hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Naフラックス法を用いた無欠陥GaN結晶大口径化技術の研究開発

当該知見は、重量によるモニタリングに比べて簡便、かつ正確であり、期待していた以上の成果を挙げることができたと言える。上記に加え、当初2019年度以降に検討する予定にしていたNa高純度化技術開発も並行して進めることができたことも当初の計画以上に進展していると判断した理由である。2018年度に見出した高速成長条件を用い、2インチ口径のGaNウエハ作製を目指す。酸素不純物濃度の低減についてはイオン液体により高純度化したNaを活用することで実現する。最終的には、高成長速度、大口径、高純度、及び品質維持等のすべての要件を満たすGaN結晶を作製する。
サイトカインバランスからみたIgG4関連血管病変の病態解析

本研究では、サイトカイン(CKs)バランスに注目し、IgG4関連血管病変の病因病態の解明を目的とし、IgG4関連大動脈瘤(IgG4-AAA)、IgG4非関連炎症性大動脈瘤、通常の動脈硬化性大動脈瘤、解剖例の正常動脈を対象とし、術前血清CKs、組織のCKs発現細胞を免疫染色及びIn situ hybridizationにて同定した。IgG4-AAAのCKs発現には2つの側面がある事が解明された。1つはIL-10, IL-13優位なTh2優位あるいはTreg優位な環境であり他臓器のIgG4関連疾患と同様のサCKsである。もう1つは、特徴的なIL-6産生であり、IgG4-AAAの血管炎の側面を示す。目的;IgG4関連疾患(IgG4-RD)は、血清IgG4値高値、組織のIgG4陽性形質細胞浸潤を特徴とする原因不明の線維形成性病変である。本疾患は血管でも生じ、多くは炎症性大動脈瘤、動脈周囲炎を呈する。IgG4-RDの病因として、局所でのヘルパーT細胞のバランスの乱れが注目されており、その結果、種々のサイトカインが放出され、線維増生やIgG4陽性形質細胞の増加が起きると推察されるが、血管でのIgG4-RDの病因は未だ不明である。本研究では、サイトカインバランスに注目し、IgG4関連血管病変の病態機序を解明する。対象;大動脈瘤手術切除例からIgG4関連大動脈瘤(IgG4-AA)10症例選択した。対照症例として、IgG4-AA基準を満たさないnon-IgG4-IAAA 5症例、動脈硬化性AAA (aAAA)10例、動脈硬化性変化が軽度で動脈拡張のない解剖症例(autopsy)10例の3群を選択した。方法:1.IgG4関連血管病変の血清におけるサイトカインの測定:Th2優位の環境下を示すIL-4, IL-5, IL-13、制御性T細胞の亢進によるIL-10、TGF-β、線維化の目安となるIFN-γ、炎症の中心となるIL-6、血清IgG4、血清IgEも測定した. IgG4-AAでは,血清IL-10, IL-13, IL-6が優位に高値であった。血清IL-10,血清IL-13では,基準値よりも上昇した症例はIgG4-AAでのみ見られた。IgG4関連疾患(IgG4-RD)は、血清IgG4値高値、組織のIgG4陽性形質細胞浸潤を特徴とする原因不明の線維形成性病変である。本研究では、サイトカインバランスに注目し、IgG4関連血管病変の病態や機序を解明する。予定していた計画通り,IgG4-AAならびに対象群3群を用いて,平成26年度は血清サイトカイン値の測定,組織での免疫染色を用いたサイトカイン発現並びにサイトカイン発現細胞の同定をおこなった.平成27年度はIn situ hybridization (ISH)を用いたmRNAレベルでのサイトカイン発現を検討し,更に2plex mRNA ISHを用いて,サイトカイン発現細胞を同定し,IL-6mRNAとCD34mRNA,IL-6mRNAとCD168mRNAの共発現を確認した.当初の予定通り,IgG4ーAAの外膜におけるサイトカンの特徴の解明が進んでいる.IgG4関連疾患(IgG4-RD)は、血清IgG4値高値、組織IgG4陽性細胞浸潤を特徴とする原因不明の線維形成性病変である。IgG4-RDの病因として、局所のヘルパーT細胞のバランスの乱れが注目されており、種々のサイトカイン(CKs)が放出され、線維増生やIgG4陽性細胞増加が起きると推察されるが、血管でのIgG4-RDの病因は未だ不明である。本研究では、CKsバランスに注目し、IgG4関連血管病変(IgG4-AAA)の病態、機序を解明する。切除材料のIgG4-AAA、IgG4非関連炎症性大動脈瘤、通常動脈硬化性大動脈瘤、解剖例の正常動脈を対象とし、術前血清CKsを測定し、組織のCKs発現細胞を免疫染色及びIn situ hybridizationにて同定した。血清IL-10は、他の3群に比較しIgG4-AAAで高値であった。組織ではIL-10,IL-13陽性細胞がIgG4-AAAで有意に高頻度であった。IL-4, IFN-γでは血清値、組織でIgG4-AAAと他の3群との有意差はなかった。血清IL-6はIgG4-AAAで極めて高値であった。組織でもIgG4-AAAの外膜にIL-6が多数分布しており、血清IgG4値、外膜肥厚と相関があった。dual In situ hybridizationではIgG4-AAAの外膜で、IL-6とCD34, CD168と共発現が確認され、血管内皮細胞、組織球、繊維芽細胞のIL-6産生が示された。IgG4-AAAにおけるCKs発現には、2側面があり、1つはIL-10, IL-13が優位なTh2優位又はTreg優位な環境であり、他臓器のIgG4-RDと同様のCKsバランスである。

