hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
矯正的歯の移動におけるプロスタグランジンI2に着目した疼痛メカニズム解析

本研究では、矯正力付与時での歯髄におけるプロスタグランジン(PG)I2の機能を解析するために実験的歯の移動モデルラットを作製し、PGI2合成酵素(PGIS)、IP受容体およびTRPV1に焦点を絞り、遺伝子発現解析、免疫組織化学的解析を行った。その結果、実験的歯の移動によってPGISは象牙芽細胞と線維芽細胞で、IP受容体とTRPV1では正常時から象牙芽細胞と神経線維で検出された。さらに各mRNAの発現量も歯の移動によって有意に増加したことから、象牙芽細胞や神経線維ではIP受容体によってTRPV1が活性化され、炎症や疼痛に関与する可能性が示唆された。プロスタグランジン(PG) I2のレセプターであるIP受容体(IP)は、transient receptor potential cation channel subfamily V member 1 (TRPV1)の感作を介して末梢部での疼痛知覚に関与するとされるが、矯正的歯の移動時に生じる疼痛への関与に対する解析は申請者らの報告のみである。本研究は、歯の移動時におけるIPのTRPV1を介した疼痛知覚メカニズムに着目し、closed coil springによる矯正力付与モデルラットを用いて、IPとTRPV1の関係を遺伝子工学的および免疫組織化学的に検索し評価しようとするものである。平成28年度は上記の研究目的を達成するための端緒として、PGI2の矯正時における詳細な挙動を確認するためにPGI2合成酵素(PGIS)に着目した。Closed coil springを装着し25g、100g、および200gの矯正力を付与したモデルラットを作製し、矯正力付与後24時間における上顎第一臼歯頬側遠心根での圧迫側、あるいは牽引側に対する時空間的解析を、免疫組織学的手法を用いて行った。その結果200gの力を付与した際に、上顎第一臼歯頬側遠心根の遠心側根尖部にPGISの強い陽性反応を認めた。一方でその他の部位に対しては同様の反応を認めなかった。さらに、25gおよび100gにおいても変化を認めなかった。以上の結果から、200g程度の力が付与された場合、歯根膜組織でPGIS活性が認められ、その結果、PGI2産生が増加している可能性が示唆された。矯正力を付与した場合の、ラット歯根膜組織におけるPGIS局在解析は本研究課題達成の基盤的部分であるため、これに関する検索を詳細に行った。そのため、次段階の検索がやや遅れている状況である。8週齢Wistar系雄性ラットの上顎右側第一、第二臼歯間にエラスティック片を挿入し、6、12、24、72時間後に両歯の歯冠部歯髄を試料としてPGIS、IPおよびTRPV1のmRNA発現変化をreal-time PCRを用いて解析した。さらにHE染色による組織学的解析と酵素抗体法を用いた免疫組織化学的解析によりPGISの局在を検索した。PGIS、IPおよびTRPV1のmRNA発現量は正常歯髄と比較して実験的歯の移動12時間後、あるいは24時間後まで有意に増加し、72時間後にはすべての遺伝子において減少傾向を示した(Student's T-test: P<0.01あるいは0.05)。正常歯髄では象牙芽細胞のみにPGIS免疫陽性反応を示したが、実験的歯の移動24時間後では線維芽細胞にも陽性反応を認め、72時間後では消退した。組織学的解析では、24時間後に象牙芽細胞の空胞変性を認めた。以上の結果から、ラット臼歯歯髄では歯の移動時による力学的負荷によってPGIS、IPおよびTRPV1が24時間以内に発現が亢進し、炎症反応や疼痛に関与する可能性を示した。次段階の検索として、実験的歯の移動時における歯根膜に局所的なPGIS陽性反応を認めたため、その原因を探るツールとして有限要素解析を予定している。すでに有限要素解析によるラット臼歯の矯正的歯の移動予測や、応力集中部位とPGIS陽性反応の関連性について検索を進め、結果は得られつつある。その上で、さらにIPとTRPV1の反応についても免疫組織化学的および遺伝子工学的に検索し評価を行う予定である。以上のように、課題達成のために段階的に検索を進めていく予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。歯科矯正学分野29年度が最終年度であるため、記入しない。
精神的作業負荷を指標としたWWW用GUIの設計

精神的作業負荷を心拍動性変動により明らかにするための計測装置の開発を行った。本計測システムにより、心拍動変動R-R間隔の時系列解析によって、どのような分析が精神的負荷の記述に適しているかを明らかにする予備実験を行った。本方法は村田による、情報検索作業における精神的な作業負担の測定による方法を参考に行った。その結果、の指標において、アンケート等による自覚的精神的作業負荷とのあいだで若干の相関が見られる傾向にあった。しかしながら、WWWデザインのレベルにおいて、この指標に顕著に現れるレベルでの差異は見られなかった。WWWにおけるフレーム構造の有無による使用者の使い勝手の良さは、アンケートレベルでは項目数が少ない場合、フレームが無い方がよいとの結果がでたり、階層構造の深さも2ないし3階層程度が負荷が少ないという結果が得られたが、生理指標レベルでの変化としてとらえることは困難であった。また、テキスト、図形、写真、動画等モダリティの差異による興味関心度をこの精神的作業負荷の指標で測定可能かどうか試みたが、計測可能な範囲で有為な結論は引き出せなかった。今後とも、より精緻な実験を重ねて本課題の解決に努力したい。本研究は2カ年計画で行われるもので,当初の研究計画に基づき以下の如く実施した。1)精神的作業負荷を心拍動性変動により明らかにするための計測システムの開発を行った。本計測システムで、心拍動R-R間隔の時系列解析において、どのような分析が精神的負荷の記述に適しているかを明らかにするための予備実験を行った。その結果,瞬時パワースペクトルによるスペクトル変化が負荷の記述に適する可能性が明らかになった。2)テキスト、図形、写真、動画等モダリティの異なる画面構成による実験用教材の開発を行った。3)WWWの設計において、最近フレーム型構造のものが多く見受けられるようになってきている。そこで、フレーム構造の有無で学習者に与える使い易さ、そこに提示される情報に対する理解しやすさ、記憶への残存度などを実験的に明らかにした。その結果、フレームの有無で、学習者の与えられた情報に対する記憶量に変化が見られなかった。4)3)の実験を基に、フレーム構造、画面への提示情報量や情報の階層的提示と精神的負荷との関連を明らかにするための実験デザインの再検討を行った。
SPIO-MRIを用いた肝機能・肝線維化の評価法の確立

