hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
経静脈栄養輸液に含まれる微量元素の最適必要量の検討

血漿の銅濃度はB、C群はA群より有意に低値を示したが、D群ではA群と同じレベルであった。肝臓、心臓、脾臓、腎臓など臓器中の銅濃度は血漿中の銅濃度と良い相関を示し、血漿中の銅濃度は銅の栄養状態を示す良い指標となると考えられた。亜鉛も銅と同様な傾向が認められ血漿亜鉛濃度の測定は亜鉛の臓器中濃度を良く反映していた。血漿アルカリフォスファターゼ活性も血漿亜鉛濃度と正の相関を示し、臨床的に亜鉛の体内動態を知る上に有用と考えられた。一方Ca、Mgは経口投与時と輸液投与時で分布が異なっていたが、このような変動は血漿中のCa、Mg濃度には反映されなかった。近年、医療技術の進歩により種々の疾患に長期の完全静脈栄養輸液が行われている。しかし、輸液にはタンパク質、脂肪、糖質や数種のビタミン、カルシウム、マグネシウムなど一部のミネラルが含有されているのみで微量元素は全く添加されていない。全ての栄養素の摂取を輸液に頼る場合、特に微量栄養素欠乏症発生が憂慮される。一方、腸管における吸収過程で制御がない経管投与では輸液中に微量元素が必要以上に含まれていたり、必要量が明確になっていない元素では過剰による中毒発生の危険がある。輸液中微量元素組成の決定条件について、昨年度にひきつづき本年は以下の研究結果を得た。(1)昨年度の文献的検索結果を基に、仮に、Fe、Cu、Zn、MnおよびIの5元素のヒト輸液用微量元素の組成を元素として、Fe:1.955、Zn:3.923、Cu:0.3176、Mn:1.099、I:0.1269mg/2mlと定めた。(2)Fe、Cu、Zn、MnおよびI5元素の欠乏または添加飼料にて飼育後のラットをこれら5元素を含む完全静脈栄養輸液管理下で飼育、各種検討を加えた。2週間の飼料中微量元素欠乏群及び1週間の飼料中微量元素欠乏後1週間の微量元素欠乏輸液施行群では血液中Fe、Cu、Zn、Mn,Iは低下、各種組織中微量元素も低下したが、Mnのみは脳に蓄積する傾向が認められた。1週間の微量元素欠乏飼料育後1週間の本微量元素液添加輸液施行群(ヒト常用量及び3倍量群)では各種組織中Fe、Cu、Zn、I濃度は回復が認められたが、Mnではやはり脳への蓄積が認められた。微量元素液無添加群では生理学的、血清生化学的、組織学的にも異常が認められたものもあったが、本微量元素液添加により正常範囲を保つことが出来た。(3)本微量元素液添加輸液管理下では血清には反映されない脳へのMnの蓄積が認められたため、その栄養アセスメント方法について検討を加え、リンパ球中Mn濃度が生体組織中Mn栄養状態を良く反映することを明らかにした。昨年までの研究により鉄、銅、亜鉛、マンガン及び沃素を添加した輸液組成の妥当性を検討するために、動物実験を行っているが、鉄、銅、亜鉛、沃素については、大旨適当な量であることが明らかになった。しかし、マンガンに関してはヒト常用量の3倍濃度の投与でラット脳中のマンガン濃度が上昇することが認められた。そのため、本年度はマンガンに関して検討を加えた。まず、マンガンは必須元素とされているが欠乏状態について明確になっていない。そこでラットを2代にわたってマンガン欠乏飼料で飼育し、マンガン欠乏ラットを作成することに成功した。その結果、マンガン欠乏ラットでは成長遅延、運動の異常、鉄欠乏性貧血、脂肪代謝異常、肝機能障害、組織中マンガンおよび鉄量の低下が発生しマンガンの必須微量元素としての重要性が示唆された。
対流圏OHラジカルの直接測定による大気化学反応理論の検証

大気中OH/HO_2ラジカル測定装置の開発を行った。低圧下でLIFを測定する手法を採用し、測定セルを設計し製作した。更に、本装置を校正するために検量実験を行った。既知量のOHラジカルを生成する手法として化学滴定定法と光分解/光吸収法の2種類について行った。化学滴定法では水素分子のマイクロ波放電による大過剰の水素原子と既知量のNO_2を反応させることにより既知量のおHラジカルを生成しセル内で蛍光を観測した。この手法によりセル内で10^9-10^<11>radicals cm^<-3>のラジカルを生成でき蛍光信号とラジカル濃度は良い直線関係が保証されることが明らかとなった。更に、水蒸気の光分解により10^<11>radicals cm^<-3>程度のOHラジカルが生成することが100mの長光路(ベースパス1M ; 100回反射)吸収法測定により明らかとなり、そのOHラジカルを含んだ大気試料をLIFセルに導入することにより検量を行った。両者の手法で装置の感度を調べたところ良い一致が見られた。検出下限を見積もったところ20Hzのレーザーくり返しで1分間の積算により4×10^<10>radicals cm^<-3>という値が得られた。本装置での検出下限を規定している主な要因として多重反射ミラーからの発光による背景光の大きさが問題であることが明らかとなり、セルの改良とレーザーのくり返しを1kHzに増加したところ検出下限は7×10^8radicals cm^<-3>まで改善された。この結果HO_2ラジカルについては大気中濃度を測定できることが明らかとなった。本年度から対流圏光化学反応理論検証のための、レーザー誘起蛍光法(LIF)に基づく対流圏OHラジカル測定装置の製作に着手した。1.レーザー光源としては半導体励起YLFレーザーの第二高調波(524nm)で色素レーザーを励起し、さらにその第二高調波をとることによってOHの0-0バンドの吸収に相当する308nmの光を得た。このシステムによってくり返し5kHz、パルスあたりエネルギー数μsec、スペクトル幅約0.1cm-1の励起光を得ることができた。2.オゾン干渉を排した微弱蛍光信号を検出するため、5nsec以下の高速ゲートのかけられるゲート付きMCPとフォトンカウンティングを組み合わせた光検出系を製作した。3.レーザー波長をOHの回転線にロックするための、OHの参照シグナルを得るための、OH参照セルを製作した。参照セルとしては、セル内を室内空気を数torrの圧力で流通させ加熱したアルメル線のフィラメント上での水蒸気の熱分解によってOHラジカルを生成させ、その中をレーザー光を通過させて得られるLIFシグナルを測定するための光電子増倍管を組み込んだものとした。4.励起用レーザー光を球面鏡の間で多重反射させることによって励起効率を高め、これと直角の方向からレンズを用いてMCP上に蛍光を集光する大気中OHラジカルのLIF測定用セルを設計、製作した。多重反射鏡システムとしては従来通常用いられている3枚鏡ホワイトセルの代わりに、2枚鏡システムを採用し、調整の簡単化を図った。5.大気を吸引して上記の多重反射LIFセルに試料大気を導入するための、大気導入系および真空排気系を設計製作した。昨年度に引き続きレーザー誘起蛍光法に基づく対流圏OHラジカル測定装置の製作、特にキャリブレーションシステムの構築を行った。(1)低圧下キャリブレーションシステム

