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TAR症候群原因遺伝子産物Y14におけるリン酸化制御解析

Y14(RBM8A)遺伝子の発現低下は、橈骨欠損血小板減少症(TAR症候群)の原因として知られている。この遺伝子がコードするタンパク質は、中央領域に保存されたRNA認識モチーフを、そしてN末端に核局在化シグナルを持っている。Y14は、他の因子とともにスプライシングと共にmRNA分子上に形成されるExon Junction複合体の一員である。本研究では、特にY14に存在する2カ所のセリンのリン酸化制御を中心として成果を発表してきたが(Scientific Reports, 2018)、2018年度は、Y14と細胞内で安定に結合してヘテロダイマーを形成するMagohについても解析を行ない、両者の複合体形成がそれぞれのタンパク質レベルでの安定性に寄与していることを明らかにすることができた。この結果は、2013年に申請者がExperimental Biology and Medicine誌において報告した、培養細胞におけるノックダウン実験の結果ともよく一致した。研究の成果はBiochemical and Biophysical Research Communications誌に発表できた。また、Y 14の局在解析を電子顕微鏡レベルで実施していることで、mRNA結合因子Upf2との共局在からmRNAの構造を観察する手法を提案し、Microscopy Research and Technique (MRT)誌に公表することができた。さらに、リン酸化変異体の発現が腫瘍の悪性化に関与する可能性を薬剤誘導系の構築とともに進めており、今後解析を進めて行く予定である。また、マウスを用いたインビボでの変異体作成も進行中である。Y14の細胞内制御の解析については概ね順調に進展している。さらにリン酸化の意義については細胞内局在について解析を進め、特に免疫電顕の手法を発展させて細胞内オルガネラにおける局在を詳細に解析している。また、生理学的な意義の解析には変異体の発現系構築が重要であり、薬剤誘導系を構築して腫瘍の悪性化への関与を検討している。以上のように動物モデルでの解析も含めて順調に進展している。今後は、予定通り以下の2点について検討を進める。第1にリン酸化の役割をインビボで解明するために、リン酸化変異マウス作製を進めるとともに、リン酸化部位に変異を持つ細胞系を構築する。第2に、リン酸化変異体発現の影響をヒト培養細胞内で分子レベルにて解析することによりリン酸化の持つ細胞内機能を明らかにする。以上よりY14のリン酸化制御について生体内での役割や病態への関与について新たな知見を加え、この研究の出発点である、Y14がどうしてリン酸化を受ける必要があるのかを明らかにしていきたい。TAR症候群(Thrombocytopenia absent radius syndrome)は、血小板減少と橈骨の欠損を特徴とする劣性の遺伝疾患である。原因遺伝子はY14(RBM8A)と呼ばれるRNA結合因子であるが、2箇所のリン酸化セリンを持っている。本研究では、Y14のリン酸化が生体にどのように寄与するのかを分子、細胞、個体レベルで明らかにしていくことを目指している。Y14はSRタンパク質と同様にRRMとC末端のRS繰り返し配列から構成されており、C末端のRS繰り返し配列はリン酸化修飾を受けることが知られてきた。本研究では、GFPタグで標識した様々なY14変異体を発現させることにより、特に細胞内局在におけるリン酸化が果たす役割を解明することに成功した。具体的には、C末端領域の欠失変異体またはセリンからアラニンへの変異体は、転写領域である核質領域からリボソーム合成の場である核小体へ局在が移行することが明らかとなった。さらに、C末端RS反復含有配列自体が核小体局在化することが明らかとなった。また、Y14のC末端領域による局在の調節は、結合因子MAGOH結合によって制御されることを明らかにした。以上より、Y14の細胞内局在が、以前に報告されたN末端局在化シグナルだけでなく、Y14の166および168番目のセリンのリン酸化部位およびMAGOHとの結合を介したC末端RS反復含有領域によっても調節されることを実証した(Tatsuno & Ishigaki, Sci Rep 2018)。また、ヒト細胞においては大部分のY14分子がリン酸化されているが(Ishigaki et al.,Exp Biol Med 2015)、マウスモデル作成にあたって予備的に解析したところマウス細胞内においてもヒト培養細胞と同様に大部分のY14タンパク質がリン酸化されていることを確認した。これまで不明であったY14のリン酸化の役割について培養細胞内においては明らかにすることができた。また、結合因子の探索や、薬剤誘導による強制発現系も構築を済ませている。前者については、共沈殿してくるタンパク質について予備的な質量分析を実施してきたが、感度が低いことが共同研究者より問題として指摘されている。このためY14タンパク質と共局在するタンパク質をビオチン化して検出する系も構築し、結合タンパク質の解析、同定を進めている。ただし、よく知られている結合因子であるMagohは核小体に局在するY14タンパク質とは結合していないと考えている。一方薬剤誘導による強制発現系についても実験系を構築するとともに、下流の遺伝子発現についても検討を進めており、Y14の新たな役割を解明していく予定である。また、遺伝子改変マウスの作出についてもベクター系の構築を進めており、予備的な実験からマウスにおいてもヒトと同様にリン酸化が生じていることを明らかにした。以上より概ね順調に進捗していると判断した。Y14(RBM8A)

遺伝子の発現低下は、橈骨欠損血小板減少症(TAR症候群)の原因として知られている。この遺伝子がコードするタンパク質は、中央領域に保存されたRNA認識モチーフを、そしてN末端に核局在化シグナルを持っている。Y14は、他の因子とともにスプライシングと共にmRNA分子上に形成されるExon Junction複合体の一員である。本研究では、特にY14に存在する2カ所のセリンのリン酸化制御を中心として成果を発表してきたが(Scientific Reports, 2018)、2018年度は、Y14と細胞内で安定に結合してヘテロダイマーを形成するMagohについても解析を行ない、両者の複合体形成がそれぞれのタンパク質レベルでの安定性に寄与していることを明らかにすることができた。この結果は、2013年に申請者がExperimental Biology and Medicine誌において報告した、培養細胞におけるノックダウン実験の結果ともよく一致した。研究の成果はBiochemical and Biophysical Research Communications誌に発表できた。また、Y 14の局在解析を電子顕微鏡レベルで実施していることで、mRNA結合因子Upf2との共局在からmRNAの構造を観察する手法を提案し、Microscopy Research and Technique (MRT)誌に公表することができた。さらに、リン酸化変異体の発現が腫瘍の悪性化に関与する可能性を薬剤誘導系の構築とともに進めており、今後解析を進めて行く予定である。また、マウスを用いたインビボでの変異体作成も進行中である。Y14の細胞内制御の解析については概ね順調に進展している。さらにリン酸化の意義については細胞内局在について解析を進め、特に免疫電顕の手法を発展させて細胞内オルガネラにおける局在を詳細に解析している。また、生理学的な意義の解析には変異体の発現系構築が重要であり、薬剤誘導系を構築して腫瘍の悪性化への関与を検討している。以上のように動物モデルでの解析も含めて順調に進展している。今後は、予定通り以下の3点について検討を進める。第1にリン酸化の役割をインビボで解明するために、リン酸化変異マウスを作製する。第2にスクリーニングされたY14結合因子の細胞内機能解析を行う。第3にリン酸化変異体発現の影響をヒト培養細胞内で分子レベルにて解析するとともに、核小体局在が細胞へ与える影響を分子レベルで明らかにする。以上よりY14のリン酸化制御に新たな知見を加えるとともに、Y14やEJC因子の持つ機能について検討を進めていきたい。今後は、予定通り以下の2点について検討を進める。第1にリン酸化の役割をインビボで解明するために、リン酸化変異マウス作製を進めるとともに、リン酸化部位に変異を持つ細胞系を構築する。第2に、リン酸化変異体発現の影響をヒト培養細胞内で分子レベルにて解析することによりリン酸化の持つ細胞内機能を明らかにする。
抗生物質カプリマイシンA3の全合成に基づくDNAとの高次構造複合体形成機構の解明

