hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
次世代シーケンサーを用いた尿路性器感染症の病態解析に関する研究

2018年度は、尿路感染症に関する臨床研究のデータ解析を中心に研究を実施した。主に、閉経後女性50例の膣と直腸、および尿路感染症発症者は尿を加えた細菌(叢)の解析を次世代シーケンサーを用いて行った。その結果、直腸と膣内細菌叢に相関を認めたのは9例(非常に強い相関)、6例(強い相関)、6例(やや相関)の計22例(44%)であった。同一の被検者群においてLactobacillus brevisを1ヶ月間服用させたところ、17例において直腸細菌叢に、14例において膣内細菌叢に変化を認めた。直腸細菌叢および膣内細菌叢に変化を認めたのは、過去1年間に膀胱炎の既往がある被検者群で有意に高率であった。また、子宮摘除後の被検者(14例)および糖尿病に罹患している被検者(9例)の方が、細菌叢に変化がみられる傾向にあった。内服後に直腸と膣内細菌叢に相関を認めたのは12例(26%)であり、乳酸菌の服用によって直腸細菌叢が変化し、その一部で膣内細菌叢も変化したことを示唆する結果であった。研究期間中に膀胱炎を発症した症例における、尿中分離菌と細菌叢との関連については現在解析を施行中である。なお、以上の研究は岡山大学の研究倫理審査専門委員会の承認を得てすべて施行した。尿路性器感染症予防に関連し、当科で以前から施行しているL. crispatusの乳酸菌膣坐剤については、「人を対象とした医学系研究に関する倫理指針」に基づく臨床研究から、特定臨床研究として認定倫理委員会で承認された。本件申請に際し、膣坐剤の挿入期間(1年)開始前、期間中、期間終了後に細菌叢の解析を行う予定でおり、本研究課題である尿路性器感染症の感染経路に関する病態解明と予防に資すると考えられる。性感染症については、臨床研究法の施行に伴って侵襲を伴うスワブ検体の採取が困難であるため、多施設で一般臨床のデータ収集を行う準備を行っている。本研究課題は尿路感染症と性感染症の病態解明を行うものである。尿路感染症の病態解明については、細菌叢の解析を次世代シーケンサーで順調に解析中であるが、性感染症については、クラミジアや淋菌採取のために尿道スワブを採取する必要があり、侵襲を伴う研究であるため現時点で採取できていない。尿路感染症に関しては、膀胱炎の原因菌と膣および直腸細菌叢との関連について解析を行う。さらに、若年者(閉経前)女性の直腸、膣、尿検体の採取について倫理指針に則った研究計画書を作成している。性感染症については、侵襲を伴わない代替案として、微量な菌量となる初尿およびうがい液のデータ収集を関連施設に打診し、検討しているところである。本研究の目的は、次世代シーケンサーを用いて尿路感染症、性感染症の感染経路と常在細菌叢を解析することによって病態を詳細に解明することである。その結果によって感染症の有効な予防法を探索して使用抗菌薬の減少につなげることを見据えた本研究は、耐性菌の増加や新規抗菌薬の開発が停滞している現状にとって非常に重要度が高いと考えられる。平成29年度は、尿路感染症に関しては研究デザインの確定と倫理申請、検体採取を実際に開始した。すなわち、反復性尿路感染症の女性患者のうち、主に尿路感染症を発症していない時期の直腸および腟のスワブ検体を採取した。また、少数ではあるが発症した時期は直腸と膣に加えて尿検体の採取を行った。採取した検体は同日にDNAの抽出と保存を行い、現時点で100検体の採取が完了している。さらに、次世代シーケンサーを設置している岡山大学バイオバンクの教員との情報交換や講義の聴講を行い、シーケンス結果を解析するソフトの使用法について理解を深めている。臨床研究に並行して、膣内細菌叢と膣内のバイオフィルムに着目した基礎研究を新たに立ち上げ、細菌同士の干渉によるバイオフィルム形成阻害作用や抗菌薬の影響について新しい知見を得つつある。性感染症については研究デザインについて研究協力者と討議を行っているところである。男性については、初尿と咽頭うがい液から主にN. gonorrhoeaeについて遺伝子解析を行うこととしているが、女性については性器感染の検体の種別について確定に至っていないのが現状である。尿路感染症の研究については、おおむね計画通り進行していると考えている。一方、性感染症患者における検体採取が遅れている。すなわち、女性においては子宮頚管スワブと初尿における淋菌、クラミジアの検出感度差によって採取する検体の種類を決定する段階でとどまっている。また、女性の検体採取の協力施設をいくつか候補として挙げているが、協力の可否について回答が得られていない施設があることも、遅れている理由の一つである。平成30年度から臨床研究法が施行されているが、本研究課題に含まれる臨床研究には直接的な影響はないと考えている。しかし、薬物治療の効果が関係してくるケースや、検体(特に子宮頚管スワブ)の採取においては侵襲を伴う医行為であるかを十分に注意し、倫理的な面に十分配慮して研究を行い、必要があれば当院に設立された認定倫理委員会に相談しながら研究申請を行っていく必要がある。

