hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
母子間の「抱き」の発達行動学的研究:ダイナミックシステムズアプローチの適用

1-13ヵ月の乳幼児を持つ母親298名を対象とした質問紙調査を行ない,抱き時間や乳幼児の発達に関する情報を集めた。その結果,未首すわり段階に6時間以上あった抱き時間は,歩行段階には2.5時間へと減少していくことが明らかとなった。さらに,乳児の発達的側面から,離抱に影響を与える要因を検討した。その結果,(1)姿勢運動発達,(2)身長,(3)体重,(4)授乳形態,(5)子の体を動かす行動,(6)子の抱っこから降りたがる行動が影響を与えていることが示された。次に,それを踏まえて本研究課題の中心を為すダイナミックシステムズアプローチを,離抱現象へ適用した。生後1ヵ月3ヵ月の子どもを持つ母親21組を対象として,最長40ヵ月まで1ヵ月おきに離抱の縦断的調査が行われた。DSAに基づき,個々の母子における離抱過程が記述されるとともに,授乳抱き,通常抱き,おんぶ抱きの3側面に焦点化され,離抱に影響するコントロールパラメータが検討された。その結果,平均値からは,全抱き時間は初期に山型を描くものの全般的には乳児の月齢と共に右肩下がりに減っていくことが示された。また個々の発達軌跡に基づいて検討した結果,離抱過程は多様であり,かつ非線形の様相を呈し減少することが示された。乳児の発達的側面から離抱に影響を与える要因を検討した結果,主に(1)姿勢運動発達,(2)体重が影響を与えていることが示された。これはダイナミックシステムズアプローチを,母子の関係性発達に適用した日本先駆的な試みであり,「離抱(りほう)」現象への適用としては世界でも初の試みである。また横断研究と縦断研究(ダイナミックシステムズアプローチ)の並列的使用を理論的に担保するための人間科学的研究法に関する認識論を整備した。前年度の成果とこれらの研究をまとめて『母子間の抱きの人間科学的研究:ダイナミツク・システムズ・アプローチの適用』として出版した。またこれら一連の研究を各種研究会で発表した。
虚血病態下におけるアストロサイトのプリン作動性機構

中枢神経系の虚血病態下では、細胞外のアデノシン(ADO)が増加し神経保護作用を示す。細胞外のADO増加は、主に放出されたATPなどのプリン化合物が細胞外で代謝されて生じる。この反応にはアストロサイトが関与すると考えられているが、その機序には未だ不明な点が多い。本研究では、このADO増加機序の解明を目的としている。アストロサイトは病態下で形態や機能が変化することが知られている。虚血病態下でもこの状態変化により、ATP放出や細胞外のプリン化合物代謝が変化する可能性がある。前年度までの研究により、線維芽細胞成長因子2(FGF2)がアストロサイトからのATP放出や細胞外プリン代謝を促進することを明らかにした。そこでこれらの変化がどのような細胞内経路を介するのか検討した。まず、FGF受容体阻害薬はFGF2によるATP放出増加やプリン代謝酵素の発現と活性の上昇を抑制した。続いてFGF受容体下流経路の1つであるMAPK経路に属するMEK、p38、JNKの阻害薬を用いた。MEK阻害薬はFGF2によるATP放出増加やプリン代謝酵素の発現と活性の上昇を強く抑制したのに対し、p38阻害薬及びJNK阻害薬はプリン代謝酵素の発現・活性上昇を一部抑制した。これらの結果から、FGF2はFGF受容体やMAPK経路を介してアストロサイトのプリン放出・代謝促進を引き起こしていることが明らかになった。さらに本研究では、アストロサイトからプリン代謝酵素のADAが細胞外に放出され、その放出もFGF2により増加することを前年度までに示した。そのため、アストロサイトからのADA放出機序を検討した。細胞からのタンパク放出経路である開口放出、オートファジーやエクソソーム放出の阻害薬を用いたが、いずれも細胞外ADAの活性や発現に影響を与えなかった。放出経路の解明にはさらなる研究が必要である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。中枢神経系の虚血病態下では、細胞外のアデノシン(ADO)が増加し神経保護作用を示すと報告されている。このADO増加には主にアストロサイトが関与すると考えられているが、その機序には未だ不明な点が多い。昨年度は以下の2つの点について研究を行った。1)虚血病態下では低酸素や低グルコース、低Ca2+などが生じる。これらの虚血刺激によるADO増加機序がそれぞれ異なり、病態下では複数の刺激が同時に作用してADOを増加させている可能性がある。そこで刺激条件によるADO増加の違いを明らかにするため、培養アストロサイトを低酸素や低グルコース、低Ca2+刺激に単独または同時に暴露し、細胞外プリン化合物量を測定した。その結果、低グルコースと低Ca2+が異なる機序によりプリン化合物量を増加させることを明らかにした。また、低酸素と低Ca2+同時暴露は低Ca2+単独と比べて有意に大きなプリン化合物量の増加を示し、このプリン化合物増加にはATP放出とその分解が関与することが示唆された。2)様々な病態下でアストロサイトの形態や機能が変化することも知られており、反応性アストロサイトと呼ばれている。虚血病態下でもこの状態変化により、ATP放出やADO増加が変化する可能性がある。そこでアストロサイトの状態変化による機能の変化を明らかにするため、培養アストロサイトに薬物を処置してアストロサイトの状態変化を誘導し、低Ca2+によるATP放出量やタンパク発現量の変化を調べた。炎症性サイトカインや成長因子、その他の薬物を48時間処置すると、アストロサイトの形態やタンパク発現量の変化が認められた。その中で、FGF2処置は低Ca2+によるATP放出量を有意に増加させ、この増加にはギャップジャンクションヘミチャネルの発現量増加と活性上昇が関与することが示唆された。昨年度は複数の虚血刺激によるアデノシン増加の変化について新たな知見を得ることができた。この機序を解明するために研究を進行していたが、実験試薬が入手不可能になったため上記実験を一時中断せざるを得なくなった。しかし、実験系を変更し、新たにアストロサイトの状態変化によるATP放出変化についての興味深い知見を得るに至った。今後これらの変化の機序や病態への関与について検討することで、病態下におけるアストロサイトの役割についてさらなる知見が得られることが期待できる。そこでアストロサイトの機能変化を明らかにするため、培養アストロサイトに薬物を処置して状態変化を誘導し、低Ca2+によるATP放出量や細胞外プリン化合物蓄積、タンパク発現量の変化を調べた。線維芽細胞成長因子2(FGF2)処置は低Ca2+によるATP放出量を有意に増加させ、この増加にはギャップジャンクションヘミチャネルの発現と活性の上昇が関与することが示された。細胞外プリン代謝を測定すると、FGF2処置により細胞外AMPとADO代謝が促進されることが明らかとなった。

