hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
がん治療を受ける患者・家族の療養生活を地域で支える連携システムモデルの開発

1対象者の概要:がん診療連携拠点病院の専門職者(医師5名、看護師15名、薬剤師5名、管理栄養士5名、MSW4名)、産業保健師5名、地域住民(患者会16名、民生委員3名)、がん治療を受けている患者14名および家族11名。2分析の結果(分析途中)、がん治療を受ける患者・家族の療養生活を地域で支える上での現状・課題について、地域の多職種は、在宅療養支援に対応できる地域の医療福祉機関が限られる、患者のニーズを多職種で共有する手段がない、患者が生活する地域で専門職者に相談できる窓口が必要等と捉えており、地域住民は、患者だけでなく家族の方が周囲に出せない悩みを抱えている、支援を求められても連絡経路がわからない、患者目線に立った地域での支援が必要である、がん体験者や家族の生の声を聞く機会を広げてほしい、がん経験者の生きる姿勢に触れることで励まされることを伝えたい等と捉えていた。また、がん治療を受ける患者・家族の地域で支えることに対する認識は、がんであることを周囲には知られたくない、家庭内では言えない不安を吐き出せる場がほしい、治療を受けながら仕事を続けられることが力になる等であった。平成28年度の計画に基づき、所属施設の倫理審査の承認を得て、インタビュー調査実施に向けて対象者の協力が得られるよう、調査の依頼と実施に向けて準備をすすめた。がん診療連携拠点病院専門職者およびがん治療を受けながら療養生活を送る患者・家族に対するインタビュー調査を実施することはできたが、地域の医療福祉機関の専門職者に関しては、インタビュー実施に向けての日程調整ができず、実施に至らなかった職種もあったため。【目的】1がん治療を受ける患者・家族の療養生活を地域で支えるための地域連携の現状と課題、地域の多職種(地域住民含む)と患者・家族の認識を明らかにする。2がん治療を受ける患者・家族の療養生活を地域で支える連携システムモデルを作成する。【方法】1地域の多職種及びがん治療を受けている患者・家族を対象にインタビューを実施し質的帰納的に分析する。21の分析結果及び文献的考察から、がん治療を受ける患者・家族の療養生活を地域で支える連携システムモデルを作成する。【結果】1対象者の概要:がん診療連携拠点病院の専門職者34名(医師、看護師、薬剤師、管理栄養士、MSW)、地域の専門職者13名(薬剤師、産業保健師、管理栄養士)、地域住民19名(患者会、民生委員)、がん治療を受ける患者14名、家族11名。分析結果(分析途中):がん診療連携拠点病院の看護師が認識する患者・家族の療養生活を支えるための地域連携の現状・課題は、拠点病院から在宅医療への継続的な支援体制の不備、地域の専門職者もがんに対する偏見がある、患者ががんであることをオープンにできない、患者のライフサイクルに応じた支援体制が整っていない等であった。
高分子超薄膜の動摩擦下での分子鎖凝集状態の直接評価

側鎖にphosphorylcholine基を有する両性高分子電解質であるpoly(2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine)(以下PMPC)は優れた生体親和性と潤滑作用によって、人工関節などの医用高分子として期待されている1,2。幅広い塩濃度下において使用されることが予想されるため、PMPC分子鎖の広がりの塩濃度依存性の評価は実用上、非常に重要である。一方、イオン性ポリマーブラシは接する水溶液のpHやイオン濃度によって膨潤または収縮することが知られているが,その内部構造や溶媒界面については未知の点が多い。本研究では、このPMPC分子鎖が異なる濃度のNaCl水溶液でとる広がりと分子間相互作用を評価するため、溶液中でのダイナミクスを動的光散乱法、浸透圧を静的光散乱法でそれぞれ検討し、分子鎖形態がイオン強度に依存しないことを明らかにした。さらに、基板表面からの原子移動ラジカル重合によりポリマーブラシを調製し、水中および塩溶液中におけるブラシの拡がりを中性子反射率(NR)測定によりマクロな摩擦特性とコロイドプローブ原子間力顕微鏡法により凝着力を評価し、イオン強度の変化によってポリマーブラシの形態。摩擦挙動、凝着力が変化しないことを明らかにし、さらにブラシ化による耐摩耗性の向上を明らかにした。基板上に強い相互作用で固定化したポリアルキルシロキサン超薄膜やポリマーブラシの動摩擦特性と分子鎖凝集状態の関係を検討した。ポリアルキルシロキサン超薄膜はシリコン基板上にアルキルトリアルコキシシランの気相からの化学吸着法により調製した。またアルキル基のコンフォメーションをブリュースター角赤外吸収スペクトル法により評価した。ポリアルキルシロキサン超薄膜の場合、アルキル基の鎖長の増大とともに、アルキル基のCH2逆対称伸縮振動の波数が低波数側にシフトし、コンフォメーションはトランスリッチとなり、摩擦係数は低下し、耐摩耗性の著しい向上が観測された。一方、ポリマーブラシを、基板に固定化したラジカル重合開始剤から原子移動ラジカル重合により調製し、その摩擦・摩耗特性を検討した。ポリマーとしては、ポリメタクリル酸メチル(PMMA)とPoly(2,3-dihydroxypropyl methacrylate)を用いた。いずれの場合もポリマーブラシの面積密度が高密度になると、液中、空気中いずれの場合も耐摩耗性が向上した。また溶媒の特性により、分子鎖のコンフォメーションが変化し、良溶媒では低いい摩擦係数、貧溶媒では高い摩擦係数が観測された。
シリコン中の水素の精密制御と薄膜トランジスターへの応用

