hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
キルケゴールのキリスト教思想とデンマーク啓蒙：Ｈ．Ｎ．クラウセンとの比較を中心に

また、キルケゴール研究所のセミナーにて、他の研究員たちとともにJoakim Garff, Den Soevnloeseを検討した。研究所のJoakim Garff教授やNiels Cappeloern教授には、キルケゴール思想にある両義性や、キルケゴール思想の神学的バックグランドに関し、大変貴重な示唆をえた。また、特に、研究所所属の研究員であるBjarke HansenさんやTrine-Amalie Christiansenさんと交わした頻繁な議論からも、キルケゴールのみならず宗教哲学一般、デンマークの歴史に関し、多くの情報を得、議論を深めることができた。3については、Hal Koch, N.F.S. Grundtvig等を検討した。特にグルントヴィから現代へと至る、デンマーク啓蒙の歴史に関して、多角的な視点をもって理解を深めることができた。クラウセンのキリスト教理解がシュライアーマッハーから受けている強い影響について理解することができた。また、クラウセンを経由してキルケゴールもまた、シュライアーマッハー研究に取り組んだプロセスを追うことで、キルケゴールとクラウセンの関係を把握することができた。また、単に啓蒙主義だけに着目することの限界に気づくこともできた。というのも、ロマン主義を媒介した啓蒙主義の受容という可能性もありえ、またこの可能性が非常に有力なものであるという見通しも得られた。今年度は、デンマーク思想史に関して一定程度理解を深めることができたのも有益であった。北欧思想の特徴の一つに、地域主義があるという認識を得ることができた。そうした点が、キルケゴールの啓蒙批判や啓蒙受容に大きな影響を与えているという着想は、今後、研究を進める上で非常に大きな収穫であった。5月にキルケゴール研究所にて研究発表を行う。そこで、その時点までの研究成果を発表し、クリティカルな議論を行う。それを踏まえ、修正すべきところは修正し、足りないところを補い、9月をめどに論文に仕上げる。それを「キルケゴール・スタティーズ・イヤーブック」に投稿する。主要な分析資料は、ヨアン・ラーセンの『H.N.クラウセン:その生涯と功績』の第4部以下、『セーレン・キルケゴール・スクリフター』のクラウセンに関するコメンタールである。前者は、セーレン・ホルムのクラウセン研究と双璧をなす、これまでに発表されたクラウセン研究のうち最も詳細なものである。後者には、キルケゴールとクラウセンの実際的、具体的関係が記述されている。さらに19世紀デンマークにおいて活躍した、他の啓蒙思想家についてもある程度の研究を行う。主な思想家としては、N. F. S.グルントヴィを挙げることができる。
HIV-I構成蛋白やセレン含有蛋白の翻訳に必須な新規RNA結合因子の探索

Secは終止コドンUGAでコードされているが,真核生物におけるSecの取り込み機構は現在不明である.Sec含有蛋白のmRNA3′UTRには,stem-loop構造をとり得る配列が存在しており,この構造内にSecの取り込みに必須と考えられる配列(Sec insertion sequence;SECIS)が共通して認められる.今回,我々はこのSECISを含むmRNA3′UTRに結合する細胞質因子の検索を行った.Sec含有蛋白であるヒト細胞質型グルタチオンペルオキシダーゼ(cGPx)のmRNA3′UTR全長213baseを^<32>Pで標識し,CHO細胞の細胞質画分と反応させた.この反応物にUVを照射してSDS-PAGEを行い,オートラジオグラフィーにより解析したところ,約50KDaの位置に単一のバンドが検出された.また,stem-loop部分単独89baseを用いた場合にも同じ位置に単一のバンドが認められた.これらの結果より、細胞質に3′UTRのstem-loop部分と特異的に結合する因子の存在することが初めて示唆された.検討したうち最もSECISRNA結合蛋白含量の多いラット肝細胞質を出発材料として本因子の精製を試みた.まず末端をbiotin化したRNAを合成し、これを出発材料と反応した.その後,avidinを不溶化したアガロースと反応し,目的とするRNA結合因子を分離した.現在,分析スケールから精製スケールに試料を大量に処理しており,精製に成功したら,その生化学的性質を調べる予定である.Secは終止コドンUGAでコードされているが,真核生物におけるSecの取り込み機構は現在不明である.Sec含有蛋白のmRNA3′UTRには,stem-loop構造をとり得る配列が存在しており,この構造内にSecの取り込みに必須と考えられる配列(Sec insertion sequence;SECIS)が共通して認められる.今回,我々はこのSECISを含むmRNA3′UTRに結合する細胞質因子の検索を行った.Sec含有蛋白であるヒト細胞質型グルタチオンペルオキシダーゼ(cGPx)のmRNA3′UTR全長213baseを^<32>Pで標識し,CHO細胞の細胞質画分と反応させた.この反応物にUVを照射してSDS-PAGEを行い,オートラジオグラフィーにより解析したところ,約50KDaの位置に単一のバンドが検出された.また,stem-loop部分単独89baseを用いた場合にも同じ位置に単一のバンドが認められた.これらの結果より、細胞質に3′UTRのstem-loop部分と特異的に結合する因子の存在することが初めて示唆された.検討したうち最もSECISRNA結合蛋白含量の多いラット肝細胞質を出発材料として本因子の精製を試みた.まず末端をbiotin化したRNAを合成し、これを出発材料と反応した.その後,avidinを不溶化したアガロースと反応し,目的とするRNA結合因子を分離した.現在,分析スケールから精製スケールに試料を大量に処理しており,精製に成功したら,その生化学的性質を調べる予定である.
ビッグバン元素合成におけるリチウム合成機構の解明

