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北・中央ユーラシアのチュルク系極小言語の調査研究

本研究課題は19961998年度の3年間にわたり実施されたチュルク系極小言語の調査研究である。その実施過程においては周辺の諸言語との関係にも注目し、また海外の関連分野の研究者等と密な協力関係を築き、多角的な研究成果を上げた。極小言語すなわち消滅の危機に瀕した言語の調査研究が現在の言語研究における優先課題のひとつであることは、一般に認識されている。中央アジアを中心に東シベリアから小アジアにいたるユーラシア大陸に広く帯状に分布するチュルク語は大きく分類して30の方言をもつが、そのうち20方言はやはり消滅の危機にあるといってよい。当プロジェクトはそういったチュルク語における言語の変化や使用の状況、ならびに消滅への移行のメカニズムについて言語調査の結果を基に、過去の文字記録をも参照にしながら研究記述した。研究結果は個々の分担者が論文あるいは口頭においてすでに発表してきた。プロジェクト主催のシンポジウムと講演会の開催も合計16回に及び、その内容を一般に知らしめた。なお、本研究課題の実施期間を終えるにあたり、参加研究者すなわち研究代表者・分担者・協力者がその研究結果の一部を提出してContributions to theStudies of Eurasian Languages(1999年5月刊行予定)のもとにまとめた。内容はヤクート、ドルガン、トワ、の北ユーラシア、新ウイグル、ウズベク、カザフ、エイヌの中央ユーラシア、ガガウズ、トルコ(下位方言)、ハラジの西ユーラシアの各現代チュルク語諸方言、および中央アジアチュルク語の過去の文字記録、さらに周辺言語であるエベンキ語、エベン語、モンゴル語について論じたものである。1派遣による研究実績:(1)1996年7月に藤代がサンクト・ペテルブルグ及びベルリンにて北ユーラシアのチュルク系極小言語について情報収集、文献検索等の予備調査を行い、同年8月から9月にかけてアルタイ地方を含み、シベリアにおいて北方チュルク諸語の一次資料収集に従事した。(2)1996年7月から9月初めにかけて菅原がアンカラ及びイスタンブルにて中央ユーラシアのチュルク諸語について情報収集、文献検索をおこなった後、新〓ウイグル自治区にてチュルク諸語の予備的調査にあたった。なお、庄垣内、林は新〓ウイグル自治区等での調査が本年は予備的性質が強いものであったため、招聘研究者らと国内にて調査を行った。2招聘による研究実績:(1)1996年12月にロシア国からシチェルバック、アルテミエフ、ペトロフが、中国からタ-イル・ジャン、サ-ビット・ローズィが来日し、本研究課題について調査研究を行った。庄垣内はシチェルバックと中央・東シベリアのチュルク諸語に関する最新の情報を整理し、林はタ-イル・ジャンとサ-ビット・ローズィーと共に来年度の準備として新ウイグル語等の語彙調査を行った。また、ゴルジャ方言及びカシュガル方言の音声データを収録し、現在音声データ・ベースに加工しつつある。菅原、藤代も各々、夏期の調査で収集した資料の整理を招聘研究者らと行った。(2)国外からの研究者ら招聘を機に本研究課題のもとにシンポジウム「北・中央ユーラシアのチュルク諸語」(1996年12月22、於・東京外国語大学アジア・アフリカ言語文化研究所)を開催した。3国内研究分担者間での研究実績:年度を通じて国内の研究分担者間で研究会をもち、本調査研究で得られた知見を報告し、討議した。以上の本年度の研究は研究論集としてまとめ、近日中に刊行の予定であり、来年度以降も成果については年度毎に研究論文集としてまとめていく計画である。本研究は今年度で2年目に入り、昨年同様、当初の計画にほぼ沿ったかたちで進行している。昨年度は北ユーラシアを中心にチュルク系極小言語の調査研究を行ったが、今年度は前年度の整理分析にメンバーの一部が携わる一方で、その他は主として中央ユーラシアでの調査研究を進めた。

昨年度におこなった研究のとりまとめは順調に進んでおり、今年度の中央ユーラシア地域での調査研究の成果とともにチュルク系極小言語の言語調査データの構築が進んでいる。すなわち、本研究の当初の計画通り、テュルク2大地域についてのデータ集積が進んでいる。また、チュルク系の言語の中で「消滅の危機に瀕した言語(=「危機言語」)」と位置づけられている、もしくは潜在的にその可能性がある言語についての社会言語学的なデータの集積も行った今年度の具体な成果を以下に掲げる。1.野外調査を含む言語調査;エイヌ語、新ウイグル語、ガガウズ語、トルコ語、ドルガン語、ヤク-ト語2.文献資料調査を含む言語調査:上記諸言語に加えて、ウイグル語及び突厥語等の古代チュルク語3.研究討議・情報交換:1997年秋には、中央、北ユーラシアのチュルク系言語に関連した研究会を海外の研究者らを招聘して開催し、研究討議と情報交換をおこなった。以上の成果は刊行の準備をほぼ了えつつあるが、海外の研究分担者等からの寄稿原稿の校正作業に、予定より時間を要したため、刊行は若干遅れて来年度のはじめになる予定である。来年度は12年度に着手できなかった言語や新たに調査の必要が見込まれた言語を中心にさらに調査研究をすすめたい。本年度は最終年度であるので、これまで各年度毎に重点的に調査を行ってきた北ユーラシア地域(初年度)及び中央ユーラシア地域(次年度)のチュルク系極小言語に対して本年度は全般にわたっての補充調査を行った。さらに西ユーラシアに位置する極小言語ハラジ語について海外から研究者を招聘してユーラシア全域を視野にいれた研究を行った。これらに並行して、最終成果とりまとめ作業をすすめ、年度末に3年間の研究成果を総括した。本年度におこなった補充調査及び最終成果のとりまとめについて以下に記す:(1)北ユーラシア地域関連:ロシア国にて庄垣内、藤代がヤクート語などについて文献調査を含む補充調査をおこなった。(2)中央ユーラシア地域関連:橋本、林、菅原が中国、モンゴル国にてトゥヴア語、エイヌ語、新ウイグル語等の野外調査をおこなった。(3)西ユーラシア地域関連:ドイツ国よりテズジャンが来日し、ハラジ語の言語状況等について報告し研究討議を行った。また、栗林は前年度のガガウズ語調査の研究成果を英国にて学会発表した。(4)成果とりまとめと総括:各自が3年間におこなった調査研究の総まとめとして、論集Contributions to theStudies of Eurasian Languagesを19991春に刊行する予定である。現在、海外からの招聘研究者らの執筆原稿も揃い、最終的な編集作業を行っている。本研究課題を遂行する過程で得られた多くの調査資料や研究成果をもとに今後も順次、個別の成果を発表していくことになる。
電気磁気的エネルギーの新材料開発への応用

