hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒルベルト空間上の非有界作用素の超有限次元行列による表現の研究

超有限次元行列環によるII_1型因子環の構成はすでに成功している。そこでIII型因子環の構成が問題になるが、Powers因子のIII型構成を見てみると、増大する行列環の作るC^*-環上に適当な状態4を考え、その4によるGNS-表現を考えている。この方法をまねてIII型因子が構成できるであろうと考えられているが、そこにはいくつかの難点があることが判明した。それはまず、超有限次元行列環(今これをMとする)上に適当な状態4を定めるのは実に容易に出来るが、その4により出来る零空間N_4={χ_tMl4(χ+χ)【similar or equal】0}が両側イデアルになるための必要十分条件が、4とトレース状態τが同値になるということであるという結果を得た。これは結局4が両側イデアルになるのは本質的にII_1型を構成する場合に限られることを意味しており、III型の場合はII_1型のように単純にいかないことがわかった。また、状態4がKMS状態であれば、Powers因子の場合と同様な議論が可能であるが、先の結果は実は4がKMS^4状態ではないということも示しているので、GNS表現を考える場合でも、従来にはなかった新しい方法論が必要となる。III型構成は比較的楽観視されていたが、このように、その陰にいくつもの困難のあることが判明した。しかし、難点がわかったことは大きな進歩であり、今後の研究の方向性を定める助けにもなった。
矯正治療時に生じる歯根吸収のRANKLシグナルとTNF－αシグナルの関連性

平成24年度は以下の結果が得られた。重度歯根吸収者のGCF中のTNF-α発現量は非吸収群の者と比較すると明らかな差が認められた。また、矯正力を加えたマウスの歯根吸収部位においてTNF-α陽性細胞の増加を認めた。さらに、hPDL cellsにおいて、4.0g/cm2のCFを負荷し、24時間後までのTNF-αのmRNA発現を経時的に確認したところ、すべての時間において有意にその発現が増加していた。特に、1時間と9時間における発現量は著しく増加していた。さらに9時間における1.0 g/cm2と4.0 g/cm2負荷時のTNF-αのmRNA発現を比較すると、4.0 g/cm2ではその発現量は有意に増加していた。さらにhOCP cellsにおいてCFを負荷した上清を作用させた群で破骨細胞形成が促進された。また、それらはTNF-αの抗体により抑制された。本研究の結果、GCF中のTNF-αの発現は歯根吸収群において明らかな差が認められた。In vivoにおけるマウス歯牙移動モデルでは、対照群と比較して25gの矯正力を加えた群は歯根吸収が認められ、吸収部位にはTNF-α陽性細胞の増加を認めた。さらに、In vitroにおいて過度な圧迫刺激によりhPDL cellsのTNF-α発現が有意に増加し、産生されたTNF-αは破骨細胞分化を誘導した。本講座ではhPDL cellsが過度な圧迫刺激によりRANKLとTNF-αを誘導することを報告していることから、歯根吸収の発生にはRANKLとTNF-αの両者が破歯細胞の活性化に関与していると考えられる。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
韓国の倭城(日本式城郭)が、大坂城再築と韓国慶尚南道の城郭に与えた影響

平成16年度の金海竹島倭城日韓合同測量調査の成果を踏まえ、日韓の城郭研究者を大阪市内に集め、朝鮮の役における軍事文化交流史を中心とした国際シンポジウムを開催した。シンポの名称は「韓国の倭城と大坂城」で、2日間にわたり基調講演1本60分、研究発表11本各45分、討論120分を実施した。倭城築造の朝鮮の役は15921598年で、豊臣秀吉の大坂築城(1583年開始)と徳川幕府大坂城再築(1620年開始)の中間に位置し、秀吉晩年の三の丸築造(1598年開始)と併行することから、1倭城から秀吉の大坂城を復元するヒントが得られる、2時期が限定された倭城の石垣の検討から、徳川氏大坂城に至る矢穴の変遷がたどれる、3日韓の研究者で討着することにより、役による城郭技術の相互交流の実態について共通認識が得られると考えた。また最近の発掘調査を発表の中に盛込んで討論に幅をもたせた。すなわち三の丸の掘は江渡洋氏、亀渡・金梅竹島両倭城は泰東注氏、徳川氏の東六甲石切丁場は森岡秀人氏である。討論は石垣と縄張りの2本立てで、1は渡辺武氏が講演で文献史から豊臣氏大坂城を再整理した以上には進まなかったが、2は(1)文禄時倭城の矢穴の見えない石垣加工について西川禎亮氏が割り方を推論し、(2)堀口健弐氏は倭城に日本国内では新しい要素にされる小さい矢穴が確認されるとし、(3)羅東旭氏は役以前に邑城には栗石はないとした。3は(1)太田秀春氏は役緒戦では日本車は単郭の邑城を利用し名護屋陣と同じ分散した築城観であったが、対外戦争の緊張から求心性を求めるようになり南海岸倭城築城に至ったとし、(2)日朝の異文化交流で表面的な技術の受容はあるが、永続しないのは文化やシステムが違うからとし大方の同意を得、(3)関ヶ原以降の大量築城を経験し、材の規格化や生産のマニュアル化が矢穴利用を押し進めたとした。倭城洋行期国内城郭縄張り図集成作成も決議した。2004年度は韓国釜山市江西区の金海竹島倭城本丸の東虎口と東北隅櫓台の平面・立面測量を行い、図化した。当城は文禄の役時に鍋島直茂・勝茂によって築城・在番され、慶長の役でも使用された。2004年7月から東亜大学校博物館が当城本丸丘陵の西側丘陵の倭城遺構を発掘調査中であり、この測量も合同調査のかたちをとった。隅櫓台の高石垣は隅角部の脇石が脱落し、いつ崩壊してもおかしくない危険な状況だったが、平面・立面図を作成することができた。東亜大と測量報告書を準備中である。また先年、蔚山科学大学と合同で行った蔚山市西生浦倭城の測量調査報告書も製作中である。2000年以降、韓国側の倭城調査は目白押しで、何冊か正報告書も刊行されている。これらは日本国内でほとんど紹介されていないことに鑑み、現地説明会資料も含めて翻訳を行った。

