストラップ法による検定の漸近分布の偏り除去の可能性に関して研究した。2.線形モデルといくつかの非線形モデルのよる予測量を結合して新たな予測量を構成し、結合係数を時変として局所的に線形モデルと各非線形モデルの役割を変えるモデリングを多変量へ拡張する研究を実施した。3.非ガウス多変量時系列の問題として、多項分布やポアソン分布などにしたがう非ガウスのカウント・データの時系列モデルとそのモデリングについて研究し、状態空間を用いた動学線形ベイズモデルの適用とそのマルコフ連鎖モンテカルロ法のアルゴリズムを検討した。さらには、このモデルをマーケティングの売上数量予測モデルとして応用することで、市場全体の拡張・縮小を考慮しながら各ブランドの数量予測するモデリングが可能であることを示した。非ガウス多変量経済時系列の統計的モデリングに関し下記の項目について研究を実施した。1.線形モデルといくつかの非線形モデルのよる予測量を結合して新たな予測量を構成し、結合係数を時変として局所的に線形モデルと各非線形モデルの役割を変えるモデリングを多変量へ拡張する研究を実施し、周辺時系列係数パラメータ間に階層構造を仮定して、パラメータを節約する多変量非線形時系列モデルの可能性について研究した。2.非ガウス多変量時系列の問題として、多項分布やボアソン分布などにしたがう非ガウスのカウント・データの時系列モデルとそのモデリングについて、多変量へ拡張した研究を実施し、そのマルコフ連鎖モンテカルロ法のアルゴリズムを検討した。3.空間構造を取り入れた空間的時系列の統計的モデリングを考慮して、空間的構造変化に基づく非ガウス性を有限混合分布モデルや隠れマルコフ・スイッチング・モデルによってモデル化する方法の可能性について研究した。正規性からの乖離を表現するモデルの表現とマルコフ連鎖モンテカルロ法による推定アルゴリズムについて研究した。4.非対称な市場反応を表現する2変量非線形時系列モデルを閾値型の関数系で与え、実際のPOSデータへ適用して実証研究を行い、その有効性を実証した。その際、売上げ時系列に対して店舗レベルの参照価格が非線形性を駆動する働きをしていることを見出した。さらにこのモデリングの多変量時系列への拡張の可能性について研究した。
トランスポゾンによるイネ稔性回復遺伝子のタギングに関する研究

イネではトウモロコシ内在性のAc/Dsトランスポゾンが導入され、転移が確認されているもののAc/Dsの転移頻度が低いこと等により、未だ遺伝子がタギングされていないのが現状である。本研究ではイネの細胞質雄性不稔の稔性回復を支配する稔性回復遺伝子のタギングを目的にトウモロコシ内在性のトランスポゾンで転移頻度の高いことが報告されているMuトランスポゾンのイネへの導入を試みた。1.パーティクルガン法を用いたイネへの遺伝子導入ハイグロマイシン耐性遺伝子(hpt)をコーティングした金粒子をパーティクルガンによりイネ完熟種子に打ち込み、得られた種子カルスをハイグロマイシンで選抜して耐性カルスを得た。耐性カルスを再分化培地に移植し、得られた再分化イネについて、PCRおよびサザンハイブリダイゼーションにより、hptの導入を確認した。2.Muトランスポゾンを含むプラスミドの構築Muトランスポゾンの中で、転移頻度の高い非自律性トランスポゾンであるMulをhptおよびβ-グルクロニダーゼ遺伝子のプロモーター領域に挿入したプラスミドをそれぞれ構築した(プラスミド1,2)。次に、Muトランスポゾンのトランスポゼ-ス遺伝子と考えられているMuRAを含むプラスミドの構築を行った(プラスミド3)。Mulはトランスポゼ-スなしでは転移出来ない。したがって、プラスミド3とプラスミド1または2をイネに導入し、MulがMuRAによって転移した場合、ハイグロマイシン耐性カルスまたはGUS染色で着色するカルスが得られると考えられる。現在、これらの構築プラスミドをイネに導入し、Mulの転移を調査中である。
DYRKファミリーキナーゼと特異的に相互作用する細胞内タンパク質の同定と機能解析

ダウン症の発症に関与するタンパク質リン酸化酵素DYRK1Aと細胞内で結合するタンパク質を探索し、WDR68を同定した。WDR68は植物からヒトまで広く存在する機能未知のタンパク質である。ヒトの5種類のDYRKファミリーのうちDYRK1AおよびDYRK1BのみがWDR68と結合し、DYRK2, DYRK3, DYRK4は結合しなかった。WDR68の細胞内量を減らすと培養細胞は増殖も生存もできなかった。WDR68は細胞質及び核に存在するが、DYRK1Aが存在するとDYRK1Aと結合して核に集積するようになった。DYRK1AはWDR68と結合してその存在様式を変化させることでWDR68の細胞内機能に影響を及ぼすと考えられる。DYRKファミリーキナーゼはMAPキナーゼと構造上近縁でありながら、その生理的機能の解析は余り進んでいない。特にDYRK1Aはヒトクロモソーム21番のダウン症候群責任領域に存在して同症候群の発症に関与することが示されており、その生理的ターゲットの同定は重要な課題である。まず、哺乳類培養細胞に過剰発現させたDYRKと結合するタンパク質を共免疫沈降によって単離し、特異的抗体あるいはマススペクトルによって同定した。その結果、DYRK1B,DYRK4には分子シャペロンHsp90・Cdc37が結合することがわかった。一方、DYRK1Aには種間で良く保存された機能未知のタンパク質DYRK-BPが結合した。