hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
東南アジア・南アジア史研究資料の基礎的研究

当該研究課題「東南アジア・南アジア史研究資料の基礎的研究」のもとでの2ヵ年にわたる共同研究の結果、日本における研究資料の体系的、系統的整理の方法についての新たな知見を得ることができた。山本達郎研究代表者は、代表者として研究の会体を総括するとともに、役割としては東南アジア、大陸部、ベトナムの歴史資料研究を分担し、日本における従来の資料整理の不十分さを問題にして、新たな資料研究の方向をうちだした。石井米雄研究分担者は、東南アジア、大陸部、タイ史資料を検討し、とくにタイ・ムスリムとタイの宗教について問題点をあきらかにし、資料問題についての系統化をあきらかにした。池端雪浦研究分担者は、東南アジア、諸島部、フィリピンの資料問題をとりあげ、新たに発堀した日本軍政下の資料を検討して、華人社会の問題にふれ、近代、現代史の資料問題の大系化、系統化をあきらかにした。原實研究分担者は、インド古代の文学資料の性格を問題にし、古典資料の厳密な校訂の方法にふれ、とくに辻文庫の収集、整理、言語学上の厳密な方法にもとづく検索表の作成は、当該研究上の大きな成果である。山崎元一研究分担者は、インド古代史上の資料問題にふれ、古代史の資料批判、整理の方法についてまとめた。荒松雄研究分担者は、インド中世史の資料問題にふれ、文献資料のみならず、考古学上の資料、遺跡について、資料整理についての新たな視点をうちだした。小名康之研究分担者は、インド近世、近代の資料、とくにヨーロッパ人による資料の整理を問題にし、マニュスクリトの系統的整理をおこなった。二カ年にわたる本研究の初年度である今年度においては、東南アジア・南アジア史の研究資料の国内における調査から始めた。国内の大学図書館等に所蔵されている東南アジア・南アジア史関連の資料はかなりの量にのぼるが、全体を網羅する体系的な目的が存在するわけではないので従来から利用にはかなり不便であった。今回の調査によって、今後に必要な系統的体系化への新たな知見が得られ、今年度の基礎的研究はおおいに進行した。東南アジア史関連では従来から日本では手うすであったビルマ史およびビルマ語関連資料の収集に新たにつとめた結果、本研究にとって新たな知見が得られた。ビルマ史およびビルマ語関連資料は、個々の項目を整理し、相互の関連性を重視して、コンピュ-タ-に入力デ-タ・ベ-ス化した。次年度においてはその成果をまとめ出版し、公表する予定である。南アジア史関連では、従来から、一部のみ、個別的におこなわれていた古代インド関連資料の、網羅的、体系的整理をおしすすめていった。本研究では、基礎的研究に必要なものに限定し、資料整理をおこない、デ-タ・ベ-ス化した。その結果、資料上での新たな知見が得られた。次年度は、今年度得られた知見をもとに、用語の統一、関連事項の体系的整理を十分におこなって、索引つくりを完成させた上で、その成果をまとめ、出版し、公表する予定である。また中世インド関連資料において、従来、日本で手うすであったムガル時代資料の収集につとめ、イギリスの旧インド省関連東インド会社資料をマイクロ・フィルムにてとりよせた。今年度はそのうちの基礎的研究に関する部分だけであるが、研究上新たな所見が得られた。本年度は、前年ひきつづき、国内における主要ないくつかの大学図書館、諸研究機関に所蔵されている南アジア・東南アジア史の歴史研究資料の調査をおこない、今後の研究に必要な文献整理のための系統的・体系的な新たな知見を得ることができた。東南アジア史研究資料については、山本が、総括ととも、大陸部、ベトナムの歴史資料を、石井が、大陸部、タイの民俗資料を、池端が、諸島部、フィリピンの歴史資料をそれぞれ系統的に調査し、資料研究をおこなった。

また、南アジア史研究資料については、原が、インド古代、文学資料を、山崎が、インド古代、歴史資料を、荒が、インド中世、歴史資料を小名が、インド近世、歴史資料のそれぞれを、系統的、体系的に調査し、全体としてまとまった資料調査研究の成果を得るにいたった。本研究の二年間の調査が完全に網羅的にできたわけではないが、日本国内の大学図書館、研究機関における、南アジア・東南アジア史関連の古代、中世、近世の歴史資料の収集状況がつかめたのは、研究全体での大きな成果である。ことに、東南アジア、南アジア史研究資料の上で、きわめて重要性が高い、手書き文献については、マイクロ・フィルムの形で、ヨーロッパの文書館からとりよせ、もともとの資料状況に関する貴重な知見を得ることができた。本年度は、研究の最終年度であるから、資料状況解明の一端として、辻文庫目録のコンピューター入力、ビルマ語関連資料の整理が重要なものとしてあり、これらは全体の研究の成果報告書に収められて、公表される予定である。
農作物の紫外線UVB抵抗性とUVB誘導DNA損傷の修復能力との関係について

