hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
上皮性卵巣癌におけるARID1Aの細胞競合現象を介したがん抑制メカニズムの解明

この結果は他の報告とも一致し、ARID1Aは細胞増殖を抑制する機能を持つことが伺える。次に、これらの細胞株を共培養したときの細胞増殖過程をタイムラプス顕微鏡にて観察した結果、いくつかの細胞同士の組み合わせにおいてARID1Aを欠いた細胞がARID1A発現細胞よりも優位に増殖する様子が観察できた。次に、マウス初代培養系でも確認するために、卵巣名細胞癌の発生母地であると考えられている卵巣表層上皮細胞を単離し、レンチウイルスを用いて不死化させたのち、蛍光タンパク質の安定発現細胞を作製した。さらにこの細胞のARID1Aをノックアウトさせた細胞も作製した。これらの細胞を用いて共培養させた様子を観察したところ、ARID1Aを欠損した細胞はARID1A発現細胞よりも優位に増殖することが明らかとなった。平成29年度は、昨年度の続きとなるマウス卵巣表層上皮細胞におけるARID1Aのノックアウト細胞の作製から開始した。この細胞の樹立に時間を要してしまったため、予定していた機能解析の段階まで進むことが出来なかった。そのため、本研究課題の補助事業期間延長申請を行い平成30年度までにin vivoにおけるARID1A欠損細胞の造腫瘍能の検討とARID1A変異細胞と発現細胞の境界で起こる分子生物学的変化を解析することとした。ARID1A遺伝子の機能喪失は、多くのがんで頻繁に見られる現象であり、ARID1Aは真のがん抑制遺伝子であることがわかってきた。本研究は、ARID1Aのがん抑制機能の中でも、細胞増殖制御と細胞競合との関係という新たな概念に焦点を当てた解析から、ARID1A発現が消失したARID1A変異細胞がどのように周囲の正常細胞と相互作用しながらがん化へと向かっていくのかについて解析した。ARID1A遺伝子の有無による細胞増殖の違いを検討するために、ARID1A遺伝子をノックアウトし、且つ蛍光タンパク質を発現する細胞株を20種類作製した。それぞれの細胞株を単独で培養したときの増殖曲線を確認したところ、ARID1Aをノックアウトした細胞では細胞増殖が亢進していた。次に、マウス初代培養系でも確認するために、卵巣明細胞癌の発生母地であると考えられている卵巣表層上皮細胞を単離し、レンチウイルスを用いて不死化させたのち、蛍光タンパク質の安定発現細胞を作製した。さらに、細胞増殖を制御するARID1Aの標的遺伝子についてマイクロアレイ解析を用いて探索し、ARID1Aにより遺伝子発現が促進または抑制される遺伝子群を同定した。
ウィクセル小球問題における最大球の予測

ランダムな大きさの球が空間にランダムに配置されていて,観測可能なのは検査平面上の球の切断円面積とする,ステレオロジーの古典的な問題であるウィクセル小球問題を考える.このとき,与えられた体積中の最大球寸法を予測したい.最大球の予測問題で,次のような研究成果を得た.1.空間の球の大きさが3母数未知の一般ガンマ分布に従うモデルの下で,与えられた体積中に含まれる最大球寸法の平均値の予測を考えた.このとき,一般ガンマ分布の形状母数の一つが既知であると仮定して,最大球寸法の予測法を構成しその精度を理論とシミュレーション実験で明らかにした.形状母数の一つを既知と仮定したが,現実的な場合にこの予測法が頑健であることをシミュレーション実験で示した.2.空間の球の大円面積の従う分布がグンベル分布の吸引領域に属す場合を考えた.このとき分布の右裾は指数分布で近似できる.与えられた体積中の球のreturn level(それ以上の球は平均1個となる値)を予測する問題を考えた.平面上の切断円の上位r個の観測データに基づく簡単な予測法を提案した.rの決定方法として,指数性の検定に基づく方法を採用した.予測法の精度をシミュレーション実験で調べ,tail indexのモーメント推定に基づくrの決定方法が良いことを見いだした.関連する研究として,上記で得られた統計解析法を年間最大地震震度データに適用した.また,極値データのグンベル分布への適合を良くするためにデータのベキ変換についても研究した.ランダムな大きさの球が空間にランダムに配置されていて,観測可能なのは検査平面上の球の切断円面積とする,ステレオロジーの古典的な問題であるウィクセル小球問題を考える.このとき,与えられた体積中の最大球寸法を予測したい.最大球の予測問題で,次のような研究成果を得た.1.空間の球の大きさが3母数未知の一般ガンマ分布に従うモデルの下で,与えられた体積中に含まれる最大球寸法の平均値の予測を考えた.このとき,一般ガンマ分布の形状母数の一つが既知であると仮定して,最大球寸法の予測法を構成しその精度を理論とシミュレーション実験で明らかにした.形状母数の一つを既知と仮定したが,現実的な場合にこの予測法が頑健であることをシミュレーション実験で示した.2.空間の球の大円面積の従う分布がグンベル分布の吸引領域に属す場合を考えた.このとき分布の右裾は指数分布で近似できる.与えられた体積中の球のreturn level(それ以上の球は平均1個となる値)を予測する問題を考えた.平面上の切断円の上位r個の観測データに基づく簡単な予測法を提案した.rの決定方法として,指数性の検定に基づく方法を採用した.予測法の精度をシミュレーション実験で調べ,tail indexのモーメント推定に基づくrの決定方法が良いことを見いだした.関連する研究として,上記で得られた統計解析法を年間最大地震震度データに適用した.また,極値データのグンベル分布への適合を良くするためにデータのベキ変換についても研究した.ウィクセル小球問題で与えられた体積中に含まれる球の最大寸法の予測問題について,高橋と渋谷は共同して次の研究を行った.空間の球の寸法の分布がグンべル分布の吸引領域に含まれると仮定して研究を行った.この仮定の下で,分布の裾は指数分布で近似できる.このことを利用して球の寸法のウィクセル変換分布を評価し,与えられた体積中に含まれる球のreturn levelの推定法を構成した.return levelの推定法では指数分布に従うと見なせる上位r個のデータを利用する.このrの決定方法として,極値理論におけるブートストラップ法で用いられている.Gini統計量と分布のtail indexのモーメント推定量を利用した指数性の検定法に基づくものを考えた.人工的な分布を考えシミュレーション実験を行い.tail indexのモーメント推定を利用してrを決定し,return levelを推定する方法の精度が良いことがわかった.品質管理の点から,金属工学では顕微鏡写真上の非金属介在物の切断データから与えられた体積の鋼中に含まれる非金属介在物の最大寸法を予測する必要がある.閾値上のデータが観測されている球状黒鉛鋳鉄の画像処理データについて上記の方法を適用し,データが仮定を満たすことの確認とreturn levelの推定結果を得た.また.空間の球の直径が指数分布に近い場合の予測問題についても研究を行った.この場合も,予測法を構成しその精度を理論とシミュレーション実験で調べ望ましい予測法を得た.極値理論の中でウィクセル小球問題に関連した研究を行った.ランダムな大きさの球が空間にランダムに配置されていて,観測可能なのは検査平面上の球の切断円面積とするウィクセル小球問題を考える.このとき,与えられた体積中の最大球寸法を予測したい.今年度は昨年度に続き,次の研究を行った.1.空間の球の大円面積の従う分布がグンベル分布の吸引領域に属すとする.このとき分布の右裾は指数分布で近似できる.与えられた体積中の球のreturn level(それ以上の球は平均1個となる値)を予測する問題を考えた.平面上の切断円の上位r個の観測データに基づく予測法を構成した.用いる上位r個のデータの決定方法として,指数性の検定に基づく方法を考え,新しいシミュレーションモデルの下で予測法の精度を調べた.分布のtail indexのモーメント推定を利用した指数性の検定に基づくrの決定法が良いことが分かった.