ビッグバン宇宙元素合成において、リチウム同位体(6Liと7Li)の量は理論計算値と観測値の間に不一致があり、現在、大きな問題の一つとして挙げられている。この理論計算では、既存の核データに基づいた反応断面積を基礎として数値を算出しているが、この核データの精度が不十分であり、より詳しい実験が必要である。この観点から、我々は、6Li(p,γ)7Be反応のradiative capture過程の断面積を再測定した。実験は、筑波大学研究基盤総合センター応用加速器部門において実施し、筑波大学、日本原子力研究開発機構、東京大学CNS、理化学研究所、中国IMP、韓国Hoseo大学の機関の共同研究として行った。ターミナル電圧百万ボルトのタンデトロン加速器を用いて陽子ビームを、エネルギー0.25 MeVから2.08 MeVの間で変化させて加速し、6Li濃縮同位体ターゲットに照射した。核反応で発生した高エネルギーガンマ線を0度に設置した高検出効率高分解能のゲルマニウム半導体検出器(相対検出効率140%)で測定した。これまでの暫定的な解析結果から、我々の結果は、ほぼ過去データを再現する事が判った。しかし、より低いエネルギーにおいて、共鳴ピークに類似した変化が得られ、これまで報告の無かった新たな知見が得られた。ビッグバン宇宙元素合成において、ヘリウム4の存在比が25%と計算された、観測値と非常に良く一致した事は、宇宙物理学における最も大きな功績の1つである。しかし、リチウム7に関しては、同一の理論による計算値は、質量欠乏星における観測から推定するビッグバン時の生成量の3倍大きな値を示し、大きな問題となっている。そこで、このリチウムの生成に関わる反応率の物理的な測定が、本研究の主題である。(また、リチウム6については千分の一との報告もあったが、本研究による、フランス人研究者との議論から、リチウム6の観測値の導出方法に問題があり、現在、明確ではないとの情報が得られた。)我々は、リチウム7の崩壊する過程に着目し、7Li(3He,p)9Be反応の断面積の精密測定を開始した。先行研究では照射エネルギー0.1MeVから0.4MeVの間のデータが欠乏していた。照射エネルギーE=0.4、0.7、1.0、1.4、1.7MeVで測定した結果、先行研究とほぼ一致する結果がえられた。さらに、これまで報告の無いE=0.34MeVで実験を行ない、新たなデータを得た。この結果は、既存のデータを延長した位置よりやや低く観測された。本研究の結果の一部は、平成24年9月、日本物理学会にて報告した。また、本学数理物質科学研究科物理学専攻の湯浅暁玲氏の修士論文としてまとめた。本研究は、筑波大学研究基盤総合センター応用加速器部門に設置されている1MVタンデトロン静電加速器を用いて実験を行なった。しかし、既設設備には粒子散乱角度を正確に読みだす機構がなく、角度分解能が非常に悪い環境にあった。そこで、新たにマグネスケールを購入し角度分解能の読み出しの不確かさを飛躍的に減少させた。また、蒸着法によりリチウム7濃縮ターゲットを作成し、実験に使用した。検出器系は、半導体シリコン検出器2台を収納する検出器ホルダーを本研究経費で、特注品として購入し使用した。2台の検出器の組み合わせの最適化をはかり、混ざりの少ない解像度の良いデータの取得に成功した。この様な取り組みが次々と進展し、研究は順調に進行している。今後、7Li(3He,p)9Be反応に関し、照射エネルギーを下げて新たなデータを取得する方針である。照射エネルギーを0.25MeV程度まで下げて、広範囲にわたって新データを取得する。また、照射エネルギー0.4から3.0MeVの領域は既存データがあるが、これを確認する追試実験も予定している。さらに、これと並行して6Li(p,γ)7Be反応の研究も行う予定である。この実験に関しては、中国蘭州のInstitute of Modern Physics研究所のJ.J.He氏から共同研究の依頼を受けたところである。現在、この実験の遂行が可能かどうかを判断する準備実験を計画している。次年度は、本年度0.34MeVの測定に成功した手法を延長し、0.25MeV程度の低いエネルギーにおける新たなデータの取得を目指す。

これには、昼夜連続の長時間実験が必要になるため、この実験の継続の為に、国内および外国から研究者を募り、実験を実施する。この為に、中国や韓国、カナダとの共同実験を模索している。この場合、本研究費を招へい旅費として活用する。さらに、「爆発的宇宙元素合成過程の基礎研究」に関する共同プロジェクトの提案がなされつつある。現在、高エネルギー加速器研究機構、東京大学原子核科学研究センター、日本原子力研究開発機構との共同研究を模索している。本研究経費を、他機関研究者との打合せならびに研究会の開催の際の旅費として活用する。
深層学習による緑内障視野進行の予測及び、反教師学習付きマルチモーダル学習への拡張

1半教師付き学習を応用した深層学習法を用いた視野結果と光干渉断層計による網膜神経節細胞層厚の特徴量抽出モデルを構築すること。2深層学習法による特徴量抽出には、VariatoinalAutoencoderを応用し、精度向上が図れることを明らかにする。更にニューラルネットワーク内部には、入力情報力が増加しても対応可能なランプ関数を応用することで、精度向上が行われることを明らかとする。31で得られた視野、光干渉断層計による網膜神経節細胞層厚の特徴量のマルチモーダルな時間に対する回帰を行うモデルの構築すること。413による検証モデルを用いて視野進行解析・予測精度の精度向上が図れることを明らかとする。
質的内容分析法を用いた日米の中学校保健体育カリキュラム論とその実感の比較検討

本研究では、日本の中学校保健体育カリキュラムの改善を促進するために以下の3つの研究課題を設定する。1)アメリカ体育カリキュラム論をリードする9つの文献を翻訳して分析し、「理論・政策、授業実践、教師教育」レベルと構造化し、日本との相違点を整理して効果的なカリキュラムの仮説を生成する。2)日米の大学教員8名と日米の中学校保健体育教師16名を対象に、インタビュー調査を用いた質的内容分析からカリキュラムへの実感や評価を明らかにする。3)日米の中学校保健体育カリキュラムの比較検討と仮説検証により実現可能な効果的効率的な生涯スポーツを促進するカリキュラムを提言し、その有効性を明らかにする。
即の論理の再構築:分析アジア哲学の東アジア的展開

