hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
線維筋痛症における小胞体ストレスを介した疼痛制御機構の解析

線維筋痛症(FM)は全身性の強い慢性疼痛を主訴とする疾患である。発症原因は不明であり、根本的な治療法の確立されていない。我々はFMにおける小胞体ストレス分解、ミトコンドリア機能に注目してきた。本研究では神経特異的シノビオリン欠損マウス、FMの病態モデルマウスを作製また患者よりリンパ球を分離し、これらを用いて個体内での病因・病態解析を目的としている。臨床においてFM様の病態を引き起こすことが示唆されているワクチンを用いてモデルマウスの作製を試みたところ、尾の緊張および運動協調性低下を示すマウスが得られた。またFM様の症状に視床下部の機能が関与していることが示唆された。本研究室にて構築している検体バンクを用いて線維筋痛症患者由来のRNAを調整し、患者内での関連因子の発現解析を行いデータが得られている。またモデルマウスである神経特異的シノビオリンノックアウトマウスの組織サンプルを作製し組織学的解析も進めている。作製したワクチン投与による線維筋痛症モデルマウスを用いて、脳内における炎症およびミトコンドリアの形態・機能の解析を行う。マウスの脳よりタンパク質およびRNAを抽出して、シノビオリンおよび疼痛、小胞体ストレス関連因子の発現解析を行う。行動解析を行い疼痛との関連を検討、さらにシノビオリン阻害剤を用いて効果を検討する。別の線維筋痛症モデルと考えられる脳特異的シノビオリンノックアウトマウスにおいても同様の解析を行う。また患者検体を用いて関連遺伝子の発現解析を行う。分子生物学1患者検体におけるシグナル伝達系の解析FM患者においてミトコンドリア不全が報告されている。まず患者検体でミトコンドリアの変化とシノビオリンの関与を検討する。患者PBMCを電子顕微鏡で観察しミトコンドリアの数・形体異常を調べる。次に、ミトコンドリアの制御に関与する因子の検討を行う。患者PBMCにおいてシノビオリンの基質でありミトコンドリアの量を調節しているPGC-1βの発現量が変化しているかどうか、タンパク質RNAレベルで検討する。2モデルマウスを用いたFM病態解析神経特異的シノビオリンノックアウトマウスの脳における関連因子の発現量の解析を行う。Syn-cKOにおいて基質であるGABA受容体および、FMと関与が示唆されている神経伝達関連因子(電位依存性Ca2+チャネル、TSP-1など)の発現を検討する。Syn-cKOの脳からタンパク質およびRNA、タンパク質レベルおよび組織免疫染色を行う。またタンパク質の凝集があるかどうかユビキチン化タンパク質の量も調べる。当該年度の研究費残高不足により支払いを翌年度にしたため。当該年度の研究費残高不足により支払いを翌年度に先延ばししたため28年度研究費と合算し支払い予定である。27年度の研究費と合算し支払い予定である
運動の統計的理解と動力学に基づく適応的確率ロボティクス

本研究計画一年目においては、中心的課題として基礎となる、高次元時系列の分節化の問題に取り組んだ。議論を重ねた結果、VAE(変分オートエンコーダ)とガウス過程を同時に用いた効率的な分節化が可能になり、トップ国際会議への投稿も済んだ段階である。本成果はロボティクスに留まらず、センサーデータの解析を必要とする多くの分野に共通する有用な成果であり、今後展開についても考えていきたい。一方で、本計画において次の重要な技術的要素である動力学についても、定期的な全体打ち合わせの中で議論や論文紹介、チュートリアルなどを行い、ガウス過程と統合するための理論的な目処をつけることができた。一年目においては、実際に作業を行う学生の手が少ないという問題があり、実装には至らなかったが、二年目から学生が数名新たに参加する予定があり、実装へと移ることのできる理論的な基礎を築いたという点で、充分な成果があったといえる。三番目および四番目の柱である動作の統計および、言葉による動作の制御については一年目の主要な課題ではなく、特に分担者の小林研究室に担当学生がいなかったこともあって、二年目からの開始となる予定である。また、今年度において、本計画の研究成果は動物学における動物の行動分析に応用することに成功し、現在国内学会への論文は執筆済み、英文論文を準備中である。上記の「研究実績の概要」に鑑み、おおむね研究計画通りに、順調に研究を進めることができた。上記の「研究実績の概要」にある通りであるが、特に二年目からは学生が増えるため、二番目以降の研究の柱についても随時実装を進め、国際会議への投稿と論文化を進めていきたいと考えている。また、高次元の時系列の分節化についてはすでにジャーナル論文も投稿済みであり、修正作業を行っている段階である。
高令者のQOL向上を目的とした身体指標特に末梢循環動態指標の探索について

高齢者の末梢皮膚血流量の低下の改善は看護目標の一つであるが、その指標となる具体的な方法をレーザードプラー血流計を用いて探るのがこの研究の目的である。方法は、65才から97才の男女合計49名において、手背中央部の末梢皮膚血流波形をレーザードプラー血流計にて皮膚表面から非侵襲的に測定し、日常生活動作の容易さや入浴前後での変化との関連で比較、検討した。分析はテープに記録した血流波形をAD変換してコンピューターに取り込み、周波数分析等を行うことにより定量的に行った。記録された波形を定性的に検討したところ、血流状態が悪化していることを反映していると解釈されている"small waves"や"missing"タイプが半数以上を占め,ADL不良群にその傾向がより強かったが、不良群にも血流が豊富なものが認められ、一見した重症度だけでは判断できないことがわかった。周波数分析で定量的に処理した結果では、脈拍に一致する1Hz/sec前後にピークを持つ成分とそれより遅い成分(1)、(2)、(3)が検出された。(1)は0.3Hz/sec前後、(2)は0.1Hz/sec前後、(3)は0.03Hz/sec前後であった。(1)は呼吸に一致すると思われる群、(2)は交感神経による血管運動調節によると思われる群であった。ADL良群と不良群とを定量的に比較すると、良群では脈拍成分に対する遅い成分の割合が高かった。ADL良群10名において入浴前後の比較をすると、入浴後は脈拍成分と遅い成分の両者共に増加傾向がみられた。しかし、中には増加傾向のみられない例もあり、個人差があることがうかがえた。レーザードプラー血流計を用いた測定を定量的に扱うことにより上記のことが導かれ、高齢者の末梢皮膚血流の状態がより具体的に示されたと考える。高齢者の安静時の末梢皮膚血流動態を調べるため、特別養護老人ホーム入所中の65才から90才の男女合計50名において、手背中央部の皮下1mm半球内の血流波形をレーザードプラー血流計にて測定した。コントロールとして20代女性10名の同部位の血流波形も測定した。測定器のタイムコンスタントを操作することにより、脈拍に一致した波形の変動及び脈拍と関係のない大きなゆっくりとした波形の変動を観察した。記録された波形を末梢動脈閉塞性疾患患者にてScheffler等が分類した“aperiodical"“sinoidal"“small waves"“missing"の4つのタイプにあてはめて検討したところ、20代女性においては良い血流状態を反映していると解釈されている“aperiodical"タイプが80%以上であったのに対し、高齢者では“aperiodical"タイプは稀にしか観察されず、多くが血流状態が悪化していることを反映していると解釈されている“small waves"や“missing"タイプであった。ただし、高齢者でも“aperiodical"タイプを維持している者があり、ADLや手指の巧緻性等との相関をさらに調べているところである。身体の血行をよくするような行為の結果、高齢者における安静時の末梢皮膚血流の乏しさが改善されるかどうかを観察するため、入浴前後の血流波形を記録し比較した。多くの例で血流が改善していると解釈される波形を示したが、中には全く影響がないと解釈されるタイプの者もあった。

