hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
膝関節痛をもつ中高年者を対象とした自己管理スキル学習プログラムの開発

膝関節痛は在宅中高年女性の健康や生活に影響を及ぼす。本研究では膝関節痛をもつ在宅中高年女性を対象に通信型教育プログラムを実施し、その効果をみた。対象者はA市健康診査受診者で膝関節痛のある中高年女性86名であった。プログラム実施の結果、介入群で介入前と介入終了3ヶ月後の膝関節痛が緩和、JKOMが低下した。以上より膝関節痛をもつ在宅高齢女性に対する通信型教育プログラムは膝関節機能の向上、膝関節痛の緩和への有効性が示唆された。膝関節痛をもつ高齢者が疼痛の自己管理をしながら自立した生活が維持できるように支援することが、中高年者の予防活動において重要な役割であり、課題である。本研究では、中高年者が膝関節痛軽減のために用いている認知的・行動的対処方法について明らかにすること、その結果をもとに膝関節痛の自己管理方略を習得できる通信型教育プログラムを作成することを目的とした。研究の方法は、A県B市在住の45歳以上の中高齢者で、ほとんど毎日、膝関節痛があり、現在、膝関節痛で通院治療中でない者を対象に中高年者が膝関節痛の軽減のために用いている対処方法に関する質問紙調査を実施した。調査の内容は、膝関節痛の経験年数、疼痛のある膝関節数、膝関節痛による治療経験の有無、身体機能として日本版変形性膝関節症機能評価尺度(Japanese Knee Osteoarthitis Measure ; JKOM)、心理社会的機能として、痛み対処方略(Coping Strategy Questionaire ; CSQ)日本語版、主観的健康度自己評価、改訂PCGモラール・スケール等であった。その結果、JKOMの「痛みの程度(VAS)」は、年齢、JKOM得点(「痛みやこわばり」「日常生活の状態」「普段の活動」「健康状態」の25項目)、CSQの「願望思考」「破滅思考」「痛み行動の活性化」と有意な正の相関を示した。JKOM得点は、年齢、CSQの「願望思考」「破滅思考」「痛み行動の活性化」と有意な正の相関を示した。このことから痛みの程度と痛みによる生活機能への影響は3つの対処方略に関係していることが明らかになった。これらの結果と先行研究の結果をもとに膝関節痛の自己管理プログラムの内容を検討した。膝関節痛は在宅中高年女性の健康や生活に大きな影響を及ぼしているが、通院治療をしていない膝関節痛をもつ在宅高齢者の教育プログラムの開発と評価はほとんど行われていない。本研究の目的は、膝関節痛をもつ在宅中高年女性の健康を維持・増進するための方策として、セルフケアの教育プログラムによる介入を実施し、その効果を分析することであった。本研究の対象は、A市健康診査において膝関節に疼痛がある診断され女性42名である。対象者には、日常生活動作をしやするためのスキルの習得を中心とする教育プログラムを実施した。プログラムの内容は、(1)膝関節痛の原因、(2)膝関節痛の自己管理、(3)膝関節痛を緩和するためのウオーキングと運動であった。介入前、介入終了3ヶ月後に、日本版変形性膝関節症機能評価尺度(Japanese Knee Osteoarthitis Measure ; JKOM))、主観的膝関節痛の程度(Visual Analogue Scale ; VAS)、痛み対処方略(Coping Strategy Questionnaire ; CSQ)日本語短縮版、主観的健康度、主観的幸福感、老研式活動能力評価指標を用いて評価した。結果、対象者の平均年齢は63.2歳でBMIの平均値は21.8であった。介入前と介入終了3ヶ月後の膝関節の疼痛の程度が低下、JKOMが低下し、有意差が認められた。また、介入前と介入終了3ヶ月後でCSQが低下し、主観的幸福感が上昇し、有意差が認められた。以上より、膝関節痛をもつ在宅高齢女性に対するセルフケアの教育プログラムは、膝関節機能を向上させ、精神的健康度を高めるのに有効であり、膝関節痛をもつ高齢者のセルフケアは、看護者が高齢者の日常生活動作をしやすくするスキルを見出し、それらのスキルが実践できるよう支援していくことの重要性が示唆された。
幹細胞移植による歯髄再生療法創生を目指す―スキャホールドの開発と動物モデルの確立

本研究では、歯髄幹細胞の歯髄腔への移植による歯髄再生系の確立をはかることを究極の目的とし、歯髄幹細胞の同定、スキャホールドの選択およびラット臼歯による移植実験系の検討を行った。まず、ラット歯髄中にCD146/MAP1B陽性幹細胞様細胞が血管周囲を中心に分布することを免疫組織学的に確認した。さらに、PLLA/Puramatrix三次元複合スキャホールドとともにラット間葉系幹細胞を歯髄腔を除去したラット臼歯に移植したところ、移植4週後に歯髄腔に石灰化組織が急速に形成された。以上より、本実験モデルが幹細胞移植による歯髄組織再生の検証に有用である事が示唆された。申請者らはヒト抜去歯の根管への幹細胞移植により歯髄類似組織を再生させることに成功した。本研究課題は、この成果を発展させつつ臨床応用への技法を創成することを究極の目的として、口腔内で施術可能なスキャホールドの開発・評価、および移植の際に添加する適切な成長因子の探索を行おうとするものである。また、臨床応用を想定した術式の創生と検証には動物実験系が不可欠であるため、ラット臼歯を用いた再生実験系確立をはかるとともに、上述のスキャホールドおよび成長因子のin vivoでの効果検証も併せて行う。平成23年度は上記の研究目的を達成するための端緒として、顎骨ごと摘出したラット臼歯の組織培養系について培養可能期間の延長を図るとともに、培養歯髄組織に分布する常在性細胞・神経線維・血管系について免疫組織化学的・分子生物学的手法による検索を行った。特に常在性マクロファージやMHCクラスII分子陽性細胞については、免疫組織化学的にその局在様式や密度についてin vivoの正常歯髄との比較を行うとともに、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションおよびリアルタイムPCR法を用いて、培養組織中のこれらの細胞における免疫機能分子等のmRNA発現ンレベルを解析した。その結果、培養歯髄組織中の常在性マクロファージにおけるMHCクラスII分子mRNA発現レベルが、正常歯髄組織と同程度に保持されていることなどが確認された。また、象牙芽細胞層におけるDSPP mRNA発現レベルが培養歯髄組織正常歯髄組織で同程度であることも明らかになった。従って、この培養系が、試作スキャホールドの安全性評価やこれらを用いた再生実験に十分適用可能であることが示唆された。本研究課題は、この成果を発展させつつ臨床応用への技法を創成することを究極の目的として、口腔内で施術可能なスキャホールドの評価やラット臼歯を用いた再生実験系確立等を行おうとするものである。これまでに、ラット臼歯whole tooth culture系の確立を図るとともに、正常歯髄組織や培養歯髄組織に分布する幹細胞マーカー陽性細胞の免疫組織化学的・分子生物学的解析を行った。その結果、歯髄組織中にCD146, MAP1B陽性の少数の幹細胞様細胞が血管近傍を中心に分布すること、歯根膜と比較してこれらの細胞の密度や幹細胞マーカーmRNA発現レベルが高いことが判明した。また、各種スキャホールドをwhole tooth cultureされたラット臼歯に移植し、これらが良好な組織適合性を示すことを確認した。以上の結果を踏まえ、平成25年度においては、ラット間葉系幹細胞をPLLA/Puramatrix三次元複合スキャホールドとともに歯髄を除去したラット臼歯歯髄腔に移植し、その経時的な再生過程を組織学的、免疫組織学的に観察した。その結果、移植1週後では組織再生は不明瞭であったが、4週後では歯髄腔に石灰化した新生組織が急速に形成されることが確認された。以上より、本実験モデルが歯髄幹細胞を用いた歯髄組織再生の検証に有用であることが示唆された。平成24年度は平成23年度に引き続き、顎骨ごと摘出したラット臼歯の組織培養系について培養可能期間の延長を図るとともに、正常歯髄組織や培養歯髄組織に分布する組織幹細胞マーカー陽性細胞について免疫組織化学的・分子生物学的手法による検索を行った。