各調査の概要は「韓国の最近の倭城調査について」で紹介した。築造・使用年代が限定される倭城(159298年)と豊臣氏大坂城(1583年築造開始・1598年改造)・徳川氏大坂城(1620年築造開始)は近世城郭を考えるに当って、構成要素の時期決定の定点になるが、倭城と徳川氏大坂城の間には関ヶ原合戦(1600年)以降の築城ラッシュがあり、別の要素の介入もあり得る。そこで2005年秋に大阪市中央公会堂で開催する国際倭城シンポでは、倭城と同時期の国内の城、元和一国一城令で廃城になる関ヶ原以降築造の支城群も俎上に乗せ、倭城築造がもたらせた近世城郭築造の思想や技術が何であったか、という点まで議論すべく準備を急いでいる。平成16年度の金海竹島倭城日韓合同測量調査の成果を踏まえ、日韓の城郭研究者を大阪市内に集め、朝鮮の役における軍事文化交流史を中心とした国際シンポジウムを開催した。シンポの名称は「韓国の倭城と大坂城」で、2日間にわたり基調講演1本60分、研究発表11本各45分、討論120分を実施した。倭城築造の朝鮮の役は1592-1598年で、豊臣秀吉の大坂築城(1583年開始)と徳川幕府大坂城再築(1620年開始)の中間に位置し、秀吉晩年の三の丸築造(1598年開始)と併行することから、1倭城から秀吉の大坂城を復元するヒントが得られる、2時期が限定された倭城の石垣の検討から、徳川氏大坂城に至る矢穴の変遷がたどれる、3日韓の研究者で討論することにより、役による城郭技術の相互交流の実態について共通認識が得られると考えた。また最近の発掘調査を発表の中に盛込んで討論に幅をもたせた。すなわち三の丸の堀は江浦洋氏、亀浦・金海竹島両倭城は李東注氏、徳川氏の東六甲石切丁場は森岡秀人氏である。討論は石垣と縄張りの2本立てで、1は渡辺武氏が講演で文献史から豊臣氏大坂城を再整理した以上には進まなかったが、2は(1)文禄時倭城の矢穴の見えない石垣石加工について西川禎亮氏が割り方を推論し、(2)堀口健弐氏は倭城に日本国内では新しい要素にされる小さい矢穴が確認されるとし、(3)羅東旭氏は役以前に邑城には栗石はないとした。3は(1)太田秀春氏は役緒戦では日本軍は単郭の邑城を利用し名護屋陣と同じ分散した築城観であったが、対外戦争の緊張から求心性を求めるようになり南海岸倭城築城に至ったとし、(2)日朝の異文化交流で表面的な技術の受容はあるが、永続しないのは文化やシステムが違うからとし大方の同意を得、(3)関ヶ原以降の大量築城を経験し、材の規格化や生産のマニュアル化が矢穴利用を押し進めたとした。倭城併行期国内城郭縄張り図集成作成も決議した。
子宮体癌細胞の転移能獲得機構の解明

子宮体癌幹細胞に発現が増加している遺伝子群の中からSPARC(secreted protein acidic and rich in cystein)を選択しその性質を解析した。正常子宮内膜・子宮体癌組織におけるSPARCの発現は正常子宮内膜では発現をみとめず,子宮体癌組織で発現しており特に低分化腺癌で発現が高かった。細胞基質蛋白SPARCは子宮体癌幹細胞に発現が亢進し,腫瘍間質形成に関与し、遊走能を亢進することから、SPARCは子宮体癌の微小環境や間質への分化,転移に関与することが示唆された。ヒト子宮体癌細胞株Hec1,活性化型K-Rasを過剰発現させ造腫瘍能をもつラット子宮内膜細胞株RK12V細胞よりSide population(SP)細胞とnon SP細胞を分離した。両者の細胞増殖能・ヌードマウス上の造腫瘍能、time-lapse videscope観察下での細胞運動能を解析したところ、SP細胞はnonSP細胞に比べ分化マーカーの発現が低下、長期増殖能・自己複製能を示し、運動能が著明に亢進していた。また、造腫瘍能も著明に亢進しており、腫瘍細胞だけではなくvimentinやαSMA陽性の間質に富む腫瘍を形成した。さらにIn vitroでもSP細胞はαSMA発現細胞への分化を示した。以上より、子宮体癌細胞株Hec1、RK12V細胞のSP細胞は癌幹細胞の性質を示し、著明な運動能亢進と間葉系細胞への分化能が子宮体癌幹細胞の特徴であると考えられる。マイクロアレイを用いて、SP細胞に発現が亢進している遺伝子を検討したところ、細胞増殖や浸潤に作用する複数のシグナル経路の関与が示された。また、EMTに関与する遺伝子の中で、fibronectinの発現が増加していた。最近、乳癌幹細胞の増殖を抑制することが報告されたイオノフォア抗生物質SalinomycinをHec1-SP細胞の培養液中に添加したところ、1uMで増殖を抑制した。また、タイムラプスビデオスコープで観察したところ、運動能も著明に抑制した。Fibronectinの発現も抑制されていた。我々はside population(SP)細胞を分離する方法を用いて子宮体癌に幹細胞様の細胞が存在し、著明な運動能亢進や間葉系細胞への分化能を示すことを示した。今年度は、子宮体癌幹細胞に発現が増加している遺伝子群の中からepithelial-mesenchymal transitionに関与する遺伝子を選択しその性質を解析した。1)造腫瘍能を持つラット子宮内膜細胞RK12V細胞のSP細胞を用いて発現が亢進している遺伝子群をマイクロアレイでスクリーニングし、細胞基質蛋白SPARCを同定した。2)ヌードマウス皮下の子宮体癌細胞株Hec1-SP細胞由来腫瘍におけるSPARCの発現を免疫染色法で解析したところ、SPARCはHec1-SP由来腫瘍の間質および間質に接する腫瘍細胞に高発現していた。3)SPARC発現ベクターを作製し、子宮体癌細胞株Ishikawa(IK)に形質導入しIK-SPARC細胞を樹立し、SP出現率・細胞増殖能・造腫瘍能とともに、wound assayやtranswell assayにより遊走能を解析し、mock細胞と比較検討した。IK-SPARC細胞はmock細胞に比べSP出現率・細胞増殖能に変化はなく造腫瘍能は抑制された。遊走能は有意に亢進した。4)インフォームドコンセントを得て採取された正常子宮内膜・子宮体癌組織(類内膜腺癌)におけるSPARCの発現を免疫染色法で解析した。SPARCは正常子宮内膜では発現をみとめず、子宮体癌組織で発現しており特に低分化腺癌で発現が高かった。以上より、細胞基質蛋白SPARCは1)子宮体癌幹細胞に発現が亢進し、腫瘍間質形成に関与する。2)子宮体癌細胞の遊走能に対しては促進、造腫瘍能に対しては抑制作用をもつことが明らかとなり、SPARCは子宮体癌の微小環境や間質への分化、転移に関与することが示唆された。我々は造腫瘍能をもつラット子宮内膜細胞株を用いた実験でSP細胞はnon-SP細胞に比べてEMT誘導に関与する複数の増殖因子やサイトカインの発現が亢進していることを見出し、その一の精巣特異的発現遺伝子dbpC/contrinに着目し、子宮体癌の癌幹細胞形質獲得機構、転移浸潤能獲得について検討した。1)内因性dbpC/contrinの発現のみられない子宮体癌細胞株Ishikawa(IK)細胞株にdbpC発現ベクターを形質導入し、過剰発現株(IK-dbpC細胞)を樹立した。2)IK-dbpC細胞の幹細胞マーカーALDH1の発現とフローサイトメトリーを用いて、side-population (SP)細胞の出現率を解析した。3)siRNAでdbpCの発現を抑制し、SP細胞の出現率とALDH1の発現の変化を解析した。