本年度は入浴の条件(シャワーのみか否か、湯船につかっている時間、湯温、外気温等)、入浴後の経過時間等との関連づけが不十分であったので、今後その点を注意し、皮膚血流をより改善するにはどのような条件が必要なのか、個体によっては皮膚血流が改善することはないのか等についてさらに研究する予定である。高齢者の末梢皮膚血流量の低下は、加齢に伴う諸障害の一つの要因と考えられているが、その詳細は明らかではない。そこで65才から92才の男女合計50名において、手背中央部の末梢皮膚血流波形をレーザードプラー血流計にて皮膚表面から非侵襲的に測定し、日常生活動作の容易さや入浴前後での変化との関連で比較した。コントロールとして20代女性10名の同部位の末梢皮膚血流波形も測定した。分析はテープに記録した血流波形をAD変換してコンピューターに取り込み、周波数分析等を行うことにより定量的に行った。記録された波形を末梢動脈閉塞性疾患患者にてScheffler等が分類した4つのタイプにあてはめて検討したところ、20代女性においては良い血流状態を反映していると解釈されている“aperiodical"タイプは80%以上であったのに対し、高齢者では日常生活動作が比較的良いものでも50%以下、寝たきり者や準寝たきり者では10%前後であり、その他は血流状態が悪化していることを反映していると解釈されている“small waves"や“missing"タイプであった。周波数分析の結果では、高齢者では脈拍に一致する1サイクル前後の群、呼吸に一致すると思われる0、4サイクル前後の群、および交感神経による調節を示していると思われる群が検出された。比較的ADLの良い状態の高齢者の入浴前後の比較では、交感神経による調節に相当する周波数群の血流量に上昇がみられるケース、脈拍に一致した周波数群の血流量に上昇がみられるケースがあることがわかった。入浴後は血流が改善していると解釈される波形を多くのケースが示したが、中には全く影響がないと解釈されるケースもあった。今後動脈硬化による血管そのものの物理的な変化と、心機能や神経による調節機能などの機能的な変化の要素を区別しつつさらなる検討を重ね、高齢者のQOL向上に結びつく指標を取り出したいと考える。
メトリック・エントロピー法の統計的応用

時間の経過にしたがって変化するデータを記述する数学的モデルにおいて,データのモデルへのあてはまりの度合いを検証する問題を「適合度検定」という.それをおこなうための統計量の分布は,一般には陽に求めることはできないが,観測期間が長いときには,標準ブラウン運動の汎関数で近似することができる.このような状況を「漸近的分布不変」という.本研究の主たる成果のひとつは,さまざまな統計モデルにおいて,そのような統計量の構成に成功したことである.時間の経過にしたがって変化するデータを記述する数学的モデルにおいて,データのモデルへのあてはまりの度合いを検証する問題を「適合度検定」という.それをおこなうための統計量の分布は,一般には陽に求めることはできないが,観測期間が長いときには,標準ブラウン運動の汎関数で近似することができる.このような状況を「漸近的分布不変」という.本研究の主たる成果のひとつは,さまざまな統計モデルにおいて,そのような統計量の構成に成功したことである.前年度までに得ていた確率場の弱収束理論を応用して,tick timeサンプリング・スキームのもとでの拡散過程の適合度検定問題を解決した.非線形時系列の適合度検定問題に対して,きわめて一般的な仮定のもとで良好な結果を得た.丸められたデータに対する二標本問題において,丸めの影響が小さくなるための十分条件を見いだした.この結果によりKolmogorov-Smirnov検定統計量を丸められたデータに対して使用して良いための条件がはっきりした.エルゴード的拡散過程の不変測度の推定問題において,連続観測の場合と同じ収束率・同じ漸近分布になるような推定量の構成に成功した.結果として,提案した推定量がLe Cam理論の意味で漸近有効であることが従う.これにより,不変測度の推定問題において実用的な推定量が初めて提案されたことになる.生存解析で重要な平滑化Nelson-Aalen推定量の一様収束率の研究を行った.以上の研究は全て一様距離のもとでの弱収束理論の応用であり,研究計画を着実に実行できてると言える.ところが,一様距離のもとでの弱収束を証明することが困難な問題が存在することも判明した.これに対してヒルベルト空間におけるマルチンゲール中心極限定理を証明するという,研究計画を越えたきわめて有意義な研究成果が得られた.その最初の応用として,エルゴード的拡散過程の離散観測のもとでの適合度検定問題を新たなアプローチで考察した.この研究をさらに発展させていく予定である.無限次元空間上の手法を用いた統計解析を発展させるにあたって,ヒルベルト空間に値を取るマルチンゲールに対する中心極限定理を改良・証明した.完全正規直交系との内積の条件付き期待値の収束に加えて,ノルムの条件付き期待値の収束が満たされていれば,緊密性が成立することを発見した.それを拡散過程の適合度検定や変化点問題に応用した.特に,変化点問題に関しては,Fisher-Score Process法が確率過程モデルに非常に適用しやすいことを見いだし,従来より研究していた確率場の弱収束理論を援用して,計数過程モデルを含むさまざまなモデルに対して同様の結果を得た.他にも,カーネル推定量の一様収束率の研究や,L_2空間における弱収束に関する予想の否定的解決などを行った.射影推定量の漸近的L_2誤差が真の分布に依存せずに与えあれることを発見した.丸め誤差の扱い方の研究などを行った.ノンパラメトリック変化点問題に対し,ランクに基づく新しい検定統計量を提案した.それは漸近的分布不変であるばかりでなく,サンプル数を固定しても分布不変になるというメリットをもつ.コンピュータ実験による妥当性も確かめた.マルチンゲール理論に基づく統計解析の研究を始める方(主として,理工系の大学院生)のための教科書の大部分を執筆した.同書は2011年9月に刊行予定である.これまで主として独立同一分布列の場合に研究されてきたメトリック・エントロピー法を,より一般的なマルチンゲールの場合に発展させ,その統計的応用を産み出す研究を行ってきた.昨年度まででメトリック・エントロピー法の理論研究は終了し,本年度は,統計的応用の部分を研究した.成果の一つ目は,拡散過程の適合度検定のための新しい統計量を提案し,その漸近分布を導出するとともに対立仮説のもとでの一致性を証明した.証明の際に,独自の弱収束理論を援用した.漸近分布はブラウン運動のsupであり,解析的に計算が可能であるという利点をもつ.二つ目は,エルゴード的拡散過程の不変分布の分布関数や密度関数の推定量を構成し,その汎関数の意味での漸近正規性と漸近有効性を証明した.そのようなことは連続観測のもとでは可能であることが知られていたが,高頻度データの基づいて構成したのは世界初であった.三つ目は,カーネル型の密度推定量が,L2空間の中で弱収束するのではないかという重要な予想を,否定的に解決した.四つ目は,変化点の有無をノンパラメトリックな枠組みで検定するための統計量をランクに基づいて構成し,その性質を詳しく調べた.特に,漸近的に分布不変であるだけでなく,サンプルサイズを止めても分布不変であることが判明した.また,変化点が複数ある場合にも対応できる.これらの理由により,実用的に大きな意味をもつ.
遺伝子操作によるC_3植物の二酸化炭素固定能の増強

