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クレッチュマーおよびケステンベルクの音楽教育改革における「市民」の音楽教育の展開

本研究では,クレッチュマーおよびケステンベルクの音楽教育改革を音楽的な「市民」の育成という視点から再考し,その特質を検討した。その結果,クレッチュマーの改革では,ドイツの全国民を音楽育成の対象としながらも,19世紀的な「教養」が有する特権意識が残っており,その視点から「市民」の音楽育成の拡充を図っていたこと,ケステンベルクの改革では,音楽育成を受ける対象が全国民へと拡大される中で,階層などの属性によって異なっていた音楽的な理想像が,「ドイツ国民」という括りで統一されていったことが明らかになった。本研究の目的は、クレッチュマーおよびケステンベルクの音楽教育改革を音楽的な「市民」の育成という視点から再考し、その特質を明らかにすることである。本年度は、(1)19世紀から20世紀初頭のドイツにおける音楽的な「市民」像を明確にすること、(2)クレッチュマーの音楽教育改革において(1)のような「市民」をどのように育成しようとしたのかを明らかにすることを課題とした。まず、19世紀から20世紀初頭のドイツの音楽文化は、「教養」ある「市民」によって支えられていた。すなわち、音楽的な「市民」とは音楽的「教養」ある「市民」であった。19世紀ドイツの「教養」理念は、特に歴史学、社会学、音楽社会学の分野で研究が進められ、その特徴として、自己研鑽を積み、調和的な人格を形成すること、つまり人格陶冶に関わるものであったことが指摘されている。本研究では、このような「教養」理念を音楽教育の分野において考察の視点として取り入れることとした。次に、先行研究をふまえた上でクレッチュマーの音楽教育改革の特質を捉える新たな視座を示した。それは1「学校音楽教育」と「学校外での音楽育成」の双方を考察の射程に入れ、2音楽的「教養」理念を軸として全体像を捉えるというものである。これに関しては論文として発表している。さらに、ドイツにてクレッチュマーとケステンベルクの音楽教育改革に関する史料の収集を進め、現地図書館内でのみ閲覧可能な当時の教科書や指導書についても調査することができた。それらの史料を扱い、本年度はクレッチュマーの音楽教育改革を考察した。その結果、クレッチュマーは1音楽的「教養」の基礎を養う「学校音楽教育」、2音楽的「教養」ある「市民」として自己研鑽を促す「学校外での音楽育成」という2つの軸から、音楽的な「市民」の育成を図っていたことが明らかになった。19世紀から20世紀初頭のドイツの「市民」として必要とされていた「教養」について整理し、本研究における考察の視点を明確にした。また、クレッチュマーとケステンベルクの音楽教育改革に関する史料についても順調に収集できている。クレッチュマーの音楽教育改革に関しては、先行研究をふまえた上で、その特質を捉える視座を提示した。さらに、その視点から実際に分析を行い、音楽的な「市民」へと至る全体像を考察した。これに関しては、引き続き考察し、論文として発表する予定である。本研究の目的は,クレッチュマーおよびケステンベルクの音楽教育改革を音楽的な「市民」の育成という視点から再考し,その特質を明らかにすることである。本年度は,1クレッチュマーとケステンベルクの著書にみられる音楽的な市民像の比較,2両改革で提示されたレールプランおよびそれに即して作成された教科書や指導書の比較を行った。1について,クレッチュマーは教養ある「市民」だけではなく,「民衆」を含むドイツの全国民が音楽の基礎的な知識や技能を習得し,声楽音楽を中心とした「奉仕する芸術としての音楽」を愛好することを求めた。その一方で,教養ある「市民」に対しては,ギリシア的なエートス論に基づく音楽による人格陶冶の機能を強調し,「民衆」よりも高いレベルで音楽と関わることも要求した。それに対してケステンベルクは,あらゆるドイツ国民が一丸となって「ドイツ音楽」を愛好するべきであるとした。2について,両改革は学校を音楽育成の起点としている点で共通している。しかし,その育成方法には相違がみられた。クレッチュマーの改革では,学校を卒業した後に音楽に関わるための基礎力,特に「自ら楽譜を読んで歌える能力」の育成が重視された。一方,ケステンベルクの改革では,ドイツ民謡やドイツの芸術音楽を歌い,その価値が分かることが重視された。音楽史,形式学などの知識は,ドイツ民謡やドイツの芸術音楽の価値を知ることと関連づけられていた。音楽育成を受けるべき対象が,「市民」から彼らを包括した全ドイツ国民へと拡大される中で,学習内容の重点は「楽譜を読んで歌うこと」から,ドイツ音楽の価値が分かる学びへとシフトしていった。学校および学校外での音楽育成の柱は「ドイツ音楽」を愛好する心情を養うことであり,それはクレッチュマーの改革からケステンベルクの改革にかけて強化されていったといえる。

まず、クレッチュマーの音楽教育改革における音楽的な「市民」育成の全体像についての論文をまとめる。その後、ケステンベルクの音楽教育改革についても、クレッチュマーの音楽教育改革と同様に、「学校音楽教育」および「学校外での音楽育成」という視点から検討し、音楽的な「市民」育成の全体像を明らかにする。その後、2つの音楽教育改革を比較検討する。音楽教育学ドイツ語添削の謝金が必要なくなったため。史料収集、および学会発表や論文投稿の費用として使用する。
基本的運動能力、機能的動作能力の解析から学童期野球選手の障害因子を解明する

2)機能的動作、基本的動作の縦断的な変化を明らかにする。3)機能的動作、基本的動作と傷害発生の関連を縦断的に明らかにする。
ラマン分光法を用いたウイルス感染のリアルタイム分析

