hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
被災地域に暮らす高齢者の健康支援のためのコミュニティ・エンパワメントモデルの開発

【目的】大規模な地震災害により被災した地域住民の健康を、自助と共助の観点からプロモートする“コミュニティ・エンパワメント"の概念構造を明らかにすることである。これまでの経験を抽出し、看護実践に活用できる知識体系の可視化に取り組んだ。研究方法は文献データベースおよびフィールドワークから得られた要素を、研究命題の3つの要素に基づき看護活動を抽出しコード化、カテゴリ化を行い質的帰納的に分析した。【結果】270コード、47サブカテゴリ、12カテゴリに整理された。本研究は,自然災害における被災地域で生活する高齢者の健康支援に関して,地域住民が問題意識と関心をもち,コミュニティとして介入する健康支援体制のしくみづくりをねらいとする。研究目的は、健康支援に際し保健師,看護師が被災地域の住民にどうのように関わり「コミュニティ・エンパワメント」を行ったか,その介入要素の構造化を行い,エンパワメントするしくみを解明することである。27年度の目的においては、1被災地域の健康支援の実態把握、2調査対象者となる保健師、看護師の検討とリクルート活動、3研究命題の主要概念の抽出とインタビューガイドの再構築である。1被災地地域の健康支援の実態の把握については、文献検討および被災地域の高齢者への健康支援活動の実態に関する情報収集を行い、調査対象地域について検討を行った。i)被災状況の当時の状況と現在、ii)被災地域に暮らす高齢者の健康介入の実際、iii)保健師、看護師の健康介入支援の内容に関する情報を統合し調査対象地域を選定した。その結果、岩手県では,釜石地区,陸前高田地区,宮城県では,石巻地区,名取地区と福島県南相馬地区においてデータ収集を行うこととした。2調査対象となる保健師・活動の検討とリクルート活動については、対象者選定に時間を要しており調整中である。3研究命題の主要概念の抽出とインタビューガイドの再構築については、エンパワメントの主要の概念とコミュニティ活動の要素の統合を図り、3つの主要概念とその構成要素による構造化を行った。それに基づきインタビューガイドを整理した。この中で、2の調査対象者の検討のみ遅れている。被災地域の健康支援活動内容に基づき、調査対象となる地域選定に時間を要したことが原因である。現在、調査地域の特定を終えており、その地域で活動する保健師・看護師への調整を行い、順次データ収集を行うこととする。本研究の目的は、大規模な地震災害により被災した地域住民の健康を、自助と共助の観点からプロモートする“コミュニティ・エンパワメント"のモデル構築である。先行研究からコミュニティ・エンパワメントを地域住民の相互作用に基づくプロセスとしてとらえた。このプロセスに関与する3つの要素を設定した。その要素とは、i)コミュニティ・エンパワメントを支援する看護者の介入要素、ii)コミュニティの環境要素、iii)地域住民の要素であった。本年度は、宮城県、岩手県、福島県の被災後のコミュニティにおける健康管理、健康支援活動についてフィールドワークを行い、活動記録とあわせて質的帰納的分析を行った。分析の結果、270コード、47サブカテゴリ、11カテゴリに整理された。そのうち、コア要素は6つのコアカテゴリとしてマッピングされた。そのコアカテゴリとは、【地域の風土・規範】【時間の共有】【情報の共有】であり、コミュニティをエンパワメントする基軸となっていた。災害サイクルの過程で、時間経過とともに拡張することが期待される要素は、【住民どうしの信頼形成】【地域への愛着】【生活の安全と安心】であった。コミュニティ・エンパワメントモデルは、住民どうしの活動が組織化されていく要素と形成過程についてプロセスモデルとして説明された。28年度は、データ収集・分析に基づきモデル構築を行う。東日本大震災において甚大な被害を受けた地区の健康支援の介入の要素を抽出し体系化を図る。対象地域は、27年度に得た情報をもとに再検討し、岩手県では,釜石地区,陸前高田地区,宮城県では,石巻地区,名取地区と福島県南相馬地区を対象地域とする。調査対象者数については、各地区3名5名とし、6月8月の実施を予定している。データの一次分析を行い、調査対象者への内容確認および追加調査を行うこととする。当初の予定どおり、本年度はコミュニティ・エンパワメント要因の抽出によりモデル構築までを行う。28年度が最終年度であるため、記入しない。地域看護学28年度が最終年度であるため、記入しない。
甲状腺ホルモンの動脈硬化進展抑制機構の解明

甲状腺から分泌されるホルモンであるT4はヨードサイロニン脱ヨード酵素により活性型のT3に変換されるが、2型ヨードサイロニン脱ヨード酵素(D2)活性が選択的に低下する症例は報告されていない。本研究において、D2の一塩基多型とTSH受容体の遺伝子変異が合併することにより、D2活性が著明に低下する症例をはじめて報告した。トリグリセライド(TG)を多く含有するリポ蛋白(TG-richリポ蛋白)はリポ蛋白リパーゼ(LPL)によってレムナントに代謝され、レムナントは肝性トリグリセライドリパーゼ(HTGL)によって代謝される。我々は、潜在性甲状腺機能低下症例において、レムナント様リポ蛋白-コレステロール(RLP-C)が高値を示し、甲状腺ホルモンの補充によってヘパリン投与後のHTGL活性の上昇とこれによるRLP-Cの低下を来すことを報告した。これまで、LPLとHTGLの測定は、ヘパリン投与後に採取された検体を用いて測定されており、多数例の検討は困難であったが、本研究においてヘパリン投与を行わずにLPLとHTGLを測定することが可能な方法を開発した。LPLは筋細胞や脂肪細胞で産生され、毛細血管内皮細胞に発現するアンカー蛋白であるGPIHBP1に結合することによって、血管内腔に移送されてTG-richリポ蛋白を代謝する。我々は、GPIHBP1の血中濃度測定法を開発する過程で、GPIHBP1に対する自己抗体によって著明な高TG血症を来す自己免疫性高TG血症の病態を解明し、N Engl J Medに報告した。今回、従来ダイマーとして機能を発揮すると考えられていたLPLがモノマーとして活性を発揮することを発見し、Proc Natl Acad Sciに報告した。また、骨格筋量の多いアスリートで血中LPLとGPIHBP1の濃度が高値を示し、FT3濃度はHTGL濃度と相関することを見出して報告した。GPIHBP1の血中濃度測定法を開発する過程で、GPIHBP1に対する自己抗体によって著明な高TG血症を来す自己免疫性高TG血症の病態を解明し、N Engl J Medに報告した。さらに、従来ダイマーとして機能を発揮すると考えられていたLPLがモノマーとして活性を発揮することを発見し、Proc Natl Acad Sciに報告した。また、骨格筋量の多いアスリートで血中LPLとGPIHBP1の濃度が高値を示し、FT3濃度はHTGL濃度と相関することを見出した。甲状腺ホルモンを活性化する2型ヨードサイロニン脱ヨード酵素(D2)の一塩基多型によりD2活性が低下する例を発見したことから、同様な症例の存在の可能性について検討する。個体レベルでのD2の役割を検討する目的で、我々の研究室で所有するD2ノックアウトマウスを用いて脂質代謝の制御機構について検討する。さらに、甲状腺ホルモンと動脈硬化進展の関連について多数の症例を対象に検討を進める。我々の開発したLPL、GPIHBP1ならびにその自己抗体の測定法を用いて、新たに発見したGPIHBP1に対する自己抗体による高TG血症の症例を集積し、その病態と病因について検討を進める。甲状腺ホルモンの動脈硬化進展抑制機構の解明を行うことを目的に研究を実施した。潜在性甲状腺機能低下を含む甲状腺機能低下症により脂質異常症を来たし、動脈硬化が進展することが知られている。トリグリセライド(TG)を多く含有するリポ蛋白(TG-richリポ蛋白)であるカイロミクロンはリポ蛋白リパーゼ(LPL)によってレムナントに代謝され、レムナントは肝性トリグリセライドリパーゼ(HTGL)によって代謝される。我々は、潜在性甲状腺機能低下症例において、レムナント様リポ蛋白-コレステロール(RLP-C)が高値を示し、甲状腺ホルモン(T4)の補充によってヘパリン投与後のHTGL活性の上昇とこれによるRLP-Cの低下を来すことを報告した。これまで、LPLとHTGLの測定は、ヘパリン投与後に採取された検体を用いて測定されており、甲状腺ホルモンによる脂質代謝の制御機構を解明する目的での多数例の検討は困難であった。今回、ヘパリン投与を行わずにLPLとHTGLを測定することが可能な方法を開発し、動脈硬化におけるそれらの意義を明らかにした。LPLは脂肪細胞や筋細胞で産生され、毛細血管内皮細胞に発現するアンカー蛋白であるGPIHBP1に結合することによって、血管内腔に移送されてTG-richリポ蛋白を代謝する。すなわち、GPIHBP1はLPLの活性発現に重要な役割を果たしている。我々は、GPIHBP1に着目し、その血中濃度測定法を開発した。その過程で、GPIHBP1に対する自己抗体によって著明な高TG血症を来す自己免疫性高TG血症の病態を解明し、The New England Journal of Medicine誌に報告した。今後、我々が開発したLPL、HTGL、GPIHBP1およびその自己抗体の測定法を用いて、甲状腺機能の影響を検討する。今回、ヘパリン投与を行わずにLPLとHTGLを測定可能な方法を開発し、動脈硬化におけるそれらの意義を明らかにした。

