hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規学卒採用における「能力」概念の構成――相互行為と社会意識の分析

メカニズムに照らしズレを生じさせざるを得ないことも明らかにした。予定していた研究対象企業の採用計画の都合で、当初は2016年度からを予定していた質的調査を2017年度から始めた。そのため、全体の当初計画に照らし、ちょうど1年ぶん進展を調査研究を遅らせて実施している状況である。また、調査対象および調査設計上の都合から、事例を増加させることではなく、一つの事例をより詳細かつ多角的に検討するよう分析方針を変更し、模擬面接を中心とした調査に計画を変更して実施した。本研究の目的は、言説上でのみ語られることの多い「能力」概念の実相を総合的に把握することにある。曖昧にしか表現されない「能力」が、具体的にいかなる振る舞いを指し示す概念であり、それは人々の営みの中でいかに運用されているのかを明らかにすることを課題としている。そのため昨年度は、本番に近い環境をセッティングし行った模擬面接を動画撮影し分析を行うとともに、採用面接官および学生に事前インタビューおよび事後インタビューも行った。これに加え、当該学生のゼミ担当教員およびキャリア担当教員にもインタビューを行うことで、教員としての当該学生の評価および模擬面接での振る舞いをもとにした学生評価を尋ねた。本年度は、ここで得られた調査データの分析を行うことに専念した。本来「能力」を判定するはずである面接の場面でも、そもそも「能力」という概念が積極的に用いられるわけではなく、「能力」概念は必要に応じ事後的に構成されている。また、面接における人物の評価は、必ずしも事前に定めた一貫した基準によって行われるわけではなく、その都度の評価する学生によって変化し、またそれを正当化するための論理が構成されることもある。また、学生にとっては同じ評価者という立場である採用面接官と大学教員は、同じ振る舞いであっても評価のあり方が大きく異なることも明らかになった。そこで用いられる論理は、情報の非対称性の大きさや、目的に照らして違わざるをえないものでもある。今後、このような違いを生じさせる背景や、そこで使用されている論理の論理を、根拠となる具体的な振る舞いと合わせてより詳細に記述することが求められる。そのためには、学生の振る舞いについての評価者を増やし、その違いをより明確にする必要がある。予定していた研究対象企業の採用計画の都合で、当初は2016年度からを予定していた質的調査を2017年度から始めたため、調査研究を遅らせて実施している。また、調査対象および調査設計上の都合から、事例を増加させることではなく、一つの事例をより詳細かつ多角的に検討するよう分析方針を変更し、模擬面接を中心とした調査に計画を変更して実施している。ひとつの事例に対して、複数の異なる立場からの評価を照らし合わせるため、複層的で論理を読み解く必要が生じ、分析が極めて複雑になっている。そのため今年度は、追加の調査を行うことなく、分析に専念することになり、アウトプットや追加の調査を行えなかった。また、休暇を取得したことも、進展を遅らせている要因である。調査については計画内容を大きく変更することなく、半年から1年程度、先送りすることで対応する。
脱落膜細胞分化に関与する遺伝子に関する研究

子宮内膜間質細胞は,着床が成立する過程で非常に活発な内分泌細胞である脱落膜細胞へと分化する.脱落膜細胞分化に関する研究は分化マーカーである侏儒の遺伝子群に関する研究が大半であり分化の上流域に位置する転写因子群に関する研究はほぼ皆無である.我々は,様々な細胞分化系に関与するPOUドメイン遺伝子群と胎生期子宮の発生に関与するWT-1遺伝子に視点を当てその脱落膜化細胞分化への関与を検討した.ヒト脱落膜より調製した総RNAより、POUドメイン遺伝子群によく保存された配列をもとに混合プライマーを用いてRT-PCR法により関連配列の増幅を試みたところ、Oct-3B遺伝子の発現が認められ、さらに脱落膜化に伴いその発現が増加することが明らかにされた。脱落膜を構成する諸細胞を不連続パーコール法により種々の細胞分画に分離しOct-3B遺伝子の発現の発現を検討したところその発現は脱落膜細胞分画に集中していた。ヒト子宮内膜間質細胞の初代培養を用いた、in vtro脱落膜化においても同遺伝子の発現増加を認め、分化マーカーであるプロラクチンのそれに先行していた。同様の系を用いてOct-3B遺伝子のアンチセンスオリゴヌクレオチドによる発現抑制を行ったところプロラクチン分泌の抑制が認められた。WT-1遺伝子に関してはマウス及びヒトにおいて検討を行った.ICR系雌マウスと同系雄マウスと交配し着床前後期における発現動態を検討したところ、脱落膜化反応と時間的に一致時期に発現増加を認めた.また,偽妊娠マウスでは同様の変化は認められなっかった.偽妊娠4日目の雌マウスの偏側子宮にオイルを注入すると脱落膜反応が惹起されるが,オイル注入側子宮においてのみWT-1遺伝子の発現を認めた.さらに,免疫組織学的検討では脱落膜細胞核に陽性シグナルを認めた.ヒトでは,月経周期及び妊娠初期子宮内膜におけるWT-1遺伝子の発現を検討したところ,黄体後期及び妊娠初期子宮内膜に発現の増加を認めた.また,ヒト子宮内膜間質細胞の初代培養を用いた、in vtro脱落膜化においても同遺伝子の発現増加を認めた.現在,アンチセンスオリゴヌクレオチドによる発現抑制を試みその生理学的な意義を検討中である.以上の研究成果を関連領域の検討結果と併せて報告する.子宮内膜間質細胞は,着床が成立する過程で非常に活発な内分泌細胞である脱落膜細胞へと分化する.脱落膜細胞分化に関する研究は分化マーカーである侏儒の遺伝子群に関する研究が大半であり分化の上流域に位置する転写因子群に関する研究はほぼ皆無である.我々は,様々な細胞分化系に関与するPOUドメイン遺伝子群と胎生期子宮の発生に関与するWT-1遺伝子に視点を当てその脱落膜化細胞分化への関与を検討した.ヒト脱落膜より調製した総RNAより、POUドメイン遺伝子群によく保存された配列をもとに混合プライマーを用いてRT-PCR法により関連配列の増幅を試みたところ、Oct-3B遺伝子の発現が認められ、さらに脱落膜化に伴いその発現が増加することが明らかにされた。WT-1遺伝子に関してはマウス及びヒトにおいて検討を行った.ICR系雌マウスと同系雄マウスと交配し着床前後期における発現動態を検討したところ、脱落膜化反応と時間的に一致時期に発現増加を認めた.また,偽妊娠マウスでは同様の変化は認められなっかった.偽妊娠4日目の雌マウスの偏側子宮にオイルを注入すると脱落膜反応が惹起されるが,オイル注入側子宮においてのみWT-1遺伝子の発現を認めた.さらに,免疫組織学的検討では脱落膜細胞核に陽性シグナルを認めた.ヒトでは,月経周期及び妊娠初期子宮内膜におけるWT-1遺伝子の発現を検討したところ,黄体後期及び妊娠初期子宮内膜に発現の増加を認めた.また,ヒト子宮内膜間質細胞の初代培養を用いた、in vtro脱落膜化においても同遺伝子の発現増加を認めた.現在,アンチセンスオリゴヌクレオチドによる発現抑制を試みその生理学的な意義を検討中である.以上の研究成果を関連領域の検討結果と併せて報告する.子宮内膜間質細胞の脱落膜化にPOUを持つ転写因子のいつであるOCT-3B遺伝子が関与している可能性に関して前年度報告した。本年度は子宮内膜間質細胞の初代培養細胞のin-vitro脱落膜化系を用い、Oct-3B遺伝子の脱落膜化への関与につき検討した。黄体初期子宮内膜間質細胞はprogesteronの存在化にin-vitroで容易に活発な内分泌細胞である脱落膜細胞へと分化する。その分化過程におけるOct-3B遺伝子の発現動態を、脱落膜化の分化マーカーであるprolactin、fibronectin遺伝子の発現とともに検討した。Oct-3B遺伝子の発現はprogesteron添加後24時間後には上昇を認め48時間後にはplateau levelに達した。それにたいしてprolactin、fibronectine遺伝子発現は48時間後に上昇を認めplateau levelへの到達は96時間後以降であった。即ち、Oct-3B遺伝子の発現は分化マーカーの遺伝子発現に先行していた。

