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Stat3を分子標的とした頭頸部癌治療

1.低分子量のStat3特異的抑制剤のスクリーニング共同研究者である岐阜薬科大学酒々井教授とともにin silico svstem上で2種類の低分子量Stat3抑制剤の候補物質を見いだした。頭頸部癌細胞を用いてin vitroでその作用を解析中である。多機能アダプター蛋白であるCIN85の機能解析を頭頸部癌で行った。頭頸部癌臨床標本でCIN85のmRNAの発現量と腫瘍のprogressionに正の相関を認め、CIN85の頭頸部発癌に対する関与が示唆された。このメカニズムを解明するために、頭頸部癌細胞に対し、CIN85遺伝子導入による過剰発現とshRNAによる発現抑制実験を行った。臨床標本での結果と同様CIN85の発現量と頭頸部癌細胞の増殖活性に正の相関を認めた。CIN85は頭頸部発癌の重要な因子であるEGFRのinternalizationを亢進するが、EGFRの活性そのものには影響をあたえず、CIN85の発現量の変化により頭頸部癌細胞のEGFR inhibitorに対する感受性も変化しなかった。EGFRの下流のsignal解析の結果、CIN85はEGFR sinalによるRAS-ERKの活性化を選択的に抗進し、その結果myc遺伝子の発現量を増加させることが明らかになった。CIN85の頭頸部発癌に関わるメカニズムの一端を解明することができた。しかしながら、CIN85はStat3の活性に関しては抑制的に働くデーターが得られており、このメカニズムをさらに解析中である。1.最近の報告で、マトリゲル培養で選別した大腸癌細胞株は癌幹細胞の特徴を示すことが報告されている。われわれも同様な手法で、頭頸部癌培養細胞をマトリゲル状で培養することにより、sphereを形成する細胞集団の分離同定回収方法を確立した。これらの細胞集団は母細胞集団の中で、より上皮間葉転換をおこした細胞であり同時に頭頸部癌幹細胞の近い性格を帯びた細胞と考えられる。Sphere形成細胞を行った実験により以下の様な事が明らかになっている。母細胞集団に比較して高い浸潤能力を示しStat3の転写活性が高い。また頭頸部癌幹細胞のマーカーと考えられるCD44や間葉系細胞のマーカーであるVimentinの発現が亢進している。2. EGFRの下流で働くCIN85蛋白質に関して以下のような事を明らかにした。頭頚部扁平上皮癌の臨床標本において、CIN85の発現量がリンパ節転移及び臨床病期と有意に相関すること。頭頸部癌培養細胞においてCIN85はEGFRの細胞内移行を促進するがEGFRのシグナル強度には影響を与えない。逆にTGF-α刺激ではEGFRのfast-recycling back loopが形成される。このloopによりras-MAPKの恒常的活性化が起こる。これがCIN85による頭頸部癌の悪性化のメカニズムと考えられる。この結果はNeoplasia誌およびJ Oncology誌に掲載された。3.興味深いことに、CIN85はStat3のシグナルに対しては抑制的に働く傾向が見られる。1.頭頸部癌培養細胞株からの癌幹細胞集団の分離マトリゲル培養によりsphereを形成する能力を持つ細胞分画は、培養癌細胞の中でもcancer stem cell (CSC)様の形質と上皮間葉系転換(EMT)の両者の性格を帯びた細胞集団と考えられる。頭頸部癌においては、従来のFACSを用いた表面抗原による細胞分画の分離法の信頼性が疑問視されるなか、細胞の表現型を重視した方法でCSC様細胞集団の分離法を確立することは意義が高いと考えられる。SCC9、MDATu-138、YCU-H891,FaDu、Ca127の5種類の頭頸部癌細胞を用いて、マトリゲル上でsphereを形成する細胞分画の分離に成功した。これらの細胞は親株に比べて高い浸潤能を示し、CSC、EMRの表現型を持つ細胞であることが確認された。これらの細胞ではOct、Nanog、Bmi1、CD44などのCSCマーカー及ぶtwist、Snail、VimentinなどのEMT関連分子の発現量の亢進が認められた。また、当初の目的であるStat3の転写活性の亢進も認められた。これらの分子を抑制することによる表現型の変化を解析中である。2.低分子量のStat3特異的抑制剤のスクリーニング共同研究者である岐阜薬科大学酒々井教授とともにin silico system上で2種類の低分子量Stat3抑制剤の候補物質を見いだした。これらの薬物は頭頸部癌細胞に対して強い殺細胞効果を示すが、この濃度におけるStat3活性の抑制効果は明らかでなく、何らかの他のメカニズムが働いていることが示唆される。このメカニズムの解明とともに、さらに低分子量のStat3特異的抑制剤のスクリーニングを継続している。
初期黄檗僧の絵画制作への関わり-河村若芝の作画を中心に-

17世紀後半に渡来した初期黄檗僧、隠元隆〓、木庵性〓、即非如一の、主に絵画へ着賛された可能性の高い詩文を抽出し、実際に賛が残る絵画作品、とくに河村若芝の作品を検討することで、黄檗僧の絵画制作への関与のあり方を考察した。語録中には、日本には定着していなかった「三国志演義」の登場人物、長寿を祝う「供寿図」などへの賛文が確認でき、初期黄檗僧周辺で新たな画題が好まれて制作されていた実態を再確認することができた。また、新出作品の河村若芝「達磨図」(個人蔵)には木庵が着賛しているが、賛文は既存のものに変更を加えたものであることが判明した。改変のあり方を考察した結果、描かれた達磨の姿に合わせて語句を変更し、結果、書と画を含む作品全体で伝法の意味を強く打ち出している経緯が看取できた。木庵と若芝が、絵画に新興宗教である黄檗宗の伝法の正当性を知らしめる役割を与えたことを如実に示している。隠元の語録中で注目されるのは、日本へ渡来する自身を達磨が中国へ伝法のため東渡した姿に重ね合わせる語句が多数確認される点である。さらに三者のうち最も多く「芦葉達磨図」の賛文が遺されている。河村若芝の遺作中「芦葉達磨図」が最も多く描かれている点とあわせ考察すると、日本へ東渡した隠元はじめ初期黄檗僧が芦葉達磨(達磨)へ自身の姿を投影し、好んだことが若芝の「芦葉達磨図」量産の背景になったことを推測させる。なお、若芝は後期において、伝統的な画題である芦葉達磨を前例のない図像で描くという当時の画家としては特異な作画を行っているが、その背景を考えるうえで、このような黄檗僧の特定の画題への特別な思い入れの存在は重要と考えられる。これまで若芝はその個性的な作風が注されがちであったが、一部の作品の制作背景には、初期黄檗僧の伝法に対する特殊な意識が存在したことが確認できた。これは17世紀画壇の一端を再考する足がかりになると考えられる。
男子不妊症の免疫学的研究

