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ヒト乳歯歯根膜由来細胞の機械的外力への応答に関する細胞生物学的研究

ヒト乳歯歯根膜由来培養線維芽細胞(HPLF-Y),およびヒト永久歯歯根膜由来培養線維芽細胞(HPLF)にFlexercell strain unitを用いて培養5日目および10日目より,伸展度5%の機械的外力を24時間加え,増殖と分化に対する機械的外力の影響について検討した。さらにHPLFおよびHPLF-Yを同様の条件で培養し,24時間後より培地中に1,25dihydroxy vitamin D_3(D_3),およびretinoic acid(RA)を単独,あるいは同時に添加した。その後,D_3あるいはRA存在下で培養5日目および,10日目より5%の機械的伸展力を24時間加え,機械的外力への応答に対するRA,およびD_3の影響を検索した増殖期にある培養5日目より,5%の伸展力を10秒間隔で3回/分間,24時間加えた場合,HPLFでは増殖の促進が認められた。また,同様の条件下においてはHPLF-Y,HPLFともにALP活性の有意な上昇が認められた。続いて両細胞を5nMのD_3および0.1μMのRA存在下で培養し,5日目,および10日目より,5%,10秒間の伸展力を50秒間隔で24時間加えた。その結果,培養6日目におけるD_3,RA非添加のHPLFでのみ機械的外力の負荷により,増殖が促進された。一方,両細胞のALP活性は,培養6日目においてHPLF-YではD_3,RA同時添加の場合にのみ,機械的外力によるALP活性の上昇が認められたのに対し,HPLFではcontrol群,D_3添加群,RA添加群,D_3とRA同時添加群の全ての場合で,機械的外力によるALP活性の上昇が認められた。培養11日目においては,HPLF-YではD_3添加群,およびD_3,RA同時添加群で機械的外力によるALP活性の上昇が認められたのに対し,HPLFではいずれの場合も外力の負荷による差は認められなかった。本研究によりHPLFとHPLF-Yでは,機械的外力に対する応答性に差が認めれられ,歯周組織の形成や改造に関与する両細胞の役割の相違が示唆された。また,D_3およびRAは両細胞の機械的外力に対する応答を増強する効果が認められた。ヒト抜去乳歯および永久歯より歯根膜組織を採取し,斎藤・川瀬らの方法に準じてexplant法によりヒト乳歯歯根膜線維芽細胞(HPLF-Y)と永久歯歯根膜線維芽細胞(HPLF)を樹立した。HPLF-YおよびHPLFに対し,Flexercell vacuum systemを用いて機械的伸展力を加え,細胞層のDNA量,alkaline Phosphatase(ALP)活性を測定することにより,細胞の増殖と分化に対する影響について検討した。さらに細胞の分化に影響を及ぼすと考えられるretinoic acid(RA)および1,25dihydroxy vitamin D3(3)の機械的外力への応答に対する影響についての検索を行った。培養5日目より,変形率5%で10秒間伸展させ,10秒間弛緩させる負荷を24時間加えた場合,HPDFでは細胞増殖は促進されたが,HPLF-Yにおいてはcontrol群と有意な差は認められなかった。

また,同様の負荷によりHPLF,HPLF-Yの両者においてALP活性の上昇が認められたが,その上昇効果はHPLFにおいて,より著明であった。また,変形率10%の負荷を加えた場合,5%の負荷を与えた場合と同様にHPLFにおいてのみ増殖の促進が認められた。5%の機械的外力によりHPLFではgrowth phaseにおいてALP活性の上昇が認められたが,confluent phaseにおいては外力の負荷による差は認められなかった。HPLF-Yではgrowth phaseにおいてRAとD3を同時に添加した場合,またconfluent phaseにおいてはD3単独,あるいはRAとD3の同時添加の場合にのみ機械的外力の負荷によるALP活性の上昇が認められた。以上の結果から,HPLF-YとHPLFではの機械的外力に対する応答に差が認められ,両細胞の歯周組織改造に果たす役割の相違が示唆された。ヒト乳歯歯根膜由来培養線維芽細胞(HPLF-Y),およびヒト永久歯歯根膜由来培養線維芽細胞(HPLF)にFlexercell strain unitを用いた培養5日目および10日目より,伸展度5%の機械的外力を24時間加え,増殖と分化に対する機械的外力の影響について検討した。さらにHPLFおよびHPLF-Yを同様の条件で培養し,24時間後より培地中に1,25 dihydroxy vitamin D_3(D_3),およびretinoic acid(RA)を単独,あるいは同時に添加した。その後、D_3あるいはRA存在下で培養5日目および,10日目より5%の機械的伸展力を24時間加え,機械的外力への応答に対するRA,およびD_3の影響を検索した増殖期にある培養5日目より,5%の伸展力を10秒間隔で3回/分間,24時間加えた場合,HPLFでは増殖の促進が認められた。また,同様の条件下においてはHPLF-Y,HPLFともにALP活性の有意な上昇が認められた。続いて両細胞を5nMのD_3および0.1μMのRA存在下で培養し,5日目,および10日目より,5%,10秒間の伸展力を50秒間隔で24時間加えた。その結果、培養6日目におけるD_3,RA非添加のHPLFでのみ機械的外力の負荷により、増殖が促進された。一方,両細胞のALP活性は,培養6日目においてHPLF-YではD_3,RA同時添加の場合にのみ,機械的外力によるALP活性の上昇が認められたのに対し,HPLFではcontrol群,D_3添加群,RA添加群,D_3とRA同時添加群の全ての場合で、機械的外力によるALP活性の上昇が認められた。培養11日目においては,HPLF-YではD_3添加群,およびD_3,RA同時添加群で機械的外力によるALP活性の上昇が認められたのに対し,HPLFではいずれの場合も外力の負荷による差は認められなかった。本研究によりHPLFとHPLF-Yでは,機械的外力に対する応答性に差が認められ,歯周組織の形成や改造に関与する両細胞の役割の相違が示唆された。また、D_3およびRAは両細胞の機械的外力に対する応答を増強する効果が認められた。
高力ボルト引張接合を用いた複合構造ガセットレストラス格点部の開発

