hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
AFMを利用したエバネッセントTHz光散乱検出法の研究

本研究では,照射光源を利用しないエバネッセントTHz光散乱検出法の確立を目指した.自己検知型AFMを開発してTHzナノ顕微鏡を構築し,自然放出光の近接場イメージングを行った.常温サンプル(GaAs/Au)をイメージングした結果,Au上でGaAs上よりも遥かに大きい近接場応答(室温熱励起された表面プラズモン)が得られた.空間分解能は150nm(波長の1/100)を達成している.本研究では,照射光源を利用しないエバネッセントTHz光散乱検出法の確立を目指した.自己検知型AFMを開発してTHzナノ顕微鏡を構築し,自然放出光の近接場イメージングを行った.常温サンプル(GaAs/Au)をイメージングした結果,Au上でGaAs上よりも遥かに大きい近接場応答(室温熱励起された表面プラズモン)が得られた.空間分解能は150nm(波長の1/100)を達成している.本申請研究の目的は,原手間力顕微鏡(AFM)を利用したエバネッセントTHz光散乱検出法を確立することにある.すなわち,超高分解能を付加可能である近接場技術を超高感度THz顕微鏡に導入して,passiveかつサブマイクロメートルオーダでのイメージング技術を確立し,物質現象のダイナミクスを実時間スケールで計測することを目的としている.平成20年度は近接場光学系を導入したTHzナノ顕微鏡の構築が目標であった.目標達成へ向けて,(i)金属プローブの作製(ii)プローブ発振機構の確立(iii)サンプル-プローブ間の位置決め制御法の確立を行い,自己検知型AFMを開発した.プローブの作製に関しては,径50ミクロンのタンスステンワイヤを陰極,炭素棒を陽極として水酸化カリウム水溶液中で電解研磨することによって,先端径500 nm以下のプローブ作製に成功した.プローブ発振に関しては,プローブを接着した水晶振動子の固有振動数(32KHz程度)を持つ交流電圧をファンクションジェネレータによって付加して発振を行った.位置決め制御に関しては,プローブをサンプルにアプローチしつつ,水晶振動子に流れる電流をロックインアンプにてモニタし,シアフォース(原子間力)による電流(プローブの振動振幅に対応)減衰を評価することにより行った.評価実験の結果,サンプル-プローブ間の位置決め精度は10 nm以下を達成し,近接場検出に向けて十分な精度が得られた.以上のように自己検知型AFMが完成したため,並行して構築していたテラヘルツ顕微鏡に本AFMを導入し,THzナノ顕微鏡を完成させた.本申請研究の目的は,原子間力顕微鏡(AFM)を利用し,照射光源を利用しないエバネッセントTHz光散乱検出法を確立することにある.すなわち,超高分解能を付加可能である近接場技術を超高感度THz顕微鏡に導入して,passiveかつサブマイクロメートルオーダでのイメージング技術を確立し,物質現象のダイナミクスを実時間スケールで計測することを目的としている.前年度は自己検知型AFMを開発し,THzナノ顕微鏡を構築した.本年度は構築顕微鏡を利用して,目的であるTHz自然放出光の近接場イメージングを目指した.探針からの散乱光にはFar-field成分とNear-field成分が含まれるが,所望のNear-fild成分のみを抽出するため,計測中に金属探針をピエゾで上下に変調させ,ロックイン検出を行うこととした.探針を上下に変調させつつ,常温のサンプル(GaAs基板にAuを100nm蒸着したもの)を走査した結果,ロックイン復調により近接場応答が得られた.Auは放射率が小さいため,Far-fildではTHz信号がGaAsに比べて遥かに小さい.しかしながら,passiveな近接場計測において,Au上ではGaAs上よりも遥かに大きい応答が得られた.本結果は,金属上で室温熱励起された表面プラズモンが検出されたことを意味する.顕微鏡のスペックとしては,走査ステップ25nm,走査速度300ms/stepにおいて分解能150nm(波長の1/100)が確認され,常温かつpassiveな近接場計測において前例のない結果が得られた.
悩みを抱える青少年の長期冒険キャンプにおける「内的体験としての身体」の意味を探る

本研究では、悩みを抱える思春期の青少年を対象に長期冒険キャンプを実践し、「身体」に着目してその意味を探ることを目的とした。研究1の質的分析の結果、「心と身体の関係性が変化する」プロセスとして「混沌とした心と身体」「心と身体のつながりや限界に気付く」「身体を入口として自分に向き合う」「自分の身体に自信を持つ」4段階が示された。また「心と身体の伴走者としてのスタッフ」「冒険プログラム特有の仲間関係を体験する」「原始的な自然の中でリアルな感情を抱く」など他者や環境との相互作用が影響していることが明らかになった。研究2の事例研究では、キャンプの体験が個性化の過程として意味があることが示唆された。本研究では、不登校、軽度発達障害、問題行動などの悩みを抱える思春期の青少年を対象に約20日間の長期に渡る冒険キャンプを実践し、彼らの「内的体験としての身体」に着目してその意味を探ることを目的としている。方法として、長期冒険キャンプにおける「こころ」と「身体」を客観的・数量的に切り分けて捉えるのではなく、その個人の全体を表現する「身体」として心理臨床の視点から検討することが特徴である。平成24年度は、まず研究1として、長期冒険キャンプにおける「身体」の意味の全体像(対象者に共通するマクロの視点)を把握するため、平成23年度に長期冒険キャンプの参与観察によって収集した質的データの分析を行った。データの分析には質的データ分析法(佐藤,2008)を用いた。その結果、「自己との関わりにおける身体」「他者との関わりにおける身体」「自然との関わりにおける身体」の3つの概念的カテゴリーからなる、“キャンプの「身体性」に着目した体験の意味のモデル"が得られた。本モデルを暫定的な研究結果として野外教育学会(7月、沖縄)にて発表し、そこで得られた知見をもとに、データの精緻化および再分析に着手した。次に、研究2として、その個人の心理的背景との関連における「身体」の意味(個別性を重視したミクロの視点)を明らかにするために、特徴的な事例(女性、15歳)の検討を行った。そして、「身体が語るもの」「コミュニケーションとしての身体」「思春期のアイデンティティと身体」「身体性を回復するプロセスとしての冒険キャンプ」という4つの視点から考察を行い、研究論文として臨床心理身体運動学研究に投稿した。産前産後の休暇又は育児休業による中断:平成24年12月01日平成26年03月14日本研究では、悩みを抱える思春期の青少年を対象に長期冒険キャンプを実践し、「身体」に着目してその意味を探ることを目的とした。そして方法として、長期冒険キャンプにおける「こころ」と「身体」を客観的・数量的に切り分けて捉えるのではなく、その個人を表現する「身体」として心理臨床の視点から検討することが特徴である。平成23年度は、まず長期冒険キャンプに参加した悩みを抱える思春期の青少年(1315歳)を対象に参与観察を行い、対象者の「身体」や「動き」に着目したエピソードを抽出した。その際に、エピソード記述(鯨岡,2005)の手法を参考にし、読み手がその場面をイメージできるよう「あるがまま」を時系列に沿って描くこと、自分(研究者)がどういうかたちで関与していたか関係性も併せて描くこと、等を心掛けた。抽出したエピソードは、研究協力者(心理臨床専門家および野外教育専門家)との複数人で繰り返し検討をして修正を加え、客観性(了解可能性)および妥当性を高めるよう努めた。最終的に、対象者の各事例においてエピソード(12個17個、約6000字8000字)を本研究に用いる文書(テキストデータ)としてまとめた。次に、研究1として、長期冒険キャンプにおける「身体」の意味の全体像(対象者に共通するマクロの視点)を把握するために、質的データ分析法(佐藤,2008)を用いての分析に着手した。また研究2として、その個人の心理的背景との関連における「身体」の意味(個別性を重視したミクロの視点)を明らかにするために、特徴的な事例の検討に入った。平成26年度は、研究助成期間の最終年度となったため、研究成果のまとめを重点的におこなった。

