hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
N2a細胞における酸化的ストレスによるDNA損傷修復蛋白DDB1の動態の解析

EGFPをfusionさせたDDB1をstableに発現するHEK293細胞株(EGFP-DDB1-HRK293-1)にを樹立さした。EGFP-DDB1-HEK293-1とHEK293細胞株において、UVにより生成されるDNA損傷(CPDs及び6-4PPs)の修復について比較を行ったが、修復の速度には違いがみられず、DDB1の多量発現は損傷の修復に影響のいないことが確認された。また、EGFP-DDB1-HRK293-1とHEK293細胞株の間には、分裂速度の差もみられなかった。EGFP-DDB1-HEK293-1に酸素負荷を加え、37°Cにstageが保たれた蛍光顕微鏡を用いてreal timeに蛍光標識DDB1が核に移動することを観察した。酸素負荷としては、低酸素状態及びその状態からの急速な酸素分圧上昇(酸素濃度をコントロール可能なインキュベーターを使用)、過酸化水素の添加を検討した。生細胞で局所蛍光量を経時的に測定し、stress種類及びその強度の違いによるDDB1動態(移行する蛍光量、移行し始める時間、移行前後での蛍光量の細胞質/核比)の違いについて検討した。また、20J/m^2UV照射や120gyの放射線により生じるDNA損傷に伴うDDB1の動態との比較検討も行ったところ、DDB1の移行量は放射線照射によるものが最も大きく、DNA傷害を与えた後約24時間で蛍光量の移行が最大に達した。また、負荷を与えた後約48時間には、DDB1は再び細胞質へ移行した。これらのことから、DDB1は多くの遺伝子損傷に対応し、何らかのシグナルを細胞体から核に輸送することに関わっているシャペロン様の働きを持つのではないかと考えられた。また、EGFPをfusionさせたDDB1をstableに発現するSKN-MC神経芽細胞種株を樹立を目指したが、DDB1の全長を発現する細胞株は得られなかった。全長DDB1の大量発現はSKN-MC神経芽細胞種株にとって有害であることが示唆された。C末端を欠いた細胞株が得られた。C末端を欠いたDDB1は、APP断片との結合部位を持たないことから、APP断片の核への移行は神経細胞にとって有害ではないかと推測された。EGFPをfusionさせたDDB1をstableに発現するHEK293細胞株(EGFP-DDB1-HRK293-1)を樹立さした。EGFP-DDB1-HRK293-1とHEK293細胞株において、UVにより生成されるDNA損傷(CPDs及び6-4PPs)の修復について比較を行ったが、修復の速度には違いがみられず、DDB1の多量発現は損傷の修復に影響のいないことが確認された。EGFP-DDB1-HRK293-1に酸素負荷を加え、37°Cにstageが保たれた蛍光顕微鏡を用いてreal timeに蛍光標識DDB1が核に移動することを観察した。

酸素負荷としては、低酸素状態及びその状態からの急速な酸素分圧上昇(酸素濃度をコントロール可能なインキュベーターを使用)、過酸化水素の添加、4-hydorxy-nonenal添加を検討した。生細胞で局所蛍光量を経時的に測定し、stress種類及びその強度の違いによるDDB1動態(移行する蛍光量、移行し始める時間、移行前後での蛍光量の細胞質/核比)の違いについて検討した。また、UVや放射線により生じるDNA損傷に伴うDDB1の動態との比較検討も行ったところ、DDB1の移行量は放射線照射によるものが最も大きく、ほとんどの場合、負荷を与えた後約24時間で移行量が最大に達した。また、負荷を与えた後約48時間には、DDB1は再び細胞質へ移行した。これらのことから、DDB1は多くの遺伝子損傷に対応し、何らかのシグナルを細胞体から核に輸送することに関わっているシャペロン様の働きを持つのではないかと考えられた。EGFPをfusionさせたDDB1をstableに発現するHEK293細胞株(EGFP-DDB1-HRK293-1)にを樹立さした。EGFP-DDB1-HEK293-1とHEK293細胞株において、UVにより生成されるDNA損傷(CPDs及び6-4PPs)の修復について比較を行ったが、修復の速度には違いがみられず、DDB1の多量発現は損傷の修復に影響のいないことが確認された。また、EGFP-DDB1-HRK293-1とHEK293細胞株の間には、分裂速度の差もみられなかった。EGFP-DDB1-HEK293-1に酸素負荷を加え、37°Cにstageが保たれた蛍光顕微鏡を用いてreal timeに蛍光標識DDB1が核に移動することを観察した。酸素負荷としては、低酸素状態及びその状態からの急速な酸素分圧上昇(酸素濃度をコントロール可能なインキュベーターを使用)、過酸化水素の添加を検討した。また、20J/m^2UV照射や120gyの放射線により生じるDNA損傷に伴うDDB1の動態との比較検討も行ったところ、DDB1の移行量は放射線照射によるものが最も大きく、DNA傷害を与えた後約24時間で蛍光量の移行が最大に達した。また、EGFPをfusionさせたDDB1をstableに発現するSKN-MC神経芽細胞種株を樹立を目指したが、DDB1の全長を発現する細胞株は得られなかった。全長DDB1の大量発現はKN-MC神経芽細胞種株にとって有害であることが示唆された。C末端を欠いた細胞株が得られた。C末端を欠いたDDB1は、APP断片との結合部位を持たないことから、APP断片の核への移行は神経細胞にとって有害ではないかと推測された。
新規神経ペプチドＡＰＧＷａｍｉｄｅの抗アロディニア効果に関する基礎的研究

