hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
循環器疾患における時計遺伝子Clif/Bmal2の役割の解明

体内時計の分子機序が明らかになり、その構成因子である時計遺伝子を変異させた動物の解析により、代謝疾患、免疫疾患、循環器疾患などの発症、進展に体内時計の乱れが重要な働きを担っていることが明らかになっている。本研究は、我々が血管内皮細胞から同定した時計遺伝子であるArntl2/Clif/Bmal2のノックアウトマウスを作成し、その循環器疾患における役割を明らかにすることで、循環器疾患の発症、増悪する機序を、サーカディアンリズムの撹乱、体内時計の変調の観点で解析することを目的とする。まずCRISPR-Cas9システムを用いてArntl2/Clif/Bmal2遺伝子のノックアウトマウスの作成を行った。その結果、Exon3に1塩基のインサーション、2塩基の欠失、及び44塩基インサーションされた3系統のマウスを得ることができた。すべてDNA結合にとって重要なドメインであるbHLH(basic Helix Loop Helix)ドメインの途中でストップコードンが出現しArntl2/Clif/Bmal2の機能は欠失していると考えられる。これら変異をもつホモ接合体は正常に生まれて来て、組織学的検査では特に問題となる所見は認められなかった。行動のサーカディアンリズムに及ぼす影響を確認するため、Light/Dark10日間-Dark/Dark16日間-6時間のLightPulse-Dark/Drak14日間の条件下で輪回し運動による行動測定を行った。その結果、野生型とノックアウトマウスでphase shiftに有意差は認めなかった。現在、体重増加や糖代謝への影響を検証するとともに、さまざまな循環器疾患モデルを作成した時に異常が無いかを検証しているところである。本研究においてノックアウトマウスの作成の可否が最も重要な段階であったが、CRISPR-Cas9システムを用いて、3系統のノックアウトマウスを作成することに成功した。また輪回しによる行動解析により、行動のサーカディアンリズムには影響しないことが明らかになった。得られたノックアウトマウスを用いて以下の解析を行う。1)Clif/Bmal2ノックアウトマウスにHigh fat dietを投与して体重増加、糖脂質プロファイルを野生型マウスと比較する。2)Clif/Bmal2ノックアウトマウスの心臓、大動脈、肺で網羅的遺伝子発現解析を行い、野生型と比較することにより、Clif/Bmal2の標的遺伝子を明らかにする。3)ノックアウトマウスに、低酸素環境下における肺高血圧、胸部大動脈縮窄による左室肥大、ApoEノックアウトマウスとの交配による動脈硬化モデルを作成し、これらの病態発症におけるClif/Bmal2遺伝子の役割を検討する。今年度はCRISPR-Cas9システムを用いてArntl2/Clif/Bmal2遺伝子のノックアウトマウスの作成を行った。まずマウスArntl2のExon3を標的としたguide RNAを作成し、C57BL6Nマウスの受精卵100個にマイクロインジェクションすることでノックアウトマウスの作成を行った。その結果、Exon3に1塩基のインサーション及び2塩基欠失する2系統のマウスを得ることができた。1塩基挿入マウスではN末92アミノ酸に21アミノ酸が付加した113アミノ酸の断片を、2塩基欠失マウスでは同様にN末92アミノ酸に20アミノ酸が付加された112アミノ酸の断片ができることが予想される。ともにN末92アミノ酸内にbHLH(basic Helix Loop Helix)ドメインがある断片であるが、Arntl2/Clif/Bmal2の機能は欠失していると予想される。今後、サーカディアンリズムにおける異常が認められないか、さまざまな循環器疾患モデルを作成した時に異常が無いかを検証して行く予定である。本研究においてノックアウトマウスの作成の可否が最も重要な段階であったが、CRISPR-Cas9システムを用いて、2系統のノックアウトマウスを作成することに成功した。

これら変異をもつホモ接合体は正常に生まれて来て、組織学的検査では特に問題となる所見は認められなかった。行動のサーカディアンリズムに及ぼす影響を確認するため、Light/Dark10日間-Dark/Dark16日間-6時間のLightPulse-Dark/Drak14日間の条件下で輪回し運動による行動測定を行った。その結果、野生型とノックアウトマウスでphase shiftに有意差は認めなかった。現在、体重増加や糖代謝への影響を検証するとともに、さまざまな循環器疾患モデルを作成した時に異常が無いかを検証しているところである。本研究においてノックアウトマウスの作成の可否が最も重要な段階であったが、CRISPR-Cas9システムを用いて、3系統のノックアウトマウスを作成することに成功した。また輪回しによる行動解析により、行動のサーカディアンリズムには影響しないことが明らかになった。得られたノックアウトマウスを用いて以下の解析を行う。1)Clif/Bmal2ノックアウトマウスの心臓、大動脈、肺で網羅的遺伝子発現解析を行い、野生型と比較することにより、Clif/Bmal2の標的遺伝子を明らかにする。2)ノックアウトマウスに、低酸素環境下における肺高血圧、胸部大動脈縮窄による左室肥大、ApoEノックアウトマウスとの交配による動脈硬化モデルを作成し、これらの病態発症におけるClif/Bmal2遺伝子の役割を検討する。1)Clif/Bmal2ノックアウトマウスにHigh fat dietを投与して体重増加、糖脂質プロファイルを野生型マウスと比較する。2)Clif/Bmal2ノックアウトマウスの心臓、大動脈、肺で網羅的遺伝子発現解析を行い、野生型と比較することにより、Clif/Bmal2の標的遺伝子を明らかにする。3)ノックアウトマウスに、低酸素環境下における肺高血圧、胸部大動脈縮窄による左室肥大、ApoEノックアウトマウスとの交配による動脈硬化モデルを作成し、これらの病態発症におけるClif/Bmal2遺伝子の役割を検討する。
高次構造制御による歪み誘起電気的特性発現

本課題では、走査型プローブ顕微鏡を利用し、酸化チタンナノ粒子の単粒子機能評価を実施する。申請者が開発した手法により、異方成長した4種類の酸化チタン多形ナノ粒子を合成し、電子顕微鏡観察、Raman分光測定、第一原理計算などにより得られた粒子の歪みの評価と特性評価を合わせて行うことで、高次構造制御(形態と結晶型の同時制御)による歪み=局所構造変化が電気的特性に与える本質的な影響を明らかにする。
高度成長と日本的流通構造-とくに総合商社の形成とその現代的意義について

