hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
生体分子複合化による光機能性の芳香環ミセルの開発

この薄膜のUV-visスペクトルは、アントラセン由来の吸収帯は観測されず、純粋なフタロシアニン銅錯体のみから成る薄膜が、効率良く得られることが明らかになった。また、フタロシアニン銅錯体の内包体の水溶液にメタノールを添加し、この溶液から遠心分離により、フタロシアニン銅錯体を回収することに成功した。今年度の成果として、V型両親媒性分子によるナノカーボン類の簡便かつ安定な水溶化の達成が挙げられる。これまでに、様々なサイズや形状を有するナノカーボンを水溶化できる多様性に優れた水溶性ホストの報告例はない。本研究のV型両親媒性分子は、固体状態での混合を経ることで、種々のナノカーボンとの水溶性複合体を構築した。また、光や熱で分解するナノカーボン類では、V型両親媒性分子により抱接されることで顕著な安定化が観測された。この成果に関して、国内の学会で発表を行い、投稿論文の作成を行っている。さらに、他の疎水性分子を用いた新規な水溶性複合体の構築に取り組んでおり、進度はおおむね順調と判断した。27年度が最終年度であるため、記入しない。次年度は、本研究の水溶性ナノカーボン複合体を用いた、固体材料の構築と物性評価を目指す。また、生体分子複合型材料の構築を目指して、クロロフィルなどの光反応を誘起する生体分子をV型両親媒性分子と複合化させ、水中、新奇な光物性や光反応を開発する。さらに、本研究のV型両親媒性分子の芳香環パネルに疎水鎖を導入した新規両親媒性を構築して、芳香環と疎水鎖の相互作用を用いた、難溶性芳香族高分子の水溶化と機能創出を目指す。穐田・吉沢研究室のホームページ
イントロン性マイクロRNA-33a,-33bの脂質代謝制御機構の解明

コレステロール代謝を制御する転写因子SREBP2のイントロンにmiR-33aが存在する。ヒトは、脂肪酸代謝を制御するSREBP1のイントロンにmiR-33aと相同性の高いmiR-33bが存在する。miR-33aの各臓器における生体における役割を解明するためにコンディショナルmiR-33a欠損マウスを作成した。繊維芽細胞においてmiR-33aを欠損させると心臓の線維化が抑制されることが明らかになった。miR-33bの役割を明らかにするため、ヒトmiR-33b配列をSREBP1のイントロンに挿入したマウスを作製した。このマウスはABCA1の発現低下を示し、血清中HDL-Cが35%の低下を示した。コレステロール代謝を制御する転写因子sterol regulatoryelement binding protein 2 (SREBP2)のイントロンにマイクロRNA(microRNA; miR)-33aが存在する。これまでの研究から、miR-33a欠損マウスは組織中ABCA1上昇、血中HDL-C上昇、抗動脈硬化作用など様々な表現型を示すことが明らかとなった。ヒトには、脂肪酸代謝を制御するSREBP1のイントロンにmiR-33aと相同性の高いmiR-33bが存在する。本課題では以下の点に注目しmiR-33a、miR-33bの機能をさらに詳細に解明する。A. SREBP2のイントロンに存在するmiR-33(a)の各臓器における役割の解明:miR-33aは全身の臓器に広範囲に発現している。各臓器における生体における役割を解明するため、コンディショナルmiR-33a欠損マウスの作製を行った。現在、miR-33a欠損マウスのFloxマウスが誕生しており、繁殖を行っている。B. SREBP1のイントロンに存在するmiR-33bの脂質代謝における機能解析:マウスを用いたmiR-33bの機能解析を行うためにマウスのSrebp1のイントロン16にヒトmiR-33bの配列をノックインを行った。miR-33bノックインマウスは、メンデルの法則に従い誕生した。このマウスにおいては、肝臓におけるABCA1の発現が低下しており、血中のHDL-C濃度が約35%の低下を示した(Horie T and Nishino T, et al. Sci Rep 2014)。C. SREBP1のイントロンに存在するmiR-33bの動脈硬化における役割の解明:miR-33bの動脈硬化における役割を解明するために、miR-33bノックインマウスとアポE欠損マウスとの交配を行う。現在、ウェスタン食負荷を行い、解析を行っているところである。コレステロール代謝を制御する転写因子sterol regulatoryelement binding protein 2(SREBP2)のイントロンにマイクロRNA(microRNA;miR)-33aが存在する。ヒトにおいて脂肪酸代謝を制御するSREBP1のイントロンにはmiR-33aと相同性の高いmiR-33bが存在する。本研究では以下の点に注目しmiR-33a、miR-33bの機能をさらに詳細に解明する。A. SREBP2のイントロンに存在するmiR-33aの各臓器における役割の解明:miR-33aは全身の臓器に広範囲に発現している。各臓器・細胞におけるmiR-33a役割を解明するため、コンディショナルmiR-33a欠損マウスの作成を行い、Floxマウスを得ることに成功した。B. SREBP1のイントロンに存在するmiR-33bの脂質代謝における機能解析:ヒトmiR-33b配列をSREBP1のイントロンに挿入したノックインマウスを作製し、解析を行った。このマウスは肝臓におけるABCA1の発現低下を示し、血清中HDL-Cが35%の低下を示した。C. SREBP1のイントロンに存在するmiR-33bの動脈硬化における役割の解明:miR-33bノックインマウスとアポE欠損マウスとの交配を行った。miR-33bのアレル数に応じて、動脈硬化病変が増加することが明らかとなった。動脈硬化病変中の脂質量の増加および、不安定プラークの形成を認めた。血清中のHDL-Cは約30%の低下を示した。これらの結果よりmiR-33bは新たな動脈硬化の治療標的となりうることが明らかとなった。D. miR-33a, miR-33bの生体における個々の機能解析:miR-33a欠損マウスとmiR-33bノックインマウスの交配により、miR-33a、miR-33bの有無により4種類のマウスの作製を行った。現在、表現型を解析している。平成27年度の計画は、作成したmiR-33bノックインマウスの表現型が主である。既に、通常食状態での表現型解析は論文として報告済みである。現在は、動脈硬化におけるmiR-33bの表現型の解析を推進してるが、ほぼデータはそろってきている。また、miR-33a欠損マウスとの交配による4系統のマウス作製も順調に進行しており、miR-33a,miR-33bの生体における個々の機能役割の解明を行うことができる状況となっている。miR-

