hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
特殊環境場を利用した三重項ジアリールカルベンの反応制御による単離

メソポーラスシリカMCM-41に包接させた最長寿命の三重項ジ(9-アントリル)カルベンは真空下では室温で3日後にも観測された。また、この結晶状態でのこのカルベンは脱気条件下では7カ月後でも観測された。一方、金基板上の三脚型トリチオールの自己組織化単分子膜に連結した(9-アントリル)(フェニル)カルベンは、カルベン同士の二量化反応は起こさず、溶液中よりも安定化されていることを明らかにした。ビス[10-(2,6-ジメチル-4-tert-ブチルフェニル)-9-アントリル]カルベンは室温脱気ベンゼン中で半減期50時間の最長寿命三重項カルベンであるが、ゆっくりと二量化反応で消失する。この二量化を防ぎカルベンを永続的に存続させる目的で、メソポーラスシリカ内でのカルベンの発生と安定性の評価を行った。カルベンとその前駆体であるジアゾ化合物のDFT計算(B3LYP/6-31G*)から、ジアゾ化合物はメソポーラスシリカMCM-41の細孔(内径2.1-2.7 nm)内に包接可能であり、また、2つのジアゾ化合物が重なり合って内包できないことがわかった。すなわち、細孔内でカルベンが発生した場合、溶液中ではカルベンの主減衰経路である二量化が起こらないことが示された。この前駆体ジアゾ化合物を合成し、このヘキサン溶液にMCM-41シリカを浸漬することによりジアゾ化合物内包MCM-41シリカを調製した。この試料を脱気封管し、ESRキャビティー内で78 Kで光照射(>350 nm)しESR観測したところ、2MTHFマトリックス中観測したカルベンのシグナルとともに、それとは別に三重項種の存在を示す二量子遷移シグナルと330 mT付近に大きなシグナルが観測された。この試料を昇温すると、300 Kでカルベンのシグナルは消失したが、二量子遷移と330 mTのシグナルは室温で220時間後にも観測された。その後、この試料に空気を導入し、内包物を抽出したところ、カルベンと酸素との反応を示す、ケトンとエステル誘導体が生成していることがわかった。これらの結果から、ESRで観測されたカルベンのシグナルはMCM-41シリカの外側に付着したカルベンであり、室温でも存在する二量子遷移を示す三重項種と330 mTの大きなシグナルは、それぞれ細孔内で直線型になったカルベン単独のものとカルベン間で磁気的相互作用したものであると考えることができ、カルベンは細孔内で安定に存在することがわかった。平成27年度は、当初の計画通り、理論計算によるジアゾ化合物とカルベンの体積の見積とジアゾ化合物の合成を行い、MCM-41シリカ中での三重項カルベンの発生をESRで確認し、昇温実験による安定性の検討までを行うことができ、研究は順調に進展している。昨年度に続き、最長寿命三重項カルベンであるビス[10-(2,6-ジメチル-4-tert-ブチルフェニル)-9-アントリル]カルベンのMCM-41シリカ細孔内での安定性を検討した。シリカに内包した前駆体ジアゾ化合物の光照射(>350 nm)によってカルベンを発生させた内包試料を真空下室温で1日静置した後、2-MTHFで抽出した溶液は、三重項カルベンのESRシグナルが観測された。3日静置した試料でもほぼ同じシグナルが観測されたことから、細孔内のカルベンは3日以上安定であることがわかった。また、このカルベンを結晶として単離することを目的として、脱気したジアゾ化合物のトルエン溶液を77 Kで光照射することによって最長寿命三重項カルベンを発生させ、真空下このマトリックスをー20°Cで融解させ、ゆっくりと溶媒留去したところ、黄色結晶が得られた。この結晶のESRスペクトルを測定したところ、特徴的な三重項カルベンのシグナルは観測されず、330 mTに1本のシグナルのみが観測された。しかし、この結晶をトルエンに溶かし77 Kで凍結させてESRを測定したところ、三重項カルベンのシグナルが観測された。このカルベンは結晶状態では規則正しく配列し原子間距離が近くなることから、カルベン間での磁気的相互作用が働き、スピンが揃った高スピン状態になり1本のシグナルのみが観測されたが、トルエンに溶かすことによって、分子間の磁気的相互作用が無くなり三重項カルベンのシグナルが観測されたものと考えられる。また、黄色結晶は真空下では20°Cで2カ月以上分解しないことがわかった。しかし、空気にさらすと、カルベンが酸素に捕捉されて生成する対応するケトンとエステルが得られた。これらの結果からは、黄色結晶は明らかにカルベンであり、三重項カルベンが結晶として単離できることがわかった。平成28年度は、当初の計画通り、MCM-41シリカ中で発生させた三重項カルベンの安定性を昇温実験により行い、また、低温濃縮によって三重項カルベンの結晶を作製し、その安定性の評価までを行うことができ、研究は順調に進展している。最長寿命三重項カルベンであるビス[10-(2,6-ジメチル-4-tert-ブチルフェニル)-9-アントリル]カルベンの結晶状態での安定性を検討した。

脱気したジアゾ化合物のトルエン溶液を77 Kで光照射しカルベンを発生させ、ー20°Cでゆっくりと溶媒留去することによって作製したカルベンの結晶を、真空下25°Cで7カ月放置した後、トルエン溶液にしてESRスペクトルを測定したところ、330 mTにカルベンの分解を示唆する二重項種のシグナルとともに、三重項カルベンの存在が観測された。このカルベンは室温脱気ベンゼン中では半減期50時間で減衰することから、結晶化はカルベンを安定化し、材料として利用できる良い方法であることがわかった。また、カルベン前駆体ジアゾ化合物の自己組織化単分子膜を金基板上に作製し、これを光分解することによって単分子膜上でのカルベンの発生を試みた。(9-アントリル)(フェニル)ジアゾメタンとアダマンタン骨格を用いた三脚型トリチオールを連結したカルベン前駆体を合成し、マイカ上に真空蒸着した金表面上に単分子膜を作製した。この基板をフェロセニルメターノールを含むベンゼン溶液中で光照射し、サイクリックボルタンメトリーを測定したところ、フェロセンの酸化還元ピークを観測した。これは光照射により発生したカルベンが、フェロセニルメタノールのヒドロキシ基に捕捉されたことにより、フェロセンが観測されたものと考えられる。また、チオールの還元的脱離とフェロセンの酸化電気量から、単分子膜中の3060%以上のカルベンが捕捉されたことがわかった。単分子膜中と類似のカルベンは溶液中では、ほぼ定量的に二量化することから、金表面上に固定することにより、カルベンが溶液中よりも安定に存在できることを示した。メソポーラスシリカMCM-41に包接させた最長寿命の三重項ジ(9-アントリル)カルベンは真空下では室温で3日後にも観測された。また、この結晶状態でのこのカルベンは脱気条件下では7カ月後でも観測された。一方、金基板上の三脚型トリチオールの自己組織化単分子膜に連結した(9-アントリル)(フェニル)カルベンは、カルベン同士の二量化反応は起こさず、溶液中よりも安定化されていることを明らかにした。平成28年度は、引き続きMSM-41シリカ中での三重項カルベンの安定性を観測するとともに、これを抽出し反応生成物を解析しすることで、カルベンが発生し安定に存在していることの検証を行う。また、ジアゾ化合物の溶液を極低温下で光分解することによって発生させた三重項カルベンを、カルベンが分解する温度よりも低温で濃縮することによりカルベンの結晶を単離し、ESRを用いてカルベンの特性化と安定性の評価を行う。平成29年度は、引き続き、三重項カルベンの結晶の安定性を観測するとともに、X線結晶構造解析を試みる。また、長寿命三重項カルベンの前駆体ジアゾ化合物の単分子膜を金基板上に作製し、光分解によって発生するカルベンの特性化と安定性の評価を行う。物理有機化学
植民地期朝鮮における農業教育と勧農政策-普通学校を中心に-