1調査目的-高度成長期における総合商社形成の根拠をさぐるための鉄鋼メーカーからみた総合商社起用の根拠と意思決定の経緯の研究である。これは日本的経営分析の重要な側面をなしている。2 1のための関係者とのインタービュウ,座談会,その他資料収集を行い,高度成長期における鉄鋼業界がを商社に販売を依託した経緯がある程度解明できた。3 2の関係者としては,次の通りである。主要鉄鋼メーカー最高責任者・営業関係者,総合商社鉄鋼営業担当経営者,同OB鉄鋼業界組合関係者,鉄鋼業界紙記者,通産省鉄鋼担当者および同OB4主要鉄鋼メーカーの工場および製品の見学・調査,鉄鋼製品の流通現場調査5鉄鋼メーカーの自社商社の育成の方向についての調査6鉄鋼製品の大手購買者である自動車メーカーを訪問し,鉄鋼製品の購買状況の歴史的経緯について調査した。自動車メーカーは鉄鋼製品購入にさいし,商社排除が始まっている。7今年度と同様な方法で,来年度も化学産業について調査できれば,総合商社形成根拠のブラック・ボックスの解明に一層に寄与できると思われる。8高度成長期分析の方法論を研究するため,重点研究の戦後日本形成経済班研究会に参加して有益な刺激を得た。研究班のかなりの学者が新しい分析方法を模索していることが理解できた。9将来は来期調査(高度成長と化学工業の流通)を合わせ「高度成長と日本的流通」として,著書として公表予定である。これは日本的流通経営の現状と将来の展望につながるものである。しかし当面は今期の調査実績として,戦後日本形成班の他の研究発表にならい,今期調査した関係者の「オラル・ヒストリー」を公にしたい。
成長ホルモン及びHNF3βまたは4αによる性特異的シトクロムP450発現調節

薬物代謝酵素シトクロムP450は、医薬品の薬理効果発現に重要な役割を担っている。最近ヒトP450の-部で発現に性差が存在することが明らかとなってきた。そこで、雌特異的な発現を示すマウスCYP2B9をモデルとして調節機構の基礎的なデータを得たCYP2B9の発現に雌雄差が生ずることは、成長ホルモンの雌雄で異なる分泌パターンに基本的に支配され、Cyp2b9遺伝子の発現調節に関わる転写因子として、HNF3β(FoxA2)とSTAT5bを同定し、関わる遺伝子領域の解析を行った。メス特異的に発現するマウスCyp2b9遺伝子の転写機構について、検討した。性腺摘出動物に性ホルモンを投与することや、脳下垂体摘出動物に成長ホルモンを投与することで、Cyp2b9発現に雌雄差があるのは、雄性ホルモンが視床下部に働きかけ、脳下垂体に成長ホルモンを雄性パターンで分泌するように命令し、それによって起こる血中成長ホルモン濃度のオス型の変動を肝臓の細胞が認識して、オスでは抑制的に働くとが示唆された。次に発現調節に関わる遺伝手領域を決めるために、遣伝子の5'上流域約2.4kbをルシフェラーゼ遺伝子に連結し、マウス肝細胞初代培養系に導入したが、全く転写活性が認められなかった。しかし、このレポーター遺伝子を尾静脈からマウスに注射し、肝臓での発現をみるというハイドロダイナミック法では、メスマウスでのみ活性が認められた。2.4kb断片を精査すると-234/-193領域が疑われ、この領域に変異を入れると活性が失われることや、あらかじめメスマウスをオス型の成長ホルモン分泌パターンで処理しておくと、発現が認められなかったことなどから、性依存的な発現に関わっていることが示唆された。この塩基配列はHNF3β(FoxA2)結合領域であると想定されたので、さらに確認のために抗FoxA2抗体を用いたChIPアッセイを行ったところ、メスの染色体のみで結合が観察された。また、この塩基配列は成長ホルモンが関わる転写抑制因子として知られるSTAT5bとも結合することが予想されたので、同じくChIPアッセイを行うと、FoxA2とは逆にオスでのみSTAT5bの結合が認められた。以上の結果、Cyp2b9発現の雌雄差は、FoxA2がプロモーター領域に結合することで、抑制因子の結合を阻害して転写を促進するのに対し、STAT5bがプロモーター領域に結合することによって、転写を抑制する機構が働いていると考えられる。メス特異的に発現するマウスCyp3a41/44遺伝子の転写機構について、検討した。性腺摘出動物に性ホルモンを投与することや、脳下垂体摘出動物に成長ホルモンを投与することで、Cyp3a41/44発現に雌雄差があるのは、雌性ホルモンが視床下部に働きかけ、脳下垂体に成長ホルモンをメス特異的なパターンで分泌するように命令し、それによって起こる血中成長ホルモン濃度のメス型の変動を肝臓の細胞が認識して、メスでは促進的に働くことが示唆された。また、副腎皮質ホルモンも発現には促進的に働くことが脳下垂体摘出動物で観察された。培養細胞系では、Cyp3a41遺伝子とCyp3a44遺伝子発現に対する副腎皮質ホルモンの至適濃度に違いがあり、後者では生理的濃度で発現が最高値を示すのに対し、前者の発現は濃度依存的に発現量も増加した。また、培地に成長ホルモンを添加することで発現量が増加した。発現に対する阻害剤を検証したところ、Cyp3a41遺伝子の発現には核内転写因子PXRが、Cyp3a44遺伝子では副腎皮質ホルモン受容体GRがそれぞれ活性化される経路が主として関与することが示唆された。発現調節に関わる遺伝子領域はCyp3a41遺伝子5' -上流163塩基内に発現に関わる配列が存在することが示唆された。しかし、典型的な副腎皮質ホルモン応答配列に変異を入れても転写活性が認められた。しかし、HNF4α応答配列に変異を入れると転写活性は無くなった。ところがこの領域にGRが結合するという証拠は得られず、活性化されたGRは間接的にHNF4α配列に関わっていることが示唆された。この配列が発現の雌雄差に関わるかどうかについては、現在検討中である。
脳内情報処理の電気生理学的評価に関する研究

