hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ラパマイシンによる網膜色素変性症モデルラット網膜の外顆粒層細胞死抑制機構の解明

申請者は網膜色素変性症(RP)モデルラットであるロドプシンP347Lトランスジェニックラット(Tgラット)の眼球へラパマイシンを微量注入することにより、視細胞死を一過性に抑制することに成功した。ラパマイシン注入によって、Tgラット網膜のBipとCHOPのmRNA発現量が一過性に有意に低下した。一方でAtg5のmRNA発現量は一貫してTgラットで有意に増加していた。また、ラパマイシンの注入後の視細胞でLC3の蛍光強度が大きく増強していた。以上の結果から、Tgラット眼球へのラパマイシン注入により、オートファジーが一過性に亢進し、小胞体ストレス応答が改善してアポトーシスが遅延したことが示唆された。本研究では変異ロドプシン発現トランスジェニック動物(TgラットおよびTgウサギ)を利用し、Tg動物の網膜色素変性症発症過程で生ずるアポトーシスによる視細胞死がラパマイシン投与によって抑制される仕組みを解明する。最終的には我々のモデル動物における視細胞の長期機能維持を達成することによって、可能な限り侵襲の少ない網膜色素変性症治療法の確立を目的とする。目的達成のために初年度は、P347L型変異ロドプシン発現トランスジェニック動物(P347Lラット)網膜に小胞体ストレス関連試薬のラパマイシンを作用させた。ラパマイシンはmTORに作用してタンパク質合成を抑制することが知られている。正常ラット網膜においては、生後9日目で約13層の外顆粒層が出来上がるが、視細胞の外節はまだ出来ていない。その後ロドプシンの合成輸送と共に視細胞の外節が伸長を初め、生後14日目に網膜構造が完成する。P347Lラットの網膜では、生後9日目に正常ラットと同様に外顆粒層が出来上がるが、変異ロドプシンの合成蓄積と共にアポトーシスによる視細胞死が進行して外顆粒層が減少していく。そして生後14日目では23層まで減少する。生後9日目のTgラット眼球にラパマイシンを1回投与した群では、生後12日目の外顆粒層の減少を半分に押さえることが出来た。しかし16日目には外顆粒層が23層に減少したため、ラパマイシンの効果が一過性であることが判明した。生後8日目と10日目のTgラット眼球にラパマイシンを2回投与した群では、1回投与群と比較して14日目の外顆粒層減少が抑えられたが、16日目以降に同様に外顆粒層は減少した。これらの結果から、ラパマイシンによる変異ロドプシン合成阻害が小胞体ストレス応答が引き起こすアポトーシスの進行を遅らせたことが示唆された。P347L変異ロドプシン特異的モノクローナル抗体の作製は順調に進んでいる。当初の研究計画で初年度は、in vivo(トランスジェニック動物)とin vitro(網膜スライス培養系)を用いて、ラパマイシンを含む小胞体ストレス関連試薬を作用させ、網膜色素変性症を発症するP347L型変異ロドプシン発現トランスジェニック動物(P347Lラットおよびウサギ)網膜視細胞の細胞死抑止の仕組みを解析する予定であった。しかしin vitroスライス培養系の構築が遅れたため、in vivoでの複数の小胞体ストレス関連試薬の効果の解析を進めることとした。具体的には、小胞体ストレス関連試薬のエボジアミンの効果について検証した。エボジアミンもmTORに作用するがラパマイシンとは異なりオートファジーを促進することが知られている。エボジアミンの投与実験の結果、エボジアミンでも外顆粒層減少を押さえる効果が得られたため、小胞体ストレス応答における複数の経路が網膜色素変性症を引き起こす要因になっている可能性が示唆され、今後の研究を更に発展させる展望が開けている。初年度(平成27年度)では、P347L型変異ロドプシン発現トランスジェニックラット(P347Lラット)網膜にラパマイシンを作用させると、生後14日目までにアポトーシスによって死滅する外顆粒層の減少をある程度抑えることができた。P347Lラット網膜の視細胞では変異ロドプシンが外節に輸送されずに細胞質内に蓄積する。これは正常ラット網膜の視細胞には見られない現症であり、P347Lラット網膜視細胞のアポトーシスが小胞体ストレスによることを強く示唆している。そこで平成28年度では、このアポトーシスに関与するタンパク質群の発現変化を免疫組織化学によって解析した。小胞体ストレスにより誘導されるアポトーシス関連タンパク質の一つであるCHOPに対する抗体を使って免疫組織化学を行ったところ、ラパマイシンを投与したP347Lラット網膜の外顆粒層におけるCHOPの陽性反応が減少した。このことからP347Lラット視細胞のアポトーシス誘発経路にCHOPが関与していることが示唆された。正常ラット網膜のin vitroスライス培養系および培養細胞で変異ロドプシンの発現様式を解析するための変異ロドプシン発現ベクターの構築を完了した。P347L変異ロドプシン

特異的モノクローナル抗体の作製は、陽性抗体を産生するハイブリドーマのスクリーニングが完了し、高濃度の抗体溶液作製に向けて腹水化を開始した。当初の研究計画では、初年度にTgラット網膜の組織培養系を用いて、小胞体ストレス関連試薬を作用させ、P347Lラット網膜視細胞の細胞死抑止の仕組みを解析する予定であった。網膜の組織培養には新生仔ラットが不可欠のため、計画的な繁殖が必要であったが、P347Lラットの雌が原因不明の不妊を示し、さらに自家繁殖を行っていた正常ラットの雌が新生仔ラットの喰殺を頻発したために実験に必要な新生仔ラットを十分数確保できなかった。現在信頼できる業者から正常ラットの雌を購入してTgラットコロニーの回復を行うとともに、P347Lラットの雌の不妊の原因究明を行っている。申請者は網膜色素変性症(RP)で引き起こされる視細胞死を抑制するための新たな治療方法を確立することを目的として、初年度に視細胞死抑制効果が確認されたラパマイシンについて、次年度以降解析を進めた。RPモデルラットであるロドプシンP347Lトランスジェニックラット(Tgラット)網膜視細胞のアポトーシスが生後9日目から生じるため、ラパマイシンを、生後8日目の複数匹のラット眼球へ微量注入して、経時的に抽出した個体の網膜を形態学的および分子生物学的に詳細に解析した。その結果、網膜のアポトーシス関連因子のBipとCHOPのmRNA発現量が翌日一過性に有意に低下したが、その後はコントロールと同レベルまで戻った。一方でオートファジー関連因子のAtg5のmRNA発現量は一貫してWtラットと比べてTgラットで有意に増加していた。さらにタネル法を用いた視細胞核のDNA断片化(アポトーシス)を詳細に解析したところ、9日目で有意に低下し、その後はコントロールと比べてほぼ1日遅れで推移した。これらの結果は、ラパマイシンによって小胞体ストレス応答が一過性に改善しアポトーシスが抑えられたこと、およびRPモデルラットの視細胞でアポトーシスとオートファジーが同時に生じていることを示している。次に、LC3と変異ロドプシンに対する抗体を使って蛍光抗体染色観察を行ったところ、それぞれの分子が共局在していることが明らかとなり、さらにラパマイシンの微量注入後の網膜外顆粒層ではLC3の蛍光強度が大きく増強していた。これはラパマイシンによってオートファジーが促進され、変異ロドプシンがオートファゴソームに取り込まれていることを示唆している。以上の結果から、P347Lラット眼球へのラパマイシン微量注入により、オートファジーが一過性に亢進し、小胞体ストレス応答が改善してアポトーシスが遅延するという極めて重要な知見が得られた。申請者は網膜色素変性症(RP)モデルラットであるロドプシンP347Lトランスジェニックラット(Tgラット)の眼球へラパマイシンを微量注入することにより、視細胞死を一過性に抑制することに成功した。ラパマイシン注入によって、Tgラット網膜のBipとCHOPのmRNA発現量が一過性に有意に低下した。一方でAtg5のmRNA発現量は一貫してTgラットで有意に増加していた。また、ラパマイシンの注入後の視細胞でLC3の蛍光強度が大きく増強していた。
モンテカルロ法を用いた高精度四次元線量計算システムの開発

