hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ESETとG9aによるrunx2を介した骨芽細胞分化制御

本研究はヒストンメチル化酵素であるG9aまたはESETが、骨芽細胞分化に重要な転写因子であるRunx2の機能を調節する仕組みを明らかにする事を目的とした。その結果、G9aとESETがRunx2の転写活性化能を亢進する事、in vitroで作出したG9a欠損細胞ではRunx2発現は変動せず、Runx2制御下にあるosteocalcinの発現が抑制される事、G9aのC端側にRunx2と結合しその転写活性化能亢進に必要な部位が存在する事、が明らかになった。このことから、骨芽細胞分化過程においてG9aがヒストンメチル化酵素の機能に加え、転写制御因子としての機能を持つ可能性が示唆された。これまでに我々は骨格系組織の分化に伴いH3K9ヒストンメチル化酵素の発現が協調的に変化する事を見出した。またそのうちのG9aとESETをノックダウンまたはノックアウトした骨芽細胞では分化ならびに増殖に影響が出るとの予備的結果を得ている。そこで本研究では、G9aとESETによる骨芽細胞分化制御の仕組みの一端を明らかにすることを目指している。すでにこれまでの報告で、G9aとESETはそれぞれ、骨芽細胞特異的転写因子Runx2と結合することが示唆されている。そこでまず、Runx2の転写活性化能に及ぼすG9aとESETの効果をしらべるために、Runx2 promoter-LucやOsteocalcin promoter-Lucを用いたレポーターアッセイを293細胞、10T1/2細胞にて行なった。Runx2はそれぞれのプロモーターに対して活性化することが知られる。そのRunx2の転写活性化能は、G9aまたはESETのco-transfectionによって増強された。さらに、ウエスタンブロットにて外来性Runx2のタンパク量をしらべたところ、G9aのco-transfectionによって増強された。その一方で、G9aとESETを同時にco-transfectionしても相乗効果はみとめられなかった。また、siRNAを用いてG9aをノックダウンしたうえで、同様のレポーターアッセイを行なったが、siRNAのtransfectionによりコントロール(Firefly-Luc)の発現レベルも低下したため、正確な解析結果が得られていない。そこで現在、レポーターへ影響の少ないtransfection条件の検討を進めると共に、flox/floxマウスを用いたノックアウト細胞の作出準備を進めている。さらに転写活性化に及ぼす影響が内在性のRunx2に対しても起こるかどうか調べるために、骨芽細胞様細胞株MC3T3-E1細胞にてG9aまたはESETの過剰発現をおこない、内在性のRunx2およびRunx2ターゲット分子の遺伝子レベル、タンパク質レベルへの影響を詳細にしらべている。本研究では、H3K9ヒストンメチル化酵素であるG9aとESETによる骨芽細胞分化制御の仕組みの一端を明らかにすることを目指している。平成26年度は、293細胞と10T1/2細胞にてRunx2 promoter-LucやOsteocalcin promoter-Lucを用いたレポーターアッセイによって、G9aとESETがRunx2の転写活性化能を増強する可能性を明らかにした。平成27年度は、G9aがRunx2の転写活性化に寄与しているメカニズムを調べるため、G9a flox/floxマウス頭蓋冠由来初代培養骨芽細胞とCre発現アデノウイルスを用いてG9aノックアウト細胞を作出し、まず内在性のRunx2およびOsteocalcinのmRNAレベル、タンパク質レベルの変動を調べた。コントロール細胞に比べG9aノックアウト細胞では、Osteocalcinの発現が減少し、Runx2の発現は変化が認められなかった。ESETについてはflox/floxマウスの作出に時間を要したため、G9aとRunx2について機能解析を先行して進めている。G9aとRunx2が複合体を形成する可能性を調べるため、Flag:G9aとHA:Runx2を293細胞へco-transfectionし、細胞質タンパク質と核内タンパク質を分画調整したところ、transfectionしたHA:Runx2は速やかに核内へ移行するが、Flag:G9aは細胞質と核内の両画分にも存在する事が分かった。そこで、核内タンパク質画分を用いて抗Flag抗体による免疫沈降実験を行なったところ、Flag:G9aとHA:Runx2の結合が認められた。これまでの報告によると、G9aには他の転写制御因子との結合に必要なドメインが複数存在する事が明らかになりつつある。現在、Runx2とG9aの結合に必要な機能ドメイン、さらに転写活性化の増強に必要な機能ドメイン、それぞれを同定するために、複数のG9a部分欠損プラスミドの準備を進めている。Runx2の転写活性化能を増強するG9aはRunx2と複合体を形成している事が明らかにできた。また、頭蓋冠由来初代培養骨芽細胞でG9aノックアウトしたところ、内在性Runx2の発現に変化がなかったが、その制御下にある内在性Osteocalcinの発現に抑制が認められた事から、in vivoでもG9aがRunx2による転写活性化に寄与する可能性が示唆された。Runx2の転写活性化能の増強に必要なG9aのドメインの絞り込みを進めるにあたり、当初はG9aにFlag-tagを付加したコンストラクトを用いて実験を進めていた。

しかし、Runx2がFlag部位と結合している事が示唆される結果が得られたため、6xMyc-tagに変更したコンストラクトを用いたところ、Runx2の転写活性化能の増強に必要なG9aのドメインを絞り込む事ができた。また、内在性のRunx2とG9aの結合が認められた事から、in vivoでもG9aがRunx2と複合体を形成してその転写活性化に寄与する可能性が示唆された。本研究では、H3K9ヒストンメチル化酵素であるG9aとESETによる骨芽細胞分化制御の仕組みの一端を明らかにすることを目指してきた。その結果、Runx2の転写活性化能に影響を及ぼすG9aのドメインはRunx2との結合にも必要である可能性が示唆された。本研究はヒストンメチル化酵素であるG9aまたはESETが、骨芽細胞分化に重要な転写因子であるRunx2の機能を調節する仕組みを明らかにする事を目的とした。その結果、G9aとESETがRunx2の転写活性化能を亢進する事、in vitroで作出したG9a欠損細胞ではRunx2発現は変動せず、Runx2制御下にあるosteocalcinの発現が抑制される事、G9aのC端側にRunx2と結合しその転写活性化能亢進に必要な部位が存在する事、が明らかになった。このことから、骨芽細胞分化過程においてG9aがヒストンメチル化酵素の機能に加え、転写制御因子としての機能を持つ可能性が示唆された。本研究を進める上で、骨芽細胞特異的転写因子Runx2と結合することが示唆されていたG9aとESETが、Runx2の機能に与える効果を明らかにすることは重要であった。現在までに、外来性プラスミドのtransfectionによるレポーターアッセイにおいて、Runx2の転写活性化能をG9aとESETがそれぞれに増強する事が認められた。さらに、G9aのco-transfectionによって外来性Runx2のタンパク量が増強した事から、G9aがRunx2のタンパク質安定化を通じて転写活性化の増強を担っている新しい可能性も示唆された。G9aとRunx2が協調的に転写活性化に寄与するものと考え、さらに詳細な解析を進める。293細胞へのco-transfectionでも認められたG9a:Runx2複合体の形成が、内在性にも認められるか調べるために、マウス頭蓋冠由来初代培養骨芽細胞とマウス頭蓋冠組織から核内タンパク質画分を調整し抗Runx2抗体による免疫沈降実験をおこなう。この際、複合体にESETが含まれるかも同時に調べる。また、ゲノム上へのRunx2結合の網羅的解析に関する論文を参照し、所属研究室の骨芽細胞分化過程で発現する遺伝子の変動パターンと比較することでRunx2の直接のターゲットとなる候補遺伝子を絞り込み、G9aノックアウト細胞にてそれら候補遺伝子の発現変動を調べる。また、クロマチン免疫沈降法を用いてそれらの遺伝子制御領域にRunx2と同時にG9a、ESETが局在するかを調べることで、G9a、ESETとRunx2がin vivoでも協調的に転写制御には働く可能性を調べる。
人体と車両との振動伝達に基づく振動付加による乗り心地と触覚振動による安全性の向上

