hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
環太平洋諸国の小中学校における日本の視聴覚メディアの導入と国際理解教育の研究

日本の現代については、交通、通信、電子・電気機械、コンピュ-タ-産業、自動車・カメラ産業、建築、スポ-ツ、学校、家庭生活、若者の日常生活、食べ物、余暇の利用、婦人の社会進出、両親と子供の関係、日本の近代化の過程、教育、田園生活、環境問題、文化の保存、東京、旅行、ビジネス生活、新旧生活スタイルなどをあげている。教育委員会の職員や教師たちは、日本の急速な、社会、文化、経済、科学技術の変化に注目し、日本人の現代の生活様式の変化に関する視聴覚教材に関心をもっていることがわかった。画面については、カラフルで、美しく、自然と人間の調和があり、言葉少なく、適切な英語で興味・関心を持続するものがよい、という意見が多かった。武村重和は、オ-ストラリアのカンベラとメルボルンで教育関係者や一般人にインタビュ-を行い、国際理解の教育で視聴覚教材の編集の視点を導き出すことに努めた。その結果、(1)自然、歴史、社会、文化、生活、言語、宗教、価値観などの自国と他国の違いの理解と尊重、(2)国家間の対立・環境汚染、人口増加、富の遍在、などの国際問題の把握と解決への協力参加、(3)国際化によるコミュニケ-ションと交流の活性化、(4)貿易等による相互依存関係と共存の認識、(5)平和、自由、平等、人権、正義、人類愛などの世界共通の思想や地球共同社会という世界意識の育成に関する教材こそが、国際理解に通じるという視点を得た。溝上泰らの社会班は、ニュ-ジ-ランドの1017歳の児童・生徒及び小・中学校の教師を対象に、日本で作成された市民生活、歴史や伝統文化、生活様式などを中心に日本の都市・広島市の社会生活を紹介するビデオ教材を視聴させ、日本学習に関する経験の有無とその内容、ビデオ教材に関する興味・関心の程度とその内容、異文化理解に関する実態、日本学習に求める内容と方法などを調べる調査を行い、解答を得た。調査の集計結果に基づいて、児童・生徒及び教師はどのような日本学習を求めているのか、日本学習に関する教育用教材として何が求められているのか、ニュ-ジ-ランドにおけるニ-ズアナリシスを行った。その結果、日本の歴史、伝統文化、人間生活、日本と海外の国々との関係などの教材化の要請が強く、気候、自然、宗教、観光、産業などの日本の実情については小中学生・教師の間で関心が低いことがわかった。さらに、事実認識やデ-タ・情報の提供だけを意図したものではなく、現状や問題点の背景にある条件や原因を究明するような、また、問題解決のための判断を行うような問いを発見することができる教材の開発を要求した。さらに、貿易や文化やスポ-ツなどの相違点や共通点の両面を取り入れた教材の要請があった。また、日本人の立場から日本の社会や文化を理解させたいという教材が現地に少ないことがわかった。池田秀雄は、海外向けの環境教育用視聴覚教材ソフトを開発する目的で、英語版のビデオ環境教材を持参して、多面的な調査を1115歳の生徒に行った。その結果、特定地域の環境汚染に目を向けることだけではなく、グリ-ンハウス効果、オゾン層の破壊など全地球レベルで理解、ロ-カルな環境問題に各国相互の共通理解の必要、環境破壊や保全の社会的、歴史的背景の理解が重要である。
並行プログラム検証のための型システムとそのオペレーティングシステムの検証への応用

本年度の成果は1.デッドロック検証のための型システム、2.メモリ解放の正しさを検証するための型システムの二つである。1については、博士論文の成果であるデッドロック検証の型システムを整理し、論文として発表した。本型システムはロックへの破壊的代入が可能な参照と、入れ子構造でないロック獲得/解放プリミティブが扱える点で新規性がある。多くのプログラムがこの二つのプリミティブを用いて記述されているので、本研究はそれらのプログラムのデッドロック検証を扱う手法を提案した点で重要である。本型システムにおいては、ロックを解放する「義務」を線形型で、ロックの獲得順序を「ロックレベル」で、ロックへの参照へのアクセスを「分数権限」で管理することで、デッドロックが起こらないことを保証している。2に関しては、C言語のようにメモリ管理を手動で行う必要があるようなプログラミング言語に対して、正しくメモリ管理が行われていることを保証するための型システムを提案した。具体的には、獲得されたメモリがちょうど一度解放されることと、解放後にメモリへのアクセスがないことを、分数権限を用いて保証している。手動メモリ管理に伴うバグは、実用プログラムにおいても実際に数多くの障害をもたらしており、メモリ管理の正しさを保証することは、ソフトウェアの安全性向上において非常に重要である。なお、本研究については、実際に検証器を実装し、プログラムがある程度大きくなっても検証が現実的な時間で終了することを確認した。本年度は、前年度までに完成していた割込み入り並行計算のためのデッドロック解析の理論部分の拡張、およびプログラム検証器の実装を行い、その成果を博士論文として発表した。前年度までに、入れ予構造を取るロッグプリミティブを持った割込み入り並行計算のための型システムに基づくデッドロック解析の理論部分は完成していたので、本年度はこの理論を、入れ子構造を取らないロックプリミティブで拡張した。これにより、(1)入れ子構造を取らないロツクプリミティブ(2)ロッタへのポインタ(3)割込みという、現実のプログラムに多く用いられる三つの特徴を扱うことのできるテッドロック解析の理論が完成した。この三つの特徴はこれまでのプログラム検証の研究では扱われていなかった。拡張にあたっては、前年度までのロック獲得頂序の解析に、獲得されたロックがちょうど一度解放されることを保証するための線形型の理論と、ロックへのポインタに対する競合状態を防ぐための所有権の理論を組み合わせた。さらに、型システム上で割り込みフラグの状態を追跡することで、割り込みが起こったとしてもデッドロックが起こらないことを保証した。さらに、上記の拡張した理論に基づいて、Cプログラムの検証器を実装した。この実装を用いて、東京大学の松葉らが開発したC言語で記述されているプロトコルスタックの実装に対するデッドロック検証実験を行った。本実験では、松葉らが彼らの開発の初期段階で発見したテッドロックのバグを、検証器が発見できるかどうかを検証した。実験の結果、デッドロックのバグを修正する前のプログラムに対しては、検証器は正しくデッドロックの可能性を報告し、バグを修正した後のプログラムに対しては、検証器はデットロックが起こらないということを報告した。これにより、小規模なプログラムに対しては、検証器が正しく動作することが確認できたと考えられる。
磁気熱量効果を適用した自己熱再生型熱循環システムの研究

