hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
歯状回神経細胞の発達における知的障害・精神疾患関連Rhoシグナル伝達系の機能解明

これらのことから、生後発達期における歯状回神経細胞の発達過程では、低分子量Gタンパク質、特にRacが重要な役割を果たしていると考えられた。一方、X連鎖知的障害と関連する低分子量Gタンパク質シグナル伝達系分子の一つにCNK2がある。CNK2は、Rac1やCdc42の活性を制御するARHGAP39やARHGEF6などと複合体を形成するアダプター分子で、培養神経細胞の樹状突起スパイン形成を制御することが知られている。しかしながらマウス個体における神経細胞の発達への関与についてはよく分かっていない。そこで、CNK2の歯状回神経細胞の発達における機能解析に着手した。予備的な結果ではあるが、in vivoエレクトロポレーションによってCNK2の発現を抑制すると、歯状回神経細胞の配置に異常が見られることを見出している。今後さらに詳細な解析を進める予定である。マウス個体を用いた生後発達期の歯状回神経細胞の発達におけるRacの機能解析については、ほとんどの解析を終えている。また、Rac/Cdc42シグナル伝達系分子であるCNK2についても、歯状回神経細胞の生後発達を制御する新たな分子としての機能を明らかにできる可能性が高い。これらの事から、おおむね順調に進展していると考えている。今年度は、脳組織におけるRac1、Rac3およびCdc42の発現を免疫組織染色によって解析した。新生仔マウス脳におけるRac1の発現を検討したところ、海馬錐体細胞と歯状回顆粒細胞で発現が見られるとともに、歯状回へ移動中の幼若神経細胞での発現が見られた。Rac3およびCdc42についても数種類の抗体を使用して内在性分子の検出を試みたが、脳組織における発現を確認できなかった。昨年度までに、in vivoエレクトロポレーションによる遺伝子導入法により、低分子量Gタンパク質Rac1、Rac3およびCdc42の発現を抑制すると、新生仔マウス海馬歯状回顆粒細胞の配置に異常が見られることを明らかにしている。今年度は、これらの低分子量Gタンパク質の歯状回の発達における機能を詳細に検討した。まず、これらの分子の発現抑制による歯状回顆粒細胞の配置異常の程度を比較した。その結果、Cdc42の発現を抑制した場合に比べてRac1およびRac3を抑制した場合の方が、より多くの細胞で配置異常が見られることがわかった。次に、歯状回顆粒細胞への分化に対する影響を検討した。その結果、Rac1の発現を抑制した場合には、歯状回顆粒細胞のマーカーであるProx1を発現している細胞の割合が減少していた。一方、Rac3およびCdc42の発現を抑制した場合には、そのような影響は見られなかった。これらのことから、新生仔マウス海馬歯状回顆粒細胞の発達過程では、Rac1、Rac3およびCdc42は、それぞれ異なる様式で機能していると考えられた。新生仔マウス海馬歯状回顆粒細胞の発達における低分子量Gタンパク質の機能解析については、学術論文として研究成果をまとめ、国際学術誌に掲載されることが決定している。さらに解析を進めた結果、Racによる歯状回顆粒細胞の発達制御に関与する、細胞内情報伝達経路についての知見も得られ始めている。これらのことから、本研究はおおむね順調に進展していると考えている。Rhoファミリー低分子量Gタンパク質には、Racの他に代表的な分子としてRhoAおよびCdc42が知られている。
絵画における色彩美の数量的分析の研究

今年度は,代表色抽出における実用上の工夫,画面上の隣接色による分析,離散色分布の距離による分析,Van Goghの作品の時代ごとの変遷の分析を行なった.絵画の色彩分析における代表色数の判定基準について,絵画および代表色画像の構成色を数えさせる実験を行なって,代表色数20色以上という基準およびクラスタ偏差の最大値が12程度という基準の2つを導いた.また,この基準に基づく逐次クラスタ化法の高速化や,面積は小さいが効果的に用いられるアクセント色が代表色として抽出されないことがある問題についての実用的な工夫を示した.この成果は,第29回日本色彩学会全国大会(平成10年5月,於名古屋)において発表した.画面上の色の配置を分析するため,画面を数個ないし数十個の長方形格子状に分割してモザイク画像を作り,モザイクの各区画について,隣り合う区画の色差を分析し,画家ごとの特徴を分析した.この成果は,第29回日本色彩学会全国大会(平成10年5月,於名古屋),およびOslo International Colour Conference(平成10年10月、於オスロ(ノルウエー))において発表した.絵画の構成色の色分布の類似度による分析を,昨年度に引き続き行なった.今年度は,離散色分布間の対応を線形計画問題のひとつである輸送問題ととらえることにより,離散分布間の距離を直接定義し,これを用いて絵画やデザイン画の分類を行ない,良好な結果を得た.この成果は,カラーフォーラムJAPAN'98(平成10年12月,於東京)において発表した.Vincent Van Gogh[1853-1890]の作品を,そのときどきの画家の居地に由来する5つの時代(Nuenen,Paris.Arles,Saint-Remy,Auvers)から30点選び,各時代ごとに色彩的特徴が現われるかどうかを調べ,時代に特有の特徴をいくつか見いだすことができた.この成果は,第29回日本色彩学会全国大会(平成10年5月,於名古屋)において発表した.これまでの研究の総括を,シンポジウム「人文科学における数量的分析(4)」(平成11年3月,於葉山)において報告する予定である.またこの他にも、第30回日本色彩学会全国大会(平成11年5月,於東京)において,研究の最新成果について発表する予定である.今年度は,代表色抽出における実用上の工夫,画面上の隣接色による分析,離散色分布の距離による分析,Van Goghの作品の時代ごとの変遷の分析を行なった.絵画の色彩分析における代表色数の判定基準について,絵画および代表色画像の構成色を数えさせる実験を行なって,代表色数20色以上という基準およびクラスタ偏差の最大値が12程度という基準の2つを導いた.また,この基準に基づく逐次クラスタ化法の高速化や,面積は小さいが効果的に用いられるアクセント色が代表色として抽出されないことがある問題についての実用的な工夫を示した.この成果は,第29回日本色彩学会全国大会(平成10年5月,於名古屋)において発表した.画面上の色の配置を分析するため,画面を数個ないし数十個の長方形格子状に分割してモザイク画像を作り,モザイクの各区画について,隣り合う区画の色差を分析し,画家ごとの特徴を分析した.この成果は,第29回日本色彩学会全国大会(平成10年5月,於名古屋),およびOslo International Colour Conference(平成10年10月、於オスロ(ノルウエー))において発表した.絵画の構成色の色分布の類似度による分析を,昨年度に引き続き行なった.今年度は,離散色分布間の対応を線形計画問題のひとつである輸送問題ととらえることにより,離散分布間の距離を直接定義し,これを用いて絵画やデザイン画の分類を行ない,良好な結果を得た.この成果は,カラーフォーラムJAPAN'98(平成10年12月,於東京)において発表した.Vincent Van Gogh[1853-1890]の作品を,そのときどきの画家の居地に由来する5つの時代(Nuenen,Paris.Arles,Saint-Remy,Auvers)から30点選び,各時代ごとに色彩的特徴が現われるかどうかを調べ,時代に特有の特徴をいくつか見いだすことができた.この成果は,第29回日本色彩学会全国大会(平成10年5月,於名古屋)において発表した.これまでの研究の総括を,シンポジウム「人文科学における数量的分析(4)」(平成11年3月,於葉山)において報告する予定である.またこの他にも、第30回日本色彩学会全国大会(平成11年5月,於東京)において,研究の最新成果について発表する予定である.
思春期特発性側弯症関連遺伝子LBX1の機能解析

