hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
発達期皮質脊髄路シナプスの活動依存的除去とNMDA受容体サブタイプ

in vitro皮質脊髄投射系にGluN2B(ε2)及び2A(ε1)ノックアウトマウス(grin2b^<-/->, 2a^<-/->)を導入し、発生初期に見られる脊髄腹側からのシナプス除去過程が、2B特異的でかつ脊髄側の2Bに依存している事を明らかにし得た。その後シナプス除去の分子メカニズムを明らかにするために進めている薬理学的スクリーニング(阻害実験)で、上記過程が2Bの下流にあると考えられるCaMKII依存性であることが示唆された。今までにラットで示してきたin vitro皮質脊髄路における腹側からのシナプス除去過程をマウスで再現した上で、GluRε2(NR2B)及びε1(2A)ノックアウトマウス(ε2^<-/->,ε^<-/->)を導入することにより、上記過程がε2特異的でかつ脊髄側のε2に依存している事を明らかにした。Wild type(WT)とノックアウトマウス由来のスライスを共培養するheterotypic co-cultureを作製し、以下の手法を用いて皮質WT-脊髄ε2^<-/->たまたはε1^<-/->と皮質ε2^<-/->脊髄WTとの相違を確認した。a)皮質深層を電気刺激し脊髄灰白質よりfield EPSPを記録し、その空間分布を観察する。b)膜電位感受性色素を用いた光学的記録にてシナプス電位の変化を捕え、その分布を観察する。c)biocytinを用いて皮質脊髄投射線維を順行性標識し、軸索終末の分布を観察する。d)Exo utero electroporationにて作製した皮質ニューロンが蛍光を発するマウス由来の皮質スライスを用いることにより、皮質脊髄投射線維の軸索終末の動向を生きたままで追跡する。1)ε2^<-/->mouseにおいても、培養7日目の脊髄スライスではNMDA EPSCが記録され、ε1NMDA受容体が発現していることが確認された。2)heterotypic co-cultureにおいて、皮質WT-脊髄ε2^<-/->の組み合わせではシナプス除去過程が阻害されたのに対して、皮質ε2^<-/->脊髄WTの組み合わせでは阻害されなかったことから、シナプス除去過程には脊髄側のGluRε2が関与していることが明らかになった。3)皮質WT-脊髄ε1^<-/->の組み合わせではシナプス除去過程が阻害されなかったことから本過程がε2に特異的(ε1でなくε2)であることが示された。in vitro皮質脊髄投射系にGluN2B(ε2)及び2A(ε1)ノックアウトマウス(grin2b^<-/->,2a^<-/->)を導入し、発生初期に見られる脊髄腹側からのシナプス除去過程が、2B特異的でかっ脊髄側の2Bに依存している事を明らかにした。Wild type(WT)とノックアウトマウス由来のスライスを共培養するheterotypic co-cultureを作製し、以下の手法を用いて皮質WT-脊髄2b^<-/->または2a^<-/->と皮質2b^<-/->-脊髄WTとの相違を確認した。1)皮質WT-脊髄2b^<-/->の組み合わせではシナプス除去過程が阻害されたのに対して、皮質2b^<-/->-脊髄WTの組み合わせでは阻害されなかったことから、シナプス除去過程には脊髄側の2Bが関与していることが明らかになった。2)皮質WT-脊髄2a^<-/->の組み合わせではシナプス除去過程が阻害されなかったことから本過程が2Bに特異的(2Aでなく2B)であることが示された。3)培養液中にCaMKII阻害剤を添加するとシナプス除去過程が阻害されたことから、本過程にCaMKIIが関与していることが示唆された。
特異的抗腫瘍効果を期待した放射線療法との併用による新しい養子免疫療法の確立

本研究は放射線照射により標的細胞上のMHCclassI抗原を増加させ、LAK細胞を用いた養子免疫療法の効果を増強させるためのものである。(1)ヒト扁平上皮癌細胞上MHCclassI抗原の増強4種のヒト扁平上皮癌細胞株に放射線照射あるいはIFN-γを作用させMHCclassI抗原の発現量が増加することを確認した。(2)MHCclassI抗原増強細胞株のLAK感受性の変化MHCclassI抗原を増強させた細胞株でLAK細胞に対する感受性の低下が観察された。この実験系はallogenicであるためマウスを用い、syngenicおよびallogenicの両方について実験を行った。(3)マウス扁平上皮癌細胞上MHCclassI抗原の増強(4)MHCclassI抗原増強細胞株のLAK感受性の変化NRS1をpH3.0で処理してMHCclassI抗原が消失することを確認した。(6)MHCclassI抗原除去細胞株のLAK感受性の変化(7)LAK感受性の変化に関係するLAK内細胞亜群の検索(4)及び(6)の実験で観察されたNRS1のLAK感受性の変化はLAK細胞内のasialo-GM1陽性細胞群によるものであることが示唆されたが、CD8陽性細胞群の関与も否定できないため、これを現在検索中である。現在までのところ標的細胞培養、放射線照射、フローサイトメトリーとモノクローナル抗体を用いた細胞表面MHC抗原の解析に至る手技の一連の流れが完成し、放射線照射の至適条件の設定を行っている。本科研費申請時には基本的にはautologous LAK cellによる養子免疫療法をのモデルを考慮しており、標的細胞として自己のPHA芽球のみの検索を予定していた。