MRIで計測可能な肝実質のR2*値(鉄の沈着程度を反映)と、SPIO投与前後の肝実質のΔR2*およびΔR2値(クッパー細胞の貪食能を示唆)は、肝受容体シンチグラフィーから得られる肝機能の値と相関があったが、肝線維化および壊死/炎症細胞浸潤の程度とは有意な相関はなかった。理由として、クッパー細胞は線維化の初期には重要な役割を担っているため、同時期にはむしろ活性化され、貪食機能が亢進している可能性が示唆された。[目的]SPIO-MRIの肝機能の診断能を評価するため、SPIO投与前後における肝実質の信号変化と、肝受容体シンチのパラメータの間に相関があるか検討を行った。[症例・方法]対象は肝臓の精査のためSPIO-MRIと肝受容体シンチが施行された55例である。SPIO-MRIではリゾビスト投与前後にT2*およびT2 mapが(それぞれ37例と55例で)撮像された。それぞれのmapを用いて、肝実質のR2*およびR2値(R2*=1/T2*,R2=1/T2)を計測した。リゾビスト投与前の肝実質のR2*およびR2値をPreR2*およびPre R2、またリゾビスト投与前から後のR2*およびR2値を差分した値を△R2*および△R2と定義した。肝受容体シンチに関しては、LHL15(静注15分後の肝臓と心臓+肝臓のカウント比)およびHH15(静注3分後と15分後の心臓のカウント比)の値を記録し、肝機能のgold standardとした。SPIO-MRIの肝機能パラメータであるR2*,R2,△R2*,△R2が、LHL15およびHH15と相関があるか回帰分析を行った。[結果]Pre R2*値とLHL15の間に中等度の相関が見られた(相関係数=0.401)。△R2*と△R2、およびLHL15とHH15の、それぞれの組み合わせの間でも有意な相関が見られた(相関係数=0.333-0.430)。[考察・結論]肝実質のR2*値は鉄の沈着程度を反映すると考えられる。一方、△R2*および△R2値はクッパー細胞の貧食能を示唆する指標であり、これらと肝機能との関連を裏付ける結果となった。SPIO-MRIから得られるパラメータは、肝機能の指標となり得ると考えられる。[目的]SPIO-MRIの肝線維化の診断能を評価するため、SPIO投与前後における肝実質の信号変化と.術後病理標本との間で比較を行った。[症例・方法]対象は肝臓の精査のため術前にSPIO-MRIが施行された54例である。SPIO-MRIではリゾビスト投与前後にT2*およびT2 mapが撮像された。それぞれのmapを用いて、肝実質のR2*およびR2値(R2*=1/T2*, R2=1/T2)を計測した。リゾビスト投与前の肝実質のR2*およびR2値をPreR2*およびPre R2、またリゾビスト投与前から後のR2*およびR2値を差分した値をΔR2*およびΔR2と定義した。肝線維化は新犬山分類を用いてF0(なし)からF4(肝硬変)の間で5段階に、また壊死/炎症細胞浸潤の程度もA0(なし)からA3(高度)まで4段階に分類された。SPIO-MRIの肝機能パラメータであるR2*,R2,ΔR2*,ΔR2が、肝組織の病理像と相関があるか、Spearman's rank correlation testを行った。[結果]R2*,R2,ΔR2*,ΔR2ともに肝線維化および壊死/炎症細胞浸潤の程度と有意な相関はなかった。F1+F2のΔR2*およびΔR2(1/sec)はそれぞれ61.5+/-8.7と11.6+/-3.7であり、F0(57.5+/-11.6と9.6+/-3.9)やF3+F4(54.9+/-14.6と7.9+/-3.7)と比較して高い傾向にあった。[考察・結論]SPIO-MRIから得られるパラメータは、肝線維化および壊死/炎症細胞浸潤の程度と順序立った相関はなかった。ただし、クッパー細胞は線維化の初期(F1+F2)には重要な役割を担っているため、同時期にはむしろ活性化され、貪食機能が亢進している可能性が示唆された。[症例・方法]対象は肝腫瘍の術前にSPIO-MRIが施行された16例である。SPIO-

MRIでリゾビスト投与前後にT2*およびT2 mapが撮像され、肝実質のR2*およびR2値(R2*=1/T2*, R2=1/T2)が計測された。リゾビスト投与前の肝実質のR2*およびR2値をPreR2*およびPre R2、またリゾビスト投与前から後のR2*およびR2値を差分した値をΔR2*およびΔR2と定義した。術後標本の非癌部の病理スライドを作成し、HO-1とCD68(マクロファージのmarker)の免疫染色を行い、Kupffer細胞のHO-1発現レベルを低、中、高の3段階に分類した。Pre R2*、Pre R2、ΔR2*、ΔR2の平均値(1/sec)を、それぞれ低グループと中+高グループの間で比較した(student t-test)。[結果]低グループは8例、中および高グループはそれぞれ4例であった。R2*, R2の平均値は両群間に差はなかった。ΔR2*は、中+高グループ57.2±18.0、低グループ67.6±18.8で、有意差はなかった(p=0.31)。また、ΔR2も低グループ7.5±3.5、中+高グループ9.8±3.1で有意差は認められなかった(p=0.20)。[考察・結論]Kupffer細胞の貪色能を示唆するパラメータ(ΔR2*、ΔR2)とHO-1の発現レベルに明らかな相関はなかった。実際の腫瘍内は酸化ストレス等の複雑な微小環境が関与しており、Kupffer細胞のHO-1発現もそれに左右されている可能性が示唆された。上記に記載した研究結果をもとに、現在2本目の論文を作成して一流雑誌に投稿中である。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は主に病理を主体に解析する。免疫染色を行い、その結果を踏まえて、これまで出た成果との比較を行う予定である。
東南アジアをモデルフィールドとした大気汚染粒子の粒径別特性化と雨水移行現象の解明