思春期特発性側弯症は体幹変形を伴う原因不明の疾患であり,重症例ではしばしば治療に難渋する.我々は,これまでの網羅的ゲノム解析から本疾患の発症と,LBX遺伝子近傍にある一塩基多型が関連していることを見出している.本研究の目的は,Lbx1遺伝子改変マウスを作成し,Lbx1遺伝子の個体発生,ならびに生体における機能を明らかにすることで,本疾患の新規治療法開発に繋がる知見を得ることである.思春期特発性側弯症は体幹変形を伴う原因不明の疾患であり,重症例ではしばしば治療に難渋する.我々は,これまでの網羅的ゲノム解析から本疾患の発症と,LBX遺伝子近傍にある一塩基多型が関連していることを見出している.本研究の目的は,Lbx1遺伝子改変マウスを作成し,Lbx1遺伝子の個体発生,ならびに生体における機能を明らかにすることで,本疾患の新規治療法開発に繋がる知見を得ることである.
自発的気相酸化反応を利用する半導体薄膜材料の作製

シラン(SiH_4)のフッ素(F_2)による自発的気相酸化反応を利用する新しいSi系薄膜の低温成長技術のデバイス作製のプロセス技術としての確立を図るため、p型、n型ド-パントとして、フォスフィン(PH_3)およびジボラン(B_2H_6)を選び、本成長法における価電子制御の可能性を検討した。ド-パントの添加は、原料ガスであるSiH_4にたいし0.1%以下の極めて微量添加した場合においても膜成長に大きな影響を与え、PH_3のド-ピングでは、ノンド-プ膜に比較して膜の構造化が促進され、一方、B_2H_6のド-ピングでは、わずか50ppmの添加においても著しい構造化の抑制が起ることが堆積膜の赤外分光スペクトルの測定から明かとなった。アモルファス膜の暗伝導率とその活性化エネルギ-の測定から、顕著な伝導率の増加とその活性化エネルギ-の低下(フェルミ準位のシフト)が確認され、成長時の気相ド-ピングにより価電子制御が実現されることが分った。アモルファス膜のド-ピング特性は、従来のシラン(SiH_4)を原料とする高周波グロ-放電法によるアモルファスSi膜のド-ピング特性と比較してほぼ同等であり、従来技術に比較して、p型ド-ピングにおいて改善がみられた。一方、多結晶膜のド-ピング特性は、これまで知られる多の技術のによる価電子制御の結果に比較してn型ド-ピング特性における高濃度側での導電率の最高到達値が、約1ー2桁低く、改善の必要があることが指摘された。これは、気相ド-ピングにおけるド-パントの膜成長に与える影響と密接な関連があり、多結晶膜のド-パント濃度の高い領域での膜成長では、系の雰囲気が膜の堆積からエッチング性に変ることが認められることから、ド-パント濃度の高い領域では、ド-パント分子の膜成長への関与により、膜成長の化学過程、時に成長表面での化学過程が大きく変ったためと考えられた。
マンガン団塊の古細菌成因説を検証する

深海底で形成されるマンガン団塊・マンガンクラストの成因を理解するため,南太平洋の深海底から採集されたマンガン団塊に生息する微生物の検討を行った.ただし,マンガン団塊試料は非常に量が限られているので,試料ロスを極力抑えるために三瓶温泉のマンガンクラストを用いて予備実験を行った.まず既設の共焦点レーザー走査顕微鏡に639 nmレーザーを導入し,三瓶温泉のマンガンクラストに対して,Cy5標識プローブを用いたFISH法とSYBR Green Iによる核酸染色を同時に適用し,共焦点レーザー走査顕微鏡を用いた微生物検出法を確立した.また,三瓶温泉のマンガンクラストの形成について,微生物による直接・間接プロセスおよび非生物的プロセスの相対的寄与も評価した.その結果,マンガン酸化細菌・真菌による直接プロセスと,藻類などによる間接プロセスの寄与が非常に大きく,非生物的プロセスの寄与は非常に小さいことが明らかとなった.このことは,天然環境に見られるマンガン酸化物の形成に微生物が重要な役割を果たしていることを示しており,それはマンガン団塊にも当てはまる可能性がある.この成果に関しては,日本地球惑星科学連合2018年大会において発表し,現在国際誌に論文を投稿中である.また,南太平洋で採集したマンガン団塊の周辺に見られる遠洋性粘土中に,直径数ミクロンの鉄マンガン酸化物微粒子「微小マンガン粒」が存在することを発見し,その成果を論文として国際誌に発表した.以上の予備実験の結果を踏まえ,マンガン団塊試料の検討を開始した.当初の計画通り,マンガンクラスト試料を用いた予備実験を終え,マンガン団塊試料の検討に取り掛かっている.また,研究開始当初には予想していなかった成果も得られている.マンガン団塊に対して,本年度に確立した微生物検出法を適用し,団塊中のアーキア細胞の存在位置を可視化する.集束イオンビーム加工装置により,アーキア細胞周辺から超薄片を作成し,細胞表面にMnO2が存在するか観察する.また,次世代シーケンサーによるメタゲノム解析も行い,マルチ銅オキシダーゼにマンガン酸化能を有するものが含まれるか探索する.深海底で形成されるマンガン団塊・マンガンクラストの成因を理解するため,南太平洋の深海底から採集されたマンガン団塊に生息する微生物の検討を行った.ただし,マンガン団塊試料は非常に量が限られているので,試料ロスを極力抑えるために三瓶温泉のマンガンクラストを用いて予備実験を行った.まず既設の共焦点レーザー走査顕微鏡に639 nmレーザーを導入し,三瓶温泉のマンガンクラストに対して,Cy5標識プローブを用いたFISH法とSYBR Green Iによる核酸染色を同時に適用し,共焦点レーザー走査顕微鏡を用いた微生物検出法を確立した.また,三瓶温泉のマンガンクラストの形成について,微生物による直接・間接プロセスおよび非生物的プロセスの相対的寄与も評価した.その結果,マンガン酸化細菌・真菌による直接プロセスと,藻類などによる間接プロセスの寄与が非常に大きく,非生物的プロセスの寄与は非常に小さいことが明らかとなった.このことは,天然環境に見られるマンガン酸化物の形成に微生物が重要な役割を果たしていることを示しており,それはマンガン団塊にも当てはまる可能性がある.この成果に関しては,日本地球惑星科学連合2018年大会において発表し,現在国際誌に論文を投稿中である.また,南太平洋で採集したマンガン団塊の周辺に見られる遠洋性粘土中に,直径数ミクロンの鉄マンガン酸化物微粒子「微小マンガン粒」が存在することを発見し,その成果を論文として国際誌に発表した.以上の予備実験の結果を踏まえ,マンガン団塊試料の検討を開始した.当初の計画通り,マンガンクラスト試料を用いた予備実験を終え,マンガン団塊試料の検討に取り掛かっている.また,研究開始当初には予想していなかった成果も得られている.マンガン団塊に対して,本年度に確立した微生物検出法を適用し,団塊中のアーキア細胞の存在位置を可視化する.集束イオンビーム加工装置により,アーキア細胞周辺から超薄片を作成し,細胞表面にMnO2が存在するか観察する.また,次世代シーケンサーによるメタゲノム解析も行い,マルチ銅オキシダーゼにマンガン酸化能を有するものが含まれるか探索する.本年度は次世代シーケンサーによる分析まで進められなかったため,次年度使用額が生じた.次年度は,当初の予定通り次世代シーケンサー使用料として支出する予定である.
SNP解析によるゲノム情報は近未来の生体認証手段となる

