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民衆文学からみた、異民族間抗争がロシア民衆にもたらした精神的・文化的変容の研究

本研究の目的は、いわゆる民族間抗争の問題が有する重要性と緊急性に踏まえながら、その問題を状況分析によらずに、問題が発生したルーツとも呼ぶべき地点にさかのぼり、民衆文学ないしは口承文学を具体的な素材として、その問題の意味と基本構造を解明することにあった。このために本研究者は、18世紀後半から19世紀前半という転換期のロシア社会と文化をとりあげて、この時期の民衆の精神的・文化的変容の実体を分析することを本研究全体の基本的な作業とした。本研究は昨年と今年の2ヶ年にわたるものであったが、昨年の論点をひきつぎながらも本年度の具体的論点となったのは以下の点である。1)18世紀後半以後の「民衆文学」の全体像、2)18世紀後半から19世紀前半にかけてのロシア・ナショナリズムならびに民族意識、3)「ロシア的なるもの」「ロシア民族性」という言説の誕生と展開、4)民俗学史における18世紀後半、5)18世紀後半から19世紀前半におけるロシアの「民俗文化」こうした論点に沿って、本年度は、問題の全体の方向性をめぐる理論編とも言うべき論文「ロシア文化という方法」、そして、民衆文学・版画を素材とした事例編とも言える論文「ロシア民俗学史における『民衆版画』」、さらには、民衆とインテリゲンツィヤとの関係の発生とその構造を考察した論文「A・ラジ-シチェフ『ペテルブルグからモスクワへの旅』の「汚れなき」ナロード」の3編を成果として発表した。それに加えて、別に提出する「研究成果報告書」において、上記の具体的論点にたいする研究実績について論述した。本研究の目的は、いわゆる民族間抗争の問題が有する重要性と緊急性に踏まえながら、その問題を状況分析によらずに、その問題が発生したルーツとも呼ぶべき地点に溯り、民衆文学ないしは口承文学を具体的な素材としてその問題の意味と基本構造を解明することにあった。この目的のために本研究者は18世紀後半から19世紀前半という転換期のロシア社会と文化を取りあげて、この時期の民衆の精神的・文化的変容の実体を分析することを本研究全体の基本的な作業とした。本研究は本年と次年度の2ヶ年にわたるものであるが、本年度における具体的な論点となったのは以下の点である。1)18世紀半ばまでの「民衆文学」の全体像、2)その作品におけるロシアと非ロシア、民衆におけるそれらにたいする意識、3)18世紀後半におけるロシア・ナショナリズム、民族意識、4)18世紀後半におけるロシア「民族誌」の試みとロシア民俗学・「民衆文学研究」の発生本年度にあっては、これらの点を概観して次年度の研究続行のためのさらに具体的な問題点の発見につとめた。したがって現時点においてはまだ最終的な結論にまで到達しているわけでなく、一応の仮説的段階での確認でしかないが、18世紀後半・末から19世紀初頭にかけての時期に、いまだ誕生してまもないインテリゲンツィヤの営為の中で、ロシア的なるもの・ロシア民族性・民衆性、またはロシア民衆文化といった観念体系のごく大まかながらも確実な枠組みが創造されていったのではないか、と考えられている。この点はさらに次年の平成6年度の研究によって、よりいっそうの解明が必要であると思われる。本研究の目的は、いわゆる民族間抗争の問題が有する重要性と緊急性に踏まえながら、その問題を状況分析によらず、問題が発生したルーツとも呼ぶべき地点にさかのぼり、民衆文学ないしは口承文学を具体的な素材として、その問題の意味と基本構造を解明することにあった。本研究は昨年と今年の2ケ年にわたるものであったが、昨年の論点をひきつぎながらも本年度の具体的論点となったのは以下の点である。

1)18世紀後半以後の「民衆文学」の全体像、2)18世紀後半から19世紀前半にかけてのロシア・ナショナリズムならびに民族意識、3)「ロシア的なるもの」「ロシア民族性」という言説の誕生と展開、4)民俗学史における18世紀後半、5)18世紀後半から19世紀前半におけるロシアの「民俗文化」こうした論点に沿って、本年度は、問題の全体の方向性をめぐる理論編とも言うべき論文「ロシア文化という方法」、そして、民衆文学、版画を素材とした事例編とも言える論文「ロシア民俗学史における『民衆版画』」、さらには、民衆とインテリゲンツィヤとの関係の発生とその構造を考察した論文「A・ラジ-シチェフ『ペテルブルグからモスクワへの旅』の「汚れなき」ナロード」の3編を成果として発表した。それに加えて、別に提出する「研究成果報告書」において、上記の具体的論点にたいする研究実績について論述した。
分子スピントロニクスデバイスにおける交流インピーダンス特性