本研究では車両動力学の見地から,人間にとって不快な振動と不快と感じさせない振動を識別することで,従来からの一方的に不快な振動を抑制するという発想とは逆に,識別した不快と感じさせない振動を積極的に快適性の向上に利用することで,車両乗車時の快適の向上に寄与する振動発生系を提案する.また驚きを与えずに確実に情報を伝達させる振動の特徴を明らかにすることで,積極的に安全性の向上に寄与し,車両の安全を確保する振動発生系を提案する.これを実現するために具体的には人体への振動伝達経路を2つに絞り,その効果を理論と実験により明らかにする.(1)座位/立位における脚部・臀部・腰部・背部を介した振動伝達経路における振動(2)手部・腕部を介した振動伝達経路における振動本年度は以下の検討を行った.(1)望ましい振動特性の検討(2)触覚刺激であるハンドル振動の付加条件の検討研究目的で明示したように座位/立位での振動伝達経路の振動においては,実運用を目指したバイオメカニクスを考慮した評価が必要となる.そのため本実験では本学既設の新幹線用腰掛けを備えた既設の人体・車体連成評価装置を使用し,人体各部位での振動加速度の計測実験を行った.またハンドル振動による触覚刺激としての振動付加条件の検討においては,自動車用運転台を備えた本学に既設のDriving Simulatorを使用した.実験による客観評価を検討するため,こちらの実験においても生体情報計測を用い,特に左右腕部の筋電位計測を実施した.今後,これらの結果を元に,評価手法確立のためのモデルの提案とそれによる検証が今後の課題である.本研究では車両動力学の見地から,人間にとって不快な振動と不快と感じさせない振動を識別することで,従来からの一方的に不快な振動を抑制するという発想とは逆に,識別した不快と感じさせない振動を積極的に快適性の向上に利用することで,車両乗車時の快適の向上に寄与する振動発生系を提案する.また驚きを与えずに確実に情報を伝達させる振動の特徴を明らかにすることで,積極的に安全性の向上に寄与し,車両の安全を確保する振動発生系を提案する.これを実現するために具体的には人体への振動伝達経路を2つに絞り,その効果を理論と実験により明らかにする.(1)座位/立位における脚部・臀部・腰部・背部を介した振動伝達経路における振動(2)手部・腕部を介した振動伝達経路における振動本年度は以下の検討を行った.(1)望ましい振動特性の検討(2)触覚刺激であるハンドル振動の付加条件の検討研究目的で明示したように座位/立位での振動伝達経路の振動においては,実運用を目指したバイオメカニクスを考慮した評価が必要となる.そのため本実験では本学既設の新幹線用腰掛けを備えた既設の人体・車体連成評価装置を使用し,人体各部位での振動加速度の計測実験を行った.またハンドル振動による触覚刺激としての振動付加条件の検討においては,自動車用運転台を備えた本学に既設のDriving Simulatorを使用した.実験による客観評価を検討するため,こちらの実験においても生体情報計測を用い,特に左右腕部の筋電位計測を実施した.今後,これらの結果を元に,評価手法確立のためのモデルの提案とそれによる検証が今後の課題である.
緑地の持つ多様な機能に着目した包括的緑地環境評価

多くの自治体で策定されている「緑の基本計画」をはじめとした諸計画は,あくまで都市全体の方向性をマクロに示したものであり,即地的な保全の方向性については詳細に言及されてはいない。したがって,今後の都市や地域環境の保全や利用の方向性を考える上で,緑地の持つ多様な機能に着目し,その役割や効果を検証する必要があるといえる。そこで本研究では,現地調査やGISデータを活用して,緑の持つ多様な機能地分布の評価も実施し,緑地環境保全の方向性について考察を行った。本年度の実施事項は,(1)市街地及び緑地データの整備,(2)緑地の定量的分析,(3)緑地環境情報データベースのための追加作業,(4)緑地の視覚的効果の基礎的分析である。まず,(1)についてはLandsat TMデータから市街地,緑地などの土地被覆分類図,NDVIを作成した。次に(2)において,市街地区に存在する緑地などの植生活性度を指標化するために「市街地内植生活性度指標=UC-NDVI」を導出した。これにより,今まで単一の属性でしか評価ができなかった集塊度の評価を拡張することに成功した。つまり,市街地の密度や集塊度を評価し,さらにその内部に存在する植生の状況をも考慮できるということである。(3)においては,すでに構築している「緑地環境情報データベース」の拡張を行うべく,今回は,写真画像データベース(約2,800枚)の追加作業と現地調査を実施した。本年度は,特に市街地内を中心に通常の写真撮影にあわせて,360°のパノラマ画像(0-360使用)を撮影し,QuickTime VRによる動画像を作成した。これもGIS上でデータベース化している。これは,画像であるが周囲の状況を一つのコンテンツで把握できるものである。そして,(4)においては(3)で作成したQuickTime VRを用いて,心理評価実験を実施し,市街地内における緑地の心理的評価構造を明らかにした。さらに,パノラマ画像から緑視率を計測し,市街地内における緑視率の推定図をカーネル密度推定法により作成した。これにより,市街地内の遠くに感じる緑や近くに感じる緑の地点や状況を明らかにした。本年度の実施事項は, (1)環境保全機能の評価(前年度からの継続),(2)防災機能の評価,(3)生産機能の評価,(4)レクリエーション機能の評価の4項目である。(1)環境保全機能の評価(前年度からの継続)市街地内植生活性度指標(NB値)の開発を行った。この方法を確立することで,市街地内に残存する緑地や植生の分布を把握することができ,市街地内の環境保全機能の評価を都市全域で実施可能となった。(2)防災機能の評価および(3)生産機能の評価※関連が深いため同時に実施はじめに,市全域における生産系緑地の現地調査を実施した。写真撮影や生産系緑地の空間的分布の特徴を把握することが出来た。次に,緑地の持つ治水,延焼防止などの防災機能,緩衝緑地としての機能などの,既に実施済みの評価結果や浸水被害が想定される箇所(浸水想定ハザードマップ)とオーバーレイすることで,生産機能の評価を総合的に行った。さらに,生産機能の評価については水田や畑地などが持つ多面的な機能(洪水防止,河川流況安定,土砂崩壊防止等)から,それぞれの生産系緑地が持つ特性や,それらの分類および保全の方向性を示すことが出来た。保全の方向性等については,緑の基本計画における各地区においてそれぞれ示している。(4)レクリエーション機能の評価(4)については,本年度は対象敷地・箇所の選定と事前調査を実施し,次年度本調査に向けての課題整理等を行った。レクリエーション機能については,主に公園や各種公共施設等を対象に調査を実施予定である。最終年度は,主に住宅団地における緑地環境評価の調査・分析を中心に研究を実施した。現地調査は,レクリエーション機能である公園,住宅地内の公園に通ずる街路を中心に,住宅前面緑化率,経路緑視率の指標を作成し,評価を実施した。この指標を作成するに当たり,経路上の住宅前面パノラマ画像の作成や経路上の緑視率を算定するためのメッシュ画像の作成を行った。さらに,住宅の緑被率を併せて評価するために,空中写真を活用し,同様にメッシュ画像から,緑被率の算定を行った。くわえて,このような居住環境下,レクリエーション環境下における緑化の方向性を決める緑地協定などの緑化指針を有している団地におけるこれらの内容の精査を行い,どのような項目が含まれているかにより,住宅前面緑化率,経路緑視率,緑被率がどのように差があるか,さらには,通りによりどれくらいの差異が見られるかも明らかにしている。また,住宅内道路の緑化手法等についても整理を行い,適用時の方法・課題などを明らかにするとともに,CGシミュレーションによりどのような方法であれば安全性が確保できかっ快適な視環境が確保できるのかも評価実験を通して明らかにしている。