さらに、Oct-3B遺伝子の転写開始点近傍の延期配列を元にanti-sense oligonucleotideを作成しin-vitro脱落膜化系の添加することによりそのprolactinを分化マーカーとして脱落膜化に与える影響につき検討にした。anti-sense oligonucleotideを添加により同部位の塩基配列を元に作成したsense-oligonucleotideを添加した場合に比べprolactin遺伝子の発現は有意に抑制された。このことよりOct-3B遺伝子は脱落膜過程に関与する転写因子の1つであることが確認された。これらの研究成果の一部を国内学術誌に発表した。現在国際誌に投稿中である。妊娠の成立・維持は子宮内膜を初期胚との相互作用の過程である。子宮内膜間質細胞の脱落膜化は子宮内膜の初期胚需要能を考える上で極めて重要な過程であると考えられる。細胞分化の最終分化過程に関与することが報告されているPOU domain遺伝子群のうちの一つであるOct-3B遺伝子の発現が子宮内膜の脱落膜化過程で誘導され、単離した脱落膜細胞でその発現が認められることに関してはすでに報告した。平成7年度は、子宮内膜間質細胞の初代培養系を用いて、様々の脱落膜細胞分化調節因子を添加しIN VITRO脱落膜化過程におけるOct-3B遺伝子の発現の発現動態を検討した。estrogen・progesteroneを添加により子宮内膜間質細胞は紡錘型の細胞より多角形の細胞へと形態変化し、生化学的にも活発にプロラクチンを産生するようになる。Oct-3B遺伝子の発現誘導は分化マーカーであるプロラクチン遺伝子のそれに先行していた。また、同系にプロスタグランヂン、サイトカインを添加しOct-3B遺伝子の発現動態に与える影響につき検討したが、残念ながら現在のところ結論をだすにはいったていない。さらに、同系にOct-3B遺伝子のアンチセンスオリゴヌクレオチドを添加し分化抑制実験を行ったところプロラクチン産生の低下を認めた。妊娠の成立・維持は子官内膜と初期胚との相互作用の過程である。子宮内膜問質細胞の脱落膜化は子官内膜の初期胚受要能を考える上で極めて重要な過程であると考えられる。細胞分化の最終分化過程に関与することが報告されているPOUdomain遺伝子群のうちの、一つであるOct-3B遺伝子の発現が子官内膜の脱落膜化過程で誘導され、単離した脱落膜細砲でその発現が認められることに関しては平成6年度に報告した。平成8年度は前年度に引き続き、子官内膜間質細胞の初代培養系に様々の脱落膜細胞分化調節因子を添加し脱落膜化過程におけるOct-3B遺伝子の発現の発現動態を検討した。estrogen-progesteroneの添加により子富内膜間質細胞は紡錘型の細砲より多角形の細胞へと形態変化し、生化学的にも活発にブロラクチンを産生するようになる。また、同系にプロスタグランデン、サイトカインを添加しOct-3B遺伝子およびプロラクチンやその他の分化マーカーの発現動態に与える影響につき比較検討した。
ペア型レセプターによる新たな免疫制御機構の解明

本研究ではペア型レセプターの宿主リガンドおよび病原体リガンドを明らかにし、抑制化レセプターを介した免疫細胞の自己応答性制御機構の解明、抑制化レセプターを介した病原体の免疫逃避機構の解明、活性化レセプターによる病原体に対する攻撃機構の解明を目的として研究を実施した。その結果、ペア型レセプターの一つであるPILRが単純ヘルペスウイルスのグライコプロテインと会合し、単純ヘルペスウイルスのエントリーに関わっていることが明らかになった。さらに、PILRとそのリガンドであるCD99やグライコプロテインBとの会合には、特定のO型糖鎖修飾が重要であることが明らかになった。さらに、新たなPILRリガンドとして神経系に主に発現しているPANPを同定し、神経系における免疫制御に関与している可能性が示唆された。これらのことからペア型レセプターは免疫制御に重要な機能を担っていると考えられた。ペア型レセプターは免疫応答の制御に関与する一方、感染症の制御に重要な機能を担っている可能性が考えらる。しかし、依然として多くのペア型レセプターの機能が明らかでない。そこで、本研究ではペア型レセプターの宿主リガンドおよび病原体リガンドを明らかにし、抑制化レセプターを介した免疫細胞の自己応答性制御機構の解明、抑制化レセプターを介した病原体の免疫逃避機構の解明、活性化レセプターによる病原体に対する攻撃機構の解明を行った。これらの研究により、ペア型レセプターの宿主リガンドによって免疫応答がどのように制御されているか、さらに、免疫システムが、どのように病原体に対する抵抗性を獲得してきたかの解明を行った。その結果、ペア型レセプターの一つDCIRについてリガンドの検索を行うことによりDCIRLを同定することができた。実際、DCIR-Lの発現細胞はDCIRに認識された。また、DCIR-Lに対する単クローン抗体を樹立したところ、DCIRの認識を阻害することができた。また、ペア型レセプターの一つであるSiglecを解析することにより、Siglec-4が単純ヘルペスウィルスI型のGlycoprotein Bと会合することが判明した。さらに、Siglec-4発現細胞は、単純ヘルペスウィルスI型に感受性になることが判明した。以上のように、ペア型レセプターは免疫応答の制御ばかりでなく、宿主病原体相互作用にも深く関与していると考えられた。ペア型レセプターは免疫応答の制御に関与する一方、感染症の制御に重要な機能を担っている可能性が考えられる。また、ペア型レセプターPILRの欠損マウスを用いて免疫機能を解析すると、デキストラン誘導生腸炎やLPSによるショックがPILR欠損マウスで顕著に亢進していることが明らかになった。以上より、ペア型レセプターは免疫制御や感染免疫に深く関与していることが明らかになった。