平成24年度(最終年度)は、これまでに開発した4次元線量計算システムのスパコン利用による高速化、及び合算位相数最適化の検討を行った。前者においては512コアのスパコンシステムを用いて、1症例あたりの4次元線量計算時間を従来システムの約24時間から約6時間にまで短縮し、線量計算結果は同等のまま約4倍の高速化を実現した。後者においては呼気相を基準とした4位相合算の4次元線量結果が従来の10位相合算の結果と比べ、腫瘍においては1.0%以内、危険臓器においては2.5%以内とほぼ同じであることを定量的に評価した。これにより線量計算精度を担保しながら2.5倍の高速化が可能であることが示唆された。これらの結果により従来のシステムによる計算時間を約10倍高速化した。本研究では、超小型C-band加速器を搭載した次世代放射線治療装置(三菱重工業MHI-TM2000)のための強度変調照射、及び動体追尾照射に対応した高精度四次元線量計算システムの開発を目的としている。平成22年度(1年目)は、研究計画に従い(1)放射線を発生させる直線加速器ヘッド部分のモデル、(2)マルチリーフコリメータ部分のモデル、(3)マルチリーフコリメータモデルに動体処理を組込んだ強度変調照射モデルについて開発及び検証を行った。(1)について、最適化を行い水ファントム内の軸外線量比及び深部量百分率において1.0%以内の精度で実測と一致するモデルを構築した。また、(2)に関して、マルチリーフコリメータからの漏洩線量、及び線量不均一性の検証を行い実測と2.0%以内の精度で一致した。これより、超小型C-band搭載加速器におけるコミッショニング手法を確立した。これらの成果をまとめ、第52回The American association of physicists in medicine annual meetingにて演題発表を行った。また、申請書提出時の研究計画より進捗状況が良好であったため、先行し初年度にて、マルチリーフコリメータモデルの検証を行った。平成23年度(2年目)は、研究計画に従い(1)動体追尾照射モデル構築、(2)動体追尾照射法における実臨床プランの検証を行った。MLCモデルの線量評価は研究進捗が良好であったため前年度に完了させた。(1)に関して、仮想的にシミュレーションモデルを変形させ肺がんなどの動きが大きな腫瘍を追尾するための線量計算モデルを構築した。構築したモデルを用いて水等価ファントムを用いて検証を行い実測と2.0%以内の精度で一致した。これらの成果をまとめ、第101回日本医学物理学会学術大会に演題発表を行った。(2)に関して、(1)で作成したモデルを用いて実臨床患者における動体追尾照射の線量計算を行った。現在、臨床の場で使用されている汎用の治療計画装置において追尾条件にて線量計算可能な機種がないため、本システムを用いて腫瘍及び周辺臓器の線量評価を行った。従来法と比較して追尾照射では腫瘍への高線量を保ったまま、周辺の正常組織への線量を2030%低減可能であることを定量的に算出した。これらの研究成果は第53回The American society for therapeutic radiology and oncology annual meeting、第24回日本放射線腫瘍学会学術大会、第24回日本高精度外部照射研究会にて報告を行った。当初の研究計画通り動体追尾照射における線量計算システムを開発し、線量検証を行い十分な精度を担保していることを確認した。前年度において動体追尾照射における線量計算システムを開発し精度検証を行った。本年度はこのシステムを用いて臨床症例の線量計算結果を蓄積し四次元放射線治療におけるエビデンスを確立する。
羊胎仔の慢性低酸素環境下におけるANP及びET-1レセプターの局在

妊娠120日前後の妊娠羊を、母獣ケタミン麻酔下で胎仔の頚動脈にポリビニルカテーテルを挿入し、その後胎仔を子宮内に戻した。術後4日以降から、母獣気管内に窒素ガスを投与し、胎仔の動脈血酸素濃度を20mmHgから15mmHgに低下させ、持続低酸素状態とした。胎仔の低酸素状態が24時間経過した後に、当大学動物実験指針にのっとって母獣を安楽死させ、胎仔の頚動脈、冠動脈、腎動脈、肝動脈、大腿動脈をそれぞれ摘出した。得られた検体から組織標本を作製し、免疫染色及びNorthern blots法にてANP及びET-1のレセプターの出現状況を調べた。しかし、恐らく実験の失敗と思われますが、それぞれのレセプターが全く確認できないことがあり、その結果の評価が困難な状況です。免疫染色やNorthern blots法の際のテクニカルな問題と思われますので、今後研究期間を延長させていただき、残っている検体を用いてその点を再検討する予定です。【目的】子宮内発育遅延胎児は悪化した子宮内環境に適応するために、生命維持に重要な臓器のみに血流が増加し、その他の臓器では減少する血流再分配という現象が認められることが多いが、この機序は未だ解明されていない。我々は,羊胎仔に直接ANP及びET-1を投与し、各臓器での血流量の変化を確認することにより、それぞれが血流再分配の原因物質である可能性を報告した。各臓器における血流量の変化の異なる原因の解明として、各レセプターの出現状況を検討した。【方法】妊娠120日前後の妊娠羊4頭を、母獣ケタミン麻酔下で胎仔の頚動脈にポリビニルカテーテルを挿入。胎仔を子宮内に戻した。術後4日以降から、実験群は、母獣気管内に窒素ガスを投与し、胎仔の動脈血酸素濃度を20mmHgから15mmHgに低下させ、持続低酸素状態とした。得られた検体から組織標本を作製し、ラベリングしたANP及びET-1のレセプター抗体を用いて、免疫染色法にてレセプターの出現状況を評価した。【成績】ANP及びET-1レセプターの免疫染色を行ったが、ほとんど染色することが出来なかった。【考察】免疫染色がうまくいかなかった原因として、テクニカルな問題及びレセプターそのものの数が少ない可能性が考えられる。今後、まず保存してある検体を用いて免疫染色の手技そのものの再検討及びNorthern blots法にて各レセプターのmRNAの出現状況を検討する予定です。
ブラックボックス最適化のための不変性を考慮した汎用制約対処法の開発と解析