それぞれの代謝を担う酵素のecto-5'-nucleotidase(NT5E)とadenosine deaminase(ADA)の発現量を調べると、ともにFGF2処置で発現量が増加した。FGF2がアストロサイトのNT5EとADA発現を増加させて、細胞外プリン代謝を促進すると考えられる。FGF2により機能変化したアストロサイトが、細胞外プリン化合物量のコントロールに重要な役割を果たす可能性がある。さらに、FGF2はADAの発現を増加させるとともに、細胞外液中におけるADA活性の上昇を引き起こした。これまでの報告では、ADAはアストロサイトにおいて主に細胞質内で働くと考えられている。一方で免疫系の細胞などにおいては、ADAが細胞外に放出されることが報告されている。本研究結果から中枢神経系においても、アストロサイトからADAが放出され細胞外で働く可能性が示唆された。昨年度は、FGF2を処置したアストロサイトにおいて、ATP放出チャネルやプリン化合物代謝を担う酵素など複数のタンパク発現が変化し、細胞外プリン化合物の蓄積に大きな影響を与えるという知見が得られた。また、これまで細胞質内で働くと考えられていた酵素が、細胞外で活性を持つという興味深い知見も得ることができた。今後これらの変化の機序や生体内での役割、病態への関与について検討することで、アストロサイトのプリン化合物産生とそれによる情報伝達について、新たな知見が得られることが期待できる。中枢神経系の虚血病態下では、細胞外のアデノシン(ADO)が増加し神経保護作用を示す。細胞外のADO増加は、主に放出されたATPなどのプリン化合物が細胞外で代謝されて生じる。この反応にはアストロサイトが関与すると考えられているが、その機序には未だ不明な点が多い。本研究では、このADO増加機序の解明を目的としている。アストロサイトは病態下で形態や機能が変化することが知られている。虚血病態下でもこの状態変化により、ATP放出や細胞外のプリン化合物代謝が変化する可能性がある。前年度までの研究により、線維芽細胞成長因子2(FGF2)がアストロサイトからのATP放出や細胞外プリン代謝を促進することを明らかにした。そこでこれらの変化がどのような細胞内経路を介するのか検討した。まず、FGF受容体阻害薬はFGF2によるATP放出増加やプリン代謝酵素の発現と活性の上昇を抑制した。続いてFGF受容体下流経路の1つであるMAPK経路に属するMEK、p38、JNKの阻害薬を用いた。MEK阻害薬はFGF2によるATP放出増加やプリン代謝酵素の発現と活性の上昇を強く抑制したのに対し、p38阻害薬及びJNK阻害薬はプリン代謝酵素の発現・活性上昇を一部抑制した。これらの結果から、FGF2はFGF受容体やMAPK経路を介してアストロサイトのプリン放出・代謝促進を引き起こしていることが明らかになった。さらに本研究では、アストロサイトからプリン代謝酵素のADAが細胞外に放出され、その放出もFGF2により増加することを前年度までに示した。そのため、アストロサイトからのADA放出機序を検討した。
ハクサイ根こぶ病抵抗性遺伝子群の特性の解明とレース判定系統の作出

ハクサイ類の根こぶ病菌には4種類の病原型(G1G4)が知られており、CRbを有する、ハクサイF1品種「CR新黄」はG1、G2に罹病し、G3とG4に抵抗性を示した。既存のCRbのマーカーを改良しヘテロ個体を識別可能な共優性型の新たなDNAマーカーを開発するとともに、「CR新黄」のF2後代2,032個体を用いて詳細連鎖地図を作成し、CRb抵抗性遺伝子がKB59N07とB1005との間の約140kbのゲノム領域に座乗することを明らかにした。CRkを有するKiE75はP1には罹病したが、G2からG4に抵抗性を示した。新たに開発したCRkに連鎖するマーカーは、Crr3にも連鎖関係が認められた。Brassica rapaのゲノム配列情報を用いて根こぶ病抵抗性遺伝子CRb周辺に新たなマーカーを開発し、「CR新黄」のF2後代2,032個体のマーカーの分離から詳細遺伝地図を作成した。マーカー間で組換えを生じた個体のF3の抵抗性の有無に基づき、CRbはKB59N07とB1005との間の約140kbのゲノム領域に座乗することを明らかにした。このゲノム領域には、14個の遺伝子が推定され、植物の病害抵抗性遺伝子に共通するモチーフを有する遺伝子も含まれることを見出した。根こぶ病菌系グループ3に分類される菌株「No.14」に抵抗性を示すハクサイ・コマツナ類およびカブの48品種においてCRb周辺に座乗する10個のマーカー遺伝子型が罹病性ホモ型を示す品種数は111(平均4.4)と低く、CRbは抵抗性品種群に高い割合で存在することが示唆された。CRkの分離集団を用いた抵抗性検定の結果、抵抗性と罹病性が77と24個に分離し、報告されているDNAマーカー(HC688-4FWとHC688-6RvおよびHC688-4FWとHC688-7Rvのプライマーぺアを用いた増幅の有無)と数cM以上の距離があると推定した。「SCRひろ黄」の抵抗性遺伝子は、Crr3に連鎖するBrSTS33とは連鎖関係を見出せず、CRkに連鎖するマーカーとの連鎖が示唆された。「はくさい中間母本農7号」(PL7)を反復親に、CRa、CRb、CRk、Crr1とCrr2、Crr3の各遺伝子を有する系統を1回親とする準同質遺伝子系統(NILs)の作成を昨年度に引き続き行った。最初に、PL7と1回親との間で既存のマーカーが多型と連鎖の程度を調べた。前年度に得られたF1個体を自殖して得られた後代の分離集団を数系統作成し、これら個体の抵抗性とマーカーとの連鎖の有無を検討し、有用なマーカーを用いて親株の選抜を行った。Brassica rapa(ハクサイ類)の根こぶ病抵抗性遺伝子の中で、CRk、Crr3、CRbは抵抗性を発揮するレースの種類は異なるものの、同じ連鎖群(A03)上に位置している。CRkとCrr3に連鎖する既存のマーカー、HC688とBrSTS78の塩基配列のハクサイゲノム上の位置をゲノムデータベースを用いて解析したところ、これらのマーカー間は約714kbと推定された。この間にSSR配列を検索し8個の共優性と9個の優性の計17マーカーを開発し、さらにこの2つの抵抗性遺伝子の位置関係を詳細に調べた。80個体からなるCrr3分離集団を用いて、根こぶ病菌Ano-01に接種し、個々の発病程度から抵抗性遺伝子の有無を明らかにするとともに、既存のCrr3マーカーであるBrSTS78、BrSTS61、OPC11-2S、BrSTS33に加えて、新たに開発した17個のCRk連鎖マーカー遺伝子型をすべて決定し抵抗性とマーカー遺伝子型との関係を明らかにした。その結果、抵抗性と罹病性個体数はそれぞれ62と18でほぼ3:1に分離し、一つの遺伝子座で制御されている可能性が高いことをあらためて確認した。マーカー遺伝子型と抵抗性遺伝子の比較では、Crr3マーカーの中では末端に位置するOPC11-2SとBrSTS33において、マーカー遺伝子型と表現型の間で異同がある個体が見出された。この個体はマーカーとCrr3とで組換えが生じたものであると考えられた。そのため、Crr3はOPC11-2SよりもCRkに近いBrSTS78、BrSTS61側に位置することが明らかになった。さらに今回新たに開発したCRkのマーカー17個の中で、最も末端に位置するマーカーとCrr3と一部に組換え個体が見出されたが、ほとんどの個体でマーカー遺伝子型と表現型が一致した。これらの結果からもCRkとCrr3は近い位置に座乗することを確かめられた。今後、マーカー選抜育種やNILを作出する上でも多くのマーカー情報が活用できることを示すことにつながると考えられた。

