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病態の解明と治療を目指した硫酸化グリコサミノグリカンの機能解析

硫酸化グリコサミノグリカン鎖は、タンパク質に共有結合したプロテオグリカンとして、ほとんどすべての細胞の表面や細胞外マトリックスに存在し、様々な増殖因子や形態形成因子、そして細胞外マトリックスに存在するタンパク質などと相互作用することにより機能を発揮している。従って、グリコサミノグリカン鎖の生合成は、胚発生や恒常性の維持に深く関わり、その生合成の破綻は様々な疾患を引き起こすと思われる。そこで、本研究では、硫酸化グリコサミノグリカン鎖がどのように合成され、その合成を撹乱すると何がおこるのかを解析し、硫酸化グリコサミノグリカン鎖の合成異常と疾患との関連を考察した。我々は世界に先駆けて、ヘパラン硫酸(HS)やコンドロイチン硫酸(CS)などの硫酸化グリコサミノグリカン(GAG)鎖の生合成に関与する10種類以上の酵素遺伝子のクローニングを行ってきた。本研究では、これら合成酵素の活性や発現を改変することにより、硫酸化GAG鎖の発現制御メカニズムや機能を明らかにし、その成果に基づいた病態の解明と治療のための基盤となる研究を行う。本年は、以下の2つに関する結果を得た。(1)グルクロン酸転移酵素(GlcAT-1)ノックアウトマウスを用いたGAG鎖の機能解析:我々は、GlcAT-1のノックアウトマウスを作成し、ホモ接合体は胎生致死になることを見いだした。致死となるステージは、主に8細胞期までの発生の初期段階であることが明らかとなった。この現象は、線虫の系で我々らが見いだしたコンドロイチンた欠損した初期胚で細胞分裂がうまく進まず多核の細胞が蓄積する現象(Mizuguchi, et al., Nature, 423、443-448,2003)と類似しており、実際、致死となった胚を観察すると多核になっていた。(2)遺伝性多発性外骨腫の発症メカニズムの解明を目指したEXT癌抑制遺伝子ファミリーによるHS鎖の生合成機構の解析:EXT1欠損細胞ではEXT1/EXT2の複合体形成ができないため、HS鎖の重合化は起こらないもの予想されていた。しかし、EXT1欠損細胞であるgro2C細胞においてもHS鎖が合成されており、その合成量は野生型の細胞株であるL細胞の約10分の1程度に低下し、その鎖長も短くなっていた。また、gro2C細胞ではEXT1が欠損しているにも関わらずHS鎖が合成されているのは、EXT2とEXTL2によるものであることが明らかとなった。本年は、特に以下のテーマに関する結果を得た。(1)軟骨形成不全症や動脈硬化症の解明を目指したコンドロチン硫酸鎖の生合成機構の解析最近我々は、マウスのL細胞の変異株でコンドロイチン硫酸鎖合成が不全である変異株(sog9)が、コンドロイチン硫酸鎖の生合成に関与するコンドロイチン4-硫酸基転移酵素(C4ST-1)を欠損していることを同定した。このC4ST-1を欠損したマウスは、軟骨形成不全により生後すぐに致死となり、ヘテロ接合体マウスも変形性関節症を発症することが報告されている。現在までに我々は、C4ST-1の発現量によりコンドロイチン硫酸鎖の総量ばかりでなく鎖長も制御されることを明らかにしているが、その制御機構は不明であった。そこで本年度は、C4ST-1がCSの合成に関わる酵素と共同でCSの鎖長を制御する可能性を検討した。その結果、C4ST-1はコンドロイチンGalNAc転移酵素-2(ChGn-2)と共同しCSの鎖長を調節することが判明した。また、LDL受容体を欠損したマウスに高脂肪食負荷を行い、動脈硬化の進展に伴うC4ST-1およびChGn-2の発現変化とCSの鎖長の変化を調べたところ、動脈硬化部位においてC4ST-1およびChGn-2の発現が亢進し、糖鎖長が伸張し、脂質の貯留をきたしていることを明らかにした。我々は世界に先駆けて、ヘパラン硫酸やコンドロイチン硫酸(CS)などの硫酸化グリコサミノグリカン(GAG)鎖の生合成に関与する10種類以上の酵素遺伝子のクローニングを行ってきた。本研究では、これら合成酵素の活性や発現を改変することにより、硫酸化GAG鎖の発現制御機構や機能を明らかにし、その成果に基づく病態の解明と治療のための基盤となる研究を行う。(1)軟骨形成不全症の病因の解明を目指したコンドロイチン硫酸鎖の生合成機構の解析

我々は、CS鎖の合成に関与する糖転移酵素の一つであるコンドロイチンN-アセチルガラクトサミン転移酵素-1(ChGn-1)遺伝子のノックアウトマウスでは、CSの本数が減少し、軟骨形成に異常が見られることを報告した。CSは、N-アセチルガラクトサミン(GalNAc)とグルクロン酸の二糖が数十回交互に繰り返した構造を特徴とするが、ChGn-1はGalNAcを転移する活性しか保持せず、どのようにCS鎖の本数を制御するのかは不明であった。そこで、ChGn-1がCSの合成に関わる硫酸基車転移酵素と共同でCS鎖の本数を制御する可能性を検討したところ、ChGn-1はコンドロイチン4-O-硫酸基転移酵素-2(C4ST-2)と共同でCS鎖の本数を調節することが判明した。(2)骨芽細胞分化におけるCS鎖の機能解析CS鎖は、骨芽細胞分化を調節していることが知られているが、その機構は不明である。そこで、マウス頭蓋骨由来細胞株MC3T3-E1細胞を用いて、骨芽細胞分化におけるCS鎖の機能解析を行った。その結果、GalNAcの4位と6位が共に硫酸化された構造を多く含むCS-Eと呼ばれるCS鎖が、MC3T3-E1細胞上に存在する細胞接着分子であるN-cadherinやcadherin-11に特異的に結合することにより、ERKやSmadシグナル伝達を調節し、骨芽細胞分化を促進することが判明した。
日本古代における漢籍の伝来時期に関する研究

