hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
フォトニック結晶によるテラヘルツ・タグの創製

(1)タグの周波数幅Δfの最小化:本年度の検討に引き続き、Δfを最小にするためのフォトニック結晶の構造について考察する。(2)情報ユニットの最小化:どれくらいの周期(結晶のサイズ)があれば、所望の吸収特性を有するタグとして動作可能かについて、主として実験的なアプローチにより解明を行う。その際、タグリーダにおける、テラヘルツ波のビームサイズの影響についても調べる。(3)タグ積層数の最大化:タグを何枚まで積層して情報を読み出すことができるかについての考察を行うとともに、実際に積層構造のタグを試作し、3次元タグとしての動作を実証する。また、f-θレンズとガルバノスキャナと組み合わせて高速スキャンを行い、タグの読み出し時間の短縮化手法について検討する。以上の、理論的、実験的検討を通して、従来のテラヘルツタグを2桁以上超える記録密度のタグを実現する。工学当初、Si基板上の空孔の大きさ、周期、構造等を変えることにより、所望の吸収周波数を有するフォトニック結晶構造を設計し、それをファウンドリーで試作した後、評価を行うという一連のプロセスを複数回行い、タグとしての性能を改善する予定であった。1回目の試作で、タグとしての所期の動作確認に成功し、吸収特性についても設計値とよく一致した。しかしながら、一部の構造のタグ(Q値の高いもの)において、設計通りに動作しないものがあり、その原因の理論的・実験的究明に多くの時間を費やした。そのため、今年度に行う予定であった2回目以降の試作を取りやめ、次年度に行うこととしたことから、上記の繰越額が生じた。上述のとおり、本年度行えなかった試作を、次年度に行うことから、それに伴う経費はそのまま使用する。もともと次年度に行う予定であったタグの試作と、タグの評価のためのシステム(タグリーダ)の開発は、当初予算の枠内で実施する。
地下水の水位にみられる長周期変動の発生機構の解明

静岡県伊東市にある井戸において、地下水位の連続観測を行った。観測期間中に、十分から数時間という長い周期のさまざまな水位変動が捉えられた。1、13分周期の変動この井戸においてはしばしば13分程度の周期の変動が観測される。この井戸は海に近く、またこの周期変動が台風の通過等の荒天に伴って観測されることが多いことから、海水の水位変動との関連が示唆される。しかし潮位の記録にはこの周期の変動は認めらず、潮位の変化を直接反映したものではない。この井戸から約500m離れた別の井戸でもやはり同じ周期の変動が観測され、この二つの井戸の水位変動の位相に今のところ有意な差は認められていない。今後、分解能を上げて精度良く観測を行い、より詳細な解析を行いたい。また観測を面的に広げることによって、この変動の発生のメカニズムを解明したい。2、近傍の群発地震活動に伴う変動1996年10月に伊東市発生した群発地震活動に伴って、この井戸で顕著な水位変動が観測された。地震活動の活発化に伴って水位は低下し、その後活動の静穏化に伴って水位は回復した。特に、地震活動が活発であった10月16日から18日にかけて数時間周期の水位変動が観測されたが、この変動と地震活動の消長との間に良い相関がみられた。地震活動が活発化するとともに水位が低下し、活動が弱まると水位が上昇しており、地震活動の消長に伴って地殻の膨張、収縮が起こっていることを示唆していると考えられ非常に興味深い。
ニューロメジンＵ関連ペプチドの脳内報酬系に関わる食欲制御機構の解明

最近、エネルギー恒常性調節機構に加え「脳内報酬系」も摂食行動の調節に重要である事が報告されている。本研究ではニューロメジンU関連ペプチド(ニューロメジンU;NMU、ニューロメジンS;NMS)の新たな生理機能を「脳内報酬系」に焦点を当てて追究を行なった。まず、野生型C57BL/6J雄マウスの側脳室内にNMUを投与後2時間における視床下部のモノアミン動態(カテコールアミン系、セロトニン系)ならびにアミノ酸動態(抑制系、興奮系)の解析では、NMU投与群においては、生理食塩水投与群に比べて視床下部ドーパミン代謝回転(DOPAC/DA)が有意に亢進しており、視床下部セロトニン経路に関してはその代謝産物である5-HIAAレベルが有意に増加している事が判明した。次にNMU遺伝子欠損マウスを用いて、コカイン投与による嗜好性ならびにコカイン投与時の脳内側坐核におけるドーパミンならびにセロトニンの動態をマイクロダイアライシス法を用いて解析したところ、NMU欠損マウスでは、コントロールマウスに比べてコカインに対する嗜好性が高い傾向があるものの有意差は認めず、コカイン投与時の側坐核におけるドーパミン濃度も低い傾向があるものの有意差は認めず、セロトニン動態に関しても有意差は認めなかった。つまり、野生型マウスへのNMU脳室内投与により視床下部におけるモノアミン動態の変動の知見が得られた一方で、NMU遺伝子欠損マウスにおけるコカイン投与による依存症モデルを用いた解析では脳内報酬系への有意な表現型は確認できなかった。以上の結果から、現在、NMUならびにNMS両遺伝子欠損マウスを作製し、これらのマウスを用いてコカイン投与による依存症モデルでの行動解析ならびにモノアミン動態、特にドーパミン系、セロトニン系に着目して解析を行っている。さらに併行して、脳内におけるNMU関連ペプチドの新たな生理機能に関して他の脳高次機能を含む多方面から解析を進めているところである。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究テーマを開始し該当年度は初年度であり緒に就いたばかりである為、公に発表する事ができた成果はまだ認められなかった。該当年度は主に、一連のニューロメジンU関連ペプチド(ニューロメジンU、ニューロメジンS、ペプチドX)の中枢性作用に関して、野生型マウスを用いた解析を中心に行なった。その結果、ニューロメジンU関連ペプチドの野生型マウスへの脳室内投与にて、ストレス反応や摂食抑制作用を惹起する事を確認し、さらにこれらのペプチドの中枢性投与により、視床下部における「ノルアドレナリン量の低下」ならびに「ドーパミン代謝回転の増加」が認められた。以上の知見から一連のニューロメジンU関連ペプチドが脳内報酬系に関与している可能性が強く示唆され、来年度からの遺伝子欠損マウスを用いた解析へ繋がる結果を得る事ができた。昨年度は、一連のニューロメジンU関連ペプチド(ニューロメジンU、ニューロメジンS、ペプチドX)の中枢性作用に関して、野生型マウスを用いた解析を主に行なった。その結果、ニューロメジンU関連ペプチドの野生型マウスへの脳室内投与にて、ストレス反応や摂食抑制作用を惹起する事を確認し、さらにこれらのペプチドの中枢性投与により、視床下部におけるノルアドレナリン量の低下ならびにドーパミン代謝回転の増加が認められた。