研究1の長期冒険キャンプにおける「身体」の意味の全体像把握については、修正版グラウンド・セオリー・アプローチを用いて、平成25年度までに得られた暫定的なモデルの再分析をおこなった。その結果、キャンプの中で参加者が体験した「冒険プログラムの中で心と身体の関係性が変化する」プロセスとして、「混沌とした心と身体」「心と身体のつながりや限界に気付く」「身体を入口として自分に向き合う」「自分の身体に自信を持つ」といった4段階の過程が示された。またそのプロセスに「心と身体の伴走者としてのスタッフ」「冒険プログラム特有の仲間体験を体験する」「原始的な自然の中でリアルな感情を抱く」など他者や環境との相互作用が影響していることが明らかになった。次に、研究2の個人の心理的背景との関連における「身体」の意味について特徴的な事例を検討した結果、キャンプの体験が個性化(アイデンティティ探求)の過程として意味があることが示唆された。体育学野外教育、臨床心理学心理療法本研究の目的は、不登校、軽度発達障害、問題行動などの悩みを抱える思春期の青少年を対象に約20日間の長期に渡る冒険キャンプを実践し、彼らの「内的体験としての身体」に着目してその意味を探ることである。平成24年度はまず、研究1の長期冒険キャンプにおける「身体」の意味の全体像把握のための質的データ分析を重点的におこなった。その結果、暫定的ではあるがモデルを抽出することができた。この点で、概ね当初の計画通りに研究が進んでいる。また、研究2の個人の心理的背景との関連における「身体」の意味についても、検討すべき特徴的な事例のうち、まず1事例を研究論文としてまとめることができた。これらのことから、研究目的の達成度はおおむね順調に進展していると判断した。平成25年度は、産前産後の休暇および育児休業のため、研究を中断していた。そのため、平成24年度までの達成度を述べる。本研究の目的は、不登校、軽度発達障害、問題行動などの悩みを抱える思春期の青少年を対象に約20日間の長期に渡る冒険キャンプを実践し、彼らの「内的体験としての身体」に着目してその意味を探ることである。この目的を達成するために、まず平成23年度は、長期冒険キャンプの実施と参与観察による質的データの収集に重点を置いた。研究実績の概要に示した通り、この点においては概ね計画通り達成できたと言える。ただ、質的データの収集における個別のエピソードの精緻化に、当初予定より多くの時間を費やすこととなった。
統計的機械学習による音楽情景分析と音楽的要素のディレクションの研究

本研究では,以下を達成した.(1)ノンパラメトリックベイズ法に基づく音楽音響信号の分析手法,(2)ベイズ推定に基づく和音の認識,(3)音楽音響信号からのバイオリン運指推定,(4)仮想楽器音源パラメータを推定,(5)ギター演奏者の習熟度に応じたタブ譜自動生成,(6)歌い方の特徴を抽出し歌手の歌い方のライブラリを作成,(7)歌声と伴奏を分離し,歌声にビブラートやこぶしなどの歌唱表現を付与する音楽編集システムを開発,(8)音響信号に対する残響抑圧,(9)反復的な和音・音高推定方法の開発.当該年度は,(1)雑音や分離歪みを含む楽器音からの,楽器音合成器のパラメータ推定と楽器音の再合成,(2)演奏者の習熟度に合わせて難易度を調節可能な,ギター演奏に対するギタータブ部の自動推定,(3)伴奏を含む歌声からの歌唱表現の自動抽出と歌唱合成器への歌唱表現の転写,に取り組んだ.(1)と(3)は交付申請書における「音楽的要素のディレクション」,(2)は「汎用性・頑健性の高い多重音分析」に対応する.(1)音源分離などに起因する雑音や歪みを含む楽器音に対して,それらを含まないクリーンな楽器音を得るための仮想楽器音源のパラメータを推定する.多数の楽器音をランダムに生成し,楽器音からフレームベースの音響特徴量とその統計量を計算する.重回帰分析を用いて音源パラメータと音響特徴量との関係を学習し,未知楽器音のパラメータをその関係性を用いて推定する.(2)ギター演奏者の演奏支援をするために実際のギター演奏音から演奏者の習熟度に応じたタブ譜を自動生成する手法について述べる.具体的には,初級者向けには音符の欠落などを許容してでも演奏が容易なタブ譜を,上級者向けには音高を正確に再現するタブ譜を,それぞれ生成する.推定される運指の難易度は,音響再現度と運指容易度の相対的な重みをユーザー側で調整することによって変更可能である.(3)市販楽曲らビブラート,こぶしやグリッサンドといった歌い方に関係する特徴を歌唱表現として抽出することで、歌手の歌い方のライブラリを作成する手法について述べる.これらの特徴は,歌唱F0軌跡中の特徴的な変動として現れる.本手法ではまず,時間周波数領域での最適経路探索問題を定式化することにより高周波数分解能,高精度な歌唱F0推定を行う.推定F0軌跡からパターンマッチングにより各歌唱表現を同定,パラメータ表現する.本研究では,以下を達成した.(1)ノンパラメトリックベイズ法に基づく音楽音響信号の分析手法,(2)ベイズ推定に基づく和音の認識,(3)音楽音響信号からのバイオリン運指推定,(4)仮想楽器音源パラメータを推定,(5)ギター演奏者の習熟度に応じたタブ譜自動生成,(6)歌い方の特徴を抽出し歌手の歌い方のライブラリを作成,(7)歌声と伴奏を分離し,歌声にビブラートやこぶしなどの歌唱表現を付与する音楽編集システムを開発,(8)音響信号に対する残響抑圧,(9)反復的な和音・音高推定方法の開発.平成24年度は以下の課題に取り組んだ.(1)ノンパラメトリックベイズ法に基づく音楽音響信号の分析手法:多重奏の音楽音響信号に対して,従来法と同等以上の性能で数十倍高速な処理を行う多重基本周波数推定法を開発した.多重基本周波数を正しく推定するためには,調波構造の倍音強度比を正しく推定することが不可欠である.誤った倍音強度比が推定されることを防ぐため,楽器音シンセサイザで多種多様な楽器音の倍音強度比を分析し,その範囲内の倍音強度比のみが推定されるような手法を開発した.(2)ベイズ推定に基づく和音の認識:音響特徴・ベース音高・和音遷移の手がかりを確率的に統合した和音認識手法を開発した.複数の手がかりの相互作用を考慮することで,73.7%の和音認識率を達成した.(3)音楽音響信号からのバイオリン運指推定:手の形状やその変化速度などを考慮し,バイオリン演奏の音響信号から運指を自動推定する手法を開発した.バイオリンには弦が4本あり,音がどの弦から発せられているかを推定するために調波構造の倍音強度比を手がかりとして,倍音強度比と手の変形・移動コストを確率的にモデル化した.評価実験により,79.3%の推定精度を達成した.当該年度は1.雑音や分離歪みを含む楽器音からの楽器音合成器のパラメータ推定と楽器音の再合成技術の改善、2.一般的なポピュラー音楽などの歌声と伴奏の両方を含む音楽音響信号からの歌声・伴奏音分離技術とその基本周波数推定技術の開発、およびその歌声編集への応用、3.音楽音響信号に対する和音と音高の反復推定技術の開発、4.無限次元の自己回帰過程のベイズ推定に基づく残響抑圧技術の開発、に取り組んだ。1.音源分離などに起因する雑音や歪みを含む楽器音に対して、それらを除去したクリーンな楽器音を得るための仮想楽器音源のパラメータを推定する。多数の楽器音をランダムに生成し、楽器音から音響特徴量とその統計量を計算する。重回帰分析を用いて音源パラメータと音源特徴量との関係を学習し、未知楽器音のパラメータをその関係を用いて推定する。2.歌声と伴奏を分離し、歌声にビブラートやこぶしなどの歌唱表現を付与する音楽編集システムを開発した。歌声分離は2つのステップからなる。第1ステップでは入力混合音を伴奏成分と歌声成分に粗く分離する。第2ステップでは分離された歌声からその音高を推定し、音高に基づく調波構造マスクにより歌声を際立たせる。本歌声