減圧下における濃度既知のOHラジカル源としてH_2/Heの放電で生成した水素原子のNO_2による滴定反応H+NO_2→OH+NOを利用し、OHラジカル測定装置の調整および絶対濃度の校正を行った。この反応によって生成したOHの濃度範囲は10^9-10^<11>raclical/cm^3であり、製作された測定系がこの濃度範囲で直線性を持つことを確認した。(2)大気圧下のキャリブレーション大気圧下での校正にはH_2O/N_2の低圧水銀灯(184nm)による光分解でOHを生成し、その絶対温度をレーザー長光路吸収法で測定すると同時にOHラジカル測定装置を稼働し、その絶対校正を行うシステムを採用することとし、このためのシステムを設計・製作した。長光路セルとしては光学的ベース長1m、100パス、全光路長200mのものを設計・製作した。また吸収測定用のレーザーとしてはYAGレーザー励起の色素レーザーを用い、信号はボックスカ-積分器を用いて処理するシステムとした。設計によれば本装置によって10^8raclical/cm^3オーダーのOHラジカルを大気圧下で生成し、レーザー長光路吸収を測定すると同時に、実際の野外測定の場合と同じ条件でピンホールを通じてOHラジカルを蛍光セルに導入し、測定系の絶対校正を行うことができる。本年度はそのための準備と装置のセットアップを行った。前年度に完成したLIF測定セルを用いてOHラジカルの濃度校正を行った。既知量のOHラジカルを生成する手法として化学滴定定法と光分解/光吸収法の2種類について行った。化学滴定法では水素分子のマイクロ波放電による大過剰の水素原子と既知量のNO_2を反応させることにより既知量のOHラジカルを生成しセル内で蛍光を観測した。この手法によりセル内で10^9-10^<11>radicals cm^<-3>のOHラジカルを生成でき蛍光信号とラジカル濃度は良い直線関係が保証されることが明らかとなった。更に、水蒸気の光分解により10^<11>radicals cm^<-3>程度のOHラジカルが生成することが100mの長光路(ベースパス1M;100回反射)吸収法測定により明らかとなり、そのOHラジカルを含んだ大気試料をLIFセルに導入することにより検量を行った。両者の手法で装置の感度を調べたところ良い一致が見られた。検出下限を見積もったところ20Hzのレーザーくり返しで1分間の積算により4×10^<10>radicals cm^<-3>という値が得られた。本装置での検出下限を規定している主な要因として多重反射ミラーからの発光による背景光の大きさが問題であることが明らかとなり、セルの改良とレーザーのくり返しを1kHzに増加したところ検出下限は7×10^8radicals cm^<-3>まで改善された。
虐待予防の家庭訪問支援におけるアメリカの両親調査の活用に関する研究

本研究は、米国で標準化された「両親調査」をわが国の虐待予防を目的とした家庭訪問支援において活用する意義と課題を明らかにすることを目的とした。方法は、愛知県内の3つの自治体の協力を得て、母子手帳交付時のスクリーニングと、家庭訪問員が実施した両親調査の結果を収集し分析した。その結果、2012年の3市のスクリーニング結果ではハイリスク群が22.8%31.0%を占めていた。74例の「両親調査」を実施した結果では、総点に基づく要保護ケースのアセスメントと、家庭訪問の計画立案のためのアセスメントの2つの方法が有用であった。最後に日本の子育て文化などを考慮して「両親調査評価基準」の改訂を提案した。本研究は、虐待予防を目的とした米国Healthy Families Americaの家庭訪問プログラムで採用されている、アセスメント・ツール「Parents Survey」(以下、両親調査と言う)の日本語版を作成し、わが国で活用する意義と課題を明らかにすることを目的としている。平成23年度は、愛知県内の自治体3市に協力を依頼し、家庭訪問事業において「両親調査(日本語版)」を実施するための事前調査を行った。その結果、1両親調査のスキルの習熟、2記録用紙の簡略化の2つの課題が明らかになり、3市の担当課職員、及び家庭訪問員、研究協力者、研究分担者による研究会を重ね、記録用紙の簡易化を検討した。平成24年度には、愛知県内の妊娠届出書に虐待予防の視点が盛り込まれ、県内全市町村において統一様式が導入されたため、これを活用して「両親調査」の対象家庭をふるいわけるシステムを検討した。その結果、3市において「妊娠届出書」を出発点とした虐待予防のための支援システムが整い、対象家庭の訪問支援事業において「両親調査」を実施することができるようになった。今後は、「両親調査」の実施件数の増加に努め、そのデーターを解析して、家庭訪問支援のアセスメントツールとしての有効性を検討するとともに、「両親調査」の実施マニュアルを作成する予定である。本研究は、アメリカで虐待予防の成果を上げているHealthy Families America(HFA)の家庭訪問プログラムのアセスメント・ツールである「両親調査Parents Survey」(日本語訳)を、愛知県内の3つの自治体の養育支援訪問で実際に活用を試み、これをわが国で活用する意義と課題を明らかにすることを目的とした。研究の方法は、1「両親調査」の評価基準、実施方法、記録用紙の日本語版を作成し、協力自治体において「両親調査」(日本語版)を実施した結果を分析し、改訂版を提案した。2参考資料として平成24年度を中心に、「両親調査」の対象家庭を絞り込むプロセスに関する統計資料を収集し分析した。研究の結果、「両親調査」は養育支援訪問において2つのアセスメント機能を果たしていた。1つは10項目の総合点数に基づくアセスメントであり、特に、要保護児童ケースとしての支援の必要性を検討する場合に有用であった。2つ目は支援計画に生かすためのアセスメントで、各項目の聞き取り内容から対象家庭の強みと課題を評価するものである。また、項目別の記述内容を分析した結果、オリジナルの評価基準には盛り込まれていない評価内容や、日本の子育て状況にふさわしい言葉や表現の存在が明らかとなった。それゆえ、これらの結果を踏まえて「両親調査評価基準(日本語版)」の改訂(案)を作成した。なお、「両親調査」は虐待予防を目的とした子育て支援システムのハイリスクアプローチで活用するアセスメントツールであり、自治体の支援システムの整備が進み、継続的な家庭訪問の実施数が増えなければ「両親調査」の活用は進まない。今後は、各自治体の虐待予防を目的とした子育て支援システムの整備を支援しながら、「両親調査評価基準(日本語版)」の改訂版の活用数を増やし、養育支援訪問の成果との関連性を明らかにしたいと考えている。本研究は、妊娠・出産期に虐待ハイリスク家庭を把握するアセスメント・ツールとして米国のHealthy Families America(HFA)の家庭訪問プログラムで採用されているParents Survey(以下、両親調査と言う)の日本語版を作成し、わが国で活用する意義と課題を明らかにすることを目的としている。平成23年度の研究計画では、前半期に「両親調査(日本語版)」の予備調査を行い、後半期に本格的な調査を実施する予定であった。しかし、予備調査の段階で、「両親調査(日本語版)」を愛知県内の家庭訪問事業で実施する上で、二つの課題があることが明らかになった。一つ目の課題は、調査項目が多く調査時間がかかるため、調査項目を減らすか、時間を短縮する工夫が求められた。二つ目は、記録用紙が記述式であるため、記録にも多くの時間と労力を割かなければならないということであった。

