hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マラルメと象徴主義を中心とする無意識の詩学の生成とその展開

そして、モダニズムの父とされるマラルメとセザンヌを、自然の観点から分析することで、技巧の限りを尽くす抽象芸術とみられがちな両者の作品が、実は自然や無意識を背景に成り立っていたことを示した(「自然が与えるモデルニテーセザンヌとマラルメ」)。「マラルメの無意識の詩学の解明、そして象徴主義文学者・芸術家によるその展開」を捉えるという本研究全体の目的から見て、本年度は文学に隣接する芸術分野の考察が中心であった。しかし、文学固有の無意識の問題についても、海外出張などにより現地で収集された貴重な資料の読解を進めており、次年度にはメーテルランクといったベルギー象徴派論や、マラルメの弟子に当たるジイドやヴァレリーの初期作品分析などを発表する予定である。本年度の主要な研究としては、マラルメの未完の作品『アナトールの墓』を分析した論文「マラルメの「喪の日記」?ー『アナトールの墓』分析」が挙げられる。「書物」のプロジェクトの父子間の継承、喪の時間、父母による息子の死のとらえ方の違いという三つの視点から、マラルメの無意識を指す「自己」という概念が、先祖から子孫に伝わる遺伝的要素に特徴づけられているという、新しい論点を提出した。30000字を超えるこの論文は、研究課題「マラルメと象徴主義を中心とする無意識の詩学の生成とその展開」に対する一つの答えを示す論文であるとともに、今後、象徴主義の時代の他の詩人・作家・芸術家の「無意識」の概念を考察するうえでの基盤となる論文であると考えている。また前年度に引き続き、世紀末の知られざる女性作家ラシルドの読解・翻訳を進め、『自然を逸する者たち』の抄訳と「アンティノウスの死」の全訳を、『古典BL小説集』(笠間千浪編、平凡社ライブラリー)に発表した(発行は2015年5月)。両方の作品とも男性の同性愛を描く、現代の視点から言えば「BL」の元祖とも言える作品であり、ラシルドを現代日本の文化現象の一潮流との関連から紹介する形となった。また、無意識をジェンダーや「自然」との関係から考察するための土台となる作品を、翻訳できたように思う。論文という形にはいまだ至っていないが、文学とは別の枠組みで世紀末の時代を生き、無意識の表象を提示していた芸術運動や美術批評について、読解を進めた。これについては、本研究課題を引き継ぐ研究課題「美術批評から見たフランス象徴主義の言説の場の再編成」(若手研究(B)、2015年-2018年)によって、成果を発表していく予定である。フランス文学・表象文化論19世紀末のフランスにおける無意識の美学について、本年度はとりわけ20世紀の文学・芸術思潮との比較をすることができた。同時代の文学作品を論じることは少なかったが、その読解は進んでおり、研究全体の進捗に支障はないと考えている。19世紀末のフランスにおける無意識の美学について、本年度はとりわけジェンダーと動物性といった観点から新領域を切り開くことができたように思う。またマラルメ研究にも新たな見地を付け加えることができた。当初目標として掲げていた同時代のジイドやヴァレリーの文学作品の読解も進んでおり、研究全体の進捗に支障はないと考えている。19世紀末のフランスにおける無意識の美学について、本年度はとりわけ絵画芸術や舞踊芸術における分析が進んだ。文学作品を論じることは少なかったが、その読解は進んでおり、研究全体の進捗に支障はないと考えている。文学作品の分析を進めるため、フランス国立図書館のデジタル資料や東京大学図書館所蔵資料から取り出されたデータの解析という比較的手の付けやすい場所から始める。
電動車両の負荷特性を考慮した省エネルギー駆動のための高効率最適軌道の設計

本年度の研究の目的は,電動車両(電気自動車,鉄道,無人搬送車,などのモータを用いて走行する車両)の自動走行もしくは走行アシストにおいて,各種の駆動条件(時間,速度,移動距離,ジャーク,など)を満足しつつ,省エネルギーとなる最適な軌道(速度,移動距離,モータトルク,などの時間波形)を求めることにある。そのためにまず,これまでに提案した電動機の回転速度ートルクの二次元マップより最適軌道を導出する方法を発展させ,埋め込み磁石型同期電動機の損失特性を表す回転速度Nーモータ電流Iqー同Idの特性図(三次元損失マップ)を用いた最適軌道の数値的な導出法を検討した。具体的には,実験装置を構成し損失データを取得し三次元マップを作成,その三次元マップより駆動条件を満足しつつ,損失エネルギーを最小化する最適軌道(回転角速度,モーターd軸およびq軸電流)の設計を行った。この際,電流に対するトルク特性も計測を行い,これもマップ化することにより,モータパラメータの変動や電流依存性を考慮した設計が行えるように工夫した。最適化の方法としては,評価関数を最小化する数値的な手法であるLMI(線形行列不等式),進化的手法であるGA(遺伝的アルゴリズム)を用いて設計を行い,両者で結果が良好に一致することや計算時間の比較,省エネルギー性の検証を行った。また,負荷特性を考慮した最適軌道の設計法についても検討を開始し,解析的手法を応用した簡便な導出法について検討を行った。当初予定通りIPMSMの損失データを計測することにより三次元損失マップの構成を行った。その際,電流に対するトルク特性も計測を行い,これもマップ化することにより,モータパラメータの変動や電流依存性を考慮した設計が行えるようになった。また負荷特性を考慮した最適軌道の設計法についても検討を開始しており,おおむね研究計画通りの進捗状況となっている。最適軌道を検討する際,実際の車両の駆動においては,各種の走行抵抗(空気抵抗,ころがり抵抗,勾配抵抗)や減衰が存在する。一般的に転がり抵抗は速度に比例,勾配抵抗は勾配が一定であれば一定の負荷となることが知られている。しかし,空気抵抗や駆動系の回転に関する減衰特性は速度に依存する非線形な特性を示すため,実用的にはこれら負荷特性を考慮した軌道の導出が必要となる。そこで,構成した実験装置でこれらの負荷特性を模擬する方法について検討を行う。そして,それらの特性を考慮した省エネルギーで駆動条件を満足するための最適軌道の導出方法の検討を行う。負荷特性を考慮した軌道生成を行う場合,特に非線形な特性を加味して最適化を行う場合には動作点近傍で線形化して軌道を求める方法が考えられるが,動作点を増やすと解くべき方程式の数が増大し,結果として計算時間が長くなる。そこで,遺伝的アルゴリズム(GA)などを応用して,効率的に軌道を求める方法の検討を行う。一方で,解析的手法である変分原理を各動作点に適用し,各動作点毎の解軌道をなめらかに接続する方法についても検討する。以上の内容を進めることで,最適軌道に基づく駆動制御法が電動車両の自動走行・走行アシストにおいて,省エネルギー性や計算効率性の面で有用であるかの検証を進めてゆく。