2.切断円面積に対応する切断介在物寸法等の極値データのグンベル分布への適合を良くするために,データのベキ変換を考えた.ベキ変換を行うことにより,極値データのグンベル分布への適合が良くなることを見いだした.また,シミュレーション実験を行い,ベキ変換する事の良さを示した.得られた結果を,介在物データと年最大洪水水量データに適用して良好な結果を得た.関連する研究として,上位k個のデータを用いる方法の漸近効率を理論的に明らかにし,一定面積で上位3個まで測定されている孔食データに適用した.
中学校理科教育における課題研究の方法の開発

課題研究が学習指導要領に明記されているのは高等学校理科IIBの各教科書であるが、生徒が主体的に自然を探究していく学習には探究活動を取り入れなければならない。したがって、問題意識を持たせるために課題研究を行うことが中学校にも必要である。このため、1.中学校学習指導要領第2分野・地学領域の目標及び内容について分析ISM法による構造化。2.中学校指導書理科編により学習の総括目標の明確化、及び課題の精選。3.中学校理科第2分野の教科書の内容分析、及び単元の目標の明確化。4.ISM構造化法による学習目標-課題モジュールの構成。5.課題モジュール法による課題研究項目の設定方法の試み。6.教材としての教科書単元を含め、課題モジュールの設定。以上により、中学校理科第2分野地学領域の課題研究の方法の開発を行うことができたった。課題を設定するために、中学校学習指導要領及び指導書を用い、次の様に研究を進めている。1.学習指導要領及び指導書の「目標」及び「内容」に書かれている内容を、簡潔な文で表した要素項目を作成する。2.要素項目を単元ごとに整理し、目標(ねらい)と内容(学習課題)との区別を行い、学習目標の明確化と課題分析を行う。3.学習目標に対応する課題要素項目の関係付けを行い、部分的な関係から全体構造をISM構造化法を用いて作成する。4.ISMチャートによって構造化された学習目標と課題要素項目は、課題の決定のためクラスター分けを行う。5.中学校理科教科書の項目及び観察・実験などについて、単元及び出版会社ごとに要素項目を作成する。6.また、教科書から作成した要素項目は、学習指導要領の項目に合せて一覧表を作成する。7.34で作成した目標-課題チャートに6で整理された教科書からの情報を参照し易いように資料を作成する。このため、教科書に記載されている観察・実験などに関するものも要素項目を作成しておく。課題研究が学習指導要領に明記されているのは高等学校理科IIBの各教科であるが,生徒が自主的に自然を探究していく学習には探究活動を取り入れなければならない。したがって,問題意識を持たせるための課題研究を行うことが中学校にも必要である。このため,1.中学校学習指導要領理科第2分野・地学領域の目標及び内容について分析ISM法によって構造化を行った。2.中学校指導書理科編により学習の総括目標の明確化,及び課題の精選。3.中学校理科第2分野の教科書の内容分析,及び単元の目標の明確化。6.教材としての教科書単元を含め,課題モジュールの設定。以上により,中学校理科第2分野地学領域の課題研究の方法の開発を行った。
学習環境に最適化された学習者特性分析法による個別学習支援システムの開発

