hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ITベース・イノベーションを実現する企業経営に関する実証研究

情報通信技術(IT)を利用することで、企業は製品サービスをユーザに提供する前と後の活動を統合し、全体としてユーザの満足を実現することができる。本研究は、ITを積極的に活用するイノベーション(ITベース・イノベーション)が、どのような企業行動と関わり、いかなる現象をもたらすのかを明らかにしようとした。実証研究の結果、適度な差別化を志向する企業行動、変更可能性を有する柔軟なビジネスモデル、プラットフォームの需要創造メカニズムといった事柄について仮説を得ることができた。これらの仮説をさらなる実証研究で確かめて、企業のIT利用がイノベーションや経済社会に及ぼす影響を検討することが今後の課題である。本研究の開始年に当たる今年度(平成26年度)は、プロジェクトの基礎を作った。具体的には、(1)A社との共同研究開始、(2)研究会への参加、(3)研究対象を広げるための予備的調査を実施した。まず、(1)の共同研究では、PCやスマートフォン向けにオンラインゲームを提供しているA社とNDAを締結した上で調査を開始した。これまでの調査で、A社の概要、開発マネジメント、技術変化への対応、サービスの運用を含めた顧客(消費者)との関係性、ビジネスモデルといった項目について調査した。今後は、ITベース・イノベーションと呼べる現象と、それに関係をもつA社の行動を定性的、定量的に明らかにしていく。A社が調査研究に非常に協力的であり、IT技術を積極的に活用していることから、今後2年間の研究で十分な研究成果をあげられると考えている。つぎに、(1)で得られる研究成果の一般化可能性を高めるために、(2)関連性が高い研究会に参加した。参加した研究会は、国際大学グローバル・コミュニケーション・センターグローバル・コミュニケーション・センター(Glocom)の「ゲーム産業研究会」、同志社大学創造経済研究センターの「創造産業の持続的発展に関する研究会」などであった。研究会参加を通じて、A社の事例もしくはゲームというコンテンツの特殊性を理解し、普遍的な知見を得た。第3に、IT技術を利用する企業の行動を、より広い経済社会の文脈で理解するための予備的調査を開始した。IT技術を利用してコンテンツを創り出すためには人材が不可欠である。そこで、コンテンツを創造する人材を育成するための政策を研究することを検討している。さらに、サービス全般を視野に入れた研究、イノベーションを担う企業の国際比較研究なども検討している。これらは、IT技術ベースのイノベーションが経済社会全体にもたらす影響を、中長期的な研究継続のために必要である。平成26年度に引き続いて共同研究を進めつつ研究会に参加し、予備調査を実施した。現時点での研究成果を発表することもでき、今後の実証研究で検証可能な仮説の見通しも得られた。現時点では概ね既存研究と整合的な知見、仮説を得ている。研究対象企業は継続的に開発活動を行い、運用に入ってからも不断に改善を続けて製品サービスをブラッシュアップしている。そうした継続的な開発・運用によって、良い顧客コミュニティを形成し、維持することが可能になる。さらに、支払を求めない要素と支払を求める要素を混在させるビジネスモデルを構築することで、顧客基盤の拡大と収益化の同時達成が可能になる。こうしたITベースのビジネスの特徴は調査対象の事例でも確認されている。既存研究と異なる仮説を強いて挙げれば、それは「適度な差別化」という概念に集約される。企業は既にある製品サービスに相対し、違いすぎないものの同じではない製品サービスを創り出す。IT利用を前提とした場合(ITベースの場合)には、製品サービスの提供後に顧客からフィードバックを得たり、データによって顧客の挙動を把握したりできるため、そうでない場合よりも差別化の程度が小さくなる傾向が生じるのではないかと考えられる。「小さすぎる」差別化の程度であっても事後的な判断に基づいて差別化要素を追加すれば良いと考え、むしろ差別化の程度が大きすぎては顧客が製品サービスとはなにかを理解できない危険性があると企業が考えるからである。言い換えれば、差別化程度が大きいことのリスクを過大に評価する可能性が示唆されている。イノベーションは大きな変化を想起させるが、それは事後的な評価である。企業などのイノベーションの担い手、当事者の視点では適度もしくは小さな変化を起こすことを目指しており、ITベースの状況下では小さな変化を志向する傾向が強まる可能性があると考えられる。A社との共同研究ではインタビューに基づく事例調査、顧客を対象としたアンケート調査の実施に携わった。いずれも共同研究者、本学サービス工学学位プログラムの指導学生と共に進めた研究である。平成26年度同様、開発・運用のマネジメント、企業と顧客の関係性、技術変化への対応やビジネスモデルに焦点を当てて考察および分析を進めた。同時に、Glocomや同志社大学創造経済研究センターの研究会に参加し、A社の事例から得られる知見が他企業でも適用可能なものか否かを検討してきた。さらに、A社と同一グループに属する企業、海外企業を対象とした予備的調査も開始し、既に得た研究成果の一般化可能性も検討した。以上の調査研究はITベース・イノベーションを目指す企業そのものの研究である。これにくわえ、企業を取り巻く産業や社会の状況を調査し、ITベース・イノベーションを促進もしくは制約する要因に関する仮説の構築を目指している。具体的にはゲーム産業の歴史研究と、企業内の開発活動および営業活動の研究を開始した。ゲーム産業の歴史研究は、過去のITベース・イノベーションの事例を改めて検討し、適度な差別化がどのような経緯を経て波及効果を及ぼし、産業および社会を変えていくのかを明らかにしようとしている。

他方、企業内の開発活動と営業活動は人的要素が色濃く残っているため、IT化の進展によっても包摂が難しいのではないかという見通しを持っている。そこでこの2つの活動とそれを担う人材の育成に焦点を当てて研究し、ITベース・イノベーションで変化しうる現象の境界を見定めようと意図している。現在の企業そのものの調査研究、過去のITベース・イノベーションの事例研究、将来を視野に入れたITベース・イノベーションの影響範囲に関する研究は順調に推移しており、萌芽的な成果も得られている。それゆえ「おおむね順調に進展している」と言える。本研究の目的は情報通信(IT)技術を前提にしたイノベーションについて、実証的に明らかにすることであった。そこで、ITを積極的に活用して製品サービスを提供している現在の萌芽的事例や、ITを利用した過去のイノベーションを選択し、研究を進めてきた。企業の開発マネジメント、技術変化への対応、顧客との関係性、ビジネスモデルなどに焦点を当て、インタビュー調査やアンケート調査を行った。最終年度にあたる平成28年度は国内外の学会で発表したり、学術雑誌に投稿したりして研究成果の公表を進めた。実証研究を通じて、既存研究と整合的な知見を得ることができた。ITの利用によって、製品サービスを消費者に提供した後でも企業は消費過程を精確に把握し、製品サービスを見直すことができる。把握したユーザの動向に基づき、支払をしたいと思う要素と無料で利用したと思う要素を組み合わせたビジネスモデル(フリーミアム)を構築することが可能になる。その際、ユーザ側の創造や関与(ユーザの組織化)を促す仕組みによって、ユーザをつなぎ止めることも重要である。他方、既存研究では見いだせなかった現象も確認できた。一つにはイノベーションという言葉とは裏腹に、製品サービスの比較的小さな変化ー適度な差別化ーが実は重要であることが見いだされた。もう一つには、プラットフォーム化を進めることによる需要創造効果とはいかなるものなのかを明らかにすることができた。現在はIT分野で新しい技術が創り出され、経済社会を変えていく過程にある。そのため、本研究で得られた知見をさらなる実証研究で検証することで、より良い企業経営の実現に寄与できると考えられる。実証研究のための仮説構築、基礎となるデータの収集は相当程度進んだと言えるので、今後はITベース・イノベーションに関する研究アジェンダを提示して、産業・分野横断的な調査研究を進めていく予定である。情報通信技術(IT)を利用することで、企業は製品サービスをユーザに提供する前と後の活動を統合し、全体としてユーザの満足を実現することができる。本研究は、ITを積極的に活用するイノベーション(ITベース・イノベーション)が、どのような企業行動と関わり、いかなる現象をもたらすのかを明らかにしようとした。
小脳分子コンパートメントの進化と機能的意義

