hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
妊娠女性のニーズの解明: 3世代の子産み子育て環境の変遷を通じて

地域が東北・関東地方と広範囲であったこと、調査内容が妊娠出産や子育てに関する内容であったことから、全国的に日常生活が落ち着いた段階での実施に変更を余儀なくされ、補助金事業の8か月間の延長の許可を得て、平成23年11月に調査を終了した。大都市と地方における3世代に渡る子産み子育て体験の伝承に関する調査により、「親となること」への妊娠女性のニーズを解明することを目的に研究を実施している。1年目の大阪、京都、北海道の女性に対して妊娠出産・子育てに関するインタビューを実施、2年目のインタビュー分析と、女性に優しい出産をモットーにしている診療所のデータ分析を行った結果をもとに、調査票を作成した。今年度は、妊娠出産・子育て体験は若い世代への伝承がなされていないことと、都市部においては特にそのことが顕著ではないかとの仮説をもとに、インターネット会社を通して、1000名への調査を行った。妊娠や出産、子育てに関する14項目について聞いた体験と伝承について、(1)2140歳、(2)4164歳、(3)65歳以上の3つの世代で分析した結果、(1)の世代は他の世代に比較して、出産場所の選択、陣痛体験、児を産むこと、産後の生活、児の世話、母乳育児等の体験を聞いた得点が有意に高く、子どもたちへの伝承得点も有意に高かった。(2)の世代は妊娠出産体験を聞いてはいるが、伝承得点はほとんどの項目で低い得点であった。3つの世代の中でも(3)の世代はすべての項目において得点は最も低い結果であった。また、(3)の世代では、聞いた体験に比べて伝承得点の方はさらに低率であった。誰から体験を聞いたかは複数回答ではあったが、14項目中の5項目において「実母」を最も多く選択していたが、9項目において「助産師・看護師・教師等の専門家」を選択しており、若い世代ほど「専門家」や「知り合いの女性」を選択していた。また、大都市と地方とに差はなかった。結論として、仮説は覆され、若い世代の方が体験も聞いていたし、伝承希望も高いという結果は、生活の中で母親から娘へと伝承されていた子産み子育て体験が専門家を介した体験や伝承となっており、現代の伝承のあり方が様変わりしていることが明らかになった。長寿、少産社会において祖母、母、娘の体験や伝承に対する考え方の違いを理解した上で、現代に即した援助のあり方を探ることが今後の課題である。
グラム陽性菌由来膜傷害性タンパクの生物活性と感染免疫・病態への関与

各種グラム陽性球菌が産生するコレステロール依存性膜傷害性タンパク毒素(CDC)につき、アミノ酸置換や一部欠失を含む種々のリコンビナント標品を作製し、その膜傷害活性とサイトカイン誘導活生発現の分子機構を解析した。L.monocytogenes, L.seeligeri, S.pneumoniaeがそれぞれ産生するLLO, LSO, PLYには、何れもドメイン4が必須の膜傷害活性と、ドメイン4非依存的でN末端側依然的なサイトカイン誘導活性がみられ、2つの異なった生物活性が同一分子の異なったドメインに依存することが明かとなった。LLOにはマクロファージを刺激してIL-12, IL-18産生を誘導する活性があり、これらが共同してNK細胞を刺激してγインターフェロン産生が誘導された。マクロファージにサイトカイン応答を引き起こすレセプターとしては、各種ノックアウトマウス由来細胞およびTLRと関連分子の強制発現細胞を用いて、TLR2/TLR4/CD14の関与が示唆され、ドメイン1-3が単独でNF-kB活性化リガンドとなることが判明した。サイトカイン誘導活性は各種CDCファミリータンパクに普遍的なものと想定されたが、LLOやLSOと相同性の高いL.ivanovii由来ILOには膜傷害活性はみられたもののサイトカイン誘導活性がみられなかった。類縁CDCであるLLO, LSO, ILOのアミノ酸配列を詳細に検討した結果、ドメイン1のN末端側の疎水生およびPEST配列がサイトカイン誘導活性の有無に関与する可能性が示唆された。そこで多くのアミノ酸変異タンパクを作製した結果、特にPEST配列が活性発現(細胞による認識)に重要であることが示唆された。細胞膜傷害毒素として知られてきたCDCファミリータンパク毒素には、異なったドメイン依存的なサイトカイン誘導活性があり、各種グラム陽性菌感染の病態形成や免疫応答にも深く関与することが示唆された。各種グラム陽性球菌が産生するチオール活性化膜傷害性タンパク毒素が示す膜傷害活性と、我々が見い出したサイトカイン誘導活性につき、リステリア菌由来のlisteriolysin O(LLO)と肺炎球菌由來pneumolysin(PLO)の変異タンパクを作製し、構造活性相関を解析した。PLOのN末端やC末端側の一部欠失変異タンパクやドメイン1-3のみの標品、ドメイン4のみの標品などを、PCRによる遺伝子デザインに基づき大腸菌で発現させ、精製標品を作製した。C末端欠損標品では、欠損長に関わらず、固相化コレステロールへの結合能、細胞膜へのコレステロールを介した結合能が消失し、溶血活性やマクロファージ膜傷害活性が見られなかった。一方、N末端一部欠損標品やドメイン4のみの標品では、膜傷害活性は消失したが、コレステロールへの結合能は保持されていた。サイトカイン誘導活性はドメイン4には認めらず、N末端欠損標品では著明に低下した。しかし、C末端欠損標品やドメイン1-3標品など、膜傷害性が欠失した変異タンパクでは高い濃度で著明なサイトカイン誘導活性が見られた。以上の結果から、チオール活性化膜傷害性タンパクは、N末端側ドメインにサイトカイン誘導活性が、C末端側第4ドメインに膜傷害に関わるコレステロール結合活性が存在することが明らかとなった。また、スカベンジャーレセプター(SR)欠損マウスを用いた感染実験から、リステリア菌のマクロファージ内殺菌過程にSRが関与することが示唆される成績が得られた。各種グラム陽性球菌が産生するコレステロール依存性膜傷害性タンパク毒素(CDC)が示す、膜傷害活性とサイトカイン誘導活性につき、各種リコンビナントタンパクを作製し、その分子機構を解析した。