分離手法は、音楽情報処理アルゴリズムの世界的なコンテストであるMIREX2014の歌声分離トラックにおいて最高性能を達成した。3.音響信号からその残響を取り除く手法を構築した。残響は音高推定や和音認識などの各種の音楽情報処理アルゴリズムの精度を大きく低下させるため、これらのアルゴリズムを頑健に動作させるための前処理として残響抑圧技術は有用である。4.音楽音響信号に対する和音推定と音高推定の精度を高めるため、これらを反復的に実行する手法を実現した。入力楽曲に対して音高を粗く推定し、推定された音高から和音認識の特徴量を計算する。そこから和音を認識し、その結果を事前分布として用いることで再度音高推定を行う。音楽情報処理平成24年度の成果である個別基礎技術の開発・評価に加えて,楽器音一般,ギター音,歌声という様々な音楽音響信号に対する応用技術の開発が進捗しているため.上記の成果により,平成24年度に実施予定であった「楽器単独音のスペクトル表現と楽器の音色のモデル化」,「和音進行と調のモデル化」,平成25年度に実施予定であった「複数の音楽的要素の認識手法を統合し,同時認識によって認識精度」を実現し,さらに平成26年度に実施予定であった「複数の音楽的要素の認識において,計算量を軽減する手法の開発」に部分的に取り組んだといえる.実施の順序は前後しているものがあるが,単年度で実施すべき分量の目的は達成されており,平成25年度以降も順次課題に取り組むことで研究計画は実施できると考えられる.よって,「おおむね順調に進展している」と評価する.本年度は本研究課題の最終年度である.申請書に記載した研究計画通り,本年度は音楽的要素のディレクションシステムを統合し,総合的な評価を行う.平成25年度は応用技術の開発と評価に取り組む.(1)事前情報の誤りに頑健な多重音分析手法を開発する.楽曲の分析には,事前情報として楽譜を用いることができるようにする.楽譜に不備がある場合(音符の挿入置換誤り,一部の楽器パートのみ,音高・テンポのずれ)が想定されるため,音響信号と楽譜との同期処理を応用して楽譜の信頼できる部分を推定してその部分だけから楽曲構成要素を抽出する.(2)統計的学習に基づいて混合音を操作・合成する手法を開発する.楽器音の合成方法に関する技術を比較検討する.正弦波重畳モデルによる手法,パワースペクトルから位相を推定し時間領域信号を復元する手法,ソースフィルタモデルによる手法,既存の楽曲やその断片をつなぎ合わせる手法など,様々な手法を対象とする.また,以上画像検出手法やミッシングフィーチャー理論を応用し,楽器音の歪み(=異常な箇所)を検出することで歪みを最小化する手法を開発し,210dBの歪み軽減を目標とする.(3)楽曲の残響を推定する.短時間(1.0秒未満)と長時間(1.0秒以上)の残響に段階的に取り組む.残響を推定するためには楽器音モデルを畳み込みモデルに拡張し,補助関数法を用いて目的関数を変形することで効率的な反復推定アルゴリズムを構築する.(4)歌声を分析し,歌い方の特徴を分析・転写する手法を開発する.伴奏や残響を含む,ウェットな歌声から歌い方の特徴を分析し,ボーカロイドなどの歌声合成エンジンに歌い方の特徴を転写する.平成26年度はシステムの総合的評価に取り組む.(1)複数の音楽的要素の認識において,計算量を軽減する手法を開発する.
やまと絵の場と機能をめぐる受容美学的研究

