hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
転写因子STAT1とNF-κBによる炎症性遺伝子の発現調節機構の解析

炎症性病変ではマクロファージやリンパ球などの炎症性浸潤細胞とその組織を構成している細胞との間のサイトカインネットワークを介した細胞間相互作用が病変の進展に深く関与している。従来よりヘルパー1型T細胞由来のinterferon-gamma(IFNγ)と腫瘍壊死因子(TNFα)、あるいはグラム陰性細菌由来のLPSの共存下では、マクロファージの活性化やケモカインなどの炎症性遺伝子の発現が相乗的に誘導されることが知られていた。しかしこれらのサイトカインのクロストークがどのようなメカニズムにより遺伝子発現を相乗的に誘導するのかについては不明であった。そこで本研究課題では、IFNγによって活性化される転写因子Signal transducers and activator of transcription 1(STAT1)とTNFα、LPSで活性化される転写因子NF-κBに注目し、これら転写因子が核内においてコアクチベーターCREB-binding protein(CBP)を介してクロストークすることにより標的遺伝子の転写活性が相乗的に誘導されるのではないかとの作業仮説のもと解析を行った。解析の結果、IFNγによって活性化されたSTAT1とTNFαによって活性化されたNF-κBが、タンパク質相互作用を介してCBPと結合し、安定した複合体を形成しケモカインCXCL9遺伝子のプロモーター上に結合し、RNA polymerase IIをプロモーターへリクルートすることを明らかにした。また、IFNγ、TNFα、LPSはSTAT1、NF-κBなどの転写因子を誘導するだけでなく種々なリン酸化酵素の活性化を誘導することが知られている。そこでSTAT1とNF-κBによる相乗的な転写活性の誘導にMAP kinaseが関与しているかについても検討を行った。その結果、マクロファージにおけるIFNγ、LPSによって誘導されるCXCL9遺伝子の発現には、p38 MAP kinaseが関与していることが示唆され。本研究課題では、さらに転写制御の観点からIFNγに対する不応答性のメカニズムについても解析を行い、ある種の癌細胞ではIFNγの情報伝達経路が正常であるにもかかわらずケモカイン遺伝子CXCL9、CXCL10が誘導されないことを見いだした。この不応答性にはNF-κBが関与しており、CXCL9、CXCL10が誘導される細胞で認められる構成的なNF-κBが欠如していることにより、IFNγによって活性化されるSTAT1との相互作用が営めず、十分な転写活性が誘導されないことが明らかとなった。本研究課題で明らかにされたことは、STAT1、NF-κBによる炎症性遺伝子の発現調節機構の理解の一助になるだけでなく、異なる細胞外シグナルがどのように遺伝子の発現を相乗的に誘導するのかといったサイトカインの情報伝達経路と遺伝子発現の制御機構の理解にも大きく貢献できるものである。

本年度の研究目的は、STAT1、NF-κBによる炎症性遺伝子の相乗的な発現誘導にコアクチベーターCBPが関与しているか検討し、コアクチベーターがどのような分子機構により相乗的な発現を誘導するのか明らかにすることであった。本研究の目的を遂行するため、まず始めにSTAT1、NF-κBによって制御されている標的遺伝子を同定し、その遺伝子の転写制御機構について解析をを行った。2.そこでこのMIG遺伝子の相乗的な転写活性の誘導にコアクチベーターCBPが関与しているか検討するため、CBPの発現ベクターとルシフェラーゼレポーター遺伝子をHEK293細胞に遺伝子導入し、IFNγ、TNFα刺激下におけるルシフェラーゼ活性を測定した。その結果、CBPの過乗発現によりMIG遺伝子のプロモーター活性が増強された。3.CBPの内在性ヒストンアセチル化酵索(HAT)活性がこの相乗的なMIG遺伝子の転写活性の誘導に必要であるのか検討するため、HAT領域の変異体を作製し検討した。その結果、CBPのHAT領域の変異体においても相乗的なMIG遺伝子の転写活性がされた。またクロマチン免疫沈降法を用いてIFNγ、TNFα刺激下でMIG遺伝子のプロモーター領域にヒストンのアセチル化が増強されるか検討したところ、IFNγ刺激でヒストンH4のアセチル化が誘導されたがIFNγ、TNFα共刺激により増強は認められなかった。以上の結果から、IFNγ、TNFα共刺激によるMIG遺伝子の相乗的な転写活性の誘導にコアクチベーターCBPが関与していることが明らかとなった。またCBPによる相乗的な転写活性の誘導には内在性のHAT活性は必要なく、今後の研究課題としてCBPがどのような分子機構によりこの転写制御に関与しているか明らかにする必要がある。1. IFNγによって誘導されるSTAT1とTNFαによって誘導されるNF-κBがCBPのどの領域を介して結合し、核内で複合体を形成しているか検討するためCBPのN末端、C末端欠損変異体ならびにSTAT1、NF-κBの発現ベクターをHEK293細胞に遺伝子導入し、免疫沈降後、SDS-PAGEを行い抗STAT1、抗NF-κB抗体を用いてウェスタンブロットを行った。その結果、IFNγによって誘導されるSTAT1は、CBPのC末端領域またTNFαによって誘導されるNF-κB (p65)は、N末端にそれぞれ結合していること見出した。また、共焦点レーザー顕微鏡によりIFNγによってSTAT1が、またTNFαによってNF-κB(p65)が核内へ移行し、CBPと共存している知見を得た。2.次にこのSTAT1、NF-κBとCBPとの複合体形成がMIG遺伝子の転写活性の増強に必要であるか検討するため、上記CBPのN末端、C末端欠損変異体の発現ベクターを遺伝子導入し、MIG遺伝子のルシフェラーゼレポーター遺伝子の転写活性に及ぼす影響について検討した。
情報通信技術利用が社会生活に与える影響に関するマルチレベル分析による実証的研究

