hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
機能的層構造を有する小児の気管再生法に関する研究

家兎より皮下組織、耳介軟骨、鼻粘膜を切除して、これよりそれぞれ繊維芽細胞、軟骨細胞、円柱繊毛上皮細胞を採取し、継体して細胞数を増やしたのち、ECMフィルム(CellFeuille®)を用いて、繊維芽細胞層(単層)、軟骨細胞層(多層)、の二層構造からなる細胞シートを作製した。円柱繊毛上皮細胞層(単層)の細胞シートは、培養条件等の調整に時間を要し、現在培養シートを作製しており、このシートが作製でき次第、繊維芽細胞層、軟骨細胞層、円柱繊毛上皮細胞層の三層構造からなる細胞シートが作製できる予定である。この三層構造シートをシリコンチューブ周囲に巻いて回転培養を行い、機能的層構造を保持したままの円筒状構造体をin vitroで再生する。本法によって機能的層構造を有した気管の再生が可能となれば、小児のように広範囲の気管を再生気管によって置換する治療法への道が開かれると考えられる。円柱繊毛上皮細胞層(単層)の細胞シートの作製にあたり、その採取手技、培養条件等の調整に時間を要しており、現在培養シートを作製中である。機能的層構造を有する気管には上皮細胞層が必須であり、早急にこの作製を完了させる。24年度が最終年度であるため、記入しない。円柱繊毛上皮細胞層(単層)の細胞シートを早急に作製し、次いで繊維芽細胞層、軟骨細胞層、円柱繊毛上皮細胞層の三層構造からなる細胞シートが作製する。また、これを自家移植してその細胞の機能が維持されているかどうかを評価検討するとともに、自己の気管を再生気管で置換する実験を行う。軟骨シートの自家移植実験では軟骨基質の変性による物性強度の低下を確認しており、自家移植実験では成長因子などを有効に作用させるために、b-FGFやIGFなどを用いて機能的層構造の維持を試みる予定である。
国際移動する子ども・若者の音楽的アイデンティティ形成と学校音楽教育の国際比較

国際移動が子ども・若者の音楽的アイデンティティ形成にどう作用するかを文化の継承・変容・複合化の観点から探り、日本の学校音楽教育の課題を明らかにすることを目的に研究を進めた。研究を通して示唆されたのは、国際移動の背景をもつニューカマーの子どもは日常生活においても「家庭と学校」「家族と友だち」等の間で頻繁に文化間移動を経験しており、そこでは家族で共有できる歌の記憶が子どもたちの文化的安定性の面で大きな意味をもつことである。そこで、ドイツ等の先行事例を参考にしながら、ニューカマーの子どもの家庭の音楽文化とのつながりを考慮した音楽(子どもの歌)の教材化を試行した。本研究は、外国人労働者受け入れ等に伴い多文化化しつつある日本社会における学校音楽教育の課題を国際理解教育の観点から明らかにするとともに、ドイツの先行事例を検討しながら、日本の学校音楽教育に向けて具体的な教材・方法を提示することを目的とする。平成25年度の研究実績は次のとおりである。第1に、日本に移住してきたニューカマーの子ども・若者の音楽的アイデンティティ形成の過程を文化の継承・変容・複合化の観点から明らかにすることを目的に、静岡県浜松市在住の日系ブラジル人の保護者と子どもの双方に対する聞き取り調査を実施した。聞き取り調査から、国境を越えた文化間移動を経験した家族においては、世代間のギャップに国際移動を経験した時期の違いが重なって、祖父母世代→親世代→子世代への文化的な分断が国際移動を経験しない家族よりも大きく現れるということ、また、そういう歴史的背景をもつニューカマーの子どもの場合、日本における日常生活の中でも、家庭と学校の間、家族と友だちの間など、様々な場面で頻繁な文化間移動が行われていることが推察された。第2に、研究協力者、宮本賢二朗により、トルコ系移民を中心に外国人労働者を受け入れてきたドイツの先行事例として、1970年代から80年代初頭におけるトルコ人の子どものための音楽教育の教材・授業研究の事例が収集され、特にイアムガルト・メルクト(Irmgard Merkt)の研究を中心に分析・考察が行われた。上記の研究成果については、シンガポールで開催された第9回Asia-Pacific Symposium of Music Education Research(7月:杉江)、第44回日本音楽教育学会大会(10月:杉江・宮本)で口頭発表、『音楽表現学』Vol.11(11月:宮本)『関西楽理研究』Vol.40(12月:杉江)にて研究報告として公表した。本研究は、外国人労働者受け入れ等に伴い多文化化しつつある日本社会における学校音楽教育の課題を国際理解教育の観点から明らかにし、ドイツの先行事例を検討しながら、日本の学校音楽教育に向けて具体的な教材・方法を提示することを目的とする。平成24年度の研究実績は次のとおりである。第1に1960年代末以降トルコ系移民を中心に外国人労働者を受け入れてきたドイツの状況を先行事例として検討するために、関連文献を収集し、調査研究の方法も含めて、内容を検討した。文献で取り上げられていた個別の事例からは、ドイツにおけるトルコ系若者の音楽文化にみられる外面的なドイツ文化への同化と内面でのトルコ文化への接近・葛藤・変容等の事例、トルコ系若者にとってのトルコのポピュラー音楽と伝統的音楽との関係など、日本の状況と比較可能な視点を引き出すことができた。また、ドイツにおけるトルコ系若者の音楽的アイデンティティの形成において、トルコ系ディスコの存在が大きな影響力を持っていることが紹介されており、「若者が集う場」と、その「場における音楽」という視点を本研究に加える必要性が示唆された。(ドイツの文献の検討に関しては、研究協力者の協力を得た。)第2に、日本に移住してきたニューカマーの子ども・若者の音楽的アイデンティティ形成の過程を文化の継承・変容・複合化の観点から追究するために、日系ブラジル人の保護者の世代に聞き取り調査を実施した。聞き取り調査からは、移民等による長期的な国際移動に伴い、日系ニューカマーの子どもの保護者世代とさらにその前の世代との間、そして保護者世代と子どもの世代との間の両方において、音楽文化の継承が行われにくいという状況が起きていることが推定される。この点に関して、より明確に状況をとらえるために、今後、対象者を増やしてさらに聞き取り調査を継続して実施する予定である。本研究は、外国人労働者受け入れに伴い多文化化しつつある日本社会における学校音楽教育の課題を、国際移動する子どもや若者の音楽的アイデンティティ形成という観点から検討し、国際理解教育の視点に立った教材・方法を提示することを目的としている。平成26年度の研究実績は次のとおりである。第1に、平成25年度に実施した日系ブラジル人保護者と子ども双方への聞き取り調査データを用いて、両親の国(文化)の組み合わせ、父方、母方のいずれが日系か、家庭の教育方針と言語環境、学校選択、国際移動の経験年齢、滞在期間等が子どもの音楽的アイデンティティの形成にいかに影響するかという観点から、個々のケースを分析した。その結果、家庭の言語環境及び学校選択(日本の学校か、ブラジル人学校か等)が子どもの音楽的アイデンティティの形成に影響すること、特に幼児期のそれらの環境がより大きく影響することが推察された。例えば、バイリンガルとして育った場合でも、幼児期の言語環境がその子どもの言語ベースとなり、それに音楽的アイデンティティのベースも対応すると推察される。ただし、成長の段階で、音楽的アイデンティティのベース部分は変容しないのか、あるいはどの部分が変容するのかといった観点からの分析・考察をさらに行う必要がある。

