hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
学級規模が教師-児童・生徒の教育活動に及ぼす効果に関する研究

4.授業後の内省を検討した結果、40人学級では「教師の注意が行き届かない」、「児童の個人差を無視してしまう」、「学習効果をあげにくい」、「疲れる」、「やりがいがある」等の意見があがった。また10人・20人学級においては「個人差に対応でき個性を尊重できる」、「注意が行き届く」、「児童の授業への関与度が高まる」、「戸惑った」、「授業が活気が生まれにくい」、「児童同志の相互交流に欠ける」等の意見があがった。5.授業者の教授行動について児童に質問紙により評定を求めたが、児童は学級の規模よりも、むしろ教師のパーソナリティーに依存している回答傾向を示した。以上の結果、40人学級よりは20人学級、10人学級での教師の疲労や緊張が小さいことが示された。しかし、心理的には10人学級の方が20人学級より好ましいとの結論はくだせなかった。学級規模が教師-児童生徒の教育活動に及ぼす効果をみるため2つの実験を行った。研究1では、社会的密度(36人/25人/16人/9人)が教師の生理的反応(心拍)、心理的反応(教えやすさ)、教授行動(声量、板書活動、質問形態)にどの様な影響を与えているか検討した。本年度は教師の教授行動をビディオテープによって撮影したものを分析し、昨年、分析した生理指標や心理指標と比較検討した。低社会的密度の学級、すなわち、9人学級の教師は学生に「説明する発言」が多く、これとは対照的に高密度学級の教師、すなわち、36人学級の教師は「生徒の活動を促す発言」「指示のための発言」が多かった。教師は社会的密度が高くなると、指導性が弱まることを認知し、それに応じた教授活動を行うことが明らかとなった。研究2では、社会的密度(40人/20人/10人)が教師の生理的反応、心理的反応、教授行動及び教師-児童の相互作用にどの様な影響を与えているか検討するため、附属小学校の協力を得小学校の児童数を変化させ、実験を行った。本年度は研究Iと同様、教師の教授行動をビディオテープによって撮影したものを分析し、昨年、分析した生理指標や心理指標と比較検討した。40人学級の教師は10人学級の教師より大きな声を出していた。また、10人学級の教師は児童に「説明する発言」が多く、40人学級の教師は「生徒の活動を促す発言」「指示のための発言」が多かった。教師社会的密度が高くなると、指導性が弱まることを認知し、それに応じた教授活動を行うことが明らかとなった。以上の2研究から、36人学級は教師に負担をかける規模であると同時に10人学級は、児童教師の相互活動が乏しくなる学級規模であることが分かった。本年度は以上の分析を行い、最終、報告書としてまとめた。
アイヌ口承文学的解釈学の創出

アイヌ口承文学を内在的に読み解く方法を立ち上げる試みとして、再帰的モチーフを抽出し、モチーフ相関図を作成した。これによって特定の物語を解釈したり、モチーフ概念を検討したりする際に参照すべき物語のネットワークが可視化される。具体的事例として村の滅亡/再生テーマの物語群を分析した。村の滅亡原因は嫉妬、夜襲、疱瘡の三類型がある。この三つのモチーフ間の概念的な関係や、三つのそれぞれが他のどのようなモチーフ群と隣接関係があるかを分析することにより、個々のモチーフの概念やテーマの示唆する意味が浮かび上がる。このような作業の積み重ねにより、アイヌ口承文学のテクスト分析が可能になるだろう。本研究はアイヌ口承文学の構成や意味伝達についての内在的なルールを見出し、それに従って物語を解釈するための方法論を提起することを目的としている。具体的にはアイヌ口承文学に頻出するモチーフの存在に着目し、モチーフ自体の意味、モチーフ間関係、モチーフと話型の関係、モチーフを共有する物語間の関係、といった観点で分析を行い、アイヌ口承文学を読み解く上でのモチーフの役割について考察する。そのための素材として、金成マツ(18751961)という伝承者が親類や自らのレパートリーを筆録したノートの分析を行っている。二年目の今年度は、昨年度に引き続き、知里真志保遺稿ノートのなかの金成マツ筆録ノート(北海道立図書館蔵マイクロフィルム)の複写・PDF化を行った。これは金成マツが甥の言語学者、知里真志保(19091961)のために書き残した口承文学の筆録ノートである。散文説話が中心を占めるが、他に神謡、英雄叙事詩、歌謡、鳥の聞きなし、なぞなぞなど多様なジャンルの伝承184点が記録されている。このうち、本研究の目的には直接関係のない歌謡や鳥の聞きなしなどを除く、未公刊の部分128点について収集を完了した。これと平行してノートの翻刻およびモチーフ抽出にも着手した。現在まで20点分のモチーフ抽出を行い、エクセル表に入力し、モチーフ相関図を作成中である。モチーフ相関図作成作業については、まだサンプル数は少ないものの、物語のモチーフ構成を表をにして、並べることによって、頻出モチーフの存在と物語間の関係が可視化され、本研究の目的であるモチーフ分析のみならず、アイヌ口承文学の研究を合理化し、進展させるために、極めて有益であるという感触を得ている。本研究はアイヌ口承文学におけるモチーフの役割を明らかにすることにより、アイヌ口承文学のテクスト解釈の方法論を立ち上げようとする試みである。具体的には金成マツが筆録したテクスト群を分析対象とする。北海道立図書館所蔵知里真志保遺構ノートに含まれる金成マツ筆録ノートには物語、歌謡、なぞなぞ、早口言葉など、多様なテクスト188編が記録されている。このうち本研究の分析対象となるのは散文説話、英雄叙事詩、メノコユカラ、神謡といった物語テクストである。本研究は物語に頻出するモチーフを抽出し、モチーフ同士の組み合わせやモチーフと話型の関係などの特徴を分析することによって、それぞれのモチーフの担う働きやその意味を見出すことを目標とし、将来的にはモチーフを共有するジャンルを超えた物語間の参照関係を検討することによって、アイヌ口頭伝承的な知性のあり方にまで考察を進めることを目指している。具体的には、形式分類のためではなく、物語を読むために有益なモチーフ・インデックスを作成し、それを活用した物語解釈の実践を行う。複数の物語に登場するモチーフには、例えば、妬み、婦女誘拐、飢饉、孤児、交易、良い和人、悪い和人、悪叔父、子のない夫婦、六悪人、熊神、夜襲、ケナシウナルペ、村の滅亡・再生、疱瘡などがある。婦女誘拐モチーフにおいて、主人公の妻や許嫁を誘拐する悪人として登場するのは和人、神、魔神などである。婦女誘拐という共通のモチーフを通して、アイヌにとっての神、魔神、和人といった存在を比較関係におくことが可能になる。また、アイヌの村の滅亡・再生モチーフを持つ物語における、村の滅亡原因は疱瘡と妬みといった人災であって、例えば飢饉は自然災害に含まれ、滅亡原因にはならない。このようなモチーフと話型の相関関係から、アイヌ口承文学特有の認識論を抽出することが可能になる。本研究の目的はアイヌ口承文学の物語内容をアイヌ口承文学に内在的なルールに基づいて解釈する方法論を提起することである。具体的には、ジャンル横断的に現れるモチーフや話型を意味の単位として想定し、それらを共有する物語間の参照関係に着目しながら具体的な個々の物語を読むことによって、複数のヴァージョンの存在という口承文学の特徴を尊重しつつ、個々の物語を理解するという道を開くというものである。初年度はアイヌ口承文学において有意味なモチーフおよび話型を収集するための基礎作業として金成マツ・ノートの資料収集を中心的に行った。

