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八丈島・神津島における青年・女性組織の伝統・抵抗・自覚過程の研究

新島、大島、八丈島、三宅島における若者組・娘組等青年・女性組組の調査研究を実施した。新島では、主として教育委員会、文化財委員会、郷土資料館、長栄寺、十三社神社、旧名主家の各所蔵文書の調査、及び古老による聴きとり調査を実施した。大島では、大島古文書研究会との合同調査、及び教育委員所蔵の故坂口一雄未公開資料の調査研究に従事した。八丈島では第2回目の調査であったが、歴史民俗資料館所蔵文書及び長戸路家所蔵文書の資料蒐集及び古老による聴きとり調査を行なった。三宅島では、主として七島文庫所蔵文書、浅沼和男家文書を中心に資料蒐集及び古老による聴きとり調査を実施した。伊豆島嶼の若者組・娘組の近世における実態、及びその近代における展開過程を、若者集団の伝統・抵抗・自覚過程の各時期での分析を実証的に行なった。若者組・娘組の研究に当たり、第一には、島嶼共同体における民俗学的伝統や諸習俗の関係、第二には、いわゆる流人文化(あるいは中央文化)と伝統的習俗との混流融合の問題、第三には、島嶼における産業組織としての漁ろう組織、あるいは自治組織としての消防組等との展開過程、第四には、信仰・宗教の組織や変遷との関係、第五には、島ごとに相違をみせる家制度・隠居制度と若者の独立形態の特殊性など有機的な調査研究を実施した。I八丈島における近世から近代にかけての青年・女性組織調査。村役場所蔵文書、八丈島歴史民俗資料館、郷土史家葛西重雄、沖山誉嗣、磯崎憲之氏らとの聴き取り調査、『八丈実記』、<南海タイムス>等から、イ.新資料の発掘、ロ.青年・女性組織と学校(私塾、寺子屋を含む)との関連調査を実施した。II新島・式根島における若者組の調査。新島においては、村教育委員会、村文化財古文書点検台帳、郷土館、長栄寺、十三社神社、旧前田吉兵衛所蔵文書、新島漁業組合所蔵文書を中心に、イ.新資料の発掘、ロ.漁業組合・消防組と若者組・青年団との関連調査を実施した。同時に、新島本村、若郷地区において古老を中心とした若者組・娘組の実態に関する聴き取り調査を行ない、併わせて本村・若郷における隠居制度、一人前観に関する調査を実施した。式根島においては、式根支所、前田家文書の調査、郷土史家前田万作氏らと『式根島開島百年史』を中心に、式根島における近代化と寺子屋や学校等教育の果たしてきた役割りについて検討した。III神津島における戦中の青年・女性組織調査。神津島における場合は、村役場所蔵文書、教育委員会所蔵文書、松本一、山下彦一郎所蔵文書、濤響寺文書等の調査等を行ない、島関係では稀有な青年団報<郷土>の実態分析を行ない、古老らの聴き取りによって漁撈組織と若者集団の相互依存展開過程について研究することができた。島嶼にはそれぞれ固有の文化、生産と労働組織、女性の独自の働きをもち、それが若者・女性の一人前の成立に一定の条件をもっている。さらに各島には別箇の職能、罪状による流人の文化との融合関係も村人の生活・文化に多大の影響をもっており、教育上にも看過できない。1研究調査の内容本研究目的達成のため、平成5年度は、新島、大島、八丈島、三宅島における若者組・娘組等青年・女性組組の調査研究を実施した。(1)新島では、主として教育委員会、文化財委員会、郷土資料館、長栄寺、十三社神社、旧名主家の各所蔵文書の調査、及び古老による聴きとり調査を実施した。(2)大島では、大島古文書研究会との合同調査、及び教育委員所蔵の故坂口一雄未公開資料の調査研究に従事した。(3)八丈島では第2回目の調査であったが、歴史民俗資料館所蔵文書及び長尺路家所蔵文書の資料蒐集及び古老による聴きとり調査を行なった。(4)三宅島では、主として七島文庫所蔵文書、浅沼和男家文書を中心に資料蒐集及び古老による聴きとり調査を実施した。研究調査の分析

伊豆島嶼の若者組・娘組の近世における実態、及びその近代における展開過程を、若者集団の伝統・抵抗・自覚過程の各時期での分析を実証的に行なった。若者組・娘組の研究に当たり、第一には、島嶼共同体における民俗学的伝統や諸習俗の関係、第二には、いわゆる流人文化(あるいは中央文化)と伝統的習俗との混流融合の問題、第三には、島嶼における産業組織としての漁撈組織、あるいは自治組織としての消防組等との展開過程、第四には、信仰・宗教の組織や変遷との関係、第五には、島ごとに相違をみせる家制度・隠居制度と若者の独立形態の特殊性など有機的な調査研究を実施した。3まとめ主として八丈島・神津島における近世から近代、戦中期までの若者集団の変遷過程を実証的に分析した。今後、伊豆諸島全体についての総合的研究が課題である。
酸化物ガラスおよびその融体における局所構造とフラジリティの相関

本研究では、実用上重要な種々の酸化物系ニューガラスに対し、その融液から過冷却液体に至る幅広い粘度域での粘性係数の温度依存性を測定し、系や組成とFragilityの関係を明らかにした。一方で、様々な回析および分光学的手段を用いてそれぞれのガラスおよび融液の構造解析を行い、局所構造の組成依存性を検討した。本年度得られた成果は以下の通りである。混合アニオン系として作製したSnX_2-P_2O_5(X=F,Cl)系ガラスでは、SnX_2含量の少ない組成ではEη/TgからみたFragilityは一定であるが、SnX_2含量の多い組成では、SnX_2含量の増加に伴ってFragilityは増加した。このとき、Fragilityが一定であったガラスでは局所構造が類似しているが、SnX_2含量の多い組成ではFragilityが大きいものほど、非架橋酸素の割合が多いピロリン酸グループやP-FやSn-Cl結合が多く存在することが確認された。このことから、イオン結合性の増加がFragilityの増加に寄与していると考えられる。混合アルカリ系として作製したLi_2O-Na_2O-B_2O_3系ガラスでは、△CpからみたFragilityはほぼ一定であるが、Eη/Tgの観点からみるとアルカリを混合することでStrongになっていることが明らかとなった。この系の局所構造はアルカリ混合比によって変化せず、△CpからみたFragilityの傾向と一致した。混合フォーマ-系として作製したNa_2O-SiO_2-B_2O_3系およびAgI-Ag_2MoO_4-Ag_2PO_<3.5>系ガラスではガラスフォーマ-を混合することによって△CpとEη/Tgの両方の観点からみてStrongになることが明らかになった。また、混合アルカリ系とは異なり、フォーマ-を混合することによって局所構造が大きく変化しており、△CpからみたFragilityと局所構造の間には密接な関係があることがわかった。
タイにおける外国人労働者の移動・労働・生活

