hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
組換えDNAの高等植物細胞への導入と形質発現

植物細胞への新しい遺伝子導入ベクターの候補として、ジェミニウィルスの一種bean golden mosaic virus (BGMV)、ホップスタントウィロイド(HSV)、カリフラワーモザイクウィルス(CaMV)、ゼニゴケ葉緑体DNA (MpctDNA)が選ばれ、外来DNAの挿入可能位置や感染性への影響が調べられた。BGMVでは複製型である二本鎖DNAのクローンが作成され、感染には二つのcomponentAとBが必要であることが示された。HSVでは感染に必要なregionA領域の存在が示されたが、regionA以外の領域でも外来DNAが挿入されると感染性を失った。また、持定部域での塩基置換は病徴は示さないものの増殖することが確認され、弱毒ウィルスとして利用可能であることが示された。CaMVでは感染性を失うことなくORF-【II】と-【VI】領域中に外来DNAを導入可能であることが示された。一方、MpctDNAからは強い複製能を有するDNA断片や強力なプロモーターが単離され、薬剤耐性遺伝子とともに組み込んだ新しいプラスミドが作成された。さらに、植物細胞中で機能するプロモーターやターミネーターをもつ発現カセット中にタバコモザイクウィルスの外被蛋白質遺伝子を組み込んだキメラ遺伝子が作成され、Tiプラスミドを介して植物細胞中に導入することでこの外来遺伝子の発現が確認された。また、効率的な遺伝子導入法として電気パルス法が開発され最適条件の検討がなされた。一方Tiプラスミドを保持するAgrobacteriumのスフェロプラストを用い、本来の宿主でないイネ科植物プロトプラストへの外来遺伝子の導入が試みられ、T-DNA上の遺伝子が導入されて発現することが確認された。また、TiプラスミドやRiプラスミドを保持するAgrobacteriumをキャベツ、ハクサイ等多くの農作物に接種することで形質転換細胞が得られ、個体再分化を誘起することができた。このような再分化個体では長期間培養後も導入された遺伝子が発現し、さらに、種子繁殖を通して後代へと伝達され発現することも確認された。
歯原性腫瘍における最適な治療法選択のための、新たな遺伝子診断技術の確立。

口腔外科領域の疾患は、良性疾患であっても切除を行うことで、術後の機能障害や強い疼痛を生じることが多く、可及的に切除範囲を抑えることが理想である。しかし、顎骨内に生じる良性腫瘍である歯原性腫瘍には、局所で再発しやすい特徴を持った腫瘍が多く、経験的に切除量が増えてしまう傾向にある。そこで本研究では、実際の手術で摘出された組織から遺伝子の発現パターンを調べることで、客観的に局所再発や侵襲性のリスクについて検証を行い、データベース化する。これにより経験的に切除範囲を決めるのではなく、遺伝子レベルで客観的に判断することで、必要最小限の手術範囲で予後良好な結果を得るための指標として確立を目指す。
ガス拡散型酸素電極を用いた高出力亜鉛-空気電池の開発

1.リンゴ酸錯体法を用いることにより従来のクエン酸錯体法よりも、さらに簡単に、低温(550-650°C)で高表面積ペロブスカイト型酸化物が調製できることがわかった。電極基材の炭素材料としては、カーボンブラック、黒鉛、活性炭の中では、黒鉛が耐久性が優れており、カーボンブラックの電極性能が最も良かった。また、表面を黒鉛化したカーボンブラックであるケッチェンブラックが、特に優れた電極担体であることがわかった。2.La系ペロブスカイト型酸化物のうち、La_<1-X>A′_XCo0_3系(A ́=Sr,Ca,Ba)が、最も高い酸素還元活性と酸素発生活性を兼ね備えた高活性触媒であることがわかった。特に酸素還元活性は、Ptを添加したものの約2倍もの高電流密度が得られた。ただし、本触媒は、酸素還元時に劣化することが判明した。一方、La-Mn-0系,La-Fe-0系は、いずれも最も耐食性に優れていたが、前者は酸素還元活性のみが、後者は酸素発生活性のみが、優れていることがわかった。3.新触媒の探索を行った結果、La_<1-X>A′_XMn_<1-y>Fe_y0_3(A ́=Sr,Ca)は、耐食性および酸素還元、酸素発生の2元機能を備えた高性能な電極触媒であることを見出した。これらの高い活性は触媒の過酸化水素分解活性に起因し、特に、x=0.4,y=0.8のものが、最も優れていることが分かった。4.上記で得られたLa-A ́-Mn-Fe-0系の空気極と亜鉛極を組み合わせて、最大出力140mW/cm^2もの高出力亜鉛-空気電池が得られた。また、本電池は亜鉛-空気2次電池として十分使用可能であることがわかった。
高濃度にバナジウムを含むホヤの血球細胞の分離とバナジウムの濃縮機構

生体に含まれる微量金属元素の生理学的役割については不明のことが多い。その中で、バナジウムはATPaseの活性を制御していること、ホヤ類には高濃度で含まれていることなどから、生体において重要な働きをしていることが示唆されている。すでに我々は過去数年間にわたった基礎的な研究により、2亜目にわたる種々のホヤ類の中から日本産のナツメホヤ,Ascidio ahodoriの血球には40mMものバナジウムが含まれていることを見い出した(Michibata et al,1986a)。ところがこのホヤの血球細胞は形態学的に7種類に区分され、そのいずれの細胞がバナジウムの濃縮に関与するいわゆるバナドサイトであるかは不明であった。そこで本研究に当っては、密度勾配遠心法により血球細胞をそれぞれの細胞集団別に分離した後、放射化分析法ならびにESR分光法を用いて、実際にどの細胞がバナドサイトであるかを調べることに重点を置いた。その結果、分析電子顕徴鏡などによる研究からこれまでバナドサイトと言われてきたMorula cellsの細胞集団については90%以上の純度で集めることに成功したものの、そこからはバナジウムが檢出されず、かわって密度勾配の最下層に分配されたSignet ring cellsの細胞集団から高濃度のバナジウムを檢出することができた。ESR分光法でそれらのバナジウムの化学形を檢討すると、原子価が4価で【VO^(2+)】の構造をもち、細胞内の低分子化合物と結合して還元状態にあることが分かった。これらの成果により、今後は純度の高いSignet ring cellsの細胞集団を用いて効率よくバナジウムの濃縮機構を調べることができるようになった。
植物根を利用した回収の容易な組み換え体タンパク質の多量安定発現系の開発