DYRK-BPはDYRKファミリーのうちのDYRK1AとDYRK1Bに特異的に結合し、DYRK2,DYRK3,DYRK4とは結合しなかった。各種欠失変異体を用いた実験から、DYRK-BPはDYRK1AのN末端領域に結合することがわかった。次いでDYRK-BPと相互作用するタンパク質とその細胞内リン酸化状態をマス・スペクトルを用いた網羅的リン酸化プロテオームの手法により解析した。その結果、95%の信頼度で約250の結合タンパク質とそのリン酸化サイトが同定された。その中には細胞骨格タンパク質や分子シャペロン等の存在量の多いタンパク質、キナーゼや転写因子等のシグナル伝達に関わるタンパク質が多かった。特に結合量と特異性の高いタンパク質は分子シャペロンCCT(TCP-1)を構成する8つの異なるサブユニットのうちの7つ、及びMEK Kinase 1(MEKK1)であった。実際、細胞内のCCT及びMEKK1がDYRK-BPと特異的に結合することが共免疫沈降実験によって確かめられた。同定された結合タンパク質およびそのリン酸化状態がDYRK-BPやDYRK1Aの機能とどのような関連を持つのかを検討中である。DYRKファミリーキナーゼはMAPキナーゼと構造上近縁のプロリン指向性セリン・スレオニンキナーゼであるが、その生理的機能の解析は進んでいない。ヒトの5種類のDYRKファミリーキナーゼのうち、DYRK1Aはクロモソーム21番のダウン症候群責任領域に存在して同症候群の発症に関与することが示されており、その生理的ターゲットの同定は重要な課題である。昨年度までの本研究課題により、DYRKと相互作用する細胞内タンパク質の同定を行い、DYRK1B及びDYRK4には分子シャペロンHsp90及びCdc37が、またDYRK1A及びDYRK1BにはDYRK-BPが、それぞれ特異的に結合することを明らかにした。本年度はDYRK-BPの生理的な機能の解析を行なった。DYRK-BPは種間で非常によく保存されたWD40タンパク質で、細胞全体にほぼ一様に分布していた。DYRK1Aを細胞に過剰に発現するとDYRK-BPはDYRK1Aと共に核内に局在するようになり、DYRK1AがDYRK-BPの細胞内局在を制御することが判った。DYRK1Aは大きくN末端領域、キナーゼ活性領域、C末端領域に分けられるが、DYRK-BPはDYRK1AのN末端領域に特異的に結合した。一方,DYRK-BPはN末端ないしC末端のいずれを欠いてもDYRK1Aとは結合せず、その分子全体がDYRK1Aとの結合に必要であった。またDYRK-BPの細胞内量を特異的なsiRNAの導入によって抑制すると細胞の増殖が顕著に阻害されたことから、細胞の増殖にDYRK-BPが必須であることが示唆された。以上の知見から、ダウン症におけるDYRK1Aの過剰発現が細胞内のDYRK-BPの活性・発現パターンに影響を及ぼし、それがダウン症の細胞生理に関わる可能性が考えられる。細胞内でのDYRK-BPの生理的機能の詳細についてさらに解析を進めている。

DYRK1Aはヒトクロモソーム21番のダウン症候群クリティカル領域にコードされたキナーゼで、トリソミー形成によるDYRK1Aの量的変化がダウン症候群の多彩な症状の一部を担うと考えられている。DYRK1Aの制御機構および生理作用を知るため、細胞内DYRK1A結合タンパク質の同定を行なった。COS7細胞に過剰発現したDYRK1Aをタグアフィニティー精製によって単離し、特異的に結合した分子量約42kDaの細胞内タンパク質をマススペクトル-PMF解析によってWDR68と同定した。また共免疫沈降によって内在性WDR68とDYRK1Aとの結合が確認された。WDR68はペチュニアの花のアントシアニン色素合成異常の原因遺伝子として初めて同定されたWD40-repeatタンパク質であるが、アントシアニンを合成しない高等動物に至るまで進化的に非常によく保存されていることから、これまでに明らかにされていない重要な生理的機能を持つと推察される。siRNAによるWDR68のノックダウンにより、WDR68が培養細胞の増殖や生存に必須であることが判った。ヒトの5種類のDYRKファミリーのうちDYRK1AおよびDYRK1BのみがWDR68と結合し、DYRK2, DYRK3, DYRK4とは結合しなかった。欠失変異体の解析により、DYRK1AのN末端領域がWDR68結合部位であること、またWDR68の5つのWD40リピートだけでは相互作用には不充分でN末端・C末端の領域も結合に必要であることが明らかになった。WDR68は細胞質及び核に存在したが、DYRK1Aを共発現させると細胞質のWDR68は核に集積するようになった。これらの結果から、DYRK1Aは細胞内でWDR68と特異的に結合し、その結合によってWDR68の核移行を引き起こしてWDR68の細胞内機能に影響を及ぼすと考えられる。
エピジェネティック制御による選択的サイトカイン発現調節機構の解明とその治療応用