本研究代表者らがこれまでに見い出したシリコン結晶中の3種類の水素分子に着目して、水素添加効果を調べ、その精密制御法を新たに編み出し、それに基づいてデバイスに使用されるシリコン薄膜の特性の向上を計ることが本研究の目的である。第一に、シリコン結晶中の水素および水素分子に関して、1)シリコン素子で問題となる水素原子処理に対するドナー及びアクセプターの耐久性について明らかにし、2)高温でも安定に残存する多原子空孔欠陥を水素原子処理を利用してSi-H及びH2の形成を検出することによって調べた。その結果、1)シリコン中のドナーであるP不純物は水素処理によって100120°Cの範囲で不活性化するだけであるが、それに反しアクセプターのBに関しては水素との反応により様々なSi-H結合を含む欠陥が生成されることが判明した。Si-H-B複合体は100150°Cの範囲で形成され、安定である。一般に、Si中のドナー、アクセプターは不活性化される温度範囲以外では水素に影響されないと考えられていたが、p型Siでは水素原子密度の高い処理に対しては十分に注意を払う必要のあることを初めて指摘することが出来た。また、2)六(または十)多原子空孔型欠陥が安定であると理論的に予想されているが、600°Cまで安定な多原子空孔型欠陥を水素処理後のラマン測定によって示すことが出来た。第二に、アモルファスシリコン(a-Si)中の水素分析を行ない、またレーザーアニールで作られたポリシリコン薄膜中の水素の状態を調べた。プラズマCVDで堆積した高濃度水素を含むa-Siから熱処理で水素を除き、その量の変化をラマン測定で評価した。SIMS測定により得られる水素の含有量とラマン散乱測定のSi-Hシグナルの相関を調べ、ラマン散乱法が含有水素量の簡便な評価法として使えることを示した。しかし、エキシマーレーザーによりガラス基板上の薄いa-Si堆積層のレーザーアニールを行い、多結晶化させると、表面のモホロジーの問題が生じ、通常のラマン散乱評価が難しいことが判明した。本研究代表者らがこれまでに見い出したシリコン結晶中の3種類の水素分子に着目して、水素添加効果を調べ、その精密制御法を新たに編み出し、それに基づいてデバイス特性の向上を計ることが目的である。本年度は、結晶シリコン中の水素の状態とアモルファスシリコン(a-Si)からレーザーアニールで作られたポリシリコン薄膜中の水素の状態を調べ、比較を行った。結果を以下にまとめる。(1)マイクロ波プラズマを用いて、水素原子処理と重水素原子処理を行い、分子の形成を試みた。また、(2)水素添加効果として同位体効果を明らかにした。これらは、種々の結晶シリコンで種々の温度における水素処理の結果、形成された水素分子とSi-H結合のラマン散乱スペクトルの詳細な検討により行った。また、(3)水素を添加した結晶シリコン基板を熱アニールし、多原子空孔に捕捉された水素分子の拡散の挙動を系統的に調べた。一方、(4)応用研究として、プラズマCVDで堆積した高濃度水素を含むa-Siから熱処理で水素を除き、その量の変化をラマン測定で評価する方法を開発した。SIMS測定とラマン散乱測定によって水素の含有量とSi-Hシグナルの相関を調べ、ラマン散乱法がその評価法として使えることを示した。

エキシマーレーザーを用いてガラス基板上の薄いa-Si堆積層のレーザーアニールを行い、多結晶化させ、その状態をしらべた。しかし、モホロジーの問題があり、Si-Hの結合についての知見は得られないことがわかった。その研究のためには、顕微ラマン法を用いて評価するか、低温測定を適用するか、もしくは多結晶化した表面モホロジーの改良を行うことが今後必要であると考えられる。本研究グループで見い出したシリコン結晶中の3種類の水素分子に着目して、水素添加効果を調べ、その精密制御法を開発し、それに基づいてデバイス特性の向上を計ることが目的である。本研究の2年目は、結晶シリコン中の水素の状態をより詳細に調べるための実験的基礎研究を中心に進めた。まず、ドナー不純物になる隣(P)おほびアクセプター不純物になる(B)を結晶シリコンに注入し、熱処理した試料を作成し、それにマイクロ波プラズマを用いた水素原子処理を行い、格子間位置の水素分子の形成に関するフェルミ準位依存性を検討した。その結果、n型では100300°Cの範囲で水素分子が形成されるが、p型では200°以上の温度でのみ形成されるという違いを明確にした。また、水素複合体や水素分子の光励起効果の探索を行い、光制御の可能性を検討した。その結果、水素分子そのものの光制御は波長を広範囲に調べる必要があるが、B-H複合体の一種に関しては514.4nmの光励起分解反応が見つかり、低温制御の可能性をシリコンにおいて初めて明らかにした。最後に、Siイオン注入をした結晶シリコン基板中の水素を調べ、水素を捕捉する多原子空孔について調べて、多くの情報を得た。今後は、これらの知見を生かして、応用研究として、ガラス基板上の薄いa-Si堆積層からレーザーアニールで得られる多結晶Si中の水素の状態及び効果とその利用について研究を進める。1996年以降にシリコン結晶中で3種類の水素分子を見い出された。水素分子とその形成機構に着目して、水素添加効果を調べ、その精密制御法を新たに編み出し、それに基づいてデバイス特性の向上を計ることが本研究の目的である。最終年度は初年度と2年度の結果をさらに進めるための基礎研究を行った。即ち、1)シリコン素子で問題となる水素原子処理に対するドナーおよびアクセプターの耐性について明らかにすること、2)高温でも安定に残存する多原子空孔型欠陥を水素原子処理を利用してSi-H及びH2の形成を検出することによって調べること、の2点に的を絞った。その結果、1)シリコン中のドナーであるP不純物は水素処理によって100120°Cの範囲で不活性化するだけであるが、それに反しアクセプターのBに関しては水素との反応により様々なSi-H結合を含む欠陥が生成されることが判明した。Si-H-B複合体は100150°Cの範囲で形成され、安定である。一般に、Si中のドナー、アクセプターは不活性化される温度範囲以外では水素に影響されないと考えられていたが、p型Siでは水素原子密度の高い処理に対しては十分に注意を払う必要のある現象を見出し、この問題点を初めて指摘することが出来た。また、2)6(または10)多原子空孔型欠陥が安定であると理論的に予想されているが、600°Cまで安定な多原子空孔型欠陥を水素処理後のラマン測定によって示すことが出来た。
高血圧自然発症ラットにおける大腿骨々頭壊死の病理学的研究

