hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒルシュスプルング病および同類縁疾患における原因遺伝子変異と臨床的特徴の検討

研究目的:ヒルシュスプルング病(H病)の原因とされる遺伝子異常が判明するのは全体の3割の患者とされており、7割では不明のままである。次世代シークエンサーを用いてH病の原因と推定される遺伝子異常の有無を網羅的に解析した。またH病患者間でも重症度は異なっており、判明した遺伝子異常とその臨床像とを照らし合わせることで、今後発生する新規H病患者に予後予測などのより有益な情報を伝えることを目的とした。研究方法:ヒルシュスプルング病患者および家族からインフォームド・コンセントを得て、4家系13人から検体を採取させて頂いた。採取検体から抽出したDNAを、28遺伝子・367アンプリコンとなるプライマーセットで増幅し、次世代シークエンサーにて解析を行った。研究成果:解析結果の詳細な検討はまだ途上であるが、1家系3名の患者からはH病患者の15%において原因遺伝子とされるRET遺伝子のkinase domainに、新規のミスセンス変異を認めた。データベース解析からは、同一部位の別のミスセンス変異によるアミノ酸置換がH病の原因と考えられることが判明した。そのため、この3名の患者においてはこの遺伝子異常がH病の原因であることが高い確率で推定された。またこの3名の患者のうち1名は重症例であり、RET遺伝子では原因遺伝子異常とは別の部位にあるSNP(遺伝子多型)が疾患の重症度と関与している可能性が示されているため、現在解析中である。また解析した他の遺伝子群に異常がないかどうかについても解析を継続している。今後残る9名の検体の遺伝子異常の有無についての詳細な検討、および新たに採取させて頂いた検体の解析を行っていく。
メッセンジャ-RNA5'末端キャップ構造の形成機構と機能に関する研究

真核細胞mRNAキャップ構造の形成には少なくとも4種類の一連の酵素活性が関与する。この内、キャップ構造の基本骨格、GpppN、形成にあずからmRNAキャッピング酵素は、mRNAグアニル酵転移酵素(GTase)とRNA5'ートリホスファタ-ゼ(TPase)の2種類の酵素活性から構成されている。キャッピング酵素の構造と機能を詳細に解明するために、同酵素の機能を酵素化学的ならびに遺伝子レベルで解析し、以下の成果を得た。また、転写開始とキャップ形成との関連についても検討を加えた。(1)動物細胞のキャッピング酵素ではGTaseとTPaseが1本のポリペプチド鎖上にそれぞれドメインを形成して存在するのに対し、酵母の酵素では両活性が2種類の異なるサブユニット、α(52K,GTase)とΒ(80K,TPase)に分かれて存在する。α鎖によるキャップ形成反応は酵素ーGMP共有結合中間体を経て進行し、この場合GMPは酵素のリジン残基に結合していることを明らかにした。(2)酵母染色体遺伝子ライブラリ-より、α鎖遺伝子の全長を単離した。この遺伝子は第7染色体上に存在し、酵母の生育に必須であった。(3)α鎖遺伝子を大腸菌で大量発現させ、高度に精製した組換えα鎖を得た。精製α鎖は、Β鎖非存在下に、酵素ーGMP形成のみならずRNA5'末端にキャップを形成する能力を有していた。(4)組換えα鎖を用いて、GMP結合サイトを含む活性中心近傍15アミノ酸の配列を決定した。(5)HeLa細胞抽出液を用いたRNAポリメラ-ゼIIによるOOinWWーPP OOvitroWWーPP転写系による解析から、転写開始複合体中にはキャッピング酵素系が特異的に組み込まれ、機能していることを明らかにした。(6)当初の予定には組入れてなかったが、ウイルスのもつキャッピング酵素の反応の性質を解析した。(ー)鎖RNAをゲノムとするセンダイウイルスのOOinWWーPP OOvitroWWーPP転写系を確立し、この系を用いてmRNAキャップ形成が細胞核の酵素とは異なる機構(GDP転移型)で行なわれることを明らかにした。キャップ構造の形成に関与する一連の酵素系のうち、キャップ構造の基本骨格(G(5')pppN-)形成にあずかるmRNAキャッピング酵素は、mRNAグアニル酸転移酵素(GTase)とRNA5'トリフォスファターゼ(TPase)の2種類の酵素活性から構成されている。キャッピング酵素の構造と機能をさらに解明することを目的に、同酵素の機能を酵素化学的ならびに遺伝子レベルで解析し、以下の成果を得た。また、RNAポリメラーゼIIによる転写開始とキャップ形成との関連についても検討を加えた。(1)動物細胞のキャッピング酵素はGTase活性とTPase活性が1本のポリペプチド鎖上にそれぞれドメインとして存在するのに対し、酵母からの酵素では両活性が2種類の異なるサブユニットに分かれて存在する。高度に精製した動物(Artemia salina)のキャッピング酵素をトリプシンで限定分解して得られるGTaseとTPase各ドメインの触媒する反応の性質を解析し、両ドメインが機能的にも構造的にもかなり独立したものであることを示した。(2)酵母(S.cerevisiae)染色体遺伝子ライブラリーより、酵母キャッピング酵素GTaseサブユニット遺伝子を単離した。その遺伝子解析から、酵母酵素の2つのサブユニットはそれぞれ異なった遺伝子によってコードされていることを証明した。