そして,都市全体の緑地変化の現象を把握するために,数年前に実施した方法と同様に,リモートセンシングデータとGISデータを活用し,土地被覆データ,NDVI,社会的環境要因を指標として,主成分分析・クラスター分析を行った結果,ほぼ同様の結果となっている。この結果を,緑地保全方針を示すものとして取り扱うこととした。以上のように,3カ年にわたり緑の持つ特性から緑地環境評価を行ってきたが,緑の果たす役割は多岐にわたり,都市計画学のみでない,分野横断的な評価も今後重要になってくると考えられる。
メタボロミクスと疫学手法を用いたTh2炎症疾患の抑制因子と発症予測マーカーの同定

アダプター分子TRAF6 (TNF receptor-associated factor 6)は元来NF-kBやMAPキナーゼ経路の活性化に関与し、自然免疫反応の制御において重要な役割を果たすことで知られるが、近年T細胞における機能が注目されている。これまでの我々の解析で、T細胞特異的にTRAF6を欠損させたマウスは、生後しばらくした後に、全身の著明なTh2型炎症を起こすことが判明した(Nat Med 2006)。さらに制御性T細胞(Foxp3発現細胞)特異的にTRAF6を欠損させたマウスを解析すると、T細胞特異的欠損マウスよりも早期から、著明な全身リンパ節腫脹・皮膚炎・関節炎を伴う激烈なTh2型炎症を起こすことが判明し、特にin vivoでの制御性T細胞の安定した生存増殖とTh2抑制能の発揮においてTRAF6が重要な役割を果たすことが示された(PLoS One 2013)。このマウスはSPF(specific pathogen free)環境よりもconventional飼育環境ではさらに早期にTh2型炎症を発症することから、環境暴露因子が何らかの形で発症のtriggerとなっている可能性が示唆される。一方で近年、全身疾病と腸管内細菌叢の多様性の変化の関連が、糞便メタゲノム解析で明らかにされつつある。アレルギー疾病やそれへの影響が示唆されるtriclosan, parabenといった環境化学物質による腸内細菌叢への影響が指摘されている。さらに、Th2惹起外来環境因子としてAnisakispegreffiiによるアニサキス症といった寄生虫の指摘もある。本年は、AnisakispegreffiiをWTに感染させたマウスについて、同週齢の非感染マウスとの腸内細菌叢の相違について、分析した。感染マウス(n=6),非感染マウス(n=7)の2群(メス)について、25週齢時点での腸管内細菌叢の多様性について検討した。太平洋系群のサバにはA. simplex sensu stricto (A. simplex ss)が、日本海系群のサバにはA. pegreffiiが優先的に寄生するといわれるが、今回はA. pegreffiiを使用した。腸内細菌叢の多様性について、alpha-diversity, beta-diversityともに統計学的有意差を認めなかった。既報ではヒトアレルギー疾病や自己免疫疾病患者における細菌叢多様性の変化が指摘されている。アニサキス感染に起因するTh2型アレルギーといわれるアニサキス症劇症化で同様の傾向を仮説設定したが、明らかな有意差は認めなかった。その理由の一つとして今回の測定が、Th2炎症の早期段階をみていることが考えられる。急性期アニサキス劇症の非内視鏡的早期診断を抽出しうる指標の同定を引き続き検討する。全国の企業健保レセプトデータ(400万人規模)を使用し、アニサキス劇症化と有意に関連する因子(他の併存アレルギー疾患、地域性)について分析する。methyl, ethyl, butyl, and propyl paraben等抗菌性化学物質のヒトアレルギー疾患や腸内細菌叢への影響評価疫学調査、化学物質曝露との関連を評価する疫学解析に関する費用を計上する。これまでの解析で、T細胞特異的にTRAF6を欠損させたマウスは、生後しばらくした後に、全身の著明なTh2型炎症を起こすことが判明した(Nat Med 2006)。本年度は、T細胞特異的TRAF6欠損マウス(TRAF6 floxed, CD4Cre)の血液を用いた低分子代謝産物の網羅的なメタボローム解析により、TRAF6シグナル関連で変動する代謝物を同定し、アレルギー疾患発症の予測因子となりうる物質の同定を試みた。8-16週の若齢(Th2炎症発症前)、24-60週の老齢(Th2炎症発症後)cKO/WTマウスの血漿メタボローム解析より、複数の候補因子が探索された。特に若齢老齢ともcKOのみで検出された4物質を中心に、アレルギー発症予測因子としての可能性について同物質の検討を行った。

