hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
乱流強度からみた各種人工弁の機能評価に関する研究

加速期血流の乱流遷移時に生じる大動脈圧波形上行脚の圧低下(ΔP)をその時の流速(U)で無次元化したΔλを用いて,市販各種人工弁の血流抵抗につき解析を行った.現在迄に解析を行い得た人工弁の種類を下に示す.◎Bjork-Shiley弁(23mm, 25mm, 27mm, 29mmサイズ), ◎St.Jude Medical弁(21mm, 23mm, 25mm), ◎Carpentier-Edwards生体弁(23mm).上記人工弁により大動脈弁置換を行った21症例を対象に, Millar社製のmultisensor catheter(VPC series)を用いて,心カラ時にΔP及びUの実測を行った.尚Δλ(圧力損失係数の増加分)は次式により求めたΔλ=ΔP/1/2ρU^2 (ρ:血液密度)各人工弁で得られたΔλの平均値を下に示した. ()内は症例数を示す.◎B-S弁23mmサイズ:1.90±0.40(4),同25mmサイズ:0.60(1),同27mmサイズ:0.40±0.40(2),同29mmサイズ:0(2), ◎St.Jude Medical弁21mmサイズ:0.57±0.43(6),同23mmサイズ:0.40±0.57(3),同25mmサイズ:0(1),◎生体弁23mmサイズ:2.45±1.95(2).以上の要点を下に箇条書きで示した.1.同じ23mmサイズの比較では,生体弁>B-S弁>SJM弁の順にΔλは高値を示した.2.SJM弁の平均Δλ値は丁度2サイズ上のB-S弁のそれとほぼ等しかった.3.23mm生体弁の平均Δλ値が研究対象例中最高値を示した. 4.Δλ値が0を示した人工弁の最小サイズはSJM弁が21mm, B-S弁では27mmであった.5.25mmSJM及び29mmB-S弁のΔλ値は全例0であった.以上, Δλの値からはSJM弁が血流の加速期に乱流遷移を起し難い,血流抵抗の少い優れた人工弁であることが証明され,この傾向は特に小さな口径サイズの人工弁において著明であった.加速期血流の乱流遷移時に生じる大動脈圧波形上行脚の圧低下(ΔP)をその時の流速(U)で無次元化したΔλを用いて,市販各種人工弁の血流抵抗につき解析を行った.現在迄に解析を行い得た人工弁の種類を下に示す.◎Bjork-Shiley弁(23mm, 25mm, 27mm, 29mmサイズ), ◎St.Jude Medical弁(21mm, 23mm, 25mm), ◎Carpentier-Edwards生体弁(23mm).上記人工弁により大動脈弁置換を行った21症例を対象に, Millar社製のmultisensor catheter(VPC series)を用いて,心カラ時にΔP及びUの実測を行った.尚Δλ(圧力損失係数の増加分)は次式により求めたΔλ=ΔP/1/2ρU^2 (ρ:血液密度)各人工弁で得られたΔλの平均値を下に示した. ()内は症例数を示す.◎B-S弁23mmサイズ:1.90±0.40(4),同25mmサイズ:0.60(1),同27mmサイズ:0.40±0.40(2),同29mmサイズ:0(2), ◎St.Jude Medical弁21mmサイズ:0.57±0.43(6),同23mmサイズ:0.40±0.57(3),同25mmサイズ:0(1),◎生体弁23mmサイズ:2.45±1.95(2).以上の要点を下に箇条書きで示した.1.同じ23mmサイズの比較では,生体弁>B-S弁>SJM弁の順にΔλは高値を示した.2.SJM弁の平均Δλ値は丁度2サイズ上のB-S弁のそれとほぼ等しかった.3.23mm生体弁の平均Δλ値が研究対象例中最高値を示した. 4.Δλ値が0を示した人工弁の最小サイズはSJM弁が21mm, B-S弁では27mmであった.5.25mmSJM及び29mmB-S弁のΔλ値は全例0であった.以上, Δλの値からはSJM弁が血流の加速期に乱流遷移を起し難い,血流抵抗の少い優れた人工弁であることが証明され,この傾向は特に小さな口径サイズの人工弁において著明であった.各種人工弁の機能評価を目的として、現在迄に15例の大動脈弁置換症例を対象にmillar社製のmultisensor cotheter(VPCシリーズ)を用いて上行大動脈内の加速期乱流強度の測定を行った。1.方法:下の(1)式から得られるΔλの値から加速期乱流強度の評価を行った。ここで、ΤPは大動脈駆出血流の加速期における乱流遷移による大動脈圧の低下分、ρは血液密度、Uは上行大動脈ピーク駆出流速で、Δλは無次元数として示される。

2.研究対象:下に示すサイズの異る3種類の人工弁により大動脈弁置換を行った15例を研究対象とした。()は症例数を示す。3.測定結果:各種人工弁のサイズ別Δλの値を下に列記した。4.現在迄の結論:同じ口径を有する3種類の人工弁では生体弁,Bj【o! ̈】rk弁SJM弁の順にΔλは高値を示した。また21mmSJM弁のΔλの値は23mmのBj【o! ̈】rk弁のそれよりも小さかった。Bj【o! ̈】rk弁では口径が大きくなるに従いΔλは低値を示し、29mmBj【o! ̈】rk弁のΔλはともに0で、少くとも同サイズのBj【o! ̈】rk弁では加速期に血流が乱流に遷移することはないことが証明された。
高圧相の自由エネルギー・機械的安定性に基づく新規組織制御手法の確立

高圧相は,構造から優れた特性が予想されるが,常圧下で存在し得ないために実用化に至っていない.申請者は,高圧下せん断加工を加えることで,高圧相を常温常圧下において安定化させることに成功した.本研究は,高圧相を組織制御に利用した新材料創製を最終目的とし,本研究課題では,元素添加による相変態圧力の変化、並びに、添加元素による相の機械的安定性の変化を利用した、高圧相の制御手法の確立を目指す.具体的には,安定度評価や加工により導入される格子欠陥の定量評価と相変態挙動の評価を通して,添加元素が高圧相安定化に及ぼす影響を明らかにし,高圧相による組織制御を実現するための指導原理を構築する.高圧相は,構造から優れた特性が予想されるが,常圧下で存在し得ないために実用化に至っていない.申請者は,高圧下せん断加工を加えることで,高圧相を常温常圧下において安定化させることに成功した.本研究は,高圧相を組織制御に利用した新材料創製を最終目的とし,本研究課題では,元素添加による相変態圧力の変化、並びに、添加元素による相の機械的安定性の変化を利用した、高圧相の制御手法の確立を目指す.具体的には,安定度評価や加工により導入される格子欠陥の定量評価と相変態挙動の評価を通して,添加元素が高圧相安定化に及ぼす影響を明らかにし,高圧相による組織制御を実現するための指導原理を構築する.
機能性細胞の創出とその体内動態制御による新規細胞療法の開発