植物をタンパク質の合成工場として、外来タンパク質を根で合成させ、根の外部に分泌させたタンパク質を水耕液から回収するというアイデアで、大量発現系を構築することを目的とした。これらのシステムのテスト用として、根の表面に分泌されると推定したトマトLeGlp1のターゲットシグナルと、緑色蛍光タンパク質(GFP)およびβ-グルクロニダーゼ(GUS)融合タンパク質を根で発現するように、相当するタンパク質をコードする遺伝子をタバコに導入し形質転換した。得られた閣下は以下のようである。(1)上記の融合タンパク質が形質転換タバコの根で発現することを蛍光、および、酵素活性により確認した。(2)形質転換タバコの種子を無菌的に寒天培地上で発芽させ、伸長した根周辺の寒天のレポータータンパク質の存在を検討し、根先端部においてレポータータンパク質の婚外への分泌を認めた。(3)寒天上で生育しある程度大きくなった形質転換タバコを水耕に移し、水耕液を一定期間おきに回収して、その中のGFPおよびGUS活性を測定した。その結果、根から水耕液に分泌されるタンパク質量は、根での合成量に比較してそれほど高率ではないことが判明した。(4)根の構造を弱くする種々の処理を行い、GFPおよびGUSの根から水耕液への分泌に対する効果を検討したが、顕著に分泌量を増すような影響を与える処理を見つけることが出来なかった。医薬品、食品などに用いられるタンパク質は、直接生産する生物から、あるいは、微生物に遺伝子を導入して生産させ、単離精製の過程を経て製品として得ている。本研究では、植物の根の機能に着目し、我々が見い出した外界と接触している根の細胞表面で機能するタンパク質、LeGlpl、の特徴を借りて外来タンパク質を根から水耕液に分泌させることにより、経済的、連続的にタンパク質を合成させ、単離操作を含まない簡便性も加えてより効率的なタンパク合成系を作ることを目的としている。本年度の成果は以下のとおりである。1.トマトの根表面に存在するタンパク質、LeGlpl、のプロセシング部位を含めたN末端リーダー配列に相当する遺伝子をレポーター遺伝子、オワンクラゲの緑色蛍光タンパク質(GFP)、および、細菌のβ-グルクロニダーゼ(GUS)遺伝子のN末端に連結した、トマトのLeGlplのリーダー配列との融合タンパク質を発現するベクターを構築し、タバコに導入してLeGlplのN末端リーダー配列を持つGFPおよび、GUSを発現する形質転換植物を作製した。2.LeGlplのリーダー配列をN末端に付加されたレポータータンパク質遺伝子を持った形質転換植物より得た種子から発芽生育させたTl植物の根で、GFPの蛍光、および、GUSの酵素活性によりレポータータンパク質が根の表層に輸送されていることを確認した。GFPの分子量より、根表層にの移行に伴いN末端のリーダー配列がプロセシングにより除かれていることを確認した。
ナノニードルを用いた核輸送による高効率ゲノム編集

本研究では、Zincフィンガーヌクレアーゼ、CRISPRといった近年急速に開発が進みつつある人工ヌクレアーゼを用いて、目的遺伝子以外に損傷を与えない安全で確実、高効率なゲノム編集技術を開発することを目的とした。現在、人工ヌクレアーゼの利用において目的遺伝子以外の箇所と作用するオフターゲット効果と切断効率が問題となっている。この問題を解決するために、細胞核に物質を直接送達するナノニードル技術とアプタマーを用いた制御放出技術を組合せ、人工ヌクレアーゼを効果的に作用させる技術を開発した。取得されたFokIアプタマー及びCas9アプタマーの性能を評価し、細胞への導入が可能であることを実証した。本研究では、人工ヌクレアーゼを用いて目的遺伝子以外の部分に損傷を与えない安全で確実、高効率なゲノム編集技術を開発することを目的としている。平成26年度の研究では、細胞内に豊富に存在するATPを結合するATPアプタマーを用いた核酸分子スイッチを設計し、人工ヌクレアーゼであるジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFN)を細胞内で特異的に放出する手法の開発を試みた。in vitroの試験では、ATP濃度の上昇に伴うZFN放出が確認された。そこでATPアプタマー修飾ナノニードルアレイを用いて細胞へのZFN導入を行った結果、60分間挿入を維持しても全修飾量の2割程度しか放出されないことが判明した。細胞内の分子クラウディング環境を模擬するため、クラウディング剤を添加したin vitro試験を行った結果、ZFN放出がほとんど起こらないことが判明し、分子クラウディング環境ではATPが結合しない、あるいはATPアプタマーの構造転換が起こらないことが示唆された。そこで、ナノニードルアレイ表面上に物質を吸着させ、挿入後にアレイ動作装置に具備されたピエゾパンタグラフを用いて高周波振動による加振を行うことにより、細胞内で吸着物質を放出する方法を検討した。プラスミドDNAあるいはCreリコンビナーゼを吸着したナノニードルアレイを細胞に導入した結果、プラスミドDNAの導入効率及びCreリコンビナーゼによる染色体組換え効率は、加振を行うことにより2倍以上に向上した。特にプラスミドDNAにおいては、これまで報告されてきたナノ針状材料を利用したプラスミドDNA導入効率が約3%であったのに対し、本方法では平均で34%と約10倍の導入効率を達成した。平成27年度、ZFタンパク質の導入においてATPアプタマーを利用した制御放出を検討し、細胞内にZFタンパク質の導入が可能であることを確認した。これと並行して、FokIアプタマーの探索およびCas9アプタマーの探索を行い、また、ナノニードルアレイを高周波振動することで、細胞内で特異的にgRNAとCas9タンパク質の複合体を放出させる方法を検討し、32%の効率でGFP遺伝子破壊が可能であることを確認した。加振による物質放出法により、CRISPR/Casシステムの導入を行い、32%のゲノム編集(GFP遺伝子破壊)効率を達成した。細胞にナノニードルアレイを挿入した後に、高周波振動を行うことで、細胞内で特異的な人工ヌクレアーゼの制御放出を行うことに成功したと言える。また、ATPアプタマーを用いた制御放出において、細胞内でZFタンパク質の放出量が増大することを確認した。今後は、ZFヌクレアーゼを導入し、ゲノム編集が可能であるかどうかを検証する。人工ヌクレアーゼの作製において、GFP融合Cas9タンパク質を新規に作製した。これを用いることによってナノニードル表面上から放出されるgRNA-Cas9複合体の定量的な解析が可能となった。また、人工ヌクレアーゼを結合するアプタマーとして、FokIアプタマーで7種、Cas9アプタマーで2種の配列の取得に成功している。ATPアプタマーと放出性能を比較しながら、これらアプタマーの利用も併せて検討する。平成28年度は、SELEXにより取得されたFokIアプタマー及びCas9アプタマーの性能を評価し、細胞への輸送効率を検討した。まず、FokIアプタマーとして取得されたF6#8、F6#71の2種のアプタマーを、ナノニードルに修飾してZFN-GFPの細胞への導入を試み、導入が可能であることを確認した。但し、細胞外分泌物による脱離促進効果が確認され、迅速な挿入動作が必要であることが明らかとなった。Cas9に対して細胞内の高濃度のカリウムイオンに応答して結合が解離するアプタマーを探索し、150 mM NaClから150 mM KClへ変更することにより、30%脱離する7K16及び60%脱離する7K27の2種が取得された。CDスペクトル解析の結果、7K16はパラレル型とアンチパラレル型のグアニン四重鎖構造(G4)の混合物、もしくはハイブリッド型のG4を形成し、カリウムイオン存在下では、アンチパラレル型に移行することが示唆され、カリウムイオンの有無でCas9の脱離が制御できることを支持する結果を得た。Cas9アプタマーを修飾したナノニードルを作製し、Cas9もしくはCas9-sgRNA複合体を固定化し、150 mM KCl条件での放出量を評価したところ、いずれのアプタマーでもCas9-sgRNAでも固定化量、放出量が著しく低下し、sgRNA結合サイトとアプタマー結合サイトが競合している可能性が示唆された。

