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唐時代における道教礼拝像の革新性とその展開

本研究は、唐時代(618-907)における道教の礼拝対象=道教像について、美術史研究の視点で関連作品の調査と考察を試みたものである。研究の中心としたのは、道教最高神格である三清、つまり元始天尊、霊宝天尊、道徳天尊の主尊像三体一組からなる礼拝像=三清像の出現についての検討である。三清像の出現時期は唐時代後半を遡ることはなく、地域的には四川において創始された可能性が高いこと、またその造像形式は道教信仰者・教団が独自に生み出したとは考えにくく、同時期の仏教造像から少なからず影響を受け出現したと考えられることを明らかにした。本研究は、中国で生まれた最大の宗教である「道教」において礼拝対象となる偶像=道教像を対象としている。道教が国家的庇護をうけた唐時代(618-907)における、道教礼拝像の革新的変容とその展開、特に道教最高神格の三清、つまり元始天尊、霊宝天尊、道徳天尊の主尊三体一組からなる礼拝像の出現過程の解明を目指しながら、唐時代における道教像の広がりと展開、特にその造像様式にみられる地方性の諸相、これら諸問題について解き明かす研究である。初年度は、代表者が企画・主担当者として2009年に大阪市立美術館ほか計3会場で開催した展覧会「道教の美術」において作成した道教関連作品データを底本とし、近年中国で刊行・発表が相次ぐ数多くの道教美術に関する図録・報告書及び論文を収集した上で、現存する唐時代道教像のデータベース作成をすすめた。また2014年3月には韓国初の道教美術展「韓国の道教文化」において韓国所在の道教関連作品の調査を行い、展覧会を担当した安京淑氏をはじめとする考古歴史部門学芸研究士の方々に作品に関する情報を提供いただいた。道教が国家的庇護をうけた唐時代(618-907)における、道教礼拝像の革新的変容とその展開、特に道教における最高神格の三清、つまり元始天尊、霊宝天尊、道徳天尊の主尊三体一組からなる礼拝像の出現過程の解明を目指しながら、唐時代における道教像の広がりと展開、特にその造像様式にみられる地方性の諸相、これらの諸問題について解き明かす研究である。今年度も前年度に続き、研究代表者が企画・主担当者として2009年に大阪市立美術館ほか計3会場で開催した展覧会「道教の美術」において作成した道教関連作品データを底本とし、近年中国で刊行・発表が相次ぐ数多くの道教美術に関する図録・報告書及び論文を収集した上で、現存する唐時代道教像のデータベース作成をすすめた。また国内に所蔵される、唐時代および先行する道教像の調査を実施した。あわせて、中国・社会科学院考古研究所の研究者による助力のもと、河北省、山西省、河南省に分布する関連作品について実地調査を行った。そのなかで、南北朝時代の造像にはみられない、道教像における立像の出現という問題について検討した。さらに道教思想研究の文脈を離れ、「礼拝像」としての造像的見地において、元始天尊、霊宝天尊、道徳天尊の主尊三体一組からなる礼拝像の出現に際しては、同時期の仏教造像と密接な関連を有していた可能性があることが明らかとなった。本研究は、中国で生まれた最大の宗教である道教において礼拝対象となる偶像=道教像、なかでも唐時代(618-907)における道教最高神格の三清像、つまり元始天尊、霊宝天尊、道徳天尊の主尊像三体一組からなる礼拝像の出現過程の解明を目指しながら、唐時代における道教像の広がりと展開、特にその造像様式にみられる地方性の諸相を解明することを目的としている。今年度も前年度に引き続き中国に赴き、四川省資陽市および綿陽市を中心に現地に遺る石刻・摩崖造像の調査を実施した。あわせて近年中国国内で刊行・発表が相次ぐ数多くの道教美術に関する図録・報告書及び論文を収集し、唐時代道教像のデータベースの拡充をすすめた。本研究により次の諸問題を明らかにすることができた。[1・地域性]三清像は四川において出現された可能性が高く、その後中国各地に伝播し今日にまでその伝統が引き継がれていること。[2・造像形式の影響問題]三体の主尊像を併置(三天尊並坐)するという三清像の造像形式は、道教信仰者・教団が独自に生み出したとは考えにくく、同時期の仏教造像から少なからず影響を受け出現したと考えられること。その具体的な先例としては、唐時代に多くみられる釈迦・阿弥陀・弥勒など三体一組からなる三如来並坐像を想定すべきであること。[3・年代]現存する作例の調査に基づく限り、三清像の出現時期は唐時代の末を遡ることはなく、各地への伝播はもっぱら宋時代以降に盛んとなったと推測できること。以上、道教における中心尊格でありながらその図像・造像的検討がいまだほとんどなされていない三清像について、多くの新知見を得ることができた。

研究の中心としたのは、道教最高神格である三清、つまり元始天尊、霊宝天尊、道徳天尊の主尊像三体一組からなる礼拝像=三清像の出現についての検討である。三清像の出現時期は唐時代後半を遡ることはなく、地域的には四川において創始された可能性が高いこと、またその造像形式は道教信仰者・教団が独自に生み出したとは考えにくく、同時期の仏教造像から少なからず影響を受け出現したと考えられることを明らかにした。本研究はおおむね順調に進展している。近年中国で刊行・発表が相次ぐ数多くの道教美術に関する図録・報告書及び論文を収集した上で、現存する唐時代道教像のデータベース作成をすすめることができた。また国内に所蔵される、唐時代および先行する道教像の調査を実施している。さらに河北省、山西省、河南省の関連作品について現地調査を行った。中国仏教・道教美術史2014年度に引き続き、関連資料の収集とデータベースの拡充および作品調査を行う予定である。海外については、四川省に分布する関連作品について効率的且つ実効性のある調査を実施する。また国内に所蔵される、唐時代および先行する隋時代の道教像の調査を実施することができた。あわせて、唐時代の道教美術を研究する上で欠かせない、『旧唐書』『新唐書』などの史書にみられる道観関連の記載などを確認した。中国における現地調査の準備段階で次年度に遅らせるべきとの情報を得たことから、その費用を繰り越した。また中国では関連図書が毎年発行されており、次年度も重要な資料を得られるよう予算執行を調整した。今年度の研究成果である関連資料の収集とデータベースの作成、および国内所蔵作品の実見調査に基づき、中国に赴く予定である。まず第一回として、山西省西南部河南省洛陽周辺に分布する関連作品について効率的且つ実効性のある調査を実施する。中国調査に伴う不測の事態に際しては、これまでの調査等でご協力いただいた中国各地の考古研究機関と太い繋がりのある朱岩石氏(中国社会科学院考古研究所漢唐研究室主任)らの助力を得る予定であり、本研究の確実な遂行に万全を期している。中国における現地調査および、最新資料の収集にあてる予定である。招聘に伴う交通費の先方負担などがあり、当初計画より海外調査費用を安価に抑えることができた。初年度より繰り越すことができた助成金により、中国においてより広汎な現地調査が可能となり、これに使用する見込みである。
アーユルヴェーダ天然薬物から肥満および糖尿病予防物質の開拓

