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タイにおけるタトゥーの魅惑と暴力をめぐる人類学的研究

本研究では現代タイにおけるタトゥーの社会的布置と動態を分析した。サックヤンと呼ばれるタイの伝統的タトゥーは、僧侶などの宗教専門家によって、特別な文字と図像を身体に刻むことで呪術的な力を発揮するとされる。しかし現在ではファッション目的でサックヤンが用いられ、西洋の意匠が多く導入されている一方で、50年以上前からタトゥーが呪術でなく装飾のためにもしばしば用いられていた。タイのタトゥーをめぐる様々なフィールドデータより、魅惑と暴力という両義的な力こそがタイのタトゥーのもつ特徴であることが明らかになった。平成26年度は、8月6日より9月4日、12月25日より31日、2月10日より18日、2月25日より3月5日と4回にわたって、タイ王国コーンケーン県およびナコンパトム県においてフィールド調査を実施した。要点を以下の3点にまとめる。1タトゥーの図案:タトゥーを施す寺院などで、クライアントが図案を選ぶための冊子などを参照して、主に動物が描かれた図案とその効果を収集した。一例を挙げるなら、ノック・サーリカー・リントーン(金色の舌をもつ伝説上の鳥で、語りかけることをすべて信じさせる)、プラーライ・プワック(白ウナギで、敵に捕まえられたときに逃げることができる)、パヤー・ガイ・トゥワン(偉大なる鶏を意味する。闘鶏で掴んだ鶏を勝たせることができる)などである。また図案と価格についても情報を収集した。2タトゥーの道具・技術:現在用いられている道具、および過去に使われていた道具についての情報を収集した。木製、金属製、機械式など道具は多様でありながらも、多くは自作であって、使用者によってカスタマイズされていた。最も多く用いられていたのは、ケムサックと呼ばれる木製あるいは金属製の棒に針を取り付けたものである。感染症を防ぐ目的から、針は取り替え式である場合が多く、またインク壺も使い捨て型のものが用いられている。3タトゥーの実践:ナコンパトム県のBP寺、およびコーンケーン県ムアン郡の複数村落において、タトゥー実践の現場を観察した。またタトゥーの分布状況について具体的なデータを得るために、氏名、学歴、タトゥー歴、身体の箇所、動機などの基本的情報に関するアンケート調査を実施している。まだサンプル数が少ないが、現段階では、タトゥーを求める人々は20代前半未満、および50代後半以降に集中していることがわかった。4ほか見えないタトゥーやルーシー(隠者)との関連など新たな問題が浮上した。今年度は2015年8月13日から9月10日まで、および2016年1月11日より18日まで、タイ国コーンケーン県、マハーサラカム県、チェンマイ県にてフィールド調査を実施した。タトゥーを行う仏教僧侶(phra)と宗教職能者リシ(loesi)を対象にインタビュー調査と参与観察を実施した。得られたデータは、以下の通りである。(1)呪的タトゥーと護符との関連:タトゥーの呪文や文様の多くは、モノに書き込まれることで護符として用いられる。特にバラモン教的な特徴をもつものは、アタルヴァヴェーダに由来するワトゥ・アタンと呼ばれ、クマントーンなどの呪物とともにタトゥーを行う宗教職能者のもとで制作され頒布される。(2)女性や未成年へのタトゥー:チェンマイ県ワットスワンドーク寺の僧侶への聞き取りによって、女性や未成年へのタトゥーが特に北タイやミャンマーのシャンを中心に現在も実践されている。特に女性では、ヘビや犬の咬傷除けの呪的タトゥーが多く見られる。(3)リシとモータム・僧侶のネットワーク:コーンケーン県、マハーサラカム県では、特定のリシの僧院(asom)を頂点として、リシや宗教職能者モータム、僧侶をめぐる系譜(知識のネットワーク)について情報を得ることができた。特に東北タイにおいては、3人のリシが中心的役割を果たしていることが明らかになった。(4)リシの僧院での憑依儀礼:コーンケーン県のリシの僧院で毎週の仏日(wan phra)に行われる読経会に参加した。15人ほどが参加する読経会では、30分ほどの読経ののち、リシや参加者が毎回憑依を体験する。リシの信仰と憑依儀礼の関係についてはさらなる検討が必要である。現代の東北タイのタトゥーの装飾的機能と呪術的機能について論文を執筆し、現在査読中である。また2016年度に開催される複数の学会で成果報告を予定している。平成27年度の研究実施計画にあった、呪術的タトゥー(sak yan)とファッションタトゥー(sak faechan)については、東北タイおよび北タイでのタトゥー師へのインタビュー調査において相応の情報を得つつある。現在までの成果はまとめて、2016年2月に学会誌『タイ研究』(日本タイ学会)に投稿済みであり、現在査読プロセスにあり、2016年7月に出版予定である。そのほか関連する成果のうち、身体に特別な力を取り込むことをめぐってはIUAES Inter Congress(2016年5月)にて学会発表を行った。また見えないタトゥーをめぐっては日本文化人類学会(2016年5月)にて、呪符に関連する呪術的人形の流行については東南アジア学会(2016年6月)にて学会発表を予定しいる。そのため、過去2年間での研究成果については非常に順調に報告を行いつつあるといえる。2016年度は、海外調査としては、8月8日より22日まで、タイ・コーンケーン県とミャンマー・ヤンゴン市においてイレズミに関するインタビュー調査を実施した。

