hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
オリゴ多糖体投与による、Th2関連応答を介した感染症の緩和/治療効果

気道、静脈感染を用い、野生型、IL-13遺伝子改変のマウスで連鎖球菌及び真菌の感染感受性を検討した。低用量ではIgMに、高容量でTh1関連の炎症に依存した応答が観察された。肺炎、静脈感染の両方で、高用量の菌体投与後に、IL-13の存在下で炎症性サイトカインが抑制され、キチンオリゴマーの同時投与で感染臓器(肺、腎臓)の炎症応答が修飾された。リコンビナントIL-13とリコンビナントTGFβを添加した骨髄細胞で、菌体と接触後短時間の炎症応答を確認した。TGFβは、添加後のIL-13に濃度依存的に増幅され、410日に至る感染臓器のIL-17Aによる応答をこのTGFβが支持している可能性が示唆された。C. albicansによる血流感染モデルで、インターロイキン(IL)-13欠損(遺伝子改変)動物(マウス)と野生型で感染応答を分子生物学的に解析している。1高濃度の菌量を静脈感染した後、IL-13欠損動物は野生型に比べて腎臓内の生菌数が有意に減少した。2同様の感染後2日目以降で、腎臓内の腫瘍壊死因子(TNFα)産生量が野生型動物で有意に高値であった。31、2の理由を解明する目的で、感染後早期(36時間)と後期(23日目)の腎臓内炎症関連分子の多くについて、伝令(m)RNAの産生量をReal-time (RT) PCR法を用いて解析中である。感染後3時間の時点で、腎臓内から産生されたIL-6、TNF-α、ケモカイン(CXCL 2)、インターフェロン(IFN)-α、Ym1などのmRNAが、IL-13欠損動物で高値であった。逆に抗炎症作用を有する分子であるトランスフォーミング増殖因子(TGF)-βは野生型動物由来の腎臓から高値に検出された。IL-13は臨床的に気道喘息などの増悪因子として報告されてきている。免疫抑制者や担癌患者、熱傷患者などに起こる真菌感染症の原因微生物として重要なC. albicansの高濃度血流感染後に、菌体の排除に障害となり得る抗炎症作用の役割をIL-13が有すると考えられた。今後このIL-13を産生する細胞の局在や種類(M2マクロファージである可能性など)、感染後後期の炎症関連分子(TGF-βなど)の動態などについて更に詳細な実験と検討、解析を計画している。また実験計画に記した通り、chitin-oligomer(chitinを加水分解した化学物質)を感染前に生体に投与することで菌体排除や炎症の経過が改善し得る、治療効果としての応用結果の一部を得ている。情報が蓄積した後に、このchitin-oligomerなどが、この炎症と微生物排除の経過をどのように修飾するのかを今後の動物実験により確認していく予定である。肺炎球菌による血流感染モデルでは、以前の結果同様にIL-13KO群は野生型に比べて平均生存期間の有意な短縮が認められ、再現された。この理由を明らかにするために1血清中IgMの量と質を群間で比較、2臓器別のバイオマーカーの動態(CXCL2、IL-1β、TNFα、CRP、プロカルシトニン関連ペプチドなど)を感染後早期からRT-PCRを用いて継時的に定量し、群間で比較した。その結果IL-13KOでは血清中のIgMが野生型に比べ、感染前後で有意に低値であった。また感染後2.5時間後より肝臓内でのTNFα合成が有意に低下している点が明らかになった。これよりIL-13は1中和作用のあるIgMのB1細胞による産生と2感染後急性時期の全身炎症の調節の双方に関与していると考え現在論文化を行っている。Candida albicansの静脈内感染モデルを、野生型BALB/cとIL-13遺伝子改変(KO)マウスで検討した。感染後3日目で感染臓器である腎臓のTGFβが野生型で蛋白レベルでIL-13KO群よりも上昇した。感染臓器である腎臓内で残存するカンジダ生菌は感染後4日目でIL-13KO群で低値(有意差と再現性あり)であった。また感染後3時間目で腎臓の臓器細胞からRNAを抽出し、定量型のリアルタイム(RT)PCRを行ったところ、早期のTh1関連のサイトカイン、ケモカイン(TNFα、iNOS、IL-6、IFN-γ)がIL-13KO群で高く、感染後4日目以降ではこの差が認められなくなっていた。これらの観察結果より、IL-13はカンジダ血流感染症初期に炎症のピークやそれに伴う貪食関連のメディエーターを抑制すると考えられた。この機序にカンジダ感染早期のIL-13依存的なTGFβの臓器内での増加が関与すると考えている。この一連の結果を現在投稿中である。1.肺炎球菌とIL-13の敗血症モデル静脈感染後にIL-13-/-マウスでは野生型に比べ、平均生存期間の短縮が認められた(3回確認)。静脈感染後2.5時間から48時間まで3点で、末梢血白血球、肝臓(臓器懸濁液及び比重遠心後の細胞)、脾臓など各臓器で重要なバイオマーカーを測定した。TNFαの伝令(m)RNAと蛋白は野生型の肝臓で高値であり、それ以外のHMGB-1、CRP、IL-6、CGRPαなどは群間で差を認めなかった。末梢血白血球