そこで、協力を依頼した愛知県内3市担当課の職員、及び家庭訪問員、研究協力者、研究分担者らと研究会を重ねた結果、一つ目の課題については、調査項目を減らす方法ではアセスメント・ツール機能が損なわれるため、家庭訪問員がツールに習熟するまでは必要な時間を確保することになった。そして、ツールの習熟に要する時間やプロセスを調べるという新たな研究課題も得られた。また、二つ目の課題については、記録用紙の簡易化を検討し実現することができた。平成23年度の研究実績としては、両親調査の実施方法の調整と記録用紙の簡易化を行うことができ、予備調査の目的をほぼ達成することができた。当初の研究計画より「やや遅れている」理由は、「両親調査」の実施に至るまでに予想以上の課題の解決と時間が必要となったことにある。「両親調査」の対象は、一般家庭でなく、虐待予防の視点からふるい分けられた「支援を必要とする家庭」である。そのため、協力自治体(愛知県内3市)では、最初に対象家庭をふるい分ける段階から取り組む必要があり、その準備に時間がかかった。しかし、幸いなことに、ふるい分け項目を愛知県内統一の「妊娠届出書」に盛り込むことになり(平成24年度4月実施)、「両親調査」を実施する体制作りが進んだ。ただし、当初の計画より「両親調査」の実施件数はまだ少なく、今後、さらに実施件数を増やす努力が必要である。しかし、反面、予想を超えて、「両親調査」をアセスメント・ツールとして活かすシステムの整備が進み、対象家庭に関する基礎的な情報を得ることができた。つまり「妊娠届出書」(スクリーニング)⇒「両親調査」(アセスメント)⇒支援計画(プランニング)⇒家庭訪問(サービス)という一連の流れがシステム化されたのである。今後はこのシステムを活かして、できるだけ「両親調査」の実施件数を増やす努力をしたい。平成23年度の研究計画では、前半期に「両親調査(日本語版)」の予備調査を行い、後半期に本格的な実施を開始する予定であった。しかし、予備調査の段階で「両親調査」を愛知県内市町村の家庭訪問事業で実施するには、2つの課題があることが明らかになった。1つ目は、調査項目が多く予想以上に調査時間がかかること、2つ目は、記録用紙が記述式であるため、記録にも多くの時間と労力を要することであった。そこで研究会を重ねて検討した結果、家庭訪問員がツールに習熟するまで調査に時間をかけ、必要な時間数の実態を把握をすることになった。また、記録時間の問題を解決するために記録用紙を簡易化することができた。したがって、達成度としては、本調査を計画通りに実施することができなかった点では遅れてしまったが、「両親調査(日本語版)」の質を改善することができたため、予備調査の目的は十分達成できた。平成25年度は、協力自治体3市において、次の調査を実施する。第一は、「妊娠届出書」(愛知県統一様式)によるふるい分けの結果、及び、そこで把握された「支援を必要とする家庭」に関する基本情報を収集することである。第二は、「両親調査」の実施件数とその結果の全体的傾向に関する基本情報の収集協力自治体の担当部署が把握しているデーターの中から、実施した件数全体のスコア分布、項目別の割合、ふるい分け結果との関連性について分析することである。
蛋白質分解システムとストレス応答

分子シャペロン機能をもつと推定されるプロテアソームに会合したATPaseのcDNAクローニングによる構造解析:26Sプロテアソームは円筒型の20Sプロテアソームの両端にV字型の調節ユニットが分子集合したキャタピラ-型の巨大な(分子量約200万)分子複合体である。この調節ユニットには、これまで4種のATPase群が会合していることが知られていたが、本研究においてp45と名づけた新規なATPaseサブユニットのcDNAを分離してその一次構造を決定した。このATPaseは蛋白質分解に必要な代謝エネルギーを供給する機能を有すると推定されるが、さらに分子シャペロンとして変性蛋白質の再生や標的蛋白室に対するUnfordase活性があると推定されている。ガンマ型インターフェロン(IFN-_γ)による免疫プロテアソームの誘導機構と免疫始動制御における役割の解明:本研究において我々はIFN-_γがプロテアソームの機能特性を変化させると共に、MHCクラスII領域にコードされたプロテアソームのサブユニット遺伝子LMP2とLMP7の発現を誘導することを見出した。さらに、IFN-_γに応答して消失する2種のサブユニットを発見して、これらをXおよびYと名付け、その分子クローニングに成功した。その結果、IFN-_γはX/Y型からLMP2/7型プロテアソームへの変換を誘導して大量に侵入してきた非自己抗原のプロセシングを加速させ、細胞性免疫反応を亢進させると考えられた。さらに、ごく最近IFN-_γに応答して分子置換する新たなプロテアソームのペア-遺伝子ZとMECL1を発見した。我々はこのようにIFN-_γに応答してサブユニット構成を変換した抗原プロセシング用のプロテアソームを"免疫プロテアソーム"と命名した。
がん患者の外見変化に対応したサポートプログラムの構築に関する研究

