hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
局所麻酔薬中毒時の局所脳血流量変化に関する研究

家兎を用い局所麻酔薬を持続的に静脈内に投与し、痙攣を誘発させた際の局所脳血流量の変化について観察した。我々はこれまでにレーザーフローメトリーを用いたりドカイン痙攣必発現時の大脳皮質部局所脳血流量変化について研究を行い、痙攣発現直前に脳血流量が減少し、痙攣中は脳血流量の増加を示すものの、その増加率は対照値と比較し有意な差がみられない事を明らかにした。今回、リドカイン痙攣発現中の局所脳血流量の変化を詳細に観察するため非放射性蛍光マイクロソフェアーを用いて研究を行った。前頭皮質、後頭皮質、小脳、海馬、橋および視床下部に脳標本を分け、リドカイン痙攣発現中の各部位の血流量を対照値(リドカイン投与前)と比較した。その結果、橋部における血流量の増加が最も大きく、海馬、視床下部、前頭皮質、後頭皮質、小脳の順に血流量の減少がみられた。しかし、対照値では海馬領域の脳血流が最も少なく、橋、視床下部、小脳、後頭皮質、前頭皮質の順に脳血流量の増加がみられた。痙攣発現前と発現時の脳血流量増加率を比較すると、橋(390%)、海馬(350%)、視床下部(380%)、小脳(230%)、後頭皮質(220%)、前頭皮質(190%)であった。このことからリドカイン痙攣発現時の局所脳血流量は、橋、海馬、視床下部領域で大きく増加するものと考えられた。また、前頭、後頭皮質部で200%前後の脳血流量の増加が観察されたが、これまでにルーザーフローメトリーにより示唆された痙攣発現直前に大脳皮質部における一過性の血流低下が大きく関与し、橋、海馬、視床下部領域に比べ痙攣による血流量変動が制御されているのではないかと推察された。今後は、非放射性蛍光マイクロソフェアーを痙攣直前に投与して、対照値、痙攣発現時と比較を行うことにより、海馬、橋、視床下部領域の痙攣誘発直前の詳細な血流変化を考察する必要があると考えられた。本年度は、局所麻酔薬を静脈内に持続投与した場合と頚動脈内に持続投与した場合の痙攣誘発に伴う局所脳血流量の変化の差異を比較した。また、血管収縮薬であるエピネフリンを局所麻酔薬に添加した場合の局所脳血流量の変化についても動静脈内投与間で比較検討した。なお、今回の実験では、局所脳血流量の経時的な変化を知る目的で計測にはレーザードップラーフローメトリーを用いた。実験には白色日本家兎を用い笑気・酸素・パンクロニウムで麻酔維持を行った。実験群を1.リドカイン単独頚動脈内投与群、2.リドカイン単独静脈内投与群、3.リドカイン+エピネフリン頚動脈内投与群、4.リドカイン+エピネフリン静脈内投与群の4群に分け各薬剤を持続的に投与した。痙攣発現は、脳波上で観察を行った。各群間で、平均血圧、局所脳血流量、痙彎誘発量を比較検討した。その結果、平均動脈圧は、リドカイン単独頚動脈内投与群、リドカイン単独静脈内投与群においては、薬剤投与前に比べ痙攣発現直前に低下したものの時間的変化に有意な差はみられなかった。さらに、エピネフリンを添加した頚動脈内投与群、静脈内投与群についても、薬剤投与前値と比較し時間的な有意差は観察されなかった。局所脳血流量は、リドカイン単独頚動脈内投与群、リドカイン単独静脈内投与群、リドカイン+エピネフリン静脈内投与群において痙攣発現直前に一時的な低下が見られたものの薬剤投与前値と比較して有意な差はみられなかった。

今後は、非放射性蛍光マイクロソフェアーを痙攣直前に投与して、対照値、痙攣発現時と比較を行うことにより、海馬、橋、視床下部領域の痙攣誘発直前の詳細な血流変化を考察する必要があると考えられた。
ピアノ練習曲の思想と一九世紀における器楽学習の変容

1)国内に所蔵されている十九世紀の主要な音楽雑誌の調査(特にAllgemeine Musikalische ZeitungおよびNeue Zeitschrift fur Musik)。この雑誌記事の調査においては特に、これらの雑誌に掲載されている膨大な数のRezension(演奏会評、新刊の教本や練習曲や作品の紹介)において、「演奏技術」の問題がいかに論じられているかを分析した。技術練習と楽曲の練習とを分けて行うようにという指示が準出し始めるのは一九世紀中ごろからであり、明らかにこの頃から器楽学習における技術観が変化したことをうかがわせる。2)十九世紀においては膨大な数のピアノ教本や練習曲が出版されたが、それらの大半は言うまでもなく現在では絶版になっている。従って海外での資料調査が不可欠であった。こうしたピアノ教本や練習曲の大半は、音楽出版が盛んだったロンドン・パリ・ベルリン・ライプチッヒ・ウィーンで出版されていたものと思われるが、平成19年度はロンドン(ブリティッシュ・ライブラリー)およびパリ(国立図書館音楽部)での調査を主に行った。3)十九世紀の音楽雑誌の大半は、日本では所蔵している図書館がないものばかりである。上の海外調査においては、併せて、こうした音楽雑誌の調査も行った。とりわけRevue et Gazette musicalede Paris、Le piano、L'Art musical、La France musicale(以上パリで発行)およびRecord of the musical union、Etude、The musical world(以上ロンドンで発行)の調査からは様々な情報を得られた。例えば一九世紀に、よく知られているロギールのキロプラストのほかに、多種多様な指矯正器具が考案され、発売されていたなどの発見がそれである。一般に一般に「ロマン派」の名で呼ばれる西洋音楽の十九世紀は、同時に「音楽における技術開発」に取りつかれた時代でもあった。演奏技術、楽器製造技術、管弦楽法、作曲技法の複雑化などがそれである。十九世紀の「公式の」音楽美学(例えばシューマンやハンスリックやワーグナーの著作など)は、「自然さ」や「有機的であること」を重視し、「音楽における技術」を常に蔑視する態度で臨んだが、このことは実は、「技術」が十九世紀の音楽史において看過できない大きな存在になっていたことの裏返しに他ならない。本研究は、音楽の十九世紀を「技術開発の世紀」として新たに捉え直そうとする試みである。言うまでもなく十九世紀音楽において「技術」が絡んでくる領域は、きわめて多岐に渡る。問題の拡散を避けるために、本研究では対象を「ピアノ練習曲」の問題にひとまず絞る。その理由は、他の楽器に比べて桁外れに多い文献資料がピアノ音楽の場合は残されているからであり、そして何より「ピアノ練習曲」こそ「技術の世紀としての十九世紀」を象徴する楽器だからである。第一に、国内に所蔵されている十九世紀の主要な音楽雑誌の調査(特にAllgemeine Musikalische ZeitungおよびNeue Zeitschrift fuer Musik)を行った。この雑誌記事の調査においては特に、これらの雑誌に掲載されている膨大な数のRezension(演奏会評、新刊の教本や練習曲の紹介)において、「演奏技術」の問題がいかに論じられているかを分析した。また第二に、十九世紀においては膨大な数のピアノ教本や練習曲が出版されたが、それらの大半はいうまでもなく現在は絶版になっており、よって海外での資料調査を行った。こうしたピアノ教本や練習曲の大半は、音楽出版が盛んだったロンドン、パリ、ベルリン、ライプチッヒ、ウィーンで出版されていたが、本年度はミュンヘン国立図書館での調査を主として行った。また第三に、この海外調査においては、十九世紀の音楽雑誌の調査もあわせて行った。それに際しては、とりわけ音楽院および楽譜会社の広告において貴重な発見が見られた。また一九世紀においては、ピアノ学習のための指のトレーニング機器のようなものが色々作られていたが、それらの現物をバーゼルならびにベルリンの楽器博物館で調査した。
データ同化による内部磁気圏環境の量的モデリング