(3)酵母における遺伝子破壊の実験から、GTase遺伝子は酵母の生育に必須であることを明らかにした。(4)単離した酵母GTase遺伝子に種々の欠失変異をおこさせ、酵素活性に必要なポリペプチド鎖上の領域を解析した。(5)in vitro転写系を用いてRNAポリメラーゼIIによる転写の初期反応を解析し、キャッピング酵素ならびにmRNA(グアニン-7-)メチル基転移酵素が転写開始複合体中に特異的に組み込まれて機能していることを明らかにした。真核細胞mRNAキャップ構造の形成には少くとも4種類の一連の酵素活性が関与する。このうち、キャップ構造の基本骨格(G(5')pppN-)形成にあずかるmRNAキャッピング酵素は、mRNAグアニル酸転移酵素(GTase)とRNA5'-トリホスファタ-ゼ(TPase)の2種類の酵素活性を有する。本年度は、(1)酵母mRNAキャッピング酵素について、酵素化学的ならびに分子遺伝学的解析を行うと共に、(2)RNAポリメラ-ゼII(polII)による転写開始反応とキャップ形成の関連について検討を加えた。(1)酵母(S.cerevisiae)より高度に精製したキャッピング酵素はα(52kDa)、β(80kDa)2種類のサブユニットから成り、α鎖はGTase活性を、β鎖はTPase活性を担う。α鎖によるキャップ形成反応は酵素-GMP共有結合中間体を経るが、この場合GMPは酵素リジン残基のε-アミノ基に結合していることを明らかにした。また、酵母α鎖遺伝子を単離し、これが酵母の生育にとって必須であること、染色体VII上に存在することを示した。α鎖遺伝子の構造領域(全459アミノ酸から構成)に種々の欠失突然変異を導入し、活性に必要な機能ドメインの解析を試みた、その結果、酵素-GMP中間体形成には、少くともN末端から1134、C末端から2361アミノ酸の領域が必要であった。さらに種々の変異体について検討を加えている。(2)HeLa細胞より得た無細胞転写系を用いてpolIIによる転写の初期過程を解析した。転写開始複合体にはキャッピング酵素とmRNA(グアニン-7-)メチル基転移酵素が特異的に組み込まれており、これがpolII転写産物のみにキャッピングが起こる理由であることを明らかにした。また、polII転写開始複合体形成はATPの水解に依存することを示し、この過程に関与する因子の部分精製を開始した。昨年度にひき続き、mRNAキャッピング酵素の構造と機能について、酵素化学的並びに分子生物学的研究を行ない、以下の結果を得た。1.酵母mRNAキャッピング酵素は、α鎖(mRNAグアニル酸転移酵素、GTase)とβ鎖(RNA5'ートリホスファタ-ゼ、TPase)の二種類のサブユニットから成る。これまでに我々は、GTaseによるキャップ形成反応(GTP+ppNー→GpppNー+PPi)は、酵素(E)ーGMP共有結合中間体を経ることを示した。今回、EーGMPにおいて、GMPは酵素リジン残基のεーアミノ基にホスホアミド結合を介して結合していることを示した。
ゼブラフィッシュ初期胚発生に関与するプロテインキナーゼの機能解析

細胞内情報伝達のKey Moleculeであるプロテインキナーゼ(PK)の機能に関しては、まだ明らかにされていない点が多く存在する。脊椎動物の胚発生過程では、限られた時間・空間において各組織が決まったルールに従って器官形成されるが、この過程もリン酸化を介したシグナル伝達機構によって厳密に制御されているはずである。しかし、胚発生過程のいつ、どこで、どの分子種のPKが器官形成に関与しているかはあまり分かっていない。申請者の所属する研究室では、PK間で高度に保存された触媒領域に着目し、PKを網羅的に検出することが出来る抗体を開発した。この抗体を用いてゼブラフィッシュ受精後72時間の胚からcDNAライブラリーを作製し、発現スクリーニングを行ったところ、4種類のPK遺伝子を取得することが出来た。その中でdoublecortin-like protein kinase (DCLK)に注目して機能解析を行った。平成20年度までに、C末端領域が自己阻害部位であることが明らかとなり、C末の自己阻害領域を欠損させることにより高活性型zDCLKを取得した。平成21年度は、高活性型zDCLKを基質探索のツールとして用い、ゼブラフィッシュ脳抽出液中から内在性基質候補タンパク質:Synpsin IIを同定し、そのリン酸化部位やzDCLKとの結合などをin vitro, in vivoにおいて調べた。その結果、Synapsin IIはzDCLKの触媒領域に結合し、zDCLKによって主に2箇所のセリン残基(Ser-9とSer-58)がリン酸化されることが確認された。次に、Synapsinタンパク質がシナプス終末部に多く存在することから、ゼブラフィッシュの脳からシナプトソーム画分を分画し解析を行ったところ、zDCLKがSynapsinタンパク質と同様にシナプトソーム画分に多く存在しており、他のSynapsinファミリータンパク質よりもSynapin IIと効率良く結合し、zSynapsin IIを好んでリン酸化することが判明した。これらの結果から、zDCLKは中枢神経のシナプス周辺に局在しており、SynapsinIIのリン酸化を介して神経伝達物質の放出などの機能に関与する可能性が示唆された。その中でdoublecortin-like protein kinase(DCLK)に注目して機能解析を行っている。DCLKは受精後24時間から脳と眼に強く発現しており、DCLKをgene knockdownするとDCLKの発現部位と同様に後脳でアポトーシス細胞の増加が確認された。本研究では、「DCLKの内在性基質の探索とリン酸化部位の同定」および「軸索輸送におけるDCLKの分子レベルでの機能解明」を目的とし、重点的に研究を進めている。まず、zDCLKの活性化機構について解析を行い、C末領域を削り込むことによって約20倍に活性化することを明らかにした。この活性型zDCLKを用いてゼブラフィッシュ脳抽出液中から内在性基質タンパク質を同定し、zDCLKがin vitroでそのタンパク質をリン酸化することを確認した。さらに、zDCLKをジーンノックダウンした場合に基質タンパク質のリン酸化レベルや発現量などが変化するかを調べている。ゼブラフィッシュDoublecortin-like protein kinase(zDCLK)に重点を置いて研究を進めており、in vitroでの機能解析と平行して、基質探索を進めている。(1)各種変異体を用い、zDCLK活性化機構を調べた。C末領域を段階的に削り込んだ変異体を作製し、それらの活性を比較したところ、kinase領域の直前まで削り込んだ変異体が最も活性が高く、C末領域が全て残っている変異体の約30倍もの活性を示した。また、活性型DCLKにC末ポリペプチドを添加することにより活性が阻害され、C末領域が自己阻害部位として自身の活性を制御する機構が明らかとなった。(2)zDCLKを用いて、ゼブラフィッシュ脳抽出液からの内在性基質の探索を試みた。ゼブラフィッシュ脳抽出液を等電点分離したサンプルを基質として活性型zDCLKでリン酸化したところ、特異的にリン酸化されるバンドが複数見られた。そのバンドをLC-MS/MSにより解析し、同定した。このタンパク質を仮にXと呼ぶが、タンパク質Xは神経特異的に発現することが知られており、いくつかのkinaseによりリン酸化され、局在や機能が変化することが報告されている。まず、タンパク質Xを大腸菌にて発現させ解析したところ、in vitroでzDCLKによって主に2箇所のセリン残基がリン酸化されることが確認された。さらに、DCLKとタンパク質Xの結合について調べたところ、全長同士での結合が確認され、培養細胞での共局在が示された。

