hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
microRNAを介した胃癌における抗HER2抗体耐性機序の解明

下記のことを達成し、このmiR 223-FBXW7 pathwayが抗HER2抗体薬耐性機構に関わることを証明した。・FBXW7の発現抑制がトラスツズマブ感受性を低下させることをFBXW7 siを用いて、確認した。・トラスツズマブ耐性株と親株でmicroRNAmicroarrayを用いて耐性に関与するmicroRNAの網羅的に解析を行った。さらに、in silicoにてFBXW7を標的とし得るmiR 223を同定した。・miR 223の強制発現にてMCL1, c-Myc, c-JunといったFBXW7の下流シグナルの変化とトラスツズマブ感受性が低下することと、逆に、miR 223の発現抑制によっても下流シグナルが変化しトラスツズマブ感受性が上昇することをそれぞれ胃癌細胞株において確認した。・トラスツズマブ耐性におけるメカニズムとして、抗アポトーシスが一因であることを確認した。以上の結果を、国内・国外の学会を通じて発表を行い、またInternational Journal of Cancerに報告し、日本国内だけなく、国外に向けても発信した。平成27年までに胃癌株化細胞(NCI-N87)を用いて、トラスツズマブ耐性株を作製し、microarrayを行い、miR 21-5p/PTENとmiR 223/FBXW7経路がトラスツズマブ耐性に関わることを証明した。耐性の機序の一因として、抗アポトーシスによる変化を考え、FACSを用いてアポトーシスの変化を観察した。miR-223の強制発現によりPI陰性かつAnnexin V陽性細胞の割合が有意に減少しており、アポトーシス細胞が減少したと考えられた。アポトーシス関連タンパクであるcleaved PARPの発現も明らかに低下しており、Trastuzumabの感受性の変化の一因として、アポトーシスが関与していることが示された。また、miR 223-FBXW7経路がトラスツズマブに特異的な耐性かどうかを確認するために、胃癌株化細胞(NCI-N87)とそのトラスツズマブ耐性株を用いて、シスプラチンとの感受性について検討した。NCI-N87(miR 223低発現)に対して、miR 223を強制発現させたところ、シスプラチンの感受性は上昇した。逆にNCI-N87トラスツズマブ耐性株(miR 223高発現)に対して、miR 223を強制抑制したところ、シスプラチンの感受性は低下した。これはトラスツズマブとは逆の効果であった。この事象はmiR 223がFBXW7を制御することで抗アポトーシス効果を引き起こしトラスツズマブ耐性につながるという側面と、MCL1やc-Myc、c-Junといった細胞周期を促進させるタンパク質発現が上昇することで、細胞周期に依存するシスプラチンの感受性上昇につながるという側面があることが考えられた。これらのことにより、miR 223/FBXW7経路はトラスツズマブに特異的な耐性経路であることが考えられた。トラスツズマブ感受性株であるNCI-N87を同定し、同株にトラスツズマブの持続投与を6か月間行うことでトラスツズマブ耐性胃癌細胞株を作製した。耐性株と親株でmicroRNA(miR)
炎症性腸疾患におけるユビキチン様分子UBDの蛋白制御機能を介した新規病態の解明

本研究では腸上皮における「UBD依存的ユビキチン様蛋白・プロテアソーム系(UBD依存的UBL-PSM系)」に着目し、同機構が制御する細胞内標的タンパクを探索・同定すると共に、炎症性腸疾患の発症等における機能的意義の解明を目指す。この為、ヒト腸上皮内「UBD依存的UBL-PSM系」標的分子の網羅的探索・同定及びヒト腸上皮内「UBD依存的UBL-PSM系」の標的分子を介した機能の解析を実施する。
枯草菌染色体上への遺伝子増巾の誘起とその応用

枯草菌のツニカマイシン耐性変異株のうちで同時にαーアミラーゼの高生産性を付与された変異株の解析から、我々は枯草菌において固有遺伝子の染色体上の遺伝子増巾現象をはじめて見出した。この遺伝子増巾は形質転換によって受容菌にも誘起することが出来、その形質転換DNAの必須構造を明かにしてきた。本研究は更にこれまでの知見を敷衍し、枯草菌染色体上に外来遺伝子を増巾すること、また遺伝子増巾に関与するツニカマイシン耐性遺伝子tmrBの機能の解明を目的とする。初年度はまず外来遺伝子の枯草菌染色体上への増巾を試みた。我々は既に枯草菌に遺伝子増巾を起しうる形質転換DNAとして6.4kbEcoRI断片をクローン化している。この断片の一端にはamyE遺伝子の一部が存在する。この6.4kbEcoRI断片の中ほどにpC194プラスミド由来のクロラムフェニコールアセケルトランスフェラーゼ遺伝子catを挿入したものを作製し、このDNAを用いてamyE07変異をもつ枯草菌を形質転換し、amyE^+、Tm^r(ツニカマイシン耐性)の形質転換体を得たところ、外来遺伝子であるcatを枯草菌染色体上に約20コピー増巾させることに成功した。cat遺伝子が増巾することによってクロラムフェニコールに高度に耐性(40μy/ml)になっていた。最終年度では遺伝子増巾を誘起する役割をもつツニカマイシン耐性遺伝子tmrBの機能の解析を行った。tmrB遺伝子は我々により既にクローン化されている。この遺伝子のmRNAのスタートポイントを確めるためSIマツピングを行い、塩基配列から求めた想定ORFの正しが確められた。次にtmrB遺伝子産物が増大したときツニカマイシン耐性となるところから、この状態でツニカマイシンの分解や修飾の有無をしらべたが、これらの現象は認められなかった。tmrB遺伝子が多コピー状態でもツニカマイシン作用点の酵素活性は耐性化していなかった。我々は枯草菌のツニカマイシン耐性変異株のうちで同時にαーアミラーゼの高生産性を付与された株の解析から,枯草菌において個有遺伝子の染色体上の遺伝子増巾現象をはじめて見出した.またこの遺伝子増巾は形質転換によって受容菌にも誘起することが出来,その形質転換DNAの必須構造を明かにしてきた.本研究は更にこれまでの知見を敷街し,枯草菌染色体のどの領域においても遺伝子増巾を誘起しうる形質転換法の確立,外来遺伝子の枯草菌染色体上への増巾,およびこの遺伝子増巾現象を利用しての物質生産への応用を目的としている.またこの遺伝子増巾に関与するツニカマイシン耐性遺伝子の機能の解明もめざしている.本年度はまず外来遺伝子の枯草菌染色体上の増巾を試みた.我々は既に枯草菌に遺伝子増巾を誘起しうる形質転換DNAとして6.4kb EcoRI断片をクローン化している.この断片の一端にはamyE遺伝子の一部が存在する.この6.4kb Ecok[断片の中ほどに,pc/94プラスミド由来のクロラムフェニコール

