hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
精巣の分化成熟を支配する精原細胞因子の解明

我々は精原細胞以降の精子分化が停止しているJSD変異マウス精巣と精原細胞がほとんどないW/Wv変異マウス精巣との遺伝子発現を比較する研究を通じて、24p3やSui1など24種類の遺伝子が精原細胞依存的にセルトリ細胞で発現することを報告した。昨年、新生マウス精巣由来のセルトリ細胞株を新たに樹立し、精原細胞との共培養による24p3 mRNAの転写誘導をin vitroで再現することに成功した。今年度は、このアッセイ系を用いて転写活性化領域を徐々に短縮していき、精原細胞による24p3遺伝子の転写活性化に必要な責任領域を同定した。ここにはNFκBのコンセンサス配列が存在し、ゲルシフト解析とクロマチン免疫沈降法によりNFκBのp50,p65が24p3遺伝子プロモーター領域に特異的に結合することを見出した。さらにドミナントネガティブIκBαの強制発現により、精原細胞による24p3遺伝子の転写誘導は抑制された。24p3遺伝子の転写誘導活性は精原細胞の培養上清に存在し、IL-1やLPS刺激時よりも活性化の程度が高かった。以上の結果から、セルトリ細胞では精原細胞から分泌される物質によりNFκB経路が活性化され、24p3遺伝子の転写活性化が引き起こされていることが示唆された。最近、24p3遺伝子産物が精子の運動性あるいは細菌感染防御に働く可能性が報告されている。したがって、精原細胞は精巣のホメオスタシスを維持するために、炎症性反応と共通のシグナル伝達経路を利用しているものと推察される。本研究を通じて我々は、精原細胞側のファクターが精巣の機能成熟に関与することをはじめて示し、精原細胞からセルトリ細胞への逆シグナルの実在を証明した。本知見は、ヒトの生殖器官発達の分子設計図の理解にも大きく貢献するものと期待される。ビタミンAの輸送に関わるProstagrandin D synthetaseや24p3といったリポカリン群、B型肝炎ウイルスX抗原癌遺伝子により発現抑制されるSuilなど24種類の遺伝子群は、精原細胞の蓄積しているJSDマウス精巣に発現し、精原細胞を欠くW/W^v精巣では発現していない。これらの24遺伝子群すべてが精原細胞だけでなくそれを取り巻くセルトリ細胞でも発現しているため、精巣の初期形成段階では、幹細胞である精原細胞からそれ自身とそれを取り巻く支持細胞の増殖・分化・成熟を制御する何らかの因子が放出されていることが推察されていた。この精原細胞によるセルトリ細胞遺伝子発現制御をより直接的に証明する目的で、精原細胞とセルトリ細胞の共培養系の樹立を試みた。様々な細胞株や初代培養系の組み合わせを試行錯誤した結果、以下の方法により精原細胞依存的なセルトリ細胞遺伝子発現を検出することに成功した。GFPトランスジェノックマ新生雄マウス精巣からc-Kit陰性細胞を分離し、一週間培養して初代セルトリ細胞の単層を用意する。ここに同じく正常新生マウス精巣のc-Kit陽性細胞を添加し24時間共培養した後、GFP陽性の初代セルトリ細胞のみを分離して、JSD由来遺伝子群の発現をRT-PCRにて解析した。その結果、c-Kit陽性細胞と共培養したときのみにセルトリ細胞からの24p3 mRNA発現が検出された。MHC-IQ, Spi proteinaseinhibitorのmRNAは同様な制御パターンを示したが、PTP-TD14を含むそれ以外のJSD由来遺伝子8種類は、精原細胞がなくても初代セルトリ細胞で発現していた。この結果は、セルトリ細胞で24p3などの遺伝子発現が精原細胞との接触により誘導されることを証明すると同時に、JSD由来遺伝子群の発現調節様式には二種類あることを示唆する。我々は精原細胞以降の精子分化が停止しているJSD変異マウス精巣と精原細胞がほとんどないW/Wv変異マウス精巣との遺伝子発現を比較する研究を通じて、24p3やSui1など24種類の遺伝子が精原細胞依存的にセルトリ細胞で発現することを見出した。さらに昨年・新生マウス精原細胞とセルトリ細胞との共培養系を確立し、精原細胞依存的な24p3 mRNAの発現開始をin vitroで再現することに成功した。本年度は、この共培養系の改良をさらに進め、セルトリ細胞における24p3遺伝子の発現制御ゲノム領域の同定を試みた。まずマウス24p3遺伝子の転写開始点上流3KbのゲノムDNAをクローニングし、これをルシフェラーゼリポータープラスミドpGL3に連結した。次に、SV40 large T抗原遺伝子の導入によって、新規の新生マウスセルトリ細胞株を複数樹立した。上記のレポーターコンストラクトをこれらのセルトリ細胞株にトランスフェクトし、新生マウス精巣のc-Kit陽性精原細胞分画と24時間接触培養した後、ルシフェラーゼ活性を測定した。その結果、細胞株Bを用いたときのみに、精原細胞依存的なレポーター活性の上昇が観察された。また、この細胞株では精原細胞依存的な24p3 mRNAの発現もRT-PCRにて確認された。以上の結果により、24p3遺伝子上流3Kbゲノム領域の中に、精原細胞との接着によって活性化されるエンハンサー配列が含まれることが示された。今後は責任応答領域をさらに狭めていき、最少エレメント配列とそこに結合する転写因子を同定する予定である。

この転写因子は精巣の増殖分化や機能維持を支配するマスター分子と推定され、その実体解明は実験動物であるマウスばかりでなく、ヒトの生殖器官発達の分子設計図の理解にも大きく貢献するものと期待される。我々は精原細胞以降の精子分化が停止しているJSD変異マウス精巣と精原細胞がほとんどないW/Wv変異マウス精巣との遺伝子発現を比較する研究を通じて、24p3やSui1など24種類の遺伝子が精原細胞依存的にセルトリ細胞で発現することを報告した。昨年、新生マウス精巣由来のセルトリ細胞株を新たに樹立し、精原細胞との共培養による24p3 mRNAの転写誘導をin vitroで再現することに成功した。今年度は、このアッセイ系を用いて転写活性化領域を徐々に短縮していき、精原細胞による24p3遺伝子の転写活性化に必要な責任領域を同定した。ここにはNFκBのコンセンサス配列が存在し、ゲルシフト解析とクロマチン免疫沈降法によりNFκBのp50,p65が24p3遺伝子プロモーター領域に特異的に結合することを見出した。さらにドミナントネガティブIκBαの強制発現により、精原細胞による24p3遺伝子の転写誘導は抑制された。24p3遺伝子の転写誘導活性は精原細胞の培養上清に存在し、IL-1やLPS刺激時よりも活性化の程度が高かった。以上の結果から、セルトリ細胞では精原細胞から分泌される物質によりNFκB経路が活性化され、24p3遺伝子の転写活性化が引き起こされていることが示唆された。最近、24p3遺伝子産物が精子の運動性あるいは細菌感染防御に働く可能性が報告されている。したがって、精原細胞は精巣のホメオスタシスを維持するために、炎症性反応と共通のシグナル伝達経路を利用しているものと推察される。本研究を通じて我々は、精原細胞側のファクターが精巣の機能成熟に関与することをはじめて示し、精原細胞からセルトリ細胞への逆シグナルの実在を証明した。本知見は、ヒトの生殖器官発達の分子設計図の理解にも大きく貢献するものと期待される。
水溶性二核錯体触媒による二酸化炭素を用いた水中カルボン酸合成

