hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
地方中小都市単身高齢者の生活継続を支援する小地域ケアネット実践方法に関する研究

単身高齢者が地域で生活していくことを可能とする地域ケアネット構築の方法について検討した結果、(1)高齢者の生活の場へ出向き、日常生活における高齢者の「必要」を把握するアウトリーチの手法を援助方法の基本とし、(2)必要なサービス利用の手続きを身近な場所でシンプルに行えるような一本化された窓口の設置、(3)自治体、民間非営利団体、近隣などが役割分担(責任所在)の明確化とともに、(4)それぞれが協働していく関係を形成していくことが必要であることを確認することができた。平成19年度は、研究実施計画に基づき(1)イギリスのコミュニティケア実践についてのヒアリング、(2)日本国内の先進地域ケア実践の把握による研究を行った。(1)イギリスのコミュニティケア実践については、以下のヒアリングを実施し現状把握を行った。(1)近年のイギリスにおける小地域活動の取り組みとして始められたA Sure Start for Older Peopleプロジェクトのパイロット事業(Link-Age Plus)を実施しているTbwer Hamlet区内の3つの事業所を訪問し、ヒアリング調査を実施した。各事業所には、小地域エリアを担当するアウトリーチワーカーと事業運営に携わるコーディネーターが配置されている。アウトリーチワーカーの職務は、担当地域へ出向き高齢者へのアセスメントを実施し、ニーズを発見しサービスへつなげることである。地域内で果たすアウトリーチワーカーの存在は、地域活動を展開していくうえで大きな役割を果たしているということである。(2)地方都市のYork市のボランティア組織において高齢者の地域支援の取り組みに関するヒアリングを行った。イギリスの地方都市でも核家族化が進み、近くに家族がいない、友人や訪問する人がいない等、高齢者の孤独・孤立の深刻化や単身生活が不安定化しやすい現状にあるとの説明を受けた。孤独や孤立の問題に対し、ボランティアによる友愛活動「be friending事業」に取り組んでいること、そのなかで、訪問したボランティアが高齢者の情報が組織のコーディネーターに集約され、本人に必要なサービスへつなぐ取り組みが行われていた。(2)自治体や社会福祉協議会と協働し、在宅高齢者の小地域ケアネット実践活動を行っている岐阜県瑞穂市内および愛知県名古屋市内の団体を訪問し、問題発見プロセスやケアネット形成プロセス、ケアネット維持のための取り組み等についてヒアリングを行った。実践活動を担う地域団体と自治体や社会福祉協議会の協働のあり方が、活動の展開には重要であるとの共通点がみられた。イギリスのコミュニティケアの実践、特に現場実践の担い手として考えられるアウトリーチワーカーに対するヒアリング調査を実施し現状の把握を行った。小地域での高齢者支援のためのA Sure Start for Older Peopleプロジェクトにおけるパイロット事業(Link Age Plus)に取り組んでいたLondon市内のTower Hamlets区にある2007年に訪問することができなかった2箇所のセンターを訪問し、アウトリーチワーカーに対するヒアリング調査を実施した。アウトリーチワーカーは、各担当地域の状況に合わせ実際の活動内容は異なるものの、必要な情報を収集するとともに、問題を抱える高齢者の発見やニーズの掘り起こし、サービスへとつなげる役割が基本となっている。また、各地区センターには各事業を統括するコーディネーターが配置されているが、アウトリーチワーカーの自律性やどのような事業を地域で行って行くのか等の権限が確保されていることがこのでは大きな意味をもつといえる。さらにLink Age Plus事業の具体的な展開場面として、Tower Hamlets区内のある地域にある管理人住宅の管理人とアウトリーチワーカーが協働し立ち上げたプログラムに参加した。管理人住宅内で行われているイベント以外にも、入居している高齢者がそれぞれの思いを気軽に話せる場を作りたいという管理人のニーズに対応したものである。アウトリーチワーカーの活動がコミュニティベースであることにより、高齢者に対しての直接的な関わりに加え、地域の高齢者をとりまくさまざまな人びととの関わりにより具体的な支援方法がっくり出される結果となっていた。単身高齢者の地域生継続支援に向け、既に日常生活での支援、特に生活の基本ともいえる食生活について支援を必要とし、支援サービス(配食サービス)を利用している高齢者の生活実態およびサービス評価等についての訪問面接調査をサービス提供事業体である社会福祉法人の、地域ボランティアとともに実施した。調査結果からは、高齢者の生活のさや孤立・孤独状態にあることが明らかにるとともに、社会資源としての社会福祉施設、職員の専門性をどのように地域支援として活用していくことができるか、また、ボランティア等の地域住民とどのような協働を図ることができるかについて検討を行った。本研究は、地方中小都市の単身高齢者の在宅生活を継続する小地域ケアネット構築の方法論について、イギリス及び日本の地域実践活動から検討してきた。イギリスの活動については、前年度までに訪問したTower Hamlets区と同様、小地域を基盤とした高齢者支援のパイロット事業(Link Age Plus)終了後も引き続き、自治体独自事業として実施しているLeeds市の取り組みの情報収集を行った。二地域の活動実践から、高齢者が自宅での自立生活を支援する、必要に応じて必要な支援を包括的に受けられるシステムが小地域を基盤として構築されていることを確認した。

この活動は高齢者への支援体制の構築を意図しつつ、地域に住む多様な住民や組織等の主体的活動のきっかけをつくり、近隣ネットワークを有効に機能させ住民が住みやすい地域に変えていくことにもつながっている。このようなシステム構築には、1.サービスアクセスを可能とする窓口の一本化(シンプル化)、2.ニーズの早期把握のためのアウトリーチ手法の活用、3.自治体、非営利民間団体、地域組織、近隣、ボランティアなどの利用できる社会資源の活用とネットワーク化、4.自治体の責任・役割の明確化と非営利民間団体等とのパートナーシップ、といった要素が必要であることを確認した。一方、前年に実施した福祉施設による配食サービスを利用する高齢者の生活実態調査結果の整理、分析を、調査に携わった福祉施設職員と共同で行い報告書をまとめた。この報告書作成過程において、高齢者の生活課題に対する認識の共有化や他のセクションの職員間のコミュニケーションの改善が図られ、サービス提供者同士の協働関係が構築されていくプロセスを見ることができた。高齢者の日々の地域生活を支えるサービスや支援には、細分化したサービス等の提供ではなく、包括的に、また柔軟に対応することが求められるが、現状では、サービス提供者とボランティア、近隣住民との問でコミュニケーションやネットワークが存在しているものの、総括的な役割を誰(どこ)が担うのかは明確でなく、個別的なコミュニケーションやネットワークに限定されている状況だといえる。自治体の責任・役割の明確化とともに、パートナーシップによる取り組み実践が必要だといえる。
マクロファージによる異物認識の分子的基盤に関する研究