もう1つは、特徴的なIL-6産生であり、血管炎としてのIgG4-AAAの側面を示す。本研究では、サイトカイン(CKs)バランスに注目し、IgG4関連血管病変の病因病態の解明を目的とし、IgG4関連大動脈瘤(IgG4-AAA)、IgG4非関連炎症性大動脈瘤、通常の動脈硬化性大動脈瘤、解剖例の正常動脈を対象とし、術前血清CKs、組織のCKs発現細胞を免疫染色及びIn situ hybridizationにて同定した。IgG4-AAAのCKs発現には2つの側面がある事が解明された。1つはIL-10, IL-13優位なTh2優位あるいはTreg優位な環境であり他臓器のIgG4関連疾患と同様のサCKsである。もう1つは、特徴的なIL-6産生であり、IgG4-AAAの血管炎の側面を示す。計画通り、IgG4-AAならびに対象群3群の症例選定が進み、4群での血清でのサイトカイン値の測定、組織での免疫染色を用いたサイトカイン発現およびサイトカイン発現細胞の同定、比較まで進達した。当初、大動脈壁におけるサイトカイン発現細胞の同定のために、蛍光二重免疫法を予定していたが、蛋白質のみならず、mRNAレベルでの発現を同定可能なmRNA-ISHへ方法を変更し、条件設定中である。IgG4ーAAでのIL-6発現細胞の解明,同定は進んだので,今後は,同様の2plex mRNA ISHを用いて,IL-4, IL-10, IL-13などの発現細胞を検討する.更に,産生されたサイトカインの受容細胞を同定し.IgG4-AAのサイトカインネットワークの解明を進める.組織形態学当初、大動脈壁におけるサイトカイン発現細胞の同定のために、蛍光二重免疫法を予定していたが、蛋白質のみならず、mRNAレベルでの発現を同定可能なmRNA-ISHへ方法を変更し、条件設定中である。成果を発表するために,論文作成を進める.更に,血管外膜でのサイトカイン受容細胞の確認を行い,IgG4関連動脈疾患のサイトカインネットワークを解明する血管病変のサイトカイン発現細胞の確認は,当初は蛍光抗体法による二重免疫蛍光抗体法を予定し,その為蛍光顕微鏡を申請していた.蛍光抗体法は,発色後すぐに消退し,また蛋白質発現の確認に留まる.そのため,実際には,より高感度で安定生の高いmRNA ISHにちるう検討に変更した,しかしながら,新規検討のmRNA-ISHの条件設定は簡単ではなく,備品,消耗品購入の為に平成26年度の研究費の支出が予定を大きく超過した.現在,概ね条件設定ができたので,平成27年度は対象症例に対して.mRNA-ISH施行を推進すべく,試薬購入の為に前倒し支払い請求をした.成果の論文作成と英文校正を行う.サイトカイン受容細胞の同定を行うための免疫染色抗体,mRNA ISH probeの購入を行う.新規検討のmRNA ISHは,現在,概ね条件設定ができたので,対象症例に対して.mRNA-ISH施行を推進し.サイトカイン発現細胞を確認し.IgG4関連血管病変のサイトカインバランスの局所での状態を解明する.
身体性作業記憶に関わる神経機構についての基礎研究

運動を行う際に、事前に行った動作による感覚情報及び動作の生成に関わった情報を、後の動作の生成に利用すると考えられ、この身体性に関わる作業記憶が重要な役割を持つであろうと推測される。本研究では、アルツハイマー病(AD)発症に伴う作業記憶の障害が歩行時の障害物回避動作に与える影響をAD発症に伴う神経病理学的変化との関係から明らかにするため、マウスを用いた新たな障害物回避歩行課題を構築した。3xTgマウスはAD発症により障害物回避課題を行う際に後肢の接触率が高いこと、歩行時の後肢の制御に重要な役割を果たす作業記憶を評価した結果、AD発症後の3xTgマウスにおいて顕著な作業記憶の障害が判明した。素早く単発的に遂行される動作は、主としてフィードフォワード制御のもとで行われる。そのような動作の反復練習あるいは学習時には、事前に行った動作に関わる種々の感覚情報および動作の生成に関わった中枢性コマンドの遠心性コピー(efference copy)などの情報(ここでは身体性情報と呼ぶ)を、これから行う動作の中枢性コマンドの生成に利用するものと考えられる。この際に重要な脳機能としては、この身体性情報を一時的に保持しておく機能であり、ワーキングメモリー(作業記憶)の一つとして考えられる。本研究は、従来までほとんど神経生理学的に理解されていなかった身体性作業記憶の生成と保持に関わる神経機構について、独自の実験パラダイムを構築し、明らかにすることを目的とした。具体的には、マウスにおいて歩行路の前方に設置された障害物を跨ぎ越して回避する障害物回避歩行の際、前肢が障害物を跨ぎ越した後、一時的に歩行を中断させてから後肢の跨ぎ越し動作を行わせる遅延障害物回避歩行課題を構築した。アルツハイマー病患者は健常者に比べて歩行時の転倒が多いことが疫学的にはよく知られている。この原因として、アルツハイマー病によって引き起こされる空間認知機能、作業記憶における機能低下が関与していると予想されている。アルツハイマー病による高次認知機能障害には、本研究が取り組む身体性作業記憶の機能低下も含まれている可能性が大変高い。そこで本年度は、アルツハイマー病において身体性作業記憶がどのような機能低下を引き起こすのかについて、アルツハイマー病モデルマウスにおいて歩行時の障害物回避動作ならびに身体性作業記憶への影響を調べた。アルツハイマー病モデルマウスは障害物を跨ぎ越す際に障害物と高い接触率を示した。さらに、遅延障害物回避歩行課題において、作業記憶の減衰が生じていることが判明した。作業記憶は、認知行動を適切に遂行するために短期に保持される能動的な記憶と考えられ、現在まで霊長類やげっ歯類等において多くの研究が行われてきた。ところで、運動時に必要とされる身体性の作業記憶については、研究対象としてほとんど取り上げられることなく、その生成と保持に関わる神経機構については未だ不明である。本研究では、マウスを用いて、歩行路の前方に設置された障害物を跨ぎ越して回避する障害物回避歩行課題、さらに、前肢が障害物を跨ぎ越した後、一時的に歩行を中断させてから後肢の跨ぎ越し動作を課す遅延障害物回避課題を構築し、身体性作業記憶に関わる神経機構を調べることを目的とした。他の作業記憶課題への関与が既に報告されている海馬や腹側被蓋野について焦点を当て、海馬及び大脳皮質におけるβアミロイドの蓄積を加齢とともに示す3xTgマウスと、腹側被蓋野のドーパミンニューロンを薬理学的に破壊したマウスを用いて、それらの障害物回避歩行時の四肢の動作を解析した。3xTgマウスは約5カ月齢からヒトのアルツハイマー病患者と類似した病理的所見を示すので、野生型マウス、25カ月齢(若齢)及び1013カ月齢(高齢)の3xTgマウスの3群を設定した。障害物回避歩行時に障害物と最初に接触した肢の接触率を算出した結果、高齢3xTgマウスは他のマウスと比較して後肢の接触率が高かった。遅延障害物回避課題においては、野生型マウス及び若齢3xTgマウスにおいては、10秒以内の制止期間後、障害物より後肢を高く拳上することが観察された。しかしながら、高齢3xTgマウスは後肢の高さが設置されていた障害物より低下する傾向を示した。以上の結果から、高齢3xTgマウスは遅延障害物回避課題において作業記憶が障害されていることが示唆された。腹側被蓋野のドーパミンニューロンが破壊されたマウスにおけるデータについては現在解析中である。運動生理学マウスにおける遅延障害物回避課題の構築に成功し、また、アルツハイマー病モデルマウスにおける作業記憶の障害について信頼性のある重要なデータを得ることができた。

この研究成果について、The Society for Neuroscience Annual Meeting 2013や第68回日本体力医学会大会、第11回日本ワーキングメモリ学会大会において発表を行い、現在、国際誌への投稿論文として準備している。中脳の腹側被蓋野のドーパミンニューロンは作業記憶の神経機構として重要な役割を持っていることが知られている。そこで、今後は身体性作業記憶に対する腹側被蓋野のドーパミンニューロンの特異的破壊による影響を調べる。動物処理費用として計上していたが、大学運営校費からの予算が提供されたためにその分余剰が生じた。実験動物飼育における消耗品(餌及び床敷など)の購入費用として計画している。
日本脳炎ウイルスの生態解析