由来のCXCL2とCD14のmRNAは感染後に高く上昇したが、群間の差を認めなかった。脾臓細胞でblimp-1が2.5時間で上昇し、野生型でIL-13-/-マウスより早期に上昇する結果を観察しているが、再現性と統計学的な検証が必要である。過去に観察した、感染後リンパ節集積細胞からのIL-13(蛋白をELISAで測定)の分泌、Natural helper様細胞の感染後リンパ節への集積、インフラマソームの過剰な活性化と予後への寄与などを検証した後の論文化を予定している。2.C. albicans静脈感染へのIL-13の寄与高濃度の菌量で静脈感染を行った場合、IL-13欠損動物は野生型に比べて腎臓内の生菌数が有意差を持って減少し、感染後7日以内での平均生存期間も、IL-13-/-マウスが野生型に比べ長期であった。感染後3時間で、腎臓で産生されたTNF-α、ケモカイン(CXCL 2)、インターフェロン(IFN)-α、IFN-γ、IL-1βなどの炎症性サイトカインのmRNAが、IL-13欠損動物で高値であった。抗炎症作用を有する分子であるトランスフォーミング増殖因子(TGF)-βは野生型動物由来の腎臓で高値であった。Chitin-oligomerの投与によるIL-13の作用の修飾で、C. albicans感染初期の自然炎症機構、M1ないしはM2マクロファージへの制御機構などが変化し、真菌の生体からの排除が改善すると仮説を立てている。この一連の結果の一部を論文化しており近日投稿予定である。気道、静脈感染を用い、野生型、IL-13遺伝子改変のマウスで連鎖球菌及び真菌の感染感受性を検討した。低用量ではIgMに、高容量でTh1関連の炎症に依存した応答が観察された。肺炎、静脈感染の両方で、高用量の菌体投与後に、IL-13の存在下で炎症性サイトカインが抑制され、キチンオリゴマーの同時投与で感染臓器(肺、腎臓)の炎症応答が修飾された。リコンビナントIL-13とリコンビナントTGFβを添加した骨髄細胞で、菌体と接触後短時間の炎症応答を確認した。TGFβは、添加後のIL-13に濃度依存的に増幅され、410日に至る感染臓器のIL-17Aによる応答をこのTGFβが支持している可能性が示唆された。肺炎球菌の血流感染に関して、平均生存期間の短縮の理由として宿主保護的に作用するIL-13の役割を検討することができた。1初期IgMの産生性と2肝臓内TNFαの産生性という2点が新しい機序として確認されており、論文化と報告を予定している。上記と別にカンジダによる血流感染初期にIL-13の有無で臓器の炎症応答、菌体の排除の効率などに変化(一時的な防御能の減弱)がある点を以下のように実験結果として明らかにし、投稿中である。具体的には感染後3時間の時点で、腎臓内から産生されたIL-6、TNF-α、ケモカイン(CXCL 2)、インターフェロン(IFN)-α、Ym1などのmRNAが、IL-13欠損動物で高値であった。逆に抗炎症作用を有する分子であるトランスフォーミング増殖因子(TGF)-βは野生型動物由来の腎臓から高値に検出された。これらの新しい知見に関しては疾患患者や人で同様の検討を行うことは困難であるが、本研究実施によってこの困難な部分の知見が得られた。これらの結果より、種々の病原微生物菌体が有する多糖体はIL-13を介してTh2関連の応答を生じることが改めて示唆された。IL-13は過剰な炎症の減弱、時に緩和、あるいは恒常的なIgM産生や調節などにも関わる点を示す結果を得た。
マウス前脳虚血モデルの樹立とRNA干渉を用いた遺伝子導入マウスの作製および解析

(1)マウス前脳虚血モデルの樹立これまで、マウスの前脳虚血モデルを樹立するため様々な検討を行ってきた。本研究では、温度管理のため手術野および手術用顕微鏡をアクリルボードで覆い、全体を37°Cに保てるシステムを構築した。さらにはマウス個体間や手術手技自体の誤差をなくすため、赤外線脳血流計を用いて虚血効果を定量化した。これによりさらに虚血の正確性が増した。(2)カルシニューリン活性により制御されるNCX受容体の機能解析海馬のスライスを用いたin vitroの実験系において、CsAおよびFK506の投与により、低酸素刺激による細胞内カルシウム上昇がきわめて効果的に抑制できることが判明した(東京薬科大学、工藤佳久教授との共同研究)。これらの薬剤の共通のターゲットであるカルシニューリンが、カルシウム受容体(細胞膜、または細胞内)を制御していることを示している。現在、遅発性に起こる細胞内カルシウム上昇がNa/Ca exchangetransporter(NCX)受容体、特にNCX2受容体がカルシニューリンにより制御されていることが判明しているが。本研究では、虚血による細胞内カルシウムの上昇にこのNCX2受容体が重要な役割を果たしていることが予想されたため、まず、NCXの各サブタイプの抗体を用いて虚血ラット海馬におけるNCXを調べた。NCX1および2は虚血後12-24時間で海馬神経細胞に発現の上昇がみられた。次に、カルシニューリンを含むこれらの遺伝子に対してsiRNAを作製した。まず、カルシニューリンに対するsiRNAは6種類のうち2種類がサブタイプ別に効率よくカルシニューリンを抑制した。さらにNCXに関しては現在作製中である。今後はこれらのsiRNAを用いて培養細胞や遺伝子改変動物(ノックダウンマウス)を作製しさらに解析を進める予定である。手術視野が狭いことや、結紮すべき血管の大きさ、また頭部の温度管理等、様々な解決すべき問題点があった。現在、遅発性に起こる細胞内カルシウム上昇がNa/Ca exchangetransporter (NCX)受容体、特にNCX2受容体がカルシニユーリンにより制御されていることが判明しているが。本研究では、虚血による細胞内カルシウムの上昇にこのNCX2受容体が重要な役割を果たしていることが予想されたため、まず、NCXの各サブタイプの抗体を用いて虚血ラット海馬におけるNCXのを調べた。(3)NCX2のKOマウスを用いた虚血モデルの解析現在、共同研究にて福岡大学医学部岩本博士がNCX2のKOマウスを作製しており、このマウスができ次第、虚血マウスを作製し、詳細な解析を行う予定である。

まず、カルシニューリンに対するsiRNAは6種類のうち2種類がサブタイプ別に効率よくカルシニューリンを抑制した。さらにNCXに関しては現在作製中である。今後はこれらのsiRNAを用いて培養細胞や遺伝子改変動物(ノックダウンマウス)を作製しさらに解析を進める予定である。
巨大データからの知識発見を可能にする圧縮文字列処理基盤技術