SNP各座位における同値確率は0.3750.465を示し,66座位の平均は0.384であり,SNP66座位の総合同値確率は3.27x10^<-28>となった.我々が持つ日本人のshort tandem repeat (STR)データベースと比較してこれらと同等の同値確率を求めるならば,今回検討したSNPs座位のうちで同値確率の良いもの42座位(1.93x10^<-18>)が必要となる.また,各SNP座位における相関はなく,ハーデイワイベルグの平衡も保っていた.以上より個人識別を目的とした日本人におけるSNP66座位のデータベースが新たに構築された.次にSNPの応用,すなわち一人の試料からDNAを抽出しSNPタイピングを行うことにより,バイオメトリクスとして個人認証を行うことを考慮してみる.DNAの抽出からSNPのタイピングまで今回の検査システムでは1時間で24座位のタイピングが可能となり,その場合の同値確率は6.25x10^<-11>となる.1時間という検査時間を考慮すればパスポート等への応用が十分可能であると思われ,偽造等の抑止力,セキュリティの向上を図ることができる.また,指紋・虹彩等の既存のバイオメトリクス情報を組み合わせることにより識別精度を向上させると同時に,これらによる瞬時のプレチェックを行い,更なる検査が必要となったときにはSNPタイピングを行う方がより実用的であると思われる.SNPsの検出は、まず試料からDNA抽出、次にSNPsタイピングとなるが、抽出に自動核酸抽出システムQuickGnen-800 (FUJIFILM)を用いることにより、口腔内擦過綿棒から約10分以内でゲノムDNAを抽出することが可能となった。また、SNPsタイピングに電気形動を必要としないTaqMan法を採用し、さらに、GeneAmp 9800サーマルサイクラー(Applied Biosystems)および反応試薬であるTaqMan Fast Universal PCR Master Mix (AppliedBiosystems)を使用することで、これまでは2時間を要していた検出時間がわずか40分で済むこととなった。つまり、これまでは試料の採取からSNPsのタイピングまで3時間程度を必要としていたが、最新の機器・試薬によりわずか50分で結果が得られる検査・実験系を確立することができた。データベースに関して試算したところ、現在個人識別に用いられているSTR (short tandem repeat)検査と同等の同値確率を得るには約50座位程度のSNPs検査が必要であるとの結果が得られた。現在、既に70座位のSNPsの選択が済み、そのうち15座位(遺伝子領域外またはイントロン領域のものであると同時に対立遺伝子の頻度が0.5近傍のもの[AppliedBiosystems社による日本人45名の検査による])において、実際にボランティア100名のDNA試料を用いてSNPsタイピングを行い、同値確率は4。31×10^<-7>と算出された。これは予想された範囲の値であり、さらに検査する座位を増やすことでより高い個人識別精度が得られることになる。1時間以内にSNPsタイピングを行う検査系を確立したことから、今後はデータベースをより充実させ、より個人識別精度の向上に努めるものである。SNP各座位における同値確率は0.3750.465を示し,66座位の平均は0.384であり,SNP66座位の総合同値確率は3.27x10^<-28>となった.我々が持つ日本人のshort tandem repeat (STR)データベースと比較してこれらと同等の同値確率を求めるならば,今回検討したSNPs座位のうちで同値確率の良いもの42座位(1.93x10^<-18>)が必要となる.また,各SNP座位における相関はなく,ハーデイワイベルグの平衡も保っていた.以上より個人識別を目的とした日本人におけるSNP66座位のデータベースが新たに構築された.次にSNPの応用,すなわち一人の試料からDNAを抽出しSNPタイピングを行うことにより,バイオメトリクスとして個人認証を行うことを考慮してみる.DNAの抽出からSNPのタイピングまで今回の検査システムでは1時間で24座位のタイピングが可能となり,その場合の同値確率は6.25x10^<-11>となる.1時間という検査時間を考慮すればパスポート等への応用が十分可能であると思われ,偽造等の抑止力,セキュリティの向上を図ることができる.また,指紋・虹彩等の既存のバイオメトリクス情報を組み合わせることにより識別精度を向上させると同時に,これらによる瞬時のプレチェックを行い,更なる検査が必要となったときにはSNPタイピングを行う方がより実用的であると思われる.
病原性原虫の病原因子輸送の分子基盤に関する研究