本年度は,前年度で検討した複合構造ガセットレス格点部構造を踏まえ,弦材のみならず斜材も考慮した格点部モデル化供試体を4体作成した.対象とした格点部構造は,高力ボルト引張接合長締め形式を利用した充填コンクリート格点部であり,充填コンクリートの有無,斜材格点部の取り付け構造をパラメータとして供試体を作成した.そして,実構造物への適用にあたっての問題点,改良点等の洗い出し,これらに対する改善検討を目的として,格点部が最も厳しくなる引張,曲げ,せん断が作用する場合を想定した載荷実験を行った.その結果,提案するコンクリートを充填した長締め引張接合形式格点部の剛性,降伏時耐力,最大耐力などの力学的特性から判断すると,適用可能であることがわかった.さらに,本格点部を設計する際に必要となる終局強度の評価手法について検討し,鉄筋コンクリート梁の曲げ耐力評価と同様な平面保持を仮定し,圧縮側には中立軸から上の全断面を,引張側には中立軸から下の高力ボルト断面を有効断面と仮定する方法によって,簡易的に,その降伏時耐力,終局耐力が評価可能であることを示した.今後は,実際の適用にあたって,施工方法,架設方法について検討し,本格点部構造を基本としたより現実的な格点部構造を提案する必要がある.本年度は,主として,力学的・経済的に合理的と思われる高力ボルト複合構造ガセットレス格点部の形式を複数提案し,その力学的特性,経済性,実現可能性などについて調査・検討した.さらに,鋼製断面(弦材,斜材)と格点部との間での荷重伝達機構の解明を目的に,実験を行った.そして,当該年度のまとめとして,これらの成果を踏まえ,最適な高力ボルト複合構造ガッセトレス格点部の形式について検討した.1)複合構造ガセットレス格点部における効果的な弦材・斜材接合法の提案プレキャストコンクリート重点部を有する複合構造格点部の形式を基本に,複合構造ガセットレス格点部を複数提案した.特に,格点部の構造形式は,想定する荷重状態によっても様々な形式が考えられるが,製作性,架設性も考慮して検討を行った.そして,これらをモデル化した格点部供試体を製作し,最も不利と思われる載荷状態の一つである曲げ荷重を載荷する実験を行った.そして,提案した格点部の力学的特性を使用限界状態だけでなく,最大耐力点以降の挙動についても注目し,明らかにした.2)複合構造ガセットレス格点部における荷重伝達機構の解明前項で述べた載荷実験から得られた,格点部鋼セルのひずみ分布,締結体として使用した長締め用高力ボルトの軸力変化,格点部の変形(平均曲率)などのデータをもとに,複合構造格点部の荷重伝達機構を実験的に解明した.その結果,格点部にコンクリートを充填することの有用性が確かめられた.本年度は,前年度で検討した複合構造ガセットレス格点部構造を踏まえ,弦材のみならず斜材も考慮した格点部モデル化供試体を4体作成した.対象とした格点部構造は,高力ボルト引張接合長締め形式を利用した充填コンクリート格点部であり,充填コンクリートの有無,斜材格点部の取り付け構造をパラメータとして供試体を作成した.そして,実構造物への適用にあたっての問題点,改良点等の洗い出し,これらに対する改善検討を目的として,格点部が最も厳しくなる引張,曲げ,せん断が作用する場合を想定した載荷実験を行った.その結果,提案するコンクリートを充填した長締め引張接合形式格点部の剛性,降伏時耐力,最大耐力などの力学的特性から判断すると,適用可能であることがわかった.さらに,本格点部を設計する際に必要となる終局強度の評価手法について検討し,鉄筋コンクリート梁の曲げ耐力評価と同様な平面保持を仮定し,圧縮側には中立軸から上の全断面を,引張側には中立軸から下の高力ボルト断面を有効断面と仮定する方法によって,簡易的に,その降伏時耐力,終局耐力が評価可能であることを示した.今後は,実際の適用にあたって,施工方法,架設方法について検討し,本格点部構造を基本としたより現実的な格点部構造を提案する必要がある.
YAGレーザーによる開放隅角緑内障治療の研究

Qスイッチとモード発振方式による2種のYAGレーザーを用いて,組織破壊の過程と両者の差異を形態学的並びに生理学的に検討を行った.また破壊の程度を検索する為にアクリル板を用い,それぞれのプラズマ化の効果を比較した.次にこのエネルギーの拡散の網膜への影響を検討する為に,同様の出力を用いて正常有色家兎の硝子体腔中央部でプラズマを生じさせた.これを臨床的,蛍光眼底造影,及び硝子体蛍光測定法で検討した.以上の実験から,従来の報告と異なりQスイッチとモードロック方式では硝子体内での臨床効果に差異があり, Qスイッチではエネルギーの拡散が大きく,後部硝子体での照射では網膜合併症を引き起こす可能性が高い事が確認された.次にYAGレーザーによるプラズマ形成およびこれに伴うshielding効果等その物理特性は,プラズマ化をどこで発生させるか,つまり空気,水等で異なるとされている.従ってYAGレーザーを眼球内で照射した場合,その照射部位が前房あるいは硝子体の場合同出力でも媒体の種類の違いによりその照射組織の破壊効果およびその後方でのshock waveの影響が異なることが予想される.これを検索するために,模擬眼を作成し,圧トランスデューサーを用いこの1mm前方でプラズマを発生させ,模擬眼の中の媒体を水,家兎硝子体,シリコンオイル等に変えることで, shock waveの変化を検索した.この結果出力や媒体を変えることで,衝撃の大きさに変化があったが,この装置で記録された波形は同じであった.またどの媒体においても出力の増加にともない衝撃波も大きくなる傾向にあるが,この程度は媒体により違い,シリコンオイルではほとんど変化なく,家兎硝子体で最大であった.これらの実験結果は,まだ安全性が充分に確立されていないYAGレーザーの臨床応用において,極めて重要な知見である.Qスイッチとモード発振方式による2種のYAGレーザーを用いて,組織破壊の過程と両者の差異を形態学的並びに生理学的に検討を行った.また破壊の程度を検索する為にアクリル板を用い,それぞれのプラズマ化の効果を比較した.次にこのエネルギーの拡散の網膜への影響を検討する為に,同様の出力を用いて正常有色家兎の硝子体腔中央部でプラズマを生じさせた.これを臨床的,蛍光眼底造影,及び硝子体蛍光測定法で検討した.以上の実験から,従来の報告と異なりQスイッチとモードロック方式では硝子体内での臨床効果に差異があり, Qスイッチではエネルギーの拡散が大きく,後部硝子体での照射では網膜合併症を引き起こす可能性が高い事が確認された.次にYAGレーザーによるプラズマ形成およびこれに伴うshielding効果等その物理特性は,プラズマ化をどこで発生させるか,つまり空気,水等で異なるとされている.従ってYAGレーザーを眼球内で照射した場合,その照射部位が前房あるいは硝子体の場合同出力でも媒体の種類の違いによりその照射組織の破壊効果およびその後方でのshock waveの影響が異なることが予想される.これを検索するために,模擬眼を作成し,圧トランスデューサーを用いこの1mm前方でプラズマを発生させ,模擬眼の中の媒体を水,家兎硝子体,シリコンオイル等に変えることで, shock waveの変化を検索した.この結果出力や媒体を変えることで,衝撃の大きさに変化があったが,この装置で記録された波形は同じであった.またどの媒体においても出力の増加にともない衝撃波も大きくなる傾向にあるが,この程度は媒体により違い,シリコンオイルではほとんど変化なく,家兎硝子体で最大であった.これらの実験結果は,まだ安全性が充分に確立されていないYAGレーザーの臨床応用において,極めて重要な知見である.Qスイッチとモード発振方式による2種のYAGレーザーを用いて、組織破壊の過程と両者の差異を形態学的並びに生理学的に検討を行った。また破壊の程度を検索する為にアクリル板を用い、それぞれのプラズマ化の効果を比較した。次にこのエネルギー拡散の網膜への影響を検討する為に、同様の出力を用いて正常有色家兎の硝子体腔中央部でプラズマを生じさせた。これを臨床的、蛍光眼底造影、及び硝子体蛍光測定法で検討した。以上の実験から、従来の報告と異なりQスイッチとモードロック方式では硝子体内での臨床効果に差異があり、Qスイッチではエネルギーの拡散が大きく、後部硝子体での照射では網膜合併症を引き起こす可能性が高い事が確認された。次にYAGレーザーによるプラズマ形成及びこれに伴うShielding効果等その物理特性はプラズマをどこで発生させるか、つまり空気あるいは水等で異なるとされている。従ってYAGレーザーを眼球内で照射した場合、その照射部位が前房あるいは硝子体の場合、同出力でも媒体の種類の違いによりその照射組織の破壊効果及びその後方でのShock waveの影響が異なる事が予想される。これを検索するために模擬眼を作成し、圧トランスデューサーを用いこの1mm前方において、プラズマを発生させ、模擬眼の中の媒体を水、家兎硝子体、Silicone oilとに変えることにより、Shock waveの変化を検索中である。この実験では、Qスイッチとモード発振方式による2種のレーザーを用いて行いレーザーの発振方式の違いによる差異も同時に検討している。これらの実験結果は、まだ安全性が充分に確率されていないYAGレーザーの臨床応用において、極めて重要な知見である。
HIV-1 トランスサイトーシスの機構解明