抗生物質カプリマイシンA3は、顕著な抗腫瘍活性と多彩な官能基を有した高次構造を持つ天然物である。カプリマイシンA3はDNAおよびDNAグループ内に位置する水分子の三者からなる高次構造複合体を形成し、DNAを極めて効率よくアルキル化する。DNAと効率よく高次構造複合体を形成し、DNAをアルキル化するために必要なカプリマイシンA3の構造を明らかにすることにより、DNAと高効率で高次構造複合体を形成する有機分子、即ち新規抗ガン剤の分子設計に貴重な知見を提供出来るものと考えた。平成9年度は、カプリマイシンA3の全合成研究を強力に推進した。全合成を早期に達成するために、ABCD環部分をA環部分で二つのユニットに分ける逆合成経路を採用した。即ち、BCD環部分に相当するアルデヒドユニットと、将来A環構築の手がかりとなるアセチレン構造を持つ光学活性なビニルエポキシド側鎖をカップリングした後、本研究者が開発したエチニルケトンの6-エンドダイゴナル環化反応をケトンに用いてA環の構築を行った。一方、両対称体が容易に入手出来るリンゴ酸から山口等により報告されている方法を用いてCD環部分を構築した後、酢酸ユニットを二分子導入後環化、酸化段階を調節してBCD環アルデヒドへ誘導した。アセチレン構造を持つ光学活性なビニルエポキシド側鎖ユニットは、市販されている(Z)体アリルアルコールの不斉エポキシ化、もしくは同じく市販されている(E)体アリルアルコールの不斉ジヒドロキシル化反応と光延反応の組み合わせにより合成した。
オンラインによる元素分析受付システムの確立

職業や災害に伴いヒトは肺内に様々な異物を吸入します。肺内に粉じんとして沈着すると特徴的な生体反応をおこします。診断のために肺組織を調べることがあります。この際の病理標本から、沈着した粉じんを元素レベルで分析する方法が、肺組織の元素分析です。限られた研究機関でしかできない解析ですが、インターネット上に元素分析照会用ホームページを立ち上げて、分析依頼を受付けるシステムを構築しました。特別な設備をもたない一般病院からの依頼も可能です。3年間に45件の問い合わせがあり、41症例の元素分析を行いました。原因不明の肺疾患や職業・災害などでおこる肺疾患の原因究明・鑑別診断に役立つと思います。元素分析をオンラインで受け付けるホームページを開設して、国内外の肺組織の元素分析を行ってきました。研究目的には、「特殊な設備をもたない国内外の一般医療機関からの元素分析の依頼を積極的に受付け、原因不明の呼吸器疾患について、診断・治療に役立ててたい」という主旨でした。元素分析には、波長分散型電子線マイクロアナライザーを使用して、病理組織と対比して詳細な解析を行い、分析結果を依頼先に返送しています。平成26年は、16件の元素分析のご依頼がありました。いずれも国内からですが、依頼先は大学病院など特定機能病院に限らず、一般病院からの依頼も6件含まれておりました。また直接分析の依頼ではありませんが、元素分析についての問い合わせも5件あり、少しずつ国内の呼吸器科医に認知されてきています。分析により、タングステンが肺組織内の線維化部位に証明され、超硬合金肺と診断された症例が1件あります。また、分析の結果大量のケイ素が検出され、間接曝露に伴う珪肺と診断された症例もありました。平成27年度は、さらに元素分析を広めて、分析により診断が可能な症例、病態の解明に役立つ疾患の解析など行っていく予定です。超硬合金肺、珪肺、アルミニウム肺、インジウム肺などが疑われる症例を分析・診断していきます。最近では、自己免疫性肺胞蛋白症に元素分析を応用しており、肺胞マクロファージに含まれる元素の解析を行いたいと思います。電子線マイクロアナライザーは、鮮明な組織像の中に、元素の存在部位が明瞭に同定できる利点があります。免疫組織化学との組み合わせにより、各種のスカベンジャー受容体や炎症物質と、吸入された元素と細胞との関係を研究したいと考えております。元素分析をオンラインで受け付けるホームページを作成して、国内外の肺組織の元素分析を行ってきました。研究目的には、「特殊な設備をもたない国内外の一般医療機関からの元素分析の依頼を積極的に受け付け、原因不明の呼吸器疾患について、診断・治療に役立てたい」」という主旨でした。平成26年度は、16件の元素分析のご依頼がありました。いずれも国内からですが、依頼先は大学病院など特定機能病院に限らず、一般病院からの依頼も6件含まれていました。また、直接分析の依頼ではありませんが、元素分析についての問い合わせも5件あり、少しずつ国内の呼吸器科医に認知されてきています。分析により、タングステンが肺組織内の線維化部位に証明され、超硬合金肺と診断された症例が1件ありました。平成27年度は14件の元素分析のご依頼があり、国内の医療機関からでした。このうち10例は一般病院からで、5例はホームページの検索から初めて依頼を頂いた施設でした。超硬合金肺と診断された症例も5例あり、職歴との関連を明らかにすることができました。自己免疫性肺胞蛋白症に元素分析を応用して、肺胞マクロファージに含まれる元素の解析も開始しており、一部の結果を2015年米国胸部疾患学会で報告致しました。電子線マイクロアナライザーは鮮明な組織像の中に、元素の存在部位が明瞭にできる利点があります。超硬合金肺、珪肺、アルミニウム肺、インジウム肺、あるいは従来報告されていない元素による肺疾患をなどオンラインで受け付け、分析を続けたいと考えています。オンラインでの元素分析受付システムが稼働しており、分析依頼・結果の返送など、面倒な手続きが簡略化されている。元素分析の依頼・問い合わせは、呼吸器科医のみならず病理診断を担当されている先生からも複数あり、元素分析という解析方法が少しずつ認知されてきている。元素分析をオンラインで受け付ける照会用フォームを作成して、国内外の肺組織の元素分析を行ってきました。研究目的は「特殊な設備をもたない国内外の一般医療機関からの元素分析の依頼を受け付け、原因不明の呼吸器疾患について、診断・治療に役立てたい」という主旨でした。平成28年度には13件の元素分析の問い合わせがあり、いずれも国内の医療機関からでした。実際に11件の分析を行い、このうち3例はホームページ上の検索から初めて依頼を頂いた施設でした。平成26年度の16件、平成27年度の14件とあわせて、研究期間を通して合計41件(分析箇所として合計98箇所)の元素分析を行いました。