朝鮮では、植民地期を通じて日本内地をモデルとした「勧農体制」の移植・整備が試みられた。この「勧農体制」は、主に農事試験場、農業学校、農会によって構成されるが、本研究ではこのうち普通学校における農業教育を中心に考察した。その結果、1910年代の普通学校が朝鮮農村で勧農機関の役割を果たしていたこと、1926年以降、実業補習学校の拡充が図られたことなどその実態と変化を初めて明らかにすることができた。平成21年度は、本研究計画の初年度に当たるため、全体として見れば、必要な資料の調査・収集など研究目的的達成のための土台固めといえるよう活動を行った。本研究では、主要な資料として朝鮮や日本内地で発行された『朝鮮』『朝鮮及満洲』などの総合雑誌や『朝鮮農会報』『文教の朝鮮』などの農業・教育関係雑誌を利用することになっているが、その内の一つである『朝鮮公論』は、日韓両国に分散的に所蔵されており、これまで網羅的に調査を実施することが困難な状況であった。幸い最近その全巻の復刻版が発行されたことから、平成21年度経費のかなりの部分を活用してこれを購入し、次年度から十分に利用できる体制を整えることにした。また、合わせて、日韓両国で関連資料の調査・収集を行ったが、特にソウル市立図書館での調査では、農業教育に関するいくつかの貴重な資料を発見・入手することができた。さらに、本計画の研究成果として、平成21年(2009年)10月4日開催の第60回朝鮮学会大会(奈良県・天理大学)において、「1910年代の朝鮮における普通学校と農業教育-植民地期朝鮮の勧農体制と関連して-」というテーマで学会発表を行った。この発表は、1910年代の朝鮮において普通学校を中心に活発な農業教育が展開されたことを確証的に解明したものであう、従来の研究にはない新たな歴史的事実を提示できたものと考えている。次年度は、以上のような研究実績を基礎にしながら、研究計画を精力的に推進し、学会発表や論文発表などの形でさらに研究成果をあげていきたいと考えている。本研究計画の2年目に当たる平成22年度は、農業教育関連の資料を日本国内や韓国で調査・収集するだけではなく、学会発表や論文執筆に向けて資料の整理・分析に努めた1年であった。まず資料の調査・収集に関しては、『文教の朝鮮』『朝鮮農会報』などの雑誌資料を調査し普通学校を中心とした農業教育に関する論説・報告・統計などの収集・整理した。なかでも、韓国・ソウルでの調査を通じて『朝鮮教育会雑誌』の日本未所蔵号を収集できたことは大きな収穫であった。次に、昨年度以降収集した資料の整理・分析を進めていくことによって、以下に挙げる主に2つの研究成果を上げることができた。第一に、平成22年(2010年)11月6日開催の社会経済史学会九州部会10月例会(下関市立大学)において、「植民地期朝鮮における普通学校と農業教育-1910年代の実態と1920年代への継続性について-」というテーマで学会発表を行った。これは昨年度の成果である1910年代の普通学校における農業教育を基盤としながら、1920年代への農業教育の継続性を展望したものである。第二に、平成23年3月に、論文「1910年代の朝鮮における簡易農業学校-朝鮮の実業補習学校の前史として-」を『海外事情研究』第38巻2号に発表した。本計画では当初普通学校に重点を置いて検討する見通しであったが、調査が進むなかで普通学校に併設された簡易農業学校→実業補習学校の存在も、特に1920年代以降大きいことが新たに明らかとなってきた。そこで、取り急ぎ1910年代の簡易農業学校に関して分析を行い論文として発表することになったが、これによって次年度1920年代の普通学校や実業補習学校に関して考察を進めていくことが可能となり、本研究の遂行にとって非常に重要な研究成果となった。本研究計画の最終年(3年目)に当たる平成23年度は、これまで2年間進めてきた農業教育関連資料の調査・収集・分析の成果を、学会発表や論文投稿の形で取りまとめていく1年であった。昨年度初めて明らかにした1920年代半ば以降の実業補習学校の拡充・重点化という事実を踏まえ、まず関西農業史研究会第330回例会(4月9日)において「「産米増殖計画」と農業教育-普通学校・実業補習学校・"八尋生男"-」というテーマで学会発表を行った。この中では30年代の農村振興運動までを連続的に把握するための新たな試みとして植民地期の農業技師・農政官僚であった八尋生男も取り上げている。その一方で、10年代の普通学校の農業教科書を素材として、日本内地と植民地朝鮮における明治農法の受容過程の差異を解明する比較研究も行った。その成果は、第2回中日韓

朝言語文化比較研究国際シンポジウム(8月23日)での学会発表となり、中国や韓国の研究者とも意見交換する場を得ることにもつながった。続く第62回朝鮮学会大会(10月2日)では「「産米増殖計画」期における農業教育の再検討-普通学校・実業補習学校を中心に-」というテーマで学会発表を行った。これは4月の学会発表の内容に、1926年の計画更新前後の資料を補い、分析をさらに緻密化したものである。これによって実業補習学校拡充に至る経緯や1929年の普通学校での「職業科」必修科目化に関して従来とは異なる独自の見解を提示することができた。なお、24年度前半に国際シンポジウム論文集と『朝鮮学報』に論文が掲載される(決定済み)。本計画を終えるに当たり、勧農政策の視角から植民地期め農業教育を考察するという新しい研究手法によって、10年代の普通学校での農業教育や26年以降の実業補習学校の拡充などいくつもの事実を掘り起こすことができたと考えている。
ソフトマター3重周期極小曲面の構造と物性の理論的研究

