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Brap遺伝子はRas-MAPK症候群の原因遺伝子か?モデルマウスと遺伝子解析

BRAPの生物学的意義を明らかにするために、brapの遺伝子改変マウスを作製した。マウスは胎生致死であり、BRAP分子の発生発達過程における重要な役割が示唆された。BrapがRas-ERK経路の活性化に関与するか、BRAP欠損によってどのような変化がこのマウスに現れるか、胎生期のマウスから胎児線維芽細胞を作製し解析したところ、BRAPを欠損するとERKのリン酸化の亢進が観察された。Gene trap法によりbrap2をターゲッティングしたES細胞より、キメラマウスを作製し、さらにヘテロマウスを得た。ノックアウトマウス作製を試みたところ、brap2遺伝子のホモ欠損マウスは胎生致死であることが判明した。胎齢89日においては、野生型、ヘテロ、ホモ欠損のすべての遺伝子型が観察される。野生型、ヘテロ、ホモ欠損の胎仔サンプルよりMEFを作製し、Ras-MAPK経路の活性化の程度に差が見られるかどうか解析した。MEF細胞よりタンパク質を抽出し、ウェスタンブロットによりRas-ERK経路の分子の発現解析、またERKキナーゼ活性の測定を行った。その結果、brap2の遺伝子欠損はRas-ERK(MAPK)経路を恒常的に活性化することが示唆された。Ras-MAPK経路の恒常的活性化が原因とされるNeuro-Cardio-Facial-Cutaneous症候群の表現型をヘテロマウスが示すか、野生型マウスと比較検討しているが、明らかな差異は見ちれていない。また遺伝的背景を均一に近づけるためバッククロスを行っている。これまでの結果より、brap2遺伝子は個体の発生発達に重要な役割を果たしていること、Ras-MAPK経路の活性を制御していることが明らかになった。同腹のヘテロマウスと野生型マウスにおいて、各臓器・組織におけるbrap2の役割を解析している。Neuro-Cardio-Facial-Cutaneous症候群の患者の遺伝子解析も進める。Ras-MAPK経路の恒常的活性化が原因とされるNeuro-Cardio-Facial-Cutaneous症候群の表現型をヘテロマウスが示すか、野生型マウスと比較検討しているが、明らかな差異は見られていない。見かけ上、野生型と差異が見られていないので、個体レベルでの変化を解析するため行動実験を行っている。臓器によっては、brap2遺伝子欠損によると考えられるRas-ERK(MAPK)経路の恒常的活性化が観察された。Neuro-Cardio-Facia1-Cutaneous症候群の患者の遺伝子解析も進める予定である。我々は乳がん抑制遺伝子BRCA1に結合する分子としてクローニングされたBRAP2分子が細胞周期阻害分子p21Cip1/WAF1(p21)の核移行シグナル(NLS)に結合し、p21の核移行を阻害し細胞質に保持する分子であることを明らかにした(Asada et al, MCB, 2004)。BRAP2の生物学的意義を明らかにするために、brap2の遺伝子改変マウスを作製した。brap-2nullマウスは胎生致死であり、BRA2分子の発生発達過程における重要な役割が示唆された。Brap2がRas-ERK経路の活性化に関与するという状況証拠(論文)が提示されたため、本研究を開始しようとした。BRAP2欠損によってどのような変化がこのマウスに現れるか、胎生期のマウスから胎児線維芽細胞を作製し解析したところ、BRAP2を欠損するとERKのリン酸化の亢進がgene dose dependentに観察された。ヘテロマウスは見かけ上、異常は観察されなかった。Ras-MAPK症候群において、ヒトにおいては特徴的顔貌を示し、神経/心臓/顔面/皮膚/造血器などに症状が現れる。マウスにおいて心臓や造血組織を観察したところ、共通した異常所見は観察されなかった。

一方、解析した組織において生化学的解析により、野生型に比べERKのリン酸化亢進が観察された。症状は観察されないもののBrap分子のRas-MAPK症候群への関与の可能性は否定できないと考えている。Brap2遺伝子欠損マウスを作製し、Neuro-Cardio-Facial-Cutaneous症候群における表現型が観察されるか検討している。現在のところ、生化学的解析においてRas-ERK(MAPK)経路の活性化を検出しているが、個体レベルで神経・心臓・顔貌・皮膚においては特徴的な変化はみられない。24年度が最終年度であるため、記入しない。Brap2遺伝子欠損マウスにおいて、Neuro-Cardio-Facial-Cutaneous症候群における特徴的表現型が神経・心臓・顔貌・皮膚においては、特徴的な変化はこれまで観察されない。個体レベルの変化を解析するために行動実験を進める。
現代的なコミュニケーションにおける笑いと障がい者表象のポリティクス