小脳のプルキンエ細胞の一部の集団に発現するアルドラーゼCという酵素タンパク質の発現パタンを見ると、ラット小脳皮質では陽性・陰性の領域が約20の縦縞を形成している。この縞構造は、小脳皮質入出力線維の投射様式に密接に関わるので、小脳の機能区分に関わる基本構築を表すと考えられる。本研究では、ラット以外にマウス、マーモセット、ヒヨコの小脳において、アルドラーゼCを免疫染色し、連続切片からの再構築によってその縞構造の全貌を小脳全体で把握した。さらに、マウスとヒヨコでは縞構造と登上線維投射パタンとの関係をマッピングにより検討した。それらにより、アルドラーゼC発現の縦縞構造に反映される小脳の基本構築において、動物種によってどのような違いがあり、何が基本的な構築なのかを検討した。マウスには、ラットとよく似たアルドラーゼC発現の縞構造があり、各縞への登上線維のトポグラフィーは、ラットとほとんど完全に共通していることが明らかとなった。マーモセットでは、ラット・マウスのものと比較的良く似た縦縞状になったアルドラーゼC発現パタンが認められた。ヒヨコ小脳には、哺乳類のものとは異なる独特の縞のパタンが存在し、下オリーブ核から各縞へのトポグラフィックな投射が認められた。以上より、小脳入出力線維の投射すなわち小脳の基本的な機能区分に関係した構築としてのアルドラーゼC発現の縦縞パタンが、異なる進化をたどった動物(トリ、齧歯類、サル)の小脳に存在することと、哺乳類間では縞のパタンの相同性が高いことが明らかになった。下オリーブ核の別の部位から、陽性の縞・陰性の縞へトポグラフィックに登上線維が投射するという、縞と投射パタンとの関係は哺乳類・トリで認められ、小脳の基本的な構築であると考えられた。アルドラーゼCという酵素タンパク分子は、ラット小脳において縦縞模様状に分布するプルキンエ細胞に発現しているので、アルドラーゼC免疫染色により小脳の縦縞構造を可視化することができる。われわれはこれまで、ラットにおいて、登上線維系の投射パタンがアルドラーゼC発現の縞構造と強い関連を持つことを明らかにし、この縞構造が小脳の機能区分に関わる基本構築を示すものであると考えてきた。そこで、ラット以外に、マウス、マーモセット、ヒヨコにおいて、小脳のアルドラーゼC発現の縞構造の有無とラットの縞構造との違いを、小脳連続切片のアルドラーゼC免疫染色とトレーサー注入による登上線維標識により検討した。これらの動物の小脳においても、アルドラーゼCがラット小脳と同様に縦縞状に発現していることが明らかとなった。マウスにおいて、アルドラーゼC発現の縞構造を連続切片から詳細に再構築した。さらに下オリーブ小脳投射軸索を縞模様の上にマッピングして、下オリーブ核のどの場所がどの縞に投射するかを明らかにした。それにより、下オリーブ小脳投射パタンのトポグラフィーの共通性を利用してマウスのどの縞がラットのどの縞と同一かを決定した。その結果、マウスには、幾つかの違いはあるものの、ラットとよく似たアルドラーゼC発現の縞構造があることが明らかとなった(下の研究発表の3)。また、ヒヨコとマーモセットのアルドラーゼC発現の縞構造については、ラット・マウスのものとかなり異なっていた。以上の結果は、異なる進化をたどった動物(トリ、齧歯類、サル)の小脳の基本構築の違いがアルドラーゼC発現の縞構造に鮮明に反映されていることを示唆する。また、われわれは、各縞の機能的意義に関しては、ラット小脳における電気生理学的実験と苔状線維標識・プルキンエ細胞標識とをアルドラーゼC染色を組み合わせた(下の研究発表の2)。

下オリーブ核の別の部位から、陽性の縞・陰性の縞へトポグラフィックに登上線維が投射するという、縞と投射パタンとの関係は哺乳類・トリで認められ、小脳の基本的な構築であると考えられた。
ラット延髄の昇圧性アミノ酸・L-システイン刺激による末梢血流再配分の解析

