hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
シグナル応答性を指標とした造血幹細胞の新たな細分画法の確立

ヒト造血幹・前駆細胞としては、CD34陽性CD38陰性細胞集団を用いて、移植はNOGマウスをレシピエントとして評価する。マウス造血幹細胞では、幹細胞活性の評価の標準法であるLy5.1/Ly5.2 congenicマウスシステムを用いて、プローブ導入後にも未処理造血幹細胞に遜色ない活性が保たれるような条件を確立する。ぞ造血幹細胞の分画:プローブの導入法にある程度目処が付いた時点より、実際の造血幹細胞を用いてプローブ導入、サイトカイン刺激、フローサイトメトリー解析およびソーティングの至適化を開始する。細胞株を用いた前年度の検討を参考に、プローブ導入後の刺激開始のタイミング、解析・ソーティングの開始時期、サイトカイン濃度等をヒト造血幹・前駆細胞とマウス造血幹細胞とでそれぞれ至適化する。分画造血幹細胞の特性・機能評価:リン酸化の有無、強度を指標に分画した細胞をソーティングし、遺伝子発現プロファイル、in vitrocolony assay、移植による特性および機能の評価を行い、分画に用いたシグナル応答性の差異が特性においてもまた機能の上でも造血幹細胞を異なる画分に分別しうるかの検証を行う。リン酸化シグナルと特性・機能との関連づけ:計画どおりに新たな造血幹細胞の亜分画が同定されれば、分画の基となったシグナル応答性の差異が何故観察される造血幹細胞活性の差異へと結びつくのかの検討を行う。平成24年度において本研究の遂行に必要な物品は大方調達済みであり、次年度においては研究の進捗にあわせて不足分の消耗品を調達する予定である。分担研究者の片山においては、プローブの合成に係る費用へと調達し、申請者においてはサイトカイン、実験動物が主な出資用途となる。
子宮体内膜増殖・分化に関与する遺伝子群の発現解析

子宮体内膜において周期的に認められる殖期期から分泌期への形態的、機能的な変化に伴う遺伝子発現パターンを解析し、子宮内膜増殖症や子宮内膜癌などの増殖性疾患における責任遺伝子を解明することを研究目標とした。研究モデルとして子宮体内膜の増殖、分化への関与が示唆されるWntシグナルとエストロゲンシグナルとをターゲットとしたin vitro細胞培養系を用いて、エストロゲン刺激あるいは遺伝子導入による恒常的なWntシグナル活性条件下での遺伝子発現を検討した。子宮体癌由来培養細胞株7株(Ishikawa, Hec1A, Hec1B, Hec108,SNG-II, HHUA, KLE)をスクリーニングし、Wntシグナルの活性化に関与するβカテニンに遺伝子変異が無く、同時にエストロゲン受容体を有しエストロゲン依存性に増殖することが確認されたIshikawa株をモデル細胞とした。一方で活性変異型βカテニン遺伝子導入が実際にWntシグナル転写活性化に働くことを、ルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイ系にて確認した後(野生型βカテニン遺伝子を有するHec1A株を対象とした)、Ishikawa株にリポフェクタミン法で遺伝子導入し同様のアッセイ系で検討した。その結果、転写活性の上昇は他の細胞と比較して軽度であり、遺伝子発現のプロファイルを検討するためには転写活性の上昇が明らかであることが望ましいと考えられた。従来よりIshikawa株はheteroな細胞集団であることが指摘されていることから、Ishikawa株をsingle cell cloningし、遺伝子導入効率の良い亜株を樹立したうえで改めてルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイを行い最も条件の良い(転写活性化効率が高い)亜株を選択する方針とし、今後の検討課題とした。本研究は子宮体内膜の増殖における関与が示唆される、Wntシグナル伝達系に焦点を絞り培養細胞株を用いてWntシグナルの下流の遺伝子群を網羅的に発現解析することを目標としている。初年度として、本年は当研究に用いる細胞株の樹立を行った。つまり、Wntシグナル伝達系が機能し、転写活性を示す細胞株を樹立した。すでにβカテニン遺伝子変異によりWntシグナルが活性化していることが確認された培養細胞株から変異型βカテニンcDNAを単離した。このcDNAを発現ベクターに組み込んだものと、βカテニンを介してWntシグナルの標的となるレポーターベクターとを準備し、レポータージーンアッセイの系を確立した。同時に、子宮体癌由来培養細胞株7株を対象としてβカテニン遺伝子の状態を調べたところ、2株に遺伝子変異が確認され、5株は野生型であった。この野生型5株を対象に、変異型βカテニンとレポータージーンのダブルトランスフェクションをおこない、ルシフェラーゼ活性を測定した。その結果、1株でルシフェラーゼ活性の上昇が認められたが、比活性が低値であったので、さらにこの培養細胞株をシングルセルクローニングし、9種の亜株を樹立した。この亜株を対象に同様のルシフェラーゼアッセイをおこない、最終的にルシフェラーゼ活性が4倍程度まで上昇する株を樹立した。今後この培養細胞株を対象にして、変異型βカテニンを遺伝子導入し発現する遺伝子群をSAGE法にて網羅的に解析する予定である。
高周波用アモルファス磁性超薄帯の微細磁化機構と超低損失・高透磁率化に関する研究

本研究は,筆者らが発明した真空中のロール超急冷法で作製される極薄のCo基アモルファス磁性合金超薄帯の,製造方法(合金組成,熱処理条件)および磁区構造を詳しく検討し,MHz帯の高周波領域での磁心損失の一層の超低損失化と初透磁率の周波数特性を向上させるための指針を得ることを目的として2カ年間実施された。種々検討の結果,Crを少量添加した零磁歪組成の(Fe-Co-Cr)_X(Si-B)_<100-X>,(x=75-79),(Cr=5-6at%)の試料薄帯が,アモルファス薄帯の極薄化加工と高周波磁気特性(磁心損失および透磁率)の両面で優れていることが明らかになった。さらに熱処理条件を種々検討した結果,幅方向磁界中熱処理を施すと,MHz帯の高周波領域で磁心損失が3050%程度さらに低減されることが分かった。また,Kerr効果による磁区観察の結果,誘導磁気異方性を十分抑制した薄帯については,歪取り熱処理によって数μm10μm程度の微細な磁区が多数形成されていることを見出だし、これら磁区が透磁率の改善および磁心損失の低減に寄与している知見を得た。さらに,薄帯幅方向に磁界中熱処理を加えた薄帯では、ほぼ同方向に平行な磁区が形成されていること,組成によって磁区幅が変化することなどを確認した。これら幅方向磁区の細分化がMHz帯の磁気特性の改善・向上に寄与していることが明らかになった。本研究で得られた高周波領域の磁心損失の最小値は,最大磁束密度が0.1Tで周波数1MHzのとき,700(mW/cc)である。この値は,他の高周波用磁心の1/31/4で,世界最小である。さらに,初透磁率の周波数特性の遮断周波数が数MHzに及ぶものを得た。これは,従来の実用アモルファス磁心に比べ約1桁高いものである。以上述べたように,本研究において,極めて優れた高周波用アモルファス超薄帯磁心が得られた。本研究は、代表者八木が開発した低磁心損失のCo基のアモルファス超薄帯の、一層の超低損失化および高透磁率化を図るための基礎的検討を行うことを目的としている。本年度は、研究計画にしたがって、種々の合金組成の薄帯を作製し、さらに熱処理方法・条件を変化させ、アモルファス超薄帯磁心の高周波磁心損失および透磁率等の特性について検討した。その結果、次のような諸点が((Fe-Co)Cr_<0.06>)_x(Si-B)_<100-x>,(x=7581)について明らかになった。1.単なる歪み取り熱処理では、xの増加と共に磁心損失が増加する傾向が見られるが、これに幅方向磁界中熱処理を追加すると、磁心損失の抵減を図ることができ、x=77で30%程度損失を下げることができた。また、幅方向磁界中熱処理のみでは、x=79で同様に30%程度の損失低減効果が得られた。2.さらに、幅方向磁界中熱処理を施した磁心の透磁率の周波数特性について、MHz帯で改善効果があるが明らかになった。遮断周波数はx=7981で23MHzの値を達成し、従来のバルク材料で報告されていない優れた周波数特性が得られた。