すなわち、各種幹細胞マーカー陽性細胞を検索対象とし、免疫組織化学的にその局在様式や密度について解析を行うとともに、リアルタイムPCR法を用いて、組織中の各種幹細胞マーカーmRNA発現レベルを解析した。その結果、歯髄組織中では、CD146, MAP1Bなどの発現を示す少数の幹細胞様細胞が血管近傍を中心に分布していること、歯根膜と比較してこれらの細胞の密度や幹細胞マーカーmRNA発現レベルが高いことが明らかとなった。また、各種スキャホールドをwhole tooth cultureされたラット臼歯に移植し、これらが良好な組織適合性を示すことを確認した。ラット臼歯組織培養系の確立は本研究課題達成の基盤的部分であるため、これに関する検索を詳細に行った。そのため、次段階の検索がやや遅れている状況である。25年度が最終年度であるため、記入しない。昨年度に引き続き、本研究課題達成の基盤的部分であるラット臼歯組織培養系の確立はため、これに関する検索を詳細に行った。また、歯髄幹細胞の単離については詳細な実験条件確立を行っている段階である。このそのため、次段階の検索がやや遅れている状況である。次段階の検索として三次元的スキャホールドの試作、ラット歯髄幹細胞の単離を予定しており、いずれも予備的な検索結果は得られている。また、ラット臼歯組織培養系の確立に伴い、スキャホールドの評価も実施可能となることが見込まれる。以上のように、課題達成のために段階的に検索を進めていく予定である。次段階の検索としてスキャホールドや成長因子の選択とin vitro, in vivoでの組織再生能の評価を予定しており。in vitroでの予備的な検索結果は得られている。また、ラット臼歯組織培養系の確立に伴い、スキャホールドの評価は着実におこなわれつつある。以上のように、課題達成のために段階的に検討を進めていく予定である。
免疫賦活作用をもたらす乳酸菌の表層に露出したリポテイコ酸部分構造の解析

乳酸菌の摂取による免疫賦活効果は健康増進に寄与する。我々はこれまでに、乳酸菌Lactobacillus antriが樹状細胞に発現するTLR2受容体を介して腸管免疫を活性化し、IgA産生を促進することを明らかにしている。本研究では、菌体表層の立体構造を考慮し、表層に露出したリポテイコ酸(LTA)が樹状細胞のTLR2と相互作用することで免疫賦活作用をもたらすという作業仮設を立て、まずは菌体表層に露出したLTAの部分構造を解析するために、LTA分解能を有する乳酸菌からLTA分解酵素を精製し、基質認識をはじめとする性質を検討することを計画した。昨年度までに、市販のリパーゼで菌体を処理することでその免疫賦活作用が消失し、免疫賦活に必須な部分構造を分解できることを示した。本年度は、本菌株がもたらす免疫賦活作用の程度は、LTAの表層への露出度、あるいは露出したLTAの密度および露出部の構造に依存するという仮説を、LTAとTLR2との結合の多価性に基づき検証することを目的とした。そこでまず、本菌株のLTAについて、全体の構造解析およびTLR2との1価の結合の速度論的解析を進めるために、LTAを菌体から水/ブタノール抽出および疎水性クロマトグラフィーにより精製した。マウスマクロファージ様RAW264細胞を用いて免疫賦活作用について調べたところ、当初の予想に反し、LTAが検出された画分には免疫賦活作用はなく、リポタンパク質と予想されるタンパク質を含む画分にその作用があることが明らかとなった。これまでL. antriの免疫賦活作用は菌体表層に露出するLTAによりもたらされるとの作業仮設の下に研究を進めてきたが、菌体からLTAを精製することで、その作用はLTAにではなく、リポタンパク質と推察されるタンパク質にある可能性が示された。ただし、LTAが菌体上に固定されている場合は、樹状細胞のTLR2と多価の結合を形成することで免疫賦活作用が発現するが、遊離のLTAとTLR2との1価の結合では発現しない可能性も考慮しつつ、今後の研究計画を見直す必要がある。最終年度は、本菌株の免疫賦活作用をもたらすリポタンパク質と推察されるタンパク質の同定と菌体表層におけるこのタンパク質の局在を明らかにすることを目的として研究を進める。まず、菌体から精製した目的タンパク質のN末端アミノ酸配列を解析してタンパク質を同定する。このタンパク質に対する抗体を作製し、菌体表層での局在を解析する。また、当初の計画通り、菌体表層に存在する目的タンパク質の密度や構造に基づき、目的タンパク質とTLRとの結合、特に結合の多価性の観点から、みかけの結合・解離速度との関係を解析する。さらに、この知見に基づき、高い免疫賦活作用を有する乳酸菌の表層構造を設計し、培養する際の培地成分や比増殖速度を制御することで、乳酸菌の高機能化の可能性を検証する。我々は乳酸菌Lactobacillus antri JCM15950が、樹状細胞のToll様受容体(TLR)2を介して腸管免疫系を活性化し、免疫グロブリンA(IgA)の産生を促進することを明らかにしている。これまでに本菌株のIgA産生促進作用をもたらす菌体成分が、菌体表層に露出したリポテイコ酸(lipoteichoic acid; LTA)であることを示唆する結果を得ており、本研究では、本菌株のIgA産生誘導作用は菌体表層に露出したLTAの化学構造とTLR2との結合の多価性に依存するという作業仮説の検証を目的としている。本年度はまず、菌体表層に露出し、TLR2に結合するLTAの部分構造を同定することを目的とした。LTAは、細胞膜上の糖脂質とグリセロールリン酸をモノマーユニットとするポリマーが結合した構造をもつ。フッ化水素酸でLTAを加水分解できるが、フッ化水素酸はペプチドグリカン層に埋没した部位にも作用してしまうため、立体障害によりペプチドグリカン層に入り込めない酵素による露出部分の切り出しを試みることとした。複数の市販の酵素を用いて菌体を処理したところ、数種のリパーゼにIgA産生促進作用を減弱させる効果を確認した。すなわち、菌体表層からTLR2に結合するLTAの部分構造を切り出すことができたと判断し、現在、この部分構造の解析を進めている。当初の予定では、初年度に菌体表層に露出したLTAを部分分解するために、LTA分解酵素を精製する予定にしていたが、市販の酵素によりLTAの部分分解が可能であったため予定を一部を変更した。

