hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
幼保小連携による就学移行期にある発達障害児の社会性支援プログラムの開発

発達障害児の就学を支援するためのシステム化されたプログラムはまだ少ない。この研究では、発達障害児の就学における支援ニーズを明らかにするために、発達障害児の親と発達障害児への支援の専門家たちに対して調査をおこなった.さらに、調査によって得られた知見と文献研究から発達障害児の就学のための支援プログラムを作成した。そして、子どもたちに対してそのプログラムを実施し、効果を調べた。その結果、コミュニケーション支援を中心としたグループ指導の必要性が示唆された。一方で、一人一人のニーズに応じた個別支援の必要性が明らかになった。加えて、発達障害児の個別の支援ニーズを評価するための支援ツールを活用する必要がある。それにより、個別の発達段階や特性に応じた就学支援が可能になると考えられる。a班:支援プログラム作成...幼児期(年長組)を対象に、「学校にうまく行けるように!」と称した集団活動の活動展開例と社会性の育成要素を含んだ遊びと「学びの芽生え」と称した個別活動における卒園までに一人ひとりが身につけたい社会スキルー覧をプログラム化した。作成した集団活動のプログラム「知的・発達障害のある幼児の就学支援プログラム学校にうまく行けるように!」は、「インクルージョン保育・幼児教育ミニハンドブックII」(橋本・大伴監修,東京学芸大学刊行,2008)として成果をまとめた。b班:事例データベース構築班...東京学芸大学教育実践研究支援センター発達障害電話相談窓口への電話相談および東京学芸大学での教育相談事業での支援事例について、学校(園)不適応を示した発達障害児への学習・行動・コミュニケーション支援プログラムを適用した事例を整理分析し、電子化情報によるデータベース化を行った。c班:フィールド適用検討班...学齢期(小1)の「友達とうまくつきあう遊び」(集団活動)と称した活動展開例と社会性の育成要素を含んだ遊びと、「1年生の基本」(個別活動)と称した基本的な生活習慣・学習習慣・対人関係などの社会スキルー覧のプログラムを、東京学芸大学附属特別支援学校の幼稚部、小学部で適用した。支援プログラムは場面(個別、集団活動)別、活動別(朝の集まり、音楽遊び、運動遊び、個別遊び、日常生活の指導)ごとに適用し、成果を検討した。a班:支援プログラム作成...学齢期(小1)の「友達とうまくつきあう遊び」(集団活動)と称した活動展開例と社会性の育成要素を含んだ遊びと,「1年生の基本」(個別活動)と称した基本的な生活習慣・学習習慣・対人関係などの社会スキル一覧のプログラムを作成した。さらに、平成20年度に幼児期(年長組)を対象に作成した、「学校にうまく行けるように!」と称した集団活動の活動展開例と社会性の育成要素を含んだ遊びと「学びの芽生え」と称した個別活動における卒園までに一人ひとりが身につけたい社会スキル一覧のプログラムを統括して「社会性支援プログラム」とし、平成22年度実施予定のインターネット環境による配信のためのプログラム集にまとめた。b班:事例データベース構築班...東京学芸大学教育実践研究支援センター発達障害電話相談窓口への電話相談および東京学芸大学での教育相談事業での支援事例について、就学移行期にある困難さからみた発達障害事例のタイプ分析・検討により得られた典型事例とその対応法などについて整理・記述し、事例のデータベース化をすすめた。c班:フィールド適用検討班...本研究の研究連携機関である東京学芸大学特別支援学校との連携により、日常の遊びやインクルージョン保育のなかでおこなえるコミュニケーション支援プログラムを検討・実施し、その効果を検討した。作成したプログラム「知的・発達障害のある幼児の発達支援プログラムあそび活動事例集」は、「インクルージョン保育・幼児教育ミニハンドブックIII」(橋本・大伴監修、東京学芸大学刊行,2009)として成果をまとめた。A班:支援プログラム作成班・B班:事例データベース構築班A班は、幼児期(年長組)の「準備の遊び」(集団活動)と称した活動展開例と社会性の育成要素を含んだ遊びと、「学びの芽ばえ」(個別活動)と称したひとり一人が身につけたい社会スキル一覧のプログラムと、学齢期(小1)の「友達とうまくつきあう遊び」(集団活動)と称した活動展開例と社会性の育成要素を含んだ遊びと、「1年生の基本」(個別活動)と称した基本的な生活習慣・学習習慣・対人関係などの社会スキル一覧のプログラムを統括して「社会性支援プログラム」を作成した。さらにこのプログラムに加え、B班により収集された就学移行期にある困難さからみた発達障害事例をタイプ分析・検討したのち、その対応法について整理・記述した「事例データベース」を作成した。これらを基に、より具体的かつ実際の教育現場で取り入れることができるよう改変した「小1学級&学習活動プログラム」を作成した。

本プログラムの内容は、基本的な生活習慣・学習習慣の獲得をねらいとした「生活習慣プログラム」「健康生活プログラム」、対人関係スキルの獲得をねらいとした「社会性プログラム」、個別での支援をおこなうための「気になる子どもへの個別支援プログラム」、子どもを取り巻く環境や人にはたらきかけるための「学級環境プログラム」「保護者との連携プログラム」で構成された。これらの成果を「小1プロブレム・予防&改善プログラム-特別支援教育と学級経営・学習活動に使える目的別メニュー55・」としてまとめ、刊行した。C班:フィールド適用検討班本研究の研究連携機関である東京学芸大学特別支援学校、都内小学校・療育機関等において、それぞれの機関の中でおこなえるコミュニケーション支援プログラムを実施し、その効果を検討した。また、その成果を日本発達障害学会にて発表をおこなった。
女性ソーシャルワーカーのキャリアとライフコースに関する調査研究