本年度は、TLR4と細胞表面上で複合体を形成するために重要なマウスMD-2中のアミノ酸残基と異物認識に重要なマウスMD-2中のアミノ酸残基をアラニンスキャン法により決定した^<4)>。Cys^<37>,Leu^<71>,Leu^<78>,Cys^<95>,Tyr^<102>,Cys^<105>,Glu^<111>,Val^<113>,Ile^<117>,Pro^<118>,Phe^<119>,Glu^<136>,Ile^<138>,Leu^<146>,Cys^<148>,及びThr^<152>をアラニンに変えた変異体を導入した細胞では細胞表面上でTLR4との複合体形成は認められなかった。さらに、これらの変異体を導入した細胞は野生型を導入した細胞とは異なり、LPS及びタキソールに対する刺激に応答しなかった。一方、Tyr^<34>,Tyr^<36>,Gly^<59>,Val^<82>,Ile^<85>,Phe^<126>,Pro^<127>,Gly^<129>,Ile^<153>,Ile^<154>及びHis155をアラニンに変えた変異体を導入した細胞では細胞表面上での,TLR4との複合体形成は正常に認められたが、LPS及びタキソールに対する刺激に応答しなかった。これらの結果から、細胞表面上のTLR4-MD2複合体の形成はLPS及びタキソールに対する刺激伝達に必須であるが、十分ではないことが分かった。さらに、マウスMD-2のコドン番号34,85,101,122,及び153番目のアミノ酸残基はLPS応答性を獲得するためとタキソール応答性を獲得するためとでは部分的に異なることが分かった。これらの知見は受容体構造解析の点からも重要である。
気管支肺胞洗浄液を用いた肺リンパ腫・リンパ増殖性疾患の分子生物学的診断

本検討では、気管支肺胞洗浄液を用いたMALT1遺伝子転座、IgH及びTRBの再構成の同時検出を行い、肺リンパ腫診断における有用性を検討した。肺MALTリンパ腫に対してMALT1遺伝子転座は感度60%、偽陽性率0%であり、IgHの再構成は、肺MALTリンパ腫に対して感度90%、他の肺B細胞性悪性リンパ腫に対して感度75%であった。TRBの再構成おいては、非リンパ腫での陽性例が57%と偽陽性率が非常に高かった。以上より、気管支肺胞洗浄液を用いたMALT1遺伝子転座およびIgHの再構成の同時検出が、肺リンパ腫診断に有用であることが示唆された。本年度はまず、多施設共同研究のための体制づくりをおこなった。福岡大学、長崎大学、大分大学、宮崎大学等に共同研究依頼を行い、各施設にて倫理申請を行っていただいた。その結果、福岡大学、長崎大学、大分大学では承認され、共同研究が開始された。また、産業医科大学でも引き続き症例の集積を継続している。これまで、全体で31例の症例が集積された。31例中、最終診断が肺MALTリンパ腫であったものは10例であった。BALF中のMALT1遺伝子転座は7例で陽性であり、3例では陰性であった。また、そのほかの21例ではMALT1遺伝子転座は陰性で、MALT1遺伝子転座は肺MALTリンパ腫に対して感度良好で、また特異性も非常に高い検査であることが示唆された。IgHの再構成においては、肺MALTリンパ腫10例のうち5例で検査が実施され、5例とも陽性であった。また、肺diffuse large B cellリンパ腫においては、2例で検査が実施され2例とも陽性であった。シェーグレンの肺病変(非リンパ腫)と診断された症例で、1例弱陽性が認められた。そのほか、11例で検査が実施され、いずれも陰性であった。以上より、IgHの再構成は肺MALTリンパ腫や肺diffuse large B cellリンパ腫などの肺B細胞性リンパ腫に対して、非常に感度が高い検査であると考えられた。TRBの再構成おいては、12例で検査が実施され、肺MALTリンパ腫4例のうち2例で陽性、キャッスルマン病と結核で各1例が陽性であった。残念ながらT細胞系リンパ腫の症例がなく、有効性を確認するには不十分である。以上より、順調に検討は進んでいるが、さらに症例を蓄積して検討が必要である。全体で100例程度まで症例を集積したいと考えている。おおむね順調であるが、倫理申請中である施設や最近承認されたばかりの施設もあり、本格的に症例が集積できるのは今年度からと考えている。2015年度に福岡大学、長崎大学、大分大学、宮崎大学等に共同研究依頼を行い、各施設にて倫理申請を行っていただいた。これまで、全体で47例の症例が集積された。47例中、最終診断が肺MALTリンパ腫であったものは15例であった。BALF中のMALT1遺伝子転座は肺MALTリンパ腫に対して60%で陽性であり、40%では陰性であった。また、肺リンパ腫以外の疾患32例ではMALT1遺伝転座は全例で陰性であり、MALT1遺伝子転座は肺MALTリンパ腫に対して感度良好で、また特異性も非常に高い検査であることが示唆された。IgHの再構成においては、肺MALTリンパ腫例のうち90%で陽性であった。また、肺MALTリンパ腫以外のB細胞性リンパ腫においては、66.6%で陽性であった。そのほかの疾患では全例で陰性であった。以上より、IgHの再構成は肺MALTリンパ腫や肺diffuse large B cellリンパ腫などの肺B細胞性リンパ腫に対して、非常に感度および特異度の高い検査であると考えられた。TRBの再構成おいては、T細胞性リンパ腫の診断に有用な可能性があるものの、残念ながらT細胞系リンパ腫の症例がなく、有効性を確認するには不十分である。症例の集積が順調に行われている。しかし、目標の100例にはさらに症例蓄積の努力を要する。肺リンパ腫の診断は、気管支鏡により得られるような小組織検体では診断は容易でない。我々は、すでに気管支肺胞洗浄液を用いたMALT1遺伝子転座の検出が肺MALTリンパ腫の診断に有用であることを報告している(Chest 2012)。しかし、MALT1遺伝子転座陰性のMALTリンパ腫の診断や他のリンパ腫における診断感度の向上は一つの課題であった。本検討では、MALT1遺伝子転座に加えて、IgH、TRBの再構成の同時検出を併せて行い、肺リンパ腫診断における有効性を明らかにすることを目的としている。本研究では多施設共同研究として、産業医科医大学、長崎大学、福岡大学、九州労災病院、小倉記念病院、大分大学、宮崎大学、北九州総合病院で検討を行った。症例の登録数は、それぞれ、25例、9例、6例、3例、3例、3例、2例、2例、1例、であった。最終診断は、B細胞リンパ腫15例(MALTリンパ腫11例、DLBCL