4)Microarray解析を行い、dbpC発現細胞と非発現細胞間で発現量に差がある遺伝子群の解析を行った。結論1)dbpC/contrinは癌幹細胞の形質発現に関与する。2)発現が亢進している精巣癌抗原は癌幹細胞のマーカーになる可能性が示唆された。子宮体癌幹細胞に発現が亢進している遺伝子群のうち、細胞の運動能に対しては細胞基質SPARCが重要であることを明らかにできた。24年度が最終年度であるため、記入しない。臨床検体を用いて、SPARCの発現と生存率との相関を解析する。
実数のグレイコード表現とそれにより導かれる計算構造の研究

実数の{0,1,⊥}-無限列を用いた表現(グレイコード表現)と{0,1,⊥}-無限列上で動作する非決定性多ヘッドマシン(IM2-マシン)を用いた計算概念に関連して,プログラミング言語,ドメイン理論,および位相空間論の分野において次のような研究を行った。1.IM2マシンの機能が,ガード機能をもつ並列論理型言語により実現可能であること。IM2マシンと並列論理型言語の表現能力は,ボトム入り文字列全体を考えれば異なるが、ある種のドメインの極限要素の集合の極小元集合(実数の集合は、そのように表される)に対しては、等しいことなどを示した。2.ボトム入り文字列の上の計算を、関数型言語を拡張することにより実現する方法を考案した。McCarthyのambオペレータを制限してグラフ簡約で実現することにより、逐次実行型の関数型言語で1も、実数計算に必要な演算が実現できることを示した。また、Haskellシステムを改良することにより、そのインプリメントを行った。3.位相空間の次元と表現に必要なボトムの個数が一致するという以前の結果を,代数的ドメインに一般化し,代数的ドメイン上の次元論を展開した。4.コードと位相空間のsubbaseの関係について,グレイコードなどの計算に用いることのできる{0,1,⊥}-無限列表現は,実数空間に,regular open setのペアを基礎とするsubbaseを生成するが,グレイコードは,そのようなコードの中でも特に,冗長性がないという特徴を持つことを示した。そして,それに対応する部分基の性質として,independent, canonically-representing, full-representingという3つののものを考え,それらの関係について調べた。1.グレイコードのように、対称に位相空間を構成するサブベースの概念を拡張し、Canonically-representing subbaseの概念を定義し、その性質を調べた。それらは、Full-representing subase-->Canonically-representing subbse-->independent subbase-->Minimal subbaseという関係があり、これらの概念は、空間がコンパクトであるときには、同値になることが示せた。McCarthyのambオペレータを制限することにより、逐次実行型の関数型言語でも、実数計算に必要な演算が実現できることを示した。また、Goferシステムを改良することにより、そのインプリメントを行った。3.ボトム入り文字列上で動作するIM2マシンのプログラムを、ガード機能をもつ並列論理型言語に変換することにより実行する方法を示し、その変換がプログラムの意味を保存すること、両者の表現能力が、ボトム入り文字列全体を考えれば異なるが、ある種のドメインの極限要素の集合の極小元集合(実数の集合は、そのように表される)に対しては、等しいことなどを示した。また、この変換に、並列論理型言語のor-並列性だけが必要であり、and-並列性は必要がないことを示した。実数のグレイコード表現と、それを用いた実数の上の計算概念について、および、実数のグレイコード表現を一般の位相空間に拡張した概念について研究を行ってきた。その中で、今年度は、次の様な内容で新しい成果がでた。1.ボトム入り無限列の上の計算を実現する関数型言語について。ボトム入り文字列を用いて実数のグレイコード表現を作ることができる。ボトム入り文字列の上の計算を行うことができれば、それは、直接に実数を扱うプログラムとなる。特に、無限列は関数型言語と相性がいいので、関数型言語を拡張することによりこの機構が実現できることが望ましい。そのために、Haske11という関数型言語に、gambという、オペレータを追加する方法を考え、その実装を行った。実装は、HugsというHaske11の処理系を改変することにより行った。

また、この拡張されたHaske11のための型システムを考案し、そこで正しく型づけできるプログラムは異常な行動を起こさないことをしめした。グレイコードを一般の位相空間に拡張した概念として、Canonically-representing subbaseがある。この性質をもつサブベースがいつ存在するかという問題について研究を行った。Dense-in-itselfという性質をもつ可分な距離空間はすべて、この性質をもつサブベースが存在することが示せた。あ実数のグレイコード表現とそれを用いた実数上の計算概念について,および,実数のグレイコード表現を一般の位相空間に拡張した概念について研究を行ってきた。その中で,本年は,次のような研究を行った。1.Canonically-representing subbaseが,dense-in-itselfな可分距離空間に対して存在することに関する証明を,無限次元の場合が有限次元の場合を用いて導かれるような,見通しのよいものに書き換えた。2.Canonically-representing subbaseに対し,それから導かれる計算概念をより自然なものとするような条件として,再帰的な構造を有し,各ビットが0である空間と1である空間の間の対象性が成り立つもの(反転的subbase),および,その空間上の自己写像の力学系の旅程として定義されるもの(力学系に由来したsubbase)が考えられる。前者では1ビット反転が関数(グレイコードの場合には1-x)となり,後者では1ビットシフトが関数(グレイコードの場合には2x)となり,簡単な文字列操作が多値関数ではなく関数になるという性質をもつ。後者の条件から前者の条件が導かれることを示し,具体的に,1次元閉区間[0,1]や,2次元単位正方形[0,1]x[0,1]上で力学系に由来したsubbaseの形状について考察した。3.シェルピンスキー・ガスケットやシェルピンスキー・カーペットの上のCanonically-representing subbaseの構造について,フラクタルな図形の再帰的構造との関係から調べた。
単極記録型ホルター加算平均心電図の開発とJ波症候群における有用性の検討