女性ソーシャルワーカーのライフヒストリーの聞き取り調査、アンケート調査を終了した。ライフヒストリーでは転職、異動、家庭生活などの個人的出来事とキャリアコースを、時代背景、両親と家庭環境、受けた教育など共通点ど差異に注目して分析した。福祉分野を選択する動機は「家族や友人に障害者がいた」とか、「人を助ける、人のため役立つ仕事」「福祉への憧れ」が多かった。また、世話好きなどの親の生き方や価値観が大きく職業選択に影響している。ソーシャルワーカーを目指す要因は「社会福祉士」という難易度の高い国家資格への取得意欲と、相談援助がケアより制度や社会資源を駆使して生活援するという専門的仕事であることが大きい。ソーシャルワークとは、福祉の分野でのキャリア発展に適した仕事内容と言える。現場経験と家庭生活など人生経験が生かせる仕重だからこそ、専門職として自己実現を求める女性のアイデンテイテイにもつながり、女性のキャリア発展に適した分野である。これは30代以降のずべての世代のサンプルに共通し、取得後も自己研鑽に努めている。福祉現場は職住接近が多く、育児休業への理解も進んでいるので職業継続が可能である。むしろ家庭生活は仕事のストレスやバランスをとる助けになり、ソーシャルワーカーの仕事は他の仕事よりも充実感と自己成長につながると実感している。育児や介護への充分な支援が得られるなら、ソーシャルワーカーは女性の能力を最大限にいかせる仕事である。今回の研究成果である多様な事例によるキャリア発展の形とアンケート結果は、具体的な後続のキャリア支援として多いに役立つ。1研究実績(1)ライフヒストリーの事例収集計15人の現職種と年代(全員社会福祉士)、東北、九州、中国、東海、関東地方30代女性3人(病院医療相談室SW、市児童相談所児童福祉司、居宅介護支援事業所ケアマネ、)40代女性4人(精神障害者通所授産施設SW、包括支援センターケアマネ2人,事業団ケアマネ)、50代女性3人(介護関連NPO理事長、包括支援センターケアマネ、特別養護老人ホーム施設長)(2)最終学校と教育暦の比較専修学校3人、福祉系短大1人、福祉系4大9人(卒業時に社会福祉士受験資格取得4人)文科系4大2人(3)親・家庭背景との関係親世代の教育は義務教育家か職業高校卒がほとんど。したがってブルーカラーや自営業が多く、大学卒で事務職は2例のみ。ただ、例外もあるがほとんどはとも働きで、勤勉で倹約し家を持ち、師弟の教育に投資するなど堅実な生活ぶりが共通する。また子どもに障害者や高齢者など弱い立場の人を支援する社会福祉を仕事として選ばせる価値観が親の暮らしぶりにも伺える。地域や親族の人と助け合う姿勢、善悪へのけじめ、弱いものいじめをしないなどの義侠心が、特に娘に強く受け継がれている。2.考察(1)女性は自立できる一生の仕事として福祉分野を進学・就職の際に選択している。(2)男性は人間や社会に関わる援助職として福祉系大学と就職先を選択している。(3)男女間わず、両親の生活態度、価値観、正義感などがキャリア選択に大きく影響する。3.今後研究の展開次年度の継続研究により事例数を積み重ね、アンケート調査による数量的調査も行い、世代コーホートと関連づけ、結論を導きたい。ライフヒストリーでは転職、異動、家庭生活などの個人的出来事とキャリアコースを、時代背景、両親と家庭環境、受けた教育など共通点と差異に注目して分析した。また、世話好きなどの親の生き方が大きく職業選択に影響している。ソーシャルワーカーを目指す要因は「社会福祉士」という難易度の高い国家資格への取得意欲と、相談援助がケアより制度や社会資源を駆使して生活援助するという専門的な仕事であることが大きい。

ソーシャルワークとは、福祉の分野でのキャリア発展に適した仕事内容と言える。現場経験と家庭生活など人生経験が生かせる仕事だからこそ、専門職として自己実現を求める女性のアイデンテイテイにもつながっている。これは全世代のサンプルに共通し、取得後も自己研鑽に努めている。福祉現場は職住接近が多く、育児休業への理解も進んでいるので職業継続が可能である。むしろ家庭生活は仕事のストレスやバランスをとる助けになり、ソーシャルワーカーの仕事は他の仕事よりも充実感と自己成長につながると実感している。育児や介護への充分な支援が得られるなら、ソーシャルワーカーは女性の能力を最大限にいかせる仕事である。今回の研究成果である多様な事例によるキャリア発展の形とアンケート結果は、具体的な後続のキャリア支援として多いに役立つ。
フィンランド建築のユーゲントからモダニズムへの移行過程に関する歴史的研究

1.研究期間を通して、国内外の研究資料を探索し、すでに所有している資料はその整理を行った。2.また、全体的な総論のとりまとめに先立ち、テーマに関連する個々の事例の個別研究を行なった。(1)フィンランドのモダニズム建築が継承しているのは、前代のユーゲント建築ばかりでなく、より古い伝統的な建築物もある。そのため、広義の地域環境が建築に及ぼしている影響を評価する試みとしてモダニズム建築家A.アールトと中央フィンランド地方の建築伝統のつながりを検討した(2003年3月)。(2)また、フィンランド・モダニズムを理解するためには、同時並行して展開されたスウェーデン・モダニズムとの比較も重要である。その立場から建築家G.アスプルンドに注目し、アスプルンド・セミナー(2003年7月)にパネラーとして参加し、さらに私費によるスウェーデンのストックホルム周辺へのアスプルンド作品視察旅行(2003年8月)を実現させた。3.上記のような個別事例研究を踏まえて、2年間の研究成果として最終的な報告をまとめた。ユーゲント期からモダニズム期への移行において、建築の表面上の姿が大きく変化する一方で、その背後にある理念である「ナショナル・ロマンティシズム」は不変であることが、フィンランド建築のもっとも本質的な特徴を形成しているとの認識から、論文「フィンランドのナショナル・ロマンティシズム建築に関する基礎的研究」(2004年6月)を執筆して、研究成果報告書として公表した。研究初年度の研究基盤を固める作業として、予定どおり国内外の資料を探索し、またすでに所有している資料の整理に着手した。補助員を利用して、大学研究室に設置されたパーソナル・コンピュータおよび周辺機器の活用で、図版資料のデジタル化による保存とデータベース化を進め、一部が完了した。具体的な事例に関する研究分析も開始した。研究期間中には、私費によるヘルシンキその他フィンランド各地への視察旅行は実現できなかったが、以前に訪れたことのある事例を扱うこととした。ユーゲント期とモダニズム期をつなぐ時期に建設されて、フィンランド建築がヨーロッパ一般とは異なった方向性に進んだシンボルとも目されるヘルシンキ・カピュラ地区の住宅地をまず取り上げて、その性格を分析し、影響力の大きさを評価する試みを行なった。研究過程で次第に明らかになった可能性として、フィンランドのモダニズム建築が継承しているものは、当初から想定していた前代のユーゲント建築ばかりではなく、より古い伝統的な建築物もそこに含まれる点があった。そのため、別の論考の中で、広義の地域環境が建築に及ぼしている影響を評価するために、中央フィンランド地方の建築伝統と20世紀の建築家アールトのつながりに関する考察も行った。最終年度となる来年度の研究においては、資料のデータベース化を継続しつつ、一方で上述した今年度の個別の成果を総合して、大きな視点からまとめてゆく作業に取り組む予定である。まず、研究初年度からの作業を継続して、今年度も予定どおり国内外の資料を探索し、またすでに所有している資料の整理を行った。補助員を利用して、大学研究室に設置されたパーソナル・コンピュータおよび周辺機器の活用で、図版資料のデジタル化による整理と保存を進め、さらに完成に近づけた。全体的な総論のとりまとめに先立ち、具体的事例に関する個別研究を行なった。フィンランド・モダニズムを理解するためには、それ以前のフィンランド・ユーゲントから継承された要素を跡づけるとともに、一方で同時並行して展開されたスウェーデン・モダニズムとの比較も重要であるとの立場から、建築家G.アスプルンドに注目した。そして、アスプルンド・セミナー(2003年7月)にパネラーとして参加し、さらに私費によるスウェーデンのストックホルム周辺へのアスプルンド作品視察旅行(2003年8月)を実現させた。昨年度および上記のような今年度の個別事例研究を踏まえて、今回の2年間の研究の成果として、最終的な報告をまとめた。ユーゲント期からモダニズム期への移行において、建築の表面上の姿が大きく変化する一方で、その背後にある理念である「ナショナル・ロマンティシズム」は不変であることが、フィンランド建築のもっとも本質的な特徴を形成しているとの認識から、論文
形質転換植物を用いた光合成組織における窒素酸化物代謝応答の分子機構の解析