日本的な主題を描く「やまと絵」の遺品が多く残されている室町時代の屏風絵を中心に、享受された場やその機能について再検討を行っている。本研究は科研費補助金「国際共同研究強化」(-2018)と並行して行う研究であるが、本年度は国際共同研究強化の最終年度にあたるため、8月中旬より7ヵ月間ハーバード・イェンチン研究所にて在外研究を行った。本年度は、室町時代のやまと絵屏風、特に自然の風景を描く四季絵について、描かれた主題やモティーフ分析を通して、そこには古くから詠まれた和歌や漢詩などの言葉が内包されており、室町時代のやまと絵屏風に平安時代の屏風歌の伝統が濃厚に受け継がれている可能性について指摘した(英国のセインズベリー日本文化芸術研究所における国際シンポジウムDisplay as Ensembleにおける口頭発表"Depicting Nature: ScreenPaintings for Meeting Hall" 2018年5月)。さらに、やまと絵屏風の受容空間について、庭園の存在の重要性について確認した。「四季花鳥図屏風」(サントリー美術館蔵)や「浜松図屏風」などに描かれるモティーフは現実の庭園の前栽の植生と一致すると言われてきたが、平安時代より詠い継がれてきた和歌や漢詩の言葉は庭園の前栽の風景を彷彿とさせるものである。実際に、室町時代に入ってからも庭園を目の前に和歌会などが行われてきた実態を確認するとともに、庭園の風景を写したかのようなやまと絵屏風の存在は、単に実景の再現ではなく、和歌の言葉を紡ぎ出すためのスクリーンとしても機能していた可能性を指摘した。これらの研究成果については、昨年度までに行ってきた二回の国際シンポジウムをもとに『東アジアの庭園表象と建築・美術』(昭和堂、2019年)として編集し、「共鳴する庭園と絵画」と題して論文を収録した。本研究では、「やまと絵」が成立した中世初期の時代から国家的な歴史画を描いていくことになる「日本画」に至るまで、「日本的なるもの」として受容されてきた美術作品について、その享受された場や機能について再検討するものであり、歴史、文学、美学、建築史などを視野に入れ分野横断的な研究を志している。特に、中国や朝鮮(あるいは、西洋)に起源を持ちながらも、変容を遂げて日本的な風土に根付いていく過程について、享受者や享受の場との関わりという視点から見直すことが本研究の目的である。特に障壁画に焦点を当て、西欧のタブローとは異なる形態を持つ東アジアに特徴的な大画面の絵画作品が、それぞれの建築空間においてどのような機能を担っていたのか、ということを行事や儀礼の空間の特質とともに明らかにすることを目指す。平成27年度は、「やまと絵」や「日本画」の主題として描かれる「松」や「鶴」を描く花鳥画の系譜について研究を進めた。契機は前年の科研費補助金「研究活動スタート支援」で行った調査の際に出会った韓国古宮博物館に所蔵される日本人画家の描く「松鶴図」である。本主題については中国起源であるにも関わらず、そのイメージの持つ吉祥性から東アジア文化圏において共有される図像であり、16-17世紀になると、贈答品としての価値も付加され、特に日本で制作された花鳥を描く金屏風は中国や朝鮮にも贈られ重宝されたことも知られている。植民地期朝鮮の宮廷において日本人画家によって描かれた「松鶴図」は東アジアで交換される共通言語としての「松鶴図」の好例であるばかりでなく、朝鮮に根差した伝統的な主題である「十生図屏風」などに描かれる図様との関係性を指摘することができる。そのうえで、それらが受容された当時の宮廷において、やまと絵の金屏風がいかに受容されているのかを考察した。実際の作品を調査しながら、それらについてできるだけ国際会議を含めて発表を行うことを目指しているが、平成27年度もソウルの国立中央博物館や国立民族博物館において調査を進めることができ、その調査内容の一部についても国際シンポジウム(平成27年10月にロンドン大学SOASにて)報告を行った。本研究では、大画面の「やまと絵」の遺品が多く残されている室町時代から国家的な歴史画を描く「日本画」に至るまで、「日本的なるもの」として受容されてきた美術作品(特に屏風絵)について、その享受された場やその機能について再検討を行っている。本研究は科研費補助金に採用中の「国際共同研究強化」(2016-2018)と並行して行っている。本年度は室町後期から桃山時代の大画面やまと絵障屏画における歌枕としての「名所」の変容について、吉野山を描いた「吉野図」や京都の洛外を中心に描いた「洛外図」について、当時流行していた和歌や歌謡との関わりから研究を行った。「吉野図」については、山辺一面に咲き誇る山桜を水辺の景観とともに描く一連の作例について考察を行った。現在、所蔵が知られているサントリー美術館、ウェーバー・コレクション、春日大社に所蔵される「吉野図屏風」の三作品は先行研究によって構図や図像に共通性が見られることが指摘されているが、現在知られている三作品に加え、米国で調査を行った二つの作品、クリスティーズで取引された作品を加えた六点の作品について比較を行った。その結果、〈桜〉のほかに取り込まれた〈滝〉や〈岩〉などの図像には吉野にまつわる古歌をふまえた「名所絵」として「吉野図」は16世紀後半以降再構成され、そこには天皇家の離宮としての宮瀧のイメージが重ね合わされている可能性を指摘した(3月18日美術史学会例会にて口頭発表)。

また「洛外図」については、17世紀前半に描かれた京都の郊外を高い視線から俯瞰的に描く「洛外図」の登場について、江戸初期に刊行された地誌や「名所記」に書き込まれた歌枕との関連性を指摘した(1月に東京大学東洋文化研究所での国際シンポジウムにおいて口頭発表)。実際の作品調査については、7月に山口蓬春記念館、鍋島徴古館、10月に京都国立博物館、サントリー美術館にて行った。本研究は「国際共同研究強化」と並行して行うことにより、国内外の美術館・博物館やディーラーに所蔵されているやまと絵屏風の作品の調査が可能となったこともあり、実際の作品調査や報告活動を円滑に行うことができている。また、本研究の成果報告については、日本の学会に加え、国際学会での発表や共同研究者の協力のもと国際シンポジウムの開催を通して順調に行うことができた。本研究では、大画面の「やまと絵」の遺品が多く残されている室町時代から国家的な歴史画を描く「日本画」に至るまで、「日本的なるもの」として受容されてきた美術作品(特に屏風絵)について、その享受された場やその機能について再検討を行っている。本研究は科研費補助金に採用中の「国際共同研究強化」(2016-2018)と並行して行う研究となる。本年度は明治期の日本画を中心に研究を進めた。国際共同研究においては、日本画のなかでも、当時日本から朝鮮半島に渡って日本画の制作を行った画家の作品を考察し、東アジアで共通して描かれる花鳥図という主題について再検討を行った。一方若手(B)では、特に明治期の「歴史画」の概念について、東京大学駒場博物館所蔵、第一高等学校伝来の日本画を継続して考察を行った。開校間もない東京美術学校に関わりの深い画家たちによって描かれたこれらの歴史画は、一高より発注を受け、アーネスト・フェノロサや岡倉覚三の目指した西洋美術のジャンルにおいて高いヒエラルキーをもつ「歴史画」が日本に移入されたことを例示するごく初期の作品群であることを論じた。その成果については、ヨーロッパにおいて三年に一度開催される日本研究に関する学会(EAJS)において、今年度の視覚芸術のテーマであった「マテリアリティー」という観点から一高伝来の「歴史画」について報告を行った。歴史的人物像、特に南朝方の護良親王や楠木正成が再評価され絵画化されていく思想的背景について考察するとともに、一高の歴史画がいわゆる西洋より移入された思想や技法を駆使することによって「国民的主題」へと昇華し、公的な空間へ展示されるべき大画面のマテリアリティーを保有するべく制作された可能性について指摘した。また10月から12月にかけて、特別展示を駒場博物館にて担当し、シンポジウムを開催、駒場祭においては一般の方向けの公開講座も行った。本研究は「国際共同研究強化」と並行して行うことにより、国内外の美術館・博物館に所蔵されているやまと絵屏風や日本画の作品の調査が可能となったこともあり、実際の作品調査や報告活動を円滑に行うことができている。また、本研究の成果報告については、日本国内においては展覧会とシンポジウム、公開講座を開催することができたためこれまで知られてこなかった西洋美術のジャンルを移入した明治期の「歴史画」の萌芽期の作品を広く公開することができた。また、三年に一度の日本研究の国際学会でも発表を行うことができたことで、よりグローバルな視点から日本画研究を考える貴重な機会となった。以上のような点から本研究は当初の計画よりも順調に研究を行うことができていると考える。
δ型ホスホリパーゼCの構造と細胞内ターゲッティング