LPLは脂肪細胞や筋細胞で産生され、毛細血管内皮細胞に発現するアンカー蛋白であるGPIHBP1に結合することによって、血管内腔に移送されてTG-richリポ蛋白を代謝する。すなわち、GPIHBP1はLPLの活性発現に重要な役割を果たしている。我々は、GPIHBP1に着目し、その血中濃度測定法を開発した。その過程で、GPIHBP1に対する自己抗体によって著明な高TG血症を来す自己免疫性高TG血症の病態を解明し、The New England Journal of Medicine誌に報告した。甲状腺から分泌されるホルモンであるT4はヨードサイロニン脱ヨード酵素により活性型のT3に変換されるが、2型ヨードサイロニン脱ヨード酵素(D2)活性が選択的に低下する症例は報告されていない。本研究において、D2の一塩基多型とTSH受容体の遺伝子変異が合併することにより、D2活性が著明に低下する症例をはじめて報告した。トリグリセライド(TG)を多く含有するリポ蛋白(TG-richリポ蛋白)はリポ蛋白リパーゼ(LPL)によってレムナントに代謝され、レムナントは肝性トリグリセライドリパーゼ(HTGL)によって代謝される。我々は、潜在性甲状腺機能低下症例において、レムナント様リポ蛋白-コレステロール(RLP-C)が高値を示し、甲状腺ホルモンの補充によってヘパリン投与後のHTGL活性の上昇とこれによるRLP-Cの低下を来すことを報告した。これまで、LPLとHTGLの測定は、ヘパリン投与後に採取された検体を用いて測定されており、多数例の検討は困難であったが、本研究においてヘパリン投与を行わずにLPLとHTGLを測定することが可能な方法を開発した。LPLは筋細胞や脂肪細胞で産生され、毛細血管内皮細胞に発現するアンカー蛋白であるGPIHBP1に結合することによって、血管内腔に移送されてTG-richリポ蛋白を代謝する。我々は、GPIHBP1の血中濃度測定法を開発する過程で、GPIHBP1に対する自己抗体によって著明な高TG血症を来す自己免疫性高TG血症の病態を解明し、N Engl J Medに報告した。今回、従来ダイマーとして機能を発揮すると考えられていたLPLがモノマーとして活性を発揮することを発見し、Proc Natl Acad Sciに報告した。また、骨格筋量の多いアスリートで血中LPLとGPIHBP1の濃度が高値を示し、FT3濃度はHTGL濃度と相関することを見出して報告した。GPIHBP1の血中濃度測定法を開発する過程で、GPIHBP1に対する自己抗体によって著明な高TG血症を来す自己免疫性高TG血症の病態を解明し、N Engl J Medに報告した。さらに、従来ダイマーとして機能を発揮すると考えられていたLPLがモノマーとして活性を発揮することを発見し、Proc Natl Acad Sciに報告した。また、骨格筋量の多いアスリートで血中LPLとGPIHBP1の濃度が高値を示し、FT3濃度はHTGL濃度と相関することを見出した。
梗塞後不全心のβ受容体シグナリングに対するアンジオテンシン受容体拮抗薬の効果

代償性肥大から心不全に移行する際にβアドレナリン受容体(βAR)の反応性低下が見られ,心不全の病態形成に重要な役割を果していることが知られる。この機序の一つとしてβARとG蛋白の結合解離(uncoupling)が考えられる。不全心においてはβARキナーゼ1(βARK-1)の活性化によりβARのuncouplingが起こる。in vitroの実験でアンジオテンシンII(AII)受容体の下流にあるプロテインキナーゼC(PKC)がβARK-1を活性化させることが報告され,in vivoにおいてもAIIとβARの両シグナル伝達間に細胞内クロストークの存在することが想定される。本研究ではAII受容体拮抗薬(ARB)の投与によりこのクロストークを介してβARのシグナル伝達を変化させ,心筋梗塞(MI)後の左室(LV)機能が改善される可能性について検討した。左冠動脈結紮によるMIラットモデルを作成し,梗塞4週後に10mg/kg/日のカンデサルタンを2週間投与した投与群と非投与群に無作為に割り付けた。Sham手術群を対照群とした。投与群と非投与群ともに同程度にLV径増大,LV機能低下を認めた。イソプロテレノール(ISO)で刺激した際のLV max dP/dtの上昇は非投与群では低下したが,投与群では回復が見られた。非投与群の非梗塞部心筋において高親和性βARの比率およびISO刺激下のcAMP産生能は,対照群と比較していずれも低下した。この結果は非梗塞部心筋においてβARのuncouplingが生じていることを示すが,投与群では軽減された。イムノブロット法によると,非投与群の膜分画におけるβARK-1の発現亢進はARBによって抑制された。また,膜分画におけるPKC-εの蛋白発現は投与群の方が非投与群よりも低かった。他のβARKおよびPKCアイソフォームの発現については3群間で差がなかった。以上の結果からARBの投与によりMI後の不全心筋におけるβARのシグナル伝達が改善され,この現象の原因としてβARK-1とPKC-εを介したAIIとβAR間のシグナル伝達のクロストークが関与した可能性があると考えられた。
思春期のうつ病の早期発見と心理教育