日本古代に伝来した漢籍の伝来時期を明らかにし、その受容と影響を考察する研究を行った。最も大きな成果としては、『日本国見在書目録』と中国隋・唐の宮廷図書目録の対比により、どの時代に写された漢籍なのかを特定し、その伝来時期を推定するという研究手法を開発し、これまで未解明であった隋代の書籍の日本への流入状況を明らかにすることができたということがある。また、この研究における基本史料である『日本国見在書目録』の史料的性格を明らかにする研究も行うことができたし、伝来漢籍の全体像を俯瞰する概説をまとめることもできたし、『晋書』という唐代に編纂された漢籍(史書)の写本調査の結果をまとめることもできた。本年度の研究活動と成果は、以下の通りである。1.研究会の実施12015年10月3日1518時(於:大正大学歴史学科)会田大輔氏「『帝王略論』と南朝史書」、22016年3月11日1518時(於:大正大学歴史学科)。以上、2回の研究会を実施した。日本古代に伝来した漢籍に関する最先端の研究を講演して頂く研究会を開催し、研究テーマに関わる情報交換・意見交換を行った。2.漢籍写本の調査12016年2月12日1517時(於:九州国立博物館)、重要文化財「晋書零巻」の写本調査を行った。これまであまり研究されていない本文書の実見調査を行うことにより、古代に伝来した『晋書』の写本である手がかりをつかむことができた。現在、論文化に向けて、関連情報の収集・整理にあたっている。3.招待講演12016年2月13日1316時半(於:九州国立博物館)「「神宿る島」宗像・沖ノ島関連遺産群世界遺産推薦記念講演会」(主催福岡県)において「遣隋使・遣唐使と古代日本の対外交流」というテーマで講演を行った。4.論文執筆と公刊1『隋書』經籍志の研究を遂行し、間もなく論文が完成する予定である。本研究の中核的な内容となる論文であり、完成後、『東洋史研究』に掲載される予定である。これ以外に、古代日本における異文化コミュニケーション、唐代の漢籍『唐六典』の編纂、というテーマでも単行本所収の論文を執筆し、間もなく公刊される予定である。また、書評論文1本も投稿中である。2本年度中に公刊された論文は、別紙に記したように単行本所収論文3本、書評論文1本、学会報告批判論文1本であった。本年度予定していた研究活動の8割程度は実行・実施することができたので、おおむね順調に進展していると判断した。1.研究会の開催12017年2月25日(土)1518時、大正大学で開催し、江川式部氏に「唐代礼書の系譜」というテーマで講演して頂き、その後参加者による質疑応答・議論を行い、漢籍研究の最新成果を共有することができた。2.漢籍写本の調査1国会図書館所蔵の北平図書館本『唐会要』のマイクロフィルムを調査し、修撰関係記事の確認を行った。現行本の武英殿聚珍版本の誤脱を修正しうることを確認した。2先年行った九州国立博物館蔵「晋書零巻」の史料調査の不備を補うため、画像データ交付を申請し、受領した画像データで史料調査を再実施した。3.招待講演12016年10月12日(水)開催の学内学術研究発表会(大正大学)において、「比較の視点」という演題で、当研究で行っている宮廷目録の比較研究の概要と意義について講演した。22017年1月28日(土)に開催された鞠智城2016東京シンポジウム(熊本県主催、於明治大学アカデミーコモン(東京都千代田区))において、「東アジア世界の変貌と鞠智城」という題で、漢籍伝来の背景としても重要な9世紀前後の国際環境について講演した。4.研究成果の取りまとめ1古代日本における異文化接触に関して、文字(書籍)文化も含め、コミュニケーションのあり方について論じる研究を行った(論文入稿済み)。2漢籍の表現が日本の史書の記載に取り入れられた際の、言葉と意味のズレの問題を、「奴婢」と「やつこ」を具体例として論じる研究を行った(論文入稿済み)。3現存最古の漢籍目録である『日本国見在書目録』の成立時期とその性格を論じるにあたり、重出書の問題について検討する研究を行った(刊行済み)。4九州国立博物館蔵「晋書零巻」と標点本の違いについて検討する研究を継続中である。5鞠智城を視点にして、9世紀前後の国際環境の変化とその意義を明らかにする研究を行った(発表済み)。家族介護の必要が急に出来し、研究時間を削減しなければならない状況が続いた。また、遠方地への調査出張が行えない期間が長くなってしまった。しかし、自宅でできる作業・研究を集中的に行うことで、予定よりも研究が進んだ部分もあった。日本古代における漢籍伝来時期を明らかにするために、最終年度に行った研究内容とその成果を以下に列挙する。1.書籍目録の研究漢籍伝来時期を明らかにする上で一番鍵となる史料が書籍目録であり、『隋書』経籍志と『日本国見在書目録』という日中双方で最も重要な書籍目録の史料的な性格を明らかにすることができた。

本研究の中心的な成果であり、それぞれ「中日書目比較考」、「『日本国見在書目録』に見える重出書について」という論文にまとめ、学術雑誌に発表した。2.伝来漢籍の写本調査九州国立博物館所蔵「晋書零巻」の写本調査の結果を、研究会で発表後、「九州国立博物館蔵「晋書列伝第五十一零巻」について」という論文にまとめ、現在投稿中である。「晋書零巻」の史料的な性格を明らかにすると共に、旧所蔵者により分断された僚巻との関係についても論じた。3.漢籍伝来状況の概観日本古代の各時期にどのような漢籍が舶載・伝来されたかについて、概観する研究を行った。「将来された書物」という題で研究論文集に寄稿した。本研究の全体像を示すことができた、と考えている。4.漢籍受容の研究いつどのような漢籍がもたらされ、それがどのように受容され、日本の文化・社会に如何なる影響を及ぼしたか、について研究を行った。その成果は、「「国風文化」における「漢」と「鄙」」という論題で学会シンポジウムで発表したほか、「中国の法・制度の受容」という論文にまとめ投稿中である。前者は、平安時代中後期にもたらされた漢籍が「国風文化」に与えた影響について論じている。後者は、法律書が古代日本にどのように受容されたか、法制度形成の問題として論じたものである。日本古代に伝来した漢籍の伝来時期を明らかにし、その受容と影響を考察する研究を行った。最も大きな成果としては、『日本国見在書目録』と中国隋・唐の宮廷図書目録の対比により、どの時代に写された漢籍なのかを特定し、その伝来時期を推定するという研究手法を開発し、これまで未解明であった隋代の書籍の日本への流入状況を明らかにすることができたということがある。また、この研究における基本史料である『日本国見在書目録』の史料的性格を明らかにする研究も行うことができたし、伝来漢籍の全体像を俯瞰する概説をまとめることもできたし、『晋書』という唐代に編纂された漢籍(史書)の写本調査の結果をまとめることもできた。今後の研究課題の推進策であるが、研究会の開催をしっかり計画的・定期的に行うこと、漢籍の写本調査にあたっては事前準備を十分行った上で早めに実施するようにすること、講演会など研究成果の社会への還元の機会があれば積極的に応じること、最終的に単行本にまとめることを想定して論文の執筆に努力すること、などを考えている。1.研究会の開催回数の増加により、最新の漢籍研究の成果をより積極的に取り入れる。2.漢籍の写本調査としては、新たに真福寺など名古屋近辺の所蔵機関を加え、唐鈔本・旧鈔本の調査を充実させる。3.陸善経など特徴的な撰者を取り上げ、漢籍伝来の具体相を検討する。4.『日本国見在書目録』の書目としての性質を明らかにするため、書籍情報の特徴を再検討する。5.社会への成果還元のため、依頼講演にはできるだけ応じるようにしたい。日本古代史
ミツバチ脳で新規に発見された「中間型」ケニヨン細胞のダンス言語における機能解析