本研究で対象とする制約付きブラックボックス最適化とは高コストなシミュレーションを通すことでしか目的関数を評価できない,実社会において頻出の重要な問題クラスである.実問題では違反すると目的関数を評価できない物理的な制約や,違反してもシミュレーション上は問題の無いユーザーの要望等の制約がある.単一の種類の制約を対象とした手法はあるが,種類の異なる制約が混在する問題では適用できない場合が多々あり,このような問題では,利用者は試行錯誤を繰り返し,多大な時間とコストを費やしてその問題用の制約対処法を開発していた.本研究では,複数種類の制約が混在する問題でも扱える汎用的な制約対処法を開発していく.本研究で対象とする制約付きブラックボックス最適化とは高コストなシミュレーションを通すことでしか目的関数を評価できない,実社会において頻出の重要な問題クラスである.実問題では違反すると目的関数を評価できない物理的な制約や,違反してもシミュレーション上は問題の無いユーザーの要望等の制約がある.単一の種類の制約を対象とした手法はあるが,種類の異なる制約が混在する問題では適用できない場合が多々あり,このような問題では,利用者は試行錯誤を繰り返し,多大な時間とコストを費やしてその問題用の制約対処法を開発していた.本研究では,複数種類の制約が混在する問題でも扱える汎用的な制約対処法を開発していく.
セルアセンブリ逐次活動による時間の認知と計測のメカニズムの解明

本研究では、海馬のセルアセンブリの逐次活動が実際にどのように時間を計測するのに利用されているのかそのメカニズムを明らかにすることを目的とした。まず、行動課題として、時間の計測を必要とする意思決定課題(インターバル計時課題)を確立した。これは、自由行動下のラットにおいて、数秒から十数秒の時間計測(インターバル計時)を行わせ、その時間の長さによって右か左の報酬場所の選択を行う行動課題である。課題はブロック式とし、ブロック1では5秒と10秒の弁別、ブロック2では10秒と20秒の弁別、ブロック3では再び5秒と10秒の弁別を行うプロトコールとした。このインターバル計時課題を行っているラットのニューロンの活動を観測するため、多チャンネルシリコンプローブを用いた大規模細胞外記録実験を行い、数十個のニューロンを同時に測定する実験を行った。その結果、海馬のニューロンは計時中の経過時間にともない、逐次的な発火活動を行うことを確認した。また、これらのニューロンの活動は、海馬のシータ波(711Hz)に強く影響されており、個々のニューロンはシータ波に対し位相前進を示すことお明らかにした。さらに、ブロック間での神経活動の変化を調べたところ、セルアセンブルの逐次的活動は弁別する時間の長さに対して相対的に変化することが明らかになった。この結果は、海馬の時間細胞の時間受容野は計測する時間の長さに対してフレキブルに伸縮することを示唆しており、海馬における計時のメカニズムを明らかにするうえで重要な知見であると考えられる。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、海馬のセルアセンブリの逐次活動が実際にどのように時間を計測するのに利用されているのかそのメカニズムを明らかにすることを目的としている。昨年度は、行動課題として、時間の計測を必要とする意思決定課題(インターバル計時課題)の開発を行った。行動課題は、自由行動下のラットにおいて、数秒から十数秒の時間計測(インターバル計時)を行わせ、その時間の長さによって右か左の報酬場所の選択を行う行動課題である。昨年度は行動システムと適切なトレーニング方法を開発することにより、ラットは安定して行動課題を行えるようになった。また、このインターバル計時課題を行っているラットのニューロンの活動を観測するため、多チャンネルシリコンプローブを用いた大規模細胞外記録実験を行った。このシリコンプローブを複数用いることにより、自由行動中のラットから数十個の海馬ニューロンの活動の同時記録データが得られた。このインターバル計時課題において、海馬で時間経過がどのようにセルアセンブリの活動として観測されるか、また、その海馬の情報を、線条体など他の時間計測にかかわる脳領域がどのようにして読み取って、時間に認知に利用しているのかを、ニューロン活動パターンの相互作用解析を行うことにより今後明らかにしていく。脳波(局所電位)の位相同期などがインターバル計時における脳領域間の情報のやりとりに関係しているかどうも数理的に解析していく。昨年度は、行動実験の開発と電気生理学記録実験において大きな進展があった。まず、行動実験として、時間の計測を必要とする意思決定課題(インターバル計時課題)の開発を行った。この課題では、ラットはトレッドミルの上を決められた期間走行し、その期間が短い場合は左方向のポートで、期間が長い場合は右方向のポートで報酬が得られる時間弁別課題である。課題はブロック式とし、ブロック1では5秒と10秒の弁別、ブロック2では10秒と20秒の弁別、ブロック3ではふたたび5秒と10秒の弁別を行う課題を設計した。この課題を行うことにより、海馬時間細胞が、時間弁別課題にどうかかわっているか、また時間の表現として絶対時間を表現しているのか相対時間を表現しているかを検証することができる。また、昨年度はこのインターバル計時課題を行っているラットの海馬にシリコンプローブ電極を埋入することにより、数十個のニューロンの活動を同時に記録することに成功した。これらの記録したニューロンのうち、多くの割合が時間情報に対する表象を有していることが確認された。予備的な解析により、これらの時間細胞は、上記の実験パラダイムに対し、相対的な時間を表象していることが示唆された。