思春期のうつ病と統合失調症を対象とした疾患の認知と希求行動に関する調査を9484名の高校生(15歳から18歳)を対象にアンケート調査した。疾患の認知には症例のビグネットを作成し回答させた。疾患を同定せずにメンタルヘルスの理解力を高めることは友人からの希求行動を増加させる可能性がある。思春期の精神疾患についての希求行動を増加させるためにはメンタルヘルスを認知させることが重要である研究実施施設の校長と研究計画について再確認を行った。また全教職員を対象にした思春期の精神疾患の説明と早期介入の重要性について講義を行った。また講義とは別に実施に関する具体的な手順と不安に感じている案件について協議した。GHQ-12を含んだ抑うつ状態の判定のみでなく、精神病体験と不安障害に関するアンケートを作成した。アンケートの追加を作成したのは抑うつ状態を引き起こす病態に高校生では統合失調症や不安障害が少なからず関与しており、スクリーニングの段階で評価をしておくことが臨床的にも学術的にも有益であると判断したためである。うつ状態に対する家族心理教育についても別途説明会を行い、SSRIなどの成人では一般的に使用している抗うつ薬が高校生では有効性の証明が出来ていないこと、自傷行為のリスクを上げる可能性があることを説明した。また、薬物療法ではなく家族への心理教育が抑うつ状態をもった生徒の状態の悪化を防止あるいは改善をもたらす可能性について説明した。学校全体のサポートを行う必要性があるとの指摘を受けて、対象生徒が医療機関に通院が迅速に行えるように特殊外来を構築した。共同研究者とはクラス単位で心理教育介入群と非介入群(ストレスコーピングのみ)を分類するなどよりブラインドを保った研究計画を提案された。これを受けて、抑うつ状態の重症度による層別の割り振りとクラスごとの割り振りが可能になるように実施計画をブラッシュアップした。すべての教職員と研究代表者がメールで個別に相談を受けれるように研究体制を整えた。学校現場で心理教育を行うために2回のメンタルヘルス研修を教職員を対象に実施した。また、前年度に引き続き生徒を匿名化したメールにより、メンタルヘルスの個別相談を行った。本年度は24件の相談案件があり、すべてに24時間以内に対応した。学術的な活動成果物の内容としては1)軽度の内容も含めていじめ問題と希求援助行動を自殺念慮を有する集団において調査をし、国際誌に掲載した。いじめ問題を有する生徒の多くは希求を考えていたが、自殺念慮が重症になってくると希求行動がとれなくなるという結果となった。2)10%程度の高校生は精神病様体験を有しており、メンタルヘルスの低下を来している者が多く存在する。このような精神病様体験を有する生徒を調査したところ、自殺念慮に関する希求援助行動が少ないという結果が得られ国際誌に掲載した。3)女子の生徒における過度のダイエットが社会問題となっている。正常体重以下の繰り返されるダイエットと暴力行為に関して有意な関連性を認めたため、国際誌に掲載した。高校生の精神疾患に関しては成人よりも変化が多様であり診断が困難である。精神症状評価のみでなくリスクファクターを調査することで早期発見ができる可能性が高まると思われる思春期、とりわけ高校生を対象としたうつ病を中心としたメンタルヘルスに関する調査研究を行った。本年度は精神疾患に関する情報や知識が乏しい場合には相談や治療などの希求行動をとりにくいことを調査し国際誌に投稿しアクセプトされた。調査期間内に教職員にメールと携帯電話による相談窓口を継続的に開放した結果、養護教諭が精神疾患に気付いた場合は家族等に説明をすることが、家族の偏見の問題もあり困難であることが分かった。また、担任が家族からうつ病の診断等で通院中であることの相談を受けた場合も服薬のサポートを具体的に行ったり、他の生徒からの偏見に対応をしたりすることが極めて難しいことが明らかになった。うつ病の家族心理教育に関しては、ドイツのフライブルク大学の研究チームとドイツでの研究を実施しており、本年度はプロトコール論文を共同で作成し、国際誌に掲載された。思春期における不調のほとんどは精神疾患であるが、広く認知されていない。また、精神科を専門とする医師においてもうつ病であるのか統合失調症などの異なる精神疾患の初期症状であるのか区別がつきにくい。家族への心理教育は本人の負担が少なく、精神疾患を有する者が思春期の場合には家族への重要な情報提供にもなる。成人の精神疾患においての心理教育は重要であり、少しずつ統合失調症からその対象疾患がうつ病になってきている。思春期の精神疾患を取り扱う場合は、家族への十分な説明が必要であり、服薬が必要な場合はほとんどの対象者の服薬順守を家族にサポートしてもらわねばならない。思春期の精神疾患についての希求行動を増加させるためにはメンタルヘルスを認知させることが重要である研究成果は公表できているが、生徒のリクルートに遅れを生じている。精神医学児童思春期社会精神医学研究成果は英文で公表をさらに行う。リクルートの遅れについては教育現場との調整を早急に行う。アンケート調査の実施が遅れているが、すでにアンケートの作成と説明会は終了している。またアンケート調査の集計に必要な守秘義務を有する事務員を雇用して研究内容について説明した。

守秘義務に関しては大学の規定に則して個人情報の漏洩を研究終了後も行わないことを宣誓している。アンケートに必要な本人が密閉可能な封筒の準備など実際の実施に必要な用品の準備も終了している。スクールカウンセラーが研究代表者の勤務先である大学病院の思春期の専任の心理士であったため、本研究の説明と今後の連携についてスムーズに行える見込みである。対象リクルートの遅れにより人件費を次年度に残余した。当初はうつ状態の生徒の抽出と家族への無作為の心理教育であったが、他の精神疾患の調査も可能であり、知られていない高校生の統合失調症あるいは前駆状態、不安障害などの精神疾患の有病率を明らかにする。また7月中にアンケート実施が可能になっており夏休み期間に介入研究が開始できる見込みである。対象リクルートを軌道に乗せ主として人件費に充足したい。次年度にアンケート調査の実施と解析作業と共同研究者との直接会議が必要なためアンケート調査の実施と入力作業人件費として1,200,000円、プリンターのインク代と印刷用紙などの費用に300,000円、東京での会議に100,000円を使用予定
肺癌における血管・リンパ管新生の三次元的考察

