hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
BDNFプロドメインの新しい生理作用に関する構造生物学と神経生理学の融合研究

成長因子をはじめとする生体タンパク質は、活性化型になるまでにプロセッシングと呼ばれる酵素反応を受けるものが存在する。本研究においては神経栄養因子のプロセッシングに反応proBDNF→mature BDNF+BDNF pro-peptideに注目した。その結果、BDNF pro-peptideにはBDNF伝達を抑制する活性があること、その活性発現に必要な受容体等を決定した。プロセッシングは多くの成長因子の活性化に共通するメカニズムであるが、本研究の成果は成長因子研究分野に新たなメカニズムの存在の可能性成長因子をはじめとする生体タンパク質は、活性化型になるまでにプロセッシングと呼ばれる酵素反応を受けるものが存在する。プロセッシングは多くの成長因子の活性化に共通するメカニズムであるが、本研究の成果は成長因子研究分野に新たなメカニズムの存在の可能性BDNFはLTPを促進しLTDを抑制する(Reichardt,Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci, 2006)。一方、proBDNFはLTDを促進しスパイン密度を低下させる(Woo et al., Nat. Neurosci., 2005 ; Koshimizu et al., Mol. Brain, 2009)。つまり、BDNF依存的なシナプス可塑性において、BDNFプロドメイン(BDNF pro-peptide)はBDNFに対する相反的に作用する可能性が推察される。本年度は、1)BDNFプロドメイン単独処理によるbasal synaptictransmissionへの効果について検証した。つまり、昨年度見出したBDNF pro-peptideのLTD促進効果の分子メカニズムについて電気生理学および細胞イメージングの解析を行った。BDNF pro-peptide等の組換え蛋白質の調整は21年度と同様に行った。その結果、BDNF pro-peptideのLTDにはp75受容体が必須であることが、p75受容体アンタゴニストREX、p75ノックアウトマウスを用いた研究から見出された。このようなBDNF pro-peptideについて、AMPA受容体GluAlのendocytosisに対する効果を培養海馬神経細胞のイメージングにより検証した。その結果、BDNF pro-peptideで処理した細胞では、NMDA添加により促進されるGluAlのendocytosisが有意に促進されていることが見出された。以上の結果から、BDNF pro-peptideのLTD促進作用はp75受容体を介していること、LTDメカニズムであるAMPA受容体のendocytosisを促進する作用があることが見出された。神経栄養因子ファミリーはTrk(tropomyosin-related kinase)受容体ファミリーを介したシグナル伝達により神経細胞の生存維持や神経回路の発達などを調節する脳の成長因子群である。脳由来神経栄養因子BDNF(Brain-derived neurotrophic factor)は、その高親和性受容体であるTrkBや低親和性受容体であるp75NTRに結合し、神経細胞の発達やシナプス機能等の調節を行っている。BDNFはN末端から分泌に必須のシグナル配列、機能未知のプロドメイン、BDNF活性を有する成熟ドメインで構成されており、多くの成長因子と同様に、細胞内外のプロテアーゼにより、前駆体BDNF(proBDNF)から成熟体BDNF(matureBDNF,mBDNF)に変換される。このようにして活性化されたmBDNFは軸索の分岐、樹状突起の成長、活動依存的なシナプス形態の調節などを行うことが過去に報告されてきたが、最近、不活性と考えられていたproBDNFが、成熟海馬神経細胞の突起の退縮やシナプス機能低下を引き起こすことが報告したが。昨年度までの本研究では、proBDNF→mBDNFの際に産生されるプロドメイン(BDNF pro-peptide)が海馬スライス標本上で神経伝達を修飾することを見出した。proBDNF→mature BDNF+BDNF pro-peptideというプロセッシング反応は、多くの成長因子の活性化に共通するメカニズムであるが、mBDNFと同時に産生されるpro-peptideの生理機能の研究は進んでいない。本年度は、pro-peptideに対する抗体、組換え型を用いた研究から、3点を見出した。内在性BDNF pro-peptideがシナプス前部に存在することを報告した。放出されたBDNFpro-peptideはシナプス伝達の長期抑圧を促進する因子であること、そのメカニズムとして、p75を介するシグナル伝達が重要であること、一塩基多型による配列中のアミノ酸置換(Val66Met)はBDNF pro-peptideの生理作用を変えることも見出した。さらには、低密度海馬培養神経細胞を用いて、発達初期におけるBDNFおよびBDNF pro-peptideの突起成長への効果を形態学的に解析しその違いの研究に着手した。多くの成長因子の活性化に共通するメカニズムであるが、mBDNFと同時に産生されるpro-peptideの生理機能の研究は進んでいない。平成24年度の本研究においては、pro-peptideの生理活性について次の2点を明らかにした。Y.-A. Bardeとの共同研究により、内在性BDNF pro-

peptideがシナプス前部に存在することを示したが(DIeni et al., 2013)、BDNF pro-peptideが培養海馬神経細胞の培養上清にも存在することを確認した。さらには、ノックアウトマウス、特異的ブロッカーを用いた電気生理の研究から、BDNF pro-peptideは神経伝達の長期抑制(LTD)を促進する因子であること、そのメカニズムとして、p75を介するシグナル伝達が重要であること、LTDの分子メカニズムであるグルタミン酸受容体の細胞表層からのendocytosis、exocytosisをBDNF pro-peptide自身が促進することを見いだした。以上の研究から、BDNF pro-peptideは、プロセッシングに反応proBDNF→mature BDNF+BDNF pro-peptideの反応残物ではなく、LTDの促進因子として機能することを明らかにした。本研究の進捗に重要な役割を果たした抗体の作製、pro-peptideの生理作用と一塩基多型の関係など、当初の計画以上の新しい成果が得られている。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題では、神経系で作用する新規ペプチドBDNF pro-peptideの機能を明らかにしてきた。同様のpro-peptideの作用が神経系およびそれ以外の生体で研究することは重要であり、本研究を新学術分野の重要な課題として大きく発展させていきたい。
神経系の発生にかかわる転写調節遺伝子群