さらに、ブロック間での神経活動の変化を調べたところ、セルアセンブルの逐次的活動は弁別する時間の長さに対して相対的に変化することが明らかになった。この結果は、海馬の時間細胞の時間受容野は計測する時間の長さに対してフレキブルに伸縮することを示唆しており、海馬における計時のメカニズムを明らかにするうえで重要な知見であると考えられる。今後は、上述した行動実験および電気生理学記録実験の例数を増やすことで、より多くの神経細胞の活動を観測する予定である。また、より精度の高いデータ解析法を開発することにより、時間表現の相対性について詳細な定量を行うことを目標とする。さらに、これらの時間細胞が、休息中のリップル波発生時に再現活動を行っているかどうかも検討していく。以上に加えて、線条体の神経活動も同時に記録することにより、部位間で時間情報をどのようにやり取りしているかを研究していく。29年度が最終年度であるため、記入しない。
マルチターゲット脂質プロファイリングによる大腸がんの早期診断バイオマーカ―探索

大腸がんはがん死因の上位に位置しており,日本においても,近年,男女ともに大腸がんの増加が目立っている.このことから,大腸がんの完治を目指すため,その早期発見が求められている.脂質は,多種多様な構造を持ち,生体膜の構成成分であると同時に,一部の脂質分子においては生理活性シグナル分子として重要な働きを担っている.本研究では,液体クロマトグラフィー三連四重極型質量分析計による網羅的脂質分析手法を確立した.さらに,腸炎の発症,腸炎から大腸がんへの進展までの一連の疾患の進行に伴う脂質分子種の変動をマウスモデル,および大腸がん患者の臨床検体を用いて評価し,大腸がんの早期バイオマーカー候補を見出した.脂質は、多くの分子種が存在し、様々な重要な生理機能を果たしているが、個々の分子種とがんの発症機構との関連性はまだよく分かっていない。そこで本研究では、質量分析計を用いたマルチターゲット脂質プリファイリング法により、大腸がんの発症により変動する脂質分子種を見出すことを目的とする。平成25年度では、昨年度の炎症性腸疾患モデルであるIL-10遺伝子欠損マウスを用いた網羅的脂質分子種のプロファイル結果を踏まえ、新たに、脂質メディエーターの分析系構築を行った。一般的に炎症性作用を示すアラキドン酸(AA)カスケードのプロスタグランディンやロイコトリエン、トロンボキサンなどのω-6脂質メディエーター、および、ドコサヘキサエン酸(DHA)由来の抗炎症性作用を示すプロテクチンなどのω-3脂質メディエーターを測定対象とした。脂質メディエーターは微量生理活性物質であることから、試料の前処理方法の最適化および分析系の高感度化が必要であった。そこで固相抽出精製、および、LC/MS/MSシステムへの大量導入法を確立することで微量な組織(脳・肝臓・小腸・大腸)や体液中(ヒト血清)からの網羅的脂質メディエーター分析を達成した。続いて、10週齢の野生型およびIL-10遺伝子欠損マウスの腹水および大腸組織の脂質メディエーターの分析を実施した。その結果、IL-10遺伝子欠損マウスは野生型マウスと比べて炎症性作用を示すプロスタグランジンD2が大腸組織において統計学的に有意に上昇(2.8倍)していることが示された。また、抗炎症作用を示すプロテクチンD1においても、IL-10遺伝子欠損マウスは野生型マウスよりも産生量が1.5倍程度上昇した。しかしながら,プロテクチンD1の内生量はプロスタグランジンD2と比べて100分の1程度であり、さらに、プロテクチンD1の上昇率はプロスタグランジンD2よりも低値を示した。大腸がんはがん死因の上位に位置しており,日本においても,近年,男女ともに大腸がんの増加が目立っている.このことから,大腸がんの完治を目指すため,その早期発見が求められている.脂質は,多種多様な構造を持ち,生体膜の構成成分であると同時に,一部の脂質分子においては生理活性シグナル分子として重要な働きを担っている.本研究では,液体クロマトグラフィー三連四重極型質量分析計による網羅的脂質分析手法を確立した.さらに,腸炎の発症,腸炎から大腸がんへの進展までの一連の疾患の進行に伴う脂質分子種の変動をマウスモデル,および大腸がん患者の臨床検体を用いて評価し,大腸がんの早期バイオマーカー候補を見出した.多くの疾患はタンパク質の活性異常による代謝制御の乱れで生じる場合が多いと考えられているため、代謝物総体を捉えるメタボロミクスは予期せぬ大発見をもたらす可能性を秘めている。疎水性代謝物である脂質は、多くの分子種が存在し、様々な重要な生理機能を果たしているが、個々の分子種とがんの発症機構との関連性はまだよく分かっていない。平成24年度は、マルチターゲット脂質プロファイリングを実施するために、リゾリン脂質(LPC, LPE)、リン脂質(PC, PE)、遊離脂肪酸などを測定対象とした超高速液体クロマトグラフィー/質量分析(UHPLC/MS/MS)分析システムを開発した。続いて、確立した分析手法において堅牢性が担保されるかどうかを、生体組織や血清サンプルを用いて検証した。検証試験には、野生型マウスから採取した大腸組織、血漿、ならびに、ヒト血清を使用した。その結果、マウス大腸組織で253種、血清中で226種、ヒト血清から218種の脂質が同定され、定量性の精度を示すバラツキも良好な値(RSD15%以内)を示した。ことから、当該分析手法は、動物組織や臨床検体に適応可能な堅牢性の高い脂質プロファイリングであることが示された。さらに、炎症性腸疾患モデルであるIL-10遺伝子欠損マウスを用いて、腸炎発症における脂質分子種のプロファイルについて検討した。その結果、大腸組織と血漿中で共通して有意に変動した代謝物は15種類あり、その中には、DHA (22:6)やアシル基にDHAをもつPCなど、DHA関連代謝物が多く存在した。このことは、IL-10の欠損に伴う腸炎の発症とその慢性化に、DHA代謝が強く関与していることを示唆している。多くの大腸癌における発癌形式は、多段階発がんであることが知られている。すなわち、様々な遺伝子異常の蓄積によって正常組織からがん組織へ移行すると考えられており、大腸がんの場合、APC遺伝子・K-ras遺伝子・DCC遺伝子・P53等の遺伝子異常が同定されている。