そして,それらの特性を考慮した省エネルギーで駆動条件を満足するための最適軌道の導出方法の検討を行う。負荷特性を考慮した軌道生成を行う場合,特に非線形な特性を加味して最適化を行う場合には動作点近傍で線形化して軌道を求める方法が考えられるが,動作点を増やすと解くべき方程式の数が増大し,結果として計算時間が長くなる。そこで,遺伝的アルゴリズム(GA)などを応用して,効率的に軌道を求める方法の検討を行う。一方で,解析的手法である変分原理を各動作点に適用し,各動作点毎の解軌道をなめらかに接続する方法についても検討する。以上の内容を進めることで,最適軌道に基づく駆動制御法が電動車両の自動走行・走行アシストにおいて,省エネルギー性や計算効率性の面で有用であるかの検証を進めてゆく。本研究では,電動車両の駆動系を模擬した電動機駆動システムを構成し,その損失解析により三次元損失マップを作成する。研究計画では,設備備品費により,電動車両に用いられることが多い誘導電動機や磁石埋込型永久磁石電動機,モータ駆動用インバータ(既存),トルクメーター,負荷モータ(既存),回転速度と位相を検出するロータリーエンコーダを適切に配置した駆動システムを設計・制作するする予定であった。しかし,本研究の準備として検討を始めていた内容と本研究との連続性を考慮して,まずは主に既存の装置を用いた検討を行った。今年度は,次年度使用額と本年度予定額を用い,研究で得られた知見をフィードバックして実験装置・計測装置の改良や製作を行う。
北海道における農耕の成立と拡散

本研究では、昨年度北海道の例を利用して、農耕の起源と拡散を説明する理論的なモデルを作成した。このモデルは「3Eモデル」と呼んで、農耕システムはexpansion(拡散)・exclusion(除外)・exploitation(開発)という三つの特徴を持つこと。このモデルは、北海道の農耕史ではとくに重要と考えられていた従来の環境説と違って、社会経済的な要因を主張する。今年度の研究では文献、考古と民族資料、それから人骨にみられる健康状態を利用し、このモデルを検討した。調査は北海道大学図書館・札幌市立図書館および札幌医科大学で行い、考古学からのアプローチは10月に筑波大学の利尻島の続縄文・オホーツク文化の遺跡の発掘に参加し、該期の生業問題の調査を行った。3月は石垣と沖縄で八重山と北海道の近代化、植民化と農耕との比較調査を行った。「3Eモデル」で北海道の農耕開始の「遅れ」と近世以前に始まった資本主義的な開発を説明することができた。琉球との比較はまだ分析が必要だが、日本以外の国々でも北海道と似た状況がよくみられる。農耕システムは基本的に拡散するが、その農耕社会が農耕が行っていない周辺の地域を交易などで利用する場合が多いと思われる。本研究は2002年に英語の単行本として出版する予定である。今年度は文献の基本研究を中心にして研究を進んできた。1月に札幌で北海道大学図書館・札幌市立図書館および北海道開拓記念館を利用し,北海道の農業史・開拓史の資料を集成し,分析を始まった。考古学からのアプローチは9月に筑波大学歴史・人類学系の利尻島の続縄文・オホーツク文化の遺跡の発掘に参加し,該期の生業問題の調査を行った。11月はカナダ・カルガリー大学で行った「先史時代の開拓問題」という国際会議に参加し,今までの研究成果を発表した.文献の調査は明治時代における農業と植民地政策との関係,それからアイヌの農耕活動を中心に進んだ。北海道庁の根室地方の農業政策の資料を利用して,明治初期のアイヌの農耕および狩猟採集の生業変化の過程が明確になった。北海道開拓記念館では明治初期の北海道移民の物質文化を観察し,先住民との交流を分析した。来年度は明治時代の本格的な農業と先史時代の農耕との比較をし,特に察文時代の生業問題を考える予定。従来の説では続縄文文化が進化し察文文化に変わって来たが,最近の考古学の研究成果では察文時代でも本州からの移住が考えられる。この興味深い新しい仮説を考古学や人類学的なアプローチから観察する必要があるのが今年度の一つの成果と言える。
微生物由来の植物ホルモンの信号伝達系に関する低分子プローブの探索

植物ホルモンであるオーキシン、ジベレリンは、植物生理現象に多様な作用を示すが、その分子機構は明らかでない。今回、オーキシンとジベレリンの信号伝達系に関する低分子プローブを微生物由来の2次代謝産物中に探索した。オーキシン、及びジベレリンによって誘導される遺伝子発現を指標とし、微生物培養液をスクリーニングした結果、ジベレリンの信号伝達系を特異的に阻害するgibbestatin Bおよび、オーキシンの信号伝達系を特異的に阻害するyokonolide Aを単離、構造決定した。Gibbestatin B(1)の作用機序を詳細に検討した結果、1は、ジベレリンによって誘導される大麦のα-アミラーゼ遺伝子の発現を特異的に阻害し、また、ジベレリンによって引き起こされる細胞死を抑制した。一方、オーキシンや、アブシジン酸によって誘導される遺伝子発現を阻害しなかった。さらに、シロイヌナズナの植物ホルモン耐性変異株gai,spy,axr,abiなどに対する1の作用から、1は、ジベレリンとアブシジン酸の信号伝達経路が交差する点に作用することが推定された。Yokonolide A(2)は、スピロケタール環を有する新規22員環マクロライドとして単離した。2は、オーキシンの信号伝達を特異的に阻害することを確認しており、現在、その詳細な作用機序を検討している。
SOD1ノックアウトマウスを用いたドライアイ発症における上皮間葉移行の検討

