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ラテン語詩と近世初期日本の交差

特に2)の、近世初期日本人神学生によって筆写されたのではないかと推定される擬古典ラテン語詩4点が、1588年にリスボンで刊行された書籍から採られているとほぼ同定できたことが最大の成果である。2015年度は、1)国際会議での英語報告2件、2)関連資料の収集とデータ整理、および論文執筆、3)研究協力者の招へいと打ち合わせ、が主な活動であった。1)については、4月に米国ケンタッキー州レキシントン大学、8月にオーストリア・ウィーン大学にてそれぞれ行われた国際学会において、研究の方針および成果について英語での発表と討論を行った。後者の発表に基づく論文も執筆・提出し、現在査読中である。国際学会における発表を通して本研究計画の成果を国際的に発信するとともに、近世ラテン語学を専門とする欧米研究者との学術交流を進めることができた。また学術交流を通して次年度以降の国際学会参加・発表の機会を新たに得ることができた。2)については、近世ラテン語エピグラムや叙事詩、およびエンブレム学を中心とする文学・美術史関係図書や資料の収集・整理を行った。また日本人キリシタンの散文を含むラテン語使用について、バチカン図書館収蔵写本reg.lat.428を中心に同書の一部校訂・英訳を含む英語論文を平岡隆二氏(熊本県立大学)と共著執筆・査読通過し、学術誌掲載に至った。3)については、2016年3月に海外研究協力者Peter・Daly氏(McGill University名誉教授)を招へいし、エンブレム学の世界における最新の研究状況について学び、今後の学会発表や資料校訂・刊行の可能性について打ち合わせを行った。交付申請書に記載した3つのテーマのうち、(1)キリシタン銅版画における寸詩、および(2)日本人キリシタンによる詩作、については、2回の国際会議報告およびそれに関連する学術交流や論文執筆によって当初想定していた程度の成果をあげることができた。(3)『パチェコ讃詞』関連調査については、当初予定していたポルトガルにおける研究調査は実施できなかったものの、国内における資料収集や整理を行い、また海外研究協力者の招へいを通して関係分野の現在の研究状況について打ち合わせを行うことができた。2016年度は、1)国際会議および招待講演での発表計2件および国際学会参加1件(発表なし)、2)関連資料の収集とデータ整備、が主な活動であった。1)については、4月にイタリア・ローマにて行われた国際学会にて研究の成果、特に水戸銅版画の意義とバチカン図書館収蔵写本reg.lat.428巻末にあるエピグラム群の意義について英語での発表と討論を行った。また6月にドイツ・ミュンスター大学に招待され、日本人キリシタンの人文主義的ラテン語使用について英語で講演した。また直後にドイツ・フライブルク大学にて行われた国際学会に参加し、国外研究者と交流を深めた。これら国際学会における発表や参加を通して本研究計画の意義と成果を国際的に発信するとともに、近世ラテン語学を専門とする欧米研究者との学術交流を進めることができた。また学術交流を通じて次年度の国際学会参加・発表の機会を新たに得ることができた。特にドイツ語圏の研究者との交流を深め、ドイツおよびオーストリアにおける近世ラテン語学研究の著しい進捗を実感したことが、次年度にむけて2国間交流事業(オーストリアとの共同研究)の申請をするきっかけとなった。2)については、近世ラテン語エピグラムや叙事詩、および近世ラテン語全般について資料の収集・整理を行った。イタリア・ローマにて行われた学会発表原稿は同学会主催者により出版される予定である。また前年度オーストリア・ウィーンで行った発表に基づく論文も査読を通過し、出版予定である。交付申請書に記載したテーマのうち、(1)キリシタン銅版画におけるラテン語寸詩、および(2)日本人キリシタンによるラテン語詩作については、2回の発表およびそれらに関連する学術交流や論文執筆によって当初想定した以上の成果をあげることができた。(3)『パチェコ讃詩』関連調査については、予定していたポルトガルにおける研究調査が未だ実施できていないものの、ポルトガルの研究者とのメールによる意見交換を開始しており、資料収集や整理も進んでいる。2017年度は、1)国際会議での報告1件、2)国内における報告2件および発表なしの参加(司会)1件、3)フライブルクとミュンスターにおける研究調査、4)関連資料の収集とデータ整備、が主な活動であった。1)については、7月から8月にかけてアメリカ・ケンタッキーにて行われた国際学会で研究の成果を報告し、世界的な近世ラテン語文学の広がりについて外国人研究者達と意見交換を行った。2)については、5月に東京大学における多分野交流演習に参加してパネル発表を行い、7月に学習院女子大学における学会で研究テーマと関係する発表の司会を行い、また3月に東京にて行われたカトリック教育学会で報告を行い、研究成果の発信をすると共に国内研究者と意見交換をした。3)については、8月に近世ラテン語研究が盛んなドイツ・フライブルクとミュンスターの研究機関にて研究調査を行って2次文献の知識を深めると共にドイツの研究者と意見交換を行った。4)については、特に上記3)で得られた知見に基づいて、近世ラテン語研究書や関連資料を収集し、データ整備を行った。さらに2015年度と2016年度に行った国際学会報告2件の原稿はいずれも査読を通過し出版予定であるが、外国編集陣の要請に従ってそれらの校正を引き続き行った。また研究テーマと関連がある西洋古典と受容の問題について紀要論文を1点発表した。特に本年度、上に記した2016年にイタリア・ローマで行った学会報告論稿の整備

・校正の過程で、バチカン所蔵手稿『講義要綱』内のラテン語寸詩4点が、16世紀末のリスボン刊行本に収録されているものであるとほぼ同定できたことが、3年の研究期間内に得た最大の成果であるといえる。特に2)の、近世初期日本人神学生によって筆写されたのではないかと推定される擬古典ラテン語詩4点が、1588年にリスボンで刊行された書籍から採られているとほぼ同定できたことが最大の成果である。前掲のテーマ、(1)キリシタン銅版画における寸詩、および(2)日本人キリシタンによる詩作、については、8月のウィーン大学における国際学会の際に行った学術交流を通して、2016年4月にローマで行われる当該テーマに関係する国際学会にて報告する機会を得た。この機会を活用し、さらに報告や論文執筆の機会を探っていく。3)『パチェコ讃詞』関連調査についても、2015年度国内で行った資料収集・整理に続き、海外研究者との協力を進め、学会報告や論文執筆の機会を探っていく。研究テーマ総括を含む発表を5月に国内(東京大学)で1回行い、7月にはアメリカ・ケンタッキーにおける国際学会(Academia Latinitati Fovendae)にて本事業の総括を行う予定である。また8月あるいは9月に近世ラテン語文学研究の拠点であるドイツ・フライブルクとオーストリア・インスブルックを訪問し、海外研究者との交流を通じて本事業の成果を国外にアピールする。西洋古典夏季に予定していた資料調査旅行は大学業務(学生引率)と重なったため実施しなかった。また春季に予定していた資料調査旅行も実施せず、代替として行った研究協力者招へいの費用も、書類整理のため執行が次年度にずれこんだ。夏季に予定していた研究調査出張は2件は大学業務(学生引率)と重なったため実施しなかった。ただ代替として4月にイタリア・ローマにおける学会発表1件、6月にドイツ・ミュンスターにおける招待講演とドイツ・フライブルクにおける学会参加を行った。しかし代替の出張2件が予定していた研究調査出張2件より短期であったため、差額が生じた。28年度に、当初予定していなかった成果発表(4月ローマ)を実施し、また当初予定していなかった関係学会参加・研究交流(6月フライブルグ)を行う。今年度の活動の結果、研究課題について新たに本年度7月末にアメリカ・ケンタッキー州レキシントンで学会発表する機会を得た。差額はこの学会参加発表のため使用する。
PNAプローブを用いた簡便なテロメア長測定法の開発

