hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
下垂体腺腫における14q32インプリンティング領域の遺伝子発現制御機構

miRNAマイクロアレイ分析においてGH産生腺腫での14q32のDLK1-DIO3座位のmiRNAsの発現増加を認め、これらの変化はqRT-PCRで確認した。14q32におけるDNAコピー数の変化を認めなかった。パイロシーケンシングおよびバイサルファイトシークエンシングによるDNAメチル化分析により、2種のGH産生腺腫において、DLK1-DIO3遺伝子座での母親由来遺伝子発現を調節するDMRおよびMEG3-DMRの個々のCpG部位ごとにメチル化レベルが異なることを確認した。以上、14q32 miRNAはGH産生腺腫において発現増加が認められ、メチル化異常が特定のGH産生腺腫で観察された下垂体の腫瘍化機構においてエピゲノム異常の関与が想定される。本研究においては、下垂体腺腫各タイブにおいて、特徴的発現パターンを示す14q32インプリンティング領域に位置するマイクロRNA (miRNA)クラスターおよび長鎖非コードRNA (lncRNA)、蛋白をコードする遺伝子のインプリンティング発現調節機構およびその破綻を解析することにより下垂体腺腫の発生・進展への関与を解明する。マイクロアレイの再解析結果から、14q32に位置するmiR-770からmiR-370のクラスター、miR-379からmiR-656のクラスターでは、ナルセル, FSH/LH, ACTH腺腫で低いシグナルを示すが、GH腺腫では2倍程度の発現増加を認めた。他のインプリンティング領域(19q13.4、11p15.5、7q32.2、20q13.3)では正常下垂体組織で発現シグナルが弱いこと、各タイプの腺腫においてもシグナル変化を認めないから、14q32領域に特異的は変化であることを確認した。同部位に位置し蛋白をコードし父方アレルが発現するDLK-1およびRTL-1は、GH腺腫で発現が高く、ナルセル, FSH/LH, ACTH腺腫で低発現を示すこと、長鎖非コードRNAで母方アレルが発現するMEG3、MEG8はナルセル, FSH/LH, ACTH腺腫で低発現を示すことをrRT-PCRで確認した。MEG3-DMRにおけるbisulphite sequencingにおいて、正常下垂体組織ではメチル化を示すクローンは半数であった。本結果は正常下垂体において片親由来のDMR部位がメチル化されている可能性を示唆する。一方、FSH/LH腺腫3例では100%ちかいクローンがメチル化を受け、高メチル化状況であることを認めた。非機能性腺腫やACTH腺腫におけるmiRNAの発現低下は、14q32に位置するインプリンティング領域内のmiRNAクラスターに特異的に認められること、及び14q32のインプリンティング状況を調節するMEG3-DMRにおいて、解析した領域が高メチル化状態を示すことを確認したことより、順調に進展していると考える。1. MLPA法を用いた14q32.2インプリンティング領域のゲノムコピー数の解析14q32.2に位置するDLK1、MEG3の5'上流部分、MEG3 (exon 11)、RTL1、miR-380のゲノムコピー数は正常下垂体と同様に、いずれの腺腫においても2コピーを示し、コピー数の増減は認められなかった。また、他染色体のインプリンティング領域部位である6q24.2, 7p12.1, 7q32.2のコピー数も2であった。ゲノムDNAをメチル化感受性制限酵素であるHhaI処理後、MLPAを行った。MEG3のexon 1aの3箇所について検討した。正常下垂体では半数のゲノムDNAがメチル化されていることより、父方アレルにおけるメチル化によるインプリンティングを受けていることが明らかとなった。FSH/LH腺腫3例のうち1例でMEG3の1-2の塩基位置で両アレルの高メチル化を認めた。しかし同部位から0.1および0.4kb上流のCpGが正常と同じメチル化であった。GH腺腫4例のうち1例でMEG3のexon 1aの上流の2箇所で両アレルの低メチル化を認めた。14q32.2インプリンティング領域のmiRNAおよびlong non-coding RNAの発現低下あるいは増加が、腺腫におけるコピー数の増減によるものでないことを多検体を用いて確認できた。以前に実施した正常下垂体および下垂体腺腫におけるmiRNAマイクロアレイ解析の生データを再解析した。シグナル強度が100以上で,正常下垂体に比べ2倍以上のシグナルの差異があるものを選んだ。ACTH・FSH/LH・ナルセル腺腫いずれにおいても低下していた24種のmiRNAのうち23種が14p32インプリンティング領域に位置するmiRNAであった。一方、14p3領域の33種のmiRNAがGH腺腫で発現増加が認められた。qRT-PCRで確認したところmiR-127-3p, MiR-495, miR-487b, miR-154では正常下垂体に比してGH腺腫で有意な発現増加を、FSH/LH腺腫では発現低下を認めた。そこで、14p32インプリンティング領域の発現を調節しているIG-DMRのCG4領域の4ヵ所のCpGおよびMEG3-DMR内の8ヵ所のCpGのメチル化状態をパイロシークエンシング法にて解析した。2種の正常下垂体においてはIG-DMRおよびMEG3-DMRの12箇所のメチル化は40-70%であった。

2種のGH腺腫においては40-100%で、発現上昇から期待した低メチル化は認めなかった。MS-MLPA法でのMEG3の低メチル化を認めた1種では特定のCpGの低メチル化を認めたため、バイサルファイトシークエンシング法で確認した。その結果、同部位に非メチル化を認めたが、全体的(8ヵ所)には66%のメチル化であった。1種のFSH/LH腺腫ではIG-DMRで30-50%, MEG3-DMRで40-70%と低発現を説明しうる高メチル化は認めなかった。一方、正常下垂体のMEG3-DMRサルファイトシークエンシング法では75%のクローンのすべてのCpG部位にメチル化を認めたことから、成人下垂体において14q32のインプリント機構は保持されていることが強く示唆された。miRNAマイクロアレイ分析においてGH産生腺腫での14q32のDLK1-DIO3座位のmiRNAsの発現増加を認め、これらの変化はqRT-PCRで確認した。14q32におけるDNAコピー数の変化を認めなかった。パイロシーケンシングおよびバイサルファイトシークエンシングによるDNAメチル化分析により、2種のGH産生腺腫において、DLK1-DIO3遺伝子座での母親由来遺伝子発現を調節するDMRおよびMEG3-DMRの個々のCpG部位ごとにメチル化レベルが異なることを確認した。以上、14q32 miRNAはGH産生腺腫において発現増加が認められ、メチル化異常が特定のGH産生腺腫で観察されたメチル化状況の検討には、解析部位および腺腫の解析数を増やすためには、bisulphite sequencingでは多量の労力を要することがわかった。そこで、定量化も優れているpyrosequencingを用いて解析することとした。Methylation-specific MLPA法を用いたCpGのメチル化解析の結果と以前に解析したbisulfite sequencing法によりメチル化の結果が一致しない(検討しているCpGの位置は異なる)。このため、MEG3プロモータ領域のメチル化解析をより詳細に解析する必要があいpyrosequencing法による解析を検討している。内分泌学・代謝学平成28年度実施予定のゲノムコピー数の解析の試薬が高額であることが見込まれるため平成29年度にメチル化の解析をおこなう予定で、検体数を増加させると費用がかさむため次年度使用に充てることとした。平成28年度実施予定のゲノムコピー数の解析の試薬に充当する予定14q32.2インプリンティング領域プロモーター部分のメチル化をpyrosequencingを中心として解析をおこなう予定。
膵癌における線維化の抑制と癌関連線維芽細胞を標的とした新規治療薬の開発