しかしながら、日常臨床での担癌患者に対する養子免疫療法ではLAK細胞誘導時に宿主の末梢血から得られる単核球が少ないため培養によりautologous LAKが必要量得られず、養子免疫療法の施行が困難となる症例も存在した。そこで申請者は養子免疫療法のエフェクターをautologous LAKのみでなく、allogeneic LAKにまで広げることを想定し、PHA芽球(auto)、ヒトロ腔扁平上皮癌由来細胞株3種(allo)について^<60>Co放射線照射を行い、細胞表面のMHCクラスIおよびクラスII発現について解析を行い、MHC抗原を有効に変化させうる総照射線量、1回照射線量、照射間隔を検索している。現在までのところ放射線照射によりMHC抗原の発現量に少量の増減を認めているが標的細胞によりその傾向が一定しておらず、またその変化量も十分なものとは考えられない。これは、担癌患者で確認されている小線量照射での腫瘍細胞上MHC抗原の変化はin vitroとin vivoで差があるとも考えられるため、今後、現在行っている放射線照射のみによる標的細胞作成と同時に放射線照射後の細胞を限界希釈法によりクローニングを行い、目的に合致したMHC抗原発現増強細胞の作成も検討している。これまで放射線照射による標的細胞上MHCclassI抗原の発現増強について検索してきたが、放射線照射(1回照射・510Gy)において標的細胞上MHCclassI抗原の発現増強が確認された。またBRMであり放射線照射照射同様、標的細胞上MHCclassI抗原発現増強作用をもつインターフェロンgammaの添加培養についても標的細胞上、MHCclassI抗原発現増強が確認された(添加濃度100500ユニット)。さらに放射線照射とインターフェロンgamma添加培養の併用では各々の単独に比べ標的細胞上MHCclassI抗原増強が強いことが確認された。このMHCclassI抗原増強をうけた標的細胞のうち口腔底扁平上皮癌由来細胞株KB細胞についてNK細胞およびLAK細胞からの細胞障害活性感受性について検索したところ、MHCclassI抗原発現増強の最も強かった放射線、インターフェロンgamma併用群では未処理群に比べ、LAK感受性の低下が観察された。また放射線単独群とインターフェロンgamma単独群についても併用投与群より弱いがLAK感受性の低下が観察された。NK感受性については未処理群、処理群とも非感受性であった。

今回のアロジェニックの系でのLAK活性において実験結果は、癌治療という点から考えると放射線照射およびインターフェロンgamma処理によるMHCclassI抗原への影響がマイナスに働く可能性が示唆された。しかしMHCclassI抗原増強はCTLの誘導および細胞障害活性発現については有利に働く可能性が高く、今後、ヒトのalloCTLの系あるいはマウスのautoCTLの系で放射線照射およびインターフェロンgamma処理によるMHCclassI抗原発現増強が細胞障害活性に与える影響を検索するとともに、酸処理による標的細胞上MHCclassI抗原除去を行い、LAK感受性およびCTL感受性に与える影響と癌治療における意味を考えたい。これまでヒト扁平上皮癌由来細胞株、およびPHA芽球について放射線照射あるいはIFN-_7添加培養でMHCclassI抗原の増強を行ってきたが、MHCclassI抗原の挙動に安定性がなく、さらに今回のヒトの系では我々が最終的な治療目標とする扁平上皮癌由来細胞株でautoの系が確立できないため、マウスの系で扁平上皮癌由来細胞株を検索し,NRS1細胞株を入手した。本細胞株はC3H/He由来で、C3H/Heマウスを用いることによりsyngenicの系で実験が可能となった。NRS1細胞は放射線照射(510Gy)あるいはIFN-_7(100U/ml)添加培養で良好なMHCclassI抗原の増強が得られ、その程度は放射線・IFN-_7併用で最も強く、ついでIFN-_7添加培養、放射線照射の順であった。標的細胞上MHCclassI抗原の増強に伴い、LAK感受性はsyngenic、allogenicとも低下する傾向がみられ、またNRS1細胞をPH3.0試薬処理してMHCclassI抗原の除去を行い、この細胞に対するLAK感受性を観察したところ、syngenicの系では有意の増強を認めなかったが、allogenicの系では有意の増強を認めた。この結果は、MHCclassI抗原増強とLAK感受性の変化に対する当初の予想に反するものであり、MHCclassI抗原変化の影響を受けるLAK感受性に関係している細胞群(effector)を検索するため、NK細胞を抗asialo-GM1抗体のマウス腹腔投与により除去し、この細胞群から誘導されたLAK細胞について細胞障害活性を解析した。その結果、LAK細胞誘導前にNK細胞を除去することによりMHCclassI抗原を増強した標的細胞に対するLAK感受性低下の消失が認められた。このことからMHCclassI抗原を増強した標的細胞のLAK感受性低下に関与するLAK細胞内亜群はasialo-GM1陽性のNK細胞であることが示唆された。今後、腫瘍の抗原刺激を受けた細胞からLAK細胞を誘導し、この細胞についてMHCclassI抗原増強とLAK感受性の変化の解析が必要と考えられる。
高度侵襲手術に対する免疫栄養療法の投与法確立に向けた臨床試験