(1)UVB感受性品種農林1号における、光修復能力の低下の要因について抵抗性イネ品種ササニシキと感受性品種農林1号の生葉(in vivo)および光修復酵素を含む粗液(in vitro)を用い、Single Photoflash法により、各品種の光修復酵素活性の特性(酵素一基質複合体形成速度、複合体の温度1に対する安定性など)について解析を行った結果、農林1号の光修復酵素は構造上に変異があることによって、その活性が低下していることが示唆された(投稿中)。(2)紫外線抵抗性の異なるイネ品種間の遺伝子的背景インド型イネ品種で、紫外線抵抗性品種Marich-batiは、感受性Surjamkhiと比較して、これまでに日本型イネ品種で認められた結果と同様、CPDの光修復能力が低下していた(投稿準備中)。そこで、インド型抵抗性品種Marich-batiと日本型感受性品種農林1号を交配した後代株(F2,F3)を用いて、後代株の紫外線感受性と光修復酵素の親型との関係について解析を行うための準備段階として、約120種類の単純反復配列の繰り返しの違いを認識するプライマーを用いたマイクロサテライト法により、親株間での多型解析を行った。そして、染色体上での多型位置の決定を行った。(3)種々の農作物におけるUVB抵抗性とUVB誘導CPD光修復能力との関係についてイネ、インゲン、ナス、トウモロコシ、ダイズ、キュウリの6品種を材料に解析を行った。その結果、(1)植物種間によってUVBによる生育阻害効果は大きく異なる、(2)UVB誘導CPD生成の感受性、さらにはCPDの光修復活性も植物種間で大きく異なることがわかった。しかし、植物種間におけるUVB抵抗性とCPD光修復能力との相関関係を見出すことはできなかった。今後、可視光に種々の強度のUVBを付加した条件下で生育した植物葉でのCPDの動態、さらには各植物の光修復酵素の比活性等を比較する必要がある。これらは今後の課題である。(1)多種のイネ品種のUVB抵抗性とUVB誘導DNA損傷(CPD)の修復能力との関係およびその遺伝的背景についてこれまでに選抜したインド型イネ品種、Marich-bati(抵抗性)とSurjamkhi(感受性)を材料に、CPDの修復能力と紫外線感受性との関係について検討した。その結果、両品種間においてUVBによるCPD生成の感受性を比較したところ差異は認められなかった。しかし、生成したCPDを修復する光修復速度は明らかに、抵抗性品種Marich-batiの方が感受性のSurjamkhiよりも速く、これまでに我々が報告した日本型イネ品種ササニシキ(抵抗性)と農林1号(感受性)での結果と同様の結果を得た。これの結果は、紫外線抵抗性とCPDの光修復能力がより密接な関係にあることを示唆している。そこで、次にUVB抵抗性とUVB誘導CPDの修復能力との関係についての遺伝的背景について検討する目的のため、ササニシキ(抵抗性)X Surjamkhi(感受性)、および農林1号(感受性)X Marich-bati(抵抗性)の交配を行いF1個体を得た。現在、交雑後代F2を栽培中である。(2) UVB感受性品種農林1号における、光修復能力の低下の要因についてササニシキおよび農林1号の光修復酵素を含む粗液と、一定量のCPDを有するλDNA(基質)を用いて、それぞれの品種の粗液中での光修復酵素活性の特性について検討を行った。その結果、(1)基質であるCPDと結合し、基質-酵素複合体の形成に要する時間は、農林1号の方がササニシキと比較して長いこと、(2)基質-酵素複合体の温度に対する安定性について比較したところ、農林1号は45°C以上で活性が低下するのに対し、ササニシキは45°Cでは安定で、60°Cで活性の低下が認められた。以上の結果から、農林1号の光修復酵素は構造上に変異があることにより、その能力が低下している可能性が示唆された。その結果、(1)植物種間によってUVBによる生育阻害効果は大きく異なる、

(2)UVB誘導CPD生成の感受性、さらにはCPDの光修復活性も植物種間で大きく異なることがわかった。しかし、植物種間におけるUVB抵抗性とCPD光修復能力との相関関係を見出すことはできなかった。今後、可視光に種々の強度のUVBを付加した条件下で生育した植物葉でのCPDの動態、さらには各植物の光修復酵素の比活性等を比較する必要がある。これらは今後の課題である。
拮抗アクチュエータによるリハビリテーションアームに関する研究

本研究は,動物特有の拮抗筋の効果を工学的に模倣した新しいアクチュエータを開発したことに始まる,これまでの研究から,バイラテラルサーボ系(位置決め制御,力制御)を新しい概念でシステム化することによって,(1)安全性の確立,(2)操作性の確立,(3)強力な出力の発生を進めることが可能になった.特にこれらの(1)(3)は障害者用パワーアシストに有効であることが確認されている.平成17年19年までの成果は、(1)頸髄損傷者を対象に、障害者自身が操作できるリハビリテーション・アームの設計・試作を行い、特に、前腕の機構を撓骨・尺骨を模倣した機構の開発、上腕部に二関節筋を模倣したアクチュエータの開発から、よりヒトの腕の動きに近いアームを設計・試作した。(2)脳障害による手のリハビリテーションは、機能回復が難しく世界的な課題である。特に、5指を独立に動かすメカニズムと制御(位置と力制御)に対応した手の装具は国内外とも無く、本研究は、バイラテラルサーボを導入することで設計・試作した。リハビリテーションの機能回復には、アームおよびハンドの動作プログラムと訓練用プログラムが重要である。アームのデータベースとして、格子点座標系と言うアルゴリズムを開発し、また、ハンドに関しては、指の反力を検知し動作プログラムの開発を進めた。これらのソフトウェアは実用段階ではないが障害者を対象とした訓練へ進む準備はできた。本研究は,障害者(頸椎損傷者,筋ジストロフィー)を対象としたバイラテラルサーボシステムを用いたリハビリテーションアームの構築を目的としている.従来のロボット設計では,1つのアクチュエータで一つの関節を駆動するが,本研究では,人類特有の1つのアクチュエータで二つの関節を駆動する機能と拮抗筋によるブレーキの効果を工学的に模倣した新しい二関節筋型アクチュエータを用いることによって人間の腕の機能に近い動作を実現したリハビリテーションアームの研究である.本年度は,この新型アクチュエータを用いた障害者自身が操作できるリハビリテーションアームの設計試作を行った.このアームは,ヒトの腕の機構と動作を模倣した構造を持ち,車椅子に搭載されている.バイラテラルサーボシステムのマスター部は車椅子の裏側に搭載され,スレーブ部はアーム内に内蔵され,位置制御系と力制御系により動作する.このリハビリテーションアームの主要な特徴の1つに,前腕の橈骨・尺骨を模倣した新機構がある.この機構は,ヒトの前腕の橈骨・尺骨がねじれるように交差することで実現される手首の回転を2つの直動型バイラテラルサーボシステムを使って実現している.この機構によって,これまで困難であった保持力の高い回転運動が可能となり,障害者の前腕の動きを滑らかにパワーアシストすることと,ヒトの腕の構造に適した自然な動きにより,リハビリテーションが実現可能となった.本研究は,障害者(頸椎損傷者,筋ジストロフィー)を対象としたバイラテラルサーボシステムを用いたリハビリテーションアームの構築を目的としている.特徴は、障害者自身が操作できるリハビリテーションアームであり,ヒトの腕の機構と動作を模倣(上腕肩関節と肘関節を単独または同時駆動する二関節筋型アクチュエータ)構造を持ち,車椅子に搭載されている.バイラテラルサーボシステムのマスター部は車椅子の裏側に搭載され,スレーブ部はアーム内に内蔵され,位置制御系と力制御系により動作する.特に、リハビリテーションアームの特徴の1つに,前腕の橈骨・尺骨を模倣した機構は,ヒトの前腕の橈骨・尺骨がねじれるように交差する機構であり、これまでこの機構の特徴が解剖学的に良く分かっていなかった.実現された手首の回転を2つの直動型バイラテラルサーボシステムを使って実現したところ、非常に高い回転保持力が可能なことが分かり体重を支え、回内外運動による位置制御と力制御が切り替わることにより、例えば、ワニの歩行のような体重保持を行いながら動作できる機構であることが実験的に判明した.本年度の他の成果は、手部の訓練装置の設計試作にある.

