hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
抗マラリア防御免疫の誘導とその制御機構

LPSで刺激した場合のサイトカイン産生では感染マウス樹状細胞はIL-12産生の低下とIL1-10産生の上昇を認めた。抗原提示能については、両者の間で著名な差異は認めなかった。樹状細胞のサイトカイン産生の違いの機序と、その防御免疫応答における意義については現在解析中である。1.赤内型マラリア原虫によるT細胞免疫応答の修飾マラリア原虫P.yoelii 17XNL(弱毒株)感染治癒マウスCD4^+ T細胞の原虫特異的免疫応答とその防御効果について解析した。治癒マウス脾CD4^+ T細胞は原虫抗原特異的な増殖反応を示し、記憶細胞の存在が示された。しかしながら、IL-2産生は殆ど検出されずIL-10産生が高かった。さらに、精製CD4^+ T細胞を受け身移入したマウスにP.yoelii 17XLスポロゾイトの感染実験を行ったところ、有意な防御効果は得られなかった。これら記憶CD4^+ T細胞が機能的に修飾を受けている可能性が示唆され、その機構についてさらに解析を進めている。2.マラリア感染マウス樹状細胞の機能解析P.yoelii 17XL(強毒株)感染マウス及びP.yoelii 17XNL(弱毒株)感染治癒マウスの脾樹状細胞の性状を解析した。正常樹状細胞と比較し、共にLPS等Toll-like receptor(TLR)刺激に対するIL-12産生は低下しており、IL-10産生が増加していた。一方、T細胞に対する抗原提示能力はMHC class I経路、MHC class II経路共に特に低下してはいなかった。IL-10産生増加の機構と、抗原提示されたT細胞の機能についてさらに解析を進めている。3.免疫応答を制御する転写因子IRF-4のマクロファージにおける機能転写因子IRF-4は、免疫細胞(リンパ球・樹状細胞・マクロファージ)に発現されている。本研究では、マクロファージにおけるIRF-4の役割を解析した。IRF-4 KOマウスを用いた実験などから、IRF-4がTLRの刺激伝達に抑制的に働くことを明らかにした。さらにこの抑制は、MAPキナーゼJNKやNF-κB活性化を制御していることを明らかにした。
1階言語で定義された算術理論のモデルの研究とその応用

単純理論(simple theory)のモデルにおけるタイプ排除定理(Omitting Types Theorem)の研究を行った.単純理論は安定理論(stable theory)を含むより広い範疇の理論のクラスである.Steinhornは,超安定な理論(superstable theory)のモデルにおいて,無限の一様列(indiscernible sequence)を含めば,そのモデルにおいて排除されているタイプを排除したままモデルを拡大できることを示した.本研究では超単純(super-simple)な理論に対してその結果を拡張することを考え,より広い範囲に適用でき,証明もより明解になる議論の仕方を発見した.その結果以下のような結果を得ることができた.結果:言語Lは可算言語とする.TをLにおいて記述された完全理論とする.Tは超単純と仮定する.またモデルMを理論Tの可算モデルとし,空集合上の完全タイプpがMにおいて排除されているとする.さらにMは無限独立集合Iを含むとする(Iが独立集合であるとは,分岐(forking)の意味で独立な集合とする).このとき,Mを真に拡大する(elementary extension)モデルNでタイプpを排除するものが存在する.この結果の証明は,古典的タイプ排除定理を使い,Steinhornにおける証明のような,安定性特有の議論(平均タイプ(average type)など)を用いない.このため安定の場合に限ってもより明解な証明法が得られたことになる.その他,Shelahのタイプ排除定理とMorleyのタイプ排除定理に関連した拡張も得られている.単純理論(simple theory)のモデルにおけるタイプ排除定理(Omitting Types Theorem)の研究を行った.単純理論は安定理論(stable theory)を含むより広い範疇の理論のクラスである.Steinhornは,超安定な理論(superstable theory)のモデルにおいて,無限の一様列(indiscernible sequence)を含めば,そのモデルにおいて排除されているタイプを排除したままモデルを拡大できることを示した.本研究では超単純(super-simple)な理論に対してその結果を拡張することを考え,より広い範囲に適用でき,証明もより明解になる議論の仕方を発見した.その結果以下のような結果を得ることができた.結果:言語Lは可算言語とする.TをLにおいて記述された完全理論とする.Tは超単純と仮定する.またモデルMを理論Tの可算モデルとし,空集合上の完全タイプpがMにおいて排除されているとする.さらにMは無限独立集合Iを含むとする(Iが独立集合であるとは,分岐(forking)の意味で独立な集合とする).このとき,Mを真に拡大する(elementary extension)モデルNでタイプpを排除するものが存在する.この結果の証明は,古典的タイプ排除定理を使い,Steinhornにおける証明のような,安定性特有の議論(平均タイプ(average type)など)を用いない.このため安定の場合に限ってもより明解な証明法が得られたことになる.その他,Shelahのタイプ排除定理とMorleyのタイプ排除定理に関連した拡張も得られている.単純理論(simple theory)のモデルにおけるタイプ排除定理(0mitting Types Theorem)の研究を行った.単純理論は安定理論(stable theory)を含むより広い範疇の理論のクラスである.Steinhornは,超安定な理論(superstable theory)のモデルにおいて,無限の一様列(indiscernible sequence)を含めば,そのモデルにおいて排除されているーつのタイプを排除したままモデルを拡大できることを示した.本研究では超単純(super-simple)な理論に対してその結果を拡張することを考え,より広い範囲に適用でき,より明解な証明法を発見した.その結果以下のような結果を得ることができた.結果:言語Lは可算言語とする.TをLにおいて記述された完全理論とする.Tは超単純と仮定する.またモデルMを理論Tの可算モデルとし,空集合上の完全タイプpがMにおいて排除されているとする.さらにMは無限独立集合Iを含むとする(Iが独立集合であるとは,分岐(forking)の意味で独立な集合とする).このとき,Mを真に拡大する(elementary extension)モデルNでタイプpを排除するものが存在する.この結果の証明は,古典的タイプ排除定理を使い,Steinhornにおける証明のような,安定性特有の議論(平均タイプ(average type)など)を用いない.このため安定の場合に限ってもより明解な証明法が得られたことになる.理論を固定したときのモデルの定義可能集合とその振る舞いについて研究することが本研究のひとつの目的になっている.モデルの性質としてタイプの排除性に注目して本年度の研究は行われた.タイプの排除性定理は可算言語のモデルに関する定理で,孤立的でないタイプに対して,そのタイプを排除する(すなわちそのタイプの解が存在しない)モデルの存在を主張する.位相空間論におけるBaireのカテゴリー定理のモデル理論版であり非常に重要な定理である.このタイプの排除定理の拡張を考えた結果次の結果を得た.(1)Mを有限生成でない超単純(supersimple)な可算モデルとする.いまタイプp (x)が排除されているとする.このときMの真なる基本拡大Nでp (x)を排除するモデルが存在する.(2)Sを完全タイプの集合でその濃度が連続濃度より小さいとする.このときSを排除するモデルの濃度に関してHanf数が存在する.(1)はシュタインホーンの定理(無限一様列が存在するsuperstable理論の場合)の拡張になっていて,さらに証明も飛躍的に簡単になっている.(2)はモーレイのタイプ排除定理とシェラーのタイプ排除定理を結びつける結果である.

