hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
大韓民国の成立過程における「国民」確定基準の法的模索

本研究は、大韓民国の建国時に「国民の範囲」がどのような法的基準で確定していったのかを解明するところにその目的がある。韓国では、憲法や国籍法などで国民を確定する規定を設けなかった。経過規定すらも盛り込まれなかった。法的には国民の範囲が不明確なままで国家が樹立してしまった。判例や実務では、この法的な欠陥を治癒するために、植民地時代の「朝鮮戸籍」に依拠して大韓民国の国民を確定したのである。この研究は「朝鮮戸籍」の機能に着目している。本年度は、研究最初の作業として、主に植民地当時の日本人と朝鮮人との法的区別を探るために、一次資料の調査および収集を実施した。現地韓国で国立中央図書館、国会図書館および各大学附属図書館で上記の作業を行った。朝鮮の保護国期の「民籍法」および「民籍」に関する立法資料、民籍の原本に接し、当時、日本帝国当局の人的把握に関する実態を明らかにすることができる史料を入手することができた。また、日本の最高裁判所附属図書館など国内の機関でも同様の調査を実施し、朝鮮植民地時代の戸籍に関する史料を入手することができた。現在、入手した史料の複本をデータベース化する作業を行っている。同作業では、次のような研究のねらいがある。(1)「民籍」の成立過程を解明することで、朝鮮の旧来の戸籍と、植民地期における日本式戸籍の差異に注目するためである。民籍は、植民地期前において朝鮮の領域での人的構成を確定させるところにその目的があったようである。(2)内地戸籍から朝鮮戸籍へ、反対に朝鮮戸籍から内地戸籍への転籍事例に焦点を当てながら、当時の日本人と朝鮮人の法的境界の実態を解明する端緒を発見しようとしている。日本人と朝鮮人との婚姻、認知および養子などに転籍事例がある。その事実関係、家籍の転籍および転籍による法的効果を解明している。本年度の研究は、大韓民国の建国前に当時の朝鮮人が法的にどのような形式と基準で把握し、分類されていったのかを明らかにするための前提作業であった。本年度は、3回に渡って現地・韓国にフィールドワークを実施した。韓国の建国以降、国民確定の問題を解明する端緒について、次の問題点を中心に調査を実施した.(1)建国時の国勢調査の方法や実施状況である。(2)国政選挙の被選挙および選挙資格の基準およびその対象者の範囲である。(3)戸籍制度における国民登録の基準とその対象者の範囲である。こうした問題点を解明するために、官報、行政文書、国会議事録および当時の新聞記事などの一次資料を通して、各論点ごとにデータベース化を図っているところである。この作業の意義は、建国の初期において、この三つの領域で大韓民国の国民が、国家によってどのように認識され、また、各領域での国民確定の法的基準を実証的に析出する可能性を探る史料が収集できたことである。韓国政府は、建国当時から国民の実態を綿密に把握しようとした。それが、総人口調査および人口動態調査である。その際、国民の実質を認識する手がかりとなっていたのが、朝鮮戸籍であった。また、国会議員選挙での選挙人を確定する場合でも、朝鮮戸籍と寄留簿に依拠していたことがほぼ判明しつつある。もし、この点が明らかになれば、大韓民国における国民の確定は、米軍政期から採用されてきた「戸籍主義」にもとづいていたことが裏付けられることになる。国民確定の問題は、日本帝国による植民地期から米軍政期および建国期に渡って、ある一貫した法基準が存在していたのである。本年度は、研究の最終年度として2回に渡って現地・韓国にフィールドワークを実施すると共に、朝鮮戸籍令にもとづく「朝鮮戸籍」制度の運用と機能ついて解明することを目標に研究に取り組んだ。当時の法令、戸籍例規、判例などの関連資料を再調査し、収集した。また、同研究を締めくくるために今までのフィールドワークの修正点および補正点を検証して、補足すべき資料や近時の隣接領域における先行研究を確認する作業を実施した。また、法院などを訪問し、資料の再調査を行った。その結果、当時、統治国たる日本が現地住民の人々をどのような法形式と基準で「日本国民」に編入したのかを解明しようとした。その前身である「民籍制度」との関連から主に保護国時代の現地「戸籍」が現地の人々を認識する法的な手がかりとなった。現地戸籍から日本式の戸籍制度への転換が、韓国における近代国民国家の「国民」(臣民)を生み出す契機となったことを明らかにする。また、朝鮮戸籍は、日本本土(内地)とは区別される外地・朝鮮に所属すべき領域を区分する「地域籍」としての機能を有する。植民地朝鮮の法体制は、内地のそれと同一ではない。台湾および関東州と共に、本土の法体制とは異なった異法地域として位置づけられた(日本帝国の多元的法体制)。

朝鮮への所属は、朝鮮戸籍に登載すべきこと、すなわち、本籍地にしたがって朝鮮の人々の帰属すべき地域が決定されていたのである。この機能が、植民地の解放後、大韓民国を建国するに当たって自らの「国民」を確定する上での主要な法的根拠となったのである。研究の進展状況は、ほぼ計画どおりである。ただし、1次資料のうち、まだ調査が不十分なところがある。その原因は、現地でのフィールドワークで1次資料の所在をまだ明らかにできなかったところにある。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の最終年度である24年度は、上記の不十分な部分について、重点的に1次資料などの調査を現地で実施する予定である。そのほかの計画は順調である。最終年度で計画通りに本研究を進めていく。
生体内におけるSTAT3の機能の解明