これらの研究により、ペア型レセプターの宿主リガンドによって免疫応答がどのように制御されているか、さらに、免疫システムが、どのように病原体に対する抵抗性を獲得してきたかの解明を行った。その結果、ペア型レセプターの一つであるPILRに関して、PILR欠損マウスを作成して免疫機能を解析すると、LPSによるショックがPILR欠損マウスで顕著に亢進していることが明らかになった。さらに、PILR欠損マウスでLPSによるショックが亢進するかを解析したところ、好中球の遊走能が顕著に亢進していることが明らかになった。実際、PILR欠損マウスでは、肝臓や肺への好中球の浸潤が亢進していた。以上より、ペア型レセプターPILRは、好中球の遊走能を制御することによって、炎症反応を制御していることが明らかになった。
ルート系に付随する多重ゼータ関数の研究とその応用

自然を記述する基本的な理論の一つである量子ゲージ理論において、分配関数は最も基本的で重要な量であると考えられる。Wittenは特定の状況における量子ゲージ理論の研究において、その分配関数の極限がある種の空間の体積で記述されることを発見した。これはゼータ関数の特殊値とみなすことができる。当該研究ではこの特殊値を与える最も一般的な公式を導き出し、また関連する様々な物理的問題や数論的問題に一定の解答を与えた。量子ゲージ理論において、分配関数は最も基本的で重要な量であると考えられる。Wittenは二次元コンパクト多様体上のコンパクトリー群による量子ゲージ理論の研究に際し、その分配関数の極限が、対応するリー群の有限次元既約表現の次元に関するディリクレ級数となることを見出した。当該研究はこのWittenゼータ関数を含む「ルート系に付随する多重ゼータ関数」の解析によって種々のゼータ関数の総合的な理解を目指すものである。具体的には以下を目標とする。(1)ルート系に付随する多重ゼータ値及びそれらの関係式、関数関係式の完全な理解。(2) contour積分の拡張を用いた、ルート系に付随する多重ゼータ関数の有理型関数としての理解。(3)ルート系に付随する多重ゼータ関数理論の応用。(1)ルート系に付随したBernoulli多項式を用いた多重L値及び値の関係式等についての研究。(2) Riemannゼータ関数論へ応用。(4)量子ゲージ理論への応用。今年度は以下の二点について主に研究を進めた。・ルート系に付随する多重ゼータ関数の正の領域における値を記述するベルヌーイ数およびベルヌーイ多項式の母関数の研究:前年度までの結果では母関数には複雑な積分が残されており、実際の計算や応用には不向きであったが、単純凸多面体の台のフーリエ変換を研究することによってこの積分を実行することに成功し、その結果ルート系の情報を十分に反映した母関数の簡単な表示を得ることができた。これによってウィッテンによる平坦接続のモジュライ空間の体積が具体的に計算可能となった。また、これまでほとんどなされていないディリクレ指標を含む多重ゼータ値の計算も可能となり、いくつかの具体例を与えることができた。さらにこの母関数の簡単な具体系から古典的なベルヌーイ多項式に関するいくつかの公式に対して、新たな知見が与えられつつあり、今後の発展が大いに期待される。・一般の多重フルヴィッツ・レルヒゼータ関数に対する面積分表示の研究:前年度までに二重モーデルトーンハイムゼータ関数に対して面積分表示を与えることができていたが、今年度の研究によって一般の多重フルヴィッツ・レルヒゼータ関数に対しても同様の表示を与えることに成功した。これによりこれらの関数の非正領域における挙動を詳しく調べることが可能となり、特に非正領域におけるベルヌーイ数およびベルヌーイ多項式の定義を与えることができたことは非常に重要であると考えられる。●Eisenstein型級数とqゼータ関数の特殊値の計算とその母関数の研究:フルヴィッツやクロネッカーらによって研究されてきたEisenstein級数の特殊値や、保型形式と密接な関連のあるラマニュジャンによる公式等に対し統一的な見方を与え、それら特殊値の母関数を構成した。さらにリーマンゼータ関数のq類似であるqゼータ関数の正整数での特殊値も全く同様の方法で計算できることを示し、さらにBernoulli多項式のq類似を定義することができた。q類似はリー代数の表現の指標公式と自然に解釈できるため、これはSU(2)の場合を求めたことに相当する。したがってこの結果を一般のルート系に対応するゼータ関数のq類似に適用することが望まれる。●多重ゼータ値におけるシャッフル積の研究:これまで多重ゼータ値のシャッフル積はドリンフェルト積分によって与えられてきたが、それは部分分数展開だけで与えられることを示した。これによればシャッフル積の展開とルート系の多重ゼータ値とが対応することが分かり、多重ゼータ値とシャッフル積との対応がより明確になった。またこの方法を用いることによって、extended double shuffle relationを積分を使わない形で再定式化することができた。これらによって多重ゼータ値の理解がより進むことが期待される。今年度は主に以下の三点について主に研究を進めた。●ルート系に付随する多重ゼータ関数の正の領域における値を記述するベルヌーイ数およびベルヌーイ多項式の母関数の研究:前年度までの結果により母関数の簡単な表示を得ることができ、ウィッテンによる一般の半単純コンパクト単連結リー群を主束とする平坦接続のモジュライ空間の体積が具体的に計算可能となった。今年度はこの結果を元に例外型であるG_2型に対しての具体的な母関数の構成や特殊値の計算、及び関数関係式の導出を行った。またさらにウィッテンがもともと問題としていた単連結とは限らない一般の半単純コンパクトリー群に対するモジュライ空間の体積を求める方法として数論におけるディリクレ算術定理の考え方を用いることによって考察した。

●Euler型二重級数の関数等式の研究:Euler型の多重ゼータ関数の関数等式の探求がなされているが、この問題について名古屋大学の松本氏の研究を推し進めることによって、二重ゼータ関数に関してこれまでに得られていなかった対称的な関数等式を得ることができた。今後この方法による一般化が期待される。●Wengゼータの関数等式の研究:Wengによるルート系に付随するゼータ関数について、これまでA_2, A_3, A_4, B_2, G_2型についてのみ示されていた関数等式を、統一的な方法により一般ルート系において証明することができた。上記のルート系については関数等式からリーマン予想が示されているため、一般ルート系における関数等式によってこのクラス全体に対するリーマン予想の証明へ大きく近づくことができたと思う。
バクテリオロドプシンのプロトン移動における水分子の役割