LZ77圧縮に着目し, LZ77圧縮を省領域で計算するアルゴリズムの開発を行った.LZ77圧縮は理論的にも実用的にも圧縮率の良い圧縮法であることが知られており,圧縮用途以外にも,連の解析や周期の発見など文字列解析に幅広く応用される,汎用かつ知識発見において重要な位置づけにある圧縮データ構造である.そのような応用を考える上でボトルネックとなるのがLZ77圧縮の計算にかかる時間と領域であり,省領域で動作する線形時間アルゴリズムの開発が求められている.LZ77圧縮は入力テキスト全体に渡る繰り返し構造を計算する必用があるため,線形時間アルゴリズムの開発にはテキストの索引構造とその補助データ構造を使うことが一般的であり,より省領域なアルゴリズムの開発はこれらのデータ構造の領域を如何に削減するかが課題であった.筆者は計算に必要な使用領域の削減に取り組み, NlogN+0(σlog N) bits領域を使用する線形時間アルゴリズムを提案した,ここでNは入力テキストサイズ, σはアルファベットサイズである.先行研究で最も省領域な2N log Nbitsを使用する線形時間アルゴリズムKKP2と比較すると,アルファベットサイズが小さい場合,提案手法はKKP2に比べほぼ半分の領域で動作し,大きな改善に成功している.計算機実験によりKKP2と新手法の実行時間を比較した場合,新手法は領域を半分程度に抑えた事による計算の複雑さが増したにも関わらず,実行時間はKKP2の2倍ほどの実行時間の増加に留まっているとの結果が得られた.圧縮や,文字列の解析などに応用される重要な圧縮データ構造について,最も省領域で動作する線形時間のアルゴリズムの開発に成功した.このことにより,これまで適用困難だったサイズのデータについても適用可能となり,テーマに沿って研究が進展していると考えている.今年度に行った研究で,ある程度まとまった結果が出たにも関わらず,論文投稿が間に合わなかったトピックがある.来年度移行順次,国際会議,学術雑誌に投稿していく予定である.LZ77圧縮に着目し, LZ77圧縮を省領域で計算するアルゴリズムの開発を行った.LZ77圧縮は理論的にも実用的にも圧縮率の良い圧縮法であることが知られており,圧縮用途以外にも,連の解析や周期の発見など文字列解析に幅広く応用される,汎用かつ知識発見において重要な位置づけにある圧縮データ構造である.そのような応用を考える上でボトルネックとなるのがLZ77圧縮の計算にかかる時間と領域であり,省領域で動作する線形時間アルゴリズムの開発が求められている.LZ77圧縮は入力テキスト全体に渡る繰り返し構造を計算する必用があるため,線形時間アルゴリズムの開発にはテキストの索引構造とその補助データ構造を使うことが一般的であり,より省領域なアルゴリズムの開発はこれらのデータ構造の領域を如何に削減するかが課題であった.筆者は計算に必要な使用領域の削減に取り組み, NlogN+0(σlog N) bits領域を使用する線形時間アルゴリズムを提案した,ここでNは入力テキストサイズ, σはアルファベットサイズである.先行研究で最も省領域な2N log Nbitsを使用する線形時間アルゴリズムKKP2と比較すると,アルファベットサイズが小さい場合,提案手法はKKP2に比べほぼ半分の領域で動作し,大きな改善に成功している.計算機実験によりKKP2と新手法の実行時間を比較した場合,新手法は領域を半分程度に抑えた事による計算の複雑さが増したにも関わらず,実行時間はKKP2の2倍ほどの実行時間の増加に留まっているとの結果が得られた.圧縮や,文字列の解析などに応用される重要な圧縮データ構造について,最も省領域で動作する線形時間のアルゴリズムの開発に成功した.このことにより,これまで適用困難だったサイズのデータについても適用可能となり,テーマに沿って研究が進展していると考えている.今年度に行った研究で,ある程度まとまった結果が出たにも関わらず,論文投稿が間に合わなかったトピックがある.来年度移行順次,国際会議,学術雑誌に投稿していく予定である.
教師の人格形成についての臨床教育学的研究-「危機」体験のエスノグラフィー

平成21年度は本研究のまとめ段階として、以下の内容で研究を進めた。(1)人格概念の系譜学的分析を継続して行った。(2)平成21年度の研究過程で明らかとなった、調査方法、研究方法の再検討の必要性、すなわち、教師の危機体験が社会状況の変化に大きな影響を受けざるをえないのであるとしたら、そのような影響をどのような因子として研究過程の中に位置づけるか、という課題であるが、ライフステージ論を展開する際の因子として位置づけることを断念し、別の影響因子として位置づけることとして、平成20年度に実施したインタビュー調査4件の再分析・検討を行った。(3)(2)の結果を踏まえてインタビュー調査を再開し、教師のライフヒストリー研究としてのインタビュー調査を幼稚園教諭に対して5件実施した。現在、この調査のテープ起こしおよび分析・検討を行っているが、まだ完成にはいたっていない。しかし、就業経験年数の長い幼稚園教諭の場合、ほとんどが女性であることから、特に出産、育児経験がそのキャリア形成に大きな影響を及ぼしていることが明らかとなってきた。自分の子どもを育てることと、教師として教育に携わることの関係を教師の人格形成の過程上の重要な因子として位置づけることは新たな視点の提起といえるであろう。上記研究経過により、平成21年度に予定していた学会発表、論文投稿等の成果発表までは至らなかったため、平成22年度に本研究の成果を発表する予定である。平成19年度は本研究の基礎段階として、以下の内容で研究を進めた。(1)人格概念の通時的・系譜学的な分析、特に、日本における人格概念の受容と変遷の課程を辿り、それが現在の日本の教育、特に道徳教育にどのような影響を及ぼしているかを検討した。(2)原理的研究とフィールド調査の相互作用のあり方を、現象学的社会学に依拠しつつ人格概念の共時的分析を行う中で検討した。(3)教師文化に関するエスノグラフィー研究、ライアヒストリー研究を参照しつつ、インタビュー調査の質問内容と方法の枠組みを検討した。その際、(1)教師のエスノグラフィー研究の成果と課題、(2)教師のライフヒストリー研究の成果と課題、(3)フィールド調査の臨床教育学的意義の分析、(4)本研究に最適な調査方法の設定と仮説の設定、の4つの観点から検討した。これらの成果については平成20年度からの実際のインタビュー調査の実施および調査結果の検討後、平成21年度に発表していく予定である。平成20年度は本研究の展開段階として、以下の内容で研究を進めた。(2)平成19年度における調査方法の検討にもとづいた、教師のライフヒストリー研究としてのインタビュー調査を幼稚園教諭に対して4件実施した。(3)インタビュー調査結果についてテープ起こしした内容をもとに分析した。特に、教師としての資質形成過程における「ゲシュタルト・クライシス」を指示するものとして位置づけられるようなキーワードの抽出を主眼として分析したが、幼稚園教諭の場合、社会的、特に教育行政施策の変化に対応した危機体験の感得状況が強く、これをライフステージ論的に展開できるかという点については疑問であった。(4)上記インタビュー調査結果の分析にもとづき、新たな調査方法、研究方法の再検討の必要性が明らかとなってきた。すなわち、教師の危機体験が社会状況の変化に大きな影響を受けざるをえないのであるとしたら、そのような影響をどのような因子として研究過程の中に位置づけか、という課題である。これは平成21年度への継続課題となっている。上記研究経過により、平成20年度に予定していた学会発表、論文投稿等の成果発表までは至らなかった。平成21年度は本研究の成果を発表する予定である。
間葉-上皮転換における転写因子の役割とその機序の解明

