hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新型の出現に対応したアデノウイルス検出法の開発

昨年度に引き続き、作成したリアルタイムPCR法を臨床検体へ応用し、2症例の尿道炎の尿検体からアデノウイルスを検出した。ウイルスの型別を行った結果、アデノウイルス56型で、発症2週間後の尿検体からもウイルスが検出可能であった。また、ヘキソンloop1領域を用いて作製した型別用のPCR法を用いて、2012年から2016年の間に結膜ぬぐい検体から分離されたアデノウイルス株の分子疫学解析を行った。咽頭結膜熱からは3型、4型、54型が、結膜炎からは37型、53型、54型、56型が検出でき、塩基配列はいずれの型も同型間で相同性が非常に高かった。ウイルス分離方法については41型および54型のアデノウイルス株で検討した。用いた細胞株はMA104、U251、HEp2、HCT116、HEK293で、通常ウイルス分離に用いているA549細胞と細胞変性効果(CPE)を比較した。54型についてはA549細胞より効率よくCPEが観察できる細胞は認められなかったが、41型についてはHEK293細胞の方がA549細胞より細胞変性効果がより強く認められた。そこで、HEK293細胞およびA549細胞に10 TCID 50の41型のウイルスを感染させ、24、48、72時間でのウイルスコピー数をリアルタイムPCR法で測定し、その増殖性を検討した。その結果、48時間まではどちらの細胞でも同等の増殖性を示したが、A549細胞は48時間でピークとなった。72時間ではHEK293細胞でのみさらにウイルスコピーが増加していた。HEK293細胞は、臨床検体からの41型の分離にも有用だと考えられる。本研究で作製したアデノウイルス検出法およびその応用について論文化する予定であったが、その作成が遅れているため。前年度までに得られた結果をまとめ、査読付き論文として発表を行う。アデノウイルスは近年、同種間の遺伝子組換による新型株の報告が日本を含む各国で相次いでおり、これらのウイルス株は従来の抗血清を用いた型別方法では正確に型別するが難しくなっている。新型株も含めて型別を行うにはアデノウイルス遺伝子全長または複数領域の遺伝子解析を行うのが最も正確であるが、多検体を扱う病原体サーベイランスでは現実的には1領域で型別できることが望ましいと考えられる。そこで今回、新型を含む各型のアデノウイルスの遺伝子配列を検討することにより、新たに作製したプライマーを用いたPCR法および塩基配列解析による型別について検討を行った。その結果、当所で保管している各型のアデノウイルス分離株を用いてそのヘキソン遺伝子の抗原領域(loop1領域)の部分配列(約600bp)を決定することにより、近年国内で一般的に検出されている各型の型別が可能であることが確認された。また、臨床検体からアデノウイルスを高い感度で検出できるようリアルタイムPCR法による検出系の確立を試みた。ペントンベース遺伝子の部分領域を用いたこの方法は、新しい型である53型、54型、56型に加えて当所で分離された57型および82型も検出可能で、A-F種のすべての種のアデノウイルスが検出できることを確認した。陽性コントロールを用いた検討では、この系で少なくとも10コピー/μLまで検出可能で、実際の病原体検索に応用できると考えられる。当初に計画していた通り、アデノウイルスの型別に適当な領域を用いたPCR法を作製でき、また、所期の計画に加えてリアルタイムPCR法による高感度な検出系を作製し、いずれの方法についても臨床分離株を用いてその有用性を検証することができた。アデノウイルスは型が非常に多く、近年は新型の検出報告が相次いでいる。また、アデノウイルスのサーベイランスは検体の種類が多岐に渡るため、作製したリアルタイムPCR法が臨床検体からのアデノウイルス検出に応用できるかを検証した。前年度に作製したリアルタイムPCR法について、臨床検体を用いたウイルス分離の結果と比較したところ、ウイルス分離が陽性であった20検体から、検体の種類(咽頭ぬぐい液、鼻汁、結膜ぬぐい液、尿、便)に関わらず問題なくアデノウイルスを検出できた。また分離陰性であった10検体のうち8検体はリアルタイムPCR法でも陰性であったが、2検体からは低コピーのウイルスを検出することができた。使用したアデノウイルス1型および41型のDNAコントロールは共に10コピー/μLまで検出可能であった。前年度に同時に作製したPCR法については、リアルタイムPCR法に比べて感度が低いため検体からの検出には不向きであるが、一組のプライマーでA-F種の超可変領域を増幅することが可能なため分離株の型別に有用であった。国内で一般的に検出される各型のアデノウイルスの本リアルタイムPCR法での検出については前年度に分離株を使って確認済みであるが、結膜炎の原因ウイルスとして2017年に同定された新型アデノウイルスである85型を尿検体から本法で検出することができた。また、本検出法を用いて経時的に尿検体からのウイルス検出を試みた結果、最長で発症から約一ヶ月間ウイルス遺伝子が検出可能であることが明らかとなった。アデノウイルス遺伝子を用いた検出および型別法の検討についてはほぼ所期の計画通りに進めることができ、実際のサーベイランスにも応用可能であることが確認できた。ウイルス分離培養方法の検討については次年度も実施する。