L.monocytogenes, L. seeligeri, S. pneumoniaeがそれぞれ産生するLLO, LSO, PLYには、何れもドメイン4が必須の膜傷害活性と、ドメイン4非依存的なサイトカイン誘導活性がみられた。LLOによるサイトカイン誘導は、まずマクロファージを刺激してIL-12, IL-18の産生が誘導され、これらが共同してNK細胞を活性化しγインターフェロン産生に至ることがノックアウトマウス細胞などを用いて確認された。NF-kBのレポーターを強制発現させた細胞を用いて、全長LLOのみならずドメイン1-3のみのLLO標品にも、NF-kB活性化能の存在が示された。マクロファージにサイトカイン応答を引き起こすレセプターとしては、各種ノックアウトマウス由来細胞における実験から、TLR2/TLR4/CD14の関与が示唆され、TLRおよび関連分子の強制発現細胞を用いた実験でもこれを支持する結果が得られた。サイトカイン誘導活性は各種CDCファミリータンパクに普遍的なものと当初予想されたが、LLOやLSOと相同性の高いILO(L. ivanovii由来)には膜傷害活性はみられたもののサイトカイン誘導活性がみられなかった。類縁タンパクであるLLO, LSO, ILOのアミノ酸配列を詳細に検討した結果、ドメイン1のN末端側の疎水性およびPEST配列がサイトカイン誘導活性の有無に関与する可能性が示唆された。そこで多くのアミノ酸変異タンパクを作製した結果、疎水性ではなく、PEST配列が活性発現(細胞による認識)に重要であることが示唆された。この成果は極めて興味深いが、さらにPEST配列を変えた標品で確認中である。
ソリトン・ストレイジリングに関する研究

ソリトンは非線形分散媒質中に特有な波動である。しかし、多くの媒質は非線形性と分散性だけではなく、他の性質を持ち合わせる場合がしばしばある。たとえば、散逸はほとんどすべての媒質に普遍的に現れる性質である。この散逸の結果、ソリトンは時間内、空間的に減衰する。離散的な非線形分散系では散逸によるソリトンの減衰を交流駆動の方法により打ち消すことができることをB.A.Malomedが理論的に示した。その理論は直ち非線形電気回路に応用され、T.Kuuselaによって交流駆動の有効性が実験的に検証された。本研究では、非線形電気回路に交流駆動の方法を適用し、(1)クノイダル波を安定に回路中を伝播させる実験、および、(2)ソリトンをリング状の回路に永久に閉じこめるソリトン・ストレイジリングを作製する実験を行った。クノイダル波実験では、まず、散逸の少ない電気回路でクノイダル波の分散式を測定し、戸田格子の理論と比較した。クノイダル波を指定する楕円関数の母数を波の周波数と振幅から実験的に見出だす方法を開発し、実験で求めた分散式が理論と極めて良く一致することを確認した。次に、散逸の多い電気回路で交流駆動の実験を行い、波の速度で決まる共鳴条件と波長の量子化条件を同時に満足するとき、交流駆動によりクノイダル波にエネルギーが供給されて散逸と釣り合い安定な伝播が可能になることを示した。ソリトン・ストレイジリング散逸を含むリング状電気回路の一点からパルスを加え両方向に伝播させると同時に、回路に交流駆動を印加し散逸を補う。パルスと交流駆動の位相を調節することにより一方方向に進む波にのみ共鳴する条件を作るとソリトン・ストレイジリングが実現できることを確かめた。位相の調整により伝播方向は制御可能である。これにより、ソリトン閉じこめを利用したソリトンダイナミックメモリーの実現が可能になった。なお、これら二つの研究成果は現在投稿準備中である。
フェティシズムの思想史――19世紀西洋における「所有する主体」の誕生と身体

フェティシズム概念の思想史的な解明を目指す本研究の、当該年度における研究実績の概要は、主として以下の二点に要約することができる。1近代西洋において人とモノとの関係は所有に還元され、所有関係を超えた過度のモノへの執着は、「フェティシズム」と呼ばれて忌避されることになった。このような所有関係に還元することのできない、例外的なモノのひとつが、身体である。このような近代における身体のステータスを考察する手がかりとして、カニバリズムの問題を見出したことは、本研究の進捗にとっての大きな力となった。前年度より着手し始めたこの問題について、本年度は計画通り編著書を刊行することができたほか、分担執筆した書物においてもこの問題について検討した。2写真とフェティシズムの関係の検討も、本研究の重要な目的のひとつである。写真にフェティシズムというと、被写体(身体である場合が多い)をフェティッシュとした過度の愛着についてばかりが語られてきたが、本研究においてはむしろ、写真が集合的なアニミズムを媒介する社会的なフェティッシュであることを証明することを目指している。当該年度においては、従来のフェティシズムと、本研究が問題とするフェティシズムを切り分けることを目指した仏語論文を執筆し、仏語での口頭発表を行ったほか、近代的主体の法的ステータスと写真の発明とが深く関わっていることを示した論文を発表した。所有の問題の考察においては法制史的な観点からの検討も不可欠である。この点に関して本研究は、コレージュ・ド・フランス教授である法学者アラン・シュピオ氏の研究に大きな示唆を得ている。当該年度は同教授と、2019年度に日本で開かれる国際会議についての研究打合せを行ったほか、著書の翻訳も終わらせ、2019年度に刊行の予定である。カニバリズムの問題は、構想段階では本研究にとってこれほどまでに本質的な意味を持つものとなることは想定していなかったが、本研究の着手後、この概念が近代における身体のステータスを考察するうえで重要な意味を持つことに気づくに至った。このように新たに発見した問題系について、当該年度には編著書および分担執筆の2冊の書物を刊行できたことからすれば、本研究が当初の計画以上に進展していると見なしても、過大な評価には決してあたらないだろう。当初より計画していた写真に関する研究についても、論文を2本(フランス語および日本語)執筆したほか、フランスのポンピドゥー・センターで開かれたシンポジウムで発表を行うなど、国際的な展開を見せるに至っている。国際的な研究協力については、前年度翻訳書(『法的人間』、嵩さやか氏との共訳、勁草書房)を刊行したアラン・シュピオ教授とは本年度も良好な関係を一段と深めており、2019年度には同教授を招いての国際会議を日本で開催できる見込みである。同教授の新たな著作『フィラデルフィアの精神』も、すでに翻訳を終え、来日に合わせて刊行の予定である。本研究の最終年度となる2019年度については、主として写真に関する研究の成果を世に問うつもりである。勁草書房より刊行予定の単著については、同年度中に、写真における瞬間性の問題を考察した一章を執筆することで、すべての原稿が出揃うことになる。その他にも、ルドルフ・テプフェールの写真史上における重要な著作を監訳し、解説を付して刊行の予定である。長期休暇期間中には、フランス国立図書館において主として上記の執筆に関する資料調査を行うほか、写真史家であるパリ第1大学のミシェル・ポワヴェール教授と研究打合せを行い、同教授の著作の翻訳刊行に関して計画を進めるほか、2020年度以降に計画している在外研究についてのアドバイスをもらう。身体の問題についてはカニバリズムに関する研究書を編著および分担執筆としてすでに刊行し、写真の問題については単著を刊行することで、本研究は完成を見ることになる。これらの研究を発展させた2020年度以降の新たな研究についても、本年度より準備段階に入る予定である。写真における瞬間性の問題という、本研究において今年度取り組む問題を手がかりに、イメージにおける瞬間表象の問題を、西洋美術史と思想史の両者の観点から横断的に考察することが、今後の研究課題となる予定である。本研究の目的の一つは、写真とフェティシズムの本質的な関係を解明することである。これまで一般的にフェティッシュ的と呼ばれてきた写真とは、個人の欲望の対象としての性的なイメージを被写体とするものだった。しかし本研究はフェティシズムを、集合的なアニミズムを含む、より広い概念として捉えている。かつて人類学が異文化の中に認めた呪物崇拝は、西洋においては、モノに対する個人的な欲望の固着すなわち(狭義の)フェティシズムとしてのみ存続を許されてきた。本研究が明らかにしようとしているのは、写真とはそのような西洋において例外的に存在することになった集合的なフェティシズムの対象であるということである。本年度はその準備として、写真における狭義のフェティシズムと広義のフェティシズムの文節を試みる考察を、国際シンポジウムにおいて発表した。この考察は平成30年度中に論文として公表の予定である。フェティシズムの誕生と「所有」概念の成立との関係を明らかにすることも、本研究の目的である。フェティシズムやアニミズムが西洋において否定的な概念として用いられたのは、モノに対して「所有物」以上の価値を認めることができなくなったためであると考えられる。あらゆるモノが「所有物」とされる中で、「身体」は、所有には還元できない唯一のモノであると言える。このような「身体」のステータスを、「病気」の概念を手がかりに考察する論考を発表した。