「即の論理」として、主として(一)華厳思想における、無限個の事物の間の「即」関係と、(二)空の思想における、有限個の概念の間の「即」関係において見てとれる「論理」を、現代の非古典論理のツールを用いて分析した。(一)に関して、より具体的には、法蔵等の華厳思想家が「十数のたとえ」において展開した「一即一切」思想における「即」関係を、「偶然的同一性」と解釈し、様相論理学を用いて定式化した。また(二)については、西谷啓治が論文『空と即』で論じた回互的連関における「即」関係を、「二重の矛盾」として解釈し、否定不動点を持つ三値論理型のパラコンシスタント論理を用いて形式化することに成功した。出口は、連携研究者・佐野と協力して、両名の共著論文"Kegon Arithmetic"の修正・加筆を続け、12月にその最終バージョンを確定した。それと並行して、出口と海外共同研究者であるG.プリーストは、上記論文も収録される予定の英文論文集The Moon Points Back(仮題)の編集を進め、12月には全原稿をOxford University Pressに提出した。これらの作業の一環として、出口は、プリーストを、7月にはメルボルン大学に、9月にはニューヨーク市立大学に訪ね、当科研費研究全般にわたる共同研究・研究打合せを行うとともに、来年度11月に京都で開催される予定の「分析哲学の東アジア的展開」国際ワークショップに向けた研究計画をも策定した。なお同ワークショップにおける研究成果は、再来年度に発刊される予定の国際誌Philosophy East & Westの特集枠を利用した公刊される予定であるが、出口やプリーストは、他の研究者の協力も仰ぎ、この雑誌特集に関する研究計画をも推進した。また出口は9月にカリフォルニア州立大学ノースリッジ校にて招待講演を行い、同校の八木沢敬教授らと「華厳算術」を中心とする「分析アジア哲学」に関する議論を行った。これらの国際的な活動と並行して、出口は、華厳思想の一次資料を中心とする文献読解・分析作業を進めた。具体的には、「華厳算術」として得られた、華厳思想に対する可能世界論的な解釈の枠組みに、形而上学的な内実を盛る努力がなされた。特に、法蔵の宇宙論・仏身論に関する研究が進められると共に、田辺元の法蔵の「十数の喩え」に対する批判へ答える形で、「華厳算術」を「超限数」をも扱う体系へと拡張する試みがなされた。これらの研究の進展に伴い、本研究の最終成果として発刊される予定の『即の論理の再構築』の執筆構想もより具体化し、それについて、担当の編集者と協議を重ねた。今年度の研究成果は以下の四点にまとめることができる。(一)非古典算術と可能世界形而上学の道具立てを用い、「十数の譬え」に即して構築した華厳思想解釈の枠組みを、法蔵の「無尽仏身論」とコスモロジーをカバーできるように展開し、異なった可能世界に属する存在者の間の新たな関係として「アバター・フェローシップ」という概念を提案した。この解釈の試みは、「Buddha Body as a Trope」という論考としてまとめられ、その様々なバージョンにもとついた発表を、2012年6月には台湾の国立中央研究院(アカデミア・シニカ)、8月にはメルボルン大学、3月にはマサチューセッツ州のスミスカレッジで、それぞれ行なった。(二)Jay Garfield, GrahamPriestとの共著論文であるThe Ways of Dialetheism(2008)をテーマとする国際ワークショップを11月に京都大学で開催し、海外から参加した6名の研究者と2日間にわたる集中討議を行なった。この討議の結果は、上記論文に対する数編の批判的論考と、それに対する応答論文として、比較思想の分野で国際的に高い評価を得ているPhilosophy East & West誌の特集号として公刊される予定である。(三)矛盾許容型論理を用いた、西谷啓治の後期哲学の解釈の新展開となる論考を「Later Nishitani on Emoionand Action」としてまとめ、3月にスミスカレッジで講演した。(四)その他にも、国内外の研究者を京都大学に招き、講演やセミナーを開催したり、研究打ち合わせを行なうことで、研究計画全般に関する意見交換を行なった。中国三論宗の代表的思想家・吉蔵のテキストをも参照することで、論文「空と即」で展開された、西谷啓治の「即の論理」の再構築を試みた。その結果、現代の三値のパラコンシスタント論理の体系をもちいた論理体系を提案し、日本語・英語の論文として執筆するとともに、国際会議で研究発表を行った。さらに華厳思想における「即の論理」を扱った共著論文の出版に向け、共著者と密接に協力しつつ、最終的な執筆作業を行った。

華厳思想の仏身論、コスモロジーに対する解釈の展開は、当初の予定通りに遂行されたが、その過程で、「アバター・フェローシップ」という新たな形而上学的概念の提案を行なえたことは、予期された以上の成果であった。また、その新概念を用いて、天台の「無情仏心論」に対する独自の解釈を与え得たこと、さらに上記共著論文に対する批判に答える作業において、道元の正法眼蔵、天台の「三諦円融論」に対する独自の解釈の足がかりを売ることも出来た。これらも計画された内容を上回るの研究成果である。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成21年度に得られた知見を、英語論文、日本語論文として執筆、公刊する。また当初の計画に加え、高山岩男の「呼応の論理」と「所の倫理」を、「呼応の倫理」と「所の論理」として換骨奪胎的に展開することを目指す。
東南アジア・ドライゾーンの地域形成と発展-コラート高原を中心として-

東南アジア各地に見られるドライゾーンはかつては先進地域であったにも関わらず、現在では後進地域となっているという共通の特徴を持っている。本研究はこのような東南アジア・ドライゾーンの地域形成と発展をタイ東北部コラート高原を事例として取り上げ、人間居住、農業生産力、産業立地、統治システムなどの観点から総合的に捉えることを目的として研究を進めてきた。本年度の研究は、平成8年度から始まった日本学術振興会の日タイ拠点大学事業の一環として行われているプロジェクト「東南アジアにおける平原半乾燥地の比較研究」と共同してワークショップを2回開催した。1回目は、平成8年6月3日から4日にかけて京都で開催され、本研究のメンバー以外に外部からも多くの出席者を集めて開催された。このワークショップは2回目のワークショップの準備と位置付けられる。2回目は平成8年10月21日から23日にかけてやはり京都で開催された。このワークショップの内容は報告書としてまとめられ、日本学術振興会により発行される予定である。本研究の成果は重点領域研究報告書シリーズNo.3133としてまとめている。タイトルは以下の通りである。池本幸生編『東南アジア・ドライゾーンの地域形成と発展-コラート高原を中心として-』池本幸生著『東南アジアのグローバル化と地域研究』東南アジア各地に見られるドライゾーンはかつては先進地域であったにも関わらず、現在では後進地域となっているという共通の特徴を持っている。池本幸生編『東南アジア・ドライゾーンの地域形成と発展-コラート高原を中心として-』池本幸生著『東南アジアのグローバル化と地域研究』
硬組織再建への応用を目的とした新規BMP活性制御因子の同定

