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性ホルモン標的組織のアポトーシスにおけるミトコンドリアを介する経路に関する研究

1)成熟期マウスのエストロゲン刺激中止後の子宮上皮細胞のアポトーシスでは,ミトコンドリアを介するアポトーシスの経路が作動しており,Bc1-2 family蛋白がそれを制御している事,更にミトコンドリアからのチトクロームCの放出経路であるvoltage dependent anion channel(VDAC)が増加し,アポトーシスの感受性を増加させている事を示した。2)マウス男性ホルモン依存性癌であるシオノギ癌115細胞を用いて,in vitroで男性ホルモン除去後でのアポトーシスの機構を検討し,in vitroでもシオノギ癌細胞の細胞死では,ミトコンドリアを介するアポトーシスの経路が作動している事を示した。3)c-fos欠損マウスを用いて,c-fosの子宮,前立腺,精嚢,凝固腺,副睾丸でのアポトーシスにおける役割を検討し,c-fosは,これらの臓器での性ステロイドホルモン刺激中止後のアポトーシスでは,重要な役割を果たしていない事を明らかにした。4)出生直後から成熟期迄の間でのマウス精嚢,副睾丸上皮細胞のアポトーシスに及ぼす去勢の影響を検討し,精嚢発育の緩やかな生後20日迄のアポトーシスの程度は,発育速度の早いそれ以降の時期のアポトーシスの程度と較べて有意に低い事を示した。5)エストロゲン除去後のラット子宮上皮細胞のアポトーシスの機構として,間質の萎縮による上皮支持面積の減少が上皮のアポトーシスに重要な役割を果たすとの仮説を提唱し,この仮説を検証するために,底がシリコン膜でできた細胞培養面積を変化させることのできる培養器具を作成し,実験系を確立した。エストロゲンで刺激されている子宮では、エストロゲン刺激がなくなると上皮にのみにアポトーシスが起こるが、その細胞内機構は解明されていない。我々は、エストロゲン刺激中止後のマウス子宮上皮のアポトーシスの細胞内機構について研究し以下の点を明らかにした。1)ミトコンドリア外膜に存在するvoltage dependent anion channel (VDAC)には、VDAC1,2,3の3つのisoformがあるが、子宮の上皮のVDAC1,2,3 mRNA及び蛋白は上皮のアポトーシスに相関して増加する。2)ミトコンドリアからのcytochrome cの細胞質への放出、caspase-3の活性化(caspase-3は上皮にのみ認められた)が上皮のアポトーシスに相関して増加する。3)上皮のBax/Bcl-2,Bax/Bcl-X (mRNA及び蛋白)比が上皮のアポトーシスに相関して増加する。最近の研究では、ミトコンドリアから放出されたcytochrome cは、caspase-9を活性化し、次にcaspase-9はcaspase-3を活性化することによりアポトーシスを誘導する事が明らかにされている。更にVDACはcytochrome cの放出の通路であり、cytochrome cの放出は、Bcl-2 family蛋白であるBaxにより促進され、BCl-2やBcl-Xにより抑制される事が報告されている。従って、我々の研究は、エストロゲン刺激除去後の上皮のアポトーシスにおいても、Bcl-2 family蛋白により制御されるミトコンドリア経由のアポトーシスの情報伝達機構が作動している事を示唆する。上皮のアポトーシスに相関したVDAC量の増加は、上皮細胞のアポトーシスの感受性の増加に関与している可能性があると推測される。1)成熟期マウスのエストロゲン刺激中止後の子宮上皮のアポトーシスの機構について検討し、次の事を明らかにした。(1)エストロゲン刺激中止後の上皮のアポトーシスに相関して、チトクロームCがミトコンドリアから細胞質に漏出するとともに、caspase-3が活性化される。(2)チトクロームCの漏出の通路と推定されているミトコンドリアのvoltage dependent

anion channel(VDAC)が、上皮のアポトーシスに相関して上皮で増加する。(3)上皮のアポトーシスに相関しBak又はBax/Bcl-2又はBcl-xL比が増加する。これ等の結果から、エストロゲン刺激中止後の子宮上皮のアポトーシスでは、ミトコンドリアを介するアポトーシスの経路が重要であり、Bc1-2familyの蛋白がそれを制御している事、更にVDACの増加がアポトーシスの感受性を増加させている事が示唆された。2)男性ホルモン依存性癌細胞であるシオノギ癌115細胞を用いて、in vitroで男性ホルモン除去後のアポトーシスの機構を検討し、男性ホルモン除去後シオノギ癌細胞のアポトーシスが起こり、その時チトクロームCがミトコンドリアから細胞質に漏出する事を明らかにした。現在、アポトーシスに伴うVDAC,caspase3,Bcl-2family蛋白の変動を検討中である。3)出生直後から成熟期迄の間でのマウス精嚢上皮のアポトーシスに及ぼす去勢の影響を検討し、次の事を明らかにした。(1)出生後から成熟期までのどの時期でも去勢により精嚢上皮のアポトーシスがおこる。(2)精嚢の発育の緩やかな生後20日迄のアポトーシスの程度は、発育の速度の早いそれ以降の時期のそれに較べて有意に低い。(1)我々は、エストロゲン除去後のマウス子宮上皮細胞のアポトーシスの機構として、間質の萎縮による上皮支持面積の減少が上皮のアポトーシスに重要な役割を果すとの仮説を考えた。この仮説を検証するために、底がシリコン膜でできた細胞培養面積を変化させることのできる培養器具を作製し、シリコン膜上での上皮の培養を可能にするコーティング物質を検索した。更に、この培養条件で培養面積を現象させるとアポトーシスが増加する事を明らかにした。現在、このアポトーシスでのミトコンドリア経路の関与を検索中である。(2)c-fos蛋白欠損マウスでは、去勢により誘導される前立腺の上皮のアポトーシスが起こらない事が報告されている。我々は、c-fos蛋白の前立腺、精嚢、凝固腺、副睾丸及び子宮でのアポトーシスにおける役割を、c-fos蛋白欠損マウスを用いて検討した。特に、c-fos蛋白欠損の性ホルモン分泌に及ぼす影響を除外するために、去勢後性ホルモンを投与しその投与を中止する事によりアポトーシスを誘導した。2ヶ月齢のc-fos蛋白欠損マウスの前立腺、副睾丸、子宮のアポトーシスの程度は、同月齢の正常マウスのそれと同様であったが、c-fos蛋白欠損マウスの精嚢、凝固腺のアポトーシスの程度は、正常マウスのそれよりも減少していた。しかしながら、この減少は、c-fos蛋白欠損マウスの発育の遅れ(体重より推定して1ヶ月齢相当)による減少であり、事実c-fos蛋白欠損マウスの精嚢、凝固腺のアポトーシスの程度は、同程度の発育の正常マウスのそれと変らなかった。以上より、c-fos蛋白は、性ホルモン標的組織の上皮のアポトーシスには無関係である事が明らかになった。
金属クラスターへの錯体化学的アプローチ