本研究では圧縮機に替わり、磁性体を磁場変化に晒した時に得られるエントロピー変化を利用して可逆的な温度変化が得られる磁気熱量効果を用いた自己熱再生型熱循環システムの開発を目的としている。本年度の研究では磁気熱量材料の充填層を用いたAMR(Active Magnetic Regenerative)ヒートサーキュレーター実験装置の作成をし、その装置における熱伝達速度及び圧力損失の測定を行い、そのデータを元に数値モデルを構築した。実験装置により、室温である293 [K]付近にて最大約6.5 [K]の温度の範囲内で循環した熱量の約1.8[%]程度で熱循環を行うことに成功した。また、装置を利用し数値モデル作成に必要な温度及び圧力変化のデータの収集を行った。測定により得られたデータを基にAMRヒートサーキュレーター内のエネルギーバランスから数値モデルの構築を行った。数値モデルを用いた解析により、非常に小さな仕事の入力(循環する熱量の数%)によってプロセス流体の全ての熱を循環することができることを確認したものの、AMRヒートサーキュレーターの層内の温度の上下に使用される熱の循環を行うため、当初温度-エントロピー線図を利用した理論計算により期待されたエネルギー消費量よりも多くのエネルギーを必要とすることがわかった。数値モデルにより流速や層の大きさなどのパラメーターがエネルギー消費量及び熱循環することのできる温度範囲へ与える影響が明らかにされた。また、熱交換に必要な最小熱交換温度差が決定された際の最小エネルギー消費量と比較して2倍程度のエネルギー消費量でプロセス流体の熱を循環することができるがわかった。室温付近のガドリニウムでは励磁/消磁に伴う不可逆性が非常に小さいため、自己熱再生型プロセスに応用した際に断熱効率が低い小さな圧縮機を用いるよりも省エネルギー性が高くなる可能性を示した。26年度が最終年度であるため、記入しない。
ｍＲＮＡのキャップ構造におけるｍ６Ａ修飾酵素の探索及び機能解析

N6-メチルアデノシン(m6A)修飾は真核生物のmRNAに豊富な化学修飾であり、細胞の様々な機能に関与している。特に脊椎動物では5'cap構造に続く1塩基にもm6A修飾が存在する。これまでの研究においてCAPAMがcap構造におけるm6A修飾を形成していることを解明し、生理学的な意義として細胞の酸化ストレス応答に関与していること、およびm6A修飾がmRNAの翻訳効率を向上していることを見出した。本研究ではm6A修飾がどのような遺伝子の発現を制御することで細胞の酸化ストレス応答に寄与しているのか、またm6A修飾がどのような因子を介してmRNAの翻訳効率に寄与しているのかを解明することを目指す。
脳虚血における内在性神経幹細胞活性化を介した神経再生医療に関する研究

1.脳虚血後の神経幹細胞・前駆細胞のマーカーMusahi-1の観察:一過性中大脳動脈閉塞マウスにおいて、脳室下帯ではMusashi-1/BrdU二重陽性細胞数が脳虚血後より7日後までは増加しその後減少して14日後に元のレベルとなり、脳虚血後での神経幹細胞の増殖を観察し得た。一方梗塞巣周辺にはNestin/BrdU及びMusashi-1が三重陽性となる細胞が出現し、7日後まで増加を続けた。この梗塞巣周辺で増加するMusashi-1陽性細胞は反応性アストロサイトと考えられ、Musashi-1は神経幹細胞・前駆細胞だけではなく反応性アストロサイトのマーカーとしても使用できる可能性が示唆された。双方の細胞でのMusashi-1の機能解析は、脳虚血後の"neurovascularunit"の検討として重要であると考えられる。2 . Nestin-CreERマウスの解析:低酸素状態への応答のmaster regulatorであるHIF-12の研究を目的に、Cre/LoxPsystemによるHIF-1αconditional knockoutマウスに対してCreを発現させるNestin-CreERマウスの解析を行った。これはTamoxifen投与により時間・部位特異的にNestin発現細胞(=神経幹・前駆細胞)においてCreを発現させる実験系である。Tatmoxifen投与3週間後では脳室下帯において、Creを発現したことを示すGFPがGFAP陽性の神経幹細胞やDcx陽性のneuroblastにおいて認められた。また嗅球においても、GFPがNeuN陽性の神経細胞に認められ、脳室下帯の神経幹細胞から分化し嗅球へ遊走しか新生neuronを確認することができた。本年度ではマウス海馬由来神経幹細胞を用いて、酸素濃度調節が可能な密閉チャンバー内での低酸素刺激、または安定化HIF-1発現plasmidの細胞内導入による低酸素関連因子の転写調節を定量的RT-PCRにて解析した。低酸素関連因子であるerythropoietin、adrenomedullinにおいては、今回の実験系での密閉チャンバー低酸素刺激により10倍から100倍程度、mRNA量が上昇することが確認されたが、安定化HIF-1発現plasmidの細胞内導入ではmRNA量にほとんど変化は認められなかった。また同様の実験系における低酸素刺激とplasmid導入実験においてMusashi1のmRNA量に変化は認められなかった。現在、安定化HIF-1の細胞内導入効率の上昇を目指し、lenti virusを用いた導入方法を検討中である。またRT-PCRによるmRNA量の解析ではmRNAの分解の影響も考慮しなくてはならないため、Musahi1の転写調節領域にレポーター遺伝子をfusionさせたplasmidを作成し、HIF-1のMusashi1に対する転写調節を直接的に検討することを計画している。
転写因子調節不全を介する慢性関節リウマチの免疫異常発現機序に関する研究