第2に、ブラジルの子どもの歌に関わる資料(歌集、DVD、CD)を収集し、それぞれの歌の歌詞と音楽的な特徴を整理・分析して教材化の可能性を検討した。今後、これらの資料を活用した教材化と事例集の作成を行う計画である。第3に、平成25年度にまとめたドイツの1970年代から80年代初頭の多文化的な音楽教育研究の方向がその後どう展開されてきたかに関し検討を継続し、その過程で、参照すべき先行国の事例として他の多文化的状況にある国に対象を広げる必要性を認識した。平成27年度は上記を踏まえ研究を継続し最終報告をまとめる。多文化化しつつある日本社会における学校音楽教育の課題を国際理解教育の観点から明らかにするとともに、ドイツ等の先行事例等を参考にしながら、日本の学校音楽教育に向けての具体的な教材・方法を試行的に提示することを目的としている。最終年度は、前年度までに収集したブラジルの子どもの歌の中から教育現場で教材として活用するに相応しい歌を選択するために、日系ブラジル人児童・生徒の保護者層を対象にアンケート調査を実施した。調査結果から、多くのブラジル人保護者がよく知っており、かつ歌に付随する手遊びや集団遊びが紹介された歌をとりあげ、学校の音楽教育や国際理解教育の活動プランを作成した。国際比較の対象であるドイツに関しては、1970年代以降のトルコ系移民の子どもを対象とした音楽教育の教材・授業開発研究から、近年はより多文化化した状況に合わせた研究へと向かいつつある傾向が明らかにされた。日本も多文化化の方向に漸次向かっていることから、ドイツの事例については今後も追跡し検討を続ける必要がある。さらに、多文化的状況を積極的に国の発展につなごうとしているカナダの教育政策も注目される。今後の研究につなぎたい。研究期間全体を通して実施した研究成果としては、国際移動が子ども・若者の音楽的アイデンティティ形成にどのように作用するかを文化の継承・変容・複合化の観点から明らかにするために、日本に居住するニューカマーの子ども・若者及びその保護者への聞き取り調査を実施し、国際移動の背景をもつ子どもは日本での日常生活においても様々な場面で頻繁に文化間移動を経験していること、その中で家族で共有できる歌の記憶があることが文化的安定性の面で大きな意味をもつことが示された。研究成果は、日本音楽表現学会(6月)、第10回APSMER(7月・香港)で口頭発表、『関西楽理研究』Vol.32(12月)にて研究論文として公表した。国際移動が子ども・若者の音楽的アイデンティティ形成にどう作用するかを文化の継承・変容・複合化の観点から探り、日本の学校音楽教育の課題を明らかにすることを目的に研究を進めた。研究を通して示唆されたのは、国際移動の背景をもつニューカマーの子どもは日常生活においても「家庭と学校」「家族と友だち」等の間で頻繁に文化間移動を経験しており、そこでは家族で共有できる歌の記憶が子どもたちの文化的安定性の面で大きな意味をもつことである。そこで、ドイツ等の先行事例を参考にしながら、ニューカマーの子どもの家庭の音楽文化とのつながりを考慮した音楽(子どもの歌)の教材化を試行した。以下、目的項目ごとに、これまでの達成状況について記す。
超イオン導電体の構造と動的挙動の研究

この研究課題では、様々な静的構造モデルのうち実際の構造に適合するものはどの構造であるがを判定する方法として、X線異常散乱法を適用すること、また超イオン導電体中の低エルネギ-励起の系統的な理解をめざし、銅イオン導電型超イオン導電体の中性子非弾性散乱測定を行う目的でスタ-トした。X線異常散乱法を適用する物質を探索するすちに、鋼ーハロゲンーカルコゲン系物質の存在を知った。この系の物質のいくつかの室温で無秩序分布をもつが、室温以下の構造および物性測定は全くなされていなかった。低温で銅原子の配列が秩序構造となる予想をもとに、比熱測定およびX線回折測定を行った。この結果、CuBrTe,CuITe,CuITe_2の3種類の物質で比熱の異常およびX線回折スペクトルの変化を見いだした。また合成後ほぼ20年の間構造が未知のままであったCuBrSe_3の構造解析を行い、結晶系、空間群および単位胞中の詳細な原子位置を決定した。CuBrSe_3中の拡散イオンであるCu原子の基本構造は秩序分布を仮定した取扱で十分に回折スペクトルを説明できた。X線異常散乱法をCuBrSe_3に適用しこの仮定の妥当性を検討している。超イオン導電体中の低エネルギ-励起の存在は、これまでカチオン電導型のAg,Naイオン化合物に関して知られていた。研究期間中に一連のCuイオン電導型物質の中性子非弾性散乱の測定を行い、Cuイオン電導型超イオン導電体では分散のない約3.4meVの低エネルギ-励起が存在することを見いだし、カチオン型電導体に共通の拡散イオン種の質量と低エネルギ-励起の値との関係を得た。現在、アニオン電導型超イオン導電体にもこの関係が適用できるかどうか検討中である。平成元年度では、この研究課題の2つの柱,(1)X線異常散乱測定および(2)中性子散乱測定により得られたデ-タの解析を実行し、次のような新たな知見をえた。まずCu^2Seの超イオン導電相でのX線異常散乱測定から得られたデバイライン強度を、説明可能な新たなモデルを提出した。(T.Sakuma et al.Materials Transactions,JIM 30(1989)365)超イオン導電体の構造解析モデルの判定にX線異常散乱法が有効なことがわかった。一方Cu^2Seの中性子散乱でCuイオンによる低エネルギ-励起を観測した。(T.Sakuma and K.Shibata J.Phys.Soc.Jpn 58(1989)3061)他の超イオン導電体との比較から、エネルギ-の値はイオンの質量と関連することを見いだした。X線異常散乱実験で得られたデ-タのうち、デバイラインおよび散漫散乱の両方を一括して解析しようと試みたが、散漫散乱はその解析法がまだ定着しているとはいえず(short range order parametersを導入する方法ではあまりにもパラメ-タ数が多くなる)、とりあえずデバイラインの解析のみを発表した。散漫散乱の解析には、多量の数値計算を必要(たとえば32ビット計算機で1つのデ-タあたり10日の連続計算)となることがわかった。解析法の改良などで数値計算のウエイトを落す必要がある。中性子散乱ではデ-タ解析にフオノンの状態密度の影響を差し引くことができれば、目的の低エネルギ-励起のより信頼性のある同定が可能となることがわかった。これまで多数報告されているフオノンの状態密度をどのように数値計算にとりこむかが、これからの問題点である。

