hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
行動に関連した神経ネットワーク；音脈分擬の基盤をなす音節間の時間間隔を脳に見る

即ち、非条件音のテンポをより条件音のそれと識別しやすくして(より早いテンポにして)実験を行ったところ、1週間程の追加訓練で徐々に両音を識別するようになった。このような延長訓練を1から2週間にわたり行なった訓練動物に対して、その脳活動を膜電位感受性色素を用いて計測し始めた。予備的な結果だが、ともに一見するとテンポの遅い条件音に反応し、テンポの早い非条件音に反応しない行動様式を示す2週間訓練個体と4週間訓練個体の間に脳活動の差が見られた。その差は繰り返し音への脳活動の追随性の違いとして検知されるように思われるが、より多くの個体数で確認する必要がある。現在、訓練とイメージングを押し進めて、結果の再現性を検証しつつある。なおこの予備実験の結果は米国耳鼻咽喉学会にて口頭発表を行なった。以上予想外の行動結果に直面したが、既に改善方法等を見いだしたためおおむね順調に研究はすすんでいると考える。目的:一定の間隔を持つ異なる連続音を識別するようにモルモットを訓練し、条件付けした時間間隔と他の対照間隔を示す音に対する聴覚皮質の活動の違いを見出すことを研究目的とした。連続提示する個々の音セグメントは周波数構成において全て同一である事が、セグメント間の無音時間(ISI)が刺激音により異なるため、異なるISI刺激音を識別するには時間情報に依存することになる。この時間情報の脳内表現がどのようになっているかを見出す。平成28年度は研究計画の申請最終年に該当する。行動実験:約100ms長の自然音セグメントを条件音では約1100msのISIとし、他の刺激音ではその10あるいは20%とした(速いtempoの音)。また全体の音の長さをほぼ同じ長さ(約10秒)になるように再生音セグメント数を設定。2週間訓練個体では10%、20%短ISI音をほとんど識別できなかったが、3ー4週間の訓練で条件間ISIと短ISI試験音を識別できるようになった。3週間訓練より4週間訓練群のほうが10%、20%短間隔音の識別成績は良かった。イメージング実験:対照非訓練動物では、10%-ISI音に対し一次聴覚皮質は最初の数セグメントのみに応答したが、20%-ISIや100%(条件音)-ISI音には全てのセグメントに応答した。2週間訓練動物では、20%-ISI音に対して最初の数セグメントを除き応答は減衰した。100%-ISIでは全てのセグメントに応答した。3、4週間訓練動物では、10%, 20%-ISI音に対して最初の数セグメントに加え、その後のセグメントにも応答を示し、また100%-ISI音で全てのセグメントに応答した。これらの結果は、ISIの異なる音の識別訓練により、識別すべき短ISIの遅いセグメント部分にまで応答が延長されるようになったことを示唆。音は提示される時間間隔(I)により異なる印象を与え、音響学的にはIの長さにより個々の音がまとまった音脈として認識されたり、または離散する印象を与える(音脈分凝)。このIが聴覚皮質(AC)内で1)どのように表現されているかを動物を用いて調べ、更には2)動物がIを識別できるかを行動学的に明確にし、3)学習効果により、AC活動がどのように変わるかを光イメージング法で解明する。1)約100ms長のノイズ様音節を約230msの間隔で繰り返すと、個々の音に対するAC応答性は1100ms間隔と比べ著しく低下した。
メンブレントラフィックから見た歯周病の早産誘発機構の分子基盤研究

歯周病は早産・低体重出生児の危険因子であると考えられており、動物実験により歯周病菌Porphyromonas gingivalisの血行性感染が原因の1つと考えられている。しかしながら、その発症機序は不明であった。我々はP. gingivalisに侵入されたトロホブラスト細胞では細胞周期G1アレストやDNA傷害が誘発されることを報告した。本研究では、本菌が細胞侵入後、細胞傷害性を発揮するシグナル経路を探索した結果、本菌のジンジパインが細胞周期G1アレストやアポトーシスを誘導することが示唆された。歯周病は早産(低体重出生)の危険因子であると考えられており、Porphyromonas gingivalisどの歯周病菌の口腔から子宮への血行性感染が原因とされている。しかし、子宮感染から早産へと至る発症機序は、推論すら曖昧なのが現状である。我々はこれまで歯科研究領域では馴染みの無かった不死化トロホブラスト細胞を用い、細胞内P.gingivalisの捕捉・分解を司るメンブレントラフィック機構と、それを制御する細胞分子群に焦点を当て、細胞自然免疫という斬新な観点から、歯周病による早産(低体重出生)誘発の細胞分子基盤と病因論の研究を展開した。本年度、我々はP.gingivalis胎盤栄養膜細胞(トロホブラスト細胞)に侵入することを見出した。面白いことに、P.gingivalisの細胞侵入により、トロホブラスト細胞は歯肉上皮細胞などとは全く異なる独特の細胞応答を示し、細胞周期G1アレストを始め、深刻な細胞障害に陥った。さらにP.gingivalisの細胞侵入によりDNA傷害が誘発された。これに伴い、ATR-Chk2経路の活性化とp53 ser15のリン酸化が認められた。また、MDM2の分解に伴い、p53が蓄積した。活性化されたp53はサイクリン依存性カイネースインヒビターp21を誘導し、細胞周期G1アレストを誘発した。さらにp53によりFasが活性化され、アポトーシスが誘導された。同時にプロテアーゼの刺激によりRas-Ets1-ERK1/2経路も同時に活性化することにより、サイクリン依存性カイネースインヒビターp16を誘導し、細胞周期G1アレストおよびアポトーシスを誘導されることが明らかになった。昨年度、我々は、P. gingivalisに侵入されたトロホブラスト細胞では細胞周期G1アレストやDNA傷害が誘発されることを見出した。またATR-Chk2-p53-Fas経路やRas-Ets1-ERK1/2経路も活性化されることを見出し、P. gingivalis感染によるトロホブラスト細胞への影響の一端を明らかとした。本年度は、P. gingivalis線毛遺伝子型の代表菌株、線毛遺伝子入替え株、ジンジパイン欠損株、線毛遺伝子欠損株および線毛保有ジンジパイン欠損株を用い、胎盤栄養膜細胞(トロホブラスト細胞)のアポトーシス誘導機序について検討を加えた。P. gingivalisの侵入によってATR-Chk2経路とRas-ERK1/2-Ets1経路の活性化がみられた。この活性化にはジンジパインの関与は認められなかった。一方、プロテアーゼ欠損株の侵入ではp53の蓄積は見られなかった。これら知見より、細胞侵入を果たしたP. gingivalisはジンジパインによりMDM2を特異的に分解し、トロホブラスト細胞の細胞周期G1アレストならびにアポトーシスを誘導することが示唆された。一方、線毛保有ジンジパイン欠損株の細胞侵入はp53の蓄積を誘導しないが、p21の活性化を促進した。これらの知見から、ジンジパインはp53依存性にp21を活性化することによりアポトーシスを誘導する一方、線毛はp53非依存性にp21を活性化し、ネクローシスを誘導する可能性が示された。
ベーパーミスト誘電体による電力機器絶縁に関する基礎的研究