本研究との関わりの深い、法制史や身体論についてのフランス語の著作を翻訳刊行した(アラン・シュピオ『法的人間』〔共訳〕、ミサ、ヌーヴェル編『ドーピングの哲学』)。長期休暇を利用したフランスにおける資料調査においては、主として写真史に関わる調査を行い、その成果の一部は、国際シンポジウムにおいてすでに発表しているほか、平成30年度中に執筆を終える、勁草書房より刊行の単著に盛り込まれる予定である。本研究のもう一つの主軸である「身体」と「所有」の関係をめぐる考察に関しては、医学雑誌『Cancer Board Square』に連載中の論考の形で、3本の論文を刊行した。その過程で「カニバリズム」という新たな主題を発見したことは、本研究にとっての大きな進展である。この新たな主題については平成30年度中に共編著を刊行の予定である。今年度は本研究とも関わりの深い2冊の学術書の翻訳を刊行することもできた。アラン・シュピオ『法的人間』(嵩さやか氏との共訳、勁草書房)は、「身体」や「所有」といった概念と法との関わりを問う本研究にとって重要な視点を与えてくれる著作である。ミサ/ヌーヴェル編『ドーピングの哲学』(新曜社)は、ドーピングを身体論的な観点から考察した論集であり、本研究の身体論的な展開にも有意義な著作である。フェティシズム概念の思想史的な解明を目指す本研究の、当該年度における研究実績の概要は、主として以下の二点に要約することができる。1近代西洋において人とモノとの関係は所有に還元され、所有関係を超えた過度のモノへの執着は、「フェティシズム」と呼ばれて忌避されることになった。このような所有関係に還元することのできない、例外的なモノのひとつが、身体である。このような近代における身体のステータスを考察する手がかりとして、カニバリズムの問題を見出したことは、本研究の進捗にとっての大きな力となった。前年度より着手し始めたこの問題について、本年度は計画通り編著書を刊行することができたほか、分担執筆した書物においてもこの問題について検討した。2写真とフェティシズムの関係の検討も、本研究の重要な目的のひとつである。写真にフェティシズムというと、被写体(身体である場合が多い)をフェティッシュとした過度の愛着についてばかりが語られてきたが、本研究においてはむしろ、写真が集合的なアニミズムを媒介する社会的なフェティッシュであることを証明することを目指している。当該年度においては、従来のフェティシズムと、本研究が問題とするフェティシズムを切り分けることを目指した仏語論文を執筆し、仏語での口頭発表を行ったほか、近代的主体の法的ステータスと写真の発明とが深く関わっていることを示した論文を発表した。所有の問題の考察においては法制史的な観点からの検討も不可欠である。この点に関して本研究は、コレージュ・ド・フランス教授である法学者アラン・シュピオ氏の研究に大きな示唆を得ている。当該年度は同教授と、2019年度に日本で開かれる国際会議についての研究打合せを行ったほか、著書の翻訳も終わらせ、2019年度に刊行の予定である。
フーリエ向井変換とミラー対称性

前年度に引き続き,ラグランジュ部分多様体のラグランジュファイバー束による射影の特異点(ラグランジュ特異点)の分岐について,特に,勾配系の性質を研究した.すならわち,ラグランジュ特異点を横方向に眺めて,ある関数のグラフと見なし,その関数の変形によって,その勾配ベクトル場がどうなるかを調べた.ラグランジュ特異点が原点でだけ2重とする2重分岐被覆の場合を詳しく調べた.つまりその変形であるラグランジュ特異点について,勾配ベクトル場の性質を調べた.これは,特異点論ではいままで見逃されていた視点である.この研究により,勾配ベクトル場の族の中で,鞍点の間を結ぶ積分曲線が例外的に存在する場所(1次元である分岐集合)の様子が明確になった.すなわち,変形後コースティックスは3角形であり,その3角形と分岐集合の形が主要な問題である.これは分岐の仕方によって非常に多様な形をとりうるが,その形について多くの詳細な研究をおこなった.これは将来ホモロジー的ミラー対称性をフレアーホモロジーの族を調べることで研究するとき重要と思われるが,すでに特異点論の立場からおもしろい結果であると思われる.前年度に引き続き,ラグランジュ部分多様体のラグランジュファイバー束による射影の特異点(ラグランジュ特異点)の分岐について,特に,勾配系の性質を研究した.すならわち,ラグランジュ特異点を横方向に眺めて,ある関数のグラフと見なし,その関数の変形によって,その勾配ベクトル場がどうなるかを調べた.ラグランジュ特異点が原点でだけ2重とする2重分岐被覆の場合を詳しく調べた.つまりその変形であるラグランジュ特異点について,勾配ベクトル場の性質を調べた.これは,特異点論ではいままで見逃されていた視点である.この研究により,勾配ベクトル場の族の中で,鞍点の間を結ぶ積分曲線が例外的に存在する場所(1次元である分岐集合)の様子が明確になった.すなわち,変形後コースティックスは3角形であり,その3角形と分岐集合の形が主要な問題である.これは分岐の仕方によって非常に多様な形をとりうるが,その形について多くの詳細な研究をおこなった.これは将来ホモロジー的ミラー対称性をフレアーホモロジーの族を調べることで研究するとき重要と思われるが,すでに特異点論の立場からおもしろい結果であると思われる.
宇宙実験成果に基づく高品質混晶半導体バルク結晶の育成