主に、閉経後女性50例の膣と直腸、および尿路感染症発症者は尿を加えた細菌(叢)の解析を次世代シーケンサーを用いて行った。その結果、直腸と膣内細菌叢に相関を認めたのは9例(非常に強い相関)、6例(強い相関)、6例(やや相関)の計22例(44%)であった。同一の被検者群においてLactobacillus brevisを1ヶ月間服用させたところ、17例において直腸細菌叢に、14例において膣内細菌叢に変化を認めた。直腸細菌叢および膣内細菌叢に変化を認めたのは、過去1年間に膀胱炎の既往がある被検者群で有意に高率であった。また、子宮摘除後の被検者(14例)および糖尿病に罹患している被検者(9例)の方が、細菌叢に変化がみられる傾向にあった。内服後に直腸と膣内細菌叢に相関を認めたのは12例(26%)であり、乳酸菌の服用によって直腸細菌叢が変化し、その一部で膣内細菌叢も変化したことを示唆する結果であった。研究期間中に膀胱炎を発症した症例における、尿中分離菌と細菌叢との関連については現在解析を施行中である。なお、以上の研究は岡山大学の研究倫理審査専門委員会の承認を得てすべて施行した。尿路性器感染症予防に関連し、当科で以前から施行しているL. crispatusの乳酸菌膣坐剤については、「人を対象とした医学系研究に関する倫理指針」に基づく臨床研究から、特定臨床研究として認定倫理委員会で承認された。本件申請に際し、膣坐剤の挿入期間(1年)開始前、期間中、期間終了後に細菌叢の解析を行う予定でおり、本研究課題である尿路性器感染症の感染経路に関する病態解明と予防に資すると考えられる。性感染症については、臨床研究法の施行に伴って侵襲を伴うスワブ検体の採取が困難であるため、多施設で一般臨床のデータ収集を行う準備を行っている。本研究課題は尿路感染症と性感染症の病態解明を行うものである。尿路感染症の病態解明については、細菌叢の解析を次世代シーケンサーで順調に解析中であるが、性感染症については、クラミジアや淋菌採取のために尿道スワブを採取する必要があり、侵襲を伴う研究であるため現時点で採取できていない。尿路感染症については、現状を継続して臨床検体の採取を進めると同時に、次世代シーケンサーによる解析の準備を行う。必要物品の購入を進め、解析後の分析に必要なソフトウェア使用の練度を上げておく。基礎研究については、膣内細菌叢とバイオフィルムの関係、バイオフィルム抑制効果(干渉)のある細菌、特に乳酸菌を中心に基礎的な実験を行って膣内細菌叢と尿路感染症の関係を明らかにし、尿路感染症の予防について今後の方向性を探索する。性感染症については早急に臨床検体の採取に関する倫理承認を受け、検体採取を開始する。特に、咽頭感染の感染経路を明らかにする(咽頭から咽頭、もしくは性器から咽頭)目的に沿って進めていく。当施設の次世代シーケンサーは一度に384検体を同時に解析することが可能である。できるだけ経済効率を高くするため、尿路感染と性感染症の検体を多く収集し、少ない回転数で解析を進めていく必要がある。そのため、計画的な検体収集と解析を行っていくことが重要である。尿路感染症に関しては、膀胱炎の原因菌と膣および直腸細菌叢との関連について解析を行う。さらに、若年者(閉経前)女性の直腸、膣、尿検体の採取について倫理指針に則った研究計画書を作成している。性感染症については、侵襲を伴わない代替案として、微量な菌量となる初尿およびうがい液のデータ収集を関連施設に打診し、検討しているところである。平成29年度は検体採取と学会等での情報収集が目的であった。
膜構造のモディフィケーションによる次世代型超高性能RO膜の開発

本研究の目的は、既存の市販逆浸透膜の物理化学的構造をモディファイすることにより、簡易なプロセスで膜性能(汚染物質の除去率、目詰まり)を向上させることである。まず、一年目は塩素を用いて意図的にポリアミドの架橋構造を破壊することにより、膜性能の向上を検討した。しかし、本研究で対象とした逆浸透膜では、塩素処理条件を変えても膜性能を向上することはできなかった。二年目は、膜表面のポリビニルアルコールコーティング量が異なる膜を対象とすることにより、ポリビニルアルコールコーティングが目詰まりに与える影響を評価した。その結果、ポリビニルアルコールコーティングは目詰まりを軽減する効果があることが分かった。上水処理技術として逆浸透膜(RO膜)の重要性が今後一層高まることを踏まえ、数多くの研究者が高性能RO膜の開発に取り組んでいる。しかし、新しい実用技術のブレークスルーには至っていないのが現状であり、これまでの常識を覆す斬新なアイデアが超高性能RO膜の開発には必要とされている。近年、次亜塩素酸などの酸化剤により膜を処理することにより、汚染物質の除去率を損なうことなく水流束が向上することができるという研究成果が報告されている。この背景を踏まえ、本研究の目的は、酸化剤による処理により、既存の逆浸透膜の性能を著しく向上させることである。今年度は、低濃度の酸化剤に晒した膜を用いて、膜の水流束および汚染物質の除去率を評価し、さらにそのメカニズムを検討した。その結果、酸化剤に晒した膜の水流束は新品の膜に比べて低く、さらに、汚染物質(H3BO3、NaCl、そしてNaNO3)の除去率も低下していることが分かった。つまり、酸化剤に晒すことで既存の逆浸透膜の性能を著しく向上させることはできなかった。次に、この膜性能の劣化の原因を検討した結果、水流束の低下はポリアミドの水素結合能力が低下したことにより水分子のポリアミド層への分配が低下したことが原因であることが分かった。また、汚染物質の除去率の低下については、ポリアミドの孔径の拡大が原因であることが分かった。今後の計画としては、ポリアミド層のモディフィケーションとして使用されている表面コーティングに着目し、コーティングが各種汚染物質の除去率に与える影響を検討することが挙げられる。昨年度の研究成果より、今回対象とした逆浸透膜の場合は、酸化剤による表面処理により汚染物質の除去率および水流束を同時に向上させることは困難であることが分かった。そして、今年度の目標として、ポリアミド層のモデフィケーションとして使用されている表面コーティングに着目し、各種汚染物質の物理化学的特性に合ったコーティングを行うことで汚染物質の除去率の向上を挙げた。このことを踏まえ、本年度はポリビニルアルコールによる表面処理がNaCl, H3BO3,そしローダミン-WT(有機汚染物質のサロゲートとして使用)の除去率に与える影響を検討した。その結果、NaClの除去率にはポリビニルアルコールによる表面処理は影響を与えないが、ローダミン-WTの除去率にはポリビニルアルコールによる表面処理により向上することを示唆する結果が得られた。計画していた項目を検討することができ、さらに膜性能が変化した理由の詳細も検討することができたから。浄水処理今年度の実験結果により、今回対象としたRO膜の場合は酸化剤による表面処理により汚染物質の除去率および水流束を向上させることは難しいことが分かった。今後の計画としては、ポリアミド層のモディフィケーションとして使用されている表面コーティングに着目し、各種汚染物質の物理化学的特性に合ったコーティングを行うことで除去率を向上させることを検討する。
膠原病診療を変革するニューロパチーの早期診断マーカー同定と至適検査手順の確立