これは、一般的に動力手装具と呼ばれているが、5指を訓練するようなリハビリテーションハンドは無く、本研究開発が初めてである.それは、脳障害(脳梗塞、脳血管障害など)として片麻痺が残り今もってその訓練装置が無い状況である.その理由は、手の訓練には、単なる開閉動作だけではなく手の把持力の認識が重要とされている.今回、バイラテラルサーボを指動作に導入することで、把持駆動中から把持に掛け圧力変動として捉えることが可能となり、片麻痺障害者の手訓練装置としての可能性が見えてきた.本研究は,動物特有の拮抗筋の効果を工学的に模倣した新しいアクチュエータを開発したことに始まる.これまでの研究から,バイラテラルサーボ系(位置決め制御,力制御)を新しい概念でシステム化することによって,(1)安全性の確立,(2)操作性の確立,(3)強力な出力の発生を進めることが可能になった.特にこれらの(1)(3)は障害者用パワーアシストに有効であることが確認されている.平成17年19年までの成果は、(1)頸髄損傷者を対象に、障害者自身が操作できるリハビリテーション・アームの設計・試作を行い、特に、前腕の機構を撓骨・尺骨を模倣した機構の開発、上腕部に二関節筋を模倣したアクチュエータの開発から、よりヒトの腕の動きに近いアームを設計・試作した。(2)脳障害による手のリハビリテーションは、機能回復が難しく世界的な課題である。特に、5指を独立に動かすメカニズムと制御(位置と力制御)に対応した手の装具は国内外とも無く、本研究は、バイラテラルサーボを導入することで設計・試作した。(3)リハビリテーションの機能回復には、アームおよびハンドの動作プログラムと訓練用プログラムが重要である。アームのデータベースとして、格子点座標系と言うアルゴリズムを開発し、また、ハンドに関しては、指の反力を検知し動作プログラムの開発を進めた。これらのソフトウェアは実用段階ではないが障害者を対象とした訓練へ進む準備はできた。
希土類錯体の電子状態に及ぼす環境効果

本研究では、含希土類機能性セラミックス材料を電子論に基づいて設計することを最終の目的として、モデルクラスターとして希土類錯体をとりあげ、その電子状態をDV-Xα法により詳しく調べ、実験的に知られている諸物性との対応を系統的に調べている。経験的なパラメーターを入れることなく電子状態を計算する手法は、すでに幾つかの汎用のものが存在するが、この内、本研究で用いるDV-Xα法は、希土類を含む周期律表の全元素を同じ精度で同じように取扱うことができ、本研究の目的に最適の方法である。計算は,高温構造用セラミックスとしての広い応用が期待されているα-及びβ-Si_3N_4の格子間位置に希土類元素が存在する固溶体について行った.Lu^<3+>イオン周囲の化学結合性を評価したところ,特にLn-Nが強い反結合性を示した.overlap populationの成分を詳しく見たところ,その反結合性の主因はLn-5spおよび6spとこれに隣接するNの価電子との反結合にあり,Lnの4f軌道はほとんど結合に関与していない.このLn-5spおよび6SPによる反結合性は,Lnのイオン半径の増大にほぼ比例して強くなった.このことは,β-Si_3N_4構造においても同様であったが,Lnイオン周囲のSi-N結合がα-Si_3N_4において強化される分だけ,半径の小さいYb^<3+>などのイオンがα-Si_3N_4において安定化されることが判明した.このことは実験結果とよく対応している.本研究では、含希土類機能性セラミックス材料を電子論に基づいて設計することを最終の目的として、モデルクラスターとして希土類錯体をとりあげ、その電子状態をDV-Xα法により詳しく調べ、実験的に知られている諸物性との対応を系統的に調べている。計算は,高温構造用セラミックスとしての広い応用が期待されているα-及びβ-Si_3N_4の格子間位置に希土類元素が存在する固溶体について行った.Lu^<3+>イオン周囲の化学結合性を評価したところ,特にLn-Nが強い反結合性を示した.overlap populationの成分を詳しく見たところ,その反結合性の主因はLn-5spおよび6spとこれに隣接するNの価電子との反結合にあり,Lnの4f軌道はほとんど結合に関与していない.このLn-5spおよび6SPによる反結合性は,Lnのイオン半径の増大にほぼ比例して強くなった.このことは,β-Si_3N_4構造においても同様であったが,Lnイオン周囲のSi-N結合がα-Si_3N_4において強化される分だけ,半径の小さいYb^<3+>などのイオンがα-Si_3N_4において安定化されることが判明した.このことは実験結果とよく対応している.
豚筋形質由来の機能性タンパク質の特性並びに分子構造の解析

豚筋形質由来の酵素処理後の機能性ペプチド並びにグリセルアルデヒド-3リン酸-デヒドロゲナーゼ(GAPDH)を部分精製し,それぞれ機能性および加工特性について検討したところ,以下のような結果が示された。1)豚筋形質の硫安50-75%飽和沈殿区分(SP-F2)を回収し,同画分の酵素処理を行い,得られた抗酸化ペプチドの部分精製を試みた。その結果,各酵素(プロナーゼE,パパイン,ペプシン,キモトリプシン,フィシン)のうち,プロナーゼE処理が最も,抗酸化性を示すペプチドを多く含むことが,DPPHラジカル消去能の試験により確認された。このプロナーゼE分解物をイオン交換クロマトグラフィーで3つの画分に分画され,さらにトヨパールHW40Sでゲルろ過を行った結果,5番目のピークに高い活性が示された。この画分は逆相クロマトグラフィーにより,ほぼ1つのペプチドに分画されていることが確認できた。現在,このペプチド成分の同定を試みているところである。2)また,GAPDHによる食肉製品の加工特性改善効果については,粗GAPDH画分である硫安75%飽和上清画分(SP-F3)に高いリン酸塩様のテクスチャー改善効果を有することが確認した。GAPDHの精製度を上げるため,EDTA法さらにアフィニティークロマトグラフィー法により,精製度をられることをGAPDH活性の測定で確認し,得られた各GAPDH画分を豚筋原線維タンパク質に添加したところ,精製度に応じて破断応力値が増大しており,テクスチャー改善効果が強くみられた。また,精製されたGAPDHは筋原線維のアクトミオシンに作用し,0.2M以下のNaCl濃度下で,ミオシンおよびアクチンの可溶化を促進していることが,電気泳動を用いた共沈法により確認され,筋原線維のフィラメント構造の発達が走査型電子顕微鏡(SEM)による観察から明らかとなった。豚胸最長筋由来の筋形質タンパク質(SPは25MKClを含む50mMイミダゾール緩衝液を用いて抽出後、硫酸アンモニウムによる塩析を行い、SP全画分(WSP)、0-50%硫安飽和沈殿画分(SP-1)、50-75%硫安飽和沈殿画分(SP-2)ならびに75%硫安飽和沈殿画分(SP-3)を得て、水で透析した後、それぞれ凍結乾燥することでSP粉末標品を得た。このSP粉末標品を用いて、以下に示す加工および機能特性に関して基礎的な検討を行った。SPの加工特性については、次のこと明らかとなった。すなわち、乳化活性の結果は、SP-2がWSPよりも高い値を示した。また、ゲル形成性は、SPの各画分とも単独ではその特性を示さなかったが、低塩濃度(0.15MNaCl)下において、豚肉ホモジネートに各SP画分を添加したところ、SP-3添加区では豚肉ホモジネートの粘性が著しく増大し、加熱処理、著しくゲル強度を高める作用がみられた。その効果はホエーやオボアルブミンを大きく上回り、SP未添加のゲルの10倍の破断応力値を示し、ポリリン酸塩様の保水性および結着性を付与する効果が認められた。SPの生理活性機能に関しては、ロダン鉄法による抗酸化能の測定結果から、SPは優れた抗酸化能を有することがわかった。さらに、DPPHに主るラジカル消去能の測定では、WSPでほとんどその作用がみられなかったが、SP-3画分(5mg/ml)添加区では約50%の高いラジカル消去能が確認された。また、血圧上昇に関わるレニン-アンジオテンシン系のアンジオテンシン変換酵素(ACE)の阻害効果を調べたところ、WSPではACE阻害効果を有していなかったが、SP-3画分(5mg/ml)では約45%の高い阻害活性を示した。豚筋形質タンパク質の機能性および加工特性について検討し,以下の1)および2)のことが明らかとなった。1)酵素水解物の抗酸化性:豚筋形質タンパク質を種々のプロテアーゼ(プロナーゼE,パパイン,ペプシン,キモトリプシン,フィシン)で処理し,DPPHラジカル消去能を調べたところ,プロテアーゼEに高い活性が認められた。そこで豚筋形質を硫酸アンモニウム(硫安)で塩析処理し,3つの画分に分け,それぞれプロナーゼE作用させたところ,硫安50-75%飽和沈殿区分(SP-F2)に高い同活性が認められた。SP-F2のプロナーゼE分解物をゲル濾過で分画したところ,4つのピークが観察され,そのうち,分子量が最も低い成分を含む画分にラジカル消去能を示すペプチド(分子量数百)の存在が示唆された。2)食肉製品の物性に及ぼすリン酸塩様作用:豚筋形質を硫酸アンモニムで3つの画分に分け,それぞれモデルソーセージに添加したところ,硫安75%飽和上清画分(F3)に高いリン酸塩様のテクスチャー改善効果を有することが明らかとなった。この添加効果は中性付近で最も高く,NaCl0.15M以上で高い効果が認められ,タンパク質濃度依存的に同効果の増大が認められた。F3画分をキレート剤のEDTAで処理し,GAPDH(グリセリアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ)を部分精製し,豚筋原線維タンパク質に添加したところ,同様のテクスチャー改善効果がみられた。