Hox遺伝子群はショウジョウバエAntp遺伝子群に構造が類似した遺伝子としてクローン化された哺乳類遺伝子群であり、哺乳類の形態形成過程をコントロールしている遺伝子だと考えられている。Hox遺伝子産物は転写因子であり、その標的遺伝子の発現を調節することによって、発生過程を制御していると考えられているがその標的遺伝子については全く明らかにされていなかった。我々は転写因子の抗体を用いた標的遺伝子クローン化の方法を開発し、HoxC8蛋白の標的遺伝子としてHoxA7、mgl-1等の遺伝子をクローン化した。本研究の目的は、これらの標的遺伝子の発現がHox遺伝子によってどのようにコントロールされているかを明らかにすることである。末盛らとの共同研究によって作製したところHoxC9ターゲットマウスに生じる形態の異常は、HoxC8ターゲットマウスのそれとよく似ていた。このことはHoxC8とC9遺伝子が相互作用して機能している可能性を示している。そこでHoxC8とC9蛋白が直接相互作用しているかどうかを、酵母ツ-ハイブリッドシステムを用いて解析した。その結果、HoxC8とC9蛋白が酵母内で直接特異的な相互作用をしていることが明らかになった。このことはHoxC8、C9蛋白が直接相互作用をすることによって、標的遺伝子の発現をコントロールすることが、マウスの形態形成の過程を、個体レベルで制御していることを強く示唆している。高等動物の脳には極めて多くの神経細胞が存在し、この多くの神経細胞間にシナプスが形成されている。認知、学習、記憶などの高次神経機能はこの数多くの神経細胞間に形成されているシナプス形成によるネットワークによって実現されていると考えられる。このシナプスの形成は高い特異性を持った神経細胞間での認識によって行われており、それぞれの神経細胞では特異的な認識のための分子を発現していると考えられる。これらの分子は、極めて限られた細胞のみで発現していること、分子の構造が予想できないことなどから、全く明らかにされていない。我々はこれらの分子をコードする遺伝子の発現を制御する転写調節因子を同定することによって、特異的なシナプス形成のメカニズムを明らかにすることを計画している。極めて多様な神経細胞の特異性は転写調節因子の特異性によって実現されていると考え、PCR(polymerase chain reaction)の生成物を、a,asymmetric PCRによる塩基配列の決定。b,SSCP(single strand conformation polymorphism)法。c,4塩基認識制限酵素による消化などによって多様性を検出し、極めて大きな遺伝子ファミリーを形成している転写調節遺伝子群を検出する方法を開発した。この方法によってマウスゲノム中に百種以上のホメオボックスをモチーフとする配列を検出した。さらに、RT-PCR法によってこれらのホメオボックス配列の一部は、マウス脳内で特異的に発現していると考えられる結果を得た。哺乳類の神経系には、極めて多くの種類の神経細胞が存在しており、この多様な神経細胞の間に形成されるネットワークが、認知、記憶、学習などの高次神経機能発現の場であると考えられる。このネットワークは、神経細胞間の特異的認識によって形成されていると考えられ、それぞれの神経細胞で異なる分子間の識別によって特異性を獲得していると考えられる。しかし、このような神経細胞間の特異的認識に関わる分子は、これまでほとんど明らかにされていない。本研究は、神経細胞の多様性を規定していると考えられる転写調節遺伝子群をクローン化し、その標的遺伝子群を同定することによって、ネットワーク形成に関わる分子を明らかにすることを目的としている。平成5年度は、RT-PCRを基礎とした転写調節遺伝子のクローン化法を開発し、神経系で特異的に発現しているホメオボックス遺伝子群をいくつかクローン化した。その中には、これまでPCR産物の報告しかなかった、脳で特異的に発現している遺伝子MMox-Bや、線虫の神経ネットワーク形成に関与していると考えられるホメオボックス遺伝子のマウスホモログなどの遺伝子が含まれていた。

現在これらの遺伝子の標的遺伝子を、最近我々が開発した転写因子の抗体を用いた標的遺伝子クローン化法によってクローン化しつつあるが、我々はすでにこの方法によって、Hox遺伝子の標的遺伝子をいくつかクローン化しており、その中にはこれまでクローン化されていなかった、ショウジョウバエがん抑制遺伝子のマウスホモログと考えられる遺伝子も含まれており、この方法によって神経ネットワーク形成に関わる分子をコードする遺伝子群をクローン化できると考えられる。高次神経機能実現の場である神経細胞のネットワークは、神経細胞の分化、軸策の伸張、シナプスの形成などいくつかのステップを経て形成される。これらの過程は高度に制御された遺伝子発現の制御によって実現されていると考えられているが、その分子レベルでのメカニズムについてはほとんど明らかにされていない。本研究はこの高次神経機能獲得の過程の個体レベルでの機構を、1、神経系で特異的に発現しているホメオボックス遺伝子の同定、2、その標的遺伝子のクローニングという2つの方法で明らかにすることを目的としている。神経細胞の分化の過程は、ホメオボックス遺伝子HoxC8の脊髄における標的遺伝子としてクローン化した遺伝子mgl-1がショウジョウバエの神経細胞の分化にかかわる遺伝子1(2)glの哺乳類ホモログであり、ジーンターゲティングによってmgl-1も哺乳類神経細胞の分化にかかわっているということを示すことによってそのメカニズムを明らかにしてきた。また神経細胞間の特異的シナプスの形成機構については、神経系で特異的に発現しているホメオボックス遺伝子として、線虫の運動神経と介在神経との間の特異的シナプス形成にかかわるホメオボックス遺伝子unc-4のマウスホモログをはじめとして、PCR法によっていくつかのホメオボックス遺伝子をクローン化しており、その標的遺伝子をクローン化し、その機能を調べることによって明らかにしつつある。
HIV-1個体内複製と病原性に関する基礎研究：アクセサリー蛋白質の機能解析