1.キュバン型〔Cp_4Fe_4E_4〕^nクラスター(E=SおよびSe, Cp=シクロペンタジエニル).これらクラスターが電気化学的に0から4+まで可逆的に酸化還元できることを明らかにし,各酸化状態に対応する吸収スペクトルを得た.特にE=Se, n=3+のものについてはX線構造解析に成功した.2.キュバン型クラスターおよび二核錯体の生成に対するCp誘導体の効果.〔Cp_2Fe_2(CO)_4〕とS8との反応からは四核クラスターが, Cpの代わりにC_5Me_5(Cp1)を用いると二核の〔Cp1_2Fe_2S_4〕(1__)が得られる. C_5(SiMe_3)nH_<5-n>(n=1, 2)を用いて同様の合成を試みたところ, n=1では主として三核以上のクラスターが, n=2のときは二核錯体(2__)が得られ,クラスターの生成にはCp誘導体のかさ高さが大きな効果を持つことがわかった. 1__および2__ともに電気化学的に酸化することができる. 1__の酸化生成物および2__のX線解析を行い興味ある構造であることを明らかにした.3.トリメチレン鎖架橋ビス(パーメチルシクロペンタジェニル)(Cp_2^3)を含む錯体の合成,〔Cp_2^3Fe_2(CO)_4〕(3__), 3__のオリゴマー,〔Cp_2^3Fe〕(4__)_1〔Cp_2^3Fe_2(C_6H_6)_2〕(PF_6)_2などを合成し,物性を明らかにした. 4__の2電子酸化生成物を得て, 3__と共に構造決定に成功した.4.トリヒドロシランを用いる二核錯体の合成.光反応により〔Cp_2Fe_2・(CO)_3(μ-SiHBu^t〕を合成し,シリレン架橋鉄錯体の最初の構造解析ができた.5.ホスフィン置換ボラン錯体の合成.ボランを含むカチオン型銅錯体の最初の例として〔Ca「B_2H_4(PMe_3)_2」_2〕Iを合成し構造決定を行った.6.クラスターの基本となる金属-金属結合を持つW_2Cl_9^<3->とコバルト(III))錯体との電子移動反応を速度論的に研究しこところ,実験条件によりきわめて珍しいゼロ次反応速度式の成立する場合のあることを見出し,その反応機構を明らかにした.1.キュバン型〔Cp_4Fe_4E_4〕^nクラスター(E=SおよびSe, Cp=シクロペンタジエニル).これらクラスターが電気化学的に0から4+まで可逆的に酸化還元できることを明らかにし,各酸化状態に対応する吸収スペクトルを得た.特にE=Se, n=3+のものについてはX線構造解析に成功した.2.キュバン型クラスターおよび二核錯体の生成に対するCp誘導体の効果.〔Cp_2Fe_2(CO)_4〕とS8との反応からは四核クラスターが, Cpの代わりにC_5Me_5(Cp1)を用いると二核の〔Cp1_2Fe_2S_4〕(1__)が得られる. C_5(SiMe_3)nH_<5-n>(n=1, 2)を用いて同様の合成を試みたところ, n=1では主として三核以上のクラスターが, n=2のときは二核錯体(2__)が得られ,クラスターの生成にはCp誘導体のかさ高さが大きな効果を持つことがわかった. 1__および2__ともに電気化学的に酸化することができる. 1__の酸化生成物および2__のX線解析を行い興味ある構造であることを明らかにした.3.トリメチレン鎖架橋ビス(パーメチルシクロペンタジェニル)(Cp_2^3)を含む錯体の合成,〔Cp_2^3Fe_2(CO)_4〕(3__), 3__のオリゴマー,〔Cp_2^3Fe〕(4__)_1〔Cp_2^3Fe_2(C_6H_6)_2〕(PF_6)_2などを合成し,物性を明らかにした. 4__の2電子酸化生成物を得て, 3__と共に構造決定に成功した.4.トリヒドロシランを用いる二核錯体の合成.光反応により〔Cp_2Fe_2・(CO)_3(μ-SiHBu^t〕を合成し,シリレン架橋鉄錯体の最初の構造解析ができた.5.ホスフィン置換ボラン錯体の合成.ボランを含むカチオン型銅錯体の最初の例として〔Ca「B_2H_4(PMe_3)_2」_2〕Iを合成し構造決定を行った.6.クラスターの基本となる金属-金属結合を持つW_2Cl_9^<3->とコバルト(III))錯体との電子移動反応を速度論的に研究しこところ,実験条件によりきわめて珍しいゼロ次反応速度式の成立する場合のあることを見出し,その反応機構を明らかにした.本年度は金属クラスター構築の基本要素である二核錯体に主点を置いた。内容は【i】)鉄のキュバン型クラスターおよびその先駆錯体の合成研究と【ii】)クラスター独特の、あるいはクラスターであるが故に発現する性質の追求とに大別できる。【i】)

シクロペンタジエニル(Cp)を配位したキュバン型クラスタ-[【Cp_4】-【Fe_4】【S_4】](【1!】)の生成機構の解明を進めている。[【Cp_2】【Fe_2】【(CO)_4】]と【S_8】からの【1!】の生成においては、[【Cp_2】【Fe_2】【S_4】]などの二核錯体を経由するものと考えている、Cpの代りにペンタメチルシクロペンタジエニル(【Cp^*】)を用いたところ、興味深いことにキュバン型クラスターは得られず、代りに二核錯体[【Cp(^*_2)】【Fe_2】【S_4】](【2!】)が高収率で得られた。【2!】はより高次のクラスター合成の出発物質として重要である。空気酸化により[【Cp(^*_2)】【Fe_2】【S_3】【O_2】]錯体に変化し、さらに酸化もできる。この他チオレート、スルフィド、あるいはセレンを含む鉄クラスターの合成も行った。チオール架橋の最初の二核銅(【III】)錯体も合成した。この錯体は二つの銅(【II】)間でスピン交換があり、構造を保持したまま電気化学的にCu(【I】)-Cu(【II】)、Cu(【I】)-Cu(【I】)へと還元を行うことができる。【ii】)金属クラスターの最小単位である金属-金属結合を有する錯体として【W_2】【Cl(^3-_9)】(【3!】)を取り上げ、【3!】を還元剤とする電子移動反応の反応論的研究を行った。その結果、たとえば、【[Cox(NH_3)_5]^(2+)】との反応では【3!】は6電子還元剤として作用してW【O(^2-_4)】を生ずること、電子移動反応速度はXの種類に大きく依存し、いわゆる内圏型反応の特徴を持っていることがわかった。しかし、単核錯体で知られている内圏型機構と同様の過程は考えにくく、W-Cl-W結合の一ヶ所の切断、もしくはタングステンイオンの配位数の増加を伴い、コバルト錯体のXを架橋配位子とする新しい型の内圏機構であることがわかった。この結果はクラスターの酸化還元を考える上で重要な現象と考えられる。大別して次の3つの研究を行った。すなわち、1.二核錯体の合成,構造および性質,2.キュバン型クラスターの合成,構造および性質,3.t-アルキルシランと遷移金属錯体との反応による二核と三核錯体の合成である。1.ペンタメチルシクロペンタジエニル(【Cp^※】)を含む[【Cp(^※_2)】【Fe_2】【S_4】](【1!】)を得た。【1!】は空気酸化により[【Cp(^※_2)】【Fe_2】【S_3】【O_2】]に変化するが、【NH_4】【PF_6】の共存下で電気化学的に酸化すると[【Cp(^※_2)】【Fe_2】【S_4】]【(PF_6)_2】(【2!】)を与える。【2!】の構造解析から、【1!】において互いに直交していた2つのジスルフィド配位子がほぼ平行になるよう向きを変えていることを見出した。2つの【Cp^※】をトリメチレン鎖でつないだ配位子を合成し、その鉄のカルボニルならびに硫黄錯体も得ており、これらについても構造ならびに物性を調べている。2.シクロペンタジエニル(Cp)を含む[【Cp_4】【Fe_4】【Se_4】]【(PF_6)_3】【CH_3】CN(【3!】)を高収率で合成することに成功した。【3!】はキュバン骨格を形成する価電子が17個の【M_4】【X_4】型クラスターの最初の例である。構造解析の結果、【S_4】-【4!】軸をもつ4面冠4面体型構造であることがわかった。【3!】は電気化学的に4+から0価までの1電子酸化環元を行うことができる。セレンの代りに硫黄を含む[【Cp_4】【Fe_4】【S_4】]
弱サブクール状態の超流動ヘリウムに現れる異常に高い熱伝達率を持つ膜沸騰現象の解明