Heha細胞からLAI株のHIVに感染するP6HeLa細胞と感染しないN7HeLa細胞をクローニングした。この感染感受性P6HeLa細胞はCD4分子とガラクトシールセラマイドは陰性、CXCR4陽性であった。そこでP6HeLa細胞のHIV感染機構を、CD4陽性のHeLa細胞であるCD4HeLa細胞と比較し調べた。P6HeLa細胞にHIVを感染させると、CD4HeLa細胞と同程度のHIV陽性細胞数の増加が見られた。しかし、感染P6HeLa細胞ではCD4HeLa細胞で見られるような細胞融合現象は認められなかった。P6HeLa細胞の感染にはCD以外の因子が関与していると考えられ、P6HeLa細胞を免疫し細胞表面抗原に対するモノクローナル抗体を作製した。P6HeLa細胞のHIV感染を抑制するA14ITKとC57a9-9抗体を得たが、A14ITKはさまざまなヒト細胞株の47と51kDaの蛋白と反応した。一方、C57a9-9抗体はP6HeLa細胞と特異的に反応し、100kDaを中心とした幅広い蛋白を認識した。P6HeLa細胞ではHIVの持続感染産生細胞であるMOLT-4/HIV細胞と混合培養すると、ウイルスが接触面の反対側に通過するトランスサイトーシスの現象が認められた。このトランスサイトーシス活性はコルヒチンで抑制され、AZTでは阻害されなかった。またC57a9-9抗体はこの現象を抑制した。C57a9-9抗体が認識する分子は、P6HeLa細胞の系では、HIVの感染とトランスサイトーシスに関与していると思われた。
全エクソーム解析によるヒト無精子症患者における新規遺伝子の同定

本研究により、ヒトの全エクソームを網羅的に解析することが可能であり、他の類縁疾患との類似点や相違点を抽出し、精子形成過程のメカニズムを解明する一助になる。また、医療の現場で活用されつつあるAIシステムを駆使することで、SCOSの新規の原因遺伝子を同定し、この分野の研究の裾野を広げることができる。さらに、従来は精巣生検のみでしか診断できなかった本疾患を、DNAの採取という、より低侵襲の検査で原因を明らかにすることができ、男性不妊症患者の遺伝学的な診断の確立にも貢献できる。
生物のサイズを決定する2つの細胞数計数蛋白質の競合作用の解析

多細胞生物の生体サイズはそれぞれの種で決まっているが、それがどのように決まり維持されているのかについては不明な点が多い。その機構を解明するために私はもっともシンプルな多細胞真核生物である細胞性粘菌の3種の遺伝子(countin、countin2、countin3)を解析している。countin破壊株は野性株より大きな多細胞体を構築するのに対してcountin2破壊株とcountin3破壊株はともに野性株より小さな多細胞体を形成する。また、3種類の遺伝子破壊壊株細胞を同数ずつ混ぜると野性株とほぼ同じ大きさの多細胞体を構築する。すなわち、countinはサイズを負に、countin2とcountin3はともにサイズを正に調節しており、これらのバランスによって正常な生体サイズが決定されていると思われる。細胞性粘菌には3種類の細胞接着因子が同定されておりgp24、gp80、gp150と名付けられている。countin破壊株はgp24が過剰に発現している(米Rice大学R.Gomer博士による)。一方、countin破壊株ではgp24、gp80、gp150すべての発現量が低下している。countin破壊株ではgp80とgp150の発現量が低下している。そのため細胞間接着はcountin破壊株では強くなっておりcountin2破壊株とcountin3破壊株では逆に弱くなっている。以上のことからcountin、countin2、countin3は細胞接着因子の発現量を制御し細胞集合体の細胞数を制御することにより生体のサイズを決定していると考えられる。細胞性粘菌のサイズ決定因子の候補遺伝子としてcountin1とcountin2を解析した。これらの遺伝子はよく似ておりアミノ酸レべルで40%一致する。countin1遺伝子破壊株は、野生株より多くの細胞が集合しサイズの大きな多細胞体を形成するが、countin2遺伝子破壊株は逆に野生株より少ない細胞数から成る小さな多細胞体を形成する。また、countin1破壊株とcountin2破壊株を混合培養するとほぼ正常のサイズの多細胞体を形成する。これらのことは、countin1とcountin2の綱引きにより多細胞体を構成する細胞数が決まりその結果サイズが決まる、というサイズ決定機構を示唆している。サイズ決定の具体的な機構は何かを明らかにするため私は細胞接着因子に注目した。細胞性粘菌においては現在3種類の細胞接着因子(gp^<24>,gp^<80>,gp^<150>)が同定されている。野生株および遺伝子破壊株におけるこれらの遺伝子発現を調べたところcountin1破壊株では発現量が上昇しておりcountin2破壊株では逆に減少していた。これらの結果から野生株の細胞性粘菌はcountin1を発現して細胞接着因子の発現を抑制し細胞集団が小さくなるようにする一方で、countin2を発現し細胞接着因子の発現を促進し細胞集団が大きくなるようにしていると思われる。このような細胞接着のバランスの上に適正な数の細胞が細胞集団を作り、その結果適正な身体サイズが決定・維持されると考えられる。最近になり細胞性粘菌ゲノムデータベースから新規なcountinのhomologを見い出しcountin3と名付けた。本遺伝子の機能については現在解析中である。
ゲノム情報に基づいた生分解性共重合ポリエステル生産微生物の分子育種