また6月にRoyal Ontario Museum(カナダ・トロント市)で開催されたイレズミに関する企画展"Tattoos: Ritual. Identity. Obsession. Art."の調査を行った。今年度の調査で得られたデータは次のとおりである:(1)タイ国の周辺のイレズミの状況:これまでの調査で、北タイでは強力なイレズミの出所としてミャンマー起源が語られていた。そこで国家を越えたイレズミのグローバルな展開を知るため、ミャンマー・ヤンゴン市において、シャン系寺院やタトゥースタジオでインタビュー調査を行い、現代ミャンマーの都市部で実践されているイレズミの状況の情報を得ることができた。(2)呪術的な道具の流通:呪術的イレズミと同じ伝統文字を用いた呪具をめぐって、バンコク周辺の護符や仏具を扱うショッピングセンターや市場にて調査を行った。仏教的な道具というポジティブな力と、呪術的な道具というネガティブな力の双方が、それぞれ別々の店で取引されている様子を確認した。(3)イレズミ師の系譜:タイ東北部におけるヒンドゥー系の修行者リシに伝わるイレズミなどの呪術的知識をめぐって、コーンケーン県周辺の著名なリシを回って聞き取り調査を行い、年に一度の儀礼を通じて強化される師子関係を通じて、知識と力の正当化が図られている様子を見ることができた。これらの研究成果は、2016年5月にIUAES中間会議(ドゥブロヴニク)にて、国内では5月に日本文化人類学会(南山大学)にて、6月に東南アジア学会(大阪大学)にて、それぞれ学会発表を行った。本研究では現代タイにおけるタトゥーの社会的布置と動態を分析した。サックヤンと呼ばれるタイの伝統的タトゥーは、僧侶などの宗教専門家によって、特別な文字と図像を身体に刻むことで呪術的な力を発揮するとされる。しかし現在ではファッション目的でサックヤンが用いられ、西洋の意匠が多く導入されている一方で、50年以上前からタトゥーが呪術でなく装飾のためにもしばしば用いられていた。タイのタトゥーをめぐる様々なフィールドデータより、魅惑と暴力という両義的な力こそがタイのタトゥーのもつ特徴であることが明らかになった。当初に予定していた、文字と音声との関係、および僧侶と俗人の刺青師へのインタビューについては、おおむね順調にデータを収集している。タトゥーは身体の私的な部分と密接に関わるとともに、タイにおいてもタトゥーを求める者には社会的逸脱者が多く見られる。そのため、インタビューなどの現地調査を行う際には細心の注意が求められ、調査対象とのあいだに信頼関係を構築することが不可欠となる。その意味で、今年度の調査を通して、東北タイ・コーンケーン県のムアン郡において複数のタトゥー師のインフォーマントを得られたことは重要である。こうして知己を得たインフォーマントのもとで許可を得ることによって、通常は立ち会いが認められないタトゥー実践を直接観察することが可能となるとともに、タトゥーのクライアントとのあいだでも信頼関係を保ちながら、インタビューとアンケート調査を行うことが可能になった。次年度以降は、初年度に構築した人間関係を活用することで、より効率的なフィールド調査が実現できるだろうと思われる。
細胞内情報伝達機能に基づいたPET診断法新技術の実用化

本研究は、細胞内情報伝達機能画像診断薬として開発してきたポジトロン標識ジアシルグリセロールを高次脳機能診断・心機能診断・腫瘍診断への適用拡大を図り、それぞれの診断技術の高度化と実用化を目指すものである。脳損傷後の高次脳機能回復メカニズムの解明に対して、脳損傷症例においてイノシトールリン脂質シグナルの増強現象と高次脳機能の改善程度との関連を調べ、増強現象が出現した皮質連合野の領域と、改善を示した高次脳機能の質的関連を検討した.増強現象を生体で知るためにはpositron emission tomography(PET)を用いてイノシトールリン脂質シグナルを体外測定した.またラットを用いた実験的脳損傷モデルで増強現象を誘発し、この部位を取り出しdifferential display法をもちいてシナプメ伝達機能の修飾に関与する因子を検索した。このようにして神経回路のリモデリングと増強現象との関連、特に全脳的にみた高次脳機能の修復メカニズムを調べた.その結果高次脳機能の改善には全脳的な修復機転を考慮する必要があることが示唆された。F-18標識ジアシルグリセロールについて光学活性体を合成し生体での代謝動態を調べたところ特異性はなく、ラセミ体で十分PLD活性を評価できることが分かった。腫瘍組織において集着はPLD活性に基づいているが、培養主要細胞においてもPLD活性を評価できた。心筋機能診断において、^<11>C標識ジアシルグリセロールの心筋への集積がイノシトールリン脂質代謝回転をよく反映することを動物実験において確認し、その後ポジトロン断層撮影を用いて臨床応用を開始した。13例の慢性期の前壁中隔梗塞患者で得られた結果では、梗塞後の残存心筋における^<11>C標識ジアシルグリセロールの集積は、左室拡大が著明であるほど、また、左室収縮性が低下しているほど、さらに血清中のヒト脳性利尿ペプチドが高いほど増加することが明らかとなった。すなわち、ジアシルグリセロールを介した情報伝達系はヒトにおいても、心室リモデリングにおいて非常に重要な働きをしていることが本研究により初めて示された。さらに簡便なPET-MR fusion programを開発しこのprogramの上で、kinetic analysisを可能とした。本年度の研究においては刺激に対する早いレスポンスのPLC活性(C-11標識ジアシルグリセロール)と遅発性のPLD活性(F-18標識ジアシルグリセロール)との相違に注目して研究を進めた。高次脳機能診断への適用拡大では脳損傷後の回復機構に対して、代償的回路形成の引き金となる増強現象は多数の連合野領域に存在したので、多くの脳損傷のPET症例から画像解析により検索した結果、右脳の前頭前野に安定したシステム回路の存在が示唆された。ラットを用いて実験的脳損傷モデルやLTP刺激で増強現象を再現し、C-11標識ジアシルグリセロールの集積は免疫組織染色および電気生理学的検索によってPKCgammaの活性化によることが確証された。今後これらの手法によって、増強現象と代償回路形成の誘導との関連を明確にする。

F-18標識ジアシルグリセロールの合成はオンライン合成に適する方法が開発され、培養神経細胞においてPLD活性を評価できた、腫瘍組織においてもPLD活性に基づいて集積することが明らかとなった。犬における自然発生の乳癌においてPET陽性画像が得られ、肺への転移診断も可能であった。心筋機能診断においてF-18標識ジアシルグリセロールの1位の炭素鎖を短く(C4)すると、イノシトールリン脂質代謝回転系の活性(PLC活性)に基づいて集積することが明らかとなり、虚血心筋の回復過程の評価への応用可能性が示唆された。PET測定技術においては、特異結合を考慮に入れたコンパートメント解析を行い画像化する新プログラムを開発した。これはフィテングにSimulated annearing法を採用したものでモデルの初期値がはっきりしない新薬剤に対しても極値にとらわれることなく真の値を得ることが出来、放射性薬剤のモデル要素、たとえば結合強度の画像化などが可能となった。本研究は、細胞内情報伝達機能画像診断薬として開発してきたポジトロン標識ジアシルグリセロールを高次脳機能診断・心機能診断・腫瘍診断への適用拡大を図り、それぞれの診断技術の高度化と実用化を目指すものである。脳損傷後の高次脳機能回復メカニズムの解明に対して、脳損傷症例においてイノシトールリン脂質シグナルの増強現象と高次脳機能の改善程度との関連を調べ、増強現象が出現した皮質連合野の領域と、改善を示した高次脳機能の質的関連を検討した.増強現象を生体で知るためにはpositron emission tomography(PET)を用いてイノシトールリン脂質シグナルを体外測定した.またラットを用いた実験的脳損傷モデルで増強現象を誘発し、この部位を取り出しdifferential display法をもちいてシナプス伝達機能の修飾に関与する因子を検索した.このようにして神経回路のリモデリングと増強現象との関連、特に全脳的にみた高次脳機能の修復メカニズムを調べた.その結果高次脳機能の改善には全脳的な修復機転を考慮する必要があることが示唆された.F-18標識ジアシルグリセロールについて光学活性体を合成し生体での代謝動態を調べたところ特異性はなく、ラセミ体で十分PLD活性を評価できることが分かった。腫瘍組織において集積はPLD活性に基づいているが、培養主要細胞においてもPLD活性を評価できた。心筋機能診断において、^<11>C標識ジアシルグリセロールの心筋への集積がイノシトールリン脂質代謝回転をよく反映することを動物実験において確認し、その後ポジトロン断層撮影を用いて臨床応用を開始した。13例の慢性期の前壁中隔梗塞患者で得られた結果では、梗塞後の残存心筋における^<11>C標識ジアシルグリセロールの集積は、左室拡大が著明であるほど、また、左室収縮性が低下しているほど、さらに血清中のヒト脳性利尿ペプチドが高いほど増加することが明らかとなった。すなわち、ジアシルグリセロールを介した情報伝達系はヒトにおいても、心室リモデリングにおいて非常に重要な働きをしていることが本研究により初めて示された。
疾患バイオマーカーの微量検出を目的とする超高親和力変異抗体の効率的創出法の開発