ミツバチ脳のキノコ体を構成するクラスIケニヨン細胞は、大型・中間型(mKastを発現)・小型の3つに分類される。本研究では、これらサブタイプの機能と進化の解析を行った。1)その結果、mKastは成虫の様々な脳機能に関与することを示唆した。2)世界で初めて、ミツバチでゲノム編集法を確立した。3)ケニヨン細胞サブタイプは、原始的なハバチ(1つ)から、寄生性のコマユバチ(2つ)、スズメバチ・ミツバチ(3つ)と増えており、行動進化と相関する可能性がある。本研究成果は中間型ケニヨン細胞の生理機能の理解だけでなく、神経生物学一般の進展にも寄与する、国際的にも重要な知見である。ミツバチは尻振りダンスにより、仲間に餌場の位置に関する情報を伝えるが、その分子・神経基盤には不明な点が多い。申請者らは最近、ミツバチ脳の高次中枢であるキノコ体が、従来考えられていた、大型と小型のケニヨン細胞に加えて、その境界域に存在し、mKastを発現する新規な「中間型」ケニヨン細胞で構成されることを発見した。また、初期応答遺伝子を用いた解析から、採餌蜂では小型と「中間型」ケニヨン細胞の一部が興奮していることを発見した。このことは、採餌飛行時の感覚情報処理に、小型と「中間型」の2種類のケニヨン細胞が関与することを示唆する。本研究では主にこの「中間型」ケニヨン細胞の機能、分化、進化の解析を通じて、ダンス言語の分子・神経基盤の一端を解明することを目的とした。平成26年度は「中間型」ケニヨン細胞の神経投射を解析する目的でmKastに対する特異抗体を用いた蛍光抗体法を行い、脳内の特定の部域にmKastが局在することを示した。また、ミツバチでの遺伝子機能解析に向けて、ミツバチ胚を用いてCRISPR/Cas9法を試みたところ、ミツバチ胚でもゲノム編集が起きることを見いだした。一方、以前から、ミツバチと哺乳類に共通な分子・神経機構が存在するかを検証する目的で、大型ケニヨン細胞選択的転写因子Mblk-1のマウスホモログMlr (Mblk-1-related protein-1)-1と2の解析を進めてきたがが、今年度は、Mlr-1と2が、それぞれNOL4 (nucleolar protein 4)の異なるスプライスバリアントと相互作用することで、その転写活性が正または負に制御されることを示し、組織毎にMlr-1と2が異なる転写調節を受けることを示唆した。[Takayanagi-Kiya, Misawa-Hojo et al., Zool. Sci. (2014)]。ミツバチは社会性昆虫であり、尻振りダンスで餌場の情報を仲間に伝える等、高度な社会性行動を示す。従来、ミツバチ脳の高次中枢であるキノコ体は異なる遺伝子発現プロフィルをもつ3種類(クラスI大型と小型、クラスII)のケニヨン細胞から構成されると考えられてきた。しかし、申請者らは、mKastと命名した遺伝子が選択的に発現するクラスI中間型ケニヨン細胞を同定し、ミツバチのキノコ体が4種類のケニヨン細胞から構成されることを示した[Kaneko et al. PLoSONE (2013)]。採餌蜂では小型ケニヨン細胞と一部の中間型ケニヨン細胞が活動する。そこで本研究では、mKastを中心に、ケニヨン細胞の各サブタイプ選択的に発現する遺伝子を用いて、これら遺伝子の機能解析を進めると共に、各サブタイプが変態のどの段階で誕生し、ハチ目昆虫の進化のどの段階で獲得されたか検討することを目的とした。今年度は、大型ケニヨン細胞選択的に発現する遺伝子3種類の遺伝子(PLCe, Syt14, dlg5)について幼虫、蛹、成虫脳での発現を調べたところ、PLCeが全ての段階で発現したのに対し、Syt14とdlg5は成虫でのみ発現することが判明し、幼虫と成虫のキノコ体が異なる機能をもつことを示唆した[論文投稿中]。社会性進化の段階が異なるツチバチ(単独性、縄張りをもつ)とスズメバチの脳での発現解析は現在進行中である。さらにmKastも成虫脳でのみ発現することを示すと伴に、蛍光抗体法により、mKastがキノコ体の他、視葉や触角葉、食道下神経節の一部のニューロンに局在することを示し、mKastの脳内での多機能性を示唆した[論文投稿中]。またローヤルゼリータンパク質遺伝子(mrjp1)を標的としたゲノム編集法により、mrjp1をノックアウトしたミツバチ(雄蜂)の作出に世界で初めて成功した。平成27年度の最大の研究成果は、ミツバチで初めてゲノム編集法による遺伝子ノックアウト技術を確立したことである[Zool. Sci. in press (2016)]。これまで我々のグループを含め、世界の幾つかのグループが、ミツバチの社会性行動や高次脳機能に働く候補遺伝子を同定してきたが、簡便で有効な逆遺伝学的手法がなかったため、その生体機能は不明であった。本法の確立により、ミツバチ遺伝子の生体機能解析が初めて可能になった。国際的にもミツバチ生物学のレベルを一段向上させる成果と言える。またミツバチ成虫のキノコ体が幼虫と一部、共通な分子的性質(PLCeの選択的発現)をもつものの、成虫固有な性質(Syt14とdlg5, mKastの選択的発現)をもつことが示された。