昨年度に引き続き、作成したリアルタイムPCR法を臨床検体へ応用し、2症例の尿道炎の尿検体からアデノウイルスを検出した。ウイルスの型別を行った結果、アデノウイルス56型で、発症2週間後の尿検体からもウイルスが検出可能であった。また、ヘキソンloop1領域を用いて作製した型別用のPCR法を用いて、2012年から2016年の間に結膜ぬぐい検体から分離されたアデノウイルス株の分子疫学解析を行った。咽頭結膜熱からは3型、4型、54型が、結膜炎からは37型、53型、54型、56型が検出でき、塩基配列はいずれの型も同型間で相同性が非常に高かった。ウイルス分離方法については41型および54型のアデノウイルス株で検討した。用いた細胞株はMA104、U251、HEp2、HCT116、HEK293で、通常ウイルス分離に用いているA549細胞と細胞変性効果(CPE)を比較した。54型についてはA549細胞より効率よくCPEが観察できる細胞は認められなかったが、41型についてはHEK293細胞の方がA549細胞より細胞変性効果がより強く認められた。そこで、HEK293細胞およびA549細胞に10 TCID 50の41型のウイルスを感染させ、24、48、72時間でのウイルスコピー数をリアルタイムPCR法で測定し、その増殖性を検討した。その結果、48時間まではどちらの細胞でも同等の増殖性を示したが、A549細胞は48時間でピークとなった。72時間ではHEK293細胞でのみさらにウイルスコピーが増加していた。HEK293細胞は、臨床検体からの41型の分離にも有用だと考えられる。本研究で作製したアデノウイルス検出法およびその応用について論文化する予定であったが、その作成が遅れているため。作製した方法を実際の病原体サーベイランスで使用し、現在行っている型別方法と結果の比較を行う。特に新型アデノウイルスの型別は1領域の塩基配列解析で実際に問題なく応用可能かを検討する。また、ウイルス分離が難しいあるいは時間がかかると考えられるD種やF種のアデノウイルスの分離方法を検討するために、これまであまりアデノウイルスの分離に使用されていないような細胞株を用いて受容体分子の発現の有無や分離および増殖効率に改善が認められるかについて検証を行う。さらに、当所で保有しているD種やF種の臨床分離株の中には、比較的増殖効率が良い株があるため、そのウイルス遺伝子を解析して増殖効率が良くない株と何らかの違いがないか検討を行う。リアルタイムPCR法による臨床検体からのウイルス検出については必要に応じて次年度も実施する。ウイルス分離が難しいあるいは非常に時間がかかるD種およびF種のアデノウイルスについては、より分離しやすい細胞株や方法など、サーベイランスに応用可能な分離培養方法を引き続き検討する。また、増殖効率が良いウイルス株の分子系統解析を行い、分離率に改善が見られた細胞株については細胞表面の接着分子等の発現を検討する。前年度までに得られた結果をまとめ、査読付き論文として発表を行う。当初予定していた学会に参加できなかったために旅費が予定額より少なくなったため。ウイルス分離培養法の検討において消耗品の使用量が予定していたより少なかったため。次年度の検討で使用する予定である。論文執筆が遅れ、投稿に至らなかったために次年度使用額が生じた。論文発表のための費用して使用する予定である。
海洋生態系の持続的な食物連鎖の維持と窒素・炭素安定同位体効果の関係

栄養段階に伴うδ15N及びδ13Cの濃縮の変動について、捕食者の生理状態、餌と捕食者の筋肉のアミノ酸組成の差、この2つの要素に着目し、1成魚を用いた飼育実験、2代謝理論モデルによる検証、に着手した。1飼育実験:2018年度(平成30年度)は、魚種の選定作業および実験期間や餌調合について研究協力者(水産研究・教育機構杉崎氏および水産研究・教育機構瀬戸内海区水産研究所米田氏)と相談しながら準備を行った。飼育実験の魚種選定にあたって、成熟ステージによる同位体比のバラつきを除外するために成魚で実験可能なこと、また給餌実験時に複数個体の同位体の体組成比を揃えることが可能な飼育魚であること、数か月から1年程度の給餌実験が行える飼育環境が整っていること、以上の要素がクリアできる魚種を慎重に選定した。検討した結果、本科研費内に給餌実験が複数回行え、且つ同位体に対するターンオーバータイムが異なると考えられる2つの魚種、カタクチイワシ(ターンオーバータイムが12か月程度と比較的早い)、マイワシ(カタクチイワシに比べ、ターンオーバータイムが数か月程度と長い)を用いて給餌実験を行うことにした。給餌実験の前準備として、搬入したイワシの同位体比の組成比を揃え、さらに成熟・産卵ステージを除外する必要があるため、2019年度(令和元年度)秋季から本実験を開始することとした。なお、給餌実験は、水産研究・教育機構瀬戸内海区水産研究所にて、米田氏の研究協力のもと実施する。2代謝理論モデル:代謝系のダイナミクスと炭素・窒素同位体効果についてタンパク質合成・分解素過程の代謝理論モデルを用いて、同位体濃縮効果の生理的理論値の推定と同濃縮率が成長速度、餌のC/N比などの生育条件に対して受ける影響の感度を推定するモデルの開発を行った。2018年度(平成30年度)は窒素同位体比に関する代謝モデルの開発を進めた。魚種の選定作業が難航したため、給餌実験の開始時期が当初予定していた時期よりも半年程度遅れた(当初予定では、2018年度(平成30年度)末には、最初の実験を行う予定であった)。しかし、ターンオーバータイムが異なる2魚種(カタクチイワシ、マイワシ)を選定し、さらに同位体比の再現性をに関して極めて良い実験環境が確保できたこと、イワシ類の給餌実験に関し熟達した研究者の研究協力を得られたことは、代謝理論モデルの比較検証にも有意義であると考えている。給餌実験は、やや遅れているものの、代謝理論モデル開発は予定通り進行している。1飼育実験:同位体比に関してターンオーバータイムが異なると考えられるマイワシ、カタクチイワシを用いた給餌実験を、成熟・産卵ステージ期間外となる2019年度(令和元年度)秋季から実施する。そのための前準備として、個体の体組成比をそろえるための飼育を現在進めている。給餌実験では、異なる配合飼料を用いた感度実験などを行うことにより、対象魚種の筋肉中の同位体組成の調査解析を行う。2代謝理論モデル:窒素同位体比と共に炭素同位体比に関する代謝モデル開発を進める。開発したモデルを用いて、同位体濃縮効果の生理的理論値の推定と、同濃縮率が成長速度や生育条件(餌の組成の違いなど)に対して受ける影響の感度を推定し、給餌実験結果の説明要因の妥当性について検証する。また、実験データの複数回の取得と、理論モデルを用いた検証を実施したいと考えている。

魚種の選定作業が難航したため、給餌実験の開始時期が当初予定していた時期よりも半年程度遅れた(当初予定では、2018年度(平成30年度)末には、最初の実験を行う予定であった)。しかし、ターンオーバータイムが異なる2魚種(カタクチイワシ、マイワシ)を選定し、さらに同位体比の再現性をに関して極めて良い実験環境が確保できたこと、イワシ類の給餌実験に関し熟達した研究者の研究協力を得られたことは、代謝理論モデルの比較検証にも有意義であると考えている。給餌実験は、やや遅れているものの、代謝理論モデル開発は予定通り進行している。1飼育実験:同位体比に関してターンオーバータイムが異なると考えられるマイワシ、カタクチイワシを用いた給餌実験を、成熟・産卵ステージ期間外となる2019年度(令和元年度)秋季から実施する。そのための前準備として、個体の体組成比をそろえるための飼育を現在進めている。給餌実験では、異なる配合飼料を用いた感度実験などを行うことにより、対象魚種の筋肉中の同位体組成の調査解析を行う。2代謝理論モデル:窒素同位体比と共に炭素同位体比に関する代謝モデル開発を進める。開発したモデルを用いて、同位体濃縮効果の生理的理論値の推定と、同濃縮率が成長速度や生育条件(餌の組成の違いなど)に対して受ける影響の感度を推定し、給餌実験結果の説明要因の妥当性について検証する。また、実験データの複数回の取得と、理論モデルを用いた検証を実施したいと考えている。飼育実験の魚種選定作業に難航したため、当初計画していた物品購入や旅費、その他経費を使用することが出来なかった。2019年度(令和元年度)は飼育実験を行う計画であり、前年度未使用の助成金を執行する予定である。
イラン中世国家の支配構造