本研究では、メディアにおける障害者表象を題材としながら、障害者に向けられた視線に付随する権力性や政治性を明らかにしてきた。とくに、障害者表象の意味とは表象そのものに内在するわけではなく、それを受容する人々の視線によって生成されるものであるという視点は、当該研究の中核をなす。本研究では、多くの障害者表象がしばしば「笑い」という要素を排除した構造をもつことに着目し、障害者自身が笑いを積極的に用いて自己表現を行なうような事例を分析することで、そこでの笑いがもつ社会的役割を検討してきた。最終年度となる本年度は、障害者と笑いの新たな関係性(「パフォーマー」としての障害者)を示す事例である、NHK制作・放送のテレビ番組『バリバラ』を分析題材として取り上げ、そこで提示される障害者による笑いを用いたパフォーマンスの位置づけや、番組全体の社会的意義について検討した。また、番組制作関係者や出演者へのインタビュー調査も行ない、表象の意味が多角的に生成されていく点にも論及した。さらに本研究では、障害者と笑いの関係を論じるうえで、新たにコミュニケーションという観点を導入した。とりわけ障害者パフォーマンスを視聴するという行為が、「よきオーディエンス」の想定や「よきコミュニケーション」の想定を前提として成り立つものであることを示し、そのような前提が障害者パフォーマンスを笑うという視聴者の行為を規定しうることを論じた。これらの点は、本研究の今後の発展可能性として、社会やコミュニケーションという視座との接合を試みていくための端緒となったと考えられる。29年度が最終年度であるため、記入しない。平成26年度の研究では、メディア(写真および映画)における障害者表象の分析をおこなった。その結果、1障害者表象は障害概念との関連のなかで時代にともなう変遷をたどってきた、2障害者表象が受け手(健常者)に対して理解可能なものとして障害者や障害を提示しようとしている、3そのような障害者像がときに障害の多様性や細部を隠蔽する力として作用しうる、といった問題が明らかになった。1:メディアのなかの障害者は差別あるいは同情の対象から「共生」の対象へと変化してきた。その背景には、障害概念の変化が介在していると考えられる。現代社会において障害者を差別的に描くことはもはやタブー視されているが、その代替として違和感なく受容されている障害者像にも、障害者をステレオタイプ化し一元的なものとして提示するという点では疑義が呈される。2:障害者が「共生」の対象として表象されることによって、それを受容する人々が同化可能な存在として障害者を理解できるような枠組みが設定されている。それらの表象は、障害者表象に対するわかりやすい「読み」を促し、ときには表象のなかの障害者とそれを受容する人々のあいだに生じる「わたし」と「あなた」の関係を置き換え可能なものとして提示する。3:映画の場合、障害の多様性や細部の隠蔽は、とりわけ障害をめぐる物語が「コミュニケーションの不全」から「コミュニケーションの成立」という一様なプロセスを描くことによってなされている。また写真の場合には、被写体としての障害者が主題に従属的な配役された存在として位置づけられ、匿名的な背景やノイズとして存在する可能性が排除されていることを指摘できる。平成27年度には、本研究の最終目標(障害者のコミュニケーションにおいて笑いが果たしうる役割を明らかにすること)を達成するために必要な要素のうち、笑いの問題(現代的なコミュニケーションにおいて笑いがどのような役割や機能をもつのか)に着眼することを目的として研究を進めてきた。昨今のバラエティ番組をはじめとしたメディアにおける笑いの表象を分析対象とし、それらが人々のコミュニケーションに与える影響や、現代社会における笑いの位置付けについて理論的な検討を行なった。具体的には、主にテレビメディアにおいて展開されるお笑いのジャンルに着目し、それをとりまく(1)障害者による笑いの受容、および(2)障害者による笑いの発信の二つの側面について考察をおこなった。これら二つの側面は笑いという活動をめぐる両極に位置するものでありながら、そのプロセスを精査していくと、そこには共通の問題ー「障害者」と「健常者」の関係における非対称性が笑いという文化的な活動にも介在している、あるいは「健常者」中心の社会的な制度や枠組みが笑いを含む障害者の文化的な活動を制限しうるという問題ーが認められた。平成27年度の年度計画に従い研究を進めることができた。また、その成果発表の機会を定期的に設けることで、継続的な進展と、各段階における研究状況の確認・整理が可能となった。具体的には、2回の研究発表(日本コミュニケーション学会、障害学会)、3本の論文投稿(『日本コミュニケーション研究』『年報カルチュラル・スタディーズ』)に加え、書籍における担当章の執筆(『よくわかるヘルス・コミュニケーション』『理論で読むメディア文化』『ショッピングモールと地域ー地域社会と現代文化』、いずれも2016年刊行予定)も行なった。

最終年度となる本年度は、障害者と笑いの新たな関係性(「パフォーマー」としての障害者)を示す事例である、NHK制作・放送のテレビ番組『バリバラ』を分析題材として取り上げ、そこで提示される障害者による笑いを用いたパフォーマンスの位置づけや、番組全体の社会的意義について検討した。また、番組制作関係者や出演者へのインタビュー調査も行ない、表象の意味が多角的に生成されていく点にも論及した。さらに本研究では、障害者と笑いの関係を論じるうえで、新たにコミュニケーションという観点を導入した。とりわけ障害者パフォーマンスを視聴するという行為が、「よきオーディエンス」の想定や「よきコミュニケーション」の想定を前提として成り立つものであることを示し、そのような前提が障害者パフォーマンスを笑うという視聴者の行為を規定しうることを論じた。これらの点は、本研究の今後の発展可能性として、社会やコミュニケーションという視座との接合を試みていくための端緒となったと考えられる。メディアにおける障害者ステレオタイプがいかなるものであるのかを明らかにする(具体的には、写真や映画において描写される障害者表象の分析をつうじて、メディアにおける障害者ステレオタイプが障害概念の変遷といかなる関連性をもつのかを考察していく)、という26年度の年次計画に従って、研究を進めることができた。上記の研究内容は、本研究の今後の展開において(とくにメディアにおける笑いと障害者表象の問題を扱うにあたって)不可欠な要素となることからも、本研究の最終的なテーマを念頭に置いたうえで、必要なプロセスを踏むことができたと考えられる。また調査方法や、研究成果の発表についても、概ね当初の計画どおりに進められた。本研究の最終的な目標は、1現代社会における障害者ステレオタイプがどのようなものであり、そこにはどのような問題点があるのか、2現代的なコミュニケーションにおいて笑いがどのような役割や機能をもつのかという二点を明らかにしたうえで、障害者のコミュニケーションにおいて笑いが果たしうる役割を論じることにある。最終年度は、これまでの研究で得られた成果を踏まえ、障害者による笑いを用いたパフォーマンスやコミュニケーションの実態を調査し、そこでの笑いの役割や社会的な機能について考察を行なう。具体的な研究方法としては、文献調査に加え、障害者と笑いを扱ったメディア表象(テレビ番組や映画等)の分析、さらに障害者と笑いにかかわる活動に携わる人々へのインタビュー等も予定している。上記の研究成果の詳細は、最終的に博士論文にまとめる。その研究過程を整理する過程において、学会発表(コミュニケーション学会)や学会誌(『日本コミュニケーション研究』)への投稿も引き続き行なう。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の最終的な目標は、1現代社会における障害者ステレオタイプがどのようなものであり、そこにはどのような問題点があるのか、2現代的なコミュニケーションにおいて笑いがどのような役割や機能をもつのかという2点を明らかにしたうえで、障害者のコミュニケーションにおいて笑いが果たしうる役割を論じることにある。
18世紀フランスにおける文学空間と作者