細胞内に蛋白質を導入することによる機能性細胞の創製や細胞内を標的とした蛋白質療法を達成するためには、細胞外から効率よく細胞内へと目的の蛋白質を送達可能な、新たな細胞内導入キャリアの創製が必要不可欠である。細胞内への蛋白質導入キャリアとして、細胞内へと侵入する機能を有するペプチドとして知られているProtein Transduction Domain(PTD)に着目した。既存のPTDの細胞内移行特性を比較解析したところ、細胞内へと導入された物質の大部分がエンドソーム内に捕捉されてしまうことが明らかとなった(Br J Pharmacol)。このPTDのエンドソーム捕捉性という課題の克服に向け、エンドソーム膜を破壊する活性を有するHA2ペプチドを利用した、効果的な細胞質内への物質導入法を開発した(Biochem Biophys Res Commun)。さらに、オルガネラ移行シグナルを利用することによって、細胞内の特定オルガネラへと選択的に物質を送達可能な、細胞内DDS技術の開発に成功した(HUPO 6th Annual World Congress、第30回血栓止血学会学術集会)。また、これまで私はファージ表面提示法を用いることで、様々な機能性人工蛋白質を創製などを行ってきた(J Biol Chem)。そこで、昨年度に引き続き、これらファージ表面提示法を応用した新規細胞内導入キャリアの創製の検討を行った(Pharmazie)。本年度は、ランダムな18アミノ酸のペプチドライブラリの中から新規PTDの単離・同定に成功した。さらに、昨年度創製した新規PTDの細胞内薬物導入キャリアとしての有用性を検討したところ、既存のPTDよりも優れた細胞内移行活性を示し、有効なキャリアーとなり得ることを明らかとした(日本薬学会第128年会)。また、機能性細胞の創製による治療を目指し、まずは生体内に存在する免疫細胞の体内動態を制御することによる、がんを対象疾患とした新規治療戦略の有用性を評価した(Gene Therapy、臨床免疫)。免疫細胞の遊走機能を司っているケモカインに着目し、従来のサイトカイン療法にケモカインを併用することにより、抗腫瘍効果の増強に成功した。さらに、ケモカイン・サイトカイン併用により副作用の低減効果も認められたことから、細胞の体内動態制御による本治療戦略が、がんに対して非常に有効であり、将来的な治療法として期待している。
DNA複製制御における核膜の機能の解析

DNA複製がライセンス因子によって細胞周期あたり1回に限定されるが、この制御系において、核膜がライセンス因子の通過を妨げるという重要な役割を果たしている。本研究では、ライセンス因子の候補であるMCMファミリーに属する分裂酵母nda1、nda4産物及びnda4サプレッサー遺伝子sna41産物が、DNA複製時において、核膜とどの様に関わりながら機能するか、そのメカニズムを明らかとする事を目的とする。nda4産物の機能を明らかにするため、nda4サプレッサー変異株sna41を単離した。フローサイトメトリーの結果、sna41変異株は制限温度下において1CのDNA含量の細胞が増加することから、DNA複製に関与することが示された。sna41産物の局在を調べるため、染色体上の自分自身のプロモーターの下流に、C末端にFLAGをつけたsna41産物をコードする遺伝子をつないだ株を用いて、抗FLAG抗体を用いて蛍光抗体法を行ったが、シグナルは観察されなかった。このことから、この遺伝子産物は、微量しか存在しないことが示唆された。分裂酵母細胞内で誘導可能なプロモーターを、用いて大量に発現し、同様の実験を行ったところ、一部の細胞で核に局在が認められsna41産物は、核膜を通過する事が示された。さらに、細胞周期の各時間でのsna41産物の局在を調べるため、細胞分裂周期突然変異株cdc25あるいはcdc10細胞内でFLAGをつけたsna41産物を発現し、その局在を調べた。G1期で停止したcdc10変異株では、30-40%の細胞でsna41産物の局在が核に認められたが、G2期で停止したcdc25変異株では、10-20%の細胞のみに核にsna41産物が検出され、また、そのシグナルもcdc10変異株のシグナルより弱かった。このことから、細胞周期におけるsna41産物の局在が異なることが示唆される。
水の過冷却液体状態での挙動の大規模計算機実験による解明

