hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
口腔外科手術をしやすくする麻酔法の検討-炭酸ガスが口腔血流と疼痛閾値に及ぼす影響

炭酸ガスは血管平滑筋弛緩作用を有し、重要臓器の血流増加をもたらす反面、末梢組織における血流減少作用を有する。これにより口腔外科手術時の出血量減少効果が期待できるかどうかを、口腔粘膜血流を指標として検討した。方法:日本白色種雄性兎15羽を対象として研究を行った。酸素-イソフルランで全身麻酔導入後、気管切開および大腿動脈、耳介静脈にカニュレーションを行い、輸液路の確保と血圧の連続測定を行った。輸液は酢酸加リンゲル液を30ml/hの速度で投与した。レスピレータを使用して調節呼吸を行った後、左開胸を行い、大動脈起始部に超音波トランジット血流計を装着した。さらに左心室に酸素電極を挿入して心筋の酸素分圧を連続測定した。口腔粘膜上にレーザードップラー血流計を設置して固定した。針電極を使用して心電図計を装着した。以上の準備を行った後に、吸入麻酔薬の投与を中止し、耳介静脈からプロポフォールを10mg/kg/minの速度で投与し、60分放置した。測定項目は血圧、心拍数、大動脈血流量、心筋酸素分圧、血液ガス、口腔粘膜血流とし、血圧、心筋酸素分圧はポリグラフに連続記録した。安静後、normocapnia(PaC02 35-40torr、NCと略),hypocapnia(PaC02 20-25torr、Hypoと略),hypercapnia(PaC02 55-60torr、Hyperと略)の3条件下で上記パラメータを記録した。Hyperは10%炭酸ガスを吸入気に負荷することにより作成し、Hypoはレスピレータの設定条件を変更し、過換気により作成した。結果:NCに比較して、Hypoでは心筋酸素分圧の低下がみられたが、口腔粘膜血流と大動脈血流量は変化しなかった。Hyperでは心筋酸素分圧の上昇がみられたが、口腔粘膜血流と大動脈血流量は変化しなかった。いずれの条件下でも血圧、心拍数、心電図に有意な変化は認められなかった。日本白色種雄性兎15羽を対象とし、酸素-笑気-イソフルランで全身麻酔導入後、気管切開および大腿動脈、耳介静脈にカニュレーションを行った。その後左開胸を行い、大動脈起始部に超音波トランジット血流計を装着した。さらにオトガイ神経を露出させ、電気刺激装置を装着した。口腔底粘膜上にはレーザードップラー血流計をシリコンパテを用いて固定した。以上の準備を行った後、純酸素+0.7%イソフルランに吸入気を変更し、60分放置した。測定項目は血液ガス、大腿動脈収縮期血圧、脈拍数、大動脈血流量、口腔粘膜血流とした。血圧と脈拍数はポリグラフに連続記録した。呼吸は機械的調節呼吸とし、輸液は乳酸加リンゲル液を50ml/hで投与した。コントロール値を測定後、10%炭酸ガスを吸入気に混入した。吸入気炭酸ガス濃度は呼気ガスモニターで調節した。吸入炭酸ガス濃度は20分ごとに1,5,10%に変化させた。開胸により呼気ガスモニタではPaCO2の推察が困難なため、各々の炭酸ガス値につき動脈血ガスを測定し、PaCO2およびPaO2を調べた。現在、吸入気炭酸ガス、酸素濃度と血液ガスの関係を算出するべく、データ採取中である。今後の展開として炭酸ガス分圧の違いによる口腔粘膜血流の違い、刺激に対する反応の違いについて検討を行っていく。血液ガスデータはエプソン社製Edi Cubeを使用して集計、分析を行っている。現在上記のプロトコールに基づいて予備実験を行っているところであり、今後、炭酸ガスの鎮痛作用を加えて検討する。

結果:NCに比較して、Hypoでは心筋酸素分圧の低下がみられたが、口腔粘膜血流と大動脈血流量は変化しなかった。Hyperでは心筋酸素分圧の上昇がみられたが、口腔粘膜血流と大動脈血流量は変化しなかった。いずれの条件下でも血圧、心拍数、心電図に有意な変化は認められなかった。
清酒酵母の低胞子形成メカニズムの解明とその改善に関する研究

清酒酵母はSaccharomyces cerevisiaeに属する酵母であるが、胞子形成率が非常に低いため、清酒酵母の交配育種はきわめて困難である。本研究は、清酒酵母のゲノム解析結果を活用して低胞子形成のメカニズムを解明し、胞子形成率を改善することを目的とした。その結果、清酒酵母は胞子形成に重要な役割を持つ遺伝子であるRIM15に変異があり、正常なRIM15を発現させることで、胞子形成能がわずかに回復すること。さらに、正常なRIM15及びRTF1を共に発現させることで胞子形成率が大きく回復することを見出した。清酒酵母K7は胞子形成培地に移してもほとんど胞子を形成しない。平成21年度は清酒酵母のゲノム解析の結果を利用して、約340の胞子形成関連遺伝子群について清酒酵母と胞子形成が良好な実験室酵母のアミノ酸配列の比較を行った。その結果、清酒酵母でアミノ酸配列に変異の入っている遺伝子を251個見出した。その中で、RIM15は胞子形成の比較的初期に機能するリン酸化酵素をコードしているが、清酒酵母のRIM15はフレームシフト変異のためC末端の推定モチーフ領域を欠損し、機能不全が疑われた。そこで、実験室酵母S型のRIM15アレルを清酒酵母へ導入し、胞子形成条件下での挙動の観察を行った。その結果、胞子形成能の回復は見られなかったものの、胞子形成条件下での細胞形態に変化が見られた。このことは、清酒酵母の胞子形成では、Rim15よりも下流にも何らかの異常があることを示唆するものである。また、清酒酵母の1倍体と実験室酵母の1倍体の交雑株を作成し胞子形成をさせると、交雑株は約40%と高い胞子形成能を持つことがわかった。この事は、K7における低胞子形成能の原因が実験室酵母の遺伝子で相補可能な劣性変異である事を示している。さらに、清酒酵母と実験室酵母の胞子形成条件下での遺伝子転写プロファイルの解析を行うために、GeneChipを用いた解析を行った。その結果、清酒酵母では多くの胞子形成関連遺伝子の発現が誘導されていないことがわかった。特に、胞子形成初期で重要な役割を持つIME1,IME2の発現が、実験室酵母では上昇しているのに対して、清酒酵母では全く上昇していないことがわかった。したがって、清酒酵母では減数分裂初期に働く遺伝子の活性化に異常があることがわかった。清酒酵母はSaccharomyces cerevisiaeに属する酵母であり、原理的には減数分裂によって胞子を形成させ、得られた一倍体同士を接合させることで交配育種が可能である。しかし、清酒酵母の胞子形成率は非常に低いため、清酒酵母の交配育種は実際にはきわめて困難である。清酒酵母の胞子形成率が低い原因については、いまだに遺伝子レベルでの原因は解明されておらず、胞子形成率の向上した実用清酒酵母も得られていない。本研究は、清酒酵母のゲノム解析結果を活用して清酒酵母の低胞子形成のメカニズムを解明し、清酒酵母の胞子形成率を改善することを目的とする。平成21年度までに、清酒酵母は胞子形成条件において減数分裂初期の進行に必要な遺伝子の発現が低いことを確認し、胞子形成関連遺伝子の塩基配列を清酒酵母と実験室酵母で比較して、アミノ酸配列の異なる遺伝子を抽出した。特に、減数分裂初期における栄養情報のシグナル伝達に関与するプロテインキナーゼであるRim15に機能不全の疑いがあり注目した。平成22年度は、清酒酵母に正常なRIM15遺伝子を導入し、胞子形成に対する影響をくわしく調べた結果、形質転換体では胞子形成が若干回復することを見出した。また、実験室酵母一倍体BY4742の遺伝子破壊株コレクションから胞子形成関連遺伝子の破壊株を選択し、清酒酵母K7の一倍体と交雑させた二倍体について、胞子形成能を検討した。その結果、K7一倍体とBY4742親株との交雑株は高い胞子形成率を示したが、RTF1、SGF29、VAM6、VPS20、YNL107Wの各遺伝子破壊株とK7一倍体の交雑株は胞子形成を行わないことがわかった。このことは、清酒酵母ではこれらの遺伝子に変異があり機能していないことを示唆している。