本年度は、2017年度(1年目)の乾季(10月)に実施した大気観測で粒径別に捕集した粒子状物質(PM)試料に対して、各種成分分析、画像解析を進めるとともに、大気圏から水圏へのPMの移行について、多環芳香族炭化水素(PAH)を指標として評価した。さらに、雨季(6月)と乾季(9月)に継続的な大気観測を実施した。成分分析の結果として、イオン成分濃度は地殻由来のCa2+やMg2+が粗大粒子で高く、二次生成に起因するNH4+、SO42-, NO3-が微小粒子で高かった。イオンバランスは超微小粒子ではアニオン側に寄っており、水溶性有機アニオンの存在が示唆された。一方で、PM濃度の高い特異日にはイオンバランスが崩れ、NO3-が高濃度に検出される傾向を示した。有機マーカー分析では、バイオマス燃焼由来のレボグルコサンが極めて高い濃度で検出され、有機炭素濃度の変動と一致していた。またプラスチック燃焼由来の成分も同時に増加しており、これら燃焼系発生源の影響を強く受けていることが示唆された。また、気象影響をPM2.5のデータから解析したところ、PM2.5の日変化は深夜から明け方にかけて急激に極大となり、比湿との関連が示唆される一方で、PM濃度上昇には風向も影響することが確認された。ハノイで採取した雨水中およびPM2.5試料中のPAHsを測定したところ、雨水中からは日本国内よりも高濃度のPAHsが検出された。雨水中PAHsの組成は主として親水性PAHsであったが、有害性の高いベンゾ[a]ピレンなども含まれていた。このことから降雨現象が大気中に存在するPAHsの陸水圏への移行に大きく関与する可能性が示唆された。また、雨水試料中の成分について走査型顕微鏡を用いて画像観察したところ、いくつかの不溶性粒子を観察することができたが、試料に藻状の不純物が付着しており、エアロゾル由来かどうかの識別は困難であった。本年度の計画では、2017年度(1年目)の乾季(10月)に実施した大気観測において粒径別に捕集した粒子状物質(PM)試料に対して、各種成分分析、画像解析を進めるとともに、雨季(6月)と乾季(9月)にさらなる集中観測を実施することとなっており、概ねその通り遂行できたため。次年度は当初の計画通り、2年目に実施した集中観測の成分分析、画像解析を進めるとともに、雨季の56月に再度集中観測を実施し、大気PMの水圏への移行が定常的に起きうるかを再確認する。さらに、これまでのデータを総括し、各成分の濃度や相関関係、さらには統計解析により、二次粒子生成や沈着に与える発生源および降雨の影響をナノ粒子も含め粒径別に定量評価する。最終的にはこれら結果を報告書として取りまとめるだけでなく、現地研究機関との強固な研究協力と活動基盤の確立に向け、大学間協定の締結やシンポジウムの開催など、学術交流の推進を図る。実施した研究概要本年度は、モデルフィールドとして選択したハノイ近郊の3大学を訪問し、研究協力関係の構築と観測場所の確保、さらに小型PM2.5質量モニターの設置を行った。また、ナノサンプラーの繊維層フィルターの分割における性能評価に加え、水中PAH成分の分析手法および水中微粒子の画像解析手法の検討も行った。得られた成果小型PM2.5質量モニターの連続測定により、ハノイ近郊ではPM25濃度が数十から百数十ug/m3で推移していることが明らかとなった。この濃度変化は観測した3大学で非常に似通った傾向を示しており、安定的に汚染粒子が存在すること、また、この安定粒子に光化学生成やバイオマス燃焼が加わり、地域特性を示している可能性が示唆された。本年度から前倒しで本格的な大気観測が開始できたことから、これら捕集サンプルに対して化学的な成分分析を行い、発生源影響等を明らかにしていく予定である。ナノサンプラーの性能評価においてはPM0.1分級の繊維層フィルターが分割できないため、成分分析の種類が制約されていたが、繊維層フィルターを4分割した新たなカートリッジを開発し、安定にPM0.1を分級しつつも繊維層に成分が安定に4分割できることを示した。また、水中PAHの成分分析に関してはスターバー抽出(SBSE)手法を用いることで、わずか25 mL程度の試料量でng/LレベルでPAHsが分析できる高感度分析手法を確立した。一方、水中微粒子の画像解析手法については標準のブラックカーボン粒子を純水に懸濁させ、その後吸引濾過した後に電子顕微鏡で形状の変化等観察したところ、水に溶けない粒子であれば水中に分散した微粒子でも性状観察ができる可能性が示唆された。今後はハノイ近郊の湖沼等の実サンプルに対して観察を行い、大気微粒子が水中に移行した際に特徴的な性状変化が見られないか観察を進める。本年度は、フィールド観測の実施に向けたサンプラー評価や現地での研究協力体制の構築、さらに適切な集中観測時期を検討しつつ、プレ観測を実施するのが当初計画であったが、現地との協力関係、適切な集中観測時期の把握が予想以上に早期に達成できたことから、予算の前倒し申請を行い、10月のプレ観測を本観測として実施することができた。

さらに、雨季(6月)と乾季(9月)に継続的な大気観測を実施した。成分分析の結果として、イオン成分濃度は地殻由来のCa2+やMg2+が粗大粒子で高く、二次生成に起因するNH4+、SO42-, NO3-が微小粒子で高かった。イオンバランスは超微小粒子ではアニオン側に寄っており、水溶性有機アニオンの存在が示唆された。一方で、PM濃度の高い特異日にはイオンバランスが崩れ、NO3-が高濃度に検出される傾向を示した。有機マーカー分析では、バイオマス燃焼由来のレボグルコサンが極めて高い濃度で検出され、有機炭素濃度の変動と一致していた。またプラスチック燃焼由来の成分も同時に増加しており、これら燃焼系発生源の影響を強く受けていることが示唆された。また、気象影響をPM2.5のデータから解析したところ、PM2.5の日変化は深夜から明け方にかけて急激に極大となり、比湿との関連が示唆される一方で、PM濃度上昇には風向も影響することが確認された。ハノイで採取した雨水中およびPM2.5試料中のPAHsを測定したところ、雨水中からは日本国内よりも高濃度のPAHsが検出された。雨水中PAHsの組成は主として親水性PAHsであったが、有害性の高いベンゾ[a]ピレンなども含まれていた。このことから降雨現象が大気中に存在するPAHsの陸水圏への移行に大きく関与する可能性が示唆された。また、雨水試料中の成分について走査型顕微鏡を用いて画像観察したところ、いくつかの不溶性粒子を観察することができたが、試料に藻状の不純物が付着しており、エアロゾル由来かどうかの識別は困難であった。本年度の計画では、2017年度(1年目)の乾季(10月)に実施した大気観測において粒径別に捕集した粒子状物質(PM)試料に対して、各種成分分析、画像解析を進めるとともに、雨季(6月)と乾季(9月)にさらなる集中観測を実施することとなっており、概ねその通り遂行できたため。次年度は当初の計画通り、1年目に実施したプレ観測の成分分析、画像解析を進めるとともに、本年度行う集中観測期間をまず決定する。前述した各種発生源影響を同時に確認できる時期として、二毛作の稲わら燃焼を考慮し、さらに湿度や降雨による凝縮成長や湿性沈着などの挙動を季節別に評価すべく、雨季の56月、乾季の1011月にそれぞれ、2週間程度の集中観測を実施する。期間の詳細は、小型PM2.5質量モニターの通年データを解析するとともに、プレ観測時に各種発生源の排出状況を現地研究者に確認することで決定する。この集中観測期間に大気PM(粒径別捕集)、雨水、表層水を採取し、1年目と同様に成分分析、画像解析を実施し、得られた成分濃度や粒子性状から大気PMの発生源寄与について調査を行うとともに、雨水による大気PMの地表への沈着挙動についても検討を行う。次年度は当初の計画通り、2年目に実施した集中観測の成分分析、画像解析を進めるとともに、雨季の56月に再度集中観測を実施し、大気PMの水圏への移行が定常的に起きうるかを再確認する。さらに、これまでのデータを総括し、各成分の濃度や相関関係、さらには統計解析により、二次粒子生成や沈着に与える発生源および降雨の影響をナノ粒子も含め粒径別に定量評価する。最終的にはこれら結果を報告書として取りまとめるだけでなく、現地研究機関との強固な研究協力と活動基盤の確立に向け、大学間協定の締結やシンポジウムの開催など、学術交流の推進を図る。
無機イオン交換体充填による熱硬化性樹脂複合材料の劣化抑制効果に関する研究