脊椎動物の胚発生過程では、限られた時間・空間において各組織が決まったルールに従って器官形成されるが、この過程もリン酸化を介したシグナル伝達機構によって厳密に制御されているはずである。しかし、胚発生過程のいつ、どこで、どの分子種のPKが器官形成に関与しているかはあまり分かっていない。申請者の所属する研究室では、PK間で高度に保存された触媒領域に着目し、PKを網羅的に検出することが出来る抗体を開発した。この抗体を用いてゼブラフィッシュ受精後72時間の胚からcDNAライブラリーを作製し、発現スクリーニングを行ったところ、4種類のPK遺伝子を取得することが出来た。その中でdoublecortin-like protein kinase (DCLK)に注目して機能解析を行った。平成20年度までに、C末端領域が自己阻害部位であることが明らかとなり、C末の自己阻害領域を欠損させることにより高活性型zDCLKを取得した。平成21年度は、高活性型zDCLKを基質探索のツールとして用い、ゼブラフィッシュ脳抽出液中から内在性基質候補タンパク質:Synpsin IIを同定し、そのリン酸化部位やzDCLKとの結合などをin vitro, in vivoにおいて調べた。その結果、Synapsin IIはzDCLKの触媒領域に結合し、zDCLKによって主に2箇所のセリン残基(Ser-9とSer-58)がリン酸化されることが確認された。次に、Synapsinタンパク質がシナプス終末部に多く存在することから、ゼブラフィッシュの脳からシナプトソーム画分を分画し解析を行ったところ、zDCLKがSynapsinタンパク質と同様にシナプトソーム画分に多く存在しており、他のSynapsinファミリータンパク質よりもSynapin IIと効率良く結合し、zSynapsin IIを好んでリン酸化することが判明した。これらの結果から、zDCLKは中枢神経のシナプス周辺に局在しており、SynapsinIIのリン酸化を介して神経伝達物質の放出などの機能に関与する可能性が示唆された。
器械運動における新しい教具の開発-運動説明の新技術とその役割-

本研究は、体育の器械運動における新しい教具の開発とその役割に関する研究である。本研究では、(1)これまで詳しく取り上げられてこなかった教師の運動説明をめぐる問題(教師の説明不足による指導ミス等)を浮き彫りにし、(2)それを解決する為に現在筆者が開発中である運動呈示教具をさらに発展させ、(3)それを使用した指導実践を行い新教具の使用可能性を探り、(4)その成果を運動指導現場に寄与することが目的であった。当該研究期間では、(1)(4)を予定通り進むことができ、研究の成果として学会発表し、小学校をはじめとする運動指導現場に提供することができた。本研究では、1.これまで詳しく取り上げられてこなかった教師の運動説明をめぐる問題(教師の説明不足による指導ミス等)を浮き彫りにし、2.それを解決する為に現在筆者が開発中である運動呈示教具をさらに発展させ、3.それを使用した指導実践を行い新教具の使用可能性を探り、4.その成果を運動指導現場に寄与することが目的である。これを達成するために2年間で(1)体育授業における運動呈示における既存の有効手段とその問題点の把握、(2)マグネット製の人形を使用した指導実践、(3)指導実践から得られた結果に対してスポーツ運動学的立場からの考察、(4)関連学会での発表、実践への提言という4段階の内容を設定した。平成26年度においては、(1)および(2)を重点的に行った。(1)の運動説明の既存の方法としては、実際に見本を見せる〈示範〉やVTRを使用した映像機器による運動の説明の他に、絵や図を描いての説明やデッサン人形(立体型の模型)などを使用した説明なども利用されていた。そこでの問題としては、教師の運動説明における表現技術の差による伝達力に左右されるという点であった。すなわち、いくら便利なツールが用意されていてもその使い方に洗練していないと効果がないという点が指摘される。そこで、本研究では、それらを改善するために、多くの教師が説明しやすいような教具の開発を進めた。そこでは、いくつものマグネット人形を試作する中で、いくつかの特徴を押さえたものが完成した。現在は、いくつか試行錯誤して作成した人形の中から最も使用しやすい大きさのもの(身長約45cm)を筆者自身が担当する器械運動の授業にて使用し、運動説明の効果を検証している。当該研究期間では、1.これまで詳しく取り上げられてこなかった教師の運動説明をめぐる問題を具体的に浮き彫りにし、2.それを解決する為に現在筆者が開発中である運動呈示教具をさらに発展させ、3.それを使用した指導実践を行い新教具の使用可能性を探り、4.その成果を学会発表し、運動指導現場に提供することができた。平成27年度においては、(3)および(4)を主に行った。(3)では筆者が開発を進めている運動説明のための教具であるマグネット人形を用いて授業で指導実践を行った。そこでは、これまで問題となっていた教師が生徒に技(動き)を教える際の難点を解決できる糸口が発見できた。具体的にはこれまで学習者(生徒や学生)に教師が伝えづらかった運動感覚的な部分を鮮明に表すことが可能となった。運動の形を簡単かつ正確に表現することができ、指導に大きな効果を表した。しかし、このマグネット人形を使用すれば誰でも必ず効果を上げるということではない。指導者である教師がそれを用いて適切なアドバイスを用いて行うことが前提となる。これらの結果が得られたところで平成27年度は研究のまとめの段階であったため、(4)の段階としてこれらの成果を学会発表の形にまとめ20th Annual Congress of the ECSSにて発表した。また、これらを国内にて広く周知するための論文も現在執筆している。平成26年度は、器械運動における運動説明の為のマグネット人形を作成し実践の中で使用する中で、その効果を検証してきた。また、それらを検証するに至った経緯を学術的背景も確認してきた。これらの行程については当初の予定通り進んでいると考えられる。これらに加え、小学校教員をはじめ、中学校体育教員、高等学校体育教員、さらにはスポーツクラブにおける指導者の方から、運動指導に関して直面している問題や筆者が作成したマグネット人形についてご意見いただくことが出来た。

これについては、当初の予定より一歩進んだ研究材料が得られた。とりわけ特筆するべき点は、平成26年10月にそれまでの研究成果を学会にて口頭発表した点である(第28回日本スポーツ教育学会大会-愛媛大学-)。10月の発表においては、マグネット人形の作成法とバリエーションの紹介、その使用可能性を示唆するまでにとどまったが、多くのスポーツ教育学および教科教育の専門家よりご意見を頂けた。当初は26年度に学会発表する段階まで進まないと考えられていたが、学校現場で苦労される教員やスポーツ指導者のご意見やご協力も頂き、学会発表するまでに至った。その点においては当初の予定より進んでいると考えられる。体育科教育平成26年度の進捗状況を踏まえて、27年度は筆者が作成したマグネット人形が器械運動における指導的効果を検証し、その使用可能性を学術的に考察することで指導現場に貢献できる知見を得る。具体的には、年度の前半では、指導実践の遂行と記録したビデオ映像を確認・整理し、考察のための基礎資料を作成する。また、教師と学習者の運動に関する会話やジェスチャー(身振り・手振り)も同時に記録し、考察のための基礎資料とする。それらの行程を済ませた後は指導実践から得られた資料が指導現場にどう活きるかをスポーツ運動学的立場から考察する。ここまでの行程をできるだけ早く完了し、これまでの成果を学会にて発表し、多くの専門家や研究者から意見をいただきたい。そしてそれらの意見を踏まえてまとめとして、指導現場に立つ教師に伝達したい。平成27年度は、上記計画を遂行するために、資料収集のための機器や消耗品、学会発表するための旅費などが主である。これらは当該研究の活動に必要不可欠な経費であると考える。以下の使用計画の通り計上したい。当該年度においては、1.映像資料を蓄積・保存するための機器、2.学術的背景や資料収集のための文献、3.学会参加・および発表するための旅費、4.研究資料・考察資料を作成・推敲するための消耗品を使用したい。これらはすべて、器械運動における新しい教具の開発のために使用され、指導現場に寄与するために購入される。以上の内容を適正かつ合理的に使用し、当初の目的を達成する予定である。
ロイコトリエンの細胞間情報伝達における役割の解明

