hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
がん細胞が出現した正常間質組織でのシンギュラリティ現象の解明

腫瘍組織は特殊な微小環境が整備されており、がん細胞によって教育された間質細胞が腫瘍進展に有利に作用する。しかしながら、がん細胞が正常間質細胞と初めて接触した際にどのような相互作用が生じるかはよく分かっていない。本課題では、がん細胞と正常間質細胞との細胞間コミュニケーションの実態を明らかにすることにより、腫瘍細胞社会形成の超初期に生じるシンギュラリティ現象を解明する。
ストレスが子宮内膜症の免疫系ならびに病態進展に与える影響についての検討

子宮内膜症は炎症性疾患であり、マクロファージが炎症に関与している。ヒト腹腔内マクロファージを用いたin vitroの検討で、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAchR)の活性化は炎症性サイトカインの産生を抑制した。子宮内膜症マウスモデルを用いた検討でもnAchRの活性化は病変の縮小を誘導した。Achは副交感神経刺激である。子宮内膜症患者では交感神経が活性化しているという仮説の下、各種検討を行ったところ、子宮内膜症患者では血中ノルアドレナリン高値の傾向および、不安特性が高いことが判明した。当初の計画通り、婦人科手術患者を対象として1術前の心電図検査による自律神経評価および2術中の腹腔内洗浄液を採取することに関して倫理委員会から承認をえた。実際に婦人科手術患者における1および2の検体集積を行っており、順調に研究を遂行することができている。2の腹腔内洗浄液から採取した細胞を分離・保存を行っている。子宮内膜症と自律神経との関連を明らかにするべく、1ヒト腹腔内細胞を用いたin vitro研究、2マウスを用いた子宮内膜症モデル3子宮内膜症手術症例に対して自律神経状態を血液やホルター心電図にて評価を行う。という3つのモデルを用いて検討を行っている。これまでの検討により、子宮内膜症は炎症性疾患と捉えられているが、交感神経の活性化が炎症を惹起することで同疾患に関与するデータを得つつある。ヒト腹腔内免疫担当細胞を用いたin vitro検討において、副交感神経刺激作動薬は炎症を抑制することを認めた。また、マウス子宮内膜症モデルに副交感神経刺激作動薬を投与したところ、子宮内膜症様病変が縮小することを見出した。子宮内膜症は炎症性疾患として捉えられていることから、子宮内膜症では副交感刺激よりも交感神経刺激が優位になることが仮説として挙げられる。そこで、子宮内膜症患者と非子宮内膜症患者の自律神経の状態について網羅的な検討を行ったところ、子宮内膜症患者では交感神経のマーカーである血中ノルアドレナリンの濃度が対象群と比べて高値を示す傾向を認めた。ヒト腹腔内マクロファージを用いて、LPS添加により誘導されるIL-1β発現は、ニコチン、ニコチン性受容体α7 agonist刺激により有意に減少することを認めた。また、子宮内膜症マウスモデルにニコチン、α-7 nAchR agonistで、有意に子宮内膜症様病変が縮小することをこれまで認めた。特に、同縮小効果はα-7 nAchR antagonist投与によりキャンセルされたことから、α-7ニコチン性アセチルコリン受容体を介しての作用であることが示唆された。また、病変誘導早期の時点でのマウス腹腔内血球系のIL-1βmRNA発現はα-7 nAchR agonistにより減少し、同受容体アンタゴニスト同時添加によりキャンセルされた。子宮内膜症は慢性炎症性疾患であり、その炎症の機転として、腹腔内のマクロファージから分泌される炎症性サイトカイン、特にIL-1βが子宮内膜症病変に作用し、更なる炎症を誘導すると考えられた。ニコチン刺激は副交感神経のアゴニストである。そこで炎症性疾患である子宮内膜症患者では交感神経が活性化していることにより、慢性炎症状態が誘導されているとの仮説を立て、子宮内膜症患者における交感神経状態に関して検討を行った。子宮内膜症および非子宮内膜症患者に対し、1精神神経状態についての問診、また交感神経の評価方法として2ホルター型心電図による自律神経状態の評価および3血液検査による交感神経活性状態の評価を行った。子宮内膜症患者では、不安状態の指標となるSTAIテストのうち、特性不安が非子宮内膜症患者に比べて高値を示すことを認めた。そして、子宮内膜症群では血中のノルアドレナリンが上昇している傾向を認めた。月当たりに2ー3件の症例数を対象として検討を行っている。腹腔内洗浄液の採取も順調に行われており、予定通りに研究が遂行することができている。特に、子宮内膜症手術症例患者における自律神経状態の評価に関して、更なるデータの蓄積が必要である。生殖免疫このまま症例のリクルートメントを継続する。現在は手術予定の入院患者を対象としているが、今後は外来患者を対象として、子宮内膜症患者の自律神経の状況についての検討を行うことも予定している。
革新学校が実現する学校組織の民主化ー韓国の教育革新運動に着目してー

韓国における革新学校が従来の権威的な学校文化を変革し、学校民主化を達成することが出来た要因について明らかにするために、以下の研究を行っていく。まず、教員による教育運動から革新学校が生まれるに至った要因を明らかにする。そのために、革新学校を構想した教員への聞き取りと、革新学校での実践内容を詳細に考察する。次に、革新学校における学校民主化の構成要素を抽出するために、革新学校の教員、保護者、生徒にインタビューを行い、革新学校における教育実践の内容の詳細を探る。その他、革新学校に求められる教員の資質・能力を担保するためのシステムである教員研修について考察を行う。
林鵞峰交遊圏の研究

