hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
リングせん断型地震時地すべり再現試験機の試作研究

ついで、1984年の長野県西部地震で発生した御岳大崩壊と1990年のイラン地震で発生したガルディアン地すべりからサンプルを採取して、この両地すべりについて地震時の地すべりを再現するための試験を行った。その方法は次の通りである。1)サンプルをスラリー状態にしてせん断箱にいれてから地すべり土層の自重に相当する垂直応力で圧密し、さらに斜面土層の自重によるせん断応力を載荷する。2)地震力に相当する繰り返し応力を0.1Hzの周期で載荷する。3)その結果、せん断破壊が生じればその破壊後のすべり速度、変位、体積変化、およびせん断応力と垂直応力を測定する繰り返し応力を変化させることによって地震時に地すべりが発生する限界の地震力を実験的に推定することが可能と思われ、事実、両地すべりにおいて、地震の際に観測された地震力で地すべりが発生することが裏付けられた。また、御岳大崩壊のすべり面となった軽石層では繰り返し載荷によってせん断破壊が生じるとマサツ抵抗が急激に低下し、せん断が急速に進行することが見いだされた。一方、ガルディアン地すべりの試料では尺取り虫的なゆっくりしたせん断が生じた。御岳とガルディアンの違いの原因は試験後の試料の状態の観察より、御岳大崩壊の軽石層ではせん断面で粒子が著しく破砕されることにより体積収縮が生じ、せん断面で間ゲキ水圧を発生させているためと推定された。この間ゲキ水圧発生を直接測定するため、試験機のせん断箱をせん断中も非排水状態に保て、発生した間ゲキ水圧が正確に測定できるように種々の試みを行い、現在、最終案に基づいてせん断箱の改良を行っている。本年度は、1984年の長野県西部地震の際に発生した長野県御岳山の大崩壊のすべり面を形成した風化軽石層(パミス)よりサンプルを採取して、パミス層が飽和状態の時に地震力が水平に載荷される場合と鉛直に載荷される場合の両者を再現する試験を行った。その結果、いずれの場合もパミスは、破壊以前には過剰間隙水圧の累積は見られないが、せん断破壊が生じるとせん断面の粒子が著しく破砕されて体積収縮が生じようとするため、急激に過剰間隙水圧が発生して強度が著しく低下すること、そしてその結果として高速の地すべり移動が発生することが見いだされた。この結果は、実際に発生した高速の地すべり現象を説明するものである。ついで、地震による地すべりの発生が懸念されている西安市にある華清池(楊貴妃の宮殿)裏山から採取した黄土(レス)について試験を行い、地震力が繰り返し与えられると、破壊以前から試料の体積収縮が生じ間隙水圧が徐々に累積されること、そのために比較的小さな地震力で地すべりが発生し得ること、しかし破壊後の地すべりの運動は、パミスのように急激なものではないことが推定された。一般に地震により地すべりが発生しやすいのは、垂直応力減少時にせん断応力が増大する水平方向に地震力が作用する場合であると考えられてきた。しかし、本試験によれば、地震力の方向によって発生する過剰間隙水圧が異なるため、水平方向(遠距離地震)の場合も鉛直方向の場合(直下型地震)もほぼ同じ規模の地震で地すべりが発生することが推定された。すなわち斜面土層が飽和状態で過剰間隙水圧が発生しうる場合と不飽和の状態で過剰間隙水圧が発生しない場合では地すべりの発生に必要な地震力はまったく異なることがわかった。本年度の研究結果は佐々恭二が指導する大学院生の博士論文としてまとめられ、京都大学博士(理学)が授与された。
アミノ酸窒素安定同位体比を用いた森林施業が河川生態系へ及ぼす長期的影響とその解明

本研究は、森林伐採が河川生態系へ及ぼす長期的影響を水生昆虫の各種同位体から解明した。炭素安定同位体より、水生昆虫は森林の若齢期では水域(付着藻類)に、成熟林では陸域(落葉)資源に依存していた。アミノ酸窒素安定同位体からは、各分類群の水域と陸域の依存度や栄養段階を推定した。また、付着藻類及び刈取食者に含まれる放射性炭素14は、現代の二酸化炭素よりも低かった。これは、岩石中に含まれる古い炭素が地下水等に溶け込み、生態系に利用されていることを意味していた。森林施業が河川生態系へ及ぼす影響は、河川水の栄養塩などは比較的早く回復するものの、食物網構造など生態系の回復は50年以上必要であることが分かった。本研究は、森林施業が河川生態系へ及ぼす長期的影響を、生物の群集構造、及びアミノ酸の窒素安定同位体比から明らかにすることを目的にしている。研究にあたっては、河川生態系の主要な構成員である水生昆虫を対象に行っている。H25年度は研究の開始年であるので、まず、1)生物試料の採集、及び2)アミノ酸の窒素安定同位体比の測定体制の確立に重点をおいた。第1の研究として、伐採からの時間軸の異なる6河川を対象に、水生昆虫の採集を行った。水生昆虫は、口腔形態と採餌パターンから採餌機能群(捕食者、採集食者、濾過食者、破砕食者、及び刈取食者)に分類した。その結果、伐採直後(3年)の若齢林では、付着藻類を主な餌起源とする刈取食者が、成熟した(90年以上)高齢林では、陸域の落葉などを餌起源とする破砕食者が量的に多く生息していた。第2の研究として、水生昆虫を対象にアミノ酸の窒素安定同位体比手法を測定し、野外生態系でアミノ酸の手法が応用可能であるかを検証した。さらに栄養段階(TL)を推定し、その妥当性についても検討した。その結果、アミノ酸の窒素安定同位体比は河川生態系においても応用可能であること、また、一次生産者、及び低次の水生昆虫においては、精度良くTLを推定できることが分かった。しかし、一部の捕食者のTLは、採餌機能群から考慮されたTLに比べ、過小評価されていた。このことは、陸域からの餌資源の混合を考慮する必要性があることを示唆していた。本研究は、京都大学フィールド科学教育研究センター和歌山研究林、及びその周辺の集水域を対象に、集水域単位の皆伐施業という特殊な施業法の利点を活用し、森林施業が河川生態系へ及ぼす長期的影響を、水生昆虫の群集構造、炭素・窒素安定同位体比、及びアミノ酸の窒素安定同位体比から解明することを目的としている。H26年度は、野外採集された水生昆虫とその餌資源の安定同位体比分析を精力的に進めた。まず、水生昆虫の群集構造について、本調査地に生息していた水生昆虫は、6目20科9属の計35分類であった。最も多様性が高かったのは伐採後5年の渓流で、12、23年と多様性は低下した。その後、多様性は上昇し、49年以降大きな変化は見られなかった。炭素・窒素安定同位体比分析により、森林伐採からの時間軸に応じて水生昆虫のδ13Cは減少していた。このことは、水生昆虫の生産依存性が、森林の成熟に応じて水域(付着藻類)から陸域(落葉)へシフトしていることを意味していた。しかし、δ13Cの減少は、川底へ届く光環境の変化によって一次生産者のδ13Cが低下していた可能性も考えられる。ところが、高齢林における付着藻類と落葉のδ13Cは重複していたため、時間軸に応じたδ13Cの減少は、水生昆虫の餌資源のシフトなのか光環境の変化なのかは区別できなかった。次に、アミノ酸の窒素安定同位体比を測定したところ、各地点で採集された付着藻類のフェニルアラニンのδ15Nは-55 ‰、落葉は511 ‰と重複しなかったことから、アミノ酸の窒素安定同位体比を測定することで、時間軸に応じた生産依存性の変化を明らかにすることができると考えられた。本研究は、森林施業が河川生態系へ及ぼす長期的影響を、炭素・窒素安定同位体比に加え、発展的な手法であるアミノ酸の窒素安定同位体比および放射性炭素14を用いて解明することを目的とした。調査地は、京都大学フィールド科学教育研究センター和歌山研究林およびその周辺の集水域を対象とした。H27年度は、採集された水生昆虫とその餌資源の同位体比の分析を進めた。河川水の硝酸態窒素濃度(NO3-)は伐採後急速に上昇し、5ー6年後に最高値を示し、その後15年で伐採前の水準に回復した。溶存炭素濃度は林齢に伴う明らかな傾向はなかったが、溶存窒素濃度は伐採後濃度が上昇し、その後20年程度で伐採前の水準に回復した。水生昆虫は、6目20科9属の計35分類群を確認した。摂食機能群別に出現量をみると、若齢林ではヒラタカゲロウなど刈取食者が卓越し、高齢林ではヨコエビなど破砕食者が増加していた。また、水生昆虫の炭素安定同位体比(δ13C)は、成熟林になるほど低下し、リターのδ13Cに近い値を示した。

