hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
体温概日リズムの調節機構、生理学的意義の解明

本研究の大きな目的は体温の概日リズムの形成メカニズムを明らかにする事であった。具体的には(仮説1)体温調節は中枢、末梢2つの部位の温度情報に基づき体温調節反応を行っているが、生物時計の最上位中枢である視交叉上核はこの温度情報の感受性を変化させ体温調節反応の時間差を発生させる、(仮説2)体温のリズムは中枢-末梢間での遺伝子発現の同調にかかわっている、の2つの仮説を検証した。マウスに自由摂食もしくは48時間の絶食を行った上、20°Cの中等度寒冷負荷を行い、代謝、褐色脂肪組織のUCP1mRNA発現を調べた。さらに脳視床下部でのcFos発現を指標にまた時計遺伝子の1つであるClock遺伝子のミュータントマウスを用いて同様の実験をおこなった。まず自由摂食下には熱産生反応の昼夜の差は認められず視床下部でのcFos発現も著明ではなかった。一方絶食時には活動期である夜間のみ積極的な熱産生反応が見られた。この際,視交叉上核に昼間特異的なcFosの著明な発現増加が認められた。さらに視交叉上核と交感神経にかかわる室傍核の間には機能的連絡があり抑制性のニューロンを介している事が明らかになった。視交叉上核は温度、摂食情報を受容している,あるいは感受性を変化させ体温調節の時間依存性を形成していると考えられた。1)時計遺伝子欠損マウス(clock mutanat),視交叉上核破壊ラットを用いて非拘束下に体温計測を行うシステムを確立した。また外的に体温を変動させるために脳温(ラット)を変動させる、温水環流サーモードシステムを開発し、安定した生理学データが採取されている。あるいは環境温度の変動によりマウスの体温を変動させるプロトコールを確立した。現在はこのシステム、プロトコールにて体温と末梢の時計遺伝子の発現がいかに影響を受けるか調べる実験を開始している。1日のうち4時間ごとに実験動物を殺し、視床下部の脳組織、肝臓、筋肉の組織を採取の後、RT-PCR法にて時計遺伝子Per1,Per2の発現を半定量している。この際動物の体温を一定にした場合と変動させた場合に分け遺伝子の発現パターンが中枢での時計発現が存在しない場合いかに影響を受けるか検証中である。2)脳スライス標本を用いて視床下部、特に体温調節と関係の深い内側視索前野での温度感受性ニューロンの温熱反応生が生物時計の最上位中枢である視交叉上核の存在下にいかに影響を受けるか調べるシステムを確立中である。64ch細胞外電位測定システムの確立途中であり、視交叉上核と内側視床下部の電位同時測定法の確立のための方法を開発途中である。また同時に脳スライスにAVP,VIPなどの視交叉上核に関係するホルモンを加え内側視索前野での温度反応性を検証するプロトコールを検討中である。[目的]体温には概日リズムがあり、われわれの過去の研究からこの現象は調節されたものであることを発見している。本研究は、この体温の概日リズムの形成機構と生理学的意義を明らかにすることを目的にしている。[方法と結果]i)多チャンネル微小電極を用いて、概日リズムの最上位中枢である視交叉上核と体温調節の中枢である視索前野の神経ネットワークを調べること、また視索前野の温度感受性が視索前野の電気刺激によって変動するかを調べた。現在、当初計画より遅れてシステムを確立し、予備実験を行っている途中である。ii)体温概日リズムの代謝にあたえる影響を調べる。clock遺伝子ミュータントマウス、ワイルドタイプマウスを用いて、2日間の絶食を行う。この間の体温,代謝の変動を調べ、時計遺伝子が体温調節、代謝調節にいかに影響を及ぼすか調べた。ミュータントワイルドタイプとも絶食により、自由摂食時より30-40%の代謝量の減少を認めた。しかし、体温の減少はワイルドタイプにのみ認められ、特に主観的明期に特異的であった。

これより絶食時の代謝減少は時計遺伝子に関与しない調節であるが。代謝減少は時計遺伝子を介して,何らかの形で体温調節に影響を及ぽしていると考えられた。iii)同様にclockミュータント、ワイルドタイプマウスを用いて暑熱、寒冷暴露時の視床下部のFOS発現を調べた。FOSの発現はワイルドタイプにのみ時間特異性があり、ミュータントでは認めなかった。時計遺伝子は体温調節もしくは温度感受性の時間特異性に関係していると考えられた。[結語と展望]代謝時計体温の調節系には密接な関係があり、このメカニズムの解明が必須である。ラットなどげっ歯類における絶食時にはtorporと呼ばれる体温の低下が見られることが知られている。この現象は時間特異的であり、非活動期である明期に特異的に見られる。本年度の研究では、この現象に時計遺伝子の一つであるClockが関与するか否かを検証すること、また関与していればそのメカニズムを明らかにすることを目的とした。実験はJcr系マウス、クロックミュータントとそのワイルドタイプを用いて行った。測定は2日間の絶食、およびコントロールとして自由摂食期間の体温、代謝量、その期間後屠殺した後、脳視床下部領域のcFos発現、褐色脂肪組織のUCP1 mRNAの発現を調べた。また同様な条件下に18°Cの寒冷暴露時の反応を調べた。クロックミュータントマウスではワイルドタイプに比較して絶食時のtorporは減弱していた。また寒冷暴露時にはtorporの見られる時間にはワイルドタイプマウスでは体温の低下が著明であるのに対して、torporの見られない時間では体温はほぼ保たれていた。ミュータントマウスでは時間に関わらず体温はほぼ一定に保たれていた。また代謝量の変化もワイルドタイプマウスでは寒冷暴露時、torporが見られる時期には減弱していたのに対して、ミュータントマウスでは時間による差が認められなかった。視床下部領域でのcFos免疫反応陽性細胞数、UCP1 mRNAの発現からもワイルドタイプマウスのみに時間特異的な差が認められた。以上のことにより体温調節反応には時間特異性があり、時計遺伝子であるClockが重要な役割を担っていることが明らかになった。
その場合成によるハイブリッド薄膜の作製とその高分子表面の無電解めっきへの応用