高血圧自然発症ラット(SHR)の大腿骨々頭には、小児ペルテス病類似の無腐性壊死が高頻度に発生する。この病態解明のため、以下の目的で研究を行った。(1)大腿骨々頭の発育過程をX線学的に観察する。(2)組織学的に無腐性壊死の出現時期やその修復過程を検索する。(3)骨頭へ至る血管の途絶部位を明らかにし、血管閉塞のメカニズムを解明する。実験には6,9,12,15,20及び40週令の雄SHR100匹と対照として同週令の雄京都ウイスタ-ラット(WKY)36匹を用いた。各週群それぞれ両側大腿骨を摘出後、軟X線撮影により骨頭の発育過程を観察した。組織学的観察のためには、大腿骨近位部のHE染色標本を作製した。さらに新鮮な無腐性壊死を示す14骨頭を用いて、骨頭の栄養に関与していると思われる血管を追跡するため、連続切片を作製した。その結果、以下の知見が得られた。(1)SHRではWKYに比べて、約60%の骨頭で骨化が遅延しており、また骨頭の扁平化や頸部短縮などの変化を伴っていた。(2)組織学的に骨頭の無腐性壊死は、生後9週から15週の間に発生していた。(3)この壊死骨頭には、まず骨髄腔に肉芽組織が侵入し、壊死骨梁は類骨添加により修復され、生後40週ではほぼ完全に治癒していた。(4)無腐性壊死を来たす血管閉塞の部位は、骨頭外側の軟骨内貫通部附近であった。また閉塞部位周囲の関節軟骨や成長軟骨帯には、脆弱性を示す所見が認められた。以上、成長期の雄SHRに好発する大腿骨々頭壊死では、骨頭の関節軟骨や成長軟骨帯に糸統的な異常がある事、その脆弱性のため軟骨管内を通過し骨頭内へ至る血管が機械的に閉塞される結果、無腐性壊死が発症する事などが示唆された。高血圧自然発症ラット(以下SHR)の大腿骨々頭には、骨化障害とペルテス病類似の無腐性壊死が高頻度に発症する。本研究ではSHR大腿骨々頭病変の病態解明の一環として、骨頭の発育過程をX線学的に観察し、病理学的には無腐性壊死の出現時期やその修復過程を検索した。実験には生後6、9、12、15、20および40週の雄SHR36匹と対照として同週の雄京都ウイスターラット(以下WKY)36匹を用いた。各週群それぞれ6匹ずつエーテル麻酔下に両側大腿骨を摘出し、軟X線撮影を行い、骨頭の骨化過程を観察した。さらに組織学的観察のため、大腿骨近位部を脱灰後パラフィン包埋し、前額面のHE染色標本を作製した。これら染色標本を用いて、大腿骨々頭の無腐性壊死の有無や、その修復反応を観察し、修復過程の推移を調べた。その結果、新たに以下の知見が得られた。1 WKYでは生後9週より骨頭の骨化が始まり、15週でほぼ完了するのに対して、SHRでは約60%の骨頭で骨化が遅延しており、また骨頭の扁平化や頸部短縮などの変化を伴っていた。2組織学的に骨頭の無腐性壊死は、生後9週から15週の間に発生していた。

発生頻度はWKYが5.6%だったのに対して、SHRでは27.8%と高く、特に生後15週では6匹12骨頭中8骨頭も壊死化していた。3この壊死骨頭には、まず骨髄腔に肉芽組織が侵入し、壊死骨梁は類骨添加により修復され、生後40週ではほぼ完全に治癒していた。以上、SHRにおける大腿骨々頭壊死では、骨頭の変形や骨化の遅延を伴っていることから、骨頭の骨端軟骨や成長軟骨板の異常が壊死発生に深く関与していると考えられた。この点の解明をさらに進めることは、ペルテス病の病態解明につながることが示唆された。高血圧自然発症ラット(SHR)の大腿骨々頭には、小児のペルテス病に類似した無腐性壊死が高頻度に発生する。昭和63年度の研究で無腐性壊死の出現時期やその修復過程を検索した結果、生後9週から15週の間の成長期に発症し、その後すみやかに自然治癒する事が判明した。本年度の研究では、この無腐性壊死の発生に関して、大腿骨々頭へ至る栄養血管がどの部位で閉塞する事によって起きるかを検索した。実際には生後9週から15週の雄SHR80匹、160骨頭のうち修復反応のない新鮮な無腐性壊死を示す14骨頭と、対照として正常骨化を示す15骨頭を用いた。大腿骨々頭の栄養に関与していると思われる血管を追跡するため、大腿骨近位部の前額面連続切片を作製後HE染色を行い、組織学的に観察した。その結果、以下の知見が得られた。1.正常骨化を示すものでは、骨頭内へ至る血管はほとんど骨頭外側の関節軟骨と成長軟骨帯の移行部を貫いて侵入していた。2.これに対して、新鮮な無腐性壊死を示すものでは、いずれも骨頭外側の軟骨直前までしか血管は追跡出来ず、それより末稍の軟骨貫通部附近には、瘢痕形成や肉芽形成が認められた。以上より、SHRにおける大腿骨々頭壊死では、骨外血行路は開存している事、それより末稍の骨頭軟骨層の血管貫通部には、瘢痕形成や肉芽形成などが認められた事から、血管が骨頭外側から軟骨層内へ侵入した部位で閉塞する事が示唆された。
結核菌感染に対するマクロファージの初期感染防御機構における転写因子MafBの役割