男子不妊症の原因はいまだに解明されているものは少ないが、その原因の1つに免疫の関与が挙げられている。そこで我々は不妊患者における血中抗精子抗体の検索と精巣の免疫組織学的検索を行った。抗精子抗体の検索は精子凝集抗体、精子不動化抗体を男子113例、女子67例に施行した。結果は男子では精子凝集抗体14例(12.4%)、精子不働化抗体6例(53%)が陽性であり、女子ではそれぞれ8例(11.9%)、8例(11.9%)が陽性であつた。精子濃度との関係は特にみられなかったが、azoospermia例ではobstructive azoospermia例にのみ精子凝集抗体、精子不働化抗体陽性例が認められた。次いで精巣生検を行った例についてPAP法でIgGの存在を検討したが、パラフィン包埋による切片では抗原性を消失するためか沈着はみられなかったが凍結切片による検討では精細管壁にIgGの免疫複合体の沈着をみた。また血中抗精子抗体と精巣生検を同時に行った41例では、炎症、壊死、精管欠損などの症例に血中抗体陽性例が認められ、Sertoli cell only syndromeや停留精巣など精子形成のみられない疾患では抗精子抗体が造精機能障害を起こすと仮定すれば、造精機能障害が起こされると考えられる。そのため、この途中の段階で患者が受信すれば抗精子抗体保有の乏精子症となり、最終段階で抗原性を消失したgerm cell aplasiaの状態で受診すれば抗精子抗体陰性の無精子症となることも考えられ今後も引き続き検討が必要であろう。また、男子不妊症の原因として頻度の高い精索静脈の診断法として赤外線サーモグラフィーを用い新しい測定法、評価法を検討し診断率の向上をみた。そこで今年度は不妊患者における血中抗精子抗体の検索と精巣の組織免疫学的検索を行った。抗精子抗体の検索は精子凝集抗体、精子不働化抗体を男子74例、女子25例に施行した。結果は男子では精子凝集抗体12.1%、精子不働化抗体8.0%が陽性であり、女子ではそれぞれ28.0%、8.0%が陽性であった。精子濃度との関係は無精子症例で凝集抗体11.8%、不働化抗体17.6%と高値を示したが、その全てが精管結紮術術後症例を含む後天性の閉塞性無精子症例であり、先天性の閉塞性無精子症例には陽性例がみられなかった。次いで精巣生検を行った26例について、酵素抗体法により精巣組織内のIgGの存在を検討した。その結果、パラフィン切片による検査ではIgGの沈着は全例にみられなかった。これはパラフィン包埋により抗原性の消失があるのではないかと考え、凍結切片標本を作製し同様の酵素の酵素抗体法を行ったところ精細管壁にIgGの免疫複合体の沈着を認めた。今後症例を重ね検討を加えたい。また、人精子には特異プロタミンの存在が示唆されており、定性・分離をすすめている。これが免疫機序の一端をになっているのかを研究中である。不妊症の精巣内ステロイド含有量の検討も、高速液体クロマトグラフィーを用いてステロイドの分析を行なった。男子不妊症の原因の1つである精索静脈瘤の診断法である陰嚢シンチグラフィーヤ、サーモグラフィーを用いて準臨床的精索静脈瘤の発見に成果を挙げている。

特に陰嚢部シンチグラフィーでは現在、分類曲線を【IV】型に分け検討を加えているが、術後妊娠成立例との関係をみるとI型、【II】型にのみ妊娠成立例がみられ興味ある成積を示していた。男子不妊症の原因はいまだに解明されているものは少ないが,その原因の1つに免疫の関与が挙げられている.そこで今年度も不妊患者における血中抗精子抗体の検索と精巣の組織免疫学的検索を行った.抗精子抗体の検索は精子凝集抗体,精子不働化抗体を男子113例,女子67例に施行した.結果は男子では精子凝集抗体14例(12.4%),精子不働化抗体6例(5.3%)が陽性であり,女子ではそれぞれ8例(11.9%), 8例(11.9%)が陽性であった.精子濃度との関係は特にないがazoospermia例ではobstructive azoospermia例にのみ精子凝集抗体,精子不働化抗体陽性例が認められた.次いで精巣生検を行った例についてPAP法でIgGの存在を検討した.パラフィン包埋による切片では抗原性を消失するためか沈着はみられなかったが凍結切片による検討では精細管壁にIgGの免疫複合体の沈着をみた.また人製子中にあるプロタミンが免疫に関与するのではないかと考え,現在定性分離をすすめている.そして不妊症患者の精巣内ステロイド含有量の検討も高速液体クロマトグラフィーを用いて分析を行っている.また,男子不妊症の原因の1つである精索静脈瘤の診断法として非侵襲的検査法である赤外線サーモグラフィーを用いて従来の測定法とは異なるヒストグラムモード,冷負荷試験を用いて診断率は向上した.今後有力な測定法になるものと考えられた.今年度は血中抗精子抗体と精巣生検を同時に行った41例では、炎症壊死、精管欠損などの症例に血中抗精子体陽性例が認められ、sertoli cell only syndromeや停留精巣など精子形成のみられない疾患では抗精子抗体陽性例はみられなかった。これらより、抗精子抗体自身が精巣障害と引き起こす可能性は少ないのではないかと考えられた。しかし、抗精子抗体が造精機能障害を起こすと仮定すれば、造精機能がある程度保たれている間は抗体が産生され、逆にそのために常に造精機能障害が起こされると考えられる。そのため、この途中の段階で患者が受信すれば抗精子抗体保有の乏精子症となり、最終段階で抗原性を消失したgerm cell aplasiaの状態で受診すれば抗精子抗体陰性の無精子症となることも考えられ今後も引き続き検討が必要であろう。また、男子不妊症の原因として頻度の高い精索静脈瘤の診断法として赤外線サーモグラフィーを用い新しい測定法、評価法を検討し診断率の向上をみた。
フェムト秒波長可変レーザーイオン化質量分析計の開発とその科学計測への応用