本年度は計画に沿って,DNAウイルスであるアデノウイルスに続き,レトロ(RNA)ウイルスであるレンチウイルスを用い,感染に対するHEK293細胞の応答について研究を進めた。アデノウイルスと同様に,感染3時間で細胞のラマンスペクトルに変化が観測され,ウイルス感染の検出が可能であることが示唆された。レトロウイルスのRNAゲノムは逆転写酵素を経て宿主染色体に組み込まれる。本研究に用いたレンチウイルスは遺伝子組み込み実験用で,カプシドタンパク質を別に合成して与えなければウイルスとして発現することは無い。従って,HEK293に感染すると,組み込み用に与えたEGFPゲノムを宿主細胞に組み込むが,ウイルス自身が増殖することは無い。今回観測されたラマンスペクトルの変化は宿主細胞の変化のみを反映していることが分かる。感染後3,6,12,18,24時間での分析を行ったが,感染細胞のうち50-90%だけに変化が観測された。ウイルス濃度は細胞数に比較して高く,レンチウイルスによる遺伝子導入効率も非常に高いことから,遺伝子発現の停止が生じていることが示唆された。レトロウイルスは感染後に一部の細胞で遺伝子発現を停止し,免疫系によって完全に除去されることを防止する能力を持つ。ラマンスペクトルの解析の結果,非感染-感染細胞を判別するスペクトル成分には,DNAと見られるバンドが強く観測され,遺伝子の複製活動が活性化していることを示唆した。蛍光観測では,EGFPの発現は24時間後でも細胞の30%程度に過ぎず,転写されたタンパク質がスペクトル変化の原因では無いことを示唆している。アデノウイルスと異なるレンチウイルスに関する結果を得ることができた。ヘルペスウイルスは利用していない。キャプシドタンパク質の精製は試験に成功しており,来年度早々に実験に取りかかる準備ができている。予定していたLC-MSの応用は遅れているが,RT-PCRの導入によりレトロウイルスであるレンチウイルスの分析が容易になった。アデノウイルス,レンチウイルスが共に増殖できる293T細胞導入のアイディアを得ることができたため,LC-MSを利用しなくても,ウイルス感染に対する細胞の反応を研究することができる。HEK293細胞で増殖可能なアデノウイルスと,遺伝子組み込みしか生じないレンチウイルス,レンチウイルスの外殻であるキャプシドタンパク質に対する細胞の反応を比較し,感染に対する細胞の変化をスペクトル変化の相関を明らかにすることを目指す。アデノウイルスとレンチウイルスの比較によって,ウイルス種の違いによる細胞の初期反応の違い,すなわちウイルス種の早期判別の可能性を検証する。初期反応は侵入してきた外殻タンパク質への細胞の反応であり,細胞のウイルス判別能に関する知見が得られる。アデノウイルス,レンチウイルスが共に増殖できる293T細胞を用いる場合,増殖による産物の違いを検出することとなる。従って,ラマン分光分析による判別が可能である場合は,増殖産物の異なるウイルスは全て判別できることを示唆する。レンチウイルスとキャプシドタンパク質を比較した場合,早期のスペクトル変化が細胞の異質ゲノム侵入と異質タンパク質侵入のどちらに対する反応かを知ることができる。本年度は研究をいったんとりまとめ,論文を国際雑誌J. Biomed. Opticsに投稿した。感染3時間での早期検出の成功,10回以上の繰り返し実験によるデータの増加と信頼性の向上に関して報告した。ラマン分光法を用いて細胞へのウイルス感染が検出できる原理については,まだ明確に説明されていない。細胞には細胞周期のほかにも,培養条件など細胞内の分子組成を変化する要因がある。原理的には,ウイルス感染が,これらの変異を超えた大きな分子組成変化を生じるときのみ,検出が可能である。ウイルス感染初期の分子組成変化はまだあまり研究されておらず,分からないことが多い。早期発現タンパク質の一つであるE2は,ウイルスのDNAを複製するDNAポリメラーゼであり,ウイルス複製経路で最初に多量に発現するタンパク質である。E2発現量をモニターした結果,感染後3時間では同タンパク質の発現はほとんど無く,免疫染色でも確認できなかった。従って,感染後3時間では,細胞内のウイルスの複製はまだ始まっていないことが確認された。本年度は新しいイメージングラマンシステム,イメージング赤外分光システム,自動スペクトル処理ソフトウェアなど,新装置,技術の開発と導入を進めた。イメージングラマンシステムの導入により,細胞内に局在する変化を探査することが可能になった。また,アデノウイルスと比較するためにレンチウイルスを導入し,同じHEK293細胞に対する感染実験を進めている。HEK293細胞が継代の繰り返し回数により,培養速度が異なることが示唆された。ウイルス感染の検出には同世代の培養細胞を比較するため,ウイルス感染による分子組成変化を検出できることには違いないが,母細胞の性質が異なると感染に伴う分子組成変化に影響が生じる可能性がある。従って,培養されたHEK293細胞の性質が一定になるように,培養条件を調整する研究を行い,研究計画が一部計画通りに達成できなかった。

今回観測されたラマンスペクトルの変化は宿主細胞の変化のみを反映していることが分かる。感染後3,6,12,18,24時間での分析を行ったが,感染細胞のうち50-90%だけに変化が観測された。ウイルス濃度は細胞数に比較して高く,レンチウイルスによる遺伝子導入効率も非常に高いことから,遺伝子発現の停止が生じていることが示唆された。レトロウイルスは感染後に一部の細胞で遺伝子発現を停止し,免疫系によって完全に除去されることを防止する能力を持つ。ラマンスペクトルの解析の結果,非感染-感染細胞を判別するスペクトル成分には,DNAと見られるバンドが強く観測され,遺伝子の複製活動が活性化していることを示唆した。蛍光観測では,EGFPの発現は24時間後でも細胞の30%程度に過ぎず,転写されたタンパク質がスペクトル変化の原因では無いことを示唆している。アデノウイルスと異なるレンチウイルスに関する結果を得ることができた。ヘルペスウイルスは利用していない。キャプシドタンパク質の精製は試験に成功しており,来年度早々に実験に取りかかる準備ができている。予定していたLC-MSの応用は遅れているが,RT-PCRの導入によりレトロウイルスであるレンチウイルスの分析が容易になった。アデノウイルス,レンチウイルスが共に増殖できる293T細胞導入のアイディアを得ることができたため,LC-MSを利用しなくても,ウイルス感染に対する細胞の反応を研究することができる。実用性の評価を目的とし,検出・判別技術の高度化,性能評価実験を実施する。異なるウイルス種間(レンチ,ヘルペス)の判別能力の有無や,キャプシドタンパク質への細胞応答を解析することにより,エンベロープや遺伝子タイプが細胞に与える影響を解明する。LC-MS解析により,個別の変動タンパク質について種別とコードする遺伝子を同定し,ウイルス感染に対する細胞の応答を解明する。ラマン分光分析と共にGFPを用い,in situでの検証実験を行い,本技術の信頼性と実用化の可能性を評価する。異なるウイルスを用いて感染検出を目指す。再現性の確認を実施すると共にデータを蓄積し,信頼性の高い検出モデルを開発する。ラマン分光分析が検出した2段階の感染過程について,それぞれの原因を定量的に解明する。新しく導入したラマンイメージングシステムを用い,ウイルス感染に伴う変化が細胞内のどの場所で生じ移動していくのかを調査する。ラマンイメージ測定には数時間以上要する。タンパク質分解などを起こさず細胞活動を停止させる,低温処理技術の開発が必要である。二次元電気泳動とLC-MSにより変動タンパク質を同定する。変動タンパク質の局在化の観測とGFPラベルにより,ターゲットタンパク質の増減とラマンスペクトルの変化の相関を明らかにする。
多重双晶粒子を核とするナノ・ミセルの構造と物性