北海道立図書館にマイクロフィルムの形で所蔵されている「知里真志保遺稿ノート」のなかに、金成マツが甥の知里真志保のために筆録したノートがある。その大部分は未公刊で、翻訳・紹介されていない。内訳は散文説話115、神謡6、英雄叙事詩8、シノッチャ6、その他44である。大部分が散文説話である。英雄叙事詩が少ないのは、金成マツが英雄叙事詩のレパートリーを金田一京助のために筆録しているためである。神謡が少ないが、散文説話のなかにはカムイ・ウエペケレ(神々の自叙による物語)が多く含まれている。カムイ・ウエペケレは神謡のサケへ(リフレイン)を省いたもの、ともいわれている。作業はノートを複写してPDF化し、翻刻・翻訳し、モチーフ・話型を抽出してエクセルにまとめるという手順で進めている。一つの物語は複数のモチーフの組み合わせによって構成されているが、エクセル表にすることで、どのモチーフがどのモチーフや話型と組み合わさって現れるのか、といったモチーフ連関や物語間の参照関係が検索可能になる。作業は現在も継続中である。本研究はアイヌ口承文学におけるモチーフの役割を明らかにすることによって、アイヌ口承文学の内容を解釈するための方法論を立ち上げようとする試みである。金成マツ筆録の散文説話や胆振・日高地方の散文説話に再帰的に現れるモチーフを抽出し、表にまとめてモチーフ相関図を作成した。この相関図は分類のためのモチーフ・インデックスとは異なり、再帰的に現れるモチーフとモチーフの関係やモチーフと話型・テーマの関係を可視化し、それによって個々のモチーフの概念やニュアンスを明らかにすることを可能にする。例えば疱瘡のモチーフは、夜襲や嫉妬といった人災モチーフと話型を共有し、飢饉や津波、地震といった自然災害モチーフとは話型を共有しない。一方で、疱瘡は飢饉モチーフとも一定の隣接関係にあるモチーフとして現れることから、人災・自然災害の双方の性格を持つと同時にいずれにも完全には属さない現象として表象されており、極めてニュアンスに富んだ表象のされ方がなされている。更に疱瘡の流行・終息ともに和人に関わる問題として表象されない点はアイヌにとってのこの病の意味を考える上で重要である。また、ポン・マチ(妻妾)というモチーフは、一般に子のない夫婦モチーフと接続し、妻が夫に勧めて別の妻を娶ったり、女性の側が強く望んでポン・マチになったりするというように肯定的に描かれる。一方、異文化人である山丹人が単なる好色のために娶るポン・マチは極めて否定的に描かれる。このようにモチーフ相関図によって、ポン・マチの概念と価値評価の振幅を明らかにすることができる。近世後半以降、蝦夷地において和人の支配人や通詞がアイヌの慣習を「真似て」複数のアイヌ女性を妻に持つといった例が記録されている。ポン・マチ概念のアイヌ口承文学的概念の幅を認識することによって、このような和人による「多妻制」をアイヌ文化的基準において検討することも可能になる。口承文学研究資料の量が想定していた以上に膨大で、収集に予定以上の時間を費やすことになったため、作業が予定よりも遅れている。しかしながら、本年度はモチーフ相関図の作成に着手することが出来た。
コエンザイムQ10結合タンパク質サポシンBを介した脂質の腸管吸収機構の解明

サポシンBは脂溶性のコエンザイムQ10と結合してこれを可溶化する.本研究は小腸におけるサポシンBの役割解明を目的とした.小腸モデルとしてCaco-2細胞を用い,遺伝子工学手法を用いてサポシンB前駆体タンパク質プロサポシンノックダウン株を作製したところ,細胞内コエンザイムQ10量が低減した.細胞を3次元培養したところ,プロサポシンノックダウン株では経上皮電気抵抗値が上昇せず,タイトジャンクション形成がうまくできないことが明らかとなった.サポシンBは脂溶性のコエンザイムQ10と結合してこれを可溶化する.本研究は小腸におけるサポシンBの役割解明を目的とした.小腸モデルとしてCaco-2細胞を用い,遺伝子工学手法を用いてサポシンB前駆体タンパク質プロサポシンノックダウン株を作製したところ,細胞内コエンザイムQ10量が低減した.細胞を3次元培養したところ,プロサポシンノックダウン株では経上皮電気抵抗値が上昇せず,タイトジャンクション形成がうまくできないことが明らかとなった.食事、サプリメント中のコエンザイムQ10は小腸で吸収されるが、その吸収機構は不明である。我々は、糖タンパク質サポシンBがコエンザイムQ10と複合体を形成し、脂溶性のコエンザイムQ10を可溶化することを見出した。更にサポシンBが腸管に存在すること、その存在が管腔側に局在していることを見出している(未発表データ)。本研究は、コエンザイムQ10の小腸における吸収機構の解明、特にコエンザイムQ10結合蛋白質サポシンBの役割解明を目的とする。研究初年度は下記3点を遂行した。(1)ヒト結腸癌由来Caco-2細胞の3次元培養手法を確立した。Caco-2細胞の分化とタイトジャンクションの形成は、電気抵抗値測定(Millicell-ERS, Millipore社)手法により確認した。(2)3次元培養したCaco-2細胞のApical側(管腔側)に酸化型のコエンザイムQ10を投与し、細胞への吸収とBasal側への輸送を検討した。コエンザイムQ10はCaco-2細胞に取り込まれ、還元されて、還元型のコエンザイムQ10がBasal側に分泌されることを確認した。またBasal側に分泌されたコエンザイムQ10は主にリポプロテイン分画に含まれることを確認した。(3)遺伝子工学手法を用いてサポシンB高発現Caco-2細胞株およびサポシンBノックダウン株を作製した。次年度以降、(3)で作製したCaco-2細胞株を3次元培養し、(1)、(2)で確立したコエンザイムQ10輸送機構の解析を行う。本検討により、コエンザイムQ10の小腸吸収機構が解明されると、吸収効率に大きな個人差があり、必ずしも吸収効率の優れてはいないコエンザイムQ10を効率よく吸収する手法の確立に寄与することが期待される。食事、サプリメント中のコエンザイムQ10は小腸で吸収されるが、その吸収機構は不明である。研究初年度(昨年度)に、ヒト結腸癌由来Caco-2細胞の3次元培養手法を確立した。また、遺伝子工学手法を用いてサポシンB高発現Caco-2細胞株およびサポシンBノックダウン株を作製した。本年度は、樹立したサポシンB高発現Caco-2細胞株とサポシンBノックダウン株の基本的な細胞特性の解析を行った。結果、サポシンBノックダウンCaco-2株では内因性コエンザイムQ10がコントロールCaco-2細胞より低値であること、一方で、サポシンB高発現Caco-2細胞ではその値がコントロール細胞より高いことを見出した。次年度以降、作製したサポシンB遺伝子改変Caco-2細胞株を3次元培養し、コエンザイムQ10輸送機構の解析を行う。更に、サポシンBが腸管に存在すること、その存在が管腔側に局在していることを見出している(未発表データ)。本研究は、小腸におけるコエンザイムQ10結合蛋白質サポシンBの役割解明を目的とする。小腸のモデルとして、Caco-2細胞を用いた。Caco-2細胞は結腸腫瘍から単離された培養細胞であり、小腸上皮細胞様に分化することが知られている。昨年度までに、遺伝子工学手法を用いてサポシンB前駆体蛋白質プロサポシンのノックダウン株を作製した。