身体に一定量しかない血液は、必要なとき必要とする器官に絶妙にやりくりされている。たとえば動物が毛づくろいをする時と運動をする時では、「脳血流」と「下肢筋血流」間に反対方向の配分が起きる。水道の蛇口のように、自律神経の中枢が器官ごとの血管径を変えて血流の再配分を行うと考えられている。下部中枢の延髄には安静時の血管への神経活動を調節する専用のニューロンネットワークがあり、反射の際には特定の興奮性レセプター(iEAAR)を介することが近年明らかになっている。しかし、いろいろな器官の血流調節を行なう専用ニューロンの延髄内の分布等の詳細についてはいまだ不明である。私たちは1990年にL-システインの中枢作用をはじめて報告したが、その後延髄における血圧作用がiEAARを介することを明らかにした。本研究では、血流再配分のしくみ解明を目指して、L-システインでラットの延髄を刺激して血流抵抗反応マップを作成し、延髄内の器官ごとの血流調節ニューロンの局在の有無を調べている。本年度の実施状況は次のとおりである。1)筋血流:ラットの延髄には副腎髄質を興奮させるニューロンも存在し、延髄刺激でアドレナリンが分泌され筋血流が増加するはずだが、有効な刺激手段がいままでなかった。今回、システイン刺激で筋血流増加部位が低下部位と共に多数得られ、システインが副腎髄質機能研究の強力な研究ツールになる可能性を示唆した。また、筋血流と血圧反応の大きさがほぼ対応しており、システインが起こす血圧変化は筋血流反応に依存しており、反応局在がないことから、筋血流に関しては局在のあるネコ等と異なることも判明した。2)脳血流:システインの延髄刺激による脳血流は、筋血流と異なり、延髄の昇圧領野のうち尾側しか脳血流抵抗の上昇をおこさない反応局在が得られた。現在さらに検証を重ねている。本研究は、3年間で、まず1)L-システインによる筋血流反応の実験を推し進め、つぎに2)脳血流反応のマッピングを行い、最終的に、3)両血流反応部位の解析を行う、と計画した。また、部位間に再現性の高い明らかな特徴があれば、引き続き、4)RVLMへの投射脳部位を調べるための順行性および逆行性軸索輸送を利用するトレーサー実験の予備実験を行う、としている。初年度(本年度)は、1)筋血流反応実験をほぼ終えて、かねてより延髄におけるアドレナリン分泌部位の特定が困難とされていた部位をシステイン刺激により同定可能であることを示すこともでき、予定通り進行している。続けて2)脳血流反応のマッピングを開始し、筋血流反応マップと異なり、昇圧変化を示すものの対応する血管収縮を起こさない部位が昇圧領野の頭側にあることを観察した。つまり、筋血管への交感神経が昇圧野全体に分布しているのとは異なり、脳血管への交感神経は昇圧野の尾側に局在している可能性が示された。しかし、延髄露出の際に頭頸部の筋肉等への血管交感神経を傷害しているために局在が観察されている可能性もあるので、延髄露出の方法を見直したり、血管交感神経の経路となる外頸および内頸神経の切断実験等を行ったりと、検証を重ねている。降圧野については脳血流抵抗の低下がほぼ平行して起こることを観察した。つまり昇圧野には局在があり、降圧野には局在がない。降圧野のニューロンは、昇圧野にある脊髄の交感神経に接続するニューロンに終末を送ると考えられており、この局在の有無が何を意味するのか、さらに追求する予定である。このように、研究計画は新しい発見をしながら、ほぼ順調に進行中である。本研究計画の2年目では、研究計画2)脳血流反応マッピングを進める。2-1)脳血流反応局在:筋血流マップでは昇圧領野全体に血圧に平行した筋血流反応が見られたが、脳血流マップでは昇圧野の尾側のみ脳血管収縮反応が観察され、脳血管交感神経の昇圧野内の機能局在が示唆された。しかし、脳血管交感神経は延髄露出の際に部分的に切断される可能性があるので、延髄露出の際になるべく神経損傷を最小限にする手術法を開発して脳血流マッピングを行い、反応局在が確実であるかを調べる。また、頭頸部血管交感神経の末梢経路である上頸神経節、内頸神経、および外頸神経の切断後、脳血流マッピングを行い血流反応の消去の有無、反応局在との関係を追及する予定である。2-2)降圧野と昇圧野の反応パターンの違い:通常の延髄露出法では、昇圧野には脳血流の反応局在があるものの、降圧野には反応局在がなく血圧とほぼ平行した血流抵抗反応が得られる。降圧野のニューロンは昇圧野に投射していることがすでに報告されているので、この反応パターンの違いは、ニューロン投射のつながりを示唆していると思われる。投射のつながりを調べる研究方法を考案し、できれば2年目に予備実験まで漕ぎつけたいと考えている。2-3)昇圧野の吻側に時々血圧の変化を伴わない脳血流増加部位が観察されている。脳血流を増やす

唾液核は通常、延髄の尾側腹側浅部の昇圧野(RVLM)より吻側深部にあるので、副交感神経前運動ニューロンの存在する反応部位を特定した可能性がある。こちらも深部のマッピングにより脳血流増加反応が再現性よく得られるか、また副交感神経経路を介する反応であるか等々検討する予定である。身体に一定量しかない血液は、必要なとき必要とする器官に絶妙にやりくりされている。たとえば動物が毛づくろいをする時と運動をする時では、「脳血流」と「下肢筋血流」間に反対方向の配分が起きる。水道の蛇口のように、自律神経の中枢が器官ごとの血管径を変えて血流の再配分を行うと考えられている。下部中枢の延髄には安静時の血管への神経活動を調節する専用のニューロンネットワークがあり、反射の際には特定の興奮性レセプター(iEAAR)を介することが近年明らかになっている。しかし、いろいろな器官の血流調節を行なう専用ニューロンの延髄内の分布等の詳細についてはいまだ不明である。私たちは1990年にL-システインの中枢作用をはじめて報告したが、その後延髄における血圧作用がiEAARを介することを明らかにした。本研究では、血流再配分のしくみ解明を目指して、L-システインでラットの延髄を刺激して血流抵抗反応マップを作成し、延髄内の器官ごとの血流調節ニューロンの局在の有無を調べている。本年度の実施状況は次のとおりである。1)筋血流:ラットの延髄には副腎髄質を興奮させるニューロンも存在し、延髄刺激でアドレナリンが分泌され筋血流が増加するはずだが、有効な刺激手段がいままでなかった。今回、システイン刺激で筋血流増加部位が低下部位と共に多数得られ、システインが副腎髄質機能研究の強力な研究ツールになる可能性を示唆した。また、筋血流と血圧反応の大きさがほぼ対応しており、システインが起こす血圧変化は筋血流反応に依存しており、反応局在がないことから、筋血流に関しては局在のあるネコ等と異なることも判明した。2)脳血流:システインの延髄刺激による脳血流は、筋血流と異なり、延髄の昇圧領野のうち尾側しか脳血流抵抗の上昇をおこさない反応局在が得られた。現在さらに検証を重ねている。本研究は、3年間で、まず1)L-システインによる筋血流反応の実験を推し進め、つぎに2)脳血流反応のマッピングを行い、最終的に、3)両血流反応部位の解析を行う、と計画した。また、部位間に再現性の高い明らかな特徴があれば、引き続き、4)RVLMへの投射脳部位を調べるための順行性および逆行性軸索輸送を利用するトレーサー実験の予備実験を行う、としている。初年度(本年度)は、1)筋血流反応実験をほぼ終えて、かねてより延髄におけるアドレナリン分泌部位の特定が困難とされていた部位をシステイン刺激により同定可能であることを示すこともでき、予定通り進行している。続けて2)脳血流反応のマッピングを開始し、筋血流反応マップと異なり、昇圧変化を示すものの対応する血管収縮を起こさない部位が昇圧領野の頭側にあることを観察した。つまり、筋血管への交感神経が昇圧野全体に分布しているのとは異なり、脳血管への交感神経は昇圧野の尾側に局在している可能性が示された。しかし、延髄露出の際に頭頸部の筋肉等への血管交感神経を傷害しているために局在が観察されている可能性もあるので、延髄露出の方法を見直したり、血管交感神経の経路となる外頸および内頸神経の切断実験等を行ったりと、検証を重ねている。降圧野については脳血流抵抗の低下がほぼ平行して起こることを観察した。つまり昇圧野には局在があり、降圧野には局在がない。降圧野のニューロンは、昇圧野にある脊髄の交感神経に接続するニューロンに終末を送ると考えられており、この局在の有無が何を意味するのか、さらに追求する予定である。このように、研究計画は新しい発見をしながら、ほぼ順調に進行中である。
新しい免疫抑制剤の腎毒性発現におけるProtein Kinase Cの役割