下水道環境における微生物由来の硫酸によるコンクリートの腐食に対し、抑制するためのライニング材の開発を主な目的としている。コンクリートとの接着性は良いが、耐酸性に劣るアミン硬化エポキシ樹脂の使用を基本にし、無機(イオン交換ゼオライト)粒子の充填により、耐酸性の向上を目的とした研究を行っている。試験材料は、アミン硬化エポキシ樹脂および充填材としてイオン交換機能を有する2種類の合成ゼオライトで、Naイオンを有する合成ゼオライトと、このゼオライトと母体構造が同じでHイオンを有する2種類のゼオライトを使用した。比較のために一般的な充填物であるアルミナの計3種類を実験に使用した。各試験材料は、樹脂および硬化剤と充填物がかさ密度で0,10,20,30,40,50,60vol%となるように調整し、樹脂に対して消泡剤を0.5phr添加し、室温・大気中で厚さ2mmの板状に注型し、50°C一定で24時間の硬化後,80°C一定で3時間の二次硬化を行った。さらに、長さ60mm、幅20mmに切断したものを試験片として使用した。試験環境は50°C10mass%の硫酸水溶液中で試験片を単純に浸漬させる方法によって行った。耐食性の評価は試験片断面をエネルギー分散型X線分析(以下EDS)によって、硫酸由来の硫黄の存在分布を測定し、侵入深さから侵入速度を算出した。その結果、Alを充填した試験片は充填量が増えるにつれて硫酸の浸入が顕著であった。対してゼオライトを充填することによって、Hイオンは20%以上、Naイオンは30%以上充填することにより樹脂単体よりも硫酸の浸入は抑制された。以上の結果からイオン交換合成ゼオライトを充填することにより硫酸の浸入を抑制する効果があるが、最適な充填量が存在することを明らかにした。アミン硬化樹脂にゼオライトを充填するが、低充填ではゼオライトの沈降によって試験片の作製が困難であった。完全に硬化するまで30分間隔で回転させることによって、おおむね樹脂中に均等に分散した試験片を作製することができたが、これにかなりの時間を要した。アルカリに対し加水分解反応によって劣化する不飽和ポリエステル樹脂(オルソフタル酸系)にこれらのイオン交換樹脂を充填し、アルカリ環境に浸漬することで、イオン交換反応と耐食性の効果について検討することを目的に試験片の作製に取り掛かった。しかし、アルカリ性を示すゼオライトを充填した場合、常温では硬化せず、50°Cの熱を加えることで硬化することを確認した。この試験片作製に時間を要したことも遅れとなった。現在、アミン硬化樹脂をマトリックスとした試験片については硫酸環境を温度、濃度を変化させた状態で行う予定である。不飽和ポリエステル樹脂については充填量の違いについても実験を行っている。イオン交換機能を有するゼオライトをアミン硬化樹脂および不飽和ポリエステル樹脂に充填し試験片を作製した結果、沈降による不均一、イオン交換反応による樹脂の未硬化が確認されたが、これらの問題をクリアすることはできた。アミン硬化樹脂をマトリックスとした試験片については硫酸環境を温度、濃度を変化させた状態で行う予定である。不飽和ポリエステル樹脂については50Vol%の充填量の試験片に加えて、充填率の変化に研究を行う予定である。これらからイオン交換機能を有する合成ゼオライト耐食性の向上効果についてのメカニズムを引き続き検討を行っている。さらに,硫酸の温度及び濃度を変化させた環境において実験を行い、温度-濃度換算即により寿命予測を行う予定である。次に、この合成ゼオライトをオルソフタル酸系不飽和ポリエステル樹脂に充填し,試験環境を水酸化ナトリウム水溶液とした検討を行い、アルカリ環境においてこの合成ゼオライトのイオン交換反応を利用することで、耐食性の向上効果の有無を検討する。アミン硬化樹脂に対し硫酸、不飽和ポリエステル樹脂に対し水酸化ナトリウムの環境にイオン交換ゼオライトがどのように機能するのかを解明することによって、耐食性の向上メカニズムを明らかにできるものと考えている。近年,下水道環境において微生物由来の硫酸が発生し,コンクリートを腐食させることが問題となっている.このような腐食を防ぐため,アミン硬化エポキシ樹脂などが被服防食用途に多く用いられているが,耐酸性には劣るため,硫酸の組み合わせは注意を要する.また,様々な目的から多くの種類の充填物が用いられているが,この充填物の存在が腐食速度を増加させることが確認されている.一方で,環境液の浸入もしくは環境液との反応によって劣化を抑制するような充填物があれば,材料の耐食性向上につながるとも考えられる.そこで,このような充填物としてイオン交換特性を有するゼオライトに着目し,アミン硬化エポキシ樹脂に充填させ,硫酸環境において樹脂の劣化に及ぼすゼオライトの効果および寿命について検討を行った.試験材料はアミン硬化エポキシ樹脂および充填材として合成ゼオライトを2種類用いた.Naイオンのカチオンを有する合成ゼオライトと,母体の形状が同じHイオンのカチオンを有するゼオライトを用いた.比較のために一般的な充填物であるアルミナの計3種類を実験に使用した.各試験材料は,樹脂および硬化剤と充填物がかさ密度で50vol%:50 vol%となるように調整し,樹脂に対して消泡剤を0.5phr添加し,室温・大気中で厚さ2mmの板状に注型し,50°C一定で24時間の硬化後,80°C一定で3時間の二次硬化を行った.さらに,長さ60mm,幅20mmに切断したものを試験片として使用した.試験環境は50°C10mass%の硫酸水溶液中で試験片を単純に浸漬させる方法によって行った。