林鵞峰の交遊圏について調査を進め、近世前期の林家林門の漢学者たちが、詩文によるコミュニケーションを持っていたこと、また彼らのネットワークで共有されていた価値観や情報が、中国明末に活躍した"山人派"文人たちの文化から強い影響を受けていたことを検証することができた。多色摺資料として重要視される詩箋資料や、従来注目されることがなかった林永喜や石川子復の自筆資料などの文献を翻刻・紹介することができた。本年度は、まず『篁軒詩稿』(板倉重矩著、板倉重道編、国会図書館鶚軒文庫蔵)を複写物により収集した。板倉重矩は、老中・京都所司代を勤めた譜代大名で、林家周辺で活動した重要人物である。そこで、この詩文集の内容を検討して、本研究の目的を達成するに資する情報の収集につとめた。なお、この作業は、次年度も継続して実施する。つぎに、西尾藩に仕えた井川春良の資料調査のため、愛知県西尾市に出張した。春良は、その詩文集が伝存不明であったため、従来はほとんど知られていなかった林門の儒者である。研究代表者は、その詩文集を発見し、すでに前年にその本文を報告していた(「井川春良『兼山詩文』-西尾藩儒臣の詩文集-」『湘北紀要』31)が、その地元での研究状況や残された資料の有無を確認するために実施したものである。さらに、注目すべき資料として、林家林門の儒者たちと親交を結んでいた木下公定(備中足守藩主、号は葵峯)の『桑華蒙求』(大本三冊)、また人見竹洞らの詩懐紙15枚を収集した。後者は、従来注目されることの少ない近世前期の漢学者たちの自筆資料として貴重なものである。そして、調査の過程で収集した情報を素材として、「近世前期における明末「随筆」の受容-『徒然草』受容の-側面-」と題して論文をまとめた。これは、林家林門で明末随筆が読まれていた事実とその意義について考察したものである。さらに、東武カルチュアの依頼により「江戸教養人の遊び元禄時代の文人趣味」と題して講演を行った(本来は3月20日実施予定だったが、震災の影響で4月24日に延期)。これは、近世前期の林家林門の文事の意義について考察を加えたものである。本年度は、前年度に引き続き、『篁軒詩稿』(板倉重矩著、板倉重道編、国会図書館鶚軒文庫蔵)の内容を検討して、本研究の目的を達成するに資する情報の収集につとめた。また、当時の漢学や林家と関係のあった大名家の情報を収集するために『楽只堂年録』(八木書店刊)他の近世漢文学関連図書を収集。さらに、複写物としては、『文穆先生遺墨』(東京大学資料編纂所蔵林家資料・林家本34・I、2)他を収集した。つぎに、関連の資料調査のため、京都府立総合資料館に出張した。具体的には石川丈山や人見竹洞の関連資料を閲覧することができた。そして、調査研究の成果として、和漢比較文学会全国大会において「丈山の杜甫受容-「拙」をキーワードとして-」と題して発表、同学会機関誌に同タイトルの論文を掲載させて頂くことができた。丈山の杜甫受容に関しては、従来その詩話・詩論を資料として論じられていたが、本論文では具体的に丈山の漢詩に就いて考察した。また、「近世的表現様式と知の越境プロジェクト」において、「明末詩箋の流布と影響-付『文敏先生遺墨』について-」と題して発表をおこなった。『文敏先生遺墨』は、羅山が孫の梅洞の教育のために応酬した詩懐紙をまとめたもの。これは、複写物で収集した『文穆先生遺墨』(鷲峰が孫の春宗に与えた懐紙類)と同様の性格を持った資料で、林家の教育に対する意識を具体的に知ることのできる資料である。なお、東武カルチュアの依頼により「江戸教養人の遊び元禄時代の文人趣味」と題して講演を行った(本来は3月20日実施予定だったが、震災の影響で4月24日に延期)。本年度は、前年度に引き続いて『文敏先生遺墨』等の文献について調査を進め、本研究の目的を達成するに資する情報の収集につとめた。すなわち、当時の漢学や林家と関係のあった人物たちの情報を収集するために『播陽曽根十二景詩歌集』(写本)他の近世漢文学関連図書、さらに複写物として『元旦詩集』(弘前市立弘前図書館蔵本)他を収集した。

また、資料調査のため、京都府立総合資料館に出張し、陳継儒の著作の和刻本等を閲覧した。なお、『文敏先生遺墨』については、シンポジウム「江戸の「表現」ー浮世絵・文学・芸能ー」(「近世的表現様式と知の越境プロジェクト」於:国文学研究資料館、2014年9月28日)において「多色摺の源流ー中国詩箋と林羅山ー」と題して資料の概要と意義について発表、また「第二十三回隆盛寺蔵芭蕉翁と元政上人展講演会」(於:隆盛寺、2013年3月13日)でも「中国の詩箋と俳諧資料の多色摺」と題して詩箋資料の歴史的意義について報告した。『文敏先生遺墨』は、鵞峰の息子である梅洞の教育のために、羅山が応酬した詩懐紙をまとめたもので、前年度に複写物で収集した『文穆先生遺墨』(鵞峰が孫の春宗に与えた懐紙類)と同様、林家の教育に対する意識を具体的に知ることのできる資料である。さらに、当時の漢詩壇における作法書流布の状況を分析するため、「近世前期における『円機活法』受容一斑ー『詩苑綺繍』・『詩林要玄』ー」(『湘北紀要』34号)をまとめ、『円機活法』の影響力の大きさを指摘した。さらに、本研究が最終年度となるため、あらためてこれまで発表していた論考の全面的な見直しを行うこととし、その結果を、学位請求論文「近世前期における明末文化の影響と江戸文人の発生」としてまとめ、早稲田大学大学院文学研究科に提出した。鷲峰の交遊関係を検討することにより、従来注目されていなかった資料について研究をすすめ、新たな視点から研究成果を報告・発表することができたため。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後の推進方策について、研究計画を大きく変更する必要はないと考えている。すなわち、林鷲峰周辺の人物たちの動向を検討し、従来の研究では注目されなかった資料を見い出し、検討の姐上に上げられなかった資料を分析することで、なるべく巨視的に、当時の漢文学の文化的意味や文化史的な意義を問題としていきたい。
縮重軌道ラジカル分子の分子設計と開発

平成22年度に本研究では,構造による軌道準位接近系である有機強磁性体や金属ジチオレン錯体のこれまでの研究を発展させ、一中心にラジカル部位が3つ結合した「三翼型分子」の開発研究をおこなった。一炭素中心にNO基が3つ結合した型のラジカル分子合成を目的として,在来α-ニトロニルニトロキシドとニトロソ化合物の反応による経路で合成に成功した。類似化合物について他グループの先行した合成研究が平成22年度に出版されたが,本研究の手法は常温・空気中で実行可能で,この方が簡便である。また,さらに一般的な合成法の探索をおこなって,チオ尿素誘導体を経る別の経路や,オルトギ酸トリメチルのメトシキ基をN置換ヒドロキシルアミンで順次置換する方法でも,目的の化合物群が得られることがわかった。このように分子設計・物質開発の当初の目的は,ある程度達成できた。この過程で得られた化合物を結晶化し,現在は構造と物性の研究に進んでいて,それが完了した段階で成果を公表する予定である。以上の物質開発研究と並行して,赤外可視領域偏光分光装置による試料同定・分子配向異方性測定と単結晶X線回折測定を実際に活用し始め,低温での偏光顕微分光測定のための試料角度調整台を製作した。また以前から続けている金属ジチオレン錯体の三角格子スピン系の研究,および固体におけるトポロジカル縮重の顕著な効果である質量ゼロのディラック電子系の物性研究として,高圧下でのθ-(BEDT-TTF)_2I_3のNMP測定と,α-(BEDT-TTF)_2I_3の層間縦磁気抵抗の温度依存性によるランダウ準位間隔の評価の研究に貢献し,これらの成果を国際会議で報告し,また論文として出版された。縮重した不対電子軌道をもつ分子を用いて,新しい電子物性を発現する系をつくるため,3つ以上のラジカル配位子を金属イオンに配位させた錯体の開発,および,1つの炭素原子に3つのNO基が結合した化合物の合成に取り組んできた。ラジカル配位子として,1,10-フェナントロリン骨格にニトロニルニトロキシドを縮合させた分子を設計し,原料としてのフェナントロリンキノンからオキシム誘導体を合成した。当初計画したオキシム誘導体からのニトロニルニトロキシドの直接合成はできず,いったん還元してヒドロキシルアミンを経由する合成法の検討に着手した。1炭素に3つのNO基が結合したグアニジン型ラジカル分子の合成は,既存ニトロニルニトロキシドにニトロソ化合物を反応させて成功したが,21年度に別グループによって同種の合成が報告された。そこで,より一般的で高対称なグアニジン型ラジカル分子の合成法確立に向け,中間体精製法と新しい合成経路の探索を進めてきた。物性評価測定の面では,低温磁場中での電気抵抗など基本物性測定系を完成させ,特異なバンド構造をもつ有機導体の面間抵抗の研究に適用開始した。また,赤外可視域の分光測定に適合する温度可変装置の設計と試作を進めた。そのほか,すでに測定を進めてきた三角格子量子反強磁性体の偏光分光による異方性の評価・解析を進め,得られた結果の主要部分を口頭発表により報告した。また,高圧下のθ型ET塩が,固体の電子状態として特異な縮重状態といえるディラックコーン型ゼロギャップ系であることを明らかにする研究論文に貢献した。
中世シャンパーニュ方言の総合的記述の試み