FK-506はシクロスポリンAと極めて類似した免疫抑制作用を有しているが、FK-506の免疫抑制機序に関しては最近さらに研究が進んでいる。FK-506がT細胞内に入るとFK-506結合蛋白質(FK-506-binding Protein, immunophilin)に結合し、このFK-506-immunophilin複合体が、Ca^<++>、calmodulin存在化でcalcineurinを阻害してT細胞機能を抑制し免疫抑制作用を発揮すると考えられている。しかしこの薬剤は有効血中濃度と副作用域濃度が近接しており特にその腎毒性が問題となる場合が多い。そこでFK-506の腎毒性発現に関し、腎組織内でのprotein kinase C(以下PKC)の関与の可能ついてSD系ratを用い検討を加えた。具体的には、FK-506腹腔内投与群(2.5mg/g体重投与群、5.0mg/g体重投与群)、対照群の腎臓を屠殺後直ちに摘出し、氷上で腎皮質、腎髄質に分け各組織抽出液のPKC活性および、phorbol ester受容体としての各組織抽出液のBmax(PKC総量)、Kd(解離定数)を測定、比較した。現時点でFK-506(5.0mg/g体重)投与群のBmax(PKC総量)が対照群に比較してやや低値傾向があるが有意差は認めていない。PKC活性に関しては、FK-506腹腔内投与群、対照群で全く差を認めていない。この原因について考察してみると、FK-506投与量が未だ少ない、シクロスポリンAとは作用機序が違うといった可能性が考えられるが、さらにPKCには現時点で少なくとも7種類のisozymeが確認されておりFK-506投与によって7種のisozymeすべてには変化が生じず、数種のisozymeにのみ変化が生じている可能性もある。さらにこの研究を続行する予定であるが、今後PKC isozymeを分離するchromatographyを用いた実験も必要になってくる可能性がある。腎移植は慢性腎不全に対する根治的治療法であるが、その成否は免疫抑制剤に依存していると言っても過言ではない。臨床上、免疫抑制剤を使用する際の問題点は、副作用としての腎毒性である。最も頻用されるシクロスポリンの腎毒性は、Protein KinaseC(PKC)を介して引き起こされる腎血管抵抗の増加に関連しているとする報告もある。我々は、新しい免疫抑制剤であるFK506、15-deoxyspergualinの腎毒性も細胞内PKCが関与している可能性があると考え、検討を加えた。具体的には、免疫抑制剤をラットの腹腔内に投与し、免疫抑制剤投与群と非投与群とで腎皮質、髄質外層、髄質内層の細胞質画分および膜画分でPKC活性およびPhorbolesterの受容体としてのBmax(PKC総量)、Kd(解離定数)を比較した。この動物実験系での中間結果としては、FK506投与群と非投与群管間においてPKC活性、Bmax(PCK総量)、Kd(解離定数)に有意差を認めなかた。文献的にはシクロスポリンには、PKC活性を抑制する作用があるという報告があり、FK506も同様の作用を有することが推測される。現時点での問題点としては、この結果がFK506とシクロポリスの作用機序の相違に起因するものかどうかを解明することにある。

FK-506がT細胞内に入るとFK-506結合蛋白質(FK-506-binding protein,immunophilin)に結合し、このFK-506-immunophilin複合体が、Ca^<++>、calmodulin存在化でcalcineurinを阻害してT細胞機能を抑制し免疫抑制作用を発揮すると考えらえている。しかしこの薬剤は有効血中濃度と副作用域濃度が近接しており特にその腎毒性が問題となる場合が多い。そこでFK-506の腎毒性発現の関し、腎組織内でのprotein kinaseC(以下PKC)の関与の可能ついてSD系ratを用い検討を加えた。具体的には、FK-506腹腔内投与群(2.5mg/g体重投与群、5.0mg/g体重投与群)、対照群の腎臓を屠殺後直ちに摘出し、氷上で腎皮質、腎髄質に分け各組織抽出液のPKC活性および、phorbolester受容体としての各組織抽出液のBmax(PKC総量)、Kd(解離定数)を測定、比較した。現時点でFK-506(5.0mg/g体重)投与群のBmax(PKC総量)が対照群に比較してやや低値傾向があるが有意差は認めていない。PKC活性に関しては、FK-506腹腔内投与群、対照群で全く差を認めていない。この原因について考察していみると、FK-506投与量が未だ少ない、シクロスポリンAとは作用機序が違うといった可能性が考えられるが、さらにPKCには現時点で少なくとも7種類のisozymeが確認されておりFK-506投与によって7種のisozymeすべてには変化が生じず、数種のisozymeにのみ変化が生じている可能性もある。さらにこの研究を続行する予定であるが、今後PKCisozymeを分離するchromatographyを用いた実験も必要になってくる可能性がある。
反復経頭蓋磁気刺激法のリハビリテーション医学への応用

平成10年度には、経頭蓋磁気刺激法(rTMS)法の安全性を検討する目的で、行動学的に分析した。32匹の正常マウスと31匹のcytosine arabinosideを注射した運動失調マウスを対象とした。週5回3週間、運動皮質閾値の130%の強度でrTMSを施行した。A群(正常11匹、失調マウス10匹)では、10Hz刺激を10秒間与えた。B群(正常11匹、失調マウス10匹)では、3Hzを60秒間与えた。C群(正常10匹、失調マウス11匹)には磁気刺激を与えなかった。オープンフィールド法で、運動回数と転倒率を測定した。失調群は対照群に比べ有意に運動回数が低下した(p<0.05)。rTMSは対照群でも失調群でもこの運動回数に影響しなかった。転倒率は、失調A群(10Hz×10秒)では平均36%の転倒率で、磁気刺激をしない失調C群(59%)に比べ有意の低下を示した(p<0.05)。長期効果は認めなかった。また、B群(3Hz×60秒)は、非刺激C群との差違を認めなかった。以上、失調マウスに対する反復経頭蓋磁気刺激の治療効果を確認した。平成11年度には、大学の倫理委員会の承認を得て、rTMSを、薬物療法、運動療法、心理療法などで充分な効果がなく、意欲が下十分であった6名のパーキンソニズム、不随意運動を呈する患者に試みた。rTMSのパラメーターは低頻度(0.3Hz)、30回を1日2回、刺激強度は運動閾値の110120%、一週間に5日間で2週間、平円形コイルを用いて行った。1例の脳波モニターで一側大脳にrTMS時に3Hzのslow waveが出現し、長くrTMSを続けるとそれは延長する傾向があった。日をかえて同様なslow waveを認めたため、以後この症例へのrTMSは中止した。臨床症状の改善は除外した1例を除く5例中4例にみられた。改善内容ではうつスケールは3例に、パーキンソン病スコア(UPDRS)は2例で改善、痴呆を呈した1例では長谷川式痴呆スケールでの著明な改善があった。UPDRSでの改善では抑うつ、意欲などの改善は著明であり、運動機能評価も軽度中等度の改善を認めた。経頭蓋的高頻度磁気刺激(rTMS)法の安全性を検討する目的で,マウスにrTMSを与えて行動学的に分析した。対象・方法:32匹の正常マウスと31匹のcytosine arabinoside注射したCrj:ICR雄マウスにて実験を行った。マウスに生後2-4日の3日間cytosine arabinosideを50mg/kg1日1回注射し2・3週間後には頻回に転倒する運動失調マウスを得る。