また、走査型電子顕微鏡(SEM)により,精製したGAPDHを添加したソーセージの微細構造を観察したところ,三次元ネットワーク構造の発達が強く認められた。豚筋形質由来の酵素処理後の機能性ペプチド並びにグリセルアルデヒド-3リン酸-デヒドロゲナーゼ(GAPDH)を部分精製し,それぞれ機能性および加工特性について検討したところ,以下のような結果が示された。1)豚筋形質の硫安50-75%飽和沈殿区分(SP-F2)を回収し,同画分の酵素処理を行い,得られた抗酸化ペプチドの部分精製を試みた。その結果,各酵素(プロナーゼE,パパイン,ペプシン,キモトリプシン,フィシン)のうち,プロナーゼE処理が最も,抗酸化性を示すペプチドを多く含むことが,DPPHラジカル消去能の試験により確認された。このプロナーゼE分解物をイオン交換クロマトグラフィーで3つの画分に分画され,さらにトヨパールHW40Sでゲルろ過を行った結果,5番目のピークに高い活性が示された。この画分は逆相クロマトグラフィーにより,ほぼ1つのペプチドに分画されていることが確認できた。現在,このペプチド成分の同定を試みているところである。2)また,GAPDHによる食肉製品の加工特性改善効果については,粗GAPDH画分である硫安75%飽和上清画分(SP-F3)に高いリン酸塩様のテクスチャー改善効果を有することが確認した。GAPDHの精製度を上げるため,EDTA法さらにアフィニティークロマトグラフィー法により,精製度をられることをGAPDH活性の測定で確認し,得られた各GAPDH画分を豚筋原線維タンパク質に添加したところ,精製度に応じて破断応力値が増大しており,テクスチャー改善効果が強くみられた。また,精製されたGAPDHは筋原線維のアクトミオシンに作用し,0.2M以下のNaCl濃度下で,ミオシンおよびアクチンの可溶化を促進していることが,電気泳動を用いた共沈法により確認され,筋原線維のフィラメント構造の発達が走査型電子顕微鏡(SEM)による観察から明らかとなった。
ヒト胎盤形成における糖転移酵素GnT-Vの機能と絨毛外栄養膜細胞浸潤機構の解明

GnT-V発現抑制による浸潤能促進機構を明らかにするために、zymographyによるmatrix metalloproteinase活性の変化を確認したが、MMP-2,MMP-9活性ともに変化は認めなかった。次に、細胞外基質への接着能を検討すると、ラミニン、フィブロネクチン、コラーゲンIおよびIVすべてにおいて接着能は亢進していた。絨毛細胞が浸潤能を持つEVTに分化するときには、膜表面に発現するインテグリンのサブタイプが基質の変化とともに変化し、浸潤に最も重要であるのはα5β1インテグンである。インテグリサブタイプの発現をフローサイトメトリーで確かめると、α1,α5,α6,β1インテグリンすべてに発現変化は認めなかった。しかし、α5β1インテグリンによる免疫沈降後にL_4-PHAを用いたレクチンブロットを行うと、α5β1インテグリンヘのβ1-6GlcNAc鎖付加レベルがGnT-V抑制株において明らかに抑制されていた。免疫沈降後に行ったα5、β1インテグリン抗体を用いたWesternblotでもそれぞれの蛋白発現レベルに変化は認めなかった。以上より、ヒトEVTにおいてはGnT-Vがα5β1インテグリンにβ1-6-G1cNAc鎖を付加することによって、浸潤を抑制している可能性が示唆された。細胞における分子の機能は、蛋白発現レベルのみでなく糖鎖修飾によってさらに制御されることは、今後の研究においても重要な視点である。患者からのインフォームドコンセントを得た胎盤組織を用いて、抗ヒトGnT-Vモノクローナル抗体による組織免疫染色を施行し、絨毛外栄養膜細胞(EVT)に発現を認めた。L4-PHAレクチン染色では、GnT-Vによる特徴的な糖鎖構造であるβ1-6GlcNAc鎖もEVTに発現していた。さらに、胎盤組織より蛋白を抽出し、抗GnT-V抗体を用いたWestern blotとL4-PHAを用いたlectin blotを施行した。妊娠初期、中期に比べて後期にはGnT-V、β1-6GlcNAc鎖の発現はともに減少した。また、lectin blotより胎盤におけるGnT-Vの標的分子は約120kDaと80kDaと推測された。妊娠初期絨毛を洗浄後細切し、collagen I coat dish上に5-7日間培養して得られた培養EVTを上記と同様に免疫染色を施行すると、GnT-Vおよびβ1-6GlcNAc鎖の発現が認められた。β1-6GlcNAc鎖は細胞膜に局在していた。GnT-V強発現株であったJarをEVTモデルとして、大阪大学医学部生化学教室三善英知先生から供与されたGnT-V siRNAレトロウイルスベクターを遺伝子導入し、シングルクローンを採取した。GnT-Vの発現量をWestern blotで解析し発現抑制株を樹立した。親株とmock株が比較的紡錘形であるのに比べて、GnT-V発現抑制株は接着面に対してより拡がっているような形態変化が見られた。
黒鉱からのガリウム、インジウムの液膜分離プロセスの開発