2例、LPL1例、濾胞性リンパ腫1例)、シェーグレン症候群に伴う間質性肺炎4例(非リンパ腫)、MTX関連リンパ増殖性疾患4例、他の疾患27例、除外3例であった。肺MALTリンパ腫に対してMALT1遺伝子転座は感度60%、特異度100%であり、IgHの再構成は、肺MALTリンパ腫に対して感度90%、特異度75.7%、全肺B細胞性悪性リンパ腫に対して感度86.7%、特異度84.3%であった。TRBの再構成おいては、非リンパ腫での陽性例が非常に多く、診断への有効性は低いと考えられる。以上より、気管支肺胞洗浄液を用いたMALT1遺伝子転座およびIgHの再構成の同時検出は、肺リンパ腫診断に有用である。本研究の概要は学会、研究会で発表した。現在、論文化を進めている。本検討では、気管支肺胞洗浄液を用いたMALT1遺伝子転座、IgH及びTRBの再構成の同時検出を行い、肺リンパ腫診断における有用性を検討した。肺MALTリンパ腫に対してMALT1遺伝子転座は感度60%、偽陽性率0%であり、IgHの再構成は、肺MALTリンパ腫に対して感度90%、他の肺B細胞性悪性リンパ腫に対して感度75%であった。TRBの再構成おいては、非リンパ腫での陽性例が57%と偽陽性率が非常に高かった。以上より、気管支肺胞洗浄液を用いたMALT1遺伝子転座およびIgHの再構成の同時検出が、肺リンパ腫診断に有用であることが示唆された。上述のように本格的に症例を集積できるのはこれからであると考えており、合計100例をまずは目標に症例を集積し、各検査の各疾患に対する感度、特異度を検討したい。症例の集積を引き続き行う。また、国内外の学会での発表や論文の作成にも取り組んでいきたい。呼吸器内科学おおむね順調であるが、倫理申請中である施設や最近承認されたばかりの施設もあり、本格的に症例が集積できるのは今年度からと考えており、やや使用計画が遅れている。概ね計画通りに使用できているが、予定した症例数よりやや症例の集積が少ない状態であり、次年度使用額が生じている。本格的症例の集積がすすめば、計画は順調に遂行できるものと考える。主に検体の解析費用(1症例約3-5万円の費用を要する)や学会発表で使用したい。残額に関しては、引き続き症例の集積を行う努力をし、遺伝子転座検出にかかる費用等に使用させていただければと考えている。
ギボシムシゲノムに見出された昆虫性決定遺伝子の機能解析

我々は、ギボシムシ(Saccoglossuskowalevskii)のゲノムに昆虫性決定において中心的な役割を持つ遺伝子として知られるtraの相同遺伝子Sktraを見つけ、その完全長cDNAの塩基配列並びに遺伝子構造を決定した。RT-PCR解析の結果、昆虫のtraとは異なり、Sktraには性特異的なスプライスバリアントが存在しないことが明らかとなった。しかし、Sktraは精巣における発現量が卵巣に比べ9倍以上高かったことから、Sktraがギボシムシの性分化に関与する可能性が示唆された。昆虫培養細胞を利用したsplicingassayの結果、SktraをSktra-2と共発現させるとショウジョウバエdsxミニ遺伝子のsplicingを雌型に誘導出来ることが判明した。以上の結果から、Sktraがショウジョウバエのtraの機能を保持していることが明らかとなった。この研究により、新口動物において昆虫のtra遺伝子と互換性を示す遺伝子を同定するという、世界初の研究成果を収めることに成功した。Sktraの完全長cDNA含むプラスミドDNAを塩基配列解析に供試し、その全長構造を決定した。次にその塩基配列を基に複数のプライマーを設計し、Saccoglossus kowalevskiiの成体の精巣と卵巣由来のcDNAを用いたRT-PCR解析を行った。その結果、Sktraの発現パターンに雌雄差は見られないことが明らかとなった。但しSktraのmRNAの発現レベルをqRT-PCRにより定量した結果、精巣と卵巣の間で有意差が見られたことから、この遺伝子の発現量には雌雄差が見られる可能性が示唆された。次に、Sktraがショウジョウバエのdsxの雌型スプライシングを誘導出来ることを昆虫細胞を利用したin vitroアッセイ系にて評価したところ、Sktra2を共発現させた場合においてさえ雌型のスプライシングが起こらないことがわかった。昆虫に比較的近縁なミジンコから同定されたtraホモログであるDmagTraについても同様の解析を行ったが、やはり雌型dsxのスプライシングは見られなかった。以上の結果は、これらのtraホモログがショウジョウバエのtraとは異なる機能をもつことを示している。さらにこの点について詳細な解析を加えるため、GAL4-UAS発現システムによりSktraもしくはDmagTra cDNAを強制発現させることのできる遺伝子組換えショウジョウバエ系統を複数樹立した。マーカー遺伝子の発現による雌雄を判別でき、なおかつ前進でGAL4をドライブさせることが可能なBsY, Act-GAL4系統も合わせて樹立した。今後はこれら2つの系統を交配し、雄個体においてSktraもしくはDmagTra cDNAを強制発現させることにより、性転換を引き起こすことが出来るか否かを確認する予定である。ギボシムシ(Saccoglossus kowalevskii)のESTデータベース上に見出された、昆虫の性決定遺伝子traに相同性を示す遺伝子(便宜上Sktraと呼ぶ)が、実際にギボシムシ体内で発現していることを確認する目的でRT-PCR解析を行った。Saccoglossuskowalevskiiはアメリカ近海にのみ生息するため入手が困難であると判断し、代用サンプルとして日本産のギボシムシの1種シモダギボシムシ(Balanoglossus simodensis)を供試することにした。なお、シモダギボシムシは宮本教生博士(独立行政法人海洋研究機構)に分与して頂いた。胚子、孵化後5日目の幼生、孵化後1ヶ月の幼生、幼若体由来のcDNAを用いたRT-PCRを行った結果、2種類の転写物の存在を確認することが出来たが、塩基配列解析の結果、これらの遺伝子はSktraとは全く異なる遺伝子であることが明らかとなった。Sktraが供試した組織やステージにおいて発現していない可能性が考えられたため、成体の卵巣と精巣から再度cDNAを合成しなおし、改めてRT-PCRを行ったが特異的増幅産物を得ることは出来なかった。ゲノムDNAを用いてPCRを行った場合も特異的増幅産物を得ることが出来なかったことから、シモダギボシムシはSktraを持たないか、もしくはシモダギボシムシのtraはSktraとは著しく異なる塩基配列からなることが予想された。本研究で着目しているSktra遺伝子はアメリカ原産のギボシムシであるSaccoglossus kowalevskiiのゲノムに見出された遺伝子である。本種はアメリカ近海にのみ生息するため入手が困難であると判断し、代用サンプルとして比較的入手の容易な日本産のギボシムシの1種シモダギボシムシ(Balanoglossus simodensis)を実験に用いることにした。