研究の目的染色体末端のテロメアはTTAGGGの繰り返しによる反復配列であり、細胞分裂ごとに短縮するため癌や老化との関係が知られている。患者検体を対象とした場合では細胞種ごとのテロメア解析が、テロメア/テロメラーゼ調節機構の解明に重要である。核酸に特異的に結合するアナログであるPNAプロープと、フローサイトメーターによるテロメナ長測定法(Flow-FISH法)を開発し、造血器疾患の病態診断に応用することが研究目的であった。本年度の研究成果(1)テロメアの測定(Flow-FISH法の確立)フローサイトメーター(現有施設)で細胞を分画し、細胞種ごとのテロメア長を測定した。従来のサザンブロット法によるテロメア長(kb)と比較検討したうえで換算式を得た。健常者では加齢によるテロメア短縮を認めた。(2)骨髄異形成症候群MDSにおけるリンパ球および顆粒球テロメア短縮の相違RA症例では加齢による各分画のテロメア短縮を認めた。ただし顆粒球の加齢によるテロメア短縮は顕著ではなかった。RA症例では年齢に比較してリンパ球テロメア長の短縮している症例を認めた。RAEB症例では加齢によるテロメア短縮傾向を認めず、さらに顆粒球テロメア長はリンパ球よりテロメア短縮を来していた。顆粒球テロメア長は多くの症例で健常者より短縮しており、MDS腫瘍細胞のテロメアを反映していると推察される。なお今回の検討結果は、第66回日本血液学会総会(2004年9月)にて発表した。考案および展望MDSの病型進展によるリンパ球分裂寿命の変化と顆粒球におけるテロメア制御機橘の破綻が示唆された。今回確立されたテロメア長測定法は、免疫老化の観点から骨髄異形成症候群をはじめとする骨髄不全症候群の病態解明に有用である可能性が示唆された。研究の目的;.染色体末端のテロメアはヒトではTTAGGGの繰り返しによる単純反復配列で、細胞分裂の度に短縮するため癌や老化との関係が知られている。臨床検体を対象とした場合も細胞・細胞種ごとのテロメア解析が、テロメア・テロメナーゼ調節機構の鍵を握っている。PNAは核酸に特異的に結合するアナログで、in situ hybridization(FISH)などの手技に応用されている。このPNAプローブとフローサイトメーターを組み合わせ、迅速で簡便なテロメア長測定法(Flow-FISH法)を開発し、癌、免疫疾患、感染症などの免疫診断に応用するのが本研究の目的であった。本年度の研究成果;(1)リンパ球と顆粒球分画のテロメア長の測定(Flow-FISH法の確立)フローサイトメーター(現有施設)で細胞を分画し、細胞種ごとのテロメア長を測定した。細胞集団ごとにPNAプローブ添加とPNAプロープ非添加の差をテロメア長として数値化(arbitrary unit)する。自家発光や蛍光強度のばらつきをなくすため、牛胸腺細胞を蛍光強度のスタンダードとして用いた。従来のサザンブロット法によるテロメア長(TRF)と比較検討したうえで換算式(TRF=4.551+0.077 x arbitary unit)をえた。(2)同種造血幹細胞移植患者におけるリンパ球テロメア短縮は免疫老化を反映する非血縁同種骨髄移植患者(成人例6例、年齢中央値38歳)における免疫状態と、造血細胞のテロメア動態との関連を明らかにする目的で、造血幹細胞移植前後のテロメア長解析を試みた。移植前後の骨髄血および末梢血のテロメア長を、flow-FISH法を用いて約1ヵ月ごとに計測した。移植直後の少数の末梢血のテロメア長解析も可能であった。GVHDの重症度と末梢血リンパ球のテロメア短縮に有意な相関は認めなかったが、一部の症例では慢性GVHDに一致して一過性のテロメア短縮を認めた。なお今回の検討結果は、第26回日本造血細胞移植学会総会(2003年12月横浜)にて発表した。考案および展望;今回確立された迅速で簡便なテロメア長測定法は、今後癌治療において進展が期待される抗テロメラーゼ療法の効果予測、適応決定にも診断的意義が大きい。免疫老化の観点から、骨髄異形成症候群をはじめとする骨髄不全症候群の病態解明に有用である可能性も示唆された。

RAEB症例では加齢によるテロメア短縮傾向を認めず、さらに顆粒球テロメア長はリンパ球よりテロメア短縮を来していた。顆粒球テロメア長は多くの症例で健常者より短縮しており、MDS腫瘍細胞のテロメアを反映していると推察される。なお今回の検討結果は、第66回日本血液学会総会(2004年9月)にて発表した。考案および展望MDSの病型進展によるリンパ球分裂寿命の変化と顆粒球におけるテロメア制御機橘の破綻が示唆された。今回確立されたテロメア長測定法は、免疫老化の観点から骨髄異形成症候群をはじめとする骨髄不全症候群の病態解明に有用である可能性が示唆された。
希土類元素添加高輝度誘電体発光ゲルの室温合成と発光機構の解明