1.トウモロコシの維管束鞘細胞特異的なホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ(PCK)遺伝子はtransit peptideを持つトマトrbcs-3C Promoter配列下流に連結して、これを用いてタバコを形質転換された。2.形質転換したタバコ植物のPCK遺伝子の発現と位置はNorthernとWestern解析を通じて確認した。その活性も測定・確認した。3.形質転換によって葉のサイズ、葉の新鮮重、茎の太さと植物の高さの増加に観察される植物生長が促進された。この結果はT2植物に再現された。4.形質転換タバコ植物の葉緑素含有量も増加し、光合成活性も高光強度と高CO2濃度の条件で増加することを示した。5.形質転換タバコ植物の成熟葉の澱粉、Sucrose、GlucoseとFructoseの含有量増加を観察した。そして、成熟葉のアミノ酸の含有量も測定したところ、Aromaticアミノ酸の含有量が増加している。これは形質転換タバコ植物では二次代謝が促進されることによるのかもしれない。6.Synechococcus vulcanusの野生種、部位特異性変異ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ(PEPC)とトウモロコシC4型のPEPC遺伝子を35Sプロモーターの制御で、タバコ植物に導入した。組み換えタバコ植物のPEPC遺伝子の挿入と発現はRT-PCRで確認した。しかしながら、組み換えタバコ植物のPEPC遺伝子の発現量はNorthernとWesternの分析によっては検出できなかった。7.もう一つの新規代謝回路(C1回路)は遺伝子操作によるC3植物光合成活性の増強のため、開発できるかもしれない。1)ゲートウェイベクターpH2GW7を用いて、次の遺伝子を挿入した植物形質転換用DNAコンストラクトを作成した。それらは、ZmPEPC(トウモロコシC4型ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、PEPC)、SvPEPC(好熱性ラン藻のPEPC)およびSvK(889)S-PEPC (SvPEPCに変異を導入したもの)である。このベクターは選択マーカーとしてはハイグロマイシン耐性(Hyg-r)をもつ。これらの遺伝子が正しくCaMV35SプロモーターとNosターミネーターの間にクローニングされていることおよび全塩基配列の確認をおこなった。2)トウモロコシの維管鞘細胞特異的なホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ(PCK)のcDNAはすでに共同研究者である田茂井と重岡(近畿大学)によって、トマトのrbcS遺伝子のプロモーターおよび葉緑体へのトランシットペプチドの下流につなぎ、バイナリーベクターのpBI121に挿入されたものが構築されていたが、塩基配列に問題があったため、もう一度確認し、一部修復をおこなった。このベクターの選択マーカーはカナマイシン耐性(Km-r)であるため、1)のベクターとの二重の形質転換が可能となった。3)上記のDNAコンストラクトをアグロバクテリウムpMP90株に導入し、コロニーハイブリダイゼーションによって確認した。これを用いて、アラビドプシス(コロンビア株)の形質転換を行い、さらにこの植物は小さすぎて光合成の測定などが容易でないため、タバコ(キサンチ株)の形質転換もおこなった。4)PCK遺伝子を導入したアラビドプシスとタバコの形質転換株の作出に成功し、ノザンハイブリダイゼーションによってその発現を確認した。ZmPEPC, SvPEPC, SvK(889)S-PEPCを導入した両植物の作出を完了し、現在発現を解折中である。
聴覚再生に向けた内耳有毛細胞発生の基礎研究

初年度に予定していたSfrpの発現解析、および2年目に計画していたSfrpノックアウトマウスの交配についての経過報告を以下に示す。実験計画の中断に伴う実質的な研究期間は2014年4月同年8月14日である。Sfrpの発現を、in situ hybridizationにより解析するとともに、Sfrpと同様にWntシグナルを阻害する遺伝子であるDkk1についても解析を進めた。発生段階の内耳において、Sfrp1は胎生11日目頃より発現を開始し、胎生1213日目には外側半規管および蝸牛の予定領域に発現する。Sfrp2は前庭の極めて狭い領域で発現し、1113日胚の蝸牛では発現を認めなかった。Sfrp3 (Frzb)は、耳胞周囲の間葉組織で発現しており、この部分は1314日目にかけ軟骨形成、それに引き続く骨形成を経て骨迷路を形成する部位である。Sfrp5の発現は今回調べた1113日胚では確認できなかった。Dkk1 (Dickkopf1)について、12日胚においてそのリガンドであるDkk1の発現を調べた。Dkk1はSfrp1の発現領域と一部オーバーラップし、蝸牛予定領域の狭い範囲で発現がみられ、前庭では発現していなかった。また、三次元再構成を行うソフトウェアを購入した。Sfrpノックアウトマウスの交配についてはマウス系統を維持している発生再生医学分野の動物室を継続して使用した。FVBをバックグラウンドとするこの系統の多重ノックアウトマウスは攻撃性が強く繁殖が困難であり、戻し交配を検討している。
アイデア創出における専門家と非専門家による協働の有効性の研究

本研究は、イノベーションに携わる組織を想定し、有効な発想をする環境や手法の実践的な知見を得るために、特定の技術に関する専門的知識を持つ専門家と、それを持たない非専門家の協働が、イノベーションに有効に働くという仮説を検証する。技術の用途開発において、専門家は抽象的かつ詳細な思考を行うのに対し、非専門家がより広い空間で拡散的かつ具体的なアイデアを出すことが示されている。本研究では専門家と非専門家がアイデア生成時に想起した知識の共有を統制する実験を通じて、非専門家と専門家によるアイデア創出の協働が探索と開発にとって本当に有効であるのか、また、どうしたら専門家のアイデアが拡散的になるかを調査する。
ペルオキシソーム形成因子群の構造と機能の解明