しかし、上述したようにシモダギボシムシはSktraを持たないか、もしくはシモダギボシムシのtraはSktraとは著しく異なる塩基配列からなるという予想外の研究展開となってしまったたため、当初予定していたSktraの発現プロファイルを確認するという研究目標は、残念ながら現時点でも達成することが出来ていない。シモダギボシムシを供与して下さった宮本教生博士と相談した結果、シモダギボシムシを用いた解析を断念し、アメリカからSaccoglossus kowalevskiiを入手して改めて解析をやり直した方が良いとの結論に至った。そこで、宮本教生博士に紹介して頂いた、Saccoglossus kowalevskiiのESTデータベースや全ゲノム解読プロジェクトのリーダーであるChris Lowe教授(スタンフォード大学)にサンプル分与等の研究協力を要請することにした。この点については既に先方からの了承を得ることが出来ており、Saccoglossus kowalevskiiの成体の精巣と卵巣のサンプリングが終了次第、サンプルを送付して頂く予定になっている。また、あわせてSktraの完全長cDNAを含むプラスミドDNAも分与して頂く予定となっている。今後はこれらのサンプルを用いて解析を行うことにする。Sktraの完全長cDNA含むプラスミドDNAを塩基配列解析に供試し、その全長構造を決定すると共に、その塩基配列を基に複数のプライマーを設計する。一方、Saccoglossus kowalevskiiの成体の精巣と卵巣からtotal RNAを抽出し、cDNAを合成する。以上のプライマーとcDNAを用いてRT-PCRを行い、精巣及び卵巣におけるSktraの発現パターンに雌雄差が見られるか否かを確認する。もし可能であるなら、精巣や卵巣以外の組織やステージ由来のサンプルを分与して頂き、RT-PCR解析に供試することによって、Sktraの発現プロファイルについて出来るだけ精密に調べる。次にSktraの機能解析を行うため、RNAiによるノックダウン実験を実施する。但し、Saccoglossus kowalevskiiにおけるRNAi実験は試行錯誤段階にあるため、必ずしも良好な結果を得られるとは限らないと予想される。そこでキイロショウジョウバエのpseudo-male(遺伝的にはメスであるが、traに変異をもつためオスになる個体)のゲノムにSktraを挿入し、pseudo-maleが正常なメスへと分化するか否かを観察することによってSktraがショウジョウバエのtraと同様、メス決定能をもつか否かを評価することによってSktraが性決定遺伝子として機能的に保存されているか否かを検討する。
イヌの内分泌腫瘍マーカーとしてのIA-2の可能性について

IA-2とそのアナログIA-2βは1型糖尿病の発症に関わる因子で、最近は妊娠に関わる神経内分泌支配にも重要であることが示唆されている。またC.elegansやゼブラフィッシュにも類似のmoleculeが存在するため、広い動物種で保存される生存のために必須の蛋白と予測されている。しかしこれらの働きについて、ヒト以外のほ乳類での情報は少ない。本研究では、広い動物種で保存される神経内分泌の蛋白という性質から、両蛋白のいずれかがイヌの神経内分泌細胞由来の腫瘍のマーカーとなるのではないかと予想し、免疫組織化学的検索とウェスタンブロットによる生化学的検索によって、イヌという動物種の両蛋白の基本的性状、さらに内分泌腫瘍といった疾病に関わる性状について検討した。免疫組織化学的に、IA-2とIA-2βはともに健常イヌの脳の神経網、下垂体前葉細胞、甲状腺傍濾胞細胞、胃腸粘膜クロム親和性細胞、膵の膵島細胞、副腎のクロム親和性細胞などで認められ、IA-2βの染色性はIA-2より強かった。腫瘍組織では下垂体前葉腺腫、髄様癌、胃カルチノイド、膵インスリノーマの腫瘍細胞に認められ、特に膵インスリノーマでIA-2βが強く染色された。脳、下垂体、膵、副腎の各臓器の細胞内分画を抽出し、ウェスタンブロットによる解析を行ったところ、シナプス、核、ミクロゾームにIA-2とIA-2βの特異バンドが検出された。半定量的にIA-2βの発現はIA-2よりも強く、特に下垂体と膵臓では両者のバンドの差は大きかった。イヌもヒトと同様に、両蛋白が内分泌に関わる重要な因子であり、一方でヒトと異なりIA-2βの方が優位に働いているのかもしれない。従ってIA-2βはイヌ内分泌細胞由来腫瘍の有用なマーカーになることが明らかとなった。IA-2とそのアナログIA-2βは1型糖尿病に関わる因子として知られていたが、最近、妊娠など様々な神経内分泌に関わる因子である可能性が示唆されている。またC.elegansやゼブラフィッシュにも類似のmoleculeが存在することから、様々な動物種で広く保存される蛋白と予測されるにも関わらず、ヒト以外のほ乳類の情報は乏しい。これら、神経内分泌細胞での局在の共通性と広い動物種で保存されている性質から、IA-2とIA-2βがイヌの神経内分泌細胞由来の腫瘍のマーカーとなるのではないかと予想し、免疫組織化学的検索、ウェスタンブロットによる生化学的検索を行った。免疫組織化学的に、IA-2とIA-2βはともに健常イヌの脳の神経網、下垂体前葉細胞、甲状腺傍濾胞細胞、胃腸粘膜クロム親和性細胞、膵の膵島細胞、副腎のクロム親和性細胞などで認められた。腫瘍組織では下垂体前葉腺腫、髄様癌、胃カルチノイド、膵インスリノーマの腫瘍細胞に認められた。今後はクロモグラニンA・シナプトフィジンなど神経内分泌細胞由来腫瘍の汎用マーカーとの染色性の比較を行い、IA-2とIA-2βはいずれの腫瘍に有効か検討していく予定である。また脳、下垂体、膵、副腎の各臓器のいくつかの細胞内分画を抽出し、ウェスタンブロットによる解析を行ったところ、シナプス、核、ミクロゾームにIA-2の特異バンドが検出された。IA-2βについては現在検索中である。IA-2の特異バンドがシナプスのみならず、核やミクロゾームにも見られたことは、最近のIn vitroによる研究で明らかとなっている、IA-2とIA-2βの細胞内トランス・ロケーションに関係していると推測される。ここまで得られた結果からIA-2とIA-2βがイヌ内分泌細胞由来の腫瘍の有用なマーカーになる可能性が高いと思われる。