内部磁気圏内の多数の人工衛星によって取得される荷電粒子直接観測データをリングカレントシミュレーションモデルに同化する手法を開発し,衛星配置の条件がよければ,リングカレントイオンや電場の空間分布が推定できることを模擬データによる実験によって確認した.一方,プラズマ圏を撮像したIMAGE衛星による極端紫外線画像データをプラズマ圏モデルに同化する手法も開発し,これについても,有用性を確認した.内部磁気圏内の多数の人工衛星によって取得される荷電粒子直接観測データをリングカレントシミュレーションモデルに同化する手法を開発し,衛星配置の条件がよければ,リングカレントイオンや電場の空間分布が推定できることを模擬データによる実験によって確認した.一方,プラズマ圏を撮像したIMAGE衛星による極端紫外線画像データをプラズマ圏モデルに同化する手法も開発し,これについても,有用性を確認した.本年度は,内部磁気圏におけるリングカレントイオンの数値モデルと人工衛星による高エネルギーイオンの直接観測データの情報とを組み合わせ,現実の内部磁気圏でリングカレントイオンがどのような空間分布をしており,それがどう変化するのかを量的に正しく推定するためのプログラムを開発した.開発に際して問題になったのは,磁気圏などのような非線型性を持つシステムに対して逐次データ同化を適用する際に,従来のアルゴリズムでは多大な計算コスト必要となってしまう点であった.そこで,既存の粒子フィルタと呼ばれるアルゴリズムを基にmerging particle filterという新たなアルゴリズムを考案し,比較的効率的に衛星データの情報をモデルに同化することを実現した.この新しいアルゴリズムは,磁気圏のみならず,地球科学の様々な領域のモデリング研究においても,観測に非線型性が含まれる問題などの従来の方法でうまく扱えなかった問題に対してデータ同化を行うことができる有効な手法となる可能性があり,考案の意義は大きいものと考えている.現在は,開発したプログラムを,シミュレーションから生成した擬似データを用いて評価している段階である.現在のところ,多数の人工衛星が磁気圏全体に均等に分布しているという理想的な状況であれば,内部磁気圏のイオン分布に加え,電場分布がうまく推定できることは確認している.今後,どのような配置で衛星が分布していれば推定がうまくいくのかを詳細に検討していく予定である.19年度までに,内部磁気圏におけるリングカレントの数値モデルと人工衛星の高エネルギーイオン直接観測データとを統合し,現実の内部磁気圏でのリングカレントイオン分布の推定するためのデータ同化プログラムを開発した. 20年度は, 19年度に引き続き,このプログラムで推定がどの程度うまく行くのかを評価するため,数値シミュレーションから別途生成した擬似データを用いてデータ同化のテストを進めた.様々な衛星の配置を考えてテストを繰り返した結果,内部磁気圏全体のイオン分布の推定には,ある程度の数の衛星が静止軌道程度の高度に存在する必要があること,数keV数100keVという広範囲のエネルギー帯をカバーする粒子観測が利用できるのが望ましいことなどがわかった.一方,直接観測データが充分得られなかった場合でも精度よく推定が行えるようにするために,直接観測データ以外のデータの利用の検討も始めた。特に20年度は,磁気圏内に存在するプラズマ圏と呼ばれる領域から放射される極端紫外光の遠隔観測データの利用を検討した.プラズマ圏のイオンの運動は磁気圏内の電場に大きく影響されるが,それが極端紫外光観測にどの程度反映されるのかを数値シミュレーションによって調べ,内部磁気圏の電場構造が,プラズマ圏の構造に大きく影響し,極端紫外光観測データにも影響が出ることを確認した.このことは,極端紫外光データから,リングカレントイオンの分布にも大きく影響する内部磁気圏電場構造を推定できる可能性を示唆しており,今後,リングカレントイオンの推定手法の開発を進めていく上でも重要な結果である.また,内部磁気圏のモデリングの一環として,内部磁気圏において重要な役割を果たす電流の特性についての研究も行った.特に,内部磁気圏と電離圏との間を流れるRegion-2沿磁力線電流について低軌道衛星のデータを用いて調べ,リングカレントの発達した磁気嵐時には,太陽風動圧とRegion-2電流強度との間に一定の相関が見られることを明らかにした.本年度は,THEMISミッションによる5機の衛星と静止軌道衛星を組み合わせて推定を行いたいと考えていたが,THEMISミッション期間中に適当な磁気嵐イベントがほとんど発生しなかったこと,一方で前年度に検討したIMEMIS衛星による極端紫外線画像データを用いたプラズマ圏のモデリングにより内部磁気圏環境を包括的に推定できる見込みができたことから,プラズマ圏モデルへの極端紫外線データの同化システムの開発に注力した.まず,逐次データ同化手法の一つである粒子フィルタを用いてプラズマ圏シミュレーションモデルへの同化を行う部分を実装し,極端紫外線画像データから,プラズマ圏プラズマ密度分布,内部磁気圏の電場ポテンシャル分布の推定ができるようにした.プラズマ圏の空間構造は,リングカレントのそれと異なり,過去数日間にわたる内部磁気圏電場の変動に大きく影響されるため,初期値をある程度精度よく決定する必要があるが,この点について現段階では,紫外線画像データの線型インバージョンによって推定を実現している.次に,推定がうまくいくことを確認するために,別の数値シミュレーションから生成した模擬データを用いて同化実験を行った.その結果,内部磁気圏電場の時間変化が激しくない条件の下では,プラズマ圏構造や電場分布がうまく再現できることを確認できた.