研究目的今回、私はヒト肺癌内の血管構造を三次元的に観察し血管内皮増殖因子受容体の発現部位について検討し、新生血管が生じるかどうか、生じるとすればどのように生じるのかを検討した。本研究では、まず血管内皮に発現している血管内皮増殖因子受容体2(VEGFR2)抗体とリンパ管内皮に発現している血管内皮増殖因子受容体3(VEGFR3)抗体を用いて厚切りパラフィン切片における新生血管や新生リンパ管を特異的に染め分け評価する方法を検討した。研究方法最初に、(1)免疫組織化学的法を用いてVEGFR2抗体とVEGFR3抗体がパラフィン切片上で新生血管や新生リンパ管が特異的に染色することが出来るかを検討した。血管新生およびリンパ管新生が確立されている大腸癌を用いて二次元的に検討し、染色条件を決定した。次に、(2)肺癌における血管新生を検索するために野口分類タイプCの肺癌手術材料およそ20例を用いて二次元的に検討し、(3)その後厚切りパラフィン切片を作成し、VEGFR2抗体を用い蛍光染色を行い、レーザー共焦点顕微鏡で観察した。研究結果(1)間接法、増感法、LSAB法(VENTANA)を行いLSAB法にて腫瘍部新生血管に陽性像を観察することができた。(2)野口分類タイプCの肺癌腫瘍線維化部の新生血管に陽性像を観察することができた。(3)VENTANAではスライドグラス上の二次元切片のみ染色可能なため三次元では用手法LSAB法を行った。既存の血管はCD34抗体間接法により陽性像を得られたがVEGFR2抗体では陽性像は観察できなった。今後の課題として繊維化した腫瘍内部まで抗体が浸透するような一次抗体反応時間、反応方法の検討を行う。
水田各部位の生物相に関する研究

田面水、浸透水、暗渠水それどれの部位から試水を採取し、その脂肪酸組成を比較したところ、採取時期に関わらず極めて類似した脂肪酸組成が得られ、主要な微生物群集がグラム陰性細菌群であることが判明した。田面水に関しては、長期肥料連用試験水田圃場を供試し、季節変動を特徴付ける微生物群集、常時存在する微生物群集、各処理区に特徴的な微生物群集の解明を目的としてPCR-DGGE法を適用し、クローニングの後、その塩基配列から、それぞれの微生物群集を推定した。化学肥料、稲ワラ、稲ワラ堆肥をそれぞれ加えた湛水ポットを準備し、培養した4種のミジンコを別個に添加し、6週間にわたって経時的に回収後、それぞれのミジンコに共生している微生物群集をPCR-RFLP法で調査した結果、共生する細菌群集は施肥の違いに関わらず、ミジンコごとに異なっていることが判明した。水稲根に生育する微生物をPCR-DGGE法から構造解析した結果、PCR-RFLP法で得られた前年の結果とよく一致し、水稲根の採取時期によって規則的に変動するとともに、高位節根から低位節根に向かっての微生物群集構造の変動も観察された。そこで、常時水稲根で観察されたDGGEバンド、季節変動に伴って変動するDGGEバンド、高位節根および低位節根に特徴的なDGGEバンドをそれぞれ切り出し、クローニングの後、塩基配列からbiotypeの系統関係を明らかにした。加えて、水田圃場に埋設した稲ワラを定期的に回収し、その脂肪酸組成を解析した結果、圃場においても稲ワラらの分解に関与する微生物群集が主にグラム陽性細菌群であることが判明した。以上の本年度の研究成果および過去2年間の研究成果をもとに、水稲生育各時期における水田土壌各部位の生物相の特徴として、それぞれの部位に特徴ある微生物群集が生育し、全体として水田生態系の微生物群集を多様にしていると、総括された。土壌動物:長期肥料連用水田圃場から10日に一度田面水を採取し、水生生物の種類と数を測定した結果、各処理区に特徴的な水生生物が存在すること、無肥料区でもっとも種類数が少ないこと、中干し後に種類数が増加することなどが明らかとなった。田面水中の微生物:長期肥料連用水田圃場から定期的に田面水を採取し、リン脂質脂肪酸含量から各処理区に生息する微生物群集を比較した結果、湛水直後の田面水中の微生物群集は処理区の相違に関わらず類似していたが、その後、無肥料区、化学肥料区、堆肥区でそれぞれ異なった微生物群集が確立されていくこと、また中干し前後で微生物群集が相違することが明らかとなった。稲ワラの分解過程:田植時に稲ワラ葉鞘と葉身を土壌中に埋設し、その後経時的に回収後、SEMで詳細に表面を観察し、稲ワラ分解の進行と分解に関与する微生物との関係を観察した結果、葉身は葉鞘に比べ速やかに分解すること、葉鞘の分解は表面及び内部から進行するのに対し、葉身の表面は小片状のエピクチクラワックスで密に覆われており、微生物の表面定着を抑制しているために分解は主に内部から進行することが判明した。水稲根圏の微生物相:水稲を作付けしたポットから経時的に水稲を採取し、節ごとに節根を採取した。節根を体系的にSEM観察し、その分解程度と微生物の発達状況から水稲根の微生物分解は4つの段階に区分されることを明らかにした。

次いで、節根に生育する微生物をPCR-RFLP法により解析し、根のagingに伴う微生物遷移を確認した。水稲生育期間中、田面水、浸透水、土壌、植物遺体を定期的に採取するとともに、水稲根を節位ごとに採取し、それぞれの部位に生育する微生物を解明するため、リン脂質脂肪酸の含量と組成、PCR-RFLPパターン、PCR-DGGEパターンを解析した。また、田面水中に生育する水生生物の種類組成の調査も行った。その結果、1)各部位にはそれぞれ異なった微生物が生育しているとともに、微生物群集は水稲生育時期とともに変化することが判明した。また、微生物群集構造は施肥の種類によっても変化することが明かとなった。2)稲ワラ上の微生物は施用初期には表皮細胞上に分散して生育するが、時間とともに一面を覆うように生育すること、葉身部の分解は内部組織から分解されるのに対し、葉鞘部の分解は表面と内部の両方からであることも明かとなった(走査型電子顕微鏡観察)。3)水稲根に生育する微生物は各採取時期とも節位の低い(古い)根から高い(新しい)根へと規則的に微生物群集構造の変化していた。4)浸透水中の微生物群集構造は、水稲の生育に伴って変化していた。また、同時に採取した田面水、作土還元層土壌と比較したところ、その群集構造は田面水と還元層土壌の中間的性質を有することが判明した。5)0.5mm以上の粗大植物遺体を篩を用いて>4、2-4、1-2、0.5-1mmに4分画し微生物群集を比較した結果、細かくなるに従って微生物群集が変動していた。5)水生生物群集の種類と数は、施肥の影響を受けるとともに、中干し前後で大きく2つの時期に区分された。以上の結果をもとに、PCR-DGGEパターンで観察された特有のバンドに対応する微生物種を解明するため、現在、その塩基配列を調査中である。田面水、浸透水、暗渠水それどれの部位から試水を採取し、その脂肪酸組成を比較したところ、採取時期に関わらず極めて類似した脂肪酸組成が得られ、主要な微生物群集がグラム陰性細菌群であることが判明した。田面水に関しては、長期肥料連用試験水田圃場を供試し、季節変動を特徴付ける微生物群集、常時存在する微生物群集、各処理区に特徴的な微生物群集の解明を目的としてPCR-DGGE法を適用し、クローニングの後、その塩基配列から、それぞれの微生物群集を推定した。化学肥料、稲ワラ、稲ワラ堆肥をそれぞれ加えた湛水ポットを準備し、培養した4種のミジンコを別個に添加し、6週間にわたって経時的に回収後、それぞれのミジンコに共生している微生物群集をPCR-RFLP法で調査した結果、共生する細菌群集は施肥の違いに関わらず、ミジンコごとに異なっていることが判明した。水稲根に生育する微生物をPCR-DGGE法から構造解析した結果、PCR-RFLP法で得られた前年の結果とよく一致し、水稲根の採取時期によって規則的に変動するとともに、高位節根から低位節根に向かっての微生物群集構造の変動も観察された。そこで、常時水稲根で観察されたDGGEバンド、季節変動に伴って変動するDGGEバンド、高位節根および低位節根に特徴的なDGGEバンド、をそれぞれ切り出し、クローニングの後、塩基配列からbiotypeの系統関係を明らかにした。加えて、水田圃場に埋設した稲ワラを定期的に回収し、その脂肪酸組成を解析した結果、圃場においても稲ワラらの分解に関与する微生物群集が主にグラム陽性細菌群であることが判明した。
摘出脳幹標本を用いた咀嚼等三叉神経運動系リズム性活動の中枢解析