タイのミャンマーとの国境県の広域調査をふまえて、ミャンマー労働者が集中するターク県を対象に選び、各業種におけるミャンマー労働者の移動、労働、生活状態についての調査を行った。先行調査研究は繊維関係の工場労働者に集中しているので、これ以外の業種として、農業、建設、商業等を選んで、それらの分野の労働者についても調査研究を行った。手法として調査票とフリー・インタビューを併用した。産業構造の点では、ターク県はタイでは有数の繊維産業の集積地であるが、これは、ミャンマーから流入する低賃金労働者を求めて、外国、タイの工場がバンコク周辺からこの国境県に移転したためである。基本的には、賃金支払い制度は出来高払いである。労働条件が相対的に良いのは工業省への登録工場であるが、現地には工業省への未登録の工場・作業所も多く、そこでは労働者の労働条件はより厳しい事例が多いもようである。国境県の農業は、平地水田、山地畑地ともに、ミャンマー人、カレン人が農作業を行い、彼らは農地の中の掘立住宅に住み、タイ人農民は自らは全く農作業はせず、彼らの労働の統制・監視役に徹する。建設労働、商店、等の労働もほぼ同様の状況にあり、タイ人労働者は統制・監督役である。ミャンマー人労働者の法的立場は、入局管理法の上では不法であり、パスポートも持たないが、労働法の上では、タイ政府の特別措置によって半合法的であり、特定年月によって異なる各種の労働許可証を所持する。まず、ミャンマー労働者に焦点をあて、タイ・ミャンマー国境地帯の概況調査を行う。その上で、対象を特定地域に絞り、工場労働者を含む多様な移動労働者の量的、質的な調査を行う。この結果を、過去のタイ湾地域の調査結果と比較しつつ、タイにおける外国人労働者の共通性と国・民族ごとの特性とを明らかにする。本年度の目的は、ミャンマーからタイヘの不法労働者の移住リクルート経路、労働・生活条件等について、従来の東部の調査地だけでなく、国境地帯において明かにし、両者の関係を明らかにすることにあり、そのために、従来の労働現揚の調査に加えて、国境地帯の移住経路、労働・生活の概観的調査を計画した。そして、国境地帯では、メーソート、メーサーイの2地点において計画通りの概観的調査を行うことができた。国境地帯の調査を夏休みに行ったが、調査地に移動する時間と経費を費やし、経費的に旧調査地の再訪調査が不可能となった。このため、春休みは旧調査地再訪に代えて、資料収集調査を行った。国境地帯の調査は成果があり、以下のような諸事実を知ることができた。1)移住・リクルート経路は、東部の労働者と異なり、ミャンマー居住地が近距離のため、自主的な越境も可能で、自国人のコミュニティ形成も活発であること、2)したがって、労働者個人を現場に紹介するリクルーターの役割がそれほど決定的でないこと、3)業種も3K労働だけでなく各種の商売にまで広がること、4)3K的な業種では女性の労働者が多いこと、5)少数民族の政治的亡命者集団も多く、欧米のNGO援助を受けて独自の空間を作っていること、6)2地点を比較すると、前者は、歴史的な流通、交流関係もあって、ミャンマー人が地域社会に融和しているのに対して、後者は、少灘民族ごとの分断的コミュニティが地域社会から隔離している傾向があること、等々。こうした国境地帯での情報により、東部地域でえた外国人労働者の情報をかなり訂正することができた。そこで今後は、1地点に集中して、よりインテンシブな調査を行うことに決めたが、そのためのデータ、人的関係、地域情報はかなり準備された、といえよう。1.夏休み中にターク県メーソートに出向いて、ミャンマー人労働者を対象として、量的な調査票調査および質的なフリーインタビューの2種の聞取調査を実行した。前者は調査相手にラポールのあるミャンマー人移動労働者支援NGOのスタッフの協力をえて、調査票を600名分集めることができた。

この調査票調査では、すでに先行調査研究のある繊維工場の調査は200人分程度に限定し、農業、建設労働などの季節的・日雇的労働者の調査にも重点をおいた。そのため、女工哀史的な工場労働者だけでなく、移動労働者の職種別、民族別の多様性を示す一次資料を集めることができた。また、同NGOの紹介や個人的ネットワークを通じて、特定個人に対して詳細なフリーインタビューを行い、そのデータ記録を20名分ほど集めることができた。その他、調査現場の写真、調査記録等の一次的な生資料を収集することができた。2.なおこの諸民族(エスニック・グループ)、農業労働者等の調査では、メーソート市周辺20-30キロ圏内の米作農村はもちろんだが、100キロ近く離れた山麓開墾地農村を訪問して、民族別の集落的居住地で聞取調査をする必要も生じた。これを通じて、市周辺部の工場、建設現場等で行った通常の調査とは全く異なる生活・労働環境で生活する移住労働者を観察し、諸情報を聞き取ることができた。3.集めた調査票600部については、研究助手の協力をえて、工場労働、農業労働、建設労働、店員等の業種別の単純集計作業を行った。その結果をふまえて、5.の二次史料をも参照しながら、分析を継続し、研究会等でその中間報告を行った。4.フリーインタビュー記録、および、調査現場記録は文章データ化を行った。その整理をふまえて、民族別の分析は、少数民族カレン族の移住・定着状況の分析を行い、成果の一部は近刊書の1章に掲載される予定である。業種別の分析はまだ進行中であるが、今後は、量的な調査票の集計データとの調整と統合とが課題であろう。5.二次データは、ターク県庁統計部・工業部、県商工会議所、メーソート郡庁、外国人労働事務所等に出向いて、担当職員から直接的な情報をえるとともに、関連文書、統計データをもらうことができた。今年度は、まず現地調査は、調査対象をメーソート市、メーソート郡メーパ行政村に絞って、ミャンマー人労働者の受け入れ制度や実態の情報を集めるとともに、地域レベルの農業労働者の聞き取り調査を行った。これら情報やデータをふまえて、以下のような全体的枠組みをも検討した。1)労働者流入の産業構造および労働市場構造は、工業、農業、サービス・建設の部門により異なる。工業部門は、労働集約的業種、繊維、農産物加工、等が国境地帯を集積地とし、農業部門は、耕作放棄回避のため、ミャンマー人労働力に依存し、経営を維持する。都市のサービス・建設部門等も、経営維持のためミャンマー人労働力に依存し、経営を維持する。2)労働者の労働・生活の条件は以下の状況である。工場労働者は、雇用の歴史も古く、相対的に賃金が良く、専門技術習得も必要なので、中卒以上の学歴の若年単身労働者が多く、種々のルートを通じてミャンマー国内への送金を行う。繊維部門は、出来高払い雇用が主で、その労働条件や賃金も、中小規模工場から個人営業的家内作業所まで多種、多様である。農業労働者は、平地の稲作の場合、ビルマ族が家族・親族や村仲間同伴の移動者集団で移動し、農家の居住地に一定期間住み、母国への送金はしない。丘陵地の畑地農場では、賃金は稲作より良く、カレン族等の少数民族が農場にスラム的定住集落を作る。サービス部門労働者は女性の単身者住込み店員が多く、建設部門労働者は男性の単身者住込み労働者が多い。3)労働者の管理については、工場労働者は、大中規模的繊維工場を典型として、一部ミャンマー人現場労働者に中間管理させる。
新規麦芽乳酸菌由来活性物質による腸内細菌叢変化と過敏性腸症候群への臨床応用