コノフィリン(Conophylline:CnP)は肝の星細胞を抑制を介して肝の線維化を抑制することが知られている。CnPを癌関連線維芽細胞(Cancer associated fibroblast:CAF)に投与した報告はなく、CnPのCAF抑制効果を評価し、抑制したCAFが膵癌の悪性度に与える影響を評価した。3.マウスを用いて膵癌細胞とCAFを同時に接種する皮下腫瘍モデルを用いてControl(無治療:no treat),CnP単独治療、GEM単独治療、CnP+GEM治療の4群に分けて治療を行うと、CnP+GEM治療群は他の3群と比較して著明な腫瘍縮小を認めた。以上より、コノフィリンは膵癌の増殖・進展に重要な癌関連線維芽細胞の増殖・活性化・サイトカインの産生を抑制し、膵癌の治療剤として有効であることが示唆された。本研究は、熱帯植物より抽出・分離された新規化合物コノフィリン(Conophylline:CnP)の線維化抑制効果を癌関連線維芽細胞に応用し、膵癌の増殖・進展に重要な癌関連線維芽細胞を制御することで膵癌に対する新たな治療法を開発することを目的とした。CnPは肝の星細胞を抑制を介して肝の線維化を抑制することが知られている。CnPを癌関連線維芽細胞(Cancer associated fibroblast:CAF)に投与した報告はなく、CnPのCAF抑制効果を評価し抑制したCAFが膵癌の悪性度に与える影響を評価した。マウスを用いて膵癌細胞とCAFを同時に接種する皮下腫瘍モデルを用いてControl(無治療:no treat),CnP単独治療、GEM単独治療、CnP+GEM治療の4群に分けて治療を行うと、CnP+GEM治療群は他の3群と比較して著明な腫瘍縮小を認めた。研究実績の概要に記載した結果から、コノフィリンは膵癌の増殖・進展に重要な癌関連線維芽細胞の増殖・活性化・サイトカインの産生を抑制し、膵癌の治療剤として有効であることが示唆された。研究結果を論文として執筆し、現在学術雑誌へ投稿中である。今回の結果で得られた研究成果は、膵癌だけでなく他の肝胆膵悪性腫瘍についても同様に検討する価値があると考えるため、現在研究計画中である。また、癌関連線維芽細胞を抑制する他の因子・阻害剤などについても研究を行っていくことを検討している。当該年度の全体額のうちの約4%程度(66,489円)が次年度使用額となった。研究としては、ほぼ計画的に進んでおり成果と支出費用に問題ないと考えている。したがって、次年度に使用することとした。
ゲノム標的化学を指向した機能性分子の創製

ヒトゲノム情報の解析が終了し、ゲノムの大部分は蛋白に翻訳されずに機能すると考えられてきており、従来、「生命の設計図」であり情報の担い手であると考えられていたDNAやRNAに様々な機能があることが次々と明らかになってきている。本申請研究では、ゲノムの分子レベルからナノレベルの構造変化を厳密に識別できる高機能性分子を開発し、生命科学研究の新たな方法論に展開することを目指した。その結果、標的RNAの機能を制御できる人工分子の開発に成功した。本申請研究では、ゲノムの分子レベルからナノレベルの構造変化を厳密に識別できる高機能性分子を開発し、生命科学研究の新たな方法論に展開することを目指している。本年度は我々が独自に開発した遺伝子応答型アルキル化機能性核酸という概念に基づき機能性RNAの阻害を行う方法論として(1)RNA型アルキル化機能性核酸及び(2)第2世代遺伝子応答型アルキル化機能性核酸について検討した。その結果、(1)に関しては、従来型の機能性核酸の糖部2'位にメトキシ基を導入することで、反応の選択性がシトシンからチミンに変化すること、さらに中性条件下でもチミンに対して高い反応性を示すことを明らかにした。またこれらの誘導体を用いてインビトロにおけるアンチセンス効果を検討したところ、天然型塩基を含む2'-OMe体オリゴに比べ、効率よく蛋白質発現効果を示すこともわかった。興味深いことに、この機能性核酸は相補的な位置の4-チオチミンに対しては反応しないこともわかった。(2)に関しては、従来型機能性核酸の構造に基づき新たに設計した分子が標的DNAの相補的な位置にあるチミン、及び標的RNAのウリジンに対して中性条件下、非常に効率的に反応することがわかった。以上の結果は遺伝子応答型アルキル化機能性核酸を用いた細胞内におけるmiRNAの阻害方法へと適用する可能性を示すものであると考えている。本年度は我々が独自に開発した遺伝子応答型アルキル化機能性核酸のさらなる高機能化及び細胞内における遺伝子発現制御について検討を行った。まず、高機能化の方法として、細胞内安定性さらには標的塩基の拡大を目指し、従来開発していた4-amino-6-oxo-2-vinylpyrimidine塩基をフレキシブルなスペーサーでオリゴヌクレオチドのバックボーンに導入した新規アルキル化機能性核酸を合成し、その反応性について検討した。その結果、RNAの相補的な位置のグアニンに対して、選択的に反応させることに成功した。さらにこの反応はZn,Niの添加により加速され、24時間後、約90%の収率で付加体を生成することを明らかにした。昨年度までに、2-amino-6-vinyl purine(2-AVP)を導入した2'-OMeRNAオリゴが中性条件下RNAに対して効率よく架橋反応が進行することを明らかにした。本年度はこれらを用いて、アンチセンス効果及びmiRNAの阻害について検討した。その結果、試験管内の翻訳系において、効率的に蛋白質発現を阻害できることがわかった。さらにmiRNAの結合部位を持つRNAを構築し、試験管内で2-AVPを反応させた後、細胞に導入したところ、miRNAが阻害され、蛋白質発現が活性化されることがわかった。さらに昨年度までに合成した、4-amino-6-oxo-2-vinylpyrimidine(VAOP)誘導体は2'-OMe RNAオリゴ内に導入したところ、RNAに対する反応性が低下することがわかった。導入する配列を検討した結果、VAOPの前後配列にミスマッチを導入した配列では、標的塩基に対して架橋反応することがわかった。
現代ギリシャ詩研究-セフェリス、エリティス、ソロモスを中心に-