我々は、間葉系細胞である線維芽細胞にHnf4αとFoxa(Foxa1 or Foxa2 or Foxa3)という肝細胞の分化に関連する転写因子を導入し、上皮細胞であるiHep細胞へと変化させることに成功した。iHep細胞作成過程には間葉-上皮転換(MET)というダイナミックな変化が見られる。本研究はMETと転写因子の関わりを明らかにすることを目的として行った。本研究では、まずMETの誘導とその時間的変化を明らかにし、次に、遺伝子・タンパク質発現解析を行い、iHep細胞誘導因子の標的候補を複数同定することに成功した。今後の解析によりiHep細胞誘導にともなうMETの実態解明が進むと考えられる。マウス皮膚線維芽細胞にHnf4aとFoxA(1/2/3)、という2つの転写因子を導入すると、肝細胞の性質を持つ誘導肝細胞(iHep細胞)を作製することができる。しかし、転写因子が引き起こす細胞運命転換の過程は未解である。iHep細胞樹立時、初期過程において間葉-上皮転換(Mesenchymal Epithelial Transition ; MET)が誘導される。iHep細胞誘導因子であるHNF4aとFoxA、2つのうちいずれかの転写因子が単独でMETを引き起こしているのか。それとも、双方が同時に存在し協調することがMETに必須なのか。また、各々の転写因子単独の導入によりMETは誘導されるのか。本研究では、マウスiHep細胞樹立時のMETに焦点をあて、iHep細胞誘導因子(HNF4aとFoxA)の作用機序の解明を目的とした。マウス胎児線維芽細胞(MEF)を用いた解析の結果、1つの遺伝子を導入するだけで上皮細胞マーカー遺伝子の発現が誘導され、さらにタンパク質も発現し隣接細胞との細胞接着領域に局在することが確認できた。また、METが誘導された後、iHep細胞と同様に増殖を維持できることも明らかとなった。今後は、作製した1因子導入細胞の性状解析を行う。1因子導入細胞を数回継代培養後にもう1つの因子を導入すると、肝細胞特有のタンパク質を発現する細胞へと変化することが明らかとなった。引き続き、培養下で肝機能解析や、肝機能不全マウスの肝臓への移植を行い、2段階で誘導した細胞が従来の方法で誘導したiHep細胞(2因子同時に導入して作製)と同様の細胞であるか検証する。我々はダイレクトリプログラミング法を用いてマウス皮膚線維芽細胞から肝細胞の性質を有する細胞(iHep細胞)へ変化させることに成功した。間葉系細胞である線維芽細胞はHnf4αとFoxa(Foxa1、Foxa2、Foxa3のいずれかひとつ)という肝細胞分化に関連した2種類の転写因子を導入することで、上皮細胞であるiHep細胞へと変化する。本研究は、iHep細胞作成過程に見られる間葉-上皮転換(MET)というダイナミックな変化と転写因子の関わりを明らかにすることを目的として行った。本研究では、まずiHep細胞の作製過程を詳細に解析し、METの誘導とその時間的変化を明らかにした。そして次に、iHep細胞の誘導因子導入にともなう遺伝子・タンパク質発現解析を行い、MET関連因子群の発現上昇、並びにEMT関連因子群の発現低下を明らかにし、iHep細胞誘導因子の標的候補を複数同定することに成功した。今後、iHep細胞誘導因子の標的候補についてさらに解析を進めることで、iHep細胞誘導にともなうMETの実態解明が進むと考えられる。当初計画していた初年度の課題はほぼ終了することができた。さらに、次年度に予定していた1因子導入細胞の機能解析を前倒して着手することができている。また、1つの転写因子のみの導入で増殖可能な細胞が誘導できたことより、今後の解析によりこの細胞の属性が判明すれば、当初の目的であるMET機序解明だけではなく、新たなダイレクトリプログラミングの手法の開発につながると予想される。細胞生物学今年度、1つの転写因子のみの導入でMETが起こることが判明し、さらに増殖可能な細胞を誘導することができた。今後は、今年度に行ったマイクロアレイ解析結果を用い、MET関連遺伝子や肝臓以外の消化器官特有の遺伝子等の発現変動に着目して解析を進める。さらに、in vivoでの解析を中心に進め、誘導細胞のより詳細な機能と属性を追及したい。
三日熱マラリア肝内休眠原虫の検出系の確立

マラリア原虫の肝臓ステージの培養系を、まずはネズミマラリア原虫をモデルとして最適化を行った。次に、三日熱マラリアの肝内型原虫を検出できるような種々の特異抗体を作成した。タイ王国において、三日熱マラリア患者の血液を人工的に吸血させた蚊の唾液腺から原虫を回収し、これを肝由来培養細胞に添加後培養し、作成した抗体を用いて、肝内型原虫が検出できた。さらに原虫の侵入効率の評価系が確立できた。三日熱マラリア対策の大きな課題は、原虫が肝細胞内で時には数年にも及び「休眠」するために、一旦治癒した後に再発することである。本課題は、三日熱マラリア原虫の肝細胞内での培養法の確立および、肝内型原虫と休眠体との識別法を開発することを目的とし、本年度は以下の研究を実施した。三日熱マラリア原虫肝臓ステージの培養系を確立するために、まずはその評価に用いる肝内型原虫を認識するためのマーカーとなる抗体が必要となる。原虫細胞質に発現するLISP70、寄生胞膜に局在するUIS4,肝臓ステージ後期の寄生胞膜に局在するHSP1、感染肝細胞の細胞質に発現するLISP2について、小麦胚芽由来無細胞タンパク質合成系を用いて組換えタンパク質を調整した後、それぞれをマウスとウサギに免疫することで抗血清を得た。また、スポロゾイトから肝臓ステージを通して発現しているCS蛋白に対するモノクローナル抗体の産生細胞を入手し、マウスモノクローナル抗体を調整した。さらに、三日熱マラリア原虫肝臓ステージの最適な培養条件を検討する予備実験として、ネズミマラリア原虫Plasmodium bergheiを用いて、様々な培地を検討した。その結果、RPMI培地を用いた場合に顕著に肝内型原虫の発育がよいことがわかった。一方で、低グルコース濃度のDMEMでは、発育が初期の段階で止まる休眠体様の原虫が複数見出された。これらが休眠体のモデルになりうるのか、マーカーとなる抗体で染色することで今後判定して行く。タイとミャンマーの国境付近のメソッドのマラリア診療所、およびバンコクの研究所を訪問し、三日熱マラリア感染蚊の作成、スポロゾイト回収のための基盤を整備した。以上の成果により、本プロジェクト遂行のための材料の準備がすべて完了した。1.感染流行地(カンチャナブリ)における実験システムの構築。タイ王国における海外共同研究者、Jetsumon Sattabongkot博士の所属がマヒドン大学に変更となったのに伴い、ミャンマーとの国境に近くのカンチャナブリに於いて新たなフィールドサイトを立ち上げた。カンチャナブリのマラリア診療所、実験室を訪問・視察し、実際に患者血液を蚊に吸血させる実験を行った。2.三日熱マラリア患者から得られた血液を吸血させた蚊の唾液腺からスポロゾイトを得て、ヒト肝癌由来培養細胞HepG2と、海外共同研究者の樹立した肝細胞HC-04に添加後、培養を行った。原虫細胞質に発現するHSP70の抗体を用いて蛍光抗体法を行ったところ、肝内型原虫が検出できた。同時に行った熱帯熱マラリア原虫では、HCマ04細胞株を用いると原虫発育が後期まで進行したが、三日熱マラリア原虫では大きな違いが認められなかった。材料調達が困難なため、再現性を得ることが次の課題である。3.材料調達が比較的容易なネズミマラリア原虫(Plasmodium berghei)を用いて、肝臓ステージ原虫の培養系の最適化を行った。最初に、分化マーカーの検討をおこなったところ、LISP2は発育が進行するに伴い、局在が原虫細胞質から、肝細胞質へと移行することを見出した。次に、培地を数種類比較検討した結果、RPMI1640+10%FCSを用いた時に、1)肝内型原虫の大きさ、2)分化マーカー抗体(LISP2)を用いた時の分化段階、の2つの指標で最も発育がよいことが判明した。また、培地中のどの因子が発育に関与するのか現在解析中である。三日熱マラリアは、アジア地域においては熱帯熱マラリアと同等の脅威を及ぼす感染症であり、原虫が肝細胞内で時には数年にも及び「休眠」するために、一旦治癒した後に再発するという大きな課題が残されている。再発防止法の開発を目指した三日熱マラリア研究の最大の困難は、原虫培養法さえ確立されていないために、実験室での研究が不可能なことである。