本研究は、清酒酵母のゲノム解析結果を活用して清酒酵母の低胞子形成のメカニズムを解明し、清酒酵母の胞子形成率を改善することを目的とする。前年度までに、清酒酵母は胞子形成条件において減数分裂初期の進行に必要な遺伝子の発現が低いことを確認し、胞子形成関連遺伝子の塩基配列を清酒酵母と実験室酵母で比較して、アミノ酸配列の異なる遺伝子を抽出した。平成23年度は、まず、清酒酵母K7でフレームシフトによりC末端が欠失していることが明らかとなったRIM15に着目し、清酒酵母K7において実験室酵母型の正常なRIM15を発現させたところ、胞子形成能がわずかに回復した(0.78%)。また、実験室酵母BY4742の胞子形成関連遺伝子の遺伝子破壊株で清酒酵母K7の胞子形成不全を相補することができなかった株を解析した結果、清酒酵母K7のRTF1の変異が低胞子形成に関与していることがわかった。しかし、正常なRTF1を清酒酵母K7に導入しても、胞子形成率の上昇は認められなかった。そこで、正常なRIM15及びRTF1を共に導入したところ、共発現株では胞子形成率が7.6%まで上昇した。以上の結果から、清酒酵母K7の低胞子形成の原因にはRIM15とRTF1の変異が関与していることが明らかとなった。
多元信号に対する量子通信路容量とその超加法性に関する研究

本年度に行った研究業績を要約すると次のようになる.1.M元線形独立信号系に対する最大相互情報量の条件の考察昨年度は,3元線形独立信号系に対し最大相互情報量を数値的に算出した.その結果,相互情報量最大の条件が,3つの信号が等確率である場合とそうでない場合があることを明らかにしていた.今年度は,4元以上の信号系に対し,用いる信号数を制限することで,情報量を大きくする効果があることを示した.また,その結果が,信号の張るヒルベルト空間の近似的次元に深く関連していることを明らかにした.2.非線形符号を用いた通信路容量の超加法性の検証従来,通信路容量の超加法性は,線形符号を用いて検証されていた.しかし,量子信号の構造は,信号の属するヒルベルト空間の構造に大きく依存するため,古典情報理論で優れた特性をもたない符号も考察の対象として重要である.そこで,2元信号に対し,非線形符号を用いた相互情報量を数値計算した.その結果,線形符号よりも大きな超加法性が得られる例があることが明らかになった.3.2元信号の3次拡大に対する最大相互情報量の数値計算2元信号の3次拡大は,8元信号となるが,この信号系に対し,最大相互情報量の数値計算を行った.ここでは,用いる符号語数を符号語全体の張る空間の近似的次元に基づき,7個および4個に限定した.また,符号語生起確率は等確率とした.その結果,これまでに得られていた情報量よりもわずかに改善が得られた.しかし,真の最大相互情報量は,生起確率に偏りがあるときに得られると予想され,その計算は,今後の課題である.本年度に行った研究業績を要約すると次のようになる.1.3元線形独立信号系に対する最大相互情報量の数値計算量子情報理論において,これまでは2元信号系と線形従属信号系のみ,最大相互情報量が明らかにされていたが,3元線形独立信号系に対し,最大相互情報量を数値的に算出した.扱った信号系は,3元PSK信号及び3元実対称信号である.Fuchsらの推論に基づき,用いる決定作用素のクラスを3個と限定し数値計算を行った結果,信号間の内積によって,相互情報量最大の条件が,3つの信号が等確率である場合とそうでない場合があることが明らかになった.2.2元信号の2次拡大に対する最大相互情報量の数値計算2元信号の2次拡大は,4元信号となるが,この信号系に対し,最大相互情報量の数値計算を行った.ここでも,用いる決定作用素のクラスは信号数と同じ4個と限定した.その結果,拡大前の信号間内積が1に近いところで,4つの信号のうち,1つは全く使用しないときに,最大相互情報量が達成される可能性が高いことが明らかとなった.3.3元線形独立信号系に対する通信路容量の超加法性の検証通信路容量の超加法性の検証のためには,符号化なし最大相互情報量の計算が不可欠であるが.本年度の研究で得られた,3元線形独立信号系に対する結果を用いて,その超加法性の検証を行った.その結果,3元PSK信号と3元実対称信号の超加法性の達成度特性は,信号間の内積が同じ値であっても,大きく異なることがわかった.また,信号系によって,高い超加法性の達成可能な符号が異なることが明らかになった.これは,これまでに得られていた2元信号にはなかった性質である.本年度に行った研究業績を要約すると次のようになる.1.M元線形独立信号系に対する最大相互情報量の条件の考察昨年度は,3元線形独立信号系に対し最大相互情報量を数値的に算出した.その結果,相互情報量最大の条件が,3つの信号が等確率である場合とそうでない場合があることを明らかにしていた.今年度は,4元以上の信号系に対し,用いる信号数を制限することで,情報量を大きくする効果があることを示した.また,その結果が,信号の張るヒルベルト空間の近似的次元に深く関連していることを明らかにした.2.非線形符号を用いた通信路容量の超加法性の検証従来,通信路容量の超加法性は,線形符号を用いて検証されていた.しかし,量子信号の構造は,信号の属するヒルベルト空間の構造に大きく依存するため,古典情報理論で優れた特性をもたない符号も考察の対象として重要である.そこで,2元信号に対し,非線形符号を用いた相互情報量を数値計算した.その結果,線形符号よりも大きな超加法性が得られる例があることが明らかになった.3.2元信号の3次拡大に対する最大相互情報量の数値計算2元信号の3次拡大は,8元信号となるが,この信号系に対し,最大相互情報量の数値計算を行った.ここでは,用いる符号語数を符号語全体の張る空間の近似的次元に基づき,7個および4個に限定した.また,符号語生起確率は等確率とした.その結果,これまでに得られていた情報量よりもわずかに改善が得られた.しかし,真の最大相互情報量は,生起確率に偏りがあるときに得られると予想され,その計算は,今後の課題である.
口唇・口蓋裂の発生制御遺伝子の解析