申請者らは、独自に開発した高濃度ゾルーゲル法により作製したEu元素添加チタン酸バリウムゲルが強い発光を示すことを見出した。作製された0.11.Oat.%Eu添加チタン酸バリウムゲルは、昨年度までの研究において、波長466nm(^7F_0-^5D_2遷移に対応)の励起光に対して、波長613nm(^5D_0-^7F_2遷移に対応)の強い発光を示すことを見出し、1.0at.%の添加濃度においても顕著な濃度消光を起こしていないことを確認した。また、パルスレーザー励起によるEu^<3+>イオンの^5D_0-^7F_2発光の減衰曲線から、Eu添加乾燥ゲルの蛍光寿命の測定を10-300Kの温度範囲で求め、発光は約0.6msの寿命をもつ単一輻射遷移機構によることを明らかにした。そこで、今年度はこの発光ゲルの薄膜発光体(蛍光及び電界発光薄膜デバイス)としての応用を目指した研究を行い、以下に示す成果を得た。1)1%Euを添加したものと無添加のBa, Tiアルコキシド溶液(溶媒;メタノール/メトキシエタノール混合溶媒、濃度;1.0mol/L)前駆体溶液を用い、Si、Pt、Cu、ITO、ガラスなど種々の基板上にスピンコート法により製膜した。形成した室温乾燥薄膜は非晶質であるが、50°C水蒸気雰囲気中で1h程度エージング(基板上エージング法)すると結晶性のBaTiO_3薄膜が得られる。この方法によるBaTiO_3結晶薄膜の合成は、ガラス基板上では成功していたがPt、Cu、ITOなどの導電性基板上では亀裂のない薄膜を得ることはできていなかった。今回、0.71wt.%のPVB(ポリビニルブチラール)を添加することにより、いずれの基板上でも平滑な表面をもつ亀裂のないBaTiO_3結晶薄膜を合成することに成功した。2)蛍光分光装置を用い、得られたEu添加BaTiO_3結晶性薄膜の発光特性を調べた。その結果、波長270nmの励起光に対して波長613nmにおいて顕著な発光スペクトルを観測した。この発光スペクトルの強度は薄膜のエージング条件によって変化することがわかり、エージング条件によってBaTiO_3薄膜中におけるEuの存在状態が変化することを確認した。この結果に基づいて、現在、最大発光強度を与える薄膜合成条件の決定と、XRD, FE-SEM及びTEMによる薄膜のキャラクタリゼーションを行っている。3)Eu無添加のBaTiO_3結晶性薄膜(90°C乾燥)は、100kHz1MHzの周波数範囲で100を越える誘電率と2%以下のtanδを示し、ZnS(Mn)蛍光体用透明絶縁膜としての機能を有することを見出した。現在、新しいタイプの電界発光薄膜の開発研究を進めている。マイクロモールドを鋳型として、筆者らが独自こ開発した高濃度の金属アルコキシド溶液を用いたゾル-キャスティング法によるゲルフォトニック結晶の作製法と光学特性の評価法の確立を目的として本年度の研究を行った。得られた成果の概要を以下に示す。1)Si基板上に形成したSiO_2空孔型及びSi柱型モールドを鋳型として用い、2.0mol/Lの高濃度Tiイソプロポキシド前駆体溶液(一部、10wt%ポリエチレングリコールを添加)をキャスティングし、ゲル化させることにより、高さ0.55μmの柱型及び空孔型TiO_2ゲルフォトニック結晶の合成に成功した。2)電子描画装置を用い、Si基板上に形成した厚さ0.51μmのレジスト膜に直径1μmレベルの空孔型モールドの作製を行い、ゲルフォトニック結晶の合成を試みた。まだ、完全なゲルフォトニック結晶の合成法としては確立できていないが、多様な形態を持つモールドの作製法の確立することができた。3)FT-IR測定器を用いた赤外光の反射スペクトル法を用い、ゲルフォトニック結晶の作製に用いたSiO_2空孔型フォトニック結晶の光学的特性を評価した。その結果、空孔径及び空孔の格子間隔から生じるフォトニックバンド波長に対応する強い反射光が観測され、フォトニック結晶としての光学特性の発現を確認した。これより、現在評価中であるが、これと同じ構造を持つ今回作製されたゲルフォトニック結晶が同様のフォトニック結晶光学特性を示すことが確立された。4)可視領域透過型フォトニック結晶光学特性の評価装置の構築を行った。作製されたフォトニック結晶試料の形状から、まだ本装置を用いた精密な光学特性の評価はできていないが、可視光の透過スペクトル測定からフォトニックバンド波長に対応する光透過率の低下が観測され、装置の基本動作を確認した。5)強いフォトルミネッセンス(PL)を示す1.0at.%Eu添加BaTiO_3ゲルの低温(90°C乾燥)合成に成功した。これより、PL型ゲルフォトニック結晶の合成が可能となった。今後、このゲルを用いたフォトニック結晶の作製と光学特性の評価を行っていく。作製された0.11.Oat.%Eu添加

チタン酸バリウムゲルは、昨年度までの研究において、波長466nm(^7F_0-^5D_2遷移に対応)の励起光に対して、波長613nm(^5D_0-^7F_2遷移に対応)の強い発光を示すことを見出し、1.0at.%の添加濃度においても顕著な濃度消光を起こしていないことを確認した。また、パルスレーザー励起によるEu^<3+>イオンの^5D_0-^7F_2発光の減衰曲線から、Eu添加乾燥ゲルの蛍光寿命の測定を10-300Kの温度範囲で求め、発光は約0.6msの寿命をもつ単一輻射遷移機構によることを明らかにした。そこで、今年度はこの発光ゲルの薄膜発光体(蛍光及び電界発光薄膜デバイス)としての応用を目指した研究を行い、以下に示す成果を得た。1)1%Euを添加したものと無添加のBa, Tiアルコキシド溶液(溶媒;メタノール/メトキシエタノール混合溶媒、濃度;1.0mol/L)前駆体溶液を用い、Si、Pt、Cu、ITO、ガラスなど種々の基板上にスピンコート法により製膜した。形成した室温乾燥薄膜は非晶質であるが、50°C水蒸気雰囲気中で1h程度エージング(基板上エージング法)すると結晶性のBaTiO_3薄膜が得られる。この方法によるBaTiO_3結晶薄膜の合成は、ガラス基板上では成功していたがPt、Cu、ITOなどの導電性基板上では亀裂のない薄膜を得ることはできていなかった。今回、0.71wt.%のPVB(ポリビニルブチラール)を添加することにより、いずれの基板上でも平滑な表面をもつ亀裂のないBaTiO_3結晶薄膜を合成することに成功した。2)蛍光分光装置を用い、得られたEu添加BaTiO_3結晶性薄膜の発光特性を調べた。その結果、波長270nmの励起光に対して波長613nmにおいて顕著な発光スペクトルを観測した。この発光スペクトルの強度は薄膜のエージング条件によって変化することがわかり、エージング条件によってBaTiO_3薄膜中におけるEuの存在状態が変化することを確認した。この結果に基づいて、現在、最大発光強度を与える薄膜合成条件の決定と、XRD, FE-SEM及びTEMによる薄膜のキャラクタリゼーションを行っている。3)Eu無添加のBaTiO_3結晶性薄膜(90°C乾燥)は、100kHz1MHzの周波数範囲で100を越える誘電率と2%以下のtanδを示し、ZnS(Mn)蛍光体用透明絶縁膜としての機能を有することを見出した。現在、新しいタイプの電界発光薄膜の開発研究を進めている。
成人T細胞白血病の制圧を目標とした、モデル動物を用いた治療法の開発