昨年までにPLC-δ1遺伝子ならびにその変異体の大腸菌発現系、酵母発現系および動物細胞発現系を確立する作業を行った。本年度はこれらの系を利用してin vitro, in vivoでの酵素活性と分子間相互作用の検討、また本酵素の構造と機能(特に細胞内機能)との関係についての詳細な検討を行った。(1) PLC-δ1の構造解析:(1)高純度のレコンビナントPLC-δ1を調整し、構造解析のための結晶化を試みた。幾つかの条件で微結晶が得られるようになったが、現在までにX線解析に興せられるような結晶は得られていない。(2)酵素活性がCa^<2+>依存性を持つことにより、本酵素のCa^<2+>結合部位を種々の欠失変異体を用いて解析した。その結果、本酵素には56個のCa^<2+>結合部位があり、そのうち12個はC端のC2領域に存在すること、またこの領域中の一部のアミノ酸置換により酵素活性が著明に低下することが判明した。我々がこれまでに解析したPH領域以外にも触媒活性の機能修飾部位が存在することが明らかになった。(3)他のいくつかのPH領域含有タンパクに対するモジュレーターとして知られるGタンパクβγサブユニットはin vitro, in vivoいずれの条件でもPLC-δ1と相互作用していることが明らかになった。(4)本酵素がセリン・スレオニン型キナーゼ、特にタンパクキナーゼCの基質になりうることがin vitroでのリン酸化実験により判明した。またin vivoリン酸化を行い、リン酸化がスレオニンにおこることを明らかにした。現在、リン酸化部位の特定と、細胞応答に伴うリン酸化の変動の有無を調べている。(2)無傷細胞におけるPLC-δ1の機能解析:培養細胞(MDCK, PC12)を使用し、PLC-δ1の局在性の変化を観察した。(1) MDCKにマイクロインジェクションによりPH領域変異体を導入し、免疫組織化学的に酵素の局在を調べることによって、PH領域の膜移行にN端37-43残基に含まれる4個の塩基性アミノ酸のそれぞれが決定的に重要であることを明らかにした。(2)内在性PLC-δ1をもつPC12に対し、IP3/PIP2結合領域(30-43)に相当する合成ペプチドを電気穿孔法により細胞内導入を行ったところ、この領域が細胞の形態維持に必要であることを示唆する結果を得た。
炎症性腸疾患に対する腸管ＩｇＡ抗体の作用機序の解明

近年、腸内細菌の乱れ(dysbiosis)が原因で様々な疾患が誘発されることが知られている。様々な細菌に対して反応し結合するIgA抗体を経口投与することで腸内細菌を制御しdysbiosisを改善できると考えた。そこで、マウスの小腸粘膜固有層に存在するIgA産生細胞からハイブリドーマ細胞を作製した。様々な腸内細菌に対して反応し強く結合するW27抗体を獲得した。Dysbiosisが起きて炎症性腸疾患様の腸炎が発症しているマウスや腸炎モデルマウスにW27抗体を経口投与することで腸炎の改善が確認できた。年次研究計画に従い、ヒトの炎症性腸疾患の患者と健常人の糞便からポリクローナルIgA抗体を単離した。単離したポリクローナルIgA抗体を用いて細菌に対する結合力を比較したところ、炎症性腸疾患の患者糞便由来のIgA抗体に比べ、健常人糞便由来のIgA抗体は大腸菌やPseudomonas fulvaに対して強く結合していた。しかし、プロバイオティクスとして使われるLactobacillus caseiやBifidobacterium bifidumに対しては患者糞便由来のIgA抗体と健常人糞便由来のIgA抗体の結合に差はなかった。この結果から、炎症性腸疾患の患者の腸管IgA抗体は健常人に比べ腸炎を誘発する細菌に対する結合力が弱いために腸内細菌叢のバランスが崩れ炎症性腸疾患が起きている可能性が示唆された。さらに、ヒトの腸管由来のIgA産生ハイブリドーマの作製にも成功した。問題点として、ハイブリドーマ作製の効率が悪く、多くの種類のハイブリドーマの作製ができなかった。この問題を解決するためにヒトの腸管からハイブリドーマを作製するのではなく、ヒトの腸内細菌叢を移植した無菌マウスの腸管からIgA産生ハイブリドーマを作製し、作製したIgA抗体を用いて研究を行っていく。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
小児ネフローゼ症候群における小胞体ストレスの分子生物学的検討

本研究の目的は、小児ネフローゼ症候群における小胞体ストレスの有無を明らかにし、その病態に関与していることを証明することである。本研究では小児ネフローゼ症候群において小胞体ストレスの存在を確認した。さらに、シクロスポリン使用後で小胞体ストレス関連因子の有意な増加を認めシクロスポリンが小胞体ストレスを引き起こすことが分かった。またアポトーシス関連因子がシクロスポリン治療後に有意な増加を認め、シクロスポリンは小胞体ストレスを介してアポトーシスを誘導していることが示唆された。ネフローゼ症候群で、糸球体係蹄壁のバリア機能が破綻し、タンパク尿が発現する機序はほとんど解明されていない。特発性ネフローゼ症候群を含む後天性腎疾患では、細胞膜に存在するべきネフリンの細胞質内異常蓄積現象が確認されており、小胞体ストレスによるネフリンの輸送障害、病的細胞質内蓄積によると推測されている。しかし、これまでのところヒトにおける後天性腎疾患での小胞体ストレスの有無の検討はなされておらずご今回小児ネフローゼ症候群における小胞体ストレスの有無を明らかにすることを具体的な目的とする。今年度は臨床的に得られた腎生検検体を用いるための倫理審査を完了し、症例の蓄積を行った。小胞体ストレス応答としてUPR(unfolded protein response)により活性化される分子シャペロンGRP78とGRP94の発現の検討をタンパクレベルで検討し、ネフローゼ症候群における異常を確認した。今後、小胞体ストレスを示すネフリンの局在をネフリン抗体により検討し、さらにネフリンの合成状況をRT-PCR法により検討する。UPR(unfolded protein response)により活性化される分子シャペロンを遺伝子レベルでも検討する。また、小胞体関連分解に重要なユビキチン化を抗ユビキチン抗体で検出する。さらに、小胞体ストレス関連としてアポトーシスを評価すると共に、抗活性型caspase-3抗体、抗caspase-12抗体を用いてアポトーシスの状態を検討する。しかし、これまでのところヒトにおける後天性腎疾患での小胞体ストレスの有無の検討はなされておらず、今回小児ネフローゼ症候群における小胞体ストレスの有無を明らかにすることを具体的な目的とする。今年度の新たな知見として薬剤使用との関連が示唆されており、臨床上特に有用と考えられる。小胞体ストレス応答としてUPR (unfolded protein response)により活性化される分子シャペロンGRP78とGRP94の発現の検討をタンパクレベルで検討し、ネフローゼ症候群における異常を確認した。UPR (unfolded protein response)により活性化される分子シャペロンを遺伝子レベルでも検討する。また小胞体関連分解に重要なユビキチン化を抗ユビキチン抗体で検出する。