APCタンパクは通常細胞質内でβ-cateninと結合する事によってautophagosomeにより自己消化されます。その結果wnt signalを負に制御していると考えられています。しかし、APC遺伝子変異によってβ-cateninが細胞質内で過剰に蓄積され、恒常的に核内移行することによりWnt pathwayが活性化される。その結果、wnt pathway標的タンパクが過剰に発現し異常な細胞増殖に繋がると考えられている。従って、APC遺伝子異常は大腸がんの発がんにおいて重要な働きをしていると考えられている。そこで、平成26年度は、大腸発がんモデルAPCmin/+マウスを用いたマルチターゲット脂質プロファイリングを実施することで、APC遺伝子変異が脂質代謝に与える影響を詳細に調べた。野生型マウスとAPCmin/+マウスの血清脂質プロファイリングを行った結果、大腸がんの発症に伴い、数種のリン脂質が統計的に有意に変動した。そこで、次に、大腸がん患者血清のリピドーム解析を実施した。その結果、健常者と比べて数種の脂質分子種において有意な変動を示した。最終的にAPCmin/+マウス血清の結果、および、大腸がん患者血清の結果を比較したところ、いくつかの脂質分子において共通して変動していることが分かり、これらの脂質分子は信頼性の高い大腸がんバイオマーカー候補に成ると考えられる。メタボロミクス平成25年度では、不飽和脂肪酸から生合成される生理活性代謝物、脂質メディエーター類の包括的分析手法を確立し、昨年度に引き続きIL-10遺伝子欠損マウスの代謝解析を行った。その結果、慢性炎症時には、炎症性作用を示すプロスタグランジンD2と抗炎症性作用を示すプロテクチンD1生産量のアンバランスが顕著に生じており、昨年度IL-10遺伝子欠損マウスの代謝解析により見出したDHA関連脂質分子の変動との関連性が明らかとなった。また、今年度は大腸がん患者血清のリピドーム解析にも着手した。予備試験のデータ解析を行ったところ、健常者と比べていくつかの脂質分子種において有意な変動を示した。最終年度においては、大腸がん患者血清の検体数を増やし、感度、確度の高い脂質バイオマーカーの探索を実施する予定である。以上のことから、実験計画の進歩状況としては、「おおむね順調に進展している」と判断している。平成24年度では、マルチターゲット脂質プロファイリング分析手法を確立し、マウス、あるいは、ヒト試料に適応可能であることを示した。さらに、炎症性腸疾患マウスモデルである、IL-10遺伝子欠損マウスを用いて、大腸、あるいは、血漿中の脂質プロファイリングも終了した。長期にわたる炎症が大腸がん発症を誘導することが知られていることから、本プロファイリング結果は、大腸がんの発症に強く関与する、代謝物、あるいは、代謝経路を特的できる可能性を示唆している。特に、DHA関連代謝物が有意に変動したことから、今後の研究において、最も着目すべき代謝経路であると考えている。平成26年度では、「大腸発がんモデルAPCmin/+マウスを用いたマルチターゲット脂質プロファイリング」および「ヒト大腸がん患者の脂質メタボローム解析」を実施する。そして、モデル実験
子ども用デ-タベ-スソフトと学習用通信ネットワ-クシステムの開発に関する研究

本研究プロジェクトでは,小・中学校の理科や社会で学習する学習項目のうち,子ども達が自ら資料を収集したり,デ-タを整理していく学習場面に対し,コンピュ-タ間で情報をお互いに交換できるような統合的な環境を整備しするとともに、児童・生徒が科学的な探究や情報活用に基づく考察をコンピュ-タを活用しながら進めていけるカリキュラムを開発することを2年間の実現目標に置き,研究計画をたてた。実際に開発された環境は,子ども自ら操作し,デ-タを分析したり,グラフに表示したりできるような子ども用デ-タベ-スソフト「いち・に・さん」と,子どもどうしでメッセ-ジ交換できる通信ソフト「かわらVAN(ばん)」である。研究経過のうち,上記ソフトウェアの開発のプロセスや,実践事例については,1991年3月に第1年次の中間報告書の中で報告し、2年次の成果については、最終報告書として、ソフトウェアの開発環境、開発されたソフトのマニュアル、開発されたカリキュラムの実践事例にわけ、報告した。開発されたソフトのうち「子ども用デ-タベ-ス(いち・に・さん)」については,本研究で評価されたアイデアをもとに,日本IBM社が商品化を企画し,「教育用電子地図帳(マップDB:PCー98版とIBM日本語DOSV版)」として商品化されることになっている。また,かわら版や,通信まわりのソフト,NARUTOーNETとの接続のためのソフト,PRETTY BASICなどの本研究で開発された多くの関連ソフトウェアは,協力者に無償で配布できるフリ-ウェアとして希望者に配布できる。本研究は,教育現場で,子ども達がコンピュ-タを自らの情報処理の道具として活用することで,学習をより楽しく,より深くできるような支援環境を作りだすことが大きな目標であったが,2年間の研究で,一応の成果を得たものと考える。本研究は、小中学校の理科や社会の教科の中で、子どもたちが自らデ-タを収集、加工、伝達していけるような学習場面を取り出し、グル-プ間、学級間、学校間で観測デ-タ等をお互いに交換できるような統合的な通信ネットワ-ク環境を整備して、(a)児童、生徒が科学的な探求や情報活用に基づく考察を進めていけるカリキュラムと教材を開発すること、および(b)それを支援する共同学習用コンピュ-タネットワ-クシステムのソフトウェアを開発することを目的としている。平成2年度は、子ども達が操作できるインタ-フェイスをもった学習用の道具を開発することに主眼をおいた。すなわち、(1)子どもが理科や社会の学習で、自ら操作し、デ-タを分析したり、グラフに表示したりできるようなデ-タベ-スソフト「いち、に、さん」を開発した。これをPCー9800,IBM30Zに移植し利用できるようにした。(2)子ども用通信ソフト「かわらVAN」を開発した。(3)上記のシステムと本研究機関のホストコンピュ-タとを結合して、理科や社会の学習資料のデ-タベ-スをサ-ビスしたり、子どもたちが地域のデ-タを収集してホスト上に構築できるようにした。(4)尼崎、鳴門、横浜、小田原の4小学校を協力校として、4年生向けのカリキュラムを企画し、実験授業を開始した。この実験は、5年生まで継続される。本研究の目的としていたソフトウェアの開発、および移植は平成2年度中に終了したので、次年度は協力校を数校ふやし、デ-タベ-スソフトや通信ソフトを活用して行える具体的カリキュラムを小、中の協力校で実践しながら、問題点を探る予定である。コンピュ-タを学校教育に活用する方法の1つとして,日常的に行われている理科や社会など日常的学習活動のなかで子ども達が情報を収集したり,加工したり,伝達するための道具として利用する方法が考えられる.