本研究ではバクテリオロドプシンにおいて観測された水分子の変化が、蛋白質内におけるプロトン移動とどのように関与しているか明らかにすることを目的とした。変異蛋白質、同位体置換蛋白質を駆使した赤外分光法により以下の成果が得られた。(1)水分子のO-H伸縮を含む中赤外のすべての振動数領域でのノイズのないバクテリオロドプシンの差スペクトルを測定できる系を構築した。さらに時間分解測定、偏光赤外分光による結合角度の決定、ロドプシンとトランスデューシンの系を用いた蛋白質・蛋白質間相互作用の直接測定を新たに実現し、赤外分光法が構造と機能を結ぶ有力なツールであることを示した。(2)バクテリオロドプシンにおいて構造変化する水分子の局在を、変異蛋白質によって構造を局所的に改変することで検討した。その結果これまでに4個の水分子の局在を同定した。これらはヘリックスB、C、Gが形成するプロトン輸送経路に沿って存在しており、プロトンポンプに密接な関わりをもつ水分であると考えられる。(3)活性中心に存在し364cm^<-1>にO-H伸縮をもつ水分子がL中間体において示す強い水素結合構造がプロトンポンプという機能と直接相関をもつことを明らかにした。この水分子はシッフ塩基の正電荷とAsp85の負電荷とを分離するのに重要な存在であり、一方L中間体においてこのコンプレックスがレチナ-ルに誘導した歪んだ構造がシッフ塩基のpKaを下げてプロトン移動を誘導するものと考えられる。(4)変異蛋白質と種々の分光学的手法を組合せることによってプロトン放出基がGlu204であることを明らかにした。これによって、バクテリオロドプシンはプロトンポンプなどのすべての輸送蛋白質の中で、はじめて輸送されるプロトンの経路が確定した系となった。(5)バクテリオロドプシンの1個のアミノ酸残基を置換したところ、プロトンポンプがハロロドプシンのように塩基イオンポンプとなることを発見した。両者は本質的に共通のイオン輸送機構をもち、わずか1個のアミノ酸が輸送するイオンの選択性を決定しているらしい。当該年度における主要な研究テーマは、(1)プロトン移動が起こらないバクテリオロドプシン変異体に対してその原因を解明すること、(2)時間分解赤外測定系を構築することにあった。バクテリオロドプシンの変異体であるD85N,R82Q,D212N,Y57N等では、プロトン移動が起こらず、M中間体を生成しないことが知られている。このうち、D85N,R82Qではプロトンの受容体である解離したアスパラギン酸85が存在しないために、プロトン移動が起こらないと考えられる。一方、D212N,Y57Nでは興味深いことに、プロトン供与体であるプロトン化シッフ塩素と受容体である解離したアスパラギン酸85が存在するにも関わらず、プロトン移動は起こらない。

赤外分光法によるD212NのL中間体の構造解析により、シッフ塩基からAsp85への分子内プロトン移動は、水分子を介して起こり、その過程においてAsp212が重要な役割を演じていることが明らかになった(Kandori et al., J. Am. Chem. Soc. 1995,117,2118)。さらに本年度、既存のナノ秒レーザーを利用した時間分解赤外分光測定系を構築した。時間分解赤外分光の実現は今後の研究の発展を約束するものである。目標とした研究テーマ以外にも、ロドプシンの赤外分光、バクテリオロドプシンやその変異体、ハロロドプシンの研究を推進し、研究発表論文の欄に掲載した種々の成果を挙げることができた。本研究ではバクテリオロドプシンにおいて観測された水分子の変化が、蛋白質内におるプロトン移動とどのように関与しているか明らかにすることを目的とした。変異蛋白質を駆使した赤外分光法により本年度は以下の成果が得られた。(1)プロトンではなくクロライドを輸送するバクテリオロドプシン変異体の活性中心ではクロライドが水分子に水和された構造をとることがわかった。この場合、シッフ塩基とクロライドは水分子を挟んだ弱い水素結合環境にあるという知見が得られた。(2)細胞外側ドメインに存在するArg82,Glu204の変異体を用いた研究から、この領域に存在する水分子が同定された。プロトン放出基であるGlu204からのプロトンの解離を制御するArg82はプロトンポンプの前後で活性中心との相互作用を変化させること、このとき水素結合構造が重要な役割をはたすことが明らかになった。(3)細胞質側ドメインに存在するVal49の変異体を用いた実験から、活性中心と細胞質側のAsp96を結ぶ経路にはVal49を仲立ちとした水素結合ネットワークが存在することが明らかになった。この水素結合には水分子も関与しており、このネットワークを遠隔的な相互作用によるプロトン結合基のpKa変化をもたらすものと考えられる。(4)我々の研究室でこれまで行ってきた赤外分光法は、冷却した試料に対して適用されてきた。しかしながら、バクテリオロドプシンの光反応は常温で進行するものである。そこで、ステップスキャン法を用いた時間分析赤外分光測定系を構築し、バクテリオロドプシンのO中間体の構造解析を行い、その構造を明らかにした。
原位置凍結試料による砂礫地盤の地震時変形強度特性の評価

砂礫地盤を対象に原位置凍結サンプリングを実施し、部分凍結、部分コアサンプリング法で、深度4mから14mまでの砂礫地盤から、直径300mm、高さ600mmの不撹乱試料を採取した。また、同地点で標準貫入試験、大型貫入試験及び、PS波検層を含む原位置試験を実施した。上記地盤より求められた不撹乱試料に対し、非排水繰返しせん断試験・静的非排水試験を行ない、動的・静的強度と原位置試験で求められる指標との関係及び動的・静的強度の関係について検討した。さらに、過去に行なった試験結果をも加えて、上記関係の一般性について考察した。上記結果に基づいて、原位置試験から求まる指標を用いて、砂礫の動的強度・静的強度を予測する方法を、標準貫入試験、大型貫入試験、およびS波速度について検討した。まず、貫入試験に基づく強度予測法は、対象とする地盤の粒径が大きくなるほど、その信頼性が低下することを示し、粒径に関する補正値を提案した。提案する補正値により、貫入試験値を補正したところ、補正貫入値と動的強度の間に良い対応関係があることが確認された。このことにより、貫入試験値を補正すれば、ある程度の精度で原位置動的強度が予測できることが示された。次に、S波速度から求められる試料の正規化せん断剛性と動的強度の間に一義的な関係のあることを明らかにし、正規化せん断剛性を用いて、原位置動的強度を予測する方法を示した。予測手法の妥当性を上記試験結果について検討したところ、矛盾のない対応関係が得られ、提案手法の有効性が示された。選定した砂礫地盤を対象に原位置凍結サンプリングを実施し、部分凍結、部分コアサンプリング法で、深度4mから14mまでの砂礫地盤から、直径300m、高さ600mの不攪乱試料を40本採取した。さらに、同地点で標準貫入試験、大型貫入試験及び、PS波検層を含む原位置試験を実施した。原位置試験から求められた、標準貫入試験N値は3050、大型貫入試験Nは2030、S波速度は330420m/s程度であった。上記地盤より求められた、不攪乱試料に対し、非排水繰返しせん断試験を実施して、動的強度を求めた。試験を行う前に測定した試料のS波速度は原位置の値と良く対応しており、採取された試料が良質の不攪乱状態であったことを示していた。室内試験から求められた、動的強度は繰返し回数15回で0.50程度で比較的安定したものであった。上記結果も含めて、原位置試験から簡便に砂礫の動的強度を予測する方法を、標準貫入試験、大型貫入試験、およびS波速度について検討した。まず、貫入試験に基づく強度予測法は、対象とする地盤の粒径が大きくなるほど、その信頼性が低下することを示し、粒径に対応する補正値を提案した。提案する補正値により、貫入試験値を修正したところ、補正貫入値と動的強度の間に良い対応関係のあることが確認された。このことにより、貫入試験値を補正することにより、ある程度の精度で原位置動的強度が予測できることが示された。次に、S波速度から求められる試料の正規化せん断剛性と動的速度の間に一義的な関係のあることを既住の実験データから明らかにし、正規化せん断剛性を用いて、原位置動的強度を予測する方法を示した。予測手法の妥当性を上記試験結果について検討したところ、矛盾のない結果が得られ、提案手法の有効性が示された。砂礫地盤を対象に原位置凍結サンプリングを実施、部分凍結、部分コアサンプリング法で、深度4mから14mまでの砂礫地盤から、直径300mm、高さ600mmの不攪乱試料を採取した。