微生物が貯蔵物質として合成するポリヒドロキシアルカン酸(PHA)は環境低負荷型の生分解性プラスチックとして注目されている。そこで本研究では、微生物ゲノム情報を基盤として物性の優れたポリ(3-ヒドロキシブタン酸-co-3-ヒドロキシヘキサン酸)共重合体[P(3HB-co-3HHx)]を効率生産する微生物を分子育種することを目指す。今年度は重要なバイオマスである糖質を原料として、P(3HB-co-3HHx)を合成可能な組換え大腸菌株の作製を試みた。まず、基質特異性の広いA.caviae由来PHA合成酵素、チオラーゼ、およびアセトアセチル-CoA還元酵素をコードする3遺伝手の人工オペロンを含む低コピープラスミドpMW-CABを作製し大腸菌に導入することで、グルコースを炭素源としたポリ(3-ヒドロキシブタン酸)[P(3HB)]合成能を付与した。次に、炭素鎖をさらに伸長して炭素数6の3HHx-CoAユニットを供給する代謝経路を構築するため、クロトニル-CoA還元酵素、広基質特異性チオラーゼ、広基質特異性3-オキソアシル-CoA還元酵素、(R)-エノイル-CoAヒドラターゼをコードする4遺伝子を、アラビノース添加により制御可能なBADプロモーター下流に配置したプラスミドpBAD-3HHxを作製した。pMW-CABおよびpBAD-3HHx両方を保持する大腸菌株を選抜してグルコースを炭素源としたP(3HB-co-3HHx)の生合成を試みたが、合成されたのはP(3HB)ホモポリマーで、3HHxユニットを含む共重合体を合成するにはいたらなかった。この際、アラビノースを添加して導入遺伝子を転写誘導すると生育阻害の兆候が観察された。これは導入した4遺伝子の発現が強すぎたために菌体全体の代謝を撹乱してしまった可能性が挙げられる。今後、誘導時期や誘導条件の検討により糖質を原料とした[P(3HB-co-3HHx)]共重合体の微生物合成を達成することを目指す。
民俗芸能の上演を通じた地域文化の創出とその再編過程に関する現代民俗学的研究

平成15、16の両年度を通じた成果の第一として、本研究の分析枠組みの基礎をなすフォークロリズムとフェイクロアの概念について、おもに北米を中心とする研究史を展望し、両概念がパブリック・セクター・フォークロアの発展を理解する上で、重要な意義をもつことを明らかにしえた。とくにフォークロリズムが、民俗文化の客体化と担い手によるその流用という、両側面の営みを現象の上で規定できる概念として、きわめて有効であることを指摘しえたと考えている。成果の第二として、各地の民俗芸能を一堂に集めて上演する大規模イベントとして、いわゆる「おまつり法」を背景に地域伝統芸能センターと都道府県が協力して実施する「全国フェスティバル」を取り上げ、その動向を広島大会(平成15年10月)と茨城大会(平成16年10月)における参与観察を通じて把握することができた。第三には、全国フェスティバルに対して、ローカルな規模で実施される民俗芸能上演イベントである「北上みちのく芸能祭り」を比較することによって、臨時に立ち上げられた部門による遂行が毎年繰り返される全国フェスティバルのはらむ問題点を析出することができた。最後に第四として、大規模イベントに主演する側である個別の民俗芸能についても、いわゆる伝統的な無形民俗文化財から、近年の創作による和太鼓グループまでの多様な出演団体の実態を数量的に把握するとともに、事例として選択した「八ツ鹿踊り」(愛媛県宇和島市)や「まんのう太鼓」(香川県満濃町)などの民俗芸能集団への聴き取り調査を通じて、民俗文化の担い手が地域文化の再編過程に自覚的に作用する状況を明らかにすることができた。本年度の研究では、(1)北上みちのく芸能まつり、(2)地域伝統芸能全国フェスティバル広島、(3)霜月祭り、(4)『遠野物語』観光、のそれぞれに対する実地踏査と、関係する民俗芸能・民俗文化についての現況調査を実施し、さらにフェイクロアとフォークロリズムに関係する文献の収集整理、およびその分析をあわせて行った。岩手県北上市で実施された北上みちのく芸能祭りに関しては、平成15年8月のイベント当日におけるビデオ撮影を含む参与観察調査、および関連資料の収集などを通じて、40年以上の歴史を持つ都市型民俗芸能イベントの実態把握につとめた。地域伝統芸能全国フェスティバル広島では、10月12日に開催された演目を中心に参与観察を行い、とくに愛媛県宇和島市の八ツ鹿踊り関係者への聴き取り調査を実施した。二つの事例調査を通じて、民俗芸能の「地域文化」化の様相およびその舞台化(上演)の実態に関するデータの集積を実現することができた。12月には、長野県上村下栗の霜月祭りの調査を実施した。前年度NHKのBS放送の対象となったことにより、外部からの見学者を増加させた同地の祭が、一年後にいかなる変化をとげたかという点を中心に参与観察を行った。平成16年3月に実施した『遠野物語』観光の調査では、鹿踊りやオシラ様、民話などの民俗文化を客体化してこれを流用する地元の営みの現況を、既往の研究成果を参考にしつつ確認することができた。他方では、本研究の分析枠組みの基礎をなすフェイクロアとフォークロリズムの概念について、おもに北米を中心とする研究史を展望し、両概念がパブリック・セクター・フォークロアの発展を理解する上で、重要な意義をもつことを明らかにした。その成果は「フェイクロアとフォークロリズムについての覚え書き-アメリカ民俗学における議論を中心にして-」という題目で『日本民俗学』第236号(2003年11月。2048頁)に発表した。本年度の研究では、(1)「北上みちのく芸能まつり」、(2)「地域伝統芸能全国フェスティバル」並びに同時開催の「地域伝統芸能による豊かなまちづくり大会」、(3)「讃岐太鼓のつどい」、の三つの事例における民俗芸能の上演機会を対象として、ビデオ撮影を含む参与観察調査を実施した。また、(4)フォークロリズムとパブリック・セクター・フォークロアに関係する文献の収集と議論の整理を行った。

