hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
蛋白質の凝集メカニズムの原子レベルでの解明と化学修飾法による安定化

当初の予想と少し違った点は、pH4.0でVanXが2量体をとっていることが質量分析の結果より示唆されたことであった。つまり、NMRでのきれいなスペクトルは2量体としての安定な構造を反映していたことになる。また、その状態で蛋白質濃度を下げると、0.1 mM程度を境にスペクトルの質がかなり劣化することも分かった。これは、濃度を下げることにより2量体が解離して単量体になり、また非可逆的に単量体がunfoldしたためではないかと考えている。グラム陽性である腸球菌がもつバンコマイシン耐性に関与するプロテアーゼVanXは、酸性pHの条件下では単分散状態にあると考えていた。実際、NMR実験によると、きれいな二次元スペクトルが得られた。しかし、質量分析の結果から、これは安定な2量体であることが分かった。2量体は回転対称性をもつため、NMRでは単量体のスペクトルとなかなか区別がつかない。さらに蛋白質の濃度を下げると、この2量体が解離し、続いてunfoldすることも示唆された。このことから、pHと濃度という2つの条件に関するパラメータで蛋白質の相図が変わるという、当初に想像していたよりも複雑な状況であることが分かった。そこで、まずは2量体としてどのような立体構造をとっているのかを解析することとした。このデータをもとに中性pHでどのように凝集しているのか、そして、それを防ぐためにはどのような化学修飾を施せばよいのかを正しく判断することができると考えている。タンパク質の凝集が最近の大きな話題となっているが、原子レベルでこれを見ると、凝集と言えどもその様子は大きく二つに分けられる。1つ目は個々の分子が特定の立体構造をとらず、さまざまな、あるいは動いた構造をとったタンパク質分子がお互いに非特異的に相互作用して大きな凝集体となっているケースである。もう1つは、ある程度決まった構造をすでにとってはいるが、その構造を保ったまま集まって凝集しているケースである。その決まった構造がもともとの構造と異なるようなケースもこの範疇に入る。この二つのケースのうち後者を対象として、その凝集の物理的なメカニズムを解明することを研究の目的とした。対象として、バンコマイシン耐性に関与する腸球菌由来のVanXを選んだ。研究を進めるにつれて、これが二量体である証拠が出始め、さらにこのVanXは濃度に依存して二量体と四量体の間の平衡が移動しているようであった。凝集を防ぐための具体的な化学修飾の開発にまでは至らなかったが、最終年度はNMRによる主鎖の帰属をほぼ完成させ、二量体としての立体構造が分かりつつある。当研究は今後も継続していき、多量体を形成するメカニズムを立体構造の観点から解明する。立体構造を保ったままタンパク質が凝集する現象は、アミロイドなど多くの病気と関連している。そのため、そのメカニズムの解明はそれらの病気の解明につながる。また、大腸菌発現系における封入体(inclusion body)の実体についてもあまり良く分かっておらず諸説が出されているが、この解明にも役立つであろう。また、多くのタンパク質が自発的に複雑な複合体を形成する系において、その組織化の物理的メカニズムには今回の凝集のメカニズムと共通している要素も多い。このことから、当研究は生体内における純粋な生命科学の解明にもつながると考えている。蛋白質には特定の立体構造を保ったまま相互作用して凝集する例が見られる。このような凝集は多くの病気にも関連している。
尿路上皮腫瘍に対する殺細胞性リンパ球の誘導とその臨床応用に関する研究

2、免疫療法剤の1つであるBacillus Calmette Guerin(BCG)がエフェクター細胞であるリンパ球を活性化するばかりでなく、標的細胞である尿路上皮腫瘍細胞とリンパ球との結合度を上昇させることで尿路上皮腫瘍細胞のリンパ球に対する感受性をも増強させることにより、リンパ球の尿路上皮腫瘍細胞傷害活性を増強させることを明らかにした。3、BCGとフィブリノーゲンとを混合局所投与することにより、BCGの局所での滞留時間が長くなり、BCGの尿路上皮腫瘍に対する抗腫瘍作用が増強されることを証明した。4、OK-432がBCGのごとくリンパ球を活性化するばかりでなく、尿路上皮腫瘍細胞のRNA合成を阻害し、尿路上皮腫瘍細胞のリンパ球との結合度を上昇させることで尿路上皮腫瘍細胞のリンパ球に対する感受性をも増強させることにより、リンパ球の尿路上皮腫瘍細胞傷害活性を増強させることを証明した。5、化学療法制の1つであるcis-diammine dichloroplatinum(II)(CDDP)が尿路上皮腫瘍細胞のDNA合成を阻害し、細胞膜を修飾することで腫瘍細胞のリンパ球に対する感受性を増強させることにより、リンパ球の尿路上皮腫瘍細胞傷害活性を増強させることを明らかにした。1.膀胱癌患者の末梢血リンパ球にin VitroでBacillus CalmetteーGuerin(BCG)を作用させることにより、T24ヒト尿路上皮癌細胞株および新鮮分離自己癌細胞に対する殺細胞効果が増強されることを示した。さらに、この殺細胞効果の増強が効果細胞である末梢血リンパ球側の殺細胞効果の増強と,癌細胞側の感受性の増強の両者によることを示した.2.膀胱癌患者の末梢血リンパ球にin vitroでPolysaccharideKurehe(Krestin:PSK)を作用させることにより,T24ヒト尿路上皮癌細胞株および新鮮分離自己癌細胞に対する殺細胞効果が増強されることを示した.また,PSKの経口投与により,膀胱癌患者の末梢血リンパ球によるT24細胞株および自己癌細胞に対する殺細胞効果の増強がみれるめことを示した.4.マウス膀胱腫瘍(MBTー2)に対するBCGとHyperthermiaの併用効果を検討中である.マウスにMBTー2接腫後8日目にBCG1.0mgもしくは生理食塩水の皮下注を行い,43°CでのHyperthermiaの併用効果をみたところ,BCG投与かつHyperthermia施行群で最も腫瘍の発育が抑制された.1、免疫療法剤の1つであるBCGがエフェクター細胞であるリンパ球を活性化するばかりでなく、標的細胞である尿路上皮腫瘍細胞とリンパ球との結合度を上昇させることで尿路上皮腫瘍細胞のリンパ球に対する感受性をも増強させることにより、リンパ球の尿路上皮腫瘍細胞傷害活性を増強させることを明らかにした(CANCER,65:537-545,1992.,BIOTHERAPY,1993,in press)。2、OK-432がBCGのごとくリンパ球を活性化するばかりでなく、尿路上皮腫瘍細胞のRNA合成を阻害し、尿路上皮腫瘍細胞とリンパ球との結合度を上昇させることで尿路上皮腫瘍細胞のリンパ球に対する感受性をも増強させることにより、リンパ球の尿路上皮腫瘍細胞傷害活性を増強させることを証明した(CANCER,65:2999-3007,1992)。3、化学療法剤の1つであるCDDPが尿路上皮腫瘍細胞のDNA合成を阻害し、細胞膜を修飾することで腫瘍細胞のリンパ球に対する感受性を増強させることにより、リンパ球の尿路上皮腫瘍細胞傷害活性を増強させることを明らかにした(J.Uro1.,147:505-510,1992.,CANCER,1993,in press)。1.免疫療法剤の1つであるBCGがエフェクター細胞であるリンパ球を活性化するばかりでなく、標的細胞である尿路上皮腫瘍細胞とリンパ球との結合度を上昇させることで尿路上皮腫瘍細胞のリンパ球に対する感受性をも増強させることにより、リンパ球の尿路上皮腫瘍細胞傷害活性を増強させることを明らかにした(BIOTHERAPY,7:317-318,1993,The Year Book of Urology,109-110,1993,Int.J.Urol,in press,1994,医事新報、発表予定、1994)。3、化学療法剤の1つであるCDDPが尿路上皮