モーレイのタイプ排除定理は可算個のタイプに関するHanf数の存在定理であり,シェラーのタイプ排除定理は通常のタイプ排除定理の「可算個のタイプ」の部分を完全タイプに限れば「連続濃度未満の個数のタイプ」にかえることができるという非常に面白い定理でありこれらを結びつけるところが興味深いと思われる.単純理論(simple theory)のモデルにおけるタイプ排除定理(Omitting Types Theorem)の研究を行った.単純理論は安定理論(stable theory)を含むより広い範疇の理論のクラスである.Steinhornは,超安定な理論(superstable theory)のモデルにおいて,無限の一様列(indiscernible sequence)を含めば,そのモデルにおいて排除されている一つのタイプを排除したままモデルを拡大できることを示した.本研究では超単純(super-simple)な理論に対してその結果を拡張することを考え,より広い範囲に適用でき,より明解な証明法を発見した.その結果以下のような結果を得ることができた.結果:言語Lは可算言語とする.TをLにおいて記述された完全理論とする.Tは超単純と仮定する.またモデルMを理論Tの可算モデルとし,空集合上の完全タイプpがMにおいて排除されているとする.さらにMは無限独立集合Iを含むとする(Iが独立集合であるとは,分岐(forking)の意味で独立な集合とする).このとき,Mを真に拡大する(elementary extension)モデルNでタイプpを排除するものが存在する.この結果の証明は,古典的タイプ排除定理を使い,Steinhornにおける証明のような,安定性特有の議論(平均タイプ(average type)など)を用いない.このため安定の場合に限ってもより明解な証明法が得られたことになる.その他,Shelahのタイプ排除定理とMorleyのタイプ排除定理に関連した拡張も得られている.
結晶磁気異方性制御希土類系新永久磁石材料の設計と試作

1983年に住友特殊金属(株)により発表された希土類-鉄-ボロニ系合金は【Nd_2】【Fe_(14)】Bを代表として、保磁力・エネルギー積、11KOe,47MGoeの非常に大きな材料として注目されており、その原因は【RE_2】【Fe_(14)】Bの結晶構造に起因するREイオンの不飽和4f電子殻による結晶磁気異方性であるとされている。本研究では、【Yb_2】【Fe_(14)】Bに注目し、その合成を試みた。【Yb_2】【Fe_(14)】BはYbの価数摂動のため常圧下では作成できなかった。そこで15Kbar20Kbarの高圧合成を試みた。高圧下ではYbは+3価となり、【Yb_2】【Fe_(14)】B化合物相をつくる事がわかった。得られたデーターとしては、1.キュリー点温度545K,2.格子定数a軸8.740【A!゚】,C軸11.910【A!゚】である。また、結晶場計算解析を計算機を使用して行い、【Yb_2】【Fe_(14)】Bについて、計算により磁気異方性解析をした。実験で得られた格子定数を用いた結果、Ybの+3価イオンは、Erの+3価イオンと同じような副格子としての性質を示す事がわかった。これは、【Yb_2】【Fe_(14)】BのF(τ)[=Km(τ)]の傾向が【Er_2】【Fe_(14)】Bの△F(τ)によく似ており、【Yb_2】【Fe_(14)】Bについても【Er_2】【Fe_(14)】Bと同様の軸の回転現象が予想され、低温域で【Yb_2】【Fe_(14)】Bは容易磁化軸[100]をとることが予想される。また異方性エネルギー【K_1】・Λ【in^2】Q型の考虜により、ΔFの温度依存性から容易磁化軸の回転を説明しうると考えられる。本研究課題は、大きなBH積をもつ新永久磁石材料として脚光を浴びている希土類-鉄-ホウ素三元系化合物の結晶磁気異方性の結晶場解析を行い、その結果に基いて擬二元系・擬三元系について結晶磁気異方性を理論設計し、また試作を行うものである。第一年度の研究実績は下記の通りである。(1)東大の大型計算機の通信端末として使用出きるNEC,PC-9800型のコンピューターを購入して、【RE_2】【Fe_(14)】Bの結晶磁気異方性解析プログラムを開発した。(2)前記プログラムを用いて、RE=Ce,Pr,Nd,Dy,Er,Ybについて結晶磁気異方性の解析を行った。いずれの化合物についても結晶磁気異方性は4f電子と結晶電場や交換磁場との相互作用で基本的には説明できることがわかった。その一致は【Er_2】【Fe_(14)】

Bで良いが、Ndについては125Kでの容易磁化軸の回転を説明できないでいる。(4)実験的に容易磁化軸回転の挙動を明らかにするために、比熱及び音速の測定を行っている。【Nd_2】【Fe_(14)】Bの125Kにおけるスピン方向の[001]からの30°の回転は1次の相転移と考えられる。
機械翻訳前処理自動化のための基礎研究

機械翻訳システムの直接入力は、原文ではなく前処理された編集文である。前処理作業は、これまで個人の経験や勘などに依存してきたが、これに必要な統語的操作、意味的手続きを、原文と編集文そして翻訳文の対照研究を通じて、前処理規則群として設定し、自動編集プログラムとして翻訳機に組み込んで翻訳の能率を向上させることが当初の基本的な研究目標であった。今年度はこの延長上で下記の研究を基礎的に行なった。1.関連文法研究を整理、再機成し、前処理作業をできる限り規則化する。2.主要な文法構造の翻訳能力をパソコン用、大型計算機用の翻訳ソフトで検証し、翻訳能力を評価すると共に、翻訳能力向上に必要な文法規則ならびに前処理規則を検討する。3.言語形式全般に渡って、派生関係を持つ文を翻訳機に入力し出力言語形式との構造的な対応を検討する。これによって、最適な条件を備えた入力言語構造を決定し、原文をこの構造に変換する規則群を設定する。4.談話レベルにおいて日本語特有の表現様式を英語の表現様式に直接対応するような文に変換する前処理規則群を設定する。5.従来、機械翻訳の対象外となっていた(目標言語に対応構造を欠く)特定言語固有の文法構造を、翻訳可能な構造に変換する新しい概念の前処理規則群を設定する。6.制限文法の設定を回避するシステムを前処理の観点を中心に構築する。7.前処理を操作形式,機能,適用対象などに基づいて類別化し、これを前処理の下位部門として独立させる。8.前処理操作の形式的特性、意味的な条件などを解明する。
記憶を利用した文脈を考慮した自然言語処理の開発

