hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
慢性活動性EBウイルス感染症とEBウイルス関連リンパ増殖症におけるT細胞の解析

伝染性単核症(IM)の原因であるEpstein-Barrウイルス(EBV)は、免疫不全時に再活性化しB細胞リンパ腫/リンパ増殖性疾患(LPD)を、またT/NK細胞に感染して慢性活動性EBV感染症(CAEBV)や血球貪食症候群(HLH)などのリンパ網内系疾患を発症する。EBVがT細胞に感染したCAEBVやHLHは予後不良なEBV^+T-cell LPDである。私たちはCAEBV患児のT細胞活性化とoligoclonal増殖を明らかにし、活性化T細胞にEBVコピー数が多いこと、この細胞群のサイトカイン発現に異常のあることを明らかにした。このことはCAEBVにおける活性化T細胞の増殖が反応性というより、腫瘍化段階(clonal evolution)である可能性を示唆する。また、移植後LPDの発症予測に末梢血のEBV-DNA定量が有用であることも明らかにした。EBV-DNA定量(全血)が移植後B-LPDおよびCAEBV(T-LPD)の発症と病勢の指標になることを証明した。活性化T細胞とEBウイルス(EBV)のクローナル増殖を証明した慢性活動性EBV感染症(CAEBV)患児(J Pediatr Hematol/Oncol 20:342-346,1998&21:42-46,1999)を含む4名の末梢血より単核球を分離しcDNAを作成して、T細胞抗原受容体(TCR)Vβ領域遺伝子を用いたinverse PCR法によりTCRレパートアを解析した。症例ごとに異なる特定のVβを使用するクローンが増加しており、これはJβの使用状況からoligoclonal expansionであることが示された(Am J Hematol 61:26-33,1999)。つぎに患児の末梢血単核球を3時間培養しPMAとCaイオノフォアにて刺激してIFNγ/IL-4蛋白の細胞内発現(細胞内サイトカイン)をFACSにて解析した。伝染性単核症(IM)患者と比較して有意にTh0、Th1、Tc1細胞の割合が増加しIFNγ産生細胞の優位が示唆された。この現象をEBV感染T/NK細胞が担っているのか、感染細胞に対する反応性変化であるのかを検討するため、Cell Sorterにより分離したHLA-DR陽性および陰性T細胞のEBV-DNA量と細胞内サイトカインmRNAをReal time PCRを用いて定量し、IMの同細胞亜群と比較して検討中である。現在のところ、CAEBVではいずれも活性化T細胞にEBV感染量が多いことが明らかとなり二年次はこの解析を継続する。なおこのEBV定量法の妥当性を臍帯血移植後にEBV関連リンパ増殖症(PLD)患児の末梢血のモニターなどから確認し報告した(BMT 2000 in press)。
前立腺誘導因子の探索と同定

アンドロゲンにより活性化された尿生殖洞間充織は前立腺誘導能がある.しかし,上皮に働くものは,アンドロゲンではなく,いろいろな成長因子であるとの仮説をもとに,本年度の研究が求められた.1.前立腺芽誘導に効く成長因子の探索......多くの成長因子を雌雄胎児の尿生殖洞に与え,アンドロゲン非存在下にて培養したところ,EGF,TGFα,KGFが極めて強く前立腺芽を誘導した。HGF,aFGF,bFGFは無効であった.2.アンドロゲンレセプター抑制下における前立腺芽誘導......アンドロゲンレセプター抑制剤CASODEX存在下においても,EGF,TGFα,KGFは尿生殖洞に前立腺芽を誘導した.すなわち,前立腺芽誘導に,アンドロゲンもアンドロゲンレセプターもともに不必要であることがわかった.3.Tfmマウスにおける前立腺芽誘導......アンドロゲンレセプター欠如雄マウスの尿生殖洞をEGF,TGFα,KGFとともに培養したところ,前立腺芽が誘導され,この発見が確認された.4.成長因子による細胞増殖の促進と前立腺芽形成......成長因子によりS期細胞核は増加し,とくに伸長しつつある前立腺芽全体に観察された.5.前立腺形成時における成長因子mRNAの検出......アンドロゲン作用時に尿生殖洞間充織に出現する成長因子mRNAをin situ hydridization法により検出しつつある.アンドロゲンにより活性化された尿生殖洞間充織は前立腺誘導能がある.しかし,上皮に働くものは,アンドロゲンではなく,いろいろな成長因子であるとの仮説をもとに,本年度の研究が求められた.1.前立腺芽誘導に効く成長因子の探索......多くの成長因子を雌雄胎児の尿生殖洞に与え,アンドロゲン非存在下にて培養したところ,EGF,TGFα,KGFが極めて強く前立腺芽を誘導した。HGF,aFGF,bFGFは無効であった.2.アンドロゲンレセプター抑制下における前立腺芽誘導......アンドロゲンレセプター抑制剤CASODEX存在下においても,EGF,TGFα,KGFは尿生殖洞に前立腺芽を誘導した.すなわち,前立腺芽誘導に,アンドロゲンもアンドロゲンレセプターもともに不必要であることがわかった.3.Tfmマウスにおける前立腺芽誘導......アンドロゲンレセプター欠如雄マウスの尿生殖洞をEGF,TGFα,KGFとともに培養したところ,前立腺芽が誘導され,この発見が確認された.4.成長因子による細胞増殖の促進と前立腺芽形成......成長因子によりS期細胞核は増加し,とくに伸長しつつある前立腺芽全体に観察された.5.前立腺形成時における成長因子mRNAの検出......アンドロゲン作用時に尿生殖洞間充織に出現する成長因子mRNAをin situ hydridization法により検出しつつある.
自己免疫疾患の治療戦略としてのデヒドロエピアンドロステロンの妥当性