我々はヒトT細胞性白血病(ATL)のモデル動物の作製を試みlckプロモーターで発現をコントロールしたHTLV-1のTaxトランスジェニックマウスを作製した。このマウスは生後10から23ヶ月後にT細胞性のリンパ腫・白血病の発症が認められ白血病細胞は形態学的にflower cells様の末梢血像を示し、発症した個体ではカリニ肺炎等の日和見感染がみられヒトATLに類似した病態を示した。本マウスの白血病では、ヒトATLと同様にNF-kappaBの恒常的活性化が認められるため、この経路を標的とした治療法の基礎的検討を本モデルマウスを用いて行った。実験ではNF-kappaBの上流でIKKbetaを阻害するNF-kappaB阻害剤:Bay65-1942を用いた。Bay65-1942を培養液中に添加することで、in vitroでマウスATL細胞に対してアポトーシスを誘導し、DNAの断片化を引き起こすことが、アガロース電気泳動法およびTUNEL法にて確認された。ウエスタンブロット法では薬剤処理によりCaspase 3および9の活性化が3時間後から観察されるのに対し、Caspase8の活性化は12時間後まで観察されなかった。さらにCaspaseの活性化と平行してBcl2の発現が著明に減少していた。以上の結果からNFkB経路の抑制を介してBcl2発現量が減少することで、ミトコンドリア経路を介したアポトーシスが誘導される薬剤作用機序が考えられた。次にNOD-SCIDマウス腹腔内にマウスATL細胞を1x10^6個移植し、薬剤を腹腔内投与することでin vivoでの薬剤の効果を検討した。薬剤未投与群では生存期間が30日前後であったものが、Bay65-1942を800ug/day投与した群では最大で42日間生存するものが観察され、約1.3倍の延命効果が認められた。また投与群では組織への腫瘍細胞の浸潤の程度が低く抑えられていることが病理組織学的に確認された。以上の結果からBay65-1942によるNF-kappaB経路の阻害は、今後ATL治療法候補のひとつとなり得る可能性があると考えられた。成人T細胞白血病(Adult T cell Leukemia: ATL)は、ヒトTリンパ球指向性ウイルスタイプ1 (Human lymphotoropic virus type 1 : HTLV-1)の感染によって引き起こされる予後不良の腫瘍性疾患で、我が国では将来的に510万人がATLを発症すると予測されているが、未だ有効な治療法が見つかっていない。本研究は、長谷川らが開発したATLのマウスモデルを(Nat Med, 12(4): 466-72. 2006)を用い、この疾患の発症に深く関わっているとされているNFkB経路を上流で選択的に阻害する新規薬剤を使った治療実験を行い、臨床へ還元できる有効かつ安全な新しい治療法を開発することを目的としている。平成20年度はin vitroとvivoでの薬剤の効果をマウスモデルを用いて検討した。まず薬剤を培養液中に添加することで、in vitroでマウスモデルの白血病細胞(マウスATL細胞)に対してアポトーシスを誘導し、DNAの断片化を引き起こすことが、アガロース電気泳動法およびTUNEL法にて確認された。

次にNOD-SCIDマウス腹腔内にマウスATL細胞を1×106個移植し、薬剤を腹腔内投与することでin vivoでの薬剤の効果を検討したところ、薬剤未投与群では生存期間が30日前後であったものが、薬剤を800μg/day投与した群では最大で42日間生存するものが観察され、約1.3倍の延命効果が認められた。また薬剤投与群では組織ヘの腫瘍細胞の浸潤の程度が低く抑えられていることが病理組織学的に確認された。このように新規NFkB阻害剤はin vivoとvitroの両面でATLモデルマウスに対して一定の効果を示すことが明らかになったため、平成21年度は、薬剤の作用メカニズムについてのより詳細な検討を中心とした研究を進めているところである。成人T細胞白血病(Adult T cell Leukemia : ATL)は、ヒトTリンパ球指向性ウイルスタイプ1(Human lymphotoropic virus type 1 : HTLV-1)の感染によって引き起こされる予後不良の腫瘍性疾患で、我が国では将来的に510万人がATLを発症すると予測されているが、未だ有効な治療法が見つかっていない。本研究は、長谷川らが開発したATLのマウスモデルを(Nat Med, 12(4) : 466-72. 2006)を用い、この疾患の発症に深く関わっているとされているNFkB経路を上流で選択的に阻害する新規薬剤を使った治療実験を行い、臨床へ還元できる有効かつ安全な新しい治療法を開発することを目的としている。平成21年度は、マウスモデル白血病細胞(マウスATL細胞)に対する薬剤の作用メカニズムについて詳細な検討を行なった。EMSA法では薬剤処理でNFKB/DNA複合体の形成が特異的に抑制されることが明らかになった。薬剤処理で、Bax、Bnip31、Cideb、Atf5などのアポトーシス誘発因子の発現が充進し、Bcl2、Mcl1、Hells、Naip2などのアポトーシス抑制因子の発現が減少していることがPCR array法で明らかになった。ウエスタンブロット法では薬剤処理によりCaspase 3および9の活性化が3時間後から観察されるのに対し、Caspase8の活性化は12時間後まで観察されなかった。さらにCaspaseの活性化と平行してBcl2の発現が著明に減少していた。以上の結果からNFkB経路の抑制を介してBcl2発現量が減少することで、ミトコンドリア経路を介したアポトーシスが誘導される薬剤作用機序が考えられた。平成20,21年度の実験結果から、新規薬剤によるNFkB経路の抑制は、ATL治療の標的となり得るものと考えられた。
ストレスシグナルの分子機構解明による創薬基盤の確立

細胞のストレス応答は最も基本的な生命現象であり、その破綻は様々な疾患の原因となる。我々はASKファミリータンパク質が物理化学的ストレス応答の重要な担い手であることを明らかにしてきた。ASK1複合体に関する本研究によって、さらなる制御機構が明らかになり、酸化ストレスによる細胞死の機構を解明した。また、ASK3の活性が浸透圧ストレスによって制御され、血圧制御に関与することも明らかになった。さらに、細胞が亜鉛の欠乏状態を感知して亜鉛濃度の恒常性を保つ機構としてSOD1タンパク質の関与を発見した。これらの成果は様々なストレスが惹起する疾患の診断予防治療法の開発に寄与することが期待される。ストレス応答は、細胞が持つ最も基本的な生命現象のひとつであり、その破綻は、炎症、がん、神経変性、自己免疫などをはじめとする多様な疾患の発症原因となる。シグナル伝達分子の多くは、ホルモンやサイトカインなどの生理活性物質のみならず物理化学的ストレスによってもその活性が制御されるが、ストレスセンサーの実体ならびにタンパク質によるストレス認識の構造的ならびに時空間的分子基盤については不明な点が多く残されている。本研究は、ストレス応答性ASKファミリーキナーゼならびにその活性制御タンパク質群の機能解析を中心テーマとして推進し、酸化ストレス、小胞体ストレス、浸透圧ストレスなどの物理化学的ストレスが如何にしてリン酸化シグナルに変換され、またストレスシグナルが如何にして細胞機能を司るかという、基本的な生命現象の分子的実体の解明を目指す。その特徴は、研究代表者が世界に先駆けて明らかにしてきたASKファミリーとその活性制御タンパク質群を標的とし、最先端のシグナル伝達解析技術を用いて研究を進めることにある。また、ASKファミリー阻害斉1」等の基盤開発も視野に入れ、ストレスの受容・認識・変換の分子機構の解明ならびにストレスシグナルと疾患との関わりを解明する事を目的としている。本年度は、1.ASKファミリーシグナルソームの生化学的解明、2.遺伝学的アブロ一チ(スクリーニング)によるASKファミリーシグナルの解明、3.自然免疫応答における活性酸素種発生機構の解明、4.ASKlによる小胞体ストレス依存性細胞死誘導機膚の解明、5.ASK3による浸透圧ストレス応答機構の解明、に焦点を絞って研究を展開し、それぞれの項目について、ストレスシグナルの分子機構に立脚した全く新しい生命原理ならびに疾患治療法の発見へと繋がることが期待される成果が得られた。本年度は、1.ASK1活性の時間的制御におけるユビキチンー脱ユビキチン化の役割、2.線虫ならびにショウジョウバエを用いた遺伝学的アプローチ(スクリーニング)によるASKファミリーシグナルの解明、3.ASKファミリーの発がん過程における役割、4.新規脱リン酸化酵素PGAM5によるASK1活性制御機構の解明、5.浸透圧ストレス応答機構の解明、に焦点を絞って研究を展開し、それぞれの項目について、ストレスシグナルの新しい制御機構の解明に進展がみられた。