ベーパーミスト誘電体は、適切なバッファーガス中に誘電液体をミスト状にして加えたもので、少量の液体を用いて飛躍的に高い絶縁耐力を得る可能性が示された。本研究CーGIS等の電力機器絶縁にベーパーミスト誘電体を用いて、それを小形化、高性能化するための可能性を見出すことを目的としている。昭和62年度はベーパーミスト誘電体の絶縁破壊特性を測定した。ミスト発生のために用いた誘電液体はC_8F_<18>、(C_4F_9)_3N、C_8F_<16>Oである。結果は、(1)いずれの誘電液体に対してもベーパーミスト絶縁の効果が明瞭に存在することを明らかにした。(2)ギャップ長4mm付近では3種の液体とも大気圧空気の約2倍の絶縁耐力を示す。(3)ミスト停止後の破壊電圧の時間依存性を測定の結果、60分後の破壊電圧は空気中の約1.8倍を維持しており、ミスト発生器のデューティーを著しく軽減しうる可能性がある。(4)粒径分布はC_8F_<18>ミストとC_8F_<16>Oミストでは0.52.0μmの粒径よりは0.30.5μmのものが多く、(C_4F_9)_3Nミストでは1.02.0μmのものが多い。(5)超音波ミストによらなくても破壊電圧が上ることが示され、超音波ミストとくらべミスト粒径分布が異ること、破壊電圧が上昇が異ることが示された。昭和63年度は前年度に確認されたベーパーミスト誘電体による絶縁耐力の上昇のメカニズムを放電基礎過程の観点から明らかにすることを目的とした。このために、平行平板ギャップ中の電子なだれの発達の統計分布を設備備品として購入したパルス波高分布分析装置によって観測した。その結果バッファーガスにベーパーを加えることにより大きな電子なだれの発生が抑制されること、即わち等価的な電離係数が低下すること、更にミストを発生すると大きななだれの発生が一層抑制されるらしいことが見出され、ベーパーミストの添加の効果は少なくとも実効的な電離係数の低下によるものであることが見出された。ベーパーミスト誘電体は,適切なバッファーガス中の誘電液体をミスト状にして加えたもので,小量の液体を用いて飛躍的に高い絶縁耐力を得る可能性が示された.本研究はCーGIS等の電力機器絶縁にベーパーミスト誘電体を用いて,それを小形化,高性能化するための可能性を見出すことを目的としている.昭和62年度は,直径5cmの標準球ギャップに対する絶縁破壊特性を測定しうるような放電チエンバー(ステンレス制容告積80l)を製作するとともに,これに直径5cmの球ギャップ(ギャップ長1cm迄可変)及びミスト発生器(三菱EVー800超音波方式;コンビヘルスAJ型吸入器方式;ノズル噴射器)ならびにパーティクルカウンター(リオンKCー01B,設備備品として購入)をとりつけた.測定はバッファーガスとして室内空気を用い,誘電液体としてC_8F_<18>,(C_4F_9)_3N, C_8F_<16>

Oを用いて行なった.結果は, (1)いずれの誘電液体に対してもベーパーミスト誘電体の効果が明瞭に存在することを明らかにした.(2)ギャップ長が4mm付近では3種のミストとも空気の約2倍の絶縁耐力を示す.(3)ミスト停止後の破壊電圧の時間依存性を測定の結果, 60分後の破壊電圧は空気中の約1.8倍を維持しており,ミスト発生器のデューティーを著しく軽減しうる可能性がある,(4)粒径分布はC_8F_<18>ミストとC_8F_<16>Oミストでは0.52.0μmの粒径よりは0.30.5μmのものが多く, (C_4F_9)_3Nミストでは1.02.0μmのものが多い.(5)超音波ミストによらなくても破壊電圧が上ることが示され,超音波ミストとくらべミスト粒径分布が異ること,破慧電圧の上昇も異ることが示された.未年度の課題は, SF_6などの高絶縁耐力のバッファーガスに対してどのような効果を示すかを明らかにすること,及びミストによる破壊電圧上昇のメカニズムを明らかにするとである.ベーパーミスト誘電体は、適切なバッファーガス中に誘電液体をミスト状に加えたもので、少量の液体を用いて飛躍的に高い絶縁耐力を得る可能性が示された。本研究はC-GIS等の電力機器絶縁にベーパーミスト誘電体を用いて、それを小形化、高性能化するための可能性を見出すことを目的としている。昭和63年度は、前年度に確認されたベーパーミスト絶縁による絶縁耐力の上昇のメカニズムを放電基礎過程の観点から明らかにすることを目的とした。放電チェンバー中に直径8cmの平行平板電極を設置し、この間を走行する電子なだれの増倍についてその統計分布を観測する。方法としては陰極側に放電ギャップに直列に電子なだれによる電荷蓄積用コンデンサーを挿入し、適切な時定数を設定するために並列に漏洩抵抗を接続し、コンデンサー両端の出力電圧(電子なだれの増倍に比例)をパルス波高分布分析器(キャンベラ35MCA、購入備品)により観測した。対象としたガスおよびミストは空気、窒素、空気+FC84ベーパー、空気+FC77ベーパー、空気+FC77ベーパー+ミストである。その結果、バッファーガス(空気、N_2)にベーパーを加えることにより大きな電子なだれの発生が抑制されること、およびこれにミストを加えることにより、更にその抑制が強く行なわれるらしいことを明らかにした。またバッファーガス中及びベーパーを加えた場合について定常タウンゼント法により電流成長を観測したが、ベーパーを加えることによって実効電離係数が低下することを確認した。これらの結果からバッファーガスにベーパーを加えることによる破壊電圧の上昇は少なくともベーパーの添加による実効電離係数の低下が寄与していること、ミストを加えるとこの効果を更に助長するらしいことが示された。また第二の成果としてはFC77及びFC84の両フロリナート液体についてベーパーミスト効果を詳細に調べその効果を確認したことが挙げられる。
ARB一過性投与による高血圧・腎障害の持続抑制効果とレニン・プロレニン系の関連

