hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
環境教育の枠組みに関する比較研究

環境教育の理論・方法論の枠組みについて、その世界的な流れを主として文献資料によって批判的に整理した。また実践家・研究者と枠組みについて、フィールドワークを行い、環境教育の枠組みが教育の現場でどのように機能しているか、実践者はどのように受けとめているかを、具体的な環境教育のプロジェクトや行事の中で調査した。調査手法としては、昨年に引き続き、参与型参加法を採用した。これは、単に客観的な観察者ということを超えて、参加者として、あるいはプロジェクトの参画者としてかかわる中で、企画メンバー同士および実施者と一般参加者が相互に影響しあい、学びあう関係の構築の過程である。この手法が日本の環境教育の現場でも有効であることがわかった。今年度の研究で重点を置いたことに、環境教育と開発教育の連携の模索がある。それぞれ固有の課題と歴史的な流れをもちつつ、底流では深く関係しあっているこれら教育分野の担い手たちに、相互の関係をふりかえることを通してそれぞれの教育の枠組みやあり方を見直す呼びかけを繰り返し試みた。少人数でのつっこんだ研究会と、やや規模の大きな公開の研究会を組み合わせて実施することにより、結果の深まりと広がりとの両面において成果をあげることができた。具体的な活動も動き始めている。地域には様々な問題・課題に取り組んでいる市民がいながら、ほとんど没交渉で、互いに存在すら知らないことがしばしばある。そこでまず最初に必要で具体的なプロセスとしてまず「出会う」こと、そして率直に話し合い、学び合うことを提案している。「持続可能な社会」に向かう、地域ごとのこのような取り組みの可能性については、今後の研究課題としたい。平成7年度は、本研究の初年度である。まず、環境教育の枠組みの比較に関しては、既存の文献資料に加えて今回備品として購入した文献および雑誌などから、世界的視野の中で環境教育の枠組みを比較しているところである。これについては、来年度にまとめていく予定である。次に、プログラムや教材と枠組みと実践家および研究者と枠組みについては、あわせてフィールドワークを行った。それらは、日本環境教育学会主催の公開シンポジウム、日本環境教育フォーラム主催の環境教育清里ミーティング'95、環境庁・市民フォーラム2001他が中心となって企画した環境教育シンポジウム'95全国会議、そして環境教育ネットワーク千刈ミーティング'96等である。ここでわたしたちは、参与型観察法(participatory observation)から、より踏み込んで参与型参加法を採用した。それは、単に客観的な観察者ということを越えて、参加者として、あるいはプロジェクトの一参画者としてかかわる中で、メンバー同士および実施者と一般参加者が相互に影響しあい、学びあう関係の構築の過程である。日本の環境教育に関して、このようなタイプの参与調査が行われたのは初めてであり、環境教育における新たな方法の展開としても位置づけられ、本研究の成果として最も大きいものと考える。(この一部は平成8年の日本環境教育学会全国大会で発表を予定している)。最後に、研究集会としては、本補助金を利用して、2月に京都市で環境倫理研究会を実施してわたしたち両名も報告の機会を持ち、50名以上の参加を得て踏みこんだ討論を行えた。平成8年度にはこの研究会の記録報告書を刊行し、その成果を広く伝える予定である。
重篤な状態で長期入院し、障害を残して在宅生活する児をもつ家族の看護とシステム化

1.インタビューの結果、退院を阻んでいる最大の要因は「重障度」であった。特に「在宅での急変時の予期不安」が大きい。長期入院中に家族と医療者(特に看護師)とは信頼関係がしつかり築かれ、家族はケアの技術を習得済みであり、ともに将来の在宅を目標に「待ち」の状態で見解が一致していた。しかし、退院に向けての予測や意志決定、在宅ケアの具体的プランは無く、したがって、在宅でのケア力量を増強するための病院内外のシステムとの連携が不十分なことを家族も医療者も認識していた。また、家族、看護師、医師の内部の関係および相互の関係性からは退院に対するそれぞれの認識等に立場の相違による微妙な「ズレ」があった。入院の長期化による「病棟内での安寧感」が生じていると考えられた。病状の回復や発達を待ちながら、併行して病棟外のシステムとの積極的な連携協働が強化される必要が示唆された。2.協力を得た家族は子育て期の、対象児にはきょうだいのいる核家族であった。事例検討の過程を通して、継続的に担当する看護師は重要な役割を果たしていた。加えて家族看護の専門的な知識・技術を実践的に活用すれば、より効果的な査定と介入の可能性が考えられた。重篤な障害のある子をもつ家族には家族システム看護のアプローチが効果的に資すると考えられた。3.院内の「家族看護実践研究会」は10年度までに基礎が築かれ、参加者は院内外の実践研究者へと拡大した。この実践研究会は臨床経験を有した看護師のための上級コース(看護継続教育)の端緒となりうる。4.個別に機能している既成のシステムを取り結ぶ実働チームを家族システム看護の視点をもった看護職により形成することが重障児・家族を支援するモデルシステムとして意義があると考える。5.本研究の開始時には、重障児の在宅ケアには地域条件の不足が大きな課題であるとされていたが、ここ数年来、状況は変化して先進的な実践例を生み出している。現在はこれら点在する資源を連結し児と家族によりそい柔軟に機能する新しいシステムを創造する時期にある。今年度の目標である、1.現状分析については、まず予備調査として相模原市内を中心に、対象となる重い障害をもった子どもとその家族が入院から退院、在宅生活というライフサイクルを過ごす経過中に、活用したサービスおよび現状におけるニーズについて症例をとおして検討を行った。関係する複数の専門職種のカンフアレンスおよび面談中の記録を分析中である。2.先行研究に関する情報収集は主として国内文献(理論に関するものは海外)について行った。3.実践モデルに関する情報収集は、文献検討により看護領域では国内のモデルが確立したものが見あたらないため、とりあえず家族支援の視点からカルガリ-モデルを詳細に検討することにし継続中である。4.事例検討はこの研究の基盤となる部分であるので、入院児のみに限らずに地域を視野に入れて、福祉施設に通所する症例についても行ってきた、現在はこの研究を開始したところでああり、目標とする課題へのアプローチがまだ点的存在であるが、事例研究をとおしてシステム化の方向に進計画である。次年度は、1.対象を拡大しての調査、2.実践モデルについては現地研修への参加により、研鑽を深めることによって、実際に障害のある子どもと家族への支援を試みる予定である。