我々は、膵頭十二指腸切除術などの高度侵襲手術において、免疫栄養療法の術前から術後への継続投与が更なる上乗せ効果を有するかを検証するためのランダム化比較試験を実施した。検討の結果、術前後群と術前群では感染性合併症の発生率に差はなく、細胞性免疫の指標であるConA/PHA刺激リンパ球幼若化能や炎症反応にも差を認めず、免疫栄養療法の術前から術後への継続投与の上乗せ効果は認めなかった。よって高度侵襲手術に対する免疫栄養療法は術前投与が推奨されると考えられた。我々はこれまでに高度侵襲手術の一つである膵頭十二指腸切除術に対する免疫栄養療法(immunonutrition)の有効性を2つのランダム化比較試験にて検討し、それぞれ術前術後免疫栄養療法、術前免疫栄養療法の有効性を実証し、国内外の学会において発表してきた。本研究は、膵頭十二指腸切除術などの高度侵襲手術において、免疫栄養療法の術前から術後への継続投与がさらなる上乗せ効果を有するかを検証するものである。本研究の結果により、高度侵襲手術における免疫栄養療法のベストプラクティスが確立し、医療の発展に貢献できるものと考えている。本研究のプロトコルは、60名の膵頭十二指腸切除術予定の患者を対象とし無作為に2群に分けて比較検討する。まず術前のみ免疫強化栄養剤を摂取し、術後は通常経腸栄養剤の経腸栄養管理とする「術前群」と術前は同様に免疫強化栄養剤を投与し、術後は免疫強化栄養剤の経腸栄養管理とする「術前後群」の2群とし、既に60名の患者のエントリーは終了した。現在、採取した検体の細胞性免疫の指標であるCon A/PHA刺激リンパ球幼若化能や、ヘルパーT細胞分化を検討するために末梢血単核球mRNAの1型ヘルパーT細胞(Th1)、Th2、Th17の転写因子であるT-bet、GATA-3、RORγtのRT-PCR法よる測定を進めているところである。本研究の結果の一部は、第36回ヨーロッパ静脈経腸栄養学会(ESPEN)、第27回日本外科感染症学会総会(シンポジウム)、日本外科代謝栄養学会第51回学術集会等で報告した。本研究は、膵頭十二指腸切除術などの高度侵襲手術において、はたして免疫栄養療法の術前から術後への継続投与がさらなる上乗せ効果を有するかを検証するものである。この結果により、高度侵襲手術における免疫栄養療法のベストプラクティスが確立し、医療の発展に貢献できるものと考えている。まず術前のみ免疫強化栄養剤を摂取し、術後は通常経腸栄養剤管理とする「術前群」と、術前は同様に免疫強化栄養剤を摂取し、術後も免疫強化栄養剤の経腸栄養管理とする「術前後群」の2群とし、既に60名の患者のエントリーは終了した。採取した検体より細胞性免疫の指標であるCon A/PHA刺激リンパ球幼若化能や血漿IL-6等を測定し、解析を進めている。本研究結果の一部は、第36回欧州静脈経腸栄養学会(ESPEN)、第27回日本外科感染症学会(シンポジウム)、日本外科代謝栄養学会第51回、第52回学術集会(シンポジウム)、第77回日本臨床外科学会総会(パネルディスカッション)等で報告した。本臨床試験の患者のエントリーは終了し、結果を解析中である。我々はこれまでに高度侵襲手術の一つである膵頭十二指腸切除術に対する免疫栄養療法(immunonutrition)の有効性を二つのランダム化比較試験にて検討し、それぞれ術前術後免疫栄養療法、術前免疫栄養療法の有効性を実証し、国内外の学会において報告してきた。本研究は、膵頭十二指腸切除術などの高度侵襲手術において、はたして免疫栄養療法の術前から術後への継続投与が更なる上乗せ効果を有するかを検証するものである。本研究のプロトコルは、60名の膵頭十二指腸切除術予定の患者を対象とし無作為に2群に振り分けて比較検討する。検討の結果、術前後群と術前群では感染性合併症の発症率に差はなく、細胞性免疫の指標であるConA/PHA刺激リンパ球幼弱化能や血漿IL-6にも差を認めず、免疫栄養療法の術前から術後への継続投与の上乗せ効果は認めなかった。本研究の一部は、第36回欧州静脈経腸栄養学会(ESPEN)、第32回日本静脈経腸栄養学会(シンポジウム)、日本外科代謝栄養学会第53回学術集会(シンポジウム)等で報告した。

我々は、膵頭十二指腸切除術などの高度侵襲手術において、免疫栄養療法の術前から術後への継続投与が更なる上乗せ効果を有するかを検証するためのランダム化比較試験を実施した。検討の結果、術前後群と術前群では感染性合併症の発生率に差はなく、細胞性免疫の指標であるConA/PHA刺激リンパ球幼若化能や炎症反応にも差を認めず、免疫栄養療法の術前から術後への継続投与の上乗せ効果は認めなかった。よって高度侵襲手術に対する免疫栄養療法は術前投与が推奨されると考えられた。本臨床試験の患者のエントリーは終了し、当初の計画より早く進展している。各種データーの解析を進めるとともに、国際学会および国内学会等にて研究成果の報告を行うとともに、論文を作成中である。医歯薬学各種データーの解析を進めるとともに、国際学会および国内学会等にて研究成果の発表を行う。
血液ー脳関門の機能維持からみた中枢神経保護の分子解析