それらを3群に分け,週5回3週間にわたり,運動皮質刺激閾値130%の強度でrTMSを施行した。A群(正常11匹,失調マウス10匹)では,1回の刺激で10Hz刺激を10秒間与えた。B群(正常11匹,失調マウス10匹)では,3Hzを60秒間与えた。C群(正常10匹,失調マウス11匹)には磁気刺激を与えなかった。第1回目の運動観察は,磁気刺激を与える直前の第8週令で観察した。第2回目の運動観察は,11-TMS終了後の11週令で,第3回目の運動観察は,rTMS終了後2週間後の13週令で行った。オープンフィールド法は,1cm異なる方向へ移動した場合1カウントとし,その総和を運動回数とし,転倒率は,転倒回数を運動回数で除した値とした。結果:失調群は対照群に比べ有意に運動回数が低下した(p<0.05)。rTMSは対照群でも失調群でもこの動作点数に影響しなかった。転倒率は,失調・対照群とも経時的に減少した。特に,失調A群(10Hz×10秒)では,平均36%の転倒率で,磁気刺激をしない失調C群(59%)に比べ有意の低下を示した(p<0.05)。この差違は,13週目(刺激終了2週間後)までの長期効果を認めなかった。また,B群(3Hz×60秒)の磁気刺激頻度が少ない場合は,刺激時間が6倍と長いにも関わらず,非刺激C群との差違を認めなかった。以上の結果,失調マウスに対する経頭蓋的高頻度磁気刺激の治療効果を認めたが,この刺激条件ですべての観察期間を通じて,意識障害や痙彎などの異常を認めなかった。反復経頭蓋磁気刺激法(rTMS)を大学の倫理委員会の承認を得て、臨床的に研究した。目的:リハビリテーションへ意欲の乏しい患者へrTMSを用いて検討した。方法:薬物療法、運動療法、心理療法などで充分な効果がなく、意欲が不十分であった6名のパーキンソニズムを対象とした。rTMSのパラメーターは低頻度(0.3Hz)、30回を1日2回、刺激強度は運動閾値の110120%、一週間に原則として5日間で2週間、平円形コイルを用いて行った。モニターはrTMS施行時に脳波、筋電図、ビデオ画像で行った。刺激前後で末血、血液生化学、SPECTを行った。rTMSの評価は臨床所見、神経心理テスト、パーキンソン病スコア(UPDRS)、10m歩行テストなどであった。結果:1例の脳波モニターで一側大脳にrTMS時に3Hzのslow waveが出現し、長くrTMSを続けるとそれは延長する傾向があった。日をかえて再度rTMSを行うと同様なslow waveを認めたため、以後この症例へのrTMSは中止した。筋電図や動作では異常を認めなかった。また数日後の脳波記録では特に異常を認めなかった。1例のSPECTではrTMS後で著明な血流の増加を認めたが、それ以外では有意差を確認できなかった。臨床症状の改善は除外した1例を除く5例中4例にみられ、1例では変化を認めなかった。改善内容ではうつスケール(SDS)は3例に、UPDRSは2例で箸明に改善、痴呆を呈した1例では長谷川式痴呆スケールでの著明な改善があった。UPDRSでの改善をみると抑うつ、意欲などの改善は著明であり、運動機能評価も軽度中等度の改善を認めた。1例では、主として動作・歩行での改善であった。考察:意欲に乏しいパーキンソニズムに対して、rTMSを施行した結果、臨床的な改善は、意欲、抑うつの項目でより著明であった。
新しい線維化抑制剤発見による肝硬変および慢性膵炎の線維化抑制療法の開発

従来より肝の線維化と一酸化窒素(NO)の関連についてはほとんど検討されていないが、肝線維化とNOの関連、特に誘導型NO合成酵素由来NOが肝線維化や膵線維化に関与しているのか検討した。藤沢薬品が開発した経口投与可能な誘導型NO合成酵素阻害剤:FR260330を供与していただき、本剤によって肝線維化を抑制できるのかラット肝硬変モデルを用いて検討した。本薬剤は投与方法として経口投与した。ラット肝硬変を作成するに当たってはTAA200mg/kgを週に2回、腹腔内投与することで作成した。本モデルは投与8週目で慢性肝炎となり、12週目で完全に肝硬変となった。12週目で肝萎縮、脾腫、腹水を認め、組織学的には炎症細胞浸潤、強い繊維化を認めた。本モデルにおいてFR260330を32mg/kg1日2回連日経口投与させたところ肝硬変への進展が抑制され、腹水・脾腫は認めず、肝線維化率も25%から9.6%に軽減した。総ビリルビン値・ピアルロン酸値の上昇抑制、血小板数低下抑制などの肝硬変における血液・生化学的検査異常値の改善を認めた。免疫染色でSMA染色、iNOS染色、ニトロチロシン染色はともにFR投与群で減弱していた。また、肝組織中のNFBもFR投与によって低下した。RT-PCRではTGF1、iNOS、SMAのmRNA発現は減弱していた。以上の研究結果よりFRの経口投与は肝硬変進展を抑制し、TGF1発現抑制によって星細胞の筋線維化を抑制することでコラーゲンの産生が抑制され、その結果として肝の線維化が抑制されたと考えられた。一方、膵については同様にラット膵線維化モデルでFRを投与したが、糖尿病の進展抑制をある程度認めたが、肝ほどの線維化抑制は認めなかった。FR260330は経口剤であるため、慢性肝炎における肝硬変進展を抑制する薬剤として臨床応用できる可能性が考えられた。われわれは従来にない肝線維化抑制方法を開発することを目的として、一酸化窒素(NO)に注目し、経口型誘導型NO合成酵素阻害剤を投与することで肝線維化を抑制することが可能であるかをラット肝硬変モデルにおいて検討した。「方法」肝硬変モデル作成:体重200gのラットにThioacetamide(TAA)を200mg/kgの用量で週に2回腹腔内投与し、12週間投与することで肝硬変を作成した。NO合成酵素阻害剤は藤沢薬品工業より誘導型NO合成酵素阻害剤(FR260330)を供与していただいた。FR260330は32mg/kgの用量で1日2回、連日経口投与した。実験群は(1)TAA単独群:TAAのみ投与(n=7)、(2)TAA+FR投与群:TAAとFRを投与(n=8)。12週目に犠牲死させ、肝重量、脾重量を測定。肝組織の一部を凍結切片とホルマリン固定で保存し、組織学的検討(HE染色、Azan-Malloty染色)、免疫組織学的検討(iNOS染色、TGFβ1染色)を施行した。「結果」TAA群では全例肝硬変となって肝萎縮を認め、腹水の貯留と脾腫も認めた。