この中には、特殊な合金による超硬合金肺8例、アルミニウム肺3例、その他じん肺を多数認めました。検出された元素は多彩で、一般的な元素であるシリコン、鉄、アルミニウム、酸素以外にも、タングステン、コバルト、タンタルなどの超硬合金構成成分、ニオブ、ジルコニウム、金、銀、銅、インジウムなど特殊な元素も検出されました。依頼施設は、一般病院26例、大学病院15例で、一般病院の臨床医からの依頼が多く、実際の臨床で役立てて頂きました。元素分析の結果の一部を2017年5月米国胸部疾患学会で報告致しました。電子線マイクロアナライザーは鮮明な組織像の中に、1ミクロンに満たない元素の存在を明瞭にできる利点があり、超硬合金肺、珪肺、アルミニウム肺、インジウム肺、従来報告されていない元素による肺疾患などを解析することに役立っています。日常臨床における原因不明の肺疾患の鑑別として、あるいは間質性肺炎を含む肺疾患の病因について、臨床と研究が一体となった解析手法を国内外に確立することに今回の研究の意義がありました。職業や災害に伴いヒトは肺内に様々な異物を吸入します。肺内に粉じんとして沈着すると特徴的な生体反応をおこします。診断のために肺組織を調べることがあります。この際の病理標本から、沈着した粉じんを元素レベルで分析する方法が、肺組織の元素分析です。限られた研究機関でしかできない解析ですが、インターネット上に元素分析照会用ホームページを立ち上げて、分析依頼を受付けるシステムを構築しました。特別な設備をもたない一般病院からの依頼も可能です。3年間に45件の問い合わせがあり、41症例の元素分析を行いました。原因不明の肺疾患や職業・災害などでおこる肺疾患の原因究明・鑑別診断に役立つと思います。オンラインでの元素分析受付システムが稼働しており、分析依頼・結果の返送など、面倒な手続きが簡略化されている。元素分析に関する問い合わせは、呼吸器内科医のみならず病理診断を担当される先生からもあり、実際に分析を行っている。オンラインによる元素分析受付を継続する。研究会・国内外の学会での発表・出席を通して、肺組織の元素分析の認知度をさらに上げる。免疫組織化学を併用して、元素と細胞相互の病態解明に結びつける。呼吸器内科オンラインによる元素分析受付を継続する。研究会・国内外の学会での出席・発表を通して、肺組織の元素分析の認知度を上げる。次年度使用額が生じた理由は、物品購入において、元素分析に必要なガラスカーボンの購入の2回目を行う前であったこと、免疫染色用抗体用抗体の購入前であったことが関係しております。当該助成金が生じた理由は、いくつかあります。初年度で慎重になったこともあり、前倒しでの物品購入を控えたこと。日程により米国胸部疾患学会など、海外学会への参加を見合わせたこと。免疫組織化学に使用する抗体ついて、選定を行っており、抗体と試薬の購入前であったこと。ガラスカーボンの購入前であったことなどがあげられます。今後の使用計画として、元素分析に使用するガラスカーボンの購入(単価350,000x1回)、免疫組織化学に関わる抗体と試薬の購入、染色(単価29,000x10回)を予定しております。
眼球運動に伴う脳皮質電位の研究

正常人23名、パ-キンソン病患者13名、その他の神経疾患患者15名の眼球運動関連脳電位を検討した。方法は、脳波と眼電図の多チャンネル同時記録を行い、眼球運動開始点をトリガ-点として脳波を加算平均し、saccadeに伴う脳皮質電位を得た。脳波記録は国際10ー20法に準じ、眼球運動は振幅の10°のsaccadeをランダムに4ー5秒に1回反復し、視覚誘発性saccade(VTS)、聴覚誘発性saccade(ATS)、随意性saccade(VS)、暗闇での随意性saccade(VSD)の4種類のタスクのうち、正常者は1ー3種類、パ-キンソン病患者はVTSとVSの2種類を行った。脳波の加算平均はoffーlineで行い、波形をチェックしてア-チファクトのあるものは除いた。分析時間はトリガ-前2.8秒、後1.2秒の計4秒であった。正常人についての結果は、1)眼球運動開始前の緩徐な陰性電位(PSN)はトリガ-前1.8秒から始まり、Czに最大振幅を持ち、振幅は随意性の高いタスク(VS、VSD)における方が、多いタスク(VTS、ATS)におけるより大きく、運動準備電位と考えられた。2)Presaccadic Slow Positivityはトリガ-前90ー170ミリ秒に始まり、VSDでは遅れる傾向にあり、視覚刺激の処理に関与している電位であるとの説に矛盾しなかった。3)Spike Potentialは、saccadeの開始にほぼ一致して見られ、眼筋などに由来すると考えられた。4)λ電位は、VTS、VS、VSDの順に潜時が長く、振幅が小さくなり、視覚誘発電位と考えられた。5)右向き左向きのsaccadeで、PSNは左右の後頭部と前頭眼野部で振幅に左右差を認めた。後頭部で得られたPSNは、視覚刺激に対する準備電位と考えられた。パ-キンソン病では、VSで正常者には全例で見られるPSNが、12例中8例にしか見られず、有意に出現しにくかった。小脳障害患者や一側眼球運動経路の障害例におけるPSNについては結論はまだ得られなかった。随意運動、眼球運動の脳内機序を知るためにまず正常人の眼球運動に伴う脳皮質電位を検討した。方法は脳波と眼電図の多チャンネル同時記録を行い、眼電図をトリガ-として脳波を加算平均し、saccadeに伴う脳皮質電位を得た。脳波記録は国際10-20法に準じ、眼球運動は振幅10°のsaccadeをランダムに4-5秒に1回反復し、visually triggered saccade(VTS),auditory triggered saccade(ATS),voluntary saccade in light(VS),voluntary saccade in darkness(VSD)の4種類のタスクについて各々の脳波の加算平均を行った。分析時間とトリガ-前2.8秒、後1.2秒の計4秒で、少なくとも60回以上の加算平均した。対象は正常人12名(21-71歳)であった。