3.事例へのかかわりは、現状では縦割りサービスの活用を余儀なくされている家族をネットワークで支える手がかりをつくることを目標にする。1.在宅生活への移行を困難にしている要因についての調査:昨年来、主として先行研究のまとめおよび臨床例の検討をおこなってきたところ重い障害をもった子どもの入院生活から在宅生活への移行を阻むバリアについての概念図と仮説が見えてきた。これを明確化する作業を進めつつ、看護ケアに直接つながる要因について検討を進めたところ、さらに質的な面での確認が必要であることが判明したため、あらためて面接調査を行うことにした。2.海外情報の収集とその後の実績:わが国に導入されている家族看護学ではカルガリ-モデルが知られている。基礎編の文献については既に十分マスターしたと考えるが、文献や講演からでは修得できない実状を知るために平成9年45月にかけて実施されたカルガリ大学のエクスターンシップに参加して家族看護学の実践理論(アセスメント、インターベンションモデルの臨床の実際)の研修を行った。ユニットの見学をはじめ、数々の収穫があった。しかし、この理論の即事例への適用には慎重を期するため、実践例をモデルにロールプレイ等で検討を行うと同時にさらに研鑽を積みながら試行中である。3.4.臨床事例への取り組みについては研究者が直接ケアに参加していない立場にあることから、関与の仕方に課題を残している。関連機関(部門)とのカンファレンスの開催については、まだ、試行の段階という性質上、関係調整および今後の積極的な取り組みが必要である。本年度の研究実施計画に沿って、研究実績を述べる。(1).在宅生活への移行を困難にしている要因についての調査先に作成した概念モデルから想定される阻害要因をカテゴライズした項目を再検討し、質的内容を明らかにするため、家族・看護職・医師への面談を継続実施中である。引き続いて結果の整理を行う。(2).カルガリーモデルの臨床事例への適用と実用性の検討カルガリー家族看護に関する研修会、研究会等の開催に積極的に関わり、技法の修得に努めながら、入院中の事例について病棟のスタッフと協同してアセスメントモデルの適用を試みた。概ね実用的であることが評価された。(3).病棟・関連部門との研究協力体制を整え、事例・課題解決カンファレンスを開催現在は準備段階として、研究科学生を世話役とする研究会を開催することになった。事例研究を中心にカンファレンスを進めている。院生の他、主として小児、総合相談などの部門のスタッフが取り組んでいる事例について研鑚を深めており、定期的に開催できるようになった(月例で9回開催)。(4).システムとしてのモデルを作成この研究が実践的なものであるため、上記のいくつかの条件を整える必要がある、特に1.の結果が重要な要素であるので、分析検討の後モデル作成を行う。(5). 3年間の成果と今後の課題、報告書の作成1.で得られた結果をふまえて、報告書を作成する予定である。スケジュール調整などの関係から報告書作成が延滞する見込みである。(6).今後に向けてこの研究を進める中で、重症の障害をもち長期入院を余儀なくされている子どもとその家族がユニットとして地域での安寧な生活を営めるようになるためには、病院一地域を含む支援システム、特にその質的な面での充実が望まれることを改めて痛感した。今年度はまとめのために休止したが、今後の継続研究を期したい。
走査型誘電顕微鏡による生体インピーダンスのイメージング

生物細胞懸濁液や生体組織のインピーダンスを広い周波数範囲で測定すると(インピーダンス・スペクトロスコピー)、誘電緩和現象が見られる。この誘電緩和スペクトルを解析すると、細胞や組織の構造や電気的性質を知ることができる。この方法は細胞や組織の平均的な性質を調べるのには都合が良いが、個々の細胞や組織の局所部分の性質を調べることはできない。このために、微小プローブを試料上で走査するインピーダンス・イメージング法(走査型誘電顕微鏡)の開発を行ってきた。本研究では光学顕微鏡で試料の形態を確認しながら、そのインピーダンス・イメージを高精度で求めることができるように、光学顕微鏡に走査プローブ・ユニットの組み込みを行った。これによって、生体組織や細胞の形態と電気的性質の相関を明らかにすることができる。位置決め精度の高い顕微鏡用X-Y自動ステージを光学顕微鏡に組み込み、X-Yステージとインピーダンス測定の制御を行うためのコンピュータプログラムを完成させた。ITO透明ガラス電極を使用した試料ホルダーを試作し、また、針状のプローブを顕微鏡のコンデンサーレンズ筒に装着することにより、光学顕微鏡像とインピーダンス・イメージの同時測定を可能にした。測定では、スポット、ラインスキャン、ラスタスキャンの三つのモードが可能である。光学顕微鏡像はCCDカメラよりコンピュータに取り込む。プローブ電極には、注射針内にテフロンコート白金線を挿入した同軸電極を用いた。注射針をガード電極、内導体を測定電極、透明電極を対電極として三端子の構成でインピーダンス測定を行う。測定系の分解能をナイロンメッシュやステンレスメッシュを用いて検討した。生体組織として、植物の葉の上皮細胞について、インピーダンスイメージと光学顕微鏡像を比較したところ、気孔を構成している孔辺細胞と上皮細胞は異なるインピーダンス・イメージ示し、二つの細胞を区別することができることが分かった。また、開いている気孔と閉じている気孔の区別も可能である。今後、血液細胞や動物細胞の組織培養系での測定を行う予定である。生物細胞懸濁液や生体組織に電場を与えると、細胞膜と媒質や細胞質との界面で分極するため(界面分極現象)、その見かけの誘電率が大変大きくなる。電場に交流電場を用いて、その周波数を掃引して誘電率を測定すると(誘電スペクトロスコピー)、周波数に依って誘電率が変化する誘電緩和現象が見られる。この緩和スペクトルを解析すると、細胞や組織の構造や電気的性質を調べることができる。このような目的のために、誘電スペクトロスコピーを用いた細胞や組織の誘電イメージング法の開発を行ってきた。しかし、試作した測定システムは分解能、使い勝手、計測速度などの点でまだ実用システムとしては不十分である。このため、本研究では光学顕微鏡で試料の形態を確認しながら、そのインピーダンス・イメージを高精度で求めることができるように、光学顕微鏡に位置決め精度の高い自動ステージの組み込みを行った。現在、画像データーの取りこみと誘電計測の制御を行うためのプログラミングの開発を行っている。これにより、使い勝手が向上し、分解能の高い誘電イメージが得られることになる。また、電極のインピーダンスは誘電イメージに大きく影響(電極分極)をする。このため、誘電イメージを定量的に解析することがしばしば困難になるので、電極分極の補正方法を検討している。