主に、狭隘流路内における超流動ヘリウム(He II)における圧力依存性について、実験的研究を行いながら、非常に近い他の研究グループの実験データを用いてこれらとの比較をする事で、さらに理解を深めた。この結果、狭隘流路内における超流動ヘリウム中の沸騰形態は大きく2つの領域に区分する事ができることがわかった。比較的熱流束の低い未発達な膜沸騰状態では、λ圧力近傍でもやや高い圧力では特徴的な気泡の生成消滅が現れるが、λ圧力以上とλ圧力未満では大きな差があることがわかった。λ圧力以上では、気泡のすぐ外側にはHe I相の層があり飽和蒸気圧曲線上の気液界面で状態が変化する。しかしながらλ圧力未満では、気泡のすぐ外側には過熱He I相という準安定相が広がっており、気泡が成長した後、消滅になる場合準安定相が崩壊しており、飽和蒸気圧曲線上の状態になり気泡が収縮していく。そのため、λ圧力未満でのみ、λ線を往来するサイクルとなる為、λ線比熱異常が非常に高い熱伝達に使われる事となる。この結果λ圧力において、沸騰熱伝達率はジャンプが起き、λ圧力を超えると熱伝達率は大きく下ってしまう。しかし一方で、比較的高い熱流束においてはHe II膜沸騰は、狭隘流路中であっても開放空間におけるHe II膜沸騰の圧力依存性と同様に、各沸騰モードの特徴的な圧力依存性は変わらない。沸騰モードマップは狭隘流路にする事で安定沸騰モードが拡大し、開放空間で異常に高い熱伝達率を示した弱サブクール膜沸騰とノイジー膜沸騰の境界圧力は10kPa程度であったものが、λ圧力(5kPa)であるため、狭隘空間における熱伝達率のピークはλ圧力となる。このように未発達な領域と発達した領域の両者で圧力依存性は異なるものの、λ圧力が最も熱伝達の良い領域であることが結論できる。本年度は主に透明な狭隘流路を作成して実験し、沸騰開始時のHe II-He I界面の可視化に成功するなど成功を収め、He II膜沸騰についての知見を深めた。細線ヒータによる膜沸騰時の蒸気膜厚さの計測への取り組みも始めた。透明な狭隘流路については酸化インジウム薄膜を蒸着したガラスと、ガラス板の2枚を間にスペーサーを挟みこんで狭い平行平板流路を形成した。流路幅を狭くすることで、これまで詳細に観測された例の無い加熱によるHe II-He I界面の可視化に成功し、加圧He II中に起こるHe II、He I、He Vapor三相の共存する膜沸騰状態について、特に沸騰開始期について圧力の効果を明確にすることに成功した。沸騰開始期においては例え同じ熱負荷をかけても圧力条件によって変化する蒸気密度と、液相の圧力の差があるためその伝播速度には大きな違いがあり、圧力を下げるほどその伝播速度は速くなる。本研究の目的の一つである膜沸騰モードを区分する安定-不安定分岐に対して、熱的な不安定性だけではなく流体力学的な不安定性がかかわることを明示する結果といえる。また、狭隘な流路に特有な現象として、飽和蒸気圧下のHe IIの膜沸騰開始期において過熱されたHe II相と過熱されたHe I相の相転移界面を捉えることに世界で始めて成功し、この界面を伴って沸騰を起こす際に見られる、周期的な気泡の発生・崩壊のサイクルを発見した。このサイクルは非常に高い沸騰熱伝達率を持つと予想され、その範囲はλ圧力を挟んで約10kPa飽和蒸気圧近傍にいたるまでの範囲である。弱サブクール状態で異常なピークを持った膜沸騰熱伝達率が観測されることと密接なかかわりがあると予見される。本年度は主に細線ヒータによる膜沸騰時の蒸気膜厚さの計測、蒸気相のNu数評価、蒸気膜厚さを決定するパラメータ等について実験し、調査した。大気圧飽和蒸気圧までのHeII膜沸騰の状態を観察した実験はこれまでにもあったが、細線ヒータ周りの膜沸騰状態について可視化観測ヒータ温度計測をしたものこれまでに無く、細線周りの沸騰という幾何学的に単純な円筒座標で示すことの出来る系で、実験を行うことは重要であり、現象の物理を明らかにする上で重要な基礎実験の役割を果たすものである。これまで、平板ヒータ上で観察されたHeII中の4つの膜沸騰モードはヒータ形状が著しく変わったにも関わらず、観察された。更に、平板ヒータ実験では明らかに出来なかった、安定沸騰モード中のレーリーテイラー不安定の出現や特定の領域でのみ観察されるコルゲート管状の蒸気膜を形成する不安定モードなどが新たに明らかになった。そして、沸騰モード分岐の境界においては大幅な変化が見られ、特に2.0K以下では、平板ヒータ上で観測されていた弱サブクール膜沸騰モードが観測されなくなるなどの大幅な変化が見られた。しかしながらこの効果についても細線ヒータにおける膜沸騰のハイスピードカメラによる計測、ヒータ温度の同時計測により、気液界面を貫く熱流束を基準に沸騰モードマップの再構築をすることで、更なる理解へとつながりを見せている。