HIV-1の個体内複製機構や病原性発現機構を解明するにはアカゲザル感染実験系を確立することが極めて重要であり、研究代表者らは、アカゲザル個体内で充分良く増殖し持続感染から発症に至る能力を備えたCCR5細胞指向性/アカゲザル指向性HIV-1(HIV-1rmt)の構築に取組んだ。その結果、アカゲザル細胞においてベストの増殖性を示す既存のCXCR4細胞指向性HIV-1rmtと同等以上の複製能を持つ複数のCCR5細胞指向性HIV-1rmtの構築に成功し、アクセサリー蛋白質の個体内機能を解析するためのアカゲザル個体感染実験へと進展させることができた。HIV-1は宿主域が狭く適切な実験動物モデルが存在しない。このHIV-1の特性は、病原性発現機構の解明等の基礎研究、また、新規抗HIV-1薬の開発基盤構築やワクチン開発等の臨床応用研究の大きな障壁となっている。本研究の研究代表者らは、HIV-1/エイズ研究の霊長類モデルの樹立を目指し、様々なウイルス抑制細胞因子に抵抗性を示す一連のマカクザル指向性HIV-1(HIV-1mt)を作製してきた。本邦と欧米諸国の研究者の研究成果から、アカゲザルがHIV-1/エイズの動物モデルとして最適とされている。研究代表者らは、アカゲザル由来末梢血単核細胞(PBMC)において、SIVのアカゲザル病原性標準株(SIVmac239)と比肩できるレベルで増殖するHIV-1mtクローン(MN4/LSDQgtu)を世界に先駆けて構築した。米国の研究グループが作製したクローンと比較したところ、MN4/LSDQgtuはアカゲザル細胞(株化細胞およびPBMC)で最も効率良く増殖するHIV-1mtであることが明らかになった。接種実験の結果、SIVmac239には劣るものの、MN4/LSDQgtuはアカゲザル個体でも増殖可能であり、アカゲザル指向性ウイルス(HIV-1rmt)であることが示された。しかし、感染アカゲザルにウイルス接種による症状等は全く認められなかった。一方、アカゲザルM1.3S細胞を用いたMN4/LSDQgtu由来フレームシフト変異体クローンの感染実験から、Vifはウイルス複製に必須であり、他の全てのHIV-1アクセサリー蛋白質もサル細胞におけるウイルス複製に必要であることもわかった。注目すべきことに、Vpr欠損体がVpuやNef欠損体より複製能が減弱していた。これらの成績はアクセサリー蛋白質とHIV-1の個体内複製機序や病原性発現機構を考える上で基盤となる重要な成果である。HIV-1は宿主域が狭く適切な動物モデルが存在しない。このため、個体内ウイルス複製機構や病原性発現機構解明等の基礎研究、さらに、新規抗エイズ戦略開発等の臨床応用研究の推進が著しく困難となっている。研究代表者らはこの課題の克服に向け、抗HIV-1細胞因子に抵抗性を示す一連のアカゲザル指向性HIV-1 (HIV-1rmt)の作製に取組み、末梢血単核細胞(PBMC)において病原性SIV標準クローン(SIVmac239)と同等に複製するCXCR4細胞指向性HIV-1rmtクローン(MN4/LSDQgtu)の構築に世界で初めて成功した。MN4/LSDQgtuはアカゲザル個体でも再現性良く増殖するが、SIVmac239より増殖能は劣り病原性は示さなかった。感染個体にエイズを発症させるファウンダーウイルスはCCR5細胞指向性であるので、本年度はMN4/LSDQgtuを出発材料に様々の手法を用いてこの特性を持つHIV-1rmtの構築に特に注力した。その結果、アカゲザル細胞に感染性を示す4種類のCCR5細胞指向性HIV-1rmtクローンの作出に成功した。とりわけ、gtu+A4Y1と命名されたプロウイルスクローンはアカゲザルPBMC中でMN4/LSDQgtuと同等レベルで増殖した。注目すべきことに、このクローンはHIV-1の臨床分離株由来のEnvを持つ。さらに、ウイルス複製能の向上に寄与すると報告されている種々のGag変異やEnv変異をこれら4種類のクローンに導入したが、明確な効果は認められなかった。現在、アカゲザル細胞におけるウイルス馴化を試みている。これと並行して、アクセサリー蛋白質の欠損体/変異体の作製を進めている。以上の成績はHIV-1の個体内複製機構や病原性発現機構を解析する上で重要な材料を提供する。HIV-1は高度にヒトに特化したウイルスであるが、この特性を担うのは主としてアクセサリー蛋白質である。種々のSIV/HIVは特有の組み合わせのアクセサリー蛋白質を有し、HIV-1もアクセサリー蛋白質として固有のVif、Vpr、VpuおよびNefをコードしている。分子・細胞レベルにおけるHIV-1アクセサリー蛋白質の研究は非常な勢いで進展したが、感染個体におけるウイルス複製動態やエイズ発症機構を実験的に解析するため、これまでに様々な動物モデル(ヒト化マウスや霊長類等)が提唱されている。感染実験用ウイルスとしては、SIVmac、SIVmacをベースにしたSIV/HIV-1遺伝子組換えウイルスSHIVが頻繁に用いられている。それぞれの系には一長一短があるが、HIV-1がヒトに特化したウイルスであること、また、ウイルス特異的アクセサリー蛋白質の存在を考えると、できる限りHIV-1そのものを使用する実験系が望ましいと思われる。多くの研究者の研究成果から、発症実験動物モデルとしてはアカゲザルが最も適していると考えられる。

本研究は、HIV-1rmtクローンMN4/LSDQgtuを基に、HIV-1の個体内複製とその病原性発現機構の実験的解明を目指し、アカゲザル細胞・個体を用いたアクセサリー蛋白質群の系統的機能解析を行うものである。これまでに、MN4/LSDQgtuがアカゲザル個体で再現性良く増殖するHIV-1rmtであることを実証した。さらに、gtu+A4Y1がアカゲザルPBMCにおいてMN4/LSDQgtuと同等に増殖し得ることが明らかになった。これにより、gtu+A4Y1がアカゲザル個体感染実験に使用可能であり、アクセサリー蛋白質の欠損体/変異体解析の出発材料として有用であることが示された。これらを総合して考えると、本研究はおおむね順調に進展していると言える。HIV-1は高度にヒトに特化したウイルスであり、アクセサリー蛋白質がこの特性を担っている。したがって、HIV-1の個体内複製機構や病原性発現機構の解明、さらに、これらに基づく抗HIV-1戦略の新規開発には、霊長類感染実験系を確立するとともに、そのシステムを用いてアクセサリー蛋白質の機能解析を行う必要がある。研究代表者らは、アカゲザル個体内で充分良く増殖し持続感染から発症に至る能力を備えたCCR5指向性/アカゲザル指向性HIV-1(HIV-1rmt)の構築に取組んでいる。本年度は、遺伝子工学的に構築した4種類のCCR5指向性HIV-1rmtクローンをアカゲザル個体に単独あるいは混合感染させた。いずれの感染個体でもウイルス複製が確実に観察されたが、CXCR4指向性HIV-1rmtの標準クローンに比較すると、約1/4程度であり、持続感染を個体で成立させるためには更なる改善が必要であると考えられた。この実験と並行して、文献的に最も優れた増殖能を持つCCR5指向性HIV-1rmtクローン(研究代表者ら、2013)を比較対照とし、5種類のCCR5指向性HIV-1rmtクローンをアカゲザルリンパ球細胞株M1.3Sに接種し長期培養を行った。その結果、M1.3S長期感染細胞から増殖能が顕著に向上した2種類の分子ウイルスクローンの取得に成功した。いずれも臨床分離株由来のenv遺伝子を持つクローンである。この他、親クローンより著しく増殖能の向上した分子クローンが多数得られており、ウイルスの多様性を確保しアカゲザルにおけるウイルス増殖能、変異性、病原性発現能等を厳密に検証するため、それぞれについて細胞レベルで解析を進めている。これらの成果に基づき、アカゲザル末梢単核細胞での確認実験により適当なクローンを複数選択し、アクセサリー蛋白質変異体の構築、アカゲザル個体感染実験を行う。HIV-1の個体内複製機構や病原性発現機構を解明するにはアカゲザル感染実験系を確立することが極めて重要であり、研究代表者らは、アカゲザル個体内で充分良く増殖し持続感染から発症に至る能力を備えたCCR5細胞指向性/アカゲザル指向性HIV-1(HIV-1rmt)の構築に取組んだ。その結果、アカゲザル細胞においてベストの増殖性を示す既存のCXCR4細胞指向性HIV-1rmtと同等以上の複製能を持つ複数のCCR5細胞指向性HIV-1rmtの構築に成功し、アクセサリー蛋白質の個体内機能を解析するためのアカゲザル個体感染実験へと進展させることができた。HIV-1は高度にヒトに特化したウイルスであるが、この特性を担うのは主としてアクセサリー蛋白質である。
慢性肝炎・肝硬変に生じる肝内胆管癌の発癌機構の解明