全身性エリテマトーデス(SLE)は全身性自己免疫病の原形的なもので,SLETリンパ球によるインターロイキン2(IL2)産生は著しく低下しておりSLEの病態形成に関わっていると考えられている.デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)は副腎が産生するステロイドホルモンで,性ホルモン合成系の中間生成産物である.研究代表者は正常者T細胞に対するDHEAの効果を検討し,DHEAは正常者T細胞に作用して抗原刺激によるIL-2産生を増強させることを見出した.実際DHEA/DHEAレセプター複合体はIL-2プロモーター/エンハンサー領域の-222から-127bpの領域に作用してIL-2遺伝子の転写を促進し,IL-2メッセンジャーRNAの増加をもたらし,IL-2蛋白の産生増加が起こることが明らかになった.一方,ヒトSLE患者では血中DHEA濃度が発病初期から低下していることを見出した.SLET細胞によるIL-2産生不全がDHEA濃度の低下によるものかを検討した.SLET細胞のIL-2産生不全は正常者の血中濃度である10^<-9>MのDHEAで前処理するにより改善した.DHEAに反応しIL-2産生増強を認めるのはCD4陽性T細胞であり,CD8陽性T細胞ではあまり影響を受けなかった.SLET細胞のIL-2産生増強はメッセンジャーRNAレベルで起こっていた.一方,DHEA処理は,B細胞の分化を誘導するIL-4とIL-6の産生には影響せず,DHEAがSLE患者B細胞のポリクロナールな免疫グロブリン産生は増悪させないことが示唆された.この成績から血清DHEA濃度の低下がSLE患者T細胞のIL-2産生不全の少なくとも一因となっており,さらにDHEAがSLE患者Tリンパ球のIL-2産生不全を是正することでSLE患者治療にDHEAが応用可能であることが示唆された.全身性エリテマトーデス(SLE)は全身性自己免疫病の原形的なもので,SLETリンパ球によるインターロイキン2(IL2)産生は著しく低下しておりSLEの病態形成に関わっていると考えられている.デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)は副腎が産生するステロイドホルモンで,性ホルモン合成系の中間生成産物である.研究代表者は正常者T細胞に対するDHEAの効果を検討し,DHEAは正常者T細胞に作用して抗原刺激によるIL-2産生を増強させることを見出した.実際DHEA/DHEAレセプター複合体はIL-2プロモーター/エンハンサー領域の-222から-127bpの領域に作用してIL-2遺伝子の転写を促進し,IL-2メッセンジャーRNAの増加をもたらし,IL-2蛋白の産生増加が起こることが明らかになった.一方,ヒトSLE患者では血中DHEA濃度が発病初期から低下していることを見出した.SLET細胞によるIL-2産生不全がDHEA濃度の低下によるものかを検討した.SLET細胞のIL-2産生不全は正常者の血中濃度である10^<-9>MのDHEAで前処理するにより改善した.DHEAに反応しIL-2産生増強を認めるのはCD4陽性T細胞であり,CD8陽性T細胞ではあまり影響を受けなかった.SLET細胞のIL-2産生増強はメッセンジャーRNAレベルで起こっていた.一方,DHEA処理は,B細胞の分化を誘導するIL-4とIL-6の産生には影響せず,DHEAがSLE患者B細胞のポリクロナールな免疫グロブリン産生は増悪させないことが示唆された.この成績から血清DHEA濃度の低下がSLE患者T細胞のIL-2産生不全の少なくとも一因となっており,さらにDHEAがSLE患者Tリンパ球のIL-2産生不全を是正することでSLE患者治療にDHEAが応用可能であることが示唆された.全身性エリテマトーデス(SLE)の病態の形成には免疫調節性T細胞の機能不全中でも患者T細胞のIL-2産生不全が重要である。研究代表者らは男性ホルモン合成系の中間産物であるDehydroepiandroslerone(DHEA)が正常ヒトT細胞に作用して抗原刺激によるIL-2産生を増強させることを見い出した。本年度はIL-2産生増強に関するDHEAの作用機序とSLE治療への応用の可能性を検討した。まずDHEA存在下に正常ヒトT細胞を抗原刺激するとIL-2産生量は明らかに増加した。DHEA処理により活性化T細胞のIL-2mRNA発現はIL-2蛋白産生量とほぼ比例して増加した。DHEAがIL-2遺伝子の転写調節に陽性に作用するのかレポーター遺伝子を用いて検討したところ、DHEAはIL-2プロモーター領域に作用して、IL-2産生を亢進させることが分かった。次にDHEAの特異的な結合蛋白をサウスウエスタン法を用いて検討した。分子量約97Kdの蛋白がDHEA結合蛋白の可能性が高いと考えられた。これらの結果からDHEAはT細胞の細胞質内の特異的なDHEAレセプターと結合し、DHEA/DHEAレセプター複合体を形成して、細胞核内に移行し、IL-2プロモーター領域の一定の配列を認識しその転写を亢進させて、IL-2mRNAの産生を増加させ、それに対応してIL-2産生が増強され免疫賦活作用を発揮することがわかった。SLE患者にDHEAを応用すればIL-

2産生不全が改善し、それに随伴してSLEの病態が改善する可能性がある。まずSLE患者血清DHEA濃度を検討すると患者では正常者に比し明らかに低値であった。この成績からSLE患者T細胞のIL-2産生低下は血清DHEAの低値よる可能性が示唆された。そこで患者T細胞に対するDHEAの効果をin vitroで検討した結果、DHEAはSLE患者T細胞のIL-2産生不全を改善できることが明らかになった。これらの成績からSLE患者のIL-2産生不全は血清DHEAの低下によること、さらにDHEAを補充することでSLE患者Tリンパ球のIL-2産生不全を是正することで、新しい治療薬としての可能性が示唆された。全身性エリテマトーデス(SLE)は各種臓器に多彩な症状を現す全身性自己免疫病の原形的なもので,SLE患者およびループスモデルマウスではTリンパ球によるインターロイキン2(IL2)の産生は著しく低下しておりSLEの病態形成に関与していると考えられている。研究代表者は昨年度,ヒトSLE患者では血中のデヒドロエピアンドロステロン(DHEA)濃度が低下していることを見出し,さらに正常Tリンパ球に対するDHEAの作用機序を解析し報告した。本年度はSLE患者Tリンパ球によるIL-2産生不全がDHEA濃度の低下によるものかをあきらかにするため,SLE患者Tリンパ球をDHEAで前処理するにより患者Tリンパ球のIL-2産生不全を是正することが可能であるのか検討した。その結果,SLE患者Tリンパ球のIL-2産生不全10^<-9>MのDHEAで前処理するにより改善することが明らかになった。DHEAに反応してIL-2産生の増強を認めるのはCD4陽性T細胞であり,CD8陽性T細胞ではあまり影響を受けなかった。さらにIL-2産生の増強はメッセンジャーRNAレベルで起こっていた。一方,DHEA処理は,B細胞の分化を誘導するIL-4とIL-6の産生には影響せず,SLE患者に実際に投与してもSLE患者B細胞によるポリクローナルな免疫グロブリン産生は増悪させないことが示唆された。この成績から血清DHEA濃度の低下がSLE患者Tリンパ球のIL-2産生不全の少なくとも一因となっており,さらにDHEAがSLE患者Tリンパ球のIL-2産生不全を是正することでSLE患者治療にDHEAが応用可能であることを示唆する。
血小板凝集の調節作用を持つ生理活性タンパク質の構造-機能相関