コンディショナル・ノックアウト法により、STAT3をさまざまな細胞や組織で特異的に欠損したマウスを作製し解析した。T細胞ではIL-6によるアポトーシスの抑制に必須であることが明らかになった。マクロファージではIL-10による活性抑制に必須であることを明らかにした。さらに、この変異マウスでは、異常なマクロファージの活性化にともない慢性腸炎を発症した。B細胞でSTAT3を欠失したマウスでは、B細胞の分化・成熟、増殖反応は正常であったが、血清中のIgを測定すると、IgM濃度は正常だがIgG1濃度が著明に減少し、さらにIgG2b,IgG3,IgAの濃度も半分程度に低下していた。このことから、STAT3はB細胞においてIgのクラススイッチあるいはIg産生細胞への最終分化に関与していることが明らかになった。また免疫系だけでなく、皮膚でSTAT3を欠損させたマウスは、創傷の治癒過程が著明に遅延した。これは表皮細胞の成長因子による運動性亢進作用が消失した結果であった。乳腺でSTAT3を欠損したマウスの雌では離乳後の乳腺の消退が著明に遅延した。このように、STAT3はさまざまな組織で、多彩な生理現象に深く関与していることが明らかになった。マクロファージで特異的にSTAT3を欠損させたマウスでは、マクロファージにおいてSTAT1の恒常的活性化が認められたため、慢性炎症の発症にSTAT1の関与が考えられた。そこで、STAT1とSTAT3を同時に欠損したマウスを作製した。すると、STAT1/STAT3二重欠損マクロファージでは、TNF-α産生が亢進しており、このマウスはSTAT3単独変異マウスと同様に慢性腸炎を発症した。このことは、STAT3欠損によりIL-10によるマクロファージ不活性化の誘導がなくなると、IFNによるSTAT1活性化からの活性化経路と非依存性にマクロファージの活性化に至る経路が存在することを示唆している。STAT3をマクロファージ、皮膚、乳腺で特異的に欠損したマウスを、遺伝子欠損マウスの作製技術を応用し、作製・解析した。マクロファージでSTAT3を欠損させたマウスでは、慢性腸炎を発症した。STAT3欠損マクロファージは、IL-10による抗炎症作用が欠失し、エンドトキシンによる炎症性サイトカインの産生が異常に増加するなど、異常に活性化された状態を示した。これらの結果は、マクロファージにおけるIL-10によるSTAT3の活性化が、抗炎症作用の発揮に必須であることを示している。皮膚でSTAT3を欠損させたマウスでは、皮膚創傷治癒過程が異常に遅延した。STAT3欠損皮膚細胞は、成長因子による増殖反応に異常はないものの、運動性の亢進が全く認められなかった。このように、STAT3は皮膚において、細胞の運動性亢進を司り皮膚創傷治癒に関わっていることが明らかになった。乳腺でSTAT3を欠損したマウスでは、乳児の離乳後の乳腺の退縮が異常に遅延した。これは、乳腺上皮細胞のアポトーシスが起こらないためであった。このようにSTAT3は、乳腺の退縮に関与していることが明らかになった。以上のように、STAT3を組織特異的に欠損させたマウスの解析から、STAT3が生体内において、種々の組織で様々な反応に深く関与していることが明らかになった。STAT3をT細胞、マクロファージ、乳腺、皮膚で特異的に欠損したマウスをコンディショナル・ジーンターゲティング法により作製し、解析を行ってきた。

その結果、それぞれの組織でさまざまな反応に深く関与していることが明らかになった。さらに、B細胞でSTAT3を欠失したマウスを作製したところ、このマウスでは、B細胞の分化・成熟、増殖反応は正常であった。しかし、血清中のIgを測定すると、IgM濃度は正常だがIgG1濃度が著明に減少し、さらにIgG2b,IgG3,IgAの濃度も半分程度に低下していた。このことから、STAT3はB細胞においてIgのクラススイッチあるいはIg産生細胞への最終分化に関与していることが明らかになった。マクロファージでSTAT3を欠失するとマクロファージの異常な活性化にともない慢性腸炎を発症する。このSTAT3欠損マクロファージではSTAT1の恒常的活性化が認められたため、慢性腸炎の発症にSTAT1活性化の関与が考えられた。そこで、STAT1とSTAT3を同時に欠損したマウスを作製した。すると、STAT1/STAT3二重欠損マクロファージでは、TNF-α産生が亢進しており、このマウスはIFN-γのシグナルがブロックされているにも関わらずSTAT3単独変異マウスと同様に慢性腸炎を発症した。このことは、STAT3欠損によりIL-10によるマクロファージ不活性化の誘導がなくなると、IFN-γによるSTAT1活性化からの活性化経路と非依存性にマクロファージの活性化に至る経路が存在することを示唆している。
運動失調症に関与する小脳発達障害候補遺伝子BRAP2の機能解析

小脳発達障害候補遺伝子BRAP2の生化学的解析をおこない、BRAP2は現在までに知られているプロテアソームによるタンパク質分解系とは異なる様式でポリユビキチン化することを見出した。さらに個体レベルでの機能解析を目指してGene trap法によるマウスES細胞のデータベースより、brap2遺伝子の領域にターゲティングされたクローンを見つけた。ノックアウトマウスを作成する目的でヘミ接合子マウスを作製した。我々は乳がん抑制遺伝子BRCA1に結合する分子としてクローニングされたBRAP2分子が、細胞周期阻害分子p21の核移行シグナルに結合し、p21の核移行を阻害し細胞質に保持する分子であることを明らかにした。BRAP2分子はこのように本来核において機能する分子を細胞質に保持することにより、核内での分子の機能を不活化する、あるいは細胞質において新たな機能を付加することのできる分子と考えられる。そこで、BRAP2の神経系における生物学的意義を明らかにすべく、遺伝子ターゲティングを計画した。129J系のES細胞を用いて遺伝子ターゲティングを行うため、公開されているB6系マウスのゲノム情報を下にPCR用のプライマーを作製し、129系ES細胞のDNAを鋳型として、マウス染色体5番に存在する129J系のbrap遺伝子の一部をクローニングした。さらに、染色体DNA上のbrapの構造解析を行い、ターゲティングベクターの設計および作製をした。ES細胞をMEF細胞存在下で培養し、直鎖状化したターゲティングベクターをエレクトロポレーションにより導入した。G418添加ES細胞培養液を用いたpositive selection、diphtheria toxinによるnegative selectionを行い、耐性ESコロニーを顕微鏡下でピックアップする。サザンブロットにより相同組換えを起こしたES細胞を選別する。現時点で相同組換えES細胞は得られていない。Gene trap法によるマウスES細胞のデータベースより、brap遺伝子の領域にターゲティングされたクローンを見つけた。このES細胞を入手してノックアウトマウスを作製することも同時に行う。我々がヒトのBRAP2に対して作製した抗体を用いて、マウスおよびラットの神経組織でBrap2の特異的発現が見られるか検討している。我々は乳がん抑制遺伝子BRCA1に結合する分子としてクローニングされたBRAP2分子が、細胞周期阻害分子p21の核移行を阻害し細胞質に保持する分子であることを報告した。BRAP2分子は本来核において細胞周期を制御する分子を細胞質に保持することにより、発生発達過程において重要な役割を果たしているのではないかと考えた。マウスにおいて細胞周期チェックポイント分子の欠失変異により小脳発達障害を示しているものがある。マウス染色体5番に存在する129J系のbrap遺伝子部分をクローニングし、ターゲティングベクターを作製した。129J系のES細胞に導入するも、相同組換えES細胞は得られなかった。Gene trap法によりマウスES細胞においてbrap遺伝子の領域にターゲティングされたクローンをMutant Mouse Regional Resource Centersのデータベースで見つけ、入手した。このES細胞を胚盤胞にインジェクションし、キメラマウスを作製した。現在、キメラマウスよりヘミ接合体マウスを得ている。ヘミ接合体マウスにおいてGermline transmissionしていることを、brap2のサザンブロットにより確認した。ヘミ接合体マウスをかけ合わせることでホモ接合体、すなわちノックアウトマウスが得られるはずであるが、ホモ接合体の遺伝子型をもったマウスは生まれてきていない。Brap2は個体レベルで重要な役割を担っているために、遺伝子欠損マウスは胎生致死なのかもしれない。
日米中印におけるリンパ系腫瘍の細胞遺伝子的ならびに分子生物学的所見の比較研究