平面にビリヤード球を並べると、1つの球のまわりに6つの球が並ぶ。この構造は電子、原子から始まり、コロイド球、界面活性剤や高分子が作る構造に至るまで普遍的な規則構造として知られている。球状ウィルスのように、正曲率曲面である球面上の規則構造もよく知られている。しかし、ポテトチップのような馬の鞍型(負曲率)曲面上の物理的規則構造の研究はなされていなかった。本研究ではシュワルツのダイヤモンド及びプリミティブ3重周期極小曲面上で球のシミュレーションを行い、エントロピーを駆動力としたアルダー相転移を観察することによって、負曲率曲面上の規則構造を多数発見し、それらを結晶学、数学的観点から解析した。ジャイロイド(G),ダイヤモンド(D),プリミティブ(P)とよばれる3重周期極小曲面に関連した共連続構造は1960年代の界面活性剤系に始まり、1990年代以降ブロック共重合体、液晶、多孔質シリカ、有機-無機ハイブッリッド分子、生体内でもミトコンドリア、網膜色素細胞、葉緑体、蝶の羽の鱗粉などでつぎつぎに発見され、興味深い。研究課題「ソフトマター3重周期極小曲面の構造と物性の理論的研究」の25年度の研究項目は、(1)P曲面とD曲面上のアルダー転移、(2)双曲面と3重周期極小曲面との写像関係、(3)ABC格子高分子の階層的ジャイロイド構造、(4)極小曲面の固有値問題、(5)ジャイロド曲面の発見者であるアラン・ショーン博士からの情報収集であった。(1)については、D曲面上の計算研究を行ったがはっきりとした結果が得られなかった。(3)については、格子高分子シミュレーションを実施中で、小規模計算で最適パラメータが明らかになった。(2)(4)については実施できなかった。(5)については、平成25年11月ショーン博士を米国イリノイ州カーボンデールの自宅に訪問し情報収集を行った。個人研究史と研究内容の両面から情報収集し、ジャイロイド曲面の複素関数による表現におけるθ_Gという定数が如何に計算されたか、1970年の発見の報告以来専門家の間でも明確でなかったことが明らかになった。この他に国際会議「Geometry and Physics of Spatial Random Systems (ドイツ)」で関連研究者と情報交換を行った。ジャイロイド(G),ダイヤモンド(D),プリミティブ(P)とよばれる3重周期極小曲面に関連した共連続構造は1960年代の界面活性剤系に始まり、1990年代以降、ブロック共重合体、液晶、多孔質シリカ、有機-無機ハイブッリッド分子、生体内でもミトコンドリア、網膜色素細胞、葉緑体、蝶の羽の鱗粉などでつぎつぎに発見され、興味深い。26年度の研究項目は、(1) 3重周期極小曲面上のアルダー転移の研究(P,D,G曲面の統一描像の構築)、(2) ABC格子高分子モデルの階層的ジャイロイド構造研究のまとめ、(3) FDTD法(時間領域差分法)を共連続相に応用したメタマテリアルという視点の研究、(4)離散的3重周期極小曲面上の量子力学(タイトバインディングモデル)あるいはバネの固有値問題を重点項目として計画していた。また、この分野の世界的権威オーストラリア国立大学ハイド教授との国際学術連携も計画した。(1)については、P、D曲面の計算機実験を行い、それら負曲率曲面上の規則構造を多数発見するという大きな成果を得た。成果の一部は、2015年3月のアメリカ物理学会でA50.00002「Hard Spheres on the Primitive Surface」として口頭発表した。この研究が予想以上に進展したため、項目(3)については試行的研究のみを実施し、(2)、(4)については実施しなかった。学術交流についてはドイツのガード教授やオランダのカーケンスガール博士と連携し、アメリカ物理学会でハイド教授を招待講演者とする「Beyond Gyroid」というセッション設立に寄与した。また、G曲面の発見者ショーン博士を主賓に国内のジャイロド研究者を組織し、Workshop Schoen Geometry: The Gyroid (奈良女子大2015年4月)の開催準備を行った。平面にパチンコ玉やビリヤードの球を並べると、1つの球のまわりには6つの球が並ぶことは誰もが知っている事実であり、ヘキサゴナル構造とよばれるこの構造は電子、原子から始まり、液晶分子、コロイド球、界面活性剤が作るミセル、高分子のメソ構造に至るまで、普遍的な規則構造として知られている。あるいはサッカーボール型フラーレン分子や球状ウィルスのように、正曲率曲面である球面上の規則構造もよく知られている。ジャイロイド,ダイヤモンド(D),プリミティブ(P)とよばれる負曲率をもつ3次元空間に周期的に織り込まれた曲面(3重周期極小曲面)に関連した物質構造がはじめて発見されたのは1960年代の界面活性剤系で、1990年代以降、ブロック共重合体、液晶などの有機分子、界面活性剤を利用して合成される多孔質シリカ、有機-無機ハイブッリッド分子、生体内でもミトコンドリア、網膜色素細胞、葉緑体、蝶の羽の鱗粉などでつぎつぎに発見された普遍的構造である。

研究代表者は高橋、田中と共同し、P、D曲面上の剛体球のシミュレーションを行い、ソフトマター系で重要なエントロピーを駆動力としたアルダー相転移を観察することによって、これまで知られていなかった負曲率曲面上の規則構造を多数発見した。それらはまず曲面のもつ空間群の部分群として立方晶になるもの、三方晶になるもの、部分群ではなく2倍の超構造を作るものの3種に分類された。また双曲空間(ポアンカレ円盤)、3次元タイリングとしても解析された。さらにCasparとKlugの20面体ウィルスの配列を説明するT数とよく似たH数を定義して規則構造のマジックナンバーを明らかにした。これらの結果は、ソフトマター物理学、結晶学、数学という異なる研究分野を横断する学際的成果である。平面にビリヤード球を並べると、1つの球のまわりに6つの球が並ぶ。この構造は電子、原子から始まり、コロイド球、界面活性剤や高分子が作る構造に至るまで普遍的な規則構造として知られている。球状ウィルスのように、正曲率曲面である球面上の規則構造もよく知られている。しかし、ポテトチップのような馬の鞍型(負曲率)曲面上の物理的規則構造の研究はなされていなかった。本研究ではシュワルツのダイヤモンド及びプリミティブ3重周期極小曲面上で球のシミュレーションを行い、エントロピーを駆動力としたアルダー相転移を観察することによって、負曲率曲面上の規則構造を多数発見し、それらを結晶学、数学的観点から解析した。平面にパチンコ玉やビリアードの球を並べると、1つの球のまわりには6つの球が並ぶことは誰もが知っている事実であり、この構造は電子、原子から始まり、液晶分子、コロイド球や高分子のメソ構造(ソフトマター)に至るまで普遍的な規則構造である。あるいは、フラーレン分子(サッカーボール型)やウィルスの構造のように正曲率曲面である球の上の規則構造もよく知られている。しかし、負曲率曲面上の物理的な意味での規則構造の研究は歴史上なされていなかったと言ってよい。今回われわれの得た結果は、自然界でよく発見されるP、D、G曲面上、負曲率曲面上の規則構造を多数発見した点で画期的である。それらはまず空間群で整理され、双曲空間(ポアンカレ円盤)との対応、3次元のタイリングとしても解析された。したがって、この発見は数学的発見としても、物理学的発見としても非常に価値があると考えている。ソフトマター物理学(1)3重周期極小曲面上のアルダー転移については大きな成果が得られたので、これを完成し、統一描像を構築し公表することが最終年度の最重要課題である。(2)(1)以外の研究テーマとして、メタマテリアルの観点から共連続構造の固有値問題(フォトニクス、フォノニクス)を研究することを研究実施計画に掲げていたが、フォトニクスについては当初から外国から大きく取り残されており、後追いの月並みな計画であったため、現状でもブレークスルーの見通しが立っていない。したがって当初の計画を変更し、最終年度にこの課題は取り上げない。(3)(1)の結果とソフトマテリアルについての研究動向から、全く新しい3重周期極小曲面を自己組織化するソフトナノマシーンを着想するに至った。これについて予備的研究をすることも最終年度に取り上げたい。研究実績の概要に記載した通り、項目(3)について順調に進んでいる。(5)については科学史的成果であるが、世界的に見ても学問の源流についての予想以上の成果が得られたと考えている。しかし、(1)のついて明確な科学的成果が得られていない。
筋電図生理学的手法を用いた呼吸リハビリテーションのエビデンス作成に関する研究