計算機上で複雑な水などの過冷却液体状態を実現するために、一次相転移点近傍の研究のために考案された一般化されたレプリカ交換法を多分散粒子系に適用を試み、定圧での計算機実験を行った。臨界点以下と臨界点以上における温度ー多分散性に対する相図を作成し、結晶化の消失点を求め、臨界点以上と以下の相図の類似点と相違点を明らかにした。その結果、一般化されたレプリカ交換法を用いることにより、気体ー液体ー結晶・ガラス相を効率よく求めることがわかった。そのため、この手法は、一次相転移のみならず、水など複雑な系でのガラス相転移などにも適用可能な手法であることが示唆された。一般化されたレプリカ交換法を、粒子サイズが異なる多分散レナードジョーンズモデルへ適用することによって、相転移現象に対するレプリカ交換法を用いて得られる物理量がどのような挙動を示すかについては研究が大きく進んだ。現時点では、定圧で、温度を変化させることによって、気体ー液体ー結晶、もしくはアモルファスになる領域についての研究を主に進めており、今年度、研究を進めていた範囲内では、エンタルピー、体積、内部エネルギーについて、それぞれ、内部エネルギーとエンタルピーが温度に対して非常に近い振る舞いを示すことを明らかにする一方で、体積はそれら二つとは異なる温度変化を示すことを明らかにした。さらに、過冷却液体状態のみならず、気体ー液体相転移での多分散性の効果についても、研究会や国際会議などで興味を持たれ、多分散性の効果と相転移という面でも成果を挙げつつあり、かつ、一般化されたレプリカ交換法が、一般的な相転移現象を記述するのに有効であることが示されつつある。しかし、その一方で、有限系でのサイズ依存性について、考慮すべき問題点が存在する点を国際会議での議論で指摘されたため、今後、有限サイズ系におけるサイズ効果を明らかにした後、水系にその成果を生かし、発展させる予定である。計算機実験により水の過冷却液体状態の様子を探るためには、複雑な系において不安定な過冷却液体状態を実現できる計算手法が重要となる。そこで、一次相転移近傍の不安定な領域にアクセス可能な一般化されたレプリカ交換法のガラス相転移への適応可能性を探るために、これまで単分散レナードジョーンズ系の気体-液体相転移やIsingモデルなどのみに適応されてきた一般化されたレプリカ交換法を圧力一定の多分散レナードジョーンズ系に適応し、気体、液体のみならず固体も含む広範囲な温度領域に対する計算機実験を行った。系のエンタルピー、内部エネルギー、体積、動径分布関数などの温度依存性を計算することにより、温度-多分散度に対する相図を詳しく調べた。圧力を変化させて、引力が重要となる気体-液体-固体相が生じる臨界点と三重点の間と斥力が系を支配する液体-固体相のみの臨界点以上の相図を比較した。その結果、臨界点以下では、多分散度の違いは、気体-液体相転移温度に強く影響を与えるが、液体-固体相転移温度については影響が小さく、圧力変化に対しても液体-固体相転移温度はほとんど変化しない。その一方、臨界点以上では、液体-固体相転移温度が圧力に強く依存することが分かった。しかし、液体-結晶相転移が消失する多分散度が圧力によらず一定でありs=0.15-0.20であり、それ以上の分散度では液体からガラス相へ遷移することを明らかにした。多分散度を大きく変化させたり、圧力を変化させるなど系を様々に変化させて計算を行った結果、本研究により水などの複雑な系にも一般化されたレプリカ交換法が広範囲な温度領域に対して適応可能であることが示唆された。一般化されたレプリカ交換法を用いて、水系の過冷却液体領域における平衡状態の実現を目指すために、まず、単分散レナードジョーンズポテンシャル系と多分散レナードジョーンズポテンシャル系の定圧系において温度変化に対する液体ー結晶相転移、および、液体ーガラス転移現象を再現することに成功し、この方法が結晶相転移、ガラス転移の双方の店移転近傍で有効なことを確かめつつある。さらに、相転移点近傍での挙動に関係する物理量を明らかにするべく、エンタルピー、体積、内部エネルギー、同径分布関数などを用いて解析を行った。その結果、結晶転移からガラス転移への変化を明らかにしつつあり、水に関わる相転移現象にも適用できる適切な物理量がわかりつつある。また、系のダイナミクスについては、よりシンプルな剛体球流体と剛体円盤流体の分子動力学シミュレーションによって、ガラス転移現象に関わるケージ領域と密接な関係があるベータ緩和時間やさらにより長時間領域に関係するアルファ緩和時間、長時間自己拡散に関係する緩和時間などを比較し、長時間自己拡散係数が等しければ緩和時間が一致することを明らかにした。その一方構造に関わる物理量であるノンガウシアンパラメータなどは次元性を持つことを明らかにした。

これらの次元性による違いの結果は、水のガラス転移が、実験的には、バルク状態では置きにくく、閉じ込められた系や薄膜系で観測されることを側面からサポートする結果である。一般化されたレプリカ交換法の多分散レナードジョーンズモデルへの適用については研究が大きく進み、気体ー液体ー結晶、もしくはアモルファスになる系についての成果について、興味深い結果を得ている。さらに、多分散性をもつ系の気体ー液体相転移という観点からもコロイド系などソフトマター関係の研究者からも興味を持たれる結果を得ている。しかし、これらについては予想していなかった結果であり、その解析に時間がかかっている。さらに、有限系におけるサイズ効果についての問題点に対して、その点を明らかにするべく、現在研究を進めており、レプリカ交換法の一般的な相転移への適用への研究は大きく進んでいるが、水に特化した適用が遅れている。23年度は東日本大震災後の復旧や学生指導などのために、予定していた海外出張を行うことができず、共同研究者との詳細な意見交換ができなかったため、水系への取り組みは遅れている。しかし、よりシンプルな系において水系にも適用できるガラス転移現象の鍵となる物理量の解析を行い、新たな重要な知見を得つつあるため、今後、それを発展させ、水系に取り組む予定である。圧力一定の系におけるレプリカ交換法の多分散レナードジョーンズモデルへの適用については研究が大きく進み、気体ー液体ー結晶、アモルファス相への相転移について研究が大きく進んだが、さらに、圧力を大きくすることによって、気体-液体相転移がなくなる高圧に圧力を設定することによって、同じモデルポテンシャルで引力系と斥力系の違いを比べる。さらに、有限サイズ効果についてもシステムサイズを大きく変化させて、違いを明らかにし、これらの点を明らかにした後、大規模な水系の過冷却液体状態への研究へと進める。23年度は東日本大震災後の復旧や学生指導などのために、予定していた海外出張を行うことができず、共同研究者との詳細な意見交換ができなかったため、水系の研究遂行が遅れているが、水系の研究のベースとなる一般化されたレプリカ交換法を用いた多分散レナードジョーンズポテンシャル系の結晶転移、ガラス転移の研究で水のガラス転移につながる重要、かつ、より詳細な解析が必要なことがわかったため、早急にこれらの計算を、23年度購入した計算サーバー、および、所属研究所の大型計算機センターでの計算を行う。さらに、水系の計算を進め、参照系と比較し、また、海外の共同研究者とも連絡を密にし、水系特有の状況を明らかにする。また、レプリカ交換法で得られた安定な過冷却液体領域のデータを基に分子動力学法を用いて、粒子の挙動を再現し、その解析を行う。さらに、液体領域から過冷却液体領域で、長時間自己拡散係数などの挙動について研究分担者の徳山道夫教授が提案している理論を基に、ダイナミクスの解析を行い、理論の適用限界などを議論する。多分散レナードジョーンズモデルの研究を進めつつ、レプリカ交換法の開発チームのリーダーであるボストン大学のT. Keyes教授を訪問し、これまでに明らかになった諸問題を議論し、さらに、レプリカ交換法の水への適用についてより具体化し成果を示す。また、そのためにデータ解析用のサーバーやアプリケーションなどを購入する。また、成果について、論文や国際会議などでの発表を行うために経費を利用する。
4'-チア核酸類の特異的構造キナーゼによる分子確認に関する研究