都道府県レベルのインターネット普及率を考慮に入れ、インターネット利用が社会生活に与える影響を検討した。第1に地域のインターネット普及率が高いほど、その地域に居住するネット利用者はより活発に利用する可能性が示唆された。第2に、PCによるWeb利用は内的政治的有効性感覚を押し上げる可能性がある一方で、携帯メール利用は携帯メール利用が普及している地域において、政治的関心よりも私生活を優先させる傾向を強化する可能性があることが示された。本研究では、情報通信技術の利用が社会生活に対して与える影響について、マルチレベル分の手法を用いることで、マクロレベルの情報通信技術の普及状況の要因を加味したミクロレベルの分析を行うことで、マクロ、ミクロの両側面を考慮した知見を提出することを試みた。平成20年度は階層的データを適切に取り扱える統計的な分析手法を検討した上で、平成21年度に行うデータ分析のためにデータセットの整理を行った。2005年3月に全国規模で実施された日本人の情報行動に関する調査データをデータ分析の対象とし、「統計でみる都道府県のすがた」などの公開されている官庁統計の指標を精査することで、都道府県レベルの指標の構成を行った。都道府県レベル(マクロレベル)の指標としては、各都道府県における人口、人口密度、インターネット普及率などを構成した。また、ミクロレベルの変数として、インターネット利用時間、電子メール利用量、インターネットからの情報取得行動などの行動に関する諸変数、インターネットからの情報に対する重要性認識、内的・外的政治的有効性感覚、政治的関心、私生活主義的価値観、一般的信頼などの心理に関する諸変数を構成した。本課題においては、居住する地域におけるインターネット普及率とインターネット利用行動の関係を検討した上で、情報通信技術利用の帰結として心理的側面にどのような影響がみられるかを考察するために、これらの変数を整理することは重要である。平成20年度は各変数の信頼性・妥当性を検討して、変数構成を行うことで、平成21年度に行う分析の準備態勢を整えた。本研究では、情報通信技術の利用が社会生活に対して与える影響について、マルチレベル分析の手法を用いることで、マクロレベルの情報通信技術の普及状況の要因を加味したミクロレベルの分析を行うことで、マクロ、ミクロの両側面を考慮した知見を提出することを試みた。平成21年は平成20年度の研究の成果をもとに、研究課題に取り組んだ。まず、各都道府県における人口、人口密度、インターネット普及率などのマクロレベルの変数と、インターネット利用時間、電子メール利用量、インターネットからの情報取得行動などの個人の情報通信技術利用行動に関する変数の関係を分析した。分析の結果、パソコンを通じたインターネットの都道府県レベルの普及率に関しては、ウェブの閲覧時間やインターネットからの情報取得行動を促進させる傾向がある一方で、携帯電話を通じたインターネットの都道府県レベルの普及率に関しては、携帯メール利用量を増加させる傾向があるという結果が得られた。また、インターネット利用と都道府県レベルのインターネット普及率、個人の心理的変数の関係を検討した結果、携帯電話を通じたインターネット利用が普及した地域では携帯メール利用が私生活主義的価値観を高める可能性があることが示唆された。これらの成果は部分的に学会発表、学会誌論文を通じて公表した。また、平成20年度に行った階層的データを取り扱える統計的分析手法を検討した成果を取りまとめ、他領域においてではあるが、成果を論文として公表した。
f電子系化合物のメタ磁性転移前後のフェルミ面に関する理論的研究

遍歴4f電子系CeRu_2Si_2において80KOeの外部磁場でメタ磁性的振る舞いが観測され、ド・ハ-スアルフェン(dHvA)振動数ブランチやサイクロトロン有効質量の磁場依存性の詳細な報告がされた。そのdHvA振動数の角度依存に対して、メタ磁性転移前では4f電子を遍歴電子としたCeRu_2Si_2の我々のバンド計算の結果から説明することができる。一方、メタ磁性転移後ではLaRu_2Si_2のバンド計算の結果と対応させることができる。今研究では、低磁場における遍歴4f電子状態がメタ磁性転移前後にどのように変貌し、フェルミ面に寄与しているかを理解するために、磁場依存性を考慮したスピン分極した相対論的LAPW法を使って、外部変数の関数としてCeRu_2Si_2の電子状態とフェルミ面の変化を調べた。この方法では、外部磁場によるゼーマン分裂が主要な効果であると仮定して、APW球内の相対論的基底関数を展開した。そのため、スピンによる縮対がほどけ、分裂する。計算により、外部磁場を強くするにつれてより多くのバンドがフェルミ面を横切る結果となった。そのため、簡単に実験を説明することがでない。この研究から次の重要性が理解することができた。小さな外部磁場においては、4f電子のスピン・軌道分裂したJ=5/2とJ=7/2の軌道がほぼ独立して、ゼーマン効果によりバンド幅が広がる。しかし、非常に大きな磁場においてはこの二つの軌道が独立の量子状態を取れず、混成して新しい結合状態を作ることが分かった。メタ磁性に関して実際の定量的な考察を行うためには、この混成軌道を考慮した理論が要求される。
輸入魚介類における多剤耐性菌等の汚染状況