1.13.56MHZ高周波プラズマ蒸着法による【CH_4】/【H_2】混合ガスからのシリコン基板上へのダイアモンド膜の生成過程で判明したことは以下の通りである。(1)誘導型においては基板温度が500°Cまでの範囲でダイアモンドは生成しない。(2)容量型では500°C近くの高温板上にfccカーボンまたはダイアモンド膜が生成する。(3)自由エネルギーの計算上では、標準条件下でグラファイトの方がダイアモンドより安定である。(4)以上の事実から推測できることは、誘電エネルギー1/2ε【E^2】Vの減少によりダイアモンド(誘導体)の自由エネルギーの方がグラファイト(電導体)のそれより小さくなるであろう。(5)これは容量型の実験装置においてのみダイアモンド生成可能であるという上記事実と矛盾しない。2.強磁場下における鉄合金中の溶解度の測定の追行状況は次の通りである。(1)新しい安定化電流源の設計および製作の完了が予想以上に長びき、その完了が1986年12月末であった。(2)現在、この電源を用いた強磁場発生装置の組立が完了したところであり、実際の測定は次年度に入ってから行う予定である。
初期近代イギリス演劇における舞台のカーテンの使用方法に関する研究

シェイクスピア劇等が上演された初期近代のロンドンの劇場では、各シーンの場所の設定を示す書割は使われなかった。そのため、舞台背後の中央開口部に掛けられたカーテンの存在感は極めて大きかったはずである。本研究では、現存する劇テクストを演劇空間論的観点から調査することにより、当時の劇団はどのような色や模様や種類のカーテンを所有していたか、それは悲劇や喜劇の上演においてどのような効果を果したか、また、上演の途中での付け替えなどを含め、どのような方法で使用されたのか、等の問題について重要な結論を得ることができた。本研究は、大別して、次の三つの営為から構成される。1.劇テクストの調査・分析によるデータ収集、2.関連する諸研究の調査および研究、3.論考の作成および理論の構築。本年度は初年度であり、上記のうち、主に1と2を行った。以下、それぞれについて、記す。1.劇テクストを一つ一つ調査して、中央開口部が何らかの形で使われるシーンや、カーテン等に言及するト書き、台詞、書き込みなどを収集し、カーテンの種類や使用方法について分類した。ファクシミリで間に合う作品は国内で分析し、直接オリジナル・テクストを調査する必要のあるものについては、British LibraryとFolger Shakespeare Libraryで調査した。2.データを有効に分析し議論を深めていくために、関連諸分野の調査および研究を行った。当時の劇場や劇団に関する研究や、劇テクストの出版や印刷に関する研究など、初期近代イギリス演劇に関する諸研究は当然ながら、カーテンの使用には文化的側面があるので、美術史や宗教史なども視野に入れた調査および研究を行うよう心掛けた。またルネサンス期の手法のうち、あるものは中世演劇やローマ古典劇などの手法が発展したものであることが予測されるので、こうした劇も調査するとともに、イギリス演劇全般にわたる研究書も広く、新旧を問わず、対象とする。特に古いものに関しては、British Library, Folger Shakespeare Library等で閲覧したり複写したりした。こうした調査の中で、いくつかの喜劇テクストの中に直接、舞台のカーテンに言及しているせりふを見つけ、それらを分析し、喜劇の上演における舞台のカーテンの使用方法に関する論文を書くことができた。劇テクストを分析しながら、特に、喜劇の上演におけるカーテンの使用に関して、仮説を立て、それを論証するに足るいくつかの有益な証拠を発見することができた。それらに基づき、論考の作成し、オリジナル・ステイジングや関連諸分野の研究者たちのリヴューを得るために、国際的なジャーナルに投稿したところ採択された。査読者たちからは有益なコメントを得た。本年度も、大別して、次の三つの営為から構成される研究を行った。昨年度に行った調査や研究を受け、本年度は、上記のうち、主に3に力を注いた。以下、それぞれについて記す。イギリス演劇全般にわたる研究書も広く、新旧を問わず、対象とし、特に古いものに関しては、British Library, Folger Shakespeare Library等で閲覧したり複写したりした。3.こうした調査の中でBen Jonsonの作品に有益な情報やヒントが見つかった。とりわけ、Bartholomew Fairにおける中央開口部の使用方法に関して、定説とは異なる新たな見解を持つに至り、その見解を主張する論文を書くことができた。劇テクストを分析しながら、いくつかの作品について、従来定説とされている見解に対して疑念を抱き、新たな仮説を立て、それを論証するに足るいくつかの有益な証拠を発見することができた。それらに基づき、特にBen Jonson, Bartholomew Fairのホープ座で行われた初演のステイジングに関する論考の作成し、英米のオリジナル・ステイジングや関連諸分野の研究者たちの有益なリヴューを得た。現在、国際的なジャーナルに投稿中である。また、中世演劇と近代初期演劇、そして王政復古期の演劇の断絶と継続に関しても多くの有益な事例を発見し、新たな視点を得ることができた。一昨年度および昨年度に行った調査や研究を受け、最終年度に当たる本年度は、上記のうち、3に最も多くの時間を費やした。以下、それぞれについて順に記す。ファクシミリで間に合う作品は国内で分析し、直接オリジナル・テクストを調査する必要のあるものについては、British Libraryで調査した。

当時の劇場や劇団に関する研究や、劇テクストの出版や印刷に関する研究など、初期近代イギリス演劇に関する諸研究は当然ながら、カーテンの使用には文化的側面があるので、美術史や宗教史なども視野に入れた調査および研究を行うよう心掛けた。イギリス演劇全般にわたる研究書も広く、新旧を問わず、対象とし、特に古いものに関しては、British Libraryで閲覧したり複写したりした。3.こうした調査を行いながら、幸い、カーテンの使用方法に関するきわめて有益な言及を多数見つけることができた。これらの言及のうち、いくつかのものは様々な解釈が行われているが、さらに新たな解釈が可能であることに思い至り、その解釈に基づいて、この機会に、これまで扱ったいくつかの例について再考した。このような新たな発見を含むかたちで、研究を完成することができた。シェイクスピア劇等が上演された初期近代のロンドンの劇場では、各シーンの場所の設定を示す書割は使われなかった。そのため、舞台背後の中央開口部に掛けられたカーテンの存在感は極めて大きかったはずである。本研究では、現存する劇テクストを演劇空間論的観点から調査することにより、当時の劇団はどのような色や模様や種類のカーテンを所有していたか、それは悲劇や喜劇の上演においてどのような効果を果したか、また、上演の途中での付け替えなどを含め、どのような方法で使用されたのか、等の問題について重要な結論を得ることができた。来年度も、3種類の調査研究を継続する。(1)劇テクストの調査・分析によるデータ収集の継続:データの収集とその整理を続ける。可能な限り、オリジナルテクストに当たる。そのため、British Library, Huntington Library, Folger ShakespeareLibraryなどの研究図書館での調査を行う。(2)関連する諸研究の調査および研究の継続:上記のような初期近代イギリス演劇関係諸分野をはじめ、美術史や宗教史の分野にまでいたる範囲の研究書や論文を対象とする調査および研究を継続して行う。国内で入手することのできない文献は、British Library, Folger Shakespeare Library等で閲覧したり複写したりする。(3)研究成果の発表:収集したデータを分析しながら、ある問題について考えがまとまるごとに、その問題を扱う研究ノートや論文を書く。それらをベースにオリジナル・ステイジングや関連諸分野の研究者たちと議論を重ねる。また、国内および国外の学会や研究会などで口頭発表を行ったり、国際雑誌に投稿したりすることで、広く初期近代イギリス劇の研究者たちからのフィードバックを得ることができるようにする。こうした調査や研究を積み重ね、最終年度には、研究全体をまとめる。研究の完成まで、下記の3種類の調査研究を継続する。
閉鎖系苗生産システム利用による無農薬葉菜類の計画生産と食品機能性強化技術の開発