計画年度終了約1年間をかけて、これまで行ってきた4'-チオ核酸類の当該研究について、有機合成化学上の問題点ならびに合成した4'-チオ核酸の抗ウイルス活性および抗腫瘍活性における問題点を再度詳細に検討して、それぞれの正確なデータを求めた。具体的には、4'-チオ核酸合成上の問題点としてチオ糖部分に塩基部分を導入するグリコシル化反応におけるβ選択性を向上させるべく検討を重ねた。その結果、チオ糖部の3位および5位の水酸基保護基のかさ高さを変えることにより幾分β選択性向上が観察されたが依然としてα体が主生成物出あることには変わりが無かった。一方、抗ウイルス活性においてAZTと同等の強力なHIV活性を有するD型4'-チオチミジンおよび4'-チオ-2'-デオキシシチジンでは再現性ある活性が観察された。しかしながら、同時に正常細胞に対する細胞毒性も大きなことがわかった。また、抗腫瘍活性についてもこれまで合成してきた4'-チオ核酸類について再試験した結果、ほぼ前年度の結果と同じ活性を表した。本年度はこれら全体をまとめるとともに、この分野の現状を加えた総合論文を総説誌に発表した。計画申請書にある通り4'-チア核酸類の合成を行ない、それらの抗ウイルス活性について調べた。即ち、不斉導入時における不斉試薬を変える以外、既に我々が確立したD-型の4'-チオピリミジン核酸の合成径路を踏襲して、L-型の4'-チオピリミジン核酸の合成を行なうことが出来た。合成されたL-型のチオ核酸は極めて毒性が低く、毒性という観点からは十分満足ゆく誘導体であった。しかしながら同時に、相当するD-型に比較して抗ウイルス活性も著しく低下した。抗HIV活性についてはチミジン体に弱い活性が観察されただけであった。抗HIV活性についてはEC50値がシチジン体で2.2μg/ml、チミジン体で43μg/mlであった。一方D-型の核酸合成の一環として2'位メチル体および4'位メチル体について、それぞれ、ウラシル、チミン、シチジンを塩基にもつ4'-チオピリミジン核酸を合成した。その結果、α-2'位メチル置換体ではいずれも抗ウイルス活性は見いだせなかった。β-2'位メチル置換体ではシチジン塩基の場合に抗HIV活性が5μg/mlレベルで発現した。これに対して、4'位メチル体ではシチジン体に0.0055μg/mlの抗HIV活性が、0.1μg/mlの抗HSV活性が観察された。またチミジン体では0.7μg/mlの抗HIV活性が、またシチジン体とはほぼ同じレベルの抗HSV活性が認められた。申請計画書に記載した通り4'-チオ核酸類の合成を行い、これらの抗ウイスル活性について調べた。その結果、2'-デオキシ-4'-チオリボ核酸の2'位のα、β両メタル各種誘導体、4'位のβ位メタル、エチル各種誘導体の合成を行った。また同時に、毒性の軽減という観点からL-型の誘導体の合成を行った。その結果D-型のシチジン体及びD型の4'位メチル置換チミン体が0.0055mg/mlの濃度で高い抗HIV活性を示すことを見い出した。一方L-型の誘導体においては、正常細胞に対する毒性は大きく減少したが、これに相応して抗HSV、抗HIV活性とも低下した。一連の結果をコンピューターを用いて安定配座の解析を行って、その活性の関係を評価しようと努めたが、五員環ヘテロサイクルのパラメーターが充分でなく明確な結論を出すに至らなかった。D-および-L型の4'-チオ核酸類に対するキナーゼの認識は、糖部の構造だけでなく、ピリミジン塩素部との関連も重要であることが明らかになった。
児童養護施設形態に着目した職員の「専門性」形成・継承に関する研究

職員の「専門性」の形成・継承には、職場における所属感や職員としてのアイデンティティの形成を保障する職場環境が必要である。そのためには、職員が継続的な就労を通して、職員同士、職場環境との相互作用を行うことが不可欠となる。しかし、一方で、職場では、不適切なもの(例えば、不適切なケアの方法)も継承される。よって、不適切なものの継承を阻む仕組みも、職場環境の中に同時に構築する必要がある。2年間の研究計画の1年目である平成22年度は、2つの児童養護施設を対象としたインタビュー調査を実施した。対象者は、主として主任(リーダー)クラスの現場職員である。本調査研究では、児童養護施設職員の「専門性」の形成・継承に焦点を当てている。「専門性」の形成・継承と「継続的就労」は相補的な関係にあるとする立場から、職員同士の現場における相互作用に着目している。職員同士および子どもとの継続的な相互作用のなかで、すなわち、「実践を共有する」なかで、職員の専門性は形成され、継承されていく、と同時にそのことが継続的就労を支えると考える。継続的就労において重要なことは、職員が孤立せず、自分の「居場所」があると感じられること(所属感)、児童養護施設職員としてのアイデンティティの形成を実感できる職場環境であることである。調査の結果、ベテランの職員と若手職員との間、また、ベテランか若手かに限らず職員同士の間で意識の差が生じるいくつかの要因が明らかになった。1、若手職員が子どもとのトラブルに直面した際に、ベテランが介入するタイミングに対する認識にズレがあること。そのことが、若手職員の孤立感、実践に対する不全感を助長する場合があること。2、いくつかの職員集団が形成されケアが行われているが、職員が育つ集団とそれが困難である集団の違いは、業務内容や分担、責任の所在の明確化について、一定程度のシステムが確立されているか否かに関連していること。3、ベテラン、若手職員に限らず、ケアに対する理念や方法、様々な情報に対して、職員はお互いに「共有できているはず」との認識をもっているのだが、実際にはズレがあり、それに気づいていないことがあること。また、職員間で「共有すべきもの」の中身が何であるかに対するズレがあること。上記の点をふまえ、今後は、施設形態という視点を導入し、職員の相互作用について考察を深めたい。本調査研究は、児童養護施設職員の「専門性」の形成・継承に焦点を当て、それを支える職場環境のあり方について考察を行うことを目的としている。「専門性」の形成・継承には、「実践の共有」、すなわち、職員同士および職場環境における相互作用を保障することが求められる。職員の「専門性」の形成・継承について職場環境という観点からの捉え直しを行う際には、以下の2点を考慮に入れる必要性が、施設職員を対象としたインタビュー調査から明らかになった。1、「職場環境」が職員の「専門性」を育む場としての機能を備えていること。2、それと同時に、職員の「意識変容」に働きかける仕組みづくりの構築が必要であること。1、については、これまでのインタビュー調査から、職場への所属感の形成を支える職員集団づくりを意図的に行う必要があること、それを前提として、「専門性」の形成・継承のための働きかけを行うことが求められていることを確認することができた。所属感は、入職動機のみでは形成が難しく、職員との相互作用の積み重ねによって形成される。これは、「働きつづけたい」という就労継続に対する動機づけにも影響を与えていることが示唆された。2、は、調査プロセスの中で新たに発見された課題である。この点については、今後の継続的調査によって、明らかにすることが必要である。これまで、社会福祉の現場では、離職問題や人材育成における課題を抱え、それが喫緊の課題であるという認識をもちながらも、そのことに対する具体的な方策については、開発途上と言わざるを得ない。特に、人材育成や施設内研修等の企画・立案において、その教育効果や検証の方法等をふまえた実践が積み重ねられているとは言い難い状況があると考える。本調査研究では、職場環境における相互作用という観点から、上記2点の視点をいれた人材育成や施設内研修等のあり方を考えて行く点に意義があると考えている。
動的平均場理論を用いたランダムネスのある強相関電子系の電子状態の研究