我が国は多くのエビをアジア諸国からの輸入している.そこで,市販冷凍エビ235検体の拡散型β-ラクタマーゼ(ESBL)菌とサルモネラ汚染状況を調査した.28.5%(67検体)の冷凍エビからESBL菌が,6.4%(15検体)からサルモネラが分離された.ESBL菌分離67検体中58検体はStenotrophomonas maltophilia,9検体はChryseobacterium indologenesであり,カルパペネム系抗生物質について耐性を示した.分離サルモネラは今回供試した抗菌性物質全てに感受性を示した.冷凍エビを生食することは無いが,解凍する際には二次汚染に配慮すべきであると思われた.我が国は多くの魚介類をアジア諸国から輸入している。そこで、ニューデリー・メタロ-β-ラクタマーゼ1(NDM-1)産生多剤耐性菌を含む耐性菌やサルモネラの日本への食品を介する侵入経路解明調査のひとつとして、輸入魚介類、特に冷凍エビからサルモネラや生菌等を分離し、それらの薬剤耐性試験を実施した。また、ミャンマー(水産省)とタイ(カセサート大学)を訪問し、エビ養殖や水産加工、輸出体制の実態を調査した。平成23-24年度に国内で市販されている輸入冷凍エビ104検体(インド40検体、インドネシア59検体、タイ12検体、ベトナム6検体、ミャンマー3検体、オーストラリア2検体、サウジアラビア、アルゼンチン1検体ずつ)を検査した。冷凍エビ1gあたりの平均一般生菌数(平均±標準偏差log cfu/g)は4.8 ±0.9 log cfu/gであった。サルモネラは4検体(S. salmae、S. Weltevredenはインドネシア産、S. Abony、S. Stanleyはインド産)から分離された。分離サルモネラは供試した抗菌性物質のすべてに感受性を示した。染色体上にメタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子を保有するStenotrophomonas maltophiliaが13検体、Chryseobacterium indologenesは1検体から分離された。ミャンマーはエビ養殖の技術や施設の普及が遅れており、採取したエビは養殖することなく集めた後その多くをタイ等に輸出していた。タイではエビ養殖技術が進んでおり養殖した後、HACCP導入加工場で加工し、諸外国に輸出していた。エビの養殖に際してサルファ剤-トリメトプリムが養殖場で使用されていた。我が国は多くの魚介類をアジア諸国から輸入している.そこで,ニューデリー・メタロ-β-ラクタマーゼ1(NDM-1)産生多剤耐性菌を含む耐性菌やサルモネラの日本への食品を介する侵入経路解明調査のひとつとして,輸入魚介類,特に冷凍エビからサルモネラや生菌等を分離し,それらの薬剤耐性試験を実施した.また,インドネシア(エビ養殖場)とタイ(水産省)を訪問し,エビ養殖や水産加工,輸出体制の実態を調査した.平成25年度に国内で市販されている輸入冷凍エビ131検体(インド60検体,インドネシア48検体,ベトナム5検体,オーストラリア4検体,マレーシア3検体,ミャンマー,バングラディシュ,産地表示なしは2検体ずつ,タイ,パキスタン,中国,サウジアラビア,エクアドルは1検体ずつ)を検査した.冷凍エビ1gあたりの平均一般生菌数(平均±標準偏差log cfu/g)は4.0 ±2.1 log cfu/gであった.サルモネラは11検体(5検体はインドネシア産,4検体はインド産,1検体はベトナム産,1検体はオーストラリア産)から分離された.分離サルモネラは供試した抗菌性物質のすべてに感受性を示した.染色体上にメタロβラクタマーゼ遺伝子を保有するStenotrophomonas maltophiliaが45検体,Chryseobacterium indologenesが8検体から分離された.ベトナム,タイ,マレーシアでは稚エビに致死性の病原性を示すEarly Mortality Syndrome(EMS)が流行しているために,インド産やインドネシア産のエビが多量に輸入されていた.インドネシアではエビ養殖の技術や施設の普及が進んでおり,主要な産業となっていた.養殖場ではEMSの侵入・流行に注意を払っていた.タイではEMSの流行によりエビ養殖は壊滅的な打撃をうけていた.腸炎ビブリオが原因病原体であることから,抗菌性物質を養殖池に投与することもみうけられ,今後の薬剤耐性菌の出現に気をつけなければならないと思われた.我が国は多くのエビをアジア諸国からの輸入している.そこで,市販冷凍エビ235検体の拡散型β-ラクタマーゼ(ESBL)菌とサルモネラ汚染状況を調査した.28.5%(67検体)の冷凍エビからESBL菌が,6.4%(15検体)からサルモネラが分離された.ESBL菌分離67検体中58検体はStenotrophomonas maltophilia,9検体はChryseobacterium indologenesであり,カルパペネム系抗生物質について耐性を示した.分離サルモネラは今回供試した抗菌性物質全てに感受性を示した.冷凍エビを生食することは無いが,解凍する際には二次汚染に配慮すべきであると思われた.我が国でも、ニューデリー・メタロ-β-ラクタマーゼ1(NDM-1)産生多剤耐性菌は院内感染として問題となっており、平成21年5月のインド渡航者からのNDM-

1産生多剤耐性大腸菌の検出のように海外渡航者からの輸入例が確認されている。現在、鳥インフルエンザや口蹄疫の流行によってアジア諸国から生鶏肉・牛肉・豚肉が我が国に輸入されることはない。しかし、多くのエビはアジア諸国から輸入されている。そこで、NDM-1多剤耐性菌を含む耐性菌の日本への食品を介する侵入経路解明調査のひとつとして、アジア諸国の国毎に輸入される魚介類、特に冷凍エビからサルモネラや一般生菌等を分離し、それらの薬剤耐性試験を実施し、NDM-1産生多剤耐性菌や多剤耐性菌の分布状況について調査を実施した。平成23年度は国内で市販されている魚介類、特に輸入冷凍エビ30検体(インドネシア14検体、インド9検体、オーストラリアとタイ2検体ずつ、ベトナム、サウジアラビア、アルゼンチン1検体ずつ)を検査した。今回の調査では大腸菌を分離することができなかった。サルモネラは4検体から分離された。インドネシア産の2検体のエビからはSalmonella enterica subsp.salamaeおよびS. Weltevredenが、インド産の2検体のエビからはS. Abonyおよび型別不能(O4群)が、各々1検体から血清型等が分離された。分離サルモネラは供試した多くの薬剤に感受性であった。冷凍エビ1gあたりの平均一般生菌数は24,000個/gであった。今回、基質特異性拡張型βラクタマーゼ腸内細菌分離用のESBL培地やカルパペネル耐性菌分離用培地用培地のKPC培地上に発育した菌を多数分離したことから、現在、これらの菌の薬剤耐性と菌種の同定を実施中である。前回の調査(2007年)では、冷凍エビから大腸菌群・大腸菌が容易に分離できたが、今回の調査では少数の大腸菌群が分離されるにすぎず、衛生状態が向上していることが伺えた。冷凍エビからはサルモネラおよび染色体上にメタロ-β-ラクタマーゼの遺伝子を保有するStenotrophomonas maltophiliaやChryseobacterium indologenesが分離された。現在、本結果については論文として投稿中である。国内で市販されている魚介類、特に輸入冷凍エビについてアジア輸入国ごとに多量の大腸菌等を分離する予定であった。前回の調査(2007年)では、大腸菌群・大腸菌が容易に分離できたため、これらの菌が分離できたところで薬剤感受性試験を実施する予定であった。今回は大腸菌・大腸菌群を分離することができなかった。今回、サルモネラが分離されたため、その同定・薬剤感受性試験等を実施したため、分離された一般生菌の薬剤感受性試験や同定試験が遅れてしまった。また、研究代表者が(独)国際協力機構の短期専門家としてウガンダ共和国に派遣(8月8日9月2日まで)されたことも研究がやや遅れている理由である。平成25年度はさらに冷凍エビの検体数を増やすとともに、エビだけでなく輸入貝等の検体について精力的に調査を実施し、病原体や多剤耐性菌の検査を実施する、また、平成23・24年度に分離したサルモネラやStenotrophomonas maltophiliaおよびChryseobacterium indologenesについての遺伝子学的特徴等を調査する。また、特殊な菌については次世代シーケンサーを用いた全ゲノム解析を行う。さらに、エビを輸出している東南アジアのエビ養殖場・エビ加工場を訪問し、衛生状態を把握する。調査結果については学術誌や専門誌に公表する。
受容体型チロシンキナーゼを介する情報伝達機構