10月に播種したコマツナ、ホウレンソウを土耕と養液で栽培し生育と機能性成分としてのビタミンCを測定した。土耕栽培では基肥の量を3段階として栽培し、また養液栽培では有機質を含む培養液の有効性についても検討した。播種後32日までの生育調査の結果、コマツナ、ホウレンソウ共に多肥により生育は抑制される傾向にあり、草丈、新鮮重量が低下した。またビタミンCに対する肥料の影響はホウレンソウで強く現れ、基肥の量に応じて含有量が増加する傾向にあった。コマツナはいずれの基肥量でもホウレンソウよりビタミンC含有量が多かったが、基肥の量との関係は明瞭ではなかった。有機質を含む培養液は慣行の培養液に比較し生育を抑制するとともにビタミンC含有量の低下も招いた。またその影響はホウレンソウよりもコマツナで顕著であり今後、適応作物と添加する有機質の資材及び培養液組成の検討が必要である。高機能発芽室と閉鎖系苗生産システム及び養液栽培利用により、無農薬栽培のホウレンソウ、コマツナを栽培した結果、慣行の育苗方法に対して、反収がコマツナで23倍、ホウレンソウで1.52.5倍の収量が得られた。さらに高速安定生産を確保するため、播種密度について検討した結果、144穴/セルトレイに対して288穴を使用した場合、わずかに生育が遅延するが、育苗経費の節減に大きく寄与することから、288穴トレイの有効性が実証できた。ホウレンソウにおいては過度の硝酸態窒素含有が人体の健康に影響を及ぼすとされ、植物体中の硝酸態窒素濃度低下が求められており、本研究では収穫数日前より追肥を停止することにより培養液中の硝酸態窒素濃度を低下させ、葉中硝酸態窒素濃度を下げた。しかし過度の抑制は生育の遅延を招く結果となった。閉鎖系苗生産システムを使用し苗生産を計画的に行い、周年栽培の実用化が可能となった。本研究費で設置した高機能発芽室は4段の棚を有し、棚ごとに発芽温度を設置できる仕様とした。インキュベータに変わる装置として十分な機能があり、葉菜類の発芽に極めて効果的であり、従来のハウス育苗に比較し、播種粒数に対する苗の仕上がり率が向上し、95%以上の苗仕立て率となった。本装置により発芽させた、ホウレンソウ、コマツナ、ミズナ、ルッコラ、カラシナ等は、4日間の発芽処理の後、日長16時間、温度25-20°C、CO21000ppmの条件下の閉鎖系苗生産システムで8日間育苗することにより、養液栽培装置に定植可能な大きさになることが確認できた。従来のハウス育苗に比較し56日間の短縮が可能であった。また育苗中の農薬使用は皆無であり、種苗会社の種子処理だけであった。養液栽培装置は、循環式のNFT栽培であり。施設内最低気温10°C、EC2.02.5dS/mの培養液を常時循環させることにより、生育は促進され、23月期の栽培の場合、定植後約3週間で葉菜類の収穫が可能となった。定植後の生育速度はハウス土耕栽培に比較し2/31/2にまで短縮された。栽培装置は定植前に次亜塩素酸カルシウムにより消毒を行ったが、その他は無農薬により栽培し、市場価値の高い生産物を得ることができた。高機能発芽室、閉鎖系苗生産システム、養液栽培と順を追った栽培技術が無農薬葉菜類の生産に極めて有効であることが証明された。

ほぼ周年栽培が可能であったが盛夏期の栽培には培養液の冷却が必要であると思われ今夏の検討を予定している。次年度は上記葉菜類のほか食品機能性の高いと思われるイタリアンパセリ、コリアンダー、カラシナなどを順次供試して、これら野菜の栽培方法を培養の濃度、温度などの面から検討することを予定している。10月に播種したコマツナ、ホウレンソウを土耕と養液で栽培し生育と機能性成分としてのビタミンCを測定した。土耕栽培では基肥の量を3段階として栽培し、また養液栽培では有機質を含む培養液の有効性についても検討した。播種後32日までの生育調査の結果、コマツナ、ホウレンソウ共に多肥により生育は抑制される傾向にあり、草丈、新鮮重量が低下した。またビタミンCに対する肥料の影響はホウレンソウで強く現れ、基肥の量に応じて含有量が増加する傾向にあった。コマツナはいずれの基肥量でもホウレンソウよりビタミンC含有量が多かったが、基肥の量との関係は明瞭ではなかった。有機質を含む培養液は慣行の培養液に比較し生育を抑制するとともにビタミンC含有量の低下も招いた。またその影響はホウレンソウよりもコマツナで顕著であり今後、適応作物と添加する有機質の資材及び培養液組成の検討が必要である。高機能発芽室と閉鎖系苗生産システム及び養液栽培利用により、無農薬栽培のホウレンソウ、コマツナを栽培した結果、慣行の育苗方法に対して、反収がコマツナで23倍、ホウレンソウで1.52.5倍の収量が得られた。さらに高速安定生産を確保するため、播種密度について検討した結果、144穴/セルトレイに対して288穴を使用した場合、わずかに生育が遅延するが、育苗経費の節減に大きく寄与することから、288穴トレイの有効性が実証できた。ホウレンソウにおいては過度の硝酸態窒素含有が人体の健康に影響を及ぼすとされ、植物体中の硝酸態窒素濃度低下が求められており、本研究では収穫数日前より追肥を停止することにより培養液中の硝酸態窒素濃度を低下させ、葉中硝酸態窒素濃度を下げた。しかし過度の抑制は生育の遅延を招く結果となった。
Bc1-2ファミリー分子の局在化を制御する可溶性因子の検索