1)血小板粘着、凝集を調節する種々の蛇毒タンパク質の精製と構造-機能相関:既にBothrops jararaca蛇毒よりフォンビルブランド因子(vWF)を活性化し、血小板凝集を惹起するボトロセチンの精製とそのユニークな全化学構造の解析に成功しているが、本研究では同じ蛇毒から、トロンビン様活性をもつボトロンビン、コラーゲン惹起血小板凝集を阻害するジャララギン-C、血小板GPIbと特異的に結合して、vWFと血小板の結合を阻害するジャララカGPIb-BP(別名ヨシトビン)など作用の異なる種々のタンパク質性因子を精製し、その全アミノ酸配列を決定した。GPIb結合タンパク質は別種の蛇毒からも単離し、それらの構造を詳細に比較検討するとともに、それらの構造-機能相関に関する知見を得た。このほか、Bitis arietansの蛇毒中に強いボトロセチン様活性を検出し、ビチスセチンと命名した。単離後全一次構造を決定した。ボトロセチンとの相同性は45%と低く、両者でその作用機序が異なることを示唆した。2)vWFの生理的活性化分子の探索:ボトロセチンに対して作製したモノクロナール抗体の1種(BCT-4-3)がヒト血管内皮細胞に反応性を示し、その反応はフィブロネクチンの添加により増加した。臍帯抽出液より、BCT-4-3固定化カラムを用い、ボトロセチン疑似分子を精製したところ、フィブロネクチンと130kDaタンパク質が抽出され、これらの複合体が生理的vWF活性化分子であると推定した。3)vWFと細胞外マトリックス成分との結合:vWFとマトリックス構成タンパク質との結合をELISA系で調べたところ、III型コラーゲンのみが特異的に結合することが判明した。しかし、静的状態ではその結合によりvWFとGPIbの細胞外ドメインに相当するグリコカリシンとの結合は惹起されなかった。このことは、その結合はさらに動的状態におけるずり応力などの変化が必要であることを示唆するものである。ボトロンビンの精製と構造および機能:Bothrops jararacaの蛇毒からトロンビン様活性を待つボトロンビンを精製し、232アミノ酸残基の全一次構造を決定した。ボトロンビンはフィブリノーゲンに作用してフィブリンを形成するが、その際フィブリノペプチドAのみを遊離する。凝固第VIII因子を活性化する活性は弱く、またDFPによって阻害されるがヒルジンによる阻害は認められなかった。単独では血小板に作用しないが、フィブリノーゲン添加後の血小板を凝集するという特異な性質を示した(Biochemistry(1994)33,1843-1849)。フォンビルブラント因子(vWF)の生理的活性化分子の探索:in v itroでvWFを活性化する蛇毒ボトロセチンに対するモノクロナール抗体を作製した。その中で、一種(BCT-4-3)がヒト血管内皮細胞に反応性を示し、その反応はフィブロネクチンにより増加した。臍帯抽出液より、BCT-4-3固定化カラムを用い、ボトロセチン凝似分子を性製したところ、フィブロネクチンと45kDa分子が抽出され、これらの複合体が生理的vWF活性化分子ではないかと推察した(J.Biochem.(1995)印刷中)。ジャララギンC末端ドメインの精製と構造:

Bothrops jararacaの蛇毒からコラーゲン惹起血小板凝集を阻害するタンパク質因子を精製し、212アミノ酸残基からなる全一次構造を決定したところ、既知の高分子出血性メタロプロテアーゼ′′ジャララギン′′のジスインテグリン様ドメインを含むC末端部位(残基210-421)に一致した。ただしこのドメインではRGD配列に相当する部位はECDに置換していた(Biochem.Biophys.Res.Commun.(1994)201,331-339)。血小板GPIb結合タンパク質の精製と性質:Bothrops jararacaなどの蛇毒からGPIbと特異的に結合し、リストセチン又はボトロセチン活性化vWFとGPIbの結合を阻害するタンパク質因子を精製し、そのN末端アミノ酸配列を決定したところ、いずれも作用の全く異なるボトロセチン(vWF結合タンパク質)と高度の相同性を示した(Thromb.Haemost.(1995),Biochem.J.(1995)およびBiochim.Biophys.Acta(1995)印刷中)。フォンビルブラント因子(vWF)の生理的活性化分子の探索:in vitroでvWFを活性化する蛇毒ボトロセチンに対するモノクロナール抗体の中で、BCT-4-3がヒト血管内皮細胞に反応性を示し、その反応はフィブロネクチンにより増加した。臍帯抽出液より、BCT-4-3固定化カラムを用い、ボトロセチン疑似分子を精製したところ、フィブロネクチンと45kDa分子が得られ、その複合体が生理的vWF活性化分子ではないかと推察した(J. Biochem.(1995)117,331-338)。血小板GPIb結合タンパク質の精製と性質:数種の蛇毒からGPIbと特異的に結合し、vWFとGPIbの結合を阻害するタンパク質因子を精製し、ジャララカGPIb-BP、トカラセチン、フラボセチンA,Bと命名し、そのN末端アミノ酸配列を決定したところ、いずれも作用の全く異なるボトロセチン(vWF結合タンパク質)と高度の相同性を示した(Thromb. Haemost.(1995)74,743-750,Biochem. J,(1995)308,947-953、Biochim. Biophys. Acta(1995)1244,331-338)。ジャララカGPIb-BP、およびアルボアグレギン(AL)-Bの全アミノ酸配列の決定および構造・機能相関:上記ジャララカGPIb-BPとPengらが単離しているAL-Bの全アミノ酸配列を決定し、ボトロセチンなどの蛇毒タンパク質と比較した。又ジャララカGPIb-BPのα、β鎖を還元後分離したところ、そのβ鎖に活性が認められた。但し還元後S-アルキル化した場合、その活性は消失した(J. Biol. Chem.(1996),Biochem. Biophys. Res. Commun.(1996)(印刷中)。Bitiscetin(ビチスセチン)の精製と性質、並びに全アミノ酸配列の決定:ボトロセチン様活性タンパク質を、20種の蛇毒を用いて調べたところ、Bitisarietans蛇毒中に強い活性が検出された。これを完全に精製し、全アミノ酸配列を決定したところ、等電点9.1の塩基性タンパク質で、ボトロセチンとの相同性も45%と低い値が得られた(J. Biol. Chem.(1996)(投稿中)。血小板膜GPIb結合タンパク質の精製と性質: GPIbと結合し、フォンビルブラント因子(vWF)とGPIbとの結合を阻害する蛇毒タンパク質を精製し、それらの作用と部分構造を比較した。
中世中・東欧法史研究としてのザクセン・マクデブルク法研究