これらの結果から、河川生態系は森林の若齢期は付着藻類を起点とする食物網が形成され、成熟林では陸上資源に強く依存すると考えられた。また、生体内アミノ酸の窒素安定同位体比(δ15NGluおよびδ15NPhe)からは、各分類群の水域と陸上起源の有機物の依存度や栄養段階を推定できることを示した。また、付着藻類および刈取食者に含まれる放射性炭素14は、現代のCO2よりも低い値を示していた。これらは、岩石中に含まれる古い炭素が地下水などに溶け込み、水生昆虫に利用されていることを示唆していた。以上の結果から、森林施業が河川生態系へ及ぼす影響は長期に渡り作用し、食物網構造が伐採前の状態に回復するには、50年以上必要であることが分かった。本研究の成果は、Ecology 97(5),pp.1146-1158に公表した。本研究は、森林伐採が河川生態系へ及ぼす長期的影響を水生昆虫の各種同位体から解明した。炭素安定同位体より、水生昆虫は森林の若齢期では水域(付着藻類)に、成熟林では陸域(落葉)資源に依存していた。アミノ酸窒素安定同位体からは、各分類群の水域と陸域の依存度や栄養段階を推定した。また、付着藻類及び刈取食者に含まれる放射性炭素14は、現代の二酸化炭素よりも低かった。これは、岩石中に含まれる古い炭素が地下水等に溶け込み、生態系に利用されていることを意味していた。森林施業が河川生態系へ及ぼす影響は、河川水の栄養塩などは比較的早く回復するものの、食物網構造など生態系の回復は50年以上必要であることが分かった。当初の予定通り、おおむね順調に進展している。水生昆虫の群集構造の解明、炭素・窒素安定同位体比、及びアミノ酸の窒素安定同位体比の測定も進んでおり、着実にデータの収集が出来ている。同位体生態学研究計画の大きな変更はない。前年度までの結果を基に、一部補完調査を実施するかどうかを判断する。また、次年度は最終年度であるので、得られた成果をまとめ、国際誌に投稿する。当初の予定通り、水生昆虫群集の構造解明、及びアミノ酸の窒素安定同位体比の測定を順調に進めており、着実にデータの蓄積が出来ている。初年度の進行状況はおおむね計画通りといえる。炭素・窒素安定同位体比、及びアミノ酸の窒素安定同位体比の分析を効率的に進めたことにより、当初の予定より少額で研究が進行している。決して少額であったことで研究成果が乏しいわけではない。研究計画の大きな変更はない。来年度も引き続き、生物群集のデータ収集、及びアミノ酸の窒素安定同位体比の測定を行う予定である。炭素・窒素安定同位体比、及びアミノ酸の窒素安定同位体比の分析数を確保するため、残金は消耗品の購入に使用する。また、成果が蓄積されてきたので、論文の英文校閲、及び論文掲載料に使用する。別プロジェクトと野外調査の日程を調整し、かつ分析を効率的に進めたことにより、当初の予定より少額で研究が可能であった。決して、少額であったことで研究成果が乏しいわけではなく、むしろ当初の予定通りに成果が出ている点は評価される。当初の予定よりも水生昆虫の試料が多く採集されたため、今後、安定同位体比の分析数が増加することが予測される。そのため、次年度以降は分析に使用する消耗品の頻度が増すため、残金は消耗品の購入に使用する。
複雑な天然物合成の基盤となる生化学的変換反応の捜索

末端にアレニル基を有するキラル一級アルコールの光学活性体合成末端にアレニル基は、特異な反応性を有することから、近年有機合成化学上注目を集めている官能基である。鈴木らはアレンとアルキンの還元的結合における1,5-遠隔不斉誘起を見い出し、2-メチル-3,4-ペンタジエン-1-オール(1)のメトキシメチルエーテル体を、トコフェロール側鎖合成の出発原料として有効に用いた。しかし、1の光学活性体合成には、光学活性な3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸を出発原料とし、多数の合成段階が必要であった。筆者らは、1のラセミ体が容易に合成可能なことに着目し、生体触媒を用いた光学分割を試みることとした。検討の結果、Pseudomonas cepacia由来のリパーゼを用いたアセチル化、Candida antarctica由来のリパーゼを用いた加水分解反応という2つの鏡像選択的反応を組み合わせることによって、両鏡像体ともに96%e.e.以上で得られるようになった。
革命現代京劇における人物形象とその身体