以上の知見から一連のニューロメジンU関連ペプチドが脳内報酬系に関与している可能性が強く示唆され、来年度からの上記ペプチドの欠損マウスを用いた解析への基盤となる結果を得る事が出来た。これまでの野生型マウスを用いた解析により、一連のニューロメジンU関連ペプチドが脳内報酬系に関与する可能性が示唆された。得られた知見をもとに、今後はこれらのペプチドの遺伝子欠損マウスを用いて、各種依存症モデル(コカイン依存症モデルや食事性依存症モデル)における詳細な行動解析ならびに脳内報酬系に関与する分子やニューロトランスミッター等の動態について解析し、ニューロメジンU関連ペプチドの脳内報酬系に関わる食欲抑制機構について明らかにして行く予定である。これらの研究を遂行するにあたり、各種遺伝子欠損マウスは順調に増えてきており、ビデオ行動解析装置に関しても既にセットアップが終了しているので、スムーズにこれらのステップに進む事が出来ると思われる。
オートファジーを誘導する分子RNF5を標的とした乳癌に対する化学療法抵抗性の克服

乳癌には、化学療法に抵抗を示す予後不良なものが存在し、その治療成績の向上が喫緊の課題となっている。最近、乳癌の増殖に、タンパク分解酵素であるユビキチンリガーゼのひとつ「RNF5」が関与していることが報告された。私たちはこれまでに、乳癌組織におけるRNF5遺伝子の発現低下が、乳癌の予後不良因子であることを見出した。これらの知見を踏まえ、RNF5が、「化学療法による“小胞体ストレス"下では、オートファジーを誘導し、乳癌の増殖を抑制する」ことに着目し、RNF5の発現を亢進させることにより、乳癌に対する化学療法抵抗性を克服できないかと考えた。本研究の目的は、ユビキチンリガーゼRNF5を治療標的とした乳癌に対する新規分子標的治療薬の開発である。検証のための研究として当施設で長期フォローアップ(中央値10年)を行った、異なる乳癌症例セットを用いて、RNF5遺伝子のmRNA発現と予後との検討を行った結果、RNF5の低発現が予後不良因子であることを確認した。乳癌細胞株に対するRNF5遺伝子強制発現およびRNF5遺伝子ノックダウンの影響に関する研究の進捗が遅れている。乳癌細胞株に対するRNF5遺伝子強制発現およびRNF5遺伝子ノックダウンの影響に関する研究を計画に沿って進めていく。
腸管粘膜上皮層バリア機能を制御するアミノ酸の同定および作用機序の解明

まず最長観察期間12年間の長期インフリキシマブ継続投与中のクローン病患者74名を対象に、後ろ向きコホート研究を行った。1日600kcal以上の経腸栄養療法併用が、長期寛解維持に有用な因子であることを解明した。次にin vitroで、経腸栄養剤に含まれるアミノ酸が大腸粘膜上皮細胞層のバリア機能へ影響するかを調べた。TNFα刺激によりバリア機能が低下した上皮細胞層において、それぞれグリシンとグルタミン添加により、バリア機能が有意に回復することを見出した。PCR arrayの結果、グリシン添加群ではclaudin-14遺伝子の発現が有意に上昇しており、バリア機能の回復に関与するものと推定された。消化管粘膜上皮のバリア機能は重要な生理的機能であり、クローン病患者ではバリア機能が低下していると言われている。我々は、抗TNFα抗体製剤で加療中のクローン病患者では、アミノ酸含有経腸栄養製併用により臨床効果が高まることを見いだした。そこで、本研究では腸管粘膜上皮バリア機能を増強させるアミノ酸の同定・作用機序の解明を行った。まず、無血清化したT84大腸上皮細胞層の基底膜側からIL-6あるいはIL-10を添加しバリア機能の変化を観察した。IL-6添加により、TER (transepithelial electrical resistance)はcontrol(100%)と比較して優位に低下した(87±0.6%)。一方、IL-10添加によりTERは増加した(124±5.6%)。IL-6添加により、選択的にclaudin-2蛋白量が増加していた。次に、上記の系に対して、20種類のアミノ酸(pH=7.4、2mM)を個々に添加しTERの変化を観察した。その結果、グリシンおよびグルタミン添加時にのみ、TER値は、サイトカイン無添加群でそれぞれ118±0.1%, 116±2.6%、IL-6添加群で100±1.8%, 97±2.1%、IL-10添加群で150±10%, 140±7.5%と、いずれの群においても有意に増加した。また、グリシンおよびグルタミン添加によりいずれの群においても選択的にclaudin-2蛋白量が有意に抑制されていた。以上より、大腸上皮細胞層において、炎症性サイトカインはclaudin-2蛋白を選択的にup-regulateしTERを抑制しバリア機能を低下させるが、グリシンおよびグルタミンは、逆にclaudin-2蛋白を選択的にdown-regulateしTERを上昇させバリア機能保持に働くことが明らかになった。本年度は主として臨床的検討を行った。アミノ酸を含有する経腸栄養療法の投与が、クローン病患者の長期的な寛解維持に意味があるかどうかを明らかにする臨床的検討を行った。具体的にはインフリキシマブにより寛解導入に成功したクローン病患者において、寛解維持の成否と、経腸栄養療法の有無ならびに臨床的特徴について検討した。当院で2002年から2010年にインフリキシマブで寛解導入に成功し、かつ6か月以上の寛解維持ができたクローン病症例を対象とした。寛解維持群と二次無効群を2014年8月まで追跡調査して解析を行い、成分栄養療法の寛解維持への寄与、各群の臨床的特徴を明らかにした。最終的な対象症例は74症例、平均観察期間40.8カ月(5143カ月)、男性/女性=56例/18例、平均発症年齢23.7歳(1353歳)、IFX使用までの平均罹病期間91.4カ月(9290カ月)、IFX平均開始年齢31.2歳(1860歳)、小腸型/大腸型/小腸大腸型=9名/14名/51名であった。寛解維持群は19名、二次無効群は55名であった。寛解維持群では、二次無効群に比し、1日600kcal以上の経腸栄養療法併用率が有意に高かった(p=0.0229,Log-rank test)。経腸栄養療法以外には寛解維持成功因子は見いだせなかった。従って、この12年間のコホート研究で、アミノ酸を含有する経腸栄養療法(1日600kcal以上)の併用が、インフリキシマブ投与クローン病患者の寛解維持に有効であることが示された。前年度のin vitroの結果、および本年度の臨床的結果から、アミノ酸を含有する経腸栄養療法がバリア機能を強化することにより有意に寛解維持成功率が高くなったとの仮説を設定し、現在、特定のアミノ酸が腸管上皮tight junctionの遺伝子発現に与える影響を明らかにする実験を進めている。既存治療で効果不十分なクローン病に対しては、世界的に抗TNF-α療法が主流であるが、症例により効果減弱を来すことが問題になっている。我々は平成2526年度に、臨床的に経腸栄養療法の併用が、短期的にも長期的にも抗TNFα療法の効果減弱予防効果を持つことを明らかにした。そこで、平成27年度は、上記のメカニズムをin vitroで裏付けるためにT84大腸粘膜上皮細胞を用い、経腸栄養剤含有アミノ酸が上皮細胞層のバリア機能を強化するか検討を行った。我々は既にIL-6刺激により低下した大腸粘膜上皮細胞層のバリア機能が、glycineあるいはglutamine添加により回復し、valine添加では影響しないことを見出している。そこで今回、10 ng/mlのTNFα刺激によりバリア機能が低下したT84大腸粘膜上皮細胞層にglycineとglutamineをそれぞれ添加したところ、有意にバリア機能が回復することを見出した。