5章から成る研究成果報告書の内容に対応させて、以下に概要を記す。セフェリスに関しては、セフェリス「16の俳句」語彙を基に他詩との関連を探り、俳句の中にテーマの凝縮があることを示唆し、またセフェリスによって俳句形式が現代ギリシァ詩の一部となり、現代ギリシァ語による俳句の内にホメロスやサッポーの修飾語句的表現が見られることを日本の詩歌伝統とギリシァとの出会いという点から論じた。エリティスについては、サッポー翻訳と他詩及び散文におけるサッポー言及及び引用を調査し、両者の深い繋がりを指摘。また特に抒情詩論の変貌という観点に基づいてサッポー断片31番とカトゥルス51番及びエリティス訳を比較、更に祝婚歌伝統の観点からサッポー断片104(a)(b)105(a)(c)とカトゥルス62番及びエリティス訳を比較考察した。ソロモスに関しては、現代ギリシァ詩への展開という立場から、ウーゴ・フォスコーロのソネットとソロモスのギリシァ民衆語詩におけるホメロスの意味を考察、更に極僅かなホメロス翻訳を原文と対照した。またペトラルカ『カンツォニエーレ』126番とソロモスの現代ギリシァ語訳も比較した。更に、ギリシァ的伝統考究の試みとして、アルドゥス版アリストパネスと写本異読の検討を、イタリア・ルネッサンスにおけるギリシァ語写本及び本文校訂の観点から行った。更にギリシァ伝統影絵人形劇カラギョージを現代の古喜劇と捉え、また絵本版アリストパネス『蛙』のメッセージを通して、絵本として生きる文化伝統を指摘した。最終章「異文化に架ける橋」では、現代ギリシァ語実験詩の日本語翻訳を通して経験した文化異性の不思議な変容を論じ、また日本古典及び近代詩歌の現代ギリシァ語への翻訳を抒情詩の普遍性指摘の目的で、小論と共に行った。現在までの本年度研究成果は裏面に記載した四論文にまとめた。日本比較文化学会における発表「現代ギリシァ詩としてのXAIKAI(俳譜)或いはXAIOY(俳句)」を発展させて論文1「瞬間の雫-現代ギリシァ俳句の重要性-」2「ホメロス揺曳-現代ギリシァ俳句序説-」3「現代ギリシァ俳句考察-ホメロス、サッフォーと芭蕉の出会い-」に、また英米現代詩学会の発表「恋の波紋-サッフォー、カトゥルス、エリティス-」は論文4「詩論の変貌-サッフォー断片31番とカトゥルス、エリティス訳の比較考察-」にまとめた。1及び2では、詩集、日記に残されたセフェリスの全俳句に見られるホメロスの語彙やテーマとの関漣を調査し、『航海日誌』や『神話物語』のような主要な作品と同様に深い関連を見出せた。また、セフェリスは俳句という短詩形式を詩心の象徴と考えていたことが日記等の記述からわかる。3は、最初にギリシァ語で俳句を書いたクリネオスや、アンドニウ等のセフェリス以後の詩人たちによるギリシァ俳句のうちに、ホメロスやサッフォーの特に修飾語句を連想させる表現が多いこと、三行短詩として俳句が、カリマコス以来の、長大な叙事詩に対して繊細で短い詩を尊重する西欧詩論の伝統に位置付けられた可能性を指摘した論考である。

4では、サッフォー断片31番(LP)とカトゥルスのラテン語訳、エリティスの現代ギリシァ語訳を、科研費申請以前の調査よりも詳細に比較し、特に翻訳詩集『サッフォー』に見られるエリティスとサッフォーの繋がりには、セフェリスのホメロスへの傾倒を意識した面も存在することを示した。今後は、エリティスとサッフォー、セフェリスとホメロスという二つの研究課題を同時進行で調査して行くことにしたい。本年度の現代ギリシァ詩研究は、裏面に記した4点(上から1、2、3、4として記す)のうち下記2論文にまとめた。発表雑誌は、いずれもアテネ出版の学術的文芸、特に詩、誌であり、編集者からの求めに応じて投稿したものであるが、以後も継続的に現代ギリシァ詩に関する論文を依頼されている。3は、現代ギリシァ語俳句の伝統とその意義を論じた論文である。1926年12月12日に文芸週間新聞ΜεγαληΕλληυικηΕγκυκλοπαιδειαに最初のギリシァ語俳句10句を発表したキプロス詩人クリネオスの俳句知識の背景を探り、セフェリスとフランス俳譜の可能な影響関係を考察した上で、以後のギリシァ語俳句に見られるホメロス的語彙、及びサッポー的表現を指摘することによって、ギリシァ詩における俳句の伝統化(これは筆者の知る複数のギリシァ詩人の言葉である)とその意義について、昨年度の研究成果である俳句文学館紀要掲載論文を一層展開しつつ現代ギリシァ語で記述したものに他ならない。4は、ギリシァ語及びギリシァ文学の連続性及び一貫性という観点から、セフェリス、エリティス等の詩における古代ギリシァ詩からの影響について、同じく現代ギリシァ語で論述したものである。1、2は、在アテネ日本西洋古典及び考古学研究所設立提唱の意図で書いた論文であり、アメリカ研究所付属イェンナディオス図書館所蔵の、1498年アルドゥス版アリストパネスの西洋古典伝播の観点からの意義を述べ、若干の重要写本と同版本との本文異読を検討した上で、現代ギリシァにおける日本の西洋古典及び考古学研究所設立の必要性を示唆した。現代ギリシァ研究の一環として敢えてここに記す。本年度研究計画(以下、「計画」)に記した学会発表「セフェリスの俳句-『日記』と『詩集』から-」及び雑誌論文「現代ギリシァ詩研究の意義」(仮題)を、ギリシァの文学研究誌に発表した。古代ギリシァの詩及び詩人観をホメロス、ピンダロス、アリストファネス等の作品のうちに辿り、その伝統のなかでセフェリスとエリティスの位置付けを試み、セフェリスの俳句の重要性を詩全体との関連で指摘した。また日本の古典詩歌との比較に基づいて、ギリシァ語による俳句を二つの文芸伝統の出会いとして理解する考えを提示した。「計画」に記載した古典俳句等の現代ギリシァ語への翻訳は、歴史及び文学的重要性を考慮し先ず和歌から始めて、和歌の美学を古代、現代ギリシァ詩と比較しつつ解説した。この作業は、以後も継続し図書として著す予定であり、協力者のギリシァ人学者とも同意の下で計画を遂行している。日本文学の翻訳は少なくないが誤謬が多いので、刊行時には貴重な貢献となるであろう。夏季に主としてイオニア諸島で行った調査成果の一部は、東京とコルフ島で偶々同時に開催されたアレクサンドロス大王展に見られるヘレニズムの重要性に関する小論のうちに生かされている。また、現代ギリシァ影絵人形劇カラギョージに関するおそらく最初の日本語による紹介を行ったが、登場人物に反映しているコルフ島及びザキンソス島の文化性に触れることができたのは調査出張が無ければ不可能であった。同人形劇は、アリストファネス的諷刺の伝統、即ち生きている古典と呼べる。現代に生きる古典伝統研究として、カラギョージは興味深くかつ重要な課題であろう。本年度の研究実績は主に、3点の雑誌論文(日本語、英語、ギリシァ語各1点)と[図書]項目記載の『続現代ギリシァ語俳句アンソロジー』序文(ギリシァ語)として作成した「詩的対話-
シリコン基板上に界面制御して形成した単結晶強誘電体薄膜の作製