またCas9アプタマーを介してCas9-GFPをナノニードル表面へ結合し細胞への導入を検討した結果、細胞内での放出は確認されたものの細胞膜へのCas9-GFPの吸着が観察され、Cas9の正電荷の集中する領域が細胞膜と静電的相互作用すると推察された。本研究では、Zincフィンガーヌクレアーゼ、CRISPRといった近年急速に開発が進みつつある人工ヌクレアーゼを用いて、目的遺伝子以外に損傷を与えない安全で確実、高効率なゲノム編集技術を開発することを目的とした。現在、人工ヌクレアーゼの利用において目的遺伝子以外の箇所と作用するオフターゲット効果と切断効率が問題となっている。この問題を解決するために、細胞核に物質を直接送達するナノニードル技術とアプタマーを用いた制御放出技術を組合せ、人工ヌクレアーゼを効果的に作用させる技術を開発した。取得されたFokIアプタマー及びCas9アプタマーの性能を評価し、細胞への導入が可能であることを実証した。アプタマーによる制御放出が困難であることが判明したが、同時に加振による物質放出法を開発し、高い導入効率を達成している。今またCreリコンビナーゼの導入によって、染色体の組み換えが可能であることを証明した。今後、人工ヌクレアーゼにこの手法を適用することによって導入量の制御されたゲノム編集が可能になると考えられる。また、ATPアプタマーでは方向な結果を得られなかったものの、人工ヌクレアーゼで最も良く用いられるヌクレアーゼFokIに対して結合するアプタマーのスクリーニングを開始しており、PBSで結合し、細胞内模擬緩衝液で放出される配列を選抜した結果、7種の配列の取得に成功している。このように、当初計画で困難であった点を見直し、良好な結果を得ており、計画はおおむね順調に進展していると言える。平成28年度は、非相同末端結合による遺伝子修復を回避するために2種のgRNAを同時に導入する手法を開発し、オフターゲット効果と、遺伝子破壊効率の関係を調査する。また、アプタマーを用いた制御放出系によって、ZFNタンパク質を導入することで、ヒトリンパ球細胞等のヒト由来細胞に対してCCR5遺伝子の破壊を試み、オフターゲット効果の発生を評価する。28年度が最終年度であるため、記入しない。ナノ細胞工学高周波加振によって人工ヌクレアーゼを導入する手法を開発する。使用する人工ヌクレアーゼにはZFNの他にCRISPR/Casを用いる。ZFNおよびCRISPR/Casをナノニードルアレイ表面に吸着させる表面処理方法を最適化する。吸着条件を検討するためにGFP-ZFNまたは蛍光標識gRNA/Casを用い、in vitro、in vivoの放出試験を行う。HIVの感染に必須のCCR5遺伝子の破壊を指標にゲノム編集効率を算出する。またオフターゲットの割合を同時に算出し、従来法のプラスミドベクターを用いる方法と比較してオフターゲット効果の低減が可能であったかどうかを評価する。また取得されたFokIアプタマーを用いて、ナノニードルアレイからの放出を確認する。良好な放出が可能であった場合は、ZFNを用いた導入試験を行う。
ソシュール『一般言語学草稿』の校訂と注釈

1996年にソシュール自身の手による草稿が発見され、それ以前に発見されていた草稿と共に『一般言語学草稿』(ガリマール、2002年)が刊行された。しかしながらこの版は数多くの判読上の誤りを含み、50頁にのぼる草稿を無視している。本研究の目的は注釈を付した文献学的な校訂版を作成し、ソシュールの沈黙に関わる問題を検討することであった。すなわち、なぜソシュールは理論的体系の試みを放棄したのか、という問題である。本計画は、草稿の解読に伴う困難のために完全には実現できなかったが、草稿が我々に示すのは一般理論の構築の不可能性を表現しているもう一人のソシュールであることが明らかになった。ガリマールから刊行されたR.エングラーとS.ブーケの編纂によるECRITS DE LINGUISTIQUE GENERALE (2002年)の本文校訂と注釈の作業を、ジュネーヴ図書館に保存されている自筆草稿のマイクロフィルムを利用しながら、推し進めた。その過程で以下のような課題に新たに直面したが、研究の深化の契機ともなった。まず第一に、ガリマール版におけるサンスクリット語の解読転写に問題点があることが判明し、サンスクリット語の習得にも時間をかなり割いた。その結果ソシュールが、同時代の歴史言語学者によるサンスクリット文法研究をどのように評価するか、という問題が横たわっていた事が判明した。第二に、ソシュールの独創的な見解、とりわけ共時言語学の提唱が、19世紀の比較・歴史言語学の動向と密接に関係していることが具体的に明らかになってきたことは、大きな成果と言えよう。その一端は、雑誌『言語』(2009年2月号)に発表した「ソシュールにおける共時態と通時態との峻別について」と題する論考に示すことができた。第三にlangage, langue、paroleという基本用語の日本語訳の問題である。langueを果たして「言語」と一般的に訳することが適切であるかどうか、再検討の必要性が浮上してきた。1996年にソシュール邸で発見された自筆草稿の一部「言語の二重の本質について」と題された草稿は、ガリマール版Ecrits de linguistiquegeneraleの前半に収録されているが、オリジナルの草稿のマイクロフィルムに基づいて校訂を進めた結果、多くの判読の誤りがあることが判明した。ギリシャ語、とりわけサンスクリット語の誤りが目に付くが、このためにガリマール版は意味のとれない本文となっている。またジュネーヴ図書館の草稿の整理番号とは異なった順序となっているが、何の説明もなされていない。おそらくガリマール版の校訂者エングラーとブーケにとっても意味不明な箇所であったと思われるが、これは校訂だけの話に留まらない。なぜならば、そこでソシュールは、パーニニ文法への言及をしており、ソシュールの言語学的格闘が繰り広げられていたからである。このことが校訂と注釈の作業の過程で明らかになったことは大きな収穫であった。当初の研究計画に沿って、『一般言語学草稿』の対象であるソシュールの自筆草稿の判読・転写・邦訳・注釈の作業を進めたが、その過程で重大な問題に直面した。ジュネーヴ大学公立図書館に所蔵されているこの自筆草稿はArch de saussure 372なる分類番号の元に整理されているが、ガリマール版には収録されていない草稿が50頁を超えることが判明した。しかもその内容は、主にソシュール自身の若い日の業績である『インド・ヨーロッパ語における母音の原初体系』に関する書評に対する批評的なメモであり、ギリシャ語やサンスクリットをはじめとするインド・ヨーロッパ語が頻出する。ガリマール版に収録されなかった理由も、判読に極めて手間がかかること、および内容の理解が容易ではないことなどが挙げられよう。最終年度の後半は、この手つかずの草稿の判読転写の作業に全面的に費やされた。まだこの部分の草稿は半分余り残っているが、ソシュールの『覚書』と後年の一般理論との内的連関を探る上で、決定的な重要性を有する貴重な考察が読まれるので、今後の最重要課題となった。
ガラスのミクロ偏析誘起による超高速核形成と結晶化