Syt14とdlg5の発現は大型ケニヨン細胞、mKastの発現は中間型ケニヨン細胞固有な性質であることが判明した。さらに、mKastが成虫脳のキノコ体の他にも、視葉、触角葉、食道下神経節の一部の神経回路に局在することを見いだし、これら神経回路が社会性行動に関わる可能性を指摘した(2報の論文として伴にPLoSONE誌に投稿中)。ミツバチの社会性行動は成虫に見られるため、ゲノム編集法を用いた研究の対象とする遺伝子は、発生段階で機能しないことが望まれる。この点でも、Syt14とdlg5、mKastはゲノム編集法の標的遺伝子として適している。今年度はこの他に、ミツバチ働き蜂の分業に伴う生理状態変化をエクダイソンと幼若ホルモンが協調的に制御することを見いだし、論文発表した[Ueno et al., PLoS ONE (2015)]。また北海道大学の渡邊崇之博士が独自にクラスIIケニヨン細胞選択的に検出される抗原を同定され、共著論文として発表した[Watanabe & Kubo, Biophysics (2015)]。ミツバチ脳の高次中枢(キノコ体)を構成するケニヨン細胞は、細胞体の位置と大きさ、遺伝子発現プロフィルにより、クラスI大型・中間型・小型とクラスIIの4つに分類できる[Kaneko et al. (2012)]。本研究では、これら4つのサブタイプ、特にmKastが選択的に発現する中間型ケニヨン細胞について、その生理機能と進化を調べることを目的とした。1)mKastは蛹後期から発現し、脳特異的に発現した。mKastタンパク質はキノコ体の他、視葉や触角葉、食道下神経節の一部の神経細胞にも局在し、成虫の様々な脳機能への関与が示唆された[Yamane et al. (2017) in press]。2)逆遺伝学による遺伝子機能解析を目的として、ミツバチでCRISPR/Cas9によるゲノム編集法の確立を試みた。その結果、働き蜂下咽頭腺で特異的に発現するローヤルゼリータンパク質1 (MRJP1)遺伝子を欠失した雄蜂の作出に、世界で初めて成功した。mrjp1は雄蜂の正常発生には可欠であった[Kohno et al. (2016)]。3)ミツバチで見られる3つのクラスIケニヨン細胞サブタイプが、ハチ目昆虫の進化のいつ獲得されたか調べるため、原始的なハバチ、寄生性のコマユバチ、真社会性のスズメバチ、ミツバチに近縁で営巣するが社会性はもたないツチバチの4種について、キノコ体の遺伝子発現プロフィルを調べた。その結果、サブタイプはハバチで1つ、コマユバチで2つ、スズメバチ以降で3つに増えたことが判明した。サブタイプの増加は、ハチ目昆虫の行動進化と相関する可能性がある。本研究成果は中間型ケニヨン細胞の生理機能の理解だけでなく、神経生物学一般の進展にも寄与する、国際的にも重要な成果である。本研究ではこの他、関連する原著論文を2報、総説を3報発表し、十分な研究成果が得られたと判断している。ミツバチ脳のキノコ体を構成するクラスIケニヨン細胞は、大型・中間型(mKastを発現)・小型の3つに分類される。本研究では、これらサブタイプの機能と進化の解析を行った。1)その結果、mKastは成虫の様々な脳機能に関与することを示唆した。2)世界で初めて、ミツバチでゲノム編集法を確立した。3)ケニヨン細胞サブタイプは、原始的なハバチ(1つ)から、寄生性のコマユバチ(2つ)、スズメバチ・ミツバチ(3つ)と増えており、行動進化と相関する可能性がある。
ヒト免疫細胞グルカン受容体を用いたハイスループット免疫賦活作用評価法の開発と応用

ヒト免疫細胞グルカン受容体をカイコ-バキュロウイルス発現系により融合タンパク質として発現させ、その結合特異性を解析した。この組換えグルカン受容体は特異的にある種のグルカンに結合したが、他の糖質には結合しなかった。このグルカン結合は可溶性グルカンであるラミナリンやラミナリオリゴ糖によって阻害されたが、他の糖質では阻害されなかった。さらにヒトのグルカン受容体の首ドメインとオリゴ糖鎖はリガンド結合活性や結合特異性に影響を与えなかった。これらの結果は、本組換えヒトグルカン受容体が厳密な結合特異性を有するため、生体内のリガンドや免疫賦活糖質の同定のためのプローブとして有用であるということを示唆している。組換えヒト免疫細胞β-グルカン受容体(アイソフォームAとB)をカイコ-バキュロウイルス発現系により大量発現させ、ニッケル-キレート樹脂を用いたアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。これら2つの組換えヒトβ-グルカン受容体は、それぞれの細胞外領域のN末端側にヒスチジンタグが付加された構造を有しており、可溶性タンパク質としてカイコ体液に分泌された。アイソフォームAの細胞外領域は首領域とC型レクチン様ドメインから成り、アイソフォームBの細胞外領域はC型レクチン様ドメインだけから成る。すなわち、アイソフォームAとBの違いは細胞外領域の首領域の有無だけである。ヒトβ-グルカン受容体ではアイソフォームAだけに存在する首領域にオリゴ糖鎖が付加されており、細胞表面における発現に対して重大な影響を及ぼすことが知られている。ヒトβ-グルカン受容体の首領域とオリゴ糖鎖の機能の解明を目的として、これらの組換えタンパク質のグルカン結合特異性を解析した。その結果、ヒトβ-グルカン受容体のアイソフォームAとBのグルカン結合特異性には違いはなく、首領域とオリゴ糖鎖はグルカン結合特異性には影響を与えないことが明らかとなった。組換えヒト新規β-グルカン受容体をカイコ-バキュロウイルス発現系により大量発現させ、ニッケル-キレート樹脂を用いたアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。この組換えヒトβ-グルカン受容体は細胞外領域のN末端側にヒスチジンタグが付加された構造を有しており、可溶性タンパク質としてカイコ幼虫体液に分泌された。この細胞外領域は首領域とC型レクチン様ドメインから成り、C型レクチン様ドメインにオリゴ糖鎖が付加していることが知られている。本組換えタンパク質では2つのグリコフォームの存在が確認された。このヒト新規β-グルカン受容体のグルカン結合特異性を解析した結果、従来のヒト免疫細胞β-グルカン受容体のグルカン結合特異性と類似してはいるが、それとは異なる特徴的なグルカン結合特異性を有することが明らかとなった。また、オリゴ糖鎖の違いはグルカン結合特異性に影響しないことも明らかとなった。さらに従来のヒト免疫細胞β-グルカン受容体のGFP融合タンパク質を作製し、それを用いたアッセイ系も確立した。様々なタグを有する組換えヒトβーグルカン受容体をカイコーバキュロウイルス発現系により発現させ、アフィニティー精製を行った。これらの組換えタンパク質を用いて、βーグルカン結合特異性を解析するためのインビトロ結合アッセイ系を確立し、食品中の免疫賦活糖鎖のスクリーニングへの応用を試みた。N末端側にヒスチジンタグを有する組換えヒトβーグルカン受容体は厳密なβーグルカン結合特異性を有し、ヒトβーグルカン受容体の細胞外領域に存在する首領域およびオリゴ糖鎖は結合活性および結合特異性に影響を与えないことが明らかとなった。また、タグの種類や位置はヒトβーグルカン受容体の結合活性や結合特異性にあまり影響を与えないことも明らかとなった。これらの組換えヒトβーグルカン受容体を用いたインビトロ結合アッセイ系は免疫賦活剤や機能性食品の開発に応用できる可能性があることが示唆された。最終年度において、ヒトβーグルカン受容体のGFP融合タンパク質の発現・アフィニティー精製・機能解析を行った。この組換えタンパク質はN末端側にGFPタグを有し、ヒトβーグルカン受容体の細胞外領域に存在する首領域およびC型レクチン様ドメインから成っている。このGFPーヒトβーグルカン受容体は可溶性タンパク質として発現・精製され、他のタグを持つ組換えヒトβーグルカン受容体と同様に厳密なβーグルカン結合特異性を示した。このGFP融合タンパク質を用いたインビトロ結合アッセイ系では蛍光を測定するだけで結合活性を評価できるため、簡便・迅速・安価・高感度で定量性に優れたβ-グルカン結合特異性の解析法および免疫賦活糖鎖のスクリーニング法を開発したことになる。