33aコンディショナル欠損マウスの作成に関しては、作成が完了し、まず、全身でCreを発現するマウスとの交配を行い、既に作成されている全身のmiR-33a欠損マウスとの表現型の整合性を確認した。今後、各種Creマウスとの交配を開始する予定である。以上より、概ね順調に研究計画が進展していると考える。コレステロール代謝を制御する転写因子sterol regulatoryelement binding protein 2 (SREBP2)のイントロンにマイクロRNA(microRNA; miR)-33aが存在する。ヒトには、脂肪酸代謝を制御するSREBP1のイントロンにmiR-33aと相同性の高いmiR-33bが存在する。A. SREBP2のイントロンに存在するmiR-33(a)の各臓器における役割の解明:各臓器における生体における役割を解明するため、コンディショナルmiR-33a欠損マウスの作製を行った。miR-33a欠損マウスのFloxマウスの作製に成功した。線維芽細胞特異的Creマウスとの交配で、心臓の線維化が抑制されることが明らかとなった(Nishiga, etal.CirRes.2017)。B. SREBP1のイントロンに存在するmiR-33bの脂質代謝における機能解析:マウスのSrebp1のイントロン16にヒトmiR-33bの配列をノックインを行った。肝臓におけるABCA1の発現が低下しており、血中のHDL-C濃度が約35%の低下を示した(Horie T and Nishino T, et al. Sci Rep 2014)。C. SREBP1のイントロンに存在するmiR-33bの動脈硬化における役割の解明:全身の表現型解析は終了し、現在はマクロファージに注目し、機序の解明を行っている。D. miR-33a, miR-33bの生体における個々の機能解析:miR-33a欠損マウスとmiR-33bノックインマウスの交配を行い、miR-33a、miR-33bの有無で4種類のマウスを作製することにより個々の機能を明らかにする。現在交配を行い、マウスを樹立した。E.ヒトにおける血中miR-33a,-33bレベルと動脈硬化性疾患との関係の検討:現在解析中である。コレステロール代謝を制御する転写因子SREBP2のイントロンにmiR-33aが存在する。ヒトは、脂肪酸代謝を制御するSREBP1のイントロンにmiR-33aと相同性の高いmiR-33bが存在する。miR-33aの各臓器における生体における役割を解明するためにコンディショナルmiR-33a欠損マウスを作成した。繊維芽細胞においてmiR-33aを欠損させると心臓の線維化が抑制されることが明らかになった。miR-33bの役割を明らかにするため、ヒトmiR-33b配列をSREBP1のイントロンに挿入したマウスを作製した。このマウスはABCA1の発現低下を示し、血清中HDL-Cが35%の低下を示した。平成26年度の研究計画は、遺伝子改変マウスの作成が主であった。
年金政策の農家等の維持に与えた影響の評価

自営業者である農家の国民年金加入率は,他の地域と比べても高く9割を越えている。このことから制度として支給される年金額は満額である。その結果,1990年には、夫婦で年額150万円を越える給付額となり,その他からの収益を含めて考えると,高齢者2人が暮らすことは他産業よりも容易であり,従って高齢専業の農家が維持されてきたことに公的年金は大いに貢献したといえる。そして、そのことは、日本農業が直面するはずの地滑り的世代交代を2030年遅らせることになったと考えられる。24年度は,引き続き公的年金、特に農業者年金と農業生産活動の関連について統計分析を行った。旧農業者年金では農家単位で少なくとも一人は加入することが原則で、かつ国民年金と付加年金にかならず加入する。そのため国民年金も加入率が高く、支給額はその制度が提供するもっとも高い額になる。公的年金のシミュレーションを行うと、1990年には、夫婦で年額150万円を越える給付額になる。農家にあっては自家消費や帰属家賃を考慮すれば、高齢者の実質的な所得は200万円以上のものになり、農村での「暮らしやすさ」を補強し、単独でも生活可能な水準であったわけである。農家の生産年齢の生活がコメなど農産物価格水準の改善によってもたらされたとすれば、戦前の酷かった働けない老人の扱いが、公的年金の導入後改善されていったといえる。農家にインタビューをすると、親の年金についてはほとんど知らないとの回答が多い。また、好きに使ってもらうことを容認する発言、そうあることに誇りであるような回答も聞く。一方、親の懐具合がよくなったため、子世代は親が高齢になっても扶養を必ずしもみる必要がなくなったことが指摘される。親が農業や農村から離れない理由は、農業と年金でそれなりの固定所得が確保され、独立した生活が可能であるということも大きな要因である。そのことが子供の他出を可能にした。その結果、農村に高齢者人口の滞留が発生したが、同時に子世代の適職への移動も可能にしたものと推測できる。また、農業者年金を含め、農家高齢者への公的年金の提供は、農業という産業だけでは無理であった。世代によるが掛け金の十数倍にもなる年金額が提供されているのだが、その大部分は農外産業の年金保険料からの移転である。農業政策として進められている法人格化は、農業者年金の役割を厚生年金に変え、また強制加入という点も加味して、農家の高齢者の老後が保障される。23年度は,主としてデータの整理と,公的年金と農業生産活動の関連に関しての調査を行った。国民年金と農業者年金の制度的な変遷や,日本の経済成長に伴っ厚生年金の制度が農村においても中心的な公的年金制度となっていくことが分かった。ただ,日本の農村においてどのていど厚生年金が生活に役立ったのかは,まだデータ的には不明である。1990年の社会保険庁の資料によれば,農村部と都市部の国民年金の検認率を比較すると,農村部の検認率が際立って高いことがわかる。これは,農業者が当然加入する農業者年金制度の存在が大きかったことがわかる。これらの加入者が高齢になったときには,満額での支給ということで生活にも十分役立っていることが伺える。ただ,それは専業農家であったかつての農家の在り方であり,兼業農家については,今後いっそうの考察を深める必要がある。また,2001年以降,農業者年金が完全な積立方式に変わったことに伴い,農業者年金からの脱退が認められたことから,農村部でも加入の在り方が変わっていく可能性はある。農業者年金の最近の傾向としては,北海道と九州の加入率が高い。これは,これらの地域では農業が盛んであること,また,兼業機会が少なく農業の所得依存率が高いことがその理由として考えられる。農家の場合,一般的には直系家族制の下で,多様な稼得機会によって所得活動を行っている。そのため,世代による稼得機会を考えたとき,3代直系家族では,息子世代は他産業に,親世代は農業にという形で家計としての所得が形成されることになる。年金の場合,職業選択の結果,それに対応した年金が給付されるので,農家が受け取る年金は,この職業選択が重要な役割を果たすことになる。労働環境に関する考察も含めて,シミュレーションを行う予定であったが,今年度は間に合わず,来年度にその傾向に関して分析を行うことにしたい。東日本大震災によって研究環境が整わず,大学講義の終わる8月までの間は,本研究に取りかかることができなかった。その後は,予定通りデータや文献などの収集を行ってきており,農家の年金のかつての状況については,明確になった。また,地域ごとのデータについても収集を行ったところである。しかしながら,今年度行う予定であった地域による年金の在り方の違いの統計的な分析・シミュレーションについては,行うことができなかった。