ガラス中に機能性のナノ結晶を析出させることで、波長変換などの様々な機能性を持った機能性の高透明部材が得られる。ガラス(または過冷却融液)から析出する結晶の粒径は、核形成と結晶成長のそれぞれの速度の競合によって決まり、核形成が速く成長が遅ければ結晶粒径は小さくなる。本研究では、従来の長時間熱処理による結晶化とは一線を画す、融液冷却固化過程での超高速ナノ結晶化を目指す。ガラスの中距離構造、ミクロ偏析を設計することで、超高速の核形成が実現し、超短時間熱処理でナノ結晶化可能であることを実証するとともに、その材料設計指針を明らかにする。
部位特異的変異導入によるＭＭＬＶ逆転写酵素の耐熱性と逆転写の正確性の向上

核酸系阻害剤(NRTI)耐性変異に相当する変異、Q84D、V223I、N249Wを導入することで、逆転写の正確性の向上を試みた。四種のdNTPのうち三種のdNTP存在下でプライマー伸長反応を行ったところ、Q84D、V223I、N249Wによる生成物は野生型酵素による生成物より短かった。NRTI耐性変異に相当する変異、Q84D、V223I、N249WによりMMLV RTの逆転写の正確性が向上することが示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。当初の計画では、耐熱化のメカニズムを調べるために、蛍光を指標として耐熱型MMLV RTと鋳型フライマーの親和力を評価する予定であった。しかし、この方法では親和力を正しく評価できなかったので、^<32>Pを指標とした新規評価系を構築することが必要となったため、達成度がやや遅れた。当初の計画と異なり、耐熱型MMLV RTはRNaseH活性をもたないことを見出し、MMLV RTの耐熱性とRNase H活性には相関があると考えた。このことはMMLV RTの耐熱化のメカニズムを解明し、さらなる耐熱化を進める上で重要な手掛かりになりうる。したがって、今後も耐熱型MMLV RTのRNase H活性について詳細な解析を行う予定である。また、MMLV RTの逆転写の正確性の向上の研究は、当初の計画通り遂行する予定である。
新しいイメージング技術による神経伝達物質受容体の多様性の理解

一つの神経伝達物質には機能の異なる複数の受容体が存在する。個々の受容体の分子生理学的特性については、詳細な解析がされてきた。しかし、生体内において一つの伝達物質が複数の受容体を持つ生物学的意義は十分に理解されていない。研究代表者らの研究グループによるこれまでの研究から、ショウジョウバエのドーパミン入力は、コンテクストにより「異なる情報」として細胞に受容されることが明らかになっている。本研究では、内在性のドーパミン受容体の分布と活性化をイメージングすることで、受容体の組み合わせが伝達物質の作用の違いを生むメカニズムを明らかにする。2017年度は、ドーパミン受容体遺伝子を発現する細胞を特異的に標識・操作するため、CRISPR/Cas9を用いて部位特異的DNA挿入を行った。ノックイン後に生体内において任意の遺伝子との入れ替えを可能にする「交換可能ベクター」を挿入することで、GAL4やGFPなどの任意の遺伝子を内在性受容体遺伝子の一部として発現させることができる。この手法を全てのドーパミン受容体に適用し、2A-GAL4遺伝子をノックインしたトランスジェニック系統を作出した。また、大規模脳イメージングに向けて、多数の脳のスキャンを自動一括で行うための標本包埋技術や画像取得システムの確立など、組織染色の高速処理化を試みた。さらに、脳レジストレーションのパイプライン構築を目指して、ソフトウェアの開発および自動化に着手した。三次元脳画像データ自動処理システムの開発の過程で、想定以上に処理時間を要したり、細胞の検出が不正確であるなどの技術的な困難が生じた。本研究では膨大な数の脳画像を処理する都合上、高効率かつ高精度なシステムの確立が必要不可欠である。このため、プログラムや標本包埋手法を一から再検討する必要が生じ、計画に遅延が生じた。2017年度に作成したGAL4系統で細胞内局在するマーカー遺伝子を発現させ、脳内における各受容体遺伝子を発現する細胞の分布を可視化する。さらに、各ドーパミン受容細胞の脳内分布を標準脳座標系に網羅的にマップしたデータベースを作成する。この同一座標系に表現された顕微鏡データを主成分分析やクラスター解析などの多次元数理解析を用いて分析する。
第二言語の視覚的単語認知における語彙競合過程の解明と語彙習得研究への応用