phosphoinositide(PI)3-キナーゼはcatalytic subunitである110K蛋白(p110)とadaptor subunitである85K蛋白(85K)よりなる。インスリンがインスリン受容体に結合すると受容体に内在するチロシンキナーゼ活性が活性化され、IRS-1と呼ばれる蛋白がチロシン燐酸化される。この部位をp85のSH2ドメインが特異的に認識し結合して、IRS-1とPI3-キナーゼの複合体ができる。この複合体がインスリン作用の中でどのような情報を伝達しているか明らかにするために、P110と結合しえない変異p85を細胞内に大量に発現することを試みた。IRS-1上のp85結合部位をこの変異p85が占拠すれば、PI3-キナーゼがどのようなインスリン作用を伝達しているか明らかになると思われる。実際にこの変異p85を大量にCHO-IR細胞(Chinese hamster ovary細胞にインスリン受容体を発現させた細胞)に発現すると、IRS-1に結合しているPI3-キナーゼ活性は高度に低下した。さらにインスリンによるPI(3,4,5)3燐酸の上昇も低下していた。この細胞におけるインスリン作用を検討すると、インスリンによるrasの活性化は認められるが、糖輸送の活性化、膜ラッフリングの形成は認められなかった。すなわち、IRS-1に結合したPI3-キナーゼは、インスリンの作用の中で糖輸送の活性化、膜ラッフル形成を担っていると推定された。インスリンの糖輸送の活性化は糖輸送担体が細胞内から細胞表面へtranslocationすることによるが、変異p85を発現した細胞ではインスリンによる糖輸送担体のtranslocationが低下していることが確認された。従って、PI3-キナーゼは、細胞内のvesicleのtranslocationなどに関与していることが推定された。
肉用牛の社会行動と産肉能力の関係

本研究では、群飼肥育牛の社会的順位が社会行動および産肉能力に及ぼす影響を明らかにするため、黒毛和種5群39頭、褐毛和種9群68頭を用いて検討した。その結果の概要は以下のとおりである。群編成後、最上位牛と下位牛は直ちに決定したが、中位牛グループ間にはかなりの変動があり、これらの社会的順位が安定したのは約75時間(3日)後であった。闘争行動は時間の経過とともに減少し、採食行動は逆に増加の傾向を示した。また起立休息及び移動行動が減少するにつれて横臥休息は増加した。社会的順位と闘争行動の間には高い正の相関(γ=0.857)が認められたが、維持行動との間には有意な相関は認められなかった。社会的順位の長期間にわたる変化を観察したところ、最上位牛の順位には殆んど変化が認められなかったが、中下位牛グループには、その順位にかなりの変動が認められた。群編成時の日令や体格と社会的順位の間には有意な高い相関は認められず、これらの諸形質が社会的順位を決定する主要な要因とは成り得なかった。社会的順位と産肉能力の関係については、黒毛和種においてDGと社会的順位の間には有意な正の相関(γ=0.527)が認められ、また枝肉量との間にも有意な正の相関(γ=0.687)が認められた。しかし褐毛和種においては社会的順位とこれらの産肉諸形質との間には有意な相関は認められず、品種による相違が判明した。また社会的順位と肉質の間には、両品種いずれも有意な相関は認められなかった。
発話を促す実用的スピーキングテストの開発とピア評価システムの確立

本研究は、中高大の授業で使いやすいストーリー・リテリング・スピーキング・テスト(SRST)とその評価尺度(ルーブリック)の開発を目的とした。中学及び高等学校で学習する文法や表現が発話時に使えるかを評価できるテストにするために、オリジナルSRSTと評価尺度を改良し、ストーリーの中にどの程度の文法項目を入れ、どのような指示を出せば、ターゲットになった項目を使いながら再話をすることができるかを調査した。そして、外部試験との高い併存的妥当性のある評価尺度を開発した。また、その尺度を使用したピア評価では、内容面よりも、言語的観点の評価が比較的、妥当性が劣り苦手とする生徒が多いことを明らかにした。平成24年度は、教室で生徒や教員が気軽に使えるスピーキングテストの開発に向けて、次の2点を研究した。第1点目は、前年度に引き続き、スピーキングのストーリー・リテリング(SRST)に使用するリスニング用テキストの作成に向けて、テキストをスピーチ化するために合成音声ソフトを利用することができるかを検討した。合成音声と自然音声を音源に使用したテキストを聞かせ、ディクテーション課題を課した。その後、ディクテーションの再生率が異なる単語を比較し、音源の使用可能性について検討した。合成音声の場合、自然音声より機能語までも規則的に発話されており、その部分の再生率はよく、レベルの低い学習者にも使用できるものであることが確認できた。また、最初の聞き取り訓練に使用する場合にも利用できることがわかった。第2点目の研究は、SRSTとVersant (Pearson Education, 2008)とStandard Speaking Test (SST; ALC Press, 2010)の3つのスピーキングテストと比較することで、SRSTの得点に基づく解釈の妥当性を吟味した。まず、64名の受験者に3つのテストを受けてもらい、テストの共通点と相違点を調べるために、その言語機能と得点、発話を分析した。その結果、SRSTはVersantよりは多いがSSTよりは少ない言語機能を引き出すこと、SRSTは他の2つのテストと中程度の相関を持ち、初級者・中級者グループで弁別力を発揮すること、(a)タスクと言語機能と(b)評価時に重きを置く要素の相違により、テスト得点の違いが説明されうることが分かった。結果に基づき、評価の目的と状況に沿って適切なスピーキングテストを選ぶ際に有益となる、各テストの相対的な利点を示した。平成25年度は、ストーリー・リテリング・スピーキング・テスト(Story Retelling Speaking Test: SRST)とその評価尺度の開発に向けて、次の3点を研究した。第1点目は、SRSTのストーリー提示をリーディングさせるかリスニングさせるかによって、その後のリテリングの量と質がどのように異なるかを検証した。この結果、リスニングにすると量・質とも若干劣り、英語力のない学習者ほどリスニングで行うことは難しいタスクになることがわかった。よって、新しい学習項目を学ぶ必要のある中高生には、その項目に下線を引いて提示することができるリーディングの方が好ましいと推測した。第2点目は、実用的なスピーチ用評価尺度であるEBB尺度(an Empirically derived, Binary-choice, Boundary-definition (EBB) scale)の改良版を完成させ、その成果を論文し公表した。しかし、中高生の授業使用に合わない部分があることがわかり、さらにつけやすいリスト形式の評価尺度を作成した。この評価リストの中にターゲット文法や表現が使用できたかを評価できるようにした。そして、55名の高校生にリーディングによるSRSTを実施し、その後ピア評価をさせ、十分活用できることを確認した。最後に、成果発表に向けて、SRSTがインプットからアウトプット活動として如何に効果があるか、またその後の評価を如何に教室で行うことができるかについて、これまで集めた資料および書籍を整理し、第二言語習得理論に沿って、如何に効果的な流れになっているかをモデル化した。本研究は、授業で手軽に活用できる実用性のあるスピーキングテストおよび評価方法の研究・開発を目的とする。特に、中学・高校・大学の学習実態に合った発信能力だけでなく受容能力の学習にプラスの波及効果を生むテスト形式として、読んだ内容あるいは聞いた内容を話す方式を取るテスト(SRST:ストーリーリテリング・スピーキングテスト)を完成させ、教員評価だけでなく生徒同士が評価し合うピア評価の信頼性を上げるような評価システムを築き上げることを目標とする。初年度である平成23年度は、リスニングを組み合わせた中級レベルのスピーキングテストの開発に向けて、リスニング用テキストを読み上げソフト(有料ソフトのGlobalvoice English)で代用することができるか調べた。読み上げソフトで作られる合成音声スピーチをネイティブ・スピーカーによる読み上げスピーチと次の2点について比較を行なった。(1)理解可能度(どれくらい内容を理解できる音質を有しているか)、(2)自然さ(直感的にどれくらい聞き手にとって自然に聞こえるか)である。(1)は通常多肢選択式問題で、(2)はアンケートを用いて調査を行った。その結果、合成音声を使用した音声テキストであっても、一度聞いた経験がある場合は、自然音声と同程度の理解度を得ることができることがわかった。また、合成音声であっても、自然音声同様に自然さがあると知覚していた。特に、英語力の低いレベルの学生は、音が規則的に変換された音声の方が聞きやすいと感じていた。よって、ネイティブ・スピーカーに毎回、録音を依頼せずに、文字テキストを合成音声ソフトで音声変換して、授業や実験などで代用できることがわかった。