本研究で対象とする原液は黒鉱からの亜鉛浸出残渣である2段中和石膏の硫酸浸出液であり、この中には約300ppmのGa、Inとその100倍程度のAl、Zn及びFeを含んでいる。この原液から3断の溶媒抽出行程を経てGaとInを分離、濃縮する湿式製錬プロセスに液膜法を応用することが本研究の目的である。まず第1段はカルボン酸系抽出試薬を用いてGa、Inを20倍に予備濃縮する工程であるが、抽出試薬としては2プロモデカン酸を用い、支持液膜法と乳化液膜法の双方について検討を行った。支持液膜法については次の結果が得られた。(1)原液中に共存する硫酸イオンがGa、Inの膜透過速度を著しく減少させる。(2)支持液膜法でGa、Inを20倍濃縮するには約20mの膜長が必要であり、既存の溶媒抽出プロセスに比較して必ずしも有利とは癒えない。次に界面活性剤としてスパン80を用い乳化液膜法の適用を検討して次の結果を得た。(1)原液のpH調整にカセイソーダやアンモニアを添加するのは、Na^+イオンやNH_4^+イオンが膜透過して内水相の酸を消費するので好ましくない。むしろpHを低下するにまかせた方がよい。(2)原液を水で2倍に希釈した方が抽出効率が上がる。これは抽出速度が硫酸イオン濃度の増加とともに急激に低下するためである。(3)乳化液膜法を適用することにより、従来のミキサセトラを用いた抽出プロセスに比して装置体積を1/10にまた抽出試薬量を1/50に軽減できる。次にジィソプロピルエーテル(IPE)を用いてGaを分離する第3段抽出工程への支持液膜法の応用を検討した。その結果、比較的水への溶解度の大きいIPEやTBPについてもボリプロピレン不織布を裏打ちしたテフロン多孔質膜(ラミネート膜)を用いることにより、安定な支持液膜を形成することができ所要膜長も10m程度ですることがわかった。
リガンド賦活法を用いたヒト脳における神経伝達物質遊離測定法の開発

新しい^<11>C-ヨウ化メチル合成法の確立と標識合成:^<11>CO_2をトラップしたあと^<11>CHA4に還元(ニッケルと水素ガス混合)し、ヨウ素(I_2)と反応させることにより^<11>C-ヨウ化メチルを合成し、さらに^<11>C-ヨウ化メチルから^<11>C-メチルトリフレート法による標識合成法を確立した。従来法を比較すると数倍以上比放射能が高く安定して標識合成が可能になった。新しい標識合成法により、^<11>C-ドキセピン(H1アンタゴニスト)、ラクロプライド(D2アンタゴニスト)、ドネペジル(アセチルコリンエステラーゼ阻害薬)を新規に合成することに成功した。特に、ループ法という簡便な方法とセッパックによるHPLC分離時の塩類を除去する方法で、より安全な^<11>C標識薬剤の臨床応用に成功した。脳スライスを用いたインビトロPET法による評価:脳スライスと^<11>C標識薬剤をインキュベートして^<11>C標識薬剤の取りこみをIPにて測定してリガンド賦活法の基礎開発研究を行った。3次元データ収集PETを用いた新しい脳機能検査法の開発:3次元データ収集PETとH_2^<15>Oを用いた新しい新しい脳機能検査法を開発した。顔の表情認知課題遂行時にH_2^<15>Oによる脳血流量測定による脳機能マッピングを行い脳の賦活部位と行動や心理的変化との相関を調べた。またこの方法により眠気と認知機能障害のイメージングに成功した。正常者被験者におけるリガンド賦活法による神経伝達物質遊離測定:被験者に腸管(直腸内)にバルーンを留置して、バルン・パンピングをおこない、不快感・痛み刺激を与え、^<11>C-標識ドキセピンを投与し受容体結合量を測定した。得られたデータを解剖学的に標準化して、SPM等によりその変化率を統計的に評価したところ、ヒスタミン神経系が痛みの受容メカニズムに関係している部位(大脳皮質、視床)においてヒスタミンの遊離をヒトにおいて証明できた。新しい^<11>C-ヨウ化メチル合成法(Gas-Phase法)の確立と標識合成:^<11>CO_2をトラップしたあと^<11>CH_4に還元(ニッケルと水素ガス混合)し、ヨウ素(I_2)と反応させることにより^<11>C-ヨウ化メチルを合成し、この方法の最適化条件を見つけて合成法を確立した。Lithium aluminum hydride/THFを還元剤として用いる従来からの方法を比較すると数倍以上比放射能が高く安定して標識合成が可能になった。新しいヨウ化メチル合成法により、^<11>C-ドキセピン(H1アンタゴニスト)、ラクロプライド(D2アンタゴニスト)、ドネペジル(アセチルコリンエステラーゼ阻害薬)を新規に合成することに成功した。

正常者被験者におけるリガンド賦活法による神経伝達物質遊離測定:被験者に腸管(直腸内)にバルーンを留置して、バルン・パンピングをおこない、不快感・痛み刺激を与え、^<11>C-標識ドキセピンを投与し受容体結合量を測定した。得られたデータを解剖学的に標準化して、SPM等によりその変化率を統計的に評価したところ、ヒスタミン神経系が痛みの受容メカニズムに関係している部位(大脳皮質、視床)においてヒスタミンの遊離をヒトにおいて証明できた。
生活習慣（病）の改善が冠動脈プラーク性状に与える影響