本年度は、強相関電子系の一つである重い電子系の中でも、近年急速に研究が盛んになっている充填スクッテルダイト化合物の物性に着目して研究を行った。充填スクッテルダイト化合物は、新奇な超伝導状態の発現などで注目されているが、本研究では、近藤絶縁体との関連で注目されているCe系充填ネクッテルダイト化合物、特に、CeOs_4Sb_<12>やCeRu_4Sb_<12>を念頭に置いて、それらに対するバンド計算から得られているバンド構造を定性的に再現するタイトバインディングモデルを構築し、そのモデルに電子間相互作用を仮定して、その相関効果を調べることを目的とした。相関効果については、動的平均場理論を用いる前段階として、動的平均場理論と同じ局所近似に基づく自己無撞着二次摂動理論を用いて計算を行った。バンドギャップを持つバンド構造を仮定した上で、光学伝導度におけるギャップ構造の温度変化を中心に調べた。電子間相互作用について自己無撞着二次摂動計算を行ったところ、実験で得られている、昇温に伴うギャップ構造の消失がよく再現される結果を得た。一体近似による結果では、温度変化こそするが、実験で得られているような昇温に伴う迅速なギャップ構造の消失は見られず、また、中赤外ピークと呼ばれる大きなピーク構造も温度変化しないため、実験で見られている温度変化は、一体近似では表せない、多体相互作用による相関効果の影響であることが明らかになった。これらの結果については、学会発表『光学伝導度における混成ギャップの波数依存性の効果』:武藤哲也、佐宗哲郎(日本物理学会2003年秋季大会,22aPS-102,岡山大学,2003)、及び、『充填スクッテルダイト系の光学伝導度』:武藤哲也、佐宗哲郎(日本物理学会第59回年次大会,27pXA-6,九州大学,2004)にて発表された。動的平均場理論とコヒーレントポテンシャル近似を組み合わせた新しい理論的枠組を発展させるため、まず、コヒーレントポテンシャル近似の簡単な適用例として、Fe_<1-x>Co_xSiの強磁性を研究対象とした。FeSiもCoSiも、ともに、磁気的秩序は持たないが、FeをCoで置換したFe_<1-x>Co_xSiは、ある濃度領域で強磁性を示すことがわかっている。この強磁性自体の研究の歴史は古いが、その中では、FeSiとCoSiの状態密度を濃度xの比率で単純平均した状態密度が用いられており(リジッドバンド近似)、系の不均一性はよく取り込まれていなかった。本研究では、系の不均一性をより積極的に取り込むため、コヒーレントポテンシャル近似を用いて状態密度と磁化率を計算し、強磁性転移温度のx依存性を調べた。定性的には、実験と同様に、中間濃度領域で強磁性が発現することが確かめられた。系の不均一性は転移温度を抑制する効果があるが、電子間斥力相互作用にも、同じく転移温度抑制効果があることが知られている。本研究の結果では、ある有効相互作用によって、系の不均一性による転移温度抑制効果と完全に等価な抑制効果を与えることはできず、系の不均一性と電子間相互作用では、その抑制効果が異なることがわかった。この研究の成果をまとめた論文は、Journal of Physics : Condensed Matterに投稿し、掲載が決定している。また、動的平均場理論を用いた強相関効果の研究も引き続き行った。酸化物高温超伝導体を含む遷移金属酸化物の光学伝導度では、通常金属で見られる、Drudeモデルで記述できる応答(Drude応答)とは異なる応答が見られることがある。特に高温で顕著になる、この特異な光学応答を調べるため、簡単なモデルに動的平均場理論を適用して、強い電子相関によって絶縁体的になった系の、高温での光学伝導度を計算した。

これらの結果については、学会発表『光学伝導度における混成ギャップの波数依存性の効果』:武藤哲也、佐宗哲郎(日本物理学会2003年秋季大会,22aPS-102,岡山大学,2003)、及び、『充填スクッテルダイト系の光学伝導度』:武藤哲也、佐宗哲郎(日本物理学会第59回年次大会,27pXA-6,九州大学,2004)にて発表された。
漢魏六朝を中心とした辞賦、駢文の研究