糖尿病性神経因性疼痛モデルラットへの神経ペプチドAPGWamideの髄腔内投与によって、疼痛行動であるアロディニアが顕著に軽減する。また、APGWamideは、糖尿病ラット後肢への温熱刺激による、脊髄後角でのc-Fosタンパクの発現も顕著に抑制する。この抗アロディニア効果が脊髄後角において5-HT1レセプターアンタゴニストやα1レセプターアンタゴニストによって顕著に阻害されることが示され、下行性抑制系の関与が示唆された。さらに、APGWamideアナログペプチドを用いた研究から活性に重要なアミノ酸配列がわかってきた。行動実験からAPGWamideは糖尿病性神経因性疼痛モデルラット(糖尿病ラット)のアロディニアを軽減し、この抗アロディニア効果はセロトニン(5-HT)レセプターのアンタゴニストとノルアドレナリン(NA)レセプターのアンタゴニストによって有意に抑制されることがわかった。また、アロディニアを示すラットは、足への温熱刺激によって、その神経投射部位である脊髄後角にc-Fosタンパクを発現する。このc-Fosの発現は痛み入力の指標とされており、免疫組織化学的な解析を行ったところ、糖尿病ラットの足底に温熱刺激を与えると正常ラットに比べて有意にc-Fosの陽性細胞数が増大する。APGWamideの髄腔内投与は、温熱刺激によるc-Fos陽性細胞数を正常ラットの場合と同程度まで減少させることが分かった。さらに、5-HTレセプターのアンタゴニストとNAレセプターのアンタゴニストはAPGWamideのc-Fos発現抑制作用を阻害した。このことから、糖尿病性神経因性疼痛を示すラットにみられるc-Fos発現の増大もAPGWamideによって顕著に抑制され、その効果は神経伝達物質である5-HTやNAを介している事が示された。これまでの行動学的実験の結果と同様に今回の免疫組織化学的実験の結果は、APGWamideの作用には下行性の疼痛抑制系が関与していることを強く示唆している。上位中枢(大脳皮質、大脳基底核、扁桃核、視床、中脳水道周囲灰白質、大縫線核など)におけるAPGWamideの効果を明らかにするために、正常ラットおよび糖尿病ラットにAPGWamideを投与し、c-Fosタンパクの免疫組織化学を行ったが、両ラット群における有意な違いがまだ、得られていない。今後、APGWamideの投与経路の見直し、実験法の改善等を進めていく必要がある。糖尿病性神経因性疼痛モデルラット(糖尿病ラット)の行動実験から腰髄髄腔内に投与したAPGWamideは糖尿病ラットが示すアロディニアを軽減し、その効果は、セロトニン(5-HT)レセプターのアンタゴニストとノルアドレナリン(NA)レセプターのアンタゴニストによって有意に抑制された。5-HTとNAは下行性疼痛抑制系の伝達物質と考えられており、APGWamideの効果は下行性疼痛抑制系を介していると考えられた。アロディニアを示すラット足底への温熱刺激によって、その神経投射部位である脊髄後角に発現するc-Fosタンパクは痛み入力の指標とされており、糖尿病ラットの足底に温熱刺激を与えると正常ラットに比べて有意にc-Fosの陽性細胞数が増大することが示された。APGWamideの髄腔内投与は、この糖尿病ラット足底への温熱刺激による脊髄後角でのc-Fos陽性細胞数を減少させた。さらに、5-HTレセプターとNAレセプターのアンタゴニストはAPGWamideのc-Fos発現抑制作用を阻害した。このことから、糖尿病ラットにみられるc-Fos発現も行動学的実験と同様にAPGWamideによって顕著に抑制され、その効果は神経伝達物質である5-HTやNAを介している事が示された。行動学的実験の結果とc-Fos免疫組織化学的実験の結果から、APGWamideの作用には下行性疼痛抑制系が関与していることが強く示唆された。さらに、APGWamideの構造活性関係を明らかにするためにそのC末端フラグメントペプチドである、PGWamide、GWamideの効果を調べたところ、APGWamideと同様の抗アロディニア活性を示した。C末端のPGWamide構造を保存しN末端のAla残基を他のアミノ酸に置換したアナログペプチドを合成し、その活性を調べた。Ala残基を疎水性アミノ酸に置換すると活性が強くなり、酸性アミノ酸に置換すると抗アロディニア活性が消失することが示された。糖尿病性神経因性疼痛モデルラットを作製し、APGWamideおよび、そのC末端フラグメントペプチド、PGWamide、GWamideを髄腔内に投与した。糖尿病ラットは、アロディニア(触刺激による痛み行動)を示すが、いずれのフラグメントペプチドもアロディニアを有為に軽減した。また、その効果はAPGWamideが一番強く、PGWamide、GWamideの順番であった。

アロディニアを示すラットは、足への温熱刺激によって、その神経投射部位である脊髄後角にc-Fosタンパクを発現する。このc-Fosの発現は痛みの入力の指標とされており、c-Fosの免疫組織化学を行ったところ、APGWamideの髄腔内投与は、足への温熱刺激によるc-Fosタンパクの発現を抑制した。行動学的実験、組織化学的実験、いずれの実験でも、APGWamideは抗アロディニア作用があることが示された。この効果が、脊髄における抑制系を介していると考え、APGWamideの作用に対するセロトニン(5-HT)レセプターとノルアドレナリン(NA)レセプターのアンタゴニストの効果を調べた。5-HT1、5-HT2、5-HT3、α1、α2、それぞれのレセプターサブタイプに選択的なアンタゴニストをAPGWamideと同時投与したところ、5-HT1、5-HT3、α1レセプターアンタゴニストが、APGWamideの抗アロディニア作用を抑制することがわかった。これらの結果から、APGWamideとそのアナログペプチドは、糖尿病性神経因性疼痛に対して抗アロディニア作用を示し、その作用は神経伝達物質である5-HTやNAを介している事が示唆された。さらに、効果のあったアンタゴニストが結合するレセプターサブタイプから、APGWamideの作用には下行性の疼痛抑制系が関与していることが考えられる。新型神経ペプチドであるAPGWamideの抗アロディニア効果を調べ、その作用機序を目的として研究を進めてきた。糖尿病ラットを用いた行動学的実験および免疫組織化学的実験はほぼ終了しており、別のモデルである坐骨神経圧迫モデルに対する実験を次年度に進めていく。さらに、上位中枢(大脳皮質、大脳基底核、扁桃核、視床、中脳水道周囲灰白質、大縫線核など)におけるAPGWamideの効果は前年度に明確な結果を得られなかったが、実験法等の改善点は明確になっているので、次年度に結果を出せるものと考えている。おおむね計画に沿って研究・実験を実施している。現在まで糖尿病ラットに対するAPGWamideの効果を調べてきたが、他の神経因性疼痛モデルの1つである坐骨神経圧迫モデルラットを作製し、同様の手法でAPGWamideの抗アロディニア効果効果を調べ、糖尿病ラットと比較検討する(武田)。APGWamideのC末端アナログペプチド、PGWamide、GWamideの活性の比較から、N末端のアミノ酸残基が活性の強さに影響を与えていると考えられる。そこで、構造活性関係を詳しく調べるために、N末端のアミノ酸残基Alaを他のアミノ酸残基に置換したXPGWamideを作製し、抗アロディニア効果を調べる(池田)。上位中枢におけるAPGWamideの効果を明らかにするために、正常ラット、糖尿病ラットおよび坐骨神経圧迫ラットにAPGWamideを投与し、c-Fosタンパクの免疫組織化学を行う。24年度の実験をふまえて、APGWamideの投与法、投与経路、実験法の改善等を進めて、上位中枢におけるAPGWamideの作用部位を明らかにする(池田・武田)APGWamideの5-HTやNAを介した抗アロディニア作用は抗うつ薬の薬理作用と似ており、脳内への投与でも抗うつ薬と同様に5-HTの放出量が増えることを確認している。
RT-PCRによる水中ウイルス検出に関わる阻害物質の同定及び阻害回避手法の確立