本研究は、著作権誕生以前の18世紀フランスにおける作者と作品の関係の概念を個別的な作者の視点を通して解明することを目的とする。これまでの研究では、プレヴォーの定期刊行物『賛否両論』や小説、ディドロの『出版業に関する手紙』を細かく考察し、そこに示された概念を抽出する一方、同時代の他の作家や行政官、書籍商やそれを代弁する法律家の論考と比較検討した。さらに、フランス文学論では参照されることがほとんどない法制度にも視野を広げ、16世紀から18世紀末までの英・仏出版関係法の流れの中にそれらを位置づけた。プレヴォーの場合、作者が作品として生み出したテクストという形ある部分については自らの所有権を強く訴えたが、作品に実名で署名することは一度もなく、作品のアイディアなどの無形の部分については他者との共有を進んで認め、すでに英国に萌芽していた作者と作品の絶対的関係の概念には、懐疑的な態度を示した。このことは、作者、作品、読者についてのプレヴォーの概念が前近代的な認識の中にとどまっていたことを示す。他方ディドロは、作者の個人的営為の成果である作品が作者の所有物であることを強く主張したが、同時に金銭と引き替えにその所有権を書籍商が十全に享有することを認め、その結果、書物の専売特許制度の強化と存続を訴えた。この考え方は、長く市場を独占し続けたパリの有力書籍商たちとその代弁者の主張を踏襲するもので、ディドロの独創は見られず、また近代的な著作権の概念を予告するマルゼルブなどの行政官の主張と対立するものでもあった。啓蒙思想家ディドロのイメージにそぐわないこうした概念は、文学作品を土地や樹木と同様に財産権の対象としてのみ論じ、その所有の精神的側面を無視したことに由来する。以上の成果は従来のプレヴォー、ディドロ研究が明らかにしてこなかったことであり、現在は後者について仏語の論文を準備中である。本研究は、18世紀フランスの主要な作家の文学テクストだけでなく、それらの作家が読み、寄稿していた文芸誌をも考察対象とすることによって、当時の文学空間における作者の概念を、テクスト生産者とその受容者の二つの側面から明らかにすることを目的としている。今年度の科学研究費により、Mercure de Franceの一部(1721-1740)とJournal litteraire(1713-1737)等の文芸誌のリプリント版をはじめとする書籍を購入し、現在は文芸誌を中心に分析中である。これまでの調査をとおしてわかったことは、18世紀の前期から後期にかけての作者概念の漸次的転換が、当時の文学テクストの中だけでなく、文芸誌の批評テクストや読者の投稿など、受容者側のテクストの中にも同様に検証されるということである。例えば、物質的にも精神的にも作者をその作品の絶対的所有者と考えない前近代的な作者の概念は18世紀前半までの文学テクストに頻繁に表れるが、同様の概念は同時代の文芸誌の中にも散見する。また、文学作品が匿名または偽名で刊行される習慣は、当時の文芸誌が読者とともに形成していた文芸共和国と称するユートピア的文学空間と密接に関係している。その中に登場するのは、多くの場合、匿名あるいは偽名を使った書き手であり、誰もが読者であると同時に作者となる可能性を持っていた。当時の人々にとって文学的言説を公にすることは、現実の個人を脱してもう一人の人物を生きることであったことをこのことは示唆している。現代のインターネットが提供する仮想的空間にも通じるこの文学空間の在り方は、世紀後半になると、新しいタイプの読者層の拡大、書物の商業的価値の向上とともに、次第に変質してゆく。

文学テクストの中に確認されるそうしたその変化の過程を、平行する文芸誌の中に読み取ってゆくのが今後の課題である。昨年度に引き続き、研究費で購入したMercure de France(1756-1791)を中心とする18世紀の定期刊行物等の資料の分析を進めた。同時に、著作権法成立以前のフランスにおける出版関係の法制度を詳しく調査し、出版統制に携わっていた当時の行政官や、大きな発言力を持っていた書籍商その他の論者たちの文章を分析することによって、作品と作者の所有関係について、当時の社会が共有していた概念を追求した。その上で、この問題について比較的多くの言及を残しているプレヴォーとディドロの著作を取り上げ、作者と作品の関係に関するそれぞれの概念を法制度と照らし合わせ、行政官や書籍商などの観点と比較検討することで、18世紀中期の特殊な文学空間のありようを明らかにした。本科研費の研究期間内に発表された成果としては、以下の二本の論文がある。・「作品は誰のもの?-ディドロの『出版業に関する手紙』とその前後」、『人文学報』、第323号、2001年3月、p.19-69.これらの論文をとおして、著作権の概念誕生以前の作家・作品観の過渡的な様態を示すことができたことは収穫であった。現在はディドロと作品の所有概念に関して、今回和文で発表した論文に新たな修正を加えてフランスの学術誌Recherches sur Diderot et sur l'Encyclopedieに発表を計画している。今後はさらに数多くの作家に研究対象を広げ、最終的には、旧体制期の文学作品の匿名性や一人称の多用といった現象の解明に結びつくような研究書にまとめたいと思っている。
日中戦争の再検討―マルチアーカイブによる多角的研究

初年度は日中戦争に関する各国の外交・軍事史料の収集につとめ、武漢会戦を経て重慶撤退に至る対日戦略・戦術と英国、イタリアを通じた和平交渉を主題として中国の対日抗戦を検討し、中国社会科学院近代史研究所において「中日戦争初期日本的謀和工作」と題して研究成果の報告をおこなった。まず、史料収集については、既刊の史料集である『中華民国時期外交文献彙編』やイタリア外交文書集を入手し、史料館については、計画どおりスタンフォード大学フーバー研究所史料館において白崇禧文書等の閲覧・収集を行った。欧州における調査については、本研究期間3年分に必要な英国・伊国の収集予定史料の事前調査に時間を要したことから、来年度の仏国との調査と入れ替え、仏国の調査を前倒し、英・伊を次年度に実施することとした。なお、仏国では外交史料館ならびに軍事史料館において仏国の援蒋ルートに関する史料の収集を行った。また、台湾における調査については、主たる調査先であった国史館がネットで部分的に史料公開を始めたことから、今年度についてはそれらの活用で研究を進めた。収集した史料の分析については、冒頭で述べた和平交渉についての成果を発表したほか、年度の計画に掲げた既発表論文に新たに得られたドイツ軍事顧問団の史料を加え、ドイツ軍事顧問団の中国の対日抗戦戦略に関する献策について分析をより一層具体化させた。なお、今年度研究報告を行った和平交渉部分については、次年度実施予定の英国・伊国の調査を踏まえ、内容をより具体的に展開して論文として刊行する予定である。史料収集については事前調査の実施に時間を要したために英国・伊国の調査を来年度に回したことから、当初の予定より成果の刊行は遅れるものの、基本的な構成と分析はすでに終えて成果報告を行っていることから、調査を踏まえて比較的早く成果を公表できるものと考えている。また、来年度実施予定であった仏国での調査を前倒ししたことにより、次年度の検討に着手できたことから総合的に判断して順調に進展していると評価できる。事前調査に時間を要し次年度に回した英国・伊国の調査を実施するとともに、台湾において中国の対英米工作に関する史料を党史館ならびに国史館において実施する。あわせて、以上の収集史料をもとに1939年から1941年にかけての中国の対日抗戦戦略について取りまとめ、成果として公刊する。
在庫管理費用とサプライチェーンの構造の関係を考慮した商店立地に関する理論分析