一方,内部磁気圏のモデリングの一環として,リングカレントの強さの指標であるDst指数の時間変動について,Burton et al.(1975)に基づいた解析を行い,Burton et al.のモデルで説明できるDstの変動とそうでない変動とを分離する手法を開発した.Dst指数は,今後内部磁気圏環境,特にリングカレントの状態を知る重要な指標であり,その特性の一端を明らかにしたことは,内部磁気圏環境のモデリングを進めていく上でも,一定の意義があると考えている.
両耳間差を聴覚の定位手がかりとした腹話術効果の研究

平成15年度では両耳間時間差(interaural time difference : ITD)を定位手がかりとしたときの腹話術効果(ある場所に提示された音源の位置が、異なる場所に提示された視覚刺激の位置に捕捉されて知覚される現象)について検討したが、平成16年度では定位手がかりが両耳間レベル差(interaural level difference : ILD)の場合について、および、腹話術効果をもとにITDとILDという明示的に空間的でない手がかりの量と実空間を結びつけることを検討した。まず、ILDを手がかりとした腹話術効果であるが、CRTモニタ上の水平方向の様々な位置に点光を提示して、点光の位置がILDを手がかりとした音像定位に与える影響を検討したところ、ITDと同様、モニタ上の点光の位置が頭内の音像を補足し、音像の位置は点光の方向に知覚された。ILDを定位手がかりとした場合も腹話術効果が生起することが確認された。ITDもILDも両耳間の差という情報処理上の属性であって明示的に空間の標識となっているわけではない。一方、腹話術効果を引き起こす視覚刺激は明示的に空間に位置づけられている。よって、視覚刺激の提示位置が腹話術効果に及ぼす効果を検討することでITDおよびILDの量を実空間にマッピングすることができるはずである。実際に、CRTの様々な位置に点光を提示したところ、腹話術効果がほとんど起きない場所があることが観察された。この場所はあるITDなりILDが点光と同じ場所にある(ゆえに効果が起こらない)と脳内で解釈された結果と考えられ、これをもとにILDおよびILDという脳内表象の量を実空間にマッピング出来ることがわかった。ほぼ計画通り、実験環境の整備と、両時間時間差(interaural time difference:ITD)を定位手がかりとしたときの腹話術効果(ある場所に提示された音源の位置が、異なる場所に提示された視覚刺激の位置にバイアスをうけて知覚される現象)の検討を進めた。実験機材については配分額との関係で一部機材に省略があったが、本課題を遂行するに十分な精度(特に視覚刺激の量子化ビット数と輝度測定において)を確保しながら、実験環境を構築することが出来た。実験ではITDのついた正弦波(頭内の両耳を結ぶ線上に定位する)をヘッドフォンを通じて提示すると同時に、CRTモニタ上の水平方向の様々な位置に点光を提示して、点光の位置がITDによる音像定位に与える影響を検討した。ITDを定位手がかりとする場合、音像は頭内に定位する(手がかりが限定されているため)。従って、モニタ上の点光と頭内の音像の間には空間的近接性は認められないが、にも関わらず、モニタ上の点光の位置が頭内の音像を補足し、音像の位置は点光の方向に知覚された。このことは、空間上の位置ではなく、ITDなどの情報処理上の属性を媒介して、視覚が聴覚に影響を及ぼしていること、そして、このことを利用してより分析的に(情報処理上の属性と対応させながら)、メカニズムという観点から腹話術効果というもっとも基本的な視聴覚相互作用現象に切り込むことの出来る可能性を示している。平成15年度に得られたこのような基礎的知見を元に、腹話術効果をメカニズムという観点から論じる、あるいは腹話術効果を利用してITDや両耳間レベル差(interaural level difference:ILD)を実空間座標と対応づけるための検討(平成16年度計画)を進めていく。
ポリシラン及びポリゲルマンの光反応における反応中間体・反応機構に関する研究

本研究では、ケイ素およびゲルマニウムがカテネートしたポリシラン、ポリゲルマンの光反応について、光に対して不安定な反応生成物や高分子生成物の同定ならびに反応中間体の直接検出をも含た反応機構の解明を目的とした。ポリシランおよびポリゲルマンの合成:フェニル基やメチル基を有する種々のポリシランおよびポリゲルマンを合成した。合成したポリマーの精製に本申請で購入したGPCカラムを用いた。光反応:パルスレーザー光(10ns/pulse:266nm、355nm)を励起光としてサンプルをフローしながら光反応を行うための反応セルおよびフロー系を製作した。中間体の直接検出ならびに反応機構の解明:ナノ秒レーザー光分解によって直接的に反応中間体を捕捉し反応機構を検討した。本研究により以下のことが明らかになった。(1)フローシステムによるレーザー励起光反応装置により、一度光照射(10ns)されたサンプルは二度と光を受けない条件で反応を検討することができるようになった。(2)光照射によりケイ素-ケイ素およびゲルマニウム-ゲルマニウム結合が開裂し、ポリシリルおよびポリゲルミルラジカルが生成することがナノ秒レーザー光分解法により明らかになった。(3)結合開裂反応と同時にシリレンおよびゲルミレンの発生が確認された。シリレンおよびゲルミレンの生成過程にはレーザー光照射による時差が見られないことおよび吸収の増加がないことから、ポリシリルおよびポリゲルミルラジカルからのシリレンおよびゲルミレンの発生はないと考えられる。反応生成物の詳細なる検討は今後の課題である。
混合分布モデルのコンポーネント数の推定における数値的処理に関する研究

自然科学・社会科学等の様々な分野用いられている“クラスタリング"と呼ばれる統計的分類法の一つである混合分布モデルによる分類法について研究を行った.とくに情報量規準に基づいた多変量混合分布モデルによる分類法のコンポーネント数(群数)の推定について検討を加えた.研究の概要とその具体的な成果は以下のとおりである.分類を行なう場合必ず考えなければならない事項として,“いくつのグループ(群)に分けるのが良いか"という問題がある.統計科学の立場では,この問題に応えるために統計的検定あるいは情報量規準が用いられてきた.しかし混合分布モデルが正則条件を満足しないので様々な工夫がなされてきたが,どの方法も一般的なものではなく,限られた条件下で成り立つものや,理論的根拠が薄いものであった.そこで,情報量規準の立場で混合分布モデルのコンポーネント数の推定をする研究をここ数年間進めてきた結果,一般化情報量規準に基づいた推定方法が実際のデータやシミュレーション実験において,有効であることが分かってきた.本研究は3種類の情報量規準AIC,EIC(ブートストラップ法でバイアス推定を行う方法),CEIC(EICのバイアス推定の変動を抑える工夫をしたもの)について検討を行ってきたが,とくに成果として特筆すべきことは,シミュレーション実験において情報量規準を用いてコンポーネント数の推定するとき,EICが次元に関係なく安定したコンポーネント数の推定が可能であり,平均二乗誤差の意味でも有効な手法であることを示すことができた.自然科学・社会科学等の様々な分野用いられている“クラスタリング"と呼ばれる統計的分類法の一つである混合分布モデルによる分類法について研究を行った.とくに情報量規準に基づいた多変量混合分布モデルによる分類法のコンポーネント数(群数)の推定について検討を加えた.研究の概要とその具体的な成果は以下のとおりである.分類を行なう場合必ず考えなければならない事項として,“いくつのグループ(群)に分けるのが良いか"という問題がある.統計科学の立場では,この問題に応えるために統計的検定あるいは情報量規準が用いられてきた.しかし混合分布モデルが正則条件を満足しないので様々な工夫がなされてきたが,どの方法も一般的なものではなく,限られた条件下で成り立つものや,理論的根拠が薄いものであった.そこで,情報量規準の立場で混合分布モデルのコンポーネント数の推定をする研究をここ数年間進めてきた結果,一般化情報量規準に基づいた推定方法が実際のデータやシミュレーション実験において,有効であることが分かってきた.本研究は3種類の情報量規準AIC,EIC(ブートストラップ法でバイアス推定を行う方法),CEIC(EICのバイアス推定の変動を抑える工夫をしたもの)について検討を行ってきたが,とくに成果として特筆すべきことは,シミュレーション実験において情報量規準を用いてコンポーネント数の推定するとき,EICが次元に関係なく安定したコンポーネント数の推定が可能であり,平均二乗誤差の意味でも有効な手法であることを示すことができた.
Klotho蛋白質によるカルパインの活性制御機構の解析