細胞間情報伝達におけるアラキドン酸カスケ-ド、特にリポキシゲナ-ゼ系産物の役割を解明する目的で、本年度は(1)生合成酵素の細胞局在の解明、及び(2)ロイトコトリエン関連物質の細胞膜受容体の解析に関する研究を行った。ロイトコトリエンA_4水解酵素の細胞局在の解明同酵素cDNAを大腸菌内で発現させ、この蛋白で家兎を免疫し、得られた抗体をアフィニティカラムで精製した。この精製抗体はモルモットのいずれの組織でも分子量70K付近の単一蛋白を認識した。抗体を用い、種々の臓器を免疫染色したところ、小腸の粘膜上皮、気管や血管の平滑筋、さらに気管支上皮細胞に染色された。中枢神経では嗅脳や脊髄前角細胞等の神経細胞に腸性所見が得られた。これらの細胞でのロイコトリエンの役割の解明が重要となってきた。(2)ロイコトリエン受容体の解析三種類(C,D.B)のロイコトリエン結合能を全身臓器で調べると、Cは脳、下垂体、心臓に、Dは肺に、そしてBは脾、白血球等に多く存在する事が明らかとなった。それぞれの結合蛋白を受容体が豊富に存在する臓器から可溶化すると、いずれの受容体もGTP結合蛋白とカップルしている事が明かとなった。各々のロイコトリエンは受容体→G蛋白→ホスホリパ-ゼCの経路で細胞内ストアよりカルシウムイオンを放出させるが、Cに関しては、この他に細胞内レセプタ-を介してポタシウムチャンネルを開く可能性が示された。
運動トレーニングと大動脈における遺伝子プロファイリング-トレーニングによる大動脈伸展性増大における分子メカニズムの解明-

有酸素性運動トレーニングは、大動脈などの中心動脈の伸展性を増大させるが、このトレーニングによる中心動脈の適応がどのようなメカニズムで引き起こされているかは不明である。そこで我々は、運動トレーニングによる大動脈伸展性増大のメカニズムを分子レベルで解明することを計画し、トレーニングによる大動脈伸展性の増大にどのような遺伝子が関与しているのかを検討することを目的とした。まず、運動トレーニングによる大動脈伸展性増大の適応機序における関連遺伝子のプロファイリングを行うため、3,800遺伝子の発現を定量的に評価することができるマイクロアレイを用いて遺伝子発現の解析を行った。4週齢の雄SDラットにトレッドミルによる走トレーニングを4週間行い、大動脈におけるmRNAの発現を解析・評価したところ、大動脈伸展性に血管拡張・収縮因子として関連する可能性のある29遺伝子が抽出された。さらに、抽出された候補遺伝子のうち、プロスタグランディンEP2レセプター(PGE-EP2R)、プロスタグランディンEP4レセプター(PGE-EP4R)、C型ナトリウム利尿ペプチド(CNP)、そして内皮型nitric oxide合成酵素(eNOS)について詳細な検討を行った。PGE-EP2R、PGE-EP4R、CNP、eNOSのmRNA発現を定量PCRで確認したところ、いずれのmRNA発現もトレーニングにより、有意に増大していた。さらに、これらのmRNA発現と大動脈伸展性との関係には、相関関係が認められた。これらの結果より、運動トレーニングによる大動脈伸展性増大のメカニズムの一部には、トレーニングによるPGE-EP2R、PGE-EP4R、CNP、eNOSの遺伝子発現の変化が関与している可能性が示唆された。さらに、運動トレーニングによる心臓の適応に関する検討も行い、トレーニングによる心臓の適応に関連する遺伝子を明らかにした。有酸素性運動の継続は、大動脈などの中心動脈の伸展性を増大させるが、このトレーニングによる中心動脈の適応がどのようなメカニズムで引き起こされているのかは不明である。そこで我々は、有酸素性運動トレーニングによる大動脈伸展性増大のメカニズムを分子レベルで解明することを計画し、有酸素性運動トレーニングによる大動脈伸展性の増大にどのような遺伝子が関与しているのかを検討することを目的とした。本年度は、運動トレーニングによる大動脈伸展性増大の適応機序における関連遺伝子のプロファイリングを行うため、3,800遺伝子の発現を定量的に評価することができるマイクロアレイを用いて遺伝子発現の解析を行った。4週齢の雄SDラットにトレッドミルによる走トレーニング(30m/min,60分/日,5日/週)を4週間行った。また、コントロールとして、同週齢の安静飼育したラットを用いた。トレーニングあるいは安静飼育終了後、大動脈伸展性を測定し、その後、大動脈を摘出し、大動脈におけるmRNAの発現を解析・評価した。コントロールと比較して、トレーニングにより、遺伝子の発現量が2倍以上の高値、あるいは1/2以下の低値を示したものを抽出した。大動脈伸展性はトレーニングにより、有意に増大した。大動脈にて、トレーニングにより増大した遺伝子数は206遺伝子、低下した遺伝子数は117遺伝子であった。このうち、大動脈伸展性に血管拡張・収縮因子として関連する可能性のある遺伝子を選ぶと、増大した遺伝子数は24遺伝子、低下した遺伝子数は5遺伝子であった。これらの結果から、運動トレーニングにより大動脈伸展性が増大し、その増大に血管拡張・収縮因子として作用する可能性のある多くの遺伝子の発現が関与している可能性が示唆された。有酸素性運動トレーニングは、大動脈などの中心動脈の伸展性を増大させるが、このトレーニングによる中心動脈の適応がどのようなメカニズムで引き起こされているのかは不明である。

そこで我々は、有酸素性運動トレーニングによる大動脈伸展性増大のメカニズムを分子レベルで解明することを計画し、有酸素性運動トレーニングによる大動脈伸展性の増大にどのような遺伝子が関与しているのかを検討することを目的とした。昨年度は、まず運動トレーニングによる大動脈伸展性増大の適応機序における関連遺伝子のプロファイリングを行うため、3,800遺伝子の発現を定量的に評価することができるマイクロアレイを用いて遺伝子発現の解析を行った。4週齢の雄SDラットにトレッドミルによる走トレーニング(30m/min,60分/日,5日/週)を4週間行い、大動脈におけるmRNAの発現を解析・評価したところ、大動脈伸展性に血管拡張・収縮因子として関連する可能性のある29遺伝子が抽出された。本年度は、マイクロアレイにより抽出された候補遺伝子のうち、プロスタグランディンEP2レセプター(PGE-EP2R)、プロスタグランディンEP4レセプター(PGE-EP4R)、C型ナトリウム利尿ペプチド(CNP)、そして内皮型nitric oxide合成酵素(eNOS)について詳細な検討を行った。PGE-EP2R、PGE-EP4R、CNP、eNOSのmRNA発現を定量PCRで確認したところ、いずれのmRNA発現もトレーニングにより、有意に増大していた。さらに、これらのmRNA発現と大動脈伸展性との関係には、相関関係が認められた。これらの結果より、運動トレーニングによる大動脈伸展性増大のメカニズムの一部には、トレーニングによるPGE-EP2R、PGE-EP4R、CNP、eNOSの遺伝子発現の変化が関与している可能性が示唆された。
硫黄架橋金属クラスター錯体の立体化学, 光化学および磁性