本研究では、SB88死菌投与による腸内細菌叢の変化、IBSマウスモデルにおける治療効果を明らかにすることで、IBSに対する新規治療法開発の基盤的成果を得ることを目的とした。結果としてSB88死菌をマウスに投与することで腸内細菌叢を変化させることが明らかとなった、また腸内細菌層が変化したマウスほど抗炎症効果を強く発現することが明らかとなったかIBSモデルマウスへの有効性は残念ながら確認できなかった。H26年度の目標として、1.正常SPFマウス及びIBSモデルマウスにおける腸内細菌叢の変化の解明。2.SB88死菌および菌由来活性物質ポリリン酸投与によるSPFマウスおよびIBSモデルマウスにおける炎症関連サイトカインや腸上皮バリア関連分子の発現を解明。3.新規麦芽乳酸菌SBC8803死菌およびポリリン酸のIBSに対する有効性を動物モデルで検討し腸内細菌叢変化との関連性を解明。以上の研究目標を設定していた。これまでに麦芽乳酸菌死菌をSPFマウスおよびIBSモデルマウスに投与することで腸内細菌叢が変化することが実際に確認された。現在変化した菌種の同定を行っている。またIBSモデルマウスにおいてある種類の炎症サイトカインの抑制効果、一部の腸管上皮バリア関連タンパク質の発現増強も確認された。さらに麦芽乳酸菌死菌は長期投与することでより強い効果があることも証明できた。哺乳類の消化管には約1000種類の細菌が共生し腸内細菌叢を形成している。腸内細菌叢は栄養素の代謝や腸管防御機構の増強,嫌気性代謝,血管新生,腸管リンパ組織の発達など腸管の恒常性維持に必須の役割を果たしている。近年、腸内細菌叢の異常は多くの消化器の炎症性、腫瘍性疾患に関与していることが明らかにされつつある。一方、本邦において機能性消化管傷害(Functional gastrointestinal disorders; FGIDs)の患者が増加し、その予備群を含めると3000万人の有症状者が存在するとされる。今回私は新規麦芽乳酸菌由来活性物質による腸内細菌叢変化と過敏性腸症候群への臨床応用として研究を行ってきた。新規麦芽乳酸菌死菌をSPFマウスに混餌投与することにより腸内細菌叢が変化することが確認された。しかしながら過敏性腸炎モデルマウスでは明らかな有効性は確認できなかった。症状のスコアリングに有意差は認めなかったが、腸管の炎症サイトカイン発言の検討では、TNF-α、IL-1βを抑制することが確認できた。炎症性サイトカインが制御されるメカニズムに関しては、すでに麦芽乳酸菌由来活性成分であるポリリン酸による腸管上皮と免疫担当細胞に対する作用であることがin vitroの検討から確認できた。またポリリン酸の腸管上皮への取り込みに関するメカニズムに関しても解明することができた。新規麦芽乳酸菌の投与のみでは有効性が確認できなかったことの問題点として、有効成分であるポリリン酸が十分に腸管内に到達できていないことが原因と考えられた。そこで今後は有効成分であるポリリン酸そのものを腸溶剤カプセルとして投与することでIBSモデルマウスへの有効性が期待できるものと考えられる。今後も研究を継続していく予定である。H26年度中に腸内細菌叢の変化に影響を与えた菌種の同定を予定していたが次世代シークエンサーの設定に時間を要し若干進捗状況に遅れをきたしている。しかしながら同時進行でH27年度の研究に移行している。腸内細菌叢次世代シークエンサーの設定が完了すれば菌種の同定はできる。次世代シークエンサーそのものは当講座で所有しており今年度中の達成は可能と考える。次年度において次世代シークエンサーを用いた腸内細菌叢解析を行うために発生した物品費として次世代シークエンサーのランニングコストに使用する予定である
アデノウイルスベクターを用いたα-グルコシダーゼ欠損症の遺伝子治療の研究

α-glucosidase(acid maltase : AM)欠損症に対するアデノウイルスベクターを用いた遺伝子治療の効果を動物モデルにおいて検討した。COS-TPC法によりアデノウイルスベクターにCAGプロモーターに支配されるヒトAMcDNA発現単位を構築した(AxCANAM)。動物モデルとしてまずAM欠損(AMD)ウズラを用いた。3週齢の個体の浅胸筋に筋注し、最長84日まで経過を追って解析した。マーカーとして墨を混注した。AxCANAMを個体の浅胸筋に筋注すると、筋注していない筋組織でPAS染色により観察されるglycogenosomeは注射した部位の周辺で消失し、acid phosphatase活性による染色性も低下していた。生化学的にも注射部位のAM活性は増加し、グリコーゲン量は低下していた。これらの効果は注射後14日後までは著明で、28日後まで認められたが、84日後には明らかではなくなった。次に動物モデルとして用いるべく開発されたばかりのAMノックアウト(KO)マウスの解析を行った。ホモ接合子は各臓器でAM酵素活性はほとんどゼロとなり生直後より骨格筋、心筋、脳などにグリコーゲンが蓄積し骨格筋には空胞変性をきたすが、ヒトでの乳児型ほど重症とならなかった。しかし生後7-8月齢になると、それまで動作が遅いという程度の表現型であったのが、明かな筋症状を呈するようになった。すなわち後肢の開脚、走行の不能、脊柱の後弯などが出現した。6週齢のAM-KOマウスの心腔内にAxCANAMを注射し1週間後、前脛骨筋、心筋、肝のAM活性、グリコーゲン含量を測定し、組織切片のPAS染色、acid phosphatase染色を行った。またこれら臓器と血清中のAM蛋白のWestem blot解析を行った。AxCANAMを心腔内注射したAM-KOマウスの各臓器では生理食塩水を注射したマウスの臓器に比べ、AM酵素活性は著明に増加し、グリコーゲンの蓄積は減少した。この効果は心筋で特に著しく、PAS染色、acid phosphatase染色による染色性も著明に低下した。またWestem blot解析では血清、肝、心筋、前脛骨筋にAM蛋白が検出された。心腔内注射したAxCANAMは肝細胞によく導入されたが、筋での導入効率は低かった。しかし肝で発現したAMは主に前駆蛋白として分泌され血液を介し全身に及び、筋細胞などでuptakeされライソゾーム中で活性型AMにプロセスされるといった過程を経て全身に効果を及ぼしたと考えられた。α-glucosidase(acid maltase:AM)欠損症に対するアデノウイルスベクターを用いた遺伝子治療の効果を動物モデルにおいて検討した。動物モデルとしてAM欠損(AMD)ウズラを用いた。