我々は先ず、多重双晶粒子(MTP)を成長させるための真空装置を作製した。これを用いて、球形のガラス容器を350°Cに加熱し、この表面に最初にNaClを1500A蒸着した。この表面にさらにAu(100A)とNaCl(1000A)を交互に蒸着し、NaCl蒸着膜中に埋め込まれたAu粒子を作製した。この容器にチオール水溶液(今回はメルカプトプロピオン酸を使用、濃度は10^<13>mol/1)を注ぎ込み、NaClを溶かし、MTPの表面にチオールを化学吸着させ、イガ栗状またはウニ構造状の分子集合体を作製することに成功し、これを「MTPナノミセル」と名付けた。この様にして作製したMTPナノミセルの水溶液を電子顕微鏡のメッシュ上に滴下し、乾燥させて透過電子顕微鏡(TEM)、透過電子回折及び走査電子顕微鏡で解析し、殆どのAu粒子がMTPナノミセルになっていることを確認した。その平均の大きさは約70Aであった。TEMで観察する際に電子線を強くすると複数のAu粒子が、強い電子線に照射されている場所に向かって移動し、35分後にはMTPナノミセル同士が融合する現象を発見した。またMTPナノミセル水溶液をSi(111)表面に滴下し全反射角X線分光(TRAXS)で元素分析を行い、AuとSを検出しMTPナノミセル構造を確認した。このMTPナノミセルを電子分光(UPS,MIES)により研究し、カルボキシル基が外側に張り出していることからチオールがAuのMTPに化学的に結合していることを確認した。また核磁気共鳴(NMR)による研究も行った。またこのMTPナノミセルは、金属塗布剤、カラムクロマトグラフィ、触媒、デバイス、化粧品などに使用できることを指摘した。平成8年度はまず、ナノミセル作製チャンバーの作製を行った。食塩と金の真空蒸着源をチャンバー内に設置し、多重双晶粒子が最も効率よく生成される条件を求めた。次にアルカリハライドと金を交互に真空蒸着蒸着するための蒸着自動制御装置を自作し、これにより多重双晶粒子作製を自動化することに成功した。こうして、食塩結晶内に埋め込まれた金の多重双晶粒子をパイレックスビーカーに蒸着することで大量に作製し、これをチャンバーより取り出す。これにβ-メルカプトプロピオン酸を10^<-3>M溶かした水溶液を注ぐ事により、食塩が溶かされて、金の多重双晶粒子表面にβ-メルカプトプロピオン酸が化学吸着することにより、多重双晶粒子とアルカンチオールから成るミセル型分子集合体を作製することに成功した。我々はこの分子集合体を「ウニ微粒子」と命名した。このウニ微粒子を透過型電子顕微鏡で観察した結果、生成したほとんどの微粒子の内部構造が多重双晶構造になっていることを確認した。また作製した微粒子の大きさの平均は7nmであった。さらに作製したウニ微粒子の重水溶液についてプロトン核磁気共鳴スペクトルを測定した結果、アルカンチオールは金微粒子表面上でジスルフィド(2量体)化して吸着していることがわかった。昨年度(平成8年度)において、AuのMTPにアルカンチオールを吸着させ、イガ栗(またはウニ)状の分子集合体を創製することに成功し、この新物質を「MTPナノミセル」と名付けた。今年度はこのMTPナノミセルを透過型電子顕微鏡でさらに詳しく観察・解析した。先ずMTPナノミセルの粒径分布を測定した。

それをみるとガウス分布に近い形をしており、ピーク位置は約70Aで、半値巾は約50Aであった。この試料の透過電子回析パターンには、面心立方格子から現れる回折リングの他に(200)と(220)リングの間に強い付加的なリングが観察された。これは(111)と(220)反射の2重回折によって説明可能であり、このことよりAu粒子が多重双晶粒子であることが実証された。チオールを吸着させると正20面体粒子は「面取りされた球形に近い構造」に変化した。しかし110面体粒子はチオールが吸着しても外形は変化しなかった。また、ドイツのクラウスタール大学のケンプター教授との共同研究により、MTPナノミセルを光電子分光法およびペニングイオン化電子分光法により研究した。その結果、メルカプトプロピオン酸のメルカプト基側が金多重双晶粒子に吸着して外側にカルボキシル基が張り出しているミセル構造になっている事を確認した。またMTPミセルの応用研究として、以下の実験を行った。適切な濃度のMTPミセル水溶液をシリコンウェハ-上に滴下して乾燥し、このシリコンウェハ-を真空中で通電加熱したところ、ウェハ-上に金の1原子層が形成され6×6構造になることを反射高速電子回折により確認した。この実験は、真空蒸着を使わないで金属薄膜を1原子層またはそれ以下の単位で制御して作製できる可能性を示唆している。
人工知能技術を応用した3次元医用画像診断支援システムの開発