平成26年度は、中高生用のストーリー・リテリング・スピーキング・テスト(Story Retelling Speaking Test: SRST)とその評価尺度の開発に向けて、次の5点を実施した。第1点目は、学会やワークショップに参加し、ストーリー・リテリングの理論部分になる技能統合的スピーキング評価に関する理論と評価方法に関して最新の情報や書籍を入手することに努めた。平成20年には中学校学習指導要領が、平成22年には高等学校の学習指導要領が発行されたが、どちらにも技能統合的活動と評価が求められていることが明記されている。このことから、中高の授業に沿った形で、これまで構築したリテリング評価のモデルに修正を加えた。第2点目は、中高生にSRSTを実施した際に、ターゲットとする文法事項が1つのテキスト内に2,3種類あった場合は、すべての種類の文法事項をリテリングすることは困難で、さらにピア評価を行う際にも、ターゲット文法事項を正確に評価できないということがわかった。そこで、ターゲット文法を1つのテキストに付き1項目として、同じ種類の文法項目が同テキストに2,3回使われるように作成し直した。それに伴って自己評価およびピア評価尺度も修正した。第3点目は、上記の結果に基づいて、同じ種類の文法項目が1つのストーリーに複数回現れるようなテキストを、SRSTとして使えるようにできるだけたくさん作成した。第4点目は、SRSTと外部スピーキングテストであるTSST(アルク社)を実施して、修正版SRSTの妥当性を確認した。そして、第5点目は、これまでの実験結果と成果を学会で発表した。最終年度の平成27年度は、中高大の授業で使いやすいストーリー・リテリング・スピーキング・テスト(Story Retelling Speaking Test: SRST)とその評価尺度の開発に向けて、次の6点を実施した。第1点目、学習した文法や表現などを発話時に使えるように、指定したターゲット項目をこれまでの3種類から1種類に絞ったテストを実施した。そして、前回行った3種類の項目が入っているテキストの場合と比較して、高校生および大学生がどの程度、ターゲット項目を出せるようになったか、また、教師評価やピア評価の採点の妥当性がどの程度向上したかを評価尺度の観点別で調査した。その後、流暢さ及び正確さの客観指標による比較を行うために、発話データを書き起こしタグ付けを行なった。これに関しては、現在、分析中である。第2点目、ペアによる意見交換タスクを加えたSRSTを開発し、高校生に実施し、リテリングというモノローグタスクからペアによるインタラクション活動が問題なく行えること確認した。第3点目、それに伴って、ペアタスクによる意見交換部分をピアまたは自己評価でも使えるよう、SRST用評価尺度の別バージョンとして完成させた。第4点目、さらに上級者用に、要点を掴み簡潔に話す口頭要約タスクを取り入れたSRST要約バージョンを試作し、予備実験を行った。
道路や空港舗装の力学的・経験的設計、パーフォーマンス予測、メインテナンスに関するシステム開発