ヴェトナムから口唇裂・口蓋裂の患者211人とその親(少なくとも片親)と親類290人をコントロールとして濾紙にしみこませた血液のサンプルを採取することができ(DNA解析に関して長崎大学、愛知学院大学の倫理委員会の承認あり)このサンプルを用いて候補遺伝子H-RYK(レセプター型チロシンキナーゼ)について患者DNAの変異解析を行い、続いて見いだされた多型部位に関して290人の内部コントロールの遺伝子型を決定し、単一多型部位での相関解析、ハプロタイプを用いての相関解析、および伝達不平衡テストを行った。患者の変異解析の結果、CAT→CGT(A743G)(H248R)とTAC→TGC(A1355G)(Y452C)の2個のミスセンス変異と、5箇所の多型部位を見いだした。ミスセンス変異は親から伝わったアリルのみに変異が見いだされ、コントロールサンプルには見られなかった。H248Rは膜貫通部位と細胞内ドメインの境界部位にあり、Y452Cはよく保存された細胞内チロシンキナーゼ第2ドメイン(Hanks kinase second motif)の中に存在している。今後、この2つの変異が機能的な喪失を起こす変異かどうかを変異蛋白の発現プラスミドを細胞に導入してsoft agar上でのコロニー形成能を測定して決定する。多型部位を用いて単一多型部位での相関解析、ハプロタイプを用いての相関解析では、統計学的に有意な差は得られなかった。イントロン13内の多型部位を用いた伝達不平衡テストにて唯一p-value=0.01を得た。相関解析の結果はp-value=0.16であり有意な差でなく伝達不平衡テストの結果の確定のためには、両親のそろったさらなるサンプルの解析が必要と思われる。今後は、H-RYKのシグナル伝達系の下流に存在する、EPHB2,EPHB3,などを解析する予定である。
マックス・ウェーバーにおける宗教と社会倫理の研究

マックス・ウェーバーの宗教と社会倫理を巡る壮大な比較文化史的研究の実質上の意義を、宗教的営為や社会倫理の意味と可能性を問う、倫理学がもつ現実学としての研究領域の方法論の確立という観点から再検討・吟味し、その画定を図る本研究の基礎的段階を、まず、濱井修が担当した。濱井は、ウェーバー以前の西欧の社会思想とウェーバーの思想との比較対照を経て、重点的には、ウェーバー以降の西欧の社会思想(主に、H・アルバート、K.ポパー、A・シェッツおよびフランクフルト学派)におけるウェーバー思想の影響・受容・批判の確認を通して、社会文化世界内の対象・営為の総体=「意味の世界」の「説明」と「理解」の統一的地平を展望して、他の二人の研究のための前提を設えた。濱井の成果を承けるかたちで、関根清三は、ウェーバーの主論文の一つである「古代ユダヤ教」を文献内在的に読解しながら、新約聖書の福音書研究に用いられてきた編集史的方法を旧約予言書に適用して、本文批判・文学批判・伝承史・様式史等を踏まえた編集史的考察を加え、さらにこの編集史的仮説の意味論的な検討を通して、従来の旧約聖書学を発展させ-具体的には、「第三イザヤ書」の作者問題に「作者複数説」の提唱によって決着をつけ、研究史上のアポリアを克服するとともに、ヤハヴェ宗教と他宗教との歴史的・教義的関係を確定した-、宗教思想、宗教倫理の象面での先の現実学の方法論的土台の構築を図った。森岡正博は、社会倫理の現代社会的な意味を問う作業の一環として、バイオエシックスの論争に着目し、ウェーバーの社会分析、人間論を踏まえつつ、いわゆる「パーソン論」(トゥーリー、プチェッティ、エンゲルハート等)の展開-人工妊娠中絶、安楽死、脳死、臓器移植問題を巡る議論-を批判的に検討して、その限界を画定し、これを乗り越え、新たな現実的倫理学として「生命学」を提唱した。今年度の中心的な目標は,現代技術の全体的状況を把握することと,先端的な個別技術特にコンピュータの発展に集約される情報科学技術の具体的な内容にある程度まで通暁することであった.そのための具体的な目標は,最近公刊されたその種の文献に目的意識的に当たることと,可能な限り広範な現場の研究者と交流することによって,問題意識を鮮明にすることであった.本年度は,諸大学・研究所・会社の文献を利用し,研究者・技術者との情報交換によって所期の目的はある程度まで実現できたと思われる.訪問した各種研究機関としては,東京大学(特に大型計算機センター)・千葉大学・日本IBM・鈴木教育ソフトなどがある.その他に,オーストリア哲学のデータ・バンク化の中心であるグラーツ市の哲学研究資料センター,オクスフォード大学の計算センターを訪問し,計算機利用の現象とさまざまな問題点を見学・討議する機会を持つことが出来た.現場を実際に体験することによって,今後の研究方針として重要だと思われるのは,技術開発に伴うマイナス面の具体的・実質的な解明と解決方針の提示である.従来も,この点に関してはある種の文明批評として,直観的・情緒的な批判の論調があったが,それば現実的に説得力のある建設的なものではなかった.もしも倫理学が現実に有効な,社会的に責任を自覚した学問を志すのであれば,この点は緊急に対処すべき重要な問題点である.

情報科学技術の展開に対して,基本的に賛同する立場からのいわゆる内在批判的な論評は数多く見られるが,技術の場面に超越的な立場からの批判は倫理学の研究者に最も要求されている研究領域であるように思われる.研究成果の公表は,今年度は従来の継続的研究によるものに限られているが,論文化され次第順次公刊を予定している.
タンザニア産コーヒーのフードシステムと生産農村の持続的発展