高血圧自然発症ラット(SHR)の高血圧発症時期にアンジオテンシン拮抗薬(ARB)を一過性に投与すると、休薬後も高血圧・腎障害の発症が抑制され、レニン・アルドステロン共に低値であった.そこで今回はSHRの高血圧発症後である1618週齢の間ACE阻害薬・ARBを一過性投与('一過性パルス療法')した後休薬した.血圧はパルス療法終了3ヶ月後でも無処置群と比較して約30-40mmHg低値を保った。組織学的に2週間のARBパルス療法直後では腎細動脈の肥厚が著明に退縮し,ほぼWKと同様であった.腎臓のマイクロアレイ解析とreal-time RT-PCRではARBパルス投与により細動脈におけるMMP-13活性の誘導・MMP-9活性の低下を認め、蛍光免疫染色でも同様な成績が確認された。これらの変化が腎細動脈肥厚の退縮をもたらし、microvascular remodelingに直接関与することで、投与中止後の血圧低下が持続し,血圧の退行(regression)をもたらす可能性が示された。本研究では、高血圧・高血圧性腎障害の発症を永続的に予防しうる可能性として、アンジオテンシン拮抗薬一過性投与による高血圧・腎障害の持続抑制効果について、検討を重ねている。高血圧関連モデル動物(SHRSP/Izm)の高血圧発症時の限定期間(critical period)にARBを一過性に投与すると、休薬後も血圧の上昇が抑制され、尿蛋白上昇の抑制、組織学的変化の抑制がみられた。これらのラットにおいて、ARB投与中止後2ヶ月の段階での検討でレニン・アルドステロン共に低値を示していた。すなわち、高血圧発症時期に一致する"criticalperiod"にARBを一過性に投与するとreno-vascular amplifierが抑制され、レニン・アンジオテンシン・アルドステロン系のリセッティングが生じ、後の高血圧や腎障害の発症を抑制できる可能性が考えられた。しかし、この現象がみられる"criticalperiod"がどの時点であるか、未だ明らかにされていない。これは機序を解明する点からも非常に重要な点であり、次にARB一過性投与が、既に確立された高血圧に与える影響について検討した。高血圧自然発症ラット(SHR/Izm)を用い、高血圧発症後の16週齢の段階でのACE阻害薬・ARBの一過性投与(`一過性パルス療法')により高血圧の退行(regression)が見られるのか評価した。雄SHR/Izmを用い、エナラプリル(30mg/kg/day)またはカンデサルタン(50mg/kg/day)を、16週齢から18週齢まで2週間投与した後休薬した。無処置のSHRでは血圧は3週齢以降次第に増加し、10-12週齢ではほぼプラトー値(220mmHg)に達していた。一方、パルス療法終了時の休薬状態での血圧はいずれも150-170mmHg前後であり、終了後も血圧低値が続き、パルス終了3ヶ月の時点での血圧は、エナラプリル,カンデサルタン投与群共に170-180mmHgといずれも有意(p<0.01)に血圧の改善が続いていた。これより、今まで考えられていた"criticalperiod"を過ぎた16週齢(生後4ヶ月)のSHRへのACE阻害薬・ARBの一過性投与(`一過性パルス療法')は高血圧の退行(regression)を一部もたらす可能性が示唆された。すなわち、既に高血圧発症が確立した場合でも"ACE阻害薬・ARB一過性パルス療法"により血圧の上昇を一部rescue(治癒)できる可能性が示唆された。本研究では、高血圧・高血圧性腎障害の発症予防として、アンジオテンシン拮抗薬(ARB)一過性投与による高血圧・腎障害の持続抑制効果を検討している。高血圧自然発症ラット(SHR)の高血圧発症時期である310週齢の間ARBを一過性に投与すると、休薬後も血圧の上昇が抑制され、尿蛋白・組織学的変化の抑制がみられた。これらのラットではARB投与中止2ケ月後の検討でレニン・アルドステロン共に低値であり、高血圧発症時期("critical period")のARB一過性投与は、レニン・アンジオテンシン・アルドステロン系のリセッティングを生じる可能性が考えられた。次にARB一過性投与が高血圧の退行をもたらすか評価した。SHRの高血圧発症後である1618週齢の間ACE阻害薬(エナラプリル30 mg/kg/day)

・ARB (カンテサルタン50 mg/kg/day)を一過性投与('一過性パルス療法')した後休薬した。血圧はパルス療法終了3ケ月後でも無処置群と比較して約30-40mmHg低値(p<0.01)を保った。組織学的には、正常血圧ラットWKYに比して無処置のSHRで腎細動脈が著しく肥厚していたが、2週間のARBパルス療法直後では肥厚が著明に退縮し、ほぼWKYと同様であった。カルシウム措抗薬パルス投与ではこの変化は見られなかった。腎臓のマイクロアレイ解析、real-timeRT-PCRでは、ARBパルス療法群で細胞外マトリックス成分や細胞外マトリックス分解系の遺伝子の変動を認めた。これらより、今まで考えられていたcritical period"を過ぎた16週齢のSHRへのACE阻害薬・ARBの一過性投与('一過性パルス療法')は高血圧の退行(regression)をもたらす可能性が示唆され、その機序としてmicrovascular remodelingの関与が考えられた。本研究では、高血圧・高血圧性腎障害の発症予防として、アンジオテンシン拮抗薬(ARB)一過性投与による高血圧・腎障害の持続抑制効果を検討している。高血圧自然発症ラット(SHR)の高血圧発症時期である310週齢の間ARBを一過性に投与すると、休薬後も血圧の上昇が抑制され、レニン・アルドステロン共に低値であった.高血圧発症時期("critical period")のARB一過性投与は、レニン・アンジオテンシン・アルドステロン系のリセッティングを生じる可能性が考えられた。次にSHRの高血圧発症後である1618週齢の間ACE阻害薬(エナラプリル30mg/kg/day)・ARB(カンデサルタン50mg/kg/day)を一過性投与('一過性パルス療法')した後休薬した.血圧はパルス療法終了3ヶ月後でも無処置群と比較して約30-40mmHg低値を保った。組織学的には,正常血圧ラットWKYに比して無処置のSHRで腎細動脈が著しく肥厚していたが, 2週間のARBパルス療法直後では肥厚が著明に退縮し,ほぼWKYと同様であった.カルシウム拮抗薬パルス投与ではこの変化は見られなかった.大動脈並びに腸間膜・心臓・脳細動脈では群間に有意な変化を認めなかった。腎臓のマイクロアレイ解析とreal-timeRT-PCRでは複数の細胞外マトリックス関連遺伝子の変動を認め,腎細動脈のhighly sensitve in situ zymographyではARBパルス投与により細動脈におけるMMP集13活性の誘導・MMP-9活性の低下を認め、蛍光免疫染色でも同様な成績が確認された。これらの変化が腎細動脈肥厚の退縮をもたらし、mcrovascular remodelingに直接関与することで、投与中止後の血圧低下が持続し,血圧の退行(regression)をもたらす可能性が示された。
東アジアにおける高齢者のセイフティネットワーク構築に向けての社会人類学的研究