本研究は、膠原病患者のニューロパチーに関する発症予知因子、早期診断あるいは予後推定のマーカーを探索、同定し、同症診断への検査手順を確立することを目的とした。quantitative sensory testing(QST)、レーザー血流画像検査、ならびに生検皮膚のH. E.染色標本における膨隆汗腺の有無チェックが、最も早期にこれらの患者における末梢神経障害の発症を確認しうる方法であることをつきとめた。さらに血清の羅的解析の結果、早期診断マーカーとなりうる可能性を持つ候補蛋白質、ペプチドが多数ピックアップされた。本研究は、膠原病患者のQOLを大きく規定する因子である後根神経節炎、自律神経ニューロパチーに関する発症予知因子、早期診断あるいは予後推定のマーカーを探索、同定するとともに、より早期から定量性をもって本症を検出しうる神経生理学的、病理組織学的検査手順を確立することを目的としている。上記の目的を達成すべく、初年度にあたる平成21年度はまず、様々な神経生理学的、病理組織学的手法を用い、シェーグレン症候群患者の末梢神経機能、あるいは末梢神経の障害度を評価することにより、最適な神経学的検査法、病理組織学的検査法を構築しようと試みた。ここまでの結果をまとめると、神経生理学的検査としては、quantitative sensory testing(QST)、およびレーザー血流画像検査が、病理組織学的検査としては、生検皮膚のH. E.染色標本における膨隆汗腺の有無チェックが、最も早期にシェーグレン症候群患者における末梢神経障害の発症を確認しうる方法であると考えられる。次年度は、今回QST、レーザー血流画像検査、あるいは膨隆汗腺の存在から末梢神経障害の早期と判断したシェーグレン症候群患者の血清、あるいは皮膚生検組織を用い、プロテオミクス解析の技術を応用した網羅的解析を行うことによって、シェーグレン症候群に伴う後根神経節炎、自律神経ニューロパチーに関する発症予知因子、早期診断あるいは予後推定のマーカーを探索、同定する作業に入る予定である。本研究は、膠原病患者のQOLを大きく規定する因子である後根神経節炎、自律神経ニューロパチーに関する発症予知因子、早期診断あるいは予後推定のマーカーを探索、同定するとともに、より早期から定量性をもって本症を検出しうる神経生理学的、病理組織学的検査手順を確立することを目的とするものである。初年度にあたる平成21年度はまず、様々な神経生理学的、病理組織学的手法を用い、シェーグレン症候群患者の末梢神経機能、あるいは末梢神経の障害度を評価することで最適な神経学的検査法、病理組織学的検査法を構築しようと試み、quantitative sensory testing(QST)、レーザー血流画像検査、ならびに生検皮膚のH.E.染色標本における膨隆汗腺の有無チェックが、最も早期にシェーグレン症候群患者における末梢神経障害の発症を確認しうる方法であることをつきとめた。さらに平成22年度は、前述の各種検査法で末梢神経障害の早期と判断したシェーグレン症候群患者の血清、あるいは皮膚生検組織を用い、プロテオミクス解析の技術を応用した網羅的解析を行うことにより、シェーグレン症候群に伴う後根神経節炎、自律神経ニューロパチーの発症予知因子、早期診断マーカー、あるいは予後推定マーカーの探索、同定を試みた。網羅的解析の結果、発症予知因子、早期診断マーカー、あるいは予後推定マーカーとなりうる可能性を持つ候補蛋白質、ペプチドが多数ピックアップされたことから、更なる絞り込みが必要と判断し、本研究は平成23年度にも継続していくこととした。初年度にあたる平成21年度はまず、様々な神経生理学的、病理組織学的手法を用い、シェーグレン症候群患者の末梢神経機能、あるいは末梢神経の障害度を評価することで最適な神経学的検査法、病理組織学的検査法を構築しようと試み、quantitative sensory testing (QST)、レーザー血流画像検査、ならびに生検皮膚のH.E.染色標本における膨隆汗腺の有無チェックが、最も早期にシェーグレン症候群患者における末梢神経障害の発症を確認しうる方法であることをつきとめた。さらに平成22-23年度は、前述の各種検査法で末梢神経障害の早期と判断したシェーグレン症候群患者の血清、あるいは皮膚生検組織を用い、プロテオミクス解析の技術を応用した網羅的解析を行うことで、シェーグレン症候群に伴う後根神経節炎、自律神経ニューロパチーの発症予知因子、早期診断マーカー、あるいは予後推定マーカーの探索を試みた。網羅的解析の結果、発症予知因子、早期診断マーカー、あるいは予後推定マーカーとなりうる可能性を持つ候補蛋白質、ペプチドが多数ピックアップされたものの、最終的に臨床的に有効と思われるマーカーの確立までには至らなかった。しかし、3年間本研究を遂行していく過程で、副産物としてシェーグレン症候群以外の自律神経ニューロパチー患者の診断に有用なツールが複数考案された(業績参照)。
絵本とのかかわりから捉える幼児期から小学校低学年期の子どもの「ことばの力」

子どもと絵本(本)のかかわりに着目し、幼児期から小学校低学年期の絵本(読書)体験と「ことばの力」との関連を検討した。幼児期では家庭と園での絵本体験量と「ことばの力」との顕著な関連は見られなかったが、小学校では読書量の多い女児は概して「ことばの力」も高かった。ただし、2, 3年生で優れて「ことばの力」が高いと評定された女児では、自分で選んだ本をじっくり読むという、量よりも質を重視した「自ら本の世界を楽しむ力」が「ことばの力」と関係していた。本研究の目的は,子どもと絵本(本)のかかわりに着目して,幼児期と小学校低学年期をつなぎ,絵本(読書)体験と「ことばの力」との関連を明らかにすることである.研究初年度の09年度は,小学校1年生を対象に観察と教師へのインタビュー,図書の貸出状況から学校での絵本とのかかわりを捉え,保護者へのアンケート調査によって就学前からの家庭でのかかわりを調べた.これら2つの生活の場での子どもの絵本体験と,研究者,教師,テストの3つの観点から捉えた「ことばの力」との関連を以下の通り検討し,成果をまとめた.1.研究経過(1)本とのかかわり:(1)学校場面(a)観察09年4月10年3月に計36回実施.(b)教師へのインタビュー毎学期終了時に観察結果をもとに実施.(2)家庭10年3月,観察クラスの保護者を対象に質問紙調査を実施(回収19名,57.6%).(2)ことばの力:年度末,教師と観察者で子どもの「ことばの力」について7つの観点から評定を行った.2.主要結果(1)本とのかかわり:学校場面では,幼児期同様,毎日の教師による読み聞かせ,週1回の読書の時間の他,授業で課題が早く終わった子どもが本を読んで待つ,休憩時間に自発的に本を読むというかかわりが見られた.子どもが手に取る本は,教師がクラスに読み聞かせた本が多く,図書の時間に借りる本は友だちが借りた本が多かった.子どもと本をつなぐ「人」の存在が重要だった.家庭では,親子で読むことから自分で読む体験へ移行していた.(2)ことばの力:全般的には本とのかかわりと「ことばの力」には関連がみられなかった.ただし,学校の休憩時間に自発的に「童話」を読む姿が多く見られた女児は,図書の貸出でも文章主体の本を借り,「ことばの力」も全般的に高かった.しかし発表場面で「伝える力」は,慎重さなど本人の性格の要因も大きく,場面への参加自体が少なかった.「ことばの力」を外に発揮する力の育ちも重要であることが指摘された.本研究の目的は,子どもと絵本(本)のかかわりに着目して,幼児期と小学校低学年期をつなぎ,絵本(読書)体験と「ことばの力」との関連を明らかにすることである.研究2年目の10年度は,小学校2年生を対象に学校生活の観察と教師へのインタビュー,及び読書記録(図書の貸出状況・「読書マラソン」)の分析から,学校と家庭での絵本(本)とのかかわりを調べた.これらの絵本体験と,研究者・教師・テストの3つの観点から捉えた「ことばの力」との関連を以下の通り検討し,成果をまとめた.1.研究経過(1)本とのかかわり:(1)観察10年4月11年3月に計32回実施.(2)教師へのインタビュー毎学期終了時に観察結果をもとに実施.(3)「読書マラソン」3学期終了後回収し(回収31名,93.9%),全読書記録のコピーをとった.(2)ことばの力:年度末,教師と観察者で子どもの「ことばの力」について7つの観点から評定を行った.2.主要結果(1)本とのかかわり:学校場面では,担任教師による読み聞かせ,週1回の読書の時間の他,授業で課題が早く終わった子どもが本を読んで待つ,休憩時間に本を読むというかかわりが見られた.今年度「読書マラソン」が導入されたことで,一部の子ども達には競って本を手に取る姿が見られた.子どもがよむ本は,1年生同様,教師が読み聞かせた本やそのシリーズが中心であり,図書の時間に借りる本は友だちが借りた本が主だった.子どもと本の間には,両者をつなぐ「人」の存在が重要であることが,今年度も確認された.(2)ことばの力:読書量の多い女児は概して「ことばの力」も高かった.