中世の中・東欧ではザクセン=マクデブルク法がひろく伝播した。本研究は、この法が通用していた地域で中心的地位を占めていたマクデブルクの参審人という団体について、その構成や歴史について検討し、また同法圏の重要な史料である『ハレ参審人文書』の校訂作業も併せて行っている。さらに、本研究では中・東欧法制史の重要性にも注意を向け、今後の研究への基礎を据える作業(文献蒐集等)も行った。本研究は中世中・東欧の法(文化)研究の端緒としてのザクセン・マクデブルク法についての研究である。その際、(1)ザクセン・マクデブルク法の形成・発展において重要な役割を果たしたマクデブルク参審人(団)についての研究、および(2)彼らが法教示を通して影響を与えた、ザクセン・マクデブルク法を受容した伝播先各国の都市法史についての研究状況の調査、が重要である。それによって、中世中・東欧都市法(文化)史の総合的理解の端緒を開くことが本研究の目的である。この目的に鑑みて、本研究では(1)に対応するものとして、マクデブルク参審人団研究、とりわけ(a)同参審人団のプロソポグラフィ的調査、(b)『ハレ参審人台帳』の校訂作業、加えて(2)に対応するものとしてザクセン・マクデブルク法伝播先各国の研究状況の調査、を行うことを計画した。このうち、平成25年度は(1-a)の作業として、内外の大学図書館・文書館での調査を行った。加えて、ザクセン=アンハルト州中央文書館所蔵の未公刊史料を基に検討を行い、参審人の経歴やローマ・学識法との関係について、本研究計画にとって鍵となる重要な新知見を得た。また、(1ーb)の作業として、『ハレ参審人台帳』の校訂に取り組んだ。これにより、マクデブルク参審人の影響下にある法廷での法実務について具体的な知見を得る史料的基盤を拡充することができた。(2)に関しては、本年度は中・東欧の文献を中心として網羅的に調査し、今後の研究に役立てるためのデータベース作成にあたった。本研究は、中世中・東欧の法(文化)研究の端緒としてのザクセン・マクデブルク法についての研究である。その際(1)ザクセン・マクデブルク法の形成・発展において重要な役割を果たしたマクデブルク参審人(団)についての研究、および(2)彼らが法教示を通して影響を与えた、ザクセン・マクデブルク法を受容した伝播先各国の都市法史についての研究状況の調査、が重要である。この目的に鑑みて、本研究では(1)に対応するものとしてマクデブルク参審人団研究、とりわけ(a)同参審人団のプロソポグラフィ的調査、(b)『ハレ参審人台帳』の校訂作業、加えて(2)に対応するものとして、ザクセン・マクデブルク法伝播先各国の研究状況の調査、を行うことを計画した。このうち、平成26年度は(1-a)の作業として、内外の大学図書館・文書館での調査を行った。とくにドイツ語圏の諸大学文書館の協力によって未刊行の大学学籍簿関連資料について調査を行い、前年度までの調査の補遺を行った。さらに新たに入手した史料をもとに、すでに調査済みの史料との照合・比較検討作業を行った。なお、国立文書館(ベルリン)での調査において、これまで知られていなかった、通説を修正する可能性が高い史料を発見した。また(1-b)の作業としては、『ハレ参審人台帳』の校訂に引き続き取り組んだが、未刊行部分である第6巻および第7巻の校訂作業をほぼ終え、ハレ史の裁判所における法実務の具体的な像を描くための資料が多く得られた。(2)に関しては、本年度は、大学図書館での資料調査をさらに進めることができた。本研究は中世中・東欧の法(文化)研究の端緒としてのザクセン=マクデブルク法についての研究である。その際、(1)ザクセン=マクデブルク法の形成・発展において重要な役割を果たしたマクデブルク参審人(団)についての研究、および(2)彼らが法教示を通して影響を与えた、ザクセン=マクデブルク法を受容した伝播先各国の都市法史についての研究状況の調査、が重要である。この目的に鑑みて、本研究では(1)に対応するものとして、マクデブルク参審人団の研究、とりわけ(a)同参審人団のプロソポグラフィ的調査、(b)『ハレ参審人台帳』の校訂作業、加えて(2)に対応するものとしてザクセン=マクデブルク法伝播先各国の研究状況の調査、を行うことを計画した。このうち、平成27年度は、最終年度として、これまでの調査活動を最終確認し、さらに補足的な史料調査を行うこととしていた。このうち(1-a)については、とくに今年度は、文書館において集中的に文書館調査を行い、史料の補完的蒐集を行った。これらの調査により、通説に大幅な修正をもたらす重要史料を発見した。また、(1-b)については、予定していた作業をおよそ終了させた。(2)については、先行研究について文献の蒐集を進め、そこで得られた史料・文献の批判的再検討の結果、より精確な情報を得ることができた。

こうした成果を論文として公表するべく作業を進めていたが、新史料が発見されそれを研究に含めるために、成果論文の公表自体は期間内に終了しなかった。しかし、論文そのものは近時公表予定であり、計画全体の最終像を損なうものではない。中世の中・東欧ではザクセン=マクデブルク法がひろく伝播した。本研究は、この法が通用していた地域で中心的地位を占めていたマクデブルクの参審人という団体について、その構成や歴史について検討し、また同法圏の重要な史料である『ハレ参審人文書』の校訂作業も併せて行っている。さらに、本研究では中・東欧法制史の重要性にも注意を向け、今後の研究への基礎を据える作業(文献蒐集等)も行った。平成26年度には、前年度行っていた作業の継続を主な課題としていた。1-aで挙げた作業については、更なる作業の結果、多くの新知見を得た。しかし、予想を超える新知見を得られた反面、そうした新知見を整理する作業に若干の遅れが見られ、結果として当初の目標設定を達成していない。1-bで挙げた『ハレ参審人台帳』の校訂作業については、大いに作業が進んだ。2については、図書館・文書館等での調査と並んで、ドイツ法制史家大会への出席をはじめとする研究者との情報交換の機会を利用し、大いに進展を見た。以上の進捗状況を総合的に評価して、研究計画はおおむね順調に進行していると考える。基礎法学平成27年度は、最終年度となる。過去二年度間における作業の補完を進めるとともに、主に、これまでの調査のとりまとめ及びその分析の最終的な作業にあたることになる。また成果を漸次、論文や報告等の形で公にすることを考えている。平成25年度には、史料調査を重点的に行う計画であった。とくに、ザクセン=アンハルト州中央文書館所蔵史料を中心とした史料解読を行うことを予定していたが、調査の結果、重要な新知見を得ることができた。『ハレ参審人台帳』の校訂作業についても、当初予定していた未校訂部分の検討に目途をつけることができた。中・東欧地域の文献調査についても、おおむね計画通りに進行している。以上の進捗状況より、研究計画はおおむね順調に進行していると考える。平成26年度は、初年度同様、計画通り研究を進めていく予定である。実質的な作業内容は、研究計画書にある通り、初年度に従事した作業の継続となる。また、すでに収集した情報を分析する活動に徐々に推移していく予定である。また、ザクセン・マクデブルク法の伝播先各国の研究状況の調査については、今年度はとくにドイツ法制史家大会の開催が予定されているため、関係各国の関連分野の研究者のとの意見交換により、この作業を加速できると考える。
インクレチン経路からみた小児メタボリック症候群治療介入の新展開