ブルガダ症候群は日本人に多く認められ、突然死の原因疾患として近年注目されているが、そのリスク評価法は確立していない。ブルガダ症候群では12誘導心電図では右側胸部単極誘導(V1-V3)に限局して特徴的な変化が認められる。近年、特徴的な心電図の変動が突然死の予知と関連があることが報告されているが、その臨床応用は未だ十分ではない。加算平均心電図により記録される遅延電位のリスク評価における有用性については賛否両論あり、その原因の一つとして、従来のホルター心電計を用いた加算平均心電図は心臓全体での遅延伝導記録でしか解析できないため、心臓の部位別の遅延伝導の検討ができなかったことが考えられる。今回の研究では、ブルガダ症候群症例において、単極記録型ホルター加算平均心電図を用いて24時間微小な心臓内の遅延電位を記録し、致死的不整脈である心室細動発症群(重症例)と非発症群(軽症例)で比較検討し、リスク評価に有用な指標を検討した。安静時の検査結果では明らかな有意な差を認めなかったが、薬物負荷後の変化において重症例での遅延伝導が有意に顕著となり、この遅延伝導がブルガダ症候群リスク評価に有用であることを明らかにした。今回の研究では単極誘導による加算平均心電図の長時間記録により、部位特異性の遅延伝導を見出し、非侵襲的な突然死の予知法を明らかにした。これにより健診で認められる多くの無症候性ブルガダ型心電図症例のリスク評価が可能となると思われる。平成28年度において、単極誘導においてホルター加算平均心電図が評価可能なシステムを構築した。現存の双極誘導の陰極を10 kohmの抵抗を介してウィルソン中心電極とし、双極誘導の陽極から単極胸部誘導を記録する方式により、現存の双極誘導での遅延電位(DP)の解析が可能な記録装置、解析装置でも単極誘導記録からDPの解析可能な記録装置、解析装置を心電図メーカーのアドバイスの下、当施設の臨床工学技師と協力し開発した。その後20名の健常者に単極、双極両者でホルター加算平均心電図を施行し、既存のホルター心電図での双極記録加算平均心電図との波形の比較検討を行い、今回検討した単極誘導記録からのDP解析の信憑性を検討したところ、ほぼ同様の結果が得られた。フィルター条件は夜間であれば、既存のホルター心電図での双極記録加算平均心電図と同様の条件(40-250Hz)で可能であり、日中活動期はノイズレベルが高く、夜間安静時を中心に単極誘導によるホルター加算平均心電図が記録するように修正した。ブルガダ症候群やJ波症候群は夜間安静時発症がほとんどであり、夜間安静時のデータ収集で問題ないものと考えられる。現在データの再現性について健常者でデータ集積中であり、再現性が得られれば、informed consent取得の上、患者様に応用する。今年度は患者様への応用までは到達できず、データ収集、解析、学会発表等は実施できなかった。平成28年度において、倫理委員会の承認後、単極誘導において加算平均心電図が評価可能なシステムを構築した。予想以上にノイズレベルが少なく、まだ双極誘導でのデータとの整合性も認められたため、データの再現性を評価できれば、現在のシステムでのデータ集積に移行する。今後患者様に応用し、目標症例数まで現在の症例登録、データ集積を行う。平成29年度において、システムを構築した単極誘導ホルター加算平均心電図を用いて、患者様にinformed consentを取得の上、ブルガダ症候群やJ波症候群の症例に応用し、データ収集に努めた。心電計が不足傾向であったため、1台補充して、データ収集を行った。ブルガダ症候群の特徴的な心電図変化は、右室流出路前面に位置する右側胸部誘導(V1,V2)に限局したST部分からT波の変化であり、V2誘導と電気的な異常がないと考えられるV5誘導に電極を装着して記録を行った。J波心電図を認める症例では、J波を認める誘導ごとにサブグループ(下壁誘導、側壁誘導、下側壁誘導の3つのグループ)に分けて単極誘導の装着部位を変えてデータ収集を行った。集積データの内容を検討すると、やはり日中活動期はノイズレベルが高く、データ解析が困難であったが、夜間安静時のデータはノイズレベルが低く解析可能と考えられた。ブルガダ症候群やJ波症候群は主に夜間安静時発症がほとんどであり、夜間安静時のデータ収集で問題ないものと考えられる。現在、無症候症例が多く、有症候症例の登録がリスク評価を比較検討するには必要である。特にJ波症候群症例が不足しており、目標である5例以上を登録する必要がある。また、無症候J波心電図症例も20例以上となるように症例登録する。今後目標症例達成まで症例を積み重ね、その後集中的に解析する予定である。結果が未だ出ておらず学会発表等は実施できなかった。前年度はシステム構築と健常人でのデータの再現性をチェックしたが、今年度は患者様に応用した。現在のところ、順調に夜間安静時にノイズレベルの低いデータ収集できており、今後目標症例数に達するまで症例登録を行い、その後集中的にデータ解析を行う。

近年、特徴的な心電図の変動が突然死の予知と関連があることが報告されているが、その臨床応用は未だ十分ではない。加算平均心電図により記録される遅延電位のリスク評価における有用性については賛否両論あり、その原因の一つとして、従来のホルター心電計を用いた加算平均心電図は心臓全体での遅延伝導記録でしか解析できないため、心臓の部位別の遅延伝導の検討ができなかったことが考えられる。今回の研究では、ブルガダ症候群症例において、単極記録型ホルター加算平均心電図を用いて24時間微小な心臓内の遅延電位を記録し、致死的不整脈である心室細動発症群(重症例)と非発症群(軽症例)で比較検討し、リスク評価に有用な指標を検討した。安静時の検査結果では明らかな有意な差を認めなかったが、薬物負荷後の変化において重症例での遅延伝導が有意に顕著となり、この遅延伝導がブルガダ症候群リスク評価に有用であることを明らかにした。今回の研究では単極誘導による加算平均心電図の長時間記録により、部位特異性の遅延伝導を見出し、非侵襲的な突然死の予知法を明らかにした。これにより健診で認められる多くの無症候性ブルガダ型心電図症例のリスク評価が可能となると思われる。データの再現性を評価できれば、今後患者様に応用し、目標症例数まで現在の症例登録、データ集積を行う。外部にもデータ解析を委託する必要があり、そのための経費にも充当する。解析結果を分析し、学会発表を行う。今後目標症例数に達するまで症例登録を行い、その後集中的にデータ解析を行う。解析結果を分析し、学会発表等を行う。心電図からの電流記録装置の購入費のみの使用であったため、当初より支出が少なくなった。今後開発した電極ケーブルを10-15台準備するため、当初28年度に支出予定であった電極ケーブル用の費用が29年度に必要になる。またデータ集積が今年度得られなかったため、学会報告等が未施行であり、人件費、旅費等の支出がなかった。(理由)心電計を用いたデータ集積を今年度中心に施行したため、心電計の購入費用がメインとなった。データ集積中であり、まだ解析ができていないため、学会報告等への費用、人件費の支出がなかった。(使用計画)今後データ集積を進め、解析結果を学会報告等で報告するため、今後人件費、旅費等に利用する。次年度使用額は、今後開発した電極ケーブルを10-15台準備するため電極ケーブル用の費用に充足する。またデータ集積を進め、解析結果を学会報告するため、人件費、旅費等に利用する。
酸素発生型光合成生物におけるニトロゲナーゼ類似酵素の作用機構