事象関連電位Nogo N2成分は、音声呈示課題でも呈示刺激の判別が困難な課題や、S1-S2刺激対呈示では明確に認められ、刺激の種類や呈示課題の違いに対して、異なる情報処理過程を反映し、低解像度脳電磁図トモグラフイーでは、ジェネレータは前帯状皮質や前窩前頭皮質にあることを示唆した。また、近赤外線を用いた光トポグラフィー検査では、音声呈示課題や電流感覚閾値検査施行中には前頭部での酸素化ヘモグロビンの増加が認められた。(2)光トポグラフィーでの記録も可能となったので、健康成人で、光トポグラフィーでの記録を行い、脳波、事象関連電位成分との関連を検討する。(3)健康成人、高次脳機能障害患者で、各呈示課題および呈示刺激に対する課題施行時における事象関連電N1, P2, P3a, P3b, Nogo N2、Nogo P3、N400、P600成分などとともにLORETA解析を含め検討を行ない、その特徴を明らかにする。(4)事象関連電位成分、LORETA解析、光トポグラフィーでの解析所見のそれぞれの関連を含めて検討を行なう。(5)痛覚や温度覚に関する小径有髄繊維なども含めた体性感覚を評価するため異なる周波数5Hz,250Hz,2000Hzの微弱な電流による電流知覚閾値と脳内での感覚情報処理との関係を明らかにするため、電流知覚閾値検査施行中の光トポグラフィー検査を同時記録し、小径有髄線維が関わる知覚認識時の脳内の情報処理過程を検討する。従来の体性感覚大脳誘発電位の後期成分など大径有髄線維が関わる感覚の脳内情報処理過程との違いを検討し、患者の知覚過敏や疼痛など主観的な知覚障害の訴えとの関係や知覚過敏や疼痛などの数量的、客観的な評価を試みる。コンピュータで音声呈示課題のプログラムを作成した。また、LORETA(low-resolution brain electromagnetic tomography)解析のためのプログラムを入手して、事象関連電位成分の従来の解析方法だけではなく、LORETAでの解析も行えるようにした。聴覚情報処理に対してボタンを押し反応する課題において,反応の抑制の際の事象関連電位のNoGo N2成分、NoGoP3成分について検討した。単純なオッドボール形式で刺激呈示した場合には、NoGoN2成分は明確ではなかったが、S1-S2の刺激対で刺激呈示をした場合には、NoGo N2成分は明確に認められ、頭皮上分布は視覚呈示刺激課題の際認められるNoGo N2成分と異なった。従来のオッドボール課題などによる検討では、聴覚呈示課題では、NoGo N2はほとんど認められないと報告されてきたが、先行するCueがある場合には,より課題に注意が向けられるなどオッドボール課題施行時と異なる情報処理過程を反映して、S1-S2の刺激対で刺激呈示課題ではNoGo N2が明らかであること、また、NoGo N2は聴覚刺激時には、視覚呈示課題と異なる頭皮上分布を示し、下前頭側頭部にも電極を装着して記録した場合にはNoGo N2と同じ潜時の陽性波のNoGo P2が認められる。刺激の種類や呈示課題の呈示方法の違いにたいして、それぞれ異なる情報処理過程を反映して、反応および反応の抑制が行なわれることを示した。視覚情報、聴覚情報の脳内情報処理について研究するため、視覚呈示および聴覚的呈示の言語課題を用いて、ボタンを押し反応課題における反応の抑制の際の事象関連電位のNoGo N2成分、NoGoP3成分について検討した。あらたに光トポグラフィーが使用可能となったので、事象関連電位の検討だけではなく光トポグラフィーを用いて、事象関連電位の課題試行時における大脳皮質の活動変化にともなう、酸化ヘモグロビン、還元型ヘモグロビン変化と事象関連電位成分との関係の検討を行うために、視覚呈示および聴覚的呈示の言語課題のコンピュータのプログラムの変更および改良を行なった。また、頭皮上に装着した脳波の記録電極の部位と光トポグラフィー記録のプローブの位置との関係、およびMRI画像を使って、脳の解剖学的位置関係を明確にするための方法を確立した。事象関連電位では、聴覚呈示課題でも、S1-S2刺激対で刺激呈示した場合には、NoGo N2成分は明確に認められ、頭皮上分布は視覚呈示刺激課題の際認められるNoGo N2成分と異なった。まだ少数例の検討で学会発表や論文発表はしていないが、Goの時とNoGoのときとで、光トポグラフィーを用いた検討でも、頭皮上の異なる部位でのそれぞれの課題施行中に酸化ヘモグロビンの増加が認められた。聴覚刺激時には、視覚呈示課題と異なる頭皮上分布を示し、刺激の種類や呈示課題の呈示方法の違いにたいして、それぞれ異なる情報処理過程を反映して、反応および反応の抑制が行なわれることが事象関連電位でも光トポグラフィーの結果からも示された。

低解像度脳電磁図(low-resolution brain electromagnetictomography:LORETA)解析のための設定を行い、事象関連電位成分の従来の解析方法だけではなく、LORETAでの解析を行った。また、光トポグラフイーが使用可能となったので、事象関連電位の検討だけではなく光トポグラフィーを用いて、事象関連電位の課題試行時における大脳皮質の活動変化にともなう、酸化ヘモグロビン、還元型ヘモグロビン変化と事象関連電位成分との関係の検討を行うために、視覚呈示および聴覚的呈示の言語課題のコンピュータのプログラムの変更および改良を行ない、健康成人での検討を行った。視覚情報、聴覚情報に対する反応時および反応の抑制時の脳内情報処理について研究するため、視覚呈示および聴覚的呈示の言語課題コンピュータで音声呈示課題のプログラムを作成し、呈示課題プログラム用いて、ボタンを押し反応課題における反応の抑制の際の事象関連電位のNoGo N2成分、NoGo P3成分について検討した。一般に、単純な聴覚呈示課題では、事象関連電位成分NoGo N2成分は明確でないことが多いとされているが、視覚呈示課題同様に、聴覚呈示課題でも、呈示刺激の判別が困難な課題や、S1-S2刺激対で刺激呈示した場合には、NoGo N2成分は明確に認められた。しかし、頭皮上分布やLORETAでの所見は、視覚呈示刺激課題の際に認められるNoGo N2成分の所見とは異なった。聴覚刺激時には、視覚呈示課題と異なる頭皮上分布を示したことから、刺激の種類や呈示課題の呈示方法の違いにたいして、それぞれ異なる情報処理過程を反映して、反応および反応の抑制が行なわれることが事象関連電位成分だけではなくLORETA、光トポグラフィーの結果からも示された。言語情報処理について、インフォームドコンセントを得た若年健康成人を対象に、音声呈示課題に対し、反応施行時および反応抑制時の事象関連電位成分の検討とともに、光トポグラフィーでも検討した。両側側頭部での酸化型ヘモグロビンの増加および両側前頭部での酸化型ヘモグロビンの増加が認められた。これまでに記録した事象関連電位のデータで頭皮上21か所以上から記録し、LORETA (low resolution electromagnetic tomography)を用いた解析が可能な一部のデータを用いて再度解析した。音声呈示課題でNogo課題施行時には、前帯状皮質や前窩前頭皮質にジェネレータがあることを示唆した。脳内での体性感覚情報処理については、インフォームドコンセントを得た若年健康成人を対象にして、触覚の伝達に関わる大径有髄Aβ線維だけではなく、温痛覚の伝達に関わる小径有髄Aδ線維および無髄のC線維の検討も含めた感覚について、5Hz, 250Hz, 2000Hzのsine波の微弱な電流刺激による電流感覚閾値検査施行中の脳内での感覚情報処理に関して、光トポグラフィー検査を同時時記録し、小径有髄繊維が関わる知覚認識時の脳内の情報処理過程を検討した。微弱な電気刺激であるため、通常の大径有髄の刺激による電気刺激を用いた体性感覚大脳誘発電位の時のように刺激対側の体性感覚領野での酸化ヘモグロビンの増加は顕著ではなかったが、前頭部での酸化ヘモグロビンの増加は顕著であり、5Hzの時と2000Hzの時とで異なった。時間的分解能に優れた事象関連電位での検討だけではなく、光トポグラフィーは空間的解析に有効であり、非侵襲的に被験者の脳内情報処理過程について評価するのに有用と思われた。
腸球菌の病原性因子(定着・凝集因子、バクテリオシン、バンコマイシン耐性等)の研究