3.歪み取り熱処理および幅方向磁界中熱処理材料について、カー効果による磁区観察を行った結果、前者については極めて微細な磁区の生成が、後者については薄帯幅方向磁区の微細化と合金組成の関係が、明らかになった。本研究は,真空中の単ロール超急冷法で作製される板厚10mum以下の極薄Co基アモルファス磁性合金超薄帯の,MHz帯の高周波領域での磁心損失の一層の低減化と初透磁率の周波数特性を向上させることを目的として2カ年間実施された。本年度は,前年度に引き続き、高周波磁気特性に及ぼす合金組成と熱処理条件についてを検討した。さらに,これらの問題と磁化機構の関係を明らかにするために,Kerr効果を用いた磁区観察を行った。その結果,(Fe-Co-Cr)(Si-B)系では、幅方向磁界中熱処理を施すと,(Fe-Co-Cr)の増加にともなって,磁区の微細化が進み,(Fe-Co-Cr)_<79>(Si-B)_<21>の試料薄帯でMHz帯の高周波領域での磁心損失特性が30%程度さらに改善されることが分かった。さらに,初透磁率については、低周波域の値は低下するものの周波数特性は大幅に改善され、遮断周波数が数MHzにまで伸びる結果が得られた。一方.誘導磁気異方性を十分抑制した組成の薄帯については,歪取り熱処理の場合,明瞭ではないが,数mum程度の極めて微細で複雑な磁区が多数形成されていることが窺われた。2カ年の本研究で、筆者ら自身の世界最小の磁心損失値をさらに低減することができたが,MHz帯で実用に供するには,損失の大幅な低減化を図る必要がある。そのためには,幅方向磁界中熱処理によって得られる幅方向磁区の磁区幅を,少くとも1/2-1/10にする必要がある。また,磁区の固着化についての基礎的な検討も重要と考えられる。これらの課題については,微細磁区の観察と共に今後さらに詳しく検討する予定である。
超微粒子クラスターの形成・成長・崩壊のメカニズム解明とその制御

粒子クラスターの形成において粒子と周りの環境とのインタラクションを精確に見積もることは、粒子間付着力を有する粒子塊(クラスター)の形成メカニズムの解明に必要不可欠である。影響因子のモデルとして常圧下で吹き込みガスの湿度を調整すること(相対湿度3090%)で、液架橋による粒子間付着力を人工的に制御し、クラスターを形成させる。それら形成条件を整えることで形成メカニズムと形成プロセスを検討した。さらには形成クラスター群(これらが積層し難流動粒子群を形成する)を崩壊制御するために、容器側面から超音波を印加させその層における間接的な圧力損失の測定により、クラスター崩壊の程度を計測した。これは流動性の程度により熱伝達へも影響するのでこれも同時に測定した。後者の場合、分散版からのガス流れはチャネリングという流路を形成(クラスター群を回避しながら進行するガス流れ)するので、超音波印加強度と関連付けて層高くガラスビーズ粒子径、ガス流速を変えることで実験的に調べた。その結果、超音波印加により、液架橋が破壊されチャネルの形成を避けることができ流動状態を改善することが可能であること、一度、層内にチャネリングが形成されると、粒子間に液架橋が存在していない流動状態における熱伝達率と比較して90%以上の熱伝達率の低下があり、きわめて回復が難しいこと、低湿度(クラスター形成の程度が小さい)状態では、超音波印加は層内の流動状態に影響を与えることができるが、影響は比較的低流速において表れるため、最大熱伝達率にまでは顕著な影響を及ぼさないことなどが知見として得られた。そのためにはまず対象とする粒子充填層における吹き込むガスが形成する気泡挙動と粒子移動現象との関係を更に議論する必要がある。本年は加圧下における充填層内の単一ノズルから生成した気泡の成長及び崩壊の一連の挙動に関して、実験と数値計算両者から粒子径、層高、圧力の影響を明らかにした。微粒子でも400μmのような比較的大きい粒子の場合は、気泡発生に必要とする流入空気量が増加するためガス流れが噴流状態への移行を早めること、気泡の上昇速度は、気泡径の大きさに比例して増加していること、これら(粒径100μm400μm、層内圧力0.10.7MPa)を考慮し、単一ノズルから発生する気泡の上昇速度に関する新しい近似式が提案できたことなどが成果として列挙される。さらに影響因子の1つである温度の影響を見るため気泡流動層内鉛直伝熱面周りの伝熱特性を調べた。伝熱特性は層内に設置した鉛直平板伝熱面周りの温度環境と粒子挙動、クラスター形成と層内圧力、層高、ガラスビーズ粒子径、ガス流速が与える影響を実験的に調べることでえられた。その結果、充填層高7090[mm]の範囲では熱伝達には顕著な影響は見られないこと、加圧することにより粒子ヌッセルト数は増加すること、ヌッセルト数が極大値をとる速度比が減少すること、粒子径により最大ヌッセルト数をとる速度比は異なる値をとることなどが分かった。微粒子槽内クラスターの形成において吹き込むガスの運動量(外部力)が粒子クラスターの形成メカニズムに多大なる影響を与える。前年度に引き続き、加圧下における充填層内の単一ノズルから生成した気泡による粒子クラスターの成長及び崩壊に関連して、その被影響因子の1つである温度への影響を見るため気泡流動層内に鉛直伝熱面を設置しその周りの温度場の特性を調べた。そして温度環境と微細粒子(100,200,400マイクロメータ)の粒子挙動、クラスター形成と層内圧力、層高、ガラスビーズ粒子径、ガス流速が与える影響などの諸関係を実験的に調べることで槽内環境と粒子クラスター形成のメカニズムに関する考察を行った。