有機ポリマーと金属・無機化合物の複合体であるハイブリッド材料の開発おいて、有機/無機成分間の界面制御は重要課題である。本研究では、ポリマー基材表面に、その場合成もしくは交互積層法を利用してハイブリッド層を形成させ、その表面に無電解めっき皮膜を形成させた。ハイブリッドの構造、特にナノスケールでの有機/無機成分間の界面の構造が、めっき被膜の形成とその基材への密着性向上に大きな役割を果たすことを見出した。ポリマー材料表面に、無電解めっきにより金属薄膜を形成させるためには、めっき反応開始触媒の付与、およびポリマー/金属間の密着性の確保が必要となる。本年度は、優れた化学・物理的安定性をもつ工業用ポリエチレンナフタレート(PEN)およびポリエチレンテレフタレート(PET)フィルムに対して、表面処理よる親水化、ついで交互積層法(LbL:layer-by-layer)による高分子電解質薄膜形成を経て、パラジウムナノ粒子を生成・分散させることで、無電解めっき可能な表面(ハイブリッド層)を作製することを検討した。また、フィルム表面に“その場合成"により、アクリルモノマー/酢酸パラジウム/光ラジカル開始剤/シリカナノ粒子を含む混合物(薄膜)から、パラジウムナノ粒子/シリカナノ粒子/アクリルポリマーハイブリッド層を形成させることについても検討した。プラズマ処理や紫外光照射(254 nm)によりその表面にカルボキシル基を生成させたPEN,PETフィルム表面に、LbL法により高分子電解質薄膜を形成させた。LbL層の最表面はカチオン性とし、そこにPd錯イオン(PdCl42-)の吸着およびそれからのパラジウムナノ粒子生成の過程を経ることでめっき反応開始触媒能を付与した。その結果表面に密着性に優れた無電解銅めっきが可能となった。“その場合成"によるハイブリッド層形成では、大きな吸光係数を持つ光ラジカル開始剤、および増感剤として含硫黄化合物を用いることで、標準条件と比較して光照射量の大幅な低減を達成できたが、一方その表面へのめっきにおいて、皮膜の成長速度が低下した。チオエーテル基は、ラジカルの伝播を促進する一方で、金属表面の触媒能を低下させることが知られている。本研究においても、チオエーテル基とパラジウムナノ粒子表面が相互作用することで触媒能が低下したと考えられる。ポリマー材料の表面に、無電解めっきにより金属薄膜を形成させるには、その表面へのめっき反応開始触媒の付与、ポリマー/金属間の密着性の確保が必要となる。高い化学・物理的安定性をもつ工業用PENおよびPETフィルムの表面をプラズマ処理することで極性官能基を生成させ、それを利用してポリカチオンとポリアニオンから形成される高分子電解質多層膜(PEM)を交互積層法(LbL:layer-by-layer)により形成させた。その表面への無電解めっきを行った。プラズマ処理を行ったPEN,PETフィルムをポリ(ジアリルジメチルアンモニウムクロライド)(PDDA)とポリ(スチレンスルホン酸ナトリウム)(PSSNa)の水溶液に交互浸漬し、最終層をPDDAもしくはPSSNaとすることでカチオンもしくはアニオン性の最表面を持つPEMを作製した。アニオン性表面を持つシリカ粒子をPEM表面に吸着させたところ、カチオン性表面にのみ吸着されることが明らかとなり、最終層がPEM表面の電荷を決定していることが確認された。またFE-SEM観察等により、プラズマ処理はフィルムの表面での極性官能基の生成に加えて、高分子成分の低分子量化とそれに伴うフィルム表面の微細構造変化、すなわちナノフィブリル構造の形成を引き起こし、それらがフィルム表面とPEMとの親和性を高めると考えた。PETフィルム表面において、ラジカルを活性種とするアクリレートの重合と金属ナノ粒子の同時進行により、金属ナノ粒子/シリカナノ粒子/アクリルポリマーハイブリッド薄膜をIn-Situ形成させ、その無電解めっきを行った。希少元素であるPdの代替としてAgについて検討した。ペンタエリスリトールトリアクリレート(PETA)を用いたハイブリッド薄膜表面では無電解めっきが進行したことから、アルコール基がAgナノ粒子の触媒活性向上に寄与していると考えた。無電解めっきによる高分子表面での金属薄膜形成への応用を目指して、工業用PENおよびPETフィルムの表面における、プラズマ処理、ポリカチオンとポリアニオンから形成される高分子電解質多層膜(PEM)の交互積層法(LbL:Layer-by-Layer)による形成、そしてPd触媒の担持について検討した。LbL積層によりカチオン性もしくはアニオン性の表面を持つPEMを形成させ、そこにカチオン性もしくはアニオン性のPdの錯イオンを吸着させた。次いで、錯イオンの還元過程を経て、無電解ニッケルメッキを行ったところ、均一で密着性に優れためっき被膜が形成された。様々な検討から、PEM内に生成したPdナノ粒子がめっき反応開始触媒として作用すること、およびPEMの表面電荷が触媒生成に影響を与えることが明らかとなった。ミニエマルション重合において、水中に分散されたモノマー油滴を数100 nmサイズの反応場(ナノリアクター)として利用し、触媒能を持つ金属ナノ粒子をその内部もしくは表面に有する数100 nm径のポリマー微粒子、すなわち金属ナノ粒子/アクリルポリマーハイブリッド粒子をin situに生成(“その場合成")させることを試みた。種々の油溶性もしくは水溶性の、重合開始剤および金属塩(金属ソース)の組み合わせについて検討したところ、ハイブリッドラテックス粒子が得られたが、同時に金属ナノ粒子を含まないポリマー粒子も生成した。

ハイブリッド粒子の収率を向上させるためには、詳細な反応機構の解明および、ポリマー成分の金属親和性をさらに高める必要があると考えられる。また、これらの研究において重要な役割を果たす、ハイブリッド、特にそれに含まれる金属ナノ粒子の微細構造評価に欠かせない、FE-SEM、TEM等の観察技術の向上に努めた。無電解めっき浴の安定性向上についても合わせて検討した。有機ポリマーと金属・無機化合物の複合体であるハイブリッド材料の開発おいて、有機/無機成分間の界面制御は重要課題である。本研究では、ポリマー基材表面に、その場合成もしくは交互積層法を利用してハイブリッド層を形成させ、その表面に無電解めっき皮膜を形成させた。ハイブリッドの構造、特にナノスケールでの有機/無機成分間の界面の構造が、めっき被膜の形成とその基材への密着性向上に大きな役割を果たすことを見出した。PENフィルム/PEM/Pdナノ粒子/銅薄膜が積層した構造体において、めっき皮膜の密着性を向上させるためには、各層間の相互作用を高める必要がある。プラズマ処理では、フィルム表面に生成する数十nmサイズのナノフィブリル構造とそれに含まれるカルボキシル基およびアルコール基が、PEMの構成成分であるポリ(ジアリルジメチルアンモニウムクロライド)(PDDA)と強く相互作用するためPENフィルム/PEM界面で高い密着性が得られると考えられる。一方、UV光照射、UV/オゾン処理、アルカリ処理等によるフィルム表面の親水化では、プラズマ処理と比較して親水化の程度が十分でなく、かつナノフィブリル構造も認められず、PENフィルム/PEM界面での密着性も得られなかった。ハイブリッド薄膜のIn-Situ形成では、それらのFE-SEM観察結果、およびAgナノ粒子由来のプラズモン吸収の分析結果などから、初期過程に高濃度で発生するラジカルによりポリマーネットワーク構造の形成とAg+の還元が進行し、引き続いてネットワーク中で熱反応によりAgナノ粒子が生成することが示唆された。ネットワーク中でAgナノ粒子の拡散は制限されるため凝集による粗大粒子化が進行せず、その触媒活性を維持することが示唆された。以上のように、有機無機複合体の構造、特に各成分間の界面の構造を、ナノスケールで解析・制御することが機能発現において重要であることを明らかにする本研究課題の目的の一部を達成できた。高分子材料PENフィルム/PEM/Pdナノ粒子構造において、1)プラズマ処理が引き起こす化学反応とそれにより生じるPEN表面の分子構造の解明、2) PENフィルム/PEM界面における成分間の相互作用を項目(1)の結果をふまえて解明、3) PEM中でのパラジウムナノ粒子の状態の解明を中心に研究を行う。項目(1)についてはXPS, ATR-FT-IR,対水接触角測定等の基本的な表面の機器分析に加えて、PENの蛍光スペクトル測定、フィルム表面への色素の吸着とそのUV吸収スペクトルおよび蛍光スペクトル測定などを行い、分析厚み・改質厚み等についても考慮し、PENフィルム表面の分子構造を解明する。項目(2)では、PEMとPDDA単層との挙動の比較、あるいは他の親水化処理を経たPENフィルム表面でのPEM形成などについても検討を行う。
高精度マッピングによるリンゴのカラムナー遺伝子の探索と選抜マーカーの開発