動脈硬化性疾患を中心とした生活習慣病の増加が懸念されているが、リスクファクターである成人肥満を減らすためには、小児期の肥満やメタボリック症候群へ早期から対応することが重要である。そこで、本研究では、食事摂取に伴い消化管から分泌されるホルモンであるインクレチンで最近、明らかにされた摂食・嗜好・味覚への作用(膵外作用)に注目し、今まで未解明であった、小児肥満・メタボリック症候群における摂食・嗜好・味覚などの脳・腸管経路の病態を明らかにすることにより、小児期発症メタボリック症候群への効果的な介入方法と適切な食事療法の根拠を得ることを目的としている。本年度は、まず、コホート研究として、健常小児と肥満小児において、味覚や食物嗜好の個人差と体格の関連を検討するために、本邦の小児肥満頻度についての調査を実施した。公表されているデータベースや小児や内分泌代謝疾患を扱う学術集会等で発表されている、小児肥満の一般集団に対する頻度を6歳18歳の階層別データとして集積し、調査を実施するための参考とした。併せて,経年評価の可能なデータベースを利用し、年次比較を実施した。小児肥満の頻度は、肥満度による判定では、男子では1112歳に、女子では15歳に最高値となり、それぞれ、男子12歳(11-13%)、女子15歳(8-11%)に小児期・青年期のなかでの最高値をとるとの報告が多かった。一方、小児期メタボリックシンドロームの頻度は、一般小児のなかで0.51%であるとの報告が多かったので、メタボリックシンドロームだけを対象とした味覚調査よりも、小児肥満を含めた検討の方がコホート調査として適切であることが明らかとなった。平成30年度については、コホート研究を先行させたので、それ以外のin vivo研究等については、実施準備の段階に留まった。この経験をもとに、次年度は研究内容をより具体化することを期す。コホート研究をさらに伸展させるとともに、in vivo研究、in vitro研究の推進を行う。ただし、平成30年4月の臨床研究法の施行により、in vivo研究の方法については、研究計画の修正が必要となる可能性があるので、慎重に検討を進める。平成30年度の研究は、主にコホート研究を主体とした。研究のためにかかる費用は、他のin vivo研究やin vitro研究に比して少ないため、今年度の使用額は予定より少額でした。次年度以降は、研究範囲の増加が見込まれているので、今年度からの繰越も含めて、補助いただいた金額を使用予定です。
腎尿細管・糸球体フィードバックにおける酸化ストレス作用の解明(副題:腎におけるトロンボキサン系と一酸化窒素系の機能および遺伝子発現と酸化ストレス)

1)分子生物学的検討:マクロファージは動脈硬化の病態に重要な役割を果たしていると考えらている。そこで、マクロファージにおけるトロンボキサン合成酵素(TXS)の遺伝子発現を特にPPARγとの関係から検討した。PPARγのリガンドであるPGJ2やトログリタゾンはTXSの遺伝子発現を抑制した。PPARγを強制発現させるとPPARγの遺伝子発現は抑制され、そのうえにPGJ2やトログリタゾンを加えると、遺伝子発現はさらに抑制された。5'-フランキング領域の分析により、PPARγの効果はNuclear Factor E2(NFE2)/Ap-1部位を含む領域であることが明らかとなった。トログリタゾンはインスリン感受性を改善するだけでなく、抗動脈硬化作用があると考えられているが、その作用の一部には、マクロファージおけるTXSの転写調節によることが考えられた。2)腎糸球体微小灌流実験:酸化ストレスはアンジオテンシンIIやトロンボキサンなど存在下で亢進することが知られている。酸化ストレスの亢進により一酸化窒素(NO)は破壊され、血管収縮や内皮障害が生ずる。我々はアンジオテンシンIIの作用がNO合成阻害薬により亢進すること、及び、高濃度のアンジオテンシンIIに見られる一過性の収縮が持続性になることを報告してきた。そこで、酸化ストレスを抑制するTempolのアンジオテンシンIIによる血管収縮作用に対する効果を検討した。TempolはアンジオテンシンIIによる血管収縮作用を抑制したのみならず、通常では持続性の血管収縮を起こす比較的低濃度のアンジオテンシンIIにおいても一過性の収縮となった。アンジオテンシンIIの作用の一部は酸化ストレスの亢進によるものと思われる。
『畸人十篇』とその朝鮮・日本における思想的影響に関する研究

本研究は、マテオ・リッチが中国人と行った対話を記録した『畸人十篇』について、その成立過程と思想内容を分析した上で、その朝鮮や日本に対する思想的影響について解明したものである。特に、該書の諸版本の異同に関する研究や明末刊本と清末刊本との異同に関する研究は、従来全く行われてこなかったもので、本研究の大きな成果である。また、思想内容としては、特に死生観をめぐってリッチと中国人との間で盛んな議論がなされていたことを明らかにした。更に該書の精密な現代語訳と詳細な注釈を行った点も、本研究の成果の一つと言える。『畸人十篇』とその朝鮮・日本における思想的影響に関して、本年度は以下のような研究を行い、成果を得た。。1前年度に引き続き、韓国、台湾及び国内に所蔵されている『畸人十篇』の版本や写本の調査を行い、諸本に収載されている序文の相違点や刊行時期、文字の異同などに関する書誌学的な研究を行い、従来不明であった点を明らかにした。また、『畸人十篇』を収載する『天学初函』の国内における現存写本を検討することによって、江戸期における明末天主教書籍受容の実態について解明することができた。2『畸人十篇』の内容分析を行うことによって、主要課題である死生観をめぐってどのような中西対話がなされているかということを明らかにした。また、死生観の問題が『天主実義』の内容とどのように関係するかについても解明した。さらに、『畸人十篇』の第五篇・第六篇の訳注の準備を行い、全文訳注への準備ができた。3本研究の成果を基にして、平成24年11月20日に台湾師範大学東亜学系において、「101学年度第一学期専題演講」として、「明末天主教與生死観」という講演を行い、研究成果の一部を公表することができた。4本研究の成果発表の一貫として、平成25年5月24日に東京で開催される「第58回国際東方学者会議」のシンポジウム「17-18世紀:西学東漸と東アジア」において、「明末天主教と死生観ー中西対話の底に流るるものー」と言う標題で発表を行うことが決まり、その準備を行った。本研究は、明末においてイタリア人イエズス会士マテオ・リッチが中国人と実際に行った対話を記録した『畸人十篇』について、その成立過程と思想内容を分析した上で、朝鮮や日本に与えた思想的影響について解明したものである。従来、平田篤胤に与えた影響などは注目されていたが、『畸人十篇』自体に対する研究はほとんどなされておらず、その意味で本研究が果たした役割と意義は大きいと言える。本研究では、先ず現存書の調査と検討を行うことによって、該書の出版過程を明らかにした。そうした書誌学的研究を経て、最終年度には明末刊本と清末刊本の異同について具体的に解明し、「明清刊本校勘表」を作成した。これは従来にない画期的成果の一つと言える。また、日本における該書の影響という観点から、『天学初函大意書』を取り上げて、最終年度には『畸人十篇』に関する部分の翻刻を行った。これも初めての試みである。本研究の目的の一つでもあった『畸人十篇』の訳注に関しては、第一篇から第四篇までの現代語訳と詳細な注釈を完成させることができた。これも本邦初訳であり、全篇が完成すれば、天主教思想史研究のみならず、平田篤胤研究に対しても多大な貢献を果たすことになる。また、最終年度には本研究の成果をもとにして、「国際東方学者会議東京会議」において「明末天主教と死生観」という標題で発表を行った。中西の「対話」の意義についての本発表は、従来にない新たな視点として注目され高い評価を受けた。発表内容は、刊行予定の『西学東漸と東アジア』の中に収載されるが、これも本研究の重要な成果の一つと言えよう。『畸人十篇』とその朝鮮・日本における思想的影響に関して、本年度は以下のような研究を行った。(1)台湾(国家図書館、中央研究院等)及び国内(内閣文庫、国会図書館、香川大学図書館等)に所蔵されている『畸人十篇』の版本や写本の調査を行い、刊行時期、序文の異同など書誌学的な研究を行った。(2)『畸人十篇』の重要な対話者の一人である徐光啓に関する資料を調査・収集し、当該対話の背景や内容の分析を行った。(3)『畸人十篇』と『天主実義』の関係性について、使用語句の異同等を中心として分析・検討を行った。