アーユルヴエーダ医学において肥満や糖尿病の予防や治療に用いられるSalacia reticulata(幹,根部)をはじめとしたSalacia属植物について,抗肥満および抗糖尿病作用の解析ならびに活性成分の探索研究に着手した結果,スリランカ産S.reticulata MeOH抽出エキスに,二糖類であるショ糖および麦芽糖負荷ラットにおける強い血糖値上昇抑制作用が認められた.一方,単糖のブドウ糖負荷モデルにおいては殆ど作用を示さなかったことから,その作用様式としてα-グルコシダーゼ阻害活性が示唆された.そこで,ラット小腸刷子縁膜由来α-グルコシダーゼ阻害活性を指標に活性成分の探索を実施したところ,新奇なチオ糖スルホニウム硫酸塩構造を有するsalacinolおよびkolatanolを単離し,その化学構造をNMRおよびX線結晶構造解析などにより決定した.さらに,salacinolについてin vivoにおける糖負荷試験を検討した結果,市販α-グルコシダーゼ阻害剤のacarboseよりも強い血糖値上昇抑制作用が認められ,これらのチオ糖誘導体が新たなα-グルコシダーゼ阻害剤の候補化合物として有望であることが示された.また,Salacia属植物(S.chinensis)に含有されるキサントン配糖体mangiferinやトリテルペン成分に,白内障や神経障害などの糠尿病合併症の予防効果が期待できるアルドース還元酵素阻害活性が認められた.一方,S.reticulataの熱水抽出エキスについてZucker fattyラットや高脂肪食飼育ラットにおける体重増加の抑制傾向が認められ,また含有ポリフェノール成分にはブタ由来膵リパーゼおよびラット脂肪組織由来リポプロテインリパーゼ阻害活性が認められたことから,小腸からの脂肪の吸収と脂肪蓄積の両方を抑制すると示唆される結果を得,肥満や高脂血症予防に有効であることが明らかとなった.その他,アーティチョーク(Cynara scolymus L.,葉部)含有セスキテルペンに血清中中性脂質抑制作用が認められ,また,flavonoid類について,アルドース還元酵素阻害活性,AGEs生成抑制活性およびラジカル消去活性における活性発現の必須構造や構造活性相関を明らかにするなど,本研究課題の当初計画についてほぼ達成したものと考えられる.アーユルヴエーダ医学において肥満や糖尿病の予防や治療に用いられるSalacia reticulata(幹,根部)をはじめとしたSalacia属植物について,抗肥満および抗糖尿病作用の解析ならびに活性成分の探索研究に着手した結果,スリランカ産S.reticulata MeOH抽出エキスに,二糖類であるショ糖および麦芽糖負荷ラットにおける強い血糖値上昇抑制作用が認められた.一方,単糖のブドウ糖負荷モデルにおいては殆ど作用を示さなかったことから,その作用様式としてα-グルコシダーゼ阻害活性が示唆された.そこで,ラット小腸刷子縁膜由来α-グルコシダーゼ阻害活性を指標に活性成分の探索を実施したところ,新奇なチオ糖スルホニウム硫酸塩構造を有するsalacinolおよびkolatanolを単離し,その化学構造をNMRおよびX線結晶構造解析などにより決定した.さらに,salacinolについてin vivoにおける糖負荷試験を検討した結果,市販α-グルコシダーゼ阻害剤のacarboseよりも強い血糖値上昇抑制作用が認められ,これらのチオ糖誘導体が新たなα-グルコシダーゼ阻害剤の候補化合物として有望であることが示された.また,Salacia属植物(S.chinensis)に含有されるキサントン配糖体mangiferinやトリテルペン成分に,白内障や神経障害などの糠尿病合併症の予防効果が期待できるアルドース還元酵素阻害活性が認められた.一方,S.reticulataの熱水抽出エキスについてZucker fattyラットや高脂肪食飼育ラットにおける体重増加の抑制傾向が認められ,また含有ポリフェノール成分にはブタ由来膵リパーゼおよびラット脂肪組織由来リポプロテインリパーゼ阻害活性が認められたことから,小腸からの脂肪の吸収と脂肪蓄積の両方を抑制すると示唆される結果を得,肥満や高脂血症予防に有効であることが明らかとなった.その他,アーティチョーク(Cynara scolymus L.,葉部)含有セスキテルペンに血清中中性脂質抑制作用が認められ,また,flavonoid類について,アルドース還元酵素阻害活性,AGEs生成抑制活性およびラジカル消去活性における活性発現の必須構造や構造活性相関を明らかにするなど,本研究課題の当初計画についてほぼ達成したものと考えられる.南アジア地域の伝統医療体系であるアーユルヴェーダ医学において用いられる薬用植物約120種の抽出エキスを調製し,ラット小腸刷子縁膜由来α-グルコシダーゼ阻害活性,ラットレンズ由来アルドース還元酵素阻害活性およびブタ膵臓由来リパーゼ阻害活性といったin vitroスクリーニングを実施し,数種の侯補素材を見い出した.次いで,ショ糖および麦芽糖負荷ラットモデルにおける血糖値上昇抑制作用(in vivo)試験により,最も有望な素材として現地で肥満や糖尿病の予防あるいは治療に,主に茶剤などとして供されている薬用食物Salaciareticulata(幹・根部)をはじめとしたSalacia属植物が見い出された.そこで,Salacia属植物の抗肥満および抗糖尿病作用の解析ならびに活性成分の探索研究に着手した.スリランカ産S.reticulata MeOH抽出エキスに,二糖類であるショ糖および麦芽糖負荷ラットにおける強い血糖値上昇抑制作用が認められた.一方,単糖のブドウ糖負荷モデルにおいては殆ど作用を示さなかったことから,その作用様式としてα-グルコシダーゼ阻害活性が示唆された.そこで,ラット小腸刷子縁膜由来α-グルコシダーゼ阻害活性を指標に活性成分の探索を実施したところ,新奇なチオ糖スルホニウム硫酸塩