本研究においてスーパーオキシドジスムターゼ(Superoxide dismutase, SOD) 1欠損高週齢マウスでは同週齢の野生型に比べて涙液量の減少及び眼表面障害が起きていた。また免疫組織学的検討により涙腺の炎症、線維化、酸化ストレスマーカー発現の上昇を認めた。これらの変化のメカニズムとして上皮間葉移行(Epthelial Mesenchymal Transition)の関与を示唆する結果が得られた。加齢変化とともに体内の酸化ストレスは増え続けている。以前に我々のグループはSOD1(Cu, Za-superoxide dismutase 1)ノックアウトマウスが加齢性黄斑変性と類似した病態を起こすことを報告している。我々は、酸化ストレスが涙線に与える影響を中心に研究しており、仮説としてEpithelial-Mesenchymal Transition(EMT;上皮間葉移行)が涙腺の酸化ストレスによる繊維化に関与していると考えた。今年度我々は10週と50週のSOD1ノックアウトマウスを用いて、涙腺の加齢変化を検討した。涙腺は加齢とともに顕著に繊維化を起こし、それとともに涙液分泌量は低下し、角膜上皮障害が増えており、この変化はノックアウトマウスで顕著であった。同様に免疫染色にて加齢とともにDNAの酸化ストレスマーカーである8-OHdG(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine)および脂質酸化ストレスマーカーである4HNE(4-Hydroxy-2-nonenal)の発現上昇が確認でき、これもノックアウトマウスで顕著であった。50週ノックアウトマウスの涙腺を免疫染色でEMTに関連するマーカーを評価したところ、上皮細胞のマーカーであるE-カドヘリンの発現の低下及び、αSMAの発現上昇がノックアウトマウスにて確認された。また基底膜の構成成分であるコラーゲンtype1の発現を調査したところ、ノックアウトマウスでは基底膜に不連続性を認めた。電子顕微鏡での観察において、10週齢のノックアウトマウスではほぼ成城の構造が保たれていたが、50週齢においては涙腺腺房上皮細胞のmicrovilliの消失、間質への侵入を認める所見を得た。我々は昨年度までの研究で、酸化ストレス増加モデルマウスであるCu,Zn-superoxide dismutase1(SOD1)欠損マウス(SOD1KOマウス)を用いて、加齢とともに涙腺の病理組織学的変化が起こり、高週齢のSOD1KOマウスに涙液分泌障害と眼表面障害が発症することを証明した。このことはSOD1KOマウスがヒトにおけるドライアイ発症モデルとして使用可能であることを示唆している。今年度は涙腺の病理組織学的変化のメカニズムに関して集中的に研究を行った。50週SOD1KOマウスでは上皮系細胞マーカーであるEカドヘリン染色が減弱し、問葉系細胞マーカーであるα-smooth muscle actin(SMA)染色陽性細胞が増加し、mRNAレベルで上皮間葉移行(Epthelial Mesenchymal Transition(EMT)の視標とされるαSMA/Eカドヘリン比が有意に上昇していた。透過型電子顕微鏡では50週SOD1KOマウスの一部の腺房上皮細胞で微絨毛が間質側に発現し、間質側に遊走している所見を認めた。これらより、SOD1KOマウスにおける涙腺の繊維化にEMTが関与していることが強く示唆された。またモデルマウスの結果がヒトでの変化に結びつくかどうか検討するために、ヒト剖検涙腺サンプルの病理組織学的に検討を行った。これによってヒトでも年齢とともに酸化ストレスマーカーが強く発現することが免疫染色で確認された。また加齢による涙腺の炎症、繊維化も明らかになった。
炎症性細胞の肝内浸潤過程の動的解析-接着分子とshear stressを中心に-

アルコール性肝炎(ALD)ではリンパ球と共に好中球が・ウイルス性肝炎や自己免疫性肝炎ではリンパ球が肝実質に浸潤し、これが肝炎の発症・進展に大きな役割を果たしている。今回、in vitro flow systemを用いて類洞に比較的類似した条件のshearstress存在下での好中球やリンパ球の類洞内皮へのadhesion,migrationの機序を細胞接着分子(ICAM-1,CD-18,LFA-1)との関係で明らかにした。これら接着分子の抗体を用いてのブロック試験も行った。そして、これらの疾患の治療にしばしば使用される副腎皮質ステロイド剤の抗炎症作用のメカニズムも明らかにした。これらの様子は装置に接続したvideo cameraで経時的に観察した。なお、類洞内皮とクッパー細胞はelutriation rotarを用いて単離し、類洞内皮をconfluentの状態に培養し、実験に供した。また、LPSでクッパー細胞を刺激しTNFの産生を高めたのちその上清を用いた。TNFは濃度依存性にICAM-1の表出を増加させた。adhesionやmigrationには類洞内皮の細胞接着分子であるICAM-1の表出が重要で、それに好中球のリガンドであるCD-18やリンパ球のリガンドであるLFA-1の表出があって初めてadhesion,migration、すなわち、炎症性細胞浸潤が成立することが判明した。クッパー細胞の出すTNFalphaはICAM-1の表出に大きな役割を果しており、副腎皮質ステロイド剤はこれを抑制することにより抗炎症作用を発揮することが明らかとなった。
「不均衡なクモ膜下腔の拡大」は正常圧水頭症に特異的か? 既病理確定例による検討

・今年度も東京都健康長寿医療センター及び福祉村病院神経病理研究所のデータベースを用いて,頭部MRI及びCTにて「不均衡なクモ膜下腔の拡大を伴う水頭症(disproportionately enlarged subarachnoid-space hydrocephalus:DESH)」を呈する既病理確定例を検索した.上記のDESH所見を有する既病理確定例として,嗜銀顆粒病,アルツハイマー病が多く,他にレビー小体型認知症,ハンチントン舞踏病,加齢性変化のみと診断された症例も見出された.これらの症例群における脳室拡大の程度に加えて,海馬や中脳被蓋の萎縮などを含めた形態画像所見を中心とした定性的及び定量的な解析を行った.・今年度は東京都健康長寿医療センター及び福祉村病院神経病理研究所のデータベースを用いて,頭部MRI及びCTにて「不均衡なクモ膜下腔の拡大を伴う水頭症(DESH)」を呈する既病理確定例を検索している.現時点では,上記のDESH所見を有する既病理確定例として,アルツハイマー病,レビー小体型認知症,嗜銀顆粒病と診断された症例が認められた.現在,これらの画像所見に関して,信号変化,萎縮所見を中心とした視察的評価に加え,画像統計解析を含めた画像解析を行いつつ,更なる症例収集を行っている.・上記のアルツハイマー病の病理像に加え,画像にてDESH,中脳被蓋の萎縮を呈した症例に関しては,進行性核上性麻痺の画像所見に関する論文(Neuroradiology 2017; 59: 431-43)にて,DESHを有する症例の注意点として,言及した.・DESH/正常圧水頭症に関連した画像所見として,腰椎穿刺に伴う脳脊髄液漏出がある.穿刺後の脳脊髄液漏出の新たなMRI所見を発見し,「Dinosaur tail sign」と命名した.この新たなsignとその他の画像所見の診断率などを纏めて,英文誌に上梓した(Headache. 2017Apr 16. doi: 10.1111/head.13075).また,2017年日本画像医学会の脳脊髄液漏出の画像診断に関する講演にて「Dinosaur tail sign」について言及した.更に,「Dinosaur tail sign」を呈する症例に関する画像所見に関して,現在,英文誌に投稿中である.画像にてDESH所見を有する既病理確定例を収集できたことはある程度の進展であり,今後の画像評価の弾みになると言える.また,DESHを有する症例の画像診断時の注意点やDESHに関連した画像所見に関して,英文誌にて言及できたことは一つの進展であった.・今年度も東京都健康長寿医療センター及び福祉村病院神経病理研究所のデータベースを用いて,頭部MRI及びCTにて「不均衡なクモ膜下腔の拡大を伴う水頭症(disproportionately enlarged subarachnoid-space hydrocephalus:DESH)」を呈する既病理確定例を検索した.上記のDESH所見を有する既病理確定例として,嗜銀顆粒病,アルツハイマー病が多く,他にレビー小体型認知症,ハンチントン舞踏病,加齢性変化のみと診断された症例も見出された.これらの症例群における脳室拡大の程度や形態に加えて,海馬や中脳被蓋の萎縮などを含めた画像所見に関して,定量的および定性的な視察的評価を加えた画像解析を行い,第47回神経放射線学会において,発表した(正常圧水頭症に特徴的な形態変化を呈した症例群の臨床及び病理学的検討).・DESH/正常圧水頭症に関連した画像所見として,腰椎穿刺に伴う脳脊髄液漏出があり,穿刺後の脳脊髄液漏出の新たなMRI所見を「Dinosaur tail sign」と命名した.この新たなsignが診断に有用であった症例を英文誌に上梓した(BMJ case reports Aug 2017. doi: 10.1136/bcr-2017-221447).また,2018年日本画像医学会の脳脊髄液漏出の画像診断に関する講演にて「Dinosaur tail sign」について言及した.DESH所見を有する既病理確定例を収集し,神経放射線学会で発表できたことはある程度の進展であり,今後の症例収集,画像評価の弾みになると言える.また,DESHに関連した画像所見に関して,英文誌にて言及したことも一つの進展であったと考えている.・今年度も東京都健康長寿医療センター及び福祉村病院神経病理研究所のデータベースを用いて,頭部MRI及びCTにて「不均衡なクモ膜下腔の拡大を伴う水頭症(disproportionately enlarged subarachnoid-space hydrocephalus:DESH)」を呈する既病理確定例を検索した.上記のDESH所見を有する既病理確定例として,嗜銀顆粒病,アルツハイマー病が多く,他にレビー小体型認知症,ハンチントン舞踏病,加齢性変化のみと診断された症例も見出された.これらの症例群における脳室拡大の程度に加えて,海馬や中脳被蓋の萎縮などを含めた形態画像所見を中心とした定性的及び定量的な解析を行った.引き続き,東京都健康長寿医療センター及び福祉村病院神経病理研究所のデータベースを検索し,更なる症例収集を行う.画像評価に関しては,信号変化,萎縮所見を中心とした視察的評価に加え,画像統計解析を含めた画像解析を行っている.