骨誘導因子BMP (bone morphogenetic protein)はTGF-βスーパーファミリーに属する生理活性物質である。BMPは骨芽細胞、軟骨細胞の分化および骨形成作用を増強し、また異所性の石灰化を誘導することが知られている。BMPファミリー分子は十数種類存在しており、なかでもBMP-2は強力な骨形成促進作用を有する。我々は、BMP-2の骨芽細胞分化促進作用を調節する遺伝子を探索するため、BMP-2による骨芽細胞分化誘導過程において発現の変化する遺伝子の網羅的解析を行った結果、Alx3(aristaless like homeobox 3)が骨芽細胞分化に伴い発現が増加することを見出した。Alx3はホメオボックス遺伝子に属する転写因子であり、顔面頭蓋の形成に重要な遺伝子であることが知られている。そこで本研究ではさらに、BMP-2による骨芽細胞分化誘導におけるAlx3の発現制御機構ならびにその作用機序について検討した。概要我々は、BMP-2の骨芽細胞分化促進作用を調節する遺伝子を探索するため、BMP-2による骨芽細胞分化誘導過程において発現の変化する遺伝子の網羅的解析を行った結果、Alx3 (aristaless like homeobox 3)が骨芽細胞分化に伴い発現が増加することを見出した。本年度は、BMP-2による骨芽細胞分化誘導におけるAlx3の発現制御機構ならびにその作用機序について検討した。BMPのシグナル伝達経路の一つであるSmad経路をSmad4に対するsiRNAにより阻害したところ、Alx3の発現誘導が有意に抑制された。BMP-2による骨芽細胞分化誘導におけるAlx3の作用機序を検討するために、Alx3に対するsiRNAによりその発現を抑制したところ、骨芽細胞分化の指標とされるAlkaline phosphatase活性が有意に低下していることが認められた。また骨芽細胞分化マーカー遺伝子であるOsteocalcinや、骨芽細胞分化に重要な転写因子であるOsterixの発現もAlx3発現抑制により有意に減少した。一方、筋管細胞の分化に関連する遺伝子であるMyogeninやMyoDの発現はAlx3発現抑制により増加が認められた。以上の結果から、BMP-2によるAlx3の発現誘導はSmad経路を介して行われる。またAlx3はC2C12細胞の筋管細胞への分化に対して抑制的に、骨芽細胞への分化に対して促進的に作用する因子であることが示唆された。骨誘導因子BMP(bone morphogenetic protein)はTGF-βスーパーファミリーに属する生理活性物質である。BMPファミリー分子は十数種類存在しており、中でもBMP-2は強力な骨形成促進作用を有する。我々は、BMP-2の骨芽細胞分化誘導を調節する遺伝子を探索するため、BMP-2による骨芽細胞分化誘導過程において発現の変化する遺伝子の網羅的解析を行った結果、Alx3(aristaless like homeobox 3)が骨芽細胞分化に伴い発現が増加することを見出した。平成21年度では、BMP-2によるAlx3の発現制御機構について検討した。その結果、BMPのシグナル伝達経路の一つであるSmad経路を介し行われることを解明した。平成22年度では、BMP-2による骨芽細胞分化誘導におけるAlx3の作用機序を検討した。Alx3に対するsiRNAによりその発現を抑制したところ、骨芽細胞分化マーカー遺伝子であるALP(Alkaline phosphatase)、Osteocalcinや、骨芽細胞分化に重要な転写因子であるOsterixの発現がAlx3発現抑制により有為に減少した。また、細胞内でAlx3を高発現させる発現ベクターを作製し、導入したところALP活性の有為な上昇が認められた。以上の結果から、BMP-2によるAlx3の発現誘導はSmad経路を介して行われること、またAlx3はBMP-2による骨芽細胞分化誘導に対して促進的に作用する転写因子であることが示唆された。
血管平滑筋細胞とマクロファージとの共存培養による動脈硬化形成機序の解析

動脈硬化巣にみられる泡沫細胞は、初期病変では主にマクロファージがコレステロールを蓄積し泡沫化したものであるが、病巣が進行すると血管平滑筋細胞が増殖し過剰の脂質を蓄積し泡沫化したものである。病変部の発症段階や進行する過程で、マクロファージが血管平滑筋細胞にどのように影響するかを明きからにするために、マクロファージと血管平滑筋細胞の共培養を試みた。血管に存在する平滑筋細胞は増殖せず、収縮を主な機能としている。そこで、増殖能を有する培養平滑筋細胞の増殖を抑制するために、コラーゲンでできたチューブ内で細胞の培養を行った。平滑筋細胞は増殖を停止すると同時に、マトリックスを分解するMMP(Matrix metalloprotease)の分泌をも抑制したが、コラーゲンの分泌が増加した。また更に、成熟した細胞のマーカーであるカルデスモン重鎖が発現するようになり、分化型の性質を示すようになった。この状態の平滑筋細胞にマクロファージを添加し共存培養した。マクロファージはコラーゲンチューブ中を遊走し、平滑筋細胞がコラーゲンチューブに対して接着している部位に集積していた。このマクロファージはMMP2とMMP9を積極的に分泌していた。これらの結果から、マクロファージはコラーゲンマトリクスと平滑筋細胞の接着部位に集積し、MMPを分泌することで平滑筋細胞接着部位のコラーゲンを分解することがしめされた。また、これが刺激となり、平滑筋細胞は形質変換をおこし遊走し増殖するようになると考えられる。
新規TLR応答制御分子におけるTLR制御機構および生理的意義の解明

我々は、TLRに会合する新規分子であるEpithelialmembraneprotein3(Emp3)を同定し、invitroの実験系においてEmp3のノックダウンが複数のTLRによる免疫応答を顕著に増長することを見出した。しかしながら、Emp3のTransgenic(Tg)およびKnockOutマウス由来の骨髄マクロファージではTLRにより誘導される免疫応答に優位な変化が認められなかった。一方、Emp3を全身性に発現するEmp3Tgは半年以内に100%が死亡し、その多くで拡張型心筋症様の症状が認められた。また小腸炎を呈す個体も散見された。今後、Emp3Tgで認められた表現型がTLR応答の制御を介するものか否かを検討していく必要がある。病原体認識レセプターであるToll Like Receptor (TLR)ファミリーは免疫細胞に高発現し、様々な免疫応答を惹起することで生体防御に必須の役割を果す。一方、TLRの過剰応答は自己免疫疾患の発症につながる。この為、TLR応答の厳密な制御は恒常性維持において必須であり、様々なTLR会合分子がTLR応答制御に関与する。我々は、新規に同定したTLR2会合分子であるEmp3のトランスジェニック(Tg)およびノックアウト(KO)マウスを作製し、同マウスの解析を網羅的に行った。in vitroの実験系において、Emp3のノックダウンは複数のTLRによる免疫応答を顕著に増長したが、Emp3のTgおよびKO由来の骨髄マクロファージおよび樹状細胞では、TLRリガンドに対する免疫応答(サイトカイン産生、CD40やCD86の細胞表面発現上昇)に優位な変化は認められなかった。以上の結果より、TLR会合分子であるEmp3はTLRによる免疫応答の制御に直接的には関与しないことが判明した。一方、全身性にEmp3を発現するEmp3 Tg/CAG-Creは23週齢までに100%が死亡し、その多くで拡張型心筋症様の症状を発症した。また一部個体では小腸炎の発症も認められた。しかしながら、CAG-Cre遺伝子を除いた全身性にEmp3を発現するEmp3 Tgマウスでは拡張型心筋症や小腸炎は全く発症しなかった。CAG-Creマウスが高率かつ無症候性に突然死することを考慮すると、Cre遺伝子の強制発現により誘導された何らかの異常をEmp3が増長した結果として拡張型心筋症などが発症したと考えられる。今後、CAG-Creマウスで誘導されていると予測されるERストレスなどがEmp3の発現変化でどのように影響されるのかを検討する必要がある。Toll Like Receptor (TLR)ファミリーは免疫細胞に高発現する病原体認識レセプターである。同分子群は様々な免疫応答を惹起することで生体防御に必須の役割を果す一方、過剰応答により自己免疫疾患の発症に関与することが報告されている。この為、TLR応答の厳密な制御は恒常性の維持において必須である。23年度は、新たに同定したTLR関連分子Eのトランスジェニックおよびノックアウトマウスを作製し、同マウスより得られた免疫細胞の解析を行った。以前に作製した分子EのKOは胎性致死であったが、新たに作製した分子Eのconditional KOでは正常な全身KOマウスを得ることが可能であった為、解析には分子Eの全身KOを用いた。分子Eの発現量の変化は、作製したポリクローナル抗体を用いて確認した。In vitroの実験系において、分子Eのノックダウンは複数のTLR応答を顕著に増長した。しかし、分子EのTgおよびKO由来の骨髄マクロファージおよび樹状細胞では、in vitroの結果とは異なり、TLRリガンドに対する応答に優位な差が認められなかった。また、同マウスにおけるTLR1/2/4/5/6の細胞表面も分子Eの発現量変化の影響を全く受けなかった。以上の結果より、TLR会合分子である分子EはTLRの細胞内分布や応答を直接的に制御する分子ではないことが判明した。一方、分子EのKOおよびTgマウスを半年にわたり飼育・観察した結果、分子EのTg(n=15)は45カ月以内に死亡することが判明した。体調不良を呈した分子EのTgでは、削痩や重度の腫脹が認められ、心臓の肥大および心筋の菲薄化が認められた。今後、これらの現象が分子Eの強制発現に伴うTLR応答の変化によるものか否かの解明を進める予定である。当初、分子EがTLR応答の制御に必須であるという仮定で研究を推進してきたが、in vivoでは分子EとTLRに明確な関連は認められなかった。