本研究は、がん患者のQOLを向上させて治療意欲を高め、社会復帰を促進するための、「エビデンスに基づく外見関連の患者サポートプログラムの構築」を目的とする。具体的には、外見変化の実態と患者ニーズに関する数量的研究を通して基礎的なデータを収集するほか、外見のケアに関する先進国フランスの調査などを実施した。その結果をふまえて、段階的患者サポートプログラムの試案(成人患者版・思春期患児版)を作成した。最終年度には、プログラムをさらに改良し発展させるために必要な有用性の検証と普及に向けた研究にも着手した。本研究の目的は、まず、がんの治療に伴う外見の変化が患者の心理的well-beingを中心としたQuality of Lifeに与える影響を明らかにすること、そして、外見の変化に対応した患者サポートプログラムを構築し、それを臨床応用に展開するための研究基盤を確立することである。そこで平成21年度は、がん治療が外見にもたらす変化の実態(発生頻度・苦痛度・QOLへの影響など)を明らかにするために2つの横断研究を実施した。(1)がん専門病院にて外来化学療法を受けている18歳以上のがん患者753名に対する質問紙調査を行った(回収率84.7%)。80.3%の患者が、治療により変化した外見に懸念をもっていた。脱毛など、治療に伴い外見に現われる身体症状(=外見症状)64項目のすべてに該当者がおり、その発現は多岐にわたることや、外見症状の中には、治療部分の痛みなどの一般的な身体症状(=身体症状)よりも苦痛度の高いものがあった。また、外見症状に対する苦痛の感じ方や対象部位には明らかな性差や年齢差がみられ、男性より女性が、また高齢者より若年者のほうが外見の変化を苦痛に感じ、心理的well-beingが低かった。その一方で、年齢に関わらず97.4%の患者が、外見の変化とケアの情報は病院で与えられるべきと回答しており、外見に関するサポートニーズは高いことが示された。(2)10歳20歳の思春期小児がん患児42名に対する質問紙調査も実施した。治療内容に連動して、身体症状・外見症状ともに成人より体験頻度が高かった。外見症状については、成人同様の性差が認められたほか、年齢の高い患児の方が年齢の低い患児より、外見の変化を強く感じていた。また、小児・成人ともに、自分の外見変化に対処できたと感じている人ほど心理的well-beingが高かった。治療技術の進歩や外来治療環境の整備により社会生活を送りながら治療を続ける患者の増加している現状において、外見の問題は患者支援を考えるうえで重要であることが明らかになった。成人がん患者と思春期小児がん患児に対する2つの横断研究を実施して,がん治療が外見にもたらす変化の実態と心理的苦痛,外見関連サポートプログラムに対するニーズの高さが明確になった(平成21年度)。それをふまえて,平成22年度は,実際にプログラムの内容を構築するために必要な調査研究を実施した。1.小児がん患児のQOLを改善して治療意欲を向上させるために,「外見のサポートを通じた小児がん患児のQOL改善プログラム」を作成する一連の研究を行った。(1)研究1は,外見サポートプログラムに必要な構成要素を検討するため,実際に患児が体験した具体的な問題やニーズを明らかにした。(2)研究2では,思春期患児の外見変化に対する養護教諭の意識を調査した。(3)それらをもとに研究3として,小児用外見サポートプログラム(第1案)の作成を試みた。成人がん患者と比較し,外見変化が問題となる場面が異なることや,学校などの対応が患児の心理面に大きく影響すること,半面,学校側でもその対応について戸惑いがあることなどが明らかになった。2.成人に関しては,(1)外見のケア先進国であるフランスを訪問し,がん治療で代表的な病院や患者会の取り組みを調査した。外見に関する患者支援の現状と課題を調査する中で,日本との相違点や今後生じる可能性のある問題が示唆された。現在,それらを踏まえて,情報を提供するために必要な事項をまとめ直している。その上で,(2)最も外見の変化がQOLに影響を与えやすい若年がん患者(厚生労働省清水班研究「がん患者およびその家族や遺族の抱える精神心理的負担によるQOLへの影響を踏まえた精神心理的ケアに関する研究」と一部について共同研究)を対象に,プログラムの有用性について検証する研究を計画している。平成21年度のがん患者の外見変化に対する横断研究に基づき、22年度は患者支援プログラムの作成研究を行い、対象とニーズに応じた4段階の患者支援プログラム(がんセンターモデル)の試案を作成した。それをふまえて、23年度は、支援プログラムの検証に向けた研究((1)(2))と普及に向けた研究((3)(4))を実施した。研究(1)「外見関連の情報提供を中心とした患者サポートプログラムの有用性に関する予備的検討」:医療者による第2段階プログラムの効果を明らかにするために、国立がん研究センター

中央病院倫理審査委員会の承認を得て、2012年3月31日までに症例集積目標であった患者30名のインタビュー調査を行った(現在データの解析中)。なお本研究は、平成21-23年度厚労省科研費(がん臨床研究事業)「がん患者及びその家族や遺族が抱える精神心理的負担によるQOLへの影響を踏まえた精神心理的ケアに関する研究」との共同研究である。研究(2)「外見に問題をもつ入の心理的well-beingを測定する尺度短縮版の作成研究」:外見の変化が患者の心理的well-beingに及ぼす影響を検証する際に、患者の負担を軽減し簡易に測定するためのツールの一つとして、DAS59の短縮版(DAS12)を作成した。研究(3)「チーム医療を担う美容専門家の資質に関する検討研究」:段階的サポートプログラムを効果的に実施するには、チーム医療における美容専門家の資質が重要である。そこで、3つのがん診療連携拠点病院の医療職120名と医療機関での勤務経験を有する仏人美容専門家8名を対象に質問紙・インタビュー調査を実施した。研究(4)「外見関連患者サポートプログラムの構築に向けたアンケート調査」:外見支援プログラムを発信する前提として、医療現場の外見支援の実態と医療者の研修ニーズ等を調査した。がん診療連携拠点病院で研修の一部を試行するとともに、質問紙調査を実施した。
ひと概念の再構築をめざして-人文科学・アート・医療をつなぐ問いかけ