現代のスーパーやコンビニエンスストアなどのフランチャイズ小売企業の多くは、物流センターを都市内に配置し、傘下のチェーン店に商品を配送する戦略を採用している。この傾向には、都市内道路網整備等による物流費用の継続的低減が寄与している可能性がある。仮に、都市内道路ネットワークが未整備であり、物流センターとチェーン店間の商品の輸送時間が長い場合には、チェーン店が急遽商品を追加発注したとしても、商品がチェーン店に配送されるまでの間に在庫切れが発生する可能性がある。このため、チェーン店は安定的に商品を販売するために、商品の在庫ストックを増加させることが合理的となる。このような状況では、チェーン店は物流センターを介さずにサプライヤから直接商品を仕入れることが効率的になると考えられる。一方、都市内物流時間が十分に短縮されれば、都市の物流拠点となる物流センターを配置することが効率的になると考えられる。平成30年度においては、以上の問題意識を踏まえ、フランチャイズ小売企業の在庫管理戦略(在庫の発注タイミングやロットサイズ、在庫切れを防ぐための安全在庫の積み増し)を明示的に考慮した、理論的な立地モデルを定式化した。モデル内における小売企業は、自己の利益を最大化するように、サプライチェーンの構造(物流センターを立地するか否かや、都市内のチェーン店数)を決定する。このモデルを分析することにより、都市内道路整備による物流の円滑化が、都市内物流センターやチェーン店の立地パターンを再編する効果と、消費者の買い物利便性を改善する効果について分析を行った。これにより、都市内道路整備がもたらすストック効果に関する新しい知見を得ることができた。研究計画の作成時点において、研究により何を明らかにすべきかや、具体的なモデルの構想について十分に検討していたことが役に立ったと考えられる。今後も研究計画に沿って研究を進める。平成31年度においては、平成30年度に作成したモデルの現実的な応用を可能とするために、『(1)異質なメッシュ状の地区から構成される2次元平面状の空間を持ち、(2)商店に商品を供給する小規模な物流センターの上流に、基幹的な物流センターを置くことができる』という特徴を導入した、広域圏を対象とした立地競争モデルを定式化し、数値計算により均衡解を求めるプログラムを作成する。このモデルを用いて、道路整備による企業のサプライチェーンの再編が、複数の都市と過疎地から構成される広域圏の消費者余剰や道路交通量に及ぼす、地区ごとに異なり得る影響に関して理論的分析を実施する。
「拡散しない反応拡散」に基づく形態形成の分子機構

本研究では、反応拡散原理を念頭に置いた細胞自律的なパターン形成の分子メカニズムの解明を目指している。研究対象としてはゼブラフィッシュの体表にみられるストライプパターンとこれを構成する二種類の色素細胞、黒色素胞と黄色素胞をターゲットにしている。反応拡散原理で示される2因子間の反発と活性化という相反する作用が、細胞の配置(距離)とその細胞の持つ細胞仮足の長さで決められているという仮定のもと、ここにかかわる因子の単離とそのメカニズムの解明を進めている。H27年度、H28年度に、尾鰭から単離した色素細胞のNGS解析を行い、色素細胞で発現がありかつ細胞間相互作用にかかわる膜蛋白質及び分泌蛋白質に焦点を絞った。CRISPRを用いたノックアウト系統の作製及び色素細胞特異的遺伝子のプロモーターを用いた過剰発現系の作製を行い、その評価を行った。ノックアウトのF0世代ではパターンに異常が見られた遺伝子が複数得られたが、次世代、次々世代での形質が得られておらず、現在のところ確定的な候補遺伝子は得られていない。また、の過程で、色素細胞前駆細胞の持つ細胞仮足が細胞間の反発作用にかかわるという報告があった。このためH29年度は色素細胞前駆細胞を蛍光標識したゼブラフィッシュ遺伝子組換え系統を作製し、色素細胞前駆細胞をセルソーターを用いて単離した後、NGSを用いた遺伝子発現解析を行った。現在ここに発現する膜蛋白質・分泌タンパク質の解析を進めている。また、in vitroにおける細胞仮足の動態解析も引き続き行っている。色素細胞の初代培養細胞にトランスフェクションを行い、対象となる遺伝子の機能解析を進めている。細胞仮足の形成に関して、野生型の他、チューブリンタンパク質の一つに異常が生じているゼブラフィッシュ変異体の色素細胞に関して、形態観察、in vitroでの動態観察を行った。この変異体では体表上の黒色素胞領域と黄色素胞領域が混在しており、領域分けにこのチューブリンが関与する細胞仮足が重要な機能を担っている可能性が示唆された。一方、ここにかかわる分子の単離を目指して、黒色素細胞、黄色素細胞、色素細胞前駆細胞それぞれに対してNGSを用いて遺伝子発現の解析を行い、細胞間相互作用に関与する遺伝子候補を抽出した。この中には、色素細胞間の短距離での反発作用と、長距離での活性化作用のそれぞれに関与する候補遺伝子が含まれている。これまでに約40遺伝子についてCRISPRを用いた遺伝子ノックアウトを行った。F0世代で体表模様に異常の見られた遺伝子に関して、F1世代、F2世代の取得のため交配を繰り返している。このスクリーニングにより取得できた遺伝子は、現在のところ体表模様形成に関わる既知遺伝子が主で、新規遺伝子の取得には至っておらず、引き続きスクリーニングを行う計画である。最近取得した色素細胞前駆細胞のNGSを用いた遺伝子発現のデータをもとに、遺伝子破壊株の作製・解析を進める。このデータをもとに、細胞間相互作用における細胞仮足の機能解明を目指す。NGS解析のデータに関しては、論文の作製中であり、早々の完成を目指す。本研究は、生物の形態形成における細胞仮足の役割を明らかにすることを目的としている。生物に見られるパターン形成ではモルフォゲン濃度勾配原理と反応拡散原理が知られている。いずれの原理でも生体内での物質の拡散を想定しているが、安定した拡散を維持することは困難であると考えられてきた。最近、細胞仮足がモルフォゲン分子を直接的に近位の細胞に受け渡していること、細胞仮足の分布が拡散を模倣することにより拡散と同じ役割を果たしていることが分かってきた。本研究では、ゼブラフィッシュの体表模様(ストライプ模様)形成を対象にし、反応拡散モデルに基づく形態形成(パターン形成)における細胞仮足の機能解明を目指している。H27年度はまず、細胞仮足の形態観察を行った。細胞膜移行型のEGFPを発現させた黒色素細胞の継時観察を行い、細胞仮足の伸長とパターン形成における時期を、野生型及び模様変異体で比較した。その結果、細胞仮足は受精後23週のパターン形成過程での伸長が観察された。また、その伸長には、皮膚上での配置依存的ではあるが3-7日程度要することが分かった。この仮足とパターン安定化に関わる因子候補としてNotch-Deltaについて解析を行ったが、Notch1a、DeltaC、Her6、Her9などの単独での過剰発現及びCRISPRを用いたノックアウトでは効果は現れなかった。これと平衡して、細胞間相互作用に関わる因子のスクリーニングを目指して色素細胞ごとのトランスクリプトーム解析を行った。黒色素胞、黄色素胞それぞれで発現する膜蛋白について順次選択し、過剰発現系統、ノックアウト系統の作製を進めている。特に神経軸索ガイダンス因子のノックアウト個体ではパターンの変化が見られており、現在詳細な解析を進めている。黒色素細胞のもつ細胞仮足の動態の観察を行ったところ、1)パターン形成初期には細胞仮足は比較的ランダムに仮足を伸ばすこと、2)黄色素細胞との接触により細胞仮足が安定化すること、3)仮足の伸長には周辺環境が重要であることがわかってきた。細胞仮足の身長については、これまで得られている模様変異体の黒色素細胞についても継時的な解析を行ったが、黒色素細胞と黄色素細胞との距離の近いjaguar変異体以外では野生型と同様の様態を示した。この仮足により形態形成に関わる因子としてNotch-Deltaを想定していたが、Notch1a、DeltaCの遺伝子破壊では表現型は得られなかった。