λ圧力以上では、気泡のすぐ外側にはHe I相の層があり飽和蒸気圧曲線上の気液界面で状態が変化する。しかしながらλ圧力未満では、気泡のすぐ外側には過熱He I相という準安定相が広がっており、気泡が成長した後、消滅になる場合準安定相が崩壊しており、飽和蒸気圧曲線上の状態になり気泡が収縮していく。そのため、λ圧力未満でのみ、λ線を往来するサイクルとなる為、λ線比熱異常が非常に高い熱伝達に使われる事となる。この結果λ圧力において、沸騰熱伝達率はジャンプが起き、λ圧力を超えると熱伝達率は大きく下ってしまう。しかし一方で、比較的高い熱流束においてはHe II膜沸騰は、狭隘流路中であっても開放空間におけるHe II膜沸騰の圧力依存性と同様に、各沸騰モードの特徴的な圧力依存性は変わらない。沸騰モードマップは狭隘流路にする事で安定沸騰モードが拡大し、開放空間で異常に高い熱伝達率を示した弱サブクール膜沸騰とノイジー膜沸騰の境界圧力は10kPa程度であったものが、λ圧力(5kPa)であるため、狭隘空間における熱伝達率のピークはλ圧力となる。このように未発達な領域と発達した領域の両者で圧力依存性は異なるものの、λ圧力が最も熱伝達の良い領域であることが結論できる。
インド更紗の日本における受容の諸相と展開

本研究では、3種類のインド貿易布の呼称と日本に舶載された布との同定に成果を得た。サルピカードと呼ばれる布が更紗の一種と判明し、オランダが自国にインド更紗を輸入し始めた時期を、従来の想定より50年程早める結果となった。小堀遠州の周辺で、特注の更紗が制作されたことがわかり、遠州はインド更紗の茶道への導入のみならず、和更紗制作にも関与したと考えられる。また、江戸中期の更紗鑑賞熱の高まりには、円山応挙が関与した可能性があることが判明した。当該年度は主に資料調査および文献収集を行った。海外に関しては6月にオランダ、10月にイギリスにて調査をした。オランダでは、アムステルダム国立美術館、アーネムのオランダ野外博物館、レーワルデンのフリース博物館および歴史センター、ロッテルダムの世界博物館で作品あるいは文献調査を行った。特記すべき知見として、インド更紗のガウン(少なくともその一部)は、日本の絵羽のように仕立て上がりを想定して染められたことがわかった。また、これまで特に言及されてこなかったが、インド製の縞や格子模様、経緯絣の布が衣装の一部として大量にインドから到来していたことがわかった。これらは広義の更紗研究には貴重なものである。図書資料としては、アムステルダム国立博物館所蔵のインド更紗の布地の販売記録(18世紀後半の服地屋のセールスカタログ)を探しだすことができた。イギリスでは、V&A美術館で作品および文献調査、オックスフォード大学ボドリアン図書館で文献調査を行った。V&Aでは、修復中の霜降手の生命樹文様のインド更紗を調査し、図版では切れていた両端部分やスタンプを確認することができた。ボドリアン図書館では貿易の記録をつづった手写本を閲覧、縞や格子模様にさらに文様を描いたものが輸出されていたことが確認できた。国内では煎茶道具を所蔵する入間市博物館ほか個人への調査を行ったが、煎茶における更紗の歴史がさほど古くないことが明らかになってきた。ほかに東京国立博物館、文化服飾学園博物館、女子美術大学美術館、京都服飾文化研究財団ほか個人コレクターの所蔵品を調査。個人コレクターの所蔵品に、経緯絣技法と更紗の技法(媒染防染模様染)が併用されたインド更紗を用いた間着、帯などこれまで紹介されていなかった資料が見つかった。また、伊達家伝来の裂帖も見出された。江戸初期の有力大名による更紗受容を語るのに欠かせないものとなるだろう。インドの木綿の貿易布(更紗、縞)の具体的な名称とその特色の記述に関して、イギリスの東インド会社についてはJournal of Indian Textile Hostory I, II所載のJohn Irwinの用語集、オランダの東インド会社については、Instituut voor Nederlandse GescguedenisのVOC-GLOSSARIUM、さらに山脇悌二郎の『事典絹と木綿の江戸時代』を参照しながら、『日本関係海外史料オランダ商館長の日記1-11』『平戸オランダ商館の日記』『長崎オランダ商館の日記』『平戸市史海外史料編I-III平戸オランダ商館の会計帳簿』における用例を確認した。商館長日記で実際それらが取引あるいは贈答された文脈をたどることで、インドの木綿の貿易布のうち、将軍あるいは幕府高官への贈物として、どのようなものがふさわしいとされたか、あるいは、それらの中でもより価値が高いとされたものはどれか、など、用語集からは判然としない布のランク付けなどが見えた。また17世紀初期の時点では、オランダ東インド会社で用いられた貿易染織品の名称に、スペイン語/ポルトガル語の貿易用語がそのまま使用されている例を確認できた。これらの用語を、随時「彦根更紗」を中心とする、日本に残された裂帳や貼り交ぜ屏風、茶道具の包裂などと比較するうちに、用語と裂そのものを一致させることができそうなものが数種類浮かび上がった。それらのうち1つの用語は、スペイン語/ポルトガル語であり、ポルトガル、スペインにも照会をかけるべきであろう。最終年度には、国内で奈良の個人コレクター、広島県立美術館、大阪市経済戦略局文化部文化課(大阪市新美術館業務担当)での調査を行った。この調査および初、次年度の研究の成果として、特別展「更紗の時代」(平成24年10月11日11月24日)を開催した。本研究の目的として、(1)インド更紗の貿易名と現存する裂の同定(2)インド更紗受容の歴史的背景(3)インド更紗の日本の産業への影響をあげた。(1)については、同展図録所収の小論「17-18世紀の記録に残る貿易布の名称についてーサルピカード、ギンガム、ササーグンタスとは何か」に論じたように、3種類のインド貿易布の名称と、日本に舶載された布との同定に成果を得た。