本研究の目的は、「水中で機能する二核錯体触媒を独自のアイデアに基づいて設計・合成し、二酸化炭素を用いるC-H結合の直接カルボキシル化法を開発すること」である。平成29年度はニッケル・ロジウムおよびニッケル・イリジウム二核錯体の合成法を確立し、これらを用いてこれらをヒドロシランなどの種々の有機物と反応させ、反応中間体を単離し、メカニズムの解明を行った。具体的には、チオラト架橋二核錯体[Ni(meppp)ML2]PF6 (M = Rh, Ir; L = 1/2cod, CO, XylNC, P(OPh)3)を系統的に合成し、これらとヒドロシランなどの種々の有機物との反応生を検討した結果、配位子としてXylNCを有するニッケル・イリジウム錯体のみがヒドロシランを活性化し、対応するシリルヒドリド中間体が得られることを見出した。以上の結果より、P2S2型四座配位子を有するチオラト架橋異種金属二核錯体を合成し、有機基質との反応性を明らかにした。さらに、二座ホスフィン配位子であるdppmを支持配位子とする銅多核ヒドリド錯体を合成し、その二酸化炭素に対する反応性を検討した結果、二酸化炭素が容易にヒドリド還元を受け、対応するギ酸錯体を生成することを見出した。またこの反応は触媒的に進行し、二酸化炭素を触媒的にヒドロシリル化することを見出した。以上の結果より、二酸化炭素を安価な銅を中心金属とする多核錯体で触媒的に有用な有機物であるシリルホルメートへと変換することに成功した。
熱帯性海草帯における食用二枚貝類の繁殖と加入過程

本研究では、沖縄島の金武湾内に発達している海草藻場の中に多産する食用二枚貝を対象にして、その繁殖と加入の実態を明らかにすることを目的として、主要種であるホソスジヒバリガイとリュウキュウサルボウの生殖巣の発達状態の時期的な変化、浮遊幼生のプランクトン資料における出現、そして付着器への稚貝の定着について調査・研究をおこなった。また、それらの二枚貝についての人工繁殖もこころみた。上記の二枚貝の繁殖盛期である夏の間に、干出と温度変化をくり返して産卵誘発を試みたが、合計7回の実験すべてが失敗に終わった。そのため、幼生の飼育実験に進めず、浮遊幼生の同定もできないままとなった。これは、今回の計画年度内に完了できなかったが、次年度以降に自主的に実験を継続して所期の成果を出す計画である。付着器に出現した稚貝では、ホソスジヒバリガイと思われるものがもっとも多く、その他の二枚貝が数種類みられた。しかし、リュウキュウサルボウは出現しなかった。付着器における大きさの分布の変化をみると、ホソスジヒバリガイは、浮遊幼生から付着基盤に着定した後に、しばらく成長したものが離脱して海底の砂泥中に移住するが、同種や他の二枚貝の表面を付着基盤として成長を続けるものもあった。熱帯性の海草藻場の食用二枚貝の繁殖戦略は、夏の間不規則にくり返し産卵して、稚貝の加入を長期間続けることであることがわかった。金武湾の海草藻場の貝類群集は種の多様性が高いが、個体群は小さく分布密度の低い種類がほとんどであった。1沖縄本島の金武湾沿岸に発達している海草帯で、リュウキュウサルボウとホソスジヒバリガイの2種類の食用二枚貝を中心にして、1993年の6月から11月にかけて1週間の間隔で採集した標本について生殖腺指数の季節的変化を調べた。その結果、両種とも不規則な間隔で部分的な生殖細胞の放出を繰り返すことが明らかになった。2主な貝類についての人口産卵誘発、人口受精、幼生飼育は当該年度中の産卵期間中に飼育設備がそろわなかったために次年度に集中的に行う計画である。3金武湾の海草帯においてシュロ縄やプラスチック繊維をほぐしたものをトリカルネット篭に収容した採苗器を設置し、それに付着した貝類の種類と大きさを観察した。これにはホソスジヒバリガイの付着がもっとも多く、リュウキュウサルボウはまったく付着しなかった。ホソスジヒバリガイの付着稚貝は56ミリの大きさで付着器から脱離するらしく、それより大きい個体は見られなかった。4上の採苗と平行して海草帯でプランクトン採取を行い、多種類、多数の浮遊期の貝類幼生を検出したが、それらの種類の査定は今後の課題として、幼生飼育の結果を待ってから次年度におこなう予定である。上記の野外実験を実施している金武湾沿岸の海草帯に近接している道路で大規模な拡張工事が当該年度から開始されていて、現在も進行中である。また、ここでは一般人による貝類の収穫活動も盛んであり、実験対象の重要種のリュウキュウサルボウの資源が枯渇する恐れがあるので別の集団を探索していたが、中城湾で同種の個体群を地元の漁業共同組合の漁民が収穫しているのを知った。そこで、次年度はこれも研究対象に含める予定である。

本年度は、上記の二枚貝の繁殖盛期である夏の間に、干出と温度変化をくり返して産卵誘発を試みたが、合計7回の実験すべてが失敗に終わった。そのため、幼生の飼育実験に進めず、浮遊幼生の同定もできないままとなった。これは、今回の計画年度内に完了できなかったが、次年度以降に自主的に実験を継続して所期の成果を出す計画である。付着器に出現した稚貝では、ホソスジヒバリガイと思われるものがもっとも多く、その他の二枚貝は数種類みられた。しかし、リュウキュウサルボウは出現しなかった。付着器における大きさの分布の変化を見ると、ホソスジヒバリガイは、浮遊幼生から付着基盤に着定した後に、しばらく成長したものが離脱して海底の砂泥中に移住するが、同種や他の二枚貝の表面を付着基盤として成長を続けるものもあった。熱帯性の海草藻場の食用二枚貝の繁殖戦略は、夏の間不規則にくり返し産卵して、稚貝の加入を長期間続けることであることがわかった。
広義力学系の位相的研究