東アジア各国にも日本の老人クラブに似た組織がある。しかし、高齢者の多くは、そうした組織にあまり依存せず、主体的に人生を享受している。一方日本の老人クラブの活動には、概して受け身的な傾向が認められる。高齢者が多様化する現在、トップダウン型の組織化は不適切である。高齢者を高齢者として枠づけない考え方が重要である。本調査研究は、高齢者に自由な場を提供することこそが組織の持続化につながることを提言する。本計画のうち、本年度は、初年度の研究計画に沿い、東アジア諸国の高齢者問題についてその問題群の把握と整理のために文献、官公庁資料などを収集し、諸国における高齢化の対応を把握するとともに、社会人類学的な視点における問題の位置づけを検討した。また高齢化問題とその関連諸研究について、シンガポール大学、中山大学(広州)、中央民族学院(北京)、中央民族学研究所(台北)、東亜大学校(韓国)等の研究者と情報交換した。予備的な聞き取り調査から明らかになったことは、祭事の主役としての老人(沖縄)、子・孫世代と結びつく高齢者(韓国、シンガポール)、社会に埋め込まれた老人クラブ(広州)の諸例が示すように、東アジア諸国において、高齢者たちが直面する諸問題が社会的に十分認識されておらず、制度・政策面での立ち遅れといった点がある反面、それが必ずしも高齢者の組織化の弱体化に繋がるわけではないという点であり、今後のアクティブエイジングを考える上で示唆的であった。代表者、分担者、研究協力者による研究会を1回実施し、調査計画の調整ならびに理論化の方向性に関する検討を行った。研究代表者、分担者、協力者による国内外での調査活動は以下の通りである。伊藤:シンガポール(10月31日-11月6日、3月8-19日)、中国広東省(1月10-16日)、渡邊:台湾(7月22-31日)、鄭:韓国:(9月13-18日、10月31日-11月5日)、高桑:沖縄(7月22-31日)何:中国北京・上海(9月9-21日、11月12-16日)、協力者としては劉:日本(12月24日-1月9日)、横田:台湾(3日3-23日)。また、これ以外に新たに2名の研究協力者を追加し、それぞれ台湾、シンガポールで補足調査を実施した。本年度は、(1)高齢者の組織化において先導的な役割をする諸団体の活動、(2)高齢者の介護者に対する考え方に焦点を当て調査を実施した。その結果、東アジアの国々における高齢者は、宗教団体、寺院、教会など宗教施設を基盤として組織化が進められていること、高齢者介護に関しては、家族主義的イデオロギーにより家族による介護が強調される反面、現実には外国人介護労働者に依存する割合が高いことが明らかになった。以上の指摘は、伊藤ほか連携研究者の調査に基づいている。伊藤は、シンガポールの高齢者支援団体の活動について観察・インタビューを通じて、キリスト教団体の役割を明らかにした。渡邊は台湾の台北市における日本人経営のデイケアセンターの設立と活動内容について聞き取り調査を行った。また、台湾人の老後生活に関する調査により、家族主義的道徳に基づく家庭内ケアーは近年減少し、政府の年金制度に依存する傾向が強くなっていることを指摘した。鄭は、毎週数千人規模の高齢者が参集するソウル市内の公園で観察と聞き取り調査を行い、大規模な参集が韓国の高齢者たちが経験しつつある文化・社会的な孤立や経済的困難を軽減する役割を担っている点を明らかにした。何は、北京市における新型の養老施設の登場に焦点を当て、市民の反応、入居者の意見などについて調査を実施した。綾部は、チェンマイ大学及び高齢者開発福祉財団の協力により、チェンマイ県などタイ北部県の高齢者にインタビューを実施した。また、翌年度繰越金では、H20年度の国際人類学会中止で果たせなかった中国側研究者との意見交換のために、清華大学社会学部老齢学研究センターにおいて高齢者問題共同ワークショップを開催した。中国では高齢化の度合いは未だ低いがすでに取り組みが行われていることがわかった。東フジア諸国、とくに香港、台湾、シンガポールでは、高齢者の生活がインドネシア、フィリピンなど海外からの家事・介護女性労働者に多くを依存していることが特徴である。その実態を把握すべく、伊藤はシンガポールおよび香港においてインドネシア人家事・介護労働者、外国人労働者支援団体とコンタクトをとり、聞き取り調査をおこなった。その結果、家事介護労働者と高齢者の関係構築においては、国によって外国人労働者受け入れ条件が大きく異なること、外国人労働者側の要望として休暇日の取得がもっとも多いにも関わらず、その要望を満たしているのは、香港のみであることが判明した。またインドネシアでの調査により、ジャワ、スマトラを中心に女子労働者のリクルートが組織化されており、インドネシアの外資獲得においても家事介護労働者による海外送金への依存度が急速に高まっていることが判明した。連携研究者のおもな研究概要は次の通りである。渡邊は、台湾高雄市・屏東県において都市部の高齢者生活についての補充調査をおこなった。

高桑は、沖縄県石垣市の北部地区と竹富町鳩間の調査データの分析、さらに南日本ならびに南西諸島の高齢者組織に関する文献研究を実施するなかで沖縄社会の独自性を確認し、報告書執筆に向けて研究のもとめを行った。鄭は、ソウル市中心部に位置する宗廟市民公園に参集する4000人もの高齢男性たちの存在について、旧態依然とした男女区分と急速な高齢化が生み出したものとして分析し、報告した。何は、北京や上海を中心として、老人生活への社会的対応のあり方を系統的に跡づけ、その資料整理をおこなった。綾部は、タイ・チェンマイ地域で有識者、相対的富裕層から高齢者問題に関する聞き取りを行ったほか、チェンマイ市内諸機関における資料収集、バンコク市内諸機関における資料収集にも従事した。
幼児・児童期の他者理解：社会的文脈での感情会話・コミュニケーションに着目して