特にサルピカード(霜降更紗)については、小論発表後1630年代にオランダにもたらされた記録があることがわかり、オランダがインド貿易布を自国用に輸入しはじめた時期を、定説より50年程早める結果となった。また、研究目的の(2)については、更紗受容を促した人物として、江戸初期の小堀遠州、中期の木村蒹葭堂、後期の松平不昧が与えた影響を調査した。結果として、中期には木村蒹葭堂よりも、蘭宿の定式出入商人・三井家と関係の深い円山応挙によって、更紗が描かれる対象になったことに注目すべきであるという結論に至った。(3)については、小堀遠州あるいはその周辺で、特注の更紗が制作されていたことがわかり、遠州がインド更紗を茶の湯に取り込んで日本の文化に根付かせたのみならず、和更紗制作にも関与した可能性がでてきた。最終年度のインド調査は、展覧会の後に行なった。貿易と産業という側面に注目したゆえに、インド国内の需要についての調査の必要を感じ、デリーでのデカン高原文化のシンポジウム参加とデカン高原の中心地、ハイデラバードでの作品調査に特化した。今後は生産国インドのあり方を十分検討した研究を行いたい。アジアの染織目標としていたヨーロッパ2箇所の調査を行うことで、研究の大きな枠組をつかむことができた。国内調査のうち、端物切本帖の調査が進んでいないが、早々に行うこととしたい。文献と図版との対比による調査に時間を要して、国内外の出張の連絡調整が遅くなり、館内業務との調整がうまくつかずに、年度内にほとんど調査にでることはできなかった。2013年度の調査では経緯絣技法と更紗の技法(媒染防染模様染)が併用されたインド更紗(いわゆる絣手格天井文様更紗)の新資料が多く見つかった。ふたつの技法が併用されていることから、それぞれの工程が別の場所で行われている可能性もある。今年はインドでのその製作状況のてがかりをつかむべく調査を行う。18世紀の更紗流行の仕掛けについては、これまで見てきた三井家や円山応挙との関連に加えて、山東京伝周辺を探ることとする。旅費等:(海外)インドにて博物館、美術館、染工房調査。(国内)長崎、東京、大阪、名古屋物品:図書購入初年度調査予定のイギリス・オランダに関しては、オランダでの調査は年度あけ早々に試みる。イギリスのV&A美術館は収蔵庫の移転中で、2013年10月にならないとアクセスできないとのことなので、他のヨーロッパ出張とかねて10月に再度試みる。できるかぎり、2012年度の積み残しと2013年度の国内外調査を、すべて2013年内に済ませるべく予定を立てる。安永年間の更紗ブームに関しては、木村蒹葭堂よりもオランダ商館との取引もあった三井家を入口に探る方が手がかりがつかみやすいと感じるので、特に三井家や和更紗制作に携わった染物屋(華布師)を中心に文献調査を進める。日・蘭・英の用語集を比較すると、蘭・英の用語の共通点、相違点が整理されていないことに気づかされた。その整理をあわせておこなうことで、より多くの裂と名称の同定が可能になると考えられる。ちなみに、インド貿易布におけるスペイン語/ポルトガル語の用語は、1920世紀まで対アフリカ貿易などで用いられており、今後はスペイン、ポルトガルでの情報収集も必須となるだろう。目的とした国内調査のうち行くことができなかった所があったため。7月までには、未調査分の国内調査を行う。旅費:(海外)オランダおよびイギリスにて博物館・美術館・図書館・文書館調査。(国内)
ＡＤＣＣ活性に基づく肺癌・中皮腫の抗体療法開発と免疫学的バイオマーカー探索

肺扁平上皮癌および悪性胸膜中皮腫に高発現する膜蛋白ポドプラニンを標的に抗腫瘍活性を有する新規抗体の開発を進めた。本研究において新たに作成したヒト・ラットキメラ抗体であるNZ-8はラット抗体であるNZ-1に比較して抗体依存性および補体依存性細胞障害活性に基づく高い抗腫瘍効果を示した。NZ-8は正常組織より腫瘍細胞に発現するポドプラニン分子に高い結合活性を示し臨床応用に向けた利点と考えられた。最終年度にNZ-8より抗腫瘍活性の高いキメラ抗体NZ-12を作成し臨床応用に向けて検討中である。抗体治療前後のマウス移植腫瘍組織の遺伝子発現解析から抗体療法の有効性に関連すると考えられる候補遺伝子を同定した。平成24年度は研究実施計画に沿って抗ポドプラニン抗体を中心に検討を進めた。まず、悪性胸膜中皮腫細胞(malignant mesothelioma : MPM)株および腫瘍組織におけるポドプラニン抗原発現を詳細に検討したところ、細胞株では73%(11/15)、腫瘍組織では92%(33/36)に発現を認めた。そこで抗ポドプラニン抗体(NZ-1)のヒト・キメラ抗体NZ-8を作製し、機能解析をin vitroおよびin vivoにて検討した。フローサイトメトリー法による検討では、NZ-8はNZ-1と同程度にMPM細胞を認識した。またNZ-8はポドプラニン発現MPM細胞に対して、ヒト末梢血単核球をエフェクター細胞とした抗体依存性細胞傷害活性(antibody-dependent cellular cytotoxicity : ADCC)を示した。エフェクター細胞の解析では、NK細胞たADCC潜性を認めたが、単球ではADCC活性は検出されなかった。以上から、NZ-8のADCCにはNK細胞が重要である可能性が示された。一方、NZ-8のADCC活性は、ヒト単核球をエフェクター細胞とした場合、NZ-1に比較して有意に高いADCC活性を示した。さらに、補体依存性細胞傷害活性(complement-dependent cytotoxicity : CDC)についても、NZ-8はNZ-1に比較して高い活性を示した。ACC-MESO-4細胞のSCIDマウス皮下移植系を用いた検討では、ヒトNK細胞とNZ-8を投与した群で、有意に腫瘍増殖抑制効果が確認された。またNZ-8は、NZ-1に比較し有意に強力なin vivo腫瘍増殖抑制効果を示した。以上から、ヒトキメラ抗ポドプラニン抗体NZ-8を用いた臨床応用の可能性が示唆された。平成25年度の研究実施計画に沿って研究を進めた。平成24年度に引き続き抗ポドプラニン抗体NZ-1およびそのヒトキメラ抗体NZ-8を用いた検討を行った。その結果、免疫組織染色法においてNZ-1およびNZ-8は他の抗ポドプラニン抗体であるD2-40と比較して、胸膜中皮腫の腫瘍細胞に発現するポドプラニンを認識しやすい傾向にあり、正常組織である肺胞上皮細胞や腎臓のポドサイトを認識しなかった。また、Western blotting法による検討では検出されるポドプラニンのバンドのパターンが異なっていたことから、NZ-1およびNZ-8は比較的特異的に腫瘍細胞に発現するポドプラニンを認識する特徴を持っており、臨床応用を考えた場合に有利な特性であると考えられた。また、SCIDマウス皮下移植悪性胸膜中皮腫腫瘍の実験系を用いて、蛍光標識したNZ-1をマウス尾静脈投与することにより、皮下腫瘍へのNZ-1の高い集積性を確認した。さらにSCIDマウスの同所移植モデルを用いて、NZ-1およびNZ-8を用いた治療と抗がん剤(ペメトレキセド)との併用効果を検討した結果、抗がん剤との併用により抗腫瘍効果の増強が認められた。一方、腫瘍へのエフェクター細胞、特にNK細胞の集積に関わる因子の同定のため、SCIDマウス皮下移植腫瘍モデルにおいて、NZ-1投与後の胸膜中皮腫腫瘍を用いてDNAマイクロアレイ解析を行い、現在解析中である。また、悪性胸膜中皮腫の同所移植モデルにおいて形成される悪性胸水中には、CD11b+Gr-1+のmyeloid-derived suppressor cellsの集積を確認した。今後、antibody-dependent cellular cytotoxicity活性への影響を検討する予定である。SCIDマウスにおけるヒト悪性胸膜中皮腫細胞の同所移植モデルを用いて、抗ポドプラニン抗体NZ-1およびヒトキメラ抗体NZ-8による抗腫瘍効果の追加検討を行った。それぞれの抗体治療は抗癌剤であるペメトレキセドとの併用により抗腫瘍効果の増強が認められ、抗がん剤との併用治療が有用であることが示唆された。一方、悪性胸膜中皮腫細胞をin vitroで、抗癌剤存在下に培養すると、ポドプラニン発現が一過性に低下することを見出した。

