hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
群集動態に対する安定化メカニズムと等質化メカニズムの相対的重要性の評価方法の開発

この点で岩礁潮間帯の固着生物群集は理想的な材料である。なぜなら個々の種は潮位に沿った出現のモードを持ち、出現季節が限られる種も多いため、特定の季節と潮位の群集を対象にして各種の出現季節と出現潮位のモードを明らかにすれば、コア種と偶来種の峻別ができるからだ。そこで北海道東部の25の岩礁で行った9年間の調査から得られたデータを用い、夏の中潮帯の群集構成種を潮位と出現季節を基準にコア種と偶来種に峻別し、1)生態的特徴、2)種数の時空間変動、3)出現頻度分布の形状、4)局所群集における存否やアバンダンスの動態を左右する要因を比較した。出現した全41種のうち、コア種は7種すべてが多年生であった。一方、偶来種には季節性の種も含まれていたが、ほとんどは低潮位に分布モードを持つ種であった。コア種は偶来種にくらべ種数の空間変異も年変動も小さく、コア種の出現頻度分布は2峰型なのに対し偶来種は単峰型となるなど、コア種と偶来種では種数の時空間変異や出現頻度分布の形状が大きく異なっていた。さらに、各種の存否やアバンダンスの動態を左右する要因もコア種と偶来種で大きく異なった。たとえばコア種では中潮位が、偶来種では中潮位以外の潮位がそれぞれ加入個体の供給源として重要であることが示唆された。双方の相互作用も非対称的で、偶来種はコア種から一方的に負の影響を被っていることや、コア種同士では種間より種内で密度効果が強く働いていることが示唆された。以上の結果は、岩礁潮間帯の固着生物群集は、おもに潮位に沿ったニッチの違いに対応したコァ種と偶来種から構成され、両種群間では数と分布の時空間動態のパターンとそのプロセスが大きく異なることを示唆している。1.研究計画の概要共存機構と群集動態との関係を明らかにすることは群集生態学の中心課題のひとつである。本申請研究は、多種共存に必須な安定化メカニズムと等質化メカニズムの相対的重要性を野外群集で評価するための新しい方法を開発することにあったが、昨年度までの解析により、研究対象とする岩礁潮間帯の固着生物群集は、その場所の潮位が好適な潮位域とは異なる「偶来種」とそれ以外の「コア種」の二群からなることが判明した(後述)。このことは、岩礁潮間帯の固着生物群集における共存機構と群集動態の関係は、計画当初に想定したような比較的単純なアプローチでは明らかにできないことを意味する。そこで、今年度は種数の少ない「コア種群」を対象に、個体群動態と種間相互作用についての研究を進めることにした。2.研究の内容北海道東部の25の岩礁で行った10年間の調査から得られたデータを用いた前年度の解析により、岩礁潮間帯中部の固着生物群集は、おもに潮位に沿ったニッチの違いに対応したコア種と偶来種から構成され、両種群間では数と分布の時空間動態のパターンとそのプロセスが大きく異なることを示唆された。その中で、コア種群は偶来種群からは強い負の影響を受けていないことが分かった。そこで、本年度は、コア種中最も優占度の高いキタイワフジツボとコア種内の唯一の外来種であるキタアメリカフジツボを対象に個体群動態を解析した。キタイワフジツボでは、生息潮位の中心部ほど、種内の密度効果が強いこと、個体群動態の安定性も高く、確率的変動性は低いことが明らかになった。また、キタアメリカフジツボは、過去5年間で分布域を東方に年当たり約20kmの速度で拡大し、その個体群の確立の成否に、キタイワフジツボを含む他のコア種からはほとんどネガティブな影響を受けていないことなどが明らかになった。
細胞形質別に見た分化型胃癌の遺伝子変化

Mismatch repair geneの一つであるhMLHl遺伝子プロモーター領域のメチル化による不活化がMicrosatellite instability(MSI)と密接に関係していることが最近判明してきた。われわれは、昨年の検討で分化型胃癌の中でも腺窩上皮型細胞形質を強く有するものではMSIの関与が高頻度であることを示した(J Pathol 191:257-263,2000)。本年度はこの高率なMSIに,hMLH1遺伝子のメチル化による不活化が関わっているのではと考え検討を行った。胃腺窩上皮型分化型胃癌ではMSIは55%,hMLH1遺伝子のメチル化は73%とMSIよりもさらに高頻度に認められた。さらにメチル化を認めた病変では腫瘍近傍非腫瘍粘膜でも69%にメチル化を認め,腺窩上皮型分化型胃癌においてはhMLH1遺伝子の不活化がその組織発生に重要な意義を持つことが示唆された(Am J Pathol 157:717-722,2000)。分化型胃癌には胃型の形質を持つものから完全腸上皮化生型の細胞形質を有するものがあり,その組織発生は従来考えられてきたような単純なもの(分化型癌は腸上皮化生粘膜から,未分化型癌は胃固有粘膜から)ではないことを明らかにしてきた(J Pathol 1999;189:201-206,Hum Pathol 1999;30:826-832,J Pathol 2000;1191:in press)。さらに今回は細胞形質で遺伝子変化も異なるのではと考え,種々の遺伝子解析を行った。その結果胃型細胞形質を強く発現している分化型胃癌ではp53遺伝子の変異は極めて低頻度であるのに対し,Microsatellite instability(MSI)の頻度は高率で,腸型形質を強く有する分化型癌とはgenetic pathwayも大きく異なることを示した(J Pathol 2000;1191:in press)。今現在,MSIの引き金となっていると考えられる,hMLH1遺伝子のメチル化による不活化の検討を終了し論文作成中である。
多文化社会を創造的に生き抜くためのリーダーシップ養成：「異文化跳躍力」の提案