本研究では、多くのペルオキシソーム形成因子(ペルオキシン)のうち、ペルオキシソーム移行シグナル1(PTS1)受容体Pex5pの膜状ドッキング因子Pex14pのN-末側領域、Pex14p(25-70)の結晶構造解析に成功した。この領域は、3個のヘリックスからなるドメイン構造をもち、突出したPhe-35およびPhe-5が近傍の塩基性アミノ酸残基とで形成する結合部位(Sites 1 & 2)にPex5p N-末端領域側のペンタペプチドモチーフ、WXXXF/Yがすっぽりはまり込む構造をとっていることを、初めて見出した。また、膜形成に必須なPex3pは、Pex19pとシトゾールで複合体を形成、膜上のPex16pへ局在化されることにより、ペルオキシソームの膜形成が始まることを発見した(Class II pathway)。本年度は以下の研究項目に取り組み、分子・原子レベルでの成果を得ることができた。1)ペルオキシンの発現・精製・大量調製技術に関する研究ペルオキシソーム移行シグナル1(PTS1)の受容体であるペルオキシンPex5pとその膜状ドッキング因子であるPex14pの結合部位を含むN-末側領域Pex14p(25-70)の大量調製に成功した。2)ペルオキシンの結晶化と立体構造に関する研究上記Pex14p(25-70)の結晶化に成功、結晶構造解析を行った結果、3個のヘリックスからなるドメイン構造を明らかにした。さらに、生物種間で最も保存性の高いPhe-35およびPhe-52が溶媒側に突出ており、近傍の塩基性アミノ酸残基とで形成する結合部位(Sites1&2)にPex5p N-末端領域側の複数存在するペンタペプチドモチーフ、WXXXF/Yがすっぽりはまり込む構造をとっていることを見出した。3)ペルオキシンの機能解析系の確立に関する研究4)ペルオキシソーム膜タンパク質の輸送と膜形成機構ペルオキシソーム膜形成過程の解明は重要課題の一つである。ペルオキシソーム膜形成には、ほ乳類細胞ではペルオキシンPex3p、Pex16p、およびPex19pが必須である。先に、Pex19pとPex3pの機能に関しては、Pex19pはシャペロン活性を有し新規合成ペルオキシソーム膜タンパク質と細胞質ゾル中で複合体を形成、安定化させ,膜上のPex3pをレセプターとして輸送・局在化させ、膜形成が起きること(Class I pathway)を、我々を含めいくつかのグループは見出している。我々は、今回Pex19pが同様に新規合成Pex3pと細胞質ゾル中で複合体を形成、膜上のPex16pをレセプターとして輸送,局在化させることにより、ペルオキシソームの膜形成が始まることを発見した(Class II pathway)。1)ペルオキシソームマトリックスタンパク質の輸送・局在化機構の解明ペルオキシソーム移行シグナル1(PTS1)受容体、Pex5pの膜状ドッキング因子Pex14pのN-末側領域、Pex14p(25-70)の結晶構造解析に成功、3個のヘリックスからなるドメイン構造を昨年明らかにした。現在、Pex14pのN-末端領域(アミノ酸配列20-70)の詳細な構造を明らかにすべく、その発現・精製と結晶化を試みている。同時に、その単量体-2量体間(Pex14p-Pex14pおよびPex14p-Pex5pすなわちホモおよびヘテロ2量体)変換の分子形状を明らかにした。2)マトリックスPTS2-タンパク質の輸送機構:プラスマローゲン生合成酵素、ADAPSをはじめペルオキシソーム局在化シグナルPTS2タンパク質のPTS2受容体Pex7pを介したペルオキシソームへの無細胞輸送系の確立に成功、PTS1受容体Pex5pおよびPex7pはATP非依存的にインポートされること、Pex5pとPex7pは化学量論的にそれぞれ異なった様式でペルオキシソーム膜上タンパク質輸送装置複合体間を遷移することなど、その基本的分子機構をほぼ明らかにした。今後、構造生物学的解析に取り組む予定である。3)ペルオキシソーム膜タンパク質の輸送と膜形成機構4)エーテルリン脂質プラスマローゲンの生合成調節酵素の同定プラスマローゲンの生合成の制御機構に関して、i)ペルオキシソーム膜蛋白質であるfatty acyl-CoA reductasel(Farl)が、プラスマローゲン合成中間産物であるalkyl-DHAP産生に必須な長鎖アルコールを産生する酵素である;ii)

プラスマローゲンの生合成は生合成経路の中間産物ではなく、最終産物であるプラスマローゲンによって調節される;iii)この調節は、細胞内プラスマローゲン量依存的なFarlの安定性調節を介した活性制御によって達成されている、ことを見出した。これらの知見は、リン脂質ホメオスタシスに関するまったく新しい発見として、高く評価されている(J. Biol. Chem.誌に"Paper of the Week"として掲載された)。本年度は以下の研究項目に取り組み、いくつかの新たな知見を得、一層の進展を図ることができた。1)ペルオキシソームマトリックスタンパク質の輸送・局在化機構の解明a)新規pex5 CHO変異株ZPEG241の解析:PTS1受容体,Pex5p[S型とL型(S型内部に37アミノ酸の挿入配列)が存在]のうち、PTS2タンパク質輸送に関わるPex5pLの特異的37アミノ酸配列のN-末側上流7アミノ酸配列の必須性が新規に単離したpex5 CHO変異株ZPEG241により、明らかになった(Honsho et al.2011)。b)Pex26pによるPexlp-Pex6p複合体のリクルート機構:Pex26pはN-末側領域をサイトゾルへ配向したII-型ペルオキシソーム(Ps)膜タンパク質であり、サイトゾル側領域でAAA ATPaseであるPex1p-Pex6p複合体をPsへとリクルートする役割を持つ。Pex1pとPex6pのPs膜上への局在化機構を解明するため、セミインタクト細胞を用いたin vitro targeting assay系を構築した。この系による解析結果から、Pex1pはATP加水分解依存的に、またPex6pはATP結合依存的にPsへ局在化することが明らかとなった。Pex1pおよびPex6pはATPの有無によりプロテアーゼ耐性が変化することから、ATPaseサイクルを通して構造変化を起こし、かつこの構造変化が局在化に必須であるものと推察された。さらに、Pex26pの機能に重要であると思われるアミノ酸配列領域を同定した(Nashiro et al.2011)。2)ペルオキシソーム欠損細胞の酸化還元状態解析レドックス変化を検知できる蛍光分子プローブ(レドックスフロール)を用いて、ペルオキシソーム形成障害性・欠損性変異細胞(CHO変異細胞)および正常細胞とのレドックス状態を検討の結果、変異細胞では細胞質が非常に還元的状態であることを見出した(Yano et al.2010)。この発見は、ペルオキシソーム形成障害性疾患の統合的理解に繋がるものと期待される。3)PPARの核-細胞質間輸送機構:核局在化シグナルNLS)の同定ペルオキシソームの誘導制御機構解明の一環として、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体(PPARα)のNLSの同定に成功した(Iwamoto et al.2011)。DBD-Hinge領域内アミノ酸残基144-187に存在する2つの塩基性アミノ酸クラスターをNLSとして見出し、かつPPARαのimportinα/β依存的輸送を明らかにした。
宇宙で成長したタンパク質結晶の構造解析と分子機能の解明に関する研究