Notch2に関しては現段階では遺伝子破壊系統が得られていないが、海外のグループの研究によりNotch2がパターン変異体において重要な機能を持つことが明らかにされ、一部方向転換を迫られた。このため、Notch-Delta以外の因子の単離を目指して、スクリーニングの目的でトランスクリプトーム解析を行い、黒色素細胞あるいは黄色素細胞特異的に発現する膜蛋白質、分泌蛋白質のリストを作成した。このリストを元に、順次遺伝子破壊系統の作成を進めている。現在のところ、F0世代では、軸索ガイダンスに関与することが分かっている膜蛋白質について2つの因子が体表模様形成に関与している可能性が示されている。Notch-Deltaあるいはこれまでに単離されてきた細胞間相互作用因子であるCx41.8, Cx39.4, Kir7.1, Tspan3c, Igsf11などとの関係についても明らかにしていきたい。本研究では、細胞自律的なパターン形成原理として反応拡散モデルに注目し、そのモデルケースとしてゼブラフィッシュの体表模様(ストライプ模様)形成メカニズムの解明を目指している。これまでの研究により、ゼブラフィッシュの体表にパターンを作る2種類の色素細胞、黒色素胞と黄色素胞の間には短距離の反発作用と長距離の活性化作用が存在することが分かっている。そして、長距離の相互作用には>100umの長い細胞仮足が重要な機能を担っているのではないかと考えられている。反応拡散モデルでは、安定した拡散の形成・維持が問題になっていたが、細胞仮足のファクターを加えることでこの問題を解決できる。このため、細胞仮足の機能及びその形成メカニズムを解明する意義は大きい。これまでの研究により、この細胞仮足上のシグナルとしてNotch-DeltaとGap Junctionの重要性があげられている。本研究では1細胞仮足とこれら因子の役割、及び2ここに関わる新規因子のスクリーニングを目指している。平成27年度はNGSを用いたトランスクリプトーム解析を行い、各色素細胞で発現する遺伝子リストの作成を行った。更に、細胞間相互作用にかかわることが予想される遺伝子について強制発現系及びCRISPRを用いた遺伝子破壊系統の作製を順次行い、パターン形成への関与を検討することにした。平成28年度は、引き続き強制発現系統と遺伝子破壊系統の作製を進めた。また、細胞仮足の形成に関してはin vitro培養系で黄色素胞ー黒色素胞間に長い細胞仮足を形成する条件を整え、変異体間での比較解析を進めている。細胞間相互作用に関与する新規因子のスクリーニング目的で遺伝子破壊系統の作製を進めている。遺伝子の機能から、膜蛋白あるいは分泌タンパクに注目した。遺伝子破壊の致死性を考慮に入れて、一時スクリーニングとして、F0世代で体表模様変化を起こした遺伝子の選択を行った。その後の、得られた遺伝子についてノックアウト系統の作製や遺伝子機能に応じた解析を進めた。これまでに、約40の遺伝子について破壊系統の作製を行ったところ、6種類の遺伝子の破壊系統F0代で体表模様に変化がみられた。
中国西南部のシダ植物のバイオシステマティクス

今年度は、8月上旬に岩槻, ^*中藤, ^*林および中国側の協同研究者武,林,成の合計6名が海南島に入り、熱帯性シダ植物の採集を行なった。その結果、約400点の錯葉標本を得た。同時に、中藤,林,成は染色体を観察するための根端サンプルあわせて240点を採集した。これらを中国科学院昆明植物研究所の研究室あるいは日本の研究室へもち帰って染色体を観察した。一方、8月下旬から9月上旬に村上および中国側の武,成は,日本の暖温帯と関連の深い植生をもつ雲南省昭通地区に入って採集を行なった。その結果約3000点の錯葉標本を得た。この地域ては日本との共通種が多数見られた。これらの共通性を中心に村上と成は染色体観察用の根端サンプルを200点ほと採集した。また、村上は、これらの共通性について日本と中国の間で詳しい比較をするために新鮮な緑葉を採集して昆明植物研究所へもち帰り、約50種類のシダ植物から全DNAを抽出した。そして、この全DNAを解析のため日本へもち帰った。さて、10月下旬から中国での野外調査に中国側としてずっと同行してきた成が来日し、約2ケ月間、こちらに滞在した。この間、鹿児島県屋久島,三重県尾鷲などの暖温帯性シダ植物が特に豊富な地域を村上と共に採集してまわった。この際、村上は、中国で採集したものと同じと考えられる共通種を日本で採集し、その葉から全DNAを抽出した。現在、これら両サンプルを用いて葉緑体DNAの制限酵素断片長多型解析を行なっているところである。染色体数については、採集した根端サンプルを観察することで、6070%のサンプルについて結果を出すことができた。染色体数については、中国産のものでも日本産のもの(すでに報告されているもの)と大部分は同じ数をもつことがわかった。中国側の〓は、別に日本に2ケ月滞在し資料標本をもとに研究を行なった。*は研究協力者。日華植物区東区の種の多様性の解析にとって,すでに研究実績のあるシダ植物を材料にすることは大変有効である。3年計画のうち,当設年度においては次のような成果をあげた。雲南省の各地でシダ植物の胞子を採集し、中国政府の許可を得て日本へ持ち帰り,東京大学植物園において発芽育成を行った.この研究により、50種以上について,これまで未記載であった前葉体の構造について詳細な観察を行った。生材科は順調に生育しており,胞十体が得られるようになっているので,細胞分類学的研究をはじめ,バイオシステマティクスの研究材料として用いる。また,細胞分類学の研究材料として,現地で固定した材料を用いて観察を行っている。すでに30種以上の観察を終えており,これまでこの面での情報の欠落していた地域の植物について,貴重な知見を加えることになる。染色体数のほか、生殖型についても新らしい情報が得られている。調査の過程で,1つの個体のうちで,無融合生殖型と有性生殖型を示唆する胞子形成を行っている株を発見した無融合生殖の進化をあとづける上で興味のある材料であり,現在胞子から前葉体を得ており,さらに育成して,分離の様式などを確かめたい。この材料を含め,イノモトソウ属における変異と生殖型については,日本の種と対比させながら中国の種について観察を進めてきたので,それらをまとめた論文を作成したい。以上のように,成果は順調に上がりつつあり,まとまった部分から論文作成に取り組む予定である。
核膜・粗面小胞体膜の解離・再会合機構解明のためのIn vitro系確立の試み