1.研究背景米国における濾胞性リンパ腫は全悪性リンパ腫の35%(対10万人口当たり3.4人)を占めるが,本邦では約5%(対10万人口当たり0.2)と非常に少ない。また,米国の濾胞性リンパ腫は約85%に14;18転座やbcl-2遺伝子再構成がみられるが,本邦症例では転座や再構成頻度は30%と非常に低い。また,慢性リンパ性白血病の発生頻度も本邦では非常に低い。このように本邦のリンパ性造血器腫瘍には明らかな地理病理的相違がみられる。本研究はこのような相違がアジア系人種に共通してみられるかどうかを日・中・印の症例解析より明らかにし,リンパ性造血器腫瘍発生機構の解明に資することを目的とした。2.研究成果(1)濾胞性リンパ腫i.インド(ニューデリー地区とマドラス地区)においても本症の発生頻度が本邦同様,非常に低いことが明らかとなった。全悪性リンパ腫に占める比率は約9%である。ii.染色体解析:本邦例では15例中6例(40%)に14;18転座がみられ,4例に他の異常が,5例では正常核型を示した。米国に比し14;18転座陽性症例が低率であった。印度症例の4例について検査が可能で,14;18転座陽性例はみられなかった。iii.遺伝子解析:サザンブロット法を用いた場合,本邦症例の濾胞性リンパ腫11例中5例,45%にbcl-2遺伝子(mbr,mcr,5'の3プローブ)再構成がみられ,米国の症例に比し再構成率が低いことを確認した。bcl-2遺伝子再構成はmbrプローブのみで検討されており,mcrや5'プローブでは一例も検出されておらず,米国症例での検出率と異なる所見が得られた。尚,myc遺伝子再構成は全例認められなかった。また,PCR法を用いた場合,主にDNA保存のない症例の病理用パラフィンブロックより低分子DNAを抽出し検出したが,本邦症例は27症中3例,11.1%にmbrプローブによるbcl-2遺伝子再構成が見出され,印度症例では31例中3例,9.7%に再構成が検出された。これはサザンブロット法同様,米国症例より低い検出率を示した。尚,印度症例については濾胞性リンパ腫以外の悪性リンパ腫10例(びまん性8例,リンパ芽球性2例)についてもPCR解析を行ったところ,2例にbcl-2遺伝子再構成が認められており,印度症例は病期の進んだ状況が初めて診療を受けているが推定された。(2)慢性リンパ性白血病i.印度においても本症の発生頻度が低率であることがわかった。ii.染色体解析:本邦においては,症例数が少ないため染色体解析のまとまった報告はまだない。このため厚生省大野班班長および班員の援助を得て過去2年間に48症例を収集し,解析した。クローン性の染色体異常は47.9%の症例にみられ,米国症例に比べやや低い。クローン性異常として14q32の異常,18q21異常がみられたが,米国症例に高頻度にみられる+12の異常は本邦では17.4%にしかみられず,差異がみられた。中国の5症例のうち2例は正常核型を示し,残り3例は解析中である。印度の10症例も現在解析中である。iii.遺伝子解析:本邦55症例についてbcl-1,bcl-2(mbr,mcr,5'),bcl-3遺伝子の再構成の有無を検討した。bcl-1遺伝子は11q13に異常をもつ1例にのみ再構成がみられ,5'プローブで2例(3.6%)に遺伝子再構成がみられた。5'プローブでの陽性頻度は米国症例とほぼ同等である。5'プローブ再構成例の染色体所見はそれぞれt(2;18)(p12;p21),t(18;22)(q21;q11)および正常核型であった。t(2;18)およびt(18;22)症例の遺伝子配列を決定したところ,前者ではIgLκ鎖遺伝子しbcl-2遺伝子のhead totail結合であることを,また後者ではIgLλ鎖遺伝子とbcl-2遺伝子のhead to headの結合であることが明らかになった。まとめ:日本およびインドにおけるリンパ系悪性腫瘍は細胞遺伝学的ならびに分子生物学的研究より欧米と異なる病態を有することが明らかにされた。2.研究成果(1)濾胞性リンパ腫