慢性肝炎からの発癌プロセスは不明であったが、慢性肝炎・肝硬変に生じる肝内胆管癌にはp62およびubiquitin陽性の封入体がすることがあり、肝硬変に生じる胆管異型上皮については、慢性胆道疾患における胆管異型上皮と同様に胃型粘液発現やp16, p21タンパクの異常を認めることが判明した。【目的】Biliary intraepithelial neoplasia(BilIN)は肝内結石症、原発性硬化性胆管炎、先天性胆道拡張症などの慢性胆道疾患に生じる胆管上皮内病変として提唱された。今回我々は慢性胆道疾患に生じた胆管上皮内病変(biliary type)と胆道疾患を伴わない肝硬変に生じた胆管上皮内病変(LC type)について病理学的に比較した。【方法】65例の慢性胆道疾患症例(肝内結石症、原発性硬化性胆管炎、胆道拡張症)と310例の肝硬変症例(肝細胞癌切除180例および移植摘出肝130例-肝細胞症例を含む)について胆管内異型上皮の有無を観察し、免疫組織化学的に検討した。【結論】肝硬変に生じた胆管異型上皮は胆道疾患にみられる異型上皮に比べ、増殖能は低かった。今回検討した肝硬変症例の多くは肝細胞癌を有しており、腫瘍の圧排による胆管への影響や、移植例では繰り返された内科的治療による胆管への影響で異型性が生じた可能性がある。また肝硬変状態での血流動態の変化によって上皮の異型性が生じた可能性もあり、肝硬変症例においては胆管上皮の異型性が腫瘍性であるかどうかについては慎重に吟味すべきであると思われる。【目的・方法】【結果】1)S100P蛋白は再生胆管上皮ではわずかに陽性で核内発現がBilIN-1の15%、BilIN-2の75%、BilIN-3の100%に陽性で異型度が増すにつれ発現率が高くなった。2)S100Pは末梢型ICCでは12%に陽性であるのに対し、傍肝門型ICCでは68%に陽性であり(p<0.0001)、Ezrinも傍肝門型ICCで高率に発現し(p=0.0039)、S100PとEzrin発現には正の相関を認めた。3)末梢型ICCにおけるS100P発現は血管浸潤、リンパ管侵襲群とリンパ節転移群で高く(p=0.0209、p=0.0003、p=0.003)、予後不良であった(p=0.001)。【結論】S100P-Ezrin経路が傍肝門型ICCにおいてはBilINからの発癌に関与し、末梢型ICCにおいてはその悪性度に関与することが示唆された。
物質代謝系社会基盤システムの安定性と環境影響

今年度は研究分担者を3グル-プに編成してそれぞれ以下のような研究成果を得た。1.垂直的影響グル-プでは、下水処理水を地下還元する統一モデルを作成するため、地盤沈下、地下水ポテンシャル、揚水帯水層と還元帯水層の関係、還元水質の制御・処理・監視、熱影響の回避と熱負荷の軽減策のためのデ-タ収集フレ-ムを設定し、その収集に着手した(丹保)。一方、都市物質代謝系基盤システムにおけるエネルギ代謝の位置づけを考察するため、課題の整理、廃熱デ-タの要件整理およびその収集を実施した(水野)。2.水平的影響グル-プでは、規模および計画方式の異なる2つの下水再利用システムについて、その安定性を検討し、そのうちの1つの時間調整問題について日変動、月間変動の分析を行った(松尾)。また、廃棄物の洋上処理・処分計画について、基本的計画要因の関連を検討し、その構想の妥当性を検証すると共に、環境影響評価上重要な焼却飛灰からの重金属溶出問題について、接触水量・接触時間を指標として分析した(藤田)。3.物質代謝システム統合モデルグル-プでは、人口10万人以上の日本および世界の都市3000に関するデ-タベ-スを作成し、各因子間の関係を考察した(松岡)。また、廃棄物発生・処理・処分のフロ-解析に対して、Product lifecycle assessmentの概念を加えるため、発生廃棄物の資源・エネルギ比なる新指標の提案とデ-タベ-ス化の作業に着手した(田中)。更に、地域的な水文量収支に目的別フロ-を弁別して表示する水量収支図を東京圏について作成した(江藤)。同グル-プではまた、廃棄物処理システムに関して、発生から処理・輸送に至るプロセスにおける社会・経済的評価の適用について考察を行う(植田)とともに、リサイクル市民工房を拠点とし、廃棄物の静脈流通系形成へ市民レベルから関与することについての基礎的評価を実施した(末石)。
心筋細胞の非分裂性を規定する因子の同定・機能解析と治療への応用に向けた基盤研究