本年度は、本科研申請時に提案した異文化跳躍力(個々の成員が抱く異質なアイディアを元に,独自の行動規範を対話的に構築するリーダーの省察力)に関する理論的検討を進めてきた。申請者がこれまで研究を進めてきたヴィゴツキー・バフチン理論の関連する議論を精査し、特に「対話」概念を中心とした理論研究を進めてきた。また、複数の文化的背景を持つ人々が同じ地域で活動を行ってきたヨーロッパにおける習俗(特にカーニバルに関わる道化文化)に関する知見が、バフチンのダイアローグ論と深く関連し得ることが分かった。新たに判明したこれらの研究領域に関する文献学的な研究を進めると共に、現地におけるフィールドワークも実施した。これらの研究成果は、複数の学術図書・学術論文および学会発表・現場教員向けの招待講演などにおいてその成果発表を行ってきた。また実践面においては、協力研究関係にある専門家との研究連携を深め、そこでの論議を踏まえたテーマによる講演会を、研究代表者が勤める東京外国語大学において科研に関わるテーマでの講演会を実施した。小学校現場の教育研究者である藤倉憲一氏(新授業デザイン研究会代表)には、『学習者の主体性を促進する教員の権威と権力:学びを深めるリーダーシップ』(2018年12月14日実施)、民間企業の人材研究者である武元康明氏(株式会社・半蔵門パートナーズ社長)には、『あなたにとって一番大切なものは何ですか:日本最強ヘッドハンターが語る,実社会が希求するリーダーの実像』(2019年1月11日実施)のタイトルで実施した。来場者はそれぞれ,およそ200名だった。藤倉憲一氏が代表を務める、小学校教諭が参加する新授業デザイン研究会との連携においては、小学校現場において異文化跳躍力を育成し得る教育方法のあり方について研究交流(具体的な授業案の発表およびその改善に関する議論を含む)を進めた。異文化跳躍力に関する理論研究は、当初の予想を超える進度で進んでおり、またその成果発表(学術論文・学術図書の出版を含む)についても順調に行えている。まずL.S.ヴィゴツキーの発達理論とプラトンのイデア論を、E.A.ハヴロックによる著名なメディア論を媒介として関連づけて検討した学術論文では、異文化跳躍力に関わる自己意識の成立が書きことば教育と深い繋がりがあることを指摘し,その育成のあり方について示唆を行うことができた。さらにM.M.バフチンのダイアローグ理論の精査を進め,異文化跳躍力に関わるコミュニケーションの性質を整理した概念モデルを提唱した。この研究成果は、複数の学術雑誌への論文において発表を行った。さらに研究計画を提出した時点では想定していなかった、ヨーロッパにおける民俗学的な研究の必要性を発見し、現地におけるフィールドワークも含む研究の蓄積を行えたことも想定以上の成果と考えている。民間企業や小学校現場における人材開発研究の専門家との研究連携がスムーズに進み、異文化跳躍力を養成し得る教育実践の具体的なイメージを描くことができた点も大きな成果といえる。著名なヘッドハンターでもある武元康明氏との研究協議を通し、自集団における常識的な言語実践に対する言語認識を、他集団の視点から再検討し直すことを示す、バフチンの援用した「異化」の概念が、実践的に重要な重みを持つことが分かった。これらの概念は、学術界においては古くから存在したものであるが、研究代表者の理論研究を通じ、実業界における実践的価値を再発見できた点は意義深いと考えている。また大阪市の小学校現場における実践研究を長年にわたりリードしてきた藤倉憲一氏との協議を通じ、上記の概念を含む理論研究が持つ実践的価値を再検討し、また学校現場における実践像を具体的に描くことができた点も、想定以上の成果であると考えている。2019年度においては、当初の研究計画通り、2018年度の研究成果をもとに理論研究・実践研究をさらに深化させる予定である。理論研究としては、バフチン・ヴィゴツキー理論を発展的に解釈し、異文化跳躍力に関する言語学的・心理学的分析を深めていく。また2018年度からスタートさせたカーニバルに関するフィールドワーク調査の成果を、これらの研究と接続させていく。さらに社会心理学領域におけるリーダーシップ研究の蓄積との接続を進め、現代の学校教育における様々な実践現場に適用可能な、強靱な人材育成モデルの構築を目指す。実践研究としては、これまでの研究成果を基に、教育方法の開発につとめる。具体的には、小学校現場における実践研究者との研究連携を通じ、対話的な学びに関する教育方法の開発に参加する。さらにこれらの研究成果をもとに、大学における教育方法・教育評価法についても検討を行い、パイロットスタディを開始する。以上の理論研究・実践研究をもとに、本研究が設定した異文化跳躍力の要請実現に向けた教育のありかたについて提言を行うための成果発表を行う。

また実践面においては、協力研究関係にある専門家との研究連携を深め、そこでの論議を踏まえたテーマによる講演会を、研究代表者が勤める東京外国語大学において科研に関わるテーマでの講演会を実施した。小学校現場の教育研究者である藤倉憲一氏(新授業デザイン研究会代表)には、『学習者の主体性を促進する教員の権威と権力:学びを深めるリーダーシップ』(2018年12月14日実施)、民間企業の人材研究者である武元康明氏(株式会社・半蔵門パートナーズ社長)には、『あなたにとって一番大切なものは何ですか:日本最強ヘッドハンターが語る,実社会が希求するリーダーの実像』(2019年1月11日実施)のタイトルで実施した。来場者はそれぞれ,およそ200名だった。藤倉憲一氏が代表を務める、小学校教諭が参加する新授業デザイン研究会との連携においては、小学校現場において異文化跳躍力を育成し得る教育方法のあり方について研究交流(具体的な授業案の発表およびその改善に関する議論を含む)を進めた。異文化跳躍力に関する理論研究は、当初の予想を超える進度で進んでおり、またその成果発表(学術論文・学術図書の出版を含む)についても順調に行えている。まずL.S.ヴィゴツキーの発達理論とプラトンのイデア論を、E.A.ハヴロックによる著名なメディア論を媒介として関連づけて検討した学術論文では、異文化跳躍力に関わる自己意識の成立が書きことば教育と深い繋がりがあることを指摘し,その育成のあり方について示唆を行うことができた。さらにM.M.バフチンのダイアローグ理論の精査を進め,異文化跳躍力に関わるコミュニケーションの性質を整理した概念モデルを提唱した。この研究成果は、複数の学術雑誌への論文において発表を行った。さらに研究計画を提出した時点では想定していなかった、ヨーロッパにおける民俗学的な研究の必要性を発見し、現地におけるフィールドワークも含む研究の蓄積を行えたことも想定以上の成果と考えている。民間企業や小学校現場における人材開発研究の専門家との研究連携がスムーズに進み、異文化跳躍力を養成し得る教育実践の具体的なイメージを描くことができた点も大きな成果といえる。著名なヘッドハンターでもある武元康明氏との研究協議を通し、自集団における常識的な言語実践に対する言語認識を、他集団の視点から再検討し直すことを示す、バフチンの援用した「異化」の概念が、実践的に重要な重みを持つことが分かった。これらの概念は、学術界においては古くから存在したものであるが、研究代表者の理論研究を通じ、実業界における実践的価値を再発見できた点は意義深いと考えている。また大阪市の小学校現場における実践研究を長年にわたりリードしてきた藤倉憲一氏との協議を通じ、上記の概念を含む理論研究が持つ実践的価値を再検討し、また学校現場における実践像を具体的に描くことができた点も、想定以上の成果であると考えている。2019年度においては、当初の研究計画通り、2018年度の研究成果をもとに理論研究・実践研究をさらに深化させる予定である。理論研究としては、バフチン・ヴィゴツキー理論を発展的に解釈し、異文化跳躍力に関する言語学的・心理学的分析を深めていく。
戦後イギリス社会におけるＢＢＣサードプログラムのラジオドラマ