上記の資料体をデータ・ベース化し、その綴り字に現れた様々な方言的音声特徴を分析した(図書欄参照)。その際にパソコンの画面上に語形の頻度を地点表示できるプログラムを開発した。さらに古フランス語の「態」、とくに代名動詞による「態」の表現を言語的選択の問題として捉え資料体を分析した(雑誌論文欄参照)。音声的特徴から推論されて方言境界は当時の政治的境界線と深い関係があるのではないか、ということが明らかになった。単年の研究であったため十分な時間的余裕がなかった。今後は種々の音声特徴・形態的特徴・統辞的特徴・語彙的特徴を引続き分析する予定である。
視聴覚統合における情動情報処理メカニズムの解明

本研究では,視覚と聴覚の感覚情報の統合処理過程において,感覚刺激に含まれる感情情報がどのような役割を果たすのかを実験的に検討した。まず,感情カテゴリーによる感覚処理への影響の違いが視聴覚統合においても観察されるかを検討したところ,感覚処理に促進的にはたらく「恐怖」に関連した刺激のみが干渉的な影響をもち,抑制的にはたらく「嫌悪」に関連した刺激は影響を与えないことが示された。また,視聴覚表象の形成時に感情情報がどのように処理されるのかを時間知覚を用いて検討したところ,一方の感覚刺激に内包される感情情報も表象に内包され,他方の感覚刺激の知覚に影響を与えることが明らかとなった。本年度は,実験環境の整備および本研究課題において検討を進めていく視聴覚統合における情動情報の影響に関連した予備的検討を行った。視聴覚統合について検討していく上では,まず単一感覚における感覚情報処理について十分に明らかとなっている必要がある。そこで,予備的検討の一環として画像刺激から喚起される情動の強さが感覚処理に与える影響について実験的に調べた。事前に各実験参加者に怒り顔の画像刺激から喚起される情動価の強度を評定してもらい,各個人にとって情動価の高い刺激と低い刺激を選定した。それらの刺激を,統制条件となる同一人物の無表情顔と合わせて実験刺激として提示した。実験の指標としては,高速提示される視覚刺激系列の中からターゲットを検出する課題の検出成績,および視覚探索課題における探索時間を使用した。検出成績においては,従来の研究同様に無表情顔よりも怒り顔の方が課題の成績が高くなっていたものの,怒り顔どうしでは情動価による課題成績の違いは見られなかった。一方,探索時間においては,情動価の高い怒り顔刺激の探索時間が情動価の低い刺激や無表情刺激と比較して短くなっていた。対して,情動価の低い怒り顔刺激と無表情刺激の探索時間には違いが見られなかった。したがって,表情刺激から喚起される情動価の強さは,ターゲットの検出の精度には影響を与えないものの検出する速度に対して影響を与えており,情動価が十分に高くないと素早い検出が行われないことが明らかとなった。この結果は,喚起される情動価の強さは多数の対象から自分に対する脅威を素早く発見する機構には関連していることを示唆している。合わせて,表情刺激に内包される情動情報がダブルフラッシュ錯覚と呼ばれる視聴覚統合によって生じる錯覚現象への影響についても検討を行った。しかし,情動情報がダブルフラッシュ錯覚に関連していることを示す結果は得られなかった。本年度から所属研究機関に新しく着任したが,そこでの科学研究費による物品購入の事務手続きのルールを把握するのに手間取り,思ったように実験環境整備のための実験機器を揃えることができなかった。しかし,何とか当該年度中に実験及び解析用のPC,視覚刺激提示用のCRTディスプレイ,聴覚刺激提示用のインターフェースとヘッドホン,実験全体を制御するためのソフトウェアの一式を揃えることができた。また,実験機器を揃えるのに手間取ったために,当該年度に予定していた予備的検討も計画通りには実施できなかった。また,計画通りに実施した表情刺激から喚起される情動情報とダブルフラッシュ錯覚との間に関連を見出すこともできなかった。しかし,計画を一部変更して実施した喚起される情動の強度と視覚処理との関連の検討においては,高速提示される視覚刺激系列内のターゲット検出には影響を与えない一方で,視覚探索には寄与しているという興味深い実験結果を得ることができた。この研究成果は,次年度の研究を進めていく上で必要な知見となると考えられる。上記の理由から,研究はおおむね順調に進展しているといえる。本年度は,視覚と聴覚の2つの感覚情報を統合する過程で,感情情報がどのように処理および統合に関連していくのかについて,注意機能と時間知覚の観点から検討を行った。注意機能の観点からは,情動刺激のカテゴリーの違いによる感覚情報処理への影響の差異が視聴覚統合にも現れるのかについて検討を行った。これまでの研究により,恐怖顔と嫌悪顔で注意機能に与える影響が異なることが報告されている。本実験では,注意の瞬き課題において第1標的としてこれらの表情刺激を提示し,第1標的および第2標的にと同時に純音も提示することで,第2標的の見落としの割合に与える影響について検討を行った。実験の結果,第1標的が恐怖顔の場合,純音を同時に提示することによって第1標的の300ミリ秒後に提示される第2標的の見落としが多くなることが明らかとなった。本実験より,恐怖顔のもつ情動情報の処理により,聴覚情報は統合されるのではなくむしろ干渉するように機能するようになることが示唆された。時間知覚の観点からは,一方の感覚刺激が内包する感情情報により,他方の感覚刺激の提示時間の長さの知覚が影響を受けるのかについて検討を行った。単一感覚における情動刺激による時間知覚の研究では,ポジティブおよびネガティブどちらの情動刺激であっても中性刺激よりも提示時間が長く知覚されることが報告されている。本実験では,視覚の情動刺激である表情刺激を同時に提示することにより,感情情報をもたない聴覚刺激の純音の提示時間の長さの知覚が変容するのかを調べた。実験の結果,怒り顔を同時に提示した場合に,純音の提示時間が実際よりも長く知覚されていた。視覚と聴覚の統合過程においては,2つの感覚の統合時に1つの感覚表象が形成される。本実験より,この表象の形成時に感情情報も内包されていることが示唆された。本研究では,視覚と聴覚の感覚