その結果、温度場には充填層高7090[mm]の範囲では粒子クラスター形成の顕著な影響は見られないこと、加圧することによりその影響が顕著に現れること、また流速(ここでは、最小流動化速度で基準化した速度比)によりその形成が崩壊に変わり、伝熱面温度的には極小値をとる速度比が存在すること、また粒子径に依存しその崩壊の開始位置が早まることなど貴重なデータが得られた。加圧条件下における粒子クラスターは一般に小さなものとなり、また吹き込みガスにより気泡成長が促されるという(400マイクロの場合)、これが流動層伝熱の促進をもたらすものと思われる。粒子クラスタの形成が伝熱促進をもたらすかどうかは更なる精査が必要だが、粒子の種類(A,B)に依存した発生気泡の大きさ(粒子クラスターに関連)や上昇速度と熱伝達との関係は密接でこれを制御することで熱伝達が制御できる。また、本実験範囲内の狭い条件ではあるが最大熱伝達整理式が得られた。粒子クラスターの形成において粒子と周りの環境とのインタラクションを精確に見積もることは、粒子間付着力を有する粒子塊(クラスター)の形成メカニズムの解明に必要不可欠である。影響因子のモデルとして常圧下で吹き込みガスの湿度を調整すること(相対湿度3090%)で、液架橋による粒子間付着力を人工的に制御し、クラスターを形成させる。それら形成条件を整えることで形成メカニズムと形成プロセスを検討した。さらには形成クラスター群(これらが積層し難流動粒子群を形成する)を崩壊制御するために、容器側面から超音波を印加させその層における間接的な圧力損失の測定により、クラスター崩壊の程度を計測した。これは流動性の程度により熱伝達へも影響するのでこれも同時に測定した。後者の場合、分散版からのガス流れはチャネリングという流路を形成(クラスター群を回避しながら進行するガス流れ)するので、超音波印加強度と関連付けて層高、ガラスビーズ粒子径、ガス流速を変えることで実験的に調べた。その結果、超音波印加により、液架橋が破壊されチャネルの形成を避けることができ流動状態を改善することが可能であること、一度、層内にチャネリングが形成されると、粒子問に液架橋が存在していない流動状態における熱伝達率と比較して90%以上の熱伝達率の低下があり、きわめて回復が難しいこと、低湿度(クラスター形成の程度が小さい)状態では、超音波印加は層内の流動状態に影響を与えることができるが、影響は比較的低流速において表れるため、最大熱伝達率にまでは顕著な影響を及ぼさないことなどが知見として得られた。
Toll様受容体の細胞内輸送を制御する分子機序の解析

近年自然免疫の研究が進み、病原微生物の分子をパターンとして認識することが解明され、それらの受容体としてToll様受容体(Toll-like receptor ; TLR)ファミリーが同定されてきている。しかしながら、TLR受容体自体の細胞内動態、即ちTLR受容体がどのような機序により細胞表面に発現し、病原微生物の分子を認識後に活性化されて細胞内に取り込まれ、細胞内輸送されるのかという分子機序に関しては、ほとんど解明されていない。LPSをリガンドとするTLR4に焦点を絞り、これらの受容体が各々のリガンドで刺激後にどのような細胞内動態を呈するか、この受容体の細胞内ドメインのアミノ酸配列中に輸送を規定する重要な細胞内モチーフは何かということを検証した。LL(ロイシン-ロイシン)というモチーフに着目して、TLR4受容体の種々のトランケーション変異体を作成した。これらをMD2とともにHEK293T細胞に発現させ、NF-・Bを指標としてLPS刺激による活性化を検討したところ、1-826変異体では活性化が認められたが、1-815変異体では活性化は認められなかった。さらに1-826変異体では野生型と同様の細胞内分布を示したが、1-815変異体では細胞表面発現が認められなかった。以上のことから、少なくともこれらの部位にTLR4の細胞内動態を規定するモチーフがあることが示唆されたので、次にこれらの部位の種々の変異体を作成し、解析を行った。その結果、815番のL(ロイシン)をA(アラニン)に置換した変異体TLR4(L815A)は、細胞表面発現が認められず、CD14の非存在下では、LPSによる活性化が認められなかった。ただし、CD14の存在下では、LPSによる活性化が認められた。以上の研究により、TLR4の細胞内分布に影響を与える変異部位を同定した。これらをMD2とともにHEK293T細胞に発現させ、NF-κBを指標としてLPS刺激による活性化を検討したところ、1-826変異体では活性化が認められたが、1-815変異体では活性化は認められなかった。以上のことから、少なくとこれらの部位にTLR4の細胞内動態を規定するモチーフがあることが示唆された。次にこの部位の種々の変異体を作成し、細胞内動態を規定するモチーフを同定した。現在そのモチーフの変異体を用いて、細胞内動態および詳細な分子機序を解析中である。

しかしながら、TLR受容体自体の細胞内動態、即ちTLR受容体がどのような機序により細胞表面に発現し、病原微生物の分子を認識後に活性化されて細胞内に取り込まれ、細胞内輸送されるのかという分子機序に関しては、ほとんど解明されていない。LPSをリガンドとするTLR4に焦点を絞り、これらの受容体が各々のリガンドで刺激後にどのような細胞内動態を呈するか、この受容体の細胞内ドメインのアミノ酸配列中に輸送を規定する重要な細胞内モチーフは何かということを検証した。LL(ロイシン・ロイシン)というモチーフに着目して、TLR4受容体の種々のトランケーション変異体を作成した。これらをMD2とともにHEK293T細胞に発現させ、NF-κBを指標としてLPS刺激による活性化を検討したところ、1-826変異体では活性化が認められたが、1-815変異体では活性化は認められなかった。さらに1-826変異体では野生型と同様の細胞内分布を示したが、1-815変異体では細胞表面発現が認められなかった。以上のことから、少なくともこれらの部位にTLR4の細胞内動態を規定するモチーフがあることが示唆されたので、次にこれらの部位の種々の変異体を作成し、解析を行った。その結果、815番のL(ロイシン)をA(アラニン)に置換した変異体TLR4(L815A)は、細胞表面発現が認められず、CD14の非存在下では、LPSによる活性化が認められなかった。ただし、CD14の存在下では、LPSによる活性化が認められた。以上の研究により、TLR4の細胞内分布に影響を与える変異部位を同定した。
手術中洗浄細胞診検体からの癌細胞検出 ―遺伝子増幅法(OSNA法)を用いて―