引き続き,東京都健康長寿医療センター及び福祉村病院神経病理研究所のデータベースを検索し,更なる症例収集を行う.画像評価に関しては,萎縮所見を中心とした視察的評価に加え,定量的評価を含めた画像解析を行い,正常圧水頭症との違いを見いだせるかを検討する予定である.国外文献ダウンロードを1文献控えたため,次年度使用額が発生しました.(理由)書籍の購入や国外文献のダウンロードを控えたため,次年度使用額が発生しました.(使用計画)次年度以降,国外文献のダウンロードや書籍の購入に使用する予定です.次年度以降,国外文献ダウンロードや書籍購入に使用する予定です.
リンパ球の増殖、細胞死における新規ポリコーム群遺伝子MBLRの役割

本年度は、引き続きMBLR欠損マウスを中心にMBLRの機能について解析を行った。MBLR欠損マウスの胸腺、脾臓での細胞数、細胞表面マーカーの発現、細胞増殖やT細胞の分化に異常は見られなかった。次いで脾臓CD4 T細胞の抗腫瘍活性の強いサイトカイン産生をELISA法で解析した。その結果、T細胞増殖に必須のインターロイキン2、インターフェロンガンマの産生が、MBLR欠損マウスにおいて低下していることがわかった。しかしながら、Th1/Th2細胞への分化は、MBLR欠損マウスと野生型マウスとの間に顕著な違いは見られなかった。さらに、T細胞受容体下流の細胞内シグナル伝達経路に関して、ウエスタンブロット法で、解析を行った結果、NFATの蛋白量、ERKのリン酸化に違いは見られなかった。さらに、Gel shift assayによるNFATのインターロイキン2プロモーターへの結合についても解析を行ったが、両者の間に違いは見られなかった。次に、上記研究とは別に、NK細胞の分化とサイトカイン産生制御機構の解析を行った。始めにin vitroNK細胞分化系を構築し、それぞれをNK0/1/2細胞とした。各分化したNK細胞の細胞傷害活性は、NK1細胞で最も高く、NK2細胞で低かった。転写因子の発現をRT-PCR法で解析すると、GATA3の発現がNK2細胞で、他のNK細胞と比べて、2倍程度の発現の上昇が見られた。また、GATA3による遺伝子発現誘導を阻害するROGの発現が各NK細胞で高くなっていた。次いで、2型サイトカイン遺伝子領域のヒストンのアセチル化の状態をクロマチン免疫沈降法で解析したが、各NK細胞間で大きな違いは見られなかった。最後にNK2細胞分化とIL-4/13のシグナル伝達との関係を明らかにするために、Stat6欠損マウスでNK2細胞を分化させると、特徴的なサイトカイン産生が完全に阻害された。本研究結果は現在投稿中である。本研究は、支持細胞なしにNK細胞のin vitro分化系を初めて確立し、NK細胞分化の分子機構に迫ったもので、NK細胞の分化と機能の解明に大きく寄与するものである。本年度は、MBLR欠損マウスを中心にMBLRの機能について解析を行った。MBLR欠損マウスの胸腺、脾臓での細胞数、細胞表面マーカーの発現やT細胞の分化に異常は見られなかった。脾臓CD4T細胞の増殖に関して、チミジンの取り込み、CFSEによる細胞分裂の進行、7-AADによる細胞周期の分布、RNase Protection Assayによる細胞周期の進行をコントロールしている、CDKの発現を調べたが、MBLR欠損マウスと野生型マウスとの間に顕著な違いは見られなかった。次いで脾臓CD4T細胞の抗腫瘍活性の強いサイトカイン産生をELISA法で解析した。さらに、T細胞受容体下流の細胞内シグナル伝達経路に関して、ウエスタンブロット法で、解析を行った結果、NFAT2の蛋白質量が、MBLR欠損マウスで低下している事が明らかになった。さらに免役したマウスの血中IgG量を測定したところ、MBLR欠損マウスにおいてIgG1の産生が昂進していた。MBLRトランスジェニックマウスにおいては、C57BL/6とバッククロスをしたマウスにおいてのみ、サイトカイン産生に違いが見られた。いずれの遺伝子組換えマウスもC57BL/6へのバッククロスを進めていて、遺伝型の整った系で、表現型の違いが、さらに見られないか検討中である。さらに、Gel shift assayによるNFATのインターロイキン2プロモーターへの結合についても解析を行っている。これらの解析を通じて、サイトカイン産生とMBLRとの関係などについて解析を進めてゆき、癌の発生、それに対する免疫系による生体防御機構に対する更なる知見が得られることが期待される。