アポトーシス制御に機能するBcl-2ファミリー蛋白質の細胞内局在化の分子機構前年度までにBcl-2ファミリー蛋白質輸送を視覚的かつ定量的に評価するための実験系(セミインタクト細胞系)を構築し、Bcl-2ファミリー蛋白質の輸送は一般的なミトコンドリア外膜輸送装置複合体(TOM)は依存しないことを明らかにした。本年度はさらに他のミトコンドリア外膜因子の関与を検討するためセミインタクト細胞をプロテアーゼ処理し、外膜細胞質側を消化した系で輸送を検討したところBcl-2蛋白質の正常な輸送が見られた。このことはBcl-2ファミリー蛋白質輸送はミトコンドリア外膜蛋白質には依存しないことを示唆している。しかしながらプロテアーゼにより消化されない外膜蛋白質であるVDAC2をRNA干渉法により抑制するとBakの輸送のみ特異的に阻害が見られた。VDAC2の発現抑制における効果はBak輸送だけに限定されBcl-XLあるいはOmp25では見られなかった。VDAC2はBakの細胞質領域に作用して機能すると考えBakの細胞質領域を欠失させた変異体でVDAC2依存性を調べた。その結果、本変異体ではVDAC2に依存せずミトコンドリアへの輸送が見られた。従って、VDAC2はBakの細胞質領域に作用し構造変換を引き起こすことでBakの輸送に機能することが示唆された。前年度までにBakの輸送シグナルのみをGFPに融合させたモデル蛋白質輸送には細胞質因子は必要ないことを明らかにした。本年度はさらにBcl-XL、Omp25のシグナルについても同様の解析を行った。その結果、これらの輸送シグナルも細胞質因子に依存せず自発的にミトコンドリアへ輸送された。全長の蛋白質についても細胞質因子の要求性について解析したところ、BakおよびBcl-XLの輸送には細胞質因子の添加効果が見られたがOmp25には見られなかった。このことはすなわちBcl-2ファミリー蛋白質輸送には細胞質因子が必要であるが、それ以外のC末アンカー蛋白質輸送には細胞質因子は必要ないことを示唆している。本研究で、ミトコンドリアC末アンカー蛋白質輸送は細胞質因子に依存せず自発的に輸送されることを明らかにすることができた。アポトーシス制御に機能するBcl-2ファミリー蛋白質の細胞内局在化の分子機構上記課題を解析するための評価系を構築した。コレステロール感受性界面活性剤であるジギトニンにより細胞膜のみ半透過性にしたHeLa細胞(セミインタクト細胞)を調製し、ウサギ網状赤血球ライセートで合成したBcl-2ファミリー蛋白質{Bak、Bcl-XL(C末アンカー蛋白質)}をミトコンドリア特異的に輸送させうるアッセイ系を再構成した。本アッセイ系によりBcl-2ファミリー以外のミトコンドリア外膜蛋白質{VDAC2/voltage dependentanion chanel(βバレル蛋白質)}あるいはマトリックス蛋白質(Su9-DHFR)などの輸送も同時に再構成した。次に本アッセイ系を用い輸送におけるATP加水分解の要求性を解析したところBak、Bcl-XLの輸送にはATP加水分解エネルギーは必要ないが、VDAC2とSu9-DHFR輸送には必要であることを明らかにした。またミトコンドリア外膜透過装置複合体(TOM複合体)の構成因子であるTom20、Tom22、Tom40、Tom70などの発現をRNAi干渉法(RNAi)により抑制してもBakおよびBcl-XL輸送には影響ないが、VDAC2およびSu9-DHFRにはTOM複合体が必要であることを明らかにした。さらにBcl-2ファミリー蛋白質と同じC末アンカー蛋白質であるOmp25によりBak、Bcl-XL輸送の阻害が認められたことからBakおよびBcl-XL輸送はOmp25などの一般的なC末アンカー蛋白質と同じメカニズムでなされていることを明らかにした。特異的オルガネラへの標的化を可能にする分子メカニズムについて解析するためまずシステイン修飾試薬であるNEM(N-ethylmaleimide)感受性を調べた。その結果、VDAC2輸送には影響が見られたが、BakおよびBcl-XL輸送には影響なかった。一方、精製したBakの輸送が細胞質成分の添加に依存して促進することを見いだした。Bakの輸送シグナルのみをGFPに付加したモデル蛋白質(GFP-BakC)輸送は細胞質成分に非依存的に輸送されたことから、BakおよびBcl-XLなどのBcl-2ファミリー蛋白質(C末アンカー蛋白質)輸送は細胞質シャペロンなどに依存するものの、分子内に存在する輸送シグナル自身によりミトコンドリアへ標的化するものと推察された。以上の結果をまとめて論文投稿準備中である。

VDAC2の発現抑制における効果はBak輸送だけに限定されBcl-XLあるいはOmp25では見られなかった。VDAC2はBakの細胞質領域に作用して機能すると考えBakの細胞質領域を欠失させた変異体でVDAC2依存性を調べた。その結果、本変異体ではVDAC2に依存せずミトコンドリアへの輸送が見られた。従って、VDAC2はBakの細胞質領域に作用し構造変換を引き起こすことでBakの輸送に機能することが示唆された。前年度までにBakの輸送シグナルのみをGFPに融合させたモデル蛋白質輸送には細胞質因子は必要ないことを明らかにした。本年度はさらにBcl-XL、Omp25のシグナルについても同様の解析を行った。その結果、これらの輸送シグナルも細胞質因子に依存せず自発的にミトコンドリアへ輸送された。全長の蛋白質についても細胞質因子の要求性について解析したところ、BakおよびBcl-XLの輸送には細胞質因子の添加効果が見られたがOmp25には見られなかった。このことはすなわちBcl-2ファミリー蛋白質輸送には細胞質因子が必要であるが、それ以外のC末アンカー蛋白質輸送には細胞質因子は必要ないことを示唆している。本研究で、ミトコンドリアC末アンカー蛋白質輸送は細胞質因子に依存せず自発的に輸送されることを明らかにすることができた。
オートマタ・ネットワークの自己組織化能力

オートマタ・ネットワークの学習能力や自己組織化能力を研究する第一段階としてまず与えられたネットワークの動作を解析し評価する適切な手段を確立する必要がある。具体的にネットワークが実現すべき仕事が与えられているとそれをどの程度効率的にあるいは誤り少なく行なえるかで評価基準を定める。問題はこのような全体としての結果の評価とネットワークの構造をどう結び付けるかである。我々は状態の集合から実数への写像(状態関数)がネットワークのある特性(即ち、評価関数や適応関数、等)を表現していると考えらこの問題にアプローチした。具体的に2状態を持つ素子のネットワーク即ちプール関数のネットワークを考える。この時一般に状態関数が満たすべき条件を明らかにし、次いでリヤプノフ関数の存在条件を求めた。即ち、与えられた状態関数がプール関数ネットワークノリヤノフ関数となっているために各素子がどのようなプール関数でなければならないかを明らかにした。ここでの結論の一つは、高次の神経回路網を考える限り、任意の状態数数がリヤプノフ関数となるようなネットワークが存在することである。状態関数やプール関数を正項表現を使って表現することによってリヤプノフ関数や関数ネットワークノ次数議論することができる。状態関数がd次であれば、それをリヤプノフ関数とする(d-1)次のプール関数ネットワークが存在する。このようなネットワークの応用の一つとして単語の意味ネットワークを考え、状態遷移によって単語集合が自己組織的に形成される過程をシミュレーションした。単語間の類似度を各単語が持つ意味素の中で相手の単語の意味素と共通なものの割合で表現する、先に述べたリヤプノフ関数の存在条件を満足することが示せる。形成された単語集合についてその代表元的な単語を一定の評価法で選定することによって概念の自己組織への第一段階を明らかにした。
口蓋発生におけるMFCS4の役割