研究目的遺伝子増幅方法のOSNA(One Step Nucleic acid Amplification)法を用い、細胞診検体中の腫瘍細胞(腺癌細胞)の検出を行い、分子生物学的に良悪の判定が可能か否かについて検証した。検討方法対象検体として術中腹腔洗浄細胞診や通常の腹水細胞診検体22検体(腹水11検体、腹腔洗浄7検体、ダグラス窩洗浄4検体)を用いた。対象検体の細胞診での判定結果は陰性8症例、陽性14症例であった。CEA遺伝子を標的とし、そのcDNA内でOSNA法に利用可能なプライマーセットを4本作製し、遺伝子増幅装置(RD-100i)を用いOSNA法で測定した。研究成果OSNA法で測定を行った結果22検体すべてにおいて反応が得られなかった。今回反応が得られなかった原因の検証を行った。まず、検体保存法が良好か否かをOSNA法で普段使用している標的遺伝子CK19を用い測定したところ、反応が得られる検体があったためカルノア固定での検体保存法は良好と考えた。次にOSNA法での反応時間は至適ではないのではと考え、別のリアルタイム濁度測定装置を用い反応時間を60分(OSNA法用RD-100iは16分)と延ばし測定したところ、5症例について反応が得られた。考察今回、OSNA法での測定結果は良好な結果が得られなかった。しかし、別条件においてはいくつかの検体で反応が得られたことは、OSNA法による検出の可能性があることが示された。OSNA法での測定を可能とするためには測定法にあったCEA標的プライマーを作製することが重要である。そのため、多くプライマーを作製し検討する必要があると認識した。今後、遺伝子増幅装置(RD-100i)以外のリアルタイム濁度測定装置を用いプライマーのデザインや反応時間などの検討を行い、OSNA法に至適な測定条件の確立が優先課題と思われた。
補文タイプのマーキングとCP構造の研究

文タイプと法性に関わる問題(平叙文、疑問文、命令文等の表示)と極性に関わる問題(肯定文、否定文の表示)を節構造と意味との相関性に焦点をあてて総合的に研究した。これらの問題は、従来は、構文研究の問題として、あるいは否定文の諸特性の研究として、別個の課題のもとに研究されていたので、それらを統合してその統語的・意味的諸特性を関連付けて研究することは、新しい試みであった。またこのような統合的研究によって得られた知見は意義ある研究成果であると言える。具体的には、埋め込み構造と英語の間接疑問文の多様性に関する理論的研究について、従来のCP構造に関する仮定には問題があることを指摘し、その解決法として日本語、英語をはじめとする諸言語の疑問文の類型化と問い返し疑問文の構造に関する詳細な研究に基づいて、普遍文法の理論の構成に関する新しい分析を示唆した。また、日・英語の否定対極表現の認可に関する従来の研究の問題点を指摘し、否定に関する2種類の機能範疇(PolP, NegP)の役割について、日・英語には非対称性が存在することを指摘した。また、強交差現象に関する理論的考察、再構築効果の統語的・意味的特性の研究において大きな成果をあげた。これらの研究成果については、関連学会講演会、日本英語学会、日本英文学会九州支部大会シンポジウム、福岡言語学会等において発表し、また出版物で公表した。本年度は、特に疑問文と否定文に焦点をあて、節タイプのマーキングの手段としてどのような統語構造を仮定するのが妥当であるかを、従来の分析を批判しながら解明した。また、これにより、比較統語論的観点から、節タイブと否定文の構造が普遍文法理論に対しどのような制約を課すのかを明かにした。具体的には、補文構造、節タイプ、否定文構造に関連する文献を整理し、間接疑問文と否定対極表現を中心とした基礎資料の収集と作成を行った。そして、基礎資料に基づき従来の分析を批判的に検討し、間接疑問文の倒置に関する問題(稲田)と否定文の統語構造に関する問題(西岡)を考察し、これらの問題を解決する文法モデルをそれぞれ提案した。それぞれの成果の一部は日本英語学会等で口頭発表し、裏面に記載した雑誌に発表した。また、日本英語学会に出席した折に今西典子氏(東京大学)、大津由紀雄氏(慶慮大学)と個人面談し(稲田)、研究成果について意見を聞いた。さらに、日本語に関する理論的問題を考察するために星宏人氏(ロンドン大学)を招聘し、最新の理論的研究の成果を聴くとともに本問題に関する我々の研究に対するコメントをもらい本問題に関して議論した。また、米国に行きNorvin Richards氏(MIT)、Howard Lasnik氏(コネクチカット大学)、久野障氏(ハーバード大学)と個人面談を行い(西岡)、研究成果についてコメント、批判をもらい本問題を議論した。今後、稲田、西岡が別個に行った調査、研究をつきあわせるとともに、CP構造としてどのようなものが妥当であるかを総合的に判断するために命令文、感嘆文等に関する研究をすすめ、最適な文法モデルを提案する予定である。本研究では、節の統語的、意味的特性のうち、従来別個に扱われてきた法性の問題(疑問文、平叙文、感嘆文、命令文など)と極性の問題(肯定文、否定文)とを総合的に研究することを目標としたが、本年度までに、関連する研究(Cheng 1991,Watanabe 1993,Rizzi 1997,Laka 1990,Culicover 1991,Haeman 1995)を批判的に検討して、それらの問題点を整理した。特に、CP構造や日英の機能範疇、補文内の主節現象、否定対極表現の認可、等に関わる従来の研究の問題点を検討し、これらの問題点を克服するためには、(従属)節における節タイプの表示に関する比較統語論的研究、CP, TP, PolP(and/or NegP)など機能範疇投射に関する詳細な検討、ならびに普遍文法理論の再構築が必要であることを明らかにした。それらの研究成果の一部は、日本英語学会19回全国大会(西岡)、日本英文学会九州支部大会(稲田、西岡)で発表した。

特に、日本英文学会九州支部大会においては、本研究の課題を中心とした講師4名によるシンポジウムを企画し、その妥当性をめぐって検討を行った。更に、研究成果の一部を、論文として「日本英語学会研究論文集」(西岡)、「文学研究」(西岡)、「市川賞30年の歩み(仮題)」(稲田)、「英語青年」(稲田)などにおいて発表した。また、MITの宮川教授を講師とした言語科学研究会を開催して、関連する問題にについて講演と専門的知識の提供を受けた。関連文献の整理についても、補文タイプ・否定表現の認可、CP, TP, PolP(and/or NegP)等の機能投射に関連する論文を中心として、謝金による大学院生の研究補助により、進行中である。節の統語的、意味的特性のなかで、文タイプと法性に関わる問題(平叙文、疑問文、命令文等の表示)と極性に関わる問題(肯定文、否定文の表示)を節構造と意味との相関性に焦点をあてて総合的に研究した。これらの問題は、従来は、構文研究の問題として、あるいは否定文の諸特性の研究として、別個の問題として扱われていたので、それらを統合してその統語的・意味的諸特性を関連付けて研究することは、新しい試みであった。またこのような統合的研究によって得られた知見は意義のある研究成果といえる。具体的には、埋め込み構造と英語の間接疑問文の多様性に関する理論的研究について従来のCP構造に関する仮定の問題点とその解決法について、日本語、英語をはじめとする諸言語の疑問文の類型化と問い返し疑問文の構造に関する研究とその普遍文法理論研究における意義について、日英語の否定極性表現(Negative Polarity Item : NPI)の認可に関する従来の分析の問題点とPolPの有無に関する日英語の構造的差異について、極性表現の認可と強交差現象(Strong Cross-over)に関する理論的研究、再構築(reconstruction)に関する理論的研究などを研究し、節構造の統語的・意味的特性の研究において大きな成果をあげた。これらの研究成果については、関連学会講演会、日本英語学会全国大会、日本英文学会九州支部大会シンポジュウム、福岡言語学会等において発表し、また学会誌等の出版物において公表した。
疾患関連マクロファージにおける転写因子MafBのin vivo機能解析