現在のところ、走査プローブの高さ(電極間距離)を変えて測定した2つの測定データーを使いた補正法が有効と考えている。インピーダンス・スペクトルはマクロスコピックな不均質構造に敏感であるので、生物細胞や組織のインピーダンス・イメージと光学顕微鏡像との間には強い相関がみられる。そこで、走査型誘電顕微鏡を光学顕微鏡に組み込み、光学顕微鏡像とインピーダンス・イメージを直接比較できるようにした。これによって、生体組織や細胞の形態と電気的性質の関係を明らかにすることが可能となる。今年度は、昨年導入した顕微鏡用X-Yステージの制御とインピーダンス測定制御を行うためのコンピュータプログラムを完成させることができた。測定装置には、以前に用いていた4192ALFインピーダンスアナライザーを4194Aゲインフェーズ/インピーダンス・アナライザーに替えることにより、測定精度の向上をはかった。ITOコーティング透明ガラス電極を使用した試料ホルダーを試作し、また、針状のプローブを顕微鏡のコンデンサーレンズの前部に装着することにより、光学顕微鏡像とインピーダンス・イメージの同時測定を可能にした。測定には、スポット、ラインスキャン、ラスタスキャンの三つのモードが可能である。光学顕微鏡像はCCDカメラよりコンピュータに取り込む。プローブ電極には、直径76μmあるいは25μmのテフロンコート白金線を挿入した注射針を用いた。注射針をガード電極、針内の白金線を測定電極、透明電極を対電極として、三端子の構成でインピーダンス測定を行うようになっている。測定系の分解能をナイロンメッシュやステンレスメッシュを用いて検討した。生体組織として、植物の葉の上皮細胞について、インピーダンスイメージと光学顕微鏡像を比較したところ、気孔を構成している孔辺細胞と上皮細胞は異なるインピーダンスイメージ示し、二つの細胞を区別することができることが分かった。また、開いている気孔と閉じている気孔の区別も可能である。現在、血液細胞や動物細胞の組織培養系での測定の準備をしている段階である。
腹膜炎に対する気腹はbacterial locationを増悪させるか

【目的】平成11年度の研究では、腹膜炎の影響は気腹の方が開腹に比較して少ないことが示唆された。平成12年度は腹膜炎状態において、開腹ならびに気腹がもたらす免疫学的変化の機序に関してさらに研究を進めた。【方法】1)6週齢雄F344ラット(ラット)を、a)麻酔のみの群,b)開腹群,c)気腹群の3グループを設定し、大腸菌(10^6)を投与群した(各n=100)。2)a)群では30分間麻酔した。b)群では剣状突起から恥骨までの腹部正中切開で開腹した後,30分後に4-0Vicryl糸で閉腹した。c)群は18G気腹針を刺入し、46mm Hgの腹腔内圧で炭酸ガスを30分注入した。3)手技終了後2時間、4時間、12時間、24時間、48時間後にsacrificeし腹水の採取と採血を行った。5)ELISA法により血中のTNF-αとIL-6の測定、ならびに白血球数とその分画を検討した。また腹水中マクロファージ(CD4陽性細胞)の数とそのcytotoxicityとsuperoxide産生能を測定した。結果】手技終了後2時間より、すべて群で白血球数の増加が認められ、48時間後には正常に復した。白血球増加は単球とリンパ球の増加によるものであった。b)開腹群の血中TNF-αとIL-6値は、手技後2時間から48時間まで通して、他2群に対する有意な上昇が認められた。腹腔内総細胞数も、b)開腹群がa)麻酔のみの群やc)気腹群に比較して有意に多かった。またCD4陽性細胞の割合は、3群間に有意差はなかった。なお、CD4陽性細胞のcytotoxicityとsuperoxide産生能に関する有意差は3群間に認められなかった。【まとめ】腹膜炎の状態において、気腹群の炎症反応は開腹群に比較して軽微であり、bacterial translocationを増悪させなかった。このデータからは、腹膜炎の状況下においても、積極的に腹腔鏡下手術に取り組んでも問題ないと考えられた。【目的】平成11年度の研究では、まず大腸菌を用いたラットの腹膜炎モデルを用いて、気腹による大腸菌の血液へのtranslocation、ならびに生存への影響を、開腹した場合と比較検討した。【方法】1)6週齢雄F344ラット(ラット)を、a)エタノール麻酔のみの群,b)開腹群,c)気腹群の3つにまず大きく分け、さらにそれぞれの群を少量大腸菌(10^6)投与群と大量大腸菌(10^8)投与群に分けて計6グループを設定した(各n=50)。2)すべての群は麻酔下で大腸菌を腹腔内に注入した。3)a)群では30分間麻酔を持続する。またb)群では剣状突起から恥骨までの腹部正中切開で開腹した後、30分後に4-0 Victryl糸で閉腹する。さらにc)群は18Gの気腹針を刺入し、46mmHgの腹腔内圧で炭酸ガスを30分注入する。4)術翌日より術後5日まで、毎日10匹づつsacrificeし、血液を採取し、大腸菌の血液への移行状態を検討する。また、生存数の確認も連日行う。【結果】大量大腸菌投与の3群間で血液からの大腸菌の検出率を比較した結果では、a)麻酔のみの群に比較して、b)開腹群とc)気腹群では検出率が高かったが、有意とはいえなかった。少量大腸菌投与の3群間では検出率に差は認められなかった。また、少量大腸菌投与群と大量大腸菌投与群のいずれもラットの生存に影響を及ぼさなかった。以上,腹膜炎の影響は気腹の方が開腹に比較してむしろ少なことが示唆された。【今後の計画】今回の結果を踏まえて,平成12年度は腹膜炎状態において開腹ならびに気腹がもたらす免疫学的変化の機序に関してさらに研究を進めたい。

結果】手技終了後2時間より、すべて群で白血球数の増加が認められ、48時間後には正常に復した。白血球増加は単球とリンパ球の増加によるものであった。b)開腹群の血中TNF-αとIL-6値は、手技後2時間から48時間まで通して、他2群に対する有意な上昇が認められた。腹腔内総細胞数も、b)開腹群がa)麻酔のみの群やc)気腹群に比較して有意に多かった。またCD4陽性細胞の割合は、3群間に有意差はなかった。なお、CD4陽性細胞のcytotoxicityとsuperoxide産生能に関する有意差は3群間に認められなかった。【まとめ】腹膜炎の状態において、気腹群の炎症反応は開腹群に比較して軽微であり、bacterial translocationを増悪させなかった。このデータからは、腹膜炎の状況下においても、積極的に腹腔鏡下手術に取り組んでも問題ないと考えられた。
Txnipリボヌクレオプロテイン複合体による代謝制御・癌抑制