国内で流行している主なフラビウイルスはJEVのみとされているが、近隣のアジア諸国ではウエストナイルウイルスやデングウイルスなど複数のフラビウイルスの流行が報告されている。昨今の環境および生態系の変化や国際化に伴いJEV以外のフラビウイルスが国内に侵入する可能性が考えられる。そこで、今年度は国内における日本脳炎ウイルスおよび他のフラピウイルスの動態を調査するために、抗原および抗体検出系の確立を試みた。また、採取した野生動物のサンプルを用いてフラピウイルスの遺伝子検出を行った。計18個の単クローナル抗体の作製に成功し、そのうち調べたすべてのフラビウイルス属のウイルスと交差反応性を示すもの(5個)、日本脳炎ウイルス血清群(1個)または日本脳炎ウイルス(2個}に対して特異的なものがあった。これらの特異性の異なる抗体を利用して、各種動物からの抗体およびウイルス検出系の確立を試みている。抗原検出系では現在2.75x10^6PFU/mlまで検出できる系が確立できたが、実用には感度の向上が必要であると考えている。抗体検出系は二次抗体を必要とせず、様々な動物種に適用できるブロッキングELISAの系の確立を目指しており、犬、イノシシでは有用であることが示された。また、2012年から2014年にかけて山口県下関市で捕獲されたイノシシの肝臓(48頭)、血清(51頭)、シカの血清(79頭)、2013年から2014年山口県周南市で採集されたダニ(3413匹、143プール)よりフラビウィルスの遺伝子検出を試みた。下関市のイノシシ2頭、シカ2頭、周南市のダニ1プール(20匹)からフラビウイルスが検出された。系統解析の結果、イノシシ1頭から検出されたのはダニ媒介性脳炎ウイルス(TBEV)様ウイルスで、Langatvirus (91%)と最も相同性が高かった。イノシシ、シカ、ダニから検出された遺伝子はほぼ同一で既知のフラビウイルスと相同性が最大で73%であった。シカ1頭からは日本脳炎ウイルスの遺伝子が検出された。(抄録なし)日本脳炎ウイルス(JEV)は主に豚と蚊の間で増殖するが、蚊のいない11月から翌年6月の問の越冬機序は明確には分かっていない。そこでJEVの越冬機序を解明することを目的として今年度は様々な野生動物におけるJEVの動態を調査した。山口県下関市においてシカおよびイノシシ、和歌山県田辺市およびフィリピンのミンダナオ島においてコウモリのサンプリングを行った。これらのサンプルを用いてJEVに対する抗体およびウイルス分離および遺伝子の検出を試みた。田辺市およびフィリピンのコウモリの血清を用いてJEVに対する抗体保有状況の調査を実施したところ、田辺市では87%(52頭中45頭)、フィリピンでは25%(319頭中80頭)のコウモリが抗体陽性と判定された。以上のことより、和歌山県やフィリピンのコウモリはJEVもしくは近縁なフラビウイルスに感染していることが示された。また、下関市のイノシシ(51頭)や田辺市のコウモリ(52頭)の血清またはPBMCからウイルス分離、さらにはフィリピンのコウモリ(71頭)および下関市のイノシシ(46頭)の肝臓からフラビウイルスの分離および遺伝子検出を試みたが、現在までに陽性例はない。また、JEV(JEV/sw/Chiba/88/2002:遺伝子型1)に対する単クローナル抗体の作製、およびその性状解析を実施した。計18個の単クローナル抗体の作製に成功し、そのうち調べたすべてのフラビウイルス属のウイルスと交差反応性を示すもの(5個)、日本脳炎ウイルス血清群(1個)または日本脳炎ウイルス(2個)に対して特異的なものがあった。抗体検出系は二次抗体を必要とせず、様々な動物種に適用できるブロッキングELISAの系の確立を目指しており、犬では有用であることが示された。今後は様々な動物に適応可能か検討していく予定である。

また、2012年から2014年にかけて山口県下関市で捕獲されたイノシシの肝臓(48頭)、血清(51頭)、シカの血清(79頭)、2013年から2014年山口県周南市で採集されたダニ(3413匹、143プール)よりフラビウィルスの遺伝子検出を試みた。下関市のイノシシ2頭、シカ2頭、周南市のダニ1プール(20匹)からフラビウイルスが検出された。系統解析の結果、イノシシ1頭から検出されたのはダニ媒介性脳炎ウイルス(TBEV)様ウイルスで、Langatvirus (91%)と最も相同性が高かった。イノシシ、シカ、ダニから検出された遺伝子はほぼ同一で既知のフラビウイルスと相同性が最大で73%であった。シカ1頭からは日本脳炎ウイルスの遺伝子が検出された。日本脳炎ウイルスに対するモノクローナル抗体を作製し、その性状解析を実施した。それを応用し、抗体および抗原の検出系の確立に取り組んでいる。また、平成25年度に実施予定であった野生動物のサンプリングを今年度から実施しており、当初の予定より多くのサンプルを採取することができると考えられる。以上のことより、現在当初の計画以上に研究が進展していると考えている。日本脳炎ウイルスの増幅動物の可能性が示唆されているイノシシやコウモリを中心とした野生動物のサンプリングを継続し、それらのサンプルを用いて日本脳炎ウイルスに対する抗体の検出、ウイルス分離、遺伝子検出を実施していく。また、単クローナル抗体を用いた簡便かつ高感度にウイルスを検出・識別できる系や様々な動物に適用できる簡便な抗体検出系を確立し、イノシシやコウモリを中心とした様々な動物における日本脳炎ウイルスの生態を明らかにしていく。(抄録なし)
閉経モデルマウス滑膜内腱の網羅的遺伝子発現解析による狭窄性腱鞘炎の病態解明