本研究は、幼児・児童期の他者理解について、社会的文脈での感情会話・コミュニケーションに着目し検討した。具体的には(1)幼児間の仲間遊びでの感情語言及や、葛藤状況を中心とした調整的やりとりについて検討した。(2)小学校児童が、葛藤を伴う、あるいは葛藤経験についての話し合い場面において、どのように調整的なやりとりを行っていくか検討した。(3)家族の夕食時の感情会話について、葛藤経験を再解釈する上での3世代を含めた家族(母や祖母)の媒介によるサポートに着目し、検討した。総じて、こうした園・学校・家庭での感情会話・コミュニケーションが幼児・児童期の他者理解に果たす役割の重要性が示唆された。本研究の主目的は、『幼児・児童期の他者理解』について社会的文脈での感情に関する会話・コミュニケーションに着目し、発達的な検討を行うことである。今年度は、感情会話に関わる内外の資料収集及び、家庭・園・学校場面での感情会話に着目し、以下の点について検討を行った。1.家族間の感情会話の検討:幼児・児童を含む母子間の感情会話に関わる分析内容を学会論文(「母子4者間の夕食時の会話におけるネガティブ感情経験の調整的な対処や解釈に関するやりとりの縦断的検討」、日本家政学会誌、2014)として発信した。さらに、3世代の家族間の感情会話に焦点をあて、会話を行うメンバーの違いによって生じる感情会話の多様性について報告した(日本心理学会大会、2014)。今後は新たなデータもふまえ、そうしたやりとりの質的な面にも着目し分析を行っていく必要性が示された。2.幼児の感情会話の検討:幼稚園において、横断的・縦断的観察及び、観察データの整理を行った。またそれらのデータをふまえ、自他感情言及がなされる仲間遊びの文脈や、そうした文脈での「感情語」への言及について報告を行い(日本保育学会大会、2014;日本発達心理学会大会、2015;千葉大学教育学部紀要、2015)、いずれも、4歳期以降に特徴的な変化がみられてくる可能性を指摘した。今後、同時期の質的な変化に焦点をあてた検討の必要性が示された。3.児童の感情会話の検討:学校での観察について調整を行うとともに、低・高学年学級での葛藤状況における児童の感情表明に関わる分析内容について、日本教育心理学会総会(2014)及び、日本発達心理学会大会(自主シンポジウム、2015)において研究発表を行った。今後は、そこでの意見交換を通じて得られた新たな研究の視点もふまえ、学級での葛藤を含む多様な児童間のやりとりをさらに詳細に検討していくことが重要な課題として挙げられた。本研究の主目的は、『幼児・児童期の他者理解』について社会的文脈での感情会話・コミュニケーションに着目し、発達的な検討を行うことである。今年度は特に以下の点について検討を行った。1.幼児の感情会話の検討:幼稚園での横断的・縦断的観察を続行するとともに、幼児のポジティブ・ネガティブ感情言及を伴うやりとりの様相をより深く捉えるために、本年度はエピソードの質的な検討に焦点をあて、分析及び学会報告を行った。3歳児間の仲間遊びにおけるポジティブ感情言及を伴うやりとりの検討では、ポジティブ感情言及が仲間遊びの発展に重要な役割を果たしている可能性が窺えた(日本保育学会大会、2015)。また、一人の子どもの葛藤状況に対する4歳女児間のやりとりの検討では、女児たちがふりと現実の世界を行き来する中で、多様な感情言及を伴いながら、仲間のネガティブ感情の調整にかかわる洗練されたやりとりを行っている様相が窺えた(日本教育心理学会総会、2015)。今後は、これらの結果もふまえながら、新たなデータの検討を進めていく予定である。2.児童の感情会話の検討:前年度に続き、葛藤を伴う話し合い場面での児童の意見表明やそれを含むやりとりに着目した。今年度は、低学年(1,2年)や高学年(5年)学級の複数回の予備観察をふまえ、5年生の1学級を新たな対象とし本観察を行った。これらのデータを学級担任とも共有し、話し合いに関わる状況設定や、これまでの背景等について細かい聞き取りも行った。現在、これまでのデータを統合しながら分析を行っており、まもなくその一部を報告できる段階となっている。3.家族間の感情会話の検討:本年度は3世代家族における感情会話について焦点をあて、特に、家族間の会話における葛藤(けんか)緩和やポジティブなやりとりに関わる祖父母の発言の役割等に着目し、理論的な整理も進めながら、データの予備分析を行った。今年度は、昨年度に引き続き、園や学校で観察を施行し、新たなデータ収集を行った。現段階までに得られた観察データについては、プロトコル化を完了させ、理論的な検討も行いながらそれぞれの基礎分析を進めることができた。特に幼児の感情会話の検討についてはその成果の一部を、2015年5月、8月の学会発表(日本保育学会第68回大会、日本教育心理学会第57回総会)等を通じて発信することができた。そこでの討議や意見交換を通じて今後の分析のための手がかりとなる有益な助言等を得ることができ、それらをふまえた新たな分析が進んできている状況である。また、学校や家庭でのデータについても理論的な枠組みの整理や予備分析が進んできており、研究成果の一部をまもなく報告できる段階となっている。学校(学級)のデータの予備分析においては、やりとりの背景についての教師等への聞き取りなどもふまえて、今後の分析に関わる視点を整理することができた。

また、そうしたやりとりに影響を及ぼすであろう学級での友人関係(特に性別に基づくグループ)について回顧法による予備研究にも着手した(千葉大学教育学部紀要、2016)。さらに、新たなデータ収集についても小学校、家庭とも調整が進んでいる。小学校については、これまでの小学校に加え、現時点で新たな近隣の小学校から観察の快諾が得られており、今後の観察内容について打ち合わせを行っている状況である。また、園については現在継続している観察を同園にて今後も行う予定である。こうしたことから、当初の研究目的に沿った研究の進行は概ね順調になされているといえる。本研究の主目的は、『幼児・児童期の他者理解』について社会的文脈での感情に関する会話・コミュニケーションに着目し、発達的な検討を行うことである。最終年度の本年は、今後の発展を視野に入れ、以下の検討を行った。1.幼稚園児を対象とした検討:幼稚園での観察を継続するとともに、幼稚園期における仲間遊びでの感情語の発達に関する縦断的検討の総括を行い、その一部は国際心理学会(ICP,2016)にて発表・討議を行った。また、仲間遊びにみられるポジティブな感情言及が関係調整においてどのように機能しているかについて検討を進めた。本年度は35歳女児間における「かわいい」への言及に着目した分析内容について、学会発表を行った(保育学会大会,2016;発達心理学会大会,2016,2017)。また、感情会話が自己発達や、遊びの中での葛藤調整にどのような役割を果たしているかについて、シンポジウムで発表、討議を行った(発達心理学会大会,2016,2017)。2.学校児童を対象とした検討:小学校6年学級の「特別活動」授業の継続的な観察を行い、プロトコル化も含めた基礎データの構築を進めた。また、昨年度までに収集されたデータをふまえ、低・高学年児童の「特別活動」時の葛藤を含んだ話し合いにおけるネガティブ感情を含む意見表明のあり方について検討した。日本教育心理学会総会(2016)では、このうち、5年生学級での葛藤状況に関わる話し合いでの、自他の感情的側面をふまえた対処への言及等に焦点をあて報告した。3.家族を対象とした検討:基礎データの整備及び、これまでの3世代を含む家族間の感情会話の多様性についての検討結果をふまえ、その質的な検討に着手した。本年度は、特に、祖母の感情調整に関わる経験知が媒介する母子の感情会話の分析について焦点をあてた検討を行い、その一部は日本家族心理学会大会(2016)で発表し、討議を行った。本研究は、幼児・児童期の他者理解について、社会的文脈での感情会話・コミュニケーションに着目し検討した。具体的には(1)幼児間の仲間遊びでの感情語言及や、葛藤状況を中心とした調整的やりとりについて検討した。(2)小学校児童が、葛藤を伴う、あるいは葛藤経験についての話し合い場面において、どのように調整的なやりとりを行っていくか検討した。(3)家族の夕食時の感情会話について、葛藤経験を再解釈する上での3世代を含めた家族(母や祖母)の媒介によるサポートに着目し、検討した。総じて、こうした園・学校・家庭での感情会話・コミュニケーションが幼児・児童期の他者理解に果たす役割の重要性が示唆された。
肝臓におけるコレステロールハンドリングと小胞体ストレス