我々は膠原病の慢性炎症維持に重要であるIL-17およびGM-CSFの制御機構・治療介入研究を行った。マウスT細胞株を多量のIL-17を産生している細胞と産生しない細胞にクローニング後、網羅的解析施行し、遺伝子Xが、IL-17プロモーター領域のCpGメチル化を介して制御していることを明らかにした。次ぎにその炎症性サイトカインとしての重要性が報告されてきているGM-CSFの機能解析をSKG間質性肺炎モデルマウスを用いて行った。予想に反しIL-17の寄与は低く、GM-CSFが主たる炎症維持因子であることを証明した。以上の知見はヒト難治性膠原病病態に対する新規治療法の可能性を示唆した。IL-17産生ヘルパーT細胞(以下Th17細胞と略)は、膠原病を含む多くの炎症性疾患に深く関与する新規の炎症惹起性ヘルパーT細胞として発見以来注目を集めてきた。しかし他のヘルパーT細胞と異なり、その分化機序の必要十分条件および可塑性の本質は不明のままである。本研究の目的は、そのTh17細胞の分化およびIL-17産生制御機構をエピゲノム・転写因子レベルで網羅的に解析することで、それらの謎を解読することである。我々は偶然に,あるマウスT細胞株クローンが多量のIL-17を産生していることを発見し,同じT細胞株の非IL-17産生クローンと網羅的に比較検討することで,何がその表現形に必須の因子であるのかを解析している。これまでの解析でゲノム配列や,プロモーター機能,ヒストン修飾には差異を認めなかったが,プロモーター領域のGCアイランドのメチル化が両細胞株間で大きく異なることを見いだし,さらにその現象に直接関わっている可能性のある因子として遺伝子Xを同定し,現在その直接の因果関係を解析中である。遺伝子Xを強制発現させることでIL-17産生クローンを非産生クローンに転換できることまで確認している。現在遺伝子Xのノックダウン解析・正常マウスT細胞およびヒトT細胞を用いた同現象確認実験,および遺伝子Xがいかにしてプロモーター領域のGCアイランドのメチル化に関与しているのかについて,核酸-蛋白相互作用の解析を行っている。我々は偶然に,あるマウスT細胞株クローンが多量のIL-17を産生していることを発見し,同じT細胞株の非IL-17産生クローンと網羅的に比較検討することで,何がその表現形に必須の因子であるのかを解析した。遺伝子Xを強制発現させることでIL-17産生クローンを非産生クローンに転換できることまで確認した。また最近IL-17の上位の炎症性サイトカインとしてGM-CSFの重要性が報告されてきていることからin-vivoにおけるIL-17産生細胞とGM-CSF産生細胞の解析が重要と考え,従来関節炎モデルとして使用されてきたSKGマウスにザイモザンを投与することで慢性進行性間質性肺炎モデルが作成できることを利用して,肺局所における細胞解析を行ったところ,抗IL-17抗体介入より,抗GM-CSF抗体介入の方が強い抗間質性肺炎作用があることが判明した.今後ヒトにおける応用が期待できる我々は膠原病の慢性炎症維持に重要であるIL-17およびGM-CSFの制御機構・治療介入研究を行った。本プロジェクト全体の達成度は現時点で70%前後である。原因遺伝子の特定まで解析が進んでおり,今後この遺伝子によるIL-17産生制御機構の解析が主題となっている.臨床免疫学1)遺伝子Xのノックダウン解析i細胞株においてはアンチセンスもしくはShRNAベクターを用いて安定細胞株を得,エピゲノム解析に供する。ii正常マウスT細胞およびヒトT細胞における遺伝子X強制発現およびノックダウン我々がすでに技術を有するレトロウイルスベクターを用いて解析する。ノックダウンはsiRNA法を用いる。2)遺伝子Xのクロマチン免疫沈降法およびゲルシフトアッセイ解析遺伝子XがいかにIL-17プロモーター領域のGCアイランドをメチル化しているのか,その機序は不明のままである。まず遺伝子Xが直接DNAに結合し得るのか解析する必要があるが,我々はIL-17産生・非産生マウスT細胞株を有しているため,高精度にその解析を行うことができる。まずクロマチン免疫沈降法,およびゲルシフトアッセイ法にて解析するが,直接結合でない場合他の介在因子を同定する必要があり,解析が困難になる可能性があるが,我々は細胞クローンとして同じ細胞株由来のIL-17産生および非産生細胞クローンを所有しており,そのような事態になってもエピゲノム解析が可能であると考えている。
口腔粘膜上皮自由表面にみられるマイクロリッジの微細立体構築の解析

非角化重層扁平上皮の最上層細胞の自由表面にはマイクロリッジと呼ばれる細胞質の隆起構造がみられる。マイクロリッジは、魚の口腔粘膜では細胞を単位に渦巻いた模様を描いており、動的で、環境の変化に応じてリッジから突起へ、また、その逆へ変化することが知られている。マイクロリッジはケラチンフィラメントを土台にしたアクチンフィラメントから構築されているが、立体的にどのようにして帯状の隆起構造が形成されているかは、まだ明らかにされていない。本研究の目的は、高分解能走査型電子顕微鏡を用いて、マイクロリッジとこれらのフィラメントの立体的関係、動的に変化するマイクロリッジとその変化に必要とされる膜の移動に細胞骨格がどのように関係しているかを調べた。サポニンやトリトンX-100で処理した粘膜上皮の超薄切片の観察や日立S-900高分解能走査型電子顕微鏡による観察を行った。超薄切片法の一部の試料はヘビメロミオシンS1を反応させた。また、膜内粒子を観察するために、フリーズ・レプリカを作成した。マイクロリッジをもつ細胞は、中央に核や分泌顆粒を含む小器官をもち、周囲を太いフィラメントの厚い層に囲まれていた。マイクロリッジ部では細いフィラメントが密に詰まっていた。二つのフィラメントの層には分泌顆粒と被膜小包が見られ、それぞれにフィラメントが付着していた。最表層部の細いフィラメントは超薄切片法の結果からアクチンフィラメントと考えられ、錯走するフィラメントが所々で隆起しリッジを形成していた。リッジ内部のフィラメントはリッジの模様に平行するもの、直交するもの、斜走するものが見られた。