ひとという概念が現代の先端医療・国際情勢・社会状況との関係の中で直面する問題を鮮明にしつつ、さらにそれを乗り越えるための指針を見定めることに成功した。さらに内外の様々なアーティストや研究者を招聘し研究会やシンポジウムを開催したことは、一般への知的刺激という面でも大いに成果があった。当研究プロジェクト全体に対して、平成19年度の研究が果たすべき目的は、現代社会において、ひと概念の再構築という問題が、人文科学・アート.・医療という異なった領域をどのような形で貫通しうるか、またどういう点にその可能性が見いだされるかを見定めるということであった。まず現代美術と現代社会との関係について、森美術館で活躍する研究者である椿玲子氏から報告を受けたのち、医療人類学の領域における世界的権威であるアラン・ヤング教授の講演を主催し、また人文科学の領域においてはハイデガー哲学とひと概念の関わりについてのシンポジウムやフロイトの精神分析についてのシンポジウムを開催した。また研究会においては、主にフランス現代思想や精神医学とひと概念について検討した。一方、今後の年度に行われるべき研究や活動の準備をすることも、本年度の課題であった。まず芸術家としては、アメリカ在住の写真家森本洋充氏、インスタレーションなどを中心に活躍するアーティストやなぎみわ氏、日本におけるコンテンポラリー・ダンスの第一人者である勅使河原三郎氏などと連絡を取り、当研究への参加・協力について承諾を受けた。また人文科学の領域においては、フランスの生命倫理学を代表する法学者であるカトリーヌ・ラブリュス氏を訪問し、来日の承諾を受け、また哲学者アンリ・マルディネ氏については、インタービューの承諾を受けた。日本においてはすでに宇野邦一氏、渡辺公三氏などと今後の研究への協力についての話し合いを行った。以上、本年度の研究・調査活動は、当研究プロジェクトを平成21年度末までに完成させることができるための出発点として必要かつ十分な成果を得たと言えるだろう。前年度に行った準備的調査・研究の成果が現れ始めた年度であった言えるだろう。人文科学・アート・医療の接点を創設しつつ、その場において「ひと」という概念について、新たな見解を探求するということが私たちの目標であったが、それは例えば2008年7月に行った現代芸術家、塩田千春を招いての研究会において、十全な形で実現された。「ひと」という存在が抱える苦しみや不安の大きさをそのまま作品にする塩田の世界に対して、カナダ・マッギル大学の精神科医・医療人類学者カーマイヤー教授は、戦争や殺戮をめぐる人類の暴力の歴史を指摘され、私たちの視点を世界の様々な民族の間の諸問題へとむけさせた。そのほか、今年度はフロイトの思想をめぐる研究会、病院内における芸術活動の紹介、舞踏家土方巽の上映会、制度を使った精神療法をめぐる研究会など多くの成果が上がった。さらに2009年に入ってからは、フランス・ボルドー大学からル・ブラン教授を招いて、フランスの思想家ミシェル・フーコーにおける「ひと」の概念について講演会とセミナーを開いたほか、日本を代表する舞踏家勅使川原三郎と思想家宇野邦一を招いて、人間の身体の再発見をめざすワークショップを開いた。いずれの会も、私たちに現代において「ひと」が置かれている危機的状況や、その状況から私たちが抜け出すために、今私たちはどういう手順で、どういう問題について考えなければならないかを明確に示してくれた。一方、海外や国内での研究調査も継続して行った。また昨年度のマルディネに続き、思想と精神分析・精神医学をつなぐ重要な人物として(いずれも故人ではあるが)ベルギーのジャック・ショット、あるいはハンガリー出身のレオポルド・ソンディらの人物が注目された。また昨年度から連絡を取っている芸術家やなぎ・みわは、まさに本年度ヴェネチア・ヴィエンナーレの日本代表に選ばれており、帰国後は当研究プロジェクトに積極的に参加してくれる予定である。最終年度である21年度は、計画を発展させつつ、最終的なまとめを行った。まずアーティストとのコラボレーションに関しては、昨年度から懸案であった内藤礼氏の招聘が実現した。現代日本を代表する内藤氏の作品は、ひとの最奥にある「人間的空間と時間の始原」とでも言えるような希薄にして強烈、純粋にして茫漠たる世界を表現しており、ビデオ・映像を交えての彼女との意見交換は私たちの研究にとって実り豊かなものとなった。また私たちの研究のまとめとして、これも懸案だったフランス生命倫理法の専門家である法学者カトリーヌ・ラブリュス=リウ氏の招聘も実現し、その際日本側からは同様の専門家〓島次郎氏の参加を得て、シンポジウムを開催した。フランスにおける生命倫理法の整備作業が、常に「ひと」という概念の革新と共に行われていることが浮き彫りになり、我が国での同様の試みを行う際に留意すべき重要課題を明確にすることが出来た。このほか、昨年度招聘した勅使川原三郎氏のもとで頭角を現している若手ダンサー佐東利穂子氏との討論会、レヴィナスやアーレント研究を専門とするパリ第7大学教授

マルティーヌ・レイボヴィッチ氏の講演会、研究会メンバーである大黒弘慈氏による講演会を催したほか、数度の研究会も行い、「ひと」という概念が関わる問題系を洗い直し、それを出発点としながら、メンバーそれぞれの専門領域で「ひと」という概念の構築を試みた。さらに内外の様々なアーティストや研究者を招聘したことは、私たちの研究の進展のみならず、基本的に一般公開として開催したシンポジウムや講演会などによって、一般への知的刺激・問題提起という面でも大いに成果があっただろう。
慢性心不全における心室再分極異常と後天性QT延長症候群の発生機序

動脈灌流左室心筋切片において遅延整流カリウム電流急速活性化成分(IKr)と緩徐活性化成分(IKs)を遮断したところ、QT延長症候群に類似した異常T波が出現した。異常T波は心筋各層における活動電位持続時間の延長のばらつきや早期後脱分極によって生じる電気勾配を反映していた。また心筋シンシチウムにおいて初めて早期後脱分極が認められ、早期後脱分極によって誘発された撃発活動がTorsades de Pointesの引き金となる期外収縮を引き起こすことが確認された(J Cardiovasc Electrophysiol.2001;12:1369-78、心臓;33;44;330-339;2001)。Brugada症候群はNaチャネル遺伝子の異常が原因の一つとして考えられており、心電図上再分極過程の異常も疑われている。Brugada症候群の患者においては、心房細動が正常心電図の人に比べて有意に多かったが、心房の有効不応期には有意な差はなかった。心房間の伝導時間は有意に長った。Brugada症候群患者は心房細動が誘発されたが正常者は誘発されなかった。以上よりBrugada症候群患者は心房細動になりやすい性質を持っていることが示唆された(J Am Coll Cardiol.2002;40:1437-1444)。心房細動は心不全を起こすことも知られており、今後Brugada症候群患者が心房細動および心不全をおこさないか、観察していく予定である。動脈灌流左室心筋切片において遅延整流カリウム電流急速活性化成分(lKr)と緩徐活性化成分(lKs)を遮断したところ、QT延長症候群に類似した異常T波が出現した。また心筋シンチシウムにおいて初めて早期後脱分極が認められ、早期後脱分極によって誘発された撃発活動がTorsades de Pointesの引き金となる期外収縮を引き起こすことが確認された(J Cardiovasc Electrophysiol. 2001;12:1369-78、心臓;33;44;330-339,2001)。心不全においては、交感神経の活動が亢進しており、QT間隔にも大きな影響を及ぼしていることが考えられる。そこでまずQT間隔の変化が著明に現れるQT延長症候群(LQT)において、エピネフリンの影響をみた。lKs電流に異常を持つLQT1患者では、lKr電流に異常をもつLQT2患者よりもエピネフリンによってtransmural dispersionが増大した。lKs電流が交感神経活動に大きな影響を受けることが示された(J Am Coll Cardiol 2001;37:911-919)。Brugada症候群型の心電図を示す患者の予後を調査したが、突然死および心不全死は少なく、比較的予後良好であった(J Cardiovasc Electrophysiol;12;1;2-6;2001)。心不全ならば再分極の異常を示すが、再分極の異常が心不全をもたらすわけではないと考えられた。心房間の伝導時間は有意に長かった。