研究代表者らが報告したα-アレスチンタンパク質thioredoxin interacting protein (Txnip)は、糖尿病の病態・病因に重要な役割を果たし(Nature Commun., 2010)、同時に膀胱癌で変異が7%見られる実際の癌抑制遺伝子である。申請者は、Du145前立腺細胞株においてTxnipがglucose依存的に1000から1300kDaの核内高分子複合体を構成し、その複合体がRNAを含むことを明らかにした。Txnipの分子機構を調べるためにTxnipと相互作用するタンパク質を解析し、タンデムアフィニティー精製とプロテミクス分析によって複数の候補タンパク質を同定した。また、RNase処理によりこの高分子複合体は減少し、Txnipが高次リボタンパク質複合体を形成することを明らかにしている。これらの結果により、Txnipが多くの結合パートナーと相互作用し、一過性の高次リボ蛋白質複合体を形成することによってその機能を発揮し、シグナル伝達調節因子の分解を調節するモデルを提示することができた(投稿中)。今年度は、さらにこれらのRNAをnon coding RNAを含めてRNAseqにより網羅的に解析する手法を検討した。一方、Txnipの発現を制御するCDK5/ CaMKK2/ AMPK経路に働くglucose取り込みを促進する低分子化合物を得ている。この低分子化合物のいくつかについて、SHSY5Y細胞において神経保護作用があることを明らかにしている。今年度はこれらの化合物がTauのリン酸化を抑制することを示した。さらに、これらの化合物を用いたchemical biologyにより、化合物に特異的に反応するターゲット蛋白質の候補を得て、プロテオミクス解析を行っている。これまでの研究の実施状況として、Txnipと相互作用するタンパク質を解析し、複数の候補タンパク質を同定した。また、Txnipが形成する高次リボタンパク質複合体の成分のRNAをnon coding RNAを含めて網羅的に解析する方法を検討した。これらによりTxnipによるリボヌクレオプロテイン高次複合体形成成分の解明とその機構解析を最終年度に行う。さらに、糖によるTxnip発現誘導を抑制し、糖取り込みを増強させる低分子化合物のいくつかについて、神経保護作用があり、新たにTauのリン酸化を抑制することを明らかにした。これらは、概ね計画どおりであり、また、アルツハイマー病治療薬の開発への新たな展開を期待できるものであり、計画は順調に進展していると考えられる。Txnipが形成する高次リボタンパク質複合体の成分の蛋白質候補について機能解析を進めるとともにRNAについて網羅的解析を行う。また、Tauのリン酸化を抑制し、神経保護作用を有する低分子化合物についてターゲット分子を明らかにすることによりアルツハイマー病治療薬の開発を目指す。申請者は、Du145前立腺細胞株においてTxnipがglucose依存的に100, 250, 1000から1300kDaの核内高分子複合体を構成し、その複合体がRNAを含むことを明らかにした。今年度は、Txnipの分子機構を調べるためにTxnipと相互作用するタンパク質を解析し、タンデムアフィニティー精製とプロテミクス分析によって複数の候補タンパク質を同定した。今年度は、その成分のRNAの候補を得た。これらの結果により、Txnipが多くの結合パートナーと相互作用し、一過性の高次リボ蛋白質複合体を形成することによってその機能を発揮し、シグナル伝達調節因子の分解を調節するモデルを提示することができた。一方、Txnipの発現を制御するCDK5/ CaMKK2/ AMPK経路に働くglucose取り込みを促進する低分子化合物を得た。この低分子化合物のいくつかについて、SHSY5Y細胞において新たに神経保護作用があることを明らかにした。また、Txnipが形成する高次リボタンパク質複合体の成分のRNAの候補を得ることができた。さらに、糖によるTxnip発現誘導を抑制し、糖取り込みを増強させる低分子化合物のいくつかについて、新たに神経保護作用があることを明らかにした。これらは、概ね計画どおりであり、また、新たな展開を期待できるものであり、計画は順調に進展していると考えられる。

これらの結果により、Txnipが多くの結合パートナーと相互作用し、一過性の高次リボ蛋白質複合体を形成することによってその機能を発揮し、シグナル伝達調節因子の分解を調節するモデルを提示することができた(投稿中)。今年度は、さらにこれらのRNAをnon coding RNAを含めてRNAseqにより網羅的に解析する手法を検討した。一方、Txnipの発現を制御するCDK5/ CaMKK2/ AMPK経路に働くglucose取り込みを促進する低分子化合物を得ている。この低分子化合物のいくつかについて、SHSY5Y細胞において神経保護作用があることを明らかにしている。今年度はこれらの化合物がTauのリン酸化を抑制することを示した。さらに、これらの化合物を用いたchemical biologyにより、化合物に特異的に反応するターゲット蛋白質の候補を得て、プロテオミクス解析を行っている。これまでの研究の実施状況として、Txnipと相互作用するタンパク質を解析し、複数の候補タンパク質を同定した。また、Txnipが形成する高次リボタンパク質複合体の成分のRNAをnon coding RNAを含めて網羅的に解析する方法を検討した。これらによりTxnipによるリボヌクレオプロテイン高次複合体形成成分の解明とその機構解析を最終年度に行う。さらに、糖によるTxnip発現誘導を抑制し、糖取り込みを増強させる低分子化合物のいくつかについて、神経保護作用があり、新たにTauのリン酸化を抑制することを明らかにした。これらは、概ね計画どおりであり、また、アルツハイマー病治療薬の開発への新たな展開を期待できるものであり、計画は順調に進展していると考えられる。Txnipが形成する高次リボタンパク質複合体の成分の蛋白質候補について機能解析を進めるとともにRNAの候補について検証を行う。また、糖によるTxnip発現誘導を抑制し、糖取り込みを増強させる低分子化合物について構造機能相関の解析を進め、ターゲット分子を明らかにする。Txnipが形成する高次リボタンパク質複合体の成分の蛋白質候補について機能解析を進めるとともにRNAについて網羅的解析を行う。また、Tauのリン酸化を抑制し、神経保護作用を有する低分子化合物についてターゲット分子を明らかにすることによりアルツハイマー病治療薬の開発を目指す。2017年4月に、京都大学ウイルス・再生医科学研究所から異動し、天理医療大学に着任した。そのため、2017年4月、5月は実験のセットアップのために一時ペースダウンを余儀なくされた。そのため、次年度に繰り越す金額が発生した。しかしながら、2017年度はほぼ当初計画どうりの成果が得られ、一部期待以上の研究結果が得られたため、2018年度はこの繰り越し金額とあわせて研究を発展加速させる。4,390円と少額残余したが、約10,000円の必要な消耗品を購入するには不足したので次年度にまとめて購入することにした。
講式に関する基礎的研究