本研究の成果として以下の三点がある。(1)ラジオドラマに描かれる、ウェールズやアイルランドなどのイギリスの境界に位置する国々が、新たに打ち建てられるEnglishnessに収まらない差異を表していることが判明した。(2)モダニズムのエリート主義にとって大衆は忌むべき問題であったが、ラジオが大衆に語りかける新しい言語を模索する手段として、ラジオドラマがあったことが分かった。(3)第一次世界大戦が多くの戦争詩を生んだが、第二次世界大戦に詩的表現を与えた作家は少ない。それに対して、BBCラジオは、戦争にたいする、より複雑な感情を代弁するメディアになったことが分かった。本研究は1950年代から60年代にかけてのイギリスの社会状況を背景に、BBC(The British Broadcasting Corporation)サードプログラムで制作されたラジオドラマを再評価することを目的にする。特にDylan Thomas、Samuel Beckett、Harold Pinterらの作品を題材にする。まずロンドンを中心とした、文化・芸術の中央集権的政策が生み出した、「都市」と「周縁」という二項対立をそれらのラジオドラマが覆していることを証明する。2013年度後半は、国際比較文学会で発表した際の様々なアドヴァイス、意見を踏まえ、Under Milk Wood論を書き直しに費やした。またそれとともにThomasの他のBBCラジオドラマのスクリプト("Margate - Past and Present", "Lodoner"など)を考察の対象として、都市や地域のローカルな特性を前景化させるようなレトリックを分析した。これは2014年度にまとめて論文にしたい。〔調査〕9月6日から9月16日にかけてイギリスはロンドンの大英図書館に赴き、サードプログラムで放送されたラジオドラマの台本をチェックした。特に、二本のみならずイギリスにおいても入手困難といわれるHenry ReedやGiles Cooperの台本を複写できたのは大きい。またLouis MacNeiceのラジオドラマ、およびインド独立を伝えるためにBBCによって1947年に現地に派遣された際に彼の報告したレポートをも閲覧することできた。またこれは別経費だが、11月23日から12月2日にかけて、アメリカのテキサス大学オースティン校に併設されているHarry Ransom Humanities CenterでDylan Thomasの草稿を調査した。特に、ラジオドラマの傑作と言われるUnder the Milk Woodの草稿を分析し、テクスト生成を跡づけることができたのは収穫であった。本研究は1950年代から60年代にかけてのイギリスの社会状況を背景に、BBC (The British Broadcasting Corporation)サードプログラムで制作放送されたラジオドラマを再評価することを目的にする。まずはロンドンを中心とする、文化・芸術の中央集権政策が生み出した「都市」と「周縁」という二項対立が、サードプログラムのラジオドラマによって覆されていることを証明する。1950年代には、サードプログラムのクラシック音楽を中心にしたハイカルチャー路線にたいして、大衆文化を掘り起こそうとする試みがBBC全体(特にホームサービス)でなされた。2014年度はこの事実に着目し、おもに、Folk Music RevivalやCultural Studiesに代表される大衆路線とラジオドラマの関係を調査した。成果として、まずはイギリスのウォーリック大学で行われたInternational Federation for Theatre Researchにて、"Floating England: Voices in the Air in the BBC Third Programme"という題目で発表(2014年7月30日)をした。これはDonald Cottonが企画し、複数のラジオフューチャー(実験的で短いラジオドラマ)を集めたものである。そこにちりばめられた皮肉などを分析し、それがかつての植民地主義から"Shrinking Island"へと変貌してしまったイギリスの現状を揶揄していることを明らかにした。またその形式が19世紀ロンドンで流行したMusic Hallを思い起こさせるとともに、1969年に始まるMonty Pythonのテレビシリーズを予告していることを指摘した。また2013年度に重点的に研究したDylan Thomasのラジオドラマに関しては、第二次世界大戦期の戦争表象と関連付け、2015年度夏に発行予定の学術誌に掲載予定である。本研究の実績は以下の三点にまとめることができる。(1) BBB ThirdProgrammeのラジオドラマがイギリスの「周縁」を描くことが多ことを確認することができた。ウェールズやアイルランドなど、イギリスの境界線近隣の国々が、ロンドンを中心に、新たに打ち建てられるEnglishnessにはおさまらない差異を表していることが判明した。そこで描かれるのは、都市文化と二項対立の関係にあるローカリティではなく、植民地主義を清算し、小さな福祉国家として生まれ変わろうとするイギリス社会全体を批判する視座を有していた。(2) Third Programmeにおいて、「階級」が頻繁に言及される問題であったことが確認できた。モダニズムの作家たちは、ラジオが新しい知識層をつくりだし、これまでの階級安定性が失われることを危惧し、特定の知識層にのみ理解可能な言語を彫琢していった。それにたいしてBBCラジオ放送は、作家たちを、それまでなかった規模の、不特定多数の読者/聴取者に直面させた。コミュニケーションの新しい対象であった大衆に語り掛けるために、作家たちは、古典作品のフォーマットを利用したり、大衆音楽を利用したりして、文化の大衆化を図っていた。(3)第二次世界大戦にたいする、作家たちの様々な反応を考察することができた。アメリカに積極的な参戦を呼びかけるプロパガンダ的な放送をしたLouis MacNeiceや、戦争下における市民の連帯のかたちを描いたDylan Thomasなどの作品である。第一次世界大戦が多くの戦争詩を生んだのにたいして、第二次世界大戦に詩的表現を与えた作家は少ない。

それに対してBBCラジオは戦争への、より複雑な感情を代弁するメディアになったことが分かった。本研究の成果として以下の三点がある。(1)ラジオドラマに描かれる、ウェールズやアイルランドなどのイギリスの境界に位置する国々が、新たに打ち建てられるEnglishnessに収まらない差異を表していることが判明した。(2)モダニズムのエリート主義にとって大衆は忌むべき問題であったが、ラジオが大衆に語りかける新しい言語を模索する手段として、ラジオドラマがあったことが分かった。(3)第一次世界大戦が多くの戦争詩を生んだが、第二次世界大戦に詩的表現を与えた作家は少ない。それに対して、BBCラジオは、戦争にたいする、より複雑な感情を代弁するメディアになったことが分かった。毎年ノルマとしている海外での研究発表を2014年度も無事終えることができた。調査を進めていくにつれ新たな発見があり、それに伴い軌道修正をすることで当初の計画からはわずかに逸れたところで調査する点も増えてはきているが、研究はおおむね順調といえる。英文学2015年度は本研究の最終年度である。これまでの成果をまとめるとともに、近い将来単著として出版できるように準備を整えておきたい。また研究を進めていくにつれ、当初設定した視点の限界と新たな問題点があきらかになってきた。たとえば文学者とBBCの関係であれば、サードプログラム以外でも多くの芸術関連の番組が制作されている。またラジオドラマだけでなく、ポエトリーリーディングやインタビューなどの番組にも参加している作家が多くいる。そこで今後は、マスメディアにおける文学者の活動を包括的に分析できるような研究の準備をしていきたい。毎年のノルマとしている海外での発表を無事消化することができた。また収集した資料の分析も順調で、その結果として論文も書くことができている。以上のような理由で研究はおおむね順調に進展しているといえる。しかし、2013年のバルセロナで開催されたInternational Federation for Theatre Researchが、国際比較文学会と日程が重なっているために参加できたなったこと、また2014年4月に大学を転出したため、2014年2月から3月はその準備のために忙殺され、研究に十分な時間がさけなかった。したがって、予想以上の進展とまではいかなかった。
C/C複合材料の耐酸化SiC/C多層コーティングシステムの開発