ホウレンソウNiRcDNAを富化したトランスジェニック植物として、再分化当代(T1植物)および自殖第1代および第2代(T2およびT3植物)をそれぞれ107,43および9系統得た。これらが外来遺伝子を持つことはPCR法およびサザンハイブリ分析により確認した。また、ホウレンソウ由来のNiRタンパク質を発現していることは2次元泳動分離したタンパク質のイムノブロット分析により確認した。これまでに、野性株に比べ最大1.9倍高いNO2同化能力を持つトランスジェニッククローンが得られた。これらトランスジェニッククローンにおいてNIR, NiR酵素活性が野性株のそれの1.4-1.5倍を示すものが認められた。アンチセンスGScDNA断片(660bp)の導入により、導入後2時間で植物葉のGS酵素活性およびGSポリペプチド量は有意に減少した。また、遺伝子導入処理後、植物をNO2暴露処理すると、GSポリペプチドと酵素活性の減少はさらに強まり、かつ著しい可視障害が生じた。キャピラリー電気泳動法による硝酸、亜硝酸およびアンモニウムイオンの分析の結果、アンチセンスGS cDNAを導入した植物をNO2暴露処理すると、顕著な亜硝酸イオンの蓄積が生じることが分かった。従って、上記の可視障害は亜硝酸イオンの蓄積に起因すると推定された。また、NO_2暴露処理したシロイヌナズナ植物葉からタンパク質を抽出し、2次元電気泳動法により解析した結果、分子量31kDa等電点5.8-6.2のタンパク質がNO_2暴露処理で誘導されることが分かった。ホウレンソウNiR cDNAを富化したトランスジェニック植物として、再分化当代(T1植物)および自殖第1代および第2代(T2およびT3植物)をそれぞれ107,43および9系統得た。
赤かび病菌のストレス応答シグナル伝達経路によるトリコテセン合成制御機構の解明

麦類赤かび病菌のストレス応答MAPキナーゼ(FgOS2)経路の下流に位置すると推定されるCREB型転写因子のFgATF1は、トリコテセン合成に必須ではないが、分化誘導を通して合成制御に関与することを明らかにした。さらに、FgOS2経路で制御される11遺伝子を同定した。これらの遺伝子群には、グリセロール合成酵素、カタラーゼ、糖新生鍵酵素や細胞壁関連酵素など様々な酵素群が含まれており、本経路がストレスに応答して多様な役割を担っていると考えられる。麦類赤かび病菌のストレス応答とカビ毒(トリコテセン)合成制御の関係を明らかにするために、当初計画に基づき研究を展開し、下記の成果を得た。1、CREB型転写因子FgATF1破壊株の作成とトリコテセン合成能赤かび病菌のストレス応答MAPキナーゼFgOS2遺伝子の欠損株は、トリコテセン合成能を失う。一方、アカパンカビのMAPキナーゼOS-2の主要な転写因子は、ATF-1であることを報告している。そこで、本年度は、赤かび病菌のFgATP1遺伝子を相同組み換え法により破壊した。ΔFgATF1株のトリコテセン合成能を調べたところ、野生株と同等のトリコテセンがTLCにより検出された。このことから、FgATF1はトリコテセン合成に直接関与しないことが明らかになった。MAPキナーゼはリン酸化により活性化される。そこで、抗リン酸化抗体を用いてウエスタン法によりFgOS2のリン酸化の有無を解析した。その結果、フルジオキソニル処理により顕著にリン酸化されることが明らかになった。3、かび病菌のFgOS2依存的にフルジオキソニルにより誘導される遺伝子群の同定アカパンカビのOS-2により制御される遺伝子群のオルソログを検索し、赤かび病菌でも同様に誘導されるかを、リアルタイムPCR法により解析した。その結果、FgCAT1、FgGCY1、FgCCG1などの遺伝子群がフルジオキソニル処理により、FgOS2依存的に誘導されることが明らかになった。ただし、例外遺伝子も存在した。4、糸状菌のストレス応答MAPキナーゼにより制御される転写因子の同定FgATF1がトリコテセン合成に関与しなかったことから、FgOS2により制御される新たな転写因子を探索する必要がある。そこで、本年度は、アカパンカビを用いて、OS2に結合するタンパク質をアフィニティ精製しTOF-MASS解析により、RCO-1を同定した。今後、赤かび病菌のFgRCO1がトリコテセン合成に関与するかを検証する。1.赤かび病菌のAキナーゼ触媒サブユニット遺伝子の破壊株の作成とトリコテセン合成への影響解析赤かび病菌のトリコテセン生産が糖源による制御を受けていることから、糖源を感知して応答すると考えられるcAMP-PKA経路の関与を調べるために、Aキナーゼの触媒サブユニット(FgPKA1)遺伝子のノックアウト株を相同組換え法を用いて作製した。FgPKA1欠損株は、やや生育抑制が認められたが、トリコテセン合成能は野生株と顕著な差は認められなかった。ことのとから、cAMP-PKA経路のトリコテセン合成への貢献度は低いと推定された。2.マイクロアレイを用いたcAMP-PKA経路の下流で制御される遺伝子群の同定cAMP-PKA経路で制御される糸状菌の遺伝子群を明らかにするために、アカパンカビのcAMP合成酵素欠損cr-1変異株を用いて、cAMPの添加による誘導遺伝子の探索を行った。マイクロアレイ解析により、誘導遺伝子の候補を選抜したが、リアルタイム定量PCRで顕著な発現誘導が認められた遺伝子はほとんどなく、実験手法の改善が必要であると考えられた。3.転写因子FgATF1破壊株の分生子形成能の再検定赤かび病菌のFgOS-2MAPキナーゼは、トリコテセン合成を制御するものの、その下流の転写因子であるFgATF-1欠損株では、トリコテセン合成に顕著な異常は認められなかった(前年度報告)。しかし、分生子形成能を欠損した株を親株として使用していたため、改めて分生子形成能を有する赤かび病菌を親株として、FgATF1破壊株を作製した。その結果、FgATF1遺伝子の破壊はトリコテセン合成能を消失することが明らかになった。このことから、FgATF1はトリコテセン合成を制御する転写因子であるが、その制御は分生子形成能と強く関連していることが明らかになった。赤かび