肝臓内コレステロール含量を増加させる経路は3経路存在するが、どの経路で肝臓内コレステロールを増加させても、ERストレスは惹起されないことが判明した。さらに、どの経路を活性化させても血糖値低下をもたらすが、その機序は同一ではないことも判明した。また、薬剤によりERストレスを惹起あるいは軽減しても肝臓中性脂肪蓄積を認めており、肝臓におけるERストレスと糖・脂質代謝との関係は、複雑であることが示唆された。I.アポE欠損マウスにおけるNPC1L1発現によるERストレス・肝細胞内コレステロール(Chol)分布の変化の検討:アポE欠損マウスにNPC1L1を発現させたところ、野生型マウスの場合とは異なり、VLDL-Cholは増加したがHDL分画の増加は認めなかった。野生型マウスではNPC1L1発現による肝臓Chol量・血清GPT値・肝組織像に影響はなかったが、アポE欠損マウスでは肝臓のChol量・血清GPT値の増加、組織像での好中球浸潤の増加をNPC1L1発現により認めた。しかしNPC1L1発現による小胞体ストレスマーカー(Grp78発現量やeIF2のリン酸化など)の変化は認めなかった。II.LDL受容体およびHMG CoA還元酵素の肝臓発現によるERストレスの変化: LDL受容体を野生型マウスに発現させたところ、LDL受容体群では、総Chol値の低下、LDL分画とHDL分画のCholの低下、およびVLDL分画のCholの増加を認めた。肝臓内Chol量はLDL受容体群にて増加していたが、小胞体ストレスマーカー(Grp78の発現量、XBP1のスプライシングなど)には影響はなかった。HMG CoA還元酵素遺伝子のアデノウイルスを作成したが、タンパク発現を認めていないため、現在遺伝子配列の確認、発現確認のための抗体の検討などを行っている。III.NPC1L1、LDL受容体過剰発現による糖代謝への影響:野生型マウスにNPC1L1を過剰発現させた群ではコントロール群と比較して、糖新生の抑制による空腹時血糖の有意な低下(60 mg/dL vs 110 mg/dL)を認めた。LDL受容体を野生型マウスに過剰発現させた場合も、コントロール群と比較して、空腹時血糖の有意な低下(90 mg/dL vs 110 mg/dL)を認めた。[平成25年度]1Lanosterol合成酵素(LSS)発現による肝臓内コレステロール(Chol)・小胞体(ER)ストレスに与える効果の検討:LSSを通常食マウス、高脂肪食マウスに過剰発現させたところ、いずれにおいても肝臓内Chol量・中性脂肪(TG)量は増加したが、ERストレスマーカーには変化を認めなかった。NPC1L1発現の場合(平成23年度報告)とは異なり、細胞内CholはHeavy Membraneへ分布した。2血糖値への効果に関する検討:NPC1L1・LDL受容体発現による血糖値改善(平成24年度報告)と同様にLSS発現でも血糖値の改善を認めた。その機序を解析したところ、NPC1L1発現ではFOXO1低下による糖新生抑制、LDL受容体およびLSS発現ではIRS1/IRS2の蛋白量増加およびAktリン酸化増強によるインスリン抵抗性改善、によるものであった。3薬剤誘発性ERストレスの肝臓内脂質・糖代謝への影響:通常食マウス、食事誘導肥満マウスにtunicamycin (Tm)およびthapsigargin(Tg)を投与した。Tmでは血糖値は変わりなかったが、Tgでは血糖値の著明な上昇を認めた。脂質に関しては、Tm, Tgともに血液中のChol値はLDL/HDLともに低下し、TmではTG値も低下した。また、肝臓内脂質含量はTmではTG、Cholともに増加した。一方、高脂肪食マウスにERストレス軽減剤であるTMAOを投与しても、血糖値の改善は認めず、肝臓脂質含量に関してはTmと同様にTGが蓄積した。[研究総括]肝臓内コレステロール含量を増加させる経路は3経路存在するが、どの経路で肝臓内コレステロールを増加させても小胞体ストレスは惹起されない可能性が示唆された。さらに、どの経路の活性化にても血糖値低下が生じるが、その機序は同一ではないことも判明した。また、薬剤により小胞体ストレスを惹起しても軽減しても肝臓中性脂肪は蓄積することより、肝臓における小胞体ストレスは、単純に良い、悪い、ということはできないことが示唆された。I.HepG2細胞へのステロール負荷による、ERストレス惹起の検討:コレステロール、シトステロール、カンペステロールをそれぞれ160μMの濃度で、サイクロデキストリンを担体として、単層培養HepG2細胞、スフェロイド培養HepG2細胞に投与し、この方法にて、各ステロールが細胞内に取り込まれることをHPLC法を用いて確認した。これら細胞にて、ステロール負荷によるERストレスを、eIFのリン酸化とGRP78の発現量を指標に検討したところ、単層培養HepG2細胞ではコレステロール負荷群のみにERストレスが惹起されたが、スフェロイド培養では、各群間に相違は認めなかった。

II.HMG CoA還元酵素およびLDL受容体cDNAのクローニングとアデノウイルス作成:ヒトLDL受容体をコードするアデノウイルスの作成を終了し、in vitro・in vivoともに発現することをウエスタンブロット法にて確認した。HMG CoA還元酵素はcDNAクローニングが終了し、ウイルス作成がほぼ終了したところである。これらウイルスを用いて、平成24年度以降の検討を行う予定である。III.NPC1L1発現によるマウス肝臓におけるコレステロールの細胞内分布、およびERストレスの評価:NPC1L1をマウス肝臓に発現させ、蔗糖密度勾配法を用いて肝臓のミトコンドリア、Light Membrane(エンドソームなど)、Heavy Membrane(小胞体など)を分離して、それぞれのコレステロール含有量を測定したところ、NPC1L1を発現させた群では、ミトコンドリア、Light Membraneでのコレステロール含有量が増加していたが、Heavy Membraneでは増加を認めなかった。また、I.と同様にERストレスについて検討したが、eIFのリン酸化、GRP78の発現共に両群間で明らかな相違は認めなかった。HMG CoA還元酵素のアデノウイルスは未完成であるが、そのほかの研究は当初予定していた検討、および平成24年度以降のI、IIIはほぼ終了している。さらには、LDL受容体、NPC1L1の過剰発現により糖代謝が改善するという新しい発見をすることができた。平成23年度は、HMG CoA還元酵素をコードするアデノウイルスの完成が未達成である以外は当初予定していた検討(「研究実績の概要」のI項およびIII項参照)はほぼ終了しており、おおむね順調に進展していると考える。HMG CoA還元酵素アデノウイルスは、蛋白での発現を確認する段階に入っている。今後の研究は、当初の研究計画書にしたがって進めていく。具体的には、コレステロール新生酵素の肝臓での過剰発現による肝臓での脂質・小胞体ストレス変化、糖代謝変化を検討するとともに、NPC1L1/LDL受容体発現による糖代謝の修飾の詳細な機序を検討する。また、小胞体ストレス誘導物質による肝臓での小胞体ストレス・脂質代謝・糖代謝への効果、肝臓でのERストレス亢進マウスの肝組織を用いたタンパク解析も考慮する。次年度に使用する予定の研究費が生じた状況:平成25年度には通常の研究費に加え、動物に小胞体ストレスを生じさせるための研究費やマススペクトロメトリーの経費に相当額が必要と考えられ、研究費の基金化を利用して、次年度にできる限り温存した。今後の研究は、当初の研究計画書に従ってすすめていくとともに、作成したウイルスおよび既に使用しているウイルス発現によるマウスでの糖代謝に及ぼす効果を検討することも考慮中である。次年度に使用する予定の研究費が生じた状況:平成24年度および平成25年度には平成23年度と比較して、通常の研究(ウイルス作成や各種抗体、生化学的検討やRT-PCRのプライマーなど)にかかる費用に加えて高価な遺伝子改変マウス(アポE欠損マウスやLDL受容体欠損マウス)の購入費用、マススペクトロメトリーなどの費用が必要となる。
動物インフルエンザウイルスのレセプター認識特異性に関する研究