平成2年度では、この研究課題の2つの柱,(1)X線異常散乱測定結果のデ-タ解析および(2)中性子散乱実験およびのデ-タの解析を実行し、次のような新たな知見をえた。まずCu^2Seの超イオン導電相でのX線異常散乱測定から得られた散漫散乱強度を,デバイラインの強度条件を保ちつつ散漫散乱強度の説明可能なモデルシミュレ-ションを新たに開発し、これを実行した.いまのところ,散漫散乱ハロ-の第一及び第二ピ-クの位置の再現性はあるが、定量性は不十分な状況にある。この原因として近接原子間相互作用の単純な近似の仕方があげられ、これを改善すべく銅イオン間の短距離秩序度の導入などを現在検討している.一方昨年度のCu^2Seに引き続きCu^2Se,Cu^<1.8>S,Cu^<1.8>Se等の銅イオン伝導型超イオン導電体の中性子散乱実験を行った.(T.Sakuma,K.Shibata and S.Hoshino Solid State Ionics40/41(1990)337)この結果,銅イオン型超イオン導電体はすべて3.4meVの低エネルギ-励起のあることを確認した.この他,CuIの低エネルギ-励起の温度依存性を初めて測定し、このスペクトルは予想どおりイオン伝導度の増加とともいわゆる準弾性散乱スペクトルに近ずくことを確認した.この解釈として,従来フォノンで用いられている減衰項を取入れた考察を現在行っている。この結果は平成3年10月にカナダで開催される第8回固体電解質国際会議で発表予定である.これらの研究に関連し銅ハライドー銅カルコゲナイト化合物の研究を行った。これらの物質群についての研究は、物質合成後ほとんどなく、我々は主として低温領域での相転移の有無および未決定の構造解析を行っている。これらの研究結果は近日中にJ.Phys.Soc.Jpn.に発表する予定で準備中である.平成3年度では、この研究課題で,1.X線異常散乱法の超イオン導電体への適用,2.銅ーハロゲンーカルコゲン系超イオン導電体の構造解析,3.陽イオン導電型超イオン導電体における低エネルギ-励起の3つの研究対象をとりあげた。1.ではX線異常散乱法を銅イオン伝導型超イオン導電体CuBrSe_3に適用し、Cu原子吸収端近傍での散乱強度のX線入射波長依存性を測定した。超イオン導電体では導電イオンの静的分布として無秩序分布となる場合が多い。ただしすべての物質が必ずしも無秩序分布となるのでなく、基本的に秩序分布モデルで散乱スペクトルを説明できる物質があることが知られている。最近我々が構造解析を行ったCuBrSe_3における拡散イオンの静的分布を検証するため、高エネルギ-研SORを利用し散乱実験を行った。デ-タは現在解析中である。2.では試料合成後ほぼ20年間詳細な原子位置等の構造解析が行われていなかった銅ーハロゲンーカルコゲン系超イオン導電体CuBrSe_3のX線回折実験を行い、結晶系、空間群、詳細な原子位置等を決定した。また銅ーハロゲンーカルコゲン系超イオン導電体の室温以下の室温以下での相転移の存在の確認を比熱およびX線回折測定を初めて行い、CuBrTe,CuITe,CuITe_2に低温相が存在することを見いだした。3.では粉末CuI試料を用いて、高エネルギ-研KENS(パルス中性子研究施設)に設置されているLAMー40分光器を用いた中性子非弾性散乱実験を行った。この実験から従来我々がCuイオン導電体で新たに見いだした約3.4meVの分散ないエネルギ-励起がCuIにも存在することを確認し、またその温度依存性を詳細に測定した。
新規システムによる骨髄増殖性疾患における未知の染色体転座および遺伝子変異の探索