炭素繊維強化炭素複合材料(C/C複合材料)は、高耐熱性・軽量・高強度・高靱性を併せ持つ希有な材料である。しかしながらC/C複合材料には、高温で容易に酸化され揮散するという大きな欠点があり、この欠点を克服するために、C/C複合材料表面に耐酸化被膜を施す技術が提案されている。しかしながら、C/C複合材料の熱膨張係数は極めて小さく、C/C複合材料上の耐酸化被膜には多数の亀裂が発生する。この亀裂を通して酸素が基板に到達するため、これまでの耐酸化コーティングは酸素の遮蔽能力は不安定かつ能力の劣るものと見なされてきた。本研究では、この耐酸化被膜に発生する亀裂を抑制することを目的とした検討を行った。具体的には、1)耐酸化被膜を多層の積層構造にする方法、2)C/C表面を波形にして発生する熱応力を低減する方法、3)耐酸化被膜中に強化繊維を混入させ、耐酸化被膜の靭性を向上させる方法の三種類を検討した。多層コーティングに関しては、各層を薄くすることで亀裂を抑制できることを見いだしたが、無亀裂にするためには多層中の各層の膜厚を0.2mm以下に押さえる必要があり、膜の一様性及び安定性に問題を残すことが明らかになった。C/C表面を波形にする方法に関しては、実際に熱応力が低減でき、この傾向が異方性材料では特に顕著に起こることを確認した。更に強化繊維型のコーティングでは、クラックの開口を大幅に低減できることを明らかにした。これらの三つの方法はいずれも単独ではコーティングクラックの完璧な抑制には至らなかったが、これらの方法を組み合わせることにより効果的なコーティングが形成できることが推定された。
トランス脂肪酸により誘導される炎症性反応の解析とその抑制法の開発

【目的】トランス脂肪酸(TFA)の高摂取は心血管疾患、動脈硬化症のリスクを高める。今回の研究は、工業的TFAであるエライジン酸(EA)の動脈硬化誘導作用を解析した【方法】実験にはヒト乳癌由来YMB-1-E細胞及びヒト単球由来U937細胞を用いた【結果】EAは、抗動脈硬化たんぱく質アディポネクチン発現を強く抑制した。EAはPMA刺激U937細胞のdishへの接着、分化抗原CD68、CD147、TNF-αの発現、脂質蓄積、及び食作用を促進した。阻害剤による実験からEAはTLR4を介して、上記の様な動脈硬化性変化を進めることが示された。この事はTLR4制御による発症抑制の可能性を示唆するものである。本研究ではトランス脂肪酸のアディポネクチン産生の抑制に関与する受容体や短鎖脂肪酸の関与する機構を明らかにすること、アディポネクチンの産生低下による接着因子、LDL受容体、その他の受容体などの発現に及ぼすエライジン酸の影響などを明らかにすることを目的とし、以下の実験を行ってきた。(1)エライジン酸が炎症性のサイトカインを誘導する経路はどのようなものであるのか、Toll Like Receptor 4を含めた細胞内情報伝達系のより詳しい解析。(2)アディポネクチンの産生低下の阻害に対する短鎖脂肪酸の影響の詳しい解析。(3)エライジン酸の誘導するLDL受容体、(4)その他の受容体の産生機構の解析。エライジン酸により量的に低下したアディポネクチンの分子型の変化についても検討する。1については、この項目に関してはすでに細胞内情報伝達系の阻害剤を用いた検討の結果、生体の細菌感染のセンサーと言われるTLR-4経由したNF-kBの活性化を経路するの推測を持つに至っているが、さらに詳しい解析を行いエライジン酸のアディポネクチン産生抑制機構を解明する。エライジン酸は細胞に対して炎症性の反応を示すことが申請者らの実験で明らかとなってきた。従来考えられていた、PPAR受容体の変動ではなくToll Like Receptor 4をその受容体とする、細胞内情報伝達経路でアディポネクチンの発現をコントロールしている可能性を考えるに至っており、詳しい情報伝達経路を明らかにする予定である。この受容体に結合することを妨げることが可能であればトランス脂肪酸摂取による弊害が防げる可能性がある。2については申請者は最近の実験から上記の情報伝達系に対してプロピオン酸などいくつかの短鎖脂肪酸がエライジン酸によるアディポネクチン産生低下を阻害することを示した。3、4については予備実験を行っている段階である。脂肪酸(TFA)の高摂取は心血管疾患、動脈硬化症のリスクを高める。今回の研究では、工業的に生産される主要なTFAであるエライジン酸が、抗動脈硬化作用を持つアディポネクチンの発現を抑制する可能性を検討した。実験はYMB-1-E細胞にエライジン酸、他の試薬を添加して培養を行った。mRNA量の解析にはRT-qPCR法を用い、たんぱく質量の変動はウエスタンブロット法にて解析した。エライジン酸は、アディポネクチンmRNA及びタンパク質レベルの発現を強く抑制し、一方、TNF-αmRNA発現を濃度依存的に誘導した。TNF-αタンパク質の添加により、アディポネクチンmRNA発現は顕著に抑制された。さらに、TNF-αの合成阻害剤、分泌阻害剤、分泌されたTNF-αの細胞のTNF-α受容体への結合阻害剤などによりアディポネクチン合成が抑制されることを見いだした。このことはアディポネクチン合成の抑制にTNF-αが関与していることを示していると思われる。またToll様受容体(TLR)-4の特異的阻害剤、VIPER、TAK-242の添加で、エライジン酸により亢進されたTNF-αmRNA発現は抑制され、アディポネクチンmRNA発現は回復した。TLR-4の情報伝達系のNF-κBの阻害剤によってもアディポネクチン合成の抑制が解除されることを明らかにした。エライジン酸はTLR-4/NF-κB情報伝達系を介してTNF-αmRNA発現を促し、細胞外へ分泌されたTNF-αがTNF-α受容体を介した情報伝達系を経てアディポネクチン発現を抑制していると考えられる。今回の研究ではさらに一歩を進めて動脈硬化発症のもう一つの原因であるマクロファージへの分化、泡沫化への過程にもエライジン酸が関与していることを突き止めた。「研究の背景」近年、トランス脂肪酸摂取が心疾患のリスクを高めることが多くの疫学的研究で明らかになった。しかしながらトランス脂肪酸がこれらの疾患を引き起こす機構についての生化学的解析は殆ど行われていない。申請者はヒト乳がん由来YMB-1-E(YMB)細胞を用いて、エライジン酸を添加により、抗動脈硬化蛋白質アディポネクチンの産生低下、炎症性サイトカインTNF-αの発現上昇、Toll様受容体4(TLR-4)の活性化が起こることを見いだした。「研究の目的」今回の研究ではトランス脂肪酸摂取に動脈硬化の発症機構を明らかにし、予防、防御に役立てることを目的とした。「研究成果」本研究ではTNF-α蛋白質の添加によりアディポネクチンmRNA発現が抑制されたことからエライジン酸はTNF-αmRNA発現を促し、分泌されたTNF-αがアディポネクチン発現を抑制すると考えた。