赤痢アメーバの病原機構のおいて中心的な役割を果たすシステインプロテアーゼの細胞内輸送機構を理解することを目指し、システインプロテアーゼの輸送体の同定とその機能解析を行った。生化学的手法により、システインプロテアーゼ結合ファミリータンパク質1(CPBF1)が同定され、その結合特異性が確認された。また、細胞分化特異的に発現するシステインプロテアーゼを網羅的転写解析により明らかにした。赤痢アメーバには>50のCPが存在するが、それぞれの機能並びにその輸送経路はほとんど理解されていない。各々のCPの機能的相違を理解することを目的として、関連種Entamoeba invadensを用いて嚢子過程におけるCPの発現プロファイルの変化を追跡することにより、CPのステージ特異的な発現を解析した。同時にCPの輸送調節の中心分子である>90種以上のRabの発現の変動をモニターした。まず、E.histolyticaのゲノム上で発見された約50のCPと90のRabの相同遺伝子、並びにE.invadens特異的遺伝子の注釈付け(アノテーション)を行った。その結果、ほとんどのE.histolyticaのホモログはE.invadensに存在する一方で、CP-A群ではA2,A3のアイソタイプで、CP-B群では多くのアイソタイプに関してE.invadens特異的な遺伝子の多重化が起こっていた。一方、Rab遺伝子は他種生物と保存性の高いRab1,Rab2,Rab7,Rab11等で両者間で極めて高い相同性が見られた。一方、E.invadensに特異的な7種のRab遺伝子、E.histolyticaに特異的な19種のRab遺伝子が発見された。これらの遺伝子のE.invadensの嚢子化過程における発現変化を調べたところ、栄養型特異的に発現する18種のCPとシスト特異的な5種のCPが同定された。また、Rab遺伝子に関しても様々なパターンで発現する遺伝子群が特定され、約20のRabが嚢子で発現上昇した。以上嚢子化に伴いCP並びにその輸送経路は大胆なリモデリングを受けることが明らかとなった。本研究は赤痢アメーバの生存と寄生・病原に必須なシステイラプロテアーゼ(CP)の機能的特異性、輸送ならびに活性調節機構を、生化学的・細胞化学的・逆遺伝学的手法、トランスクリプトーム・プロテオームなどの"-omics"手法を応用した統合的アプローチにより解明することを目的とする。本年度は、CPの中でも病原性に関与することが示唆されているCP5の輸送に関与すると示唆される分子を同定し、その機能を明らかにした。HAにより標識したCP5を発現したから免疫沈降法により、CP5に結合する分子として同定されたCP5輸送体(CPBF1)にHA標識をしたものを強制発現した形質転換体から免疫沈降法により結合するタンパク質を同定したところ、CP5並びにCP4が特異的に同定され、CPBF1の輸送物(cargo)の特異性が示された。次にCPBF1遺伝子抑制株を作成し、CPの輸送の変化を調べたところ、CPBF1発現抑制体では野生型と比較して、細胞内のCP活性が減少し、細胞外に分泌されるCP活性が約2倍に上昇していた。また特異的抗体による解析でもCP5が選択的に細胞外に放出されていることが確認された。以上のことよりCPBF1はCP4/CP5の輸送に、恐らくはリソソーム等への輸送に関与する特異的輸送体であることが示された。また、Entamoeba invadensの全遺伝子を網羅したAffymetrixカスタムDNAマイクロアレイを用いた解析により、栄養型の嚢子化過程における約40のCP遺伝子の発現プロファイルを明らかにした。更にこれらのCPの特徴を明らかにするために、E.invadens CP遺伝子の注釈付けを終了し、報告した。赤痢アメーバ症はマラリアに次いで死亡者数の多い原虫性感染症であり、発展途上国だけでなく、わが国でも知的障害者などに濃厚な感染を起こしている。本研究では赤痢アメーバの生存と寄生・病原に必須なシステインプロテアーゼ(CP)の輸送ならびに活性調節機構を、生化学的・細胞化学的・逆遺伝学的手法を駆使し解明するとともに、トランスクリプトーム・プロテオームなどの"-omics"手法を応用した統合的アプローチにより多様なCP遺伝子群の機能的特異性を解明することを目的とする赤痢アメーバはゲノムに>40ものCP遺伝子をもち、腸管上皮や肝細胞などの傷害、免疫細胞の貪食・分解による免疫回避、細菌などの貪食・分解による栄養摂取などに関与するとされているが、それぞれのCPの機能的相違・特異性ほとんど理解されていない。また、CPの細胞内での輸送機構、活性の調節機構などの分子基盤は十分に理解されていない。本年度は、CP輸送体(CPBF1)の機能解析を行い、赤痢アメーバの細胞内におけるリソソームやファゴソームへのCPの輸送に、CPBF1が必須であることが示された。更に、CPの内因性阻害タンパク質ICPの立体構造を解明するために、結晶化の至適条件を確立した。
新規心臓前駆細胞リプログラミング因子の同定と分子基盤の解明

心臓は再生能力に乏しく、重症心不全に対する新しい治療として再生医療が期待されている。心臓再生には幹細胞から心筋を作製し移植する方法があるが、細胞作製工程が煩雑、腫瘍形成の可能性、移植心筋の生着が困難など課題もある。これに対し、我々は心筋特異的転写因子を導入して、線維芽細胞から心筋を直接作製する心筋リプログラミング法を開発した。この方法は工程が単純、細胞移植の必要がない、腫瘍も形成しないなど利点を有する。しかしこれまでの心筋リプログラミング法は作製した心筋が増えず、心筋以外の心臓構成細胞を作製できないという課題があった。そこで本研究では増殖能・多分化能を有する心臓前駆細胞の直接誘導を目指し、新規心臓前駆細胞リプログラミング因子を同定する。さらに心臓前駆細胞誘導の分子機構を解明する。本年度は新規心臓前駆細胞リプログラミング因子のスクリーニングと同定を行った。これまでに分担研究者の産業技術総合研究所・五島先生から供与される世界最多のcDNAライブラリーを用いて心臓前駆細胞リプログラミング因子のスクリーニングを行った。候補因子は心臓発生過程において、心臓前駆細胞が出現する時期特異的に発現が上昇する転写因子で、かつノックアウトマウスの表現型で心臓の発生異常・胎生致死などをきたす機能的に重要な遺伝子60個を候補因子とする。これら候補遺伝子をcDNAライブラリーから作製したレトロウイルスベクターでマウス胎児線維芽細胞に感染させ、心臓前駆細胞特異的遺伝子であるMesp1, T (Brachyury), Flk1/PDGFRの発現をQRT-PCRやFACSにより解析した。これまでの実験で複数の新規心臓前駆細胞リプログラミング因子を同定した。心臓前駆細胞リプログラミング遺伝子のスクリーニングシステムの構築に成功した。さらにこれまでの実験で遺伝子60個をスクリーニングし、複数の心臓前駆細胞リプログラミング候補遺伝子を見出した。今後は心臓前駆細胞リプログラミング遺伝子による細胞リプログラミングの分子機構解明や作製した細胞の機能解析の検討を行っていく。
超流動ヘリウム流れ場における量子渦の運動状態の研究