その結果、眼球運動開始前の緩徐な陰性電位は運動開始前1.7-2.2秒、最大振幅1.6-6.4uVで、VTSでは1/9(11%)、ATSで4/6(67%)、VSで10/12(83%)、VSDで9/9(100%)に見られた。陽性スパイク電位は、運動開始前12-52msecで後頭部に最大振幅を有し、全てのタスクで見られた。ラムダ反応は後頭部優位にトリガ-後120-224msecに最大振幅を有したが、VSDでは見られなかった。これらの電位は垂直性saccadeでも同様に出現し、また、saccadeの振幅の大きさを10°、20°、30°と変化させると緩徐な陰性電位と陽性スパイク電位の振幅に影響を与えるようであった。以上より1)眼球運動開始前の緩徐な陰性電位はVTS、ATSのような随意性の低いタスクより明析、暗所の随意性saccadeでよく出現し、運動準備電位と考えられた。2)ラムダ反応は暗所でのsaccadeでは見られず、視覚誘発電位と考えられた。3)陽性スパイク電位はすべてのタスクで見られたことから眼球運動そのものに関連した電位であると推定された。今後、パ-キンソン病など神経疾患におけるこれらの電位について検討する予定である。前年度、正常人の眼球運動に伴う脳皮質電位を検討し、1)眼球運動開始前の緩徐な陰性電位は随意性の高いタスクで出現し易く運動準備電位と考えられる、2)ラムダ反応は、視覚誘発電位と考えられる、3)陽性スパイク電位は眼球運動そのものに関連した電位であると推定されるなどの結論を得た。本年度は種々の神経疾患患者の眼球運動に伴う脳皮質電位のうち、眼球運動に先行する緩徐な陰性電位について検討した。方法は脳波と眼電図の多チャンネル同時記録を行い、眼電図をトリガ-として脳波を加算平均し、saccadeに伴う脳皮質電位を得た。脳波記録は国際10ー20法に準じ、眼球運動は振幅10゚のsaccadeをランダムに4ー5秒に1回反復し、visually triggered saccade(VTS)、voluntary saccade(VS)の2種類のタスクについて各々の脳波の加算平均を行った。分析時間はトリガ-前2.8秒、後1.2秒の計4秒で、少なくとも60回以上を加算平均した。対象はパ-キンソン病(PD)7名、脊髄小脳変性症(SCD)6名、共同偏視を示した1側脳血管障害(CVD)9名であった。その結果、眼球運動開始前の緩徐な陰性電位の出現は、1)VSTでは正常者で10%、PDで0%、SCDで14%、CVDで44%であった、2)VSでは正常者で83%、PDで43%、SCDで50%、CVDで67%であった、3)CVDでは障害脳へ向かうsaccadeで56%、正常脳へ向かうsaccadeで22%であった。以上より眼球運動開始前の緩徐な陰性電位は、1)神経疾患患者では正常者に比し随意性saccadeで出現しにくかった。2)脳血管障害患者では随意性の低いvisually triggered saccadeでも出現しやすかった。3)PDとSCDとの差は不明であった。4)CVDでは前頭眼野などの神経活動が反映されている可能性が示唆された。今後、これらの神経前年度までのデ-タは、脳波の記録条件と脳波の加算方法に問題があることがわかり、本年度は正常人とパ-キンソン病患者についてデ-タの取り直しを行い、脳波の加算平均は手動で行い、ディスプレイ上で波形をチェックしてア-チファクトのあるデ-タをすべて除いた。対象は正常人23名、バ-キンソン病患者13名であった。方法は、脳波と眼電図の同時記録を行い、眼球運動開始点をトリガ-点として、トリガ-前2.8秒、トリガ-後1.2秒を加算平均し、saccadeに伴う脳皮質電位を得た。
FDP-DD測定試薬の基礎性能および反応性の解析

【研究目的】血中FDP-DDの増加は体内に血栓が存在することを反映するため、臨床的意義が高い検査である。一方、測定試薬の違いにより得られる測定値も異なってしまうという問題点を抱えている。試薬間差を生じさせている主因は、多種多様な分子サイズで血中に存在しているFDP-DD分画と、それらに対し測定試薬中の抗体の反応性が異なることであると考えられている。本研究はFDP-DD測定法の標準化に必要な基礎的データをとることを目的とし、多様性に富んだFDP-DD分画と測定試薬中に含まれる抗体との反応性について解析を実施する。【研究方法】信州大学医学部附属病院でFDP-DDの依頼のあったクエン酸加血漿を対象として、ナノピアDダイマー(以下ナノピア)、リアスオート・Dダイマーネオ(以下リアスオート)、エルピアエースD-DダイマーII(以下エルピア)の三社のFDP-DD測定試薬を用いて測定し、試薬間差を確認した。試薬間で乖離が認められた患者血漿について、ウエスタンブロット法を実施し、その原因を解析した。【研究成果】三社の試薬間の相関関係を評価したところ、リアスオートとエルピアに比べてナノピアが異常高値を示す検体が2.8%認められた。抗フィブリノゲン抗体を用いたウエスタンブロット法によってFDP分画を解析したところ、非乖離検体では高分子量安定化フィブリン分海産物(HMW-XDP)と最小単位であるDD/E分画がバランスよく存在していた一方、乖離検体ではDD/E分画と比較してHMW-XDPが著しく減少していた。この結果より、ナノピアは低分子のFDP-DD分画に対する反応性が高く、一方リアスオートとエルピアはHMW-XDPに反応性が高いと思われた。
アミノアシルtRNA合成酵素複合体のX線結晶構造解析による基質認識,反応機構解明