シアノバクテリアLeptolyngbyaboryanaを用いた各DPORコンポーネント(L-proteinとNB-protein)の大量発現系を構築に成功し、その発現系より得られた精製コンポーネントを用いた活性の再構成に成功した。またこの活性測定系を用いて、各コンポーネントの酸素感受性について個別に評価を行った。その結果、NB-proteinはある程度酸素に対する耐性を示すのに対し、L-proteinは半減期3分以内という非常に高い酸素感受性を示し、この感受性は光合成細菌Rhodobacter capsulatusのL-proteinと同等であった。これは、酸素発生型光合成生物においてもDPORは酸素感受性という性質を保持しており、シアノバクテリアの細胞内では何かしらの酸素に対する防御機構が存在することを示唆している。これらの結果は、"Oxygen Sensitivity of Nitrogenase-like Protochlorophyllide Reductase from the Cyanobacterium Leptolyngbya boryana"というタイトルでPlant and Cell Physiologyに掲載された(Yamamoto et al.(2009)Plant Cell Physiol.50 : 1663-1673)。
オスとメスの生殖細胞における染色体・核小体動態の解析

申請者はメダカを用いた研究でfoxl3(転写因子)が生殖細胞の性のスイッチ遺伝子であることを明らかにした。foxl3が欠損したメスメダカは、生殖細胞を取り巻く環境がメス、つまり身体はメスで卵巣を作るにも関わらず、生殖細胞は精子に分化することがわかった。このことはfoxl3は精子形成を抑制することで生殖細胞の性のスイッチを制御していること示している。foxl3が具体的にどのような因子を制御することで性のスイッチを制御しているのか明らかにするために、foxl3の機能を欠損した生殖細胞と野生型の生殖細胞で遺伝子発現差解析を行ったところ、染色体動態に関わる因子が多数同定された。また、組織学的な観察により減数分裂に入るまでのシスト型生殖細胞の分裂回数がオスよりもメスで多いこと、さらには減数分裂期には核小体のサイズがメスで顕著に大きくなることを見出した。以上のことからfoxl3は染色体や核小体動態をダイナミックに変化させることで、生殖細胞の性のスイッチとして働いているという仮説をたてた。そこで本研究ではライブイメージングにより染色体や核小体動態のオスとメスの違いを明らかにすることを目的とし、染色体動態の専門家であるCollege de FranceのJean-Rene Huynh博士と共同研究を行う。高解像度ライブイメージング構築のためにいくつかの顕微鏡システムや器官培養装置を用いて、撮影条件を検討した。またJean-Rene Huynh博士の研究室に3週間滞在し、ショウジョウバエで確立されたライブイメージング法について学んだ。その結果、マイクロ流路デバイスを用いて培養液を循環させ、光毒性の小さいスピニングディスク型共焦点システムを用いたところ、精巣組織を24時間に渡り核内の動態が追跡できる解像度で撮影に成功した。ライブイメージングのための最適な顕微鏡システムと器官培養法を決定できたため、おおむね順調に研究は進展している。ただ、今までに確立した方法では、精巣組織内の細胞分裂を観察することができなかったため、今後は培養液の組成を変えることで、配偶子形成が最適にすすむ培養条件を探る必要がある。今後は、染色体や核小体を可視化できるトランスジェニックメダカを作製し、これらをサンプルとして用いて、生殖細胞の性決定が起きる有糸分裂期からその性差が顕著となる減数分裂前期までをライブイメージング行う予定である。有糸分裂期から減数分裂前期へと移行すると生殖細胞内の染色体の配置がダイナミックに変化する。テロメア領域は核膜の一箇所に集合し、セントロメアは核小体にクラスタリングすることが知られ、それらのことは相同染色体の対合に重要であることがわかっている。そこでセントロメアはCENP-A,テロメアはTERF1,核小体はFIBRILLARINと蛍光タンパク質を融合させることとで可視化させる予定である。また減数分裂期の進行がモニターできるようにSYCP1と蛍光タンパク質を融合させて光らせるトランスジェニックメダカの作製も予定している。

テロメア領域は核膜の一箇所に集合し、セントロメアは核小体にクラスタリングすることが知られ、それらのことは相同染色体の対合に重要であることがわかっている。そこでセントロメアはCENP-A,テロメアはTERF1,核小体はFIBRILLARINと蛍光タンパク質を融合させることとで可視化させる予定である。また減数分裂期の進行がモニターできるようにSYCP1と蛍光タンパク質を融合させて光らせるトランスジェニックメダカの作製も予定している。当該年度はライブイメージング構築のために、どのような顕微鏡システムを用いるのが最適か、予備的な実験を進めてきた。その結果、スピニングディスク型共焦点顕微鏡システムを用いることが最もライブイメージングに適していることがわかった。そこでそのシステム導入のために、一部の資金を残し、次年度の予算と合わせて購入を進めていくこととした。
脂質膜搭載素子の機能発動・解離を時空間的に制御する多重膜遺伝子ナノキャリアの創製