本研究では、骨髄増殖性腫瘍における新たな遺伝子異常を発見することを目的とし、融合遺伝子発見のための新規ベクターシステムの開発・応用および全エクソン配列解析法を導入し包括的ゲノム解析を行った。新規システムの応用により、融合遺伝子に関連するゲノム構造異常の候補領域を同定した。一方、エキソーム解析からは症例間に共通した高い頻度の新規遺伝子異常を見つけるには至っていない。個々の遺伝子異常に対しては、ゲノム編集法(CRISPR)を利用したiPSによる遺伝子機能解析を行うとともに、ミスセンス変異を免疫標的とした個別化免疫療法による新規治療法の開発を行っている。本研究は、骨髄増殖性疾患(MPD)の特異的遺伝子異常を発見することを目的としている。MPDは、真性多血症(PV)、本態性血小板血症(ET)および原発性骨髄線維症(MF)から成り、近年Jak2・Tet2遺伝子異常などの病因遺伝子が発見されてきている。しかし、各疾患はそれら遺伝子変異のみでは説明できず、未知の疾患特異的な遺伝子異常が存在することが予測されている。MPDにおける、新しい臨床診断そして治療法開発の基盤を築くことを目指し、次の2点を中心に疾患特異的遺伝子異常の探索を開始した。(1)新規開発ベクターシステムのMPDへの応用による未知の融合遺伝子の発見:新規開発のベクターシステムは、2段階DNA環状化法による高精度の単分子環状化cDNAライブラリー作成により高精度のメイトペア断片をillumina GAにて高速大量に遺伝子解析する方法であり、既知の融合遺伝子を有するAML症例の検討により効率良く融合遺伝子を発見できることを実証した。現時点までの解析では融合遺伝子の発見には至っていないが、すでに4症例の本態性血小板増多症(ET)に本システムの応用を開始している。(2)全エクソン塩基配列決定によるMPDの包括的ゲノム解析:遺伝子変異の探索法として、(i)エクソン領域濃縮による遺伝子解析、(ii)cDNAライブラリーの均一化による発現遺伝子解析、を予定していたが、実験ではcDNAライブラリーの高レベル均一化は困難であることが明らかとなった。そのため、エクソン濃縮法による解析を選択し、濃縮効率についての検討を完了するとともに、若年発症ETの2症例についてエクソン濃縮を実施している。症例の蓄積と同時に全エクソン塩基解析による疾患特異的遺伝子変異の探索を行う。本研究は、骨髄増殖性疾患(MPD)の特異的遺伝子異常を発見し治療法開発の基盤を築くことを目的としている。MPDでは、様々な病因遺伝子が発見されてきているが、各疾患はそれら遺伝子変異のみでは説明できず、未知の疾患特異的遺伝子異常が存在することが予測されている。(1)新規ベクターシステムによる未知の融合遺伝子の発見:われわれの開発したシステムは、2段階DNA環状化法による単分子環状化cDNAライブラリー作成により、高純度のメイトペア断片を次世代シーケンサーで高速大量に遺伝子解析することで融合遺伝子を発見する方法である。本態性血小板増多症(ET)および原発性骨髄線維症(MF)に本システムを実施しているが、現時点では新規融合遺伝子の発見には至っていない。一方で、本システムを同じくゲノム構造解析に応用することにより構造異常の候補を見出しており、ゲノム構造の解析から染色体転座および融合遺伝子の同定にアプローチしている。(2)全エクソン塩基配列決定による探索:遺伝子変異の探索法として、全エキソーム解析を導入した。われわれのエキソーム解析からは、すでに報告されている病因遺伝子変異は見出されたが、新たなドライバー変異は発見されていない。現時点では個々の症例の遺伝子変異の意義の評価にはデータが不足しており、症例数を増やすとともに、これら個別の遺伝子変異の機能を明らかにするため、ゲノム編集による機能解析を開始している。さらに、見出された個々の遺伝子変異は、ドライバー変異でなくとも免疫療法のターゲットになる可能性がある。実際に、各症例におけるミスセンス変異のデータから、HLA結合性の遺伝子変異群を抽出することが可能であった。現在、これらの変異を認識するT細胞クローンの樹立を行っており、エキソーム解析によるゲノム情報を個別化免疫療法として臨床応用することを検証している。骨髄増殖性疾患(myeloproliferative disease; MPD)は真性多血症(PV)、本態性血小板血症(ET)および原発性骨髄線維症(MF)から成り、近年ではJak2変異など特異的遺伝子異常が発見されてきているが、各疾患はそれらの遺伝子変異のみでは説明できず病態には未だ不明な点が多い。本研究では、MPDにおける新たな疾患特異的な遺伝子異常を探索・発見することを目的とし、(1)未知の転座遺伝子の探索、および(2)全エクソン解析、による包括的ゲノム解析を行っている。(1)新規開発ベクターシステムによる未知の融合遺伝子の発見:新規融合遺伝子を発見するため、cDNAライブラリーに特異配列アダプター付加し2段階環状化反応で単分子環状化DNAのみを作成する方法を開発し、体系的な融合遺伝子の探索・発見を行う新たな基盤技術の確立に成功しており、疾患への応用により高い精度で新規融合遺伝子の発見が可能となっている。

本システムをMPD症例に応用することで新規融合遺伝子の探索を行っている。(2)全エクソン配列決定によるMPDの遺伝子解析:疾患特異的な遺伝子変異を探索するため、全エクソン塩基配列決定による遺伝子解析を行う。現在、若年発症ETの2症例についてエクソン解析を行っており、すでに複数の遺伝子変異候補が得られている。候補遺伝子の機能解析を開始するとともに、さらにMPD症例数を増やして全エクソン解析を行い、疾患特異的な遺伝子変異を探索する。本研究による新たな遺伝子異常の発見は、MPDの病態のみならず、新しい臨床診断そして治療法開発の基盤となるため、臨床医学への成果が期待される。本研究では、申請時の方法のさらなる改良により、完全なノイズ排除を可能とした新規方法の開発、およびその有効性の実証に成功しており、融合遺伝子探索の効率とスピードは一層高まると予想している。一方、エクソン解析のために試行したcDNA均一化は期待するレベルに達しないことが明らかとなり、エクソン濃縮法に集中することとした。症例は順調に蓄積されており、全体として、(2)おおむね順調に進展している、と評価した。25年度が最終年度であるため、記入しない。(1)新規開発ベクターシステムの骨髄増殖性疾患(MPD)への応用による未知の融合遺伝子の発見新規融合遺伝子を発見するベクターシステムの開発として、cDNAライブラリーに特異配列アダプター付加し特異配列前後の酵素処理による2段階環状化で単分子環状化DNAのみを作成する方法を開発し、さらに本システムを基礎として新たに特異配列並置アダプター法を開発した。また、改良アダプターに固有配列および4カ所のEcoRIサイトを有するアダプターを導入することで2段階環状化を完全に遂行することが可能となった。既存の融合遺伝子を有する細胞株を対象に本システムの実証実験を行い、体系的な融合遺伝子の探索・発見を行う新たな基盤技術の確立に成功しており、疾患への応用により高い精度で新規融合遺伝子の発見が可能となっており、MPDへの応用を継続する。(2)全エクソン配列決定によるMPDの包括的ゲノム解析一方、(1)が「おおむね順調に進展している」のに対し、全エクソン解析については「やや遅れている」。エクソン濃縮の効率についてはすでに検討を終了し、若年発症ETの2症例についてエクソン解析を行っているが、実際のデータ解析において遺伝子変異のフィリタリングに想定よりも時間を費やしている。徐々にデータ解析も軌道に乗ってきており、引き続き全エクソン解析の症例を増やし遺伝子変異発見に努める。今後の研究推進方策として次の2点を中心に実施・継続する。
おとり型核酸(デコイ)遺伝子導入による肝不全の予防