Valine添加ではバリア機能に影響を与えなかった。上記の機序解明のために、glycineとglutamine添加がそれぞれtight junction構成蛋白遺伝子発現に影響を与えるかPCR arrayにより検討した。T84大腸粘膜上皮細胞に対する10 ng/mlのTNF-α刺激により、ICAM-1とICAM-2の遺伝子発現が有意に増強され、既報の如く、これがバリア機能の低下原因の一つと推定された。Glycineあるいはglutamineの添加は、ICAM-1とICAM-2の遺伝子発現には影響を与えなかったが、glutamine添加群では、claudin-14遺伝子の発現が有意に上昇しており、バリア機能の維持に寄与するものと推定された。しかし、glycine添加ではtight junction構成蛋白の遺伝子発現に有意な変化は認められなかった。そこで、アミノ酸の主たる作用機序はtight junction構成蛋白の遺伝子発現制御ではなく、蛋白の分解制御やリン酸化制御にあることが示唆された。まず最長観察期間12年間の長期インフリキシマブ継続投与中のクローン病患者74名を対象に、後ろ向きコホート研究を行った。1日600kcal以上の経腸栄養療法併用が、長期寛解維持に有用な因子であることを解明した。次にin vitroで、経腸栄養剤に含まれるアミノ酸が大腸粘膜上皮細胞層のバリア機能へ影響するかを調べた。TNFα刺激によりバリア機能が低下した上皮細胞層において、それぞれグリシンとグルタミン添加により、バリア機能が有意に回復することを見出した。PCR arrayの結果、グリシン添加群ではclaudin-14遺伝子の発現が有意に上昇しており、バリア機能の回復に関与するものと推定された。平成26年度は、千葉大学環境健康フィールド科学センター・千葉大学柏の葉診療所長との兼務となり、診療所開所の準備作業に多くの時間を費やす必要があったため。消化器内科特定のアミノ酸が、腸管粘膜上皮バリア機能を強化するメカニズムを明らかにするために、in vitroでT84腸管粘膜上皮のtight junction関連蛋白の遺伝子発現していないか、PCR arrayを用いて網羅的に解析する。また、クローン病患者の病変部位の腸管粘膜から生検を行い、腸管粘膜上皮のtight junction関連蛋白の遺伝子発現を明らかにするために、PCR arrayを用いて健常部と比較する。ヒトでは24種類のclaudin遺伝子を有することが分かっており、バリア機能を正に制御するもの、負に制御するものとがある。Claudin遺伝子発現の変化と、疾患活動性、内視鏡的活動性、経腸栄養療法の施行の有無という要素に相関が認められないか多変量解析を行う。おおむね、初年度の研究の目的は達成された。アミノ酸が腸管粘膜上皮バリア機能に与える作用のメカニズムを明らかにするために、腸管粘膜上皮を用いてアミノ酸添加によるmRNAレベルの発現変化の評価作業を行う必要があるため。該当アミノ酸がtight junction関連蛋白の遺伝子発現に対する影響をPCR arrayを用いて網羅的に解析し、該当アミノ酸がバリア機能に与える作用を、遺伝子発現の観点から明らかにし、作用pathwayを明らかにする。
尿素を用いた光感受性試薬の開発－エルビウムヤグレーザー併用による歯周治療の確立

近年、歯周病治療において光感受性物質を応用する交戦力学療法やレーザーの応用が注目されている。今回、歯周病治療における有用性の高いEr:YAGレーザーの応用法の獲得を目的とし、尿素含有光感受性試薬を調製し、Er:YAGレーザー照射併用の歯周病原性細菌に対する殺菌効果の評価を行った。その結果、5%,10%尿素濃度試薬においてレーザー照射時間に依存してP.gingivalisの細菌数が減少した。またエネルギー密度が上昇するほどLPS除去率は高くなる傾向にあったが、レーザー単独群と有意差は認められなかった。以上より尿素含有光感受性試薬・Er:YAGレーザー併用による歯周治療の新たな可能性が示唆された。昨年度は尿素含有光感受性試薬を調製し、Er:YAGレーザー併用による歯石除去効率を評価した。今年度は調製した試薬を用い、光感受性試薬・Er:YAGレーザー照射併用の歯周病原性細菌に対する殺菌効果の評価を行った。P.gingivalisおよびA.actinomycetemcomitans菌液に5%,10%尿素濃度試薬をそれぞれ滴下後、Er:YAGレーザー照射を用いて照射(15S, 30S, 60S)を行い、嫌気培養後のコロニー形成数計測により殺菌効果を評価した。その結果、P.gingivalisにおいては照射時間に依存して細菌数が減少した。一方A.actinomycetemcomitansにおいては照射時間が長くなるにつれて細菌数の減少がわずかに認められた程度であった。またいずれの菌についても尿素濃度5%, 10%で違いで細菌数の有意差は認められなかった。さらに、光感受性試薬・Er:YAGレーザー照射併用によるLPS除去率の評価を行った。カバーグラスにLPS,調整試薬滴下後レーザー照射(15S, 30S, 60S)を行い、照射後のLPS量(リムルステスト)よりLPSの除去率について評価した結果、エネルギー密度が上昇するほどLPS除去率は高くなる傾向にあったが、レーザー単独群と有意差は認められなかった。また現在aPDTの一つとして注目されている赤色LED・トルイジンブルー併用による殺菌効果と比較検討した結果、赤色LED・トルイジンブルーのほうが有意にLPS除去率が高かった。歯周病は糖尿病合併症であり、慢性炎症としての歯周病をコントロールすることで、糖尿病のコントロール状態が改善するということが知られている。近年、歯周治療において光感受性物質を応用する光線力学療法やレーザーの応用が注目されている。しかしながらそれらの手技や臨床効果は確立しておらず、補助的手段にすぎないのが現状である。故に歯周病の改善に貢献しうる、有用性の高いEr:YAGレーザーの応用法の獲得を目的とし、尿素を光感受性物質として含有する光感受性試薬の開発を目指す。今年度は尿素含有光感受性試薬の調製および歯石除去効果の評価を行った。尿素は無色であるため、視認性向上のために、従来のう蝕検知液の成分であるアシッドレッド、aPDTの光感受性薬剤の成分として既に応用されているメチレンブルーを用い比較検討した。また、リン酸カルシウムを主成分とする多孔質の石灰化組織である歯石を選択的に染色する溶媒の粘度を探索、調整した。調製試薬を用い、Er:YAGレーザー照射による歯石除去効率を視覚的に評価した(歯石付着ヒト抜去歯使用)。尿素濃度10.1%21%35%410%溶液およびコントロール群(尿素0%)で比較検討した結果、1,2はコントロールと差が認められなかった。5%と10%ではコントロール群よりも効率的に歯石除去が可能であったが、10%では尿素の溶解性の低下が認められた。また、アシッドレッドおよびメチレンブルーの違いによる除去効率の差は認められなかった。さらに、歯石の効率的な除去が認められた5,10%尿素溶液について、Er:YAGレーザーの照射エネルギーを変えた場合の歯石除去後の歯根表面構造変化についてSEMを用いて分析した結果、いずれにおいても歯根表面の構造欠陥は認められなかった。尿素含有光感受性試薬の調整および実験材料の収集に当初の予定よりも時間がかかった。今年度は歯石を有するヒト抜去歯を用い、尿素含有光感受性試薬の調製し、調整試薬・Er:YAGレーザー併用による歯石除去効率を視覚的に評価し、さらにSEMにて歯石除去後の歯根表面構造変化分析を行った。今後、至適な調整試薬の濃度、Er:YAGレーザーの照射条件を策定した後、Er:YAGレーザーと調製試薬併用の歯周病原性細菌に対する殺菌効果の評価を行う。