一方、分子EのTgマウスは心筋症や腸炎を自然発症することが見出され、分子Eの発現量の変化が生体の恒常性維持に大きく影響を与えることが判明した。以下、予定していた研究内容の達成度の詳細を記載する。分子E cKOおよびTgマウス、抗分子Eモノクローナル抗体の作製:マウスの作製に関しては、全身TgおよびKOに加えてLyzsM-CreやTie-2 Creとの交配によるConditional TgおよびKOまでを作製済みである。モノクローナル抗体の作製に関しては、免疫動物としてBalb/cに5回バッククロスした分子E KOマウスを作製した。現在、分子E強制発現細胞による免疫を継続中である。分子E KO/Tgマクロファージ・樹状細胞におけるTLR応答の解析:分子E KOおよびTgマウス由来のマクロファージ/樹状細胞におけるTLR応答を網羅的に解析したが、in vitroでのデータとは異なり、TLR応答に顕著な変化が認められなかった。また、新たに樹立したTLR5抗体などを用い、TLRの細胞表面発現も解析したが、顕著な変化は検出されなかった。生体内免疫応答における分子Eの役割:分子EのTgマウスは、45ヶ月齢までに体重減少またはその後の急激な体重増加を呈して死亡した。一部の分子E Tgマウスでは全身皮下における浮腫、胸水や腹水の貯留が認められ、心筋の菲薄化に伴う高度の心腔拡張が認められた。病理組織学的所見では、肺のうっ血を示唆するヘモジデリン貪食マクロファージ(心臓病細胞)が肺胞内に浸潤していた。また、心筋では高度の錯綜配列や線維化が認められ、心筋内に広範な炎症巣を伴っていた。新たに得られた結果は、分子Eの過剰発現が拡張型心筋症に関与する可能性を示唆している。分子EはTLRと会合することから、これら表現型とTLRとの関連に焦点を当てながら分子E Tgマウスの解析を更に進める。1.抗分子Eモノクローナル抗体の作製:Balb/cバックグラウンドの分子E KOマウスを用い、抗分子Eモノクローナル抗体を作製する。2.分子E会合分子の同定:分子Eによる免疫応答制御メカニズムの解明を目指す為、作製したモノクローナル抗体を用いて分子Eと共沈殿するする分子E会合分子群の同定を行う。同定された分子群に関しては、細胞株を用いて分子Eとの会合を確認すると共に、各々の分子のノックダウン細胞を用いて機能解析を行う。3.恒常性維持における分子Eの役割:分子Eの過剰発現は拡張型心筋症(DCM)様の症状を引き起こす。分子EはTLRの会合分子であることより、最初にTLRがこれら疾患に関与する可能性を探索する。これら症状におけるTLRの役割は、TLRシグナル伝達に必須のアダプター分子MyD88またはTRIFを欠損させた分子E Tgを作製することで解析する。DCM様症状がこれらアダプター分子の欠損で消失した場合、更に分子E Tgマウスにおいて様々なTLRを欠損させ、DCM発症に関与するTLRの同定を行う。4.拡張型心筋症と分子Eの関連:ドキソルビシンは抗腫瘍剤として汎用されるが、その副作用としてDCMの誘発が知られる。発症機序は不明だが、ドキソルビシンの連続投与はC57BL/6マウスでDCMを再現する為、ヒトと同様のDCMを簡便に再現できるマウスの実験系として用いられる。
絨毛外絨毛細胞によるらせん動脈リモデリングにおけるｍｉＲ－２１０の機能の検討