腫瘍細胞の細胞膜を修飾することで腫瘍細胞のリンパ球に対する感受性を増強させることを明らかにした(CANCER,71:1313-1321,1993,医事新報、発表予定、1994)。
小・中学校の自律的改革のための形成的評価指標の開発とその実用化に関する研究

本研究は、日本において、差異や多様性を尊重する共生社会の構築を目指したインクルーシブ教育システムを実現するための基本的研究である。共生社会構築に不可欠な要素として、小・中学校改革に着目し、学校が自律的にインクルーシブな教育環境を築くにあたっての評価指標の開発を目的とした。初年度は以下の2つを実施した。1システィマティック・レビュー:目的:低発生頻度障害の代表である視覚障害に焦点をあて、1980年から2018年までに査読付き英文誌に掲載されたインクルーシブ教育に関連する論文をレビューすることとした。方法:EBSCO, ERIC, Education fulltextのデータベースを活用し、視覚障害、インクルーシブ教育等、計4つのキーワードで検索した。成果:472の論文雑誌が挙がった。472論文のタイトルとアブストラクトからテーマ外のものを外した結果、93の論文雑誌が残った。現在は研究代表者と米国オハイオ州立大学教員で93の論文雑誌のカテゴリー化を進めている。2実地調査:目的/方法:米国(ミシガン州、オハイオ州)、ドイツ(バーデン=ビュッテンベルグ州、ハンブルグ州)の小・中学校で学ぶ低発生頻度障害児の支援に携わる教員11名に対し、インクルーシブ教育を構築するための工夫や活用されているツールについてインタビュー調査を行った。成果:米国では法的拘束力をもつ個別化教育プログラム(IEP)が重要な役割を果たしていたが、その詳細を決定する上で、一つの指標として活用されていたのが低発生頻度障害のニーズを可視化するミシガン視覚支援サービス介入尺度(MVSSRS)であった。ドイツでは複数の盲学校にて視覚障害児の支援ニーズと必要となる学習環境や専門家による支援内容・時間数などを数値化したガイドラインを作成していた。こうした複数のツールが、小・中学校の主体的な改革を促していることが分かった。初年度である平成30年度は本研究の理論的枠組みとなる文献研究を開始できたほか、一部の実地調査にも着手できた。以上の理由から順調に進展していると判断した。2019年度は2018年度に実施した研究成果を海外の学会等で発表し、関連分野の研究者と情報交換を行う予定である。
人文科学支援のための「かたち」と色の解析ツールの開発研究

民具や情景に現れる民族の特性をひとたび数量的に記述することができれば、多変量解析によるさまざまな科学的解析が可能になり、新しい人文科学の手法の確立が期待される。本研究では「かたち」についてこれまで開発してきた対称性解析にもとづく各種の計量の方法によるツールの整備と応用を図ることを目的とした。また、色について、カラー画像入力データからマンセル表色系へ変換し、また、色スケールを導入して、その同時入力による色補正法を開発し、人文科学向きの色解析のためのツールの整備と応用を図ることを目的とした。本年度は、とくにコンピュータプログラムの完成度を高め、また、数量的記述の方法の開発と解析への応用を進めることを目標とした。ツールの整備については、これまでに開発してきた、入力画像から「かたち」の対称性解析に至り、さらに、その結果にもとづいて主形状を求めるだけでなく、規格化形状を生成して局所幅関数とくびれ関数を求める方式およびコンピュータプログラムの完成度を高め、洗練化を図った。さらに、人文科学への応用の事例として、同一人物によるひらがな書体に適用した結果、毛筆と筆ペンの違いが局所幅関数とくびれ関数として数量的に明確に現れ、解析の示唆を得ることができた。また、色については、マンセル表色系変換のプログラムを製作し、開発した簡便な色補正法について実験的に評価するとともに、その利用の指針を与えた。さらに、等色と照明の問題について検討するとともに、自然物と人工物における色を解析するということの意味の違いを明確にした。
DNAセンシングシステムの開発

本研究ではまず蛍光偏光解消を応用したDNAの検知システムについて検討した。すなわち、蛍光物質を標識したプロ-ブDNAとハイブリダイズした後の蛍光物質は、回転運動などの運動モ-ドが大きく異なる。したがって偏光解消度を指標としてハイブリダイズしたDNAの量を推定することが可能と考えられた。まずハイブリダイゼ-ションの過程でどのように偏光度が変化していくかを調べた。その結果、偏光解消は時間とともに増加していき、しだい定常値に達することがわかった。この変化はハイブリダイゼ-ションの進行度を示している。いま、タ-ゲットとなるDNAとして、pBR322プラスミドDNAを540bp断片中の3個あるいは6個のシトシンをチミンに変化させた試料を用いて、これにプロ-ブDNAを作用させ、ハイブリダイゼ-ションの時間経過を調べた。その結果、ミスマッチの塩基数が増加することにつれ、蛍光解消度の増加率が小さいことが明かになった。PCR増幅反応は、超微量のDNAを検出するきわめて有効な方法である。そこで蛍光偏光解消法をPCR増幅反応に適用した。まず、16merのオリゴマ-にFITCを標識したDNAプロ-ブを合成し、タ-ゲットDNAとしてpUC119プラスミドを用い、遺伝病の診断を考え、200bpから1kbpまでの範囲を選んだ。PCR増幅回数を5回より30回まで5回おきに測定したところ、5回以降蛍光偏光異方度が上昇していることが判った。これは、FITCで標識されたDNAプロ-ブがPCR増幅反応の進行にともなって、16merから目的の長さの2本鎖DNAへと伸長し、FITCの動的挙動が変化したことを示すと考えられた。またPCR増幅の初期の段階でより迅速に、タ-ゲットDNAの存在を確認できることも示された。さらに測定温度を高くすると偏光異方度が下がることもわかった。これは、溶液の粘度変化が反映しているものと考えられた。
網膜剥離の発生過程および治癒過程における網膜色素上皮の役割