インフルエンザウイルスは人の他に多くの鳥類および哺乳動物に感染する。ニワトリ、ウマ、ブタ、ミンク、アザラシ等に致死的な流行を起こし、その被害は甚大である。最近、これらのインフルエンザウイルスの遺伝子はすべて野生水禽のウイルスに由来することが明らかとなった。また、渡りガモのウイルスが中国南部でアヒルを介してブタに伝播し、ブタの呼吸器でヒトのウイルスと遺伝子再集合体を形成することによってヒトに導入されたという新型ウイルスの出現機構が明らかにされた。しかし、ウイルスが異なる動物種間を伝播するメカニズムが解明されていない。我々はインフルエンザウイルスの宿主域とレセプター特異性が関連する成績を得た。本研究はレセプター特異性を分子レベルで解析することにより、インフルエンザウイルスの異動物種間伝播のメカニズムを明らかにすることを目的として企画された。まずインフルエンザウイルスの代表的な宿主であるカモ、ウマおよびブタの標的細胞表面のレセプターの糖鎖構造をシアル酸の結合様式の違いを認識するレクチンを用いて解析した。これにより、ウイルスのレセプター結合特異性と宿主細胞表面の糖鎖構造が宿主域を決定する重要な要因であることを証明した。一方、シアル酸の分子種の違い(Neu5Ac,Neu5Gc等)を認識する特異抗体を用いて、N-グリコリル型シアル酸(Neu5Gc)の分布がカモのウイルスの腸管での増殖部位と相関する成績を得た。さらに、このNeu5Gcを認識するヒト由来ウイルス変異株のヘマグルチニンを持ち、他の遺伝子は全てカモのウイルス由来である遺伝子再集合体を得た。このウイルスがカモの腸管で増殖するか否かを現在検討中である。これによりインフルエンザウイルスのカモの腸管における増殖に関わる因子が明らかになるであろう。また、この研究過程で各種動物由来赤血球を用いた凝集試験により、インフルエンザウイルスのレセプター特異性を調べる簡便法を確立した。古くから知られるこのインフルエンザウイルスの血球凝集の機構をウイルスのレセプター結合特異性と血球表面に存在する糖鎖構造という観点から究明することが出来た。今後はヘマグルチニン以外のウイルス構成蛋白に関してインフルエンザウイルスの宿主域に関わる因子を明らかにし、インフルエンザウイルスの異動物種間伝播のメカニズムをさらに解明したい。A型インフルエンザウイルスの宿主細胞レセプターは末端にシアル酸をもつ糖鎖である。一般にカモおよびウマのインフルエンザウイルスはシアル酸がガラクトースにα2-3結合している糖鎖(SAα2-3Gal)に親和性がありヒトのインフルエンザウイルスはSAα2-6Galに親和性がある。本年度の研究においてカモの腸管およびウマの気管上皮細胞上にはSAα2-3Galが優位に存在することが明らかとなった。このことは1989年に中国でカモのインフルエンザウイルスが直接ウマに導入されたというGuoらの報告を裏付けている。一方、ブタの気管上皮細胞上にはSAα2-6GalおよびSAα2-3Galの両方が存在することが明らかとなった。このことはブタの呼吸器がヒト由来ウイルスとカモ由来ウイルスの両方に感受性を示すという喜田らの感染実験の成績を裏付けている。またヒトの新型ウイルスの出現においてブタがカモのウイルスとヒトのウイルスとの遺伝子再集合体産生の場であるという喜田らの提案を支持する。

以上の成績から宿主の標的細胞表面の糖鎖構造がインフルエンザウイルスの宿主域を決定する因子であると考えられた。しかしながら、SAα2-3Galに結合するウイルスのすべてがカモの腸管で増殖する訳ではないこともまた明らかとなった。一方、異なる宿主の標的細胞上にはインフルエンザウイルスに対する吸着インヒビターが存在することが明らかとなった。現在、その分離精製を実施している。しかし、ウイルスの感染性を中和するインヒビターの存在の可能性は現段階では少ない。異なる宿主由来のウイルスのHAのアミノ酸配列およびレセプター特異性の比較解析も終了し、感染実験に用いる候補のウイルスを選択することができた。これらの成績を踏まえて平成7年度はインフルエンザウイルスのカモの腸管増殖を規定する因子を中心に解析し、ウイルスの異動物種間伝播のメカニズムを明らかにしたい。インフルエンザAウイルスの宿主細胞レセプターは末端にシアル酸を持つ糖鎖である。これまでウイルスのレセプター結合特異性は解析されているが、宿主側のレセプターの構造を解析した成績は殆どない。本研究ではインフルエンザウイルスの動物種間伝播のメカニズムを解明することを目的として、昨年度までにカモ、ウマおよびブタの標的細胞表面のレセプターの糖鎖構造をシアル酸の結合様式の違いを認識するレクチンを用いて解析し、ウイルスのレセプター結合特異性と宿主細胞表面の糖鎖構造が宿主域を決定する重要な因子であることを証明した。本年度はさらに、シアル酸の分子種の違い(Neu5Ac、Neu5Gc等)を認識する特異抗体を用いて解析を試みた。その結果、ウマおよびブタの気管では上皮細胞表面全体にN-グリコリル型シアル酸(Neu5Gc)が存在したが、カモの結腸では陰窩を形成する細胞に限局して認められ、表層の細胞では検出されなかった。ヒトの臓器にはNeu5Gcが存在しないことが知られている。またKidaら(1980)はヒト由来インフルエンザウイルスはカモの腸管で増殖しない、カモ由来ウイルスはカモの結腸の陰窩でよく増殖し、表層部では増殖が認められないことを報告した。今回の成績はNeu5Gcの存在がウイルスの宿主域のみならず増殖部位とも関連することを示唆している(論文準備中)。更に、Neu5Gcを認識するヒト由来ウイルス変異株のヘマグルチニンを持ち、他の遺伝子はすべてカモのウイルス由来である遺伝子再集合体を得た。現在、このウイルスがカモの腸管で増殖するか否かを検討中である。また、この研究過程で各種動物由来赤血球を用いた凝集試験によりインフルエンザウイルスのレセプター特異性を調べる簡便法を確立した。さらに、古くから知られるこのインフルエンザウイルスの血球凝集の機構をウイルスのレセプター結合特異性と血球表面に存在する糖鎖構造という観点から究明した(論文投稿中)。
アンドロゲン依存性気分障害と雄性性機能制御の分子・神経メカニズム相関の解明