広義力学系とは,葉層構造,離散群作用,擬群作用,更には空間の分割をも含む,力学系の拡張概念である.本研究では狭義力学系の諸理論の広義力学系への一般化について考察し,以下の成果を得た.まず,平成9年度は,葉層構造に対して擬葉追跡性の概念を定義し,その基本性質を調べた.具体的には,次の結果を得た.1.レープ葉層,アノソフ葉層は擬葉追跡性をもつ.2.擬葉追跡性と拡大性を併せ持つ葉層は構造半安定である(Bowen-Waltersの有名定理の拡張).3.群作用とその懸垂葉層との間に擬軌道(擬葉)追跡性の遺伝がある.平成10年度は,更に考察を進め,次の結果を得た.4.群作用とその懸垂葉層との間の遺伝が,上述3以外に,構造半安定性と拡大性についても成立する.5.擬葉を可算点集合として定義すには,Cheegerの質量中心の概念が有効であることを認識した.6.コンパクト葉の増加率のエントロピーによる評価式ついては,現在,反例を構成中である.7.葉層の場合,安定性から擬葉追跡性は従わないと思われる.これらの結果は研究代表者が論文としてまとめ,TokyoJ.Math.から出版予定である.また,関連論文はErg.Th.Dyn.Sys.から出版した.また,本研究で導入された擬葉の概念は,既に,Walczak等により,別の方面(ヴァーチャル葉の存在,エントロピーの定義)にも応用された.分担者日野は解析的視点から時間依存力学系(プロセス)の安走性について研究した.越川は群作用のcut and pasteについて論じ,高木は複素射影空間内の実超曲面を研究した.広義力学系とは,葉層構造,離散群作用,擬群作用,更には空間の分割をも含む,力学系の拡張概念である.本研究では狭義力学系の諸理論の広義力学系への一般化について考察し,以下の成果を得た.まず,平成9年度は,葉層構造に対して擬葉追跡性の概念を定義し,その基本性質を調べた.具体的には,次の結果を得た.1.レープ葉層,アノソフ葉層は擬葉追跡性をもつ.2.擬葉追跡性と拡大性を併せ持つ葉層は構造半安定である(Bowen-Waltersの有名定理の拡張).3.群作用とその懸垂葉層との間に擬軌道(擬葉)追跡性の遺伝がある.平成10年度は,更に考察を進め,次の結果を得た.4.群作用とその懸垂葉層との間の遺伝が,上述3以外に,構造半安定性と拡大性についても成立する.5.擬葉を可算点集合として定義すには,Cheegerの質量中心の概念が有効であることを認識した.6.コンパクト葉の増加率のエントロピーによる評価式ついては,現在,反例を構成中である.7.葉層の場合,安定性から擬葉追跡性は従わないと思われる.これらの結果は研究代表者が論文としてまとめ,TokyoJ.Math.から出版予定である.また,関連論文はErg.Th.Dyn.Sys.から出版した.また,本研究で導入された擬葉の概念は,既に,Walczak等により,別の方面(ヴァーチャル葉の存在,エントロピーの定義)にも応用された.分担者日野は解析的視点から時間依存力学系(プロセス)の安走性について研究した.越川は群作用のcut and pasteについて論じ,高木は複素射影空間内の実超曲面を研究した.本年度は,広義力学系に対して,擬軌道(葉層構造の場合には擬葉と呼ぶ)の概念を定義し、特に葉層構造の場合に,擬葉追跡性を持つ葉層の例,及び擬葉追跡性と他の概念との関連について考察を進めた.具体的には次の様である.2.擬葉追跡性と拡大性を合わせ持つ葉層は位相安定であることの証明(狭義力学系における有名定理の拡張).一方,狭義力学系と異なり,位相安定性から擬葉追跡性は導かれないとの感触を得ている.3.群作用とその懸垂葉層との間に擬軌道追跡性の遺伝があることの証明.4.周期軌道の個数の増大度を位相entropyで評価する狭義力学系の定理の,葉層への拡張を試みたが,現在暗礁に乗り上げている.以上の結果については現在論文を準備中である.本研究代表者の導入した擬葉の概念は既にWalczak等によって別の方面(擬葉を用いたentropyの定義,virtual葉の存在)にも応用された.また,本研究に関連して,本研究代表者は曲面状に極小集合を許容しない流れの例を構成した(論文発表予定).分担者日野は解析的視点から力学系(process,斜積流)の安定性を,高木は平行平均曲率流を持つ部分多様体の幾何学的性質を,越川は群作用(同変SK群)の構造を論じた.これらはいずれも広義力学系と係わっており,本研究の幅を広げるために大いに役立っている.また,久我および杉山とはgauge理論の広義力学系への応用の可能性を検討中である.本年度は,昨年度からの継続主題「広義力学系への擬軌道追跡性(擬葉追跡性)の概念の導入およびその構造安定性との関係」を中心に,関連話題も含めて更に考察を深めた.具体的には次の様である.1.群作用とその懸垂葉層との間の遺伝に関して,擬軌道追跡性以外に,構造半安定性と拡大性についても遺伝性が成立することがわかった.

2.実験や観測の立場から言えば,擬葉を部分多様体としてではなく,可算点集合として定義することが望ましいが,その両定義を結ぶものとして,Cheegerの質量中心の概念が有効であることを認識した.3.コンパクト葉の枚数の増加率をエントロピーで上から押さえる試みが成功しない本質的理由は,葉の面積増大度にあることを理解した.現在,反例を構成中である.4.葉層の場合,流れと異なり,積分可能性が邪魔をして局所的改変が自由にできない.このことが安定性から擬葉追跡性が従わない原因となっていることがわかった.これらの結果は論文としてまとめ,現在,投稿中である.また,関連論文はErg.Th.Dyn.Sys.に掲載予定である.分担者日野は解析的視点から時間依存力学系(プロセス)の安定性について研究した.プロセスの幾何学的研究は今後の大きな課題である.越川は群作用のcut and pasteについて論じ,高木は複素射影空間内の実超曲面を研究した.杉山は多様体に対して新ゼータ関数を構成したが,更に,広義力学系に対し,その構造を反映するようなゼータ関数を構成する試みも将来の興味ある研究方向であると考える.
魚類の脳の性差に可逆性をもたらす分子基盤の解明