既存のCRbのマーカーを改良しヘテロ個体を識別可能な共優性型の新たなDNAマーカーを開発するとともに、「CR新黄」のF2後代2,032個体を用いて詳細連鎖地図を作成し、CRb抵抗性遺伝子がKB59N07とB1005との間の約140kbのゲノム領域に座乗することを明らかにした。CRkを有するKiE75はP1には罹病したが、G2からG4に抵抗性を示した。新たに開発したCRkに連鎖するマーカーは、Crr3にも連鎖関係が認められた。異なる根こぶ病抵抗性遺伝子(CRb,CRk, CRkまたはCrr3)を有するハクサイ(Brassica rapa)F1品種や系統を用いて4種類のPathotype(以下P)1、2、3、4の根こぶ病菌を接種した結果、CRbを有する「CR新黄」はP1とP2には罹病し、P3とP4に対して抵抗性を示した。またCRb遺伝子座に既存のマーカーよりも近傍でかつ選抜しやすい共優性のマーカーセットを開発した(Kato et al,2012in press)。CRkを有するKiE75は、P1には罹病性、P2に対しては部分的な抵抗性を、P3とP4には抵抗性を示した。CRkはP3にも部分的な抵抗性を付与することから、CRbとは機能的な違いが認められた。またCrr3またはCRkをヘテロに有すると推定されているハクサイF1品種「SCRひろ黄」はP1とP3には罹病性であり、P2とP4に抵抗性であった。「SCRひろ黄」の抵抗性はP2に強い抵抗性、P3には全く抵抗性を付与しないことから、KiE75が有するCRkとは異なった。以上のようにCRb、CRkまたはCrr3の抵抗性の機能はPathotypeによってそれぞれ異なることが明らかになった。CRb、CRk、Crr3の各遺伝子の効果を詳細に明らかにするには、抵抗性遺伝子座領域以外を同じゲノム構造にする必要がある。そこで、抵抗性遺伝子を有しない「はくさい中間母本農7号」(PL7)を戻し親に用いた準同質遺伝子系統(NIL)の作成に着手し、これらの遺伝子を有する系統にPL7を戻し交雑を行い、BC1F1世代を得た。根こぶ病抵抗性遺伝子CRbの詳細連鎖地図の作成に関しては、2000を超える個体の中からマーカー間で組換えを起こした個体を選んだため、詳細な連鎖地図が構築された。作成した抵抗性遺伝子座周辺のマーカーについて、マーカーの保有の有無と抵抗性程度を調べたところ、抵抗性のない品種群ではほとんどこれらのマーカーを有していいないことが明らかになったため、今後抵抗性を付与する際にこれらのマーカーは極めて有用である等の副次的な成果が得られた。CRk解析用に育成した分離集団では、PL7とKiE75の交雑後代からは抵抗性を示す系統は得られなかったものの、PL7とKKの交雑後代から抵抗性遺伝子を引いた系統が複数個体見出された。これらの抵抗性は既報のマーカーと連鎖し、マーカーと遺伝子座間の距離が数cM以上離れていることを明らかにした。またこの情報は、CRb、CRk、Crr3は同じ連鎖群(A03)に座乗するが、詳細な座乗位置の解明に向けて有用な情報となった。CRkもしくはCrr3を有していると推定される「SCRひろ黄」については、その抵抗性とCrr3連鎖マーカーとは連鎖の関係を見出せず、CRkとの連鎖が示唆された。「SCRひろ黄」は根こぶ病のレースを判定する品種であるが、どの遺伝子によってレース特異的な抵抗性が発揮されるのか不明のままであるためこの成果は今後の研究に有用な情報である。NILsの作出に当たっては、反復親のPL7と各1回親間での多型を検出できるマーカーが明らかになった。これにより効率的にNILsの作成が進みことが期待される。以上のとおりほぼ計画どおりに進行している。3つの根こぶ病抵抗性遺伝子(座)、CRb、CRk、Crr3について、その根こぶ病菌のpathotypeとの対応関係について調査した。CRbはP3とP4にのみ抵抗性を付与することを明らかにした。
モノアザ-およびジアザポリチアエーテル誘導体の銀(I)イオン分離・定量への応用

本年度は,新たに合成したN-フェニルモノアザ-テトラチア-15-クラウン-5及び-ジチア-9-クラウン-3をニュートラルキャリアーとする銀イオン選択性電極を作製すると共に,環状と非環状のN-フェニルモノアザテトラチアエーテルにプロトン解離性部分としてヒドラゾン部分を付与した誘導体をイオノフォアとする銀イオンのプロトン駆動型輸送について主に検討した.銀イオン選択性電極では,マトリックスであるポリ(塩化ビニル)(PVC)と可塑剤,それに上記の試薬を含むTHF溶液を風乾して調製した可塑化PVC膜を感応膜として用いた.これらの電極により測定を行ったところ,いずれの試薬の膜についても可塑剤にNPOEを使用し,添加塩としてNaDPAを含むもので銀イオンに対して良好なネルンスト応答が認められた.しかしながら,溶媒抽出の結果とは異なり,アルカリ金属イオンや他の遷移金属イオンの妨害を強く受けることがわかった.現在は,膜溶媒や添加塩などの膜条件を変えて最適条件を検討している.また,ヒドラゾン部分を持つモノアザテトラチアエーテル誘導体を用いた銀イオンのプロトン駆動型の液膜輸送では,環状と非環状のいずれの試薬においても溶媒抽出と同様に極めて高い銀イオン選択性を示した.特に非環状のものでは高いイオン輸送能を示し,実際にFe(III),Co(II),Ni(II),Cu(II),Zn(II),Cd(II),Ag(I),Hg(II)の混合溶液中から銀イオンのみを選択的に,ほぼ完全に分離できることを認めた.本年度は,新たに合成したN-フェニルモノアザ-テトラチア-15-クラウン-5及び-ジチア-9-クラウン-3をニュートラルキャリアーとする銀イオン選択性電極を作製すると共に,環状と非環状のN-フェニルモノアザテトラチアエーテルにプロトン解離性部分としてヒドラゾン部分を付与した誘導体をイオノフォアとする銀イオンのプロトン駆動型輸送について主に検討した.銀イオン選択性電極では,マトリックスであるポリ(塩化ビニル)(PVC)と可塑剤,それに上記の試薬を含むTHF溶液を風乾して調製した可塑化PVC膜を感応膜として用いた.これらの電極により測定を行ったところ,いずれの試薬の膜についても可塑剤にNPOEを使用し,添加塩としてNaDPAを含むもので銀イオンに対して良好なネルンスト応答が認められた.しかしながら,溶媒抽出の結果とは異なり,アルカリ金属イオンや他の遷移金属イオンの妨害を強く受けることがわかった.現在は,膜溶媒や添加塩などの膜条件を変えて最適条件を検討している.また,ヒドラゾン部分を持つモノアザテトラチアエーテル誘導体を用いた銀イオンのプロトン駆動型の液膜輸送では,環状と非環状のいずれの試薬においても溶媒抽出と同様に極めて高い銀イオン選択性を示した.特に非環状のものでは高いイオン輸送能を示し,実際にFe(III),Co(II),Ni(II),Cu(II),Zn(II),Cd(II),Ag(I),Hg(II)の混合溶液中から銀イオンのみを選択的に,ほぼ完全に分離できることを認めた.
カンチレバーの高次振動を用いる超音波原子間力顕微鏡によるナノメカニカル物性計測