本研究では、人工知能技術を応用した3次元医用画像診断支援システムの開発を行った。本研究で開発した人工知能技術は、改良形GMDH(Group Method of Data Handling)-typeニューラルネットワークアルゴリズムで、対象となる医用画像の特徴に適した人工ニューラルネットワークの構造を、医用画像のデータから自動的に自己組織化する機能を備えている。本研究では、従来のアルゴリズムで問題になっていた学習計算における多重共線性の発生を、主成分回帰分析を用いることにより防止して高精度なアルゴリズムを開発した。そして肺癌などの医用画像診断に適用して、その有効性を確認した。平成22年度は、本研究を実行するための改良形GMDH-typeニューラルネットワークスのアルゴリズムの開発を行った。GMIDH-typeニューラルネットワークは以下のような機能を備えている。(1)最適な画像特徴量(入力変数)の自己選択機能マルチスライスCTやMRI装置から得られた3次元画像は、それぞれの装置によって医用画像の画質が大きく具なる。また、対象となる臓器によって医用画像の特徴が大きく異なる。このために、精度の良い画像認識精度を得るためには、対象となる医用画像の種類に最も適した画像特徴量を自己選択することが重要である。このため、ニューラルネットワークスに、対象となる医用画像の特徴に最も適した画像特徴量を自己選択させる機能を持たせた。(2)最適なニューラルネットワークス構造の自己選択機能精度の良い画像認識精度を得るためには、対象となる医用画像の特徴に最も適したニューラルネットワークスの構造を自己組織化する必要がある。このため、GMDH-typeニューラルネットワークスに、対象となる医用画像の特徴に最も適したニューラルネットワークス構造を自己選択させる機能を持たせた。(3)アルゴリズムの高精度化GMDH-typeニューラルネットワークスのアルゴリズムは、進化的計算方法の一種である発見的自己組織化法を用いて多層構造をした人工ニューラルネットワークを構成している。このためニューロンの組み合わせを行うことにより、新しい性質を備えたニューロンを発生させており、このような組み合わせを重ねていくと、統計学上の多重共線性という状態が起こりやすくなりニューラルネットワークの状態が不安定化しやすくなる。本研究では、主成分分析の手法を応用して、GMDH-typeニューラルネットワークスのアルゴリズムの改良を行い、アルゴリズムの安定化と高精度化を試みた。次年度では、これらの機能を備えた改良形アルゴリズムを組み込んだ3次元医用画像診断支援システムを開発する。本年度は、医用画像診断支援システムに組み込むための改良形GMDH-typeニューラルネットワークのアルゴリズムを開発した。この改良形GMDH-typeニューラルネットワークは以下のような機能を備えている。(1)最適な画像特徴量(入力変数)の自己選択機能(2)最適なニューラルネットワークス構造の自己選択機能(3)アルゴリズムの高精度化GMDH-typeニューラルネットワークスのアルゴリズムは、進化的計算方法の一種である発見的自己組織化法を用いて多層構造をした人工ニューラルネットワークを構成する。この人工ニューラルネットワークは、最適な入力変数とネットワーク構造の自己選択機能を備えており、ネットワーク構造は、シグモイド関数型、ラジアルベース関数型、多項式型の3種類のネットワーク構造から予測誤差評価基準を最小にするように自己選択する。これらの機能を備えた改良形アルゴリズムを3次元医用画像診断支援システムに組み込む。3次元医用画像診断支援システムは以下のような機能を持っている。(1)対象臓器を画像認識するための改良形GMDH-typeニューラルネットワークスを組み込んだ画像認識機能(2)画像診断を行うための改良形GMDH-typeニューラルネットワークスを組み込んだ画像診断支援機能平成22年度と平成23年度で開発した、医用画像診断支援システムを用いて、胸部マルチスライスCT画像を用いた肺癌の医用画像診断を行った。この医用画像診断支援システムは、(1)最適な画像特徴量(入力変数)の自己選択機能、(2)最適なニューラルネットワーク構造の自己選択機能などの機能を備えているため、対象となる胸部のマルチスライスCT画像の特徴に最も適したニューラルネットワーク構造を自己組織できる。また、従来のGMDH法の計算過程で問題になっていた多重共線性の発生を防ぐために学習アルゴリズムに主成分分析と回帰分析を適用しており、予測誤差の小さな高精度で安定なウエイトの推定が可能になった。本研究で開発した人工ニューラルネットワークのアルゴリズムは、多層構造型GMDH-typeニューラルネットワークアルゴリズムと、フィードバックループを備えたフィードバックGMDH-typeニューラルネットワークスの2種類に分類できる。本年度は、これらの開発したGMDH-typeニューラルネットワークのアルゴリズムを組み込んだ医用画像診断支援システムを、胸部マルチスライスCT画像に適用して、肺癌の医用画像診断を複数の症例に対して行い肺癌の領域抽出を行った。そして、いろいろな症例に適用することにより問題点を抽出して、これらの問題点を克服するようにアルゴリズムの改良を行い、より実用的な医用画像診断支援システムの開発を行った。

本研究で開発した人工ニューラルネットワークのアルゴリズムは、汎用性が非常に高く、胸部マルチスライスCT画像以外の他の医用画像の解析に対しても十分有効であると考えられるので、今後も本研究を続けていく予定である。肺癌を対象にして、すでにいくつかの症例に対して、開発した改良形GMDH-typ6ニューラルネットワークのアルゴリズムを適用して詳しく解析した。そして、得られた結果を、論文としてまとめることができ、また、国際会議などで発表できた。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究で開発した、改良形GMDH-typeニューラルネットワークのアルゴリズムは、、まだ改良すべき点が多く残っており、来年度は、医用画像診断システムに組み込み多くの症例に適用して、問題点があればアルゴリズムの改良などを行っていく。
がん浸潤・転移における膜型マトリックスメタロプロテアーゼ新規機能の解析

ヒトがん組織に広く発現し、悪性度・浸潤性との相関性が高く、がんの浸潤・転移に重要な役割を果たす膜型マトリックスメタロプロテアーゼ-1(MT1-MMP)の活性制御分子・新規基質を検索し、それらの浸潤・転移に果たす役割を解析することにより、MT1-MMPを分子標的とした診断・治療法の開発へと発展させることが本研究の目的である。MT1-MMPの活性制御分子・新規基質を発現クローニング法により検索し、新規基質として細胞外マトリックス成分でありがん抑制遺伝子産物とされるルミカン及びデコリンを同定した。ルミカン及びデコリンは共にMT1-MMPにより切断されることを見出し、ルミカンの4箇所の切断点を同定した。またルミカン、デコリンは細胞にp21/Waf-1の発現を誘導し、細胞の軟寒天中でのコロニー形成を抑制するが、がん細胞の発現するMT1-MMPによるルミカン及びデコリンの切断はコロニー形成能を回復させることを明らかにした。また、がん細胞のコラーゲン培養によりExtracellular Signal-Regulated Kinase (ERK)が活性化され、活性化されたERKによりMT1-MMPの発現が誘導され、誘導されたMT1-MMPがさらにERKの持続的な活性化を引き起こすという正のフィードバック機構を見出した。そして、その結果として細胞運動が著しく亢進することを示した。以上の結果よりMT1-MMPは様々な細胞外マトリックス成分および関連分子を分解することにより腫瘍原性、運動、浸潤・転移に深くかかわっていることが強く示唆された。
アートがつくる新たな支援者関係、その実証的研究