本年度は、本菌株がもたらす免疫賦活作用の程度は、LTAの表層への露出度、あるいは露出したLTAの密度および露出部の構造に依存するという仮説を、LTAとTLR2との結合の多価性に基づき検証することを目的とした。そこでまず、本菌株のLTAについて、全体の構造解析およびTLR2との1価の結合の速度論的解析を進めるために、LTAを菌体から水/ブタノール抽出および疎水性クロマトグラフィーにより精製した。マウスマクロファージ様RAW264細胞を用いて免疫賦活作用について調べたところ、当初の予想に反し、LTAが検出された画分には免疫賦活作用はなく、リポタンパク質と予想されるタンパク質を含む画分にその作用があることが明らかとなった。これまでL. antriの免疫賦活作用は菌体表層に露出するLTAによりもたらされるとの作業仮設の下に研究を進めてきたが、菌体からLTAを精製することで、その作用はLTAにではなく、リポタンパク質と推察されるタンパク質にある可能性が示された。ただし、LTAが菌体上に固定されている場合は、樹状細胞のTLR2と多価の結合を形成することで免疫賦活作用が発現するが、遊離のLTAとTLR2との1価の結合では発現しない可能性も考慮しつつ、今後の研究計画を見直す必要がある。菌体から抽出したLTAの全体の化学構造と、IgA産生促進作用に直接関わる表層に露出した部分構造を明らかにする。また、酵素処理により菌体表層に露出するLTAの密度を変化させ、TLR2との相互作用を表面プラズモン共鳴法にて速度論的に評価することで、結合の多価性とIgA産生誘導作用との関係を明らかにする。最終年度は、本菌株の免疫賦活作用をもたらすリポタンパク質と推察されるタンパク質の同定と菌体表層におけるこのタンパク質の局在を明らかにすることを目的として研究を進める。まず、菌体から精製した目的タンパク質のN末端アミノ酸配列を解析してタンパク質を同定する。このタンパク質に対する抗体を作製し、菌体表層での局在を解析する。また、当初の計画通り、菌体表層に存在する目的タンパク質の密度や構造に基づき、目的タンパク質とTLRとの結合、特に結合の多価性の観点から、みかけの結合・解離速度との関係を解析する。さらに、この知見に基づき、高い免疫賦活作用を有する乳酸菌の表層構造を設計し、培養する際の培地成分や比増殖速度を制御することで、乳酸菌の高機能化の可能性を検証する。当初の予定では、初年度(平成29年度)にリポテイコ酸分解酵素の精製に必要なリポテイコ酸の購入を予定していたが、市販の酵素で研究を進めることができた。そのため、余剰が生じた物品費を、次年度(平成30年度)の市販酵素の追加購入に充てることとした。また、本年度(平成30年度)は、リポテイコ酸の精製とその抗体作製のために、申請当初に予定していた通りに物品費を使用する。
中国舟山の人形劇に見る口承文藝の研究-「説唐」故事を中心に-

中国舟山群島定海県では、今も「願戯」(願掛け、願ほどき芝居)、また結婚など人生儀礼における奉納戯として人形劇が上演される。舟山における人形劇の現状を、当地を代表する人形劇団侯家班の上演を録画し、一部は文字テキストとして詳細に検討することによって、明らかにした。舟山人形劇の演目は「説唐」など、基本的にすべて歴史物であるが、テキスト面からも中国口承文藝における「講史」の伝統を受け継ぐものであることを確認した。平成18年8月18日から25日まで、中国舟山定海市を訪問した。人形劇団侯家班に三日間、午前午後計12時間で「郭子儀」戯を最初の段から「郭子儀大閙花灯」「鮑家荘打」「洞房驚変劫囚車」と上演してもらい、ビデオに録画した。四日目は、舟山の人形劇団の現状を調べるため、侯家班以外の人形劇団に上演を依頼した。紫尾郷顧李村の人形劇団に、午前は「龍鳳双飛」、午後は「馮世恩出考」を演じてもらった。団員は三人で農業をやりながら、兼業で行っているが、後継者はいないと言う。舟山民間文芸家協会会長の張堅氏に劇の上演中の解説をお願いした。中央大学非常勤講師瀬田充子氏に同行してもらい、写真撮影、録音を担当してもらった。平成19年3月9日から14日まで、再度、舟山を訪問し、前回と同じく侯家班に「郭子儀」戯の続きを三日、計十二時間上演してもらった。今回は、貧しい李白が科挙受験に苦労する話、李林甫と楊国忠の対立など、玄宗皇帝の治世の話、李白出御の段などを上演してもらう。四日目は、比較検討するため、今回は沈家門の人形劇団に、「白兎記」の一段、劉知遠の「投軍」を演じてもらった。大型木偶戯とあるので、人形が大きいことを期待したがそうではなく、3人が同時に上演する、と言う意味であった。舞台が大きく三人でも同時に両手を使い、六体の人形を戦わせるとかなり迫力も出る。四日目の午後は、沈家門の人形劇団が、唐塘天后廟で上演するのを見学した。二百人ほどの観客がいた。今年は春節が遅かったので、まだ正月行事の延長という雰囲気で人形劇の上演は毎日行われていた。昨年度までの調査結果とあわせ、男勝りの女英雄の話が多く、女性の役回りの特徴が見えてきたように思う。次年度はこの点に注目して、上演を整理してみたい。舟山島だけで二十もの人形劇団が存在することに、改めて驚かされる。次年度も引き続き、郭子儀戯の記録を続け、同時に舟山で活動する人形劇団調査も継続する予定である。平成19年8月16日から24日まで、昨年に続き、中国舟山定海市を訪問した。人形劇団侯家班に三日間、午前午後計12時間「郭子儀」戯の続きを上演してもらい、ビデオに録画した。四日目は、舟山の人形劇団の現状を調べるため、双〓新裕村の黄其善一座に「金獅豹」を上演してもらった。団員は三人で農業をやりながら、兼業で行っている。また平成20年3月7日から14日まで、再度、舟山を訪問し、前回と同じく侯家班に「郭子儀」戯の続きを三日、計12時間上演してもらった。他に、一日、侯家班が橄欖鎮の党書記の家で願ほどきの劇を演じるのを見学した。「郭子儀」戯については、二年間で十二日、計24時間上演してもらったことになるが、更にまだ十数日分ある、という。評書の整理本「月唐演義」を手に入れたので、比較してみたところ、上演範囲は全五十回のうち、三十回までにあたり、内容はほぼ等しいが、神仙が登場する信仰にかかわる部分が、この84年に出た整理本では、みごとにカットされていることがわかった。主演の侯雅飛氏の話では、後半部分が整理本では削られている、という。今年度も舟山民間文芸家協会会長の張堅氏に劇の上演中の解説をお願いした。なお、平成19年9月には、東京経済大学の招請で来日した侯家班について、18日に国立オリンピック記念青少年総合センターでワークショップをおこない、広く市民に中国舟山の人形劇を紹介した。上演原稿の整理もだいぶ進んできたので、方言に国際音標文字よる注音を、元舟山海洋学院教授方松熹先生に依頼した。昨年に続き瀬田充子氏(中央大学非常勤講師)と、9月に中国舟山群島定海市を訪れ、人形劇団侯家班に市内の壇聚廟で4日間、郭子儀戯の続きを各日二台4時間強、上演してもらいビデオ録画した。