本研究の研究実績は、1:革命英雄の人物形象の歴史的変遷に関する検証、2:文革期のスタニスラフスキーシステム批判の検討、3:革命現代京劇の演技術として採用された京舞体三結合に関する実態調査の三点にほぼ集約される。1は主に台本のレベルで検証されうる課題であり、一定数の先行研究も存在するが、本研究ではそれらを土台としつつ、英雄人物が生身の人間から離脱して当時「高・大・全(崇高で偉大かつ完全な)」といわれた特殊な形象を獲得していく時間的な経緯とその筋道をより明確なものにした。2と3はいずれも俳優の演技に関するトピックであり、2については1969年に『紅旗』誌上に発表されたスタシステム批判に関する最初の文章を詳細に検証すると同時に、同時期に発表された関連の論文などを収集し、批判の全容を把握するため基礎的な作業を行っている。また3に関しては、革命現代京劇の創作に関わった演劇人にインタビューを行い、舞(バレエ)と体(体操)の演技術への浸透の様相を検証すると同時に、文革期に教育を再開した各種演劇学校の卒業生から教育現場への導入に関する情報を得、京舞体三結合の京劇「教育への浸透状況を明らかにした。以上三つのトピックは、革命現代京劇の人物形象と、それを演じる俳優の身体を構成する主要なファクターであるといってよい。ほぼ未開拓の領域であるため、本研究はまだ初歩的踏査というレベルに止まるが、以後の研究推進のためのフレームを築いたという点で、萌芽研究としての役割は果たせたと考えている。なお本研究の研究成果の一部に関し、京劇史研究会(大阪)、中国都市芸能研究会(北京)、プラハ・カレル大学における国際シンポジウム「New Trends in Chinese and Japanese Theatre Studies」(チェコ)、および日本演劇学会(博多)において、それぞれ口頭発表を行っている。今年度は当初の計画通り、文化大革命期の演劇関連の文献資料収集、および革命現代京劇に直接にかかわった当事者へのインタビューを行い、以後の研究推進のための基礎的な情報を蓄積した。まず文献資料に関しては、『中国京劇史』、『中国戯曲現代戯史』等の基礎的文献によってマクロな状況を整理しつつ、革命現代京劇に関する個別の資料の収集を行った。文革期の演劇関係資料については、残されているものが少ない上にアクセスが容易でない場合が多く、収集には一定の困難が伴うが、早稲田大学現代政治経済研究所には昨年度に出版されたCD-ROM『中国文化大革命文庫』が収められており、ここから当時劇団内で伝達された指示の内容など、かなり具体的な情報が入手できた。これらの資料から、これまで明らかにされなかったミクロなレベルの状況が把握できると考えている。またインタビューに関しては、北京の複数の関係者から当時の状況を直接に取材する機会を得た。特に北京京劇院の俳優として革命現代京劇『杜鵑山』の創作に関わった石宏図氏からは、文革期の俳優訓練に関して詳細なお話をうかがうことができた。また当時中国京劇院で『紅色娘子軍』創作組に所属していた李興海氏からも、一定の情報提供を受けている。さらに日本国内在住の複数の京劇俳優に、文化大革命期の演劇学校内の状況についてインタビューする機会を得た。彼らは文革中に京劇俳優養成が復活した際、第一期生として演劇学校に入学しており、当時学校内で行われていた様々な身体訓練に関して、彼らの直接の体験に基づく詳細な情報を提供していただいた。以上の調査活動によって、当時の革命現代京劇の創作、および俳優の身体訓練について具体的なイメージを描くための情報はある程度入手できたと思われる。以後は論文執筆に向けた整理作業を行いつつ、関連情報をさらに収集していきたいと考えている。
MYCNによるMitotic catastrophe誘導の解析

1.p27のDNA損傷後の発現制御解析前年度CDKインヒビターであるp27がDNA損傷時の中心体過剰複製を抑制する機能を担っていることを明らかにした。本年度はp27がDNA損傷後にいかに制御され、どのように中心体機能へ関わるか明らかにするため、解析を行った。まず、正常細胞におけるp27のDNA損傷後のタンパク量を調べたところ、p27はγ線照射後あるいはdoxorubicin処理によって経時的に増加することがわかった。p27はユビキチンリガーゼSCF複合体の構成因子Skp2に特異的に認識され分解誘導されることから、DNA損傷後のSkp2のタンパク量を調べたところ、p27とは反比例して経時的に減少することがわかった。また、RNAレベルにおいてもp27は経時的に量を増加させることもわかった。そこでDNA損傷シグナルで知られるATM-p53経路にp27増加が関与するかどうか明らかにするため、ATMインヒビターあるいは、p53-/-MEFを用いて検討したところ、p27はATM-p53経路には関与していないことがわかった。CDK2/cyclin Eあるいはcyclin A複合体はDNA複製を司ると同時に中心体複製も司る。また、p27はCDK2/cyclin E, cyclin Aと結合し、CDK2の酵素活性を減少させることでDNA複製の抑制を行うことがわかっている。そこでDNA損傷後にp27がこれら複合体と結合するか否かp27抗体による免疫沈降にて検討した結果、p27はDNA損傷時にCDI(2及びcyclin Eと結合することがわかった。しかし、cyclin Aは発現量自体が低く、結合は確認できなかった。これらのことから、p27はDNA損傷時にRNA及びタンパクレベルでその量を増加させ、CDK2/cyclin Eと結合することで中心体の過剰な複製を抑制していることが示唆された。2.MYCNによるp27の発現制御と中心体数異常の解析前年度、MYCN発現細胞にてp27が減少していることを明らかにしたが、さらに詳細に分子機構を解析したところ、MYCN発現細胞ではskp2が増加していることがわかった。そこで、MYCN発現細胞にskp2のsiRNAを処理したところ、p27タンパク量が回復した。さらにDNA損傷時の中心体数異常を調べたところ、skp2 siRNAを処理することによりMYCN発現細胞における中心体数異常が有意に減少した。以上の結果からMYCNはSkp2を介してp27量を減少させ、DNA損傷時の中心体過剰複製を行っていることが示唆された。がん遺伝子MYCNを遺伝子導入した神経芽腫の細胞株にγ線を照射した後、FACS解析にてDNA含有量を調べたところ、多倍体化した細胞はほとんどみられず、DNA損傷後に増加した中心体数異常は1細胞周期中に生じることが示唆された。さらに、この細胞株へAphidicolinを処理し、細胞周期のS期で同調させると同時にDNA損傷を与えた結果、中心体数異常増加はS期からG2期の間に生じることがわかった。DNA損傷後、MYCN導入株と対照株において中心体数異常に関与すると考えられるタンパク質群の増減の検討を行った結果、中心体複製を制御するCDK2の阻害因子の一つであるp27がMYCN導入株にて減少していることがわかった。また、p27の減少はプロテアソーム阻害剤であるMG132処理によって回復したことから、MYCNはp27をタンパクレベルで減少させることがわかった。さらに、p27のcDNAを入手し、p27発現ベクターを構築した後にMYCN導入株で発現させたところ、DNA損傷後の中心体数異常が抑制された。以上のことから神経芽腫細胞株においてMYCNによるp27の発現抑制がDNA損傷時の中心体数異常の増加を引き起こすことを明らかにした。来年度は1及び2の知見をもとにp27ノックアウトマウスの胎児線維芽細胞株やp27のsiRNAを処理したヒト細胞株を用いて、直接的にp27の減少がDNA損傷時の中心体数異常の増加を引き起こすかどうか、また、Mitotic catastropheが生じるかどうか検討を行う予定である。1.p27タンパク質減少によるDNA損傷時の中心体数異常増加の解析前年度に得られた結果をもとに、p27タンパクの減少がDNA損傷後の中心体数異常を生じさせるかどうか詳細に解析するため、p27ノックアウトマウス胎児線維芽細胞(p27-/-MEF)にγ線を照射したところ、野生型に比べ、有意に中心体数異常が生じることがわかった。さらに、ヒト正常線維芽細胞(NB1RGB)及びヒト神経芽腫細胞株(SHEP)にp27siRNAを処理した後、γ線を照射したところ、p27-/-MEFと同様に中心体数異常が増加した。また、p27-/-MEFにおいて中心小体特異的タンパク質であるcentrin-3の免疫染色の結果から、DNA損傷後に過剰に増加した中心体は一対の中心小体を含む機能的な中心体であることもわかった。さらに、p27-/-MEFのDNA含有量をFACSにて調べたところ、8Nのピークがほとんど見られなかったため、細胞質分裂異常が中心体数異常を増加させたのではないことがわかった。2.MYCNによって生じる細胞死の解析MYCNをSHEPに過剰発現させたところ、癌抑制遺伝子であるp53のタンパク質量が著しく増加することが確認された。このp53の増加はDNA損傷シグナル経路として知られるATMに依存して増加することがわかった。さらにMYCN発現細胞にDNA損傷を与えるとp53依存的な細胞死が増加することがわかった。