IA-2とそのアナログIA-2βは1型糖尿病の発症に関わる因子で、最近は妊娠に関わる神経内分泌支配にも重要であることが示唆されている。またC. elegansやゼブラフィッシュにも類似のmoleculeが存在するため、広い動物種で保存される生存のために必須の蛋白と予測されている。しかしこれらの働きについて、ヒト以外のほ乳類での情報は少ない。本研究では、広い動物種で保存される神経内分泌の蛋白という性質から、両蛋白のいずれかがイヌの神経内分泌細胞由来の腫瘍のマーカーとなるのではないかと予想し、免疫組織化学的検索とウェスタンブロットによる生化学的検索によって、イヌという動物種の両蛋白の基本的性状、さらに内分泌腫瘍といった疾病に関わる性状について検討した。免疫組織化学的に、IA-2とIA-2βはともに健常イヌの脳の神経網、下垂体前葉細胞、甲状腺傍濾胞細胞、胃腸粘膜クロム親和性細胞、膵の膵島細胞、副腎のクロム親和性細胞などで認められ、IA-2βの染色性はIA-2より強かった。腫瘍組織では下垂体前葉腺腫、髄様癌、胃カルチノイド、膵インスリノーマの腫瘍細胞に認められ、特に膵インスリノーマでIA-2βが強く染色された。脳、下垂体、膵、副腎の各臓器の細胞内分画を抽出し、ウェスタンブロットによる解析を行ったところ、シナプス、核、ミクロゾームにIA-2とIA-2βの特異バンドが検出された。半定量的にIA-2βの発現はIA-2よりも強く、特に下垂体と膵臓では両者のバンドの差は大きかった。イヌもヒトと同様に、両蛋白が内分泌に関わる重要な因子であり、一方でヒトと異なりIA-2βの方が優位に働いているのかもしれない。従ってIA-2βはイヌ内分泌細胞由来腫瘍の有用なマーカーになることが明らかとなった。
発達期の脳と麻酔薬：脳の臨界期を介する神経毒性機序に関する新規統合的アプローチ

<研究の目的>発達期の脳に対する麻酔薬の神経毒性作用に関する研究を行った。麻酔薬は、脳内の興奮と抑制のバランスを変動させることで、鎮静や鎮痛作用、さらに神経毒性作用を持つのではないかという仮説を検証した。<方法>実験動物として雄マウスを用い、全身麻酔薬としてセボフルランとプロポフォールを使用した。脳内の興奮と抑制バランスを変動させるための手法として、抑制性の低下のためには、遺伝子改変マウス(GABA合成酵素欠損マウス)を、また抑制性の増強のためには薬理学的手法(GABAトランスポーター阻害薬)を使用した。鎮静の指標としてLORR (Loss of righting reflex)、鎮痛の指標としてLTWR(Loss of tail-pinch withdrawal reflex)を使用した。別の実験系として、幼弱マウスに一定時間、臨床濃度のセボフルラン暴露を行い、成長後の麻酔薬感受性、不安作用、学習能力への影響を調べた。<結果> GABA受容体アロステリック修飾薬であるプロポフォールは、細胞外GABA濃度の変動によって鎮静作用と鎮痛作用が大きく影響された。一方、細胞外GABA濃度が変動は、セボフルランの鎮静や鎮痛作用への影響は限定的であった。この結果は、同じ全身麻酔薬であっても、細胞外GABA受容体の役割が異なることを示唆している。さらに、麻酔薬暴露の実験では、幼弱期のセボフルラン暴露によって、麻酔薬感受性、不安のレベル、空間認知学習能力には影響が少ないことが判明した。<考察と結論>麻酔薬の神経毒性は、これまでの多くの研究にも関わらず臨床的に結論に至らない重要な課題である。細胞外GABA濃度の変動は、鎮静や鎮痛に重要な役割を担っていることが判明したが、神経毒性分子機序として脳の臨界期にも影響を及ぼすのかという点に関しては今後さらに多くの研究必要である。脳の臨界期とは、神経機能発達の過程で外界刺激に特に敏感な時期と考えられる。臨界期の例として、生後28ー32日齢マウス視覚野の再構築が知られる。生後28日前後に訪れる視覚野の臨界期は、一生に一度だけであり、この時期を決定しているのはGABA抑制系の強さである。これが増強されると臨界期は早期に移動し、逆にGABA系が減弱した状態が継続すると、臨界期は遅れるか、あるいはピークを迎えない場合もある。実際にベンゾジアゼピンは臨界期の大きな影響があることが示されている(Fagiolini and Hensch, Nature 2000; Katagiri et al. Neuron 2007)。では、臨床麻酔使用されるプロポフォールやセボフルランの使用では脳の臨界期は移動するのかどうか、まず第一段階として、GABAニューロンにGFPを導入したマウス(生後1週間)にセボフルランを6時間投与し、4ヵ月後のGABAニューロンの機能、学習・記憶能力への影響を調べた。セボフルランを投与されたマウスでの行動解析から、空間認知能力への影響は極めて少ないが、非学習系不安検査でやや不安度の増強が観察された。再度の麻酔(セボフルランとプロポフォール)への感受性の変化はなかったことから、グルタミン酸やGABAなど主要な神経伝達物質のバランスにも大きな変化を及ぼさなかったことが示唆される。今後は、GABAニューロンの変化を脳スライス標本を使って電気生理学的に解析する。初年度に予定していた、新生マウスにセボフルラン投与の実験は計画とおり進行しているので、ほぼ順調である。今後は、セボフルラン投与後の神経細胞の機能変化に関して、シナプスレベルでの解析を行う。今後は次の電気生理学実験を計画している。

海馬および脊髄におけるGABA電流の解析:スライス標本を作製する(方法はNishikawa & MacIver, J Neuroscience 2000による)。赤外線顕微鏡下に直接細胞の形態を観察しながら、CA1領域の錐体細胞からホールセルパッチを行う。臨界期に麻酔(プロポフォール、セボフルラン)を行ったマウスの4ヶ月成長後、シナプス可塑性の変化と記憶に関する行動実験との関連を精査する。また、臨界期の麻酔後の持続電流(tonic inhibition)変化に関して、GABA-tonic inhibitionを測定し、行動解析における不安はGABA系の変化と関連するかを解析する。電気生理(パッチクランプ)のセットアップのために、麻酔薬をバブリングしながら投与できるチャンバー、また麻酔濃度モニター、さらにマウスを麻酔できる密閉さらた麻酔箱などの購入が必要である。
アストロサイトにおけるc-Metの発現調節機構に関する研究

ラット新生仔の海馬を摘出し、アストロサイトの初代培養系を作成。2回の継代後、10%fetal calf serum添加minimumessential medium中で培養し、aFGF、bFGF、TNF-α、IL-1β、TFG-β1、EGF、HGFにて24時間刺激した後、アストロサイト細胞抽出液および培養上清を調整した。上記の細胞抽出液および培養上清からc-Metの細胞内ドメインに対する抗体を用いたWestern blot法にて、c-Metの各isoformの定量を行った。c-Metは、アストロサイト細胞抽出液中に検出され、aFGF、bFGFにて発現が増強し、HGFで発現が減少した。また、上記の培養アストロサイトを上記の抗c-Met抗体を使用し、免疫染色した。c-Metは培養アストロサイトの細胞質内に免疫染色性が認められた。上記の培養アストロサイトよりRT-PCRおよびNorthern blot法によるc-met遺伝子のmRNA量の定量、リン酸化チロシンに対する抗体を用いた定量的Western blot法によるc-Met自己リン酸化に対するサイトカインの効果の検討、アイソトープで標識したPiを種々のサイトカインと供に培地に加えたアストロサイトの細胞抽出液から抗Ras血清を用いた定量的Western blot法によるGTP-binding Rasの測定と、Ras活性に対する効果の測定などを、引き続き検討する。2回の継代後、10%fetalcalf serum添加minimumessential medium中で培養し、aFGF、bFGF、TNF-α、IL-1β、TGF-β1、EGF、HGFにて24時間刺激した後、アストロサイト細胞抽出液および培養上清を調整した。上記の細胞抽出液および培養上清からc-Metの細胞内ドメインに対する抗体を用いたWestem blot法にて、c-Metの各isoformの定量を行った。上記の培養アストロサイトよりRT-PCRおよびNorthem blot法によるc-mc遺伝子のmRNA量の定量、リン酸化チロシンに対する抗体を用いた定量的Westem blot法によるc-Met自己リン酸化に対するサイトカインの効果の検討、アイソトープで標識したPiを種々のサイトカインと供に培地に加えたアストロサイトの細胞抽出液から抗Ras血清を用いた定量的Westem blot法によるGTP-bindingRasの測定と、Ras活性に対する効果の測定などを、引き続き検討する。
アナフィラキシーショック時の低血圧発現機序における交感神経抑制の役割