近年、分子材料を用いた新たなスピントロニクス研究分野が大きな注目を集めている。本研究課題では、CoとNi75Fe25強磁性体電極間にtris(8-hydroxyquinolinato) aluminium (Alq3)有機分子を挟んだ分子スピントロニクスデバイスを作製し、その交流インピーダンス特性を調べることを目的とした。その結果、低温にて観測したスピン信号は、交流インピーダンス特性(Cole-Coleプロット)により解析した等価回路モデルにより良く説明できることが明らかになった。本研究課題では、全期間を通して、ナノメートルサイズからマイクロメートルサイズに及ぶ様々な接合サイズを有する強磁性体/分子/強磁性体接合を作製し、その交流インピーダンス特性を調べることを目的とする。本研究目標を達成するため、本年度はナノメートルサイズの接合面積を有する接合デバイスの作製について検討した。作製には磁性薄膜のエッジを利用したナノエッジ法を用いた。本ナノエッジ法は、その作製手法自体、研究開発途中であるため、本年度は、その電極作製について検討した。本年度提案した電極作製方法を以下に示す。初めに、電子ビーム(EB)蒸着法を用いて低融点ガラス上にコバルト薄膜を成膜した。次に、スパッタ法を用いてコバルト薄膜の両端に金薄膜を成膜した。そして、作製した試料のコバルト薄膜面上に低融点ガラスを高温でプレスし接着した。このときプレス温度は屈伏点程度とし、プレス環境は窒素雰囲気中とした。最後に、化学機械研磨(CMP)法を用いてコバルト薄膜のエッジを研磨した。走査型電子顕微鏡(SEM)によりコバルト薄膜のエッジ面を観察した結果、数10nmのエッジ幅を有するコバルトエッジを観察することに成功した。また、原子間力顕微鏡(AFM)により同面の表面状態を観察した結果、0.3-1.0nm程度の表面粗さを有する平坦なエッジ面を形成することに成功した。さらに、直流2端子法によりコバルト電極の抵抗を調べた結果、数10-100Ω程度の低い抵抗値を示すことがわかった。これにより、ナノメートルサイズの接合面積を有する接合デバイスの交流インピーダンスを調べる際、電極のインピーンダンスを最大限に抑えることができ、より厳密な測定結果が得られる。以上より、本ナノエッジ法、並びに、本材料系は本研究目標を達成するための要素技術・材料として極めて有効であることがわかった。分子スピントロニクス研究分野は、強磁性体/多層カーボンナノチューブ/強磁性体における磁気抵抗(MR)効果の発見を機に、近年大きな発展を遂げてきた。しかしながら、これまでの研究ではMR効果、すなわち、磁場による直流抵抗変化に関する報告が多く、磁気インピーダンス(MI)効果、すなわち、磁場による交流インピーダンス変化に関する研究報告例はほとんどなかった。そこで、本研究課題では、分子スピントロニクスデバイスにおいて、その交流インピーダンス特性を調べ、これによりスピン依存伝導現象に関する新たな知見を見出すことを目的とする。本研究目標を達成するため、平成24年度は、様々な接合サイズを有する強磁性体/有機分子/強磁性体接合デバイスを作製し、その構造・磁気特性を調べることを目的とした。マイクロメートルサイズの接合面積を有する接合デバイスの作製には、メタルマスク蒸着法、及び、スピンコーティング法を用いた。磁化状態観察にはマイクロ磁気光学カー効果(MOKE)法を用い、MR効果測定には直流4端子法を用いた。その結果、Ni75Fe25/Alq3/Co接合デバイスでは、77Kにおいて、磁化状態に対応して電気抵抗が変化し、正のMR効果が生じることがわかった。ナノメートルサイズの接合面積を有する接合デバイスの作製には、磁性薄膜のエッジを利用したナノエッジ法を用いた。本ナノエッジ法は、その作製手法自体、研究開発途中であるため、本年度は、その電極材料であるポリエチレンナフタレート(PEN)有機膜上の磁性薄膜について検討した。その結果、Co/PENでは、Co薄膜の膜厚が5nm付近で保磁力、及び、角型比が最大ピーク値を示すことがわかった。本研究結果より、本提案のナノ接合デバイスの電極材料にはCo/PENが有望であることがわかった。本研究課題では、マイクロメートルサイズからナノメートルサイズに及ぶ様々な接合サイズを有する分子スピントロニクスデバイスを作製し、その直流・交流インピーダンス特性を調べることを目的とした。マイクロ接合デバイスの作製にはメタルマスク蒸着法とスピンコーティング法を用いた。ナノ接合デバイスの作製にはナノエッジ法を用いた。各作製工程における構造解析には、走査型電子顕微鏡、原子間力顕微鏡、X線回折法、フーリエ変換赤外分光光度計を用いた。デバイスの電気的評価には、直流・交流4端子法を用いた。磁気特性評価には、磁気力顕微鏡、集光型磁気光学カー効果装置を用いた。平成24年度では、NiFe/Alq3/Coマイクロ接合デバイスを作製し、その電気磁気特性を調べた。その結果、77Kにおいて、磁化状態に対応して電気抵抗が変化し、正の磁気抵抗効果が生じることがわかった。平成25年度では、ナノエッジ法の要素技術となる電極作製法を検討した。

その結果、数10-100Ωの低インピーダンスを示し、かつ、表面粗さが0.3-1.0nmの平坦なエッジ面を有する電極の形成に成功した。平成26年度では、インピーダンス測定系を構築し、NiFe/Alq3/Coマイクロ接合デバイスの交流インピーダンス特性を調べた。その結果、本デバイスは抵抗とキャパシタンスの並列等価回路で説明できる他、デバイスの構造によってはインダクタンスを含む複雑な等価回路で説明できることも、厳密なインピーダンス数値解析により明らかになった。また、同年度では、ナノエッジ法によりNiFe/Alq3/Rhナノ接合デバイスを作製し、その電気伝導特性も調べた。その結果、Alq3におけるナノスケール伝導の観測に成功し、TCL(Trapped-charge limited)電流モードで説明できることがわかった。本研究課題で得られた成果は、近年注目されている分子スピントロニクスデバイスに新たな知見を与えるものであり、これにより当該研究分野の更なる発展が期待できる。応用物理現在までに、マイクロメートルサイズの接合面積を有するニッケル-鉄合金/アルミニウム錯体/コバルト接合デバイスに関しては、その作製が可能となり、これにより正の磁気抵抗(MR)効果の観測に成功している。また、ナノメートルサイズの接合面積を有する接合デバイスに関しては、構造・電気的特性の観点から、1作製手法としてナノエッジ法を用いること、2電極材料としてコバルト/低融点ガラス系を用いることが極めて有効であることが明らかになっている。これらの結果は平成24・25年度の研究実施計画に従って得られた研究成果であり、これにより平成26年度の研究内容を予定通り遂行できるものと考えられる。このような事由から本研究は順調に進展していると判断した。現在までに、マイクロメートルサイズの接合面積を有するNi75Fe25/Alq3/Co接合デバイスに関しては、その作製が可能となり、これにより正のMR効果を観測することに成功した。また、ナノメートルサイズの接合面積を有する接合デバイスに関しては、構造・磁化状態の観点から、その電極材料としてCo/PENが有望であることが明らかになった。これらの結果は平成24年度の研究実施計画に従って得られた研究成果であり、これにより平成25年度の研究内容を予定通り遂行できるものと考えられる。平成26年度は、ナノメートルサイズの接合面積を有する強磁性体/分子/強磁性体接合デバイスを作製し、本接合デバイスの交流インピーダンス特性を調べる。ナノメートルサイズの接合面積を有する接合デバイスの作製には、磁性薄膜のエッジを利用したナノエッジ法を用いる。磁性薄膜のエッジ間に挟む分子の成膜については、真空蒸着法とスピンコーティング法の2種類の手法を検討する。
血管新生抑制因子の制御を応用した新しい細胞治療の開発