網膜色素上皮は正常な網膜の接着および網膜剥離の治癒機転において重要な役割を持つ一方,網膜剥離の重篤な合併症である増殖性硝子体網膜症にも深く関っている。本研究において,生体眼の網膜接着力およびその増強,汎網膜光凝固術のERG C波におよぼす影響,眼虚血の網膜色素上皮におよぼす影響について成果が得られた.いずれの研究も有色家兎を用いた。網膜下腔にマイクロピペットを刺入し,液を注入することにより作製される限局性網膜剥離が進展する際の網膜下腔と硝子体側の圧差をmicropressure measuringsystemにより記録した。理論式にあてはめて得られた家兎生体眼の網膜接着力は(1.8±0.2)×10^2dyn/cmであった。網膜接着力は,種々網膜凝固術によっても20%増強された。このことは,網膜色素上皮の代謝活動が網膜接着力に関与していることを示唆する。網膜色素上皮の機能を反映するERG C波を指標として,網膜剥離の治療法の1つである汎網膜光凝固術の効果を検討した。凝固早期にはC波は消失し,炎症・浮腫による網膜色素上皮の機能障害が強いと考えられたが,長期にわたって徐々に回復しバリア-機能は再構築され得ることが判った。家兎眼で網膜剥離から増殖性硝子体網膜症を生ぜしめることは出来なかったが,眼虚血によって網膜色素上皮の増殖が起こることを発見した.眼内圧を上昇させることで得られる眼虚血を負荷し,その後の変化を光学顕微鏡,電子顕微鏡にて観察した。網膜の神経細胞は容易に変性壊死に陥ったが,ミュ-ラ-細胞,網膜アストログリアおよび網膜色素上皮は残存した。眼虚血後1月で網膜色素上皮は遊走,重層化など増殖傾向を示した。このことは網膜剥離がなくても,虚血のみによって網膜色素上皮が増殖し得ることを示唆している。網膜下腔にマイクロピペットを刺入し、実験的網膜剥離を作製する手技は格段に向上し、大小各種大きさの網膜剥離を家兎眼において作ることが出来るようになり、満足できるモデルとして確立された。このモデルを用いて、剥離初期から復位後まで時間経過を追って、網膜色素上皮(RPE)の形態学的変化が主として電子顕微鏡を用いて研究された。網膜剥離によるRPEのバリヤー機構の破たん、網膜復位後のその修復のメカニズムが明らかになってきた。電気生理学的観察では大きな収穫が得られた。RPEの機能を反映するERGC波は網膜剥離治療法の1つである網膜光凝固術によって、a,b波よりも大きな影響を受けた。それは光凝固における熱変換が、主として網膜色素上皮層で起こり、それによる網膜色素上皮層の破壊が、電気的極性を喪失させ、網膜下腔のイオン動態を修飾するからであると考えられた。さらに光凝固後のc波の経時的変化からRPEのバリヤー機能を回復(瘢痕化の完成を意味する)に要する時間は光凝固の程度に比例し、又最終的なc波の回復度は凝固面積に依存することがわかった。網膜剥離の重篤な合併症である増殖性硝子体網膜症にRPEが関与しているといわれているが、その点についての新しい手がかりが得られた。眼圧を上げることにより完全な眼虚血を負荷し(ERGによって完全な網膜虚血が得られたことを確認する)、その後の変化を形態学的、電気生理学的に長期観察したところ、RPEの増殖傾向を確認することが出来た。

これは、網膜剥離がなくとも、網膜虚血のみによってRPEが増殖することを示唆し、組織化学的手法などマーカーを用いた検索により、虚血によるRPEの増殖という現象を細胞レベルで研究する有力なモデルを提供できるであろう。網膜と網膜色素上皮の間の生理的接着力は網膜色素上皮の代謝機能に大きく依存しているが、その接着力について画期的な成果が得られた。家兎網膜下腔にマイクロピペットを刺入、Hank's液を注入することにより小さな網膜剥離を作製し、ゆっくり網膜剥離が拡大するときの硝子体腔と網膜下腔間の圧差をマイクロプレッシヤ-システムにて正確に測定する。Laplaceの法則を応用した計算式より家兎正常眼における網膜接着力は(1.8±0.2)×10^2dyn/cmと見積られた。今回得られた値は、従来の摘出眼を用いたpeeling法による結果の約5倍であった。われわれの方法が、従来のpeeling法などに較べ、はるかに生理的条件下で行なうことが可能であるためであろう。この方法は非生理的条件下、すなわち網膜剥離復位後の網膜接着力、各種網膜凝固法による接着力の増強効果などの評価に有力であると考えられ、さらに研究を行なっている。臨床面では網膜剥離眼を対象としてパタ-ンERG(P-ERG)、パタ-ンVECP(P-VECP)を応用し電気生理学的に検討することを開始した。網膜色素上皮の支持を失なった剥離網膜、術後復位した網膜の機能、特に黄班機能を客観的に評価することを目的とした。剥離網膜からのP-ERG,P-VECPは著明に減弱し剥離部位特性を示した。復位後、除々に回復が見られるが、視力、フリッカ-値などの自覚的機能との解離が観察された。それらの意味するところは現在不明であるが、今後症例数、経過観察期間を増やし検討していく。網膜剥離の発生に抵抗する網膜接着の生体内測定法は確立され,家兎生体内網膜接着力は(1.8±0.2)×10^2dyn/cmであることは前年度までに明らかとなった。この網膜接着力を増強あるいは損う因子の研究が次の目標となった。網膜光凝固術,網膜冷凍凝固術,網膜ジアテルミ-凝固術の各種網膜凝固術および炭酸脱水酵素阻割剤アセタゾラミドの静脈内投与の効果を検討した。網膜光凝固は220%,網膜冷凍凝固は215%,網膜ジアテルミ-凝固は280%の接着力増強効果を示し,これら凝固法による瘢痕形成が十分網膜剥離の予防に有効であることが確認された。アセタゾラミドは20%網膜接着力を増強した。このことは網膜接着力は網膜色素上皮の代謝作用にも依存していることを示唆する。家兎眼で,網膜剥離および網膜製孔を作製し,その状態から増殖性硝子体網膜症を発生させることは困難であった。困難の最大の理由は,家兎網膜が無血管であることと考えられた。家兎眼に作られた大きな網膜剥離はその維持が極めて困難であった。剥離部網膜は数日で壊死に陥り,やがてphagooyteに貧食され,硝子体腔により一掃されてしまい,臨床的に見られる増殖性硝子体網膜症に近似した状態を生ぜしめることはできなかった。すでにある線維芽細胞を硝子体腔に注入する方法より優れたモデルとするためには一層の努力が必要であろう。一方,眼虚血によって網膜色素上皮が増殖する現象は,再現性にも優れていることが判った。網膜神経細胞の変性壊死に伴う二次的な変化ではないかという疑問はぬぐい切れないが,眼虚血が増殖性硝子体網膜症に関与していることを示唆する所見であろう。眼虚血が網膜色素上皮の増殖を促すメカニズムと,化学的因子の検索を含め追求するのが今後の課題である。
プロテインチップ創製のための新規な表面ナノコーティング