最終年度は、滋賀県の研究としては、「みんなで歩く、湖(うみ)、島、お寺」カタログを成安造形大学で発刊し、また滋賀県での調査と福井県での調査を比較検討するシンポジュウムを福井県、福井市の文化フォーラム主催にて、「ハナスバ2018ワーク×ライフ=幸福?!アートがしかける仕事と生活のよりよい関係」と題して、2018年8月18日(土)・19日(日)福井北ノ庄クラシックスで開いた。また、フランスのリールにあるCCOMSセンター長のジャンリュック・ローラン医師とイタリアのトリエステの精神保健センターのマリオ・コルッチ医師を11月に日本に招き、アートのもたらす精神科医療への効用について多文化間精神医学会にて講演をしてもらった。アートは、アートセラピーでもなく、アール・ブリュットでもない、効用を脱医療化のために用いていることが説明された。全体として言えることは、一見、アートという精神医療に無関係であるものを巻き込むことで、精神科医療に支えられる患者の、日常的ニーズへ介入して、幅広い対応が可能となる見込みがあることが判明したということである。そのためにも、町興しになる様な産業としてアートがある場合、それに患者とともにスタッフが従事し関係することを超えて、敢えてアーティストの精神医療への「参画」を招くことが、今まで無いような医療化からの解放を生む。それがゆえに、アートに頼りアートに近しい地域では、フランスのリールやイタリアのトリエステのアートの活用は模倣可能であろう。しかし、単にアートが好きな地域幹部による無理強いとも言える様な安易な模倣は許されるものではない。この場合の、「参画」とはどの様なことを意味するのか、美学的な検討を行う必要が出てきた。この「参画」は、ハンナ・アーレントの言うところの、労働、仕事、活動の何になるのか、さらなる研究を行う課題に到達した。福祉領域でのアートの活動は、滋賀県では伝統があり、福井県ではさほど伝統がない印象があった。初年度の調査は、その理由を把握することにあてがわれた。福祉の領域では、福井県でも、若狭町にて「きらりアート展」というアートフェスティバルが開かれており、成果が発表される機会はあった。しかし地域を起こしながらアート活動を行う事例は見つからなかった。しかし朝倉由希氏が浄善寺で継続している地域起こしとアートの連携の動きを発見することができた。NPO法人福井芸術・文化フォーラムの開くハナスバという公開議論の場にも朝倉氏が参加しており、今後とも連携していきたい。滋賀では、研究分担者の成安造形大学の岡田修二教授とともに社会福祉法人glowの活動を取材した。滋賀県の病院については、スタッフの地域でのアート活動への参加の可能性がある病院の候補を挙げるにとどまった。病院に関しては、福井済生会病院にて、研究協力者の福井工大西尾浩一教授が指導する学生の参加型アートの設営に協力し、アンケートをスタッフに行った。フランスのリールからアートを用いた際の支援者側の変化の説明を成安造形大学で受けることができた。聞き取りは、研究分担者の松嶋健准教授と行った。その結果、アート活動は、精神科病院の外で生活する患者の病理的でない能力を開発し、いわゆるアールブリュットやアートセラピーとは異なる、反精神医学的な活動として機能していることがわかった。医療福祉と異なる局面をアートが開いていており、それを市民性と名付けることが理解できた。国内研究に関しては遅れている。なぜなら、福井県に関しては、精神科の患者とスタッフが参画できるようなアートを用いた持続的な活動は発見できなかったからである。滋賀県に関しては、地域の動きは独特の発展があるが、精神科病院スタッフと一緒にアート活動を行うことはない。いずれも、本研究チームの独自の動きでゆっくりつないでいくしかないという事情がある。海外との連携研究では、計画より進んでいる。代表者が分担をしていた別の科研費研究の成果により、アートの活動を用いて精神科病院を使わずに地域医療を行うことで有名な、フランスのリールから関係者に来日講演してもらい、聞き取り調査を実行することができたからである。この情報を岡山で代表者が講演した際に、法律家からの研究協力依頼を受けるなどした。2017年8月4日、福井県済生会病院が、福井工業大学と協力してきたホスピタルアートの取り組みや、癒しの空間作りについて、10名程度の事務スタッフと意見交換会を実施した。協力スタッフは事務スタッフのみで、様々な職種の参加は得られなかった。当病院は、NPO法人と連携した街つくりには進む段階にはまだなく、ゆっくりしたスピードで進めていくとのことだった。アートをはじめとする療養環境の改善、あるいは癒やしの環境づくりは、トップの意識次第、経営理念や経営戦略次第とも考えられ、ボトムアップでは一気に進まないことが伺えた。8月5日には、当科研費研究の中間報告会を開催するために、福井工業大学にゲストとして札幌市立大学蓮見学長を迎え、代表者、分担者、連携研究者が科研研究の振り返りを行った。滋賀では、アールブリュトでもアートセラピーでもない形で、アートと障害者支援を組み合わせる方策を探していたが、滋賀県の社会福祉法人、信楽青年寮と成安造形大学が協力することとなり、「みんなで歩く、湖(うみ)、島、お寺展」を2018年2月10日から2018年3月3日まで成安造形大学にて開いた。2月12日には、代表者、分担者も全員参加した作品鑑賞会・対話会が開かれた。

この際、支援者、当事者、学生、教員、全ての者をクリエーターにするという方針が確認され、これがフランスのリールから教えられたアートと障害者支援を組み合わせる一つの立場であることが確認できた。フランスのリースの精神医療の状況を知るために11月10日、ピエールドゥリオン、リール第2大学精神医学講座名誉教授を招聘し、明治学院大学で開催された第24回多文化間精神医学会で講演してもらった。11月11日には、代表者の三脇がドゥリオン名誉教授から聞き取り調査をして、その翻訳は多文化間精神医学会雑誌「こころと文化」vol17no1p56-63に掲載された。今まで国内の研究は、遅れ気味であり、未だパイロット研究状態にあったが、滋賀県において信楽青年寮という具体的な協力機関を見つけることができて一気に目的を達成することができたため、国内の研究が予定に追いついてきたためである。国際的な協力関係に基づく研究は、予定通りのスピードで進んでいる。最終年度は、滋賀県の研究としては、「みんなで歩く、湖(うみ)、島、お寺」カタログを成安造形大学で発刊し、また滋賀県での調査と福井県での調査を比較検討するシンポジュウムを福井県、福井市の文化フォーラム主催にて、「ハナスバ2018ワーク×ライフ=幸福?!アートがしかける仕事と生活のよりよい関係」と題して、2018年8月18日(土)・19日(日)福井北ノ庄クラシックスで開いた。また、フランスのリールにあるCCOMSセンター長のジャンリュック・ローラン医師とイタリアのトリエステの精神保健センターのマリオ・コルッチ医師を11月に日本に招き、アートのもたらす精神科医療への効用について多文化間精神医学会にて講演をしてもらった。アートは、アートセラピーでもなく、アール・ブリュットでもない、効用を脱医療化のために用いていることが説明された。全体として言えることは、一見、アートという精神医療に無関係であるものを巻き込むことで、精神科医療に支えられる患者の、日常的ニーズへ介入して、幅広い対応が可能となる見込みがあることが判明したということである。そのためにも、町興しになる様な産業としてアートがある場合、それに患者とともにスタッフが従事し関係することを超えて、敢えてアーティストの精神医療への「参画」を招くことが、今まで無いような医療化からの解放を生む。それがゆえに、アートに頼りアートに近しい地域では、フランスのリールやイタリアのトリエステのアートの活用は模倣可能であろう。しかし、単にアートが好きな地域幹部による無理強いとも言える様な安易な模倣は許されるものではない。この場合の、「参画」とはどの様なことを意味するのか、美学的な検討を行う必要が出てきた。この「参画」は、ハンナ・アーレントの言うところの、労働、仕事、活動の何になるのか、さらなる研究を行う課題に到達した。国内の研究としては以下である。福井県では、福井済生会病院で陶芸のワークショップを行い、地域のアーティストの参画と、患者の参画を試みて、スタッフ側の意識の変化を調査したい。また、ホスピタルアートの研究者の講演を夏に用意して、スタッフ研修を行いたい。その際には、地域でのアート活動とホスピタルアートの出会いの場所を創設したい。
染色体重複モデル動物を用いた科学的根拠に基づく自閉症治療法開発の基礎的研究