Shhの転写を時空間特異的に調節する遺伝子配列群のうちMFCS4は、口腔と咽頭の発生時期(胎齢(E)11.00-15.50)に活性を発揮する。MFCS4を、Shhと共にヘテロ欠失させたマウス(Shh+/-MFCS4-/+マウス)は、完全正中口蓋裂を表現型に持つ。その主たる原因と目される舌はShh+/-MFCS4-/+マウスでは、基底膜は不連続に局在し、平坦で波打ち状の構造が認められなかった。舌中隔も連続性が失われ部分欠損していたので、これが舌筋の配列が乱れる原因と考えられた。Shhシグナリングにより基底膜構成成分Lamininα1や舌中隔マスター転写因子Scleraxisが支配されることを示す過去の報告と一致した。MFCS4はsonic hedgehog(Shh)のエンハンサー領域のひとつで哺乳類から魚類までよく保存されており、咽頭領域の発生期に特異的に活性を示す。MFCS4ホモ欠失マウスでは約16%、MFCS4とShhの複合ヘテロ欠失マウスでは100%の頻度で口蓋裂が発生する。このマウスについて、組織学的な観察、in situ hybridization、上顎の器官培養を行った結果から、このマウスでは舌の発達に異常があり、それが主たる原因で口蓋裂になることが判った。このことを踏まえ、ヒトMFCS4配列の変異と口蓋裂に相関があるかを調べた。本学倫理委員会承認のもと、口蓋裂患者からヒトゲノム試料を100検体以上得て配列を比較し、MFCS4の遺伝子配列を読み取った。比較対象として口蓋裂でない提供者からのヒトゲノム試料とデータベース上に報告されている遺伝子配列を用いた。その結果、新規の数十の一塩基多型をヒトMFCS4配列のうちに発見し、口蓋裂を持つヒト個体にのみ見られる多型を複数発見した。Shhをコードする遺伝子には過去の報告通り配列異常がなかった点、MFCS4欠失マウスが口蓋列の表現型を持つ点から、我々が発見した多型は口蓋裂の原因の可能性がある。ここまでは今年度の計画通りなので、今後は全長1.3kbのMFCS4の中で、機能を持つと推測される配列と多型の重なる部分を中心に機能解析を進めてゆく予定である。並行して、上記複合ヘテロ欠失マウスにおけるShhの発現の詳細な検討や、未検討のものを含む他の表現型についても解析し、機能解析との整合性が得られるか、裏付けとなり得るかを考察する予定である。sonic hedgehog(Shh)のエンハンサー領域のひとつで哺乳類から魚類までよく保存されている配列であるMFCS4は、咽頭領域の発生期に特異的なエンハンサー活性を示す。このマウスについて、組織学的な観察、in situ hybridization、口蓋原基を含む上顎の器官培養を行った結果から、このマウスでは舌の発達に異常があり、それが主たる原因で口蓋裂になることが判った。このことを踏まえ、ヒトMFCS4配列の変異と口蓋裂に相関があるかを引き続き調べた。本学倫理委員会承認のもと、口蓋裂患者からヒトゲノム試料を150検体以上得て配列を比較し、MFCS4の遺伝子配列を読み取った。その結果、新規の数十の一塩基多型をヒトMFCS4配列のうちに発見し、口蓋裂を持つヒト個体にのみ見られる多型を複数発見したが、これまでのところ統計学的に有意に口蓋裂をと相関を持つ変異を得るには至っていない。今後は全長1.3kbのMFCS4の中で、機能を持つと推測される配列と多型の重なる部分を中心に機能解析を進めてゆく予定である。特に、他の器官発生に役割のあることが多いいくつかのシグナリングに関与する分子はMFCS4の中に結合配列を持つので、これらの発現やin vivoでのMFCS4との結合について分子生物学的な手法を用いて検討をしている。Shhの転写を時空間特異的に調節する配列のうちMFCS4は、口腔と咽頭の発生時期に活性を発揮する。

MFCS4とShhをヘテロ欠失させたマウス(Shh+/-MFCS4-/+マウス)は、口蓋裂を表現型に持つ。口蓋の発生過程では、舌は変形や上下運動により、舌の両側にある口蓋突起が舌の上に挙上するよう促し、これと口蓋突起自身の挙上しようとする力との協調でE13.50-14.00の間に口蓋突起が挙上する。これまでの研究で上記Shh+/-MFCS4-/+マウスでは挙上を促す舌の働きが不足していることが示唆されているので、舌の発生異常を焦点に研究を行った。舌の変形は内舌筋が、舌の上下運動はオトガイ舌筋がそれぞれ担う。筋芽細胞は舌前駆体へ遊走する際上記各舌筋の予定領域に区分けされながら遊走するが、Shh+/-MFCS4-/+マウスではE11.75で筋芽細胞の分布は区分けが不明瞭であった。また、E13.75で、舌筋の配列は非対称で整然とせず各内舌筋の同定が難しい状態であった。内舌筋は舌上皮基底膜直下の結合組織層の間または結合組織層と舌中隔との間を走向するが、Shh+/-MFCS4-/+マウスでは、基底膜は不連続で平坦で波打ち状の構造が認められなかった。舌中隔も連続性が失われ部分欠損していたので、これが舌筋の配列が乱れる原因と考えられた。一方、in situ hybridizationにより、Shhは舌上皮に、その受容体であるPtcは上皮とその直下の結合組織層とほぼ一致する深さに、標的遺伝子発現にかかわるGli1はさらに舌の中深くにまで発現がみられた。これまでに、基底膜の主たる構成成分であるLamininや、腱の発生に中心的な役割のある転写因子Sox9がShhの制御下にあることが知られているので、基底膜と舌中隔の形成不全について、分子シグナルと組織表現型の間に整合性のとれる可能性を見いだせた。MFCS4配列に結合する可能性のある分子について、その絞込みと検討方法をすでに決定しており、今年度中に本計画全体の目標を達成できる見込みが立っているので24年度が最終年度であるため、記入しない。MFCS4の配列内に結合配列をもつシグナル分子の発現とMFCS4の活性との重なりを検討することで、MFCS4の活性を正負に制御する分子を遺伝子改変マウスを用いて同定する。ヒトMFCS4配列と口蓋裂の発症との相関についても継続して行う。これらマウスとヒトでの結果を比較検討することでMFCS4配列のマウスおよびヒトでの機能を検討する。24年度が最終年度であるため、記入しない。
熟年・高齢期における在宅生活への人的支援を醸成する場の計画