(4)以上の調査や分析・検討の成果を基にして、『畸人十篇』第一篇・第二篇の訳注(既発表)について、再検討と修正を行った。(5)以上の調査や分析・検討の成果を基にして、『畸人十篇』第三篇・第四篇の訳注を新たに行い、「『畸人十篇』の研究ー第三篇・第四篇訳注稿ー」という題の論文を、『哲学年報』第71輯に発表した。(6)平成23年11月4日に日本教育会館(東京都)で開催された東方学会のシンポジウム「朝鮮朝後期の社会と思想」の討論に参加して、『畸人十篇』の朝鮮における思想的影響を考察するための様々な知見を得た。『畸人十篇』の版本・写本の調査も順調に行うことができている。『畸人十篇』の内容分析に関しても、主題が明確になってきており順調に進展している。『畸人十篇』の訳注に関しては、第5篇・第6篇の訳注の準備ができており、おおむね順調に進展している。『畸人十篇』とその朝鮮・日本における思想的影響に関して、最終年度である本年度は以下のような研究を行う。1前年度までに調査を行うことができなかった『畸人十篇』の版本・写本の調査を行う。2『畸人十篇』の明版と清版との文字の異同に関する校勘表を完成させる。3『畸人十篇』の内容分析と訳注を完成させる。4以上を踏まえて、本研究の報告書を作成する。『畸人十篇』とその朝鮮・日本における思想的影響に関して、本年度は以下のような研究を中心として行う。(1)本年度実施できなかった韓国を始め、台湾及び国内に所蔵されている『畸人十篇』の版本や写本の調査を継続して行う。(2)関連資料の調査・収集・分析に努めると共に、特に『畸人十篇』と『天主実義』の関係性について、内容分析を行う。(3)『畸人十篇』第五篇以降の訳注を行う。『畸人十篇』の版本・写本の調査の一部が、所蔵機関の都合等で実施できなかったので残額が生じた。研究費の残額は調査旅費として使用する。本年度に実施できなかった韓国における調査など、引き続き版本の調査を行うために旅費を使用すると共に、関連資料の収集等のために物品費を使用する。また、文献の複写も継続して行うと共に、収集資料の整理等のために人件費・謝金を使用する。
中心市街地の新たな役割に着目した10万人都市の復興・再生プロセスの確立

本研究では、人口10万人の地方都市の復興・再生プロセスにおいて、中心市街地の新たな役割というテーマを設定し、都市変容過程と中心市街地の社会的資源を分析し、地域再生のプロセスとマネジメント手法についての考察を行った。その結果、都市の復興・再生プロセスに関して、2011年以降活発化した、個人や小規模な活動主体による事業や拠点の展開を把握し、中心市街地の役割を再定義した。また、市民主導の活動や事業と、行政施策に市民が応答することで生まれた活動・プロジェクト、双方の連携とネットワーキングにより展開した一連の運動領域などが判明し、都市固有のスケールと特性に合わせた社会的資源の蓄積が明らかになった。今年度は対象地域を選定し、分析フレーム・方法の検討を行い、代表的都市における関連データ、資料の収集と現地での実態調査、ヒアリング調査を集中的に実施した。また、これらの調査結果を踏まえ、中心市街地を取り巻く社会資源の分析と都市変容過程の解読、地域再生の土台を構成する環境と諸要素の関係分析を行った。具体的には、まず、以下の3つの都市群から、中心都市と周辺地域を含めた人口規模が10万人20万人程度の地域を研究対象候補地域として分類、整理した。A:東日本大震災により甚大な被害を受けた東北地方三陸沿岸部の都市(宮城県石巻市、気仙沼等)/B:東日本大震災により大きな被害は受けていないが、Aに類する東北地方の都市(山形県鶴岡市、福島県いわき等)/C:大都市圏、政令市に隣接する地域を除いた中部・中国・四国・九州地方の都市で、Aに類する都市(富山県高岡市、鳥取県鳥取市、広島県尾道市等)次に、これらの対象候補のうち、以下の3つの条件について基礎調査を行い、対象を絞り込む作業を行った。近代以降、都市基盤と産業構造が大きく変化した都市/人口減少が進みつつある都市/平成の大合併等により、一つの都市の中に旧市街と既成市街地、中山間地域など、複数の性格を持つエリアが包含された広域圏を持つ都市/近年、居住や社会的企業、地域再生に関して新たな動きが見られる都市。合わせて、対象地域における都市変容の分析を行うために、市街地変容と土地・建物、産業・事業所等に関する資料収集と、現地での実態調査を行った。最後に、2000年以降の約10年間における、中心市街地と広域における地域再生に関わる主体と事業、プロジェクト等に関する資料の収集と、ヒアリング調査を中心とした現地での実態調査を行い、地域再生の土台となる環境について分析した。今年度は対象地域において、中心市街地を取り巻く社会資源の分析と都市変容過程の解読、事業所と商店等の集積、中心市街地と広域における地域再生を行う主体・事業、に関する追加調査を実施した上で、昨年度作成したデータベースを修正し、これを用いた分析によって得られた知見をもとに、各地域で住民や活動主体との意見交換とヒアリング調査を行った。合わせて、各対象地域の市街地内の特徴的な地区を複数絞り込み、空き家を含む建物・街路・空地など空間ストックの時系列での変化と、建物用途・権利等の変遷の分析、関連資料の収集を行った。上記の詳細な分析と意見交換、ヒアリング調査等の対象地域として、宮城県石巻市、富山県高岡市、広島県尾道市を選定し、これら3地域との比較対象として、青森県八戸市、山形県鶴岡市、鳥取県鳥取市、鳥取県米子市を選定した。追加調査と分析、意見交換・ヒアリング調査の結果、市民主導の活動や事業展開と、行政の施策に市民が応答することで生まれた活動・プロジェクト、双方の連携とネットワーキングにより展開していく一連の運動領域などが判明し、これら3つの特性を持つ動きが重層する、10万人都市固有のスケールと市街地特性に合わせた社会的資源の蓄積の一端が明らかになった。最後に、これらの現象を1つのプロセスとして把握し、そのプロセスが持続的に展開するための条件や方法論について考察を行い、地域再生プロセスに向けた課題をまとめた。今年度は昨年に引き続き、宮城県石巻市、富山県高岡市、広島県尾道市の3つの対象地域において、中心市街地で蓄積された社会関係資本と空間変容、それをもとに派生した活動主体と拠点、プロジェクト群の詳細な分析を行った。また、初年度、2年度に実施した中心市街地の変容過程調査のうち、2000年以前の100年間の建物ストックと事業者、事業組織(商店街組合、同業者組合等)の変化についてのより詳細な調査を実施し、空間変容と社会組織の形成の関係を再度考察した。次に、昨年度解読した、市民主導の活動や事業展開と、行政の施策に市民が応答することで生まれた活動・プロジェクト、双方の連携とネットワーキングにより展開していく一連の運動領域に関しては、主要な活動主体(NPOやプロジェクト実行組織等)へのヒアリング調査とワークショップを継続的に実施し、中心市街地内の再生プロセスの定着と、中心市街地外の広い地域での新たな事業等の展開の両面から考察を進め、一定の成果を得た。その一方で、ケーススタディを継続的に実施している3つの地域から読み取った再生プロセスと事業・活動展開の普遍的意味の考察をもとにした、再生手法の確立に向けた知見のまとめについては、国内外の関連事例や第三者によるレビューの分析、再生論の整理、関連する統計データ等との照合などが必要であるが、まだ十分な作業と知見を得る段階には到達しておらず、次年度の研究項目とする。再生手法の確立に向けた知見のまとめについて、国内外の関連事例や第三者によるレビューの分析、再生論の整理、関連する統計データ等との照合などが必要であるが、今年度の期間中では、十分な作業を踏まえた知見を得る段階には到達していないため。