P.gingivalisおよびA.actinomycetemcomitansに対し調製した光感受性試薬併用によるEr:YAGレーザー照射を行い、嫌気培養後のコロニー形成数計測により殺菌効果を評価する。さらに、LPSに対し同様に照射を行い、リムルステストによる照射後のLPS量測定によりLPSの除去率について評価する。また、また、現在aPDTの一つとして注目されつつある赤色LEDと光感受性ジェル(トルイジンブルー)併用による殺菌効果と比較検討する。抗菌光線力学療法(antimicrobial hotodynamic theraphy:aPDT)では、歯周病原性細菌に光感受性物質を結合させ、特定の波長の光照射により活性酸素を発生させて選択的に細菌を破壊させる。次年度は、Er:YAGレーザーと調製試薬併用の歯周病原性細菌に対する殺菌効果を評価することを目的とし、必要な試薬、材料を購入する。
難治性喘息の気道炎症病態の解析

難治性喘息では、好酸球性炎症だけでなく、好中球性炎症が重要な役割を果たすことが知られている。我々は以前、経口ステロイドに依存性の難治性喘息では、誘発喀痰中に好中球数が増加し、これが好酸球集積と相関性を示すことを報告した。さらに、好中球と好酸球の共存下にIL-8で好中球基底膜通過反応を誘導すると,好酸球刺激因子がなくても,好酸球の基底膜通過遊走反応が誘導され、好中球が好酸球の組織集積を能動的に調節しうることを報告した。本研究においては、さらに難治性喘息における気道炎症病態の解析をすすめ、以下の知見を得た。(1)重症喘息患者の喀痰ではIL-8が選択的に発現亢進している(2)呼気凝縮液では、重症またはコントロール不良例でTXB2またはLTB4の発現亢進が見られる(3)IFN群は血管内皮細胞における接着因子の発現亢進を介して好酸球の接着能を亢進させる(4)代表的吸入β2刺激薬であるsalbutamolは喘息患者単核球からのIL-13産生を亢進させ,IFN-γ産生を抑制する(5)IP-10などのCXCR3 ligandsは直接に好酸球の接着反応及び活性酸素産生を亢進させる。これらの事象が、重症喘息の病態形成において重要な役割を果たすと考えられた。重症の難治性喘息の基礎病態である慢性気道炎症のプロファイルに関連して、誘発喀痰と呼気濃縮液、ならびにin vitroでの炎症細胞の組織浸潤・活性化実験システムを連動的に用い、下記の知見を得た。まず誘発喀痰をもちいた研究において、重症喘息患者では気道における好中球遊走性因子の代表であるCXCケモカインのうち、IL-8産生のみが有意に亢進していることが確認された。一方で、他のCXCケモカインであるENA-78、GRO-αは増加していなかった。さらに、好酸球遊走活性を有するEotaxin産生は有意に抑制されていた。重症喘息患者における喘息治療・管理向上のためには、従前の吸入ステロイドに加え、IL-8あるいは好中球を標的とした薬物の併用療法等も考慮すべきであることが示唆される。呼気凝縮液を用いた基礎的検討において、喘息の有無にかかわらず、これらのケモカインは十分に定量ができなかった。一方でTXB2,ロイコトリエンなどの脂質メデイエーターは検出できることが確認でき、次年度以降に重症度別の検討を行う予定である。一方でin vitroでの炎症細胞の組織浸潤システムをもちいての検討で、重症喘息気道組織での増加が指摘されているIFN群をもちいて、他の内皮細胞活性化因子であるTNF-αの共存下で血管内皮細胞をIFN群で刺激すると、かかる血管内皮細胞においてはヒト好酸球の接着誘導能力が有意に増強することを観察した。かかる好酸球接着の増強には主として血管内皮細胞のVCAM-1あるいはICAM-1などの免疫グロブリンスーパーファミリイに属する接着分子群の発現増強が寄与することが確認された。これは重症喘息でみられる好酸球組織浸潤機構のメカニズムのひとつであることが想定された。喘息の基礎病態である気道炎症のプロファイルに関連し、誘発喀痰ならびにin vitroでの炎症細胞の組織浸潤・活性化実験システムを連動的に用い、下記の知見を得た。まず誘発喀痰をもちいた研究において、重症喘息患者では吸入ステロイド療法が十分に奏功していないことから、その機序を明らかにする目的において、吸入ステロイド薬を中止可能な喘息患者、すなわち治療中止を希望する長期寛解喘息患者においてその中止前後での気道炎症病態を検討した。その結果、吸入ステロイド中止前後で誘発喀痰中のIL-8量、TNF-α量、好中球比率は不変であった。

