hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
中国福建省の対外開放と対台湾工作をめぐる中央地方関係の分析

その内容は、中国の中央・地方関係に関する理論的考察、福建省や厦門経済特区に関する議論、中国共産党政権の台湾政策に関する議論である。また、本研究とは関心の所在もアプローチも異なるが、関連性のある最新の研究動向として、平成23年に福田円氏が発表した、1950年代の福建省と台湾工作に関する研究についても検討した。2.文献調査については、アジア経済研究所や香港中文大学中国研究服務センターの資料を活用した。福建省や大陸全体への台湾資本の導入は実態把握が難しいが、台湾側の統計を用いて大陸側統計の不備を補い、年ベースの概況を作成することができた。3.研究成果については3回報告し、先行研究の整理・本研究の仮説・研究手法・現地調査の実施方法などについて、歴史・政治・経済・国際関係の各分野の研究者と意見交換を行った。南島史学会では1970年代末から1980年代前半における福建省の対台湾工作の転換点について地方指導者の言動を中心に報告した。APISA5では1980年代1990年にかけての福建省の対外開放の中で、台湾がどのような存在感を持っていたのかについて発表した。東アジア地域研究会では、台湾工作について中央・地方の各レベルでどのような政策が採られたのかについて議論した。4.三通の意義と実態を確認するため、金門島を含む台湾・福建省の直行便ルート(船舶および航空)を踏査した。あわせて大陸で経済活動を行っている台湾企業を視察し、中台経済関係の実情について考察した。評価の理由は、研究成果の公表が予定通りに進まなかったことにある。その理由は、14月から9月までの中国滞在と、10月以降の公務の集中により、10月翌年3月までに研究報告・論文公表を行うことが困難であった。2英語論文の公刊が出版側(海外)の事情で無期延期となり、年度内に本研究課題に関する論文を公表できなかった。3上海滞在中に3本の論文を発表したが、何れも本研究課題とは関連しなかった。遅れを取り戻す対策として、上記2の英語論文について、既に原稿は完成した状態にあるので、平成25年度の出来るだけ早い時期に公表する。また、エフォートの配分を見直して平成25年度は本研究課題に集中し、これまでの情報収集・踏査の結果に基づく研究成果の公表を急ぐ。なお、研究に関わる調査については比較的順調に進んでいる。1当初想定していた改革開放以前の資料の入手はあまり進んでいないが、歴史的観点から中台関係を分析した文献のうち、最新の研究を利用して補いたい。2現地での長期滞在(および受け入れ先の協力)を生かして政府系シンクタンク・台湾弁公室などに接触できたことは、当初思いつかなかった新たな考察をもたらしてくれた。福建省での聞き取りを生かして、現実に即した理論的考察を進めたい。3中台間の交流が活発化した後の資料はかなり蓄積できたため、これらを整理・分析する作業に取り組みたい。先行研究の整理、中央・地方関係に関する文献の検証、中台双方が発表した統計資料の整理、改革開放期の台湾工作に関する文献の一部入手、国内外での資料収集、研究会・学会・国際シンポジウムでの今年度の成果を報告し意見交換したことなど、概ね順調に予定していた研究目標を達成した。また、日中友好経済懇話会主催の三通(中台間の直接の通航・通郵・通商)視察に同行し、三通の実態と中台経済交流の観察、福建省沿岸部の交通機関整備状況を確認して、研究上、大きな知見を得ることができた。
標的タンパク質との複合体におけるリガンド分子結合部位の高精度特異的検出法の開発

核磁気共鳴法の試料溶液としては100%重水が測定しやすいが、溶媒置換の操作が不可避となり、貴重な試料を損失することがある。本研究では、軽水溶液(95% H2O+5% D2O)として測定可能であり、ターゲットであるレセプター分子と結合するリガンドを、精確に検出できる高感度な測定法の開発を行った。具体的には、飽和移動差スペクトル法およびWater-LOGSY法をベースに、巨大な水シグナルを効率的に消去し、高感度化を目指した。本法の特徴は、13C, 15Nなどの高価な安定同位体を使用せずに、1次元1Hスペクトルより、目的のリガンド分子を短時間で検出できることにある。ここ数年、核磁気共鳴(NMR)法の薬剤スクリーニングへの応用が試みられており、新規なスクリーニング法として注目されている。NMR用の試料溶液としては100% D2Oが測定しやすいが、溶媒置換の操作が不可避となり、貴重な試料を損失することもある。本研究では、軽水溶液(95% H2O+5% D2O)として測定可能であり、ターゲットであるレセプター分子との結合に寄与するリガンドの部位を、精確に特定できる高感度なNMR測定法の開発を目的とする。具体的には、ここ数年主流となっているSaturation Transfer Difference (STD)法およびWater-LOGSY法をベースに、高感度化・高精度化の開発を行う。高価な安定同位体を使用せずに1次元スペクトルにより、リガンド分子中のどの部位が標的レセプター分子との結合に関与するかの情報を得ることを目的とした。水シグナル近傍のリガンドシグナルを検出するため、巨大な水シグナルを効率的に消去するパルステクニックを開発し、実際のパルスシーケンスに取り入れた。現在、WATERGATE W5シーケンスおよびZ-filterを用いて、良好な結果が得られており、H25年度は他の複合体として、オリゴ糖ー加水分解酵素【インベルターゼ】への応用を試み、加水分解過程の観測も行った。平成24ー25年度で検討した効率的な水シグナルの消去テクニックをSTD法に取り入れ、次にタンパク質の選択励起法を検討した。タンパク質の照射位置とリガンドシグナルの感度の関連性に関しては報告例がないため、系統的な研究を行った。本申請課題では、標的タンパク質との結合に寄与するリガンドの部位を特異的に検出できる高感度な核磁気共鳴法の開発を目指している。核磁気共鳴法では試料中の原子核を観測する。本研究では、低分子であるリガンド分子中の特定の水素原子核を観測対象としている。シグナルの形状変化により、標的タンパク質との結合に寄与する水素を選択的に認識できる測定法の汎用性、利便性が高いものと考えるからである。初年度である平成24年度では、以下に示す3種類の複合体について分子間相互作用の解析を行った。1.パーキンソン病の原因遺伝子産物であるalpha-シヌクレイン(タンパク質)とドパミン、グルタチオン(リガンド)概要:alpha-シヌクレインは線維化することが知られているが、ドパミン存在下では線維化が抑制され、オリゴマーすることにより毒性を発現するとの報告がある。本測定法により、alpha-シヌクレインとドパミンは相互作用するものの、グルタチオンは相互作用には関与しないことが判明した。2.スクロースの分解酵素であるインベルターゼ(タンパク質)とN-アセチル-D-グルコサミン(リガンド)概要:インベルターゼはスクロースの誘導体であるN-アセチルスクロサミンを分解しないことより、N-アセチルの部分構造が結合に関与するものと考え、相互作用解析を行っている。3.ヒト血清アルブミン(タンパク質)ーフロセミド(リガンド)概要:薬剤であるフロセミドのどの水素が、ヒト血清アルブミンとの結合に関与するかを解析中である。各シグナルの面積強度の比較より、候補となる水素を特定化した。本研究では、軽水溶液(95% H2O+5% D2O)としても測定可能であり、ターゲットであるレセプター分子との結合に寄与するリガンドの部位を、精確に特定できる高感度なNMR測定法の開発を行った。具体的には、ここ数年主流となっているSaturation Transfer Difference (STD)法およびWater-LOGSY法をベースに、水シグナル選択励起パルスおよび水シグナル消去のためのパルステクニックの検討を行い、水シグナル近傍のリガンドシグナルの検出を可能にした。水シグナル消去の際、WATERGATE W5シーケンス、Z-filter、WETシーケンスの組み合わせにより、効果的に選択的水シグナルの消去を行うことができた。