樹立したプロサポシンノックダウン株の基本的な細胞特性の解析を行ったところ、プロサポシンノックダウンCaco-2細胞株では内因性コエンザイムQ10がコントロールCaco-2細胞より低値であることを見出している。本年度は、作製したプロサポシンノックダウンCaco-2細胞株の3次元培養を行った。コントロール細胞と同じ条件で3次元培養し細胞分化を試みたが、プロサポシンノックダウンCaco-2細胞株では、膜抵抗値が上昇せず、タイトジャンクション形成がうまくいっていないことが示唆された。そこで、膜透過性を解析した。解析にはLucifer Yellowを用いた。コントロール細胞ではApical側に投与したLucifer YelIowが膜を透過せず、タイトジャンクションの形成が確認できたものの、ノックダウン株ではLucifer Yellowが膜を透過し、Basal側へ移行した。このことから、プロサポシンノックダウンCaco-2細胞株では、タイトジャンクション形成がなされていないと考えられる。以上の結果より、Caco-2細胞のプロサポシンは小腸のタイトジャンクション形成に必要不可欠な蛋白質であることが明らかとなった。
希土類金属イオンを含む機能性材料の電気化学的手法による作製と評価

希土類イオンを含む無機化合物は、その水素吸蔵能や磁性作用により近年注目を集めている。電気化学的に薄膜を合成することによって、膜内に希土類イオンを含む種々の層状膜の作製に成功してきた。しかしながら、生成した膜は、結晶性に乏しく、構造を規制することは困難であった。そこで本研究では、高温条件下で膜を作製し、直接結晶化した希土類含層状化合物の合成に関する検討を行った。オートクレープ電解槽を用いて,高温でのコバルト酸化物膜の作製を行った。コバルトのみの電解液である0.1MCo(NO_3)_2溶液中において種々の電位および温度によって白金電極上に電析させた酸化物膜の構造を検討した。150゚Cよりも高い電解温度では種々の電位領域で結晶化した酸化物膜が直接電極上に析出した。結晶化した酸化膜は電解電位に依存し、電極電位が+0.5Vよりも負の時には、Co_3O_4で析出し、+0.9Vよりも正になると主にCoOOHとして析出することが分かった。また、電解液に希土類であるサマリウムイオンが含まれると、生成した酸化物膜は常にCoOOHの結晶構造を取ることが分かった。コバルトのみの電解液で作製した電析膜に比べて、サマリウムを含む電解液で電解作製した膜では、c軸方向の格子定数に変化は見られなかったが、サマリウムの含有率が増加するにつれ、c軸方向の格子定数が大きくなっていった。これは、取り込まれたサマリウムイオンが、層状構造をとるCoOOHの層間に存在することによって、a軸方向の結晶格子だけが伸びているためであると考えられる。電気化学的合成法である陽極酸化を用いてランタンやサマリウムなどの希土類イオンを含むニッケルおよびコバルト層状酸化物膜の作製を行った.白金基板上に電析させた希土類を含むニッケル層状酸化物膜ではアルカリ溶液中、陰分極下において特徴的なアノード電流が観察された.このアノード電流は、電析膜の表面構造に違いにより、電流の大きさが変化し、白金基板上に析出した膜でのみ観察できたこと.したがって、電極電位のカソード掃引時に白金基板上で発生した水素が溶液中の水酸化物イオンと反応することによりアノード電流が出現したものと考えた.これは、希土類-ニッケル層状酸化物膜が、膜内に水素を貯蔵できるためである.オートクレーブを用い高温でのコバルト層状化合物の電析の検討も行った.80度以上の温度で電析を行うと基板上に直接結晶化した電析膜が生成した.電析膜の構造は電解電位に依存し、電極電位が+0.5Vよりも負の時には、Co_3O_4で析出し、+0.9Vよりも正になると主にCoOOHとして析出することが分かった.硝酸コバルトと硝酸サマリウムの混合溶液を用いた電解では、コバルトが電析する時に膜内にサマリウムが取り込まれることが分かった.電解温度を80°C以上にすると、コバルトのみの電解液で電析した場合同様に、直接結晶化したCoOOH複合酸化物膜を作製することができた.しかし、膜内に希土類元素が存在することによってc軸方向の格子定数が大きくなった.これは、取り込まれたサマリウムイオンが、層状化合物であるCoOOHの層間に存在することによって、c軸方向の結晶格子だけが伸びているためだと考えられる.希土類イオンを含む無機化合物は、その水素吸蔵能や磁性作用により近年注目を集めている。
日常化しつつある都市在宅高齢者の交流媒体としてのインターネットの役割