本研究は、ストレス応答性キナーゼならびにフォスファターゼの機能解析を中心テーマとして推進し、酸化ストレス、小胞体ストレス、浸透圧ストレスなどの物理化学的ストレスが如何にしてリン酸化シグナルに変換され、またストレスシグナルが如何にして細胞機能を司るかという、基本的な生命現象の分子的実体の解明を目指す。本年度は、1.MEKK2活性の時間的制御におけるユビキチン-脱ユビキチン化の役割、2.線虫ならびにショウジョウバエを用いた遺伝学的アプローチ(スクリーニング)によるASKファミリーシグナルの解明、3.ASKファミリーの発がん過程における役割、4.新規脱リン酸化酵素PGAM5によるミトコンドリアストレス制御機構の解明、5.ASK3による浸透圧ストレス応答機構の解明、に焦点を絞って研究を展開し、それぞれの項目について、ストレスシグナルの新しい制御機構の解明に進展がみられた。ストレス応答は、細胞が持つ最も基本的な生命現象のひとつであり、その破綻は、炎症、がん、神経変性、自己免疫などをはじめとする多様な疾患の発症原因となる。シグナル伝達分子の多くは、ホルモンやサイトカインなどの生理活性物質のみならず物理化学的ストレスによってもその活性が制御されるが、ストレスセンサーの実体ならびにタンパク質によるストレス認識の構造的ならびに時空間的分子基盤については不明な点が多く残されている。本研究は、ストレス応答性キナーゼならびにフォスファターゼの機能解析を中心テーマとして推進し、酸化ストレス、小胞体ストレス、'浸透圧ストレスなどの物理化学的ストレスが如何にしてリン酸化シグナルに変換され、またストレスシグナルが如何にして細胞機能を司るかという、基本的な生命現象の分子的実体の解明を目指す。本年度は、1.ASKファミリー活性の時間的制御におけるユビキチンー脱ユビキチン化の役割、2.線虫ならびにショウジョウバエを用いた遺伝学的アプローチ(スクリーニング)によるASKファミリーシグナルの解明、3ASKファミリーのがん転移過程における役割、4.PGAM5によるネクローシス制御機構の解明、5.ASK3による浸透圧ストレス応答機構の解明、に焦点を絞って研究を展開し、それぞれの項目について、ストレスシグナルの新しい制御機構の解明に進展がみられた。
レーザー応用プラズマ計測の進展に関する調査研究

本総合研究は、本年(平成元年)11月に九州大学で開催を予定している「第4回レーザー応用プラズマ計測に関する九州国際シンポジウム」の準備研究である。この国際会議は、第1回を1983年(昭和58年)11月に九州大学で開催して、文部省はじめ民間及び科学研究費「エネルギー特別研究」の総合総括班の援助を得て、数名の外国人を含む50人程度の参加者があり非常に有意義な討論会になった。この成功に刺激されて、第2回の会議が1985年9月に"揺動及び乱れと粒子計測"をメインテーマとしてオックスフォードで開かれた。参加者40人足らずであったが、密度の高い討論会であった。ついで1987年10月に、UCLAに於て"レーザー蛍光法の応用、トムソン散乱、密度、電流測定及びα粒子計測"をテーマとして第3回の会議が持たれた。第4回目の会合を再度九州で1989年に開くこととし、一昨年UCLAからの帰国後に本研究の計画を立案した。本総合研究の進め方を具体的に検討するために昨年7月に幹事会を開催して、この第4回会議のテーマとプログラムの大要を想定した上で本研究の実施方法を検討した。その結果、12月に研究会を開くことにして研究分担者以外の研究者にも参加を求めた。第1回会議では核融合プラズマのレーザー計測を主として、放電プラズマ、燃焼プラズマも含めたものであったが、第2,3回は、それぞれ開催地の特徴をだすためにテーマが絞られた。しかし、最近におけるレーザー応用計測の分野の広がりと将来の発展を考えて、次回は再び高温プラズマ並びに燃焼プラズマ、プロセスプラズマへの応用と、それらの基礎を含めることにした。12月の研究会には多数の出席者が得られ、それらの講演内容は報告書としてまとめた。
視機性動眼反射に潜む非線形力学機構と脳型ロボットビジョン開発に関する研究

2011年3月の東日本大震災をきっかけに,災害中の現場に入って活動する災害救援ロボットの技術開発の動きは,ますます加速する.災害救援ロボット技術開発では,人間の脳の視覚情報処理過程を模擬し,その視覚機能に匹敵するロボットの眼「ヒューマノイドビジョン」開発は,急務の研究課題である.本研究課題では,視機性動眼反射の神経モデルやロボットビジョン運動制御で使われる神経モデルを用い,発火率勾配を導出することで神経モデルに潜む非線形性を解析する手法を提案し,神経活動の変化と分岐遷移との関係を明らかにした.また,神経モデル実装用の,人間の眼球の運動機能以上の性能を持つ両眼ロボットビジョン装置を開発した.2011年3月の東日本大震災をきっかけに,災害中の現場に入って活動する災害救援ロボットの技術開発の動きは,ますます加速する.災害救援ロボット技術開発では,人間の脳の視覚情報処理過程を模擬し,その視覚機能に匹敵するロボットの眼「ヒューマノイドビジョン」開発は,急務の研究課題である.本研究課題では,視機性動眼反射の神経モデルやロボットビジョン運動制御で使われる神経モデルを用い,発火率勾配を導出することで神経モデルに潜む非線形性を解析する手法を提案し,神経活動の変化と分岐遷移との関係を明らかにした.また,神経モデル実装用の,人間の眼球の運動機能以上の性能を持つ両眼ロボットビジョン装置を開発した.H24年度までに既に開発した両眼ロボットビジョン装置を改良した.両眼それぞれにチルト用のサーボモータをとりつけ,自由度を増やした.次に,装置自体のコンパクト化を行なうため,糸捩り機構を導入し,動作音が発生しない,人間の目の動きと同等ないし,それ以上の動的性能の実現を可能にした.上記の顔検出用Multi-scale EGMアルゴリズムを改良したアルゴリズムを両眼ロボットビジョン装置に実装し、ロボットビジョン装置の2つのステレオカメラのリアルタイム顔追跡を実現した.また,大脳皮質の運動野に存在する運動ニューロンは,その発火率勾配に修飾され,発火活動を増強・減弱する生理実験の知見に基づき,n次元非線形常微分方程式で表わされ,視機性動眼反射等の眼球運動制御に関わる神経活動の数理モデルや神経振動子を利用し,位相縮約法と呼ばれる,n次元空間の微小摂動の位相記述から,発火率勾配を導出し,神経振動子に潜む非線形力学特性や分岐特性遷移を理論的に明らかにした.この発火率勾配解析をロボットの歩行運動制御で広く利用される松岡振動子に適用することで,ロボットビジョン運動制御における,松岡振動子の機能的役割の新たな可能性を示唆した.
ナノ光学による半導体単一量子ドット中の非線形光学過程の研究