リッジ基部より下層では、やや太い、ケラチンフィラメントと考えられるものが網目状に配列しており、マイクロリッジ膜の供給源と考えられている分泌顆粒膜や核膜に結合していた。本年度の目的は、高分解能走査型電子顕微鏡を用いてマイクロリッジの微細立体構造の観察することである。魚類の口腔粘膜上皮のマイクロリッジを構築する主たる線維はアクチンフイラメントとケラチンフイラメントであるが、現在まで走査型電子顕微鏡下で詳細にこれらのフイラメントを観察する方法は確定していない。今までの超薄切片作成時に得られた条件、すなわち、マイクロリッジにトリトンXー100およびサポニンを処理し細胞質内の可溶性タンパク質を洗い流す条件や、さらにこれらを処理した標品のアクチンにミオシンS1を反応させる条件をもとに、高分解能走査型電子顕微鏡下でマイクロリッジの微細立体構造の観察を試みた。従来の超薄切片と同じ方法では、可溶性タンパク質が細胞質内にかなり残存しフイラメント系を埋めてしまい細胞骨格を構築する線維を観察することできなっかた。そこで、トリトンーX100とサポニンの処理時間などを変えて標本を作成し、かなり線維系を観察できるようになった。細胞小器官とりわけ分泌果粒とアクチンフイラメントとの関係は詳細に観察することが出来たが、細胞膜とアクチンフイラメンとの関係、すなわち、マイクロリッジをつくっている自由表面膜とアクチンフイラメント、細胞側面の密着結合とアクチンフイラメント、デスモゾ-ムとケラチンフイラメントさらにこれらのケラチンフイラメントとマイクロリッジを構築するケラチンフイラメントとの関係を明かにするためには、方法をさらに改良することが必要であると思われる。口腔粘膜上皮の自由表面に見られるマイクロリッジはケラチンフィラメントを土台にしたアクチンフィラメントから構築されていることが、超薄切片法で明かにされている。しかし、立体的にどのようにして帯状の隆起構造が形成されているかは、まだ明らかにされていない。

今年度の研究目的は、高分解能走査型電子顕微鏡を用いて、マイクロリッジとこれらのフィラメントの立体的関係を調べることである。粘膜上皮をサポニンやトリトンX-100で処理し細胞内の可溶性タンパク質を洗い出した後、通法に従い、固定、脱水した。いくつかの試料については、脱水途中に液体窒素中で割断した。臨界点乾燥後、金蒸着し、高分解能走査型電子顕微鏡で観察した。上皮を表面から観察すると、界面活性剤により所々形質膜が溶かされ、膜下のフィラメントの走行を観察することができた。この最表層のフィラメントは超薄切片法の結果からアクチンフィラメントと考えられる。錯走するフィラメントが所々で隆起しリッジを形成していた。割断面では、リッジ内部のフィラメントはリッジの模様に平行するもの、直交するもの、斜走するものが見られた。基部では、アクチンフィラメントは網目状に密に配列するが、表面に平行に束になって走り細胞側面において密着結合部の形質膜に付着するものも観察された。マイクロリッジ基部より下層では、やや太い、ケラチンフィラメントと考えられるものが網目状に配列しており、マイクロリッジ膜の供給源と考えられている分泌顆粒膜や核膜に結合していた。非角化重層扁平上皮の最上層細胞の自由表面にはマイクロリッジと呼ばれる細胞質の隆起構造がみらる。マイクロリッジの描く模様は動物種によって異なり、魚の口腔粘膜では細胞を単位に渦巻いた模様を描いている。この構造は動的で、環境の変化に応じてリッジから突起へ、また、その逆へ変化することが知られている。また、魚類の口腔粘膜上皮のマイクロリッジはケラチンフィラメントを土台にしたアクチンフィラメントから構築されていることを、超薄切片法で明かにしてきたが、立体的にどのようにして帯状の隆起構造が形成されているかは、まだ明らかにされていない。本研究の目的は、高分解能走査型電子顕微鏡を用いて、マイクロリッジとこれらのフィラメントの立体的関係を調べることである。錯走するフィラメントが所々で隆起しリッジをを形成していた。
重度視覚障害学生の論理回路実験支援装置の開発

計画では、重度視覚障害学生が、物理的な配線を行うための特殊なジャンパー線等の作成と、出力確認用論理回路装置を複数作成することにしていたが、特に重度視覚障害学生にとって配線の負担が大きく、その軽減が課題となっていた。このため、そこに至るまでの過程を細分化し、各過程での検証を積み上げていくことが、重度視覚障害学生が論理回路を学修するという目的を達成する上で重要であることがわかった。そこで、ハードウェアでの学修に至る前の過程として、ソフトウェアによるシミュレーションによる学修を容易に行えるようにするため過程について検討を進め、それを重度視覚障害学生が単独で行うことができるプロトタイプを作成した。ソフトウェアによるシミュレーションの過程を2段階に分け、さらに後者を2段階(その1とその2)に分けて学修を進めるモデルを構築した。第1段階は、プログラミング言語を用いて検証できるようにした。これにより、各自が設計した論理関数や論理式が、目的とする応用問題を正しく解くことができるかどうかを容易に検証可能となった。第2段階は、設計した論理式や論理関数が正しいとわかった上で、論理素子を配線して行うグラフィカルな論理回路シミュレーターを重度視覚障害学生にも使えるように、マウスを使わずに記述可能なフロントエンドのインタフェースを開発した。第2段階その1では、素子の種類とファンインを設計し、検証できるようになっている。