まず、平成16年8月に岩手県北上市で開催された「北上みちのく芸能まつり」の調査に関しては、おもに神楽と鬼剣舞を対象にして、参与観察・ビデオ撮影・関連資料の収集などを行った。次に、平成16年10月に茨城県水戸市で開催された「地域伝統芸能全国フェスティバル」および「地域伝統芸能による豊かなまちづくり大会」では、舞台化された演目のビデオ撮影を行うとともに、実施に関する主催者側の関係資料の収集を行った。また、平成17年2月に香川県丸亀市で開催された讃岐太鼓のつどいについては、創作太鼓というつくられた民俗芸能の上演機会を確認するとともに、主催者からの聴き取りを得ることができた。他方、本研究の分析枠組みの基礎をなすフォークロリズムの概念については、昨年度に引き続いて関係文献の収集を行い、とりわけパブリック・セクター・フォークロアに関わる既往研究成果に検討を加えることができた。これらの研究成果の中間発表として、2004年12月22日、八木康幸「地域伝統芸能の10年-おまつり法の成果を考える-」(御影史学研究会第36回年会)と題する口頭発表を行った。
筋萎縮に対する新規栄養学的アプローチ：鉄代謝とエネルギー産生系をつなぐ観点から

加齢や消耗性疾患によって引き起こされる筋萎縮は、高齢化社会の進展に伴いますます大きな問題となってきている。申請者はこれまでの研究で、萎縮筋では酸化ストレスによるミトコンドリアの機能低下、TCA回路の障害が引き起こされていることを明らかにしてきた。このようなTCA回路の障害は、ミトコンドリアの酵素アコニターゼ活性の低下が一因であると考えられる。アコニターゼは、生命維持に必須である細胞内鉄濃度の調節と、TCA回路の律速酵素としてエネルギー代謝を制御する、二つの機能を併せ持っている。そこで本研究では、このミトコンドリアの酵素アコニターゼに着目し、筋萎縮の進展に果たす役割を解明し、アコニターゼを標的とした筋萎縮治療法について検討する。本年度は、培養細胞系を用いた実験と、筋肉特異的アコニターゼノックアウトマウスのコロニー確立を中心に作業を行った。培養細胞系を用いた解析では、アコニターゼのノックダウンにより、遅筋型のミオシン重鎖タンパク質の減少が認められ、これには細胞内ATPレベルの低下が関与していることが示された。細胞内エネルギー産生をモニタリングできるフラックスアナライザーを用いた解析においても、アコニターゼをノックダウンした細胞では、コントロール細胞と比較して特に最大酸素消費量の著名な低下が認められた。さらに、アコニターゼのノックダウンはミトコンドリアの形態異常を誘導することも明らかとなった。これらの実験結果は、アコニターゼが細胞内エネルギー代謝の中心であるミトコンドリアの障害を通して、遅筋型ミオシン重鎖タンパク質の分解を誘導していることを示唆している。遅筋繊維はミトコンドリアを豊富に含むため、特にミトコンドリア障害の影響を受けやすいと考えられる。筋細胞レベルにおけるアコニターゼの筋萎縮への影響性検討については、申請書の計画に従い、アコニターゼをノックダウンした筋細胞でのエネルギー代謝・筋タンパク質動態を中心に解析を進めている。個体レベルでのアコニターゼの影響性についても予備的な検討を進めている。筋肉特異的アコニターゼノックアウトマウスの解析結果と併せて、次年度中には筋肉におけるアコニターゼを中心としたエネルギー・鉄代謝連関の解明が達成できると考えている。これらを総合的に判断して「おおむね順調に進展している」と判断した。次年度では、アコニターゼの活性を回復させるフラタキシンや、レスベラトロール等の抗酸化成分を用いた、アコニターゼの機能回復による筋萎縮阻害・予防効果について検討する。上記について、培養細胞系を用いた実験を中心に行い、並行して筋肉特異的アコニターゼノックアウトマウスのコロニーを確立し、個体レベルでのアコニターゼの筋萎縮への影響性を検討する。ノックアウトマウスを用いた動物実験では、尾部懸垂による機械的負荷減少刺激や、高脂肪食負荷によるエネルギー代謝異常刺激を加えた際のコントロールマウスとの比較検討を行う。メタボローム解析によるエネルギー代謝経路の網羅的解析や筋繊維の断面積・繊維タイプの変化、ミトコンドリアの形態制御に関わるタンパク質の発現変化などの解析を予定している。

上記について、培養細胞系を用いた実験を中心に行い、並行して筋肉特異的アコニターゼノックアウトマウスのコロニーを確立し、個体レベルでのアコニターゼの筋萎縮への影響性を検討する。ノックアウトマウスを用いた動物実験では、尾部懸垂による機械的負荷減少刺激や、高脂肪食負荷によるエネルギー代謝異常刺激を加えた際のコントロールマウスとの比較検討を行う。メタボローム解析によるエネルギー代謝経路の網羅的解析や筋繊維の断面積・繊維タイプの変化、ミトコンドリアの形態制御に関わるタンパク質の発現変化などの解析を予定している。平成30年度に予定していた動物実験のうち、ノックアウトマウスの網羅的解析は匹数が確保できず行えなかった。そのため、当該実験で使用予定であった試薬等の購入費を平成31年度で使用予定である。
翻訳後修飾によるジベレリン信号伝達機構の解析