一般に,水からのウイルス検出は,ウイルス濃縮を要するが,ここで夾雑物質もともに濃縮されてしまい, RT-PCRによるウイルス検出効率の低下が生じる.検出効率の低下を引き起こす物質の特性を評価した事例は存在せず,このため検出効率向上のための手法も確立していない.水のウイルス学的安全性評価のためには10-100Lの大容量水試料を検査することが求められるが,現状では検査水量の増大は必ずしも検査感度の向上をもたらさない.昨年度の研究により,ウイルス濃縮液中には疎水性及び30kDa程度の有機物が含まれやすいことを見出した.さらに, DAX-8樹脂及びゲルろ過による濃縮液精製がウイルス検出効率の向上に有効である可能性を見出した.本年は考案した濃縮液精製手法の更なる適用及び,遺伝子配列解読への親和性の検証を試みた.東京都及び宮城県で収集した河川・海水試料100L程度をウイルス濃縮操作に供し, 0.7mL程度まで減容した.濃縮液を上述の精製操作に供し,定量RT-PCRによるウイルス遺伝子数の定量, RT-Nested-PCR及びSanger Sequenceを用いたGII-ノロウイルスの遺伝子配列解読,次世代シーケンサーを用いたRNAの網羅的解読を試みた.濃縮液精製手法の適用により, GI及びGIIノロウイルス,サポウイルス,エンテロウイルス,アイチウイルスGII及びGIIIFRNAファージなど,複数種のウイルスについて定量精度の向上が確認された.また,精製後の奥多摩河川水濃縮液中のGIIノロウイルス遺伝子数は1.53.0copies/tube程度であった.これら低濃度試料からも, RT-Nested-PCR及びSanger Sequenceを用いた遺伝子配列解読が可能であることを確認した.また,精製後のウイルス濃縮液を用いた次世代シーケンサーによるRNAの網羅的解読では,上記ウイルス群に加え,アストロウイルスやピコビルナウイルス,ヒト腸管系ウイルスとは形状の大きく異なるトウガラシ微斑ウイルスなどの植物ウイルス様の遺伝子配列が確認された.これらの結果は考案した濃縮液精製手法が,幅広い水中ウイルスに対して有効であること,また,水中ウイルス解析に用いる多様な分子生物学的手法との親和性が高いことを示すものである.(抄録なし)水からのウイルス検出は,ウイルス濃縮,核酸抽出に続く逆転写(RT-)PCRにより行われるが,試料中に夾雑物が含まれる場合,核酸抽出やRT-PCRの効率は著しく低下する.このような検出阻害は原水試料に由来する阻害物質がウイルス濃縮過程で共濃縮されることで生じると考えられる.共濃縮される阻害物質について,有機物の観点から特性を評価した事例は存在せず,このため検出阻害回避手法も確立していない.水のウイルス学的安全性評価のためには10-100Lの大容量水試料を検査することが求められるが,検出阻害が問題となるため,現状では検査水量の増大は必ずしも検査感度の向上をもたらさない.そこで,ウイルス濃縮過程での水試料中の有機物の動態解析と,ウイルス検出阻害評価を組み合わせることで,ウイルス濃縮により共濃縮される検出阻害物質の特性評価を試みた.東京湾沿岸域及び石巻沿岸域で水試料を採取し,これらをウイルス濃縮操作に供した.原水試料及びウイルス濃縮操作を有機物分析に供したほか,ウイルス濃縮液を用いウイルス検出及び検出阻害評価を試みた.対象とした試料の9割程度で顕著なウイルス検出阻害が観測された.ウイルス濃縮液の254nm紫外線吸光度と検出阻害の強度には線形関係が見られた(R2=0.49-0.65).また,原水試料と比較し,ウイルス濃縮液では疎水性及び30kDa程度の高分子有機物が特に顕著となる傾向が見られた.これら有機物画分が特にウイルス検出阻害へ関与していると考えられた.これに対し,ウイルス粒子は親水性かつ2,000kDa以上であると考えられる.そこで,疎水性物質を吸着するDAX-8樹脂及び70kDa未満の粒子を排除可能なゲルろ過による濃縮液精製手法を検討した.DAX-8とゲルろ過を併用することで,東京湾及び石巻試料について,検出阻害の抑制効果及びウイルス定量値の向上が確認された.従って,当手法は水試料ウイルス濃縮液について,ウイルス検出阻害の克服に効果的であると判断できる.一般に,水からのウイルス検出は,ウイルス濃縮を要するが,ここで夾雑物質もともに濃縮されてしまい, RT-PCRによるウイルス検出効率の低下が生じる.検出効率の低下を引き起こす物質の特性を評価した事例は存在せず,このため検出効率向上のための手法も確立していない.水のウイルス学的安全性評価のためには10-100Lの大容量水試料を検査することが求められるが,現状では検査水量の増大は必ずしも検査感度の向上をもたらさない.昨年度の研究により,ウイルス濃縮液中には疎水性及び30kDa程度の有機物が含まれやすいことを見出した.さらに, DAX-8樹脂及びゲルろ過による濃縮液精製がウイルス検出効率の向上に有効である可能性を見出した.本年は考案した濃縮液精製手法の更なる適用及び,遺伝子配列解読への親和性の検証を試みた.東京都及び宮城県で収集した河川・海水試料100L程度をウイルス濃縮操作に供し, 0.7mL程度まで減容した.濃縮液を上述の精製操作に供し,定量RT-PCRによるウイルス遺伝子数の定量, RT-Nested-PCR及びSanger Sequenceを用いたGII-ノロウイルスの遺伝子配列解読,次世代シーケンサーを用いたRNAの網羅的解読を試みた.濃縮液精製手法の適用により, GI及びGIIノロウイルス,サポウイルス,エンテロウイルス,アイチウイルスGII及びGIIIFRNAファージなど,複数種のウイルスについて定量精度の向上が確認された.