都市部の高齢者が,活動や交流においてどのようにインターネットを位置付けているかを明らかにすることを目的とした.分析の結果,1電子メールを介して交流する他者には「趣味や余暇活動を通じての友人・知人」「(元を含む)職場関係の友人・知人」が多いため,他者には,住所も本名も知らない人が1割以上含まれた,2それらの他者は,交遊や形式的なお付き合いが多く,手段的・情緒的サポートの提供者は僅かなことが,示された,3また,既知のつながりの維持・強化,自身の想いや知識の承認を行う手段としてインターネットを利用していた.老いを自覚していくなかで,今後の人生に向けた老いを見据えた可能性をインターネットに感じていた.都市部の高齢者が,活動や交流においてどのようにインターネットを位置付けているかを明らかにすることを目的とした.分析の結果,1電子メールを介して交流する他者には「趣味や余暇活動を通じての友人・知人」「(元を含む)職場関係の友人・知人」が多いため,他者には,住所も本名も知らない人が1割以上含まれた,2それらの他者は,交遊や形式的なお付き合いが多く,手段的・情緒的サポートの提供者は僅かなことが,示された,3また,既知のつながりの維持・強化,自身の想いや知識の承認を行う手段としてインターネットを利用していた.老いを自覚していくなかで,今後の人生に向けた老いを見据えた可能性をインターネットに感じていた.本研究は,高齢期の社会的ネットワークおよび社会活動を維持していくうえでのインターネットの役割を明らかにし,活動能力が低下しても社会とつながり続けられる豊かな高齢社会を実現するために必要な知見を得ることを目的としている.研究の一年目である本年は,社会関係や活動の縮小が危惧される後期高齢層を対象に,加齢のプロセスとICTの役割について質的調査を行った.調査は,高齢者層へのインターネットの普及を行う指導者育成制度の認定団体「NPO法人自立化支援ネットワーク(IDN)」の講座を受講した後期高齢者を対象とした.会全体で後期高齢者の占める割合は低く,70歳代以上に対象を広げて協力者を募った結果,23名の協力者を得た.一人当たり1.52時間程度の半構造化面接方による個別インタビュー行った.現役時代に興味はあってもICTに関わる接点がほとんどないまま退職をむかえた人と,出向先などで限られた機能のみを使っていた人が存在した.退職後にICTに関心を示したきっかけは,知的好奇心の充足を目的とした「終わりのない挑戦」,やる事のない毎日のなかで認知症予防を目的とした「健康の維持」,それまでの知識を活かして地域社会などとの関わりを得ることを目的とした「社会参加の手段」の3つに分類された.年齢を重ねていくなかで,社会とつながり続けるための交流媒体としてICTを位置づけ,facebookやスマートフォンなどの新たな技術を生活に取り入れることに積極的な姿勢をみせる人がみられた.その反面,電子メールと検索機能といった限られた機能を使い続けることで満足する人や,ほとんどICTを使わなくなっている人もみられた.この結果は,加齢のプロセスとICTの役割,孤立防止や見守りのあり方などを検討する上で考慮すべき重要な視点であり,本データの分析を進めると共に,二年目に行う量的調査にも反映させたい.本研究は、高齢期の社会的ネットワークおよび社会活動を維持していくうえでのインターネットの役割を明らかにし、活動能力が低下しても社会とつながり続けられる豊かな高齢社会を実現するために必要な知見を得ることを目的としている。研究の一年目には、社会関係や活動の縮小が危惧される都市部に居住する後期高齢者層(前期高齢期前後からICTを活用してきた定年退職者)を対象に、加齢のプロセスとICTの役割について質的調査を行った。年齢を重ねていくなかで、社会とつながり続けるための交流媒体としてICTを位置づける人がみられる反面、ほとんど交流媒体としてのICTを使わなくなっている人もみられた。この結果をもとに、二年目は、東京都江戸川区に居住する一般の中高齢男女を対象に、訪問面接によるアンケート調査を実施した。合計800名を対象に調査依頼状を発送し結果、311名から協力の返信があった。回答者の8割が携帯電話を有し、4割がパソコンを保有しており、5割が交流媒体として電子メールを活用しており、メールを送った相手は配偶者や子どもが多く、また親族以外では友人、関わる団体やサークル、職場関係の人が多く含まれることが明らかになった。三年目の本年は、これらの結果をより詳細に分析し、関連学会等での報告、原著論文(「応用年学」2014年7月刊行予定)の投稿を行った。同時に、成果の社会実装をめざし、簡易かつ具体的なメッセージに絞り込んだ一般向けの研究成果報告書をまとめ、自治体担当者や研究者だけではなく、高齢期のICT活用に取り組むNPOや地域活動団体などに送付し、多くの反響を得た。さらに、不特定多数の人々に本成果を届けるべく、電子書籍化し、所属機関のホームページを介して無料で配信を行っている。研究期間終了後の平成26年度は、これらの成果を本として出版すべく準備を進めている。本研究は、高齢期の社会的ネットワークおよび社会活動を維持していくうえでのインターネットの役割を明らかにし、活動能力が低下しても社会とつながり続けられる豊かな高齢社会を実現するために必要な知見を得ることを目的としている。

年齢を重ねていくなかで、社会とつながり続けるための交流媒体としてICTを位置づける人がみられる反面、ほとんど交流媒体としてのICTを使わなくなっている人もみられた。これらの結果をもとに、二年目にあたる本年は、東京都江戸川区に居住する一般の中高齢男女を対象に、訪問面接によるアンケート調査を実施した。計画当初、東京都中野区を調査対象と想定していたが、5年前から申請者が孤立防止などで関わる江戸川区役所より本調査研究に対する理解が得られ、地域特性を理解している当該地域の方がデータを分析するうえでも最適と判断し、対象地域を変更した。江戸川区を50の地点に分割し、各地点から16名づつの中高齢者を抜き出し、合計800名を対象に、調査依頼状を発送した。このなかで、協力の返信のあった311名を対象に、日常的な交流状況、電子メールを介して交流する5名、心理的状況について、調査員が訪問面接により調査を行った。回答者の8割が携帯電話を有し、4割がパソコンを保有しており、5割が交流媒体として電子メールを活用していた。相手については配偶者や子どもが多く、また親族以外では友人、関わる団体やサークル、職場関係の人が多く含まれていた。これらの結果をより詳細に分析し、三年目は一年目の質的調査の結果と統合した検討を行っていく。都市部の後期高齢者23名を対象にしたデプス・インタビュー調査から,高齢期における活動継続に向けたインターネットの可能性に関する知見を得ることができた.また,このインタビューからは,次年度に行う定量調査の質問項目の妥当性も検証できたことから,初年度の研究目的をおおむね達成していると評価した.25年度が最終年度であるため、記入しない。より正確かつ緻密なデータを得るために、訪問面接調査の準備に計画より長い時間を費やしたため、調査実施が年明けになった。このため、年度内に、調査データの予備的な分析が完了できなかった。研究の二年目にあたる24年度は,中年期(5564歳)および前期高齢期(6574歳)の都市住民を対象に,インターネットを介した交流と社会活動の実態,QOLとの関連について量的調査により明らかにする.電子メールを介した他者との交流と社会活動についての詳細なデータを得るために,自記式の郵送調査などではなく,訓練された調査員による訪問面接法により行うことが求められる.そこで,6月末までに訪問面接調査実績の豊富な調査会社を選定し,調査員の訓練と管理等について十分な打合せを行う.同時に,調査地域として想定している東京都中野区の関連機関との情報交換を密に行い,円滑な調査実施と住民への効果的なデータの還元方法を検討する.調査の実施後は速やかにデータのクリーニングと入力を行い,年度内の予備的分析の完了を目指す.25年度が最終年度であるため、記入しない。これまで行った、社会関係や活動の縮小が危惧される後期高齢層を対象に,加齢のプロセスとICTの役割についての質的調査(一年目)、中年期(5564歳)および前期高齢期(6574歳)の都市住民を対象に,インターネットを介した交流と社会活動の実態についての量的調査(二年目)の結果を総合し、考察を行う。その結果を研究実績報告書(一般向けの簡易レポートを含む)にまとめるとともに、国内外の学会での発表・投稿の準備をすすめる。同時に、次年度以降の研究計画の策定を進める。
唾液腺開口分泌過程における低分子量GTP結合蛋白質の解析