第2段階その2では、素子をマザーボード上に具体的に配置する場所を設計し、マザーボード上の座標を用いて検証できるようになっている。主に平成29年度の研究成果により、重度視覚障害学生を含む視覚障害学生に対する論理回路の配線を、学生が行える目処を得た。しかし、物理的な配線には、視覚障害学生にかなりの負担がかかっており、その負担の軽減が課題となっていた。これに対し、今年度は、その前段階までを充実させて、学生が設計した論理式や論理関数を段階的に検証をすすめられるようにすることで、学修を進めるモデルとそのためのフロントエンドのプロトタイプを作成できた。重度視覚障害学生から有効である旨の評価を得ている。本学修モデルと方法について、成果をまとめるとともに、学修を進めるための教材作りを進める。また、ハードウェアでの検証を行えるようにするための、多数の特殊ジャンパー線等を作成すると共に、出力確認用論理回路装置を複数作成する。1.視覚障害学生が映像を取得するための簡便な映像取得機器を調査した4種類のマイクロスコープ型の映像入力装置と、2種類のハンディ型の拡大器と、スマートフォンによる拡大表示とを比較した。使いやすさの見地からは、フォーカス調整機能、画像と被写体との位置合わせ・回転あわせ、拡大率の調整機能、被写体までの距離、画角、映像の歪み、解像度、表示遅延時間、持ちやすさ・固定しやすさ、発光機能が影響を及ぼした。弱視学生が映像をそのまま見て作業をする場合と、ネットワークにより別室にいる講師等に映像を送信して見てもらい、音声で支援を受ける方法についても検討し、その有効性を調査した。2.HMDの視認のしやすさを調査した弱視学生の視覚障害の状態(視野、視力)によって、HMDの利用可能性が異なっていた。HMDの見やすさ、目の疲労度の見地からは、映像表示の位置・大きさ、表示デバイスが両眼か片眼か、視度調節機能が影響を及ぼした。HMDの代わりに通常のPCでの表示を利用する場合とで、比較検討もおこなった。弱視学生のために、目的の箇所を半自動で認識して拡大するプログラムも開発した。3.映像解析ソフトの開発を進めた有効なマイクロスコープ型のカメラから映像を取得し、回転補正をしてパソコンに表示するプログラムを開発した。事前準備をおこなうことで、ブレッドボード上の穴(ソケット)位置やソケット番号を認識させることができた。ただし、照明環境の変化に対する頑健性や、ICの足(ピン)の位置とその形状の自動認識並びにピンを正しいソケットに入れるためのナビゲーションの仕方については、今後の課題である。(1)平成26年度に引き続き、「局所的な配線状況を伝える論理回路キットの開発」を進めた。ICは直方体形状の両脇にICの足(ピン)があるため、ピンの位置を把握するためには、一方向からの映像では不十分である。このため、カメラを2つ設置し、両側から同時に撮影するようにした。そして、注目点周辺を2台のカメラで合成して拡大表示するようにした。2台のカメラの映像を射影変換して、視認性を高めるように接続した合成画像ではあったが、1800×1200画素でブレッドボード全体を含む実験キット領域を撮影すれば、ピンの位置を十分に把握できる解像度であることがわかった。ただし、解像度がそれほど高くないディスプレイが用いられることを想定し、注目点付近の部分画像を表示するようにした。(2)「ジャンパー線での配線が少ない論理回路キットの開発」を検討した。当初、マイクロコンピュータPICを用いて実現する予定で進めたが、より実用的なFPGAによるプログラミングを用い、画面を見ずに論理回路実験を実現できるようにすることを進めた。ジャンパー線の配線はプログラムに置き換わったものの、FPGAプログラミング用のプロジェクト作成・実行・検証時に、メニュー等に文字情報が入っておらず、現状では、画面読み上げのためのスクリーンリーダとしてPC-Talker, NVDA, Jawsを利用したが、いずれも画面を見ないで音声とキーボードだけで論理回路実験を行うことはできていない。また、タイミングチャート波形を音声で伝えるためには、波形の認識等が必要であるが、その認識と波形を音声表現するためのアルゴリズムもできていない。

分析力と開発力不足により,想定された以上に,コンピュータが自動的に読み上げることのできないメニューや表示が多かったため。学術的な成果は乏しいものの、実用上の成果は以下の通りである。1.ICのブレッドボードへの配置ICは、全てのピン(足)がブレッドボードのソケット(穴)の正しい位置にないままブレッドボードに押し込むと、ピンが曲がったり、開いたり、折れたりする。このため、視覚障害学生が目的のICをブレッドボードに挿入することは非常に困難であった。これを解決すべく、ICの全てのピンの曲がり具合をソケットに合うよう事前に揃えたり、軽く配置した際にソケットに正しく入っていないピンを特定して修正してもらう方法を検討したが、自動化は困難であった。一方、論理回路の実験では、回路の等価性により、ICの種類を限定することができる。このため、論理回路の基礎実験を十分行えるために14個のICを予め配置し、さらに、ブレッドボード上の電源用のソケットに給電するための配線を予め行うことで、ICのブレッドボードへの設置の問題を解消した。2.弱視学生が配線しやすい拡大画像の提供配線は、配線箇所付近が拡大表示されるとよい。この際、課題になるのは、(1)拡大画像の高精細表示、(2)表示のリアルタイム性、(3)IC等に隠れない配線箇所の表示、である。