情報の統合処理過程において,感覚刺激に含まれる感情情報がどのような役割を果たすのかを実験的に検討した。まず,感情カテゴリーによる感覚処理への影響の違いが視聴覚統合においても観察されるかを検討したところ,感覚処理に促進的にはたらく「恐怖」に関連した刺激のみが干渉的な影響をもち,抑制的にはたらく「嫌悪」に関連した刺激は影響を与えないことが示された。また,視聴覚表象の形成時に感情情報がどのように処理されるのかを時間知覚を用いて検討したところ,一方の感覚刺激に内包される感情情報も表象に内包され,他方の感覚刺激の知覚に影響を与えることが明らかとなった。次年度は,今年度実施することのできなかった,視聴覚統合における情動情報の感覚間の共有の有無についての検討を行っていく。一方の感覚刺激に含まれる情動情報が他方の感覚刺激の知覚に影響を与えているかを検討することは,本研究課題の目的を達成する上でも重要な知見になると考えられる。また,視聴覚情報の統合過程の中で,情動情報が促進的もしくは抑制的に処理されているのかについても検討を試みたいと考えている。情動刺激はその情動のカテゴリー(怒りや恐れ)によって,感覚処理に異なる影響を与えることが明らかとなっている。この情動カテゴリーによる影響の差異が視聴覚統合の中で増大あるいは減少するのであれば,どのような処理過程を経ているのかを推定する手がかりになると考えられる。本年度得られた研究成果,および来年度の研究成果については,ある程度まとまり次第随時学会発表および論文投稿を行っていく。28年度が最終年度であるため、記入しない。実験系心理学28年度が最終年度であるため、記入しない。
ピペコリン酸によるウキクサの花芽形成誘導機構の解析

ピペコリン酸による花成誘導機構解明の糸口を見い出すことを目的として、ウキクサにおけるピペコリン酸の生合成・代謝と花成の関連を追究するとともに、ピペコリン酸によって特異的に誘導される遺伝子やタンパク質の解析を目指した。ピペコリン酸、リジン、花成誘導の関連を追及した結果、ピペコリン酸に比べると活性は弱いものの、リジン単独でも花成誘導効果を示し、さらに、リジンの代謝物であるアミノアジピン酸を培養液に添加することによって、活性が高まることを見い出した。これらのことから、リジンから生成するピペコリン酸を介して花成が誘導されるであろうと推測した。実際に培養液にリジンを添加することによって、ピペコリン酸のレベルが数倍に上昇することを見い出すとともに、重水素標識リジンを用いた代謝実験から重水素ピペコリン酸が生成することを実証した。従って、リジンによるウキクサの花成誘導はリジンから生成するピペコリン酸を介していることが示された。ウキクサの培養液にピペコリン酸を添加することによって、花芽形成を誘導することができる。この系を用いて、花成誘導過程で特異的に発現する遺伝子やタンパク質の探索を試みた。ピペコリン酸処理によって全RNAが増加する傾向が認められたが、遺伝子発現の変化に大きな違いは認められなかった。また、ピペコリン酸処理、未処理のウキクサからタンパク質を抽出し、差異を検討したが、ピペコリン酸処理で特異的に発現するタンパク質は見い出されなかった。ピペコリン酸による花芽形成誘導機構解明の糸口を見出すことを目的として、ウキクサにおけるピペコリン酸の生合成・代謝を追究するとともに、ピペコリン酸によって、特異的に誘導される遺伝子やタンパク質を追究した。1.リジンと花成誘導の関係を追究したところ、ピペコリン酸処理に比べると活性は弱いものの、リジン単独でも花成誘導効果を示し、さらに、アミノアジピン酸を培地に添加することによって、活性が高まることを見出した。このことは、内生のリジンやリジンの代謝中間体がピペコリン酸の生成に関与している可能性を示唆している。2.ピペコリン酸処理、未処理のウキクサからタンパク質を抽出し、両者の質的、量的差異を検討した。これまでのところ、ピペコリン酸処理で特異的に発現するタンパ質は見出されていない。3.ピペコリン酸処理、未処理のウキクサからデイファレンシャルスクリーニングにより、処理によって特異的に発現してくる遺伝子のクローニングを試みたが、遺伝子発現の質的変化に大きな違いは現在のところ認められていない。昨年度、リジンと花成誘導の関係を追究したところ、ピペコリン酸処理に比べると活性は弱いものの、リジン単独でも花成誘導効果を示し、さらに、アミノアジピン酸を培養液に添加することによって、顕著な花成が誘導されることを見出した。これらのことからリジン代謝が花成と関連していることが示唆された。ウキクサから花成誘導物質として単離したピペコリン酸は、動物や微生物の系ではリジン代謝と係わりがあることが示されているので、リジンから生成するピペコリン酸を介して花成が誘導されるであろうと推測した。重水素標識したリジンを培養液に添加して、実際に重水素標識ピペコリン酸が生成するか否か検討した。代謝物を精製後、最終的にTMS誘導体にした後、GC-MSで分析した結果、内生のピペコリン酸とともに重水素標準ピペコリン酸が検出された。従って、リジンによるウキクサの花成誘導はリジンから生成するピペコリン酸を介していることがわかった。ピペコリン酸処理、未処理のウキクサからタンパク質を抽出し、差異を検討したところ、大きな違いは見出されなかったが、未処理のウキクサから処理区よりも量的に多いバンドが検出された。このタンパク質の減少と花成誘導との関連は、現時点では不明であるが、花成と何らかの関連があるかもしれない。