近年、四肢の末梢動脈虚血性疾患や虚血性心疾患などに対し、従来の薬物治療、経皮的血管形成術、バイパス手術等に加え、自己骨髄細胞やVEGFなどの血管新生促進因子を用いた血管新生治療が開発された。しかしながら十分な効果が認められない症例が少なからず存在する。ところで主に血管新生治療は血管新生促進因子の補充によるものであるが、生体内には多数の血管新生抑制因子が存在している。しかしながら虚血性血管新生における血管新生抑制因子の役割については現在のところ解明されていない。本年度我々は、虚血モデルに対しVEGF投与を行った場合の虚血組織にお}ナるPEDFの発現を観察(実験1)し、虚血モデルに対するVEGF投与に加え、外因的にPEDFを投与した群,内因性のPEDFを抗PEDF抗体で中和した群について血流回復を観察(実験2)した。さらにPEDFの末梢組織における血管新生抑制のメカニズムにっいて検討した(実験3)。[実験1]虚血モデル作成後、VEGF投与により虚血組織において対照群(非投与群)と比較しPEDFが強く発現することを確認した。[実験2]虚血モデルに対しVEGFを投与することで対照群(非投与群)と比較し有意に血流回復を認めるが、これに加え外因的にPEDFを併用投与することで血流回復作用は消失すること、内因性PEDFを抗体で中和することで血流回復はさらに増加することを確認した。[実験3]虚血組織に対しVEGF投与を行うことで、組織の酸化ストレスは増加し、これにPEDFを併用投与することで減少することをDHE染色を行い確認した。そこで我々は、血管新生抑制因子の中でも最も抑制作用の強いとされるPEDF (Pigment epithelium-derived factor)の虚血組織における動態の観察(実験1)、抗PEDF抗体のPEDF中和能の確認(実験2)を行い、片側下肢虚血モデルをマウスに作成後抗PEDF抗体を投与し血流の回復を観察した(実験3)。[実験1]マウスに片側下肢虚血モデルを作成し、PEDF mRNAをRT-PCR法を用いて経時的に観察した。虚血モデル作成前と比較し1週間後以降に、PEDF mRNAが強く発現していることを確認した。[実験2]MG63(骨肉腫細胞)の自然増殖能はPEDFにより抑制されるが、これが抗PEDF抗体の併用投与により中和されることを細胞培養で確認した。[実験3]マウスに片側下肢虚血モデルを作成し、非投与群(自然経過)、抗PEDF抗体投与群に分け、Laser Doppler Blood flowを用いて虚血肢の血流回復を観察した。抗体投与群は比投与群と比較し、血流回復が良好であることを確認した。現在以上の経過であるが、今後は血管新生促進因子(VEGF)と併用投与した場合の観察や組織学的検討を行う予定である。
高分解能MRI画像計測のための高感度な折り畳み式マイクロコイルの研究

本研究では、MRI画像計測のための高感度なマイクロコイルとして、円錐型マイクロコイルの試作手法を確立し、MRI画像計測を行った。円錐型マイクロコイルとして、直径30 mm、高さ8 mm、抵抗値2.14 Ω、インダクタンス1.29 μHの良好な電気特性を持つコイルを試作することができた。試作コイルにより、オクラやうずらの卵のMRI画像計測を行い、深さ方向に深い画像を高感度に計測できることを確認し、高分解能なMRI画像が取得可能であることを示した。平成24年度は,高分解能MRI(Magnetic Resonance Imaging)画像計測のための高感度な折り畳み式マイクロコイルとして,3次元構造を持つ円錐型マイクロコイルの試作手法を確立し,試作した円錐型マイクロコイルによるMRI画像計測を行った.試作した円錐型マイクロコイルは,直径30mm,高さ8mmであり,内視鏡などの先端に配置して手術中に局所的に高分解能なMRI画像を取得することを目的としている.ここで,高分解能な画像を取得するためには,MRI信号計測用のコイルの受信感度を向上させることが必要であり,そのためにはコイルの抵抗値減少と,巻き数の増加が必要である.しかし,これまでの2次元的な構造のマイクロコイルでは,コイル抵抗を低減するために導線の線幅を太くすると巻き数が減少し,巻き数を増加させるために線幅を減少させると抵抗値が増加するという,トレードオフの関係にあった.これに対し,2次元の平面型コイルを展開させることで3次元的な構造を持つ円錐型マイクロコイルを実現した.この際,コイルにピッチ保持具を持たせることで,等間隔な線間隔を持つコイルとすることができ,近接効果よる抵抗値上昇を低減することで,2.14 Ωと低抵抗なコイルを実現できた.さらに,インダクタンス1.29 μH,自己共振周波数150 MHzの電気特性を持っていたが,コイルの線間隔を一定とすることで高い自己共振周波数を実現できた.最後に,試作したマイクロコイルにより,MRI画像計測実験を行った.計測対象として水ファントムや,オクラ,うずらの卵の画像計測を行い,高いSNR(Signal to Noise Ratio)で画像計測ができること,深さ方向に深い画像計測ができることを確認した.以上より,3次元構造を持つ円錐型マイクロコイルにより,高分解能なMRI画像が取得可能であることを示した.本研究では、MRI画像計測のための高感度なマイクロコイルとして、円錐型マイクロコイルの試作手法を確立し、MRI画像計測を行った。平成23年度は,マイクロコイルの新しい試作手法として,平面型マイクロコイルを平行に折り畳む試作方法の確立を行った.MRI(Magnetic Resonance Imaging)の高分解能画像を取得するためには,MRI信号計測用のコイルの信号受信感度を向上させることが必要であり,そのためにはコイルの抵抗値減少と,コイルの巻き数の増加が必要である.しかし,これまでは柔軟なポリイミド基板上にCuなどの金属配線を行う試作手法であったので,コイル抵抗を低減するために導線の線幅を太くすると巻き数が減少し,巻き数を増加させるために線幅を減少させると抵抗値が増加するという,トレードオフの関係にあった.この問題を解決するために,平面型マイクロコイルを平行に折り畳む方法により,低抵抗で巻き数多いマイクロコイルを実現できる試作手法を確立した.試作コイルは,Cu/ポリイミド/Cuのフレキシブル基板を使用し,2つの平面型マイクロコイル部と,コイル連結部から構成されている.マイクロコイルの外周には,固定用の爪を差し込む穴を4か所配置した.コイルの外周は両面にCu層を残し基板の強度を保つ.コイルの中心部はコイルに影響が出ないようにポリイミドのみとなっている.コイルの組み立て手法としては,まず基板上に試作した平面コイルを基板から切り出し,平面型コイルと連結部の境界線で90度に折り曲げる.そして,連結部の腕を平面コイル外周に沿って曲げ,固定用の爪を平面コイル部の穴に差し込み曲げることで構造が完成する.周波数80MHzにおいて,試作コイルは1.72μH,手巻きコイルは0.41μHのインダクタンスであり,試作コイルは手巻きコイルの約4.2倍の値となった.また試作コイルの自己共振周波数は約120MHzとなり,アンテナ用コイルとして十分な性能を持つことがわかった.本研究課題では,平成23年度に折り畳み式マイクロコイルの試作手法の確立と,MRI信号計測デバイスのプロトタイプの試作を行い,平成24年度にMRI信号計測デバイスとマイクロコイルを統合してMRI画像計測実験を行うことを予定していた.このうち,平成23年度に実施を予定していた折り畳み式マイクロコイルの試作手法の確立については,2つの平面型マイクロコイル部とコイル連結部を折り上げることにより,マイクロコイルを試作する手法を確立した.研究開始当初は,折り畳むことだけを念頭にしていたが,コイルが配置された2面が接触すると特性が不安定になってしまうため,微小な間隔で平行に保持することが重要であることがわかった.