NF-kBは単球・マクロファージ系細胞の活性化やサイトカイン産生調節に重要な役割を果たす転写調節因子である。NF-kBの活性化は細胞内レドックス(酸化還元状態)機構により制御をうけることが知られている。至適条件下では抗リウマチ薬であるD-Penicillamine,Bucillamine,Auranofineは,THP-1(単球細胞株)の細胞内活性酸素量を速やかにかつ著しく増大させ,その増殖能をも抑制した。一方,健常人末梢血を対象にした場合,リンパ球サブセット間でD-Penicillamine,Bucillamineに対する感受性が異なることも判明した。これらの薬剤は内因性活性酸素産生の増大を介してNF-kBの活性化を制御している可能性が示された。さらに,Bucillamine(BUC)が銅イオン存在下で,活性酸素産生を介してアポトーシスを誘導するか否かを検討した。銅イオン存在下でのTHP-1に対するBUCの細胞毒性はMTT法およびPI染色法により測定した。まが。DNAラダーやsubdiploid DNAピークを指標にアポトーシスの有無を検討した。活性酸素の産生と細胞膜透過性の変化はフローサイトメトリーにより評価した。BUCと銅イオンによるTHP-1の細胞死はカラターゼあるいは赤血球の添加により完全に回避された。銅イオン存在下でBUCはTHP-1にDNAラダーやsubdiploid DNAピークを出現させたが,このアポトーシスに特徴的なDNA degradationの出現に先立ち,活性酸素の産生や細胞膜透過性の変化が認められた。BUCと銅イオンは活性酸素を介してアポトーシスを誘導した。従って,BUCの作用機序として,慢性関節リウマチで見られる滑膜細胞の異常増殖をアポトーシスにより抑制する可能性が示唆された。まが。NF-kBの活性化は細胞内レドックス(酸化還元状態)機構による制御をうけることが知られている。本年度は抗リウマチ薬のレドックス状態への影響を検討するために、過酸化水素をはじめとする様々な内因性の活性酸素産生に与える抗リウマチ薬の影響を調べた。細胞内活性酸素量はDCFH-DA,HE等のレドックス感受性色素を用いてフローサイトメトリーにより測定した。その結果、至適条件下では抗リウマチ薬であるD-Penicillamine,Bucillamine,Auranofinは、THP.1(単球細胞株)の細胞内活性酸素量を速やかにかつ著しく増大させ、その増殖能をも抑制した。一方、健常人末梢血を対象にした場合、リンパ球サブセット間でD-Penicillamine,Bucillamineに対する感受性が異なることも判明した。またNF-kB活性は従来の報告どうり、THP.1の核抽出液中に非RIのゲルシフトアッセイにて検出することが可能であった。本研究の目的は抗リウマチ薬の転写調節因子活性に与える影響を明らかにすることにある。平成7年度の研究により抗リウマチ薬であるD-Penicillamine,Bucillamine,Auranofinは、NF-kBの活性化を制御する内因性活性酸素の産生を増大させることが明らかとなった。従って、当初予想した抗リウマチ薬によるNF-kB活性化の可能性は極めて高くなったといえる。今後は当初の計画どうり、抗リウマチ薬のNF-kB活性への影響を確認するとともに、NF-kB以外の転写因子についても検討を進める。NF-kBの活性化は細胞内レドックス(酸化還元状態)

機構による制御をうけることが知られている。至適条件下では抗リウマチ薬であるD-Penicillamine,Bucillamine,Auranofineは,THP-1(単球細胞株)の細胞内活性酸素量を速やかにかつ著しく増大させ、その増殖能をも抑制した。一方,健常人末梢血を対象にした場合,リンパ球サブセット間でD-Penicillamine,Bucillamineに対する感受性が異なることも判明した。またNF-kB活性は従来の報告どおり,THP-1の核抽出液中に非RIのゲルシフトアッセイにて検出することが可能であった。本年度はBucillamine(BUC)が銅イオン存在下で,活性酸素産生を介してアポトーシスを誘導するか否かを検討した。銅イオン存在下でのTHP-1に対するBUCの細胞毒性はMTT法およびPI染色法により測定した。またDNAラダーやsubdiploid DNAピークを指標にアポトーシスの有無を検討した。活性酸素の産生と細胞膜透過性の変化はフローサイトメトリーにより評価した。BUCと銅イオンによるTHP-1の細胞死はカタラーゼあるいは赤血球の添加により完全に回避された。銅イオン存在下でBUCはTHP-1にDNAラダーやsubdiploid DNAピークを出現させたが,このアポトーシスに特徴的なDNA degradationの出現に先立ち,活性酸素の産生や細胞膜透過性の変化が認められた。BUCと銅イオンは活性酸素を介してアポトーシスを誘導した。従って,BUCの作用機序として,慢性関節リウマチで見られる滑膜細胞の異常増殖をアポトーシスにより抑制する可能性が示唆された。
光力学作用物質,フェオホーバイドに関する基礎と応用に関する研究

フェオホーバイドを癌の光治療法に応用するためには、癌に対してより親和性の強いフェオホーバイドの誘導体をつくり出すことが大切であり、またこの物質が脂溶性であることから、生体への投与方法についても検討する必要がある。そこで本年度は、とくにこれらの点について実験的に追究した。一方、フェオホーバイドの癌組織への親和性という特性を癌の診断に応用する目的でポジトロン核種である【^(48)V】をフェオホーバイドにキレートさせた化合物を合成し、オートラジオグラフィーによる癌組織への集積性を検討した。その結果、次のことが明らかにされた。すなわち(1)ピロフェオホーバイド二分子からなる二量体はフェオホーバイドに比較して、アルゴン・レーザーを用いた殺細胞効果はやや弱いが、その癌組織への集積性が高く、集積時間もフェオホーバイドの2分の1と速く、親和性が強いことが分った。なお二量体は癌組織中で一部フェオホーバイドとピロフェオホーバイドに分解していることが示唆された。(2)フェオホーバイドを極少量のジメチルスルホキシドに溶解し、これを卵黄レシチン-リン酸バッファーと混合し、超音波処理によってリポソーム内にとりこませたところ、このリポソーム化したフェオホーバイドは静注が可能となり、体内への吸収をはるかに向上させることができた。(3)チタニウムのプロトン照射によってできる【^(48)V】(バナジウム)をフェオホーバイドに結合させた化合物を作成し、これをFM3Aを皮下にもつ担癌マウスに注射し、経時的に各臓器や癌組織への累積量をγ-カウンターで測定した。その結果、バナジウム-48-硫酸では肺臓に集積するのに反し、バナジウム-48-フェオホーバイドは血液や肝臓にとりこみが多く、時間の経過とともに癌への蓄積が増大していき、ポジトロンによるCTによる診断ができる可能性が強いことが明らかになった。
老年期における家族ネットワ-ク