AttentionベースのSequence-to-Sequenceに基づいた対話生成システムの開発を行い、実際に対話システム構築することで、ニューラルネットワークベースの対話システムの評価を行なった。この評価では、一文内における係り受けなどの妥当性を評価する結束性(cohesion)を満たす文が生成できることを確認することはできたが、文間をまたいだ統一性の判断基準である一貫性(coherence)については十分でないことを確認した。特に、発話に関しては前後の文脈を十分考慮できていないものが生成されており、取り組むべき課題が明確になった。また、このような発話の一貫性のなさが対話における不自然感を強めることも確認できた。この発話の一貫性のなさに関する課題に取り組むために、過去の発話内容を記憶するメモリ(記憶)を用いたシステムが有効であると確信し、記憶を組み込んだ対話生成システムの設計を行った。特に、発話の情報を保存しているEncoderとDecoder間の中間表現に着目し、これを保存することで先行発話との一貫性を確保した対話の生成に取り組もうと考えている。また、この設計に基づいたプロトタイプシステムの実装に取り組んでいるところである。特に、ニューラルネットワークが従来に比べ複雑になるため、学習における時間の短縮が必要になると考えている。このため、計算機資源を考慮したシステム実装について検討を行なっているところである。まず、既存技術の問題点を明確にし、本課題の中心的トピックである記憶を利用した対話システムの設計を行うことができており、当初の予定に従った進捗である。今後は、プロトタイプシステムの実装の段階に移る段階で、計算資源を考慮した実装に関する課題についても明確になっており、特に問題はないと判断している。今後については、プロトタイプシステムを構築して実験を行うことで、対話生成における記憶の有効性について検証を行う。また、対話生成システムとして計算資源を考慮した実装に関する課題などの課題に着実に取り組んでいく予定である。概ね実施計画に従ってプロジェクトを進めていたが、出張において予定していたものより交通費および宿泊費が低く抑えることができたため、差が生じている。翌年度においては物品購入や出張に関して執行していく予定である。
特定染色体領域に濃縮される核マトリックス構成RNAの解析

がん細胞にみられる増幅遺伝子は、多くの場合染色体外遺伝因子であるDMの上に存在する。DMが排出されると、`多くのがん細胞は脱がん化、分化する。この際の排出は、細胞質に生じた微小核へDMが極めて選択的に取り込まれることを介する。我々は、微小核を精製する方法を樹立し、その中のDNAを調べたところ、DMのDNAが高度に濃縮されていることを以前示した。本研究では、DMを選択的に取り込んで形成される微小核の核マトリックスに、DMの間期核内における高次機能となんらかの点で関連したRNAが濃縮されている可能性を検討した。ヒトCOLO 320DM株を使用し、微小核精製法をさらに改良することに成功した。このようにして精製した微小核から、核マトリックスRNAを調製し、それをプローブとして、RNA FISH法により検討した。その結果、微小核にハイブリダイズしたシグナルが見られるとともに、間期細胞核内の特定領域にもシグナルが見られた。このことは、当初の目的の核マトリックスRNAが存在することを示している。そこで、RAP(RNA arbitrarily primed)PCR法を用いて、核マトリックスRNAに比べて微小核マトリックスに濃縮されているRNA分子種の同定を試みた。80種類以上のプライマーの41種類の組み合わせについて検討した結果、微小核マトリックス特異的なバンドを19種同定できた。このようなバンドからcDNAを抽出し、その塩基配列の決定を行った。しかし、得られた配列の大半はrRNAの部分配列であった。その他の配列(4種)については、それをもとにプローブを調製し、RNA FISHにより局在性の解析を行ったが、有意な結果は得られなかった。用いた精製微小核中には、DMのDNAが約8000倍もの高純度で濃縮されていたが、RNAレベルでは、まだ不純物が多かったことが原因であると考えられる。がん細胞にみられる増幅した遺伝子は、多くの場合染色体外遺伝因子であるDMの上に存在する。DMが排出されると、多くのがん細胞は脱がん化、分化する。本研究では、DMを選択的に取り込んで形成される微小核の核マトリックスに、DMの間期核内における高次機能となんらかの点で関連したRNAが濃縮されている可能性が高いと考え、そのようなRNAの解析を行っている。本年度は、ヒト大腸がん細胞COLO320DM株を使用し、最初に、微小核精製法をさらに改良することを行った。その結果、従来法に比べて2倍、精製度を上げることに成功した。次に、精製微小核マトリックスRNAから調製したプローブを用いて、COLO320DM細胞に対してRNA FISHを行った。そこで、RAP(RNA arbitrarily primed)PCR法を用いて、核マトリックスRNAと比較して微小核マトリックスに濃縮されているRNA分子種を同定する試みを行った。本実験では80種類以上のプライマーの41種類の組み合わせについて検討し、微小核マトリックス特異的なバンドを19種同定した。そこで、このようなバンドからcDNAを抽出し、ベクターに組み込んで、塩基配列を決定することを、現在急いでいる。得られた配列は、その周辺配列をもとにPCRでプローブを調製し、RNA FISHにより微小核、あるいはDM染色体領域への局在性等を検討していく予定でいる。
遺伝子レベルにおけるエンジイン抗腫瘍抗生物質生合成系の解析