マウスやラットでは、出生期に確定した脳の性は一生涯変わることがないのに対し、魚類の脳は生涯にわたって、性を変えるポテンシャルをもっている。そこで本研究では、脊椎動物における脳の性の確かさと揺らぎやすさの分子基盤、そして、そこに存在する基本原理を理解することを目的として、魚類(メダカ)の脳における性差構築と、その可逆性のメカニズムを解析することとした。本年度は、メダカの脳内の性行動中枢(終脳腹側部の神経核であるthe supracommissural/posterior nuclei of the ventraltelencephalic area(Vs/Vp)および視索前野の神経核であるthemagnocellular/gigantocellular portions of the magnocellular preoptic nucleus(PMm/PMg))でメス特異的に発現する神経ペプチドneuropeptideB(NPB)の機能解析を進めた。ゲノム編集技術の一種であるtranscription activator-likeeffector nucleases(TALEN)を用いたNPBとその受容体のノックアウト個体を作出し、表現型解析を行った結果、NPBシグナルは、メスの性行動に際して、オスの受け入れを抑制する機能をもつことが示唆された。このNPBシグナルはメスの性行動中枢だけに存在する機構であるが、この機構によって、メスは、オスと出会ってすぐ産卵するのではなく、求愛ダンスのうまさなどの情報を得た上で、より優れたオスを選択しているのかもしれないと考えられた。26年度が最終年度であるため、記入しない。1我々はこれまでに、卵巣除去およびアンドロゲン投与によって、メスのメダカの前脳における、メス特異的なエストロゲン受容体(ERb2)、アンドロゲン受容体(ARb)、神経ペプチド(NPB)の発現が消失する(オス型に変化する)ことを見出している。本年度はまず、精巣除去およびエストロゲン投与によって、逆に成熟オスの同領域でそれらの遺伝子の発現を誘導できることを明らかにした。それにより、メダカの前脳におけるERb2/ARb/NPB発現の性差(有無)には両方向性の可逆性が存在することが証明された。2我々はこれまでに、メダカの前脳には、神経内分泌細胞様の形態を示す巨大ニューロンがメス特異的に存在することも見出しているが、本年度の研究によって、このメス特異的な巨大ニューロンこそが、ERb2/ARb/NPB発現ニューロンであることを明らかとした。3 NPBの機能を明らかにすることを目的として、TALEN法を用いて、NPBおよびNPB受容体をノックアウトしたメダカの作出を試みた。その結果、NPBノックアウトメダカの作出を終え、NPB受容体のノックアウトメダカについても、作出完了の見通しが立った。4メスの卵巣を除去し、前脳におけるERb2/ARb/NPB発現を消失させた(オス型に変化させた)際に、それらの発現ニューロンの活性化度合い、電気生理的特性の変化を解析した。その結果、卵巣除去によって、遺伝子発現だけでなく、ニューロンの活性も低下し、発火頻度もイレギュラーになることことを示唆するデータを得ることができた。5 ERb2/ARb/NPBニューロンでメス特異的に発現する新たな遺伝子を発見した。また、メダカの脳において発現に性差を示す新規の性染色体遺伝子を発見した。上記の項目4は本来、来年度に予定していた実験であるが、前倒しで成果を得ることができた。また、項目5は当初は予定していなかった成果である。研究が順調に進んでいるので、このまま推進していく。
単クローン抗体を用いた住血吸虫の各発育期特異抗原の解析

次にマンソン住血吸虫(Sm)を対照としてCGPAの種特異性を検討した。種特異性を確認するうえで、MoAbを使用することで関連抗原内の一部の抗原決定基の違いを見てしまう危険を避け、抗血清を用いて2Dパターンでのイムノブロッティングをおこなった結果、CGPAのスポットはSm成虫タンパク質の2Dパターン上には見られなかった。さらにSjおよびSm成虫の免疫組織化学的な観察をおこなったところSjでは腸管上皮細胞質に発色が見られたがSmでは上皮細胞に発色は見られなかった。以上の結果から、CGPAはSj特異的な抗原であると判断した。既知の5種類の循環抗原すべてについて、Smに類似抗原が存在することがわかっていることからCGPAは、循環抗原としては未報告のものであると考えられる。今後CGPAの生物学的な役割の解析、Sj症の血清診断への応用を念頭において研究を進めていきたい。日本住血吸虫卵の種特異性を検討するために、COP反応を惹起させるモノクローナル抗体(MoAb)を作製し、関連抗原の同定、およびその性状解析を行った。(1)日本住血吸虫(Sj)感染マウスの脾細胞より、設備備品機器(炭酸ガス培養装置)を用いて4種のMoAbを樹立した。そのうち、18-4-1および48-39-2抗体は住血吸虫卵に特異的で、とりわけ18-4-1はSj虫卵にのみ反応する極めて特異性の高いMoAbであることが明らかとなり、COP反応惹起関連抗原の解析に有用であることが示唆された。(2) Immunoblottingにより、18-4-1および48-39-2抗体の標的抗原を同定したところ、18-4-1抗体はSj虫卵抗原の分子量330KDaおよび360KDaの部位のみを認識し、48-39-2抗体はSj虫卵抗原の分子量58-265KDaの拡散性を示す領域を認識した。前者により認識される抗原はRCA120およびPNAと結合し、従来の報告とは異なる抗体であった。(3)免疫組織染色の結果から、18-4-1および48-39-2抗体によって認識される抗原は組織内虫卵のミラシジウム、卵殻とミラシジウムの間の領域、および卵膜に存在することが明らかとなった。今回、MoAbによって同定されたCOP反応惹起関連抗原は、その分子量、生化学的性状が従来の報告と異なることから、本研究において新たに同定された抗原であり、特に18-4-1は、二次元電気泳動上からも日本住血吸虫卵に特異的であった。(4) MoAb1-7Bは、患者血清中の循環抗原を認識する抗体でSj成虫の2次元電気泳動パターン上、等電点4以下、分子量100KDaを中心とする縦長のスポットを認識した。このスポットは、Sj虫卵とマンソン住血吸虫(Sm)成虫および虫卵の2次元パターン上には見られず、Sj成虫に特異的な抗原であることが明らかになった。本抗体の認識する標的抗原は免疫組織化学的並びに免疫電顕的に成虫の腸管に局在することを認識した。このように、初年度においてSj虫卵と成虫抗原にそれぞれ特異的に反応するMoAbが樹立されたので、次年度では更に他の発育期虫体に関しても検討する。循環抗原(CA)に対する抗体を得るため、日本住血吸虫(Sj)成虫の排泄・分泌物質との反応および腸管への局在を指標に選択してモノクローナル抗体(MoAb)1-7Bを得た。Sj成虫の蛋白質成分の2次元電気泳動パターン(2Dパターン)上、MoAb1-7Bによるイムノブロッティングで等電点4よりやや酸性、分子量およそ100kDaを中心とする縦長のスポットが検出された。この抗原がCAであることを、ウサギ血清の2Dパターンでのイムノブロッティングで相当するスポットがSj感染ウサギ血清で、MoAb1-7Bと反応させたものでのみ検出されることにより示した。この結果に加え、レクチン結合性、V8プロテアーゼ感受性であることから糖タンパク質であると考え、この抗原をCGPA(circulating glyco-proteinaceous antigen)と名付けた。

種特異性を確認するうえで、MoAbを使用することで関連抗原内の一部の抗原決定基の違いを見てしまう危険を避け、抗血清を用いて2Dパターンでのイムノブロッティングをおこなった結果、CGPAのスポットはSm成虫タンパク質の2Dパターン上には見られなかった。さらにSjおよびSm成虫の免疫組織化学的な観察をおこなったところSjでは腸管上皮細胞質に発色が見られたがSmでは上皮細胞に発色は見られなかった。以上の結果から、CGPAはSj特異的な抗原であると判断した。既知の5種類の循環抗原すべてについて、Smに類似抗原が存在することがわかっていることからCGPAは、循環抗原としては未報告のものであると考えられる。今後CGPAの生物学的な役割の解析、Sj症の血清診断への応用を念頭において研究を進めていきたい。
湿原植生保全の基礎としての長期的植生動態解析