材料表面の厚さ、広がりともナノメートルスケールの微小部分の機械的性質(ナノメカニカル物性)はシリコンウエハの加工法における加工変質層、ナノマシン用材料などの先端的工学の分野で大きな問題となり、その迅速で正確な評価法の確立が急務である。本研究では、原子間力顕微鏡(AFM)のカンチレバーを共振モードで振動させ、慣性とノード形成によるレバー長の実効的減少効果によりレバー剛性を向上させる超音波原子間力顕微鏡(超音波AFM)の高度化と適用研究を行った。成果は以下の通りである。接触弾性(試料・探針の接触によるバネ定数)の荷重依存性をSneddonの弾性接触理論を用いて計算し、超音波AFMの周波数方程式による共振周波数の計算結果と弾性率既知試料の実測結果との誤差を最小化することにより探針形状を決定し、これを用いて未知試料の実効弾性を推定する逆問題解析法を開発し,定量計測を実現した。ついでこれを応用して,PACE(Plasma Assisted Chemical etcing)法により加工したシリコンウエハの加工変質層の弾性特性を評価した結果、鏡面研磨したシリコンより接触弾性が低下しており、共振周波数の荷重依存性が、深さ方向に弾性率が変化する有限要素モデルにより説明できた。より微小な欠陥として表面下の格子欠陥を解析した。グラファイト単結晶は,炭素6員環が2次元的に広がったシートが積層されたもので,層間のすべりやすさから固体潤滑材に,また層間への他種原子の侵入しやすさから黒鉛層間化合物としてLi電池電極材料等に使用されている。超音波AFMによる表面下の刃状転位の観察を行った結果,探針の荷重が100nN400nNまで変化すると転位は横方向にC-C結合距離の330倍に及ぶ47nmも移動し,除荷するともとの位置に戻った。この移動方向は探針の走査方向の影響を受けず,常に余剰原子面を圧縮する方向であった。これは今まで報告のない転位の運動様式なので,弾性変形による上昇と呼ぶことを提起した。1.Si(III)-7×7構造表面における反応素過程の解析(1)HBO2分子の反応素過程:解離した原子を区別して解析することにより、HBO2分子の特異な反応過程の詳細を明らかにした。同分子は、他の多くの原子・分子吸着とは異なるサイトと選択的に反応し、解離したB原子が自己組織化をおこして、ネットワーク構造を形成することを見いだしたが、その際、歪みが大きな影響を及ぼすため、他のIII族元素の場合と異なり、√<3>構造を形成する際、中間的なdisiorder相が発現することが明らかになった。自己組織化を含む上記反応過程を制御する試みを展開している。(2)酸素吸着反応:低温STMを用いることにより、80Kに於いて、酸素分子がこれまでに報告されていない新しい吸着相を取ることを見いだした。7×7構造のアドアトムと呼ばれる最表面の2原子が対になって吸着に関与し表面拡散する様子等も直接観察された。低温STMを用いることにより、Xe/Pt等の系とは異なり、原子間の相互作用が吸着量により変化するという新しい過程や、基板との電荷移動により定在波の変調等が発現すること等を見いだした。3.低次元系における構造相転移の解析と制御低温STMを用いることにより、(BEDT-TTF)2PF6表面で、バルクとは異なるCDWの発現や、超構造の揺らぐ様子をとらえることに成功し理論的な解析を行った。表面特有の構造を反映した2kF電荷密度波の発現を直接示した初めてのものである。表面層では、個々の分子が緩和して新たな構造を誘起し、緩和構造は結晶の対称性に関連すること等も明らかになった。フエムト秒レーザーで光誘起トンネル電流を測定すると、偏光依存性を持ち、減衰が非常に早い振動の存在を確認したが、相の揺らぎにより系が乱される様子を反映している可能性が高い。現在、これら結果を基に、光STMを用いた解析・制御による新しい物質相を創製する試みを展開している。4.シクロデキストリン包摂錯体の構造解析と分子算盤金基盤とチオール化したシクロデキストリンを用い、単分子膜の形成・構造解析、分子認識素子としての機能解析を進め、素子としての可能性を示した。また、分子ネックレスの構造解析から、包摂過程における水素結合の役割を定量的に示すことに成功した。更に、STM探針を用いて、分子ネックレス中のシクロデキストリンを操作することに成功し、記憶素子としての展開を可能にした。

ついでこれを応用して,PACE(Plasma Assisted Chemical etcing)法により加工したシリコンウエハの加工変質層の弾性特性を評価した結果、鏡面研磨したシリコンより接触弾性が低下しており、共振周波数の荷重依存性が、深さ方向に弾性率が変化する有限要素モデルにより説明できた。より微小な欠陥として表面下の格子欠陥を解析した。グラファイト単結晶は,炭素6員環が2次元的に広がったシートが積層されたもので,層間のすべりやすさから固体潤滑材に,また層間への他種原子の侵入しやすさから黒鉛層間化合物としてLi電池電極材料等に使用されている。超音波AFMによる表面下の刃状転位の観察を行った結果,探針の荷重が100nN400nNまで変化すると転位は横方向にC-C結合距離の330倍に及ぶ47nmも移動し,除荷するともとの位置に戻った。この移動方向は探針の走査方向の影響を受けず,常に余剰原子面を圧縮する方向であった。これは今まで報告のない転位の運動様式なので,弾性変形による上昇と呼ぶことを提起した。走査トンネル顕微鏡(STM)を用い原子レベルでの解析を行った結果、今後、課題の研究を進めていく上で必要かつ重要となる、以下の知見が得られた。まず、基板とするSi(111)-7x7表面の安定性・相変化の機構を明らかにする目的で、新しく開発した、最上層のアドアトムと呼ばれるシリコン原子の電荷分布を調べることによりにより下層まで含めた構造解析が可能となる手法を用い、動的な構造変化を解析した。その結果、下層に積層欠陥を含む完全な形のコーナーホールが、7x7構造の安定性や、相変化、核形成において非常に重要な役割を担っていることが明らかになった。続いて、HBO_2を照射するさい、照射源の温度を制御することにより、飛来分子をHBO_2、HBOの間で制御できることが明らかになった。更に、基板の温度を、350°Cに保つことによって表面に飛来したHBO分子の解離反応を抑制できることを確認した。また、温度上昇による解離反応後、原子種を区別することが可能であることも示した。これらは、レーザー光を利用して反応素過程を選択的に制御する上で本質的に重要となる点である。他の3族原子の吸着による√3x√3構造の形成においては、7x7構造と√3x√3構造が共存することが知られているが、HBO2の場合は、歪みにより、まず7x7構造が完全に壊れてから、√3x√3構造が形成されていく様子が明らかになり、B原子の表面濃度と表面構造の安定性の間の関係も確認した。1.Si(111)-7x7構造表面における反応素過程の解析(1)HBO2分子の反応素過程:解離した原子を区別して解析することにより、HBO2分子の特異な反応過程の詳細を明らかにした。同分子は、他の多くの原子・分子吸着とは異なるサイトと選択的に反応し、解離したB原子が自己組織化をおこして、ネットワーク構造を形成することを見いだしたが、その際、歪みが大きな影響を及ぼすため、他のIII族元素の場合と異なり、√<3>構造を形成する際、中間的なdisiorder相が発現することが明らかになった。自己組織化を含む上記反応過程を制御する試みを展開している。(2)酸素吸着反応:低温STMを用いることにより、80Kに於いて、酸素分子がこれまでに報告されていない新しい吸着相を取ることを見いだした。7x7構造のアドアトムと呼ばれる最表面の2原子が対になって吸着に関与し表面拡散する様子等も直接観察された。
日本列島における海岸環境の変遷