平成30年度においては,29年度に実施した2つの実験結果の分析を行った。1つ目の実験は,プライムをマスキングするのではなく,プライムが知覚できる程度に長く提示し,ターゲットの語彙性判断課題を行う実験であった。分析の結果,この実験においても明確な語彙競合現象は確認されなかった。2つ目の実験は,プライムとして未知語を使用し,マスク下のプライミング法による語彙性判断課題を行う実験と,同じ未知語を学習した後,その語をプライムとして同じ語彙性判断課題を行う実験であった。分析の結果,未知語を学習しなければ,促進的なプライミング効果が見られるが,未知語を学習すれば,そのプライミング効果が見られなくなるという,プライム語彙性効果(prime lexicality effect)が確認された。この結果は,学習による未知語の部分的な語彙化(lexicalization)を示すものと解釈される。平成28年度からの一連の実験結果は,第二言語(L2)視覚的単語認知においては,第一言語(L1)話者と同じように語彙競合は起こらないことを示している。そこで,平成30年度においては,これまでのL1およびL2の語彙競合研究において注目されていなかったプライムとターゲットの間の音韻的類似性という新たな要因に着目し,プライムとターゲットの形態的類似性に加え,音韻的類似性を持つ場合にL2視覚的単語認知において語彙競合が起こるか否かを検討した。実験の結果,プライムとターゲットが類似する実験条件では,類似しない統制条件よりも語彙性判断課題における反応時間が遅くなり,これまでの実験よりも明瞭な語彙競合現象が確認された。本研究の目的は,第一言語の視覚的単語認知において報告されている語彙競合という減少が,第二言語の視覚的単語認知においても起こるのかを明らかにし,そのメカニズムを第二言語語彙習得研究に応用することである。語彙競合とは,視覚提示された単語を認知する際,形式的に類似する単語同士が心的辞書内で競合し,単語認知が不正確になったり遅くなったりする現象を指す。このことはつまり,それらの単語が心的辞書内に格納されていることの証左とされる。語彙競合の実験においては,プライミング法が用いられることが多く,特に,プライムとターゲットを形式的に類似させ,ターゲットの語彙性判断課題などを行うマスク下のプライミング実験(masked form-priming)が多く用いられる。平成27年度においては,次年度以降に実施する本実験の材料を確定することが主な目的であった。そのために,先行研究の概観し,予備実験を実施した。先行研究の概観としては,第一言語の視覚的単語認知研究において語彙競合現象を報告している代表的な研究を概観した。これをもとに,予備実験で用いる実験材料の選定を行った。上記の実験材料を用いて,小規模な予備実験を行った。実験には,マスク下のプライミング実験として行い,課題には語彙性判断課題を用いた。予備実験の結果,選定された実験材料を用いることの妥当性と語彙競合現象の第二言語の視覚的単語認知研究への応用可能性を確認した。また,第一言語での研究とは異なり,第二言語の視覚的単語認知研究において語彙競合現象を観察する上での注意点を確認した。本研究の計画は,平成27年度の主な計画として,(1)実験材料の選定,(2)事前調査及び予備実験の実施,の2点を挙げていた。そのための方法として,学会参加や文献調査を通した情報収集や各種データベースの参照,また小規模の被験者を対象とするデータ収集を行う計画であった。平成27年度は,先行研究の概観やデータベースの参照により,実験材料を選定した。また,パイロット実験を行い,実験の材料と方法の妥当性を確認した。以上のことから,当初の計画通り,本研究は概ね順調に進呈していると考えられる。平成28年度においては,昨年度の予備実験を基に,本実験の一部についてデータの収集を行った。28年度の実験は,第一言語(L1)の視覚的単語認知研究において報告されている語彙競合現象が,第二言語(L2)の視覚的単語認知においても起こるのか否かを様々の実験条件において確認することを目的とした。実験1では,課題としてマスク下のプライミング法(masked form prime)を用いた語彙性判断課題(lexical decision task,LDT)を採用し,プライムとターゲットの間の時間であるstimulus onset asynchrony(SOA)を操作した。実験では,各条件において前方マスクが800ミリ秒提示され,その後プライムが50ミリ秒提示された。実験条件として,(a)プライムの直後にターゲットが提示される条件(SOA 50 ms),(b)後方マスクが50ミリ秒提示され,その後ターゲットが提示される条件(SOA 100 ms),(c)後方マスクが100ミリ秒提示され,その後ターゲットが提示される条件(SOA 150 ms),(d)後方マスクが150ミリ秒提示され,その後ターゲットが提示される条件(SOA 200 ms),の4条件が設定された。実験の結果,(b)のSOA 100 msの条件において,語彙競合に近い反応が得られたが,L1単語認知研究の結果ほど明確な結果は得られなかった。実験2では,上記実験1の(b)と同様の課題と手続きを用いて,実験材料の文字数を操作した。実験では,プライムとターゲットの文字数が3文字(e.g., was-GAS)の条件と8文字(e.g., rational-NATIONAL)の条件を設け,両者のプライミングパターンを比較した。

実験の結果,3文字条件では実験条件と統制条件で反応時間に違いは見られなかったが,8文字条件では実験条件において,わずかに語彙競合の反応が得られた。このように,平成28年度の研究では,L2視覚的単語認知における語彙競合現象について実験を行い,いくつかの条件下で語彙競合に近い反応が得られた。本研究の計画は,平成28年度の主な計画として,本実験のデータ収集を挙げていた。前年度のパイロット実験の結果を基に,本実験の一部についてデータ収集を行った。このことから,当初の計画通り,本研究は概ね順調に進呈していると考えられる。平成28年度の実験では,課題としてマスク下のプライミング法(masked form prime)を用いた語彙性判断課題(lexical decision task,LDT)を採用し,プライムとターゲットの間の時間であるstimulus onset asynchrony(SOA)を操作した。実験の結果,SOAが100 msの条件において,語彙競合に近い反応が得られた。また,28年度に行ったもう1つの実験では,上記実験のSOA 100ms条件と同様の課題と手続きを用いて,実験材料の文字数を操作した。実験では,プライムとターゲットの文字数が3文字の条件と8文字の条件を設け,両者のプライミングパターンを比較した。このように,平成28年度の研究では,第二言語(L2)視覚的単語認知における語彙競合現象について実験を行い,いくつかの条件下で語彙競合に近い反応が得られた。他方,それらの結果はL1での先行研究に比べ,明確な語彙競合反応とは言えないものであった。その理由として,L2ではL1に比べて処理が遅いため,マスク下のプライミング法では,プライムが十分に処理されないことが考えられた。また,未知語を学習した結果として,その語が心的辞書内に格納され,既に心的辞書内にある語との間で語彙競合が起こるのかは依然として不明である。そこで平成29年度においては,(1)プライムが知覚できる条件において,語彙競合が起こるか否か,(2)未知語を学習した後,28年度の実験と同様にマスク下のプライミング法を用いて,学習した未知語をプライム,その近傍語をターゲットとする語彙性判断課題の実験を行った。その結果は現在分析中である。本研究の計画は,平成29年度の主な計画として,本実験のデータ収集を挙げていた。前年度の実験の結果を基に,本実験のデータ収集を行った。このことから,当初の計画通り,本研究は概ね順調に進展していると考えられる。平成30年度においては,29年度に実施した2つの実験結果の分析を行った。1つ目の実験は,プライムをマスキングするのではなく,プライムが知覚できる程度に長く提示し,ターゲットの語彙性判断課題を行う実験であった。分析の結果,この実験においても明確な語彙競合現象は確認されなかった。
生体内金属イオン検出のための新規な蛍光共鳴エネルギー移動型化学センサーの開発