今年度も宮城県石巻市、富山県高岡市、広島県尾道市の3つの対象地域において、震災復興を含めた再生対象市街地と広域エリアの近年10年間の空間変容とコミュニティ形成、中心市街地での市民・民間セクターによるまちづくり活動、関連する行政施策を把握し、相互の関係について分析を実施した。市民主導の活動や事業展開と、行政施策に市民が応答することで生まれたプロジェクト、双方の連携とネットワーキングにより展開していく一連の運動領域に関しては、主要な活動主体へのヒアリング調査とワークショップを継続的に実施し、中心市街地内の再生プロセスの定着と、中心市街地外の広い地域での新たな事業等の展開の両面から考察を進めた。また、富山県高岡市においては、伝統工芸と製造業、観光に関連した民間・市民主導の事業、プロジェクトと中心市街地の空間変容の関係について、広島県尾道市においては、中心市街地衰退商業地区の空き店舗、併用住宅の実態と活用されていない歴史的建造物のビルディングタイプ(蔵、別荘住宅等)とその活用等に関連したまちづくり活動について、宮城県石巻市においては、震災復興事業で新たに建設された復興住宅と再建建物に関連した住民、商店主等のコミュニティ形成と非営利・市民セクター(NPO、一般社団法人)、社会的起業等の関係についてという、独自のテーマを設定し、10年間のプロセスと空間変容、社会組織の形成の関係を考察した。こうした活動の派生と関係性の定着は、いずれも後半の数年で多様化し、一定の集積が生まれていることが観測され、これらが中心市街地の今後の新たな役割につながるシーズであることが明らかになった。最後に、ケーススタディを継続的に実施した3つの地域から読み取った再生プロセスと事業・活動展開の意味の考察をもとにした、再生手法の確立に向けた知見のまとめを行い、本年度の主な研究成果である論文と書籍にまとめた。本研究では、人口10万人の地方都市の復興・再生プロセスにおいて、中心市街地の新たな役割というテーマを設定し、都市変容過程と中心市街地の社会的資源を分析し、地域再生のプロセスとマネジメント手法についての考察を行った。その結果、都市の復興・再生プロセスに関して、2011年以降活発化した、個人や小規模な活動主体による事業や拠点の展開を把握し、中心市街地の役割を再定義した。また、市民主導の活動や事業と、行政施策に市民が応答することで生まれた活動・プロジェクト、双方の連携とネットワーキングにより展開した一連の運動領域などが判明し、都市固有のスケールと特性に合わせた社会的資源の蓄積が明らかになった。当初予定していた海外都市との比較や、海外都市を含めた際のフレームワークや分析方法の検討が十分行えていないため。研究のまとめに向けて、最終年度では客観的なデータ分析やプロセス分析を十分に行い、対象地域における綿密な議論と合わせて、より深い知見を得ることに注力する。建築学・都市計画・建築計画今後の研究推進上の課題は、海外都市における地域再生状況と手法の整理、国内都市との比較のフレームワークを進めていくことと、今年度絞り込んだ対象地域で得た結果の詳細な検討、方法論の確立に向けた考察を進めていくことである。研究の枠組みの整理、研究対象の核となる都市の選定、関連資料とデータ収集のそれぞれが順調に実施できたため。
T細胞サブセット特異的な細胞膜ガングリオシド発現の機能的意義の解明

T細胞の分化過程においてどのようなガングリオシド分子種が発現し、それがT細胞免疫機能にどのような意義を持つのかよくわかっていない。GM3SとGM2/GD2Sの二重欠損マウス(DKO)を用いてT細胞の分化を解析したところ、DN3aステージで強く抑制されていることが判明した。このDN3aステージではガングリオシド発現が顕著に上昇し、それはTCRβの発現上昇と完全に一致した。DKOマウスにおけるTCRβ鎖の発現を確認したところ、コントロールに比べて顕著な発現の抑制が認められた。TCRβが発現するDN3aステージにおいてガングリオシド発現が上昇することがT細胞の分化にとって重要であることが判明した。25年度では、まずT細胞の分化過程におけるガングリオシドの発現パターンを解析した。マウス胸腺細胞を分化系列マーカー、コレラ毒素(Gal-(SA)-GalNAc-Gal構造を持つガングリオシドを認識)にて多重染色を行った。その結果、ガングリオシドはDN3ステージ(CD4-CD8-CD44-CD25+)で急激な発現上昇が起こり、DP(CD4+CD8+)で発現を低下させた後、CD8SP(CD4-CD8+)で顕著な増加を示した。また、ガングリオシド合成酵素遺伝子の欠損マウスを解析すると、T細胞分化はDN3aステージで著明に抑制されている。この欠損マウスの胎児肝臓由来造血幹細胞をin vitroにてT細胞に分化誘導したところ、やはり分化は抑制されていた。このことは、in vivoにおけるDN3aステージの分化抑制は胸腺環境の異常ではなく、T細胞系列の未分化細胞の異常によることを示している。以上より、T細胞成熟過程におけるユニークなガングリオシド発現パターンはT細胞分化において重要な意義をもつことを示唆している。また、ヒトT細胞におけるガングリオシド発現をLC/MS解析したところ、主要な分子種はGM3であり、さらにGD3も発現していた。さらに、脂肪酸側鎖の長さとしてC18が主要であった。今後は、T細胞活性化後やアレルギー喘息患者T細胞においガングリオシド発現がどのように変化するかを捉えたい。ガングリオシド欠損マウス(GM3SとGM2/GD2Sの二重欠損マウス)では胸腺におけるT細胞の分化がDN3(double negative 3)で停止することを既に見出している。また、前年度の成果より、T細胞分化の停止の原因が、胸腺の支持組織の機能異常ではなく未熟T細胞自体に障害があることを解明した。今年度はガングリオシドを欠損した未熟T細胞にどのような障害があるかを検討した。DN3のステージでは、TCRb遺伝子の再構成が起こることが知られており、本欠損マウスにおいてTCRの発現の有無を解析したところ、TCRの発現が顕著に低下していることを見いだした。従って、ガングリオシドを欠損したとき、TCRの再構成に障害が及ぶことにより、T細胞の分化が停止することが示唆された。また、ガングリオシド生合成阻害剤を用いてヒト末梢血T細胞の機能におけるガングリオシドの役割の解析を試みた。抗原刺激を施したヘルパーT細胞はTh1,Th2,Th17などの機能的サブセットに分化することが知られている。ヒトナイーブヘルパーT細胞におけるガングリオシドの生合成を阻害したところ、Th1の分化は抑制された。一方、非常に興味深いことにTh2への分化は促進されるという結果を得た。すなわち、ナイーブT細胞がTh1とTh2に向かう分化を選択する際に、細胞膜ガングリオシドの存在が重要な要素となっていることを示唆するものである。現在、この分化に選択に対してガングリオシドを基盤とした細胞膜脂質ドメインのシグナル伝達を解析しているところである。糖鎖免疫学概ね予定通り進捗しており、現在、大きな問題はない。T細胞分化におけるガングリオシド発現の意義については、欠損マウスで認められた未熟T細胞の分化障害の分子メカニズムを解析する。T細胞分化では分化シグナル、増殖シグナルおよび生存シグナルのバランスが重要であることから、種々の受容体シグナルや分化に必須の転写因子の活性化を検討していく。また、喪失したガングリオシドを補充することにより、分化能が回復するか否かを検討する。また、アレルギー喘息におけるT細胞ガングリオシド発現の意義については、東北薬科大病院との打ち合わせを重ねており、正常T細胞とアレルギー喘息患者あるいは薬物治療後緩解患者T細胞におけるガングリオシド発現を解析する。また、ガングリオシド発現を抑制することによって、患者T細胞の異常な活性化を制御できるか検討していく。