初年度よりデータの蓄積をおこなってきた成果として、最終年度においてインスリン抵抗性に着目し、糖尿病治療薬投与前後における冠動脈プラークの変化をserial IVUSを用いて検討した部分の解析に取り掛かっている。本内容にに関しては、商業誌に投稿予定である。また、メタボリック症候群と密接に関連するCKDの中でも最重症でありデータも欠落している透析症例において、第二世代冠動脈ステント留置後におけるプラーク性状変化をOCTを用いて検討した。本研究はすでにエントリーが終了しており、最終解析段階に入っている。これら3年間の総合的な成果に関して、研究論文も海外有力ジャーナルに投稿中である。生活習慣病と急性心筋梗塞を発症しやすい冠動脈プラークの関連を解明し、心筋梗塞も含めた虚血性心疾患の早期発見およびその発症予防に効果的な生活習慣改善方法・薬物療法を明らかにすることを目的に本研究を行っている。欧米型の食生活・喫煙習慣などは心筋梗塞の発症と密接に関連していることが疫学的調査により明らかとなっているが、そのメカニズムに関してはいまだ不明な点が多い。我々は侵襲的冠動脈プラーク解析により、脂質性のプラークが将来的な心筋梗塞の発症と密接に関連することを世界に先駆けて報告した(Circ J. 2011;75:157-166)。今回我々は、侵襲的冠動脈プラーク解析として、血管内超音波法(IVUS)および光干渉を応用したOCTを用いて、DPP4阻害薬の投与による糖代謝完全により冠動脈プラーク性状がいかに改善するかを検討中である。また、同様の検討をより低侵襲な画像診断法である、冠動脈CTを用いても検討予定である。上記に関して、臨床検査チームが心臓カテーテル検査、IB-IVUS検査、冠動脈CT,末しょう静脈よりの採血などを施行してデータ収集中であるが、今後画像解析チームによる、各種画像データを用いた、冠動脈プラーク定性(脂質性プラーク占有率等)および冠動脈プラーク定量(総プラーク量等)の解析に着手予定である。同時にデータ収集解析チームによる画像データの集約、各種データのブラッシュアップも行っている。今年度以降に、統計解析チームによるデータ品質管理、品質保証、実際の統計解析も予定している。これまで我々は生活習慣病の原点ともいえる不摂生な食生活、その下流に存在する内臓脂肪増加、インスリン抵抗性、そして最終像ともいえるメタボリック症候群の病態では心筋梗塞発症と密接に関連している脂質性プラークが増加しており、結果として心筋梗塞等の心血管イベントが増加していることを見出した。当初、1)食生活の改善、具体的には肉食から魚食への転換あるいは魚油の投与が冠動脈プラークに与える影響をIB-IVUS、冠動脈CTを用いて評価すること。2)インスリン抵抗性改善をもたらす適切な運動あるいはインスリン抵抗性改善薬の投与が冠動脈プラークに与える影響を上述のモダリティにて検証すること。3)メタボリック症候群の各コンポーネント(高血圧、脂質異常症、糖尿病、肥満)をコントロールすることが冠動脈プラークに与える影響を検討することとしていたが、これまで本研究ではインスリン抵抗性改善作用を有する糖尿病薬を用いて、心筋梗塞を発症する前の虚血性心疾患の症例を対象に、各種インターベンション介入前後の2点における冠動脈プラーク性状の変化をIVUS、OCTにて評価している。本研究においては2回の画像診断検査を必要とし、その間隔が通常1年あるため、フォローアップの脱落防止が重要であるとともに、進捗状況に関しても注力している。さらに、メタボリック症候群とも関連している透析症例に関しても同様に評価することとし、こちらのほうは企画的順調に症例が追加されている。本研究においては、2回の画像診断を必要としている。この間隔は通常1年であるため、エントリーより1ー2年の時間を経てはじめて一症例となるため。また、本研究開始後に透析患者も対象としたため.平成28年度においては、メタボリック症候群において中心的な病態である、インスリン抵抗性に着目し糖尿病治療薬投与前後における冠動脈プラークの変化をserial IVUSを用いて検討した部分の解析に取り掛かっている。本内容に関しては、以前の我々のインスリン抵抗性に関する報告とともに商業誌に投稿予定としている。また、メタボリック症候群と密接に関連するCKDのなかでも最重症である透析症例において、第二世代ステント留置後におけるプラーク性状変化をOCTを用いてけんとうした。さらに、最近の心筋梗塞におけるメタボリック症候群のインパクトを調べるため、2015年から2017年に当院に来院した急性冠症候群症例を後ろ向きに検討した。その結果、若年性心筋梗塞(発症時49歳以下)の特徴として、肥満、低HDLコレステロール血症、高中性脂肪血症、EPA/AA比低値などが特徴として浮かび上がった。これらの所見は最近の心筋梗塞におけるメタボリック症候群の重要性を示唆するものであった。この結果も加味し、急性冠症候群発症時、2週間後、3か月後におけるステント留置部、非責任病変部のプラーク進行と各種危険因子との関連をOCTを複数回施行することにより検討した。本研究は、日本循環器学会学術集会2017で発表し、さらに8月にスペイン、バルセロナで開催予定のヨーロッパ心臓病学会でも発表予定である。さらに本研究論文を現在海外有力ジャーナルに投稿中である。

また、メタボリック症候群と密接に関連するCKDの中でも最重症でありデータも欠落している透析症例において、第二世代冠動脈ステント留置後におけるプラーク性状変化をOCTを用いて検討した。本研究はすでにエントリーが終了しており、最終解析段階に入っている。これら3年間の総合的な成果に関して、研究論文も海外有力ジャーナルに投稿中である。メタボリック症候群の最上流にある生活習慣を改善することによる、冠動脈プラーク性状の変化に関して、脂質改善、糖代謝改善による変化を冠動脈内超音波法および、OCTにて観察中である。現在、DPP4阻害薬の投与による糖代謝完全により冠動脈プラーク性状がいかに改善するかを検討中である。今回の検討は、ベースラインとフォローアップの2点のデータを比較検討するため、現時点ではデータの収集中である。上記にそくして、症例をエントリーする。フォローアップのもれを防ぐため、医局会などで主治医に注意喚起する。冠動脈インターベンション今後、各種研究チームの役割(統計解析チームによるデータ品質管理、品質保証、臨床検査チームによる心臓カテーテル検査、IB-IVUS検査、冠動脈CT,末しょう静脈よりの採血、画像解析チームによる冠動脈プラーク定性(脂質性プラーク占有率等)および冠動脈プラーク定量(総プラーク量等)、データ収集解析チームによる画像データの集約、各種データのブラッシュアップなど)を再確認し、各チーム間の情報共有を密にして、さらに症例数を増加させる予定である。本研究における最終年度として、学会発表諸経費等への支出が必要である。研究成果を学会などで発表するための経費学会発表諸経費、交通費、印刷代等国内、国際学会にて発表を予定している。
沖縄県の口腔癌におけるヒトパピローマウイルスの関与に関する研究