本研究では疾患に関与するマクロファージ(MΦ)での転写因子MafBの機能解析を行った。1.動脈硬化発症におけるMafBの機能解析これまでの解析からMafBは脂質を含んだMφ(泡沫細胞)で発現し、アポトーシス抑制因子AIMの発現を直接制御することによって動脈硬化発症に重要であることを発見した。今回MafB欠損Mφにアポトーシス誘導を行うと野生型に比べてアポトーシス細胞が増加した。またこの増加はAIMタンパク添加によってレスキューされたことから、MafBが欠損するとAIMが減少することでアポトーシスが促進することが分かった。またAIMは核内受容体型転写因子LXR/RXRの制御を受けるとされていたことから、LXR欠損マウス由来の培養MφにおいてMafbの発現を確認したところ、LXR/RXRのアゴニスト刺激によるMafbの発現上昇が見られなかった。従ってMafBはLXR/RXRによる制御を受ける可能性が示唆された。以上の結果から泡沫細胞におけるより詳細な転写制御機構が明らかとなった。2.自己免疫疾患におけるMafBの機能解析Mφによるアポトーシス細胞の除去機能に異常があると、この残骸が自己抗原となり自己免疫反応が誘導されることが報告されている。本研究によりMafBがアポトーシス細胞認識に関わるC1qの構成成分であるC1qa、C1qb、C1qcの発現を制御することが分かった。またin vitroおよびin vivoでMafB欠損MΦはアポトーシス細胞の食食能が低下していた。さらに補体を含む野生型の血清添加により、貧食能の低下がレスキューされた。さらに、骨髄移植によって血液を再構築したMafb欠損マウスでは血清中の自己抗体量の増加が見られた。このことから、MafBはC1qの発現を制御することによってアポトーシス細胞の貧食に重要な役割を果たし、自己免疫疾患に関与することが示唆された。本研究では疾患に関与するマクロファージでの大Maf群転写因子MafBの機能解析を行った。また、疾患関連マクロファージで重要とされている核内受容体型転写因子とMafBとの関係についても検討した。1.動脈硬化発症におけるMafBの機能解析これまでの解析からMafBは脂質を含んだマクロファージ(泡沫細胞)で発現し、アポトーシス抑制因子であるAIMの発現を直接制御することによって動脈硬化発症に重要であることを発見した。今回、MafB欠損マクロファージにアポトーシス誘導を行うと野生型に比べてアポトーシス細胞が増加した。またこの増加はAIMタンパク添加によってレスキューされたことから、MafBが欠損するとAIMが減少することによってアポトーシスが促進することが分かった。また過去の報告からAIMは核内受容体型転写因子LXR/RXRの制御を受けるとされていたことから、マクロファージにおいてsiRNAを用いてLXRをノックダウンした。その結果、MafBの発現が減少したことから、MafBはLXR/RXRによる制御を受ける可能性が示唆された。2.自己免疫疾患におけるMafBの機能解析ヒトの体内においてマクロファージによるアポトーシス細胞の除去機能に異常があると、この残骸が自己抗原となり自己免疫反応が誘導されることが報告されている。本研究によりMafBがアポトーシス細胞認識に関わるClqの構成成分であるClqa、Clqbの発現を直接制御することが分かった。また、in vitroおよびin vivoのアポトーシス細胞貪食実験の結果、MafB欠損マクロファージは貪食能が低下していた。このことから、MafBはClqの発現を制御することによってアポトーシス細胞の貪食に重要な役割を果たし、自己免疫疾患に関与することが示唆された。

このことから、MafBはC1qの発現を制御することによってアポトーシス細胞の貧食に重要な役割を果たし、自己免疫疾患に関与することが示唆された。各種疾患におけるマクロファージでの転写因子MafBの機能について、in vitroでの実験結果をin vivoでも検証しており論文の投稿に向けて進んでいるため、おおむね順調に進展していると評価した。1.動脈硬化発症におけるMafBの機能解析投稿論文に対するリバイスに迅速に対応する。2.自己免疫疾患におけるMafBの機能解析Clqの減少がMafB欠損マクロファージにおけるアポトーシス細胞貪食能の低下の原因かを検討するため、レスキュー実験を行う。また、MafB欠損マウスにおける自己抗体量などを測定し、MafBが自己免疫疾患に関与しているかを生体レベルで検証を行い、論文としてまとめる。
有機金属気相選択成長法による半導体ナノワイヤヘテロ構造作製とその応用に関する研究