本研究では主としてモリブデンおよびタングステンを含む硫黄架橋三核および四核金属クラスター錯体の多様な性質を追求した。これまでの硫黄架橋金属クラスター錯体の研究の主眼は、置換反応・酸化還元など、金属に注がれていたが、ここでは架橋硫黄の反応性についても注目した。不完全キュバン型硫黄架橋モリブデンク錯体のアセチレンとの反応より硫黄-炭素結合を持つ錯体を取り出し、構造決定・物性測定を行った。また、対応する硫黄/酸素架橋不完全キュバン型タングステン錯体に関して、架橋硫黄部位のアセチレンとの反応性を配位子により調節できることを見いだした。硫黄架橋錯体の架橋硫黄部とアセチレンおよびその誘導体との反応による硫黄-炭素結合の生成が契機となり、ジフェニルジチオレンおよびその類縁化合物を配位子とするいくつかの新規化合物を見いだし、モリブデン、タングステンおよびクロム錯体のフォトクロミズムを含む光化学へと発展させることができた。また、私たちの年来の研究テーマである「金属取り込み反応」に関する研究も発展させ、モリブデン-ガリウム、モリブデン-アンチモン、およびモリブデン-カドミウムの混合金属クラスター錯体の合成・X線構造解析・物性測定を行うことができた。ニトリロ三酢酸を配位子とする硫黄架橋キュバン型タングステン-ニッケル混合金属クラスター錯体の合成・X線構造解析に成功し、ヒドラジン配位子とする錯体を単離した。硫黄/酸素モリブデン錯体への配位によるジエチレントリアミンの脱プロトン化を明らかにした。また、イミノ二酢酸を配位子とする不完全キュバン型硫黄架橋クラスター錯体の4種の異性体を単離し、その内の3種のX線構造解析を行うと共に、異性化が起こることを見いだした。平成8年度は以下の研究実績を得ることができた。2)Cのイミノニ酢酸を配位子とする誘導体[Mo_3OS_3(ida)_3]^<2->(E)の幾何異性体のカラム分離に成功した。第3分画のアセチレン誘導体エチルプロピオレートとの反応生成物の光学分割を行い、CDスペクトルの測定に成功した。(第46回錯体化学討論会にて発表(1A120))。3)太陽光に敏感な複核錯体[Mo_2(μ-S_2)(μ-S_2C_2Ph_2)_2(S_2C_2Ph_2)_2]の有功波長が580-620mmであることを確認した。また、類似の配位子をもつ錯体[Mo_2(μ-S_2)_2(μ-S_4)(S_2C_2Ph_2)_2]を初めて合成し、X線構造解析を行い物性の比較を行った(第46回錯体化学討論会にて発表(1A119))。4)混合金属錯体[Mo_3GaS_4(H_2O)_<12>]^<n+>(F,n=5;G,n=6)を酸濃度を調節することにより合成した。Fは水素イオンにより酸化されGを生じ、水素を発生する。磁気的挙動をSQUID法を用いてヘリウム温度から室温まで測定し興味ある結果を得た(第46回錯体化学討論会にて発表(1PA449))。5)硫黄架橋錯体[(H_2O)_9Mo_3S_4Mo_3(H_2O)_9]^<8+>(H)の誘導体[(ida)_3Mo_3S_4MoS_4-Mo_3(ida)_3]^<4->(I)を合成し,電気化学を行った。また、HのDV-Xα法による分子軌道計算を行い、電子スペクトルなどのシミュレイションをおこなった。

(第46回錯体化学討論会(1PA45)および第9回DV-Xα研究会(C8)にて発表)。6)硫黄/酸素架橋タングステンアクアクラスター錯体[W_3S_4(H_2O)_9]_<4+>(J)および[W_3OS_3(H_2O)_9]^<4+>(K)はアセチレンと反応しないが、それらのチオシアナト誘導体はアセチレンと反応することを見いだした。(第46回錯体化学討論会にて発表(1PB43))。平成9年度は以下の研究実績を得ることができた。1.カドミウムとモリブデンを含む硫黄架橋キュバン型クラスター錯体の合成に成功した。このクラスターがMo_3CdS_4骨格を持つことを元素分析およびCu^<2+>との反応生成物の解析から明らかにした。このクラスター錯体は水素イオンを還元して水素を発生する。2.ジフェニルジチオレンおよび二硫黄を配位子とする新規タングステン複核錯体[W_2(μ-S_2)(μ-S_2C_2Ph_2)_2-(S_2C_2Ph_2)_2]の合成に成功し、X線構造解析を行い対応する既知モリブデン錯体との物性比較を行った。4.ニトリロ三酢酸を配位子とする硫黄架橋キュバン型タングステン-ニッケル混合金属クラスター錯体[W_3NiS_4Cl(Hnta)(nta)_2]^<5->の合成・X線構造解析に成功し、アセチレンおよびエチレンとの反応することを見いだした。6.イミノ二酢酸を配位子とする不完全キュバン型硫黄/酸素架橋クラスター錯体[Mo_3XS_3(ida)_3]^<2->(X=O,S)の異性体を単離し、X線構造解析すると共に、水溶液中で異性化が起こることを^1HNMRで確認した。上記成果は平成9年9月岩手大学において開催された第47回錯体化学討論会において発表した:2YA01,2YA02,2YA03,PA54,2PA55,2PA56。本研究では主としてモリブデンおよびタングステンを含む硫黄架橋三核および四核金属クラスター錯体の多様な性質を追求した.これまでの硫黄架橋金属クラスター錯体の研究の主眼は、置換反応・酸化還元など、金属に注がれていたが、ここでは架橋硫黄の反応性についても注目した.不完全キュバン型硫黄架橋モリブデンク錯体のアセチレンとの反応より硫黄-炭素結合を持つ錯体を取り出し、構造決定・物性測定を行った.また、対応する硫黄/酸素架橋不完全キュバン型タングステン錯体に関して、架橋硫黄部位のアセチレンとの反応性を配位子により調節できることを見いだした。硫黄架橋錯体の架橋硫黄部とアセチレンおよびその誘導体との反応による硫黄-炭素結合の生成が契機となり、ジフェニルジチオレンおよびその類縁化合物を配位子とするいくつかの新規化合物を見いだし、モリブデン、タングステンおよびクロム錯体のフォトクロミズムを含む光化学へと発展させることができた.また、私たちの年来の研究テーマである「金属取り込み反応」に関する研究も発展させ、モリブデン-ガリウム、モリブデン-アンチモン、およびモリブデン-カドミウムの混合金属クラスター錯体の合成・X線構造解析・物性測定を行うことができた.ニトリロ三酢酸を配位子とする硫黄架橋キュバン型タングステ-ニッケル混合金属クラスター錯体の合成・X線構造解析に成功し、ヒドラジン配位子とする錯体を単離した。硫黄/酸素モリブデン錯体への配位によるジエチレントリアミンの脱プロトン化を明らかにした。また、イミノ二酢酸を配位子とする不完全キュパン型硫黄架橋クラスター錯体の4種の異性体を単離し、その内の3種のX線構造解析を行うと共に、異性化が起こることを見いだした。
コーパスに基づく英語シノニム・語法研究