スペースシャトルを利用して宇宙の微小重力環境の下で蒸気拡散法により酵素タンパク質ニワトリ卵白リゾチームを結晶化し、タンパク質結晶成長に対する宇宙の微小重力の影響について構造生物学的観点から考察した。リゾチームの空間群の異なる3種類、5種の単結晶(単斜晶、斜方晶(20°C及び37°C)、正方晶(pH4.7及びpH9.1))について宇宙並びに地上で結晶化し、X線結晶構造解析により得られた結晶学的データと分子構造を比較した。宇宙の結晶はX線結晶学的に良質で、分解能の高い高精度の反射データを収集することができた。結晶格子のサイズは宇宙と地上で僅かに差異が認められたが、分子パッキングに相違はなく、分子構造自体にも宇宙と地上の結晶構造の間で本質的に顕著な差異はなかった。特に、斜方晶系に属する結晶では、宇宙と地上に関係なく、結晶化したすべての結晶について結晶内分子配列に同一の分子配置を有するユニットが認められた。しかし、タンパク質分子に結合した水の分布については保存性の高い結合水は3分子しか同定できなかっただけでなく、格子内の分子間水素結合の形態や数に相違が認められた。これらの事実は、結晶成長が地上と宇宙で同様のメカニズムで進行すること、そして、宇宙の微小重力はタンパク質分子の構造自体には影響を与えないが、タンパク質分子間の相互作用に影響することを示唆している。実験を行った宇宙の微小重力場では重力が地球の10^<-3>10^<-4>に減少するのに対してタンパク質分子表面の電荷の強度は両環境の間で殆ど変化しない。従って、タンパク質分子表面の物理的特性、すなわち、分子表面の電荷の分布や強度が微小重力場における結晶核生成時のタンパク質分子間相互作用に対して、地上に比べて重要な意味を持ち、微小重力場では分子配列の良好な結晶核(モザイク度の少ない結晶)が生成することによってX線結晶学的に良質の単結晶が得られると推察した。スペースシャトルを利用して宇宙の微小重力場でニワトリ卵白リゾチームの結晶成長実験を実施した。3種類の結晶化条件のうち、正方晶と単斜晶の条件で結晶化に成功し、現地(米国、UAB)でこれら2種類の単結晶についてX線回折実験を行い、回析データを収集した。その結果、これまでの宇宙実験の中では最も精度の高いデータ(正方晶:1.6Å、単斜晶:1.7Å)を得ることができた。タンパク質結晶成長に対する宇宙の微小重力場の影響をX線結晶学的観点から解明するため、構造解析を行い、地上のデータと比較した。主鎖の温度因子や結晶内の分子間相互作用について僅かに差異が認められたが、いわゆる、宇宙で晶出した単結晶の高い結晶性やモザイシティの低さを説明できるような証左は得られなかった。宇宙の単結晶の方が地上の単結晶に比べてX線結晶学的に良質のデータが得られる理由として結晶内の分子配列が広範囲にわたって正確に配向していることが予測されるが、これを示唆する結果としては結晶のパッキングエネルギーの中でタンパク質分子表面の静電相互作用が最も大きなエネルギーとなっていることが挙げられる。タンパク質構造そのものは両者の間に差異は認められなかった。スペースシャトルを利用して宇宙の微小重力環境の下で酵素タンパク質ニワトリ卵白リゾチームを結晶化し、タンパク質結晶成長に対する宇宙の微小重力の影響について構造生物学的観点から考察した。リゾチームの空間群の異なる3種類、4種の単結晶(単斜品、斜方晶(20°C及び37°C)、正方晶)について宇宙並びに地上で結晶化し、X線結晶構造解析により得られた結晶学的データと分子構造を比較した。

結晶格子のサイズは宇宙と地上で僅かに差異が認めちれたが、分子パッキングに相違はなく、分子構造自体にも宇宙と地上の結晶構造の間で本質的に顕著な差異はなかった。しかし、タンパク質分子に結合した水の分布については保存性の高い結合水は3分子しか同定できなかっただけでなく、格子内の分子間水素結合の形態や数に相違が認められた。このことは宇宙の微小重力はタンパク質分子の構造自体には影響を与えないが、タンパク質分子間の相互作用に影響することを示唆している。実験を行った宇宙の微小重力場では重力が地球の10^<-3>10^<-4>に減少するのに対してタンパク質分子表面の電荷の強度は両環境の間で殆ど変化しない。従って、タンパク質分子表面の物理的特性、すなわち、分子表面の電荷の分布や強度が微小重力場における結晶核生成時のタンパク質分子間相互作用に対して、地上に比べて重要な意味を持ち、微小重力場では分子配列の良好な結晶核(モザイク度の少ない結晶)が生成することによってX線結晶学的に良質の単結晶が得られると推察した。
頭頸部扁平上皮癌多段階発生におけるNiban遺伝子の機能解析