特に若齢老齢ともcKOのみで検出された4物質を中心に、アレルギー発症予測因子としての可能性について同物質の検討を行った。さらに近年、ヒトアレルギー疾患患者の腸内細菌叢の偏りの可能性が指摘されているため、同cKOマウスを用いた糞便メタゲノム解析を開始した。アダプター分子TRAF6 (TNF receptor-associated factor 6)は元来NF-kBやMAPキナーゼ経路の活性化に関与し、自然免疫反応の制御において重要な役割を果たすことで知られるが、近年T細胞における機能が注目されている。これまでの我々の解析で、T細胞特異的にTRAF6を欠損させたマウスは、生後しばらくした後に、全身の著明なTh2型炎症を起こすことが判明した(Nat Med 2006)。さらに制御性T細胞(Foxp3発現細胞)特異的にTRAF6を欠損させたマウスを解析すると、T細胞特異的欠損マウスよりも早期から、著明な全身リンパ節腫脹・皮膚炎・関節炎を伴う激烈なTh2型炎症を起こすことが判明し、特にin vivoでの制御性T細胞の安定した生存増殖とTh2抑制能の発揮においてTRAF6が重要な役割を果たすことが示された(PLoS One 2013)。このマウスはSPF(specific pathogen free)環境よりもconventional飼育環境ではさらに早期にTh2型炎症を発症することから、環境暴露因子が何らかの形で発症のtriggerとなっている可能性が示唆される。一方で近年、全身疾病と腸管内細菌叢の多様性の変化の関連が、糞便メタゲノム解析で明らかにされつつある。アレルギー疾病やそれへの影響が示唆されるtriclosan, parabenといった環境化学物質による腸内細菌叢への影響も指摘されている。そこで今回我々は、T細胞特異的TRAF6欠損マウス(TRAF6 floxed, CD4Cre)の糞便を用いたメタゲノム解析により、TRAF6シグナル関連による腸管内細菌叢への影響について、8週齢のcKO/WTマウスを使用して検討した。
RNAファージSPによる溶菌機構の解析

A2蛋白質は大腸菌RNAファージ粒子の外殻を構成する蛋白質の一種であるが、SPファージに近縁のQβファージではA2蛋白質の過剰生産が溶菌を引き起こすことが知られている。同蛋白質のSPファージ感染における役割を検討するために、SPファージのA2遺伝子をcDNAクローン化し、プラスミド上で大腸菌のlacプロモーターあるいはλファージのcroプロモーターに連結した。IPTG添加(lacプロモーター)あるいは温度シフト(croプロモータ)によりA2蛋白質を誘導産生すると、いずれの場合も溶菌は生じなかったが、後者の場合には大腸菌の増殖がかなり抑制された。従って、A2蛋白質の過剰生産が細胞増殖を阻害することが示唆された。さらに、SPファージのA2遺伝子を標的としたアンチセンスRNA発現クローンを用いて、ファージ感染過程における同遺伝子の役割を検討した。アンチセンスRNA発現菌ではファージ感染に伴う溶菌は抑制されたが、細胞内での感染性ファージ粒子の形成は阻害されなかった。以上のことから、A2遺伝子が溶菌に関与していることが推察されたが、A2蛋白質が溶菌蛋白質であるとは断定できなかった。しかしながら、SPファージ感染におけるA2蛋白質の二面性が明らかになった。また、細胞外への子ファージ放出時期と溶菌時期が離れていることから、A2蛋白質以外の因子も溶菌に関与している可能性が示唆された。一方、ファージ非感染菌から全RNAを調製し、A2遺伝子の塩基配列をプライマーにして逆転写酵素を用いてPCRを行ったところ、一定長のDNAが増幅された。このDNAをクローニングして塩基配列を解析すると、A2cDNAの配列に類似していた。従って、大腸菌染色体上にもSPファージA2遺伝子に似た構造が存在することが推察された。SPファージRNAのクローン化cDNAからA2蛋白質遺伝子領域を取り出してプラスミドpUC8にクローニングし、菌体内で同蛋白質を誘導合成した。A2蛋白質は外殻蛋白質の一種であるが、Qβファージでは溶菌蛋白質でもあることがわかっている。しかしながら、SPファージ蛋白質の産生は溶菌を引き起こさなかった。また、A2遺伝子の翻訳開始領域に対するアンチセンスRNA、および同遺伝子5'端部のGUC配列に対するリボザイムRNA発現クローンを作製した。SPファージがこれらの菌に感染すると、溶菌は抑制されるにもかかわらず、感染性子ファージ粒子の形成は阻害されなかった。従って、アンチセンスRNAあるいはリボザイムRNAによるA2遺伝子の発現抑制は効率が良くないこと、そしてSPファージA2蛋白質そのものは溶菌蛋白質ではないらしいことが推察された。しかし、溶菌には多量の同蛋白質が必要である可能性は残されている。さらに、外被蛋白質、A1蛋白質および複製酵素蛋白質についても、溶菌効果に見られなかった。以上の結果から、ファージA2遺伝子に類似した遺伝子構造が宿主細胞にも存在し、溶菌に関与している可能性が示唆された。A2蛋白質は大腸菌RNAファージ粒子の外殻を構成する蛋白質の一種であるが、SPファージに近縁のQbetaファージではA2蛋白質の過剰生産が溶菌を引き起こすことが知られている。同蛋白質のSPファージ感染における役割を検討するために、SPファージのA2遺伝子をcDNAクローン化し、プラスミド上で大腸菌のlacプロモーターあるいはlambdaファージのcroプロモータに連結した。IPTG添加(lacプロモーター)あるいは温度シフト(croプロモーター)によりA2蛋白質を誘導産生すると、いずれの場合も溶菌は生じなかったが、後者のばあい場合には大腸菌の増殖がかなり抑制された。

従って、A2蛋白質の過剰生産が細胞増殖を阻害することが示唆された。さらに、SPファージのA2遺伝子を標的としたアンチセンスRNA発現クローンを用いて、ファージ感染過程における同遺伝子の役割を検討した。アンチセンスRNA発現菌ではファージ感染に伴う溶菌は抑制されたが、細胞内での感染性ファージ粒子の形成は阻害されなかった。以上のことから、A2遺伝子が溶菌に関与していることが推察されたが、A2蛋白質が溶菌蛋白質であるとは断定できなかった。しかしながら、SPファージ感染におけるA2蛋白質の二面性が明らかになった。また、細胞外への子ファージ放出時期と溶菌時期が離れていることから、A2蛋白質以外の因子も溶菌に関与している可能性が示唆された。一方、ファージ非感染菌から全RNAを調製し、A2遺伝子の塩基配列をプライマーにして逆転写酵素を用いてPCRを行ったところ、一定長のDNAが増幅された。このDNAをクローニングして塩基配列を解析すると、A2cDNAの配列に類似していた。従って、大腸菌染色体上にもSPファージA2遺伝子に似た構造が存在することが推察された。
作物生産における下層土の役割-下層土のエダホロジー-に関する研究