本課題は、この状況を打破するために、タイの感染流行地において三日熱マラリア患者から感染血液を採取し、それを媒介蚊に人工的に吸血させた後、感染蚊から肝細胞感染型原虫を回収、培養肝細胞に添加することで、肝細胞内で原虫を発育させる培養法の確立を目指す。本年度は、実際に三日熱マラリア原虫のスポロゾイトを、肝由来培養細胞に添加後培養し、肝内型原虫を作成済みの特異抗体を用いて検出することを目的とする。タイの共同研究先を訪問し、媒介蚊の唾液腺からスポロゾイトを回収し、肝由来培養細胞HC-04に添加後、37度で培養し、6時間、4日後にフォルマリン固定した。6時間後に固定したサンプルは、2種類の坑CSP抗体で染めることで、スポロゾイトの細胞侵入効率を評価するアッセイ法を検討した。その結果、培養細胞や培養条件、スポロゾイト解剖の日にち等を含めた培養系の改良の為の評価方法が確立できた。さらに、4日目に固定したサンプルを作成済みの種々の特異抗体を用いて染色を行った。その結果、坑HSP70抗体は原虫の細胞質を認識し、坑LISP1抗体、坑LISP2抗体が、肝臓ステージ中期原虫の寄生胞膜を検出することができた。従って、発育初期ー中期の肝内型原虫を検出できるマーカーとなる抗体が得られた。また、さらに発育の進んだ原虫も坑LISP1,2抗体で検出できることが確認できた。今後は、これらの抗体を用いて、休眠体と正常に発育している原虫を識別できるのか検討していく。海外共同研究者の移籍により、新たなフィールドサイトの立ち上げ、および研究に必須な媒介蚊の確保という問題が生じたが、本年度中に概ね解決し、以前と同等以上に使いやすい設備の立ち上げに至った。また、本年度のタイの大洪水に関しては、共同研究先、診療所とも被害に遭うことはなく、研究を続けられる状態である。その間、スポロゾイトの回収実験は-度しか行えなかったが、初めて蛍光抗体法で原虫を検出することができた。また、準備が整うまでの間に、ネズミマラリア原虫をモデルどして用いて、より良い培養条件の検討を行うことができた。24年度が最終年度であるため、記入しない。新しいフィールドサイトの準備が整った次年度は、回収できる三日熱マラリア原虫スポロゾイトの数の増加が見込まれるため、三日熱マラリア原虫を用いた肝臓ステージ培養系の最適化に取り組む。具体的には、スポロゾイトをHepG2,HC-04細胞に添加し、HSP70抗体に加えて、寄生胞膜に局在するタンパク質、UIS4,EXP1,LISP1抗体を用いて蛍光抗体法を行い、原虫を確実に検出できる方法を確立する。また、本年度にネズミマラリア原虫を用いて明らかにしたLISP2が三日熱マラリア原虫でも肝臓ステージの分化マーカーとして用いられるか検討する。その後、培養細胞、培地を比較検討することで、最適な培養条件を決定する予定である。
高齢化社会における運転特性の指標化と交通システムに関する研究