郭子儀戯は、3年間かけて、約三分の一を見終わったことになる。全体の話の展開をつかむまでには至らなかったが、一応、基づいているテキストについては確認できたし、劇の展開の仕方、脚本なしでの上演の仕方も大体見当がついたので、これで上演録画は区切りをつけた。2009年3月13日から18日まで、補充調査で定海市を再訪した。これまでの調査のまとめとして、人形劇が現在、実際にどのような場面で演じられているのかを見学して回った。結婚を祖先に報告する結婚式前日の行事では、子どもの誕生を願う予祝行事として、幼児用の椅子が上演途中に用意され、子どもの靴が置かれるのを確認した。また市内の寿山廟で「願戯」が上演されるのを見学した。侯家班は、今や舞台を二つ持ち、侯雅飛さんと姪の侯夏玲さんがそれぞれ主演を勤めて、別々に上演するようになっていた。「願戯」の需要は衰えることなく続いており、現在はなお、人形劇需要安泰の情況を確認した。前回、録画した郭子儀戯の中に、郭子儀を処刑するために、王爺が手下の兵士に城門を守らせていると、二龍山の仲間たちが、商人や乞食芸人に化けて、門番の兵士を騙して城門を突破する場面があった。これは『水滸伝』の、魯智深救助の場と共通する場面設定である。郭子儀戯には、林沖のように、同名の人物が登場するなど、他にも『水滸伝』と共通点が多い。この点を検討する参考資料として、この場面を文字に起こしてもらった。尚、9月3日には中国浙江省寧波における「中日非物質文化遺産保護・〓州論壇」で、無形文化財として、侯家班の人形劇を紹介した。また12月22日には、台湾の東呉大学人文社会学院中国文学系で、舟山人形劇の演出について講演を行った。
遺伝子導入を応用した安全で機能的なiPS細胞由来歯性細胞の新規分化誘導技術の開発

本研究では、iPS細胞由来歯性上皮細胞および間葉細胞の樹立を目的とした。iPS細胞をケラチノサイト分化培地を用いて培養することにより、歯性上皮細胞の前駆細胞となる上皮様細胞を樹立した。また、歯性間葉細胞への分化に必須な因子をiPS細胞由来神経堤細胞に遺伝子導入し、導入遺伝子の発現亢進を確認した。フローサイトメトリーを用いて遺伝子導入されたことを示すGFP陽性細胞の検出を行うことにより、遺伝子導入効率の評価を行った。歯の再生を実現するためには、良質で安全な細胞を十分量準備するための技術開発が必要である。これまで、サイトカインの添加や共培養系により、iPS細胞は歯性細胞へ分化することが報告され、iPS細胞が再生歯作製のための細胞シーズと成り得ることが示された。しかし将来の臨床応用を考えた場合、これらの方法には、他種細胞の混入、分化誘導効率、癌化、および分化した細胞のheterogeneity等の解決すべき問題が残されている。幹細胞から分化誘導を行う方法の一つである遺伝子導入法は、iPS細胞の分化誘導方法として、最も有効な手段の一つである。本研究課題では、遺伝子導入法を基軸とした、より効率的で安全なiPS細胞から歯性細胞への新規分化誘導方法の開発を目的とした。本年度では、iPS細胞から歯性細胞への分化誘導のための遺伝子導入方法を確立した。また、ヒト歯髄細胞のRNAから合成したcDNAを鋳型としてPCRにより増幅させ、増幅させたDNAフラグメントをサブクローニングすることで、歯の発生に必須であると考えられる転写因子の発現プラスミドの作製を行った。加えて、将来的にhomogenousなiPS細胞由来歯性細胞の樹立を行うために、フローサイトメトリーによるソーティング条件の検討を行った。さらに、iPS細胞由来歯性上皮細胞を樹立するために、iPS細胞からケラチノサイト分化培地を用いて上皮様細胞を誘導し、上皮細胞に特異的な因子の発現が認められることを確認した。iPS細胞から歯性細胞への分化誘導のための遺伝子導入方法の確立がなされ、iPS細胞由来歯性上皮および間葉細胞の誘導もほぼ計画通り進行している。本研究課題では、安全性の高い歯の再生に用いる細胞シーズの獲得を目的として、将来的に臨床応用が可能な基盤技術の開発の開発を目的とした。本年度では歯性間葉細胞の樹立をめざし、iPS細胞由来神経堤様細胞に歯の発生に必須であると考えられる転写因子の発現プラスミドを遺伝子導入を行った。遺伝子導入されたiPS細胞由来神経堤様細胞からトータルRNAおよびタンパク質を精製し、それぞれリアルタイムPCRおよびWestern blotにより、導入遺伝子の発現亢進を確認した。また、フローサイトメトリーを用いて、遺伝子導入されたことを示すGFP陽性細胞の検出を行うことにより、遺伝子導入効率の評価を行った。さらに、GFP陽性細胞をフローサイトメトリーによりソーティングし、遺伝子導入されなかった細胞の混入による細胞集団のheterogeneityの問題を解決し、homogenousなiPS細胞由来歯性間葉細胞の樹立をおこなった。iPS細胞由来再生歯胚作製のために必要な歯の発生に関わる因子の同定を進めるとともに、iiPS細胞から分化誘導した歯性細胞のcharacterizationと安全性の検証を行う。28年度が最終年度であるため、記入しない。歯学28年度が最終年度であるため、記入しない。
環オホーツク海圏と広域圏交流形成のための総合的研究-環境科学研究を中心として-