核膜・粗面小胞体膜の解離・再会合の現象は細胞周期に伴うものであるが、その前半の解離・消失の部分に着目すると、この現象は細胞周期のみならず、細胞の分化等に伴い生ずることが知られている。細胞周期に伴うものと細胞分化に使うものとが同一現象であるがどうかは議論のあるところではあるが、今回は後者についてその機構をin vitro系を確立することにより解析し、極めて興味深い結果を得たので報告する。我々はT cell receptor αsubunit(TCR α)を指標とするin vitro系を確立した。TCRαを網状赤血球由来の無細胞蛋白質合成系に於いて、犬膵臓由来の粗面小胞体ベジクル(KRM)存在下に翻訳合成させると、その分子の大部分がKRMの内腔に露出した形でKRMの膜に膜蛋白質として組み込まれた。KRMには糖鎖の添加も組み込みに伴って生ずるが、さらにその糖鎖末端のグルコース残基の切断も生ずることが判明した。TCRαが組み込まれたKRMを高塩濃度で洗浄し、超遠心により回収後、緩衝液に懸濁し、37°Cに4時間保ったが、顕著な変化は認められなかった。次に網状赤血球のライセートを加えたところTCRαは急速に分解された。グルコース残基の切断を抑制するCastanospermine存在下では膜へ組み込まれたTCRαはライセート存在下と同様急速に分解された。この系をもちいて、網状赤血球ライセート中の因子を精製したところ15-Lipoxygenaseが得られた。これが粗面小胞体膜のリン脂質を酸化し、粗面小胞体内腔に存在するプロテアーゼによる膜蛋白質の分解を惹起することが、赤芽球から網状赤血球への分化に伴う粗面小胞体消失の機構であることが示され、さらに同様の機構がapoptosisに於いても働いていることも示唆された。
初乳を介した移行免疫の重要性の解明　仔ブタの発達促進にむけた基盤研究

本研究成果は主に以下の3点である。1.ブタ初乳から仔豚に移行するタンパク質の推定、2.その成果のなかから選抜した2つのタンパク質の生後24時間の仔豚血漿中濃度変化の解明、3.初乳から仔豚の腸管を介して細胞が取り込まれることの確認。この他にも、3をさらに詳細に解明するための新規手法を確立した。本研究の成果から、ブタ初乳からは相当数のタンパク質が移行すること、細胞が腸管を介して移行することが示唆された。本年度は、実験1として初乳から仔豚へ移行する液性免疫成分(タンパク質)のプロテオーム解析を行った。また、実験2として、初乳から仔豚へ移行する細胞に関する研究も行った。実験1では、初乳摂取前の仔豚及び初乳摂取12時間後の仔豚から血漿、腸間膜リンパ節を採取し、それぞれのプロテオーム解析を行った。さらに、プロテオーム解析の精度が格段に上昇しているため、試験に供した仔豚が摂取した初乳(乳清)のプロテオーム解析も行った。その結果、血漿からはおよそ400種類、腸間膜リンパ節からは750-800種類程度、初乳からは約600種類のタンパク質が同定された。初乳摂取前には検出されず、摂取12間後のみで検出されたタンパク質のうち、初乳でも検出されたものは、血漿で106個、MLNで61個であった。また、初乳摂取前に比べて摂取12時間後で濃度が2倍以上に増加したタンパク質で、初乳でも検出されたタンパク質は、血漿で41個、MLNで54個であった。これらの中には、仔豚の発達に重要であると考えられるタンパク質も複数含まれていたため、これらのタンパク質に着目してH27年度の実験を計画する。実験2に関しては、初乳から仔豚へ移行する細胞についての興味深い知見が得られた。この点に関してもH27年度に追試を行い、詳細な解析を行う予定である。本年度は主に初乳細胞の仔豚腸管からの取り込みを検討した。生後4-6時間の仔豚を解剖し、十二指腸・空腸・回腸を摘出し、腸管サックを作成した。サックの中に、初乳から単離し、蛍光標識た単核球を導入し、37°Cで2時間培養した。その後、サックを解列し、常法に従い粘膜固有層から細胞を単離した。単離細胞をフローサイトメーターで解析し、蛍光標識された細胞の有無を確認した。その結果、小腸の特定部位の粘膜固有層から単離した細胞中に蛍光標識した細胞が含まれる、つまり初乳から取り込まれたと考えられる細胞が存在することがわかった。なお、この試験は1腹2匹の仔豚を使用して行い、異なる時期に計3回行い、再現性を確認した。初乳から取り込まれる細胞の大きさ及び内部構造の複雑さをフローサイトメーター上で確認したところ、取り込まれる細胞は通常血液中に存在している細胞とは異なることが示唆されたため、現在、別個体の初乳から大きさ及び内部構造の複雑さが合致する細胞を単離し、細胞種の特定を試みている。昨年度絞り込んだ初乳から仔豚に移行するタンパク質の種類が想定を大きく超えて多かったこと、今年度実施した試験で初乳から移行する可能性が示唆された細胞が既知の細胞ではなかったことが原因で、再現性の確認や細胞種の特定に時間を要している。このため、申請当初に比べると進捗はやや遅いが、これは新規知見が多数明らかになった結果である。本年度は、初乳からの移行タンパク質、移行細胞の2つに関する研究を実施した。初乳に含まれるタンパク質のうち、昨年度までの研究で仔豚への移行が示唆されたタンパク質で、抗体以外のものを2種類選抜し、そのタンパク質の移行をさらに詳細に確認した。仔豚4-8匹を初乳摂取前、初乳摂取後4、10、24時間後で解剖し、血漿中の当該タンパク質の濃度を測定したところ、いずれのタンパク質も初乳摂取前は検出限界以下であったが、摂取4時間後には検出可能なまでに増加した。さらに、摂取10時間後にはピーク濃度に到達したが、腸管を介した乳成分の移行が縮小する24時間後では、検出可能ではあるものの、10時間後に比べると濃度が減少した。このことから、この2種類のタンパク質は初乳を介して仔豚の体内に移行することが強く示唆された。いずれも、仔豚の発達に影響を与え得る機能が報告されているタンパク質であるため、これらのタンパク質が仔豚の発達を促している可能性が高い。次に、初乳からの細胞移行を検証するための新たな手法を探索・検証した。昨年度までに、これまでの既報等で使用されていた蛍光標識した細胞を摂取させ、仔豚組織から検出する方法を蛍光標識試薬の変更も試みつつ検証したが、移行細胞の少なさのためもあり、感度が劣るため、抜本的な見直しの必要性を認めたためである。その結果、次世代シーケンサーを利用した新たな手法を確立することに成功した。予備的ではあるが、本手法をを利用することで、本研究成果は主に以下の3点である。