米国UCLAのScott Chandler教授の研究室(H14 4月9月)と大阪大学、古郷幹彦教授の研究室(H14 9月12月)にて以下の研究を行った。前年度に引き続き三叉神経が司る顎運動リズム性活動に関係する脳幹内神経回路の内、特に三叉神経中脳路核ニューロンの膜特性とそれに関わる各種イオン電流の特性について検討を加えた。研究には生後2から12日目(P2-12)のSD系ラットより作製した脳幹スライス標本を用いて、whole-cell patch clamp recording techniqueにより、赤外線透視条件下で中脳路核ニューロンより記録を行った。三叉神経中脳路核ニューロンにおいては、生後発達に伴う内向き整流作用の増大、活動電位後再分極過程の短縮傾向、周波数依存性膜応答特性,P6以降で反復発射活動、内因性群発活動の出現がそれぞれ観察された。さらに検討を加えたところ、反復発射活動、内因性群発活動の発現にはpersistent-sodium current (I_<NaP>)、修飾にはh-current (I_h)の関与が示唆された。また生後発達における1)内向き整流作用の増大にはI_hの生後発達における電流密度の増大が関与していた他、2)再分極過程の短縮傾向にはI_<NaP>, I_h両者の電流密度の増大がその一因になっていると推察された。さらに膜の脱分極に伴って観察される高周波数特異性のresonance(50-100Hz)にはI_<NaP>が、静止膜電位あるいは過分極に伴って観察される低周波数特異性のresonance(<10Hz)にはI_hが特異的に関わっていることが明らかとなった。中脳路核ニューロンがその発火閾値下において低周波数領域のシナプス入力を選択的に増強、修飾しうるということは、in vivoにおける顎筋の活動周波数が5Hz前後であることから極めて興味深い結果と考えられた。
TRICチャネルとミツグミン56に関する研究

筋小胞体はCa2+ストア機能に特化した細胞内小器官であり、その構成タンパク質として同定したTRICチャネルとMG56の生理機能の解明を目指した本研究により、以下の代表的事例を含む成果が得られた。TRICチャネルの遺伝子変異は先天性骨形成不全症の原因であることが近年報告され、本研究により骨芽細胞の小胞体Ca2+ストア機能不良に起因する骨基質生合成の障害が発症メカニズムであることが判明した。一方、MG56欠損マウスは骨格筋小胞体の形態異常を伴い、授乳障害による致死性を示すことも判明した。アラブ系の複数家系にてヒトTRIC-B遺伝子変異が先天性骨形成不全症の原因であることが報告されたが、その発症メカニズムは不明である。TRIC-B欠損マウスは肺胞上皮細胞の小胞体Ca2+放出異常に起因する呼吸不全により、出生後数時間内に死亡。この変異マウスの主要な骨組織において組織染色によるミネラル化部位の縮小とコラーゲンマトリクスの減少、CT解析による骨密度の低下が確認され、TRIC-B欠損マウスはヒト骨形成不全症の有用なモデル動物であることが判明した。軟骨内骨化と膜性骨化での障害が観察されることから、骨芽細胞の機能不良または破骨細胞の機能亢進が主病因であると予見された。TRIC-B欠損骨芽細胞ではマトリックスタンパク質の貯留による小胞体の膨潤、Ca2+放出の減弱と小胞体Ca2+過剰負荷などが観察された。一方、破骨細胞では異常所見は観察されなかった。得られた結果からは、TRIC-B欠損により骨芽細胞での小胞体Ca2+ハンドリングが混乱し、コラーゲン生合成が障害されることが、骨形成不良のメカニズムであると結論される(論文投稿中)。1)TRICチャネルに関しては、骨解析は順調に進展したが、電気生理と心筋解析でやや遅延、2)MG56に関しては、KOマウス骨格筋の解析が順調に進展。TRICチャネルサブタイプ(TRIC-AとTRIC-B)はホモ三量体を形成して小胞体や核膜に分布し、ユニークな細胞内K+透過性チャネルである。遺伝子欠損マウスの種々の細胞系で小胞体Ca2+放出の減弱が観察されることから、TRICチャネルにはCa2+放出を促進するカウンターイオンの膜透過に寄与する生理的機能が想定されている。近年、TRIC-BチャネルをコードするTRIC-B/TMEM38B遺伝子において点変異や欠失変異を伴う骨形成不全症(osteogenesis imperfecta)の症例が報告されているが、その全身性の骨ミネラル化障害のメカニズムは不明であった。H28年度の本研究においては、骨形成不全症様異常を示すTric-b欠損マウスに注目した研究を中心に遂行した。TRIC-B欠損骨芽細胞では小胞体ストアにて過剰Ca2+貯留が観察され、その異常により小胞体内腔におけるコラーゲン生合成のプロセッシングが障害され、プロコラーゲンが小胞中に過剰蓄積される結果、骨基質コラーゲン量が低下することを明らかにした。尚、本成果については論文発表に至った。TRIC-B遺伝子変異に起因するヒト骨形成不全症においても、重篤なTRIC-Bチャネルの機能障害が推定されており、マウスモデル系での観察と同様の病態メカニズムが想定される。一方、TRIC-B変異による骨形成不全症患者に対してビスホスホネート投薬により骨密度の改善効果が観察されたとの報告があるが、極めて限定される症例における定量的解析データの取得は困難であるものと予想される。この希少疾患の治療のみならず、骨密度改善薬の開発に向けて、TRIC-B欠損マウスは有用なモデル実験系を提供することも期待される。近年の論文発表では様々な査読コメントが寄せられて、その対応のために若干の研究遅延が発生した。しかしながら、ほぼ順調に本研究は進展しているものと自己判断する。骨格筋では両サブタイプが共発現しているが、TRIC-Aが圧倒的に高発現している。TRIC-A欠損マウス骨格筋ではリアノジン受容体によるCa2+放出が抑制されることが以前観察されたことに基づき、その単一チャネル電気生理学測定実験を遂行した。この変異マウスより調製した小胞体より再構成されるリアノジン受容体は、通常溶液中での開口確率が顕著に低下していることが判明した。リアノジン受容体はCa2+により活性化、Mg2+による不活性化の活性調節が知られているが、TRIC-A欠損による開口確率の低下はCa2+による活性化効果の抑制ではなく、Mg2+による阻害効果の亢進に起因するものと考察されるデータが得られた。一方、リアノジン受容体はcAMP依存性キナーゼのリン酸化により活性化するが、野生型とTRIC-A欠損マウスより調製された小胞体でのリアノジン受容体のリン酸化に変動は確認されなかった。さらに、チャネル計測中のcAMP依存性キナーゼのリン酸化処理は、TRIC-A欠損によるMg2+の阻害亢進を解除する作用を示さなかった。これら電気生理学的解析にて判明したTRIC-A欠損によるリアノジン受容体の不活性化は、TRICチャネル分子によるK+透過性の減弱では説明不可能である。