ただし,最も「ことばの力」が高いと評定された女児は,量(冊数)よりも質を重視した本の読み方をしており,読書記録や学校生活の観察から,直接的に「人」を介さず,独自に選書した本(文章主体)を読んでいた.自ら本の世界を楽しむ力が「ことばの力」と関係していると解釈された本研究の目的は,子どもと絵本(本)のかかわりに着目して,幼児期と小学校低学年期をつなぎ,絵本(読書)体験と「ことばの力」との関連を明らかにすることである.研究最終年度の11年度は,小学校3年生を対象に学校生活の観察と教師へのインタビュー,読書記録の分析から,学校と家庭での絵本(本)とのかかわりを調べるとともに,観察対象となった子どもの幼児期と小学校13年生の絵本とのかかわりを縦断的・総合的に分析し,幼児期から小学校低学年期の「ことばの力」について検討した.主要結果は以下の通りである.(1)絵本(本)のかかわり読書機会:小学校では,週1回の読書の時間の他,幼稚園同様,担任教師による読み聞かせ,課題が早く終わった子どもが本を読んで待つ,休憩時間に読むという絵本(本)とのかかわりが3年間を通して見られ,子どもが本とかかわる機会は幼小に共通していた.また子どもが読む本は,幼稚園,小学校の3年間を通して,教師が読み聞かせた本やそのシリーズが中心であり,子どもと本の間には,両者をつなぐ「人」の存在が重要であることが強調された.読書量:2,3年生では「読書マラソン」が導入されていたが,一部の子どもたちは競って本を手に取り,量の多寡に執心する様子が見られた.「読書マラソン」は本を読む「きっかけ」づくりとしては有効であるが,本の世界を楽しむなど読書の「質」の観点からは再考の必要が指摘された.(2)ことばの力=幼児期では家庭と園での絵本体験量と「ことばの力」には顕著な関連は見られなかったが,小学校では読書量の多い女児は概して「ことばの力」も高かった.ただし,2,3年生で優れて「ことばの力」が高いと評定された女児は,量(冊数)よりも質を重視した読み方をしており,読書記録や学校生活の観察から,自分で選んだ本(文章主体)をじっくり読む,自ら本の世界を楽しむ力が「ことばの力」と関係していると解釈された.
積層構造、高歪構造によるポルフィリンの機能開発と制御

今年度は(N,N')-(ビニレン)ビスポルフィリンの金属錯体、(NN)-(CH=CH)(TTRM(II)X)_2(1-9)について酸化還元電位を測定した。銅複核錯体ではCu(II)/Ci(I)のレドックスが025Vに見られた。これらの値はN-メチルテトラフェニルポルフィリン金属錯体での値と殆と変化がない、配位性の軸配位子であるCl、OAc、OHを持つ銅複核錯体では金属の酸化還元に由来する一対に可逆波が見られたが、非配位性のBF_4、ClO_4、PF_6を持つ銅錯体では二対に可逆波が現われた。これは、Cu(II)Cu(II)の状態から1電子還元によりCu(II)Cu(I)の混合原子価状態を経て、Cu(I)Cu(I)まで還元される過程を示している。軸配位子が強い場合には銅-銅間での電子スピンの非局在化によって混合原子価状態が安定化されたものと考えられる。次に、異種複核金属錯体の合成を行ない、そのスペクトル的性質を明らかにした。(N、Co)-(ビニレン)ビスポルフィリンコバルト錯体を酸化して得られる(N、N')-(ビニレン)ビスポルフィリンモノコバルト錯体を銅(II)イオンと処理し、Co(II)Cu(II)異種複核錯体、(NN((CH=CH)(OEPCo(II)TTPCu(II))(BF_4)_2を高收率で得た。複核銅錯体のプロトンNMRは著しくブロードで裁定不能であるが、複核コバルト錯体は40から-180ppmにかけて常磁性シテトを示す鋭いスペニクトルを与える。異種複核錯体では銅-コバルト間の磁気的カップリングにより、すべてのプロトンNMRシグナルを観測することができた。複核銅錯体の粉末をプレスしてペレットとし、銀ペーストで表面処理を行ない、交流2瑞子で電導度を測定した。Collmanらはピラジンを架橋配位子とするFe、Ru、Osポルフィリンの一次元ポリマーの電導性について報告したいる。(4)はドーパントを用いない場合の鉄ポルフィリンと同様の電導度を示したが、ヒドロキノンをドープすると10^2程戸の増加が見られた。
HGFアンタゴニストNK4による腫瘍新生血管抑制機序の解明および臨床応用への検討