1.グルジア王国は、1220年ジェベとスュベテイ軍、1936年にチョルマガン・ノヤン軍による征服を受けた後、モンゴル帝国、およびその後継者としてのイルハン国の支配を被る。イルハン国崩壊後は、チム-ル帝国、カラユンル朝、アクコユンル朝に支配される。ジョベとスュブティの軍はグルジアの首都トビリスィには入らなかったが、1236年グルジア王国の東部はヤサウル、西南部はチャガタイによって征服され、8個の万人隊区に組織された。また、人口調査と新税制が実施されると現地長官アルグンは、グルジアの9個のトマン(郡)を置き、タブリーズから知事が派遣された。1256年、チョルマガン軍は、アランからアナトリア、タウロス山脈の西に移動し、ザカフカ-スには、フラグの遊牧地が配置された。2.アナトリアのセルジューク朝(ルーム・セルジューク朝)の国力は、ホラズムの滅亡後ジョズィーラ地方とアゼルバイジャン(現イラン領のタブリーズ地方)地方に伸張して、モンゴル帝国のチョルマガン・タマチ軍とバグダードのアッバース朝とを遮断したが、これが、モンゴル軍のアナトリア遠征の理由となった。大アルメニアは、13世紀の始め、アイユ-ブ朝、セルジューク朝のイスラーム王朝によて支配されていたが14世紀にはカラコユンル朝、15世紀にはアクコユンル朝の支配を受ける。カラコユンルの起源の初期の活動はこれはで不明であったが、13世紀30-40年代にアナトリアやシリアを根拠地としてグルジア南部に侵入したトルコマン人は、ホラズムシャーの指揮下にあった人々であり、13世紀末にヴァン湖西北に遊牧していたいた集団と関係がある。彼らの一部はイルハン・アブ-サイド期に地域的政治権力として承認され、カラコユンル集団として組織された。初年度においては、史料整理等の都合上、広い意味で歴史的にイラン圏に含まれるザカフカース(トランス・コーカサス、南コーカサス)諸国家の支配構造の問題について、研究およびその成果の公表をおこなった。先ず、助成題目と直接関係のある中世に関しては、モンゴル帝国のグルジア支配の前提となるジェベおよびスベテイの遠征に関して、モンゴル軍とグルジア軍の三度に及ぶ戦闘の年次、場所、結果について、ペルシャ語、アラビア語、アルメニア語、グルジア語等の史料に基づいて考証した。また、1230-50年代にわたるモンゴル軍のザカフカース、東アナトリア、イラク、イラン北西部の活動に関する分析をおこない、モンゴル帝国の北西イラン支配について研究した。これらの成果は、講義において発表したが、前者については、「ジェベとスベテイのグルジア遠征」『史朋』に出版、後者についても、「チョルマガン軍政府考-12世紀30-50年代アルメニア、アゼルバイジャン、グルジアのモンゴル軍」として公刊発表原稿を作成中である。今日のザカフカースにおけるいわゆる「民族紛争」は、ロシア帝国とオスマン帝国の進出、抗争によって中世的国家秩序が歪められて解体されたことに起因するが、この過程については、「ザカフカース」『スラブの世界』第9巻(1994年刊行開始予定)に発表した。また、この件に関する現代アゼルバイジャンの歴史記述の問題については、1994年1月日本国際問題研究所主催の「日英ラウンド・テーブル」において、“International affairsand ethinic conflicts in the Transcaucasia"として発表した。発表原稿は、公刊される予定である。なお、グルジア古代、中世、近世国家の諸問題についても、1993年8月東京外語大学アジア・アフリカ言語文化研究所の語学研修(グルジア語)において、講義を行った。

今年度は、ホラズム帝国、モンゴル帝国およびイルハン国時代の中央政権とイラン・東部アナトリア・ザカフカ-スの在来政権との関係を研究した。主要な成果は以下の通りである。1.アナトリアのセルジューク朝(ルーム・セルジューク朝)の国力は、ホラズムの滅亡後ジャズィーラ地方とアゼルバイジャン(現イラン領のタブリーズ地方)地方に伸張して、モンゴル帝国のチョルマガン・タマチ軍とバグダードのアッバース朝とを遮断したが、これが、モンゴル軍のアナトリア遠征の理由となった。2.ホラズム帝国の残党は、長期間ジャズィーラ地方に滞留したが、アイユ-ブ朝、アルトゥク朝等の在地勢力の間に恒久的地歩を確立することができず、シリアに移動した。3.1256年、モンゴル・タマチ軍は、アランからアナトリア、タウロス山脈の西に移動し、タウロス山脈には、フラグ揮下のトゥダン等が配置された。4.モンゴル支配下の東部アナトリアとジャズィーラにアクコユンル、カラコユンルのトルコマン遊牧民集団が形成されるが、前者の主体は、セルジューク朝期の、後者の主体は13世紀の移住者であった。5.14世紀半ばまで、東部アナトリアとジャズィーラのトルコマン人は、地方君侯や、モンゴル人遊牧貴族の統治下にあり、イルハンは彼らを直接統治していなかった。地方からのモンゴル部族軍の移動が、トルコマン集団の勃興を促した。1グルジア王国は、1220年ジョベとスベテイ軍、1936年にチョルマガン・ノヤン軍による征服を受けた後、モンゴル帝国、およびその後継者としてのイルハン国の支配を被る。チム-ル帝国の征服の後、カラコユンル朝、アクコユンル朝に支配される。2ジョベとスュブテイの軍はグルジアの首都トビリスィには入っておらずその点では、グルジア軍が勝利したとする評価も間違いではない。1236年グルジア王国の東部はヤサウル、西南部はチャガタイによって征服され8個の万人隊区に組織された。グルジアで人工調査と新税制がおこなわれると現地長官アルグンにより、タブリーズから知事が派遣されるが、この知事はジョチ家との関係のため排除される。アルグンはグルジアに9個のトマン(郡)を置いたが、しばしば上の8万人隊区と混同されていたことが明らかになった。3 13世紀30-40年代にアナトリアやシリアを根拠地としてグルジア南部に侵入したトルコマン人は、ホラズムシャーの指揮下にあった人々であると考えられるが、彼らの少なくとも一部は後にカラコユンル集団に組織される。4大アルメニアは、13世紀の始め、アイニ-ブ朝、セルジューク朝のイスラーム王朝によって支配されていたが、14世紀にはカラコユンル・トルコマン集団の支配をうける。カラコユンルの起源と初期の活動は、これまで不明であったが、13世紀末にヴァン湖北西に遊牧していていた集団と関係があり、イルハン・アブ-サイド期に地域的政治権力として構成されるようになる。
口唇裂・口蓋裂児をもつ母親の出生前告知の実態と告知時の支援モデル作成