生体内で様々な重要な働きをしている金属イオンが「いつ」、「どこで」、「どのように」作用しているかを明らかにすることは生命科学の研究にとって非常に重要である。本研究では、2-アミノトリプタンスリンを蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)のエネルギーアクセプターとする種々の新規FRET型蛍光性化学センサーを合成し、FRET-onからFRET-offへの変化による金属イオンの蛍光検出に成功した。ピレンをエネルギードナー(D)、2-アミノトリプタンスリンをエネルギーアクセプター(A)とし、DとAをペンタエチレングリコールで繋いだ新規蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)型化学センサーを合成し、FRETのon,offを利用した金属イオンの蛍光センシングについて検討した。その結果、金属イオンに対する応答性は、吸収・発光挙動から、以下の4グループに分類できることがわかった。1.〔Al^<3+>,Ni^<2+>,Hg^<2+>,Cd^<2+>〕,2.〔Cu^<2+>,Fe^<2+>,Fe^<3+>〕,3.〔Pb^<2+>,Ca^<2+>,Ba^<2+>〕,4.〔Ag^+,Zn^<2+>,Co^<2+>,Mg^<2+>〕3と4は、不規則或いは顕著な蛍光変化を示さなかったが、1と2は、吸収スペクトルの変化の仕方に違いがあるため錯形成の様式は異なるものと予想されるが、Aの蛍光減少とDの蛍光増加、即ちFRET-onからFRET-offへの変化が観測された。中でもHg^<2+>,Fe^<2+>,Cu^<2+>に対しては、Aの蛍光の消失とDの蛍光の増大が顕著であった。Hg^<2+>やCu^<2+>に対しては、蛍光団から金属の空のd軌道への電子移動により蛍光消光が観測されるのが一般的であるが、これら金属イオンを捕捉することで、Dのピレン蛍光が増大したことは、報告例の少ないHg^<2+>やCu^<2+>に対する蛍光"発光"センサーとして応用できるため、注目すべき結果と言える。また、現在DとAを繋ぐスペーサーの長さの異なる系や、Dをピレンから植物由来のウンベリフェロン(7-ヒドロキシクマリン)に替えた系についても合成中である。新規蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)型化学センサーとして、ピレン又は7-置換クマリンをエネルギードナー(D)、2-アミノトリプタンスリンをエネルギーアクセプター(A)とし、DとAを長さの異なるポリエーテル鎖((OCH_2CH_2)_nO;n=1,2,3,4,5,6)やポリメチレン鎖((CH_2)_n;n=1,4)で繋いだ幾つかの系を合成し、その性質について調べた。その結果、全般的にスペーサーの短い系、即ちD,A間距離の短いもの程、効率よく分子内FRETが起こることがわかった。しかし、D,Aへのスペーサーの導入部位の違いによっては、n=1の系で、立体障害等によりD,AがFRETに適した配向をとることが難しく、FRETが起こらない場合や、D,A間距離が近接しているために、D,Aの衝突に伴う熱的失活によると思われるD,A両方の蛍光消光を示す系も観測された。更に、FRETよりも光誘起電子移動(PET)による蛍光消光が優先する系も見られた。金属塩添加による実験では、トリプタンスリンの2-位のアミノ基にスペーサーを導入してDのピレンと繋いだ系では、特にHg^<2+>,Cu^<2+>,Fe^<2+>,Fe^<3+>を添加した際に、FRET-onからFRET-offへの挙動、即ちAの蛍光消光とDの蛍光増大という顕著な蛍光変化が観測され、報告例の少ないHg^<2+>やCu^<2+>に対する蛍光"発光型"センサーとして応用できることがわかった。一方、8-位の酢酸基にスペーサーを導入してDのピレンと繋いだ系では、Hg^<2+>,Cu^<2+>,Fe^<3+>,Al^<3+>を添加することで、Aの著しい蛍光消光が観測されたものの、Dの蛍光増大は観測されず、Dから無蛍光のAの金属錯体へのFRETが、引き続き起こっていることが示唆された。以上のように、新規金属イオン用FRET型化学センサーの開発において重要となる、幾つかの知見が得られた。その最も有力な手段として、蛍光性化学センサーがある。

本研究では、研究代表者が見いだした優れた蛍光特性を有する2-アミノトリプタンスリンを蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)のエネルギーアクセプター(A)とする種々の新規なFRET型蛍光性化学センサーを合成し、生体内における必須金属イオン及び有毒金属イオンの定量検出について検討した。その結果、例えばエネルギードナー(D)としてピレンを用いた系では、ある一定の長さのスペーサーで、D, Aをつなぐことによって、低濃度で効率の良い分子内FRETがおこることや、スペーサーの長さを調整することで、金属イオンの選択性に影響すること等を明らかにした。特にHg2+, Cu2+, Fe2+, Fe3+に対しては、FRET-onからFRET-offへ顕著な蛍光変化が観測され、報告例の少ないHg2+やCu2+に対する蛍光“発光型"化学センサーとして応用できることを明らかにした。また、今回合成したFRET型蛍光性化学センサーはいずれも優れた蛍光ソルバトクロミック挙動を示し、Dがピレンや8-メトキシクマリンの系では紫から赤、Dがウンベリフェロンの系では青から赤の可視領域全般の蛍光を示すこともわかり、細胞内の環境変化(分子周辺の極性変化)を調べる蛍光プローブとしての応用が可能であることもわかった。以上のように、新規金属イオン用FRET型蛍光性化学センサーの開発において重要となる、幾つかもの知見を得ることができた。幾つかの新規金属イオン用FRET型化学センサーの合成に成功しており、FRET挙動や金属イオンの蛍光センシングに関する知見が得られている。24年度が最終年度であるため、記入しない。新規金属イオン用FRET型化学センサーであるピレン(エネルギードナー,D)-2-アミノトリプタンスリン(エネルギーアクセプター,A)の系を中心に詳細な検討を行進めてきたが、水溶液中で強い蛍光を示すウンベリフェロンを含む7-置換クマリン(D)-2-アミノトリプタンスリン(A)の系についても、今後は詳細に検討して行く予定である。また、これまでのin vitroでの実験に加えてin vivoでの実験へと展開できたらと考えている。
副腎皮質の細胞層構築および層機能分化の分子機構