光照射された金属探針先端に誘起される表面プラズモンが生成する局在増強場を利用することにより、探針直下のナノメートルサイズの空間領域の物質のみを強く光励起することができる新しいナノ分光法である探針増強ナノ光学分光装置を作成するために、既存のSPMコントローラーを用いて金属探針を液体ヘリウム温度で任意の場所に移動させるシステムを作製した。空間分解能が数10nmの液体ヘリウム温度で動作するナノ分光装置がほぼ完成した。この装置を用いて実際にInGaN半導体表面からの発光やラマン散乱の増強度効果を調べて、この装置の性能を評価した。また、探針増強共鳴レイリー散乱光を調べることにより、ナノ領域の半導体の屈折率変化を観測できることをGe/Si量子ドット系を用いて実験的に示した。半導体単一量子ドット内の励起子構造を調べるために顕微分光法を用いた測定も行った。光子相関法を併用することにより、GaAs単一量子ドット中の多励起子構造、特に励起子分子、電荷励起子分子状態の詳細を明らかにした。GaAs多重量子井戸における重い正孔(HH)-軽い正孔(LH)励起子間相互作用のコヒーレント制御を4光波混合法を用いて行った。平成19年度中に空間分解能が100nmの液体ヘリウム温度で動作するナノ分光装置がほぼ完成できた。実際に、半導体表面からの発光やラマン散乱の増強度効果を調べて、この装置の性能を評価した。その結果、作成した装置は、発光、ラマン散乱に対しては10^4倍程度の電場増強効果を持つことが判明した。しかし、ラマン散乱に対してはまだ集光効率が完全ではなく、現在光学系の改良に着手している。同時に、半導体単一量子ドット内の励起子構造を調べるために顕微分光法を用いた測定も行っている。光子相関法を併用することにより、GaAs単一量子ドット中の多励起子構造の詳細が明らかになりつつある。これらの成果はすでに論文にて公表してある。フェムト秒パルスを励起光源として用い、時間情報も加味した実験にも着手した。実際に、金属探針先端に誘起される表面プラズモンにより10^4倍程度増強されたパルス電場により、非線形光学効果が金属探針先端のみで増強されるかに重点を置いて研究を進めている。現在、半導体表面からのSHG過程に対して、金属探針による増強効果が起こっていることの確認が取れている。平成20年度中に空間分解能が100nmの液体ヘリウム温度で動作するナノ分光装置がほぼ完成できた。これらの成果は論文、国際会議で公表予定である。同時に、半導体単一量子ドット内の励起子構造を調べるために顕微分光法を用いた測定も行った。また、フォトニック結晶中の光伝播特性をこの装置を用いて調べ、伝搬モードは直線的に伝搬するモードと無指向的に拡散するモードの二種類のモードに分けられることを結論した。この結果はすでに論文として発表済みである。
新生児の生理的胆汁うっ滞に及ぼす人乳の役割と臨床疾患の関連について

ラット胆管瘻実験を用いたこれまでの母乳に起因する胆汁うっ滞機構をまとめると、(1)母乳投与はビタミンKの吸収を阻害する(2)腸管での胆汁酸吸収に対して、人工乳の投与は阻害的に作用する(3)胆汁酸の吸収は回腸のみでなく、空腸での拡散も関与する(4)胆汁量および胆汁酸の吸収は摂取する栄養分により著しく異なった動態を見せたが、これらの現象は乳汁のどの成分が影響を与えているのかは不明である。(5)ラットに飼料を投与した場合、その吸収が著しく遅れることから腸管内での物理的性状が胆汁流量を調節している可能性も考えられる。(6)胆管内への胆汁酸投与実験から、胆汁中に排出される胆汁酸量と胆汁流量との間には密接な関係が認められた。さらに、この実験系に母乳あるいはテオフィリンを共存させて、投与すると、胆汁酸依存性の胆汁流量は減少する事が確認された。この結果から、テオフィリンは細胞内のcAMPレベルを上昇させ、塩素イオン依存性の胆汁流量に変動を与える可能性が示唆された。また、テオフィリンは肝血流量を減少させる事から、二次的に肝臓に作用している事も考えられる。もし、この推察が事実であれば、母乳による胆汁量の変化には細胞内のcAMP量が関与すると考えられるので、今後さらに検討する必要がある。一方、部分肝切除後あるいは胆管結紮による胆汁うっ滞時の肝機能を検討していた時に、canalicular100kD胆汁酸輸送蛋白および肝細胞膜蛋白(26kD)の存在を確認しているので、今後さらに検討したいと考えている。これらの結果の一部は、数編の論文として、現在投稿中である。研究計画に基づき,放射性胆汁酸投与後の胆汁への排泄を経時的に測定することにより,胆汁酸の腸管からの吸収動態を検討した.アイソトープを用いた検討のため,実験動物として7週齢のウィスター系雄性ラットを用いた.胆汁酸吸収に対する人乳および人工乳の影響を検討するため,1週間の間,通常通り水と肥料で保育したグループ(水保育群;n=6),人乳と肥料で保育したグループ(人乳保育群;n=5),人工乳と肥料で保育したグループ(人工乳保育群;n=6)の3群のラットに対し外科的に胆管ろうを作成,固定後にラット体内で変化を受けない^<14>C-cholic acidを経口投与,投与後48時間後までの総胆汁排泄量と,放射性胆汁酸の排泄量について検討した.同様に3群のラットに対し,^<14>C-cholic acidを静脈内投与した後の胆汁中への放射性胆汁酸の排泄率についても検討した.【成績】胆管瘻作成後48時間までの総胆汁量は,水保育群18.4±2.5(ml),人乳保育群13.6±3.7,人工乳保育群17.7±3.2と,水保育群で多く人乳保育群で少ない傾向があった.経口投与した放射性胆汁酸の胆汁への経時的な排泄率には群によって著しい差が見られた.水保育群:初期の排泄は最も速く,1時間後で37%,48時間後でも90%の回収率であった.人乳保育群:人工乳保育群:排泄の立ち上がりは人乳保育群が遅く,投与2時間までは人工乳保育群に比し有意に低かった.48時間での回収は人乳保育群86%,人工乳保育群82%と水保育群より劣ったが人乳保育群と人工乳保育群間で有意差は見られなかった.放射性胆汁酸を静注した場合,胆汁中への経時的な放射性胆汁酸の排泄は3群において全く差は見られなかった.【結論】