アナフィラキシーショックの低血圧発現機序として、化学伝達物質の末梢血管拡張作用、血管透過性亢進に伴う循環血液量減少や心筋抑制等が指摘されているが、その病態生理は必ずしも明かでない。今回の研究目的は、これまで我々が報告したアナフィラキシーショック時の交感神経抑制の、ショック発現における役割を明らかにすることであった。方法:1家兎を用い、犬血清(1ml/kg)の3回皮下投与にて感作し、同一犬血清を溶解後0.5ml/kgを静脈内投与し、アナフィラキシーショックを作成。2調圧神経温存群(10羽)、頚部迷走神経切離群(10羽)、大動脈洞神経および頚動脈洞神経切離群(10羽)、血圧調節神経全切離群(10羽)において検討。3測定項目:体血圧、心拍数、中心静脈圧、気道内圧、腎交感神経活動。その他に、ショック発現前後での血清及び脳脊髄液中の化学伝達物質の濃度を測定。結果:1麻酔下感作家兎において、同ショック発現の確率を上げ、交感神経活動を長時間安定記録できた。2今回の検討でも、同ショックの発現に迷走神経の関与が示唆された。また、同ショックにおける中枢神経系の役割を検討し、以前報告した中枢神経系の関与(信州医誌、37:275-288,1989)を支持する結果であった。一方、本研究の重要な検討項目であった同ショック時の各種化学伝達物質やサイトカイン動態については、結果のばらつき大きく、一定した傾向は得られなかった。この原因として、各動物の感作状態が異なること、または各動物で各化学伝達物質の発現速度が異なること等が考えられ、今後、感作状態の均一化が可能な実験モデルの開発が必要である。尚、現在、我々は、均一無菌抗原であるウシアルブミンにより感作した家兎において、同ショックを作成し、サイトカイン変動につき検討中である。本研究目的は、アナフィラキシ-ショック時の交感神経活動の抑制の役割を明らかにすることである。今年度の実験計画では、麻酔下感作家兎において、本ショック発現の確率を、さらに確実なものとするとともに、同ショック時の交感神経活動を、これまでより、さらに長時間安定して記録することを可能とすることも重要な課題であった。具体的な結果では、圧受容体が正常の動物では、本実験法で惹起されたアナフィラキシ-ショック時には(ウシアルブミンによって感作)、血圧低下に伴い、心拍数および腎臓交感神経活動が低下した。このアナフィラキシ-ショック時の交感神経活動の機序を検討するため、頚部迷走神経切離または頸動脈洞神経及び大動脈神経切離を行い検討した。頚部迷走神経切離を行うと、圧受容体反射が温存されている正常群で見られた、同ショック時の低血圧に際した交感神経抑制が消失した。一方、頸動脈洞神経及び大動脈神経を切離した動物では、同ショック時の交感神経抑制は、さらに著明となりそれらの動物は、短時間内に死亡した。これらの結果は、ウシアルブミンで感作された家兎における、アナフィラキシ-ショック時の交感神経活動低下は、主に迷走神経を介する可能性が示唆された。その際中心静脈圧の著明上昇を伴っており、その迷走神経を介する交感神経抑制には、低圧系圧受容体の興奮に起因する迷走神経求心性入力が延髄の血管運動中枢に対し抑制性に作用したものと推察される。

しかし、調圧神経系をすべて切離した動物においても、同ショック時に、交感神経活動低下が出現したことから、末梢の圧受容体以外を介する機序の存在も示唆された。今回のもう一つの重要な検討項目である同ショック時の各種化学伝達物質やサイトカイン動態については、結果のばらつき大きく、一定した傾向は得られていない。今後、これらの生化学的検査項目を、さらに絞り込み検討する必要がある。アナフィラキシ-ショックの低血圧発現機序として、化学伝達物質の末梢血管拡張作用、血管透過性亢進に伴う循環血液量の減少や心筋抑制等が指摘されているが、その病態生理については不明な点が多い。申請者は、同ショック時において、早期の血圧低下に際しても、交感神経活動の抑制が出現することを報告している。今回の研究目的は、このアナフィラキシ-ショック時の交感神経抑制の、ショック発現における役割を明らかにすることである。今年度の実験では、麻酔下感作家兎において、本ショック発現の確率を下げ、同ショック時の交換神経活動を、これまでより、さらに長時間安定して測定できた。その結果、以前から報告してきたアナフィラキシ-ショック時の交感神経抑制に、中枢への迷走神経求心性入力の増加が重要であることが、再確認できた。来年度の研究のもう一つの重要な検討項目である同ショック時の各種化学伝達物質やサイトカイン動態については、結果のばらつき大きく、一定した傾向は得られていない。来年度も、これらの生化学的検査項目を、さらに絞り込み、動脈中と髄液内IL-6とIL-8等につき検討する必要がある。アナフィラキシーショックの低血圧発現機序として、化学伝達物質の末梢血管拡張作用、血管透過性亢進に伴う循環血液量の減少や心筋抑制等が指摘されているが、その病態生理については不明な点が多い。申請者(信州医誌、37:275-288,1989)とKoyamaら(Am.J.Physiol.,258:R383-387,1990)は、同ショック時において、早期の血圧低下に際しても、交感神経活動の抑制が出現することを報告している。今回の研究目的は、このアナフィラキシーショック時の交感神経抑制の、ショック発現における役割を明らかにすることであった。今年度の実験で、麻酔下感作家兎において、本ショック発現の確率を上げ、同ショック時の交感神経活動を、これまでより、さらに長時間安定して測定できた。その結果、以前から報告してきたアナフィラキシーショック時の交感神経抑制に、中枢への迷走神経求心性入力の増加が重要であることが再確認できた。しかし、同ショック時の各種化学伝達物質やサイトカイン動態については、昨年と同様に結果のばらつき大きく、一定した傾向は得られなかった。今年度の目標であった、動脈中と髄液内IL-6とIL-8の検討についても、有意な変化を捕らえるにいたらなかった。この理由の一つとして、個体の感作後の抗体産成量の差異による可能性もあり、今後同ショックの実験モデルを再考する必要がある。
水系で水素結合により分子認識する人工高分子レセプターの開発