本研究では、ヒトβ-グルカン受容体の結合特異性を解明し、食品成分の科学的なハイスループット免疫賦活作用評価法の開発に応用することを目的としており、これまでにカイコ-バキュロウイルス発現系における可溶性組換えヒト新規β-グルカン受容体の作製とグルカン結合特異性の解析に成功している。また、従来のヒトβ-グルカン受容体のGFP融合タンパク質の作製と機能解析も進行している。生物化学ヒト新規β-グルカン受容体のGFP融合タンパク質を作製し、簡便・迅速・安価・高感度の定量的なグルカン結合特異性の解析方法を開発して食品成分の免疫賦活作用評価法に応用する。本研究では、ヒトβ-グルカン受容体の結合特異性を解明し、食品成分の科学的なハイスループット免疫賦活作用評価法の開発に応用することを目的としており、これまでにカイコ-バキュロウイルス発現系における可溶性組換えヒトβ-グルカン受容体の作製とグルカン結合特異性の解析に成功している。また、新規ヒトβ-グルカン受容体の組換えタンパク質の作製と機能解析も進行している。当初の計算よりも5円安くなったため。ヒトβ-グルカン受容体のGFP融合タンパク質を作製し、さらに簡便・迅速・安価・高感度の定量的なグルカン結合特異性の解析方法を開発し、食品成分の免疫賦活作用評価法に応用する。また、新規ヒトβ-グルカン受容体の機能解析を進め、ヒトにおける新たな免疫賦活作用のメカニズムを明らかにする。試薬の購入費の一部に充当する。
癌の浸潤・転移に関与するヘパラナーゼ及び血管新生調節因子アンジオモジュリンの研究

癌細胞が組織へ浸潤、転移していく際には、癌細胞の分泌するヘパラナーゼによって基底膜のヘパラン硫酸(HS)が分解される過程が含まれる。ヘパラナーゼがHS鎖中のβ-D-グルクロニド結合を特異的に分解することは分かっていたが、詳細な基質特異性はまだ明らかになっていない。そこで、ヒトヘパラナーゼの基質特異性を調べた。発現ベクターにヒトヘパラナーゼcDNAを組み込み、リポフェクション法によりヒトメラノーマ細胞A375Mに導入し、発現させたヘパラナーゼをアフィニティークロマトグラフィーで精製した。精製ヒトヘパラナーゼを、ヘパリン(Hep)及びHSから調製した様々な構造の硫酸化オリゴ糖約20種類に作用させ、消化物をポリアミンカラムを用いたHPLCで分析を行った。構造の違いによる感受性の違いを、消化率によって定量化し、作用のために必須の構造、また作用しやすい構造、作用しにくい構造を推定した。その結果、グルクロニド結合の周辺が高硫酸化されたオリゴ糖ほど、より分解を受けやすいことがわかった。また、分解部位近傍にグルコサミン3硫酸構造が存在すると、分解を受けにくくなることがわかった。一方、アンジオモジュリン(AGM)は腫瘍組織の血管基底膜に特異的に存在する細胞接着タンパク質で、癌性血管の新生を調節する活性を持つことが知られている。これまでに、HSとの相互作用がAGMの搬能発現に重要であることが証明されている。今年度、AGM中のHep/HS結合部位のアミノ酸配列を含むペプチドを化学合成し、アフィニティーカラムを作成した。様々な組織に由来するHep/HSを、高親和性画分と低高親和性画分に分画し、両画分の構成二糖組成を比較した。その結果、ある特定の硫酸基だけが親和力に特に貢献しているわけではなく、AGMとの相互作用にはHS上のある特別な硫酸化配列が重要である可能性が示唆された。
近代国家における文化政策史の比較研究：昭和期日本と韓国・欧米

本研究は、「独特な日本文化」というような、日本文化を他国・他文化から切り離して捉える見方に挑戦し、日本文化政策史をトランスナショナルな文脈から再考する。一方で日本は、戦時期には欧州の文化政策の方法論を受容し、占領期にはアメリカの文化的浸透と競う中で、自国文化に対する自信を高揚させてきた。他方、高度成長期には、自らの文化政策の経験を解放後の韓国に教示してきた。本研究は、一見、一国にユニークな現象に見える「文化」というものが実は他国との関係から「政策」として形作られていくものであることを明らかにする。本研究は、日本文化政策史をトランスナショナルな文脈から再考し、一国に独特な現象に見える「文化」というものが実は他国との関係から「政策」として形作られていくものであることを明らかにする。本年度に実施したことにおいては、植民地から独立した韓国が国家再建の中で戦後日本の文化政策の方法論を導入してきた歴史的過程を研究することに集中した。このためまずは、韓国で資料収集を行った。国会図書館には、朴正煕大統領時代の文化政策資料(演説文、報告書、政府刊行書)などが多数所蔵されている他、全斗喚時代の政策に関する資料、映像などをも閲覧できるので、これらを利用した。ただし、政策だけでなく、当時の国民が軍事政権の政策をどう受け取ったのかという、政策と民族主義との関係や、社会認識の面についても調査を行うことにした。このため、韓国文化芸術振興院より発行されている『月報文芸振興』を調査し、演劇、映画、文学、歌、広告、娯楽政策報告書などの資料を収集・分析した。なお、日韓政策比較調査を行い、韓国の文化政策に影響を与え、助言を提供した日本人政治家、思想家、文化政策担当者、芸術家のエッセイなどを調査した。さらに、The Social Science and Historical Association(アメリカ)とEast Asia Institute(韓国)に参加し、最新の研究動向を把握するとともに、申請者の研究に対する適切なコメントを求めた。上記の調査をもとにした、戦後日本の文化政策と韓国へのその影響についての成果を英文雑誌(The Journal of Korean Studies)から出版することができた。以下は、H23年度に実施した研究成果の概要である。まず、主な成果は、単行本(和文)の出版に向かったマニュスクリプトの初稿がほぼ完成したことである。昭和期の中でも占領期・戦後日本の文化政策について焦点を当て、関係文献を分析した。全章の構成や論調、内容については、すでに作業を完了しており、H24年度は、日本語の文面を修正し、本文を脚注や参考文献と照会するなど、さらに綿密な校閲を行う。また、単行本には収まりきらないその他の研究成果を国際学会で口頭発表した。毎年北米で開催されるThe Association for Asian Studiesに参加し、討論者とオーディエンスから大変有益な情報を収集した。同学会の参加者の中には、韓国からの研究者も多く、韓国の学会で発表することを提案された。具体的日程については調整していくが、本研究には、日韓の文化政策の比較の視点も重要な位置を示しており、韓国学界からの意見を得ることも、渡韓の重要な目的である。さらに次のような単行本の出版のための共同研究に参加しているが、本年度はその完成に向かった執筆活動を引き続き行う。こうすることで、個人の研究だけでなく、協力研究者との連携を形成する。(1)朴祥美「コンタクト・ゾーン」「トリックスター」吉見俊哉ほか編『現代社会学事典』凍京:弘文堂、2012年刊行予定)、(2)朴祥美「韓国群山市-日常の歴史を写すミュージアムとしての地方都市-」石田佐恵子外編『ポピュラー文化ミュージアムとは何か-文化の収集・展示をめぐる政治経済-』(東京:ミネルヴァ書房、2012年刊行予定)本研究は、日本文化政策史をトランスナショナルな文脈から再考し、一国に独特な現象に見える「文化」というものが実は他国との関係から「政策」として形作られていくものであることを明らかにする。日本は、戦時期には欧州の文化政策の方法論を受容し、占領期にはアメリカの文化的浸透と競う中で、自国文化に対する自信を高揚させてきた。本研究の目的を達成するため、過去4年間にわたって行った研究調査は、おおむね順調に進展してきた。