病菌の浸透圧シグナル伝達(FgOS)経路は、トリコテセン合成に関与している。FgOS経路はアカパンカビのOS経路と共通性が高く、変異株の形質や下流で制御される遺伝子群にも共通性が高いことを明らかにしてきた。一方、FgOS経路とクロストークが予想されたcAMP-PKA経路の変異株は、トリコテセン合成への関与が認められず、アカパンカビの変異株と形質が大きく異なった。本年度は、cAMPの下流で制御されている遺伝子の探索系の構築および赤かび病菌とアカパンカビで各種ストレスにより誘導される遺伝子群の共通性および相違性について検証した。まず、cAMP合成酵素の欠損cr-1株を利用して外部から与えたcAMPに応答する遺伝子の同定をアレイ解析したが、誘導遺伝子を同定できなかった。そこで、さらに高感度にcAMPに応答する株として、cAMP合成酵素と分解酵素を両方欠損したcr-1; pde-2二重変異株を作製した。cr-1; pde-2株はcr-1株よりも1/100のcAMP濃度に反応し、その効果が持続した。本株を使用することにより、cAMP-PKA経路の下流で制御される遺伝子を同定することが可能になると考えられる。さらに、各種殺菌剤により誘導される遺伝子について、赤かび病菌とアカパンカビの相関を調べた。酸化ストレスを誘発するメナジオンおよび電子伝達系の脱共役剤であるフルアジナムは、glutathione S-transferase遺伝子やoxidoreductase遺伝子を顕著に誘導し、赤かび病菌とアカパンカビ間に高い共通性が認められた。エルゴステロール合成阻害剤であるメトコナゾールは、その標的酵素ERG11遺伝子の誘導が認められた。以上から、赤かび病菌とアカパンカビは分類上も比較的近縁であり、相違点はあるものの殺菌剤に対する応答に高い共通性があることが明らかになった。ストレス応答MAPキナーゼの下流に存在する転写因子FgATF1がトリコテセン合成に関与すること、および下流で制御されている遺伝子群を同定した。また、RCO-1転写因子が、ストレス応答MAPキナーゼの制御を受けていることを明らかにした。これらのデータはいずれもこれまでに報告のないものであり、学術的な価値が高いと考える。また、cAMP-PKA経路の下流で制御されている遺伝子群の同定には至らなかったものの、本経路のトリコテセン合成制御は限定的である結果が得られた。24年度が最終年度であるため、記入しない。当初、cAMP-PKA経路がトリコテセン合成制御に関与している可能性を想定していたが、本経路は重要ではないとこが明らかになったことから、この部分の実験計画を縮小し、ストレス応答で制御される遺伝子群と比較ゲノム解析に注力して、研究を推進する。
動脈硬化の病因と予防に関する研究血管平滑筋増殖に関する因子について

1動脈硬化発症の基礎的検討動脈硬化の発症には血管平滑筋細胞の増殖脂質の蓄積が重要である。1)培養血管平滑筋細胞において活性型ビタミンDの特異的受容体を見いだしまたこのホルモンが血管平滑筋細胞を増殖させるとともに、グリコサミノグリカン合成を抑制させる事を明らかにした。2)培養軟骨細胞において血小板由来成長因子が細胞内Ca^<2+>を上昇させるとともに、増殖グリコサミノグリカン合成を促進させることを明らかにした。スラミンは細胞内Ca^<2+>の上昇および増殖の両者を抑制した。3)培養血管平滑筋細胞において低比重リポ蛋白が細胞内Ca^<2+>の上昇させることを明らかにした。この作用はイノシトール代謝回転を介した。4)腎尿細管基底側膜において血小板由来成長因子の受容体の存在を証明するとともに、その因子がCa^<2+>ポンプ活性を亢進させることを明らかにした。2血管平滑筋細胞の細胞内Ca^<2+>情報伝達系に与える種々の科学物質の影響についての検討1)培養血管平滑筋細胞において血管収縮物質であるプロスタクランジンF2αアンジオテンシンIIが細胞内Ca^<2+>を上昇させるとともに血管拡張物質であるニコランジルはそれらによる細胞内Ca^<2+>の上昇を抑制することを明らかにした。2)培養血管平滑筋細胞において、K^+イオノフォアバリノマイシンは、アンジオテンシンIIによるイノシトールトリフォスフェイト産生に影響与えずに、細胞内Ca^<2+>ストアからのCa^<2+>の遊離を抑制することを明らかにした。3)豚冠状動脈平滑筋細胞のCa^<2+>ポンプ活性を亜硝酸剤、ニトログリセリン、ニコランジルが亢進させることを明らかにした。〔目的〕動脈硬化の原因は,血管平滑筋の増殖促進にあるとするRossの説は修正を受けながらも一般に認められつつある.そこで血小板由来増殖因子(P.DGF)などの血管平滑筋の増殖に影響する因子かどのようなメカニズムを介して増殖を促すかについて検討し,さらに生体内物質や薬剤が血管平滑筋の増殖に影響するか否かについて検討した.〔方法〕ラット大動脈の血管平滑筋細胞を培養し, PDGFの増殖ニオヨボス硬化と培養血管平滑筋細胞の細胞内カルシウムおよぼす効果について検討した.つぎにカルシウム拮抗剤の血管平滑筋細胞の増殖に及ぼす影響について検討した.さらに活性型ビタミンDが血管平滑筋細胞の増殖に影響するのか否かについても検討した.〔結果〕PDGFは血管平滑細胞の増殖を促進するとともに細胞内カルシウムを増加させることを明らかにした.一方カルシウム拮抗剤のニカルジピンは血管平滑筋細胞の増殖を抑制した.活性型ビタミンDである1, 25(OH)_2Dは10^<-10>M以上の濃度で用量反応的に血管平滑筋細胞の増殖を促進した.また血管平滑筋細胞に1, 25(OH)_2Dのレセプターの存在することも明らかにした.一方Dcxamethasoneは増殖を抑制した.〔考案〕PDGFは強力な血管平滑筋細胞の増殖因子であり,平滑筋細胞の細胞内カルシウムを増加させた. PDGFのレセプターのブロッカーであるスラミンを加えるとPDGFの増殖促進効果は抑制され,また細胞内のカルシウムの上昇も抑制されたので,細胞内カルシウムの上昇も抑制されたので,細胞内カルシウムの増加が細胞の増殖と関係しているように思われる.したがってニカルジピンや他のカルシウム拮抗剤の増殖抑制作用は細胞内カルシウム上昇抑制を介しているものと考えられた.1動脈硬化発症の基礎的検討動脈硬化の発症には血管平滑筋細胞の増殖脂質の蓄積が重要である。