昨年度の「実績報告書」で強調したように、タンザニアにおけるコーヒー生産農村の持続的発展のためには、単協による競売所への直接販売をはじめとする自律・内発的努力に、フェア・トレードが結び付くことが重要である。さらに本年度の調査により、下記の小農民による自律・内発的努力も重要であることが確認できた。単協による直接販売の成功が生産者価格を改善し、小農民の生産意欲が戻りつつある。その象徴的事例が、病害に対して耐性が高く、そのため高価な農薬を使わずにすむ、新品種の苗木の普及である。さらに虫害をも避けるため、薬用植物や家畜の尿などを、木に噴霧する方法の適用が始まっている。このような農業の低費用化の工夫は、タンザニアの小農民が得意とするところである。例えば直射日光に弱いコーヒーの木に対して、彼らの主食であるバナナの木や、疎林の高木が日陰を与えている。それらは同時に、土壌の水分保持や浸食防止に役立っているし、最も大切に扱われている豆科の高木は、空気中の窒素を固定する役割を果たしているという。地力の減耗を妨げているのである。さらにバナナやコーヒーの木の根本には、家畜の糞とバナナの葉などをからめて作った、堆肥が投入される。それらのおかげで、コーヒー・バナナ畑には、高価な化学肥料を投入する必要がない。また収穫時の労働者や特定時のみに使う農機具は、拡大家族の成員間での助け合いで調達され、やはり現金を支払う必要がない。以上の低費用生産の実現は、コーヒー生産を持続化するための、小農民の私的価値の追求の結果であるが、同時に「低投入持続的農業」や「アグロフォレストリー」と呼ばれる、社会的価値の高い、環境保全的な生産方法が実現していることが興味深い。フードシステム論的なアプローチを援用する、つまりタンザニアにおける生産から日本における消費までの各流通段階における、構成主体間の相互依存的な関係の連鎖を分析すると、大きく2つのコーヒー・フードシステムの「不公正さ」が浮かび上がってくる。まずはニューヨーク・コーヒー取引所で決まる先物価格を、あらゆる流通段階における取引の基準価格としていることの「不公正さ」である。消費国側に基準があるため、生産者はその情報を得にくいし、自らの供給調整による生産者価格の引き上げが困難となる。またニューヨーク先物価格を動かすのは、ブラジル産コーヒーの供給実勢、そしてそれを参照して価格差益を追求する投機家の行動であり、タンザニア産コーヒーの供給実勢や生産者の必要性は全く反映しない。もう1つの「不公正さ」は、生産者価格と消費者価格の大きな格差である。それは多国籍企業が、生産者の必要性を無視する形で安価に調達した原料豆に対して、恵まれた競争構造の下にいる日本の大手焙煎業者が、自由にフルコストを上乗せした結果である。コーヒーのフェア・トレードは、ニューヨーク先物価格の低迷時に、輸出価格(→生産者価格)の下支えのために、最低輸出価格(生産コストを差し引いても生産者に利益が残る最低水準の輸出価格)を固定する。先物価格が上昇すると従来通りに戻ってしまうという中途半端さはあるが、1つめの「不公正さ」を避け、「生産コストと一定の利益(生活水準)」を基準にする望ましい価格形成のあり方だと考える。同じくその認証基準は、生産地の社会開発経費として利用される「フェア・トレード・プレミアム」の支払を義務付ける。上記の下支えは、生産者価格と消費者価格の格差拡大を避け、さらにこの利益の一部の生産地への還元によって、2つめの「不公正さ」が間接的に改善する。コーヒーのフードシステムの不公正さ、特にニューヨークのコーヒー取引所で決まる先物価格を基準とする価格形成制度の下では、特に200102年に深刻化した「コーヒー危機」(国際価格(ニューヨーク先物価格)の史上最安値)が、そのまま生産者価格の史上最安値につながってしまう。実際、タンザニア農村において、小農民のコーヒー販売所得が激減している。さらなる生活水準の悪化に耐え切れなくなった小農民は、出稼ぎ(都市での就職)の可能性を追求するとともに、コーヒー老木を伐採した跡地に、じゃがいも、トマト、トウモロコシなどの新たな商品作物を植え付けている。このようにコーヒーの生産量は減少しているが、すべての小農民から見捨てられたわけではない。高価な農薬の投入はほとんど期待できないが、無農薬栽培を可能とする新しい品種の苗木が、少しずつ畑に植え付けられている。さらには、遠いニューヨークで決まる先物価格に従属するのでなく、小農民の側から何とか価格を引き上げようとする動きもある。これまでのように、民間業者や協同組合連合会によって、「上から」生産者価格を押し付けられるのではなく、連合会を通さずに単位協同組合が、あるいは新たに設立した生産者組織が、直接的に競売所へ販売する方法を選択し始めた。その結果、民間や連合会より100200Tshs高い生産者価格を実現している。その連合会(KNCU)への出荷を停止した32単協は、新しい連合会を組織する勢いにあり、積極的な事業改善の努力なしには、KNCUの存続も危ぶまれる。消費国NGOが主導するフェア・トレード運動が、この32単協の挑戦のような、自律的な「下から」の価格引き上げの努力に結び付いて初めて、タンザニア農村の持続的発展が導かれるのである。

単協による直接販売の成功が生産者価格を改善し、小農民の生産意欲が戻りつつある。その象徴的事例が、病害に対して耐性が高く、そのため高価な農薬を使わずにすむ、新品種の苗木の普及である。さらに虫害をも避けるため、薬用植物や家畜の尿などを、木に噴霧する方法の適用が始まっている。このような農業の低費用化の工夫は、タンザニアの小農民が得意とするところである。例えば直射日光に弱いコーヒーの木に対して、彼らの主食であるバナナの木や、疎林の高木が日陰を与えている。それらは同時に、土壌の水分保持や浸食防止に役立っているし、最も大切に扱われている豆科の高木は、空気中の窒素を固定する役割を果たしているという。地力の減耗を妨げているのである。さらにバナナやコーヒーの木の根本には、家畜の糞とバナナの葉などをからめて作った、堆肥が投入される。それらのおかげで、コーヒー・バナナ畑には、高価な化学肥料を投入する必要がない。また収穫時の労働者や特定時のみに使う農機具は、拡大家族の成員間での助け合いで調達され、やはり現金を支払う必要がない。以上の低費用生産の実現は、コーヒー生産を持続化するための、小農民の私的価値の追求の結果であるが、同時に「低投入持続的農業」や「アグロフォレストリー」と呼ばれる、社会的価値の高い、環境保全的な生産方法が実現していることが興味深い。
ハサミモデル機を使用したチゴガニの行動解析に関する研究と臨海実習の支援

1 :研究目的干潟に生息するチゴガニのオスは、繁殖期にハサミを上下に振るWavingという行動によりメスを巣穴へと誘引する。どのようなWavingがメスに好まれるかを調査するために、RCサーボモータをマイコンにより制御して一定のリズムで動かすことのできるモデル装置を開発し、繁殖期におけるチゴガニの行動解析を行った。2個体モデル機として、1先行して動く(Leading Wave)の効果, 2上下高さを変更したモデル機による実験で、1先行モデル, 2大きくハサミを振るモデルがメスに好まれることを確認した。干潟にてWavingを行っているオスは、集団でWavingを行い、その動きは同調して動くため、本研究では、同調そのものに誘引効果があるかを調査することを目的とする。また、全国の大学生を対象とした臨海実習での実験支援を行う。2 :方法6個体vs6個体(計12個体)にモデル機をレイアウトしたものを製作し、実験を行った。干潟にいるオスのWavingを模擬する動きとして、上昇0.3秒,下降0.1秒,待機(休憩)0.6秒の1.0回/秒サイクルで上下高さは10mmで実験を行った。片方の6個体は全て同時に動かし(=同調)、もう片方の6個体は全てバラバラに動かす(=ランダム)こととした。およそ300個体のメスを用意し、1回の実験ごとにメスを入替え、実験を行った。3 :結果,まとめ同調とランダムのどちらのモデルに対しても目立った有意差はなかったことから、同調そのものに誘引効果はなく、Leading Waveを介した競争に伴って時間がたつに連れ自然と同調していくということがわかった。臨海実習では、10名の学生が実習に参加し、ハサミの大きさの違い,ハサミの色の違い,など各自で設定した実験条件にて実験を行った。特に大きなトラブルもなく円滑に実習を進めることができた。
難治性網脈絡膜炎の分子生物学的および免疫組織科学的解析