8週齢雌C57/BL6マウスを使用し,卵巣摘出後8週時に後肢第2-4趾より滑膜内腱である深趾屈筋腱を採取しRNAを抽出した.RNA次世代シークエンス(RNA-seq)を用いて閉経モデル(OVT)群とコントロール群(CT)における遺伝子発現を網羅的に解析した.さらに, RNA-seqの結果から発現変動遺伝子,およびERの2つのアイソフォームであるERα,ERβの発現量をリアルタイムPCRにより解析した.結果、RNA-seqによる解析では、OVT群において2倍以上の発現増加を認めた遺伝子を30,減少した遺伝子を325認めた.Gene ontology(GO)解析の結果,発現増加を認めた遺伝子群は急性炎症反応,血管新生に関連していた.リアルタイムPCRでは,RNA-seq.の発現変動遺伝子は同様の発現傾向を認めた.また,OVT群ではERαの発現増加を認めたが,ERβは発現に有意差を認めなかった.よって,閉経モデルマウスの滑膜内腱では,ERの発現が増加し,急性炎症に関連する遺伝子群の変動を認めたことから,エストロゲンが滑膜内腱の恒常性や機能の維持に重要な役割を担っており,エストロゲンの欠乏が狭窄性腱鞘炎発症に関与していると推測された.今後の課題として,同腱より単離させたprimary cultureを使用したin vitroでの実験による再現性の確認を検討中である。また、閉経モデルマウスの腱および腱周囲組織の免疫蛍光染色を用いた組織学的検討を行う。研究計画調書に記載した平成30年度の実験計画は予定通り遂行できたこと。すでに平成31年度の実験計画を開始し予備実験を終了させていることなどから進捗状況は(2)おおむね順調に進展している、と評価した。研究調書で記載した実験計画に基づき平成31年度の課題を遂行する予定である。また、平成30年度の実験結果から得られた発現変異遺伝子は計355であった。今後の課題として、腱代謝のキーファクターとなりうるkey geneの検索と検討を併せ行う予定である。そのために閉経モデルマウスの閉経期間の変更やマウスの変更を行なった上でのRNA-seq.の再検討や、腱の特定部分(腱鞘、腱表面組織など)をlaser microdissectionを使用して解析するなどを予定している。当初計画では平成30年度に海外学会参加の予定であったが、研究の進捗状況により平成31年度に実施することとしたため次年度使用額が生じた。次年度使用額は平成31年度請求額と合わせ外国旅費として使用する。
ダイズの高α-トコフェロール化遺伝子の同定と作用機序の解明

高α-トコフェロール(Toc)品種「Keszthelyi A.S.」と普通品種「いちひめ」の交配後代の分離集団を用いた解析の結果、Sat_243とSat_167(連鎖群K)の遺伝子型とα-Toc含有率との問に密接な関係を認めた。また、α-Toc含有率とγ-Toc含有率の間に高い負の相関を認め,高α-Toc形質にはγ-Tocをα-Tocに変換するγ-Tocopherol methyltransferase(γ-TMT)が関与することが示唆された。次に,トコフェロール生合成関連酵素、Homogentisate phytyltransferase(HPT),2-Methyl-6-phytyl-1,4-benzoquinol methyltransferase(MPBQMT),Tocopherol cyclase(TC),及びγ-TMTの4種の酵素遺伝子について,ダイズTACライブラリーからPCRにより上記4酵素遺伝子を含むと推定されるクローンを単離した。さらに、上記の中でも特に高α-Toc化に強く影響を及ぼすと考えられるγ-TMTについて解析を進め,cDNAを用いた3'-RACEの結果から、γ-TMT遺伝子には少なくとも3コピー(γ-TMT1,γ-TMT2,γ-TMT3)が存在することを明らかにした。また、これらの3つの遺伝子の発現解析を行うためにリアルタイムRT-PCRを試みた。しかしながら、これら3つの遺伝子のC末端領域の配列は非常に類似性が高く、個々の遺伝子を識別するための特異的プライマーを設計することはできなかった。そこで、発現解析にはこれら3つの遺伝子を全て検出できる相同領域においてプライマーを設計して行った。なお、γ-TMT遺伝子の発現の程度は、内在性のα-チューブリン遺伝子の発現と比較して評価を行った。高α-Toc品種と普通品種それぞれにおいて、開花後30日、40日および50日後の種子から全RNAを抽出しステージごとのγ-TMT遺伝子の発現を定量した。その結果、高α-Tocは普通品種とくらべ、開花後40日から50日にかけてγ-TMT遺伝子発現の極端な増加が認められた。このことから、高α-Toc品種では登熟中後期にγ-TMT遺伝子の発現が極端に増加することで種子におけるα-Toc含量を増加させることが示唆された。これまでに、連鎖群Kに寄与率の大きな1個のOTL座を認めており、現在、γ-TMT1,γ-TMT2,γ-TMT3の多型を調査し、いずれの遺伝子座が本OTL座と一致するか解析を進めている。次に,高α-Toc化遺伝子を同定し,その作用機序を解明するために,トコフェロール生合成関連遺伝子のクローニングを行った。すなわち,Homogentisate phytyltransferase (HPT),2-Methyl-6-phytyl-1,4-benzoquinol methyltransferase (MPBQMT), Tocopherol cyclase (Tc),およびγ-TMTの4種の酵素遺伝子について,既存のダイズ,イネ,シロイヌナズナのESTおよびゲノムデータベースを参考にプライマーを作製し,ダイズTACライブラリーからPCRにより上記4酵素遺伝子を含むと推定されるクローンを単離した。上記4酵素遺伝子のうち,特にα-Tocの生合成に深く関与すると考えられるγ-TMTについて解析を進め,3つのTACクローンを整列化した。γ-TMTのcDNAをプローブにしてこれらのTACクローンのサザン解析を行うことにより,γ-TMT遺伝子が2コピー(γ-TMT1,γ-TMT2)存在することを明らかにした。現在,これらのゲノム配列をもとにα-Toc含量の高い変異品種と普通品種からこの領域を増幅し,品種間の多型性を調査している。また,登熟種子の全RNAからRT-PCRでγ-TMTのcDNAの部分配列を増幅し,3種類の配列を得た。このうち,2種類の増幅産物の配列はそれぞれ上記のγ-TMT1,γ-TMT2の配列と一致した。現在,α-Toc含量の高い変異品種と普通品種とを比較しながら開花後の日数ごとの各ステージでの発現解析を進めている。

しかしながら、これら3つの遺伝子のC末端領域の配列は非常に類似性が高く、個々の遺伝子を識別するための特異的プライマーを設計することはできなかった。そこで、発現解析にはこれら3つの遺伝子を全て検出できる相同領域においてプライマーを設計して行った。なお、γ-TMT遺伝子の発現の程度は、内在性のα-チューブリン遺伝子の発現と比較して評価を行った。高α-Toc品種と普通品種それぞれにおいて、開花後30日、40日および50日後の種子から全RNAを抽出しステージごとのγ-TMT遺伝子の発現を定量した。その結果、高α-Tocは普通品種とくらべ、開花後40日から50日にかけてγ-TMT遺伝子発現の極端な増加が認められた。このことから、高α-Toc品種では登熟中後期にγ-TMT遺伝子の発現が極端に増加することで種子におけるα-Toc含量を増加させることが示唆された。これまでに、連鎖群Kに寄与率の大きな1個のOTL座を認めており、現在、γ-TMT1,γ-TMT2,γ-TMT3の多型を調査し、いずれの遺伝子座が本OTL座と一致するか解析を進めている。
変異原物質に対する個人の感受性評価に関する研究