interleukin (IL)-1βはラットグリオーマ由来細胞株(C6細胞)からIL-6の産生・遊離を促進し、adenylyl cyclase-cAMP経路の活性化がIL-1βによるIL-6の産生・遊離を増強することはこれまでに報告されている。今回、その機序の詳細を検討した。その結果、adenylyl cyclase/cAMP/PKA経路はJAK2/STAT3経路の活性化を介してIL-1βによるIL-6遊離を促進することが明らかとなった。また、静脈麻酔薬dexmedetomidineがIL-1β受容体と転写因子の間に作用しL-1βによるIL-6産生・遊離を抑制すると推測された。IL-6は中枢神経系において炎症疾患のみならず他の急性・慢性疾患において重要な役割を果たしていることが知られている。我々はこれまでに培養グリア細胞を用いてIL-1βがIκB/NFκB経路、p38 MAPkinase、SAPK/JNK、STAT3の活性化を介してIL-6の産生・遊離を促進することを明らかにした。また、cAMPがIL-1βによるIL-6の産生・遊離を更に増強させることも報告してきたが、その機序の詳細は明らかではなかったため、今回、その機序を検討した。その結果、1. 8-bromo-cAMPはIL-1βによるSTAT3のリン酸化を増強したがIκB、p38 MAP kinase、SAPK/JNKのリン酸化には影響を及ぼさなかった。2. JAK inhibitor Iは8-bromo-cAMPによるIL-1βのIL-6の遊離増強を抑制した。3. adenylyl cyclaseの活性化物質であるforskolinはIL-1βによるSTAT3のリン酸化を増強した。4. PKAの阻害剤である4-cyano-3-methylisoquinolineは8-bromo-cAMPによるIL-1βのSTAT3のリン酸化増強を抑制した。以上より、adenylyl cyclase/cAMP経路はIL-1βによるSTAT3のリン酸化を増強することにより、IL-1βによるIL-6の産生・遊離を更に増加させると示唆された。IL-6は中枢神経系において炎症疾患のみならず、他の急性・慢性疾患においても重要な役割を果たしていることが知られている。昨年度までに培養グリア細胞からのIL-1βによるIL-6の遊離・産生をcAMPが増強すること、その機序としてadenylyl cyclase/cAMP経路がIL-1βによるSTAT3のリン酸化を増強することを明らかとしてきた。更に1.cAMPを増加させる内因性物質であるPGE2が実際にIL-1βによるIL-6の遊離を増強した。2.IL-1βはJAK2のリン酸化は促進したがJAK1のリン酸化には影響しなかった。3.JAK2のsiRNAはIL-1βによるIL-6の遊離には影響を及ぼさなかったが、JAK2の阻害剤であるFLLL32はIL-1βによるIL-6の遊離を抑制した。3.8-bromo-cAMPはJAK2のリン酸化を促進したが、JAK1のリン酸化には影響しなかった。4.PKAのsiRNAおよびEPACのsiRNAは8-bromo-cAMPによるIL-1β惹起性IL-6遊離増強を抑制した。ことを明らかにした。以上より、IL-1βによるIL-6の遊離・産生をcAMPが増強する機序をより詳細に明らかにした。英文雑誌に上記ないようで1編掲載されており、おおむね予定通りと考えられる。Trandforming growthfactor (TGF)βは中枢神経細胞保護因子の一つであるが、Interleukin (IL)-6の遊離・産生を促進することが知られている。IL-6は中枢神経系において急性・慢性の様々な疾患に関与している。TGFβがIL-6をグリア細胞から遊離する機序の詳細を解明することは中枢神経保護戦略にとって有用である。TGFβがsmad経路を活性化することはよく知られているが、近年、smad経路以外にRho family、mitogen-activated protein (MAP) kinase経路、Akt経路なども活性化することが報告されている。我々は培養アストロサイト細胞株C8D1Aを用いて、1)TGFβがIL-6の遊離を濃度依存性、時間依存性に促進すること、TGFβがsmad2のリン酸化を促進しsmad2の阻害剤であるSIS3がTGFβによるIL-6遊離を抑制することを確認した後、2) rho-kinaseの阻害剤であるfasudil、Y-27632が濃度依存性にTGFβによるIL-6遊離を促進する、3) racの阻害剤NSC23766がが濃度依存性にTGFβによるIL-6遊離を促進すること、を見いだした。今後、smad経路とRho family、rac経路との関係を検討予定である。

また、静脈麻酔薬dexmedetomidineがIL-1β受容体と転写因子の間に作用しL-1βによるIL-6産生・遊離を抑制すると推測された。結果が出そろったので、公表準備をしている。より生体に近い条件で実験するため細胞株を変更した。そのため実験条件を調節している。麻酔学・疼痛治療これまで実験にグリオーマ細胞株を用いていた。より生体に近い条件にするため初代培養系あるいはグリア細胞株に変更し、炎症性サイトカイン、神経栄養因子の産生・遊離に関わる細胞内情報伝達系を明らかにしたい。使用する細胞を変更したため、条件設定を行っている。そのため、まだ本格的にデータを取るに至っていない。実験自体は平成26年末までに終わり、現在、結果まとめている途中であるため、平成27年に入ってからは行っていない。また、所属部署の主催する学会があり、実験自体を行う時間がない。そのため、平成27年に入ってからは研究費はあまり必要としなかった。条件設定後、これまでと同様に炎症性サイトカイン、神経栄養因子の遊離・産生にいたる細胞内情報伝達を検索していく。脳血管関門への影響を検討するため、血管透過性因子産生に関しても検討する。学会が終われば実験は再開するので、次年度使用する。結果がまとまれば投稿するため、論文掲載費用も必要。
NMRによるタンパク質分子複合体の迅速な立体構造決定方法の開発