1) 1993年1996年の琉球大学医学部附属病院歯科口腔外科において、生検や外科的切除を行った口腔扁平上皮癌60例を対象に、組織学的検討とヒトパピローマウィルス(HPV)について検討した。また、同時期の北海道(札幌医大・口腔外科)の症例42例の口腔扁平上皮癌についても同様に検討した。症例は、琉大では男性47例、女性13例、平均60.5歳であった。札医大では、男性31例、女性11例、平均60.5歳であった。方法は、病理組織学的検討を行い、さらにパラフィンブロックよりDNAを抽出し、HPV6,11,18.のE6およびE7領域DNAをPCR法で増幅した。電気泳動後、Southern.blot法により確認した。結果:琉大の症例では、HPV DNAの陽性率は78.3%で、舌7/15例、咽頭10/14例、口底10/10例、上顎洞3/4例、頬粘膜5/5例、歯肉6/6例、口唇3/3例、鼻腔、耳下線、口蓋各1/1例であった。他方、北海道の症例では、HPV DNAは26.2%の陽性率であった。部位別では舌7/20例、下歯肉2/7例、口底1/5例、咽頭1/5例であった。組織学的には、沖縄県の症例では高分化型35例、中分化型19例,、低分化型5例、dysplasia 1例であったが、北海道の症例では高分化型17例、,中分化型13例、低分化型12例で低分化型がやや多い傾向がみられた。これらの結果より、沖縄県の症例にはHPVが高率に検出され、組織型に影響を与えている可能性が考えられた。2)さらに、EBV DNAについても検出を行った。EBVについても沖縄県の症例では陽性率78.3%、北海道の症例では陽性率43.2%となっており、沖縄県の症例に高率に検出された。3) HPV DNAおよびEBV DNAのPCR産物をHitachiSQ5500シークエンサーで検討したが,mutation等はみられなかった。1)1993年1996年の琉球大学医学部附属病院歯科口腔外科において、生検や外科的切除を行った口腔扁平上皮癌60例を対象に、組織学的検討とヒトパピローマウィルス(HPV)について検討した。方法は、病理組織学的検討を行い、さらにパラフィンブロックよりDNAを抽出し、HPV6,11,18のE6およびE7領域DNAをPCR法で増幅した。電気泳動後、Southern blot法により確認した。

結果:琉大の症例では、HPV DNAの陽性率は78.3%で、舌7/15例、咽頭10/14例、口底10/10例、上顎洞3/4例、頬粘膜5/5例、歯肉6/6例、口唇3/3例、鼻腔、耳下腺、口蓋各1/1例であった。他方、北海道の症例では、HPV DNAは26.2%の陽性率であった。部位別では舌7/20例、下歯肉2/7例、口底1/5例、咽頭1/5例であった。組織学的には、沖縄県の症例では高分化型35例、中分化型19例、低分化型5例、dysplasia 1例であったが、北海道の症例では高分化型17例、中分化型13例、低分化型12例で低分化型がやや多い傾向がみられた。これらの結果より、沖縄県の症例にはHPVが高率に検出され、組織型に影響を与えている可能性が考えられた。2)さらに、EBV DNAについても検出を行った。EBVについても沖縄県の症例では陽性率78.3%、北海道の症例では陽性率43.2%となっており、沖縄県の症例に高率に検出された。EBVについては、高温多湿な沖縄で有意に検出率が高かったが、癌発生との関連性については現在検討中である。1) 1993年1996年の琉球大学医学部附属病院歯科口腔外科において、生検や外科的切除を行った口腔扁平上皮癌60例を対象に、組織学的検討とヒトパピローマウイルス(HPV)について検討した。また、同時期の北海道(札幌医大・口腔外科)の症例42例の口腔扁平上皮癌についても同様に検討した。症例は、琉大では男性47例、女性13例、平均60.5歳であった。札医大では、男性31例、女性11例、平均60.5歳であった。方法は、病理組織学的検討を行い、さらにパラフィンブロックよりDNAを抽出し、HPV6,11,18のE6およびE7領域DNAをPCR法で増幅した。電気泳動後、Southern blot法により確認した。3) HPV DNAおよびEBV DNAのPCR産物をHitachiSQ5500シークエンサーで検討したが、mutation等はみられなかった。
改良型インパクターフィルターによる大気中超微小粒子の分級濃縮捕集と成分組成の評価

超微小粒子(0.1 μm以下の粒子、UFP)は、呼吸により肺の深部まで到達し、様々な健康影響を及ぼすと言われている。そこで、その組成を正確に把握するために、インパクターフィルターを組み込んだ分級濃縮捕集装置の開発、改良を行った。そして、UFPの空間分布に関して調査するために、道路近傍や都市部高層ビルの上層階、さらには、都市部郊外において大気観測を実施した。その結果、UFPの光化学生成や成分の季節変動が確認されただけでなく、UFPが直接発生源のないバックグラウンド大気においても安定に存在していることが明らかとなった。また、UFPの構成成分として、人為起源の指標であるECが、大気中で一様に遍在している可能性も示唆された。実施した研究概要本年度は、多重管拡散デニューダーのガス吸着能ならびに超微小粒子の通過効率試験を複数の管数に対して行い、高流量により超微小粒子の慣性分級を行うインパクターフィルター(慣性フィルター)に適した多重管デニューダーの選択をまず行った。さらに、次年度においては、この多重管デニューダーと慣性フィルターを接続した系にて大気観測を行う計画にしていることから、本年度はその基礎試験として、インパクターフィルターのみによる超微小粒子の分級と観測を実験室レベル(燃焼実験装置とディーゼル発電機を使用)、ならびに、実大気空間(都市部道路近傍と高層ビル上階)にて行い、超微小粒子の空間分布と成分組成の把握を行った。得られた成果多重管拡散デニューダーのガス吸着能ならびに超微小粒子の通過効率試験において、インパクターフィルターでは40L/minの高流速が必要であり、超微小粒子の通過には有利に働くためにほぼ問題ない効率を示した。ただし、拡散によるガス吸着は流量の影響を大きく受け、実大気観測の長期使用においては、3チャンネル以上(5チャンネルが最も望ましい)の多重管拡散デニューダーを使用する必要性が示唆された。一方、超微小粒子の分級と観測においては、まず、実験室的な燃焼実験から、粒子成分の発生源による違いが超微小粒子域に顕著に現れることを確認した。その上で、実大気観測を都市部道路近傍と高層ビルで行い、超微小粒子成分について以下を明らかにした。・道路近傍での主要成分は炭素成分であるが、季節別の不均一核形成の作用により有機炭素成分は異なる。・冬期は自動車排ガスの影響を強く受けるが、夏期は、光化学二次生成由来の粒子が混在する。・発癌性を有する多環芳香族炭化水素(PAH)の割合は、超微小粒子域で高く、冬期はそれが顕著になる。・超微小粒子は拡散性が高く、高層ビルの下層から上層へ顕著に拡散移流する。実施した研究概要本年度は、昨年度評価を行い有効性を確認した超微小粒子(PM_<0.1>)の慣性分級手法であるインパクターフィルター(慣性フィルター)を用い、道路近傍大気観測ならびに関東広域(都市部郊外)の各地点における大気観測を夏期、冬期の季節別に行い、広域的な超微小粒子の動態観測を行った。得られた成果大気中超微小粒子の主要な成分は、有機炭素(OC)、元素状炭素(EC)といった炭素成分であった。夏季の超微小粒子中のイオン成分では、硫酸イオン(SO_4^<2->)濃度がもっと高くなってなり、光化学生成の影響を示唆するものであった。冬季のバックグラウンド大気中では、夏季のPM_<0.1>中に見られなかった塩素イオン(Cl^<->)や硝酸イオン(NO_3^<->、OC1成分が観測され、これは、冬季は低温であるため、温度依存の高いNH_4NO_3、NH_4Clといった塩類や揮発性のOCが揮発せずにPM_<0.1>中に含まれていたと考えられ、PM_<2.5>と同様、PM<0.1>においても、気象条件の影響を受けることが明らかとなった。バックグラウンド大気のEC成分を見たところ、夏季および冬季で季節変動がほとんどなく、バックグラウンド大気中では、ECがPM_<0.1>中で一様に遍在している可能性が示唆された。また、道路近傍大気とバックグラウンド大気とではEC濃度が異なったが、道路近傍大気では、EC中のEC1成分とEC2成分が同程度、もしくは若干EC2成分の比率が高く、バックグラウンド大気では、EC中のEC1成分の比率が高くなり、特に冬季に顕著であることが確認された。このことから、道路近傍とバックグラウンド大気では、寄与しているEC発生源が異なる可能性が示唆される。なお、PM_<0.1>中の成分に関してPMF解析を行ったところ、ECをEC1成分とEC2成分の別々の因子に分けることができ、UFP成分の指標の1つになり得る可能性が示唆された。
古代エジプト国家形成期における儀礼と権力に関する考古学研究