本研究では、平成4、5年度の二年間にわたり漢魏六朝を中心とした辞賦、駢文について、総合的な検討を行なった。1)研究会の開催:二年間にわたり計10回の研究会を開くことにより、研究課題をめぐって研究成果の報告、討論を行なった。これにより、分担者による研究成果を得るのみならず、国内外での近年の研究情報をも把握することができた。さらに研究代表者をはじめとして、海外の学会、シンポジウムに積極的に参加することにより、中国・台湾をはじめとする海外での研究動向を的確につかむことができた。また現在来日し、各地の大学で教鞭を執っている中国の研究者を招くことにより、より進んだ研究を行うことができた。2)研究資料の作成:まず、研究代表者が香港での「魏晋南北朝文学国際研究会」に参加し、報告を行うとともに、近十年来の日本での研究文献目録を作成し、配布した。3)索引の作成:南北朝時代を代表する文学者である〓信の「賦」について、一字索引を作成した。4)文献目録の編制:「漢魏六朝研究文献目録」については、そのフォーマットを作成し、コンピュータに入力し、データベース化をはかっている。ただ、量的に厖大であるため、本研究年度内に完成することは困難であるが、鋭意入力中である。本年度は、主に課題「漢魏六朝を中心とした辞賦、駢文」に関して、これまでの研究成果の把握と、研究分担にかかわる研究内容の報告、交流を行ない、併せて研究資料の蒐集、整理を行なった。隔月で行なわれた研究会の内容は、以下の如くである。第一回平成4年7月「今後の研究計画の打合わせ」第二回平成4年9月「李善の駢文分析について」(富永)「近代における賦学の系譜(1)」(戸川)第三回平成4年11月「けい康の『ト疑』について」(大上)第四回平成5年1月「漢魏時期詞匯的主要変化」(董志翹)「中国における道教の調査」(蜂屋、高橋)第五回平成5年3月「虚構文学の視点から見た漢賦」(竹田)「劉邦、項羽の故地を訪ねて」(石川)さらに、平成4年11月に香港中文大学において「第二届国際賦学研討会」が開催された。これは、「賦」に関する世界的な最も大きな学会であり、参加者は大陸、台湾、香港、韓国、日本、アメリカ、マカオなどから約60名にのぼった。研究代表者である松岡は、このシンポジウムに参加し、国際的な研究動向を調査するとともに、帰国後、本研究会(第三回)に於いて報告を行なった。当初からの大きな目的の一つである、「六朝文章語彙集」の作成と研究文献目録の編成については、データの分析、整理が精力的に進められている。本年度は、平成5年5月9日第6回会合から、平成6年2月11日第10回の会合まで、5回の研究会を開き、当該の研究テーマについて報告・分析を行った。報告書・議題については、以下の如くである。平成5年5月9日第6回会合稲畑耕一郎氏-出土文物と楚辞7月18日第7回会合佐竹保子氏-漢から晋に至る「説論」の展開松岡榮志氏-「魏晉南北朝文學國際研討會」の報告9月23日第8回会合神塚淑子氏-六朝道教経典に見える駢文11月28日第9回会合甲斐勝二氏-『文心雕龍』文体論に於ける賦体の位置づけ福井佳夫氏-六朝美文の諸特徴平成6年2月11日第10回会合衣川賢次氏-漢魏六朝漢訳仏典の文体研究会と並行して、索引文献目録を作成した。そのうち、〓信の賦については『〓信賦一字索引』として完成した。つぎに、「漢魏六朝文学研究文献目録」については、そのフォーマットを作成し、コンピュータに鋭意入力中である。また、「六朝文章語彙集」は、カード化と整理を行った。
レトロウイルスgag抗原由来感染防御性及び非防御性 T細胞エピトープの構造特性

1)マウスレトロウイルスgag遺伝子産物MA(マトリクス)タンパク質上に、複数のCD4陽性Tリンパ球認識抗原エピトープを見出した。このうち中央部のアミノ酸残基62番から76番の範囲には、IL-4産生を強く誘導するTh2タイプのエピトープがあり、C-末端の119番から138番の範囲には、IL-4産生を起こさないエピトープがある。2)ペプチドワクチンで免疫したマウスにマウスレトロウイルスを感染させると、エフェクターT細胞の他にナチュラルキラー(NK)細胞が活性化され、NK細胞はレトロウイルス感染細胞を効果的に傷害する。その理由として、レトロウイルス感染細胞ではNK細胞レセプターリガンド分子の発現が上昇していることを見出した。3)MAタンパク質中の感染防御に必須な抗原構造を同定するため、新しいワクシニアウイルスベクターを構築し、MAの部分断片を発現させてマウスを免疫した。その結果、MAのN-末端側を欠失させてもC-末端側を欠失させても感染防御能がなくなった。N-末端側の欠失で感染防御能がなくなる理由として、gag遺伝子産物N-末のミリスチル化が必要である可能性を考え、末端グリシン残基をアラニンに置換したところ、ミリスチル化部位を失ったMAタンパク質は、本来細胞膜の裏打ちに分布するはずのところ、核に移行するようになった。同時に感染防御能も失われたので、MAの全長を発現してもその細胞内分布が変わると感染防御が出来なくなることがわかった。4)N-末のミリスチル化が起こる条件で比較すると、MA中央部のTh2エピトープは感染防御には必要でなく、C-末側のエピトープが必要であることがわかった。フレンド白血病レトロウイルスgag遺伝子の部分断片を発現する新しい組換えワクシニアウイルスを複数作成し、N-末端のMAタンパク質が単独で感染防御免疫反応を誘導出来ることを明確に証明した。しかし、MAタンパク質のN-末端側あるいはC-末端側の断片を発現する組換えウイルスで免疫を行った場合はそれぞれ単独では感染防御能を示さなかった。従って、MAタンパク質内に存在する複数の抗原エピトープ構造が協調して働くことが、感染防御に必要と思われる。MAタンパク質全体をカバーするお互いにオーバーラップした合成ペプチドを用いて、この領域内に少なくとも二つのTリンパ球認識抗原エピトープが存在することを示した。このうち中央部のエピトープはH2^d拘束性に認識され、CD4陽性Tリンパ球の強い増殖反応とIL-4産生を誘導する。しかし、このペプチド単独で免疫した動物ではフレンドウイルス接種後にウイルス中和抗体の産生は起こらない。一方、C-末端側に存在するエピトープはCD4陽性Tリンパ球の増殖誘導能は弱いが、免疫後にウイルス接種を行うとウイルス中和抗体が産生される。現在、部分遺伝子発現ウイルスを複数組み合わせて免疫を行い、感染防御に必要なエピトープの数と組み合わせを解析している。マウスレトロウイルスgag遺伝子産物MA(マトリクス)タンパク質上に、複数のCD4陽性Tリンパ球認識抗原エピトープを見出した。MAタンパク質中の感染防御に必須の抗原構造を同定するため、新しいワクシニアウイルスベクターを構築し、MAの部分断片を発現させてマウスを免疫した。

N-末端側の欠失で感染防御能がなくなる理由として、gag遺伝子産物N-末第2残基のグリシンにおけるミリスチル化が必要である可能性を考え、この残基をアラニンに置換したところ、発現したMAタンパク質は本来細胞膜の裏打ちに分布するはずのところ、核に移行するようになった。同時に感染防御能も失われたので、MAの全長を発現してもその細胞内分布が変わると感染防御が出来なくなることがわかった。N-末のミリスチル化が起こる条件で比較すると、MA中央部のTh2エピトープは感染防御には必要でなく、C-末側のエピトープが必要であることがわかった。
シクロブタジエンジアニオンの芳香族性の解明と合成試剤への応用