(目的)急性エンドトキシン肝障害の動物モデルを作成し転写因子NFkBを標的とした遺伝子治療を行い高サイトカイン血症と、それによる急性臓器障害の回避が可能かを検討した。(方法)FITC-oligoをHVJ-liposomeに包埋しBALB/Cマウス肝へ遺伝子導入し、肝における合成核酸の分布を検討した。次にグラム陽性菌P.acnes)の加熱死菌を腹腔内投与、前感作し一週間後E.Coli由来のLPSを静注投与して急性エンドトキシン肝障害モデルを作成した。治療群はP.acnes処理後NFkBデコイを肝へ導入した。LPS投与後、約16時間後に両群を犠死させ肝組織障害をHE染色にて、肝組織のIFN-g, Fas-LをRT-PCR, apoptosisをTUNEL法にて、血清中の各種炎症性サイトカインをELISA法で検討した。(結果)1.経門脈的に導入されたFITC-oligoは主にKupffer細胞へ導入された。2.急性エンドトキシン肝障害モデルにおいてNFkBデコイ導入群は対照群と比較し肝組織内の炎症細胞浸潤、肝細胞壊死が著明に抑制された。肝組織中のIFN-g, Fas-LのmRNAの発現を抑制した結果、肝細胞の広範なapoptosisも回避された。3.血清中の炎症性サイトカインTNF-a, IL-1b, IL-12、及びIL-18も対照群と比較して抑制された。(総括)肝非実質細胞、主にKupffer細胞へ導入されたNFkBデコイはエンドトキシンによって活性化した転写因子NFkBと特異的に結合して炎症性サイトカイン遺伝子の急激な転写活性化を抑制し、致死性のエンドトキシン肝障害を回避しえた。本研究により侵襲に続く高サイトカイン血症による肝障害への遺伝子治療の可能性が示唆された。BALB/Cマウスにグラム陽性加熱死菌P.acnesを注射後,エンドトキシン(LPS)を注入することにより劇症肝炎モデルを作成した。このモデルは,P.acnesによりリンパ球が活性化され,さらにLPSによりIL-12,IL-1,IFN-γ等の炎症性サイトカインが著明に産生され劇的な急性肝障害が惹起され死亡するものである。この発生機序は,LPS刺激により活性化した転写因子NFκBが細胞質内から核内に移行しDNAと結合することにより,種々のサイトカインを発現させ高サイトカイン血症によるショックを引き起こすことによる。このNFκBの結合するDNA配列に似せ作成した型核酸(デコイ)をHVJ-liposome法により肝臓に導入することにより,急性肝不全が予防可能か否かを検討した。尚,対照群では,同方法で生食を注入した。本年度は,(1)HVJ-liposome法により導入されたNFκBの肝内分布(2)炎症性サイトカインに対する作用を検討した。肝内分布の検討では,経脾経門脈的に蛍光色素(FITC)でラベルした核酸をHVJ-liposomeに包埋し注入した結果,クッパー細胞を中心とする非実質細胞に多くの集積が確認された。(2)血清中炎症性サイトカインの測定結果では,デコイ注入群では対照群に比しIL-12およびIL-18が有意(p<0.01)に抑制される結果が得られた。またデコイ注入群では,肝組織内の炎症細胞浸潤および肝細胞壊死が著明に抑制され,致死的な急性肝障害からの離脱が図られたと考えられた。現在エルトレーターにてクッパー細胞の分離・培養し,これらを用いてゲルシフトアッセイを行なっている。このアッセイで実際にクッパー細胞でNFκBが抑制されているのかを検討中である。(総括)肝非実質細胞、主にKupffer細胞へ導入されたNFkB

デコイはエンドトキシンによって活性化した転写因子NFkBと特異的に結合して炎症性サイトカイン遺伝子の急激な転写活性化を抑制し、致死性のエンドトキシン肝障害を回避しえた。本研究により侵襲に続く高サイトカイン血症による肝障害への遺伝子治療の可能性が示唆された。
幹細胞を用いたステロイドホルモン産生細胞の作製と分化機構の解明

過去の研究で、私は間葉系幹細胞からステロイドホルモン産生細胞を分化誘導することに成功している。本研究では、この方法に基づき、ES細胞からステロイドホルモン産生細胞を分化誘導することに成功した。また、これらの細胞モデルを用いることにより、転写共役因子のPGC-1αが卵巣顆粒膜細胞のプロジェステロン産生に重要であることを明らかにした。これまでの研究で、多分化能を有するヒト骨髄間葉系幹細胞は、SF-1の導入とcAMPにより副腎のステロイドホルモン産生細胞に分化することを報告してきた。この分化誘導法を胎児の臍帯血由来の間葉系幹細胞に用いたところ、卵巣の顆粒膜細胞様の細胞へと分化した。この間葉系幹細胞による分化の違いを分子レベルで、調べるためにDNAマイクロアレイを行ったところ転写共役因子のPGC-1αが、臍帯血由来の間葉系幹細胞において発現していることが分かった。そこで、PGC-1αが顆粒膜細胞におけるステロイドホルモン産生に関わるかを調べた。まず、卵巣におけるPGC-1αの発現を調べたところ、間葉系幹細胞の結果を支持するように顆粒膜細胞に局在していた。顆粒膜細胞株・KGN細胞におけるPGC-1αの過剰発現は、ステロイドホルモン合成系の遺伝子の発現を著しく上昇させ、プロジェステロンの産生を亢進させた。この結果を支持するように、PGC-1αは、SF-1やLRH-1が誘導するステロイド合成酵素遺伝子のプロモーター活性を著しく上昇させた。さらに、卵巣機能に関わるSF-1やLRH-1の他の標的遺伝子の発現やプロモーター活性は、PGC-1αにより上昇した。以上の結果から、PGC-1αはSF-1やLRH-1を介して、プロジェステロン合成を含む顆粒膜細胞の機能に重要な役割を果たすことが分かった。PGC-1αは、PPAR_γを含む核内レセプターの転写共役因子であり、肝臓における糖新生やインスリン感受性に関与している。多くのPCOS患者は、肥満と共に、インスリン感受性を失うことから、PGC-1αは、生殖と代謝を繋ぐ重要な因子である可能性が、本研究から示唆される。幹細胞からステロイドホルモン産生細胞を分化誘導することは、ステロイドホルモン産生器官の再生治療法の開発にむけて、非常に重要である。私は、これまでの研究で、成人からも採取可能な間葉系幹細胞に、転写因子のSF-1やLRH-1を導入することにより、生殖腺や副腎のステロイドホルモン産生細胞を分化誘導することに成功している。今年度は、間葉系幹細胞における実験結果に基づいて、より再生医療への応用性が高い胚性幹(ES)細胞をステロイドホルモン産生細胞へと分化させることを試みた。ES細胞に、SFL1やLRH-1を導入した場合、増殖が停止して、やがて細胞は死んでしまう。そこで、テトラサイクリン依存性に目的遺伝子を発現させることができるマウスES細胞株・EBRTcH3を用いて、ES細胞を間葉系幹細胞に分化誘導した後に、SF-1を発現させた。コラーゲンコートしたシャーレ上で培養した後に、レチノイン酸を添加するとES細胞は間葉系幹細胞に分化するが、この状態でSF-1を発現させたところ、細胞は生存して、副腎皮質束状層様のグルココルチコイド産生細胞へと分化した。この細胞は、ACTHレセプターを発現しており、ACTHに反応して、ステロイドホルモンの産生が上昇した。これらの成果は、万能細胞から自律的にステロイドホルモン産生する細胞を分化させた世界で初めての報告である(Yazawa et al., 2011)。今後は、このES細胞由来のステロイドホルモン産生細胞を用いることにより、遺伝子治療も含めたステロイドホルモン産生器官の再生治療の道が切り拓かれることが期待される。
スマートメンブレンのキャラクタリゼーション