口唇裂・口蓋裂児をもつ母親の出生前告知の実態把握と告知時の支援モデル作成を目的として、母親12名と医療者(医師・看護師・助産師・言語聴覚士)13名にインタビューを行った。告知場面、告知後の支援体制、治療情報提供の各々の実態ついて、母親と医療者側からインタビューした結果を検討し、出生前診断を受ける母親への支援モデルを作成した。1.出生前診断を受ける意思の確認2.適切な告知の保障(1)誰に告知:適切な時期に本人へ、あるいは、本人の希望する同席者と共に告知する(2)誰が告知:主治医、臨床遺伝専門医(遺伝カウンセラー、遺伝ナース)の参加が望ましいが、現状では看護者を同席させる(3)適切な告知の場:静かで落ち着けるプライバシーの保てる部屋3.本人の不安を取り除き、将来への希望を与える告知内容(1)医学的事項:病状、今後の治療方針(チーム医療の範囲を広げ、治療領域の専門医からの説明が受けられるようにする(2)長期予後:療育上の問題についての説明と不安への対応(3)社会資源(公的補助、親の会)に関する適切な情報提供4.告知後の継続的援助の必要性(1)ピアカウンセリング(必要時、経験者を紹介)(2)常に本人の立場で家族全体をカウンセリング(児の受容から再起の全過程を援助)し、スムーズなチーム医療に協力する(遺伝カウンセラー、遺伝ナースの役割)。この支援モデルの内容については、研究協力していただいた産科医師に説明し、実践可能、あるいは努力できる範囲との判断を頂いた。今後多くの産科領域に支援モデルの提示を行っていきたい。しかし、告知後の継続的援助を実践上可能なものとするためには、遺伝カウンセラーや遺伝ナースの育成が急務であり、看護者の役割は大きい。出生前に口唇口蓋裂の情報提供を受けた母親12名、その場面に立ち会った医療者(医師、看護師、助産師)11名に対して(1)情報提供場面の実態、(2)情報提供後の精神的支援の実態、(3)治療に関する情報提供の実態、の3項目に関して半構成的面接を実施した。母親への聞き取り調査を基に、治療専門医受診の時期別(A妊娠中受診、B出生直後受診、C産科退院後2週間未満受診、D退院後2週間以降受診)に看護の役割を検討した。その結果、妊娠中に専門医を受診しCL/CPの詳しい説明や治療、予後等について説明を受けた群では、母親の不安は小さく、冷静に事態を受け止め児の受容もよく、その後の治療もスムーズに行われている。妊娠中にCL/CPの説明を産科医からは受けていても、専門医への紹介が無いか、遅い場合は、母の不安が大きく、児の受容も治療も満足できるものではなかった。さらに、家族の対応も極めて重要で、特に祖父母の妊婦あるいは出産直後の母親に対する心無い発言(『うちの家系にはいない』)が、児の受容や治療に暗い影を落とす例が注目された。一般市民の遺伝や遺伝病に対する正確な認識が乏しい現状で、検査手法のみが進歩普及してこのような不都合が生じていることが考えられる。遺伝病・先天異常の子どもを持つと母親の情動不安はきわめて大きい。遺伝ナースや遺伝カウンセラーを早急に養成し母親の身近に配置し、治療専門医との連携をとるべきである。医療者側の聞き取り調査の分析に関しては、現在進行形であるが、治療領域に対する知識の不足が一番の問題である。そのために、いつ、どのように治療専門医と連携をとっていいのかさえ、理解できていない医療者が存在していた。少子化が進み、1年に1回出会うかどうかのCL/CP児と母親への医療は、地域差あるいは出会う医師の力量によってかなり差がある。

だれもが、活用できる支援モデルの作成を急いでいる。口唇裂・口蓋裂児をもつ母親の出生前告知の実態把握と告知時の支援モデル作成を目的として、母親12名と医療者(医師・看護師・助産師・言語聴覚士)13名にインタビューを行った。告知場面、告知後の支援体制、治療情報提供の各々の実態ついて、母親と医療者側からインタビューした結果を検討し、出生前診断を受ける母親への支援モデルを作成した。1.出生前診断を受ける意思の確認2.適切な告知の保障(1)誰に告知:適切な時期に本人へ、あるいは、本人の希望する同席者と共に告知する(2)誰が告知:主治医、臨床遺伝専門医(遺伝カウンセラー、遺伝ナース)の参加が望ましいが、現状では看護者を同席させる(3)適切な告知の場:静かで落ち着けるプライバシーの保てる部屋3.本人の不安を取り除き、将来への希望を与える告知内容(1)医学的事項:病状、今後の治療方針(チーム医療の範囲を広げ、治療領域の専門医からの説明が受けられるようにする(2)長期予後:療育上の問題についての説明と不安への対応(3)社会資源(公的補助、親の会)に関する適切な情報提供4.告知後の継続的援助の必要性(1)ピアカウンセリング(必要時、経験者を紹介)(2)常に本人の立場で家族全体をカウンセリング(児の受容から再起の全過程を援助)し、スムーズなチーム医療に協力する(遺伝カウンセラー、遺伝ナースの役割)。この支援モデルの内容については、研究協力していただいた産科医師に説明し、実践可能、あるいは努力できる範囲との判断を頂いた。今後多くの産科領域に支援モデルの提示を行っていきたい。しかし、告知後の継続的援助を実践上可能なものとするためには、遺伝カウンセラーや遺伝ナースの育成が急務であり、看護者の役割は大きい。
アナンダミド生成に係わる新規リン脂質代謝酵素の生理機能解析