青森県八甲田山地先櫃萢湿原,前谷地湿原.、北海道上川浮島湿原において,環境庁および上川営林署の採取許可を得て,調査および試料の採取を行った.1.植生と微地形との関係を調べるため,湿原中央で直交する2本のラインを周辺の低木群落から湿原全体にかかるように設け、ライン沿いに比高の測量を行い,2方向の地形断面図を作成した.また,ライン上の多数地点で,表層花粉組成と比較するための相対被度による植生調査を行った。現地での植生調査の際に不明であった種の同定作業も,これまでにほぼ終了した.2.全ての植生調査地点から表層および最新火山灰直下の花粉分析用試料をヒラ-型ハンドボーラーで採取した。これは、周辺の低木群落の花粉組成に対する影響が、距離とともにどのように減じていくかを確かめると同時に、湿原内部の群落の花粉組成を明らかにし、さらに,その組成が千百年あるいは約3百年間でどのように変遷したかを同一地点で比較するためである。3.2本のライン沿いの表層試料の花粉分析を終了し、周辺の低木群落や、湿原内部の植生(頻度および相対被度)と花粉組成との関係を検討した。4.予備調査の黄瀬谷地湿原と下毛無湿原を含めた表層花粉分析の結果,カエデ属,モチノキ属,ミズバショウ属等の花粉が,湿原と低木群落との境界を精度よく示すこと,および,草本花粉の多くが数m以内の植生を示しうることが明らかとなった.5.矢櫃萢湿原については,火山灰直下の花粉分析を終了した.6.これまでに得られた植生および花粉分析の結果は、データベースとして保存した。南八甲田山地の矢櫃萢湿原において,環境庁の国立公園特別保護地区内土石の採取許可を得て,調査および試料の採取を行った.1植生と微地形との関係を調べるため,湿原中央で直交する2本のラインを周辺の低木群落から湿原全体にかかるように設け、ライン沿いに比高の測量を行い,2方向の地形断面図を作成した.また,ライン上の31地点で,表層花粉組成と比較するための相対被度による植生調査を行った。現地での植生調査の際に不明であった種の同定作業も,これまでにほぼ終了した.2全ての植生調査地点から表層およびAD.915年に降下した十和田a火山灰直下の花粉分析用試料をヒラ-型ハンドボーラーで採取した。これは、周辺の低木群落の花粉組成に対する影響が、距離とともにどのように減じていくかを確かめると同時に、湿原内部の群落の花粉組成を明らかにし、さらに,その組成が約千年間でどのように変遷したかを同一地点で比較するためである。3湿原の縁辺を示す花粉組成をより正確に解明し、湿原の広がり(周辺群落との境界)を高い精度で復元するために、湿原周辺の様々なタイプの低木群落内から湿原に短いラインをのばし、同様に表層試料を採取した。4 2本のライン沿いの表層試料の花粉分析を終了し、周辺の低木群落や、湿原内部の植生(頻度および相対被度)と花粉組成との関係を検討した。5これまでに得られた植生および花粉分析の結果は、データベースとして保存した。南八甲田山地の前谷地湿原において,環境庁の国立公園特別保護地区内土石の採取許可を得て,調査および試料の採取を行った.1植生と微地形との関係を調べるため,湿原中央で直交する2本のラインを周辺の低木群落から湿原全体にかかるように設け,ライン沿いに比高の測量を行い,2方向の地形断面図を作成した.また,ライン上の35地点で,表層花粉組成と比較するための相対被度による植生調査を行った。現地での植生調査の際に不明であった種の同定作業も,これまでにほぼ終了した.

2全ての植生調査地点から表層およびAD.915年に降下した十和田a火山灰直下の花粉分析用試料をヒラ-型ハンドボーラーで採取した。これは、周辺の低木群落の花粉組成に対する影響が、距離とともにどのように減じていくかを確かめると同時に、湿原内部の群落の花粉組成を明らかにし、さらに,その組成が約千年間でどのように変遷したかを同一地点で比較するためである。3 2本のライン沿いの表層試料の花粉分析を終了し,周辺の低木群落や,湿原内部の植生(頻度および相対被度)と花粉組成との関係を検討した。4昨年度および今年度の表層花粉分析の結果,カエデ属,モチノキ属,ミズバショウ属等の花粉が,湿原と低木群落との境界を精度よく示すことが明らかとなった.5これまでに得られた植生および花粉分析の結果は、データベースとして保存した。北海道上川浮島湿原において,上川営林署の採取許可を得て,調査および試料の採取を行った.1.植生と微地形との関係を調べるため,湿原中央で直交する2本のラインを周辺の低木群落から湿原全体にかかるように設け、ライン沿いに比高の測量を行い,2方向の地形断面図を作成した。また,ライン上の23地点で,表層花粉組成と比較するための相対被度による植生調査を行った。現地での植生調査の際に不明であった種の同定作業も,これまでにほぼ終了した.2.全ての植生調査地点から表層およびAD.1694年に降下した駒ヶ岳C2火山灰直下の花粉分析用試料をヒラ-型ハンドボーラーで採取した。これは、周辺の低木群落の花粉組成に対する影響が、距離とともにどのように減じていくかを確かめると同時に、湿原内部の群落の花粉組成を明らかにし、さらに,その組成が約3百年間でどのように変遷したかを,同一地点で比較するためである。3.2本のライン沿いの表層試料の花粉分析を終了し、周辺の低木群落や、湿原内部の植生(頻度および相対被度)と花粉組成との関係を検討した。4.昨年度および今年度の表層花粉分析の結果,カエデ属,モチノキ属,ミズバショウ属等の花粉が,湿原と低木群落との境界を精度よく示すことが明らかとなった.5.矢櫃萢湿原については,火山灰直下の花粉分析を終了した.6.これまでに得られた植生および花粉分析の結果は,データベースとして保存した。
結核菌由来の新しい感染防御抗原の特定と宿主感染防御への応用