心房細動は心不全を起こすことも知られており、今後、Brugada症候群患者が心房細動および心不全をおこさないか、観察していく予定である。Brugada症候群では心外膜がわに伝導遅延をみとめることも報告し(J Am Coll Cardiol.2002;39:1992-5)。このような遅延した電流が心臓の再分極過程の異常に基づくものか今後検討予定である。心不全の原因として近年酸化ストレスが注目されている。しかしながらヒトの不全心筋において酸化ストレスの発生が増強しているかどうか直接の証拠はまだない。さらにβブロッカーによる治療が酸化ストレスに及ぼす影響も明らかでない。そこで我々は、拡張型心筋症患者の心筋において過酸化脂質が増加しているか、さらにCarvediol投与後に心筋における過酸化脂質のレベルが減少するかどうかを検討した。拡張心筋症の患者では過酸化脂質の代謝産物である4-Hydroxy-2-noncnal(HNE)修飾蛋白質が増加していた。Carvecdiol投与によって心機能の改善とともに酸化ストレス(HNE修飾蛋白質)が減少した(circulation 2002;105:2867-2871)。今後酸化ストレスと再分極異常、不整脈の発生について検討していく予定である。後天性QT延長症候群と考えられる症例の中に、先天性の遺伝子異常があり、潜在性のQT延長と考えられる症例があることを報告した(心臓)。81歳の高齢者で多発性脳梗塞・肺炎にて入院中に、低カリウム血症を誘因として心電図で著明なQT間隔の延長(QTc=0.64秒)、Torsades de pointes(TdP)を認めた。電解質補正とMexilletine投与で発作は認めなくなった。孫にKCNQ1遺伝子の異常(V254M)によるQT延長症候群患者がおり、同遺伝子を検索したところ、同様の異常が認められた。本症例は高齢になるまでTorsades de pointesや失神を発症せず、LQT1(V254M)の同一家系内でも、発症には電解質や自律神経など後天的な因子も大きく関与していると考えられた。先天的に内向き整流Kチャネルが障害されるとQT延長症候群(Andersen症候群)がおきる。我々は内向き整流Kチャネル抑制作用がある有害なアルデヒドである4-Hydroxy-2-nonenal(HNE)が拡張型心筋症・肥大型心筋症の不全心において増加していることを報告した。肥大型心筋症では肥大から心不全に至る過程で特に増加していた(Circ J)。このHNEは単離心筋細胞に投与するとCa過負荷も生じ、心不全における不整脈の発症に関与していると考えられた。抗酸化作用を持つβ遮断薬であるカルベジロールはHNE減少作用を持ち(JPn JElectrocardiology)、不整脈発生の抑制に関与する可能性がある。
エネルギー代謝調節と糖脂質代謝調節の連関に関する研究

1.レプチン過剰発現マウスと遺伝性肥満糖尿病モデル動物であるKKA^yマウスを交配させ、レプチン過剰発現KKA^yマウスを作製した。そのマウスでは、摂食は抑制されず、肥満の発症は抑制できなかったが、糖尿病の発症時期がレプチン過剰発現でないものに比べ、遅延していた。6週齢のマウスではKKA^yマウスでは著名な高インスリン血症が認められ、一方、レプチン過剰発現KKA^yマウスでは高インスリン血症は認めなかった。さらに、高脂肪食負荷によって、レプチン過剰発現マウスでも高血糖とインスリン抵抗性を来したが、レプチン過剰発現マウスではカロリー制限により、より速やかな体重減少と血糖正常化が確認され、レプチンは、抗糖尿病薬としての可能性が示された。2.正常マウスに全身および脳室内にレプチンを投与した場合およびレプチン過剰発マウスの肝臓および筋肉において、インスリンによるIRS-1結合PI3キナーゼの活性化は亢進していることを見いだした。インスリンによるインスリン受容体、IRS-1のチロシンリン酸化は軽度亢進していたが、インスリンによるAktの活性化には差異は検出されず、レプチンのインスリンシグナルに及ぼす影響の多様性が示唆された。また、レプチン過剰発現マウスにおいてインスリンシグナルの構成分子の変化を探索し、探索したほとんどの分子においてその蛋白量に有意な変化は認められなかった。さらに、特に肝臓においてレプチンがあるフォスファターゼを介して単独あるいはインスリンシグナル伝達に影響を及ぼす可能性を示唆する結果を得ており、現在追究中である。3.UCP3の過剰発現マウスも作製し、各種負荷を行って解析中である。今後も、この動物を用いてエネルギー消費亢進のエネルギー代謝全体におよぼす影響や糖脂質代謝に対する効果についての検討を行う。6週齢のマウスではKKA^yマウスでは著明な高インスリン血症が認められ、一方、レプチン過剰発現KKA^yマウスでは高インスリン血症は認めなかった。従って、レプチンは、抗糖尿病発症作用を持つと考えられた。2.正常マウスに全身および脳室内にレプチン投与した場合およびレプチン過剰発現マウスの肝臓および筋肉において、インスリンによるIRSl結合PI3キナーゼの活性化は冗進していることを見いだした。インスリンによるインスリン受容体、IRSlのチロシンリン酸化は軽度冗進していたが、インスリンによるAktの活性化には差異は検出されず、レプチンのインスリンシグナルに及ぼす影響の多様性が示唆された。レプチンがインスリンシグナル伝達に及ぼす作用機構については現在も解析中である。また、レプチン過剰発現マウスにおいてインスリンシグナルの構成分子の変化を検索し、検索した殆どの分子においてその蛋白量に有意な変化は認められなかった。従って、レプチン過剰発現マウスにおいてレプチンは、他の細胞内シグナル伝達系を介してインスリンシグナルを冗進させることが示唆された。3.UCP3の過剰発現マウスも作製しており、現在解析中である。今後、この動物を用いてエネルギー消費冗進のエネルギー代謝全体におよぼす影響や糖脂質代謝に対する効果についての検討を行う予定である。