Achaeoglobus fulgidus由来のアラニルtRNA合成酵素の結晶化と予備的なX線回折実験に成功した.またAlaRSの校正反応ドメインのホモログタンパク質であるAlaXのX線結晶構造を2.7A分解能で決定した.AlaXはNドメインとCドメインの2つからなっていた.Cドメインに亜鉛を結合した校正反応活性部位があり,Nドメイン中の保存されたグリシンに富むループ(glycine-richループ)がその活性部位近くに位置していた.ホスホセリルtRNA合成酵素(SepRS)はホスホセリン(Sep)をtRNA^<Cys>に結合させる.A.fulgidus SepRS・tRNA^<Cys>・ホスホセリンの3者複合体のX線結晶構造を2.6Å分解能で決定した.SepRSはN端伸長領域,アミノアシル化活性ドメイン,挿入ドメイン,C端のアンチコドン結合ドメインの4つの構造要素からなっていた.SepRSは結晶中でホモ4量体を形成し2分子のtRNA^<Cys>を結合していた.ホスホセリン側鎖のリン酸基がアミノアシル化活性ドメイン中で強固に認識されていた.C端のアンチコドン結合ドメインがtRNA^<Cys>のアンチコドンループを認識していた.構造に基づいてアンチコドン認識部位に変異を導入し,サプレッサーtRNA(tRNA^<Opal>およびtRNA^<Amber>)を認識する改変SepRSを創出した.これはコドン表を拡張しホスホセリンを加え,タンパク質翻訳時にホスホセリンを部位特異的に導入する技術に利用可能である.改変SepRS・tRNA^<Opal>・ホスホセリン3者複合体および改変SepRS・tRNA^<Amber>・ボスホセリン3者複合体のX線結晶構造をそれぞれ3.2および3.3A分解能で決定し,改変SepRSによるナンセンスアンチコドンの認識機構を解明した.古細菌Pyrococcus horikoshii由来のロイシルtRNA合成酵素(LeuRS)単独の結晶化、およびX線結晶構造解析に成功した(2.1Å分解能)。それにより古細菌/真核生物型LeuRSは新規のタイプ3の校正反応ドメイン配置を有し、それはそれまでに知られていた真正細菌型LeuRSのタイプ2やイソロイシルtRNA合成酵素(IleRS)およびバリルtRNA合成酵素(ValRS)のタイプ1のものとは異なっていた。配列解析と組み合わせて、以下のことが推測された。もともとLeuRSはタイプ1の校正反応ドメイン配置を持っていたが、進化の過程でtRNA^<Leu>に長いバリアブルアームが付加されたことにより酵素上でのtRNAの配置が変化し、古細菌/真核生物型LeuRSはタイプ3へ、真正細菌型LeuRSのタイプ2へとドメイン配置を変化させることで校正反応を維持している。また生化学的解析からLeuRSはIle-tRNA^<Leu>を加水分解し、その反応にはAsp332が重要であることを明らかにした。古細菌LeuRS・tRNA^<Leu>との複合体の結晶化とX線結晶構造解析に成功した(3.2Å分解能)。LeuRSに特徴的なC端ドメインがtRNA^<Leu>の特徴的な長いバリアブルアームの先端の塩基を認識していた。tRNAの3'末端はアミノアシル化部位に入り込んでいた。これは校正反応ドメインをもつアミノアシルtRNA合成酵素で「アミノアシル化状態」の構造をとらえた初めての成果である。校正反応ドメインが動くことによりtRNAとの衝突を回避してアミノアシル化部位にtRNAの3'末端を受け入れていることが明らかとなった。また、構造中で2種類の認識決定部位の認識様式が見られ、tRNAの末端をアミノアシル化部位から校正反応部位へ移動させるのに認識決定部位の認識様式の変化を経ていることが推測された。古細菌Pyrococcus horikoshii由来のロイシルtRNA合成酵素(LeuRS)・tRNA^<Leu>との複合体の結晶化とX線結晶構造解析に成功した(3.2Å分解能)。変異体解析を行ってC末端の吸う残基がtRNAの認識に重要な役割を果たしていることを明らかにした。すなわち、"A mode"でアミノアシル化活性部位に入り込み、アミノアシル化を受けたtRNAは、そのアミノアシル化を契機として"B mode"へと構造を変化させる。A modeはアミノアシル化に適したモードであるのに対して、Bモードはアミノアシル化部位から抜け出して校正反応部位へとtRNA移るのに適したモードである。この成果を国際学会での口頭発表と論文で発表した。

(Fukunaga, R. and Yokoyama, S., Nat Struct Mol Biol., 12, 915-922, 2005)Achaeoglobus fulgidus由来のアラニルtRNA合成酵素の結晶化と予備的なX線回折実験に成功した.またAlaRSの校正反応ドメインのホモログタンパク質であるAlaXのX線結晶構造を2.7A分解能で決定した.AlaXはNドメインとCドメインの2つからなっていた.Cドメインに亜鉛を結合した校正反応活性部位があり,Nドメイン中の保存されたグリシンに富むループ(glycine-richループ)がその活性部位近くに位置していた.ホスホセリルtRNA合成酵素(SepRS)はホスホセリン(Sep)をtRNA^<Cys>に結合させる.A.fulgidus SepRS・tRNA^<Cys>・ホスホセリンの3者複合体のX線結晶構造を2.6Å分解能で決定した.SepRSはN端伸長領域,アミノアシル化活性ドメイン,挿入ドメイン,C端のアンチコドン結合ドメインの4つの構造要素からなっていた.SepRSは結晶中でホモ4量体を形成し2分子のtRNA^<Cys>を結合していた.ホスホセリン側鎖のリン酸基がアミノアシル化活性ドメイン中で強固に認識されていた.C端のアンチコドン結合ドメインがtRNA^<Cys>のアンチコドンループを認識していた.構造に基づいてアンチコドン認識部位に変異を導入し,サプレッサーtRNA(tRNA^<Opal>およびtRNA^<Amber>)を認識する改変SepRSを創出した.これはコドン表を拡張しホスホセリンを加え,タンパク質翻訳時にホスホセリンを部位特異的に導入する技術に利用可能である.改変SepRS・tRNA^<Opal>・ホスホセリン3者複合体および改変SepRS・tRNA^<Amber>・ボスホセリン3者複合体のX線結晶構造をそれぞれ3.2および3.3A分解能で決定し,改変SepRSによるナンセンスアンチコドンの認識機構を解明した.
ペルオキシソーム膜形成ならびに分解の分子機構

ペルオキシソーム膜形成ならびに分解の分子機構を明かにすることを目的として、【.encircled1.】培養細胞系、in vitroタンパク質輸送系を駆使し、ペルオキシソーム膜タンパク質の生合成からペルオキシソーム膜への組込み過程を解析すること、【.encircled2.】ペルオキシソーム膜タンパク質分解に係わる酵素を検索することを行った。その結果、以下に示す新しい知見を得た。1.ラット肝癌細胞(H4-II-E)を[^<35>S]methionineでパルス-チェイス後細胞分画し、抗69kDaぺルオキシソーム膜抗体を用いた免疫沈降により、69kDaタンパク質が生合成後、短時間細胞質に存在し、その後ぺルオキシソーム膜に挿入されることを明らかにした。また細胞質中のATPを枯渇させると移行過程の本タンパク質が凝集すること、膜への組込みにもATPなどのエネルギーが必要であることを見いだした。2.69kDaタンパク質cDNAをin vitroでtranscription/translationし、ラット肝より精製したぺルオキシソームとincubationすることにより、69KDaタンパク質が温度、incubation時間に依存し、ぺルオキシソーム膜に特異的に組込まれる実験系を構築することができた。その結果、現在までに69kDaタンパク質のぺルオキシソーム膜への組込みには細胞質因子が必須であること、本タンパク質のぺルオキシソーム移行シグナルは膜貫通領域を含むN末端1/4内に存在することを明らかにした。3.ラット肝ぺルオキシソームにmetalloendoproteaseが存在することを見いだした。また本酵素は酸化タンパク質に大して高い特異性を持つことから、ぺルオキシソームで酸化的修飾を受けたタンパク質の分解に関与している可能性を指摘した。最近、ぺルオキシソーム膜、マトリックス分画に酸化タンパク質が存在することを確認したので、これら酸化タンパク質が本prpteaseによりすみやかに分解されることを確認したい。以上、ぺルオキシソーム形成機構および分解系の一端が明らかにされた。今後、さらに詳細な解析を進めたい。
異質な知識を用いた自然言語の曖昧性解消に関する研究