三量体GTP結合蛋白質は、細胞膜上で情報変換因子として役割を果たしているが、これとは別に細胞内に存在している低分子量GTP結合蛋白質の存在が見いだされ、しかも分泌細胞ではその分泌顆粒膜に挿入されて構成分子の一員を担っている。そこで、耳下腺腺房細胞における低分子GTP結合蛋白質が分泌顆粒膜に存在し、アミラーゼ分泌についてどの様な役割を果しているか検討した。初年度においては、ラット耳下腺からHopferらの方法によって分泌顆粒を得てここから分泌顆粒膜を調整した。この分泌顆粒膜にたいしてGTP-overlay assayを行った結果、20kd-25kdの範囲に2本のGTP結合性蛋白質のバンドを認めた。同様のバンドは細胞膜においても発現していた。本年度においては、これらの結果をもとに、既存蛋白質との異同を検討すると共に本蛋白がアミラーゼ分泌におよぼす影響を検討した。[方法と結果]1.ラット耳下腺腺房細胞から得られた分泌顆粒膜をSDS-PAGEで蛋白展開し、PVDF膜に転写後[^<32>P]GTPによるbinding assayを行いGTP結合蛋白質を確認した。さらに、このPVDF膜を抗rho Aおよびrho B抗体を用い、免疫ブロットしたところ、両者の抗体に反応する分子量21kd付近のバンドを認め、このバンドはbinding assayによって発現しているバンドと一致した。2.rho蛋白をADP-リボシル化するbotulinum C3 exoenzymeで2-3時間耳下腺腺房細胞を前処理したのち、イソプロテレノールまたはカルバコールで分泌刺激した。その結果、アミラーゼ分泌が抑制された。以上のことから、分泌顆粒膜に存在するGTP結合蛋白質の一つは、rho蛋白であり、本蛋白はアミラーゼ分泌機構に深く関与することが示唆された。目的)情報伝達系に関与する低分子GTP結合蛋白質が、内分泌および外分泌を問わず分泌細胞の分泌顆粒膜に存在し、これらの蛋白質分子が開口分泌に関与している可能性が示唆されている。そこで、ラット耳下腺腺房細胞における低分子GTP結合蛋白質の局在を明らかにすると共に、分泌顆粒膜に存在することが予想される低分子GTP結合蛋白質と新規蛋白質分子群を解析し、アミラーゼ開口分泌の活性化機構の一つとして機能し得るか検討する。方法と結果)1.酵素処理して得られたラット耳下腺遊離腺房を用いて細胞質および細胞膜画分を得た。また、分泌顆粒はHopferらの方法に準じてpercoll-gradientにより分離し,Burgoyneらの方法により分泌顆粒膜を調整した。2.得られた分離した画分にたいして、GTP-overlay assayにより低分子GTP結合蛋白質の存在を検討したところ、細胞膜画分と分泌顆粒画分にその存在が認められた。すなわち20kd-25kdに主たるバンドが2本みられた。3.さらに、低分子GTP結合蛋白質の存在が明らかになった細胞膜と分泌顆粒膜について2次元電気泳動で蛋白質展開後,GTP-overlay assayにより塩基性の蛋白質スポットが観察された。三量体GTP結合蛋白質は、細胞膜上で情報変換因子として役割を果たしているが、これとは別に細胞内に存在している低分子量GTP結合蛋白質の存在が見いだされ、しかも分泌細胞ではその分泌顆粒膜に挿入されて構成分子の一員を担っている.そこで、耳下腺腺房細胞における低分子GTP結合蛋白質が分泌顆粒膜に存在し、アミラーゼ分泌についてどの様な役割を果たしているか検討した.初年度においては、ラット耳下腺からHopferらの方法によって分泌顆粒を得てここから分泌顆粒膜を調整した.

この分泌顆粒膜にたいしてGTP-overlay assayを行った結果、20kd-25kdの範囲に2本のGTP結合性蛋白質のバンドを認めた.同様のバンドは細胞膜においても発現していた.本年度おいては、これらの結果をもとに、既存蛋白質との異同を検討すると共に本蛋白がアミラーゼ分泌におよぼす影響を検討した.[方法と結果]1.ラット耳下腺腺房細胞から得られた分泌顆粒膜をSDS-PAGEで蛋白展開し、PVDF膜に転写後[^<32>P]GTPによるbinding assayを行いGTP結合蛋白質を確認した.さらに、このPVDF膜を抗rho Aおよび抗rho B抗体を用い、免疫ブロットしたところ、両者の抗体に反応する分子量21kd付近のバンドを認め、このバンドはbinding assayによって発現しているバンドと一致した.2.rho蛋白をADP-リボシル化するbotulinum C3 exoenzymeで2-3時間耳下腺腺房細胞を前処理したのち、イソプロテレノールまたはカルバコールで分泌刺激した.その結果、アミラーゼ分泌が抑制された.以上のことから、分泌顆粒膜に存在するGTP結合蛋白質の一つは、rho蛋白であり、本蛋白はアミラーゼ分泌機構に深く関与することが示唆された.
モータータンパク質の活性化状態の生体内可視化による繊毛運動機構の解明