2色のフェムト秒レーザー光を水素ガスと相互作用させ、波長185 nmから600 nmに亘る多色超短パルス光源を得た。質量分析計において新規試料導入法を研究し、従来法より2倍高い検出感度を得た。波長200 nmの深紫外超短パルス光を用いて非共役二重結合を有する化合物の検出感度を2倍から100倍向上した。TATPの分子イオン検出、血液中での生成機構を研究した。PCDF, PCDD, PCB計32種の化合物、近年社会問題となっているPM2.5に含まれるPAH、NPAHの網羅的分析を行った。多色紫外超短パルス光源を爆発物の分析へ応用し、実用性を示した。Aレーザーの波長変換技術の開発本年度新しく導入した超短パルスレーザー再生増幅器(出力:4W、中心波長:800nm、時間幅:35fs)を用いることによって、以下の成果を得た。1.第3高調波(波長:266nm)と基本光(波長:800nm)のBBO結晶中での和周波混合によって、パルスエネルギー15μJの深紫外第4高調波発生(波長:200nm)に成功した。また、第3高調波(波長:266nm)に対しても、従来の装置に対して3倍以上となる最大650mWまで出力を増大させた。2.光パラメトリック増幅器によって、発生したシグナル光(波長:1200nm)、およびアイドラー光(波長:2400nm)を、基本光と共に水素分子(圧力1-10atm)と相互作用させた。その結果、水素分子の振動モードに共鳴した、高次ラマンサイドバンド光(波長:600nm、480nm、400nm)の発生に成功した。Bレーザーイオン化質量分析計の開発飛行時間型質量分析器への試料導入法として、モノリスカラムをトランスファーラインとした新規手法を考案した。クロロベンゼンを試験試料とし、試料の導入とマススペクトルの観測に成功した。また、トルエン、ナフタレンとの混合試料によるマスクロマトグラムの測定を実施した。Cレーザーイオン化質量分析計の計測科学への応用1.深紫外超短パルス光(波長:200nm)を用いて、農薬の標準試料、及び実資料分析を行った。非共役二重結合を有する化合物に対する検出感度が2倍から100倍向上することを確認した。2.高出力紫外超短パルス光によって、テロ関連物質であるTATPの分子イオン検出感度の向上に初めて成功した。開発した手法を用いて、科学捜査での応用を視野にいれた血液中でのTATP生成反応機構の観測を実施した。従来の電子衝撃イオン化法では実現できない分子イオン直接計測による本手法の優位性を実証した。水素中に水素の振動ラマン周波数の2倍及び3倍の周波数のチャープしたフェムト秒レーザーパルスを入射して四波ラマン混合を引き起こすことでラマン光を発生させる研究を行った。入射光のチャープ量制御により、ラマン光のパルス幅を短縮できることを実証した。また、深紫外-真空紫外レーザー光がレーザーイオン化質量分析計における爆発物等のイオン化に有用であるが、そのような応用が期待される紫外光源開発を、3色の入射パルスを用いた四波ラマン混合に基づいて行った。レーザーイオン化質量分析計の計測科学への応用を行った。本応用では毛髪中のダイオキシンを抽出し、計測することで有用性を評価することができた。また、近年社会問題となっているPM2.5に含まれるPAH、NPAHの網羅的分析を行ったが、石英繊維フィルターに吸着したPM2.5中のこれら化合物を抽出・計測することで、これらの分析における本分析計の有用性を示すことができた。そして前述の紫外レーザー光源をレーザーイオン化質量分析計へ応用した。トリニトロトルエン等、短波長のイオン化光源が分子イオン生成に有効である反面、その他の化合物においては長波長のイオン化光源が有用であるなど、化合物により異なる挙動が観測された。開発した光源の有用性を示すとともに、各爆発物のイオン化挙動の波長依存性についての新たな知見を得ることができた。血液中に含まれる過酸化アセトンの分析、光学活性化合物の分離分析にも本分析装置を適用し、その応用範囲の広さと実用性を示すことができた。レーザーイオン化質量分析計の高感度化を目的とした新規導入法の研究では、従来導入法より2倍高い検出感度が得られた。また、フェムト秒レーザー光を金属に照射して発生する光電子を用いたイオン化を研究したが、これはレーザーイオン化質量分析計内で電子衝撃イオン化も可能とするものであった。クロロベンゼンを試料として研究し、開発した装置で電子イオン化できることを確認し、本質量分析計の高性能化が達成された。

開発したレーザーイオン化質量分析計を用い、PCDF, PCDD, PCB計32種の化合物を含む試料の網羅分析を行った。特に、2種のカラム(HP-5, DB-5ms)を比較・検討し、妨害成分なく全ての化合物を高感度に検出できるカラムの調査を行った。HP-5の場合ではカラムの固定相が同時にイオン化されてしまい、妨害成分が生じ検出感度が低下した。一方、DB-5msを用いた場合固定相のイオン化がなく、32種ほぼすべての化合物においてHP-5よりも高い検出感度が得られた。カラムの内径についても、0.25 mm, 0.18 mmの2種を比較・検討した。ほぼ全ての化合物において内径が小さい方が高い感度が得られており、最大で3倍感度を向上することができた。300 nmレーザー・選択制ジオキサン、クロロナフタレン、PCB等種々の化合物におけるイオン化挙動のイオン化レーザー波長依存性を研究した。その内多環芳香族化合物(クロロナフタレン)とクロロベンゼンのイオン化挙動の比較においては、イオン化波長を267 nmから290 nmへ変更することでクロロナフタレンのイオン信号強度が10分の1まで低下する一方、クロロナフタレンの信号強度は半分に留まった。レーザー波長によりイオン化化合物を選択できることが示された。さらに、レーザー光のパルス幅によってもイオン化化合物を選択できることが明らかとなった。Aレーザーの波長変換技術の開発に関しては、(1)新規再生増幅器の導入(2)高調波発生(3)新規ラマンセルを製作(4)高次ラマン光の発生について、(3)に対する計画変更を除いては成功裏に実現した。また、B.レーザーイオン化質量分析計の開発に関しても、(1)質量分析計の高感度化(2)"モノリスカラム"導入(3)ノズルの閉塞の問題の解決について、(3)を除く実験を計画通りに実施できた。これに加えて、農薬・TATPの新規分析手法の開発を実施できたために、「(1)当初の計画以上に進展している」と評価した。25年度が最終年度であるため、記入しない。当研究グループのレーザーイオン化質量分析計をより高感度にし、世界標準となっている高分解能ガスクロマトグラフ/二重収束型高分解能質量分析計よりも高い感度を実現することを目的とし、研究を行った。まず、試料を横から導入する新規試料導入法の研究、固定相イオン化による妨害成分の少ないカラムの選定、カラム内径と検出感度の関係を研究した。いずれも分析計の高感度化に繋がり、目的通りの成果が得られている。分析計の実用性を評価するために網羅分析を行い、ダイオキシン、PCB等を高感度、高精度に検出・同定できることを示した。さらにレーザーパルスにより電子を放出させ、これを用いて試料をイオン化する電子衝撃イオン化法を組み込んだ装置開発についても目的通りに遂行できた。イオン化レーザー波長を選択することでイオン化する分子種を選択する研究を行い、実際にそれが可能であることを実験で示し、分析計の選択性を向上させる研究も完遂することができた。当初想定していなかった成果であるが、一般に共鳴イオン化よりもイオン化効率が2-3桁低いと言われてきた非共鳴イオン化においても、パルス幅40 fsの短いイオン化レーザーパルスを用いれば共鳴イオン化と比べ遜色ないイオン化効率が得られることが明らかとなり、詳細な調査を行った。
哲学の西洋性―ハイデガー・レヴィナス・デリダにおけるヘレニズムとヘブライズム―