そこで,2平面間を一定間隔で保持できるようにコイル連結部を作成することで,この問題を克服することができた.以上によって,巻き数が多く,かつ,低抵抗なMRI画像計測用のマイクロコイルを試作する手法を確立することができた.一方,MRI信号計測デバイスのプロトタイプについては,これまでアクリルパイプの先端にマイクロコイルを配置したデバイスを試作してきたが,平成23年度は従来試作してきたデバイスをそのまま使用し,平成24年度に改良をおこなうこととした.平成24年度は、マイクロコイルをMRI信号計測デバイスと統合してMRI画像の計測を行い,さらに画像計測結果をフィードバックしたコイルの改良を行うことで高解像度なMRI画像計測の実現を目標として研究を遂行する予定である.具体的には,まずMRI信号計測デバイスのプロトタイプの試作を行い,プロトタイプの先端部にマイクロコイルを配置できるようにする.これまでアクリルパイプの先端にマイクロコイルを配置したデバイスを試作してきたが,デバイス根本部分を内視鏡の根本部と結合し,既存の術具と類似した形状とする.このプロトタイプの先端に折り畳み式マイクロコイルを配置し,試作コイル用に調整したMRI装置との接続回路を内視鏡の根本部分に配置する.この統合デバイスによって,MRI信号計測用標準試料(ファントム)の計測を行い,折り畳み式マイクロコイル,旧手法により試作したマイクロコイル,医療用コイルでの信号対雑音比(SNR:Signal to Noise Ratio)計測の比較実験を行う.折り畳み式マイクロコイルのSNRが十分に向上しなかった場合には,スケール効果による検討を行う.スケール効果による検討結果,試作した折り畳み式マイクロコイルの電気特性,計測されたSNR計測の実験結果から,マイクロコイルや統合デバイスの改良すべき点の洗い出しを行う.このようにして改良を行うことで,MRI信号受信感度を大幅に向上し,高解像度なMRI画像計測を実現する.なお,統合デバイスを利用した高解像度なMRI画像計測の結果を取りまとめ,その成果を国内・国外の学会や学術論文誌で発表する.平成24年度の研究費使用計画としては,設備備品用の物品費として,試作基板へのレジスト塗布用のスピンコーター(ミカサ社製MSA-100)を購入することを予定している.これは,試作基板上に均一にレジストを塗布することによってマイクロコイルの試作精度の向上を目的とした装置の導入であり,研究遂行上必要な装置である.また,消耗品用の物品費としては,マイクロコイルとなるフレキシブル基板や,MEMSプロセスに必要となるアセトン・銅エッチング液などの各種薬品類を購入予定である.旅費としては,国内外での研究調査・研究発表のため,IEEE MEMS(台湾・台北で開催予定),電気学会「センサ・マイクロマシンと応用システム」シンポジウムに参加するための交通費を想定している.その他の費目では,東京大学「超微細リソグラフィー・ナノ計測拠点」の電子線描画装置でガラスマスクを試作する費用を予定している.最後に,研究成果を投稿する際の外国語論文の添削費や投稿費,学会への参加費もその他の費目からの支出を予定している.
経皮吸収性の飛躍的向上を目指したトランスポーター分子標的化薬物デリバリー

本課題では,薬物送達に有用な皮膚に注目し,ここにおいて,薬物の細胞内外の輸送を担う膜タンパク質、トランスポーター群の機能を解析し,経皮投与の可能性の拡大,皮膚の薬物トランスポーターを利用した新規薬物送達システム開発に基盤的知見を提供すること目的としている。昨年度は,皮膚におけるNSAIDsであるフルルビプロフェン透過機構に有機アニオントランスポーターが関与していることが示唆された。本年度は,代表的な排出型トランスポーターであり,皮膚においても発現が観察されているMDRIおよびMRP1に関してその検証実験を実施した。前年度同様,モデル動物としてマウスを採用し,MRPIおよびMDR1の寄与をそれぞれの遺伝子欠損マウスから採取した皮膚を用いUssing chamber法で解析した。Mrp1遺伝子欠損マウスにおいては,モデル化合物としてfluo 3を採用した際に,表皮側および真皮側の両方において排出方向の活陸低下が認められた。このことから,Mrp1は皮膚組織から薬物、異物を排除する機能を発揮していることが示唆された。一方,Mdr1遺伝子欠損マウスにおいては,ローダミン123をモデル化合物として採用した際に,表皮→真皮方向の輸送活性の低下が観察された。以上から,排出型トランスポーターが皮膚組織において機能していることが明らかとなった。近年,医薬品添加剤による薬物トランスポーターの機能阻害、促進が報告されていることから,このような知見と本課題の成果を併せることにより,皮膚を利用した新規薬物送達システムの開発に繋がるものと期待される。本課題では、薬物送達に有用な皮膚に注目し、ここにおいて、薬物の細胞内外の輸送を担う膜タンパク質・トランスポーター群の機能を解析し、経皮投与の可能性の拡大、皮膚光毒性発現機構の解明と回避戦略、また、皮膚の薬物トランスポーターを利用した新規薬物送達システム開発に基盤的知見を提供すること目的としている。経皮投与される非ステロイド性抗炎症薬(NSAIDs)には、そのバイオアベイラビリティーが物理化学的パラメーターによって説明困難なものが存在することから、本年度は、まず、NSAIDsであるフルルビプロフェンに焦点を絞り、解析を実施した。単離皮膚組織を用いて、Ussing・typeChamber解析において、[^3H]フルルビプロフェンの皮膚透過には担体介在型の輸送機構が見出され、特に、皮膚組織の取り込み機構には、飽和性・温度依存性・エネルギー依存性といったトランスポーターの関与を示唆する結果が得られた。さらに、詳細な阻害プロファイル実験を実施した結果、皮膚の[^3H]フルルビプロフェン取り込み機構に有機アニオントランスポーター(OATs)が関与することが示唆された。そこで、Oat2が一部のNSAIDsを輸送することが知られていたことから、アフリカツメガエル卵母細胞にOat2を発現させ、取り込み輸送実験を行った。その結果、Oat2を発現した卵母細胞は有意に[3H]フルルビプロフェンを取り込んだことから、皮膚におけるフルルビプロフェン透過機構に有機アニオントランスポーター・Oat2が関与していることが示唆された(投稿中)。本年度の研究により、薬物トランスポーターが皮膚の薬物透過に寄与することが示された。皮膚には、MDRsやMRPsなど主要な薬物排出型トランスポーターも発現していることから、次年度はこのようなトランスポーター分子と薬物皮膚透過との関わりを解明することが課題と考えられる。
SOX17発現抑制と炎症反応の相互作用によるがん悪性化機構の研究