モデル複合体として、ヒト血清アルブミンーイブプロフェン、ヒト血清アルブミンージフルニサルを使用し、新規パルスの性能を確認した。更に、N-アセチルスクロサミンーインベルターゼ複合体の解析も行った。この複合体では、分子間相互作用が弱く、等温滴定カロリーメトリーでは結合が確認できなかった。1H NMRスペクトルより、スクロースの加水分解がN-アセチルスクロサミンの添加により抑制されたことを確認し、次に、STD法により、低感度ながらも酵素であるインベルターゼに結合に関与するN-アセチルスクロサミンのシグナルを検出した。この結果は、NMR法が他の分析機器と比較しても、レセプター-リガンド結合の検出に有効な方法であることを明確に示した。分析化学「研究実績の概要」(2)において記載した、タンパク質の照射位置とリガンドシグナルの感度の関連性に関しては、当初の研究計画には含まれていなかった項目である。これまでのSTD法の報告例では、タンパク質の照射位置はほとんど0-1 ppm付近のメチル基領域である。これは、リガンド分子中に0-1 ppm付近のシグナルがないことを前提にしている。本研究課題の遂行において、モデル複合体として、ヒト血清アルブミンーイブプロフェンを使用した際、イブプロフェンのメチル基が1.5 ppm付近に観測されることより、ヒト血清アルブミンの選択照射位置を0.0, 4.8, 5.5, 9.0 ppmなど複数個所で測定を行った。この測定結果では、イブプロフェンのシグナルの相対強度が照射位置により、異なることが明らかになった。この原因を解析するために、他のリガンドでも同様の測定を試す必要があった。予想される原因として、次の2つが考えられる。(1)照射位置とシグナルの相対強度の関連ー照射位置に近いリガンドシグナルの相対強度が高くなる。(2)標的レセプター(ヒト血清アルブミン)との結合部位に近いリガンドシグナルの相対強度が高くなる。上記の2点に関しては、現在検討中である。この検討項目は、当初の実験計画にはなかったため、若干の研究遂行の遅れにはなったものの、全体としては概ね研究計画に沿っている。(a)に関して、申請者らは数種類の測定方法を報告してきたが、汎用性を考慮した場合、報告例以外のモデルシステムにも適用を試みた。標的タンパク質として、スクロースの分解酵素であるインベルターゼ、リガンドとしてN-アセチル-D-グルコサミンを用い、Water-LOGSYを適用したところ、共鳴周波数によっては消え残りと思われるシグナルが観測された。シグナルの形状は、結合するリガンドの解釈に影響を与えるため、消え残りを最小限にする必要がある。対策として、ダミーパルスを多くする、および待ち時間を長くすることによる溶液温度の安定化を試みた。これらは積算効率と相反する測定条件となるため、高感度化の観点からは障壁となるが、シグナル形状の安定化を優先すべきと考えた。消え残りシグナルは完全とは言えないが抑制されているので、次に高感度化の検討を行う。(b)に関して、アミロイド線維化することが報告されているalpha-
T細胞マルチファンクション性評価による効果的な癌のTCR改変T細胞療法の開発

1有効な遺伝子導入ベクターの開発とその評価についてi)導入TCRの発現効率が高く、内因性TCRとのミスペアリングの少ないウイルスベクターの作製すでに作製したマウス線維肉腫CMS5の腫瘍抗原である変異型MAPキナーゼを特異的に認識するTCR遺伝子を組み込んだエコトロピックレトロウイルスベクター(TCRベクター)にヒト用ベクターで開発した内在性TCRを特異的に阻害するsiRNAを同時に搭載することにより、導入TCRの発現を高め、内在性TCRとのミスペアリングを防ぐ技術(siTCRベクター)を組み合わせて、新たにマウス用siTCRベクターを作製した。このsiTcRベクターを導入したマウスリンパ球は、TcRベクターを導入したマウスリンパ球に比べ、内在性TCRが抑制されていることを確認した。ii)上記ベクターのin vivo有効性評価TcRベクター、およびsiTCRベクターを導入したマウスリンパ球を、cMs5腫瘍担癌マウスに輸注し、抗腫瘍効果を観察した。siTcRベクター導入リンパ球輸注群で抗腫瘍効果が強い傾向が認められた。また、TCR遺伝子導入リンパ球の抗腫瘍効果を増強する工夫として、輸注前の放射線照射や免疫抑制剤投与によるリンパ球減少性の処置について検討した。放射線照射とシクロフォスファミド投与の前処置を行うと、輸注細胞のin vivoにおける分裂とマルチファンクション性が増強し、抗腫瘍効果が増強することを確認した。TCRベクター、およびsiTCRベクターの安全性を評価するために、これらのベクターを導入したマウスリンパ球を、リンパ球減少性前処置を施行したマウスに輸注し、長期にわたる観察を開始した。経時的にin vivoにおける輸注細胞の生存を、Flow cytometryおよびゲノムDNA中に含まれるレトロウイルスのコピー数で確認したところ、長期にわたる輸注細胞の生存が確認できた。上記の内容は、日本遺伝子治療学会、日本がん免疫学会、日本免疫学会にて発表した。
免疫学的生殖不全におけるNK・NKT細胞,Th1/Th2サイトカインの役割の解明