また,精製後の奥多摩河川水濃縮液中のGIIノロウイルス遺伝子数は1.53.0copies/tube程度であった.これら低濃度試料からも, RT-Nested-PCR及びSanger Sequenceを用いた遺伝子配列解読が可能であることを確認した.また,精製後のウイルス濃縮液を用いた次世代シーケンサーによるRNAの網羅的解読では,上記ウイルス群に加え,アストロウイルスやピコビルナウイルス,ヒト腸管系ウイルスとは形状の大きく異なるトウガラシ微斑ウイルスなどの植物ウイルス様の遺伝子配列が確認された.これらの結果は考案した濃縮液精製手法が,幅広い水中ウイルスに対して有効であること,また,水中ウイルス解析に用いる多様な分子生物学的手法との親和性が高いことを示すものである.本研究の最終目的であるウイルス検出阻害抑制手法の確立は,概ね達成することができたため,上記の評価とした.今後は手法のさらなる最適化を試みる予定である.構築した阻害物質除去手法により,試料中のウイルスのロスが生じ得る.従って,ウイルスのロスを最小化する必要があると考えている.具体的には,ゲルろ過に際し,排除可能分子量の異なる複数のゲルろ過ユニットの比較検討を試みる.また,現時点では,手法は海水及び河川水試料についてのみ適用しているが,地下水や浄水についても有効性を検証する予定である.(抄録なし)
腎アンジオテンシン系およびアドレノメデュリン系の臨床的意義に関する分子医学的研究

腎疾患の発症・進展において重要と考えられる組織レニン-アンジオテンシン系(RAS)、また抑制系のアドレノメデュリン(AM)およびNa利尿ペプチド系の機能的意義について、以下の知見を得た。(1)レニン-アンジオテンシン系AII受容体の2型(AT_2)サブタイプは、昇圧に関与する1型(AT_1)受容体に拮抗的な役割が示唆されているが、その意義は未だ不明である。ラット腎臓におけるAII受容体発現を検討し、若年の高血圧自然発症ラット(SHR SP)糸球体で正常対照(WKY)に比しAT_2受容体発現の有意な減少を認め、高血圧発症への関与を示唆した。またWKY由来培養腎メサンギウム細胞ではconfluent後の増殖抑制に伴ってAT_2受容体発現が著増するが、増殖性の亢進したSHRSP由来細胞ではその発現が全く見られず、さらにAT_1受容体を介した細胞増殖がAT_2受容体刺激で抑制されることを見出し、その機序として、MAPキナーゼ(ERK-1/2,p38)カスケードの抑制とアポトーシスの亢進を認めた。(2)アドレノメデュリン系AMに対する高親和性モノクローナル抗体を作製してRIAを確立しAM分泌を検討したところ、培養メサンギウム細胞から内皮細胞や血管平滑筋細胞に匹敵するAM分泌を認め、またAMは強力な細胞噌殖抑制作用を示し、これらの細胞において内因性のAMがautocrine/paracrine調節因子として増殖抑制に関与することを示した。また、SHRSP由来メサンギウム細胞においてWKYに比し有意のAM分泌の減少およびAMに対する反応性の亢進を認め、増殖調節への関与を示唆した。(3)腎アンジオテンシン系とAM系、Na利尿ペプチド系との相互作用マウスでRAS活性化に続き糸球体肥大・硬化を来す5/6腎摘モデルを作製し、約2倍の著明な糸球体面積増加と糸球体内TGF-β、fibronectin発現亢進を認めた。慢性的なNa利尿ペプチド過剰を示すBNP-transgenic mouse(BNP-Tg)では、糸球体肥大およびTGF-β、fibronectin発現の著明な抑制を認めた。抗糸球体基底膜腎炎でも、BNP-Tgで蛋白尿減少効果を認め、これら保護作用の機序を検討中である。また、AMは腎尿細管に多く発現するが、別のRAS活性化モデルである尿管結紮水腎症モデルで間質線維化とともにAM発現が著減することを見出し、内因性AMが保護的に働く可能性が示唆された。高血圧や腎疾患の発症・進展において組織レニン-アンジオテンシン系の異常や、新しい降圧利尿ホルモンであるアドレノメデュリン(AM)の意義が注目されている。今回、腎におけるアンジオテンシンII(AII)受容体およびAMの発現調節と機能的意義について、以下の知見を得た。1.ラット腎臓におけるAII受容体遺伝子発現とその調節機序の検討ラット腎臓ネフロン

セグメントにおけるAT_1、AT_2受容体発現を検討し、若年の高血圧自然発症ラット(SHRSP)糸球体でのAT_2受容体発現が正常対照(WKY)に比し有意に減少していることを認め、高血圧発症への関与を示唆した。また、WKY由来培養腎メサンギウム細胞ではconfluen後の増殖抑制に伴ってAT_2受容体発現が著しく亢進するのに対し、増殖性の亢進したSHRSP由来細胞ではその発現が全く見られず、またこの調節にIRF-1誘導の有無が関与することを見出した(Hypertension)。2.培養メサンギウムおよび内皮細胞におけるAM発現とその意義の検討Amに対するモノクローナル抗体を調製し、それを用いて高感度RIAを確立して各種培養細胞におけるAM分泌を検討したところ、培養メサンギウム細胞から内皮細胞や血管平滑筋細胞に匹敵するAM分泌を認めた(Kidney Int.)。さらに内皮細胞では内因性のAMがautocrine抑制因子として細胞増殖調節に関与することを示した。また、SHRSP由来メサンギウム細胞においてWKYに比し有意のAM分泌の減少およびAM反応性の亢進を認め、増殖調節への関与を示唆した。3.AT_2受容体およびAM受容体を介する細胞増殖抑制およびアポトーシス誘導のついての検討培養腎メサンギウム細胞を用いて、AIIによるAT^1受容体を介した細胞増殖促進効果がAT_2受容体刺激で抑制されることを見出した。またその機序のひとつとして、MAPK(ERK-1,-2,p38)カスケードの抑制およびアポトーシスの亢進を認めた。さらに、AM刺激は強力なメサンギウム細胞増殖抑制を来たし、この機序にcAMP上昇およびMAPK抑制が関与することが示された。腎疾患の発症・進展において重要と考えられる組織レニン-アンジオテンシン系(RAS)、また抑制系のアドレノメデュリン(AM)およびNa利尿ペプチド系の機能的意義について、以下の知見を得た。1.腎障害モデル動物を用いたRASとNa利尿ペプチド系、AM系との相互作用に関する検討C57BL/6マウスでRAS活性化に続き糸球体肥大・硬化を来す5/6腎摘モデルを作製し、約2倍の著明な糸球体面積増加と糸球体内TGF-β、fibronectin発現亢進を認めた。慢性的なNa利尿ペプチド過剰を示すBNP-transgenic mouse(BNP-Tg)では、糸球体肥大およびTGF-β、fibronectin発現の著明な抑制を見出した。抗糸球体基底膜腎炎でも、BNP-Tgで蛋白尿減少効果を認め、これら腎保護作用の機序を検討中である。また、AMは腎尿細管に多く発現するが、別のRAS活性化モデルである尿管結紮水腎症モデルで、間質線維化とともにAM発現が著減することを見出し、内因性AMが保護的に働く可能性が示唆された。2. AII受容体によるMAPキナーゼ(MAPK)を介する細胞機能調節の検討これらのモデルでの腎障害の機序のひとつにAIIによるMAPKの活性化が考えられるが、培養腎メサンギウム細胞において、AIIによるAT@@S21@@E2受容体を介した細胞増殖促進およびTGF-β発現亢進作用に対しAT@@S22@@E2受容体刺激が抑制作用を示し、この際MAPK(ERK,p38)カスケードの抑制とアポトーシス誘導を認めた。3.培養メサンギウム細胞におけるAM発現とその意義の検討
サイクリックAMP応答配列を介するWntシグナル伝達系の解析