(1)研究目的本研究は、老夫婦のみの世帯を対象とし、老親子の家族ネットワ-クなどを明らかにするために、調査研究をした。(2)対象と方法サンプルは、東京都内足立区を選定し、そこに居住する老夫婦のみの世帯(800世帯)をランダムサンプリングし、その妻に対して面接調査を完了した(660ケ-ス)。(3)分析結果質問項目は、過去、現在の生活状況や子供、近隣、友人とのネットワ-ク、同居・別居意向、余暇、趣味、地域社会、社会福祉サ-ビスとのかかわりなどについてであった。近隣とのネットワ-クについては、高齢女性の過半数が「気軽に行き来し、親しく話をするくらい」のつきあいをしている一方、約3割に近い者が「会えばあいさつをする程度のつきあい」しかしていない。また、近隣のネットワ-クには、高齢の男女間で大きなちがいがみいだされた。親しい友人の状況については、対象女性の約8割の者が親しい友人を有していることが判明した。また、その友人の居住地は近く、緊密なネットワ-クを形成していることが判明した。しかし、一方では、約2割の者が親しい友人を一人も持っていないことが判明し、問題の多いことを推測させた。子どもとのネットワ-クについては、友人ネットワ-クと同様、子どもの居住地は近く、時間的距離も短いことが判明した。しかし、その一方で、接触頻度は多い者と少ない者とに二極分解していることが示唆された。また、それは、高齢女性の年齢、健康度、子どもとの時間的距離、どによって統計的に有意であることが証明された。(1)目的近年、大都市地域や農村地域(特に過疎地域)において、一人暮し老人や老夫婦のみの世帯が著しく増加している。そこで、本研究は、老夫婦のみの世帯を対象とし、その状況を明らかにするとともに、老親子のソーシャル・サポート・ネットワークを明らかにすることを目的とする。(2)対象と方法当初、都市と農村の比較研究を念願においていたため、調査地域は、都市と農村の両地域を考慮していた。しかし、予備調査の結果、農村では、老夫婦のみの世帯数が絶対的に少ないことが判明したため、その比較を断念し、サンプルを都市地域に限定し、都内足立区を選定した。そして、そこに居住する800世帯の老夫婦のみの世帯をランダムサンプリングし、その妻に対して面接調査を完了した。また、子供のいる世帯には、子供にも同様の質問紙を用いて郵送調査をした。(3)分析結果質問項目は、過去、現在の生活状況や子供とのネットワーク、同居・別居意向、余暇、趣味、地域社会、社会福祉サービスとの関わりなど、についてであった。今回の調査は、対象者を老夫婦とその子供をペアでmotchingしてとったところに大きなねらいがある。それは、老親の子供との同別居意向と、子供の老親との同別居意向がどう一致しているのか、またはどうくいちがっているのか、あるいは、老親子双方の住宅事情はどのような状況にあるのか、などについて、親子でmotchingした資料がえられる。現在、分析中であるが、その結果は、今後、家族の私的扶養と老人福祉サービスとの関わりをどのように考えていくべきか、その手がかりをわれわれに与えてくれるものと考えている。(1)研究目的本研究は、老夫婦のみの世帯を対象とし、老親子の家族ネットワ-ク、友人ネットワ-クなどを明らかにすることを目的とした。(2)対象と方法サンプルは、東京都内・足立区を選定し、そこに居住する老夫婦のみの世帯を800世帯、ランダムサンプリングし、その妻に対して面接調査を完了した(660ケ-ス)。(3)分析結果

質問項目は、過去、現在の生活状況や子供、近隣、友人とのネットワ-ク、同居・別居の意向、余暇、趣味、地域社会、社会福祉サ-ビスとのかかわりなど、についてであった。近隣のネットワ-クについては、高齢女性の過半数が「気軽に行き来し、親しく話をするくらい」のつきあいをしている一方、約3割に近い者が「会えばあいさつをする程度のつきあい」しかしていない。また、近隣のネットワ-クには、高齢の男女間で大きなちがいがみいだされた。親しい友人の状況については、対象女性の約8割の者が親しい友人を有いていることが判明した。その友人の居住地は近く、緊密なネットワ-クを形成していることが判明した。しかし、一方では、約2割の者が親しい友人を一人も持っていないことが判明し、問題の多いことを推測させた。子どもとのネットワ-クについては、友人ネットワ-クと同様、子どもの居住地は近く、時間的距離も短いことが判明した。しかし、その一方で、接触頻度は多いものと少ない者とに二極分解していることが示唆された。また、それは、高齢女性の年齢、健康度、子どもとの時間的距離などによって統計的に有意であることが証明された。
敗血症性ショック対策―血管透過性トレランスに関する基礎的研究

〔目的〕エンドトキシン(LPS、グラム陰性菌由来)は、血管透過性を亢進しその作用には誘導型NO合成酵素(iNOS)により産生されるNO、プロスタグランジン(PG)、サイトカイン(TNF-α、IL-1α)が関与することを明らかにした。一方、LPS前処置後LPSおよび種々の炎症メディエーターによる血管透過性が抑制され(トレランス)、そのトレランス発現にコルチコステロンが一部関与することを明らかにした。本研究では、LPSによる血管透過性亢進作用が、LPSの生物活性作用の本体であるリピドAによるものか否かを、リピドAアナログのONO-4007による血管透過性冗進作用およびその作用に関与するメディエーターについて調べる。更に、ONO-4007を前処置後LPS、ONO-4007および他の炎症メディエーターについて調べ、リピドAアナログが敗血症性ショックの予防薬候補になりうるかを推測する。〔成績〕1)ONO-4007投与による血管透過性亢進作用の出現は、LPSの場合と同様に遅効性で、投与2時間後に著しく色素漏出量が増加し、その増加は用量依存性であった。2)ONO-4007による色素漏出量増加は、NOS阻害薬のL-NAMEで抑制されたが、アミノグアニジン(iNOS選択的)では抑制されなかった。ONO-4007の作用はインドメタシンやジフェンヒドラミンで抑制されなかったが、抗TNF-α抗体および抗IL-1α抗体で抑制された。3)少量のONO-4007前処置後LPS、ONO-4007、PAF、ヒスタミン、5-HTによるトレランスが発現した。ONO-4007前処置後に血清中コルチコステロン量は一過性に著しく増加した。〔結語〕ONO-4007による血管透過性亢進作用は、LPSの場合と類似しているが、血管透過性亢進作用の機序は全く同じではないことが明らかとなった。ONO-4007前処置後、血清中コルチコステロン量が増加したことから、トレランス発現にはコルチコステロン量の増加が一部関与することが明らかとなった。以上の結果は、敗血症時のショックの予防にLPSの生物活性作用の本体であるリピドAアナログが応用可能であることを示唆している。〔目的〕敗血症時には過剰な一酸化窒素(NO)産生が低血糖やショックの誘因となり、エンドトキシンショックでは末梢血管の透過性が亢進すると考えられている。エンドトキシン(LPS、グラム陰性菌由来)は、血管透過性を亢進し、その作用には誘導型NO合成酵素(iNOS)により産生されるNO、プロスタグランジン、サイトカイン(TNF-α、IL-1α)が関与することを明らかにした。一方、LPS前処置後LPSによる血管透過性が抑制される(トレランス)が、そのトレランス発現には内因性コルチコステロンの上昇が重要で、NOやサイトカインも関与することを明らかにした。