1動脈硬化発症の基礎的検討:動脈硬化の発症には血管平滑筋細胞の増殖脂質の蓄積が重要である。1)培養血管平滑筋細胞において活性型ビタミンDの特異的受容体を見いだし、またこのホルモンが血管平滑筋細胞を増殖させるとともに、クリコサミノグリカン合成を抑制させる事を明らかにした。2)培養軟骨細胞において血小板由来成長因子が細胞内Ca^<2+>を上昇させるとともに、増殖グリコサミノグリカン合成を促進させることを明らかにした。スラミンは細胞内Ca^<2+>の上昇および増殖の両者を抑制した。3)培養血管平滑筋細胞において低比重リポ蛋白が細胞内Ca^<2+>の上昇させることを明らかにした。この作用はイノシトール代謝回転を介した。4)腎尿細管基底側膜において血小板由来成長因子の受容体の存在を証明するとともに、その因子がCa^<2+>ポンプ活性を亢進させることを明らかにした。2血管平滑筋細胞の細胞内Ca^<2+>情報伝達系に与える種々の科学物質の影響についての検討1)培養血管平滑筋細胞において血管収縮物質であるプロスタクランジンF2αアンジオテンシンIIが細胞内Ca^<2+>を上昇させるとともに血管拡張物質であるニコランジルはそれらによる細胞内Ca^<2+>の上昇を抑制することを明らかにした。2)培養血管平滑筋細胞において、K^+イオノフォア、バリノマイシンは、アンジオテンシンIIによるイノシトールトリフォスフェィト産生に影響与えずに、細胞内Ca^<2+>ストアからのCa^<2+>の遊離を抑制することを明らかにした。3)豚冠状動脈平滑筋細胞のCa^<2+>ポンプ活性を亜硝酸剤、ニトログリセリン、ニコランジルが亢進させることを明らかにした。
災害復興時の財務と非財務情報の役割―阪神と東日本の大震災の経験的研究

営利および非営利組織の災害復興に際し、財務・非財務情報がどのようにポジティブ/ネガティブな役割を果たすかを経験的に解明し、将来の災害復興への指針を示すことを企図した。研究成果として、平時と震災時では財務・非財務情報の果たす役割が違っていることが明らかになった。特に、優れた震災マネジメントを行った企業は、文化コントロールによって財務情報を中心とした成果コントロールを代替することを発見できた意義は大きい。研究の目的は以下の通りである。<全体構想>営利および非営利組織の災害復興に際し、財務・非財務情報がどのようにポジティブ/ネガティブな役割を果たすかを経験的に解明し、将来の災害復興への指針を示すこと。<目標1>阪神と東日本の両大震災に関して、財務情報(被害額や必要投資額決定等)と非財務情報(安全、品質、顧客、環境対策等)が、組織のマネジメント(意思決定や業績管理)とガバナンス(情報開示やコンセンサス形成)の両面で果たした役割の解明。<目標2>阪神被災企業は、前大震災の教訓を、東日本大震災においてどのように活かしたか、それとも活かさなかったのかについて、促進と阻害の要因の解明。<目標3>被災経験を基に、将来の震災復興のためのマネジメント/ガバナンスへの指針策定。当該年度の研究実施計画は、(1)メンバー同士の情報共有と研究組織体制の確立、(2)本研究計画に関連する先行研究の文献調査、(3)東日本大震災被災組織へのヒアリング調査、(4)海外研究者からの意見聴取の4つの活動の実施であった。研究実績については、(4)については、中国からの研究者の招聘を企図していたが、実施できなかった。それを除いてすべて達成した。また、実施計画を前倒しして、H25年以降に計画していた、(5)阪神地区の被災組織へのヒアリング調査、(6)質問票の設計についても着手した。さらに(7)論文執筆を行い、研究成果の発信も行った。何より、補助金の存在が企業の意思決定を近視眼的にするという深刻な問題について発見できたことは大きな成果と言えよう。昨年度の調査を通じて、東北地区の研究者、宮城県内や神戸の商工会議所とのネットワークが構築できた。東北学院大学の佐々木教授のお陰で適切なリサーチサイトでのインテンシブなケース研究ができた。本年度から研究分担者になってもらうことにもなった。当該年度の研究実施計画は、1大規模質問票調査、2海外研究者からのヒアリング、3東日本大震災被災組織へのヒアリング、4阪神大震災被災組織へのヒアリング、5研究成果の発信、6提言策定の6つで構成される。研究実績は、1については、営利組織向けの大規模質問票調査を実施した。非営利組織向けは未実施である。2については、英国よりAnnika Beelits(Bangor Business School)氏を招聘し、ヒアリングを実施した。3については大興水産訪問はじめ全メンバーで頻繁に実施した。4についてはオムロン訪問はじめ全メンバーで複数回実施した。5については、学会発表としてAsia Pacific Interdisciplinary Perspective in Accountingや日本会計研究学会はじめ国内外の発表を行った。論文は、『産業経理』および『国民経済雑誌(近刊)』などを発表した。提言としては、研究代表者が朝日新聞からの取材を受けた。また、神戸大学社会科学系研究府主催のシンポジウムで政策提言を行った。当該年度の研究実施計画は、1営利組織向けの大規模質問票調査の完了、2日本会計研究学会の統一論題での報告、3非営利組織向けの大規模質問票調査の実施