私達はメラノサイト特異的遺伝子であるドーパクロムトートメラーゼ(DCT)やMITF-M遺伝子がWntシグナルによって活性化される事を示した。さらにMITF-MがbHLHzipを介してWntシグナル伝達系の転写因子LEF1と複合体を形成し、DCTやMITF-M自身の転写を活性化することを明らかにした。興味深いことにMITF-MはDNA結合を必要とせず、LEF1と複合体を形成しコアクチベーターとして機能した。このコアクチベーター機能はMITF-A,MITF-H,MITF-Dにおいても認められた。MITF-M以外のアイソフォームはメラノサイトのみならず各種細胞に発現している。よってMITFは多くの細胞において、その認識配列CANNTGの有無に関わらずWntシグナルの標的遺伝子の多くに関与すると考えられた。またMITF遺伝子疾患であるワーデンブルグ症候群2型の発症はMITF-Mの量不足(haploinsufficiency)と考えられており、MITF-M遺伝子の自己活性化機構はMITF-Mの発現を維持するのに非常に重要である。さらにWntシグナルによるDCT遺伝子の転写活性化にはDCT遺伝子プロモーター上のcAMP応答類似配列TGAGGTCAが関与していたが、当配列に結合する転写因子はCREBではなく核内レセプターである可能性が示唆された。当該核内レセプターはDCT遺伝子プロモーター上の複数のTGAGGTCA類似配列を認識する。一方、DCT遺伝子は網膜色素上皮にも特異的に発現しており、メラノサイトと同様にWntシグナルとの関わりを解析した。その過程で、ホメオドメイシタンパクであるOTX2が網膜色素上皮におけるDCT遺伝子の転写を調節することが明らかとなった。しかもOTX2がMITFと相互作用した。またMITFが種々の細胞でWntシグナルに関わる可能性があるので、MITFが発現する候補となる幾つかの組織を検討し、MITFがマウス精巣において生殖細胞に限局して発現することが判明した。このコアクチベーター機能はMITF-A, MITF-H, MITF-Dにおいても認められた。また、転写因子OTX2がDCT遺伝子の転写を調節することを明らかにした。

私達はメラノサイトに特異的に発現するドーパクロムトートメラーゼ(DCT)やMITF-MがWntシグナルによって活性化される事を示した。興味深いことにMITF-MはDNA結合を必要とせず、LEF1と複合体を形成しコアクチベーターとして機能した。このコアクチベーター機能はMITF-A,MITF-H,MITF-Dにおいても認められた。MITF-M以外のアイソフォームはメラノサイトのみならず各種細胞に発現している。よってMITFは多くの細胞において、その認識配列CANNTGの有無に関わらずWntシグナルの標的遺伝子の多くに関与すると考えられた。さらにWntシグナルによるDCT遺伝子の転写活性化にはDCT遺伝子プロモーター上のcAMP応答類似配列TGAGGTCAが関与していたが、当配列に結合する転写因子はCREBではなく核内レセプターである可能性が示唆された。当該核内レセプターはDCT遺伝子プロモーター上の複数のTGAGGTCA類似配列を認識する。一方、DCT遺伝子は網膜色素上皮にも特異的に発現しており、メラノサイトと同様にWntシグナルとの関わりを解析した。その過程で、ホメオドメインタンパクであるOTX2が網膜色素上皮におけるDCT遺伝子の転写を調節することが明らかとなった。しかもOTX2がMITFと相互作用した。またMITFが種々の細胞でWntシグナルに関わる可能性があるので、MITFが発現する候補となる幾つかの組織を検討し、MITFがマウス精巣において生殖細胞に限局して発現することが判明した。
RNAinterferenceによる膵癌遺伝子治療ウイルスベクターの開発

膵癌の遺伝子治療に利用する標的遺伝子を抽出することを目的として、臨床検体を用いた遺伝子解析を行った。北海道大学病院および33の関連施設で切除された癌組織を、十分なインフォームドコンセントに基づいて超低温下に凍結保存し、約6000症例の腫瘍組織による検体ライブラリーを構築した。このうち、2003年12月までに31症例の膵癌の遺伝子発現解析を施行し、1289の癌関連遺伝子についての発現プロファイルを作成した。これらのデータを症例の臨床病理学的因子と比較検討した結果、リンパ節転移の有無を診断し得る遺伝子群として40、短期再発を予測する遺伝子群として46の遺伝子を抽出した。個々の遺伝子検索ではRCAS1の強発現が膵癌患者の予後と強く相関することが明らかになった。同様の方法でCaveolin-1遺伝子の過剰発現が膵癌患者の予後と強く相関することが明らかになった。近年報告された血管新生阻害因子であるPEDF(Pigment Epithelium Derived Factor)は膵臓の正常組織で発現していることが報告されている。膵癌においてはPEDFの発現低下が手術後の肝転移を有意に増大させ、患者の予後を不良にする因子であることが明らかになった。以上のことから、これらの遺伝子を標的遺伝子としてRNAi作成を行った。アポトーシス抑制遺伝子であるsurvivinに対して5種類のRNAi配列を構築し、うち2種類の配列を用いることでsurvivinの発現を抑制可能であることを見いだした。一方で、RNAi発現プラスミドを細胞内に導入するシステムを開発した。HIV-1のTatPTDとリジンの重合体を融合させ、これをプラスミドDNAと複合体形成させて細胞に暴露することで、エンドサイトーシスによってRNAi発現プラスミドが各種癌細胞内に取り込まれることが確認された。北海道大学病院および33の関連施設で切除された癌組織を、十分なインフォームドコンセントに基づいて超低温下に凍結保存し、約5000症例の腫瘍組織による検体ライブラリーを構築した。個々の遺伝子検索ではRCAS1が切除された膵癌組織においては約90%の頻度で強発現していることが確認された.さらに、RCAS1の強発現が膵癌患者の予後と強く相関することが明らかになった。一方で、RNAi発現プラスミドを細胞内に導入する手段としてのベクターを開発した。
フィリピン系移民第１．５世代による社会生活の構築に関する比較研究