本研究は、氷河性海面変動の1サイクルにあたる最終間氷期から現在までの期間における日本列島における海岸環境変遷とその要因を究明するものである。得られた主な成果は次の通りである。1.最終間氷期最盛期については、海岸環境変遷図を作成し報告書の付図とした。2.最終間氷期から現在にかけての海水準変動とそれに伴う海成段丘の形成過程(特に、琉球列島では、現地調査とウラン系列年代測定法やESR年代測定法によって、第四紀後半の海成段丘の形成時代や形成機構、海成段丘の変形から見た地殼変動様式などが詳細に解明された。3.個々の地域の後氷期海面上昇曲線の特色は、凡世界的な海面上昇とそれに伴うハイドロ・アイソスタシー効果の影響を考慮するとよく説明できる。4.完新世におけるオホーツク海への黒潮の進入状況、中国地方での鉄穴流しに伴う海岸線の急速な前進などが明らかになった。しかし、自然状態下で汀線が前進し続けてきた九十九里海岸でもの汀線の前進は期待できず、人工物に守られた不動の汀線が出現するものと予想されることが判明した。5.年代測定法の改良と年代幅の拡大によって、氷河性海面変化のほぼ1サイクル間の海岸環境の変遷を、更新世完新世前半の期間については、ほぼ1万年刻みで、完新世後半については、千百年刻みで復元できる可能性がでてきた。6.[^<230>Th/^<234>U]ー[^<231>Pa/^<235>U]コンコーディア(年代ー致曲線)の利用によって、軟体動物殼からも十分信頼できるウラン系列年代が得られることが期待でき、最終間氷期以降の海岸環境変遷の解明に多大の貢献が期待される。本研究は、氷河性海面変動の1サイクルにあたる最終間氷期から現在までの期間に見られる、日本列島における海水準上昇に伴う海岸環境の将来予測のための基礎的資料を得ることを目的とするものである。本年度は、分担者各人はそれぞれ現地調査を中心に研究を進めた。主な調査地域は、北から、オホ-ツク沿岸釧路(松島)、庄内海岸(福本、中西ー研究協力者)、山形県飛島、(宮内)、新潟平野(米倉、海津)、九十九里海岸平野(砂村)、山陰海岸(貞方)、足摺岬(太田)、宮崎平野(宮内)、奄美大島(木庭)、与那国島(大村)、沖縄島(小池、河名ー研究協力者)などである。これらの現地調査の結果、更新世最終間氷期から現在にかけての海水準変動とそれに伴う海成段丘の形成過程がより詳細に判ってきた。また、後氷期の海面上昇とハイドロ・アイソスタシ-との関係もかなり明瞭になってきた。また、年代測定研究班は、それぞれの年代測定法の精度向上、測定年代幅の拡大に務めた。これらの結果、従来年代決定にやや困難のあった38万年前の海岸環境の変遷を解明するための手がかりを得た( ^<14>C年代測定の幅が6.5万年前位まで広がったことや、単体珊瑚化石によるウラン系列年代測定が可能となったため)。このため、氷河性海面変化のほぼ1サイクル間の海岸環境の変遷を、更新世完新世前半の期間については、ほぼ1万年刻みで、完新世後半については、千百年刻みで復元できる可能性がでてきた。設備に関しては、定温乾燥器はすでに関西大学木庭元晴助教授の研究室に設置済みである。マルチアノ-ト・コインシデンス・カウンタ-も日本大学小元久仁夫助教授の研究室(日本大学年代測定室)に設置され、年代測定を始めた。

本研究は、氷河性海面変動の1サイクルにあたる最終間氷期から現在までの期間に見られる、日本列島における海水準上昇に伴う海岸環境の将来予測のための基礎的資料を得ることを目的とするものである。本年度は、分担者各人はそれぞれ現場調査と、現地調査によって得られた試料の整理・分析、および、研究成果をまとめる準備を中心に研究を進めた。主な調査地域は、北から、オホ-ツク沿岸釧路(松島義章)、北海道日本海海岸(海津正倫)、下北半島海岸(福本紘・中西弘樹)、常磐・九十九里浜海岸(砂村継夫)、渥美半島(宮内崇裕)、山陰・山陽海岸(貞方)、奄美大島・徳之島・久米島(河名俊男)、与那国島(太田陽子・大村明雄)などである。これらの現地調査と関係資料の収集・分析をとうして、更新世最終間氷期から現在にかけての海水準変動とそれに伴う海成段丘の形成過程がより詳細に判ってきた。そして、最終間氷期最盛期の海岸環境復原図作製の目処がたった。また、後氷期の海面上昇とハイドロ・アイソスタシ-トとの関係もかなり明瞭になってきた。また、年代測定研究班は、それぞれの年代測定法の精度向上、測定年代幅の拡大に務めた。これらの結果、従来年代決定にやや困難のあった38万年前の海岸環境の変遷を解明するための手がかりを得た(_<14>C年代測定の幅が6.5万年位まで広がったことや、単体珊瑚化石によるウラン系列年代測定が可能となったため)。このため、氷河性海面変化のほぼ1サイクル間の海岸環境の変遷を、更新世完新世前半の期間については、ほぼ1万年刻みで、完新世後半については、千百年刻みで復元できる可能性がでてきた。設備に関しては、前年度設置されたマルチアノ-ト・コインシデンス・カウンタ-(日本大学年代測定室)からはすでに40点ほどの_<14>C年代が測定された。本年度設置された外部記憶装置(金沢大学、大村明雄研究室)では、ウラン系列年代測定のデ-タベ-スの作成が進み、ウラン系列年代値の信頼性の検証が進れらている。本年度は3年にわたる本総合研究の最終年度である。現地精査、年代測定を進めると同時に、最終間氷期最盛期については海岸環境変遷図を作成し報告書の付図とした。また、分担者各人は補足調査を行なった。おもな調査地域は、北から、オホーツク沿岸(松島義章)、北海道風蓮湖(海津正倫)、能登半島の海岸線(福本紘・中西弘樹)、九十九里海岸・仙台平野(砂村継夫)、房総半島(小池一之)、山陰海岸(木庭元晴)、山陽海岸(貞方昇)、沖縄島・慶良間諸島・渡名喜島・久米島・宮古島(河名俊男)である。琉球列島では、現地調査とウラン系列年代測定法やESR代測定法によって、第四紀後半の海成段丘の形成時代や形成機構、海成段丘の変形から見た地殻変動様式などが詳細に解明された。また、北海道東部では、現在生息していない貝類(温暖種)が7200年前にオホーツク海まで進入し約4000年前迄生息していたことが、中国地方では、鉄穴流しが始まった近世初頭以降、海岸線の急速な前進が生じ、これまでとは極めて異質の地形変化が進んだ事などが明らかになった。しかし、自然状態下で汀線が前進し続けてきた九十九里海岸でもの汀線の前進は期待できず、人工物に守られた不動の汀線が出現するものと予想される[ ^<230>Th/^<234>U]-[ ^<231>Pa/ ^<235>U]コンコーディア(年代一致曲線)の利用によって、一部変質したサンゴ化石から、その変質年代と死亡年代とを同時に求めることが出来たので条件さえ整えば、軟体動物殻からも十分信頼できるウラン系列年代が得られることが期待できる。ウラン系列年代測定法の有効性が拡大する事が明らかとなった。最終間氷期以降の海岸環境変遷の解明に多大の貢献が期待される。
精神疾患脆弱性、および薬物応答性に関わる因子の探索