来年度はp27によるDNA損傷後の中心体数制御の分子機構、またMYCNによってもたらされる細胞死(Mitotic catastrophe)やMYCNによるp27の発現制御に関して検討を進める予定である。1.p27のDNA損傷後の発現制御解析前年度CDKインヒビターであるp27がDNA損傷時の中心体過剰複製を抑制する機能を担っていることを明らかにした。本年度はp27がDNA損傷後にいかに制御され、どのように中心体機能へ関わるか明らかにするため、解析を行った。まず、正常細胞におけるp27のDNA損傷後のタンパク量を調べたところ、p27はγ線照射後あるいはdoxorubicin処理によって経時的に増加することがわかった。p27はユビキチンリガーゼSCF複合体の構成因子Skp2に特異的に認識され分解誘導されることから、DNA損傷後のSkp2のタンパク量を調べたところ、p27とは反比例して経時的に減少することがわかった。また、RNAレベルにおいてもp27は経時的に量を増加させることもわかった。そこでDNA損傷シグナルで知られるATM-p53経路にp27増加が関与するかどうか明らかにするため、ATMインヒビターあるいは、p53-/-MEFを用いて検討したところ、p27はATM-p53経路には関与していないことがわかった。CDK2/cyclin Eあるいはcyclin A複合体はDNA複製を司ると同時に中心体複製も司る。また、p27はCDK2/cyclin E, cyclin Aと結合し、CDK2の酵素活性を減少させることでDNA複製の抑制を行うことがわかっている。そこでDNA損傷後にp27がこれら複合体と結合するか否かp27抗体による免疫沈降にて検討した結果、p27はDNA損傷時にCDI(2及びcyclin Eと結合することがわかった。しかし、cyclin Aは発現量自体が低く、結合は確認できなかった。これらのことから、p27はDNA損傷時にRNA及びタンパクレベルでその量を増加させ、CDK2/cyclin Eと結合することで中心体の過剰な複製を抑制していることが示唆された。2.MYCNによるp27の発現制御と中心体数異常の解析前年度、MYCN発現細胞にてp27が減少していることを明らかにしたが、さらに詳細に分子機構を解析したところ、MYCN発現細胞ではskp2が増加していることがわかった。そこで、MYCN発現細胞にskp2のsiRNAを処理したところ、p27タンパク量が回復した。さらにDNA損傷時の中心体数異常を調べたところ、skp2 siRNAを処理することによりMYCN発現細胞における中心体数異常が有意に減少した。以上の結果からMYCNはSkp2を介してp27量を減少させ、DNA損傷時の中心体過剰複製を行っていることが示唆された。
VascularStiffnessに及ぼすmechanicalstressの役割

本研究の目的は、細胞膜に存在する力ベオリンの血管stiffnessに及ぼす役割の解明にある。そのため、以下の目的を掲げている。目的1:進展刺激によるmicrotubuleの重合形成に及ぼすカベオリンの影響を明らかにする。目的2:カベオリンのmicrotubuleの重合調節効果の機序を明らかにする。目的3:血管stiffness亢進が血管壁細胞(特に血管平滑筋細胞)のマイクロチューブの重合状態あるいはcaveolinの発現量、caveolaeの構造変化と関連するのか、明らかにする。現在、主に培養血管平滑筋細胞(VSMC)を用いたin vitroの実験系で、カベオリンのmicrotubuleへの重合形成への調節機序解明の実験を遂行している。今年度における研究達成状況は以下のとおりである。1.遺伝子組み換え(caveolin senseおよびantisense)アデノウイルス作成し,平滑筋細胞内のcaveolin量を過剰発現および減少させることに成功した.2.同ウイルス感染によりcaveolin発現を変化させた平滑筋細胞におけるmicrotubuleの重合性に影響を与えることを明らかにした.3.今後,大動脈stiffnessが高めたラットモデル,すなわち腹部大動脈狭窄あるいは,anngiotensinII投与による高血圧モデルを作成し,同血管壁でのstiffnessにおよぼすcaveolinの働きを評価する.本研究の目的は、細胞膜に存在するカベオリンの血管stiffnessに及ぼす役割の解明にある。現在、主に培養血管平滑筋細胞(VSMC)を用いたin vitroの実験系で、カベオリンのmicrotubuleへの重合形成への調節機序解明の実験を遂行している.今年度における研究達成状況は以下のとおりである。1.VSMC内のMicrotubuleなど細胞骨格の重合、分解に影響を与える各種試薬のインキュベーション時間、用量などの基本的条件の設定を完了した。2.VSMC内のカベオラ構造を各種のコレステロール・キレート剤で破壊することを確認し、その条件(カベオラ構造破壊)では、カベオリン量自体に変化がなくても、各種の細胞内伝達系(アンギオテンシンIIなど)に変化を与えることを明らかにした。1.遺伝子組み換え(caveolin senseおよびantisense)アデノウイルス作成し,平滑筋細胞内のcaveolin量を過剰発現および減少させることに成功した.2.同ウイルス感染によりcaveolin発現を変化させた平滑筋細胞におけるmicrotubuleの重合性に影響を与えることを明らかにした.3.今後,大動脈stiffnessが高めたラットモデル,すなわち腹部大動脈狭窄あるいは,anngiotensinII投与による高血圧モデルを作成し,同血管壁でのstiffnessにおよぼすcaveolinの働きを評価する.
粒界制御によるセラミックスの超塑性変形能の改善