構造を有するsalacinolおよびkolatanolを単離し,その化学構造をNMRおよびX線結晶構造解析などにより決定した.さらに,salacinolについてin vivoにおける糖負荷試験を検討した結果,市販α-グルコシダーゼ阻害剤のacarboseよりも強い血糖値上昇抑制作用が認められ,これらのチオ糖誘導体が新たなα-グルコシダーゼ阻害剤の侯補化合物として有望であることが示された.また,Salacia属植物に含有されるキサントン配糖体mangiferinやトリテルペン成分に,白内障や神経障害などの糖尿病合併症の予防効果が期待できるアルドース還元酵素阻害活性が認められた.一方,S.reticulataの熱水抽出ユキスについてZucker fattyラットや高脂肪食飼育ラットにおける体重増加の抑制傾向が認められ,また含有ポリフェノール成分にはブタ由来膵リパーゼおよびラット脂肪組織由来リポプロテインリパーゼ阻害活性が認められたことから,小腸からの脂肪の吸収と脂肪蓄積の両方を抑制すると示唆される結果を得,肥満や高脂血症予防に有効であることが明らかとなった.その他,医薬品のα-グルコシダーゼ阻害剤の重篤な副作用である肝障害については,S.reticulata熱水抽出エキスは,むしろ肝障害に対して保護的に作用することや,抗酸化作用,胃粘膜保護作用などを有することを明らかとしており,平成14年度の当初計画について,ほぼ達成したものと考えられる.平成14年度に引き続き,アーユルヴェーダ生薬の抽出エキスを作製し,各種スクリーニング試験を経て,肥満あるいは糖尿病予防効果に有望な素材を探索した.その結果,アーティチョーク(Cynara scolymus L.,葉部)のMeOH抽出エキスにオリーブ油負荷マウスにおける血清中中性脂質上昇抑制作用を見出した.活性を指標に分離・精製したところ,guaiane型セスキテルペンのcynaropicrin, aguerin Bおよびgrosheiminが活性成分として見出されるとともに,新規セスキテルペン配糖体cynarascoloside A-Cを単離・構造決定した.
盲ろう者の触覚による非言語情報活用促進に関する認知神経心理学的研究

指点字通訳のエキスパートが通訳を行う時の指先のタッピング強度を圧力センサーにより計測した圧力値を対象として,プロソディのある音声を指点字へ通訳した場合とそうでない場合(平坦な韻律の音声の指点字通訳およびビープ音に合わせたタッピング)を比較した結果,タッピング強度の時間変動は,プロソディのある音声を通訳する際に有意に大きかった。また,指点字通訳者がプロソディのある音声を通訳している際には,そうでない場合と比較して,右前頭前野(眼窩前頭回)の酸化ヘモグロビン量が有意に増加した。また、両実験で使用された音声刺激の話者の情動を推測する課題を健常対照群54名に実施し、同一の音声を1名の熟練した通訳者が通訳した指点字を3名の盲ろう者が読み取り,健常者と同様の話者情動評定を行った。健常者と盲ろう者のPearsonの積率相関係数は,肯定的および平坦なプロソディに関してはそれぞれr=.995,r=.987と高い相関を示し,否定的プロソディではr=.642であった。これらの結果から,盲ろう者が熟練通訳者の指点字から話者の情動を読み取ることができることが明らかになった。眼窩前頭回はプロソディを含む非言語情報処理に関与する部位であることも知られており,本研究の結果から,通訳者が非言語的側面に注意を向けた通訳処理を行っているかを示す,指点字通訳時のプロソディ処理レベルのインデックスとしてこの領域の活動が使用できる可能性が示された。本研究の結果から,盲ろう者の指点字読解および通訳者の指点字通訳では,いずれもプロソディ情報が指のタッピングを通じて表現・利用されているエビデンスが示された。またこのエビデンスを根拠に,プロソディ情報の活用を指点字読解および通訳の訓練課程において強調することは,盲ろう者のコミュニケーションをさらなる拡大に資することができる。眼窩前頭回はプロソディを含む非言語情報処理に関与する部位であることも知られており,本研究の結果から.通訳者が非言語的側面に注意を向けた通訳処理を行っているかを示す,指点字通訳時のプロソディ処理レベルのインデックスとしてこの領域の活動が使用できる可能性が示された。指点字通訳では,いずれも情報が指のタッピングを通じて表現されているエビデンスが示された。
ネット「世論」と世論の関連についての探索的研究

平成18年度は、ネット「世論」を支える層であるインターネット利用者の特性を詳細に検討した。インターネットから1種類でも情報を入手したと回答した者を「インターネット利用者」とし、デモグラフィック要因との関連をみたところ、性別では統計的に有意な差は認められ、男性で「利用者」が多かった。一方、年代では、統計的に有意な差はみられなかった。教育程度では、統計的に有意な差がみられた。「大学・大学院」で「利用者」が多く、「専門学校・職業訓練校・短大・高専」で利用者が少なかった。ただ、これは男性と女性の教育程度の差を反映していると考えられる。職業別では、統計的に有意な差がみられ、「自由業・管理職、専門職・技術職」で「利用者」が多く、「農業・商工業・サービス業」「事務職、販売・サービス、労務職、パート・アルバイト」「主婦」で少なかった。また、「利用者」が選挙のどのような点に注目しているかを検討したところ、「小泉内閣の業績」「郵政民営化法案反対の候補と刺客候補の対決」で「利用者」の注目度が高かった。また、投票行動に関しては、「投票参加」については「利用者」の参加が多かったが、「投票方向」については、「利用者」と「非利用者」で差は見られなかった。「利用者」が争点化されたことへの注目度が高く、投票参加が高かったことは興味深い結果である。ネット「世論」に影響を与えるものとして、自民党が総選挙の際に開催した政策懇談会に注目した。政策懇談会の参加者の多くが、自らのメルマガやブログに懇談会の様子を記述し、ブログについては、通常の記事よりコメントやトラックバックが多い傾向が観察された。このような点から、このような懇談会が選挙戦略上、一定の効果を持つことが考えられた。平成17年度においては、総選挙が予定されていなかったが、郵政民営化をめぐって突如衆議院が解散されたため、その機会を捉えて世論調査をおこなうこととした。有権者がどの程度インターネットを利用しているのかを把握することは重要だと考えられるためである。世論調査は2005年9月の総選挙投票日後に、東京都府中市の有権者1000名を対象に郵送調査法で実施し、回収率は40%弱であった。調査からは、今回の選挙においてインターネットからの情報は有権者にあまり利用されていなかったことが判明した。衆院選について、「政党・候補者・政治家のホームページ」「新聞社やテレビ局のホームページ」「個人のホームページ」「ヤフーなどのポータルサイト」「掲示板」から情報を入手したかどうかを尋ねたところ、最も多かった「政党・候補者・政治家のホームページ」でも約10%ほどであった。この数値は、「NHKのニュース」「民放のニュース」など既存のマスメディアが50%以上あげられていたことを考慮すると低いものである。従って、ネット上の「世論」が世論に対して直接的に大きな影響があるとは考えにくい。しかし、「週刊誌・月刊誌」「スポーツ紙・夕刊紙」よりは多くあげられていたこと、また若年層において利用が多かったことは注目するべきところである。ネット「世論」については、総選挙の際には、アルファ・ブロガーと呼ばれる一部の先端的とされるブロガーが自民党支持ないしは、自民党の勝利を予測するような現象が見られた。これらの点は注目されるべきところであり、ネット「世論」の機能についてさらに検討が必要なことを示している。
補強切土斜面の合理的設計法に関する研究