また、同地点で標準貫入試験、大型貫入試験及び、PS波検層を含む原位置試験を実施した。上記地盤より求められた不攪乱試料に対し、非排水繰返しせん断試験・静的非排水試験を行い、動的・静的強度と原位置試験で求められる指標との関係及び動的・静的強度の関係について検討した。さらに、過去に行なった試験結果をも加えて、上記関係の一般性について考察した。上記結果に基づいて、原位置試験から求まる指標を用いて、砂礫の動的強度・静的強度を予測する方法を、標準貫入試験、大型貫入試験、およびS波速度について検討した。まず、貫入試験に基づく強度予測法は、対象とする地盤の粒径が大きくなるほど、その信頼性が低下することを示し、粒径に関する補正値を提案した。提案する補正値により、貫入試験値を修正したところ、補正貫入値と動的強度の間に良い対応関係のあることが確認された。このことにより、貫入試験値を補正すれば、ある程度の精度で原位置動的強度が予測できることが示された。次に、S波速度から求められる試料の正規化せん断剛性と動的強度の間に一義的な関係のあることを明らかにし、正規化せん断剛性を用いて、原位置動的強度を予測する方法を示した。予測手法の妥当性を上記試験結果について検討したところ、矛盾のない対応関係が得られ、提案手法の有効性が示された。
鏡像体タンパク質を用いた医薬品探索技術の開発と実証

化学合成タンパク質を利用した天然物のスクリーニングにより、天然物の鏡像体化合物群から医薬品候補化合物を探索するプロセスの確立と応用に関する研究を展開した。(1)鏡像体タンパク質の化学合成:カスパーゼの機能を調節するタンパク質に含まれるBIRドメイン(約70残基)の化学合成の検討を行い、XIAPタンパク質中のBIR3ドメインを4つのペプチドセグメントから合成するプロセスを確立した。スクリーニングに用いる各種修飾基を導入したタンパク質を合成するとともに、フォールディング条件に付すことで所望の生物活性を有することを確認した。また、新たに腫瘍免疫の標的分子となるタンパク質の化学合成に取り組み、効率よくペプチドセグメントを得るための精製プロセスについて精査した。(2)生物活性評価系の構築とスクリーニング:XIAP BIR3ドメイン阻害剤の探索に利用可能な化合物アレイ解析、蛍光偏光法、ELISAによる生物活性評価系を、天然型タンパク質と鏡像体タンパク質のそれぞれについて確立した。SMACペプチドとの結合阻害活性の評価系の構築にあたっては、最適な応答が得られる配列を複数のペプチドから選択した。また、化合物アレイ解析を用いたスクリーニングにより、XIAP BIR3ドメインへの結合活性を有するヒット化合物を同定した。(3)ヒット化合物の生物活性評価と構造活性相関研究:化合物アレイ解析により得られたSrc SH2ドメインに対する結合を示すヒット化合物について、ELISAによる二次評価を行い、Src SH2ドメインとリン酸化チロシン含有ペプチド間の結合を阻害する複数のヒット化合物を同定した。平成29年度が最終年度であるため、記入しない。鏡像体タンパク質を活用した天然物・天然資源の鏡像体化合物群からの医薬品候補化合物の探索手法の確立に向けて、以下の検討を行った。(1)鏡像体タンパク質の化学合成:細胞増殖・腫瘍増殖に関わるSH2ドメインタンパク質の化学合成について検討し、Grb2 SH2ドメインを複数のフラグメントのNCL反応を経て合成するプロセスを確立した。Dアミノ酸からなる鏡像体タンパク質も同様のプロセスで合成するとともに、あらかじめ蛍光団等の修飾基を付したN末端フラグメントを用いることで、生物活性評価系に用いる数種類の標識タンパク質を合成した。この他のSH2ドメインタンパク質についても化学合成の可能性の検討を進めた。(2)生物活性評価系の構築とスクリーニング:新たに化学合成MDM2タンパク質を用いたELISA系を確立し、これまでに確立済みの蛍光偏光法等による生物活性評価系と同様にMDM2-p53阻害活性を高感度に評価できることを明らかにした。また、天然資源からのMDM2-p53相互作用阻害剤の同定を目指して、植物由来の成分のスクリーニングを行った。さらに、新たに化学合成したGrb2 SH2ドメインタンパク質について、化合物アレイ法によるスクリーニングを実施するとともに、Grb2 SH2ドメインのリン酸化チロシン結合部位に結合する化合物を同定するためのELISA系を確立した。(3)ヒット化合物の鏡像体の生物活性評価と構造活性相関研究:これまでに見出したMDM2-p53相互作用阻害剤について、部分構造の異なる複数の誘導体の合成と生物活性評価を行い、活性発現に寄与する立体配置やアルキル側鎖長を明らかにした。これによりヒット化合物がMDM2のp53結合ドメインに特異的に結合していることを確認した。MDM2-p53相互作用阻害剤のヒット化合物について、その生物活性に寄与する構造要素を明らかにするとともに、天然資源をリソースとするスクリーニングを実施した。また、新たな標的分子として設定したGrb2 SH2ドメインタンパク質の化学合成法を確立し、化合物アレイ解析によるスクリーニングを完了した。いくつかのドメインタンパク質では、化学合成後のフォールディング条件の設定がうまくいかず、期待された構造・機能を示さないことがあったものの、当初予定していたよりも多くの化学合成タンパク質の取得に成功しており、研究は順調に進展していると考えられる。平成27年度に引き続き、天然物・天然資源の鏡像体化合物群からの医薬品候補化合物の探索手法の確立と応用に向けた研究を実施した。(1)鏡像体タンパク質の化学合成:平成27年度までに確立したGrb2 SH2ドメインの化学合成法を応用して、他のSH2ドメイン含有タンパク質の化学合成を検討し、2つのペプチドセグメントのNCL反応によりSrc SH2ドメインを化学合成するプロセスを確立した。このプロセスを利用してSrc SH2ドメインの鏡像体タンパク質を合成し、生物活性評価系に用いる複数の標識タンパク質を取得した。得られた化学合成タンパク質は、それぞれ適切なフォールディング処理により、生物活性評価系に利用可能な活性型タンパク質となることを確認した。(2)生物活性評価系の構築とスクリーニング:新たに化学合成したSrc SH2ドメインタンパク質を利用して、表面プラズモン共鳴解析を用いたリン酸化ペプチドとの結合親和性の評価系、化合物アレイ解析を用いた天然物・天然資源のスクリーニング系、蛍光偏光法を用いたヒット化合物の二次評価系、をそれぞれ確立した。また、化合物アレイ解析によるスクリーニングにより、Src SH2ドメインの両異性体に結合する複数のヒット化合物を取得した。(3)ヒット化合物の鏡像体の生物活性評価と構造活性相関研究:アポモルヒネの2つの異性体が、強力なMDM2-p53相互作用阻害活性を示すことを見出した。MDM2の変異タンパク質等を利用した解析により、アポモルヒネが酸化反応により構造変換を受けた後MDM2と共有結合を形成して生物活性を示すメカニズムを明らかにした。強力なMDM2-p53相互作用阻害活性を示したヒット化合物の阻害メカニズムを化学合成タンパク質を利用した解析により明らかにした。