本研究は,副腎皮質の細胞層構築,層機能分化の分子機構の解明を,主に発生工学的手法を利用できるマウスを用いておこなった.本研究によって得られた新たな知見,今後の研究の展開について以下に記す.1マウス副腎皮質の球状層細胞のみを欠失させる実験を進めた.当初の計画より確実性の高い,標的遺伝子破壊法を用いて,チミジンキナーゼをアルドステロン合成酵素遺伝子のプロモーター下流に導入することを試みた.標的遺伝子破壊法の常法に従い,遺伝子導入ベクターを構築した.これを胚性幹細胞(ES細胞)へ導入し,相同組換え体を得ることに成功した.今後この組換え体を用いて,キメラマウスを作製し,さらにこの遺伝子座についてヘテロな動物個体を得,薬剤ガンシクロビル投与によるコンデイショナルな細胞の欠失を行う.2機能的に末分化な細胞層の性質を持った不死化細胞株の確立を行った.温度感受性の不死化遺伝子を持ったトランスジェニックマウスを用い,副腎から細胞のクローン化を行った.得られたクローンの性質を解析した結果,ミネラルコルチコイド合成酵素,グルココルチコイド合成酵素のいずれの遺伝子も発現していない細胞株を得た.この細胞株は,不死化遺伝子産物の非許容温度へのシフトにより,分化しうることが判明した.3マウス束状層細胞を用いたところ,AP-1因子群(束状層に特異的に存在し,グルココルチコイド合成酵素遺伝子の転写活性化因子)は,副腎皮質刺激ホルモンACTHにより,束状層細胞内に転写活性化能の強い分子種が誘導され,グルココルチコイド合成酵素遺伝子の発現を転写の段階で調節することが判明した.4マウス副腎皮質に,ラット副腎皮質の未分化な細胞層と同様の細胞層が存在すること,等が判明した.本研究は,副腎皮質の細胞層構築,層機能分化の分子機構の解明を,主に発生工学的手法を利用できるマウスを用いておこなった.本研究によって得られた新たな知見,今後の研究の展開について以下に記す.1マウス副腎皮質の球状層細胞のみを欠失させる実験を進めた.当初の計画より確実性の高い,標的遺伝子破壊法を用いて,チミジンキナーゼをアルドステロン合成酵素遺伝子のプロモーター下流に導入することを試みた.標的遺伝子破壊法の常法に従い,遺伝子導入ベクターを構築した.これを胚性幹細胞(ES細胞)へ導入し,相同組換え体を得ることに成功した.今後この組換え体を用いて,キメラマウスを作製し,さらにこの遺伝子座についてヘテロな動物個体を得,薬剤ガンシクロビル投与によるコンデイショナルな細胞の欠失を行う.2機能的に末分化な細胞層の性質を持った不死化細胞株の確立を行った.温度感受性の不死化遺伝子を持ったトランスジェニックマウスを用い,副腎から細胞のクローン化を行った.得られたクローンの性質を解析した結果,ミネラルコルチコイド合成酵素,グルココルチコイド合成酵素のいずれの遺伝子も発現していない細胞株を得た.この細胞株は,不死化遺伝子産物の非許容温度へのシフトにより,分化しうることが判明した.3マウス束状層細胞を用いたところ,AP-1因子群(束状層に特異的に存在し,グルココルチコイド合成酵素遺伝子の転写活性化因子)は,副腎皮質刺激ホルモンACTHにより,束状層細胞内に転写活性化能の強い分子種が誘導され,グルココルチコイド合成酵素遺伝子の発現を転写の段階で調節することが判明した.4マウス副腎皮質に,ラット副腎皮質の未分化な細胞層と同様の細胞層が存在すること,等が判明した.本研究は、副賢皮質の細胞層構築、層機能分化の分子機構の解明を、主に発生工学的手法を利用できるマウスを用いておこなった。本研究によって得られた新たな知見、今後の研究の展開について以下に記す。1マウス副賢皮質の球状層細胞のみを欠失させる実験を進めた。当初の計画より確実性の高い、標的遺伝子破壊法を用いて、チミジンキナーゼをアルドステロン合成酵素遺伝子のプロモーター下流に導入することを試みた。標的遺伝子破壊法の常法に従い、遺伝子導入ベクターを構築した。これを胚性幹細胞(ES細胞)へ導入し、相同組換え体を得ることに成功した。今後この組換え体を用いて、キメラマウスを作製し、さらにこの遺伝子座についてヘテロな動物固体を得、薬剤ガンシクロビル投与によるコンデイショナルな細胞の欠失を行う。2機能的に末分化な細胞層の性質を持った不死化細胞株の確立を行った。温度感受性の不死化遺伝子を持ったトランスジェニックマウスを用い、副賢から細胞のクローン化を行った。得られたクローンの性質を解析した結果、ミネラルコルチコイド合成酵素、グルココルチコイド合成酵素のいずれの遺伝子も発現していない細胞株を得た。この細胞株は、不死化遺伝子産物の非許容温度へのシフトにより、分化しうることが判明した。3マウス束状層細胞を用いたところ、AP-1因子群(束状層に特異的に存在し、グルココルチコイド合成酵素遺伝子の転写活性化因子)は、副賢皮質刺激ホルモンACTHにより、束状層細胞内に転写活性化能の強い分子種が誘導され、グルココルチコイド合成酵素遺伝子の発現を転写の段階で調節することが判明した。4マウス副賢皮質に、ラット副賢皮質の末分化な細胞層と同様の細胞層が存在すること、等が判明した。
歴史写真に基づく1860～1930年代の日独関係史の再構築