マウスを用いたMycobacterium bovis BCGの実験感染モデルで、抗結核防御免疫の発現に重要なIFN_γ産生性CD4陽性T細胞の認識抗原を特定し、この抗原の抗結核防御免疫における重要性について解析した。1.マウスをBCG生菌で免役するとIFN_γ産生能を有するT細胞が誘導され、防御免疫が出現する。シカシBCG死菌で免役するとDTHを担うT細胞の出現は認められるが、IFN_γ産生性細胞は出現せず防御免疫も発現しない。そこで、BCG生菌より精製した各種抗原でBCG生菌免疫マウスの脾細胞を刺激しIFN_γ産生を調べた結果、分子量約18kDaの抗原で刺激した場合に最も強いIFN_γ産生が認められた。この抗原はPPDやBCG生菌のみならず防御免疫を誘導しない死菌にも存在した。この結果から、感染防御免疫を誘導するためには抗原以外の別の因子の関与が示唆された。2.強いIFN_γ産生は生菌免疫マウスの脾細胞を刺激した場合にのみ認められたがIL-2産生は生菌免疫でも死菌免疫でも分子量の異なる幅広い抗原刺激に対して同様に認められ、T細胞の増殖応答やIL-2産生は防御免疫の指標にはならないと考えられた。3.正常脾細胞をBCG生菌および死菌で刺激してBCG初感染時の宿主反応を比較した。TNFαの発現は両刺激で同程度に認められたが、マクロファージの殺菌に重要なNOの産生は生菌刺激の場合に強く誘導され死菌刺激では認められなかった。また、BCG生菌はNK細胞からのIFN_γ産生を強く誘導したが、死菌には、その能力は認められなかった。IFN_γはNO産生のためのiNOS発現誘導に不可欠であることが明かとなり、NK細胞からのIFN_γ産生誘導能の違いが両者のNO産生能を反映していると考えられた。さらに、IFN_γ産生はTh1タイプのT細胞の分化因子であり、BCG生菌でのみその産生が認められたことから、死菌が免疫早期にIFN_γあるいはその他の分化因子の産生を誘導出来ないことが、死菌ワクチンが有効に作用しない原因であろうと考えられた。抗結核防御免疫の主体となるCD4^+感染抵抗性T細胞はBCG生菌免疫によってのみ出現し、抗原刺激後のIFNγ産生能により特徴付けられる。平成6年度は、この感染抵抗性T細胞の認識抗原を特定し、精製することを目的として実験を行い、以下のような知見が得られた。1.BCG菌体より得られたIFNγ産生惹起抗原の分子量は約18kDaで、菌体中の細胞質膜画分に多く存在することが示された(Infect.Immun.62:4396-4403,1994)。2.2次元電気泳動の結果、この抗原の等電点は約4.5であった。3.既知の結核菌抗原で、本研究で精製した抗原と分子量が比較的近い、TB23(19kDa)およびTB68(16kDa)に対するモノクローナル抗体が、本研究で精製した抗原に反応するか否かを調べた。

その結果、BCGlysate中にはこれら結核菌抗原に対する抗体と反応する抗原が存在するが、IFNγ産生を惹起する抗原とは反応しないことが示された。4.BCGlysateより得られた抗原でBCG生菌および死菌免疫マウスの脾細胞を刺激し、各種サイトカインmRNAの発現をRT-PCRで調べた。その結果、生菌免疫マウスではTh1型の反応が認められた。一方、防御免疫を発現しない死菌免疫マウスではTh2型の反応も認められ、死菌免疫では結果的に防御を担うTh1型T型細胞の機能や分化が抑制されていることが示唆された。5.正常マウス脾細胞をin vitroでBCG生菌刺激した場合に、NK細胞由来のIFNγ産生が認められた。IFNγはTh1型T細胞の分化を促進することが知られており、また死菌刺激ではIFNγ産生は認められなかったことから、NK細胞がIFNγ産生を介して感染抵抗性T細胞の分化に関与している可能性が示された。マウスを用いたM.bovis BCGの実験感染モデルで、抗結核防御免疫の発現に重要なIFN_γ産生性CD4陽性T細胞の認識抗原を特定し、この抗原の抗結核防御免疫における重要性について解析した。1.マウスをBCG生菌で免疫するとIFN_γ産生能を有するT細胞が誘導され、防御免疫が出現する。しかしBCG死菌で免疫するとDTHを担うT細胞の出現は認められるが、IFN_γ産生性細胞は出現せず防御免疫も発現しない。そこで、BCG菌体より精製した各種抗原でBCG生菌免疫マウスの脾細胞を刺激しIFN_γ産生を調べた結果、分子量約18kDaの抗原で刺激した場合に最も強いIFN_γ産生が認められた。この抗原はPPDやBCG生菌のみならず防御免疫を誘導しない死菌にも存在した。この結果から、感染防御免疫を誘導するためには抗原以外の別な因子の関与が示唆された。2.強いIFN_γ産生は生菌免疫マウスの脾細胞を刺激した場合にのみ認められたが、IL-2産生は生菌免疫でも死菌免疫でも分子量の異なる幅広い抗原刺激に対して同様に認められ、T細胞の増殖応答やIL-2産生は防御免疫の指標にはんならないと考えられた。3.正常脾細胞をBCG生菌および死菌で刺激すると、TNFαの発現は両刺激で同程度に認められたが、マイクロファージの殺菌に重要なNO産生は生菌刺激の場合に強く誘導され死菌刺激では認められなかった。またBCG生菌はNK細胞からのIFN_γ産生を強く誘導したが、死菌にはその能力は認められなかった。IFN_γはNO産生のためのiNOS発現誘導に不可欠であることが明かとなり、NK細胞からのIFN_γ産生誘導能の違いが両者のNO産生能を反映していると考えられた。IFN_γタイプのT細胞の分化因子であり、BCG生菌でのみその産生が認められたことから、死菌が免疫早期にIFN_γあるいはその他の分化因子の産生を誘導出来ないことが、死菌ワクチンが有効に作用しない原因であろうと考えられた。
海洋における動物行動追跡のための超小型アルゴスポップアップタグの開発と実用化

3年間の開発研究を通じて,海洋生物の行動観察用ポップアップタグの開発・実用化を図り,以下の成果を得た。1.ポップアップタグの心臓部となるアルゴス送信装置を55mm×13.5mm×6mmと大幅に小型化し,電源電池,圧力計,水温計と共に143mm×17.2mmφのカーボンFRP容器に収納した。送信用アンテナ長は約210mmで,タグの全長は353mmとなった。本タグの外枠には切り離し装置30mm×8mmを装着した。タグの総空中重量は約60gとなった。2.2002年11月28日,利根川河口域において開発したポップアップタグの試験放流を実施した。切り離し設定期間を5日間と15日間に設定したタグをウナギ2個体に装着し,放流したところ,切り離し設定5日間のタグからのデータ受信は確認できなかったが,切り離し設定15日間のタグからは放流後15日目にデータを受信でき,アルゴス衛星経由のデータ取得が可能であることを確認した。3.データ送信の点で,一部微調整が必要であるものの,3年間で当初目標とした超小型ポップアップタグの開発を達成することができた。これは今後野外放流実験を通じてさらに改良を加える。また,12年後を目途に,民間関連会社と協同で製品化する方向で,研究を継続推進している。本年度は,本研究課題「海洋における動物行動追跡のための超小型アルゴスポップアップタグの開発と実用化の初年度にあたるため,このタグに使用する基本的素子および基本性能評価を行った。成果は以下の通り。1.海底5,000mまでの圧力を測定するために,超小型の500kg/cm^2の圧力センサ(直径8.2mm,長さ11mm,重量3g)の開発・製作を行った。2.水温0度から50度まで測定可能な超小型サーミスタ型温度センサーの開発・製作し,その温度評価試験を行った。3.上記2つのセンサーとアルゴスシステムとのインターフェース回路(長さ65mm,幅20mm)の設計・製作を行い,その性能評価試験を行った。4.ウナギ用アルゴス送信機(T-2063型)の製作(長さ80mm,幅24mm,厚さ12mm,重量33g)とソフトの変更を行い,総合評価と実機試験を行った。また,上記の2つのセンサーをT-2063送信機に接続し,その動作が正常であるか地上にて動作確認試験を行い,良好な結果を得た。5,上記の機器を納入するための圧力容器の検討および試作圧力容器試作し圧力試験を行った。6.切り離し装置として直径1mmの銀線と直径1mmの亜鉛線を接続し,海水中における電触反応により切断試験を行った。その結果,仕様通りの切断が可能であることが確認された。7.徳島県とニュージーランドにおいて,市販のタグを親ウナギに装着し,放流実験を実施した。13年度は現用の小型アルゴス送信機を使用して,下記の通り小型アルゴス・ポップアップタグシステムを試作した。1.小型アルゴス送信装置(データ蓄積を含む)と,圧力および温度計回路の製作。2.1.4mm厚のCFRP(カーボンFRP)製の容器を試作し,送信機および回路等を組込んだタグを完成。試作したタグの諸元は,以下の通りである。寸法:本体長(180mm),外径(31mmφ),全重量:134.4g,送信電力:500mW,8ビットCPU,RAM:4Kバイト2ch・ADC内蔵,計測:圧力(水深)および温度(水温),データ取得間隔:1分24時間,データ取得個数:720固定,浮上後データ送信間隔:90秒(45255秒設定可能),送信時間:920ms,データ送信期間:10日以上。このタグを東京大学海洋研究所大槌臨海研究センター地先の海域において,海上に浮遊させてアルゴス衛星とのデータ通信を試みた。