アセチルトランスフェラーゼ遺伝子catを挿入したものを作製し,このDNAを用いてamyE07変異をもつ枯草菌を形質転換し,amyE^+,Tm^r(ツニカマイシン耐性)の形質転換株を得たところ,外来遺伝子であるcatを枯草菌染色体上に約20コピー増巾させることに成功した. cat遺伝子が増巾することによってクロラムフェニコールに高度に耐性(40μg/ml)になっていた.cat遺伝子は1つの例でよって,同様に他の外来遺伝子を枯草菌の染色体上に増巾させることが可能となった訳である.ついで遺伝子増巾し際選択圧に耐える遺伝子としてツニカマイシン耐性遺伝子tmrBが必須の役割を果しているので,この遺伝子の機能の解明を試みた.薬剤の修飾又は分解が最も可能性が高いと思われたが,しらべた限りではツニカマイシンの修飾や分解は全く起っていないことが判明した.我々は枯草菌のツニカマイシン耐性変異株のうちで同時に2-アミラーゼの高生産性を付与された株の解析から、枯草菌において個有遺伝子の染色体上の遺伝子増巾現象をはじめて見出した。またこの遺伝子増巾は形質転換によって受容菌にも誘起することが出来、その形質転換DNAの必須構造を明らかにしてきた。本研究はさらにこれまでの知見を敷衍し、枯草菌染色体のどの領域においても遺伝子増巾を誘起しうる形質転換法の確立、外来遺伝子の枯草菌染色体上への増巾、およびこの遺伝子増巾現象を利用しての物質生産への応用を目的としている。またこの遺伝子増巾に関与するツニカマイシン耐性遺伝子timrBの機能の解明も行う必要がある。本年度はtimrBの遺伝子の機能の解析を行った。timrB遺伝子は我々により既にクローン化されているが、この遺伝子の想定オープンリーディングフレーム(DRF)が正しいかどうかを確かめるためmRANのスタートポイントの決定をまず行った。SIマツピングの結果は想定のORFの開始ユドンの196p上流のAより転写が開始しており、想定ORFが正しいことが示された。ついでtimrB遺伝子の機能を明らかにするために^3H化ツンカマイシンを調製した。timrB遺伝子を多コピー持つ枯草菌と1コピー持つ野生菌を用いた^3H-ツニカマイシンの分解や修飾についてしらべた。生菌そのもの、或は菌の粗抽出液を用いた場合もツニカマイシンの分解、修飾は認められなかった。またtimrB遺伝子を多コピー持つ枯草菌の膜標品を調製し、N-アッセチルグツユサミンのリピド中間体形成反応をしらべたが本反応はツニカマイシンに対して耐性になっておらず、耐性化の構造は未だ明らかでない。しかしツニカマイシン耐性になるためにはtimrB遺伝子が増巾されねばならず、遺伝子増巾の誘起には必須の遺伝子であり、よく用いられるcat遺伝子と同様に有用である。
交通事故死者および負傷者の損失評価値の計測に関する研究

本研究では,交通事故死者および負傷者の損失評価に関連して,以下の2点を明らかにすることを目的としていた.1.交通事故による死亡を回避することの価値を計測するためのリスク回避への支払い意思額に年齢がどのように影響するか.2.重度後遺障害の評価方法の検討まず,1については,アンケート調査を実施し,その結果を分析することで影響を検討した.具体的には,年齢の影響と相関の強い所得の影響を考慮する方法を提案し,所得以外の影響でどの程度支払い意思額が異なるかを検討した.結果は,30代の支払い意思額は,60代と比較して約2.6倍大きいことがわかった.ただし,この違いがどのような要因によって発生しているかについては,今後検討が必要である.なお,この結果に関しては,国際学会(審査付)^*にて発表した.次に,2については,仮想市場法,標準ギャンブル法,時間得失法という3つの評価手法を改良して,死亡よりもより重大な損失である可能性がある重度後遺障害の評価にも適用可能なように改良し,実際に調査を行い比較検討を行った.得られた知見としては,仮想市場法は重度後遣障害と死亡との違いを計測するには,適切ではないこと,時間得失法は被験者間でばらつきが小さくなる傾向があること,標準ギャンブル法は,比較的一様に結果がばらつく傾向を待つことなどが挙げられる.現在,各手法の特性の分析を済ませ,手法間での違いの検討をしている.結果が整理でき次第,論文として投稿する予定である.死亡の損失評価値への年齢の影響死亡の損失評価値を年齢別に推計する手法として,CVMを用いて評価をする方法(直接計測アプローチ)とCVMを用いて軽度の負傷の損失評価値を計測し,この軽度の負傷と死亡の損失評価値の限界代替率を標準ギャンブル法を用いて計測し,2つの値を用いて評価をする方法(チェーンアプローチ)の2つの手法の特性を検討した.後者の手法は,負傷の損失評価値,限界代替率等の複数の値を計測しそれらを掛け合わせるという操作をするため,年齢による違いのような詳細な分析をするには,それぞれの計測値への年齢の影響が複雑に入り込むため,適していないことがわかった.現在,上記の知見を踏まえ,追加調査を実施した段階であり,現在,結果の分析に入った段階である.重度後遺傷害の損失評価値の計測重度後遺傷害を評価する手法として,3つの手法を用いて定量化を実施することとした.1.CVMを用い事故に遭い重度後遺傷害になるリスク(確率)を削減できることへの支払意思額を調査し,重度後遺傷害の損失評価値を計測する.2.重度後遺傷害と死亡の損失評価値の限界代替率を修正した標準ギャンブル法を用いて計測する.3.時間得失法を用いて,重度後遺傷害と死亡の損失評価値の比率を計測する.(2および3から重度後遺傷害の損失評価値を導出するに死亡の損失評価値を別途計測しておく).2の手法は重度後遺傷害と死亡の発生確率のトレードオフから評価をする手法であり,一方3の手法は,死亡により失う余命の長さと,重度後遺傷害の状態で生活する時間の長さのトレードオフ関係から評価をする手法である.現在調査を実施し分析の途中であるが,重度後遺傷害等級一級の症状については,死亡よりも大きな損失であるという結果(CVMでは1.71倍,標準ギャンブル法では1.45倍,時間得失法では1.26倍)が出ている.本研究では,交通事故死者および負傷者の損失評価に関連して,以下の2点を明らかにすることを目的としていた.1.交通事故による死亡を回避することの価値を計測するためのリスク回避への支払い意思額に年齢がどのように影響するか.2.重度後遺障害の評価方法の検討まず,1については,アンケート調査を実施し,その結果を分析することで影響を検討した.具体的には,年齢の影響と相関の強い所得の影響を考慮する方法を提案し,所得以外の影響でどの程度支払い意思額が異なるかを検討した.結果は,30代の支払い意思額は,60代と比較して約2.6倍大きいことがわかった.ただし,この違いがどのような要因によって発生しているかについては,今後検討が必要である.なお,この結果に関しては,国際学会(審査付)^*にて発表した.次に,2については,仮想市場法,標準ギャンブル法,時間得失法という3つの評価手法を改良して,死亡よりもより重大な損失である可能性がある重度後遺障害の評価にも適用可能なように改良し,実際に調査を行い比較検討を行った.得られた知見としては,仮想市場法は重度後遣障害と死亡との違いを計測するには,適切ではないこと,時間得失法は被験者間でばらつきが小さくなる傾向があること,標準ギャンブル法は,比較的一様に結果がばらつく傾向を待つことなどが挙げられる.現在,各手法の特性の分析を済ませ,手法間での違いの検討をしている.結果が整理でき次第,論文として投稿する予定である.
WWW文書のコラージュ的編集から学術的な論作文へと高める文章技術指導法の確立