Bi_4Ti_3O_<12>(BIT)薄膜は、アルゴンと酸素ガスを用いた反応性スパッタリング法により、エピタキシャルIrあるいはPt薄膜上にヘテロエピタキシャル成長した。そのIrやPt薄膜は、アルゴンガスを用いたスパッタリング法によりエピタキシャル(100)YSZ/(100)Si基板上に堆積した。X線回折パターンは、エピタキシャル(001)BIT薄膜が(100)IrやPt薄膜上に45°面内方向に回転してヘテロエピタキシャル成長していることを示した。しかし、ラザフォーフォド後方散乱(RBS)法からは、Ir/YSZ/Si構造上のBIT薄膜には多くの空洞が存在すること及びBIT, Ir, YSZ及びSiが相互に拡散していることが観測された。これは、BIT薄膜作製時の酸素とIr薄膜とが反応して酸化Irとなるこや、それに誘発されて他の元素と酸素との反応が一因であると、X線回折測定やRBS測定かちわかった。一方、Pt薄膜上に堆積したBIT薄膜は、ほどんど拡散のない、通常の密度を持つ膜、即ちほとんど空洞が無い膜であることがわかった。Pt薄膜上のBIT薄膜の分極一電圧ヒステレシス特性は、ループが小さいながらも観測されたが、Ir薄膜上のものは、ほとんど観測することができなかった。このことから、Ir薄膜上のBIT薄膜の空洞及び構成元素の相互拡散が、BIT薄膜の強誘電性の発現を阻害する要因であると推測された。なお、Ptでも(111)Pt薄膜上のBIT薄膜は、強誘電体であるペロブスカイト相ではなく準安定なパイロクロア相となっており、強誘電性を示すBIT薄膜を成長させるには、Pt薄膜を(001)BITが成長させやすい(100)方向に成長させる必要があることがわかった。初年度は、Zr+Y金属ターゲットを用いた反応性スパッタ法によるSi基板上へのYSZ薄膜のエピタキシャル成長について、検討を行った。従来、用いられてきたターゲット表面が酸化している状態の酸化物モードでの堆積では、チャンパー内のプラズマ中に、活性な酸素や未反応の酸素が多く存在するため、それが堆積したYSZ膜中を拡散して、YSZ薄膜とSiとの界面にSiOx層を厚く形成すると考えられる。そこで、これらの影響を少なくする方法として、ターゲットが酸化されない金属モードによる堆積を試みた。その結果、金属モードで堆積したYSZ薄膜の実効誘電率は、YSZのバルク値が27ぐらいに対して約20と、従来の酸化物モードによる試料の倍以上の値が得られた。また、堆積時のO_2とArとの流量比を変化させることで、膜の実効比誘電率を22にすることができた。このことは、界面のSiOx層形成をSiO2換算膜厚で0.2nm程度まで抑制したことを意味している。これは、金属モードによる堆積によりチェンバー中の残留酸素つまり、YSZ膜の形成には余分な酸素が減少したためと考えられる。さらに、YSZ膜中ヘのSiの拡散をO_2流量比8%以上で、ある程度抑制出来ることがわかった。最後に、YSZ薄膜の堆積後、その上に直径0.10.5mmのAl電極形成し、窒素雰囲気中で300°C、30分のポストアニール処理を施したところ、膜の実効誘電率を減少することなく、C-V特性のヒステリシスが解消され、曲線の歪みもなくなることがわかった。

また、400°C、30分のポストアニール処理では、SiOx層が厚くなることもわかった。Bi_4Ti_3O_<12>(BIT)薄膜は、アルゴンと酸素ガスを用いた反応性スパッタリング法により、エピタキシャルIrあるいはPt薄膜上にヘテロエピタキシャル成長した。そのIrやPt薄膜は、アルゴンガスを用いたスパッタリング法によりエピタキシャル(100)YSZ/(100)Si基板上に堆積した。X線回折パターンは、エピタキシャル(001)BIT薄膜が(100)IrやPt薄膜上に45°面内方向に回転してヘテロエピタキシャル成長していることを示した。しかし、ラザフォーフォド後方散乱(RBS)法からは、Ir/YSZ/Si構造上のBIT薄膜には多くの空洞が存在すること及びBIT, Ir, YSZ及びSiが相互に拡散していることが観測された。これは、BIT薄膜作製時の酸素とIr薄膜とが反応して酸化Irとなるこや、それに誘発されて他の元素と酸素との反応が一因であると、X線回折測定やRBS測定からわかった。一方、Pt薄膜上に堆積したBIT薄膜は、ほどんど拡散のない、通常の密度を持つ膜、即ちほとんど空洞が無い膜であることがわかった。Pt薄膜上のBIT薄膜の分極-電圧ヒステレシス特性は、ループが小さいながらも観測されたが、Ir薄膜上のものは、ほとんど観測することができなかった。このことから、Ir薄膜上のBIT薄膜の空洞及び構成元素の相互拡散が、BIT薄膜の強誘電性の発現を阻害する要因であると推測された。なお、Ptでも(111)Pt薄膜上のBIT薄膜は、強誘電体であるペロブスカイト相ではなく準安定なパイロクロア相となっており、強誘電性を示すBIT薄膜を成長させるには、Pt薄膜を(001)BITが成長させやすい(100)方向に成長させる必要があることがわかった。
どのような口腔内装具が睡眠時無呼吸症候群に奏効するのか