ケイ素置換シクロブタジエンを配位子とするコバルト錯体と金属リチウムとの反応により、ケイ素置換シクロブタジエンジアニオンジリチウム錯体を合成した。また、合成したシクロブタジエンジアニオンのジブロモエタンを用いた二電子酸化反応により、中性の4π電子系化合物であるケイ素置換シクロブタジエンに変換した。これはシクロブタジエンの新規な合成法であり、ヘテロ原子が4つ置換した初めてのシクロブタジエンである。さらに、シクロブタジエンに低温下、光照射することにより、最小のかご型化合物であるケイ素置換テトラヘドランに光異性化することに成功した。これは、ヘテロ元素が4つ置換した初めてのテトラヘドランである。正四面体骨格を有する分子構造をX線結晶構造解析により明らかにした。また、炭素骨格はp性の高い結合でできており、炭素-ケイ素結合は非常にs性の高い結合であることを核磁気共鳴スペクトルを用いた研究により明らかにした。このケイ素置換テトラヘドランは高歪みを有するにもかかわらず、高い熱安定性を有することが特徴である。また、ケイ素置換シクロブタジエンの種々のアルカリ金属を用いた2電子還元反応について検討し、シクロブタジエンジアニオンジリチウム錯体、ジナトリウム錯体、ジカリウム錯体をそれぞれ合成した。アルカリ金属イオンは周期表を下にいくにつれてイオン性が増大するが、合成したシクロブタジエンジアニオンジアルカリ金属錯体はいずれも安定である。シクロブタジエンジアニオンでは四員環6π電子系による芳香族安定化寄与が大きいことを明らかにした。ケイ素置換シクロブタジエンを配位子とするコバルト錯体を前駆体とし、金属リチウムによるトランスメタル化反応により、ケイ素置換シクロブタジエンジアニオンジリチウム錯体を合成した。同様の方法により、フェニル基の置換した新規なシクロブタジエンジアニオン種を合成することに成功した。合成した一連のシクロブタジエンジアニオンジリチウム錯体の分子構造をX線結晶構造解析により解明するとともに、溶液中における構造や性質についてNMR研究を行い、四員環6π電子系シクロブタジエンジアニオンの芳香族性について明らかにした。結晶中において四員環は置換基の種類や幾何配置によって正方形からやや台形や菱形へと構造変化する。リチウムNMRでは、6π電子系反磁性環電流による遮蔽効果が顕著に観測された。構造パラメーター及びNMRデータから、シクロブタジエンジアニオンジリチウム錯体は非ベンゼン系芳香族化合物であり、アニオン安定化効果はシリル基よりもフェニル基の方が大きいと結論される。.また、ケイ素置換シクロブタジエンジアニオンの磁気円二色性スペクトル(MCDスペクトル)を測定し、負のファラデーA項を観測することに成功した。シクロブタジエンジアニオンが縮退した2つのHOMOと1つのLUMOを有することを実験化学的に証明した。有機化合物において負のファラデーA項を観測した初めての例である。さらに、合成したシクロブタジエンジアニオンを原料とし、ジブロモエタンを用いた二電子酸化反応により、中性のシクロブタジエンに変換することに成功した。これは、シクロブタジエンの新規な調製法である。ケイ素置換シクロブタジエンの分子構造では、四員環は反芳香族性を避けるように二重結合が局在化した長方形構造であることを明らかにした。
大規模データからの知識獲得における精度と複雑性のトレードオフ

知識獲得の目的は,利用者が容易に理解できる形式で高精度な知識を獲得することである.しかし,高精度な知識は,理解することが難しい複雑な知識であることが多い.逆に,単純で分かりやすい知識は,精度の点で問題があることが多い.本研究では,精度と複雑性の間でのトレードオフ分析を行うことで,様々な利用者の選好に応じた知識獲得が可能になることを明らかにした.本研究の研究成果を要約すれば以下のようになる.まず,遺伝的ルール選択と遺伝的機械学習との比較を行うことで,遺伝的ルール選択における候補ルール集合の設定の重要性を明確にした.次に,個々のルールに対する評価基準に基づいて獲得されたルール集合に関する精度と複雑性の間のトレードオフ曲線が,進化型多目的ルール選択により大きく改善されることを明確にした.また,進化型多目的ルール選択により得られた多様なルール集合を用いてアンサンブル識別器を設計する方法の性能評価を行った.さらに,アンサンブル識別器の性能評価に基づき,アンサンブル識別器の設計方法の改良を行った.具体的には,単一の識別器を表現する2進数コードを,複数の識別器を一度に表現することのできる整数値コードに拡張した.このような拡張により,複数の識別器による共通の識別ルールの使用を禁止することが可能になり,識別器の間の多様性が高まった.また,進化型多目的ルール選択における候補ルールとして,SupportとConfidenceに関するパレート最適ルールを用いるというアイディアを提案した.最後に,利用者の選好に応じた知識獲得を行うために,進化型多目的最適化アルゴリズムにおける多目的探索に,利用者の選好情報を組み込む方法を提案した.具体的には,個々の目的に関する重み,目的関数空間内での参照点,個々の目的に関する制約条件などを選好情報として組み込む方法を提案した.知識獲得の目的は,利用者が容易に理解できる形式で高精度な知識を獲得することである.しかし,高精度な知識は,理解することが難しい複雑な知識であることが多い.逆に,単純で分かりやすい知識は,精度の点で問題があることが多い.本研究では,精度と複雑性の間でのトレードオフ分析を行うことで,様々な利用者の選好に応じた知識獲得が可能になることを明らかにした.本研究の研究成果を要約すれば以下のようになる.まず,遺伝的ルール選択と遺伝的機械学習との比較を行うことで,遺伝的ルール選択における候補ルール集合の設定の重要性を明確にした.次に,個々のルールに対する評価基準に基づいて獲得されたルール集合に関する精度と複雑性の間のトレードオフ曲線が,進化型多目的ルール選択により大きく改善されることを明確にした.また,進化型多目的ルール選択により得られた多様なルール集合を用いてアンサンブル識別器を設計する方法の性能評価を行った.さらに,アンサンブル識別器の性能評価に基づき,アンサンブル識別器の設計方法の改良を行った.具体的には,単一の識別器を表現する2進数コードを,複数の識別器を一度に表現することのできる整数値コードに拡張した.このような拡張により,複数の識別器による共通の識別ルールの使用を禁止することが可能になり,識別器の間の多様性が高まった.また,進化型多目的ルール選択における候補ルールとして,SupportとConfidenceに関するパレート最適ルールを用いるというアイディアを提案した.最後に,利用者の選好に応じた知識獲得を行うために,進化型多目的最適化アルゴリズムにおける多目的探索に,利用者の選好情報を組み込む方法を提案した.具体的には,個々の目的に関する重み,目的関数空間内での参照点,個々の目的に関する制約条件などを選好情報として組み込む方法を提案した.
多フッ素アミノ酸を素構造とする非水系人工タンパク質の設計合成と構造制御