習慣流産患者の末梢血NK細胞の高活性が染色体正常流産の病因と関連し,抑制型レセプターであるKIR2DL1(CD158a)の発現低下が認められた.孤発例自然流産の脱落膜中NK細胞の解析で,CD158a,CD94,CD244の発現低下とperforin発現亢進が,染色体正常流産で認められた.習慣流産患者の末梢血では,NKT細胞異常はなくT細胞数の減少が見られ,Th2/Tc2優位であった.子宮内膜中のCD3+細胞,CD4+IFN-g+細胞,CD4+TNF-a+細胞比率が低かった.Th1/Th2バランスやNKT細胞比率は,差異を認めなかった.習慣流産の病因として,新たにimmunodystrophism説を提唱した.習慣流産の遺伝学的要因について解析を行った.GST M1 null(OR 2.2),CYP17 A2 allele(OR 2.4),およびIL-6 G allele(OR 0.46)が発症に関与していることを報告し,習慣流産が多遺伝子疾患であることを提唱した.カフェイン代謝酵素CYP1A2^*1F多型と妊娠初期カフェイン摂取量との関連解析によって,高活性型であるAalleleホモ型女性においてのみ,カフェイン摂取量に従い習慣流産リスクが増大すること(100-299mg/day OR 1.9,≧300mg/day OR 5.2)が判明した.習慣流産は,生活環境要因と遺伝学的素因とが関連して発症する生活習慣病であることが初めて明らかになった.CBA/J×DBA/2Jの系にpoly(I:C)を負荷することによって55%に流産を起こす免疫学的生殖不全マウスモデルを開発した.このマウスにintact型免疫グロブリンを投与することによって,流産を抑止できることが判明した.養子移入実験からMφ機能を修飾することで流産抑止効果を発揮することを世界で初めて発見した.習慣流産患者の末梢血NK細胞の高活性が染色体正常流産の病因と関連し,抑制型レセプターであるKIR2DL1(CD158a)の発現低下が認められた.孤発例自然流産の脱落膜中NK細胞の解析で,CD158a,CD94,CD244の発現低下とperforin発現亢進が,染色体正常流産で認められた.習慣流産患者の末梢血では,NKT細胞異常はなくT細胞数の減少が見られ,Th2/Tc2優位であった.子宮内膜中のCD3+細胞,CD4+IFN-g+細胞,CD4+TNF-a+細胞比率が低かった.Th1/Th2バランスやNKT細胞比率は,差異を認めなかった.習慣流産の病因として,新たにimmunodystrophism説を提唱した.習慣流産の遺伝学的要因について解析を行った.GST M1 null(OR 2.2),CYP17 A2 allele(OR 2.4),およびIL-6 G allele(OR 0.46)が発症に関与していることを報告し,習慣流産が多遺伝子疾患であることを提唱した.カフェイン代謝酵素CYP1A2^*1F多型と妊娠初期カフェイン摂取量との関連解析によって,高活性型であるAalleleホモ型女性においてのみ,カフェイン摂取量に従い習慣流産リスクが増大すること(100-299mg/day OR 1.9,≧300mg/day OR 5.2)が判明した.習慣流産は,生活環境要因と遺伝学的素因とが関連して発症する生活習慣病であることが初めて明らかになった.CBA/J×DBA/2Jの系にpoly(I:C)を負荷することによって55%に流産を起こす免疫学的生殖不全マウスモデルを開発した.このマウスにintact型免疫グロブリンを投与することによって,流産を抑止できることが判明した.養子移入実験からMφ機能を修飾することで流産抑止効果を発揮することを世界で初めて発見した.本研究の目的は,正常の生殖機構および免疫学的生殖不全,特に習慣流産における,NK細胞,NKT細胞,Th1/Th2サイトカインバランスの役割を解明することを目的とした.以上のように習慣流産発症機構に,多くの免疫学的異常や遺伝子多型が関与していることが本研究によって明らかにされた.正常の生殖機構および免疫学的生殖不全,特に習慣流産における,NK細胞、NKT細胞,Th1/Th2サイトカインバランスの役割を解明することを目的とした.2.染色体正常流産ないし化学妊娠に至った17人の非妊娠時NK細胞活性/細胞比率は,生産に至った59人に比較し有意に高く,染色体異常流産に至った9人と同レベルであった.非妊娠時の高NK細胞活性(>46%)/高細胞比率(>16.4%)は,その後の妊娠における染色体正常流産ないし化学妊娠の予知因子(相対危険率3.6/4.9)であることを明らかにした(Yamada et al.,Am J Reprod Immunol,2003).免疫学的生殖不全におけるNK細胞等の役割を解明することを目的とした.1.前方視的コホート研究として,自然流産の脱落膜中NK細胞のperforin,CD94,CD161,CD158a,CD158b,CD244発現,CD8陽性

T細胞のperforin発現をフローサイトメトリー法で調べ,同時に絨毛染色体核型分析を行った.染色体正常流産(SANK,n=11),染色体異常流産(SAAK,n=18),人工中絶(IA,n=13)の3群で比較した結果,SANKのNK細胞CD158a(26±15%),CD94(50±26%),CD244(81±25%)陽性比率は,SAAKの各42±20%,71±20%,94±4%,およびIAの各44±22%,81±18%,92±5%に比べて有意に低値だった.逆に,SANKのNK細胞(76%±11%)やT細胞(31±9%)のperforin陽性比率は,SAAK(67±17%,24±9%)およびIA(63±12%,20±8%)と比べて有意に高値だった.CD158a(KIR2DL1)やCD94はNK細胞抑制受容体として,perforinは細胞障害性に関与するため,SANKでは脱落膜中NK細胞活性化や細胞障害性が亢進していると考えられる.本研究によって,SANK発症機構における免疫学的要因を初めて明らかにした(Yamada et al., Mol.Hum.Reprod.,投稿中).2.CBA/J×DBA/2Jの系にpoly(I:C)を負荷することによって55%に流産を起こす免疫学的生殖不全マウスモデルを開発した.このマウスにintact型免疫グロブリンを投与することによって,流産を抑止できることが判明し,特にMφ機能を修飾することで流産抑止効果を発揮することを世界で初めて発見した.
異核金属構造により電子状態を制御したポリオキソメタレートの合成と触媒特性