本研究の目的は、有機金属気相選択成長法(以下、MOVPE選択成長法)に筆者が考案した特殊な工程(以下、Re-growth法とする)を付与することで、半導体ナノワイヤの成長方向に半導体ヘテロ構造(縦型ヘテロ構造)を作製する手法の確立を行なうことである。本年度は、このRe-growth法を応用して、GaAs/InAs/GaAs量子井戸ナノワイヤの作製し、光学評価を行うことで、量子井戸構造の成長過程、光学物性を調べた。具体的には、GaAs(111)B基板上にMOVPE選択成長法により作製したGaAsナノワイヤに対して、Re-growth法によりInAs膜厚のことなる3種類のGaAs/InAs/GaAs量子井戸構造を作製し、顕微フォトルミネセンス法による評価を行なった。その結果、InAs量子井戸数に相当する半値幅の非常に狭い発光が観察された。次に、サイズ制御性を改善するため、Si基板上に作製したGaAsナノワイヤに対して、同様の量子井戸構造の作製を行なった。Si基板を用いたのは、マスク外周部にInAs供給原料が拡散するため、InAs量子井戸層の実効的な成長速度を減少し、膜厚の制御性を高めることができるためである。今回は膜厚の異なる4つのInAs層をGaAsナノワイヤ中に作製した。光学特性評価から、各InAs量子井戸に相当する発光ピークを観察することができ、1原子層以下の成長速度の制御を実現することができた。各層の発光スペクトルの励起強度依存性から、1原子層以下の膜厚をもつInAs層は励起子発光を示し、数原子層からなるInAsからは量子井戸構造的な振る舞いを示すことを明らかにした。この結果から、本法におけるInAsの量子井戸成長過程は、InAs二次元島から1原子層へと移行することが分かり、初期核形成から数原子層レベルの精密な膜厚制御を実現することができた。また、新たな技術展開として、Si基板上におけるIII-V族化合物半導体量子井戸ナノワイヤの集積技術を実現した。MOVPE選択成長法によって作製したGaAsナノワイヤに対して、スパッタリング法でSiO_2膜を堆積させた。膜厚は100nmとした。その後、反応性イオンエッチング(RIE)法によりナノワイヤの上部に堆積されたSiO_2をエッチングし、ウェットエッチングにより、GaAsナノワイヤの上部を選択的にエッチングし、SiO_2/GaAsナノワイヤ構造中にSiO_2チューブを作製した。この構造に対し、再度MOVPE成長を行い、チューブ形状のくぼみ部に選択的にGaAs, InAsを成長し、横方向成長のない縦型ヘテロ構造の作製を試みた。MOVPE成長における成長原料の表面拡散長を考慮し、この構造のナノワイヤの高さは、1μm以下で行った。今回試みた工程は、選択エッチングにより、ナノワイヤをエッチングしくぼみ構造を作製するため、埋め込み成長によるヘテロ構造作製の選択成長が可能となる。材料系は、半導体ナノワイヤ中に縦方向に積層された量子井戸を作製するために、InAsとその混晶系に重点を置き、今回はGaAs/InAs/GaAs量子井戸構造の作製を試みた。具体的には、InAsについては、成長温度540°C、原料分圧比256、成長膜厚が1、3、5原子層(MLs)となるように成長を行い、GaAsの成長温度540°C、原料分圧比250とし、成長膜厚は20原子層となるように成長を行った。この工程により作製したGaAs/InAs/GaAsナノワイヤ量子井戸構造について、はじめに、走査型電子顕微鏡(SEM)により、形状の評価を行った後、フォトルミネッセンス法による光学特性の評価を行った。SEM観察では、設計どおりのナノワイヤ形状を有していることが分かり、光学特性では、1,3,5MLsの厚みを有したGaAs/InAs/GaAs量子井戸特有の半値幅の非常に狭い発光が、1.3-1.4eVで確認された。次に、この構造の結晶構造と、成長膜厚を評価するため、この量子井戸構造ナノワイヤについて、透過型電子顕微鏡(TEM)観察を行った。作製されたナノワイヤの結晶構造は、閃亜鉛鉱型結晶構造を示し、上記プロセスで作製した結晶構造は、単結晶構造になる傾向が分かった。

光学特性評価から、各InAs量子井戸に相当する発光ピークを観察することができ、1原子層以下の成長速度の制御を実現することができた。各層の発光スペクトルの励起強度依存性から、1原子層以下の膜厚をもつInAs層は励起子発光を示し、数原子層からなるInAsからは量子井戸構造的な振る舞いを示すことを明らかにした。この結果から、本法におけるInAsの量子井戸成長過程は、InAs二次元島から1原子層へと移行することが分かり、初期核形成から数原子層レベルの精密な膜厚制御を実現することができた。また、新たな技術展開として、Si基板上におけるIII-V族化合物半導体量子井戸ナノワイヤの集積技術を実現した。
慢性腎臓病発症の成因となるエピゲノム変化の解明および新規治療法開発の研究基盤

骨から分泌されるFGF23は腎臓リン調節機構の中心を担うが、慢性腎臓病(CKD)ではこの機構が破綻して骨ミネラル代謝異常へと発展する。CKDモデル動物で血中レチノール濃度の異常な高値による腎機能低下の助長が報告されている。近年、急性腎障害発症に対するエピゲノム変化の関与が報告され、CKD発症に関しても同様の可能性が考えられるが、ビタミンAとCKD発症とエピゲノム変化の関係についてはよく分かっていない。本研究は、血中レチノール濃度の異常な上昇によるFGF23/Klothoエピゲノム変化を明らかにすることを目指す。初年度(2017年度)は8週齢雄マウスの腎臓5/6を摘出し(CKDモデル)、レチノイン酸受容体antagonist(RAR-ant)を9週間投与した。その結果、大腿骨重量はCKD群で減少し、RAR-ant投与により増加したが、血中FGF23濃度および骨FGF23 mRNA発現量には差は見られなかった。次年度(2018年度)は、別の方法(アデニン投与)で作製したCKDモデルマウスにRARα選択的なantagonistまたはpan-RAR antagonistを4週間投与した。その結果、CKD群の血中リン、BUN、FGF23濃度の高値から腎機能の悪化を確認し、2つのantagonistにより血中リン、BUN濃度の改善傾向、FGF23濃度に関しては更なる上昇傾向を示した。次に、human FGF23 reporter vectorを細胞にトランスフェクションし、all-trans retinoic acid (ATRA)を添加するとFGF23転写活性はRAR依存的に低下し、その効果はRARγで最大を示した。次に、デリーションベクターを作製して同様に検討した結果、ATRAによるFGF23転写活性抑制に関わるプロモーター領域を推測することができた。初年度は、各ステージにおけるCKD発症に対するビタミンAの影響を検討し、どのステージ(性成熟期、繁殖期、老齢期)が今回の実験に適しているかを確認することができた。さらに、CKD時にみられる血中レチノール濃度の上昇状態への対策は、大腿骨重量、骨格筋の重量、筋力およびタンパク質発現、さらに腎臓の遺伝子発現に対してある程度効果があることを明らかにした。次年度は、CKDモデルマウスへのレチノイン酸受容体(RAR)antagonist投与による血中リンやFGF23濃度に対する影響を評価することができた。さらに、ルシフェラーゼアッセイによりhuman FGF23の転写調節機構に関してもある程度検討できたので、実験は概ね順調であると考えている。FGF23/klothoのエピゲノム変化(DNAメチル化、ヒストン修飾)によるCKD発症機序を解明するために、繁殖期の雄C57BL/6Jマウスにアデニン食を与えCKDモデルマウスを作製した後に、1 mg/kgのレチノイン酸受容体(RAR)αアンタゴニスト(Ro 41-5253)またはRARγアンタゴニスト(MM11253)を3週間投与し、以下の解析を行う。大腿骨を採取し小動物用3D-X線CTにより骨密度を測定し、さらに骨代謝に関わる遺伝子発現変化をReal-timePCR法により解析する。これらの結果から繁殖期のCKDモデルマウスの骨ミネラル代謝異常に対するRARのサブタイプの作用の違いを評価する。腎臓を採取して、FGF23/KlothoのDNAメチル化をバイサルファイトシーケンス、ヒストン修飾をペプチドマイクロアレイやChIP-Seq法で解析して、CKDによるFGF23/Klothoのエピゲノム変化に対するRARのサブタイプの作用の違いを評価する。次に、ChIP法を用いてRAによるヒストン修飾を介したFGF23転写抑制に関わるnRARE領域を絞る。さらに、nRARE部分にMutagenesis Kitを用いて点変異を入れたFGF23遺伝子のReporter Vectorを作製してLuciferase assayによりnRAREを同定する。このnRAREに結合し、RAR/RXRと複合体を形成する未知のタンパク質をYeast one-hybrid法により探索する。骨から分泌される線維芽細胞増殖因子(FGF23)は、FGF受容体およびKlothoと複合体を形成し腎臓リン調節機構の中心を担う。しかし、慢性腎臓病(CKD)ではこれらの機構の破綻により、骨ミネラル代謝異常(CKD-MBD)やタンパク質ーエネルギー障害(CKD-PEW)へと発展する。近年、急性腎障害発症に対するエピゲノム変化の関与が報告され、CKD発症に関しても同様の可能性が考えられる。CKDモデル動物で血中レチノール濃度の異常な高値による腎機能低下の助長が報告されているが、我々はレチノイン酸(RA)による腎臓のリン再吸収の促進を見出しており、CKDで上昇した血中レチノール濃度によるCKD進行への関与を示唆している。しかしながら、RAによるエピゲノム変化を介したCKD発症・進行への影響は全く不明であり、その解明はCKD患者の生命予後の改善にとって非常に重要である。本研究は、血中レチノール濃度の異常な上昇によるFGF23/Klothoエピゲノム変化を明らかにし、CKD発症を制御する新たな機序の発見および新規治療法開発のための基盤確立を目指す。初年度の研究で明らかにしたことを以下に示す。全身麻酔下で8週齢雄マウスの腎臓5/6を摘出し(CKDモデル)、1週間後からRA受容体アンタゴニスト(RAR-ant)を9週間投与し、以下の結果を得た。大腿骨重量はsham群と比してCKD群で減少し、RAR-ant投与により増加した。