蓄積した学習データに基づく最適化させるための分析手法の検討では,学校吹奏楽初学者の演奏基礎力向上に着目し,ロングトーン練習に特化した個人練習支援システムを開発した。グラフ上で得られる情報をある程度パターン化することで,その特徴や傾向に応じて適切なフィードバックを与えることが可能であることを明らかにした。また,開発したシステムは初学者の演奏音の特徴を捉えており,学校吹奏楽初学者の省察に有用であり,昨年度開発したシステムを発展させ多様な学習環境に最適化した分析に応用できることを明らかにした。初学者のスキル向上に着目し先進的技術を活用した分析手法を検討した。学生が擬似的に授業観察し授業スキルを高めるための仮想現実教材を開発し,平面画像と全天球画像をもとに教員養成学部生が授業観察した内容の差異を分析した。授業観察で気づいたことを比較した結果,全天球画像では空間認識がしやすくなり,学生は子ども達の手元や身体の向き,教室全体の環境までより広く詳しく観察したことを明らかにした。さらに,中山間・へき地小規模校を対象に遠隔支援を行った学生の意見などを分析した結果,ビデオ会議システムを活用した教師支援型遠隔教育の経験を通じて,教員養成学部生らは,(1)児童らが,ビデオ会議システムなどのICTを用いて遠方にいる専門家などの遠隔支援を受けることで探究的な学習活動に取り組めることを実感し,(2)ICTの特性を理解したうえで,ICTを有効活用した遠隔教育を実現するための知識や技能を獲得できることを明らかにした。2017年度に開発したシステムの応用により,主に学校吹奏楽初学者や授業観察初学者の児童生徒や教員養成学部生を対象に学習特性を把握できることを明らかにした。また,昨年度の繰り越し課題とした海外研究機関等における先進的な学習履歴分析手法の調査を実施し,意見交換や情報収集を行うことができた。ここで得られた意見や情報,本年度の研究成果などをもとに,2017年度に開発したシステムをさらにブラッシュアップする計画を進めており,これらのことを踏まえると,ほぼ計画どおりに本研究が進行できるものと考える。2018年度までに得られた国内外学会・研究会などでの意見や情報,研究成果をもとに,これまでに開発したシステムをさらにブラッシュアップし,新たな学習データの蓄積を行う。異なる地域性や社会性等を有する多様な学校環境に対応するため,多様な学校環境下での試行・評価を通じて,都市部や山間過疎地等の異なる環境を有する学校等で本研究開発手法の有用性をさらに検証する。有用性の検証では,IRT(項目反応理論)をはじめとする確率推定モデルの利用を検討し,学習成果などから統計的に分析・評価する。特に,確率推定モデルの利用検討においては,Learning Analyticsに関する国内外の研究会やシンポジウムなどに参加し,最新の学習履歴分析手法やその研究・実践について調査,情報収集を行う。なお,これまでに得られた研究成果は,前年度に引き続き,国内外の各学会・研究会などへの参加・成果報告や研究成果の公開を行う。アダプティブ・ラーニング(適応学習)は,児童生徒個々の学習進捗状況を記録しそれを分析・反映することで,学習内容を分岐させ,最適化して提示する。この進展により,学校教育法にある「基礎的・基本的な知識・技能の習得」を効果的に履行し,児童生徒一人一人の習熟度や学習上の困難さ,得意分野等,個に応じた学習が可能となると期待されている。しかし,日本の学校における学習集団は1学年あたりの人数が100名に満たず,「少ないデータでも,可視化しモデルを作り,そのモデルが他のコンテクストにも適応可能というサイクルを回すこと」を実現する手法の開発が求められている。そこで本研究では,個別学習支援システムに蓄積された学習データをもとに,少人数学習集団の中で児童生徒の学習特性を可視化するシステムの開発を開始した。本年度はWebアプリケーションとしての実装を試み,サーバ側とクライアント側の両サイドから,クライアントが指定した学習データを提供する機能を開発した。教師は児童生徒らの学習履歴をグラフ上に表示し,クラス内の全児童生徒の学習履歴を一覧表示することで,クラス全体の中で任意の児童生徒の学習特性を可視化し,分析,把握することを可能とした。なお,児童生徒の学習特性の分析では,データの分析結果から学習特性の傾向までを自動的に出力させることも考えられるが,教員養成学部生に対する指導やその学習状況などに基づく考察から,教師が児童生徒らを理解する能力を育成するためにも,あえて教師自らが学習特性を分析することとした。また,学習指導要領では,学習履歴の可視化を通じた評価も求めており,教員養成段階から学習特性を分析するための能力を育成する必要がある。そこで,主に教員養成学部生を対象とした大学生らの学習履歴および学習特性を可視化・分析し,学習状況と成績などとの関連性を明らかにした。当初の計画どおり,既存の個別学習支援システムを用いて蓄積されてきた学習履歴データをもとに,1時間の授業のなかで個々の児童生徒がどのように学習を推移させていったのかをWebアプリケーション上で可視化し,教師が児童生徒の学習特性を把握することができるようになった。海外研究機関等における先進的な学習履歴分析手法の調査が実施できなかったが,関連する国際会議等に参加し,成果報告および情報収集を行うことができた。また,すでに2018年度に海外調査を実施することを決めており,これらのことを踏まえると,ほぼ計画どおりに本研究が進行できるものと考える。

蓄積した学習データに基づく最適化させるための分析手法の検討では,学校吹奏楽初学者の演奏基礎力向上に着目し,ロングトーン練習に特化した個人練習支援システムを開発した。グラフ上で得られる情報をある程度パターン化することで,その特徴や傾向に応じて適切なフィードバックを与えることが可能であることを明らかにした。また,開発したシステムは初学者の演奏音の特徴を捉えており,学校吹奏楽初学者の省察に有用であり,昨年度開発したシステムを発展させ多様な学習環境に最適化した分析に応用できることを明らかにした。初学者のスキル向上に着目し先進的技術を活用した分析手法を検討した。学生が擬似的に授業観察し授業スキルを高めるための仮想現実教材を開発し,平面画像と全天球画像をもとに教員養成学部生が授業観察した内容の差異を分析した。授業観察で気づいたことを比較した結果,全天球画像では空間認識がしやすくなり,学生は子ども達の手元や身体の向き,教室全体の環境までより広く詳しく観察したことを明らかにした。さらに,中山間・へき地小規模校を対象に遠隔支援を行った学生の意見などを分析した結果,ビデオ会議システムを活用した教師支援型遠隔教育の経験を通じて,教員養成学部生らは,(1)児童らが,ビデオ会議システムなどのICTを用いて遠方にいる専門家などの遠隔支援を受けることで探究的な学習活動に取り組めることを実感し,(2)ICTの特性を理解したうえで,ICTを有効活用した遠隔教育を実現するための知識や技能を獲得できることを明らかにした。2017年度に開発したシステムの応用により,主に学校吹奏楽初学者や授業観察初学者の児童生徒や教員養成学部生を対象に学習特性を把握できることを明らかにした。また,昨年度の繰り越し課題とした海外研究機関等における先進的な学習履歴分析手法の調査を実施し,意見交換や情報収集を行うことができた。ここで得られた意見や情報,本年度の研究成果などをもとに,2017年度に開発したシステムをさらにブラッシュアップする計画を進めており,これらのことを踏まえると,ほぼ計画どおりに本研究が進行できるものと考える。海外研究機関等における先進的な学習履歴分析手法の調査を行う。この調査結果を踏まえ,学習者の学習特性を効率的に解析するためのデータセットをより最適化することに取り組む。また,様々な地域や学校において学習データを収集・分析し,システムの精度や可用性の向上を図る。加えて,教育実習生をはじめとする教員養成学部生らに対して学習特性を可視化・分析することを行い,より幅広い対象者への有用性を明らかにするとともに,将来の教師たちがどのようにしてそれらの指導力を身につけていくべきかを考察していく。2018年度までに得られた国内外学会・研究会などでの意見や情報,研究成果をもとに,これまでに開発したシステムをさらにブラッシュアップし,新たな学習データの蓄積を行う。異なる地域性や社会性等を有する多様な学校環境に対応するため,多様な学校環境下での試行・評価を通じて,都市部や山間過疎地等の異なる環境を有する学校等で本研究開発手法の有用性をさらに検証する。有用性の検証では,IRT(項目反応理論)をはじめとする確率推定モデルの利用を検討し,学習成果などから統計的に分析・評価する。
精密代謝分析にもとづく高級アルコール高生産酵母の構築