リンゴ品種`McIntosh'の枝変わりとして発見された`Wijcik'は,節間が短く,側枝がほとんど発生しないため,細長い円柱状の樹形に生長する.この性質はカラムナー性と呼ばれ,単一の優性遺伝子Coに制御される.本研究では,高精度マッピングによりCo遺伝子と完全連鎖する3つのDNAマーカー(Mdo.chr10.12, 10.13, 10.14)を見出し,Mdo.chr10.12と10.14が信頼性の高いカラムナー性選抜マーカーとして利用できることを示した.また,Co遺伝子座乗領域をDNAマーカー11-1と14-3の間に絞り込み,Co遺伝子座乗領域に挿入変異が生じていることを明らかにした.リンゴのカラムナー性は単一の優性遺伝子Coに制御される.ファインマッピングにより絞り込んだCo遺伝子の座乗領域をクローニングするため,カラムナー品種`Telamon'からBACライブラリーを作製した.分画1のDNAから作製したライブラリーは49,152クローン,分画2のDNAから作製したライブラリーは3,840クローンから構成されており,平均インサートサイズは分画1のライブラリーが166 kb,分画2のライブラリーが153 kbであった.リンゴのゲノムサイズは約750 Mbであることから,作成した分画1及び分画2のライブラリーはそれぞれ10.9ゲノムと0.8ゲノムに相当し,リンゴゲノムの99%以上をカバーしていると考えられた.Co遺伝子と密接に連鎖するSSRマーカー11-1を用いてBACライブラリーをPCRスクリーニングした結果,Coと相引に連鎖する領域を含む7クローンが単離された.これら7クローンを整列化したところ, 2クローンがCo遺伝子の座乗領域を完全にカバーしていた.次に,SSRマーカーとBAC末端配列からプライマーを設計することができたCo遺伝子座乗領域内の5つの領域(R1R5)に対し,Coホモ個体とcoホモ個体のゲノムDNAを鋳型にしてLong PCRを行った.R1, R3R5領域ではCoホモ個体とcoホモ個体から増幅された断片長に大きな違いは見られなかったが,R2領域ではCoホモ個体から約16 kbの断片が,coホモ個体から約8 kbの断片が増幅された.16 kbと8 kb断片の塩基配列を決定し比較したところ,Coホモ個体にはLTR型レトロポゾンと考えられる約8 kbの配列が挿入されていることが明らかになった.この挿入変異を利用することにより、カラムナー個体を効率的に選抜できるDNAマーカーを開発することができる.リンゴ品種`McIntosh'の枝変わりとして発見された`Wijcik'は,節間が短く,側枝がほとんど発生しないため,細長い円柱状の樹形に生長する.この性質はカラムナー性と呼ばれ,単一の優性遺伝子Coに制御される.本研究では,高精度マッピングによりCo遺伝子と完全連鎖する3つのDNAマーカー(Mdo.chr10.12, 10.13, 10.14)を見出し,Mdo.chr10.12と10.14が信頼性の高いカラムナー性選抜マーカーとして利用できることを示した.また,Co遺伝子座乗領域をDNAマーカー11-1と14-3の間に絞り込み,Co遺伝子座乗領域に挿入変異が生じていることを明らかにした.これまでの研究により、リンゴのカラムナー(円筒形)樹形を制御するカラムナー遺伝子(Co)は、第10連鎖群のマーカーCH03d11とHi01a03の間に座乗することが明らかになっている。Co遺伝子の高精度マッピングを行うため、マーカーCH03d11とHi01a03の間で組換えを起こした個体を、カラムナー性品種・系統の交雑実生約1600個体から探したところ、58個体が見つかった。また、リンゴの公開ゲノム配列情報を利用して、CH03d11とHi01a03の間約1.7Mbの塩基配列から45個のSSRマーカーを設計した。これらのSSRマーカーを用いて58個体の遺伝子型を調査し、表現型と対応させたところ、Co遺伝子はマーカー11-1と14-3の間約180kbの領域に存在することが明らかになった。180kbの候補領域に存在する予測遺伝子のうち、オーキシン誘導性遺伝子に着目し、普通樹形品種「McIntosh」とカラムナー性品種「Wijcik」から遺伝子をクローニングした。塩基配列を解析した結果、両品種からクローニングした遺伝子の配列に違いは見られなかったことから、オーキシン誘導性遺伝子はカラムナー性には関与していないと考えられた。平成24年度の計画では、Co遺伝子の高精度マッピングを行い、Co遺伝子の座乗領域を100200kb程度に絞り込む予定であった。現在までに、Co遺伝子の座乗領域を、リンゴの公開ゲノム配列に換算して約180kbに絞り込むことができたので、研究は計画通り進展している。リンゴの公開ゲノム情報を利用して、Co遺伝子の座乗領域に相当する配列から、候補遺伝子を探索する。一方、公開ゲノム情報には塩基配列が読めていないギャップ領域や曖昧な領域、品種間差が存在することから、ゲノムライブラリーの作製やPCRなどの手法を用いて、候補領域をクローニングし、塩基配列の解析を行う。得られた配列から遺伝子予測ソフトを用いてORFを予測する。予測されたORFの構造や塩基配列、発現パターンを普通樹形品種「McIntosh」とカラムナー性品種「Wijcik」の間で比較し、違いの見られる遺伝子を探索する。