klotho変異マウスは多彩な老化症状を呈することから、klotho遺伝子が老化の制御に深く関与していると考えられている。我々はこれまでに、klotho変異マウスの腎臓と肺におけるμ-calpainの異常活性化と、その内在性阻害物質であるcalpastatinの消失を明らかにし、μ-calpainによる細胞骨格系の分解が腎および肺障害の原因であることを示してきた。最近、klotho蛋白質にβ-グルクロニダーゼ活性があることが報告され、klotho蛋白質が糖分解酵素として機能している可能性が示唆された。しかし、klotho蛋白質の生体内における糖分解酵素としての具体的な作用点や基質に関してはほとんど分かっていない。そこで本年度は、klotho遺伝子の変異によって生じる糖鎖変化について検討した。各種抗糖鎖抗体及びレクチンを用いてklotho変異マウスと野生型マウスの糖蛋白質糖鎖を比較した結果、klotho変異マウスの肺と腎臓で特異的に増加している糖鎖があることを明らかになった。これらの糖鎖はklotho蛋白質の欠損により増加していたことから、klotho蛋白質の標的(基質あるいは結合糖鎖)である可能性が考えられ、klotho蛋白質がこれらの糖鎖の修飾や分解に関与していることが予想される。また、これらの糖鎖の増加はμ-calpainの異常活性化が顕著な肺と腎臓で観察されることから、μ-calpainの活性制御やカルシウムホメオスタシスの制御に関与している可能性が考えられる。klotho変異マウスは多彩な老化症状を呈することから、klotho遺伝子の機能がヒト老化疾患解析の重要な鍵となっている。私はこれまでに、klotho変異マウス,の腎臓と肺ではμ-calpainが異常に活性化され、その内在性阻害物質であるcalpastatinが消失していることを明らかにしている。こうしたcalpainの活性制御の異常が、細胞骨格系の分子を分解し、組織の正常な機能を損ねている可能性が考えられる。そこで、Klotho蛋白質の減少を起因とするcalpain活性制御異常の分子機構の解明を目指し、本年度はRNAi技術による細胞レベルでのKlotho蛋白質の発現を制御する実験系の検討を行った。これまで培養細胞でのKlothoの発現は、mRNAでしか検出することができず、Klotho蛋白質の細胞レベルでの研究はほとんど行われていない。そこで、まず内在性に検出可能な量のKlotho蛋白質を発現している細胞の検索を行った。マウスにおけるKlotho蛋白質の主要発現臓器である腎臓を中心に、klotho mRNAの発現が報告されている各組織由来の培養細胞株についてウェスタンブロットにより検索し、ヒト腎臓由来の細胞株からKlotho蛋白質が検出可能な株を発見した。本細胞株は今後のKlotho蛋白質の機能研究における重要なツールとなることが期待される。次に、本細胞株を用いてKlotho蛋白質の発現阻害効果を持っsiRNA配列を検討した。この検討によりKlotho蛋白質の発現を強力に阻害するsiRNA配列を見いだすことに成功し、RNAi効果によるKlotho蛋白質の発現制御システムを構築した。現在、このシステムによりシグナル伝達系の解析を行っている。klotho変異マウスは多彩な老化症状を呈することから、klotho遺伝子が老化の制御に深く関与することが考えられている。従って、klotho遺伝子の機能解析は老化および老化に伴う病態の分子機構の理解に繋がることが期待される。これまでに私は、klotho変異マウスの腎臓と肺におけるμ-calpainの異常活性化を見いだしており、calpainによる蛋白質分解系の亢進が、組織の原因となる可能性を示してきた。一般的にcalpainの活性化はカルシウム依存的であることから、klotho変異マウスでは細胞内カルシウム濃度調節に異常があると予想される。そこで本年度は、klotho蛋白質と細胞内カルシウム濃度との関係を検討した。昨年度に見いだした、klotho蛋白質を内在性に発現している細胞株を用いて、klotho遺伝子の発現に影響することが知られるangiotensin IIを作用させたときのklotho蛋白質の発現変化とカルシウム代謝への影響を調べた。半透膜で培地を上層と下層に区切った培養器を用いて、半透膜上で培養した細胞に各試薬と^<45>Caを添加し、上層-下層問のカルシウム流動量と細胞内カルシウム濃度の変化を^<45>Caの放射活性により測定した。その結果、angiotensinIIの添加によりklotho蛋白質の発現は減少し、同時に上層-下層間のカルシウムの流動量が増加することが明らかとなった。また、カルシウム輸送の亢進に伴って、細胞内カルシウム濃度も上昇する傾向が観察された。以上より、klotho蛋白質の発現量とカルシウム輸送には密接な関係があることが明らかとなった。klotho変異マウスや自然老化マウスにおいてklotho蛋白質の発現異常が長期的に続く場合、細胞内カルシウム濃度が持続的に上昇することが予想され、その結果μ-calpainの活性化が誘導されている可能性が考えられる。

最近、klotho蛋白質にβ-グルクロニダーゼ活性があることが報告され、klotho蛋白質が糖分解酵素として機能している可能性が示唆された。しかし、klotho蛋白質の生体内における糖分解酵素としての具体的な作用点や基質に関してはほとんど分かっていない。そこで本年度は、klotho遺伝子の変異によって生じる糖鎖変化について検討した。各種抗糖鎖抗体及びレクチンを用いてklotho変異マウスと野生型マウスの糖蛋白質糖鎖を比較した結果、klotho変異マウスの肺と腎臓で特異的に増加している糖鎖があることを明らかになった。これらの糖鎖はklotho蛋白質の欠損により増加していたことから、klotho蛋白質の標的(基質あるいは結合糖鎖)である可能性が考えられ、klotho蛋白質がこれらの糖鎖の修飾や分解に関与していることが予想される。また、これらの糖鎖の増加はμ-calpainの異常活性化が顕著な肺と腎臓で観察されることから、μ-calpainの活性制御やカルシウムホメオスタシスの制御に関与している可能性が考えられる。
マイコプラズマ感染関節リウマチマウスモデルの滑膜組織変化と獲得免疫関与の検討