昨年度、ウキクサでは、ピペコリン酸はリジンから生合成されることを重水素標識リジンを用いた代謝実験で明らかにした。本年度、さらに追究した結果、リジンを培養液に入れない場合に比べて、リジンの添加によってピペコリン酸のレベルが数倍に上昇することを明らかにした。これまでの研究から、既に、ピペコリン酸によるウキクサの花成誘導効果はリジンに比べてはるかに強力であることを明らかにしている。従って、上記の結果は、リジンのウキクサに対する花成誘導効果はリジンがピペコリン酸へ変換されることによって発現していることを強く示唆している。貧栄養条件下でも、リジンを培養液に添加することによって花成が誘導されることが報告されており、この場合も、生体内でリジンがピペコリン酸に変換されることによって花成が誘導される可能性が高いものと考えられる。ウキクサの培養液にピペコリン酸を添加することによって、花芽形成を誘導することができる。この系を用いて、花芽誘導過程で特異的に発現する遺伝子の解析を試みた。ピペコリン酸処理によって全RNAが増加する傾向が認められたが、遺伝子発現の質的変化はウキクサ全体でみる限り、ピペコリン酸処理の前後ではほとんど変化しないことが判明した。
分化、老化、癌化の過程で変化するDNAメチル化の生物学的意義

がん細胞のもつさまざまな特性のうちDNAメチル化の変化は多くの腫瘍でしかも高頻度に見出されている。さらにがんの多発する老化個体でも変化していることが分かっている。しかしこのDNAメチル化の変化ががん化の結果なのが原因なのかについては未だ確たる証拠があかっていない。そこで本研究では、この点を解明すべく以下の二点からのアプロ-チを行った。(i)DNAメチル化を人工的に変更させた時何が起こるか、(ii)肝腫瘍でみられるcーmyc遺伝子のメチル化の変化の詳細な解析。(i)についてはすでに培養細胞で有効であることが報告されている放射線照射とアルブミンプロモ-タにつないだDNAメチルトランスフェラ-ゼのマウスへの挿入の2つを試みたが、放射線によるDNAメチル化の変化には組織特異性や分化時期依存性があり必ずしも有効な方法ではないことが分かった。DNAの挿入については技術的な問題が解決しきれず、現在も引続き行っている。また(ii)についてはC3Hに自然発生した肝腫瘍とB6C3F_1に誘発された肝腫瘍40例について調べた結果、第2エクソンから第2イントロンでのメチル化の変化と5'上流ー3.5kb領域での脱メチル化が90%以上の高頻度におこっていることを見出した。特に5'側上流域での脱メチル化はヒトの肝腫瘍でもみられており、がん化に伴うcーmyc遺伝子の発現異常と密接に関与している可能性を示唆している。しかし変化のみられたcーmyc遺伝子上流域の遺伝子発現調節への役割についてはまだ何も分かっていないので、今後に残された課題といえよう。
心不全における内皮依存性血勘拡張能異常に関する研究

本年度は心不全における血管拡張障害に、内皮機能がいかに関与するかを心不全患者で検討した。(方法)心不全患者及び対照健康成人の前腕動脈にカニューレを挿入し、薬物注入及び直接的動脈圧測定に用いた。ストレインゲージにより前腕血流量を測定し、血管抵抗を算出した。内皮依存性血管拡張反応はアセチルコリン(ACh)やサブスタンス-P(S-P)を少量、段階的に動注し検討した。内皮非依存性拡張反応はソジウムニトロプルシド(SNP)を動注し検討した。10分間前腕阻血後の反応性充血時の血管拡張反応を検討し、心不全における拡張反応低下が、基質であるL-arginine投与により、改善するかも検討した。(結果)心不全患者では前腕血流量は対照群に比し有意に低下しており、血管抵抗は上昇していた(43±5VS20±2units,PCO.01)。AChによる血管拡張反応は心不全患者で対照者に比し有意に低下していたが(PCO.01)、S-PやSNPによる血管拡張反応は両者間で差がなかった。反応性充血時の最小血管抵抗は心不全患者で対照群に比し有意に大きかった(1.8±0.4VS2.4±0.5units)。L-arginineの前投与はACh高用量投与や反応性充血時の最大血管拡張反応を不全患者のみで増加させたが、対照群では変化させなかった。L-arginineの前投与はS-PやSNPによる血管拡張反応に心不全患者及び対照群で影響しなかった。(結論)これらの結果は心不全患者ではAChによる内皮依存性血管拡張反応低下を示唆する。しかしS-Pによる血管拡張反応に低下はなく、二つのagonistによる内皮依存性血管拡張能の差異の機序は明らかではない。心不全患者に特徴的に認められる反応性充血時の最大拡張能の低下はL-arginineにより改善した。この成績は心不全患者の最大拡張能低下に内皮異常が関与している可能性を示唆する。
前駆細胞移植による血管再生療法の分子基盤探索と新規臨床応用に向けた展開研究

今回は骨髄細胞以外の自己組織由来幹細胞移植による血管再生療法の可能性を探るために、以下の検討を行った。脂肪組織をミンスし、コラゲナーゼ処理を行う。浮遊培養を行い、成熟脂肪細胞を分離したのちに、付着細胞としての間葉系幹細胞(Mesenchymal stem cell:MSC)・内皮細胞・周皮細胞を1塊として採取した。低酸素下培養を行い、間葉系幹細胞(Adipose-derived stem cell:ASC)の分離を行った。ASCの血管再生能に関する研究:自己脂肪組織由来ASCについて、細胞移植による血管新生効果について検討を加えた。我々はこれまでにマウス・ラット・ウサギの重症下肢虚血モデルやラット・ブタ心筋梗塞モデルにおいて、自家骨髄単核球細胞やヒト臍帯血由来内皮前駆細胞の移植により、虚血心筋・骨格筋内の血管新生や側副血行路の発達が増強され、心機能改善や下肢血流増加がもたらされることを報告してきた(JCI 2000;Circulation 2001)。今回これら動物モデルを用いて、脂肪組織由来ASC細胞移植による血管再生効果についてin vivoで検討した。ASC移植は、マウスにおいて下肢虚血後の血管新生を有意に増強した。ASC移植群では、組織からのSDF-1やVEGFの産生が増強しており、末梢血液中、骨髄中のEPC様細胞の増加が見られた。この血管新生作用やEPC増加作用はSDF-1中和抗体の投与で有意に抑制された。我々は、成人の末梢血液においても血球血管芽細胞(hemangioblast)のような未分化内皮細胞が存在し、それが骨髄に由来することを報告してきた(Asahara et al. Science 1997)。その後、これらの細胞を多く含む自己骨髄単核球細胞移植による血管新生効果があることを報告してきた(Tateishi-Yuyama etal.Lancet.2002)。また、細胞機能の強化療法については、以前我々は移植前虚血刺激で細胞機能が強化されることを報告している。最近我々は自己骨髄単核球細胞と薬剤(Beraprost sodium)を組み合わせたり(Otsuka et al. Ann.Vasc.Surg. 2006)、遺伝子治療(Angiopoietin-1 plasmid)を組み合わせることで(Kobayashi et al. ATVB. 2006)、より効果的な血管再生療法が可能なことを確認し報告してきた。これらの方法によると、より少ない自己骨髄液採取(従来の5分の1程度)でも、これまでとほぼ同等の治療効果・強度が期待出来ることが分かる。本申請研究では、ヒト型Angiopoietin-1プラスミド遺伝子、VEGF-E/PIGFキメラ・プラスミド遺伝子などを治療遺伝子としてさらに考慮し、これらと自己骨髄細胞単核球細胞移植による血管新生療法の増強方法について探求していく。今年度はVEGF-E/PIGFヒト型キメラ・プラスミド遺伝子について、遺伝子単独治療でも血管再生療法が可能であることを報告した(Inoue, et al. ATVB. 2007)。遺伝子治療と細胞治療の併用療法や、その他の細胞治療効果の増強法に関しては、循環器領域で未だ全世界的に研究が遅れている分野であり、今後も研究が待たれる分野である。今年度はまず骨髄細胞移植に代わる、代替え幹細胞を用いた血管再生療法の開発について焦点を絞り研究を行った。我々は自己由来細胞ソースとして皮下脂肪に着目した。皮下脂肪は低侵襲で容易に採取することが可能で、間葉系幹細胞を培養により分離拡張できる。脂肪組織由来幹細胞の分離:脂肪組織をミンスし、コラゲナーゼ処理を行う。浮遊培養を行い、成熟脂肪細胞を分離したのちに、付着細胞としての間葉系幹細胞(Mesenchymal stem cell: MSC)・内皮細胞・周皮細胞を1塊として採取した。低酸素下培養を行い、間葉系幹細胞(Adipose-derived stem cell: ASC)の分離を行った。ASCの血管再生能に関する研究;自己脂肪組織