前年度に考案した論作文指導法に基づき、授業実践を行った。本指導法では、まず、a)論理的な論作文、b)WWW文書の検索と蓄積、c)WWW文書のコラージュ的な編集、d)引用・参考、の4点に関する、知識・技術を指導する。その後、1)課題の設定、2)WWW文書の検索・閲覧と蓄積、3)文章の論理構成の構想、4)文章の骨格(問題提起、意見提示、展開、結論の4パートで構成)の作成、5)各パートへのWWW文書の必要部分の埋め込み、6)埋め込んだ文書間やパート間をつなぐ分の記述、の6段階からなる論作文の実践に移る。知識・技術の指導では、前年度に作成した、レポートの事例集や、WWW文書の事例集、引用・参考の手引きを用いた。これらは、論作文を行う際の資料としても用いた。論作文では、大学入試の是非、子どもの携帯電話利用の是非、早期英語教育の是非など、身近な話題から始め、最終的に、インターネット普及の是非について、レポートを作成させた。多くの学生のレポートには、当初は、引用・参考が適切ではない、主張が明確ではない、議論にぶれがある、論理に飛躍があるなどの問題が見られた。しかし、指導を重ねることで、徐々に問題が解消され、最終的にはほとんどの学生が、少なくとも、1)序論・本論・結論などの構成が明確である、2)引用・参考を明示している、といった点で問題のないレポートを作成した。なお、授業実践では、支援システムの開発が間に合わなかったために、既存のWWWブラウザやファイルシステムを用いた。授業実践後に、授業実践における学生の様子や、既存のシステムに関する研究から得られた知見を元に、支援システムを設計し、開発した。本システムでは、WWW文書の蓄積や整理、分類、コラージュ的な編集をスムーズに行うことができる。レポートや論作文の指導法についての先行研究や、関連する文献を調査し、既に提案されている指導法について整理した。その中から、文章の骨格の書き方や、段落の構成、段落間のつなげ方など、文章を論理的に構成する方法と、論作文を念頭に置いたWWW文書の検索方法について、有効な方法を見出した。また、著作権法について調査し、正しい引用や参考の方法について整理した。これらに基づき、1)論理的な論作文、2)WWW文書の検索と蓄積、3)WWW文書のコラージュ的な編集、4)引用・参考、の4点について、一連の指導方法を考案した。特に、1)については、学生を被験者として実験を行い、指導方法の有効性と改善すべき点について確認した。ところで、こうした指導については、学習者のレディネスによっては、段階的に指導を行うことが望ましい。例えば、指導の最初の段階では、手本を提示し、それをアレンジさせながら文章を書かかせる、次の段階では、論作文のテーマを提示し、骨格については考えさせるが、その中で論拠として引用したり参考にするWWW文書については、検索させずにこちらから提供するなどの措置が必要である。そのために、論作文の事例集や、論作文に用いるためのWWW文書の事例集を作成した。また、検索したWWW文書の蓄積や整理、分類、コラージュ的な編集、論作文での引用を行うためには、手動では作業が繁雑であり、コンピュータによる支援が望ましい。そのため、支援システムを開発するための準備として、システム開発に必要な要素技術の調査と試験を行った。
脳血管障害痴呆症モデルの神経回路再生に関する研究