主な研究成果を箇条書きにしてまとめると,1)ヘキサゴナルカラムナー相を形成した,n-アルキル側鎖を有するポリエステルが提供する,直径約3nmのチャンネル型キャビティーの評価を,本研究において開発した高磁場勾配NMR法を用いて,プローブガス分子の拡散係数の高精度計測を行うことにより,高延伸試料が高ガス分離能を有することを見出して,スマートメンブレンとして優れた材料となることを発見した.2)高磁場下においてα-ヘリックスPBLGを高磁場配向させた後,架橋させることにより直径μmスケールのチャネルを有する高配向ポリペプチドゲルの創成に成功した.このチャネルの直径サイズをコントロールすれば,高機能を有するスマートメンブレンを創成できる可能性が示された.また,直径サイズの制御により光るゲルの創成にも成功した.従って,スマートメンブレンのみならずフォトニックス材料への展開も期待される.前半部分の成果については特許申請中である.3)両親媒性デンドロンの要に位置するところに親水性基であるオリゴエチレンオキシド(PEO)鎖を,末広がりの他末端に疎水性基である3本の長鎖アルキル基を導入した,両親媒性デンドロンの創成に成功した.4)スルホン基を有するディスク状Y104黄色染料の水溶液がリオトロピックディスク状カラムナー液晶を形成することを見出し,Baイオンを用いて凝集体間を連結させチャンネル状分子キャビティーを有する棒状凝集体の創成に成功した.5)アルキル側鎖を有する全芳香族ポリアミドのイミド化を制御して,キャビティーを有するポリイミドの創成に成功した.これらの研究成果はスマートメンブレン材料への新規な道を切り拓くとともに,高分子科学の基礎研究としても新しい方向を示したものである.主な研究成果を箇条書きにしてまとめると,1)ヘキサゴナルカラムナー相を形成した,n-アルキル側鎖を有するポリエステルが提供する,直径約3nmのチャンネル型キャビティーの評価を,本研究において開発した高磁場勾配NMR法を用いて,プローブガス分子の拡散係数の高精度計測を行うことにより,高延伸試料が高ガス分離能を有することを見出して,スマートメンブレンとして優れた材料となることを発見した.2)高磁場下においてα-ヘリックスPBLGを高磁場配向させた後,架橋させることにより直径μmスケールのチャネルを有する高配向ポリペプチドゲルの創成に成功した.このチャネルの直径サイズをコントロールすれば,高機能を有するスマートメンブレンを創成できる可能性が示された.また,直径サイズの制御により光るゲルの創成にも成功した.従って,スマートメンブレンのみならずフォトニックス材料への展開も期待される.前半部分の成果については特許申請中である.3)両親媒性デンドロンの要に位置するところに親水性基であるオリゴエチレンオキシド(PEO)鎖を,末広がりの他末端に疎水性基である3本の長鎖アルキル基を導入した,両親媒性デンドロンの創成に成功した.4)スルホン基を有するディスク状Y104黄色染料の水溶液がリオトロピックディスク状カラムナー液晶を形成することを見出し,Baイオンを用いて凝集体間を連結させチャンネル状分子キャビティーを有する棒状凝集体の創成に成功した.5)アルキル側鎖を有する全芳香族ポリアミドのイミド化を制御して,キャビティーを有するポリイミドの創成に成功した.これらの研究成果はスマートメンブレン材料への新規な道を切り拓くとともに,高分子科学の基礎研究としても新しい方向を示したものである.高分子メンブレンの物性・機能はメンブレン中のキャビティーの化学的および物理的性質に加えて、形状、サイズ、大きさに密接に関係している。高機能なメンブレンを設計し、開発するためにはキャビティーの高精度なキャラクタリゼーションが重要となる。このような背景を踏まえて、本班ではキャビティーの高精度なキャラクタリゼーションの方法論を確立することと、それを応用して1)新規なネットワークポリマーのキャビティーの高精度なキャラクタリゼーションし物性・機能の解析評価の大きな展開を行うことと、2)液晶状態において,側鎖長鎖アルキル部と主鎖芳香族環部の一種のミクロセグリゲーションにより、様々なナノメーター・オーダーの独特な構造を形成する長鎖アルキル側鎖、また主鎖芳香族環部を有するポリエステルおよびポリイミドの物性・機能の解析評価を行うことを研究目的としている。磁場勾配パルスを用いたNMR法により自己拡散係数Dが他の方法に比べて簡便にしかも正確に測定できることから、多くの研究者によりその方法が用いられている。通常、市販されている磁場勾配NMRプローブは100G/cmの磁場勾配パルスが用いられ、10^<-5>cm^2/s程度の拡散係数の測定が可能である。しかし、この程度の磁場勾配の大きさで測定できる拡散係数の範囲は極めて限られている。私どもはゲル中の溶媒およびプローブ高分子の拡散過程を観測するために、700-2000G/cmの磁場勾配を発生できる磁場勾配NMRプローブの試作に成功し、10^<-10>cm^2/sまでの拡散係数の精度高い測定を可能にし、世界に先だって高分子ゲル中のプローブ高分子の拡散過程の研究を成功させた。このような超高磁場勾配システムを利用して、高分子内のナノスケールのサイズの分子キャビティーの中にサイズの小さなプローブ分子を導入しその制限拡散を解析するシステムを開発してキャビティーの高精度なキャラクタリゼーションし物性・機能の解析評価の大きな展開するとともに、班員柿本・渡辺教授の創製した側鎖にアルキル鎖を有するポリエステル・ポリイミドの分子キャビティーのサイズを高い精度で評価する。