混晶半導体InxGa1-xSb結晶はその組成比を変えることで構造や電気的・光学的特性を制御出来るため、赤外線素子および高速電子素子素用基板材料として期待されている。しかし、それらの均一組成・低欠陥のバルク単結晶の育成が課題である。結晶の高品質化のために無対流条件が最適であるとして宇宙実験が実施されたが、多結晶化を抑制できないという新たな課題が判明した。そこで本研究は、強磁場と電場の複合印加による溶融帯中の対流と温度勾配を同時制御することで、従来に比べ結晶の特性が格段に向上した高品質In0.11Ga0.89Sbバルク結晶の育成を地上で実現し、他の混晶半導体結晶成長への適用を検討する。
コラーゲン誘導関節炎発症性T細胞のレセプターとエピトープの同定:発症に関与する抗原エピトープは限定されているか

DBA/1マウス由来T細胞クローンK-102は、II型コラーゲン(IIC)のCNBrフラグメントCBll(アミノ酸278個)と反応する。CBllフラグメント中にはT細胞エピトープが少なくとも5個存在するが、我々は、アミノ酸が10個ずつ重複する20merの合成ペプチドを作製し、それらとK-102細胞との反応性から、CBllのN末端5090番目にK-102が認識するarthritogenicepitope(関節炎誘起に関与するエピトープ;AE)が少なくとも1つ存在することを明らかにした。さらに、このアミノ酸配列を細かく切断した合成ペプチドとK-102との反応性などから、N末端60-81の22個のアミノ酸から成るペプチドIIC60-81が、目的とするエピトープであることを突き止めた。この合成エピトープは、K-102細胞のみでなくIIC感作マウスの局所リンパ節細胞とも反応性を示すことから、K-102細胞にのみ反応する特異なエピトープではなく、IIC感作によって誘導されるIIC反応性Tリンパ球の全レパートリーの中に含まれるAEに関与する重要なエピトープと推測された。このIIC60-81は、単独でDBA/1マウスを感作してもコラーゲン誘導関節炎(CA)は発症せず、さらに、このマウスにその後、nativeのIICで感作してもCA発症性を示さず、加えて、これらのマウスの末梢リンパ細胞はIIC60-81に反応性を示さないことから、IIC60-81は、AEに関してトレランスを誘導し、ペプチドワクチン活性を有していることが明らかになった。さらに、IIC60-81を構成するアミノ酸と、I型コラーゲン(CA誘導性を欠く)のα1(1)鎖の対応する残基とがホモロジーが高くなるように、site-directed substitutionを行ったアナログペプチドを4種類合成して調べたところ、そのうちの1つIIC60-81(S68,78,80)は、wild type抗原のIIC60-81のI-A^qへの結合に対するアンタゴニストであることが示され、DBA/1マウスをIIC60-81で免疫する際、このIIC60-81(S68,78,80)を加えて共免疫すると、CAの発症を有意に抑制し、その機序はMHCアンタゴニストとして働いていることが示唆された。ヒト慢性関節リウマチ(RA)の実験モデルであるII型コラーゲン(IIC)誘導関節炎(CA)発症マウス(DBA/1)から確立したIIC特異的T細胞クローン(K-102)は、「T細胞ワクチン」活性と共に正常動物に移入すると関節炎を受身発症させるCA発症活性を保持している。このCA発症活性を利用して、IIC分子上に存在するCA発症エピトープ(artritogenic epitope)の同定を試みた。

ヒトIICのCMB_rフラグメント、CB11(アミノ酸278個)にK-102は反応性を示したので、CB11のアミノ酸残基10個ずつがオーバーラップした20merの合成ペプチドとK-102の反応性を試験管内増殖反応によって調べた(抗原提示細胞としてはDBA/1マウスのX線照射脾細胞を用いた)。その結果、CB11N末の6080のペプチドRGPEGAQGPRGEPGTPGSPGP,CB11(6080)>CB11(5070)>CB11(7090)の順で高い反応性が認められた。このエピトープは、L.K.Meyersらが、IIC感作リンパ球のgamma-インターフェロン分泌を指標として同定している。2ヶ所のエピドープCB11(5785)とCB11(121146)の、前者にほぼ一致した。しかしながらCB11ペプチド全体による反応性に比較すると最も高い反応性を示すCB11(6080)でも1/41/5の反応性しか示さず、その原因としてP(プロリン)がヒドロキシプロリンの可能性があると考えて、現在CB11(6080)内に4個あるPをプロリンとヒドロキシプロリンの組み合わせを種々に変えて合成したペプチドを用いて、真のエピトープを同定中である。さらにCB11(6080)でDBA/1マウスを免疫してCAの発症性について調べたが、このペプチドに関節炎発症活性はなく、むしろ予期した様に、その後にIIC全分子で免疫してもCAの発症を抑制するいわゆるペプチドワクチン活性があることが明らかになった。現在、より詳細なエピトープの同定と、CB11(6080)にHSA(ヒト血清アルブミン)などをキヤリアとして結合させたものについてCA発症活性があるか否かなどについて検討中である。DBA/1マウス由来T細胞クローンK-102,II型コラーゲン(IIC)のCNBrフラグメントCB11(アミノ酸278個)と反応する。CB11フラグメント中にはT細胞エピトープが少なくとも5個存在するが、我々は、アミノ酸が10個ずつ重複する20merの合成ペピチドを作製し、それらとK-102細胞との反応性から、CB11のN末端5090番目にK-102が認識するarthritogenicepitope(関節炎誘起に関与するエピトープ;AE)が少なくとも1つ存在することを明らかにした。さらに、このアミノ酸配列を細かく切断した合成ペプチドとK-102との反応性などから、N末端60-81の22個のアミノ酸から成るペプチドIIC60-81が、目的とするエピトープであることを突き止めた。この合成エピトープは、K-102細胞のみでなくIIC感作マウスの局所リンパ節細胞とも反応性を示すことから、K-102細胞にのみ反応する特異なエピトープではなく、IIC感作によって誘導されるIIC反応性Tリンパ球の全レパートリーの中に含まれるAEに関与する重要なエピトープと推測された。このIIC60-81は、単独でDBA/1マウスを感作してもコラーゲン誘導関節炎(CA)は発症せず、さらに、このマウスにその後、nativeのIICで感作してもCA発症性を示さず、加えて、これらのマウスの末梢リンパ細胞はIIC60-81に反応性を示さないことから、IIC60-81は、AEに関してトレランスを誘導し、ペプチドワクチン活性を有していることが明らかになった。
時間記号シミュレ-ションによる論理設計検証システムの試作研究