本研究は、講式に関する基礎的研究として、多くの種類を有する講式の全体像の把握を可能とする1900点の伝存資料について、基本的調査および複写資料の作製・収集を実施し、本研究者が提唱する講式各段初句抽出方法により識別・整理し、新しい分類法のもとに諸構式とその資料を配置し、講式全体を概観しようとするものである。1.第1段階講式資料の基本的調査と複写資料の作製・収集。(1)調査:1900点、但し480点は未了。(2)収集:1660点但し900点は未了。計画では、1500点の資料を調査・収集する予定であったが、実施段階において講式関係資料をも含め400点の調査と160点の収集を追加した。基本的調査は各段初句および書誌等について実施した。資料所蔵者等:醍醐寺,高野山大学図書館,三千院円融蔵,東寺観智院金剛蔵,魚山叢書,西大寺,仁和寺,金沢文庫,法隆寺,東大寺図書館,東京大学史料編纂所,上野学園日本音楽資料室,その他。なお、調査・収集は昭和62年9月に完了する予定である。2.第2段階1の検討・整理,講式分類の作成,研究のまとめ。(1)調査資料・複写資料を検討、主題・構造等により類別,整理する。(2)研究のまとめ。講式分類を作成、これに基づき全調査資料を配置し、その全容を概観する。報告論考執筆。各講式文は各段初句を提示。(3)本研究に関わる全資料を上野学園日本音楽資料室にに常備し、研究者の利用に供する。今後の課題1.調査対象の拡大。2.講式本文の校合等。3.講式資料集成(伝存資料目録を含む)の作成とその刊行、ほか。(2)研究のまとめ。報告論考執筆。
ゲノムワイド相関解析に有用な統計手法の開発

今年度は,遺伝子多型の相関解析における問題点である構造化についての研究を行った.構造化問題とは,複数の人種の混合集団を用いた相関解析において偽陽性が増加する現象を指す.原因は人種間でのアレル頻度や罹病率の異なりである.特に罹病率の異なりは,人種間の遺伝的効果の異質性と関係していると思われる.本年度は人種間の遺伝的効果の異質性についての研究を行った.ゲノムワイド相関解析で発見された疾患感受性遺伝子に対し,最初の報告と別の研究機関で追試を行った結果を収集し,人種間の異質性が存在するかを検討した.研究の対象として,変形性関節症とアスポリン(ASPN)の関連を取り扱った.日本人集団において,ASPNのリピート多型が,変形性関節症のリスク多型となることが,ゲノムワイド相関解析により発見された.これに対し,欧米や中国で追試が行われ,それぞれ異なる結果がみられた.本研究では,それらの結果をメタアナリシスで検討し,ASPN多型の膝変形性関節症に対する効果には,欧米とアジアで異質性が存在することを確認した.ASPN多型は,アジア人においては膝変形関節症に対し大きなリスクをもつが,欧米では大きなリスクとならないことが示された.その結果は,論文として報告されている.また,研究間の異質性を示す尺度を構成する方法を引き続き検討している.EMアルゴリズムによる異質性の尺度構成法について,性質を検討し,シミュレーションにより手法の評価を行った.また同手法をASPNのデータに適用している.現在,同手法については,論文を作成中である.今年度は,ゲノムワイド相関解析における多重比較の問題と,人種間の異質性についての研究を行った.ゲノムワイド相関解析には,疾患感受性遺伝子のみならず,表現型と遺伝子型の関係を表す遺伝継承モードも不明であるという問題がある.現在,遺伝継承モードの推定は,1つの多型について,4つの遺伝継承モードで検定を行い,P値が最小値となるモードを探索することにより行われることが多い.理研では,4モードで最小となったP値を最小P値と呼び,関連がある多型の発見に用いている.しかしながら,この最小P値は真の第一種過誤の確率ではない.本研究では,この最小P値を統計量とし,Permutation testを行うことで,遺伝子多型の第一種過誤の確率を求める方法を用い,その計算プログラムを作成した.また,近年は,ベイズ統計の枠組みで考案されたFalse discovery rateに基づく多重比較問題の解決法が利用されている.しかし,この手法はP値が一様分布に従うという性質に基づいているため,最小P値には適用できない.Permutation testによる第一種過誤の確率は,この問題を解決する手段にもなる.これらの計算が可能になるよう,文献調査と計算プログラム作成を行った.また,構造化の問題として,遺伝的効果の異質性に着目した.ゲノムワイド相関解析で発見された疾患感受性遺伝子に対し,別の人種で追試を行うと結果が食い違うことが多い.これには,人種間の遺伝的効果の異質性が存在する可能性がある.異質性の評価には,Mantel-Haenzel検定等に含まれる,異質性の検定を用いることが多い.しかしながら,研究間の異質性を示す尺度を得ることは出来ない.本研究ではEMアルゴリズムにより,研究間の異質性の評価を行うための尺度構成法を提案した.現在,同手法については,論文を作成し,投稿中である.今年度は,遺伝子多型の相関解析における問題点である構造化についての研究を行った.構造化問題とは,複数の人種の混合集団を用いた相関解析において偽陽性が増加する現象を指す.原因は人種間でのアレル頻度や罹病率の異なりである.特に罹病率の異なりは,人種間の遺伝的効果の異質性と関係していると思われる.本年度は人種間の遺伝的効果の異質性についての研究を行った.ゲノムワイド相関解析で発見された疾患感受性遺伝子に対し,最初の報告と別の研究機関で追試を行った結果を収集し,人種間の異質性が存在するかを検討した.研究の対象として,変形性関節症とアスポリン(ASPN)の関連を取り扱った.日本人集団において,ASPNのリピート多型が,変形性関節症のリスク多型となることが,ゲノムワイド相関解析により発見された.これに対し,欧米や中国で追試が行われ,それぞれ異なる結果がみられた.本研究では,それらの結果をメタアナリシスで検討し,ASPN多型の膝変形性関節症に対する効果には,欧米とアジアで異質性が存在することを確認した.ASPN多型は,アジア人においては膝変形関節症に対し大きなリスクをもつが,欧米では大きなリスクとならないことが示された.その結果は,論文として報告されている.また,研究間の異質性を示す尺度を構成する方法を引き続き検討している.EMアルゴリズムによる異質性の尺度構成法について,性質を検討し,シミュレーションにより手法の評価を行った.また同手法をASPNのデータに適用している.現在,同手法については,論文を作成中である.
人間の奥行き知覚特性を考慮した時空間画像からの領域の奥行き認識に関する研究