1.黒ボク畑土壌における作物生育に対する下層土の役割下層土からの養分供給によって、エンバク(夏作物)およびオオムギ(冬作物)の子実収量および窒素吸収量は非アロフェン質黒ボク土で1.11.3倍および1.72.0倍に増加し、アロフェン質黒ぼく土ではさらに高く、2.12.4倍および2.93.3倍に増加した。全窒素吸収量における下層土での吸収割合および施肥窒素吸収量における下層土での吸収割合は、非アロフェン質黒ぼく土では4249%および2261%であり、アロフェン質黒ボク土ではさらに高く、6573%および6081%であった。このことから、下層土は作土から溶脱した施肥および土壌窒素の吸収の場として重要な役割を果たしており、その寄与率には下層土のコロイド組成が強く影響することが明らかとなった。下層土への根張りが制限される場合の省力的対策として、肥効調節型肥料(例えば、ポリオレフィン被覆尿素)を全量基肥施用することが効果的であり、慣行施肥(硫安の追肥体系)に比べて1.41.5倍の子実収量が得られた。耕起栽培と同様に、黒ボク土におけるデントコーンの不耕起栽培においても、下層土の養分吸収の場としての重要性が、養分吸収活性の高さと軟X線撮影による根跡構造が多いことから明らかとなった。2.沖積水田土壌のアンモニウムイオンの保持量と水稲生産性水田土壌におけるアンモニウムイオンの保持量は下層土への窒素溶脱に強く関わる要因である。それは一定負荷電量にほぼ決定され、主要粘土が2:12:1:1型中間種鉱物である土壌より、膨張性2:1型鉱物である土壌で大きな値を示し、施肥窒素の利用率や水稲の収量は後者で高いことが明らかとなった。一定負荷電量の少ない砂質もしくは中間種鉱物を主体とする水田土壌では、水稲生育は下層土の養分供給能により強く依存することが明らかとなった。本年度の研究により、我が国の黒ボク畑における下層土の作物生産における役割に関して、以下のような研究成果を得た。1.我が国の黒ボク土における下層土の層分供給能の評価全国の都道府県の「環境基礎調査定点土壌」より黒ボク土(385土壌)を抽出し、有効土層60cmにおける下層45cmの養分量の割合から下層土の養分供給能を評価した。4つのコロイド組成の異なる黒ボク土(アロフェンの有無と腐植の多少で区分)の平均値は、全窒素含量:69-72%、可給態リン酸含量:38-60%、可給態カリ含量:68-71%であった。また、可給態微量要素含量(Cu、Zn、Mn、Co)における下層土の養分量割合は、酸性・中性岩質由来土壌で40-72%、塩基性岩質由来土壌で50-75%であった。2.コロイド組成の異なる4つの黒ボク畑・精密圃場における作物生育と下層土の役割の評価遮根シートで下層土への根伸長を制限した作土区(厚さ15cm)と作土+下層土区(厚さ60cm)におけるエンバクの生育・収量および窒素吸収量を比較した。施肥は全量基肥(N10kg/10a)とした。

作土区に対して、下層土区の乾物収量および窒素吸収量は非アロフェン質黒ボク土で1.11.4倍および1.12.0倍であり、アロフェン質黒ボク土では2.42.7倍および3.33.8倍であった。全窒素吸収量における下層土での吸収(両区の窒素吸収量の差)割合および施肥窒素吸収量における下層土での吸収割合は、非アロフェン質黒ボク土では1649%および2461%であり、アロンフェン質黒ボク土では7073%および8081%であった。特に、酸性および物理性において下層土に根が伸長しやすいアロフェン質黒ボク土においては、下層土は作土から溶脱した施肥および土壌窒素の吸収の場として非常に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。以上の本年度の結果より、黒ボク畑の下層土は養分供給および溶脱養分の吸収の場として重要な役割を担っており、その生産力に対する貢献は土壌のコロイド組成のよって影響されることが明らかとなった。本年度の研究により、わが国の主要土壌である沖積水田土壌および黒ボク畑土壌における下層土の作物生産における役割として、溶脱養分の吸収の場として重要であり、さらに、下層土の作物生産力に対する寄与は土壌のコロイド組成によって大きく影響されることが明らかになった。1.沖積水田土壌のアンモニウムイオンの保持量と水稲生産性水田土壌におけるアンモニウムイオンの保持量は下層土への窒素溶脱に強く関わる要因である.それは一定負荷電量にほぼ決定され,主要粘土が2:12:1:1型中間種鉱物である土壌より,膨張性2:1型鉱物である土壌で大きな値を示し,施肥窒素の利用率や水稲の収量は後者で高いことが明らかになった.一定負荷電量の少ない砂質もしくは中間種鉱物を主体とする水田土壌では,水稲生育は下層土の養分供給能により強く依存すると考えられた.2.コロイド組成の異なる黒ボク畑土壌における作物生育と下層土の役割遮根シートで下層土への根伸長を制限した作土区(厚さ15cm)と作土+下層土(厚さ60cm)におけるオオムギの生育・収量および窒素呼吸量を比較した。作土区に対して、下層土区の子実収量および窒素呼吸量は非アロフェン質黒ボク土1.3倍および1.7倍であり、アロフェン質黒ボク土では1.82.4倍および2.82.9倍であった。全窒素呼吸量における下層土での呼吸割合および施肥窒素呼吸量における下層土での呼吸割合は、非アロフェン質黒ボク土では42%および22%であり、アロフェン質黒ボク土では6465%および5760%であった。このことから,下層土は作土から溶脱した施肥および土壌窒素の吸収の場として重要な役割を果たしており,その寄与率には下層土のコロイド組成が強く影響することが明らかとなった.下層土への根張りが制限される場合の省力的対策として,肥効調節型肥料(例えば、ポリオレフィン被覆尿素)を全量基肥施用することが効果的であり,慣行施肥(硫安の追肥体系)に比べて1.41.5倍の子実収量が得られることが明らかとなった.
流域圏の炭素動態計測-リモートセンシングとGISによる生態系機能解析-