本研究プロジェクトは、「環オホーツク海圏交流」を促進するため、環境科学的学術交流に的を絞り、持続的可能な経済発展交流の研究を追求することを目的とした。研究計画及び研究成果については研究分担者が所属する5大学の、1995年以来の各種の地域とのコンソーシアム開催事業によって、その課題を絞り込んで環境科学研究のテーマを設定してきた。そこで具体的な対象地域を設定し、社会科学的アプローチ、人文科学的アプローチ、自然科学的アプローチといった多種多様の切り口から分析を行ってきた。主な研究実績は下記の通りである。1.分析視点を深めるとともに、調査研究方法の検討会議を開催した。具体的には、これまでに先駆的に海圏交流研究を行なっている研究者に講演して頂き、研究手法・論理展開を参考としつつ、国際的見地からの環境問題への視座や、伝統的地域圏交流の再確立、広域圏交流へむけた新たな研究の視座を盛り込む研究手法を検討した。2.環オホーツク海圏における環境科学研究に関する基礎資料及び比較のための環日本海圏域における基礎資料の収集及び国内調査を実施した。3.「環オホーツク海圏広域交流」形成の課題を明らかにするため、北東アジア(モンゴル、ロシア・サハリン、中国東北部)を対象に、環オホーツク海圏における農畜産業の展開や環境汚染の状況、国際交流に向けての取り組みなどについて、各国の関係機関を中心に聞き取り調査を実施し、また関係機関からの提供資料や広域交流関連の文献などを用いながら、研究を深化させてきた。本研究の主な研究実績としては、「越境広域経営」や「環境ガバナンス論」を土台に、環オホーツク海圏の持続的な資源の利用と管理のための環境ガバナンスの構築を目指して、学術的なグランドデザイン「(仮称)OSERIEG(The Okhotsk Sea Rim for Environmental Governance)ビジョン」のモデルを検討し、「環オホーツク海圏」の位置づけを明らかにしたことがあげられる。本研究プロジェクトは、「環オホーツク海圏交流」を促進するための環境科学的学術交流に的を絞り、学際的・国際的総合研究を目指す持続的可能な経済発展交流の研究を追求することを目的とした。当初研究計画及び研究成果については研究分担者が所属する5大学の、1995年以来の各種の地域とのコンソーシアム開催事業によって、その課題を絞り込んで環境科学研究のテーマを設定してきた。そこで具体的な対象地域を設定し、さらに本研究のメンバーの特色を最大限に活用するために、社会科学的アプローチ、人文科学的アプローチ、自然科学的アプローチといった切り口から分析を行っているものである。1.分析視点を深めるとともに、第7回までにわたる調査研究方法の検討会議(全体会議)を開催してきた。また、そのうち2回を研究会とし、これまでに先駆的に海圏交流研究を行なっている研究者を講師とし「(1)中国東北部における社会・経済事情(范為仁氏)(2)ロシアサハリンの社会・経済事情(佐藤芳男氏)、(3)ロシアの「環オホーツク圏」と北海道の役割(荒井信雄氏)」から研究手法・論理展開を参考としつつ、国際的見地からの環境問題への視座や、伝統的地域圏交流の再確立、広域圏交流へむけた新たな研究の視座を盛り込む研究手法を検討した。2.環オホーツク海圏における環境科学研究に関する基礎資料及び比較のための環日本海圏域における基礎資料の収集及び予備調査(国内)を実施した。1)調査としては、(1)北海道の北方圏センター。(2)富山県庁生活環境部国際・日本海政策課。(3)(財)環日本海環境協力センター。(4)富山大学極東地域研究センター。(5)九州経済調査協会。(6)北九州市市役所環境局環境国際協力室に対するヒアリング調査および文献調査を実施した。

また、入手した文献の検討から、環オホーツク海圏域に存在するロシア・中国の各州・各市の概況を網羅し、調査報告書作成に向け、押さえるべき基礎的統計的資料を整理した。本研究プロジェクトは、「環オホーツク海圏交流」を促進するための環境科学的学術交流に的を絞り、学際的・国際的総合研究を目指す持続的可能な経済発展交流の研究を追求することを目的とした。当初研究計画及び研究成果については研究分担者が所属する5大学の、1995年以来の各種の地域とのコンソーシアム開催事業によって、その課題を絞り込んで環境科学研究のテーマを設定してきた。そこで具体的な対象地域を設定し、さらに本研究のメンバーの特色を最大限に活用するために、社会科学的アプローチ、人文科学的アプローチ、自然科学的アプローチといった切り口から分析を行っているものである。1.分析視点を深めるとともに、第7回までにわたる調査研究方法の検討会議(全体会議)を開催してきた。また、そのうち5回を先駆的に海圏交流研究を行なっている研究者を講師として招き、研究会を開催したものである。2.また、中国東北地方への調査を2005年8月16日(火)8月26日(金)にかけて実施し、ロシアサハリン州への調査を9月4日(月)9月11日(土)にかけて行った。3.中国東北部およびロシアサハリン州調査は、総計12名が参加し、それぞれ、1テーマを設定して調査報告書を執筆した。これら原稿を総括し「2005年度環オホーツク海圏と広域圏交流形成のための総合的研究報告書」を刊行する予定である。4.2005年10月2日(日)において環日本海学会にて、黒瀧秀久他2名にて「環オホーツク海地域協力の研究」と題する研究を発表し、環オホーツク海圏研究の研究視座と方向性を明確にし、広く環境科学(自然科学、人文・社会科学)からアプローチする必要を論証した。本年度の主な研究実績としては、計4回の研究会の開催と中国・サハリン・モンゴルの3力国における海外視察調査の実施、環日本海学会への参加及び報告を行っている。研究会では、澤井安勇氏(総合開発研究機構)、山村理人氏(北海道大学スラブ研究センター)、沢野伸浩氏(星陵女子短期大学)らを講師として迎え、ロシアサハリン・北東アジア等の実態と環オホーツク海圏と広域圏交流形成の問題等について議論を行うなどして、本研究を進行させてきた。さらに各研究分担者は、海外視察調査の内容を中心として研究の成果をまとめた成果報告書の作成作業を開始し、報告書発刊へ向けて準備を進めている。海外調査においては、昨年度に引き続き中国東北部・ロシアサハリンにおける調査を実施し、今年度より新たにモンゴルを調査対象地として加えて実態調査を行っている。中国調査(8名参加)では、大連環境保護局への訪問、食品会社視察、企業及び農家への視察調査などを実施してきた。サハリン調査(9名参加)では、サハリンプロジェクトの実施現場の視察調査、農業経営体への聞き取り調査、学校における環境教育に関する聞き取り調査等を実施している。
ベトナム中部地域におけるゴング文化の動態　―楽器の製造・流通に着目して