i.インド(ニューデリー地区とマドラス地区)においても本症の発生頻度が本邦同様,非常に低いことが明らかとなった。全悪性リンパ腫に占める比率は約9%である。ii.染色体解析:本邦例では15例中6例(40%)に14;18転座がみられ,4例に他の異常が,5例では正常核型を示した。米国に比し14;18転座陽性症例が低率であった。印度症例の4例について検査が可能で,14;18転座陽性例はみられなかった。iii.遺伝子解析:サザンブロット法を用いた場合,本邦症例の濾胞性リンパ腫11例中5例,45%にbcl-2遺伝子(mbr,mcr,5'の3プローブ)再構成がみられ,米国の症例に比し再構成率が低いことを確認した。bcl-2遺伝子再構成はmbrプローブのみで検討されており,mcrや5'プローブでは一例も検出されておらず,米国症例での検出率と異なる所見が得られた。尚,myc遺伝子再構成は全例認められなかった。また,PCR法を用いた場合,主にDNA保存のない症例の病理用パラフィンブロックより低分子DNAを抽出し検出したが,本邦症例は27症中3例,11.1%にmbrプローブによるbcl-2遺伝子再構成が見出され,印度症例では31例中3例,9.7%に再構成が検出された。これはサザンブロット法同様,米国症例より低い検出率を示した。尚,印度症例については濾胞性リンパ腫以外の悪性リンパ腫10例(びまん性8例,リンパ芽球性2例)についてもPCR解析を行ったところ,2例にbcl-2遺伝子再構成が認められており,印度症例は病期の進んだ状況が初めて診療を受けているが推定された。(2)慢性リンパ性白血病i.印度においても本症の発生頻度が低率であることがわかった。ii.染色体解析:本邦においては,症例数が少ないため染色体解析のまとまった報告はまだない。このため厚生省大野班班長および班員の援助を得て過去2年間に48症例を収集し,解析した。クローン性の染色体異常は47.9%の症例にみられ,米国症例に比べやや低い。クローン性異常として14q32の異常,18q21異常がみられたが,米国症例に高頻度にみられる+12の異常は本邦では17.4%にしかみられず,差異がみられた。中国の5症例のうち2例は正常核型を示し,残り3例は解析中である。印度の10症例も現在解析中である。iii.遺伝子解析:本邦55症例についてbcl-1,bcl-2(mbr,mcr,5'),bcl-3遺伝子の再構成の有無を検討した。bcl-1遺伝子は11q13に異常をもつ1例にのみ再構成がみられ,5'プローブで2例(3.6%)に遺伝子再構成がみられた。5'プローブでの陽性頻度は米国症例とほぼ同等である。5'プローブ再構成例の染色体所見はそれぞれt(2;18)(p12;p21),t(18;22)(q21;q11)および正常核型であった。t(2;18)およびt(18;22)症例の遺伝子配列を決定したところ,前者ではIgLκ鎖遺伝子しbcl-2遺伝子のhead totail結合であることを,また後者ではIgLλ鎖遺伝子とbcl-2遺伝子のhead to headの結合であることが明らかになった。まとめ:日本およびインドにおけるリンパ系悪性腫瘍は細胞遺伝学的ならびに分子生物学的研究より欧米と異なる病態を有することが明らかにされた。1.インド研究者の招へい細胞遺伝学的ならびに分子生物学的所見の比較を行う場合、日印間の調査方法の一定化が前提となる。
SiC-AIN系強靭性固溶体と複合体の焼結合成と特性評価

炭化ケイ素(SiC)セラミックスは1500°C以上でも高い強度を示し耐熱性に優れており、窒化ケイ素よりもさらに高温で安定に使用できると期待されているが、室温強度と破壊靭性が十分でない欠点がある。本研究では、窒化アルミニウム(AIN)との固溶化(いわゆるセラミックアロイング)を行うことにより、従来の炭化ケイ素より高い強度と靭性を示すSiC-AIN系セラミックスを合成することができた。具体的に、まず、炭素還元反応法を取り上げ、平均粒径が約0.3mumのSiC-AIN固溶体および複合体粉末を合成できた。その反応課程と固溶体の組成範囲を詳しく調べ、合成反応モデルを提案した。次に熱間等方圧成形法により焼結固化を行い炭化ケイ素単体粉末より低い焼結温度で緻密なSiC-AIN固溶体および複合体を作製した。機械的性質を評価した結果、SiC-AIN固溶体と複合体はそれぞれSiC単体焼結体より2倍程度高い強度(最高値1000MPa)あるいは破壊靭性(最高値6.5MPam^<1/2>)を示し、SiCの強靭化に対してセラミックアロイングの有効性を明らかにした。さらに炭素還元反応法の他に、SiC粉とAIN粉の素粉末混合体を調製し、加圧焼結と常圧焼結法によりSiC-AIN系固溶体と複合体を作製し、組織観察、相分析および特性評価を行い、合成プロセスと特性との関係を明らかにした。本系材料は従来の炭化ケイセラミックスより高い強靭性を有すると共に、組成と組織を制御することにより熱伝導率などの物性を幅広く制御できる特徴があるため、遮熱性と耐熱性が要求される環境において使用できることが分かった。
Differential display法による歯周病原因菌遺伝子の検出

1.歯周ポケット内細菌のDNAマーカーの分離とDNAの解析歯周ポケットから採取した細菌を直接Differential displayを行うと,安定した結果を得ることが出来なかった.歯周ポケットから採取した細菌を初めにプレートに播種し増菌し,性状の異なるコロニーを単離しDifferential displayを行った.前培養,増菌という作業を加えることによって,安定した結果を得ることが出来た.Porphyromonas gingivalis,Actinobacillus actinomycetemcomitans,Prevotella intermediaなどの歯周病関連細菌の標準菌株をDifferential displayを行った結果,それぞれに特徴的なパターンを表示することが可能であった.2.歯周病病態と細菌DNAマーカー1)歯周炎の病態として,正常,早期発症型歯周炎,成人性歯周炎の患者からポケット内細菌を採取し,前述した前培養,増菌作業を行った後にDifferential displayを行った.研究計画に前培養,増菌作業が加わったことから,Differential displayだけで病態と関連する細菌DNAマーカーを同定することは出来ない事が明らかになった.2)歯周炎の病態が異なる,正常,早期発症型歯周炎,成人性歯周炎の患者から分離したポケット内細菌を採取し,プレートに播種し増菌し,性状の異なるコロニーを単離しDifferential displayを行った結果,病態ごとに異なる細菌をDifferential display法によってそのパターンの違いを表示することが可能なことが明らかになった.歯周ポケット内細菌の中には培養が著しく困難なものが多く、さらには、現在でも培養不可能な細菌が、70%を占めるともいわれている。これら培養不可能な細菌の中で、歯周病の原因と考えられる細菌を検出するために以下の研究を行った。1)広島大学歯学部付属病院第二保存科来院患者のうちで、過去6ヶ月間抗生物質投与、抗菌剤投与および歯科治療を受けていない患者12名を選択した。これら患者の同意のもとに、治療開始前に歯周ポケット内から歯肉縁下プラークを採取し、-80°Cで凍結保存した。同時に、ポケット内細菌検査、血清中の歯周病原因菌に対する抗体価および歯周組織検査を行い、患者の歯周炎の病態を分類した。2)プラーク内は,細菌のほか、アメーバ、真菌、剥離上皮、好中球、赤血球などの細胞や多糖体などの基質が混然一体となった状態であるため、この中から細菌DNAだけを純粋に抽出する方法を検討中である。3)サンプル中には、血球細胞や上皮細胞由来のヒトDNAの混在が避けられないことが考えられる。歯周炎が発症、進展することにより、歯肉縁下プラーク中のヒト細胞も著しく増加する。これらヒト細胞由来のDNAのオーバーラップを除去するため、現在、細菌に選択的なプライマーを検討中である。本研究は健常者と歯周病患者の歯肉縁下プラークサンプルを比較したDifferential display法により、培養不可能な歯周病原因菌の遺伝子を同定することを最終目標としており、今後さらに研究を進める予定である。1.歯周ポケット内細菌のDNAマーカーの分離とDNAの解析歯周ポケットから採取した細菌を直接Differential displayを行うと,安定した結果を得ることが出来なかった.歯周ポケットから採取した細菌を初めにプレートに播種し増菌し,性状の異なるコロニーを単離しDifferential displayを行った.前培養,増菌という作業を加えることによって,安定した結果を得ることが出来た.Porphyromonas gingivalis,Actinobacillus actinomycetemcomitans,Prevotella intermediaなどの歯周病関連細菌の標準菌株をDifferential displayを行った結果,それぞれに特徴的なパターンを表示することが可能であった.2.歯周病病態と細菌DNAマーカー1)歯周炎の病態として,正常,早期発症型歯周炎,成人性歯周炎の患者からポケット内細菌を採取し,前述した前培養,増菌作業を行った後にDifferential displayを行った.研究計画に前培養,増菌作業が加わったことから,Differential displayだけで病態と関連する細菌DNAマーカーを同定することは出来ない事が明らかになった.2)歯周炎の病態が異なる,正常,早期発症型歯周炎,成人性歯周炎の患者から分離したポケット内細菌を採取し,プレートに播種し増菌し,性状の異なるコロニーを単離しDifferential displayを行った結果,病態ごとに異なる細菌をDifferential display法によってそのパターンの違いを表示することが可能なことが明らかになった.
mRNAを標的とする遺伝情報のDECODE調節としてのRNAi機構の解明