2. Mf感染における関節炎惹起での獲得免疫の関与を検討するため、Mf感染後抗体投与し、感染1か月後まで関節炎発症の有無を検討した。その結果、感染1ヶ月後の関節滑膜細胞総数は抗体除去により減少したものの、四肢の関節可動域に軽微な制限を認めたことから関節炎を完全に抑制することはできなかった。3.関節炎の治療薬としてマイコプラズマ肺炎の治療で行われる抗生剤投与がMf感染での関節炎発症を抑制できるのか、検討した。Mf感染後の様々な時期に抗生剤を投与し、感染1ヶ月後の関節炎の程度を検討したところ、抗生剤投与時期により関節炎発症度合いが異なることが判明した。1)M.fermentans(Mf)感染gp130F759の関節炎発症時に見られる病理像の詳細解析;滑膜関節組織における蛍光免疫染色観察条件を設定した。関節リウマチの主病変となる滑膜表層の細胞、マクロファージ様のTypeA滑膜細胞と線維芽細胞様のTypeB滑膜細胞を検出するCX3CR1-eGFP/gp130F759、Col1-ECFP/gp130F759を作出し、gp130F759における造血系細胞も抗体染色で検出が可能となった。2)関節炎惹起での獲得免疫関与検討;中和抗体によるT、B細胞の除去が関節炎惹起を一部抑制することが明らかとなった。これはMf感染が自然免疫だけでなく、獲得免疫に関与することを示唆している。3)Mf感染から関節炎発症までに関与する信号伝達経路の解析と新たな治療戦略の探索;処置した抗生剤投与が関節炎発症の程度を左右する結果は薬剤投与実験において重要な発見であると考えられる。続けてMf感染におけるin vivoでのIL-6の信号伝達系を確認する予定であったが実験に使用予定する十分なマウス数を確保できなかった。項目の一部において、達成度に課題があるもののおおむね順調に進んだと考えられる。1)Mf感染後の関節におけるMfの局在を検証する。これまでに行ってきた条件設定を基に蛍光色素で標識したMf感染後、関節におけるMfの局在を検証し、感染後から関節炎発症までに増加する造血系細胞(好中球、B、T細胞)と非造血系細胞(線維芽細胞)について明らかにする。2)関節炎惹起での獲得免疫関与検討において抗体投与により関節炎発症を部分的に抑制することが判明した。Mf感染後の血清や細胞を移入し関節炎惹起に必須な細胞を特定する。3)-1 IL-6KO/gp130F759を用いた感染実験を行いin vivoでのマイコプラズマ感染とIL-6信号伝達が関節炎発症に必須なのか検討する。3)-2感染の治療として考えていた抗生剤は種類・投与時期・使用量を検討し、効用の高い投与方法を模索する。1.滑膜組織造血・非造血系細胞における病変の時間空間的解析:関節リウマチの主病変となる滑膜表層は2種類の細胞、マクロファージ様のTypeA滑膜細胞と線維芽細胞様のTypeB滑膜細胞から構成される為、各々が検出できるCX3CR1-GFP、Col1a1-ECFP tgを川崎医科大学SPF飼育室へ搬入後、gp130F759と交配した。CX3CR1GFP/+ gp130F759の作出は少数ながら成功し、滑膜におけるCX3CR1GFP/+の存在を検討した。膝滑膜から細胞を回収し、フローサイトメトリー(FCM)を用いてCX3CR1陽性細胞を確認したところ、6.7%存在した。しかし、この中には血液内に循環するCX3CR1陽性細胞も含まれる可能性があったことから、PBSにて全身を還流後、FCMにて確認したところ、4.2%であった。この割合が本来滑膜組織に存在するCX3CR1陽性細胞と考えられる。さらに局在を検討する為、川本テープ法にて関節滑膜の薄切切片を作成後、蛍光顕微鏡にて陽性細胞の有無を確認したが、蛍光を認めなかった。そこで抗GFP抗体を用いて陽性細胞を検出したところ、野生型では極少数であるが滑膜表層に、CX3CR1GFP/+ gp130F759では滑膜内の線維化部分にも陽性細胞が存在した。Col1ECFP/+gp130F759の作出はやや遅れている。2.関節炎惹起での獲得免疫関与検討:Mf感染におけるT細胞の関与を明確にするため、gp130F759nu/nuを作成したが、発育不良のためgp130F759と同等に扱うことはできないと判断した。3. Mf感染から関節炎発症までに関与する信号伝達経路の解析と新たな治療戦略:IL-6KO/gp130F759を作出した。自然経過の観察からgp130F759におけるMf感染と解析時期の3-4ヶ月齢において関節炎の発症を認めないことを確認した。CX3CR1GFP/+ gp130F759、Col1-ECFP Tg /gp130F759、IL-6KO/gp130F759の作出において実験に使用予定する十分なマウス数を産出することができなかったため、やや遅れているとの区分とした。特にCol