現在,舗装のマネージメントシステムの中で,火急の課題として舗装の理論設計システムの構築に関心が集まっている.土木学会舗装工学委員会から,理論設計に必要な舗装構造解析ソフト(GAMES)を公開し,舗装技術者が広く利用できるようにしてほしいとの依頼があり,2003年9月に土木学会舗装工学ライブラリー3として出版の準備をすることが決まった.2005年2月に脱稿し,現在印刷中である.GAMESの基本ソフトウエアは,研究代表者の研究室で開発しており,車両の自重を考慮した鉛直方向の分布荷重と,水平方向の制動荷重を考慮できる.研究分担者は本ソフトウエアで用いられている理論をすっきりした形に再構築し,計算効率化と計算精度の向上を図り,さらにユーザが利用しやすいようにウインドウズ化を行い,本ソフトウエアの開発に多大なる貢献を果たした.本ソフトウエアの精度については,同様の機能を持ち世界的にも評価の高いシェル石油開発のBISARとの比較も行っており,GAMESの方が優れていることを確認している.すでに本ソフトウエアは,現在進行中の羽田空港拡張工事と関西空港拡張工事の設計で利用され,超大型ジェット機の設計にも十分に対応できることを確認され,実務にも役立つことが実証されている.さらに研究としては,舗装表面に作用するより複雑な荷重形態(ねじり荷重やモーメント荷重)に対する解析も行うことができる理論を構築,論文にも投稿している.また,舗装マネージメントで必要な舗装構造評価についても,従来の理論に改良を加え新しいDBALMを開発し,初期値の影響を評価した.このソフトウエアでは動的FEMを用いているが,現在波動理論を解析的に解く方向で作業中であり,理論構築は終了しコード化が最終段階にある.現在,舗装のマネージメントシステムの中で,火急の課題として舗装の理論設計システムの構築に関心が集まっている.土木学会舗装工学委員会から,理論設計に必要な舗装構造解析ソフト(GAMES)を公開し,舗装技術者が広く利用できるようにしてほしいとの依頼があり,2003年9月に土木学会舗装工学ライブラリー3として出版の準備をすることが決まった.2005年2月に脱稿し,現在印刷中である.GAMESの基本ソフトウエアは,研究代表者の研究室で開発しており,車両の自重を考慮した鉛直方向の分布荷重と,水平方向の制動荷重を考慮できる.研究分担者は本ソフトウエアで用いられている理論をすっきりした形に再構築し,計算効率化と計算精度の向上を図り,さらにユーザが利用しやすいようにウインドウズ化を行い,本ソフトウエアの開発に多大なる貢献を果たした.本ソフトウエアの精度については,同様の機能を持ち世界的にも評価の高いシェル石油開発のBISARとの比較も行っており,GAMESの方が優れていることを確認している.すでに本ソフトウエアは,現在進行中の羽田空港拡張工事と関西空港拡張工事の設計で利用され,超大型ジェット機の設計にも十分に対応できることを確認され,実務にも役立つことが実証されている.さらに研究としては,舗装表面に作用するより複雑な荷重形態(ねじり荷重やモーメント荷重)に対する解析も行うことができる理論を構築,論文にも投稿している.また,舗装マネージメントで必要な舗装構造評価についても,従来の理論に改良を加え新しいDBALMを開発し,初期値の影響を評価した.このソフトウエアでは動的FEMを用いているが,現在波動理論を解析的に解く方向で作業中であり,理論構築は終了しコード化が最終段階にある.
家禽類及びその類縁種の糖鎖遺伝子の網羅的解析とその分子系統樹の確立

生物のゲノムの全構造解析が各分野で競争して行われ、解析結果が明らかになりつつある。ゲノム解析は種の遺伝学に未利用資源として今後活用するための前段階としても考えられる。複合糖質は主として細胞表層や細胞間に存在し、細胞膜の主要な構成成分であり、ABO(H)式の血液型のような特異的抗原として働いていたり、細胞認識に関わっていることが周知され,我々はフォルスマン糖脂質に非常に興味を持ち,この糖鎖を発現している種としないものがあり、この糖鎖と進化の関連性が指摘された。本研究ではこの糖鎖抗原が発現している種、特に家禽類より、この糖転移酵素をクローニングすることにより、種或いは類縁種でこの遺伝子が保存されているか、またその進化ではどう行われていたかを解明するために、家禽類が生息する国から試料を収集し、その後の解析を行うことを目的として3年目は収集の他に各動物園に依頼を行った家禽類のDNAあるいはRNAからの解析により力を入れて,更にはまとめを行なった.1,遺伝子の比較;(a)持ち帰った試料のDNAあるいはRNAから既知のマウスあるいはイヌ及び家禽類のダチョウ,ニワトリのcDNAをプローブにして6種の家禽類のゲノムサザンを行った.(b)(a)で得られたゲノムDNAを基に,対応する糖転移酵素の全長を把握する.これは昨年から引き続き行った.家禽類の中でフォルスマン糖脂質を発現する家禽(ダチョウ,ニワトリ)のホモログの解析はほぼ終了した.(c)約20種類の主として野生種の家禽類をこれらの遺伝情報を基に分類し,他の遺伝情報も合わせて,体系化を試みる.これは2年目から行ったが,解析中であるため,十分な情報がまだ得られていない.2,複合糖質の構造解析;(a)精製可能な試料(ダチョウ)より有機溶媒抽出,カラムクロマトにより既知の構造と酸性画分からフォルスマン活性を有する脂質の精製と構造解析を行った.MALDITOF/MSとNMR解析により完全構造解析を現在めざした.以上,試料からの遺伝子の解析と比較的大量に入手できる試料については,複合糖質の解析を併用して解析を進め,最初の目的である体系化に向けて,現在入手できる試料の数を増やすことと,更に複合糖質の完全構造解析に向けて論文化を行なっている.生物のゲノムの全構造解析が各分野で競争して行われ、解析結果が明らかになりつつある。本研究ではこの糖鎖抗原が発現している種、特に家禽類より、この糖転移酵素をクローニングすることにより、種或いは類縁種でこの遺伝子が保存されているか、またその進化ではどう行われていたかを解明するために、家禽類が生息する国から試料を収集し、その後の解析を行うことを目的として3年目は収集の他に各動物園に依頼を行った家禽類のDNAあるいはRNAからの解析により力を入れて,更にはまとめを行なった.1,遺伝子の比較;(a)持ち帰った試料のDNAあるいはRNAから既知のマウスあるいはイヌ及び家禽類のダチョウ,ニワトリのcDNAをプローブにして6種の家禽類のゲノムサザンを行った.(b)(a)で得られたゲノムDNAを基に,対応する糖転移酵素の全長を把握する.これは昨年から引き続き行った.家禽類の中でフォルスマン糖脂質を発現する家禽(ダチョウ,ニワトリ)のホモログの解析はほぼ終了した.(c)約20種類の主として野生種の家禽類をこれらの遺伝情報を基に分類し,他の遺伝情報も合わせて,体系化を試みる.これは2年目から行ったが,解析中であるため,十分な情報がまだ得られていない.2,複合糖質の構造解析;(a)精製可能な試料(ダチョウ)より有機溶媒抽出,カラムクロマトにより既知の構造と酸性画分からフォルスマン活性を有する脂質の精製と構造解析を行った.MALDITOF/MSとNMR解析により完全構造解析を現在めざした.以上,試料からの遺伝子の解析と比較的大量に入手できる試料については,複合糖質の解析を併用して解析を進め,最初の目的である体系化に向けて,現在入手できる試料の数を増やすことと,更に複合糖質の完全構造解析に向けて論文化を行なっている.ヒトゲノム構造の解析をきっかけとして生物のゲノムの全構造解析が各分野で競争して行われ、解析結果が明らかになってきている。ゲノム解析は、種の遺伝学を学問的に体系化するためばかりでなく、未利用資源として今後活用するための前段階としても考えられる。一方、複合糖質は主として細胞の表層や細胞間に存在し、細胞膜の主要な構成成分であり、ABO(H)式の血液型のような特異的抗原として働いていたり、細胞認識に関わっていることが知られている。我々は複合糖質の一つであるフォルスマン糖脂質に絞り、マウスのテラトカルシノーマ細胞株やES細胞を用いて発現解析の研究を行っているが。その糖鎖の発現が未分化細胞に特徴的なことから、この糖脂質の発現を合成するcDNAをクローニングすることに成功した。