RNAi(RNA interference)とは真核生物の細胞に二本鎖RNAを導入した場合に相同配列を持つ遺伝子の発現抑制が生じる現象であり、線虫C.elegansで最初に発見された。遺伝子発現を制御する新しい手段として、基礎研究のみならず将来の医療や植物育種等へのRNAiの応用が期待されている。我々の研究グループは線虫をモデル生物として用いてRNAiの分子機序の解明に取り組んでいる。RNAiをRNAの分解反応の流れとして捉える場合、in vitroの無細胞反応系でRNAiを再現して解析することが有効な研究手法として考えられる。そこで、線虫の細胞抽出液を用いてRNAiを再現する無細胞反応系の開発を行った。粗精製した細胞抽出液を用いる工夫によって、RNAi反応において上流で長い二本鎖RNAを小分子RNAに分解するDicer(RNaseIII)活性および下流で標的mRNAを破壊するRISC活性、それぞれを検出する実験系の開発に成功した。RNAiは線虫で最初に発見された現象であるが、線虫におけるRISCの実体は未だ不明であり解明が求められている。現在、RISCの生化学的精製を進めているところである。又、生化学的に同定されてくる分子については、対応する遺伝子の破壊変異体を単離して個体レベルで機能を検証することが望ましい。そこで、ゲノムにランダムに欠失変異を生じさせた線虫集団を凍結保存ライブラリー化して、PCRスクリーニングによって目的遺伝子に欠失を持つ変異体を単離するシステムを構築した。
根尖性歯周炎における細菌叢と根尖組織免疫応答の動態

研究実施計画に従って本大学病院に来院した根尖病巣を有する患者の感染根管から慢性、急性のそれぞれの時期において滅菌ペーパーポイントを使用して根管滲出液を採取した結果、全ての根管から細菌が分離され特に、疼痛などの臨床症状を伴う急性の根管からはPeputococcus,Peputostreptococcus,Bacteroidesの順で分離され慢性症状の根管から分離される細菌とは若干異なっており根尖周囲組織での急性から慢性への転帰に果たす役割が示唆される。しかし、症例により分離される菌種に差があるため更なる検討が必要である。
中南米の寄生吸虫症,特にブラジルにおける肺吸虫症の病態生理学的研究

1850年に世界ではじめて報告された肺吸虫が見いだされたブラジルのロンドニア州における調査を行った結果,第一中間宿主の貝では肺吸虫の中間宿主となり得るAroapyrgusなどの小さな貝は見いだされず,MalisaやPilaが採集されたのみであった。第二中間宿主のカニはローラン・ド・ムーラで15匹,パオ・デ・オレオで15匹が採集されて検査したが,肺吸虫のメタセルカリアは検出されず,他種のメタセルカリアがそれぞれの地区から一匹ずつ見いだされたのみであった。ペドラネグラで捕獲したオポッサムやRattusおよびインデイアンの居住区であるパウ・デ・オレオで捕獲したAgoutiなど野獣の調査でも肺吸虫成虫は検出されず,また住民検診でも検痰や検便で虫卵陽性者が1名も見いだされなかった。メキシコ肺吸虫抗原を用いての皮内反応の結果は,全体で358名中陽性が4名(1.1%),疑陽性が4名(1.1%)であって,一番陽性率の高かったローラン・ド・ムーラでも122名中陽性3名(2.5%),疑陽性4名(3.3%)であった。4年程前に研究分担者のプラタ教授らが同地区で行った折はその陽性率が10ないし25%であったので今回その陽性者を呼び出した再検査を実施したところ,1名が疑陽性を示した以外はすベてが陰性であった。この原因は皮内反応の接種量が異なっていたためで,肺吸虫症の検診では通常0.02ないし0.05mlを接種するのに対し,プラタ教授らは0.1mlと約倍量の抗原を接種し乍ら膨疹の判定を同じにしていたためである。皮内反応が陽性あるいは疑陽性を呈した8名と先の検診で皮内反応が陽性を示し,臨床的に肺吸虫の感染が疑われていた11名を加えた19名について採血を行い,その血清について免疫電気泳動法やELISA,補体結合反応などの血清反応を実施したが,全例が陰性であった。この4例は何れも日本からの移住者である。なおブラジルの国境から約800Kmにあるペルーのアマゾン地区のフアンコおよびロレト州から人体感染例や野生動物から肺吸虫が証明されいてることからブラジルのアマゾン地区にも肺吸虫が存在するものと推察されるが今回の調査からは肺吸虫の証明はなされなかった。しかし近隣諸国から多くの肺吸虫が見いだされているので,広いアマゾン地区での調査は腰を落ち着けて綿密に行うことが必要であると同時に,今回調査を行ったグアポーレ河の対岸に位置するボリビア側の支流の調査を実施して最終判断をしなければならない。今回の調査で行った住民検診の検便は全部で282例である。現地で行った直接厚層塗抹法と検査材料を日本に持ち帰って実施したフォルマリン・エーテル法による検査の結果,肺吸虫卵は検出されなかったが,206名(73.0%)で何らかの蠕虫卵か原虫の嚢子が証明された。蠕虫卵陽性は162例(57.4%)で,その内訳は蛔虫83例(29.4%),鉤虫86例(30.5%),鞭虫51例(18.1%),蟯虫1例(0.4%),糞線虫18例(6.4%),小形条虫14例(5.0%),縮小条虫16例(5.7%)であり,原虫嚢子陽性は141例(50.0%)で,その内訳は赤痢アメーバ47例(16.7%),大腸アメーバ89例(31.6%),小形アメーバ1例(0.4%),ヨードアメーバ38例(13.5%),ランブル鞭毛虫23例(8.2%)であった。なお現地で行った厚層塗抹法で蠕虫卵が陽性であった症例に対しては日本から持参した駆虫剤を投与した。肺吸虫症患者は見いだされなかったが,アマゾンのグアポーレ河流域のロンドニア州における寄生虫症の疫学調査は今回の我々の調査団が始めてであり,多くの蠕虫および原虫の感染者が存在していると云う成績が得られた意義は大きく,ロンドニア州衛生局およびウベラーバで行った臨床医を含めたセミナーの席でブラジル側の研究者や臨床家からも高く評価された。特にグアポーレ河の本流から約40Km離れた支流に居住するインデイアンの部落で感染率が100%であったことは隔絶された地域だけに,同地区における今後の衛生対策に大きな示唆を与えるものである。今後も機会があればアマゾン地区の寄生虫に対する研究と対策をブラジルの研究者と共同で継続したいと考えている。