本研究では、iNOS欠損マウスでLPSによる血管透過性亢進へのiNOS由来のNOの直接の関与を証明し、LPSトレランスの性質をより明らかにするために、iNOS欠損マウスでのLPSによるLPSトレランスの発現の有無を調べ、トレランスに関与するメディエーターを決定することにより、敗血症性ショックを予防する可能性がある薬物を探索することを目的とする。〔成績〕1)iNOS欠損マウスのLPSによる色素漏出量は、用量依存的に増加したが、対照マウスに比し、約40%低値であった。2)iNOS欠損マウスにおけるLPSの色素漏出量増加作用は、シクロオキシゲナーゼ(COX)阻害薬のインドメタシン、NS-398(COX-2選択的)、ジフェンヒドラミン、抗TNF-α抗体で抑制されたが、NOS阻害薬のL-NAMEやアミノグアニジン(iNOS選択的)では抑制されなかった。3)iNOS欠損マウスでは、LPS前処置後のLPSトレランスは発現しなかった。LPS前処置後はiNOS欠損マウス、対照マウス共に血中コルチコステロン量は増加したが、血中NO_2/NO_3(NO代謝物)は、対照マウスでのみ増加した。〔結語〕1)LPSによる血管透過性亢進作用に、iNOS由来のNOが直接関与すること。2)LPSによるLPSトレランスの発現には、iNOS誘導によるNOが関与することが明らかとなった。以上の結果、敗血症時のショックの予防にNO関連物質が応用可能であると考えられる。〔目的〕エンドトキシン(LPS、グラム陰性菌由来)は、血管透過性を亢進しその作用には誘導型NO合成酵素(iNOS)により産生されるNO、プロスタグランジン(PG)、サイトカイン(TNF-α、IL-1α)が関与することを明らかにした。一方、LPS前処置後LPSおよび種々の炎症メディエーターによる血管透過性が抑制され(トレランス)、そのトレランス発現にコルチコステロンが一部関与することを明らかにした。本研究では、LPSによる血管透過性亢進作用が、LPSの生物活性作用の本体であるリピドAによるものか否かを、リピドAアナログのONO-4007による血管透過性亢進作用およびその作用に関与するメディエーターについて調べる。更に、ONO-4007を前処置後LPS、ONO-4007および他の炎症メディエーターについて調べ、リピドAアナログが敗血症性ショックの予防薬候補になりうるかを推測する。〔成績〕1)ONO-4007投与による血管透過性亢進作用の出現は、LPSの場合と同様に遅効性で、投与2時間後に著しく色素漏出量が増加し、その増加は用量依存性であった。2)ONO-4007による色素漏出量増加は、NOS阻害薬のL-NAMEで抑制されたが、アミノグアニジン(iNOS選択的)では抑制されなかった。ONO-4007の作用はインドメタシンやジフェンヒドラミンで抑制されなかったが、抗TNF-α抗体および抗IL-1α抗体で抑制された。3)少量のONO-4007前処置後LPS、ONO-4007、PAF、ヒスタミン、5-HTによるトレランスが発現した。ONO-4007前処置後に血清中コルチコステロン量は一過性に著しく増加した。〔結語〕ONO-4007による血管透過性亢進作用は、LPSの場合と類似しているが、血管透過性亢進作用の機序は全く同じではないことが明らかとなった。ONO-4007前処置後、血清中コルチコステロン量が増加したことから、トレランス発現にはコルチコステロン量の増加が一部関与することが明らかとなった。以上の結果は、敗血症時のショックの予防にLPSの生物活性作用の本体であるリピドAアナログが応用可能であることを示唆している。
上皮性癌における細胞内プロテアーゼの新しい機能の解析

これまで癌とプロテアーゼの研究は多くの報告がなされており、プロテアーゼは発癌を助長する「悪玉因子」として長い間認識されてきた。しかしながら、我々はエンドソーム・リソソーム性プロテアーゼであるカテプシンEが抗腫瘍効果を示す「善玉因子」として機能することを見出した。本研究ではカテプシンE欠損は乳腺細胞の癌化を促進することと、カテプシンE欠損による変動遺伝子群及びタンパク質の同定を試みた。その結果カテプシンE欠損乳腺細胞は正常細胞と比べてWnt5aタンパク質が著しく減少していた。従ってカテプシンE欠損により、Wnt-βカテニン経路のシグナルの異常が癌発症の原因となる可能性が示唆された。。カテプシンE欠損マウスを用いた発癌メカニズムの解析カテプシンE欠損マウスは癌の発症率が高いことが明らかになっており、癌の病理組織学的解析は既に終了している。そこで以下の解析を行った。(A)癌病変部のDNAマイクロアレー解析野生型マウスとカテプシンE欠損マウスの癌の特徴を分子生物学的に解析する目的で、癌病変部のDNAマイクロアレー解析を行った。野生型およびカテプシンE欠損マウスの癌病変部位を切除し、組織からmRNAを抽出した。両組織で発現レベルの増減の大きい遺伝子を同定した。この実験により、カテプシンE欠損により変動する遺伝子群が明らかになった。(B)癌病変部のプロテオーム解析カテプシンEはプロテアーゼであることから、癌特異的なタンパク質分解に関与している可能性も充分考えられた。そこで野生型マウスとカテプシンE欠損マウスの癌の特徴を生化学的に解析する目的で、癌病変部のプロテオーム解析を行った。カテプシンE欠損マウスの癌病変部位および野生型マウスの正常同一部位を切除し、切除組織からタンパク質を抽出後、2次元電気泳動で展開し、変化の大きいタンパク質スポットを同定した。定法通り、質量分析法にてタンパク質のアミノ酸残基からタンパク質を同定した。これまで癌におけるプロテアーゼ(タンパク質分解酵素)の機能は、増殖・浸潤・転移に関与する「悪玉因子」として作用すると考えられてきた。本プロテアーゼは、in vitroの実験系で、癌細胞のみを濃度依存的にアポトーシスに誘導し、免疫系細胞の活性化などを通じて、腫瘍の増殖・転移を抑制しているようである。最近我々は、in vivoでも、カテプシンE欠損マウスが上皮性癌を発症することを見出している。本研究では、抗腫瘍効果を示すプロテアーゼのさらなる分子メカニズム、特に上皮細胞における発癌に関する分子機構の解明と予防・診断・治療への応用を目指す研究を遂行する。本研究では、抗腫瘍効果を示すプロテアーゼのさらなる分子メカニズム、特に上皮細胞における発癌に関する分子機構の解明と予防・診断・治療への応用を目指す研究を遂行することを目的とした。研究成果として以下のことが明らかとなった。まずヒトに対するカテプシンEの抗腫瘍効果の1つとして、ヒトの乳腺癌患者のカテプシンEレベルは健常者のそれと比べて有意に低いことが分かった。さらに分子メカニズムを明らかにする目的で、カテプシンEノックアウトマウスと正常マウスの乳腺上皮細胞を使った実験により、カテプシンEがWnt5aβ-catenin依存性のシグナリングに関与していることを見出した。実際、カテプシンE欠損メスマウスでは乳腺癌を引き起こすが、欠損マウス由来の細胞ではWnt5aの蓄積と核への移行していることが分かった。今後はこれらの結果よりカテプシンEを使った新たな応用が期待される。。本年度は以下のような3つの項目の実験を行った。1)カテプシンE欠損マウスにおける酸化ストレスの上昇機構の解明:カテプシンE欠損マウスの血清を検査すると、H2O2の値が異常に高いことに気が付いた。そこで、生体に多量に含まれる還元タンパク質であるグルタチオンに関して存在レベルを測定すると、これらの結果から、カテプシンEの欠損マウスでは酸化ストレスが上昇していることが明らかになった。2)酸化タンパク質の蓄積の免疫組織学的解析による同定:細胞や組織で発生する活性酸素種(ROS)は近くに存在するタンパク質を非特異的に酸化することが知られている。