代表的な量子凝縮相である超流動ヘリウム(4He)の渦の量子化の発見から半世紀がたつが、量子渦の動的な性質はいまだ明らかになっていない。それは渦芯半径が0.1 nmと大変細く、渦の運動を観測する手段が少ないためである。我々は、超流動ヘリウムの量子渦が境界(壁)に付着し、境界の振動に伴って量子渦が運動することを発見した。この量子渦のユニークな性質を利用し、渦の運動状態を実験的に明らかにすることを目的としている。これまでの主な研究実績は以下のとおりである。1.振動ワイヤーによる量子乱流生成装置と量子渦検出装置を用いて、振動流れ場によって発生する量子渦の運動状態を調べた。ワイヤーに直径2μmの超伝導極微細線(NbTi)を用いることで、振動流による量子渦発生条件と、それに伴って失うエネルギー損失を精密に測定した。2.ワイヤーの振動方向に放出される量子渦の運動について、渦の発生から検出までの時間を測定し、ある時間が立つとその統計性が指数分布にしたがうことを明らかにした。この結果は、渦の検出がポアソン過程であることを示している。すなわち、渦放出はランダムであるが平均放出頻度は一定であり、生成される量子乱流は、エネルギー流入と放出がバランスする定常状態であることを示している。3.検出する最小渦輪サイズを0.8μmから200μmまで変化させて平均検出頻度を測定し、検出頻度は最小渦輪サイズのべき乗則に従い、その指数が-1.6であることを明らかにした。この結果は、量子乱流の渦構造が自己相似性を持つことを示唆している。4.ワイヤーの振動に垂直な方向への渦放出の統計分布を測定し、振動方向とは異なり、2つの指数分布にしたがうことを明らかにした。この結果は、放出される渦輪の平均頻度が、ある時間が立つと増加することを示している。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。超流動ヘリウム(4He)の渦の量子化の発見から半世紀がたつが、量子渦の動的な性質はいまだ明らかになっていない。それは渦芯が0.1 nmと大変細く、渦の運動を観測する手段が少ないためである。1.超流動ヘリウムの振動流れ場による量子渦の生成・伸長過程と、振動流れ場から放出される量子渦の運動を研究する。振動流れ場は、物体を振動させることにより、相対的に駆動される超流動流を利用する。振動物体として直径2μmの超伝導極微細線(NbTi)を製作した。振動物体に極微細線を用いることで自身の質量を軽くし、渦の生成・伸張に伴って失うエネルギー損失を精密に測定する。また渦の検出器として渦の付着を抑制した極微細線を用いる。この極微細線を振動させた状態で渦がぶつかると、渦が細線に付着・伸長し、このときエネルギーを失うことを利用して渦を検出する。渦の生成器と渦の検出器を製作し、これらの動作テストと渦生成と放出に関する実験を行った。さらに量子渦放出の統計性に関する予備的な結果を得た。2.超流動中の回転物体に付着する量子渦の運動と、これらの運動に伴う超流動流れ場を研究する。超流動ヘリウム中(絶対温度2K以下)で動作するモーターと、流れを駆動するために6枚羽根のブレードを設置した装置を開発した。粘性の無い超流動ヘリウム中では、ブレードの回転によって流れを駆動できない。しかし量子渦がブレードに付着すると、回転によってブレード周辺に駆動される超流動流によって量子渦が生成・伸長する。これらの量子渦を介して、ブレードから離れた場所でも超流動回転流を引き起こすことを明らかにした。当初の計画どおり実験装置の開発・製作をおこなった。実績1については、渦の生成器と検出器について超流動ヘリウム中で動作テストを行い、計画どおりの結果を得た。さらに渦の生成器から放出される量子渦を、検出器で検出することに成功した。これらの組合せにより量子渦放出の統計性に関する予備的な実験を行い、これらの研究成果を国際会議や日本物理学会などで報告した。実績2については、超流動ヘリウム中で動作するモーターを開発し、超流動ヘリウム中でブレードを回転させることで、ブレードから離れた場所に回転流を駆動することに成功した。これらの研究成果を国際会議や日本物理学会などで報告した。1.初年度に製作した振動ワイヤーによる量子乱流生成装置と量子渦検出装置を用いて、振動流れ場によって発生する量子渦の運動状態を調べた。

ワイヤーに直径2μmの超伝導極微細線(NbTi)を用いることで、振動流による量子渦発生に伴って失うエネルギー損失を精密に測定し、量子渦が発生する振動流の臨界速度を求めた。2.量子渦の再結合によって放出される量子渦の運動について、渦の発生から検出までの時間を測定し、時間の分布からその統計性が指数分布にしたがうこと、したがって渦の放出がランダムであることを明らかにした。3.実験の設定条件を変えることにより、検出渦輪サイズの調整に成功した。また渦環放出の異方性についての予備的な結果を得た。これらの研究課題を発展させるために、継続して研究を行っている。4.低温モーターによるブレードの回転によって、超流動回転流の駆動に成功した。この装置を利用する量子渦の生成・観測装置を試作し、回転流駆動の予備的な結果を得た。当初の計画どおり実験装置の開発・製作を行い、次の成果を得た。実績1、2については、渦の生成器と検出器について超流動ヘリウム中で動作テストを行い、計画どおりの結果を得た。さらに渦の生成器から放出される量子渦を、検出器で検出することに成功した。これらの組合せにより放出された量子渦運動の統計性に関する実験を行い、これらの研究成果を国際会議や日本物理学会などで報告した。実績4については、超流動ヘリウム中で動作するモーターを開発し、超流動ヘリウム中でブレードを回転させることで、超流動回転流を駆動することに成功した。これらの研究成果を国際会議や日本物理学会などで報告した。代表的な量子凝縮相である超流動ヘリウム(4He)の渦の量子化の発見から半世紀がたつが、量子渦の動的な性質はいまだ明らかになっていない。それは渦芯半径が0.1 nmと大変細く、渦の運動を観測する手段が少ないためである。我々は、超流動ヘリウムの量子渦が境界(壁)に付着し、境界の振動に伴って量子渦が運動することを発見した。この量子渦のユニークな性質を利用し、渦の運動状態を実験的に明らかにすることを目的としている。これまでの主な研究実績は以下のとおりである。1.振動ワイヤーによる量子乱流生成装置と量子渦検出装置を用いて、振動流れ場によって発生する量子渦の運動状態を調べた。ワイヤーに直径2μmの超伝導極微細線(NbTi)を用いることで、振動流による量子渦発生条件と、それに伴って失うエネルギー損失を精密に測定した。2.ワイヤーの振動方向に放出される量子渦の運動について、渦の発生から検出までの時間を測定し、ある時間が立つとその統計性が指数分布にしたがうことを明らかにした。この結果は、渦の検出がポアソン過程であることを示している。すなわち、渦の放出はランダムであるが、その平均は一定であり、定常的な渦放出が起こることがわかる。3.検出する渦輪サイズを変化させて2と同様の測定を行い、その統計性は2と同様の指数分布にしたがうことを明らかにした。しかしその平均検出頻度は、渦輪サイズが増加するにつれて、減少する傾向を見出した。4.ワイヤーの振動に垂直な方向への渦放出の統計分布を測定し、振動方向とは異なり、2つの指数分布にしたがうことを明らかにした。この結果は、放出される渦輪の平均頻度が、ある時間が立つと増加することを示している。実績1,2については、渦の生成器と検出器について超流動ヘリウム中で動作テストを行い、計画どおりの結果を得た。
関節リウマチの遺伝的リスクスコア解析による関節破壊予測