心臓の特異性を決定するシグナル因子の同定を行い、それらの機能解析を行うことにより、心血管疾患の病態解析から新しい治療法の開発につなげることを目的とする。心臓で特異的に発現誘導される因子としてGSという蛋白質を同定し、低酸素ストレス時にエネルギー代謝酵素を活発に調節する因子であることを明らかにした。またストレス応答酵素の新規器質CLI-170を心臓から同定し、その機能を明らかにした。2つのストレス応答機構の発見が、今後心不全の病態解明と新規の治療法の開発につながると期待される。非分裂細胞である心筋細胞の機能維持に必要なシグナルの解析を通して、心臓特異的な生存維持機構の解明を行うことが本研究の目的である。心臓は生後まもなく細胞分裂を中止し、さらに決して癌化をおこさない唯一の器官である。初年度はこの細胞分裂抑制機構の解明を主な目的として、細胞分裂に必要な転写因子に対する心臓の反応性を比較した。我々は以前、HB-EGFと呼ばれる増殖因子が心臓の機能維持に重要な役割を果たすことを報告してきた。この増殖シグナルの働きにより心臓においても分裂細胞と同様c-fosやc-mycと呼ばれる癌遺伝子の誘導がおこる。しかしその後は特異的な遺伝子の調整機構が働き心臓の非分裂性が規定されている。特にc-mycは最近iPS細胞の誘導に使用されるなど細胞運命決定とも深い関与が示唆されている。そこでc-mycを心臓および分裂細胞で発現させ、それにより誘導される遺伝子の差を網羅的に解析した。結果、GSという蛋白が心臓特異的にc-mycにより発現誘導されることが明らかになった。GSは今日までほとんど、その機能が解析されていなかった。そこで、さらにその結合蛋白の精製・同定を行いF-ATPaseという蛋白との結合を証明した。F-ATPaseはミトコンドリアに存在する酸化的リン酸化に関与する重要な分子であり、特にミトコンドリアの発達した心臓においてはその細胞機能に直接かかわることが考えられる。今後はGS蛋白がF-ATPaseの活性調節を通していかに心臓特異的な細胞機能を担うかを検討していく。これに関係して本度は心臓の生理機能とくにエネルギー代謝に特に関係の深いキナーゼに注目しその心臓における基質のスクリーニングを行った。独自の精製系と生体外でのキナーゼアッセイ系を使用することにより、新規の基質の同定に成功した。来年度よりはこれらの解析もあわせておこなう。1、GOS2の機能解析心臓の非分裂性の分子メカニズムの解明のため、癌遺伝子であるc-mycによる転写誘導を心臓及び他の組織の細胞で比較検討した。それによりGOS2とよばれる膜蛋白が心臓において特異的に発現抑制されることが明らかになった。本蛋白は機能不明であったが、昨年までの本研究によりミトコンドリアにGOS2が存在すること、およびミトコンドリアのATP産生をつかさどるFoF1ATPaseにGOS2が結合することが明らかとなった。そこで本年度は、ラットFOF1ATPaseを用いGOS2を加えることによるATPase活性の変化を観察したが変化が見られなかった。さらにGOS2が膜蛋白質であること、変異ドメイン解析によりGOS2の細胞膜貫通領域がFoF1ATPaseと結合することが証明されGOS2の機能アッセイ系を生体内でおこなう必要性が生じた。そこで、新規に細胞内ATP濃度を測定できるプローブを開発した。本プローブをアデノウイルスヴェクターに導入することにより心筋のATP濃度をリアルタイムで測定する系を確立した。この系を利用してGOS2がFOF1ATPaseの機能にあたえる影響を心筋細胞内で測定しエネルギー代謝と心筋の分裂性との関連を今後解明していく。2、心臓の非分裂性に係る新たな分子の同定と解析さらに、昨年に引き続きキナーゼを中心として、細胞極性やエネルギー代謝に関係する酵素の標的をスクリーニングし心臓特異的な高次構造の形成に係るキナーゼ・基質関係の解析をおこなった。その中でNUAK2というキナーゼをTNFで誘導されるキナーゼとしてあらたに同定し、さらにその基質としてミオシン軽鎖の脱リン酸化酵素であるMYPT2を同定した。今後、本キナーゼの細胞極性・心筋の非分裂性に与える影響を検討する。(1) GSの機能解析心臓の非分裂性の分子メカニズムの解明のため、癌遺伝子であるc-mycによる転写誘導を心臓及び他の組織の細胞で比較検討した。それによりGSとよばれる膜蛋白が心臓において特異的に発現抑制されることが明らかになった。本蛋白は機能不明であったが、昨年までの本研究によりミトコンドリアのATP産生をつかさどるF-ATP synthaseに高親和性結合すること、GSがそのATPase活性には直接影響を与えないことなどを明らかにした。本年度は、ATP感受性FRETを使用した実験により細胞内ではGSがF-ATP synthaseの活性を上昇させること、低酸素により強く発現誘導されることなどを明らかにした。

つまり、GSはF-ATP synthaseの働きを動的に制御することができる初めての物質であることが明らかになった。GSは心臓におけるエネルギー代謝と非分裂性のメカニズムを結び付ける重要な因子であることが本研究により明らかになった。(2)心臓の非分裂性に係る新たな分子の同定と解析さらに、昨年に引き続きキナーゼを中心として、細胞極性やエネルギー代謝に関係する酵素の標的をスクリーニングし心臓特異的な高次構造の形成に係るキナーゼ・基質関係の解析をおこなった。その中でAMPKの新しい器質としてCHP-170を同定しその微小管動態における役割を明らかにした。微小管は細胞分裂にもかかわっておりエネルギー代謝と心臓の非分裂性を結び付ける重要な発見となった。
CMOS互換プラズモニクスの開拓

本研究のCMOS互換プラズモニクスでは、アルミ・銅などのCMOS互換な金属材料を用いてシリコンフォトニクス上に局所的にプラズモニック回路を形成する。まず、計算によりシリコン導波路とプラズモニック導波路の高効率接続構造を設計する。さらに、設計した構造を所属機関が保有する45-nm技術ノードのCMOSプロセスを用いて実際に試作し、特性を実証する。
二段階抽出法の高次漸近有効性と多群判別問題への応用および非正規分布への拡張