高親和力で特異的な抗体は、臨床検査における体外および体内診断薬として有用である。しかし、従来のハイブリドーマ法で得られる抗体の性能には限界がある。そこで、天然の抗体遺伝子を改変する抗体工学が期待されているが、膨大な多様性をもつ抗体提示ファージライブラリーから目的の改良分子種を効率的に選別することは困難である。この問題を解決するために、本研究ではフローサイトメトリーの原理を基盤とする改良抗体の革新的な単離法の確立を目指した。必要なキー試薬であるモノクローナル抗ファージ抗体を作製し、これを人工のミニ抗体(scFv)に改変した。さらに、発光タンパク質との融合体を調製し、その有用性を検討した。体外および体内診断薬としてより優れた機能をもつ抗体を得るために,天然の抗体分子を遺伝子操作により改変する抗体工学が革新的な方法論と期待されてきた.本法は,膨大な多様性を持つ変異抗体の分子集団ファージ提示し、そのファージライブラリーからごく希少な改良分子種を選別する。しかし、実際には目的抗原を高い水準で認識する変異抗体の取得は困難である場合が多く、新しい手法の開発が待たれる。申請者はまず、抗原非特異的なファージの凝集が問題点になっていると考えた。そこで、モノクローナル抗ファージ抗体を新たに樹立し、これを用いたファージの分散が可能か試みた。ファージ提示法でヘルパーファージとして多用されるVCSM13を大腸菌から大量調製して精製し免疫源として用いた。これを免疫増強剤と共にBALB/cマウスに投与してその血清中抗体価を調べたところ、強い陽性反応を示すマウスを特定した。このマウスの脾細胞を用いてミエローマ細胞と融合させた。融合後の細胞を選択培養してハイブリドーマを得たのち、限界希釈法によりクローン化して目的の抗ファージ抗体産生株を7種樹立した。このうち2種のモノクローナル抗体がVCSMに対して良好な反応を示した。これら抗体のエピトープをウェスタンブロッティングにより調べた結果、いずれの抗体についてファージの主要コートタンパク質であるpVIIIに相当する分子量5.2kDaにバンドが認められ、これら抗体のエピトープはpVIIIであると推定された。体外・体内診断薬として有用な機能をもつ抗体を得るために、天然の抗体分子を遺伝子操作により改変する抗体工学が革新的な方法論として期待されてきた。本法は、膨大な多様性をもつ変異抗体フラグメントの分子集団をファージ提示し、そのファージライブラリーからごく希少な改良分子種を識別する。しかし、実際には目的抗原を高い水準で認識する変異抗体の取得は困難であることが多く、新しい手法の開発が待たれる。申請者はマウスモノクローナル抗ファージ抗体を作製し、その可変部をリンカーで連結した一本鎖Fvフラグメント(scFv)を調製し、抗原特異的なscFv提示ファージの検出を試みた。まず、ファージ粒子のみを検出する条件をELISAで検討した結果、エタノールを含む緩衝液でファージを希釈したときに感度良く測定が可能であった。本条件で抗ファージscFvを認識する蛍光標識抗体を用いて共焦点レーザー顕微鏡による蛍光観察を行ったところ、ファージと推定されるサイズの蛍光像が得られた。続いて、scFv提示ファージを同様に観察しscFvの蛍光検出を調べた。scFvの検出には申請者が調製したビオチン標識マウスモノクローナル抗イディオタイプ抗体を用いて蛍光標識アビジンで染色したが明瞭な画像が得られなかった。本申請研究ではファージの蛍光検出を利用したフローサイトメーターでの選別を予定していたが、蛍光では感度が不十分であることが研究途中で判明し、より高感度な検出が可能とされる発光タンパク質(Gaussia Luciferase)を抗ファージscFvと連結させた融合タンパク質として調製した。本融合タンパク質を用いるELISAではscFv単独での検出よりも高感度化に成功しており、超高親和力変異抗体フラグメントの単離に応用が可能と期待される。本研究を遂行するにあたって、VCSM13に対するモノクローナル抗ファージ抗体をハイブリドーマ法により樹立することが最初のポイントであった。これは平成26年度中に達成できており、そのキャラクタリゼーションも終了している。従って、本抗体の修飾やこれを用いるファージの顕微鏡観察は比較的短期間に行えることが予想される。医歯薬学ファージの凝集を解消するため、得られたモノクローナル抗ファージ抗体に分散性タグを標識することを試みるが、まず、抗体を反応させる前にファージの分散を促進させる溶媒条件を検討しておく。続いて、種々のタグで標識することになるが、ファージ抗体の低分子量化も合せて行う。この際、酵素消化による方法または遺伝子操作によるフラグメント化も試みる。

国際学会で発表するための旅費として計上していた助成金を平成26年度中に使用することがなかったため。次年度の早い時期(6月)に国際学会で発表することが確定しており、生じた次年度使用額をこれに使用する。平成27年度分として請求した助成金は申請書の予定通りに使用する。
芳香族アミンN-水酸化体の0-アセチル化酵素による活性化機構とDNA傷害