また、両品種間で見られた塩基配列の違いを利用して、カラムナー性個体を効率的に選抜できるマーカーを開発する。組換えを起こした個体を効率的に同定できたことや、マッピングに用いるSSRマーカーを効果的に配置することができたため、当初の見積もりより少ない経費で実験を進めることができた。一方、絞り込んだ候補領域に相当する公開ゲノム配列には、塩基配列が読めていないギャップ領域や曖昧な領域、品種間差が想定よりも多く存在していたため、当初の計画に加えて、次年度は候補領域のクローニングと塩基配列解析を追加する予定である。繰越額は、これらの実験経費として使用する予定である。
対称性が破れた系の乱流輸送に関する基礎実験

対称性が破れた系の乱流輸送に関する実験研究として、回転軸が観測領域に平行な場合の回転系の実験を実施した。液晶に混入した微粒子追跡から乱流拡散係数を評価することができるが、粒子ごとのばらつきが大きく、回転軸に平行方向と垂直方向の乱流輸送に回転の影響を見出すことはできなかった。液晶の透過光の計測から視線方向速度の2次元空間分布を計測できるため、速度場の波数スペクトルの評価を行った。回転軸に平行方向と垂直方向の違いを調べた結果、高波数領域では両者はよく一致したが、低波数領域では違いがみられ、乱流構造が回転軸方向に伸びる傾向を初めて観測することに成功した。極めて制御性に優れた乱流に“対称性の破れ"を導入することにより、流れ場構造形成の物理過程、及び“対称性の破れ"が乱流中の輸送特性に与える影響を実験的に解明することを目的として、液晶乱流実験の機器整備を実施した。1つ目は、乱流駆動軸と回転軸の角度がこれまでは、平行方向のみでしか実験が出来なかったが、0-90度の範囲で任意の角度に設定できるステージを製作した。これにより回転による対称性の破れを3次元的に調べる実験を開始することが出来た。現在は初期結果解析中であり、今後新たな進展が期待できる。2つ目は、1000rpmを目指した高速回転駆動機用の計測機器を開発した。これによりロスビー数が、0.1より小さい領域まで実験領域が拡大できる見通しである。極めて制御性に優れた乱流に“対称性の破れ"を導入することにより、流れ場構造形成の物理過程、及び“対称性の破れ"が乱流中の輸送特性に与える影響を実験的に解明することを目的として、液晶乱流実験の機器整備を進め、実験を実施した。平面セルにレーリーベナール対流と等価な電気対流を発生させ、乱流を駆動した。発達した乱流状態では、3次元等方な乱流が生成されている。この乱流を回転させて、乱流や乱流輸送の変化を調べた。乱流駆動軸と回転軸の角度を0度から90度まで変化させ、回転させた状態で乱流輸送評価を行う実験を行った。実効的な拡散係数が回転により低減する傾向が観測された。現在、詳細解析を行なうと共に、系統的な実験の準備に取り掛かっている。一方で、回転を加えた際の時間、空間乱流スペクトルには、顕著な違いは観測されなかった。特に、加えた回転数近傍の周波数スペクトルの変化に注目したが、変化を観測できなかった。ところが、バイコヒーレンス解析を行うと波数スペクトルに有意な変化を観測することができた。回転させた場合には、低波数(大きな構造)が連続スペクトルと相関をもつことが分かった。乱流スペクトルの低波数領域との詳細な比較検討が必要であるが、回転は、乱流のエネルギー輸送に影響を与えている可能性がある。上記2つの実験は、同時行われたものでないため、詳細な検討は難しいが、現在、蛍光粒子をもちいた粒子追跡により、乱流輸送評価の精度を向上させて、検証実験を行う予定である。2つの装置の開発を目指しているが、実験が行える状態になっているのは、未だ1台だけである。主な原因は、人手不足である。平成28年度は、修士課程の学生の研究課題となったためこの問題は解消できる見込みである。一般に構造形成をともなう複雑な系における熱拡散係数などの巨視的なパラメータを決める物理過程を理解するために、極めて制御性に優れた乱流に“対称性の破れ"を導入することにより、流れ場構造形成の物理過程、及び“対称性の破れ"が乱流中の輸送特性に与える影響を実験的に調べる研究を行った。具体的には、液晶電気対流乱流に回転を加えたときに、乱流構造や乱流拡散係数に現れる回転の効果を実験的に調べた。回転の影響を詳しく調べるために、電気対流はz軸方向に駆動し、x,y方向の2次元波数を観測した。このときに加えた回転の軸は、y方向であり、x,y方向の比較から回転の影響の観測を目指した。Rossby数(液晶電気対流と回転場の時定数の比)が1付近をターゲットに、弱い乱流状態(ε=110)回転を加えたときの拡散係数と乱流の波数スペクトルを比べた。この実験では、回転を加えたときに波数スペクトルの低波数領域で、kxとkyに冪の違いが観測され、その差は、回転数とともに増加した。この結果は、回転を加えるとkyの低波数領域が大きくなる(大きな構造がy方向に延びる傾向)ことを示す結果となり、水などを用いた通常流体を回転させた場合のTaylor柱形成現象と考えることができる。一方で、拡散係数に対する明確な回転の影響は、観測されなかった。乱流構造と拡散係数の相関を観測することには至っていないが、液晶電気対流乱流に通常流体と同様の現象を見出したことは、液晶電気対流を用いた制御性の良い乱流実験が可能であることを示した点で大きな成果である。

回転軸に平行方向と垂直方向の違いを調べた結果、高波数領域では両者はよく一致したが、低波数領域では違いがみられ、乱流構造が回転軸方向に伸びる傾向を初めて観測することに成功した。回転軸可変ステージの開発などが予定通りに実施できた。初期結果は解析中であるが、本格的な実験を開始できているため、概ね計画通りと判断している。初期結果で良い方向性が見え始めているので、再現実験として、論文化できるレベルの系統的なデータセットの取得を目指す。また、遅れ気味の回転装置2号機の整備を進め、より広範な実験パラメータでの実験を目指す。プラズマ科学提出済みの研究計画に沿って、高速回転装置での実験を本格化させる。また、平行して新たな解析プログラムの開発を進め、乱流中の構造形成の観測を目指す。時間的制約により十分な研究時間が確保できなかったため、実験の実施はできたものの、機器開発に遅れが生じてしまった。繰越可能であるため。4月から学生が研究テーマとして実験及び、機器開発に参加するため、遅れを取り戻し、当初予定の計画を実行できる見込みである。提出済みの計画通り研究を実施する。高速回転ステージを用いた低ロスビー数領域の実験を実施し、回転場が乱流や乱流輸送に与える影響の評価を目指す。さらに回転球殻乱流場の実験を実施する。これにより太陽対流層のような大規模循環構造形成が可能な系で、回転乱流中からの大規模構造形成の実験を目指す。これまでは、スペクトル解析、非線形結合解析などを実施してきたが、2次元速度場の解析(velocimetry)などの新たな解析に挑戦する。
Uniform rationality of algebraic varieties