難治性網脈絡膜炎、特にヘルペスウイルス性ぶどう膜炎におけるPCR法の診断的意義および病態との関連性を解明するために、以下の研究を行った。家兎を用いて実験的単純ヘルペスウイルス性網脈絡膜炎を発生させ、その網脈絡膜炎の病態、病期とPCR法の検出感度およびウイルス抗体価の変動を検討した。抗体価の上昇は硝子体内へのウイルス接種後7日より上昇し始め、2128日にピークを示した後、低下した。PCR法による前房水中のウイルスDNAの検索では、接種後37日に検出され、その陽性率は30%であった。ヘルペスウイルス性網脈絡膜炎の臨床症例の検討では、前房水におけるPCR法によるウイルスDNAの検出は、硝子体に比べ、検出率が低かった。しかし、2週間の抗ヘルペス剤投与後にも眼内液から検出することが可能であった。免疫抑制患者においては、眼内液のウイルス抗体価よりもPCR法によるウイルスDNAの検出が有用であった。免疫抑制患者における水痘・帯状ヘルペスウイルス性網脈絡膜炎の検討から、免疫能の低下が網脈絡膜炎の病態に関与していることが示唆された。ヘルペスウイルス性網脈絡膜炎の診断における眼内液のPCR法によるウイルスDNAの検出率は、必ずしも高率ではなかった。生体の免疫能を考慮し、眼内液のウイルス抗体価と併せて評価すべきと考えられる。免疫抑制患者では、健常者と比べ免疫能の低下していることから、眼内液のウイルス抗体価は低く、PCR法によるウイルスDNAの検出率が高くなると考えられた。ウイルス性網脈絡膜炎患者においては、その免疫能を考慮し、ウイルス学的検索結果と臨床所見を詳細に検討する必要がある。1.網脈絡膜炎の臨床的解析についてヘルペスウイルス性網脈絡膜炎である桐沢・浦山ぶどう膜炎症例におけるPCR法によるウイルスDNAの検索から、抗ヘルペス剤を比較的長期投与した症例でも検索することはできるが、眼内液においても前房水と硝子体液では同じ病期でも検出感度は異なり、前房水では検出感度の低いことが明かとなった。このことは、臨床診断上、しばしば用いられる前房水の検索の限界と臨床上の解釈において留意すべき点であることがわかった。また、眼部帯状ヘルペスにみられるぶどう膜炎における検出感度は低く、同じヘルペス性ぶどう膜炎においても、その発生機序は異なることが示唆されている。臨床症例より得られる検体を増やし、さらに検索中である。2.実験的ウイルス性網脈絡膜炎の解析について実験的ウイルス性網脈絡膜炎の作成方法としておこなっている逆行性感染、視中枢へのウイルスの接種からは十分な結果を得ていない。すなわち、実験動物に生じるウイルス性髄膜炎の発生から実験動物の長期生存が得られないこと、および、逆行性感染による網脈絡膜炎の発生時期が多様であるため、ウイルス性網脈絡膜炎の発症経過を十分にとらえることができない。しかし、実験動物の数を増やし、今後も検討する予定である。そこで、逆行性感染のみでなく、網膜下腔へウイルスを接種し、中間透光体を経ない直接の網膜色素上皮細胞および脈絡膜におけるウイルス感染を成立させることによってもウイルス性網脈絡膜炎の発生過程および眼内液の検索と病期の関連性は検討し得ると考え、網膜下腔へのウイルス直接接種およびウイルス感染培養網膜色素上皮細胞の移植を検討している。1.網脈絡膜炎の臨床的解析についてヘルペスウイルス性網脈絡膜炎である桐沢・浦山ぶどう膜炎症例では、急性期にはPCR法にりウイルスDNAが検出されるが、抗ヘルペス剤の投与や急性期を過ぎた場合は眼内液抗体価は高値であったがPCR法検出感度は低かった。

一方、同じヘルペス群ウイルスであるサイトメガロウイルス網膜炎症例では眼内液抗体価は低値であったが、PCR法によりウイルスDNAが検出されている。このことは、臨床診断上、しばしば用いられる前房水の検索の限界と臨床上の解釈において留意すべき点であることがわかった。臨床症例より得られる検体を増やし、さらに検索中である。2.実験的ウイルス性網脈絡膜炎の解析について実験的ウイルス性網脈絡膜炎の作成方法としておこなっている逆行性感染、視中枢へのウイルスの接種からは十分な結果を得ていない。すなわち、実験動物に生じるウイルス性髄膜炎の発生から実験動物の長期生存が得られないこと、および、逆行性感染による網脈絡膜炎の発生時期が多様であるため、ウイルス性網脈絡膜炎の発症経過を十分にとらえることができていない。実験動物の数を増やし、今後も検討する予定である。また、PCR法の検出はウイルス性網脈絡膜炎の比較的早期にのみ検出されるのに対し、眼内液における抗体産生は眼局所のおいて長期間持続するという臨床所見を解明するために眼局所におけるウイルスに対する免疫反応の経過についても検討中である。1.網脈絡膜炎の臨床的解析について水痘・帯状ヘルペスウイルス性網脈絡膜炎には、健常者に発生する桐沢・浦山ぶどう膜炎(急性網膜壊死症候群)と免疫抑制状態にある患者に日和見感染として発生する急性進行性網膜外層壊死があり、同じ水痘・帯状ヘルペスウイルス性網脈絡膜炎でも病態の異なることが明らかとなった。健常者における診断においては、前房水などの眼内液のウイルス抗体価が診断上有用であったが、後天性免疫不全症候群などの日和見感染では、眼内液、血清の抗体価の変化は診断上有効ではなく、むしろPCR法によるウイルスDNAの証明が有用であり、健常者では眼内液の採取時期によりウイルスDNAの検出率は影響を受けるが、免疫抑制状態にあることから、ウイルスDNAの検出は容易となっている可能性が考えられた。また、サイトメガロウイルス網脈絡膜炎患者では、抗ウイルス剤ガンシクロビル治療による病態の改善とともに、ウイルスDNAは検出されなくなった。2.実験的ウイルス性網脈絡膜炎の解析について白色家兎を用いた実験的単純ヘルペスウイルス網脈絡膜炎におけるウイルス抗体価とPCR法によるウイルスDNAの経時的検索から、PCR法による検出は感染後極めて早期のみ可能であり、ウイルス抗体価、抗体率が陽性となる時期にはPCR法による検出は不能であった。このことは、生体のウイルスに対する防御反応が速やかに行われており、液性免疫の関与までに時間差があることを示していると考えられた。
気候変動下における水田依存性トンボ類の保全に向けた灌漑システムの開発