タンパク質がROSにより酸化修飾を受け、カルボニル誘導体となったタンパク質を特異的に検出することができる2,4-ジニトロフェニルヒドラジン(DNPH)を用いて、カルボニル基を誘導体化し、DNPH特異的抗体で免疫組織化学的解析を行う。このことにより、カテプシンE欠損マウスでの酸化タンパク質の蓄積を組織レベルで解析を行った。3)組織、細胞での酸化タンパク質のプロテオーム解析:カテプシンEはプロテアーゼであることから、特殊な酸化タンパク質分解に関与している可能性も充分考えられた。そこで野生型マウスとカテプシンE欠損マウスの癌の特徴を生化学的に解析する目的で、癌病変部のプロテオーム解析を行った。カテプシンE欠損マウスの癌病変部位および野生型マウスの正常同一部位を切除し、切除組織からタンパク質を抽出後、2次元電気泳動で展開し、変化の大きいタンパク質スポットを同定している途中である。今後は定法通り、質量分析法にてタンパク質のアミノ酸残基からタンパク質を同定する予定である。歯科薬理学今後は以下のような研究を行う予定である。1)カテプシンE酵素による癌治療への試みカテプシンEが癌細胞の増殖を抑制するかを調べるために、ヒトの前立腺癌であるALVA101に空ベクターとヒト・カテプシンEを含むベクターを発現させた細胞群の同数をヌードマウスへ移植29日後肉眼的観察した。結果は、明らかに増殖が小さくなっていた。病理組織学的解析により、カテプシンE発現細胞はよく発達した被膜構造物によって仕切られていた。ここでは以下に述べる治療効果の検討を行う。2)カテプシンE酵素製剤の直接注射による癌細胞増殖抑制効果の検討ヒト由来前立腺がん細胞(ALVA-41,ALVA-10)をヌードマウス右脇腹皮下に移植し、腫瘍がある一定の大きさに達したのちに、生理食塩水と精製カテプシンE酵素を1020日投与し、腫瘍の大きさを測定した。予備実験ながら、カテプシンE投与により、癌は退縮した。雄ヌードマウス5匹に対して、生理食塩水あるいは精製カテプシンEを200μg/kg/dayを16日続けると、腫瘍の大きさが半分にまで退縮するという結果を得ている。今後、組み換え型ヒト・カテプシンEを大量精製し、投与方法などを検討してさらに効率の良い抗癌作用をもたらす方法を開発する。癌病変部のDNAマイクロアレー解析で遺伝子レベルの変化を野生型とカテプシンE欠損マウスで比較した。また、カテプシンE欠損により蓄積しているタンパク質について、癌病変部のプロテオーム解析を行った。これらの解析より、カテプシンE欠損で変動する遺伝子やタンパク質が同定できた。今後は個体レベルでの解析に移行する。カテプシンE欠損マウスにおける酸化ストレスの上昇機構の解明-----カテプシンE欠損マウスの血清を検査すると、H2O2の値が異常に高いことに気が付いた。そこで、生体に多量に含まれる還元タンパク質であるグルタチオンに関して存在レベルを測定すると、これらの結果から、カテプシンEの欠損マウスでは酸化ストレスが上昇していることが明らかになった。(A)酸化タンパク質の蓄積の免疫組織学的解析による同定細胞や組織で発生する活性酸素種(ROS)は近くに存在するタンパク質を非特異的に酸化することが知られている。
NAD前駆体NMN産生酵素Namptの糖尿病性腎臓病における機能解析

既に作出したNamptCKOで広範なTBM(tubular basement membrane)肥厚=尿細管基底膜肥厚(PAM)、線維化(マッソン)を認め、type IV collagen増生がその実態である事まで同定できた。倫理審査認可の下、原因が糖尿病と明らかな為、本来施行例が限られるヒト糖尿病性腎臓病腎生検も積極的に施行し、多数標本を採取しているが、これらでも重要な事にNampt低下と線維化が強相関した。今後、Nampt低下がtype IV collagenを増生する分子機序の詳細を同定し、新規医薬の標的分子としての意義を確立したい。
アリストテレスの「エネルゲイア」論の行為の理論としての現代的意義の研究

本研究の目的は、アリストテレスのエネルゲイア概念が行為の理論において占めている位置を明らかにし、あわせて現代におけるその意義を検討することであった。平成7年度には、予備的な作業として現代における行為論の問題点をサーベイして、行為の説明において欲求概念をどのように理解するかが依然として重要な未決の問題であることを確認すると共に、アリストテレスにおいては、エネルゲイア概念の分析が、その公式の表明にも関わらず、ヘクシス概念の分析に依存してしまうことを明らかにし、その一部を「アリストテレス『形而上学』は21世紀に生き残れるか」「アリストテレスの快楽論」として纏めた。平成8年度には、エネルゲイアを支えるヘクシスの成立についてのアリストテレスの目的論的分析は、公式には進化論的な歴史性への言及を許さないが、歴史性と矛盾するものではないことを論じ、「折り畳まれた進化」論として再構成できるのではないかという見通しをえ、その一部を「アリストテレスの友愛論」として纏めた。最終年度である平成9年には、研究成果報告書を作成し、その中で、行為におけるヘクシス概念の分析を進め「完成としての「性向」」、また「折り畳まれた進化」の場としての共同体について考察し「「共同体」と正義」として纏めた。さらに、この過程で、ヘクシス概念の解明には「心の哲学」におけるヘクシス概念の明確化が必要であることが明らかとなったので、新たな研究課題として、心の哲学におけるエネルゲイア概念についての研究補助金の申請を行った。科研費採択に先立つ平成6年度刊の「アリストテレスの理論的理性論(上)」(千葉大学文学部紀要)に引き続き、今年度は「アリストテレス『形而上学』は21世紀に生き残れるか?」(哲学雑誌)、また「アリストテレスの快楽論」(千葉大学文学部紀要)において、アリストテレスの「心の哲学」におけるエネルゲイア概念、および論理学において批判されつつ依然として大きな位置を占める「快楽」に関する基本問題の一部についての検討がなされた。さらに「医学における「先端技術」と「治療」の間」(千葉大学普遍科目「科学技術の発達と現代社会II」企画運営委員会編「生命・環境・科学技術倫理研究資料集(続編)」)、また近刊『現代社会と倫理』(晃洋書房)所収の「経済と倫理」において、重要性と緊急性が叫ばれている現代の倫理学の問題の一部を検討した。前者からは、歴史的な過程とは無縁であるはずのエネルゲイア概念の分析が、アリストテレスの公式の表明にもかかわらず、むしろ歴史的な過程を考慮せざるをえないヘクシス概念の分析に依存してしまうこと、その中で、しばしば現代遅れと思われている「目的論」が広い意味での「進化論」的枠組みの中で現代においても検討に値するものであることが明らかとなり、後者においては、倫理を、歴史を通じて成立する時代的な「環境」の中で、必ずしも意図せざる結果として成立し、それ故に、すぐれて歴史的な問題として位置づけることを試みた。このような理解が、すべてを歴史と社会に相対化する「相対主義」とは異なるものであることを明らかにすること、つまり、「本質」としてのエネルゲイアを語ることの意義を明らかにすることが、次の課題である。8年度は、7年度のアリストテレスのテキストを主とした「心の哲学」の検討を背景に、倫理学への展開をテキスト(主に「ニコマコス倫理学」「政治学」)に即して検討すると同時に、現代行為論・倫理学の問題のサーベイを行った。成果は、7年度末に刊行した「アリストテレスの快楽論」(千葉大学文学部紀要)、今年度刊行予定の「アリストテレスの友愛論」において、アリストテレスの「心の哲学」および倫理学の基本問題の一部について纏められ、また「経済と論理」(「現代世界と倫理」(晃洋書房)所収)、「専門職の「倫理網領」と制裁」(「電気情報通信学会技術報告」FACE96)において、現代の倫理学の問題の広がりと関連性について報告した。