また、平成27年度までの研究で確立したGrb2 SH2ドメインの化学合成技術を他のSH2ドメインタンパク質にも適用できることを明らかにし、本手法の汎用性を実証することができた。実際に天然物・天然物誘導体へのスクリーニングに応用し、複数の候補化合物を取得している。これらのことから、研究は順調に進展していると考えられる。化学合成タンパク質を利用した天然物のスクリーニングにより、天然物の鏡像体化合物群から医薬品候補化合物を探索するプロセスの確立と応用に関する研究を展開した。(1)鏡像体タンパク質の化学合成:カスパーゼの機能を調節するタンパク質に含まれるBIRドメイン(約70残基)の化学合成の検討を行い、XIAPタンパク質中のBIR3ドメインを4つのペプチドセグメントから合成するプロセスを確立した。スクリーニングに用いる各種修飾基を導入したタンパク質を合成するとともに、フォールディング条件に付すことで所望の生物活性を有することを確認した。また、新たに腫瘍免疫の標的分子となるタンパク質の化学合成に取り組み、効率よくペプチドセグメントを得るための精製プロセスについて精査した。(2)生物活性評価系の構築とスクリーニング:XIAP BIR3ドメイン阻害剤の探索に利用可能な化合物アレイ解析、蛍光偏光法、ELISAによる生物活性評価系を、天然型タンパク質と鏡像体タンパク質のそれぞれについて確立した。SMACペプチドとの結合阻害活性の評価系の構築にあたっては、最適な応答が得られる配列を複数のペプチドから選択した。また、化合物アレイ解析を用いたスクリーニングにより、XIAP BIR3ドメインへの結合活性を有するヒット化合物を同定した。(3)ヒット化合物の生物活性評価と構造活性相関研究:化合物アレイ解析により得られたSrc SH2ドメインに対する結合を示すヒット化合物について、ELISAによる二次評価を行い、Src SH2ドメインとリン酸化チロシン含有ペプチド間の結合を阻害する複数のヒット化合物を同定した。(1)鏡像体タンパク質の化学合成:感染症治療薬の標的となる病原微生物由来のタンパク質の化学合成を新たに検討する。固相合成法やNCL法の組み合わせにより効率的な化学合成プロセスを確立した後、生物活性を示す機能性タンパク質であることを確認する。(2)生物活性評価系の構築とスクリーニング:SH2ドメインタンパク質に対するスクリーニングから得られたヒット化合物の生物活性を精査するための二次評価系を確立する。これまでに経験した均一系・不均一系の利点・欠点をもとに、高い感度で阻害活性を評価できる方法を作成する。(3)ヒット化合物の鏡像体の生物活性評価と構造活性相関研究:スクリーニングでは、L体とD体の両方のタンパク質にヒットするキラル化合物が取得されている。化合物側およびタンパク質側の両方の観点から、これらの生物活性が発現するメカニズムを精査する。
超音波および高周波刺激がrhBMP-2による骨形成に及ぼす影響

骨折の治療において超音波刺激が有効であることが知られている.口の中の骨を増やす治療や歯科インプラント治療において超音波刺激や高周波刺激ならびに骨形成因子の併用が動物実験的に有効であることが示唆された.さまざまな刺激や骨を作る特殊な材料が骨形成を促進,治癒期間の短縮に寄与することが明らかとなった.実際の治療に使用するにあたってはより詳細な検討が必要であることも示唆された.骨折の治療において超音波刺激が有効であることが知られている.口の中の骨を増やす治療や歯科インプラント治療において超音波刺激や高周波刺激ならびに骨形成因子の併用が動物実験的に有効であることが示唆された.さまざまな刺激や骨を作る特殊な材料が骨形成を促進,治癒期間の短縮に寄与することが明らかとなった.実際の治療に使用するにあたってはより詳細な検討が必要であることも示唆された.本研究は骨形成因子としてrhBMP-2,その担体としてβ-TCPのブロックを用い,そこに超音波治療器や高周波治療器を併用することで骨形成過程にどのような影響を及ぼすかを検討する研究である.ラット頭頂骨に直径4mm,高さ2mmのβ-TCPブロックを埋入,縫合したのち1週後に抜糸,創部の回復を確認,超音波刺激を1週間,照射条件3MHzにて2分間照射を行い編計2週観察群と照射後2週放置群の4週観察群の2条件をrhBMP-2含浸群,非含浸群に分け観察した.いずれにおいても骨形成を認め,含浸群においては非含浸群より骨形成が多くなる傾向にあった.この結果は超音波刺激の効果によるものと推察される.また, β-TCPブロックのみを埋入して照射せずに観察した結果と比較すると,骨形成が明らかに多くなっており注目される結果である。この結果についてはさらなる精査が必要と考え,追実験により検証を開始している.超音波刺激はさらに条件を変えて検討することが望ましいと思われる.高周波刺激の影響についてはラット頭頂部骨膜下にβ-TCPを埋入したモデルにおいて,照射条件,照射時間の検討を開始している.条件は埋入1週後から使用機器の最少の刺激にて照射を行っている。現段階では照射によるラットの異常反応の有無を調査することを中心としており,今後はこの結果をもとに照射条件や時間の検討を開始する段階である.本研究においては超音波刺激が骨形成に有効な結果をもたらすことが推察され,さらに高周波刺激についても同様な可能性を見出すことが骨形成の分野の発展に意義ある成果となると予想される.本研究は骨形成因子としてrhBMP-2,その担体としてβ-TCPのブロックを用い,そこに超音波治療器や高周波治療器を併用することで骨形成過程にどのような影響を及ぼすかを検討する研究である.ラット頭頂骨に直径4mm,高さ2mmのβ-TCPブロックを埋入,縫合したのち1週後に抜糸,創部の回復を確認,高周波刺激を1週間,2分間照射を行い,計2週観察群と照射後2週放置群の4週観察群の2条件をrhBMP-2含浸群,非含浸群に分け観察した.いずれにおいても骨形成を認め,含浸群においては非含浸群より骨形成が多くなる傾向にあった.この結果は高周波刺激が有効に作用しているものと推察される,また,前年度に実施した超音波刺激を与えた骨形成の結果とも類似した点が多く,骨形成への刺激にいずれもが有効であり,利用可能なことを示唆したものである.これらの結果から超音波および高周波での骨形成への影響として,骨形成を促進する可能性を示唆した.今後は得られた試料の詳細な検討を行い,超音波および高周波刺激の効果を組織形態的に比較することを予定している.また,刺激の強さについては,その程度を変え,有効に作用する範囲や危険域など何らかの基準を示すことが今後必要であると思われ,検討していく必要があると考えている.本研究においては超音波刺激が骨形成に有効な結果をもたらすことが推察され,さらに高周波刺激についても同様な可能性を見出すことが骨形成の分野の発展に意義ある成果となると予想される.本研究はβ-TCPのブロックを骨面に埋入し超音波治療や高周波治療器を併用することで骨形成状態を検討する研究である。骨形成因子を併用した同実験においては、併用による効果を明らかにしてきた。そこで骨形成因子が作用のない状態における効果を明らかにする目的で本研究を行っている。ラット頭頂骨に直径4mm、高さ2mmのβ-TCPブロックを埋入、縫合したのち1週後に抜糸、創部の回復を確認、高周波刺激および低周波刺激を1週間、2分間照射を行い。計2週観察群と照射後2週放置群の4週観察群の2条件を観察した。いずれにおいてもβ-TCPブロックが固定される効果が認められた。この結果は高周波や低周波刺激が有効に作用しているものと推察される。また、β-TCPブロックを埋入し照射を行わなかったものはβ-TCPブロックが固定されずに頭頂部で移動するものや、排出されるものなどがあったことから骨形成への刺激にいずれもが有効であることを示唆したものである。レントゲンや組織学的検索においても骨の形成が認められ、早期の骨形成に影響を及ぼすものである。また、刺激の強さについては、その程度を変え、有効に作用する範囲や危険域などさらなる検討が必要であると考えられる。安全域の解析は臨床での使用に重厚な指標となるものと思われる。