本年度では,以下のような諸点について,昨年度までの成果による手法で得られた3次元空間におけるエッジ線分の位置と姿勢から,3次元空間における領域を求める方法を提案した.また,本手法に関して人間による評価実験を行い,その有効性を示した.1.シーン中における領域の3次元的な位置と姿勢を求めるために,領域を構成する構造的な要素である稜と頂点について,「2次元画像面上におけるエッジ線分とコーナー点」および「時空間画像中におけるエッジ面と交線」との関係を解析した.これらの関係から,シーン中おける稜と頂点により構成されるグラフを求め,グラフから平面を構成するような部分的な関係を見つけることにより,領域を抽出する手法を提案した.2.椅子を対象として,時空間画像から椅子を構成する平面を抽出し,それらの構造関係を記述し,3次元物体認識の可能性について考察した.この結果,面により構成されるモデルとの構造的なマッチングを用いる認識システムの実現の可能性が示された.3.人間によるエッジ検出の結果を作成し,これをもとに各エッジ検出手法のパラメータを最適化し,さらに人間による2点比較法を行いエッジ検出手法の検出結果に対する比較評価を行った.この評価結果は,直接的に3次元の奥行き推定の正確さを表していると考えられる.結果として,本手法で提案した3次元エッジベクトル抽出器の元となる手法が比較的良いという評価結果が得られた.本研究の目標は,人間の「動きからの奥行き知覚」の特性を参考にして,時空間画像から動きを検出し,物体の前後関係を実時間で安定に計算できる手法を開発することである.本年度は,以下のような諸点について,平面で構成されている物体を対象に,時空間画像から3次元エッジベクトルを計算して時空間画像においてエッジを検出し,検出されたエッジの相対的な奥行きと姿勢を計算する方法を研究した.1.2次元エッジベクトル抽出器を時空間画像にたいする3次元エッジベクトル抽出器に拡張した.時空間画像上における重み関数の特性を考慮して,時間と空間という異なる次元を持つフィルタを扱うための方法を開発した.2.次に,時空間画像から,直接的なエッジにより構成されるエッジ平面の法線すなわちエッジベクトルを求め,それから奥行き距離を安定に算出する方法を提案した.直線的なエッジ間の隣接関係を調べることにより一般的なエッジにも対応でき,各エッジの相対的な前後関係を知ることができる.また,別の奥行き知覚特性の一つであるステレオ立体視についてもその可能性を検証した.3.現在,領域の3次元的な位置と姿勢を求めるために,領域を構成する構造的な要素として,2次元画像面上におけるエッジとコーナー点,時空間画像中におけるエッジ面と交線の関係を解析し,これらの構造と関係を抽出する手法を実装している.エッジからの領域の構成については,2次元画像平面における,領域と境界線のもつ幾何学的性質を利用した手法を拡張し,領域と境界線およびコーナー点の幾何学的な関係を用いた構造的な領域分割手法を考案し実装している.本年度では,以下のような諸点について,昨年度までの成果による手法で得られた3次元空間におけるエッジ線分の位置と姿勢から,3次元空間における領域を求める方法を提案した.また,本手法に関して人間による評価実験を行い,その有効性を示した.1.シーン中における領域の3次元的な位置と姿勢を求めるために,領域を構成する構造的な要素である稜と頂点について,「2次元画像面上におけるエッジ線分とコーナー点」および「時空間画像中におけるエッジ面と交線」との関係を解析した.これらの関係から,シーン中おける稜と頂点により構成されるグラフを求め,グラフから平面を構成するような部分的な関係を見つけることにより,領域を抽出する手法を提案した.2.椅子を対象として,時空間画像から椅子を構成する平面を抽出し,それらの構造関係を記述し,3次元物体認識の可能性について考察した.この結果,面により構成されるモデルとの構造的なマッチングを用いる認識システムの実現の可能性が示された.3.人間によるエッジ検出の結果を作成し,これをもとに各エッジ検出手法のパラメータを最適化し,さらに人間による2点比較法を行いエッジ検出手法の検出結果に対する比較評価を行った.この評価結果は,直接的に3次元の奥行き推定の正確さを表していると考えられる.結果として,本手法で提案した3次元エッジベクトル抽出器の元となる手法が比較的良いという評価結果が得られた.
希土類錯体の基礎物性と新規錯体の創製

負の溶解度-温度依存性を示すポリエチレンオキシドオリゴマーを溶媒として希土類塩の分離を試みる中で適切な分子量のポリエーテルを溶媒として特定の希土類塩が選択的に効率良く分離できることを明らかにした。例えばトリエチレングリコールにSmCl_3・6H_2O,LaCl_3・6H_2Oを溶解させた場合高温側ではLaCl_3のみが析出した。またNdCl_3・6H_2Oとジエチレングリコール(DEG)錯体,Nd(DEG)_3Cl_3の構造を明らかにした。一連の希土類金属を含むサンドイッチ型フタロシアニン錯体の光エネルギー移動、電子移動過程を時間分解温度吸収スペクトル測定ににより明らかにした。イオン伝導性の高分子であるポリエチレンオキシド(PEO)におけるEu^<3+>、Eu^<2+>の蛍光挙動が電気化学的挙動と併せて詳細に検討された。また有機高分子系発光デバイスとして応用するために各種希土類塩のPEOに対する溶解度が求められこの温度依存性にチクソトロピック現象が見い出された。光励起により生じた希土類フタロシアニン二量体の三重項状態の時間分解EPRスペクトルが求められ、励起三重項状態は電荷移動共鳴型と励起子の2種類の相互作用の混ったものであること、前者の相互作用はフタロシアニン環の距離が小さくなるに併い大きくなること、三重項状態の寿命は数nsであること等が判明した。希土類金属を含むチオガレート蛍光体の新しい合成法としてジチオカルバメート錯体を焼成する方法を見い出した。この方法により合成したCaGa_2S_4:Ceの青色蛍光体は市販のY_2SiO_5:Ceのそれに比べて相対量子収率0.84と高いことが明らかとなった。Sを配位子とするEu^<3+>錯体の構造と蛍光特性をこれまで集積してきたヘテロポリ酸を配位子としたEu^<3+>錯体のそれと比較することを目的としてジチオカルバメートのEu^<3+>錯体Na〔Eu{(CH_3)_2NCS_2i_4〕・3.5H_2Oを合成し結晶構造、発光特性をまず求めた。含水希土類金属塩の短鎖ポリエーテル,ジエチレングリコールに対する溶解度が調べられた。その結果、ジエチレングリコールは希土類金属塩の再結晶に極めて有用であることが見い出され、この方法で得られた、結晶の組成が求められた。またポリエチレンオキサイド中でのEu^<3+>/Eu^<2+>の赤色と青色の発光スイッチングを改善するためEu/BPy錯体について行い応答速度の改善が必要であることが明らかとなった。希土類フタロシアニンのサンドイッチ型錯体のレーザーフラッシュ光分解法により過渡吸収スペクトルを求め、これが希土類金属の種類により異なることを見い出し希土類金属のイオン半径,f-電子の電子配置の相異によって説明できることを明らかにした。
3次元実装用低ひずみ・高アスペクト比TSV開発