研究成果は次のように要約される。(1)TZP-βスポジュメンガラスの超塑性変形特性を詳細に調べ、粒界ガラス相の存在によりTZPの変形応力が低下すること、延性がジルコニア結晶粒と界面の強度で支配されていることを示した。(2)TZPに粒界SiO_2相を添加することによって、高温延性を顕著に改善できる。ところがSiO_2に少量のドーパントを添加すると、延性が劣化することを見出した。ガラス添加TZPの超塑性は、ドーパントによる粒界結合状態の変化に敏感であるといえる。(3)SiO_2添加TZPの粒界構造を、高分解能電顕により詳細に解析した結果、アモルファスSiO_2相は粒界3重点あるいは4重点に存在し、粒界面には存在しないことを見出した。従来の理解とは異なり、Si^<4+>イオンは粒界面に偏析して粒界結合状態を変化させるが、アモルファス相とはなっていない。(4)TiO_2添加-TZPの超塑性について、従来の理解からは説明不可能な新たな現象を見出した。TiO_2添加は、TZPの結晶粒を大きくするが変形応力を低下させ、しばしば延性の改善をもたらす。この結果を説明するための新しい現象論的解析を提案した。Al_2O_3系セラミックスについても、変形応力、延性に関して新しい現象を見出した。この解釈には粒界構造および総合状態の理解が不可欠である。平成6年度に得られた実績は以下のように要約される。(1)TZP粒界ガラス相としてSiO_2、アルミノシリケートガラス(AS)、β-スポジユメンガラス(βS)を加えた材料を調整し、高温引張特性を調べた。いずれのガラスも高温変形応力の低下をもたらしたが、高温延性はガラスの種類によって全く異なるものであった。SiO_2は延性を著しく改善するが、ASおよびβSはむしろ延性の低下をもたらした。この結果、延性が母相結晶粒とガラス相との界面の特性に依存するものであることを示している。(2)従来、多結晶セラミックスの高温変形応力は、結晶粒が微細になるにつれて低下し、伸びが改善されるといわれている。ところが、材料によってはこの解釈が成立しないものがあることが明らかとなった。上記のガラス添加TZPはその一例である。Al_2O_3基複合セラミックスについても、変形応力及び延性が結晶粒寸法だけでは記述できないことが示された。(3)三菱マテリアル(株)との共同研究により、優れた機械的特性を有するAl_2O_3-ZrO_2セラミックスを焼結鍛造により製造できることが明らかになった。これは、セラミックスの超塑性加工の実現に展望をひらくものである。今年度に得られた研究実績は、以下のように要約される。(1)TZPの高温延性は、粒界にSiO_2相を導入することによって大幅に改善される。5wt%のSiO_2を添加したTZPではひずみ速度1.2×10^<-4>s^<-1>、1400°Cで1000%を越える伸びが容易に得られる。また、100%を越える伸びは、同一温度で1.2×10^<-2>s^<-1>でも達成される事を見出し、セラミックスの高速超塑性の実現に向けた展望を開いた。(2)SiO_2添加TZPの延性は、微量の不純物の存在によって著しく劣化する。例えば、粒界SiO_2中にわずか1%のLiO_2を添加することにより、1400°Cでの最高伸びが100%以下となる。この現象はLi^+イオンが結晶粒とガラス相の界面に偏析すると考えることによって説明可能である。(3)TZPの粒界にβ-スポジユメンガラスを導入すると、高温変形応力は著しく低下するものの、超塑性とよべるような大きな伸びは得られない。

ガラス添加TZPの延性は、変形応力との相関性が認められない。これは結晶質セラミックスと明らかに異なっている。今年度の研究実績は以下のように要約される。(1)TiO_2添加TZPについて、セラミックスの微細結晶粒超塑性の一般的特徴とは異なる新しい現象を見出した。TZPにTiO_2を添加すると、焼結中の緻密化および結晶粒成長が促進される。例えば、TZP-5wt%TiO_2は十分緻密化すると粒径0.66μmとなり、一方、TZPは0.30μmとなる。しかし、粒径の大きいTZP-5wt%TiO_2の変形応力は1300°C以上でTZPのそれより小さく、しばしば延性も改善される。この結果は、拡散の促進に起因するものであることを現象論的に明らかにし、TiO_2添加による超塑性の促進が、1500°C以下で生じる現象であることを示した。(2)SiO_2添加TZPの結晶粒界構造を高分解能電顕を用いて詳細に解析した結果、アモルファスSiO_2は粒界三重点あるいは四重点に存在し、粒界面には存在しないことを見出した。Si^<4+>イオンは、粒界面に偏析してはいるものの、アモルファス相を形成していない。Si^<4+>イオンの粒界偏析によって、粒界の結合状態が変化していることをEELS分析によって示した。SiO_2添加によるTZPの超塑性変形能の改善が、粒界構造と密接に関連しているものといえる。(3)1997年バンガロ-ア(インド)で開かれた超塑性国際会議で基調講演を行った。また、1996年8月に北京(中国)で開催された超塑性ワークショップで招待講演を行った。1996年7月には宮津市で"Innovation in Superplasticity"と題する小規模国際会議をChairmanとして主催した。
微生物エステラーゼの農薬系内分泌撹乱物質分解技術への応用

微生物は進化速度が速く、人工今成物を分解する能力を短期間に獲得する。この性質を利用することにより効率的な農薬分解技術を開発するための基礎的知見を得ることを目的とした。1)分離したKFEE100株はBurkholderia属細菌に分類されたKFEE100株はフェニトロチオンをエネルギー源、炭素源として増殖した。この菌株は10^<10>個で30°Cとしたとき、14mg/hという速度でフェニトロチオンを3-メチル-4-ニトロフェノールに加水分解した。また生成した代謝物、3-メチル-4-ニトロフェノールとメチルヒドロキノンも直ちに分解された.2)土壌から2種類の細菌によりフェニトロチオンを分解する分解系を分離した。この分解系はSphingomonas sp.TFEE100とBurkholderia sp.TFEE200の2種類の細菌により成立していた。共生分解系ではSphingomonas sp.TFEE100が最初にフェニトロチオンの有機リンエステル結合を加水分解し3-メチル-4-ニトロフェノールを生成する。これをBurkholderia sp.TFEE200が炭素源、エネルギー源として資化する。初期菌数をTFEE100が10^6個/ml、TFEE200が10^8/ml程度になるように調製したとき、24時間後に138ppmのフェニトロチオンを分解した。3)Burkholderia sp.NF100から有機リンエステラーゼの精製方法を確立した。精製酵素1mgは30°C、1分間で50mgのフェニトロチオンを加水分解した。Burkholderia sp. NF100はフェニトロチオンを有機リンエステラーゼ(Fed)により加水分解し、生成した3-メチル-4-ニトロフェノールを唯一の炭素源・エネルギー源として生育する。基質特異性の広いFedは有機リン系農薬分解技術に有用と考えられる。そこでFedの性質を明らかにするために精製方法を検討した。培養菌体を超音波破砕し超遠心したところ酵素活性は沈殿に認められた。沈殿(膜画分)を各種界面活性剤により抽出したところ0.1%Nonidet P-40により安定的に酵素を可溶化することができた。この可溶化酵素液を40%硫安塩析し沈殿を緩衝液に溶解し、陰イオン交換クロマトグラフィー(Q Sepharose)に吸着させ00.3MNaClにより溶出した。活性画分を濃縮しゲル濾過(Sephacryl)に供した。以上の精製により比活性が130倍となったが、SDS-PAGE、銀染色で単一バンドにはならなかった。Burkholderia sp. NF100の有機リンエステラーゼ遺伝子(fed)の3つのORFを上流域からORF1,2,3とした。ORF1に変異を導入したとき酵素活性は完全に消失したことから、ORF1は酵素活性の触媒サブユニットをコードしていると考えられた。ORF2またはORF3に変異を導入した場合、酵素活性は1/10程度に低下した。またORF2とORF3両者に変異を導入したとき、1/20以下に活性が低下した。ORF2のDNA配列から推定したアミノ酸配列に基づき解析したところ、ORF2は疎水性のアミノ酸配列が規則的に連続した構造をとっていた。以上の結果からORF1は触媒サブユニットでORF2はこれを細胞膜に局在化させるサブユニットと考えられた。
慢性疲労による食欲神経制御変調の分子神経メカニズム研究