本研究では、時間記号シミュレ-ションによる論理設計検証システムの試作研究を行ない、以下の成果を得た。1.論理設計検証アルゴリズムの研究時間記号シミュレ-ションの結果解析の手法として、イベント木の照合を行なう方法、および、仕様を表すオ-トマトンの記号シミュレ-ションに基づく方法を開発した。また、被検証システムの期待される動作を記述する方法として、正則時相論理を用いる方法について研究を行なった。2.記号シミュレ-ション、論理関数処理のアルゴリズムの研究時間記号シミュレ-ションで必要になる論理式の整理、簡単化を効率良く行なう方法として、共有二分決定グラフ表現に基づく高速な論理関数処理手法を開発した。また、シミュレ-ション結果の理解しやすい表示を得る方法として、論理関数の最小化、素項生成に関する研究を行なった。3.時間記号シミュレ-ション・ソフトウェアの開発シミュレ-ションおよび結果解析のアルゴリズムの研究を行ない、時間記号シミュレ-ションのソフトウェアを開発した。このシミュレ-タは、帰還ル-プを含む回路を直接シミュレ-ションすることができ、約100ゲ-ト程度の非同期回路を扱うことができる。4.論理設計検証のシステムのグラフィック・インタフェ-スの研究マルチコンピュ-タ・マルチスクリ-ン(MCMS)システムとワ-クステ-ションの結合、デ-タ管理に関する研究を行ない、論理設計検証システムの利用者インタフェ-スの試作を行なった。時間記号シミュレ-ションによる論理設計検証システムに関して、本年度はと主として時間記号シミュレ-ション本体の開発を行なうとともに、さらに効率的な検証を可能にするために、論理設計検証手法、記号シミュレ-ション手法、及びシミュレ-ションのグラフィクス・インタフェ-スに関する研究を行った。(1)論理設計検証アルゴリズムの研究シミュレ-ションの結果解析のためのアルゴリズムとしてイベント木の照合を行なう方法を開発した。また、被検証システムの期待される動作を記述する方法として、正則時相論理を用いる方法を検討した。(2)記号シミュレ-ションのアルゴリズムの研究時間記号シミュレ-ションの論理演算部分で必要になる論理式の整理、簡単化を効率良く行なう方法として、共有二分決定グラフ表現を用いた論理関数の操作法の研究を行なった。さらに、シミュレ-ション結果の理解しやすい表示を得る方法として、論理関数の最小化、素項の生成法に関する研究を行なった。(3)時間記号シミュレ-ション・ソフトウェアの開発以前に作成した実験プログラムをもとに、デ-タ構造やコ-ディング法の検討を行ない、本格的な時間記号シミュレ-タを開発し、100ゲ-ト規模の回路のシミュレ-ションに成功した。また、これまでのアルゴリズムでは処理効率の悪かったフィ-ドパックル-プを含む回路のシミュレ-ションの手法として、符号化時間記号シミュレ-ションというアルゴリズムを開発した。(4)論理設計検証システムのグラフィック・インタフェ-スの研究グラフィック表示装置に関しては、マルチコンピュ-タ・マルチスクリ-ン(MCMS)グラフィック・システムと、時間記号シミュレ-タが実現されているワ-クステ-ションの間の通信方式の研究を行なった。平成元年度の成果をもとに研究を進め、時間記号シミュレ-ションによる論理設計検証システムの試作を行なった。1.論理設計検証アルゴリズムの研究シミュレ-ションの結果解析のためのアルゴリズムとして、仕様を表すオ-トマトンの記号シミュレ-ションに基づく方式を開発し、これをプログラムとして実現した。2.時間記号シミュレ-ション・ソフトウェアの開発シミュレ-ションおよび結果解析のアルゴリズムの効率化を進め、高性能な時間記号シミュレ-ションのソフトウェアを開発した。とくに、論理関数処理を利用して符号化時間記号シミュレ-ションという手法により、前年度試作したシミュレ-タでは扱えなかった、帰還ル-プを含む回路を扱うことができるようになった。3.記号シミュレ-ションの研究符号化時間記号シミュレ-ションの基礎となる論理関数処理、記号シミュレ-ションの研究を進め、共有二分決定グラフに基づく高速な計算法を開発した。

4.論理設計検証システムのグラフィック・インタフェ-スの研究マルチコンピュ-タ・マルチスクリ-ン(MCMS)システムとワ-クステ-ションの結合、デ-タ管理に関する研究を行ない、論理設計検証システムの利用者インタフェ-スの試作を行なった。
リソソームへのタンパク質輸送の分子機構