さらにTLR-4の特異的阻害剤、TAK242およびviral inhibitory peptide of TLR-4 (VIPER)の添加で、エライジン酸によるTNF-αmRNA発現誘導は抑制され、アディポネクチンmRNA発現抑制が解除されることから、アディポネクチンmRNA発現抑制にはTLR4情報伝達系が関与することを明らかにした。このことはTLR4ノックアウトマウスあるいはsiRNAを用いた実験でも裏付けられた。ヒト単球系白血病U937細胞を用いた実験ではPMAで刺激したU937細胞でエライジン酸処理により、dishへの接着、CD68、CD147の発現、及び食作用の促進が認められた。エライジン酸のこれらの作用はTAK-242およびVIPERで阻害された。これらの結果は動脈硬化発症にTLR4が重要な役割を果たしており、TLR4の阻害剤の開発、同定により発症の予防、防御が可能となることを示唆するものである。【目的】トランス脂肪酸(TFA)の高摂取は心血管疾患、動脈硬化症のリスクを高める。今回の研究は、工業的TFAであるエライジン酸(EA)の動脈硬化誘導作用を解析した【方法】実験にはヒト乳癌由来YMB-1-E細胞及びヒト単球由来U937細胞を用いた【結果】EAは、抗動脈硬化たんぱく質アディポネクチン発現を強く抑制した。EAはPMA刺激U937細胞のdishへの接着、分化抗原CD68、CD147、TNF-αの発現、脂質蓄積、及び食作用を促進した。阻害剤による実験からEAはTLR4を介して、上記の様な動脈硬化性変化を進めることが示された。この事はTLR4制御による発症抑制の可能性を示唆するものである。トランス脂肪酸(TFA)の高摂取は、心血管疾患、動脈硬化症のリスクを高めることが知られている。今回の研究では、エライジン酸がTLR-4/NF-κB情報伝達系を介してTNF-αmRNA発現を促し、細胞外へ分泌されたTNF-αがTNF-α受容体を介した情報伝達系を経てアディポネクチン発現を抑制していることを示した。さらに一歩を進めて動脈硬化発症のもう一つの原因であるマクロファージへの分化、泡沫化への過程にもエライジン酸が関与していることを明らかにした。ヒト単球由来細胞株U937細胞を用い、マクロファージへの分化は、接着細胞数の測定及びCD68、CD147の免疫蛍光染色を行い、評価した。TNF-αmRNA量の解析はRT-qPCR法、脂質蓄積の観察にはオイルレッドO染色を行った。食作用の評価には、蛍光ビーズを用いた。分化誘導剤PMAによりU937細胞に認められるdishへの接着、分化抗原CD68、CD147の発現誘導などの分化形質の発現が、エライジン酸処理により促進された。さらにU937細胞由来マクロファージにおいて、エライジン酸によるTNF-α発現、及び脂質蓄積、食作用の促進が認められた。エライジン酸はマクロファージの分化誘導、さらには食作用を亢進し、アテローム性動脈硬化症のリスクを高めることが示唆された。生化学・細胞生物学今回の研究では、エライジン酸がTLR-4/NF-κB情報伝達系を介してTNF-αmRNA発現を促し、細胞外へ分泌されたTNF-αがTNF-α受容体を介した情報伝達系を経てアディポネクチン発現を抑制していることを示した。
立体異性化ヌクレオチドを含む特異な交叉型三重鎖形成核酸の機能化と遺伝子発現の制御

これまで実施計画に従って研究を実施するとともに、以下のような成果を得ることができた。先ず、インターヌクレオチド結合中のリン原子に、適当なアルキルリンカーを介してインターカレーターを結合したジヌクレオチド誘導体を構築し、生成するジアステレオマーを分離した後別々にキメラDNA中に導入したところ、一方の異性体のみが交差型三重鎖の安定性を向上すること、この効果は三重鎖形成時に特有であり、対応する二重鎖形成時には発現しないことを見出した(論文発表済み)。次ぎに、通常三重鎖形成の標的となるポリピュリン鎖中に一ヶ所ピリミジン塩基が出現する、いわゆるピリミジンギャップを含む標的に対しても三重鎖形成を行うことのできる新たな三重鎖形成核酸の創製を目指し、非ヌクレオシド性プラットホームであるビスヒドロキシプロピオン酸とインターカレーター結合させたコンジュゲートを合成した。このコンジュゲートを導入した三重鎖形成核酸は、ピリミジンギャップを有するポリピュリン鎖に結合し、安定な三重鎖を形成できることを見いだした(論文発表済み)。三重鎖形成能の向上に関し、核酸塩基部の修飾についても検討を行った。その結果キメラDNAのリンカー鎖中のピリミジン塩基C-4位にインターカレ一夕ーを導入することで、交差型三重鎖の安定性を大きく向上できることを見いだした(論文発表済み)。同様に、ビスヒドロキシプロピオン酸とインターカレーター結合させたコンジュゲートを上記リンカー鎖中に導入した場合、得られる修飾キメラDNAは標的二重鎖とほぼ生理的条件下でも安定な三重鎖を形成出来るだけでなく、不斉炭素を持つビスヒドロキシプロピオン酸を導入することで生成するジアステレオマーの何れもが、ほぼ等しい三重鎖安定化効果を示すという、非常に意外な結果を得ることができた。これによって、ここで企図しているキメラDNAの修飾法は、立体化学に依存することなく初期の効果をもたらしうる、非常に用途の広い修飾法であることが示された(論文発表済み)。金属配位子とインターカレーターからなる新規コンジュゲートとビスヒドロキシプロピオン酸とを結合させた三元系新分子を構築し、これを導入した新たな機能性キメラDNAの合成についても実施した。これらの研究で得られた修飾キメラDNAを用いた、遺伝子機能の制御に関する実験を行った。先ず、本年度の研究実施計画の1)及び2)に従い、以下の研究を行った。○ヌクレオチド2量体のインターヌクレオチド結合中にインターカレータを結合した新規コンジュゲート物質の合成、不斉なりん原子に基づく2種類のジアステレオ異性体の分離、それらの3'-末端水酸基の亜リン酸化とキメラDNAへの導入、さらに得られた2種類の修飾キメラDNAの交叉型三重鎖形成能の解析を行った。その結果、コンジュゲート分子の一方の異性体が導入された修飾キメラにおいて、その熱的安定性の指標となる融解温度が、対応する末修飾キメラに比べて約6度近く上昇することを見出し、これらを論文として発表した。○平成16年度以降に予定していた研究の準備研究として、2,2-Bis(hydoroxymethyl)propionic acidにアミド結合を介してアントラキノンを結合させた、非核酸性の新たな機能性核酸結合分子を合成し、上と同様にこれをDNA中に導入した後、その三重鎖安定化効果について研究した。