本研究の成果から、ブタ初乳からは相当数のタンパク質が移行すること、細胞が腸管を介して移行することが示唆された。可能であれば反復実験を行う予定であったが、母豚の手配、予算の都合上見送らざるを得なかった。27年度に継続して行う予定である。今後は、初乳から移行するタンパク質を既知情報からさらに絞り込み、その機能の特定を試みるとともに、バイオインフォマティクスを駆使して、移行するタンパク質を更に詳細に解析する。また、初乳から移行する細胞種の特定も引き続き進める。28年度が最終年度であるため、記入しない。腸管免疫、移行免疫引き続き初乳から仔豚に移行する細胞について詳細な検討を実施するとともに、実験3:初乳からの成分が生後何時間までの間に仔豚に移行するかを特定する。また、実験4:仔豚の免疫系発達に寄与する成分の特定を試みる。
シアノバクテリアの順化応答における光化学系I遺伝子群の転写調節機構の解析

シアノバクテリアSynechocystissp.PCC6803は、光強度の変化に応答し、系I遺伝子群のプロモーター活性を大きく変動させる。ところが、光強度変化シグナル受容から系I遺伝子発現調節に至るシグナル伝達経路は、全く明らかになっておらず、本研究課題ではその解明を目指している。今年度は前年度に引き続き、系I遺伝子プロモーターの光応答領域の同定を行なった。系I反応中心サブユニットをコードするpsaABおよび小サブユニット遺伝子の代表としてpsaDのプロモーター領域の解析を行った。転写開始点を決定し、また推定プロモーター部位を段階的に欠失させてluxABに連結し、光応答に必要な領域の同定を行ったところ、psaABには独立に光応答性を持つ2つのプロモーター(P1、P2)が存在することが明らかになった。上流プロモーターであるP1については、弱光下におけるプロモーターの活性化に必要なATリッチな領域を同定し、強光下ではこの活性化が解除されることを見いだした。一方、下流プロモーターP2の光応答領域は、P1の上流域に、P2自体からはかなり隔たって存在していることが分かった。この領域は強光下でのP2活性の抑制に関わっており、P1とP2の光応答性は、異なるメカニズムにより実現されていることが分かった。一方、psaDには、psaABと同様2つのプロモーター(P1、P2)が存在していたが、P1の活性は弱く、光応答性は認められなかった。P2はpsaAのP1と同様、弱光下で正の制御を受けることにより、光応答性が付与されていた。このことから、psaDでは、主にP2プロモーターが、系I遺伝子群の協調的な転写制御に関与していると推測される。psaAのP1とpsaDのP2の塩基配列を比較したが、両者に共通性は特に見いだされなかった。研究代表者はこれまでに、シアノバクテリアSynechocystis sp. PCC6803が、光強度の変化に応答し、光化学系I遺伝子のプロモーター活性を大きく変動させることを明らかにしたが、その調節メカニズムは全く分かっていなかった。本研究では光化学系I遺伝子転写調節に関与する因子を同定するために、ランダムにトランスポゾンの挿入を行ったSynechocystis sp. PCC6803のゲノムライブラリーを、psaAプロモーターとルシフェラーゼ遺伝子の融合コンストラクトを持つ株に導入し、弱光下、及び強光下でレポーター活性が通常と異なる株のスクリーニングを行った。これまでにゲノムの約半分の領域についてスクリーニングを終え、正常な強光応答を示すが、通常より弱光下でのレポーター活性が高くなった株を10株単離した。その内、5株はslr0609に、2株はsll1531内にトランスポゾンの挿入が見られた。slr0609、sll1531、slr0551に挿入の起きた株では、弱光下で実際にpsaA、luxAB転写産物量が野性株に比べ増加していた。他の系I遺伝子の転写産物量にも増加が見られたが、系II反応中心をコードするpsbA転写産物量には違いが見られなかった。これら3個のORFは系I遺伝子の転写制御に特異的に働く可能性があるが、全て機能未知であり、現在遺伝子破壊株の表現型解析を進めている。さらに、系I遺伝子上流の調節領域の解析を行うために、psaA、psaDの各遺伝子について転写開始点を決定した。シアノバクテリアSynechocystissp.PCC 6803は、光強度の変化に応答し、系I遺伝子群のプロモーター活性を大きく変動させる。ところが、光強度変化シグナルが系I遺伝子に伝えられるメカニズムは、全く明らかになっていない。そこで今年度は、系I遺伝子プロモーターの光応答領域の同定を試みた。P1についてはATリッチな光応答領域を同定し、さらにゲルシフトアッセイによりタンパク質のこの領域への結合を検出した。P2の光応答領域はコアプロモーター内に存在しており、現在この領域内へ点突然変異を導入することにより更なる解析を進めている。psaDにも2つのプロモーター(P1、P2)が存在していたが、P1の活性は弱く、光応答性も低かった。P2はpsaAのP2同様コアプロモーター内に光応答領域を持つことが明らかになった。psaA、psaD共に、主にP2プロモーターが、系I遺伝子群の協調的な転写制御に関与していると推測される。今後、本研究で同定されたトランス因子がpsaABプロモーターのどの部分に作用するかを調べ、また光応答領域に結合するタンパク質を単離したいと考えている。系I反応中心