曖昧性は自然言語に本質的で、それは豊かな表現力を示すものでもある。しかし、それは言語処理上では難点である。たとえば、I sawa dog witha telescope.には、sawに「見る」と「のこぎり」の語義(意味)的曖昧性がある。with a telescopeが直前の名詞にかかるのか、動詞にかかるのかの構造的曖昧性もある。質の高い自然言語処理システムを構築するためには意味的、構造的曖昧性の解消が必要である。これは辞書や文法があれば解決される問題ではない。曖昧性の解消には「知識」が必要である。一般に「遠鏡をもっている犬」は存在しない。われわれは、このような知識(常識)を使って文を理解する。しかし、同じ構造の文でも、I sawa house witha telescope.の理解では、状況の知識も必要である。「望遠鏡で家をみる」ことも、「望遠鏡を備えている家をみる」こともあり得るからである。本研究では、知識源を大規模なコーパスに求め、それからの単語の共起性や類似性をもとに語義的曖昧性と構造的曖昧性を解消する手法を提案した。また、その手法の有利性を実験によって検証した。対象とした言語は、日本語、中国語、英語で、日本語では、助詞「の」を複数回使うことによってできる名詞句の構造的曖昧性を、中国語では、単語分割の際に遭遇する分割上の曖昧性の解消を、英語では、語義(word senses)的曖昧性の解消を試みた。本研究では、自然言語のもつ曖昧性を解消するためのモデルをつくり、、実験を通して、その有効性を検証している。本年度の成果の一端に、日本語の助詞「の」によってつくられる名詞句の構造的曖昧性の解消を試みた実験がある。これは、コーパスを使い、共起関係をもつ単語間の意味的なつながりの度合いを計算することによって、構造上の係り受け関係を明らかにしようとしたもので、実験結果では、78%の成功率を得た。もう一つの成果として、英語の多義語の語義的曖昧性の解消実験がある。この実験では、コーパスから品詞情報、共起情報、構文情報、文脈情報などを得、それらをもとに曖昧性を解消している。本研究では、自然言語のもつ語義的曖昧性と構造的曖昧性の解消手法を提案し、その有効性を実験によって検証した。対象とした言語は、日本語、中国語、英語である。日本語では助詞「の」を複数回使うことによってできる名詞句の構造的曖昧性、中国語では単語分割の際に遭遇する分割上の曖昧性、英語では語義(word senses)的曖昧性の解消実験を行った。曖昧性解消の手法は、単語の共起性や類似性にもとづいている。たとえば、I go to thebank to get money.には、bank(「銀行」と「土手」)は、「銀行」の意味をもつが、この文での特定の意味は、この文と類似の文脈(bankがmoneyやdepositやinterest companyなど一緒に使われたとき)で、bankがもつ意味と同じになると考えられる。この考えは、構造上の曖昧性を解く場合にも通じる。たとえば、「川の上流の村落」は、(川の(上流の(村落)))ではなく、(川の((上流の(村落))である。「川」は「村落」より、「上流」と強い共起性がある。人間は、共起性や類似性に関する知識(常識)をもっている。しかし、その知識をコンピュータに与え、処理するのはむずかしい。ここでは、知識源を大規模なコーパスに求め、その中にみる単語の共起性や文脈の類似性を統計量にてつかむことにより曖昧性の解消を試みた。当該単語(構造)の意味(構造)は、それが使われている文脈と同様の文脈で与えられている意味(構造)と同じである。本研究の成果はいくつかの雑誌論文と研究会論文として発表されている。
新規光触媒材開発に向けたイオン化ポテンシャルの支配要素の特定とデータベース作成

二価カチオンを含む二元系酸化物について、第一原理計算のnsc-dd法を用いてイオン化ポテンシャル(IP)および電子親和力を求めた。その結果、原子の大きさ(原子あたり体積の三乗根)の逆数とIPの間にほぼ線形の相関が得られることが判明した。酸化物では価電子帯の上端はOの2s状態の位置で決まってくるが、この2sバンドの中心位置も、原子あたり体積の三乗根の逆数とほぼ線形の相関があった。ただ、同じ結晶であっても、表面のとり方によってはIPに2eV程度の幅があることも判明し、表面の計算を行わずに水分解光触媒をスクリーニングする際の一つの限界とみられる。[Hinuma et al., Phys Rev. Mater. 2, 124604 (2018)]。なお、通常の第一原理計算で行われるGGA法はバンド端の位置が実験値2と大きくずれる一方、ハイブリッド汎関数を用いると実験値に近い値が得られるが計算時間が数桁多くかかることが知られている。nsc-dd方法はGGA法より少し多い計算量で、ハイブリッド汎関数を使用するのとほぼ同等の結果が得られる。また、30種のバンドギャップを有する二元系酸化物の表面について、電子親和力と酸素脱着エネルギーについて、ある程度の相関が見られることを示した。酸素脱着エネルギーはH2等の小分子吸着パターンと吸着エネルギーに強く影響することが判明したため、光触媒表面での反応を制御する際にこの値の考慮を要する。[Hinuma et al.,J. Phys. Chem. C. 122, 29435 (2018)]。目標の「問い」である「IPを決める要素は何か?」に対し、「原子あたり体積」という一つの答えを得た。また、「原子あたり体積」の情報だけを用いた場合、IPの推計値に2eV程度の幅が生じることも判明した。これらは大きな進歩だが、まだまだ研究の余地がある。目標となるIPが5.67eV強の材料をスクリーニングするためには、原子あたり体積が重要であることが判明したので、この条件に該当する材料を狙ってIPを求めていく。また、「バルクを劈開するだけで無極性かつ化学量論的に正しいスラブモデル」のアルゴリズムを改良し、表面を再構成しないと無極性かつ化学量論的に正しいスラブモデルを得られない系に対応する。これにより、光触媒として探索が進んでいるスピネル構造のZnFe2O4等のイオン化ポテンシャルの探索が可能になり、さらなる材料のスクリーニングの効率化を進めることができる。また、IP以外にも電子親和力の位置も水分解光触媒にとっては重要なため、電子親和力、あるいは電子親和力とIPの差であるバンドギャップ値のスクリーニングのめどを立てる。
歩行者危険行為の早期検出による積極的な安全運転支援