平成11年度は,マイクロスフェア脳塞栓モデルでは記憶学習能低下には一部のACh系神経損傷が伴っている可能性を示唆した.本年度はこの点を先ず明らかにする研究を実施した.海馬スライスでのACh受容体刺激に反応する情報伝達経路一部の活性化(MAP kinaseの活性化)は脳虚血で低下した.この活性低下は情報伝達系のPKC/MAP kinase系の中のGαq subunitのチロシンリン酸化が進行しないためと判明した.即ち,マイクロスフェア脳塞栓による記憶学習機能障害の一因として情報伝達系Gαqの障害が推察された.一方,神経再生過程を検索するためにマイクロスフェア脳塞栓ラットにおいて,神経再生因子であるbrain-derived neurotrophic factor(BDNF),growth-associated protein 43(GAP43),nerve adhesion molecule L1の変化を追跡した.神経成長因子であるBDNFはマイクロスフェア塞栓7日目の両側海馬で増大した.神経成長指標であるGAP43は梗塞部位では到底認められないが,梗塞周縁部位では増大する部位が認められた.一方,細胞接着因子であるL1は梗塞部位では勿論,梗塞周縁部位でも発現は増大しなかった.海馬部位自体ではGAP43およびL1のタンパクがむしろ低下したことを認めた.この事実は梗塞部位ではまったく神経再生は発現していないこと,梗塞周縁部位の一部では神経成長因子,神経成長指標は活動する気配はあるが,神経接着因子の協調が認められないため,最終的には神経成長は発現できないこと,その結果,虚血障害は増悪し,結局は神経細胞壊死につながることが推測された.平成11年度は,マイクロスフェア脳塞栓モデルでは記憶学習能低下には一部のACh系神経損傷が伴っている可能性を示唆した.本年度はこの点を先ず明らかにする研究を実施した.海馬スライスでのACh受容体刺激に反応する情報伝達経路一部の活性化(MAP kinaseの活性化)は脳虚血で低下した.この活性低下は情報伝達系のPKC/MAP kinase系の中のGαq subunitのチロシンリン酸化が進行しないためと判明した.即ち,マイクロスフェア脳塞栓による記憶学習機能障害の一因として情報伝達系Gαqの障害が推察された.一方,神経再生過程を検索するためにマイクロスフェア脳塞栓ラットにおいて,神経再生因子であるbrain-derived neurotrophic factor(BDNF),growth-associated protein 43(GAP43),nerve adhesion molecule L1の変化を追跡した.神経成長因子であるBDNFはマイクロスフェア塞栓7日目の両側海馬で増大した.神経成長指標であるGAP43は梗塞部位では到底認められないが,梗塞周縁部位では増大する部位が認められた.一方,細胞接着因子であるL1は梗塞部位では勿論,梗塞周縁部位でも発現は増大しなかった.海馬部位自体ではGAP43およびL1のタンパクがむしろ低下したことを認めた.この事実は梗塞部位ではまったく神経再生は発現していないこと,梗塞周縁部位の一部では神経成長因子,神経成長指標は活動する気配はあるが,神経接着因子の協調が認められないため,最終的には神経成長は発現できないこと,その結果,虚血障害は増悪し,結局は神経細胞壊死につながることが推測された.本年度は,先ずマイクロスフェア塞栓による多発梗塞モデルに記億・学習機能の悪化とアセチルコリン系神経伝達機能の低下が共存しているかを検討した.water maze法およびpassive avoidance法で検討した記憶・学習機能は,マイクロスフェア塞栓で著しく低下した.脳大脳皮質,海馬、線条体でのACh量は低下した.また,ChAT活性も同様に低下した.M1受容体の量も減少した.これらの結果はAChの生合成の阻害が推測された.しかし,M1受容体mRNAは大脳皮質で塞栓後1時間目で若干の増大はあるものの、他部位での変化はほとんど関連がなかったため,受容体の生合成は発現していないと推測された.以上の結果はマイクロスフェア塞栓で発生する脳虚血障害は記憶・学習能の低下をもたらし,その原因の一部はACh系作動障害が伴っていることを示唆している.この病態下で発生する神経回路再生の可能性を追究するべく,先ず,神経障害がpre-synapseあるいはpost-synapseで起こっているかを決定するため,それぞれのマーカーであるsynaptophysinおよびmicrotubularassociated protein-2(MAP-2)の上記三部位での存在を確かめたところ,各部位のMAP-2には変化がなかったものの,synaptophysinは減少した.しかし,免疫組織学的検索では梗塞巣周縁ではsynaptophysin陽性細胞が増加した.この事実は梗塞巣周縁に存在する障害を免れたニュ、ロンでは新たな神経突起が発芽している可能性を示した.
難消化性オリゴ糖の有効エネルギ-量に関する研究

本研究の最終目的は、消化・吸収されずに発酵・吸収される砂糖代替質甘味料の生理的エネルギ-を評価する方法を確立することである。従来のエネルギ-評価法は口から取り入れる食品が持っているエネルギ-量と糞便に排泄されるエネルギ-量を根拠にして算出し、摂取した食品が腸内微生物によって状態変化を受けて宿主に利用されることはブラックボックスとして取り扱ってきた。従って、消化吸収されず腸内微生物によって発酵を受ける難消化性糖類の有効エネルギ-量は、従来の評価法とは異なった方法で行わなければより正しい評価はできない。本研究においては、このよう難消化性糖類の有効エネルギ-量を発酵式に基づいて算出する方法を考案した。発酵式に基づいて有効エネルギ-量を求めるにあたっては、対象となる糖類の消化・発酵・吸収・排泄などの代謝的特微を明らかにしなければならない。本研究では代謝経路が著しく異なるネオシュガ-、マルチト-ル、エリスリト-ルの代謝経路を明らかにし、発酵式を用いてエネルギ-を推算することの妥当性を検討した。近年、わが国でその開発が盛んである単糖ならびにオリゴ糖は上記3つの糖類のいづれかと類似した経路で代謝されると考えてよい。ネオシュガ-の消化・発酵・吸収・排泄、代謝などはすでに明らかにしている。マルチト-ルは一部が消化吸収されるのでその生体利用の経路は煩雑である。代謝経路はすでに研究されているが、新たな研究によって摂取したマルチト-ルの約10%が消化され、90%が腸内微生物で発酵を受けることを明らかにした。また、マルチト-ルを資化する腸内微生物とネオシュガ-を資化する腸内微生物が異なることを明らかにした。マルチト-ルは酵母や真菌類によって主として資化されるようである。さらに、マルチト-ルが大腸の二糖類水解酵素で消化されて利用される可能性がないことを証明した。エリストリト-ルは四炭糖で分子量が小さいため、経口投与の90%以上が小腸から吸収され、代謝されずに速やかに尿中に排泄されることを明らかにした。これはヒトにおいてもラットにおいても極めて類似していた。ただし、大量に摂取したときには消化管の吸収能に限界があるため尿中排泄率は低下し、大腸において発酵を受ける比率が増加することも明らかにした。エリスリト-ルの有効エネルギ-量は他の難消化性糖質甘味料に比べて極めて少ないことが明らかになった。今後、提唱した発酵式によるエネルギ-評価法が妥当であるか否かを、幾つかの方法によって検討する予定である。基本飼料の澱粉を難消化性オリゴ糖であるフラクトオリゴ糖、マルチト-ルあるいはラクチト-ルで5%または10%になるように置換した飼料あるいはそれらを1日12g基本飼料に上乗せして、幼若ラット(約100g)を8週間ペア-フィ-ディングさせ、その時の飼料効率を求めると共に、屠殺時に解剖し、各臓器への影響を観察した。その結果からはそれぞれの難消化性糖類の相対的利用効率は推定できたが、明確な有効エネルギ-を推算するには至らなかった。^<14>Cーマルチト-ル、^<14>Cーフラクトオリゴ糖、^<14>Cー蔗糖を通常ラットへ経口投与または盲腸内投与して、呼気への^<14>CO_2排泄率、^<14>C化合物の尿中並びに糞中排泄率を24時間にわたって経時的に観察した。また、屠殺時に^<14>Cの肝臓、小腸粘膜、脂肪組織並びに血液への取り込み量、胃、小腸、大腸内残存量を測定した。その結果、同じ消化吸収されない糖類であってもネオシュガ-のようなオリゴ糖とマルチト-ルのような糖アルコ-ルとでは消化管内の移行速度に差異があり、腸内細菌を介した炭酸ガスへの代謝に時間的づれの生じること、大腸における発酵性に差異のないことなどが明らかになった。さらに、^<14>Cーマルチト-ル、^<14>Cーネオシュガ-を、抗生物質処理ラット並びに無菌ラットへ経口投与または盲腸内投与して呼気への^<14>CO_2排泄率、^<14>Cの尿中並びに糞中排泄率などを同様に観察した。抗生物質処理ラットあるいは無菌ラットの盲腸内に^<14>Cーマルチト-ルを直接投与した場合にはかなりの^<14>CO_2量が産生されたが、ネオシュガ-の場合はほとんど産生しなかった。これらの事実は、ネオシュガ-は腸内細菌によって容易に発酵を受けるが、マルチト-ルは盲腸内で水解されるか、盲腸に残存する他の微生物によって利用されることを示唆している。これらの結果は当初期待したものとは著しく異なっている。これらについてはさらに検討する予定である。