本研究は繊毛の原動力であるモータータンパク質ダイニンが繊毛内で力を出している様子をダイニンの立体構造変化の可視化により、運動中の繊毛で観察することを目指している。立体構造変化の可視化のためダイニン重鎖Dnah11のアミノ酸配列中にFRETが起こるように2つの蛍光タンパク質を挿入した遺伝子組み換えマウスが必要である。本年度は、遺伝子ターゲッティングによりDnah11に蛍光タンパク質Venusを挿入したES細胞に対し、CRISPR-Cas9システムを用いて、18番エキソンにmCherryの挿入を行った。挿入候補は、2か所(アミノ酸1142番、1165番)としDnah11-Venus-mCheery(1142)、Dnah11-Venus-mCheery(1165)のアリルを持つES細胞をそれぞれ樹立、さらにES細胞からDnah11-Venues-mCherry(1165)を持つマウスの作製に成功した。しかし、Dnah11-Venues-mCherry(1165)アリルを持つマウスのノード繊毛では、明確な運動性を確認できていない。また、mCherryの蛍光は僅かに確認できるが、Venusと比較すると非常に弱かった。一方で、本研究により作成した、Dnah11-Venusを導入したマウスにより、(i)気管やノードにおいてDnah11のライブイメージングが可能となり、(ii)軸糸ダイニン重鎖(約500 kDa)で、一部の機能性を維持したままタンパク質を挿入することができた。また(iii)運動性が低下したダイニンを持つノード繊毛は単純な回転数の低下ではなく、振幅の低下と回転数の上昇、逆回転の頻度上昇など、興味深い運動性を示すことが観察された。本来の目的であるFRETを利用したダイニンの構造変化観察までは至っていないが、ダイニンの機能性と回転運動について新たな知見を見出すことができた。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、繊毛の原動力となるモータータンパク質(ダイニン)のアミノ酸配列中に2種類の蛍光タンパク質VenusとmCherryを挿入し、1分子内FRETによりダイニンの活性化・非活性化状態を立体構造変化として可視化することを目指している。そのために蛍光タンパク質を挿入したダイニンを持つノックインマウスを作製し、マウス初期胚に存在するノード繊毛内で、ダイニンがどのようなパターンで活性化するかを観察することを目標としている。平成29年度は主にES細胞を用いてノックインマウスの作製を行った。蛍光タンパク質を挿入するのは、ノード繊毛で発現・機能しているダイニン重鎖DNAH11 (accession# AF183144)で、先行研究を参考に蛍光タンパク質の挿入位置を決定した。挿入部位の間はおよそ100kbpで同時に挿入することは難しいので、まずVenusをES細胞に対する遺伝子ターゲッティングで43番エキソンの目的の位置に挿入した(※)。続いて、Venusを挿入したES細胞に対しCRISPR-Cas9システムでmCherryを18番エキソンに挿入した。CRISPR-Cas9システムは、遺伝子ターゲティングよりも早くノックインマウスを得られるためmCherryは、2つの位置の作製に成功した。加えて蛍光タンパク質が挿入されたダイニンが機能的であるかどうかを検討するために、ES細胞からマウスを作成した。この操作には34カ月ほど必要なため、まずVenusのみを持つES細胞(※)を用いてキメラマウスを作製し、次世代からノックインマウスを得ることに成功した。機能性については、ノード繊毛の運動に強く相関している左右軸の異常で評価した。Venus挿入DNAH11遺伝子のホモ接合型は左右逆位のノックインマウスが得られなかったため、Venusが挿入されたDNAH11は機能を維持していると考えられる。本年度予定していた2つの蛍光タンパク質が挿入されたDNAH11を持つノックインマウスの作製は達成できた。しかしながら、予定ではこのノックインマウス(DNAH11-Venus+mCherry)を用いて観察を始めている時期であるが産仔数が少なく、ノード繊毛を観察するために必要なメスマウスの確保に時間がかかっている。観察系については、Venusのみが挿入されたノックインマウス(DNAH11-Venus)のノード・気管を用いて観察しているが蛍光が弱く、現在種々の条件で観察を行い安定的にシグナルが得られる条件を探している。加えて、mCherryのみを持つノックインマウスの作製も行っており、DNAH11-Venusと同様に機能性の評価を行う予定である。DNAH11には、点変異により活性が失われた変異体DNAH11-ivが知られている。DNAH11-Venusの機能性をより詳しく評価するために、DNA11-VenusとDNAH-ivのヘテロ接合型(DNAH11-Venus/iv)を作製して左右軸を観察したところ、左右逆位のマウスが得られた。DNAH11-iv/WTの左右軸は正常であることから、DNAH11-Venusは、機能は維持しているものの野生型ほどの活性がないことが分かった。1つの挿入で活性が低下しているので、2つの蛍光タンパク質を挿入した場合には、活性がさらに低下する恐れが考えられるため、異なる場所への挿入が必要になる可能性がある。

立体構造変化の可視化のためダイニン重鎖Dnah11のアミノ酸配列中にFRETが起こるように2つの蛍光タンパク質を挿入した遺伝子組み換えマウスが必要である。本年度は、遺伝子ターゲッティングによりDnah11に蛍光タンパク質Venusを挿入したES細胞に対し、CRISPR-Cas9システムを用いて、18番エキソンにmCherryの挿入を行った。挿入候補は、2か所(アミノ酸1142番、1165番)としDnah11-Venus-mCheery(1142)、Dnah11-Venus-mCheery(1165)のアリルを持つES細胞をそれぞれ樹立、さらにES細胞からDnah11-Venues-mCherry(1165)を持つマウスの作製に成功した。しかし、Dnah11-Venues-mCherry(1165)アリルを持つマウスのノード繊毛では、明確な運動性を確認できていない。また、mCherryの蛍光は僅かに確認できるが、Venusと比較すると非常に弱かった。一方で、本研究により作成した、Dnah11-Venusを導入したマウスにより、(i)気管やノードにおいてDnah11のライブイメージングが可能となり、(ii)軸糸ダイニン重鎖(約500 kDa)で、一部の機能性を維持したままタンパク質を挿入することができた。また(iii)運動性が低下したダイニンを持つノード繊毛は単純な回転数の低下ではなく、振幅の低下と回転数の上昇、逆回転の頻度上昇など、興味深い運動性を示すことが観察された。本来の目的であるFRETを利用したダイニンの構造変化観察までは至っていないが、ダイニンの機能性と回転運動について新たな知見を見出すことができた。平成30年度は、すでに得られたDNAH11-Venus+mCherryを用いた観察と、より機能性を維持しているダイニンの作製と観察に注力する。DNAH11-Venus+mCherryのノックインマウスは12カ月程度で実験を行うために十分な数が揃うと考えられ、機能性(左右軸・ノード繊毛の運動)・蛍光強度について、それぞれ解析可能であるかどうかの評価を行っていく。特に蛍光観察については、いくつかの顕微鏡システムを検討してシグナルが得られる条件を探す予定である。DNAH11-Venusが野生型ほどの活性が確認できなかったため、Venusの挿入位置については今後いくつかの挿入場所を検討する必要があると考えている。同時に、mCherryだけを挿入したDNAH11 (DNAH11-mCherry)については機能性と蛍光を評価し、より機能性が高く蛍光強度が高いものを選択する。mCherryの挿入に用いたCRISPR-Cas9による挿入は、Venusを挿入するときに用いた遺伝子ターゲティングよりも速いスピードでノックインマウスの作製が可能である。しかしながら、現在の機能性チェックはES細胞からマウスを作製するプロセスが入っており、この手法では複数の挿入位置を同時に評価するために長い時間がかかってしまう。そこで、ES細胞から直接気管繊毛を生やすなど、迅速なスクリーニング系の確立が必要になると考えられる。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
ユビキチン連結酵素PARKINを活性化するメカニズム