N-アシルトランスフェラーゼは,カンナビノイド受容体の内在性リガンドとして知られるアナンダミドと関連脂肪酸アミド化合物の動物組織における生合成に関与する酵素であり,ホスファチジルエタノールアミン(PE)に別のグリセロリン脂質から脂肪酸鎖を転移してN-アシル-PEを合成する。我々はこの反応を触媒する新規酵素を発見し,同酵素のcDNAをラット,マウス,ヒトからクローニングし,組換えタンパク質の性状を明らかにした。カンナビノイド受容体の内因性リガンドとして見出されたアナンダミドを含む種々のN-アシルエタノールアミンは動物組織中で生体膜のグリセロリン脂質から2段階の酵素反応で合成される。この反応の第一段階を触媒するホスファチジルエタノールアミンN-アシル転移酵素の実態は依然として不明であるが、我々は、同じ反応を触媒する別酵素を発見し、Ca^(2+)非依存性N-アシルトランスフェラーぜと名付けた。同酵素のcDNAをラット、マウス、ヒトからローニングし、組換えタンパク質をCOS-7細胞で発現させたところ、いずれもCa^(2+)非依存的に反応を触媒した。また、構造類似タンパク質の間で高度に保存されているヒスチジン及びシステイン残基が触媒に必須であることや、N末端ドメインが膜との結合もしくはタンパク質間相互作用に関与する可能性を部位特異的変異体の解析により見出した。カンナビノイド受容体の内因性リガンドとして見出されたアナンダミドを含む種々のN-アシルエタノールアミンは、動物組織中で生体膜のグリセロリン脂質から2段階の酵素反応で合成される。この反応の第一段階を触媒するCa^<2+>依存性N-アシル転移酵素の実体は依然として不明であるが、我々は、同じ反応を触媒する別酵素を発見し、Ca^<2+>非依存性N-アシルトランスフェラーゼと名付けた。同酵素のcDNAをラット、マウス、ヒトからクローニングし、組換えタンパク質をCOS-7細胞で発現させたところ、いずれもCa^<2+>非依存的に同反応を触媒した。一方、Ca^<2+>依存性N-アシル転移酵素については、ラット脳で比較的強い活性を示すことが既に報告されているが、高度の精製やcDNAクローニングについての報告はない。そこで21年度は、同酵素の精製を試みた。具体的には、生後2日のラットの脳から膜画分を調製し、0.5%の界面活性剤Nonidet P-40を用いて可溶化した。次に、HiTrapQ HP陰イオン交換クロマトグラフィーとHiTrap SP HP陽イオン交換クロマトグラフィーの組み合わせにより精製度を高め、部分精製することに成功した。酵素活性の測定については、sn-1位とsn-2位の両脂肪酸鎖を^<14>Cで放射標識したホスファチジルコリンと非放射標識のホスファチジルエタノールアミン(PE)をそれぞれアシル基供与基質および受容基質に用いて、酵素標品と反応させた。反応後、生成物のN-[^<14>C]パルミトイル-PEをシリカゲル薄層クロマトグラフィーで分離後、BAS1500バイオイメージングアナライザーで放射活性を測定した。現在、酵素のいっそうの精製を検討中である。カンナビノイド受容体の内因性リガンドとして見出されたN-アラキドノイルエタノールアミン(アナンダミド)を含む種々のN-アシルエタノールアミンは、動物組織中で生体膜のグリセロリン脂質から2段階の酵素反応で合成される。この経路の第一段階は、ホスファチジルエタノールアミンに別のグリセロリン脂質から脂肪酸鎖を転移してN-アシルホスファチジルエタノールアミンを生成する反応であるが、この反応を触媒するCa^<2+>依存性N-アシルトランスフェラーゼの実体は依然として不明である。しかしながら申請者らは同じ反応を触媒する別酵素を発見し、Ca^<2+>非依存性N-アシルトランスフェラーゼ(iNAT)と名付けた。また、iNATは「HRASLSファミリー」の一員であるが、同ファミリーのメンバーで、がん抑制遺伝子として報告されてきたH-rev107、TIG3、HRASLS2にもN-アシルトランスフェラーゼ活性が認められた。引続き平成22年度は同ファミリーに属するがん抑制遺伝子で、これまで酵素活性の報告がなかったA-C1についても、ホスホリパーゼA_1/A_2活性やリゾリン脂質O-アシルトランスフェラーゼ活性に加えてN-アシルトランスフェラーゼ活性を有することを見出した。一方、Ca^<2+>依存性N-アシルトランスフェラーゼについては幼弱ラットの脳で比較的強い活性を示すので、同組織の膜画分から同酵素の可溶化と精製を試みたが、高度な精製には至らなかった。
エピジェネティックな低酸素応答の解析による腎臓病の病態生理の解明