209年度は測定機器の購入と設営を行い、研究の準備を行う。研究対象者を公募し、本研究への参加に文書にて同意した健常成人を対象に研究を行う。研究対象者に痛みを感じさせない細さと柔軟性を有した白金線を用いて作成した電極を種々の呼吸筋に留置し、筋電図信号を測定する。換気機能や筋電図信号を安静換気下、吸気または呼気抵抗負荷時、肘を机について上半身を前傾させた姿勢(上肢支持前傾座位)の条件下で測定する。2020年度、2021年度は研究対象者を増やしながらデータの集積に努める。最終的に安静時を基準として、呼吸負荷時や上肢支持前傾座位で呼吸機能や呼吸筋筋電図活動にどのような差がみられるのかを解析する。
細菌人工染色体(BAC)DNAを用いた疾患感受性遺伝子スクリーニング法の開発

現在広く行われているプラスミドレベルの遺伝子断片の導入では、トランスジーンの挿入部位周辺の遺伝子発現の影響を強く受けること、ベクターの性質上、十分な発現制御領域をカバーできないことなどの問題点があり、しばしば導入遺伝子についての正確な情報を得ることができない。そこで本研究では、十分な発現制御領域をカバーできる細菌人工染色体(BAC)DNAを用いたトランスジェニックマウスを作製して、疾患感受性遺伝子を同定を行った。これまでの連鎖解析により、自己免疫疾患感受性の一つの候補遺伝子として想定されたCD72遺伝子が、疾患感受性遺伝子として機能しうるかどうかを明らかにするために、自己免疫疾患を発症するMRL/1prマウスに、抵抗性の多型を有するCD72 BAC DNAを遺伝子導入した。2系統の抵抗性多型のCD72BAC DNAを有したMRL/1prマウスと、コントロールとしてMRL/1prマウスと同様の感受性多型のCD72BAC DNAを有したMRL/1prマウスを樹立した。これらのマウスを解析した結果、抵抗性多型BAC DNAを有するマウスでは、感受性多型のBAC DNAを有するマウスと比較して、寿命が著明に延長し、腎炎の改善を認めた。これらのマウスでの導入CD72の発現を解析したところ、正常のCD72の発現分布を示した。以上の解析結果から、連鎖解析によって同定されたCD72が実際に疾患感受性を決定していること、さらには導入したBAC DNAが生理的な発現を十分カバーできる領域を有していることが明らかとなった。従って、本研究によってBAC DNAを用いた、疾患感受性のスクリーニング方法が確立できたと考えられる。今後、これまで連鎖解析によって同定された他の疾患感受性遺伝子について、順次解析を行いたい。ヒトゲノムプロジェクトにより、ヒトの全遺伝子配列は既に統べてデータベース化され、今後は、遺伝子の生体内における機能や発現制御機構を明らかにするポストゲノム研究が、研究の主体になることは火を見るよりも明らかである。また、ヒトの疾患解析は、単独遺伝子変異による先天性疾患から、より多くのヒトが罹患している高血圧や糖尿病、自己免疫疾患等の多因子疾患の解析が中心的な課題となると予想される。従って、それら多因子疾患の発症を左右する疾患感受性遺伝子の同定は、今後10年間の中心的な研究課題の一つであり、疾患感受性遺伝子の候補遺伝子を導入したトランスジェニックマウスの作製は、非常に強力な同定および解析ツールであると考えられる。しかしながら、現在広く行われているプラスミドレベルの遺伝子断片の導入では、トランスジーンの挿入部位周辺の遺伝子発現の影響を強く受けること、ベクターの性質上、十分な発現制御領域をカバーできないことなどの問題点があり、しばしば導入遺伝子についての正確な情報を得ることができない。そこで本研究では、十分な発現制御領域をカバーできる細菌人工染色体(BAC) DNAを用いたトランスジェニックマウスを作製して、疾患感受性遺伝子を同定しようとするものである。今年度は、連鎖解析により自己免疫疾患感受性の一つの候補遺伝子として想定されたCD72遺伝子が、疾患感受性遺伝子として機能しうるかどうかを明らかにするために、自己免疫疾患を発症するMRL/lprマウスに、抵抗性の多型を有するCD72 BAC DNAを遺伝子導入した。既に2系統の抵抗性多型のCD72BAC DNAを有したMRL/lprマウスを樹立した。今後、これらのマウスで自己免疫病の発症が抑制されるかどうかを解析する予定である。
脳循環動態および脳波周波数解析による老年者の痴呆性疾患の鑑別に関する研究