本研究の目的はゲノムワイド関連解析(genome-wide association study: GWAS)のメタ解析によって同定された関節リウマチ(rheumatoid arthritis: RA)における101個の疾患感受性遺伝子が骨関節破壊の進行に影響を及ぼしているかどうか調査することであり、複数の遺伝子の組み合わせによる作用について遺伝的リスクスコア(genetic risk score: GRS)を利用した遺伝統計学的解析による評価を試みた。更に解析で特に有意となった遺伝子群によるGRSと臨床指標とを組み合わせることによってRA重症化におけるリスクを層別化する予測アルゴリズムを作成し、オーダーメイド医療に向けた基盤情報の構築を目指した。1.国際共同研究によるGWASのメタ解析(Okada Y, et al. Nature 2014)によって同定された101個のRA疾患感受性遺伝子の内、RAの疾患重症化を規定する表現型(骨関節破壊の進行)と関連するSNPもしくは複数のSNPsの組み合わせの同定、および単一危険因子や従来の臨床的指標と比較した予測能の判定を行う。2.同定された遺伝子については機能解析を行い、機能的遺伝子多型を同定する。3.独立したサンプル群による結果の再現を検証する。4.遺伝子多型情報に基づいた疾患重症化のリスク予測アルゴリズムを作成し、臨床応用につなげる。研究代表者の異動に伴い、研究に十分な時間を割くことが困難となり、研究期間を全うすることなく終了することとなったが、上記1.および3.については解析を終え、HLA-DRB1などの骨破壊関連遺伝子群を同定できた。本研究はゲノムワイド関連解析のメタ解析によって同定された関節リウマチ(RA)における101個の疾患感受性遺伝子が疾患の重症化に影響を及ぼしているかどうかを遺伝的リスクスコアを用いて解析するものである。RA重症化の指標としては骨関節破壊の直接評価法であるX線スコア(Sharp/ van der Heijde score)を使用した。これは手足の各関節における骨びらんと関節裂隙狭小化を評価するもので、現在RA患者における骨関節破壊の評価法としては多くの研究で標準的に利用されている。開発者に直接読影法の指導を受けた熟練した整形外科専門医が読影を行い、DNA試料を保有する患者の内、現在1,042名が発症より5年時のX線スコアデータを保有している。遺伝的リスクスコアに用いる候補遺伝子として国際共同研究によるGWASのメタ解析(Okada Y, et al. Nature 2014)によって同定されたRAの101個の疾患感受性遺伝子を用いた。解析対象患者全例においてそれら遺伝子多型情報の同定を行う。ゲノタイピングには多検体同時タイピングに適したTaqMan法を使用して行った。重症化指標であるRA発症5年時のX線スコアを従属変数とし、各SNPにおけるリスクアレル数を説明変数とした回帰分析を行った。調節因子として年齢、性別、抗CCP抗体価を加えた重回帰分析を行った。当初計画した内容はほぼ達成している。大きな研究の遅れはなく、平成28年度も計画通りに進行することが見込まれている。関連を認めたSNPについては周辺のゲノム構造解析を行い、有意な関連を認めるハプロタイプブロックを決定する。決定されたハプロタイプブロック内のエクソン領域およびプロモーター領域についてはリシーケンスを行い、より関連の強いSNPや機能的SNPの探索を行う。機能的SNPについては機能解析を行うことで評価する。その際の手法としては得られたSNPの予想機能にもよるが、発現解析やルシフェラーゼアッセイによるプロモーター活性評価、ゲルシフトアッセイによる転写因子のDNA結合能の検討などが考慮される。当施設は国内最大の関節リウマチ手術件数を誇り、これまでに800名以上の患者の手術時摘出組織由来の軟骨および滑膜のRNAをライブラリー化しており、また培養細胞としても保存している。これらを利用し、当該遺伝子の発現解析を行う。また細胞への当該遺伝子導入や遺伝子発現抑制実験によってその機能解析を行うことも可能である。
圧負荷心筋肥大における核骨格による情報伝達、及び遺伝子発現制御の研究

[目的]心筋細胞の伸展刺激による肥大過程では、転写因子とco-activatorの複合体が心筋特異遺伝子プロモーターに結合し転写活性を促進する。一方、DNAと蛋白複合体は核骨格の足場に支えられている。従って、伸展刺激が直接骨格構造の歪みを引き起こして複合体とDNAの立体構造を変形させる可能性があると考えた。この核骨格の働きを解明する第一歩として、本研究では伸展刺激によってプロモーターに近接する核骨格蛋白を同定しようとした。[方法と結果1]ラット上行大動脈狭窄30分後においてBNPプロモーターに結合する核骨格蛋白の同定(サウスウエスタン法):心筋核骨格分画を精製、SDS-PAGE、ニトロセルロースフィルター転写、^<32>PラベルBNPプロモーターと反応させた。120kDの蛋白に結合したが、結合程度は対照心筋と差が認められなかった。[方法と結果2]培養ラット胎児心筋細胞伸展刺激によりDNAに近接する核骨格蛋白の同定(シスプラチンクロスリンク法):心筋細胞をシリコン膜上に培養、30分間周期的伸展刺激をかけた。シスプラチンを作用させ、DNAと核蛋白をクロスリンクした。5M尿素、2Mグアニジン、2MNaClにより核骨格分画をそれに結合したDNAと共に抽出した。ハイドロキシアパタイトにDNAを吸着させ、次に結合した核骨格蛋白を溶出した。SDS-PAGEでは205kDから117kDの間に伸展していない細胞では存在しない少なくとも3本のバンドを認めた。2次元電気泳動を実験し始めたときに年度末となり、結果は得られていません。[結論と考察]伸展刺激で有意にDNAに近接する核骨格蛋白がシスプラチンクロスリンク法により求められた。なお、抽出する核骨格の蛋白量を増量するため、細胞伸展装置を大規模なものに作製しなおす必要があり、時間を要した。(目的)心筋が圧負荷あるいは伸展刺激により肥大および形質転換を行う際、情報が核骨格を通じて直接、遺伝子のプロモーター部分に作用する可能性を検討する。実験目標は、圧負荷あるいは伸展刺激によりプロモーターに近接・結合する核骨格蛋白を同定することである。(方法および現在までの結果)1.ラット上行大動脈狭窄心肥大モデルにおいてBNPプロモーターに結合する核骨格蛋白の同定(in vitroサウスウエスタン法):WKYラットを麻酔人工呼吸管理下に左肋間開胸し、上行大動脈を狭窄させる手術を行った。狭窄30分後に心臓を取り出し、心筋組織をホモゲナイズし、脱核し、スクロース密度勾配遠心により核のみ回収した。界面活性剤、DNAse、硫安、高濃度NaClにて抽出、核骨格分画を精製した。SDS-PAGEを行い、ニトロセルロースフィルター上に転写、^<32>PラベルBNPプロモーターとin vitroで反応させた。洗浄後、オートラジオグラフィーを行った。その結果、約120kDの蛋白が有意に結合した。今後、対照心筋から採った核蛋白の場合との差、および肥大刺激後各時間経過で結合程度が変化するかどうかを検討する予定である。2.ラット培養心筋細胞伸展刺激によりDNAに近接する核骨格蛋白の同定(シスプラチンクロスリンク法):本年度は、まずクロスリンクを行わないで、抽出核骨格蛋白を2次元電気泳動する条件の検討を目標とした。胎児WKYラット心筋細胞を培養した。細胞をハーベストし、ホモゲナイズ、脱核した。界面活性剤、DNAse、硫安、高濃度NaClにて中間径フィラメントと核骨格を抽出した。尿素に溶解し、再び低塩バッファーで透析し、核骨格分画のみを精製した。2次元電気泳動を行い、銀染色にてスポットを十数個同定しえた。その中には抗原性が核膜裏打ち蛋白ラミンと交差しない、約6kDと4kDの蛋白がメジャーに存在した。今後は、クロスリンクを行った後に精製し、伸展刺激による変化を検索する予定である。