一方で代表的Th2サイトカインであるIL-4量は吸入ステロイド中止にともない増加し、喀痰中好酸球の増加と連動した。この成績は、吸入ステロイドは基本的にTh2サイトカインによる気道炎症を沈静しているが、自然免疫系炎症分子、そして好中球炎症の制御に成功していないことを示唆する。またこの情報は重症喘息喀痰でIL-8,TNF-α量、好中球が増加していることを見出した我々の検討成績と符合しており、治療反応性の観点から喘息難治化におけるこれらの寄与を示す。次に治療薬が喘息難治化に寄与しえるかを検討する目的で、過剰使用が喘息死などと連関することが指摘されている吸入β2刺激薬の、炎症性サイトカイン産生におよぼす効果を調べた。代表的吸入β2刺激薬であるsalbutamolは、喘息患者の無刺激あるいはアレルゲン刺激単核球からのIL-13を増強し、IFN-γ産生は減弱することを観察した。とのことは過剰なβ2刺激薬使用が喘息気道でのTh1/Th2インバランスを助長し、気道炎症を難治化させる可能性を示唆する。呼気凝縮液での臨床的検討についてはTXB2,ロイコトリエンなどの脂質メデイエーターは検出できることを確認しており、次年度に病態・重症度別の検討を行う。喘息の基礎病態である気道炎症のプロファイルに関連して、呼気凝縮液及びin vitroでの炎症細胞の組織浸潤・活性化実験システムを用いて、下記の知見を得た。(1)呼気凝縮液での検討:平成20年度に、好中球遊走因子であるCXCケモカイン(IL-8,GRO-α,ENA78)の中で、IL-8が重症喘息患者の喀痰上清で選択的に発現亢進していることを報告した。呼気凝縮液ではサイトカインやケモカインは測定できなかったが、TXB2やLTB4など脂質メディエータは検出できることを確認しており、本年度は重症度による発現の差異について検討した。重症喘息での呼気凝縮液では、TXB2の発現が亢進していた。またコントロール不良群においてTXB2及びLTB4の発現が亢進していた。従って、TXB2やLTB4は、重症喘息またはコントロール不良喘息における有用なマーカーとなる可能性がある。(2) CXCR3 ligandsの好酸球に対する直接効果:重症喘息患者では、Th1サイトカインであるIFN-γの発現が亢進しており、Th1細胞の遊走因子であるCXCケモカインであるCXCR3 ligands(IP-10,MIG,I-TAC)の発現亢進も推測される。好酸球にはCXCR3が発現しており、IP-10などのCXCR3 ligandsは、好酸球を直接漕性化する可能性が考えられる。本年度はCXCR3 ligandsの好酸球に対する直接効果について検討した。CXCR3 ligandsは、好酸球のICAM-lcoating plateに対する接着反応を有意に亢進させ、またICAM-1存在下で活性酸素産生を有意に亢進させた。気道におけるIP-10などのCXCR3 ligands発現は、ステロイドで抑制されづらい事が知られており、この機序が重症喘息において好酸球性気道炎症が残存する一つの原因である可能性が考えられる。
老化関連遺伝素因が健康長寿に及ぼす影響:老化表現型に関するゲノム疫学研究基盤整備

加齢は多くの病気の最大の発症要因である。本研究は、老化や長寿に関連すると考えられる遺伝子の遺伝素因(多型・変異)が、健康長寿や虚弱性(frailty)、高血圧、糖尿病、動脈硬化症といった生活習慣病に及ぼす影響を明らかにし、疾病の病態解明やゲノム創薬に繋げることを目的としている。本研究では高齢者コホート研究(関西健康長寿研究)を進めた。本研究は100歳、90歳、80歳、70歳の都市部・山間部在住の高齢者計1500名程度を対象に、遺伝素因、血圧やその他の生活習慣病の状態、動脈硬化度、肺機能といった医学的側面、心理学的側面、口腔内衛生状態といった多面的に健康長寿に関わる要因を検討する我が国でも初めての高齢者コホート研究である。22年度にこの研究の倫理審査を申請し、承認され、研究を開始した。都市部として兵庫県伊丹市ならびに第一次産業が盛んな山間部の朝来市の一般住民を対象にコホートを開始し、本年度は主に90歳前後100名以上の調査を行い全年代の登録をほぼ完了した。本研究課題の成果の一つとして健康長寿研究の対象者において、心筋梗塞など冠動脈疾患(CAD)のリスク遺伝子である染色体9p21領域ANRILの遺伝子多型とANRIL遺伝子の発現を解析した。CADのリスクアレルを有するヒトではANRILの発現が低下しており、また頸動脈硬化のある群では有意にANRIL遺伝子発現が低下していたことからCADとの関連メカニズムがわかっていなかったANRIL遺伝子のヒトでの動脈硬化への関与の機序を証明し発表した(Congrains A, et al. Atherosclerosis 2012)。本ANRIL遺伝子は高齢者の虚弱(frailty)への関与も指摘されており本研究は長寿関連遺伝子の遺伝素因が、心血管病の発症・進展と関連している証拠となる知見である。本年度は本研究課題の核となる高齢者コホート研究(関西健康長寿研究)を大阪大学人間科学部、歯学部と連携し開始した。本研究は100歳、90歳、80歳、70歳の都市部・山間部在住の高齢者計1700名程度を対象に、遺伝素因、血圧やその他の生活習慣病の状態、動脈硬化度、肺機能といった医学的側面、生活歴、学歴、家庭環境、性格、認知機能などの心理学的側面、口腔内衛生状態といった多面的に健康長寿に関わる要因を検討する我が国でも初めての高齢者コホート研究である。22年度はこの研究の倫理審査を申請し、承認され、研究を開始した。来年度以降も継続していく。本関西健康長寿研究において、高血圧や糖尿病、脂質異常症といった生活習慣病への長寿関連遺伝子の関与を検討していく予定であるが、本年度はマウスにおいて明らかになった長寿遺伝子klothoの高血圧合併症への関与を調べた。我々がすでに動脈硬化への関与を指摘している一塩基多型rs650439 (Oguro R, et al.Geriat Geront Int 2010)のリスクアレルを有する高血圧患者は将来の脳卒中発症が有意に多い可能性を示した(平成22年日本老年医学会総会)。