上皮増殖因子(EGF ; epidermal growth factor)受容体は,細胞膜でEGFに結合して増殖シグナルを発信する.過度のシグナルは癌化につながるため,受容体はエンドサイトーシス経路を運ばれてリソソームで分解される.これまでのモデルでは,受容体は細胞膜でユビキチン化され,これがりソソームヘの輸送シグナルとなると考えられていた.しかし,われわれがユビキチンリガーゼであるCblの局在を調べたところ,受容体とともに細胞膜からエンドソームへ移り,受容体はエンドソームまでずっとユビキチン化されていることが明らかになった.EGFで10分刺激した後でCblのユビキチン化活性を阻害すると,最初の10分に受容体についたユビキチンがすぐに外れてしまった.したがって,受容体は非常に脱ユビキチン化されやすく,Cblはこれを防ぐためにエンドソームまでユビキチン化を続けていることが強く示唆された.CblはE2とよばれるユビキチン結合酵素と協調してユビキチン化を行う.E2のうち,これまではUbcH7がCblのパートナーであると提唱されていたが,局在とsiRNAによるノックダウン実験の結果,Ubc4/5がCblと共同で受容体をユビキチン化していることが明らかになった.さらに,受容体はモノユビキチンとポリユビキチンのいずれの修飾も受けるが,主にどちらで修飾されるかはEGF刺激後の時間に依存することを強く示唆する結果を得た.このことから,ユビキチン化の様式がエンドサイトーシス経路を運ばれるにつれて変わっていく可能性が考えられた.上皮増殖因子(EGF ; epidermal growth factor)受容体は,EGFに結合して増殖シグナルを発信した後に,細胞膜からエンドサイトーシス経路を通ってリソソームへ運ばれて分解される.この経路では,受容体のユビキチン化が輸送シグナルとして機能することが知られている.ユビキチンリガーゼであるCb1の局在を調べたところ,従来考えられていた細胞膜ではなく,むしろエンドソームに局在することが明らかになった.このことは,ユビキチン依存的な受容体の選別がエンドソームで行われ,さらにエンドソームでEGFシグナリングが起こる可能性を示唆するものである.次に,Cb1はエンドソームからリソソームへ輸送される間にEGF受容体から離れ,AAAタイプATPaseであるSKD1が,受容体とCb1を解離させることを強く示唆する結果を得た.SKD1の機能を阻害すると,受容体の輸送がエンドソームで止まり,Cb1とずっと結合した受容体のユビキチン化が亢進した.ユビキチン化を完了させる分子メカニズムについては全く分かっていなかったが,基質とリガーゼがSKD1のような分子シャペロンによって引き離される可能性が浮上した.エンドサイトーシス経路は,細菌やウイルスの細胞内侵入に利用される場合もある.歯周病菌の侵入メカニズムについて調べたところ,宿主細胞膜のコレステロールに富んだドメインが,菌が侵入する際の足場として必要であることを明らかにした.オートファジー経路については,オートファゴソーム形成に必要なAtg9タンパク質がゴルジ体に局在することを示した.また,この経路は細胞質のタンパク質を非選択的に分解することが知られていたが,小胞体に蓄積した異常タンパク質の除去にも関わることを明らかにした.これは,アンチトリプシン欠損症の原因となる,アンチトリプシンZ変異型の分解機構の研究から得られた知見である.上皮増殖因子(EGF ; epidermal growth factor)受容体は,細胞膜でEGFに結合して増殖シグナルを発信する.過度のシグナルは癌化につながるため,受容体はエンドサイトーシス経路を運ばれてリソソームで分解される.これまでのモデルでは,受容体は細胞膜でユビキチン化され,これがりソソームヘの輸送シグナルとなると考えられていた.しかし,われわれがユビキチンリガーゼであるCblの局在を調べたところ,受容体とともに細胞膜からエンドソームへ移り,受容体はエンドソームまでずっとユビキチン化されていることが明らかになった.EGFで10分刺激した後でCblのユビキチン化活性を阻害すると,最初の10分に受容体についたユビキチンがすぐに外れてしまった.したがって,受容体は非常に脱ユビキチン化されやすく,Cblはこれを防ぐためにエンドソームまでユビキチン化を続けていることが強く示唆された.CblはE2とよばれるユビキチン結合酵素と協調してユビキチン化を行う.E2のうち,これまではUbcH7がCblのパートナーであると提唱されていたが,局在とsiRNAによるノックダウン実験の結果,Ubc4/5がCblと共同で受容体をユビキチン化していることが明らかになった.さらに,受容体はモノユビキチンとポリユビキチンのいずれの修飾も受けるが,主にどちらで修飾されるかはEGF刺激後の時間に依存することを強く示唆する結果を得た.このことから,ユビキチン化の様式がエンドサイトーシス経路を運ばれるにつれて変わっていく可能性が考えられた.
慰安婦の生きた日本占領下インドネシアの社会史

本プロジェクトは1942-45年日本占領下インドネシアにおいて慰安婦が置かれた社会的文脈を、都市数地域を焦点に探求した。相当量の史資料を収集し、保健医療分野を含めた様々な活動を検討することにより、戦時中の出来事や経験を理解する具体的基礎を提供している。日イに跨る個人的・専門的人脈の重要性が明らかになり、幾つかの新プロジェクトが派生した。助成期間(2013-17)に、国際シンポジウムを二度、国際ワークショップを一度、九州での地域シンポジウムを一度開催、国際学会パネル発表を三度行なった。個別論文に加え、分担者と海外の研究者の研究成果を論文集としてまとめ、近く出版される予定である。本研究は、歴史や社会から断絶され、「政治化」された慰安婦の過去を、彼女たちが生きた時代の社会に再編すべく、多角的に当時の社会を検証することにより、その社会状況ひいては社会心理の中で慰安婦がいかなる立場におかれていたかを詳らかにし、今後の歴史研究への提言を目指すものである。本研究は、慰安婦に関する当時の資料が豊富なジャワ島都市部に対象を絞り、社会状況、軍政、経済、日本人と現地人との関係、日・イ外交、女性の状況を中心に史資料調査を外交史料館、国会図書館、早稲田大学、オランダ国立戦争資料研究所、オランダ国立公文書館、インドネシア国立図書館等で行った。特に平成25年度は、分担者、連携者及び研究協力者が、それぞれ担当を決めて資料調査を行う中、社会状況の変化を視覚的に理解できるように、戦前・戦中・戦後の詳細な都市図を作ることに着手した。地図を描くことで、距離感、移動の仕方、それぞれのコミュニティーの関係性が、明らかになるだけでなく、本研究担当者が、それぞれの調査結果を地図を使い説明することで、社会状況の変化もより明快になると考えたからである。日本占領期に戦地ではなかったジャワ島も、外島での戦況によって、「敵性国人」収容所の移動がしばしばあった。これは、単なる場所の移動ではなく、取り締まりが強化される社会空間も変わることで、周辺の社会心理にまで大きな影響を与えていたことが理解できた。また、慰安婦に関していえば、慰安所の取り締まりに関わった憲兵の部隊の性格によっても、心理状況は異なっていたことが見えてきた。本研究を進めるなか、戦前・戦中・戦後のインドネシアは、決してそれぞれが閉ざされた時間でも、政治権力の交代による分断された社会でもなく、人間関係という観点から検証すると、継続した関係が見えてきた。これは、戦後日本とインドネシアの関係に影響を与えるほど強いパイプであった。本課題研究2年目にあたる26年度は、2か月に1度のペースで研究会を開催したことが、26年度後半になり成果として表れた。英語および日本語で、著書1本、論文4本、報告書1本を出版、また慰安婦関係の国際ワークショップに2名参加し、学会・シンポジウムにおいて3名が発表した。「慰安婦の生きた」時代の社会再構という本研究の焦点である「慰安婦」については、政治問題化した1990年以降、定義の明確化されなかった。しかし、当時の史料調査から、ジャワ占領軍であった16軍は、「公娼」という認識を持っていたことを、山本が、“Hidden Sexualities and Secrecy of Prestige"で明るみにした。また、ホートン(研究代表者)は国際ワークショップJapan and the Comfort Women of Asiaを所属の日米研究機構で企画・開催、長期化した慰安婦問題を解決するには、学問が政治・メディアに翻弄されたことに起因したこれまでの慰安婦言説のあり方が問題であり、今後「歴史学および法学という領域」と「政治・メディアの領域」が、別々に議論されるべきであるという結論に達した。慰安婦の生きたインドネシア社会に関しては、日本軍が慰安婦の輸送を依頼した最初の地域ボルネオ島(山本)を中心に、後藤乾一が著書『近代日本の「南進」と沖縄』で「大東亜共栄圏」下の沖縄漁業南進とオランダ領東インドの問題に光をあて、戦前かの緊迫した政治状況を詳らかにした。ホートンは、日本占領下日本人像が、兵士や男性軍属というジェンダーバランスを欠いたものになっていることから、慰安婦ではない勤労女性の存在を「忘れ去られた南方への旅人たち」他で明らかにした。倉沢愛子は、戦後賠償に言及する論文を、また、山崎功は、日本とインドネシアのビジネス人脈に関する口頭発表を行った。最終年度のまとめに向けて、5月から研究発表を行った。後藤乾一は、「沖縄エリートとインドネシア」、山本まゆみは「ボルネオの慰安婦」についての研究成果発表は内容の濃いものであった。9月16日には、研究代表者Hortonが、インドネシア科学院の地域研究センターに招聘され、“Researching the Japanese Occupation Period with Japanese Sources"をジャカルタで発表した。調査は7月に調査資料収集のため研究代表者がジャカルタへ、また、12月1月2週間、オランダへ史資料調査出張。戦前戦中戦後の電話帳、医学関係の資料を見つけ、デジタル化したものを持ち帰った。研究代表者が、体調を崩した。また、分担者の家族に不幸があり、研究が予定どおり進まなかった。研究代表者Hortonは、植民地末期の政治家M.H. Thamrinに関する論考を発表、更にオランダにて資料を追加収集した(2017.1.9-14、3.6-25)。成果発表は以下活動を行なった。なお、研究成果を論文集として出版するため、出版社との協議を既に開始した。