さらに小胞体ストレス関連としてアポトーシスを評価すると共に、抗活性型caspase-3抗体、抗caspase-12抗体を用いてアポトーシスの状況を検討した。
国際標準化に向けたeラーニング品質保証査定方法と基準の研究

本課題は、eラーニングや遠隔教育の品質保証における査定方法および査定基準の記述データモデルを開発するとともに、国際的なレベルでの研究環境の下、国際標準化機構(ISO)を通じてその成果を国際的に普及することを目標とした。本課題での主な活動は、eラーニングや遠隔教育を含めた学習技術に関する海外の標準化団体との共同プロジェクトとして進めてきた。具体的には、D-Learn(ドイツのeラーニング団体)およびEFQUEL(欧州のeラーニングの品質保証推進団体)およびKERIS(韓国の国立教育研究所)と共同研究をおこないながら、ISO/IEC-SC36(国際標準化団体学習技術標準化委員会)との活動方針と連携させる形で進めた。2006年度での成果としては以下の4つをあげるとともに、具体的な論文・報告書を追記しておく。1)研究代表者は、ISO/IEC-SC36での品質保証における査定方法および査定基準の記述モデル規格の開発責任者であるため、当該委員会を運営してきたことといえる。標準規格の作成に向けて年2回の総会と年2回の中間会議、メールでの討議を主導してきた。その結果、2)ISO/IEC-SC36ワーキングドラフト(WD)を7月に作成した。その後、議論し修正を重ね3)ISO/IEC19796-3Quality management, assurance and metrics-Part3 Reference methods and metricsとして委員会ドラフト(CD)を11月に作成した。さらに、この委員会ドラフトは2月に投票がおこなわれ、140に及ぶ各国からの修正コメントが寄せられ、4)3月に修正コメントに対する修正案を作成した。次年度は継続的に変更・修正をおこない、正式な成果としてISO規格に向けて、共同研究をおこなっていく。研究論文としての成果平田謙次,2006,スキルマネジメントに向けた能力情報のモデリング.教育システム情報学会大会論文誌本課題は、eラーニングや遠隔教育の品質保証における査定方法および査定基準の記述データモデルを開発するとともに、国際的なレベルでの研究環境の下、国際標準化機構(ISO)を通じてその成果を国際的に普及することを目標とした。具体的には、D-Leam(ドイツのeラーニング団体)およびKERIS(韓国の国立教育研究所)と共同研究をおこないながら、ISO/IEC-SC36(国際標準化団体学習技術標準化委員会)との活動方針と連携させる形で進めた。2006年度までにISO/IEC 19796-3Quality management, assurance and metrics-Part3 Reference methods and metricsを委員会ドラフト(CD)を作成し、国際公表の結果、次の段階に進めることが決まっていた。
中耳真珠腫上皮におけるCD_<40>の表出について

中耳真珠腫は、感染により病巣が拡大し、隣接骨組織を破壊する。これには何らかの刺激を受けて真珠腫上皮が増殖したり、上皮からのサイトカン産生が促されるなどの機序が考えられている。その際の真珠腫上皮に対する刺激として、Tcellなどの浸潤してくる炎症細胞が考えられる。今回は、真珠腫上皮とTcellとの細胞間相互作用に注目し、真珠腫上皮におけるCD40の表出についてin vivoでの検討をした。真珠腫組織は4人の中耳真珠腫患者より手術に採取した。患者はいずれも男性で、平均年齢は37才であった。PLP固定をした真珠腫組織から6μmの凍結切片を作製し、抗CD40モノクローナル抗体を用いてAPPAP法による免疫染色を行った。4例中2例の真珠腫上皮ではCD40陽性であった。しかし他の2例では染色性が認められずこれらの真珠腫上皮はCD40陽性例の上皮に比べて増殖像に乏しかった。これにより真珠腫上皮にCD40が表出している可能性が示唆されたが、現時点では例数が少なく、今後例数を増やす予定である。また、真珠腫上皮におけるCD40の表出がどのような意味を持つのか、例えば、上皮の増殖を促すのか、GM-CSFやIL-1、TNFなどのサイトカインの産生を促すのかなどを調べる必要があるため、真珠腫上皮の培養によるin vitroの実験を現在行っている段階である。
II-VI族半導体微粒子に閉じ込められた不純物電子状態の局所領域発光による解析

1.表面および超微粒子の局所物性の測定を目的として、STM像、発光像およびSTSの3種類の同時測定が可能な、ナノメータスケールトンネル発光2次元像測定装置を製作した。これは、自作のデジタル制御トンネル顕微鏡(STM)を拡張し、トンネル電流が流れることによりSTMの探針先端で発光する極微弱光を分光、検出し、その発光強度を画像化できるようにした装置である。これにより、STMによる幾何学構造と発光像を直接比較することができ、発光機構と構造の詳細な関係を研究することができるようになった。これはわが国で初めて実現されたものである。さらに、発光した光を分光して、その強度の2次元像すなわちスペクトル分解トンネル発光像を得ることにも、世界で初めて成功した。これを用いて貴金属(Au,Ag)微粒子薄膜におけるトンネル発光像を測定した。これにより、微粒子の頂上と端では異なる発光スペクトルを示すことが明らかになった。このことより、トンネル発光の原因となる表面局所プラズモンのスペクトルはSTM探針および表面微粒子の幾何学構造によってきまることが明らかとなった。また、発光は微粒子の表面状態及び微粒子の種類にも依存することが示され、このトンネル発光像測定法は表面の化学分析にも有用であることが示された。2.II-VI族半導体微粒子の電子状態をトンネル発光で解析するための基礎研究として、CdSマイクロクラスターを溶液法により作製しその光学特性の測定を行った。これにより、サイズが10から16ÅのCdSマイクロクラスターをサイズをコントロールして作製することができた。そして、その可視光吸収スペクトルの測定により、CdSクラスターの電子状態はクラスターサイズに依存することを示した。これは、クラスターに閉じこめられた電子のサイズ効果として解釈できた。1.ナノメータスケールでの局所空間分解電子状態を解析するために、局所分光型トンネル顕微鏡(STM)を開発した。トンネル顕微鏡は、種々の分光装置への拡張性を高くする必要があるので、全ての制御方式としてデジタル制御を採用し製作した。局所領域分光の方法としては、ナノメータスケールの分解能でトンネル電流対トンネルバイアス電圧依存測定をできるようにし、STM探針先端近傍での局所電子状態密度を解析できるように製作した。また、トンネル過程に伴う探針先端での発光測定も可能にした。さらに、清浄表面の解析を行うため、超高真空装置を製作し、これらの分光型STMを超高真空装置に設置し動作するようにした。2.II-VI族化合物半導体の微粒子作成の成長機構の基礎として、CdS薄膜を水素プラズマスパッタリング法により作成し、膜成長機構の研究を行った。膜成長速度、微粒子サイズ、格子定数、組成比などの、プラズマ密度依存性を解析することにより、化学量論的なCdS薄膜は、CdS分子が表面反応で生成されるのではなく、プラズマ気相中で生成されることを明らかにした。ただし、これにはプラズマ密度が高いことが必要であり、プラズマ密度が低い場合化学量論的なCdSは成長しないことが明らかになった。3.II-VI族半導体微粒子の粒子サイズを制御するために、水素プラズマスパッタリングによるSi膜成長素過程の制御に関する研究を行った。膜成長においては、プラズマ密度及び入射粒子束に依存して膜成長過程とプラズマエッチングの相反する過程が共存することを明らかにした。