申請者は既にPINK1のキナーゼ活性とParkinのユビキチン連結酵素(E3)活性が細胞内で良く相関すること,つまり「PINK1キナーゼ活性の欠損変異体によって、ミトコンドリアの膜電位低下時におけるParkinのE3酵素活性化が阻害されること」及び「恒常的活性型PINK1によって、ParkinのE3酵素活性がミトコンドリアの膜電位とは無関係に活性化されること」を見出していた.この補助金の初年度の成果として、ParkinのSer65がPINK1依存的にリン酸化されること、それがParkinの活性化に重要であることを報告した(Iguchi JBC 2013)。本年度は、このSer65のリン酸化と、Parkinの活性中心であるCys431の露出との詳細な関係を明らかにした。Parkinの活性化を分子のレベルで記述すると、活性中心であるParkin Cys431とユビキチンがチオエステル結合した中間体の形成を介して機能することがわかった。海外グループによるParkinの立体構造解析から、このCys431が普段はParkin自身のRING0ドメインによって塞がれた形をしていることも示された。そこで、W403AやF463Aといった、これらのParkin自己阻害を脱抑制する変異をParkinに導入し、それらの脱抑制変異体とSer65のリン酸化不能(S54A)・リン酸化模倣(S54E/D)変異体を組み合わせてその影響を調べることで、「PINK1によるSer65のリン酸化とユビキチンとチオエステル結合中間体を形成する為のCys431露出とを結びつける」分子機構の解明を行なった。さらにその過程で、Parkinが活性化される為には、Parkinとは異なるPINK1基質が必須であり、その基質がユビキチンであることを明らかにした。成果は、本年度にNature誌に掲載された。26年度が最終年度であるため、記入しない。申請者は研究計画に従って研究を遂行し、「異常なミトコンドリアによってParkinが活性化される仕組み」に関して顕著な進展があった。ひとつはParkinのリン酸化を介した制御であり、もう一つは活性中心であるCys431とユビキチンが高エネルギーチオエステル結合を形成することによる制御である。申請者は2010年にはPINK1のプロテインキナーゼ活性がParkinの異常ミトコンドリアへの移行とユビキチン連結酵素(E3)活性化に必須であること、つまりPINK1のキナーゼ活性とParkinのE3活性が細胞内で良く相関することを報告した(JCB, 2010)。本年度はこのParkinの活性化を分子の言葉で説明するべく研究に邁進した。まずParkin様のタンパク質HHARIがRING-HECT hybrid型のE3であることに着想を得て、Parkinの活性中心がCys431であることや、このCys431とユビキチンがチオエステル結合した中間体を形成してParkinがE3として機能することを見出した。更に、PINK1のリン酸化標的を解析する過程で、ParkinのSer65がPINK1依存的にリン酸化されることや、このSer65リン酸化がCys431を介したユビキチン-チオエステル結合中間体形成に重要であることを報告した(Iguchi JBC 2013)。これらの結果から考察すると「活性中心であるCys431が普段はParkinの自己阻害ドメインによって塞がれているが、これがPINK1依存的なParkinのSer65リン酸化を介して脱抑制される」モデルが示唆されるが、「ParkinのSer65リン酸化模倣変異体(S65D, S65E)が細胞内でPINK1機能をバイパスしない」という実験結果との矛盾があり、次年度の研究課題であると考える。

成果は、本年度にNature誌に掲載された。26年度が最終年度であるため、記入しない。ParkinのSer65がPINK1依存的にリン酸化されること、そのリン酸化がParkinのCys431を介したユビキチンとのチオエステル結合の形成やParkinの活性化に重要であることを見出しており、さらに上記の内容でJBC誌に論文を報告した。研究は概ね順調に推移していると考える。研究実績概要に記したように、「活性中心であるCys431が普段はParkinの自己阻害ドメインによって塞がれているが、これがPINK1依存的なParkinのSer65リン酸化を介して脱抑制される」という仮説が考えられるが、「ParkinのSer65リン酸化模倣変異体(S65D, S65E)が細胞内でPINK1機能をバイパスしない」という実験結果と矛盾しており、次年度には両者を統合するような仮説の提出と、その実験的な検証に挑む。
PEG化リン脂質ミセルによる糖鎖電気泳動分析の高性能化