変異原物質に対する感受性を個人レベルにおいて評価する目的から、一般健常人の集団を対象として、自然誘発小核頻度とX線ならびにコルヒチン誘発小核頻度を測定し、その分布を統計学的に解析した。その結果、自然誘発小核頻度に加え、両変異原によって誘発された小核頻度にも明らかな個体差が存在することを明らかにした。また、両変異原により誘発された小核頻度の間には相関は認められず、このことは両変異原に対する感受性が独立していることを示唆した。さらに、変異原に対する感受性の個体差を生じさせる宿主側要因として、血清の坑酸化能に着目し、電子スピン共鳴法によって血清のヒドロキシルラジカル消去能を測定・評価し、この指標と自然小核頻度や血清ビタミン濃度との関連について検討した。また自然誘発小核を坑動原体抗体法によって染色し、染色体切断型異常と消失型異常に分類をした上で、それぞれの染色体異常のタイプに対する抗酸化性ビタミン濃度の関連性について検討した。健常一般集団33名を対象にサイトブロック小核試験を実施し、動原体陽性小核と陰性小核の出現頻度から、各個人の染色体切断型異常と消失型異常の誘発感受性を調べた。同時に採取した血清のビタミン濃度(葉酸、ビタミンC、E、B12、ベータカロチン)を定量した。小核頻度を従属変数、各種ビタミン濃度と年齢を独立変数とした重回帰分析の結果、血清葉酸濃度が消失型・切断型異常の両タイプの染色体異常の発生に負に関連し、ビタミンC濃度が消失型異常に正に関連し、また切断異常にも正に関連する傾向が認められることを明らかにした。以上の結果、自然誘発される染色体異常と同様に、変異原により誘発された小核頻度に個体差を認め、その個体差を生じさせる宿主側要因として、年齢の他、葉酸やビタミンCの血清中水溶性ビタミン濃度が重要な要因として関連していることが示唆された。変異原物質に対する感受性を個人レベルにおいて評価する目的から、末梢血中リンパ球における小核頻度の測定を行った。本年度は加齢影響を除外できる同一年齢層(19-24才)の健常男女26名を対象として、自然誘発小核頻度、および小核誘発のメカニズムを異にするコルヒチンとX線により誘発した小核頻度の量反応関係ならびに同一用量を処理した際の小核頻度の分布について検討した。各変異原による量反応曲線の解析からは小核誘発の閾値(統計学的に有意な小核誘発を認めた最低用量レベル)はコルヒチンにおいて個体差が認められたが、X線においては認められなかった。繰り返し実施した2回の測定値(最大用量での小核頻度)は各個人においてはよく一致するが、被検者全体の分布をみると、いずれの変異原による誘発小核頻度の分布も正規分布に適合する(カイ二乗検定による)ことがわかった。このことから変異原に対する細胞遺伝学的影響(感受性)に個体差が存在することが強く示唆された。染色体切断(chromosome breaks)型異常を反映するとされる動原体染色陰性の小核と染色体消失(chromosome loss)型異常を反映する動原体陽性小核に分類する目的から、二種の変異原によって誘発された小核の動原体染色をを進めている(動原体染色法についてはその改良法をまとめた:Environ. Mut. Res. Commun.,17:217-221)が、X線では動原体陰性小核が、またコルヒチンでは動原体陽性小核が優位に誘発される傾向を認めているが、個体差との関連を示すのに十分なサンプルが未だ解析されておらず継続中である。

本年度は19-80才の健常男女124名に対象集団を拡大し、自然誘発小核頻度、および小核誘発のメカニズムを異にするコルヒチンとX線により誘発した小核頻度の分布について検討した。各変異原による小核誘発頻度はANOVA検定により個人差が明らかであり、変異原に対する感受性の個体差が示唆された。さらにX線誘発小核頻度とコルヒチン誘発小核頻度の間には有意な相関は認められず、これらの変異原に対する感受性は独立していることが示唆された。対象者の一部に対して、誘発された小核の動原体染色を実施した結果から、染色体切断(chromosome breaks)型異常を反映するとされる動原体染色陰性の小核はX線にdominantに誘発され、染色体消失(chromosome loss)型異常を反映する動原体陽性小核はコルヒチンで誘発されることが判明し、各々のタイプの染色体異常に対する感受性が独立していることが両変異原に対する感受性が独立している理由であると推察された。現在、X線による小核誘発がラジカルによるものであると考え、小核試験と同時にサンプリングした血清の抗酸化性について各種抗酸化ビタミン濃度と電子スピン共鳴法によるヒドロキシルラジカル捕獲能について測定し、小核頻度との関連について実験を継続中である。昨年度までに、変異原物質に対する感受性と個人レベルにおいて評価する目的から、一般健常人の集団を対象として、自然誘発小核頻度とX線ならびにコルヒチン誘発小核頻度の分布を測定し、統計学的に解析した。その結果、自然誘発小核頻度に加え、変異原誘発小核頻度にも明らかな個体差が存在することを明らかにした。さらに、変異原に対する感受性の個体差を生じさせる宿主側要因として、血清の坑酸化能に着目し、電子スピン共鳴法によって血清のヒドロキシルラジカル消去能を測定・評価し、この指標と自然小核頻度や血清ビタミン濃度とのとの関連について検討した。本年度は、自然誘発小核を坑動原体抗体法によって染色し、染色体切断型異常と消失型異常に分類をした上で、それぞれの染色体異常のタイプに対する抗酸化性ビタミン濃度の関連性について検討した。健常一般集団33名を対象にサイトブロック小核試験を実施し、動原体陽性小核と陰性小核の出現頻度から、各個人の染色体切断型異常と消失型異常の誘発感受性を調べた。同時に採取した血清のビタミン濃度(葉酸、ビタミンC、E、B12、ベータカロチン)を定量した。小核頻度を従属変数、各種ビタミン濃度と年齢を独立変数とした重回帰分析の結果、血清葉酸濃度が消失型・切断型異常の両タイプの染色体異常の発生に負に関連し、ビタミンC濃度が消失型異常に正に関連し、また切断異常にも正に関連する傾向が認められることを明らかとした。本年度の研究結果はこれまでの知見と考え合わせると、小核頻度の個体差を生じさせる宿主側要因として、年齢の他、葉酸やビタミンCの血清中水溶性ビタミン濃度が重要な要因として関連いることが示唆された。
再発性角膜ヘルペスの機序解明と根治治療の開発