このようなことを可能にするために、本研究プロジェクトでは,子ども達が自ら資料を収集したり,デ-タを整理していく学習場面に対し,コンピュ-タ間で情報をお互いに交換できるような統合的な環境を整備しするとともに、児童・生徒が科学的な探究や情報活用に基づく考察をコンピュ-タを活用しながら進めていけるカリキュラムを開発することを実現目標に置き,研究をすすめてきた.第2年次においては,第1年次に開発したソフトウェアをさらに現場での実用性を高めるために,つぎのようにした。1.子ども用ソフトウェアを開発するための条件を検討し、基本モジュ-ルを整備した。また、統一したインタ-フェイスによりソフトを開発するための支援システムを開発した。2.子ども用デ-タベ-スの第1版では,会話のためのコマンド入力は,ファンクションキ-の利用を意識したものとしたが,第2版では,1)のようなインタ-フェイスとし,プルダウンメニュ-の版に改良した.3.教育現場間あるいは学校内でネットワ-クを構成し,情報交換を行うための技術的問題を検討し、モデルシステムを開発した。4.昨年につづき、小学校で多くの実践研究を実施した。この事例は,システムの実用性の評価や,ソフトウェア改善の情報を得るのに役立った.
非ステロイド系消炎剤によるCD44を介した頭頚部癌遠隔転移抑制効果の基礎的研究

がんの浸潤・転移を抑制するNSAIDsのCD44連続的切断に対する影響について検討した。Sulindac sulfide(SS)、Meclofenamic acid(MA)処理でCD44切断亢進が確認された。これら薬剤によるCD44連続的切断のうち細胞外領域切断はmetalloprotease阻害剤により、膜貫通領域切断はγ-secretase阻害剤により抑制された。また、MAの切断活性はEGTA、PKC阻害剤では抑制されなかった。これら薬剤処理後、経時的にCD44の発現動態を検討したところ、scrape処理では全長蛋白のturn overが確認されたのに対し、NSAIDs処理では時間経過と共にその発現量は低下した。本実験結果は、その癌転移抑制作用の一機序として、接着分子の細胞膜上での切断、及び新規合成の抑制による機能的な接着分子の発現低下を介していることを示唆している。接着分子CD44は癌細胞の増殖能、浸潤・転移能に関与することが多くの研究によって示されている。我々はその機能を制御する機構のひとつとして、カルシウムシグナルやPKC活性による細胞外領域切断機構に着目し、がんの浸潤・転移を抑制するNSAIDsのCD44連続的切断に対する変化について検討した。CD44連続的切断に対する影響を各種NSAIDsにおいて検討したところSulindac sulfide(SS)、Meclofenamic acid(MA)処理で切断亢進が確認された。NSAIDsによる癌転移抑制についてはすでに報告されているが、その分子生物学的機序はいまだ不明な点が多い。我々はその機能を制御する機構のひとつとして、カルシウムシグナルやPKC活性による細胞外領域切断機構に着目し、がんの浸潤・転移を抑制するNSAID sのCD44連続的切断に対する変化について検討した。
宗教ロビーと政治の総括的関係モデル-現代日本における神道系組織の事例を通じて

昨年度神道政治連盟国会議員懇談会のメンバーとのインタビューを通じて得られた情報の比較の対象として日本国会議員ほぼ全員(600人以上)にアンケートを郵送した。120人からの回答を得た。また、アメリカ合衆国におけるキリスト教系ロビーと政治の関係について情報を収集するためにシカゴで行われたアメリカ政治学会研究大会に出席した。そこで、アメリカの学者と研究の打ち合わせもできた。その結果、これまで見てきた3つの民主主義国家において宗教と政治の関係には強さの点で差があることが分かった。現在、両者の間に最も強い関係が存在しているのはアメリカであり、最も弱いのはフランスである。日本はその間の強さを見せている。しかし、強さの点で差があるものの、その関係の本質は同じだという結論に至った。したがって現代民主主義国家における政治と宗教の関係モデルの構築が可能であると思われる。そのモデルの論理的展開の要約は次の通りである:1.元来宗教と政治は一体であった。2.超越性との親しさは権力に結びつき、また、権力と共に発生する服従にも繋がる。そして超越の経験を共有することは社会の構成員の絆を強化するものである。政治家はそれらの事実を無自覚だが認識している。3.それと平行して近代国家において統一的な国民感情を創造するあるいは、維持するために市民宗教が形成される。4.ところで宗教は本質的に保守的である。5.その理由で多数派の宗教は自然に保守政党の味方になる。6.更に宗教の伝統に対する強い執着は宗教団体の国家主義的な立場に繋がる可能性が高い。7.そのためイデオロギーの面で重なる部分の多い保守政党は多数派の宗教団体に好意的になる。8.しかしながらそのイデオロギーの寄り沿いは保守政党にとって完全に非打算的なものではない。なぜなら、更に保守的になった社会の構成員は、選挙の時に自然にその政党に投票するからだ。神道政治連盟と同団体の国会議員懇談会に所属している議員の間に、どのような関係がどの程度あるか、また様々な政治問題に関して神道政治連盟と懇談会所属メンバーの立場がどの程度一致しているかということを把握するために10人の国会議員と面会した。その内には、懇談会会長である綿貫民輔氏、副会長である亀井久興氏も含まれる。そして、2000年に「神の国」発言をした懇談会顧問でもある森喜朗元首相との面会も実現できた。それ以外にも、自由民主党の週刊および月刊機関紙を購読し、その党の政治的な主張を検討した。収集したデータはまだ整理の途中であるが、自由民主党の党としての方針は神道政治連盟の右翼的な主張と一致している点が多い。しかし、同党の議員の間では、神道政治連盟の政治的な主張に対して立場のばらつきが見られる。面会した10人の国会議員の間で、アニミズムに由来する神道の感覚および象徴天皇制度が日本文化の土台であるという考えは共通しているが、首相および天皇の靖国神社公式参拝の是非という問題に関しては慎重派と賛成派に分かれている。各世論調査の検討(政府発行の『世論調査年鑑』等)を通じて神道政治連盟のイデオロギーの日本社会への浸透度も調べた。さらに、既存の世論調査の中で見つけることのできないデータについては三重大学、岐阜大学、和歌山大学、中央大学の各大学の教官の協力を得て、学生やその学生の親戚を対象にした世論調査も行った(回答数800程度)。データはまだ整理の途中であるが既に言えるのは、全体的に神道政治連盟が主張している諸政治問題に関する立場は今のところでは世論にあまり深く浸透していない。問題によってばらつきがあるが、神道政治連盟の立場に近い世論の割合は1,2割であろう。
慢性肝疾患の門脈域濾胞様リンパ球集簇巣内の免疫応答:co-stimulator moleculeを介したリンパ球活性化の解析