由来ASCについて、細胞移植による血管新生効果について検討を加えた。我々はこれまでにマウス・ラット・ウサギの重症下肢虚血モデルやラット・ブタ心筋梗塞モデルにおいて、自家骨髄単核球細胞やヒト臍帯血由来内皮前駆細胞の移植により、虚血心筋・骨格筋内の血管新生や側副血行路の発達が増強され、心機能改善や下肢血流増加がもたらされることを報告してきた(JCI2000; Circulation 2001)。今回これら動物モデルを用いて、脂肪組織由来ASC細胞移植による血管再生効果についてin vivoで検討した。ASC移植は、マウスにおいて下肢虚血後の血管新生を有意に増強した。ASC移植群では、組織からのSDF-1やVEGFの産生が増強しており、末梢血液中、骨髄中のEPC様細胞の増加が見られた。この血管新生作用やEPC増加作用はSDF-1中和抗体の投与で有意に卸制された。前駆細胞移植の他疾患への応用:次に内皮前駆細胞や骨髄細胞の他の疾患モデルへの応用に関する基礎的検討を加えた。糖尿病モデルマウスの下肢に移植すると、末梢神経表面の栄養血管新生とともに、末梢神経機能が改善することを示した。急性・慢性肝傷害が前駆細胞移植により改善することを示した。
Pt金属の核スピン・オーダーと量子ゆらぎの研究

濃縮^<195>Pt(97%)の試料について核スピン秩序の転移温度を見積もるためにNMRの測定によりスピンー格子緩和時間T_1、とスピンースピン緩和時間T_2の温度変化、磁場変化を求めた。さらにKnight shiftも測定した。また比較のために天然のPt(^<195>Ptが33.8%)についても同じ測定を行った。その結果T1についておよびKnight shiftは濃縮試料も天然のPt試料も同じ値を示した。それに対して、T_2は濃縮試料は天然の半分の短さであった。これは核スピン間の距離が短くなったため、核スピンー核スピン間の相互作用が強くなったと理解できる。さらにT_2には磁場依存性が有り、この磁場依存性がやはり濃縮試料の方が大きい。この磁場依存性については現在分からない。これまで求めたT_1、T_2の値から核スピン秩序転移の温度を求めると4.5μKとなった。濃縮試料の磁化の温度変化をSQUIDで1.8K300Kの間で測定した。その結果Curie-Weiss型の温度変化を示した。この温度変化の原因を調べるために80%濃縮試料と濃縮試料と同じ方法で作られた天然の試料(33.8%)も同様に磁化測定をおこなった。その結果、磁化の大きさは195Ptの濃度に比例している。しかし通常の方法で作られた天然の試料についてはこのような大きな温度変化は観測されなかった。この温度変化から転移温度を見積もると0.7Kであった。この興味有る温度変化については今後とも研究する予定である。目的:Pt金属の核スピン・オーダーを実現しその核磁性と電子との相互作用、特に電子のゆらぎの効果を調べる。また核スピンもI=1/2なので量子ゆらぎが大きいと思われる。この量子ゆらぎの効果も調べる。またPtは核スピンを持っている同位元素が195Ptだけで天然には33%しか存在しないので、逆に濃縮した試料を用いることによって核スピンの濃度依存性の実験を周りの状況を全く変えずに行うことが出来る。初年度はまず98%濃縮した試料についての実験を開始した。濃縮Ptについての実験はこれが最初である。試料:濃縮した^<195>Ptの直径0.5mmのwire試料をアメリカOak Ridge National labolatoryから購入することが出来、科技庁(現文部科学省)の金材技研で不純物の分析を依頼したところ、主にFe不純物だが2.3ppmと非常に少なく、我々の超低温実験に充分使える試料であることが分かった。RRR:試料は線材化したときの歪みが残っているため非常に硬かった。そこで歪みの目安となる抵抗比(RRR)を測ったところやはり20と非常に悪かった。濃縮試料は非常に高価なためまず通常のPt試料で予備実験を行うために同じ形状のwire試料を購入しRRRを測定したところこれは200であった。NMR測定:核磁気秩序の転移温度の見積もりのために、核スピン-核スピン間の相互作用の大きさの目安となるスピン-格子緩和時間T_1を測定した。通常のPt wireはこれまで測定されている値を与えたが、濃縮したPtはNMRの信号が観測されなかった。NMRの信号を与える核スピンは濃縮されて多い筈なのでこれは歪みが大きいためであろうと思われる。現在熱処理をして歪みを取り除く最適な方法を調べている。Pt金属の核スピン・オーダーを実現しその核磁性と電子との相互作用、特に電子のゆらぎの効果を調べることを目的とし、実験を開始した。97.5%に濃縮した^<195>Pt金属の直径0.5mmのwire試料をアメリカOak Ridge National labolatoryから得た。不純物の分析によると、主にFe不純物だが2.3ppmと非常に少なく、超低温実験に充分使える試料であることが分かった。