3次元配線実装技術の中心的課題が最短配線技術(Cu-TSV)であり、その低低抗率化は不可欠な課題であるが、正確な値が公表されていない。本研究では、低抗率測定用TEGパターンの設計および低抗率評価を行うとともにデータの検証も行った。得られた結果を以下に示す。1)直径10μm,深さ80nmのCu-TSVの低抗率は4.13μΩ・cmとバルクCuよりも高い。2)Cu-TSVには50nm以下の結晶粒の存在比が27%も存在し、この小さい結晶粒が電子の散乱を引き起こして低抗率を増大させたと考えられる。3)Cl,Oおよび金属元素からなる不純物が粒界に存在し、粒成長を抑制したと考えられる。Cu-TSVの抵抗率は微細化・高密度化に従い増加し、システム全体としての高速化を妨げると考えられる。しかし、これまでCu-TSVの抵抗率の微細構造の関数として評価した例は無い。TEG(模擬デバイス)構造が複雑になるためである。Cu-TSV用TEGの設計、製作プロセスを繰り返し行い、抵抗率を測定できるTEGの見通しを得た。また、めっき後のCu-TSVの均一・大粒径結晶粒成長のためのシミュレーションを行った。さらに、現状のTiN系バリア膜に比べ、Cuめっき膜の低歪化と密着性に優れたRuバリア膜を検討した。1)CVDおよび2)スパッタ法の両者で検討中である。CVD膜に関しては、Cu(111)が得られる膜形成条件が得られつつあるが、SiO2基板との密着性が低く、企業と共同で高密着性の得られる膜形成プロセスの改良を検討している。スパッタ法では、抵抗率が低く(20μΩ・cm)、平滑なRu膜が得られる低温(400°C、従来は700°C)膜形成条件を見出した。Cuめっき性も良好である。さらに、TSVのアスペクト比とRu膜のステップカバレージとの関係について検討中である。上記Ru形成条件を明確にした後、本TEGを用いて、Ruバリア膜、Ruバリア膜上のCuめっき膜の微細構造と抵抗率の関係を明らかにするとともに低抵抗率の得られるめっきプロセス(添加剤の種類、硫酸銅の純度)も開発する。最終的には、抵抗率および歪を従来プロセス(TiN系バリア、従来硫酸銅)と比較する。・Cu-TSVの微細化に伴い、溝のアスペクト比(溝深さ/溝幅)が増大する。このため、Cuめっき時に添加剤などを多量に導入してTSVを作製しているので抵抗率がかなり増大する可能性がある。そこで測定用TEGを作製し、アスペクト比8のCu-TSVの抵抗率を測定し約6μΩ・cmの値を得た。この値はCuの抵抗率2μΩ・cmに比べ3倍高い。今後、TEG構造の最適化を図り、抵抗率のめっき速度、アスペクト比依存性を明確にしていく。・Cu-TSVの加熱による突き出し(Pop-Up)もシステムLSIの信頼性を劣化させる。そこで、Cu-TSVをSEM中に設置し、温度を室温から500°Cまで変化させてPop-Upをその場観察した結果、Pop-Upの高さは加熱温度が高くなるにつれて増大し、1μm以上になった。また、高さは冷却により減少するが、室温においても500°CにおけるPop-Upの高さは一部保持されることが分かった。今後、Pop-Up高さの加熱冷却による定量値をアスペクト比の関数として明確にする。・Cu-TSVの加熱冷却に伴う、Pop-Up高さの変化のシミュレーションを行い、実測値に近い値を再現できた。さらに、Cu-TSVの周囲のSi基板に与える応力歪のシミュレーションも行い、歪も加熱温度とともに増大し、信頼性を損ねる可能性があることを示唆する結果を得た。今後、Siの低歪化の検討のための指導原理(バリアメタルの材質・厚さ)をシミュレーションで得て、実験で確認して行く。・3次元実装におけるCu-TSVの抵抗率は、システムLSIの高速化・低損失化大きく関係しているため、正確な抵抗率の測定が不可欠である。現在までに、信頼できる抵抗率は未だ報告されていない。従来の抵抗率測定法の欠点を補完することができる新しいTEGパターンを設計・製作し、抵抗率4.13μΩ・cmを得た。・この抵抗率の精度を明確にするため、EBSD(Electron Backscattering Diffraction)による結晶粒径の測定とX線回折による結晶粒径の測定を行った。直径10μm、深さ80μmのCu-TSVにおける50nm以下の結晶粒の存在比は27%, 40nm以下のそれは13%であることが分かった。すなわち、微細Cu配線の場合と同様、微細粒界における電子散乱が増大しCu-TSVの抵抗率が増大したと考えられる。・微細粒の生成原因を明らかにするため、STEMによるCu-TSVの構造解析を行った。その結果、粒界には塩素、酸素および鉄からなる化合物が存在し、これがアニール時の粒成長を妨げていると考えられる。

得られた結果を以下に示す。1)直径10μm,深さ80nmのCu-TSVの低抗率は4.13μΩ・cmとバルクCuよりも高い。2)Cu-TSVには50nm以下の結晶粒の存在比が27%も存在し、この小さい結晶粒が電子の散乱を引き起こして低抗率を増大させたと考えられる。3)Cl,Oおよび金属元素からなる不純物が粒界に存在し、粒成長を抑制したと考えられる。抵抗率を測定できるTEGの製作が可能になり、実際に抵抗率を測定できたこと。また、Cu-TSVの信頼性を左右する加熱による突き出し(Pop-Up)をその場観察できる技術を確立し、観察して加熱による高さと冷却後の高さには違いがあることを明らかにしたこと。さらに、Cu-TSVの加熱・冷却に伴う変形挙動および周囲のSi基板に与える応力歪のシミュレーションが可能になり、これを用いてSiの低歪化およびCuの低変形化の指導原理を得て当初の目的を達成できる見通しが得られつつあること。27年度が最終年度であるため、記入しない。電子情報デバイス用材料科学2.Cu-TSVの加熱・冷却に伴う変形挙動(Pop-Up高さ・粒径等)のアスペクト比およびめっき条件の影響3.シミュレーションによるCu-TSVの変形挙動およびSiに与える応力歪のバリアメタルの材質・構造依存性Cu-TSVの抵抗率を測定可能なTEGを設計・製作できる見通しを得たため。このTEGを使用し、高アスペクト比TSVに高速で、しかも微細構造を制御できるプロセスでCu-TSV形成を行い、低歪化を実現する。H26年度は物品が予定より安価に購入できたりして計上した予算を全部使用しなくとも研究が進捗したため。1.Ruバリア膜の形成プロセスの確立2.Cu-TSVの抵抗率および埋め込み性に及ぼすバリア材質、硫酸銅純度、添加剤の影響4.低抵抗率Cu-TSVの歪(信頼性)のEBSDによる評価H27年度に抵抗率の測定、Cu-TSVの変形共同およびSiに与える応力歪の解析等に使用する。Cu-TSVの加熱冷却に伴う変形挙動を走査型電子顕微鏡中にTEGをセットし、in-situ観察するための予備検討を行う予定であったが、抵抗率測定用のCu-TSVの設計・製作に注力したため、次年度以降に行うことになった。このためのTEGは作製せず、計上しなかった。次年度以降に、走査型電子顕微鏡内での加熱・冷却によるCu-TSVの変形挙動の結晶粒径分布依存性観察を予備検討まで含め行う。
中枢神経系原発悪性リンパ腫の起源を探る。