その結果,ゼオライトを充填することによって,樹脂単体よりも硫酸の浸入は抑制された.さらに,Hイオンのゼオライトを充填したものは優れた耐食性を示した。当該年度においてはアミン硬化エポキシ樹脂に充填材として2種類のカチオンで母材は同じ合成ゼオライトを用いた.このゼオライトはNaイオンのカチオンを有する合成ゼオライトと,母体の形状が同じHイオンのカチオンを有するゼオライトであるが,前述したとおり,この条件ではアミン硬化エポキシ樹脂に比べてカチオンの種類を問わず5倍以上の良い耐食性を示した.これは硫酸イオンとの交換反応により耐食性が向上したものと示唆される.さらにNaイオン(樹脂単体に比べて5倍)に比べてHイオンの方が高い耐食性(樹脂単体に比べて8倍)を示したことから,単純な硫酸とのイオン交換による耐食性の向上だけではないことが示唆された.このメカニズムについて詳細な検討をイギリス、マンチェスターのThe University of Manchester,School of Materials, Corrosion and Protection, AkzoNobel Laboratoryにおいて,分析する予定であったが,2017年5月に発生したManchester terror attackによって現地が混乱し、安全性の面と入国の面で問題があると思われたため,詳細な分析は次年度以降とした.さらに,材料分析のための工作機械の購入も予定していたが,研究上で必要とするスペックのものがなく、購入を見送ったのも多少影響している。現在,これらの材料について異なるゼオライト充填量の試験片についての検討,硫酸の温度及び濃度を変化させた環境において実験を行っている.下水道環境における微生物由来の硫酸によるコンクリートの腐食に対し、抑制するためのライニング材の開発を主な目的としている。コンクリートとの接着性は良いが、耐酸性に劣るアミン硬化エポキシ樹脂の使用を基本にし、無機(イオン交換ゼオライト)粒子の充填により、耐酸性の向上を目的とした研究を行っている。試験材料は、アミン硬化エポキシ樹脂および充填材としてイオン交換機能を有する2種類の合成ゼオライトで、Naイオンを有する合成ゼオライトと、このゼオライトと母体構造が同じでHイオンを有する2種類のゼオライトを使用した。比較のために一般的な充填物であるアルミナの計3種類を実験に使用した。各試験材料は、樹脂および硬化剤と充填物がかさ密度で0,10,20,30,40,50,60vol%となるように調整し、樹脂に対して消泡剤を0.5phr添加し、室温・大気中で厚さ2mmの板状に注型し、50°C一定で24時間の硬化後,80°C一定で3時間の二次硬化を行った。さらに、長さ60mm、幅20mmに切断したものを試験片として使用した。試験環境は50°C10mass%の硫酸水溶液中で試験片を単純に浸漬させる方法によって行った。耐食性の評価は試験片断面をエネルギー分散型X線分析(以下EDS)によって、硫酸由来の硫黄の存在分布を測定し、侵入深さから侵入速度を算出した。その結果、Alを充填した試験片は充填量が増えるにつれて硫酸の浸入が顕著であった。
糖鎖認識におけるSIGNR1と他のファミリー分子における差異の解析

始めに、マウスに抗SIGNR1抗体を投与すると腹腔内マクロファージ(rpMφ)上のSIGNR1が消失することを確認した。次に当該マウスの腹腔内にzymosanを投与し一定時間後に腹腔内細胞を取り出し解析したところ、抗体処理によってrpMφのzymosan捕捉と続くTNF-α産生が有意に低下した。TLR2KOマウスでは、zymosan投与によるTNF-α産生が大きく低下したことから、先のin vitroの結果と同じく、生体においてもSINGR1はTLR2を介してrpMφのTNF-α産生を昂進することが示された。一方で、熱処理C.albicansのrpMφによるoxidative burst誘導における抗SIGNR1抗体処理の影響を同様に検討したところ、抗体処理によりrpMφのoxidative burstが有意に低下した。先に、細胞株で見られたSIGNR1とDectin-1の結合をrpMφにおいても検討したが確認されなかった。しかしながら、熱処理C.albieans刺激の後に両者の共局在および結合が確認され、更に、Dectin-1が認識しにくい生菌C.albieansをrpMφに感染させたところ、菌体周囲にSIGNR1に加えてDectin-1の局在が見られた。先に、SIGNR1はDectin-1/Sykを介してoxidative burstを惹起することを報告していることから、SIGNR1は生菌体の取り込みと共にDectin-1をその周囲に導き効果的なoxidative burst誘導を可能にしているものと思われる。先に、SIGNR1が病原性C.albicans表面のα-mannanを認識し細胞のTNF-α産生およびoxidative burstを昂進することを示した。そこで今年度は、SIGNR1のC.albicans認識における糖特異性をヒトホモログhDC-SIGNを交えて検討した。始めに、異なる表面N-glycan糖鎖構造を有するC.albicansおよびS.cerevisiae株に対する可溶性SIGNR1及びhDC-SIGNの結合性を検討したところ、SIGNR1は両者に同程度結合したが、hDC-SIGNは前者に対してのみ強い結合性を示した。次に、様々な菌株より調製したN-glycan糖鎖を用いてhDC-SIGNの結合阻害実験を行ったところ、hDC-SIGNはα-mannose構造を認識するものの、SIGNR1と異なりβ-mannan-capped α-mannanを認識し得ないことが示された。次にN-グリカンより側鎖を切り出し阻害実験に供することを目指したが、技術的問題より精製糖鎖の調製・構造解析には至らなかった。そこで、糖鎖アレイを用いてSIGNR1の特異性を検討した。この際、通常のアレイではSIGNR1の結合が見られないため、液層でレクチンとリガンドの結合を検出できるevanescent-fieldfluorescence-assisteddetection法を用いた。その結果、SIGNR1はC.albicansおよびS.cerevisiae由来糖鎖だけでなく、単糖のhDC-SIGN同様α-mannoseにも結合した。しかしhDC-SIGNの結合するFucose含有Lewis抗原には結合せず、両者の特異性が異なることが示された。
ハドロン分子状態としてのハドロン励起状態