試料は線材化したときの歪みが残っているため抵抗比(RRR)は20であった。これが熱処理によって約40になった。NMR測定によりスピン-格子緩和時間T_1とスピン-スピン緩和時間T_2の測定を行った。比較のため同じ形状の自然に存在するPtについてもNMR測定を行った。その結果T_1については同じ値,これまで報告されているものと同じ値が濃縮試料および天然Pt試料の両方で得られた。しかし,T_2は濃縮試料の方が半分の短さであった。これは核スピン間の距離が短くなったため核スピン-核スピン間の相互作用が強くなったものとして理解できる。ところがT_2の磁場依存性が両方の試料で観測されている。これは磁場の不均一さから来るものと理解できるがその磁場依存性に4倍の違いがある。即ち濃縮試料の方が4倍磁場依存性が大きい。これは現在のところ理解できない。このようにこの研究は世界で始めて濃縮PtのNMRの測定を行い大変重要な知見を得ている。これは単にPt試料に付いてではなく濃縮核スピン系の本質を明らかにする研究と言える。一方大型核断熱消磁冷却装置の準備もほぼ終了したので次年度は超低温での実験が開始される。我々はPt金属の核スピン・オーダーを実現しその核磁生、特に量子ゆらぎの効果を調べることを目的としている。Pt金属の核の同位元素の中で核スピンが有るものは^<195>Ptだけでありその存在比は33.8%であり、核スピンはI=1/2である。濃縮^<195>Ptを用いることにより電子状態は変えることなく核スピンの濃度を変化できる。従って理想的に磁気秩序状態の濃度依存性の研究ができる。我々は97.5%に濃縮した^<195>Pt金属の直径0.5mmのwire試料をアメリカORNLから得た。不純物の分析によると、主にFe不純物だが2.3ppmと非常に少なく、超低温実験に充分使える試料であることが分かった。NMRによりスピン-格子緩和時間T_1とスピン-スピン緩和時間T_2の測定を行った。比較のため同じ形状の天然のPtについてもNMR測定を行った。その結果T_1Tは濃縮試料も天然の試料も同じ値30msec・Kとなり,これまで報告されているものと同じ値である。しかし、T_2は濃縮試料の方が半分の短さであった。これは核スピン間の距離が短くなったため核スピン間の相互作用が強くなったものとして理解できる。その磁場依存性に濃縮試料の方は天然よりも4倍大きい。またナイトシフトの測定も行われておりその値は濃縮試料と天然の試料とも同じ値で、-4.2%であった。一方この試料の磁化率の温度変化の測定を行った。^<195>Ptの濃度に比例して磁化が低温で大きくなっている。通常Pt金属の磁化率は温度にあまり依存しないパウリ常磁性を示す。どうしてこのように大きな温度変化を示すか明らかではない。ナイトシフトにも現れていない。これは単にPt試料についてではなく濃縮核スピン系の本質を明らかにする研究と言える。
体格決定の新規分子機構に関する研究

個体の体格形成には成長ホルモン(GH)からインスリン様成長因子(IGF1)へのシグナル(GH-IGF1軸)が深く関わっている。私達研究グループはEphA4KOマウスおよびこのマウス由来細胞の詳細な研究から、ephrin-EphA4シグナル伝達系がGH受容体(GHR)およびその下流分子と相互作用してそのシグナルを増強し、IGF1産生を増強することを発見した。これは従来のGH-IGF1 axis定説に修正を加えるものである。EphA4が個体の体格決定にIGF1産生を介して関与することは、EphA4KOマウスへのIGF1の皮下注により正常化することにより確認した。これまでにEphA4のノックアウトによりマウスの体格が小さくなる原因として、GH-GHRを介するシグナル伝達にEphA4が重要な働きをすることを発見している。臓器特異性を調べるためにCre-LoxPシステムを使ってEphA4を臓器特異的にノックアウトした。組織特異性EphA4ノックアウトマウスの作製とその解析:肝細胞特異性・横紋筋細胞特異性・脳細胞特異性EphA4ノックアウトマウスを作製した。これらのマウスから血液・組織等を採取し、体格を詳細に測定した。体格に関しては、臓器特異性のノックアウトでは変化は認められなかった。今後これらのサンプルを使ってIGF1mRNA発現や血清IGF1濃度の測定等を実施していく。Ephrin-EphA4系とGH-GHR系とのクロストーク接点の解明:EphA4がIGF1産生に関わる経路としてGH-GHR-Jak2系シグナルの修飾を介するものと、この経路によらないものの2種類に分けて研究を進めた。1EphA4の発現によるGHR/Jak2下流シグナルおよびIGF1 mRNA量への作用を調べるために、EphA4遺伝子(-/-)マウス由来線維芽細胞にretrovirusを使ってEphA4を発現させた。2Jak2発現の有無およびEphA4発現の増減によるIGF1産生シグナルへの作用を調べるために、Jak2遺伝子(-/-)マウス由来線維芽細胞にretrovirusを使い、Jak2およびEphA4を量を変えて発現させた。3上記12の細胞を使って、リガンド刺激後のGHR, Jak2, Stat5bなどの分子の活性化を、免疫沈降(IP)による候補分子の免疫沈降(IP)、およびその後のチロシンリン酸化蛋白特異的抗体を使ってのウエスタンブロッティング(IB)により解析した。4上記3の研究と合わせて、特にEphA4との分子間結合を調べるために、GH-GHR系の各シグナル分子との共免疫沈降およびIBを実施した。5上記3の研究と合わせて、シグナルの最終点であるIGF1転写への作用を調べるために、Real time PCR法を用いてIGF1 mRNAを定量する。6EphA4発現の有無の条件下で、IGF1刺激によるIGF1Rより下流のシグナルを調べるために、下流分子であるIRS1, MAPK, IP3-kinaseの活性化を、活性化分子特異的抗体を使用して解析した。EphA4シグナルがIGF1産生および体格変化につながる組織の決定:臓器により、そのIGF1産生機序がGH依存性および非依存性と異なることが知られているため、臓器毎にCre-LoxP系を使ってEphA4を欠損させた。本研究は、EphA4 KOマウスの体格が小さいのは何故かという疑問から発したものである。生直後の体格は正常マウスと変わらないため、生後の成長に関係するシグナルへの影響が最も考えられた。これまでに知られている生後の体格決定に大きな作用を持つシグナル伝達系はGH-IGF1 axisである。EphA4は細胞膜に存在する受容体であるため、GHRおよびIGF1Rとの相互作用を調べた。EphA4はGHRと直接結合してGHR下流のシグナルを増強することを発見した。また、これまでGHRの下流と考えられてきたJAK2-STAT5Bを介するシグナルは、EphA4の下流でもあることが判明してきた。本研究はGH-IGF1 axisのこれまでの定説に修正を加えたものである。当初の計画のとおり、EphA4 KOマウスのGH-IGF1 axisに関する種々の指標を正常マウスと比べた。また、マウス胚から線維芽細胞(MEF)を樹立し、JAK2-STAT5Bを介するシグナルについて詳細に調べた。EphA4 KOマウスでは、GH-IGF1 axisに属するシグナルが脳を除くほとんど全ての臓器で低下しており、血中IGF1値が正常の1/3程度に低下していた。MEFにおける実験でも、EphA4 KOマウス