静注した場合の結果から,少なくともラットにおいて,肝細胞への胆汁酸の取り込み,胆汁への排泄に関しては,栄養法による変化は見られない.経口投与後の結果から,少なくともラットにおいて,人乳での保育は胆汁酸吸収を遅延させることが判明した.しかしながら,人乳保育群のラット消化管内は末梢化物で充満しており,胆汁酸吸収の遅延はラット体内で人乳蛋白が分解できないことが原因とも考えられる.今後,小腸ループ法を用いて,同様の検討を行っていく予定である.【目的】昨年度の研究報告で,人乳及び人工乳で保育したratにおいて,経口投与した放射性胆汁酸の胆汁中への排泄について報告した.人乳で保育したratでは人工乳・水で保育した場合に比べ^<14>C-cholic acidの胆汁中排泄は著しく遅延していたが,この場合,人乳がrat消化管内で凝固する傾向があるなど他の要因の関与が考えられたため,本年度は小腸ループ法を用いて胆汁酸の小腸からの吸収に対する人乳・人工乳の影響について検討した.【方法】基礎実験として,生後3週のwister系ratに対し,小腸末端から口側15cm長の小腸ループを作成,^<14>C-cholicacidおよび腸管内で吸収されない^3H-mannnitolの2種のアイソトープを含有した生食を充填し,一定時間後に内容を排出,洗浄し,放射性胆汁酸の消失率から胆汁酸吸収率を求めた.また,2種のアイソトープを人乳・人工乳・生食に混入したものを小腸ループ内に充填し,投与15分での胆汁酸吸収に与える人乳・人工乳の影響について検討した.【成績】経口投与に比べ小腸内に直接投与した場合の胆汁酸吸収率は投与5分;43.1%,10分;64.4%,15分;84.8%,30分;93%,60分;97.9%と著しく早かった.^3H-mannnitolの回収率は73.5±17.3%であった.生食に混じた場合(n=9)の胆汁酸吸収率は88.9±5.2%,人乳に混じた場合(n=8)は77.9±12.5%であったのに対して,人工乳(n=10)に混じた放射性胆汁酸の吸収率は52.2±15.0%と非常に劣り,人乳と人工乳の2群間でp=0.0034,人工乳と生食の2群間でp=0.0002と,著しい有意差を認めた.【結論】この結果からは人乳が胆汁酸吸収を促進するというより,人工乳により胆汁酸の小腸からの吸収が阻害されていることが考えられた.腸管からの胆汁酸吸収に対する人乳及び人工乳の影響を比較、検討したが、人乳及び人工乳で哺育したラットを作成する方式では、人乳がラット消化管内で凝固してしまうため困難である事がわかった。そのため他の因子を除去するために小腸ループを作成し人乳及び人工乳と共に放射性胆汁酸を投与し、一定時間後の腸管内胆汁酸の消失率から胆汁酸吸収率を検討した。即ちラットの小腸末端から15cm長の腸管内に^<14>C-コール酸及び内部標準物質として腸管内で吸収されないない3H-マンニットルの2種類のアイソトープを主食に混じて充満させ、一定時間後に内容を洗浄し、放射性胆汁酸の消失率を検討した。その結果、消失率は経口投与法に比較を検討した。その結果、消失率は経口投与法に比較して非常に早かった。その結果、内部標準の回収率は70%以上と良好であった。また、胆汁酸投与15分後の吸収率はコントロール群88.9±5.2%、人乳群77.9±12.4%、人工乳群52.2±15.0%と、ラット腸管での胆汁酸吸収に対し、人工乳が阻害的に働くという知見が得られた。
ポータブル装置で記録した生体現象からブラキシズムを抽出するアルゴリズムの開発

ポータブル装置を用いた睡眠中の生体現象記録システムの有用性を検討することを目的とし、20歳代の健常者10名とBruxist10名の睡眠中の生体現象を日本光電社製無線テレメータシステム(WEE-6112およびWEB-5000)とエスアンドエムイー社製ポータブル記録装置(DL200)を用いて同時記録後,任意に選択した区間の睡眠段階と心拍数, bruxism発現時の咬筋筋活動の持続時間と積分値をそれぞれ算出し,両装置間で比較した.結果は,いずれも両装置間で近似し,装置間に有意差が認められなかった.これらの結果から、ポータブル記録装置を用いた生体現象記録システムは、無線テレメータシステムによる生体現象記録システムと同程度の精度で記録できることが確認され、臨床応用できることが示唆された。ポータブル記録装置を用い,自宅で就寝時の筋活動を記録し,bruxismを推計する試みが行われている.しかしながら,ポータブル記録装置は,簡便に夜間睡眠中時の筋活動を記録できるが,体動,嚥下,電気的アーチファクトなどのアーチファクトとbruxismによる筋活動との識別ができないという大きな問題を残している.そこで,本研究は,簡便なポータブル記録装置により得られた生体現象のデータから,bruxismのみを抽出するアルゴリズムを開発することを目的とし,まず型軽量の記録装置を用いた睡眠中の生体現象分析システムを開発することとした.全身に臨床的な異常と咀嚼系に障害の既往が認められず,事前に実験の主旨についての説明を受け,同意した20歳代の健常者3名を被験者として選択後,被験者の生体現象は,エスアンドエムイー社製小型軽量の生体現象記録装置DL200を用いて,被験者の夜間睡眠中の両側咬筋筋電図,オトガイ筋筋電図,脳電図,心電図,呼吸運動図,眼球運動図を記録した.次いで,記録装置から再生した生体現象を表示でき,咬筋筋活動の定量的分析を行えるプログラムの作成を試みた.その結果,睡眠中の生体現象のデータをオンラインリアルタイムでコンピューターのディスプレイに表示して被験者の状態をモニタリングし,正確な記録が行われているか否かが確認できた.また,記録した生体現象のデータは,全チャンネル表示や必要チャンネルを表示することができた.さらに,記録した夜間睡眠中の咬筋筋活動は,振幅,積分値,持続時間をそれぞれ算出し,コンピューターのディスプレイに表示することができた.これらの結果から,小型軽量の記録装置で測定した生体現象をモニタリングし,正確な記録が行われているか否かを確認すると同時に,必要な部分の生体現象データを分析できる生体現象分析システムが開発できた.ポータブル記録装置による生体現象データから咬筋筋活動を抽出する目的で、全身に臨床的な異常および側頭下顎障害の既往が認められず、自覚的、他覚的にbruxismの徴候・症状が認められる成人bruxist 5名を被験者として選択した。実験は、被験者の夜間睡眠中の生体現象(両側咬筋筋電図、オトガイ筋筋電図、脳電図、心電図、呼吸運動図、眼球運動図)をエスアンドエムイー社製ポータブル記録装置DL200を用いて記録した。再生したポータブル記録装置によるデータの筋活動とアーチファクトを識別し、それぞれパターン化してコンピュータのディスクに保存した。分析は、パターン化されたデータの振幅と持続時間について、筋活動とアーチファクトとの間で比較した。その結果、咬筋筋活動は、振幅が大きく、持続時間が長いパターンを示した。一方、アーチファクトは、振幅が小さく、持続時間が長いパターンと振幅が大きく、持続時間が短いパターンの両者がみられた。しかしながら、振幅が小さく、持続時間が長いパターンは、振幅が嚥下時の振幅よりも小さい場合が90%以上であり、振幅が大きく、持続時間が短いパターンは、持続時間が筋活動の持続時間よりも短い場合が90%以上であった。これらのことから、小型軽量のポータブル記録装置は、生体現象データの振幅と持続時間を調べることにより、アーチファクトを90%以上除外できるレベルで咬筋筋活動を抽出できることが示唆された。ポータブル装置DL200を用いた睡眠中の生体現象記録システムの有用性を検討するため、20歳代の男性健常者10名と男性bruxist 10名の睡眠中の生体現象を無線テレメータシステム(WEE-6112およびWEB-5000)とDL200を用いて記録した。分析は、無線テレメータシステムとDL200で記録した生体現象から、任意に選択した区間の睡眠段階と心拍数、bruxism発現時の咬筋筋活動の持続時間と積分値をそれぞれ算出後、両装置間で比較した。その結果、いずれの指標値も両装置間で近似し、両装置間に有意差が認められなかった。