同時に、調査で得られた史料とホートン、山本(編)『インドネシア通信情報関係史料1940ー1948』(龍渓書舎)として近日中に出版することになっている。本プロジェクトは1942-45年日本占領下インドネシアにおいて慰安婦が置かれた社会的文脈を、都市数地域を焦点に探求した。相当量の史資料を収集し、保健医療分野を含めた様々な活動を検討することにより、戦時中の出来事や経験を理解する具体的基礎を提供している。日イに跨る個人的・専門的人脈の重要性が明らかになり、幾つかの新プロジェクトが派生した。助成期間(2013-17)に、国際シンポジウムを二度、国際ワークショップを一度、九州での地域シンポジウムを一度開催、国際学会パネル発表を三度行なった。個別論文に加え、分担者と海外の研究者の研究成果を論文集としてまとめ、近く出版される予定である。当初の計画では、研究2年目の目標は、研究会を通じ調査史資料の持ち寄り、夫々の研究の関連性を確認することを主としていたが、後藤乾一の著書『近代日本の「南進」と沖縄』(岩波出版)を始めとし、Horton, Williamが、「忘れ去られた南方への旅人たちー日本占領期インドネシアの日本人勤労女性」を含め2本の論文と1本の報告書。また倉沢愛子および山本まゆみも、それぞれ1本ずつ英文で論文を発表している。また、国際学会、シンポジウムという口頭発表は、研究代表、研究分担者、連携研究者、研究協力者全員が行うなど、申請当時の計画以上に成果を上げている。一方、オランダを中心とした海外調査も、結果を出し27年度中に日本占領下史料の復刻版として2巻出版する予定である。いずれも戦前・戦中のインドネシアに関する一級の史料である。また、2年目の調査を経て、計画にあるインドネシア都市部の生活史は、史料の多さと多角的な精査が可能である点が、より明らかになり、最終年度にあたる27年度の研究調査の中心都市が複数都市ではなくジャカルタに絞り込むことも明確になった。以上の内容を考慮し、26年度の研究は計画以上に進展していると評価した次第である。研究を延長した最終年度のため、積極的に学会発表に参加し、昨年の国際シンポジウムで発表した各自の論文を纏め、出版するべく、9月にはおおよその目処を付ける予定である。また、昨年のシンポジウム発表以外の調査結果も10月以降から纏め、資料集として、発表できるようにする。できる限り、今年度の予定は、1月中には終了できるよう心掛けることで、研究の遅滞を避けることができると考える。28年度が最終年度であるため、記入しない。アジア史・アフリカ史最終年度にあたる27年度は、一年を4期に分けて考えている。第1期(4月7月)研究会を通じ今年度の論文あるいは著書の題目を各自の調査内容と日本占領期ジャカルタの生活・社会史を紡ぎだす課題を明確にする。また、毎月の研究会を通じ、各自研究対象が他の研究者の研究対象とどのようなのかかわりを持っているか明確にすることで、社会の中の位置づけを解明していく。上記の他、一年度を通じた機械的な作業として、1ジャカルタの地図を戦前・戦中・戦後と3つ作成、当時の地域の写真を地図に入れ込むプログラムを作る。
PCR法を用いた上咽頭癌の早期診断に関する研究

平成5年1月より12月までに当院耳鼻咽喉科を受診し、リンパ節組織を採取し得た9症例を対象に検討した。その内訳は、上咽頭癌のリンパ節転移症例2例、咽頭癌のリンパ節転移症例3例、中咽頭・下咽頭癌症例各々1例、頚部リンパ節炎2例であった。いずれも自動針生検装置を用い採取した。採取した組織から蛋白分解酵素やフェノール・クロロホルム処理によりsampleDNAに精製した。あらかじめ決定しておいたEBVの領域(internal repeat 1)をターゲットとしてPCRを行った。PCRの条件はDenatureを94°C1分、Annealingを55°C2分、Extensionを72°C1.5分を1サイクルとして25サイクルとした。また、各症例(sampleDNA)は3つのチューブに分配され同一条件下で3度にわたり研究を行いその再現性・特異性に付いても検討した。結果:上咽頭癌のリンパ節転移症例の2例はEBV陽性であったが、その結果には再現性が認められなかった。考察:今回の研究結果には再現性がなく、その真偽の判定は不明である。今後、症例を重ねて検討していく予定である。今後の研究の展開:1)本研究系の継続・・・症例を重ねての検討。(リンパ節のみに限ると症例数に限度があるので初発部位についても検討を加えたい。)2)EBVの腫瘍組織内の局在に関する研究・・・EBVはリンパ球嗜好性があり、また上気道に常在していると考えられており、本研究系で検出されたEBVは腫瘍細胞に特異的であるかの判断はできない。したがって、今後、in situ hybridization法を用いてEBVの局在を明確にする必要があると思われる。
肺癌の癌抑制遺伝子の解析および細胞周期と臨床的予後との相関に関する研究