精神疾患脆弱性や薬物応答性は遺伝的要因との関与が知られており、その遺伝的要因を明らかにすることで、精神疾患の重症化を防ぎ、また、適正な薬物治療を行うことが可能となる。本研究では、精神疾患脆弱や薬物応答性の遺伝的要因を探索するために、まず日本人健常者での精神疾患脆弱性に関わる遺伝子多型データの蓄積を試みた。解析した遺伝子多型の一部は、これまで日本人での頻度報告がなく、精神疾患脆弱性、および治療薬応答性を検討する上で、有益なデータとなると考えられた。大きな社会問題となっているうつ病などの精神疾患は、その特殊性から軽症のうちに自らが進んで受診するケースは少なく、重篤化する前に治療を開始することが重要である。本研究の目的は精神疾患の脆弱性や薬物応答性に関わる要因を検索することである。初年度は精神疾患、特に代表的な精神疾患であるうつ病と統合失調症の脆弱性に関わる健常人データベースの構築を目的に研究を行った。初年度の対象は、以下の遺伝子多型(5HTTLPR, NET-182T>C, DRD2 TaqI, 5HT2A-1438G>A, CREB1 rs4675690, PACAP rs2856966, BDNF 196G>A)とし、健常人250名について解析を行った。CREB1とPACAPの遺伝子多型解析には、新規にアレル特異的PCR,またはPCR-RFLPによる方法を構築した。本研究で得られた5HTTLPR, NET-182T>C, DRD2 TaqI, 5HT2A-1438G>A, PACAP rs2856966, BDNF 196G>Aの遺伝子多型分布は、これまでに報告されていた日本人健常人データとほぼ同じであった。次年度は精神疾患患者検体について、上記遺伝子多型を解析し、健常人データと比較することで、精神疾患脆弱性に関わる遺伝的要因について調べると共に、精神疾患患者の治療薬歴とその薬物応答性、遺伝子多型データを解析し、薬物応答性に関わる遺伝的要因についても検討を行う。社会的ストレスを含む精神疾患は大きな社会問題であるが、その特殊性から軽症のうちに自らが進んで受診することは少ない。精神疾患の脆弱性には遺伝的要因が関与していることが知られており、その遺伝的要因を明らかにすることで、例えば、個人の同意を得た上で遺伝子解析を行い、得られた情報を基に個人自らがセルフケアを行うことが可能となる。また、抗うつ薬をはじめとする精神疾患治療薬の応答性にも遺伝的要因が関わっていることが知られており、症状の重篤化により薬物治療が開始されたとしても、遺伝子情報を基にした個別化医療を直ちに施行することができる。本研究では、精神疾患脆弱性、および治療薬応答性に関わる遺伝的素因の探索を目的としている。まず、日本人健常者での精神疾患脆弱性に関わる遺伝子多型データの蓄積を試みた。日本人260人において、うつ病などの精神疾患脆弱性に関わる遺伝子(セロトニントランスポーター(5HTT)、ノルアドレナリントランスポーター(NAT)、ドパミントランスポーター(DAT)、cAMP responsive element binding protein 1 (CREB1)、脳由来神経栄養因子(BDNF)、セロトニン2A受容体(5HT2A)、piccolo(PCLO)、PACAPなど)において多型解析を行った。そのうちCREB1 rs4675690、PCLO rs2522833に関しては、これまで日本人での頻度分布の報告がなく、また欧米人とは異なるアレル頻度分布を示し、日本人と欧米人との間に人種差が存在する可能性が示唆された。これらの結果は、今後、精神疾患脆弱性、および治療薬応答性を検討する上で、有益なデータとなると考えられた。
フランスにおける刑事事件報道の規則

本研究の結果、次のような知見を得ることができた。2.1881年出版自由法(フランスにおける現行の言論基本法)の諸条件に規定される弁論(debat)および判決(decision)の公表の原則およびその例外の制度について-1881年法によって、「裁判所における審理に関し、善意でなされた正確な報道」の自由の原則が確立されている(第41条)が、(1)名誉毀損訴訟の報道が、人の私生活に関する事実、10年以上溯る事実、大赦もしくは時効の対象となった法律違反を構成する事実、名誉回復や再審によって消滅した有罪事実に関する場合(第39条)、(2)親子関係、養育費請求、離婚、別居、婚姻無効、中絶などの事実に関する場合(第39条)には、当該事件の報道が禁止されることが定められていることが明らかになった。3.刑法典第226条および第227条に規定される裁判所の独立および権威の保護の制度について-両条文によって、(1)終局裁判の決定以前に証人の証言や司法決定に影響を及ぼす可能性のある解説、(2)裁判所の行為および決定に対する不信をかきたてようとする行為、が禁止されているものの、これらは、純粋に学術的な解釈、再審を求める行為、などには適用されないことが明らかになった。
漆黒の質感　ー黒うるしの表面特性とその感性評価ー