報告者は「哲学の西洋性-ハイデガー・レヴィナス・デリダにおけるヘレニズムとヘブライズム-」という研究課題を三年間にわたって、研究した。具体的には、研究対象としている三人の現象学者の思考において、いかに「西洋的」と呼ばれる枠組みが各々の思考において顕在化してくるのかを研究してきた。以上のような研究を通して、報告者が解明しようと試みていたのは、西洋哲学を内部から規定し境界づけている問いの特殊性と地域性を明らかにすることであった。そして最終的な研究の目的は、さらに、その研究を通して、どこから哲学的な問いを出発させれば、その問いの背景をなす「問いの地域性・特殊性」を自明化せずに、むしろその問いの内部で、問いの限界と境界を見定めることが可能となるような問題設定を行えるのかということに関して、哲学的問いの出発点を正しく見定めることであった。この課題に対する報告者の最終的な解答は、いたってシンプルである。それはまさしく広い意味で理解された「語る」という出来事に定位して哲学的な分析をはじめることであった。そのような語りの様態から哲学的記述を開始することは、同時に「言語と意味」という大きな哲学的な問題圏に、現象学の観点から学的寄与を試みることでもあった。語りの様態の分析が「言語と意味」の問題に触れるのは、まずは端的に「語る」という行為が、たいていは、なにがしかの仕方で言語を伴って語る行為を意味しており、その意味で、語ることの様態の分析は、常に言語とその意味への考察と不可分なものだからである。しかし単に言語と意味の分析から問題を始めるのではなく、語る行為から分析をはじめることの必然性は、語るという行為そのものがその行為の只中で、「言葉を語り」「意味する」というこの事態を可能にしているという端的な事実にもとづくものである。今年度は研究課題に関する最終的な解答とそれを発展的に検討する見通しが立ったという点で、順調に研究が進展した。またその研究成果をより確かなものにするために、今後より多くの公刊論文を世に問うていく必要がある。本研究から得られた「語り」の様態分析に関する知見に基づいて、今後はまず「声と眼差し」という問題圏を、語りの構成分析の位相のもとで取扱い、現象学研究への学的寄与を目指していく。その際に引き続き三人の哲学者(ハイデガー・レヴィナス・デリダ)を研究の対象とし、この三者の思考のもとで同問題圏がどのように取り扱われているかを検討する。報告者は、「哲学の西洋性-ハイデガー・レヴィナス・デリダにおけるヘレニズムとヘブライズム-」に関連した次のような研究を当該年度実施した。まず、ハイデガー哲学とヘレニズム性、もしくはギリシャ性を解明するという研究目的に沿って、(1)ハイデガーによって、ヘレニズム的伝統に拮抗するものとして捉えられるキリスト教的存在神学の解釈を明確化し、そしてその問題に関連させることで、(2)ハイデガーが「存在」という問題圏をどのような文脈で問題にしているのかをより見通しのきくものにした。その上で、単なる言語の翻訳という以上の哲学的意味を持った、(3)ハイデガー哲学におけるギリシャ語なりギリシャ性の「翻訳」という概念を論じ、研究成果を発表した。以上のような研究は、単にハイデガー哲学を解釈するうえで重要であるばかりでなく、言語と思考の関係というより大きな哲学的問題に一石を投じるものである。また、レヴィナス・デリダとユダヤ性という問題についても上記(3)と関連して論じることを試みた。そのためにまず(4)両者とハイデガー哲学との関連性を、ハイデガーのフランス哲学受容の文脈から明確化する一方で、更に(5)旧約聖書・ユダヤ哲学との関連で両者の思索の伝統的背景を明確化した。以上のような研究によって、当初の計画通り「ヘレニズムとヘブライズム」というより大きな文脈に三者の思想を置くことで、従来は本人たちの相互言及や批判が文字通り解釈されることで、単なる三者の思想家間の対立や同調だと思われていたことが、実は対立という見かけとは違い同じ思考的装置を用いていたり、意見の一致の中にも重要な思想的差異が存在したりすることが明らかになった。報告者は、まずハイデガーによる現象学の解釈学的転換が含意するのは、まさしく我々の「現象の経験」が不可避的に「言語」を媒介としてしか行われないという事実であることを文献研究によって確認した。またその際に問題となる「言語」とは、通常の記号学・言語学とは異なった独自の位相を現象学において有しているということを明らかにし研究発表した。ここで言われる「言語」とは、ハイデガーの言うところの現象の「解釈と了解の機能」であるばかりでなく、我々の認識の構造がその媒介項の只中で初めて成り立つような世界の成立基盤そのものであり、存在論的差異を差異として成り立たせているその運動を名指しているということが明らかになった。そして、この問題に最も直接的に、そしてある観点からは、ハイデガーよりも徹底的に取り組んだのが、デリダであった。『声と現象』(1967)の中で既にデリダは、フッサール現象学を検討する過程で、この「現象における言語(エクリチュール)の原初的な浸食」を問題にしており、とりわけその言語の現象への原的な錯綜の形態を、人間の「声」の中に見出したと考えられる。