Nibanの機能はいまだ未知な部分が多い。我々は、マウス頭頸部癌モデルを作成し発癌各段階で腫瘍のサンプルを採取しパラフィン包埋した組織切片をヒトと同様に作成し、Nibanの免疫組織染色を施行した。結果、マウス切片でも、ヒトと同様にNibanの発現を認めた。次にNibanが分子標的薬セツキシマブの標的となりうるのかEGFRとNibanの免疫組織染色を比較検討した。口腔癌症例でEGFRとNibanの免疫組織染色を施行したところ細胞内局在の相違により癌細胞における役割は異なりNibanがセツキシマブの効果判定因子になる可能性が低いことが示唆された。Nibanはヒトでは、正常腎臓組織に発現していないが、ヒト散発性腎癌での発現が認められており、同遺伝子の機能は未知であるが、ストレスタンパクの一種と推定されている。我々は、頭頸部扁平上皮癌を用いてNibanの機能解析を行っているが、NIbanの機能解析として実際の頭頸部扁平上皮癌症例からのみの検体提供ではなく、多くの検体を得るため、頭頸部扁平上皮癌のマウスモデルを作成した。雌のヌードマウス(BALB/cAJcl-nu/nu)が7週齢で約22gとなった時点で、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株、KB細胞を継代培養した癌細胞をPBSに溶解し1.0×10 8乗個/mlの濃度とし、細胞液0.1mlをツベルクリン用注射器および27ゲージ注射針を用いてマウスのオトガイ部に移植し、移植後14日目にマウスを屠殺し、舌・口腔底の腫瘍や頸部リンパ節・肺・肝臓・脾臓などとともに摘出、摘出した組織片はすべて緩衝ホルマリン液で固定を行い、以後は通法に従いパラフィン包埋後に厚さ4μmの切片を作成しH-E染色を行い光学顕微鏡的に発癌、浸潤、転移の有無を確認した。癌が確認された切片に対し、NibanのN末ペプチドに対する、ウサギ抗ヒトNiban抗体を用いてEnVision+System-HRP法にて免疫組織化学染色を施行したところ、口腔癌モデルの原発巣や転移巣でも扁平上皮癌にNibanの有意な染色が認められ、正常組織には染色されなかったため、ヒト扁平上皮癌症例と同様の結果であり有効な組織モデルと考えられた。頭頸部癌患者は日本のがん罹患全体でも比較的稀であり、一般的にはなじみの低い疾患である。それらを考慮して、ヒト頭頸部癌症例からの検体は当施設でも限られた検体量となっておりヒト頭頸部扁平上皮癌検体のみではなく、効率よく研究を進めるために、マウス頭頸部癌の実験モデルを作成した。継代培養を行っているヒト口腔癌扁平上皮癌細胞株であるKB細胞を細胞密度が8.0×106細胞/mlに調整しヌードマウスのBALB/c-nu/nuの舌縁に26G針で移植し、観察を続け、各段階の口腔癌モデルを作成し腫瘍のサンプルを採取し冷凍およびパラフィン包埋保存している。それにより前癌病変から進行癌までの細胞・組織を容易に採取することが可能になった。更にそのパラフィン包埋組織より切片を作成しNiban遺伝子の免疫組織学染色を施行したところヒトの組織と同様の染色状況を示し移植した癌細胞株でも発癌の過程でNibanが発現していることの証明ができた。Nibanの機能解析は、MDアンダーソンがんセンターでも研究されており、Haitao Jiらは、人の肺癌細胞と脳腫瘍であるglioblastoma細胞に紫外線で外的ストレスを与えNibanの機能解析を行った。その結果フリーなMDM2が増加し、がん抑制遺伝子であるp53と結合することによってp53を分解する。p53が分解され、その機能が抑制されることにより、細胞のアポトーシスが阻害された。EGFRの機能も、細胞のアポトーシスの抑制や腫瘍内の血管新生にも大きく寄与している。頭頸部癌でもセツキシマブが承認され、今後は分子標的治療が更に広まることが予想される。そこでNibanもEGFRと同様に分子標的治療導入時の腫瘍マーカー的な役割を保持していないか、ヒト口腔癌切片でEGFRとNibanの免疫組織染色を比較検討してみたが、染色部位、染色程度ともに異なる結果であった。耳鼻咽喉科学頭頸部扁平上皮癌のマウスモデルの作成に比較的時間を要してしまったこと、思うように頭頸部癌検体の収集が行えなかったことが遅延の大きな要因となっている。さらにタンパク機能解析に関しては適切な機能解析実験を選択するため慎重な実験系の確立に時間を必要としている。マウスモデルを有効に活用し、実際の頭頸部癌症例と合わせて病変部および非病変部から核酸を抽出しNiban遺伝子の発現解析を行う。

各種組織学的、免疫組織化学、電子顕微鏡学的検索および遺伝子・タンパク質解析法を組み合わせて総合的に検索することにより、preneoplasticな状態から発癌に至る過程におけるNiban発現と、その役割関係を明らかにする。頭頸部扁平上皮癌のマウスモデルの作成に比較的時間を要してしまったこと、思うように頭頸部癌検体の収集が行えなかった。マウスモデルを有効に活用し、実際の頭頸部癌症例と合わせて病変部および非病変部から核酸を抽出しNiban遺伝子の発現解析を行う。適時年度計画を見直しつつ支出計画の確認を行う予定である。
ヘリウム・水素同位体照射下におけるプラズマ対向材料の動的リテンション特性

本研究は水素同位体及びヘリウム照射下における各種プラズマ対向材料の動的リテンション特性についての基礎的かつ系統的なデータを取得し、ITERやLHD等の各種大型装置が長時間放電時に生じうる問題点を明らかにし、関連する研究者に必要な知見を提供することを目的として行った。動的リテンション特性を十分に解析するための要衝は材料中に形成されるナノレベルの欠陥の挙動にある。本課題研究においては、ダイバーター環境下でのタングステンの使用を考慮し、1273K以上の高温領域におけるヘリウム照射効果に関する基礎的な知見を得ることを目的とした。この温度領域においては、従来までに制御された照射研究はほとんど行われておらず、その学理の解明に必要なデータが非常に少ない。具体的には1273K以上の温度でヘリウムイオン照射後、材料内に形成される微細損傷組織を透過型電子顕微鏡(TEM)を用いることによって観察した。得られた代表的な結果を以下に示す。(1)照射温度が高くなるにしたがって、バブルの密度が低下した。この現象は、ヘリウムバブルの安定核形成効率の低下及び形成されたバブルがブラウン運動などにより試料表面から脱離可能な温度領域にあることに起因している。(2)1473Kでのバブルは球形ではなく角張った形状を示した。したがって、この時のバブルの圧力は平衡圧よりも低く、バブル中のヘリウム濃度は1273K照射の場合に比べてかなり低くなっている。(3)照射温度の上昇に伴い、粒界部でのバブルの成長がより顕著になり、特徴的な形状・配列が現出する。これは、照射温度の増加に伴い、粒界部における空孔の捕獲効率が上昇していることを示している。(4)1473Kにおいて形成されたバブルは少なくとも注入領域の3倍(200nm程度)にまで存在していた。このことは、原子空孔とヘリウムが多量に拡散していき、深部においてもキャビティの核形成およびその成長が行われることに起因する。本研究は水素同位体及びヘリウム照射下における各種プラズマ対向材料の動的リテンション特性についての基礎的かつ系統的なデータを取得し、ITERやLHD等の各種大型装置が長時間放電時に生じうる問題点を明らかにし、関連する研究者に必要な知見を提供することを目的として行っている。動的リテンション特性を十分に解析するためには材料中における基本的な水素同位体の保持・放出特性が重要になる。今年度は特に遷移金属材料中にキャビティ(三次元的な空洞)が形成された時における重水素の保持・放出特性に注目した研究を行った。Fe-9%Cr二元系合金に対して4keVの重水素イオンを照射したところ、室温照射下ではキャビティの形成は一切見られないのに対し、573Kで照射すると多量のキャビティが観察されるようになる。この時、キャビティの内部に重水素分子が含まれていることがTDS実験より明らかになった。しかしながら、アルミニウムやベリリウムと比べ、その内部に含まれる重水素分子は極めてすくない。Fe-9Crにおけるキャビティ中に含まれる重水素分子は照射されたイオンの数%以下に過ぎない。一方,キャビティを形成後に室温で重水素を追照射した試料においては多量の重水素が保持されるようになった。しかしながら、重水素分子として放出される量は依然として極めてすくない。このことは,追照射によって試料中に導入された重水素原子がキャビティの内部に分子化して捕獲されるようなことがほとんどないことを示している。したがって、この状況下におけるほとんどの重水素はキャビティの壁、すなわち、キャビティとマトリックスとの界面に原子状で捕獲されていると考えられる。
都市の形態と景観