前者の検討からは、エネルゲイア概念の分析が、エネルゲイアの先行性というアリストテレスの公式の表面にもかかわらず、むしろヘクシス概念の分析に依存してしまうことを確認し、ヘクシス概念の解明のための予備作業として、否定的に論じられることの多い目的論の位置を明らかにする作業に取りかかっている。アリストテレスの目的論は歴史性を無視した本質主義的完成主義としてではなく「折りたたまれた進化」論として再構成できるのではないかという見通しを持っている。「アリストテレスの目的論」として纏められる予定である。後者のサーベイからは、倫理を、歴史を通じて成立する。必ずしも意図せざる結果として位置づけるという、アリストテレスのヘクシス概念の転用という狙いの有効性を確認した。9年度は本研究課題にもとづく研究の最終年度であるため、行為におけるエネルゲイア概念の現代における意義を検討するという課題を継続すると共に、研究成果をまとめる作業を行った。1現代の行為論、倫理学の問題に関するアリストテレスの行為論の意義を検討しつつ、7-8年度を通じて行ったアリストテレスの『ニコマコス倫理学』『政治学』のテキストの分析を継続した。この中で、前年度にその重要性を認識したヘクシス概念についての分析、またアリストテレスの共同体概念についての検討を行った。2本研究にともなうアリストテレス理解の変化に応じて、本補助金を受ける以前に公表したアリストテレスの行為論に関わる論文を含めて、これまでに公表した論文の見直し改訂の作業を行った。3以上をあわせて、「研究成果報告書」として纏める作業を行った。「研究実成果告書」には、アリストテレスの行為論に関わる以前の論文を改訂再編したもの3編、7-8年度に公表したアリストテレスの行為論に関わる論文を改訂したもの2編、今年度新たに行った研究論文(未公表)2編のあわせて7編(400字詰め350枚強)を収録した。この際、本助成金によって購入した備品、ソフト、また作業補助の謝金が、作業を進める上で大きな助けとなったことを申し添えておきたい。5アリストテレスにおけるエネルゲイア概念の現代における意義は、その十分な解明のためには、『形而上学』『霊魂論』における「生物学主義」の検討が必要であることを確認し、そのために引き続き、「心の哲学におけるエネルゲイア概念の意義についての研究」を申請することとした。
腎上皮細胞におけるNa/H交換輸送体の局在に関する研究

腎尿細管における輸送担体のターゲッテング機構を解明するために、輸送担体としてナトリウム/水素イオン交換輸送蛋白(Na/H exchanger : NHE)を、モデル上皮としてLLC-PK1細胞を用いて、NHEのアイソフォーム(NHE-1,NHE-3)の上皮細胞における局在を分子生物学的手法により解析した。1。透過性のあるフィルター膜上にLLC-PK1細胞をconfluentに培養し、上皮側、基底側それぞれのNa^+依存性の細胞内pH上昇(NHE活性)を、HCO_3^-のない条件で測定した。この結果LLC-PK1細胞においては上皮側、基底膜側にアミロライドに対する感受性が異なるNHE活性が存在することが判明した。3。すでにクローニングされているラットとラビットのNHE-3に共通して保存されている部分をprimerとしてLLC-PK1細胞のNHE-3 cDNAのPCRクローニングしている。得られたNHE-3 cDNA cloneを、作成したNHE欠損fibroblastに発現させ機能を検討し、また得られたcDNA cloneに対するantisenseを作成し、上記と同様の機能抑制の有無からNHE-3のLLC-PK1細胞における分布を確認している。1。3。
Exosomeの体内動態機序の解明に基づいたアクティブターゲティング技術の開発

本研究では、薬物動態制御技術の確立に資する基礎情報を得ることを目的に、がんの臓器特異的転移のメカニズムに関わることが示唆されている分泌小胞(exosome)に着目し、exosomeの作用の解析及び機能分子の探索を実施した。本研究の結果、がん細胞が、血管新生の促進作用を有するexoxomeを分泌していること、また、exosome上のEphA2を介して血管内皮細胞に増殖シグナルを伝えていることが判明した。今後、exosomeのin vivoでの動態など、がん転移との関連をより詳細に調べることにより、薬物動態制御技術に応用可能ながんの臓器特的転移のメカニズム解明につながるものと期待される。本研究では、薬物動態制御のためのアクティブターゲッティング技術の確立に資する基礎情報を得ることを目的に、がんの臓器特異的転移のメカニズムに関わることが示唆されている分泌小胞(exosome)に着目し、がん細胞分泌exosomeの作用の解析及び機能分子の探索を実施した。本研究では、ヒト肺がん細胞株HARA-Bおよびヒト正常肺胞上皮細胞HPAEpiCの培養上清に分泌されるexosomeを回収精製し、各種実験に使用した。まず、がん細胞分泌exosomeが、転移巣の形成に関与する可能性を探るため、血管新生に対する影響を評価した。培養ヒト臍帯静脈血管内皮細胞(HUVEC)の細胞増殖及びマトリゲル上での管腔形成に与える影響を検討したところ、HARA-B由来exosomeは、HPAEpiC由来exosomeに比べて細胞増殖及び管腔形成を有意に促進した。また、HUVECの細胞内シグナルを解析した結果、HARA-B由来exoxomeの作用により、MAPK経路が活性化されていることが判明した。そこで、exosome膜上に発現するタンパク質のプロテオーム解析を行ったところ、MAPK経路を活性化する分子の一つとしてEphA2が同定された。さらに、HARA-B由来exosomeによるHUVECの増殖促進作用は、EphA2を介していることが明らかとなった。以上の結果は、がん細胞が、転移巣の形成に必要となる血管新生の促進作用を有するexoxomeを分泌していること、また、exosome上のEphA2を介して血管内皮細胞に増殖シグナルを伝えていることを示唆するものである。今後、exosomeのin vivoでの動態など、がん転移との関連をより詳細に調べることにより、アクティブターゲッティング技術に応用可能ながんの臓器特的転移のメカニズム解明につながるものと期待される。プロテオミクス
糖鎖認識デバイスを活用した細胞移植におけるナビゲーション法の開発