従って、消化吸収されず腸内微生物によって発酵を受ける難消化性糖類の有効エネルギ-量は、従来の評価法とは異なった方法で行わなければより正しい評価はできない。本研究においては、このよう難消化性糖類の有効エネルギ-量を発酵式に基づいて算出する方法を考案した。発酵式に基づいて有効エネルギ-量を求めるにあたっては、対象となる糖類の消化・発酵・吸収・排泄などの代謝的特微を明らかにしなければならない。本研究では代謝経路が著しく異なるネオシュガ-、マルチト-ル、エリスリト-ルの代謝経路を明らかにし、発酵式を用いてエネルギ-を推算することの妥当性を検討した。近年、わが国でその開発が盛んである単糖ならびにオリゴ糖は上記3つの糖類のいづれかと類似した経路で代謝されると考えてよい。ネオシュガ-の消化・発酵・吸収・排泄、代謝などはすでに明らかにしている。マルチト-ルは一部が消化吸収されるのでその生体利用の経路は煩雑である。代謝経路はすでに研究されているが、新たな研究によって摂取したマルチト-ルの約10%が消化され、90%が腸内微生物で発酵を受けることを明らかにした。また、マルチト-ルを資化する腸内微生物とネオシュガ-を資化する腸内微生物が異なることを明らかにした。マルチト-ルは酵母や真菌類によって主として資化されるようである。さらに、マルチト-ルが大腸の二糖類水解酵素で消化されて利用される可能性がないことを証明した。エリストリト-ルは四炭糖で分子量が小さいため、経口投与の90%以上が小腸から吸収され、代謝されずに速やかに尿中に排泄されることを明らかにした。これはヒトにおいてもラットにおいても極めて類似していた。ただし、大量に摂取したときには消化管の吸収能に限界があるため尿中排泄率は低下し、大腸において発酵を受ける比率が増加することも明らかにした。エリスリト-ルの有効エネルギ-量は他の難消化性糖質甘味料に比べて極めて少ないことが明らかになった。今後、提唱した発酵式によるエネルギ-評価法が妥当であるか否かを、幾つかの方法によって検討する予定である。本研究においては、難消化性糖類の有効エネルギ-量を発酵式に基づいて算出する方法を考案した。発酵式に基づいて有効エネルギ-量を求めるにあたっては、対象となる糖類の消化・発酵・吸収・排泄などの代謝的特徴を明らかにしなければならない。ネオシュガ-の消化・発酵・吸収、排泄、代謝などはすでに明らかにしている。動物実験においてマルチト-ルの代謝経路はすでに研究されているが、ヒトに^<14>Cーマルチト-ルを投与した代謝実験は行われていない。健常な成人男子6名に^<14>Cーマルチト-ル50mCiを経口投与し、経時的に48時間まで呼気^<14>CO_2、尿、糞、腸ガス、血液を採取した。また、別の実験においてマルチト-ル30gを健常な成人男子10人に経口投与し、経時的に10時間まで呼気水素ガスを測定した。これらの研究によって、経口投与したマルチト-ルの約10%が消化され、約90%が腸内微生物で発酵を受けることが明らかになった。さらに、大腸粘膜に非常に弱いマルタ-ゼ活性の存在することを明らかにすると共に、大陽に送り込まれた未消化のマルチト-ルはこの二糖類水解酵素で消化されて利用される可能性がないことを証明した。一方、四炭糖アルコ-ルであるエリスリト-
ケトン体代謝を介したグリア系3細胞の統合的制御による新規脳梗塞治療開発

ケトン体の1つβヒドロキシ酪酸(BHB)が脳虚血でアストログリア(AG)から放出されることを明らかにした。ケトン体の脳保護作用と多発性硬化症治療薬フマル酸ジメチル(DMF)の関連が注目されている。Nrf2を介した作用が提唱されてきたが、DMFおよびBHBのHCAR2リガンド作用を介する神経保護的ミクログリア(mg)誘導作用が注目されている。培養細胞でDMFはNrf2活性化を惹起し、qRT-PCRによるHO-1遺伝子転写亢進が確認された。脳梗塞モデルマウスに対するDMF経口投与でも有意に梗塞巣体積を縮小、運動機能も改善した。Nrf2-KOマウスでも効果が維持され、HCAR2の関与が示唆された。脳虚血におけるグリア系細胞相互のコミュニケーションと神経細胞への保護、障害作用を検討するため、アストログリア(AG)とミクログリア(mg)に発現するtoll-like receptor 4 (TLR4)を介したメカニズムを検討した。TLR4はミクログリア中心に発現し、その古典的リガンドlipopolysaccharide (LPS)はROS/NO産生を介して炎症反応を惹起する。我々はLPSが培養アストログリアに対してpentose-phosphate pathway (PPP)活性化とグルタチオン還元を介する抗酸化作用を惹起することを報告したが、数%混在するmgとの相互作用を明らかにするため、mgを化学的に除去し、LPSによるROS/NO産生とPPP活性化について、低酸素誘導性のPPP活性化と比較検討した。SDラットよりAGを調整し、Ara-C + L-leucine methyl ester (LME)処理によりmgを除去した。正常(21%)・低(1%)O2チャンバー内でLPS (0.01 μg/mL)を負荷後、PPP flux([1-14C]と[6-14C]glucoseの代謝差分)、ROS/NO産生率(H2DCFDAとDAFDA蛍光強度)を測定した。AG、mg同定、Nrf2核移行は免疫染色で、TLR4発現はWBで検討した。培養AG(GFAP+)に約10%認められたmg(Iba1+)は、Ara-C + LME処理で消失したが、TLR4発現は維持された。LPS投与(12 h)で惹起されるROS/NO産生はmg除去後消失、AGのNrf2核移行とPPP活性化も消失した。低酸素下のPPP活性化は維持された。MEK阻害薬U0126前処理はLPSによるNO産生とPPP活性化を阻害した。mg除去後AGにグルタチオン産生阻害を施すことで、LPS誘導性ROS産生が再観察された。TLR4刺激は、mg由来のNOを介してAGにNrf2依存性PPP活性化を惹起し、mgのもたらす酸化ストレスに対する防御作用が示唆された。AGのTLR4刺激もROS/NO産生をもたらすが高い除去活性により顕在化せず、PPP活性化トリガーとして低酸素はmg非依存性に、TLR4刺激はmg依存性に作動すると推測された。本研究課題であるグリア系細胞の統合的制御機構の解明として、本年度はまずアストログリアとミクログリア間のTLR4を介した神経保護効果のメカニズムに注目して研究を進めミクログリアから放出される一酸化窒素(NO)産生がアストログリアのKeap1/Nrf2システムを直接活性化し、その下流にある抗酸化ストレス機構を介して神経保護的に作用する可能性を初めて明らかにした。ラット由来の初代培養ニューロンを培養プレート底面にて培養し、プレートインサート底面には培養アストログリア(約10%のミクログリアを含有)、および化学的(ara-C + LME)ミクログリア除去法にてミクログリアを含まない純粋アストログリア、さらにミクログリアのみの単独培養(少数のアストログリアを含む)を準備した。4.5時間のOGD(無グルコース+ 1%酸素)負荷をかけ、通常の培養条件に復した後24時間におけるニューロンの生存率をLDHアッセイ、ABアッセイにて定量した。ミクログリア単独ではニューロンの生存率はコントロールに比して低下し、アストログリア存在下、さらにミクログリアの併存がニューロンの生存率を上昇させた。培地にはケトン体合成に必要なパルミチン酸を添加後には、ミクログリアを含まない純粋アストログリアでもニューロン保護作用を認めた。当施設の倫理審査で承認された臨床研究計画に基づき、神経内科外来患者に対して書面同意を取得の後、ミエリンマップを含むルーチンのシーケンスの頭部MR(一部Gd造影あり)を実施した。対象患者は頭痛、めまいなどの愁訴にて当院神経内科外来に通院中、もしくは初診の患者であり、神経学的局在徴候を認めず、認知機能正常の患者である。また通常の心血管疾患の危険因子を有さず、抗血栓療法を受けていない患者から、通常のシーケンスからMR上無症候ラクナ、白質病変を有する患者を選別した。同時に撮像された「ミエリンマップ」では、FLAIR画像にて描出された白質病変には全例で髄鞘密度の低下が確認された。一部の病変ではFLAIR画像の病変に比して髄鞘脱落はより広範であった。Gdによる造影効果は認めなかった。FLAIR画像による病変とミエリンマップによる病変の両者の間で継時的に変化が生じるか否かは現在解析中である。培養細胞を用いたアッセイ系でアストログリアとミクログリアの相互連関についてニューロンへの保護作用として証明した。