高性能プロテインチップの開発のためには、生体高分子の固-液界面でのナノスケールでの物理化学的挙動をより深く理解する必要がある。具体的には生体分子の機能を失わずに化学あるいは物理固定する手法の開発、非特異的吸着を避けるための材料表面処理法の開発、固-液界面での生体分子間相互作用の動力学解析が挙げられる。本研究ではこれら全てを同時に解決するための新規なコーティングとして、メタクリレート系高分子から調製されるステレオコンプレックス超薄膜を利用し、タンパク質固定化能、生体成分との相互作用を定量的に解析し、高機能プロテインチップのための新規な機能ナノコーティング表面を創製した。水晶発振子法を利用し、薄膜調製、タンパク質の固定化について定量化した後、引き続き、固定化したタンパク質と特異的に相互作用するタンパク質水溶液に浸すことで結合挙動を定量的に解析した。固定化された全タンパク質に対する結合割合を求めるとともに、タンパク質濃度を変化させて結合定数や結合速度定数を算出し、従来得られている結果と比較した。なかでも、免疫グロブリンのFcと相互作用するプロテインAを吸着固定した際、コンプレックス薄膜上でその活性が維持され、その後のIgG抗体の固定化と抗原検出を効率よくできることを明らかにした。イソタクチック(it-)ポリメタクリル酸メチル(PMMA)およびシンジオタクチック(st-)ポリメタクリル酸の各溶液に交互に基板を浸すだけでステレオコンプレックス超薄膜が調製できるか否かを検討した。平らなモデル基板として9-MHzの基本振動数を有する金電極の水晶発振子(QCM)を用い、各溶液に浸しリンスした後に気相中でQCMの振動数減少量を測定した。得られた振動数減少から、Sauerbreyの式に従い積層重量を定量的に解析した。溶媒種、調製温度、高分子の分子量、立体規則性、分子量分布などの膜調製条件を変化させながら、ステレオコンプレックス超薄膜を調製した。ステレオコンプレックスの形成は反射型X線回折および全反射赤外吸収スペクトルにより、逐次積層の有無は動的および静的接触角測定により、膜表面の凹凸度は原子間力顕微鏡により、それぞれ観察した。最終的に、目的の会合形態や膜厚を有するステレオコンプレックス超薄膜が、整理された条件の中から様々な基板上に短時間かつ普遍的に調製できるようにした。次にタンパク質としてアルブミン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、各種抗体を選択し、様々な化学構造を有するステレオコンプレックス超薄膜表面への物理吸着挙動について、QCM法により定量的に解析した。タンパク質濃度を変化させることにより吸着等温線を得て、見かけの吸着定数と最大の吸着量を算出した。吸着固定されたタンパク質の構造変性の有無について、アミド領域の赤外吸収スペクトル変化から詳細に検討した。ステレオコンプレックスに対して、タンパク質は変性することなく、ソフトランディングすることが明らかになった。
１分子 VoV1 によるプロトン輸送の測定

VoV1は、ATPを分解してプロトンを輸送する回転分子である。ATP1分子の分解で輸送されるプロトンの数(proton/ATP ratio, P/A比)を求めるため、極微小体積のチャンバーを利用し、1分子VoV1のプロトン輸送活性を測定した。予想より低いP/A比が見積もられたが、プロトンのリークが原因と考えられる。そこで、脂質分子にpH指示薬を結合させたリポソームを用いてプロトン輸送活性を測定し、P/A比は3-4の間になった。初めて実験的に求められたVoV1のP/A比であり、この結果、V1とVo間のエネルギー共役がtightであることが実験的に示された。VoV1は、ATPを分解して得られる回転力を使ってプロトンを輸送するプロトンポンプである。本研究課題では、一分子のVoV1によるプロトン輸送を可視化することにより、一回転当たりに輸送されるプロトン数を明らかにする。実験系の概要は以下の通りである。極微小体積のチャンバー上に脂質二重膜を張り、そこに一分子のVoV1を再構成させ、ATP存在下でのプロトン輸送を計測する。プロトン輸送は、チャンバー内に閉じ込めたpH指示薬の蛍光強度を測定することにより見積もる。継続的なプロトン輸送活性が計測に必要であるが、野生型のVoV1はADP阻害という現象により、プロトン輸送活性が数分以内に消失する。このADP阻害に陥るのを阻害するため、腸球菌の触媒ドメインを導入した。作成したキメラ型VoV1のプロトン輸送活性を、リポソームを使った多分子系で測定した。その結果、このキメラVoV1が、ADP阻害に陥ることなくプロトン輸送活性を長時間にわたって示すことがわかった。以後の実験にこのVoV1を用いた。最初の実験として、渡辺らが行ったマイクロチャンバーを使った測定系により、このVoV1のプロトン輸送活性を測定した。マイクロチャンバー上に脂質二重膜を形成させた。次にVoV1を含むリポソームを脂質二重膜上に添加する。膜融合によりVoV1がマイクロチャンバー上の膜に再構成される。この時、1チャンバーあたり1分子のVoV1が載るようにVoV1の濃度を調節する。ATP溶液を加えたところ、予めチャンバー内にいれておいたpH指示薬の蛍光変化を測定することができた。プロトン輸送活性が測定できた。この活性が1分子のVoV1によるものかを検討していく。VoV1は、ATPを分解して得られる回転力を膜内在性のVo部分にある回転子(ローターリング)に伝え回転させることでプロトンを輸送する。V1部分で3分子のATPを分解すると、回転子が一回転することから、ATP1分子の分解で輸送されるプロトンの数(proton/ATP ratio, P/A比)は、ローターリングにあるプロトン結合部位の3分の1と予想される。これは、V1とVo間のエネルギー共役が`tight'であることが前提である。しかしながらVoV1のプロトン輸送活性の実測値がないことから、実験値に基づくP/A比は不明であった。本研究では、極微小体積のチャンバー上に貼った脂質二重膜上にVoV1を再構成し、チャンバー内に閉じ込めたpH指示薬の蛍光強度変化を測定することで1分子VoV1のプロトン輸送活性の測定を試みた。ATP依存的な蛍光強度変化は観察されたものの、プロトン輸送活性に換算すると非常に低く、P/A比は理論値である4に比べ低くなった。これは、チャンバーと膜との密閉性が低く、プロトンのリークがあることが原因と考えられる。そこで、リポソームにVoV1を再構成し、リポソームを構成する脂質分子に蛍光指示薬であるpHrodeを結合させた系を用いてプロトンポンプ活性を測定した。この系では溶液中に蛍光指示薬がなくバックグランドの蛍光を低くすることができる。さらに、直径が揃ったリポソームを作成すること、緩衝液や酵素によるpH変化に対する緩衝能を見積もった理論式を使うことで、プロトン輸送速度を見積もった。その結果、概ねP/A比は3-4の間になった。チャンバー上に貼った脂質二重膜上にVoV1を再構成し、ATP駆動によるプロトン輸送活性を測定することができたため。生化学、生物物理学、構造生物学現在観察できているプロトン輸送活性が1分子VoV1によるものかを検定する。また、マイクロチャンバーでは体積が十分小さいとはいえず、見かけのプロトン輸送活性も低い。連携研究者の横川がもつナノ開口( 200 nm直径)されたチャンバーを用いた計測を試みる。