本研究課題において,研究代表者は,タンパク質-タンパク質あるいはタンパク質-低分子化合物複合体の立体構造を迅速に決定できるよう,新しい安定同位体標識法を提案することを目的とした.好中球NADPHオキシダーゼの構成成分,p67phoxのTetratricopeptide repeat(TPR)ドメインは,GTP結合状態のRacと結合することにより,NADPHオキシダーゼを活性化する役割を担っている.研究代表者らは,p67phoxのTPRドメイン(203残基)の主鎖連鎖帰属およびメチル基特異的帰属をおこなった.Val,LeuおよびIleのメチル基のみプロトン化された2H/13C/15NラベルTPRドメインを作成し,NMRスペクトル解析をおこない,連鎖帰属を完了した.さらに,プロトン化されたVal,LeuおよびIleのメチル基についても帰属することができた.さらに,このTPRドメインのグローバルフォールドを迅速に決定することができた(投稿準備中).この手法はタンパク質単体の立体構造決定だけでなく,タンパク質分子複合体においても応用可能である.Grb2タンパク質のSH2ドメインは乳癌との関連が指摘されている,細胞内シグナル伝達において重要なタンパク質である.近年,米国保健研究所Burke博士より開発された低分子化合物がGrb2 SH2ドメインに対して強い親和性を持つことが示され,薬剤候補化合物として注目が集まっている.研究代表者は,Grb2 SH2ドメイン-この薬剤候補化合物の複合体の立体構造をNMR法を用いて決定した.構造解析過程にて,Grb2 SH2ドメインを重水素標識することにより,タンパク質に結合した低分子化合物のNMR信号を高感度で検出することができ,このタンパク質分子複合体の立体構造を従来よりも短時間かつ高精度で決定することができた(投稿準備中).本研究課題において,研究代表者は,タンパク質-タンパク質あるいはタンパク質-低分子化合物複合体の立体構造を迅速に決定できるよう,新しい安定同位体標識法を提案することを目的とした.好中球NADPHオキシダーゼの構成成分,p67phoxのTetratricopeptide repeat(TPR)ドメインは,GTP結合状態のRacと結合することにより,NADPHオキシダーゼを活性化する役割を担っている.研究代表者らは,p67phoxのTPRドメイン(203残基)の主鎖連鎖帰属およびメチル基特異的帰属をおこなった.Val,LeuおよびIleのメチル基のみプロトン化された2H/13C/15NラベルTPRドメインを作成し,NMRスペクトル解析をおこない,連鎖帰属を完了した.さらに,プロトン化されたVal,LeuおよびIleのメチル基についても帰属することができた.さらに,このTPRドメインのグローバルフォールドを迅速に決定することができた(投稿準備中).この手法はタンパク質単体の立体構造決定だけでなく,タンパク質分子複合体においても応用可能である.Grb2タンパク質のSH2ドメインは乳癌との関連が指摘されている,細胞内シグナル伝達において重要なタンパク質である.近年,米国保健研究所Burke博士より開発された低分子化合物がGrb2 SH2ドメインに対して強い親和性を持つことが示され,薬剤候補化合物として注目が集まっている.研究代表者は,Grb2 SH2ドメイン-この薬剤候補化合物の複合体の立体構造をNMR法を用いて決定した.構造解析過程にて,Grb2 SH2ドメインを重水素標識することにより,タンパク質に結合した低分子化合物のNMR信号を高感度で検出することができ,このタンパク質分子複合体の立体構造を従来よりも短時間かつ高精度で決定することができた(投稿準備中).タンパク質と低分子有機化合物の複合体の立体構造をNMR法により決定するには,(1)タンパク質と結合した状態での低分子化合物のNMRスペクトル帰属,(2)タンパク質と低分子化合物間の分子間NOE情報の取得,の2段階のNMR解析が必要である.従来,上記のNMR情報を得るためには,同位体フィルター測定法を用いる必要があった.しかし,同位体フィルター法はパルススキームが複雑なため,信号のS/Nが悪く,解析に手間がかかっていた.研究代表者は,タンパク質を2Hで均一ラベルすることにより,低分子化合物の1H-NMRスペクトルのみを選択的に観測する手法を考案した.今年度,この手法をGrb2タンパク質のSH2ドメインとその阻害剤(NIHにおいて開発された薬物候補化合物)の複合体試料に適用し,阻害剤の1H-NMRスペクトル帰属を短時間で完了することができた.従来型の同位体フィルター法を用いた場合では,信号の帰属に多大な時間を要しつつも帰属を完了することができなかったことから考えて,今回考案した2Hラベル法がタンパク質-低分子化合物の立体構造解析に役立つことが実証できた.さらに,2Hおよび15Nで均一ラベルされたGrb2 SH2タンパク質と阻害剤複合体において,15N-edited NOESYを測定したところ,阻害剤の水素とタンパク質のアミド水素(H2O溶媒中ではアミド位の2Hは容易に1Hに交換する)間の分子間NOEを多数観測することに成功した.これは,タンパク質が2Hラベルされたことにより,試料分子中のプロトン密度が低くなり,結果的に、遠距離の水素原子間相互作用を感度よく測定できたことを示している.2Hラベルタンパク質を用いることで,(1)低分子化合物のスペクトル帰属が極めて容易になり,(2)分子間相互作用を,選択的かつ高感度に測定することを確認した.