これにより、STMによる幾何学構造と発光像を直接比較することができ、発光機構と構造の詳細な関係を研究することができるようになった。これはわが国で初めて実現されたものである。さらに、発光した光を分光して、その強度の2次元像すなわちスペクトル分解トンネル発光像を得ることにも、世界で初めて成功した。これを用いて貴金属(Au、Ag)微粒子薄膜におけるトンネル発光像を測定した。これにより、微粒子の頂上と端では異なる発光スペクトルを示すことが明らかになった。このことより、トンネル発光の原因となる表面局所プラズモンのスペクトルはSTM探針および表面微粒子の幾何学構造によってきまることが明らかとなった。また、発光は微粒子の表面状態及び微粒子の種類にも依存することが示され、このトンネル発光像測定法は表面の化学分析にも有用であることが示された。2.II-VI族半導体微粒子の電子状態をトンネル発光で解析するための基礎研究として、CdSマイクロクラスターを溶液法により作製しその光学特性の測定を行った。これにより、サイズが10から16ÅのCdSマイクロクラスターをサイズをコントロールして作製することができた。そして、その可視光吸収スペクトルの測定により、CdSクラスターの電子状態はクラスターサイズに依存することを示した。これは、クラスターに閉じ込められた電子のサイズ効果として解釈できた。
格差是正に向けた生涯学習施策の論理と戦略に関する調査研究

本研究は文化や学習環境の格差是正に向けた生涯学習施策の論理と戦略を究明するものである。その際に着目したのは“定住自立圏構想“である。同構想は暮らしの満足度を高め定住や移住を促進するものであるが、その政策過程には“学習"が深く介在しているからである。考察からは生涯学習施策の供給主体の多様化とともに供給方法の多様化が看取され、従来の「講座」「教室」とは異なり住民に対する情報提供や協働の実践、地域社会の形成という過程のなかに学習の要素を内在させることで、生涯学習施策が日常生活そのもののデザインへと変容し、様々な格差是正の取組がなされていることを明らかにした。本研究「格差是正に向けた生涯学習施策の論理と戦略に関する調査研究」は、「知の循環型社会」の構築を目指す一連の生涯学習施策にあって、知や文化を巡る地域間格差および個人間格差がいかなる論理と戦略によって是正されようとしているのかを究明するものである。2年度目となる平成24年度は、以下のような研究を行った。計画「I.生涯学習施策や成人学習に関する理論研究」については、昨年度に引き続き書籍や関連資料によって、昨今の生涯学習施策の動向について情報を収集し、理解を深めた。また、成人学習に関しても、引き続き、近年注目されているワークショップに関してその手法や効用などについて研究をすすめた。計画「II.地方自治体行政に関する理論研究」については、知や文化を巡る地域間格差および個人間格差を是正するために、地方自治体がいかなる取組を行っているのかについて、書籍や関連資料などによって情報を収集した。とりわけ24年度は、引き続き総務省が推進する定住自立圏構想に着目し、その理念や制度設計について研究するとともに、子育て支援行政の計画化・総合化のなかで、生涯学習関連NPOがいかなるかたちで公的支援に関わっているかについて検討した。計画「III.先進自治体の調査研究」については上記ですすめた研究を実態レベルで検証する目的から、広範な取り組みを体系的に行う「みのかも定住自立圏」の実態調査を行うとともに、子育て支援に関する格差是正の実態については多くのNPOが行政と協働する福岡市の実態調査を行った。こうした研究を進めるなかで得られた成果の一部については、日本教育制度学会第20回大会における課題別セッションや各種の研究会で発表を行った。最終年度となる平成25年度は、以下のような研究を行った。計画「I.生涯学習施策や成人学習に関する理論研究」については、昨年度までと同様に書籍や関連資料によって、昨今の生涯学習施策の動向について情報を収集し、理解を深めた。また、成人学習に関しても、教育主体を持たない学習促進の手法として、引き続き近年注目されているワークショップに関してその効用などについて研究をすすめた。計画「II.地方自治体行政に関する理論研究」については、知や文化を巡る地域間格差および個人間格差を是正するために、地方自治体がいかなる行政手法を開発し施策を行っているのかについて、書籍や関連資料などによって情報を収集した。計画「III.先進自治体の調査研究」については上記ですすめた研究を実態レベルで検証する目的から、自治体の教育関連施設を自治体出資法人とNPOの共同事業体によって運営する川崎市事例について実態調査を行った。こうした研究を進めるなかで得られた成果の一部については、日本教育制度学会編『現代教育制度改革への提言』(下)東信堂における執筆などで公表した。また、3カ年を通しての研究成果に関しては平成26年度に開催される日本教育学会でのラウンドテーブルや日本教育制度学会の課題別セッションなどで報告する予定である。初年度となる平成23年度は、以下のような研究を行った。計画「I.生涯学習施策や成人学習に関する理論研究」については、書籍や関連資料によって、昨今の生涯学習施策の動向について情報を収集し、理解を深めた。また、成人学習に関しては、近年注目されているワークショップに関して、その手法や効用などについて研究をすすめた。とりわけ23年度は、総務省が推進する定住自立圏構想に着目し、その理念や制度設計について研究するとともに、同構想に取り組む全国すべての圏域についてホームページなどによって情報収集を行った。