従って、TRIC-Aの直接または介在分子を介した間接的な相互作用によるリアノジン受容体を活性化する新規な機構の存在を示唆するものであった。筋小胞体はCa2+ストア機能に特化した細胞内小器官であり、その構成タンパク質として同定したTRICチャネルとMG56の生理機能の解明を目指した本研究により、以下の代表的事例を含む成果が得られた。TRICチャネルの遺伝子変異は先天性骨形成不全症の原因であることが近年報告され、本研究により骨芽細胞の小胞体Ca2+ストア機能不良に起因する骨基質生合成の障害が発症メカニズムであることが判明した。一方、MG56欠損マウスは骨格筋小胞体の形態異常を伴い、授乳障害による致死性を示すことも判明した。2016年度の研究では、TRIC欠損マウス由来の軟骨細胞と心筋細胞の解析、MG56過剰発現マウスの作製と解析を中心課題とする。上述のTRIC-B欠損マウスが示す骨形成不全症様症状の組織学的観察にて、骨芽細胞のむならず、軟骨細胞においても微細形態異常が観察された。ヒト骨形成不全症患者においては間接障害も報告されており、その関連も興味深い。本研究の最終年度となるH29年度には、TRIC-B欠損軟骨細胞に注視する。29年度が最終年度であるため、記入しない。生化学29年度が最終年度であるため、記入しない。
蒸気養生不要の高強度コンクリートの開発および強度発現・耐久性メカニズムの解明

国内の全重油使用料の約0.6%を使用する蒸気養生を必要としない製品用コンクリートが開発されれば、地球環境問題への貢献は大きい。また、生コンクリートとして使用可能であれば建設期間の短縮等によりコストの大幅な縮減につながると期待される。当研究グループでは、このニーズに応えるべく、この種の超早強性コンクリートの開発を試み、ある種の混和材料を使用することで超早強性を有するコンクリートを開発した。さらに、開発されたコンクリートに対する性能試験の結果、耐久性等に関しては従来の蒸気養生されたコンクリートと同等の性能を有することを実験的に確認した。最後に、この混和材の使用によりもたらされる超早強性の強度発現および耐久性のメカニズムの解明および各種配合条件とこれらの関係を化学的あるいは微視構造的に把握した。得られた実験成果を以下に記す.(1)蒸気養生不要の超早強性コンクリートについて、配合条件と各種物性値(圧縮強度、引張強度、曲げ強度、弾性係数など)との関係を定量的に評価した。(2)超早強性に関して有効であると認められた金属化合物の使用によりもたらされるセメント硬化促進に対する化学的、物理的性質の変化の解明および相互の関係を明らかにした。(3)使用する混和材とセメント硬化中における各種生成物の生成率に対する材齢毎の相関関係の検討や、硬化過程のセメントに対する微視的観察から、開発した混和材と早期の強度発現メカニズムの関係を化学的に明らかにした。コンクリート製品の製造において,コンクリートそのものに常温下においても早強性を持たせることによって,蒸気養生を不要にすることを目指し,早強性混和材を用いたコンクリートについて研究を行った.今年度は実験の第一段階として,基礎的物性についての広範囲な実験を行い検討を加えた.また,今後予定している実験の参考になると期待されるものについても併せて物性を測定した.1.まず,フレッシュコンクリートとしての取り扱いが充分に容易であるかどうかを確認するためにスランプロス試験とブリーディング試験を行った.2.実際の構造物に供するために重要な圧縮,引張,曲げ、静弾性係数などの力学的要素の発現状況について,混和材を加えない普通コンクリートとの比較を行い,対象とするコンクリートが普通コンクリートに対してどのような特質を持っているか検討を加えた.3.さらに、対象とするコンクリートは膨張性を持つので,その初期材齢における膨張挙動とその後の乾燥収縮について埋め込み型ゲージを用いて計測した.これ以外にも,主に耐久性について検討を加えるときに参考になることを期待して,質量の変化と動弾性係数の変化を測定した.4.今後は,今回得られたデータを基にさらに詳細な実験を行い,対象とするコンクリートの強度発現のメカニズムの解明を目標とする.また,耐久性や膨張挙動についての検討や,構造物に使用した場合の影響についての検討も行う予定である.国内の全重油使用料の約0.6%を使用する蒸気養生を必要としない製品用コンクリートが開発されれば、地球環境問題への貢献は大きい。
樹状細胞の分化系列とレチノイン酸産生能のエピジェネティック制御の関係解明