TAA+FR群ではTAA群に比して線維化は軽度で肝萎縮程度も僅かであり、腹水、脾腫は認めなかった。線維化の程度を面積比率で割り出すと、TAA群は25.45%であったが、TAA+FR群では9.60%と有意に線維化の程度が低かった。iNOS免疫組織学的検討ではTAA群でiNOS発現を免疫染色で認めたが、TAA+FR群ではiNOS発現が減弱していた。TGFβ1免疫組織学的検討ではTAA群では線維化を起こしている部位にTGFβ1が強く染色されていたが、TAA+FR群では減弱していた。「結論」FR260330投与によって肝硬変への進展を抑制することが可能であった。肝硬変に対する新たな治療法となることが示唆された。従来より肝の線維化と一酸化窒素(NO)の関連についてはほとんど検討されていないが、肝線維化とNOの関連、特に誘導型NO合成酵素由来NOが肝線維化や膵線維化に関与しているのか検討した。藤沢薬品が開発した経口投与可能な誘導型NO合成酵素阻害剤:FR260330を供与していただき、本剤によって肝線維化を抑制できるのかラット肝硬変モデルを用いて検討した。本薬剤は投与方法として経口投与した。ラット肝硬変を作成するに当たってはTAA200mg/kgを週に2回、腹腔内投与することで作成した。本モデルは投与8週目で慢性肝炎となり、12週目で完全に肝硬変となった。12週目で肝萎縮、脾腫、腹水を認め、組織学的には炎症細胞浸潤、強い繊維化を認めた。本モデルにおいてFR260330を32mg/kg 1日2回連日経口投与させたところ肝硬変への進展が抑制され、腹水・脾腫は認めず、肝線維化率も25%から9.6%に軽減した。総ビリルビン値・ヒアルロン酸値の上昇抑制、血小板数低下抑制などの肝硬変における血液・生化学的検査異常値の改善を認めた。免疫染色でSMA染色、iNos染色、ニトロチロシン染色はともにFR投与群で減弱していた。また、肝組織中のNFκBもFR投与によって低下した。RT-PCRではTGFβ1、iNOS、αSMAのmRNA発現は減弱していた。以上の研究結果よりFRの経口投与は肝硬変進展を抑制し、TGFβ1発現抑制によって星細胞の筋線維化を抑制することでコラーゲンの産生が抑制され、その結果として肝の線維化が抑制されたと考えられた。一方、膵については同様にラット膵線維化モデルでFRを投与したが、糖尿病の進展抑制をある程度認めたが、肝ほどの線維化抑制は認めなかった。FR260330は経口剤であるため、慢性肝炎における肝硬変進展を抑制する薬剤として臨床応用できる可能性が考えられた。
海産養殖魚種の効率的な栄養管理を目指した脂質蓄積・代謝機構に関する基盤研究

本研究では、水産有用魚種の栄養状態管理技術に繋がる基盤研究を目指して、栄養状態の変化による脂質代謝調節のメカニズムを細胞学的・組織学的に観察すると共に、それらに関わる重要因子の役割を分子生物学的・生化学的手法を用いて解析することにより「海産魚の脂質代謝機構」を究明することを目的とした。まず、カタクチイワシを海産有用魚のモデル種として人為的な栄養制御を行い、それに伴う生理変化を観察した。飼育は、季節による差を確認するために、68月(夏群)と101月(冬群)に2回行い、肥満(日間給餌率8%)と欠乏(日間給餌率0.20.4%)の状態に調整した。その結果、夏群では高水温期に肥満区の死亡増加および体重・肥満度の低下が見られたが、冬群ではより長い期間、高い肥満度を維持していることが確認できた。生殖腺体指数は、夏群で低下傾向にあったことに反して、冬群では増加傾向を示した。一方、内臓脂肪の蓄積は夏で高く、肝臓脂肪の蓄積は冬に高かった。血中栄養成分の濃度変化では、総タンパクが成長に伴い同様に低下したが、コレステロールは成熟の状態によって、トリグリセロールは栄養の状態によって大きい変動を示した。なお、肥満区では肝臓の大量脂肪蓄積による繊維化の病変が見られ、過度な給餌により代謝機能の異常が起こる可能性が示唆された。以上のように、高水温期では肥満度が高い程ダメージを受けやすく、成長へのエネルギー転換も悪くなることが推測された。一方、低水温期では高水温期に比べ成長へのエネルギー転換がよかったが、肥満区と対照区との成長差は認められなかったことから、過給餌の不要性が示された。今後は、多様な海産魚をモデルとして栄養状態の制御を行い、もっと詳細な解析を加えて行くことにより養殖魚の効率的な栄養調節技術の確立に寄与できると思われる。
候補遺伝子アプローチ・連鎖解析・罹患同胞対解析を用いる痛風の病因遺伝子の同定

本申請では、「産生過剰型」と「排泄低下型痛風」患者の両者を対象として、痛風、および高尿酸血症の病因遺伝子を同定するために、『候補遺伝子アプローチ』と『連鎖解析』の両方法を用いて解析を行い、以下の知見を得た。1)排泄低下型痛風患者の6世代にわたる一大家系(40検体)の末梢白血球から抽出したDNAを用いて、X染色体を除く全染色体上の343種類のマイクロサテライトマーカーを用いて多型を解析し、得られた結果を、Linkage packageソフトを用いて分析を行った。パラメトリック連鎖解析の結果、16番染色体短腕に連鎖が認められ、多点解析で最高ロッド値6.14を示す領域を見い出した。2)産生過剰型痛風の疾患感受性遺伝子を同定するために、疾患候補遺伝子であり、申請者らがクローニングしたアミドフォスフォリボシルトランスフェラーゼ(ATase)遺伝子、およびプリン代謝の生合成に重要なPRPP合成酵素複合体の4つの構成要素をなす、PRS1、PRS2、PAP39、PAP41の遺伝子局所の単一ヌクレオチド多型(SNP)解析を行うために、これら遺伝子のゲノム構造を決定した。さらに、全エクソン、およびプロモーター領域について、多色蛍光標識MF-PCR-SSCPを用いてSNP多型を集積し、痛風患者と健常者集団間でSNPの頻度を比較し、両群間で連鎖不平衡にあるSNP多型を数種類見い出した。排泄低下型痛風の候補遺伝子アプローチ・連鎖解析・罹患同胞対解析大家系の連鎖解析と罹患同胞対解析排泄低下型痛風を示す三世代40名以上の痛風患者を擁する大家系を対象として、全ゲノム領域にわたり、358種類のマイクロサテライトマーカー(Linkage Mapping Set)について、ABI PRISM 877ロボットを用いてPCR増幅後、Genotyperソフトを用いて、ゲノムマーカー毎のDNAの多型を決定した。また、独自に開発した、遺伝形式の矛盾を検出するソフトLinkmanを用いて、遺伝的矛盾データーを修正後、Linkageソフトを用いて、疾患と連鎖しているマーカー遺伝子座位を解析中である。全国の痛風専門医の協力で、排泄低下型痛風患者の家系の50罹患同胞対(250検体以上)の末梢白血球を収集中である。現在までに約50検体のDNAを収集済みである。末梢白血球からDNAを抽出し、連鎖解析と同様に358種類のマイクロサテライトマーカーを用いて多型データーをとり、Mapmaker/sibソフトを用いて罹患同胞対解析を行う。産生過剰型通風の候補遺伝子アプローチ産生過剰型痛風患者の末梢白血球(300検体以上)、健常者(100人)、および癌細胞株サンプルより抽出したゲノムDNAを用いて、ATaseの全エクソン(11個)およびプロモーター領域について蛍光標識PCR-SSCP法で、遺伝子変異のスクリーニングを終了した。移動度の変化を認めた検体について、DNAシークエンサにて塩基配列を決定した結果、7種類の単一ヌクレオチド多型(SNP)を見いだした。さらに、健常者と癌細胞株間で、多型の頻度に有意な差を認め、現在、人種差による多型差の検討を実施中である。4)ヒトガレクチン9(ヒトUATと推定される)のトランスポーター活性の測定とゲノム構造の決定(山岡)COS細胞にラットUATcDNA遺伝子とアミノ酸配列で72%(塩基で79%)の一致性をもつヒトガレクチン9cDNA遺伝子を導入発現(GFPを同時に発現するコンストラクトを用いて同定)させ、尿酸トランスポーター活性をパッチクランプ法で測定する。ガレクチン9のcDNAの塩基配列をもとに、ヒトガレクチン9遺伝子のゲノム構造を決定する。
バンコマイシン耐性腸球菌のバンコマイシン耐性プラスミドの伝達性と病原性の研究