近年プロの目を満足させるディスプレイ仕様に関する研究が様々な視点から行われている.本研究では,漆器製作経験者と非被験者に対して黒漆器椀の塗料・素地・艶の判別実験を行い,被験者群間の相違について検討した.同時に,素材判別に必要な情報を明らかにするため,様々な物理特性の計測を行った.実験刺激として同じ形の黒い漆器椀を8個用意した.漆器椀には塗料として国産天然漆とカシューを用い,それぞれ艶ありと艶消しを用意した.素地としては天然木,集積材,プラスチックを使用した.実験の手順は最初に実験刺激を見るだけで判断する「見るだけ条件」を行った.次に実験刺激を自由に観察できる「見て触る条件」を行った.実験結果より,両被験者群ともに後者の方が成績が良かった.物理特性との関係では,漆器椀内部の輝度コントラストに塗料による相違が見られた.まずは輝度分布を測定し漆器椀内部の立ち上がり部分に該当する底面,側面の平均輝度をLB,LSとし,(LB-LS)/LBを輝度コントラストとした.天然漆はカシューより高い輝度コントラストであった.これより経験者は,天然漆とカシューを判別する際に,漆器椀内部の輝度コントラストの微小な違いを用いている可能性がある.他にも,BRDF,表面粗さ,重さ,厚みの計測を行った.BRDFは艶の判断に,表面粗さ,重さ,厚みは触感に関係していると考えられる.漆器椀判別実験の結果では,全ての試行において経験者群は非経験者群より高い正解率となった.経験者は優れた判別力を持っていると考えられる.物理特性の計測より,経験者は視覚情報としては漆器椀内部における輝度コントラストの微小な違いを用い,それに他の情報を加えて天然漆とカシューを判別している.25年度が最終年度であるため、記入しない。25年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、光学計測、漆工芸、感性工学、視覚心理物理を専門とする分野横断的研究グループにより、黒漆表面の物理特性と漆黒の質感の関係解明を目的とする。平成23年度は、連携研究者である松島さくら子の研究室で製作した下塗、胴刷り、漆磨きの各工程での漆手板を提示刺激とした評価実験を行った。現有の黒みマッチングボックスを用い、様々な輝度コントラストで呈示されるマッチングボックス内の円形参照刺激と手板刺激の黒みを比較し、どちらがより黒いかを被験者に応答させる。これを繰り返して、知覚的黒みが等しくなるコントラストを種々の条件で決定した。被験者には、工学部学生と教育学部美術コースの学生を採用し、美術に対する興味等に関するアンケートを実施した。刺激呈示条件は、円形窓がある板をかぶせてマッチングボックスの参照刺激の見え方とほぼ同じ状況にした「窓有り」条件と、手板の存在感が認識できる「窓なし」条件で行った。現在結果を解析中である。また、同じ領域の京都工芸繊維大学の大谷芳夫グループから光沢度の異なる漆板群を借りて、連携研究者の芝浦工業大学大倉典子が黒漆板の評価語を絞り込み、感性評価実験を実施中である。学内共同研究施設現有の三次元形状計測装置および電子顕微鏡を用いて、既存漆手板刺激表面の表面粗さ測定と電子顕微鏡写真撮影を実施した。しかしこれはまだ試験的なものである。また、同じ領域の千葉大学の津村研究室の装置を用いて、宇大の手板刺激と京都工芸繊維大学の漆板の双方向反射率分布関数(BRDF)を測定した。また、評価実験に手板を設置し、被験者の観察位置からの輝度を測定した。窓有り条件では被験者群間の相違はないが、窓なし条件では美術コース学生の結果の個人差が大きくなる傾向が見られた。近年プロの目を満足させるディスプレイ仕様に関する研究が様々な視点から行われている.本研究では,漆器製作経験者と非被験者に対して黒漆器椀の塗料・素地・艶の判別実験を行い,被験者群間の相違について検討した.同時に,素材判別に必要な情報を明らかにするため,様々な物理特性の計測を行った.実験刺激として同じ形の黒い漆器椀を8個用意した.漆器椀には塗料として国産天然漆とカシューを用い,それぞれ艶ありと艶消しを用意した.素地としては天然木,集積材,プラスチックを使用した.実験の手順は最初に実験刺激を見るだけで判断する「見るだけ条件」を行った.次に実験刺激を自由に観察できる「見て触る条件」を行った.実験結果より,両被験者群ともに後者の方が成績が良かった.物理特性との関係では,漆器椀内部の輝度コントラストに塗料による相違が見られた.まずは輝度分布を測定し漆器椀内部の立ち上がり部分に該当する底面,側面の平均輝度をLB,LSとし,(LB-LS)/LBを輝度コントラストとした.天然漆はカシューより高い輝度コントラストであった.これより経験者は,天然漆とカシューを判別する際に,漆器椀内部の輝度コントラストの微小な違いを用いている可能性がある.他にも,BRDF,表面粗さ,重さ,厚みの計測を行った.BRDFは艶の判断に,表面粗さ,重さ,厚みは触感に関係していると考えられる.漆器椀判別実験の結果では,全ての試行において経験者群は非経験者群より高い正解率となった.

経験者は優れた判別力を持っていると考えられる.物理特性の計測より,経験者は視覚情報としては漆器椀内部における輝度コントラストの微小な違いを用い,それに他の情報を加えて天然漆とカシューを判別している.当初の予定通り,1)漆産地別および工程別の漆手板の製作,2)それらの手板を用いた黒み評価実験の実施,3)表面粗さの試験的測定,4)漆手板の漆塗布部の電子顕微鏡写真撮影,5)感性評価実験の評価語絞り込み、6)感性評価実験、7)黒みマッチングボックスを用いた黒み評価実験、8)双方向分光反射率測定、9)分光反射率測定、などを実施することができたため.25年度が最終年度であるため、記入しない。今後の研究課題としては、1)漆を塗布したアクリル板を製作し、その分光透過率の測定、2)昨年の45°とは異なる入射光角度に設定した条件での双方向分光反射率測定、2)ワンポイント蒔絵をつけた手板を製作し、かわいい評価実験、3)黒み評価を行った手板刺激を用いた感性評価実験、を行う。感性評価実験および黒み評価実験の結果と、様々な物理特性の測定結果を比較検討し、どのような質感評価がどの物理特性と関係があるのかを解明する。25年度が最終年度であるため、記入しない。
実験的歯牙形成不全に関する研究:サイトメガロウィルス感染の影響