我々は既にケトン体の1つβヒドロキシ酪酸(BHB)が、脳虚血刺激によりアストログリアにおいて産生、放出されることを明らかにした。一方、ケトン体自体のもたらず種々の脳保護作用とフマル酸ジメチル(DMF)との関連が注目されている。DMFはもともと尋常性乾癬の治療薬として古くから使用されていたが、近年多発性硬化症(MS)の再発予防に有効であることが判明し、本邦でも昨年MSの再発抑制効果に対する承認を得ている。その作用機序としてはnuclear factor-kappa B(NF-κB)を介した炎症を抑制する作用や、nuclear factor erythroid 2- related factor 2(Nrf2)を介した組織保護作用が提唱されており、これらの経路は脳梗塞急性期の神経障害に対する保護作用をもたらす可能性を示唆する。一方、DMFおよびBHBがhydroxycarboxylic acid receptor 2(HCAR2)に対するリガンド作用を介しミクログリアを神経保護的な形態に変化させる作用が注目されている。本課題におけるアストログリア由来のケトン体の脳保護作用を、第3のグリア細胞であるミクログリアとの関連で検討するため、フマル酸ジメチルがマウス脳梗塞急性期モデルにおいて神経保護効果を検証した。培養細胞においてDMFはNrf2活性化を惹起し、qRT-PCRによるHO-1転写亢進が確認された。脳梗塞モデルマウスに対する経口投与においても有意に梗塞巣の体積を縮小し、運動機能にも改善効果をもたらした。しかし、その作用には培養細胞で確認されたミクログリアにおけるNrf2活性化作用にも拘わらず、Nrf2ノックアウトマウスにおいても脳梗塞縮小効果が維持されるなど、相反するデータが取得されたたため、DMFやBHBの作用機序は慎重に検討する必要がある。ケトン体の1つβヒドロキシ酪酸(BHB)が脳虚血でアストログリア(AG)から放出されることを明らかにした。ケトン体の脳保護作用と多発性硬化症治療薬フマル酸ジメチル(DMF)の関連が注目されている。Nrf2を介した作用が提唱されてきたが、DMFおよびBHBのHCAR2リガンド作用を介する神経保護的ミクログリア(mg)誘導作用が注目されている。培養細胞でDMFはNrf2活性化を惹起し、qRT-PCRによるHO-1遺伝子転写亢進が確認された。脳梗塞モデルマウスに対するDMF経口投与でも有意に梗塞巣体積を縮小、運動機能も改善した。Nrf2-KOマウスでも効果が維持され、HCAR2の関与が示唆された。我々は虚血下ではアストログリアからはケトン体の産生が亢進、放出されることを確認しており、今後はアストログリアからミクログリアへのケトン体シグナルの検討を進める。ミクログリアには代表的なケトン体の1つ、βヒドロキシ酪酸の受容体であるHCA1が発現していると報告されており、次年度は培養ミクログリアにおける受容体発現とリガンド刺激によるミクログリアへの作用をin vitro培養細胞ならびにin vivo CX3CR1-GFPトランスジェニックマウスを用いて検討する予定である。アストログリア特異的ケトン体産生能欠損マウスを用いたin vitroアッセイおよびin vivo脳梗塞モデルによる研究を進める。
含フッ素弱配位性アニオン種の金属塩を用いた新しい触媒反応の開発