SOX17遺伝子はSOXファミリーに属する転写因子で、腫瘍形成に関与すると考えられている。また、SOX17はWntシグナル標的因子として報告されているが、大腸がん細胞ではSOX17の発現低下が報告され、がん抑制遺伝子としての可能性も示唆されている。よって、SOX17が、向腫瘍性か抗腫瘍性に作用するのかは未だ明らかとされていない。本研究では、各種マウスモデルを用いて遺伝学的解析により、腫瘍の悪性化過程におけるSOX17の役割について解析した。本研究により、SOX17は腫瘍発生初期からWntシグナル依存的に発現誘導されるが、腫瘍発生過程と粘膜下浸潤過程のどちらにも関わっていない可能性が示された。SOX17は、HMGボックスを持つSOXファミリーに属する転写因子である。SOX17は、Wntシグナルを抑制性に制御する機能が報告されている。また、大腸がん細胞でSOX17遺伝子を強制発現させると、Wntシグナルの低下にともなって腫瘍原性が低下するという報告から、SOX17は、がん抑制遺伝子として機能する可能性が示唆されている。一方で我々は、これまでにマウスモデルを用いた研究結果から、Apc遺伝子欠損により発生する良性の腸管腫瘍細胞でSOX17の発現上昇が認められるが、ApcとSmad4の複合遺伝子変異により発生する悪性化した浸潤性の腸がん細胞では、SOX17の発現が低下する現象を発見した。さらに、我々は浸潤過程においては、慢性炎症による炎症性微小環境の形成が重要である事を示す予備的結果を得ている。本研究課題では、SOX17の欠損と炎症反応の相互作用による腫瘍の悪性化機構を解明する事を目的とする。今年度は、SOX17欠損マウスを用いて、炎症反応依存的な大腸がん発がん実験を行った。AOMとDSSを連続的に投与したマウスでは、beta-catenin遺伝子変異の導入と、潰瘍性大腸炎の相互作用により腸管腫瘍を形成する。SOX17遺伝子をvillin-CreERマウスと交配し、タモキシフェン(Tmx)投与によりSOX17を腸上皮で欠損させたマウスを作製して、AOM/DSS投与を行うと、SOX17遺伝子野生型マウスと同様の大腸腫瘍を発生した。すなわち、SOX17遺伝子欠損は、初期の炎症発がん過程には関与していない可能性が示された。また、次年度解析のため、炎症依存的に浸潤性の腸がんを発生するTgfbr2のコンディショナル欠損マウスと、SOX17欠損マウスとの交配を開始した。SOX17は、SOXファミリーに属する転写因子である。SOX17は多くのヒト大腸がんで、発現が低下していることから、がん抑制遺伝子と考えられていた。ApcΔ716マウスの腸管に自然発症するポリープで、Apc遺伝子の欠損による腫瘍の発生初期からSOX17の発現が誘導されることを発見して報告した。また、良性腫瘍から浸潤を伴う悪性腫瘍に進展すると、SOX17の発現は顕著に低下することも観察し、以上の結果から、SOX17は腫瘍発生過程で促進性に、悪性化過程で抑制性に作用する可能性が考えられた。本研究では、SOX17遺伝子コンディショナルノックアウトマウス(SOX17fl/fl)を用いて、ApcΔ716マウスとの交配実験からSOX17の腸管腫瘍発生への関与を解析している。腸管上皮特異的に遺伝子欠損させるために、villin-CreERマウスを使用した。これまでに、ApcΔ716/SOX17fl/fl/Villin-CreER複合マウスを作製してポリープ形成について解析したが、SOX17遺伝子の欠損による小腸での腫瘍発生への影響は認められなかった。一方で、結腸ポリープ数はSOX17遺伝子欠損により有意に増加した。また、SOX17遺伝子欠損により結腸粘膜が肥厚する傾向が認められたため、マウスの解析例数を増やして検討することとした。また、腫瘍発生と炎症とは密接に関わっていることから、炎症依存的に腫瘍を結腸に発症するAOM/DSSの実験系を用いて検討し、この結果、SOX17遺伝子欠損によっても、AOM/DSS投与による腫瘍発生の頻度、大きさは変化しなかった。さらに、SOX17の腫瘍悪性化への影響を観察するため、ApcΔ716/Tgfbr2fl/fl/SOX17fl/fl/Villn-CreERマウスを作製し、ポリープの浸潤過程にSOX17が関与しているかについての検討を進めている。SOX17は、HMGボックを持つSOXファミリーに属する転写因子である。SOX17には、Wntシグナルを抑制的に制御する機能が報告されている。また、ヒトの癌では、その発現抑制が報告されることから、がん抑制遺伝子として機能する可能性が示唆されているが、未だにその詳細は明らかとされていない。我々の研究室では、これまでにApc遺伝子ノックアウトマウスを用いた研究結果から、Wntシグナル亢進により発生する良性腸管細胞ではSOX17発現が誘導されることを明らかとした。また、浸潤を伴う悪性化進展した腸管腫瘍ではSOX17の発現が低下することも観察している。これまでに、Aocノックアウトマウスの交配によりSOX17遺伝子を欠損させても腸管腫瘍発生の頻度や大きさの変化が認められなかったことから、SOX17遺伝子は、初期の腸管腫瘍発生には関与していないと考えられた。