本研究は,高齢者の交通に関する意識調査として,東海4県(愛知,岐阜,三重,静岡)の各自治体に高齢者の意識に関するアンケート調査を郵送により配布回収し,その結果から行政の高齢者に対する交通対策と,行政に勤務する個々人の高齢者対策の結果をえた.高齢者が各種公共施設を利用するとき,行政として何かの交通機関を考慮している考え方は98年度の方の割合が高く,行政の高齢者交通に対しての関心の向上が高まっており「施設巡回バスの運行」や「福祉バスの運行」等を考慮している.また,高齢者交通手段の提供は高齢者側から申し出があった時に考える行政が多くなっている.個人の考えで,運転断念年齢は88年より98年の方が高年化の傾向にあり,車の運転を断念し次に利用できる交通手段を転換交通手段として調査したが,家族や友人などの車両に同乗する割合が最も高く,さらに,年齢で見ると実年齢が上がると公共交通機関を希望する傾向がある.高齢者を被験者としたアクセレレーションノイズと心拍数の調査を名古屋市港区東海通り線で実施した.アクセレレーションノイズは,安全運転記録システム(YAZAC-5064車載装置)を利用し,車両の速度を変速機内で分離しその結果をメモリーカード内に記録した.心拍数はHeat Beat Counter(MODEL.. PL-6000)を使用して耳たぶに耳たぶセンサーを取り付け,耳たぶを流れる血流量の変化を検出し心拍数を測定する機器である.アクセレレーションノイズと心拍数は交通条件,道路条件等に相関し道路交通事故と深い関係にあり,ある一定区間(今回は375m)内に有料駐車場数"4個"以上,店駐車場数なし,進入禁止側道数"2個"以上,規制標識数"20個"以上出現する道路はアクセレレーションノイズと心拍数が高く,道路交通事故の発生が見込まれるのでこのような道路は建設すべきではないと思われる.本研究は,高齢者の交通に関する意識調査として,東海4県(愛知,岐阜,三重,静岡)の各自治体に高齢者の意識に関するアンケート調査を郵送により配布回収し,その結果から行政の高齢者に対する交通対策と,行政に勤務する個々人の高齢者対策の結果をえた.高齢者が各種公共施設を利用するとき,行政として何かの交通機関を考慮している考え方は98年度の方の割合が高く,行政の高齢者交通に対しての関心の向上が高まっており「施設巡回バスの運行」や「福祉バスの運行」等を考慮している.また,高齢者交通手段の提供は高齢者側から申し出があった時に考える行政が多くなっている.個人の考えで,運転断念年齢は88年より98年の方が高年化の傾向にあり,車の運転を断念し次に利用できる交通手段を転換交通手段として調査したが,家族や友人などの車両に同乗する割合が最も高く,さらに,年齢で見ると実年齢が上がると公共交通機関を希望する傾向がある.高齢者を被験者としたアクセレレーションノイズと心拍数の調査を名古屋市港区東海通り線で実施した.アクセレレーションノイズは,安全運転記録システム(YAZAC-5064車載装置)を利用し,車両の速度を変速機内で分離しその結果をメモリーカード内に記録した.心拍数はHeat Beat Counter(MODEL.. PL-6000)を使用して耳たぶに耳たぶセンサーを取り付け,耳たぶを流れる血流量の変化を検出し心拍数を測定する機器である.アクセレレーションノイズと心拍数は交通条件,道路条件等に相関し道路交通事故と深い関係にあり,ある一定区間(今回は375m)内に有料駐車場数"4個"以上,店駐車場数なし,進入禁止側道数"2個"以上,規制標識数"20個"以上出現する道路はアクセレレーションノイズと心拍数が高く,道路交通事故の発生が見込まれるのでこのような道路は建設すべきではないと思われる.本研究を実施するため,1.高齢者の交通に関する調査2.高齢者を対象としたアクセレレーション・ノイズの調査3.高齢者を対象とした心拍数の調査を実施した.この内調査1.は愛知,岐阜,三重及び静岡県下の市町村を対象に全部で325箇所にアンケート用紙を配布した.その内容は,各地方公共団体が実施または計画している高齢者サービス全般と担当者が考えている高齢者の交通政策である.この内回答は156件であった.現在このデータを解析中であるが,回答数は愛知県35件(配布数88件),岐阜県57件(99件),三重県27件(69件)及び静岡県27件(69件)で回収率48%であった.各県とも特に力を入れているサービスは,「家庭奉仕員派遣」が愛知県の100%をはじめ各県とも高く,岐阜県90%,三重県でも80%と高い.「入浴サービス」が5064%,「日常生活用具の給付・貸与」が静岡県の40%を除き50%,「老人医療費補助が」が岐阜県の54%を最高に30%台となっている.調査2,3は高齢者を対象にしたノイズと心拍数の調査で,名古屋市港区東海通り線(競馬場交差点南陽中学校前交差点)約4.9Kmを対象に高齢者の自動車に車載用走行測定装置(幸和電子製DSC-10A)を登載し,運転者にはHEARTBEAT OOUNTER(キャットアイMODELPL-6000)を装着し,実測区間を4往復走行した.なお,実測員は5名である.

調査区間は中央分離帯で分離されているため,375mで一区間となるように西行き113区間,に東行き1426区間に区別し各区間ごとに平均速度・ノイズと心拍数を測定した.ノイズの平均値は5.4(Km/h/sec)^2で西行きは5.6(Km/h/sec)^2東行きは5.1(Km/h/sec)^2で西行きの方向が高い値となった.なお,各区間での最低値は1.5(Km/h/sec)^2,最高値は11.0(Km/h/sec)^2となったが西行きの方が大きな値となったのは,西行きの交通量が多かったためと考えられる.心拍数の平均値は95.0(回/分)で西行きは95.2(回/分)東行きは94,8(回/分)で西行きの方向が少し高い値となった.なお,各区間での最低値は93.5(回/分),最高値は96.4(回/分)であった.現在,ノイズと心拍数を目的変数とし説明変数に道路交通環境値(大・中・小交差点数,車線数,出入り口数,側道数,バス停数,勾配,標識)との相関を数量化I類で考察中である.さらに,この区間でのノイズと心拍数を目的変数とし説明変数に交通事故とした関係式を考えている.これらのデータは調査中であるが多くの知見が得られたものと考えてえる.本研究は,高齢者の交通に関する意識調査として,東海4県(愛知,岐阜,三重,静岡)の各自治体に高齢者の意識に関するアンケート調査を郵送により配布回収し,その結果から行政の高齢者に対する交通対策と,行政に勤務する個々人の高齢者対策の結果をえた.高齢者が各種公共施設を利用するとき,行政として何かの交通機関を考慮している考え方は98年度の方の割合が高く,行政の高齢者交通に対しての関心の向上が高まつてをり「施設巡回バスの運行」や「福祉バスの運行」を考慮している.また,高齢者交通手段の提供は高齢者側から申し出があった時に考える行政が多くなっている.個人の考えで,運転断念年齢は88年より98年の方が高年化の傾向にあり,車の運転を断念し次に利用できる交通手段を転換交通手段として調査したが,家族や友人などの車両に同乗する割合が最も高く,年齢で見ると実年齢が上がると公共交通機関を希望する傾向がある.高齢者を被験者としたアクセレレーションノイズと心拍数の調査を名古屋市港区東海通り線で実施した.アクセレレーションノイズと心拍数は交通条件,道路条件等に相関し道路交通事故と深い関係にあり,ある一定区間(今回は375m)内に有料駐車場数"4個"以上,店駐車場数なし,進入禁止側道数"2個"以上,規制標識数"20個"以上出現する道路はアクセレレーションノイズと心拍数が高く,道路交通事故の発生が見込まれるのでこのような道路は建設すべきではないと思われる.
糖質コルチコイド受容体と核内転写因子の相互作用による転写制御機構に関する研究