in vivoにおける腎臓でのエピジェネティックな変化の機能的意義を明らかにするため、臓器レベルでのChIP-seqを行うための条件検討を行った。laser capture microdissectionによるPAT-ChIPを検討したが、RNAのqualityがChIPに耐える十分良質な状態の採取ができず、最終的に臓器レベルでwholeのChIPを行い、腎臓の大半を占める尿細管を対象とすることにした。モデル動物としては、虚血再還流後急性腎障害の後で長期的に進展する腎線維化モデルを使用し、ヒストン修飾を調節する化合物を用いて線維化の状態に変化が起こることを見出した。本研究は、従来ゲノムの観点のみから解析が行われていた低酸素応答について、エピゲノムの観点を取り入れて詳細な解析を行い、これを腎臓病学の病態生理に応用するものである。まず、培養血管内皮細胞を低酸素で刺激し、ピストン修飾蛋白の発現変動を解析し、その変動に相当するピストン修飾の変化をChIP-seqでゲノムワイドに解析し、種々の分子のhypoxia inducible factor(HIF)結合領域周辺の変化に注目して解析を進めた。なかでも低酸素状態で嫌気的解糖を助けるglucosetransporter 3(SLC2A3)においては、低酸素に伴ってHIF依存性に発現が上昇するKDM3Aにより抑制性ピストン修飾の脱メチル化が起こり、更にクロモゾームの高次構造の変化が起こることにより、低酸素での発現上昇が起こることが分かった。また、この研究の過程で低酸素状態でHIFが結合する分子のうち新規HIFターゲット分子としてsperm-associated antigen 4(SPAG4)を同定した。癌細胞の生存には低酸素に対する抵抗性が重要であることが知られているが、SPAG4は通常の腎臓ではあまり発現がみられないが腎細胞癌では高発現し、SPAG4の高発現は腎細胞癌の予後と相関し、更にSPAG4は細胞質分裂の時にintercellular bridgeに局在して分裂を調節する役割を果たしていることを示した。一方、抗癌剤として使用されるanthracycline系の薬剤はHIFの抑制作用があり、これが抗癌剤としての効果の一端をになっているものの、その副作用としての心不全の発症にも寄与していることを示した。まず、培養血管内皮細胞を低酸素で刺激し、ヒストン修飾蛋白の発現変動を解析し、その変動に相当するヒストン修飾の変化をChIP-seqでゲノムワイドに解析し、種々の分子のhypoxia inducible factor (HIF)結合領域周辺の変化に注目して解析を進めた。昨年度は嫌気的解糖を助けるglucosetransporter 3 (SLC2A3)の低酸素状態におけるエピゲノミックな調節作用を解明したが、本年度は低酸素状態の腎臓で最もシグナル・ノイズ比よく発現が増加するangiopoietin like 4 (ANGPTL4)のエピゲノミックな発現調節と、それにともなうクロマチン高次構造の変化を解明した。また、その過程で施行したHIFのChIP-seqで同定した新しいHIF target分子であるSPAG4が細胞質分裂に関与し、その発現が腎臓癌の予後不良と相関することを示した。慢性腎臓病では低酸素が末期腎不全へのfinal common pathwayとなっている。本来そのような腎臓では、HIFが低酸素に対する防御機構として発動するべきであるが、尿毒素によってHIFとco-factorであるp300との結合が阻害され、尿毒症状態ではヒストンのアセチル化が減弱することにより十分な生体防御作用を発揮できないことを示した。この尿毒症状態でのHIF target分子のヒストンアセチル化減弱は、腎性貧血の主因であるEPO産生低下に関与している可能性があるが、同時に腎臓病で起こる小胞体ストレスが抑制性転写調節因子ATF4を介してEPO発現を抑制し、腎性貧血の増悪に関与することも判明した。まず、培養血管内皮細胞を低酸素で刺激し、ヒストン修飾蛋白の発現変動を解析し、その変動に相当するヒストン修飾の変化をChIP-seqで解析し、種々の分子のhypoxia inducible factor (HIF)結合領域周辺の変化に注目して解析を進めた。これまでの研究では、嫌気的解糖を助けるglucose transporter 3 (SLC2A3)の低酸素状態におけるエピゲノミックな調節作用、低酸素状態の腎臓で最もシグナル・ノイズ比よく発現が増加するangiopoietin like 4 (ANGPTL4)のエピゲノミックな発現調節とそれにともなうクロマチン高次構造の変化などを解明してきた。

慢性腎臓病では低酸素が末期腎不全へのfinal common pathwayとなっている。本来そのような腎臓では、HIFが低酸素に対する防御機構として発動するべきであるが、尿毒素によってHIFとco-factorであるp300との結合が阻害され、尿毒症状態ではヒストンのアセチル化が減弱することにより十分な生体防御作用を発揮できないことを示した。更に、HIFの新規調節分子を同定するためにsiRNA libraryを用いたスクリーニングを行い、炎症に関与するCEBPdeltaがHIFの発現をmRNA levelで調節していることを示し、低酸素と炎症の新しい相互関係の分子機序を示した。26年度が最終年度であるため、記入しない。腎臓内科学26年度が最終年度であるため、記入しない。血管内皮細胞を使用した解析は順調に進行し、更にそこから派生した様々な研究の派生効果を得ることが出来ている。エピゲノムの解析は順調に進行し、更にそこから派生した様々な研究の派生効果を得ることが出来ている。これまでに得られた成果を応用して、尿細管細胞を使用した実験およびモデル動物を使用した実験を進めていき、腎臓病学の病態生理に応用していく。これまでに得られた成果を応用して、腎疾患モデル動物を使用した実験を進め、腎臓病学の病態生理に応用していく。
浜崖の形成過程と複合断面海浜上の遡上波運動に関する研究

浜崖の形成機構と発達過程に重要な,砕波帯から複合海浜面上の遡上域での波動運動と底質掃流の機構とを検討するため,これまで測定しえなかったswash帯での内部流速と底面せん断力の時空間変動を,水面変動測定結果から算定する手法を開発・提案したことは,本研究の重要な成果の一つである.浜崖の発生限界地点を算定するため,複合断面地形(固定床)に対する検討結果から,wave set-upを考慮した平均廷汀線付近で発生する,bore collapseのもつ内部流速運動エネルギーが,主要な物理量であることが明らかにされた.bore collapseの発生と遡上運動に対する重要性は,段波理論と実験とで確認されていたが,本研究によって周期波に対しても同様なことが初めて確認された.以上の成果から,入射波の砕波位置,wave set-up,平均汀線での波高の算定を含む遡上モデルを提案することが出来た.一方,移動床上の遡上波内部流速変動から,浜崖前面での沖向き底質輸送が卓越することを指摘し,浜崖の崩落土砂による土砂供給と相まって,浜崖前面に急勾配斜面の前浜地形が形成する機構が解った.また,sheet flowによる底面せん断力,言い換えれば底面摩擦係数が,移動床実験で直接評価され,遡上波の一周期間平均量としてこれらを評価することの妥当性が確認できた.この結果を踏まえ,掃流・浮遊底質輸送のせん断力モデルにより,浜崖地形の変形を算定することが可能となったが,地形変動速度の時間依存をモデルに組み込むことが必要である.以上の研究から,浜崖形成・砕波帯内地形変動・遡上域の底質移動との関係を解明し,浜崖の形成過程モデルを提案することができた.浜崖の形成機構と発達過程に重要な,砕波帯から複合海浜面上の遡上域での波動運動と底質掃流の機構とを検討するため,これまで測定しえなかったswash帯での内部流速と底面せん断力の時空間変動を,水面変動測定結果から算定する手法を開発・提案したことは,本研究の重要な成果の一つである.浜崖の発生限界地点を算定するため,複合断面地形(固定床)に対する検討結果から,wave set-upを考慮した平均廷汀線付近で発生する,bore collapseのもつ内部流速運動エネルギーが,主要な物理量であることが明らかにされた.bore collapseの発生と遡上運動に対する重要性は,段波理論と実験とで確認されていたが,本研究によって周期波に対しても同様なことが初めて確認された.以上の成果から,入射波の砕波位置,wave set-up,平均汀線での波高の算定を含む遡上モデルを提案することが出来た.一方,移動床上の遡上波内部流速変動から,浜崖前面での沖向き底質輸送が卓越することを指摘し,浜崖の崩落土砂による土砂供給と相まって,浜崖前面に急勾配斜面の前浜地形が形成する機構が解った.また,sheet flowによる底面せん断力,言い換えれば底面摩擦係数が,移動床実験で直接評価され,遡上波の一周期間平均量としてこれらを評価することの妥当性が確認できた.この結果を踏まえ,掃流・浮遊底質輸送のせん断力モデルにより,浜崖地形の変形を算定することが可能となったが,地形変動速度の時間依存をモデルに組み込むことが必要である.以上の研究から,浜崖形成・砕波帯内地形変動・遡上域の底質移動との関係を解明し,浜崖の形成過程モデルを提案することができた.
サミュエル・ベケットの作品に見られる錬金術の思想に関する研究