実際,Grb2 SH2とその阻害剤複合体の立体構造を上記手法により得られた距離情報に基づき,迅速かつ精密に決定することができた(論文投稿準備中).本研究課題において,研究代表者は,タンパク質-タンパク質あるいはタンパク質-低分子化合物複合体の立体構造を迅速に決定できるよう,新しい安定同位体標識法を提案することを目的とした.好中球NADPHオキシダーゼの構成成分,p67phoxのTetratricopeptide repeat (TPR)ドメインは,GTP結合状態のRacと結合することにより,NADPHオキシダーゼを活性化する役割を担っている.研究代表者らは,p67phoxのTPRドメイン(203残基)の主鎖連鎖帰属およびメチル基特異的帰属をおこなった.Val,LeuおよびIleのメチル基のみプロトン化された2H/13C/15NラベルTPRドメインを作成し,NMRスペクトル解析をおこない,連鎖帰属を完了した.さらに,プロトン化されたVal,LeuおよびIleのメチル基についても帰属することができた.さらに,このTPRドメインのグローバルフォールドを迅速に決定することができた(投稿準備中).この手法はタンパク質単体の立体構造決定だけでなく,タンパク質分子複合体においても応用可能である.Grb2タンパク質のSH2ドメインは乳癌との関連が指摘されている,細胞内シグナル伝達において重要なタンパク質である.近年,米国保健研究所Burke博士より開発された低分子化合物がGrb2 SH2ドメインに対して強い親和性を持つことが示され,薬剤候補化合物として注目が集まっている.研究代表者は,Grb2 SH2ドメイン-この薬剤候補化合物の複合体の立体構造をNMR法を用いて決定した.構造解析過程にて,Grb2 SH2ドメインを重水素標識することにより,タンパク質に結合した低分子化合物のNMR信号を高感度で検出することができ,このタンパク質分子複合体の立体構造を従来よりも短時間かつ高精度で決定することができた(投稿準備中).
ポスト冷戦時代における主権概念の再構成-対内的側面と対外的側面の統合-

平成9年度においては、前年度の研究を踏まえて、研究代表者と研究分担者それぞれの専門領域から問題にアプローチするとともに、意見交換を行った。研究代表者は、我が国における中央地方関係についての研究を軸に、現代国家における対内的主権に関する考察を進展させた。特に近年のアジアの経済発展とその背景にある社会変動との比較、日本との相互作用の分析を重視して、前年度からの継続として、外国人住民登録、地方公務員国籍問題についての研究を進展させた。同時に、利益政治の変容という観点から、最近の圧力政治の変化を実証的に分析する試みにも取り組んでいる。研究分担者は、前年度に引き続き、冷戦後の国家に対する脅威概念や安全保障の諸問題について、日本の現状分析とその歴史的背景に関する分析を中心としながら、アメリカ、アジア、ヨーロッパ諸国との比較のための資料を収集した。それら資料の多くはコンピュータに入力され、整理されつつある。以上のような資料収集・整理を踏まえて、研究分担者は、1970年代に唱えられるようになった「総合安全保障」の概念が冷戦後の安全保障を考える理論的フレームワークとして有効であると認識するに至り、そうした角度から研究をまとめ、その一部を公表した。以上のような研究代表者、分担者それぞれの研究から、現代国家における主権が、近代的なモデルでは捉えきれないような、さまざまなレベルでの同意と決定のミクロな積み重ねからなる多元的な構造となっていること、また、国際関係は複数の独立した主権の相互作用としてのみならず、複数の主権が重なり合いながら作用する機能する場として存在していることを確認した。同時に、こうした現象を把握するためには膨大な研究の積み重ねが要求され、一層の研究の必要性も再確認された。本研究の初年度である平成8年度、研究代表者と研究分担者の間でそれぞれの専門領域からみた現在の国家主権のあり方を相互に検討し、共通の理解枠組みをもつための準備作業を開始した。研究代表者は、行政学の立場から、我が国における、中央地方関係にとっての国際環境の変化の意味あいを、従来の研究成果を検討すると同時に、実地調査によって明らかにしようと試みた。例えば地域経済の諸外国の関係(具体的には九州と韓国、沖縄と台湾、新潟とロシアなど)、外国人住民登録の問題、地方公務員の国籍問題など、いくつかの政策領域で複数の地方自治体の対応を調査し、その変容の過程を分析するための資料を収集した。研究分担者は、国際政治学における、冷戦後の国家に対する脅威の概念や安全保障の諸問題について、欧米、アジア太平洋、日本での分析を実証的に比較検討するための資料収集にあたった。インターネットや商用ネットワークを通じ、あるいは直接内外の関係省庁や研究機関から収集したこれらの一次資料文書は、スキャナなども利用してコンピュータに入力され、現在整理を進めつつある段階である。今後は、それぞれのデータ蓄積をよりいっそう進めるとともに、研究代表者と分担者の相互でさらに意見を交換して、主権の概念とその実質的な意味あいが国際システムの変動とともにそのように変容していったか、理論的な分析枠組みの対内的側面と対外的側面との統合をはかることを目標とする。