本研究では、低分子医薬品や機能性核酸をその作用部位へ送達するため、「体内動態・細胞内動態制御素子の機能発動・解離を時空間的に制御可能なドラッグデリバリーシステム(DDS)」の構築を目指した。第一年度では、核酸等を封入する『コア粒子』が、細胞内取り込みやエンドソーム脱出を担う『サテライト粒子』に取り巻かれた構造を持つNano-sized Satellite-type Organized Lipid-nanoparticle Assembly(Nano-SOLA)を開発した。本キャリアは二種の粒子が核酸の二本鎖形成により複合体化されており、機能性素子の配置制御が可能である。第二年度目では、本複合体を形成するサテライト粒子に着目した。本粒子の物性を蛍光分光学的手法により解明した。本研究の第三年度目では、サテライト粒子を低分子送達へ応用するため、低分子医薬品の搭載並びに作用部位への送達を試みた。また、血管透過性の亢進が知られる炎症部位に対し粒子送達を試みた。粒子径制御技術を用いて50nmから180nmまでの大きさの粒子を作り分け、炎症部位に対する送達能を検証した。その結果、全ての粒子で炎症の誘起による粒子集積量の増加が認められた。粒子集積性と炎症の強さを解析したところ、炎症が強いほど粒子が集積しやすくなることが明らかとなった。特に110nm程度の粒子が炎症部位の集積性に最も優れることを明らかとした。ここまでの結果からサテライト粒子は高い血中滞留性を持ち、腫瘍や炎症部位へ効率的な送達が可能であることが分かっていた。一方、低分子医薬品をナノ粒子に搭載するためにはcLogP値が9程度必要である。低分子医薬品の疎水性を高めるため、環境応答性リンカーによる二量体化を行った。抗がん剤カンプトテシンの二量体化薬はカンプトテシン単体に比べて効果が向上し副作用が提言されることを明らかとした。28年度が最終年度であるため、記入しない。薬物を作用部位へ送達するためには多くの生体障壁を突破する必要あり、その目的にナノ粒子を利用したDDS研究が広く進められている。従来から生体障壁を突破するための機能性素子が探索されており、複数の素子を同時に利用した多機能性キャリアによる「異なる生体障壁の同時突破」により薬物送達効率の相加相乗的な向上が期待される。しかし、従来型DDSキャリア機能性素子の発動タイミングについて考慮されていなかった。さらに、意図しない機能発動が動態に悪影響を与えることが報告されており、機能発動・解離の時空間的な制御が到達可能なDDSキャリアの開発が必要とされていた。平成26年度では、二つの異なる粒子を別々に作成し、後から複合体形成を行うことでサテライト型ナノ粒子複合体の形成を行った。ナノ粒子構成材料として当研究室で開発された脂質用物質Palmを用い、粒子リンカーとして相補的PEG脂質化オリゴDNAを用いた。まず電気泳動にてサテライト型ナノ粒子複合体の形成を確認した。内外粒子はアニーリングによりバンドシフトし、一本のバンドとなったことから形成した複合体は均質な集団であることが示唆された。さらに、粒子サイズの温度依存性から、二つの粒子はDNAの二重らせん形成により結合していることを確認した。また、ストレプトアビジン修飾磁気ビーズを用いたアッセイにより、内外粒子の物理的結合が確認されたため、サテライト型ナノ粒子複合体の形成に成功したと判断した。本サテライト型ナノ粒子複合体を細胞へ取り込ませたところ、同じ細胞集団に取り込まれやすくなる傾向が認められ、顕微鏡観察の結果、細胞内においても同じコンパートメントに存在することが明らかとなった。以上から、階層性を持つキャリアの開発に成功したと判断した。また作成した粒子は複合体として細胞と相互作用することが示された。本研究では、小分子薬物や機能性核酸を作用部位へ送達するため、「体内動態・細胞内動態制御素子の機能発動・解離を時空間的に制御可能なドラッグデリバリーシステム(DDS)」の構築を目指す。第一年度ではこの問題を解決するため、二種の粒子を事前につくりわけ、相補的DNAの二重らせん形成によりサテライト型ナノ粒子複合体とする技術を開発した。この際の材料粒子を作成するため、40ー200ナノメートル程度の大きさで粒子サイズを調製可能な微小粒子調製法を確立していた。本粒子は従来型リポソーム製剤と比べても非常に微細であるため、小分子の腫瘍送達に適する可能性が見いだされた。第二年度では本技術を実用化に近づけるため、詳細な物理化学的データの取得を行った。基本物性として、界面極性および内部流動性をLaurdanおよびDPHで、環境応答性としてジスルフィド開裂速度および酸性環境下における荷電を還元応答性色素ssPalmPおよびTNSで解析した。さらに負電荷脂質膜との融合をFRET解消にて調べた。その結果本粒子は界面に環境応答性が局在し、内部が流動的な脂質ナノ粒子であることが明らかとなった。次に本粒子を担癌マウスの尾静脈から投与したところ、肝臓、脾臓への集積が少なく、腫瘍への集積性が高いことが明らかとなった。さらに、腫瘍切片の顕微鏡像を取得し解析した結果、ピクセル強度のばらつきを表すCV値が低いことが明らかとなった。この結果は、微小粒子径、中性表面である本粒子は腫瘍へたどり着くまでの体内動態過程、および腫瘍内拡散過程に優れていることを示している。

本年度ではサテライト型ナノ粒子複合体の材料である微小粒子について詳細なデータを得た。これら物性データは第三年度の研究を進めるうえで重要な知見となる。第2年度の達成目標は細胞応用であったが、これは第一年度の時点で達成されている。これらの点から総合的に考え、おおむね順調に進展していると判断した。本研究では、低分子医薬品や機能性核酸をその作用部位へ送達するため、「体内動態・細胞内動態制御素子の機能発動・解離を時空間的に制御可能なドラッグデリバリーシステム(DDS)」の構築を目指した。第一年度では、核酸等を封入する『コア粒子』が、細胞内取り込みやエンドソーム脱出を担う『サテライト粒子』に取り巻かれた構造を持つNano-sized Satellite-type Organized Lipid-nanoparticle Assembly(Nano-SOLA)を開発した。本キャリアは二種の粒子が核酸の二本鎖形成により複合体化されており、機能性素子の配置制御が可能である。第二年度目では、本複合体を形成するサテライト粒子に着目した。本粒子の物性を蛍光分光学的手法により解明した。本研究の第三年度目では、サテライト粒子を低分子送達へ応用するため、低分子医薬品の搭載並びに作用部位への送達を試みた。また、血管透過性の亢進が知られる炎症部位に対し粒子送達を試みた。粒子径制御技術を用いて50nmから180nmまでの大きさの粒子を作り分け、炎症部位に対する送達能を検証した。その結果、全ての粒子で炎症の誘起による粒子集積量の増加が認められた。粒子集積性と炎症の強さを解析したところ、炎症が強いほど粒子が集積しやすくなることが明らかとなった。特に110nm程度の粒子が炎症部位の集積性に最も優れることを明らかとした。ここまでの結果からサテライト粒子は高い血中滞留性を持ち、腫瘍や炎症部位へ効率的な送達が可能であることが分かっていた。一方、低分子医薬品をナノ粒子に搭載するためにはcLogP値が9程度必要である。低分子医薬品の疎水性を高めるため、環境応答性リンカーによる二量体化を行った。抗がん剤カンプトテシンの二量体化薬はカンプトテシン単体に比べて効果が向上し副作用が提言されることを明らかとした。第一年度の到達目標は「機能発動・解離の時空間的な制御が到達可能なDDSキャリアの開発」であった。本年度に開発した階層性キャリアである「サテライト型ナノ粒子複合体」は本要件を満たすものと考えており、従っておおむね順調であると判断した。最終年度では本サテライト型ナノ粒子複合体の体内動態解析、機能評価を行う。申請時の予定では、第3年度は多層型粒子のEx vivo応用であった。しかし、本年度の粒子物性評価により、その材料粒子の体内動態が優れている可能性が見いだされたため、血中投与への応用を目標に研究を進める。28年度が最終年度であるため、記入しない。平成26年度はサテライト型ナノ粒子複合体の作成に専念し、複合体形成を確認した。
アトリウム空間の煙突効果及び自然換気に関する研究