ヒトにおける自閉症スペクトラム(ASD)の原因の1つとされる15番染色体の部分重複自閉症モデルマウスを用い、ASDに特徴的な「社会性の欠如」や「物事へのこだわり」等の症状の改善方法を検討した。モデルマウスの脳内セロトニン量が出生直後から低下していたので、生後3週間にわたり選択的セロトニン再取込阻害薬のフルオキセチンを投与すると、成長後社会性の低下とセロトニン濃度が改善したが、「こだわり行動」や「繰り返し行動」は改善しなかった。電気生理学的な解析ではモデルマウスにおける背側縫線核の深い膜電位や興奮性入力の低下が改善された(Science Advances, in press)。我々は内匠らによって作製された染色体の重複による自閉症のモデルマウス(以下patDp/+マウス、Nakatani et. al. Cell, 2009)を用い、自閉症スペクトラム障害(ASD)に特徴的な症状である「社会性の欠如」や「物事へのこだわり」等、共通した表現型の分子基盤を解明し、その知見に基づいた症状の改善方法について、開発基盤を確立することを目指す。まず、生後約3週間に及ぶ選択的セロトニン再取込み阻害薬(SSRI)のフルオキセチン(FLX)の処置により、成長後に社会性の欠如が改善されることを見いだした。しかし、FLX処理は「物事へのこだわり(水迷路で観察)」、「繰り返し行動(Rotarodで観察)」は改善しなかった。また、中脳におけるセロトニン含有量の減少もFLX処置で改善された。社会性の改善に関与するセロトニン受容体の検索を行うと、生後FLX処理とほぼ同じ時期にセロトニン1A受容体のアゴニストである8OH-DPATを処置するとFLX同様に社会性の改善が再現されることが分かり、一方セロトニン4受容体を欠損している動物でもFLXの効果は再現された。よってこれまでのところ、社会性の改善にはセロトニンの生後一定期間の1A受容体の刺激が重要であり、4受容体は関係ないことが明らかになった。昨年度、我々は内匠らによって作成された自閉症のモデルマウス(以下patDp/+マウスNakatani et al., Cell, 2009)用いた行動学的実験において、生後約3週間に及ぶ選択的セロトニン再取り込み阻害薬のフルオキセチン(FLX)の処理により成長後の社会性行動が改善したが、「物事へのこだわり(水迷路で観察)」、「繰り返し行動(Rotarodで観察)」は改善できないことを見いだした。この動物は脳内セロトニン系の異常が既に認められていたが(Tamada et al., PLos One 2010)、電気生理学的解析により、背側縫線核のセロトニン神経細胞が野生型動物(WT)に比べ、深い静止膜電位を示し、興奮性のグルタミン酸ニューロンの入力が少ないことを明らかにすると共に、この性質が上記FLX投与によって改善されることを見いだした。また、社会性行動の改善はセロトニン1A受容体の8OH-DPATの投与によっても改善することが昨年度には判明していたが、この完全作用はオキシトシン受容体のアンタゴニストL-368,899の同時投与によりキャンセルされてしまうことも明らかとなった。ASD最大の特徴である「社会性の欠如」が生後一定期間だけの薬物処理によって改善された背景の1つとして、背側縫線核のセロトニン神経の性質の改善があるらしいことが電気生理学的手法を用いて判明した。また、生後一定期間だけのセロトニン1A受容体刺激による「社会性行動の改善」はその背景にオキシトシンの作用を介しているらしいことが判明した。現在、以上の結果について論文へまとめているところである。これまで我々は内匠らによって作成されたヒトにおける自閉症の原因の1つとされる15番染色体の部分重複をマウスで再現させた自閉症のモデルマウス(以下15q dupマウス、Nakatani et.al.,Cell 2009)を用い、自閉症スペクトラム障害(ASD)に特徴的な症状である「社会性の欠如」や「物事へのこだわり」等、共通した表現型の分子基盤を解明し、その知見に基づいた症状の改善方法について検討を行ってきた。15q dupマウスの脳内セロトニン(5-HT)量が出生直後から低下していること(Tamada et.al., Plos One 2010)を端緒に、生後3週間に及ぶ選択的5-HT再取込み阻害薬のフルオキセチン(FLX)処理を行うと、成長後、社会性の低下と5-HT濃度が改善することを見いだした。一方で「こだわり行動(水迷路で観察)」、「繰り返し行動(Rotarodで観察)」は改善しなかった。社会性の改善については生後1週目から3週目までの5-HT1A受容体アゴニストである8OH-DPATの投与でも再現されたことから、FLXの効果は増加した5-HTによる1A受容体刺激が関与することが示唆された一方、8OH-DPATによる社会性の改善はオキシトシン(OXY)受容体のアンタゴニストL-368,899の同時投与によりキャンセルされた。それを踏まえ、今年度は同時期にOXYのみを投与すると、社会性の改善が再現された。生後一定期間のオキシトシン受容体の刺激が15q dupマウスの社会性改善に重要であることが示唆された。

電気生理学的解析では、背側縫線核の5-HT細胞において15q dupマウスで深い静止膜電位を示し、興奮性グルタミン酸神経の入力が少ないことが判明し、どちらも上記FLX処理で改善することを見いだした。現在、これらの知見について論文にまとめ投稿し、受理された(Science Advances, in press)。ヒトにおける自閉症スペクトラム(ASD)の原因の1つとされる15番染色体の部分重複自閉症モデルマウスを用い、ASDに特徴的な「社会性の欠如」や「物事へのこだわり」等の症状の改善方法を検討した。モデルマウスの脳内セロトニン量が出生直後から低下していたので、生後3週間にわたり選択的セロトニン再取込阻害薬のフルオキセチンを投与すると、成長後社会性の低下とセロトニン濃度が改善したが、「こだわり行動」や「繰り返し行動」は改善しなかった。電気生理学的な解析ではモデルマウスにおける背側縫線核の深い膜電位や興奮性入力の低下が改善された(Science Advances, in press)。ASD最大の特徴であり、問題でもある「社会性の欠如」が生後の一時的な薬物処理によって成長後でも改善されることが複数の薬物処置で再現性良く確認できた。そのメカニズムにはセロトニンの1A受容体の関与が示唆された。このことは大きな成果である。また、ASDに共通して見られるいくつかの特徴的な症状の中で「社会性の欠如」と「物事へのこだわり」、「繰り返し行動」は異なるメカニズムで制御されているらしいことが分かった。セロトニン1A受容体刺激が「社会性の回復」だけでなく同時に背側縫線核のセロトニン神経の性質の改善も担っているのか、その場合オキシトシンの介在を必要としているのか、などを解明する必要がある。昨年度はできなかった「物事へのこだわり」、「繰り返し行動」の分子的メカニズムの解明について進める。神経薬理学どのようなメカニズムでセロトニンの1A受容体が「社会性」に関係するのか、脳の解剖学的、電気生理学的、分子生物学的なレベルで精査を進めていく。また、薬物処理によって改善されなかった「物事へのこだわり」、「繰り返し行動」についての分子メカニズムの解明に取り組む。
糞便中のmRNAを標的にした大腸がん診断法の確立を目指して