二段階法の実用化でしばしば問題となるオーバーサンプリングについて、必要な標本数を大幅に削減する計画定数の選び方が存在することを論文1で示した。初期標本数の増加率にある条件を課せば、漸近的な意味で二段階法の標本数をさらに削減することが可能であることも証明した(投稿中a)。さらに、多段階理論の第一人者N.Mukhopadhyay教授(Connecticut大学,U.S.A.)との意見交換により、複数個の多変量正規母集団の平均の線形結合に関する推測への応用が考えられ、各母集団の初期標本数に同様の条件を課して危険関数の展開式を与え、二段階法の標本数を削減する計画定数の展開公式を導出することに成功した(投稿中b)。得られた計画定数の展開公式を用いれば、互いに相関をもつ平均成分に関する多重比較を複数個の母集団間で同時に行う問題に対しても、2次の漸近有効な解を与えることが可能であることを論文4の補題を使って証明した(投稿中c)。これは、熊本大学との意見交換で完成した論文3の結果をも含む一般解を与える。固定された大きさの楕円型信頼領域を非正規分布のもとで構築するために、ホテリング型統計量の二段階標本抽出における分布を漸近展開式で与えた。これにより、多変量正規分布よりも裾の重い分布には、追加標本の大きさが初期標本数の半分以下に計画されるとき、二段階法は頑健性をもつことが広島大学との意見交換によって証明され、その際に、論文6における数値実験の中で発見した二段階法の超有効性という現象について、理論的解釈を与えることにも成功した(投稿中d)。二段階法の応用として、母集団分類と選択の問題に対して、論文2と5において最適解が与えられた。複数個の多変量正規分布の平均の線形結合に関する推測において、信頼領域の大きさと確率を制御するための手法を、任意の共分散行列に対して、二段階法を用いて論文2で開発した。開発された二段階法は、多変量解析の第一人者M.S.Srivastave教授(Toronto大学,Canada)および熊本大学との意見交換によって、一般の有界リスクの問題にも有効であることが論文3で示された。また、二段階法の実用化でしばしば問題となるオーバーサンプリングについても、計画定数の選び方を工夫することで大幅な削減が可能であることを論文5で示した。初期標本数に関するある条件のもとで、二段階法の1次の漸近有効性は2次の漸近有効性を意味することを論文6で証明した。初期標本数の比率が分散の比率に依存する場合にも、上記理論を拡張することで2次の漸近有効性が示されることを、多段階法の第一人者N.Mukhopadhyay教授(Connecticut大学,U.S.A)との意見交換で証明した(投稿中a)。さらに、指数型分布族における母集団選択の問題にも上記理論を応用することができることを、E.J.Dudewicz教授(Syracuse大学,U.S.A)との意見交換で完成した論文4を用いて明らかにした(投稿中b)。多群判別問題への応用として、誤判別確率を要求される大きさに制御するために必要となる標本数を算出することに、二段階法を用いて論文1で成功した。また、非正規分布の場合への拡張として、判別ルールの良さを判定するための4つの基準を考察し、各々の基準に対する最適な判別ルールを構築することに、愛媛大学との意見交換による高次の漸近理論を用いる方法で成功した(投稿中c)。
有用ヘテロ環化合物の新しい一般的簡便合成法の開発

まず、キノリン誘導体の二つの新しい合成法を開発した。一つ目の方法は、2-イソシアノスチレン誘導体と、ケトン、アルデヒド、アセタールなどの求電子反応剤との、ルイス酸存在下の反応によるものである。二つ目の方法は、2-イソシアノ-β-メトキシスチレン誘導体と有機リチウムまたはリチウムジアルキルアミドとの反応によるものである。前者の合成法の応用として、2-(2-イソシアノフェニル)-1-メチル-1H-インドールの求電子剤存在下の環化反応により、6位に様々な官能基を有する11H-インドロ[3,2-c]キノリン誘導体を合成した。後者の合成法の応用として、2-シアノ-β-メトキシスチレン誘導体と有機リチウムまたはリチウムジアルキルアミドとを反応させることにより、イソキノリン誘導体を合成することができた。次に、ヘテロ環縮合キノン類の合成としては、1H,5H-ピラノ[3,4-f]インドール-4,9-ジオン、12-ヒドロキシ-12H-チオキサンテン-6,11-ジオン、チエノ[2,3-f]ベンゾフラン-4,8-ジオン、チエノ[3,2-g]ベンゾフラン-4,5-ジオンおよびナフト[1,2-b]チオフェン-4,5-ジオンの各誘導体の合成を行った。さらに、エノラートの反応を用いて、3,6,7,8-テトラヒドロ[3,2-c]オキセピン-4(2H)-オン誘導体、(3-イミノイソインドリン-1-イリデン)カルボン酸エステル誘導体ならびに3-(1-アミノアルキル)キノリン-2(1H)-オン誘導体を合成した。最後に、オルト位に官能基を有するスチレン誘導体のヨウ素を用いる環化反応により、ベンズアゼチン誘導体ならびに4H-1,3-ベンゾジオキシン-2-オン誘導体を合成した。α位にメチル基あるいはアリール基を持つ2-イソシアノスチレン誘導体と各種親電子反応剤との反応で、2位に各種置換基を持ったキノリン誘導体を合成できることを見い出した。まず、2-イソシアノスチレン誘導体とアルデヒドを、触媒量の三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯塩で処理すると、2-(1-ヒドロキシアルキル)キノリン誘導体が好収率で得られた。アルデヒドの代わりに、アセトアルデヒドジエチルアセタールまたはフェニルオキシランを用い、同触媒存在下で同様に反応を行うと、2位にそれぞれ、1-エトキシエチル基または2-ヒドロキシ-2-フェニルエチル基を持つキノリン誘導体が得られた。2-イソシアノスチレン誘導体とN,N-ジメチルイミニウム塩との反応は触媒を用いずとも進行し、2-(1-ジメチルアミノアルキル)キノリン誘導体が得られた。いずれの反応も、イソニトリルの炭素が親電子剤あるいは触媒により活性化された親電子剤を攻撃して、発生した炭素カチオン中心と、スチレンのβ-炭素原子が結合し環化するものと考えられる。次に、2-(2-メトキシエテニル)ベンゾニトリル誘導体と各種求核反応剤との反応により、イソキノリン誘導体が合成できることを見い出した。2-(2-メトキシエテニル)ベンゾニトリル誘導体をアルキル(またはアリール)リチウムと反応させると、1-アルキル(またはアリール)イソキノリン誘導体が良好な収率で得られた。2-(2-メトキシエテニル)ベンゾニトリル誘導体とリチウムジアルキルアミドとの反応では、N,N-ジアルキルイソキノリン-1-アミン誘導体が生成した。