たとえば、1単行本の作業、2英文ジャーナルへの投稿、3資料調査、4学会発表など、といった研究活動がバランスよく実行された。最終年度のH25年度には、単行本の初稿に基づいて、出版社の編集者と具体的な刊行年度について日程を見込むことができた。また、韓国、アメリカ、オーストラリアから刊行される査読付英文ジャーナルに複数の論文を投稿してきたが、そのすべての掲載が決まったことは大きな成果といえる。学会発表においては、東京と香港で開かれた国際シンポジウムに参加したが、同学会の参加者の中には、アジア諸国からの研究者が多く、相互意見を得ることができた。同学会では、個人研究の発表を行っただけでなく、討論者としても参加し、関連分野の研究者の成果について協力を行った。これからまたさらに本研究を深めていくための計画を立てる予定である。本研究は、日本文化政策史をトランスナショナルな文脈から再考し、一国に独特な現象に見える「文化」というものが実は他国との関係から「政策」として形作られていくものであることを明らかにする。日本は、戦時期には欧州の文化政策の方法論を受容し、占領期にはアメリカの文化的浸透と競う中で、自国文化に対する自信を高揚させてきた。他方、高度成長期には、自らの文化政策の経験を解放後の韓国に教示してきた。こうした研究目的を単行本に収める作業を続けてきたが、H24年度には、マニュスクリプトの初稿を出版社に提出したことができた。すでに出版社の編集者と面談を終え、その企画にむけている。本年度は、過去3年間にわたって行った研究調査・マニュスクリプトの作成をもとに英文の論文、和文の単行本を完成することにしたい。具体的には下記の通りである。(1)単行本のマニュスクリプトの初稿作成、(2)学会発表、(3)資料調査、(4)共同研究、など、本研究の進展のための研究活動がバランスよく行われてきており、こうした活動をH24年度にも引き続き行いたい。25年度が最終年度であるため、記入しない。1出版社に、単行本(和文)のマニュスクリプト(初稿)を提出、2学会発表、3資料調査、4英文ジャーナルに投稿、5共同研究、など、本研究の進展のための研究活動がバランスよく行われており、こうした活動をH25年度にも引き続き行い、完成に仕上げたい。まずは、単行本(和文)の執筆作業を引き続き行い、出版の完成に持ち上げる。尚、H24年度にも、国際学会に参加できるよう、発表用の論稿を別途、作成する。まずは、単行本(和文)の出版に向かって、編集者と相談しながら、加筆作業を引き続き行い、出版の完成に持ち上げる。また、英文の査読ジャーナル『Asian Studies Review』から、投稿した拙稿が「条件付き掲載」となったとの連絡が届いたので、その修正・校閲を行う。これにおいて必要な、ネイティブによる校閲を行う。学会発表においては、台湾と香港で開かれたシンポジウムに参加し、論文には収まりきらないその他の成果を発表した。同学会の参加者の中には、アジア諸国からの研究者も多く、相互意見を得ることも、学会参加の重要な目的である。H25年度にも、引き続きこうした国際学会に参加する予定である。
極限微生物に由来する多糖分解酵素の構造-活性相関と糖鎖認識機構

好アルカリ性バシラス属細菌41M-1株が生産するキシラナーゼは、反応の至適をアルカリ性領域に有する.本酵素の触媒ドメインはN末端側に位置しており,そのC末端側には機能未知領域が連結している.本重点領域研究では,本酵素のアルカリ性条件における基質認識ならびに触媒反応機構を分子レベルで解明することを目的とする.平成9年度は,本酵素のC末端領域の機能解明と,基質認識ならびに触媒活性に関与するアミノ酸残基の特性を試みた.41M-1株キシラナーゼのC末端機能未知領域を欠失した変異型酵素△JCも活性を保持しており,本酵素のC末端領域は活性発現に必須ではないことがわかった.次に,C末端領域をグルタチオンSートランスフェラーゼに融合したキメラタンパク質GST-JC1を調製した.GST-JC1は不溶性キシランへの結合能を有しており,本酵素のC末端領域はキシラン結合ドメインであると考えられた.不溶性キシランの加水分解反応において,野生型酵素は△JCよりも数倍高い活性を示した.これより,本酵素のキシラン結合ドメインは,不溶性キシランに特異的に結合し,連結している触媒ドメインによる加水分解反応を促進する機能があると考えられた.41M-1株キシラナーゼの触媒活性に関与するアミノ酸残基を特定する目的で,その触媒ドメインにアミノ酸置換を施した変異型酵素を種々調製し,野生型酵素との活性比較を行った.その結果,E93,E183,W18,W86,Y84およびY95にアミノ酸置換を施した変異型酵素において,キシラナーゼ活性の大幅な低下が認められ,これらのアミノ酸残基の活性への関与が示唆された.E93およびE183が触媒残基として,そしてW18,W86,Y84およびY95は基質キシランとの結合に関与しているものと推察した.好アルカリ性バシラス属細菌41M-1株が生産するキシラナーゼは、反応の至適をアルカリ性領域に有する.本酵素の触媒ドメインはN末端側に位置しており,そのC末端側には機能未知領域が連結している.本重点領域研究では,本酵素のアルカリ性条件における基質認識ならびに触媒反応機構を分子レベルで解明することを目的とする.平成9年度は,本酵素のC末端領域の機能解明と,基質認識ならびに触媒活性に関与するアミノ酸残基の特性を試みた.41M-1株キシラナーゼのC末端機能未知領域を欠失した変異型酵素△JCも活性を保持しており,本酵素のC末端領域は活性発現に必須ではないことがわかった.次に,C末端領域をグルタチオンSートランスフェラーゼに融合したキメラタンパク質GST-JC1を調製した.GST-JC1は不溶性キシランへの結合能を有しており,本酵素のC末端領域はキシラン結合ドメインであると考えられた.不溶性キシランの加水分解反応において,野生型酵素は△JCよりも数倍高い活性を示した.これより,本酵素のキシラン結合ドメインは,不溶性キシランに特異的に結合し,連結している触媒ドメインによる加水分解反応を促進する機能があると考えられた.41M-1株キシラナーゼの触媒活性に関与するアミノ酸残基を特定する目的で,その触媒ドメインにアミノ酸置換を施した変異型酵素を種々調製し,野生型酵素との活性比較を行った.その結果,E93,E183,W18,W86,Y84およびY95にアミノ酸置換を施した変異型酵素において,キシラナーゼ活性の大幅な低下が認められ,これらのアミノ酸残基の活性への関与が示唆された.E93およびE183が触媒残基として,そしてW18,W86,Y84およびY95は基質キシランとの結合に関与しているものと推察した.
浅層土壌中のシェルタ-崩壊による溶質の拡がりと蓄積に及ぼす表面蒸発の影響評価に関する基礎的研究