この現象は、抗癌剤と抗ポドプラニン抗体の併用療法を行う際には、その投与スケジュールに工夫が必要であることを示唆している。さらに新たなヒトキメラ抗ポドプラニン抗体であるNZ-12を作成し、抗腫瘍効果を検討した。その結果、NZ-12は従来のヒトキメラ抗体NZ-8に比較して、明らかに高い抗体依存性細胞障害活性(ADCC)および補体依存性細胞障害活性を示し、同所移植モデルにおける抗腫瘍効果も高いことを確認した。以上から、臨床応用に向けた抗体として新たにNZ-12を用いた検討を進めている。また抗体による抗腫瘍効果に関連するエフェクター細胞の遊走因子の同定を試みた。NZ-1投与下の腫瘍組織とコントロール抗体投与下の腫瘍組織によるマイクロアレイ解析から、エフェクター細胞の遊走に関連すると考えられるいくつかの分子を同定した。その分子群の中には、血球系細胞の遊走に関与する分子であるS100A8あるいはS100A9が存在した。我々の用いている抗ポドプラニン抗体のエフェクター細胞はNK細胞であり、S100A8あるいはS100A9のNK細胞に及ぼす作用について検討を進めている。NK細胞によるADCCを介した抗腫瘍効果にこれらの分子の関与が証明されれば、遊走因子を応用した効果的な抗体治療法の開発につながる可能性があると思われる。26年度が最終年度であるため、記入しない。医歯薬学26年度が最終年度であるため、記入しない。抗ポドプラニン抗体NZ-1のヒトキメラ抗体NZ-8を作製し、抗腫瘍効果の第一段階の検証が終了した。さらに本研究については、学会発表および論文発表を行っており、全体の研究計画の中で抗ポドプラニン抗体に関する研究は順調に進んでいる。免疫抑制機序の解析も同時に開始できていることから、当初の研究計画通り順調に進んでいると思われる。当初の研究計画として平成25年度以降に予定していた研究計画の中で、1抗HM1.24抗体および抗ポドプラニン抗体の正常細胞および組織への結合の検討、2抗HM1.24抗体および抗ポドプラニン抗体と抗癌剤の併用効果の検討がある程度終了した。研究実績の概要に記載したように、ポドプラニン抗体は肺、腎等いくつかの正常組織にも発現しているものの、我々の使用しているNZ-1、NZ-8の特性として正常組織に発現するポドプラニンを認識しにくい特徴があることが明らかとなった。さらに、抗がん剤との併用治療実験において、有意な併用効果が確認された。また、研究計画3肺癌および胸膜中皮腫組織における骨髄由来免疫抑制細胞(MDSC)の検討、4抗HM1.24抗体および抗ポドプラニン抗体のADCCに及ぼす骨髄由来免疫抑制細胞(MDSC)の効果の検討についていくつかの結果が出つつある。今後、重要な検討項目として5抗HM1.24抗体および抗ポドプラニン抗体治療下のマウス移植腫瘍での遺伝子発現の網羅的マイクロアレイ解析、6マイクロアレイで同定された分子の腫瘍組織における発現の検討が残っている。現在5を実施し候補遺伝子の探索を進行中であり、平成26年度にスクリーニングを行いいくつかの候補遺伝子を絞り込む予定である。
ポリアスパルテートの低温側の逆ヘリックス-ヘリックス転移の解明

ポリペプチドは、溶液中において様々の異なる2次構造を取ることは古くから知られている。また、温度、溶媒組成及び圧力などの変化により2次構造は変化することも知られている。特にヘリックスコイル転移については実験及び理論の両面から研究され、溶媒とペプチド残基の相互作用、即ち水素結合生成が重要な因子として考えられている。我々は、最近、ポリ(β-フェネチルL-アスパルテート)(PPLA)がテトラクロロエタン(TCE)の希薄溶液及び液晶状態中で温度の昇降により、α-ヘリックスの右巻き【tautomer】左巻きの鋭い一次転移を示すことを見い出した。更に研究過程において、PPLAが、微量の変性溶媒を含む系で、温度の昇降により左巻きから右巻きへ反転し、再度左巻きへ反転するというエントラント・ヘリックス-ヘリックス転移を確認した。本研究では、ポリアスパルテートに見られる特異的なリエントラント転移現象の低温側の逆ヘリックス-ヘリックス転移に着目し、転移の機構と水素結合相互作用について検討した。本研究の第一段階で、PPLAのモデル化合物として、環状ペプチドであるジケトピペラジンを合成し、各種溶媒を用いてNMR測定を行った。NMR測定結果よりジケトピペラジンの各結合のコンホメーション解析を行った結果、側鎖根元のχ1結合回りのトランス分率が溶媒極性の増加に伴い増加することが分かった。また、変性溶媒を含む混合溶媒系では、変性溶媒濃度が増加すると低温側でコンホメーションがゴ-シュ安定からトランス安定へ変化することも見い出した。重水素化PPLAの混合溶媒系における重水素NMR測定の解析からは、低温側で側鎖根元のコンホメーションが変化するという結果が得られた。以上の研究成果から、PPLAの低温側の逆ヘリックス転移は、溶媒効果による側鎖のコンホメーション変化が主鎖のらせん反転を誘起する機構であることが分かった。
末梢組織におけるキスペプチンの作用機序に関する研究

下垂体初代培養細胞を用いて実験を行った。プロラクチン産生GH3細胞にはキスペプチン受容体(Kiss1R)が存在するが、内因性のKiss1Rはキスペプチンに反応せず、Kiss1Rを細胞に過剰発現させた場合にのみキスペプチンはプロラクチンの転写活性を増加させることを実験で証明した。さらに、E2はGH3細胞においてKiss1R発現を増加させた。E2存在下にGH3細胞を培養した場合、内因性のKiss1Rはキスペプチンに反応してプロラクチンの転写活性を増加させた。Kiss1R発現の増加はキスペプチンによるプロラクチンの転写活性を増強させたが、TRH刺激によるプロラクチンの転写活性には影響を与えなかった。上記研究結果を論文で報告した。下垂体前葉細胞の初代培養細胞を用いて上記結果を得られたが、ラット下垂体前葉組織や絨毛細胞、胎盤細胞における検討については現在準備中であるため。ラット下垂体前葉組織を摘出し、キスペプチン及びKiss1Rの局在を下垂体前葉ホルモン産生細胞と位置関係で検討する。キスペプチンは下垂体前葉のどの部分で合成されるのか、あるいはどのホルモン産生細胞にKiss1Rが発現しているのか、組織免疫染色法を用いて確認する。下垂体前葉にはキスペプチンが発現している。下垂体前葉に影響を与える視床下部ペプチドが下垂体局所のキスペプチン発現あるいはKiss1R発現にどの様な影響をあたえるのか蛋白発現及び遺伝子発現で検討する。またキスペプチン発現をsiRNAを用いてノックダウンした時の下垂体ホルモン発現量の変化を検討する。絨毛細胞におけるこれら生殖関連神経ペプタイドの発現促進因子を見つける。具体的にはエストラジオールの他、プロゲステロン、ゴナドトロピン、hCGあるいは着床に関連するとされる成長因子、サイトカイン(EGF、TGF-&#61538;、CSF-1、LIF、IL)の効果について網羅的に検討する。遺伝子発現はreal time RT-PCRで検討するほか、タンパク発現をwestern blotting法にて測定する。胎盤細胞にこれら生殖関連ペプタイドが発現している以上、これらのペプタイドは胎盤における作用をもつと考えられる。着床に関連する因子との関連を調べる。胎盤に関連する因子としてはムチン類、細胞外マトリックス、接着因子であるインテグリンの他、上述した成長因子、サイトカインが挙げられる。キスペプチン及びGnRHがこれらの発現に関与するのかどうか網羅的に検索する。
高力率で電源電流波形を正弦波化する単相および三相昇降圧整流器