いずれの場合も、求核剤がニトリル炭素を攻撃することにより発生した窒素アニオンが、メトキシエテニル基のα位に付加して、ベンジルアニオンとなり、最後にメトキシドが脱離し、イソキノリン骨格が生成するものと考えられる。ヘテロ環縮合キノン類の新規合成法の開発として、まず、5-ヒドロキシメチル-1H-インドール-4,7-ジオン誘導体とエナミンとを反応させることにより、新規骨格である1H,5H-ピラノ[3,4-f]インドール-4,9-ジオン誘導体が合成できることを見い出した。次に、1,4-ナフトキノンとo-アシルベンゼンチオールを混ぜて加熱するだけの極めて簡便な操作で、12-ヒドロキシ-12H-チオキサンテン-6,11-ジオン誘導体を、ワンポットで合成した。o-イソシアノ-β-メトキシスチレン誘導体と求核反応剤との反応による2,4-二置換キノリン合成について詳しく検討し、求核反応剤として、有機リチウムのみならずリチウムジアルキルアミドやリチウムベンゼンチオラートも使用できることがわかり、キノリン-2-アミン誘導体や2-フェニルスルファニルキノリン誘導体も合成できることを明らかにした。酢酸t-ブチルのリチウムエノラートとγ-ブチロラクトン類との反応で容易に合成できる、2-(2-ヒドロキシテトラヒドロフラン-2-イル)酢酸t-ブチルをアルケン存在下、硝酸セリウム(IV)アンモニウム(CAN)で処理をすると、3,6,7,8-テトラヒドロ[3,2-c]オキセピン-4(2H)-オン誘導体が得られることを見い出した。最後に、カルボン酸エステルをマグネシウムビス(ジイソプロピルアミド)(MBDA)で処理して発生させたマグネシウムエノラートとフタロニトリル誘導体の反応で、(3-イミノイソインドリン-1-イリデン)カルボン酸エステルを合成した。2-(アシルアミノ)スチレン誘導体を、炭酸水素ナトリウム存在下、0°Cで、ヨウ素と処理をするだけの簡便な操作で、ベンズアゼチン誘導体を合成した。本誘導体の一般的合成法は、これまで全く知られていなかった。5-ヒドロキシベンゾ[b]チオフェン-4,7-ジオン誘導体とアルケンとを光照射すると、3+2型の付加反応が起こり、チエノ[2,3-f]ベンゾフラン-4,8-ジオン誘導体が得られた。同様の反応は、CANを用いても起こり、上記誘導体とともに、チエノ[3,2-g]ベンゾフラン-4,5-ジオン誘導体が得られた。後者骨格の合成は、今回が初めてである。3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン誘導体を、マグネシウムビス(ジイソプロピルアミド)で処理したのち、ニトリルと反応させると、対応するエナミン誘導体が得られた。これらを無水酢酸でアセチル化したのち、DBUを用いて二重結合を移動させることにより、3-(1-アミノアルキル)キノリン-2(1H)-オン誘導体を合成できた。2位に1-アミノアルキル基を有する誘導体の一般的な合成法はこれまでなかった。3-アシル-1,2-ナフトキノンとメルカプト酢酸エチルとの反応、1-トリメチルシリルイミダゾール、ついで塩酸での処理、最後にCAN酸化を行うことにより、ワンポットでナクト[1,2-b]チオフェン-4,5-ジオン誘導体を合成した。本誘導体の一般的合成法はこれまで全く報告されていない。2-(2-イソシアノフェニル)-1-メチル-1H-インドールの求電子剤存在下の環化反応により、6位に様々な官能基を有する11H-インドロ[3,2-c]キノリン誘導体を合成した。従来の本誘導体の合成法に比べ、本法は極めて簡便である。
両生爬虫類の集合における自律分散メカニズムの研究

同種個体は、ある目的のために協同したり、集合する場合と、逆に、要求が一致するため競争関係になって、互いに排除する場合がある。このような矛盾した2つの要因が、同種の個体関係の様々な存在形態をもたらす。とりわけ、集合する動物では、集合を維持するためのメカニズムに関心がもたれてきた。このような動物の集合は、魚類や哺乳類についてよく調べられてきたが、系統的にその中間に位置する両生類、爬虫類のグル-プについては、あまり関心が持たれていなかった。このうち、両生類では、多くの種類のカエルのオタマジャクシが、群れて集合をつくる。しかし、それは単に光や餌にひかれて集まったものもあるし、それは個体間の誘引による社会的な群れをつくるものもある。社会的集合としての群れも、非常に単純な構造をしている。これらの群れは、視覚と嗅覚的に個体が誘引されることによって維持され、いくつかの種では、同腹の兄弟姉妹を識別し、主として兄弟姉妹で群れをつくる。このようなオタマジャクシの社会的群れには2つの異なる型がある。ヒキガエル型とツメガエル型である。前者の群れは平面的で、主に水底を移動しながら、摂食する。一方、後者の群れは立体的で、オタマジャクシは水中に浮かんで、同じ向きに並ぶ。濾過食者で水中の浮遊物を濾しとって食べる。濾過食に専門化しているので歯が無い。そこで、これらの2つの型のオタマジャクシの集合行動を観察することを計画しているが、今年度は、後者のツメガエル型の群れをつくるヒメアマガエルを用いて、実験下でのオタマジャクシの群れの動きをビデオにとり、解析をおこなっている。
認知と言語コミュニケーションの相互関連性に関する社会心理学的研究