1.HSV-1再活性化の機序解明におけるin vitro experiment:今回,使用した糸では,エピネフリンがin vitroにおいてHSV-1の再活性化に影響を及ぼさないことが判明した.今後,ウイルス株あるいはMDIを変えることによって, in vitroにおけるHSV-1再活性化の機序について解明する.2.HSV-1再活性化の機序解明におけるin vivo experiment:今回の研究では, HSV-1感染マウス三叉神経節を採取して,エピネフリンを添加することにより,ある一定の条件下(1μg/mlのエピネフリンを添加)でHSV-1が再活性化することが判明した.さらに, β-blockerによりそのHSV-1再活性化率は低下し, α-blockerにより, HSV-1再活性化率は変化がなかった.以上の事から,今回使用した糸において, HSV-1再活性化におけるβ-receptorの重要性が示唆された.3.インターフェロンのHSV-1潜伏感染抑制効果: HSV-1急性感染期において, IFN-α/βの全身投与群は点眼群およびイオントフォレーシス群に比べて治療効果があった. HSV-1の神経節内潜伏感染抑制効果は上記3群の中でイオントフォレーシス群が最もよかった.以上の結果からIFN-α/βをイオントフォレーシスによって高濃度に眼内移行させるとHSV-1の神経節内潜伏感染を抑制できる可能性が示唆された.4.マウス角膜ヘルペスに対するワクチン投与の治療効果:マウス角膜ヘルペス動物モデルを用いてglycoproteinD(gD)は実質型病変に対し著明な抑制効果を示した.神経節内潜伏感染率もgD免疫マウス群で有意に減少した.これらの結果はgDが角膜ヘルペス感染予防に応用できる可能性を示唆した. gD投与により細胞性免疫の誘導は認められず,液性抗体を主体とする免疫機構が強く誘導された.1.HSV-1再活性化の機序解明におけるin vitro experiment:今回,使用した糸では,エピネフリンがin vitroにおいてHSV-1の再活性化に影響を及ぼさないことが判明した.今後,ウイルス株あるいはMDIを変えることによって, in vitroにおけるHSV-1再活性化の機序について解明する.2.HSV-1再活性化の機序解明におけるin vivo experiment:今回の研究では, HSV-1感染マウス三叉神経節を採取して,エピネフリンを添加することにより,ある一定の条件下(1μg/mlのエピネフリンを添加)でHSV-1が再活性化することが判明した.さらに, β-blockerによりそのHSV-1再活性化率は低下し, α-blockerにより, HSV-1再活性化率は変化がなかった.以上の事から,今回使用した糸において, HSV-1再活性化におけるβ-receptorの重要性が示唆された.3.インターフェロンのHSV-1潜伏感染抑制効果: HSV-1急性感染期において, IFN-α/βの全身投与群は点眼群およびイオントフォレーシス群に比べて治療効果があった. HSV-1の神経節内潜伏感染抑制効果は上記3群の中でイオントフォレーシス群が最もよかった.以上の結果からIFN-α/βをイオントフォレーシスによって高濃度に眼内移行させるとHSV-1の神経節内潜伏感染を抑制できる可能性が示唆された.4.マウス角膜ヘルペスに対するワクチン投与の治療効果:マウス角膜ヘルペス動物モデルを用いてglycoproteinD(gD)は実質型病変に対し著明な抑制効果を示した.神経節内潜伏感染率もgD免疫マウス群で有意に減少した.これらの結果はgDが角膜ヘルペス感染予防に応用できる可能性を示唆した. gD投与により細胞性免疫の誘導は認められず,液性抗体を主体とする免疫機構が強く誘導された.単層培養のVero Cellに、HSV-1(FUKUDA株)を接種し、接種前後におけるエピネフリン添加の上清中HSV-1 titerに対する影響を検討した。その結果エピネフリン添加群と非添加群で差を認めなかった。次に、Balb/cマウスの角膜にHSV-1を点眼接種し、21日後に三叉神経節を採取。エピネフリン添加によるin vitro reactivationを施行して、HSV-1のCPE出現率とプラーク数を測定した。このIN VIVOの系では、エピネフリン添加群と非添加群で差を認めた。(2)chemical sympathectomy(6-hydroxydopamineのiontophoresisをマウス角膜上にて施行)後、エピネフリンを点眼して、涙液、眼球及び神経節内再活性化HSV-1を検索した。Balb/cマウスで50%、C57BL/6にて15%、C3H/Heにて30%の再活性化を認めた。しかし涙液、眼球、三叉神経節のすべてにおいて再活性化HSV-1を認めたものは1例もなかった。さらにHSV-1によると考えられる樹枝状潰瘍も認められなかった。マウスは家兎に位べHSV-1並びに6-HDに対して弱く、現在の時点では実験的に確実な系とは言えない。今後、indicator cellの変更、他の方法(免疫抑制剤など)との併用の必要性が示唆された。(3)上記マウス角膜ヘルペス再発モデルが確立しなかった為、急性期モデルにおけるHSV-1 glycoprotein Dによる角膜炎の予防効果について検討した。

glycoprotein D免疫群では、コントロール群に比べて、上皮性病変は軽度抑制されたのみであったが、実質性病変はほとんど発生せず、各組織(角膜、眼球、三叉神経節、中脳)のウイルスカ価も著しく低下していた。また、glycoprotein Dを投与したマウスでは血清中の中和抗体価及びCDAC能が上昇していた。
次世代超音速航空機のエンジンのNOx生成機構と環境に及ぼす影響に関する研究

近年世界各国で開発が期待されている次世代超音速機は成層圏レベルの高度を飛行することになり,これらの排気ガス中のNOxがO_3に及ぼす影響が危惧される.本研究では,航空機から排出されるNOxとO_3の挙動を調べた.特に排気プルームと周囲雰囲気中のオゾンとの反応を簡略な場で調べるため,ボックスモデルを用いた数値計算を行った.その結果,排気ガスによりオゾン濃度は減少し,その回復には数日要すること,オゾン濃度の減少量は排気プルームが昼間に排出されるよりも夜間に排出される方が少ないことを明らかにした.また,排気プルーム中においてはOHのNOxを減少させる反応のオゾン濃度に対する感度は正の値を持っており,オゾン濃度を増加させる作用を及ぼしていることがわかった.一方,次世代空気吸い込み式エンジンの候補として考えられているスクラムジェットエンジンに液体燃料を適用するための基礎実験を行った.液体燃料の微粒化の促進および貫通高さの制御を目的として燃料噴射弁の内径および背圧を変化させた.光学計測により,超音速流中に垂直に噴射された液体燃料の噴霧特性および微粒化特性を定性的に明らかにした.その結果,主流全温400Kにおける噴射口径0.5mmと0.3mmの実験の比較から,貫通高さが大きくても,微粒化が十分になされていないと着火に至らないことがわかった.また,燃料流量を増やしていくと,非燃焼状態から,弱燃焼モード,強燃焼モードを経ずに熱閉塞に至ることが観察された.さらに,0.3mm噴射口径において2300K以下では燃焼が起きていないのに対し,0.5mm噴射口径においては当量比1以上で燃焼が確認された.近年世界各国で開発が期待されている次世代超音速機は成層圏レベルの高度を飛行することになり,これらの排気ガス中のNOxがO_3に及ぼす影響が危惧される.本研究では,航空機から排出されるNOxとO_3の挙動を調べた.特に排気プルームと周囲雰囲気中のオゾンとの反応を簡略な場で調べるため,ボックスモデルを用いた数値計算を行った.その結果,排気ガスによりオゾン濃度は減少し,その回復には数日要すること,オゾン濃度の減少量は排気プルームが昼間に排出されるよりも夜間に排出される方が少ないことを明らかにした.また,排気プルーム中においてはOHのNOxを減少させる反応のオゾン濃度に対する感度は正の値を持っており,オゾン濃度を増加させる作用を及ぼしていることがわかった.一方,次世代空気吸い込み式エンジンの候補として考えられているスクラムジェットエンジンに液体燃料を適用するための基礎実験を行った.液体燃料の微粒化の促進および貫通高さの制御を目的として燃料噴射弁の内径および背圧を変化させた.光学計測により,超音速流中に垂直に噴射された液体燃料の噴霧特性および微粒化特性を定性的に明らかにした.その結果,主流全温400Kにおける噴射口径0.5mmと0.3mmの実験の比較から,貫通高さが大きくても,微粒化が十分になされていないと着火に至らないことがわかった.また,燃料流量を増やしていくと,非燃焼状態から,弱燃焼モード,強燃焼モードを経ずに熱閉塞に至ることが観察された.さらに,0.3mm噴射口径において2300K以下では燃焼が起きていないのに対し,0.5mm噴射口径においては当量比1以上で燃焼が確認された.本年度は,航空機から排出される窒素酸化物(NOx)が成層圏環境に及ぼす影響を明らかにすることを目的として,数値解析による調査を行った.高度25kmおよび21kmの成層圏環境において,航空機から排出された排気プルーム中におけるNOx, HOxおよびオゾン反応系の機構をExpanding Box法を使用することにより明らかにすることを試みた.また,感度解析によりこのような反応系に詳細な考察を行った.排気される時刻の影響を調べるため,排気時刻として,6時,12時,18時および24時の4条件を設定し,計算を行った.その結果,以下のことが明らかになった.・高度25kmにおいて排気ガスが排出された場合,排気72時間後においてオゾン濃度は1ppb以内まで回復しない.高度25kmで排気された方が,高度21kmの場合に比べてオゾンの減少量が大きい.・排気プルームが日中(太陽光の存在)に排気された方が,夜間に排出される場合に比べて,オゾン濃度の減少量は大きい.また,オゾン濃度の時間変化は排出される時刻に大きく影響を受ける.・排気プルームが排出された際,周辺雰囲気に対するNO濃度の変化量の時間経過は排出される時刻にほとんど依存しない.硝酸についても同様であった.・排気プルームが排出された際,周辺雰囲気に対するNO2の変化量の時間経過は排気される時刻に依存し,また太陽光強度の変化に大きな影響を受ける.これは,NO2濃度が光化学反応の影響を大きく受けることによるものと考えられる.近年世界各国で開発が期待されている次世代超音速機は成層圏レベルの高度を飛行することになり,これらの排気ガス中のNO_XがO_3に及ぼす影響が危惧される.本研究では,航空機から排出されるNO_XとO_3の挙動を調べ,特にこれらの反応系に及ぼす微量の炭化水素(メタン)の影響を明らかにした.実験室において大型真空チャンバを使用することで成層圏環境を模擬し,一定濃度のメタンが存在した場合のNO_Xとオゾンの反応挙動を測定した.実験ではFTIRを用い,オゾン,メタン,NO, NO_2濃度の時間的変化を計測した.