これをAMDウズラの線維芽細胞に感染させ2日後にAM酵素活性を測定した。また3週齢の個体の浅胸筋に筋注し、最長84日まで経過を追って解析した。マーカーとして墨を混注した。またLacZを組み込んだアデノウイルスベクター(AxCALacZ)も同様に正常ウズラに筋注し、経過を追って筋切片をβ-galactosidase活性で染色した。AxCANAMを感染させたAMDウズラ線維芽細胞ではMOIに応じて上昇する著明なAM酵素活性の増加を示した。個体に筋注すると、筋注していない筋組織でPAS染色により観察されるglycogenosomeは注射した部位の周辺で消失し、acid phosphatase活性による染色性も低下していた。生化学的にも注射部位のAM活性は増加し、glycogen量は低下していた。これらの効果は注射後14日後までは著明で、28日後まで認められたが、84日後には明らかではなくなった。AxCALaxZを筋注した正常ウズラの注射部位にはβ-galactosidaseが28日後まで安定して発現していたが、84日後には減少していた。アデノウイルスベクターによって導入されたヒトAM遺伝子はAMDウズラの筋組織で発現し局所的ながらglycogenの著積を著明に改善した。現在有効な治療法のない本症において、将来の新しい治療法の候補として遺伝子治療の可能性を示した。α-glucosidase(acid maltase:AM)欠損症に対するアデノウイルスベクターを用いた遺伝子治療の効果を動物モデルにおいて前年度に引き続き検討した。AM欠損(AMD)ウズラとAMノックアウトマウスを用いた。組み替えアデノウイルスは前年度に作製したAxCANAMを用いた。AxCANAMを筋注したAMDウズラの浅胸筋のWestern blotを行ったところ、プロセスされた活性型AMのバンドを確認した。またヒトAMD患者由来の培養線雑芽細胞にAxCANAMを感染させ抗AM抗体で蛍光染色すると細胞内でlysosomeと考えられる顆粒状の局在を示した。これらよりAxCANAMによって導入され発現したAMは生理的状態と同様にlysosome内に移動し、プロセスされ活性型となると考えられた。開発されたばかりのAMノックアウトマウスの解析をまず行った。AMノックアウトマウスはAM遺伝子のエクソン6をネオマイシン耐性遺伝子で置き換えたもので、ホモ接合子は各臓器でAM酵素活性はほとんどゼロとなり生直後より骨格筋、心筋、脳などにglycogenが蓄積した。また骨格筋には空胞変性をきたした。しかしながらヒトでの乳児型ほど重症とならず、生殖も可能であった。生後7-8月齢になると、それまで動作が遅いという程度の表現型であったのが、明かな筋症状を呈するようになった。すなわち後肢の開脚、走行の不能、脊柱の後弯などが出現した。このAMノックアウトマウスの皮膚より線維芽細胞を培養しAxCANAMを感染させたところmoiに応じて著明なAM活性の上昇を示した。またwestern blotで活性型AMのバンドを確認した。今後このマウスを用いたin vivoでの効果を調べる。
イラワジ川源流部の環境保全に向けた河川質・底生生物分類調査と技術供与

ミャンマーはインドと並んで生物多様性が高い地域であると言われているものの、学術的情報が乏しい。本研究は、今なお政情が不安定なミャンマーの中でも外国人が比較的入所しやすい西部のチン州南部の山岳地域において、水質と底生生物調査を行った。トビケラ目においては過去の文献と合わせると28科68属227種の記録があり、このうちミャンマー初記録は10科15属21種あった。さらに、現地少数民族が占有する2つの集落において環境保全に関する知識および意識調査を行った。この地域は焼畑農業により支えられるが、傾斜は大きいため雨季の土砂流出が多く、一体した管理が必要である。ミャンマー山岳域を対象に、生物多様性が高いと言われながら依然として学術データベースが不足している河川水質や底生生物群集の実態を明らかにするため3回の現地調査を実施した。さらに、地元の自治体長と住民に対し、過度の焼畑農業により急速に失われる森林の保全の意識を向上させるため、現地で環境セミナーを開催した。研究対象地は、未だ民族間の混乱が続くミャンマーの中でも外国人の研究活動を許容するチン州・ミンダット村とカンペレ村の流域であり、過去、イギリス植民地時代においても学術調査は全く行われていない。ミンダット村を流れるChee川とカンペレ村を流れるGaDin川において、トビケラ目・カワゲラ目・カゲロウ目等の採集を行い、ヒゲナガカワトビケラ科に関しては、幼虫レベルで7種生息していることが有力であり、蛹と成虫から4種が判明した。その他の目についても専門家に種の同定を依頼中である。水質に関しては、雨季(9月)と乾季(12月)で、窒素・リン濃度が大きく異なっていた。現地の地質から、窒素やリンの流出は少ないと考えられていたが、流域は急斜面であり、焼畑が盛んに行われていることから、雨季になると大量の栄養塩の流出が生ずることが示唆された。衛星写真から焼畑面積が拡大している様子が確認でき、GISによって面積を計算した。環境セミナーの実施は、5月にパートナーであるミャンマー環境研究所(ヤンゴン)、11月に多くの専門分野を包含するミャンマー工学会(ヤンゴン)、3月に研究対象地のカンペレ村事務所において行い、我が国の環境問題の歴史や河川質と底生生物種調査の意義について説明した。カンペレ村では、地元住民に対して、環境保全の意識、現金収入の手段、および労働環境等についてアンケートを実施し、現地が抱えている問題の分析を行っている。r2012年9月から、現在の調査地区であるチン州南部のミンダット周辺を流れるChee川とカンペレ周辺を流れるGadin川において、水質と底生生物群集を調査した。水質に関しては、雨季(9月)と乾季(11月)で栄養塩濃度に極めて大きな違いが確認された。当地では焼畑農業が生活の基盤となっているため、雨季には土砂とともに高い窒素・リン濃度が記録され、斜面からの供給が考えられる。この現状を衛生画像によっても確認し、GISを用いて傾斜の高さも確認した(Fujino et al.,2013)。底生生物種においてはトビケラ目種を中心に種の確認を進めた。幼虫のみならず、ライトトラップによって夜間に成虫を収集し、種同定を専門家(野崎隆夫博士)の協力のもとで行った。過去のミャンマーで記録された文献を整理した結果、本研究からは10科、15属、21種が同国初記録となった(Hnin et al.,2014)。中でも、ヒゲナガカワトビケラ属(Stenopsyche sp.)では同一採集地点にも関わらず5種が確認された。それぞれ対応する幼虫は異なった形態的特徴を有しており、遺伝子解析(GP法など)により親子関係を検証中である。これより、同属においては幼虫段階で種同定が可能になると期待される。また、現地では住民に対して水質保全に関するセミナーを開いた。同時に、地元住民に対して環境保全に関する意識調査(社会アンケート)を実施し、生活様式や専門知識のレベルを把握した(Senaviratuna et al., 2014)。水環境保全は重要との意識は認めらたが、それ以前に物資を運ぶ移動手段とインフラの整備が強く求められている。ミャンマー・南チン州のChee川とSaw川流域において採集を試み出現種リストを作成した。トビケラ目においては過去の文献と合わせると28科68属227種の記録があり、このうちミャンマー初記録は10科(ナガレトビケラ科、ツメナガナガトビケラ科、ヤマトビケラ科、カワトビケラ科、ヒゲナカカワトビケラ科、クダトビケラ科、シマトビケラ科、ニンギョウトビケラ科、ヒゲナガトビケラ科、フトヒゲトビケラ科)15属21種あった。特にヒゲナガカワトビケラ科とシマトビケラ科の種数が多い。