エンジイン抗生物質のうち、アントラキノン構造とエンジイン構造のハイブリッド化合物であるダイネミシンの生合成遺伝子のクローニングとその解析を目的として、以下の研究を行った。ダイネミシン生産菌であるMicromonospora chersinaより、アクチノロジン生合成のactI遺伝子をプローブとしてクローニングした約20kbの遺伝子断片のうちの14.3kbについて、塩基配列を決定し、Open Reading Frame(ORF)の解析を行ったところ、12個のORFの存在を見出すことができた。データベースのホモロジー検索により、ORF6、ORF8は、それぞれポリケタイド生合成のスターターユニットの供給に関与すると考えられるCoA-ligase、acyltransferaseとの相同性を示した。ポリケトメチレン鎖の伸長に関与すると考えられる縮合酵素(ORF4)、鎖長決定因子(ORF5)、また、生成したポリケトメチレン鎖の閉環を触媒するcyclase(ORF2)の存在も認められた。更に閉環後の酸化的修飾に関わると推定されるoxygenaseをコードするORF10も存在しており、放線菌タイプII型ポリケタイド合成酵素遺伝子クラスターに共通した遺伝子配置に加え、特異的なスターターや、酸化的修飾に関わる遺伝子などこれまでに例のない特徴的なクラスターを構成していた。生合成遺伝子の破壊による生産能の欠失を検討したが、M.chersinaの遺伝子破壊株を得ることはできなかった。一方、クローニングした遺伝子の全長をエンジイン化合物ネオカルチノスタチン生産菌Streptomyces carzinostaticusに導入したところ、ダイネミシン関連化合物の生産を確認することはできなかったものの、S.carzinostaticusのポリエン化合物の生産性を著しく増大させることを見出した。1)ダイネミシン生産菌であるMicromonospora chersinaより、ゲノムDNAを調製し、サザン分析を行ったところ、アクチノロジンのポリケタイド合成酵素遺伝子であるactI、actIIIとハイブリダイズする遺伝子の存在を確認した。ファージベクターを用いて、M.chersinaゲノムDNAライブラリーを作製し、actI、actIIIをプローブとしたスクリーニングにより、陽性クローンを得ることに成功した。actIとハイブリダイズするクローンMcIの塩基配列を部分的ではあるが、決定したところ、放射菌における芳香族ポリケタイド合成酵素遺伝子に共通した縮合酵素遺伝子、鎖長決定因子遺伝子の存在を確認することができた。また、actIIIとハイブリダイズするクローンMcIIIもクローニングすることができ、現在、その塩基配列の決定を行っている。2)クローニングしたMcI、McIIIがダイネミシン生合成の遺伝子かどうかを遺伝子破壊等の手法により確認するため、M.chersinaの遺伝子工学系の確立を試みた。まず、本菌株の薬剤感受性を検討したところ、チオストレプトン、アプラマイシンに感受性であり、Streptomycesにおいて用いられるこれら薬剤の耐性遺伝子の利用が可能であると考えられた。そこで、M.chersinaのプロトプラスト調製法、および、プラスミドベクターを用いた形質転換法についてその確立と最適化を試みている。ダイネミシン生産菌であるMicromonospora chersinaより、アクチノロジン生合成のactI遺伝子をプローブとして、クローニングした約20kbの遺伝子断片のうちの14.3kbについて、塩基配列を決定し、Open Reading Frame(ORF)の解析を行ったところ、12個のORFの存在を見出すことができた。

データベースのホモロジー検索により、ORF6、ORF8は、それぞれポリケタイド生合成のスターターユニットの供給に関与すると考えられるCoA-ligase、acyltransferaseとの相同性を示した。ポリケトメチレン鎖の伸長に関与すると考えられる縮合酵素(ORF4)、鎖長決定因子(ORF5)、また、生成したポリケトメチレン鎖の閉環を触媒するcyclase(ORF2)の存在も認められた。更に閉環後の酸化的修飾に関わると推定されるoxygenaseをコードするORF10も存在しており、放線菌タイプII型ポリケタイド合成酵素遺伝子クラスターに共通した遺伝子配置に加え、特異的なスターターや、酸化的修飾に関わる遺伝子などこれまでに例のない特徴的なクラスターを構成していた。生合成遺伝子の破壊による生産能の欠失を検討したが、M.chersinaの遺伝子破壊株を得ることはできなかった。一方、クローニングした遺伝子の全長をエンジイン化合物ネオカルチノスタチン生産菌Streptomyces carzinostaticusに導入したところ、ダイネミシン関連化合物の生産を確認することはできなかったものの、S.carzinostaticusのポリエン化合物の生産性を著しく増大させることを見出した。
光電子機能を有するポリペプチド性情報変換分子モジュールの組立と機能性御

本研究は、タンパク質の高度な機能の本質、つまりポリペプチドの立体構造とそれにより高度に配向化された機能団という特徴を化学的に模倣し、光電子機能性材料の基盤となるポリペプチド性光電子機能分子モジュールの組立を行うことを目的とする。本年度は、denovodesign法により設計した4α-ヘリックスバンドルポリペプチド中のアミノ酸側鎖に機能性原子団を導入し、ポリペプチド3次元構造中への機能性原子団の配向固定化を行った。芳香族側鎖を持つ非天然アミノ酸含有人工タンパク質を4α-ヘリックスバンドル構造として組み立てた。異なるセグメント上に2個のピレンを配置した場合、4α-ヘリックスバンドル構造を証明するエキシマー発光が見られた。さらにバンドル内部の疎水場ヘドデシルアクリジンオレンジを取り込ませることにより、この蛍光エネルギーをアクリジン環に効率良く移動させることに成功した。またトリプトファンとダンシル基を対にした系では、バンドル構造においてインドールからダンシル基への完全なエネルギー移動が認められた。これらの人工タンパク質の立体構造に依存した高効率エネルギー移動現像を利用し、人工タンパク質の種々の溶存状態でのfolding状態を解析した。両親媒性α-ヘリックスモチーフを適用した本人工タンパク質は、水溶液中で特定の4α-ヘリックスバンドル構造を形成するが、メタノール添加により3次元構造の融解やグアニジン塩酸塩の添加によって、2次構造の崩壊が起こる。上記エネルギー移動の減少過程から、これらの3次元構造変化がモルテングロビュール準安定状態を経てランダムコイル構造へ変化していくことを明らかにした。これらの成果から、人工タンパク質設計の精密化に必要な機能性原子団の空間配置を達成するための重要な知見が得られた。これらを光機能の高度化に応用することにより、新たな人工タンパク質創製が可能となるであろう。
電子相制御に基づく一次元金属錯体の新機能創出