トンボ類は、水田に生息する他の生物と同様に一時的水域に生活史を対応させている。トンボの幼虫は、乾燥した長期間を湿った土やデトリタスに隠れて生き延びている。水田に依存するトンボ類幼虫にとって、乾燥状態の変化をもたらす灌漑システムの変化は生存に大きな影響を及ぼす。本研究では、水田に生息するアカネ属幼虫を用いてライシメータや室内実験をおこなった。実験の結果から、中干し管理の実施時期によってアカネ属幼虫の個体数に大きな差が生じることが明らかとなった。特に気候変動に伴う早期中干しは、幼虫の生存率の低下を招く。中干し実施時期と幼虫生存率の関係を理解することは、水田に依存したトンボ類全般の保全に重要である。【22年度研究成果・研究準備状況】・水田灌漑時期の変化に関する聞き取り調査地域によってどの程度、湛水期間と中干し時期が異なるのかを調査するために、宮城県内の各地域の水田を現地踏査し、湛水期間と中干し時期を確認した。具体的には、宮城県稲作管理指導指針(基本編)を基に一般的な栽培管理スケジュールに照らして地域ごとの水管理状況を把握した。東日本大震災の影響により、全国的な動向を把握するためのJAへのヒアリング調査は実施できなかった。・ライシメータ実験準備のためのアカネ属卵の採取平成23年実施予定の実験準備としてアカネ類の卵採取を行った。宮城大学付属農場の水田において、アキアカネ、ノシメトンボ、ナツアカネ、マユタテアカネの4種の卵を採集した。夏の高温のため、ナツアカネの卵が十分に採取できなかったので、今年度も採取する予定である。採取した卵は恒温器(H22年備品購入、低温インキュベータ)で今春まで保管している。卵の休眠覚醒のためには、低温に接触する必要があるので、卵は一定期間バイオフリーザーで人工的に低温処理した。低温処理が不十分だった場合に備えて、野外条件下(宮城大学圃場)の卵の保管は実行できなかった。・水田灌漸時期の変化に関する聞き取り調査地域によってどの程度、湛水期間と中干し時期が異なるのかを調査するために、宮城県内の各地域の水田を現地踏査し、湛水期間と中干し時期を確認した。22年度に実施できなかった、全国的な動向を把握するためのJAへのヒアリング調査を実施した。・実験圃場を使用した中干しめ影響評価平成22年に採取したアキアカネ卵を恒温器(H22年備品購入、低温インキュベータ)で保管した。5月以降に宮城大学付属農場の実験水田を用いて、中干し開始時期を3段階に分けた試験区画を作成した。具体的には、中干し開始時期を(1)6月下旬、(2)7月上旬、(3)7月中旬、(4)常時湛水の4条件を設定した。採取した卵を各区画に300個放流し、1週間ごとに幼虫個体数を調査した。また、羽化時期には、羽化殻数を毎日調査した。その結果、(1)6月下旬の中干し開始が最も早い条件でも、幼虫が終齢に達している場合は、羽化が正常に粉割れることが明らかとなった。したがって、早場米やより早い中干し条件が、幼虫の生存率に影響を及ぼすと考えられた。農村で一般的にみられてきたアキアカネは減少傾向にあるが、その原因として様々な要因が挙げられている。その中で中干しも要因の一つとして挙げられている(上田1998)。一方でアキアカネ幼虫は10齢まで成長すると乾燥への耐性が高まることが示されており(先崎ら2013)、中干しは水稲を行う上で重要な農法であるが、幼虫が10齢に達するまで延期することでアキアカネ保全に大いに有効であると考えられる。本研究ではアキアカネとノシメトンボの死亡率、成長速度、発育ゼロ点および有効積算温度を室内実験によって明らかにし、この結果をもとに宮城県の各地域におけるアキアカネ・ノシメトンボの10齢到達日を推定した。アキアカネの孵化必要日数は4.71日から7.27日の間となった。孵化予測日は5月3日から5月12日の範囲にあり、宮城県内14地域で最も早い5月3日となり、柴田郡村田町が5月12日と最も遅くなった。孵化予測日が5月10日以降となった地域は7地域であった。本研究のデータを用いて算出したアキアカネの10齢到達必要日数は72.29日から76.70日の間となった。10齢到達予測

日は7月17日から7月23日の範囲にあり、6地域で最も速い7月17日となり、柴田郡村田町が7月24日と最も遅くなった。10齢到達予測日の前後は、地域間で水温の高低による必要日数の差は若干見られるものの、やはり取水日の影響を受けたと考えられる。本研究の結果から、7月中旬以降の中干しがアキアカネ保全に有効だと考えられた。取水日が遅い地域では7月下旬頃まで中干しを延期することも重要だと考えられる。現在行われている慣行の中干しは6月下旬から7月上旬にかけて行うのが一般的であり、1020日程度の延期でアキアカネ保全に効果があるものだと考えられた。〔水田灌漑時期の変化に関する聞き取り調査〕地域によってどの程度、湛水期間と中干し時期が異なるのかを調査するために、宮城県内の各地域の水田を現地踏査し、湛水期間と中干し時期を確認した。具体的には、宮城県稲作管理指導指針(基本編)を基に一般的な栽培管理スケジュールに照らして地域ごとの水管理状況を把握した。また、全国的な中干し管理の動向を把握するためにJAへのヒアリング調査を実施した。〔ライシメータを使用した中干しの影響評価〕平成23年に採取したアキアカネ卵を恒温器(H22年備品購入、低温インキュベータ)で保管した。5月以降にライシメータのマイクロコズム水田を用いて、中干し開始時期を3段階に分けた試験区画を作成した。具体的には、中干し開始時期を16月下旬、27月上旬、37月中旬、4常時湛水の4条件を設定した。採取した卵を各区画に100個放流し、1週間ごとに幼虫個体数を調査した。また、羽化時期には、羽化殻数を毎日調査した。その結果、16月下旬の中干し開始が最も早い条件でも、幼虫が終齢に達している場合は、羽化が正常に行われることが明らかとなった。したがって、早場米やより早い中干し条件が、幼虫の生存率に影響を及ぼすと考えられた。東日本大震災の影響で実験計画に遅れが生じている。25年度が最終年度であるため、記入しない。計画的に実験を行い、実験圃場、ライシメータおよび農家圃場での中干しの影響を把握している。アキアカネ幼虫の発育ゼロ点と有効積算温度を用いて、中干しリスクを緩和する中干し時期マップの作製にまで研究を拡張している。計画的に実験を遂行する予定である。ライシメータ実験に加えてワグネルポットを用いた実験を新たに加えて行う予定である。アキアカネに加えて、ナツアカネ、ノシメトンボ幼虫の発育ゼロ点、有効積算温度を実験的に明らかにする。水田を代表するアカネ属3種の中干しによる死亡リスクを緩和するための中干しマップの作製にまで発展させる。そのための飼育実験を最終年度に実施する。
ホスファターゼプロファイリングを志向した新規共有結合型阻害剤の創製