その結果,微量のメタンはNO_Xによるオゾンの反応を初期段階では若干抑制することがわかったものの,定常状態に達した際のオゾン濃度への影響については計測時間の不足等により明確な結論を得られなかった.また,次世代空気吸い込み式エンジンの候補として考えられているスクラムジェットエンジンに液体燃料を適用するための基礎実験を行った.液体燃料の微粒化の促進および貫通高さの制御を目的として2流体噴射弁を用いて,キャリアガスと液体燃料の2相流の状態で噴射させた.その結果,液体燃料流量を一定とした場合でもキャリアガスの流量を調整することにより燃料流の貫通高さを制御することが可能となり,安定な強燃焼状態を実現させることができることを明らかにした.また,水素をパイロットとして点火させた場合,安定な燃焼状態が広範囲な実験条件で達成されること,およびパイロット水素の供給を止めた状態においても液体燃料の燃焼が安定に保持される条件が存在することを実験的に明らかにした.
ペーストタイプ陶材を用いた審美修復法の実用的検討

これまでの研究で開発した金属焼き付けポーセレン用に開発したペーストタイプ陶材を基にオールセラミックシステム用のペーストタイプ陶材を開発し、CAD/CAMで作製した高強度セラミックコアーにレヤリングすることにより、優れた審美性と生体親和性を有するオールセラミッククラウンを簡便に作成可能なシステムを構築することが本研究の目的である。現在、審美修復物の主流は金属焼付ポーセレン(メタルボンド)であるが、患者の審美性に対する要求の高度化や歯科金属アレルギーの問題などから、金属構造をもたない(メタルフリーの)オールセラミッククラウンが脚光を浴びている。しかし、これらのオールセラミックシステムはいずれにおいても粉末陶材によるレヤリングが必要である。ペーストタイプ陶材は硬質レジンペーストと同程度の簡便さで築盛できるため、CAD/CAMによるセラミックコアーの削りだしと共に技術的な関与が少ない為、その実用性は極めて高い。本研究では高強度オールセラミックコアとして2種類(In-Ceram Alumina, In-Ceram Spinell)のシステムを用いた。これらのオールセラミックスと熱膨張係数を合わせた新たなペースト陶材を開発して、その焼き付け強度を3点曲げ試験を用いて従来型陶材と比較検討した。その結果、ペースト陶材は従来型の粉末陶材よりもわずかに高い値を示し、ペースト陶材がオールセラミックシステムのレヤリングに有効であることが明らかとなった。さらに、ペースト陶材の色調安定性(再現性)、微小硬さについても検討を行った結果、色調については従来型陶材と有意差がないこと、また微小硬さ試験においては、ペースト陶材のほうが従来型陶材に比較して破折抵抗性に優れていることが示唆された。このように本研究によってペースト陶材をオールセラミックシステムに応用することが可能であり、またきわめて有効であることが明らかとなった。本年度はまずCAD/CAMで作製したオールセラミックスコアー上にペースト陶材を積層・焼成した試片の強度試験を行い、その実用性を詳細に検討した.1.オールセラミックコアー試験片の作製オールセラミックコアー試験片は新たに購入したCADシステムGN-I上で設計し、そのデータをインターネット経由で(株)ジーシーの臨床推進センターへ送信してインセラムよりCAMにて作製した。2.ペースト陶材の改良レヤリング用のペースト陶材は、本来金属焼付ポーセレン用に開発したものであることから、まずオールセラミックスと熱膨張係数を合わせた新たなペースト陶材を開発して実験に使用した。コアー材からの陶材焼成時の剥離が最も重要な課題であり、この点の克服を目的として予備実験を行った。この結果、剥離の防止には陶材を少量含む新開発のプライマー塗布が有効であることが判明したので、今回購入したポーセレンファーネスを用いてプログラムを検討し、最適の条件で試験片を焼成した。3.3点曲げ試験上記2種類のオールセラミック試片(In-Ceram Alumina. In-Ceram Spinell)にオールセラミック用ペースト陶材をレヤリングし,その曲げ強度を従来の粉末陶材でレヤリングしたものと比較検討した.ISO 6872:1995Dental Ceramicsに準じて3点曲げ試験を行った結果.ペースト陶材は従来型の粉末陶材よりもわずかに高い値を示した.このことからペースト陶材がオールセラミックスのレヤリングに有効である事が示唆された。4.学会発表以上の結果を、2003年6月にスウェーデン・イエテボリのIADRにおいて,Flexural Strength of All Ceramics Layered with Paste Porcelainの題名で発表した。