1.〔脳循環動態に関して〕(1)痴呆例では脳の末梢循環抵抗が増し,総頸動脈の血流量が減少していたが,血流量は正常老人(NC)>局在型血管性痴呆(CVD-L)>びまん型血管性痴呆(CVD-D)≒老年痴呆(SD)であった.(2)血管の広がり難さを現わす容積弾性率(Ve)の値は, CVD-D>CVD-L>SD≒NC,であった.このことはVeがCVD群(特にCVD-D群)とSD群の鑑別のための有用な指標であることを示唆する.(3)健常者では左右の頸動脈血流量の差は通常1ml/sec以下であるが,痴呆例ではこれ以上の差のある例が多く,特にSD群に著しい(CVD-L(36.9%)<CVD-D(43.4%)<SD(76.0%)).(4)CVD-L群において,血流量の左右差と粗大病変の局在・夜間せん妄出現との相関はなかったが, dysphoric moodの出現率は,左側低下群(dysphoric mood出現率;81.8%)が,右側低下群のそれ(16%)を大きく上回っていた.2.〔脳波周波数(パワー比)分析に関して〕CVD-D群とSD群との比較を行なった.一般にCVD-D群の方が痴呆の程度が軽いが,痴呆の重症度による影響を除くために重症極めて重症のCVD-D群の症例を集め,両群の臨床的重症度を一致させて重症度別に各帯域のパワー比を較べることができた.(1)比較的軽度の段階ではθ帯域の増加とfast-α帯域の減少が見られる.(2)痴呆の進行につれてこれとは質の違った変化が出現する.すなわち, δ帯域の増加とslow-α帯域の減少である.この変化はCVD-D群に較べて痴呆のより軽度な段階からSD群の方に早期に出現する.(3)さらに痴呆が重症化し末期状態になると, CVD-D群でも同じ変化が出現してSD群との差が不明瞭になる.1.〔脳循環動態に関して〕(1)痴呆例では脳の末梢循環抵抗が増し,総頸動脈の血流量が減少していたが,血流量は正常老人(NC)>局在型血管性痴呆(CVD-L)>びまん型血管性痴呆(CVD-D)≒老年痴呆(SD)であった.(2)血管の広がり難さを現わす容積弾性率(Ve)の値は, CVD-D>CVD-L>SD≒NC,であった.このことはVeがCVD群(特にCVD-D群)とSD群の鑑別のための有用な指標であることを示唆する.(3)健常者では左右の頸動脈血流量の差は通常1ml/sec以下であるが,痴呆例ではこれ以上の差のある例が多く,特にSD群に著しい(CVD-L(36.9%)<CVD-D(43.4%)<SD(76.0%)).(4)CVD-L群において,血流量の左右差と粗大病変の局在・夜間せん妄出現との相関はなかったが, dysphoric moodの出現率は,左側低下群(dysphoric mood出現率;81.8%)が,右側低下群のそれ(16%)を大きく上回っていた.2.〔脳波周波数(パワー比)分析に関して〕CVD-D群とSD群との比較を行なった.一般にCVD-D群の方が痴呆の程度が軽いが,痴呆の重症度による影響を除くために重症極めて重症のCVD-D群の症例を集め,両群の臨床的重症度を一致させて重症度別に各帯域のパワー比を較べることができた.(1)比較的軽度の段階ではθ帯域の増加とfast-α帯域の減少が見られる.(2)痴呆の進行につれてこれとは質の違った変化が出現する.すなわち, δ帯域の増加とslow-α帯域の減少である.この変化はCVD-D群に較べて痴呆のより軽度な段階からSD群の方に早期に出現する.(3)さらに痴呆が重症化し末期状態になると, CVD-D群でも同じ変化が出現してSD群との差が不明瞭になる.1、超音波定量的血流測定装置(以下QFM)を用いて、痴呆患者の頸動脈血流量を測定し、脳循環動態の3つの指標(頸動脈血流量,血管弾性率:Ve,末梢血管抵抗:Zo)を用いて、中等度以上の痴呆を有する老人の臨床経過,臨床症状,各種のスケールのうえから診断のはっきりしないものを除外し、老年痴呆(SDAT),局在型脳血管性痴呆(CVD-L),びまん型脳血管性痴呆(CVD-D)の3群に分類した。SDAT群:32列(平均年齢76.9±11.5)、CVD-L群:27列(平均年齢72.9±11.5)、CVD-D群:31例(平均年齢79.6±5.8)の3群について比較検討し、以下の結果を得た。(なお、対照として慈恵医大第四内科よる報告されている七○歳代の健常者の標準値を採用した。)(1)CVD-L群とCVD-D群との間に質的な差異は認めず、頸動脈血流量が低下し、ZoとVeが増加していた。

(2)SDAT群は、CVD群と同様に、頸動脈血流量が低下し、Zoが上昇していたが、Veは正常範囲であった。していたが、Veは正常範囲であった。(3)両群の間でVeにかなりはっきりした差異があることは、VeがSDATとCVDの鑑別指標として有望なパラメーターであることを示唆している。2、上記の研究と平行して、脳波のパワースペクトル分析によるSDATとCVDの鑑別についても検討した。周波数帯域はδ,θ,slow-α,fast-α,β,の5帯域に分割し、total power spectrumと各帯域の比を算出し、検討した。その結果SDATはCVDに比べてδ帯域の増加と、slow-α帯域の減少が著しいといった脳波所見上の特徴をしめす可能性が示唆された。今後痴呆の重症度との関連から、重症のCVDの症例を増やして検討する必要がある。
リチウムイオン内包フラーレン結晶における「周回イオン常磁性」の検証

リチウムイオン内包フラーレン化合物[Li@C60](PF6)はNaCl型のイオン結晶で,室温においてはC60ケージ内の球形領域に閉じ込められたリチウムイオンがほぼ自由な周回運動をしているものと考えられている(DOI: 10.1039/c6cp06949e).正電荷を帯びたリチウムイオンの運動は一種の環電流と解釈できるので,当然それに付随する磁気モーメントが期待される.このような磁性は固体中で検出された例がなく,まったく新しい磁性であることから,われわれは「周回イオン常磁性」と名付けてその性質を調べようとしている.本研究の目的は,強磁場中にこの物質をおいて,「周回イオン常磁性」に起因する磁気共鳴信号を検出することである.磁気共鳴実験を担当する,国立強磁場実験施設(NHMFL,米国)のArneil P. Reyes博士のもとへ約100 mgの粉末試料を送付し,磁気共鳴実験を試みた.温度200 Kにおいて,7 MHz,10.7 MHz,18 MHz,20 MHzの4つの周波数で磁場を0 Tから12 Tまで掃引してシグナルを探索したが,これらの条件においては検出することができなかった.さらに,温度208 Kにおいて,23 MHzで20-22 Tの磁場掃引,また33 MHzで29-31 Tの掃引を行ったが,この条件でもシグナルを発見することができなかった.この原因はシグナルが小さく,低周波数域では分光器の感度が充分でないためであろうと考え,より高い磁場(36 T)での実験を計画していたが,マシンタイム予約が設備の故障により延期され,研究期間内に実験を完結するに至らなかった.リチウムイオン内包フラーレン化合物[Li@C60](PF6)はNaCl型のイオン結晶で,室温においてはC60ケージ内の球形領域に閉じ込められたリチウムイオンがほぼ自由な周回運動をしているものと考えられている(DOI: 10.1039/c6cp06949e).正電荷を帯びたリチウムイオンの運動は一種の環電流と解釈できるので,当然それに付随する磁気モーメントが期待される.このような磁性は固体中で検出された例がなく,まったく新しい磁性であることから,われわれは「周回イオン常磁性」と名付けてその性質を調べようとしている.本研究の目的は,強磁場中にこの物質をおいて,「周回イオン常磁性」に起因する磁気共鳴信号を検出することである.磁気共鳴実験を担当する,国立強磁場実験施設(NHMFL,米国)のArneil P. Reyes博士のもとへ約100 mgの粉末試料を送付し,磁気共鳴実験を試みた.温度200 Kにおいて,7 MHz,10.7 MHz,18 MHz,20 MHzの4つの周波数で磁場を0 Tから12 Tまで掃引してシグナルを探索したが,これらの条件においては検出することができなかった.さらに,温度208 Kにおいて,23 MHzで20-22 Tの磁場掃引,また33 MHzで29-31 Tの掃引を行ったが,この条件でもシグナルを発見することができなかった.現在,この原因はシグナルが小さく,低周波数域では分光器の感度が充分でないためであろうと考えており,より高い磁場での実験を計画中である.磁気共鳴実験を担当する,国立強磁場実験施設(NHMFL,米国)のArneil P. Reyes博士のもとへ約100 mgの粉末試料を送付し,磁気共鳴実験を試みた.温度200 Kにおいて,7 MHz,10.7 MHz,18 MHz,20 MHzの4つの周波数で磁場を0 Tから12 Tまで掃引してシグナルを探索したが,これらの条件においては検出することができなかった.さらに,温度208 Kにおいて,23 MHzで20-22 Tの磁場掃引,また33 MHzで29-31 Tの掃引を行ったが,この条件でもシグナルを発見することができなかった.現在,この原因はシグナルが小さく,低周波数域では分光器の感度が充分でないためであろうと考えており,より高い磁場での実験を計画中である.本研究課題のような試みは極めて挑戦的なものであり,必ずしも成功は約束されていない.その中で,主として低磁場域での予備的実験を着実に遂行しているという点で,研究としては順調に推移していると評価している.リチウムイオン内包フラーレン化合物[Li@C60](PF6)はNaCl型のイオン結晶で,室温においてはC60ケージ内の球形領域に閉じ込められたリチウムイオンがほぼ自由な周回運動をしているものと考えられている(DOI: 10.1039/c6cp06949e).正電荷を帯びたリチウムイオンの運動は一種の環電流と解釈できるので,当然それに付随する磁気モーメントが期待される.このような磁性は固体中で検出された例がなく,まったく新しい磁性であることから,われわれは「周回イオン常磁性」と名付けてその性質を調べようとしている.本研究の目的は,強磁場中にこの物質をおいて,「周回イオン常磁性」に起因する磁気共鳴信号を検出することである.磁気共鳴実験を担当する,国立強磁場実験施設(NHMFL,米国)のArneil P. Reyes博士のもとへ約100 mgの粉末試料を送付し,磁気共鳴実験を試みた.温度200 Kにおいて,7 MHz,10.7 MHz,18 MHz,20 MHzの4つの周波数で磁場を0 Tから12 Tまで掃引してシグナルを探索したが,これらの条件においては検出することができなかった.