肺胞マクロファージは結核に対する局所での感染免疫において重要な役割を担っており,Fcレセプターなどの細胞表面受容体を介して結核菌を細胞内に取り込む。マクロファージ細胞株RAW264.7において転写因子MafB遺伝子発現をshRNAにより抑制したところ,コントロール細胞株に比べて貪食能が低下した。また,MafBの抑制によりFcレセプターを構成するFcgr3の発現はコントロールと比べて有意に低下した。そこで,MafB抑制細胞にFcgr3を強制発現させると貪食能が回復した。すなわち,MafBは細胞表面のFcgr3発現を誘導することで,マクロファージの貪食能を制御していることが証明された。平成26年度は,DN-MafB発現遺伝子改変(DN-MafB Tg)マウスによるBCG感染モデルの作製を試みた。当教室で確立した肺特異的CCL1発現遺伝子改変マウスに対するBCG感染実験方法と同様の手法で実施した。すなわち,感染モデルの作製には,1012週齢の野生型マウスおよびDN-MafB Tgマウスが用いられた。乾燥BCGワクチン溶解液(日本化薬)を1匹あたり5×10^6 CFUに調整して気管内投与した。その後,28日目にサンプリングを行って,感染肺の組織像をHE染色で評価した。その結果,BCG投与後の体重増加率は,野生型マウスおよびDN-MafB Tgマウスでは差がなかった。肺組織像を確認したところ,野生型マウスおよびDN-MafB Tgマウスいずれにおいても,両肺に肉芽腫が形成されていた。肉芽腫数を比較すると野生型マウスよりもDN-MafB Tgマウスの方が少ない傾向にあった(1切片あたり平均206.8 vs. 163.6)。さらに,肉芽腫を含む肺組織中でのBCG菌体の有無を鏡検で確認した。抗酸菌染色(チール・ニールセン染色)では肉芽腫の内部に少数の菌体が確認された。一方,乾燥BCGをFITCで蛍光染色してから経気道感染させて同様に観察したが,こちらは鏡検での確認が困難であった。また,感染肺胞マクロファージの細胞死および貪食能を評価するため,まず細胞実験を行った。実験にはマウスマクロファージ細胞株RAW264.7細胞の他に,MafB過剰発現細胞,shMafB発現細胞を用いた。それぞれの細胞をBCGで刺激してから,Annexin Vと7-AADで二重染色し,フローサイトメトリーでアポトーシスを解析した。さらに,RAW264.7細胞に蛍光ポリスチレンビーズを添加してフローサイトメトリーで貪食能を評価したが,いずれも予備実験としての条件設定がほぼできたところである。平成27年度は,昨年度の予備実験を踏まえて,マクロファージの貪食能における転写因子MafBの役割とそのメカニズムを評価した。マウスマクロファージ細胞株RAW264.7細胞にMafB-shRNAを遺伝子導入した細胞(RAW264.7-MafB-shRNA)を作成した。コントロールとしてshRNAベクターのみを導入した細胞(RAW264.7-control-shRNA)を用いた。Phycoerythrin (PE)でラベルされた蛍光ポリスチレンビーズをIgGでコーティングしてから(すなわちオプソニン化してから)各細胞に添加して,フローサイトメトリーおよび蛍光顕微鏡を用いて貪食能を評価したところ,RAW264.7-MafB-shRNAではRAW264.7-control-shRNAと比較して貪食能は有意に低下していた。すなわち,MafBの発現を抑制することでRAW264.7細胞の貪食能が抑制されることが示された。この実験系では,Fcレセプターを介した貪食能を見ていることから,FcレセプターのコンポーネントであるFcgr2bとFcgr3に対してMafBがどのように影響を及ぼすか,について着目した。マクロファージ細胞株におけるFcgr2bとFcgr3のmRNA発現レベルを定量的real-time PCRで確認したところ,Fcgr2b mRNAはRAW264.7-control-shRNAでもRAW264.7-MafB-shRNAでも変化はなかったが,Fcgr3 mRNAはRAW264.7-control-shRNAと比べてRAW264.7-MafB-shRNAで低下していた。細胞表面のFcgr2bとFcgr3の抗原発現を見てみると,mRNAと同様にFcgr2bは変化しなかったが,Fcgr3はRAW264.7-control-shRNAと比べてRAW264.7-MafB-shRNAで低下していた。さらに,RAW264.7-MafB-shRNA細胞にFcgr3遺伝子を強制発現させてフローサイトメトリーで貪食能を確認したところ,オプソニン化された蛍光ポリスチレンビーズの貪食能はFcgr3遺伝子の強制発現により増加した。以上の結果から,MafBはFcgr3を介してマクロファージの貪食能を制御することが示唆された。本研究では,転写因子MafBにより制御されるマクロファージの機能が結核菌の細胞内感染および生存・増殖に与える影響について検討することを目的としている。この目的を達成するために,BCG感染マウスモデルの実験系を確立し,さらに平成27年度はマクロファージ特異的MafB発現遺伝子改変マウスの作製を計画していた。しかし,BCGの生菌を扱う実験系が若干不安定であり,このため新たな遺伝子改変マウスの作製にまで着手できなかった。

そこで,動物実験系と並行してMafBによるマクロファージの機能制御の細胞内メカニズムの解析を進めることとして,平成27年度は貪食能の解析を中心に実施した。以上より,現在までの達成区分を「やや遅れている」とした。マクロファージは細菌などの異物を細胞表面の受容体で認識する。そして、認識後に細胞内に貪食をすることで、生体内から異物を除去している。生体内では、異物に対して免疫グロブリンや補体などが結合するが、これらが、結合することによって、マクロファージの細胞表面に存在するFc受容体を介して、異物の認識はさらに容易となる。細胞分化には分化促進転写因子の発現が重要である。MafBはマクロファージの分化促進転写因子として知られている。我々はマクロファージ細胞株RAW264.7細胞にMafB-RNAiにて機能が抑制される細胞株(RAW264.7-MafBshRNA)を作成した。そして、これまでにMafBがマクロファージの異物貪食を促進することを報告した(Plos One 2013)。しかし、その現象がどのような機序で起こされているのかということは不明であった。そこで、MafBが細胞表面のFc受容体発現を亢進し、異物貪食が亢進するという仮説を立てた。RAW264.7-MafBshRNA細胞では、オプソニン化されたビーズに対する貪食がコントロールに比して低下していることが、蛍光顕微鏡による観察とフローサイトメトリーで確認された。そして、RAW264.7-MafBshRNA細胞ではFcgr3遺伝子発現がコントロールに比して有意に少ないことをrealtime PCRで確認し、抗体を用いたフローサイトメトリーで、細胞表面のFcgr3受容体数が減少していることを確認した。そして、RAW264.7-MafBshRNA細胞に対して、プラスミドベクターを用いて、Fcgr3遺伝子を強制発現させることで、低下していたオプソニン化ビーズに対する貪食が改善することが示された。すなわち、本研究によって、MafBがFcgr3の発現を制御することで、マクロファージにおける異物貪食を制御しているという機序を発見した。肺胞マクロファージは結核に対する局所での感染免疫において重要な役割を担っており,Fcレセプターなどの細胞表面受容体を介して結核菌を細胞内に取り込む。マクロファージ細胞株RAW264.7において転写因子MafB遺伝子発現をshRNAにより抑制したところ,コントロール細胞株に比べて貪食能が低下した。また,MafBの抑制によりFcレセプターを構成するFcgr3の発現はコントロールと比べて有意に低下した。そこで,MafB抑制細胞にFcgr3を強制発現させると貪食能が回復した。すなわち,MafBは細胞表面のFcgr3発現を誘導することで,マクロファージの貪食能を制御していることが証明された。本研究では,転写因子MafBにより制御されるマクロファージの機能が,結核菌の細胞内感染および生存・増殖に与える影響について検討することを目的としている。この目的を達成するために,平成26年度はBCG感染マウスモデルの作製を主な目標としていた。今回,BCGを野生型マウスおよびDN-MafB Tgマウスに経気管投与することにより,両肺へのBCG感染が確認できた。
大豆の主要アレルゲンGly m Bd 26Kのアレルゲン性に関する研究