ポリオキソメタレートは、バナジウム、タングステンのオキソ酸が自己集合的に縮合した分子性の金属酸化物クラスターである。ポリオキソメタレートは骨格内に金属構造を安定化させる無機配位子として作用することが知られている。タングステンを基盤としたポリオキソメタレートでは、コバルト四核構造を有する化合物が、水や温度に応答する可逆な構造変換が可能であることを見出した。バナジウムを基盤としたポリオキソメタレートでは、タングステン系に比べて、構造の多様性に富む。マンガンやコバルトを導入した化合物は可逆な核数制御が可能であり、異なる金属種からなる化合物の合成が可能であることを見出した。ポリオキソメタレートは、バナジウム、タングステン、モリブデンなどのオキソ酸が自己集合的に縮合したアニオン性金属酸化物クラスターである。ポリオキソメタレートは分子性が高く、無機配位子として、多核金属構造を構築することが可能である。本研究では、酸化還元不活性金属と遷移金属を組み合わせた異核金属構造をポリオキソメタレート内に構築することを目的としている。本年度は、多核金属構造の核数制御、構造制御、ポリオキソメタレート配位子の構造制御について研究を進めてきた。本研究では、異核構造を構築すると共に、幾何構造の制御も検討する。四核コバルト構造を有するポリオキソメタレートが、平面四核構造と、立方体四核構造との構造変換が可能であることを見出した。これらの反応は平衡であり、前者が紫色、後者がオレンジ色と異なることから、室温付近で応答するサーモクロミズム材料となることが明らかとなった。これまで、ケイ素とタングステンからなるポリオキソメタレートを用いてきたが、中心金属をリンに変えたポリオキソメタレート配位子を新たに合成し、チタンの四核構造を構築することが可能であることを見出した。さらに、タングステンではなく、バナジウムを基盤としたポリオキソメタレート配位子についても検討した。二種類のフッ素を含有したポリオメタレートの生成過程、構造の関係性について明らかにした。また、ポリオキソメタレート配位子を用いて、マンガンの二核構造、三核構造と構造変換が可能であることを見出した。バナジウムを基盤としたポリオキソメタレート配位子を用いることで、より柔軟な金属核構造を構築可能であることが明らかとなった。ポリオキソメタレートは、バナジウム、タングステン、モリブデンなどの前周期遷移金属のオキソ酸が自己集合的に縮合したアニオン性金属酸化物クラスターである。ポリオキソメタレートは分子性が高く、多核金属構造を安定化させる無機配位子として働くことが出来る。本研究では、異なる金属からなる構造をポリオキソメタレート内に構築することを目的としている。タングステンを基盤としたポリオキソメタレート内に、セリウムの四核構造を導入したポリオキソメタレートを合成し、セリウムとポリオキソメタレート骨格の間の電荷移動を利用することで、光触媒として働くことを見出した。コバルト四核構造では、水や温度に依存して立体的な構造と平面的な構造の間で可逆に構造変換し得ることを見出した。チタンを導入したポリオキソメタレートでは、活性種となるチタンペルオキソ種の単離に成功した。バナジウムを基盤としたポリオキソメタレートは、タングステン系と比べて構造の自由度が大きい。フッ化物イオンを包接したポリオキソメタレートでは、酸の添加により、7核、11核のバナジウム種が段階的に合成されることを見出した。10核、12核、13核のバナジウム種に対して、酸、塩基の添加により、構造変換の関係性を解明した。四面体構造を有するバナジウムと金属カチオンを反応指させることで、マンガン、コバルトなどの核数制御が可能であることを見出した。イットリウムを含むポリオキソメタレートを合成し、カルボニルのシアノシリル化反応で、既報と比較しても最高レベルの活性を示すことが明らかとなった。本年度の計画では、異核構造の合成、多核構造の幾何構造制御を計画していた。幾何構造制御に関して、四核コバルト構造の幾何構造が制御可能であることを見出した。異核構造については、二種類の金属をタングステンを基盤としたポリオキソメタレートに導入することが可能であったが、核数を増やすことが困難であった。そこで、配位子となるポリオキソメタレートに関して知見を広げた。中心金属をケイ素からリンに変えた化合物でチタンの多核構造が構築可能であることを見出した。さらに、バナジウムを基盤としたポリオキソメタレートを用いることで、より柔軟に導入する金属構造を制御可能であることを見出した。バナジウムを基盤としたポリオキソメタレートは発展途上であり、基礎的な化学を解明すると共に、当初の計画より可能性のあるバナジウムを基盤としたポリオキソメタレート配位子の可能性を発見でき、次年度に活かすことができる。

以上のことから、本研究は、おおむね順調に進展しているといえる。無機化学研究計画の段階では、タングステンを基盤としたポリオキソメタレートを配位子として核数、幾何構造、金属の組み合わせを制御することを考えており、取り組んできた。取り組む中で、ポリオキソメタレートの基盤となる金属をタングステンからバナジウムに変更することで、より柔軟に核数制御が可能であることが明らかとなった。今後は、バナジウムを基盤としたポリオキソメタレート配位子を用いて、マンガンとカルシウムとの組み合わせをはじめとする種々の異核金属構造の合成を行い、得られた化合物の同定、電気化学測定、触媒反応などによって、電子状態を明らかにしていく。これらの得られた結果を取りまとめ、学会誌への投稿や、学会発表を行う。
フッ素の凝集作用を活かした新しいフッ素系分子集合体の構築とその応用に関する研究

フッ素の凝集作用を活かすことにより全く新しいタイプの分子集合体を構築させることを目的とし、特に、これらフッ素を有する集合体の興味深い機能を解明させ、フルオロアルキル基の凝集作用が効率よく発現されたフッ素系機能性材料としての新しい分野を構築させることを目的とし本研究を開始させた。まず、初年(平910年)度においては、フッ素の凝集作用が活かされた新しいタイプの多次元的な分子集合体(ゲル)の開発を行い、次いでこれら新しい含フッ素ゲルのユニークな特性(金属捕捉能さらには抗エイズウイルス活性)の解明も併せて行った。平成1011年度および最終年度においては、フルオロアルキル基が末端に導入されたアクリルアミドオリゴマー類に注目し、これらオリゴマー類の合成さらにはその分子集合体形成能について詳細に検討を行った。その結果、過酸化フルオロアルカノイルをキーマテリアルとすることにより、目的とする新規なフルオロアルキル基含有アクリルアミドオリゴマー類の合成に成功した。得られたオリゴマー類の分子集合体形成について、表面張力測定、GPC(ゲルバーミェーションクロマトグラフィー)さらには光散乱法により詳細に検討を行った。その結果、これらオリゴマー類は末端に導入されたフルオロアルキルセグメント間の凝集作用さらには分子内部に導入されたアミドセグメント間の分子間水素結合が相乗的に作用した分子集合体を形成することが見出された。特に興味深いことに、これらフッ素の凝集作用により形成された分子集合体はメチレンブルー等の親水性色素をゲスト分子として特異的に認識することがわかった。さらに、5-フッ化ウラシル等の抗ガン活性なセグメントを有するフルオロアルキル基含有オリゴマー類の合成にも成功した。従って、これら抗ガン活性なセグメントを有する含フッ素オリゴマーは、新しいタイプのフッ素系ポリマードラッグとしての応用展開が期待できる。このように、本研究により開発された新しいフッ素系分子集合体は、フッ素の凝集作用が活かされた新しいタイプの多次元的な分子集合体(ゲル)への展開を可能とさせた。さらに、これら分子集合体が形成するホスト場は特定のゲスト分子のみを認識しうることを示唆し、フッ素化学における新しいホストーゲスト化学のフィルドを開拓しうるものとして今後の研究が大いに期待される。その結果、まず、トリオールセグメント、ヒドロキシルセングメントおよびベタインセグメントを有するモノマー類を過酸化フルオロアルカノイルとそれぞれ反応させることにより、フルオロアルキルがオリゴマー末端に導入された新しいタイプのトリオールセグメント、ヒドロキシルセグメントおよびベタインセグメント含有化合物の合成にそれぞれ成功した。これらフルオロアルキル基含有オリゴマー類は、興味深いことに水以外にメタノール、ジメチルホルムアミド,ジメチルスルホキシド等の極性有機溶媒中において架橋剤を加えない系にも関わらず、それぞれ多次元的な分子集合体、すなわちゲルを形成することが見いだされた。一方、対応するフッ素を含まないオリゴマーにおいてはこれら溶媒に易溶でありゲルの形成は見られなっかった。