そこで、今年度は、Aoc/Tgfbr2ダブルノックアウトマウスに発生する、浸潤を伴う悪性化した腫瘍形成過程にSOX17遺伝子が関与しているかについて、交配実験により検討したところ、SOX17遺伝子がなくても浸潤を伴う腫瘍が発生し、またその頻度や形態的な変化は認められなかった。さらに、発症した腫瘍では、SOX17遺伝子が欠損していることを確認した。そこで、発生した腫瘍組織を用いた三次元培養法によって、Wntシグナルが亢進した上皮細胞でのSOX17遺伝子発現の影響について検討した。しかし、SOX17遺伝子が欠損した上皮細胞では、SOX17遺伝子が野生型の上皮細胞と比較して、成長の度合いや、形態に変化が認められなかった。SOX17遺伝子はWntの標的遺伝子として、Wntが活性化した腫瘍細胞での顕著な発現誘導が認められる。しかし、良性腫瘍や浸潤を伴う悪性化腫瘍発生も、その発生にSOX17遺伝子は関与していない可能性が示唆された。SOX17遺伝子はSOXファミリーに属する転写因子で、腫瘍形成に関与すると考えられている。また、SOX17はWntシグナル標的因子として報告されているが、大腸がん細胞ではSOX17の発現低下が報告され、がん抑制遺伝子としての可能性も示唆されている。よって、SOX17が、向腫瘍性か抗腫瘍性に作用するのかは未だ明らかとされていない。本研究では、各種マウスモデルを用いて遺伝学的解析により、腫瘍の悪性化過程におけるSOX17の役割について解析した。本研究により、SOX17は腫瘍発生初期からWntシグナル依存的に発現誘導されるが、腫瘍発生過程と粘膜下浸潤過程のどちらにも関わっていない可能性が示された。昨年度までに、小腸での腸管ポリープ発生にSOX17が関与していないことを明らかにし、また、炎症依存的に発症する腫瘍形成にもSOX17は関与していないことを明らかにした。そこで、今年度は、Apc変異とTGF-βシグナルの遮断によって発症する悪性化浸潤ポリープの形成にSOX17が関与しているかを、ApcΔ716/SOX17fl/fl/Villin-CreER複合マウスを作製して検討した。その結果、小腸ではSOX17遺伝子が欠損しても浸潤ポリープの形成が認められた。これまでの報告から、SOX17が腫瘍形成に促進的、あるいは抑制的に働くかは不明であったが、本研究によるこれまでの結果から、SOX17は小腸の腫瘍発生過程および浸潤過程のどちらにも関与していない可能性が示唆された。分子病理学ApcΔ716マウスで発生するポリープは、90%以上が小腸で発症するが、結腸にも少数の腫瘍ポリープが発症する。これまでの実験から結腸に発生するポリープのみにSOX17が関与している可能性が示唆されたため、マウスの数を増やして結腸ポリープの発生における影響に焦点を絞って検討する。また、腸管の腺管を単離して、培養するオルガノイド技術が確立できたため、この培養法を用いた検討を行う。ポリープ形成では変化は認められなくても、オルガノイド培養法によって、SOX17遺伝子欠損による上皮細胞の種々の形質変化を解析する。炎症依存的な腸管腫瘍発生過程では、SOX17遺伝子欠損は関与しない事を示す事が出来た。この結果を踏まえて、浸潤性腸がん発生モデルにおけるSOX17遺伝子欠損の影響についての研究へと進める。一方で、当初計画したSOX17遺伝子欠損マウス由来腸上皮細胞の3次元オルガノイド培養実験は、まだ成果が得られていないが実験系の確立による準備を整えた。
近代フランスにおける教会・学校・国家

本研究は、近代フランスの国民国家形成において、カトリック教会と公教育システムが担った機能の史的意味を明らかにしようとするものであった。具体的には、1819世紀を通して現象した公教育をめぐる国家と教会との熾烈なヘゲモニ-闘争の実相をフォロ-することによって、近代社会における「文化統合」の変容を跡ずけようとした。編著『規範としての文化ー文化統合の近代史』(1990年3月、平凡社)巻頭の二論考「文化統合の社会史にむけて」、「司祭と教師ー19世紀フランス農村の知・モラル・ヘゲモニ-」は、その主たる成果の一部である。前者では、従来の社会史研究にありがちな政治史アレルギ-の不毛性の克服と、伝統的な政治史や思想史の社会史的「読み替え」による歴史学の革新を提唱した。後者では、その視座をふまえ、地方農村の文化的・政治的規範形成の担い手と見られる司祭・教師・村長の三者に着目し、その出自・年令・教養・収入・統合機能などの諸要素を多角的に分析した。さらに、この三者の「村の政治」における力関係、「中央」とのパイプの性格など、言わば文化統合のメカニズムを剔抉し、その変化を19世紀全般を通して検討した。フランス農村の「政治化」は、従来、選挙の投票行動や農民蜂起といった非日常的な「事件」のレベルで論じられて来たが、ここでは、教会・学校・役場といった日常的な場で、構造的に組み込まれた係争にメスを入れることにより、「「政治文化」の変容という視角が不可欠であることを確認することができた。この構造は、実のところフランス革命期に淵源を発するものであり、そのため最終年度は、主として革命下の「非キリスト教化運動」の分析に力を注いだが、このテ-マについて論文として世に問うのは、復古王政期の掘り下げと併せて、なお数年の努力が必要とされよう。他日を期したい。他日を期したい。本年度は、19世紀の農村におけるヘゲモニー構造の変化を中心に研究を進めた。地方農村の文化的・政治的ヘゲモニーの担い手と見られる司祭、教師、村長の三者に着目し、その出自、年齢、教養、収入、村民の統合に果たす機能などの諸要素を多角的に検討した。さらに、この三者の「村の政治」における力関係、「中央」(国家、司教座、教皇庁など)とのパイプの性格などの変化を【○!1】19世紀前半【○!2】第二帝政期【○!3】第三共和政期の三時期に分けて分析した。その結果、欧米のフランス史研究者のあいだで続けられいいる論争--19世紀フランス農村はいつ、いかにして「政治化」し「近代化」されたか--の盲点が明らかとなった。第一に農民の「政治化」を従来のように、選挙の投票行動や「農民蜂起」への参加形態の分析といった非日常的、例外的「事件」のレベルで問題にしているだけでは決定的に不十分であり、教会や学校教育問題などの、より日常的な係争点での統合のメカニズムにメスを入れなければならないこと。また、E.Weberのように農村の政治的・文化的後進性、孤立性を過度に強調することは実態に反すること。さらに、フェリー改革(1880年代)以降の公教育の世俗化の推進を、中央の国家権力による地方文化の「圧殺」ととらえる近年の研究動向は、民衆レベルでも存在した反教権主義(反聖職者・反教会)感情を見落していること。以上の三点である。