各群の握力、腓腹筋重量、筋断面積および筋タンパク質量(MyHC fast、slow)を測定した結果、3つの項目全てにおいてCKD群で低下し、RAR-ant投与により回復した。腎臓のリン代謝関連遺伝子発現をReal-time PCR法で解析した結果、CKD群で低下したKlotho mRNA発現量はRAR-ant投与により上昇傾向を示した。初年度は、各ステージにおけるCKD発症に対するビタミンAの影響を検討し、どのステージ(性成熟期、繁殖期、老齢期)が今回の実験に適しているかを確認することができた。さらに、CKD時にみられる血中レチノール濃度の上昇状態への対策は、大腿骨重量、骨格筋の重量、筋力およびタンパク質発現、さらに腎臓の遺伝子発現に対してある程度効果があることを明らかにしたので、実験は概ね順調であると考えている。骨から分泌されるFGF23は腎臓リン調節機構の中心を担うが、慢性腎臓病(CKD)ではこの機構が破綻して骨ミネラル代謝異常へと発展する。CKDモデル動物で血中レチノール濃度の異常な高値による腎機能低下の助長が報告されている。近年、急性腎障害発症に対するエピゲノム変化の関与が報告され、CKD発症に関しても同様の可能性が考えられるが、ビタミンAとCKD発症とエピゲノム変化の関係についてはよく分かっていない。本研究は、血中レチノール濃度の異常な上昇によるFGF23/Klothoエピゲノム変化を明らかにすることを目指す。初年度(2017年度)は8週齢雄マウスの腎臓5/6を摘出し(CKDモデル)、レチノイン酸受容体antagonist(RAR-ant)を9週間投与した。その結果、大腿骨重量はCKD群で減少し、RAR-ant投与により増加したが、血中FGF23濃度および骨FGF23 mRNA発現量には差は見られなかった。次年度(2018年度)は、別の方法(アデニン投与)で作製したCKDモデルマウスにRARα選択的なantagonistまたはpan-RAR antagonistを4週間投与した。その結果、CKD群の血中リン、BUN、FGF23濃度の高値から腎機能の悪化を確認し、2つのantagonistにより血中リン、BUN濃度の改善傾向、FGF23濃度に関しては更なる上昇傾向を示した。次に、human FGF23 reporter vectorを細胞にトランスフェクションし、all-trans retinoic acid (ATRA)を添加するとFGF23転写活性はRAR依存的に低下し、その効果はRARγで最大を示した。次に、デリーションベクターを作製して同様に検討した結果、ATRAによるFGF23転写活性抑制に関わるプロモーター領域を推測することができた。さらに、CKD時にみられる血中レチノール濃度の上昇状態への対策は、大腿骨重量、骨格筋の重量、筋力およびタンパク質発現、さらに腎臓の遺伝子発現に対してある程度効果があることを明らかにした。
スーパーヌクレオソーム構築による1細胞エピジェネティック修飾マッピング

本研究では、種々の生命現象におけるヌクレオソーム機能の制御と意義を理解するために、研究代表者独自の方法で任意の位置に特定の修飾を入れた化学構造的にピュアな人工ヌクレオソームを製造し、これらの生細胞内のヌクレオソームダイナミクスを超解像顕微鏡観察を用いて時空間的に捉えて、ヌクレオソーム修飾の意味を明らかにする。また、独自の化学合成を通して、天然にはない標識や反応性官能基、複数の複雑な機能性ユニットをヒストン構造に入れられるので、機能解明を支援する創造的スーパーヌクレオソームを作成して未知のヌクレオソーム機能を明らかにする。本年度では、コアヒストン4種類(H2A, H2B, H3, H4)およびリンカーヒストンH1の合成法を確立した。H2AおよびH2Bの合成が終了したとともに、既知のH3とH4の合成についても我々独自の合成法を確立した。H1についてもほぼ終了した。合成したヒストンは、601DNAとともにヌクレオソームを再構成させた。また、標識ヒストンバリアントH2A.Xを同様の方法に従って化学合成することができた。人工ヌクレオソームの化学的製造法の確立が終了し、エピジェネティック修飾ヌクレオソームの合成・再構成と熱力学解析へ研究が向かっている。また、機能化ヒストンバリアントの作成が一部終了し、次の生化学的な検討段階へ入っている。原子による細胞機能制御の本質を見抜くために、天然にはない機能を付与した「スーパーヌクレオソーム」を化学合成して、ヌクレオソームのエピジェネティック修飾機能をつぶさに解明する。(1)DNA配列特異性を持つユニット(亜鉛フィンガーやペプチド核酸など)を連結したヒストンタンパク質を作成し、配列特異的ヌクレオソーム形成を誘導して、人工的な遺伝子発現制御を試みる。(2)特定の箇所の特定の修飾に対してライター(修飾)・リーダー(認識)・イレーサー(脱修飾)タンパク質を捕捉するために、光親和性修飾や結合特異性蛍光修飾を近在させたスーパーヌクレオソームを作成する。捕捉したタンパク質は酵素分解及び質量分析を経て同定される。既に確立した方法で非天然の特殊機能を付与したスーパーヌクレオソームを合成する。ペプチド合成工程を拡大して亜鉛フィンガーやペプチド核酸をヒストンに付加することにより、DNA配列選択的にクロマチン構造を固定できるヌクレオソームを作成する。また、ジアジリンやベンゾフェノン等の光親和性標識やチアゾールオレンジやプロダン等の結合特異的蛍光標識を含むヌクレオチドもしくはアミノ酸を開発して、これらを含むスーパーヌクレオソームを合成する。これらの標識を活用したヌクレオソーム構造解析と細胞内動態解析を進めるとともに、光親和性標識によって修飾特異的なライター・リーダー・イレーサータンパク質を捕捉する。プルダウンした後に、酵素分解して質量分析することによりタンパク質を同定する。
子宮内膜症腹腔内マクロファージの免疫シナプス形成からみた抗原提示能の評価