〈目的〉地球温暖化を抑制するための京都議定書策定に伴い、植生による温暖化ガスの吸収速度が問題になっている。小面積での計測実験結果は数多く報告されているが、広域的評価の手法はいまだ確立されていない。そこで、岐阜県高山市を流れる大八賀川小流域(約60km2)を対象として、リモートセンシングと地理情報システム(GIS)を使った広域的な炭素動態を計測する手法を確立する。〈手法〉これを行う上で、最初に必要な情報は正確な土地被覆状態である。地上部については各種人工衛星画像を用いて、植生分布やバイオマス、葉面積の季節変動(フェノロジー)を解析している。これを炭素量に換算する。一方、土壌圏の炭素量は土地被覆(主に植生)の違いに基づく貯留炭素量の違いを実測によって明らかにし、これを類型化して流域圏の土壌圏に含まれる炭素量を推算した。〈結果〉(1)日本が2006年1月に打ち上げたALOS/AVNIR(空間分解能10m)、QuickBird(同2.4m)など数種衛星画像を用いた多段階画像解析によって、対象流域圏の詳細土地被覆図を作成した。(2)森林フェノロジーの季節変化を流域標高別に把握するため、高頻度観測衛星によるTerra/MODIS(同250m)の画像解析を行うとともに、地上でムービーカメラやデジタルカメラを使って衛星情報を検証する手法を開発した。(3)土壌圏の炭素貯留量を土地被覆、傾斜角度、傾斜方位によって推定する手法を提示し、大八賀川小流域の土壌圏炭素マップを作成した。(4)農地における作物や耕作放棄地の植物現存量や葉面積の季節変化を実測するとともに、衛星植生情報との関連を解析した。〈今後の予定〉成果の公表に努める。<目的>地球温暖化にともない、温暖化ガスの植生による吸収速度が問題になっている。小面積での計測実験の結果は数多く報告されているが、広域的評価の手法はいまだ確立されていない。<手法>これを行う上で、最初に必要な情報は正確な土地被覆状態である。地上部については各種人工衛星画像を用いて、植生やバイオマスの分布とその季節変動(フェノロジー)を解析している。類型化の要素として、噂土地傾斜角度と傾斜方位を国土数値情報から導入している。<結果>(1)日本が2006年1月に打ち上げたALOS衛星画像(空間分解能10m)など数種衛星画像を用いた多段階画像解析によって、流域圏の詳細な土地被覆図を作成した。(2)流域単位のフェノロジー変化を把握するため、高頻度衛星によるMODIS画像解析を行うとともに、地上でムービーカメラやデジタルカメラを使って検証する手法を開発した。<今後の予定>地上部のバイオマスを推定し、炭素量に置換える部分がまだ完成していない。また土壌圏炭素マップの検証を行なっていない。これらについての研究を進める。<成果の公表>上記内容のうち、植生フェノロジー解析に関する論文を2007年5月にアメリカ・フロリダ州で行なわれるASPRS(米国リモセン学会)において発表する。また、多種衛星複合画像を使った土地被覆分類の解析結果をJournal of Applied Remote Sensing誌に投稿中である。

(4)農地における作物や耕作放棄地の植物現存量や葉面積の季節変化を実測するとともに、衛星植生情報との関連を解析した。〈今後の予定〉成果の公表に努める。
酸化触媒能を有するマンガン酸化物クラスターの合成

(tacn^<(')>)MCl(M=Mn,Rh,tacn':tacnの窒素原子上にメチル、エチル、ヒドロキシベンジルなどの置換基を導入したもの)とモリブデン酸化物イオン、[Bu^n_4N]_2[Mo_2O_7]あるいはNa_2MoO_4との反応により極めてユニークな立方体構造を有する(tacn)Mn-Mo系クラスター[{(tacn)Mn}_2Mo_4O_<16>]・4H_2Oおよび三重架橋型構造を持つ(tacn')Rh-Mo系クラスター[(tacn')_2Rh_2(μ-MoO_4)_3]・17H_2Oの合成に成功した。そしてX線結晶解析を行い、その構造を明らかにした。これらのクラスターが染料(ピナシアノール:不飽和炭化水素化合物の一種)の酸化的脱色を触媒することを見いだした。一方、Cp(cyclopentadienyl)系配位子をもつ酸化物クラスターとして[(Cp^*Rh)WO_4]_4クラスターを合成し、X線結晶解析によりその構造を同定した。このクラスターには二つの幾何異性体、windmill型(1)とtriple cubane型(2)、があることを見いだした。このクラスターが生成する機構をESI-マススペクトロメーター(混合とスプレイをミリセカンドで行うことができる手作りのスプレイヤーを有している)を用いて明らかにした。タングステン酸化物クラスター[(Cp^*Rh)WO_4]_4が生成する反応(アセトニトリル中、[Cp^*RhCl(μ-Cl)]_2と[n-Bu_4N]_2WO_4との1:2反応)を、開発した短寿命反応化学種測定用スプレイヤーを用いて、ESI-MSで追跡した。反応初期段階の化学種、[Cp^*RhClWO_4](1im)及び[Cp^*RhW_2O_7(OH)(CH_3CN)_3]^-の特徴的な同位体パターンを得た。1imはおよそ20ms以内に生成する反応活性なイオンで、金属酸素酸イオンが有機金属基によって縮合する第一段階の化学種である。このを基に1及び2が[(Cp^*Rh)_2W_<2->O_8(MeCN)_4]の組成から成るラダー骨格を経由して生成するメカニズムを提案した。近年、メタロセンやその類似化合物などが多様な触媒能をもつことが知られるようになり、その触媒能の開発がなされている。このメタロセン系で用いられているCp(cyclopentadienyl)配位子をtacn(1,4,7-triazacyclononane)配位子に変えることで、Cp錯体とは異なった触媒能を持つtacn錯体が合成できるのではないかと期待して本研究を行った。tacn及びその誘導体(tacn':窒素原子上にメチル、エチル、ヒドロキシベンジルなどの置換基を導入したもの)を有する(tacn^<(')>)M^<n+>ユニットとポリ酸イオンとを反応させることで金属酸化物複合体を合成した。

(tacn^<(')>)MCl_3(M=Mn,Rh)とモリブデン酸化物イオン、[Bu^n_4N]_2[Mo_2O_7]あるいはNa_2MoO_4との反応により極めてユニークな立方体構造を有する(tacn)Mn-Mo系クラスター[{(tacn)Mn}_2MO_4O_<16>]・4H_2Oおよび三重架橋型構造を持つ(tacn')Rh-Mo系クラスター[(tacn')_2Rh_2(μ-MoO_4)_3]・17H_2Oの合成に成功した。そしてX線結晶解析を行い、その構造を明らかにした。また予備的な研究で、これらのクラスターが染料(ピナシアノール)を酸化的脱色をすることを見いだし、不飽和炭化水素の酸化にたいする触媒能を持つことが分かった。昨年度は、立方体構造を有する(tacn)Mn-Mo系酸化物クラスター[{(tacn)Mn}_2-Mo_4O_<16>]・4H_2Oの合成に成功した。そしてこのクラスターが不飽和炭化水素の酸化を触媒することを見いだした。しかしこのクラスターは、溶解度と試薬に対する安定性が悪く、触媒として改良すべき点があることも判明した。今年度は、その点を考慮して、酸化物クラスターとしてCP^*Rh-W系酸化物クラスター合成を行い、[(Cp^*Rh)WO_4】_4クラスターを得た。このクラスターには二つの幾何異性体、windmill型(1)とtriple cubane型(2)、があることを見いだした。このクラスターが生成する機構をESI-マススペクトロメーター(混合とスプレイをミリセカンドで行うことができる手作りのスプレイヤーを有している)を用いて明らかにした。タングステン酸化物クラスター[(Cp^*Rh)WO_4]_4が生成する反応(アセトニトリル中、[Cp^*RhCl(μ-Cl)]_2と[n-Bu_4N]_2WO_4とのl:2反応)を開発した短寿命反応化学種測定用スプレイヤーを用いて、高分解能磁場型ESI-MSで追跡した。反応初期段階の化学種、[Cp^*RhClWO_4]-(1im)及び[Cp^*RhW_2O_7(OH)(CH_3CN)_3]-の特徴的な同位体パターンを得た。1imはおよそ20ms以内に生成する反応活性なイオンで、金属酸素酸イオンが有機金属基によって縮合する第一段階の化学種である。この結果を基に、1及び2が[(Cp^*Rh)_2W_2O_8(MeCN)_4]の組成から成るラダー骨格を経由して生成するメカニズムを提案した。
阻血による骨格筋の傷害程度判定に関する実験的研究