ジベレリン(GA)は、発芽、成長、開花を制御する植物ホルモンである。GA信号伝達では核内タンパク質DELLAの分解が鍵反応である。DELLAと相互作用する転写因子GAF1を単離した。GAF1複合体はGA依存的に転写促進複合体から抑制複合体に機能転換し、GAフィードバック制御において主要な役割を担っていることを明らかにした。また、GAF1複合体が、翻訳後修飾制御される可能性を示した。GA信号伝達においてDELLAタンパク質とSPYタンパク質は、抑制因子として知られている。DELLAタンパク質は、機能未知の核タンパク質であり下流の信号伝達を抑制している。GA投与によりDELLAタンパク質が速やかに分解され抑制が解除されることでGA応答が誘引される。また、SPYタンパク質は、その構造からGlcNAc転移酵素としての機能が予測されており、リン酸化と拮抗してはたらくと考えられている。しかし、具体的な標的タンパク質が明らかになっておらず、その機能は明らかとなっていない。両タンパク質は、共に抑制因子として機能することが知られており、遺伝学的な解析から、DELLAタンパク質の機能制御にSPYタンパク質が必要であると考えられてきた。しかし、DELLAタンパク質とSPYタンパク質は、相互作用しないことから両タンパク質の関係は未だに明らかになっていない。これまでに、DELLAタンパク質の相互作用因子GAF1の単離に成功しDELLAーGAF1複合体が転写活性化複合体としてはたらき、またもう一つのGAF1相互作用因子であるTPRタンパク質と転写抑制複合体を形成し、下流の標的遺伝子の発現制御を行っていることを明らかにしてきた。本年度は、GAF1複合体には、DELLAタンパク質のみならず、翻訳後修飾タンパク質も含まれることを明らかにした。また、このGAF1複合体は、翻訳後修飾を受けることを明らかにした。GAによるDELLAタンパク質の分解によりGAF1複合体は、転写活性化複合体から転写抑制複合体へと構成が変化させるが、さらに翻訳後修飾による制御機構の存在を示した。GAF1複合体の機能転換はGAのみならず、翻訳後修飾によっても制御される可能性を示した。また、SPYタンパク質は、その構造からGlcNAc転移酵素としての機能が予測されているが、具体的な標的タンパク質が明らかになっておらず、その機能は明らかとなっていない。DELLAタンパク質の相互作用因子GAF1の単離に成功しDELLAタンパク質が、GAF1と相互作用することによって、下流の標的遺伝子の制御を行っていることを明らかにしてきた。本年度は、GAF1複合体には、DELLAタンパク質のみならず、SPYタンパク質も含まれることを明らかにした。また、植物細胞を用いたトランジェント解析により、SPYタンパク質の共発現は、DELLA-GAF1による転写活性化を促進することが明らかとなった。GA信号伝達においてDELLAとSPY両タンパク質は、GAF1複合体において同一複合体に存在することで、転写活性化複合体の形成に関与し、GA信号伝達を制御すると考えられる。DELLA-GAF1複合体にSPYタンパク質も存在し、転写の活性化を正に制御できることを明らかにした。この結果は、SPYタンパク質が、DELLAタンパク質とともにGA信号伝達の抑制因子として働き、DELLAタンパク質の機能制御にSPYタンパク質が必要であるといった遺伝学的な解析結果を支持するものである。また、SPYの共発現によりDELLA-GAF1複合体の転写活性化能が変化することから、SPYによるGlcNAc修飾の標的が、DELLA-GAF1複合体であることを間接的に示している。この実験系の確立は、今後のSPYによるGlcNAc修飾の修飾部位の同定、修飾の生物学的な意義を検討するうえで有効な実験手法となると考えられる。H23年度は、植物培養細胞を用いたトランジェント解析によるSPYタンパク質の共発現による転写活性化能の評価、酵母を用いた結合領域の同定等の解析を行った。これらの研究手法は、DELLA-GAF1の機能解析と並行して研究を行うことができたため、新たな研究試薬等をそれほど購入することなく研究が遂行できたため、消耗品費等を節約でき次年度にH23年度未使用分(次年度使用額1,307,629円)を使用することとした。H24年度から、申請者は広島大学に移籍し、大学院生、学部生とともに研究を進める。in vitro系、または、in vivo系SPYによるGlcNAc修飾系の確立し、SPYによるGlcNAc修飾部位の同定を行う。

この研究推進のために、変異タンパク質作成のための合成オリゴマーの作製、放射標識されたUDP-GlcNAc、GlcNAc修飾を検出するモノクローナル抗体といった消耗品費に多くを投入する。また、SPYによって修飾されたタンパク質を用いて、MALDI-Tof mas解析によるGlcNAc修飾部位の同定にも使用する。H24年度は、大学院生、学部生の研究人員の増加と、GlcNAc修飾部位同定のために試薬購入等で、前年度よりも多くの消耗品費の支出が見込まれることから、H23年度の持ち越し分とH24年度の研究費の多くを消耗品費に使用する。また一部を学会等の出張費に使用予定である。
ＣＡＭ型光合成における解糖系及びミトコンドリア呼吸の関与について

パイインアップル及びデンドロビュウムを用い解糖系及びミトコンドリア呼吸のCAM型光合成制御への関与を検討した。ピルビン酸正リン酸ジキナーゼの細胞内局在位置が昼間のミトコンドリア電子伝達系におけるシトクロームCオキシダーゼ(COX)への電子の流れを制御していることが明らかになった。また、解糖系酵素遺伝子発現の日変化は、夜のCO2吸収に関与するグループ、昼のリンゴ酸脱炭酸に関与するグループ、日変化を示さないグループの3種類に分類され、特にグリセルアルデヒド3リン酸脱水素酵素(GAPDH)がCAM型光合成の特異的なガス交換の日変化に関与することが示唆された。本研究では,ME型CAMのデンドロビウム,Crassula argentea,コダカラベンケイのミトコンドリアにおける電子伝達メカニズムの違いを調査した.また,デンドロビウムにおけるPPDKの局在位置を同定した.NAD-MEによる脱炭酸を想定し,リンゴ酸およびNAD-MEの活性化剤であるNAD,CoA,MnCl2を同時に添加した時,KCNによる呼吸阻害率(%)は,デンドロビウムで77.0%,C. argenteaで2.8%,コダカラベンケイで0.7%であり,デンドロビウムで高いKCN感受性を示し,リンゴ酸酸化によって生じる電子が,デンドロビウムはCOXへ,C. argenteaとコダカラベンケイはAOXへ多く伝達される事を示していた.NADHおよびNADPHを基質とした呼吸にピルビン酸を添加すると,呼吸速度,RCR,ADP/O比およびKCN添加直後の呼吸阻害率は,デンドロビウムで有意な変化を示さず,C. argenteaとコダカラベンケイでは呼吸速度が増加し,RCR,ADP/O比、KCN添加直後の呼吸阻害率が減少した.この事は,C. argenteaおよびコダカラベンケイはピルビン酸によってオルタナティブ経路が主に制御され,デンドロビウムではCOXの活性がオルタナティブ経路の制御に深く関与していることを示している.C. argenteaのPPDKの局在位置はChlt型,コダカラベンケイはCyt-Chlt型である事が知られているが,本実験によって,デンドロビウムのPPDKの局在位置はCyt型であることが明らかとなった.細胞質に存在するPPDKに必要なATPは主にミトコンドリアから供給されている可能性があり、デンドロビウムでは,細胞質PPDKにATPを供給するため,COXへ電子を伝達しているものと考えられる.本年度は、パインアップルのCAM型光合成の日変化と解糖系の係わりを明らかにするために、8種類の解糖系酵素のmRNA発現の日変化とキャピラリー電気泳動質量分析法(CEMS)による代謝中間体の日変化について調査した。調査した8種類の解糖系酵素のmRNA発現の日変化は、CAM型光合成の特性との関係から3種類のグループに分けることができた。ひとつは、解糖系方向の制御に関与するもので、従来から解糖系の律速部とされてきたヘキソキナーゼ(HK)、フルクトース1,6二リン酸ホスホトランスフェラーゼ(PFP)、ピルビン酸キナーゼ(PK)であった。特に、PKの発現増大は、パインアップルにおいて新たな夜間のCO2固定の存在を示唆するものであった。第2のグループは、糖新生系の反応に係ると考えられるものでグルコースリン酸イソメラーゼ、グリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)、ホスホグリセリン酸キナーゼである。特に、GAPDHは、phase 3の後半に発現ピークを示した後、phase 4の始めに発現が急減し、その後は緩やかに発現が増大するという推移を示し、CAM型光合成において最大の謎である解糖系の昼夜逆転の制御に関与することを示唆する日変化を示した。第3のグループは、一日を通して高い発現レベルを維持するものでアルドラーゼとトリオースリン酸イソメラーゼであった。次にCEMSによる解糖系代謝中間体の日変化については、フルクトース1,6二リン酸含量がphase 1に上昇するものの一日を通して最も低く推移し、PFP発現レベルの低さと日変化に対応するものであった。また、パインアップルにおいては、HKにアイソザイム変異が存在していることが示唆された。本事業の成果を日本作物学会第236回講演会(平成25年9月)で発表し、優秀発表賞を受賞した。パインアップルの解糖系に係わる6種類の酵素遺伝子について、PCR解析用のプライマーを設計し、解糖系の制御に係わると予想されるピルビン酸キナーゼのmRNA発現の日変化を調査した。mRNAの発現は、20時に最低となり、深夜0時に向けて発現が増大、その後は低下するという日変化を示した。