本研究では非特異有理多様体Xが一様有理(以後URと記す)になる条件を検討した。グロモフは任意のXが一様有理であると予想したが,私は反例を見つけ,実際はより複雑であることを示そうとした。XがURであるとは,Xのアフィン開被覆Uが存在し,それぞれの開集合がアフィン空間Cのn乗の開集合となるものが取れることを示す。反例構成のためX上の共形不変な関数fの構成を試みた。そのようなfがある場合,おおよそfは全てのUで定数になる。つまり,あるUで定数でないようなXとfを構成すればよい。結果として,U=Cのn乗, n>4と別のアフィン多様体Vを貼り合わせ,X=U vVがコンパクトで条件を満たすものを構成した。27年度が最終年度であるため、記入しない。幾何学27年度が最終年度であるため、記入しない。
細胞老化制御に基づく上皮・実質・内皮幹細胞と人工実質による三次元的再生角膜の移植

我々は、角膜上皮、実質、内皮細胞よりスフェアー法により老化した細胞を除去し、non-senescentな我々は、角膜上皮、実質、内皮細胞よりスフェアー法により老化した細胞を除去し、non-senescentな組織幹細胞を選択的に採取することに成功した。またスフェアー法により採取した角膜上幹細胞を用いた角膜上皮幹細胞シート、実質幹細胞とゼラチンにより作成した実質幹細胞シート、あるいは角膜内皮幹細胞塊を動物眼に移植することにより、角膜を透明にする治療に成功した。本邦の角膜移植手術におけるドナー角膜不足は深刻であり、ドナー角膜を必要としない、角膜再生治療に期待がかかっている。本研究では、コラーゲン、ゼラチンを主体とした細胞外基質と角膜実質幹細胞を用いて角膜実質シートを作成し、これまでに作成した上皮幹細胞シート、内皮幹細胞シートと組み合わせることにより全層角膜を再構築し、研究期間内の臨床応用実施を目標に、動物眼での移植研究を中心に行っている。本年度はコラーゲンあるいはゼラチンを単独で家兎角膜実質内に移植し、拒絶反応の有無を確認するとともに、移植した人工実質内への細胞遊走および、長期生着性について調べた。次に、細胞外基質と角膜実質幹細胞を用いて三次元的に角膜実質を再生した。また、どの部位に組織幹細胞が局在しているが、角膜中心部、中間部、周辺部で組織幹細胞の局在を比較し、またその遺伝子発現(幹細胞マーカー: CD34、Nestin、間葉系マーカー: Vimentin、αSMA、神経系マーカー: NFM、β-Tublin、NSE、MAP2)をRT-PCRおよび免疫染色により調べた。培養角膜上皮、実質、内皮のいずれの部位からも細胞培養が可能であり、またスフェアーフォーミングアッセイ法により組織幹細胞の採取が可能であった。いずれの部位からの組織幹細胞はNestinおよびBrDUに強陽性となり、増殖能および未分化能を示した。それらのprogenyは上皮では上皮系マーカーを発現し、実質はkeratocyte用の形態を持ち、内皮はNa-Ka ATPaseに依存性のポンプ機能を有した。これらの結果は少なくともvitroの実験では、採取した細胞あるいは組織幹細胞が生体内と同様の機能および形態を保持しうることを示している。次年度はこれらの細胞を用いて、シートを作製し、動物眼に移植する研究を行う。本研究の培養角膜シート移植法はドナー角膜を必要としないため、本邦におけるドナー不足を解消できる。また大量培養をすることにより定時の手術が可能となり、患者と術者にとって、手術計画が立てやすくなる。現在角膜移植の費用は高く、更にドナー角膜が使用できない施設では輸入角膜移植を行い100万以上の移植費用が必要となるが、輸入ドナー角膜と比較した場合にも、輸送コストの削減ならびに患者の医療費の負担軽減につながることが期待される。更に、患者自身の健常眼から採取した幹細胞を用いることにより、生体適合性が高まるとともに、術後の拒絶反応を抑制することも可能となる。幹細胞を移植する方法では、通常の培養細胞よりも細胞の形態が良好で、かつ移植後の幹細胞の自己近年我々は、角膜上皮、実質、内皮細胞よりスフェアー法により老化した細胞を除去し、non-senescentな組織幹細胞を選択的に採取することに世界で初めて成功した。またスフェアー法により採取した角膜上幹細胞を用いた角膜上皮幹細胞シート、又は角膜内皮幹細胞塊を動物眼に移植することにより、角膜を透明にする治療に成功した。しかし、臨床的に角膜移植を必要とする患者は実質の混濁が生じている症例が大半を占めるため、角膜上皮や内皮のみならず、角膜実質の再生が必要となる。同様の方法により我々は、角膜実質より採取した組織幹細胞と人工実質を用いて、角膜実質を再生し、動物眼に移植することにより角膜透明性を維持することにも成功した。本研究では、角膜上皮・実質・内皮の各層より得られた幹細胞を用いて作成した各シートを組み合わせることにより、ドナー角膜に匹敵する幹細胞を用いた人工角膜を開発することを第一の目標とし、幹細胞主体の再生角膜を臨床応用することにより慢性的なドナー角膜不足を解消することを最終目的とする。本年度は角膜上皮・実質・内皮の各層より組織細胞を選択的に採取した。採取した組織幹細胞を用いて、上皮、実質、内皮幹細胞シートを作成した。再構築した各層の再構築角膜の透明性ならびに強度性、上皮層のバリアー機能、実質層の細胞外基質の産生能、内皮層のポンプ機能について評価を行った。その結果、いずれの再生シートも透明性を維持し、内皮のシートはヒト角膜の約80%以上の電位差を有した。