申請者は疲労の慢性化形成機序を解明するために、独自に慢性疲労モデルを開発した。このモデルは疲労負荷中に意欲低下や身体疼痛だけではなく、疲労負荷後に1週間掛けて緩やかに回復するなど慢性疲労症候群の臨床像に似た症状を示す。申請者が着眼した食欲ホルモンレプチンとグレリンによって、ストレス反応の中枢である視床下部における神経制御の異常や慢性疲労に関連する自律神経の制御異常を示すなど、慢性疲労の形成に強く関与する可能性がある。本研究はこうした中枢制御変調のメカニズム及び関連する脳内領域を同定し、慢性疲労症候群の診断・治療法への応用を目指す。
エピジェネティックメモリーを標的とした内分泌撹乱化学物質の作用機序に関する研究

甲状腺ホルモン(TH)は、動物の成長・発生・分化・代謝に重要な役割を担っている。本研究では、環境化学物質によるTH撹乱作用の分子機構を明らかにする目的で、TH応答遺伝子上のヒストンとRNAポリメラーゼIIの修飾、及び同遺伝子制御部位のDNAメチル化状態を調べた。THは、標的遺伝子の転写を増大させるとともに、転写活性化マークであるヒストンとRNAポリメラーゼIIの修飾を誘導した。これらのマークの幾つかは両化学物質で抑制された。一方、標的遺伝子の制御部位は、高度にメチル化されており、TH処理により影響を受けなかった。(1)ホルモン応答遺伝子の発現を撹乱する化学物質の検索:ホルモン応答性の培養細胞XL58-TRE-Lucを用いて、Lucアッセイ及び標的遺伝子のリアルタイムRT-PCR法で行い、甲状腺系を撹乱する化学物質として、臭素化難燃剤テトラブロモビスフェノールA (TBBPA)と塩素系除草剤イオキシニル(IOX)を選別した。また、解析対象遺伝子として、甲状腺ホルモン受容体&#61538;遺伝子(Thrb)、転写調節因子TH/bZIP遺伝子(Thibz)を選別した。これらの遺伝子は、プロモーター上にある甲状腺応答エレメント(TRE)を介して、ホルモンにより直接制御されることが知られている。(2)エピジェネティックメモリーを変化させる化学物質の絞り込み:標的遺伝子プロモーター近傍のヒストンのアセチル化状態、及びコーディング領域のヒストンH3K36のトリメチル化状態、さらにRNAポリメラーゼIIのC末端ドメインのリン酸化状態を検討した。ホルモンによって、これらのエピジェネティックな修飾は有意に変化したが、上記に示した化学物質は、部分的にこれらの修飾を抑制した。これらのことから、化学物質TBBPAとIOXは、甲状腺ホルモンによるエピジェネティックな修飾を撹乱することでホルモン標的遺伝子の発現に影響を与えていると考えられる。(1)両生類オタマジャクシを用いたホルモン応答遺伝子の発現に影響を与える化学物質の作用:両生類オタマジャクシを(i)未処理(コントロール)、(ii)甲状腺ホルモン、(iii)甲状腺ホルモン+塩素系除草剤イオキシニル(IOX)、(iv)甲状腺ホルモン+臭素系難燃剤テトラブロモビスフェノールA (TBBPA)に暴露させ、ホルモン応答遺伝子である甲状腺ホルモン受容体遺伝子(thrb)の発現レベルを検討した。(ii)甲状腺ホルモン存在下では発現誘導が認められ、(iii)IOX共存下ではさらに発現促進が、(iv) TBBPA共存下では、発現抑制が認められた。これらの結果のうち、(iii)は、培養細胞で昨年度行った結果と異なっており、細胞(組織)特異的に撹乱作用が異なる可能性を示唆した。(2)化学物質のエピジェネティックメモリーに与える影響:標的遺伝子thrbプロモーター近傍のヒストンのアセチル化状態は、甲状腺ホルモンで増加し、化学物質を共存させても影響を与えなかった。ヒストンH3K4トリメチル化とH3K36トリメチル化は有意に変化しなかった。RNAポリメラーゼIIの動員、RNAポリメラーゼIIS5のリン酸化およびRNAポリメラーゼIIS5のリン酸化はmRNAレベルとよく相関した変化を示した。これらのことから、化学物質TBBPAとIOXは、甲状腺ホルモンの標的遺伝子のエピジェネティックな修飾を撹乱することでホルモン標的遺伝子の発現に影響を与えていると考えられる。甲状腺ホルモンの初期応答遺伝子の活性化は、遺伝子調節領域においてホルモンが受容体に結合し、その複合体が転写調節タンパク質と複合体を形成する中で、ヒストン修飾酵素やクロマチン再構成因子によるエピジェネティックな変化を伴って進行する。本研究では、このエピジェネティックな変化に及ぼす化学物質の作用に焦点を絞って、解析を行った。ホルモン応答性の培養細胞を用いて、甲状腺ホルモンのシグナル伝達を撹乱する化学物質として、臭素化難燃剤テトラブロモビスフェノールA (TBBPA)と塩素系除草剤イオキシニル(IOX)を選別した。また、解析対象遺伝子として、甲状腺ホルモン受容体ベータ遺伝子(Thrb)、転写調節因子TH/bZIP遺伝子(Thibz)を選別した。エピジェネティックな変化として、ヒストン修飾(アセチル化とメチル化)とRNAポリメラーゼIIのリン酸化、DNAのシトシンのメチル化を検討した。DNAのメチル化レベルは、解析した遺伝子において、ホルモンによって影響を受けなった。上記の化学物質は、ホルモンよるヒストンとRNAポリメラーゼIIの修飾を部分的に抑制した。本研究は、甲状腺撹乱化学物質が標的遺伝子のエピジェネティックメモリーを変化させる初めての報告である。同様の研究を両生類オタマジャクシを用いて試みた。撹乱作用に組織特異性が認められた。また、化学物質のエピジェネティックな効果はヒストンやRNAポリメラーゼIIの個々の修飾で差異があった。前年度はホルモン応答性の培養細胞を用いて化学物質の影響を検討し、今年度は両生類オタマジャクシを用いてほぼ同様の実験を検討した。