ゲンタマイシシ耐性プラスミドpMG1(Gm^r65kb)は、グラム陽性菌のE.faeciumで初めて発見された、液体培地中で高頻度に接合伝達するプラスミドである。pMG1(65kb)の接合伝達機構の分子遺伝学的研究により、供与菌と授与菌の安定を接合に必要な、pMG1に特異的な遺伝子traAを同定した(J.Bacteriol.184:5800-5804(2002))。米国の臨床分離VREの700株を調べ、その約50%の株はpMG1型ゲンタマイシン耐性プラスミドを保持していた(J.Clin.Microb.40:3326-33(2002))。このことから、pMG1型プラスミドはVREを含めE.faeciumに一般的に存在することが解った。さらに、日本の臨床分離E.faecium VREの中に、液体培地中で高頻度に接合伝達するバンコマイシン耐性プラスミドを発見、制限酵素地図の異なる3種類(6467kb)を分離した。このプラスミドは、これまで解析してきたE.faeciumの高頻度接合伝達性ゲンタマイシン耐性プラスミドpMG1(65kb)と非常に高い(90%以上)相同性があり、不和合性が一致した。さらにpMG1型プラスミドに特異的なtraA遺伝子を保持していた。このことは、グラム陽性菌のE.faeciumにはpMG1型プラスミドが特異的に存在し、これらのプラスミドはゲンタマイシン耐性のみならず、バンコマイシン耐性等の各種薬剤耐性をE.faeciumに急速に拡散される役割をしていることが示唆される。これらの結果はJ.Bacteriol.185:7024-8(2003).に報告した。
ケラチノサイトを介したランゲルハンス細胞活性化機序の解明と治療への応用

ハウスダストマイト抗原(HDM)は犬ケラチノサイトにおけるGM-CSFの産生を誘導し、その産生はシステインプロテアーゼ阻害薬によって阻害された。したがって、HDMによって活性化された犬ケラチノサイトにおけるGM-CSFの産生にはシステインプロテアーゼが重要であることが示された。天然由来のシステインプロテアーゼであるパパインはNFATの核内移行を誘導した。シクロスポリンによるNFATの阻害によってGM-CSFの産生は部分的に抑制されたことから、システインプロテアーゼを介した犬ケラチノサイトにおけるGM-CSFの産生にはNFATのみならず未知のシグナル伝達系の関与も示唆された。平成23年度の実績は以下の通りである。1.ハウスダストマイト抗原によるケラチノサイト活性化メカニズムの解明ハウスダストマイトの代表的なアレルゲンであるコナヒョウヒダニ(Der f、10μg/ml)抗原とともにイヌケラチノサイト細胞株(CPEK)を培養し、GM-CSタンパクの産生をELISAによって評価した。その結果、添加するDer f抗原量の増加に伴い、GM-CSFタンパクの産生量が増加した。さらに、このDer f抗原介在性のGM-CSFタンパクの産生は、システインプロテアーゼの添加によって完全に抑制されることが明らかとなった。これらの結果から、HDMによるケラチノサイトの活性化には、Der fに含まれるシステインプロテアーゼが関与していることが示された。2.CPEKおよびランゲルハンス細胞を用いた三次元皮膚モデルの作製CPEKをタイプ1コラーゲン上に播種し、液相下において8日間培養した。その後、細胞表面に存在する培養液を除去し、続く9日間は空気に暴露させた状態で培養した。その結果、培養開始8日目における顆粒層の形成および12日目における角層の形成を確認した。しかしながら、角層においては有核細胞が散在していたことから、角化は不完全な状態であった。さらに、分化状態を詳細に評価するために、サイトケラチン10およびサイトケラチン14に対する免疫染色を行った。その結果、有棘層および顆粒層の細胞で発現すべきサイトケラチン10の発現は全く認められず、三次元モデルの下層および中層において、サイトケラチン14の発現を認めるのみであった。(1)単層培養、3次元培養モデルおよび正常皮膚における各種遺伝子の転写量解析単層培養および3次元培養したCPEKとイヌの正常皮膚サンプルからトータルRNAを抽出した。ゲノムDNAを除去した後、逆転写反応を行い、GM-CSF, IL-1beta、TNF-alpha、TGF-beta、CCL2、CCL20およびCCL17についてリアルタイムRT-PCRを行なった。その結果、TNF-alphaは単層培養のみで転写が認められなかった。GM-CSF、CCL2、CCL20およびCCL17においては単層培養、3次元培養および皮膚の順に転写量が増加した。TGF-beta1については単層培養、3次元培養および皮膚において有意差は認められなかった。これらの結果から、3次元培養におけるサイトカインおよびケモカインのmRNA転写は単層培養に比べて、より正常皮膚に類似したパターンを示すことが明らかとなった。(2)悪性組織球症由来細胞株(DH82)細胞表面分子発現解析悪性組織球症を有する犬から確立された単球・マクロファージ系の細胞株(DH82)の3次元培養モデルにおいて使用する樹状細胞様細胞としての有用性を検討するために、細胞表面分子発現の解析を行った。フローサイトメーターを用いて、DH82におけるCD5、CD14、CD45およびMHCIIの発現を解析したところ、CD45のみの発現が確認された。また、CPEKとの混合培養およびサイトカイン刺激下(GM-CSFおよびIL-4)においてもMHCIIの発現が認められなかったことから、DH82は3次元培養モデルにおける樹状細胞様細胞として用いることができないという結論に至った。(1)CPEKおよびランゲルハンス細胞を用いた三次元皮膚モデルの作製イヌ皮膚組織球腫の病変部から株化した組織球(Jack)をCPEKと共に三次元培養し、Jackにおける細胞表面抗原の発現変化について検討した。Jackの細胞表面上には、CD1c、CD11b、CD18およびMHCIIが発現しているが、CPEKとの三次元培養によって、これらすべての分子の発現が消失した。したがって、CPEKを用いた三次元皮膚モデルにおいては、Jackの使用は適切でないことが明らかとなった。(2)プロテアーゼによるケラチノサイト活性化メカニズムの解明プロテアーゼを介したケラチノサイトの活性化メカニズムを明らかにするために、パパインを用いてGM-CSFの産生に関わるシグナル伝達経路を同定した。Der f 1同様に、パパインはケラチノサイトからのGM-CSFの産生を促進した。パパインを添加することによってケラチノサイトにおけるnuclear factor of activated T