実質の組織幹細胞をゼラチン内で培養すると、通常の培養実質細胞と比較して、細胞基質の産生能が高かった。また、再生実質シート内には、幹細胞により再生したシートは培養細胞を用いたものと比較して、Nestinなどの未分化マーカーの発言が高く、細胞増殖マーカーであるBrDUの取り込みが高かった。再構築角膜実質シート中に間葉系マーカー:Vimentin、αSMAの発現が免疫染色により確認できた。近年我々は、角膜上皮、実質、内皮細胞よりスフェアー法により老化した細胞を除去し、non-senescentな組織幹細胞を選択的に採取することに世界で初めて成功した。またスフェアー法により採取した角膜上幹細胞を用いた角膜上皮幹細胞シート、又は角膜内皮幹細胞塊を動物眼に移植することにより、角膜を透明にする治療に成功した。しかし、臨床的に角膜移植を必要とする患者は実質の混濁が生じている症例が大半を占めるため、角膜上皮や内皮のみならず、角膜実質の再生が必要となる。同様の方法により我々は、角膜実質より採取した組織幹細胞と人工実質を用いて、角膜実質を再生し、動物眼に移植することにより角膜透明性を維持することにも成功した。本研究では、角膜上皮・実質・内皮の各層より得られた幹細胞を用いて作成した各シートを組み合わせることにより、ドナー角膜に匹敵する幹細胞を用いた人工角膜を開発することを第一の目標とし、幹細胞主体の再生角膜を臨床応用することにより慢性的なドナー角膜不足を解消することを最終目的とする。昨年度までに我々は角膜上皮・実質・内皮の各層より組織細胞を選択的に採取し、採取した組織幹細胞を用いて、上皮、実質、内皮幹細胞シートを作成した。本年度は各幹細胞を動物眼に移植を行った。その結果、角膜上皮では移植後に通常の培養細胞を用いて移植を行ったものと比較して、細胞の更なる重層化に成功した。実質ではゼラチン素材と実質幹細胞を共培養することにより人工角膜実質を作成することに成功し、動物眼に移植することにより、通常の培養実質細胞を移植したものと比較して、細胞基質の産生能が高く、未分化マーカーネスチンなどの発現が高いことを証明した。内皮細胞を脱落させると角膜浮腫を起こすが、内皮組織幹細胞塊を移植することにより、角膜浮腫を抑制することに成功した。いずれのシートも、動物眼に移植した後は角膜透明性維持に働くことを証明できた。
新規のイノシトール1,4,5-三リン酸結合蛋白質の機能に関する研究

イノシトール1,4,5-三リン酸(Ins(1,4,5)P3)はカルシウムシグナリング系の重要な一翼を担っている。我々は分子量130kの新しいIns(1,4,5)P3結合蛋白質(p130またはPRIP1)を見い出した。本分子は1,096個のアミノ酸よりなり、95-850領域はホスホリパーゼC-delta(PLC-delta)と類似しているもののPLCとしての酵素活性は認められなかった。今回、PRIP1の細胞内での役割を明らかにすることを目的とし、種々の受容体刺激に伴う細胞内Ca2+濃度変化、Ins(1,4,5)P3産生に及ぼすPRIP1の影響を調べ、PRIP1はIns(1,4.5)P3を介する情報伝達の負の調節因子として作用することを示唆した。また、イーストツーハイブリッド系によりPRIP1と結合する蛋白質を探したところ、gamma-アミノ酪酸(GABA)受容体に結合する蛋白質、GABARAPと蛋白質脱リン酸化酵素(PP1)に結合することが分った。そこで試験管内での実験系により、それぞれの結合を確認するとともに、それらの結合が生体内でどのように役立っているかを解明するためにPRIP1のノックアウトマウスを作製した。まずGABA受容体情報伝達経路に対する影響を調べた。PRIP1-/-マウスではGABA誘発性Cl-電流のZn2+による抑制効果が完全に消失していた。次にベンゾジアゼピン系薬剤に対する影響を調べた。PRIP1-/-マウスの海馬細胞にジバゼパムを作用させたところGABA誘発性Cl-電流の増強効果が抑えられ、抗不安効果を評価するプラス迷路を用いたPRIP1-/-マウス行動解析実験においてもジバゼパム作用効果が減弱していた。したがってPRIP1は、GABA受容体情報伝達経路においてGABARAPとPP-1と共役してGABAシグナルを調節している可能性を示した。分子量が130kDの新規のイノシトール1,4,5-三リン酸[Ins(1,4,5)P_3]結合蛋白質を見い出し、p130と名付けた。p130はプレックストリン相同領域(PHドメイン)を有し、ここでIns(1,4,5)P_3やホスファチジルイノシトール4,5-二リン酸[PtdIns(4,5)P_2]と結合する。この蛋白質の機能を解明するために安定的にp130を発現するCOS-1細胞株を作製した。細胞内のp130は同じくPHドメインを持つホスホリパーゼC-δ(PLC-δ)とは異なり決して細胞膜に局在することなく、細胞質中に均一に分布していた。ブラジキニン(Bk)や上皮成長因子(EGF)刺激に伴う細胞内Ca^<2+>濃度変化を測定したところ対照に比し、Bk刺激によるCa^<2+>反応の減弱化が認められた。EGF刺激の場合も基本的には同じ結果が得られた。この原因として二つのことが考えられる。発現したp130が細胞膜の内側にあるPtdIns(4,5)P_2に結合して、PLC活性化による加水分解を抑制したか、あるいは、PLC活性化によって生成したIns(1,4,5)P_3がp130によって結合され、小胞体上の受容体に結合する量を減らしたためか、である。これを区別するため、Bk刺激によって細胞内に生成したIns(1,4,5)P_3を定量した。

刺激前の量はp130を過剰発現した細胞のほうがむしろ多く、刺激に伴って生成するIns(1,4,5)P_3量に対照との相違は認められなかった。この結果は後者の可能性が高いことを支持している。したがって、p130は細胞内Ca^<2+>反応のnegative regulatorとして働いている可能性が考えられる。そのことにより、種々の細胞機能の抑制に関わっている可能性がある。新規Ins(1,4,5)P_3結合蛋白質(PRIP1)は、我々が精製・遺伝子クローニングしたPLC-δ1類似蛋白質であるが、PLC酵素活性を持たない。PRIP1分子の機能を探るためイーストツーハイブリッド系でPRIP1に結合する分子を2種類同定した。1つは、protein phosphatase-1(PP-1)でありもう一つはGABARAP(GABA_A受容体結合蛋白質、GABA_A receptor associated protein)であった。PP-1がPRIP1と複合体を形成するとホスファターゼ活性が抑えられることが分った。一方、PRIP1とGABARAPが結合することが明らになったので、PRIP1のノックアウトマウスを作製しGABA_A受容体情報伝達経路に対する影響を調べた。PRIP1^<-/->マウスの海馬細胞を用いwhole-cell patch記録法でGABA誘発性Cl^-電流のZn^<2+>による効果を調べた結果、PRIP1^<-/->マウスでは、Zn^<2+>によるCl^-電流の抑制効果が完全に消失していた。この結果はGABA_A受容体のγサブユニットを介した情報伝達経路が機能しない事を示唆するものであった。そこで、γサブユニットに作用点をもつベンゾジアゼピン系薬剤に対する影響を調べた。PRIP1^<-/->マウスの海馬細胞にジバゼパムを作用させたところGABA誘発性Cl^-電流の増強効果が抑えられた。また、抗不安効果を評価するプラス迷路を用いたPRIP1^<-/->マウス行動解析実験においてもジバゼパム作用効果が減弱していた。以上より新しいIns(1,4,5)P_3結合性蛋白質(PRIP1)は、GABA_A受容体情報伝達経路においてGABARAPとPP-1と共役してGABAシグナルを調節している可能性を示した。
酵母メタロチオネイン遺伝子の発現調節機構の研究