さらに,温度208 Kにおいて,23 MHzで20-22 Tの磁場掃引,また33 MHzで29-31 Tの掃引を行ったが,この条件でもシグナルを発見することができなかった.この原因はシグナルが小さく,低周波数域では分光器の感度が充分でないためであろうと考え,より高い磁場(36 T)での実験を計画していたが,マシンタイム予約が設備の故障により延期され,研究期間内に実験を完結するに至らなかった.磁気共鳴実験を行っている国立強磁場実験施設では,昨夏に実験装置をすべてシャットダウンし,二ヶ月間をかけて建屋の全面改修を行った.そのため,実験装置が再稼働したいま,機器の予約が殺到している状況にあり,なかなかマシンタイムを確保することが困難である.現在,36 T級ハイブリッドマグネット(SCH)のこの夏の課題募集に応募しており,予約がとれれば秋から初冬の時期に実験できる予定である.本課題の目的はあくまで磁気共鳴信号の発見であるが,今冬の実験においても検出がかなわない場合には目標を変更して,強磁場下でのテラヘルツ分光により,吸収帯の磁場依存性を磁気共鳴実験の代替手段として検討することも視野に入れたい.
グレリン分泌細胞における体内エネルギー量認識機構の解明

グレリンは、空腹時に胃のX/A様細胞から分泌され、摂食やグルコース負荷によりその分泌が抑制される。しかし、グレリン分泌の詳細な制御機構は明らかになっていない。そこで本研究では、グレリン産生細胞株であるマウスMGN3-1細胞を用いて、分泌を制御する分子メカニズムの解明を試みた。解析の結果、グルコース濃度低下によって細胞内ATP産生量が低下し、その結果ATP感受性K+チャネルが開口し、膜電位が過分極する。そして、過分極によって活性化する電位依存性Ca2+チャネルが開口することで細胞内にCa2+が流入し、グレリン分泌が起こることを見出した。グレリン分泌細胞は、主に胃や十二指腸などの消化管や膵臓ランゲルハンス島などに存在する。例えば、胃のグレリン分泌細胞からのグレリン分泌は、周辺細胞から分泌されるペプチドホルモンや自律神経から分泌される神経伝達物質によって調節されると考えられている。さらに、摂取した栄養素によってもグレリン分泌が調節される可能性が考えられる。そこで本年度は、グレリン分泌細胞株であるMGN3-1細胞からmRNAを抽出し、MGN3-1細胞に発現してる栄養素感受に関与する各種受容体、チャネル、トランスポーター、ホルモン受容体の遺伝子発現解析を行った。解析の結果、甘味受容体、苦味受容体、カルシウム感受性受容体(CaSRやGPRC6A)、レプチン受容体、脂肪酸受容体、脂肪酸受容体、カンナビノイド受容体、ATP感受性カリウムチャネルの発現を見出した。遺伝子発現の認められた受容体、チャネル、トランスポーターやホルモン受容体等については、組織中での発現細胞をin situ hybridization法にて、細胞内での発現と局在は、定量PCR、免疫ブロッティング法や蛍光免疫染色法によって検討を開始している。また、一部の受容体やチャネルに対しては、リガンドやアゴニスト、そしてブロッカー投与時の細胞内カルシウム濃度変化やcAMP濃度変化について、ライブセルイメージング解析を開始している。しかしながら、グレリン分泌の詳細な制御メカニズムについては、明らかになっていないのが現状である。そこで本年度は、低グルコース条件下で培養したグレリン分泌細胞株であるMGN3-1細胞からmRNAを抽出し、グレリン分泌に関与すると考えられる神経伝達物質受容体、ホルモン受容体、イオンチャネル、トランスポーターなどの遺伝子発現について、次世代シークエンサーを用いたRNA-seq解析を行った。解析の結果、ATP感受性カリウムチャネルと電位依存性カルシウムチャネルの発現変動を見出した。そこで、低グルコース時のグレリン分泌細胞内のATP濃度変化およびカルシウムイオン濃度変化とグレリン分泌動態との関係について解析を行った。解析の結果、細胞外グルコース濃度低下によって細胞内ATP産生量が低下し、ATP感受性カリウムチャネルが開口することが分かった。またATP感受性カリウムチャネルの開口に伴い、膜電位が過分極し、過分極によって活性化する電位依存性カルシウムチャネルが開口することで細胞内にカルシウムイオンが流入し、グレリン分泌が起こることを見出した。本年度は、受容体やチャネル、トランスポーターの遺伝子発現の検討、また受容体サブタイプの同定、そして細胞内シグナル伝達経路同定のための可視化解析系の構築を完了した。この可視化解析系を用いて、細胞外グルコース濃度変化によって起こるグレリン分泌が、ATP感受性カリウムチャネルおよび電位依存性カルシウムチャネルによって制御することを見出すことができた。胃のグレリン分泌細胞からのグレリン分泌は、周辺細胞から分泌されるペプチドホルモンや自律神経から分泌される神経伝達物質によって調節されると考えられている。さらに、摂取したアミノ酸、グルコース、脂質などの栄養素によってもグレリン分泌が調節される可能性が考えられる。昨年度までに、細胞外グルコース濃度変化によって引き起こされるグレリン分泌調節機構について、グレリン分泌細胞株であるMGN3-1細胞を用いて解析を行った。解析の結果、細胞外グルコース濃度低下によりATP感受性カリウムチャネルが開口することで、電位依存性カルシウムチャネルが開口し、その結果細胞内にカルシウムイオンが流入し、グレリン分泌が起こることを見出した。本年度は、このグレリン分泌を制御する因子の同定と機能解析を進めた。まず、低グルコース条件下で培養したMGN3-1細胞からmRNAを抽出し、次世代シークエンサーを用いたRNA-seq解析を行った。解析の結果、膜(小胞)輸送や膜(小胞)融合を司る低分子量Gタンパク質Rabファミリー、CAPSファミリー、そしてSNAREタンパク質ファミリーの発現を見出した。そこで、RNA干渉法を用いて内在性のRabとCAPS遺伝子をそれぞれ個別にノックダウンし、グレリン分泌への影響を解析した。解析の結果、RabおよびCAPSともに、グレリン分泌における膜融合過程を調節する可能性を見出した。研究成果を、国際誌に投稿したが、査読者から多数の追加実験の実施を求められた。現在、指示された追加実験を実施しているが、指示された追加実験をすべて終了するのに時間がかかっており、計画よりやや遅れている。グレリン分泌細胞は、胃や十二指腸などの消化管や膵臓ランゲルハンス島などに存在することが報告されている。胃のグレリン分泌細胞からのグレリン分泌は、周辺細胞から分泌されるペプチドホルモンや自律神経から由来の神経伝達物質によって制御されていると考えられている。