イスラムの都市性について、その形態と景観を学際的交流を通じて研究することにした。都市を屋根、壁面,舗石などの形態要素に分解し、その複合体としての住戸、モスク、市壁、広場などの景観構成要素について考察し、形態と景観その多重的構造として把えようとするものである。イスラム都市の特性を明らかにするため、イスラム圏以外の都市の形態と景観と比較、対照して明確にしたいとかんがえている。以上の視点にたって、今年度はその第1年度として、長野、東京、京都の三地点で研究交流の集会をもった。長野では、善光寺門前町を実地に踏査し、都市空間の理解の認識座標をえることにつとめた。同時に研究者がそれぞれ、パキスタン、カシュガル、インドネシア、トルコの都市について紹介した。ひきつづいて、東京では、G班、都市のコスモロジーと共同研究会をもち、都市の形態と景観についてそのコスモロジーの関連について討議した。京都での集会では、本年度C班の集結の研究集会として、パキスタンのイスラム都市-ムルタンとラホール-で、イスラム都市にみる基層文化と外来文化としてのイスラムについて考察し、前回にひきつづいてカシュガルについて18-20世紀の都市の復原的考察をすすめ、ヤルカンドと対照して考察した。また、トルコのイスラム都市の構造を都市図をもとにして考察し、日本の都市との対比的考察をすすめた。また、パキスタン北部地域のフンザ、西北辺境州のノウグラムなどの集落と聖廟建築に関する実地調査による報告を特別参加の形で行った。イスラム都市の形態と景観に関する研究の第一歩をかためることができた。来年度はこの成果の上に、宗教聖域論のもとに再開発をすすめている天理市、門前町琴平を対象として調査し、イスラム圏の都市の宗教空間と対比して考察したい。同時に東京および箱根で共同研究集会をもつことにしている。
四国地方外帯を特徴づける上部地殻内低比抵抗領域とその成因に関する研究

本研究は、これまでの四国地方における地殻比抵抗構造研究の総括として、四国地方外帯を特徴づける低比抵抗領域の存在形態を明確にするとともに、その成因を考察することを目的とし、そのために(1)これまで未調査地域である四国地方西部地域において広帯域MT調査を行うとともに、(2)比抵抗境界と構造線の関係が特に着目される中央構造線周辺で精密構造探査を行い、さらに(3)既存のデータに対しても再解析を行うことで、より精度の高い2次元構造解析を行うことを3本の柱とした.(1)に関して、四国地方西南部の山間部を除いて、合計10地点で観測を行った.その結果、特にデータの質の高い外帯下の2次元構造解析から、上部地殻内に数ohm-m程度の比抵抗値を持つ低比抵抗層が存在することを確認し,同時に下部地殻の比抵抗値の下限およびプレート上面深度およびプレートの比抵抗値の下限に関する知見を得た.(2)に関して、自然の電磁場を用いて広帯域のMT測定を行い、far remoter eference法によるノイズ処理を行ったが、誤差の少ない探査曲線を得ることはできなかった.ただし、夜間の短い時間帯ではあるが、時系列上での磁場・電場の対応が見られるデータを取得したので、他のノイズ処理を施すことにより探査曲線が改善される可能性は高い.(3)に関しては、東部15地点・中央部15地点・西部10地点のMTあるいはGDSデータの再解析を始めたところである.その予察的な結果によると、四国地方の地殻比抵抗構造の最大の特徴は、「内帯・外帯の地質構造区分にほぼ対応するように、内帯ではみられない低比抵抗領域が、外帯では上部地殻内に一様に存在し、その比抵抗境界(中央構造線)は地殻深部にまでおよぶこと」であることが再確認されつつある.このことは同地方東部でのネットワークMT法観測のデータとも整合的であり、今後、両者の統合解析が求められる.本研究は,四国地方外帯を特徴づける低比抵抗領域の存在形態を明確にするとともに、その成因を考察することを目的としている。平成9年度は、(1)未調査地域である四国地方西部地域において広帯域MT調査を行い、四国地方の面的データの充実をはかること、(2)既存のデータに対しても再処理(局所的な電場擾乱の除去)を行うことで、より精度の高い2次元構造解析を行うことを中心に研究を進めた。以下に概要を記す。1.広帯域MT調査地域:四国地方西部において愛媛県松山市(1点)・東宇和郡城川町(2点)・上浮穴郡久万町(2点)小田町(1点)柳谷村(2点)の計8点の観測点を設定し広帯域MT測定装置を用い観測を行った。2.観測点の選定には注意を払ったが、中央構造線沿いの3点のデータは都市部から人工ノイズの影響を強く受けている。夜間の測定値を数多くスタッキングするなど、測定値の精度向上をはかる必要がある。3.それ以外の5点のデータ(いずれも秩父帯上にある)を用いてTE・TM両モードを用いた二次元構造解析を行った.その結果、(a)上部地殻内に数ohm-m程度の比抵抗値を持つ低比抵抗層が存在する,(b)下部地殻の比抵抗値の下限は100ohm-m程度である,(c)プレート上面深度およびプレートの比抵抗値の下限は150から250ohm-m程度であることが明らかになった。4.これらの結果とこれまでの中央部・東部の成果から、四国地方における比抵抗構造の特徴として、上部地殻内に普遍的に低比抵抗層が存在することならびに、地殻深部構造は深度を増すに従い徐々に高比抵抗になることが示された。5.既存データに対する再処理として、東部・中央部のデータのデータベース化を行った。6.本研究の成果は、98年5月末の地球惑星化学関連学会において2編の論文(「四国地方西部における地殻比抵抗構造に関する研究」・「中国・四国地方の電気比抵抗構造と活断層の関連について」)として報告させて頂きます。本研究は、これまでの四国地方における地殻比抵抗構造研究の総括として、四国地方外帯を特徴づける低比抵抗領域の存在形態を明確にするとともに、その成因を考察することを目的とし、そのために(1)これまで未調査地域である四国地方西部地域において広帯域MT調査を行うとともに、(2)比抵抗境界と構造線の関係が特に着目される中央構造線周辺で精密構造探査を行い、さらに(3)既存のデータに対しても再解析を行うことで、より精度の高い2次元構造解析を行うことを3本の柱とした.(1)に関して、四国地方西南部の山間部を除いて、合計10地点で観測を行った.その結果、特にデータの質の高い外帯下の2次元構造解析から、上部地殻内に数ohm-m程度の比抵抗値を持つ低比抵抗層が存在することを確認し,同時に下部地殻の比抵抗値の下限およびプレート上面深度およびプレートの比抵抗値の下限に関する知見を得た.(2)に関して、自然の電磁場を用いて広帯域のMT測定を行い、far remoter eference法によるノイズ処理を行ったが、誤差の少ない探査曲線を得ることはできなかった.ただし、夜間の短い時間帯ではあるが、時系列上での磁場・電場の対応が見られるデータを取得したので、他のノイズ処理を施すことにより探査曲線が改善される可能性は高い.(3)に関しては、東部15地点・中央部15地点・西部10地点のMTあるいはGDSデータの再解析を始めたところである.