本研究者は、水に不溶のポリ(2-ビニル-4,6-ジアミノ-1,3,5-トリアジン)(PVDAT)が水溶液からチミンとウラシルを選択的に認識・分離することを見出し、これがジアミノトリアジン残基との相補的水素結合の形成に基づくことを分光学的な手法で明らかにした。高分子場が形成する疎水場は水溶液中だけでなくアルコール中でも有効であり、メタノール中でも相補的水素結合形成によってチミンとウラシルを認識・分離した。またメタノール中ではスタッキング相互作用など疎水相互作用が強く働かないため、相補的水素結合の数に基づく基質選択性は水中よりも高かった。さらに高分子場が上記のような不均一系ではなく、均一水溶液系でも有効に疎水場を形成して基質との相補的水素結合が可能となるか検討した。ジアミノトリアジン残基を持つ水溶性高分子は、2-ビニル-4,6-ジアミノ-1,3,5-トリアジンをアクリルアミドと共重合させることで得られた。上記共重合体は、均一水溶中でもチミンを選択的に認識することが、限外ろ過膜を使用した透析実験より判明した。またH-NMR測定より、チミンのイミドプロトンのみが共重合体の存在下で低磁場シフトしたことから、チミンの認識が相補的水素結合に基づいていることを明らかにした。一方対応するモノマーでは、チミンとの相補的水素結合の形成は全く認められなかった。以上より、高分子場が均一水溶液中でも水素結合形成に有効なことが明らかとなった。これまでに、ターゲット分子と相補的な位置に水素結合サイトを持つ人工レセプター分子が数多く合成され、クロロホルムのような非プロトン性溶媒の中で効果的な分子認識能を示すことが報告されてきた。しかし、これらのレセプター分子も、水溶液中では、水分子が水素結合サイトに対して競争阻害を起こすために十分に機能しない。我々は、高分子内に形成される疎水場の活用によるこれらの問題の解決を目指した。その結果、ジアミノトリアジンを側鎖に持つポリ2-ビニル-4,6-ジアミノトリアジン(PVDT)が、水の中でも、相補的な水素結合を効率的に形成し、基質を高選択的に認識することを見出した。すなわち、一連の核酸塩基の中で、ジアミノトリアジンと3本の相補的水素結合を形成するウラシルおよびチミンのみがPVDTにより強く吸着される。それに対して、水素結合サイトが2箇所のシトシンおよび1個所のピリミジンの吸着は極めて低く、ゲストとの相補的水素結合サイトの数との良好な対応が認められた。更に複合体形成に際して、ウラシルのカルボニル基の伸縮振動は10-20cm_<-1>だけ低波数側にシフトしたことから、水素結合生成により基質認識が行われていることが確認できた。高分子場の疎水性を高めることを目的として、PVDTのジアミノトリアジン残基と主鎖の間にベンゼン環を導入した高分子レセプター(PVATS)を合成したところ、シトシンの吸着はPVATSとPVDTの間でほとんど差がなかったのに対してPVATSはチミンをPVDTの倍以上強く吸着した。このことから、水中での相補的水素結合の形成には、認識部位周囲に疎水的な高分子場の形成が重要であることが明らかとなった。
青年期アスペルガー障害の社会的環境に対する適応促進プログラムの開発

アスペルガー障害者は対人関係に困難を感じており,共通した対処策持たない。枠組みのある会話は可能で,モデルやパターンが表出言語の獲得を促進する。関係性の心配や自分の役割・身体の心配に焦点をあてた介入が高等部の子どもをもつ親のメンタルヘルス向上に有効である。きょうだいの幸福感を受領サポートが促進する。児童プログラムでは,様々な社会的行動の質の改善がみられた。実行機能障害に問題があることが示唆された。【研究1】経済的自立のアスペルガー障害成人の困難感を,成人男性3名に半構造化面接を行い,質的分析を行った。『趣味』,『日々の楽しみ』,『感覚過敏』,『ストレス場面』,『ストレス対策』は少なく,ストレスを書き出すという積極的対処も指摘された。『ストレス回避』も少なく,我慢しているか,回避と自覚していない可能性が考えられる。『対人関係における困りごと』では,多くの項目が挙げられたが,友達のなさを寂しいと思わない点,および「友達を作ろうとしない」が「仕事上の話はできる」という係わりが適応によい可能性が考えられる。他に「時間に対する意識」の問題点が抽出された。【研究2】当事者を支える周囲の者を対象に質問紙調査を実施した。具体的には,発達障害を持つ子の親の会2団体の会員81名に対して質問紙調査を実施し,子どもの発達に気になることが生じた時,専門家への援助希求を促進する要因と阻害する要因について明らかにした。次に,特別支援学校高等部に在籍する子どもを持つ保護者130名に対して質問紙調査を実施し,現在や将来の心配事(worry)を測定する尺度を開発し,多変量解析を用いて,保護者の精神的健康との関係を明らかにした。【研究3】認知行動的介入法を中心に,ソーシャルスキルの獲得支援を狙ったグループ介入のためのパイロットプログラムの有効性を検討した.対象は5人のアスペルガー障害が疑われるHAF児で,表情理解や対話のルール,会話を始める/継続する,感情理解などを内包したプログラムを,隔週で10回の介入を行った結果,児童たちはERSSQを用いた評価によって社会スキルを改善させたが,一方CASTによる評価において,こだわりや困難行動などの得点が高くなる例もみられた.今後は,このプログラムを就労支援に活かしていくために,より社会性の向上を狙うべくプログラムの内容の精選と介入の質を高めて行く必要がある。【佐々木和義(早稲田大学)分担】社会的に自立したアスペルガー障害をもつ成人に対して,表出言語をどのように獲得したかに関して,半構造化面接を行った。認知や感情を表出できるようになったのは成人以降であり,作家のエッセイなどを読むこと,あるいは5W1Hの入った文章や作文を書くことによって文章の構成を知り,それを音声表出することや、会話訓練が役立ったが、アニメのセリフは使う状況を誤るので役立たない等の示唆をえた。【中村菜々子(兵庫教育大学)分担】障害児.者を同胞に持つ18歳以上のきょうだいに焦点を当て,同胞に対して持つきょうだい関係認知やサポート提供行動を質的・量的に明らかにし,それらときょうだいの精神的健康との関連を検討した。研究1では7名のきょうだい(平均21.7歳,同胞の障害は高機能自閉症等)への面接調査と先行研究から要素を抽出した。研究2では,福祉施設2施設と自助グループの所属者計40名(平均32.1歳,回収率5.6%)に質問紙調査を実施した。重回帰分析の結果,主観的幸福度にはサポート提供と共に受領が有意な影響を与えており,サポートの授受のバランスがきょうだいの精神的健康に重要であることが示唆された。【堤俊彦(福山大学)分担】次年度に行なうグループ介入プログラムの作成の過程として,パイロットプログラムとしてグループセラピーを行なった。対象児は,発達障害(主に広汎性発達障害)のある小学生5名,及び中学生4名のグループである。対象児は,それぞれが学校での対人関係に関する不安や経験不足,スキル不足のため,友人との関わりに困難を生じていた。プログラムでは,同年代の者とのグループワークを柔軟に行なうことを狙いに,個々の発達および心理状況に応じた相互的やりとりスキルの向上を目指した。現在は,基礎データを分析し,実際の介入に向けてのプログラムの修正段階にある。【研究1】社会的自立アスペルガー成人に半構造化面接を行い,平成21年度(ストレス反応と対処)と平成22年度(表出言語獲得過程)のデータの補充を行った。アニメや辞書などの新たな表出言語獲得モデルとなり,理解には図が主で文が従であるという情報が付け加わった。【研究2】障害児(者)を同胞に持つ18歳以上のきょうだい40名に質問紙調査を実施し,同胞に対して持つ関係性の認知と精神的健康との関連を検討した。同胞の特徴を制御変数とした,関係性認知とGHQ12および主観的幸福感との偏相関分析の結果から,きょうだいの精神的健康に同胞との関係性の認知が影響していることが示された。