さらに、摂取したアミノ酸、グルコース、脂質などの栄養素によってもグレリン分泌が制御されている可能性がある。これまでに、細胞外グルコース濃度変化によって引き起こされるグレリン分泌制御機構について、グレリン分泌細胞株であるMGN3-1細胞を用いて解析を行った。解析の結果、細胞外グルコース濃度低下によりATP感受性カリウムチャネルが開口することで、電位依存性カルシウムチャネルが開口し、その結果細胞内にカルシウムイオンが流入し、グレリン分泌が起こることを見出した。そこで今年度は、このグレリン分泌を制御する因子の同定と機能解析を進めた。まず、低グルコース条件下で培養したMGN3-1細胞からmRNAを抽出し、次世代シークエンサーを用いたRNA-seq解析を行った。解析の結果、小胞輸送や開口放出を司る低分子量Gタンパク質Rabファミリー、CAPSファミリー、そしてSNAREタンパク質ファミリーの発現を見出した。そこで、RNA干渉法を用いて内在性のCAPS遺伝子をノックダウンし、グレリン分泌への影響を解析した。ELISA法により、グレリンの分泌量を比較すると、CAPSのノックダウンによってグレリン分泌量が減少することが示された。またCAPSは、分泌反応の引き金となる細胞内カルシウム濃度上昇には影響しないが、グレリン分泌動態には影響を及ぼすことが明らかとなった。全反射蛍光顕微鏡による更なる解析の結果、CAPSは、グレリン分泌における膜融合過程を調節する可能性も見出した。グレリンは、空腹時に胃のX/A様細胞から分泌され、摂食やグルコース負荷によりその分泌が抑制される。しかし、グレリン分泌の詳細な制御機構は明らかになっていない。そこで本研究では、グレリン産生細胞株であるマウスMGN3-1細胞を用いて、分泌を制御する分子メカニズムの解明を試みた。解析の結果、グルコース濃度低下によって細胞内ATP産生量が低下し、その結果ATP感受性K+チャネルが開口し、膜電位が過分極する。そして、過分極によって活性化する電位依存性Ca2+チャネルが開口することで細胞内にCa2+が流入し、グレリン分泌が起こることを見出した。当初の研究計画の通り、受容体やチャネル、トランスポーターの遺伝子発現の検討、また受容体サブタイプの同定、そして細胞内シグナル伝達経路同定のための可視化解析系の構築などについて、ほぼ終了している。同定した受容体に対して、グレリン分泌反応における機能について解析を開始している。しかし、解析の過程で、受容体を介さないグレリン分泌調節機構の存在が示唆される結果も得られており、さらなる詳細な解析が必要である。全体を通して、おおむね当初の研究計画に沿って順調に進展している。解析の過程で、グルコースよりも強力にグレリン分泌を誘導する物質を見出した。
遺伝子タギング法によるクワの病害抵抗性遺伝子の単離

クワ芽枯病菌(Fuarium lateritium f.sp.mori)がクワに感染すると、組織中に菌糸が蔓延し、組織表面に分生胞子からなるスポロドキアが形成される。一方、非病原性フザリウム菌の感染に対してはクワ植物は抵抗性反応を示し、菌糸の蔓延はみられず病徴が現れることもない。これらの病害抵抗性反応の相違は、菌側の非病原性(病原性)遺伝子と宿主植物側の抵抗性遺伝子との相互作用により発現されると考えられる。そこで今回は、宿主植物側に焦点をあて、遺伝子タギングによりクワの病害抵抗性関連遺伝子を単離しその機能を解析することによりクワの病害抵抗性機構を解明することをめざした。本研究では、まずタギングした遺伝子の機能解析に不可欠であるクワの病害抵抗性発現の迅速な評価法をクワ培養細胞を用いて確立した。本法を用いることにより、季節にとらわれること無く僅か3日間でクワの病害抵抗性の程度を一度に多数評価することが可能となった。続いて、病害抵抗性関連遺伝子のT-DNAタギングを行うために、Agrobacterium tumefaciensによるクワ植物(培養細胞)おける形質転換法の確立をした。一方、非病原性フザリウム菌の感染時にみられる局部的かつ急速な感染組織の褐変化がクワの病害抵抗性反応に重要な役割を果たしていると考えらる。そして、ペルオキシダーゼおよびポリフェノールオキシダーゼが感染組織の褐変化に関与していることが明らかにされ、両酵素はクワの病害抵抗性発現に極めて重要な機能を持つことが示唆された。本研究で検討された方法を用いて病害抵抗性に関連する遺伝子を単離が可能であると考えられる。また、今後、ペルオキシダーゼ遺伝子とポリフェノールオキシダーゼ遺伝子を単離し、それらの発現調節することにより病害抵抗性における両遺伝子の役割を確認する必要がある。クワの病害抵抗性関連遺伝子をアグロバクテリウムを用いたT-DNAタギング法により単離するため、平成8年度は、(1)クワの病害抵抗性の強弱を迅速に評価するためのアッセイ法の確立と(2)形質転換体クワカルス作出法の確立を目的とし以下の検討を行った。(1)クワ病害抵抗性アッセイ法の確立:クワ(品種フィカス)実生胚軸からカルスを誘導し、クワ培養細胞系を確立した。クワに対する病原性がすでに明かにされているフザリウム菌(19菌株)を用いて、それらの胞子懸濁液をクワカルス表面上に接種し、胞子の発芽、菌糸の生育状況を観察した。供試した全てのクワ芽枯病菌(8菌株)はクワカルス上からの菌叢の発育が認められたが、非病原性菌では多犯性の1菌株を除き、供試した11菌株のうち8菌株では菌叢が全く形成されなかった。菌叢形成は、接種2-3日後に肉眼判別することが出来た。非病原性フザリウム菌を接種すると抵抗性反応が誘導され、その結果菌糸の発育が抑制されたと考えらる。本研究により、クワカルスを用いたクワの病害抵抗性の程度あるいはフザリウム菌の病原性の程度を極めて短時間に評価する方法が確立された。(2)クワ培養細胞における形質転換法の確立:クワカルスへのアグロバクテリウムによる形質転換法を確立するため、クワカルスの培養日数、A.tumefaciensの接種方法(有傷接種法、真空投入法)、アセトシリンゴン、カルスとA.tumefaciensとのコカルチャー時の温度、抗生物質の濃度と処理時期について検討した。