本研究は、酸素濃度変化に伴い絨毛細胞の表現型を調節するmicroRNAと標的遺伝子を明らかにすることを目的とした。HTR-8/SVneoを低酸素培養すると浸潤能は低下し、miRNA-135bの発現が増加したが、CXCL12の発現は低下した。miRNA-135b過剰発現株では浸潤能が低下し、CXCL12の発現は低下した。CXCL12中和抗体添加では浸潤能が低下した。ルシフェラーゼアッセイでは、CXCL12のプロモータ領域がmiRNA-135bの標的配列であることを示した。低酸素環境では、絨毛細胞中のmiRNA-135bがCXCL12の発現を抑制し、その細胞浸潤能を調節していると考えた。1.低酸素環境によるEVT細胞株の細胞挙動に関与するmicroRNAと標的遺伝子の決定昨年度解析した2%酸素培養下で低下する細胞株(HTR-8/SVneo)の浸潤能に関連するmicroRNAと標的遺伝子をmicroarray法による網羅的解析による発現変化より明らかにした。その関連性より遺伝子の絞り込みを行い、miRNA135bとCXCL12の組み合わせによる解析を行った。2. miRNA135b導入によるHTR-8/SVneoの浸潤能およびCXCL12発現の検討miRNA mimics antagomir導入によってHTR-8/SVneoにmiRNA135bを過剰発現させ、その浸潤能変化をinvasion assayによって検討した。また過剰発現株のCXCL12遺伝子発現をQuoantitative PCR法によって検討を行った。その結果過剰発現株は、低酸素環境下と同様に浸潤能は低下し、CXCL12遺伝子発現は増加した。3. CXCL12中和抗体によるHTR-8/SVneoの浸潤能の検討HTR-8/SVneoにCXCL12中和抗体を添加して、その浸潤能の変化を確認した。中和抗体添加によって、HTR-8/SVneo浸潤能は低下した。1.低酸素環境によるEVT細胞挙動を確認EVTの細胞株であるHTR-8/SVneoを2%の低酸素下で培養し、細胞増殖能、浸潤能、移動能について20%の標準酸素下培養時と比較し、低酸素下では増殖能、移動能は明らかな変化はないが、浸潤能が低下することが確認された。2.低酸素環境によるEVT細胞microRNA発現変化HTR-8/SVneoの低酸素暴露によるmicroRNA(miRNA)の発現変化をmicroarray法による網羅的検索により明らかにした。結果は、これまでの先行研究報告と同様なプロファイルであり、再現性を確認したのちに定量的PCRによって発現量の差を確認した。3.低酸素環境によるEVT細胞mRNA発現変化と標的遺伝子の決定HTR-8/SVneoを同じく低酸素培養を行い、mRNAの発現変化をDNA microarray法による網羅的検索によって明らかにした。これらの検索によって、今後の解析を行う候補となるmiRNAとmRNAの発現データを統合的に解析し、35個の遺伝子を決定した。酸素濃度によって絨毛細胞の表現型が変化することはすでに知られているが、分子レベルでのメカニズムは十分に明らかとされていない。そこでmiRNAが関与していると考え、網羅的検索から標的分子を明らかとして機能解析を行った。絨毛外栄養膜細胞株であるHTR-8/Svneoを2%, 20%の酸素下で培養し、増殖能、浸潤能を確認したところ、2%酸素下で増殖能は変化せず、浸潤能が低下したことにより、酸素濃度による表現型の変化が示された。次に異なる酸素濃度下でのmiRNA, mRNAの発現変化をマイクロアレイ法で検討し、細胞浸潤能に関与するmiRNAと標的分子候補をIPA®を用いて抽出した。準備段階ではmiR-210が関連miRNAであると考えていたが、このmiRNAは浸潤能に影響する標的分子との関連は薄く、関与するmiRNAはmiR-135b、標的分子をケモカインであるCXCL12と考えて解析を進めた。HTR-8/SvneoにmiRNA-135bを過剰発現、siRNAで発現抑制を行ったところ、過剰発現で浸潤能の低下、発現抑制では変化が見られなかった一方、CXCL12の発現はそれぞれ減少、増加がみられた。CXCL12の中和抗体を添加培養したところ、HTR-8/Svneoの浸潤能は抑制された。ルシフェラーゼアッセイでmiR-135bがCXCL12のプロモーター領域で、発現調節をしていることを確認した。絨毛細胞浸潤不全によるらせん動脈のリモデリング異常が妊娠高血圧腎症の原因とされている。今回の検討で明らかとなったmiR-135bとその標的分子であるCXCL

12は、絨毛細胞の浸潤メカニズムに大きく影響することから、今後妊娠高血圧腎症でのmiR-135bとCXCL12の発現を確認することにより、妊娠高血圧腎症発症の予知や発症予防にもつながる可能性がある。医学産科学予定通りの研究が進行している。細胞株入手が予想より時間がかかり、本格的実験開始までに時間がかかったが、共同研究者の努力により、年度終了時には計画通りの進行となった。今年度は、現在の研究組織、それぞれのエフォートで目的とする研究の達成が可能と考える。研究計画は順調に進んでおりますが、少額の余剰が出てしまったため。消耗品の一部として使用予定です。当初計画案と大きな変更はない。
次世代”原子核”時計のキーマテリアルTh-229mの大量製造と検出

質量数229のトリウム同位体は,これまで知られている中で最も低い励起エネルギーを持つ核異性体(Th-229m)が存在しており,そのエネルギーは7.8 eVと報告されている。このエネルギーは真空紫外領域であり,一般的な原子核と比べ極端に低い。そのためTh-229は次世代"原子核時計"となる可能性がある。本研究の目的は大強度電子線によるTh-229の直接励起の可能性を探ることである。本年度は,昨年作成した放電励起装置に紫外可視分光器,真空紫外分光器等を導入して,フッ化マグネシウムのビューポートを通して,放電しながら分光分析できる装置を作成した。また,電極にTh-229を固定するための専用のテフロン製電着用セルを作成して,大強度電子線に耐えうるターゲット作成条件を再検討した。イソプロパノールを用いた分子電着法により比較的強固なターゲットは作成できるが,耐性試験が不十分であり残念ながらTh-229実試料を用いた実験には到達していない。耐性試験および分光分析の予備実験の解析を進め,Th-229を用いた実試験を近日中に実施する予定である。また,昨年に引き続きTh-229試料の増量にも取り組んだ。国内の研究所から数グラムのU-233(Th-229の親核種)を東北大に輸送し,その同位体比の測定を行った。昨年度入手したTh-229試料に比べ測定の妨害となるTh-228が多く含まれているが,今後の研究に十分利用することができることがわかった。これについても今後分離してTh-229研究に活用する予定である。質量数229のトリウム同位体(Th-229)の第一励起状態(Th-229m)はこれまで知られている中でも最も低い励起エネルギーを持つ核異性体である。その励起エネルギーは現在7.8 eVと報告されている。最外殻電子の束縛エネルギーと同程度の極端に低い励起エネルギーのため,Th-229mは次世代“原子核時計"の鍵となる可能性を持っている。しかしながら1990年代に数eVの励起エネルギーと報告されてから現在までにTh-229mの崩壊信号をとらえたという明確な証拠は未だ得られていない。本申請課題ではTh-229mの放電励起を行い,Th-229mの確かな検出を試みる。本年度はTh-229を放電励起するための装置の設計を進めた。放電励起装置は六ホウ化ランタンLaB6などの陰極,銅などで作成した陽極,およびそれらと検出器を固定するチャンバーで構成されている。装置には陰極を加熱するためのカソードヒーター用電源および熱陰極から放出された電子を引き出し陽極に導くための電子引出用電源が接続されている。実験時は陽極に励起したい核種を電着して,真空に引きながら放電励起を行う。現在,放電励起装置の電極周りの設計を終えて,試作機のテストを行っている。今後は安定した放電を目指し,テスト結果を元にしながら放電励起装置の改良を進めていく予定である。また,本装置の陽極に数mmの大きさで放射性同位元素を効率良く電着するための手法開発,及びTh-229mを検出するための測定法の確立なども同時に進めている。Th-229を放電励起するための装置の設計を進めた。本年度は1日程度連続で放電できるような放電励起条件を決定するまで進める予定であったが,試作した放電装置に取り付ける真空ポンプなどの整備が遅れ,理想的な放電条件を決定できるところまでは進んでいない。しかしながら,次年度以降に行う予定であった放射性同位元素を用いた陽極の線源調製などを先に進めており,進歩状況はそれほど遅れているわけではない。また,研究対象である貴重なTh-229の増量についても新たに進めている。再来年度以降にTh-229を利用する予定であり,使用できるTh-229量が増えれば実験精度を上げることができる。そこで,核燃料物質のU-233からTh-229を分離して製造することも研究計画に加えて今年度から進めている。以上より研究計画は,概ね順調に進展していると考えられる。このエネルギーは真空紫外領域であり,次世代"原子核時計"となる可能性が指摘されている。本研究では,これまで誰も成功していないTh-229の直接励起によりTh-229mを製造し,その確かな検出を試みる。本年度の実績は以下のとおりである。(1)Th-229直接励起装置の開発:本年度は昨年度に引き続き,Th-229の直接励起するための放電励起装置の設計を行った。昨年度の結果を基に新たな試作機のテストを行い,安定した放電で,目標の電流量を確認することができた。現在はTh-229m実験ための実機の作成を行うとともに,レーザーによる直接励起の可能性も考慮し,新たな励起装置の設計も行っている。(2)新たなTh-229試料の調製:実験に使用できるTh-229の量が増えるほど実験精度が上がるため,核燃料物質のU-233から娘核種のTh-229を分離することを試みた。