MX錯体の未踏の電子状態にひそむ新しい機能の創出を目指し、本研究では以下の2つのテーマに取り組んできた。【テーマ1】AV相の実現による初の金属伝導性の発現とスピンラダー化合物への展開【テーマ2】MX錯体への多孔性の導入による初の化学ドーピングの実現本年度は錯体合成を中心に取り組んだ。テーマ1では、L-酒石酸から誘導される配位子(2S,3S)-2,3-diaminobutane-1,4-diol (dabdOH)を合成し、これを配位子に用いて新しいMX錯体の合成を試みた。ヨウ素架橋Pt錯体は、既報の塩素架橋や臭素架橋Pt錯体とは異なる結晶構造となり、目標としていた平均原子価相を有するPt(III)錯体には未だ成功していない。このため、今後はアルキル鎖間に働く引力的相互作用など、他の因子と複合化させる必要があると考えられる。また、dabdOH配位子から一段階で合成できる五員環を有するキレート配位子dathfも合成したので、今後は単一鎖系MX錯体及びラダー型MX錯体の合成に進む予定である。テーマ2では、2-aminomethylpyridine (amp)を配位子に有するMX錯体の合成に初めて成功した。これは単一鎖のMX錯体として、面内配位子に芳香族部位を有する初めての錯体である。芳香族部位は有機合成反応により様々な置換基を導入可能なので、今後はピリジル基の導入などにより、多孔性MX錯体への発展が期待できる。なお、このMX錯体には対イオンとしてPt(IV)錯体が含まれており、2つのMX鎖間に挿入してπ積層構造を構築し、結晶構造を安定化していることが明らかとなった。これもこれまでにない新しい構造的特徴である。テーマ1については、ヨウ素架橋Pt錯体の合成に成功していない点はやや計画通りに進んでいないと言えるが、dabdOHを原料としたdathf合成など、当初計画に無かった新しい配位子合成にも成功しており、今後の展開が期待できる。最近、対アニオンにアルキル鎖を有するヨウ素架橋Pt錯体において、結晶内に電子状態の相分離と思われる現象が見つかったので、部分的には平均原子価状態が得られている可能性がある。テーマ2では、ampを配位子に有するMX錯体の合成に成功したことで、dabdOH配位子を用いるよりもより安価かつ容易に多孔性MX錯体を合成する道が開けた。現在、ピリジル基の導入を進めている。また、diethylenetriamineとパラ置換ピリジンを配位子に持つMX錯体の合成にも成功した。この系もチューブ型の多孔性MX錯体の合成に繋がることが期待される。以上のことから、研究はおおむね順調に進展しているといえる。テーマ1については、引き続きヨウ素架橋Pt錯体の合成を目指す。水素結合ではなくハロゲン結合による鎖間距離制御を行うため、dabdBt, dabdIなどの新しい配位子も合成し、dathfとともにMX錯体の合成に用いる。また、対アニオンにアルキル鎖を有するヨウ素架橋Pt錯体において、電子状態の相分離現象をラマン散乱スペクトルのマッピング測定等によって詳細に調査し、狙っていた平均原子価状態が発現しているかどうかを確認する予定である。テーマ2については、ampやdien-パラ置換ピリジン系を面内配位子として用いることで、多様なMX錯体の合成へと展開していく。amp系は多孔性MX錯体への展開が期待されるため、鈴木カップリング等を駆使して様々な配位性置換基を導入する予定である。dien-パラ置換ピリジン系では、多孔性に加えて、ピリジル基を有する様々な機能性有機分子を導入できると考えている。

テーマ1については、ヨウ素架橋Pt錯体の合成に成功していない点はやや計画通りに進んでいないと言えるが、dabdOHを原料としたdathf合成など、当初計画に無かった新しい配位子合成にも成功しており、今後の展開が期待できる。最近、対アニオンにアルキル鎖を有するヨウ素架橋Pt錯体において、結晶内に電子状態の相分離と思われる現象が見つかったので、部分的には平均原子価状態が得られている可能性がある。テーマ2では、ampを配位子に有するMX錯体の合成に成功したことで、dabdOH配位子を用いるよりもより安価かつ容易に多孔性MX錯体を合成する道が開けた。現在、ピリジル基の導入を進めている。また、diethylenetriamineとパラ置換ピリジンを配位子に持つMX錯体の合成にも成功した。この系もチューブ型の多孔性MX錯体の合成に繋がることが期待される。以上のことから、研究はおおむね順調に進展しているといえる。テーマ1については、引き続きヨウ素架橋Pt錯体の合成を目指す。水素結合ではなくハロゲン結合による鎖間距離制御を行うため、dabdBt, dabdIなどの新しい配位子も合成し、dathfとともにMX錯体の合成に用いる。また、対アニオンにアルキル鎖を有するヨウ素架橋Pt錯体において、電子状態の相分離現象をラマン散乱スペクトルのマッピング測定等によって詳細に調査し、狙っていた平均原子価状態が発現しているかどうかを確認する予定である。テーマ2については、ampやdien-パラ置換ピリジン系を面内配位子として用いることで、多様なMX錯体の合成へと展開していく。amp系は多孔性MX錯体への展開が期待されるため、鈴木カップリング等を駆使して様々な配位性置換基を導入する予定である。dien-パラ置換ピリジン系では、多孔性に加えて、ピリジル基を有する様々な機能性有機分子を導入できると考えている。MX錯体の合成過程で、ヨウ素架橋Pt錯体の合成が予想通りに進まなかったため、当初使用する予定だった物性測定関連費などを使わず、合成原料の購入に使用した。今後、平均原子価状態の化合物が得られ次第物性測定に進むので、物性測定関連費はその際に利用する予定である。次年度は引き続き合成を主体とした実験となるので、主に試薬代やガラス器具第、元素分析測定費等に助成金を使用する。また、低温における伝導度測定のために液体ヘリウム代としても使用する予定である。測定実験では東京大学新領域創成科学研究科の岡本博研究室や高エネルギー加速器機構(放射光X線回折)に出張する必要があり、そのための旅費としても用いる。成果発表のための旅費の支出は予定通り行う。
進行性系球体障害に対する遺伝子治療の開発