本研究は、平成16年度から平成19年度までの4年間に、英語シノニム(類義表現)・語法の研究を行い、それを言述しようとするものである。状況に応じた最適の英語表現を選択しようとするとき、シノニムの知識や情報は欠かせない。本研究では、コーパス活用の利点である、(1)英米の参考書にない当該表現についても分析記述が可能となり、英米の参考書に負うところの多い現状を打破できる、(2)少人数のインフォーマント調査では避けることのできないインフォーマント自身の個人差を吸収できる、(3)母語話者が無意識のうちに行っている使い分けを分析の対象とすることができる、(4)母語話者ゆえに見過ごされていた現象や言語事実を非母語話者の立場から客観的に明らかにすることができるといった点を生かしながら、日本語母語話者が誤りやすい英語シノニム表現10組について分析研究した。分析には、主として英国Collins社の提供による世界で最大級のコーパス検索サービスBank of English(フルコーパスで5億2千万語)を用いる。より信頼性の高いデータが得られるだけでなく、これまでは抽出数の関係で分析をあきらめざるを得なかったシノニム表現も調査対象とすることができるようになる。また、コロケーション分析には欠くことのできない頻度・MI-score・t-scoreなどの統計値に関する情報を得ることができ、大量のデータに溺れることなく効率的に分析を行うことが可能となる。井上(2005)では,シノニムの一形態である変異形を学習辞書記述の観点から取り上げた。コーパスを辞書編集に使うようになると,通常は文法的に非文とされる形も出てくる。教育現場で使うことが想定されている学習辞書において,非文をどのように扱うかはそのターゲットユーザーがだれであるかを考慮すべきである。例えば,not only Abut (also) Bの構文ではalsoが選択的であるとされることが多い。コーパスを検索してみると,butのみが続く形が4割ほどで最も多く,alsoのみが続く形は2割に満たない。尤も,butもalsoもいずれも続かない形が4割近くあることも見過ごすことはできない。今後,記述の改善が望まれる。次に代名詞の単複呼応について,each of themを例に検討している。規範的には単数呼応だが,Celce-Murcia, Larsen-Freeman and Williams (1999:65-66)が示すように,母語話者のアンケート結果を見る限り,単複どちらも可能といった印象を受ける。ところが,コーパスの検索結果を見ると,複数呼応はまれであることがわかり,学習辞書や教育現場の立場としてはあくまで単数呼応で対応しておけばよいことがわかる。また,母語話者の意見は個人的な意見にすぎず,必ずしも常に教育的に適切であるとは限らないことも教訓として得られる。変異形は,学問的には面白い現象でついつい大きく扱いがちだが,実際にはそれほど数は多くなく,学習効率という面ではあまり強調しすぎない方が賢明であろう。次に,コーパスを活用することによって,具体的にどのような分析や情報提示ができるようになるかを示した。学習効率を上げることに貢献する見出し語の頻度情報,語義や用例の頻度順提示,頻度を基にした語義・用例・コロケーションの選択は言うに及ばず,aroundとround, come in Aとcome into Aといったペアを例にシノニム〔類義表現〕・語法記述の可能性,breakfast in bedやroll up one's sleevesといった表現を例に文化的・語用論的記述の可能性,womanを例にPC〔political correctness,(差別的表現排除のための)政治的妥当性〕表現の実情記述の可能性を示した。また,日常的な決まり文句である句表現(phraseology)は,成句やコロケーションといった範疇だけでは捉えきれない上に,その性質上辞書編集のための記録資料として残ることが少なく,しかも母語話者にとっては当たり前の表規であるので学習辞書でさえこれまではしばしば無視されてきた。

コーパスを活用すれば非母語話者でさえもこれらの表現を母語話者による辞書に先駆けて記述することができることを示した。井上(2005)以外では,what S V is (to)do(SがVすることは...することである)のtoの出没,(前)の後に生起するwho(m),その他のシノニム・語法を研究準備中である。井上永幸(2005)「英和辞書セミナー:『ウィズダム英和辞典』」,第1回英語語法文法セミナー〔2005年8月2日(火),於:大阪市立大学文化交流センター〕.井上永幸(2006)「特集『辞書』の使い方・使わせ方『辞書のレーベルを読もう』」,『英語教育』2006年3月号,大修館書店,p.21.--(2007)「学習英和辞典のシノニム記述と語法記述-Corpus-BasedからCorpus-Drivenへ-」,第8回英語辞書学ワークショップ2007,英語の辞書と語彙(大学英語教育学会(JACET)英語辞書研究会)〔2007年3月24日(土);於京都外国語大学〕.--(2007b,予定)「コーパスに基づく英語シノニム・語法研究」〔科学研究費補助金(課題番号:16520298)〕.--・赤野一郎編(2007)『ウィズダム英和辞典』第2版,三省堂.〔ISBN:4-385-10569-3,2144pp.〕井上(2008)は、井上・赤野(2007)におけるシノニム・語法記述の妥当性を検証する意味で、Bank of English(5億2千万語)に基づく研究成果と照合するものである。コーパス基盤的(corpus-based)な方法論とコーパス駆動的(corpus-driven)な方法論とはどういったものかを確認した後、(1)英語のsomethingが日本語の「何か」のように、未知・未定の内容だけでなく、名前など詳しいことを知らない場合はもちろん、それらにはふれずに漠然と物事を指す揚合にもしばしば用いられること、(2)可算名詞〔以降、(C)名詞〕と不可算名詞〔以降、(U)名詞〕を両極とする段階性についてふれ、(C)名詞と(U)名詞両方の性質をもつinterestを例に、「不定冠詞のほか、しばしば強意や量を表す形容詞を伴う」という性質に言及した後、greatやconsiderableなど程度を表す形容詞とともに用いられる場合は(U)名詞化が進み常に無冠詞だが、それ以外の形容詞を伴う場合、後にin句を伴うとより具体的な性質を表し(C)の性質が強くなり通例不定冠詞を伴うこと、(3)主格補語を従えるfallを取りあげ、become、get、go、tum、growなど、他にも主格補語をとる動詞はあるが、fall選択される際には、後に主語の意志に関わらないことを暗示する語句が続く傾向があること、(4)「すべて」の意を表す語とその範囲を明示するfrom...to...との間に高い共起可能性があること、などを指摘した。これらの成果は、近く提出予定の井上(2008g)で詳しく発表する予定である。なお、本補助金による雑誌論文や図書の形をとっていないため次ページのリストには挙げていないが、本研究に関連する研究業績を以下に挙げておく。井上永幸・赤野一郎編(2007)『ウィズダム英和辞典』
日韓相互理解教育プログラムの開発研究-子ども文化の比較を通して-