また、過去の文献で記録されている中で、この地域で確認されなかった科も多数存在する。カワゲラ目は東南アジアでは元々記録が大変少なく、形態的特徴から全て未記載種であり、少なくとも4種類のカワゲラ科(Perlidae)の生息が確認された。これらの親子関係の検証をゲノムプロファイリング(GP)法により行っている。これまでの現地調査から、山地内の勾配の高い礫状河川において河床の平坦化と水質の富栄養化が懸念される。2つの調査した河川のうち1つはダムの建設が進められており、そこでは環境アセスメントは行われておらず、長期のモニタリングが必要である。その他、H25年度に発表した焼畑による土砂流出や現地住民の環境保全に関する意識調査などは現地の行政官や国立公園長等に周知され、持続的なモニタリングと彼らで実施可能な保全活動プランの必要性が確認された。26年度が最終年度であるため、記入しない。環境保全学26年度が最終年度であるため、記入しない。当初、大規模ダム開発計画が持ち上がり環境アセスメントが実施された北部カチン州の河川を対象としたが、治安が良くならないため西部チン州に変更した。しかし、チン州の底生生物に関する学術調査は例がないため貴重な情報が得られただけでなく、人口増と水不足が懸念される地元住民に対してセミナーを通じて森林環境保全の重要性を伝えられたことは大きな意義があり、得られた情報は急変する地元社会の維持に役立っている。底生生物種においては遺伝子解析を行うことで幼虫段階から優占種を判別できるようになる。地元で複数回環境セミナーを開き、社会調査も実施できたことから、環境保全に向けて具体的な政策提言が行える段階にきている。技術供与においては次の段階で実践したい。引き続き調査を重ねて得られたデータベースを論文等の形で公表するだけでなく、現地語に翻訳した生物種のガイドブックを作成して地元の環境教育にも生かす。焼畑の現状分析を元に水質の維持管理についての議論を継続する。管轄する森林保護庁やヤンゴンの大学等に情報を発信し、調査研究の協力体制を強化する。焼畑による河川水質の変化の影響について、衛生画像の解析と継続的な水サンプリング(地元住民に依頼済み)により因果関係を明らかにしていく。底生生物種の確認においては、トビケラ目以外にカワゲラ目・カゲロウ目にも着目する。このたびの調査研究は、この間に知り合った研究協力者の手によってミャンマーの他の地域にも展開されつつある。多様な少数民族が生活する山岳地域全体に対して現状の理解と問題の解決に向けた議論が深まるであろう。
経皮的ラジオ波およびマイクロ波肝細胞癌凝固療法の増感剤の開発

油性造影剤であるリピオドール(iodized oil)は肝動脈から注入すると肝細胞癌に集積する性質を持っている。このリピオドールと増感剤としての鉄製剤および界面活性剤からwater in oilのエマルジョンを作成した。混合する鉄製剤としてフェジン(一般名:含糖酸化鉄)、ブルタール(一般名:コンドロイチン硫酸・鉄コロイド)、フェリデックス(一般名:フェルモキシデス)の3鉄製剤を使用しin vitroの凝固実験を行った。各鉄製剤を含んだ3種類のエマルジョンと卵白の混合液および卵白のみに対し、ラジオ波凝固用ニードルを用いて蛋白質の凝固実験を行い、フェジン含有時が最も凝固量が多いことがわかった。続いてin vivo実験として、20kgの豚を用いて肝実質に対する凝固の増強効果および至適投与量を調べる実験を行った。in vitroの実験結果をふまえて増感剤としてのエマルジョンはフェジンを用いて作成した。全身麻酔下で血管造影の手技を用いて左右中肝動脈にカテーテルを入れ分けて、薬剤非注入群(正常肝)、リピオドールのみ注入群、エマルジョン注入群を作成し、開腹直視下にラジオ波凝固用ニードルを用いて肝臓に対し凝固実験を行った。薬剤非注入群、リピオドール注入群、エマルジョン注入群のそれぞれの凝固範囲を測定し、さらに病理学的検討を行った。凝固範囲はエマルジョン注入群が最も広く、リピオドール注入群と薬剤非注入群では差は見られなかった。また、病理学的にはエマルジョン注入群が最も凝固壊死が強いことが確認された。これまでの実験により鉄を含むエマルジョンの注入により、肝凝固の増強が得られることがわかった。今後は肝腫瘍の実験モデルの作成と肝腫瘍に対する凝固の増感効果の検討が必要である。
消化器癌の転移・再発の予測および抑制に関する基礎的臨床的研究

癌細胞の基底膜浸潤能の定量的測定方法としてのinvasion-MTT assayは、撥水処理を導入することにより信頼し得る測定方法として確立された。同法によって求められた基底膜浸潤能(PI値)とともに、基低膜に対する接着能,分解能(Type IV collagenase活性)および細胞の増殖能,遊走能について、ヒト消化器癌を対象に解析した。肝転移25例では非転移26例に比べてPI値が有意に高値を示し、癌細胞のPI値と肝転移との関連が明らかであった。また、PI値は接着能,分解能,増殖能および遊走能との有意の相関を認めず、これらの因子の総合的な結果であることが示唆された。しかし、肝転移例におけるType IV collagenase活性は非転移例に比べ有意に高値を示し、肝転移のメカニズムの重要な一因であることが示唆された。さらに、in-vivoのヌードマウス脾内移植モデル8腫瘍の肝転移発現率とPI値の間に有意の相関を認めた。以上より、PI値による肝転移予知とともに、Type IV collagenase活性の制御による肝転移予防の可能性が示唆された。臨床研究として、教室の切除消化器癌906例(胃癌447例,大腸癌417例,膵癌42例)を対象とした臨床病理学的検索と、対象症例から得られたヌードマウス移植腫瘍30株(胃癌7例,大腸癌14例,膵癌9例)に対してinvasion-MTT assayを行い、肝転移の予知について比較検討を行った。臨床病理学的因子では静脈侵襲,リンパ管侵襲,リンパ節転移が肝転移に有意な関連因子であったが、肝再発に対するSpecificityはそれぞれ90%以上と高値を示したのに対し、Sensitivityは20%以下と低値を示した。それに対し、肝再発例におけるPI値上昇(cut off値:0.8%)のSpecificityは90%、Sensitivityは70%とともに高値を示した。以上より、invasion-MTT assayによって得られたPI値は、肝転移予知に関して従来の臨床病理学的因子より有用であることが示唆された。基礎的研究のinvasionーMTT assayはほぼ確立され、ヌ-ドマウス移植腫瘍による検討では、in vitro浸潤能は悪性度判定における独立した因子であることが推定された。注目すべき結果として、臨床での肝転移と浸潤能との関連性が示唆されるデ-タが得られており、現在さらに追求中である。臨床的研究のProspective Studyは症例集積が進行中である。またRetrospective Studyとして、胃癌・大腸癌・膵癌の各種パラメ-タ-と予後あるいは再発形式の検討を行っている。現在までの結果は以下の通りである。胃癌においては、切除例766例での解析を試みている。胃癌再発で最も頻度の高い腹膜播種再発と関連性のある漿膜面浸潤度ではS0:278例、S1:51例、S2:269例、S3:121例でその5年生存率は、S0:72%、S1:58%、S2:28%、S3:7%とS2以上の症例ではとくに予後不良であった。したがって、再発の予測あるいはリスク因子の判定のため治癒切除がなされたS2症例での無再発例と再発例とにおける術後5年以上経過症例を用いての比較検討を行っている。