予想に反して、培養細胞での結果と個体を用いた化学物質の影響は必ずしも同じではなかった。「ホルモン受容体にホルモンが結合」した後から「標的遺伝子の発現誘導」までのステップに、細胞(または組織)特異的な過程が存在するものと思われ、そのどこかが化学物質の標的になっているものと考えられた。これらの新規な発見をもとに、研究はおおむね計画通り進行していると判断した。環境内分泌学(1)本研究で用いたホルモン標的遺伝子Thrbのプロモーター領域には、20個程度のCpGが存在している。また、この周辺にホルモン応答エレメント(TRE)があるため、この領域に焦点をあてて、DNAメチル化レベルを検討したい。共同研究者の西山氏と、バイサルファイトシークエンス法を予備的に検討し、培養細胞を用いた解析は現在進行中である。そこで、H26年度は両生類オタマジャクシを用いて、DNAメチル化レベルを調べる予定である。(2)培養細胞を用いた場合とオタマジャクシを用いた場合では、化学物質IOXのエピジェネティックメモリーに与える影響がまったく逆の結果となった。その違いがどこにあるかを検討したい。ホルモン応答性の培養細胞XL58-TRE-Lucを用いた甲状腺ホルモン撹乱化学物質の一次スクリーニングは簡便であり、すぐに2つの候補化学物質が見つかった。そのため、それ以上の化学物質のスクリーニングを検討しなかった。その代わりにChIPアッセイによって、候補化学物質がホルモンによって誘導されるエピジェネティックな修飾に影響を与えるかをという点を優先させた。その結果、用いた化学物質がホルモンによって誘導されるエピジェネティックな修飾に影響を与えていることが判明したため、その詳細を検討した。ホルモンは、用いた標的遺伝子に対して、遺伝子活性化のエピジェネティックな修飾を誘導していたが、化学物質は、その幾つか抑制していることが明らかとなった。本研究で多用している定量PCR機器の消耗が激しく,科研費の初年度に修理・維持費を計上したが,平成25年度は故障しなかったため,その分が繰り越しとなった。平成26年度になり,徐々に機器の調子が悪くなって,修理となった。その費用が当初の予定より少なく済んだ。年度末ぎりぎりの会計処理であったため,その差額が残額となってしまった。(1)用いたホルモン標的遺伝子Thrbのプロモーター領域には、20個程度のCpGが存在している。共同研究者の西山氏と、バイサルファイトシークエンス法を予備的に検討し、解析法はすでに確立している。そこで、H25年度に用いたXL58-TRE-Luc細胞を用いて、DNAメチル化レベルを調べる予定である。(2)培養細胞での知見を元に、化学物質の影響が生物個体でも再現できるかを知るために、アフリカツメガエルの幼生を用いてヒストン修飾、RNAポリメラーゼIIの修飾を検討する。
骨折治癒におけるテリパラチド＋デノスマブの協調効果の検討

ヒト大腿骨骨幹部骨折後の偽関節や骨きり手術後の遷延骨癒合など骨癒合が遷延する状況をしばしば経験する。本研究では難治性骨折に対する治療法を新たに樹立することを目的とした。対象はラット、10週齢(オス」難治性骨折モデルを作成し、低容量のテリパラチドの効果の検討および、テリパラチド+ゾレドロネート,テリパラチド+デノスマブの協調効果の検討を行った。結果は低容量テリパラチドのみでは早期骨癒合は見られないが、ゾレドロネートやデノスマブなどの骨吸収抑制剤を投与すると強調効果がみれらた。結果を以下の欧文雑誌に投稿し、受理された。さらに予想以上にゾレドロネートの早期骨癒合効果(架橋形成など)が強く、テリパラチド単独にくらべ約10倍の効果がみられたことを、前回報告した。これを受けてゾレドロネートの早期骨癒合効果を用いて、同種骨移植に応用可能かを検討した。結果は仮骨形成が著しく、早期骨癒合の可能性が示唆された。検証中である。計画は順調に伸展しており、以下の欧文論文を執筆した。本研究中に偶然で発見されたビスフォスフォネート(ゾレドロネート)の早期骨癒合効果に着目し、実際の臨床で頻繁に用いられる同種骨移植に応用可能か検討中である。同種骨移植では、免疫学的問題から一旦骨吸収されたのちに骨形成されることが多い。移植骨に前もってゾレドロネートを付着させたものを作成し、早期の骨癒合完成をめざす。また、人工骨の応用について、検討中である。1テリパラチド、デノスマブのラットチャンバーモデル内の移植骨に対する効果を見るために病理組織学検討と、組織形態計測による検討2ラット大腿骨難治性骨折治癒モデルにおけるテリパラチド、デノスマブの効果の検討をおこなった。1Sprague Dawleyラット雄、10週齢、体重300g 48匹のうち24匹から移植骨(海面骨)を採取しー80°Cに保存したのち、予定通りチャンバー設置を残りの24匹のラット両脛骨内側におこなった。テリパラチドとデノスマブを予定通り投与した。さらに手術2週間後に生理食塩水を皮下投与した8匹をコントロールとした。手術6週間後にチャンバー内の骨を摘出しH.E染色による病理組織標本を作製する。専用ソフト(analySIS FIVE)を用いてそれぞれ移植骨全体の面積、骨吸収領域の面積、骨形成領域の面積を求め、統計学的検討を行う。その結果、プレリミナリーではあるが予測した通りの結果が得られた。すなわちテリパラチド、デノスマブ投与群のチャンバー内移植骨の骨リモデリングは理想的に行われていた。2Sprague Dawleyラット雄、10週齢、体重300g30匹に対して右後肢に骨折手術を行った。すなわち骨膜を骨折部より幅1cmにかけて剥離しKirschner鋼線(1.8mm)で逆行性に骨髄内に刺入し骨接合を行った。テリパラチド単独投与群1(1μg/kg週に5日投与)、テリパラチド単独投与群2(10μg/kg週に5日投与)、デノスマブ(10mg/kg)+テリパラチド、コントロールの4群に分けた。手術6週間後に右大腿骨を摘出し、軟X線撮影を2方向おこなった。病理組織学的な検討を脱灰・非脱灰標本でおこなった。その結果テリパラチドの1μg/kg、10μg/kg群で有意な結果を得た。これまでテリパラチドが200μg/kgなど大量投与の報告しかなかったので、貴重な結果である。予定していたラット大腿骨難治性骨折治癒モデルにおけるテリパラチド、デノスマブの効果の検討は平成29年に予定していたが、同時並行でおこなった。テリパラチドの少量投与で十分な効果が得られることが分かったので、予想以上に実験結果に明白は差がでると思われる。ヒト大腿骨骨折後の偽関節など難治性骨折が臨床において遭遇する。結果は低容量テリパラチドのみでは早期骨癒合は見られないが、ゾレドロネートやテリパラチドなどの骨吸収抑制剤を投与すると強調効果がみれらた。予想以上にゾレドロネートの早期骨癒合効果(架橋形成など)が強く、テリパラチド単独にくらべ約10倍の効果がみられた。研究はおおむね順調に進行しておりデータの確認中である。