本研究は、補強切土斜面の安定化問題を論ずるものであり、補強機構および斜面の安定特性を理論的手段と二つの現場実験に基づいて検討し、その結果より合理的設計法を提案した。極限つりあい法による斜面安定設計法の種々の不都合を避けるために、有限要素法によるハイブリッド斜面安定設計法を開発した。本解析法は、有限要素法と極限つりあい法を組み合わせたものであり、破壊すべり面は、せん断強度低減法を用いてひずみの発達を調べることにより決定し、その破壊すべり面に沿う斜面安定の安全率は応力の破壊基準により決定する。ハイブリッド法によって得られた安全率および斜面の破壊パタ-ンはビショップ法のものと非常に近いことが明かにされた。開発したハイブリッド法の補強切土斜面に対する実設計への適用性を確かめるために、二つ野外実験を行うとともに、実験結果に対する解析的検討も行った。さらに、土と補強材とのひずみを適合させた極限つりあい法による簡便設計法も提案し、実験斜面に適用した。以上の結果から以下の点が明かにされた。(1)ハイブリッド法による予測補強材軸力と実測値はほぼ一致している。(2)実際に生じた小規模のすべり面はハイブリッド法による予測結果とほぼ一致している。(3)予測破壊すべり面は、実測値より得た補強材の最大引張力が現れる点を通り、かつ簡便法によるすべり面とも整合性がある。(4)ハイブリッド法による安全率は実測軸力値を用いて算定した簡便法による値とほぼ一致している。以上により、開発したハイブリッド斜面安定設計法が実設計へ十分適用できることが確認できた。また、簡便設計法も適用可能であることが示された。まず、土と補強材との境界面において、拘束状態のダイレイタンシ-の特性を表現するための、せん断応力とせん断変位、またせん断による垂直応力の増加とせん断変位の関係がそれぞれバイリニアとして理想化し、簡単な弾塑性理論に基づいた弾塑性ジョイント要素の力学的モデルを提案した。つぎに、補強切土斜面を対象として、提案した弾塑性ジョイント要素を考慮した弾塑性有限要素解析を行い、筆者らによってすでに得られた実大野外実験結果と比較し、解析の妥当性を確認した。また、上記した解析モデルにもとづいて、斜面への負荷レベル、補強材の長さ、補強材の配置方法、地盤の初期状態などを変化させたシミュレ-ション解析を行い、補強切土斜面の安定機構の検討を行った。その結果、補強斜面における応力レベルおよびせん断ひずみが補強材の影響により減少し斜面の安全率が増加するメカニズムを詳細に明らかにした。さらに、極限つり合い法による斜面安定設計法の種々の不都合を避けるために、有限要素法と極限つり合い法を組み合わせたハイブリッド斜面安定設計法を開発した。提案したハイブリッド法においては、安全率を応力の破壊基準より、破壊すべり面をひずみの破壊基準より求めるものであり、破壊すべり面はせん断強度低減法にもとづいてせん断ひずみの発達を調べることにより決定される。つぎに、提案したハイブリッド斜面安定設計法を無補強斜面に適用したところ、両者の破壊パタ-ンがうまく追跡でき、また無補強斜面の破壊パタ-ンが慣用のビショップ法のものと非常に近いことが分かり、その適用性が確認された。今後、野外実験によりハイブリッド斜面安定設計法の検証を行うとともに、簡便設計法の確立にも努める。前年度に開発したハイブリッド斜面安定解析法を検証するため、大阪府北部の砂岩系の風化残積土の切土斜面において、実大野外実験が行われた。実験は二段階に分けて行われた。第一段階では、斜面下部を道路施工位置まで二回に分けて切土を行い、六ヶ月間計測し、第二段階では、さらに2mの切土を行い、一ヶ月間計測した。ハイブリッド解析法による予測は、実験前に実施するType A予測で行われた。

第一段階の実験結果に対して、Type A予測結果の妥当性を確認し、さらに第二段階の予測解析を行うことにより、第二段階の掘削深さを決定した。以上の実大野外実験結果および解析結果に基づいて、極限つり合い法に基づく既往の設計法の問題点を明確にし、土と補強材とのひずみを適合させた極限つり合い法による簡便設計法を提案した。本簡便設計法では、すべり面と各補強材の交角および地山のせん断ひずみにより補強材の軸ひずみを評価する手法が導入されている。補強切土実験に対するハイブリッド解析値と実測値あるいは簡便法による値とを比較することによって、以下の点が確認できた。(1)ハイブリッド法による予測補強材軸力と実測値はほぼ一致している。(2)実際に生じた小規模のすべり面はハイブリッド法による予測結果とほぼ一致している。(3)予測破壊すべり面は、実測値より得た補強材の最大引張力が現れる点を通り、かつ簡便法によるすべり面とも整合性がある。(4)ハイブリッド法による安全率は実測軸力値を用いて算定した簡便法による値とほぼ一致している。以上により、開発したハイブリッド斜面安定設計法が補強切土斜面の挙動を適確に実現していることが明かになり、その実設計への適用性が確認できた。
ファイブロサイト及び関連幹細胞による皮弁生着・延長、創傷治癒の新規治療法の開発