便潜血検査に代わる検査法として、糞便中のmRNAを指標にした大腸がん診断法(Fecal RNA Test)の確立を目指した。標的分子としてCOX-2、MMP-7、Snailを用いて、大腸がん、腺腫、コントロール(大腸に腫瘍性かつ炎症性病変のない)を用いたblind case-control studyによる当検査法の有用性の検討とconventional PCRに代わる遺伝子増幅法により検査時間の短縮を検討した。コントロール15例でPCRの条件を最適化し、がん68例、大きさが1cm以上の腺腫14例と条件設定に使用しないコントロール15例を他の検査者に臨床情報をblind化し検討した。がんに対するCOX-2、MMP-7、Snailの各々の感度は85%、65%、50%であり、腺腫では各々57%、50%、57%であった。3分子いずれかが陽性であるFRTの感度はがん88%、腺腫86%で、便潜血検査1回法(FOBT)では各々73%、36%でありFRTが統計的に有意であった。特異度はFRT100%、FOBT80%であるが、統計的有意差はなかった。今回の検討でもFRTは高感度・高特異度な検査法であることが判明した。nested PCR法に変わる方法として定量性と反応時間の短縮を目的に、Real-time PCRによる検討を行った。Real-time PCRでの3分子各々のプライマーの選択ならびに最適化を行い、PCRのアッセイ時間は1/2-1/3に短縮が可能となった。がん68例、コントロール30例検討では、がんでのCOX-2、MMP-7、Snailの感度は各々85%、62%、50%、FRTは90%であり、特異度は100%であった。同一症例でのnested PCRとReal-time PCRの3つの分子の感度はほぼ一致した。Real-time PCR法でもFRTは時間短縮も含め有用性の高い検査法である。内視鏡的、病理学的に診断した癌患者75例、腺腫19例、正常コントロール37例の糞便サンプルを収集し、全例糞便RNAを抽出した。サンプルの記号化とともにnested PCR法による解析を3分子について施行中である。LAMP法ならびにReal-timePCR法導入による検査時間の短縮を目指し、3分子各々のプライマー設定ならびに、各方法の最適化中である。Real-time PCRでの3分子各々のプライマーの選択ならびに最適化を行ったところ,PCRのアッセイ時間は1/2-1/3に短縮が可能となった。Nested,Real-time PCRともに行った大腸がん68例とコントロール30例による比較検討では,Real-time PCRでも適切な条件を設定することにより特異度100%を得た。がんでのCOX-2,MMP-7,Snailの感度は各々85.3%,61.8%,50.0%であり,3分子どれか1つでも陽性であるFecal RNA Testは89.7%であった。またnested,Real-time PCRでの感度はCOX-2では85.3%:85.3%、MMP-7では64.7%:61.8%,Snailでは50.0%:50.0%とほぼ一致していた。より定量性の高いReal-time PCRにおいてもFecal RNA Testは感度、特異度ともnested PCRと同等であることを確認した。
抗酸化食品による動脈硬化予防作用に関する多面的研究

ポリフェノール、カロテノイド、ビタミンC、Eを中心とした抗酸化食品成分を用いて、動脈硬化の危険因子として、血管内皮機能障害、マクロファージの活性化、脂肪細胞の肥大化に対する影響を検討した。血管内皮細胞においては活性酸素種産生、炎症性サイトカイン発現、単球接着といった炎症反応を抑制することが示された。マクロファージにおけるMMP産生、スカベンジャー受容体発現、さらには泡沫化を抑制する可能性が見出された。脂肪細胞においても分化を抑制しインスリン抵抗性を改善する可能性が示された。抗酸化食品成分は、その抗酸化作用のみならず、多面的な抗動脈硬化作用を発揮する可能性が示された。本研究では、抗酸化物質(ポリフェノール、カロテノイド等)の更なる動脈硬化予防作用を明らかにするため、「血管内皮機能障害」、「脂肪細胞の肥大化に伴う炎症反応」、「マクロファージの活性化」に対する抑制機序を検討することを目的としている。初年度である本年度は、血管内皮機能障害とマクロファージの活性化について、検討を行った。まず、血管内皮機能に対する影響を、果実(レモン、ライチ)、葉物野菜(シソ、サツマイモ葉部)に含まれるポリフェノールについて検討した。その結果、レモン、ライチ、シソ、サツマイモ葉部の抽出液は血管内皮細胞を介したLDLの酸化を抑制し、さらにレモン、ライチから抽出したポリフェノールは血管内皮細胞への単球の接着を抑制することが明らかとなった。また、マクロファージの活性化に対する影響を、ポリフェノール(レモン、ライチ)、カロテノイド(アスタキサンチン)、紅麹について検討した。その結果、レモン、ライチポリフェノール、アスタキサンチンにおいて、プラークの破綻を惹起するMMP-9の活性抑制作用が認められた。さらに、アスタキサンチン、紅麹においては、酸化LDLの取り込みに関与するスカベンジャー受容体の発現を抑制することが明らかとなった。現在、それぞれの作用について、PKC経路やMAP kinase経路、NADPH oxidase活性に及ぼす影響を検討し、作用メカニズムの解明を目指している。本研究では、抗酸化物質(ポリフェノール、カロテノイド等)の更なる動脈硬化予防作用を明らかにするため、「血管内皮機能障害」、「脂肪細胞の肥大化に伴う炎症反応」、「単球/マクロファージの活性化」に対する抑制機序を検討することを目的としている。2年目である本年度は、血管内皮機能障害および、単球/マクロファージの活性化に対する改善作用について、作用メカニズムの解明をあわせて、更なる検討を行った。その結果、カロテノイドの一種であるアスタキサンチンにおいて高血糖刺激による血管内皮機能障害を、PKC-βIIの活性化抑制を介して、改善する可能性が示された。さらにポリフェノールを豊富に含むコーヒーを健常成人に摂取させたところ、血管内皮機能の指標であるFMDの改善が認められた。また、単球/マクロファージの活性化については、レモン、ライチ、シソ、レッドビート、サツマイモ葉部、バルサミコ酢など、いくつかのポリフェノールを含む食品において、活性酸素種産生、炎症性サイトカイン発現、内皮細胞への接着、マクロファージの泡沫化などを抑制することが示された。これらの抗炎症作用の多くは転写因子NF-κBの活性抑制を介する可能性が示唆された。これらの成果は、国内外の関連学会での発表、海外学術雑誌への掲載が示すとおりである。本研究では、食品に含まれる抗酸化物質(ポリフェノール、カロテノイド、ビタミン等)の更なる動脈硬化予防作用を明らかにするため、「血管内皮機能障害」、「脂肪細胞の肥大化に伴う炎症反応」、「単球/マクロファージの活性化」に対する抑制機序を検討することを目的としている。最終年度の本年度は、生理的な刺激因子として、グルコース、酸化LDLを用いて、「血管内皮機能障害」ならびに「単球活性化」に対する抗酸化物質の改善作用を検討した。さらに、これまでにin vitroにおいて強いLDL酸化抑制作用を示したサンプルについて、ヒトに摂取させた際の効果を検討した。その結果、高グルコース刺激によって生じる血管内皮機能障害を、ビタミンC、ビタミンEならびにイチゴ抽出液が柳制し、さらに作用機序としてPKC-βIIの活性化抑制が関与している可能性を見出した。また、酸化LDLによる血管内皮傷害に対し、ポリフェノールを豊富に含むシソならびにピスタチオの抽出液が抑制効果を有することが明らかとなった。これらの作用には、NF-κBの活性化阻害が関与している可能性が示唆された。そして、高い抗酸化能を有するブドウ由来ポリフェノールを健常成人に摂取させ、摂取後の血管炎症に対する影響を検討したところ、血管内皮機能の改善ならびに単球活性化の抑制作用が示された。以上、本研究よりポリフェノールやビタミンC、ビタミンEなどの抗酸化物質は、抗酸化作用に加え、血管内皮機能障害や単球活性化といった血管炎症を改善することが明らかとなり、動脈硬化予防に寄与する可能性が示唆された。
子宮頚部扁平上皮細胞の癌化過程でのアポトーシスと増殖にかかわる諸因子の解明