その後,タグを海中水深40mの海底に沈め,外部タイマーを用いて海底から浮上させ,アルゴス衛星との通信を行った。海上試験に先立ち,相模原の宇宙科学研究所屋上において,衛星との会合試験を行ったところ,特に問題なく良好なデータを得ることができた。また,海上試験においては,ポップアップタグはほぼ当初の予定通りデータを取得できることを確認した。さらに海中から切り離されたタグは期待通り浮上し,衛星へデータを送信するなど,一連の作業が自動で順調に行われることがわかった。一方で,タグの親ウナギへの装着方法を種々検討した結果,背側に一点支持する方法がよいと判断された。計画の最終年度にあたる本年度は,タグに内装する小型アルゴス送信装置と切り離し装置のさらなる小型化を進めた。またタグの切り離しと浮力に関する室内実験と水槽内でウナギへの実装テストを実施した。さらに利根川河口において,完成したポップアップタグ2基を下りウナギヘ適用し野外放流実験を行った。その結果,以下のような成果を得た。(1)本装置の心臓部であるアルゴス送信装置は55mm×13.5mm×6mmと小型化され,電源電池,圧力計,水温計と共に143mm×17.2mmφのカーボンFRP容器に収納することができた。送信用アンテナ長は約210mmでタグ全長は353mmである。本タグの外枠に切り離し装置30mm×8mmを装着してある。タグの総空中重量は約60gである。(2)2002年11月28日,利根川河口域において切り離し設定期間を5日と15日に設定したタグをウナギ2個体に装着し,同時に放流した。切り離し設定5日のタグからのデータ受信は確認できなかったが,切り離し設定15日のタグからは放流後15日目にデータを受信でき,アルゴス衛星経由でデータを取得できることを確認した。(3)データ送信の点で,一部微調整が必要であるものの,3年間で当初目標とした超小型ポップアップタグの開発を達成することができた。これは今後野外放流実験を通じてさらに改良を加える。また,12年後を目途に,東洋通信機株式会社と協同で製品化する方向で,研究を継続推進している。
卒前教育が医学科学生の外科医志望に及ぼす影響の質的研究

目的:医学生の外科志望に関する因子を分析する。対象と方法:外科研修中の若手医師のべ39名(男32、女7)に、12回のインタビューを実施した。結果:以下の主題が抽出された。1.若手外科医は「臨床実習・卒後研修の外科経験」により、「患者さんの回復への直接貢献」、「技術の習得と治療への応用」に魅力を感じ、「外科的思考と方法論が合っている」と思い、外科を専攻していた。2.外科敬遠の理由は、「ワーク・ライフ・バランス困難さ」、「給与に反映されない」だが、若手外科医はそれらを厭わない傾向が共通した。3.外科医増のため、卒前の「患者さんの回復過程を体験する機会」、卒後の「基本手術の執刀経験」等が挙げられた。【研究実績の概要】本研究では医学生の外科医志望に関する因子を卒前教育との関わりから分析する。研究方法として教育学・社会学の研究法である質的研究法を用い、因子分析を行う。H25年度の研究計画のうち、データ収集の方法を【外科研修医を対象とするfocus group interview】に絞って実施し、インタビューの内容から主題(テーマ)分析を行った。【focus group interviewの構造確定】外科医師の減少に関する国内外の文献を検討し、インタビューの構造の大枠を定めた。H25年5月に研修代表者の所属する機関の外科研修医3名の協力を得てインタビューを試行し、インタビューの構造を確定した。【focus group interview実施】外科医師教育病院の診療科長に研究協力を依頼し、承諾を得た7施設(大学病院6,市中病院1、予備調査を含む)で、H25年5月よりH26年1月までにのべ8回のインタビューを実施した。本研究参加に同意してインタビューに応じた外科研修医はのべ23人で、初期研修修了後の外科研修年数は17年、インタビュー時間は1457分であった。【主題分析】録音したインタビューの音声を逐語文書化し、文書情報について主題分析を進めた。抽出された主題のうち外科医を目指した動機は(1)臨床実習中の外科の現場体験、(2)患者さんの回復への直接貢献、(3)技術の習得と治療への応用、などであった。外科志望者が少ない要因としては他の診療科との比較において(1)過重労働、(2)自由時間が少ない、(3)前記1,2に対して報酬が少ない、などが指摘された。外科志望者を増やす方略として、卒前の外科臨床実習で患者さんの回復過程を当事者として体験させること、が挙げられた。一方、臨床実習前の小外科手技トレーニングや外科医の報酬増は外科医志望に寄与しないという声が多かった。本研究では医学生の外科医志望に関する因子を卒前教育との関わりから分析する。研究方法として教育学・社会学の研究法である質的研究法を用い、全国調査と因子分析を行う。H24年度は研究代表が所属する医学部において学内調査を行うとともに全国調査の準備を進めた。【外科後期研修医を対象とする調査】外科医師の減少に関する要因の質的研究を行うため、医学科学生が外科系と専攻するプラス・マイナスの両要因につき文献を収集し、これを元に調査項目を策定して全国調査の原案を作製した。全国調査の対象・実施方法等について連携研究者と討議し、大枠を定めた。関東、四国等の卒後研修医教育病院で外科研修医を指導する外科医に研究の趣旨を説明して、研究に関する提案を得るとともに協力の同意を得た。また、アジア諸国の医学教育関係者および外科医と連絡を取り、外科を希望する医学生の増減と対応策等に関する情報を得た。その結果、韓国、台湾においては本邦同様あるいはそれ以上に外科医希望者の減少が著しいことが判明した。【医学科学生対象の調査】研究代表者の所属する医学部において医学科5年次および6年次学生を対象に、卒業後の専攻希望に関する調査を行った。6年次の時点で約15%の学生が将来の専門領域として外科(消化器・一般、乳腺、呼吸器、心臓血管、小児のいずれか)を志望していることが確認された。また、医学科1年生を対象に将来の進路・専攻に関する調査を行い、自由回答について言語処理ソフトウエアによる傾向分析を行った。その結果、「生活・暮らしの安定」、「収入・経済的・年収の安定」等のライフスタイルを重視する傾向は医学部入学時から見られることが明らかになった【研究成果と発表】上記の分析結果の一部をH25年7月開催の第45回日本医学教育学会、および同年8月開催のヨーロッパ医学教育学会で発表することとして、H25年3月に登録した。【研究目的】医学生の外科志望に関する因子を卒前教育との関わりから分析する【研究対象と方法】