創傷動物モデルとしてマウスの下肢リンパ浮腫モデルとラットの下肢虚血肢モデルを作成した。それぞれの動物モデルに脂肪幹細胞を投与し下肢リンパ浮腫モデルではリンパ管の再生を確認した。下肢虚血肢モデルでは、虚血肢の血行改善を確認した。さらに脂肪幹細胞と投与に加え、皮弁を虚血肢に移植すると、さらなる血行改善を認めた。今研究で作成した2つの創傷動物モデルは様々な幹細胞や細胞移植による組織再生、血流改善効果および創傷治癒促進に応用でき、臨床への新規治療法の開発に役立つと考える。まず近交系マウス(BALB/C、雌)から採取した全血より単核球細胞分画を採取しフローサイトメトリーでFibrocyteの膜表面マーカーであるCD45,CD34,ビメンチンがすべて陽性の細胞を確認したが陽性細胞数は少量であった。陽性細胞が少なかったため、マウスの全血より単核球細胞分画を採取し、細胞培養を行った。Fibrocyteの細胞培養を行ったが、増殖スピードが遅かったので、培養条件を変えて培養し一定の細胞数が得られるようになったが、肉眼的形態及びフローサイトメトリーでの解析では、Fibrocyteの性質を維持した細胞は少なく、分化して幹細胞の性質を失った細胞が多く認められた。Fibrocyteの性質を維持したままで培養増殖できる培養条件を確立することを検討中である。創傷モデルとしてマウスの下肢リンパ浮腫モデルを作成した。具体的にはマウスの鼡径部に30Gyの放射線を照射し1週間後、鼠径周囲を全周性に切開し顕微鏡下でリンパ管を焼灼抜去し、皮膚縫合は皮膚が連続しないように隙間ができるように筋肉に縫合し、リンパ浮腫モデルを作成した。作成した下肢リンパ浮腫モデルに細胞を移植しない群ではリンパ管の再生は認めなかったが、脂肪幹細胞を注入した群では、蛍光色素を使ったリンパ管蛍光造影法でリンパ管の再生を確認した。その成果は日本形成外科基礎学術集会で報告した。幹細胞移植によりリンパ浮腫を改善した本法は今後のリンパ浮腫改善の新規治療法の開発につながると考えられる。また当初皮弁作成モデルにより幹細胞の投与の効果を判定する予定であったが、皮弁作成モデルより血流の回復が肉眼的にわかりやすい下肢の虚血モデルも作成中である。今後下肢虚血および皮弁作成モデルに幹細胞を投与し皮弁生着や延長効果、血流改善効果および創傷治癒促進について検証し新規治療法の開発につなげたいと考える。近交系マウス(BALB/C、雌)から採取した全血より単核球細胞分画を採取しフローサイトメトリーでFibrocyteの膜表面マーカーであるCD45,CD34,ビメンチンがすべて陽性の細胞を確認したが陽性細胞数は少量であったので、移植および解析に使用するために、Fibrocyteの細胞培養を行ったが、Fibrocyteの性質を維持したまま増殖させるのが、困難であった。色々な培養条件で培養を行ったが、解析および移植用に必要なFibrocyteの細胞数を培養することが出来なかった。創傷モデルとして前年度マウスの下肢リンパ浮腫モデルを作成し、脂肪幹細胞を注入した群では、リンパ管の再生を確認した。その成果は平成24年に日本形成外科基礎学術集会で報告した。また当初の計画では皮弁作成モデルにより幹細胞の投与の効果を判定する予定であったが、皮弁作成モデルより血流の回復が肉眼的にわかりやすい下肢の虚血肢モデルを今年度作成した。具体的には、ラットの下肢への動脈を切離後、同部に放射線を照射して虚血肢モデルを作成した。そのモデルにFibrocyteを移植する予定であったが、培養がうまくいかず、代わりに脂肪由来幹細胞を移植して、効果を検討した。脂肪由来幹細胞単独投与でも虚血肢の改善を認めたが、同時に皮弁を付加したほうが、改善効果がより高いことを確認し、その成果は平成26年4月に米国で開催されたThe Symposium on Advanced Wound Care/Wound Healing Society 2014で報告した。今研究で作成したマウスの下肢リンパ浮腫モデルおよびラットの下肢虚血肢モデルは様々な幹細胞や細胞移植による組織再生、血流改善および創傷治癒促進効果の検証に応用でき、臨床への新規治療法の開発に役立つと考える。Fibrocyteの細胞培養を行ったが、増殖スピードが遅かったので、培養条件を変えて培養し一定の細胞数が得られるようになった。培養増殖した細胞が培養条件で膜表面マーカーの発現が違うかフローサイトメトリーで解析中である。

Fibrocyteの性質を維持したままで培養増殖できる培養条件を確立することは、今研究だけでなく今後のFibrocyteを使用する研究にも有用と思われる。創傷モデルとしてマウスのリンパ浮腫モデルを作成した。具体的にはマウスの鼡径部から後肢の皮下および軟部組織を主要血管のみを温存して全周性に顕微鏡下で剥離しリンパ浮腫が発生するようにモデルを作成した。作成したリンパ浮腫モデルは肉眼的に浮腫を認めるだけでなく、蛍光色素を使ったリンパ管蛍光造影法でリンパ管の断絶とリンパ液の鬱滞を確認した。次にマウスの脂肪から抽出し培養増殖した脂肪幹細胞をリンパ浮腫モデルのマウスに移植し創傷治癒促進やリンパ浮腫の改善、リンパ管再生などの効果を検討中である。リンパ浮腫モデルへの幹細胞の移植は創傷治癒の検証だけでなく各種癌の術後に発生するリンパ浮腫の新規治療法の開発につながると考えられfibrocyteや脂肪幹細胞など移植し効果を検証していきたい。また同時に皮膚欠損モデルおよび皮弁作成モデルにも投与し皮弁生着・延長効果や創傷治癒促進について検証し新規治療法の開発につなげたいと考える。Fibrocyteの培養を行っているが、Fibrocyteの性質を維持したまま増殖している細胞数が少なく、移植する細胞数に足りないため、現在培養条件を調整し検討中である。すでにマウスの下肢リンパ浮腫の創傷モデルを作成しFibrocyteではなく脂肪幹細胞を移植しリンパ管の再生を確認し学会で発表を行った。今後はFibrocyteの性質を維持したまま培養増殖が可能になれば同モデルに移植予定である。また、下肢虚血モデルを作成し、まずは脂肪幹細胞を移植する予定もあり、おおむね順調に進展していると思われます。Fibrocyteのin vitroでの解析はおおむね予定通り進行中である。Fibrocyteの培養を行ったが、増殖スピードが遅く、培養条件を変えて培養増殖を試みて、当初より予定が遅くなったが、その間リンパ浮腫の創傷モデルを作成し脂肪幹細胞を移植し解析中であり、今後はFibrocyteも移植予定でありおおむね順調に進展していると思われます。Fibrocyteを分離培養増殖し、増殖した細胞がFibrocyteの性質を維持していることを確認後、下肢リンパ浮腫モデルおよび下肢虚血モデルに移植する。Fibrocyteを分離増殖が、直ちにうまくいかない場合は、下肢虚血モデルに脂肪幹細胞を移植する。Fibrocyteを分離培養増殖し皮膚欠損モデルやリンパ浮腫モデルおよび皮弁作成モデルなどの動物モデルに移植して解析する。ヒトあるいはマウスからFibrocyteを分離増殖し分化能や遺伝子及びタンパクの発現を評価する実験動物や試薬の購入および研究会への参加費などに使用する予定である。実験動物や試薬の購入および研究会への参加費などに使用する予定である
次世代の磁気冷凍作業物質をめざした磁性ナノコンポジットの気相合成