体積がより小さいため、測定感度の改善が期待できる。並行して、ナノアイランドを用いた回転、輸送同時観察系の構築も試みる。チャンバー上にピラーを立て、その上にVoV1のローターを固定し、固定子に観察ビーズを結合させる。回転を観察しながら、チャンバー内のPH変化を同時に観察する。
聴覚障害者への偏見を変容する要因の検討と介入実践の効果

本研究では、日本における聴覚障害者への偏見の実態を調べる。次に、偏見の影響を左右する要因として、不確実性、スティグマ意識の影響を検討する。その際、健聴者が抱く偏見と聴覚障害者自身が抱く偏見の影響をそれぞれ調べる。これらの研究成果から、聴覚障害者への偏見変容・健聴者と聴覚障害者の相互理解を深めるための介入実践を行い、その効果を評価する。最終年度には研究成果をとりまとめ、聴覚障害者への偏見を変容し、よりよい合理的配慮を行うための提言を作成する。
絡み合い高分子の流動誘電緩和:高速流動下の非平衡分子運動に対する基礎的研究

高速流動下の溶融絡み合い高分子鎖の非平衡分子運動は、学術的にも実用的にも重要であるにもかかわらず、十分に解明されていなかった。このような状況に鑑み、本研究では、A型双極子を持つ高分子鎖の大規模運動が誘電活性であることに着目し、流動下で誘電測定を行うことで、高速流動下の非平衡鎖運動を検出・解析した。代表的A型鎖である絡み合い直鎖ポリイソプレンについての流動誘電測定の結果、鎖の平衡緩和速度より10倍以上速い高速流動下で著しい非ニュートン性が観察される領域においてすら、流動の速度勾配方向の鎖運動は流動の影響を殆ど受けないことが明らかとなった。絡み合い星型ポリイソプレンについても、流動の速度勾配方向の鎖運動はやや(30%程度)加速されるに留まった。また、いずれの鎖についても、流動の速度勾配方向の鎖の拡がりは、流動に殆ど影響されなかった。これらの結果は、高速流動下の鎖の配向が、絡み合い鎖に対する古典的管理論の予想より遥かに弱いことを示す。この弱い配向は、最近提唱されている流動誘起束縛解放機構を支持するものである。また、上記の直鎖と星型鎖の差に関連して、誘電量と粘弾性量の比較から、これらの鎖の大規模平衡運動の特徴を精密解析した。その結果、直鎖の大規模平衡運動は現在の精密管理論で想定されている膨張管中の運動と一致するが、星型鎖の大規模運動は膨張管中の運動としては記述されないこと、この星型鎖の運動は熱的束縛解放機構に支配されていることが明らかとなった。この結果に基づき、星型鎖に対する精密管理論をさらに修正したところ、誘電量と粘弾性量の双方についての理論と実験の一致が改善された。この結果は、直鎖と星型鎖の終端緩和機構の差を示すもので、上記の高速流動下で挙動の差(運動の加速の有無)はこの終端緩和機構の差を反映することが示唆された。本研究は、高速流動下での絡み合い鎖の非平衡運動を流動誘電緩和の手法で検出・解析し、非平衡運動と非線形粘弾性の関係を明らかにすることを目的とする。この目的達成のため、本年度は、一連の直鎖型ポリイソプレン(PI)試料をアニオン重合して特性解析を行った。また、主電極と対電極の間の同軸円筒状キャピラリー流路に沿って加圧試料を高速流動させながら誘電測定が行えるステンレス製同軸キャピラリー型の流動誘電緩和セル(キャピラリー間隙0.2mm、流路長35mm)を設計・作成した。このセルを用いて、上記のPI試料のバルク系および濃厚溶液系について流動誘電緩和測定を行ったところ、緩和時間が短い低分子量系では十分に非ニュートン性が発現するまでの高速流動が実現できず、流動誘電挙動は静止状態での挙動から変化しなかった。また、緩和時間が長い高分子量系では、非ニュートン性が発現する高速流動は実現できたものの、今回用いたキャピラリー流路中では定常流動が実現されず、流動誘電挙動は静止状態での挙動から僅かにブロードニンクを示すに留まった。上記の測定結果を用いて高速流動下での非平衡絡み合い運動を定量的に論じ、非線形性に対する管理論(Mead et al.,Macromolecules,31,7895(1998))を検証することには無理がある。