本研究は、東南アジアにおけるゴング文化の総合的な理解に向けた一歩として、ベトナム中部地域におけるゴング文化の動態を、楽器の製造・流通に着目して明らかにすることを目的とした。現地調査の結果、ベトナム北中部沿岸にあるキン族の村で行われている鋳造によるゴング製作方法の詳細と、少数民族へのゴング販売の実態の一部について明らかにすることができた。またベトナム中部高原の幾つかの少数民族の間では、村落や民族の垣根を越えて、ゴングが売買されていることが明らかとなった。2012年度は、当初の計画通りベトナム中部地域でゴングの製造と流通について現地調査を行った。中部クアンナム省では、ゴング製作工房においてゴングの製作工程について調査を行った。ゴングの製作工程をビデオカメラで記録し、職人への聞き取り調査を行うことによって、ゴングの製作について詳細なデータを得ることができた。またベトナム中部高原のコントゥム省、および、ジャライ省の複数の少数民族村落で、ゴングの所有者、調律師などに対し、ゴングの流通に関して聞き取り調査を行った。ゴングの購入先は、他村のゴング所有者から直接購入した事例が多くみられた他、ゴング調律師が各村落を回ってゴングセットの売買を行っていることも確認した。以上より、当該地域におけるゴング文化の動態について、その概要を把握することができた。本年度は、前年度ベトナムで行ったフィールド調査で得たデータ(映像資料を含む)を分析して、キン族の鋳造によるゴング製作の詳細に関する論文としてまとめた。同論文は、国立民族学博物館研究報告誌に投稿し、2014年3月に出版された。また5月に国立民族学博物館で行われた研究会、および、11月に静岡文化芸術大学で行われた東洋音楽学会大会において、現地で撮影した映像を用いて研究成果の一部を発表した。12月には、イギリスの大英図書館、フランスのケブランリ美術館などにおいて、ベトナムのゴング文化に関する資料を収集し、複数の研究者と意見交換を行った。また前年度ベトナムで調査・撮影を行ったジャライ族の墓放棄祭に関する映像を編集して、民族誌映画「Po thi」を完成させた。同作品は、2014年3月にエストニアで行われた11th Tartu World Film Festivalに入選し、現地での作品上映とディスカッションに参加した。同作品は、今後も海外の国際民族誌映画祭などに積極的に出品する予定である。以上より、東南アジアにおけるゴング文化の総合的な理解に向けた一歩として、ベトナム中部地域におけるゴング文化の動態の一端を、とくにゴングの製作・流通の視点から明らかにすることができた。今後は、ベトナム中部地域のゴングの流通に関してさらなる研究を実施し、論文としてまとめる予定である。今年度はベトナムで2度フィールド調査を行い、当地のゴング製造、流通に関して豊富なデータを得ることができたため。25年度が最終年度であるため、記入しない。ベトナム中部高原におけるゴングの流通について、少数民族間のゴング取引、および、ラオス、カンボジアと国境を接する地域で国境を越えたゴング取引について研究を進める。当地のゴング製作についての論文を学術雑誌に投稿する他、現地で記録した映像をもとに民族誌映画を制作し、海外の民族誌映画祭に出品する。また現地の人々に映像を寄贈し、その内容について意見交換を行う。
寄生虫感染防御における腸管上皮間リンパ球とサイトカイン産生の研究

腸管寄生線虫の自然排虫機構は,寄生虫の種によりエフェクター機構が異なることが分かってきた。排虫機構の全体像を解明するためには,直接のエフェクター細胞を調節する機構を知る必要がある。本研究では腸管上皮間リンパ球(IEL)に着目し,フローサイトメトリーとRT-PCRによりS.ratti(Sr)とN.brasiliensis(Nb)感染における細胞変化とサイトカイン産生の比較を試みた。また,腸管膜リンパ節細胞についても検討を行った。Sr感染マウスIELの平均回収量は正常マウスの40%以下、Nb感染マウスについては6%以下であった。SrとNb感染で,IELのCD3^+,CD4^+,CD8^+,γδTCR^+細胞の割合には根本的な差は検出されなかった。Sr感染マウスのIELにおいて,Th2タイプのIL-4,IL-3mRNAは正常ではほとんど検出されないが,感染7日目には顕著に増加した。Th1タイプのIFN-γmRNAは正常IELに検出され,感染によってもほとんど変化がなかった。感染により肥満細胞増殖因子の一つであるIL-3のmRNAがIELで顕著に増加することから,Srの排虫にはIELが何らかの関与をしているものと思われる。Nb感染マウスのIELについては,mRNAの検討はできなかった。フローサイトメトリーにより腸管膜リンパ節細胞の細胞内サイトカインを検出した。SrとNb感染で,共にIL-3含有細胞は増加した。IL-4とIFN-γ含有細胞について,二つの寄生虫感染で根本的な違いは認められなかった。ところが,TNF含有細胞にはSrとNb感染で明らかな違いが認められた。Sr感染ではTNF含有細胞の割合が顕著に減少するが,Nb感染ではそれ程減少しなかった。以上の結果は,腸管寄生線虫の異なる排虫機構を解明する上で重要な手掛かりとなるであろう。また,IELの回収数からNb感染では腸管粘液分泌量が多いと思われたので,Nb感染における粘液分泌調節機構についても検討をした。その結果,杯細胞からの粘液分泌がCD4^+細胞により調節されている可能性が示唆された。1)正常マウスからの腸管上皮間リンパ球(IEL)の分離は,通常どうりEDTA存在下で腸管細胞を集め,ナイロンウ-ルカラムとPercoll密度勾配遠心を用いることにより比較的うまく行われた。糞線虫,N. brasiliensis感染マウスからのIELの分離は腸管粘液量が多く,回収率が極端に減少する問題があった。しかし,摘出腸管を80ml以上の緩衝液で十分に洗浄した後,EDTA存在下で集めた細胞を5-6回洗浄してから上記の操作を行なうことにより回収率はかなり改善された。それでも,N. brasiliensis感染マウスからのIELの回収は,糞線虫感染マウスからのそれよりも悪かった。2)フローサイトメトリーによる分析で,IELはCD4^+,8-10%;CD8^+,85-90%;γδTCR^+,60%を含むことが分かった。これは,腸管膜リンパ節細胞のCD4^+,47%;CD8^+,23%;γδTCR^+,5%とは際立った違いを示した。