●TEM観察によれば、ナノコンポジット(以下NC)試料は数nmから30nm程度の結晶粒から構成される多結晶ナノ構造材料であり、上述サイズの銀粒子の中にさらに小さな鉄を含有するサブ粒子を内包する形態のナノ組織も見い出した。●NC中の鉄酸化物は350450°CでのNH_3気流中での熱処理で、顕著な粒成長なしに、窒化物に転換できた。NH_3の流量、H_2によるNH_3の希釈、を制御し、γ-Fe_4Nかε-Fe_3Nを選択的に得ることができた。●数%の濃度に過ぎない鉄酸化物または窒化物が銀中に埋め込まれたNCでは、X線回折法では相同定が不可能だったが、X線吸収端微細構造法の適用によって可能であった。●磁化測定の結果、約120K以上ではこれらNCは超常磁性で、磁性粒子は単磁区で磁気的に孤立している。磁化曲線を解析した結果、磁性粒子のサイズには分布があり、対数正規分布関数で表現できた。●磁気エントロピー変化ΔSを磁化データから計算し、同量の鉄原子を含む常磁性ミョウバンより約一桁大きなΔSを得た。しかしこのゲインは常磁性理論から計算されるより遙かに小さい。この原因の一つが上述の分布であると推論した。●ランジェバン常磁性と対数正規分布を仮定した時のΔSを、幾何学的標準偏差をパラメータとして計算し、粒度分布が超常磁性体のΔSに及ぼす関係を導いた。分布はナノ構造によるΔSの増進を損なう。●鉄窒化物を磁性種とする磁性NCのΔSは、鉄酸化物よりさらに一桁近く大きかった。特に、ε-Fe_3Nではγ-Fe_4Nに較べて鉄原子あたりの磁気モーメントは小さいがΔSは大きかった。原因は、ε-相の飽和磁化の大きな温度依存性がΔSに寄与するためと推論した。●試みた材料の中では、ε-Fe_3Nを磁性種とするものが次世代磁気冷凍作業物質として最有望だが、モーメントサイズの分布を極力抑えることが必要である。●鉄金属、鉄酸化物の強磁性相と銀又は銅マトリクスの系で、様々な条件でコンポジットを合成し、電子顕微鏡等による基礎的な構造解析、PFでのX線吸収スペクトル測定、SQUID磁化計による磁化測定を行った。磁気熱量効果の大きさを評価するため、磁化の温度依存性データからエントロピー変化を数値計算する手順を確立した。これらの結果から、鉄系のナノコンポジットを評価し、その最適合成条件を検討している。●酸化活性の激しい希土類系試料の取扱のためにグローブボックスを整備した。圧縮成型器からこれに試料を移送するため、隔離バルブを持つ移送密閉フラスコを整備した。これを利用して、ガドリニウムを磁性相とするナノコンポジットの合成実験を開始した。●鉄酸化物ナノコンポジット粉末を出発物質として、水素ガス還元、アンモニアガスによる窒化反応により鉄を窒化物相に変換した。磁化測定、顕微鏡観察などから見て、ナノ粒子相の粒子成長は起こっていない。二種類の鉄窒化物相、g′-Fe4N、e-Fe3Nの二種類をつくり分けることに成功し、多様な磁気的特性のナノコンポジットの合成の可能性を広げた。

●以上の結果は、ナノ構造材料国際会議(ストックホルム、1998年6月)と日本原子力学会、日本金属学会などで、発表した。●鉄金属、鉄酸化物の強磁性相と銀マトリクスの系で、様々な条件でコンポジットを合成し、電子顕微鏡等による構造解析、PFでのX線吸収スペクトル測定、SQUID磁化計による磁化測定、を昨年度に引き続き行った。磁気熱量効果の大きさを、磁化の温度依存性データからエントロピー変化から評価した。エントロピー変換の直接評価をめざし磁場中比熱の測定を開始した。これらの結果から、鉄系のナノコンポジットを評価し、その最適合成条件を検討している。●鉄酸化物ナノコンポジット粉末を出発物質とし、アンモニアガスによる窒化反応により鉄を窒化物相に変換し窒化物系ナノコンポジットの合成を続けた。二種類の鉄窒化物相、γ'-Fe4N、ε-Fe_3Nの二種類の磁性層について、ナノコンポジットのエントロピー変化を評価し、後者が優れていることを見出した。●以上の結果は、MRS会議(ボストン、1999年12月)と日本原子力学会、日本金属学会などで、発表した。●TEM観察によれば、ナノコンポジット(以下NC)試料は数nmから30nm程度の結晶粒から構成される多結晶ナノ構造材料であり、上述サイズの銀粒子の中にさらに小さな鉄を含有するサブ粒子を内包する形態のナノ組織も見い出した。●NC中の鉄酸化物は350450°CでのNH_3気流中での熱処理で、顕著な粒成長なしに、窒化物に転換できた。NH_3の流量、H_2によるNH_3の希釈、を制御し、γ'-Fe_4Nかε-Fe_3Nを選択的に得ることができた。●数%の濃度に過ぎない鉄酸化物または窒化物が銀中に埋め込まれたNCでは、X線回折法では相同定が不可能だったが、X線吸収端微細構造法の適用によって可能であった。●磁化測定の結果、約120K以上ではこれらNCは超常磁性で、磁性粒子は単磁区で磁気的に孤立している。磁化曲線を解析した結果、磁性粒子のサイズには分布があり、対数正規分布関数で表現できた。●磁気エントロピー変化ΔSを磁化データから計算し、同量の鉄原子を含む常磁性ミョウバンより約一桁大きなΔSを得た。しかしこのゲインは常磁性理論から計算されるより遥かに小さい。この原因の一つが上述の分布であると推論した。●ランジェバン常磁性と対数正規分布を仮定した時のΔSを、幾何学的標準偏差をパラメータとして計算し、粒度分布が超常磁性体のΔSに及ぼす関係を導いた。分布はナノ構造によるΔSの増進を損なう。●鉄窒化物を磁性種とする磁性NCのΔSは、鉄酸化物よりさらに一桁近く大きかった。特に、ε-Fe_3Nではγ'-Fe_4Nに較べて鉄原子あたりの磁気モーメントは小さいがΔSは大きかった。原因は、ε-相の飽和磁化の大きな温度依存性がΔSに寄与するためと推論した。●試みた材料の中では、ε-Fe_3Nを磁性種とするものが次世代磁気冷凍作業物質として最有望だが、モーメントザイズの分布を極力抑えることが必要である。
中学校体育における学習意欲を促す動機づけ雰囲気の実証的研究