H26年度は4回のインタビューを行い、外科研修医計16名が参加した。研究期間全体では、インタビュー12回(8大学病院、4市中病院)、参加した外科研修医39名(男性32、女性7)で、外科研修年数は17年、インタビュー時間は14分62分であった。参加者には事前に研究の説明を行い、文書による同意を得た。インタビュー音声は逐語文書化し、個人情報は削除して匿名化した。【結果】インタビュー内容を8項目に分類して分析した。(1)外科を志した時期と理由:時期は「臨床実習での外科経験後」が多く、ついで「卒後初期研修中」であった。理由は「外科的思考や方法論が合っている」が大半であった。(2)外科手技実習の影響:縫合等の実習は、「自身の外科志望に寄与しなかった」が多かった。(3)外科の魅力:「患者さんの回復への直接貢献」が多く、「技術の習得と自らの手による治療への応用」がついだ。(4)ロールモデルの存在:個別の外科医より、「外科チーム全体の姿勢・雰囲気に惹かれた」という声が多かった。(5)キャリア・プラン:大学病院の研修医は「漠然と将来を描いている」傾向が見られた。一般病院の研修医は「手術経験を数値目標として持っている」傾向が見られた。(6)外科が敬遠される理由:「時間の制約」、「過重労働」などワーク・ライフ・バランスの厳しさが挙げられた。「外科診療に接する機会が乏しい」こともマイナス要因とされた。(7)外科医を増やす方策・提案:卒前では「患者さんの回復過程を体験する」が、卒後研修では「外科研修の必修化」、「基本手術の執刀経験」が挙げられた。報酬増については外科希望者増の効果に懐疑的意見が多かった。(8)その他:女性研修医から昼夜外科臨床に従事する生活を将来も続けられるか不安である、という声があった。医学教育学H25年度の研究計画のうち、データ収集の方法をfocus group interviewに絞って実施した。当初、外科研修医の多忙によりインタビューの日程調整が困難であった。そこで、早朝、夜間、休日等に訪問することでインタビューを実施して、データを収集し得た。研究計画に沿って概要の分析を進めた結果、医学部卒前教育と外科医志望との関連に関する主題の抽出に到った。インタビュー音声を起こした文書データは膨大であり、主題の確定にはなお分析を進める必要がある。【外科後期研修医を対象とする調査】および【医学科学生対象の調査】において、学内のデータ収集と分析は計画以上に進んだ。一方、全国の外科研修医と医学部学生を対象とする調査は基本案を作製したが実施には到っていない。その主な理由は、分析対象とした学内データ、特に医学科1年生の自由記載文(過去3年間)が総文字数約20万字と膨大であり、分析に多大な時間を要したことにある。手書きコメントであるため分析可能とするためのタイプ入力に長時間を要した。この分析と同時に全国調査の原案策定を進め、対象とする教育病院、医学部の選定を行ったが、調査実施には到らなかった。H26年度はfocus group interviewを継続し、主題分析を完了して研究の総括を行う。【外科研修医を対象とするfocus group interview】H
心・血管肥大・増殖の機序解明と虚血に対する心・腎保護作用に関する研究

1)Wistar-Kyoto rat(WKY)および高血圧自然発症ラット(SHR)の左冠動脈結紮/再灌流(I/R)後に経時的に、左室虚血部のchemokine(Ch)及びCh受容体(ChR)のmRNA発現レベルを解析した。SHRではWKYよりも梗塞面積比が大きかった。ChのGROとその受容体CXCR2は好中球走化性を持つが、これらのmRNA発現レベルは再灌流後速やかに上昇し、再灌流3時間後でもWKY、SHRともに擬手術群よりも増加した。主に単球走化性に関与するCCR2、CCR5の発現レベルは血流再開後漸増し24時間後に最大となった。尚、SHRにおけるGROおよびCXCR2の発現レベルは再灌流3から6時間後、CCR2は24時間後、CCR5は6時間後にWKYよりもSHRの方が高くなった。リンパ球走化性を持つCXCR4の発現レベルは1/Rで変化しなかった。以上より、特定のCh及びChRがI/R障害時に著明に増加し、特にSHRでは好中球走化性のCh及びChRの増加が大であった。新たなCh抗体投与が高血圧性肥大心におけるI/R障害軽減に寄与する可能性が示唆された。2)われわれは5/6腎摘SHRに中等度の運動を長期的に行わせた際に尿蛋白減少作用、腎組織保護作用が認められることをあきらかにした。また、本モデルにおいてアンジオテンシン変換酵素阻害薬enalapril、カルシウム拮抗藥amlodipineと運動との腎機能保護相乗作用が確認された。一方、腎炎モデルでは、中等度の運動ではむしろ尿蛋白は増加し、enalapril併用にて尿蛋白の増加が抑制された。すなわち、同じ腎不全でも活動性や病因により運動の腎への効果が異なることが示された。さらに、enalaprilの予防投与により、運動可能域を広げられることがあきらかとなった。1)われわれは心不全患者、腎不全の血中glial-cell-line-derived neurotrophic factor(GDNF)が著明に増加していることをあきらかにした。GDNFは心不全・腎不全の成因や心・腎肥大・成長になんらかの重要な役割を果たしている可能性が示唆され、GDNFの動態や心・腎内局在を検討中である。3)われわれは5/6腎摘高血圧自然発症ラット(SHR)に運動(treadmill exercise)を長期的に行わせた際に尿蛋白減少作用、腎組織保護作用が認められることをあきらかにした。また、本モデルにおいて運動の腎機能保護作用およびアンジオテンシン変換酵素阻害薬enalaprilやアンジオテンシンII受容体拮抗薬losartanと運動の相乗作用が確認された。一方、エンドセリン受容体(ET-A)拮抗薬(FR139317)の血圧低下、腎保護作用は、本モデルにおいては認められず、長期的運動による作用を凌駕するものではないことが示唆された。1)Wistar-Kyoto rat(WKY)および高血圧自然発症ラット(SHR)の左冠動脈結紮/再灌流(I/R)後に経時的に、左質虚血部のchemokine(Ch)及びCh受容体(ChR)のmRNA発現レベルを解析した。ChのGROとその受容体CXCR2は好中球走化性を持つが、これらのmRNA発現レベルは再灌流後速やかに上昇し、再灌流3時間後でもWKY、SHRともに擬手術群より増加した。