肝細胞癌に対する新しいstrategyとして、HGFの癌-間質相互作用を断つために強力な腫瘍血管新生抑制および腫瘍の浸潤・転移を抑制するHGFantagonistであるNK4を用いて遺伝子治療研究を行い、マウス肝腫瘍モデルにおいて著明な腫瘍新生血管抑制および浸潤・転移の抑制、それによる優れた増殖抑制効果を確認し、報告した。これらの研究結果をふまえて、本研究課題では、本治療法をさらに発展させ臨床応用を目指すべく、NK4による腫瘍新生血管抑制の詳細なメカニズム解明、および臨床応用へ向けた基礎的検討を行なった。(1)NK4はHGFによる新生血管を阻害するだけでなく、VEGFおよびbFGFによる血管新生を強力に阻害することが報告されているが、その作用点は明らかになっていない。NK4は局所における一連の血管新生プロセスをブロックすることは報告されたが、骨髄より誘導される腫瘍新生血管を阻害しえるのか、その作用点に焦点を当ててLaczTgマウスを用いて解析を行なった。マウス皮下腫瘍モデルを用いてLaczTgマウスより骨髄移植行い、NK4,およびコントロールとしてLacZを発現するアデノウイルスベクターを導入し検討したが、皮下腫瘍ではコントロールでも腫瘍内に新生血管誘導が認められずNK4の作用点は評価しえなかった。(2)HGFアンタゴニストであるNK4はHGFの肝再生に負の影響を与える可能性があるため、ラットに肝切除を行いNK4発現の影響を検討したところ、肝重量、PCNA染色、BrDUにおいて肝再生はコントロールに比して有意に遅延したことより、肝癌術後早期のNK4導入には慎重であるべきと考えられた。(3)臨床応用を目指してウイルスベクターを用いないhydrodynamicstransfectionにてNK4を皮下腫瘍モデルマウスに導入したところ、血中・肝組織ともにNK4の明らかな発現を確認したが、皮下腫瘍は抑制傾向を認めた。plasmidDNA量のmaximumdoseを今後検討する予定である。肝細胞癌に対する新しい戦略として、HGFの癌-間質相互作用を断つために強力な腫瘍血管新生抑制および腫瘍の浸潤・転移を抑制するHGFアンタゴニストであるNK4を用いて腫瘍新生血管抑制の詳細なメカニズム解明、および臨床応用へ向けた基礎的検討を行なっている。(1)培養血管内皮細胞へアデノウィルスベクターを用いNK4遺伝子を導入し、ウェスタンブロット法にてNK4蛋白の発現を確認した。今後、リコンビナントHGFの存在下にて培養血管内皮細胞の増殖・遊走能の評価を検討中である。(2)腫瘍血管新生において骨髄細胞からの誘導がみとめられるかを確認すべく遺伝子導入に先立ち全身放射線照射を行った後LacZトランスジェニックマウスの骨髄細胞移植を施行。その4週後にヒト肝癌細胞株を用いた皮下腫瘍モデルを作製した。その後NK4遺伝子導入を行い腫瘍の組織学的検討をLacZ抗体・CD31抗体を用い行うも新生血管の内皮細胞が骨髄細胞からリクルートされるという結果は得られなかった。(3)NK4の遺伝子発現をウィルスベクターを用いずhydrodynamics transfection methodにて行ったところマウス血清中に約3ng/mlという高濃度のNK4発現を認めた。この手技を頻回に行うことによって長期間・高濃度のNK4発現を得ることが可能となると思われた。以上より今年度の研究成果は、腫瘍新生血管抑制の詳細なメカニズム解明し、臨床応用へ向け研究をさらに進める。

肝細胞癌に対する新しいstrategyとして、HGFの癌-間質相互作用を断つために強力な腫瘍血管新生抑制および腫瘍の浸潤・転移を抑制するHGF antagonistであるNK4を用いて遺伝子治療研究を行い、マウス肝腫瘍モデルにおいて著明な腫瘍新生血管抑制および浸潤・転移の抑制、それによる優れた増殖抑制効果を確認し、報告した。これらの研究結果をふまえて、本研究課題では、本治療法をさらに発展させ臨床応用を目指すべく、NK4による腫瘍新生血管抑制の詳細なメカニズム解明、および臨床応用へ向けた基礎的検討を行なった。(1)NK4はHGFによる新生血管を阻害するだけでなく、VEGFおよびbFGFによる血管新生を強力に阻害することが報告されているが、その作用点は明らかになっていない。NK4は局所における一連の血管新生プロセスをブロックすることは報告されたが、骨髄より誘導される腫瘍新生血管を阻害しえるのか、その作用点に焦点を当ててLacz Tgマウスを用いて解析を行なった。マウス皮下腫瘍モデルを用いてLacz Tgマウスより骨髄移植行い、NK4,およびコントロールとしてLacZを発現するアデノウイルスベクターを導入し検討したが、皮下腫瘍ではコントロールでも腫瘍内に新生血管誘導が認められずNK4の作用点は評価しえなかった。(2)HGFアンタゴニストであるNK4はHGFの肝再生に負の影響を与える可能性があるため、ラットに肝切除を行いNK4発現の影響を検討したところ、肝重量、PCNA染色、BrDUにおいて肝再生はコントロールに比して有意に遅延したことより、肝癌術後早期のNK4導入には慎重であるべきと考えられた。(3)臨床応用を目指してウイルスベクターを用いないhydrodynamics transfectionにてNK4を皮下腫瘍モデルマウスに導入したところ、血中・肝組織ともにNK4の明らかな発現を確認したが、皮下腫瘍は抑制傾向を認めた。plasmid DNA量のmaximumdoseを今後検討する予定である。
IgG4関連膵炎(自己免疫性膵炎)の病態の解明と特異的診断法の確立