本研究は、古代エジプト文明において、儀礼祭祀によるイデオロギー操作の視点から、エリートの権力形成を考察する。文明形成期のヒエラコンポリス遺跡では近年、エリートの儀礼空間と考えられる大型構造物と供物を供給する生産施設と考えられる遺構が磁気探査によって新たに発見された。そこでこれらの発掘調査をつうじて、儀礼行為の具体的内容を明らかにし、権力の維持・強化における儀礼の機能について考察する。
RNAウイルス複製場の形成と崩壊における核内コンピテンシーの解明

すべてのウイルスは、細胞内で安全かつ効率的に複製するために独自の複製場を形成している。これまでの研究から、RNAウイルスの複製場の形状やその形成機構はきわめて多様であることがわかっている。しかしながら、RNAウイルスが独自の複製場の形成に細胞のどのような機構を利用しているのか、また複製場の詳細な構造的基盤と複製における役割については明らかになっていない。私たちはマイナス鎖RNAウイルスであるボルナ病ウイルス(BDV)の、核内での複製場(vSPOT)の構造と核内コンピテンシーの解明を行ってきた。これまでの研究で、BDVは宿主クロマチンを足場にvSPOTを形成すること、細胞分裂期にはvSPOTを崩壊させ、内部のウイルスRNPを宿主染色体上に拡散させることを明らかにしてきた。本研究領域では、vSPOTの構造と形成に関与する宿主因子の解明を試みた。超解像顕微鏡法を用いてvSPOT内のBDV蛋白質の局在を解析した結果、BDV N蛋白質がウイルスRNAとともにvSPOT外殻を形成していることが示された。また、PとM蛋白質はvSPOT内部に規則性を持ち、網目状に局在していることが明らかとなった。さらに、vSPOT形成に関与する宿主因子の同定を行った。BDV N蛋白質に結合する核内因子を質量分析にて解析したところ、mRNAスプライシングやDNAダメージ応答に関与するRBMXを同定した。RBMXをsiRNAによりノックダウンさせた結果、vSPOTの構造が崩壊するとともにBDVの複製レベルが顕著に低下し、BDVの核内持続感染にRBMXが関与していることが明らかになった。また、vSPOT形成やBDV RNPの染色体への局在に核内アクチン分子が関与する結果を得ることが出来た。本研究の遂行により、RNAウイルスの核内持続感染における核内宿主因子とのコンピテンシーを明らかにできたと考える。28年度が最終年度であるため、記入しない。RNAウイルスの多くは細胞質で複製し、封入体あるいはウイルス・ファクトリーとよばれる複製場を形成する。これまでの研究から、マイナス鎖RNAウイルスの複製場の形状やその形成機構は、きわめて多様であることがわかっている。しかしながら、RNAウイルスが独自の複製場の形成に細胞のどのような機構を利用しているのか、また複製場の詳細な構造的基盤、そしてウイルス複製における詳細な役割については明らかになっていない。マイナス鎖RNAウイルスであるボルナ病ウイルス(BDV)は、核内で持続感染する。これまでに、BDVがvSPOTと呼ばれる複製場を形成することを明らかにしてきた。vSPOTは、クロマチンを足場に構造を保っているが、細胞分裂期には崩壊し、ウイルスRNPを染色体上に拡散させる。すなわち、vSPOTの詳細な解析は、核内でのウイルスRNPのダイナミズムと核内コンピテンシーを明らかできると考えられる。本研究は、細胞核におけるBDVの複製場の構造的基盤を宿主因子との関与を含め解明することを目的とした。超解像顕微鏡法により、vSPOT内のBDV蛋白質の局在分布が明らかとなった。N蛋白質はRNPを形成し、vSPOTの外殻を構築していた。また、P蛋白質やM蛋白質はvSPOTの内部に網目状に局在していることが明らかとなった。このことから、BDVの複製はvSPOTの辺縁部で行われている可能性が示された。また、vSPOTの表層には直径約100 nmの細孔が空いており、vSPOT内部への物質の選択的透過性への関与も示唆された。一方、BDV Nと結合する核内因子を同定した。このタンパク質の欠損はウイルス複製にも影響を与えることが示され、宿主因子との分子競合が示唆された。昨年度に計画をしていた超解像顕微鏡を用いる実験に関しては概ね終了している。また、宿主因子も同定しており論文も執筆した。

RBMXをsiRNAによりノックダウンさせた結果、vSPOTの構造が崩壊するとともにBDVの複製レベルが顕著に低下し、BDVの核内持続感染にRBMXが関与していることが明らかになった。また、vSPOT形成やBDV RNPの染色体への局在に核内アクチン分子が関与する結果を得ることが出来た。本研究の遂行により、RNAウイルスの核内持続感染における核内宿主因子とのコンピテンシーを明らかにできたと考える。今年度は、BDVと宿主因子の相互作用を明らかにして核内における宿主コンピテンシーの解明につなげる。具体的には昨年度同定したRBMXに加え、宿主のDNAダメージ修復反応に関与する因子とウイルス複製との関連性を明らかにしていく。28年度が最終年度であるため、記入しない。