この糖鎖抗原は発現している種としないものが分けられ、この糖鎖と進化との関連性が示唆されている。本研究ではこの糖鎖抗原が発現している種、特に家禽類よりこの糖転移酵素を網羅的にクローニングすることによって、種あるいは類縁種でこの遺伝子がどのように保存されているか、またその進化における移行はどうように行われていたかを解明するために、多くの家禽類が多く生息する国々でのサンプル収集とその後の遺伝学的な解析をすることを目的とする。初年度は試料の収集を目的として、日本の各種の動物園に依頼を行い、収集できる家禽類のDNAあるいはRNAを集め、解析を開始した。1、子発現の比較解析;(a)持ち帰った試料DNAあるいはRNAより、既知のイヌ・マウス及び家禽類のダチョウ・ニワトリcDNAをプローブにして約4種の家禽類ゲノムのサザン解析を行った。(b)(a)で得られたゲノムDNAを基に、対応する糖転移酵素の全長を把握する。家禽類の中でフォルスマン糖鎖陽性の家禽(ダチョウ・ニワトリ)のホモログを現在解析中である。(c)約20種の主に野生種の家禽類をこの遺伝情報を元に分類し、他の遺伝子情報も合わせて体系化を試みている。2、複合糖質の構造解析;(a)精製可能な試料(ダチョウ)より有機溶媒抽出、カラムクロマトグラフィーの併用で行う。既知のフォルスマン糖脂質(5糖を有するグロボペンタオシルセラミド)と酸性画分からフォルスマン活性を有する酸性の脂質の精製を行った。MALDITOF/MS及びNMRにより完全構造を決定する。(b)少ないものは脂質画分を確保し、TLCと抗フォルスマン抗体により、免疫反応を行いその反応性と移動度から推定構造を判断する。現在完構造を解析中である。上の結果を踏まえ、次年度は後半の試料収集や実験方法の進め方についての検討も加え、方法論の確立も合せて行う。ヒトゲノム構造の解析をきっかけとして生物のゲノムの全構造解析が各分野で競争して行われ、解析結果が明らかになってきている。ゲノム解析は種の遺伝学を学問的に体系化するばかりでなく、未利用資源として今後活用するための前段階としても考えられる。一方、複合糖質は主として細胞表層や細胞間に存在し、細胞膜の主要な構成成分であり、ABO(H)式の血液型のような特異的抗原として働いていたり、細胞認識に関わっていることが周知されている。我々は複合糖質の一つであるフォルスマン糖脂質に非常に興味を持っているが、マウスのテラトカルシノーマ細胞株やES細胞を用いて発現解析の検討を行っている.その糖鎖の発現が未分化細胞に特徴なことから、この糖鎖の発現を制御するcDNAをクローニングすることに成功した。この糖鎖を発現していない種としないものがあり、この糖鎖と進化の関連性が指摘されている。本研究ではこの糖鎖抗原が発現している種、特に家禽類より、この糖転移酵素をクローニングすることにより、種或いは類縁種でどのようにこの遺伝子が保存されているか、またその進化における移行はどのように行われていたかを解明するために、多くの家禽類が生息する国から試料を収集し、その後の解析を行うことを目的として2年目は収集の他に各動物園に依頼を行った家禽類のDNAあるいはRNAからの解析により力を入れて行った.1,遺伝子の比較;(a)持ち帰った試料のDNAあるいはRNAから既知のマウスあるいはイヌ及び家禽類のダチョウ,ニワトリのcDNAをプローブにして6種の家禽類のゲノムサザンを行った.(b)(a)で得られたゲノムDNAを基に,対応する糖転移酵素の全長を把握する.これは昨年から引き続き行った.
脳組織構築にはたす神経分化のペース調節の役割