(1)定着凝集因子の研究ヒト膀胱培養細胞及び人膀胱組織に高頻度に定着するE.faecalis株を臨床分離株より分離し、ヒト細胞表面のフイブロネクチンに特異的に結合する蛋白がE.faecalisの細胞表面に存在することを報告した(Infect.Immun.67:1585-92.(1999))。その後定着をin vitroで定量する方法を開発し解析した結果、ヒト細胞の定着にはコラーゲン、ラミニン、ファイブロネクチンへの定着が必要であることを解明した(Infent.Immun.(2004) in press)。この結果はアメリカ微生物学会(ASM)主催の第1回国際腸球菌会議(1999年カナダ、バンフ)に招聘され発表した。(2)バクテリオシンの研究この研究におけるバクテリオシンはバンコマイシン耐性E.faecium(VRE)から分離されたものである。これはE.faeciumとE.hiraeに殺菌作用があり、VREの臨床分離株の約30%が同様のバクテリオシン生産株である。約12.5kbの接合伝達性プラスミド上の、バクテリオシン遺伝子の遺伝学的解析の結果、バクテリオシン遺伝子は、バクテリオシン前駆体の生産、及び分泌、細菌細胞外での前駆体の活性化因子、自らのバクテリオシンの免疫因子等の遺伝子をコードしていた。論文を作成しJ.Bacteriol.に投稿中である。(3)バンコマイシン耐性(VRE)の研究アボパルシン使用歴のある国(タイ、フランス)から日本への輸入鶏肉から高頻度にVREが分離されることを発見した。これは薬剤耐性菌がglobalに拡散されることの最初の報告となった(Lancet 353:1854.(1999))。1)タイ産輸入鶏肉から分離されるVanA型VREは一般的なVanA型VRE(高度バンコマイシン、高度テイコプラニン耐性)と異なり高度バンコマイシン、低度テイコプラニン耐性でそのVanA型遺伝子に特徴的な構造があることを発表(FEMS Microbiology Letters 185:247-54.(2000))した。さらにこれと同じバンコマイシン耐性度と遺伝子構造を持つVREが日本の患者から分離されることからVREが輸入鶏肉を介して人に伝播する可能性を明らかにした(Appl.Environ.Microb.68(12):6457-61(2002))。これと同じプラスミドがVREに高頻度に存在することを報告した。2)E.faeciumで初めて当研究者等により発見された、液体培地中で高頻度に接合伝達するゲンタマイシン耐性プラスミドpMG1(65kb)の接合伝達機構の分子遺伝学的研究により、供与菌と授与菌の安定な接合に必要な、pMG1に特異的な遺伝子traAを同定した(J.Bacteriol.184:5800-5804(2002))。これと同じプラスミドがVREに高頻度に存在することを報告した(J.Clin.Microbiol.40:3326-33(2002))。3)(1)vanD型VRE、(2)バンコマイシン依存性VanA型VRE、(3)ヒトおよび鶏肉から分離されたフェロモン反応性バンコマイシン耐性プラスミド、および(4)VanB型VREそれぞれの分子遺伝学的解析を行い、論文投稿準備中である。

1)タイ産輸入鶏肉から分離されるVanA型VREは一般的なVanA型VRE(高度バンコマイシン、高度テイコプラニン耐性)と異なり高度バンコマイシン、低度テイコプラニン耐性でそのVanA型遺伝子に特徴的な構造があることを発表(FEMS Microbiology Letters 185:247-54.(2000))した。さらにこれと同じバンコマイシン耐性度と遺伝子構造を持つVREが日本の患者から分離されることからVREが輸入鶏肉を介して人に伝播する可能性を明らかにした(Appl.Environ.Microb.68(12):6457-61(2002))。これと同じプラスミドがVREに高頻度に存在することを報告した。2)E.faeciumで初めて当研究者等により発見された、液体培地中で高頻度に接合伝達するゲンタマイシン耐性プラスミドpMG1(65kb)の接合伝達機構の分子遺伝学的研究により、供与菌と授与菌の安定な接合に必要な、pMG1に特異的な遺伝子traAを同定した(J.Bacteriol.184:5800-5804(2002))。これと同じプラスミドがVREに高頻度に存在することを報告した(J.Clin.Microbiol.40:3326-33(2002))。3)(1)vanD型VRE、(2)バンコマイシン依存性VanA型VRE、(3)ヒトおよび鶏肉から分離されたフェロモン反応性バンコマイシン耐性プラスミド、および(4)VanB型VREそれぞれの分子遺伝学的解析を行い、論文投稿準備中である。1)グラム陽性菌においては、液体培地中で高頻度に接合伝達するプラスミドは一般的でない。ゲンタマイシン耐性プラスミドpMG1(65kb)は日本のE.faecium臨床分離株から分離されたプラスミドで、E.faeciumにおいて、世界で初めて発見された高頻度接合伝達性プラスミドである。pMG1型プラスミドは米国の臨床分離バンコマイシン耐性腸球菌VREの60%が保持していることを発見し、VREを含めE.faeciumに一般的に存在するプラスミドであることを示した。これらのプラスミドにはAE型の5種類のプラスミドが存在し、中でもA、B型プラスミドが最も多く(それぞれ40%)存在すること、またこれらのプラスミドは非伝達性バンコマイシン耐性プラスミドを可動化することから、バンコマイシン耐性等の薬剤耐性を腸球菌間で広げる役割をしていることを示した。2)pMG1(65kb)の全塩基配列を決定し、その遺伝子の発現性、凝集塊形成能遺伝子についての遺伝学的解析を行っている。遺伝学的解析の中で、液体培地中で接合伝達するための接合凝集形成に必要な遺伝子を同定した。この遺伝子は接合の初期に高度に発現し、その変異株は液体培地中での接合伝達が不可能になる。3)E.faecalisのフェロモン反応性接合伝達性プラスミド上のBac41の分子遺伝学的解析を行った。Bac41は、相補的にバクテリオシン活性を発現させる2つの蛋白を持つバクテリオシンである。その遺伝子構造および発現機構を解明し、現在論文作成中である。(1)定着凝集因子の研究ヒト膀胱培養細胞及び人膀胱組織に高頻度に定着するE.faecalis株を臨床分離株より分離し、ヒト細胞表面のフイブロネクチンに特異的に結合する蛋白がE.faecalisの細胞表面に存在することを報告した(Infect.Immun.67:1585-92.(1999))。その後定着をin vitroで定量する方法を開発し解析した結果、ヒト細胞の定着にはコラーゲン、ラミニン、ファイブロネクチンへの定着が必要であることを解明した(Infent.Immun.(2004)in press)。この結果はアメリカ微生物学会(ASM)主催の第1回国際腸球菌会議(1999年カナダ、バンフ)に招聘され発表した。(2)バクテリオシンの研究
ＲＮＡとタンパク質の相互作用を用いたヒト細胞運命制御システムの構築