cells (NFAT)の核内移行が認められたことから、GM-CSFの産生に至るシグナル伝達経路にNFATが関与している可能性が示された。そこで、NFATの核内移行を阻害するシクロスポリンを用いて阻害実験を行ったところ、GM-CSFの産生は部分的に抑制された。以上の結果より、ケラチノサイトにおけるプロテアーゼを介したGM-CSFの産生にはNFATのみではなく、それ以外のシグナル伝達経路も関与している可能性が示された。1.ハウスダストマイト抗原によるケラチノサイト活性化メカニズムの解明において、PAR-2アンタゴニストを用いた抑制実験が実施できていないため。2.三次元皮膚モデルが確立されていないため。25年度が最終年度であるため、記入しない。ランゲルハンス細胞を含む三次元皮膚モデルが未だに確立していないため。1.PAR-2特異的アンタゴニストを作製できなかった場合に備えて、受容体の下流に存在するシグナル伝達分子の阻害剤を用いた実験を行う。2.3次元培養モデルに分化促進薬を添加し、有核細胞の存在しない角層の形成を試みる。三次元皮膚モデルの確立をめざし、新たにイヌ皮膚組織球肉腫の病変部より株化した細胞を用いて、同様の実験を行う予定である。
デジタル画像復原技術を用いた禅観の総合的研究

(1)トヨク第20窟正壁の壁画は非常に保存状態が悪いが、エルミタージュ美術館に保存される断片と、ドイツ探検隊の記録を参照することによりかなりの部分を復原できる。また表面を泥で覆われた側壁の壁画や題記を、赤外線写真と画像処理によってある程度その内容が観察できるようにした。(2)クムトラ第75窟の題記を撮影・画像処理して、判読不能であった題記の読みを確認することに成功した.その内容を壁画と比較し、それらが密教の観想と関わりのあることを明らかにした。(3)ギメ美術館所蔵の劣化した観経変相を撮影・処理して明瞭化し、その内容がエルミタージュ美術館所蔵のものと密接に関係していることを明らかにした。クムトラ第75窟の題記と壁画の画像処理の結果をふまえてその内容を再検討する発表(講演)を9月にイェール大学,ハーバード大学で,12月にはムンバイのソーマイヤ大学で行った.本石窟の題記は退色のため現状では殆ど判読できず,そのため先行研究でもその内容に関しては種々の推論がめぐらされているのが現状であるが,今回画像処理の結果をふまえることによりかなり確度の高い理解が提示できたように思う.ソーマイヤ大学での学会終了後には,カーンヘーリー石窟・アジャンター石窟・エローラ石窟での見学および撮影(可視光)を行い,今後のインド石窟研究のための見通しを得ることができた.3月のパリ出張では,ギメ美術館で同館長の許可のもと同館所蔵の観経変相二点に対する可視光・赤外線撮影を行い,特別な照明器具は使用しなかったものの,新規に購入した高性能のデジタルバックによりかなり良好な結果を得ることができた.またフランス国立図書館では,文字とスケッチが重なって判読し難い観経変相の画稿の原本一点を詳細に観察して,画稿の原型を復原するための有益な観察の機会を得たさらにルーブル美術館で美術品の撮影技法に関する多数の資料を収集したほか,担当者と今後の研究遂行に関する協議を行い,セルニュスキ博物館でも今後の研究協力に関する打合せを行った.この出張では現地当局の協力のもと,期間内に希望していた調査をほぼすべて順調に終えることができた.本年度は,まず前年度に撮影した資料の処理と分析を進めた.9月にトゥルファンとクチャでの調査・撮影を行った.トルファンではトゥルファン地区文物局の許可と協力のもと,トヨク石窟にて調査および撮影を行った.クチャでは新彊亀茲研究院の許可と協力によりクムトラ第75窟の再撮影を行い,またスバシ寺院とキジルガハ石窟を参看した.トゥルファン,クチャ両地区とも現地管理当局の協力によって円滑に調査を終えることができたが,特に川に遮られてアクセスが難しく,前回調査を断念したトヨク西岸の調査が今回実現したことは非常に有意義であった.クムトラ第75窟に関しては以前にも撮影を試みているが,今回は最新の機材を用いて撮影することにより,以前のものよりはるかに良好な画像を得ることができた.これらの成果については,事前の合意に基づきそれぞれの管理当局に画像を提供し,現在発表準備を進めている.今回のトヨクの成果については,現在ウィーンで出版準備が進められている論集で発表する予定である.本論集は既に編集の最終段階にあるので,近く刊行されるものと思われる.クムトラの成果については,平成26年度にエルサレムで行われる学会で発表の予定である.また,中央アジア成立と思われる漢文禅観経典『観仏三昧海経』にみられる釈尊の陰馬蔵相をめぐる奇妙な説話の展開を,美術および文献資料を参照しつつ検討する拙稿が,学術書India in the Chinese Imaginationに収載された.本年度は、まず6月にエルサレム・ヘブライ大学で開催されたシンポジウム「中国とチベットの密教」における招待講演で、クムトラ第75窟の壁画と題記の画像復原に基づく分析結果を英語で発表した。この発表においては、本研究費により平成25年度に撮影した高精度写真の処理結果により、従来の題記の判読の一部を修正した上でその内容を分析し、本石窟の題記と壁画の内容を総合的に解釈した。即ち、それらが禅観経典の伝統やアビダルマ的世界観をふまえつつも、直接的には密教的な実践と関係している可能性が高いことを指摘したのである。この成果に関しては、現在新彊亀茲研究院および庫車県文物局と連携して論文を発表する準備を進めている。8月から9月にかけて、トゥルファン地区で同地区文物局の協力のもと、禅観に関係すると考えられるヤルホト第4窟、センギム第4窟、バイシハル第4窟の調査と撮影を行った。また10月にはトゥルファン博物館と法鼓仏教学院(台湾)におけるシンポジウムで連続して招待講演を行った。