本研究は、種々の弱配位性アニオン種のアルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩を新規に合成し、これらの金属塩を触媒に用いて、弱配位性有機溶媒中において極限的に活性化された親電子的なリチウムイオンによって促進される新しい炭素一炭素結合形成反応を開発することを目的した基礎的研究である。触媒機能発現に及ぼすアルカリ金属イオンの種類と弱配位性アニオン種の構造の影響、および、その反応機構の詳細を明らかにするため、実験化学的および計算化学的手法を駆使した研究を行った。計算化学的研究:各種弱配位性アニオン種の配位性の大きさを定量的に評価するために、Gaussian98やSPARTANを用いたab initio法や密度汎関数法を用いて、1)各種弱配位性アニオン種を対アニオンとするBroensted型超強酸の計算による酸性度と気相酸性度との相関関係を詳細に調べた。2)リチウムイオンの親電子性に及ぼす対アニオンの効果を詳細に調べた。また、3)リチウムイオンと各種有機化合物の錯体の安定性や各種リチウム塩によって促進されるDiels-Alder反応やクアドリシクランの原子価異性化反応の反応遷移状態に関する精密理論計算を行い、これらの結果をプロトンやオキソニウムイオンの場合の相互作用の大きさと比較して、リチウムイオンの特異性を考察した。実験化学的研究:含フッ素テトラアリールホウ酸アニオン、イミドアニオン、メチドアニオンおよびアルミナートイオンなど各種弱配位性アニオン種のリチウム金属塩を合成し、これらのリチウム金属塩によって促進される各種有機溶媒中の塩化トリチルやトリチルアルコールのハロクロミズム、Diels-Alder反応、およびクアドリシクランの原子価異性化反応の比速度定数を用いて、脱溶媒和したリチウムイオンの特異なLewis酸性について速度論的に詳細に検討した。本研究は、種々の弱配位性アニオン種のアルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩を新規に合成し、これらの金属塩を触媒に用いて、弱配位性有機溶媒中において極限的に活性化された親電子的なリチウムイオンによって促進される新しい炭素-炭素結合形成反応を開発することを目的した基礎的研究である。計算化学的研究:各種弱配位性アニオン種の配位性の大きさを定量的に評価するために、Gaussian98を用いたab initio法や密度汎関数法を用いて、各種弱配位性アニオン種を対アニオンとするBroensted型超強酸の計算による酸性度と気相酸性度との相関関係を詳細に調べた。また、リチウムイオンと各種有機化合物の錯体の安定性やリチウムイオンによって促進される有機化合物の反応遷移状態の電子構造に関する精密理論計算を行い、これらの結果をプロトンやオキソニウムイオンの場合の相互作用の大きさと比較して、リチウムイオンの特異性を考察した。実験化学的研究:含フッ素テトラアリールホウ酸アニオン、イミドアニオン、およびメチドアニオンの各種弱配位性アニオン種のリチウム金属塩を合成し、これらのリチウム金属塩によって促進される各種有機溶媒中での塩化トリチルやトリチルアルコールのハロクロミズムやDiels-Alder反応やクアドリシクランの原子価異性化反応の比速度定数を用いて、脱溶媒和したリチウムイオンの特異なLewis酸性について速度論的に詳細に検討した。

触媒機能発現に及ぼすアルカリ金属イオンの種類と弱配位性アニオン種の構造の影響、および、その反応機構の詳細を明らかにするため、実験化学的および計算化学的手法を駆使した研究を行った。計算化学的研究:各種弱配位性アニオン種の配位性の大きさを定量的に評価するために、Gaussian98やSPARTANを用いたab initio法や密度汎関数法を用いて、リチウムイオンの親電子性に及ぼす対アニオンの効果を詳細に調べた。また、各種リチウム塩によって促進されるDiels-Alder反応やクアドリシクランの原子価異性化反応の反応遷移状態に関する精密理論計算を行い、リチウムイオンの特異性を考察した。実験化学的研究:含フツ素テトラアリールホウ酸アニオン、イミドアニオン、メチドアニオンおよびアルミナートイオンなど各種弱配位性アニオン種のリチウム金属塩を合成し、これらのリチウム金属塩によって促進される各種有機溶媒中の塩化トリチルやトリチルアルコールのハロクロミズム、Diels-Alder反応、およびクアドリシクランの原子価異性化反応の比速度定数を用いて、脱溶媒和したリチウムイオンの特異なLewis酸性について速度論的に詳細に検討した。
ニトログリセリンに対する冠動脈狭窄下心内膜側微小血管拡張反応の解析

心臓は絶えず収縮弛緩を繰り返し、莫大なエネルギーを消費している。このエネルギー産生に必要な酸素や栄養素の供給路である冠動脈に狭窄が生じ自己調節能を超えると短時間のうちに虚血に陥り、最後には心筋梗塞を来す。ニトログリセリン(NTG)は虚血性心疾患の治療の代表的薬剤であり、その作用機序は、(1)冠動脈系を拡張させ心筋への酸素供給量を増加させる。(2)静脈容量血管を拡張させ、静脈系から心臓に戻ってくる血液量を減少させることにより、心仕事量を減少させる。という主に2つの作用が考えられている。NTGの冠血管に対する作用メカニズムは、心外膜側の冠血管についてはかなり解析されているが、心筋虚血に陥り易い心内膜側での冠細動脈に対する拡張反応については観察方法がないため評価されていない。そこで本研究では、心内膜側細動脈に対するNTGの拡張反応とダイナミックな反応性を新たに開発したハイスピードCCD生体顕微鏡を用いて直接観察し解析した。麻酔開胸ブタ10匹を用い、左心房を切開し、バルーンの付いたニードル型レンズを左心房から僧帽弁を通して心腔内に挿入し、心内膜側の細動脈を心拍動下でサイズ別(30μm-100μmの細動脈、100μm300μmの小動脈)に血管径変化を心周期を通じて親察した。心内膜側細動脈の血管径変化はNTG投与前から投与後3分まで経時的に観察した。その結果、比較的大きな細動脈(>100μm)の拡張反応はNTG投与後15秒で最大となり、その後徐々に減弱した。一方、小さな細動脈(<100μm)はほとんど拡張反応は示さなかった。また、NTGは大きな細動脈の拡張末期から収縮末期までの血管径の変化を増強し、拍動性を増した。一方、小さな細動脈ではNTG投与前後で有為な変化は示さなかった。すなわち、NTGは比較的大きな細動脈を拡張させ、これらの血管の収縮期一拡張期の拍動性を増強することが窺われた。(2)静脈容量血管を拡張させるとともに末梢抵抗を低下させて、静脈系から心臓に戻ってくる血液量の減少(前負荷)とともに血圧を低下(後負荷)させることにより、心仕事量を減少させる、という主に2つの作用が考えられている。しかしながら、心筋虚血に陥り易い心内膜側での冠細動脈のNTGに対する拡張反応については観察方法がないため、我々のグループ以外ほとんど報告例がなく、特に冠動脈狭窄に伴う心筋虚血における評価はされていない。そこで本研究では、冠動脈狭窄に伴う心筋虚血下における心筋細動脈に対するNTGの拡張反応を新たに開発したハイスピードCCD生体顕微鏡を用いて観察・解析した。その結果、NTGは比較的大きな細動脈(>100μm)を拡張させたが、小さな細動脈(<100μm)は拡張させなかった。