視覚代替のためのマルチモーダル・インタラクティブ画像呈示

目的:聴覚に加えて,指先位置体性感覚,指先触覚などのマルチモーダル感覚を動員して視覚情報を呈示する技術を開発.言語によるオブジェクト属性通報方式・道路4,5本,オブジェクト10個の略地図での実験の結果,メンタルマップ生成には,他のモードに比べて4chスピーカを用いた絶対座標系ベース俯瞰モードが,1音呈示モード,身体座標系(移動座標系)による没入モード(2chステレオ音,4chステレオ音)に比べ,有意に有効.・俯瞰モードは約289[s]の時間,約73%の正解率でメンタルマップ生成.しかし,被験者の心理的負担は大.指先誘導マニュピレータによる指先触覚の呈示,指先位置感覚援用インタラクション・2自由度パラレルリンクマニュピレータ,およびマニュピレータ手先の1自由度回転型アクチュエータから構成される指先誘導マニュピレータを開発.手先アクチュエータの回転軸にはノブが取り付けられ,被験者はノブをつまむ形でシステムを使用.ノブの位置は呈示される図の輪郭を辿り,ノブの方向はトレースする方向を示す.・リンク長,サーボモータ間隔,タッチパネル座標系の並進移動と回転,タッチパネルディスプレイの画素の縦横比,サーボモータ指令値/回転角度変換のための0次係数と1次係数,計13個ものパラメータを較正する手法を開発し,絶対位置決め精度(標準偏差)を較正前の3040[pixel](=1013mm)から57pixel(1.52.0mm)へと大幅に向上.・自由に何周でも呈示図形(不定形5角形)の輪郭をトレースさせる実験では.(1)ノブを使用しない"誘導モード"は,(2)ノブを使用する"指示・誘導モード",(3)レーズライタによる"触図モード"に比べて,知覚時間に関してはいずれもほぼ同程度の性能.しかし,使用時のストレスの観点での使用感に関してはノブ使用が有意に有効.目的:聴覚に加えて,指先位置体性感覚,指先触覚などのマルチモーダル感覚を動員して視覚情報を呈示する技術を開発.言語によるオブジェクト属性通報方式・道路4,5本,オブジェクト10個の略地図での実験の結果,メンタルマップ生成には,他のモードに比べて4chスピーカを用いた絶対座標系ベース俯瞰モードが,1音呈示モード,身体座標系(移動座標系)による没入モード(2chステレオ音,4chステレオ音)に比べ,有意に有効.・俯瞰モードは約289[s]の時間,約73%の正解率でメンタルマップ生成.しかし,被験者の心理的負担は大.指先誘導マニュピレータによる指先触覚の呈示,指先位置感覚援用インタラクション・2自由度パラレルリンクマニュピレータ,およびマニュピレータ手先の1自由度回転型アクチュエータから構成される指先誘導マニュピレータを開発.手先アクチュエータの回転軸にはノブが取り付けられ,被験者はノブをつまむ形でシステムを使用.ノブの位置は呈示される図の輪郭を辿り,ノブの方向はトレースする方向を示す.・リンク長,サーボモータ間隔,タッチパネル座標系の並進移動と回転,タッチパネルディスプレイの画素の縦横比,サーボモータ指令値/回転角度変換のための0次係数と1次係数,計13個ものパラメータを較正する手法を開発し,絶対位置決め精度(標準偏差)を較正前の3040[pixel](=1013mm)から57pixel(1.52.0mm)へと大幅に向上.・自由に何周でも呈示図形(不定形5角形)の輪郭をトレースさせる実験では.(1)ノブを使用しない"誘導モード"は,(2)ノブを使用する"指示・誘導モード",(3)レーズライタによる"触図モード"に比べて,知覚時間に関してはいずれもほぼ同程度の性能.しかし,使用時のストレスの観点での使用感に関してはノブ使用が有意に有効.1.音による画像呈示(1)呈示画素数画素数,すなわち音の表示数が5を超えると(人間が短期記憶できる数,7±2に対応していると考えられる),知覚率が急に低下していることがわかった.この結果により,呈示音数として4以下を採用した.(2)呈示画素パターン1×1呈示と2×2呈示とを比較した.