子ども期にフィリピンから異なる移住先国(フランス、イタリア、日本、カナダ、アメリカ、オーストラリア)へと移住したフィリピン系第1.5世代を対象者として、彼らによる移住経験理解、そして社会関係と自己意識の再構築の過程を記述分析した。具体的には、彼らが移住以前と以後にどのような課題に直面してきたか、また新たな関係性やアイデンティティの構築を図りながら、それらの課題にどのように対処してきたかを民族誌的調査によって明らかにし、比較検討をおこなった。本研究では、子ども期に海外移住した人々を第1.5世代と呼び、異なる国へと移住したフィリピン系第1.5世代の調査を実施し、彼らの移住前と移住後の社会生活、アイデンティティの構築プロセスを比較検討することを目的としている。今年度は次のような調査研究を実施した。長坂は海外研究協力者のPertierraのオーストラリア調査、Fresnoza-Flotのフランス調査をそれぞれ支援しつつ、共同研究全体の理論的視点の整理と、以前に実施したイタリア調査の資料の分析を行った。小ヶ谷は、7月から9月にフィリピンに滞在して、来年度以降のカナダ調査のための準備をすすめると同時に、日比国際児(Japanese Filipino Children)に対する聞き取り調査を実施した。日比国際児調査では、国際移動した母親からの期待と子どもたちのキャリア・プランのずれという、小ヶ谷による以前のカナダ調査と同様の知見が得られ、来年度以降の調査の焦点が明確化された。鈴木は、2月に約2週間、ハワイのフィリピン系第1.5世代の予備調査を実施した。以前調査をおこなったバークレーとのフィリピン系住民がおかれた社会状況の比較をおこないつつ、ホノルルのフィリピンコミュニティの代表者への聞き取りを行うなど、来年度以降の調査準備をおこなった。関は、10月末に約1週間、ミシガン、シカゴ他に滞在し、アメリカにおけるフィリピン移民研究の動向についての意見交換を行うとともに、以前のカリフォルニアでの調査を補足すべく、他地域でのフィリピン系移民への聞き取りを実施した。高畑は、研究協力者の原めぐみとともに、大阪、静岡、名古屋などで日系フィリピン人の子どもを含むフィリピン系第1.5世代への聞き取りを実施した。また、シンガポール、広島、フィリピンで各1回ずつ研究会をおこない、各自の調査結果の共有をはかり、研究視点や成果公表の時期について討論をおこなった。総じて、来年度以降の調査および成果公表の準備と計画の明確化が中心的におこなわれた。3年計画の2年目に当たる今年度は次のような調査研究を実施した。長坂は海外研究協力者のPertierraのオーストラリア調査、Fresnoza-Flotのフランス調査をそれぞれ支援しつつ、共同研究全体の理論的視点の整理と、フィリピンの農村地域で子どもが生育する社会環境についての調査を実施した。鈴木は、日本在住の1.5世代移住者の家族関係に関する調査をフィリピンの彼らの出身地社会において実施した。高畑は、研究協力者の原とともに、日本各地の第1.5世代のライフヒストリーの収集を、修学・就業経験や将来展望に特に注目しておこない、その分析をおこなった。小ヶ谷は、カナダ在住の第1.5世代の追加調査を実施し、特に呼び寄せられた若者同士の紐帯のあり方について聞き取りをしたほか、過去の対象者とは異なるルートでトロントに渡った1.5世代にもインタビューを行った。関は、昨年度までのアメリカ調査で得た資料を整理した。また、本年度は、International Conference on Children, Migrants, and Third Culture Kids (Krakow), 112th American Anthropological Association Annual Meeting (Chicago), Philippine Studies Conference of Japan (Kyoto)の3つの国際会議においてパネルを組織して調査研究成果を発表した。本研究は、子ども期にフィリピンから異なる国(フランス、イタリア、アメリカ、カナダ、オーストラリア、日本)に移住したフィリピン系第1.5世代移住者を対象として、彼らの移住経験理解、および社会関係とアイデンティティの再構築の過程を記述し、比較することを目的としている。今年度は、各自が移住先およびフィリピンで補足的な調査を行うと共に、昨年度までの調査資料をまとめ、口頭、論文にて成果報告を行った。第87回日本社会学会では、研究代表者、分担者、協力者3名(長坂、小ヶ谷、原(研究協力者))が参加し、テーマセッション「移動する子ども・若者をめぐる国際社会学」を組織して成果発表をおこなった。また、年度末に静岡で研究会を開催して報告書内容の検討をおこなうなど、最終成果報告書となる共著の出版に向けての執筆、準備作業をおこなった。なお、研究代表者である長坂と海外研究協力者であるFresnoza-Flotが編集した共著は、序論、移動する子どもについての理論的検討をおこなった章、フィリピンからの子どもの移動についての概括的レビューをおこなった章、フランス、イタリア、米国、カナダ、オーストラリアの各事例を扱った章、日本の事例を扱った2つの章、そして結論の全11章からなる。

その共著書は、Palgrave Macmillanより、Mobile Childhoods in Filipino Transnational Families: Migrant Children with Similar Roots in Different Routesというタイトルで、2015年中に刊行される予定である。26年度が最終年度であるため、記入しない。文化人類学26年度が最終年度であるため、記入しない。代表者、分担者、研究協力者のほとんどが、すでに本調査を実施しており、その中間報告会がフィリピンで行われるなど、来年度の調査継続への支障は特にない。また、シンガポールで開催された3^<rd> International conference ofgeographies of children, young people and familiesという国際会議において代表者がパネルを組織し、5名が発表を行うなど、成果公表も順調になされている。フランス、イタリア、アメリカ、カナダ、オーストラリア、日本での調査は順調に行われている。代表者らは過去2年間に国際会議での成果発表の機会を4回つくり、すべての分担者、研究協力者が、代表者らが組織したパネルでの発表をおこなった。それらのパネルでは、トランスナショナリズム研究で世界的に活躍するKaren Fog Olwig氏(University of Copenhagen)、フィリピンからの国際移住についての研究を長年リードしてきたMaruja Asis氏(Scalabrini Migration Center)をディスカッサントとして招へいし、プロジェクト全体、各ペーパーへのコメントを受けた。そうした成果発表の機会を重ねることでそれぞれの残された調査分析課題も明確化されている。来年度以降は、引き続き各自が現地調査をおこなうとともに、国内外の学会・研究会等において積極的に成果公表を行い、最終年度の報告書作成、出版につなげていく計画である。6カ国のフィリピン系第1.5世代の社会関係やアイデンティティに関しては、概ね調査を終了している。今年度は、最終年度にあたるため、補充調査と成果公表のための分析作業を中心におこなう。3月末に調査を実施し、使用金額が早期に確定できなかったこともあり若干の残金が生じた。残金と来年度予算で、来年度は調査実施と積極的な成果公表をおこなっていく予定である。昨年度末(3月)に国際会議でパネルを組織し、発表者とディスカッサントを招へいするために予算の繰り上げ申請をおこなったが、国際会議用に申請していた別予算での招へいが可能となったため、使用する必要がなくなり、次年度に使用することとした。
非線形予測子パラメータ族を用いた結合カオス振動子系の時系列解析手法の開発