また,労働条件による農家の兼業の状況についても時間経過の中で把捉することができていない。これらは次年度に繰り越して実施する。23年度の遅れを取り戻し,当初の予定の最終目標に到達するため,以下の(1)(4)を実施する。(1)4月8月:23年度に整理したデータに基づき,地域の統計的な傾向を明確にし,かつ,多変量解析・シミュレーションなどによってその傾向の分類を行ってその行動の特徴について考察を行う。(2)8月10月:農業者年金,国民年金,厚生年金による農家へのトランスファーを計算し,より農家経済を詳細に検討しモデルの構築を行う。検証方法は,トランスファーを年代毎,地域ごとに算出し,地域の高齢化などを考慮して,農業・農村の維持に関して検討を行う。(3)10月12月:職業選択(雇用状況)と農業者の年金の関係について,その就業状況等から検証を行う。たとえば,農家経済調査等を用いて,農家の生活の中での年金の位置についての評価を行い,階層別の年金の位置もしくは貢献についての考察を行う。(4)1月3月:最後に,年金の農家の維持・存続に果たした役割について,経済学モデルを構築する。モデルによる年金の評価を計量的に行う。また,年金政策としての農業者年金予算の効率に関しても一定の評価を行う。(1)設備備品費:本研究では,過去の農業・農村についての分析が中心である。23年度にも収集を行ったが,その他に必要となるものが出てくることが考えられる。(2)消耗品費:図書が購入できない場合は,コピーによって資料収集を行う。また,法令などの収集も行う。資料代には,直接自分でコピーを行う費用の他,他の図書館に依頼してコピーを送付してもらう際の費用も含まれている。(3)旅費等:資料については昨年度入手の他にも,各都道府県の図書館,厚生労働省や国会図書館や各地域所蔵図書で閲覧する必要があるかもしれない。また,農業者年金基金などの年金関係者からのヒアリングも想定している。また,23年度と同様,収集したデータの打ち込みなど資料整理として,アルバイト謝金を想定している。時期としては8月と121月の3ヶ月間程度,1日2時間週2日程度での仕事を想定している。
HTLV-1関連シェーグレン症候群の病態解明に向けた免疫学的検討

本研究ではHTLV-1抗体陽性および陰性のシェーグレン症候群患者の口唇腺を用いて病変局所におけるThサブセットの局在について検討を行い、SSの病態形成におけるHTLV-1の作用機序を解明することを目的とした。口唇腺より抽出したmRNAを用いてRNAマイクロアレイ法を用いて遺伝子発現を網羅的に解析し、発現変動遺伝子をリストアップして、SS患者の口唇腺・唾液中・血清中におけるそれらの発現と局在を検索、臨床所見との検討を行った。臨床所見としては、年齢、性別、唾液分泌量、唾液腺造影検査におけるRubin & Holt分類に大きな差は認めなかった。血液検査所見では抗SS-B抗体の陽性率はHTLV-1(+) SS群が有意に高かった。また、口唇腺組織においてはHTLV-1(+) SS群に胚中心は認めた症例はないという結果であった。免疫組織学的検討において、各種サイトカイン、ケモカインの免疫染色を行ったところTh2系の分子をより多く検出した。なかでもTARC、MDC、CCR4はHTLV-1(+) SSにおいて強く検出された。しかし、それらの分子はHTLV-1(-) SSの重症例と軽症例でも差があることが分かっている。過去の報告において、Taxの作用により、ICAM-1が細胞膜上に強く発現し、MDCが大量に産生分泌され、分泌されたMDCにより、CCR4陽性T細胞が選択的に遊走されることにより、CCR4陽性T細胞はICAM-1を介してHTLV-1感染T細胞と強固に結合することが明らかになっている。より詳細な検討を行いたいところであったが口唇腺は小さく検体数も少ないので何度も同様のサンプルを用いての実験が困難であった。そこで、唾液、血液など採取の容易な検体での同様の検討の可否について検討中である。上記に示したとおり、口唇腺以外の検体を用いての検討を試みている最中である。また、研究拠点を九州大学から鹿児島大学へ移したため、実験機器等の整備にも時間を要しており当初の予定より遅れている状況。サンプルを収集し、他の検体(唾液、血液)を用いて、以前の研究の再現性を確認。その後、さらに他の因子や遺伝子等の検討も視野にいれて研究を行っていきたい。また、鹿児島はHTLV-1陽性の方が多い地域でもあるので地域差等も検討内容に加えていける可能性も検討中である。シェーグレン症候群(SS)は涙腺や唾液腺をはじめとする外分泌腺のリンパ球浸潤を主体とする慢性の炎症性疾患であるが、その発症や病態進展については不明な点が多い。最近の研究では、その要因の一つとしてウイルスの関与が示唆されているが、その中でもヒトT細胞白血病ウイルスI型(HTLV-1)は、T細胞の細胞増殖や炎症性サイトカイン産生を促進し、SSをはじめとする自己免疫疾患を惹起することが報告されている。HTLV-1関連脊髄症(HAM)患者はしばしば多関節症や間質性肺炎を合併し、HAM患者の約6割にSSを合併するという報告もある。唾液腺造影での所見の有無(Rubin&Holt分類)と口唇腺生検組織でのリンパ球浸潤の程度(Greenspan分類)でSSを評価すると、HTLV-1(+) SSでは唾液腺構造破壊をきたしにくいことが報告されている(Clin ExLp Rheumatol. 2008.)。また、SSの唾液腺組織にはしばしばリンパ濾胞が形成され,この部位でSSの免疫反応が惹起されると考えられているが、HTLV-1(+) SS(特にHAMの合併例)では胚中心(GC)形成をほとんど認めないことも明らかとなっている。このように、HTLV-1(+) SSとHTLV-1(-) SSの臨床像が明らかに違うことから、免疫学的な見地からも、病態形成のメカニズムが異なることが推察される。まず、口唇腺より抽出したmRNAを用いてRNAマイクロアレイ法を用いて遺伝子発現を網羅的に解析。さらに、発現変動遺伝子をリストアップして、SS患者の口唇腺・唾液中・血清中におけるそれらの発現と局在を検索し、臨床所見との検討を行った。網羅的解析を行っているものの、候補遺伝子が多いためシェーグレン症候群に関連する遺伝子の抽出に時間を要している。本研究ではHTLV-1抗体陽性および陰性のシェーグレン症候群患者の口唇腺を用いて病変局所におけるThサブセットの局在について検討を行い、SSの病態形成におけるHT LV-1の作用機序を解明することを目的とした。前年度まではまず、口唇腺より抽出したmRNAを用いてRNAマイクロアレイ法を用いて遺伝子発現を網羅的に解析。