(1)を実現するために高解像度で撮影並びに表示すると、処理時間がかかり、(2)の実現が困難になる上に、高精細な大型のディスプレイが必要になる。これらの問題を解決するために、配線箇所を特定し、その付近を中心とした局所領域のみを拡大表示することで高解像度な拡大表示画像を安価なノートPCでもほぼリアルタイムで表示することが可能となった。また、(3)のために、カメラを前方からと後方からの2箇所に設置して、両画像を表示することで、ソケットが隠れてしまう問題に対応した。ただし、配線箇所の特定のために、現在のところは、撮影された全体を低解像度で表示し、その中をクリックしてもらう必要がある。以下の進捗状況により、部分的に進んでいたり遅れているため。1. ICのブレッドボードへの配置については、視覚障害学生がICをブレッドボードへ装着するのは困難であるため、論理回路の基礎実験を十分行えるためのICを予め装着し、さらに、ブレッドボード上への電源供給配線を予め行うことで、ICのブレッドボードへの設置の問題を解消した。2.弱視学生が配線しやすい拡大画像の提供については、配線を行うIC付近の特定をマウス操作で指定することを前提に、そのIC付近を中心とした局所領域のみを2箇所からのカメラからの映像を拡大表示することで、高解像度な拡大表示画像を、配線のためのソケットがIC等で隠れることなく、15インチディスプレイの安価なノートPCでもほぼリアルタイムで表示することが可能となった。3.マザーボードの位置の同定については、ブレッドボード上にキャリブレーション用のポイントのあることを前提に、カメラのモデルパラメータを求める非線形最小二乗法のアルゴリズムを実装した。ただし、安定性と精度についての検討の余地がある。
医療・福祉専門家によるカウンセリング場面の会話分析的研究

本研究は、カウンセリング場面において専門家とクライアントが互いの発話をどのように解釈し、その結果として相互行為の展開にどのような影響が現れるのかを解明することを目指している。特に、1)専門家がクライアント自身の体験や感情の語りについての解釈をどのように自分の発話に反映させ、そのことがその後の相互行為の展開をどのように方向付けるかを実証的に検証し、2)そうしたカウンセリングの協同構築という活動のうちに埋め込まれた様々なレベルの「制度性」を洗い出すこと、この2っを目的とする。本年度は、すでに収録している婦人科の医療的カウンセリング場面の分析、および、教育用ビデオ教材として収録された実際の心理面接場面の分析を中心に研究を進めた。前者については、専ら医療者のための記録として診療中に書き込まれるカルテなどの記録媒体が、注視や指差しなどの動作によって、患者の語りによって提供された情報を構造化し協同的に利用するための資源として相互行為の組織に組み込まれ、カウンセリング活動の展開に決定的な役割を果たしていることを明らかにした。また、患者の過去の拒食症の経験が、このカウンセリング場面に導入され、中心的なトピックとなり、最終的に、「心の問題」と現在の身体症状とが結び付けられていく過程を詳細に分析した。後者については、カウンセラーが、クライアントの語りの合間に、聞き手の反応として「うん」と「はい」を多用することに注目し、「はい」がどのような箇所で用いられているのかを相互行為の視点から明らかにした。年度後半には、助産院における新生児健診場面において、新生児の母親が助産師や医師に対して新生児の健康状態や育児について相談をする場面をビデオ収録した。現在このデータの整理・文字化・分析を進めている。特に、1)専門家がクライアント自身の体験や感情の語りについての解釈をどのように自分の発話に反映させ、そのことがその後の相互行為の展開をどのように方向付けるかを実証的に検証し、2)そうしたカウンセリングの協同構築という活動のうちに埋め込まれた様々なレベルの「制度性」を洗い出すこと、この2つを目的とする。本年度は、まず、研究を進める上で欠かせない図書や文献・資料を購入・収集・整理し、ビデオデータの分析に必要な機器類を揃えて研究の環境を整えた。また、すでに収録している婦人科の医療的カウンセリング場面のデータ分析を中心に研究を進め、その成果を平成18年5月にヘルシンキで開催される国際学会で発表する。(発表要旨はすでに受理されている。)この学会発表では、1)クライアントが自らの性質や性格について語る談話に焦点をあて、クライアントと医師の相互行為の中で、心の問題と身体症状の関連付けがいかにして構築されているか、および2)心と身体が関連付けられる言語活動においてどのような制度性見られ、それは、治療方針の決定にどのような影響を与えているか、についての分析結果を報告する。この研究結果は、今後、他のタイプのカウンセリング場面(心理療法など)を分析していくための具体的な糸口を与えるものである。さらに、今年度3月には、国際的に活躍している第一線の会話分析専門家によるセミナーを企画し、かつ、自ら受講生としても参加し、専門的な訓練によるデータ分析力の向上をはかる。本年度は、すでに収録している婦人科の医療的カウンセリング場面の分析を中心に研究を進め、現在、得られた知見をまとめた論文を執筆中である。この論文では、一見、専ら医療者のための記録として診療中に書き込まれるカルテなどの記録媒体が、注視や指差しなどの動作によって、患者の語りによって提供された情報を構造化し協同的に利用するための資源として相互行為の組織に組み込まれ、カウンセリング活動の展開に決定的な役割を果たしていることを明らかにする。さらに、患者の過去の拒食症の経験が、このカウンセリング場面に導入され、中心的なトピックとなり、「心の問題」と現在の身体症状とが結び付けられていく過程を詳細に分析する。また、同じデータの中で、患者が用いる「ええと」という表現に注目し、「ええと」が単に「思案中」であることなど認知的な操作の状態を示す標示であるだけでなく、相互行為秩序の維持装置として働いていることを示した論文を執筆した。(「相互行為秩序維持装置としての「ええと」」『津田葵教授退官記念論文集言語と文化の展望』英宝社所収)なお、19年度に向けて新しいリサーチサイトを開拓するべく、現在、関係者に協力を依頼している段階である。