アミノ酸加熱変異/癌原物質、Glu-P-1を始めとする芳香族アミンの生体内におけるイニシェーション作用機構を知るため、Glu-P-1のN-水酸化体を基質としてin vitro系で各実験動物肝のアセチルCoA依存性活性化能を調べた。その結果、N-OH-Glu-P-1の核酸への結合は調べた6種の実験動物種のうちイヌを除く他のすべての種に認められ、中でもハムスター、ラット、ウサギの肝可溶性画分に高い活性化能が検出された。Glu-P-1の発癌実験に使用されたCD【F_1】系マウスにおける活性はラットより弱いながら、高い発癌率を示す雌性により高い活性(雌>雄1.7倍)が認められた。同様の実験をN-ヒドロキシ-Z-アミノフルオレンを基質として行なったところ、N-OH-Glu-P-1の場合とは異なりモルモットやマウスはラットよりも高い活性を示した。これらの結果および精製標品を用いた実験から、各種実験動物の肝可溶性画分に存在するアセチルCoA依存性アリルヒドロキシルアミン活性化酵素はその基質特異性が動物種間で異なり、かつ複数の酵素種が同一種に存在することが示唆された。またラットおよびハムスターの肝、肺、腎、小腸粘膜および膀胱の活性化能を比較したところ、肝に最も高い活性が認められたが、上記の肝以外の臓器にも比較的高い活性が検出された。本酵素の酵素学的性質については我々が既に明らかにしたSalmonella菌体内のO-アセチル転移酵素とは幾つかの点で異なっていた。アセチルCoA要求性の他のアセチル化酵素との異同については、芳香族アミンのN-アセチル化能を欠くイヌあるいは遺伝的に低いN-アセチル化能を示すウサギでの実験等から、本酵素はN-アセチル転移酵素と類似性があり、ウサギでは共通の遺伝的支配を受けていることが示唆された。以上の結果より、芳香族アミンの癌原性発現へのO-アセチル化の関与が強く示唆された。
生物育成教育の深化・発展をめざした教育支援フレームワークの構築と全国展開

本研究は,4カ年の3年目にあたり,以下の3つの研究について遂行した。【研究1.各研究拠点における中学校現場の生物育成学習の実態調査】「研究拠点」である北海道,東北,関東,東海,近畿,九州において,研究開始(平成28年度)に実施した全国統一生物育成学習状況調査について各地区での分析を進め,昨年度に引き続き,成果発表を学会発表するとともに,論文化を進めた。【研究2.各研究拠点の特性をふまえた新しい生物育成教材の開発】研究1で進められる成果としての教育現場の教材等のニーズに応える形で,各研究拠点において教材開発を進めた。例えば,代表者の北部九州地区においては,「アイガモ農法を学校で行うためノウハウの確立」,「教材用イネ品種の開発」および「校庭の雑草をつかった土づくりからの有機農法」などを行った。研究メンバーがそれぞれ,教材,学習プログラムの開発を進め,その多くの成果について学会発表を行った。また,教材づくりや栽培方法に関する教員対象セミナーをいくつかの研究拠点で開催した。【研究3.研究成果の共有と情報発信】研究2で行った各研究拠点(分担研究者)が各研究成果を,全国に発信し現職教員等に活用してもらうために,昨年度完成させたWebシステム「生物育成学習支援システムSUNS(Support System for Nurturing Lining Things Study)」に集約させ,年度末に一般公開した。公開内容は,開発した教材(PDFや動画)をはじめ,研究資料や学習内容案,さらには各地で行われたセミナーを撮影した動画であった。研究テーマを3つ(業況分析,教材開発,公開)に分けながら,それぞれに研究メンバーが一丸となって本研究に取り組むことができた。2回行った研究打合せ(8月,2月)では,教材開発の進め方やWebシステムによる発信内容について深く全員で議論しながら,検討を重ねることができた。このような理由から,現在までの進捗状況について,「(2)おおむね順調に進展している」と判断した。一般公開を行った"SUNS(生物育成学習支援システム)“については,今年度,さらに充実させるべく,本研究メンバーがそれぞれに地域や得意分野を活かしながら,コンテンツを増やす研究を進める必要がある。一方,全国統一アンケートについては,全国データの分析を進めるとともに,各地域の特性について論文としてまとめ,公開することにしたい。また,公開したWebシステムを通じて,大学ー教員間の全国的なネットワークに発展させることとしたい。本研究は,4カ年の1年目にあたり,以下の2つの研究テーマについて明らかにしながら,研究を遂行した。【研究1.各研究拠点における中学校現場の生物育成学習の実態調査】研究メンバー(代表者および研究分担者)の配置から,「研究拠点」を,北海道,東北,関東,東海,近畿,九州と,全国を縦断する形で網羅的に調査する体制が得られている。そこで,本年度は,実際の中学校技術科の生物育成学習の実態を把握するために,全国の技術科担当教員へのアンケート調査を行うこととした。まず,アンケートのフォーマットの作成に着手し,研究メンバー全員の意見を取り入れながら,完成させることができた。完成したアンケートを各研究拠点において実施し,回答の集計に取りかかった。ここで,アンケートの送付総数は2697校に及び,それに対する回答校総数1256校であり,全体の回収率は46.6%と高い状況であった。このことは,全国の現職の技術科担当教員の生物育成学習への関心の高さ,本研究への期待の高さが伺える結果であると判断された。【研究2.各研究拠点の特性をふまえた新しい生物育成教材の開発と共有】アンケートの結果をもとに,ニーズを分析し,各研究拠点において教材開発研究を進めた。その結果は,関連の学会にて複数発表することができた。さらに,得られた情報(アンケートの集計結果や,開発教材等)について公表していくWebシステムの開発を行う予定にしている。今年度は,研究メンバーによる2回の打合せの中でその構想について意見を持ち寄り,立ち上げに向けた準備を開始することができた。来年度の完成を目標に,専門家(ソフトウェア開発)の協力も仰ぎながら,システムの開発を行う体制を整えることができた。2つのテーマを同時進行させながら,それぞれに研究メンバーが一丸となって本研究に取り組むことができた。2回行った研究打合せでは,各研究拠点における生物育成学習の特徴,全国的な共通点も明らかにしながら,全国統一アンケートを作成し,実施回収を完了させることができた。また,このアンケート調査の結果を元に,今後の教材開発において多くの有益な情報を得ることが可能となった。本研究は,4カ年の2年目にあたり,以下の2点について明らかにしながら,研究を遂行した。【研究1.各研究拠点における中学校現場の生物育成学習の実態調査】「研究拠点」を,研究メンバーの構成により,北海道,東北,関東,東海,近畿,九州と,全国を縦断する形で配置しており,1年目に全国統一生物育成学習状況調査を研究拠点ごとに実施している。そこで,本年度は,各研究拠点で調査データの分析を進め,その結果を関連学会で公表することにし,10報の成果発表を行うことができた。各データから得られた知見は,学校現場で求められている教材や学習例のニーズであることから,これらに沿った教示開発や授業例の提案を今後行う必要があることが確認された,さらに,各研究拠点のデータを持ち寄り,収集データの蓄積を行うとともに,全国データとして分析に着手することとした。