膵癌では切除膵癌症例における各因子の比較検討で、腫瘍径(2cm以下)、リンパ節転移(-)、十二指腸浸潤(-)、手術切離縁の組織学的癌浸潤(-)の各因子が長期生存のためには必要であった。また高い悪性度を有する膵癌細胞の特性をinvasionーMTT assayおよび免疫組織化学染色やDNAのploidy patternなどで解析中である。大腸癌の337例中同時性肝転移症例は46例(13.6%)であり、治癒切除258例の異時性肝転移症例は19例(7.4%)であった。肝転移例と非肝転移例との臨床病理学比較的検討から、リンパ管侵襲・静脈侵襲・リンパ節転移の有無に有意の差がみられ肝再発の予知に有用と考えられた。IN vitro癌浸潤能評価法として確立したInvasion-MTTassayの検討より、以下の研究結果が得られた。切除腫瘍およびヌードマウス移植腫瘍の32腫瘍(胃癌7,大腫癌16,膵癌9)を対象とした検討では、肝転移例と非転移例の本法による浸潤能(PI値)に有意の差異が認められた。さらに、切除消化器癌1080例(胃敗614例,大腸癌440例,膵癌9例)の臨床病理学的所見において、肝転移の有無で有意差がみられた因子は静脈・リンパ管侵襲であったが、両因子のsensitivityとspecificityに比べて、PI値のそれは明らかに高値を示した。これらの結果より、臨床での肝転移と浸潤能との関連および肝転移予知の可能性が示唆された。臨床的研究として消化器癌における各種予後因子と転移・再発との関連について検討を行い、以下の研究結果が得られた。145例の食道癌症例を対象としたDNA ploidyによる腫瘍悪性能の検討では、77例(53%)にHeterogeneityが認められた。Heterogeneityを有する症例では、HeterogeneityのないDiploidyおよびAneuploidy症例に比べてリンパ節転移率が有意に高値を示し、5年生存率においては有意に低値を示した。さらに、大腸癌症例を対象とした同様の検討でも、DNA ploidyにおけるHeterogeneityは、重要な予後因子であることが明らかにされた。遺伝子解析に関していは、臨床材料(胃癌,大腸癌,膵癌)から抽出したm-RNAを用いて、数種の癌遺伝子(K-ras,erbB2,MKなど)についてNorthern blottingにより解析中である。癌細胞の基底膜浸潤能の定量的測定方法としてのinvasion-MTT assayは、撥水処理を導入することにより信頼し得る測定方法として確立された。同法によって求められた基底膜浸潤能(PI値)とともに、基底膜に対する接着能,分解能(Type IV collagenase活性)および細胞の増殖能,遊走能について、ヒト消化器癌を対象に解析した。肝転移25例では非転移26例に比べPI値が有意に高値を示し、癌細胞のPI値と肝転移との関連が明らかであった。また、PI値は接着能,分解能,増殖能および遊走能との有意の相関を認めず、これらの因子の総合的な結果であることが示唆された。しかし、肝転移例におけるType IV collagenase活性は非転移例に比べ有意に高値を示し、肝転移のメカニズムの重要な一因であることが示唆された。さらに、in-vivoのヌードマウス脾内移植モデル8腫瘍の肝転移発現率とPI値の間に有意の相関を認めた。
哲学の古典的素型とその変容-ヘレニズム的なるものへの新視座を求めて

本研究を通じて、研究代表者の内山は、次のような基本的な見方を明らかにした。われわれの通念的な了解によれば、ギリシア哲学はソクラテスの決定的影響のもとに、プラトンおよびアリストテレスによって大成されたのであり、彼ら以降のヘレニズムの哲学は古典的完成からの拡散と矮小化の過程と位置づけられる。しかし、プラトンやアリストテレスの没後、ギリシア世界でも、彼らの哲学は必ずしも中心的ではなかった。むしろヘレニズム時代はふたたび初期以来の「本来の」ギリシア哲学に立ち返っている。プラトンの場合、本格的な復興は、後3世紀半ばのプロティノスに始まる新プラトン主義の活動をまたなければならなかった。また、プラトン『国家』が彼の代表作と見なされ、そこに論じられた哲学と国家論が真剣に受け止められるようになったのは、19世紀になってからである。したがっていわゆる古典とは、確固たる規範として維持存続されてきたものではなく、毀誉褒貶にさらされつつ歴史を生き抜き、いくつかの時代の岐路において新たに発見され、それぞれの時代状況に拮抗しうる力を示現してきたものである。それが古典と呼ばれる所以は、むしろその多面性、重層性にある。研究分担者の中畑は、以上の一般的視点を、いくつかの観点から実証的に裏づけた。たとえば「志向性」という概念はブレンターノがアリストテレスの魂論から読み取ったものである。しかしブレンターノの読解は、知覚対象(aistheton)についてアリストテレスとは異なるブレンターノ独自の視点がはたらいていた。また心的言語というオッカムの興味深いアイデアは、アリストテレスの『命題論』の言語論についての注目すべき解釈にもとづいたものである。本年度は、主として内山と中畑がそれぞれの分担課題の研究を独自に進め、内山が初期ギリシア哲学及び医学思想を中心に哲学の素型の明確化に努めるとともに、中畑がそうした素型的思考の変容のプロセスをいくつかの概念に即して解明した。具体的には、内山は木原志乃とともに、ガレノスの『ヒッポクラテスとプラトンの学説』の邦訳と註解を完成し京大出版会から刊行した。これは古代医学史ばかりでなく、初期思想からヘレニズム哲学に至るまでの思想史を理解するためにもきわめて重要な文献であり、今後の研究の重要な基礎資料となるであろう。また論文「愛知の言語」において、初期ギリシア思想家からプラトンにいたるまでの著作を、その表現形式に注目しながらたどることを試みた。中畑は古代ギリシアに発するいくつかの基礎概念について研究を進めてきたが、なかでもイメージとイマジネイションの関係について、一見自明とも思われるその関係が、実際には古代から中世初期に至るまでいくつかの哲学的思考を経て歴史的に構築されたものであることを解明し、とりわけアウグスティヌスの果たした重要な役割を明らかにした。また「心的言語」という中世哲学において顕在化する観念について、それがアリストテレス哲学の独特の解釈にも由来することを示しながら、オッカムにおけるある変容とそれがもつ哲学的な意味の可能性を考察した。さらに両者は、相互の研究の結節点となるアリストテレスについて、基礎概念の内容の解明および適切な邦語訳の可能性をめぐって数度の打ち合わせをおこない、いくつかの基本的な問題を確認した。本年度は研究年度の最後にあたるため、内山と中畑がそれぞれの役割分担の遂行に努めるとともに、内山がそのとりまとめにあたった。内山は、第一に初期ギリシア哲学のうちに「哲学の古典的素型」の一つの形を見出すことにつとめ、そのためによい手がかりとなるカークらの共著『ソクラテス以前の哲学者たち』の翻訳を共同で公刊した。また、これまでの研究をさらに補足する形で、プラトンの作品の対話というスタイルが哲学の古典的素型としてもつ意味を、後期の対話篇を射程に入れてに見届けた。中畑は、主としてアリストテレス哲学における「素型と変容」の問題を追及した。