多フッ素化アミノ酸の代表例として、L-型のトリフルオロエチルグリシン(L-Tfe)の大量調製が可能となったので、これを他の中性あるいは親水性のアミノ酸と組み合わせて、2種類の人工タンパク質モデルを合成した。両者共に中性のアラニン(Ala)と親水性のリシン(Lys)またはグルタミン酸(Glu)を含み、両親媒性α-ヘリックスモチーフを有する21-ペプチドであるが、異なるアミノ酸配列を持たせた。2/7の比でTfeを含むモデルIは水中ではランダム構造となり、25%以上のトリフルオロエタノールの添加によってα-ヘリックス性を示した。側鎖トリフルオロエチル基の占有体積が、従来のロイシン構造(イソブチル基)に対して著しく小さいため、ペプチド主鎖の2次構造を破壊するほどの凝集力が生じており、これを緩和するためインシュレータとしてフッ素系溶媒が必要であると考えられた。炭化水素系のメタノールを溶媒に用いると、当初α-ヘリックスであった2次構造は、24時間以内にゆっくりとβ-シート構造に変化した。これはメタノールとトリフルオロエチル基間の疎媒効果が働いた結果である。モデルIIは水中でランダム構造、メタノール、トリフルオロエタノール中でα-ヘリックス構造であった。メタノール中のα-ヘリックス構造はβ-シート構造に転移しなかった。これは、モデルIIのアミノ酸配列中で連続するTfeがβ-鎖になった場合に互いに離されるより、むしろ近接してらせん構造の安定化をもたらすのが原因である。上記の知見は触媒機能を有する人工タンパク質の設計の精密化のために重要な指針を与えるものである。
副刺激を調節したγδT細胞を用いた新たな養子免疫療法の可能性の検討

4-1BB抗体、PD-L1抗体によるγδT細胞の副刺激を調節することでγδT細胞の活性状態を向上させ、更に刺激活性に伴うアポトーシスを抑制することを証明できたが、細胞障害を導くIFNγやパーフォリン、グランザイムの産生能力の有意な向上は認めず、ヒト膀胱癌細胞株に対する抗腫瘍効果増強についても証明することが出来なかった。その理由として、培養3日目に最も4-1BB、PD-1を発現するγδT細胞の割合が多かったが、10日間の培養によりその割合が減少することが考えられた。そのため培養開始初期のγδT細胞のみを使用すれば有用性を証明できる可能性はあると考える。γδT細胞を用いた養子免疫療法のdose limiting toxicityを回避するため、それぞれの細胞のエフェクター機能を向上させることを目的に本研究ではT細胞が持つ副刺激のco-stimulatory receptor、co-inhibitory receptorに着目した。γδT細胞と4-1BB抗体、抗PD-L1抗体との共培養の後、γδT細胞の活性状態、エフェクター機能を再評価した。その結果、4-1BB抗体と抗PD-L1抗体単独では1.7倍、1.3倍の活性状態向上であったが、併用によって1.8倍まで活性状態が向上した。同様にIFNγの産生は単独では1.7倍、1.9倍であったが併用によって2.2倍まで向上した。更に、T細胞はCD3刺激によってAICD(activation induced cell death)によるアポトーシスを起こすことが分かっているが、共培養によりCD3刺激単独と比較してアポトーシスを呈したγδT細胞が有意に減少した。その結果としてヒト膀胱癌細胞株に対する抗腫瘍効果は5:1のeffector/target ratioでCD3単独で40%だった抗腫瘍効果が、併用により69%まで増強した。メラノーマに対する抗PD-1抗体がFDAに認可されimmune check pointには注目が注がれているが、γδT細胞を用いた養子免疫療法においても副刺激の調節は有効であることがin vitroの実験で示唆された。精製したγδT細胞にCD3刺激し24時間後の4-1BB、PD-1の発現が最大に増強したため、この時点のγδT細胞を以後の実験に使用した。γδT細胞と抗PD-L1抗体共培養によりCD69の活性はCD3刺激単独と比較して1.7倍に有意に増強した。アポトーシスを呈したγδT細胞の割合は抗PD-L1抗体により有意に減少した。IFNγの産生は併用により1.5倍増強したが有意差は認めなかった。パーフォリン、グランザイムに関しても同様の結果であった。ヒト膀胱癌細胞株TCCSUPに対する抗腫瘍効果は併用により1.5倍向上したが有意差は認めなかった。一方253Jに対しては併用でも抗腫瘍効果の向上を認めなかった。腫瘍細胞株による抗腫瘍効果の違いはTCCSUPがPD-L1が中等度発現していたのに対して253Jは殆ど発現していなかったこと、即ち腫瘍細胞側のPDL1発現の程度によるものであることをフローサイトメーターで証明した。以上よりPDL1+の腫瘍細胞株に対してはγδT細胞の副刺激を調節した抗腫瘍効果の向上を認めたが、CD3/TCR刺激と比較し有意差を証明できなかった。更にco-inhibitory receptorであるPD1について培養スケジュールにおけるγδT細胞のプロファイルを行った。フローサイトメーターから培養3日目に最もPD1+γδT細胞の割合が多かったが、10日間の培養により4550%のγδT細胞はPD1+で残りの半数はPD1-であった。そのため10日間の培養後全てのγδT細胞を使用した本実験ではPD1/PDL1経路遮断の有用性を証明できなかったと考える。培養3日目のγδT細胞、または10日間培養後、ソーティングしたPD1+γδT細胞のみを対象とすれば有用性を証明できる可能性はあると考える。しかし、担癌状態の患者のγδT細胞の培養効率が悪いことを考慮すると臨床的に意義が少ないと考える。以上より本実験ではγδT細胞を用いた養子免疫療法における4-1BB/4-1BBL、PD1/PDL1を介した副刺激調節の意義を証明できなかった。免疫細胞療法当初の予定通りin vitroの実験は概ね終了している。アポトーシスに関するフローサイトメトリーを用いた実験は終了しているが、定量PCR実験が未であり、まず定量PCRを行い抗PD-L1抗体によりγδT細胞のアポトーシスが予防できることを証明する。更に各in vitroの実験の追試を行った後にin vivoの実験を行う予定である。in vitroの実験を証明するため、マウス膀胱癌モデルを用いて副刺激を調節したγδT細胞の抗腫瘍効果ならびに安全性を検討する。

マウス膀胱癌モデルに対して4-1BB抗体、抗PD-L1抗体単独、または両者で前処置したγδT細胞を腹腔内投与し抗腫瘍効果ならびに安全性について検討する。期待された抗腫瘍効果が得られない場合はγδT細胞の投与方法や投与細胞数、投与タイミングの変更等を考慮し、再度検討する。