私達は既に、大豆における主要なアレルゲンとしてGly m Bd 68K,Bd 30KおよびBd 26Kを見いだし、前二者は認識を深めることができたが、Gly m Bd 26Kについての知見は全くない。本研究はGly m Bd 26Kのアレルゲン性を明らかにする目的として行い、以下の成果を得た。まず、脱脂大豆より、各種クロマトグラフィーなどにより電気泳動的に均一にGly m Bd 26Kを単離・精製した。本アレルゲンは分子質量26kDaの糖タンパク質であり、その糖組成よりアスパラギン結合型糖タンパク質であることが明らかとなった。次いで、リジルエンドペプチダーゼで本アレルゲンを断片化後、糖ペプチドを単離し、そのアミノ酸配列を本アレルゲンのN末端アミノ酸配列と比較することにより糖鎖の結合位置はN末端より20番目のアスパラギン残基であることが示された。更に、興味深いことに、西洋わさびパーオキシダーゼの糖鎖は本アレルゲンのそれと同じであると考えられるが、それに特異的な抗体を用いて詳細に検討した結果、本アレルゲンの糖鎖は大豆アレルギー患者血清中のIgE抗体と特異的に反応することが示された。このことは他の同じ糖鎖を有する糖タンパク質もアレルゲン性を有するという重要な問題を提起するものである。また、大豆利用食品における本アレルゲンを定量する目的で、本アレルゲンに対する2種類のモノクローナル抗体を作製し、これら抗体を用いるサンドイッチELISAを開発した。本法により、0.510ngのGly m Bd 26Kを定量することができた。本法を用いて、各種大豆利用食品における本アレルゲンを測定した結果、本アレルゲンは豆乳、豆腐、湯葉、油揚げなどには高濃度に存在したが、醤油、味噌、納豆などの発酵食品ならびにミートボールなどの加工食品には存在しなかった。大豆は我が国においては牛乳および卵と並んで代表的なアレルギー食品の一つである。大豆中のアレルゲンの研究は著しく遅れていたが、我々は系統的な研究を行い、そのアレルゲン成分を検索し、その実体を明らかにしてきた。即ち、大豆には、約16種類のタンパク質成分が存在し、そのうち、Gly m Bd68K,Gly m Bd 30KおよびGly m Bd 26Kが主要なアレルゲンであることを明らかにした。これら主要なアレルゲンのうち、Gly m Bd 68KおよびGly m Bd 30Kのアレルゲン性についてはよく理解されるようになった。しかし、Gly m Bd 26Kについての理解はきわめて乏しい。本研究はGly m Bd 26Kのアレルゲン性を解明することを目的としているが、本年度は以下の成果が得られた。まず、Gly m Bd 26Kに対するモノクローナル抗体を作製し、それをリガンドとするアフィニティゲルを調製した。Gly m Bd 26Kを等電点沈殿、硫安分画、アフィニティクロマトグラフィー、DEAE-SepharoseクロマトグラフィーおよびSephacrylS-200クロマトグラフィーにより電気泳動的に均一に鈍化することに成功した。精製標品を用いてその諸性質を検討した結果、その分子量は26000、等電点は6.1、並びにAsn結合型糖タンパク質であることが示された。また、NおよびC末端アミノ酸配列並びに内部の部分的なアミノ酸配列より本アレルゲンは従来報告のない未知のタンパク質であることが明らかになった。これらの情報に基づいて、混合オリゴヌクレオチドからなるプローブを作製し、cDNAライブラリーより目的とするcDNAのクローンを得るように検索中である。

また、それと並行して、polymerase chain reactionを行い、Gly m Bd 26KをコードするDNA断片の合成を精力的に行っているところである。つい最近、有望な数個のクローンを見い出しており、現在、それらが果たして目的とするcDNAであるか否かを検討中である。私達は既に、大豆における主要なアレルゲンとしてGly m Bd 68K,Bd 30KおよびBd 26Kを見いだし、前二者についてはよく認識を深めることができたが、Gly m Bd 26Kについての知見は全くない。本研究はGly m Bd 26Kのタンパク質化学的性質及びそのアレルゲン性の解明を目的として行い、以下の成果を得た。まず、脱脂大豆より、各種クロマトグラフィーなどにより電気泳動的に均一にGly m Bd 26Kを単離・精製した。本アレルゲンは分子質量26kDaの糖タンパク質であり、その糖組成よりアスパラギン結合型糖タンパク質であることが明らかとなった。次いで、リジルエンドペプチダーゼで本アレルゲンを断片化後、糖ペプチドを単離し、そのアミノ酸配列を本アレルゲンのN末端アミノ酸配列と比較することにより糖鎖の結合位置はN末端より20番目のアスパラギン残基であることが示された。更に、興味深いことに、西洋わさびパーオキシダーゼの糖鎖は本アレルゲンのそれと同じであると考えられるが、それに特異的な抗体を用いて詳細に検討した結果、本アレルゲンの糖鎖は大豆アレルギー患者血清中のIgE抗体と特異的に反応することが示された。このことは他の同じ糖鎖を有する糖タンパク質もアレルゲン性を有するという重要な結論に結びつく問題を提起するものである。また、大豆利用食品における本アレルゲンを定量する目的で、本アレルゲンに対する2種類のモノクローナル抗体を作製し、これら抗体を用いるサンドイッチELISAを開発した。本法により、0.510ngのGly m Bd 26Kを定量することができた。本法を用いて、各種大豆利用食品における本アレルゲンを測定した結果、本アレルゲンは豆乳、豆腐、湯葉、油揚げなどには高濃度に存在したが、醤油、味噌、納豆などの発酵食品ならびにミートボールなどの加工食品には存在しなかった。
核膜を識別する核内共生細菌ホロスポラの全ゲノム塩基配列の解読と機能開発

1.ホロスポラ・オブツサのゲノムは現在までに約60%(ゲノムサイズ約1.7Mbp)が解読された。2D-SDS-PAGEゲルの18種のスポットの部分アミノ酸配列を決定し、解読済みゲノム部分にORFがあるかどうかと既知タンパク質とのidentityの有無を調べた。その結果、ORFが見つかったのは3種のみ、高いホモロジーが確認されたのは8種であった。解読済みゲノム部分(60%)にORFが3/18(17%)しか検出されないことは、宿主から輸入したタンパク質が多いことを示唆している。2.ディファレンシャルディスプレー法で、ホロスポラによって発現が抑制される宿主遺伝子を12種、発現が増加する遺伝子を3種検出し、前者のうちの4種の遺伝子断片のシーケンスを行った。その1種は、真核細胞核で最初のコドン逸脱性の発見になったにもかかわらず機能が不明のままになっていたイモビリゼーションアンチジェンA遺伝子であった。ノーザンブロットでも、この遺伝子発現がホロスポラの感染によって抑制されることが確認された。3.ホロスポラが細胞外膜に露出させている標的核膜識別センサー(リポ多糖)を精製した。4.ホロスポラの標的核膜貫通部位に特異的なモノクローナル抗体を1種類作成し、抗原の性質を調べた。
血管内皮細胞分化を制御するタンパク質の網羅的取得と機能解析