本研究は、都市で熟年・高齢期を迎えた生活者が現在構築している人的環境とその交流空間の実態について、住空間から近隣地域空間までの連続する日常生活空間を中心に解明することにより、住居・住宅地計画及び近隣地域計画の視点から、人的交流を通じて生活を支援する機能・役割を果たす空間、すなわち人的支援を醸成する「場」の計画条件の解明を目的としている。その研究の成果は以下に示す通りである。(1)東京都区内2地区の戸建住宅に住む50歳以上への訪問ヒアリング調査結果に基づき、日常の生活行動・人的交流について、(1)交流相手を「血縁」「地縁」「個人縁(趣味などを通じて築かれた関係)」に分類し、血縁では居住距離により交流内容が異なること、地縁や個人縁では昔から継続する縁と退職後形成した新たな縁があること、等を明らかにし、(2)地縁からみた人的交流と居住歴の関係を明らかにした。(3)人的交流の行動圏を「住宅内」「徒歩圏内」「都市圏内」「都市圏外」に分類し、住宅内や徒歩圏内を中心に行動するタイプや徒歩圏内活動はなく都市圏レベルで行動するタイプ等の特徴的事例を取り上げ、その居住歴や生活スタイルとの関係、等を明らかにした。(2)翌年の追調査では、徒歩圏内行動に注目し、日常の徒歩による外出行動を地図上に布置し、商店街、公園、地区センター、神社、図書館では複数人による外出先の重なりがあり、中でも商店街での買物や公園での散歩等をきっかけとした地域内の個人縁が、後に扶助的関係へ変化する現象等も把握した。(3)都市的利便性をもち商店街に接する東京都区内のN地区の45歳以上へのアンケート調査結果に基づき、居住地域での屋外生活行動について、(1)昼間の在宅状況により生活タイプを分類し、在宅行動の多いタイプでは外出行動範囲も徒歩圏内が多いことを明らかにした。(2)また世代との関係では、年齢が高くなるほど在宅行動が多く、徒歩圏内での行動が多くなることがわかった。(3)日常生活における地域内での交流実態では、壮年期には地域外行動が多いため地域内交流は比較的少ないが、熟年・高齢期では地域内での日常行動が多くそれに伴う交流もみられること、より高齢になると地域内行動も低下し交流機会の減少がみられること、等を明らかにした。本研究は、熟年・高齢期を迎えた生活者が構築している人的環境と彼らとの交流空間の実態から、生活歴や身体状況との関係を踏まえた生活全体に占める住居や近隣地域での生活ウエイトを把握し、住空間から近隣地域空間までの連続する日常生活空間における交流空間の位置づけを明確化した上で、住居・住宅地計画及び近隣地域計画の視点から、人的支援を醸成する「場」の具体的な空間提案を行うことを目的としている。今年度行った研究の成果は以下に示す通りである。(1)研究代表者らによる既往研究のアンケート調査回答者208名(2002年実施)に対し、訪問ヒアリング調査を依頼した。対象は、東京都中野区上高田地区及び江東区北砂地区の戸建住宅に住む50歳以上の居住者である。調査協力を得た32名に対して、日常の生活行動及び人的交流、血縁者・地縁者との関係等に関する調査を実施した。

(2)対象者属性としては、60・70歳代を中心とした年齢構成で、1/3は親の代からの居住者で長期居住層が多く、家族構成は独り暮らしから子世帯との同居まで多岐にわたるが、夫婦のみ、夫婦+未婚子が多い。(3)日常の生活行動・人的交流から、交流相手の種類により、血縁者との関係、地縁者との関係、趣味や社会活動を通じて築かれたパーソナルな関係、がそれぞれ活発なタイプと、いずれとも関係が薄いタイプがあることがわかった。(4)人的交流に伴う活動の場は、比較的住居や居住地域を中心として展開されている例が多くみられたが、近隣住民との関係にはある程度距離を置くつきあいを望む場合も多いことがわかった。(5)これらの調査結果を踏まえて、次調査の調査項目の検討を行うとともに、調査対象地域の選定を進めている段階である。対象地域は、人的環境、特に血縁者・地縁者との関係における違いが予測される2地域を想定して東京圏内の複数候補地を挙げている。本研究は、熟年・高齢期を迎えた生活者が構築している人的環境と彼らとの交流空間の実態から、生活歴や身体状況との関係を踏まえた生活全体に占める住居や近隣地域での生活ウエイトを把握し、住空間から近隣地域空間までの連続する日常生活空間における交流空間の位置づけを明確化した上で、住居・住宅地計画及び近隣地域計画の視点から、人的支援を醸成する「場」の具体的な空間提案を行うことを目的としている。今年度行った研究の成果は以下に示す通りである。(1)昨年度実施した訪問ヒアリング調査対象地のうち、より外出行動選択肢が多様である東京都中野区上高田地区に注目し、前回対象者の中の9名に対して、自宅と中心とした徒歩圏における外出行動とその際に発生する交流実態に関するより詳細な追加調査を実施した。(2)(1)に基づいて、日常生活での徒歩圏内における外出行動を地図上に布置した結果、商店街、公園、地区センター、神社、図書館において、外出先の重なりがみられた。特に商店街での買い物、公園での散歩、地区センターでの行事参加をきっかけとした個人縁については、後に地縁のような扶助的関係へと変化するといった交流促進現象もみられることがわかった。(3)東京都26市23区を対象に、各市区が実施している高齢者(介護保険制度対象外)向けのサービス事業内容、各市区内にあるボランティア活動団体等の活動内容、などの情報収集を行い、自治体レベルにおける高齢者の生活支援体制について整理している。本研究は、熟年・高齢期を迎えた生活者が構築している人的環境とその交流空間の実態から、生活全体に占める住居や近隣地域での生活ウエイトを把握し、住空間から近隣地域空間までの連続する日常生活空間における交流空間の位置づけを明確化した上で、住居・住宅地計画及び近隣地域計画の視点から、人的支援を醸成する「場」の具体的な空間提案を行うことを目的としている。(1)都市的利便性を有し商店街に接する一般的住宅地である東京都品川区中延三丁目全域の45歳以上居住者に対して、地域内での日常生活行動や施設利用とそれに伴う交流、地域活動状況等に関するアンケート調査を実施し、329名から回答を得た(回収率71%)。(2)回答者をその年齢により、壮年期(45-54歳)・熟年期(55-64歳)・高齢期I(65-74歳)・高齢期II(75歳-)の4世代に区分し、世代別にみた身体、家族、仕事の状況の変化と居住年数の特徴を明らかにした。
持続心臓図モニタ-用経食道ドプラ断層システムの開発と臨床的有用性の検討