1.無酸素傷害に関する実験切断後の切断肢内骨格筋のアデニンヌクレオチド代謝産物の経時的変化、および切断肢保存における温度による違いを検討した結果、inosine、hypoxanthine、xanthineおよび尿酸値は切断後経時的に増加し、室温保存群(18°C)と冷却保存群(4°C)との間では切断早期から有意差が認められ、室温保存群は冷却保存群より高値を示していた。従って、inosine、hypoxanthine、xanthineおよび尿酸値は阻血により傷害を受けた骨格筋の代謝状態を極めてよく反映していることが判明した。2.再潅流傷害に関する実験切断肢血流再開後の切断肢内骨格筋のinosine、hypoxanthine、xanthineおよび尿酸値の経時的変化を検討した結果、阻血2時間群ではinosine、hypoxanthine、xanthineおよび尿酸値は切断直後の値に戻るものの、阻血4時間群では切断直後の値に回復せず、また、阻血3時間群でもxanthine値は切断直後の値に戻らなかった。このことは、骨格筋は阻血2時間では一時的な組織傷害をきたすものの、血流を再開させると回復し、阻血3時間では不可逆的な組織傷害が始まり、阻血4時間では完全な不可逆的組織傷害が生じたことを示すものであり、これらの指標は阻血による骨格筋の傷害を知るのに有用であることが判明した。[研究目的]阻血による組織傷害は1)無酸素傷害と2)血流再開後の再潅流傷害とに分けられるが,比較的中枢での切断肢(moijor amputation)を再接着する場合,阻血による切断肢内骨格筋の傷害程度を術前に知ることが出来れば,手術適応を決定し,成績を予測することが可能となる。組織は阻血状態におかれるとエネルギー代謝障害をおこすことに着目し,以下の実験を行なった。[実験方法]無酸素傷害に関する実験:犬の両側,上腕を中央部で切断,その保存方法の違いにより18°Cで保存した室温保存群と4°Cで保存した冷却保存群の2群を作製し,切断肢の尺側手根屈筋から切断直後,切断後1,2,3,5,8,12時間の計7回にわたって検体を採取し,アデニンヌクレオチド代謝産物(inosine,hypoxantine,xanthine,尿酸)値を高速液体クロマトグラフィー法を用いて測定した。[結果]inosine,hypoxanthine,xanthineおよび尿酸値は切断後経時的に増加し,室温保存群と冷却保存群との間には切断早期から有意差が認められ,室温保存群は冷却保存群より高値を示していた。切断後のアデニンヌクレオチド代謝産物の経時的変化,および保存する温度による違いを検討した結果,inosine hypoxanthine,xanthineおよび尿酸値は切断後経時的に増加し,室温保存群と冷却保存群との間では切断後早期から有意差が認められ,室温保存群は冷却保存群より高値を示していた。従って,inosine hypoxanthine,xanthineおよび尿酸値は阻血により傷害を受けた骨格筋の代謝状態を極めてよく反映していることが判明した。血流再開後の切断肢内骨格筋の阻血によるinosine hypoxanthine,xanthineおよび尿酸値の変化を検討したところ,阻血1時間群ではinosine hypoxanthine,xanthineおよび尿酸値は血流再開後,切断直後の値に戻るものの,阻血5時間群では切断直後の値に回復せず,また,阻血3時間群でもxanthine値は切断直後の値に戻らなかった。このことは,骨格筋は阻血1時間では一時的な組織傷害をきたすものの,血流を再開させると回復し,阻血3時間では不可逆的な組織変化が始まり,阻血5時間では完全な不可逆的変化が生じたことを示すものであり,これらの示標は阻血による骨格筋の傷害を知るのに有用であることが判明した。再灌流傷害に関する実験方法)犬の上腕を上腕動・静脈を血管柄として温存し中央部で切断。直ちに血管柄をクリッピングし、その1、2、3、4、5時間後にクリップを解除する。

阻血時間の違いにより、それぞれ阻血1時間群、阻血2時間群、阻血3時間群、阻血4時間群、阻血5時間群とし、切断直後、クリッピング解除直前、解除後1、2、3、4、時間の6回、尺側手根屈筋から検体を採取し、inosine、hypoxanthine、xanthineおよび尿酸値を高速液体クロマトグラフィー法を用いて測定し、これらが阻血後の再灌流傷害の程度を示す指標となるか否かを検討する。結果)血流再開後のinosine、hypoxanthine、xanthineおよび尿酸値は阻血時間の長さにより血流再開後切断直後の値に戻る場合も戻らない場合もあり、これらの値の絶対値をもって阻血による再灌流傷害の程度を示す指標とすることは出来ない。しかし、阻血2時間群ではinosine、hypoxanthine、xanthineおよび尿酸値は切断直後の値に戻るものの、阻血4時間群では切断直後の値に戻らず、また、阻血3時間でもxanthine値は切断直後の値に戻らなかったことは、骨格筋は阻血2時間では一時的な組織傷害をきたすものの、血流を再開させると回復し、阻血3時間では不可逆的な組織傷害が始まり、阻血4時間では完全な不可逆的組織傷害が生じたことを示すものであり、これらの値が血流再開後、術前の値に戻るか否かにより組織に不可逆的傷害が生じたか否かを判定することが出来るものと言える。
家族への心理教育がうつ病の予後を改善させる効果の検討