理工学の様々の分野に幅広く存在する,結合カオス振動子を解析するための新しい信号処理技術を開発することが近年,急務の課題となっている.本年度は,研究代表者がこれまでに開発してきた「非線形予測子パラメータ族によるカオス時系列の解析手法」を結合カオス振動子に応用し,時系列の背後に存在するカオス振動子の結合強度等の特徴パラメータを推定する手法を開発することを目指して,以下の研究を行った.1)基本アルゴリズムの開発:二つのカオス振動子,あるいは,一つのカオス振動子と正弦波発生器が結合したシステムに対して,各振動子の時系列信号が同時計測される場合を想定した.分岐係数値の異なる条件下で計測された数組の時系列データから,背後に存在する結合強度係数および非一様性係数を逆推定し,係数族を解析することによって,同期・非同期の存在領域を予測するアルゴリズムを開発した.結合レスラーモデルおよび共振型船舶振動モデルに対して,アルゴリズムの有効性を確認した.2)脳神経系データへの応用:1)で開発したアルゴリズムをロブスターの生理ニューロンデータに応用した.実データをヒンズ・マシュローズ方程式モデルに単方向結合して,モデル係数の推定を行なったところ,定性的に実データを良く再現するモデルを獲得することができた.ロブスターの解析実験は,研究代表者がカリフォルニア大学サンディエゴ校の非線形科学研究所に短期滞在し,アバーバネル教授と共同研究することによって行った.理工学の様々の分野に幅広く存在する,結合カオス振動子を解析するための新しい信号処理技術を開発することが近年,急務の課題となっている.本年度は,研究代表者がこれまでに開発してきた「非線形予測子パラメータ族によるカオス時系列の解析手法」を結合カオス振動子に応用し,時系列の背後に存在するカオス振動子の結合強度等の特徴パラメータを推定する手法を開発することを目指して,以下の研究を行った.1)基本アルゴリズムの開発:二つのカオス振動子,あるいは,一つのカオス振動子と正弦波発生器が結合したシステムに対して,各振動子の時系列信号が同時計測される場合を想定した.分岐係数値の異なる条件下で計測された数組の時系列データから,背後に存在する結合強度係数および非一様性係数を逆推定し,係数族を解析することによって,同期・非同期の存在領域を予測するアルゴリズムを開発した.結合レスラーモデルおよび共振型船舶振動モデルに対して,アルゴリズムの有効性を確認した.2)脳神経系データへの応用:1)で開発したアルゴリズムをロブスターの生理ニューロンデータに応用した.実データをヒンズ・マシュローズ方程式モデルに単方向結合して,モデル係数の推定を行なったところ,定性的に実データを良く再現するモデルを獲得することができた.ロブスターの解析実験は,研究代表者がカリフォルニア大学サンディエゴ校の非線形科学研究所に短期滞在し,アバーバネル教授と共同研究することによって行った.
学校における安全・健康教育の次世代モデル構築

本研究は学校における安全・健康教育の次世代モデル構築を目的とし、今後特定領域研究として発展させるためのものである。本研究では、学校における安全・健康教育に焦点を絞り、その有効性と可能性あるいは問題点を下記の5つの観点からのマルチ・レベルアプローチにより検証した。(1)学校における安全・健康教育に関する次世代教育コア・カリキュラム、(2)教員養成及び現職教員の研修、(3)学校、家庭、地域の連携、(4)学校安全・健康教育に関するモニタリングと評価、(5)学校安全・健康教育の国際比較、(1)では、学校において、安全・健康教育に関わる保健、体育、家庭科、理科、社会などの分野の教育研究者の相互討論により、教科横断的な安全・健康教育の可能性を検証した。(2)では、地域の教育委員会、学校との共同作業により、教員養成及び現職教員の研修プログラムを策定した。(3)では、学校を中心とした家庭、地域との連携システムの持つべき要因を整理した。(4)では、喫煙、飲酒、薬物乱用及び性の逸脱行動など学齢期にある青少年の危険行動の実態把握のための疫学調査の基礎デザインを策定した。(5)では、これまで培ってきた米国及び欧州の安全・健康教育研究者と連携して、共同研究を策定するとともに、安全・健康教育に関して、大規模介入研究が行われている米国イリノイ州シカゴを訪問し、その中心であるミネソタ大学グループの実践を視察した。また、その主任研究者Dr.Kelli A.Komroを招聘した。(1)(5)については、平成15年11月に神戸において第50回日本学校保健学会を主催し、特別講演、シンポジウムを開催して、公開討論を行った。今後、本研究の成果を踏まえて、「学校における安全・健康教育の次世代モデル構築」を特定領域研究として発展させたい。
レ-ザ-血流計による抜歯窩内の骨形成および残遺歯槽堤の骨吸収機序の解明