1-ECFP Tgの搬入は年明けとなり当初の予定から遅れたが、現在Col1-ECFP Tgとgp130F759のF1が得られており、Col1-ECFP Tg /gp130F759の作出は来年度7月以降を予定している。一方、CX3CR1-GFP/gp130F759とIL-6KO/gp130F759は今年度中に感染実験前の状態を調べることで基礎データを獲得でき、来年度行う感染実験との比較が容易であると考えている。また、来年度以降計画している関節炎惹起での獲得免疫関与検討においても多くのgp130F759が必要となる。こちらは現在十分な繁殖マウスを準備できているので、来年度以降は安定した産出が見込めるため、実験遂行に問題はない。2. Mf感染における関節炎惹起での獲得免疫の関与を検討するため、Mf感染後抗体投与し、感染1か月後まで関節炎発症の有無を検討した。その結果、感染1ヶ月後の関節滑膜細胞総数は抗体除去により減少したものの、四肢の関節可動域に軽微な制限を認めたことから関節炎を完全に抑制することはできなかった。3.関節炎の治療薬としてマイコプラズマ肺炎の治療で行われる抗生剤投与がMf感染での関節炎発症を抑制できるのか、検討した。Mf感染後の様々な時期に抗生剤を投与し、感染1ヶ月後の関節炎の程度を検討したところ、抗生剤投与時期により関節炎発症度合いが異なることが判明した。1)M.fermentans(Mf)感染gp130F759の関節炎発症時に見られる病理像の詳細解析;滑膜関節組織における蛍光免疫染色観察条件を設定した。関節リウマチの主病変となる滑膜表層の細胞、マクロファージ様のTypeA滑膜細胞と線維芽細胞様のTypeB滑膜細胞を検出するCX3CR1-eGFP/gp130F759、Col1-ECFP/gp130F759を作出し、gp130F759における造血系細胞も抗体染色で検出が可能となった。2)関節炎惹起での獲得免疫関与検討;中和抗体によるT、B細胞の除去が関節炎惹起を一部抑制することが明らかとなった。これはMf感染が自然免疫だけでなく、獲得免疫に関与することを示唆している。3)Mf感染から関節炎発症までに関与する信号伝達経路の解析と新たな治療戦略の探索;処置した抗生剤投与が関節炎発症の程度を左右する結果は薬剤投与実験において重要な発見であると考えられる。続けてMf感染におけるin vivoでのIL-6の信号伝達系を確認する予定であったが実験に使用予定する十分なマウス数を確保できなかった。項目の一部において、達成度に課題があるもののおおむね順調に進んだと考えられる。1)Mycoplasma fermentans (Mf)感染後の関節におけるMfの局在を検証する。Mfを蛍光色素で標識し、CX3CR1-GFP/gp130F759, Col1-ECFP Tg /gp130F759へ感染させる。感染後経時的に滑膜組織(膝滑膜、後肢関節)を還流後2%パラホルムアルデヒドで固定、スクロース置換後、凍結包埋する。川本テープ法を用いて薄切し共焦点レーザー顕微鏡にてMfの局在を確認する。さらに線維芽細胞はFLSに対する抗体(抗カドヘリン11抗体)を用いて染色し線維芽細胞とMfの局在の関連性を確認する。2)関節炎惹起での獲得免疫関与検討では来年度以降gp130F759nu/nuではなく、抗体投与による細胞除去を考えている。抗CD79b抗体、抗CD4あるいはCD8抗体でリンパ球(B,T細胞)を除去し、感染1か月後まで関節炎発症の有無を検討する。3)-1 IL-6KO/gp130F759を用いた感染実験または抗IL-6受容体抗体による阻害実験を行う。3)-2マイコプラズマ肺炎の治療で行われる抗生剤(マクロライド系、ニューキノロン系)
レーザー推進技術を利用した表面反応制御とそのSTM観測

本研究においては,レーザー推進技術を利用して作成した高速の原子・分子ビームを固体表面に照射することによって化学反応を制御することを試みる。したがって実験に必要な設備は、気体原子・分子導入部、レーザー推進装置、表面反応を追跡できる測定装置,固体試料の準備が可能な真空装置である。その中で新たに必要となる設備はレーザー推進装置とSTMである。1.レーザー推進部:高速の原子・分子ビームを表面に照射して反応制御を行う。高速原子・分子ビーム作成に必要な設備は、レーザー光源、光路調整用のミラー、レーザー光収束用のミラー、ノズルの付いたガス封入用真空容器、気体原子・分子導入部である。分子ビームの運動エネルギーは、レーザーを照射した時刻と超高真空装置内に設置した質量分析計に気体分子が到達する時刻との差で測定することができる。そのために必要なレーザー発射タイミングコントロール用の制御装置を準備した。2.STM:超高真空装置内の試料表面に高速の分子を照射し、試料表面に生成した分子の種類、構造、位置などを測定する。したがって高速分子ビーム、赤外分光の赤外光、STMの走査範囲が重なっている必要があり、工夫を行った。また、STMを動作させるために中心的な役割を果たすのはピエゾ素子であるが、このピエゾ素子は、非常に振動を嫌う部品である。しかし、レーザー推進部で使用するポンプからの振動が予想以上に大きく、ピエゾ素子への振動を打ち消すための器具を新たに考案し、作成した。平成16年度は、レーザー推進装置とSTMの製作を行った。設備の大部分は現有であるのでレーザー光源と各種ミラーを購入した。運動エネルギーは、レーザーのパワー、タイミング、気体分子の種類などで制御する。2.STM:試料表面上を走査する探針、ピエゾ素子、コントローラーは購入するが、組立てと真空装置への設置に必要な部品を製作した。超高真空装置内の試料表面に高速の分子を照射し、試料表面に生成した分子の種類、構造、位置などを測定する。平成17年度は、レーザー推進装置の運転とSTMの設置および測定を行った。

2.STM:超高真空装置内の試料表面に高速の分子を照射し、試料表面に生成した分子の種類、構造、位置などを測定する。したがって高速分子ビーム、赤外分光の赤外光、STMの走査範囲が重なっている必要があり、工夫を行った。また、STMを動作させるために中心的な役割を果たすのはピエゾ素子であるが、このピエゾ素子は、非常に振動を嫌う部品である。しかし、レーザー推進部で使用するポンプからの振動が予想以上に大きく、ピエゾ素子への振動を打ち消すための器具を新たに考案し、作成した。
インプラントの病理学ー非抗原性異物による生体反応の病理細胞学的研究ー

最近の歯科の治療分野におけるインプラント学の進歩は目ざましく、各種インプラント材が市販され臨床に供されていて、また組織適合性をみる実験も多くなされている。しかし、ホスト側の基本的な異物認識のメカニズムに関しては不十分であった。当研究は細胞と同じくらいの大きさに調整したインプラント材をラット腹部皮下に注入し経時的に病理細胞学的にホストと生体材料の関係を明らかにしたものである。使用した生体材料は0.15μmから30μmの合成ハイドロキシアパタイトセラミック微粒子で水に不溶で化学反応を起こさないすなわち抗原性を持たない異物と考えられる。その結果注入後の急性炎症は速やかに消退しマクロファージ、多核巨細胞および少数の線維芽細胞からなる非特異的異物肉芽腫を形成した。一般的に、直径が7μmに満たない微粒子は注入後、マクロファージによってすべて貪食されていた。また、直径が7μm以上の微粒子または微粒子塊に対しては、注入後3日から28日までの期間、多核巨細胞が出現してそれらを貪食していた。このことはマクロファージが単独で貪食できない大きさの微粒子を、複数のマクロファージが取り囲み、融合の結果多核巨細胞となり、その細胞内に取込むことを示した。また、マクロファージは血液由来の単球が血管から出て細胞分裂し、成熟マクロファージに分化することが示された。マクロファージ、多核巨細胞の微粒子の認識・貪食過程で重要な役割を果たしていることが考えられた。以上の結果から、従来の諸材料には見られない高い組織親和性を示すといわれているアパタイトセラミックといえども、生体細胞は異物処理反応を生じることが明らかにされた。また、このことは、アパタイトセラミックにより作られた人工歯根や人工骨を臨床に使用した場合、その予後について注意を喚起するものである。実験1.直径0.15μmの700°C3時間焼成の合成ハイドロキシアパタイトセラミックス(700°CHAP)と径0.6530μmの1,050°C4時間焼成の合成ハイドロキシアパタイトセラミックス(1,050°CHAP)各粒子の2種類の微細粒子を雄ウイスター系ラットの腹部皮下に注入し、1カ月の経過の中で粒子と生体組織の係わりを、電子顕微鏡的に検討を加えた。所見:a.700°CHAP粒子:初期(3日)にマクロファージ(Mφ)がHAP粒子の周囲に集合し、粒子に接した部位でMφの細胞膜が消失。後に(7日)多核巨細胞(MGC)内に粒子が存在。Mφは粒子を貪食したり、粒子塊の間に侵入したりしている。b.1050°CHAP粒子:径0.655μmの粒子はMφに貪食された。その細胞質は、貪食により膨大している。径がさらに大きい粒子は貪食されず、その粒子にMφが集っている。MGCも出現し、小粒子は見当らないが、やゝ大きい粒子が貪食されている。しかし、径日的にMGC内の粒子が小さくなっている。c.MGCの出現はMφより遅い。また両者とも細胞表面に多数の細い細胞質突起がみられた。d.MGCがHAP粒子に接する面には、brush border様の構造物は観察されなかった。結論:a.2種類の粒子に対する生体反応の差は、焼成温度の差による粒子の性質、すなわち結晶性等の差に由来すると考えられる。b.MGCは、破骨細胞とは形態学的には異なる。