カナマイシン耐性遺伝子とβ-グルクロニダーゼ(GUS)遺伝子を持つバイナリーベクターをT-DNAとして用いた。現在カナマイシン耐性の形質転換体クワカルスの選抜を行っている。形質転換のための最適条件はまだ確立されていない。クワ芽枯病菌(Fuarium lateritium f.sp.mori)がクワに感染すると、組織中に菌糸が蔓延し、組織表面に分生胞子からなるスポロドキアが形成される。一方、非病原性フザリウム菌の感染に対してはクワ植物は抵抗性反応を示し、菌糸の蔓延はみられず病微が現れることもない。これらの病害抵抗性反応の相違は、菌側の非病原性(病原性)遺伝子と宿主植物側の抵抗性遺伝子との相互作用により発現されると考えられる。そこで今回は、宿主植物側に焦点をあて、遺伝子タギングによりクワの病害抵抗性関連遺伝子を単離しその機能を解析することによりクワの病害抵抗性機能を解明することをめざした。本研究では、まずタギングした遺伝子の機能解析に不可欠であるクワの病害抵抗性発現の迅速な評価法をクワ培養細胞を用いて確立した。本法を用いることにより、季節にとらわれること無く僅か3日間でクワの病害抵抗性の程度を一度に多数評価することが可能となった。続いて、病害抵抗性関連遺伝子のT-DNAタギングを行うために、Agrobacterium tumefaciensによるクワ植物(培養細胞)おける形質転換法の確率をした。一方、非病原性フザリウム菌の感染時にみられる局部的かつ急速な感染組織の褐変化がクワの病害抵抗性反応の重要な役割を果たしていると考えられる。そして、ペルオキシダーゼおよびポリフェノールオキダーゼが感染組織の褐変化に関与していることが明らかにされ、両酵素はクワの病害抵抗性発現に極めて重要な機能を持つことが示唆された。本研究で検討された方法を用いて病害抵抗性に関連する遺伝子を単離が可能であると考えられる。また、今後、ペルオキシダーゼ遺伝子とポリフェノールオキシダーゼ遺伝子を単離し、それらの発現調節することにより病害抵抗性における両遺伝子の役割を確認する必要がある。
近代日本の宗教運動の政治的機能に関する実証的研究

本研究は、地域社会において宗教運動が果たした政治的機能を明らかにすることを目的としたものである。その事例として、仏教者の妹尾義郎(18891961)が組織した大日本日蓮主義青年団(1919年結成)と新興仏教青年同盟(1931年創立)による宗教運動を取り上げ、分析を行った(いずれも現存しない団体)2年間にわたる調査を通じて、両団体の支部所在地だった8都道府県(岩手、福島、東京、山梨、広島、岡山、山口、和歌山)、関係資料が所蔵されている38ヶ所の研究機関等を訪ね、一次資料を収集するとともに、20名の関係者への聞き取り調査を行った。その結果、全国に散逸していた団体の機関誌(紙)、パンフレット等を相当程度、収集することができ、平成18年度末に作成した研究成果報告書に、その目次データベースを掲載することができた。これは、国内外初の試みである。また、運動に関わったメンバーの関係者への聞き取り調査を通じて、これまでの研究史では明らかになっていなかった新たな事実も得ることができ、その成果の一端は、学会報告や論文を通じて公にした。また、研究成果報告書に掲載した論文では、山梨県と岡山県の事例を取り上げ、上記団体の地方支部がどのような活動を実践し、その活動が当該地域でどのような政治的機能を果たしたのかを明らかにすることができた。これらの支部は、戦前期日本の政教関係の下、個々人の私的領域にとどまらず、各地域社会の公的領域への進出を積極的に図り、仏教(日蓮主義、新興仏教)の理念にねざした制度的かつ非制度的な政治参加を行ったという知見を得ることができた。本調査の目的は、19201940年代の複数の地域社会における妹尾義郎の宗教運動の調査・研究である。今年は長野県、岡山県、広島県、山梨県で現地調査を実施し、一次資料の収集と関係者への聞き取り調査を行なった。また、これらの地域以外の京都、名古屋、東京でも資料収集を実施した。資料収集については、上記各地の公共図書館や研究機関、大学図書館等を通じて、妹尾義郎や運動組織のメンバーの著作を始め、大日本日蓮主義青年団機関誌『若人』、新興仏教青年同盟機関誌『新興仏教の旗の下に』『新興仏教』、仏教社会(主義)同盟機関誌『ブッディズム』『前衛仏教』『仏社同盟ニュース』など、貴重な一次資料をかなり集めることできた。現在、機関誌については、目次のデータベース化を進めている。また、現地調査として、妹尾が第二次世界大戦中から逝去するまで過ごした長野県松本市、故郷の広島県庄原市東城町、旧制中学時代を過ごした岡山県高梁市、日蓮主義青年団山梨支部のあった山梨県甲府市を訪問し、妹尾富子氏(義郎の長男・鉄太郎氏の妻)、妹尾稲造氏(鉄太郎・富子夫妻の長男)、妹尾道郎氏(妹尾義郎の甥)、高梁基督教会の八木橋康広牧師、小野達雄氏(鏡中條農民組合の小野永雄氏のご子息)に話を伺った。他にも作家の稲垣真美氏、妙本寺住職の平野信行氏、岡山大学名誉教授・関西福祉大学教授の坂本忠次氏に貴重な話をお聞きすることができた。以上の調査を通じて、妹尾の生涯や日常的な活動の様子を始め、一部の地方支部の活動を把握することができた。とくに実際に市議会選挙に立候補し、具体的な政治参加を行なった新興仏教青年同盟岡山支部の活動については、その詳細を調べることができた。来年度はまだ完全ではない一次資料の収集を進めるとともに、今年度訪問できなかった地方への現地調査に臨みたいと考えている。また、関係者への聞き取り調査も引き続き継続する予定である。