本研究では、ハドロン分子的状態によるハドロン励起状態について、理論的考察を行った。本年度は主に以下の成果を得ることができた。(1)Faddeev法を用いてのハドロン3体系の計算カイラル動力学に基づくFaddeev法を用いて、様々な系に対して3体束縛状態を求めた。KKbarK系では、KbarKの強い引力によって3体束縛状態が可能であり、実験的示唆のあるK(1460)に対応すると予想される。また、πKbarKとηKbarKの結合系は共鳴状態を作りπ(1400)がその状態の候補となる。さらに、この3体系から、πとf0(980)との有効相互作用牽引き出すことで、ππf0(980)の3体系を調べ、この状態が最近見つかったf0(1790)に対応する可能性があることがわかった。こめようにハドロン少数系で記述できる状態を選別していくことで、ハドロンの再分類を進めた。(2)カイラル動力学におけるハドロンの複合性ハドロン励起状態を記述するハドロン模型を用いて束縛状態の構造を議論した。励起ハドロンを記述するのに、ハドロン模型の範囲内で可能なのか、それとも模型空間の外の成分(例えばクォーク成分)が必要であるかを、場の理論の波動関数繰り込み定数を用いて定量的に議論するための枠組みを構築した。また、a1中間子について、ハドロン分子状態とクォーク成分について、large Ncの議論を用いて行った。(3)ハドロン中のダイクォーク相関ダイクォークをあらわに取り入れたQCD和則を新たに提案し、ハドロン構造に対するダイクォーク相関の重要性を確認する方法を確立した。A、Ac、Abバリオンでは、udスカラーダイクォークがそれらの構造に重要な寄与を与えている一方で、核子やσ中間子では、udダイクォークだけではその質量が再現できず、ダイクォークがuクォークとdクォークに分かれる寄与が必要なことがわかった。A(1405)バリオン励起状態やスカラー中間子f0(980),a0(980)は、それぞれ、反K中間子と核子、K中間子と反K中間子を主成分としたハドロン相互作用によって作られた自己束縛系であるハドロン分子状態で記述される可能性が高まっている。このようなハドロン分子状態は、通常のクォークから作られているハドロンに比べて、大きなサイズを持つと予想されている。本研究では、このような2体系の知見を応用して、反K中間子-K中間子-核子および反K中間子-K中間子-K中間子の3体系でも同様な準束縛状態が作られるかを調べた。カイラル動力学に基づいた相対論的Faddeev法と非相対論的ポテンシャル模型の2種類の方法を用いて、それぞれの系で3体分裂しきい値近傍でハドロン準束縛状態を作ることがわかった。ポテンシャル模型では構造についても詳細な計算を実行し、このようなハドロンが大きなサイズを持つこともわかった。また、このようなハドロンの構成要素となりうるΛ(1405)の構造を詳細に知るために、有効な反応プロセスや物理量を提案し、今後行われる実験に対して重要な示唆を与えた。このようなエキゾチックハドロンの構造を実験的に確認することは非常に重要な意義がある。そのために、高エネルギーの重イオン衝突によるさまざまなハドロンの生成率を見積もり、ハドロンの構造によって生成率に優位な差が出ることを突き止めた。このことによって、重イオン衝突でのハドロン生成率がハドロンの構造を知る手がかりになりうることを示した。

A、Ac、Abバリオンでは、udスカラーダイクォークがそれらの構造に重要な寄与を与えている一方で、核子やσ中間子では、udダイクォークだけではその質量が再現できず、ダイクォークがuクォークとdクォークに分かれる寄与が必要なことがわかった。
歯肉を用いた動物細胞/ウイルス・フリーの iPS細胞技術‐安全な移植医療に向けて‐

細胞移植治療に応用可能なiPS細胞を作製するには安全性の課題を解決する必要があり,iPS細胞の樹立に用いるウイルスや動物性フィーダー細胞の回避もその一つである。我々は,患者歯肉を用いてiPS細胞を作製する際に,ウイルスベクターの代わりにプラスミドベクターを用い,さらに患者の歯肉から培養した細胞を樹立したiPS細胞のフィーダー細胞として利用する技術を確立した。本研究成果は,動物細胞/ウイルス・フリーのiPS細胞技術に貢献するものと期待される。本研究の目的は、患者の歯肉から培養した細胞をiPS細胞の資源とすると同時に、フィーダー細胞として利用することにより、動物細胞/ウイルス・フリーのiPS細胞技術を追究することである。前年度は、歯科治療の際に切除された歯肉から線維芽細胞を分離培養し、この細胞から従来のウイルスベクターを用いる代わりに、エピソーマルプラスミドベクターを用いてヒトiPS細胞を樹立することに成功している。本年度は、歯肉線維芽細胞を自己フィーダー細胞として用いた培養方法を検討するために、分離培養した歯肉線維芽細胞をマイトマイシンCで処理することによって増殖能を不活性化し、これらをフィーダー細胞として用いて、ヒトiPS細胞の培養維持の可否を検討した。その結果、歯肉線維芽細胞はフィーダー細胞としてヒトiPS細胞の培養を維持することが明らかとなった。これらの成果は、本研究目的である動物由来成分およびウイルスフリーのiPS細胞の作製が、患者由来の歯肉線維芽細胞を用いることで可能であることを示唆している。本年度は、歯科治療の際に切除された歯肉から分離培養した線維芽細胞を、ウシ胎児血清を用いない培地を用いて継代培養する技術を確立した。さらに、この無血清培地を用いた場合、歯肉由来の線維芽細胞は皮膚由来の線維芽細胞と比較して高い増殖能を示すことが明らかとなった。また、従来のウイルスベクターを用いる代わりに、エピソーマルプラスミドベクターを歯肉細胞にトランスフェクション法によって導入することで、ヒトiPS細胞の樹立に成功した。樹立したiPS細胞は、形態的にES細胞様コロニーを示し、多能性幹細胞マーカーであるアルカリフォスファターゼに陽性を示すとともに、ES細胞特異的遺伝子の発現を示した。これらの成果は、本研究目的である動物由来成分(血清)およびウイルスフリーのiPS細胞の作製が、歯肉細胞を用いることで可能であることを示している。今後は、歯肉線維芽細胞を自己フィーダー細胞として用いた培養方法を検討するために、分離培養した歯肉線維芽細胞を、マイトマイシンCで処理することによって増殖能を不活性化し、これらをフィーダー細胞として用いて、ヒトiPS細胞の増殖維持(継代培養)について検討し、維持されたiPS細胞の性質について詳細な検討を加えていく予定である。また、従来のウイルスベクターを用いる代わりに、エピソーマルプラスミドベクターを用いる方法を用いることで、ヒトiPS細胞の樹立に成功した。今後は、歯肉線維芽細胞を自己フィーダー細胞として用いた培養方法を検討するために、分離培養した歯肉線維芽細胞を、マイトマイシンCで処理することによって増殖能を不活性化し、これらをフィーダー細胞として用いて、ヒトiPS細胞の増殖維持(継代培養)について検討する。比較するフィーダー細胞には、ヒト皮膚由来線維芽細胞および、従来使用されているマウスSNLフィーダー細胞を用いる。また、自己フィーダー細胞上で培養を維持したiPS細胞の性質について詳細な検討を加える予定である。さらに、iPS細胞の増殖を維持できた歯肉線維芽細胞(自己フィーダー細胞)株とそうでない細胞株における遺伝子発現プロファイルの相違を検討し、歯肉線維芽細胞がフィーダー細胞として機能するための分子を探索する予定である。ウイルスフリーで樹立したiPS細胞を自己フィーダー歯肉線維芽細胞上に移し、このiPS細胞が未分化状態を維持したまま正常に増殖し、継代培養が可能であるかどうかを検討する。これらの検討を行うために必要な研究費を使用する。また、自己フィーダー細胞上で培養されたiPS細胞における未分化細胞マーカーの遺伝子発現をPCR法で、DNAメチル化状態をbisulfiteシークエンス法で解析し、従来のマウスSNLフィーダー細胞で樹立されたヒトiPS細胞と比較検討するための関連試薬の購入に研究費を使用する。