【研究2.各研究拠点の特性をふまえた新しい生物育成教材の開発と共有】研究1で進められる成果としての教育現場の教材等のニーズに応える形で,各研究拠点において教材開発を進めた。例えば,代表者の北部九州地区においては,「有機農業技術を簡易に中学校で再現できる諸条件の検討」や「教材用イネ品種の開発」,「ものづくり材料としてのヒョウタンの教材化」などであり,研究メンバーが同時に各地において,教材,学習プログラムの開発を進めた。また,教材づくりや栽培方法に関する教員対象セミナーを各地で開催し,セミナー内容を動画として収録した。一方,このような教材等の情報を集積させることで,ライブラリ化し,それを全国各地に発信する機能をWeb環境で実現できる「生物育成学習支援システム」の構築をめざした。研究メンバー全員によるアイデアを結集させながら開発をすすめ,SUNS(Support System for Nurturing Lining Things Study)として完成させた。2つのテーマを同時進行させながら,それぞれに研究メンバーが一丸となって本研究に取り組むことができた。2回行った研究打合せ(8月,2月)では,アンケート結果の分析の進め方について検討を進めるとともに,生物育成学習支援システムの構造と機能について,アイデアを持ち寄りながら,検討を積み重ねることができた。このような理由から,現在までの進捗状況について,「(2)おおむね順調に進展している」と判断した。本研究は,4カ年の3年目にあたり,以下の3つの研究について遂行した。【研究1.各研究拠点における中学校現場の生物育成学習の実態調査】「研究拠点」である北海道,東北,関東,東海,近畿,九州において,研究開始(平成28年度)に実施した全国統一生物育成学習状況調査について各地区での分析を進め,昨年度に引き続き,成果発表を学会発表するとともに,論文化を進めた。【研究2.各研究拠点の特性をふまえた新しい生物育成教材の開発】研究1で進められる成果としての教育現場の教材等のニーズに応える形で,各研究拠点において教材開発を進めた。例えば,代表者の北部九州地区においては,「アイガモ農法を学校で行うためノウハウの確立」,「教材用イネ品種の開発」および「校庭の雑草をつかった土づくりからの有機農法」などを行った。研究メンバーがそれぞれ,教材,学習プログラムの開発を進め,その多くの成果について学会発表を行った。また,教材づくりや栽培方法に関する教員対象セミナーをいくつかの研究拠点で開催した。【研究3.研究成果の共有と情報発信】研究2で行った各研究拠点(分担研究者)が各研究成果を,全国に発信し現職教員等に活用してもらうために,昨年度完成させたWebシステム「生物育成学習支援システムSUNS(Support System for Nurturing Lining Things Study)」に集約させ,年度末に一般公開した。
雲粒子から生成するエアロゾルの空間分布のライダーを用いた測定方法の研究

昨年度改造したライダー装置を用いて、本年度も引き続き名古屋大学構内におけるライダー観測を継続して行った。観測は昨年同様、昼夜連続的な観測を比較的天候の良い条件め日に行った。平均すると週12回で、一回の観測で一昼夜通して観測を行うことができた。境界層上端に観測された雲から地上まで降りてくるようなエアロゾルの層が、昨年同様にしばしば測定することができた。このようなエアロゾル層は波長依存性が通常の境界層内のエアロゾルより小さく、より粒径の大きいエアロゾル粒子からなることを示唆している。また、偏光解消度は小さく、球形に近い形をしていることが予想される。木年度も、夏季乗鞍岳の東京大学宇宙線観測所にてシーロメータ(小型ライダー)を設置し連続観測を実施した。境界層高度の変化に伴いエアロゾル濃度の変化が見いだされ、エアロゾルの物理的・化学的な変化を示唆しているようである。上記の大粒径エアロゾルに加えて、逆に波長依存性が大きいエアロゾルが境界屑上端付近にしばしば観測された。このような小粒径エアロゾルと雲の関係はまだ不明であるが、乗鞍岳におけるシーロメータとSMPSの同時観測ではシーロメータで観測された雲(霧)の合間に、SMPSで核生成モードの粒子が観測された例が複数あり、雲と新粒子生成の関係を示唆する結果が得られた。このような雲と新粒子生成の関係は予想外の結果であり、このプロセスに関しても詳細は不明なままである。今後、上記のような境界層上端付近における雲起源のエアロゾル位子生成、および今回見いだされた気体から生成されたと見られる新粒子の生成の関係を明らかにする必要がある。本年度はまず名古屋大学構内に設置しているライダー装置を昼間の観測が可能であるように改良した。昼間は太陽光線によるバックグランドノイズが大きく、これまで使用していたライダーの受信系では精度良い測定に十分なSN比が得られなかった。このノイズを低減するため、望遠鏡の光学系を改造して、受信視野を0.5mradにした。さらに送信レーザ波長の光のみを通す干渉フィルターを狭帯域のものに交換した。これらの改良で昼間でも高度15km程度までは良好なSN比での測定が可能となった。また従来Nd:YAGレーザの第二高調波(53nm)のみで観測していたものを基本波(1064nm)における受信も同時に行えるように受信部分を改造した。改造したライダーを用いて、昼夜連続的な観測を比較的天候の良い条件の日に行った。平均すると週12回で、一回の観測で一昼夜通して観測を行った。この結果、境界層上端に観測された雲から地上まで降りてくるようなエアロゾルの層がしばしば測定することができた。本年度はまた、夏季乗鞍岳の東京大学宇宙線観測所にてシーロメータ(小型ライダー)を設置し連続観測を実施した。あいにくエアロゾルのサンプリングを同時に実施することはできなかったが、境界層高度の変化に伴いエアロゾル濃度の変化が見いだされ、エアロゾルの物理的・化学的な変化を示唆しているようである。来年度はサンプリングを同時に実施する予定である。
TPAによる巨核球系細胞への分化誘導における細胞周期制御機構の解析