【目的】HPVに伴う子宮頚癌の発症過程における細胞の消退特性(Apoptosis細胞比率:%Apo)および増殖特性(PCNA陽性細胞比率:%GF)の増減とp53、bcl-2、WAF-1などの遺伝子蛋白の発現との関連性を検討し、前癌病変である異形成での予後因子を明らかにすることを目的とした。【方法】正常上皮10例、軽度・中等度異形成(CINI・II)15例、高度異形成・上皮内癌とした。HPV感染の有無は、HPV16-DNA probeを用いたISH法および抗HPV16/18-E6抗体を用いたABC法により判定した。p53、bcl-2、WAF-1およびPCNA陽性細胞はABC法により、Apoptosis細胞はTUNEL法で検出した。%Apo、%GFは500細胞中に占める染色陽性細胞数の百分率とした。【成績】HPV感染陽性と判定した正常上皮7例、CINI・II14例に比べCINIII24例、浸潤癌10例について以下の結果を得た。1)%ApOはCINI・II群に比べCINIII群で有意に低下し、%GFは正常上皮群に比べCINI・II群で、及びCINI・II群に比べCINIII群で有意に増加した。2)正常上皮に比べCINではp53、WAF-1の発現率は増加し、wt-p53の発現率は減少したが、bcl-2発現率に変化はなかった。3)CIN病変において%Apoの減少にはbcl-2の発現とwt-p53の発現消失が関与し、一方、%GFの増加にはp53、WAF-1の発現の増加が関与している。【結論】異形成が上皮内癌、浸潤癌へと進展する予後を推定する指標として、wt-p53の発現消失およびp53、WAF-1の発現増加が考えられる。【目的】HPV16型(HPV16)感染による子宮頚癌の発症機序を明らかにする目的で,HPV16感染陽性の子宮頚部異形成(異形成)における細胞の消退特性(Apoptosis細胞比率:%Apo)および増殖特性(PCNA陽性細胞比率:%GF)と,p53蛋白(p53)やbcl-2蛋白(bcl-2)の発現との関連性を検討した.【方法】異形成44例を対象とし,その10%緩衝formalin固定paraffin包埋組織を材料とした.HPV16はDNA probeを用いたin situ hybridization法にて,p53, bcl-2の発現およびPCNA陽性細胞はmicrowave処理後,免疫組織化学染色法にて,Apoptosis細胞はTUNEL法にて検出した.p53,bcl-2の発現は,5%以上の細胞が染色された場合を陽性とし,%Apo,%GFは500細胞以上中に占める染色陽性細胞の百分率とした.【成績】1)HPV16は23例(52%)に検出され,そのうちp53陽性は13例(57%),bcl-2陽性は7例(30%)であった.%Apoはp53陽性群と陰性群の間で差はないが,bcl-2陽性群(4.12±3.07%)では陰性群(8.26±3.93%)に比し有意な低値を示した.%GFはp53陽性群(18.38±7.56%)では陰性群(15.24±9.98%)に比し高値を示したが,bcl-

2陽性群と陰性群の間で差はなかった.2)HPV16は中層から表層の異型細胞やKoilocyteに検出され,Apoptosis細胞は中層から表層に,PCNA陽性細胞は旁基底層から中層に局在し,p53は旁基底層と一部中層の細胞に,bcl-2は中層の細胞に検出された.なお,HPV16陽性細胞のほとんどは,TUNEL法でも染色された.【結論】HPV16感染細胞はApoptosisに陥る.しかし,異形成ではbcl-2発現によるApoptosisの抑制とp53発現に伴う増殖特性の亢進とにより細胞増殖動態が増進する.【目的】HPVに伴う子宮頚癌の発症過程における細胞の消退特性(Apoptosis細胞比率:%Apo)および増殖特性(PCNA陽性細胞比率:%GF)の増減とp53、bcl-2、WAF-1などの遺伝子蛋白の発現との関連性を検討し、前癌病変である異形成での予後因子を明らかにすることを目的とした。【方法】正常上皮10例、軽度・中等度異形成(CIN I・II)15例、高度異形成・上皮内癌(CIN III)29例、浸潤癌14例を対象とし、それらのホルマリン固定パラフィン包埋組織を材料とした。HPV感染の有無は、HPV16-DNA probeを用いたISH法および抗HPV16/18-E6抗体を用いたABC法により判定した。p53、bcl-2、WAF-1およびPCNA陽性細胞はABC法により、Apoptosis細胞はTUNEL法で検出した。%Apo、%GFは500細胞中に占める染色陽性細胞数の百分率とした。【成績】HPV感染陽性と判定した正常上皮7例、CIN I・II14例に比べCIN III24例、浸潤癌10例について以下の結果を得た。1)%ApoはCIN I・II群に比べCIN III群で有意に低下し、%GFは正常上皮群に比べCIN I・II群で、およびCIN I・II群に比べCIN III群で有意に増加した。2)正常上皮に比べCINではp53、WAF-1の発現率は増加し、wt-p53の発現率は減少したが、bcl-2発現率に変化はなかった。3)CIN病変において%Apoの減少にはbcl-2の発現とwt-p53の発現消失が関与し、一方、%GFの増加にはp53、WAF-1の発現の増加が関与している。【結論】異形性が上皮内癌、浸潤癌へと進展する予後を推定する指標として、wt-p53の発現消失およびp53、WAF-1の発現増加が考えられる。