砂層中の液状水が水蒸気に変わる所で溶質の蓄積が生じ、蓄積量は蒸発速度と正の相関関係にある。従って、蒸発が起こる位置と蒸発量の予測が先ずもって大切である。そのために、砂層カラムを用いて、放熱強度および地下水位を種々変えて、砂層中の水蒸気圧分布および温度分布を求めた。地表面が大気と接する、いわゆる開放系の砂層中の水蒸気圧計測は未だなされていない。そのために分布形の抽出は極めて興味深く、実際に水蒸気移動メカニズムを知る上で多くの貴重な情報を与えている。水蒸気圧は直接求められないので、相対湿度と温度を同時計測することにより算定された。また、現在温風下の蒸発実験を行なっており、これについてはデ-タの収集段階である。これまでに得られた結果を列挙する。(1)水蒸気圧の最大値は毛管フリンジ付近に現われ、地表に向って値は減少し、下方(地下水面)に向って増大する。すなわち、乾燥帯では水蒸気圧勾配は負(上向き正)となり、毛管帯では正となる。(2)ガス圧は乾燥帯および毛管帯を通じてほぼ大気圧に等しく、水蒸気移動に及ぼすガスの移流効果は無視できる。(3)乾燥帯中の水蒸気圧分布は直線的であり、水蒸気圧勾配と蒸発量は正比例する。
単一荷電高分子鎖のダイナミクスにおける内部摩擦の効果

生体内ではDNAや蛋白質など溶液中で帯電した高分子鎖(荷電高分子鎖)が,一分子レベルでダイナミックに変形し反応が制御されている.本研究では,荷電高分子鎖の変形時に生じる摩擦の効果を定量的に明らかにすることを目的とし,光ピンセットによる一分子計測の方法を用いて,多価陽イオン存在下で凝縮した一分子DNAの内部摩擦の定量化を行った.理論モデルに基づく考察から,凝縮DNA伸長時に生じる内部摩擦が,凝縮相-非凝縮相間の2状態遷移過程で生じていることを明らかにした.生体内ではDNAや蛋白質など溶液中で帯電した高分子鎖(荷電高分子鎖)が,一分子レベルでダイナミックに変形し反応が制御されている.本研究では,荷電高分子鎖の変形時に生じる摩擦の効果を定量的に明らかにすることを目的とし,光ピンセットによる一分子計測の方法を用いて,多価陽イオン存在下で凝縮した一分子DNAの内部摩擦の定量化を行った.理論モデルに基づく考察から,凝縮DNA伸長時に生じる内部摩擦が,凝縮相-非凝縮相間の2状態遷移過程で生じていることを明らかにした.DNAは生体内で階層的に折れ畳まれており、遺伝子発現や複製時には凝縮構造がほどかれる。高分子鎖の変形に対し、いかなる要因がいかなる時間スケールで支配的なのか明らかにすることは、高分子物理学のみでなく生物学、生物物理学においても重要な課題である。本研究の目的は、単一荷電高分子鎖に生じる内部摩擦の要因を解明し、鎖のダイナミクスにおける内部摩擦の効果を定量的に明らかにするごとである。光ピンセットを用いて多価陽イオン存在下で凝縮したDNAの一分子伸長実験を行った結果、伸長時のエネルギー散逸が凝縮相の内部摩擦に起因していることを明らかにした。エネルギー散逸の速度依存性の結果をもとに、伸長による力学的脱凝縮過程をKramersタイプの二状態遷移モデルでモデル化し測定結果を定量的に説明できることを示した。さらに、DNAの堅さが状態間の遷移率に強く影響していることを示した。DNA結合蛋白質がDNA上を一次元的に拡散する際には、DNA鎖自身の熱運動及び相互作用を介して生じる実効的摩擦が重要な意味を持つと考えられる。これらを明らかにするため、DNA鎖の熱運動を制御し、DNA及び結合蛋白質の運動を同時観測するための装置の開発を行った。結合物質の観測に金ナノ粒子によるラベルが有効であることを確認し、金ナノ粒子の散乱光及びDNAの蛍光を同時観測するための測定系を構築した。さらに1/30sec程度で実時間画像解析が可能であることを確認した。今年度は,一分子DNAの力学応答とDNA鎖の熱運動を直接観測するため,力学応答及びDNA蛍光像の同時測定系を構築した.光ピンセットを用いてDNAの末端間距離を制御しながらDNAの蛍光像を観測し,両末端が固定化されたDNA鎖の熱揺らぎの大きさを定量化した.その結果,固定末端からの距離とその位置における部分鎖の揺らぎの大きさの関係を得ることに成功した.これにより, DNA凝縮時の核形成頻度を定量的に議論することが可能となる.また,部分鎖の熱揺らぎは, DNAポリメラーゼやRNAポリメラーゼ等のDNA結合蛋白質の運動に影響を及ぼすと考えられる.今後,末端間距離を系統的に変化させた場合のデータを蓄積することで, DNA-蛋白質相互作用におけるDNAの熱揺らぎの影響を定量的に示すことができると期待される.また,原子間力顕微鏡を用いて一分子蛋白質(スタフィロコッカルヌクレアーゼ)の伸長実験を行い,アンフォールディング過程における力学応答を測定した.その結果,力学応答に部分構造のアンフォールディングに対応したピークが現れるとともに,アンフォールディング経路は確率的に変化することを明らかにした.蛋白質の部分構造及び凝縮DNAの力学的アンフォールディングは,ともにKramersタイプの遷移ダイナミクスで議論することができ,アンフォールディング時の張力の増加は,エネルギー障壁を超える際の実効的摩擦力と解釈できる.本研究で得られたDNA及び蛋白質の力学的伸長に関する定量的知見は,荷電高分子鎖のダイナミクスを解明するにあたり,従来のバルク系の測定では得ることのできない知見である.
脳高次機能におけるNMDA受容体チャネルの役割