19967年度においては,日韓両国の子ども文化の違いを全体的に把握するために,小中学生およびその保護者を対象として質問紙調査を実施した。その質問項目は尊敬する人、希望する職業、好きな歌、好きな昔話、よくする遊び、好きなテレビ番組の6つの領域からなっている。その結果、全体として,日本の子どもより韓国の子どものほうがより具体的な回答が多く,日本の子どもの場合は、韓国の子どもに比べて回答が広く分散しているという特徴があることが分かった。尊敬する人物や好きなお話などの問いにおいては、学校教育(教科書)の影響と思われる回答が韓国の子どもに多くみられた。また、歌や番組の嗜好傾向においては、日本の子どものほうがマスコミの影響をより大きく受けていることが推測された。この結果を踏まえ,1998年度は,学校教科書の内容分析を中心に比較研究を進めた。「社会科」「図画工作」「国語」の三教科,および「道徳」の比較である。他方,学校外子ども文化として「遊び文化」を,とりわけ伝承性という視点から分析を続けた。「社会科」においては,日本の教科書では国内外の人物が広く題材として登場しているが,韓国の教科書では自国人が多く取り上げられているという違いがあった。「図画工作」では,日本においては子ども自身の感覚や個性の発揮が重要視されているが,韓国では自国文化の継承(受容)を重視するという傾向が見られた。「国語」では,日本では昔話を文学としてとらえようとしているのに対し,韓国では倫理的な文化財としての位置づけが強いことが分かった。「道徳」では,日本がより多様で抽象的な価値志向といえる一方で,韓国はより具体的現実的な価値志向がみられた。また,「遊び」分析の結果,日本より韓国のほうが世代間の遊び文化の伝承がよくなされている事が分かった。平成8年度は日韓の子ども文化の比較調査の基礎的資料として、両国の子どもの価値観などを明らかにするとともに、それらがどのような媒体によって、作り出されているかなどを考察するためのアンケートを作成し、予備調査を実施した。また、「かつての子ども」すなわち保護者の世代も対象とし、世代間比較も行った。具体的な調査項目は、尊敬する人、希望する職業、好きな歌、好きな昔話、家および学校でよくする遊び、好きなテレビ番組等と、家族、学校あるいはマスコミの子ども文化への影響力を知るため、それらを知った媒体は何かについても尋ねた。親、教師には、子に望む職業、伝えたい昔話、歌などについても尋ね、親や教師が抱く子どもへの期待感と子どもの価値観、嗜好との相違点や共通性を探ることも考慮した。平成8年7月の第1回目の協議においては、質問項目の検討をおこない、11月に両国で実施(調査対象:小学生148名、保護者214名、教師32名)、12月の協議では統計的集計結果の発表、2月には、集計結果の解釈の部分に関して、結果のベスト10の具体的な内容(例えば、尊敬する人として上げられた両国の歴史的人物に関する解説、歌詞、テレビ番組の録画など)を持ち寄り、相互に発表、討議した。予備調査の結果、全体的に祖父母との同居が全くない釜山の子どもに対して、比較的同居世代が多い島根の子どもでも、祖父母による影響は韓国の方が強く、その他相対的に韓国の方が家族の教育力が強い傾向がうかがえる。また、尊敬する人、職業観に対しても興味深い相違点がみられた。来年度は、予備調査で得られた知見をもとに、修正したアンケートで本調査を年度始め早々に行い、結果の意味的分析を進める予定である。また、両国における小学生の位置づけをより明確にするため、本調査では中学3年生も対象にしてアンケートを行う。

平成9年度は、平成8年度に行った予備調査およびその結果分析をふまえて、本調査を行った。調査票は、回答選択肢をカテゴリー化し、数量的な分析が容易になるように改訂した。調査対象には、新たに中学校3年生およびその保護者を加えた。分析に用いた数は、日本の小学生289名、中学生139名、韓国の小学生271名、中学生139名と、それぞれの保護者651名、783名である。7月に日本(松江市)で行った研究討議においては、5月6月に両国で行った本調査の集計結果を比較検討した。調査項目は、尊敬する人、希望する職業、好きな歌、好きな昔話、よくする遊び、好きなテレビ番組の6つの領域からなっている。全体的傾向として、日本の子どもの場合は「特になし」と回答した者がいずれの問いにおいても多かったのに対し、韓国の子どもの場合はよら具体的な回答が多かった。また、日本の子どもの場合は、韓国の子どもに比べて回答が広く分散する傾向にあった。2月に大韓民国(釜山市)で行った研究討議においては、7月の検討結果をふまえ、子どもの年齢別・性別視点を加えた分析を中心に行った。全体的にみて、年齢変化にともなう増減が日本の子どもと韓国の子どもでは逆の傾向を示している場合が多くみられた。また、尊敬する人物や好きなお話などの問いにおいて、学校教育の影響(教科書)と思われる回答が韓国の子どもに多くみられた。また、歌や番組の嗜好傾向において、日本の子どものほうがマスコミの影響をより大きく受けていることが推測された。次年度は、子どもと保護者との調査結果をより詳しく比較検討することによって、世代間の文化の伝承性や、歴史的・地理的背景などを分析する。また、より厳密な統計的分析とエスノメソドロジー的分析手法を併用することによって、日韓両国の子ども文化の相違点・共通点とその理由について明らかにする予定である。前年度の調査研究の結果,両国の子どもとも,学校教育(教科書内容)から大きな影響を受けていることが明らかとなった。この結果を踏まえ,今年度は,学校教科書の内容分析を中心に研究を進めた。教科書内容比較を行った教科は,「社会科」「図画工作」「国語」である。また,両国の教育思想(価値観)をより直接的に比較するために,「道徳」も分析対象とした。他方,学校外子ども文化として,引き続き「遊び文化」について,とりわけ伝承性という視点から分析を続けた。「社会科」においては,歴史人物の取り上げ方に大きな違いがみられ,日本の教科書では,国内外の人物が広く題材として登場しているが,韓国の教科書では自国人が多く取り上げられていた。「図画工作」では,日本においては,子どもの感覚や美意識を大切にする教育に力点がおかれているが,韓国では,大人の文化(伝統美術文化)の継承を重視するという傾向が見られた。「国語」では,教材としての民話の比較分析の結果,日本では文学色が強いのに対し,韓国では,倫理的な文化財としての位置づけが強いことが分かった。「道徳」では.両国の教科書・副読本に示されている諸目標間に大きな相違はなかったものの,日本がより多様で抽象的な価値志向といえる一方で,韓国はより具体的現実的な価値志向がみられた。
グローバル経済下の貿易・投資自由化と貧困削減の関係分析手法に関する研究