従って、これら含フッ素オリゴマーのゲル形成はトリオールセグメント(ヒドロキシルセグメント)間での水素結合もしくはベタインセグメント間でのイオン的な相互作用以外に、オリゴマー末端に導入されたフルオロアルキル基の凝集効果が相乗的に作用しゲルを形成するものと考えられる。さらに、本研究では、これら新規に合成された含フッ素オリゴマーゲルの特性についても解明され、具体的には金属捕捉能さらには抗エイズウイルス活性といったユニークな機能を有することを明かにさせた。今後は、本研究により初めて見出されたこの興味深いフッ素によるゲル形成等の分子集合体の生成機構さらには構造を詳細に解明させてゆくとともに、これらフッ素の凝集効果により形成される分子集合体をホスト場としたウイルスあるいはバクテリア等の種々のゲスト分子との相互作用に関する検討をより積極的に展開させ、フッ素の凝集効果が発現された新しい分子集合体の化学に関する基礎的な知見とさせてゆきたい。フッ素の凝集作用を活かすことにより全く新しいタイプの分子集合体を構築させることを目的とし、特に、これらフッ素を有する集合体の興味深い機能を解明させ、フルオロアルキル基の凝集作用が効率よく発現されたフッ素系機能性材料としての新しい分野を構築させることを目的とし本研究を開始させた。まず、初年(平910年)度においては、フッ素の凝集作用が活かされた新しいタイプの多次元的な分子集合体(ゲル)の開発を行い、次いでこれら新しい含フッ素ゲルのユニークな特性(金属捕捉能さらには抗エイズウイルス活性)の解明も併せて行った。そこで、本年(平成1011年)度においては、フルオロアルキル基が末端に導入されたアクリルアミドオリゴマー類に注目し、これらオリゴマー類の合成さらにはその分子集合体形成能について詳細に検討を行った。その結果、過酸化フルオロアルカノイルをキーマテリアルとすることにより、目的とする新規なフルオロアルキル基含有アクリルアミドオリゴマー類の合成に成功した。得られたオリゴマー類の分子集合体形成について、表面張力測定、GPC(ゲルパーミエーションクロマトグラフィー)さらには光散乱法により詳細に検討を行った。その結果、これらオリゴマー類は末端に導入されたフルオロアルキルセグメント間の凝集作用さらには分子内部に導入されたアミドセグメント間の分子間水素結合が相乗的に作用した分子集合体を形成することが見出された。特に興味深いことに、これらフッ素の凝集作用により形成された分子集合体はメチレンブルー等の親水性色素をゲスト分子として特異的に認識することがわかった。さらに本年度の研究では、5-フッ化ウラシル等の抗ガン活性なセグメントを有するフルオロアルキル基含有オリゴマー類の合成にも成功した。従って、これら抗ガン活性なセグメントを有する含フッ素オリゴマーは、新しいタイプのフッ素系ポリマードラッグとして興味深く、特にこれらオリゴマー類が形成する分子集合体をホスト場とした種々のゲスト分子との相互作用に関する検討は興味深い。今後は、今回開発された含フッ素分子集合体をホスト場としたゲスト分子としての親水性化合物の認識
タイ寄生虫感染関連胆道がんの症例・対照研究による遺伝子多型の解析

肝内胆管がんは、早期発見が困難であり予後は極めて不良である。我国においても比較的少ないが稀ではない。肝内胆管がんが世界一高率のタイ東北部ではすでに肝吸虫(OV)感染がリスク要因であるとの報告があるが、我々はこれを確認するとともに、新たに飲酒がそのリスク要因となることを示してきた。また、遺伝的多型の差が発がん感受性の個体差を規定しているとの作業仮説を立て、タイ東北部において症例・対照研究を行ないこれまでに、GSTM1遺伝子多型がOV感染による罹患リスクを修飾することを明らかにした。本年は、ニトロサミンなどの発がん剤の活性化に関与し得るCYP2E1の転写開始点上流に存在する遺伝子多型を解析したが、この多型単独では胆道がんリスクを説明出来なかった。塩基除去修復に関係するXRCC1遺伝子は399番目のコドンの多型がある。この多型単独では罹患リスクを説明出来なかったが、少なくとも一つのGlyのアレルをもつ集団では若年者で罹患リスクが上昇する傾向がみられた。また、炎症などにより生成する活性酸素種によるDNA障害を修復するhOGG1遺伝子のコドン326のSerとCysの多型単独では、胆管がんのリスクを説明することは出来なかったが、OV抗体陽性者において野生型のSerのアレルをもつヒト集団はCysのホモ接合体の集団に比して胆道がんのリスクの上昇が認められた。
心筋虚血、心肥大におけるアポトーシス誘導とその役割