バイオマス原料から、化成品原料のブタノールを生産する出芽酵母の構築を目指した。そのために、細胞内代謝中間体濃度の絶対定量値から各反応のギブス自由エネルギー変化を推定し、代謝律速を同定する熱力学レベルの解析法を確立した。エタノール非生産酵母株の代謝状態を精密に測定することに成功し、代謝フローをエタノール生合成から他経路へと転換するには、細胞内コンパートメントを考慮したNADH過剰の解消が必要なことを明らかにした。これらの知見をもとに、ピルビン酸のミトコンドリア輸送に着目し、新たなイソブタノール高生産株の構築に成功した。(1)絶対定量法の確立:酵母細胞内の解糖系中間体すべての濃度を絶対定量する手法を確立した。まず、抽出時の代謝停止法などに検討を加え、高効率な手法を見いだした。ついでLC-MSをもちいた解糖系代謝中間体測定法をATPやNADHなどの補酵素類の測定へ拡張した。これにより、解糖系の7反応のギブス自由エネルギー変化を解析可能にした。(2)エタノール生合成遮断酵母株の分析(松田):これまでに構築していた、ADH多重破壊株(BY4939 adh1Δadh2Δadh3Δadh4Δadh5Δ)、およびPDC多重破壊株(YPH499 MTH1ΔT pdc1Δpdc5Δpdc6Δ)について解析を行った。エタノール生合成を遮断することで、ピルビン酸および還元力が過剰となり他のアルコール生合成経路へとオーバーフローすることが期待される。絶対定量値から解糖系各反応のギブス自由エネルギー変化(ΔG)を算出したところ、いずれの反応のΔGも大きく負に変化しておらず、むしろ正に増加する傾向があった。また、細胞内含量がミカエリス定数に比べて著しく増加した反応も見られなかった。この結果から、代謝律速点は今回の解析に含まれなかったグリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)反応か、ピルビン酸変換部分にあると推測され、さらに、エタノール生合成遮断酵母株においても代謝物蓄積量に大きな変化がなく、代謝恒常性を維持しているという知見が得られた。H27年度の研究課題のうち、抽出時の代謝停止法の検討、酵母細胞内の解糖系中間体すべての濃度を絶対定量法、ギブス自由エネルギー変化の算出への応用を実施した。さらに、これまでに構築していた、ADH多重破壊株(BY4939 adh1Δadh2Δadh3Δadh4Δadh5Δ)、およびPDC多重破壊株(YPH499 MTH1ΔT pdc1Δpdc5Δpdc6Δ)について解析を完了させ、当初の計画通りにデータの取得を行った。また、データの解析の結果、解糖系各反応のギブス自由エネルギー変化(ΔG)から合理的に代謝律速点を絞り込むことができた。このように、精密に代謝を定量することで予想される結果を得ることができた。さらに、エタノール生合成遮断酵母株においても代謝物蓄積量に大きな変化がなく、代謝恒常性を維持しているという予期されない新たな知見を得ることができたことから、当初の計画通り以上に進展しているとした。(1)酵素量の解析:出芽酵母中の代謝律速部位の解明を目的として、定量プロテオミクス法を用いた中心代謝酵素タンパク質含量の定量を行った。そのための必要なLC-MSを用いた定量プロテオミクス法は既に開発したものを用いた。まず、中心代謝酵素遺伝子の1遺伝子破壊株30株について定量プロテオーム解析を行った。その結果、解糖系酵素群は協調して発現量が増減する傾向があった。また、無益回路であるトレハロース経路の酵素群の発現量が大きく変化していたことから、過剰なATPの消費が代謝の安定化に寄与していると推測された。次いで、エタノール生合成を遮断した酵母の中心代謝酵素発現プロファイルを調べたところ、解糖系およびトレハロース回路酵素群の発現量が顕著に増加していた。このことから、増殖速度が低下する一因として酵素タンパク生合成のために多くのリソースを割いていることが推測された。また、NADPH再生にかかわる酸化的ペントースリン酸経路の酵素群の発現量も向上していた。一方、イソブタノール生合成経路の酵素発現量は減少する傾向がみられた。以上の結果から、NADPH再生系の強化とイソブタノール生合成経路のさらなる活性化が必要であるとの知見が得られた。(2)イソブタノール高生産株の作成:これまで得られた知見を元に酵母細胞内の代謝律速を解消するための遺伝子改変を行った。まず、NADH過剰とNADPH不足を解消する反応の強化株を作成したところ、イソブタノール生産量が元株に比べて6倍以上向上した。また、イソブタノール生合成経路遺伝子を多コピーで保持した株を構築したところ、元株に比べてイソブタノール生産量が6.2倍向上し、227.6±11.0 mg/Lとなった。H28年度の研究課題のうち、(1)酵素量の解析について、定量プロテオミクス法を用いた中心代謝酵素タンパク質含量の定量を行い、その結果をもとに、(2)イソブタノール高生産株の作成について、酵母細胞内の代謝律速を解消するための遺伝子改変を当初の計画通り完了させた。その結果、イソブタノール生産能を向上することに成功したことから、おおむね順調に進展しているとした。