本研究の目的は、NMDA受容体チャネルが記憶、学習といった脳高次機能に果たす役割を明らかにすることである。NMDA受容体チャネルを構成するサブユニットのうち4種類のεサブユニットが、この受容体のチャネル機能を決定している。そこで、これらのサブユニットを欠損したノックアウトマウスを作成し、各サブユニットの生理機能を固体レベルで解析することにした。本研究期間中に、小脳顆粒細胞に高い発現をするε3サブユニットを欠損したマウスの作成に成功した。これにより、既に作成しているε1、2、4サブユニットと併せて全てのεサブユニットを欠損したマウスを得た。さらに、4種類のεサブユニットを欠損したマウスを掛け合わせて複数のサブユニット欠損マウスを作成した。これらの動物の解析により、以下のようなことが明らかになった。1)ε1、3ダブルノックアウトマウスでは、運動学習に障害があることから、この様な学習にもNMDA受容体が関与していること。2)ε4サブユニット欠損マウスでは、音による驚愕反射が亢進しており、この反射を担う神経回路に何らかの異常が起こっていること。3)プロスタグランジンで誘導されるアロデニアにε1、ε4それぞれのサブユニットが別々に影響することから、脊髄を介する痛み刺激の伝達の調節にNMDA受容体が関与していること。4)同一神経細胞のシナプスによって、存在するNMDA受容体のサブユニットの組成が異なっており、入力ごとにシナプスでのサブユニットの存在を選別する機構が細胞内にあること。本研究の目的は、NMDA受容体チャネルが記憶、学習といった脳高次機能にはたす役割を受容体を構成するサブユニットと形成される受容体の機能という面から明らかにすることである。そのために、NMDA受容体チャネルを構成し、その生理的特性を決定しているεサブユニットを欠失したマウスを標的遺伝子組換えにより作成し解析を行なうことを計画した。本年度は、小脳顆粒細胞に高い発現をするε1、2、4、サブユニットと合わせて全てのサブユニットをノックアウトしたマウスを得た。ε3サブユニットのノックアウトマウスの作成に成功した。この結果、既に作成しているε3サブユニット欠損マウスは、予想に反して形態的にも、行動学的にも異常は認められなかった。そこで、ε1とε3サブユニット両者を欠損マウスを作成して検討をおこなった。このマウスでは、軽い運動障害が観察されたが、大きな形態的な異常は認められなかった。小脳を中心とした電気生理学的な解析は現在進めている。また、ε4サブユニット欠損マウスでは、自発運動量の減少を見出し既に報告しているが、新たに音による驚愕反射が亢進していることが明らかにした。また、この亢進は、ε1とε4サブユニット両者を欠損したマウスではより大きくなることも明らかになった。これらの解析を進めることにより、εサブユニットの生理機能を明らかにしていく予定である。そこで、これらのサブユニットを欠損したノックアウトマウスを作成し、各サブユニットの生理機能を個体レベルで解析することにした。この結果、既に作成しているε1、2、4サブユニットと併せて全てのεサブユニットを欠損したマウスを得た。2)ε4

サブユニット欠損マウスでは、音による驚愕反射が亢進しており、この反射を担う神経回路に何らかの異常が起こっていること。3)プロスタグランジンで誘導されるアロデニアにε1、ε4それぞれのサブユニットが別々に影響することから、脊髄を介する痛み刺激の伝達の調節にNMDA受容体が関与していること。4)同一神経細胞のなかで、入力によりシナプスに存在するNMDA受容体サブユニットの組成が異なっており、細胞内にシナプスごとにサブユニットを選別する機構があること。
女乗物に用いられた漆芸技法の研究-大型の大名調度品における江戸のモノづくり-

本研究は、平成16年度から平成17年度にかけて行う、文部科学省科学研究費補助金特定領域研究『江戸のモノづくり』の公募研究『女乗物に用いられた漆芸技法の研究-大型の大名調度品における江戸のモノづくり-』で行う研究である。また、本研究は、平成14年度から15年度に行ってきた文部科学省科学研究費補助金特定領域研究『江戸のモノづくり』の公募研究『江戸期における「乗りもの」の研究-大名駕籠を中心とした江戸のものつくり-』の成果を受けて行うものである。本年度は、研究の集大成として成果をまとめることに終始し、東海大学学位論文『女乗物の発生経緯とその装飾性に関する研究』を刊行した。ここでは、女乗物の発生経緯として、まず駕籠の発生起源には、□輿の系統を受けたものと車、輿からの変遷を受けたもの2系統があることを明らかにし、女乗物は車、輿の系統となる駕籠の一種であるとした。また、女乗物の装飾性については、使用者の身分を表象するものであり、使用する大名家の家格に応じて使い分けがなされていることを明らかにし、この装飾性の使い分けの事例として、蒔絵粉の内、梨子地粉については輿の使用が許された大名家が用い、総梨子地仕上げのものは、徳川御三家以上の家格にのみ許されていたことを指摘した。また、装飾画の内容については、徳川家のものには源氏物語が、それ以外の大名家のものには花鳥画が描かれることを指摘した。なお、本成果の一部は、特別展「みんぱくキッズワールド:おこどもとおとなをつなぐもの」のコーナーの一部として展示を行い、その概要を図録に掲載した。本年度は、大名家の家格による女乗物の装飾性の違いについて重点的に調査を行った。大名家の家格のよる女乗物の装飾性の違いは、外装の蒔絵と内装の装飾画にみることができる。これらの装飾性のなかで、外装の蒔絵からは梨子地粉の使用の有無について大名家の家格を知ることができる。梨子地粉は享保の改革期において定められた奢侈禁止令のなかでもその使用規制が設けられていた蒔絵粉であるが、梨子地粉を女乗物に用いることができた大名家は、大名が用いた乗用具のなかで最高位のものとされた輿の使用が許された大名家に限られていることがわかった。内部装飾画については、一般的な女乗物では花鳥画が描かれているのに対し、徳川宗家、御三家に関わる女乗物には源氏物語の場面が描かれていることがわかった。これらは、女乗物の装飾性が大名家の家格に応じて定められていたことを示すものであると考える。なお、これらの成果については、東京文化財研究所が主催した国際シンポジウム『第28回文化財の保存および修復に関する国際研究集会文化財の非破壊調査法-X線分析の最前線-』において発表を行った。