本疾患の臨床像の詳細を検討した結果、高齢者男性に好発し、閉塞性黄疸を初発とすることが多く、臨床的に膵癌との鑑別が重要で、血清IgG4測定は鑑別に有用であった。膵管像の経過の検討から、本疾患の病態は多様であり多彩に変化しうることが明らかとなった。また血清学的所見については、非特異的なγグロブリン、IgG,抗核抗体等の上昇を認めるものの、SS-A,SS-B、抗ミトコンドリア抗体など疾患特異的な自己抗体の出現はほとんど認められなかった。シェーグレン症候群の標的抗原と報告されているαフォドリンとの関連を検討した結果、硬化性胆管炎合併例で陽性例を認め、膵外病変の合併等に関与している可能性が考えられた。本疾患には種々の膵外合併症が報告されており、今回Gallium scintigraphyの検討で肺門部病変の合併が確認され、また後腹膜線維症の合併も確認された。今後は本疾患を全身疾患の視点よりmultifocal idiopathic fibrosclerosis(MIF)のような包括的な疾患概念として捉えるべきか明らかする必要がある。本疾患のHLA領域の疾患感受性遺伝子がDRB1*0405-DQB1*0401haplotypeであることが明らかとなった。本疾患ではこれらclass II抗原で呈示されるペプチド抗原がTcellの活性化をきたし、発症にいたると考えられる。本疾患の患者血清に特異的に反応する25kDaの蛋白質を検出し、superoxide dismutase 2(SOD2)が同定された。SOD2は、いくつかの自己免疫疾患で検出される自己抗体に対する抗原であると考えられており、自己免疫性膵炎においても対応抗原である可能性は否定できない。しかしながら、リコンビナンントSOD2は患者血清とは反応せず、今後、培養細胞を用いてリコンビナント蛋白質を発現させ糖鎖との反応性を明らかにする必要がある。本疾患は高齢者男性に好発し、既存の自己抗体の出現頻度が少ないことが明らかとなった。シェーグレン症候群時に認められるSS-A, SS-B抗体については全例陰性であった。また、膵管像の検討より本疾患の病変範囲は必ずしも膵全体におよぶわけではなく、限局性に留まる例も約半数に認め、瀰漫性に移行する症例、自然軽快する症例も認めた。本疾患の画像所見は病態に応じて多様に変化することが明かとなった.また、後腹膜線維症の合併例の検討より本疾患はmultifocal idiopathic fibrosclerosis(MIF)に包括される概念と考えられ、IgG4がその病態に関与していると考えられた。しかし、膵臓に首座を置く病態も明らかに存在し、これらと他臓器病変合併例とはαフォドリンに対する自己抗体の出現様式より区別される可能性が示唆された。本疾患でDRB1^*0405-DQB1^*0401haplotypeの頻度が有為に高く、classII抗原でpresentationされる特定の抗原ペプチドに対する免疫応答が発症の引き金になっていると考えられた,さらにB54とはリンクしていないことより自己免疫性肝炎とは免疫遺伝学的背景が異なっていると考えられた。本研究より自己免疫性膵炎では特定の抗原に対する自己抗体が存在すると考えられ、今後さらに研究を進めていく必要があると考えられた。膵臓の全蛋白質をSDS-電気泳動し、複数の自己免疫性膵炎の患者血清と、複数の正常人血清を用いてウエスタンブロテイングした結果、患者血清にcarbonic anhydlraseとは異なる、患者特異的な25kDaのバンドを認めた。

この蛋白は不溶性の画分に存在した。今後、二次元電気泳動で単一のスポットが同定出来るまで精製を進め、その後ゲルからスポットを切り出し、アミノ酸配列を決定する予定である。自己免疫性膵炎の臨床像を検討した結果、膵頭部を含む広範囲な病変を有した活動性の高い症例に再燃が認められた。そして、初発時の免疫複合体(CIC)の値が、膵を中心に再燃する例で有為に高く、予測因子と考えられた。本疾患では活動期に膵ならびに肺門部にGa-67が集積し、血清IgG4値の上昇と相関を認めたことより、ガリウムシンチグラフィーが本疾患と膵癌を鑑別する有用な方法と考えられた。本疾患ではDRB1^*0405-DQB1^*0401haplotypeの頻度が有為に高く、これらの抗原で呈示される特定の抗原ペプチドに対する免疫応答が発症の引き金になっていると考えられた。従って、本疾患では特定の抗原に対する自己抗体が存在すると考えられ、今後さらに研究を進めていく必要があると考えられた。HLA領域にはこれらclass II抗原以外に疾患感受性遺伝子は認められなかった。自己免疫性膵炎の患者血清に反応する、23kDa,等電点約7.5の蛋白質を検出した。この蛋白質は、シェーグレン症候群等の自己免疫性の病因抗原として報告されているcarbonic anhydraseとは異なっていた。この患者血清に反応する23kDa蛋白質を部分的に精製し、電気泳動後、スポットを切り出し、TOF-MASを用いて数種類の蛋白質を同定した。今後、抗原決定基のアミノ酸配列を決定する予定である。特異的自己抗体測定系の特異性のコントロールになり得ると思われる総IgG4測定系(1Step Sandowich Type ECLIA)を確立した。今後、「自己免疫性膵炎の起因抗原の解明」と「特異的自己抗体測定系の開発」に注力する。自己免疫性膵炎は血清lgG4が高率かつ特異的に上昇する膵炎であり、lgG4が病態に大きく関与している。一般ポピュレーションでのlgG4の動態を検討したが、血清lgG4の軽度上昇を2.5%に認め、アレルギー性疾患の関与が示唆された。従って、lgG4の上昇は本疾患に対する診断的価値が高いと考えられる。膵外病変として甲状腺病変と上部消化管病変について調べた。甲状腺機能低下症、胃潰瘍がいずれもコントロールに比較して有意に高率に認めた。上部消化管病変についてはlgG4の関与が認められたが、甲状腺病変については膵病変と同様の変化が生じているという確証を得ることはできなかった。HLA領域についてTNF-α遺伝子promoter多型、lκBL1遺伝子promoter多型を含め疾患感受性遺伝子の検索を行った結果、HLA-DRB1*0405-DQB1*0401haplotype以外には有意に相関を認めるものはなく、このclassll坑原が本疾患のHLA領域における疾患感受性遺伝子と考えられた。これらclass II抗原で呈示されるペプチド抗原がTcellの活性化をきたし、発症にいたると考えられる。本疾患の患者血清に特異的に反応する25kDaの蛋白質を検出し、superoxide dismutase 2(SOD2)が同定されたが、リコンビナンントSOD2を用いた検討では標的抗原であることは確認できなかった。
膵癌における癌局所免疫が果たす役割の解明

本研究においては、TAMおよびTILに注目し、術前化学放射線療法が癌局所の微小環境および生命予後に与える影響を探索する。免疫細胞の腫瘍部への浸潤を免疫染色を用いて評価し、予後との関連を探索する。また、膵癌局所免疫に関連が強いとされているTAMについて、膵癌移植マウスモデルに対する放射線治療モデルを用いて遺伝子解析を行い、その分化・性質決定のメカニズムを解明する。
「寝かせ」が文章推敲に及ぼす効果の眼球運動による測定