本課題では、明治維新期から日独防共協定締結期、すなわち、1860年代から1930年代を対象に、日独交流の歴史を3期に分けて、日独関係史の再構築を行った。従来の日独交流史研究は、主として両国の政治家や学者の文献資料を基に描かれて来た。それに対して、本課題では、ドイツと日本の両国において歴史写真をはじめとするメディア資料と関連文献資料の調査・収集・分析を行い、日本とドイツ両国の国民の視点を重視した。ドイツにおける調査では、とくに、トラウツ・アーカイブ(ボン大学所蔵)、グラウ・アーカイブ(ヘルムート・グラウ氏所蔵)に重点を置おいて、写真資料・映像資料と関連する文献資料の調査を行った。本課題は、平成25年度10月に採択されたので、まず、研究代表者と分担研究者との間で、本年度に行う課題を調整して、本課題の最終的な達成目標を変えずに、初年度に当たる平成25年度の当初計画を見直した。その結果、本年度は、事前準備に基づいて、課題を絞り込んで確実な成果が見込まれる課題に取り組むこととした。しかしながら、研究期間を延長する(繰り越す)ことによって、最終的には、当初計画していた初年度の課題を完遂しえた。その第一は、ボン大学が所蔵するフリードリヒ・トラウツのコレクションの調査を中心に、幕末・維新期の日独(プロイセン)の交流を示す写真資料の整理、複写に取り組んだ。なかでも、トラウツが明治初年のプロイセン公使アイゼンデッヒャーから譲り受けたと言われる資料に関しては、すべての調査を完了して、目録を作成した。第二には、ヘルムート・グラウが撮影した写真の整理を行い、日記・手記・書簡などの文献資料と照合してプロファイリングを行い、目録を作成した。さらに、それらの日本語仮訳を完成させ、校正作業に着手した。。第三は、のちに日独外交において重要な役割を担う人々の多くが留学した米国ラットガース大学図書館が所蔵するグリフィス・コレクションの整理を行った。その成果の一部として、国際交流センター小村記念館(宮崎県日南市)の常設展示に協力した。そして、第四は、日本写真史の黎明期におけるキーパソンである上野彦馬が経営した写真局の海外支店(上海・香港・ウラジオストック)に関する文献調査を行った。その過程で、従来知られていなかった上海支店において撮影された写真を新たに発見した。以上の作業を通じて、初年度の当初計画である幕末・維新期の日独(プロイセン)の交流を解明するとともに、収集した写真資料等の電子データのアーカイブ構築について検討し、かつ、次年度以降の研究の基礎的資料(複写写真と文献資料)を整備した。平成26年度は、とくに大日本帝国憲法制定期に焦点を当てて、前年度に引き続き、1)写真資料収集、2)収集資料の整理・分類・分析、を進めるとともに、新たに、3)収集資料の編集とデジタルアーカイブ化、4)研究会の開催を行った。1)写真資料の収集に関しては、前年度同様、ボン大学(ドイツ)の研究協力者とともに、同大学が所蔵するフリードリヒ・トラウツの画像史料の調査を行い、可能な資料は現地で撮影し、現地での撮影が不可能な資料は借用して、日本国内で撮影を行った。また、研究代表者と研究分担者が分担して、ベルリン、ハンブルク、バンベルク、コブレンツなどドイツ国内の公文書館における調査も推進した。その結果、ドイツ国内に所在する資料約3,900点の写真を取集した。また、国内(京都・東京・大阪・仙台・高野山など)においても調査を進め、約2,300点の写真を収集した。2)収集資料は、写真の撮影日時・場所・被写体・撮影者などを同定して、写真資料にタイトルをつけて整理した。また、写真資料ではないが、1836年に沖縄の子ども達がドイツの子ども達に当てて書いた友好の絵葉書(642枚)をトラウツ・コレクションの中から新たに発見したので、これらの整理とデジタル化を行った。以上の継続作業に加えて、3)写真資料の編集とデジタルアーカイブ化を行った。写真資料の編集は、ヘルムート・グラウ氏の写真集の編集(原稿校正)を完了した。また、デジタル化し、メタデータが付与されたデータを、順次サーバに格納した。そのバックアップとしてDVDにも同様のデータを格納している。ただし、データベースは研究期間終了後に公開することとし、研究の進捗状況を、随時ホームページで報告することにしている。4)上記1)3)までの作業に膨大な時間を要したために、当初の隔月開催の計画通りに研究会を開催することはできかったが、全5回の研究会を開催した。平成27年度は、本課題の最終年度に当たるため、次の3課題について重点的に実施した。第一に、本課題において、従来の調査で漏れのあった歴史写真の補足調査、第二に、昨年度までと本年度において収集した歴史写真の整理、そして、第三に、本課題の研究成果の公開と発表、である。第一の歴史写真の補足調査に関しては、平成26年度までの調査結果を振り返り、国内においては東京都内、京都市内に所在する歴史写真ならびに関連資料、海外においてはドイツ・ボン大学日本・韓国学専攻所蔵のトラウツ・アーカイブに含まれる歴史写真ならびに関連資料の調査を行った。とくにボン大学の調査においては、靖国神社遊就館(東京都)が所蔵するドイツ・ウルム市製造の大砲のレプリカをフリードリヒ・トラウツが寄贈するに至った経緯を示す資料(写真ならびに文書)の調査を重点的に行い、同時に、靖国神社遊就館における調査結果との照合を行った。

第二の歴史写真ならびに関連資料の整理に関しては、すべての撮影データに対してメタデータを付与し、データベースに格納する準備を行った。平成27年度に新たにメタデータを付与したデータは、5,346点にのぼる。なお、これらのデータを格納、公開するためのデータベースを準備し、順次格納した。第三に、研究成果の公開に関しては、平成27年7月7日から9月6日に開催された国立歴史民俗博物館(佐倉市)の企画展「ドイツと日本を結ぶものー日独修好150年の歴史ー」に協力し、ボン大学から借用中であった原本と本課題において集積したデータ、ならびに本課題によって得られた知見を提供した(ボン大学からは貸出許可を取得した)。また、平成27年12月9日には、ボン大学において研究交流シンポジウムを開催し、とくにトラウツ・アーカイブの調査結果に基づいて研究発表を行った。今後は、本課題専用のホームページから、研究の成果とデータベースを公開する。本課題では、明治維新期から日独防共協定締結期、すなわち、1860年代から1930年代を対象に、日独交流の歴史を3期に分けて、日独関係史の再構築を行った。従来の日独交流史研究は、主として両国の政治家や学者の文献資料を基に描かれて来た。それに対して、本課題では、ドイツと日本の両国において歴史写真をはじめとするメディア資料と関連文献資料の調査・収集・分析を行い、日本とドイツ両国の国民の視点を重視した。ドイツにおける調査では、とくに、トラウツ・アーカイブ(ボン大学所蔵)、グラウ・アーカイブ(ヘルムート・グラウ氏所蔵)に重点を置おいて、写真資料・映像資料と関連する文献資料の調査を行った。本課題の採択が平成26年10月であったため、課題全体の達成目標を変えることなく、初年度に当たる平成25年度の研究計画の見直しを行ったが、研究期間を延長する(繰り越す)ことによって、結果的には、当初の計画通りに課題を推進しえたとともに、次年度以降の研究の基本的資料を整備しえたから。平成25年度には幕末維新期、平成26年度には大日本帝国憲法制定期に焦点を当てて、写真資料の調査、収集、分析を行うという当初の計画は、ほぼ計画通り進行している。しかしながら、事前調査の時点で確認した資料の点数に比較して、実際に調査を開始すると、予想以上に資料の点数が多く、その後の整理作業がどうしても遅れがちである。また、写真資料に関連する文献資料の範囲をめぐって、研究代表者や研究分担者の間で意見が相違することも少なくない。写真資料の調査方法は、本課題の重要な研究テーマのひとつであるので、研究の準備期間に、十分な事前調査と研究者間の意見の調整を行っておけば、以上のような混乱は無かったと考えられる。この混乱は、次年度の当初に十分に検討して解消したい。しかしながら、国内外で収集した写真資料は、すべて未公開の新発見資料であり、日独交流史、なかんずく、文化外交や庶民交流の新たな側面を解明するために、極めて重要かつ貴重な資料である。また、研究会を開催することで、新発見資料に基づく新たな知見を研究者間で共有しており、次年度の本課題のまとめに向けての準備は、順調に進んでいる。また、国内外の資料所蔵機関や資料所蔵者、ならびに研究協力機関や研究協力者との関係が良好に築かれてきており、研究の上で問題は生じていない。むしろ、関係者にも協力していただくことによって、より深い研究の可能性が期待される。