中心代謝酵素タンパク質含量の定量については、当初の計画に加え、中心代謝酵素遺伝子の1遺伝子破壊株30株について解析を行い、解糖系酵素群が協調して発現量が増減する傾向があること、トレハロース経路が代謝調節に重要な役割を果たしていることなど、今後精密代謝解析データを解読していくための基礎知見も得ることができた。実験室進化株の解析:出芽酵母YPH499株由来のPDC欠損変異株を長期継代培養することで、増殖速度が向上した実験室進化株(PDCΔ)が得られている。次世代シーケンサーを用いて得たゲノム配列情報を比較したところ、PDCΔではグルコースセンサーに関わるシグナル伝達経路を担う遺伝子に変異が観察された。これらの結果から、実験室進化株では、グルコースセンサーの感度が低下し、カタボライト抑制が緩和されていると推測された。次にADH欠損変異株(ADHΔ)およびPDCΔを解析した。まず野生株のATP, ADPおよびAMP含量からEnergy chargeを計算したところ、それぞれ0.79, 0.94, 0.95となり、妥当な範囲(0.8-0.95)にあることがわかった。ADHΔおよびPDCΔの共通点として細胞の増殖速度は低く、細胞内代謝物質ではピルビン酸は若干増加するものの、過剰蓄積は起きていなかった。一方で、補酵素類ではNADHの濃度が野生株に比べると増加していることが分かった。さらに、ペントースリン酸経路の各反応のギブス自由エネルギー変化はゼロに近く、ADHΔおよびPDCΔでも大きく変化しないことから、増殖低下時でも熱力学的な状態には変化がみられないことが明らかとなった。イソブタノール高生産株の構築:得られた知見をもとに、イソブタノール生合成経路をすべミトコンドリアに構築した株を作成したところ収率が2.2%に増加した。さらに、ピルビン酸輸送タンパク、Mpclp、Mpc2,およびMpc3pを恒常的に発現した株を構築したところ、イソブタノール生産量を約50%向上することに成功した。バイオマス原料から、化成品原料のブタノールを生産する出芽酵母の構築を目指した。そのために、細胞内代謝中間体濃度の絶対定量値から各反応のギブス自由エネルギー変化を推定し、代謝律速を同定する熱力学レベルの解析法を確立した。エタノール非生産酵母株の代謝状態を精密に測定することに成功し、代謝フローをエタノール生合成から他経路へと転換するには、細胞内コンパートメントを考慮したNADH過剰の解消が必要なことを明らかにした。これらの知見をもとに、ピルビン酸のミトコンドリア輸送に着目し、新たなイソブタノール高生産株の構築に成功した。(1)酵素量の解析:ピルビン酸変換部分およびグリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)反応の酵素に注目し、定量プロテオミクス法を用いて候補酵素タンパク質の含量の定量および、リン酸化状態の解析を行う。そのための必要なLC-MSを用いた定量プロテオミクス法は既に開発済みである。エタノール生合成を遮断した酵母と野生株酵母の酵素発現プロファイル、リン酸化状態を解析し、炭素フローの律速となる反応の特定および、その分子機構を酵素レベルで解明する。(2)イソブタノール高生産株の作成:エタノール生合成を遮断した酵母細胞内の代謝律速を解消するための遺伝子改変を行う。さらにブタノール生合成経路を導入した株を構築し、エタノール、ブタノール収率および増殖速度を評価する。今年度の知見から、ピルビン酸を返還する反応の強化が重要であると示唆されている。
管理会計の設計・運用に関するシミュレーション解析に基づく理論的・実証的研究

近年の管理会計研究の発展は理論と実務のギャップを埋めるため,研究者は,フィールド・スタディを通じて先進的な管理会計の実務や技法をいくつも掘り起こしてきた。それらが組織に良好な成果をもたらすことが認識されつつも,戦略的な効果については未解明な部分が多い。そのため,典型的な量的・質的調査をもとに,単純化された理論仮説とその検証では,管理会計の戦略的な効果についての包括的な理解には限界を伴う。本研究では,管理会計システムの設計とその運用に伴う相互作用を鍵概念に,その相互作用の生成と舵取りにおける管理会計システムの役割の解明を試みる。
公的分譲集合住宅ストックの中古価格の"地価割れ現象"と改善・建替の可能性について

新規に供給される分譲集合住宅の水準が向上するにつれ、ストックは相対的に低水準化する。近年になって、昭和40年代に供給された分譲集合住宅の一部で中古価格が著しく低下してきた。価格変動要因として、住宅需給構造周辺部の開発状況,建物の維持管理の状況を挙げ、各種の分析を試みたが、この中で、低価格化に最も寄与している要因は、住宅需給構造の変化であることが判明した。小規模な住宅程、交通不便な場所に立地している住宅程、中古住宅需要を失いつつあることが判明した。中古価格は更地にした場合の土地価格を大巾に下廻る場合も多く、昭和30年代団地で1/21/3戦前に供給された住宅で1/31/6になっている。これは分譲集合住宅の場合、区分所有であるから、建替困難となり、従って土地の効用が将来にわたって制限し続けられるためと判明した。中古価格が更地価格以下となる現象を"地価割れ"と名付けた。低価格化は居住者〓〓の低下を促し、管理を進める上で様々な障害を抱え込むことも判明した。居住者の経済的条件が悪化し、適正な管理費支出が困難となるばかりでなく、管理費・修繕積立金の長期未納者も増加している。管理意識の低下もみられ、スラム化が極めて懸念される。スラム化を防止し、資産を保全するとともに快的な居住水準を確保するために、共同増築を進めることが考えられる。またスラム化著しい住宅では建替も検討されなければならない。本研究では両者の可能性を投資効果の観点や土地経済の観点から検討し、事業推進の経済評価を行なった。多くの団地で可能性をみたが、一方、住民意識は多様であり、経済指標のみでは対策困難なことが判明した。改善実施団地建替実施団地の事業記録を収集することで、多くの知見を得たが、住民の合意を得る上で、コーディネーターが豊富な知識技術を持つことが急がれるほかに、今後行政の役割も緊急に検討されなければならないことが判明した。
友愛の哲学-アリストテレス研究-