そのマウスでは、摂食は抑制されず、肥満の発症は抑制できなかったが、糖尿病の発症時期がレプチン過剰発現でないものに比べ、遅延していた。6週齢のマウスではKKA^yマウスでは著明な高インスリン血症が認められ、一方、レプチン過剰発現KKA^yマウスでは高インスリン血症は認めなかった。さらに、高脂肪食負荷によって、レプチン過剰発現マウスでも高血糖とインスリン抵抗性を来たしたが、レプチン過剰発現マウスではカロリー制限により、より速やかな体重減少と血糖正常化が確認され、レプチンは、抗糖尿病薬としての可能性が示された。2.正常マウスに全身および脳室内にレプチン投与した場合およびレプチン過剰発現マウスの肝臓および筋肉において、インスリンによるIRS1結合PI3キナーゼの活性化は亢進していることを見いだした。インスリンによるインスリン受容体、IRS1のチロシンリン酸化は軽度亢進していたが、インスリンによるAktの活性化には差異は検出されず、レプチンのインスリンシグナルに及ぼす影響の多様性が示唆された。また、レプチン過剰発現マウスにおいてインスリンシグナルの構成分子の変化を検索し、検索した殆どの分子においてその蛋白量に有意な変化は認められなかった。更に特に肝臓においてレプチンがあるフォスファターゼを介して単独あるいはインスリンシグナル伝達に影響を及ぼすことを示すpreliminary dataを得ており、現在なお解析中である。3.UCP3の過剰発現マウスも作製し、各種負荷を行って解析中である。今後も、この動物を用いてエネルギー消費亢進のエネルギー代謝全体におよぼす影響や糖脂質代謝に対する効果についての検討を行う予定である。
表面力測定による蛋白質の生体分子認識作用評価

本研究は、表面力測定を中心手段として、生体の情報認識分子間(RNAポリメラーゼ、DNAなど)の相互作用、ならびに蛋白質の複合体形成の相互作用の特色や制御因子の解明を目的とした。(1)蛋白質間の相互作用大量発現させたHis-tag修飾蛋白質を用い、それと特異的に結合する官能基を表面に導入したラングミュアブロジェット膜上に二次元的に蛋白質を固定化、相互作用力を測定した。本研究ではDNA転写時に相互作用していると考えられるSigmaAとSpo0Aをポリヒスチジン(His-tag)修飾し、表面に二次元的に配向固定化した蛋白質間の特異的・非特異的相互作用を原子間力顕微鏡(AFM)により直接評価した。また試料表面の蛋白質密度を水晶振動子マイクロバランス(QCM)測定及びAFM像から見積もった。QCM測定より求めた表面の蛋白質密度は、SigmaAで1.8個/100nm^2、Spo0Aで3.9個/100nm^2であった。試料表面のAFM像の解析からもこの値に近いものが得られた。SigmaA-SigmaA、Spo0A-Spo0A、SigmaA-Spo0A表面間の相互作用力を水溶液中(NaCl 1 mM、Tris 0.1 mM)で接近及び引き離し方向において様々なpHで測定した。接近時の表面力および引離し力の結果と併せると、SigmaAとSpo0Aの間に特異的な引力が働いていると考えられる。(2)生体関連分子の相互作用の研究糖鎖が生体分子と特異的に相互作用し、細胞接着や肝細胞のレセプターやタンパク質認識を行なうことは広く知られるようになってきたが、その具体的、分子レベルでの理解はいまだ十分ではない。本研究では単糖、ニ糖、三糖を親水基に有する合成糖脂質を用い、その相互作用を測定し、作用様式を検討した。水中のGlc-lipid間の表面力曲線を示す。引力は全くみられず、50nm付近まで及ぶ斥力がみられ、それは5nm付近から急激に上昇した。近距離側の力は親水基の水和斥力として解釈される。また遠距離側の斥力は、塩の添加によってほとんど変化がみられず、また減衰長も添加塩濃度のデバイ長と一致しないことから、電気二重層斥力ではなくやはり水和によるものと考えているが、さらなる検討が必要である。
組織特異的カルパインの検索・分析によるカルパインファミリーの機能解析

カルパインは細胞質内のCa^<2+>依存性プロテアーゼであり、細胞機能のモジュレーターとして働くと考えられている。構造解析は大きく先行し、特に哺乳類カルパインの構造は完全に解明されたかに見えた。Ca^<2+>依存性の異なるアイソザイム、μ-及びm-カルパインが存在し、どちらも組織普遍的発現を示すため、細胞の基本的機能を果たすと考えられる。これに対し、最近我々は組織特異的に発現する分子種、骨格筋特異的なp94と胃特異的なnCL-2,-2'を発見し、カルパインが組織特異的及び普遍的分子種に分類され、その構造の全貌については未だ途上にある事を見い出し、今までのカルパインについての概念を大きく変換する必要のあることを明らかにした。そこで本研究は、遺伝子、タンパク質、培養細胞レベルで、広くスクリーニングし、カルパインファミリーの構造と分布を解明することを目的とした。まず、nCL-2のcDNAをプローブに用いて、種々の臓器cDNAライブラリーをスクリーニングした結果、カルパインファミリーの新しいメンバーを発見しnCL-3と命名した。一方、骨格筋においてp94タンパク質は、自己消化のために非常に少量しか存在しないので、培養細胞(COS,L8,P19細胞など)に発現させ、様々な抗体を用いて確認した。その結果p94の特異的な構造と発現レベル、分解速度に関係があることが明らかとなった。また、免疫組織染色により局在を解析した結果、ラット骨格筋では核膜上に存在する可能性が示唆された。nCL-2,-2'については、その発現量比が、発生段階などで変化する可能性もあるため、RT-PCRを用いてこれを検証した結果、両者で組織分布が異なることを見い出した。今後これらの結果を総合し、さらに研究を進めて組織特異的及び普遍的発現の意義や、その機能分担を明らかにしたい。
脳梗塞急性期におけるグリコサミノグリカン損傷機構の解明