細胞移植は、臓器移植と共に医学的な検討が進められるべき分野の一つであるが、移植した細胞をいかに標的部位へターゲテイングするかという課題がある。糖鎖を認識するタンパク質(レクチン)による糖鎖リガンドの特異的認識が生理的な細胞のタ-ゲツテイングに重要であることがわかってきた。本研究では、抗腫瘍性マクロファージに発現が認められる細胞膜貫通型のカルシウム型レクチンMMGLを糖鎖認識デバイスとして活用し、細胞を腫瘍局所に人為的にタ-ゲツテイングする方法および結果の解析法の開発を目指した。1.糖鎖認識デバイスを組み込んだ免疫担当細胞のクローンを作製した。発現ベクターpCEP-4に組み込んだMMGLのcDNAをIL-2依存性T細胞株CTLL-2に導入し、恒常的なトランスフェクタントCTL-MLを取得した。抗体を用いてMMGLの発現を証明した。2.マウス卵巣癌細胞OV2944-HM-1の肺転移結節を作らせておいたマウスに、Dilで蛍光標識したCTL-MLを尾静脈より移入し、肺の連続凍結切片を用いて蛍光顕微鏡下腫瘍組織への細胞移行性を観察した。対照(空ベクターを導入したCTL-CEP)と比べ、CTL-MLの転移結節への移行性が高いことが明かとなった。3.データーの定量的解析のため、画像解析装置あるいは共焦点顕微鏡を用いて、細胞の位置の同定および面積測定を試みた。特に共焦点顕微鏡が有効であった。4.MMGLの細胞質内ドメインの配列で分子の取り込みに関わるモチーフを改変し、Down Regulationを防止して効率良く糖鎖認識デバイスを細胞表面に配置することを試みた。YENL配列をAENLに改変したMMGLを発現した恒常的なトランスフェクタントCTL-YMを作製した。MMGLの細胞表面での発現を証明した。CTL-MLとCTL-YMの腫瘍部位への移行性を比較したが、現在のところ顕著な違いを認めていない。細胞移植は、臓器移植と共に医学的な検討が進められるべき分野の一つであるが、移植した細胞をいかに標的臓器あるいは腫瘍組織へターゲッティングするかという問題が共通の課題である。糖鎖を認識するタンパク質(レクチン)と糖鎖リガンドとの特異的接着現象が生理的な細胞のターゲッティングに重要な役割を演じていることがわかってきた。本研究では、抗腫瘍性マイクロファージ上に発現が認められる細胞膜貫通型のカルシウム型レクチンMMGLを糖鎖認識デバイスとして活用し、細胞を腫瘍局所に人為的にターゲッティングする方法および結果の解析法の開発を目指し、以下の結果を得た。糖鎖認識デバイスを組み込んだ免疫担当細胞のクローンを作製した。すなわち、MMGLのcDNAを発現ベクターpCEP-4に組み込み、IL-2依存性細胞傷害性T細胞CTLL-2にトランスフェクトし恒常的なトランスフェクタントCTL-MLを取得した。我々の作製したMMGLに対するラットモノクローナル抗体LOM-14を用いて、MMGLの発現を証明した。細胞膜に取り込まれる蛍光物質DiIでCTL-MLを標識し、マウス卵巣癌細胞OV2944-HM-1の肺転移結節をあらかじめ作らせておいたマウスに尾静脈より移入した。経時的にマウスを屠殺し、転移結節を含む肺の連続凍結切片を作製した。顕微鏡下切片内の正常肺組織と転移結節の面積を測定し、各々の部位へ到達した蛍光陽性の細胞数を蛍光顕微鏡下計数した。単位面積あたりの蛍光陽性細胞数を腫瘍部および肺組織に分けて求め、その比率を細胞集積性のパラメーターとして定義した。

対照として、空のベクターをトランスフェクトしたCTLL-2を用いた。この実験を繰り返し行い、細胞集積性を統計的に比較した。その結果、対照と比べ、MMGLを発現させたCTL-MLにおいて、転移結節における細胞集積性が高いことが明かとなった。細胞移植は、臓器移植と共に医学的な検討が進められるべき分野の一つであるが、標的臓器あるいは腫瘍組織へのターゲッティングが共通の課題である。糖鎖を認識するタンパク質(レクチン)と糖鎖リガンドとの特異的接着現象が細胞のターゲッティングに重要な役割を演じていることがわかってきた。本研究では、抗腫瘍性マクロファージ上に発現が認められる細胞膜貫通型のカルシウム型レクチンMMGLを糖鎖認識デバイスとして活用し、細胞を腫瘍局所に人為的にターゲッティングする方法および結果の解析法の開発を目指した。MMGLをトランスフェクトしたマウスT細胞株CTLL-2細胞のマウス卵巣癌細胞OV2944-HM-1の肺転移結節への移行性を調べる実験系を平成7年度に確立したが、その改良を試み以下の結果を得た。1.データーの定量的解析のため、画像解析装置ARGUS-50あるいは共焦点顕微鏡を用いて、細胞の位置の同定および面積測定など画像解析を試みた。特に共焦点顕微鏡が有効で、2種類の蛍光標識により癌細胞MMGL発現細胞の位置が癌転移の極めて初期の段階において同時に検出可能となった。発達した腫瘍転移結節の面積測定には低倍率の観察が必要であるが、トランスフェクタントの位置の同定にはむしろ高倍率が必要であるという今後の問題点がある。2.細胞質内の配列で分子の取り込みに関わるモチーフを改変し、Down Regulationを防止して効率良く糖鎖認識デバイスを細胞表面には配置することを試みた。細胞質内のYENL配列をAENLに改変した分子をコードするようにMMGLのcDNAを改変し、恒常的なトランスフェクタントCTL-YMを得た。モノクローナル抗体LOM-14を用いて、MMGLの細胞表面での発現を証明した。3.CTL-MLとCTL-YMを蛍光標識後、肺転移結節を持つマウスに移入し腫瘍部位への移行性を比較したが、現在のところ顕著な違いを認めていない。
職務空間における感覚変数が従業員満足に及ぼす影響についての研究

本研究の目的は、職務空間における感覚変数が従業員の生産性や職務満足へ及ぼす影響を明らかにしたうえで、感覚変数から従業員満足、そして顧客満足へ至る一連の影響メカニズムを包括的に明らかにすることである。実験では、オフィス空間における従業員に対する感覚変数の影響を見た後に、従業員と顧客の相互作用が展開されるサービスの現場においても検証を進めていく。また、最初に音楽単独の効果の検証を試みた後、音楽と他の刺激との複合効果も検証していくことによって、従業員が職務空間で経験する感覚経験の役割を包括的に明らかにしていく。なお、本研究の調査は企業の実験協力を受けて進められる。