c.MGCとMφの細胞表面構造の類似と、MGCの出現がMφより遅いことは、MφからMGCへの移行考えられる。実験2.上記実験を再度行い、光学顕微鏡レベルでの酸フォスファターゼ反応を含めた各種染色での検討と、透過型電子顕微鏡によるルテニウムレッド,ペルオキシダーゼ反応でMφの態度,MGCへの移行,貪食不可能な大きさの粒子に接するMφらの態度などを追求中である。実験1, 700°C3時間焼成の直径0.15μmの合成ハイドロキシアパタイトセラミック(700°CHAP)と,1,050°C4時間焼成の直径0.6530μmの合成ハイドロキシアパタイトセラミック微粒子(1,050°CHAP)を,雄ウィスター系ラットの腹部皮下にそれぞれ注入し,注入後, 6時間, 1,3,7,14,21,28日経過後,局所の組織反応を光学顕微鏡的に検索した.実験期間中に局所の肉眼的病変および全身状態に異常は認められなかった.結果:1)直径が7μm以下の微粒子は注入後1日から28日までの期間,マクロファージによってすべて貧食されていた.2)それらの微粒子でも,多数が凝集して細胞が侵入できない所では,多核巨細胞が出現してそれらを取り込んでいた.3)その多核巨細胞は,結晶化の低い700°CHAPに対する細胞の方が,核数が多かった.4)一般的に直径が7μm以上の微粒子に対しては,注入後3日から多核巨細胞が貧食をしていた.早期には,その微粒子をマクロファージが多数で取囲んでいたので,その細胞癒合の結果多核巨細胞になるものと考えた.5)マクロファージや多核巨細胞に貧食された微粒子あるいは微粒子塊はしだいに消化され,実験後期(21日後,28日後)には小さくなったり,崩壊していた.実験2,実験1と同じ施術したものを透過電子顕微鏡によって検索した.なお,標本作製に当っては,硬質のHAPを薄切する困難さから,非脱灰および脱灰標本を併用して検索した.1)700°CHAPは生体組織液にわずかに溶解し,再沈着をして,それに接する細胞膜を不明瞭にしていた.2)集合した多数のマクロファージは,血液単球由来のものが細胞分裂も含みながら成熟したものと考えた.3)マクロファージが異物巨細胞に移行する前に,互に細胞膜を密着させていた.4)28日までの経過では,骨形成や石灰化物の沈着は認められず,ハイドロキシアパタイトの骨誘導能は認められなかった.5)本多核巨細胞の表面に刷子縁などは認められず破骨細胞とは異ると考えられた.前年に引きつづきラット皮下に0.65-30μmのハイドロキシアパタイト微粒子を注入し経時的にさらに実験を重ねた。光顕的にはH・E、アザン・マロリー鍍銀染色、PAS反応、Stable formacid phosephatase等、電顕的には通法のウラン-鉛染色、ルテニウムレッド染色およびペルオキシダーゼ反応をおこなった。その結果(1)HAP粒子に対する軟組織の反応は注入後の急性炎症は速やかに消退し、組織、細胞の変性、壊死は認められず、マクロファージ、多核巨細胞および少数の線維芽細胞からなる非特異的異物反応と考えた。(2)小型粒子は、マクロファージ、多核巨細胞に貧食されてphagosome、phagolysosomeが形成され、時間の経過とともにこれらは互いに癒合し、微粒子数も増加した。微粒子を貧食したマクロファージは次第に散在し、血管周囲に多数みられるようになり稀に血管内にも認められた。
神経系におけるリソソーム酵素の細胞間輸送経路の解明

リソソーム酵素の細胞間輸送機構を明らかにするため、生体観察の容易な鶏胚モデルの構築を行った。以前申請者は、鶏胚で目的とする遺伝子を長期間・安定的に発現させることに成功した。今回、この方法を発展させ、Cre-loxPシステムとトランスポゾンシステムを併用し、目的とする時期に、目的とする細胞で、目的とする遺伝子の発現を制御する機構に確立し、さらに、U6プロモーターを分割することで、条件的に遺伝子発現の抑制を行えるシステムを確立した。リソソーム酵素が先天的に欠損または機能不全に陥ると、ライソゾーム病とよばれる先天性代謝異常疾患(特定疾患に指定)になる。ムコ多糖症、ポンベ病、バッテン病、I-cell病など、現在約30種類の疾患が報告されており、欠損する酵素によってその症状は異なるが、本来リソソームで分解されるべき基質(糖、脂質、タンパク質など)が蓄積するということが共通しいる。ライソゾーム病の治療には酵素補充療法と骨髄移植が知られており、リソソーム酵素が細胞へ取り込まれることによってある程度良好な効果が得られている。しかし、リソソーム酵素が血液脳関門を越えることが出来ないため、中枢神経系に対しては有意義な効果を得るに至っていないのが現状である。言い換えると、リソソーム酵素が血液脳関門を越えて神経細胞へ到達出来れば、ライソゾーム病が克服されると予想される。本年度は、昨年度に構築したメダカ由来のTol2トランスポゾンを用いた鶏胚への遺伝子導入モデルを利用し、末梢神経のリソソームの可視化を試みた。リソソームの可視化には、リソゾーム膜に局在するlamp-1をマーカーとして用いた。Lamp-1遺伝子の3'端にGFP遺伝子を結合させたキメラ遺伝子を作成し、同遺伝子カセットをTol2ではさんだベクターを構築した。同ベクターをエレクトロポレーション法で孵卵後二日から三日の鶏胚の神経管に遺伝子導入した。孵化後、幼雛の脊髄を共焦点顕微鏡で観察した。脊髄ではリソソーム様の構造物が確認出来たので、リソソームの生体観察が出来ることが示唆された。リソソームは細胞内で唯一酸性環境下にあるオルガネラで、数十種類の酸性加水分解酵素を有する。これらリソソーム酵素が先天的に欠損または機能不全になると、ライソゾーム病と呼ばれる先天性代謝異常疾患となる。ライソゾーム病にはムコ多糖症、ポンベ病、バッテン病、I-cell病など、現在約30種類の疾患が報告されており、欠損する酵素によってその症状は異なるが、本来リソソームで分解されるべき基質(糖、脂質、タンパク質など)が蓄積するということが共通している。申請者はこれまで、メダカ由来のTo12トランスポゾンを用いた鶏胚への遺伝子導入モデルを利用し、末梢神経のリソソームの可視化を試みてきた。本法を用いることにより、脊髄でリソソームの生体観察が出来る可能性を示してきた。本年度は、鶏胚でリソソーム病モデルを構築することを試みた。鶏胚に安定的に遺伝子導入できるTo12の系を用い、それにU6プロモーターを利用したRNAi法を組み合わせ、さらにドキシサイクリンの添加により任意の時期に遺伝子発現を抑制出来るシステムを構築した。本法を用いることで、リソソーム酵素の遺伝子発現の抑制を生体で行うことが出来、生体観察の容易な鶏胚でリソソーム病モデルを構築することが可能となった。
中学校から高校への進路選択に伴う時間的展望の変化プロセスの研究