進行性腎障害の進展を阻止する治療法の開発は腎臓病学における最も重要な課題の一つである。この原因として、増殖因子であるTransforminggrowthfactor-β(TGF-β)やPlatelet-derived growthfactor(PDGF)の過剰発現が糸球体硬化病変の形成に重要な役割を果たしていることが知られている。我々は、これらの増殖因子の過剰発現を抑制することにより、臨床応用可能な遺伝子治療を求める新たな視点からTGF-βおよびPDGFの特異的阻害物質として、それぞれのレセプターの細胞外ドメインとヒトイムノグロブリンG(IgG)のFc部分からなるキメラ分子(TGF-βR-Fcキメラ分子,PDGFR-Fcキメラ分子)を作製した。これらのキメラ分子の遺伝子をCOS細胞に導入すると本来の受容体と同じように2量体で分泌され、それぞれTGF-βおよびPDGFの作用を抑制した。そこでこれらのキメラ分子の発現ベクターをHVJ-リポソーム法を用いて筋肉に遺伝子導入することにより血流を介して作用させ,TGF-βおよびPDGFの過剰発現による実験的腎炎に対する遺伝子治療の可能性を検討した。その結果、血流を介して腎臓にこれらのキメラ分子が集積することを確認し、また、Thy-1腎炎ラットの腎糸球体でのTGF-βおよびPDGFのmRNAがそれぞれ減少することが認められた。この増殖因子の発現低下と一致して、腎炎ラットのメサンギウム細胞外基質の増生が抑制された。この結果はTGF-βおよびPDGFの過剰発現による進行性腎障害に対して、レセプターキメラ分子発現ベクターによる遺伝子治療の可能性を示唆するものである。TGF-βは多様な作用を持つサイトカインであり、細胞外基質増加、細胞増殖の抑制等が知られており糸球体腎炎の進展には重要な鍵を握る因子である。TGF-βII型受容体細胞外ドメイン-IgGFcキメラ分子(TGFbRII-IgG)を用いることにより、腎疾患が進展するときに過剰発現するTGF-βを抑制することを試みた。ヒトTGF-βII型受容体の細胞外部分とヒトIgGのFe部分のcDNAを接続し、pCDMに組み込みキメラ抗体を発現するベクターを作製した。このベクターをCOS細胞に導入して発現するTGFbRII-IgGを精製した。精製されたTGFbRII-IgG分子によりTGF-β抑制作用はBNul-7細胞の増殖抑制効果およびファイブロネクチンEDA+の遺伝子発現により評価した。1.25ng/mlのTGF-β作用を完全に抑制するTGFbRII-IgG量は1μg/mlであった。さらに抗Thy1腎炎モデルラットの糸球体硬化が抑制できるかを検討した。Thy-1抗体投与翌日に大腿四頭筋にTGF-βRII-IgG遺伝子を導入すると7日目に腎糸球体のTGF mRNAレベルは抑制され、また細胞外基質の産生も抑制された。このTGFbRII-IgG分子はin vivo,in vitroにおいてTGFb作用を抑制し、糸球体硬化を抑制する可能性が示唆された。また、同様にPDGF-b受容体細胞外ドメイン-IgGキメラ分子の効果をin vitroで確認後、このキメラ分子を遺伝子導入することにより糸球体腎炎を抑制することを試みた。その結果、キメラ分子発現ベクター導入群の糸球体では細胞増殖のマーカーであるPCNA陽性細胞数の著明な低下が認められた。糸球体のmRNAレベルは同群でTGF-β1・I型コラーゲン・FNのmRNAが抑制されていることが確認された。この作用は発現ベクターを病変惹起の1日前に投与した群で強く認められた。また、糸球体像においても細胞外基質産生が強く抑制されていることが確認された。レセプターキメラ分子

発現ベクター遺伝子の筋肉への遺伝子導入により、過剰発現したキメラ分子を血流を介して作用させることが可能となり、この方法によりTGF-βおよびPDGFの過剰発現による進行性腎障害に対して、遺伝子治療の可能性が示唆された。進行性腎障害の進展を阻止する治療法の開発は腎臓病学における最も重要な課題の一つである。この原因として、増殖因子であるTransforminggrowthfactor-β(TGF-β)やPlatelet-derived growthfactor(PDGF)の過剰発現が糸球体硬化病変の形成に重要な役割を果たしていることが知られている。我々は、これらの増殖因子の過剰発現を抑制することにより、臨床応用可能な遺伝子治療を求める新たな視点からTGF-βおよびPDGFの特異的阻害物質として、それぞれのレセプターの細胞外ドメインとヒトイムノグロブリンG(IgG)のFc部分からなるキメラ分子(TGF-βR-Fcキメラ分子,PDGFR-Fcキメラ分子)を作製した。これらのキメラ分子の遺伝子をCOS細胞に導入すると本来の受容体と同じように2量体で分泌され、それぞれTGF-βおよびPDGFの作用を抑制した。そこでこれらのキメラ分子の発現ベクターをHVJ-リポソーム法を用いて筋肉に遺伝子導入することにより血流を介して作用させ,TGF-βおよびPDGFの過剰発現による実験的腎炎に対する遺伝子治療の可能性を検討した。その結果、血流を介して腎臓にこれらのキメラ分子が集積することを確認し、また、Thy-1腎炎ラットの腎糸球体でのTGF-βおよびPDGFのmRNAがそれぞれ減少することが認められた。この増殖因子の発現低下と一致して、腎炎ラットのメサンギウム細胞外基質の増生が抑制された。この結果はTGF-βおよびPDGFの過剰発現による進行性腎障害に対して、レセプターキメラ分子発現ベクターによる遺伝子治療の可能性を示唆するものである。
顎口腔系のMRI,三次元咬合力および筋電図同時分析による顎関節態究明