本研究では、いわゆる「魔術的ルネサンス」の終焉後、闇の文化史として近・現代に至るまで脈々と継承されてきた錬金術思想が、近代合理主義を極限まで追究しその崩壊を体現してみせた作家と言われるサミュエル・ベケットの作品の成立に実は深く関与していることを、神秘主義思想はもとより、図像学、心理学、記号学、演劇学、舞踊学等を駆使しつつ、晩年の作品『クワッド』を起点として初期作品まで遡り、再び『クワッド』に回帰する形で明らかにした。ベケット自身による錬金術への直接的言及がないために、これまでこの視点からの研究はほとんどなされてこなかったが、錬金術思想は、絵画におけるアナモルフォーズのように、まさに隠された知としてベケットの作品の中に息づいているのである。ダンテ・アルギエーリ、ジョルダーノ・ブルーノ、ジャンバティスタ・ヴィーコ、カール・グスタフ・ユング、ウィリアム・バトラー・イェイツ、ジェイムズ・ジョイス、アンドレ・ブルトンらがベケットに与えた影響についてはこれまでも論じられてきたものの、時代や文学的傾向が千差万別であるこれらの芸術家や思想家を結ぶ鍵が錬金術であったこと、言い換えれば、ベケットの関心の根底には常に錬金術思想が存在していたことを明らかにし、また、その考察を通して、錬金術思想が二十世紀後半に至るまでヨーロッパの芸術にいかに深く根を張っているかを浮き彫りにすることができた点は、本研究独自の成果である。ベケットの錬金術思想の形成は、初期には主としてジョイス、後にはイェイツに負うところが大きいと考えられるが、彼らから継承した「相対物の一致・結合」という、錬金術の根幹とも言うべき概念が自我の分裂というテーマに終生向き合ったベケットの作品を読み解く重要な鍵であることを解明したことにより、ベケット研究に確実に新たな光を当てることができたと確信するものである。本年度は主として、パソコン、スキャナ、デジタル・カメラ等の電子機器を利用して、ベケットの映像作品群に表れた錬金術的イメージと文献資料に収録された錬金術やカバラ的図像のデータベース化等の基礎的な作業を行ない、ベケット作品の図像学的分析を行なった。また、ベケットの錬金術的思想のルーツを探るため、アイルランドのユニヴァーシティ・カレッジ・ダブリンおよびトリニティ・カレッジ、ドイツのフンボルト大学で古書を中心に文献資料の閲覧・収集・分析を行ない、アイルランドの中世装飾写本『ケルズの書』やジェイムズ・ジョイス、W・B・イェイツといった作家たち、またゲーテやノヴァーリスの作品に見られるドイツ神秘主義からの影響について考察した。これらについては一応の成果が得られた。とりわけイェイツの『ヴィジョン』初版に見られるものの後の版からは削除された散文「四人の王族の舞踏」とベケット作品との図像的類似性の発見は、最大の成果であったと言えよう。イェイツがベケットに与えた影響については既に様々な研究がなされてきたが錬金術という視点からの先行研究はほとんどなかった点、またイェイツ研究においてもいまだ謎の多い『ヴィジョン』初版における錬金術的性質の一端を解明したという点で、本研究は独創性が高いと言える。これについては日本イェイツ協会の2000年度秋季大会で発表することができた。また、ジョイスの作品、特に『フィネガンズ・ウェイク』が言語の解体といった従来言われてきた側面のみならず錬金術の思想という点でベケット作品に多大な影響を与えていることについても、アイルランドで入手した文献資料の分析を通じて実証的に明かにすることができた。これらの研究成果については次年度中に論文として発表する予定である。昨年度に引き続き錬金術の図像のデータベース化と資料のデジタル化によるベケット作品の図像学的考察を行なうとともに、今年度はヨーロッパにおける壮大な錬金術思想の系譜にベケットを位置付けるという作業を試み、一応の成果を挙げることができた。

本研究では、いわゆる「魔術的ルネサンス」の終焉後闇の文化史として近・現代に至るまで脈々と継承されてきた錬金術思想が、近代合理主義を極限まで追求しその崩壊を体現してみせた作家と言われるベケットの作品の成立に実は深く関与していることを、初期から晩年に至る作品群の緻密な分析と象徴的イメージの抽出により例証した。さらにダンテ、ブルーノ、シェイクスピア、ランボー、イェイツ(W・B)、ジョイス、ユング、ブルトンらからの影響を根本的に洗い直し、ベケットの錬金術思想がいかなる知的・文化的刺激のもとに形成されたかを考察した。彼らがベケットに与えた影響は個別的には先行文献において既に指摘されているものの、時代や文学的傾向等が千差万別であるこれらの芸術家や思想家を結ぶ鍵が錬金術であったこと、言い換えればベケットの関心の根底には常に錬金術思想が存在していたことを明らかにした点は本研究独自の成果である。ベケットの錬金術思想の形成は初期には主としてジョイスに、後にはイェイツに負うところが大きいと考えられるが、彼らから継承した「相対物の結合」という錬金術の根幹とも言うべき概念が自我の分裂というテーマと終生向き合ったベケットの作品を読み解く重要な鍵であることを明らかにしたことにより、ベケット研究に確実に新たな光を当てることができたと思われる。本研究の成果の一部がベケット研究では最も権威あるJournal of Beckett Studiesに日本人として初めて掲載されたことは、本研究がベケット研究の新たなアプローチとして国際的にもその意義を認められたことを示していると言えよう。
植物ゲノムにおける反復配列動態のエピジェネティックな制御