糞線虫感染によりIELのCD4^+の割合は約2倍に増加し,CD3^+,CD8^+の割合は減少した。糞線虫感染とN. brasilensis感染で,CD3^+,CD4^+,CD8^+,γδTCR^+の割合に関しては根本的な差は検出されなかった。3)RT-PCRによる糞線虫感染マウスIELのmRNAの検出では,Th2タイプのIL-4mRNAは正常IELにはほとんど検出されないが,感染7日目には顕著に増加した。Th1タイプのIFN-γmRNAは正常IELに検出され,感染によってもほとんど変化がなかった。肥満細胞増殖に関与すると考えられるサイトカインに関しては,IL-3mRNAは正常IELにはほとんど検出されないが,感染7日目には顕著に増加した。SCFmRNAは正常IELに検出され,感染によってもほとんど変化がなかった。IL-10mRNAは正常,感染IELともに検出されなかった。感染によりIELのIL-3mRNAが顕著に増加することから,腸管局所の粘膜肥満細胞の増加にはIELが関与しているものと思われる。4)N. brasiliensis感染では腸管粘液分泌量が多いと思われる結果が得られたので,N. brasiliensis感染における粘液分泌機構について検討をした。その結果,杯細胞からの粘液分泌がCD4^+細胞により調節されていることが示唆された。糞線虫,N.brasiliensis(Nb)感染マウスからの腸管上皮間リンパ球(IEL)の分離は,回収率が低いことが分かった。糞線虫感染マウスIELの平均回収率は正常マウスの40%以下(n=5),Nb感染マウスについては6%以下(n=8)であった。これは,感染により腸管粘液量が増加するためと,腸絨毛が短くなることによりIELが減少するためと思われる。IELの回収に費やす労力と得られる結果のバランスを考え,Nb感染ピーク時のIELを回収し,mRNAを測定することを断念した。Nb感染3日目のマウスIELに,少量のIL-4mRNAが検出されたが,IL-3mRNAが検出できなかった。非感染マウスの腸管膜リンパ節細胞数は12.9【plus-minus】5.7×10^6(n=6)であった。糞線虫感染では7日目にそれが2.6倍に増加したが,Nb感染では1.8倍に留まった。腸管膜リンパ節細胞についてT細胞ポピュレーションの実数を見ると,糞線虫感染5日目にCD4^+細胞がNb感染5日目のそれより1.9倍多くなっており,感染7日目にはCD8^+細胞が糞線虫感染でNb感染の2倍となった。当初,ELISPOTによりサイトカイン産生の細胞レベルでの分析を予定したが,フローサイトメトリーで細胞内サイトカインを測定することにより,簡便に同様の情報が得られることが分かったので,感染マウスの腸管膜リンパ節細胞を用いて検討を行った。細胞内にIL-3を含む細胞は糞線虫感染とNb感染で共に7日目に増加した。IL-4含有細胞は糞線虫感染5日目に増加したが,あまり顕著な変化ではなかった。IFN-γ含有細胞は二つの寄生虫感染により変化が認められなかった。TNF-α含有細胞は糞線虫感染とNb感染で明らかな違いが認められた。糞線虫感染ではTNF-α含有細胞の割合が顕著に減少するが,Nb感染ではそれ程減少しなかった。糞線虫感染とNb感染において腸管膜リンパ節のT細胞サブポピュレーション数とTNF-α産生に違いがあることが分かった。
反応性微量成分による海洋大気化学過程の変調

沖縄辺戸岬において酸化態(NO_y,HNO_3,NO_3^-)および還元態(NH_3,NH_4^+)窒素化合物等の観測を行い、含窒素化合物の濃度レベル、その変動と変動要因を明らかにした。これら観測結果と化学輸送モデルによる計算結果の比較から、東アジア地域から周辺地域にもたらされる含窒素化合物の量を評価する基礎データを得ることができた。またガス態と粒子態の分配とその支配要因を明らかにすることができた。海洋大気中に存在する窒素酸化物は最終的にはガス状硝酸もしくは粒子状硝酸塩となり海洋に吸収され海洋の生物生産活動におけるNの供給源として生物活性も支配すると考えられている。本研究では、主に窒素酸化物種を周辺からの人為活動の影響の少ない海洋境界層で直接観測する。具体的には主に、総NO_yやガス状硝酸・粒子状硝酸塩などNO_x由来の物質やアンモニア・アンモニウム塩等を中心とする人為活動由来物質の長期連続観測を継続することにより、経済発展が著しい東アジア地域からもたらされる含窒素化合物の海洋大気への影響を定量的に理解する。また、NO_xやアンモニアからの最終生成物であるガス状硝酸および粒子状硝酸塩・アンモニウム塩の濃度を明らかにすることにより、大気から海洋へのNの流入量を定量的に評価する。本研究では、沖縄辺戸岬観測ステーションにおいて、反応性窒素化合物や、人為起源の指標となる一酸化炭素、オゾン、揮発性有機化合物を通年で長期観測し、人為起源窒素化合物の海洋への沈着量を推定することを目的としている。平成18年度においては特に、沖縄辺戸岬観測ステーションにおいて、ナイトレートモニター(RP8400)を用い、粗大粒子に含まれる硝酸塩(nitrate ; NO_3^-)の通年観測を行った。硝酸塩濃度は春季に高く、濃度変動は主として気塊の履歴に依存し、中国起源の場合に高かった。気塊が中国沿岸から辺戸に到達するまでを輸送時間としたとき、輸送時間が長くなるにつれて粒子中硝酸塩濃度は減少し、粗大粒子中に含まれる硝酸塩の割合が増加していた。気相に放出された硝酸(HNO_3)が海塩や土壌粒子に吸着したため粗大粒子中の硝酸塩の割合が増えたと考えられる。同ステーションにアンモニア計を設置し、3月から外気のサンプリングを始めた。一方で、粒子分級器と化学発光式窒素酸化物計を組み合わせた硝酸塩測定装置の開発を行なった。まず、粒子分級器の性能評価を行なうため、カスケードインパクターを用いて分級器のカットオフ特性を調べたところ、沖縄辺戸岬においてほとんどを占める粒径1μm以上の硝酸塩については殆ど分離できることが明らかとなり、分級器の性能が確認された。また、本装置を用いて大阪府立大学構内及び沖縄辺戸岬観測ステーションでテスト観測を行ない、装置のパフォーマンスを確認した。今後、本装置とRP8400とで相互比較を行なうことにより、硝酸塩濃度の確度の向上が期待される。前年度開発した粒子分級器と化学発光式窒素酸化物計を組み合わせた硝酸塩測定装置を用いて実際に沖縄辺戸岬観測で観測を始めた。その一方で,本装置で用いる硝酸塩の還元触媒の性能を確かめるために,標準粒子発生装置を用いて,還元効率を調べたところ,粒径10μm以下の粒子においてほぼ定量的な還元が確認できた。一方で,ガス状硝酸と反応性総窒素化合物(NO_y)の通年観測も行なった。両方ともに濃度変動は主として気塊の履歴に依存し,中国起源の場合に高かった。また,中国起源の場合,辺戸岬への到達NOy濃度が気塊の輸送時における相対湿度と逆相関を示した。これは主として,相対湿度が高いほど硝酸の沈着速度が上がるためと考えられる。また,ガス状硝酸濃度の中国大陸から辺戸岬への気塊の輸送時間に対する依存性を用いて,東シナ海上におけるガス状硝酸の平均寿命を推定したところ,12日と見積もられた。これまでの粒子状硝酸塩,ガス状硝酸,反応性総窒素化合物(NO_y)の通年観測結果と中国国内での観測結果と比較し,輸送中にガスから粒子に変換され,また微小粒子から粗大粒子に硝酸塩がシフトしていることを明らかにした。本結果はJ. Geophys. Res.に投稿し受理された。更には,乾式微量アンモニアガス測定器の温湿度依存性について検討し水蒸気量が大きく結果に影響することを見出した。本特定領域に属する名古屋大長田グループの湿式アンモ三アガス測定器と名大で並行運転し,濃度変動がほぼ一致することを確認した。本特定領域の集中観測を沖縄辺戸ステーションで実施し,両装置とも観測ステーションに設置して春季に連続観測を行った。通常は0.5 ppb以下であるが,他の大気汚染質濃度が高くなるときにアンモニアガス濃度も数再)bまで高くなることがわかった。平成20年度では主に、沖縄本島辺戸岬において、総NO_yや硝酸・硝酸塩といったNO_x由来の物質やアンモニウム塩等を中心とする人為活動由来の連続観測を行ない、そのデータについて解析を行なってきた。