第二中間宿主のカニはローラン・ド・ムーラで15匹,パオ・デ・オレオで15匹が採集されて検査したが,肺吸虫のメタセルカリアは検出されず,他種のメタセルカリアがそれぞれの地区から一匹ずつ見いだされたのみであった。ペドラネグラで捕獲したオポッサムやRattusおよびインデイアンの居住区であるパウ・デ・オレオで捕獲したAgoutiなど野獣の調査でも肺吸虫成虫は検出されず,また住民検診でも検痰や検便で虫卵陽性者が1名も見いだされなかった。メキシコ肺吸虫抗原を用いての皮内反応の結果は,全体で358名中陽性が4名(1.1%),疑陽性が4名(1.1%)であって,一番陽性率の高かったローラン・ド・ムーラでも122名中陽性3名(2.5%),疑陽性4名(3.3%)であった。4年程前に研究分担者のプラタ教授らが同地区で行った折はその陽性率が10ないし25%であったので今回その陽性者を呼び出した再検査を実施したところ,1名が疑陽性を示した以外はすベてが陰性であった。この原因は皮内反応の接種量が異なっていたためで,肺吸虫症の検診では通常0.02ないし0.05mlを接種するのに対し,プラタ教授らは0.1mlと約倍量の抗原を接種し乍ら膨疹の判定を同じにしていたためである。皮内反応が陽性あるいは疑陽性を呈した8名と先の検診で皮内反応が陽性を示し,臨床的に肺吸虫の感染が疑われていた11名を加えた19名について採血を行い,その血清について免疫電気泳動法やELISA,補体結合反応などの血清反応を実施したが,全例が陰性であった。この4例は何れも日本からの移住者である。なおブラジルの国境から約800Kmにあるペルーのアマゾン地区のフアンコおよびロレト州から人体感染例や野生動物から肺吸虫が証明されいてることからブラジルのアマゾン地区にも肺吸虫が存在するものと推察されるが今回の調査からは肺吸虫の証明はなされなかった。しかし近隣諸国から多くの肺吸虫が見いだされているので,広いアマゾン地区での調査は腰を落ち着けて綿密に行うことが必要であると同時に,今回調査を行ったグアポーレ河の対岸に位置するボリビア側の支流の調査を実施して最終判断をしなければならない。今回の調査で行った住民検診の検便は全部で282例である。現地で行った直接厚層塗抹法と検査材料を日本に持ち帰って実施したフォルマリン・エーテル法による検査の結果,肺吸虫卵は検出されなかったが,206名(73.0%)で何らかの蠕虫卵か原虫の嚢子が証明された。蠕虫卵陽性は162例(57.4%)で,その内訳は蛔虫83例(29.4%),鉤虫86例(30.5%),鞭虫51例(18.1%),蟯虫1例(0.4%),糞線虫18例(6.4%),小形条虫14例(5.0%),縮小条虫16例(5.7%)であり,原虫嚢子陽性は141例(50.0%)で,その内訳は赤痢アメーバ47例(16.7%),大腸アメーバ89例(31.6%),小形アメーバ1例(0.4%),ヨードアメーバ38例(13.5%),ランブル鞭毛虫23例(8.2%)であった。なお現地で行った厚層塗抹法で蠕虫卵が陽性であった症例に対しては日本から持参した駆虫剤を投与した。肺吸虫症患者は見いだされなかったが,アマゾンのグアポーレ河流域のロンドニア州における寄生虫症の疫学調査は今回の我々の調査団が始めてであり,多くの蠕虫および原虫の感染者が存在していると云う成績が得られた意義は大きく,ロンドニア州衛生局およびウベラーバで行った臨床医を含めたセミナーの席でブラジル側の研究者や臨床家からも高く評価された。特にグアポーレ河の本流から約40Km離れた支流に居住するインデイアンの部落で感染率が100%であったことは隔絶された地域だけに,同地区における今後の衛生対策に大きな示唆を与えるものである。今後も機会があればアマゾン地区の寄生虫に対する研究と対策をブラジルの研究者と共同で継続したいと考えている。平成3年度には1855年に世界ではじめて肺吸虫が報告されたブラジルのロンドニア州における調査を行った。その結果,中間宿主の貝,蟹の調査およびオポッサムなど野獣の調査では肺吸虫の虫体は検出されず,また住民検診でも検痰や検便で虫卵陽性者が1名も見いだされなかった。メキシコ肺吸虫抗原を用いての皮内反応の結果は,全体で358名中陽性が4名(1.1%),疑陽性が4名(1.1%)であって,一番陽性率の高かったロ-ラン・ド・ム-ラでも122名中陽性,疑陽性は各々3名(2.5%),4名(3.3%)であった。
三次元形状計測を用いた考古遺物の形状比較法の研究(2)