培養細胞株を用いた解析中枢神経系原発悪性リンパ腫(PCMSL)患者の生検標本より浮遊培養法を用いて培養細胞株を樹立し、以下のような研究を行った。1)性状解析細胞倍加時間20時間、免疫染色LCA、L26陽性、UCHL-1陰性、Bc16陽性であった。これらは胚中心由来のBリンパ球に相当する分化度と考えられた。2)分化誘導能の検討神経系細胞への分化能を有するかを調べるためレチノイン酸を培養液に添加し、形態変化や増殖能の変化を検討した。成長速度は低下したが、形態変化やマーカー蛋白の発現は観察されず、神経系細胞への分化は証明されなかった。3)薬剤感受性の検討標準治療薬となっているmethotrexateと、臨床的に抗腫瘍効果の認められるdexamethasoneを添加すると、それぞれ100nM、10nMで増殖が抑制され、TUNNEL法によりapoptosisが誘導されていることが示された。しかしながら、高濃度でも10%程度の細胞が生存し、薬剤耐性細胞の存在が示唆された。手術摘出標本を用いた解析生存期間の長さとの相関が報告されているBc16蛋白の発現を、手術摘出標本10例を用いて免疫組織化学法で検討した。結果Bc16蛋白の発現の有無と予後とに優位な相関を認めなかった。我々のこれまでの研究ではPCNSLと中枢神経系細胞分化の系譜を結びつける結果は得られなかった。今後新たなマーカー分子や分化誘導法の利用が必要と考える。また、培養細胞株を用いた実験結果は本疾患の臨床像と相違なく、薬剤耐性機構の解明に有用と考えられた。(1)リンパ腫培養細胞株の樹立:大脳半球原発悪性リンパ腫症例(68才女性、diffuse large B cell lymphoma)の生検標本より、培養細胞株を樹立することができた。現在浮遊培養法により40世代以上継代、細胞は免疫染色によりLCA、L26陽性、UCHL-1陰性で、細胞倍加時間は20時間、染色体分析では、4950,XX,der(1)(lpter→lq32),+3,t(4;15)(q31;q15),del(6)(q21q25),+der(7)del(7)(pll)t(1;7)(q21;q22),der(17)t(13;17)(q?;q25),+18,+der(19)t(19;19)(q13;?)であった。本細胞はBc16陽性で、Bリンパ球の分化レベルでは胚中心由来細胞に相当することが示唆された。本細胞株を用いて、B細胞誘導ケモカインシステムの発現の有無に関し検討する予定である。(2)手術摘出標本を用いた解析:中枢神経系原発悪性リンパ腫の生存期間を予測できる細胞あるいは遺伝子レベルのマーカーは、従来報告されていなかった。近年、Bc16陽性例では生存期間が有意に延長していると報告されたので、手術摘出標本を用い免疫染色によりBc16発現の有無を検討した。その結果、検討した10例でBc16発現の有無と治療成績の間に相関を認めなかった。前年度までに我々は中枢神経系原発悪性リンパ腫(PCMSL)患者の生検標本より培養細胞株を樹立した。この培養細胞は免疫染色の結果などから、胚中心由来細胞に相当する分化度のBリンパ球と考えられた。中枢神経系原発悪性リンパ腫の起源を明らかにするために、これを用いて以下のような研究を行った。1)分化誘導能の検討レチノイン酸を培養液に添加すると、成長速度が低下したが、明瞭な形態変化は観察されず、神経系細胞への分化能は証明されなかった。2)薬剤感受性の検討

標準治療薬となっているmethotrexateや、抗腫瘍効果のあるdexamethasoneを添加すると、それぞれ100nM、10nMで増殖が抑制され、TUNNEL法によりapoptosisが誘導されていることが示された。しかしながら、高濃度でも10%程度の細胞が生存し、薬剤耐性細胞の存在が示唆された。我々のこれまでの研究ではPCNSLと中枢神経系細胞分化の系譜を結びつける結果は得られなかった。今後新たなマーカー分子や分化誘導法の利用が必要と考える。また、培養細胞株を用いた実験結果は本疾患の臨床像と相違なく、薬剤耐性機構の解明に有用と考えられた。中枢神経系原発悪性リンパ腫(PCNSL)培養細胞株を用いた研究PCNSL患者の生検標本よりBリンパ球性リンパ腫と考えられる培養細胞株を樹立した。これを用いて研究し以下のような治験を得た。1)レチノイン酸添加では細胞増殖速度は低下するが、形態変化や神経系細胞マーカー蛋白の発現は見られず、分化は誘導されなかった。2)PCNSLの治療薬であるmethotrexateを添加するとアポトーシスによる細胞死が誘導された。dexamethasoneでも同様に細胞死が誘導された。これらの効果は濃度依存性に増強した。また、高濃度の薬剤存在下でも生存する細胞があり、methotrexate耐性株と考えられた。PCNSL培養細胞株樹立法の研究引き続き新たな培養細胞株の樹立を試みたが現在まで成功していない。採取できる腫瘍細胞数が少ないため腫瘍細胞からのautocrineによる増殖因子が不足しているのではないかと考えている。PCNSLは治療後の再発とその時点で有効な治療法が無いことが大きな問題である。新たな培養細胞株の樹立や培養細胞株を用いた薬剤耐性機構の解明は非常に重要な研究課題であると考える。