LVSEP-FASI法の濃縮性能を検討するため,モデル試料としてfluoresceinを用いてキャピラリー電気泳動(CE)をベースにLVSEP-FASI分析を行った。バイアルの交換時間および印加圧力の最適化の結果,それぞれ10 min,1.0 psiとした際従来のCE分析と比較して70,000倍の高感度化が達成された。向様にAPTS誘導体化G7のWSEP-FASI-CE分析を行った結果,0.5 psiの圧力印加および15 minにおけるバイアルの交換により,CEと比較して10,000倍の高感度化および未反応のAPTSとG7のベースライン分離が達成された。検出時間,ピーク高さのRSDはそれぞれ2.4%,11%であり,オンライン試料濃縮を長時間行う分析法としては良好な再現性が得られた。また,分離性能の最適化の結果,LVSEP同様にLVSEP-FASI法を用いてもほとんど分離度が損なわれないことが判明した。同様にマイクロチップ電気泳動(MCE)においてもLVSEP-FASIの検討を行った。モデル試料としてfluoresceinを用い,試料濃縮時間を240sとしてLVSEP-FASI-MCE分析を行ったところ,わずか10pMの試料の検出に成功した。従来法であるpinched injectionを用いたMCE分析の結果と比較したところ,6万倍の高感度化が達成された。以上のように,CE,MCEのどちらにおいてもLVSEP-FASI法の高い濃縮性能分離性能が確認された。当初の研究計画とは異なる方向での研究成果ではあるが,糖鎖分析における高感度化,分析操作の簡略化など,高性能化は計画以上に達成されている。また,別途推進している新規親水性ナノ材料を用いた分離性能の向上,開発したLVSEP法と質量分析計(MS)との結合などについても順調に推移しており,現在開発された新規高性能糖鎖分析法の実分析への応用を推進中である。開発した高性能糖鎖電気泳動法とMSとを結合し,糖鎖実試料分析へ適用する。既に開発したLVSEP法とMSの結合については検証済みであり,今後この技術を用いて糖タンパク質の解析を実行する予定である。PEG化リン脂質ミセルを非水系CE分析に適用するために,PEG化リン脂質の有機溶媒下における臨海ミセル濃度(CMC)を測定した。Japan Oil Mills社のDSPE050-PAを試料として,水/アセトニトリルの混合溶媒におけるpyrene蛍光強度の変化を測定することでCMCを算出した。その結果,アセトニトリル混合率30%ではCMCは5μM程度と極めて低い値となり,純有機溶媒下でのミセル形成が期待された。しかし混合率を50%まで上げたところ,CMCは30mM程度まで上昇し,有機溶媒下ではPEG化リン脂質が極めてミセルを形成しにくいことが確認された。他のPEG化リン脂質についても同様のCMCが得られ,非水系におけるミセル動電クロマトグラフィー法の開発は現在のところ実現されていない。そこで一時的に従来の水系において糖鎖分析の高性能化のための新規オンライン濃縮法の開発を目指すこととした。本研究では試料吸着を抑制できるコーティングキャピラリーおよびマイクロチップにおいて,分離性能を損ねることなく試料を濃縮・分離できるlarge volume sample stacking with electroosmotic flow(EOF)pump(LVSEP)の原理を解明し,糖鎖分析へと適用した。糖鎖実試料のLVSEP-MCE分析を行ったところ,M5M9の5種類の糖鎖が分離され,従来のMCZEと比較して2200倍の高感度化(M5)が達成された。このとき,検出時間およびピーク高さのRSD(n=3)はそれぞれ1.1, 7.2%となり,高い再現性を持つことが示された。また従来のpinched injection(PI)法を用いる一般的なMCE分析で必要であった試料注入および分離のために複雑な電圧制御を高感度化と同時に省略することに成功した。これらの成果は当初の研究計画に沿うものでは無いが,MCE分析革新をもたらす画期的発見であり,この技術によりマイクロ統合分析の分野の発展に大いに貢献出来るものと期待される。また,LVSEPカチオン分析を行うため,キャピラリー内表面を4.75% poly(vinyl alcohol)と0.25% poly(allyl amine)混合ポリマーを用いて修飾し,わずかに正に帯電した内表面を実現した。正電圧条件でカチオン性である4種類の芳香族アミンのLVSEP分析を行ったところ,良好な分離と従来法と比較して110倍の高感度化が達成された。以上のようにLVSEP分析の分離モード拡張および分析範囲をカチオン性試料まで拡大することに成功した。LVSEP分析はマイクロチップ電気泳動において最も有効性を発揮する分析法であり,これまでの成果をベースに将来的に極めて汎用的かつ高速,簡便,高性能な分析法を開発できるものと期待される。

向様にAPTS誘導体化G7のWSEP-FASI-CE分析を行った結果,0.5 psiの圧力印加および15 minにおけるバイアルの交換により,CEと比較して10,000倍の高感度化および未反応のAPTSとG7のベースライン分離が達成された。検出時間,ピーク高さのRSDはそれぞれ2.4%,11%であり,オンライン試料濃縮を長時間行う分析法としては良好な再現性が得られた。また,分離性能の最適化の結果,LVSEP同様にLVSEP-FASI法を用いてもほとんど分離度が損なわれないことが判明した。同様にマイクロチップ電気泳動(MCE)においてもLVSEP-FASIの検討を行った。モデル試料としてfluoresceinを用い,試料濃縮時間を240sとしてLVSEP-FASI-MCE分析を行ったところ,わずか10pMの試料の検出に成功した。従来法であるpinched injectionを用いたMCE分析の結果と比較したところ,6万倍の高感度化が達成された。以上のように,CE,MCEのどちらにおいてもLVSEP-FASI法の高い濃縮性能分離性能が確認された。当初の研究計画とは異なる方向での研究成果ではあるが,糖鎖分析における高感度化,分析操作の簡略化など,高性能化は計画以上に達成されている。また,別途推進している新規親水性ナノ材料を用いた分離性能の向上,開発したLVSEP法と質量分析計(MS)との結合などについても順調に推移しており,現在開発された新規高性能糖鎖分析法の実分析への応用を推進中である。開発した高性能糖鎖電気泳動法とMSとを結合し,糖鎖実試料分析へ適用する。既に開発したLVSEP法とMSの結合については検証済みであり,今後この技術を用いて糖タンパク質の解析を実行する予定である。
中国及び日本産ナラ類遺伝子資源の相互利用に関する研究

北海道のミズナラ・モンゴリナラ・カシワ・コナラなどのナラ類が強い遺伝子浸透を経ていることはこれまでの研究で明らかにしてきた。本研究では中国黒龍江省のナラ類について、3地域・9林分・157個体から葉・堅果・殻斗を採集し、18形質の測定をもとに個体間・地域間の形質変異を検討した。標本数は1個体につき葉は10枚,堅果、殻斗は20個である。測定した形質のうち、反復率が高く情報量の多い、鋸歯数(左右合計)・堅果比(長さ/直径)・殻斗比(外径/高さ)の3形質の出現頻度・平均値・標準偏差を林分毎に比較した。なお、反復率は分散分析における個体間分散成分を、それと個体内分散成分との和で割った値で、遺伝率に代るものである。その結果、モンゴリナラを中心とする中国産ナラ類においても、個体間や林分間に形質の違いがあり、地域間の変異も認められた。さらに、カシワ・マンシュウミズナラが東北部に分布すること、形質によっては頻度分布の不連続性や大きなばらつきがあったことから、中国黒龍江省産モンゴリナラも他のナラ類と自然雑種を形成していることが示唆された。本研究では、これらの結果の検定のため、中国黒龍江省および北海道名寄において両国のナラ類種子を交換し、それぞれ産地試験を開始した。