本研究では,プログラミングの問題文読解とプログラム産出を対象とし,推敲による問題解決プロセスを検証した。実験協力者は,プログラミングの問題文を読解し,解答となるプログラムを生成した。分析に際しては,協力者をプログラミング上級者と初心者に分けた。眼球運動を分析した結果,プログラムの産出においては,上級者のほうが視線移動の距離と時間が長かった。このことから,上級者は初心者よりも一度に見ている語句が多く,ゆっくり読むことで頭の中で組み立てたプログラムを確認しながら書き進めていることが示された。一方初心者では,ひとつひとつの語句に注目し,書けるところからランダムにプログラムを書く方略が示された。本研究の目的は,文章推敲過程における潜在的認知プロセスである「寝かせ」が文章の質の改善に及ぼす効果を,学習者の眼球運動によって測定することである。寝かせは,文章推敲過程において推敲を一時中断する活動である。研究1では,非接触型視線計測装置を用いた文章推敲実験を行い,推敲中(執筆の手が止まっている「短い寝かせ」の間も含む)の視線データおよび文章の推敲ログを取得する。平成25年度は研究1を実施した。まず研究1-1として,文章推敲方略を質問紙によって探索した。因子分析の結果,第1因子として「変化受容」,第2因子「客観視」,第3因子「現状対応」,第4因子「制約理解」,第5因子「ピア活用」,第6因子「認知資源節約」が得られた。次に,研究1-1における高得点群の被験者を対象に,研究1-2として推敲過程の視線計測(予備実験)を行った。被験者には,非接触型視線解析装置に推敲対象の短い文章を表示し,自然な状況下でパソコン上の文章を推敲させた。さらに,論述文の段落を故意にランダムに配置した長めの実験文章を提示し,正しい順序に段落を並び替える推敲を行わせた。その結果,句読点を打つか否か,またどこに打つかという文章の表層レベルの推敲(Faigley and Witte, 1981)の際は,修正候補箇所周辺を横方向に視線が移動し,かつ大きく停留する傾向が示された。また,段落間の論理の流れを確認する場合は,1文ずつ読むことはせず,段落の頭だけを見ていくという縦方向の視線の動きが見られた。Faigleyらによれば,段落の入れ替えは文章の深層レベルに関する推敲である。今後は,実験文章のテーマや難易度を設定し,推敲にかかる状況の要因を操作した複数の群を設定し,本実験を行う。本研究の目的は,文章推敲過程における潜在的認知プロセスである「寝かせ」が文章の質の改善(推敲)に及ぼす効果を,眼球運動測定によって明らかにすることである。平成26年度は,主に以下の2点について実施した。1推敲に関する質問紙の改定・実施・分析:昨年度に実施した研究1-1の因子構造の一部(特に因子6)に不合理と思われる点があったため,再度,教育心理学および教育工学分野の文章産出に関する先行研究の調査を行った。調査の結果ならびに,研究1-1の質問紙の内容をふまえて,質問紙を改定した。改定後の質問紙について,国内の文系および理系の大学生約200名から回答を得た。得られた回答に対して因子分析を行い,読み手意識の高低と推敲行動の関係について分析を行った。効果的な推敲活動のためには,書き手が持つ読み手意識を利用することが重要であることが明らかになっている(犬塚,椿本2014)。しかし,読み手意識がどのような推敲活動に影響をおよぼすのかまでは,未だ明らかになっていない。今回の分析の意義として,推敲の認知活動の詳細が明らかになる点や,教育現場での文章作成指導においてより具体的な指導が可能になる点があげられる。2実験計画の決定および,実験準備:調査協力者に書かせる文章のテーマと難易度を決定した。また,実験で使用するインストラクションや,視線計測器の準備を完了させた。今年度は,寝かせの要因を変化させた複数の群を設定し,本実験を開始する。今年度は,大学生を中心に調査協力者を広く募り,実験を開始する。本年度の実績は以下の2点である。1.予備実験を終了し,その結果をふまえた本実験の素材や計画が完成した本研究では,寝かせの時間や質が異なる2群を設定し,各群において寝かせ前後の推敲における視線データと推敲ログを取得する。各群は,(1)寝かせ中は通常どおりの学習・生活を行う,(2)寝かせ中は実験的に設定された意識化課題を行う。つまり,(1)は推敲についての無意識的認知過程が働きやすく,(2)は強制的な意識化によって無意識的過程が働きにくい,という設定である。今年度は,大学生13名に対して予備実験を行った。被験者は,寝かせを意識化させる群とそうでない群の2群にランダムに振りわけられた。その結果,質問紙の内容や作業の節目でのインストラクションにいくつかの修正点を確認することができた。結果をふまえて,質問紙の内容や,インストラクションの順序等を修正し,本実験の準備を行った。今年度前半からは,本実験を実施する。