このように長寿関連遺伝子の遺伝素因は確かに高血圧など生活習慣病、心血管病の発症・進展と関連している可能性があるため、今後も研究を継続し、さらに複数の遺伝子の関与を明らかにして行く予定である。加齢は多くの病気の最大の発症要因である。本研究は、老化や長寿に関連すると考えられる遺伝子の遺伝素因(多型・変異)が、健康長寿や虚弱性(frailty)、高血圧、糖尿病、動脈硬化症といった生活習慣病に及ぼす影響を明らかにし、疾病の病態解明やゲノム創薬に繋げることを目的としている。本年度は本研究課題の核となる高齢者コホート研究(関西健康長寿研究)を大阪大学人間科学部、歯学部と連携し開始した。本研究は100歳、90歳、80歳、70歳の都市部・山間部在住の高齢者計1700名程度を対象に、遺伝素因、血圧やその他の生活習慣病の状態、動脈硬化度、肺機能といった医学的側面、生活歴、学歴、家庭環境、性格、認知機能などの心理学的側面、口腔内衛生状態といった多面的に健康長寿に関わる要因を検討する我が国でも初めての高齢者コホート研究である。22年度はこの研究の倫理審査を申請し、承認され、研究を開始した。都市部として兵庫県伊丹市ならびに第一次産業が盛んな山間部の朝来市の一般住民を対象にコホートを開始し、平成22年度に70歳前後約500名、本年度は80歳前後約500名の遺伝子採血を含む検診を遂行した。また100歳以上の超高齢者の訪問調査も本年度より開始した。来年度以降も継続していく。本健康長寿研究の対象者において、心筋梗塞など冠動脈疾患(CAD)のリスク遺伝子である染色体9p21領域ANRILの遺伝子多型とANRIL遺伝子の発現を解析した。CADのリスクアレルを有するヒトではANRILの発現が低下しており、また頸動脈硬化のある群では有意にANRIL遺伝子発現が低下していたことからCADとの関連メカニズムがわかっていなかったANRIL遺伝子のヒトでの動脈硬化への関与の機序を証明し発表した(Congrains A, et al.therosloersis 2012)。本ANRIL遺伝子は高齢者の虚弱(frailty)への関与も指摘されており本研究は長寿関連遺伝子の遺伝素因が、心血管病の発症・進展と関連している証拠となる知見である。本年度は本研究課題の核となる高齢者コホート研究(関西健康長寿研究)を進めた。本研究は100歳、90歳、80歳、70歳の都市部・山間部在住の高齢者計1500名程度を対象に、遺伝素因、血圧やその他の生活習慣病の状態、動脈硬化度、肺機能といった医学的側面、心理学的側面、口腔内衛生状態といった多面的に健康長寿に関わる要因を検討する我が国でも初めての高齢者コホート研究である。22年度にこの研究の倫理審査を申請し、承認され、研究を開始した。都市部として兵庫県伊丹市ならびに第一次産業が盛んな山間部の朝来市の一般住民を対象にコホートを開始し、本年度は主に90歳前後100名以上の調査を行い全年代の登録をほぼ完了した。本研究課題の成果の一つとして健康長寿研究の対象者において、心筋梗塞など冠動脈疾患(CAD)のリスク遺伝子である染色体9p21領域ANRILの遺伝子多型とANRIL遺伝子の発現を解析した。
中国における金融政策が株価に与える影響に関する実証研究

この研究では、中国の株価変動に関するデータベースを構築し、そして、中国の金融政策の株価変動に対する効果を分析し、金融政策へのインプリケーションを考察した。また、中国の株式市場の発展と問題点などを考察し、中国の株式市場と世界主要市場との株価連関について分析し、世界金融危機の中国の株価に対する影響を明らかにした。研究成果を和文と英文の論文にまとめ、日本国内外の学会や国際会議などで報告した。アメリカのサブプライムローン問題に端を発した金融危機によって、急激な株安が生じた。株価の急騰・暴落が起きないように、金融政策によるコントロールが必要不可欠である。現在の中国では、資本取引と金利の自由化が、着実かつ慎重に進められている。株式市場の価格形成を明らかにし、株式市場に対する有効な金融政策を示すことが、中国の株式市場の発展だけではなく、世界経済全体の成長にもつながると考えられる。中国の株価変動に関するデータベースを構築し、中国の株価に対する金融政策の影響について専門的に分析かつ体系的に扱う点に、本研究の大きな特徴がある。21年度では、本研究の分析に必要なデータ(株価の関連データ、金融変数、実体経済変数)を収集し、データベースを構築し、基本的なデータ分析を行った。また、金融政策の株価に与える影響について、先行研究をサーベイした。さらに、中国の株式市場の発展と問題点、金融政策などを考察した。さらに、21年度において、世界金融危機の中国株価に対する影響を明らかにするため、金融危機の発生地であるアメリカに出向き、資料収集を行い、現地の研究者と意見交換をした。また、リーマンショックが起こった直後に、中国の株価がどのように動いたのか、金融政策がどのように変更されたのか、中国に出向き、ヒアリング調査と資料収集を行った。本研究の目的は、中国の株式市場の価格形成について分析し、金融政策が株価に影響を及ぼす経路を明らかにし、中国の株式市場に対する有効な金融政策を考察することにある。2010年度は、主として資料収集、実証分析、論文執筆、研究成果の発表の四つの点で研究実績を上げることができた。資料収集については、中国の株式市場と金融政策について、中国に出向き、資料収集を行い、現地の研究者と意見交換をした。実証分析については、中国の株価変動に対する金融政策の影響について考察するため、株価、金融変数、実体経済の変数からなるVARモデルにより分析を行い、金融政策の株価変動に対する効果を考察した。具体的には、株価、預金金利、M2、工業生産の4変数について、共和分検定、グレンジャー因果性テストとインパルス反応の分析を試みた。分析結果から、現在の中国では、株価の変動に対して、金融変数の影響はそれほど大きくないが、預金金利に比べ、M2は比較的に影響していることが分かった。金利の株価に対する影響が小さかったのは、現在の中国では、貨幣供給量が金融政策の主な手段であり、金利がまだ規制されており、完全に市場化されていないためである。また、中国では資本取引が規制されており、海外の投資家は中国の株式市場に自由に投資できない。今後、金利と資本取引を自由化するには、法制度の整備、不良債権の処理などのプロセスを踏まえながら、着実かつ慎重に段階的に進める必要があると思われる。さらに、2010年度において、世界金融危機の中国の株価に対する影響を明らかにするため、中国の株価と世界主要株式市場との連関についても分析を行った。本研究の目的は、中国の株式市場の価格形成について分析し、金融政策が株価に影響を及ぼす経路を明らかにし、分析結果に基づき、中国の株式市場に対する有効な金融政策を考察することにある。本年度において、データ収集の作業を終了し、入手できないデータに対して、それに代わる推計方法を用いた。そして、完成したデータベースで、金融政策が株価や株式収益率に与える影響を、VARモデルなどの方法で分析し、金融成果の効果を分析した。さらに、リーマンショックが起こった直後に、中国の株価がどのように動いたのか、金融政策がどのように変更されたのか、世界金融危機の中国株価に対する影響を明らかにするため、中国に出向き、ヒアリング調査と資料の収集を行い、現地の関係者と意見を交換した。世界金融危機の中国の株価に対する影響、および中国の株価と世界主要株式市場の連関に対する影響、中国の金融政策へのインプリケーションなどを考察した。また、本研究について、日本、中国だけではなく、アメリカ、ヨーロッパ(ノルウェー、イギリス)、韓国などで行われた学会や研究会などで、国内外の研究者・専門家・実務家と意見交換をした。
鉄骨接合部の限界状態の定量化とそれに基づく骨組設計法