その結果この新規物質を導入した修飾DNAは、ピリミジンギャップ配列を持つ二重鎖DNAと安定な三重鎖を形成出来ることを見出し、これらを論文として投稿して受理された。さらに本年度の研究実施計画の3)に従い、以下の研究を行った。○アントラキノン分子に対して複数の金属配位部分を導入した新規物質を合成し、これに対して様々な金属イオンを作用させてその錯体形成、及び得られた錯体による二重鎖DNA切断実験を行った。その結果鋼イオン2核錯体と推測される錯体が、高濃度ではあるがDNA分解作用を持つことを確認した。現在その錯体構造、DNA分解メカニズムなどについて解析中である。先ず、本年度の研究実施計画の1)及び2)に従い、以下の研究を行った。1)標的二重鎖と高い熱安定性を持つ三重鎖を形成することが可能な修飾キメラDNAとして、キメラDNA中のα-鎖部分とβ-鎖部分を連結するリンカー配列中の核塩基部分に、二重鎖親和性性物質(インターカレーター)を結合させた核塩基を導入した、新たな修飾キメラDNAを合成した。2)上で得られた修飾キメラDNAと二重鎖DNAが形成する交叉型三重鎖の熱的安定性について、UV融解法により解析したところ、インターカレター結合塩基を一箇所導入した場合では約10°C、2箇所導入した場合では約15°Cと、大幅な安定性の向上が観察され、これにより生理的温度(37°C)を大きく越えた融解温度(52°C)を持つ、実用性の高い三重鎖形成核酸を開発することができた。さらにインターカレータ部分のUV吸収の温度依存性変化の解析から、ここで得られた安定性の向上は、導入したインターカレーターが二重鎖部分と相互作用していることに基づくもので有ることが強く示唆された。これらの結果は論文として国際誌に発表した。3)ジグザク型結合様式によって二重鎖と三重鎖形成を行うことの出来る新たなキメラDNAの開発を目指し、キメラDNA中のα-鎖部分とβ-鎖部分を入れ替えた、5'-αDNA、3'-βDNA構造を持つ新たなキメラDNAを作成し、その三重鎖形成能について解析を行った。その結果予期に反し、単純にこれまでのキメラDNA中のα-鎖部分とβ-鎖部分を入れ替えた構造を持つキメラは、標的となる二重鎖DNAと三重鎖形成はおこなうものの、その熱的安定性は以上に低下することが示唆された。現在この原因について、塩基配列の面から再検討を行っている。先ず、本年度実施計画の1)及び2)に従い、以下の研究を行った。1)・2)先ずインターカレーターと金属配位子を結合した新たコンジュゲートを構築し、その二重鎖DNA切断能について検証した。その結果1-クロロアントラキノンのトリス(2-アミノエチル)アミン誘導体を原料に、EDTA型配位子を持つ新規コンジュゲートを合成するとともに、この紺綬ゲートが鉄イオン、及び還元剤存在下で効率よく二重鎖DNAを切断できることを、ゲル電気泳動による研究によって見出した(論文準備中)。
職業威信に対する多様なジェンダー要因の影響

本研究の目的は、職業威信に対してジェンダーが与える多様な影響を明らかにすることである。本研究の目的を達成することにより、ジェンダー要因が職業威信に影響する具体的なメカニズムを解明することが見込まれる。このメカニズムの解明は、階層研究とジェンダー研究という2つの不平等研究を架橋することに資する。また、本研究は、労働市場におけるジェンダー不平等が強い日本社会において、多くの職種に女性が進出していながら女性の職業的地位が向上しない理由を明らかにすることで、労働・福祉政策への提言にもつなげることができる。目的を達成するために、人々の職業に対する評価と多様なジェンダー要因について量的社会調査を行い、そのデータを計量社会学的に分析する。2018年度は、調査計画を策定し、調査設計・調査票を確定させた。具体的には、以下の2点を行った。第一に、先行調査の再分析を行なった上で、「職業評価調査」の調査設計を確定させた。第二に、この調査設計に合わせて調査票を完成させ、2019年6月に職業評価調査を実施する準備を整えた。以上の成果の意義は、2019年6月に職業評価調査を実施・分析し、本研究の目的を達成する準備をしたことにある。また、これまでの調査の再分析を行ったことで、ジェンダー・ステレオタイプを持ちやすい傾向にある評定者の属性が明らかになった。このことは、評定者と評定対象の性質の相互作用によって職業威信が形成されるメカニズムを解明する糸口になると考えられる。当初の計画では、2018年度に大規模な量的社会調査である「職業評価調査」を実施する予定であった。しかしながら、先行調査のさらなる再分析が必要になったこと、再分析の結果によって調査設計・調査法を一部変更したこと、実際に調査を委託する業者の選定に時間がかかったことにより、2018年度には調査を実施できなかった。とはいえ、2018年度内に調査設計ならびに調査票を完成させることができ、業者の選定も2018年度内に終えることができたため、調査はすぐにも実施できる状況となった。そのため、2019年度の早い段階で調査を実施する予定である。2019年度は、主に調査結果の分析と報告を行う予定であった。しかし、上記のように調査実施が2019年度初めに持ち越しとなったため、予算執行が可能になり次第、まず、量的社会調査である「職業評価調査」を実施する。続いて、データのチェック・コーディング・クリーニングを行い、調査データを完成させる。調査データが完成したら、計量社会学的分析を行って、多様なジェンダー要因が職業威信に与える影響を明らかにする。この際、先行調査の再分析で示唆された、評定者の属性と評定者の持つジェンダー・ステレオタイプの程度との関連、そのジェンダー・ステレオタイプの強さと職業威信の関連に注意して分析を行う。分析の手法としては、階層線形回帰分析、構造方程式モデルなどを検討し、適切なモデルを用いる。データの分析を終了し、評定対象および評定者の多様なジェンダー要因が職業威信に影響するメカニズムを明らかにする。分析結果は学会で報告し、最終的な研究成果の発表に向けて専門家のコメントを得るようにする。研究成果は報告書にまとめるほか、研究成果に基づいて、「職業威信スコアに対する多様なジェンダー要因の影響」について論文を執筆し、査読誌に投稿する。この目的を達成するために、人々の職業に対する評価と多様なジェンダー要因について量的社会調査を行い、そのデータを計量社会学的に分析する。2017年度は、調査全体のデザイン、および調査票の設計を行った。具体的には、以下の3点を行った。第一に、これまでの調査を再分析し、2018年度に実施する量的社会調査の調査票に盛り込むべき項目を明らかにした。第二に、調査予算の配分、調査法、調査対象を決定した。第三に、質問項目を概ね選定した。以上の成果の意義は、2018年度に職業評価調査を行い、本研究の目的を達成する準備をしたことにある。また、これまでの調査の再分析を行ったことで、ジェンダー・ステレオタイプの職業威信に対する影響が確認されたが、同時にジェンダー・ステレオタイプ以外の職業の性質が職業威信の男女差と関連していることや、評定者の属性が職業威信に複雑に影響している、たとえば同性の評定対象をより高く評定するという「身内びいき」効果が見られることなども明らかになった。このことは、評定者と評定対象の性質の相互作用によって職業威信が形成される複雑なメカニズムがあることを示唆しており、重要な発見である。第一に、これまでの調査を再分析し、調査票に盛り込むべき項目を明らかにした。