東日本大震災被災組織へのヒアリング調査、4現代経営学研究所シンポジウムでの発表、5国際学会での発表、6アクションリサーチの実施、7国内外の研究雑誌への論文投稿であった。研究実績は、1を完了した。2は研究代表者の三矢が座長、研究分担者の佐々木が発表者・パネリストで『震災復興とマネジメント・コントロール』というシンポジウムを実施した。3は質問票を設計し、自治体向けに発送、回収を行った。分析はH27以降にに実施する予定である。4についてシンポジウムのテーマには選ばれなかった。5について、2014年11月、韓国の平澤大学校日本学科学術祭で佐々木が招待講演を行った。2015年3月の国連防災会議のパブリックフォーラムで佐々木がコーディネーターとなった。6アクションリサーチのサイトを石巻市を中心に探索中。7は、日本の研究雑誌に査読論文1本,査読雑誌の招待論文2本,査読無し論文2本。26年度が最終年度であるため、記入しない。会計学26年度が最終年度であるため、記入しない。9にも書いたが、海外研究者を招聘し、意見聴取をするということ以外は、すべて当該年度の実施計画を達成した。海外研究者として予定していたのは中国の北京大学の王立彦教授であったが、これは尖閣問題の影響ではないかと推測される。震災の記憶が風化してしまう前に調査を実施する必要があったため、科研メンバーは度々会合を開いた。本年度に実施する質問票のかなりの部分を準備できたことは、本年度と来年度に早期の成果を期待できると言えよう。研究実績の概要にも書いたが、ほぼすべて当該年度の実施計画を達成した。最難関と思われたデータ収集が順調に進んだ。特に、営利組織向けの質問票調査は一年前倒しで、統計的な分析までほぼ終了している。なお、非営利組織用の質問票調査については、営利組織用の結果との比較可能性を確保するために、営利組織用の質問票調査の結果をこれから発信し、それに対するレスポンスを確認してから実施する方が有益と判断した。そのため、あえてH25に発送することは控えたことを付け加えておきたい。現時点までの感触ではあるが、得られた知見を世の中に対して発信したことに対して、予想以上の手応えである。進捗状況のみならず、研究の質に対しても計画以上と言えよう。本年度の研究実施計画は(1)大規模質問票調査#1、(2)海外研究者からのヒアリング、(3)東日本大震災被災組織へのヒアリング、(4)阪神大震災被災組織へのヒアリング、(5)研究成果の発信、(6)提言策定の6つで構成される。特に、(1)(2)(3)(4)が重点課題である。H26年度は、精力的に成果の発信をする必要がある。既に、原価計算研究学会では、震災マネジメントが統一論題として取り上げられることが決まっている。
乱流混合対流振動場における低プラントル流体のカオス的挙動の解明

本研究では液体金属などの低プラント流体中に生じる、自然対流と強制対流の共存する混合対流振動場における振動的な流れについて検討を行った。具体的には半導体基板材料となるシリコン単結晶などの作成に用いられているチョクラルスキー法においての、融液中の流れ場の変化による温度振動を実験的に測定した。チョクラルスキー法ではルツボ内融液中に、結晶棒などの回転による強制対流と、結晶棒とルツボとの温度差による自然対流が共存し複雑な流れとなっている。このとき融液中に発生する振動流の発生機構を明らかとするため、幾つかの直径の異なるルツボを用い、融液内の振動場の測定を行った。実験は直径36mm(Case A: Gr=2x10^7)と直径76mm(Case B: Gr=5.5x10^7)のルツボを用い、実験材料としてスズ(Pr=0.0140)を用いた。結晶棒の直径はルツボ径の半分、融液深さはルツボ径と同じとし、ルツボが静止した状態で結晶回転数のみを変化させ、この時の融液内温度の変化を融液中に設置した直径0.5mmのシース熱電対により測定し、測定データをFFT解析した。まず結晶回転数が小さい自然対流支配の場合では、温度振幅0.1K程度の短周期の変動が見られるのみであったが、結晶回転数を増していくと、周期的な振動流がCaseAの場合でGr/Re^2=18、Case Bの場合でGr/Re^2=6付近より見られ、どちらも結晶回転数を増すに従い融液内温度振動周期は減少した。このときの振動周期のピークはCase Aで230秒、Case Bで592秒となった。現在またルツボ径120mm、200mm等での実験を行っており、これらを比較することにより現在工業的に行われているCz法結晶成長の大口径化に対応した、融液流れの振動特性の基礎データを築くことが可能となる。
多金属高活性反応場による低分子量分子ジョイント化学

昨年度の研究において、新規な光学活性ホスホイミノビナフトールーパラジウム二核錯体を開発し、マロノニトリルとN-Bocイミンの触媒的不斉Mannich反応において高い触媒活性を見出した。本年度は、本知見を基盤として、種々のアルキルマロノニトリルを基質に用いた不斉Mannich反応ならびに触媒反応機構の解明を行った。光学活性アミノホスフィンと3,3'-ジホルミルビナフトールをエタノール中で脱水縮合させることで目的のホスホイミノビナフトール配位子(L1)と酢酸パラジウムから調製した錯体より単結晶を得ることに成功し、パラジウム二核錯体の構造をX線結晶構造解析によって明らかにした。本錯体を用いるマロノニトリルとN-Bocイミンの触媒的不斉Mannich反応では、マロノニトリル1分子にイミン2分子が反応する過剰反応により化学収率が低下するため、アルキルマロノニトリル及びN-Bocイミンを用いて反応条件を精査したところクロロホルムを用いる反応条件において、高化学収率、高不斉収率にて目的の四級炭素を有する光学活性アミンを得ることに成功した。活性メチレンを有するマロノニトリルを用いる反応では、通常過剰反応によると思われる1:2生成物を比較的高収率に与えたことから、1:2生成物である1,3-ジアミンを主生成物として与える反応に研究を展開した。その結果、反応溶媒をジクロロメタンにし、マロノニトリルに対しN-Bocイミン2.5等量を加えることで、目的とする1,3-ジアミンを高収率、高不斉収率にて得ることに成功した。パラジウム二核錯体にのみ見出される高い触媒活性であることから、マロノニトリルが二つのパラジウム間で効果的に活性化されることが重要でることが示された。29年度が最終年度であるため、記入しない。複数の金属、特に異種金属の協調作用を取り入れた不斉触媒の創製は魅力的である。本研究では、複数の金属が協調するユニークな反応場の合目的な構築によって、新奇な触媒的不斉合成の確立を目指している。2014年我々は、亜鉛三核錯体を用いる触媒的不斉ヨードラクトン化に成功した。わずか1 mol %の触媒により99.9% eeの光学活性ラクトンを定量的に与える反応であり、世界最高記録の触媒的不斉ヨードラクトン化である。本触媒系について精査したところ、NISを用いるヨードラクトン化には、I2の添加が触媒活性の向上に役立つ一方、NBSを用いるブロモラクトン化では、I2やBr2を添加せずに-40°Cに上昇させて反応を行うことで十分に高い不斉誘起を発現することが分かった。そこで、実験化学ならびに計算科学の両面から、反応機構の解明に取り組んだ結果、NISを用いるヨードラクトン化では、NISとI2との間にL字型のハロゲン結合を形成し、ヨードラクトン化をスムーズに進行させていることが分かった。一方、亜鉛三核錯体の開発をもとに、ソフトな金属とハードな金属を選択的に取り込むphosphoiminoBINOL配位子を設計した。本配位子を用いて開発を目指す反応として、マロノニトリルなどの低分子量化合物をジョイント分子とする光学活性物質の創成を設定した。phosphoiminoBINOL配位子に種々のハード性の高い金属塩とソフト性の高い金属塩を作用させて錯体を調製し、N-Bocイミンへのマロノニトリルの触媒的不斉Mannich反応を試みた。phosphoiminoBINOL配位子に酢酸パラジウム、酢酸亜鉛を作用させた錯体の触媒活性が最も高かった。また、マロノニトリルに対しN-Bocイミン2.5等量を加えることで1:2生成物である1,3-ジアミンを高収率、高エナンチオ選択的で得ることにも成功した。ヨードラクトン化の遷移状態解析でNISとI2との間にL字型のハロゲン結合を形成し、ヨードラクトン化をスムーズに進行させていることが示されたことは予想以上の成果であった。本L字型の相互作用は、ハロゲン結合を取り入れた高立体選択的な触媒反応の精密制御に繋がる大きな成果である。また、ホスホイミノビナフトールーパラジウム2核錯体を用いるN-BocイミンとマロノニトリルのMannich型反応において、99%eeの高い光学純度にて目的とするジアミン化合物が得られたことも予想以上の成果である。本反応では、いわゆるmeso-trickという機構により、1:1生成物よりも1:2生成物の光学純度が向上していることを示すことができた。さらに、複数の金属間の相互作用に限らず、金属とプロトンの相互作用を取り入れた精密制御反応場の構築研究においてもインドールの不斉還元や塩基性条件下でのインドールの活性化など合成的に有用な新規触媒的不斉反応の創製に成功した。