ヒト細胞内の信号伝達経路による遺伝子発現ネットワークを自在に変換する新手法としてタンパク質応答型のshRNAスイッチを構築した。タンパク質応答型のスイッチによる翻訳制御の手法に、フィードバック制御などを導入することに成功した。新しいタンパク質応答型のスイッチに使用することができる人工のRNPモジュールを作成した。任意のmRNAの翻訳をONにする新しいONスイッチの開発を行った。RNPから構成される三角形のデバイスが、ステレオケミカルにヒト細胞表面レセプターの集合を制御し、それにより信号伝達を定量的に制御できることを証明した。同研究の進展に必要な関連する新技術を開発した。ヒト細胞内の遺伝子発現ネットワークを自在に変換・改変するための手法として、shRNAとRNP相互作用モチーフを利用した蛋白質-蛋白質シグナル変換システム(蛋白質応答型shRNAスイッチ)を構築。遺伝子発現制御を通した細胞内シグナル制御、および細胞運命制御が可能であることを示すため、このshRNAスイッチの標的遺伝子をアポトーシス制御遺伝子に改変することで、細胞内のアポトーシスシグナルに接続し、特定蛋白質の発現に応答した細胞死制御が可能であることを示した。また、以前の研究で構築されたmRNAスイッチと上記で構築されたshRNAスイッチを組み合わせることで、一種類の蛋白質の入力に応答して、2種類の異なるmRNAからの翻訳を同時かつ独立にON/OFF制御できることを示した。これまでに開発した、ヒト細胞内でのRNA結合蛋白質を用いる翻訳制御の方法の手法をさらに進化させるため、フィードバック制御法の導入を行うことに成功。この制御法を導入することで、ヒト細胞内での蛋白質の発現量を厳密に決定することが可能となった。制御法は、RNAへの結合能力が異なる蛋白質の誘導体を用いて、目的の蛋白質の発現量を定量的に制御することができる。数理解析モデルを用いることにより制御はRNA・蛋白質間の相互作用に連動していることを確認した。天然のRNA-蛋白質複合体(RNP)を改変し、信号伝達経路の制御などに使える新しいRNPモジュール(独立した機能構造単位)を作成することに成功。このモジュールがヒト細胞内で実際に使用可能であるかどうかを検証するために、既に開発されている翻訳制御システムにこれを組み込み、新しいクラスの翻訳制御スイッチを開発した。これまでの研究で構築した特定のヒトmRNAの翻訳を抑制する分子スイッチ(OFF switch)に加えて、特定のmRNAの翻訳をONにする分子スイッチの開発に成功した。このスイッチは、NMD (nonsense mediated decay)を応用したものであり、一般的に、これまで開発されて来たすべてのOFF switchをON switchに変換する可能性をもつ。特定のmRNAに、このスイッチを結合して細胞に導入し、同スイッチに特定のタンパク質を結合させると、mRNAにコードされたタンパク質が合成される。一方、細胞内に特定タンパク質がないとmRNAが分解され、タンパク質は合成されない。例えば、このスイッチと細胞死を誘導するタンパク質とを結びつければ、がん細胞だけを死滅させるシステムを構築することができる。テーマ2)分子テザインによる新規多機能性RNPの構築とその細胞運命制御システムへの応用。これまでにヒト細胞表面レセフターからの信号伝達の人工的な制御法開発に使用する材料として、三角形RNPおよびその誘導体を開発した。今回、これらによるヒト細胞表面に露出する特定の細胞表面レセフターへの特異的な結合法の開発に成功した。さらに、レセプターを形成するパーツであるタンパク質ユニット(これらの集合によりレセプターとして働く)に三角形RNPを結合させて同ユニット間の距離を調節し、信号伝達のON/OFFを制御して、アポトーシスの誘導及びその阻害を三角形のサイズ変化に応じて定量的に行うことに成功した(論文投稿中)。また、同様のツールとなる新しいRNPナノ構造体の設計および構築を行い、box C/D-L7Aeを用いた「王冠状のRNP」およびrRNA-L1モチーフを用いた「四角形状RNP」の構築に成功した。これらは、より高次の機能をもつRNPを創製するための基盤となる。テーマ1)人工RNPスイッチによる細胞運命制御システムの構築。以前の研究で構築されたmRNAスイッチと上記で構築されたshRNAスイッチを組み合わせることで、一種類の蛋白質の入力に応答して、2種類の異なるmRNAからの翻訳を同時かつ独立にON/OFF制御でることを示した。本研究で開発したshRNAスイッチシステムは、従来のshRNAのループ部位の配列を改変するだけで、生物学・医療研究には不可欠であるRNAiの手法全般に応用が可能なモデル技術であり、今後の幅広い応用が期待される。また、遺伝子発現スイッチの作動原理を、立体構造をもとに解明し、さらに3D分子デザインを用いてその効率を最適化した研究は例がなく、今後のバイオテクノロジー研究全般に立体構造を基にした遺伝子回路設計が普及することが期待される。また、ヒト細胞内でのRNA結合蛋白質を用いる翻訳制御の方法の手法をさらに進化させるため、フィードバック制御法の導入を行うことに成功。