過去に行われた職業威信調査を分析することにより、(1)評定者のジェンダー・ステレオタイプや同職業に就いている男女の職務の違いなどその他の要素と性別情報付きの職業威信を同じ回答者に尋ねる評価設計が必要であること、(2)性別情報を付した評定対象への評定を尋ねる調査票とまったく同じ職業について、同じ形式で性別情報なしの評定を尋ねる調査票を用意することが必要であることなどが明らかとなった。第二に、調査予算の配分、調査法、調査対象を決定した。多様な地域に住む20-69歳男女を調査対象とし、性別・学歴・産業による割り付けを行うことなどを明確にした。A票で性別付き職業評定、B票で性別なし職業評定を尋ねるよう、調査対象を分けることを決めた。第三に、質問項目を概ね選定した。主要な質問項目である職業に対する評価項目について、専門家の意見も聞いて複数案を検討し、評価対象となる職業の選び方、並べ方を決定した。すべての評価対象職業の表示順をランダムにし、職業の後ろに性別情報をランダムに付けることとした。また、その他に盛り込むべき質問項目、職業のジェンダー・イメージに関する項目、評価者の持つ一般的なジェンダー・ステレオタイプ、評価者の仕事の状況、評価者の主観的幸福や主観的健康、評価者の基本属性などを列挙した。研究計画では、2017年度に調査全体のデザインと調査票の設計を行うとしており、この計画は概ね達成されたと言え、本研究はおおむね順調に進展している。ただ、調査票の完成のためには、質問項目の最終的な絞り込みおよびプリテストが必要であり、この最終段階は2018年度初めに行うこととした。本研究の目的は、職業威信に対してジェンダーが与える多様な影響を明らかにすることである。本研究の目的を達成することにより、ジェンダー要因が職業威信に影響する具体的なメカニズムを解明することが見込まれる。このメカニズムの解明は、階層研究とジェンダー研究という2つの不平等研究を架橋することに資する。また、本研究は、労働市場におけるジェンダー不平等が強い日本社会において、多くの職種に女性が進出していながら女性の職業的地位が向上しない理由を明らかにすることで、労働・福祉政策への提言にもつなげることができる。目的を達成するために、人々の職業に対する評価と多様なジェンダー要因について量的社会調査を行い、そのデータを計量社会学的に分析する。2018年度は、調査計画を策定し、調査設計・調査票を確定させた。具体的には、以下の2点を行った。第一に、先行調査の再分析を行なった上で、「職業評価調査」の調査設計を確定させた。第二に、この調査設計に合わせて調査票を完成させ、2019年6月に職業評価調査を実施する準備を整えた。以上の成果の意義は、2019年6月に職業評価調査を実施・分析し、本研究の目的を達成する準備をしたことにある。また、これまでの調査の再分析を行ったことで、ジェンダー・ステレオタイプを持ちやすい傾向にある評定者の属性が明らかになった。このことは、評定者と評定対象の性質の相互作用によって職業威信が形成されるメカニズムを解明する糸口になると考えられる。当初の計画では、2018年度に大規模な量的社会調査である「職業評価調査」を実施する予定であった。
生理活性脂質リゾホスファチジン酸の雄性生殖における機能解明