なかでもTARC、MDC、CCR4はHTLV-1(+) SSにおいて強く検出できた。しかし、それらの分子はHTLV-1(-) SSの重症例と軽症例でも差があることが分かっている。今後はHTLV-1(+) SS群とHTLV-1(-) SS重症例との違いをより研究していく予定である。まとめ:1口腔乾燥の自覚症状は両群とも強い、2血清学的所見HTLV-1(+) SSは抗SS-B抗体陽性率高い、3画像所見腺組織破壊像はほとんど認めない、4病理組織学的所見リンパ球浸潤は中等度、導管破壊・アポトーシスは軽度、リンパ球浸潤は軽度でもTh2関連分子が強く検出。症例数が少なく、十分な検討が行えていない状態。対照群も含めてもう少しサンプル数を増やしてさらなる解析をおこなっていく。また、ほかの候補分子についてもマイクロアレイ等を行い検出していきたい。本研究ではHTLV-1抗体陽性および陰性のシェーグレン症候群患者の口唇腺を用いて病変局所におけるThサブセットの局在について検討を行い、SSの病態形成におけるHTLV-1の作用機序を解明することを目的とした。口唇腺より抽出したmRNAを用いてRNAマイクロアレイ法を用いて遺伝子発現を網羅的に解析し、発現変動遺伝子をリストアップして、SS患者の口唇腺・唾液中・血清中におけるそれらの発現と局在を検索、臨床所見との検討を行った。臨床所見としては、年齢、性別、唾液分泌量、唾液腺造影検査におけるRubin & Holt分類に大きな差は認めなかった。血液検査所見では抗SS-B抗体の陽性率はHTLV-1(+) SS群が有意に高かった。また、口唇腺組織においてはHTLV-1(+) SS群に胚中心は認めた症例はないという結果であった。免疫組織学的検討において、各種サイトカイン、ケモカインの免疫染色を行ったところTh2系の分子をより多く検出した。なかでもTARC、MDC、CCR4はHTLV-1(+) SSにおいて強く検出された。過去の報告において、Taxの作用により、ICAM-1が細胞膜上に強く発現し、MDCが大量に産生分泌され、分泌されたMDCにより、CCR4陽性T細胞が選択的に遊走されることにより、CCR4陽性T細胞はICAM-1を介してHTLV-1感染T細胞と強固に結合することが明らかになっている。より詳細な検討を行いたいところであったが口唇腺は小さく検体数も少ないので何度も同様のサンプルを用いての実験が困難であった。そこで、唾液、血液など採取の容易な検体での同様の検討の可否について検討中である。上記に示したとおり、口唇腺以外の検体を用いての検討を試みている最中である。また、研究拠点を九州大学から鹿児島大学へ移したため、実験機器等の整備にも時間を要しており当初の予定より遅れている状況。われわれはこれまでの研究からシェーグレン症候群患者(HTLV-1陰性)の唾液腺におけるヘルパーT細胞に注目し、シェーグレン症候群の発症・病態維持にはヘルパーT細胞1とヘルパーT細胞17が、病態進展にはヘルパーT細胞2と濾胞性Tfh細胞が重要な役割を担っていることを見出している。次年度はそれらの関連分子とRNAマイクロアレイ法にで抽出された遺伝子について口唇腺局所における検索を行っていく予定。
炎症性肺疾患の発症分子機構の解明