本研究では血管内皮細胞をコラーゲンゲル内で三次元的に培養することにより管腔様構造形成を誘導し、この時に特異的に発現亢進またはリン酸化するタンパク質を、プロテオソーム解析を用いて網羅的に取得し、得られた内皮細胞分化マーカータンパク質の血管新生に対する機能を明らかにすることを目的として検討を行った。ウシ毛細血管内皮(BCE)細胞を用いた検討では、管腔形成に伴い発現増加が認められる21個のタンパク質スポットを同定し、質量分析による解析の結果、これらはalpha B crystallin, phosphatidylethanolamine binding Protein, Homeobox protein, phosphoglycerate kinaseなどのタンパク質であることが明らかになった。また管腔形成に伴いリン酸化するタンパク質として、220kDaおよび280kDaのバンドが確認された。そこでBCE細胞をコラーゲンゲル上で大量培養し、得られた細胞抽出液をアガロース結合抗リン酸化チロシン抗体カラムを用いて大量分離調整を行い、質量分析にてこれらのタンパク質の同定を試みた。その結果、微小管結合タンパク質であるnineinを同定した。nineinに対するウエスタンブロット解析により、管腔形成の時期(分化誘導8-48時間)に一致して、このタンパク質がチロシンリン酸化することを確認した。またnineinに対するSiRNAをBCE細胞に導入し、タンパク質発現を抑制した結果、BCE細胞の管腔形成能は、コントロールsiRNAを導入したBCE細胞に比べて有意に低下した。これらの結果から微小管結合タンパク質であるnineinは管腔形成を制御する重要なタンパク分子であることが明らかになった。p/本研究では血管内皮細胞をコラーゲンゲル内で三次元的に培養することにより管腔様構造形成を誘導し、この時に特異的に発現亢進またはリン酸化するタンパク質を、プロテオソーム解析を用いて網羅的に取得し、得られた内皮細胞分化マーカータンパク質の血管新生に対する機能を明らかにすることを目的として検討を行った。p/1.血管内皮細胞分化特異的に発現奥シンするタンパク質の分離と同定ウシ毛細血管内皮(BCE)細胞をコラーゲンゲル内で三次元培養することにより管腔様構造形成を誘導し、このときに特異的に発現亢進するタンパク質を二次元SDS-PAGE電気泳動により同定した。その結果、管腔形成にともなって発現が有意に亢進する21のタンパク質スポットが同定された。質量分析計を用いたタンパクスポットの解析により、これらのスポットのうち2つが、Homeobox protein, Alpha B crystallinであることが明らかになった。他のタンパクスポットに関しても現在解析を進めている。2.内皮細胞分化特異的にチロシンリン酸化するタンパク質の分離と同定実験1と同様に、BCE細胞をコラーゲンゲル内で三次元培養することにより管腔様構造形成を誘導し、細胞溶解液を抽出後、アガロースビーズに結合した抗リン酸化チロシン抗体を用いた免疫沈降法を用いて、管腔形成に伴って特異的にリン酸化を受けるタンパク質の分離を試みた。その結果、220kDaおよび280kDaの位置に泳動される管腔形成したBCE細胞にのみ認められるリン酸化タンパクのバンドを確認することができた。現在、これらのタンパクを同定するため、BCE細胞をコラーゲンゲル上で大量培養し、得られた細胞抽出液をアガロース結合抗リン酸化チロシン抗体カラムを用いて大量分離調整を行っている。本研究では血管内皮細胞をコラーゲンゲル内で三次元的に培養することにより管腔様構造形成を誘導し、この時に特異的に発現亢進またはリン酸化するタンパク質を、プロテオソーム解析を用いて網羅的に取得し、得られた内皮細胞分化マーカータンパク質の血管新生に対する機能を明らかにすることを目的として検討を行っている。ウシ毛細血管内皮(BCE)細胞を用いた検討では、管腔形成に伴い発現増加が認められる21個のタンパク質スポットを同定し、質量分析による解析の結果、これらはalpha B crystallin, phosphatidylethanolamine binding protein, Homeobox protein, phosphoglycerate kinaseなどのタンパク質であることが明らかになった。また管腔形成に伴いリン酸化するタンパク質としては、微小管結合タンパク質であるnineinを同定した。そしてnineinに対するウエスタンブロット解析により、管腔形成の時期(分化誘導8-48h)に一致して、このタンパク質がチロシンリン酸化することを確認した。

現在これらのタンパク質に対するSiRNAを作製し、BCE細胞にこれらのSiRNAを導入し、タンパク質発現を抑制する結果、管腔形成にどのような影響が起こるか検討中である。また我々は、ヒト由来の血管内皮細胞(human telomerase immortalized dermal microvascular endothelial cells, TIME cells)をコラーゲンゲル内で三次元的に培養することにより、管腔様構造形成を再現性よく誘導する培養系を確立したため、この細胞を用いて上記と同様のプロテオソーム解析を行っている。その結果、内皮細胞の管腔形成に伴い発現が変化するタンパク質スポットを120個以上同定するに至っている。現在これらのタンパク質スポットをMALDI-TOF MSを用いて解析を行っている。本研究では血管内皮細胞をコラーゲンゲル内で三次元的に培養することにより管腔様構造形成を誘導し、この時に特異的に発現亢進またはリン酸化するタンパク質を、プロテオソーム解析を用いて網羅的に取得し、得られた内皮細胞分化マーカータンパク質の血管新生に対する機能を明らかにすることを目的として検討を行った。ウシ毛細血管内皮(BCE)細胞を用いた検討では、管腔形成に伴い発現増加が認められる21個のタンパク質スポットを同定し、質量分析による解析の結果、これらはalpha B crystallin, phosphatidylethanolamine binding protein, Homeobox protein, phosphoglycerate kinaseなどのタンパク質であることが明らかになった。また管腔形成に伴いリン酸化するタンパク質として、220kDaおよび280kDaのバンドが確認された。そこでBCE細胞をコラーゲンゲル上で大量培養し、得られた細胞抽出液をアガロース結合抗リン酸化チロシン抗体カラムを用いて大量分離調整を行い、質量分析にてこれらのタンパク質の同定を試みた。その結果、微小管結合タンパク質であるnineinを同定した。nineinに対するウエスタンブロット解析により、管腔形成の時期(分化誘導8-48時間)に一致して、このタンパク質がチロシンリン酸化することを確認した。またnineinに対するSiRNAをBCE細胞に導入し、タンパク質発現を抑制した結果、BCE細胞の管腔形成能は、コントロールsiRNAを導入したBCE細胞に比べて有意に低下した。これらの結果から微小管結合タンパク質であるnineinは管腔形成を制御する重要なタンパク分子であることが明らかになった。
狩野派を中心とする官学派の研究