本研究で開発したフィードバック制御法は、元来、天然に存在する信号伝達系にも数多く存在するものであり、今後、定量的な遺伝子発現制御を複数同時におこなうことを可能にするため、幅広い応用が期待される。テーマ2)分子デサインによる新規多機能性RNPの構築。)天然のRNA-蛋白質複合体(RNP)を改変し、信号伝達経路の制御などに使える新しいRNPモジュール(独立した機能構造単位)を作成することに成功。細胞表面レセプターからの信号伝達の制御法開発のため基礎技術としての、デザインされた三角形RNPおよび誘導体によるヒト細胞表面に露出する蛋白質への特異的な結合の確認法の構築。三角形RNP以外の形状を持つRNP複合体のデザインと合成。最終年度であるため、分子デザインによる多機能性RNPの構築とその細胞運命制御システムへの応用研究に焦点を絞り、研究完成に向けて集中的に研究を推進した。1)昨年度、未完成であったヒト細胞表面レセプターに特異的に結合する三角形RNPを用い信号伝達のON/OFFを制御してアポトーシスの誘導及び阻害を、三角形のサイズを変えることにより定量的に制御できることを論文として報告した。この研究はナノサイズの人工デバイスの大きさの違いによる定量的な新しい信号伝達制御法である。また、この手法の一般化を目指して研究を進めている。2)三角形RNPの精製法を開発し論文として報告した。RNPの精製法は報告がなく独自に開発をする必要があり、それに成功した。3)四角形RNPの構築研究を進め、2種類のものを再現性良く作成することに成功し、その存在をAFMで確認した。また、4つの機能性タンパク質を装着するRNPの作成とその応用への可能性を示し論文にまとめた。あたらしく、4つの異なる機能性タンパク質を有する人工デバイスの開発が可能であることを示した。4)円順列置換による三角形RNA足場上でのタンパク質の配向性の変換に成功し、論文にまとめた。これは今後必要となる三角形RNPの精細な立体制御を可能にした新しいナノテクノロジー技術である。5)三分割型足場RNAを用いた三角形RNA各頂点への三つの異なるタンパク質が結合した、すなわち三つの異なる機能を有するタンパク質をもつ三角形RNPの作成に成功し論文にまとめた。これは、例えば細胞認識、蛍光マーキング、細胞毒性をもつタンパク質を同じRNA上に設置して細胞の運命制御を行うデバイスの作成を可能にする技術である。26年度が最終年度であるため、記入しない。全体として順調に研究は進展している。
炭素質コンドライト中のリンと酸素に富む硫化物の起源と重要性

地球の水が何処から来たのかは,地球惑星科学における重要な未解決問題の一つである.地球の水の起源は太陽系の水の起源へと直接結びついている.近年,コンドライト母天体のような太陽系始原天体における水の起源が酸素や水素の同位体研究により考察することができる様になってきた.また,始原天体に取り込まれる前の原始太陽系星雲中の水蒸気の同位体的性質も受入研究者のグループにより解明されつつある.これら一連の研究の進展によると,太陽系始原水の研究は,従来の粘土鉱物の研究に加え,リンと酸素と硫黄に富む物質の研究が重要であることがわかってきた.本研究の意義は,このリンと酸素と硫黄に富む物質のうちリンと酸素に富む硫化物に注目して,その同位体的性質とナノメーターレベルの結晶学的組織を解明することにより,太陽系の水の起源と進化を明らかにする事である.この包有物は,申請者により,炭素質隕石中に発見されたものであり,新物質である可能性がある.この新物質の成因を解明するために,酸素同位体組成とナノスケールレベルの結晶構造と組織解析を行い,このリンと酸素に富む包有物の成因を解明することにより,初期太陽系に存在していた始原水の解明を行う.本年度は以下の研究成果が得られた。(1)リンと酸素に富む硫化物の岩石組織を,フィールドエミッション型走査顕微鏡(FE-SEM)により観察した.(2)同位体顕微鏡を用いたリンと酸素に富む硫化物の酸素同位体比測定法の開発を行った.(3)以上の結果をまとめ,リンと酸素に富む硫化物の起源と成因を解析した.(4)以上と平行してコンドリュールとCAIが結合したオブジェクトの分析を行いその成因を決定した.(5)第44回月惑星科学会議(米国ヒューストン)において発表を行った.地球の水が何処から来たのかは,地球惑星科学における重要な未解決問題の一つである.地球の水の起源は太陽系の水の起源へと直接結びついている.近年,コンドライト母天体のような太陽系始原天体における水の起源が酸素や水素の同位体研究により考察することができる様になってきた.また,始原天体に取り込まれる前の原始太陽系星雲中の水蒸気の同位体的性質も受入研究者のグループにより解明されつつある.これら一連の研究の進展によると,太陽系始原水の研究は,従来の粘土鉱物の研究に加え,リンと酸素と硫黄に富む物質の研究が重要であることがわかってきた.本研究の意義は,このリンと酸素と硫黄に富む物質のうちリンと酸素に富む硫化物に注目して,その同位体的性質とナノメーターレベルの結晶学的組織を解明することにより,太陽系の水の起源と進化を明らかにする事である.この包有物は,申請者により,炭素質限石中に発見されたものであり,新物質である可能性がある.この新物質の成因を解明するために,酸素同位体組成とナノスケールレベルの結晶構造と組織解析を行い,このリンと酸素に富む包有物の成因を解明することにより,初期太陽系に存在していた始原水の解明を行う.本年度は以下の研究成果が得られた。(2)作成した阻石試料中からリンと酸素に富む硫化物を岩石顕微鏡により観察した.(3)リンと酸素に富む硫化物の岩石組織を,フィールドエミッション型走査顕微鏡(FE-SEM)により観察した.(4)X線マイクロアナライザー(EPMA)により,リンと酸素に富む硫化物とその周囲の硫化物や水質変成鉱物の結晶化学を明らかにした.地球の水が何処から来たのかは,地球惑星科学における重要な未解決問題の一つである.地球の水の起源は太陽系の水の起源へと直接結びついている.近年,コンドライト母天体のような太陽系始原天体における水の起源が酸素や水素の同位体研究により考察することができる様になってきた.また,始原天体に取り込まれる前の原始太陽系星雲中の水蒸気の同位体的性質も受入研究者のグループにより解明されつつある.これら一連の研究の進展によると,太陽系始原水の研究は,従来の粘土鉱物の研究に加え,リンと酸素と硫黄に富む物質の研究が重要であることがわかってきた.本研究の意義は,このリンと酸素と硫黄に富む物質のうちリンと酸素に富む硫化物に注目して,その同位体的性質とナノメーターレベルの結晶学的組織を解明することにより,太陽系の水の起源と進化を明らかにする事である.この包有物は,申請者により,炭素質隕石中に発見されたものであり,新物質である可能性がある.この新物質の成因を解明するために,酸素同位体組成とナノスケールレベルの結晶構造と組織解析を行い,このリンと酸素に富む包有物の成因を解明することにより,初期太陽系に存在していた始原水の解明を行う.本年度は以下の研究成果が得られた。(1)リンと酸素に富む硫化物の岩石組織を,フィールドエミッション型走査顕微鏡(FE-SEM)により観察した.(2)同位体顕微鏡を用いたリンと酸素に富む硫化物の酸素同位体比測定法の開発を行った.(3)以上の結果をまとめ,リンと酸素に富む硫化物の起源と成因を解析した.(4)以上と平行してコンドリュールとCAIが結合したオブジェクトの分析を行いその成因を決定した.(5)第44回月惑星科学会議(米国ヒューストン)において発表を行った.当初の研究計画の通りおおむね順調に研究が進行しているため.研究計画に基づき以下の研究を順次進行して行く.