人間存在には本質的な二面がある。一つは、「人は一人」という原初現実がある。人はかけがえない唯一性の個体である。二つは、人間は男と女の間に生まれ、家族をはじめとして人々の間で生きる人間である。人間は社会的存在である。この二面に渡るのが友愛なのである。従って友愛には両義的な曖昧さが付きまとう。そこで人間の成長と友愛の成長は軌を一にしている。親子の友愛に始まり、楽しい遊び仲間の少年時代、人生の入り口に立つ青年期の友愛、独立した人格の大人の友愛。しかし鉄壁の孤独に縛られた人間が真理と善を共有しようとするとき生まれるのが哲学を共有する友愛であって、ソクラテスの対話問答を支えていた。見知らぬよそ者は不安にする。その不安を消すにはよそ者を消すこと。こうして社会から抹殺してきた。しかしいまひとつの方式をギリシア人は知っていた。よそ者を友として歓待して飲食を共にすることである。それはおよそどんな人間も偶然と運命の力の元では無力であり、最後は死に屈服する悲惨を免れない、という人間理解によっていたのである。人間の悲惨を共有することで生まれた友愛の姿であった。旧約聖書のアブラハムによるイサク殺しは戦慄を呼ぶ謎であるが、神は予見不可能性の無限の深淵であり、イサクを殺すときアブラハム自身が死んだということである。しかし自己に死んだとき、アブラハムはイサクが自分の子ではなく神に守られている神の子であるという超公共系の現実に開眼したのである。そして新約聖書の「よきサマリア人」の譬えは、人間の悲惨の共感から生まれた歓待の純粋形であるが、「誰が」「誰を」助けるか、ということさえ消えて、つまり自己が消えることで超開放系の出会いとなったのである。以上のことが示すのは、愛は半ば死に裏打ちされてこそである。アリストテレスはそれを別の面から指示している。アリストテレスは所有を「自分のものでなくすことができる自由」と分析した。他人に与える贈与に所有の最後的な意義があったのである。所有の極みは身体である。こうして「我が身体」は他人に与えられることに真骨頂があった。献身の美徳がそうであり、「友のために死ぬ以上の愛はない」のである。イエスの十字架が友愛の彼方に見えることとになる。テーマ「友愛の哲学-アリストテレス研究-」に従った本年度の研究は、アリストテレスが『ニコマコス倫理学』で展開した友愛論の原論に当たるプラトンの『リュシス』の研究に絞って行われた。特に夏はイギリス・ケンブリッジ大学へ出かけ、そこの大学図書館と古典学部図書館で資料を収集しつつ研究を重ね、『リュシス』についての論文を8割方完成することができた。その成果は帰国後加筆訂正して、『哲学・科学史論叢』第7号に掲載した(東京大学教養学部哲学・科学史部会編、2005年、1-48頁)。

その中心的な論点は、生死の境界領域たる老人のソクラテスを中心とした少年同士、青年同士の友情から親子の愛情、教師と生徒の愛情に至る人間の心理の成長を視野においた分析であること、議論は「誰が誰の友か」を巡っており、しかも似たもの同士の友は自他の区別が消えて「友がいない」逆理があり、似ないもの同士の友は結びつきの紐帯がなくて「友がいない」逆理があること、従ってどのような人がどのような人とどの点で似ておりどの点でどのような点で似てなくて、どのような所以のことを共にすることで友となるか、なりうるか、が問題として浮き彫りになることを示した。その「どのような点」「どのような所以」を更に子細に分析したのがアリストテレスである。しかしプラトンの友愛論に伏在する問題点としてもう一つ残った。人は死ぬ。その死んでいく人に友はあり得るかということである。死は人と人を分断する。そこには「共にする」ことが何もない。人間には友不可能性が絶対の深淵として脚下にあったのである。この深淵を跨いでどのような友愛が可能か、はアリストテレスにおいて更に探求される課題となった。人と人の友愛には互いの間の違いと同一性を跨ぐ両義性がある。人と人が異なり個となる鉄壁の孤独に守られていなければ、なにがしか似たもの同士になってしまうか、あるいは一方の圧倒的支配と影響力の下に他方が立たされるかである。いずれも過剰な一体化が進行する。自己が消える子宮退行現象であって、どんな人間集団にも起きることである。しかし他方、人が孤絶したままでは、何も共にする友がいない。ソクラテスの対話問答の秘密は、真理を第一の友にし、そこから真理探究を共にすることが鉄壁の孤独の二人を新しく友にすることにあった。見知らぬよそ者は人を不安にする。自分の保護安全圏を侵すからである。不安を消すにはよそ者を消すこと。こうして社会からよそ者として排除されまた抹殺された人は歴史上無数いる。ギリシア人は不安を消す第二の方法を考えついた。よそ者を友として歓待し食事を共にすることである。そこには人間は誰でも運命と偶然の力の前では破れる弱い存在であり、最終的には死の力の前で倒れる悲惨を免れないという共通理解がある。人間の悲惨を共有することで生まれた友愛の姿なのである。聖書の善きサマリア人の譬えは、悲惨な人間への共感から生まれる援助と歓待の純粋形である。アリストテレスは友愛に平等が基本としたが、助けるものと助けられるものの間でも助けられる屈辱感、助ける優越感という区別が生まれる。従って「誰が誰を助けるか」ということすら消えるべきだったのである。あの譬えが旅先の話としたのは、旅では「誰か」が消えるからである。援助と歓待の善行すら友愛にあってはむしろ知られない内に遂行される様相がある。それは死を含むということであった。アリストテレスの分析では所有の意義は、自分のものでなくすことができる自由にある。こうして物惜しみしないで与えるこころの広さと豪気をアリストテレスは徳としたわけだ。しかし所有の極みは自分の身体である。とすれば自分の身体とは実に与えるところのものである。献身の美徳がそれを示している。そして友愛の極みは無条件に我が身を与えることにある。友のために死ぬ以上の愛はない、との意味がそこにある。そして我が身を愛に渡し死に渡すその渡しが「わたし」の成り立ちだったのである。
フランス両大戦間における女性芸術家の活動環境