本研究では,生徒の学習意欲を促す体育授業における動機づけ雰囲気について,横断的・縦断的な調査による量データと授業介入による実践的な質データを相互補完的アプローチから検討することを目的としている.本研究を推進させることによって,以下の3点を解明することができる.具体的には1生徒の学習意欲を促す体育授業における動機づけ雰囲気について解明できる,2学習意欲の低下を回復・向上させる授業設計や指導方法について,成長段階ごとの特徴が明らかにできる,3中学校3年間を通して学習意欲がどのように変動するのかについて解明できる.さらに,これらの知見をベースに考察を進めることによって,,教育現場に実際的な知見を示すことができ,学習意欲向上を意図する指導への一助になることが期待される.昨年度に引き続き,今年度は2年目となる縦断データを蓄積する重要な年であった.予定していた調査はスムーズに実施することができた.新たに得られた知見としては,体育における学習意欲に原因帰属や体育授業経験などの心理的要因が影響していることが確認された.またそこには性差があることも示された.この2年間の実績として体育授業における熟達雰囲気,協同雰囲気,成績雰囲気が学習意欲と関連していることを横断的データからも確認できており,それらの関連に媒介する要因(目標志向性や集団凝集性)があること,さらに競技種目別に関連性がことなることが確認された.本年度は,3年目の調査を実施する年であり,さらに確実な縦断データの収集を目指す.2018年度は1体育授業における動機づけ雰囲気と学習意欲との関連性について,性差や競技種目などによる違いがあるのかを横断的データを用いて検討し,基礎的データを収集することであった.また2中学校3年間の縦断調査のうち2年目のデータを取集することであった.1に関してはデータ解析ならびに学会発表までは完了できた.2に関しては予定通り調査を開始することができ,予定数の中学校に調査を実施することができた.ただし,2月に取り終えたデータ入力が遅れている結果となった.2018年度は,予定していた調査数は実施でき,2年目の調査に向けて準備を整えることもできた.2019年度は,1新たに予定している調査を進め,3年目の縦断的データの蓄積を目指す.2体育授業における動機づけ雰囲気と学習意欲の関係について学会発表は順調に実施できており,今年度は特に論文化に向けた取り組みが必要になると考える.体育における学習意欲の欠如は,体力低下,社会性や規範意識の鈍麻,運動実施頻度の二極化など重大な教育問題を引き起こす根幹となる.健やかな心身を保ち,豊かなスポーツライフの実現を目指す体育授業では,子どもの学習意欲を促す授業展開が強く求められる.しかし,体育授業には熟達雰囲気(クラス全員の熟達,成長を望む雰囲気),協同雰囲気(仲間と協力し合える雰囲気),成績雰囲気(仲間との競争や勝敗が重視される雰囲気)のように様相の異なる動機づけ雰囲気(授業雰囲気)が存在し,どのような授業雰囲気が生徒の学習意欲向上に有効か厳密な検討が求められる.そこで本研究では,横断的・縦断的な調査による量データと授業介入による実践的な質データを相互補完的アプローチから,生徒の学習意欲を促す体育授業における動機づけ雰囲気について検討することを目的とする.本研究を推進させることによって,1生徒の学習意欲を促す体育授業における動機づけ雰囲気について解明できる,2学習意欲の低下を回復・向上させる授業設計や指導方法について,成長段階ごとの特徴が明らかにできる,3中学校3年間を通して学習意欲がどのように変動するのかについて解明できる.これらを解明することによって,教育現場に実際的な知見を示すことができ,学習意欲向上を意図する指導への一助になることが期待される.現在のところ体育授業における熟達雰囲気,協同雰囲気,成績雰囲気が学習意欲と関連していることが横断的データから確認できる.またそれらの関連に媒介する要因(目標志向性や集団凝集性)の存在も確認している.本年度は体育授業における動機づけ雰囲気と学習意欲の関係について競技種目別に着目した検討を行う.さらに引き続き調査を実施し,確実な縦断データの収集を目指す.平成29年度は1体育授業における動機づけ雰囲気と学習意欲との関係について横断データを用いて検討し,基礎的データを収集することであった.また2中学校3年間の縦断調査を開始することであった.1に関してはデータの解析までは完了できた.2に関しては予定通り調査を開始することができ,予定数の中学校に全4回の調査を実施することができた.しかし,データの入力作業や整理に予想以上の時間がかかり,4回目の調査データの入力が完了していないため,当初の計画からやや遅れている状況である.本研究では,生徒の学習意欲を促す体育授業における動機づけ雰囲気について,横断的・縦断的な調査による量データと授業介入による実践的な質データを相互補完的アプローチから検討することを目的としている.本研究を推進させることによって,以下の3点を解明することができる.具体的には1生徒の学習意欲を促す体育授業における動機づけ雰囲気について解明できる,2学習意欲の低下を回復・向上させる授業設計や指導方法について,成長段階ごとの特徴が明らかにできる,3中学校3年間を通して学習意欲がどのように変動するのかについて解明できる.さらに,これらの知見をベースに考察を進めることによって,,教育現場に実際的な知見を示すことができ,学習意欲向上を意図する指導への一助になることが期待される.昨年度に引き続き,今年度は2年目となる縦断データを蓄積する重要な年であった.予定していた調査はスムーズに実施することができた.新たに得られた知見としては,体育における学習意欲に原因帰属や体育授業経験などの心理的要因が影響していることが確認された.またそこには性差があることも示された.

この2年間の実績として体育授業における熟達雰囲気,協同雰囲気,成績雰囲気が学習意欲と関連していることを横断的データからも確認できており,それらの関連に媒介する要因(目標志向性や集団凝集性)があること,さらに競技種目別に関連性がことなることが確認された.本年度は,3年目の調査を実施する年であり,さらに確実な縦断データの収集を目指す.2018年度は1体育授業における動機づけ雰囲気と学習意欲との関連性について,性差や競技種目などによる違いがあるのかを横断的データを用いて検討し,基礎的データを収集することであった.また2中学校3年間の縦断調査のうち2年目のデータを取集することであった.1に関してはデータ解析ならびに学会発表までは完了できた.2に関しては予定通り調査を開始することができ,予定数の中学校に調査を実施することができた.ただし,2月に取り終えたデータ入力が遅れている結果となった.平成29年度は,予定していた調査数は実施でき,2年目の調査に向けて準備を整えることもできた.ただし,データ入力がやや遅れている状況である.平成30年度は,1最終4回目のデータ入力を早急に進める.2新たに予定している4回の調査を進め,2年目の縦断的データの蓄積を目指す.3体育授業における動機づけ雰囲気と学習意欲の関係について競技種目別に着目した検討を行う.2018年度は,予定していた調査数は実施でき,2年目の調査に向けて準備を整えることもできた.2019年度は,1新たに予定している調査を進め,3年目の縦断的データの蓄積を目指す.2体育授業における動機づけ雰囲気と学習意欲の関係について学会発表は順調に実施できており,今年度は特に論文化に向けた取り組みが必要になると考える.(理由)平成29年度は年4回の調査を予定していた.3回目までは既に完了しているが,4回目の調査データの入力が未完了である.研究計画上,中学生の年度最後の状態を測定するため,調査は2月中旬ごろの実施となり,回収が3月上旬になった.そこからの入力作業が遅れた.(使用計画)迅速にデータ入力及び整理を行うため,データ入力作業にかかる人件費(謝金)として平成30年度に併せて計上する.平成30年度は既に学会発表が決まっていること,それと研究成果の発表報告を調査協力校で行う予定であるため旅費を予定通り計上する.また論文投稿や英文校正に必要なその他の経費も予定通り計上する.(理由)2018年度の2月に実施した調査データ(年度最終データ)の入力が一部未完了である.研究計画上,中学生の年度最終の状態を測定するため,調査は2月中旬ごろの実施となり,回収が3月上旬になった.そこからの入力作業が遅れた.(使用計画)迅速に残されたデータ入力及び整理を行う.そのため,データ入力作業にかかる人件費(謝金)として2019年度に併せて計上する.2019年度は既に学会発表も決まっており,それと研究成果の発表報告を調査協力校で行う予定であるため旅費を予定通り計上する.またデータ数がある程度揃ってきたので論文投稿や英文校正に必要なその他の経費も予定通り計上する.
木材腐朽菌のフェニルアラニンアンモニアリアーゼの発現機構の解明