1.TPAによるサイクリンE-cdk2複合体キナーゼ活性制御の検討:MEG-01s細胞にTPA添加後、cdk inhibitor (CKI)のうちp21はmRNA、蛋白レベルとも上昇が見られ、これは細胞周期非依存性であった。一方、p27は蛋白質レベルは上昇し、細胞周期依存性にG1期に発現誘導されることが示唆されたが、mRNAレベルに変化はなかった。免疫沈降ウエスタン解析では、TPAで誘導されたこれらCKIはいずれもサイクリンEと共沈し、免疫沈降したサイクリンE複合体のヒストンH1、Rbキナーゼ活性は、ほぼ完全に抑制されていた。以上から、MEG-01sにおけるTPAによる分化誘導に伴う細胞周期停止は、TPAで誘導されたp21とp27がサイクリンE複合体に結合し、そのキナーゼ活性を抑制することによると想定された。その他の巨核球系細胞株の検討では、TPA添加後CMK,Meg-JではサイクリンE蛋白が増加したが、HELではほとんど変化が見られなかった。一方、いずれの細胞株もp21蛋白の発現が誘導され、p27蛋白は構成的な発現が見られ発現レベルに変化はなかった。以上のように、TPAによる細胞周期関連因子の発現は細胞株により異なっていた。2.正常巨核球のTPAによる分化誘導の解析:トロンボポチエン添加により臍帯血由来CD34陽性細胞から巨核球系コロニーを形成し、TPAを添加すると、CD41発現増強は見られるものの、サイクリンE、p21の発現増強は検出できなかった。p21のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて分化誘導の阻害を試みることとし、MEG-01sを用いて至適条件の検討を行なっている。MEG-01sで見られる現象が、正常巨核球で見られるかどうかさらに検討する予定である。endomitosisにおける細胞周期制御は本年度は見るべき成果が得られなかった。
トランスナショナルな移動経験を通した日比ダブルの若者のアイデンティティ構築

本研究は、成育期における日比間のトランスナショナルな移動経験を通して、「日比ダブル」の若者がどのようなアイデンティティ構築過程を経験するのかを、現在20代前半となった彼ら・彼女らの語りから実証的に明らかにすることを目的とした。特に「ルーツ」と「ルート」の概念にそれぞれ着目してインタビュー調査の結果を分析した結果、日本育ちおよびフィリピン育ちそれぞれの日比ダブルの若者にとって、「ルーツ」をめぐる学校や支援組織など家庭「外」での経験が、「ルート」として彼らのアイデンティティの形成に大きくかかわっていることが明らかになった。20代前半の「日比ダブル」の若者を研究対象する本研究は、当事者の語りから彼らの「ダブル」としてのアイデンティティ構築過程と、そこにおけるトランスナショナルな移動経験との相関について明らかにしていくことを目標とする。本年度は、首都圏に居住する日比ダブルの若者との非構造化インタビューを開始した。当初の計画どおり、同一人物に複数回インタビューを行うことで、インタビューを経て生じた当事者の心境の変化などを二度目のインタビューで話題するという手法も採用することができた。今年度の調査からは以下のような知見が得られた。1日本で主として生育している日比ダブルの青年が、母親の「外国人性」に気づいていくプロセスには複数の段階がある。2学齢期(特に小学生時)に感じとった母親の「外国人性」と、成人後に(再)発見されるそれとは質的に大きく異なっている。3自らが「ダブル」あるいは「ハーフ」である、という認識は成人後の現時点で、日比双方の文化の「バランサー」としての役割、として認識される側面がある。4その役割の認識は、フィリピンの親戚訪問や、フィリピン人母の友人たちとの交流の中で本人たちに経験・認識されていく「自分の中のフィリピン人っぽさ」に裏打ちされている。ただし今年度実施したインタビューはいずれも女性であったため、次年度以降は、男性も含めてインタビュー件数を増やし、上記のような認識にジェンダー差がどのように関係しているのかを考察しつつ「ダブル」意識の複層性について研究を深めていきたい。なお、第87回日本社会学会研究大会において、テーマセッション「移動する子ども・若者の国際社会学」を主催し、関連するテーマで研究を進める国内外の研究者と「移動する子ども・若者」研究について活発な研究交流を推進することができた。また、比較研究として移動を経験した日系ブラジル人の子どもに関する調査も実施できた。研究2年目の本年度は、1年目に引き続き首都圏に居住する日比ダブルの若者との非構造化インタビューを実施した。今年度はさらに、本研究における「ダブル」アイデンティティの構築課程への着目を、「ルーツ」と「ルート」という概念を用いて再構成しその「ルーツ」と「ルート」とが、日本育ちの日比ダブルの若者たちにどのように認識され、同時に「ハーフ」言説が、どのように彼ら・彼女らの日常に関与しているのか、という観点から分析を行った。そこで得られた知見は以下の通りである。1彼ら・彼女らが、自分自身とほかの子どもたちとの差異に気づいた契機は「学校」という場を通してであったこと2しかし、それは必ずしも「差別された」という体験ではなく、「自らのルーツに対して大人が過剰に反応する」という事実の体験でもあること。3インタビューの中で、「ダブル」の若者たちがお互いの中にそれぞれ「フィリピン人らしさ」を見出そうとしたり、それを確認し合ったり、時にはそれを拒否するようなやりとりが見られたこと。4きわめて近い境遇の彼らの間にあっても、「フィリピン」的な要素を自分の中に見出すことに関しては、ちょうど「ハーフ」ということをどのように受け止めるか、ということに見られた違いと同様に、広がりが見られたこと。5しかしながら、それを必ずしも「フィリピン的な要素が強い」と言わなくとも、フィリピン側の親族と彼らの生活とは密接に結びついていること。上記の知見は、紀要論文として刊行された。また、今年度の研究を通して、インタビュー調査の手法や研究対象者にとっての意味といった方法論的な新たな課題を発見することができた。調査対象者とのラポール形成およびスノーボールサンプリングが順調に進み、予定より早い段階で研究の成果を論文として刊行することができた。研究最終年度の本年は、過去2年間の研究成果のまとめと新たな研究課題の立案に重点を置いて研究活動を行った。5月には、在比の日比ダブルの若者およびその支援団体の専門家を日本に招聘し、日本の関連団体や大学等の研究機関および大学生との交流を実施することができた。その中で、フィリピンで生育した日比ダブルの若者へのインタビューとそれに対するフィードバックを、「ルーツ」と「ルート」という2つのキーワードを用いて分析した。その中で、彼らの成育してきた「ルート」が、単にフィリピン人の母親や日本人の父親との関係だけでなく、支援組織とのかかわりと、その中での日比間の移動経験によっても構築されてきていることが確認された。また、2年目の研究成果として刊行した紀要論文の内容について、インタビュー協力者からフィードバックを得、フォローアップ・インタビューも実施した。また、今年度は他大学での関連する研究会やワークショップに参加する機会も多く、そこで「移動する子ども・若者」および「ミックス・ルーツや多文化家族の中で育つ子ども・若者」という観点から国内外の多くの研究者と意見交換を行うことができた。こうした研究成果を踏まえて、あらためて日比ダブルの若者たちの生育「ルート」とアイデンティティの関係について、歴史的経緯を含めた時間軸を重視した研究を行う必要性および重要性を確認したことで、H29年度新規採択の基盤研究(B)「日比間の人の移動における支援組織の役割