これらの結果から、睡眠段階と心拍数、sleep bruxism発現時の咬筋筋活動の持続時間と積分値の分析に際し、ポータブル記録装置を用いた生体現象記録システムは、無線テレメータシステムによる生体現象記録システムと同程度の精度で記録できることが確認され、臨床応用できることが示唆された。ポータブル記録装置DL200で記録したデジタルデータを従来のアナログ処理装置の睡眠脳波解析装置で解析できるか否かを明らかにするため、まず無線テレメータシステムで記録したアナログ信号(信号A)をDL200で記録した。次いで、DL200からの再生デジタル信号を特注DA変換装置を介してアナログ信号(信号B)に変換した。両信号をそれぞれ睡眠脳波解析装置DEE-1100で脳波的睡眠段階を30秒毎に判定、分類後、各睡眠段階の出現率、REM睡眠潜時、REM睡眠持続時間、平均睡眠周期時間、睡眠段階の移行の頻度を求め、両信号間で比較した。その結果、いずれの指標値も両信号間で一致した。これらのことから、ポータブル記録装置DL200で記録した生体現象のデジタルデータは、DA変換することにより、アナログ信号処理の睡眠脳波解析装置DEE-1100で解析できることが明らかになった。
酵母ミトコンドリア核を構成する全タンパク質の同定

1.嫌気培養した酵母、呼吸欠損株、Antimycin Aで呼吸阻害をして培養した酵母の単離mt核では、好気培養酵母のmt核と比較して,67kDaタンパク質が少ないことを明かにした。2.mt核の67kDaタンパク質のN末端のアミノ酸配列を決定し、このタンパク質がcarnitine acetyltransferase(CAT)であることを明かにした。このタンパク質に対するポリクローナル抗体を作成して、間接蛍光抗体法を行い、この酵素の一部が単離mt核に結合していることを示唆する結果を得た。4.mt核分画の主要なタンパク質である20kDaタンパク質がDNA結合タンパク質Abf2pであり、mt核に強く結合していることをアミノ酸配列決定と抗体を用いた解析から明かにした。そして、Abf2pを簡便に検出する方法としてSDS DNA-PAGEを提案した。5.以前に筆者らが取得していた、酵母mt核タンパク質に対するモノクローナル抗体YMN-1が認識する抗原タンパク質を同定した。この抗原タンパク質はα-ケトグルタル酸脱水素酵素複合体(KGD複合体)のサブユニットのひとつdihydrolipoyl transsuccinylase(KE2)であり、また、酵素活性測定により、KGD複合体の一部がmt核分画に含まれていることを明かにした。6.二次元電気泳動で分離したmt核タンパク質について各スポットのアミノ酸配列を決定した。その結果、mt核に含まれる54kDa,52kDa,50kDa,38kDa,22kDa(2種類)の6つのタンパク質についてN末端から10個程度の配列を決定した。1、酵母菌を好気的に培養すると細胞あたり約50個の小球状のミトコンドリア(mt)核が形成されるが、嫌気的に培養するとmt核は大きく凝集し細胞あたり数個程度になる。これらの大きさの異なるmt核を細胞内の形態を保った状態で単離することができる(Shiiba et al 1997)。好気培養酵母からミトコンドリア核単離法(miyakawa et al 1987)に従って、Nonidet P-40で可溶化したミトコンドリア分画からmt核を単離レし単離mt核を2MNaClとDNaseI処理により解体し、遊離したタンパク買をDNAセルロースカラムにかけて、DNAカラムに結合したタンパク質を分離した。このうち、量的に多い分子量67kDaのタンパク質について一次元SDS-PAGEで分離後、PVDF膜に転写して、N末からのアミノ酸配列10個をアミノ酸シークエンサで分折した。その結果、配列はミトコンドリアに局在する酵素carnitine a cetyltransferase(CAT)の配列と一致した。そこで、CAT活性の測定およびこのタンパク質のポリクローナル抗体を用いた分析を行なつた。mt核抽出液からBlue SepharoseカラムとDNAセルロースカラムを用いて67kDaタンパク質をほぽ精製したところ、この画分にCAT活性が検出されたことから、このタンパク質はCATてあると考えられる。蛍光抗体法ではこのタンパク質はミトコンドリアに局在ずることが示された。ミトコンドリア内膜酵素とされるCATがなぜ単離mt核に強く濃縮されているのかについて、現在検討している。2、一次元SDS-PAGEではmt核タンパク質の分離が十分ではないので、当初の計面どうり高分解能でかつ多量のタンバク質を泳動できる大型二次元電気泳動装置(アト-社)を購入して、全mt核タンパク質を1回の泳動て分離する方法を検討している.タンパク質の可溶化と分離条件の設定が難しく当初の計面より遅れているが、分離法が確立後PVDF膜に転写した個々のタパク質について平成10年度アミノ酸配列分析を行なう予定である。1.酵母ミトコンドリア核単離方法(Miyakawa et al.1987)に従って、ミトコンドリア分画からミトコンドリア核を単離した。ミトコンドリア核タンパク質を、一次元目にアガロースを用いる二次元電気泳動法で分析した。