今年度は昨年度の研究成果を基に同笵・同型の判定での検証試験を中心に行った。その結果,形状比較法としては特徴点の有無により比較法等を換えなければならないことが判明した。特徴点があるものについては昨年開発した特徴点制御による比較ソフトを使用し,青銅製の鈴杏葉及び,銅鏡での同笵・非同笵関係の判定を行い,さらに,土製の瓦でその有効性を確認した。また,特徴点がない遺物についても銅剣を計測対象として三次元計測で得られた形状データの立体比較結果とともに計測した部分的な形状データ群をクラスター分析で解析することによって,より精度の高い解析を行うことができた。本年度の研究を通じて考古遺物のうち,型成形による遺物の同笵・同型品の判定に三次元計測による立体形状比較法がある程度適用できることを確認できた。今後の形状比較法の新しい手法として期待される。本年度のテーマである埴輪の刷毛目については特徴点制御法でデータ解析を試みたが,埴輪の場合,個体毎に刷毛目の施されている母体の形状が異なるため,立体的な比較には難しいことが判明した。(任意断面の2次元的な形状比較が重要であり,この断面データでの比較を行いその判定が可能であることが判明している。)今後,特徴点無しの手法を用いて断面計測データ群ごとの比較をクラスター分析をもちいて行う予定である。また、今回研究テーマからは多少それるが三次元計測の遺構への応用及びレプリカの作製を行い、遺構計測への応用の可能性と遺物面が脆弱で接触しての型が取れない遺物についてのデータの保存及びレプリカの作製について三次元計測の有効性を確認できた。
難治癌治療向上のため使用する重粒子線のDNAに及ぼす突然変異の特殊性

大腸菌細胞を代表とする原核細胞ではLETを横軸にした時、細胞死滅を指標としたRBE値にピークは存在しないという事が従来の定説とされて来たが、今回使用した大腸菌野生株では、100keV/μmあたりにピークが存在するという新知見が得られた。更に、D.radiodurans細胞では、RBE値とLET値の関係の曲線は、乾燥細胞では凹型、湿潤細胞では凸型となる事が判明した。温熱を併用すれば殺細胞効果的は増強する。この機序はDNAのDepurinationと推定している。現在これら結果平成11年の「原核細胞におけるLETとRBEの関係に関する新知見」の論文で発表した。この細胞の殺細胞効果の機序の解明のため、現在の癌治療で用いられている温熱(Hyperthermia)を併用した。γ線照射では抵抗を示したこの細胞でもα線照射では殺細胞の相乗効果を示した。用いる重粒子線は、放射線医学総合研究所での炭素重粒子線、日本原子力研究所高崎研究所のサイクロトロンから発生するアルゴン(40Ar13+;エネルギー460MeV,1800keV/um)、ネオン(20Ne8+;エネルギー350MeV,LET=300keV/um)、酸素(1606+;エネルギー160MeV,LET=400keV/um)、炭素(12C5+;エネルギー220MeV,LET=100keV/um)、ヘリウム(4He2+;エネルギー50MeV,LET=14keV/um)の各重粒子線である。大腸菌細胞を代表とする原核細胞ではLETを横軸にした時、細胞死滅を指標としたRBE値にピークは存在しないという事が従来の定説とされて来たが、今回使用した大腸菌野生株では、100keV/umあたりにピークが存在するという新知見が得られた。更に、D.radiodurans細胞では、RBE値とLET値の関係の曲線は、乾燥細胞では凹型、湿潤細胞では凸型となる事が判明し、現在、英文論文の投稿準備中である。培養細胞の致死や突然変異誘発率の観点だけで調べるだけでなく、プラスミドDNAの生存率や突然変異の誘発率の実験に加えて、突然変異の特異的スペクトラム(ホットスポット)の観点から調べる事は重要である。従って重粒子線の生存率や突然変異誘発率の蓄積データに加えて、ホットスポット変異が、塩基置換(base substitution)やフレームシフトによるミスセンス突然変異やナンセンス突然変異の検出のための技術の修得が必要である。研究対象を各種細菌細胞からプラスミドDNA分子に発展させるものであるが、加速器のマシン操作法、プラスミドDNAのメンテナンス、培養と調整法、加速器へのサンプル装填法等の技術の修得を現在行っている。これら結果を平成11年に「原核細胞におけるLETとRBEの関係に関する新知見」の論文を発表した。この殺細胞効果増強の機序の解明のため、現在の癌治療で用いられている温熱(Hyperthermia)を併用し検討した。
分光学的手法による過冷却水の局所構造及びダイナミクスの解明