男性ホルモン(アンドロゲン)に依存する気分障害及び雄性・性機能を制御する脳-脊髄内神経ネットワークの分子・動作メカニズムの解明を目的として多角的な解析を行い、多くの新知見を得ることができた。高次脳機能と雄性・性機能を制御する脳-脊髄神経ネットワークの分子・動作メカニズム連関をより深く理解することにより、今まさに新たな神経科学と生殖内分泌学とのトランスレーショナルな新規の研究領域が生まれつつある。ラット球海綿体筋を支配する球海綿体脊髄核(SNB)は、腰髄(L5-L6)に存在し、雄優位の性的二型核を示す運動ニューロン群であり、雄の性行動に重要な役割を果たす。また、血中アンドロゲン濃度の減少がSNBニューロンの樹状突起を萎縮させること、また、その樹状突起上のシナプス密度をも減少させることが報告されているが、これらのシナプス入力の神経化学的特性の同定は未だなされていなかった。最近我々は、神経ペプチドの一種、ガストリン放出ペプチド(GRP)の発現が雌に比べ、雄ラットの腰髄に有意に高いことを新規に見出した。また、この腰髄に存在するGRP系は脊髄内に神経ネットワークを構築し、自律神経系を制御することにより、雄の性機能を調節していることも明らかにした。さらに、この脊髄GRP系もアンドロゲンの影響を強く受けており、SNBニューロンの樹状突起やシナプス入力変化と関連がある可能性が示唆される。しかし、方法論的な困難から、脊髄GRP系からSNBニューロンへの直接的なシナプス入力についての報告は未だ成さられていなかった。今回、GRP免疫組織化学法とSNBニューロンの逆行性標識法とを組み合わせることにより、超微形態学的にSNBニューロンの樹状突起上にGRP作動性のシナプス入力が存在するかを、超高圧電子顕微鏡を用いて解析した。コレラトキシンβサブユニットにより逆行性標識されたSNBニューロンをテトラメチルベンジジン法で、また、GRP免疫組織化学法を従来のジアミノベンジジン法で、それぞれを可視化し、超高圧電子顕微鏡下で2者を区別することに成功した。その結果、SNBニューロンの樹状突起上にGRPを含む多くのシナプスが存在していることが明らかになった。球海綿体筋の収縮は勃起や射精に深く関与しており、SNBへの求心性GRPシナプス入力を介して性行動を制御している可能性が高い。現在、これらの脊髄に存在する性機能中枢と、脳との神経連絡について詳細な解析を進めている。雄の性機能を制御する神経ネットワークは、脳と脊髄の多くの部位にまたがり広く存在する。我々はこれまでにラット腰髄においてガストリン放出ペプチド(GRP)ニューロンが勃起や射精といった雄の性機能を制御することを報告してきた。一方、ヒト女性において分娩時の子宮筋収縮や乳汁放出への関与で知られるオキシトシンが、男性では射精等の性機能に深く関与することも報告されている。そこで本研究では、雄の性機能を司る神経ネットワークを明らかにする目的で、間脳視床下部オキシトシンニューロンのGRPニューロン系への関与を解析した。まず、ELISA法によりラット腰髄におけるオキシトシンの局所濃度を測定した。その結果、雌に比べ雄の腰髄においてオキシトシンの含有量が有意に高いことが明らかになった。次に、ラット腰髄におけるオキシトシンとGRPに対する二重免疫組織化学的解析を行った。その結果、ラット腰髄におけるオキシトシン線維分布に雄優位の性差が観察された。これらの結果から、オキシトシンの局所濃度と線維投射の性差に高い相関性が確認された。さらに、これらのオキシトシン線維の分布は、GRPニューロンの細胞体が存在する領域に多い傾向があり、機能的な強い結びつきも示唆される。そこで本研究ではさらに、GRPニューロンにおけるオキシトシンに対する受容能について解析した。GRPニューロンの細胞体が存在するL3-L4レベルの腰髄のパラフィン切片を作製し、ビオチン標識したオキシトシンと反応させることにより、オキシトシン特異的に結合する領域を可視化するin situ receptor binding解析を行った。その結果、ラット腰髄GRPニューロン群にオキシトシンに対する強い結合能が観察された。現在、オキシトシンニューロン系とGRPニューロン系との生理学的機能研究代表者はこれまでに、脊髄(腰髄)に存在するgastrin-releasing peptide(GRP)ニューロン系が雄優位な脊髄内局所神経ネットワークを構築し、雄の性機能を調節していることを見いだした。一方、ヒト女性において分娩時の子宮筋収縮などへの関与で知られるオキシトシン(OXT)が、男性では射精等の性機能に深く関与することも報告されている。そこで本研究では、腰髄のGRPニューロンにおけるオキシトシン受容体(OXTR)の発現を解析した。今回、OXTRを発現している細胞を可視化するため、OXTR-Venus(緑色蛍光タンパク質の一種)ノックイン(KI)マウス(東北大学・西森克彦教授より供与)を用いた。現在、OXTRに対する有用な抗体は存在せず、OXTRに対する免疫組織

化学的解析は極めて困難であるが、このOXTR-Venus KIマウスではOXTRを発現する細胞に緑色蛍光(Venus)が発現するため、簡便かつ安定的にOXTRを発現する細胞を同定することができる。このOXTR-Venus KIマウスを用いて、腰髄GRPニューロンにおけるVenus共発現率を解析した。結果、GRPニューロン細胞体ではOXTRが極めて高い確率で発現していることが明らかとなり、OXT線維が間脳視床下部のPVN領域から腰髄領域にまで投射し、GRPニューロン系を遠心性に制御することにより雄の性機能を制御することが示唆された。シナプス通過型神経トレーサーである弱毒化狂犬病ウイルス(PRV)を用い、球海綿体筋から脊髄GRPニューロン群へのシナプスを介した直接的投射を解析した。球海綿体筋へのPRV感染から2日後、雄ラットを灌流固定し、脊髄の連続凍結切片を用いてPRV/GRPに対する二重免疫染色を行った。その結果、ほぼ半数のGRPニューロンがPRV陽性を示し、SNB・GRPニューロン間の直接的なシナプスを介した神経回路の存在が確認された。球海綿体筋の収縮は勃起や射精に深く関与しており、SNBへの求心性GRPシナプス入力を介して雄性・性行動を制御していることが示唆された。