結果を以下の欧文雑誌に投稿し、受理された。さらに予想以上にゾレドロネートの早期骨癒合効果(架橋形成など)が強く、テリパラチド単独にくらべ約10倍の効果がみられたことを、前回報告した。これを受けてゾレドロネートの早期骨癒合効果を用いて、同種骨移植に応用可能かを検討した。結果は仮骨形成が著しく、早期骨癒合の可能性が示唆された。検証中である。計画は順調に伸展しており、以下の欧文論文を執筆した。チャンバーモデルではプレリミナリーではあるが、良好な結果がでておりこれを確固たるものにすることを目標にする。移植骨の統計学的な評価をおこなう。さらに大腿骨骨折モデルでは今後は生体力学的試験をおこなって、骨折治癒の質の評価も行っていく予定である。テリパラチドおよびデノスマブを骨折治療における臨床応用にもっていくためにどうするかを考える。本研究中に偶然で発見されたビスフォスフォネート(ゾレドロネート)の早期骨癒合効果に着目し、実際の臨床で頻繁に用いられる同種骨移植に応用可能か検討中である。同種骨移植では、免疫学的問題から一旦骨吸収されたのちに骨形成されることが多い。移植骨に前もってゾレドロネートを付着させたものを作成し、早期の骨癒合完成をめざす。また、人工骨の応用について、検討中である。骨の解析にかかった費用が予想よりも安く済んだので約7万円の繰り越しとなった全ての実験が成功し、予想していた結果が得られたことや、テリパラチドの容量設定で当初の計画よりもテリパラチドにかかる費用が抑えれれた点、さらに追加実験の必要なかった点などから、持ち越しとなった。次年度はデノスマブの容量を変化させた群で再検討する。これまでのラットの実験では、生後10週齢のオスのラットを使用し、予想した通りの結果を得た。今後は卵巣摘出したラット(閉経モデルを想定)を用いてこれまでの実験結果を検証したいと考えており、そのための費用としたい。
19世紀イギリス福音主義と帝国拡大

十八世紀末から19世紀初頭にかけてのソーシャル・リフォーム運動を牽引したクラパム派は、従来福音主義やミドル・クラスの価値観を体現しており、かれらの活動は、イギリスの工業化の結果、ミドル・クラスが台頭してきたことを象徴するものととらえられてきた。しかし、クラパム派の実態についてはこれまで必ずしも具体的に把握されてこなかった。今年度はまず、かれらが具体像を明らかにすることで、かれらが本当にミドル・クラスの台頭を象徴する存在であるのか否かについて検討することにした。昨年度に引き続き、奴隷貿易廃止運動などのソーシャル・リフォームの指導者たちや、国教会伝道協会の設立者等、クラパム派にかかわりのある活動や団体の刊行物からメンバーを特定し、かれらの理念をたどった。その結果、かれらが社会の上層部に属しており、ラディカルな社会改革を主張した人々ではないことや、かれらの提示した「福音主義」と、たとえばメソディストなどが主張するそれとはことなっていること、そうした違いがソーシャル・リフォームにたいする取り組み方の相違となってあらわれたことなどが明らかになった。また、クラパム派の示した「福音主義」理念が、それが後のイギリスにおけるパターナリズムの変化にいかなる影響を与えたのかについても考察した。今年度は、18世紀末から19世紀初頭にかけてイギリスで盛んに行なわれたソーシャル・リフォーム運動のうちの一つとして反奴隷制運動を取り上げ、従来許容されていた奴隷貿易や奴隷制度が非人道的であると社会的にみなされるようになっていく過程と、その背景について考察した。奴隷貿易や奴隷制に反対する人たちの主張がそれぞれの立場により多様性にとんでいたことを確認したうえで、論争の変遷をたどることで、当時のイギリス人にとっての「文明化」された社会の具体像や、「人道主義」の理念とはどのようなものであったのか、それがこの時期どのように変化したのか、さらにはそれがイギリス人の対外政策にいかなる影響を与えたのかを検討した。
金春禅竹の能楽論とその思想的背景に関する研究

平成20年度は、平成19年度に引き続き金春禅竹の『明宿集』について関連資料の収集につとめ、注釈作業を行う一方、特に禅竹の能楽論体系「六輪一露説」についての研究を進めた。六輪一露説は、「寿輪」から始まる六つの円相「六輪」と、「一露」と呼ばれる利釼の図を伴って表現されている。その代表的なテクストは、康正元年(一四五五)に成立した『六輪一露之記』であり、六輪と一露それぞれに禅竹の詞と図、東大寺戒壇院の僧・志玉の注が配され、その後に一条兼良の注と、禅僧・南江宗〓の跋が加わっている。禅竹は生涯を通してこの能楽論を発展させたが、六輪一露説は当初は[禅竹の詞と図、および志玉加注]だけの形で完結していたと推定されている。西教寺正教蔵にある『六輪尺』のように、そうした初期形態を示す伝本が現存しており、それは『六輪一露之記』の成立を十一年遡る文安元年(一四四四)には成立していた。このように初期段階から六輪一露説において少ながらぬ位置を占めていた志玉の注を検討し、これまで典拠不明とされてきた部分の多くについて典拠を指摘するとともに、その意義を考える論文を「六輪一露説の志玉加注について」として『藝文研究』(慶應義塾大学藝文学会)第95号に発表した。こうした典拠の解明により、澄観の法界思想をはじめとした華厳学を主体とする志玉の注の枠組みと、禅竹自身の論、特に能の生成を円環構造でとらえる思想との相応関係がみえてきた。本年度は、金春禅竹の『明宿集』に関連する資料を集めて注釈作業を始め、『ZEAMI』(森話社)第四号に「『明宿集』注釈稿(一)」として冒頭部の注釈を掲載した。『明宿集』は、金春禅竹が猿楽の芸能神としての翁を論じた伝書である。『金春古伝書集成』(わんや書店、1969年)において注が施されているが、頭注・補注という性格から簡潔なものにとどまっている。そこで本注釈では、能楽研究だけでなく宗教思想史や史学、美術史学など関係する諸分野における今日の研究状況をふまえた、新しい読解を行うことを目指した。注釈作成にあたっては、まず法政大学能楽研究所にある金春禅竹自筆の『明宿集』を閲覧し、禅竹自身による傍記・訂正なども含めて・本文を正確に復元した。その上で、これまでの先行研究を整理し、また新たに判明した研究成果を盛り込んだ注釈を付けている。特に『明宿集』には多くの寺社や神仏が登場するが、そうした寺社をめぐる環境や言説の展開を、諸記録や寺社関係資料の調査によって把握し、その中に『明宿集』の記事がどのように位置づけられるのか考察することに重きをおいた。今年度公開できた注釈は『明宿集』の冒頭部分だが、中世の宗教文化の中に禅竹を正確に定位するための基盤として、引き続き注釈作業を進める予定である。また、『鎮仙』第566号に発表した「「橘の内裏」考」では、世阿弥の『風姿花伝』第四神儀や禅竹の『明宿集』にみられる猿楽起源伝承を検討し、「橘の内裏」において秦河勝が初めて猿楽を舞ったとする伝承が、橘寺の縁起説と中世聖徳太子伝の影響下に形成されていく過程を明らかにした。