また、GATA3による遺伝子発現誘導を阻害するROGの発現が各NK細胞で高くなっていた。次いで、2型サイトカイン遺伝子領域のヒストンのアセチル化の状態をクロマチン免疫沈降法で解析したが、各NK細胞間で大きな違いは見られなかった。最後にNK2細胞分化とIL-4/13のシグナル伝達との関係を明らかにするために、Stat6欠損マウスでNK2細胞を分化させると、特徴的なサイトカイン産生が完全に阻害された。本研究結果は現在投稿中である。本研究は、支持細胞なしにNK細胞のin vitro分化系を初めて確立し、NK細胞分化の分子機構に迫ったもので、NK細胞の分化と機能の解明に大きく寄与するものである。
九州から琉球弧の古地理の変遷に関連した貝形虫(甲殻類)の進化古生物学的研究

本研究の目的は,九州琉球弧における相対的海水準変動による古地理の変化が,日本の閉鎖的内湾泥底に生息する貝形虫の分散や進化にどのような影響を与えてきたのかを,古生物および生物学的手法を統合して明らかにすることである.そこで,現在まで,九州トカラ列島ならびに奄美諸島周辺の小規模内湾域における現世貝形虫群集についての研究が行われてこなかったので,平成15年度にトカラ海峡の南に位置する奄美大島の笠利湾,伊須湾,住用湾で,平成16年度には,トカラ海峡の北に位置する鹿児島県上甑島の浦内湾および海鼠池にて表層堆積物を採取し,各海域における現世貝形虫の群集解析を行い,さらにDNA分析用の標本を確保した,化石に関しては,本州中部から九州にかけての鮮新-更新統を中心に調査および試料採取を行い,微化石処理を行い,貝形虫化石群集を数量的に解析した.結果として,中期更新世以降,閉鎖的内湾泥底種の時間的・空間的な変遷について以下のようにまとめられた.1.酸素同位体ステージ(MIS)15からMIS11にかけては,現在中国沿岸に卓越する高濁度・低塩分種(Sinocytheridea)が優占種であった.この種はその後,海峡の発達などにより,個々の内湾が低濁度化したため,多くの湾で絶滅した.2.MIS12に極めて海水準が低下し,その後亜熱帯性種(Neomonoceratinaなど)が海水温の上昇に伴い,本格的に九州や本州へ移入し,MIS5まで優占した.3.最終氷期には本州から九州にかけて黒潮の影響が無くなり,水温が低下し,それまで優占していた亜熱帯性貝形虫類が消滅あるいは減少した.4.現在,これらのうちのいくつかはトカラ海峡が分布の障害となり,九州以北へは再び渡来していない.このように,内湾性貝形虫は10万年周期の氷河性海水準変動,黒潮流路の変化,トカラ海峡の深度変化,様々な海峡の開閉等により影響を受けていることがわかった.本研究の目的は,九州琉球弧における相対的海水準変動による古地理の変化が,日本の閉鎖的内湾泥底に生息する貝形虫の分散や進化にどのような影響を与えてきたのかを,古生物および生物学的手法を統合して明らかにすることである.そこで,現在まで,九州トカラ列島ならびに奄美諸島周辺の小規模内湾域における現世貝形虫群集についての研究が行われてこなかったので,平成15年度にトカラ海峡の南に位置する奄美大島の笠利湾,伊須湾,住用湾で,平成16年度には,トカラ海峡の北に位置する鹿児島県上甑島の浦内湾および海鼠池にて表層堆積物を採取し,各海域における現世貝形虫の群集解析を行い,さらにDNA分析用の標本を確保した,化石に関しては,本州中部から九州にかけての鮮新-更新統を中心に調査および試料採取を行い,微化石処理を行い,貝形虫化石群集を数量的に解析した.結果として,中期更新世以降,閉鎖的内湾泥底種の時間的・空間的な変遷について以下のようにまとめられた.1.酸素同位体ステージ(MIS)15からMIS11にかけては,現在中国沿岸に卓越する高濁度・低塩分種(Sinocytheridea)が優占種であった.この種はその後,海峡の発達などにより,個々の内湾が低濁度化したため,多くの湾で絶滅した.2.MIS12に極めて海水準が低下し,その後亜熱帯性種(Neomonoceratinaなど)が海水温の上昇に伴い,本格的に九州や本州へ移入し,MIS5まで優占した.3.最終氷期には本州から九州にかけて黒潮の影響が無くなり,水温が低下し,それまで優占していた亜熱帯性貝形虫類が消滅あるいは減少した.4.現在,これらのうちのいくつかはトカラ海峡が分布の障害となり,九州以北へは再び渡来していない.このように,内湾性貝形虫は10万年周期の氷河性海水準変動,黒潮流路の変化,トカラ海峡の深度変化,様々な海峡の開閉等により影響を受けていることがわかった.本年度は主に中琉球の現生貝形虫群集を把握するため,10月に奄美大島の内湾で表層堆積物の採取を行った.さらに,九州における更新世の内湾貝形虫群集を把握するため,12月に島原半島北有馬層から微化石試料の採取を行った.これらに加え,日本各地の更新世の内湾貝形虫群集についても既存の試料を用いて群集解析を行った.奄美大島では笠利湾,伊須湾および住用湾において,主として船上からエクマンバージ式グラブ採泥器を用いて試料採取を行った.