慢性肝疾患に認められる門脈域濾胞様リンパ球集簇巣内の臨床的意義ならびに免疫応答について検討し、以下の新たな知見が得られた。尚、検討には診断時に施行した肝生検により得られた肝組織および経過観察中に採血が必要と思われた際に得た血清の一部を用いたが、その際に採取した検鯛の一部を本検討に用いることを患者に説明し承諾を得た。1門脈域濾胞様リンパ球集簇巣の臨床的意義の検討慢性C型肝炎においては他の慢性肝疾患に比較して門脈域濾胞様リンパ球集簇巣が高頻度にみられ、自己抗体産生細胞とされるCD5陽性B細胞が濾胞様構造内に認められることが明らかになった。また、濾胞様構造内にCD5陽性B細胞が認められる症例では、認められない症例に比し自己抗体の出現率が有意に高く、また血清免疫グロブリン値が高い傾向が認められた。2門脈域濾胞様リンパ球集簇巣内のCD5陽性細胞の補助分子発現の検討慢性C型肝炎の門脈域濾胞様リンパ球集簇巣内に認められるCD5陽性B細胞のCD40分子発現について検討中であるが、これまでのところCD40分子の発現は認められず、現在、染色方法の再検討を行っている。
無給油型トライボセラミックスの開発

油潤滑が適用しにくい極低温、高温、真空下などの極限環境で適用できるトライボロジー(摩擦、摩耗)特性に優れる無給油型のトライボセラミックスの開発を目的として、前年度は多孔質炭化ケイ素に低揮発性のフッ素系油を含浸した含油多孔質炭化ケイ素の摩擦摩耗特性と負荷条件との関連を検討した。その結果通常の緻密質炭化ケイ素に比較して含油多孔質炭化ケイ素は荷重依存性のない優れた摩擦摩耗特性もつことが明らかにされた。本年度は引き続き含油多孔質炭化素の摩擦摩耗特性の摩擦速度依存性を検討し、このセラミックスが速度依存性もない優れた特性を示すことがわかった。以上のことから含油多孔質炭化ケイ素は従来の緻密質炭化ケイ素に比べて、荷重や摩擦速度の摺動条件に依らない優れたトライボロジー特性をもち、極低温などの環境で適用し得る無給油型のトライボセラミックスとして実用が期待される結果が得られた。以上の結果を踏まえて、本年度はさらにフッ素系油の替わりに気孔率の異なる二種類の多孔質炭化ケイ素の開気孔部にグラファイトを充填したものについて、それらの摩擦特性を従来の緻密質炭化ケイ素と比較検討を行なった。その結果、グラファイト充填多孔質炭化ケイ素の摩擦係数は緻密質炭化ケイ素よりも安定した低い値であった。また摩擦特性は気孔率によって異なり、気孔率とこれに伴うグラファイト充填率を調整することによってグラファイト/炭化ケイ素系複合トライボセラミックスの実現の可能性が確認された。今後、上記の試料について実用にそくした極低温や真空などの摩擦環境での摩擦摩耗特性を検討するとともに、新たにカーボン/多孔質炭化ケイ素系複合材を焼成調製して種々の無給油型トライボセラミックスの完全なる実現を目指す。無給油型トライボセラミックスの開発のための最初の研究として、ピン/ディスク型摩擦試験機を用いて、含油多孔質炭化ケイ素と一般の緻密質炭化ケイ素の摩擦摩耗特性を次の(1)(4)の項目について比較検討した。(1)荷重依存性、(2)滑り速度依存性、(3)気孔率の影響、(4)ピンおよびディスクの組合せによる効果。その結果、ディスクに潤滑油(パ-フルオロポリエーテル)を含浸させることによって、緻密質炭化ケイ素同士に比較して荷重依存性および滑り速度依存性のない経時安定性のある低い摩擦係数と低い比摩耗量が得られた。また摩擦表面の走査型電子顕微鏡観察によるモルホロジーから、摩擦材料に含油多孔質炭化ケイ素を適用することによって、緻密質炭化ケイ素同士より表面損傷が少ないことが明らかとなった。多孔質炭化ケイ素の気孔率に関しては1520%以上の気孔率で上記の良好な摩擦摩耗特性が得られることが判明した。以上の結果から、無給油型トライボセラミックスの開発の可能性が得られた。以上の結果を踏まえて、気孔率の異なる2種の多孔質炭化ケイ素ディスクに、一定滑り速度、一定荷重および一定摩擦時間の条件にて、グラファイトを摺動させ、グラファイト充填多孔質炭化ケイ素を作製した。その結果、無充填のものに比較して著しく低い、しかも経時安定性のある摩擦係数が得られた。しかし油含浸に比較して、グラファイト充填はディスクの表面層の充填であるため摩耗の点では不十分であることが解った。したがって今後無給油型トライボセラミックスとして、セラミックスの複合化を計画し、目的を達成するための計画を計っている。油潤滑が適用しにくい極低温、高温、真空下などの極限環境で適用できるトライボロジー(摩擦、摩耗)

特性に優れる無給油型のトライボセラミックスの開発を目的として、前年度は多孔質炭化ケイ素に低揮発性のフッ素系油を含浸した含油多孔質炭化ケイ素の摩擦摩耗特性と負荷条件との関連を検討した。その結果通常の緻密質炭化ケイ素に比較して含油多孔質炭化ケイ素は荷重依存性のない優れた摩擦摩耗特性もつことが明らかにされた。本年度は引き続き含油多孔質炭化素の摩擦摩耗特性の摩擦速度依存性を検討し、このセラミックスが速度依存性もない優れた特性を示すことがわかった。以上のことから含油多孔質炭化ケイ素は従来の緻密質炭化ケイ素に比べて、荷重や摩擦速度の擢動条件に依らない優れたトライボロジー特性をもち、極低温などの環境で適用し得る無給油型のトライボセラミックスとして実用が期待される結果が得られた。以上の結果を踏まえて、本年度はさらにフッ素系油の替わりに気孔率の異なる二種類の多孔質炭化ケイ素の開気孔部にグラファイトを充填したものについて、それらの摩擦特性を従来の緻密質炭化ケイ素と比較検討を行なった。その結果、グラファイト充填多孔質炭化ケイ素の摩擦係数は緻密質炭化ケイ素よりも安定した低い値であった。また摩擦特性は気孔率によって異なり、気孔率とこれに伴うグラファイト充填率を調整することによってグラファイト/炭化ケイ素系複合トライボセラミックスの実現の可能性が確認された。今後、上記の試料について実用にそくした極低温や真空などの摩擦環境での摩擦摩耗特性を検討するとともに、新たにカーボン/多孔質炭化ケイ素系複合材を焼成調製して種々の無給油型トライボセラミックスの完全なる実現を目指す。
水分供給パターンと栄養塩量の変化が植物の生産および群集構造に与える影響の解析