木材腐朽菌Phanerochaetechrysosporiumより、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ(PAL)を抽出し、培地条件がPAL活性に及ぼす影響、さらに、二次代謝産物ベラトリルアルコール(VA)生合成とPAL活性との関連、PAL活性とリグニン分解酵素(リグニンペルオキシダーゼ)との関連を調べた。PALおよびリグニンペルオキシダーゼは、培地中の炭素源、窒素源のどちらか一方を減少させた培地(HC-LN培地:Kirk基本培地に、グルコース2%(w/v)酒石酸アンモニウム1.2mMを含む、又は、LC-HN培地:Kirk基本培地に、グルコース0.2%(w/v),酒石酸アンモニウム12mMを含む。)でのみ活性が得られ、同培養条件でのみ、VA生合成が観察された。最大PAL活性(58.2pkat/flask)は、LC-HN培地で得られた。一方、HC-LN培地においては、菌体成長速度が減少した培養4日めから10日めにわたって高いPAL活性が観察され、その間、リグニンペルオキシダーゼ活性、VA生合成量は低かったが、培養12日めにリグニンペルオキシダーゼ活性、VA生合成が活発化すると同時に、PAL活性の減少が観察された。類似した現象は、LC-HN培地でも観察された。以上のことから、次の3点が明らかとなった。1.P. chrysosporiumのPALは二次代謝で発現する。2.PAL活性と、培地に蓄積したVA量は、同時期に増加しない。3.P. chrysosporiumのPALはL-フェニルアラニンが培地中に存在しなくても生産される。
ベンゾピレン分解微生物の分子機構とバイオレメディエーションのための遺伝子およびバイオセンサーの開発

Benzo[a]pyrene(B[a]P)は、5個のベンゼン環からなる多環式芳香族炭化水素(PAH)であり、発ガン性、突然変異誘発性、および内分泌腺撹乱作用を有する難分解性物質である。また、B[a]Pは土壌中など自然環境中に存在するが、その性質から微生物による分解が困難である。そのため、B[a]P分解微生物の報告例は少なく、B[a]P分解酵素やその代謝経路についても明らかにされていない。そこで、本研究において、B[a]P分解菌Paenibacillus sp. B2-1株からB[a]P分解酵素の探索を行い、その特性評価を行うとともに、B[a]Pの分解代謝経路について考察を行った。まず、B[a]Pのみを炭素源とした寒天培地上で、Paenibacillus sp. B2-1株の前培養を行った。前培養により得られた菌体を0.2ppmのB[a]Pを含んだ液体培地に植菌し、25°C、110rpmの条件下で4日間、大量培養を行った。この培養液から、遠心分離機を用いて菌体を回収し、超音波破砕機によって菌体を破砕した後、遠心分離を行い、その上清を細胞抽出液とした。そして、得られた細胞抽出液のB[a]P分解特性をHPLCなどで調べた。その後、細胞抽出液を用いて、陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーを行い、分解酵素の精製を行った。B[a]P分解活性は、B[a]Pの分解代謝物の蛍光波長を測定することで評価した。精製後、得られた酵素の精製度をポリアクリルアミドゲル電気泳動により確認し、B[a]P分解酵素の分子量、補因子の検討、基質特異性、代謝物の同定などの特性評価を行った。Paenibacillus sp. B2-1株の大量培養後、得られた細胞抽出液とB[a]Pを反応させ、HPLCを用いて分解産物を分析した結果、B[a]Pの分解代謝物であるBenzo[a]pyrene-trans-9,10-dihydrodiolとBenzo[a]pyrene-cis-4,5-dihydrodiolが生成されていることがわかった。さらに、この細胞抽出液を精製した後、得られたB[a]P分解酵素はゲル濾過クロマトグラフィーとSDS-PAGE、Native-PAGEの結果から、サブユニットを構成している酵素であり、その分子量は約440kDaであることがわかった。また、得られた酵素は、NADPHおよびNADHを添加した際、B[a]Pの分解活性が増大し、これらが補因子として働いていることが確認された。さらに、基質特異性の検討を行った結果、B[a]P以外のPAHについても分解活性を確認することができたが、B[a]Pに対してより高い活性を示したことから、B[a]Pに特異性の高い酵素であることが示唆された。

また、得られた酵素は、NADPHおよびNADHを添加した際、B[a]Pの分解活性が増大し、これらが補因子として働いていることが確認された。さらに、基質特異性の検討を行った結果、B[a]P以外のPAHについても分解活性を確認することができたが、B[a]Pに対してより高い活性を示したことから、B[a]Pに特異性の高い酵素であることが示唆された。
水痘帯状疱疹ウイルス特異分泌型IgA抗体の動態に関する研究

悪性疾患やステロイド内服中の患児,高齢者では帯状疱疹の発症率は高く,その原因は特異細胞性免疫の低下と関連していると考えられている。しかし,水痘の臨床的な再感染を経験することは非常にまれで,その原因は不明である。私どもは,その機序を特異細胞性免疫が低下しても局所免疫が保たれているためではないかと推論して,唾液中の分泌型IgA抗体を測定した。水痘既往のある悪性疾患やステロイド内服中の患児から早朝朝食前の唾液を採取し,indirect fluorescent assayで測定した。その方法は簡単に述べると,採取後ただちに56°C30分温浴後,4°C180Gで30分遠沈した。その上清を4°C48時間透析後凍結乾燥し,測定まで-20°Cで保存した。VZV感染Vero細胞塗抹固定スライドに2段階希釈した検体を滴下インキュベートした後,FITC標識抗ヒト分泌型IgA抗体を滴下インキュベート後,蛍光顕微鏡で判定した。悪性疾患やステロイド内服中の患児,健康小児ともに分泌型VZV特異IgA抗体価は512倍以上と高く,両群間に有意差を認めなかったが,悪性疾患やステロイド内服中の患児でやや低い傾向を認めた。一方,血清中のVZV特異IgA抗体価は有意に悪性疾患やステロイド内服中の患児で低い傾向を認めた。帯状疱疹は潜伏感染したVZVの再活性化であり,水痘の再感染は体外からのVZVの侵入によって発症する。悪性疾患やステロイド内服中の患児は特異細胞性免疫が低下しているためVZVが活性化し帯状疱疹を発症しやすいが,局所免疫である分泌型IgA抗体は低下していないため体外からのVZVを抑制して水痘再感染を防止していると示唆された。