光学活性アミノホスフィンと3,3'-ジホルミルビナフトールをエタノール中で脱水縮合させることで目的のホスホイミノビナフトール配位子(L1)と酢酸パラジウムから調製した錯体より単結晶を得ることに成功し、パラジウム二核錯体の構造をX線結晶構造解析によって明らかにした。本錯体を用いるマロノニトリルとN-Bocイミンの触媒的不斉Mannich反応では、マロノニトリル1分子にイミン2分子が反応する過剰反応により化学収率が低下するため、アルキルマロノニトリル及びN-Bocイミンを用いて反応条件を精査したところクロロホルムを用いる反応条件において、高化学収率、高不斉収率にて目的の四級炭素を有する光学活性アミンを得ることに成功した。活性メチレンを有するマロノニトリルを用いる反応では、通常過剰反応によると思われる1:2生成物を比較的高収率に与えたことから、1:2生成物である1,3-ジアミンを主生成物として与える反応に研究を展開した。その結果、反応溶媒をジクロロメタンにし、マロノニトリルに対しN-Bocイミン2.5等量を加えることで、目的とする1,3-ジアミンを高収率、高不斉収率にて得ることに成功した。パラジウム二核錯体にのみ見出される高い触媒活性であることから、マロノニトリルが二つのパラジウム間で効果的に活性化されることが重要でることが示された。独自に開発した亜鉛三核錯体を用いる触媒的不斉ヨードラクトン化について、平成28年度の研究ではNISを用いるヨードラクトン化では、NISとI2との間にL字型のハロゲン結合を形成し、ヨードラクトン化をスムーズに進行させていることが示唆された。本遷移状態を基に、平成29年度はヨードラクトン化に限らずブロモラクトン化やクロロラクトン化、さらにはフルオロラクトン化など、合成的価値の高い汎用ハロラクトン化を確立する。また分子内反応であるラクトン化をより普遍的な分子間ハロエステル化反応に研究を展開する。本目的を達成するために、求核攻撃を行うカルボン酸のpKaと大きさは反応効率と生成物の光学純度に大きな影響を与えると考えられることから、網羅的な亜鉛カルボキシレートの探索と配位子の構造活性相関の検証を行う。さらに、アミド基質を用い、酸素環化と窒素環化を触媒により制御し、高立体選択的な触媒的不斉ラクタム化反応の開発を目指す。一方、平成28年度に開発したホスホイミノビナフトールーパラジウム2核錯体を用いるN-BocイミンとマロノニトリルのMannich型反応において、効果的な『オーバーリアクション』を制御することによる1,3-ジアミンの触媒的不斉合成に成功したことから、平成29年度は、反応機構の解明を行う。例えば、単離した1:1Mannich付加生成物を原料とし、1:2生成物を与える反応を検討する。1:1Mannich付加生成物からも反応が円滑に進行する場合には、非対称ジアミンの合成も可能になる。一方、単離した1:1Mannich付加生成物からは反応が進行しない場合にはタンデム反応と理解でき、これは反応機構の理解に重要な知見を与える。29年度が最終年度であるため、記入しない。
核酸ドメインのコンホメーション解析

核酸の塩基配列という一次構造の情報を種々の機能に関連するドメイン毎に解析し,空間的なコンホメーションを通じて情報発現の分子機構を解明しようとするのが本研究の目的である.本年度行った研究の成果は次の通りである.1.特異的な塩基配列のとるコンホメーションを調べるため,オリゴ核酸を対象としてNMRやX線結晶解析による構造研究を行った.核酸の情報の認識に高次構造が関係する可能性が強く,種々の合成オリゴヌクレオチドの屈曲性や熱安定性を研究した.結果として溶液中では結晶中とは異なる構造もとるようであり,それ程特異的な構造は検出されなかった.また12種のデカヌクレチドを合成し,化学シフト,熱安定性,プロトン交換反応等の系統的な測定を行った.その結果局所的構造に最隣接塩基が重要な役割を果していることがわかった.2.tRNAの一部を改変しコドンーアンチコドン相互作用やアミノ酸受容能に及ぼす影響を調べた.結果としてマグネシウムイオンの効果が著しく,低濃度になると活性がなくなり高次構造が崩れることがわかった.これにより熱感受性が説明できた.リボゾームRNAについては,遺伝子重複の機構が推定された.3.核酸ドメインの立体構造を認識し結合するDNA結合蛋白の構造をX線結晶解析により決定した.この蛋白のDNA結合部位はBシートであることがわかった蛋白と相互作用する核酸ドメインの塩基配列特異性を翻訳開始点に限って解析した.RNA分子の2次構造安定性は配列に依存するが, mRNAの場合同義語コドンの3文字目が安定性と関連して決められていることがわかった.4.コンピュータグラフィクスにより核酸の動的構造を図示する方法を確立した.5.核酸および蛋白質の構造データを収集,収録,編集し,データ解析の例として膜蛋白の配列特異性をしらべた.情報データベースの解析ソフトの開発を行った.本年収集文献数は1700である.核酸の塩基配列という一次構造の情報を種々の機能に関連するドメイン毎に解析し,空間的なコンホメーションを通じて情報発現の分子機構を解明しようとするのが本研究の目的である.本年度行った研究の成果は次の通りである.1.特異的な塩基配列のとるコンホメーションを調べるため,オリゴ核酸を対象としてNMRやX線結晶解析による構造研究を行った.核酸の情報の認識に高次構造が関係する可能性が強く,種々の合成オリゴヌクレオチドの屈曲性や熱安定性を研究した.結果として溶液中では結晶中とは異なる構造もとるようであり,それ程特異的な構造は検出されなかった.また12種のデカヌクレチドを合成し,化学シフト,熱安定性,プロトン交換反応等の系統的な測定を行った.その結果局所的構造に最隣接塩基が重要な役割を果していることがわかった.2.tRNAの一部を改変しコドンーアンチコドン相互作用やアミノ酸受容能に及ぼす影響を調べた.結果としてマグネシウムイオンの効果が著しく,低濃度になると活性がなくなり高次構造が崩れることがわかった.これにより熱感受性が説明できた.リボゾームRNAについては,遺伝子重複の機構が推定された.3.核酸ドメインの立体構造を認識し結合するDNA結合蛋白の構造をX線結晶解析により決定した.この蛋白のDNA結合部位はBシートであることがわかった蛋白と相互作用する核酸ドメインの塩基配列特異性を翻訳開始点に限って解析した.RNA分子の2次構造安定性は配列に依存するが, mRNAの場合同義語コドンの3文字目が安定性と関連して決められていることがわかった.4.コンピュータグラフィクスにより核酸の動的構造を図示する方法を確立した.5.核酸および蛋白質の構造データを収集,収録,編集し,データ解析の例として膜蛋白の配列特異性をしらべた.情報データベースの解析ソフトの開発を行った.本年収集文献数は1700である.
フラボノイド代謝物DOPACをプローブとした生体分子修飾の解析