細胞内のタンパク質脱リン酸化酵素(プロテインホスファターゼ)の機能を停止させる新しいタイプの阻害剤を創製した。この阻害剤はプロテインホスファターゼと共有結合で連結する不可逆的阻害剤として設計し、実際にがん細胞の細胞周期を調節するホスファターゼCdc25Aと共有結合を形成することを見出した。また細胞内でこの阻害剤が相互作用するタンパク質を、蛍光ラベル体を用いて検出することに成功した。プロテインホスファターゼは多くの重要な生理機能を担っているが、分子レベルでの活性制御機構や基質の認識機構についての解明は十分になされていない。本研究では、様々な生理的条件下におけるホスファターゼ活性をモニタリングすることを目指し、独自に開発したホスファターゼ阻害剤であるRE誘導体をプローブとしてホスファターゼ群を網羅的に標識する新たな手法の開発を検討している。まずRE誘導体を、ホスファターゼと共有結合を形成する不可逆的阻害剤へと改変することから開始した。両特異性プロテインホスファターゼであるVHRに対してもっとも効果的な阻害剤であったRE1をリード化合物として設定した。計算化学的に発生させたVHRとRE1の複合体のモデルから、5位置換基に存在する水酸基に脱離基を導入すれば不可逆的阻害剤になると期待し、種々の誘導体を合成した。その結果、メシル基を導入した化合物において効果的にDSPの一種であるCdc25Aと共有結合を形成することを見出した。また、水酸基をフッ素原子に変換した化合物でも不可逆的阻害剤となることも同時に見出した。そのことから本誘導体のホスファターゼとの共有結合形成は、単純なSN2反応ではなく、脱離-付加機構で進行していると考えられる。また、メシル基を有するRE誘導体を蛍光ラベル化した化合物を種々合成した。蛍光ラベル体をHL60細胞やHela細胞に与え、細胞内局在を観察したところ、核周辺の細胞質に局在しており、本誘導体が細胞内に取り込まれていることを確認することが出来た。我々が開発した両特異性プロテインホスファターゼ阻害剤であるRE誘導体を基盤として、昨年度は不可逆的阻害剤を創製した。この不可逆的阻害剤RE20は、Cdc25Aに対して高い阻害活性を有し、顕著な細胞増殖抑制活性を示すことを見出していた。さらにRE20を蛍光ラベル化した化合物を用いて、Cdc25Aと共有結合を形成することを明らかにしていた。しかしRE20は、同じDSPであるVHRに対する阻害活性は低下しており、細胞内のホスファターゼを網羅的に解析するプローブとしては理想的ではなかった。本年度は、まずRE20の構造活性相関研究に着手し、Cdc25Aの阻害活性は維持しながらも、高いVHR阻害活性を示す化合物を探索することにした。約50種類程度の化合物を合成し、その中からVHR阻害活性が約5倍程度向上した化合物を見出すことに成功した。また昨年度検討していた蛍光ラベル体を用いた細胞内標的酵素解析では、蛍光タグの分子サイズがRE化合物とほぼ同等であることから、蛍光団の影響を排除できていない可能性が考えられた。そこで本年度は、蛍光タグではなくアルキンタグをRE20に組み込み、細胞内でタンパク質をラベル化した後、クリックケミストリーを用いてビオチンタグを導入するストラテジーへと変更した。種々条件検対した結果、本ストラテジーの基盤技術を確立し、ビオチンタグが導入された標的酵素群を検出することに成功した。
神経再生におけるsrc tyrosine kinaseの役割

src tyrosine kinaseの神経細胞の再生反応における役割を明らかにする目的で、迷走神経・舌下神経という変性・再生反応をそれぞれ示す神経系を使い、軸索切断後のSrcの変化を蛋白およびmRNAレベルで検索した。1.免疫組織化学的検索では、tyrosine kinaseの反応産物であるphosphotyrosineに対する抗体を用いた検索より、両神経核とも軸索傷害後に神経細胞の膜に強い陽性反応を示すようになり、tyrosine kinaseの活性上昇の生じることが示された。神経細胞の栄養因子として働きそのリセプターがSrcと会合するplateletderived srowth factor(PDGF)とそのリセプターの検索により、迷走神経核のみで神経細胞死に先行してPDGFの消失が見られた。しかしPDGFリセプターに関しては変化を示さなかったこのことから、神経細胞の再生反応にPDGFなどの神経栄養因子の作用が重要であることが示された。次いでSrcに対するpolyclonal抗体と、SrcのSH3部分に対するmonoclonal抗体を用いて検索した。その結果、polyclonal抗体で認識されるSrc自身は両神経核の対照側、処置側ともに蛋白の存在が認められ、また免疫反応にも強弱の差は明らかではなかった。一方、SH3に対するmonoclonal抗体で検索すると、舌下神経核の切断側のみに陽性反応が認められ、舌下神経核の対照側や迷走神経核の対照・切断側ともに反応は認められなかった。これらの結果とSrcの活性化機構とを合わせて考えれると、Srcの活性化が生じる舌下神経核の神経細胞は再生が生じ、活性化の生じない迷走神経核では神経細胞が変性すると考えられた。2.処理後のラットより神経核を実体顕微鏡下に採取し、Western blottingを行った。その結果、両神経核とも切断によっては蛋白量には有意な変化が見られなかった。3.In situ hybridizationはデータベースとしてGenetyx CDを使い、マウスの配列に従って45merのoigonucleotide probeを用いて検索したが、結果が極めて不安定で信頼できる結論は得られなかった。しかし、最近のデータでは以前と異なる配列が記載されており、我々が当初使った配列にはイントロン部分が存在していたことがわかった。現在までラットのSrcのcDNAは報告されておらず、我々はマウスとのhomologyを利用してin situ hybridization用のprobeを作成しつつ、ラットの全配列を決定すべく仕事を継続している。src tyrosine kinaseの神経細胞の再生反応における役割を明らかにする目的で、軸索傷害後に再生を示す細胞と、変性を示すものとの比較検討を行った。tyrosine kinaseの反応産物であるphosphotyrosineに対する抗体を用いた免疫組織学的および免疫電子顕微鏡学的検索より、軸索傷害後に再生を示す舌下神経核・変性を示す迷走神経核ともに神経細胞とミクログリアの膜に強い陽性反応を示すようになり、軸索傷害により神経細胞のtyrosine kinaseの活性上昇の生じることが示された(Acta Neuropathologica,88;14-18,1994)。platelet derived growthfactor(PDGF)とそのリセプターの検索により、舌下神経核においてはPDGFは軸索傷害により変化を示さないが、迷走神経核では神経細胞死に先行してPDGFの消失が見られた。しかしPDGFリセプターに関しては、軸索傷害により両神経核とも変化を示さなかったこのことから、神経細胞の再生反応にPDGFなどの神経栄養因子の作用が重要であることが示された(Brain Res,651,108-114,21994)。一方、src tyrosine kinaseに対する抗体は軸索障害後の舌下神経核でのみ神経細胞に陽性反応が認められ、変性を示す迷走神経核や無処置の神経細胞には認められず、src tyrosine kinaseがその他のtyrosine kinaseとはことなり、神経細胞の再生反応において特異的に働いている可能性が示唆された(未発表データ)。PDGFのリセプターはsrc tyrosine kinaseと会合することが知られており、その作用はSrcを介したシグナル伝達によりもたらされると考えられる。これらのことから、PDFGをはじめとする神経栄養因子の神経細胞に対する生存・維持・再生効果は、特異的にsrc tyrosine kinaseを介して神経細胞に作用していることが示唆された。以上の検索は、組織の固定・反応ともバイオシェーカーを使用して行ったものである。