本研究においては超音波刺激が骨形成に有効な結果をもたらすことが推察され、さらに高周波刺激についても同様な可能性を見出すことが骨形成の分野の発展に意義ある成果となると予想される。
人工ニューラルネットワークを用いた食道癌化学放射線療法の予後予測モデルの構築

我々は、人工ニューラルネットワークを用いて、食道癌に対する化学放射線療法の治療効果、予後を予測するモデルを構築し、検証を行った。このモデルを用いて、まず治療効果の予測を行ったところ、AUC91%、正診率87%と良好な結果であった。また、治療効果がCRで予後良好と予測された群において、有意に予後が良好であった。結論として、このANNモデルは治療効果、予後を予測するのに有用であることが示唆された。過去に化学放射線療法を行った食道癌のデータを用い、年齢、性別などの患者背景や、血液検査や食道造影、食道内視鏡、CT、PETなど主に低侵襲的な画像検査などにより得られるさまざまな因子(腫瘍マーカー、腫瘍長径、TNMステージ、PETにおけるSUV値、Ki-67,PCNA,cyclin Dなどの免疫組織学的因子など)と治療効果、予後(生死、無病生存など)との関連性の評価を、従来汎用されてきたlog-rank法やcox比例ハザードモデルなどを用いて単変量解析、多変量解析により行った。上記で関連性があると思われた予測因子を用い、治療効果、予後(治療後2年後の生死)を予測する下記のような階層型ニューラルネットワークモデルを構築中である。ソフトはmatlabを用いてモデルの構築を行っている。簡便に言うと、複数の予測因子を入力しすると、中間層での重みづけが行われ、予測される治療効果や生死が出力されるようなモデルである。過去症例における予測因子(入力データ)と、答えとなる実際の治療効果、予後(教師データ)との関連を学習させることによって、中間層における重みづけを行い、予測モデルを構築していくこととなる。必要な予測因子を適切に選択することにより、より精度の高い予測モデルの構築に努めた。過去に化学放射線療法を行った食道癌のデータを用い、年齢、性別などの患者背景や、血液検査や食道造影、食道内視鏡、CT、PETなど主に低侵襲的な画像検査などより得られるさまざまな因子(腫瘍マーカー、腫瘍長径、TNMステージ、PETにおけるSUV値、Ki-67,PCNA,cyclin Dなどの免疫組織学的因子など)と治療効果、予後(生死、無病生存など)との関連性の評価を、従来汎用されてきたlog-rank法やcox比例ハザードモデルなどを用いて単変量解析、多変量解析により行った。簡便に言うと、複数の予測因子を入力すると、中間層で重みづけが行われ、予測される治療効果や生死が出力されるようなモデルである。過去症例における予測因子(入力データ)と、答えとなる実際の治療効果、予後(教師データ)との関連を学習させることによって、中間層における重み付けを行い、予測モデルを構築していくこととなる。過去に化学放射線療法を行った食道癌のデータを用い、年齢、性別などの患者背景や、血液検査や食道造影、食道内視鏡、CT、PETなど主に低侵襲的な画像検査などより得られるさまざまな因子(腫瘍マーカー、腫瘍長径、TNMステージ、PETにおけるSUV値、Ki-67,PCNA,cyclin Dなどの免疫組織学的因子など)と治療効果、予後(生死、無病生存など)との関連性の評価を、従来汎用されてきたlog-rank法やcox比例ハザードモデルなどを用いて単変量解析、多変量解析により行う。上記で関連性があると思われた予測因子を用い、治療効果、予後(治療後2年後の生死)を予測する下記のような階層型ニューラルネットワークモデルを構築する。ソフトはmatlabを用いてモデルの構築を行う。放射線腫瘍学過去に化学放射線療法を行った食道癌のデータを用い、年齢、性別などの患者背景や、血液検査や食道造影、食道内視鏡、CT、PETなど主に低侵襲的な画像検査などにより得られるさまざまな因子と治療効果、予後との関連性の評価を、従来汎用されてきたlog-rank法やcox比例ハザードモデルなどを用いて単変量解析、多変量解析により行った。上記で関連性があると思われた予測因子を用い、治療効果、予後を予測する階層型ニューラルネットワークモデルを構築中である。