過冷却状態の水は,水素結合ネットワークの存在のため,熱力学量などに特異性を示す.それゆえ,過冷却水の構造やダイナミクスを調べることは,水素結合ネットワークの性質を理解する上で重要である.本研究では,1ー10 μmの逆ミセル内制限空間に水を閉じ込めることで230 Kまでの温度領域の過冷却状態を作り,主に赤外分光法でその性質を調べた.また,分子動力学シミュレーションにより,赤外分光の結果と構造の関係を解析した.その結果,低温ほど構造化が進んでいることが確かめられた.今後は研究期間中に開発した赤外位相変調器を用い,時間分解赤外分光法でダイナミクスを調べる予定である.1.ダイヤモンド薄膜を窓板にした温度変化セルを製作し,遠赤外領域のOH伸縮およびOD伸縮振動の赤外スペクトルの温度依存性を測定した.ダイヤモンド薄膜内の多重反射に由来する干渉振動の存在など,まだ改善すべき点があるものの,ライブレーションバンドが低温になるに従って大きくレッドシフトするという傾向をつかむことができた.2.水125分子の分子動力学計算を行い,水の瞬間構造と振動スペクトルの関係を解析した.まず,水の瞬間的な局所構造を四面体度(Tetrahedrality)により解析したところ,四面体度の分布は低温に行くと双峰性が顕著になり,高密度状態と低密度状態に相当する構造が存在する可能性を示した(四面体度の高い構造は高密度状態,低い構造は低密度状態に相当).さらに,局所構造と観測された赤外スペクトルの関係を解析するため,速度-速度自己相関関数のFourier変換による振動状態密度と四面体度の相関を調べた.O-H(D)伸縮領域においては,振動状態密度の分布と四面体度の間には強い相関は存在しなかった.この結果は,四面体度で特徴付けられる程度の比較的短距離の長さスケールで局所構造が変化しても,赤外スペクトルはそれほど敏感には変化しないことを示唆している.ただし,速度-速度自己相関関数から計算した振動状態密度は時間平均量であるため,構造による振動状態密度の分布の差異を鈍らせてしまっている可能性もある.現在,瞬間基準振動解析を行って瞬間構造の振動状態密度を求め,速度-速度自己相関関数から求めた結果との整合性を確かめている.1.分子動力学シミュレーションの結果を解析し,四面体度で特徴付けられる局所構造と中赤外吸収スペクトルおよび遠赤外スペクトルの相関を調べた.その結果,局所構造に関しては低温にいくほど双方性が顕著になり,これまでの過冷却水の研究で存在が示唆されている高密度状態と低密度状態に対応すると考えられる2状態が存在するように見えるものの,四面体度と中赤外,遠赤外スペクトルの相関はあまりみられなかった.中赤外吸収スペクトルに関しては,そもそも温度変化がそれほど大きくない上,分子内振動を扱うため,今回用いたFlexible-SPCモデルよりもさらに精度のよいポテンシャルを用いなければ実験の再現は難しいという結論に至った.今後は,分子内ポテンシャルをより精度の高いものにし,実験結果の再現を十分にとった状態で,より詳しい解析を行っていきたい.2. quasi-phase cyclingのための光変調器の改善:前年度までに制作した光変調器では,タイミングジッタが大きい,変調器の位相に依存したオフセットを生じる,変調器の位相に依存してパルス幅が変調される,といった問題があり,これらが変調器の性能を低下させる原因となっていることがわかった.そこで,1つめの問題に関しては,機械的な安定性を高くすることによってジッタを減らすことを試みた.2つめの問題に関しては,2つの変調器をペアで動かすことで,変調器位相に依存したオフセットを除去することを試みた.3つめの問題に関しては,光学材料にフッ化カルシウム基板を用いていることが原因であり,硫化亜鉛基板などを用いることでパルス幅の変調を抑えることができると考えられる.今後,改善した基板を用いて赤外ポンプ-プローブ実験を行う予定である.過冷却状態の水は,水素結合ネットワークの存在のため,熱力学量などに特異性を示す.それゆえ,過冷却水の構造やダイナミクスを調べることは,水素結合ネットワークの性質を理解する上で重要である.本研究では,1ー10 μmの逆ミセル内制限空間に水を閉じ込めることで230 Kまでの温度領域の過冷却状態を作り,主に赤外分光法でその性質を調べた.また,分子動力学シミュレーションにより,赤外分光の結果と構造の関係を解析した.その結果,低温ほど構造化が進んでいることが確かめられた.今後は研究期間中に開発した赤外位相変調器を用い,時間分解赤外分光法でダイナミクスを調べる予定である.液体状態を保ったまま凝固点以下の温度まで冷却された過冷却水は,熱力学量や各種緩和時間について顕著な異常性を有する.この異常性は,水素結合ネットワークの存在により,高密度化及び低密度化した局所構造が不均一に形成されることに由来する.本研究では,過冷却水の局所構造およびそのダイナミクスを,分光測定と分子動力学シミュレーションを用いて明らかにするため,以下の研究を行った.1.常温から240 K付近までの温度領域で赤外およびテラヘルツ分光測定を行うことが可能な温度コントロール液体セルの開発と赤外吸収スペクトルの温度依存性の測定;光路長を最小で数μmに設定可能な温度コントロール液体セルを開発した.温度コントロールは水冷ペルチェ素子のPID制御で行い,精度0.1 Kでコントロールした.過冷却水の赤外吸収スペクトルを測定したところ,(重)水の変角振動および伸縮振動は,低温ほど低波数シフトした.この変化は低温ほど水素結合ネットワーク構造が強固になっている,つまり構造化が進んでいることに対応していると考えられる.

2.水の分子動力学シミュレーションプログラムの開発;水の古典分子動力学シミュレーションのプログラムを作成した.3. quasi-phase cyclingのための光変調器の開発;平成24年度に計画している赤外非線形分光では信号強度が線形分光に比べて小さいため,試料からの散乱光が強ければ信号のS/Nが著しく低下する.本研究では直径数μm前後の逆ミセル制限空間を用いて水の過冷却状態を実現しており,散乱光の影響が大きいことが判明した.そこで光チョッパの代わりに光変調器(透過型の1軸ガルバノスキャナ)を製作し,光の半周期に相当する光学遅延を高速に与える装置を製作した.平成24年度は光変調器を用いたquasi-phase cyclingにより散乱光の影響を抑えた測定を行う予定である.行う予定であった赤外ポンプ-プローブ測定および2D-IR測定はまだ行うことができていない.これは,前年度に開発した光変調器の改善が不十分であるからである.年度途中に神戸大学から東京農工大学への異動があった.異動先の東京農工大学ではテラヘルツスペクトル測定装置を所持していないため,テラヘルツスペクトルについては測定することができなかった.実験装置や分子動力学シミュレーションプログラムの開発については計画通りに行うことができた.まずは光変調器の改善を行い,非線形赤外分光測定を安定して行えるようにする.具体的には,窓材の交換やコイルドライバーの導入を行う.振動スペクトルや非線形赤外分光測定の結果をシミュレーションの結果と結びつけて考察を行う.実験装置および分子動力学シミュレーションプログラムの開発については概ね23年度に終えることができた.24年度には過冷却水の測定とその解析を進めていく.また,可能であればテラヘルツスペクトル測定装置を所持する研究室と共同して実験を行い,過冷却水のテラヘルツスペクトルを測定する.光変調器の改善および測定系改善のための光学素子などの物品(消耗品)の購入,成果発表のための旅費に充てる.平成23年度にはテラヘルツ分光測定を完了することができなかったため,未使用額が生じた.平成24年度にテラヘルツ分光測定が可能であればこの未使用額をテラヘルツ測定に関わる旅費及び消耗品購入費に充てる.平成24年度の研究費は赤外非線形分光測定および成果発表に必要な消耗品・旅費の購入に充てる.