現在、これらの論点を整理した論文を作成しており、筆者が事務局をつとめる「近代社会史研究会」編の共同研究論集(別記)に収録する予定である。本年度はこれらのメインテーマの他にも別記のように、フランス革命期の非キリスト教化や教育改革思想の史料収集と翻訳、都市手工芸職人の社会的結合関係の構造変化についての論文の書きおろしなどに携わった。次年度は、これらの問題をさらに掘り下げていきたい。本年度はまず、昨年度の報告書で予告したフランス農村の文化統合をめぐる考察「司祭と教師ー19世紀フランス農村の知・モラル・ヘゲモニ-」を書き下ろした(1989年4月脱稿)。この論文は近代社会史研究会のメンバ-13名の論考とともに『規範としての文化ー文化統合の近代史』(1990年3月、平凡社)と題する共同研究論文集に収録され、その冒頭を飾っている。因みに、この論集の序文「文化統合の社会史にむけて」の執筆も報告者の担当である。そこでは、従来の社会史研究にありがちな政治史アレルギ-の不毛性を克服し、伝統的な政治史や思想史の社会的「読み替え」による歴史学の革新を提唱した。すなわち本論文集で言うところの「文化」は、政治権力の技法をも射程に収めた広義の「文化」であり、分析対象も、近代社会における規範形成のプロセスや担い手の変容が中心に据えられている。たとえば、公教育をめぐるconflict、移民の「同化」に見られるホスト文化とエスニック・マイノリティ-の葛藤、飲酒やスポ-ツなどの日常的娯楽にこめられた規範化作用の分析、といった章が柱となっている。この編集作業を通じて、「文化統合の史的展開に着目する社会史」の構想にささやかながらも一歩踏みだしえたのではないかと考える。今年度のもうひとつの課題は、エリ-ト教育におけるカトリック教会のヘゲモニ-の分析であった。これについては、第三共和政下のイエズス会系コレ-ジュの隆盛をフォロ-し、その潜勢力の根強さを再確認した。この現象は、宗教教育をめぐる国家との葛藤というバリアを越えて、フランスのエリ-ト形成に占める古典教育のウェイトの圧倒的な大きさという事実と密接に関係していると考えられる。共和派エリ-トとカトリックとの「ねじれた共犯関係」を内包していると思われるこのテ-マについては、次年度に小論を草する予定である。本研究は、近代フランスの国民国家形成において、カトリック教会と公教育システムが担った機能の史的意味を明らかにしようとするものであった。具体的には、1819世紀を通して現象した公教育をめぐる国家と教会との熾烈なセゲモニ-闘争の実相をフォロ-することによって、近代社会における「文化統合」の変容を跡ずけようとした。編著『規範としての文化ー文化統合の近代史』(1990年3月、平凡社)巻頭の二論考「文化統合の社会史にむけて」、「司祭と教師ー19世紀フランス農村の知・モラル・ヘゲモニ-」は、その主たる成果の一部である。前者では、従来の社会史研究にありがちな政治史アレルギ-の不毛性の克服と、伝統的な政治史や思想中の社会史的「読み替え」による歴史学の革新を提唱した。後者では、その視座をふまえ、地方農村の文化的・政治的規範形成の担い手と見られる司祭・教師・村長の三者に着目し、その出自・年令・教養・収入・統合機能などの諸要素を多角的に分析した。さらに、この三者の「村の政治」における力関係、「中央」とのパイプの性格など、言わば文化統合のメカニズムを剔抉し、その変化を19世紀全般を通して検討した。
LKB1 遺伝子異常に基づく肺がん個別化治療の基礎的検討

肺癌の予後改善のためには個々の癌の特性に応じた薬物治療の開発が必要である。近年、種々の悪性腫瘍で、その発生や進展に寄与する活性化分子を標的にした治療法の有効性が示され、臨床導入されつつある。肺癌では、細胞増殖促進分子mTORを活性化し得るLKB1やPTEN遺伝子の変異が高頻度に存在する。我々は、本研究でこれらの変異とmTOR阻害剤の感受性との相関を見いだした。このことは、今後の肺癌個別化治療の開発の一助となると考える。LKB1遺伝手異常は、散発性悪性腫瘍のうち肺がんでのみ高率に起こり、かつ肺がんの形成や進展に重要な役割を担うと考えられる。本研究では、このLKB1遺伝子異常に基づいた肺がん個別化治療の開発を目的に、その可能性をin vitro、in vivoで検討することとした。今年度はまず、肺がん細胞株を用いてLKB1遺伝子異常と、各種抗癌剤(mTOR阻害剤、EGFRチロシンキナーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド系抗がん剤、タキサン系抗がん剤)の感受性との関連を検討した。LKB1遺伝子異常のある細胞ではmTOR阻害剤の感受性が高く、ビンカアルカロイド系抗がん剤、タキサン系抗がん剤の感受性が低いという結果を得た。次に、各細胞で細胞内シグナル伝達系におけるAKT, mTOR, p70S6Kの活性化を検討したところ、LKB1遺伝子異常を有する細胞ではLKB1の発現が消失しており、またmTORが恒常的に活性化されていた。このことがmTOR阻害剤感受性に関与していることが示唆された。現在、LKB1をノックダウンした細胞株で各抗癌剤の感受性変化や蛋白発現変化を検討中である。今後、ビンカアルカロイド系抗がん剤、タキサン系抗がん剤の感受性の違いに影響を及ぼす因子についても検討し、さらには動物実験で確認する予定である。これらの研究で成果が得られれば、LKB1遺伝子異常をバイオマーカーとした肺がん個別化治療を確立することで、新たな肺がん治療戦略の一助になると期待される。肺癌薬物治療にEGFRを標的とした治療が導入され、今後も様々な分子を標的とした治療の開発が期待される。我々のこれまでの研究によりLKB1遺伝子異常は、肺がんで高率に起こり、かつ肺がんの形成や進展に重要な役割を担うと考えられる。本研究では、まずLKB1遺伝子異常に基づいた肺がん個別化治療の可能性を検討することとした。昨年度は、LKB1遺伝子異常のある細胞ではmTOR阻害剤の感受性が高いのに対し、ビンカアルカロイド系抗がん剤、タキサン系抗がん剤の感受性が低く、またLKB1遺伝子異常を有する細胞ではLKB1の発現が消失しており、mTORが恒常的に活性化されていることを見いだした。今年度は、LKB1をノックダウンした細胞株で各抗癌剤の感受性変化や蛋白発現変化を検討しつつ、また同じくmTORの活性化に影響を及ぼしうる癌抑制遺伝子PTENの異常を有する細胞株を用いてLKB1同様の同様の検討をした。LKB1同様にPTEN遺伝子異常のある細胞株ではPTEN発現の消失によりmTORが恒常的に活性化されており、mTOR阻害剤の感受性が高いことが証明された。現在、この結果は論文を作成し海外雑誌に投稿中である。肺癌治療におけるmTOR阻害剤の、より有効な臨床応用のためにはこれらの癌抑制遺伝子の異常と薬効との関係を追求する必要があると考えられ、現在さらに検討中である。
食品由来廃棄物を有効活用した新規ビフィズス菌増殖因子の創成