移住女性とJFCの経験に着目して」の発案・計画につながった。本研究は、成育期における日比間のトランスナショナルな移動経験を通して、「日比ダブル」の若者がどのようなアイデンティティ構築過程を経験するのかを、現在20代前半となった彼ら・彼女らの語りから実証的に明らかにすることを目的とした。特に「ルーツ」と「ルート」の概念にそれぞれ着目してインタビュー調査の結果を分析した結果、日本育ちおよびフィリピン育ちそれぞれの日比ダブルの若者にとって、「ルーツ」をめぐる学校や支援組織など家庭「外」での経験が、「ルート」として彼らのアイデンティティの形成に大きくかかわっていることが明らかになった。調査対象者とのラポール構築が重要な課題にあって、おおむね順調にインタビューやそのためのネットワークづくりを進められている。研究期間3年目(最終年)においては、さらにインタビュー調査および結果の分析を進め、深化させていくと同時に、成果の社会的還元(ワークショップ開催など)も進めていきたい。国際社会学研究期間2年目においては、1年目に構築した調査対象者とのネットワークを十全に活かし、より計画的にインタビュー調査およびその結果の分析を進めていく予定である。本年度は当初の予定よりも海外旅費がかからず、またテープ起こし謝金も、当初の予定よりも支出が少なかったため。本年度は当初予定したよりも謝金がかからず、また物品費(特に書籍)に関しては、関連する他の研究費による支出が多かったために、研究費に残金が出た。物品費40万円(エスニシティ・アイデンティティ・質的調査方法論・国際児問題関連図書、和書・洋書、プリンタートナー、質的データ分析ソフト、ICレコーダー)ほか/国内旅費20万円/謝金120万円(テープ起こし謝金20万円、専門的知識の提供80万円、資料整理10万円、調査対象者謝礼10万円)/その他(通信費、複写費、会議費)10万円物品費35万円(エスニシティ・アイデンティティ・質的調査方法論・国際児問題関連図書、和書・洋書、プリンタートナー、ICレコーダー)ほか/旅費:外国旅費59万5千円(成田ーフィリピン渡航費9万円×2回=18万円、現地宿泊費(1泊@9千円×20日間)18万円、日当(20日間×@5)10万円、現地交通費(レンタカー1日@6×20日間)12万円、フィリピン国内航空券(1万5千円×3往復)4万5千円/国内旅費15万円/謝金:60万円(現地リサーチアシスタント5万円、テープ起こし謝金40万円、調査対象者謝礼6万円、資料整理9万円)/その他(通信費、複写費、会議費)20万5千円
時空間特異的遺伝子発現マウスを用いた脳のシステム制御の解析

代謝型グルタミン酸受容体1型(mGluR1)を小脳プルキンエ細胞のみで特定の時期に欠損もしくは発現誘導できるマウス系統を樹立し、mGluR1が成体でも運動協調に必要なこと、瞬目反射の古典的条件づけの学習獲得に必要だが、記憶の維持、発現には必要ないことを明らかにした。また、RhoファミリーGTPase Rac1が軸索の形成や伸長自体には必須ではないが、交連ニューロンの軸索の正中線交差に必須であることを明らかにした。1.時空間特異的にmGluR1を発現するマウス、L7-tTA Tg/TRE-mGluR1 Tg/mGluR1(-/-)マウスを作製した。mGluR1(-/-)受精卵にL7プロモーターカセットにtTAを挿入したL7-tTA DNAとTRE-mGluR1a DNAをマイクロインジェクションし、小脳失調を示さない二重Tg、L7-tTA Tg/TRE-mGluR1 Tg/mGluR1(-/-)のファウンダーマウスを独立に二系統得ることに成功した。このうち一系統の二重Tgのアリル(L7-tTA Tg/TRE-mGluR1aTg)はF1マウスに伝わり、さらにF1マウスでもmGluR1(-/-)マウスの小脳失調をレスキューすることが確認できた。2.mGluR1の下流に位置する考えられるERK経路を時空間特異的に遮断することを目的として、TRE-ドミナントネガィブ(dn)MEKTgを作製した。tTAの発現が多いCamKII-tTA Tgと交配し、CamKII-tTA Tg/TRE-dnMEK Tgを作成した。このマウスでは、dnMEKがtTAの発現する海馬、嗅球、線条体等で発現していることを免疫染色およびウェスタンブロットで確認した。3.小脳プルキンエ細胞特異的Rac1ノックアウトマウスではプルキンエ細胞樹状突起のシナプス密度が減少していることが明らかとなった。4.自ら作成したEmx1(cre/+)マウスを用い、前脳特異的Rac1ノックアウトマウスの作製した。このマウスでは前交連、脳梁が欠損し、大脳皮質の神経細胞の層構造にも異常が見られた。5.Rac3ノックアウトES細胞を胚盤胞期胚にインジェクションし、キメラマウスを作成した。ドキシサイクリン投与によりmGluR1発現を停止できるmGluR1 cKOマウスでは小脳プルキンエ細胞特異的にmGluR1が発現し、mGluR1(-/-)マウスで見られた小脳失調・登上線維によるプルキンエ細胞の多重支配がレスキューされていた。さらに、生後24日(P24)からmGluR1の発現を停止させたところ、P61-P65で運動協調能がドキシサイクリン非投与のコントロールマウスに比べ顕著に悪化した。この結果は、mGluR1が神経回路形成過程に必要なだけではなく、成体のプルキンエ細胞シナプスでも重要な機能分子として働いていることを示唆している。2.mGluR1結合タンパク質の同定mGluR1の相互作用分子の網羅的探索を試みた。まず、mGluR1(-/-)マウスを実験対照として、野生型マウス小脳からモノクローナル抗体を用いてアフィニティー精製したmGluR1複合体のLC-MS/MS分析を行った結果、既知の分子を含む100種以上の構成因子を同定することができた。また、プルキンエ細胞特異的にmGluR1スプライスバリアントのmGluR1aまたはmGluR1bを発現するトランスジェニックマウスの小脳より、それぞれの複合体を単離し、MALDl-TOF MS分析によって構成因子を同定し、mGluR1aとmGluR1bとの間で異なる数種類の相互作用分子を同定することができた。3.前脳特異的Rac1欠損マウスの解析前脳特異的Rac1欠損マウスでは大脳皮質の一部に層構造の乱れが観察された。また、逆行性標識トレーサーを用いて神経連絡を調べたところ、大脳皮質から脊髄および視床への投射には大きな異常が見られない一方、大脳皮質の左右を連絡する神経線維である脳梁および前交連が著しく欠損していることが明らかとなった。mGluRl cKOマウスに、生後24日(P24)からドキシサイクリン(Dox)投与によりmGluRlの発現を停止させるとP61-P65で運動協調能が顕著に悪化するが、P65からDox投与を中止すると、P96-P100でmGluRlの発現が回復すると同時に運動協調能も回復し、神経回路形成後のmGluRl欠損による運動協調能の低下が回復可能であることが明らかとなった。