本年度は7月27日から8月15日にかけてパリ、ニース、ポルトガルにおいて、ポンピドー・センター、国立美術史研究所、グルベンキアン美術館他において女性芸術家の作品調査と資料収集を行った。ニースでは両大戦間に芸術家の下絵をもとにタピスリーを制作・販売しかつコレクターとしても重要な役割を果たした女性マリー・クトーリと関わる二人の重要な芸術家ピカソとマティスの相互関係をテーマにした展覧会を調査した。グルベンキアン美術館ではソニア・ドローネの作品調査を試み、パウラ・レゴをはじめポルトガルの女性芸術家についても合わせてその作品にふれる機会を得た。さらに12月22日から1月5日にかけてパリの国立美術史研究所、フランス国立図書館での文献調査に加え、ロンドンではModern couples展において両大戦間における同性愛を含む芸術家カップルの作品と資料の展示に触れ、特にパリに住んでいたアメリカ人文学者ナタリー・バーニーを中心としたロメーヌ・ブルックス等女性芸術家たちのネットワークに関する貴重な資料に触れることができた。加えて単に男女の関係にとどまらない多様な形での「カップル」とみなしうる親密な人間関係が絡み合いながら芸術活動を展開する際のエンパワーメントにつながる事例に予想以上に多く触れることができたことで、本研究の理論構築にも資する成果が得られた。さらに年度末には両大戦間フランスにおいても女性コレクター、メセナとして重要な役割を果たしたヘレナ・ルビンシュタインに関する資料を入手することができ、両大戦間における女性芸術家の活動環境をめぐる多様な事例に関して、作品および資料収集を順調に展開した。また11月には著書『芸術と「他者」』(ブリュッケ)を上梓し、本研究で得られたアイリーン・グレイの作品研究を盛り込むと同時に、女性と装飾に関する具体的事例に基づく考察を展開した。2016年8月に予定より前倒しで実施された南仏での調査旅行に於いて、《E1027》の見学を実施し、事前申し込みに基づいて建築内部を含めて詳細に実見し、当初不可能とされていた写真撮影も行うことができたのは予想以上の成果であった。これによって内部構造や導線、室内の細部の設えなど細部に至るまで確認することが可能となり、十分な分析を進めることができた。今回の調査によってえられた新規収集資料の検討・分析の結果、入校後編集過程にあったアイリーン・グレイに関する論文に加筆訂正を行い、完成させた。本論文は2017年度出版予定である。また、今回のフランスにおける調査の結果、女性芸術家とその環境に関する基本的な認識に関して、特に作品の収集や注文に関わる女性たちのうち、アイリーン・グレイに関連して、服飾デザイナーであったジュリエット・レヴィ、マリー=ロール・ノワイユ等の多岐にわたる活動が確認された。さらに、マリー・ローランサンの肖像注文の状況を調査することで、本研究に於いて有益な知見が得られた。本研究と関連して、女性と芸術の基本的なあり方に関連して、身体表象とジェンダーに関する論文を執筆・出版した(天野知香「美術に於ける身体表象とジェンダー眼差しの権力とフェミニズムアート」田中正之編『現代アート10講』武蔵野美術大学出版局、2017年91-110頁)。本年度は研究初年度にあたるため、資料収集と作品調査に力を傾注するとともに、その結果十分な研究実績を上げることができた。研究初年度に当たる2016年度は、年間を通じて基礎研究と資料収集に力を入れると同時に、当初の予定を状況に応じてフレキシブルに修正して調査を進めたことで、順調な進捗を得ることができた。特に2016年8月に約三週間、南仏およびパリにおいて一部予定を前倒しして調査を行い、ケース・スタディの中心的な対象の一人であるアイリーン・グレイが南仏ロックブリュンヌ=カプ=マルタンに建設した《E1027》と呼ばれる彼女の主要建築の見学を実施した。事前申し込みに基づいて建築内部を含めて詳細に実見し、当初不可能とされていた写真撮影も行うことができたのは予想以上の成果であった。またやはり南仏のカーニュ・シュル・メールでは両大戦間の女性による作品注文や芸術支援の活動に関して、スージー・ソリドールをめぐる複数の女性芸術家を含む肖像作品を調査する機会を得、またイエールではやはりグレイを含めた両大戦間の美術や装飾を支援したシャルルとマリー=ロール・ノワイユ子爵夫妻の邸宅において、夫妻の芸術支援活動に関しての資料展示を見ることができた。またパリにおいては、女性やフェミニズムの活動に特化された図書館であるマルグリット・デュラン図書館で、マリー・ローランサンの書簡を始めとする資料調査を実施した。さらに12月26日から1月8日にかけて再びパリとロンドンの主要美術館及び図書館において、研究対象となる女性芸術家についての作品調査、資料収集を実施した。以上の結果、研究対象とする主要芸術家の資料は順調に収集・検討が進められることとなった。その一方で、調査の過程で芸術家への制作注文や支援活動における女性の参加について、予想よりも多岐にわたることが確認されたことでさらに調査対象を拡大、修正する必要を認識し、その実施に着手することができたことも今後の研究の進捗を推し進めるにあたって有効であった。1)これまでの資料検討を続行すると同時に、2017年8月5日から24日の期間、イタリア、イギリス、フランス、ドイツで作品調査と資料収集を行った。

イタリアではベネチア・ビエンナーレ、ドイツではカッセルのドクメンタにおける女性芸術家作品の展示や、フランクフルト現代美術館におけるキャロリー・シュニーマン(Carolee Schneemann)の個展などを通して、女性芸術家作品における身体やセクシュアリティをめぐる表象の事例や、ポストコロニアリズムとの関係など、研究の理論的な背景を確認した。ロンドンでは、テート・ブリテンで開催された『クイア』展を調査することを目的とし、特にレズビアンを含めた女性たちの協力と芸術生産との直接的な関係について、本研究に重要な示唆と情報を得ることができた。パリでは主にI.N.H.A(国立美術史研究所)の図書室で資料収集にあたった。さらに2017年12月25日から2018年1月6日、パリ、ロンドンの主要美術館、図書館を調査し、研究対象作家についての資料収集と作品調査を行った。2)2017年7月に本研究の研究対象の一人であるアイリーン・グレイに関する拙論「モダニズムを差異化するアイリーン・グレイについて」が出版された(鈴木杜幾子編著、『西洋美術:作家・表象・研究ジェンダー論の視座から』ブリュッケ)。本論はすでに本研究開始前に入稿していたが、出版が遅れたため、本研究で新たに得た知見を出版直前の校正時点で盛り込むことができ、本研究の成果の一部を示すものとなった。これまでル・コルビュジェとの関連で語られていたグレイの活動をむしろコルビュジェに代表される主流のモダニズムを差異化するものとして具体的な作品から分析し、さらに彼女の活動について、両義的なセクシュアリティをはらんだ彼女を取り巻く女性たちのミリューがはたした多面的な役割に言及した。本年度は計画通りの資料収集と分析をすすめる一方で、従来の理論的な枠組みを批判的に捉え直す契機として、現代美術を含めた広範な女性芸術家の作例に触れ、その制作環境を考察することを試みた。時代的文化的状況の変化と作家たちの活動環境の差異は大きいが、一方で女性芸術を巡る状況と問題において一貫した関心と問題が存在する側面も確認された。さらに調査をすすめる中で、アイリーン・グレイがジュリエット・レヴィのために制作した家具の検討などを通して、グレイが両大戦間フランスを特徴づけるコロニアリズムの背景の中で、非西欧の「プリミティフ」な要素を、同時代の装飾家たちと同様に援用しながらも、同時代の装飾家の多くがこうした要素を帝国主義的なイデオロギーを孕んだ意匠として展開したのに対し、グレイの場合、同時代の主流の様式が持つ男性性をむしろ差異化する結果をもたらした可能性が認められた。そしてこの要素は一人グレイの特質というより、グレイがジュリエット・レヴィという女性パトロンのために制作していたという事情も大きく作用しており、本研究における女性芸術家の生産現場における女性同士の人的ネットワークが作品自体の特質に及ぶケースとして注目された。このように本年度は、これまでの継続的な資料収集や作品研究の結果、重要な知見をえると同時に大枠としての理論的な背景を充実させることができた。研究成果にも記した通り、特にアイリーン・グレイについての資料や作品については順調に収集・検討が進められることとなり、一部すでにその成果を発表する機会も得ることとなった。また、現在のイギリスのクイア美術史の展開などにも直接触れることで、研究の理論的な検討も深まった。しかし一方で、ケーススタディとして計画された両大戦間フランスにおける個々の女性芸術家をめぐる一次資料の収集は、なお十分とはいえず、今後の精力的な継続が必要である。
ＤＮＡ複製・クロマチン形成とミスマッチ修復機構の機能的カップリング