「目的」近年、プログラム細胞死(アポトーシス)が様々な病態と関連することが明らかになりつつある。心筋細胞においても心筋炎などによりアポトーシスが生じることが報告され、各種心臓疾患の病態進行との関連が注目されている。当該研究費により肥大心および虚血、虚血再灌流心でアポトーシスが出現するかどうか検討を行った。「方法」圧負荷肥大心モデル(Goldblatt Rat)を作成。血圧の上昇を認めたラット(1-7週)より心臓を摘出した。またランゲンドルフ摘出灌流心を用い、実験的に冠血流量を10%に減少させ虚血(30分、60分)および虚血再灌流(30分虚血-30分再灌流)を起こした後、心臓を摘出した。摘出した心臓より、組織標本およびDNA,RNAの抽出を行った。「結果」肥大心モデルジゴキシグニン標識によるDNA断片化を検出した(Apop-Tag,Bio-Rad)。術後4週以降にアポトーシス細胞の出現を認めた。同一心臓より抽出したDNA標本よりDNAラダーの検出を行ったが著明なDNAの断片化は認められなかった。またRNA標本よりアポトーシス抑制遺伝子であるbcl-2遺伝子発現をPCR法を用い検討した。術後4週以降の心筋、特にアポトーシスが多く認められたものでbcl-2遺伝子の発現が減少していた。これら心臓では線維化の亢進が認められた。虚血・虚血再灌流モデル30分群、60分群、虚血再灌流群いずれにおいても著明なアポトーシス細胞の出現は確認できなかった。bcl-2遺伝子発現のレベルも各群間で大きな差はなかった。さらに心筋細胞体積の変化および核像の変化も同時に検討した。虚血再灌流群の心で心筋細胞体積の膨大、核像の若干の変化を認めた。「考察」肥大心においてアポトーシス細胞の出現を認め、心筋リモデリングにアポトーシスが関与することが考えられた。この現象と心筋線維化の亢進の関与も考えられた。一方、虚血・虚血再灌流によるアポトーシスの出現は認められなかった。しかし虚血によりアポトーシスが生じるという報告もなされており、より強い虚血(total ischemia)や再灌流時間の延長などを行い再度検討する必要があるものと考える。近年、プログラム細胞死(アポトーシス)が様々な面から注目されている。アポトーシスは細胞の発生、分化を制御する生体内機構の一つとして働くことが知られてきている。心筋細胞においても心筋炎などによりアポトーシスが報告され、各種心臓疾患の病態進行との関連が注目されている。本年度はまず心肥大でアポトーシス細胞が出現するかどうかについて検討を行った。摘出した心臓より、組織標本およびRNAの抽出を行った。組織標本はヘマトキシリリンおよびマッソン染色を行い、心肥大に伴う組織変化を検討した。術後3週頃より心肥大、心筋線維化、を認め。術後7周には著名な心筋線維化、血管平滑筋細胞の増殖、心筋細胞の脱落を認めた。さらに同一標本より免疫組織学的にアポトーシス細胞の有無を、ジゴキシゲニン標識によるDNA断片化を検出した(Apop-Tag,Bio-Rad)。術後4周以降にアポトーシス細胞の出現を認めた。アポトーシスは心筋細胞で多く生じ、心筋線維細胞、血管平滑筋細胞ではほとんど認められなかった。RNA標本よりMMLV reverse transcliptaseを用いcDNAライブラリーを作成した。これよりアポトーシス抑制遺伝子であるbcl-2遺伝子発現をPCR法を用い検討した。術後4周以降の心筋、特にアポトーシスが多く認められたものでbcl-2遺伝子の発現が減少していた。次年度はアポトーシス細胞の出現率の定量化、さらに別な心肥大モデルでの検討および心筋虚血によるアポトーシス誘導を検討する。

bcl-2遺伝子発現のレベルも各群間で大きな差はなかった。さらに心筋細胞体積の変化および核像の変化も同時に検討した。虚血再灌流群の心で心筋細胞体積の膨大、核像の若干の変化を認めた。「考察」肥大心においてアポトーシス細胞の出現を認め、心筋リモデリングにアポトーシスが関与することが考えられた。この現象と心筋線維化の亢進の関与も考えられた。一方、虚血・虚血再灌流によるアポトーシスの出現は認められなかった。しかし虚血によりアポトーシスが生じるという報告もなされており、より強い虚血(total ischemia)や再灌流時間の延長などを行い再度検討する必要があるものと考える。
空間表象内における物体の運動予測特性を考慮した視覚トレーニングの開発

本研究の目的は、対象物への注意配分により変化する運動予測特性を考慮した視覚トレーニングの開発である。それにより、飛躍的な視覚トレーニング効果の向上が期待できる。報告者は、今までの科研費補助による研究で、対象物への注意配分変化により、物体の運動認知・予測が変化する可能性を示唆している。しかし、視覚トレーニングの開発には、情報が不十分である。そこで、本研究期間内で、有効視野内・空間表象内・自己運動・実際のスポーツ場面の4点の運動予測特性の検討を行い、視覚トレーニングの開発につなげる計画である。平成30年度は、報告者の癌闘病により研究期間の延長を行ったために、新たな研究成果としては少ない。しかし、新しく認知予測研究会を立ち上げ、科研費補助により第1回認知予測研究会を開催した。報告者は、今までの研究成果及び今後の展開について基調講演を行った。参加者の中からは、本研究の目的である視覚トレーニングの開発に必要な運動予測特性の検討を共同で研究することに賛同して頂ける研究者が数多く現れ、第69回日本体育学会にて2件、第73回日本体力医学会にて1件の研究発表を行った。3件の学会発表で報告者は、実験デザイン、データ解析、考察等に関わった。内容は、視覚トレーニングの開発に必要な運動予測特性の検討の中で、今まで検討事例の少ない、有効視野内における現実環境での運動予測特性の検討を行った。左から右へ眼前のレールを転がるパチンコ玉の動きを一部(0.2m、0.4m)もしくはすべて(0.6m)観察させ、その後のパチンコ玉の運動予測特性を検討した。また、関東大学テニス研究会、大学スキー研究会などに参加し、他の研究者とのディスカッションや予備実験を行い、有効視野内や自己運動における実験方法について有効な情報を得ることが出来た。今後はさらなる検討を進めたい。本研究の最終目的である、対象物への注意配分により変化する運動予測特性を考慮した視覚トレーニングの開発には、物体の運動予測特性の解明が必要不可欠であり、本研究期間内で行う予定である、有効視野内・空間表象内・自己運動・実際のスポーツ場面の4点の運動予測特性の検討の中で、空間表象内での実験は計画通りに進んでいるが、特に自己運動・実際のスポーツ場面の実験統制が難しく、計画以上に時間がかかっている。自己運動では、スキーにおける不整地(コブ斜面)を用いた予備実験を行ったが、注意配分の影響は予想に反して認められなかった。しかし、自己動作の自動化による注意配分の必要性が少なくなり影響が出なかった可能性が考えられ、今後の新たな検討方針が得られた。今後は、自己動作の習熟による動作の自動化と注意の影響を検討することにより、新たな方向でも物体の運動予測特性を検討する。また、認知予測研究会を立ち上げたことにより、本研究の目的に賛同し、共同で研究を進める研究者が増えた。このことは、今後の進捗状況にプラスの影響があると考えられる。しかし、全体としては、トレーニング開発につなげるためには、さらなる検討が必要となり、やや遅れていると判断した。本研究の最終目的である、対象物への注意配分により変化する運動予測特性を考慮した視覚トレーニングの開発には、物体の運動予測特性の解明が必要不可欠であり、視覚トレーニングの開発に着手するには、まだまだ情報が不十分である。そこで、視覚トレーニングの開発には本研究期間内で行う予定であるが、有効視野内・空間表象内・自己運動・実際のスポーツ場面の4点の運動予測特性の検討の中で、特に実験的検討が進んでいる空間表象内(ゴルフパッティングにおける距離感:打球後のボールの運動予測)での運動予測特性の検討に重点を置いて研究を進める。報告者の癌闘病により、研究が一時停滞し、研究期間延長に至ったが、認知予測研究会を立ち上げ、科研費補助により第1回研究会を開催したことにより、本研究の目的に賛同し共同で研究を進める研究者が増えたことは、今後の研究推進に良い影響があると考えられる。研究会のメンバーとは、現状で特に検討の進んでいない現実環境での運動予測特性について議論を行い、研究を進めている。また、スキーでの予備実験から、実際のスポーツ場面では、運動予測特性を検討するに当たり、動作の習熟による動作の自動化と、その動作に必要な注意配分について今後検討して行く必要性が得られ、今後の研究推進方策の重点になると考えられる。本研究の目的は,対象物への注意配分により変化する運動予測特性を考慮した視覚トレーニングの開発である.それにより,飛躍的な視覚トレーニング効果の向上が期待できる.報告者は,今まで対象物への注意配分により,物体の運動認知・予測が変化する可能性を示唆している.しかし,視覚トレーニングの開発には,情報が不十分であり,本研究期間内で,有効視野内・空間表象内・自己運動・実際のスポーツ場面の4点の運動予測特性の検討を行い,視覚トレーニングの開発につなげる計画である.平成28年度は,空間表象内(ゴルフパッティングにおける距離感:打球後のボールの運動予測)での運動予測特性の検討を行った.実験の結果,被験者に対し,ゴルフボールに対する注意配分を減少させると,ゴルフパッティングの距離感が有意に減少した(初心者p<0.001,経験者p<0.05).そして,ゴルフ経験による距離感の減少率に,有意な改善が認められた(p<0.01).これらの結果は,視覚トレーニングによる距離感短縮錯覚の改善の可能性を示唆しており,第29回ゴルフ学会において報告を行った.