また,アスペルガー障害または高機能広汎性発達障害の青年2名(いずれも発達障害のない同胞あり)との心理面接経過を質的に分析し,同胞との関係が肯定的に働く場合(同胞のふるまいを見て自分の行動の参考にするなど)と否定的に働く場合(同胞のように生活できない自分への低い評価など)があることが観察された。【研究3】同年代の仲間との相互交流を不全とするASDの中学生男女4名を対象に,SSTに基づくグループ介入を行った。第一期は,グループ活動になれるための時期として,これまでに経験したことのある「カードゲーム」などを中心にアイスブレイキングを目的に5セッションを行なった。第二期は,ベースライン・アセスメントとして,グループゲームを行なう上での基本的な相互的交流に関する行動レパートリーを確定すべく,5セッション行なった。第三期は,グループ・ボードゲーム導入,相互交流の媒介として「どんじゃらゲーム」と「すごろくトーク」を相互交流の頻度を高めるための介入を行なった。
心筋カリウムチャネルβサブユニットによる交感神経刺激応答の多様性と不整脈発現

心筋カリウムチャネルβサブユニットによる交感神経刺激応答の多様性と不整脈発現について調べるために、ボアを持たないがリン酸化などによる制御を修飾するメカニズムを電気生理学的、細胞生物学的に検討した.平成18年度の研究実績を以下に述べる.(1)前年度の研究により,穿孔パッチ法を用いた手技の改善を行ない、薬物添加前後の値の比較を可能とした.そこで、KCNE3-KCNQ1はcAMPによる制御を受けないにもかかわらず、KCNE2-KCNQ1はcAMPによるKCNQ1リン酸化の制御を受け、電流が増大することを見出した.KCNE2-KCNQ1の制御は、心臓だけでなく特に胃腸管などの分泌系でも重要である。本年度は,KCNE2-KCNQ1チャネルのcAMPによる制御には,KCNQ1のN末端上のSer^<27>のリン酸化が必須であることを同定した.cAMP制御に関与しないKCNE3では,比較的相同性が高いKCNE1とKCNE2の細胞内C末端部位が切断されていることから,次の実験(2)をデザインした.(2)KCNEファミリーによるcAMP制御の分子メカニズムを明らかにするために,KCNE1のC末端の切断変異体がcAMP制御に与える影響を検討したところ,KCNE1 N79からY94の部分が制御に必須であることを見出した.現在,(1)の結果とあわせて,論文執筆中である.2,性ホルモン非ゲノム経路を介した心筋イオンチャネル制御と不整脈発現朝鮮人参の心臓作用を検討した結果,性ホルモン非ゲノム経路を介した心筋イオンチャネル制御(Pharmacol Therapeu 2007)を初めて見出した(Mol Pharmacol 2006).その他,心筋イオンチャネルの制御が不整脈等の病態発現に関与しているメカニズムを検討した(JMCC2006).心筋カリウムチャネルβサブユニツトによる交感神経刺激応答の多様性と不整脈発現について調べるために、ポアを持たないがリン酸化などによる制御を修飾するメカニズムを電気生理学的、細胞生物学的に検討した。平成17年度の研究実績を以下に述べる。1,古典的なβサブユニットによる交感神経刺激応答の多様性(1)交感神経刺激時に特異的に発現する不整脈において、心筋I_<Ks>チャネルのβサブユニットが関与しているメカニズムを総説にまとめた(FPJ 2005)。(2)他のKCNEファミリーにおけるcAMP制御の研究では、今年度は穿孔パッチ法を用いて手技の改善を行ない、薬物添加前後の値の比較を可能とした。よって、KCNE3-KCNQ1はcAMPによる制御を受けないにもかかわらず、KCNE2-KCNQ1はcAMPによるKCNQ1リン酸化の制御を受け、電流が増大することを初めて見出した。KCNE2-KCNQ1の制御は、心臓だけでなく特に胃腸管などの分泌系でも重要である。現在、論文作成中である。2,新たなβサブユニットの役割(1)心筋I_<Ks>チャネル分子複合体の素子であるYotiao蛋白も新たなβサブユニットとして機能することがわかり(PNAS 2004)、本年度はYotiaoのリン酸化がcAMP制御に影響を与えることを見出した(JBC 2005)。3,新たな心筋カリウムチャネル制御と不整脈発現(1)第2のリン酸化といわれるNOによる心筋カリウムチャネル制御が、カルシウムによる制御(Circ Res 20O5)不整脈発現の男女差(Circ 2005)を一部説明することを明らかにした。(2)I_<Ks>チャネル突然変異により不整脈が発現するメカニズムを解析した(ANEC 2005)。本年度は,KCNE2-KCNQ1チャネルのcAMPによる制御には,KCNQ1のN末端上のSer^<27>のリン酸化が必須であることを同定した.cAMP制御に関与しないKCNE3では,比較的相同性が高いKCNE1とKCNE2の細胞内C末端部位が切断されていることから,次の実験(2)をデザインした.(2)KCNEファミリーによるcAMP制御の分子メカニズムを明らかにするために,KCNE1のC末端の切断変異体がcAMP制御に与える影響を検討したところ,KCNE1 N79からY94の部分が制御に必須であることを見出した.現在,(1)の結果とあわせて,論文執筆中である.2,性ホルモン非ゲノム経路を介した心筋イオンチャネル制御と不整脈発現

朝鮮人参の心臓作用を検討した結果,性ホルモン非ゲノム経路を介した心筋イオンチャネル制御(Pharmacol Therapeu 2007)を初めて見出した(Mol Pharmacol 2006).その他,心筋イオンチャネルの制御が不整脈等の病態発現に関与しているメカニズムを検討した(JMCC2006).