過去に化学放射線療法を行った食道癌のデータを用い、年齢、性別などの患者背景や、血液検査や食道造影、食道内視鏡、CT、PETなど主に低侵襲的な画像検査などより得られるさまざまな因子と治療効果、予後との関連性の評価を、従来汎用されてきたlog-rank法やcox比例ハザードモデルなどを用いて単変量解析、多変量解析により行った。上記で関連性があると思われた予測因子を用い、治療効果、予後を予測する階層型ニューラルネットワークモデルを構築中である。このことは本年度の研究計画通りである。構築された予測モデルに、モデルの構築の際に使用していない新しい症例での予測因子を入力することにより、治療効果、予後(治療後2年後の生存)の予測を行う。出力された治療効果、予後の予測値と、実際の治療効果、予後との相関を検討し、その精度の検証を行う。治療後2年後の予後の予測が十分になされていたときは、さらに長期となる3年後の予後を予測できるモデルを再度構築し、同様に精度の検証を行っていく。また、無病生存や局所制御などの他の予後に関する予測モデルを構築し、同様に精度の検証を行っていく。構築された予測モデルに、モデルの構築の際に使用していない新しい症例での予測因子を入力することにより、治療効果、予後(治療後2年後の生死)の予測を行う。また、無病生存や局所制御など他の予後に関する予測モデルを構築し、同様に精度の検証を行っていく。研究の進歩により、さらに長期となる3年後の予後を予測できるモデルを再度構築し、同様に精度の検証を行う必要が生じたため、未使用額が生じた。このため、3年後の予後を予測できるモデルの構築、精度の検証とシンポジウムでの発表を次年度に行うこととし、未使用額はその費用に充てることとしたい。データ収集及びソフト解析のため、コンピュータ関連消耗品。研究討議、データ収集、成果発表に関する旅費。論文投稿及び掲載代、別刷り印刷代。
糸球体腎炎の進展と制御におけるアポトーシスの意義についての遺伝子レベルからの解明

研究方法:腎炎におけるアポトーシス(AP)の関与の重要性を明らかにするため抗胸腺抗体誘発糸球体腎炎(抗Thy-1腎炎)を作成し、これににおけるAP関連分子のうちLe^Y抗原とBcl-2を免疫染色にて、clusterin mRNA発現をノーザンブロットにて検討した。さらにヒトの生検腎組織(IgA腎症21例、IV型ループス腎炎5例、微少変化型ネフローゼ6例,膜性腎症6例、起立性タンパク尿3例)においてBcl-2タンパクとともにBax mRNA発現をin situ hybridizationによって検討し、糸球体の細胞増殖(Ki-67陽性細胞数で判定)およびメサンギウム拡大程度との関連性についても検討した。結果:抗Thy-1腎炎においては増殖期を中心にLe^Y抗原とBcl-2発現が認められた。Clusterin mRNAは早期に浸潤したマクロファージと増殖後期の活性化メサンギウム細胞の消失時期に一致して2峰性の発現をみた。ヒトにおいてはIgA腎症とループス腎炎において他の疾患に比し、有意なBcl-2陽性細胞とBax mRNA陽性細胞の増加が認められた。IgA腎症においてはBcl-2陽性細胞数と糸球体内Ki-67陽性細胞数との有意な正の相関がみられた。Bax mRNA発現と糸球体細胞増殖との相関は認められなかったが、メサンギウム基質の拡大程度との間には相関がみられた。結論:抗Thy-1腎炎ではその増殖および増殖細胞、浸潤細胞の消退過程においてAPの関与が重要であり、本モデルの進展、修復とAPとは密接な関連があると思われた。この事実はヒト腎炎においても認められた。すなわちBcl-2発現によるAPの回避は糸球体細胞増殖の持続に重要であり、Bax発現によるAPの誘導の増強は糸球体の基質拡大に関与していると考えられた。
植物免疫系と環境シグナル等が形成する遺伝子発現ネットワークの解明

これまで、JA応答性のMYC転写因子やSA応答性のWRKY転写因子など、NPR1とJAZの標的転写因子の多くは共通していることを明らかにした。Nicotiana Benthamianaを用いた一過的発現解析によって、NPR1はMYCの転写活性化能を、JAZと同様に抑制することを明らかにした。上述のようにNPR1、JAZ共に多くの転写因子を標的としていることが明らかになったので、次にNPR1-GFP植物を用いたChIP-seq解析を行った。3回反復した調査の結果、SA/JA同時処理時においてNPR1は約100遺伝子の5'領域(プロモーター領域)に結合することを明らかにした。興味深いことに、本結合領域に保存されるシス配列はTGACG配列のみであり、これはNPR1が活性化することが知られているTGA転写因子の認識配列である。すなわち、NPR1はMYCなど多様な転写因子と相互作用するが、プロモーター上で複合体を形成するのはTGA転写因子が主たるものであることが示された。さらに、MYC2p::MYC2-FLAGを用いたChIP-qPCR解析からも、NPR1とMYC2の結合は、プロモーター上で生じないことが示され、NPR1が標的とする転写因子の殆どすべてはその転写活性が抑制されるものであると考えられた。実際、本研究で明らかにしたNPR1とWRKYの相互作用もプロモーター上では生じず、NPR1はWRKYのリプレッサーとしての機能を除去することを明らかにした。重要な点として、NPR1は免疫を正に制御するWRKYとは結合しないことも明らかにしている。以上の結果から、多様な情報伝達系が構築するネットワークにおいて、SA/NPR1シグナルは、その標的転写因子の機能を負に調節すること、唯一TGA転写因子とのみ転写活性化複合体を形成することが強く示唆された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。昨年度までに、NPR1或いはJAZが直接相互作用する因子として、AlphaScreenシステムを用いて、サリチル酸(SA)情報伝達系を制御するWRKYやTGA転写因子、ジャスモン酸(JA)応答性のMYCやERF、さらには成長制御に関与するE2F、Mybなどが同定された。さらに、NPR1は、光形態形成に関わる転写因子との相互作用も認められた。次に、in vitroで相互作用が認められたものに関しては、in vivoにおける相互作用をBiFC法にて調査し、全ての転写因子に関し、核内での相互作用を確認した。また、光形態形成に関与する転写因子と相互作用することから、暗下でSAを処理したところ、暗下であるにも関わらず光応答性の遺伝子発現が認められた。このことから、NPR1は、暗下において成長を積極的に抑制するものと考えている。NPR1及びJAZとの新規相互作用転写因子を同定し、一部に関しては多重変異体の表現型も確認できたため。植物免疫を活性化するサリチル酸及びジャスモン酸を制御する、それぞれNPR1とJAZ1タンパク質を用い、シロイヌナズナ転写因子との相互作用をAlphaScreenシステムを用いて解析中である。シロイヌナズナ転写因子は、無細胞タンパク質合成システムを用いて合成した。相互作用結果の代表的なものとして、NPR1及びJAZタンパク質は、ジャスモン酸シグナル伝達系の主要な転写因子であるERF1とORA59とin vitroにおいて相互作用することを明らかにした。また、NPR1が相互作用することで知られるサリチル酸シグナル応答性のTGA転写因子の一部はJAZタンパク質と相互作用することを明らかにした。さらに、NAC、MYB及びHSFファミリー転写因子の一部も相互作用することを明らかにした。