その予察的な結果によると、四国地方の地殻比抵抗構造の最大の特徴は、「内帯・外帯の地質構造区分にほぼ対応するように、内帯ではみられない低比抵抗領域が、外帯では上部地殻内に一様に存在し、その比抵抗境界(中央構造線)は地殻深部にまでおよぶこと」であることが再確認されつつある.このことは同地方東部でのネットワークMT法観測のデータとも整合的であり、今後、両者の統合解析が求められる.
血球貪食症候群における包括的治療法確立に関する研究

遺伝性および続発性の血球貪食症候群/血球貪食リンパ組織球症(HLH)に対する包括的治療戦略について検討した。遺伝性HLHには、根治療法としての非血縁臍帯血移植の有用性とその課題を明らかにした。一方、続発性のうち最も重症なEBウイルス関連と新生児単純ヘルペスウイルス関連には早期免疫調節の有効性を実証した。特にEBウイルス関連には、感染細胞を同定して基礎疾患となる免疫不全症を除外する必要がある。血球貪食症候群/血球貪食性リンパ組織球症(HLH)のうち、遺伝性HLH(FHL2-5など)とウイルス関連HLH(EBV-HLHほか)の診断と治療について検討した。遺伝性HLHでは、FHLに対する非血縁臍帯血移植の方法について全国規模の多施設調査を行い、骨髄非破壊的前処置の有用性を示してその至適強度について報告した(Int J Hemaol 2013)。顆粒異常を呈するChediak東症候群の臨床像を検討し、HLHの合併について調査した(Pediatr Blood Cancer 2013)。ウイルス関連HLHでは、全国調査からEBV-HLHの予後因子を検討し、早期の免疫調節療法がとくに初感染小児例に有用で、成人例よりも予後良好であることなどを明らかにした(Pediatr Blood Cancer 2014)。重症エンテロウイルス関連HLHの新生児例を経験し、その適正治療について報告した(J Infect Chemother 2013)。予後不良で遺伝性HLHとの鑑別が困難な新生児ウイルス性HLH(単純ヘルペス及びエンテロウイルスなど)に対する新たな抗サイトカイン療法の開発が必要である。HLHをおこす亜急性壊死性リンパ節炎患者の末梢血リンパ球の遺伝子発現パターンから、リンパ腫関連HLHと鑑別する方法を提唱した(J Clin Immunol 2013)。日本ではHLHの早期診断が進み、新生児、乳児の症例が増加してきた。これらの問題点について韓国血液学会にて招請講演を行った。造血幹細胞移植の適応、これに至るまでの抗腫瘍薬(etoposideなど)を使用しない免疫調節療法、さらに移植前処置の適切な軽減について、更なる検討が必要である。血球貪食症候群/血球貪食性リンパ組織球症(HLH)のうち、遺伝性HLH(FHL2-5, XLPなど)とEBウイルス関連HLH(EBV-HLH)の治療法について検討し、本邦における造血細胞移植(HCT)後HLHの疫学調査を行った。また、HLHと鑑別が問題となるいくつかのウイルス感染症例を経験して報告した。FHLに対する非血縁臍帯血移植の成績向上はわが国の大きな成果であるが、これを全国規模で集積し、乳児期における骨髄非破壊的前処置の至適強度について解析し報告した(Am J Hemaol 2012)。FACSによるスクリーニング法が向上したことにより、最近乳児期早期の診断例が増加している。このような例には非放射線前処置が望ましいが、実際には海外でも晩期生着不全が問題となっている。中枢神経病変が主体の非定型FHLに対する移植適応、移植後混合キメラの問題が、今後の課題となることを経験した。EBV-HLHについては20年間の自験例の病態と予後因子を検討し、etoposideを使用しない早期の免疫調節療法が約60%の初感染小児例に寛解をもたらすこと、近年年長児の初感染EBV-HLHが増加していること、さらに成人例の予後が不良であることを報告した(Pediatr Blood Cancer 2012a)。HCT後HLHの全国調査(Pediatr Blood Cancer 2012b)から、生着反応との鑑別が難しく生着不全を起こさない免疫制御療法の確立が必要とされる。今後、抗体療法を用いた細胞傷害性薬剤を使用しない包括的治療戦略を探索することが重要と考えている。血球貪食症候群/血球貪食性リンパ組織球症(HLH)のうち、続発性HLHの重症型に対する診断と治療について検討した。ウイルス関連によるものではEBウイルス関連(EBV-HLH)について全国調査から予後因子を検討し、初感染CD8陽性T細胞感染型の小児例では早期の免疫療法が有効で、成人例より予後良好であることを示した(Pediatr Blood Cancer 2014)。全身型単純ヘルペスウイルス感染関連(HSV-HLH)の新生児においても同様に抗ウイルス剤と併用した早期の抗サイトカイン療法の有用性を確認した(Am J Perinatol 2015)。さらに、EBV初感染・再活性化が関連する重症薬疹でもHLHに進展する前段階で免疫調整療法が有用であることを示した(J Microbiol Immunol Infect 2014)。重症川崎病にHLHの前段階であるマクロファージ活性化症候群を合併することがあるが、心嚢液を有する重症型ではTNFαを介した炎症機転の制御が重要であることを報告した(Scand J Rheumatol 2014)。近年、EBV血症を持続しHLHをおこすいくつかの新しい原発性免疫不全症が発見された(臨床血液2014)。