(1)持続留置用のサイズの小さな経食道ドプラ断層探触子の開発持続留置用経食道ドプラ断層探触子の開発を目的とし、今日臨床で用いられている市販のNasogastric tube(フジシステムズ10号:太さ7mm)と同じサイズの経食道探触子の製作を試み、5MHz・24素子を持つ径6.8mmの横断面用経食道探触子、同じサイズで32素子を持つ縦断面用経食道探触子、及び同じサイズでそれぞれ24素子の横断面用・縦断面用の2つのtransducerをもつbiーplane経食道探触子の3つの経食道探触子を開発した。これらの探触子の発生温度・漏れ電流・音響パワ-は従来の基準を満たし手いることを確認した後、心臓外科手術モニタ-として小児先天性心疾患35例に用い、手術近接期の心機能モニタ-としての経食道心エコ-図の臨床的意義と安全性に関して検討を加え、当初の目標が達成されていることを確認した。(2)持続心臓図モニタ-経食道探触子の改良小児用Biーplane探触子を改良し心機能の持続モニタ-用経食道探触子として必要な条件を検討した。(1)探触子のコントロ-ラ-部分をなくし形態を単純化した。更に食道内膜面に良好な接触を得て良い超音波画像を得るために、探触子先端部を改良しコントロ-ラ-部分を持たずとも食道壁との密着をよくすると同時に心臓を観察するのに適した断層が得られるように探触子先端背面に小バル-ンを設け、空気の注入により先端角度の調節を簡単に出来るようにした。(2)試作探触子の長時間使用による物理的安全性(漏れ電流、発生熱など)を確保するため、この探触子にかぶせるコンド-ム様のディスポ-ザブルで滅菌したカバ-シ-スを薄いゴム膜により作成した。現在、試作探触子を開心術症例に用い体外循環下及び術後集中治療室における持続心臓図モニタ-としての診断的有用性と安全性に関して検討を加えている。小さなサイズの経食道ドプラ断層探触子の開発とその基本性能の検討Nasogastric tube typeの持続留置用経食道ドプラ断層探触子の開発を目的とし、今日臨床で用いられている市販のNasogastric tube(フジシステムズ10号)と同じサイズ、あるいはそれ以下のサイズの経食道探触子を試みた。5MHz・24素子を持つ径6.8mmの横断面用経食道探触子、同じサイズで32素子を持つ縦断面用経食道探触子、及び同じサイズでそれぞれ24素子の横断面用・縦断面用の2つのtransducerをもつbiーplane経食道探触子の3つの経食道探触子を開発し、その基本性能を検討した。これらの3つの探触子を小児症例にも使えるという意味で小児用経食道探触子と便宜的に呼んでいる。また、更に小さな5MHz・17素子をもつ径4mmの横断面用経食道探触子も開発した。これを我々は新生児にも使えるという意味に於て新生児用経食道探触子と便宜的に呼んでいる。探触子の発生温度・漏れ電流・音響パワ-は従来の基準を満たした。

我々は小児用探触子を心臓外科手術モニタ-として35例(VSD:9,TOF:5,PA:3,TGA:3,ASD:1,MR:2,DORV:2,単心室:1,TCRV:2,Ebstein奇形:1,PDA:1,ECD:1,TAPVC:2,CoA:1,Asplenia:1)に用い、新生児用探触子を3例に(CoA,VSD+PS,ECD+PDA)用いて、手術近接期の心機能モニタ-としての経食道心エコ-図の臨床的意義と安全性に関して検討を加えた。対象の年齢は生後2日13才、体重2.335kgであった。これらの検討の結果、小児用は8cm迄の空間解像力を有し、335kgの症例で十分な診断情報が得られること、新生児用では4cmの空間解像力を有し、210kgの症例で十分な診断情報が得られること明らかになった。また、今回の検討では最大6時間の持続モニタ-であったが、探触子のサイズの適切な選択により患者に与える悪影響は全く見られなかった。持続心臓図モニタ-探触子の改良:平成2年度は3つの小さなサイズの経食道ドップラ断層探触子(小児用Singleーplane[横断面用、縦断面用]探触子、小児用Biーplane探触子、新生児用探触子)の開発とその基本性能を検討し、2DDモ-ドで約8cmの深さ方向の距離分解能が得られ、巨大な心臓でない限り成人心臓のモニタ-として使用可能なことを確認した。今回はこの中の小児用Biーplane探触子を改良し心機能の持続モニタ-用経食道探触子として必要な条件を検討した。(1)探触子のコントロ-ラ-部分をなくし形態を単純化し、探触子のチュ-ブ部分を7mmの太さに保ちつつ、コ-ド部分を延長し(300cm)ベッドサイドで余裕をもって装置に接続出来るようにした。食道内膜面に良好な接触を得て良い超音波画像を得るために、探触子先端部を改良しコントロ-ラ-部分を持たずとも食道壁との密着をよくすると同時に心臓を観察するのに適した断層が得られるように探触子先端背面に小バル-ンを設け、空気の注入により先端角度の調節を簡単に出来るようにした。(2)最終的には、今日市販されている血管内超音波探触子と同様ディスポ-ザブル探触子とする予定ではあるが、コスト面の問題が大きく、また、この試作探触子の長時間使用による物理的安全性(漏れ電流、発生熱など)が確信されていないため、この探触子にかぶせるコンド-ム様のカバ-シ-スを薄いゴム膜により作成した(1個2000円程度)。カバ-シ-スはディスポ-ザブルで滅菌パックにいれてあり、このカバ-シ-ス使用により持続モニタ-経食道探触子としての細菌学的安全性、物理学的安全性が確保されるものと考えられ、現在長時間の有用性及び安全性の実験的・臨床的検討を加えている。特に臨床例では開心術症例において持続心臓図モニタ-として用い、診断的有用性と安全性に関して検討を加えている。
細胞外シグナリング受容機構と小胞体機能

Shisaは、WntおよびFGFシグナルのレセプターと小胞体内で会合し、蛋白成熟過程と、レセプターの細胞膜発現を制御することで、シグナルを抑制する。Xenopusにおいて、Shisaは4つのFamilyメンバーで更正される。これまでの研究発表で、Xenopus初期胚において、Shisa1は頭部神経の組織発生(Yamamoto, 2005)、Shisa2は体節構造形成(Nagagno, 2006)に不可欠な役割を果たしていることを明らかにしてきた。今年度は、マウス・人Shisa分子ファミリーの同定、およびその機能解析を報告した(Furushima, 2007)。我々は、4つのマウス・ヒトShisa分子ファミリーを見いだした。これらのShisa Familyメンバーは、Xenopus Shisa1と同様に、Wnt及びFGFシグナルレセプターを小胞体内に留めることで、シグナルを制御する。特に、マウスShisaの遺伝子発現は、原腸胚期の予定頭部神経組織と体節形成領域に発現しており、Xenopus Shisa1とShisa2の両遺伝子の発現領域をカバーしていた。それぞれの遺伝子改変マウス単独では、初期胚形成に大きな変化が見られなかったが、Shisa2変異マウスは中枢神経領域形成に異常を示し、出生後に死に至る。これらの解析結果は、初期胚形成期において、Shisa分子Familyと機能的に相補する未知分子の存在を示唆するものと考えられる。高等多細胞生物の発生・機能維持には、多様なシグナリングの活性化と抑制が中心的役割を果たす。一方、これらシグナリングを誘導する機能的なリガンドやレセプターを細胞膜上にセットアップするシステムや、それを制御するシステムは多くが未知のままである。申請者は小胞体内で未成熟なWnt及びFGFレセプターと複合体を形成し、タンパク成熟と細胞膜輸送を阻害することでシグナリングの受容を制御する小胞体分子Shisaの機能解析により、小胞体が細胞膜タンパク質の成熟制御に関わる役割を解明する。本年度はShisaファミリー分子群の同定と機能解析をDevelopment誌に発表した。Shisaはアミノ基側に特徴的な二つのシステインリッチドメインを持つ。このモチーフを持つ分子の検索にてShisa2と3を見いだした。両分子とも小胞体に局在し、Wnt及びFGFレセプターを小胞体内に留め、シグナリング抑制活性を示した。初期胚におけるShisa2の機能抑制はWnt及びFGFシグナルの異所的活性化を引き起こし、体節構造形成不全を引き起こす。この形質はWnt及びFGFシグナルを同時に抑制したときのみ回復する。これらの研究成果は、Shisaによる小胞体内シグナリング制御機構が、脊椎動物の頭部形成以外の幅広い生命現象で機能していることを示唆する。今後レセプター蛋白成熟過程を促進するShisa関連分子の同定と機能解析を行う予定である。
マウス骨肉腫の骨内病変に対するElectrochemotherapyの研究