1.癌遺伝子、癌抑制遺伝子、増殖因子等の解析には、ras,p53,myc,EGF,c-erbB-2等について検討した。ras遺伝子異常は、PCR,designed-RFLP法で行ない、256例中25例(9.7%)に異常を認めた。p53遺伝子異常はPCR-SSCP法で行ない、189例中60例(32%)に異常を認めた。rasおよびp53異常症例は、いずれも予後不良であった。現在、ras,p53異常の関連性と予後に与える影響について解析中である。myc遺伝子に関して、肺癌細胞株DNAのmutationを解析中である。またEGF陽性症例で、c-erbB-2が予後規定因子となることを示した。2.ウイルス遺伝子が与える影響に関して、パピローマウイルス遺伝子E6およびアデノウイルス遺伝子E1Bの肺癌組織よりの検出を試みたが、検出されなかった。3.フローサイトメトリーを用いた核DNA量の検討では、ploidy patternが肺癌の予後に影響を与えるという結果を得た。現在、他の因子(遺伝子、増殖因子)との関連性を解析中である。4.肺癌の増殖、浸潤、転移に関しては、免疫組織学的にnm23,CD44,トロンボモジュリン、カテプシンB、ラミニン等について検討した。現在、予後や臨床的因子との関連性を解析中である。さらに、早期肺癌の切除後の早期再発の理由の一つとして、micro metastasisの存在が指摘されている。当科においても肺癌におけるリンパ節転移の特異性を示す報告があり、このmicro metastasisの検出を分子生物学的、免疫組織学的手法を用いて検討中である。
発現調節可能な系によるがん抑制遺伝子p53とRBの機能とその作用機構の解析

p53とRBが共に不活性化している骨肉腫細胞株Saos-2から、遺伝子導入により単離したp53・p21・RBの各発現誘導細胞を用いて各々の細胞周期調節機構を比較した。RBファミリー遺伝子であるp107とp130の発現は、RBでp107が減少し、p53でpl30が増加したが、p21ではどちらも変化がなかった。E2F1感受性遺伝子thymidylate synthase(TS)・dehydrofolate reductase(DHFR)・B-MYBの発現は、RBではE2F1の発現低下に伴い減少したが、p53ではE2F1が減少しないにも関わらず、DHFRとB-MYBが低下していた。p21ではE2F1の増加に伴いDHFRとB-MYBが増加していたが、TSには変化がなかった。更に、正常型RBと変異型p53を発現している大腸癌細胞株DLD1から、遺伝子導入によりp53とp21の発現誘導細胞を単離し同様の解析を行った。その結果、いずれの発現誘導でもE2F1とE2F1感受性遺伝子の発現は低下し、Saos-2でのRB発現誘導の効果に類似していた。以上より、RBは強力にE2F1の発現自体を抑制しE2F1感受性遺伝子を調節する重要な因子であるが、p53はE2F1の発現変化やp21やRBに依存しなくとも一部のE2F1感受性遺伝子の発現を抑制し細胞周期を調節し得ることが示唆された。また、RBとp21の分化誘導作用についても骨肉腫細胞株Saos-2を用いて解析した。RBの発現でI型コラーゲンとオステオネクチンの発現は増加したが、骨芽細胞の分化に関わる転写囚子cbfa1の発現は変化せず、オステオポンチンの発現は検出されなかった。また、RBではVDRの発現は変化しないが、VitDの添加でI型コラーゲンの発現は更に増強した。一方、p21の発現でオステオポンチンとVDRの発現が増加したが、cbfa1とI型コラーゲンの発現は低下した。また、レチノイン酸の添加でオステオポンチンの発現は更に増加し、I型コラーゲンは更に低下した。以上より、RBとp21は骨肉腫細胞の分化を促進するが、p21はRBとは独立した異なる分化誘導作用も有すると思われた。p53遺伝子発現がテトラサイクリン(Tc)でon-off可能なベクターシステムを導入した肺小細胞がん細胞株NCI-N417で、p53のアポトーシスと細胞周期でのG1/G0期抑制の誘導能について、Tc濃度の調節でp53発現量を変え、量依存性をflow cytometryで解析した。p53高発現では速やかにアポトーシスが誘導され、低発現では細胞周期G1期での停止後にアポトーシスが起こっていた。p53で発現誘導されるp21蛋白はp53低発現でも検出されたので、同じベクター系でp21発現誘導細胞を単離し、p21のアポトーシスの誘導能を解析した。その結果、p21ではG1期での停止のみが認められた。次に、アポトーシスに関与するBc1-2とBaxの発現変化を解析した。p53高発現では、Bc1-2の発現が低下したが、Baxには変化がなかった。従って、肺小細胞がんではアポトーシスとG1期での停止はp53の発現量に依存すること、G1期での停止にはp21の発現誘導が関わること、p53高発現によるアポトーシスの誘導にはBc1-2に対するBaxの相対的量が重要なことなどが考えられた。一方、骨肉腫細胞株Saos-2では、p53高発現はアポトーシスを起こすが、低発現ではG1とG2/M期での抑制のみで、アポトーシスは誘導されず、肺小細胞がんとは異なっていた。また、細胞周期調節に密接に関わる転写因子E2F1のp53とRBによる発現変化を、骨肉腫細胞で解析した。RBの発現ではmRNAも蛋白も減少した。p53では逆に蛋白は増加したが、mRNAの増加はなかった。p53のE2F1増加作用はp21の発現と相関したため、同じベクター系でp21発現誘導細胞を単離し解析した。p21はp53と同様に細胞周期をG1とG2/M期で停止させ、E2F1の変化もp53と同様であった。従って、細胞周期抑制機構について、RBはE2F1との結合のみならず発現調節によっても作用し、p53は別の経路でも作用すると考えられた。現在更に、他のRB familyの発現、E2F1蛋白の半減期や転写活性を解析中である。

p21ではE2F1の増加に伴いDHFRとB-MYBが増加していたが、TSには変化がなかった。更に、正常型RBと変異型p53を発現している大腸癌細胞株DLD1から、遺伝子導入によりp53とp21の発現誘導細胞を単離し同様の解析を行った。その結果、いずれの発現誘導でもE2F1とE2F1感受性遺伝子の発現は低下し、Saos-2でのRB発現誘導の効果に類似していた。以上より、RBは強力にE2F1の発現自体を抑制しE2F1感受性遺伝子を調節する重要な因子であるが、p53はE2F1の発現変化やp21やRBに依存しなくとも一部のE2F1感受性遺伝子の発現を抑制し細胞周期を調節し得ることが示唆された。また、RBとp21の分化誘導作用についても骨肉腫細胞株Saos-2を用いて解析した。RBの発現でI型コラーゲンとオステオネクチンの発現は増加したが、骨芽細胞の分化に関わる転写囚子cbfa1の発現は変化せず、オステオポンチンの発現は検出されなかった。また、RBではVDRの発現は変化しないが、VitDの添加でI型コラーゲンの発現は更に増強した。一方、p21の発現でオステオポンチンとVDRの発現が増加したが、cbfa1とI型コラーゲンの発現は低下した。また、レチノイン酸の添加でオステオポンチンの発現は更に増加し、I型コラーゲンは更に低下した。以上より、RBとp21は骨肉腫細胞の分化を促進するが、p21はRBとは独立した異なる分化誘導作用も有すると思われた。