リガンド依存性の転写制御因子である糖質コルチコイド受容体は、細胞外からの情報をリガンドとの結合によって核に伝達し遺伝情報に変換する機能を有している。糖質コルチコイド受容体による転写制御には、転写基礎因子のみならずその他の転写因子及び転写介助因子により高度な調節機構の働いていることが明らかとなりつつある。本研究では、これまで我々が独自にクローニングを試みてきた糖質コルチコイド感受性制御因子(GMEB-1、GMEB-2)のクローニングを達成し、これらの分子は道の分子であり、新規の転写因子であることが明らかとなった。さらに、それらと糖質コルチコイド受容体の相互作用につき細胞生物学的並びに分子生物学的に分析したところ、GMEBは糖質コルチコイド受容体と共同で標的遺伝子の転写活性を調節することが判明した。さらに、GMEBは免疫染色でも核内に局在する核内転写因子であることが明らかとなった。一方、GMEB-1には、スプライスバリアントの存在することが見いだされ、その発現には臓器特異性が認められた。従って、臓器特異的に糖質コルチコイドによる転写調節活性が調節されていることが示唆された。以上の成績より、新規転写因子であるGMEBは、糖質コルチコイド受容体と共同作用して糖質コルチコイドによる転写感受性を制御しているものと考えられ、糖質コルチコイドによる転写制御機構の一端が明らかになった。糖質コルチコイド受容体は、リガンド依存性の転写制御因子であり、細胞外からの情報をリガンドとの結合によって核に伝達し遺伝情報に変換する機能を有している。近年、糖質コルチコイド受容体による転写制御には、転写基礎因子のみならずその他の転写因子及び転写介助因子により高度な調節機構の働いていることが明らかとなりつつある。本研究では、これまで我々が独自にクローニングしてきた糖質コルチコイド感受性制御因子(GMEB-1,GMEB-2)と、糖質コルチコイド受容体及び共役因子の1つであるサイクリックAMP反応性因子結合蛋白(DBP)との蛋白相互作用について検討を行った。方法は、HeLa細胞を用いた2ハイブリッドシステムを構築して検討した。まず、VP16の転写活性亢進ドメインとGMEB-1又はGMEB-2の癒合蛋白発現プラスミドを作成した。また、糖質コルチコイド受容体またはCBPとGAL4のDNA結合ドメインの癒合蛋白発現プラスミドを作成した。それらのプラスミドを各々細胞にトランスフェクションし、GAL4結合部位を持ったルシフェラーゼのレポーター遺伝子活性を測定した。その結果、GMEB-1並びにGMEB-2は、共役因子であるDBPとも蛋白相互作用のあることが判明してきた。以上の成績より、新たな転写因子であるGMEBは、糖質コルチコイド受容体並びに共役因子と作用して糖質コルチコイドによる転写感受性を制御しているものと考えられた。本研究では、これまで我々が独自にクローニングしてきた糖質コルチコイド感受性制御因子(GMEB-1、GMEB-2)と、糖質コルチコイド受容体及び共役因子の1つであるサイクリックAMP反応性因子結合蛋白(CBP)との蛋白相互作用について検討を行なってきた。まず、HeLa細胞を用いた2ハイブリッドシステムを構築し、VP16の転写活性亢進ドメインとGMEB-1又はGMEB-2の癒合蛋白発現プラスミドを作成した。その結果、GMEB-1並びにGMEB-2は糖質コルチコイド受容体と直接結合することが判明した。また、GMEB-1並びにGMEB-

2は、共役因子であるDBPとも蛋白相互作用のあることが判明してきた。これらの成績より、新規転写因子であるGMEBは、共役因子並びに糖質コルチコイド受容体と作用して糖質コルチコイドによる転写感受性を制御しているものと考えられ、糖質コルチコイドによる転写制御機構の一端が明らかになった。
還元型グルタチオンの歯髄保護効果：歯科保存修復への応用