ダイオードブリッジとDC-DCコンバータを縦続接続した単相単向スイッチモード整流器は,負荷あるいは昇圧比が大きくなると,電源電流波形が電源電圧の零クロス点近傍で歪む。これを改善するために,固定周波数スイッチング法を電圧反転機能を付加した整流器に適用したときの特性について検討してきた。具体的には,電圧反転機能をSEPICタイプ単相整流器,単相バックブ-スト整流器,Cukタイプ単相整流器に付加した3種類の回路構成を提案し,それらの特性を状態空間法によるシミュレーションと実験によって検討した。すなわち,前述の電圧反転機能を付加したSEPICタイプ単相整流器,単相バックブ-スト整流器,Cukタイプ単相整流器について状態空間法によるシミュレーションと実験から,負荷あるいは昇圧比が大きいときを含めて高力率の正弦波電源電流が達成できることを明らかにした。また,各スイッチング整流器の効率の向上を考慮して,シミュレーションと実験を繰り返しながら回路の諸定数を含め検討をしてきた。その結果,次のような結論を得た。1.スイッチモード整流器の制御回路を含めた新しい回路構成を提案し,いずれの構成においても電源電流が高力率で正弦波状に制御可能であること。2.高速過渡応答が可能であること。3.素子の高速スイッチングによって電磁ノイズが抑制されること。4.単相バックブ-スト整流器およびCukタイプ単相整流器における効率の向上が可能となった。これらの整流器は,一般に小容量変換器システムに十分適用可能であると考えられる。なお,これらの研究成果の一部は裏面に示している。今後は,電源電流波形を改善したスイッチモード整流器容量の増大化の検討および降圧形整流器の研究を推進する予定である。ダイオードブリツジとDC-DCコンバータを縦続接続した単相単向スイッチモード整流器では,負荷あるいは昇圧比が大きくなると,電源電流波形が電源電圧の零クロス点近傍で歪む。これを改善するために,固定周波数スイッチング法を電圧反転機能を付加した整流器に適用したときの特性を検討する。具体的には、電圧反転機能をSEPICタイプ単相整流器,単相バツクブ-スト整流器,Cukタイプ単相整流器に付加した回路構成を提案し,それらの特性を状態空間法によるシミュレーションと実験によって検討した。まず,DC-DC等価回路に基づく状態平均化法による近似解析結果から物理的な考察をする。次に状態空間法を用いたシミュレーションを行い、この結果を検証するために定常および過渡実験を行った。すたわち,前述の電圧反転機能を付加したSEPICタイプ単相整流器,単相バックブ-スト整流器,Cukタイプ単相整流器の状態空間法によるシミュレーションと実験から,負荷あるいは昇圧比が大きいときを含めて高力率の正弦波電源電流が達成できることを明らかにした。以上,スイッモード整流器の制御回路を含めた新しい回路構成を提案し,いずれの構成においても電源電流が高力率で正弦波状に制御可能であること,高速過渡応答が可能であること,また素子の高速スイッチングによって電磁ノイズが抑制されることがわかった。今後は,整流器容量の増大化の検討および実用化に向けて研究を推進する予定である。ダイオードブリッジとDC・DCコンバータを縦続接続した単相単向スイッチモード整流器は,負荷あるいは昇圧比が大きくなると,電源電流波形が電源電圧の零クロス点近傍で歪む。これを改善するために,固定周波数スイッチング法を電圧反転機能を付加した整流器に適用したときの特性を昨年度(H.8年度)以来,検討してきた。

具体的には,電圧反転機能をSEPICタイプ単相整流器,単相バックブ-スト整流器,Cukタイプ単相整流器に付加した回路構成を提案し,それらの特性を状態空間法によるシミュレーションと実験によって検討した。すなわち,前述の電圧反転機能を付加したSEPICタイプ単相整流器,単相バックブ-スト整流器,Cukタイプ単相整流器について状態空間法によるシミュレーションと実験から,負荷あるいは昇圧比が大きいときを含めて高力率の正弦波電源電流が達成できることを明らかにした。本年度は,昨年度検討してきた各整流器の効率の向上を考慮して,シミュレーションと実験を繰り返しながら,回路の諸定数を含め検討をしてきた。その結果,次のような結論を得た。スイッチモード整流器の制御回路を含めた新しい回路構成を提案し,いずれの構成においても電源電流が高力率で正弦波状に制御可能であること,高速過渡応答が可能であること,また素子の高速スイッチングによって電磁ノイズが抑制されることなどの他に単相バックブ-スト整流器およびCukタイプ単相整流器における効率の向上が可能となった。これらの整流器は,一般に小容量変換器システムに十分適用可能であると考えられる。なお,これらの研究成果の一部は裏面に示している。
神経再生に伴い出現する細胞接着因子フィブロネクチンの形態学的証明