このような日変化は、パインアップルのPEPカルボキシラーゼのリン酸化が深夜0時に最大となる従来の結果と同調した結果であり、パインアップルのCAM型光合成の日変化に解糖系の酵素遺伝子の発現の日変化が関与することを示唆する結果が得られた。また、ME型CAMに分類されながら低酸素下でCAM型光合成を維持するデンドロビュウムのミトコンドリア電子伝達特性をコダカラベンケイソウと比較した。CAM型光合成のPhase 3の光合成を想定し、リンゴ酸を基質とした場合、コダカラベンケイはAOXへ,デンドロビウムはCOXへ電子を多く伝達している事が観察され、このことが低酸素条件下においてもCAM型ガス交換を維持する原因となっているものと考えられた。NADPHを基質としてミトコンドリアの外部から電子を与えた時の電子伝達は、両種で違いはなかった。次に、リンゴ酸とNADPHを同時に与えたときの電子伝達は、コダカラベンケイはAOXへ、デンドロビウムはCOXへ相対的に多く電子を伝達する事が明らかになった。さらに、その時にKCNによりCOXを阻害した場合には、ピルビン酸が共存下ではコダカラベンケイもデンドロビウムも最終的にはAOXへ多く電子を伝達するが、デンドロビウムではKCN添加直後はCOXへ多く電子を伝達し、KCN添加によって徐々にAOXへ電子を伝達するようになった。以上の結果は、コダカラベンケイとデンドロビウムの電子伝達系におけるリンゴ酸とピルビン酸に対する反応性の違いが低酸素感受性の違いに関係していることを示唆していた。ME型CAMの制御に対するミトコンドリア電子伝達系の関与を明らかにする一環として、低酸素下でCAMが消失しないデンドロビュウムの原因について集中的に解析を行い、リンゴ酸脱炭酸の結果生じるピルビン酸の糖新生系での回収を仲介するPPDKの細胞内局在性を明らかにするとともに、ミトコンドリア電子伝達系におけるAOX及びCOXへの電子分配の特性を明らかにした。ほぼ満足する結果が得られ、現在国際誌への最終的な投稿準備を行っているところである。同時にCAM型光合成の制御に対する解糖系の関与をメタボローム解析と遺伝子発現解析から明らかにすることも計画していたが、解析法の中心となるCE・LC/MSでの分析法が、機器導入2年目で十分な解析精度が確立できずに、予備試験の段階にとどまった。また、遺伝子発現については、プラライマーの設計を終え、発現条件の確立までは達成した状態である。以上の通り、本研究の中心的なトピックであったデンドロビュウムのミトコンドリアとCAM制御の関係については、十分な成果を達成できたが、パインアップルのCAM制御における解糖系の関与については、準備段階にとどまっていることから、おおむね順調という自己評価を行った。当初計画の代謝中間体の解析については、メタボローム解析を効率的に実施できるCA-MSの本格的な使用が平成24年度から可能となるために次年度に実施することとした。パインアップルの解糖系の遺伝子発現の日変化を解析するのに必要なプライマーの設計に時間を要し、mRNA発現解析は、制御酵素とひとつと予想されるピルビン酸キナーゼのみの日変化解析に終わった。しかし、6種類の酵素遺伝子のプライマーの設計ができ、次年度においては解糖系の遺伝子発現を追跡できる準備がととのった。最終年度に計画していたデンドロビュウムのミトコンドリア電子伝達系の特性について、コダカラベベンケイとの比較で電子のCOXへの流れの偏りを明らかにすることができ、学会発表を行った。以上のことを勘案して「おおむね順調に進展している」と自己評価を行った。
ラン藻における低温誘導性遺伝子群の単離とその構造および発現様式の解析

2.lti2とlti46の塩基配列を決め,S1法によって転写領域を確定した。lti2は約2.0kntの転写産物を生じ,これには552個のアミノ酸残基からなるポリペプチドがコードされていた。lti46には約0.7kntと約1.6kntの転写産物を生ずる転写単位が隣接して存在しており,さらに両者を含む2.5kntの長い転写産物も検出された。0.7kntのRNAには119アミノ酸残基からなるorfが含まれ,1.6kntのRNAには179個(orf2)と215個(orf3)のアミノ酸残基からなる2個のorfが含まれていた。既知のアミノ酸配列のデータベースとの比較では,lti2のorfはαアミラーゼと,またlti46のorf2は細胞表面抗原とそれぞれ相同性を示した。3.これらの遺伝子の低温による発現制御をノーザン法とS1法によって調べたところ,lti2とlti46の両者とも低温シフト後1時間以内という早い時期に強く発現すること,この発現は一過性であり,一定温度の定常状態では転写産物は謹かしか蓄積しないことが判明した。4.遺伝子の転写レベルでの制御を調べるために,lti2のプロモータ部分をルシフェラーゼ遺伝子のコード領域につないだキメラ遺伝子を作って,Anabaenaに形質転換した。ルシフェラーゼ活性は低温によって約10倍に高まったが,低温の定常状態でも高い活性を示した。さらに詳細な検討が必要であると思われる。ラン藻Anabaena variabilisのゲノムDNAをλEMBL4に組み込んだ遺伝子ライブラリを作製し,differential screeningにより,低温で発現が誘導される遺伝子を単離した。スクリ-ニングでは,38°Cの一定温度で生育した細胞および22°Cにシフト後2.5時間の細胞のそれぞれから得たRNAを鋳型としてPー32ラベル一本鎖cDNAを合成してプロ-ブとし,38°Cプロ-ブとはほとんど反応せず,22°Cプロ-ブとは強く反応するクロ-ンを選択した。さらに,得られたクロ-ンDNAをプロ-ブとしてノ-ザンブロットを行い,低温シフトによる発現誘導を確認し,現在までに2個のクロ-ン(Lti2,Lti46)が得られた。各クロ-ンには遺伝子の一部しか含まれいてなかったので,さらにこれらのクロ-ンDNAをプロ-ブとしてスクリ-ニングを行い,遺伝子の残りの部分を含むクロ-ンを得,最終的にはそれぞれの遺伝子全体を含むクロ-ンを再構築した。それぞれのクロ-ンについて塩基配列を調べ,さらにSl法により転写領域を確定した。Lti2の転写産物は2.0kntで,これには552個のアミノ酸残基からなるORFが含まれており,これはαアミラ-ゼと類似のアミノ酸配列をもっていた。Lti46の転写産物には0.7knt,1.6knt,2.5kntの3つの大きさのものがあり,2.5kntのものは0.7kntと1.6kntのものおよび中間領域を含む転写産物であった。0.7knt転写産物には120個のアミノ酸残基からなるORF1が,1.6knt転写産物には180アミノ酸残基からなるORF2と215アミノ酸残基からなるORF3がそれぞれ含まれていたが,どのORFも既知タンパクのアミノ酸配列との著しい相同性はなかった。両遺伝子の各転写産物の量は38°Cでは微量であり,22°Cへのシフト後1時間で約10倍になったが,その後次第に低下するという,一過性の発現を示した。今後,キメラ遺伝子を作製して,発現調節をさらに詳しく研究してゆくことにする。ラン藻Anabaena variabilis M3のゲノムDNAから昨年度の研究において単離された低温誘導性遺伝子lti2,lti46について、遺伝子産物の解析と低温による発現制御を検討した。lti2遺伝子には552個のアミノ酸