mitogen-activatedproteinkinase(MAPK)の1つ、p38は炎症反応の中心的役割を演じている。我々は、肺胞特異的にp38の活性をコントロールしうる2系統の組織特異的トランスジェニック(TG)マウスを作出し、これらが、肺気腫や間質性肺炎といった炎症性肺疾患の発症分子機構の解明に有用であることを突き止めている。本研究では、(1)肺胞特異的p38活性低下マウスで認められた、間質性肺炎誘導への抵抗性に関して、さらに検討を加えた。また、(2)新たに、肺胞特異的に、かつ時期依存的にp38の活性を上昇させ得る誘導型TGマウスを作出することを試みた。mitogen-activated proteinkinase(MAPK)の1つ、p38は炎症反応の中心的役割を演じている。1)肺特異的なp38活性亢充進をテトラサイクリン摂取依存的に誘導するために2系統のトランスジェニックマウスを作出すべく、以下の2つのトランスジーンを作成した。(1)MKK6-c.a.(p38の活性充進を促す変異体遺伝子:p38を特異的に活性化するリン酸化酵素であるMKK6を点変異により常時活性型としたもの:N末にHA-Tagを付加している)遺伝子を、Tet受容体応答遺伝子(TRE)/CMVプロモーターのfuse遺伝子の下流に配したトランスジーン。(2)Tet受容体遺伝子(TetR)とVP16のキメラ遺伝子を、ヒト・サーファクタント蛋白(SP)-Cプロモーターの下流に配したトランスジーン。現在、それぞれのトランスジーンをc57Black6Jマウスの受精卵にマイクロインジェクションし偽妊娠マウスに着床させ、トランスジェニッグマウスの誕生を待つ段階である。誕生したフナウンダーマウスのトランスジーンを検出するRCRプデイマー等の条件は検討済みであり、計算上1-60コピー数のトランスジーンを内因性ジーンとともに検出可能である。2)新たなp38阻害薬となりうるペプチド:MEF2AのD-domaipに対応する15アミノ酸残基(SRKPPLRWIPPSSK)をコアとして,そのN末にHIV由来のTat蛋白のprotein transducqtion domain(PTD)に対応する10アミノ酸残基(RRRQRRRKKR)を,また,C末にendosomal trap阻害効果を有するインフルエンザウィルス血液凝集素蛋白由来の20アミノ酸残基(GDIMGEWGNEIFGAIAGFLG)を配したキメラペプチドをデザインした.ジョイント部のペプチドアームをグリシンとし,各1,2と変えたペプチドを作成した。このペプチドにp38活性阻害作用があるがどうかを,培養細胞を用いた系で今後検討していく。本研究は、免疫・炎症作用を司る蛋白分子群ネットワークの産生制御の中心に位置するp38MAPK(p38)に着目し、p38の活性を肺胞特異的に上昇もしくは低下させるトランスジェニック(TG)マウスを作出し、それらTGマウスを用いて、未だ有効な治療法のない炎症性肺疾患の発症分子機構を解明し、新たな治療法の探索を目的とした。<テトラサイクリン誘導性肺特異的p38活性上昇マウスの作出>(1)テトラサイクリン(Tet)受容体遺伝子をSP-Cのプロモーターを用いて肺胞特異的に導入したマウス(SP-C-rtTA/TG)(2)Tet受容体応答性プロモーター(TRE)遺伝子の下流にMKK6-c.a. (p38の活性亢進を促す変異体遺伝子:p38を特異的に活性化するリン酸化酵素であるMKK6を点変異により常時活性型としたもの)を配したトランスジーンを導入したマウス(TRE-MKK6-c.a./TG)を作出する。この両者を掛け合せたマウスにドキシサイクリン(Dox:Tetの誘導体)を溶解した飲水を与えることで、肺胞特異的に、Dox濃度依存的にMKK6-c.a.トランスジーン発現量のコントロールが可能となる。そこで、それぞれのTGマウスの作出を試み、すでに5ラインのSP-C-rtTA/TGを得たが、TRE-MKK6-c.a.遺伝子の単独導入ではTGの作出に至らなかった。その原因として、MKK6-c.a.遺伝子のleakageが発生段階に影響し胎生致死を促すことが想定されたため、TRE-MKK6-c.a.遺伝子の受精卵への導入時にTREサイレンサー(tTS)遺伝子を共導入し、TREの自発的なバッググランド活性を抑制しMKK6-c.aのleakageを阻害することを試みた(TRE-MKK6-c.a./tTS/TGの作出)。この方法により、1ラインのTRE-MKK6-c.a./tTS/TGを得ることが出来た。一方、すでに作出していた肺特異的p38活性常時低下

TGマウスを用いた解析から、肺胞内p38活性を抑えることで薬物による間質性肺炎誘導に病理的・機能的に抵抗性を示すことを確認した。今後、これらのマウスを用いて慢性閉塞性肺疾患(COPD)や間質性肺炎の治療に通じる分子基盤を構築していきたい。本研究は社会貢献に直結すると期待できる。
植物の感染防御における新奇オートファジー制御機構の解明とその応用

本研究により、細胞内物流や分解系が、植物免疫を制御することを突き止めた。また、タバコ培養細胞BY-2株を利用したオートファジー可視化系により、植物の感染防御応答過程において、オートファジーがダイナミックに変動することが判明した。併せて、イネよりオートファジー機能の欠損変異体を単離し、機能解析を進めた。その結果、複数の生殖発達過程において、オートファジーが重要な役割を果たす新規知見を得た。本研究は、オートファジー制御の上流のシグナル伝達系の解明、およびオートファジー制御による作物の自然免疫増強技術の開発が目的であり、本年度は下記の研究を進めた。1、Ca^<2+>/リン酸化を介したオートファジー制御機構OsCIPK15過剰発現/発現抑制株を用いて、オートファジー動態の定量を可視化解析により試みた。その結果、予備的ではあるが、OsCIPK14/15によるオートファジー制御の可能性が示唆された。併せて、酵母two-hybrid法により、相互作用分子の選抜を進めた結果、複数の候補が単離された。現在は植物細胞内での相互作用の確認を進めている。2、植物の自然免疫系におけるオートファジーの動態と生理的役割植物細胞のイメージングに最も適している、タバコBY-2細胞を利用し、オートファジー動態をリアルタイムで観察出来る実験系の構築を試みた。その結果、非常に定量的なリアルタイムモニタリング系の開発に成功した。現在、自然免疫応答を含めた多様な外部シグナルとオートファジー動態の関連性を検証している。3、ケミカルバイオロジーによる植物防疫剤の選抜と耐病性検定数種の化合物に関して、多様な植物体を用いて防疫剤としての効果検証を進めた。その結果、防御関連遺伝子の誘導等の免疫増強が観察された。シロイヌナズナを利用した耐病性検定の結果、まだ予備的ではあるが、菌の増殖抑制効果も観察された。本研究から得られた知見は、植物のオートファジー制御メカニズムの解明に貢献すると共に、新規防疫剤開発の基礎となる研究成果になると期待される。本研究は、オートファジー制御の上流のシグナル伝達系の解明、およびオートファジーを含む細胞内物流(メンブレントラフィック)制御による作物の自然免疫増強技術の開発が目的である。1、Ca^<2+>/リン酸化を介したオートファジー制御機構(継続研究)本年度は、イネにおける非常に定量性の高いオートファジー可視化系の再構築を進めるため、新たにOsATG5抗体を作成した。本抗体を用い、オートファジー定量の新たな指標として、OsATG5-OsATG12複合体の生成量にも着目し、検証を試みている。一方、酵母two-hybrid法により、OsCIPK15とOsATG5、相互作用因子であるPP2C(タンパク質脱リン酸化酵素)の結合部位を詳細に解析した結果、PP2CがOsCIPK15の基質として作用するだけでなく、OsATG5と共に、活性調節に関わっていることも判明した。2、イネオートファジー欠損変異株の同定本年度はイネオートファジー欠損変異株の取得を目指した。その結果、複数の欠損変異株の単離に成功した。現在、研究試料確保のため、後代種子の取得を進めている。3、ケミカルバイオロジーによる植物防疫剤の選抜と耐病性検定(継続研究)申請者が同定した数種の防疫剤候補化合物に関して、イネやシロイヌナズナ植物体を用いて、防疫剤としての効果検証を進めた。その結果、イネ及びシロイヌナズナの両者において、菌の増殖抑制効果が観察された。一方、多検体の同時測定が可能なルミノメーターを用いることにより、活性酸素種(ROS)を指標にした非常に効率的、且つ定量的な防疫剤スクリーニング法の確立に成功した。現在、スクリーニング及び選抜化合物を含む特許出願の準備を進めている(H23年度出願予定)。本研究は、オートファジー制御の上流シグナル伝達系の解明、およびオートファジーを含む細胞内物流(メンブレン、トラフィック)制御による作物の自然免疫増強技術の開発が目的である。1、Ca^<2+>/リン酸化を介したオートファジー制御機構本年度は、イネにおける非常に定量性の高いオートファジー可視化系の再構築を進めた。その結果、オートファジー可視化マーカーであるGFP-ATG8タンパク質を発現させた形質転換イネを作出し、蛍光イメージングによる定量系の構築に成功した。またOsATG5抗体を用い、OsATG5-OsATG12複合体量を指標にした定量系の構築にも成功した。現在、本手法を用い、OsCIPK15のCa^<2+>/リン酸化を介したオートファジー制御機構の解析を進めている。2、イネオートファジー欠損変異株の表現型解析本年度は昨年度取得した複数のATG因子由来のイネオートファジー欠損変異株の表現型解析を進めた。