脊椎動物や高等植物のゲノムは多くの反復配列を含む。これらは潜在的なゲノム不安定化要因であり、DNAのメチル化を始めとするエピジェネティックな修飾でその動態を制御されている。本研究では、シロイヌナズナを用いて、反復配列のエピジェネティックな制御機構を調べた。遺伝子のメチル化を負に制御するjmjCドメイン因子IBM1を遺伝学的アプローチで同定した(Saze et al 2008 Science)。さらに、ibm1突然変異体を用いたゲノムワイドのDNAメチル化プロファイリングを行ない、この因子が、転写される遺伝子のDNAメチル化を防ぐことでトランスポゾンと遺伝子のメチル化の区別に貢献していることを示した(Miura et al 2009 EMBO J)。また、インプリント遺伝子FWAの進化にレトロトランスポゾン配列が重要であることを示した(Fujimoto et al 2008 PLoS Genet)。さらに、遺伝解析とゲノミクスを組合せることで、転移能を持つ、多様な動態のシロイヌナズナの内在トランスポゾンを同定した(Tsykahara et al 2009 Nature)。反復配列は脊椎動物や高等植物のゲノムの大部分をしめる。ゲノム構造の安定性に対する潜在的脅威であるだけでなく、エピジェネティックな遺伝子制御を介して、多くの高次生命現象に関与する。エピジェネティクス研究分野の進展にともない、反復配列制御機構の生物学的重要性が近年再認識されている。私達はこれまで、シロイヌナズナのDNA低メチル化変異で誘発される発生異常を連鎖解析することで、DNAメチル化が反復配列抑制によってゲノム構造を安定するとともに、トランスポゾン由来のプロモーターを活用することにより、組織特異的遺伝子発現やインプリントされた遺伝子発現を保証していることを明らかにしてきた。これらの蓄積をふまえて、本研究では、(1)「遺伝子とトランスポゾンを区別する機構の遺伝解析」と(2)「インプリント遺伝子の進化の解明」を計画した。本研究では、宿主がトランスポゾンと通常の遺伝子とを区別する機構、およびエピジェネティックな多様性の生物学的意義について研究することを目的としている。平成19年度には、以下のような成果が得られた。(1)宿主がトランスポゾンと遺伝子とを区別する機構として、遺伝子のメチル化を防ぐ新奇遺伝子を同定した(Saze, et. al.2008 Science)。この経路の作用様式を理解するため、エピジェネティックな制御に関与する他の遺伝子との相互作用を調べている。(2)ddm1で誘発される発生異常の一つを遺伝解析することにより、新奇のシロイヌナズナ内在レトロトランスポゾンを同定した(未発表)。これは、実験室で転移の観察されたシロイヌナズナの内在性レトロトランスポゾンとしては初めてのものである。これを研究材料として、エピジェネティックな活性修飾の安定性や、野外集団中での挙動を調べる予定である。(3)インプリント遺伝子FWAでは、SINE配列が縦列型に反復したプロモーターのメチル化によって発現の修飾が起こる(Kinoshita, et. al.2007 Plant J.)。シロイヌナズナの同属近縁種を調べることにより、縦列型の構造をとらなくても、この遺伝子のエピジェネティックな抑制は起こり、メチル化も起こることがわかった(Fujimoto, et. al.2008 PloS Genetics)。前年度までに、宿主がトランスポゾンと遺伝子とを区別する機構として、遺伝子のメチル化を防ぐ新奇遺伝子IBM1を同定していた(Saze et al. 2008 Science)。また、ddm1で誘発される発生異常の一つを遺伝解析することにより、新奇のシロイヌナズナ内在レトロトランスポゾンを同定していた(論文投稿中)。平成20年度には、以下の成果が得られた。(1)ddm1を用いることにより、転移能を持つ内在レトロトランスポゾンをさらに3種類同定した(論文投稿中)。これらのトランスポゾンの自然集団中での挙動を知るため、シロイヌナズナの野外系統、および同属近縁種における分布を調べている。(2)ibm

1突然変異で影響を受ける配列をゲノムレベルで知るため、抗メチルシトシン抗体で免疫沈降したゲノムDNAと高密度ゲノムタイリングアレイを用いた(Miura et al. 2009 EMBO J)。その結果、この突然変異体では少なくとも数千の遺伝子のメチル化が上昇することがわかった。一方、トランスポゾンは影響されない。不思議なことに、転写されており、かつ長い遺伝子が最も大きな影響を受けた。トランスポゾンと遺伝子との区別に転写装置が関与していることが示唆される。DNA低メチル化突然変異体で誘発された発生異常を遺伝解析することで、転移能を持つシロイヌナズナの内在レトロトランスポゾンを同定した。さらに、ゲノムDNAをタイリングアレイにハイブリダイズさせるという単純な方法で、さらに4種類のトランスポゾンのコピー数増加が検出できた。一般にシロイヌナズナでは、トランスポゾンのコピー数が少なく、大部分のトランスポゾンの配列と座上位置が正確にわかっている。このシロイヌナズナの利点が活用できた。多様な内在トランスポゾンが同定でき、その中には、遺伝子の少ない動原体領域に特異的に挿入すると予想されるものも含まれた(Tsukahara et al 2009 Nature)。多くの生物のゲノムで、動原体付近には反復配列が多いが、その進化機構はあまり研究されていない。今回新たに同定したレトロトランスポゾンは、反復配列の多い動原体の進化機構の研究素材として使えることを期待している。また、遺伝子のメチル化を負に制御するjmjCドメイン因子IBM1遺伝子(Saze et al 2008 Science)の突然変異体を用いたゲノムワイドのDNAメチル化プロファイリングを行ない、この因子の突然変異体では、少なくとも数千の遺伝子でDNAメチル化上昇することがわかった。トランスポゾンは影響されなかった。IBM1が、転写される遺伝子のDNAメチル化を防ぐことでトランスポゾンと遺伝子のメチル化の区別に貢献していることが明らかになった(Miura et al 2009)。