一方、SH3に対するmonoclonal抗体で検索すると、舌下神経核の切断側のみに陽性反応が認められ、舌下神経核の対照側や迷走神経核の対照・切断側ともに反応は認められなかった。これらの結果とSrcの活性化機構とを合わせて考えれると、Srcの活性化が生じる舌下神経核の神経細胞は再生が生じ、活性化の生じない迷走神経核では神経細胞が変性すると考えられた。2.処理後のラットより神経核を実体顕微鏡下に採取し、Western blottingを行った。その結果、両神経核とも切断によっては蛋白量には有意な変化が見られなかった。3.In situ hybridizationはデータベースとしてGenetyx CDを使い、マウスの配列に従って45merのoigonucleotide probeを用いて検索したが、結果が極めて不安定で信頼できる結論は得られなかった。しかし、最近のデータでは以前と異なる配列が記載されており、我々が当初使った配列にはイントロン部分が存在していたことがわかった。現在までラットのSrcのcDNAは報告されておらず、我々はマウスとのhomologyを利用してin situ hybridization用のprobeを作成しつつ、ラットの全配列を決定すべく仕事を継続している。src tyrosine kinaseの神経細胞の再生反応における役割を明らかにする目的で、迷走神経・舌下神経という変性・再生反応をそれぞれ示す神経系を使い、軸索切断後のSrcの変化を蛋白およびmRNAレベルで検索した。1.免疫組織化学的検索では、Srcに対するpolyclonal抗体と、SrcのSH3部分に対するmonoclonal抗体を用いて検索した。その結果、polyclonal抗体で認識されるSrc自身は両神経核の対照側、処置側ともに蛋白の存在が認められ、また免疫反応にも強弱の差は明らかではなかった。Srcは活性化においてそのコンフォーメイションが変化し、隠されていたSH2が表面に現われ、そこにphosphotyrosineが結合するが、この時にSH3も表面に現われる。これらのことから、舌下神経核の切断側に見られたSH3の免疫反応はSrcの活性化を現しており、Srcの活性化が生じる舌下神経核の神経細胞は再生が生じ、活性化の生じない迷走神経核では神経細胞が変性すると考えられた。2.処置後のラットより神経核を実体顕微鏡下に採取し、Western blottingを行った。
モノクローナル抗体をもちいたアスパラギナーゼ感受性腫瘍の検索

新たなFlow cytometry法によるアスパラギン合成酵素ASNS測定系のためのモノクローナル抗体を作成し(Hybridoma (Larchmt). 2012 1(5):325-32.)2011年10月3日に特許出願した。この抗体を用いて、白血病臨床検体でASNS発現とL-asparaginase感受性を同時に測定し解析システムの有用性を検討し確認した。臨床検体においてもASNS低発現とASNase感受性の関連を認める結果を得た。FCMによるASNS蛋白量の測定は、Lーアスパラキナーゼの感受性について予測するための有力な情報をあたえるものと考えられた。L-asparaginase適応悪性腫瘍疾患の探索のために、東京大学先端科学技術研究センター分子生物医学浜窪隆雄教授とともに、新たなFlow cytometry法による測定系のためのモノクローナル抗体の作成し( Hybridoma (Larchmt). 2012 1(5):325-32.)2011年10月3日に特許出願した。臨床での有用性を加えて特許強化し、補正書を提出、併せて4月9日に国際出願した。この結果は、9月のEurope Academy of Peadiatrics (EAP)で発表する予定である。フランスのERYTECH Pharma SAは、腫瘍治療向け医療製品を開発しているバイオ製薬企業で、同社が特許を取得した中核的技術は、ヒトRBCの活用を基盤として治療用酵素(アスパラギナーゼなど)の持つ特性としての薬物動態と薬力学を改善するもので、ERYTECHの主力製品である急性リンパ芽球性白血病(ALL)治療薬GRASPAは、欧州と米国で希少薬指定を受けている。GRASPAについては第2相および第3相の臨床試験を実施中で、我々の抗体を併用したアスパラギナーゼ感受性腫瘍の検索を共同で行うことにしている。EAPの際にLyonを訪問し同社のCEOと交渉をする予定である。既存の抗体を用いたASNS解析システムを利用し、小児特有の腫瘍性疾患の解析を開始し、LCH症例の低ASNS発現を見いだした。(28th annual Meeting of the Histiocyte Society 2012.10.11London)。L-asparaginaseの新たな適応疾患とLCHが認識されていくことが期待される。L-asparaginase適応悪性腫瘍疾患の探索のために、東京大学先端科学技術研究センター分子生物医学浜窪隆雄教授とともに、新たなFl ow cytometry法による測定系のためのモノクローナル抗体の作成し(Hybridoma (Larchmt). 2012 1(5):325-32.)2011年10月3日に特許出願した。臨床での有用性を加えて特許強化し、補正書を提出、併せて2013年4月9日に国際出願した。急性骨髄性白血病(AML)症例の検討結果は、2013年9月のEurope Academy of Peadiatrics (EAP)にてフランスLyonにて発表した。この際に、ヒトLyonに本社がありRBC内封入アスパラギナーゼGRASPAの開発をしているERYTECH Pharma SAの研究担当者と会談をした。GRASPAは、欧州と米国で希少薬指定を受けている。GRASPAについては急性リンパ性白血病(ALL)の第2相および第3相の臨床試験を実施中で、ALLだけでなく、急性骨髄性白血病(AML)症例についても第2相および第3相の臨床試験を計画中で、我々の抗体を併用したアスパラギナーゼ感受性腫瘍の検索を共同で行うことに合意した。がん化学療法国内での多数例の白血病症例の検討を開始する。国内の主に白血病しょうにがん研究グル-プJPLSG内で、臨床研究プロジェクトとして提案し採択後は、各施設のIRB承認のもと国内での多数例でのASNS低発現とL-asparaginase感受性の検討を行う。Lyonを訪問し同社のCEOと交渉した結果companion試薬としての採用を念頭に共同研究をすすめている。