予備的ながらシロイヌナズナと異なり、複数の生殖ステージや病原菌感染シグナルにおいて、オートファジー機能が重要な役割を果たす知見を得た。現在、更なる解析を進めている。3、ケミカルバイオロジーによる植物免疫活性化剤の開発申請者が同定した数種の免疫活性化剤候補化合物および活性酸素種(ROS)を指標にした非常に効率的、且つ定量的なスクリーニング法に関して、特許出願を行った。現在、本手法を用いて、多様な化合物ライブラリーからの大規模スクリーニングを進めている。本研究から得られた知見は、植物のオートファジー制御メカニズムの解明に貢献すると共に、新規防疫剤開発の基礎となる研究成果になると期待される。
海外の学校との交流を支援する学校情報データベース構築に関する研究

学級間国際交流を支援するためには、どのような問題が交流の継続を阻害しているのかを明らかにすることがきわめて重要である。本研究を通じて、テンプレートとなる「定食」カリキュラムの存在が教師にとってきわめて重要であることがわかった。初年度には、学級情報登録・検索データベースを構築した。本データベースは、学級間国際交流をスタートする際に交流パートナーを見つけられない教師-これは特別のコネクションを持たない学級では一般的な反応であるが-を支援するとともに、双方の教師が交流にかける思いや交流目的などをお互いに交流しておくことを目的とした。平成11年度、12年度には、このデータベースを活用した授業と調査を高知と西宮の小学校で実施した。交流相手は米国ワシントン州とハワイ州の小学校であった。第1の調査は、子どもたちの感じている交流意欲についてであり、第2は、教師が学級間国際交流を開始する際の問題点、第3に、学級間国際交流を継続的に実施している教師に対するインタビュー調査の分析である。これらの調査の結果、次のようなことが明らかになった。○子どもたちは学級間国際交流に意欲づけられること。社会的スキルが影響していること。○教師の多くは自学級での学級間国際交流の実施に意欲を持っていること。○交流の開始にあたって教師は、パソコンや語学など自分自身のスキルに不安を感じていること。○教師の交流不安の大きな要素として、大枠のカリキュラムが提示されていないことが大きい。教師にとって、学級間国際交流に関して自由に改変できるカリキュラム(定食カリキュラム)が豊富に準備されていないことが大きな要因となっていることがわかった。このカリキュラムをもとに自分なりの授業をデザインできる「アラカルト」が大切であることが明らかになった。インターネットを活用した学級間の異文化交流は、交流過程で発生する種々の問題を支援する仕組みが整っていないため、コミュニケーションそのものが中断してしまう場合が多い。このような交流を阻害する要因の一つに、「相手学級に対する交流目的等の理解不足」をあげることができる。本研究では、交流過程でこの種の問題が発生することを未然に防止するために、学級が交流を始めるにあたり必要な情報を整理した。また、それらの情報を網羅する学級情報紹介のためのWEBサイトを立ち上げた。さらに、これらの情報をデータベースで管理し、海外の学級から検索できる仕組みについても開発した。交流を始めるために必要な情報とは、(1)自分の学級や学校に関する情報(2)相手学級についての希望(3)交流の目的(4)交流の方法や期間などに分類することができる。米国最大のの交流支援サイトであるSt.Olaf大学が運営するIECCの自由記述を分析した結果、自分の学級の紹介と同様に、交流の目的や、交流の方法にに関する記述が多く見られることがわかった。これらの基礎的な調査に基づいて学級紹介フォームのデザインを行った。学級紹介フォームの基本的なコンセプトは(1)交流目的などの内容をはじめ必要な情報を網羅すること(2)交流情報の登録に必要な英語での表現をソフトで支援すること(3)学級や子どもたちの写真の登録機能を持たせること、の3点である。情報を登録しようとする学級担任のコンピュータ操作や英語を支援する工夫をしている。このコンセプトに基づきPerlによって学級情報登録システムの開発を行った。本サイトの名称を「CCS(ClassRoom in Cyber Space-Tcachers Contact-)」とした。URLは次のとおりである。本研究では、国際交流を希望する学級情報を登録・提供できるWebサイトを構築している。このサイト(CCS-"ClassRoom in Cyber Spase")を活用して、いくつかの学級(小学校)でインターネットを使った国際交流の実践を行った。これらの実践を通じて、学習者、教師の意識を調査し、学級間国際交流に関する支援や学級情報登録・提供システムにとって必要な情報を検討した。また、国際交流の経験が豊富な教師との座談会を行い、真に必要な支援のあり方について調査した。