内訳は,笠利湾では水深238.9mより35試料,伊須湾では水深734mより12試料,住用湾ではマングローブ沼を含め,水深030mより14試料,合計61試料で全て砂泥質堆積物である.現段階の結果として,奄美大島の貝形虫群集は,沖縄周辺南シナ海の群集と非常に類似性が高いことがわかった.また10m以浅においてLoxoconcha uranouchiensisが非常に多く,Neomonoceratina delicata, Spinileberis quadriaculeataなども多産し,それより深くなると多様性が増し,CopytusやParadoxostomaなどが多くなることがわかった.日本各地の第四系から産する貝形虫化石群集に関する今年度の成果を考慮すると,N.delicataは現在九州以北の日本列島では生存しないが,少なくとも酸素同位体ステージ11(あるいは15)から5の間には本州九州沿岸の閉鎖的内湾泥底に優占した.この種は沖縄周辺の内湾でも多産することから,トカラ海峡が現在この種の分布の障壁になっていると考えられる.島原半島更新統北有馬層においては詳細な地質調査を行い,相対的海水準変動による堆積相の側方・垂直変化を認識できた.また,貝化石が産出する層準を中心に,おおよそ50cm間隔で微化石試料を採取し,現在,抽出作業を行っている.今年度は,化石に関しては,中南九州における後期鮮新世の貝形虫群集組成を明らかにするため,宮崎層群高鍋層を対象に研究を行った.結果として,77種の貝形虫化石が同定され,これらの多くは黒潮暖流の影響が強い陸棚中下部砂泥底に現生する種でBicornucythere bisanensis, Trachyleberis spp.などの内湾性種もいくつか認められた.さらに,群集の周期的変動が3回存在することが明らかとなり,これはミランコビッチサイクルに対比される可能性があると推定された.現世に関しては,今年度はトカラ海峡北方の鹿児島県薩摩川内市上甑島の浦内湾と海鼠池で,群集解析用とDNA分析用のための表層堆積物を採取し,水質の調査も行った.浦内湾では主として船上から採泥器を用いて32地点で表層堆積物を採取し,海鼠池では9地点より表層堆積物と海藻試料を採取した.浦内湾の30試料から貝形虫を抽出・同定した結果,少なくとも148種の内湾沿岸性種が含まれていることがわかった.数量的群集解の結果,これらは6つの貝形虫相にまとめられ,主に水深と底質の種類に関連していることが明らかとなった.昨年度調査を行った奄美大島の笠利湾の群集と比較検討した結果,共通点はどちらも湾沿岸砂底種であるLoxoconcha uranouchiensisが最も多く,日本の広範囲に優占する内湾奥泥底種のうち,Spinileberis quadriaculeataは生息しているが,Bicornucythere属が認められないことである.これは両湾とも透明度が高く,溶存酸素量も多いことよると推定される.また,浦内湾には奄美大島以南の亜熱帯熱帯海域に多産する種が極めて少ない.特に,Neomonoceratina delicataという中後期更新世に本州から九州で繁栄した種が,浦内湾に生息しないことが明らかとなったので,トカラ海峡の存在がこの種の分布の障害になっていることが確かめられた.
星間塵表面反応:分子進化と同位体分別機構の新展開

本研究は,極低温下での星間塵表面反応素過程の詳細を実験的に調べ,星間分子雲での分子進化と同位体分別における星間塵の役割を明らかにすることを主たる目的としている.本研究課題が採択されると同時に,始原天体に関する国際会議(新潟),原始太陽系における鉱物・水・有機物に関する国際シンポジウム(東京)および日本地球惑星科学連合大会(千葉幕張)に出席し,星間塵表面における水分子および始原有機分子生成に関する研究の現状報告を行ない,同位体濃集プロセスに関する情報収集・議論を通して本研究の重要性や独創性を充分アピールすることができた.現有実験装置の改良も本研究課題の重要な目的である。まず気相の原子・分子を検出する装置を駆動するための電源ユニット(NIM標準ビン電源,クリアパス社製)を購入し,信号検出系の改善に取り組み始めた.改良は現時点でも引き続き行っているところだが,これにより,実験の際の信号/ノイズ比が向上し,さらに規則的に現れる電気的なノイズを除去することが可能になると予想され、実験値の精度向上等大きな効果が期待される.その後すぐに現在実施中の基盤研究Sが採択されたため,本研究課題の実施は5月31日をもって終了した.しかし,上記の取り組みは基盤研究Sに引き継がれるため,基盤研究Aで行った発表・研究議論,整備した物品は、将来にわたって有効に活用される.本研究は,極低温下での星間塵表面反応素過程の詳細を実験的に調べ,星間分子雲での分子進化と同位体分別における星間塵の役割を明らかにすることを主たる目的としている.本研究課題が採択されると同時に,始原天体に関する国際会議(新潟),原始太陽系における鉱物・水・有機物に関する国際シンポジウム(東京)および日本地球惑星科学連合大会(千葉幕張)に出席し,星間塵表面における水分子および始原有機分子生成に関する研究の現状報告を行ない,同位体濃集プロセスに関する情報収集・議論を通して本研究の重要性や独創性を充分アピールすることができた.現有実験装置の改良も本研究課題の重要な目的である。まず気相の原子・分子を検出する装置を駆動するための電源ユニット(NIM標準ビン電源,クリアパス社製)を購入し,信号検出系の改善に取り組み始めた.改良は現時点でも引き続き行っているところだが,これにより,実験の際の信号/ノイズ比が向上し,さらに規則的に現れる電気的なノイズを除去することが可能になると予想され、実験値の精度向上等大きな効果が期待される.その後すぐに現在実施中の基盤研究Sが採択されたため,本研究課題の実施は5月31日をもって終了した.しかし,上記の取り組みは基盤研究Sに引き継がれるため,基盤研究Aで行った発表・研究議論,整備した物品は、将来にわたって有効に活用される.
長周期積層型マグネシウム合金の変形機構解明