どのような口腔内装具が閉塞型睡眠呼吸障害患者の治療に奏効するかについて、新潟大学歯学部附属病院いびき外来を訪れた患者を対象に検討を行った。スクリーニングとして、身長・体重・血圧の計測、通鼻検査、パルスオキシメトリーを用いた在宅検査、側面頭部X線規格写真の分析を行い、口腔内装具の使用前、使用後について終夜睡眠ポリソムノグラフィー(PSG)検査の結果を用いて検討を行った。口腔内装具は、平成15年度まではHerbst型装置を改良した上下分離型の装置を、平成16年度からはエルコプレスにより作成した一体型の2タイプを用いた。前者は平成15年度に51症例、後者は平成17年2月までに41症例に用いており、順次術後評価を行い比較検討を行った。また,術後評価を行ったAHIが5以上の閉塞型睡眠呼吸障害患者25名を対象に検討を行った。装具装着時のAHIが20未満となり、未装着時の値の50%以下に達したものを有効と判定したところ、有効症例は軽症では5例中4例、中等症では5例中5例、重症では15例中8例で、全体では25例中17例であった。有効群と無効群を比較したところ、装具未装着時のSpO_290%未満比とLowest SpO_2において有意な差を認め、有効群では無効群に比べて軽症な症例が多いことを示した。また、有効群の軟口蓋過剰量が、無効群よりも有意に小さくなっていた。BMIが25以上の肥満群の有効率は、14例中9例で、非肥満群の11例中8例よりも低い値を示した。肥満群は未装着時Lowest SpO_2が有意に低く、AHIも大きな値の重症症例が多く、BMIが25以上の肥満群において口腔内装具が有効であった9例と無効であった5例を比較すると、有効例では軟口蓋過剰量とPASが有意に小さな値を示したことから、口腔咽頭部での狭窄が少なく、かつ舌咽頭部での狭窄を認める症例に口腔内装具が効果的であった。平成15年度に新潟大学医歯学総合病院いびき外来を受診した患者を対象に、問診、アンケートを行い、身長・体重の計測、口腔内写真、X線写真〔セファロ(舌造影)〕の撮影、鼻腔通気度(鼻腔通気度計)検査を外来にて行い、さらに在宅検査(パルスオキシメトリー)をしてもらいその結果をデータベース化している。それに基づき、病態の重症度の判定を行い、口腔内装具による治療の適応と判断し、希望した患者40例について装具を作製している。当外来では、口腔内装具はHerbst型と呼ばれる左右に長さの調節できるロッドのついたものを用いている。作成後に、在宅検査を行い治療効果の低い症例に対して前方突出量を増加したり、顎関節などに症状が出現する症例については突出量を減らすといった調整を行っている。3ヶ月以上の使用期間をおき、効果が安定した時点にて終夜睡眠ポリグラフを行いその治療効果の判定を行っている。この際、口腔内装具を装着した状態で口腔内外の写真、X線写真〔セファロ(舌造影)〕の撮影を行っており、セファログラムより装置の装着前後にての顎位の変化や気道(posterior airway space)の拡大率について計測している。以上の結果を統計的に解析し、どのような骨格形態をした人がより口腔内装具が有効なのか、口腔内装具の前方突出量、突出方向をどのように設定すれば効果的なのか等を判定する予定である。まだ症例数が不足していることから、平成16年度も同様に検査を行い、症例数を追加する方針である。

肥満群は未装着時Lowest SpO_2が有意に低く、AHIも大きな値の重症症例が多く、BMIが25以上の肥満群において口腔内装具が有効であった9例と無効であった5例を比較すると、有効例では軟口蓋過剰量とPASが有意に小さな値を示したことから、口腔咽頭部での狭窄が少なく、かつ舌咽頭部での狭窄を認める症例に口腔内装具が効果的であった。
中国における胃がんの血清疫学的研究

1.中国瀋陽市における慢性萎縮性胃炎およびヘリコバクタ・ピロリ感染の有病率瀋陽市の血液センターより、20歳代から40歳代までの献血者380検体のパイロットの供与を受け、ペプシノゲンI、II値、IgG型抗ヘリコバクタ抗体、βカロチンの測定を行ない、宮城県での同年代の献血者の結果と比較検討を行なった。ペプシノゲンI<70mg/dlかつペプシノゲンI/II比<3.0をカットオフポイントとして慢性萎縮性胃炎を定義すると、瀋陽市におけるその有病率は男性5.2%、女性10.3%で、宮城県における有病率(男性30.0%、女性26.7%)に比して極めて低いことがわかった。瀋陽市におけるヘリコバクタ抗体の有病率は、男性40.3%、女性39.0%で、宮城県(男性50.8%、女性35.0%)に比べて男性で低い傾向が見られた。βカロチン値については、瀋陽市の男性20.3±20.8μg/dl、女性32.7±28.7μg/dlと男性が有意に(p<0.01)低かった。これらの結果は、宮城県(男性18.2±25.1μg/dl、女性38.3±34.2μg/dl)の結果と差が見られなかった。以上の結果は、慢性萎縮性胃炎の成因としてヘリコバクタ以外の要因が関与していることを示唆するものと考えられる。2.中国における胃がんの組織学的特徴瀋陽市における胃がん症例60例について、病理組織学的検討を行なった。これらのうち、低・未分化がんの占める割合は男性で51.4%、女性で69.6%であり、わが国のそれ(男性30.6%、女性54.1%:平成4年度日本消化器集団検診学会全国集計)に比べて高率であることが判明した。このことは、瀋陽市では高分化(腸型)胃がんの前がん病変とされる慢性萎縮性胃炎の有病率が低いという知見を矛盾しない結果であった。3.中国における胃がんの症例・対照研究慢性萎縮性胃炎、ヘリコバクタ感染などの寄与度を算定することを目的とした症例・対照研究を行なった。方法は、遼寧省腫瘤病院およびその関連病院で胃がんと診断された者(症例)、およびそれらと性・年齢・入院病院をマッチさせた患者対照(1:3)に対して特別にトレーニングを行った医師および医療従事者がインタビューによりライフスタイルに関する調査を行った。同時に血清を採取し、日本に移送していくつかの血清マーカーを測定した。その結果、1995年9月までに204例の症例、および612例の対照が集積されたが、症例の3例、対照の4例は、移送中の事故などにより血清量が十分得られなかったため除外し、症例201例、対照608例について解析を行った。単変量の解析では、胃がん症例には胃がん家族歴(症例8.0%:対照2.5%)、喫煙習慣(63.7%:48.7%)、漬物頻回摂取(36.8%:29.1%)、慢性萎縮性胃炎(45.8%:11.5%)、ヘリコバクタ感染を有する者(63.2%:48.0%)が有意に多く、塩魚(1.0%:5.8%)、果実の頻回摂取者(28.4%:49.0%)が有意に少なかった。この傾向は、性、年齢のほか要因の相互の関連を補正した重回帰分析でも認められ、それぞれ独立して胃がんに関連していることが示唆された。献血者を対象とした有病率研究では、中国における萎縮性胃炎の有病率はわが国に比して低率であるが、ヘリコバクタ感染の有病率は大差がないことが見られた。このことは、今考えられているヘリコバクタ感染-慢性萎縮性胃炎-胃がんというシークエンスの仮説に一見矛盾しているかに見えた。しかし、今回の症例・対照研究のような個体レベルの検討では、ヘリコバクタ感染および慢性萎縮性胃炎は胃がんと強く関連んしていることが認められ、その仮説を支持する結果であった。また、これまでの疫学研究でも認められていたように、喫煙が胃がんのリスクを上げ、果実の摂取がリスクを下げていた。