さらに,自己フィーダー細胞を用いて樹立したヒトiPS細胞の分化多能性の検討を、胚様体形成による試験管内分化誘導(免疫染色法,PCR解析)、テラトーマ形成能試験(免疫不全SCIDマウスへ精巣への細胞移植)により行うため、これらの費用が必要である。以上について得られた結果を取りまとめ、国内および国際学会にて成果の発表を行うために研究費を用いる。
現代アメリカ文学におけるフォークナーの遺産の体系的研究

本研究は、従来の批評では十分考察されてこなかったウィリアム・フォークナーと同時代の二人の巨匠である南部出身の作家トマス・ウルフとニュー・イングランド出身の劇作家ユージーン・オニールとのインターテクステュアルな比較研究をまず行うことによって、現代アメリカ文学に大きな影響力を与えたフォークナー文学の基本的特徴に関する多くの知見を得ることができた。それらの特徴は-(1)地域的アイデンティティの歴史とその探究、(2)意識の流れの手法、(3)小説形態の絶え間のない刷新、(4)土俗的な素材と実験的な小説形態との有機的な結合、(5)「過去の現在性」という歴史意識(歴史感覚)(6)マジック・リアリズム的な超自然的要素の導入、(7)人間事象の対位法的な捉え方、(8)年代記的な全体世界の構築、(9)家族を人間関係の葛藤の温床と捉えての心理的な洞察、(10)メタフィクションへの関心、(11)ギリシャ悲劇的な運命の認識-などである。こうしたフォークナー文学の原型的特質を踏まえた上で、さらに現在の文学研究ではジェンダーとともに必須となった《人種》と階級という二つの視点を通して、奴隷制度の罪業と南北戦争の敗北の後遺症に苦しんだ、アメリカ合衆国の異端児である南部社会の特異な体質を明白にした。上記の基本的研究成果を基に、現代アメリカ文学において、ヴィジョンと文学創造の方法の点で、フォークナー文学の正当な遺産後継者はウィリアム・スタイロンとトニ・モリスンだと捉える観点から、前者の場合には白人中産階級の家庭悲劇における父と娘の近親相姦的な関係の象徴的意義を解き明かし、後者の場合には《人種》に深く絡む色彩と視線のヒエラルキーという視点から、アフリカ系アメリカ人文学の研究分野において最近大きな関心を集めるようになった黒人表象の特徴や、カラーラインの不可視の暴力性を、フォークナー文学の具体的なテクストとの対比において考察した。科研の追加配分の通知を10月下旬に受けて、ウィリアム・スタイロンの処女作『闇の中に横たわりて』の再読と分析を本格的に開始し、それと並行して、彼と現代文学に関する図書、および、スタイロンの出生地であるヴァージニア州をも含むアメリカ南部を歴史的、社会文化的に扱った研究書を購入し読み進めた。その作業において、スタイロンの当作品がモダニズム文学のすぐれた成果と見なされているフォークナ-の『響きと怒り』と『死の床に横たわりて』の影響の痕跡を強く残していることが確認できた。それらの痕跡を具体的に確定しまとめる段階で、私の研究テーマとして挙げている「フォークナ-文学の遺産」という概念を少し拡大する必要があることに気づいた。すなわち、ある作家の作品のどこまでが影響によるもので、どこからオリジナリティかという難しい区別の問題が現れてくるからである。つまり、遺産の相続という垂直に見る伝統的なロマン主義の概念から考察するだけではなく、相互テクスト性(インターテクスチュアリティ)という時代を越えたテクストどうしの共振現象としても捉える方が、「あらむるテクストは引用のモザイクとして構築されている。テクストはすべて、もうひとつの別テクストを吸収、変形したものである」という現代の先鋭なテクスト観にも合致するだろう。購入した最新のスタロイン研究書を参照しながら、既発表の『ナット・ターナーの告白』と『ソフィーの選択』に関する論文に若干の修正・加筆を行い、本年度の主たる目的であった『闇の中に横たわりて』については、上記の修正作業を試みながら、現代の文学観に見合うような論稿を作成中である。なお、平成10年度の設備備品費から購入予定であったノート・パソコンが、出張先での資料収集や研究作業には不可欠の備品であることを痛感したので、今年度の予算で購入し研究のいっそうの効率化を図った。