長周期積層構造(LPSO)型マグネシウム合金は優れた力学特性を示すことから,輸送機器をはじめとする機械構造物の軽量化材料として注目されている.しかしながらその力学特性発現機構は十分に明らかにされておらず,信頼性向上のためにも早急な解明が望まれている.そこで本研究ではLPSO型マグネシウム合金の中でも実用化を目指して盛んに研究されているMg-Zn-Y系合金を対象としてその変形機構を実験観察と数値解析の両面から定量的に評価した.長周期積層構造(LPSO)型マグネシウム合金は優れた力学特性を示すことから,輸送機器をはじめとする機械構造物の軽量化材料として注目されている.しかしながらその力学特性発現機構は十分に明らかにされておらず,信頼性向上のためにも早急な解明が望まれている.そこで本研究ではLPSO型マグネシウム合金の中でも実用化を目指して盛んに研究されているMg-Zn-Y系合金を対象としてその変形機構を実験観察と数値解析の両面から定量的に評価した.本研究は,従来のマグネシウム合金と比べて著しく高い強度を示すことから,近年注目を集めている長周期積層型マグネシウム合金の変形機構を,実験観察と数値解析により明らかにすることを目的としている.平成21年度は押出材を対象とした実験観察と最密六方晶(HCP)構造のための数値解析手法の構築を行った.具体的には,まず実験的にHCP相と長周期(LPSO)相の擬似単相鋳造材を,押出温度および押出比を変化させて押出加工を施し,構成相や結晶粒径等の微視構造が力学特性に及ぼす影響を評価した.実施した試験は,室温下における引張試験,圧縮試験,負荷除荷試験,繰返負荷試験等であり,異方性変形挙動を詳細に把握した.さらに材料試験前後の組織を光学顕微鏡と電子顕微鏡を用いて観察することにより,各変形機構が異方性変形挙動に及ぼす影響についても検討した.一方,数値解析手法の構築としては,長周期積層型マグネシウム合金のための数値解析手法の基礎として,HCP構造のための結晶塑性有限要素解析手法を構築した.本解析手法は,HCP構造の非等価なすべり系および双晶変形を考慮しており,各変形機構の臨界分解せん断応力(CRSS)を設定することにより,従来のHCP相とLPSO相の両方を表現可能なものとした.さらに,未だにその取扱いが確立していない双晶回転も含めた手法とすることにより,HCP構造を持つ金属材料の微視組織発展を精密に表現可能なフレームワークを構築した.構築した手法の妥当性を検証するため,純マグネシウムおよび商用マグネシウム合金AZ31を対象として,押出解析および異方性変形解析を行い,それぞれ同条件の実験観察結果と比較し,巨視的変形挙動と微視組織発展のどちらも定性的な記述が可能であることを確認した.長周期積層構造(LPSO)型マグネシウム合金は,従来のマグネシウム合金と比べて著しく高い強度を示すことから,輸送機器をはじめとする機械構造物の強度部材としての適用が期待されている.しかしながらその強度発現機構は十分に解明されておらず,信頼性向上のためにも早急な解明が望まれている.そこで本研究では,LPSO型マグネシウム合金の中でも強度と延性のバランスが良いことから特に注目を集めているMg-Zn-Y系合金を対象として,強度に及ぼす長周期相の影響を実験観察と数値解析の両面から定量的に評価した.また,LPSO相における強化機構の一つとして注目されているキンク帯の形成機構を調査するための数値的手法を構築した.平成22年度はLPSO相の体積分率が異なるMg-Zn-Y系合金を用いて,押出条件が室温および高温下における機械的特性と集合組織を含む組織変化に及ぼす影響を材料試験と微視的観察により明らかにした.さらに平成21年度までに構築した最密六方晶のための結晶塑性有限要素解析手法を二相合金のためのものに拡張し,拡張した手法を用いて組織観察結果に基づく二相合金モデルを作成し,LPSO相の体積分率の異なるMg-Zn-Y系合金の単軸負荷解析を行った.その結果,LPSO相体積分率の増加に伴う強度上昇を定量的に再現することができた.また,LPSO相の強化機構の一つと考えられているキンク帯の形成機構を検討するため,双晶が抑制された最密六方晶の圧縮負荷解析を行った.その結果,底面に対する負荷方向に依存して粒界を介した相互拘束の結果として,底面に垂直な方向に変形帯が生ずることがわかった.この変形帯は構造的にキンク帯と等価なものであることから,本解析手法を用いてキンク帯形成過程を数値的に評価可能であることを示すことができた.
広域漂砂を考慮した海浜変形予測モデルに関する研究

深刻な海岸侵食・海浜変形を引き起こす強風・高波浪が来襲する現地海岸で漂砂量を見積もるためには,現地で適用可能な漂砂モデルの構築・改良するとともに,現地での漂砂現象をより明らかにすることが必要である.そこで,本研究では大潟波浪観測所の観測桟橋を援用して,レーザー式濃度計,ADCPおよび波高計によって,高波浪時の平均流速と浮遊砂濃度・平均粒径の鉛直分布,波浪特性の計測を行った.それにより,以下の成果が得られた.・平均流速と浮遊砂濃度の計測データから砕波帯内での沖方向浮遊砂量を推定したところ,通常で考えられている漂砂量よりも大量の浮遊砂量が砕波帯の沖側へ流出していると考えられ,特に冬季日本海沿岸での海岸侵食・海底地形には,この沖向き漂砂が大きく関係している.・砕波帯内での沖向き浮遊砂量と波浪エネルギーフラックスの間には線形関係があり,波浪エネルギーフラックスがある限界値を超えると沖向き漂砂が発生することから,波浪条件から砕波帯内での沖向き浮遊砂量が定量的に推算できる.また,広域漂砂・海浜変形モデル構築のベースとなる広域海浜流モデルの再現精度の検証を行った.観測結果と再現計算の結果を比較したところ,従来の波浪のみを考慮した計算では,砕波帯内の流れはおおよそ再現可能であるが,砕波帯沖合では全く再現されないことが明らかとなった.しかし,海上風を考慮することにより再現性がかなり向上し,沿岸域全体で海上風による流体流動を考慮することの重要性,本モデルを用いることの妥当性が示された.そこで,このような沿岸域での波浪と(波浪と海上風による)流れの影響を考慮できるBailardの漂砂モデルを用いることとし,広域海浜流モデル,地形変化モデル(漂砂量の保存則)と合わせて,広域漂砂・海浜変形モデルの構築を行い,その適用性の検討を行った.広域海浜流・漂砂はその生成機構を風に強く依存しているため,広域でかつ沿岸方向の運動が卓越する特性を有している.このため,われわれには,まず広域海浜流・漂砂の岸沖分布を把握することが要求される.当然のことながら,これは広域海浜流・漂砂の予測,制御の基礎をなすこととなる.以上のようなことから,沿岸域の広範囲・長期間を対象とした漂砂・海浜変形予測モデルを構築することを踏まえて,波浪,海上風により沿岸域の広い範囲に発生する広域海浜流系とそれに駆動される広域漂砂の岸沖方向分布を表示する簡略式の誘導を試みた.広域海浜流特性,その数値解析,さらには水平2次元解析における広域海浜流,広域漂砂のモデル化について検討した結果,以下の主な結論が得られた.1.広域海浜流系の沿岸方向の流速分布を表示するための水平2次元解析法を展開した.この場合,海面及び海底におけるせん断応力の釣り合いを考えるため,深海から浅海に至る定式化では,海底摩擦の表示に及ぼす流速の鉛直分布の影響を考慮しなければならない.そのため,準3次元の数値解析結果を用いて,水平2次元解析における水深変化を考慮した海底摩擦係数の表示式を求めた.また,沿岸方向流速の岸沖分布表示には数値実験結果とLonguet-Higginsの沿岸流の理論解を用いて定式化を行った.2.広域海浜流系(沿岸方向流速)により発生する漂砂の空間分布`(広域漂砂系)を示した.流速分布式は前述の簡略式を用い,漂砂量の推定にはBailardの漂砂量モデルを用いた.その結果,広域漂砂系は,通常のストームでは水深20m程度まで活発な漂砂が見込まれるが,異常ストームの場合には,水深2030mの領域でも顕著な海岸漂砂が発生する.このため,広域漂砂系を考慮した海岸保全対策が重要であること示した.深刻な海岸侵食・海浜変形を引き起こす強風・高波浪が来襲する現地海岸で漂砂量を見積もるためには,現地で適用可能な漂砂モデルの構築・改良するとともに,現地での漂砂現象をより明らかにすることが必要である.そこで,本研究では大潟波浪観測所の観測桟橋を援用して,レーザー式濃度計,ADCPおよび波高計によって,高波浪時の平均流速と浮遊砂濃度・平均粒径の鉛直分布,波浪特性の計測を行った.それにより,以下の成果が得られた.・平均流速と浮遊砂濃度の計測データから砕波帯内での沖方向浮遊砂量を推定したところ,通常で考えられている漂砂量よりも大量の浮遊砂量が砕波帯の沖側へ流出していると考えられ,特に冬季日本海沿岸での海岸侵食・海底地形には,この沖向き漂砂が大きく関係している.・砕波帯内での沖向き浮遊砂量と波浪エネルギーフラックスの間には線形関係があり,波浪エネルギーフラックスがある限界値を超えると沖向き漂砂が発生することから,波浪条件から砕波帯内での沖向き浮遊砂量が定量的に推算できる.また,広域漂砂・海浜変形モデル構築のベースとなる広域海浜流モデルの再現精度の検証を行った.観測結果と再現計算の結果を比較したところ,従来の波浪のみを考慮した計算では,砕波帯内の流れはおおよそ再現可能であるが,砕波帯沖合では全く再現されないことが明らかとなった.しかし,海上風を考慮することにより再現性がかなり向上し,沿岸域全体で海上風による流体流動を考慮することの重要性,本モデルを用いることの妥当性が示された.