臨床歯科領域で使用される、金属イオンの歯髄への毒性効果を、グルタチオン配合による解毒効果と合わせて評価した。う蝕予防目的で一般に臨床で使用されている、38%フッ化ジアンミン銀溶液と、マルチイオンリリース型のbioglassを対象に、細胞増殖/細胞毒性試験、細胞中のアルカリホスファターゼ活性試験をラット歯髄細胞株(RPC-C2A)にて行った。結果、前者で10万倍希釈でも毒性が呈示され、銀イオン(金属錯体)金属毒性が、象牙細管を経由し、歯髄細胞に対し組織為害性を示していることが懸念された。5mM、50mM濃度の還元型グルタチオンを添加したところ、6時間では、還元型グルタチオンの添加により有意なフッ化ジアンミン銀の毒性軽減が認められた。24時間では50mMのグルタチオンによる毒性軽減は認められたが、5mMのグルタチオンによる毒性軽減は認められなかった。ALPでは6時間、24時間ともにグルタチオンを加えた結果、有意なフッ化ジアンミン銀の毒性軽減が認められた。この内容は、ことし6月、国内学会に発表予定である。マルチイオンリリース型のbioglassでは、フッ化物イオン、ホウ酸イオン、アルミニウムイオン、ケイ酸イオン、ストロンチウムイオンなどが長期的に徐放されることによりバイオアクティブ効果が発現する機能性ガラス素材として注目されているが、深い窩洞に使用した場合、濃度依存的ではあるが、毒性が示された。このように、歯科材料では、濃度依存性ではあるが、細胞毒性を有する材料があり、グルタチオンによる毒性緩和の可能性の追及の必要性が示させた。グルタチオンは、細胞内に0.5から10 mMという比較的高濃度で存在するが、細胞外の濃度はその1/100以下である。この濃度では、還元型グルタチオンの、ラット歯髄細胞株による細胞レベル実験では、細胞増殖、細胞中のアルカリホスファターゼ活性に変化はなかった。しかし、50mM以上では、グルタチオンの毒性がやや出現した。これは、グルタチオン本来の還元作用で、アッセイテストの結果に影響が及ぶ懸念も否定できなかった。深いう蝕に、直接塗布する臨床的効果を期待していたが、う蝕起炎菌の抗菌作用、またはう蝕菌由来の脱灰を抑制する緩衝能はグルタチオンに、期待できないと考えられた。そこで、抗菌作用及び脱灰緩衝能を持つ薬剤の、歯髄への直接の影響を緩和する効果を評価することになった。上記の2つの効果を持つ、マルチイオンリリース型のbioglasとグルタチオンの並行利用に注視した場合、リリースされる、フッ化物イオン、ホウ酸イオン、アルミニウムイオン、ケイ酸イオン、ストロンチウムイオン中で、ストロンチウムイオンの毒性が懸念された。擬似体液とこれらリリースイオンの反応を分析し、リン酸カルシウム系の生成沈殿物のX線回折解析を試み、現在解析中である。還元型グルタチオンは非タンパク質チオールトリペプチドであり、生理的機能は主に細胞レベルで水溶性の抗酸化物質として働き、解毒作用に関与する物質である。しかし、ラット歯髄細胞株による細胞レベル実験では、細胞増殖、細胞中のアルカリホスファターゼ活性に変化はなかった。ある種の金属イオンは非酵素的にグルタチオンと結合するため、解毒作用を呈するが、歯科材料からの様々な金属イオンの溶出が懸念されるため、2019年度,研究期間延長し、追加実験を行う所存である。金属イオンと、グルタチオンの反応生成物に対する、組成分析を、外部分析機関にて、実施予定である。グルタチオンが、有害性の金属イオンのミネラル沈殿に、抑制または促成効果があるのか、組成分析より考察し、グルタチオンの応用方法は、金属イオンリリース歯科材料に配合させるか、イオンの景況が歯髄に及ぶ懸念があるときに、追随してグルタチオンを塗布するか、臨床的に確実な方法を検討する。細胞増殖、毒性試験は、骨芽細胞(MC3T3ーE1細胞)の使用も予定する。生体にも存在する、還元型グルタチオン(以下グルタチオン)は、非タンパク質チオールトリペプチドであり、細胞レベルで水溶性の抗酸化物質として働き、解毒作用に関与する物質である。まず、グルタチオンの使用方法は、歯髄組織に近い深い窩洞に直接塗布し、歯髄細胞活性化を想定した。本年後は覆髄剤のMineral trioxide aggregate(MTA)に注目した。MTAは工業用セメントとして汎用されるポルトランドセメント由来の構成で、微量ながら毒性の高いヒ素が検出されるとの報告がある。本材は直接覆髄剤として臨床応用されるため、生体適合性の観点から、ヒ素の溶出は歯髄反応への影響が大きいと懸念される。MTAからヒ素が溶出した場合を想定し、グルタチオンによる細胞毒性軽減効果は、臨床予後改善の可能性から大変興味深い。本研究では、Mineral Trioxide Aggregate (MTA)硬性セメントの粉体のヒ素含有量及び液混和後のヒ素溶出量を測定した。ラット歯髄細胞株(RPC-C2A)にて、MTT試験を行い、ヒ素毒性試験、及び還元型グルタチオンによるヒ素解毒効果を検討した。ヒ素による細胞毒性試験では、6時間、24時間培養の結果はともに、50μMヒ素濃度で毒性が見られた。50μMヒ素に5000μMの還元型グルタチオンを加えた結果、有意な(p<0.001)ヒ素の毒性軽減がみられ(グラフ)、培養細胞の増殖、生存形態に改善が見られた。

結果は、「MTAセメントのヒ素含有量、ラット歯髄細胞への毒性、及び、グルタチオンによる解毒作用について」として、第69回日本歯科理工学会学術講演会April 15-16,2017.東京にて、口頭発表した。まず毒性物質を確定する為、プロルートMTA(デンツプライ三金株式会社)のヒ素量測定を行う必要があった。プロルートMTAは工業用セメントとして汎用されるポルトランドセメント由来の構成で、微量ながら毒性の高いヒ素が検出されるとの報告がある。本材は直接覆髄剤として臨床応用されるため、生体適合性の観点から、ヒ素の溶出は歯髄反応への影響が大きいと懸念される。0.5g粉中ヒ素を、蛍光X線分光分析装置(X-ray Fluorescence Spectrometer HORIBA, XGT-10000WR)にて測定した。24時間湿潤状態で硬化後粉砕し、0.1N硝酸水溶液(pH 1)18mlにて溶解させ、その濾過液を試験溶液とした試験溶液中ヒ素含有量を、誘導結合プラズマ発光分析装置(SHIMADZU, ICPS-7000 ver. 2)にて測定した。ラット歯髄細胞へのヒ素毒性を測定し、毒性を呈したモル濃度にてグルタチオンの解毒作用を評価した。還元型グルタチオンの濃度依存性細胞活性効果が見られたが、5000マイクロMの還元型グルタチオンを加えた結果、十分な解毒作用が現れた。グルタチオンは生体細胞内に0.5から10 mMという比較的高濃度で存在する物質で、生体内に存在する安全な化学物質である為、5000マイクロM以上濃度での、有効利用の可能性は大きいと言える。この濃度依存性細胞活性効果が見られた最適濃度の結果を出すのに実験を繰り返したが、今年になってから、生体適合性の評価を、培養細胞レベルでのMTT、ALP活性試験、細胞増殖試験を行っている。解毒作用の効果について予備実験が十分出来たため、現在までの進捗状況毒性は概ね順調であるといえる。ラット歯髄細胞株(RPC-C2A)にて、炎症性マーカーのプロスタグランジンELISAアッセイ等を行い、ヒ素、グルタチオン、ヒ素+グルタチオンの3種で比較した。培養時間は1,6,24時間であった。ヒ素、グルタチオンの単独では、それぞれプロスタグランジンは高く、低く発現した。ヒ素+グルタチオンは1,6,24時間でも、発現が抑えられていることが分かった。また追加課題として行った歯科材料は、う蝕抑制・象牙質知覚過敏鈍麻剤の38%フッ化ジアンミン銀(SDF)溶液である。SDF溶液はう蝕抑制・象牙質知覚過敏鈍麻剤として確実な効果が得られるため、近年米国をはじめ、世界中で注目されているが、アンミン錯体所以の高いpH度、また高濃度の金属イオン含むSDF溶液の生体安全性は議論の必要がある。予備実験ではMTTアッセイテストにて、希釈濃度でも高い毒性が見られた。SDF溶液の生体安全性、臨床的適合性を向上するために、グルタチオンの解毒及び還元作用を期待し、SDF塗布時に作用させた場合の臨床的効果を考察した。SDFの問題点である歯質変色の軽減作用が見られたため、国内学会、国際論文に発表した。さらにつくば高エネルギー加速器研究機構にて、グルタチオンとSDF溶液との反応性銀の組織分析をのX線吸収微細構造(XAFS)解析を行った。グルタチオンのシステインとジアンミン銀の複合体と思われる複雑は組成の生成物が見られたものの、還元金属銀のスペクトルとの判別までは至らなかった。