本研究の目的は、中学校から高校へと進学する際の学校移行における生徒の心理的変化の特徴について、4年間にわたる調査データを分析することによって明らかにすることであった。調査の対象者は、公立中学校16校と私立中学校2校に在籍する中学13年の生徒3,604人、中学校卒業後の調査に参加した高校13年の生徒のべ1,435人、就職・アルバイトの青年のべ10人、総計5,049人だった。20042007年にかけて予備調査1回、本調査1回、縦断的調査3回が実施された。それらの調査を通じて収集されたデータにもとついて分析がおこなわれた。横断的データから、中学1年から中学2年にかけて、「将来への希望」「将来への志向性」「計画性「自己価値」「信頼できる他者の存在」「勉強理解度」の得点の減少、「空虚感」の得点の増加が見られた。縦断的データから、2004年コホートでは、高校2年から高校3年にかけての変化が顕著であり、「将来への希望」「将来への志向性」「自己価値」「信頼できる他者の存在」「勉強理解度」の得点が上昇し、「将来目標の渇望」(女子のみ)の得点の低下が見られた。このような時間的展望や自己意識の変化は横断的データと同じ傾向を示していた。中学3年から高校1年にかけて「将来への希望」「計画性」「信頼できる他者の存在」「学校享受感」「勉強理解度」の得点の低下、「空虚感」「将来目標の渇望」の得点の上昇が見られた。中学校から高校への学校移行を経験するなかで、将来目標を持ちたいと思いながらも、授業や勉強に問題をかかえて、将来への希望を弱めたり、空虚感を強く感じる生徒が出てくることが考えられる。本研究の目的は、中学校から高校にかけて縦断的な質問紙調査を実施し、生徒の進路選択と時間的展望との関連について検討することであった。縦断研究の第一年度にあたる本年度は、以下の2つの調査を実施した。1)7月に、公立中学校1校の13年生480人を対象に、中高校生用の時間的展望尺度を開発するための質問紙調査を実施した。質問項目は、(1)自己意識(30項目)、(2)時間的展望(42項目)、(3)学校生活(12項目)、(4)不定愁訴(9項目)から構成されていた。因子分析の結果、(1)自己意識については、(1)自己信頼、(2)他者の存在、(3)自己否定、(4)現在の自己肯定、の4因子を抽出した。(2)時間的展望については、(1)将来への希望、(2)将来志向、(3)空虚感、(4)計画性、(5)将来目標の渇望、の5因子を抽出した。(3)学校生活については、(1)学校享受感、(2)勉強理解度、の2因子を抽出した。(4)不定愁訴については、(1)イライラ感、(2)身体疲労、の2因子を抽出した。2)1012月に、公立・私立中学校9校の3年生915名を対象に、上記の調査から作成された質問紙調査を実施し、あわせて高校進学後に継続して調査協力をしてくれる対象者を募った。その結果、558名が今後の調査への継続的な協力を申し出てくれた。得られた質問紙調査のデータに関しては、4つのカテゴリーにもとづいて下位因子の結果を分析した。来年度以降引き続いて実施される中学3年生を対象とした調査結果との比較をおこなう予定である。また、継続して調査協力を申し出てくれた中学生の氏名・住所等の情報をデータベース化する作業もあわせて実施した。

本研究の目的は、中学校から高校にかけて縦断的な質問紙調査を実施し、生徒の進路選択と時間的展望との関連について検討することであった。縦断研究の第2年目にあたる本年度は、以下の2つの調査を実施した。1)1112月に、昨年度、公立・私立中学校9校を卒業し、継続して調査への協力を申し出てくれた558人を対象に、郵送法による調査を実施した。質問紙は、自己意識、時間的展望、不定愁訴、家庭生活、能力・適性、日本社会、学校生活、卒業後の進路や将来のことについての調査項目から構成されていた。256人から回答済みの調査用紙が送られてきた。2)1112月に、公立・私立中学校9校の3年生1176人を対象に、2004年度に実施した尺度構成のための予備調査の結果にもとづいて作成された質問紙調査(自己意識、時間的展望、学校生活、不定愁訴、進路選択に関する質問項目)を実施し、あわせて高校進学後に継続して調査協力をしてくれる対象者を募った。その結果、650人が今後の調査への継続的な協力を申し出てくれた。継続して調査協力を申し出てくれた中学生の氏名・住所等の情報をデータベース化する作業もあわせて実施した。昨年度の調査と併せると、2004年度コホートは中学3年生と高校1年の2年間分の調査データが集まり、2005年度コホートは1年間分の調査データが集まった。調査協力校に対しては、昨年度に引き続き、調査結果の概要をレポートにまとめてフィードバックした。縦断研究の第3年目にあたる本年度は、以下の2つの調査を実施した。1)1112月に、昨年度および一昨年度、公立・私立中学校のべ19校を卒業し、継続して調査への協力を申し出てくれた896人を対象に、郵送法による調査を実施した。総計で546人から回答済みの調査用紙が送られてきた。2)1112月に、公立・私立中学校8校の3年生1,063人を対象に、2004年度に実施した尺度構成のための予備調査の結果にもとづいて作成された質問紙調査(自己意識、時間的展望、学校生活、不定愁訴、進路選択に関する質問項目)を実施し、あわせて高校進学後に継続して調査協力をしてくれる対象者を募った。その結果、614人が今後の調査への継続的な協力を申し出てくれた。昨年度、一昨年度の調査と併せると、2004年度コホートは中学3年生、高校1年、2年の3年間分の調査データが集まり、2005年度コホートは中学3年生、高校1年の2年分の調査データが集まった。また、2006年度コホートは1年間分の調査データが集まった。縦断研究の第4年目にあたる本年度は、以下の2つの調査を実施した。1112月に、20042006年度、公立・私立中学校のべ19校を卒業し、継続して調査への協力を申し出てくれた1.145人を対象に、郵送法による調査を実施した。総計で661人から回答済みの調査用紙が送られてきた。