そこで、この問題をふまえて、測定対象を高分子量の準希薄絡み合い溶液に変更し、大容量の同軸キャピラリー型および円錐-円板型の流動誘電セルと吸収電流型低周波回路を用いた測定に切り替ることにした。現在,この高分子量PI試科の合成および円錐-円板型セルと吸収電流型回路の試作がほぼ完了した所である。高速流動下の溶融絡み合い高分子鎖の非平衡分子運動は、学術的にも実用的にも重要であるにもかかわらず、十分に解明されていなかった。このような状況に鑑み、本研究では、A型双極子を持つ高分子鎖の大規模運動が誘電活性であることに着目し、流動下で誘電測定を行うことで、高速流動下の非平衡鎖運動を検出・解析した。代表的A型鎖である絡み合い直鎖ポリイソプレンについての流動誘電測定の結果、鎖の平衡緩和速度より10倍以上速い高速流動下で著しい非ニュートン性が観察される領域においてすら、流動の速度勾配方向の鎖運動は流動の影響を殆ど受けないことが明らかとなった。絡み合い星型ポリイソプレンについても、流動の速度勾配方向の鎖運動はやや(30%程度)加速されるに留まった。また、いずれの鎖についても、流動の速度勾配方向の鎖の拡がりは、流動に殆ど影響されなかった。これらの結果は、高速流動下の鎖の配向が、絡み合い鎖に対する古典的管理論の予想より遥かに弱いことを示す。この弱い配向は、最近提唱されている流動誘起束縛解放機構を支持するものである。また、上記の直鎖と星型鎖の差に関連して、誘電量と粘弾性量の比較から、これらの鎖の大規模平衡運動の特徴を精密解析した。その結果、直鎖の大規模平衡運動は現在の精密管理論で想定されている膨張管中の運動と一致するが、星型鎖の大規模運動は膨張管中の運動としては記述されないこと、この星型鎖の運動は熱的束縛解放機構に支配されていることが明らかとなった。この結果に基づき、星型鎖に対する精密管理論をさらに修正したところ、誘電量と粘弾性量の双方についての理論と実験の一致が改善された。この結果は、直鎖と星型鎖の終端緩和機構の差を示すもので、上記の高速流動下で挙動の差(運動の加速の有無)はこの終端緩和機構の差を反映することが示唆された。
新規レドックス系による還元手法を用いる生理活性化合物の選択的高効率合成

本研究では、生理活性物質合成における鍵反応として適用でき、従来にない合成ルートを可能にする、レドックスに基づいた新規な骨格および官能基変換法を開発してきた。1)パツロリドAの全合成の合成ルートを明らかにするとともに、より生理活性が高いと思われるマクロリド系誘導体を、ホスホン酸ジアルキルによる還元的非共役化法を用い、系統的に合成した。例えば、β,γ-不飽和カルボニル基またはγ-オキソ(またはヒドロキシ)-α,β-不飽和カルボニル基を有する生理活性化合物を合成した。2)遷移金属錯体の一電子還元系を有効に用い、ラジカル中間体を経由する合成反応において新規な合成手法を開発した。バナジウムの一電子酸化還元過程を、gem-ジブロモシクロプロパン類のモノ脱ハロゲン化に適用したところ、モノブロモシクロプロパン類の生成において、非常に高い立体選択性が見られた。還元剤として亜鉛を共存させると、触媒反応が進行することが判明した。反応系にホスホン酸ジエチルを共存させることが必須であった。低原子価希土類金属も脱ハロゲン化反応に有効であった。3)Protease Inhibitor A-77003の全合成に適した触媒的ピナコールカップリングのための有用なプロセスを検討した。バナジウムによる一電子還元反応では、溶媒をジメトキエタンからテトラヒドロフランに変えると、生成物はジオキソランからジオールになることが判明した。前者が生成する場合には、基質のアルデヒドが一当量無駄になるので、このように単に溶媒を変えるだけで効率化がはかれた。触媒にチタン化合物を用いた場合には、いずれの溶媒を用いてもジオキソランのみを与えた。反応のジアステレオ選択性は反応基質の立体化学に依存し、立体障害の大きいアルデヒドのピナコールカップリングでは、バナジウム一電子還元触媒系を用いることにより、高いdl選択性を発現できた。生理活性物質を効率的なルートで合成するため、酸化還元反応に基づいた新規な骨格および官能基変換法を開発することで、従来にない全合成ルートを明らかにすることを研究目的とする。まず、遷移金属錯体の一電子還元系を有効に用い、ラジカル中間体を経由する合成反応において新規な合成手法を開発した。バナジウムの一電子酸化還元過程を、gcm-ジブロモシクロプロパン類のモノ脱ハロゲン化に適用したところ、モノブロモシクロプロパン類の生成において、非常に高い立体選択性が見られた。還元剤として亜鉛を共存させると、可逆的な酸化還元サイクルが形成され、触媒反応が進行することが判明した。反応系にトリエチルホスファイトまたはジエチルホスホナ-トを共存させることが必須であった。ホスファイトのリン原子とバナジウム金属の相互作用により還元能力を発現させていると考えられる。このような錯形成は立体選択性発現の要因にもなっていると推測される。さらに、トリエチルホスファイトまたはジエチルホスホナ-トはラジカル中間体の捕捉のための水素源ともなっており、配位圏において、効率的な還元が起こっているものと思われる。この触媒還元系は有用だが、炭素-炭素結合形成に適用するため、バナジウムの酸化還元機能が機能的に作用する他のレドックスシステムを開発した。カルボニル化合物のラジカルカップリングによる炭素-炭素結合形成で検討した。アルデヒドのカップリングにより、1,2-ジオール誘導体である1,3-ジオキソランが生成した。還元カップリング反応は触媒的に進行したが、この還元系にはクロロトリメチルシランが共存することが必須であった。現在、この一電子還元反応におけるバナジウム複合還元系の電子的相互作用を詳細に研究するとともに、エイズ関連の抗HIV剤であるprotcase Inhibitor A-77003合成への適用について研究を展開している。