具体的には現代哲学のタームである「志向性」をめぐって、その概念の導入者と言えるブレンターノとブレンターノ自身がその概念の素型を見出したアリストテレスの議論を照らし合わせ、ブレンターノは正確にはアリストテレスから何を継承し何を継承できなかったのかを、「感覚されうるもの」を意味するアリストテレスのギリシア語aisthetonのブレンターノの訳し方を手がかりに査定した。その結果アリストテレスにおいては「感覚知覚対象」それ自身が因果的かつ認知構成的な力を持つのに対して、ブレンターノにおいてはそのような因果的力が捨象されているという根本的な相違を明らかにした。内山は以上の成果を踏まえて、プラトンの作品の受容史をたどることを通じて、古典とは固定的な「素型」を構成するものではなく、むしろそれぞれの時代と場所において異なった相貌を現わし、各時代の状況を大きく揺り動かす力を示してきたものであり、新たな思想の創出を促す触発性においてその地位をたえず更新しつづけていく存在であることを確認した。
嫌気性グラニュール汚泥の分解能力とその微生物学的構造との関係の解明

本研究はグラニュール汚泥の微生物生態学的構造とその分解能力に及ぼす基質種類の影響を把握することを目的として、有効容積2.8LのUASBリアクターを5基用意し、それぞれギ酸(C1)、酢酸(C2)、プロピオン酸(C3)、酪酸(C4)および混合有機酸(CODベースでC2:C3:C4=2:1:1)の人工基質を用いて37°Cで約6カ月間UASBリアクターを運転した。安定状態に達したグラニュール汚泥について解析した結果、次のへ結論が得られた。(1)ギ酸及び酢酸を基質とした場合のグラニュールは小さく、沈降性も若干劣っている。これに対して反応系が比較的複雑なプロピオン酸、酪酸及び混合VFAを基質とした場合、形成されたグラニュールは大きくて、しかも沈降特性も優れている。(2)ギ酸グラニュールはギ酸を利用するSMAが高かったが、それ以外のVFAを利用できなかった。また、酢酸グラニュールは高い酢酸分解能とわずかのギ酸分解能(SMA)を示したが、C3以上のVFAを分解できなかった。その他の3種類のグラニュールはいずれも酢酸に対するSMAが高かっただけでなく、比較的多様な分解能力を有している。(3)ギ酸及び酢酸グラニュールの細菌構成は単純で、Methanobacterium formicicumおよびMethanothrixがそれぞれ優勢となっている。プロピオン酸の分解には共生コロニーが大きな役割を果たしている。C2-C4のVFAを分解するグラニュールにおいて糸状のMethanothrixがグラニュールの形成に大きな役割を果たしている。
信用リスクのモデリングとその統計的実証研究

コピュラは1次元周辺分布関数を多変量分布関数と結びつける役割を果たす関数である.このコピュラを用いた多変量モデルは確率変数間の様々な依存関係をモデル化する道具として有用であり,近年保険理論やファイナンスでのリスク管理において用いられている.このコピュラ・モデルは研究実施計画で述べた変換モデルの一種であり,セミパラメトリック・モデルの1つのクラスである.本年度の研究では,前年度の研究を継続し,コピュラ関数に関する統計的推測の問題を考察する一方で,そのファイナンスへの応用を模索した.コピュラの族としてパラメトリックなものを特定し,周辺分布は任意としたセミパラメトリックモデルにおいて,有限次元パラメータを推定する方法として2つの方法を検討した.まず,前年度に得られた経験コピュラの確率1での漸近表現を改良し,その系として汎関数の分布収束定理を示した.そして,それらに基づき,順位近似M-推定量の一致性,漸近線形性,漸近正規性について必要最小限の正則条件を求め,その下での厳密な証明を与えた.2番目の方法として考えたのは最小距離推定である.この方法は頑健性をもつことで知られており,実際に我々のモデルにおいてもそれが証明された.具体的には,最小距離汎関数の微分可能性が通常の正則条件の下で成立つこと,真のコピュラが仮定されたパラメータ族に近いときには最小距離推定量がその被推定値に局所一様収束すること,そして局所一様漸近正規性を示すことができた.コピュラのファイナンスや保険理論への応用は多岐に渡っている.我々の研究課題と最も関連の深いものではいくつかの関連企業の倒産時刻間の従属性をコピュラを用いて捉えるというアプローチであるが,これについて最新の研究をサーベイし,研究会で報告を行った.コピュラは1次元周辺分布関数を多変量分布関数と結びつける役割を果たす関数である.このコピュラを用いた多変量モデルは確率変数間の様々な依存関係をモデル化する道具として有用であり,近年保険理論やファイナンスでのリスク管理において用いられている.このコピュラ・モデルは研究実施計画で述べた変換モデルの一種であり,セミパラメトリック・モデルの1つのクラスである.本年度の研究では,このコピュラに関する統計的推測の問題を考えた.その基本は母集団コピュラのノンパラメトリックな推定量である経験コピュラとその漸近的性質であり、特に確率1での漸近表現を証明し,またその系として分布収束の結果を得た.その応用として,独立性を検定するための経験copulaに基づくいくつかの検定統計量を考え,仮説の下で検定統計量の極限分布はあるGaussian確率場の汎関数として表され,その裾確率の近似方法を議論した.また,よく知られた2つの順位相関係数などをコピュラの見地から検討し,それらの統計量をPearson型とKendall型に分けてやや一般化したものについて,漸近正規性を示した.さらに,パラメトリックなコピュラを特定し周辺分布は任意としたセミパラメトリックモデルにおいて,有限次元パラメータを推定する方法として,順位近似M-推定を考え,その漸近的性質を調べた.コピュラは1次元周辺分布関数を多変量分布関数と結びつける役割を果たす関数である.このコピュラを用いた多変量モデルは確率変数間の様々な依存関係をモデル化する道具として有用であり,近年保険理論やファイナンスでのリスク管理において用いられている.このコピュラ・モデルは研究実施計画で述べた変換モデルの一種であり,セミパラメトリック・モデルの1つのクラスである.本年度の研究では,前年度の研究を継続し,コピュラ関数に関する統計的推測の問題を考察する一方で,そのファイナンスへの応用を模索した.コピュラの族としてパラメトリックなものを特定し,周辺分布は任意としたセミパラメトリックモデルにおいて,有限次元パラメータを推定する方法として2つの方法を検討した.まず,前年度に得られた経験コピュラの確率1での漸近表現を改良し,その系として汎関数の分布収束定理を示した.そして,それらに基づき,順位近似M-推定量の一致性,漸近線形性,漸近正規性について必要最小限の正則条件を求め,その下での厳密な証明を与えた.2番目の方法として考えたのは最小距離推定である.この方法は頑健性をもつことで知られており,実際に我々のモデルにおいてもそれが証明された.具体的には,最小距離汎関数の微分可能性が通常の正則条件の下で成立つこと,真のコピュラが仮定されたパラメータ族に近いときには最小距離推定量がその被推定値に局所一様収束すること,そして局所一様漸近正規性を示すことができた.コピュラのファイナンスや保険理論への応用は多岐に渡っている.我々の研究課題と最も関連の深いものではいくつかの関連企業の倒産時刻間の従属性をコピュラを用いて捉えるというアプローチであるが,これについて最新の研究をサーベイし,研究会で報告を行った.
神経線維腫症第2型に関連した第22番染色体転座切断点の解析と疾患遺伝子の単離