計画「III.先進自治体の調査研究」については上記ですすめた研究を実態レベルで検証する目的から、多くのワークショップを実施し施策実施の過程に住民意向を反映させようとつとめる埼玉県三郷市や、定住自立圏構想をすすめる北海道小樽市を訪問し、しりべし地区における生涯学習機会の充実方策についてを調査した。こうした研究を進めるなかで得られた成果の一部については、日本教育制度学会第19回大会課題別セッションで発表を行うとともに、研究代表が所属する琉球大学生涯学習教育研究センターが発行する研究紀要『生涯学習フォーラム』第6号に論文を投稿・掲載した。研究はおおむね順調に進展しているが、調査対象のひとつであったNPOから実名の使用と決算への言及を差し止められ、公表を見合わせた研究が1件ある。研究はおおむね順調に進展しているが、当初、有力な調査地として計画をしていた宮城県石巻市や宮崎県都城市など自然災害に見舞われた地域があり、調査地選定などにおいて若干の軌道修正があった。平成25年度は、引き続きI.生涯学習施策や成人学習に関する理論研究、II.地方自治体行政に関する理論研究、III.先進自治体の調査研究の3本立てで研究を遂行するとともに、最終年度として、これまでの研究を総括する。平成24年度も、引き続きI.生涯学習施策や成人学習に関する理論研究、II.地方自治体行政に関する理論研究、III.先進自治体の調査研究の3本立てで研究を遂行する。IIIに関しては、定住自立権構想に取り組む圏域の他、個人間格差の是正施策という観点から注目される子育て支援の総合化の動向についても留意する。物品費としては書籍・資料を購入するとともに、集積した画像・音声データの整理・編集に必要な機材を購入する。旅費に関しては、当該研究の関心から注目される自治体への調査訪問の他、成果発表および情報収集のため各種関連学会に出席する。人件費・謝金、その他の経費に関してはいまのところ計画していない。物品費としては書籍・資料に加え、映像や音声資料の収集・保存のためビデオカメラやボイスレコーダなどを購入する。
抑制系免疫反応除去に注目した近未来的メラノーマ免疫治療法の基礎構築に関する研究

本研究により、マウスTreg細胞特異的または優位に発現している分子をcDNAサブトラクション法により32個を見出し、その中から細胞膜ドメインを持つ候補分子を6個を同定した。同様の方法により、ヒトTreg細胞特異的またはTreg細胞優位に発現している分子51個から、13個の細胞膜候補分子を同定した。ヒトTreg細胞特異的な13個の細胞表面分子については、in vitro translation法による全長タンパク質の精製、細胞外ドメインよりマウスシークエンスとホモロジーを持たない部位から選択した抗原性の高いペプチドとKLHとの結合体の作製、His-tag遺伝子を挿入した各種cDNAプラスミドのBALB/c3T3導入株の作製などを行い、それら免疫原のマウスへの免疫によるポリクローン抗体作製、免疫マウス脾細胞とミエローマ細胞との融合による単クローン抗体の作製作業をほぼ終了している。上記新規Treg細胞表面分子に特異的な抗体を用いたTreg細胞除去と、腫瘍関連抗原ペプチドを用いた抗メラノーマCTL誘導法の併用による実験的がん免疫治療法の実施に先だって、まず初期的に抗γδTCR抗体や抗CD25抗体投与による抑制性細胞除去またはTreg細胞活性抑制性の天然薬物(シジュウム)の経口投与と、TRP-2ペプチドによる経皮免疫療法との併用療法を行った。結果、B16メラノーマ細胞をB6マウスに移植後5日目における経皮免疫療法と抑制性細胞除去(抗γδTCR抗体または抗CD25抗体投与)の併用療法、またはシジュウム経口投与マウスへのB16メラノーマ細胞の移植後5日目に経皮免疫療法を行う併用治療では、経皮免疫効果と抑制細胞除去による抑制除去効果による強い相乗効果が観察された。抗γδTCR抗体投与または抗CD25抗体投与と経皮的TRP-2免疫法の併用療法では、それぞれ30%または5%程度のマウスで完全なB16腫瘍退縮が観察された。以上より、本研究で同定された抑制性細胞表面分子特異的抗体を用いた抑制性細胞の効果的な除去と抗腫瘍CTL誘導法との併用療法によるメラノーマ免疫治療法は、今後の有力なメラノーマ免疫治療法になりうる可能性が浮上した。本年度研究では抑制系細胞として調節性T細胞(Tr細胞)に注目し、その特異的細胞表面分子の同定に関する基礎研究とCD25陽性細胞除去と経皮免疫法を組み合わせたメラノーマ免疫治療法の基礎実験をマウスを用いて行った。Tr細胞特異的な細胞表面分子の同定には、cDNAサブトラクション法とRNAアプタマーによる同定を行うことを考えており、その材料となる細胞をDO11.10マウスの脾細胞からOVA特異的な抗原刺激により分化誘導させ作製した。Tr細胞はIL-10とOVAペブチドを用いた培養で誘導し、現在そのハイブリドーマを作製中である。コントロールであるTh1細胞はCD45RB+脾細胞をIL-2,IL-12,anti-IL4 mAb, OVAペプチドを用いて分化増殖させ、Th2細胞はCD45RB+脾細胞をIL-2,IL-4,anti-IL-12 mAb, OVAペプチドを用いて分化増殖させた。現在それらのハイブリドーマも作製中である。一方、抗CD25抗体投与(500μg/mouse)による抑制性細胞除去とTRP-2ペプチド(100μg/ml/4cm^2)による経皮免疫療法(耳翼と腹部TS後24h以内の塗布)の併用についての基礎的研究では、まずB16メラノーマ細胞をB6マウスに移植後1週間目における経皮免疫療法と抑制性細胞除去の併用を行ったが、この時期の併用治療では経皮免疫効果と抑制細胞除去による抑制除去効果の相乗効果が見られ、どちらか一方だけの治療法または無処理のコントロールよりも明らかな腫瘍増殖抑制が見られ、30%程度のマウスで完全な腫瘍退縮が観察された。ところが移植20日目における併用ではCD25+細胞除去操作による効果は全く見られず、経皮免疫法による腫瘍増殖抑制が低頻度(15%)で見られるに留まった。今後は増殖期にある腫瘍の担がんマウスで起こる免疫抑制細胞の動態を詳細に観察すること、さらにTr細胞特異的分子が同定されれば、それを用いた抑制性細胞除去効果についても検討を行いたい。マウスのTr,Th1,Th2細胞は、DO11.10脾細胞をrIL-2,rIL-10,OVA323-339ペプチド刺激により、Do11.10脾臓CD 45RB+細胞をrIL-2,rIL-12,anti-IL-4mAb,OVA323-339ペプチド誘導により、DO11.10脾臓CD45RB+細胞をrIL-2,rIL-4,anti-IL-12mAb,OVA323-339ペプチド誘導によりそれぞれ作製した。またヒトTr,Th1,Th2細胞は、末梢血リンパ球のrIL-2,TGF-βとSEB刺激により、末梢血リンパ球CD45RA+細胞のrIL-2,rIL-12,anti-4mAb、SEB誘導により、末梢血リンパ球CD45RA+細胞のrIL-2,rIL-4,anti-12mAb、サリドマイド、PHA誘導によりそれぞれ作製した。作製されたマウスTr細胞cDNAからマウスTh1+Th2細胞cDNAをcDNAサブトラクションにより除き、クローニングした後DNAシークエンスを行った。同様にヒトTr細胞cDNAからヒトTh1+Th2細胞cDNAをcDNAサブトラクション法により除き、クローニング後DNAシークエンスを行った。