顎関節症は唄嚼筋や顎関節に発現する機能異常であり、本症の本態究明には、正常機能に関する詳細な検討が求められる。また咀嚼筋の走行や付着部位など顎顔面の形態的要素は、咬合力発現時の各筋の活動量や顎関節内応力に影響する。そこで、咀嚼筋機能を形態との関連において分析することはきわめて有用と思われる。そこで当初、咀嚼筋相互の協調様式を解明する目的で、正常有歯顎者に咬合力を三次元的に規定したクレンチを命じ、その際の咬筋、側頭筋の表面筋電図を記録分析した。その結果、咬合力方向の前後的、左右的変化に伴い両筋の活動は逆向きの変化を示し、咬合力方向に関して両筋が相反的な協調活動様式を有することが判明した。次に、顎関節症の筋症状が頻発する咬筋で、その各部の機能的性質の相違を検討した。複雑な層構造や不均質な組織化学的筋線維構成から、咬筋は筋各部の機能が異なると推察されるためである。三次元咬合力と運動単位記録の同時記録に基づく本研究から、運動単位が発火を示す咬合力方向の範囲は、運動単位の記録部位によって相違し、咬筋各部の機能的役割が異なることが判明した。またその相違は前後部間と比較し深浅部間で著明であり、咬筋の層状構造を反映するものと考察された。一方、咬筋、側頭筋の協調様式と顎顔面形態の関係を明らかにするため、頭部X線規格写真による形態分析を行った。被験者間で両筋の協調活動様式はほぼ同様であったものの、各筋の活動量は下顎下縁の傾斜など形態的要素の影響が示唆された。本研究では咬筋、側頭筋の協調活動様式と咬筋各部の機能的役割が解明された。しかしながらこれらと顎顔面形態との相関は今後の課題となった。顎関節症の本態究明には、顎口腔系の生体力学的解析が必須であり、形態的、機能的研究が重要であることは明らかである。本研究の目的は、顎関節症の本態を解明するためにMRI、咀嚼筋筋電図(EMG)および三次元咬合力を測定し、形態と機能の両者から顎口腔系を分析することにある。特に本年度は、顎口腔系の最終出力である三次元咬合力と咀嚼筋筋電図の対応関係を分析した。はじめに三次元咬合力および咀嚼筋筋電図を、被検者に中心咬合位で上方、左・右側方および前・後方への5秒間の中等度のクレンチを10回ずつ行わせて測定したところ、上方クレンチでは左右側咬筋の筋活動量が最も大きく、咬合力ベクトルの垂直成分が著しく大であった。一方、左・右側方クレンチでは、クレンチ方向と同側の側頭筋前腹の筋活動量が著明に増加し、咬合力ベクトルもクレンチ方向側へ移動した。後方クレンチでは側頭筋後腹の筋活動量が増加し、前方クレンチでは咬筋活動量が増加した。これに伴い、咬合力ベクトルの方向は各々、後方、前方へと移動した。これらの結果から、各々のクレンチによって咬合力の方向が規則的に移動し、また各咀嚼筋の筋活動量が変化することが判明した。

そこで咀嚼筋筋電図と三次元咬合力の関係を詳細に知るために、正常有歯顎者に咬合力の方向を前後的および左右的に規定したクレンチを行わせ、そのときの各咀嚼筋の筋活動量を同時分析した。その結果、咬筋活動量は咬合力の前方成分が増加するにつれて増大し、側頭筋前腹の筋活動量は咬合力の後方成分が増加するにつれて増大した。一方、側頭筋前腹では筋の同側方向のベクトル成分が、咬筋では反対側方向のベクトル成分が増加するにつれて、各々の筋活動量が著明に増大することが判明した。すなわち、咬筋と側頭筋前腹は咬合力の方向に対して相反的な役割を果たしていることが明らかになった。今後、これからの結果をMRI分析から得られる結果と併せて顎関節症患者に応用し正常者と比較検討する予定である。顎関節症の筋症状はすべての咀嚼筋に発現するが、その様式は一様でない。本研究の目的である顎関節症の本態究明には、各咀嚼筋の形態と機能に渡る詳細な知識が必須である。咬筋は顎関節症の筋症状が頻発するため、本疾患の本態究明にとりわけ重要と思われる。一方、本筋は複雑な層構造や不均質な組織化学的筋線維構成を有し、その機能は筋各部で相違すると推察される。そこで、本年度は咬筋活動をより詳細に検討する目的で、顎口腔系に機能異常を認めない正常有歯者3名に三次元咬合力測定装置を応用し、クレンチング時の咬合力の大きさと方向を種々に変化させながら咬筋運動単位の活動を導出し、以下の知見を得た。運動単位活動は、咬合力の大きさと方向に依存して変化し、各運動単位は、活動を示す固有の咬合力方向の範囲(活動範囲)を有した。活動範囲の広さと運動単位の発火閾値には、負の相関が認められた。活動範囲の広がりや、その広さは個々の運動単位で異なるものの、前方ないし記録側の対側方を活動範囲に含む運動単位の割合は高く、後方ないし記録側と同側方を範囲に含む運動単位の割合は低かった。運動単位の活動範囲は記録部位で異なり、前部および深部の運動単位で広く、浅部で狭い傾向が認められた。運動単位の活動範囲の相異は、前後的記録部位間と比較し内外側的記録部位間で著明であった。以上の結果より、種々の咬合力方向の発現に際して、咬筋各部は異なる機能的役割を果すことが明らかになった。また、咬筋の内外側的部位間の機能的の相違が前後的部位間に比較して著明であるのは、咬筋の層状構造を反映するものと考察された。本研究で得られた知見は、咬筋各部に見られる圧痛の発現機序を解明するうえで、重要であるものと思われる。
肝線維化モデル動物を用いた抗肝硬変治療薬候補化合物の薬理作用解析

肝線維化疾患の治療薬は肝細胞を標的とした機能解析およびスクリーニングにより開発がなされてきたが、本研究グループは肝臓構成細胞間の相互作用に着眼し、抗線維症治療薬候補となりうる、HSC活性化を阻害する因子の探索を行い数個のリード化合物の選定を行ってきた。方法としてHSC活性化の指標遺伝子であるヒトCOL1A2のプロモーター下流に赤色蛍タンパクmCherry遺伝子を導入した星細胞株を構築した。この細胞系を用いて、GloMax Multi Detection Systemで経時的に蛍光強度の定量をし、2万化合物ライブラリー(大阪大学創薬推進研究拠点)から星細胞活性化を抑制し、弱毒性の化合物を探索した。Hit Validationから数十化合物(骨格)に絞り込み、さらに、In vitro実験で化合物添加により線維化関連遺伝子の発現抑制を確認した。結果、数個の化合物から最もHSC活性化抑制効果を示した、化合物Aを選出した。化合物AはIn vitro系でCollagen, αSMAなど線維化関連因子の発現を減弱し、強力な活性化誘導因子であるTGF-βに拮抗しHSCの活性化を抑制した。本研究では化合物Aの薬効作用をin vivo実験で立証し前臨床試験を終了することを目的とした。肝線維化モデル動物を用いた候補化合物評価および薬理作用の解析を行うために、マウス肝線維化モデルとして、thioacetamideをエスカレーション法により腹腔内投与し、溶媒または候補薬剤を2週間投与後、マウスの肝臓組織を溶媒群と候補薬剤群で比較し、薬剤による線維化軽減を観察した。また、病態モデルの血液を継続的に採取し、血清調整後ASTおよびALTの肝機能パラメーターを計測した。結果、化合物A投与群は、コントロール(溶媒)群に比較して、AST, ALT共に有意に減少し、また、HEにより肝組織の障害レベルが減衰、およびSirius Red染色により線維化軽減が認められた。さらに、現在、高脂肪高コレステロール食(HFCD)による肝NASH線維化モデルを作製し、更なる化合物の薬効と毒性試験を行っている。この結果により化合物Aを含む抗線維化剤について特許を出願した。
アレルギー性鼻炎における細菌叢の解析と短鎖脂肪酸の影響に関する検討