2.小脳プルキンエ細胞におけるERK/MAPキナーゼ経路の機能解析mGluRlの下流に存在するERK/MAPキナーゼ経路の機能を検討するため、ERKの活性化因子であるMEKの優性不能型(dnMEK1)遺伝子をプルキンエ細胞特異的に発現するマウス(L7-tTA Tg/TRE-dnMEKl Tg; HA-dnMEK1 Tg)を作製・解析した。組織学的解析から、HA-dnMEK1 Tgでは平行線維終末の分布には明らかな異常は認められなかったが、登上線維終末の大きさや分布に異常が見られた。また、電気生理学的解析から登上線維によるプルキンエ細胞の多重支配が認められた。これらの結果からERK経路はプルキンエ細胞内で、登上線維終末の形成や維持に関与していることが明らかとなった。3. mGluRl結合タンパク質の機能解析mGluRlにHomer結合を阻害するように点変異(P1147E)を導入したmGluRl cDNAをL7プロモーター下に発現させるトランスシーンをmGluRl KOマウス受精卵にインジェクションし、mGluRl(P1147E)によるレスキューマウスを得た。mGluR1 cKOマウスを用いて、運動学習の獲得、発現、保持という諸過程のどの過程にmGluR1が必要とされるのかを調べるため、瞬目反射条件付け学習を行った。瞬目反射条件付けは、音(条件刺激)とまぶたへの電気刺激(無条件刺激)を繰り返し提示することにより、音を聴くだけで瞬きの条件反射が起こるようになる連合学習であり、小脳LTDを必要とすると考えられている。一度条件付け学習をさせたcKOマウスにドキシサイクリンを投与して、mGluR1の発現を停止させ、7週間後に再学習を行わせると、mGluR1の発現がなくなっているにもかかわらず、ドキシサイクリンを投与していないcKOマウスと同程度の条件付け反応の割合を示した。一方、ドキシサイクリンを投与して、mGluR1の発現を停止させたマウスで条件付け学習をさせ、その後投与を停止し、mGluR1の発現が回復した7週間後、再学習をさせたcKOマウスは、実験初日は、mGluR1が常時発現していないcKOマウスと同程度の反応しか示さなかったが、数日のうちに学習していった。これは、mGluR1の発現が回復したことにより、学習の獲得が新たに行われていることを示していると考えられる。これら2種類の実験結果から、mGluR1は瞬目反射条件付け学習において、1)学習の獲得に必要であること、2)学習の発現には必要ではないことが明らかとなった。2.mGluR1結合タンパク質の機能解析mGluR1にHomer結合を阻害するように点変異(P1147E)を導入したmGluR1 cDNAを小脳プルキンエ細胞特異的に発現するレスキューマウスを解析した。このマウスでは、運動協調能は回復したが、シナプス除去に異常が認められた。1.小脳プルキンエ細胞特異的にmGluR1を発現し、その発現がドキシサイクリン(Dox)の投与によって停止できるマウス(mGluR1 cKO)の解析を行った。mGluR1 cKOに8週齢でDoxを投与した時、mGluR1の発現が無くなった直後にはnullマウスと同程度の運動失調がみられず、その後に生じた変化が運動協調に大きな役割を果たしている可能性が示唆された。一方、mGluR1が発現していたmGluR1 cKOでのプルキンエ細胞に対する登上線維の投射は、Dox投与によるmGluR1発現の停止により変化せず、成体でのmGluR1は、登上線維によるプルキンエ細胞の単一支配の維持には必要ないことが明らかになった。
高ブリシン血症患者に共通の欠失DNA断片がコ-ドする蛋白構造の解析

グリシン開裂炎の構成酵素の1つであるH蛋白をコ-ドするcDNAをヒトcDNAライブラリ-から既に得ている。このcDNAをEcoRIで消化すると,5 ́側800塩基長と3 ́測300塩基長の断片が得られ,これらをそれぞれ24Lと24Sと名づけた。ヒトの本酵素活性の欠失により非ケト-シス型高グリシン血症が起るが,この疾患の患者ゲノムDNA中では,両プロ-ブ(24Lと24S)による5.5kb SacI断片で9例中6例で欠けていた。一方,この断片が欠ける患者ゲノムでは,24Lプロ-ブで5.2kbEcoRI断片の欠失を検出できるが,24Sでは特定の断片の欠失や長さの変化を見出せないことは既に報告してある。しかし,24Sをプロ-ブとしたサザ-ン解析の結果を詳細に調べたところ,1.9kbと1.7kbのEcoRI断片のシグナル強度比は,正常人では約2であったが,本疾患々者では約1であった。この事実は,正常人では異なる2つの1.9kb断片が24Sで検出されるが,患者ゲノムではその中の一方が失なわれていることを示す。ヒトゲノムライブラリ-を24Sと24Lでスクリ-ニングして得られたクロ-ンの中のλHHG102とλHHG9は真のHー蛋白遺伝子をコ-ドしていた。しかし,この断片の制限酵素認識部位の分布から,他のいくつかのクロ-ンの中から,1.9kbEcoRI断片を生じるものは多く見出されたが,λHHG5とλHHG206からの断片のみが24Sとハイブリダイズした。また,この1.9kb断片中のλbaIサイトの分布の違いから,λHHG5が患者で欠失する領域を含むと判断された。λHHG5に含まれるゲノム領域をプロ-ブとしたサザ-ン解析で,正常人と患者ゲノムから異なる長さの断片が検出されたので,患者ではある程度の長さの欠落部位があると推定された。