最終年度にあたる平成17年度は、以下の通り研究を行い、研究成果の発表、報告書の印刷を行った。1.研究対象国であるカンボジア・インドネシアにおいて以下の点について追加調査を実施した。(1)貿易・投資の自由化情況と今後の展望(2)PRSPに基づいた貧困削減政策の実施状況。(3)データの収集2.Pro-Poor Growthについて、経済アプローチによって実証研究を行っている日本貿易振興会アジア経済研究所の研究員2名を招いて研究会を開催し、カンボジアおよび途上国一般についての最新の研究報告を聞くとともに意見交換を行った。3.担当分野別に、グローバリゼーション下の諸政策が貧困に影響をもたらすチャネルについて理論的検討を行うとともに、ベトナム、カンボジア、インドネシアについて、数量分析を行った。また、貿易・投資自由化が東アジア地域の経済発展に与える影響について検討した。4.上記3の成果を論文に纏めるとともに、その一部(長田論文)を国際開発学会全国大会(平成17年11月、於神戸大学)で発表し、コメントを得た。5.本テーマに関する今後の本格的な研究に繋げるために、研究代表者および研究分担者全員による論文を、研究成果の報告書『グローバル経済下の貿易・投資自由化と貧困削減の関係分析手法に関する研究』として刊行した。初年度は、次年度の具体的分析作業の準備として、以下の通りの研究を行った。1.資料収集と文献調査による予備的研究(1)ベトナム、カンボジア、インドネシアの貧困削減文書(PRSP)および関連文献の収集と検討(2)世界銀行・IMFの貧困削減戦略に関する文献収集と検討(3)成長と貧困に関する数量的実証研究論文の検討(4)ベトナム、カンボジア、インドネシアの貿易・投資自由化情報とデータの収集2.海外調査による資料収集とフィールドワーク(1)インドネシアの貧困削減、貿易・投資自由化について調査した。(2)カンボジアの社会開発、教育開発と貧困削減について調査した。(3)香港における東アジア経済学会において関連資料と情報収集を行った。3.研究者を招聘して貧困研究に関する研究会を開催した。(1)Gram VikasのJoe Madiath氏「インドにおける貧困削減のためのエンパワーメント」(2)アジア経済研究所山形辰史氏「経済成長と貧困・雇用:Pro-Poor Growth論の系譜」(3)アジア経済研究所野上裕生氏「『貧困と開発』からみた日本の経験」(4)研究の中間成果として、(1)貧困削減戦略と貧困の関係、(2)ベトナムにおける貿易自由化が成長・貧困・所得分配に与える影響、(3)教育開発のための資金調達に関するディスカッションペーパーを刊行した。以上の研究の結果、次年度の実施を予定している貿易・投資自由化が貧困に与える影響に関する数量的分析のフレームワーク原案が出来あがり、解決すべき課題も明らかになった。
細菌の細胞分裂初期の分子メカニズムの解明

FtsZは自己縮合してポリマー構造、さらにはリング構造を形成し、細菌の細胞分裂の基盤となる。この様な反応には、枯草菌ではFtsZと直接結合するFtsA、YlmF、ZapAとの結合が重要である。そこで、このような細胞分裂初期の分子メカニズムを解明するために、FtsZにランダムに変異を導入し、相互作用を失う変異FtsZを酵母2ハイブリッド解析により同定し、どのアミノ酸がFtsZ自身やFtsA、YlmF、ZapAとの結合に関わっているかを決定した。FtsZは、Plus End領域、T7 loop、Minus End領域、保存されていない領域、保存性の高いC末端配列からなる。Methanococcus JannaschiiのFtsZの結晶構造解析などから、FtsZポリマーは、異なるFtsZのPlusとMinus Endが結合して形成されると考えられていたが、本研究で得られた変異FtsZの結果はこれとよく一致しており、このようなモデルが枯草菌FtsZにも当てはまることがわかった。また、保存性の高いC末端配列に欠損、もしくは変異を持つ変異FtsZでは、FtsAとYlmFとの結合能を失うことから、この領域は両方の蛋白質との結合に必須であることがわかった。しかし、自己結合能を失った変異FtsZでは、FtsAとは結合できるが、YlmFとの結合能は失うという顕著な違いが見られた。また、ZapAとの結合には、FtsZのC末端配列を必要しないが、FtsZの自己結合能を保持していることが必須でることがわかった。この様に、FtsZに直接結合し、細胞分裂を正に制御している蛋白質との結合には、それぞれ固有の特徴があることがわかった。これらの変異を枯草菌に戻したときの、増殖への影響、変異FtsZの細胞内局在を観察する系を確立し、多くの興味深い現象を新たに発見することが出来た。FtsZにPCRにより変位を導入し、FtsZ-FtsA、FtsZ-YlmFの相互作用を失ったFtsZ変位を酵母2ハイブリッド解析により、それぞれ、25個、50個を取得し、塩基配列決定により変位部位を特定した。これらの変異部位を構造がわかっているなかで最も近縁種であるMycobacterium tuberculosisの結晶構造をもとにマップした。(N末端側のGTPase domain)最も保存されているdomainであり、GTPの加水分解と共役したpolymerization、Z-ring形成の中心domainである。多くの変異は、このdomainの表面ではなく内部、もしくはGTP binding pocket周辺に見られた。このことは、FtsAとYlmFの直接の結合domainではないが、GTPase活性とリンクした立体構造が、結合に重要である可能性を示唆している。(C末端側のαβdomain)近縁種では良く保存されているが、比較的保存性の低いdomainである。しかしながら、今回得られた変異のなかで蛋白質の表面に存在するものはこの領域にのみ見られたことから、この領域がFtsA、YlmFとの結合領域の1つである可能性が高い。(C末端の約10アミノ酸の保存された領域)結晶構造が得られていないことから、不安定な構造をとっていると予想される。しかしながら、これまでの大腸菌、枯草菌の酵母2ハイブリッド解析からはFtsZ-FtsAの相互作用において重要であることが示唆されてきた。今回の結果でも、FtsZのC末端の12アミノ酸に変位部位を持つものが数種得られた。面白いことに、YlmFと相互作用を失うものも同じ領域に変異を持つものが多数得られた。この結果は、YlmFを持つがFtsAを持たないシアノバクテリアとアクチノバクテリアでもFtsZのc末端領域の配列が保存されているという事実と合致する。