本研究は歩行者危険行為の早期検出により安全運転を支援するものである.そのために,1歩行者の早期検出,2歩行者行為の早期検出,3歩行者行為情報を用いた危険度の見積もりという3つの項目を設定し研究を進めてきた.1について,オクルージョンに強い,人体パーツを用いた歩行者検出手法,歩行者検出を高速化する路面位置の推定手法をそれぞれ開発した.2について,危険予測のためのデータベースを作成し,行動予測に有用な歩行者属性の認識技術を開発した.その上,歩行者の行動範囲を予測する技術を開発した.3について,2で作成したデータベースを用いて,歩行者危険行為を含めた様々な要因による危険度の見積もり手法を実現した.本研究は歩行者危険行為の早期検出による安全運転支援を目的としている.その目的を達成するために,1歩行者の早期検出技術,2歩行者行為の早期検出,3歩行者行為情報を用いた危険度見積もりという3つの研究項目を挙げた.平成26年度では,我々は主に上記項目1と2に関して研究を進め,一定の成果を収めた.研究項目1について,歩行者の存在を早期検出するために,歩行者の姿の一部が視野に入った段階,即ち部分オクルージョンが発生し,不完全な画像データしか得られない時点での歩行者の検出が必要となる.我々は車載カメラによって撮影した映像から路面位置が推定できれば不完全なデータしかない状況でも歩行者を迅速に検出できると考え,サーフェスレイアウトを用いて単眼カメラ映像から正確な路面位置を推定する手法を開発した.我々,まず特徴点軌跡を使用したホモグラフィを用いて路面位置の疎推定を行う.そして,局所画像の特徴量を使用してサーフェスレイアウトから計算される情報を用いて精密推定を行う.公開データセット(KittiDataset)を用いた評価実験では,提案手法は良い認識精度と処理速度を示した.研究項目2について,歩行者危険行為の早期検出を達成するために,近似スパースコーディング手法(ASC)を開発した.この手法はスパースコーディングの低次元性及び近似最近傍法(ANN)の高速性を兼ね備える手法であるため,歩行者危険行為の早期検出の実現に大きく貢献する.本研究は歩行者危険行為の早期検出による安全運転支援を目的としている.その目的を達成するために,1歩行者の早期検出,2歩行者行為の早期検出,及び3歩行者行為情報を用いた危険度の見積りという3つの研究項目を設定した.平成27年度では,我々は主に上記項目1と2に関して研究を行い,一定の成果を収めた.研究項目1について,歩行者の存在を早期に検出するために,人体パターン要素や,障害物と人体パーツ要素との重ね合わせパターンを表すミドルレベルの特徴MLDP(Middle Level Discriminative Patch)のマイニング手法,検出手法をそれぞれ開発し,良い検出精度を達成した.また,歩行者詳細属性(14カテゴリ:性別-2,年齢-5,体格-3,服装-4)を識別するための独自な手法を開発した.歩行者詳細属性の識別は歩行者の行動予測に貢献できると考える.研究項目2について,行動認識を高速でロバストに実現するための近似スパースコーディング手法(Approximate Sparse Coding, ASC)の改善を行った.次年度の研究に用いる予定である.研究項目1と2は本研究において中核的な位置づけを占めている.それらに関して一定の研究成果を収めたことから,研究全体は概ね順調に進めていると考える.本研究は歩行者危険行為の早期検出による安全運転支援を目指している.我々は,その目的を達成するために,1歩行者の早期検出,2歩行者行為の早期検出,3歩行者行為情報を用いた危険度の見積もりという3つの研究項目を設定した.平成28年度では,上記すべての項目について研究を行い,一定の成果を収めた.歩行者早期研究において,歩行者に対するオクルージョンが最も困難な課題である.その視点から,本年度は,研究項目1については,人体パーツに着目した歩行者の検出手法を研究開発した.高精度かつオクルージョンに強い歩行者検出手法を実現しただけでなく,高い汎用性をもつ人体パーツのマイニング手法や,効率的な人体パーツの統合手法も同時に提案した.研究項目2については,1)歩行者の危険行為を含めた危険予測のためのビデオデータベースを作成し,2)ディープランニングを用いた歩行者の詳細属性の認識手法と,3)映像及びLIDARデータを用いた歩行者の行動範囲を予測する手法をそれぞれ開発した.独自に作成したデータセットは,公開性,多様性,統一性があり,運転危険予測の研究分野で重要なベンチマークになることが期待できる.歩行者属性の認識手法は,近年公開された大規模歩行者データセット(CRPデータセット)を用いて,state-of-the-artの精度との比較を行った.その結果,提案アプローチでは,state-of-the-artの精度を超えることが確認された.また,深層学習を取り入れた提案手法による評価実験でも,更なる精度向上を示す結果が得られた.項目3について,上記開発したビデオデータベースを用いて,歩行者危険行為を含めた様々な要因による事故リスクのレーティング手法を実現した.様々な検証実験を行った.全体の分類(3段階)精度は50%程度である.今後より複雑な問題設定にして取り組む必要があると考える.本研究は歩行者危険行為の早期検出により安全運転を支援するものである.そのために,1歩行者の早期検出,2歩行者行為の早期検出,3歩行者行為情報を用いた危険度の見積もりという3つの項目を設定し研究を進めてきた.1について,オクルージョンに強い,人体パーツを用いた歩行者検出手法,歩行者検出を高速化する路面位置の推定手法をそれぞれ開発した.2について,危険予測のためのデータベースを作成し,行動予測に有用な歩行者属性の認識技術を開発した.

その上,歩行者の行動範囲を予測する技術を開発した.3について,2で作成したデータベースを用いて,歩行者危険行為を含めた様々な要因による危険度の見積もり手法を実現した.研究項目1と2は本研究において中心的な部分であるため,それに関する一定の研究成果を収めたことから,研究全体は概ね順調に進展していると考える.今後は主に歩行者行為の早期検出や,歩行者行為を考慮した危険度見積りについて研究を進める方針である.28年度が最終年度であるため、記入しない。映像・画像認識,機械学習今後は主にデータ収集・データセットの作成,研究項目13にまだ達成してない内容に取り組みたいと考えている.研究人員の雇用や研究成果の発表等に必要が費用が発生するためである.28年度が最終年度であるため、記入しない。データ収集は当初の予定よりすこし後ろにずらしたため,データセット作成に雇用する研究補助員の予算は次年度にまわすこととなった.研究計画を実施するための特任助教を1名雇用する.28年度が最終年度であるため、記入しない。データセット作成のための研究補助員を2名雇用する.28年度が最終年度であるため、記入しない。
セラミックスの微視割れ生成臨界応力の非破壊評価