特定の情報を持たない一般の小学校にとって、学級間国際交流を円滑に進めるためには、(1)交流相手校の選択(2)言語の支援(3)交流目的の共通理解(4)文化的背景や教育制度に対する理解(5)信頼感・親近感の醸成(6)技術的課題の解決、などが特に重要であるという仮説に基づき研究を進めた。その結果、教師は国際交流に対する意欲は非常に強いが、自分のスキルに問題点を感じ、それが阻害要因となっていることがわかった。一方、経験豊かな教師からの情報を分析した結果、お互いの文化的背景の理解や、共同学習の枠組みの整備などが重要であることがわかった。ここに得られた知見に基づいてCCS上で提供できる情報を整理し、新たなデータベースを構築する計画である。本研究では、平成10年度に学級情報登録・検索データベースの構築を行い、11年度ではそれらを活用した授業を実施した。本年度は、総合的な観点から学級間国際交流実施に関する調査研究を行い、実施上の問題点を明らかにするとともに、方向性を得ることができた。学級間国際交流を支援するために、教師や学習者にとって何が交流を促進したり阻害したりしているのかについて知ることは重要である。そのため、教師や児童に対して質問紙による調査を行い、分析し解釈を行った。分析には共分散構造分析の手法を用いた。その結果、多くの教師は、学級間国際交流に興味を持っており、自らも実施したいと考えている一方で、交流を開始するには不安も感じていることがわかった。不安の原因として、インターネットやパソコンの技能や語学などのスキルもさることながら、学習の枠組みが示されていないことも重要である。一方、児童は交流に強い関心を示していた。その要因としては、インターネットやパソコンなどに対する興味によることもあるが、交流そのものが関心の対象になっていること、また、対人関係にとって重要な社会的なスキルも交流の促進に関連があることが明らかになった。教師の不安要因の内容を探るためにインタビュー調査を行った。その結果、学習の枠組みに関する不安の原因は、学級間国際交流に関して、自由に改変できるカリキュラム(定食カリキュラム)が豊富に準備されていないことが大きな要因となっていることがわかった。このカリキュラムをもとに自分なりの授業をデザインできる「アラカルト」が大切であり、実践者たちもそれを望んでいることが明らかになった。
分子配向場におけるポリペプチド二次構造の光制御

光受容残基と長鎖アルキル基の両者を含有するポリペプチドを合成し、光による二次構造変動について検討した。n-オクタデシルーL-アスパルテ-トとP-フェニルアゾベンジルーL-アスパルテ-トとの共重合体のうち、溶液中で最大の光誘起二次構造変化を示したアゾベンゼン89%のポリマ-について、フィルム状態での光応答挙動を25°Cで検討した。可塑剤無添加のフィルムでは、光異性化は進行するが光による二次構造の変化は困難で会った。ポリマ-と可塑剤の重量比が1:0、1:2、1:12、1:60のフィルムを作製し、光による二次構造変化を検討したところ、220nm近傍の円偏光二色性スペクトルは、1:0、1:2、1:12のフィルムについては光照射による変化は微小であったが、1:60のフィルムについては左巻ヘリックスのピ-ク強度が約20%減少した。かくして、環境を柔らかくすれば、二次構造変動が可能であることが示された。新しい膜類似光応答ポリペプチドとして、アゾベンゼンが長いアルキル鎖をもつ共重合体を合成した。ポリーγ-メチ-ル-L-グルタメ-トと(p-ドデシロキシ)フェニルアゾベンジルアルコ-ルを用い、エステル交換反応によりアゾベンゼン含量19、26、46%の共重合体が得られている。アゾベンゼン含量19、46%の共重合体について二次構造の温度依存性を検討したところ、いずれの共重合体も、20°Cでは右巻α-ヘリックスの円偏光二色性のパタ-ンを示すがその強度は昇温により減少した。特に、アゾベンゼン含量46%のポリマ-では、60°C以上で顕著な不安定化が観察された。興味深いことに、20、40、80°Cで余り光の効果が見られないのに、60°Cでは光照射により二色性強度が32%も減少した。このポリマ-は、60近傍で、安定-不安定のバランスが微妙になっており、側鎖の構造変化によって大きな二次構造変化が起こったものと推測される。
胃ペースメーカーナビゲーションシステムの開発に関する臨床的研究

【研究の背景と目的】胃電図で測定される2.53.5cpmの波形は、electrical control activity(ECA)と呼ばれ胃ペースメーカーから発生する電気活動と考えられてきた。その胃ペースメーカーは、胃上部大彎側に存在しカハール神経細胞からなるとされてきたが、その局在を実際に同定した報告はない。しかし、術中に胃電図をリアルタイムに測定し周波数解析できれば、ペースメーカーの局在を術中検索し、癌の手術でも腫瘍との位置関係によっては可及的に温存することで、胃切除後残胃機能温存につながると考え、胃ペースメーカーの局在を同定するナビゲーションシステムを開発することを目的にした。【方法】1)「術中胃電図検査」は、学内倫理委員会に申請し承認を得た。2)一方「術中胃電図測定システム」は、文献から得られた胃壁で直接誘導された波形を模擬波形として設計し、数種類の電極ユニット、リアルタイムに局在診断するためのプログラムも含め本学工学資源学部電気電子工学科の協力で作製を進めた。3)システムの完成を受け、胃切除術予定患者を対象に術中胃電図検査のインフォームドコンセントを得て同意書を作製した。術前に既存の経皮的胃電図測定システムで胃電図を測定し胃ペースメーカーから発生すると考えられる3cpmの波型が出現していることを確認しておいた。4)開腹に際し胃切除前に、電極ユニットを胃に密着させ電位変化を測定した。データは、データレコーダーに記録しFFT解析すると伴に、パーソナルコンピュータに転送し局在診断をリアルタイムに行えるプログラムで解析した。【結果】開腹手術中に胃壁に電極ユニットを密着させることで、胃ペースメーカーから発生しているECAを同定し、その伝播方向を探査できる胃ペースメーカー測定システムを作製した。同システムを複数個所で測定することで、ペースメーカーの局在を同定可能である。平成15年度研究実績1)術中胃電図測定のための機器と解析ソフトウェアの開発現在、胃pacemakerの位置を同定する機器は秋田大学工学資源学部と共同開発中である。すでに生体への安全性を考慮したアイソレーションアンプとデジタルフィルターからなる測定装置が完成し、体表電極からの胃電図測定が可能である。途中、開発に関連した研究協力者の都合により、一時開発が中断したが、本年に入り術中に胃壁の電位を測定する滅菌可能な電極ユニット(当初の計画では平滑筋筋電図用電極をtriangleとsquareにフレームに配置し、両者の間で性能を比較する予定であったが、解析ソフトのアルゴリズムとの関係で理論的にはtriangleが最適であることが判明した。)の試作品が完成している。さらに電極ユニットの複数の電極から得た電気信号から信号源の位置を特定する解析ソフトも完成し、術中の測定が可能になった。システム上、当初の研究計画との相違点は、マルチチャンネルデータレコーダー(オムニエースII RA-1200)内のFFT機能では3cpm(0.05Hz)の胃電図波形を処理する精度が低いことが判明した。そこで、FFT解析だけはdataをパソコンに転送し別の解析ソフトで行うことにした。2)倫理委員会への申請測定システムの完成をうけて、開腹胃切除術予定患者を対象にした胃ペースメーカー同定に関する臨床試験を学内倫理委員会に申請した。1)胃ペースメーカーは、胃上部大彎側に存在しカハール神経細胞からなるとされてきたが、その局在を同定した報告はない。