また、平成20年春に沖縄辺戸岬で当該領域の関係者他と共同でW-PASSの集中観測を行った。沖縄辺戸岬ステーションにおいて上記の化学種のほかに、オムニセンス社製アンモニア測定器を用いて微量のアンモニアを観測した。期間中の平均濃度は0.66±0.32ppbvであった。同時に測定したエアロゾル質量分析計のアンモニウム濃度を用いて、中国起源の気塊に含まれるアンモニアの分配を計算した。中国由来の気塊ではアンモニウムはほぼ9割以上を占めており、辺戸に到達するアンモニア、アンモニウムはほとんど粒子態で輸送されてきたことがわかった。また、NO_yなどとの比較からガス状アンモニアは主にローカルな発生源に起因すると推定された。また、これらの観測結果とA04-1班(現: AO1-3班)の鵜野グループによるCMAQ化学物質輸送モデルの計算結果と比較を行なった。NO_y濃度については観測とモデルとでおおむね良く一致したが、ガス状硝酸・粒子状硝酸塩はモデルがそれぞれ過大・過小評価する結果となった。これは、CMAQモデルでは海塩粒子や黄砂とガス状硝酸との反応が組み込まれていないことにより、モデルにおける硝酸のガスー粒子分配比がガスのほうに偏っているためと考えられる。一方、NH_4^+(p), SO_4^<2->(p)はモデルと観測が良く一致したという結果になった。観測結果から、NH_4^+(p)はほとんど(NH_4)_2SO_4の形態で存在していると考えられ、中国大陸からのNH_4^+(p), NH_3(g)、SO_y(=SO_2+SO_4^<2->)の排出および輸送過程については、CMAQで非常に良く再現されていると考えられる。沖縄辺戸岬で連続観測を行っているHNO_3(g)の日内変動について着目した解析を行った。HNO_3(g)は14時に濃度ピークを持ち、大陸からの長距離輸送だけでなく、観測地点近傍におけるHNO_3(g)の光化学生成の可能性を示す結果となった。一方、HNO_3(g)の日内変動パターンは気塊の輸送経路や季節によって大きく変動しない。更にHNO_3(g)の日変化の振幅をNO_y濃度で除した値の季節変動を見ると、夏季に高く、冬季に低い結果となった。夏場のほうが太陽光強度が大きいことから、この結果はHNO_3(g)の光化学生成を支持していると考えられる。以上のことから、HNO_3(g)の日内変動を支配する要因は長距離輸送によるものというよりも、むしろ観測地点近傍でのHNO_3(g)の光化学生成、輸送であると考えられる。2008年春に測定したアンモニア、アンモニウムの動態に関する解析をすすめた。観測期間中のNH_3、NH_4^+の平均濃度はそれぞれ0.56±0.50ppbv、2.2±1.4μgm^<-3>であった。他の測定も考慮するとNH_3の平均的な濃度レベルは0.5-1ppbv程度と推定でき、NH_3の濃度変動と気象要素(風速、風向、湿度)、SO_4^<2->の濃度変動との比較から、今回観測されたNH_3は、主に、ローカルな発生に由来すると考えられた。
変異細胞株を用いた糖脂質合成酵素群及び関連タンパク質の機能解析

グルコシルセラミド合成酵素は、糖脂質合成の第一段階を触媒する最も重要な酵素である。しかしながら、その精製及び活性測定が困難なことからほとんど研究されていない。本酵素の活性を生体内で調節することができれば、様々な、糖脂質蓄積症、癌転移、ある種の皮膚疾患等の治療への応用が期待できる。今回我々は、本酵素の特性を明らかにするためにそのcDNAのクローニングを試み、これに成功した。実験方法は、最近、Seed等によって開発された発現クローニング法を用いた。グルコシルセラミド合成酵素欠損細胞株GM-95(メラノーマB16)にポリオーマウイルス、ラージTタンパクを安定発現させた細胞株GM-95-PyTを作成し受容細胞として用いた。これにヒトメラノーマ細胞SK-Mel-28 cDNAライブラリーをエレクトロポレーション法を用いてトランスフェクションした。GM3に対するモノクローナル抗体M2590を反応させた後、ヤギ抗マウスIgMをコートしたプレートに対してパニングを行った。Hirt抽出、トランスフェクションの過程を2回繰り返した後、酵素活性測定に基づくSIBセレクション法により、最終的に陽性クローンを単離した。このcDNAは本来本酵素活性を持たない大腸菌で発現させた場合も、酵素活性を示すタンパク質を作ることから、グルコシルセラミド合成酵素をコードしていることが明らかになった。グルコシルセラミド合成酵素は394アミノ酸から成る分子量45万のIII型膜タンパク質であり、データベース検索の結果、既知のタンパク質との間にホモロジーは認められず、新規のタンパク質であることが明らかとなった。
仮想現実空間と自然言語を用いる機器修復支援システム

実機と仮想モデルを重畳し、実機から受ける受動的力覚と能動的力覚の発現原因を、仮想モデルと手指や腕との干渉を可視化することにより、不可視状態での実機の操作方法を認識させるシステムを作成した。磁気センサー及びデータグローブのキャリブレーションにより、12mmの精度で仮想空間と実空間の対応づけが可能となった。実機の把持部検出には、画像を利用した。手首につけた磁気センサーの値と、手指形状と把持物形状から把持部をもとめた。把持物は典型的機械部品例である円柱のみを用いた。把持の状態が操作終了まで不変と仮定し、把持物先端の実時間追跡を実現した。手と部品の動きに同期させて仮想部品を描画し、上記の視覚と力覚の一致を試みた。現有のインターグラフ社TD300の計算速度では、手の動作速度が速くなると、描画が遅れることが判った。描画の幾何学的歪みは特に感じられなかったが、操作対象部品が微細なものでなかったのが原因かもしれない。より精細な部品に対して現実強化型システムを実現するのは、現状では困難との印象を得た。部品だけでなく、その取り付け対象機器の姿勢変更は、左手あるいは両手でなされると思われるが、左手グローブがないため行えない。機器の基盤に磁気センサーを付けることで、この問題を避けた。以上の実験により、触・力覚の発現を視覚で確認させることにより、触・力覚のみを用いた不可視操作の支援が可能となった。しかし対象毎にその模型を作るのは容易ではない。力覚提示装置を購入し同様な効果の実現を目指したい。