その第一段階として国内の研究所より数百mgのU-233の提供を受け,その一部を用いて同位体分析を行った。その結果,U-233試料には本研究に用いるのに十分な量と同位体純度のTh-229が含まれていることが分かった。本試料は平成29年度に分離・精製を行い研究に用いる予定である。(3)原子核周辺の電子密度の計算:Th-229mの7.8eVという極低エネルギーは最外殻電子の束縛エネルギーと同程度であり,化学状態により半減期が変化する可能性がある。この現象をより深く理解するためにTh-229mと同様に化学状態により半減期が変化する核種で,量子化学計算により求めた電子状態と半減期の比較を行った。今後はTh-229mについての計算を目指す予定である。本年度は昨年に引き続き,Th-229の直接励起するための放電励起装置の設計を進めた。本年度は放電励起装置の試作機のテストを終え,想定された電流量を引き出すことに成功した。研究計画ではトリウムと性質が似ている4属元素(ジルコニウム,ハフニウム)の放射性同位体を用いて,放電励起の模擬実験を行う予定であったが,そこまで達成できなかった。その理由としては,放電励起部分が思ったより高額になり,試作できる回数が少なくなったために放電励起部分の設計に手間取ったことがあげられる。しかしながら,放電励起実験のための実機の設計は既に終えており,近々模擬実験を行う予定である。また,昨年度より研究計画に加えた,貴重なTh-229の増量も来年度前期に達成できることが確実となり,Th-229実験の統計精度を上げ実験に必要な時間を短縮することが期待できる。さらに放電励起が上手く行かなかった場合のレーザー励起実験の計画や,電子を通じたTh-229m原子核の励起・脱励起を理解するための量子化学計算も進行している。以上より,研究計画はやや遅れているが,概ね順調に進んでいると考えられる。質量数229のトリウム同位体は,これまで知られている中で最も低い励起エネルギーを持つ核異性体(Th-229m)が存在しており,そのエネルギーは7.8 eVと報告されている。このエネルギーは真空紫外領域であり,一般的な原子核と比べ極端に低い。そのためTh-229は次世代"原子核時計"となる可能性がある。本研究の目的は,これまで誰も成功していないTh-229の直接励起によりTh-229mを製造し,その確かな検出を試みることである。本年度は昨年の結果に基づき,Th-229を直接励起するための放電励起装置の再設計を行い,実機の作成を行った。今年度に作成した放電励起装置は,放電時の分光分析が可能なように真空窓付きのガラスセルを備えており,検出器と線源の距離が数cmまで近づけられるように小型化している。さらにモリブデン電極による放射線の自己吸収を避けるために,電極は可能な限り肉抜き・小型化している。作成した実機を用いて放電テストを行い,100 V程度の低電圧でも安定した放電ができることを確認した。現在は電着を施した電極での試験を行うとともに,各種検出器の設置を進めている。また,新たなTh-229試料の調製を行った。昨年度,国内の研究所から輸送し,同位体比を測定したU-233試料から陰イオン交換カラム法を用いてTh-229を分離した。アルファスペクトロメトリーで定量したところ,約350 kBq(0.05 mg)のTh-229を新たに入手することができた。得られたTh-220試料のTh-228/Th-229放射能比は0.2程度であった。
肺高血圧症病状進行での血管新生抑制型アイソフォームVEGF-A165ｂ役割解明