ミスマッチ修復はDNA合成エラーを修復する機構であり、遺伝情報維持・突然変異抑制・発癌抑制に重要な役割を果たす。DNA合成エラーは新生鎖に生じるため、ミスマッチ修復機構は新生DNA鎖を識別する必要がある。さらに、ミスマッチ修復が機能するDNA合成直後には、DNA複製に伴って解離したクロマチンの再形成が起こる。従って、DNA複製、ミスマッチ修復とクロマチン形成の間に密接なクロストークが予想されるが、クロマチン複製の場でミスマッチ修復がどのように機能するかはほとんど分かっていない。本研究では、ツメガエル卵抽出液を用いて試験管内でDNA合成、ミスマッチ修復とクロマチン形成を同時に再現する実験系を確立し、これらの反応がどのように協調して機能するかを解析した。先年度の我々の研究から、DNA複製に機能するPCNAが、DNA合成とミスマッチ修復の新生鎖識別反応を結びつけることが示唆されていた。本年度はこの現象をさらに詳細に解析し、PCNAによるミスマッチ修復の鎖決定には、DNAとトポロジカルに結合したPCNA分子が機能することを示した。さらにPCNAの変異体を作成し、一部の変異体で鎖識別の効率が低下することを見いだした。ミスマッチ修復機構がPCNAのDNA結合方向性をどのようにして識別するかを明らかにするため、昨年までに精製したMutS-alphaに加え、MutL-alpha複合体の発現、精製を進めている。さらに、新生鎖識別後の鎖除去反応の機構を解析するため、この過程に必要なエキソヌクレアーゼであるExo1に対する抗体を作成し、その挙動を解析中である。24年度が最終年度であるため、記入しない。ミスマッチ修復が機能するDNA合成直後には、DNA複製に伴って解離したクロマチンの再形成が起こる。過去の研究から、真核生物ではnickもしくはgapを持つDNA鎖上のミスマッチ塩基が特異的に修復されることが分かっている。我々はこれまでに、ツメガエル卵核質抽出液(NPE)がgapに依存した鎖特異的ミスマッチ修復を効率よく引き起こす事、この系では生理的なクロマチン形成が効率よく起こること、およびクロマチン形成はミスマッチ塩基周辺で特異的に抑制されることを示していた。本研究では、NPE中ではgapに依存してDNA複製因子PCNAがDNAにロードされ、PCNAはgap修復に必須であることを見いだした。PCNAは同時にミスマッチ修復にも必須であった。さらにPCNAのDNA結合はミスマッチ修復反応の鎖特異性の決定に十分であり、PCNAのDNA結合量はミスマッチ修復の効率と対応していた。これらの結果は、DNA複製に用いられたPCNAがミスマッチ修復の鎖特異性を決定することにより、DNA複製とミスマッチ修復が機能的に協調することを強く示唆する。DNA複製と協調して新生DNA鎖を識別する機構の研究は当初計画以上に進展し、既に論文投稿準備に入っている。この反応が起こる過程でクロマチン形成がどのように制御されているかを明らかにすることが今後の課題である。ミスマッチ修復機構がDNA複製と協調して新生DNA鎖を識別する反応の研究は順調に進展しており、今後は変異蛋白質なども用いた解析により、より詳細な機能解析を行っていく予定である。クロマチン複製とミスマッチ修復の機能的な相互作用については、クロマチン形成反応がミスマッチ修復反応に阻害的であるかどうかを実験的に解明することが必要である。
エンドトキシン誘発ぶどう膜炎における細胞接着分子の関与

C3H/HeNマウスの足蹠皮下にエンドトキシンを注射するとエンドトキシン誘発ぶどう膜炎(EIU)が発症する。また、エンドトキシン刺激前にIL-1を皮下注射すると、炎症増強効果(IL-1-enhanced EIU)が生じる。これら2種のぶどう膜炎モデルを用いて、炎症に関与すると考えられている接着分子のうち、intercellular adhesionmoleculel (ICAM-1)とlymphocyte function associated antigen-1 (LFA-1)のぶどう膜炎発症時における発現状況を調べ、さらにそれぞれの接着分子の作用をモノクロナル抗体を用いて抑制した場合のぶどう膜炎発症への影響を検討した。まず、エンドトキシンおよびIL-1で刺激したマウスにおける接着分子発現について検討した。眼球を免疫組織学的に検索したところ、エンドトキシン、IL-1のいずれの刺激を与えても毛様体無色素上皮細胞のICAM-1の発現は増強した。た、白血球上のLFA-1の発現をフローサイトメトリーで検討したところ、刺激後に発現の増強はみられなかった。次にICAM-1またはLFA-1に対するモノクロナル抗体をエンドトキシン刺激と同時に腹腔内投与し、ぶどう膜炎発症への影響を検討した。炎症強度の指標として、虹彩後癒着、前房水中の細胞数、および蛋白濃度を調べた。いずれの抗体も虹彩後癒着の発生頻度および前房水中の細胞数を抑制した。蛋白濃度に関しては、EIUに対してはいずれの抗体も有意な抑制効果を示さなかったが、IL-1-enhanced EIUに対しては有意な抑制効果を示した。