実験社会心理学、発達心理学、文化心理学、言語学(語用論)などの研究方法を用いることにより、対人間や集団間に生じる葛藤の基礎となる言語コミュニケーションと認知過程との相互関連性を明らかにした。研究結果は、言語行為が当事者間の共通の期待や基盤に基づくものであり、認知過程もそれと相互規定的関係を持つことを明らかにした。対人間や集団・文化間の葛藤を解決するための方策を示唆するものであった。言語コミュニケーションによって、意図の伝達や対人関係の調節が行われる過程を、言語学的理解に基づいた上で計画された心理学的な実験研究を主とする実証的研究によって明らかにすることを目的とした。社会心理学的な観点からは、言語表現に用いられる述語の特質(たとえば動詞の他動性)が、原因の推論や責任追及の過程と関連すること、そしてこれが伝達するという目標によって影響を受けることを実験により確かめた。文化心理学的観点からは、対人葛藤の解決に用いられる言語表現と文化的特徴との関連が検討された。発達心理学的アプローチでは、心の理論の形成過程と助詞等の使用との関連が吟味された。1.行為を言語表現する際の述部が持つ「他動性」と、個人の行為に関する原因知覚や責任判断との相互関連性について社会心理学実験によって検討した。その結果、原因の所在と統制可能性に関する情報は自発的な他動詞の使用頻度に影響を与える一方、尋問表現に用いられる動詞の他動性は、単純に因果性の判断に影響するわけではないことが示された。反論や状況要因による説明など複雑なコミュニケーション過程が明らかになった。2.言語的コミュニケーションにおける言語形式と伝達内容の理解と対人関係に及ぼす影響に関して、皮肉に重点を置いて検討した。皮肉の程度は発話と状況の相互作用による不誠実性によって規定されることを検証するため発話のバレンス(ポジティブ、ネガティブ、あいまい)×状況のバレンス(ポジティブ、ネガティブ、バレンス)を操作した実験を行った。3.一組の実験参加者の各々に、相矛盾する情報のどちらかを提示した上で、この2者にコミュニケーションを行わせた。実験1の結果は、コミュニケーション直後に起こった態度変化が、後にニュートラルポイントに収束することを示した。さらに実験2では、情報の矛盾や偏りが、コミュニケーションという行為によってコミュニケーター内では解消されるが、伝達という行為を通して初期態度の影響を再発させることを示した。1.認知、文化、言語と伝達に関する社会心理学的なモデルを構築する試みを継続した。2.コミュニケーション行為が社会的事象の説明に与える影響に関する実験的研究を行った。大学生の実験参加者が、犯罪事件のケースを読んだ後、刺激人物が犯罪に至った原因を説明するよう求められた。実験結果は、伝達目標がある場合には、それがない場合に比べ、より多くの情報を用いて原因の説明が行なわれることを示した。これにより、説明の受け手の認知環境への考慮が、伝達者自身が形成する人物表象にも影響を与えることが示された。さらに、伝達目標が記憶に与える影響は、原因の説明内容によって媒介されることも明らかになった。3.動詞の他動性が原因推論に与える影響についての実験研究を推進した。同一の事象を「壊れた」「壊した」のように自動詞・他動詞のいずれを用いて表現するかによって、発話者の原因知覚、およびそれに関する聞き手の推論内容が変化することを示すための実験を計画し、そのための予備的検討を行った。実験刺激文の選定はほぼ終えているが、予備調査の結果は当初予想したよりも複雑な過程の介在を示しており、さらに詳細な検討の必要性を明らかにした。4.情報伝達が態度変容に及ぼす影響に関する実験研究を行った。結果は、相反する情報をもった2者が情報交換を行うと、直後は相互に歩み寄る方向へ態度が変化するが、その後に第三者に情報伝達を行う時には初期態度へと回帰する傾向が明らかになった。その基底にある心理的過程を明らかにするための、さらなる研究への発展可能性を示した。5.上記の他にも、他者の心的状態についての知識・信念の発達過程に関する研究や、感情表現の文化心理学的研究についても、当初の予定にほぼ沿った進捗を見せている。・言語使用と推論過程との関連に関する実験研究に進展があった。自動詞文に比べて他動詞文では、行為者の意図性、統制可能性、責任などがより強く認知されることが明らかになった。・誤信念課題を用いた発達心理学的研究では、3歳児において会話を通した他者の心的状態に関する理解が形成されていることを示唆する結果が得られた。・集団間の敵意や赦しなどの感情に与えるコミュニケーションの影響についての研究で、加害集団と謝罪者との関連性(距離)に関する認知が重要な影響を持つことが明らかになった。・終助詞の使用を比較した発達心理学研究に、より一層の進展があった。特に3歳児では、高い確信度を示す話者に対して強い信頼を示すのに対し、5歳児では母親と他者との間で弁別が行われていることを示唆する結果が得られた。

・文化心理学的研究では、他者からの援助を受けた後の感情反応において文化的基盤の影響が顕著に見られ、それがコミュニケーション内容に現れることが示された。・以上の研究を通して、国立国語研究所・言語類型論チームによる他動性研究プロジェクトなど、他の研究プロジェクトとの連携がより一層緊密になった。今後の連携強化が期待できる。・研究成果の公表に積極的に取り組むことができた。特に、日本心理学会および日本語文法学会においてそれぞれ、ワークショップを企画または参加することにより、学際的研究を一層進展させることに成功した。また海外においても、学際的研究学会に大いに寄与することができた。特に民俗心理学研究や社会的公正研究の学会などでは大きな反響を得た。
食塩感受性高血圧モデルにおけるSGLT2阻害の心不全進展抑制効果の検討

Dahl食塩感受性高血圧ラットを離乳期から0.3%の低食塩摂取をさせ、6週齢から低食塩摂取継続群(n=5)、8%の高食塩摂取群(n=5)、高食塩摂取+SGLT2阻害薬投与群(ipragliflozin 0.04%混餌投与:n=5)、高食塩摂取+サイアザイド系利尿薬投与群(hydrochlorothiazide 75 mg/L in drinkingwater:n=5)に割り付けた。ラットは、6週齢から2週間毎に血圧と体重を測定し、心エコー図検査で心形態・機能を経時的に観察すると同時に、代謝ケージを用いて尿収集を行った。最終週である第14週齢に全群で血液検査、神経体液性因子、心筋組織、腎組織を取得した。尿量、飲水量ともに高食塩群で低食塩群に較べ増加したが、高食塩+SGLT2阻害薬投与群では更に増加した。一方、高食塩+サイアザイド系利尿薬投与群では高食塩群に較べ、尿量、飲水量の更なる増加は見られなかった。尿糖排泄量は高食塩+SGLT2阻害薬投与群でのみ顕著に増加した。尿ナトリウム排泄量は高食塩群で低食塩群に較べ増加したが、高食塩+SGLT2阻害薬投与群では更に増加した。一方、高食塩+サイアザイド系利尿薬投与群では高食塩群に較べ増加は認められなかった。血圧は、高食塩群、高食塩+SGLT2阻害薬投与群で低食塩群に較べ同程度に上昇したが、高食塩+サイアザイド系利尿薬投与群では、血圧上昇は抑制された。心エコーによる左室壁厚の程度は、高食塩群、高食塩+SGLT2阻害薬投与群で低食塩群に較べ同程度に増加したが、高食塩+サイアザイド系利尿薬投与群では、やや抑制された。心筋組織、腎組織の検討、血行動態の検討がやや遅れているが、おおむね順調に進展している。心筋組織、腎組織の検討を引き続き行い、予定通りにSGLT2阻害の心不全の進展抑制効果についての検討を行いたい。