今後は,被験者のゴルフ経験値の幅を拡大し,経験による距離感短縮錯覚の改善メカニズムを検討することにより,視覚トレーニング開発に発展させる計画である.そして,VR(バーチェルリアリティ)環境における物体の運動予測特性の検討も行った.実験の結果,運動物体消失後の移動距離の短縮錯覚である見越距離短縮錯覚を,相殺する方向の錯覚であるRM(表象的慣性)が,同時に起こっている可能性が示唆され,日本体育学会第67回大会にて報告を行った.また,関東大学テニス研究会,大学スキー研究会,スノーボード研究会などに参加し,他の研究者とのディスカッションや予備実験を行い,有効視野内や自己運動における実験方法について有効な情報を得ることが出来た.今後はさらなる検討を進めたい.本研究の最終目的である,対象物への注意配分により変化する運動予測特性を考慮した視覚トレーニングの開発には,物体の運動予測特性の解明が必要不可欠である.本研究期間内で行う予定である,有効視野内・空間表象内・自己運動・実際のスポーツ場面の4点の運動予測特性の検討の中で,空間表象内での実験は計画通りに進んでいるが,特に自己運動の場面の実験統制が難しく,計画以上に時間がかかっている.全体としては,トレーニング開発につなげるためには,さらなる検討が必要となり,やや遅れていると判断した.本研究の目的は、対象物への注意配分により変化する運動予測特性を考慮した視覚トレーニングの開発である。それにより、飛躍的な視覚トレーニング効果の向上が期待できる。報告者は、今までの科研費補助による研究で、対象物への注意配分変化により、物体の運動認知・予測が変化する可能性を示唆している。しかし、視覚トレーニングの開発には、情報が不十分である。そこで、本研究期間内で、有効視野内・空間表象内・自己運動・実際のスポーツ場面の4点の運動予測特性の検討を行い、視覚トレーニングの開発につなげる計画である。平成29年度は、平成28年度に引き続き空間表象内(ゴルフパッティングにおける距離感:打球後のボールの運動予測)での運動予測特性の検討を行った。平成29年度は、被験者のレベルを初心者・中級者・上級者(プロおよびハンディキャップ5以下)の3段階で比較した。実験の結果、レベルが上がるにつれて、パッティングの距離感が、ボールへの注意配分変化の影響を受けにくい可能性が認められた。したがって、トレーニングによりゴルフの技能が向上したと仮定すると、ゴルフパッティングにおける距離感低減錯覚が、トレーニング出来る可能性が示唆され、第30回ゴルフ学会において報告を行った。今後は、被験者の数を増やすなど、よりレベルによる距離感短縮錯覚の改善メカニズムを検討することにより、視覚トレーニング開発に発展させる計画である。また、関東大学テニス研究会、大学スキー研究会、スノーボード研究会などに参加し、他の研究者とのディスカッションや予備実験を行い、有効視野内や自己運動における実験方法について有効な情報を得ることが出来た。今後はさらなる検討を進めたい。本研究の最終目的である、対象物への注意配分により変化する運動予測特性を考慮した視覚トレーニングの開発には、物体の運動予測特性の解明が必要不可欠であり、本研究期間内で行う予定である、有効視野内・空間表象内・自己運動
石炭・バイオマス・廃棄物燃焼から排出される微量金属の生成機構に関する研究

様々な燃料による燃焼プロセスにおける微量成分の生成機構解明とその制御技術に関する研究は、近年、国内外を通じて精力的に研究が遂行されており、本研究では、以下のような研究内容を遂行した。その主たる内容は、様々な燃焼プロセスにおける微量金属成分を含む微粒子の生成特性解明と炉内における微粒子生成制御技術開発に関するものである。まず、様々な反応条件における各種微量金属成分の化合物状態、微量金属成分の捕捉剤に関するスクリーニングおよび汚泥燃焼場における微量金属成分の化合物状態を、それぞれ化学平衡論に基づいて予測した。その上で、各種微量金属化合物の基礎的な放出特性を実験的に解明するとともに、得られた結果が化学平衡計算の結果と類似していることを示した。また、このようにして得られたスクリーニング結果に基づき、各種微量金属成分を化学吸収できる捕捉剤を実験的に検証し、カオリンおよび石灰石が有効な捕捉剤であることを提案した。最終的に、実際の乾燥下水汚泥燃焼場における微量金属成分を含む微粒子の生成特性を明らかにした上で、これまでに得られた最適な捕捉剤を実際の燃焼場に微量供給し、捕捉効果の検証と捕捉機構について考察した。このような一連の研究で得られた成果は、様々な燃焼プロセスから環境中へ排出されている微量金属成分を含む微粒子を極力抑制するために不可欠な、燃焼場における微粒子の生成特性・機構解明と炉内における制御技術の開発に関し、基礎的観点のみならず実用化へ貢献できる成果であるものと考える。
急性骨髄性白血病におけるNotch1シグナルの検討:新たな分化誘導療法をめざして