しかし、術中に胃電図をリアルタイムに測定し周波数解析できれば、ペースメーカーの局在を術中検索し、癌の手術でも腫瘍との位置関係により可及的に温存でき、胃切除後残胃機能温存につながると考え研究を開始した。2)「術中胃電図検査」は、学内倫理委員会に申請し承認が得られた。一方「術中胃電図測定システム」は、文献から得た胃壁で直接誘導された波形を模擬波形として設計し、数種類の電極ユニット、リアルタイムに局在診断するためのプログラムも含め本学工学資源学部の協力で作製した。3)これを受け、胃全摘術以外の胃切除術予定患者を対象に術中胃電図検査のインフォームドコンセントを得、同意書を作製した。術前に経皮的胃電図測定システムで胃電図を測定し胃ペースメーカーから発生すると考えられる3cpmの波型が出現することを確認しておいた。開腹に際し胃切除前に、電極ユニットを胃に密着させ電位変化を測定した。データは、データレコーダーに記録すると伴に、パソコンに転送しFFT解析と局在診断をリアルタイムに行えるようにした。4)このシステムで術中測定を開始したが、基線の揺れが予想以上に著しく、当初、安定した測定ができなかった。そこである期間、測定を中止し、設計回路の見直しと改造による機器の再検討を行った。その結果、基線の揺れは、測定電位の増幅率が高いため生体の定常電位の変動に伴う影響が大きく反映されたものと推定された。そこで、電位安定化回路を追加作製したところ改善され、電位変化が測定できるようになった。しかし、現在のプログラムでは、局在を特定できるまでに至っておらず、その原因として測定できる電位変化が少なくプログラム上必要な特定の波形が識別できないためと推定された。5)将来的展望として、電極ユニットの高感度化、測定電位が微弱でも信号源を特定できるようなプログラム改編が必要と考えられる。
視覚によらない象徴的空間構成の手法とその空間で生起する心理作用

本研究は視覚を媒介として構成される象徴的世界ではなく味覚、聴覚、嗅覚、皮膚感覚を媒介として構成される象徴的世界の創出を考え、このような媒介で構成される象徴的世界と視覚を媒介として構成される象徴的世界とで、創出する心理作用がどのように異なり、又それ以後の心理作用の創出とどのように関連するのかを解明することを目的としそのための基礎的な資料の蓄積と収集を企るものである。心理作用創出の出発点に香りを用いた場合の心惹き、前体験の消去が視覚による心惹き、前体験の消去とどのように異なるかを調査票による心理調査と脳波計による脳波の測定を行うための準備を行った.その比較を行い、又それ以後の心理作用創出についても調査票による予備調査を行なったが現在解析中であり本調査にむけての分析考察を行なっている.味覚についてその心理作用創出の手法をフランス料理を例にとって考察する。コース料理の構成は、日本料理とよく似ており、基本的には季節のものをメインに持ってきて構成する。オードブルから始まるがそれが冷製(常温)のものであるのは、白ワインに合う料理ということである。白ワインから始まるという決まりはなく、軽い料理から始まり、メインは重い料理である。フランス料理はあくまでワインとの組み合わせで食する料理である。それ故にソースを同じワインをいれたものにすることで、ワインと料理とを協調させる。料理のコースもワインにより素材を決めることもあるほどワインに重点を置いている。フランスでは冬でも日本より室温が高い、夏冬での冷製、温製の変化はあまりない。次にス-プが出てくるが、これは日本におけるお澄ましとは違い、一つの料理としてとらえられている。メイン料理は二つある。温かい料理が主であり、冷たい料理はほとんどない。フランス料理は、ソースの味が決め手である。したがって、ソースの味を左右する香辛料は重要な要素の一つである。メインの素材は、食卓や門に飾って、招いた人に対してこれからの料理に対する期待感を抱かせる。メインとメインの間には、口直しとしてソルベや季節の果物などを食するが、それらは味に強い自己主張のあるものではなく、前の料理の味を消し去り、次のメインの料理の味を新鮮に味わうことができるためのものである。心理作用創出の出発点に香りを用いた場合の心惹き、前体験の消去が視覚による心惹き、前体験の消去とどのように異なるかを調査票による心理調査と脳波計による脳波の測定を行うための準備を行った.その比較を行い、又それ以後の心理作用創出についても調査票による予備調査を行なったが現在解析中であり本調査にむけての分析考察を行なっている.
下垂体前葉細胞におけるホルモン分泌応答機構

下垂体前葉ホルモンの分泌にはcAMP、IP3、c-kinase、Ca^<2+>等の細胞内セカンドメッセンジャーが重要な役割を果たしている。これらのセカンドメッセンジャーの中でも細胞内Ca^<2+>が前葉細胞からのホルモン分泌に密接に関わっていることは良く知られた事実である。特に持続的なホルモン分泌には細胞外からのCa^<2+>インフラックスが重要であるが、このインフラックスの調節には活動電位の発射頻度と電位依存性Ca^<2+>チャネル電流の大きさの2つが関与している。その例として、これまでに明かにしてきたソマトスタチン(SRIF)の作用があげられる。SRIFはヒトGH産生下垂体腫瘍細胞において、K^+チャネルを開口させて細胞膜を過分極する。この過分極の際に活動電位の発生が抑制される。また電位依存性Ca^<2+>チャネルを直接的に抑制する。これらのSRIFの作用はGi蛋白の活性化によってひき起こされている。本年度はGH産生細胞のアゴニストである成長ホルモン刺激ホルモン(GHRH)をとりあげ、電気生理学的手法を用いてイオンチャネルに対する影響を検索した。電流固定法下でGHRHは細胞膜を脱分極させ、活動電位の発射頻度が増加した。またfura2で測定した細胞内Ca^<2+>濃度も増加した。この細胞内Ca^<2+>濃度の増加は脱分極に伴うCa^<2+>依存性活動電位の頻度増加によると考えられた。この脱分極のイオン機構を検討するために電位固定法下で膜電流の測定を行った。その結果GHRHは膜コンダクタンスの増加をおこすことが明かとなった。GHRHによって増加する電流の反転電位は-20から0mVの間にあり、Na^+、K^+、Li^+全てに透過性がありTMA^+には透過性が見られなかった。これらの結果からGHRHは非選択性カチオンチャネルを活性化して膜の脱分極を起こすと結論された。