肺高血圧症は、肺動脈の攣縮・狭窄と肺毛細血管の消失による肺動脈圧上昇のため、最終的には右心不全をはじめ全身の機能障害をもたらす極めて予後不良の進行性の疾患である。肺高血圧症の進展には、血管内皮促進因子(VEGF-A)の関与が知られているが、従来報告された血中VEGF-Aは、促進型(VEGF-A165a)と抑制型(VEGF-A165b)を合わせた値であった。本研究では、肺高血圧症の進展と血管内皮促進因子(VEGF-A)のアイソフォーム(促進型:VEGF-A165a、抑制型:VEGF-A165b)の注目した。107名の肺高血圧症患者[肺動脈性肺高血圧症(1群)48名、左心不全に伴う肺高血圧症(2群)5名、呼吸器疾患に伴う肺高血圧症(3群)4名、慢性血栓塞栓性肺高血圧症(4群)50名]と33名の肺高血圧症を認めないコントロール患者について比較した。1群48名の内訳は、特発性肺動脈性肺高血圧症16名、膠原病関連肺動脈性肺高血圧症17名、先天性心疾患に伴う肺動脈性肺高血圧症6名、門脈圧亢進に伴う肺動脈性肺高血圧症5名であった。コントロール群のVEGF-Aは、441.6±326.4 pg/ml、VEGF-A165bは75.2±50.3 pg/mlであった。コントロール群と比較すると、VEGF-A濃度は、1群(419.7±480.5pg/ml, p=0.098)、2群(331.6 ±252.0 pg/ml, p=0.399)、3群(639.8 ±360.8 pg/ml, p=0.001)、4群(339.4 ±261.2 pg/ml, p=0.033)であり、3群、4群で有意な上昇を認めた。一方、VEGF-A165bは、1群、3群・4群で有意に上昇していた。これまでの結果より、肺高血圧症3群ならびに4群ではVEGF-AならびにVEGF-A165bの発現量が疾患発症に関与している可能性が示唆された。患者登録は、順調に進み、登録時の総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベルの測定は終了している。肺高血圧症患者では、治療開始前と治療後の自覚症状や心臓カテーテル検査における各指標の反応性が予後と相関することが近年判明している。そのため、本研究においても、登録時の総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベルとの関係を検討を行う予定である。平成31年3月末まででは、フォローアップのための検査が終了した数は限定されており、平成31年度における検査が引き続き必要となっている。これまで測定した総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベルと臨床上得られる様々なパラメーターとの相関をチェックする。さらに、総VEGF-A血清レベルおよび抑制型アイソフォーム以外の血管新生因子の測定し、フォローアップデータとの相関を検討する予定である。肺高血圧症では、肺動脈の狭窄と肺毛細血管の消失と異常増殖が認められる。重症例では、異常毛細血管と考えられる叢状病変が出現する。肺高血圧症の進展には、血管内皮促進因子(VEGF-A)の関与が知られているが、従来報告された血中VEGF-Aは、促進型(VEGF-A165a)と抑制型(VEGF-A165b)の両方アイソフォームが含まれていた。本研究では、肺高血圧症の進展と血管増殖因子のうち、血管内皮促進因子(VEGF-A)のアイソフォーム(促進型:VEGF-A165a、抑制型:VEGF-A165b)の血清レベルとの関係を主に検討した。107名の肺高血圧症患者[肺動脈性肺高血圧症(1群)44名、左心不全に伴う肺高血圧症(2群)5名、呼吸器疾患に伴う肺高血圧症(3群)4名、慢性血栓塞栓性肺高血圧症(4群)50名]と33名の肺高血圧症を認めないコントロール患者について比較した。1群肺高血圧症患者44名の内訳は、特発性肺動脈性肺高血圧症16名、膠原病関連肺動脈性肺高血圧症17名、先天性心疾患に伴う肺動脈性肺高血圧症6名、門脈圧亢進に伴う肺動脈性肺高血圧症5名であった。現段階では、総VEGF-A血清レベルでは肺高血圧症1群4群の群間で有意な差は認めなかった。一方、抑制型アイソフォームは、3群で有意に増加していた。1群肺動脈性肺高血圧症患者群の原因別では、総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベルは、有意な差を認めなかった。総VEGF-A血清レベルと血行動態や運動耐容能との相関は認められなかった。患者登録は、順調に進んでいるが、総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベル以外の血管新生因子については、現段階では測定が終了しておらず、平成30年度に実施予定である。さらに、患者登録後1年以内であり、フォローアップのデータが揃っておらず、経過を含め平成30年度のデータ集積が必要な状態である。

肺高血圧症は、肺動脈の攣縮・狭窄と肺毛細血管の消失による肺動脈圧上昇のため、最終的には右心不全をはじめ全身の機能障害をもたらす極めて予後不良の進行性の疾患である。肺高血圧症の進展には、血管内皮促進因子(VEGF-A)の関与が知られているが、従来報告された血中VEGF-Aは、促進型(VEGF-A165a)と抑制型(VEGF-A165b)を合わせた値であった。本研究では、肺高血圧症の進展と血管内皮促進因子(VEGF-A)のアイソフォーム(促進型:VEGF-A165a、抑制型:VEGF-A165b)の注目した。107名の肺高血圧症患者[肺動脈性肺高血圧症(1群)48名、左心不全に伴う肺高血圧症(2群)5名、呼吸器疾患に伴う肺高血圧症(3群)4名、慢性血栓塞栓性肺高血圧症(4群)50名]と33名の肺高血圧症を認めないコントロール患者について比較した。1群48名の内訳は、特発性肺動脈性肺高血圧症16名、膠原病関連肺動脈性肺高血圧症17名、先天性心疾患に伴う肺動脈性肺高血圧症6名、門脈圧亢進に伴う肺動脈性肺高血圧症5名であった。コントロール群のVEGF-Aは、441.6±326.4 pg/ml、VEGF-A165bは75.2±50.3 pg/mlであった。コントロール群と比較すると、VEGF-A濃度は、1群(419.7±480.5pg/ml, p=0.098)、2群(331.6 ±252.0 pg/ml, p=0.399)、3群(639.8 ±360.8 pg/ml, p=0.001)、4群(339.4 ±261.2 pg/ml, p=0.033)であり、3群、4群で有意な上昇を認めた。一方、VEGF-A165bは、1群、3群・4群で有意に上昇していた。これまでの結果より、肺高血圧症3群ならびに4群ではVEGF-AならびにVEGF-A165bの発現量が疾患発症に関与している可能性が示唆された。患者登録は、順調に進み、登録時の総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベルの測定は終了している。肺高血圧症患者では、治療開始前と治療後の自覚症状や心臓カテーテル検査における各指標の反応性が予後と相関することが近年判明している。そのため、本研究においても、登録時の総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベルとの関係を検討を行う予定である。平成31年3月末まででは、フォローアップのための検査が終了した数は限定されており、平成31年度における検査が引き続き必要となっている。総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベル以外の血管新生因子の測定し、フォローアップデータとの相関を検討する予定である。これまで測定した総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベルと臨床上得られる様々なパラメーターとの相関をチェックする。さらに、総VEGF-A血清レベルおよび抑制型アイソフォーム以外の血管新生因子の測定し、フォローアップデータとの相関を検討する予定である。総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベル以外の血管新生因子については、現段階では測定が終了しておらず、平成30年度に実施予定である。総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベル以外の血管新生因子の測定キットの精度が不安定であることが判明し、平成30年度末までには終了できなかった。平成31年度に他の測定キットにて安定して測定できることを確認した上で再度総VEGF-A血清レベルならびに抑制型アイソフォームレベル以外の血管新生因子行う予定である。また、肺高血圧症ではベースライン時の臨床パラメーターよりもフォローアップ時の臨床パラメータの方が予後と相関すること明らかとなったため、フォローアップ時の臨床データが必要となり、平成31年度まで使用額が生じた。