またNMRイメージングに組み込むことにより高分解能三次元拡散画像化解析を可能とし、ダイナミックス解析法の可能性を大きく発展させている。これはスマートメンブレンの科学に大きな方法論を提供することになる。さらに、これらの方法論を利用して創製した新規ポリエステル・ポリイミドの混合ガスおよび液体混合物に対する分子キャビティーの分離能の解析・評価を行っている。高分子メンブレンの物性・機能はメンブレン中のキャビティーの化学的および物理的性質に加えて、形状、サイズ、大きさに密接に関係している。このような背景のもとに、高機能なメンブレンを設計し、開発するためにはキャビティーの高精度なキャラクタリゼーションが重要となる。このような背景を踏まえて、本研究ではキャビティーの高精度なキャラクタリゼーションの方法論を確立することと、それを応用して1)新規なネットワークポリマーのキャビティーの高精度なキャラクタリゼーシヨンし、物性・機能の解析評価の大きな展開を行うことと、2)液晶状態において、側鎖長鎖アルキル部と主鎖芳香族環部の一種のミクロセグリゲーションにより、様々なナノメーター・オーダーの独特な構造を形成する長鎖アルキル側鎖、また主鎖芳香族環部を有するポリエステルおよびポリイミドの物性・機能の解析評価を行うことを研究目的としている。磁場勾配パルスを用いたNMR法により自己拡散係数Dが他の方法に比べて簡便にしかも正確に測定できることから、多くの研究者によりその方法が用いられている。通常、市販されている磁場勾配NMRプローブは100G/cmの磁場勾配パルスが用いられ、10-5cm2/s程度の拡散係数の測定が可能である。しかし、この程度の磁場勾配の大きさで測定できる拡散係数の範囲は極めて限られている。私どもはゲル中の溶媒およびプローブ高分子の拡散過程を観測するために、700-2000G/cmの磁場勾配を発生できる磁場勾配NMRプローブの試作に成功し、10-10cm2/sまでの拡散係数の精度高い測定を可能にし、世界に先立って高分子ゲル中におけるプローブ高分子の拡散過程の研究を成功させた。このような超高磁場勾配システムを利用して、高分子内のナノスケールサイズ分子キャビティーの中にサイズの小さなプローブ分子を導入しその制限拡散を解析するシステムを開発してキャビティーの高精度なキャラクタリゼーションし、物性・機能の解析評価の大きな展開するとともに、班員柿本・渡辺教授の創製した側鎖にアルキル鎖有するポリエステル・ポリイミドの分子キャビティーのサイズを高い精度で評価した。またNMRイメージングに組み込むことにより高分解能三次元拡散画像化解析を可能とし、ダイナミックス解析法の可能性を大きく発展させた。さらに、これらの方法論を利用して創製した新規ポリエステル・ポリイミドの混合ガスおよび液体混合物に対する分子キャビティーの分離能の解析・評価を行った。高分子メンブレンの物性・機能の発現はメンブレン中のキャビティーの形状、サイズ、大きさとともにキャビティー内の相互作用場に密接に関係している。
歴史史料検索システムの構築と外字機能に関する研究

本研究は、歴史史料を対象にインターネットを利用した歴史史料検索システムの構築と歴史研究者にとって大きな問題である外字や異体字の問題を解決し、歴史学研究者を援用しょうとする研究である。本研究の意義として、(1)歴史史料の文書構造を解析し、関連する複数史料のインターネットを利用した横断的検索システムを構築することによって、史料の新たな解釈・解析など歴史学研究を促進する、(2)歴史研究者に大きな問題であった外字の入出力機能とインターネット上の転送について具体的な解決策を提示する、(3)人文科学分野に広く適用可能であり、コンピュータの歴史学研究支援として大いに貢献する、ことを目的とする。本検索システムの全体は、Web上のCGI(Common Gateway Interface)機能を利用しPerlで実現された。また、琉球王国評定所文書の異国船来着に関する古文書は、SGML(Standard Generalized Marku pLanguage)化され、DBMS(OpenText)に格納され、高速検索エンジンPAT50とパイプを利用したアプリケーションプログラムで検索可能である。さらに、琉球関係文献に加え、日本古典文献「古事記」、「日本書紀」の文献を「日本文」、「英訳文」「原典のペ-ジイメ-ジ画像」で格納し、英日全文連携検索システムを設計し構築した。これらはWeb((http:〃www.okinawa.oiu.ac.jp)で公開されている1.歴史史料検索システムの対象文献をOCRを利用し入力した(文字認識でデイジタル情報化)。2.テキスト検索(KWIC形式表示を含む)機能と画像表示機能の連携化を実現した。3.外字属性データベースの構築とそれを利用した外字処理機能を実現した。4.「琉球王国評定所文書」の異国船来着に関する古文書のSGML化の実現とそれを利用した歴史史料全文検索システムを実現した。5.簡易型タグを利用した日本古典文献(古事記、日本書紀、延喜式)を対象にした英日全文連携検索システムの設計、構築と外字処理機能を実現した。本研究は、歴史史料を対象にインターネットを利用した歴史史料検索システムの構築と歴史研究者にとって大きな問題である膨大な漢字数の取り扱い(外字処理機能を含む)、異体字、解読不可能な文字や欠字の問題を解決し、歴史学研究者を援用しようとする研究である。本歴史史科検索システムが直接対象とする文献は、個人記録・系図でありながら公的に作成され琉球王国の構造や特質の研究などを推進する上で重要な記録である『琉球家譜』、攻事外交等の国策に関して評議し決定する最高機関である評定所で記録作成された『琉球王国評定所文書』とこれらに関連する中国側の文献である。本検索システムは、WWW(Wofld Wide Web)サーバー上のCGl(Common Gateway Interface)機能を利用し、インタープリタ言語Perlで実現されWWWで公開(http://www.okinawa.oiu.ac.jp)されている。1.未入力史料(琉球王国評定所文書第六巻第十巻)をOCRを利用して入力した。2.既にフルテキストとして電子化されたデータに対して、テキスト検索(KWIC形式表示を含む)機能と画像表示機能の連携化を実現した。3.歴史史料検索システムに外字機能を実現した。・外字入力方法:外字フォント作成、各種属性(部首名、部首画数、総画数、音読み、大漢和コード、Unicodeなど)の利用・外字検索機能(外字表示機能の利用、漢字部分品からの検索)・外字表示・転送機能(Gif形式画像)4.外字属性データベースを作成した。

本研究は、歴史史料を対象にインターネットを利用した歴史史料検索システムの構築と歴史研究者にとって大きな問題である膨大な漢字数の取り扱い(外字処理機能を含む)、異体字などの問題を解決し、歴史学研究者を援用しょうとする研究である。本歴史史料検索システムが直接対象とする文献は、個人記録・系図でありながら公的に作成され琉球王国の構造や特質の研究などを推進する上で重要な記録である『琉球家譜』と『琉球辞令書』、さらに政事外交等の国策に関して評議し決定する最高機関である評定所で記録作成された『琉球王国評定所文書』とこれらに関連する中国側の文献である。本検索システムの全体は、Web上のCGI(Common Gateway Interface)機能を利用しPerlで実現され、さらに、琉球王国評定所文書の異国船来着に関する古文書は、SGML化され、DBMS(Open Text)に格納され、高速検索エンジンPAT50とパイプを利用したアプリケーションプログラムで検索可能である(http://www.okinawa.oiu.ac.jpで公開)。1.未入力史料(琉球王国評定所文書第十一巻第十六巻、既刊分)をOCRを利用して入力した。2.テキスト検索(KWIC形式表示を含む)機能と画像表示機能の連携化を実現した。3.歴史史料検索システムに外字処理機能を実現した。・作成外字フォント数:1,072字(e漢字使用:710字、部品からの作成:362字)・外字入力機能、外字検索機能(漢字部分品からの検索)、外字表示・転送機能(Gif形式画像)の実現4.外字属性データベースを作成した。・各種属性(部首名、部首画数、総画数、音読み、大漢和コード、Unicodeなど)の利用5.琉球王国評定所文書の異国船来着に関する古文書のSGML化とそれを利用した検索システムを実現した。本研究は、歴史史料を対象にインターネットを利用した歴史史料検索システムの構築と歴史研究者にとって大きな問題である膨大な漢字数の取り扱い(外字処理機能を含む)、異体字、解読不可能な文字や欠字の問題を解決し、歴史学研究者を援用しようとする研究である。本研究の意義として、(1)歴史史料の文書構造を解析し、関連する複数史料のインターネットを利用した横断的検索システムを構築することによって、史料の新たな解釈・解析など歴史学研究を促進する、(2)歴史研究者に大きな問題であった外字の入出力機能とインターネット上の転送について具体的な解決策を提示する、(3)人文科学分野に広く適用可能であり、コンピュータの歴史学研究支援として大いに貢献する、ことを目的とする。本検索システムの全体はWeb上のCGI(Common Gateway Interface)機能を利用しPerlで実現された。また、琉球王国評定所文書の異国船来着に関する古文書は、SGML化され、DBMS(OpenText)に格納され、高速検索エンジンPAT50とパイプを利用したアプリケーションプログラムで検索可能である(http://www.okinawa.oiu.ac.jpで公開)。
BMP受容体欠損マウスにおける肝細胞の損傷修復機構