うつ病の家族心理教育の対象者に声掛けをして、研究へのエントリーを依頼している。無作為割付けは,家族の感情表出とエントリー時のHAM-Dの重症度の階層別に封筒法を用いて実施している。評価は以下の項目を実施している。心理教育を実施する群は、約2週間間隔で、1回目:うつ病の原因について、2回目:うつ病の生野上について、3回目:うつ病の治療について、4回目:うつ病の経過・予後について、5回目:復職などの社会復帰について、6回目:総括・まとめ、として6回参加を標準としている。各セッションは、上記テーマに沿い、自主作成したビデオ教材の視聴、家族同士の問題解決を中心としたミーティングを行い、全部で約1時間から1時間30分程度で実施している。心理教育を行わない対照群は、9ヶ月後に上記と同じ内容で心理教育を実施している。また、作成した視覚教材とテキストは、うつ病の心理教育を実施している施設に無料で配布し、本研究の成果の一部を還元するよう心がけている。エントリーには、患者本人の同意、家族の同意、そして、家族に心理教育(計6回)に参加していただく必要があり、エントリーのハードルは高いようである。一方、心理教育を実施するためのコツなどのノウハウに関しては、精神科領域の専門職にとって関心がある領域であるため、日本精神神経学会学会やうつ病学会でのシンポジウム(2回)や論文(1編)、書籍(現在編集作業中)を通じて専門職に対して私たちの経験を還元し好評を得ている。対象者の同意が得られにくい状況が続いている。対象者が患者の家族が対象であるため、仕事の都合や家庭の都合で心理教育を受け入れていただく余裕がないことが多い様子のため。地道にエントリーの依頼を継続していく。さらに、結果などについては触れることはできないが、研究の過程で得られた心理教育実施のためのノウハウは、論文、シンポジウムなどを通じて社会に還元し始めており、今後も心理教育の普及に向けた活動を継続していく予定であるし、社会の需要もある。今回の研究は予後の改善に関するものであるので、うつ病の心理教育が再発防止に有効に働くために重要なポイントとしてうつ病の患者さんや家族が疾患の理解を深めることである。現在,さまざまな媒体でうつ病に関する情報があふれている。したがって,容易に患者さんやその家族はうつ病の情報を手に入れることが出来るが,正確性の問題や一側面だけ(薬物の副作用など)が強調されているため,不用意に患者さんや家族が不安になることが見うけられる。また,医療者が説明をする場合においても,使い勝手の良い教材は意外に少ない。そこで,我々はうつ病の心理教育の場面で使用が出来る教材を開発した。その際,注意した点は,1.必要な情報を簡潔にまとめること,2.その際に視覚的にわかりやすい媒体を使用すること,の2点である。抑うつ状態では,認知機能や集中力が低下しているケースが多い。そのため,簡潔な情報が視覚的に分かりやすい方法で入ってくることはとても重要である。以上のようなことを配慮し,我々は心理教育で用いるためのDVDとテキストを完成させた。心理教育は6回のセッションから構成され,第0章はじめに(DVD3分10秒),第1章:うつ病の原因と症状(DVD7分50秒),第2章:うつ病の薬物療法と経過(DVD10分),第3章:心理・社会的療法など(DVD6分),第4章:回復された方からのメッセージ(DVD13分30秒),第5章:ご家族へのメッセージとなっている。特に,第5章ではうつ病での重要な問題として,自殺の問題にもきちんと言及した。テキストは20ページにまとめ,DVDでは脳内でのSSRIの働く仕組みなどを動画でわかりやすく説明したり,実際にうつ病から回復された患者さんに経験談を語っていただくなど工夫を随所に行った。DVDとテキストは連動して活用できるよう配慮した。実際の心理教育へのエントリーの準備が整えることが出来た。研究対象者の募集及びエントリーを開始した。無作為割付けは,家族の感情表出とエントリー時のGRID-HAMDの重症度の階層別に封筒法を用いて実施している。評価は以下のように実施する。心理教育を実施する群は,約2週間間隔で,1回目:うつ病の原因について,2回目:うつ病の症状について,3回目:うつ病の治療について,4回目:うつ病の経過,予後について,5回目:復職などの社会復帰について,6回目:総括・まとめの家族心理教育を実施する。各セッションは,上記のテーマに沿い,30分程度の視覚教材を併用したうつ病の情報提供を行い,その後,家族同士が集まり,問題解決を中心としたミーティングを約1時間開催している。心理教育・家族教室ネットワーク全国集会を利用して,うつ病の心理教育の立ち上げ方,維持の仕方などの成果を発表した。また,心理教育で使用する視覚教材を多くの心理教育で使用できるように,配布する方法を構築し,一定の条件を満たせば配布を開始した。多くの医療機関からの希望があり配布し,本研究の成果の一部を還元することも行っている。準備に時間を要したが,その後は順調にエントリーを開始しており,遅延を取り戻せるよう努力している。研究対象者の募集及びエントリーを引き続き行っている。評価は以下のように行っている。

心理教育を実施する群は,約2週間間隔で,1回目:うつ病の原因について,2回目:うつ病の生野上について,3回目:うつ病の治療について,4回目:うつ病の経過,予後について,5回目:復職などの社会復帰について,6回目:総括・まとめ,で行っている。各セッションは,上記テーマに沿い,ビデオ視聴(自作映像),家族同士の問題解決を中心としたミーティングを行い,全部で約1時間から1時間30分程度で実施している。心理教育を行わない対照群は,9ヶ月後に上記の心理教育を実施している。また,作成した視覚教材とテキストは,うつ病の心理教育を実施している施設に無料で配布し,本研究の成果の一部を還元するよう心がけている。また,視覚教材にはうつ病を経験した人に出演してもらったため,プライバシー保護のため視覚教材の一般への配布は行っていない。テキストは自由に配布を行っている。上記の成果などは,心理教育・家族教室ネットワークの全国集会などを通じて情報提供を行った。高知大学医学部附属病院,一陽病院において研究参加者を募集している。また,家族への心理教育も行い,精神症状評価も順調に進んでいるが、もう少しエントリーのペースを上げたい。研究対象者の募集及びエントリーを引き続き行っている。無作為割付けは,家族の感情表出とエントリー時のHAM-Dの重症度の階層別に封筒法を用いて実施している。評価は以下のように行っている。心理教育を推進するに当たっての経験で得たものを、平成30年度の日本精神神経学会、うつ病学会にて発表する予定である。同意が得られないなど、症例の確保に苦労している。そのため、予定症例より下回っている。うつ病の家族心理教育の対象者に声掛けをして、研究へのエントリーを依頼している。評価は以下の項目を実施している。心理教育を実施する群は、約2週間間隔で、1回目:うつ病の原因について、2回目:うつ病の生野上について、3回目:うつ病の治療について、4回目:うつ病の経過・予後について、5回目:復職などの社会復帰について、6回目:総括・まとめ、として6回参加を標準としている。各セッションは、上記テーマに沿い、自主作成したビデオ教材の視聴、家族同士の問題解決を中心としたミーティングを行い、全部で約1時間から1時間30分程度で実施している。心理教育を行わない対照群は、9ヶ月後に上記と同じ内容で心理教育を実施している。