(1)同位体顕微鏡を用いたリンと酸素に富む硫化物の酸素同位体比測定法の開発を行う.(2)リンと酸素に富む硫化物について同位体顕微鏡により分析し,酸素同位体比を決定する.(3)リンと酸素に富む硫化物の酸素同位体比の値とその不均質と阻石の水質変成との間の関係について考察をおこなう.(4)リンと酸素に富む硫化物の成因について考察をおこなう.(5)以上の結果をまとめ国内学会および国際学会において発表する.又,結果を国際誌に論文投稿する.
バクテリアの転移性遺伝因子ISの転移とその制御の分子機構

1.IS3の8字型分子形成機構の解析:IS3の転移中間体である環状分子は特異な構造を持つ8字型分子から生じる。昨年度、確立した精製トランスポゼースを用いたin vitroの8字型分子形成反応系を用いて、この分子の生成機構を探るために、IS3の両端にある逆向き反復配列(IR)の色々な領域に変異を導入し、それを基質として8字型分子形成反応を調べた。その結果、IRには機能的に異なる組換えに必要な2つの領域(外側のA領域と内側のB領域)が存在し、左のIRからの組換えには左のIRのA領域と右のIRのB領域が必要であり、右のIRからの組換えにはそれと左右対称の領域が必要であることが分かった。この結果は2分子のトランスポゼースがそれぞれ一方のIRのA領域ともう一方のIRのB領域に結合し、IR間を架橋することを示唆する2.IS1の転移に関与する宿主因子H-NSの解析:H-NSの役割を解明するために、H-NSの欠損株でも転移能を有するトランスポゼースの変異体を取得した。また、H-NSの欠損株の染色体にランダムに挿入変異を誘起し、その変異株の中からIS1の転移が回復する株を数株取得した。3.IS3による融合体形成反応の解析:IS3は主たる転移産物として単純挿入体を生じるが、申請者はIS3を運ぶプラスミドと標的との融合体も形成することを発見した。融合体の多くは欠失を有する。この融合体の形成やそれに伴う欠失の機構を明らかにするために、融合体を数多く分離し、その構造をDNAシークエンシング等で解析したところ、欠失は完全な構造の融合体上の短い(4-9bp)相同配列間での組換えにより生じることが分かった。また、IS3の内部配列をほぼ完全に取り除いた変異体IS3は完全な構造の融合体を形成することが分かった。この結果は、IS3の内部配列が欠失の生成に関与していることを示す。1大腸菌細胞内における環状IS1分子の動態:環状IS1分子が、転移反応の中間体として機能する可能性を検証するために実験を行い、以下のような結果を得た。(1)環状IS1分子と通常の形状を持つIS1の転移能を測定したところ、前者は後者より約100倍高い頻度で転移することがわかった。(2)環状IS1を運ぶプラスミドを保持する大腸菌内でトランスポゼースを過剰に産生させると、環状IS1分子が切断されて生じると考えられる分子種が検出されたが、その安定性は低かった。(3)環状IS1分子が持つ69塩基対の介在配列の長さを様々に変化させた場合の環状IS1分子の転移能を調べたところ、67塩基対の場合が最も転移能が高いことがわかった。(2)精製IS3トランスポゼースによる転移素反応のin vitroでの解析:IS3のトランスポゼースをマルトース結合タンパク質との融合タンパク質の形で精製した。IS3を運ぶプラスミドDNAとこの精製タンパク質を反応させることにより、8型分子をin vitroで生成させることに成功した。この8型分子形成反応には基質DNAの超らせん構造が必要であることがわかった。(3)IS1の転移に関与する宿主因子H-NSの解析:(1)IS1 DNAに対するH-NSの結合能の有無をゲルシフト法により調べたところ、IS1の配列中にはH-NSが強く結合する部位はなかった。(2)H-NSタンパク質はいくつかの機能ドメインに分かれているが、C末のDNA結合ドメイン中に変異をもつH-NS変異株でもIS1の転移は起こったため、IS1の転移にはH-NSのDNA結合ドメインは不要であることがわかった。一方、マルチマー形成に必要な中央のドメイン中に変異をもつH-NS変異株はIS1の転移は起こらなかったため、IS1の転移にはH-NSのマルチマー形成ドメインが必要であることがわかった。

この融合体の形成やそれに伴う欠失の機構を明らかにするために、融合体を数多く分離し、その構造をDNAシークエンシング等で解析したところ、欠失は完全な構造の融合体上の短い(4-9bp)相同配列間での組換えにより生じることが分かった。また、IS3の内部配列をほぼ完全に取り除いた変異体IS3は完全な構造の融合体を形成することが分かった。この結果は、IS3の内部配列が欠失の生成に関与していることを示す。
操作・介入概念を手がかりとした科学の実在論的理解の検討