サブユニットをコードするpsaABおよび小サブユニット遺伝子の代表としてpsaDのプロモーター領域の解析を行った。転写開始点を決定し、また推定プロモーター部位を段階的に欠失させてluxABに連結し、光応答に必要な領域の同定を行ったところ、psaABには独立に光応答性を持つ2つのプロモーター(P1、P2)が存在することが明らかになった。上流プロモーターであるP1については、弱光下におけるプロモーターの活性化に必要なATリッチな領域を同定し、強光下ではこの活性化が解除されることを見いだした。一方、下流プロモーターP2の光応答領域は、P1の上流域に、P2自体からはかなり隔たって存在していることが分かった。この領域は強光下でのP2活性の抑制に関わっており、P1とP2の光応答性は、異なるメカニズムにより実現されていることが分かった。一方、psaDには、psaABと同様2つのプロモーター(P1、P2)が存在していたが、P1の活性は弱く、光応答性は認められなかった。P2はpsaAのP1と同様、弱光下で正の制御を受けることにより、光応答性が付与されていた。このことから、psaDでは、主にP2プロモーターが、系I遺伝子群の協調的な転写制御に関与していると推測される。psaAのP1とpsaDのP2の塩基配列を比較したが、両者に共通性は特に見いだされなかった。
腫瘍壊死が引き起こす栄養シグナル・浸透圧シグナルに着目したヒト膠芽腫の病態

膠芽腫は脳腫瘍の中で最も悪性度の高いもののひとつであり、腫瘍組織に壊死が見られるのが特徴である。本研究では、細胞外液の浸透圧の変化や栄養因子の欠乏が、膠芽腫細胞にどのような変化を起こすかを検討した。高浸透圧ではNFAT5タンパク質の発現が増加することが明らかとなり、一部の細胞株では、高浸透圧の培地で前処理した細胞は、コロニー形成能が上昇した。また、グルタミン、グルコースを欠乏させると、GINSタンパク質の発現が低下することを見出した。平成27年度には、まず、ヒト膠芽腫由来細胞株であるT98G、U251MG細胞株を用いて、培地の浸透圧の変化に対する細胞の応答について検討した。他の細胞種では、浸透圧応答に関与する分子として、高浸透圧の時に発現が上昇するNFAT5分子と、発現が低下するSTAT3分子が報告されているので、T98G、U251MG細胞を通常の培地より50100mOsmol/l上昇させた培地で処理し、Western blot法によりNFAT5、STAT3の発現レベルを調べた。その結果、STAT3の変化は明らかでなかったが、NFAT5は高浸透圧時に発現が上昇していた。また、RT-PCR法により、高浸透圧時にはNFAT5遺伝子の転写が促進していることが示唆された。通常の培地と高浸透圧培地中でコロニー形成アッセイを行ったところ、高浸透圧培地ではコロニー形成が抑制された。一方、高浸透圧培地で数日間培養した細胞を用いて通常の培地中でコロニー形成を行うと、コロニーの径が大きくなる傾向が観察された。この現象について、条件を種々に変化させてさらに検討中である。ヒト膠芽腫由来細胞株の栄養欠乏に対する反応については、増殖関連分子の発現調節を中心に検討した。T98G、U87細胞株をグルタミン欠乏培地、グルコース欠乏培地で培養したところ、GINSタンパク質の発現の低下を認めた。特にグルタミン欠乏時には、比較的早期より発現低下が始まることが示唆された。このように、浸透圧、栄養因子に対する膠芽腫細胞の応答について、興味深い知見を得た。浸透圧、栄養因子に対するヒト膠芽腫細胞株の応答について、順調にデータを得ることができた。ヒト膠芽腫切除標本を用いた免疫組織化学的解析については染色の条件検討が遅れているが、研究全体としてはおおむね順調に進展している。平成28年度には、まず、昨年度に引き続き、高浸透圧培地もしくは通常の培地で数日間処理した細胞を、通常の培地中でコロニー形成させるアッセイを行い、高浸透圧が膠芽腫細胞のコロニー形成能に及ぼす影響を検討した。その結果、U251MG細胞株では、高浸透圧で前処理した場合にコロニー形成率の上昇が観察された。一方で、T98G細胞株では、高浸透圧による前処理はコロニー形成率に大きな影響を与えなかった。このことから、培養環境の高浸透圧のコロニー形成能への影響のしかたは、細胞株によって異なっている可能性が示唆された。次に、高浸透圧に反応して発現が上昇する分子NFAT5について、浸透圧以外の環境因子によって発現が変化するかどうか検討したところ、低酸素(1%酸素)下で培養した時に発現の上昇が起こることが明らかとなった。膠芽腫パラフィン切片を用いたNFAT5の免疫染色については、染色条件を現在検討中である。研究期間全体を総合すると、複数の膠芽腫細胞株において高浸透圧に反応して発現が上昇する分子としてNFAT5を見出した。高浸透圧が腫瘍細胞のコロニー形成能に影響を与える可能性が示唆され、NFAT5の機能との関連も含めてさらなる検討が今後必要と考えられた。栄養因子については、グルタミン欠乏、グルコース欠乏がGINSタンパク質の発現低下に関与していることを見出し、栄養因子と腫瘍細胞の増殖能との関連について新しい知見を得ることができた。浸透圧、栄養因子に対するヒト膠芽腫細胞の応答について、分子の発現変化や増殖の観点から、より詳しい解析を行う予定である。病理学平成27年度の研究計画はおおむね順調に実施できているが、ヒト膠芽腫切除標本を用いた免疫染色の条件の最適化については検討が遅れており、その分の試薬費用等が次年度使用額となった。平成28年度に、ヒト膠芽腫切除標本を用いた免疫組織化学的検討を予定しており、それに使用する計画である。
紫外領域用大口径イメージインテンシファイアーの開発

極微光量の映像、特に瞬時映像の測定に適し、フォトンカウントのレベルで動き、かつ紫外領域で高い量子効率を有する、大口径ファイバーオプティックスイメージインテンシファイアーのヘッド(前段)の開発を本科研費を使用し、その作成に成功した。大口径イメージインテンシファイアーの用途は近年、天文学、医学、素粒子物理学、生物学の分野で重要性を増してきている。特に近紫外対応のファイバーオプティックスをもったものは、シンチレーション光・チェレンコフ光などの映像測定に有効であり、近年注目を集めているプラスチックシンチレーションファイバーと組合せ放射線検出器の心臓部をなすものである。これらの実用時を想定すると、いずれの場合も光量が大変少なく、量子効率を向上させることが決定的に重要である。研究代表者と分担者は、量子効率を増大させるため光子の入射面を、ファイバープレーとの代わりにクォーツ(水晶)ファイバーに置き換えることにより、量子効子率を倍増することに成功した。測定結果は、360nmから460nmの領域で量子効率は20%を超えており、旧来のものがほとんど感度がなかったことを考えると近紫外領域に使用できる画期的なイメージインテンシファイアーの製作に成功した。宇宙線を加速器ビームを使って旧来のものと新しいものの優劣の比較を行なったが、その差は歴然であり、単に我々の太陽中性子の観測や、宇宙ガンマ線の放出するチェレンコフ光の測定のみならず、素粒子実験や天文学の分野で非常に広い用途が考えられる。これらの成果はNucl.Inst.Methodに投稿されるべく、現在準備中である。