本研究では、レドックスに基づいた新規な官能基変換法を開発するとともに、この変換法を生理活性物質合成にける鍵反応として適用し、従来にない合成ルートを開拓してきた。前年度の研究をふまえ、下記に示した研究結果を得た。1)パツロリドAの全合成の合成ルートに従い、より生理活性が高いと思われるマクロリド系誘導体を系統的に合成した。β,γ-不飽和カルボニル基またはγ-オキソ(ヒドロキシ)-α,β-不飽和カルボニル基と有する他の生理活性化合物も合成した。2)バナジウム触媒によるカルボニル化合物のピナコールカップリングにおいて、他の前周期遷移金属を用いた触媒反応を試み、Protease Inhibitor A-77003の全合成のための工業的にも有用なプロセスを検討した。チタン錯体も、触媒系構築に有効であった。TiCl_4を用いた場合には触媒活性を示さなかったが、シクロペンタジエニル基で置換されたチタン化合物であるCp_2TiCl_2を用いれば、共還元剤である亜鉛存在下、触媒的還元反応が進行した。バナジウム触媒系同様、反応系にクロロトリメチルシランを共存させることが必須であった。添加剤の効果については、バナジウム触媒系の場合と異なり、ピリジンなどの添加剤を加えることでカップリング反応が抑制された。溶媒による影響に関しては、DMEおよびTHFいずれの溶媒でも、1,3-ジオキソランのみが得られたが、ジアステレオ選択性はDMEを用いた方が高かった。本研究では、生理活性物質合成における鍵反応として適用でき、従来にない合成ルートを可能にする、レドックスに基づいた新規な官能基変換法を開発してきた。この変換法をしてきた。前年度までの研究をふまえ、下記に示した研究結果を得た。1)バナジウムによる一電子還元反応に基づいた、カルボニル化合物のピナコールカップリングにおいて、溶媒をジメトキエタンからテトラヒドロフランに変えると、生成物はジオキソランからジオールになることが判明した。前者が生成する場合には、基質のアルデヒドが一当量無駄になるが、このように単に溶媒を変えるだけで、反応の効率化がはかれた。触媒にチタン化合物を用いた場合には、いずれの溶媒を用いてもジオキソランのみを与え、両者の間に大きな差異が見られた。2)反応温度が与える影響について検討した結果、低温での反応ではバナジウム触媒を用いてもジオキソランが生成した。すなわち、生成物の選択性は反応温度にも依存することが判明した。また、反応温度を上げると、反応のジアステレオ選択性が低下し、dl体の生成比が減少することが明らかになった。3)反応のジアステレオ選択性は反応基質の立体化学に依存し、立体障害の大きいアルデヒドのピナコールカップリングでは、バナジウム一電子還元触媒系を用いれば、高いdl選択性が発現できることが明らかになった。さらに、触媒系を形成させるため共存させたクロロシランの立体化学の違いがジアステレオ選択性に反映されることが判明した。
神経堤細胞の進化的起源

本研究では、神経堤の進化的起源を探るために、脊椎動物に最も近縁な無脊椎動物であるホヤの神経板境界にどのような細胞が存在し、その細胞がどのように分化するのかを調べた。その結果、神経板境界に存在する末梢神経前駆細胞が尾芽胚期に尾部先端部分から背側正中線に沿って前方に移動することを突き止めた。また、この末梢神経前駆細胞はneurogeninを発現し、そのneurogeninの発現はMEKシグナルとレチノイン酸シグナルにより誘導されることを明らかにした。本研究は、脊椎動物に固有な形質である神経堤の進化的起源を探るために、脊椎動物に最も近縁な無脊椎動物であるホヤが神経堤細胞に類似した細胞を有するか否かについて細胞・分子レベルで検証するものである。初年度である本年度は、神経堤細胞のような「移動能を有する細胞」がマボヤ胚の神経板と予定表皮領域の境界(神経板境界)に存在するかを検証するとともに、神経堤の形成および分化に関与することが報告されている遺伝子をマボヤ胚からクローニングすることを行った。その結果、以下の成果を挙げた。1、マボヤ後期嚢胚の神経板境界を構成する特定の細胞一個をカルボシアニン蛍光色素DiIまたはNeuroDiOでラベルし、ラベルされた細胞の尾芽胚における挙動を15分おきに観察した。その結果、神経板境界を構成する細胞うちb9.36とb9.49に由来する細胞が尾芽胚の尾部先端部分から正中線に沿って前方に移動することを明らかにした。また、この細胞移動が卵膜を除去した胚では起こらないことから、細胞移動に液性因子が関与することが示唆された。2、公開されているマボヤのゲノム情報をもとに、神経堤の形成・分化に関与する因子に相同なマボヤ遺伝子の配列を推測し、推測した翻訳領域のクローニングをRT-PCR法により行った。その結果、マボヤ胚から神経堤の誘導に関与するシグナル分子に相同な遺伝子17個、神経堤の決定に関与する転写因子に相同な遺伝子18個、細胞移動関連因子に相同な遺伝子4個をクローニングした。初年度である本年度は、神経堤の進化的起源を探る第一歩として、これまで無脊椎動物では報告されていない神経堤細胞のような「移動能を有する外胚葉系細胞」をマボヤ胚で探索すること、また神経堤分化関連因子のマボヤ胚における発現様式を明らかにすることを目指して研究を実施した。その結果、蛍光色素ラベルしたマボヤ胚神経板境界の細胞をタイムラプス観察することにより、「移動能を有する外胚葉系細胞」をマボヤ胚で発見し、その移動経路を解明した。また、神経堤の形成・分化に関与する因子に相同なマボヤ遺伝子を合計39個クローニングすることに成功した。以上のことから、本年度の目標はおおむね達成できたと考える。本研究は、脊椎動物に固有な形質である神経堤の進化的起源を探るために、脊椎動物に最も近縁な無脊椎動物であるホヤの神経板と予定表皮領域の境界(神経板境界)に存在する「移動性外胚葉細胞」の発生メカニズムを明らかにすることを目的としている。2年目である本年度は移動性外胚葉細胞の移動および分化メカニズムに関して以下の成果を挙げた。1、昨年度、移動性外胚葉細胞の細胞移動が卵膜を除去した胚では起こらないことを明らかにしたことから、本年度は卵膜に局在するテスト細胞が細胞移動に及ぼす影響について調べた。浸透圧ショックによりテスト細胞を死滅させた胚で細胞トレーサー実験を行った結果、テスト細胞は移動性外胚葉細胞の細胞移動に関与しないことが明らかとなった。2、マボヤ胚をU0126(MEKシグナル阻害剤)で処理することにより、移動性外胚葉細胞の分化におけるFGFシグナルの役割を調べた。その結果、FGFシグナルは初期嚢胚期に移動性外胚葉細胞の末梢神経細胞への分化を誘導する一方で、神経胚期には末梢神経細胞への分化を抑制していることが分かった。また、移動性外胚葉細胞の分化にはFGFシグナルに加え、Nodalおよびレチノイン酸シグナルが重要であることも明らかにした。3、昨年度、RT-PCR法によりマボヤ胚からクローニングした遺伝子の発現解析をホールマウントin situハイブリダイゼーション法により行ったところ、bHLH転写因子であるAtonalとNeurogeninが末梢神経前駆細胞に発現していることを明らかにした。2年目である本年度は、昨年度の研究で発見したマボヤ胚「移動性外胚葉細胞」の移動および分化メカニズムを明らかにすることを目指して研究を実施した。その結果、移動性外胚葉細胞の分化にFGF、Nodalおよびレチノイン酸シグナルが重要であることを明らかにした。しかし、本年度調達した実験動物マボヤの状態が良くなかったため、3種類のシグナル間相互作用に関する検証、さらには細胞移動メカニズムの解析ができなかった。本研究は、脊椎動物に固有な形質である神経堤の進化的起源を探るために、脊椎動物に最も近縁な無脊椎動物であるホヤを用いて神経板と予定表皮領域の境界(神経板境界)に存在する「移動性外胚葉細胞」の発生メカニズムを明らかにすることを目的としている。本最終年度では移動性外胚葉細胞を含む末梢神経前駆細胞の分化メカニズムについて以下の研究成果を挙げた。1、公開されているマボヤのゲノム情報をもとに移動性外胚葉細胞の分化調節因子であるFGF遺伝子のクローニングを行った。