酵母、S.cerevisiaeの重金属耐性機構の1つとして、細胞内で金属結合タンパク質メタロチオネイン(以下MTと略す)を生成することが知られている。MTの生成は銅耐性株では銅でのみ、カドミウム耐性株ではカドミウムと銅によって誘導される。また、両耐性株がそれぞれ生成するMTは結合している金属が異なるだけで、タンパク質部分は同一と考えられる結果を得ている。すなわち、両耐性株のMTの構造遺伝子は同一で同じタンパク質を作るが、その遺伝子の発現誘導にそれぞれの金属に特異的な機構があると推定される。そこで、本研究では両耐性株のMT遺伝子の構造およびその発現誘導機構について調べて次ぎの結果を得た。1.カドミウムおよび銅耐性株のMT遺伝子カドミウム耐性株のゲノムDNAからMTの構造遺伝子をクロ-ニングし、その制限酵素地図を調べると、すでに銅耐性株で報告されているCUPIと同一であると確認した。すでに報告されている結果と合わせて考察すると銅耐性株ではCUPIは第8染色体に増幅されて約10コピ-存在しているが、カドミウム耐性株では同じCUPIが第8染色体だけでなく複数の染色体にわたって数コピ-増幅されて存在していると考えられた。2.カドミウムおよび銅耐性株のCUPI発現誘導カドミウムの耐性株のCUPIのmRNA量を調べた結果、およびCUPIのプロモ-タ-部と大腸菌lacZの融合遺伝子をレポ-タ-遺伝子として用いた実験から、銅耐性株では銅と特異的に結合するACE1タンパク質によるCUP1の発現誘導機構が確認されたが、カドミウム耐性株ではこの機構とは別のCUP1が構成的に発現する機構があり、そらにカドミウムによる誘導機構が付加的に存在すると考えられた。酵母、S.cerevisiaeのメタロチオネイン(以下MTと略す)の生成は、銅耐性株では銅でのみカドミウム耐性株ではカドミウムと銅によって誘導される。また、両耐性株がそれぞれ生成するMTは、結合している金属が異なるだけで、タンパク質部分は全く同じと考えられる結果を得ている。すなわち、両耐性株のMTの構造遺伝子は同一で同じタンパク質を作るが、その遺伝子の発現誘導にはそれぞれの金属に特異的な機構があると推定される。そこで、本研究では酵母のMT遺伝子の金属に特異的な転写の調節機構について調べた。1.カドミウおよび銅耐性酵母株のMT遺伝子の比較カドミウム耐性株のゲノムDNAからMTの構造遺伝子をクロ-ニングし、その制限酵素地図を調べた結果、すでに銅耐性株で報告されているCUP1遺伝子と同一であると確認した。すでに得られている結果と合わせて考察すると銅耐性株ではMT遺伝子は第8染色体に増幅されて約10コピ-存在しているが、カドミウム耐性株では同じ遺伝子が第8染色体だけではなく複数の染色体にわたって数コピ-増幅されて存在していると考えられる。2.金属に特異的な発現誘導機構の存在確認カドミウム耐性株からクロ-ニングしたMT遺伝子で金属感受性株を形質転換した株は、銅耐性は示したがカドミウム耐性は示さなかった。さらに、CUP1遺伝子のプロモタ-部分と大腸菌のlacZ遺伝子の融合プラスミドによる形質転換株と、カドミウム耐性株を接合した2倍体株に、カドミウムを作用させるとβガラクトシダ-ゼの活性を示した。これらの結果から、カドミウム耐性株はMTの構造遺伝子は銅耐性株と同じであるが、その発現調節タンパク質、さらにはその遺伝子がカドミウムでも誘導されるように変異した株であることが示唆された。酵母、S.cerevisiaeの銅耐性株は銅によってのみ誘導的にメタロチオネイン(以下MTと略す)を生成する。

この誘導機構としては、転写調節因子であるACE1タンパク質が銅と結合して、増幅しているMTの構造遺伝子(CUP1)のプロモ-タ-上流に作用して転写が誘導されることが明らかにされている。我々の分離したカドミウム耐性株も銅耐性株と同一のMTタンパク質を生成し、その構造遺伝子も同じCUP1であることが昨年明らかにした。しかし、カドミウムは銅耐性株で明らかにされているACE1タンパク質とは結合せず、CUP1の転写を誘導できない。そこで本年はカドミウム耐性株におけるCUP1の転写調節機構について調べて次の結果を得た。ノ-ザンハイブリダイゼ-ションでカドミウム耐性株のCUP1のmRNA量を調べると金属で処理をしなくてもCUP1ーmRNAが合成されており、さらにカドミウムおよび銅で処理するとその合成量は増加した。またCUP1のプロモ-タ-部と大腸菌1acZの融合遺伝子をレポ-タ-遺伝子として用いた実験でも、金属で処理しなくてもβ-ガラクトシダ-ゼの活性が認められ、カドミウムおよび銅処理によってその活性は高くなった。これらの結果は、我々の分離したカドミウム耐性株ではCUP1が構成的に発現する機構があり、さらにカドミウムによる誘導機構が付加的に存在すると考えられた。また、カドミウム耐性株に特異的なCUP1発現誘導因子の遺伝子の検索を胞子の4分子解析によりを試みたが、この形質は2:2には分離せず、発現機構には複数の遺伝子が関与していると予想された。さらに、銅耐性株から分離したACE1フラグメントはカドミウム耐性株の第7染色体にハイブリダイゼ-ションしたが、この遺伝子がカドミウム耐性株でCUP1の発現にどのような役割を果たしているかは不明であった。
福永晴帆研究―客観的評価の確立と教育学研究への展開―