Notch1シグナルの活性化は、転写共役因子MAML1を介した系で転写因子PU. 1の発現を抑制し顆粒球系前駆細胞の分化を抑制することを明らかにした。さらに、分化が誘導される培養条件でも、Notch1シグナルが活性化された細胞の一部は未分化な形態を維持し、増殖能を保持していたことから、Notch1シグナルの逸脱した活性化が顆粒球系前駆細胞の白血病化や白血病の維持に寄与する可能性が示唆された。我々は、Notch 1シグナルの増強により顆粒球の分化が遅延することを報告したが、同シグナルの増強により顆粒球の分化が促進されると報告したグループもあり、この差異を生じた理由の説明と、我々の主張を裏付ける多角的な検討が必要であった。これまで報告されてきた研究では、活性化型Notch 1遺伝子の導入により顆粒球系前駆細胞のNotch1シグナルを増強させて、分化に与える影響が検討されてきたが、各細胞クローン間の導入遺伝子の発現量のばらつきが結果に影響を与える可能性が示唆されていた。そこで我々は、複数のクローンを含む細胞集団を用いて同様の検討を行った。さらに、ドミナントネガティブMAML1の導入により顆粒球系前駆細胞のNotch1シグナルを阻害した場合の影響も検討し、Notch1シグナルが顆粒球の分化を遅延させる方向にはたらくと推察した。これまで報告されてきた研究では、細胞の形態や分化マーカーであるCD11bやGr-1の発現量により顆粒球系の分化段階が評価されてきた。本研究では、これらの評価基準に加えてG-CSF受容体の細胞表面での発現とミエロペロキシダーゼの細胞内の発現を、それぞれフローサイトメトリー法とリアルタイムPCR法で検討し分化段階を評価した。この評価基準でも、Notch1シグナルの増強により顆粒球への分化が遅延し、阻害により分化が促進する傾向が認められ、これまでの我々のデータを補足する結果であった。これらの新しいデータは、第51回(平成21年)日本小児血液学会で報告した。現在、ドキシサイクリンの添加により活性化型Notch 1遺伝子の発現が誘導される顆粒球系前駆細胞を作成中であり、これを用いてNotch1シグナルが顆粒球分化に与える影響を検討するとともに、Notch1シグナルの標的遺伝子を検索する予定である。これまで、Notch1シグナルの増強により顆粒球の分化が遅延することを、顆粒球系前駆細胞32Dを用いた実験系で明らかにした。一方、我々の研究室で樹立された小児急性骨髄性白血病由来の細胞株ではNotch 1受容体の高発現が高率に認められており、Notch 1シグナルの増強が急性骨髄性白血病細胞の未分化性の維持や増殖能の亢進に寄与している可能性がある。本年度は、ヒト急性前骨髄性白血病由来細胞株HL-60に、ICN1遺伝子あるいはMam遺伝子を導入してNotch1シグナルをそれぞれ増強あるいは抑制し、増殖や分化に与える影響を検討した。Notch1受容体の細胞内領域であるICN1には導入された細胞のNotch1シグナルを持続的に活性化する働きがあり、Mamには内在性のICN1や外部から導入されたICN1に結合してその活性を持続的に抑制する働きがある。ICN1が導入された細胞群またはMamが導入された細胞群の増殖能はコントロール群の増殖能と有意差は認められなかった。一方、レチノイン酸を添加して分化を誘導した場合、Mamが導入された細胞群の分化の進行度はコントロール群と有意差を認めなかったが、ICN1が導入された細胞群の分化は有意に遅延した。すなわち、HL-60細胞においてNotch1シグナルは分化を抑制するが、内在性のNotch1シグナルを阻害しても分化が誘導され増殖が抑制される現象は確認されず、内在性のNotch1シグナルが同細胞の未分化性の維持や増殖能の亢進に寄与しているとはいえなかつた。今回、遺伝子の導入効率の高さからHL-60細胞を用いたが、導入方法を工夫して他の急性骨髄性白血病由来の細胞株についても同様の検討を行う必要がある。顆粒球・単球系細胞の分化・成熟におけるNotch1シグナルの役割について、2000年頃から複数のグループにより報告されているが、同シグナルが分化を抑制すると報告するグループがある一方で分化を促進すると主張するグループもあり、多角的で詳細な検討が求められていた。我々は、Notch1シグナルの活性化因子ICN1、あるいは不活化因子DNMAML1(MAML1のドミナントネガティブ)を顆粒球系前駆細胞32DとHL60にウイルスベクターを用いて導入したのち成熟顆粒球への分化を誘導した。統計学的有意差をもってNotch1シグナルの活性化が顆粒球分化を遅延させること、内在性のNotch1シグナルの不活化が顆粒球系への分化に影響しないことを示した。

我々の用いた方法の優位性は、遺伝子の導入効率が2割から6割と高く分化の誘導に先立ち遺伝子の導入された細胞を選別し増殖させる必要がないこと、マーカー遺伝子GFPの発現により遺伝子導入細胞をフローサイトメトリー法で識別し解析できるため、導入細胞と非導入細胞が混在した状態で分化を誘導できることの二点である。さらに、活性化因子ICN1と不活化因子DNMAML1を同時に導入したところ分化の遅延が解消された事から、ICN1がMAML1を介した機序により分化を抑制する事が示された。興味深い事に、分化が誘導され細胞死に至る培養条件においても、Notch1シグナルを活性化された細胞の一部は未熟な芽球様の形態を維持し、増殖能を保持していた。すなわち、Notch1シグナルの活性化が顆粒球系前駆細胞の白血病化に関与する可能性が示唆された。以上の内容は、2011年12月にサンディエゴで開催された米国血液学会で発表した。
チロシンキナーゼFyn活性化によって引き起こされるてんかんとタンパク質のリン酸化

成熟脳におけるチロシンキナーゼFynの役割を知るために、前脳ニューロンにおいて正常型あるいは活性型Fynを発現するトランスジェニックマウスを作成した(以下正常型、活性型マウス)。活性型マウスはてんかん発作によって死亡しやすいことから、Fynの活性調節が脳の興奮性の抑制に重要であることが示唆されている。本研究では、これらのマウスにおける脳内のタンパク質チロシンリン酸化の変化とキンドリングの形態に焦点を当て、以下の結果を得た。(1)両トランスジェニックマウス前脳において、5種類のタンパク質のチロシンリン酸化の亢進が同様に認められた。これらのリン酸化はFyn欠損マウス脳では逆に減弱しており、Fynの基質であると考えられた。(2)その一つはNMDA型グルタミン酸受容体の修飾サブユニット2Bであることが同定された。(3)扁桃核の電気刺激によって引き起こされるafter-dischage(AD)の閾値は正常型、活性型いずれのマウスにおいても野性型に比べ有意に低く、その持続時間はキンドリングを獲得した野性型のものと同程度に延長していた。(4)正常型マウスでは、刺激の継続とともに行動上のけいれんが発展したが、キンドリング獲得時のADは初回時のもの以上に発展しなかった。またキンドリング獲得時のけいれんも野性型のものと同程度であった。これに対して活性型マウスでは刺激の継続によりADが更に延長し、けいれんもより重篤なものに発展した。以上のように、Fynトランスジェニックマウスのキンドリングの形態は野性型とは異なっており、正常型、活性型マウスに共通してみられるAD閾値の低下、初回時のADの持続時間の延長はNMDA受容体のチロシンリン酸化の亢進による可能性がある。また活性型マウスにみられる重篤なけいれんは、Fynの活性調節がキンドリングにおけるニューロンの過剰興奮の制御に重要であることを示唆する。