由来のMEFにおいて、GHRおよびEphA4の活性化からIGF1産生につながるJAK2およびSTAT5Bのリン酸化シグナルがGHおよびephrinの刺激下で低下していた。以上から、液性因子であるGHと細胞間の接着により伝達されるephrin/Ephシグナルがお互いにクロストークをすることにより生後の体格を決定していくことが明らかとなった。分子医学臓器特異性EphA4ノックアウトマウスの作製には少し手間取っているが、シグナル伝達の分子間相互作用に関してはかなり詳細な解析が順調に進んでいる。Ephrin-EphA4系とGH-GHR系とのクロストーク接点の解明に関しては、完了し、既に出版している。後半のEphA4シグナルがIGF1産生および体格変化につながる組織の決定の部分に関しても、並行してマウスでのCre-LoxPによる遺伝子操作を実施してきたため、臓器特異的なEphA4KOマウスを作製できている。これまでに作製した単発性の臓器特異的EphA4ノックアウトでは体格の変化は認められていない。さらに詳細に検討することにより臓器特異的なEphA4の欠損が体格決定の要素となり得るかどうかを調べていく。EphA4/GHR/JAK2/STAT5B分子レベルの相互作用に関してはかなりの成果を得ている。IGF1産生に繋がる分子機構を、分子生物学的な手法を用いて今後も継続して研究していく。これまでは順調に成果を上げてきている。今後も当初の予定通り研究を進める。申請時と比べて早めに計画を完了しようとした、25年度当初の研究計画から変更があったため。申請時の計画に戻して実行する。
プエラリアミリフィカのエストロゲン受容体に対する作用と更年期障害に対する代替医療

プエラリアミリフィカ(Pueraria mirifica : PM)はタイに自生するマメ科葛属の多年草で、女性の間で不老長寿の民間薬として古来より珍重されてきた。平成15年度には、このmiroestrolについて、エストロゲンレセプター(ER)への結合を分子生物学的手法で確かめた。また平成15、16年度には、このPMが更年期障害の治療・予防に効果があることを予測し、臨床研究を行った。研究に先立って学内倫理委員会の承認を得ている。更年期症状はあるが、服薬等のない比較的健康な4050歳代の女性23人に同意を得て参加して頂き、PM群、プラセボ群に分け(二重盲検法)、自覚症状、他覚症状、血圧・脈拍数、身長・体重、臨床検査(血算・生化・ホルモン・脂質)、レオロジー、脈波伝播速度の測定を行った。その結果、PM群で、FSHの有意な減少がありPMが日常使われている量でエストロゲン作用を発揮することが明らかとなった。またPMは総コレステロール・LDLコレステロールの減少、HDLコレステロールの増加などをもたらし、閉経時の更年期症状などに対するホルモン補充療法と同様の脂質に対する反応であった。血圧、体重などには有意の変化はなく、閉経期特有の愁訴についても、自覚症状そのものが多彩であったこともあり、PM群とプラセボ群の間に有意の差は認めなかった。副作用として、PM服用の数日後から乳房の張りを認め、半量に減量せざるを得なかった症例が1例あり、生化学的肝機能検査、血液検査などに異常の見られた対象者はなかった。以上の結果は現在論文として執筆中である。プエラリアミリフィカ(Pueraria mirifica : PM)はタイに自生するマメ科葛属の多年草で、この地方に住む女性の間で不老長寿の民間薬として古来より珍重されてきた。この埴物にエストロゲン様作用があることが明らかにされ、主要な生理活性作用物質がmiroestrolであることもすでに報告されている。このmiroestrolについて、我々は予備実験として、エストロゲンレセプター(ER)への結合を分子生物学的手法で確かめている。そこでこのPMが、更年期障害の治療・予防に効果があることが予想されるので、乾燥粉末が健康食品として厚生労働省に認められているPMについて、更年期障害に対する代替医療として有効であるかを、ERに対する基礎的・臨床的両面から検討した。研究に先立って学内倫理委員会の承認を得た。臨床研究としては、更年期症状はあるが、服薬等のない比較的健康な4050歳代の女性23人に自主的に参加して頂き、PM群、プラセボ群に分け(二重盲検法)、自覚症状、他覚症状、血圧・脈拍数、身長・体重、臨床検査(血算・生化・ホルモン・脂質)、レオロジー、脈波伝播速度の測定を行った。その結果、ホルモン、脂質の改善効果は認められたが、他の諸検査は有意差が認められなかった。投与期間が短いことも関係があると思われ、今後さらに継続していく予定である。また、PM群とホルモン補充療法群との比較も検討する予定である。基礎研究としては、エストロゲン様作用がERに特異的であるかどうか、ER発現ベクターの代わりに種々の核内レセプター発現ベクター(TR, RAR, RXR, PPAR, ARなど)とそれぞれのホルモン応答領域を有するルシフェラーゼリポーターをトランフェクションすることにより確認し、また、ER alphaやER beta特異性があるかどうか、ERの転写共役因子との関連も解析する予定である。プエラリアミリフィカ(Pueraria mirifica:PM)はタイに自生するマメ科葛属の多年草で、女性の間で不老長寿の民間薬として古来より珍重されてきた。

平成15年度には、このmiroestrolについて、エストロゲンレセプター(ER)への結合を分子生物学的手法で確かめた。また平成15、16年度には、このPMが更年期障害の治療・予防に効果があることを予測し、臨床研究を行った。研究に先立って学内倫理委員会の承認を得ている。更年期症状はあるが、服薬等のない比較的健康な4050歳代の女性23人に同意を得て参加して頂き、PM群、プラセボ群に分け(二重盲検法)、自覚症状、他覚症状、血圧・脈拍数、身長・体重、臨床検査(血算・生化・ホルモン・脂質)、レオロジー、脈波伝播速度の測定を行った。その結果、PM群で、FSHの有意な減少がありPMが日常使われている量でエストロゲン作用を発揮することが明らかとなった。またPMは総コレステロール・LDLコレステロールの減少、HDLコレステロールの増加などをもたらし、閉経時の更年期症状などに対するホルモン補充療法(黄体ホルモンやLH-RHアナログ投与など)と同様の脂質に対する反応であった。血圧、体重などには有意の変化はなく、閉経期特有の愁訴についても、自覚症状そのものが多彩であったこともあり、PM群とプラセボ群の間に有意の差は認めなかった。副作用として、PM服用の数日後から乳房の張りを認め、半量に減量せざるを得なかった症例が1例あり、生化学的肝機能検査・血液検査などに異常の見られた対象者はなかった。以上の結果は現在論文として執筆中のものである。