2次元電気泳動を実験し始めたときに年度末となり、結果は得られていません。[結論と考察]伸展刺激で有意にDNAに近接する核骨格蛋白がシスプラチンクロスリンク法により求められた。なお、抽出する核骨格の蛋白量を増量するため、細胞伸展装置を大規模なものに作製しなおす必要があり、時間を要した。
日伯間の資本移動を活用した帰還移民者のキャリアの接続の研究

リーマンショック後にブラジルに帰還した日本就労経験者の雇用状況と生活状況について、ヒアリング調査をした。この他に帰還移民者を雇用する現地企業へのヒアリングから、日本就労の経験の内容が厳しく吟味されており、評価されるような職種に就いていた者とそうでない者とで大きなチャンスの差が存在していることが明らかになった。年齢が若い方が戻った場合も有利であると考えられがちであるが、このような考え方自体が日本的なものであり、ブラジルでは年齢よりも何ができるのかが厳密に評価されることで年齢ファクターがあまり効いていなく、むしろ経験値を一定程度持つことが要求されることで年齢ファクターは若年層ほど不利になっていた。日本に滞在するブラジル人は、1990年の入管法改正で日系3世まで就労可能になって以後一貫して増え続けていた。2008年にリーマンショックが起きると、日本政府は失業した日系人労働者とその扶養家族に国費で帰国費用を用意し、帰国を支援した。だが、この国による日系人の帰国支援事業も、その利用者の8割以上をブラジル人が占め、他の日系人の出身国出身者はあまり利用しなかった。アベノミクスが始まって以降も、ブラジル人の減少には歯止めがかからず、他のラテンアメリカ諸国出身者の滞日人口が安定しているのと比べると、世界同時不況の原因だけにブラジル人の減少要因を求めることはできない。この原因を探っていくと、日本が世界同時不況に喘いでいた時期のブラジルの目覚ましい経済発展が、日本への出稼ぎの意味を大きく変えてしまったということに辿り着いた。ブラジルでは2008年に300Reaisの最低賃金が2015年には788.06Reaisにまで上昇している。日本が最低賃金を50円上げるかどうかで大きな議論をしていたときに、ブラジルではそれを2倍以上に引き上げていたのだ。この最低賃金が倍以上になった本国経済は、必然的に国内の人件費の高騰、物価の上昇、不動産価格の高騰を引き起こしており、長い間賃金水準がかわっていない日本で、これまでだったらブラジルから見てましな賃金がもらえていたという状況がまったく一変してしまったのである。帰国を考えていたものたちにとって、日本での就労をし続ける意味がなくなってしまったのだ。このような環境の変化が、帰国志向を持っていた人びとの帰国を促し、ブラジル以外のラテンアメリカ諸国ではブラジルのような経済環境の好転が見えてこないため、ブラジル人にのみ滞日人口の急速な減少が発生したと思われる。こうした条件のもと、帰国した人びとが日本就労の経験を一つの資源としてブラジルに復帰する可能性を調べた。リーマンショック後にブラジルに帰還した日本就労経験者の雇用状況と生活状況について、ヒアリング調査を中心に進めた。帰還移民者自身への聞き取りとともに、帰還移民者を雇用する現地企業へのヒアリングから、日本就労の経験の内容が厳しく吟味されており、評価されるような職種に就いていた者とそうでない者とで大きなチャンスの差が存在していることが明らかになった。一般には、年齢が若い方が戻った場合も有利であると考えられがちであるが、このような考え方自体が日本的なものであり、ブラジルでは年齢よりも何ができるのかが厳密に評価されることで、年齢ファクターがあまり効いていなく、むしろ経験値を一定程度持つことが要求されることで年齢ファクターは若年層ほど不利になっている結果として出てきた。また、日本が長期にわたって経済低迷している間に、ブラジル経済が上昇することにより、1ブラジルでの賃金水準一般が上昇したこと、2ブラジルで生活するのに必要な資金も上昇したことにより、景気低迷の日本で働き続けることが獲得できる賃金の上でも、そして帰国のために用意しなくてはならないお金を貯める上でもネガティブに働いていることが判明した。この点で、ブラジル人労働者の近年の大量帰国が日本の側だけの要因で起きたのではなく、それ以上にブラジル側の状況が大きく変わることによって発生していたことを明らかにした。1)ブラジルに進出し現地法人の工場を持っている日本企業に行き、インタビュー調査を重ねており、日本企業のブラジルでの採用指針をおおむね把握できた。2)急速なブラジルの経済成長は、日系企業でも経験者の中途採用を増加させており、この中途採用ではブラジルのヘッドハンティング会社が用いられる。このブラジルでのヘッドハンティングを行っている会社にもインタビューを重ねており、どのような日本での経験がブラジルでの日系企業への就職に有利なものとなっているのかの把握ができた。3)日本政府の帰国支援事業を通じて帰国したが、なかなかブラジルでうまく就職できていない者たちへのインタビューを重ねており、これらを通じてブラジルでは評価されない日本就労が何なのかの把握ができている。以上のことより、本研究はおおむね順調に進展しており、当初の予定通りのスピードで研究を進めることができている。社会学