そこで,このような沿岸域での波浪と(波浪と海上風による)流れの影響を考慮できるBailardの漂砂モデルを用いることとし,広域海浜流モデル,地形変化モデル(漂砂量の保存則)と合わせて,広域漂砂・海浜変形モデルの構築を行い,その適用性の検討を行った.
転移腫瘍微小環境における骨髄由来細胞の機能解明

腫瘍組織は、腫瘍細胞からなる実質と、線維芽細胞や血管など非腫瘍細胞からなる腫瘍間質で構成されており、近年、腫瘍間質は、腫瘍の浸潤や転移に関与することが報告されている。本研究は、骨髄細胞のみGFPで標識されたマウスに腫瘍を移植し、腫瘍間質のGFP陽性細胞の局在を観察することで、腫瘍間質における骨髄由来細胞の役割を検討した。結果として、腫瘍間質には多様な骨髄由来細胞が存在し、腫瘍組織辺縁部で有意に骨髄由来細胞が増加していた。その一部は癌関連マクロファージや癌関連線維芽細胞と考えられ、骨髄由来細胞は腫瘍間質で様々な細胞に分化し腫瘍の浸潤を促進する可能性が示唆された。腫瘍間質は、単に腫瘍実質を栄養するのみならず、「腫瘍の性格をも規定する腫瘍微小環境を提供する組織」として近年注目を集めている。そこで、腫瘍微小環境中の血球系細胞の動態に着目し、GFP骨髄移植マウスモデルを用いて、血球系細胞の動態を特異的に追跡、腫瘍浸潤や転移への関与の検討を目的としている。本年度研究では、GFPラベル骨髄細胞移植免疫不全ヌードマウスの確立、および同マウスへのヒト口腔扁平上皮癌細胞等の腫瘍細胞移植実験系の確立に先立ち、野生型C57BL/6マウスにGFPマウスの骨髄細胞を移植した動物実験モデルを用いて詳細な解析を行った。GFP骨髄細胞移植マウスに生着力、転移能の高い悪性黒色腫細胞およびマウス肺癌細胞を、皮下移植ならびに尾静脈から移植を行い、原発腫瘍モデル、腫瘍転移モデルマウスを作製した。モデルマウスから腫瘍塊を摘出、組織学的解析、免疫化学染色を施した後、GFP陽性細胞の局在検討やマーカー検索を行った。その結果、原発腫瘍モデル、転移腫瘍モデルの腫瘍組織内にGFP陽性細胞が多数存在することを確認した。また、腫瘍随伴マクロファージ(TAM)のマーカーとして知られるCD11bや、癌関連線維芽細胞(CAF)のマーカーであるα-SMAの染色を行ったところ、GFP陽性細胞が、それらのマーカーを発現していなかった。以上のことから本実験において現在までに報告されていない骨髄由来の細胞が、腫瘍の進展に関わっている可能性が示唆された。そこで、腫瘍微小環境中の血球系細胞の動態に着目し、GFP骨髄移植マウスモデルを用いて、血球系細胞の動態を特異的に追跡、腫瘍浸潤や転移への関与の検討を目的とする。本年度研究では、ヒト口腔扁平上皮癌の移植実験の系を確立するため、BALB/c Slc-nuにヒト口腔扁平上皮癌由来細胞の移植を行い、安定した実験系を確立した。ヒト口腔扁平上皮癌は、増殖能の高いOSC2を細胞数を変えてBALB/c Slc-nuの背部皮下および尾静脈に移植した。細胞移植後4週間の生着を待ち、マウスを屠殺して標本を作製し、HE染色にて組織学的に腫瘍細胞が生着している事を確認した。また、各種免疫染色を行い、腫瘍細胞以外にも、腫瘍間質において、様々な細胞が腫瘍内に存在している事が明らかとなった。本年度研究ではBALB/c Slc-nuマウスにヒト由来口腔扁平上皮癌を移植し、腫瘍細胞が安定的に生着するプロトコルを確立する事ができた。骨髄移植を行わないBALB/cSlc-nuマウスを用いて原発腫瘍モデル、転移腫瘍モデルを作製し、得られた材料を用いてFACSを試みた。実験の進行具合としては、1ヒト口腔扁平上皮癌細胞での実験モデルの確立に成功し、2腫瘍部に存在する細胞をFACSによりソーティングする事に成功したことにより、概ね順調に進展していると判断した。そこで、本申請課題では腫瘍微小環境の血球系細胞の動態に着目し、GFP骨髄移植モデルマウスを用いて、血球系細胞の動態を特異的に追跡、腫瘍浸潤や転移への関与の検討を行っている。本年度は、腫瘍原発モデルとしてBALB/c Slc-nuマウス背部皮下にヒト口腔扁平上皮癌の細胞株を移植する実験系の確立に取り組んだ。HSC-2、HSC-3、OSC-19の3種類のヒト口腔扁平上皮癌細胞株を10万、50万、100万個の細胞数で移植し、4週間後にマウスを屠殺して標本を作製し、HE染色にて組織学的に腫瘍細胞の生着の有無の確認を行った。3種類の腫瘍細胞とも、最も細胞数が多い場合にはマウスへの生着が確認できたが、OSC-19が最も高い増殖活性を示した。細胞数が10万、50万個の場合では、3種類の腫瘍細胞とも生着は確認できなかった。またGFP骨髄移植モデルマウスはGFPマウスから骨髄細胞を回収し、10グレイのX線照射した野生型マウス尾静脈からGFP陽性骨髄細胞1000万/200μl移植、細胞の生着を確認し、確立した。本年度研究ではBALB/c Slc-nuマウス背部皮下にヒト口腔扁平上皮癌の細胞株を移植する腫瘍原発モデルのプロトコルを確立することができた。また骨髄由来細胞の動態が追跡可能なGFP骨髄移植モデルマウスも作製可能となった。しかし、腫瘍転移モデルマウスとして、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株(HSC-2、HSC-