特に、1)専門家がクライアント自身の体験や感情の語りについての解釈をどのように自分の発話に反映させ、そのことがその後の相互行為の展開をどのように方向付けるかを実証的に検証し、2)そうしたカウンセリングの協同構築という活動のうちに埋め込まれた様々なレベルの「制度性」を洗い出すこと、この2っを目的とする。本年度は、すでに収録している婦人科の医療的カウンセリング場面の分析、および、教育用ビデオ教材として収録された実際の心理面接場面の分析を中心に研究を進めた。前者については、専ら医療者のための記録として診療中に書き込まれるカルテなどの記録媒体が、注視や指差しなどの動作によって、患者の語りによって提供された情報を構造化し協同的に利用するための資源として相互行為の組織に組み込まれ、カウンセリング活動の展開に決定的な役割を果たしていることを明らかにした。また、患者の過去の拒食症の経験が、このカウンセリング場面に導入され、中心的なトピックとなり、最終的に、「心の問題」と現在の身体症状とが結び付けられていく過程を詳細に分析した。後者については、カウンセラーが、クライアントの語りの合間に、聞き手の反応として「うん」と「はい」を多用することに注目し、「はい」がどのような箇所で用いられているのかを相互行為の視点から明らかにした。年度後半には、助産院における新生児健診場面において、新生児の母親が助産師や医師に対して新生児の健康状態や育児について相談をする場面をビデオ収録した。現在このデータの整理・文字化・分析を進めている。
海藻類における成熟時期多型の維持機構の解明

褐藻アカモクは、10m以上にまで成長することもある1年生の海藻である。新潟県沿岸においては16月までアカモクの成熟が見られる。本研究は、この長い繁殖期の実態の解明と、集団分化に及ぼす影響を解明することを目的とした。野外調査の結果、新潟県沿岸の地点ごとに成熟期間が異なっていることを確認できた。また培養実験の結果から、春成熟個体と冬成熟個体では光周性が異なることを確認した。遺伝的にはミトコンドリアマーカーを用いた解析でも、核マイクロサテライトマーカーを用いた解析でも、冬(1ー3月)と春(4ー6月)成熟集団の間に明確な遺伝的分化が確認され、さらに、それぞれの季節の中で地点間の分化も確認された。平成26年度は,冬成熟アカモクと春成熟アカモク集団の遺伝的分化をミトコンドリアハプロタイプに基づき解析するために、佐渡の中でも冬集団と春集団が共存している地域におけるミトコンドリアハプロタイプの月変化の確認、および佐渡全域のハプロタイプの網羅的解析を行った。事前に主なフィールドとしていた地先において、道路工事の影響でアカモク集団が消えてしまい、毎月の採集を行うことができないというトラブルがあったが、複数の地域において、同じ場所に生育する春集団と冬集団のハプロタイプ頻度の比較を行い、明確な違いを確認することができた。核マーカーについては、1マーカーについて解析を終了したが、ミトコンドリアのように明確な遺伝的違いは確認されず、場所によっては対立遺伝子頻度の違いが全く見られない集団も存在した。この結果が、冬集団と春集団の遺伝的交流の結果なのか、マーカーの解像度不足が原因なのか明らかにするためは、ほかの核マーカーの解析が必要である。現在、さらに1マーカーについて解析を進めているが、今後、追加の核マーカーの開発を進め、順次核マーカーを用いた冬集団と春集団の比較を行っていく。また、室内培養実験を通じて冬集団と春集団由来の株に臨界日長の違いが見られることを確認した。この結果から、冬集団と春集団の成熟時期の違いが遺伝的要因によるものであることが強く示唆された。今後、使用する株数を増やすとともに、交配実験により、光周性の遺伝様式を確認し、野外における交雑の影響について確認を進めて行く予定である。平成27年度は,冬成熟と春成熟のアカモク集団間の遺伝的分化を解析するための核マーカー、とくにマイクロサテライトマーカーの開発に取り組んだ。協力者によりアカモクのRNAseqデータ中にみられるマイクロサテライト領域を増幅するようなプライマー情報の提供を受け、提供されたプライマーについてPCR条件の探索に取り組んだ。遺伝的多様性を考慮して選んだ2ー4個体のアカモクゲノム溶液を用い、55ー65度のアニーリング温度においてPCRを行い、安定的に増幅がみられるかを確認した。情報提供されたプライマーの中から、標的領域中の反復数が多い順に33領域について条件検索を行い、現在までに16領域について安定的に増幅がみられることを確認している。また、増幅が確認された領域のうち8領域については、約100個体についてすでに遺伝子型の決定を行なった。マイクロサテライトマーカーに加え、RFLPマーカーについても新たに1領域について解析を進め、150個体について遺伝子型を決定している。