これらの結果は、宮城県(男性18.2±25.1μg/dl、女性38.3±34.2μg/dl)の結果と差が見られなかった。以上の結果は、慢性萎縮性胃炎の成因としてヘリコバクタ以外の要因が関与していることを示唆するものと考えられる。2.中国における胃がんの組織学的特徴瀋陽市における胃がん症例60例について、病理組織学的検討を行なった。これらのうち、低・未分化がんの占める割合は男性で51.4%、女性で69.6%であり、わが国のそれ(男性30.6%、女性54.1%:平成4年度日本消化器集団検診学会全国集計)に比べて高率であることが判明した。このことは、瀋陽市では高分化(腸型)胃がんの前がん病変とされる慢性萎縮性胃炎の有病率が低いという知見を矛盾しない結果であった。3.中国における胃がんの症例・対照研究慢性萎縮性胃炎、ヘリコバクタ感染などの寄与度を算定することを目的とした症例・対照研究を行なった。方法は、遼寧省腫瘤病院およびその関連病院で胃がんと診断された者(症例)、およびそれらと性・年齢・入院病院をマッチさせた患者対照(1:3)に対して特別にトレーニングを行った医師および医療従事者がインタビューによりライフスタイルに関する調査を行った。同時に血清を採取し、日本に移送していくつかの血清マーカーを測定した。その結果、1995年9月までに204例の症例、および612例の対照が集積されたが、症例の3例、対照の4例は、移送中の事故などにより血清量が十分得られなかったため除外し、症例201例、対照608例について解析を行った。単変量の解析では、胃がん症例には胃がん家族歴(症例8.0%:対照2.5%)、喫煙習慣(63.7%:48.7%)、漬物頻回摂取(36.8%:29.1%)、慢性萎縮性胃炎(45.8%:11.5%)、ヘリコバクタ感染を有する者(63.2%:48.0%)が有意に多く、塩魚(1.0%:5.8%)、果実の頻回摂取者(28.4%:49.0%)が有意に少なかった。この傾向は、性、年齢のほか要因の相互の関連を補正した重回帰分析でも認められ、それぞれ独立して胃がんに関連していることが示唆された。献血者を対象とした有病率研究では、中国における萎縮性胃炎の有病率はわが国に比して低率であるが、ヘリコバクタ感染の有病率は大差がないことが見られた。このことは、今考えられているヘリコバクタ感染-慢性萎縮性胃炎-胃がんというシークエンスの仮説に一見矛盾しているかに見えた。しかし、今回の症例・対照研究のような個体レベルの検討では、ヘリコバクタ感染および慢性萎縮性胃炎は胃がんと強く関連んしていることが認められ、その仮説を支持する結果であった。また、これまでの疫学研究でも認められていたように、喫煙が胃がんのリスクを上げ、果実の摂取がリスクを下げていた。本年度は、昨年度から継続して中国遼寧省藩陽市において胃がん症例および健常対照者の質問票調査と血清検体の集積を行った。1995年2月現在、症例114例,対照342例の集積を完了した。症例の内訳は、男性80例、女性34例で、60歳代の症例が40例(35%)と最も多く、年齢のレンジは、28歳から80歳であった。病理組織所見が判明したものだけを集計すると、低分化および未分化がんの割合は、男性で51.4%(19/37)、女性で69.6%(16/23)であった。日本消化器集団検診学会平成4年度全国集計によれば、わが国における胃がんの低分化、未分化がんの割合は男性30.6%(1127/3677)、女性で54.1%(1023/1892)であるので、中国では低分化・未分化がんの割合が高いことがわかった。この結果は、分化型がんの先行病変とされている萎縮性胃炎の有病率が、わが国に比べて中国で低い(日本の萎縮性胃炎の有病率は男性で30.0%、女性で26.7%、中国のそれは男性で5.2%、女性で10.3%)という昨年度の報告と矛盾しないものであった。
マウス始原生殖細胞形成を制御する分子カスケードの解明