腹水細胞中で、腹腔macrophage(pMφ)やnatural killer(NK)細胞は、内膜症細胞処理に重要な細胞と考えられ、その機能解析は子宮内膜症の発症・進展機序の解明に極めて重要である。特にpMφは貪食・抗原提示・cytokine産生といった腹腔内の異物処理に重要な役割を担い、内膜症細胞の処理に深く関わっていると推測される。pMφからT細胞への抗原提示の際には細胞膜の脂質二重層の盛り上がり(lipid raft:ラフト)上にHLA分子とICAM-1、CD40、CD58などの接着因子群(補助シグナル分子)が集積し「免疫シナプス」が形成されることが明らかとなった。ラフト形成により細胞間接着が強固となり、T細胞との間に免疫シナプスが形成され、その中心に位置するHLAの抗原情報が効率よく伝達される。内膜症婦人におけるpMφのICAM-1とHLA-DRの発現低下は免疫シナプス形成の低下を示唆している。今後pMφのラフト形成能を解析することは、内膜症のpMφの機能、特に異物処理に関わる抗原提示能が評価可能となり、その病態解明に重要と考えられる。本研究では、1)flow cytometryで内膜症婦人のpMφ上の抗原提示に関わるHLA分子の発現を非内膜症婦人と比較検討した。2)共焦点レーザー法でpMφの細胞膜上のラフトと、HLA-ABC/DRの局在を検討した。3)ELISA法で、HLA発現を調節しているサイトカインであるIFN-γを測定した。4)摘出標本を免疫染色し内膜症抗原の同定を試みた。その結果は、1)内膜症婦人ではHLA-ABCとHLA-DRに有意な発現低下を認めた。2)ラフト形成は、両群間に差を認めなかった。両群ともHLA-ABCは細胞膜に均一に、DRはラフト領域に局在していた。3)腹腔内のIFN-γ濃度は内膜症婦人で有意に低下していた。これは、内膜症婦人では、HLA発現が低下しており、特にラフト領域に局在するHLA-DRの発現低下は,内膜症pMφの抗原提示能が低下し、HLA発現低下にIFN-γが関与していると考えられた。4)月経期の正常子宮内膜にHLA-Gの発現を認め内膜症抗原の可能性が示唆された。今後は、免疫療法の開発へ展開する予定である。子宮内膜症の発症機序への免疫系の関与が注目されている。腹水細胞中で、腹腔macrophage (pMφ)やnatural ki11er (NK)細胞は、内膜症細胞処理に重要な細胞と考えられ、その機能解析は内膜症の発症・進展機序の解明に極めて重要である。特にpMφは貧食・抗原提示・cytokine産生といった腹腔内の異物処理に重要な役割を担い、内膜症細胞の処理に深く関わっていると推測される。われわれは、pMφの抗原提示能に注目し、pMφ上の抗原提示に重要なHLA-DRやICAM-1の発現が、内膜症婦人で有意に低下していることを明らかにしてきた(Fertil Steril,2002,Fertil Steril,2003)pMφからT細胞への抗原提示の際には細胞膜の脂質二重層の盛り上がり(lipid raft:ラフト)上にHLA分子とICAM-1、B7(CD80/CD86)、CD40、CD58などの接着因子群(補助シグナル分子)が集積し「免疫シナプス」が形成されることが明らかとなった(Simons;1997)。今後pMφのラフト形成能を解析することは、内膜症pMφの機能、特に異物処理に関わる抗原提示能を直接的にかつ客観的に評価可能となり、その病態解明に重要と考えられる。これは、内膜症婦人では、HLA発現が低下しており、特にラフト領域に局在するHLA-DRの発現低下は,内膜症pMφの抗原提示能の低下を示唆すると考えられた。今後はHLA発現を調節しているサイトカイン、内膜症抗原の同定を行う予定である。

ラフト形成により細胞間接着が強固となり、T細胞との間に免疫シナプスが形成され、その中心に位置するHLAの抗原情報が効率よく伝達される。内膜症婦人におけるpMφのICAM-1とHLA-DRの発現低下は免疫シナプス形成の低下を示唆している。今後pMφのラフト形成能を解析することは、内膜症のpMφの機能、特に異物処理に関わる抗原提示能が評価可能となり、その病態解明に重要と考えられる。本研究では、1)flow cytometryで内膜症婦人のpMφ上の抗原提示に関わるHLA分子の発現を非内膜症婦人と比較検討した。2)共焦点レーザー法でpMφの細胞膜上のラフトと、HLA-ABC/DRの局在を検討した。3)ELISA法で、HLA発現を調節しているサイトカインであるIFN-γを測定した。4)摘出標本を免疫染色し内膜症抗原の同定を試みた。その結果は、1)内膜症婦人ではHLA-ABCとHLA-DRに有意な発現低下を認めた。2)ラフト形成は、両群間に差を認めなかった。両群ともHLA-ABCは細胞膜に均一に、DRはラフト領域に局在していた。3)腹腔内のIFN-γ濃度は内膜症婦人で有意に低下していた。これは、内膜症婦人では、HLA発現が低下しており、特にラフト領域に局在するHLA-DRの発現低下は,内膜症pMφの抗原提示能が低下し、HLA発現低下にIFN-γが関与していると考えられた。4)月経期の正常子宮内膜にHLA-Gの発現を認め内膜症抗原の可能性が示唆された。今後は、免疫療法の開発へ展開する予定である。
空き家を活用した世代間交流プログラムの構築

本研究は、空き家を活用した世代間交流プログラムを通して、地域コミュニティのあり方が住民の幸福度にどう寄与するのかを検証する実証研究である。本プログラムでは、住み慣れた地域の中にある空き家を活用して、地域在住高齢者と大学生が中心となって事業の企画から実施・評価までを行う。プログラムを通して、高齢者、大学生双方が超高齢社会の中で自身の役割認識及び社会貢献への意識・態度の活性化をはかり、同時に地域の活性化、地域住民の協働に対する意識の向上も目指す。看護学・サービス科学・建築学・老年学等の学際的な視点からその効果を検証し、継続的かつ発展可能な世代間交流プログラムとなるための課題を明らかにする。