イヌ血漿からフィブロネクチン(FN)を精製し,これに対する抗血清を家兎で作成した.抗血清の検定を免疫電気泳動および酵素免疫測定法で行い高純度かつ抗力価であることを確認した.このFN抗血清を用いて,ラット脳を免疫組織化学的に検索した.まず成熟ラットで脳を無傷のまま飼育した場合, FN陽性反応は髄膜を除き脳実質には全く認められなかった.そこで実験モデルとして,成熟ラット脳を開頭下に外科的切除術あるいは紫外線照射により大脳皮質損傷を与え,再び縫合した.その術後の経過を日を追って各動物群で検索したところ,術後30分という短時間ですでに術部位に限局したFN陽性反応が認められた.しかし,その反応はび慢性が主体であることから,恐らく血管透過性が高まったため血中のFNが脳実質に浸潤したものと思われた.術後3日目では,このような浸潤性のFNは次第に減少したが,代わりに神経細胞の多数およびグリア細胞の少数が皮質損傷部に一致して認められた.ここで重要な所見は, FN免疫陽性神経細胞の軸索内にも反応が出現し,皮質下へ投射する経路に沿って観察されたことである.この皮質下投射領域におけるFN陽性反応は術后2週目頃に最強となり容易に観察されたが,もっと長日時で少なくとも8週頃までは観察可能であった.これらの皮質下領域としては,視床・大脳脚・中脳被蓋および延髄錐体路であった.そこで,最も術部から遠位にある延髄錐体(術側と同側)の陽性反応を免疫電顕的に検索した.反応産物は有髄線維の軸索に一致して認められたが,その多くは,度の差はあるものの退行性変化を一過性に受けその後再生に転じたと思われる像を呈していた.以上の結果から,脳が損傷を受けると血管の透過性が高まり血中のFNが脳実質に浸潤する.ついで神経細胞とくに再生可能な程度の軽度損傷を受けたものがFNをとり込み,軸索遠位へと輸送し再生過程に役立ている事が分った.イヌ血漿からフィブロネクチン(FN)を精製し,これに対する抗血清を家兎で作成した.抗血清の検定を免疫電気泳動および酵素免疫測定法で行い高純度かつ抗力価であることを確認した.このFN抗血清を用いて,ラット脳を免疫組織化学的に検索した.まず成熟ラットで脳を無傷のまま飼育した場合, FN陽性反応は髄膜を除き脳実質には全く認められなかった.そこで実験モデルとして,成熟ラット脳を開頭下に外科的切除術あるいは紫外線照射により大脳皮質損傷を与え,再び縫合した.その術後の経過を日を追って各動物群で検索したところ,術後30分という短時間ですでに術部位に限局したFN陽性反応が認められた.しかし,その反応はび慢性が主体であることから,恐らく血管透過性が高まったため血中のFNが脳実質に浸潤したものと思われた.術後3日目では,このような浸潤性のFNは次第に減少したが,代わりに神経細胞の多数およびグリア細胞の少数が皮質損傷部に一致して認められた.ここで重要な所見は, FN免疫陽性神経細胞の軸索内にも反応が出現し,皮質下へ投射する経路に沿って観察されたことである.この皮質下投射領域におけるFN陽性反応は術后2週目頃に最強となり容易に観察されたが,もっと長日時で少なくとも8週頃までは観察可能であった.これらの皮質下領域としては,視床・大脳脚・中脳被蓋および延髄錐体路であった.そこで,最も術部から遠位にある延髄錐体(術側と同側)の陽性反応を免疫電顕的に検索した.反応産物は有髄線維の軸索に一致して認められたが,その多くは,度の差はあるものの退行性変化を一過性に受けその後再生に転じたと思われる像を呈していた.以上の結果から,脳が損傷を受けると血管の透過性が高まり血中のFNが脳実質に浸潤する.ついで神経細胞とくに再生可能な程度の軽度損傷を受けたものがFNをとり込み,軸索遠位へと輸送し再生過程に役立ている事が分った.
Notchリガンド誘導性Thy1陽性樹状細胞による原虫感染制御

本研究では細胞内寄生性原虫感染症の克服を目指し有効な免疫応答の誘導機構開発の基礎となる研究を行うことを目的としている。平成19年度もこの目的の達成に則した研究を行った。免疫応答の誘導・制御に重要な抗原提示細胞である樹状細胞(DC)には形態的、機能的に異なる亜細胞群が同定されているが、このような亜細胞の細胞系譜決定や分化の様式には明らかにされていないことも多く残されている。また、生体内ではDCはその細胞数が非常に少ないことから新たな亜集団を見出しその機能を明らかにすることも容易ではない。研究者らは細胞系譜決定因子であるNotchシグナルの免疫系での役割について研究を遂行してきた。その中で、DCの成熟や分化などDCの多様性獲得におけるNotchシグナルの関与を検討してきた。その結果、試験管内DC誘導系においてNotchシグナルの添加により本来はTリンパ球マーカーであるThy1を発現する新規のDC(Thy1-DC)が誘導されることを見出してきた。強い細胞傷害性Tリンパ球誘導能を有するThy1-DCは、マウス生体内でも存在比率は少ないものの存在していた。さらに、生体内Thy1-DCはTrypanosoma cruzi(T.cruzi)の感染に伴い脾臓、リンパ節、肝臓で増加することが確認されている。T.cruzi感染マウスからThy1-DCおよび通常のDCを分離しサイトカイン産生を検討したところ、Thy1-DCからinterferonγ(IFN-γ)の産生が観察された。このことから、Thy1-DCが感染防御に重要な細胞集団であることが想定された。Thy1-DCの生体内での役割をさらに解析するためには、同細胞を生体内から除去しその影響を観察する必要がある。しかし、従来行われてきた抗体による細胞の除去はThy1-DCの場合には用いることができない。それは、Thyl-DCがCDllcとThy1.2という2つの細胞表面分子を同時に発現する細胞として同定されているからである。そこで、私たちはこの2つの分子を同時に発現する細胞だけにアポトーシスを誘導し生体内から除去できるマウスの樹立を目指した研究を開始した。現在、試験管内にて2種類の分子を発現する細胞のみに選択的にアポトーシスを誘導できるシステムを検討中である。本研究では細胞内寄生性原虫感染症の克服を目指し有効な免疫応答の誘導機構の解明・開発を行う。免疫応答の誘導・制御には抗原提示細胞である樹状細胞(DC)の関与が大きい。従来の研究からDCには形態的、機能的に異なる亜細胞群が同定されているが、このような亜細胞の細胞系譜決定や分化の様式の詳細はわかっていない。研究者らは細胞系譜決定因子であるNotchシグナルの研究を行っており、DC分化におけるNotchシグナルの関与を検討してきた。その結果、試験管内でのDC分化系においてNotchシグナルによって本来Tリンパ球マーカーであるThy1を発現する新規のDC (Thy1-DC)が誘導されることを見出した。試験管内で誘導したThy1-DCは強い細胞傷害性Tリンパ球誘導能を有していた。また、マウス生体内でもThy1を発現するDCがその存在比率は少ないものの存在していた。生体内Thy1-DCはTrypanosoma criczi (T.cruzi)の感染に伴い脾臓、リンパ節、肝臓で増加することが確認された。さらに、Thy1-DCによるCD4Tリンパ球機能的分化制御能を検討したところ、IFN-γとIL-17の両方を産生する特異な機能的Tリンパ球(Th1/17)を誘導した。現在、IFN-γを産生するTh1とIL-17を産生するTh17とは全く異なる細胞系譜であると考えられているが、研究者らがThy1-Dcによって誘導したTh1/17は両方の機能を併有した新規の機能的Tリンパ球である可能性が示唆された。T.cruzi感染に対してIFN-γ、IL-17のいずれも重要なサイトカインであると考えられるため、両サイトカインを産生するTh1/17は多大に感染抵抗性に寄与することが示唆される。

さらに、生体内Thy1-DCはTrypanosoma cruzi(T.cruzi)の感染に伴い脾臓、リンパ節、肝臓で増加することが確認されている。T.cruzi感染マウスからThy1-DCおよび通常のDCを分離しサイトカイン産生を検討したところ、Thy1-DCからinterferonγ(IFN-γ)の産生が観察された。このことから、Thy1-DCが感染防御に重要な細胞集団であることが想定された。Thy1-DCの生体内での役割をさらに解析するためには、同細胞を生体内から除去しその影響を観察する必要がある。しかし、従来行われてきた抗体による細胞の除去はThy1-DCの場合には用いることができない。それは、Thyl-DCがCDllcとThy1.2という2つの細胞表面分子を同時に発現する細胞として同定されているからである。そこで、私たちはこの2つの分子を同時に発現する細胞だけにアポトーシスを誘導し生体内から除去できるマウスの樹立を目指した研究を開始した。現在、試験管内にて2種類の分子を発現する細胞のみに選択的にアポトーシスを誘導できるシステムを検討中である。