1.アトリウムを持つ建物の熱環境・空気流動特性の実測解析アトリウムを持つ建物の空気流のマクロ特性とアトリウム熱環境について実測調査を行った。夏期にはガラス屋根付近の空気は60°Cまで上昇しており、上部高温面からの輻射熱のために体感的にはかなり厳しい環境で、アトリウム上部の熱だまりの自然換気が重要であることがわかった。また冬期には煙突効果によるエントランスからの侵入外気のために局部的にアトリウム内で室温低下を引き起こしていることがわかった。2.煙突効果により流入する外気量、およびエレベータシャフトの漏気係数の実測解析屋外、アトリウム、エレベータホール、エレベータシャフト類の温度・差圧測定、またエレベータホールの加湿実験により煙突効果により屋外からシャフトへ流入する風量を測定したところ、エレベータホール容積基準で20回/hであることが判明した。またアトリウムとエレベータホールを仕切ることことが外気侵入の抑制に効果が高いことがわかった。エレベータシャフト類の漏気係数を求めたところ、隙間寸法調査から得られる値より実際にはかなり多くの隙間が存在すると推定できた。3.アトリウムの設計事例に関する文献調査及びアンケート調査建築専門誌に掲載されたアトリウム約500件について、アトリウムの空間構成や規模、用途などを文献調査したところ、中庭型や重合・遮蔽型など熱環境の安定しやすいアトリウム形態が多いことが判明した。最近のアトリウム85件について設計者にアンケート調査を行ったところ、熱だまりをもつアトリウムのうち約25%は熱だまりの自然換気を行っていること、冬の煙突効果対策は必ずしも多く採用されていないことなどが判明した。東京都心に建つアトリウムをもつオフィスビルの環境実測調査を行った。本建物は、温室型アトリウムをエントランスロビ-として有する35階建ての高層ビルである。アトリウム熱環境と空気流入出性状、高層棟の垂直方向の空気の通路となるシャフト類の温度、差圧・風量などの測定を行い、以下の知見を得た。1.アトリウムの熱環境測定したアトリウムはスポット冷房と床吹き出し冷房を行っており、夏期の居住域の室温は27°C程度に押さえられているが、アトリウム上部は60°C程まで上昇しており、上部高温面からの輻射熱のために体感温度はかなり暑く厳しい環境となっており、アトリウム上部の自然換気が重要であることがわかった。また冬期には煙突効果によるエントランスからの外気侵入のため、局部的に環境の厳しい箇所があることがわかった。2.高層棟とアトリウムの空気流動特性1)夏期の特性:高層棟の階段室やエレベータシャフトの空気温度は3032°Cと外気温より高温で、夏期においても建物の下部から外気侵入、上部より空気流出という冬型の煙突効果が生じていることが明らかになった。2)冬期の特性:エントランス階のエレベータホールの加湿実験からエレベータホールへの流入空気量を測定することを試みた結果、アトリウムへ流入した外気のうち高層棟へ移動する量は、エレベータホール容積基準では20回/h程度であることが明らかになり、またアトリウムとエレベータホールを仕切ることが冬期のエントランスからの外気侵入を押さえるために非常に高い効果があることがわかった。1.アトリウム空間の設計事例に関する文献調査1981年以降の建築専門誌に掲載されたアトリウム空間約500件について、アトリウムの空間構成や規模、用途などを文献調査した。寒冷地型アトリウムは約1割のみで温暖地型アトリウムが多いこと、アトリウム形態は中庭型や重合一遮蔽型など熱環境の安定しやすいものが多いこと、初期のアトリウムは中庭型が主流だが、1990年以降形態が多様化していること、吹き抜け高さの最高は130m、アトリウム床面積の最大は14,000m^2であることなどが判明した。2.最近のアトリウムの環境設計法に関するアンケート調査

最近の比較的ガラス面積の大きいアトリウム空間85件について設計者にアンケート調査を依頼し回答のあった49件について環境調整手法などを解析した。夏対策は建築的な手法で、冬対策は設備的手法で対応するという傾向があること、熱だまりをもつアトリウムのうち約25%は熱だまりの自然換気、約30%は強制換気、約10%はアトリウム全体の自然換気を行っていること、冬の煙突効果対策としてエントランスに回転扉を採用するケースは必ずしも多くないことが判明した。3.アトリウムの環境調整手法と熱環境の実態調査実際のアトリウムの熱環境と建築的・設備的環境調整手法を確認するため、東京、東北、関西のアトリウム約20件を測定調査した。東北地方でも夏対策が重視されていること、エントランスからの冬の外気侵入が激しいアトリウムが多いことなどが判明した。
犬の特発性血小板減少性紫斑病における自己抗体の解析

特発性血小板減少性紫斑病(ITP)は原因不明に突然の血小板減少と体表の点状出血を示す疾患で、その原因の一つには自己の血小板に対する抗体の関与が想定されている。イヌのITPにおける自己抗体の検出には凝集法や、自己抗体により傷害された血小板から放出されたPF3を測定し、間接的にこれを知る方法などが応用されている。今回ITPの犬について抗血小板抗体を測定し、その関与を検討した。臨床的にITPと診断した12頭の症例に対し凝集法により抗血小板抗体を測定した。このうち血清希釈x16倍以上の明らかな陽性を示した症例が5例、x8倍の偽陽性の症例が4例、x4倍以下の陰性の症例が3例認められた。体表部の紫斑は陽性例で4/5、偽陽性例で3/4、陰性例で3/3で認められ抗血小板抗体の有無とは関連が見られなかった。いっぽう抗体陽性例の2例の血清を希釈して健常犬の血小板浮遊液とIncubateした後その上清にCa添加を行い、凝固するまでの時間を測定したところ、無処置のものでは230秒であったものが血清を100倍希釈して添加したものでは190秒と125秒、10倍希釈して添加したものでは97秒と95秒と著しい短縮が認められ、抗体により血小板が傷害を受けPF3が放出されたものと考えられた。さらに抗血小板抗体を有するITPの症例2例で治療により血小板数が200300x10^3まで回復した後に血小板凝集能を測定した。2例ともADPに対する凝集能がほとんど認められず、抗血小板抗体が凝集を抑制している可能性が示唆された。
脂質ベシクル変形機構の解明；三次元画像解析とシミュレーションによるアプローチ