本研究では、マウス始原生殖細胞の分化運命が決定される過程を制御する分子カスケードを明らかにし体細胞と生殖細胞の本質的な違いを最初に生み出す機構を解明することを目的とする。そのためこれまでに前駆細胞の時期から始原生殖細胞で特異的に発現するmil-1遺伝子を単離した。次に、この遺伝子の近傍領域にGFP遺伝子をつないだものでトランスジェニックマウスを作成し、始原生殖細胞での特異的な発現には、転写開始点から上流3kbpまでの領域が必要であることを明らかにした。これらの結果をふまえて本年度は、始原生殖細胞と胎仔生殖巣体細胞を用いて、この発現制御領域のDNAメチル化の差異をバイサルフェート法で調べ、始原生殖細胞ではほぼ完全に脱メチル化状態であるのに対して、体細胞では高メチル化状態になっていることがわかった。次にDNAのメチル化とmil-1遺伝子の発現制御との関連を明らかにするために、mil-1遺伝子を弱く発現している未分化ES細胞を、DNAを脱メチル化する作用のある5アザシチジン存在下で培養したところ、mil-1遺伝子の発現上昇と制御領域の脱メチル化が確認された。さらに発現制御領域にルシフェラーゼ遺伝子をつないだレポーターベクターをin vitroでメチル化したものと、脱メチル化状態のものをES細胞に導入し培養後にルシフェラーゼ活性を調べたところ、脱メチル化によりレポーター活性の上昇が見られた。これらの結果から、mil-1遺伝子の始原生殖細胞特的な発現制御には制御領域のDNAのメチル化が重要な役割を果たしていることが示唆された。マウス始原生殖細胞は原腸陥入開始後に、多能性細胞からなるエピブラストから形成されるが、その分子機構は明らかでない。この点にアプローチするために、始原生殖細胞形成に係わる遺伝子候補としてこれまでに単離・同定した、インターフェロン誘導性膜蛋白質ファミリー遺伝子に属するmil1,mil2遺伝子は、形成期から始原生殖細胞で特異性のある発現を示す。本年度は、これら分子の始原生殖細胞形成における機能を解析することに向けて、これらの細胞外領域に対する抗体を作製した。得られた抗体でウエスタンブロットを行ったところ、予想される分子量に特異的なバンドが検出された。さらに免疫染色で、始原生殖細胞と反応することが確認された。また、mil1遺伝子の特異的な発現を引き起こし、始原生殖細胞形成の初発段階で働くような転写因子を同定する目的で、この遺伝子の発現制御機構の解析を試みた。そのためにmil1遺伝子近傍領域をGFP遺伝子につないだものでトランスジェニックマウスを作製し、GFPの発現パターンを解析した。その結果、mil1の転写開始点から上流領域約3kbpで、内在性mil1遺伝子の始原生殖細胞に特異性のある発現がほぼ再現された。この遺伝子の上流、約2kbpには、始原生殖細胞で特異的に発現する他の遺伝子の近傍領域と相同性の高い配列を含む領域が見られる。また上流、約100bpにはヒトのホモログ遺伝子がインターフェロン依存的に発現する際に必要であることが報告されている配列が存在する。これらの配列をそれぞれ欠失あるいは、変異のある配列に置き換えた場合は、始原生殖細胞での発現は影響を受けないが、体細胞組織での発現の上昇がみられ、体細胞での発現抑制に働いているものと考えられた。減数分裂は生殖細胞のみが起こす特異な分化過程で、配偶子が半数体として機能するために必須であるだけでなく、遺伝情報のシャッフリングという意味においても重要な役割を果たしている。減数分裂の開始や初期の進行に係わる遺伝子を同定するために、体細胞分裂期と減数分裂開始時の胎仔生殖細胞を材料に、サブトラクションcDNAスクリーニングを行い、後者に特異的な遺伝子としてMeisetzを同定した。この遺伝子はヒストンH3、リジン4(K4)を特異的にトリメチル化するヒストンメチルトランスフェラーゼ(HMT)をコードしている。H3K4のメチル化はユークロマチン化と遺伝子の転写活性化を引き起こすことが知られているが、実際にMeisetzはHMTの活性を担うSETドメイン依存的なトランスアクティベーション活性を持つことが分かった。また、この遺伝子を欠損したマウスでは、相同染色体の対合と組み換えが異常になり、減数分裂がパキテン期で停止し、細胞死を起こすことが明らかになった。さらにMeisetz欠損精巣では正常マウスの精巣に比べて、H3K4のメチル化が全ゲノム的にやや低下し、またDNAマイクロアレイを用いた解析により相同染色体の組み換えに必要ないくつかの遺伝子の発現が低下していることが分かった。これらの結果から、Meisetzが減数分裂の初期段階で必要な遺伝子群の発現を、クロマチンレベルで制御している可能性が考えられる。前駆細胞の時期から始原生殖細胞で特異的に発現するmil-1遺伝子の発現制御について、これまでに行ったトランスジェニックマウスを使った解析から、この遺伝子の転写開始点の上流領域、約2kbpの部分が始原生殖細胞に特異的な発現に重要であることが明らかになった。始原生殖細胞の分化過程ではDNAのメチル化状態が全ゲノム的に大きく変化することから、DNAメチル化がこの遺伝子の発現制御に係わる可能性を考えて解析を行った。発現制御に重要と思われる、転写開始点上流約2kbpに位置する約300bpの遺伝子領域には、メチル化を受けうるCpGの配列が6カ所存在する。mil-1遺伝子を発現しているES細胞と13.5日

胚の生殖巣、発現していない13.5日胚の中腎を材料に、バイサルファイト法によりメチル化状態を調べた結果、これまでのところ中腎ではメチル化は検出されないが、mil-1遺伝子が発現しているES細胞と生殖巣ではわずかだがメチル化が見られた。現在、より詳細な解析を進めている。マウス始原生殖細胞は胚発生の初期段で、多能性幹細胞の一部が前駆細胞を経て分化運命決定されることにより形成される。その過程では複数の遺伝子カスケードが働いていることが予想されるが、詳細は明らかになっていない。そこで始原生殖細胞で特異的に発現する遺伝子の発現制御を上流に遡ることにより、分化決定機構を明らかにすることを試みている。前駆細胞の時期から始原生殖細胞で特異的に発現するmil-1遺伝子の発現制御について、これまでに行ったトランスジェニックマウスを使った解析から、この遺伝子の転写開始点の上流領域、3kbpの範囲が始原生殖細胞に特異的な発現に重要であることが明らかになった。始原生殖細胞の分化過程ではDNAのメチル化状態が全ゲノム的に大きく変化することから、DNAメチル化がこの遺伝子の発現制御に係わる可能性を考えて解析を行った。Oct3/4-GFPトランスジェニックマウスからフローサイトメトリーで純化した始原生殖細胞と体細胞、およびES細胞を用いてCpG部分のメチル化を網羅的に解析できるバイサルファイト法によりメチル化状態を調べた結果、上流500bpまではいずれの細胞でもDNAは脱メチル化状態になっているが、それより上流3kbpまではmil-1を発現している始原生殖細胞では脱メチル化状態だが、発現していない体細胞では高メチル化状態で、さらにmil-1の弱い発現が見られるES細胞では中間的なメチル化状態であり、この領域のメチル化が発現制御に重要である可能性が示唆された。本研究では、マウス始原生殖細胞の分化運命が決定される過程を制御する分子カスケードを明らかにし体細胞と生殖細胞の本質的な違いを最初に生み出す機構を解明することを目的とする。そのためこれまでに前駆細胞の時期から始原生殖細胞で特異的に発現するmil-1遺伝子を単離した。次に、この遺伝子の近傍領域にGFP遺伝子をつないだものでトランスジェニックマウスを作成し、始原生殖細胞での特異的な発現には、転写開始点から上流3kbpまでの領域が必要であることを明らかにした。これらの結果をふまえて本年度は、始原生殖細胞と胎仔生殖巣体細胞を用いて、この発現制御領域のDNAメチル化の差異をバイサルフェート法で調べ、始原生殖細胞ではほぼ完全に脱メチル化状態であるのに対して、体細胞では高メチル化状態になっていることがわかった。次にDNAのメチル化とmil-1遺伝子の発現制御との関連を明らかにするために、mil-1遺伝子を弱く発現している未分化ES細胞を、DNAを脱メチル化する作用のある5アザシチジン存在下で培養したところ、mil-1遺伝子の発現上昇と制御領域の脱メチル化が確認された。さらに発現制御領域にルシフェラーゼ遺伝子をつないだレポーターベクターをin vitroでメチル化したものと、脱メチル化状態のものをES細胞に導入し培養後にルシフェラーゼ活性を調べたところ、脱メチル化によりレポーター活性の上昇が見られた。
炭素13核の常温超偏極