本研究において私達は、脳梗塞急性期においてヘパラン硫酸(HS)とコンドロイチン硫酸(CS)が分解を受けることを見出した。HS分解にはヘパラナーゼ(HPSE)が、CS分解にはヒアルロニダーゼ1 (HYAL1)およびHYAL4が関与していた。酸化ストレス除去剤としてN-アセチルシステイン(NAC)、および低分子HSおよびCSを同時投与するとNAC単独投与よりもさらに脳梗塞体積の減少が認められた。従って、脳梗塞急性期では、酸化ストレスの除去の他、脳血管内皮細胞の糖衣の主要成分であるHSとCSを効果的に保護できれば、高い治療効果が期待できると考えられる。1.脳梗塞誘導24時間後の梗塞巣では、グリコサミノグリカン(GAG)の発現量が著しく減少するため、そのメカニズムを脳梗塞モデルマウスを用いて解析した。血漿中ヘパラン硫酸(HS)濃度を調べたところ、梗塞誘導324時間後で増加した。一方、コンドロイチン硫酸(CS)濃度は梗塞誘導3時間後ではほとんど変化が認められず、24時間後に増加した。以上の結果より、脳毛細血管で梗塞が起きると血管内皮細胞のHSが速やかに分解し、血中へ放出されることが示唆された。脳梗塞誘導24時間後では、梗塞巣においてヘパラン硫酸分解酵素であるヘパラナーゼ(HPSE)およびHSプロテオグリカンを切断するマトリックスメタロプロテアーゼ9 (MMP-9)の発現量が著しく増加していた。2.血管内皮細胞にはHSを主成分とする糖衣が存在し、単球の接着を妨げる役割を担っている。脳梗塞巣では、毒性の強い不飽和アルデヒドであるアクロレイン(ACR)や活性酸素種が発生するため、ヒト不死化脳毛細血管内皮細胞にACR、H2O2および虚血/再灌流処理を施した時のGAG発現量を調べた。酸化ストレス条件下では、CS発現量はほとんど変化しなかったのに対し、HS発現量はACR添加時に著しい減少が認められた。この結果は転写レベルでのHPSE誘導に基づいており、MMPの関与は認められなかった。現在、HPSE阻害剤によるHS保護効果を検討中である。脳梗塞急性期においてHS分解に関与する主要な因子としてHPSEを同定したことから、研究実施計画は順調に進展していると考えられる。しかしながら、モデルマウスで観察されたMMPsの発現増加やCSの分解が、不死化脳毛細血管内皮細胞を用いた検討では再現できなかったことから検討の余地がある。1.梗塞部位においてコンドロイチン硫酸(CS)が分解を受けているかどうかを中大脳動脈血栓モデルマウス(脳梗塞モデルマウス)を用いて検討した。その結果、梗塞誘導24時間後では、梗塞部位のCS発現量が健常部位に比べて著しく減少していた。また、血漿中CS濃度を注意深く測定したところ、梗塞誘導3時間後からCS濃度が増加し、24時間後まで増加が認められた。梗塞部位におけるCS発現量の減少にヒアルロニダーゼ(Hyal)1、Hyal2およびHyal4が関与しているかどうかを調べた。その結果、梗塞部位におけるHyal4の著しい発現量増加がタンパク質レベルおよびmRNAレベルで認められた。2.不死化脳血管内皮細胞において、CSとHyal4の発現量に対するアクロレイン(ACR)、H2O2および低酸素処理の効果を調べた。その結果、酸化ストレス処理はCSの発現量に影響を及ぼさなかった。内皮細胞においてHyal4の発現が認められたが、酸化処理を施してもHyal4の発現量は変化しなかった。以上の結果より、梗塞部位におけるHyal4の発現亢進は、内皮細胞以外の脳血管細胞が関与していることが示唆された。3.脳梗塞モデルマウスに脳保護薬としてN-アセチルシステイン(NAC)、HPSE阻害剤として低分子ヘパリン(クレキサン)を同時投与したところ、NAC単独投与では梗塞体積が約35%減小したのに対し、NACとクレキサンの同時投与では約56%と更に減小と相加効果が認められた。脳梗塞急性期においてHSとCS分解に関与する主要な因子としてHPSEおよびHyal4を同定したことから、研究実施計画は順調に進展していると考えられる。しかしながら、脳毛細血管を構成する内皮細胞、ぺリサイトおよびアストロサイトのうち、どの細胞が酸化ストレス時にHPSEとHyal4を産生するのか検討の余地がある。1.脳梗塞巣におけるヘパラナーゼ(HPSE)、ヒアルロニダーゼ(HYAL)タンパク質の発現量の経時変化を調べた。その結果、梗塞誘導3から24時間後においてHYAL1およびHYAL4の発現増加が認められた。HYAL2の発現量は梗塞巣では変化しなかった。HPSEは、不活性型のPro-HPSEがカテプシンLによって切断を受けると活性型HPSEになることが知られている。梗塞巣におけるHPSEの発現量をこれまでPro-HPSEを認識する抗体を用いて調べてきたが、活性型HPSEを認識する抗体を用いて調べたところ、脳組織では検出できなかった。そこで、梗塞巣から組織抽出液を調製し、HPSE活性そのものを調べた結果、梗塞巣のHPSE活性は健常組織に比べて優位に増加していた。2.不死化脳血管内皮細胞にACRおよび低酸素処理を行うとHSの発現量が減少するが、活性型HPSEを認識する抗体で調べると、活性型HPSEの発現量に変化は認められなかったので、その詳細を調べた。

HEK293細胞にHPSE cDNAを形質導入した後に、ACR処理を施し、細胞抽出液中のHPSE活性を測定した結果、HPSE活性の微増が認められた。しかしながら、ACR処理による活性型HPSEの発現量の増加は認められなかった。また、活性型HPSEタンパク質を購入し、ACR処理を施してその活性を調べたが、ほとんど活性に変化は認められなかった。そこで、Pro-HPSEのみを含む培養液を調製し、ACR処理するとHPSEの活性増加を示唆するデータを得た。3.脳梗塞モデルマウスに脳保護薬としてN-アセチルシステイン(NAC)、HPSE阻害剤として低分子ヘパリン、HYAL阻害剤として低分子CSを同時投与したところ、NACと低分子ヘパリンの同時投与に比べて更に減少効果が認められた。本研究において私達は、脳梗塞急性期においてヘパラン硫酸(HS)とコンドロイチン硫酸(CS)が分解を受けることを見出した。HS分解にはヘパラナーゼ(HPSE)が、CS分解にはヒアルロニダーゼ1 (HYAL1)およびHYAL4が関与していた。酸化ストレス除去剤としてN-アセチルシステイン(NAC)、および低分子HSおよびCSを同時投与するとNAC単独投与よりもさらに脳梗塞体積の減少が認められた。従って、脳梗塞急性期では、酸化ストレスの除去の他、脳血管内皮細胞の糖衣の主要成分であるHSとCSを効果的に保護できれば、高い治療効果が期待できると考えられる。脳梗塞モデルマウスおよび不死化内皮細胞を用いてHPSE阻害剤の有効性を検討する。ヒト脳毛細血管は内皮細胞の他、アストロサイトおよびペリサイトから構成されている。梗塞巣におけるMMPの発現増加およびCS分解機構を明らかにすべく、不死化アストロサイトおよび不死化ペリサイトを培養して検討する。今年度は、脳梗塞急性期におけるHyal4の発現機構を重点的に調べ、CSの分解が炎症拡大の原因であるマクロファージの浸潤に対していかに重要であるかを分子レベルで解明する。具体的には、脳毛細血管不死化細胞(ぺリサイト、アストロサイト)に酸化ストレスを負荷した際にHyal4の発現増加に伴うCSの分解が観察されるかどうかを検討する。更に、梗塞モデルマウスに酸化ストレス除去剤としてN-アセチルシステイン、HPSE阻害剤として低分子ヘパリンおよびHyal4阻害剤として低分子コンドロイチン硫酸を同時投与した時の梗塞巣の大きさを調べる。病態分析化学