美術史上の評価が定まっていない福永晴帆とその作品について,宗像大社御便殿に現存する襖絵や腰障子絵の調査を中心に,視覚的効果の高い模写による実証的研究を通して技法や材料的な側面から晴帆の芸術性を分析した。また,晴帆のご息女ならびにお孫さんへの取材調査によって,色紙作品75点と直筆覚書他の資料を発見し,晴帆の画歴や人物像の一端を明らかにした。本研究の成果は,「福永晴帆日本画展」(2014.6.3-6.29,海の道むなかた館)を開催して広く公開する。靖國神社に残る資料を調査することで,晴帆が制作した宗像大社御便殿襖絵の由来の一部が明らかとなった。襖絵の基底材となる資料に関する記載もあり,昨年度から進めてきた腰障子絵の模写研究とともに知見を深めることができた。また,現状模写を中心とした8面の完成に続き2面の再現模写を試み,晴帆の技法の解明にあたった。南画家として紹介されることの多い画家であるが,工芸的な箔の砂子技法を駆使し,計画性を持った制作を行っていることが判明した。完成した作品は宗像大社と連携して鑑賞教育に活用することが可能となり,地域の文化財を活かした美術教育の展開が望める。また,昨年度の画稿の分析を進め,文中に書かれていた漢詩は晴帆自身によるものである可能性が高まった。さらに,漢詩にも書かれている「白狐」の作品について,発見する糸口が見いだせた。情報を頂いた個人が所有する屏風絵一点と掛軸一点についても調査協力の了解を得ており,今年度収集した作品とともに画風の変遷や技法について調査を進める。昨年度の画稿の分析とご息女への取材ならびに模写研究の成果を総合的にまとめ,大学美術教育学会において研究成果を発表し,客観的な評価を得るとともに今後の調査に関する他の専門家の助言を頂くことができた。ただ,残念なことに,晴帆のご息女が他界され大切な証言者を失ってしまった。しかし,ご遺族からの聞き取り調査を継続する了承を得ており,晴帆を直接知るお孫さん等に対する聞き取り調査と資料の発見に努めたい。晴帆の画稿に書かれた文章は西欧に長期滞在したことによる進んだ考えが表されており,戦前・戦後の時代にあって社会を客観視した内容となっている。改めて日本美術史からその存在が薄れつつあることが不思議であり,他の作家の洋風表現とは異なった意識と技法を比較検討することで,晴帆芸術の価値を明確にしていきたい。全国の美術品関連業者を調査することで,晴帆筆「軍旗図」を発見し入手することができた。これは,昨年度の研究でまとめた晴帆の画歴の内,1924年の天皇拝謁を裏付けるもので,晴帆直筆の箱書き等によってその詳細が確認できる。また,拝謁時に持参した作品が皇室以外の場所に現存するとは想像していなかったため,この作品を発見できた資料価値は高い。今年度はこの資料作品の他に3点の掛軸作品を入手することができた。また,本学の「ものづくり創造教育センター」が完成し,競争的スペースの使用が可能となったことから,新たな研究スペースを活用した模写研究ならびに資料のとりまとめを重視するとともに,教育界への研究成果の還元を意識したデジタル化を促進して,研究計画の一部を変更した。これまでの晴帆作品(掛軸・まくり・色紙)は写真データ化し,襖絵と腰障子絵は学内予算を併用することで,より効果的な研究成果の発表が可能となるように,超精細画像処理によるデジタル化を試みた。3年間の研究によって,本研究の対象となる福永晴帆とその作品について,視覚的効果の高い模写による実践的検証を含めた一定の客観的な評価が確立でき,2014年6月に予定する展覧会によって宗像大社の襖絵を中心とした研究成果を発表することが可能となった。研究成果はポートフォリオ方式でまとめているが,学校教育でのカリキュラム開発を目的としていることから,急速に拡大するタブレット型端末機器を用いた教育に対応可能なように,学内予算による超高精細画像処理を導入し,継続的に研究の成果を社会に還元するための資料保存の方法を修正して対応している。将来的には本成果を基とした保存修復事業の申請と全ての成果をまとめた『福永晴帆展』の開催を目指しており,3年間の研究によって新たな研究の基盤を構築できたと考える。研究代表者が,所属研究機関のサバティカル制度によりイタリアへ3ヶ月間,海外研修することとなったため,年度当初に適切な研究実施計画の変更を行った。具体的には,来年度計画の宗像大社御便殿腰障子絵の模写による実証的検証を先行させ,合計八点の作品を完成させた。

模写研究によって,四条円山派の写実に基づいた植物表現と琳派の技法を融合するだけでなく,古墨の収集家でもあった作者の特性を活かして,砂子技法を用いた梨地の下地に,墨と金泥を繊細に使用していることが確認できた。模写作品は洋風表現の調査・分析を担当する加藤の知見を含めて,鑑賞教育の領域で教育界にフィードバックすることとした。事前に入手していた晴帆の画稿については予定通り口語化と分析を終えた。これまでの取材・研究によって想定していた人物像に近い論が展開されており,今後は本文中に記載されている引用元の確認とご子息への取材を継続することで人物像の深化を図り,晴帆の芸術性を明らかにしていく。晴帆の作品は,イタリアの当時の王室にも献納された記載があることから,海外研修の機会を活用して追跡調査を行った。当時のSavoia王室が有していた文化財に関する資料は戦後の国外追放によって辿ることが難しく,王室研究者への取材と文献の調査に止めた。結果としては作品の所在を掴むことはできなかったが,来年度予定するイギリス留学の追跡調査に関して,その方策を練ることができた。国内の作品調査については,靖國神社宮司の京極高晴氏に研究協力の了承を受けた。同様に京都仁和寺の作品を取材し今後の調査に関する研究協力の交渉を行っている。また一般的に認識されている晴帆の画歴のうち,森寛斎を師とする記述の妥当性について,寛斎の愛弟子である春挙の資料を検証したが証明するものは無かった。寛斎と晴帆の師弟関係については当初より疑問視していたが,改めて再考の必要性を確認できた。晴帆に関する研究を進めることで,晴帆の人物像や作品に関して情報が集まりだした。学会で発表したことで,全国に情報が広まり,断片的な情報を得ることができている。また,マイクロスコープによる紙料の分析など科学的な調査を行い,模写研究にも客観性が加わってきた。これまでは個々に存在する情報や作品の収集が主であったが,作品の模写研究や研究ネットワークの拡大によって,情報や作品の関連性が読み取れるようになってきている。晴帆作品の直接的な収集は予定数に届かなかったが,調査の了解を得た作品数を加えると想定数に達しており,これに他の寺社における晴帆作品の調査を継続することで,さらに資料収集の拡大が予測できる。英国での調査を延期したが,国内調査を優先することで研究成果が高まっており,適切な時期を見計らって行う予定である。「9.研究実績の概要」の初めに記述した通り,変更した研究実施計画に基づき,模写研究を行い,事前入手した晴帆の画稿の口語化と分析等を終えた。国外作品についての追跡調査は,戦時中の王室に対する献納作品が多いことから困難が予測され,科研費研究では留学した英国のみを対象としていたが,海外研修の機会を活用することで範囲を広げることができた。国内の作品に関する追跡調査は,研究協力の了承を得た靖國神社を中心に,京都仁和寺へと展開していく。概ね調査体制は組むことができたので,各寺社の行事を確認しながら本格的な調査を進めることができる。晴帆作品の収集に関して,今年度は提供される作品が少なかったが,新たに一点を追加することができた。技法や画材の分析を進めるうえで貴重な資料となる。ご子息への取材は今年度計画した回数を下回った。しかし平成24年度に複数回計画しており,計画通りに終了した画稿の分析を基に取材内容の深化を図り,一度の取材機会に対する密度を高めて対応したい。以上のことから,「おおむね順調に進展している」と評価した。国内の作品調査ならびに技法に関する研究を継続する。また,出身地である山口県を中心に経歴の確定を目指す。