今年度は、色調の安定性(再現性)とペースト陶材の微小硬さについても検討した。1.色調安定性ペースト陶材と従来型のパウダー陶材を用いて、直径20mm厚さ1mmの円板試料を作製した。それぞれ所定のプログラムに従って焼成後、表面を0.5μmで仕上げ、グレージングを行った。測色には分光測色計CM-2600dを使用し、試料の中央および周辺部4カ所の計5カ所を測定した。結果はD65光源に対するCIE L*a*b*で表示したが、色彩分析ソフト(彩Check XP)により試料間、ならびに同一試料内の色差ΔEを次式に基づいて算出し、比較した。この結果、ペースト、パウダー試料の平均ΔEとS.D.は、それぞれ1.05(0.45)と1.29(0.16)であった。さらに、同一試料内では、0.18(0.09)と0.42(0.21)であり、ペーストの方が若干小さな値を示したが、t-検定による統計学的な有意差(p<0.05)は認められなかった。2.ビッカース硬さ試験マイクロビッカース硬さ試験機(MVK-G2,AKASHI)により、荷重500gfで試験した。この結果、ペースト。パウダーそれぞれのHvは510.1(1.7)と512.2(0.8)で統計学的な有意差は認められなかった(p<0.05)。3.SEMによる観察硬さ試験後の試料は走査型電子顕微鏡(JXA-6100P, JEOL)で圧痕周辺部を拡大観察した。この結果、菱形の頂角から延びた陶材表面の亀裂はペーストよりもパウダーの方が有意に長く、ペーストの方が破折抵抗性に優れる可能性が示唆された。以上の成果は、Color and Microhardness of Paste Porcelainの題名で、第83回IADR総会(2005年3月、アメリカ・ボルチモア)において発表する予定である。第83回IADR総会(米国ボルチモア,2005年3月11日)で以下の発表を行った。題名:目的:新しく開発したペーストタイプ陶材について色調安定性と硬さを評価するために以下の実感を行った。この陶材はペーストの状態で供されるため、コンデンスの必要がなく陶材の築盛を容易に行うことが可能である。方法:1色調安定性についてペーストタイプ陶材と従来型のパウダー陶材を用いて円板試料(直径:20mm,厚さ:1mm)を作製した。それぞれの試料を所定のプログラムにて焼成後、表面を0.5μmで仕上げグレージングを行い測定試料とした。分光測色計(CM-2600d)を使用し、測色を行った。(測定部位試料の中央、及び周辺4カ所)この結果を色彩分析ソフト(彩Check XP)により試料間、同一試料内の色差ΔEを比較検討した。2ビッカース硬さについてマイクロビッカース硬さ試験機(MVK-G2,AKASHI)をもちいて測定した(荷重:500gf)結果:1色調安定性についてペーストタイプ
保育所をコミュニティ資源として親子の抱える課題に応える体験型支援実践の形成

現場の人々とともに実践を形成していく過程の中に研究を織り込む「形成的フィールドワーク」(當眞, 2004)の方法により,保育所の子育て支援現場で親子が抱える問題を多角的に把握しつつ、親としての力量を育て,親子が互いに育み合えるような関係を築くことを支える体験型の支援実践の工夫を重ね、親子の課題に応えるワークショップ型(体験型)の子育て支援実践モデルを開発した。保育所(認定子ども園を含む)はその物理的・人的・社会文化的環境としての特徴から、入所児童だけでなく地域の家庭の乳幼児とその親の育ちを支える実践を展開する上でも活用可能な優れたコミュニティ資源である可能性が高い。しかし、そのポテンシャルが十分に引き出され活かされているとはいえない現状にある。そこで本研究では、研究者が現場の人とは異なる役割を担いながら,現場の人々とともに実践を形成していく過程の中に研究を織り込む「形成的フィールドワーク」(當眞,2004)の方法により、「子育て支援活動」を行っている保育所(認定子ども園を含む)を主なフィールドとして次の問いに応える試みを展開している。(1)子どもと親はどのような課題を抱えているか、(2)親としての力量を育て、親子が互いに育み合えるような関係を築くにはどのような支援実践が必要か、(3)親子が必要としている体験を準備する上で、保育所の物理的・人的環境をどのように活用できるか、(4)支援実践形成の過程で子ども、親、支援スタッフはどのような学びを体験するか。本年度(初年度)は次のような実践形成型の研究活動を通して記録を蓄積した。(A)子育て支援現場における、子育て相談(親子の観察及び面談を含む)を継続的に実施し、個々の親が抱える問題を多角的に把握する活動を展開した。(B)親としての力量を育て、親子が互いに育み合えるような関係を築くことを支える体験型の支援実践を行った。体験型の相談を継続的に行い、その様子をビデオ収録または筆記して、事例を縦断的に蓄積し、親子の抱える課題に応じたワークショップ型(体験型)の子育て支援実践モデルを開発するための基本データを蓄積した。(C)支援センター担当保育士の学びの記録を蓄積したD)子育て支援実践にとって有効な資源となる保育所の特徴(特に異年齢保育)に関する記録を蓄積した。保育所はその物理的・人的・社会文化的環境としての特徴から、入所児童だけでなく地域の家庭の乳幼児とその親の育ちを支える実践を展開する上でも活用可能な優れたコミュニティ資源である可能性が高い。そこで本研究では、研究者が現場の人とは異なる役割を担いながら,現場の人々とともに実践を形成していく過程の中に研究を織り込む「形成的フィールドワーク」(當眞,2004)の方法により、「子育て支援活動」を行っている保育所(認定子ども園を含む)を主なフィールドとして以下の問いに応える試みを展開している。本年度は、前年度の成果を実践に織り込みつつ、次のような実践形成型の研究活動を継続し記録を蓄積した。(B)親としての力量を育て、親子が互いに育み合えるような関係を築くことを支える体験型の支援を実践して、その様子をビデオ収録または筆記して事例を縦断的に蓄積し、親子の抱える課題に応じたワークショップ型(体験型)の子育て支援実践の有効性を検討しながら基本データを蓄積した。保育所はその物理的・人的・社会文化的環境としての特徴から,入所児童だけでなく地域の家庭の乳幼児とその親の育ちを支える実践を展開する上でも活用可能な優れたコミュニティ資源である可能性が高い。しかし,そのポテンシャルが十分に活かされているとはいえない現状にある。そこで本研究では,研究者が現場の人とは異なる役割を担いながら,現場の人々とともに実践を形成していく過程の中に研究を織り込む「形成的フィールドワーク」(當眞,2004)の方法により,「子育て支援活動」を行っている保育所を主なフィールドとして次の問いに応える研究を展開した。(1)子どもと親はどのような課題を抱えているか,(2)親としての力量を育て,親子が互いに育み合えるような関係を築くにはどのような支援実践が必要か,(3)親子が必要としている体験を準備する上で,保育所の物理的・人的環境をどのように活用できるか,(4)支援実践形成の過程で子ども,親,支援スタッフはどのような学びを体験するか。