本研究計画では、鉄骨接合部を取り巻く設計環境が大きく変わろうとしているこの時期に、鉄骨接合部の限界状態を見直して定量化し、接合部の性能に基づく合理的な骨組設計法を提案することを目的として、平成7年度からの3年計画で研究を行ってきた。平成7年度には既往の研究成果の調査を行い、これを基に平成8年度から9年度に掛けて溶接接合部の高速載荷実験、合成構造接合部の強度と変形性能に関する載荷実験、角形鋼管の脆性破壊実験、および接合部パネルの載荷実験、脆性破壊現象と高力ボルト接合部に関する実験、実大鉄骨造柱梁接合部および合成構造柱梁接合部の2方向載荷実験を行った。さらに、これらの実験結果を基に接合部の強度と変形性能に関するデータベースを整備した。他方、数値解析的アプローチからも研究を行い、平成8年度までに破断要素を組み込んだ骨組モデルの動的解析プログラムを開発し、これを用いて破断を伴う鋼構造骨組の地震応答を追跡し、十分に塑性変形して破断が生じない場合の応答結果と比較しながら、接合部の破断が骨組の変形応答やエネルギー吸収に及ぼす影響を検討した。これらの研究成果を基に、各種接合部のモデリング方法、具体的な各種骨組解析法における取り扱い方などについて検討を重ね、接合部を含む骨組の限界状態設計法、耐震診断法などに関する国内研究集会を平成9年12月9日に開催し、成果を報告すると共に、研究討議を行った。本研究計画は、鉄骨接合部をとりまく設計環境が大きく変わろうとしているこの時期に、鉄骨接合部の限界状態を見直して定量化し、接合部性能に基づく合理的な骨組設計法の提案を目的としている。本年度では、まず各分担者による各担当分野の接合部ないし部材・骨組に関する既往の研究成果の調査を行った。この調査に基づいて、既往の研究で従来の実験試料の乏しい領域をしぼり込み、重点的に実験を計画し、溶接接合部、高力ボルト接合部の実験および骨組実験に着手した。高力ボルト接合部の実験では、部分構造手法の応用を試み、半剛接骨組の部分構造ハイブリッド地震応答実験システムを開発した。静的載荷実験および地震対応実験を通じて、スプリットティー接合およびアングル接合の変形性能と耐力を確認した上で、骨組全体の応答に対する履歴曲線のpinching現象(S字になって痩せること)の影響などを検討した。また、新たに得られた実験結果を加えて、接合部の強度と変形性能に関するデータベースを整備している。一方、数値解析では骨組が機構を形成するために要求される各塑性ヒンジの回転量と全塑性モーメントがばらつくことに起因する必要塑性ヒンジ回転量のばらつきの評価について検討し、鉄骨接合部に要求される塑性回転量との変動を求める解析手法を提案した。なお来年度から溶接接合部、高力ボルト接合部の実験も続行するとともに、脆性破壊現象の定量化のための実験ならびに接合パネルに着目した骨組実験も行い、これらの実験によって得られた知見をどのような解析モデルおよび解析法の枠組の中で骨組解析に反映させるか検討し、最終的に合理的な設計法を提案する予定である。本年度では、昨年度に行った既往研究成果の調査結果に基づいて、重点的に溶接接合部の高速載荷実験、合成構造接合部の強度と変形性能に関する載荷実験、角形鋼管の脆性破壊実験および接合部パネルの載荷実験を行った。溶接接合部の高速載荷実験では、接合部の形状、載荷速度と接合部の温度をパラメータとしており、溶接部の破壊性状に対する歪み速度や試験体が置かれた環境の温度などの影響を検討している。一方、数値解析では脆性破壊を伴う骨組の地震応答性を明らかにするため、破断要素モデルとして代表的なものを想定し、その破断要素モデルが組み込まれた骨組モデルの動的応答を的確に追跡できる数値解析法を構築した。

この数値解析法を用いて、破断を伴う鋼構造骨組の地震応答を追跡し、十分塑性変形し破断が生じない場合の応答と比較しながら、接合部の破断が骨組の変形応答やエネルギー吸収に及ぼす影響を検討している。なお来年度から脆性破壊現象の実験、高力ボルト接合部の実験を続行するとともに、実大鉄骨造梁柱接合部および合成構造梁柱接合部の2方向載荷実験を行う。各種接合部のモデリング方法ならびに具体的な各種骨組解析法における取扱い法などのマニュアルを作成し、接合部を含む骨組の限界状態設計法、耐震診断法などについて総合的にまとめ、国内研究集会を開催して成果を報告する予定である。本研究計画では、鉄骨接合部を取り巻く設計環境が大きく変わろうとしているこの時期に、鉄骨接合部の限界状態を見直して定量化し、接合部の性能に基づく合理的な骨組設計法を提案することを目的として、平成7年度からの3年計画で研究を行ってきた。本年度は、昨年度までに行った既住の研究成果の調査や溶接接合部の高速載荷実験、合成構造接合部の強度と変形性能に関する載荷実験、角形鋼管の脆性破壊実験、および接合部パネルの載荷実験に基づき、脆性破壊現象と高力ボルト接合部に関する実験を引き続いて行った他、実大鉄骨造柱梁接合部および合成構造柱梁接合部の2方向載荷実験を行った。さらに、これらの実験結果を基に接合部の強度と変形性能に関するデータベースを整備した。この目的のために、パソコン1台購入した。他方、数値解析的アプローチからも研究を行い、昨年までに開発した、破断要素を組み込んだ骨組モデルの動的解析プログラムを用いて、破断を伴う綱構造骨組の地震応答を追跡し、十分に塑性変形して破断が生じない場合の応答結果と比較しながら、接合部の破断が骨組の変形応答やエネルギー吸収に及ぼす影響を検討した。これらの研究成果を基に、各種接合部のモデリング方法、具体的な各種骨組解析法における取り扱い方などについて検討を重ね、接合部を含む骨組の限界状態設計法、耐震診断法などに関する国内研究集会を平成9年12月9日に開催し、成果を報告すると共に、研究討議を行った。
Met/HGF受容体シグナル伝達能のON-OFF制御を介した組織再生制御の研究