培養実験については、昨年度に続き、新たに春1株、冬1株について光周性の確認を行なった。また、同時にこれらの株の交配を行い、F1の作成に成功した。マイクロサテライトマーカーの開発において研究が進展しない時期があったものの、年度としてみると目標としていた数のマーカーを確保できたと言える。残念なことに遺伝子型の決定を進めている8領域のうち2領域については、増幅が見られない個体が多く、最終的な遺伝的構造を解析する際のデータに含める事が難しいと考えているが、他の6マーカーについては、多型も十分である。すでに解析を行なったRFLPマーカー2つとあわせ、最終的には合計で20程度のマーカーについて遺伝子型の決定を行なうことを目標としている。目標としているサンプル数およびマーカー数を考慮すると、進捗状況は全体の20%程度で、27年度中に50%程度は終了している見込みだったことを考えると、予定よりやや遅れていると言わざるを得ない。培養実験については、現在、冬成熟株と春成熟株のF1が順調に育っているため、28年度の後半になれば光周性の確認に使用できる見込みである。平成28年度は、核ゲノム上のマイクロサテライトマーカー7領域を用いて佐渡沿岸のアカモク集団に関して遺伝的分化の解析を行なった。マイクロサテライトマーカーについては、協力者から得ているRNAseqの情報をもとに開発したプライマーを用いた。佐渡沿岸のアカモク集団については、すでにミトコンドリアマーカーにおいて、季節性の異なる2つのグループを認識できるという結果を得ているが、マイクロサテライトマーカーにおいても、1ー3月に成熟する集団と4ー6月に成熟する集団の間に明確な遺伝的分化を確認することができた。解析ソフトSTRUCTUREを用いて個体のクラスタリングを行なった結果においても同様の結果を得ることができたが、一方で少数(336個体中、8個体)ながら例外的な個体も見つかり、また2グループ間の交雑を示唆するような結果も確認することができた。また、28年には野外調査を行ない、新潟県本土沿岸のアカモク集団にも季節性の多型が観察されることを複数地点で確認した。サンプリングも兼ねて、それらの集団を対象として個体および集団の成熟期間の調査を実施した。野外調査の副産物として、生殖器官(リセプタクル)の形成と卵の放出との間に、時期的に大きなギャップがある個体がしばしば存在することを確認できた。

従来まではリセプタクルのサイズを「成熟」の一つの目安としていたが、実際の卵(配偶子)放出期間とは必ずしも関連していないことがわかったため、卵放出期間を確認した個体をサンプルとした解析を行ない、成熟時期多型と遺伝的分化の関連について詳細を確かめる必要があることが判明した。マイクロサテライトマーカー候補となる31領域をテストし、うち7領域について佐渡沿岸の19集団336個体の解析を終了した。マーカー数にやや不足があるが、目的の一つである季節的多型をしめす同所的集団間の遺伝的分化としては十分な結果を得ており、1ー3月成熟集団と4ー6月集団の間には、Fst値として0.16(1ー3月同士は0.11、4ー6月同士は0.04)、Dest値として0.48(同じく0.21と0.16)という明確な遺伝的分化を確認できた。STRUCTURE解析では、3月ー4月に成熟個体の所属する遺伝的グループが大きく変化することが示された。STRUCTUREの結果では、2グループ間の遺伝子流動を示唆する結果も得られているが、この点については更なるデータ解析が必要である。これら2グループ間の生理的な違いについて、1ー3月集団については臨界日長が短い(10時間/日)ことを示唆する結果を得ていたが、その後の実験で8時間明期/日でも成熟することがわかった。この結果は天然個体を培養下に持ち込んだ場合により顕著であり、また培養下だけでなく野外においても冬至前から生殖器官の形成をはじめる個体が少なくないことを確認した。また、本年度、野外調査において本土側にも季節性の多型が見られることを確認した。その過程で、本研究で成熟の指標としていた生殖器官のサイズと卵放出期間が必ずしも相関しておらず、1ヶ月以上のギャップがあるケースがしばしば確認された。また、卵放出を終えても流失するまで時間がかかるケースも観察され、成熟時期=繁殖時期と考えると、これまでのサンプルの中には成熟時期が不正確に記録された個体が含まれていると考えられる。成熟時期と遺伝的分化の関係を明らかにするために、成熟時期をより正確に「卵(配偶子)放出期間」により定義したサンプルの解析を行なう必要があることが明らかになった。本年度については、新潟県のアカモク集団について、野外における成熟時期の調査、およびマイクロサテライトマーカーを用いた遺伝的解析を中心に進めた。野外調査については、本土側の3地点(糸魚川市市振、柏崎市笠島、柏崎市鴎ガ鼻)において、メス個体について個体識別を行いながら卵の放出期間を調査した。市振では1月から3月末まで、鴎ガ鼻では5、6月に卵の放出が見られた。また笠島においては1月から5月末まで卵の放出が連続的に観察できることを確認した。野外調査で卵放出期間を確認した個体を加えて、マクロサテライトマーカーに基づく遺伝的解析を行った。昨年度まで用いてきた7マーカーを使った解析においては、32集団470個体のサンプルは2グループに分かれ、1-3月に成熟する集団と4-6月に成熟する集団との間で明確な遺伝的分化を示し、地理的条件に関わらず季節ごとにまとまった。