その結果、マボヤ胚から3個のFGF遺伝子(FGF3/7/10/22, FGF8/17/18, FGF11/12/13/14)をクローニングした。2、昨年度、マボヤ胚をU0126(MEKシグナル阻害剤)で後期嚢胚期から処理すると末梢神経細胞の数が増加することを報告した。本年度は、細胞トレーサー実験とホールマウントin situハイブリダイゼーション法によるNeurogeninの発現解析によりU0126処理で増加した末梢神経細胞は移動性外胚葉細胞由来であることを明らかにした。3、マボヤ胚でNodalシグナルが活性化している細胞を可視化することに成功した。その結果、Nodalシグナルが嚢胚期に末梢神経前駆細胞で活性化していることを明らかにした。また、嚢胚期からU0126処理したマボヤ胚ではNodalシグナルの活性化に変化が見られなかったことから、Nodalシグナルは嚢胚期以降に起こるMEKシグナルによる移動性外胚葉細胞の分化抑制に関与しないことが示唆された。4、マボヤ胚をDEAB(レチノイン酸合成阻害剤)で処理することにより、末梢神経細胞の分化におけるレチノイン酸シグナルの役割を調べた。DEAB処理により幼生尾部背側前方で末梢神経の細胞数が減少したことから、レチノイン酸シグナルは移動性外胚葉細胞の分化を誘導することが示唆された。本研究では、神経堤の進化的起源を探るために、脊椎動物に最も近縁な無脊椎動物であるホヤの神経板境界にどのような細胞が存在し、その細胞がどのように分化するのかを調べた。その結果、神経板境界に存在する末梢神経前駆細胞が尾芽胚期に尾部先端部分から背側正中線に沿って前方に移動することを突き止めた。また、この末梢神経前駆細胞はneurogeninを発現し、そのneurogeninの発現はMEKシグナルとレチノイン酸シグナルにより誘導されることを明らかにした。本年度の研究により、神経堤の進化的起源を探るための重要なカギとなる細胞をマボヤ胚で同定し、多数の遺伝子をクローニングすることに成功した。今後は、マボヤ胚の「移動能を有する外胚葉系細胞」の発生メカニズムを分子レベルで解明することを目指す。次年度は、「移動能を有する外胚葉系細胞」の分化誘導に関与する遺伝子を同定するために、本年度クローニングした神経堤分化関連因子のマボヤ胚における発現を解析する。さらに、この外胚葉系細胞の移動経路を規定する分子メカニズムの解明にも取り組んでいく。本年度の研究により、移動性外胚葉細胞の分化にFGF、Nodalおよびレチノイン酸シグナルが重要であることを明らかにしたことから、次年度はそれら3種類のシグナルについて下流因子を同定するとともに、それらシグナル間の相互作用について調べる。また、この外胚葉細胞の移動経路を規定する分子の同定にも取り組んでいく。発生生物学当初予定していた第93回日本生理学会大会への出席を取りやめたため。当初予定していた第94回日本生理学会大会への出席を取りやめたため。少額であることから、消耗品費として計上する。
量子多体系におけるカシミール効果の研究

量子力学の世界では真空はゆらいでおり、そのゆらぎが物質間の力(カシミール力)を生むことがある。特に電気的に中性な物質に対してはカシミール力が重要となり、1μmの物質においては最も支配的な力となる。この力の制御方法の理解は工学的な応用において必須であるだけでなく、宇宙論における宇宙項問題、素粒子物理学における余剰次元の有限サイズでの安定化、生物学における二重膜構造の安定化、化学における分子間力における重要性も指摘されている。本研究では、ゆらぎを生じている場における相互作用を考慮することにより、カシミール力の統括的理解と相互作用によるCasimir力の制御方法の提案を目的としている。
機関リポジトリを中心とするオープンアクセス環境の比較調査・研究

我が国のオープンアクセス環境は、欧米のような政策や研究者によるイニシャチブなしに、おもに図書館や情報サービス機関の事業により実現されつつある。以下、欧米、日本のオープンアクセス環境及びオープンアクセスコンテンツの発見方法の状況について調査結果を述べる。1.欧米の状況。アメリカでは、国立保健研究所(National Institute of Health)による助成対象の成果(研究論文)のPubMed Centralへの登録義務化という法令の形で(医療分野における)オープンアクセス環境が実現しつつある。また、個別の大学(ハーバード、MIT、カリフォルニア大学等)では、研究者主導により、部局単位ないしは全学で研究論文の義務化の提案がされ、実現されつつある。コンテンツは、(1)PubMed Central自体の検索、(2)PubMedの検索、(3)Google等の検索エンジン、(4)アメリカのハーベスタであるOAIsterの検索により発見できる。イギリスでは、研究者による助成組織(Research Councils,UK=RCUK)、民間の助成団体Wellcome Trustが助成対象の研究成果(論文)のオープンアクセスリポジトリ等への登録を義務付けている。後者は、医療系の助成組織であり、PubMed Central UK(PMCUK)への登録を義務づけている。RCUKは主題別の委員会により方針が異なり、機関リポジトリや上記PMCUKなど登録先は分かれる。ヨーロッパでは、ECやERC(European Research Council)など助成団体が助成研究の成果の義務化を行っている。この場合、機関リポジトリが主な登録先となる。ヨーロッパでは、DRIVERと呼ばれるハーベスタがヨーロッパ全域をカバーして検索のパスを提供しているほか、googleなどの検索エンジンによっても発見が可能である。2.我が国の状況我が国は、オープンアクセスに関する政策はほぼ皆無である。国立情報学研究所のCSI事業による各大学のリポジトリやCiNiiによって公開されている紀要・学術論文・学位論文・研究報告等、JSTAGE上の学会誌などが学術成果のオープンな利用を可能にしているが、発見のパスは様々である。しかし、機関リポジトリに限定して言えば、アクセスの多くは検索エンジン(google等)経由であり、これが最も主要な発見ルートとなっている。NIIのJAIRO経由もないではないが、自覚的に利用されているのは検索エンジンと言えよう。1.欧米の状況。