HGF-Met受容体系は肝臓を含む組織の再生を支えている。Met受容体-Ser985リン酸化は、Met受容体の細胞表面から細胞内への動態制御を調節することによって、HGF依存的Met活性化をOFFに制御することを明らかにした。組織の傷害・無傷性がMet-Ser985をリン酸化・脱リン酸化することによって、Met受容体活性化抑制を介した、過剰な再生の抑制や恒常性維持に関与すると考えられる。傷を受けた組織が回復・再組織化に達した時点でなぜ過剰な増殖に至ることなく再生を完了するかという、再生における素朴な疑問の解明が残されている。私達はHGF-Met系を介した組織再生の研究過程で、無傷の組織ではたとえHGFが結合してもMet受容体はOFFに抑制されていることを見出した。そのメカニズムとして注目しているのがMet受容体juxtamembrane(Jxt)領域である。Jxt領域を欠くMetが天然にも存在するとともに、Jxt領域内Ser985のリン酸化はMet活性化抑制に関与することを明らかにしている。本研究はJxt領域を介したMet受容体抑制(OFF機能)のメカニズムと再生制御におけるJxt領域の生理的意義を明らかにすることを目的としている。本年度は以下の研究成果を得た。1.初代培養肝細胞系でSer985がリン酸化された状態ではHGFに依存したMet受容体のチロシンリン酸化が抑制されることを見出した。無傷の肝臓ではSer985がリン酸化されている一方、CCI4による肝傷害を引き金にSer985の脱リン酸化が引き起こされ、それと相反的にMetチロシンリン酸化が引き起こされた。再生のピークを過ぎると再びSer985はリン酸化されることから、Metチロシンリン酸化(活性化)とSer985リン酸化が概ね相反的な制御を受けることが明らかになった。2. Jxt領域の生化学的・細胞生物学的意義を明らかにするため、(Trk-(+/-)Jxt-Met)キメラMet受容体をTet-ON/OFF制御のもと安定発現する細胞を調製した。3. ΔJxt-Metを発現するノックインマウス作成のため、相同的組換えを起こしたES細胞からキメラマウスを作成し、キメラマウスの交配によりΔJxt-Met発現マウスを作成し、本マウスでのMet遺伝子発現や病理異常の有無を解析した。なぜ過剰な細胞増殖に至ることなく再生を完了するかを理解することは、組織の再生と恒常性、がん進展の理解につながる。HGF-Met系は組織再生を担っているが、無傷の組織ではたとえHGFが結合してもMet受容体はOFFに抑制されている。そのメカニズムとしてMet受容体juxtamembrane(JM)領域とJM領域内にあるMet-Ser985のリン酸化に着目した。本研究はJM領域を介したMet抑制機能と生理的意義を明らかにすることを目的としている。1.Met-Ser985リン酸化の生理的意義を理解するため、初代培養肝細胞系ならびに肝臓の傷害・再生系を用いた。Ser985がリン酸化された状態ではHGFによるMet活性化が抑制され、それと一致してHGFの生物活性は発揮されなかった。無傷の肝臓ではSer985がリン酸化されている一方、CC14による肝傷害を引き金にSer985の脱リン酸化が引き起こされ、それと相反的にMetチロシンリン酸化が引き起こされた。Ser985リン酸化によりなぜHGFによるMet活性化が抑制されるか、その機構を解析している。2.JM領域の生化学的・細胞生物学的意義を明らかにするため、(Trk-(+/-)JM-Met)キメラMet受容体をTet-ON/OFF制御のもと安定発現する細胞を調製した。これら細胞をコラーゲングル内で培養し、NGF刺激によってMet活性化に特徴的な管腔形成が誘導されることを確認した。3.ΔJM-Metノックインマウスは、ホモ欠損の場合、臓器形成不全により胎生致死あるいは生後まもなく死亡した。現在、詳しい解析を進めている。細胞増殖因子は組織再生を担うことから、そのシグナル制御の理解と応用は再生医療の基盤となる。組織再生に関与するシグナル系において、とりわけ、なぜ再生組織が適切な大きさや形をもって再生を完了するかは謎である。HGF-Met系は組織の再生・修復を担っているが、無傷の組織ではHGFのレベルによらずMet受容体はOFFに抑制されている。1. JM領域の生理的役割を調べるために作成した△JM-Metマウスは、臓器形成不全により胎生致死あるいは生後まもなく死亡した。

詳しい解析の結果、JM欠損遺伝子への改変によってMetの遺伝子発現レベルが強く抑制され、HGF-Metシグナルの全身的低下に起因すると考えられた。JM領域欠失Met発現マウス作成のため遺伝子改変用ベクターに工夫が必要であることがわかった。2.初代培養肝細胞において、Met-Ser985のリン酸化を誘導した状態では、HGFによるMet活性化が抑制され、HGFによる増殖促進作用は抑制された。このとき、Ser985がリン酸化されたMetはエンドサイトーシスによって細胞表面から消失することを明らかにした。JX領域Ser985リン酸化はMet受容体の局在を制御することによってHGF依存的Met活性化の制御に関与すると考えられた。3. CCI4による肝傷害によってSer985の脱リン酸化が引き起こされ、それと相反的にMetチロシンリン酸化が増加する一方、再生の完了に向かってSer985リン酸化が上昇した。Met-Ser985制御によるMet局在制御が再生の制御に関与することが示唆された。
モノクローナル抗体作製による口腔偏平上皮癌リンパ節転移細胞表面抗原に関する研究

癌転移のメカニズム解明のために、我々は当科で、ヒト口腔偏平上皮癌株細胞のうち、invivoで特にリンパ節に高頻度で転移するsubline HSC-3LMF4.5を樹立し、この細胞表面に特徴的な抗原性の検索を行い、免疫組織学的、生化学的検討を行った。LMF4.5細胞を免疫原として6種類のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを得た。2回以上クローニングを行いその培養上清によりヒト口腔偏平上皮癌組織や正常口腔粘膜の凍結切片、口腔偏平上皮癌由来培養細胞に対して免疫組織化学的に検索した。その結果、これらの抗体は2グループに分類された。第1のグループの3抗体(8A123A1、10B2)は正常粘膜基底膜側および癌組織に発現している抗原を認識してあり、培養細胞では細胞周囲の突起や細胞内まで染色された。第2のグループの3抗体(4D11、11A8、12E9)は正常粘膜有棘原から角化層、癌組織の角化傾向の強い癌真珠などを認識しており、培養細胞では細胞密度の高い部分が染色され、染色されない細胞も存在した。そこで癌組織非角化部を認識する第1グループの抗原の検索を進め、免疫原細胞を用いた。ウェスタンブロット法により抗体が細胞膜に存在する20K付近のタンパクの2本のバンドを認識していることを確認した。また免疫電顕により正常粘膜基底細胞層を観察したところ、8A12が基底膜と基底細胞間の接着装置であるヘミデスモソームと特異的に反応しており、細胞間接着装置デスモソームとは反応しないことが確認された。本抗体の認識するヘミデスモソーム特異の構成タンパクは、上皮細胞が癌化することによって、極性を失い正常に発現されなくなっていことが示唆された。本抗体の詳細および他の5抗体について検索することにより、ヘミデスモソームの構成だけでなく、細胞の癌化、転移機構、細胞極性など細胞生物学的研究の新しい展開につなげていきたい。高リンパ節転移細胞HSC3LMF4により免疫されたBALB/Cマウスの脾臓と,マウスマエローマNS-1との細胞融合により得られたハイブリドーマの培養上清に対し, EL, SA法にてスクリーニングした結果, LMF4細胞に陽性,正常ヒト線維芽細胞に陰性を示したものが現在までに6種類得られた.これらのハイブリドーマにクローニングを繰り返し,その培養上清を用いて,口腔扁平上皮癌組織,正常に腔粘膜の凍結切片に対しABC法にて組織学的検索を行った.3A1は,扁平上皮癌では癌胞巣辺縁部,正常上皮では基底層に陽性所見を示した.8A12は,癌胞巣周囲から胞巣,細胞質に反応するものまで見られ,正常上皮ではやはり基底層と反応していた4D11は癌真珠周囲との反応が見られたが,正常上皮では陽性を示す部位は見出せなかった.10B2は癌胞巣周囲を環状にとりまいて結合し,また基底膜に結合した.11A8は癌真珠,角化巣から有棘層,基底層に至る粘膜上皮全体に反応を示した.