骨組織の形成および吸収の機序を解明するため、それに関与する大きな因子の一つとして血流量に注目して、レ-ザ-光を応用したドップラ-硬化のある血流計を適用することを試みた。この血流計の適用は補綴学領域に応用した報告がないため、まず測定のための基礎的検討から開始した。すなわち、口腔内での測定を可能にたすめの歯内用、顎堤洋ステントを開発した。そしてそれらのステントを用いてプロ-ブの非接触状態での安定した値の得られる測定距離を決定し、測定を行なった結果その血流量には日差変動は認められないが、吸収による影響があることがわかった。そこで健康な歯肉、および顎堤の血流量を測定し、正常な状態での血流量を決定した。ついで成犬を用いて抜歯後の血流量を抜歯したまま放置した状態とハイドロキシアバタイト人工歯根を挿入した部位とに分け、抜歯後治癒過程での血流量の測定、あわせて病理組織像を用いて経時的に観察した結果、両者とも同様の傾向がみられたが、血流量の変化の比率は抜歯したまま放置した状態の方が多いことがわかった。そこで最終年度では異なった維持装置を有するパ-シャルデンチャ-を患者の口腔内に装着し、支台歯周囲と顎提との血流量を調べ同時に支台歯の動揺量も観察した。テレスコ-プデンチャ-とクラスプデンチャ-とでは床下粘膜の血流量には変化がみられ、コ-ヌステレスコ-プデンチャ-の方が血流量は低い根を示した。また支台歯の動揺量の異なる歯では動揺量の違いにより異なる波形がみられた。以上、3年間本研究を行なったが、一応の成果が得られたと思っている。論文として間に合わなかったが、今後発表していく予定である。骨組織の変化すなわち骨吸収あるいは増加はその組織中に流れる血流量の変化に起因していることが予測される.血流量の変化を把握することは骨組織の変化を知ることにつながると考え,成犬で血流量の変化をみた.今年度の科研費ではレーザードップラー血流計を購入した.レーザードップラー血流計は血流を測定する機器のうちでも精度が高いといわれている.しかし,口腔内での基礎実験は全くなされていないので,まずヒト口腔内で予備実験を行った.その結果,測定部位の保持状態,歯肉部との距離によりその値が変化することから,正しい測定を行うためには固定が必要と考え,測定針の固定方法,ステント法を新たに考案した.そのステント法を用いて測定部位と測定針との距離について検討したところ, 0.9mm2.2mmの測定距離が最も安定していた.また測定部位の変化によって値も変化することから測定は一定の部位で行えことにした.以上の予備実験結果を踏まえた上で成犬での実験を開始した.成犬では全身麻酔の状態で実験を行う.麻酔薬,ネンブタールが血流に及ぼす影響について090分の間で調べたところ, 2040分後が最も安定した値を示したので,注入後20ズ40合の間に測定を行った.成犬の抜歯前の血流量を測定した後,片側の第1,第2,第3の前臼歯を抜去した.抜歯後, 1,3,7,14,30,45日後の血流量の測定を行った.抜歯前の血流量の値は1.802.00(V)であったが,抜歯後1日では2.703.00(V)抜歯後3日では, 4.004.50(V)抜歯後14日では4.705.50(V)とその値は大きくなった.しかし,抜歯後30日では1.802.20(V)抜歯後45日では1.802.00(V)と抜歯前の値に戻った.

この血流の値の変化は抜歯窩内の骨組織の再生と大きな関係があるものと考えられるので,他の成犬を用いて抜歯後の組織標本を現在作製中である.昨年度行った基礎的検索をもとにして4頭の成犬(体重814Kg)を用いて抜歯したまま放置する群(コントロール群)と抜歯窩へハイドロキシアバタイトを挿入する群(HAP群)とに分け、それぞれの治癒過程における血流量の測定を行った。血流の測定は抜歯後1,3,7,14,21,28日目に行った。術後1日目ではコントロール群は平常時の平均血流量100%とすると145%、HAP群は142%とほぼ同じ程度の上昇を示した。3日目ではコントロール群210%、HAP群156%となり、コントロール群の方が大きな値を示した。これは血餅期から肉芽組織へ移行する初期の時期に相当し、血流量の増加がみられたものと考える。7日目ではコントロール群132%、HAP群120%と減少し、14日目ではコントロール群253%、HAP群172%と上昇した。これは未分化間葉細胞が骨芽細胞に変化し、また歯槽骨の壁から被骨細胞の形成が旺盛になるという活発な骨改造期に相当する。術後21日目ではコントロール群120%、HAP群100%、28日目ではコントロール群106%、HAP群101%とほぼ平常時の血流量となった。コントロール群とHAP群とは同じような動態を示しているが、コントロール群の方が血流量が高い値を示したのはその体積の違いに起因していると推測された。抜歯窩治療過程の病理組織学的観察では、コントロール群は術後13日で抜歯創が地餅で充満、714日後で地餅が肉芽組織に置換、2ケ月後で抜歯窩は骨梁で覆われ、3ケ月後では骨組織で充満された。一方HAP人工歯根挿入部位では、術後14日目に人工歯根と歯槽骨との間に線維性結合組織の増殖と一部に骨の形成を認めた。1ケ月後で歯槽骨中隔先端との間に骨性癒着を示し、術後3ケ月では成熟した周囲骨と骨性癒着を示し、その後は骨性癒着を持続し、残遺歯槽堤の吸収はコントロール群と比較して抑制されていた。骨組織の形成および吸収の機序を解明するため、それに関与する大きな因子の一つとして血流量に注目して、レ-ザ-光を応用したドップラ-効果のある血流計を適用することを試みた。この血流計の適用は補綴学領域に応用した報告がないため、まず測定のための基礎的検討から開始した。すなわち、口腔内での測定を可能にするための歯肉用、顎堤用ステントを開発した。そしてそれらのステントを用いてプロ-ブの非接触状態での安定した値の得られる測定距離を決定し、測定を行った結果その血流量には日差変動は認められないが、呼吸による影響があることがわかった。そこで健康な歯肉、および顎堤の血流量を測定し、正常な状態での血流量を決定した。ついで成犬を用いて抜歯後の血流量を抜歯したまま放置した状態とハイドロキシアパタイト人工歯根を挿入した部位とに分け、抜歯後治癒過程での血流量の測定、あわせて病理組織像を用いて経時的に観察した結果、両者とも同様の傾向がみられたが、血流量の変化の比率は抜歯したまま放置した状態の方が多いことがわかった。そこで最終年度では異なった維持装置を有するパ-シャルデンチャ-を患者の口腔内に装着し、支台歯周囲と顎堤との血流量を調べ、同時に支台歯の動揺量も観察した。テレスコ-プデンチャ-とクラスプデンチャ-とでは床下粘膜の血流量には変化がみられ、コ-ヌステレスコ-プデンチャ-の方が血流量は低い値を示した。また支台歯の動揺量の異なる歯では動揺量の違いにより異なる波形がみられた。以上、3年間本研究を行ったが、一応の成果が得られたと思っている。論文として間に合わなかったが、今後発表していく予定である。
頭頸部扁平上皮癌を高悪性化させるRNAスプライシングバリアントの同定

頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)の発癌の分子メカニズムの解明は進んでいるが、一方でその悪性度を規定する分子メカニズムは未解明のままである。申請者が所属する研究室が見出したRNAスプライシング制御因子SF3B2は、HNSCCを高悪性化させることが示唆された。そこで本研究では、SF3B2がどのようにHNSCCを高悪性化させるのか、その分子メカニズムを解明する。具体的には、1mRNA前駆体におけるSF3B2のスプライシング制御部位の網羅的解析、2SF3B2がスプライシング制御する遺伝子のゲノムワイドな解析、3SF3B2によってHNSCCを高悪性化するスプライシングバリアントの同定、を行う。