なぜならば、声は純粋な自己触発として、「私が話すこと」と「私が話したことを聞くこと」を同根源的に含意しており、最も自明な自己同一的な自意識の見かけにあって、既にその同一性を脅かす他なるものを、話すことの能動的行為と受動的理解の間で迎え入れているからである。そしてこの両者の「間」もしくは「差異」を世界に出現させているのが、広い意味で人間の言語(エクリチュール)の機能だと言われるのである。報告者は、デリダの以上のような議論をふまえて、もう一度ハイデガーのテキストの再検討を行った。また「声」(Stimme)と気分(Stimmung)との奇妙な関係性を指摘することでハイデガー哲学における「声」の所在を問うアガンベン、また「声」の問題圏を聴取可能性や反響(エコー)などという概念を手がかりにしながら議論するヴァルデンフェルスをその際にさらに検討しながら、来年度に向けての博士論文の執筆作業に取り掛かっている。報告者は「哲学の西洋性-ハイデガー・レヴィナス・デリダにおけるヘレニズムとヘブライズム-」という研究課題を三年間にわたって、研究した。具体的には、研究対象としている三人の現象学者の思考において、いかに「西洋的」と呼ばれる枠組みが各々の思考において顕在化してくるのかを研究してきた。以上のような研究を通して、報告者が解明しようと試みていたのは、西洋哲学を内部から規定し境界づけている問いの特殊性と地域性を明らかにすることであった。そして最終的な研究の目的は、さらに、その研究を通して、どこから哲学的な問いを出発させれば、その問いの背景をなす「問いの地域性・特殊性」を自明化せずに、むしろその問いの内部で、問いの限界と境界を見定めることが可能となるような問題設定を行えるのかということに関して、哲学的問いの出発点を正しく見定めることであった。この課題に対する報告者の最終的な解答は、いたってシンプルである。それはまさしく広い意味で理解された「語る」という出来事に定位して哲学的な分析をはじめることであった。そのような語りの様態から哲学的記述を開始することは、同時に「言語と意味」という大きな哲学的な問題圏に、現象学の観点から学的寄与を試みることでもあった。語りの様態の分析が「言語と意味」の問題に触れるのは、まずは端的に「語る」という行為が、たいていは、なにがしかの仕方で言語を伴って語る行為を意味しており、その意味で、語ることの様態の分析は、常に言語とその意味への考察と不可分なものだからである。しかし単に言語と意味の分析から問題を始めるのではなく、語る行為から分析をはじめることの必然性は、語るという行為そのものがその行為の只中で、「言葉を語り」「意味する」というこの事態を可能にしているという端的な事実にもとづくものである。今年度は研究課題に関する最終的な解答とそれを発展的に検討する見通しが立ったという点で、順調に研究が進展した。またその研究成果をより確かなものにするために、今後より多くの公刊論文を世に問うていく必要がある。本研究から得られた「語り」の様態分析に関する知見に基づいて、今後はまず「声と眼差し」という問題圏を、語りの構成分析の位相のもとで取扱い、現象学研究への学的寄与を目指していく。その際に引き続き三人の哲学者(ハイデガー・レヴィナス・デリダ)を研究の対象とし、この三者の思考のもとで同問題圏がどのように取り扱われているかを検討する。
Neurokinin receptorを介する気管支喘息の発生機序の解明

喘息は気道過敏性の亢進,気道狭窄を特徴とする慢性閉塞性の肺疾患である.Gタンパク質結合受容体はAktのリン酸化を含むシグナル伝達を介して気管支平滑筋(ASM)の細胞増殖を促進する事が報告されている.またNeurokinin-1(NK1)は気道収縮を引き起こすことが知られている.当初NK1受容体の活性化は病的なASM増殖を促進すると考えたが,予想に反してNK1受容体作動薬のSM-SubPは,NK1を高発現させたASM細胞を用いた実験で,成長因子による細胞増殖とAktのリン酸化を阻害した.ASMの細胞増殖に関わる分子シグナル伝達経路は,喘息由来の気管支狭窄に対して潜在的治療標的となる可能性がある.気管支喘息はアレルギー反応や細菌・ウイルス感染などが発端となった気管支の炎症が慢性化することで気道過敏性の亢進,可逆性の気道狭窄を起こし,発作的な喘鳴,咳などの症状をきたす呼吸器疾患である.Substance Pは,タキキニン受容体の作動薬として,平滑筋収縮,血管拡張,血管透過性亢進,粘液分泌亢進,肥満細胞活性化などの作用を示す.研究代表者らは最近の研究で,この受容体の1つであるNeurokinin (NK)1が平滑筋細胞増殖の抑制に関与する可能性を示す結果を得た.次に,細胞増殖に係わる分子(ERK, Akt, Stat3, P70S6Kなど)の活性化をWestern blot法を用いて確認した.遺伝子導入を行いNK1を高発現させたヒト気管支平滑筋由来の初代培養細胞にPDGFを作用させると,Aktの活性化の指標であるリン酸化Aktが増加した.Substance Pで前処理すると,このAktのリン酸化が抑制され,気管支平滑筋の細胞増殖抑制にSubstance Pが関与する可能性が示唆された.近年,環境や食生活の変化に伴い、喘息患者は増え続けている。気管支喘息は、歯科治療の際遭遇する最も多い疾患の一つであるが、その発症機序や発作の誘因などたくさんの報告があるものの不明な点が多い。本研究では、平成25年度までの培養細胞を用いたin vitroでの研究結果で、Neurokinin1 (NK1) Receptorが気道狭窄につながる平滑筋の細胞増殖の抑制に関与する可能性を示す結果を得た。本年度は,平成25年度の課題であった平滑筋細胞培養に適した細胞増殖試験として、BrdUの取り込みを利用した細胞増殖定量キットを用いて検討を行ったところ、NK1作用薬が平滑筋の細胞増殖の抑制に作用する結果を得た。遺伝子導入を行い、NK1受容体を高発現させたヒト気管支平滑筋由来の初代培養細胞にNK1作動薬としてSubstance Pを用いて実験を行った。細胞増殖定量のキットとしてnon-radioactiveでDNAの合成期に取り込まれたBrdUの測定を原理として測定する、BrdU化学発光キット(Roche)を用いた。成長因子であるplatelet-deriverd groth facter: PDGFをNK1受動体を形質導入したヒト気管支平滑筋由来の初代培養細胞に作用させ、2日間、通法通り培養したところ、有意なBrdU値の上昇、細胞増殖を認めた。Substance PをPDGF添加の20分前に作用させると、このBrdUの取り込みと細胞増殖は抑制された。NK1は、平成25年度に行ったWestern blot法による細胞増殖に関わる分子の抑制加えて、実際の細胞増殖の抑制にも関わっていることが確認された。気管支喘息(Bronchial Asthma)はアレルギー反応や細菌・ウイルス感染などが発端となった気管支の炎症が慢性化することで気道過敏性の亢進,可逆性の気道狭窄を起こし,発作的な喘鳴,咳などの症状をきたす呼吸器疾患である.日本では1960年代は小児、成人とも有症率は1%程度であったものが近年増加の傾向にあり,数倍から十数倍程度増加しているが,気管支喘息の病態生理はまだはっきりしていない部分が多い.軸索反射などで,C線維の末端から放出される神経タキキニンは,平滑筋収縮(気道収縮,気管支収縮),血管拡張(皮膚発赤,血流増加),血管透過性亢進(血漿蛋白漏出による浮腫,粘膜の腫脹,皮膚の膨疹),粘液分泌亢進,肥満細胞活性化(ヒスタミン遊離)などの作用を示す.その作用はNK1,NK2およびNK3と呼ばれる受容体を介して発現する.研究代表者は一連の研究で,遺伝子導入を行いNK1Rを高発現させたヒト気管支平滑筋由来の初代培養細胞において,PDGF(Platelet-Derived Growth Factor)を作用させると増加する細胞増殖に係る分子であるリン酸化Aktが、代表的なタキキニンであるSubstance Pの前処理により抑制されることをWestern blot法にて確認した.また,BrdUの取り込みを利用した細胞増殖定量における実験においても、Substance Pの前処理によりPDGFによる細胞増殖の抑制を確認した.平成27年度は,NK1の細胞増殖抑制のメカニズムに係るより上流の分子を明らかにするため,腫瘍抑制因子として同定され,細胞増殖に深く関与するPTENをターゲットとしてSubstance Pを用いた実験を行ったところ,高いPTENホスファターゼ活性を認め,NK1が平滑筋細胞増殖抑制に強く関与する可能性を示す結果を得た.喘息は気道過敏性の亢進,気道狭窄を特徴とする慢性閉塞性の肺疾患である.Gタンパク質結合受容体はAktのリン酸化を含むシグナル伝達を介して気管支平滑筋(ASM)の細胞増殖を促進する事が報告されている.