1資料の収集・整理(1)東京国立博物館蔵狩野派模本の焼付写真を購入し、また、未調査分を調査・撮影し、両者を合わせ整理した。これによって見いだされた現存しない初期狩野派の作品を中心に検討を加え、その成果の一端を報告書において公刊した。(2)これまでに収集した資料、中でも狩野元信を中心とする初期狩野派や狩野光信一門のまとまった資料にさらなる検討を加え、当研究グループ以外の研究者にも公開し、活用できるようにした。2研究成果のまとめ・報告書の公刊報告書の主な内容は以下の通りである。河野元昭組織としての狩野派山下裕二狩野派,阿弥派,小栗派をめぐって板倉聖哲妙心寺天球院障壁画に関する一解釈河野元昭応挙と三井家辻惟雄東京国立博物館蔵初期狩野派模本について1資料の収集・整理(1)東京国立博物館蔵狩野派模本の焼付写真を購入し、また、未調査分を調査・撮影し、両者を合わせ整理した。河野元昭組織としての狩野派山下裕二狩野派,阿弥派,小栗派をめぐって板倉聖哲妙心寺天球院障壁画に関する一解釈河野元昭応挙と三井家辻惟雄東京国立博物館蔵初期狩野派模本について1京都諸寺院の調査(1)平成元年9月に園城寺勧学院の障壁画(狩野光信一門による制作)の調査・撮影を実施。本障壁画は従来その全面が図版として紹介されたことは無かったが、今回すべての作品を4×5フィルムで撮影することができた。その結果、当初の状態からの改変の状況、工房制作の実態等、いくつかの新知見が明らかになった。(2)これに引き続いて高台寺の障壁画及び蒔絵の調査・撮影を実行。高台寺障壁画は従来部分的な紹介がなされていたに過ぎないが、今回の調査により、開山堂の天井画・壁画等、従来見過ごされてきた重要な作品の撮影に成功した。(3)平成2年1月に法然院の障壁画の調査・撮影を実施。光信一門の制作として勧学院の障壁画とともに注目される作品であるが、これもすべての作品を撮影、詳細な調査を行なうことができた。その結果、各部分の筆者の特定がある程度可能になった。以上、従来部分的にしか紹介されることのなかった狩野光信周辺の制作による障壁画を全面的に調査し、4×5のフィルムにより撮影できたことは、狩野派を中心とした当時の障壁画の制作状況に関して新たな知見を加えるとともに、今後の研究のための重要な資料を提供する意味で成果のあるものとなった。2美術館等の収蔵作品の調査(1)遠山記念館(埼玉県川島町)において、狩野派、土佐派の作品の調査・撮影を実施。従来未紹介の土佐派の扇面画帖他、重要な作例を見いだした。(2)岡山県立美術館、山口県立美術館、栃木県立博物館、茨城県立歴史館において、予備調査を実施。室町水墨画、狩野派の作品の存在を確認、35mmフィルムにて一部分撮影。次年度以降に本格的調査を実施の予定。3資料の収集国立博物館・文化財研究所等の写真原板による官学派関係の写真資料(焼付写真)を購入、整理した。また、上記2・3による新規撮影分の写真もこれに併せて整理、資料化を進行中である。1作品の調査・撮影(1)狩野光信周辺の制作による障壁画の調査・撮影(1)平成元年9月、園城寺勧学院障壁画。当初の状態からの改変の状況、工房制作の実態等が明らかになった。(2)引き続いて高台寺の障壁画及び蒔絵の調査・撮影。開山堂の天井画・壁画等、従来見過ごされてきた重要な作品の撮影に成功した。(3)平成2年1月、法然院障壁画。各部分の筆者の特定がある程度可能になった。以上、従来部分的にしか紹介されることのなかった障壁画を全面的に調査し、4×5のフィルムにより撮影できたことは、狩野派を中心とした当時の障壁画の制作状況に関して新たな知見を加えるとともに、今後の研究のための重要な資料を提供する意味で成果あるものとなった。(2)狩野派誕生の基礎となった室町水墨画及び狩野元信を中心とする初期狩野派の作品の調査・撮影(1)平成2年、遠山記念館(2)平成2年11月、栃木県立博物館所蔵の重要な作品の調査・撮影を実施。(3)その他遠山記念館においては、未紹介の土佐派の扇面画帖他、重要な作例を見いだし、撮影した。2資料の収集・整理国立博物館・文化財研究所等の写真原板による官学派関係の写真資料(焼付写真)を購入、整理した。また、上記1による新規撮影分の写真もこれに併せて整理、資料化を進行中である。この結果、特に、元信を中心とする初期狩野派及び狩野光信一門の制作による作品に関しては、まとまった資料(従来未紹介のものを多く含む)を得ることに成功、今後の研究に広く活用されることが予想される。