リゾホスファチジン酸(LPA)は脂質メディエーターとして、様々な細胞応答を制御する。本研究では、LPA産生酵素PA-PLA1βの遺伝子欠損(KO)マウスが精巣や精嚢の形成不全を生じるという知見を元に、関与するLPA受容体やLPAシグナルの機能する細胞種の同定を目的とした。LPA6受容体KOマウスにおいて一部のマウスで精巣が小さくなる異常を示すこと、組織形態学的には精原細胞の脱落が生じることを見出した。LPA6受容体のmRNAは、新生仔マウスのセルトリ細胞とライディッヒ細胞に局在していた。本研究の結果、既報のLPA1-3受容体とは異なる雄性生殖器におけるLPAの機能が示された。リゾホスファチジン酸(LPA)は特異的な産生経路で産生され、6種類のGタンパク質共役型受容体(GPCR)を介し様々な機能を発揮する新しいタイプの脂質メディエーターである。本研究者は、精巣、前立腺、精嚢などの雄性生殖器に限局して発現する機能未知のLPA産生酵素、ホスファチジン酸特異的ホスホリパーゼA1β(PA-PLA1β、別名LIPI)の遺伝子欠損(KO)マウスを作製したところ、約半数の雄のKOマウスにおいて精巣や精嚢の形成不全が認められた。本研究ではこの予備的知見を元に、LPAの雄性生殖器形成における役割を解明することを目指す。本年度はLPA受容体の関与を明らかにするため、研究者らの所有する5種類のLPA受容体(LPA1,2,3,4,6)の各シングルKOマウスの雄性生殖器を調べた。その結果、LPA6 KOマウスのみにおいて、約半数の雄が精巣が小さくなる表現型を見出した。調べたLPA6 KOマウスにおいては精嚢の形成不全を生じる個体は見られなかった。従って少なくとも精巣においてはPA-PLA1βにより産生されたLPAがLPA6の活性化を介して器官形成に関与することがわかった。PA-PLA1βKOマウスの雄性生殖器の表現型が約半数にしか現れない理由として、他のLPA産生経路が冗長的に機能している可能性を想定し、アミノ酸配列上でPA-PLA1βと最も近縁の酵素PA-PLA1αに着目した。PA-PLA1αKOマウスは精巣でmRNAの高い発現が見られた。本年度において、各KOマウスを交配して両酵素のダブルKOマウスを作製を進めた。しかし、これまで生まれたダブルKOマウスはPA-PLA1βシングルKOマウスと比べて雄性生殖器異常の頻度は高くない。従って、PA-PLA1αとPA-PLA1βが冗長的に機能する可能性は低いことが考えられた。脂質メディエーターであるリゾホスファチジン酸(LPA)は主に細胞外で特異的な産生酵素により脂質前駆体から生成され、6種類のGタンパク質共役型受容体(GPCR)を介し様々な機能を発揮する。本研究者は、LPA産生酵素ホスファチジン酸特異的ホスホリパーゼA1β(PA-PLA1β、遺伝子シンボルLIPI)の遺伝子欠損(KO)マウスが約半数の雄のKOマウスにおいて精巣や精嚢の形成不全を生じることを見出した。本研究ではこの知見を元に、LPAの雄性生殖器形成における役割の解明を目的とした。初年度(平成26年度)までにLPA6 KOマウスの一部において精巣が小さくなる異常を示すことを見出した。第二年度(平成27年度)はPA-PLA1βKOマウスおよびLPA6 KOマウスの精巣形成過程を詳細に解析した。解析する個体数を十分確保できたLPA6 KOマウスにおいては、精細管の内部に精原細胞が脱落している様子が高頻度に観察された。さらに増殖期の精原細胞のマーカーであるPCNAを用いて免疫組織染色を行ったところ、野生型マウスの精細管の断面ではPCNA陽性の精原細胞がきれいに周囲に存在していたのに対し、LPA6 KOマウスの精細管の断面ではPCNA陽性の精原細胞が少ない様子や精原細胞が全く存在しない精細管断面の様子が観察された。さらに、LPA6 KOマウスの週齢による精巣と精細管内の精原細胞の変化を観察したところ、4週齢では精巣が小さいものの精原細胞の脱落は少なく、8週齢では精巣が萎縮し精原細胞の脱落が顕著に起こり始め、16週齢では精巣が萎縮したまま精原細胞の脱落が進行していた。精巣における細胞種の役割に関する知見から、現在LPAが精細管基底部付近でPA-PLA1βにより産生され、セルトリ細胞のLPA6を活性化し、下流のG12/13シグナルを介してセルトリ細胞と精原細胞の細胞間接着を強めることで適切な精原細胞の増殖・分化・維持に寄与していると想定している。LPA6 KOマウスを多数解析することにより、週齢による精原細胞の変化を組織形態と免疫組織染色により詳細に観察し、LPAシグナルが精原細胞の維持に重要であることを見出した。さらに、既知の遺伝子欠損マウスとの表現型の比較から、セルトリ細胞でLPAシグナルが機能し、セルトリ細胞と精原細胞の接着に関与するという新しい脂質メディエーターの機構が想定された。リゾホスファチジン酸(Lysophosphatidic acid, LPA)は脂質メディエーターとして、主に細胞外で産生され、特異的なGタンパク質共役型受容体(GPCR)を介し様々な機能を発揮する。ホスファチジン酸特異的ホスホリパーゼ

A1β(PA-PLA1β、遺伝子シンボルLIPI)は精巣、前立腺、精嚢などの雄性生殖器に限局して発現する機能未知のLPA産生酵素である。PA-PLA1βの遺伝子欠損(KO)マウスを作製したところ、約半数の雄のKOマウスにおいて精巣や精嚢の形成不全を生じることを見出した。本研究ではこの知見を元に、LPAの雄性生殖器形成における役割の解明を目的とした。第二年度(平成27年度)までに、5種類のLPA受容体(LPA1, 2, 3, 4, 6)の各シングルKOマウスのうち、LPA6 KOマウスのみにおいて一部のマウスで精巣が小さくなる異常を示すこと、組織形態学的には精原細胞の脱落が生じることを見出した。第三年度(平成28年度)はLPA6の発現局在を高感度in situ hybridization法であるRNA Scopeを用いて解析した。その結果、新生仔マウスの精原細胞、セルトリ細胞、ライディッヒ細胞に発現し、生体のマウスの精巣では発現が低レベルであった。このLPA6発現のパターンは他に精巣において発現が認められる3種類のLPA受容体(LPA1, 2, 3)とは異なっていた。既報のLPA1, 2, 3のトリプルKOマウスでは精巣重量が増加し、組織形態としては精細胞の細胞死や精細管の空胞化が生じるのに対し、今回見出したLPA6 KOマウスにおいては精原細胞の減少やセルトリ細胞のみの精細管が見られることから、LPAシグナルが精巣形成に対して多様な役割を担うことが判明した。リゾホスファチジン酸(LPA)は脂質メディエーターとして、様々な細胞応答を制御する。本研究では、LPA産生酵素PA-PLA1βの遺伝子欠損(KO)マウスが精巣や精嚢の形成不全を生じるという知見を元に、関与するLPA受容体やLPAシグナルの機能する細胞種の同定を目的とした。LPA6受容体KOマウスにおいて一部のマウスで精巣が小さくなる異常を示すこと、組織形態学的には精原細胞の脱落が生じることを見出した。LPA6受容体のmRNAは、新生仔マウスのセルトリ細胞とライディッヒ細胞に局在していた。本研究の結果、既報のLPA1-3受容体とは異なる雄性生殖器におけるLPAの機能が示された。5種類のLPA受容体のKOマウスの解析およびPA-PLA1αとPA-PLA1βのダブルKOマウスの作製・解析を進めることにより、精巣においてPA-PLA1βがLPAを産生し、LPA6を活性化することで精巣形成に関与するという新たなLPAシグナルの役割を明らかにすることができている。本年度はLPA6およびPA-PLA1βの発現細胞をRNAscope(R)を用いて同定し、実際にLPAシグナルが作用しうる細胞を絞る。また、PA-PLA1βKOマウスがLPA6 KOマウスの精巣異常と同様の表現型を示すか評価する。LPA6下流で機能することが想定されるアクチン形成や細胞間接着をファロイジン染色や抗体を用いた免疫組織染色により可視化し、LPAの下流の分子メカニズムを明らかにする。脂質生物学今後はPA-PLA1βKOマウスおよびLPA6 KOマウスの雄性生殖器形成のどの過程に異常が生じるかについて詳細に解析する。さらに、マススペクトロメトリーを用いてLPA産生が発生過程のどの段階で起こるか、またPA-PLA1βKOマウス由来の組織でLPA量が減弱するか測定する。