近年、ケルセチン配糖体代謝物である3,4-ジヒドロキシフェニル酢酸(DOPAC)をはじめとした、腸内細菌叢による食品成分発酵物とその機能性に注目が集まっている。本研究では、ポリフェノール類の化学的特性を反映した生理活性評価系を確立し、分子機構を詳細に解析することでポリフェノール標的候補分子を同定した。また、ケルセチン代謝物の中で、DOPACが最も強力なラジカル捕捉活性及び第2相薬物代謝酵素誘導活性を示すことを明らかにした。さらに、DOPACの標的分子を明らかにする目的で、DOPAC分子プローブ(DOPACプロパルギルエステル)の合成を行い、「click chemistry」への適応性を証明した。得られた主な成果は、1)ケルセチン配糖体代謝物の中でDOPACが最も強力なラジカル捕捉活性、過酸化水素酸性活性を示した、2)DOPACはHL-60細胞に対して有意にアポトシースを誘導するとともに、肝細胞において解毒酵素の一つであるグルタチオンS-トランスフェラーゼ活性を増強した、3)EGCGの酸化に対する不安定性と求電子反応性との相関をin vitroで証明するとともに、胃がん細胞株AZ521細胞における細胞増殖抑制作用のEGCGの分子標的としてDEAD-box RNAヘリカーゼp68を同定した。一方、DOPACの標的タンパク質同定研究については、新規ラベル化DOPACとして、[2+3]型付加環化反応を利用したいわゆる「In situ click chemistry」を可能とするDOPAC-alkyneの合成を開始した。具体的にはDOPACとプロパルギルアルコールとのエステル化反応で作製し、現在高収率大量合成法を目指した条件検討を行っている。前年度に引き続き、新規生理活性評価系の構築とケルセチン配糖体の代謝過程におけるDOPAC生成の生理的意義付けを試みた。生理活性の評価は肝細胞における第2相薬物代謝酵素遺伝子の発現誘導作用を対象に行い、分子生物学的、生化学的手法を用いて、DOPACとその他のケルセチン代謝物との活性の差異を比較した。さらに、DOPACに親和性を示すタンパク質の同定を目的として、生化学的に汎用性の高いClick Chemistry (Huisgen環化反応)を利用したDOPACプローブを合成し、その有用性を評価した。得られた主な成果は、1)活性酸素種や求電子剤によるアポトーシス誘導作用の評価実験法を導入するとともに、アポトーシス誘導の分子機構を一部解明し、glutathioneやc-Jun-N-terminal kinase、interferon-γなど、ポリフェノール類にも想定される標的候補分子を明らかにした。2)DOPACはケルセチン代謝物の中で最も強力な第2相薬物代謝酵素誘導作用を示し、ケルセチン配糖体の生理機能を担う代謝物であることを示唆した。3)酸触媒を用いたFischerエステル化法により、末端にアルキン基を有するDOPACプロパルギルエステル(DPE)の合成に成功し、Huisgen環化反応への応用はドラーゲンドルフ試薬による定性反応にて、タンパク質修飾作用はモデルタンパク質glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenaseの遊離SH基量の減少とDPE修飾タンパク質のビオチンラベル化により証明した。最終年度も、ポリフェノールの新規生理活性評価系の構築と標的分子の探索を行うとともに、ケルセチン配糖体の代謝過程におけるDOPAC生成の生理的な意義付けを試みた。特に、各種第2相薬物代謝酵素遺伝子のmRNA発現を対象にして、ケルセチン代謝物における構造活性相関を検討した。さらに、DOPACのClick Chemistry(Huisgen環化反応)を利用したプローブ、DOPACプロパルギルエステル(DPE)の細胞実験における有効性を評価した。得られた主な成果は、1)フラボノイドのluteolinがp53による抗がん物質耐性作用を改善することを明らかにした。また、T-リンパ球モデルを用いて、活性酸素種生成物質によるアポトーシス誘導実験法を確立し、活性酸素種によるc-Jun-N-terminal kinaseの活性化、interferon-γとその受容体シグナル伝達のアポトーシスへの寄与を明らかにすることで、これらの分子が、ポリフェノール標的分子の候補を同定した。2)ケルセチン代謝物の中で、DOPACは最も強力にNQO1、HO-1、GCLCなどの第2相酵素遺伝子発現を誘導するだけでなく、細胞内glutathione量を有意に増加させたことから、解毒亢進機能を担う代謝物であることを示唆した。3)DOPACのカルボキシ末端にアルキン基を有するDPEが親化合物のDOPACと同様の生理活性を有すること、DPEがタンパク質修飾作用を有することをそれぞれ細胞レベルで確認し、DPEがDOPACの標的分子を探索するツールとして有用であることを証明した。平成23年度の交付申請書に記載した計画のうち、1)DOPACの生理活性の評価、2)DOPAC-alkyne(DPE)の合成、の2点について、予定通り進行した。特に、DPEの大量調製とその有効性の評価が概ね完了したため、最終年度は、DOPAC標的タンパク質の動的解析と探索に集中して、研究遂行できるものと評価している。