3今後、上記1・2による成果をもとに分析を加え、狩野派を中心とする官学派の実態を明らかにし、また他との比較をおこない、印刷物として公刊する予定である。1作品の調査・撮影(1)狩野光信周辺の制作による障壁画の調査・撮影(1)平成元年9月、園城寺勧学院障壁画。当初の状態からの改変の状況、工房制作の実態等が明らかになった。(2)引き続いて高台寺の障壁画及び蒔絵の調査・撮影。開山堂の天井画・壁画等、従来見過ごされてきた重要な作品の撮影に成功した。(3)平成2年1月、法然院障壁画。各部分の筆者の特定がある程度可能になった。以上、従来部分的にしか紹介されることのなかった障壁画を全面的に調査し、4×5のフィルムにより撮影できたことは、狩野派を中心とした当時の障壁画の制作状況に関して新たな知見を加えるとともに、今後の研究のための重要な資料を提供する意味で成果あるものとなった。(2)狩野派誕生の基礎となった室町水墨画及び狩野元信を中心とする初期狩野派の作品の調査・撮影(1)平成2年、遠山記念館(2)平成2年11月、栃木県立博物館所蔵の重要な作品の調査・撮影を実施。(3)その他遠山記念館においては、未紹介の土佐派の扇面画帖他、重要な作例を見いだし、撮影した。2資料の収集・整理(1)(1)東京国立博物館の写真原板による狩野派模本の写真資料(焼付写真)・(2)東京国立文化財研究の原板による可能元信関係の写真資料を購入、整理した。(2)また、上記1による新規撮影分の写真もこれに併せて整理、資料化を進行中である。この結果、特に、元信を中心とする初期狩野派及び狩野光信一門の制作による作品に関しては、まとまった資料(従来未紹介のものを多く含む)を得ることに成功、今後の研究に広く活用されることが予想される。3上記1・2による成果をもとに分析を加え、狩野派を中心とする官学派の実態を明らかにし、また他との比較をおこない、印刷物として公刊する予定である。1資料の収集・整理(1)東京国立博物館蔵狩野派模本の焼付写真を購入し、また、未調査分を調査・撮影し、両者を合わせ整理した。これによって見いだされた現存しない初期狩野派の作品を中心に検討を加え、その成果の一端を報告書において公刊した。(2)これまでに収集した資料、中でも狩野元信を中心とする初期狩野派や狩野光信一門のまとまった資料にさらなる検討を加え、当研究グループ以外の研究者にも公開し、活用できるようにした。2研究成果のまとめ・報告書の公刊報告書の主な内容は以下の通りである。河野元昭組織としての狩野派山下裕二狩野派、阿弥派、小栗派をめぐって板倉聖哲妙心寺天球院障壁画に関する一解釈河野元昭応挙と三井家辻惟雄東京国立博物館蔵初期狩野派模本について
地盤を考慮した2方向地震力を受けるRC構造物の応答性状

構造物が地震力を受ける場合、地震は一般に構造物に対して任意の角度から入力される。しかし、任意の角度から地震波が入力された場合の構造物の応答性状はほとんど明らかにされていない。さらに、構造物の応答性状は地盤の特性により大きく影響されることが明らかにされている。本研究は、地盤の影響および任意の角度から地震波が入力された場合の鉄筋コンクリート構造物の応答性状を求めるための仮動的実験システムを開発して、その応答性状を明らかにすることである。今年度の研究成果は以下のようである。1.2台のアクチュエーターと2台のコンピューターを用いて、任意の方向から地震波が入力可能な仮動的実験システムを開発した。2.鉄筋コンクリート橋脚の模型供試体を作製して、上記実験システムを用いて仮動的実験を行い、任意方向から入力される場合の応答性状を求め、1方向入力の場合と比較検討した。その結果、2方向入力の場合には、1方向の場合と比較して耐力低下が早く生じることが明らかとなった。また、構造物の破壊も早く生じることが判明した。3.地盤を考慮した鉄筋コンクリート構造物の応答解析結果から、地盤の性状により構造物の応答性状は著しく異なることが明らかとなったので、地盤の影響をも考慮できる仮動的実験システムを開発した。鉄筋コンクリート(RC)構造物の地震応答解析あるいは耐震設計を行う場合、一般に地盤および基礎を考慮した応答解析や応答実験等はほとんど行われていない。また、地震力は構造物の軸方向に対してある角度をもって入力されるのが一般的で、構造物にはいわゆる2方向の地震力が作用することになる。本研究は、リアルタイムで2方向入力を受けるRC構造物の地震時応答性状を地盤および下部構造をも考慮して実験および解析的に明らかにすることである。地盤および下部構造物の影響を考慮した、RC構造物全体の弾塑性応答解析から、橋脚躯体の降状震度が大きい時、等価固有周期の長い時、また、地盤が柔らかい時は基礎による変位が大きくなり、その分橋脚躯体にかかる地震力は小さくなることが明らかとなった。RC模型供試体を用いた2方向入力仮動的実験手法を開発して、RC構造物の2方向応答性状を実験的に求めた。その結果、2方向入力を受けるRC部材の弾塑性応答性状は、弾性域では、1方向入力を受ける場合とほぼ等しい挙動を示したが、塑性域から終局域では、2方向入力による部材の耐荷力は1方向の場合に比べて20%程度減少することが明らかとなった。これは、2方向入力による相互作用によって、部材の応答性状に大きな影響を及ぼすからである。
運動機能発現の機構に関する実験形態学的研究

運動遂行の際、大脳皮質からの指令とそれを修飾する下行性の系が協調して働いている。後者のあるものは直接運動ニューロンに情報を伝える。脊髄の運動ニューロンに単シナプス性に連絡する網様体脊髄路と前庭神経脊髄路について、ネコを用いて入力様式、二経路の収束の有無、神経伝達物質の同定などの観察を行なった。頚部伸筋(二腹筋と錯綜筋)の運動ニューロンをHRPを注入することによって逆行性に標識すると共に、起始核(巨大細胞性と大細胞性網様核、および前庭神経下核)に順行性の標識物質であるWGA-HRPを注入するか、カイニン酸を注入して変性させるかして、運動ニューロンに至る軸索終末を可視化した。神経伝達物質については超薄切片作成後、切片上で金コロイド法によって抗グリシン血清に対する反応様式を電子顕微鏡下に観察した。網様体脊髄路の投射線維終末は、球形のシナプス小胞を持ち対称型のシナプスを作るS型と、多形性シナプス小胞を持ち、対称型のシナプスを作るP型に大別できた。同定可能なもののうち、約40%がS型で、約50%がP型であった。逆行性に標識された運動ニューロンの細胞体や樹状突起に直接シナプスするものもあった。免疫組識化学反応を行なうと、反応陽性のものはP型の軸索終末のみで、反応陰性のものにはS型とP型があった。前庭神経下核からの投射線維終末も同じように運動神経ニューロンに直接シナプスしていた。同一動物の網様体からの変性と、前庭神経下核からのWGA-HRP標識をみると、単一の運動ニューロンの細胞体や樹状突起上に、二系統の入力が収束する像が得られた。以上から、(1)延髄網様体と前庭神経下核から頚髄伸筋運動ニューロンに直接入力がある、(2)網様体からの投射ニューロンにはグリシン作動性のものがある、(3)二系統の入力が単一運動ニューロンに収束することがあるなどが結論できた。