またNeurokinin-1(NK1)は気道収縮を引き起こすことが知られている.当初NK1受容体の活性化は病的なASM増殖を促進すると考えたが,予想に反してNK1受容体作動薬のSM-SubPは,NK1を高発現させたASM細胞を用いた実験で,成長因子による細胞増殖とAktのリン酸化を阻害した.ASMの細胞増殖に関わる分子シグナル伝達経路は,喘息由来の気管支狭窄に対して潜在的治療標的となる可能性がある.平成26年度の研究で、NK1受容体の作動薬であるSubstance Pが、NK1受容体を高発現させたヒト気管支平滑筋由来の初代培養細胞において、実際に成長因子を用いた細胞増殖を抑える現象が確認された。この現象の確認は、今後の研究の遂行に必要不可欠な作業であったが、平滑筋細胞に適した増殖試験を模索するのに時間がかかり、メカニズムに関する研究が進んでいない。炎症免疫平成25年度までの研究結果で、細胞増殖に関わる分子であるAktの関与は分かっているが、より、上流の分子の関与に関しても研究を行っていきたい。ERK, Stat3, mTOR, PTEN等の関与について検討していく予定である。これら、細胞増殖に関わる分子の関与を明らかにすることにより、気管支喘息発症の際に生じる気道狭窄の原因の1つである気管支平滑筋の細胞増殖のメカニズムの解明に迫る。細菌・ウイルス感染,過労,ハウスダスト,食物,薬物などの環境刺激因子(アレルゲン),運動,タバコ,アルコール,気圧変化等のストレス刺激が引き金となり,これらに対する過敏反応として気管支平滑筋収縮,気道粘膜のむくみ,気道分泌亢進などにより気道の狭窄・閉塞が起こることが分かっているが,気管支喘息の病態生理はまだはっきりしていない部分が多い.今回,気管支平滑筋の培養細胞を用いた実験系で,成長因子を用いた細胞増殖刺激に対して,NK1の作動薬であるsubstance Pが抑制的に働く知見を得られた.今後,他の細胞増殖試験を検討し,気道の狭窄・閉塞のメカニズムに迫ることが可能と考えられ,順調な研究の進展が予想される.平成26年度に、ヒト気管支平滑筋細胞に適した細胞増殖試験を模索し、有用な結果を得られたのは良かったが、その細胞増殖試験に至るまでに時間がかかってしまった。また、次年度には、NK1の細胞増殖抑制のメカニズムに迫る増殖分子の検討を予定し、多くの研究費が必要とされることが予想されたため、次年度使用額が生じた。まずは、気管支平滑筋の細胞増殖の抑制効果をみるために適した細胞増殖試験を模索する.DAPI染色を利用した試験を検討予定である.また,NK1の細胞増殖抑制に関わる細胞内シグナル伝達に関与する分子を検討する.mTORやPTENなどを検討していく予定である.また,筋収縮に働くアセチルコリン,Rho activator,グルコン酸カリウムを用い,その増強因子と思われる細菌成分,ハウスダスト,金属イオン等を併用して,膜電位の変化を電位感受性色素を使用したFLIPR蛍光イメージングプレートリーダーで測定する.筋弛緩に働く拮抗薬や古来より喘息に良いと言われている植物由来成分(生姜・漢方など)についても併用し,治療薬としての可能性を探る.前述のとおり、平成26年度で行うことの出来なかった、NK1の細胞増殖抑制のメカニズムに関わる、より上流の細胞増殖分子を明らかにすべくWesterm blotやPCRでの検討を行う予定である。
マイクロアレイおよびプロテオーム法による喘息炎症マーカーの同定