大脳皮質形成における幼若ニューロンのアピカル突起によるニューロンの産生ペース調節の役割についての論文に関し、査読コメントに対してリバイスを行った。統計の見直し、および図版の再編等も含め再投稿し、雑誌Crebral Cortexに掲載受理された。これに並行し、幼若ニューロンのアピカル突起の保持・乖離機構について、昨年度に引き続き候補メカニズムの模索、検討を行った。当初、最有力候補として挙がっていたRhoファミリーによるアクチン細胞骨格のリモデリングによる細胞接着帯調節は、これまでの解析でこれをサポートする実験結果を得ることができなかったことから、アクトミオシン系による突起先端の自切機構に注目し、昨年同様の実験を行った。これに加えて、接着分子カドヘリンの細胞膜ダイナミクスによる接着帯の制御の重要性について示唆を受け、アピカル突起の乖離に関与する可能性の検討を開始した。Nectin, Afadinの下流でRap1によるカドヘリンの膜安定化のモデルが提唱されており、この経路を操作したときに、アピカル突起の保持時間、およびニューロン産生のペースがどのような影響を受けるかについての実験を行うべく、材料の準備、至適条件の検討を行った。これらの解析に並行して、脈絡叢形成について、FGFシグナルがその形態的な側面を制御するというこれまでの結果を受けて、脈絡叢特異的な細胞分化を担うしくみとして、BMPシグナルについて検討を行った。FGFシグナルとBMPシグナルを同時に活性化した結果、脈絡叢形成は誘導されず、生体内の状況から、おそらくFGFシグナルとBMPシグナルが時間差をもって作用することが重要ではないかと考え、その可能性を検討する実験の準備を進めた。本年度は幼若ニューロンのアピカル突起の保持・乖離機構を明らかにすべく、細胞接着帯のダイナミクスを制御する低分子量Gタンパクの活性について検討をおこなった。Rhoファミリーに着目し、まず生体内でRhoAの活性を負に制御することがしられているRnd3について、ステージ15のニワトリ胚の脊髄にエレクトロポレーションによって導入し、1日後、2日後に回収して、あらたに分化したニューロン量を定量した。先行研究により、同時期のニワトリ胚の脊髄における神経分化、および神経前駆細胞の増殖の経時的変化が明らかにされており、分化・増殖の動的平衡の破綻による明確な表現型が期待されたからである。最終的に当初のステージを含む前後1日に渡るおよそ30検体について解析したが、ニューロンの産生量に有意な変化は認められず、組織形態についても統計的に有意な影響は確認できなかった。そこで、内在性のRhoAの活性を強力に抑制するドミナントネガティブタイプのRhoA(DN-RhoA)について同様の検討を行ったが、あくまで有意な影響は検出されなかったため、この実験系は当初の目的に不適であると結論した。そこで、定量的な解析結果はないものの、神経前駆細胞の増殖と分化の領域差がきわめて顕著なニワトリ中脳に材料を変更し、Rnd3、DN-RhoAの両者について検討を行い、現在ひきつづき結果を解析中である。次に、アピカル突起の脱着制御が接着帯の制御に依存していない可能性を想定し、アクトミオシンシステムによる突起先端の自切現象について検討をおこなうことにし、このシステムの制御に関わる因子の選定と、生体内での操作実験のための材料作成に着手した。研究計画時に最有力視されたRhoファミリーGタンパクによる接着帯ダイナミクスの制御機構に関する解析結果がすべてネガティブデータであったこと、および脳組織構築における神経幹細胞の増殖・分化の平衡状態の重要性を示唆する先行研究に基づく実験系(ニワトリ脊髄)が、現実には実験操作に対する感受性が必ずしも高くないことが判明したことが主な理由と考えている。加えて、熊本地震による共通機器の復旧に時間がかかったため、ライブイメージングによる幼若ニューロンのアピカル突起の動態観察が、至適条件の検討を含めて大幅に滞ったことも理由である。幼若ニューロンのアピカル突起の保持・乖離機構を明らかにするため、細胞接着帯のダイナミクスを制御する低分子量Gタンパクの活性について検討を行った。前年度は、ニワトリ胚の脊髄を実験系としてRhoファミリーの操作を行ったが、神経分化、組織構築への有意な影響は認められなかったため、本年度は神経幹細胞の増殖と分化の領域差が著しいニワトリ胚の中脳をモデルに同様の解析を行った。内在性のRhoAの活性を負に制御するRnd3、およびドミナントネガティブ型のRhoA(DN-RhoA)をステージ15のニワトリ中脳の背側部にエレクトロポレーションにて導入し、2日後に幼若神経マーカーとチミジンアナログの取り込みを指標に新生ニューロンを定量した。その結果、いずれの操作によってもニューロン産生量に有意な変化は検出されず、また、組織学的な変化も認められなかった。この結果より、ニューロン産生のペースコントロールにはRhoファミリーの関与はないと結論した。この結果を受けて、アクトミオシンシステムによる突起先端の自切現象に焦点を切り替えて解析を行った。ミオシンの活性化を抑制すると、自切が阻害され、突起が保持されることから、ニューロン産生のペースが低下することが予想される。ミオシンのリン酸化を阻害するBlebbistatinを脳室内に投与し、ミオシンのリン酸化状態、アピカル突起の保持時間の変化を見るため、至適条件の検討を進めた。

一方、これらの解析に並行して、ニワトリ胚の脊髄にFGF8を過剰発現すると、翼板が菱脳の第IV脳室のような伸展した形状を呈するようになるという現象を受けて、これが第IV脳室の脈絡叢化している可能性について検討した。その結果、組織形状こそ第IV脳室様になるものの、TTR等の脈絡叢マーカーの発現は一切認められなかったことから、適切な脈絡叢形成には別の要因が必要であることがわかった。RhoファミリーGタンパクによる接着帯ダイナミクスの制御が、アピカル突起の保持・乖離の最有力メカニズムであろうという当初の予測に固執したこと、それがことごとくネガティブであったこと、またその結論に至る実験結果の整理に予想外に時間がかかってしまったことが主な理由である。アクトミオシン系によるアピカル突起の自切について、文献的知見はあるものの、これまでの自身のデータでそれを支持するものがなかったことから、切り替えにやや消極的であったことも理由のひとつである。大脳皮質形成における幼若ニューロンのアピカル突起によるニューロンの産生ペース調節の役割についての論文に関し、査読コメントに対してリバイスを行った。統計の見直し、および図版の再編等も含め再投稿し、雑誌Crebral Cortexに掲載受理された。これに並行し、幼若ニューロンのアピカル突起の保持・乖離機構について、昨年度に引き続き候補メカニズムの模索、検討を行った。当初、最有力候補として挙がっていたRhoファミリーによるアクチン細胞骨格のリモデリングによる細胞接着帯調節は、これまでの解析でこれをサポートする実験結果を得ることができなかったことから、アクトミオシン系による突起先端の自切機構に注目し、昨年同様の実験を行った。これに加えて、接着分子カドヘリンの細胞膜ダイナミクスによる接着帯の制御の重要性について示唆を受け、アピカル突起の乖離に関与する可能性の検討を開始した。Nectin, Afadinの下流でRap1によるカドヘリンの膜安定化のモデルが提唱されており、この経路を操作したときに、アピカル突起の保持時間、およびニューロン産生のペースがどのような影響を受けるかについての実験を行うべく、材料の準備、至適条件の検討を行った。これらの解析に並行して、脈絡叢形成について、FGFシグナルがその形態的な側面を制御するというこれまでの結果を受けて、脈絡叢特異的な細胞分化を担うしくみとして、BMPシグナルについて検討を行った。FGFシグナルとBMPシグナルを同時に活性化した結果、脈絡叢形成は誘導されず、生体内の状況から、おそらくFGFシグナルとBMPシグナルが時間差をもって作用することが重要ではないかと考え、その可能性を検討する実験の準備を進めた。今後は、アピカル突起の自切現象に焦点を移し、Notchシグナル伝達、ニューロン産生のペース調節、および神経幹細胞の分化調節に果たす役割について重点的に解析をすすめる方針である。また、Rhoファミリーに関する検討は発生期の中脳に題材を移行し、背側部(視蓋)と腹側部(被蓋)の組織構築に神経幹細胞の分化調節が果たす役割について引き続き研究をすすめる。ライブイメージングに必要な機器類の復旧は完了しており、この件に関する28年度の遅れを取り戻すべく、精力的に実験を遂行する所存である。時間と労力は要したものの、Rhoファミリーによる接着帯制御の関与の可能性を排除できたため、今後はアクトミオシン系によるアピカル突起先端の自切現象に集中して解析を行う。