上記の基本的研究成果を基に、現代アメリカ文学において、ヴィジョンと文学創造の方法の点で、フォークナー文学の正当な遺産後継者はウィリアム・スタイロンとトニ・モリスンだと捉える観点から、前者の場合には白人中産階級の家庭悲劇における父と娘の近親相姦的な関係の象徴的意義を解き明かし、後者の場合には《人種》に深く絡む色彩と視線のヒエラルキーという視点から、アフリカ系アメリカ人文学の研究分野において最近大きな関心を集めるようになった黒人表象の特徴や、カラーラインの不可視の暴力性を、フォークナー文学の具体的なテクストとの対比において考察した。前年度(1997)の補助金追加決定を11月に受けて研究開始がずれ込んだため、平成10年度開始の研究計画もそれに伴い遅れ気味になってきた。遅れを取り戻すつもりで当初の計画通り、8月末にペンシルヴァニア州立大学教授のジェイムズ・L.W.ウェスト3世とヴァージニア大学教授のレイモンド・ネルソンに、研究計画のレヴューを受けた。スタイロン研究の第一人者であるウェスト教授が6月に出版したウィリアム・スタイロンの浩瀚な伝記は、私の研究に大きな刺激になった。しかし、レヴューまでにその伝記を精読し、疑問点、質問点を整理するのに、予想以上に多くの日数を要してしまった。彼からはスタイロンの宗教的背景、継母との緊張した関係等について、伝記の中では十分触れていない詳細な情報を取得し、ネルソン教授からも作家の出身地であるヴァージニア州タイドウォーター地方の精神風土や、フォークナーの遺産を考える場合のシャーウッド・アンダソン文学の重要性について教わり、黒人に関してスタイロンの作品に表出する神秘主義的特質をアンダソンや1920年代の文学との関連で捉える必要性を指摘された。その指摘を受けて、以前からフォークナーとヘミングウェイの文学との関係で貯めていた資料をもとに、アメリカ文学におけるアンダソンの位置について論文をまとめた。アンダソンに関する本を出版する計画を持つグループと接触を取ることにより、彼らの勧めで拙論をその評論集に収録してもらうことができた。執筆の途中になっている『闇に横たわりて』(Lie Down in Darkness)と、読了したままの『この館に火をつけよ』(Set This House on Fire)という大きな両長編小説についての論文作成の作業は、ウエスト教授から恵贈された貴重な資料も使うことによって、平成11年度の前半期に仕上げ、もしその進行で時間的にゆとりができそうであれば、彼の中編と演劇と短編集についての論考を後半期に行いたい。私の研究課題である「現代アメリカ文学におけるフォークナーの遺産」という大きな問題を考察する場合、先行作家の遺産の譲渡(借用)という視点だけでなく、後世代による先達の反読(誤読)の可能性を視野に入れた相互テクスト性の観点からも考察する必要があるという認識の変化に伴い、既発表のスタイロンに関する論文2編(『ソフィーの選択』と『ナット・ターナーの告白』)についての修正を行いつつ、現代文学と彼の出身地であるヴァージニア州の社会的、歴史的背景に関する研究書を購入し読み進めた。さらに、最近のフォークナー文学解読の重要な視点となってきた人種、階級、ジェンダー、および、ポストコロニアリズム等の先鋭なポリティカルな視線にも目配りして、テクスト読解のための背景的知識を補強し、分析の精度を磨く努力をした。『闇の中に横たわりて』、『この家に火をつけよ』、『ロングマーチ』等のスタイロンのテクストについては精読作業を終えたが、現在は第一作についての論文を執筆中で、他の作品分析にまでは進むことができなかった。
ターミナルケアにおけるカウンセリングとリエゾン活動の機能

研究者が行ったカウンセリングの中で、癌患者は病者の世界を語り、それぞれが独自に状況を意味づけていった。癌患者の場合は、受容的・共感的理解と共に、関心を持って病室を訪問し続けることそのものの重要性が特徴として現れた。しかし、真実を告げられていない患者に対するカウンセリングの困難さが問題となった。またこの病棟で、医師及び看護婦に対するコンサルテーション・リエゾン活動を実施した結果、スタッフの患者への精神的ケアの関心が高まり、医療者のコンサルテーションやカウンセリングに対するニーズが明らかになった。しかし、この病棟では研究者自身もカウンセラ-として患者に直接かかわるために、スタッフと同様に臨床状況に巻き込まれることもあり、そのような立場でのコンサルテーション・リエゾン活動をどのように進めていくかが今後の課題である。ターミナルケアでカウンセリング活動を実施している人たちに行ったインタビューの結果から導き出されたことは、日本の医療におけるカウンセリングの軽視である。その一方で、現実にカウンセラ-として働いている人たちは、患者への精神的ケアだけではなく、コンサルテーション・リエゾン的な活動も行っており、非常に重要な役割を担っていた。その教育にはターミナルケアにおける独自の教育方法が必要であることが示唆された。以上の研究結果から、患者に全人的ケアを提供するために、医療の中でカウンセリングの重要性を医療者及び社会が認知し、ターミナルケアにかかわるカウンセラ-の独自の教育を確立し、精神的ケアを専門に行うスペシャリストがチーム医療の一員としての役割を担えるようになることが急務であることが示唆された。
多細胞生物進化解明の基盤としての植物不等分裂に関わる遺伝子ネットワークの解明

完全長cDNA一過的過剰発現法による植物不等分裂に関わる遺伝子の網羅的単離、機能推定1、ヒメツリガネゴケから単離したプロトプラストの細胞極性形成開始から不等分裂中の過程で,発現している遺伝子群を効率的かつ網羅的に単離するため、この過程の再生細胞を濃縮して回収する方法を検討した。プロトプラストを単離し、培養開始後2-3日目の時点で細胞を回収し、網目サイズ20μmのフィルターで再生中の細胞と死細胞を分ける操作を行った。回収した再生中の細胞はその後も再生を続けていくことを確認し、この操作が再生細胞の成長に及ぼす影響は排除できると考えられた。このようにして回収した細胞からRNAを抽出し、完全長cDNAライブラリーを作成している。2、既存の完全長cDNAライブラリーを対象として本年度新たに約1000cDNAクローンの一過的過剰発現スクリーニングを行った。その結果等分裂や細胞が巨大化する、細胞死を起こすなど様々な再生異常を引き起こす原因遺伝子を見いだした。3、これまでのスクリーニングからあわせて約200cDNAが再生過程に異常を引き起こすことがわかった。これらの表現型の再現性を確認し、細胞極性形成や不等分裂異常に関わると考えられる原因遺伝子を57種類に絞ることができた。これら候補遺伝子の全塩基配列を決定し、配列に基づいて機能の推定を行った。4、57種類の候補遺伝子についてRNA干渉による表現型観察、ならびにcDNAとGFPの融合タンパク質をプロトプラストに一過的に発現させ不等分裂時の融合タンパク質の細胞内局在を調べるスクリーニングを開始した。RNA干渉、GFP融合コンストラクトを個々の候補遺伝子に対して効率よく作成するためGatewayクローニングを利用できるようにした。これらの方法により候補遺伝子をさらに絞りこむ。