また、喪失したガングリオシドを補充することにより、分化能が回復するか否かを検討する。また、アレルギー喘息におけるT細胞ガングリオシド発現の意義については、東北薬科大病院との打ち合わせを重ねており、正常T細胞とアレルギー喘息患者あるいは薬物治療後緩解患者T細胞におけるガングリオシド発現を解析する。また、ガングリオシド発現を抑制することによって、患者T細胞の異常な活性化を制御できるか検討していく。以上を遂行するために次年度も予算が必要となった。実験用動物の購入、実験試薬および器具の購入、DNAマイクロアレイ外部発注、研究成果の発表おおび論文投稿に使用する予定である。
イネの節における選択的ミネラル分配機構の解明

イネ科植物は「節」において複数の維管束系を著しく発達させ、根から吸収した無機栄養素の新葉や種子への優先的な分配を実現しているが、その分子機構は解明されていなかった。本研究ではイネ節で働く亜鉛、銅、マンガンの輸送体タンパク質を同定し、元素毎に異なる特徴的な分配様式に大きく寄与していることを明らかにした。これらはイネ科植物の生長戦略上の重要な新知見であるとともに、穀物の生産性・安全性・栄養価の向上に応用できる。イネ科植物は「節」において複数の維管束系を著しく発達させ、根から吸収したミネラルの発達中の器官や穀粒への優先的な分配を実現しているが、その分子機構はほとんど解明されていない。本研究ではイネの節においてFe, Zn, Mn, Cuなどのミネラルの分配に関わるミネラル輸送体遺伝子を複数種類同定し、その機能と節における役割を解明する。本年度は、節におけるマイクロアレイ解析等の結果、高発現していることが明らかになったミネラル輸送体候補遺伝子、OsNramp3、OsHMA2、OsYSL16について、Tos17やT-DNA挿入による破壊株などを用いた機能解析を行った。Mn輸送体のOsNramp3は節において肥大維管束木部の木部転送細胞と分散維管束篩部の双方で発現し、蒸散流からのMnのアンローディングと新葉や穂へとつながる維管束の篩部への再ローディングを担っていることを明らかにした。OsHMA2とOsYSL16については、節においては主に篩部に発現し、それぞれZnとCuの選択的分配に寄与していることを明らかにした。節のミネラル分配機構において重要な役割を果たすと考えられる肥大維管束周縁部の木部転送細胞における遺伝子発現の制御機構を明らかにするため、木部転送細胞に高発現するケイ酸輸送体Lsi6の推定プロモーター領域のデリーションクローン4種類にGFPレポーター遺伝子をつないだ形質転換イネを作成した。しかし、抗体染色法によってGFPレポーターの発現部位を調査したところ、予想に反して4種類のいずれにおいても、組織特異性が失われていた。そこで、Lsi6の構造遺伝子領域を含むコンストラクトや、Lsi6と同様に木部転送細胞で高発現するOsNramp3のプロモーター領域を用いたコンストラクトの再設計を行い、形質転換イネのGFP発現部位の再調査を行ったところ、組織特異性の部分的な改善が見られた。前年度に引き続き、節において高発現しているミネラル輸送体候補遺伝子の解析を行い、本年度はOsNramp3について、T-DNA挿入破壊株およびRNAiによる発現抑制株を用いてより詳細な解析を行った。OsNramp3は、栄養成長期の基部節および生殖成長期の上位節のいずれにおいても、肥大維管束木部と分散維管束篩部の双方に発現していた。遺伝子発現レベルは環境中のマンガン濃度の変動によって影響を受けなかったが、タンパク質レベルでは、マンガン欠乏条件では細胞膜に局在していたのに対して、過剰のマンガンを与えると数時間程度で速やかに小胞に取り込まれ分解された。これらの働きにより、OsNramp3は欠乏条件では限られたマンガンを新葉や穂へと優先的に分配し、過剰条件では蒸散量に応じて下位葉へとより多く分配するスイッチとして機能することを明らかにした。節のミネラル分配機構において重要な役割を果たす肥大維管束木部転送細胞における遺伝子発現の制御機構を明らかにするため、木部転送細胞に高発現遺伝子(Lsi6、OsNramp3)のプロモーター解析を行った。約2kbpまでの上流配列、イントロンを含むゲノム領域、3'UTRについてもコンストラクトを作成し形質転換イネにおいてレポーター遺伝子の発現を確認した。節以外においては内在の遺伝子と同様の発現様式を示したが、節では本来とは異なる組織局在が見られ、節では何らかの特異的な遺伝子発現制御が行われていることが示唆された。前年度に引き続き、節におけるマイクロアレイ解析等の結果、高発現していることが明らかになったミネラル輸送体候補遺伝子、OsNramp3、OsHMA2、OsYSL16について、Tos17やT-DNA挿入による破壊株などを用いた機能解析を行った。