給水パターンと栄養塩量の相互作用が草本植物の群集構造決定に果たす機能の解明のために、申請計画上の課題3.群集構造に与える影響を検討した。課題3では、給水パターン、栄養塩量、密度の3要因を設定する栽培実験をおこなった。科研費によって特注した、実験処理に適した栽培容器を用いた。シロツメクサ、ヘラオオバコ、ハコベ、ギョウギシバ、ホソムギの5種を材料とし、要因に対する群集構造の変化を解析した。その結果、高密度の群集は、富栄養では高頻度給水で5種の現存量が均等で、低頻度給水より均等度が高かった。貧栄養では低頻度給水で均等度が高かった。低密度の群集では水不均質性の均等度に対する影響は認められなかった。給水パターンは群集構造に影響し、その影響は密度・栄養塩量との相互作用によって変化することが示唆された。この結果は、英語論文としてまとめ、助成により英文校閲を受け、現在投稿準備中である。また、2011年度の生態学会において発表し、ポスター発表優秀賞を受賞した。加えて、2010年度に検討した課題1.植物個体群に与える影響の種間差異、課題2.植物種間競争に与える影響について、英語論文を作成した。課題1については学術誌Journal of Plant Researchで発表した。課題2については現在投稿準備中である。給水パターンと栄養塩量の相互作用が草本植物の群集構造決定に果たす機能の解明のため、申請計画上の課題1.植物個体群に与える影響の種間差異、課題2.植物種間競争に与える影響を検討した。課題1では、給水パターン、栄養塩量、密度、種の4要因を設定する栽培実験をおこなった。ホソムギ、ギョウギシバ、シロツメクサ、ヨモギを材料とし、要因に対する反応を比較した。その結果、高頻度に給水する処理で、低頻度に給水する処理よりも、個体群重量が増加する反応が種間で共通することが明らかになった。その一方で、ホソムギでは富栄養条件下で、シロツメクサは高密度条件下で給水パターンの影響が大きく、給水パターンに対する反応の大きさや他の要因(栄養塩量・密度)との相互作用に対する反応には種間で差異があることが示唆された。現在、結果を英語論文としてまとめ、助成により英文校閲を受け投稿準備中である。課題2では、給水パターン、栄養塩量、密度の3要因を設定する栽培実験をおこない、ホソムギーシロツメクサの種間競争に与える影響を検討した。科研費によって特注した、実験処理に適した栽培容器を用いて実験をおこなった。その結果、ホソムギ-シロツメクサの種間競争では、高頻度に給水する処理で、低頻度に給水する処理よりも、競争関係の優劣の差が小さくなることが示唆された。給水パターンに対する反応の種間差によって、種間競争関係に給水パターンが影響しうることが明らかになり、給水パターンが複数の種間競争の結果である群集構造に影響する可能性が示唆された。この結果は、2009年度の生態学会において発表し、現在英語論文作成のために解析をおこなっている。
発病前検体を用いた網羅的DNA/RNA解析による川崎病の病原体の同定

川崎病の病因は未だ不明である。我々は、最近、川崎病発病時のCD4+CD25+Foxp3+制御性T細胞(Treg)が極度に減少していることを発見した。一方、従来の研究では、川崎病発病時の30%の患児から市中感染でしばしばみられる病原体が検出される。以上から、川崎病の発病以前に、Tregを減少させる感染症が起こり、さらに川崎病の発症には第2の感染症が関わるとの仮説を持つにいたった。しかしながら、この仮説に基づいて、収集できた発病前あるいは発病直後と考えられる4検体について全DNA/RNA解析を行ったが、いずれについても病原体の確定には至らなかった。川崎病研究の最大の障害は、川崎富作博士の報告以来半世紀が経過したにもかかわらず、病因が不明な点である。疫学情報からは感染症の関与が示唆される。一方、従来の研究では、川崎病診断時の30%の患児から市中でしばしばみられる病原体が検出される。以上から、川崎病の発病以前に、Tregを減少させる何らかの感染症が起こり(イベント1)、さらに川崎病の発症には第2の感染症が関わる(イベント2)との仮説をもつに至った。今回の研究の目的は、BCG接種部位の発赤・腫張を手がかりに川崎病の発病前の検体と診断確定時に採取した検体を対象に、次世代シークエンサーを用いて網羅的な全DNA/RNAの解析をおこない、既知あるいは未知の病原体を同定して、上記の仮説を証明することである。研究計画について、名古屋大学医学部の倫理委員会で承認を得た。名古屋大学医学部附属病院の関連病院においても、各施設の倫理委員会で承認を得て、検体の収集を開始した。これまでに、発病前検体として4検体を収集したが、2検体はその後川崎病の診断基準を満たさなかった。川崎病の診断基準を満たした2検体について核酸を抽出し、1検体については次世代シーケンサーによる読み取りを完了した。結果を解析中である。川崎病研究の最大の障害は、川崎富作博士の報告以来半世紀が経過したにも関わらず、病因が不明な点である。一方、従来の研究では、川崎病発病時の30%の患児から市中でしばしばみられる病原体が検出される。以上から、川崎病の発病以前に、Tregを減少させる何らかの感染症が起こり(イベント1)、さらに川崎病の発症には第2の感染症が関わる(イベント2)との仮説を持つにいたった。今回の研究の目的は、BCG接種部位の発赤・腫脹を手掛かりに川崎病の発病前の検体と診断確定時に採取した検体を対象に、次世代シークエンサーを用いて網羅的な全DNA/RNAの解析を行い、既知あるいは未知の病原体を同定して、上記の仮説を証明することである。収集した検体のうち、発病前・あるいは発病直後と考えられる4検体について全DNA/RNAシーケンス解析を行った。得られた配列のうち、ヒト由来の配列、並びに次世代シーケンス解析のアーティファクトと考えられる配列を除外したのち、データベースに基づく既知病原体の検出と、de novoアセンブルに基づく未知病原体の検出を行った。しかしながら、いずれについても病原体の確定には至らなかった。これまでに、発病前検体として4検体を収集した。結果を解析中である。本研究において、発病前検体が得られるかが最大の懸念であったが、順調に検体の収集は進んでいる。解析系も立ち上がり、順調な進展が得られていると考えられる。小児科学検体の収集を継続し、データの解析を進める。検体の収集については、名古屋大学医学部附属病院の関連施設でも予想以上の検体が収集されているが、さらに解析症例数を増やし、よい検体を確保するために、愛知県四大学小児科の合同プロジェクトとしての検体収集を開始する。

多くの検体が得られた場合にも対応できる使用額を初年度に設定したため。得られる検体数を予想することが難しい研究計画のため、この使用額を設定する必要があった。現在の検体収集状況から予想すると、これから多くの検体が得られるため、それらの解析に使用していく。