本研究では、平成元年度に引続き、平均粒径の異なる2種類の焼結アルミナの種々の寸法を有する試験片の曲げ試験の際に、AE法を用いて微視割れの発生時刻・位置を検出し、AE検出開始後のAE事象数及びエネルギ-の急増点における見かけの応力σ_Cを評価した。前年度にσ_Cが最終不安定破壊以前の主き裂形成に対応するマクロな臨界応力であることが明らかになっているが、本年度は、σ_Cに及ぼすひずみ速度や水分による応力腐食割れの影響について検討し、以下の結果を得た。(1)細粒アルミナにおけるσ_Cを前年度と同様に評価したが、曲げ強度σ_Bが試験片寸法に依存するのに対して、σ_Cは個々の試片寸法でばらつきがあるものの、本研究の範囲では、寸法によらずほぼ一定の値の周辺に存在することが示された。(2)粗粒アルミナ・細粒アルミナで評価されたσ_Cは約170MPaであり、粒径・純度・気孔率の異なる両材料で同じ値であった。一方、材料中の水分を除去した細粒アルミナで約190MPaであり、水分除去によりσ_C値が向上し、また、ばらつきが小さくなることが明らかになった。(3)4×10^<ー7>4×10^<ー5>[s^<ー1>]の範囲において、σ_C及びσ_Bのひずみ速度依存性を検討したが、ひずみ速度の上昇にともない、両者がほぼ同程度に向上することが明らかになった。なお、本年度用いた両材料は、粒径のみならず気孔率・純度も異なるため、それらの内、個々の材料因子のσ_C、σ_Bに及ぼす影響は明らかになっておらず、今後に課題を残していると言えよう。
コーパスデータの信頼性とI言語研究資料としての利用の妥当性に関する考察

特別な知識や技術がなくても利用可能なユーザーフレンドリーな環境の整備・普及は,コーパス研究の促進に寄与すると同時に,様々なレベルでブラックボックス化を進める要因の1つにもなっている。研究代表者の前研究課題では,データ抽出方法,統計処理方法等について検証し,ブラックボックス化の裏で起きている問題を具体的に指摘したが,ブラックボックス化,非明示性の問題は用語・概念,手法,方法論などにも及んでおり,より広い範囲で多角的に検討する必要がある。このような状況を踏まえ,本課題では,研究資料としてのコーパスの利用に関する用語・概念,手法,方法論について,I言語研究の観点から明示的・体系的に検討を行った。初年度の25年度は,前研究課題「言語研究資料としてのコーパスデータの客観性と信頼性に関する考察」の研究成果を基に,コーパスデータの信頼性の問題について整理を行い,本課題で扱うべき用語・概念の検討を行った。具体的には,「演繹法・帰納法」「言語能力・言語運用」「合理論・経験論」「経験的」など,コーパスを用いた研究における方法論について論じられる際,よく用いられるが,多義または曖昧で研究者によって異なる意味で用いられていたり,誤った意味で使われていたりすることが少なくない用語を取り上げ検討した。また,コーパス研究でよく見られる定量分析の基礎となる「頻度」の意味についても,I言語研究という観点から検討を行った。当初の計画では,2年目の26年度に,コロケーションに焦点を当て,問題点を検討する予定であったが,日本英文学会中部支部第65回大会で,コロケーションをテーマとしたシンポジウムが企画され,その司会となることとなったため,前倒しでコロケーションに関する検討も進めた。大会では「“コロケーション"研究の諸相」と題してシンポジウムを行い,その司会を務めると共に,「“コロケーション"を解体し,統合する」という題目で発表も行った。発表では,「語と語の慣習的な結び付き」とされる「コロケーション」が,多種多様な共起関係を示す用語として用いられていることを具体例を基に示し,そのような共起を引き起こしている原因を明らかにすることが重要であることを論じた。コロケーションに関しては,26年度も引き続き検討を行う予定である。当初の予定では“コロケーション"については26年度に扱うことになっていたが,前年度の25年度に日本英文学会中部支部大会において“コロケーション"をテーマとしたシンポジウムの司会・発表者を務めることになり,予定を一部前倒しして,“コロケーション"について検討を開始した。発表では,「語と語の慣習的な結び付き」とされる“コロケーション"が,多種多様な共起関係を示す用語として用いられていることを示し,そのような共起を引き起こしている原因を明らかにすることの重要性を論じたが,26年度はこの考察をさらに深め,このような多種多様な共起関係にある語の組み合わせがまとめて“コロケーション"として扱われる背景には,語(形態素)はある種のインターフェースとして働くため,語(から構成される句)を介して結び付けられる様々な要素(意味・形式・指示物等)の間の共起関係が,「語と語」の共起関係として捉えられて,区別せずに扱われやすいことがあることを示し,さらに,異なる種類の共起関係が心的実在物としての文法(I言語)の中でどのように位置付けられるものであるかを検討した。また,研究者によって,概念的定義,操作的定義,証拠の区別・扱いが曖昧であったり,混在しているケースがあることも,“コロケーション"の定義を考える際の混乱の原因の1つとなっていることを踏まえ,これらについても検討し整理を進めた。最終年度である平成27年度は,I言語研究のための資料としてのコーパスデータという観点から,コーパス研究に関わる様々な用語・概念の整理を試みた。「コーパス研究のパラダイムと言語モデル」では,主に,Leech (1992)の挙げる3つのパラダイムを基に,現在のコーパス研究におけるパラダイムについて検討した。また,コーパス研究で「言語能力」「言語運用」「I言語」「E言語」などの基本的な用語が誤った意味で用いられていることが少なくないことから,Chomsky (1965),Chomsky (1986)での用語の意味を踏まえ,言語能力と言語運用,言語知識の内容,言語能力・言語運用と言語の社会性など,コーパス研究において見られる言説について整理した。「確率」「確率(論)的」等の用語は一見曖昧性のない用語のように思われるが,コーパス研究論文では異なる意味で使われることがあり,生起確率による予測の問題と現象の原因の区別,文法性と生起確率,習得可能性などの観点から整理を行った。「経験論・合理論」については,研究対象と研究者,言語習得の問題,言語知識の範囲と内容の問題,言語研究の問題,研究資料の問題に分け検討した。これらの内容の一部を収録した論文は,英語コーパス研究シリーズ第7巻『コーパスと多様な関連領域』(ひつじ書房)および『コーパスからわかる言語変化・変異と言語理論』(仮題,開拓社)に掲載される予定である。また,前年度までの検討内容を踏まえ,2015年4月に英語コーパス学会シンポジウム「コーパス関連専門科目の授業内容について」において「コーパス研究の一方法論と情報教育としてのコーパス研究教育」と題しコーパス研究教育に関する発表を行い,成果の一部を公開した。