1.先天性の相互転座t(4;22)(q12;12.2)を伴う神経線維腫症第2型(NF2)の1症例を発見し、NF2遺伝子が座位する第22番染色体上の転座切断点の単離を目指してきた。第22番の切断点を含む約1Mb内の各種DNAマーカーを多数分離し解析中であったが、1993年初頭、米・仏の2グループによりNF2候補遺伝子が相次いでクローニングされた。以後、報告されたNF2遺伝子のエキソン塩基配列から各種プローブを作製し、サザン解析により、本転座切断点が第14と第15エキソン間にあることを確認した。このことは、転座染色体der(4)の切断点近傍の塩基配列を決定することによりさらに確認し、報告された候補遺伝子が、確かにNF2遺伝子であることを立証することができた。本症例の父親も同じ転座保因者(DNAレベルでの切断点も娘のそれと同じ)であるが、NF2の発症はないので、現在、NF2遺伝子の転写とメチル化の有無を解析中である。患者に発生した腫瘍DNAも解析予定であり、父親の転座切断点と共にこれらはNF2遺伝子の突然変異を起点とした腫瘍発生機構を解明するための有望な試料と考えている。2.NF2をはじめ他のいくつかの神経系腫瘍関連の遺伝子が座位する第22番染色体DNAの構造解析に資するため、第22番特異的なプラスミドクローンを多数分離・調整し、蛍光in situハイブリダイゼーションにより、これまで103種のクローンを染色体上に高精度マッピングした。うち6クローンでは22番以外の短腕、長腕領域にも蛍光シグナルが観察され、ヘテロクロマチン以外にも塩基配列の相同性がゲノム上に広汎に存在することを知ることができた。
環境汚染物質添加土壌での微生物集団応答様式の研究

汚染土壌での汚染物質微生物分解の実体と本生態系での微生物の適応様式の解明をめざし、環境汚染物質を人為的に添加した閉鎖系土壌をモデル系として、(a)土壌のメタゲノムの生物情報学解析と、(b)実際に分解能を示す各種分解酵素遺伝子群の取得・解析を経時的かつ同時平行的に実施した。この結果、汚染化に伴う棲息細菌集団と各種分解酵素遺伝子群等の変動様式を明らかにし、汚染物質分解に関与したと示唆された遺伝子群とその由来細菌属を提示した。有害化学物質で汚染された土壌において、当該土壌での棲息細菌集団と各種分解酵素遺伝子群等の汚染化による経時的な変動様式を総合的に解析し、土壌細菌集団の人工的環境汚染物質添加に対する適応様式を解明することを目的とし、本研究では、3種の多環芳香族化合物(フェナントレン、ビフェニル、カルバゾール)を添加した人工的汚染化閉鎖系土壌をモデル系として、(i)メタゲノムの生物情報学的解析と、(ii)実際に分解能を示す各種の細菌株と分解酵素遺伝子群の取得・解析、を同時平行的に実施している。汚染土壌と非汚染土壌のメタゲノムの塩基配列解析で、汚染土壌では、汚染後1週目から急激な菌叢変動が認められ、検討した24週目までグラム陰性のBurkholderia属細菌が優占菌群となったが、24週目には汚染前菌叢構成への回帰傾向が認められた。また、汚染物質分解が盛んな6週目にはグラム陽性のMycobacterium属細菌の割合が上昇していた特徴を見出した。この6週目において、多環芳香族化合物初発分解酵素遺伝子の相対的存在量が最も高く、その多くはMycobacterium属由来遺伝子と生物情報学的には想定された。ただ、初発分解以降の更なる分解に関わる酵素群の遺伝子はプロテオバクテリア由来と推定され、汚染物質の完全分解への異なる細菌門による協調分解が示唆された。また、汚染土壌から、実際に多環芳香族化合物初発分解能を持つ酵素遺伝子を複数取得した。一方、汚染土壌からBurkholderia属細菌を50株以上単離し、その分解能の検討から、多くの菌株においては汚染に用いた3種化合物の全部又は一部を少なくとも部分分解する能力を備えていた。メタゲノムの塩基配列解析で、汚染土壌の微生物遺伝子プール内の各代謝パスウェイ帰属遺伝子存在量の経時的変動様式において、汚染化で大きく変動する代謝パスウェイ帰属遺伝子群並びに変動しない代謝パスウェイ帰属遺伝子群が見出され、土壌微生物集団は遺伝情報ポテンシャルを減少させることなく迅速に汚染環境に適応していたと示唆された。3種添加汚染物質を各々完全分解できる細菌株やその分解酵素遺伝子群一部除去誘導体株に、メタゲノムDNAライブラリーを導入し、導入株に各汚染物質の完全分解能の賦与や回復に関わるメタゲノム由来分解酵素遺伝子を担うDNA断片を多数取得したが、少なくとも一部取得遺伝子に関してその新規性が強く示唆された。また、汚染土壌から添加汚染物質を完全或いは部分的に分解可能な菌株を昨年度多数単離したが、そのうちの幾株かのゲノムのドラフト配列を決定した。さらには、本研究で一貫して使用している土壌をガンマ線滅菌後に、かつて汚染化土壌から回収していた微生物集団の接種と上記汚染物質の添加を実施し、その後の当該土壌微生物叢の経時的変動を検討するとともに複数時点での土壌メタゲノムを調製した。有害化学物質で汚染された土壌において、当該土壌での棲息細菌集団と各種分解酵素遺伝子群等の汚染化による経時的な変動様式を総合的に解析し、土壌細菌集団の人工的環境汚染物質添加に対する適応様式を解明することを目的とし、本研究では、3種の多環芳香族化合物(フェナントレン、ビフェニル、カルバゾール)を添加した人工的汚染化閉鎖系土壌をモデル系として、(1)メタゲノムの生物情報学的解析と、(2)実際に分解能を示す各種の細菌株と分解酵素遺伝子群の取得・解析、を同時平行的に実施した。汚染後3週経過以降にカルバゾールの微生物分解が認められたが、その既知初発分解酵素遺伝子と相同性を示す遺伝子は経時的調製メタゲノム試料で検出できず、汚染化土壌での本化合物初発分解には未知微生物酵素が関与したと強く示唆された。