前年度において、妊娠マウスの腹腔内にMCMVを接種した場合、仔マウスの下顎切歯に色調の変化を発現し、その所見にはマウスの系統差が認められたとの結果を得た。本年度の目的は、(1)感染ウイルス量と発現の関係を明らかにする、(2)受身免疫をした場合と不活化ウイルスを接種した場合において、色調の変化を観察する、(3)幼齢マウスに感染させた場合について同様に観察する、ことである。【結果】(1)胎生期16日齢に10^6PFU/0.2mlのMCMVを接種した。感染後2,24、72時間後にanti-mousecytomegarovirus antibodyをBalb/C系マウスに接種した場合、非抗体接種群と比較し、抗体接種群における下顎切歯に色調の変化を発現する割合は有意に減少し、仔マウスの生存率は低下した。生存率の低下は繰り返しの腹腔内接種の影響によるものが考えられる。(2)Balb/C系マウスにおいて、妊娠中の10^4PFUの感染価では、下顎切歯の色調変化の発現は認められなかった。10^<6-7>PFUの感染価では30-50%の発現を見た。高い感染価においては、顕微鏡下で70%以上の切歯の組織に亀裂等の所見を見た。C3H群において、10^5PFUの感染価では20%に白斑等の所見を認めた。(3)生後48時間以内の新生児マウスの腹腔内に10^<2-4>PFUのMCMVを接種した場合、生後3週齢から下顎切歯の破折、黒変、黄変、白帯などの顕著な所見を認めた。何らかの異常な所見を発現した率は、Balb/C系とC3H系の両者のマウスにおいて、10^2PFUの感染価の場合それぞれ100%、70%であった。(4)幼齢マウスにおける実験は時間不足のため行うことができなかった。マウス胎児の歯胚形成期から石灰化開始期にあたる胎生1216日齢に、Balb/C系並びにC3H系妊娠マウスの腹腔内に10^6Plaque-forming Unit(PFU)のマウスサイトメガロウィルス(MCMV)を感染させた。出生した仔マウスについて、体重、歯牙の萌出量及び色調を経時的に観察した。下顎骨を摘出し、脱灰標本を作製し観察した。経時的に仔マウスの脾臓、肝臓、唾液腺を採取し、ウィルスの検出を行った。結果:(1)Balb/C系の仔マウスにおいて、感染群と非感染群を比較し、歯牙の萌出量に明らかな差は認められなかった。体重は、感染群において2週齢まで低い値を示した(2)色調については、感染群において出生後3-5週に黄色を帯びるものが約50%認められた。(3)出生後0-3日齢の仔マウスの下顎切歯のHE染色標本において、感染群では石灰化が僅かに少ない像が認められた。(4)生後2日齢の感染群の一部において、脾臓、肝臓からウィルスが検出された。生後4週齢の感染群仔マウスにおいて、脾臓、肝臓、唾液腺よりウィルスが検出された。(5)C3H系感染群において、著しく低体重や発育不全を示す仔マウスが各母獣より数匹ずつ出生した。(6)C3H系では、色調の黄変を示した割合は低く、30%程度であった。3週齢以降に下顎切歯に白斑や白帯を示した割合は、胎生16日齢感染群では70%にのぼり、マウスの系により症状の差が認められた。感染ウィルス量と症状の発現との関係を調べることは時間的不足で行うことができなかった。次年度に行う予定である。

(3)生後48時間以内の新生児マウスの腹腔内に10^<2-4>PFUのMCMVを接種した場合、生後3週齢から下顎切歯の破折、黒変、黄変、白帯などの顕著な所見を認めた。何らかの異常な所見を発現した率は、Balb/C系とC3H系の両者のマウスにおいて、10^2PFUの感染価の場合それぞれ100%、70%であった。(4)幼齢マウスにおける実験は時間不足のため行うことができなかった。
血液凝固と自然免疫のクロストークによる移植膵島拒絶反応の解析と制御に関する研究

臨床膵島移植の現在の最も重要な課題は一人のインスリン依存糖尿病治療に2ー3回の膵島移植、すなわち2ー3人分のドナーを必要とする非効率性が上げられる。先に我々はこの成因として移植部位(経門脈的肝内)での自然免疫拒絶反応の関与(JEM 2005)とともに、膵島に豊富に存在するHMGB1が必須の役割を担っていることを明らかにした(JCI 2010)。これらの知見はHMGB1がDIC惹起因子であることより、その治療薬がHMGB1を抑制し、移植膵島自然免疫拒絶反応を制御できることを示唆している。事実、平成23年度の研究成果で既に臨床導入されているアンチトロンビンIIIが移植早期膵島障害を制御できることを報告した(Transplantation 2012)。平成24年度の研究ではアンチトロンビンと同様にDICの治療薬として臨床使用されているトロンボモヂュリンについて検討し、以下の結果を得た。#1.HMGB1刺激(静注)による肝内NKT細胞、好中球からのIFN-gの産生がトロンボモヂュリン投与(静注)により抑制された。#2.STZ糖尿病マウスへの同種同系膵島200個(ドナー1匹分)の肝内膵島移植後対照群ではレシピエントは高血糖で推移したが、トロンボモヂュリン投与群(移植時1回、静注)では正常血糖になった。#3.肝内単核球のFACS解析で、対照群では膵島肝内移植後6時間でNKT細胞と好中球からのIFN-g産生がトロンボモヂュリン投与群では抑制されていた。以上の成果は第24回国際移植学会(ベルリン、2012)で発表した。上記知見はトロンボモヂュリンが移植早期膵島障害を制御できることを示している。トロンボモヂュリンは救命救急医療の臨床でDICでの救命率を改善する薬剤として使用されており、膵島移植への臨床使用に問題はなく、トロンボモヂュリンによる膵島移植の移植効率改善への効果が期待される。臨床膵島移植の現在の最も重要な課題は一人のインスリン依存糖尿病レシピエントの治療に2ー3回の膵島移植、すなわち2ー3人分のドナーを必要とする非効率性が上げられる。この課題は膵島移植特有の問題で、現在までの我々の研究成果で移植後早期(24時間以内)に発現する自然免疫共絶反応による移植膵島細胞死に起因していることが判明している。本研究ではこの自然免疫拒絶反応が血液凝固関連製剤により制御できるか検討し、以下の結果を得た。平成23年度はマウス膵島移植のin vivo実験系を用いて、臨床使用されている全ての血液凝固関連製剤について、自然免疫拒絶反応による移植早期(24時間以内)膵島障害を制御できるかどうか検証した。その結果、アンチトロンビンIII(ATIII)の移植時単回投与で1匹のマウスより単離できる膵島数(200)の経門脈的肝内移植でSTZ糖尿病マウスの血糖が正常化することが判明した。対照群はいずれも高血糖で推移した。機序を解明するために移植局所の肝臓より単核球を単離し、FACSで解析した。その結果、ATIII投与群で膵島移植を受けた肝臓単核球で自然免疫拒絶反応に必須の役割を担っているNKT細胞、好中球のIFN-γ産生が抑制されていることが判明した。

更に、HMGB1との関連性に於いて、ATIIIはHMGB1刺激によるNKT細胞、好中球のIFN-γ産生を抑制した。これらの所見はATIIIが移植後膵島より放出されるHMGB1の作用を抑制し、移植膵島障害を軽減していることを示している。この知見は臨床膵島移植にとって極めて有用で、Transplantationに投稿し、採択されている。ATIIIについては投稿が完了し、すでに論文がTransplantationに採択されており、研究目的はおおむね達成されていると判断できる。今後は他の血液凝固製剤(トロンボモヂュリン、FOY)の移植膵島障害制御作用について検討する。研究遂行上の問題はなく、支障なく遂行できると考えられる。。本研究課題を遂行するに際して設備備品は全て現有しており、新たな購入はない。動物実験に必要な経費、ならびに旅費を以下の如く使用予定である。消耗品費:実験動物(マウス)50万円、膵島単離、移植用試薬10万円、FACS試薬10万円国内旅費:研究打ち合わせ(理化学研究所横浜)2回、15万円外国旅費:研究打ち合わせ(米国ロスアンジェルスCity of Hope研究所、5泊7日)35万円