気管支喘息およびアトピー性疾患は20世紀後半、先進諸国において約10倍増加し、現在、対数的に増えつつあると報告されている。気管支喘息は気道の炎症がその本態と考えられているが、気道炎症のバイオマーカーとなるものはいまだ存在しない。本研究は喘息のバイオマーカーとなりうる遺伝子およびたんぱく質をプロテオミクスとGeneChipの技術により同定することを目的とした。小児アトピー性気管支喘息患者(年少者の場合は代諾者)にインフォームドコンセントを得た後に喘息発作時(入院時)と非発作時(安定期)の静脈血を採取した。静脈血より分離したリンパ球の網羅的遺伝子発現解析をタカラバイオHS Human ExpressionChipを用いて10ペアについて行い、複数の発現に差の認められる遺伝子を同定した。プロテオーム解析については蛍光二次元電気泳動システムを用いて、一次元目としてpH4-7の範囲で等電点電気泳動を行い、二次元目としてtタンパク質の分子量で分離するSDS電気泳動法をおこなった。20ペアの解析が終了し、これについてもいくつかの変化のあるたんぱく質が同定された。気管支喘息およびアトピー性疾患は20世紀後半、先進諸国において約10倍増加し、現在、対数的に増えつつあると報告されている(BMJ 316:607-16,1998)。それに伴う医療費の増加や患者本人および家族への負担は深刻であり、その原因の究明と予防法の確立は急務の課題である。本研究は喘息のバイオマーカーとなりうる遺伝子およびたんぱく質をプロテオミクスとGeneChipの技術により同定する。喘息患者発作時および同じ患者の回復期の血漿を用いてプロテインチップおよび2次元電気泳動による解析をおこなった。発作時と回復期のサンプルの収集は困難であったが現時点で12検体を収集した。プロテインチィップおよび2次元電気泳動で数百の蛋白が分離できるが、現在までに得られたデータでは発作時と回復期で差の認められるたんぱく質は同定されていない。平成16年度はさらに感度の高い方法を用い、サンプル数を増やして解析をおこなう予定である。
活性酵素による血管内皮・平滑筋細胞のアポトーシスのメカニズムの解明-動脈硬化発症機作との関連について-

血管内皮細胞(ヒト臍帯静脈由来)、血管平滑筋細胞(ラット大動脈由来)をCO_2インキュベータ-で培養し、活性酸素種を負荷(O_2:Xanthine-Xanthine oxidese、H_2O_2、NOなど)したところアポトーシスの誘導が観察された。アポトーシスの誘導はNO(peroxynitrite)、H_2O_2、O_2の順に強かった。アポトーシスの発生についてはDNAの断片化のみならず、アポトーシス小体の観察など電子顕微鏡を用いた形態学的な確認も行った。また従来より血管内皮細胞に対してアポトーシスを特異的に誘導することで知られているヘビ毒を加えたところ、アポトーシスとともに細胞内の過酸化物の増加が2′,7′-dichlorofluorescin diacetate(DCFH-DA)を用いたフローサイトメトリーで確認された。これらの細胞に細胞内グルタチオン濃度を低下させるButhionine sulfoximine(BSO)を添加すると細胞死は加速し、グルタチオンエステルの添加により部分的に改善した。またCu,Zn-SOD阻害剤であるDiethyldithio-carbamate(DDC)の影響はグルタチオン阻害に比し軽微であった。またMn-SODを誘導するホルボールエステル、TNFを添加したところBSOによるアポトーシスが抑制された。また高血糖下の培養ならびにアセチル化LDL添加によって細胞内過酸化物は増加し、アポトーシス刺激に対して脆弱となった以上より血管内皮細胞のアポトーシスには活性酸素が関与しており、グルタチオン、Mn-SODなどの抗酸化物質が保護的に作用していることが明らかになった。また高血糖や変性LDL存在下でのアポトーシス感受性が高まり、動脈硬化発症機作との関連が示唆された。また従来より血管内皮細胞に対してアポトーシスを特異的に誘導することで知られているヘビ毒を加えたところ、アポートシスとともに細胞内の過酸化物の増加が2',7'-dichlorofluorescin diacetate(DCFH-DA)を用いたフローサイトメトリーで確認された。以上より血管内皮細胞のアポトーシスには活性酸素が関与しており、グルタチオン、Mn-SODなどの抗酸化物質が保護的に作用しているのが明らかになった。

アポトーシスの発生についてはDNAの断片化のみならず、アポトーシス小体の観察など電子顕微鏡を用いた形態学的な確認も行った。また従来より血管内皮細胞に対してアポトーシスを特異的に誘導することで知られているヘビ毒を加えたところ、アポトーシスとともに細胞内の過酸化物の増加が2′,7′-dichlorofluorescin diacetate(DCFH-DA)を用いたフローサイトメトリーで確認された。これらの細胞に細胞内グルタチオン濃度を低下させるButhionine sulfoximine(BSO)を添加すると細胞死は加速し、グルタチオンエステルの添加により部分的に改善した。またCu,Zn-SOD阻害剤であるDiethyldithio-carbamate(DDC)の影響はグルタチオン阻害に比し軽微であった。またMn-SODを誘導するホルボールエステル、TNFを添加したところBSOによるアポトーシスが抑制された。また高血糖下の培養ならびにアセチル化LDL添加によって細胞内過酸化物は増加し、アポトーシス刺激に対して脆弱となった。以上より血管内皮細胞のアポトーシスには活性酸素が関与しており、グリタチオン、Mn-SODなどの抗酸化物質が保護的に作用していることが明らかになった。また高血糖や変性LDL存在下でのアポトーシス感受性が高まり、動脈硬化発症機作との関連が示唆された。
日本語母語話者における英語のリーディング習得と書字認知方略の研究