本研究は、常温における陽子の高偏極を生成し、それを炭素13の超偏極に適用することを目的としている。パラ-ターフェニルをホスト分子とし、ペンタセンをゲスト分子とした単結晶を試料として偏極実験を行った。研究の結果、同分子中での陽子偏極緩和率が280-300ケルビンで極小となること、冷却窒素ガスで試料の温度を一定化しながら偏極実験を行うことにより、従来(偏極度4.8%)に比べ3倍大きな陽子偏極度が達成できることを明らかにした。今後この条件で炭素13超偏極実験を進める。初年度に行った研究から、レーザー照射による温度上昇が常温における陽子偏極度抑制の主たる要因であることを明らかにした。今年度はそれを受けて、冷却窒素ガスによる試料冷却機構を導入した。この機構を用い、まず基礎的なデータとして、300ー360ケルビンでの陽子偏極緩和率を測定した。これまで偏極緩和率は常温以下の温度でしか測定例がなく、200ー300ケルビンの間で温度とともに単調減少することが知られていた。今回測定した新しいデータにより、280ー330ケルビン付近で偏極緩和率はほぼ一定の極小値を取り、340ケルビンを超えたところから急激に上昇することが明らかとなった。そこで、パラ-ターフェニルにペンタセンを0.05%ドープした試料を、280ケルビン程度に保持して陽子偏極生成したところ、レーザー光の平均照射パワーが1.2 Wの時に冷却機構導入前に比べて7倍の偏極生成率が達成できることが明らかになった。最終到達偏極度としては、以前の測定(陽子偏極度4.8%)に比べて3倍程度の増倍が得られた。(S. Sakaguchi, T. Uesaka etal.,Nucl. Instrum. Methods B出版予定)陽子偏極度の大幅な増大が確認されたので、これを用いて炭素13への偏極移行実験に入ったが、その直後、偏極移行に用いるマイクロ波増幅器の故障が生じ、実験を中断せざるを得なくなった。本研究により、常温における陽子偏極の基本的な研究は大きく進み、その結果を受けて以前の3倍から10倍の陽子偏極度を得られることが分かったのは大きな成果である。装置故障のため炭素13核の超偏極生成には至らなかったが、装置修理完了後超偏極生成実験に再挑戦するば、大きな炭素13核偏極が観測されると予想される。常温における炭素13核の超偏極生成を目的とし、今年度は常温における陽子偏極生成の基礎研究を行った。試料としては、ペンタセン分子を0.1 mol%ドープしたパラ-ターフェニル結晶を用いた。常温では偏極緩和時間が数分以下と短いため、十分な強度を持つ励起光を照射することが高い偏極度を生成するために必要である。そのため、まずペンタセン分子の励起に用いるレーザー光のパルス構造と強度の最適化を行った。パルスのデューティー比を5ー50%の範囲で、繰り返し周波数を0.75ー10 kHzの範囲で変化させ、偏極率の計測を行った。その結果高いデューティー比での偏極率が我々の理論予想に比べ大きく減少しているという結果を得た。この傾向はレーザー光の強度が大きい場合より顕著であった。その他の測定結果とも比較した結果、レーザー光照射による試料の温度上昇が偏極緩和率を大きくさせていることが偏極率減少の原因と結論づけた。現在0°C付近で温度を一定化させる機構を準備中であり、来年度大強度レーザー光照射により高い陽子偏極度生成を目指す。更に、光照射後の三重項状態の電子偏極度消失機構についても基礎的なデータを収集した。三重項状態の電子偏極度は、偏極緩和と基底状態への脱励起の二つのプロセスにより消失する。我々の得た結果は、三重項状態の電子偏極度が主として基底状態への脱励起により消失するというものであった。この結果は、偏極緩和が主要プロセスとなっている100ケルビンでの実験結果とは大きく異なっている。これは、熱励起により基底状態の振動バンド励起され、三重項状態と結合し易くなるためと考えられる。今年度の最後に、陽子から炭素13核への偏極移行に用いる二重共鳴装置のテストを行ったが、偏極度が小さいため炭素13核の偏極観測には至らなかった。来年度陽子偏極度を向上させた後、再度炭素13核の偏極生成に挑戦する。常温近辺での光励起三重項状態については、これまであまり研究がなされておらず、予想外の現象に直面した。そのため、炭素13核の超偏極生成には至っていないが、今年度の研究で得た知見は今後大きな偏極度生成に役立つものであり、全体としては順調に進んでいる。

初年度の研究により、試料の温度を0°C前後に維持することが大きな陽子生成に重要であるという知見を得た。今年度は、温度コントロール機構を導入し、レーザー光強度と温度の最適化をはかる。これにより、陽子偏極度の向上が可能となり、常温で10%以上の偏極度生成が可能となると予想される。次に、初年度に準備した二重共鳴装置を用いて、陽子偏極を炭素13核に移行する。ここで、炭素13核のスピン緩和時間や陽子-炭素13核のスピン接触時間などの基礎データも同時に測定する。生体分子中への応用については、引き続き有機化学研究者との議論を行い、ホストおよびゲスト分子の選定を進める。初年度は常温での偏極緩和機構等について新しい知見を得られたなど進展があった反面、新しいホスト・ゲスト分子の探索まで手を広げることができず次年度使用額32,979円が生じた。次年度は、次年度使用額と次年度配分額を合わせて、偏極試料の購入( 33万円)、実験補助謝金(30万円)の支出を行う。また、12月にスイス・PSI研究所で行われる研究会に出席し、成果発表を行うとともに、三重項偏極の最先端研究について情報収集を行う(旅費30万円)。