肝障害初期過程で一過性に発現誘導されるBMP-2/4が、肝細胞損傷の修復過程でどのような役割を果たしているかを解析した。アデノウイルスベクターにより肝臓特異的にBMP受容体をノックアウトしたマウスでは、CCl4肝障害に対する修復の遅延が見られた。また細胞増殖マーカーPCNAの発現レベルは低下していた。以上のことから、BMPシグナルが肝臓障害の細胞増殖の誘導を介して、損傷修復過程に関与することが示された。近年、C型肝炎ウイルスの活性化や薬物摂取による肝炎、肝硬変、肝癌による死亡者数が増加傾向にあり、その発症メカニズムの解明や治療法の開発は社会的急務となっている。しかし、再生不良性の肝障害における肝再生の分子生物学的メカニズムは不明な点が多い。本研究においては、肝障害初期過程で一過性に誘導されるBMP-2が、肝細胞損傷の修復過程で重要な役割を果たしていると考え、(1)BMPsが肝臓内のどの細胞種により、どのようなメカニズムで産生され、(2)未分化型肝細胞の分化・成熟にどのように関与しているのかどうかを、BMP受容体のコンディショナル・ノックアウト・モデル動物およびBMPs発現レポーター・トランスジェニックマウスを用いて分子生物学的手法により解析する。また試験管内での損傷-修復モデル系を構築しサイトカインなど損傷細胞に由来する再生誘導シグナルを同定し、肝細胞損傷の修復過程を解明することを目的とし次の点を解析した。1)BMP受容体のコンディショナル・ノックアウトを用いて、肝臓特異的にアデノウイルスベクターを介してCre組み換え酵素を導入し、肝特異的BMPRIA欠損マウスを作成し、CC14により肝障害を誘導した。その結果、肝特異的BMPRIA欠損マウスにおいては、損傷修復の遅延が観察された。2)試験管内での損傷修復機構解明のため、未分化型肝細胞株、HY1, HY2, HY3を樹立した。この細胞株の分化誘導のメカニズムを解析した。その結果、コラーゲン、TGFb、HGF、OsMの刺激により段階に幹細胞への分化が観察された。肝臓は自己再生能力の強い臓器であるが、繰り返される肝細胞の損傷と修復は、結果的に肝炎を肝硬変へと至らしめる。現在この修復のメカニズムに関し、残存する未分化肝細胞(肝幹細胞)の増殖分化が考えられる。本年度は、Creアデノウイルスベクターを用いてBMPR1A-フロックスマウスにおいて肝臓特異的にノックアウトし、さらに、BMPR1Aのドミナントネガティブ発現アデノウイルス投与によりBMPシグナルを遮断することで、BMPの肝障害に対する役割を解析した。その結果、RT-PCR解析や免疫組織化学により、BMP4の発現細胞はクッパー細胞であると考えられ、その発現細胞数は四塩化炭素投与後24時間ではコントロールマウスよりBMPR1A KOマウスでは少なく、四塩化炭素投与後24時間でのグリソン鞘のオーバル細胞の増殖マーカーki67陽性細胞数はコントロールマウスよりBMPR1A KOマウスのほうが増加していた。72時間後ではBMPR1A KOマウス肝障害の修復の遅延も観察された。これらの結果からマウス四塩化炭素肝障害において、BMP4はクッパー細胞から分泌され、オートクライン的に働き、BMP4自体を発現促進している。さらにBMPシグナルはオーバル細胞の増殖の制御に関与することが示唆された。肝臓は自己再生能力の強い臓器であるため、肝臓移植においては残存の肝臓細胞の同調的な増殖と分化によって急速な修復が引き起こされる。また、アルコール性肝臓障害においても急速な肝臓修復が観察される。本研究においては、肝障害初期過程で一過性に誘導されるBMP-2が、肝細胞損傷の修復過程で重要な役割を果たしていると考え、(1)BMPsが肝臓内のどの細胞種により、どのようなメカニズムで産生され、(2)未分化型肝細胞の分化・成熟にどのように関与しているのかどうかを、BMP受容体のコンディショナル・ノックアウト・モデル動物およびBMPs発現レポーター・トランスジェニックマウスを用いて分子生物学的手法により解析した。その結果、アデノウイルスベクターによりBMPフロックスマウスの肝臓にCre遺伝子を発現させ、CC14肝臓障害を誘導すると、コントロールではCC14投与後24時間で損傷が誘導され、72時間で修復が見られた。BMPR1A KOマウスでは、アルブミン遺伝子発現など修復の遅延が観察された。さらに、細胞増殖マーカーPCNAの発現レベルはノックアウトマウスで低下していた。BMP発現細胞を同定するため、BMPプロモーター10kbをルシフェラーゼ遺伝子上流に結合し、受精卵雄性前核に導入し、トランスジェニックマウスを作成した。このマウスの解析によりBMP発現細胞が生体組織において確認されると期待される。
ドイツにおける文化的多様性を尊重した音楽科教育の学習環境構築に関する研究

本研究は、外国人児童生徒の増加に伴う学力低下の問題を背景に、ドイツを対象として外国人児童生徒の文化的多様性を尊重した音楽科教育の意義と特質を解明するものである。そのために、まず国や地方自治体における学校の文化的多様性に関する制度や教育政策、環境整備の状況を調査し、問題点を明らかにする。次に、教科の学習において、特に活動参加型の音楽科教育に着目し、文化的多様性に対応した授業の具体的特徴と、それを実現するための教師の力量形成プロセスを明らかにする。そして、これらの検討をもとに、音楽科教育が文化的多様性に対応した学習環境として機能するための要因を解明する。