食品製造・加工過程において生成する2つの廃棄物を有効活用して、腸のビフィズス菌を増やす食品素材の生産を試みた。(1)食肉加工過程で生成するブタ胃ムチンのO-結合型糖鎖をビフィズス菌由来の酵素、あるいは菌体を用いて分解することにより、ビフィズス菌特異的な増殖活性のある2糖ガラクト-N-ビオースの生産を検討した。(2)梅干し製造過程で生成する梅酢由来の梅ポリフェノールによるビフィズス菌増殖効果を見出し、増殖の鍵酵素であるビフィズス菌由来の2種類のGH43エキソ-α-アラビノフラノシダーゼをクローニングした。梅ポリフェノールの腸内細菌フローラ改善効果について、マウスを用いて評価した。大腸菌を用いて、B. bifidum由来の組換え1,2-α-フコシダーゼ(AfcA)、B型特異的α-ガラクトシダーゼ(AgaBb)、α-シアリダーゼ(SiaBb2)、α-N-アセチルグルコサミニダーゼ(AgnB)、ラクト-N-ビオシダーゼ(LnbB)を大量発現させた。これらをあらかじめ透析したブタ胃ムチン(Sigma社製)に作用させたところ、ラクト-N-ビオース(Galβ1-3GlcNAc)の遊離が確認できた。この反応液に、さらにB. bifidum由来の組換えエンド-α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ(EngBF)を作用させると、ガラクト-N-ビオース(Galβ1-3GalNAc)の遊離も確認できた。遊離2糖をHPLCで分析したところ、基質ムチン重量に対して0.94%のラクト-N-ビオース、1.21%のガラクト-N-ビオースがそれぞれ得られた。梅ポリフェノール原末をゲル濾過で分画し、ポリフェノール配糖体、フリーのポリフェノール、多糖を含む画分に分けた。ポリフェノール配糖体と多糖を各種ビフィズス菌の培地に添加して増殖を比較したところ、前者はBifidobacterium catenulatum、B. pseudocatenulatum、B. angulatumにより資化されることが明らかになった。配糖体はいくつかの成分を含むが、ビフィズス菌により利用される主成分はアセチル化ショ糖にフェルラ酸がエステル結合したプルノースの類縁体であることが質量分析などから明らかになった。この結果からビフィズス菌はフェルラ酸エステラーゼをもつことが示唆された。また後者(多糖)はB. longumに資化され、菌体反応により23糖と予想されるオリゴ糖を遊離した。ほぼ当初計画どおりに進捗している。前年度までに、梅酢より調製された「梅ポリフェノール」中にビフィズス菌増殖因子が含まれていることを明らかにした。Bifidobacterium catenulatum, B. pseudocatenulatum, B. angulatumに対して活性のあるポリフェノール配糖体は、HPLCやMS等の分析により、アセチル化ショ糖にフェルラ酸がエステル結合したプルノースの類縁体であることが明らかになり、これら3種のビフィズス菌はフェルラ酸エステラーゼ活性によりアセチル化ショ糖を遊離させ資化していることがわかった。そこで、B. pseudocatenulatumよりゲノムDNAライブラリーを大腸菌中で構築し、pNP-フェルラ酸に対する活性を指標に発現クローニングを試みた。現在、得られたクローンに含まれるDNA挿入断片を解析中である。B. longum subsp. longumに対しては、多糖画分が増殖促進活性を示した。菌体を多糖画分に作用させると、アラビノースおよび構造未知の3糖が遊離した。後者についてはMS解析をおこなったところ、アラビノース-(メチルグルクロン酸-)ガラクトースと推定されるm/z値が観測された。この構造はアラビノガラクタンの非還元末端に存在することが報告されている。また、アラビノースの遊離に関しては、ゲノム情報から糖質加水分解酵素ファミリー43に属する未解析のBLLJ_1852とBLLJ_1853が、アラビナンに作用してアラビノースを遊離するα1,2/α1,3-アラビノフラノシダーゼとα1,5-アラビノフラノシダーゼであることが組換え酵素の解析により明らかになった。これらを「梅ポリフェノール」に作用させるとアラビノースが遊離した。新奇と推定される酵素の遺伝子を発現クローニング法で同定しようと試みたが、予想外に難航し、解析が遅れている。(1)梅ポリフェノールのビフィズス菌増殖効果について、これまでにBALB/cマウスを用いて投与試験を実施したが、このマウスの腸内にはもともとビフィズス菌がおらず影響を評価することができなかった。その後、別施設で飼育されたC57BL/6マウスにはビフィズス菌が生息していることがわかったので、29年度にはC57BL/6マウスへの投与試験を実施した。標準食群、高脂肪食群、高脂肪食+1%梅ポリフェノール群の3群(n=4)に分け、餌を自由摂取させ、5週間飼育した。盲腸内容物の細菌叢をT-RFLP法により解析したところ、標準食群で12.9(SE=1.5)%見られたビフィズス菌は、高脂肪食群で0.1(SE=0.1)%にまで減少した。ところが、梅ポリフェノール群においては0.5(SE=0.1)%とわずかではあるが、有意なビフィズス菌の回復効果が見られた。

また、高脂肪食により減少したBacteroidetes門Prevotella属の割合を有意に回復させ、高脂肪食により変化した肥満型の高Firmicutes/Bacteroidetes比フローラを回復させる効果が示された。また、体重増加を有意に抑制し、血中の中性脂肪の上昇も有意に抑制した。以上のとおり、梅ポリフェノールにはビフィズス菌を増殖させるのみならず、抗肥満効果も有する機能性食品素材であることを明らかにした。(2)硫酸化されたGlcNAcを含むムチン糖鎖に作用するビフィズス菌の糖質分解酵素として、初めてBbhIIを同定した。本酵素は以前に、β-N-アセチルグルコサミニダーゼとして報告したものであるが、6位が硫酸化されたβ-GlcNAcに10倍以上よく作用する酵素であった。この発見により、硫酸化されたオリゴ糖もビフィズス菌増殖因子になりうることが明らかになった。食品製造・加工過程において生成する2つの廃棄物を有効活用して、腸のビフィズス菌を増やす食品素材の生産を試みた。(1)食肉加工過程で生成するブタ胃ムチンのO-結合型糖鎖をビフィズス菌由来の酵素、あるいは菌体を用いて分解することにより、ビフィズス菌特異的な増殖活性のある2糖ガラクト-N-ビオースの生産を検討した。(2)梅干し製造過程で生成する梅酢由来の梅ポリフェノールによるビフィズス菌増殖効果を見出し、増殖の鍵酵素であるビフィズス菌由来の2種類のGH43エキソ-α-アラビノフラノシダーゼをクローニングした。梅ポリフェノールの腸内細菌フローラ改善効果について、マウスを用いて評価した。フェルラ酸エステラーゼは、CAZyデータベースではCE1ファミリーに分類されている。しかし、全ゲノム情報が明らかになっているB. catenulatumやB. pseudocatenulatumにはCE1に分類される候補遺伝子は含まれていない。すなわち、全く新規のフェルラ酸エステラーゼが存在する可能性が示唆される。そこで、酵素を精製して部分アミノ酸配列を決定する、あるいは発現クローニング法により、ゲノムライブラリーから責任遺伝子の同定を試みる。新奇酵素と考えているフェルラ酸エステラーゼ、および、アラビノガラクタンの非還元末端からアラビノース-(メチルグルクロン酸-)ガラクトースを遊離する新奇β-ガラクトシダーゼの遺伝子を発現クローニング法で同定する。微生物学少額の残金(2440円)で購入すべき物がなかったので次年度に繰り越した。研究計画に若干の遅れを生じ376,979円の余剰金が出たため、これを次年度に繰り越すこととした。試薬等の消耗品の購入に充てる。