実験に際しては,視線解析装置の台数を十分に揃えることは難しい。したがって,被験者1名に対して1回の実験を長期間繰りかえし,データを徐々に蓄積する必要がある。2.推敲行動に関する質問紙から,5つの因子を抽出した別途取得済みであった推敲行動に関する質問紙に対して,探索的因子分析を行った。その結果,5つの因子を抽出した。今後は確認的因子分析を行い,因子の信頼性を確認する。また,共分散構造分析を行い,推敲行動の因果モデルを探索する。実験は,予備実験が終了し,本実験を開始できる状況である。質問紙分析は,最初の探索的因子分析がほぼ成功裏に終了したので,確認的因子分析や共分散構造分析など,その後の連続的な分析にスムーズに移行できる。文章産出における推敲活動の要素を特定・分類するために,理系単科大学の学部生に対して文章推敲質問紙を実施した(前年度)。探索的因子分析の結果,5因子を得た。因子はそれぞれ,修正のための読み(因子1),ズレの発見(因子2),文章の条件の理解(因子3),構成・内容の再検討(因子4),推敲の保留(因子5)と命名できた。確認的因子分析の結果,やや信頼性に問題がある因子はあるものの,全体として概ね良好な値が得られた。質問紙で同時に取得した「読み手意識」に関する変数とこれらの因子の因果関係モデルを探索した。その結果,読み手意識と推敲活動に関する因果モデルが得られた。推敲行動における眼球運動測定に関しては,予備実験に協力した人物以外でなおかつ実験課題の内容に関してある程度の予備知識を持つ協力者を募る必要があったため,協力者の確保に非常に時間を要した。そのため,実験実施が年度末付近となり,本実験のデータ分析は途中の状態である。したがってこれ以降は,本実験のデータ収集の概要と今後の分析に関する計画をこ述べる。本実験では,ある内容に関する説明文を何も見ずに書かせた。意見文ではなく説明文とした理由は,説明文のほうが推敲前後の内容の正しさや構成のわかりやすさが意見文よりも比較的明確に判断できると考えたためである。説明文を産出させる前後に,産出や推敲活動への自信や,それがどの程度成功したかについて主観的に判断させ,質問紙に記載させた。以上の基本的な流れに対して,寝かせを妨害課題なしで行う群とありで行う群,寝かせを行わない群の3群を設定し,データを収集した。分析では,モデルを仮定したうえで,説明文の内容・構成・表現選択に関する読みと修正のプロセスおよび質問紙を併せて知見の創出を試みる。本研究では,プログラミングの問題文読解とプログラム産出を対象とし,推敲による問題解決プロセスを検証した。実験協力者は,プログラミングの問題文を読解し,解答となるプログラムを生成した。分析に際しては,協力者をプログラミング上級者と初心者に分けた。眼球運動を分析した結果,プログラムの産出においては,上級者のほうが視線移動の距離と時間が長かった。このことから,上級者は初心者よりも一度に見ている語句が多く,ゆっくり読むことで頭の中で組み立てたプログラムを確認しながら書き進めていることが示された。一方初心者では,ひとつひとつの語句に注目し,書けるところからランダムにプログラムを書く方略が示された。質問紙の見直しと再実施・再分析を行ったため,予定よりやや遅れている。ただし,すでに分析を完了させ,それをふまえた実験計画や実験素材の準備も整った。そのため,遅れを取り戻すためにすぐに本実験に入ることが可能な状態になっている。本実験については,夏から秋にかけて終了させ,最終的な分析に入る。
「植物民俗学」によるヨーロッパ伝承文学研究の発展

1年目は、8月にドイツのベルリン大学附属植物園で調査を行なった。資料室では植物分類学に関する資料を確認し、植物園では伝承に登場する植物の実物を確認し、それらの外見的特徴について調査をすすめた。成果として、Arzneipflanzenkunde und Aberglaube in der botanischenVolkskunde(『神話研究』京都府立大学学術報告、23-27頁、2018年9月)を論文として発表した。そして、研究内容の一部を周知するため、和歌山日独協会2018年度総会において、記念講演会を行い、『ドイツ語圏の植物の迷信と薬用効果』( 2019年3月28日和歌山日独協会)で研究活動を報告した。現在も引き続きおこなっている作業として、グリム兄弟のDeutsche Sagen(『ドイツ伝説集』)の植物の伝承の内容および名称の確認、既存の植物名の和訳の整理をしている。土地伝説集における植物伝承の整理は完了したため、その注釈を執筆中である。2年目にその内容を論文として、Flaschenpost(ゲルマニスティネンの会)に発表することを予定している。Woerterbuch der deutschen Pflanzennamen, Leipzig, 1943.と、以上の調査内容との検討がまだ進んでいないため、2年目の計画と並行して行う。上記の研究実績の中で、「植物の薬用効果に対する人々の期待」が植物の迷信に見られること、現在の薬用植物商品(ハーブティー、塗り薬、抗うつ剤)の広告にも、16世紀以前の植物の神話的イメージが見られることが明らかになった。医薬品については、それらの情報は削除されているが、健康食品として販売されているものには、「植物のイメージ」が利用されており、現代の代替医療と植物の迷信との関連についての調査の継続の必要性を確認できた。調査報告の取りまとめを2019年2・3月に行う予定だったが、計画時よりも項目を増やしたため、予定よりも遅れることとなった。
iPS由来GABAergic neuron移植による難治性疼痛治療

慢性期頚髄損傷マウスモデルを作成し、実際に脊髄損傷後8週目にiPS細胞由来神経前駆細胞移植を行った。慢性期脊髄損傷においても、ホスト脊髄の神経系細胞と移植細胞由来の介在ニューロン、運動神経、感覚神経との間で新たなシナプスが形成されていることが免疫電顕における評価にて確認された。さらには、移植細胞由来の神経細胞神経突起をホスト由来の神経系細胞由来のオリゴデンドロサイトが取り囲み、再髄鞘化をサポートしていることも併せて確認された。またこうして新たに形成されたシナプスは、興奮性・抑制性両者のシナプス活動を活発に行っていることが確認された。運動機能については、こうしたあらたな神経回路の再構築により生じている1つの機能回復メカニズムが再確認された。頚髄髄節機能の回復に伴い、上肢運動機能の改善が得られることが確認された。現在感覚機能評価のデータを回収し、異常疼痛の軽減(withdrawal test, tail flip test)が得られていることを確認し、組織評価(LFB染色、各種免疫組織評価)と行動学的評価の結果を踏まえて統計学的な解析を行っている。また、移植細胞は抑制系のニューロンであるGABAergic neuronにどの程度分化・誘導されているのかについて、GABA染色を含めた組織学的な定量評価を進めている。基本データの収集を終了し、最終的な統計学的データ解析を進めている。。必要な行動学的データ、組織学的データの回収がほぼ終了し、統計学的な種々の解析に移行しているため。得られた多くのデータを解析した上で、科学的なデータと仮説の検証を行う。その上で、種々の公表活動を行う予定である。運動機能についてはその機能回復が、こうしたあらたな神経回路の再構築により生じている1つの機能回復メカニズムが再確認された。ただし、実際の機能回復は、再髄鞘化や液性因子の関与も大きく関与していることは事実であり、さらなる研究の遂行継続が必要である。現在感覚機能評価のデータを回収し、実際の異常疼痛の軽減が得られるのかどうかについて確認を行っているところである。また、移植細胞は抑制系のニューロンであるGABAergic neuronにどの程度分化・誘導されているのかについても組織学的に確認を行っている。現在、本実験に移行し、組織学的評価と機能回復の解析について、個体数を増やして統計学的な解析が可能な実験系へと進んでいる。脊髄損傷モデル、アロデニアモデルが確立し、実際の細胞移植を行い、行動学的・組織学的な評価を行い、positiveデータを得ることができた。preliminaryなデータ解析が終了し、本実験への移行へと進んでいる状況であるため。。現状で研究そのものは予定通り進行しており、予定通り感覚障害の改善の評価と、GABAergic neuronの機能評価を今後進めていく予定である。マンパワーの確保が研究推進にはもっとも有効な方策であるため、大学院生による研究サポートなどを進めていく予定である。