学習者の母語に由来する言語認知の方法は、外国語習得において正と負の二重の役割を果たしている。この二重性のゆえに、学習者は母語との比較において外国語を認知するというメタレベルの方略を獲得し、それが外国語の習得を促進する。本研究の目的は、日本語母語話者の書字音韻変換のプロセスを、英単語音読における書字音韻対応関係の処理の特徴から明らかにすることである。英単語の音節は基本的にCを子音、Vを母音とするCVCで表される。音節下位の書字と音韻の対応関係は、「オンセット(C)/核(V)/コーダ(C)」および「オンセット/韻(VC)」の2通りで表される。このような英単語を音読するにあたって、英語母語話者は話し言葉の経験から記憶している韻の対応に則った方法を使用する。これに対し日本語母語話者は、母語の音節の基本単位に相当するCVを使用し、英語のC/VCの書字音韻対応関係をCV/Cのように分節して変換する傾向を示す。また、このような分節方法にもかかわらず、英単語の音読では英語母語話者と相似した正答率や反応傾向を示す。これは、書字から音韻への処理のプロセスに、誤答へ導くCV/Cから正答のC/V/CやC/VCへと、分節方法を変えての再処理が行われていることを示唆する。では、分節方法の変更は何故どのように起こるのであろうか。平成22年度は、主に、使用頻度が2通りに異なる材料と4通りのプライム条件を用いた音読実験を実施し、英単語の心内辞書への登録の有無が分節のプロセスに与える効果を検討した。日常的に使用され記憶されている高頻度語への反応からは、韻(CVCのVC)の書字と音韻が、素早く検索できる状態で心内辞書に一定数登録され、使用されていること、また、この心内辞書への登録は基本的には単語(whole word)単位でなされていることが示唆された。一方、ほぼ初見に等しく音韻の記憶がない低頻度語への反応からは、まず使用しやすい分節単位のCVによって変換がスタートするものの、残るCの処理と全体のブレンドがスムーズにいかず、誤答が多くなることが示唆された。これらの結果は、日本語母語話者の英単語の書字音韻変換のプロセスと分節方法の使用に、語彙記憶およびその要因である使用頻度が密接に関連していることを示すものであると考えられる。平成23年度の研究では、書かれた英単語の音読で日本語母語話者が示す特徴を、英語母語話者との比較において検討した。英単語に含まれる音節は基本的に、Cを子音、Vを母音とするC_1VC_2で表される。C_1とC_2は時には重子音綴りの複数のCを含むことができ、Vも重母音綴りになりうるので、1音節英単語の綴りの長さは変わる。音節には更に左から右へC_1綴り-オンセット、V綴り-核、C_2綴り-コーダのGPCの対応と、VC_2綴り-韻の下位の書字音韻対応関係が同時に含まれる。このC_1VC_2の綴りを、日本語母語話者は、母語の音節の基本単位に相当するCVを用いて、英語の書字音韻対応関係とは異なった分節方法で、左から右へCV/Cのように変換する傾向を示す。また、このような分節方法では多くの読み間違いが予測されるにもかかわらず、単音節英単語の音読では英語母語話者と相似した正答率や反応傾向を示し、書字から音韻への処理のプロセスに、誤答へ導くCV/Cから正答のC/V/CやC/VCへと、分節方法を変えての再処理が行われていること、再処理には語彙記憶の要因である使用頻度が強く関っていること、また英語の習熟に伴うV綴りの認知における変化かかわっていることが示されている。平成23年度の究では日本語母語話者の音読方法を更に見きわめる目的で、日本の学校教育用英語教材での使用頻度が特に高いC_1VC_2英単語を用い、英語母語話者との比較の下に検討したところ、両方の母語話者グループで共通する音読の特徴が示された。本研究の結果は、日本の学校英語教材で高頻度に使用される英単語、即ち英語母語話者の日常使用の英単語の音読においては、日本語母語話者も英語母語話者もほぼ同じような書字音韻変換方法を用いていることを示唆するものである。この方法とは、日本語母語話者でも既習の語彙記憶による変換に、英語母語話者ではRussel&Coltheart(2001)などで指摘されている二重回路(DRC)の語彙記憶に基づくwhole word単位での変換と呼ばれる方法に相当するものであろう。本研究からは、英語母語話者に対して従来とは異なった方法で調べると、語彙記憶によるwhole word変換には、日本語母語話者の場合と同様に、語頭のCVが最も強く影響した可能性が示された。語頭CVの異なる言語話者における認知について更に検討する。日本語母語話者の英単語の音読における書字音韻変換方法の特徴を検討した。

英語の音節はC1VC2の綴りで典型的に表され、C1-オンセット、V-核、C2-コーダのGPCの対応と、VC2-ライムの下位の書字音韻対応関係を同時に含む。綴りの分節がこの下位の構造に則って行われるなら、大部分の英単語はほぼ正確な発音で読むことができる。偽単語の音読で調べると、日本語母語話者では大学1年生程度の英語語彙サイズで、この書字音韻変換のルールがほぼ習得されている。ただし、日本語母語話者の誤答は、C1Vでの分節と語末に適当な母音を補って読むC2+(V)(anaptyxis)の分節、すなわち母音書字音韻処理への母語日本語の影響を示すが、これは同時に正答でも書字音韻変換に母音調整のプロセスが加わっていることを示唆する。そこで音節内の母音書字の処理方法を確認する目的で、中学校の英語教科書レベルの1音節英単語の音読を、C1とC1Vをプライムに用いて、英語母語成人との比較のもとに調べたところ、どちらの母語話者もC1Vで処理が早くなることが示され(山田,2012)、これまでの検証とは矛盾する結果となった。これは英語母語話者では、綴りの重なりがより大きいプライムの効果として、従来の書字音韻変換理論を補足して説明される(i.e., Schiller, 2004)。そこで、第1音節の綴りがCVとCVCの簡単な2音節英単語と、語頭のCVとCVCをプライムに用いて、英語母語話者との比較のもとに日本語母語話者の母音書字の音韻変換を調べた。英語母語成人は十分な語彙記憶をもとに変換するとされるのに対し、日本語母語話者は基本的には英単語の語彙記憶に基づいて読む。読みが困難になると限られた語彙記憶の中で各自が得ている書字音韻変換の方略を用いて変換する。母音書字の変換をも整えるこの方略は音読を通して発達すると考えられる。教育に関する日常的な業務と校務に関する業務を優先させているので、研究時間が十分に取れなかった。実験参加者の学生との時間調整が十分にできず、実験開始に手間取った。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は平成23年度に実施した上記(9.研究概要)以外の実験の結果を分析しまとめる。また、平成23年度研究の結果を受けて、英語母語話者との比較の下に、日本語母語話者の英単語および義単語の書字音韻変換方法を検討して行きたい。但し、英語母語話者を対象とした実験は、実施できるとしても平成24年度末になることが予想され、研究の遅延が予想される。平成25年度へ向けて、新たな科研研究の応募を考えている。
二次元糖脂質ナノ組織体の構築と機能発現

本研究は、種々のオリゴ糖鎖構造をもつ脂質分子を酵素法で合成し、水面単分子膜として二次元組織体を構築し、オリゴ糖鎖のコンフォメーションと分子認識性を定量的に解明することを目的として行い、以下の成果を得た。1)脂質修飾ガラクトシダーゼを作製し、イソプロピルエーテルに可溶化し、水相にラクトース、イソプロピルエーテル相に1,2-ジオクタデシルグリセロールを可溶化して有機溶媒-水ニ相系で配糖化反応を行った。その結果、約30%の収率で目的とする3-β-D-ガラクトシル-2、2-ジオクタデシルグリセロールが単離できた。2)次に酵素として脂質修飾マンノシダーゼを用いて同様にニ相系で反応を行ったところ、やはり、約30%の収率で目的とする3-β-D-グリコシル-1,2-ジオクタデシルグリセロールを得ることができた。3)酵素反応で合成できた糖脂質の水面単分子膜を作製し、水晶発振子を用いて、レクチンの結合挙動を測定した。ガラクトース型脂質にはWGAレクチンが、グルコース型脂質にはConAレクチンが選択的に結合した。