残基からなるopenreading frame(ORF)が含まれており、これはαアミラ-ゼと約20%の相同性を示した。この遺伝子の産物を大量に発現させてタンパク産物を確認するために、ORFを含む領域をプラスミドベクタ-であるpBluescriptSK+およびpKK233ー2に組み込んで、大腸菌XLー1 blueに形質転換した。IPTGによる誘導によって約75kDaのポリペプチドが合成された。この分子量はアミノ酸配列から推定される値63,832よりもやや大きいが、このくいちがいの原因ははっきりしない。この75kDaポリペプチドを多量に発現している大腸菌の抽出液についてアミラ-ゼ活性を測定したが、全く検出されなかった。このことは、lti2遺伝子にコ-ドされているのがαアミラ-ゼそのものではないことを示しており、類似のαグルカン転移酵素なのではないかと推定される。遺伝子の発現制御を調べるために、lti2およびlti46のプロモ-タ-領域をそれぞれシフェラ-ゼおよびβガラクトシダ-ゼ遺伝子のコ-ド領域につなぎ、それぞれAnabaenaと大腸菌に形質転換した。lti46プロモ-タ-は大腸菌内では低温による誘導を受けなかったが、lti2プロモ-タ-はAnabaena内で機能し、低温によって発現量はやや増加した。しかしin vivoにおけるlti2転写産物のレベルは低温シフトにより約40倍になるのに対して、lti2プロモ-タ-につないだルシフェラ-ゼの活性は2ないし3倍にしかならなかった。このことはlti2転写産物のレベルの調節にはRNAの分解も関与していることを示唆している。
日韓における高安動脈炎の比較研究

はじめに高安動脈炎は原因不明の非特異性慢性血管炎であり厚生省により難病に指定されている疾患の一つである。本症は若年女子に多いという特徴の他に欧米に少なくアジア、南米に住む民族に多くの患者をみるといる種族差のあることでも知られている。^<1)2)>。本症発生には種属差のあることや家族内発症ケ-スがみられることから高安動脈炎の発症、病態の進行に遺伝要因の関与を推定し、HLAの検索を行ってみたところ、日本人の本症患者にはHLA Aw24ーBw52ーDw12のhaplotypeの出現が健康日本人に比し有意に高い結果が得られた^<3)4)5)6)>。更に、class IIIに属する遺伝子との関連を追求すべく補体蛋白の多型について調べたところ本症患者はBw52ーC4A2ーC4BQOーDw12のextended haplotypeの存在が確認された^<6)7)8)>。一方、本症には種属差のあることから他民族での本症病態が気になるところである。そこで、昨年度から隣国である韓民族の高安動脈炎患者はどうであるかとの比較研究を行った。研究および方法韓国のソウル地域およびプサン地域について高安動脈炎と診断された患者50名につきHLA typingおよび補体蛋白型の測定を実施し、健常韓国人200名と比較検討を加えた。更に、血管造影を施行し得た112名についてその血管造影所見と東京医科歯科大学で血管造影を行った75名の患者と比較検討を行った。結果表14はHLA、A、B、C、DR locusにおける各種抗体の出現頻度を健常人と比較したものである。A locusにおいては健常人と患者との間に有意差の認められたものはなかったが、B locusにおいてはBw52(p<0.02)、DR locusではDR7(p<0.02)が健常人に比し有意に高い結果が得られている。更に補体蛋白についてもC4、A2の有意に高い出現頻度が確かめられた。(γγ=19.1、x=7.0p<0.01)。図1は血管造影の比較をしめしたものである。Nasuの分類法に基づいて行った分類では我が国ではIV型(全領域における病変の存在)が最も多く(28名37%)ついで、I型(基幹動脈型)(23名31%)、II型(上行、胸部大動脈を含む病変)(20名27%)の順になり、III型(腹部大動脈に限局)(4名5%)が最も少ない頻度であるのに対し、韓国ではIV型が同じく(65名58%)と最も多いが、次いでIII型が(34名30%)をしめ、I型、II型は合わせても(13名12%)にすぎなかった。総括まだ検索の途中であり結論を得るまでに至っていないが、韓国民の高安動脈炎患者においてもBw52抗原に有意に高い出現頻度がみられたことは注目されよう。この事実は本症の発症、病態形成にHLAと連鎖不平衡にある遺伝要因の存在が我が国のみならず他民族においてもうかがえることを示唆している。更に補体蛋白型でも両民族にC4A2の有意に高い出現頻度が認められている。もっとも、韓民族と日本民族とは同一性の強いことは人類学上でも指摘されている事実であるが、今後更に他アジア諸国と比較し追求してゆかねばならない。一方、血管造影検査において両民族に異なったtypingの出現がみられた点も今後検討すべきポイントである。しかし韓国と日本との社会的、経済的な環境の違いで患者の受診率の相違が本症の発見と分布のかたよりに影響している可能性も考慮しなければならない。文献1)沼野藤夫:高安動脈炎、循環器病学、佐野豊美編文光堂p1103、19782)沼野藤夫:高安動脈炎、診断と治療76(3):566570、19885)沼野藤夫:高安動脈炎とHLA現代医療21(12):33753380、19808)沼野藤夫、根岸駿夫、下門顕太郎、鈴木広一、松本秀雄、占部和敬、木村彰方、笹月健彦:高安動脈炎の遺伝要因に関する研究(III)高安動脈炎患者の補体アロタイプについて日内会誌78(4):486492、1989はじめに高安動脈炎は原因不明の非特異性慢性血管炎であり厚生省により難病に指定されている疾患の一つである。^<1)2)>。