【目的】SCIDマウスの後肢の大腿骨内にヒト骨肉腫を移植した骨肉腫モデルを作成し、骨を介したelectrochemotherapyの効果について検討することを実験の目的とした。【対象と方法】実験群を、抗癌剤・電気穿孔群(D_+E_+)、非処置群(D_-E_-)の2群に分け、単純X線写真より腫瘍径(膨隆した骨の最大長径および横径)を測定し、腫瘍体積を求め経時的に比較した。BLMの腫瘍組織内濃度の測定は、抗癌剤・電気穿孔群(D_+E_+)、非電気穿孔群(D_+E_-)の2群に分けelectroporationの効果を比較検討した。病理組織学的検索では、反応性被膜形成、壊死について調べ、更にproliferating cell nuclear antigen(PCNA)を用いて、陽性細胞の分布および標識率を調べた。【結果】腫瘍モデルは、単純X線写真上、大腿骨遠位に骨透亮性腫瘍占拠病変の所見を示した。腫瘍モデルは、骨皮質が菲薄化・膨隆し腫瘍占拠病変の最大径が5mmに達するまでにおおよそ2ケ月間を要した。(D_+E_+)群における腫瘍径は、単純X線写真上2ケ月にわたり腫瘍径は縮小した。その後2ケ月を過ぎる頃から徐々に腫瘍は増大に転じた。一方、未処置の(D_-E_-)群では、時間の経過に伴い骨破壊と腫瘤陰影の増大を認めた。BLMの腫瘍組織内濃度は、抗癌剤・電気穿孔群(D_+E_+)において非電気穿孔群(D_+E_-)に比べて有為に高い値を示し、骨内の腫瘍組織にもBLMが取り込まれるelectroporationの効果と考えられた。病理組織学的検索では、おおよそ6週目までは腫瘍周辺の線維性被膜は厚く、被膜にマクロファージ様の細胞浸潤と伴っていた。腫瘍中心部には壊死像が認められ、更に周辺には腫瘍細胞の密度は低下し、基質に線維化が生じた。更にproliferating cell nuclear antigen(PCNA)による検索では、陽性細胞の分布および標識率が経時的に減少していることが認められた。骨を介した荷電においても、骨内病変に対するelectrochemotherapyが殺細胞効果を有することを裏付ける所見と考えられた。1.(研究目的)薬物の膜輸送に関わるとされる膜蛋白を持たない骨肉腫細胞に対してElectrochemotherapyは抗癌剤の細胞内移行を促進し、効率よく殺細胞効果が期待される全く新しいdrug deliverysystemに成り得ると考える。今回の実験では、SCIDマウスの大腿骨内に骨肉腫を移植した動物モデルを作成し、骨を介したElectrochemotherapyの実験を行う。この中で、(1)マウス大腿骨内への骨肉腫移植法を確立すること、(2)骨を介したElectrochemotherapyの実験で骨外からパルス状高電圧を負荷する際の条件の解明を目的とする。2.(研究実施計画)(腫瘍移植実験)

骨肉腫の症例から得た腫瘍組織塊を細片化し、マウス大腿骨に骨肉腫の細片を注入し、腫瘍の径が約5mmに達した時点で実験に用いる。(骨への通電実験)麻酔下に電極を経皮的に刺入し、マウスの背部皮下の大腿骨内で成長した腫瘍に対し大腿骨を挟むように2本の電極を当て、遺伝子導入装置BTX社製ELECTRO SQUARE PORATOR(T820)を用い通電する。本研究では骨を介しての通電を行うことになり、DCパルスの実効値(電圧)および骨の抵抗値は、借用したBTX社製OPRIMIZOR(BTX500)で計測し記録する。3.(研究実績)腫瘍移植実験:SCIDマウスの大腿骨骨髄内への細片化した腫瘍塊の注入は内腔が狭く、注入量も限られ、移植腫瘍の正着は困難を極めている。現在、骨形成性の骨肉腫細胞株(NOS-1)の培養細胞を用い、(1)遠位大腿骨内に注入、(2)近位脛骨内に注入、の腫瘍移植実験を継続している。骨への通電実験:SCIDマウスの右後肢で遠位大腿骨を針電極で挟んで骨抵抗値の計測を行い、結果はOPTIMIZOR(BTX500)の抵抗計の計測上限を越える値をとっている。そのため、現在10^бOHMまで計測可能な抵抗計にて実験を継続している。【目的】SCIDマウスの後肢の大腿骨内にヒト骨肉腫を移植した骨肉腫モデルを作成し、骨を介したelectrochemotherapyの効果について検討することを実験の目的とした。【対象と方法】実験群を、抗癌剤・電気穿孔群(D_+E_+)、非処置群(D_-E_-)の2群に分け、単純X線写真より腫瘍径(膨隆した骨の最大長径および横径)を測定し、腫瘍体積を求め経時的に比較した。BLMの腫瘍組織内濃度の測定は、抗癌剤・電気穿孔群(D_+E_+)、非電気穿孔群(D_+E_-)の2群に分けelectroporationの効果を比較検討した。病理組織学的検索では、反応性被膜形成、壊死について調べ、更にproliferating cell nuclcarantigen(PCNA)を用いて、陽性細胞の分布および標識率を調べた。【結果】腫瘍モデルは、単純X線写真上、大腿骨遠位に骨透亮性腫瘍占拠病変の所見を示した。腫瘍モデルは、骨皮質が菲薄化・膨隆し腫瘍占拠病変の最大径が5mmに達するまでにおおよそ2ヶ月間を要した。(D_+E_+)群における腫瘍径は、単純X線写真上2ヶ月にわたり腫瘍径は縮小した。その後2ヶ月を過ぎる頃から徐々に腫瘍は増大に転じた。一方、未処置の(D_-E_-)群では、時間の経過に伴い骨破壊と腫瘤陰影の増大を認めた。BLMの腫瘍組織内濃度は、抗癌剤・電気穿孔群(D_+E_+)において非電気穿孔群(D_+E_-)に比べて有為に高い値を示し、骨内の腫瘍組織にもBLMが取り込まれるelectroporationの効果と考えられた。病理組織学的検索では、おおよそ6週目までは腫瘍周辺の線維性被膜は厚く、被膜にマクロファージ様の細胞浸潤と伴っていた。腫瘍中心部には壊死像が認められ、更に周辺には腫瘍細胞の密度は低下し、基質に線維化が生じた。更にproliferating cell nuclear antigen(PCNA)による検索では、陽性細胞の分布および標識率が経時的に減少していることが認められた。骨を介した荷電においても、骨内病変に対するelectrochemotherapyが殺細胞効果を有することを裏付ける所見と考えられた。