腸関連組織には、レチノイン酸(RA)を産生して腸管免疫を制御する樹状細胞が存在する。そのRA産生を担う酵素ALDH1A2の遺伝子プロモーター領域はGCリッチで、TATA box近傍には、複数の動物種で塩基配列がよく保存された転写因子Sp1結合サイトとRA応答配列ハーフサイトがあった。Sp1とRA受容体/レチノイドX受容体が協調的にこれらのサイトに結合して、RAの存在下でプロモーター活性を増強した。Aldh1a2プロモーター活性化の樹状細胞サブセットによる違いには、この領域のDNAメチル化ではなく、Sp1やヒストンなどの脱アセチル化抑制によるエピジェネティック制御が関与することが示唆された。樹状細胞(DC)は組織内外の変化を察知して免疫反応を促進または抑制する司令塔である。DCの疾患治療への応用はがんに対して始まっている。他の疾患治療への応用も考える上で、DCが複数の亜集団から成り、その分類や分化過程が不明確なことが問題となる。我々は、腸関連組織にはレチノイン酸(RA)産生DCが存在し、RAを介してリンパ球を小腸組織に配備する役割を持つことを発見した。これらのDCはRAを介してT細胞機能分化にも影響を与えて免疫寛容に寄与する。特定のDC亜集団がRA合成酵素retinal Dehydrogenase 2(RALDH2)を発現している。本研究では、RALDH2発現制御の分子機構を明らかにすることにより、この特定のDC亜集団を選択的に誘導し利用するための基盤を構築する。本年度は、RALDH2遺伝子のプロモーター領域には複数のGC rich領域が存在し、この領域への転写因子Sp1の結合と、p38およびJNK MAPKの活性化がRALDH2遺伝子発現に必須であることを見出した(大岡、岩田)。GC rich領域はDNAメチル化によるエピジェネティックな制御を受けやすい領域でもある。正常マウスから得られたRA生産DC亜集団ではこの領域がほとんどメチル化されていなかったが、一部のDC細胞株ではほとんどメチル化されていた(大岡、岩田)。また、ヒトDCのうち、抹梢血myeloid DC(mDC)の特定のサブセット(CD1c^+ mDC)のみが、GM-CSFの存在下で1α,25-dihydroxyvitamin D3(VD3)の刺激を受けることによってRALDH2を高発現すること、RA自体が協調的にこれを促進することを見出した(門脇)。VD3の効果については、マウスDCではむしろRALDH2発現を制御する傾向を明らかにしており、種または細胞種によって異なることが示唆された。腸やその関連リンパ組織にはレチノイン酸(RA)を産生する樹状細胞(DC)が存在し、RA依存性にT細胞の移動と機能分化を制御することで腸管免疫を制御する。しかし、RA産生の鍵を握るretinal dehydrogenase 2 (RALDH2)の発現誘導の分子機構は不明だった。マウスRALDH2遺伝子上流のプロモーター領域にはCpGリッチな領域が存在し、その特定部位への転写因子Sp1の結合がプロモーター活性を促進することをこれまでに明らかにした。このCpG領域をメチル化するとSp1による促進効果は抑制された。一方、正常マウスのDC、マクロファージ、T細胞においてはこの領域はほとんどメチル化されていなかった。しかし、サイトカインGM-CSFは、RAの存在下でconventional DCには強くRALDH2発現を誘導するが、plasmacytoid DC、マクロファージ、およびT細胞にはほとんど誘導しなかった。従って、他の転写制御機構の存在が考えられた。ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤がGM-CSFによるRALDH2発現誘導を阻害したことから、ヒストンまたはSp1などのアセチル化がRALDH2発現誘導制御に関与することが示唆された。また、RALDH2プロモーター領域にはRA応答配列half-siteが存在し、RA受容体(RAR)/レチノイドX受容体(RXR)がこの配列に結合すると、RA依存性に転写が促進されることを見出した。このプロモーター領域近傍の塩基配列は、ヒトを含む哺乳類において良く保存されており、互いに共通の機序でRALDH2発現に必要なRAシグナルを制御していることが示唆された。さらに他の転写因子の寄与を示唆する結果も得ている。これらの結果に基づき、Flt3リガンドでマウス骨髄細胞から分化させたDCを用いて、高いRA産生能を持つDCを分化誘導する系を構築・改良した。腸やその関連リンパ組織にはレチノイン酸(RA)を産生する樹状細胞(DC)が存在し、RA依存性にT細胞に小腸組織への移入(ホーミング)特異性をインプリントし、機能分化を制御することで腸管免疫を制御する。しかし、そのRA産生能誘導の分子機序は不明だった。

RA産生の鍵分子はretinal dehydrogenase 2 (RALDH2)であり、その発現誘導制御の分子機序を解析した。マウスRALDH2遺伝子上流のプロモーター領域は、一つのCpGアイランドに含まれることが判明した。そのCpG配列には転写因子Sp1が結合し、RALDH2遺伝子プロモーター活性を促進した。しかし、CpG配列をメチル化するとSp1による促進効果は抑制された。従って、メチル化によるRALDH2発現制御を想定した。実際、DC細胞株やマクロファージ(Mf)細胞株ではメチル化による制御が示唆されたが、正常マウスのDC、Mf、T細胞の場合はメチル化による制御は限定的で、他の制御機構の存在が示唆された。RALDH2プロモーター領域にはRA応答配列half-siteも存在し、RA受容体(RAR)/レチノイドX受容体(RXR)が結合すると、RA依存性にも転写が促進されることが示唆された。一方、ヒトDCについては、末梢血ではCD1c(+) myeloid DC (mDC)のみが、GM-CSFの存在下、活性型ビタミンD3(VD3)で刺激することにより、p38 MAPK依存性にRALDH2を高発現した。また、腸間膜リンパ節ではCD103(-) DCのみがVD3によりRALDH2を高発現した。RALDH2を高発現するCD1c(+) mDCは、同種ナイーブCD4 T細胞を刺激し、RA依存性にTh2サイトカインの産生と、腸管ホーミング受容体インテグリンα4β7の発現を誘導し、皮膚ホーミング受容体CLAの発現を抑制することを見出した。初年度であるため、まだ本研究の成果による原著論文出版には至っていないが、現在準備中である。25年度が最終年度であるため、記入しない。エピジェネティック制御は、当初、予想したDNAメチル化だけでなく、正常免疫細胞ではむしろそれ以外の機序によって行われていることが判明したが、レチノイン酸誘導能発現の分子機序について順調に解明が進んでおり、ヒトとマウスの樹状細胞での違いについても明らかにしてきた。しかし、原著論文としての発表は、漸く始まったばかりであり、現在、2報について改訂作業中である。マウスDCにおけるRALDH2発現誘導の分子機序を明らかにするため、RALDH2遺伝子の上流を中心にさらに解析する。DNAメチル化についても、さらに他の未解析のDC亜集団および細胞株について解析するとともに、核タンパク質の修飾、ヌクレオソームの構造変化などによるエピジェネティック制御についても解析する。マウスの結果を踏まえながら、ヒトDCまたはその前駆細胞から分化誘導したDCを用いてRALDH2発現誘導の分子機構の解析を続け、生理的な現象との整合性および組織におけるDC亜集団分布を調べる。ヒトとマウスでの共通点と相違点を明らかにし、その理由を検討する。正常マウスDCにおけるDNAメチル化以外のエピジェネティックなRALDH2発現制御を明らかにするために、核タンパク質やNF-κBなどのアセチル化/脱アセチル化による制御の可能性について検討する。
ミセル動電クロマトグラフィーの光学分割への応用研究