生体活動を維持する重要な細胞小器官の一つに、ミトコンドリアがある。その内膜にはクリステと呼ばれる特殊な襞状構造が存在するが、我々はこれが外膜による空間拘束の影響によるものであると仮定し、形状の起源を探究した。モデル系として脂質のみからなるモデル生体膜ベシクル(以下、ベシクル)を用い、実験・シミュレーション・理論の三方向から形状の定量化することで、拘束条件と形状の関係性を定量的に理解することに成功した。研究計画初年度である今年は、既に撮影していた実験結果を以下の二つのカテゴリーに分類した:1)外側のべシクルが球形の場合。2)外側のべシクルが非球形の場合。ミトコンドリアは後者に近いが、今回は簡単のために前者の形状定量化を行った。シミュレーションには動的三角格子モデル(Noguchi, et al., 2009, J. Phys. Soc, Jpn.)を拡張した手法を構築し、実験結果と比較しながら形状を定量化した。その結果、実験で得られた球状ベシクルに内包されたベシクルの変形過程を忠実に再現することに成功した。その後はArea-difference--elasticityモデル(Svetina, et al., 1989 Eur Biophys.)を拡張し独自のモデルを作成したところ、今回の結果をよく記述できた。これはミトコンドリアのような複雑な構造が空間の制限だけで再現できるという非常に重要な結果である。同様の機構では他にも細胞分裂の胚にみられる構造も観察されたため、応用の余地があると言える。以上の結果は、物理学におけるベシクル形状研究がより生物学に近い形状の理解を可能にする第一歩になったと言える。申請者は一年次及び二年次に予定した研究を計画通り達成でき、その結果を学術論文として投稿することができたため、達成度は当初の計画以上に進展していると言える。申請者は就職のため、今年度で日本学術振興会特別研究員を辞することとなった。そのため二年次に予定していた研究は推進しない予定である。
低塩分飼育による真珠の「キズ・シミ」軽減メカニズムの解明

最終年度は,アコヤガイのレクチンとして報告されているガレクチンとF typeレクチンの挿核後の「養生」期間中の動態および挿核前の「仕立て」の有無による差を解析した。挿核したアコヤガイを海上筏と塩分25の陸上水槽で飼育し,4,8日後に各区5個体から採血し,血球をガレクチンとF typeレクチンのそれぞれに特異的な抗体で二重染色し,フローサイトメトリーにより解析し,両レクチン産生血球数の割合を算定した。また,通常真珠養殖では挿核前に「仕立て」を行うため,対象として「仕立て」を行っていない貝も解析した。レクチンの転写量も測定した。両レクチンともに陽性血球率は挿核前に比べ4日後に増加し,8日後には減少していた。また,「仕立て」をしていない貝では「仕立て」をした貝より産生細胞数が顕著に多かった。レクチン転写量も同様な動態を示した。これらの結果は平成31年度日本水産学会春季大会で発表した。真珠養殖の挿核手術後の「養生」期間を低塩分で飼育することで真珠のキズ・シミが軽減できる。そのメカニズムについて,以下の結果を得た。アコヤガイの血リンパの凝集力価は低塩分飼育により抑制された。ガレクチンとF typeレクチンそれぞれに特異的な抗体により凝集力価が阻害されたため,凝集力価として測定しているものは,これらのレクチンによるものであると考えられた。血球中のガレクチンの転写量も低塩分飼育により減少した。両レクチンの産生血球数の割合は挿核前の工程である「仕立て」により減少し,挿核後上昇することが明らかになった。以上から,「低塩分養生」によりレクチンの産生が抑制されシミ・キズが軽減されることが示唆され,「仕立て」によってもレクチン産生が抑制されており,挿核に対する生体防御の反応を抑制している可能性も示唆された。よって,母貝の生体防御能を制御することが真珠の品質向上につながることが考えられた。・低塩分養生時のアコヤガイ血リンパ中の凝集活性飼育塩濃度は通常海水塩分と同じ33,低塩分25,17の3区を設け,挿核手術後に0,4,8日後に採血し,血リンパを得る。ヒツジ赤血球と段階希釈したアコヤガイ血リンパを反応させ,凝集力価を測定した。その結果,予備実験と同様の結果が得られた。また,養生時の塩分条件とその後飼育して得られた真珠の品質との関係も検討した。その結果をまとめ国際誌(Aquaculture Resarch)に投稿し,受理された。・凝集価として測定されるレクチンの種類の特定および濃縮精製方法の検討赤血球凝集反応を起こしているタンパク質の分離と同定を試みた。凝集力価は試みた多数の単糖では阻害されず,ムチンでのみ阻害された。そこで,ムチンを固定化したゲルを用いて凝集素を分離した。分離された赤血球凝集素のSDS-PAGEを行いった結果,分子量は約250kDaであり,そのバンドの質量解析を行った結果,アコヤガイゲノムアセンブリ(ver. 2.0)[3]のpfu_aug2.0_279.1_30551.t1に同定され, fibronectin3, kringle domainおよびlipocalinの構造を持っていた。赤血球凝集活性はGlc,Gal,Man,Fuc,Lac,GalNacでは阻害されず,ムチンでのみ阻害された。さらにそのタンパクに特異的なプライマーを設計し,RT-PCRを行ったところ,赤血球凝集素は生殖巣,中腸腺,鰓,閉殻筋,血球で発現していた。これらの結果を28年度日本比較免疫学会および12th Japan-Korea, Korea-Japan symposium on Aquacultureで発表した。低塩分養生と凝集力価の関係を明らかにし,凝集素の精製同定を行えたことは計画通りである。また,その成果を国内学会発表および日本で開催された国際シンポジュウムに発表できたことは予想以上の速さである。しかしながら,28年度に取り掛かる予定であったRNAiに関する実験には取り掛かれなかった。RNAiに関しては,血リンパ中の凝集活性を担う凝集素を特定してからがより効率的と考えられたためである。・低塩分養生時のアコヤガイガレクチン遺伝子Pogalの転写量の測定アコヤガイ血リンパの凝集力価が低塩分養生により抑制されることを昨年度に明らかにした。そこで本年度は低塩分養生が凝集力価に関連すると思われるレクチンの発現に与える影響を検討した。2017年6月に塩分25PSUに調製したタンクに挿核したアコヤガイと未挿核のアコヤガイを収容,対象として挿核したアコヤガイを海上筏で飼育した。挿核4,8,12日後に各区から10個体のアコヤガイをサンプリングし,血リンパの凝集力価,および血球,中腸腺の,既存のアコヤガイガレクチン遺伝子であるPogalの転写量の測定を行った。その結果,低塩分養生による凝集力価の抑制,および若干ではあるが血球中のPogalの転写量の低下が観察された。この結果を2018年4月23-26日に台湾の台北で開催されるAsian Pacific Aquaculture 2018で発表する。