また、NTGは大きな細動脈の拡張末期から収縮末期までの血管径の変化を増強し、拍動性を増した。一方、小さな細動脈ではNTG投与前後で有意な変化は示さなかった。すなわち、NTGは比較的大きな細動脈を拡張させ、これらの血管の収縮期一拡張期拍動を増強することが窺われた。心臓は絶えず収縮弛緩を繰り返し、莫大なエネルギーを消費している。このエネルギー産生に必要な酸素や栄養素の供給路である冠動脈に狭窄が生じ自己調節能を超えると短時間のうちに虚血に陥り、最後には心筋梗塞を来す。ニトログリセリン(NTG)は虚血性心疾患の治療の代表的薬剤であり、その作用機序は、(1)冠動脈系を拡張させ心筋への酸素供給量を増加させる。(2)静脈容量血管を拡張させ、静脈系から心臓に戻ってくる血液量を減少させることにより、心仕事量を減少させる。という主に2つの作用が考えられている。NTGの冠血管に対する作用メカニズムは、心外膜側の冠血管についてはかなり解析されているが、心筋虚血に陥り易い心内膜側での冠細動脈に対する拡張反応については観察方法がないため評価されていない。そこで本研究では、心内膜側細動脈に対するNTGの拡張反応とダイナミックな反応性を新たに開発したハイスピードCCD生体顕微鏡を用いて直接観察し解析した。麻酔開胸ブタ10匹を用い、左心房を切開し、バルーンの付いたニードル型レンズを左心房から僧帽弁を通して心腔内に挿入し、心内膜側の細動脈を心拍動下でサイズ別(30μm100μmの細動脈、100μm300μmの小動脈)に血管径変化を心周期を通じて観察した。心内膜側細動脈の血管径変化はNTG投与前から投与後3分まで経時的に観察した。その結果、比較的大きな細動脈(>l00μm)の拡張反応はNTG投与後15秒で最大となり、その後徐々に減弱した。一方、小さな細動脈(<l00μm)はほとんど拡張反応は示さなかった。一方、小さな細動脈ではNTG投与前後で有為な変化は示さなかった。すなわち、NTGは比較的大きな細動脈を拡張させ、これらの血管の収縮期一拡張期の拍動性を増強することが窺われた。
発見史料による昭和戦前期国定国語教科書編纂過程の研究

国定第四期国語教科書(『小学国語読本尋常科用』、通称サクラ読本)に関して、研究代表者が古書市場にて入手した新発掘史料をもとに、その編纂過程等を解明した。新発掘史料の中には、サクラ読本に掲載されている全教材の原案作者が示されている一覧表があった。その一覧表を翻刻して刊行することが本研究の中心作業となった。それは研究代表者編『「〔秘〕小學國語讀本尋常科用教材擔當者一覧表」翻刻・解説』(私家版、2016年)として発刊した。また各教材の編纂過程として、具体的には『小学国語読本尋常科用巻九』の第十七課「図書館」と第二十八巻「国語の力」の二教材を研究した。本研究は、国定国語教科書の編纂過程を解明することにある。その端緒として、本年度は、最後の国定国語教科書(国定第六期国語教科書)の編纂責任者・石森延男に焦点を当てた。石森延男は1941(昭和16)年から使用された国定第五期国語教科書(通称、アサヒ読本)と、1947(昭和22)年から使用された国定第六期国語教科書(通称、みんないいこ読本)の両方の編纂に関与した。戦中期と戦後期という日本社会の激変のなかで、石森延男の国語教科書編纂思想にどのような変化があったかを考察した。具体的には、国定第六期国語教科書編纂時に、石森延男が、恩師である、国語教育学者・垣内松三に宛てて送った手紙(三通)の内容を検討することで、終戦直後の石森の国語教科書編纂思想を描出した。今回考察した手紙は、発見史料であり、本研究でもって初めて公開される。三通の手紙の内容を考察した結果、次のようなことが分かった。第一には、垣内松三が戦前から提唱していた「文学形態論」が、戦後の国定第六期国語教科書に反映していることが明らかとなった。こうした見解は従来の先行研究でも指摘されてきた(桝井英人〔2006〕『「国語力」観の変遷』)ことであるが、今回、石森延男自筆の手紙の中で明記されていることによって、史実として定説になったと言えよう。第二には、戦前・戦後でヒューマニズムに関する価値観は大きく変化したものの、石森延男を始めとする国定国語教科書編纂者が共有していた「ロマンチシズム」とでも呼べる独特の国語教科書編纂思想は戦前・戦後を通して一貫して保持されていたことが明らかとなった。1837(昭和12)年に発行された国定第四期国語教科書『小学国語読本尋常科用巻九』の第17課に「図書館」という教材が掲載された。これは、図書館界の永年の願いだった。早くには1919(大正8)年4月に開催された第14回全国図書館大会において議決された文部大臣宛答申案に、次のような項目が登場している。三、尋常小學第六學年國語讀本中に圖書館に關する一課を加ふること。このように約20年に及ぶ悲願の達成であった。2012(平成24)年7月、筆者は東京都内の、とある古書店で、「文部省図書局編集(ママ)課長旧蔵小学校教科書編集資料昭和初期戦前」と銘打たれた古文書一式を購入した。この古文書資料一式を精査したところ、青木存義、藤岡継平、藤本萬治、大岡保三と、昭和3年頃から昭和14年頃までの歴代の文部省図書局編修課長間で引き継がれ、保持されてきた文書群であることが分かった。この中に、『小学国語読本尋常科用巻九』第17課「図書館」の教材文原案等、その編纂過程が分かる資料が複数含まれていた。それらの資料を紹介するとともに、考察を加えた。そして、今まで知られることがなかったところの、帝国図書館と文部省図書局編修課との間で遣り取りの行われていた教材「図書館」の編纂過程を解明した。そうした作業を経て最終的には、『小学国語読本』が内包した表現傾向の一端を明示することができた。帝国図書館が提出してきた教材文原案は、教科書教材として使えるものではなかった。出版された『小学国語読本尋常科用巻九』においては、帝国図書館の原案は換骨奪胎されて、まったく別物とも言える教材文が掲載された。帝国図書館原案と教科書本文との「差」を埋めたのは、「『小学国語読本』流ロマンチシズム」とも称することができる文学表現だったのである。このロマンチシズムこそが、『小学国語読本』の一大特色となっている。本年度は、本研究課題の2年目にあたる。1933(昭和8)年度から年次進行で出版された国定第四期国語教科書『小学国語読本尋常科用』のうち、「巻九」第17課「図書館」という教材について、編纂過程を解明した。この編纂過程については、本研究課題遂行の中心資料となる、申請者が発見した新史料を解読することで初めて明らかになったものである。当初の目的通り、国定第四期国語教科書の編纂過程を着実に解明しつつある。最終年度(平成28年度)は、本研究課題の中核的事業となる、中心的史料の翻刻・解説を刊行した。その中心的史料とは「[秘]小學國語讀本尋常科用教材擔當者一覧表」である。ここで言う「小學國語讀本尋常科用」とは、国定国語教科書の完成型とも評価される通称「サクラ読本」のことである。