ミセル動電クロマトグラフィー(Micellar Electrokinetic Chromatography;MEKC)は、キャピラリー電気泳動の手法と界面活性剤ミセルによる可溶化現象とを組合せた高分離能分析法である。本研究では、キラルな海面活性剤を用きるMEKCにおいて、より効率の高い光学分割を達成するための条件および適用試料範囲の拡大について検討した。試料には主にフェニルチオヒダントイン-DL-アミノ酸(PTH-DL-AA)を、またミセル溶液への添加剤として硫酸ドデシルナトリウム(SDS)、尿素、有機溶媒を使用した。1.これまでの研究で、キラルな陰イオン性界面活性剤であるN-ドデカノイル-L-バリンナトリウムや数種の薬物成分の光学分割が可能であることが明らかにされている。本研究では、これらと類似した界面活性剤であるN-ドデカノイル-L-セリン(DSer)、N-ドデカノイル-L-アスパラギン酸(DAsp)、およびN-テトラデカノイル-L-グルタミン酸ナトリウム(STGlu)を用いて、新たな応用の可能性を検討した。2.これらの界面活性剤は中性の水系溶媒に対する溶解度が低く充分なミセル生成が起こらないため、塩基性プロパノール(IPA)を添加した系が最も良好な結果を与えることが分かった。3.DSer系では、75mM DSer/75mM SDS/1M尿素(pH11.0)-20%メタノールを用いた場合に最も良好な結果が得られた。選択性については、SDVal、SDGluの場合とほぼ同等であった。しかし、同系で、メタノールの代わりにIPAを使用した系では、これまでいずれの系においても分割不可能であったPTH-DL-Thrが良好に分割された。DAspおよびSTGluについては満足すべき結果は得られていないが、条件の最適化により利用可能であると考えられる。
染色体形成期に特異的なヒストンH3リン酸化の機能

1)ヒストンーDNA複合体に於けるM期特異的ヒストンH3リン酸化条件の解析:M期の染色体凝縮の分子機構を詳細に解析するため、H1ヌクレオソ-ム結合体におけるH1のリン酸化、H3リン酸化の反応系を確立することにした。まずH1結合ヌクレオソ-ムとヌクレオソ-ムをラット肝臓より調整し、H1キナ-ゼ(H1pk)によるH1のリン酸化、について調べた。H1は単独では非常によくリン酸化されるが、結合体ではリン酸化され難かった。H3のリン酸化は上記の何れの基質に於いてもリン酸化された。したがって、H3のM期特異的リン酸化の条件として、ヌクレオソ-ムにH1が結合していないこと、またはH1がヌクレオソ-ム結合体してもH1が高度にリン酸化されていることが必要である。2)M期のみに特異的にH3がリン酸化される機構の解析:M期のH1(高リン酸化体)及び間期H1(低リン酸化体)をヒラ細胞より精製し、H1結合ヌクレオソ-ムとヌクレオソ-ムを調整し、M期H1または間期H1を結合させ、Aキナ-ゼでリン酸化させた。結果は、間期のH1ではH3のリン酸化は強く抑制され、M期のH1ではその抑制効果が低かった。したがって、細胞分裂のM期ではH1が高リン酸化体となるため、H3リン酸化の抑制を解除している可能性を強く示唆している。M期に特異的なリン酸化酵素の存在が示唆されるので、ヒラ細胞の蛋白をセファセルカラムを用いて分画した。その結果、相当する活性分画が2ー3検出された。その酵素の特性について分析中である。またこれまで知られているいくつかの精製リン酸化酵素の中ではAキナ-ゼ及びカルモジュリンー2キナ-ゼがヌクレオソ-ムにおけるH3をリン酸化させる傾向にあった。真核細胞の分裂期(M期)に見られるヒストンH1、H3の高度なリン酸化はクロマチンの凝縮や染色体形成の重要な要素と考えられる。これまでの我々の研究からは、H1のリン酸化はむしろ引金と考えられ、H3のリン酸化が凝縮に特異的であることが分かった。そこで、H3のリン酸化条件をクロマチンの基本構造であるヌクレオソ-ム構造に基いて解析することにした。ラット肝臓よりクロマチンを調整し、H3単量体、H3ーH4四量体、H2AーH2BーH3ーH4八量体等及び、それぞれのDNA結合体を調整し、基質とした。Aキナ-ゼはM期特異的なリン酸化サイト(セリンー1O)を生体外反応でH3をリン酸化させることが知られている。精製されたこのAキナ-ゼを用いて上記の基質をリン酸化させ、H3のリン酸化量および、ベプチドマップ法によりH3のリン酸化サイトを調べた。他のヒストンではDNAとの結合によりリン酸化量が減少するのに対し、H3ではいずれの場合も、DNA結合体の方がDNA非結合体と比べ、リン酸化量が増加した。リン酸化サイトを比較すると、DNA結合体ではH3の疎水性領域のスレオニンー118が主にリン酸化されるが、ヌクレオソ-ムやDNA結合体ではこのサイトのリン酸化は阻害され、新たにM期特異的リン酸化サイト(セリンー1O)を含む高塩基性領域がリン酸化された。したがって、H3のM期特異的リン酸化サイトはヌクレオソ-ム構造をとることにより、既にリン酸化されやすい状態になっていることが分った。このことから、間期ではH3のリン酸化を抑制する機構の存在が考えられる。その一つとして間期ではヌクレオソームへの強力なH1の結合が考えられる。

またこれまで知られているいくつかの精製リン酸化酵素の中ではAキナ-ゼ及びカルモジュリンー2キナ-ゼがヌクレオソ-ムにおけるH3をリン酸化させる傾向にあった。
自閉症スペクトラム障害のある成人の発達障害検査入院に関する効果検証研究

近年、一般の精神科で成人になって診断される自閉症スペクトラム障害(ASD)、注意欠如多動性障害(ADHD)が多く存在していると報告されており(Lehnhardt et al, 2012)、二次的に生じる問題から不安や抑うつを感じる方が多いと報告されている(Joshi et al, 2010)。当院では成人で発達障害が疑われる方に対して、「発達障害検査入院プログラム」として発達障害としての診断、併存疾患の有無、本人の特性や今後についての心理教育を実施している。今回は、当院でASDと診断された方を対象にASDの心理検査の特徴について検討した。対象は、プログラム利用者でASDと診断された60名の心理検査の結果について検討した。心理検査の結果としては、自記式のCES-Dにおいて気分障害圏に属するものが全体の76%、STAIで特性不安に該当するものが全体66%であった。しかし、ASDとの併存疾患で気分性障害と診断されたのは22%、不安障害と診断されたのは17%であった。認知機能の検査においては、WAISの群指数において言語理解が最も高く、処理速度が最も低い結果となった。また、CPTでは視覚刺激に対する注意指標において46%が平均から1SD以上であった。以上のことから、成人のASDにおいて自覚的な状態と、他者評価との違いが生じることも考えられる。外来において、うつや不安を主訴に来院した場合に、その主訴のみではなくASDについて考慮することは重要だと考える。また認知的機能において、一定の特徴が見られていることが考えられる。本研究の今後の発展としては、認知的な特徴をより詳細に検討することと、実施したプログラムから、診断だけでなく、具体的な心理教育を行うことがその後の本人たちの生活が改善する可能性が示唆されただめ、心理教育の効果についての検証が挙げられると考える。本研究については、第9回不安症学会で発表を行い、若手優秀演題賞を受賞した。