アレルギー性鼻炎患者の鼻粘膜に、シャルコットライデン結晶が認められるが、この結晶はgelatin10からなり、好酸球のETosisによって形成されることが判明した。スギ花粉症患者群、スギ花粉感作陽性だが花粉症症状なしの群、スギ花粉未感作群の鼻粘膜に関する網羅的解析によって得られたCST-1についてスギ花粉症発症機序への役割を詳細に調べた。CST-1は蛋白分解酵素阻害作用を持ち、スギ花粉の蛋白分解酵素効果を減弱させた。しかしブタクサ花粉の蛋白分解酵素活性には影響を及ぼさなかった。スギ花粉症マウスモデルにおいて、リコンビナントCST-1を投与するとアレルギー症状が減弱した。しかしブタクサ花粉症マウスモデルでは、アレルギー症状の減弱は認められなかった。CST-1を条件的に発現させるマウスにおいて、アレルギーマウスモデルを作成すると、コントロールに比べ鼻粘膜のバリア機能が強化され、アレルギー反応が減弱した。このことはCST-1が新規のアレルギー性鼻炎治療ターゲットをなりうることを示した。CST-1発現は鼻腔内の特定の細菌の存在と関連していた。アレルギー性鼻炎患者50名の鼻腔及び口腔内の細菌叢を調べるためにサンプルを回収した。現在次世代シークエンサーにて解析中であり、別途採取した慢性副鼻腔炎患者との細菌叢の違いを検討中である。概ね計画通りに進んでいる。我々は、アレルギー性鼻炎の鼻粘膜組織内において凝固系因子が亢進し、線溶系因子であるtissueplasminogenactivator(t-PA)が低下していることを見出した。t-PA産生を亢進させることによりTh2環境が変化し、アレルギー性鼻炎が改善傾向に向かう可能がある。そのため気道上皮からt-PAを産生させるアゴニストを探したが、該当する物質はわからなかった。一方で、アレルギー疾患特にアトピー性皮膚炎などにおいて、腸内細菌叢の状態が病状に反映さえるとの報告がなされている。アレルギー性鼻炎においては、腸内細菌叢の報告はないが、プロバイオティクス、プレバイオティクスによるアレルギー性鼻炎症状の発現抑制、症状の改善などがメタ解析でも証明されている。そこで腸内細菌叢が産生する短鎖脂肪酸に着目して、短鎖脂肪酸が気道上皮細胞からt-PA産生を誘導するかを検討した。その結果、1短鎖脂肪酸受容体であるG-protein-coupled receptor (GPR)41とGPR43が鼻粘膜気道上皮細胞に存在していた。2プロピオン酸、酪酸、吉草酸、酢酸の順に気道上皮細胞からt-PA産生を誘導した。3放出されたt-PAは生物学的活性を有していた。4短鎖脂肪酸によるt-PA産生誘導がGPR41とGPR43依存性であることを見出した。アレルギー性鼻炎において、抗原感作成立が直ちに発症にはつながらず、免疫担当細胞は不活性化状態でとどまっている。その機序として、体内の細菌叢およびそれら細菌によって食物繊維から発酵した短鎖脂肪酸が、重要な役割を果たしているのではないかと考えた。近年、短鎖脂肪酸が大腸疾患をはじめとする炎症の増悪を抑制している報告が相次いでいる。そこで腸内細菌叢及び鼻腔細菌叢を継時的に調べ、アレルギー性鼻炎に特徴的な細菌パターンを明らかにするため、倫理委員会の承認をすでに得て、マイクロバイオームを開始した。しかしなかなか便の回収に同意を得ることが難しく、症例数が上がってきていない。短鎖脂肪酸に関してアレルギー性鼻炎の免疫担当細胞にいかなる影響を与えるのか、in vitroにて検討する。アレルギー性鼻炎患者のマイクロバイオームに関しては、研究協力金を支払うことで、症例数を増加させていく。アレルギー性鼻炎の線溶系抑制と凝固系亢進の減少をt-PA以外の因子でも証明し、それらの発現に短鎖脂肪酸がどのような影響を及ぼすのか明確にしていく。
対話を規定する概念の因果構造の分析に関する研究

1.対話を生成する際の発話の基礎になる概念の因果関係を検討するため、「分類語彙表」(国立国語研究所編、昭和39年)の中から、6種類の概念の群を抽出し、これらの相互関係・類縁関係手段・目標関係生成と変転の関係などを調べ、概念が云語化される場合の基本過程を検討した。選ばれた概念群は自然、人間、動物、生産物(用具)、建物、機械から成っており、第1実験としてこれらの各概念の類がどのような類縁・性能関係を有しているかを調べ、第2実験としてこれらの概念が手段と目標の関係に並べた場合どのような概念の対が出来るかを検討し、第3実験として各概念を動作主とした場合、それに基いてどのような動作・運動が生ずるかを検討した。ついで第4実験として人間の行為・動作がどのような因果関係にもとづいて生ずるかを調べ、第5実験として自然界・出来事の生成と変転の結果を調べ、さらに第6実験として社会・文化的慣習におけることがらの成り行きに関する因果関係を検討した。実験はすべて質問紙状により予め用意された語彙概念を一定の順序に並べさせるという方式により行った。結果を総括的にのべると、6つの概念はその性能、類縁関係は、場所、手段、目標等をもち、一定の動作や運動を伴う因果的な関係をなして存在することが確認されたことである。(研究代表者入谷の研究)2、対話事態における指示詞コ、ソ、アの使い分けに話し手からの距離、空間の広さ、話し手/聞き手の関係、操作可能性がどのような影響を与えるかを被験者のまわりに同心円状に事物を配置し、それらを被験者がどのような指示詞を使って示すかを記録した。この結果被験者の距離が大きくなるにつれて、コの使用が減少し、アの使用が増大する。指示棒の使用(持続可能性の増大)はコの使用を増大させることが判明した。(研究分担者小熊の研究)1.対話を生成する際の発話の基礎になる概念の因果関係を検討するため、「分類語彙表」(国立国語研究所編、昭和39年)の中から、6種類の概念の群を抽出し、これらの相互関係・類縁関係手段・目標関係生成と変転の関係などを調べ、概念が云語化される場合の基本過程を検討した。(研究分担者小熊の研究)