科学的実在論争の争点を明確にするため、代表的な反実在論者であるファン・フラーセンの議論を検討し、以下のことが明らかになった。彼は、科学理論を受容することと、それを正しいと信じることが異なる態度であることを、両者の理由(規範)が異なることから説明しようとする。この理解自体は適切ないし有用かもしれない。だが、彼の構成的経験論によれば、科学は単に観察証拠を扱えるだけでなく、観察可能な事柄すべてに関して正しい信念を与えることを目指すとされる。すると、受容の理由が信念の理由に限らないことを強調する議論は、実在論だけでなく、構成的経験論とも緊張関係をなす。この緊張関係を緩和するには、理論は探求の成果としてのみならず、探求の手段として受容されることもある点に注目すべきである。理論を暫定的に受容することと、長期的に検証にさらし続けていくことを区別すれば、長期的には受容の理由と信念の理由は一致していく。このように科学を理解すれば、構成的経験論は上述の緊張から救われるが、実在論も同様である。ゆえに、受容と信念の違いに注目した議論は、科学的実在論争の争点を明確にしないことが判明した。次に、悲観的帰納法からの批判に耐えうる実在論として期待されている構造実在論の立場を検討した。この立場は一定の支持を集めてはいるが、その実在にコミットするところの「構造」がそもそもどのようなものなのかすら、明確にされているとは言い難い。代表的構造実在論者の議論を検討した結果、科学者がそれについて語るように見える「本性」は実在として信じず、せいぜい発見法的役割しか与えないが、方程式などについては実在と結びつけるという態度は、維持し難いという結論を得た。そのほかにも、ニューマン問題に対する解決が得られていないなど、構造実在論には困難な課題が多く、少なくとも現段階では、有力な立場とは言えないとわかった。研究の当初の目的は、操作・介入概念に基づく科学的実在論の正当化であった。当初計画していた、整合的な形而上学の構築による実在論の擁護は、十分な成果を得られなかった。他方で、そもそも操作・介入を基礎づけに用いた正当化を行わずとも実在論的直観が救える点、そして、そのように視点を変えたとき、操作・介入行為の理解の観点から実在論が重要でありうる点が新たな知見として得られた。科学的実在論を擁護する試みとして、科学理論による新奇な予言の成功に注目する立場がある。ある理論が新奇な予言に成功したとき、それに単なる偶然以上の説明を与えるとすれば、その理論は近似的に真だと考えねばならないとする立場である。これは直観的にもっともらしいが、なぜ予言の成否が理論の確証にとって特別なのかは明らかでない。そこで報告者は、予言の証拠能力をめぐって展開されてきた先行研究を踏まえ、予言の成功を根拠に実在論を擁護することがいかにして可能なのかを研究し、以下の結果を得た。予言の成功の特別さを擁護する論者の多くは、予言の新奇性を「使用新奇性」として解釈した上で、理論の構築方法のよさという概念に訴えて自説を主張してきた。しかし、予言が使用新奇的でなくとも理論の構築方法がよいとわかる事例も考えうることを報告者は発見した。つまり、従来の立場は不整合である。しかし、問題の分析を通して、実在論を擁護するのにより適切な予言概念が示唆された。予言の成否を、現実の歴史から独立に、再構成的に捉えるならば、従来の議論の抱える困難を回避しながら予言の認識論的特権性を擁護できる可能性がある。さらに報告者は、なぜ予言の成功が実在論を支持するように思われるのかについて、新たな説明を与えた。まだ生じていないことがこれから生じると予めわかる、という事態を理解する道具立てとして、我々は因果概念しか持っていない。ゆえに、新奇な予言の成功を説明・理解するには、予言を可能にした因果関係の担い手の実在にコミットせざるを得ないのである。以上から、理論的対象は実在するかという問いが、因果性をどう理解すべきかという問いにどう関係するかがわかった。これによって科学的実在論争がいかに解消しうるかが、より明確になる期待される。本研究の目的かちは、実在論者がいかなる因果概念を採用すべきかを問うこと今後の課題である。第一に、ファン・フラーセンの定式化によれば、科学的実在論争の第一義的な争点は科学の目的とは何かである。彼はこの問いに答えるため、科学者の営み(特に、何を科学理論の成功とみなすか)に対して、実在論と構成的経験論のどちらがうまく説明を与えられるかを検討する。そして、科学者が、情報の豊かで、まさにそれゆえに誤るリスクの高い理論を受け容れることを指摘し、実在論はこれを説明できないと論じる。ところが、この点は構成的経験論からも説明できないように見える。構成的経験論によれば、科学者は経験的に十全な理論を求めているとみなされるが、情報の豊かな理論は経験的に十全でないリスクも大きいはずだからである。このことから、誤りのリスクを負いながらも情報の豊かな理論を受け容れて進んでいくという科学の営みを記述する枠組みが、従来の科学哲学では解明されていないことが明らかになった。

そして、この点に取り組むために、科学哲学に行為論の知見などを取り込むことができないか、という栽たな研究の可能性が示唆された。第二に、ファン・フラーセンは正当化概念に基づく認識論を受け容れずに、科学のあり方を理解しようとする。これを逆手に取ると、実在論者は、科学の実在論的理解のために因果概念を持ち込む必要があると考えたとしても、因果に関する信念を正当化しなくてよいことになる。実のところ、科学を実在論的に理解したいという動機は、多くの実在論者が試みてきた(そして、本研究も当初は想定した)ほど強い主張を擁護せずとも満たされてしまうのかもしれない、ということが示唆された。科学的実在論争の争点を明確にするため、代表的な反実在論者であるファン・フラーセンの議論を検討し、以下のことが明らかになった。彼は、科学理論を受容することと、それを正しいと信じることが異なる態度であることを、両者の理由(規範)が異なることから説明しようとする。この理解自体は適切ないし有用かもしれない。だが、彼の構成的経験論によれば、科学は単に観察証拠を扱えるだけでなく、観察可能な事柄すべてに関して正しい信念を与えることを目指すとされる。すると、受容の理由が信念の理由に限らないことを強調する議論は、実在論だけでなく、構成的経験論とも緊張関係をなす。この緊張関係を緩和するには、理論は探求の成果としてのみならず、探求の手段として受容されることもある点に注目すべきである。理論を暫定的に受容することと、長期的に検証にさらし続けていくことを区別すれば、長期的には受容の理由と信念の理由は一致していく。このように科学を理解すれば、構成的経験論は上述の緊張から救われるが、実在論も同様である。ゆえに、受容と信念の違いに注目した議論は、科学的実在論争の争点を明確にしないことが判明した。次に、悲観的帰納法からの批判に耐えうる実在論として期待されている構造実在論の立場を検討した。この立場は一定の支持を集めてはいるが、その実在にコミットするところの「構造」がそもそもどのようなものなのかすら、明確にされているとは言い難い。代表的構造実在論者の議論を検討した結果、科学者がそれについて語るように見える「本性」は実在として信じず、せいぜい発見法的役割しか与えないが、方程式などについては実在と結びつけるという態度は、維持し難いという結論を得た。そのほかにも、ニューマン問題に対する解決が得られていないなど、構造実在論には困難な課題が多く、少なくとも現段階では、有力な立場とは言えないとわかった。研究の目的のひとつである、操作・介入概念を手がかりとした因果概念理解の検討は未だ十分にできておらず、当初の計画よりも遅れている。他方、実在論と反実在論の争点が因果概念に対する態度の違いにあることについては、十分に明らかとなってきた。研究の当初の目的は、操作・介入概念に基づく科学的実在論の正当化であった。当初計画していた、整合的な形而上学の構築による実在論の擁護は、十分な成果を得られなかった。他方で、そもそも操作・介入を基礎づけに用いた正当化を行わずとも実在論的直観が救える点、そして、そのように視点を変えたとき、操作・介入行為の理解の観点から実在論が重要でありうる点が新たな知見として得られた。今後は、因果概念を理解しようとするアプローチとして、操作・介入に基づくものと他のもの(特に、物理的保存量に着目するアプローチ)との関係を明らかにする研究を継続する。