これまでの成果として、進出した日系企業がデカセギ帰りの者をどのように見ているのか、日本就労期間中にどのような経験をしていると帰国後の就職に繋がっているのかということについては一定程度の資料を集めることができた。今後は、1)ブラジルの企業がデカセギ帰国者をどのように見ているのか、2)デカセギ帰国者で就職していない者たちが、ブラジルでの職にアクセスするためにどのような回路を通じてそれを試みているのか。この2点に絞って残り一年となった研究を進める。とくに2)のデカセギ帰国者で就職活動を行っている者が用いている職への回路については、これをビジネスとして行っているエージェントによる活動、現地のNPOがボランティア的に行っている活動に可能な限りの資源を投入して明らかにしたいと考えている。本年度は、当初、現地調査を2回行う予定であった。しかし、2回目の調査を行おうと考えていた時期に、メキシコのラテンアメリカ・アジアアフリカ学会より、2014年は伊達政宗の命を受けてローマまで行った支倉常長のメキシコ訪問400周年を記念したシンポジウムでキーノートスピーチをしてもらいたいと依頼され、"Japanese Immigration Policyunder an Aging Society: Missionaries in the MedievalTimes to Modern-day Foreign Labores-Are They any Changes?"を講演することになった。そのため、調査回数減らすことになってしまい、使用額が予定より少なくなった。夏休み期間中の調査をサンパウロ州内のみで行うのではなく、アマゾン川中流マナウス市の工業団地も調査対象として調査活動を行うことで、次年度の調査に関する費用は繰越額を含めて確実に活用することができる。
培養細胞を用いた薬物の消化管吸収スクリーニングシステムの開発

培養細胞としてヒト大腸癌由来のCaco-2細胞株を用い、その単層膜に対する種々薬物の透過性を測定した結果、in vivoにおけるラット小腸透過性との間に極めて良好な相関が認められ、Caco-2単層膜の消化管吸収スクリーニングシステムとしての有用性が明らかとなった。しかし、担体輸送機構によって小腸から吸収される薬物の場合には、Caco-2単層膜に対する透過性が実際の小腸に比べて低く、Caco-2細胞における輸送活性が小さいことが示唆された。そこで、細胞の刷子縁膜における薬物輸送を膜レベルで解析することを目的として、Caco-2細胞及びラット小腸上皮細胞より刷子縁膜小胞(BBMVs)を調整し、ジペプチド輸送担体を介して吸収されるセフチブテン、及びD-グルコース、L-プロリンのBBMVsへの取り込み速度を測定した。Caco-2細胞BBMVsにおいても、人工的に輸送の駆動力(H^+勾配)を付加した条件下でのセフチブテンの取り込みに明らかなオーバーシュート現象が観察され、実際の小腸と同様、ジペプチド輸送担体を介した輸送機構の存在が示された。しかし、その時の取り込み速度はラット小腸BBMVsの1/3以下と小さく、Caco-2細胞における輸送担体の発現の程度が小さいことが明らかとなった。また、Caco-2細胞BBMVsではD-グルコースの取り込みにはオーバーシュートが認められず、単糖輸送担体の発現が極めて低く、実際の小腸吸収細胞に比べて物質輸送能が低いことが示された。今後、全ての薬物の吸収性評価を行うためには、遺伝子導入などの手法によって輸送担体の発現の程度を調整する必要があると考えられる。
現代日本語のテンス・アスペット・ヴォイスについての総合的研究

1現代日本語の基礎的研究部門では、第1に、テンスとアスペクトがどちらも時間と関わる文法的カテゴリ-である点において、両者の間には相関性が認められることをシテイル、シタが表すパ-フェクト性というアスペクト的意味をとりだすことによって分析した。また、従属文におけるスル-シタの対立が、一定の条件の下で、テンス対立からアスペクト対立に変容する場合がある点も明らかにした。第2に、アスペクトとヴォイスは、どちらも文の対象的内容をなす出来事のとらえかたに関わるカテゴリ-である点において、相関性が認められることを、特に継続相のシテイル、サレテイルにおけるアスペクト的意味と、広義ヴォイスで対立する文(他動詞能動文、直接産動文、間接受動文、自動詞文、再帰構造文)との関係をとらえることによって分析した。2.対照的研究部門では、韓国人日本語学習者の作文とレポ-トを、パソコンを使ってデ-タベ-ス化し、テンス・アスペクト形のうち、ル形とタ形に関する誤用、ル形とシテイル形に関する誤用をタイプ化し、誤用の原因を分析した。作文・レポ-トの書き手の日本語習熟度の低さによる誤用、朝鮮語と日本語のテンス・アスペクト体系の相違によってひきおこされる母語の干渉による誤用が具体的に取り出された。3.言語発達研究部門では、3枚の絵を見せて、物語を作らせるという実験によって、幼児・児童の時制表現(スル、シテイル、シタ、シテイタ)の使用状況を調査し、分析した。登場人物の動きがみられない場面と動きがみられる場面とで、時制のあらわれ方が異なること、口頭による実験と作文による実験とでも時制のあらわれ方が異なること、年令がすすむに従って、過去形に統一される明確にみられる点が明らかにされた。4.以上の研究成果は、研究代表者による統括のもとにおいて、研究分担者相互間の討議によって得られたものである。1.テンス・アスペクトについての基礎的研究では、1例に1カードを使い、約35万枚の使用例を採集し、第一次分類をおこなった。ひきつづき第二次分類をおこなっている。形態論的カテゴリーとしてのアスペクト(スルーシテイルの対立)が現代日本語においても、テキスト構成的機能をはたす重要な手段であることが実証されつつある。また〈完了〉というアスペクト的意味は〈シタ〉があらわすと従来されてきているが、〈終止〉においては、むしろ〈シテイル、シテイタ〉があらわすと規定すべきであることが明らかになりつつある。2.児童におけるテンス表現の発達の研究では、900余名の小学校児童に対して、3コマの極簡単な漫画を提示し、1コマずつ説明させるという実験を行った。この結果、文中の動詞は小学校低学年では現在形の使用が多く、高学年ではほとんどが過去形であった。また、テンスは動詞の種類とも関係があり、「持っている」など状態を表す動詞には現在形(シテイル)が、「渡す」など変化を表す動詞には過去形(シタ)が用いられ易いことが小学校低学年レベルでも確かめられた。これらのことから、低学年では時間的な視点が固定されておらず、漫画のコマごとに移動すること、高学年では成人と同様、視点が一点に固定されて物語を構成することが示唆された。3.外国人日本語学習者の誤用分析の研究では、今年度は韓国人学習者がテスト時間に書いた作文(のべ400人分)全文をパソコンに入力した。その結果、約2000例の誤用例をデータベース化することができた。