その結果,知覚時間については,音呈示方法間で有意差はなかった.一方,知覚した図形の評価については,2×2呈示の方が有意に有効であることがわかり,これを採用した.2.指先位置感覚タッチパネルを用いた基礎実験の結果,指先位置の知覚の誤差の標準偏差は,水平方向,垂直方向でそれぞれ,σ_x=1.2mm,σ_y=1.7mmであり,両者の平均はσ=1.5mmであった.約3σに相当する5mmを指先位置知覚の相対的解像度とみなし,この値に対応する画素間隔,17画素(5.1mm)を最適呈示画素間隔として設定した.3.学習効果実験最も学習効果が現れ易い実験の1セット目と4セット目の2つのデータについて検定を行った結果,知覚時間は両セット間で有意差ありと認められた.4.辺長,コーナー数と知覚時間との関係凹も含む多角形による実験により,Y=0.000474・l_s+0.164・n_cなる回帰式を算出した.ここで,Y:規格化知覚時間[S],l_s:図形の周囲辺のうち,斜め線の長さの合計[画素],n_c:図形のコーナー数(辺の数)である.

規格化知覚時間とは,被験者毎に規格化したものであり,個々の知覚時間を平均知覚時間で除算した値である.なお,縦,横線の長さは,他の要因に比べると影響度は小さく,今回のデータでは有意に関係付けることはできなかった.研究の目的:聴覚に加えて,指先位置体性感覚,指先触覚などのマルチモーダル感覚を動員して,視覚情報(テレビカメラから入力された実時間オンライン画像情報やコンピュータディスプレイ上の画像情報)を呈示する技術を開発する.音による画像呈示:・聴覚情報と指先位置感覚を利用して,視覚障害者がメンタルマップを生成するためにインタラクティブに地図情報が呈示できるシステムを提案し,その特性を調べた.今回は「○○小学校」というように日本語の単語を発生する形式とした.1音呈示モード,絶対座標系による俯瞰モード,身体座標系による没入モード(2chステレオ音,4chステレオ音)からなる,4種類のモードでの知覚実験を通して,構築したシステムの評価を行った.その結果,メンタルマップ生成には,他のモードに比べて4chスピーカを用いた俯瞰モードが有意に優れていることが示された.なお,今回は,道路4,5本,対象物10個の略地図について実験を行ったが,俯瞰モードにおいて,約289[s]の時間,約73%の正解率でメンタルマップが生成されることが確認された.しかしながら,被験者の心理的負担は大きく,以下のような指先誘導アクチュエータ方式を開発することとした.指先誘導アクチュエータによる指先触覚の呈示,指先位置感覚援用インタラクション:・指先誘導アクチュエータと聴覚情報を利用したシステムが有望であると考え,そのシステムの実現の可能性を探るための基礎的検討として,アクチュエータの設計法について検討した.高剛性,高出力,高精度という特徴を考慮して,2自由度5節回転連鎖によるパラレルリンク機構を取り上げた.基線長0,サーボモータ回転角(θ=180°)なる条件の下で,正方形状の動作範囲を最大化する,最適リンク長比率ε=1.27が得られた.アクチュエータにより,被験者の指先を誘導して,被験者が道路などの全体像を把握する作業を補助することで,メンタルマップ生成時における負担が軽減されることが期待される。1.従来からの経緯昨年度までは,ペンタブレット,タッチパネルディスプレイを用いて,メンタルイメージ生成を実現するインタラクティブ音響呈示システムについて検討してきた.その結果,メンタルイメージ生成は可能であるものの効率の点で,改善の余地のあることがわかった.2.今年度の研究実績の概要新たに,指先誘導マニピュレータを用いたメンタルイメージ生成支援システムを考案,設計,試作,メンタルイメージ生成に関する基本性能確認実験を行った.このシステムにより,視覚障害者に形状を伝えることができれば,メンタルイメージ生成の手助けになると期待される.(1)指先誘導マニピュレータの考案,設計,試作2自由度回転型パラレルリンクマニピュレーターとを用いた指先位置呈示装置を試作する.動作範囲を検討し,マニピュレーターの総リンク長,呈示矩形縦横比を一定とする条件の下で,矩形面積を最大化できるリンク長上・下肢比を求めた.また,リンク長(左右各2個),サーボモータ間隔,タッチパネルディスプレイ座標系の並進移動量(2個)と回転角度,タッチパネルディスプレイの画素の縦横比,サーボモータ指令値/回転角度変換のための0次係数(2個)と1次係数(2個),計13個ものパラメータを較正する手法を開発し,絶対位置決め精度(標準偏差)を較正前の3040[pixe1] (=1013mm)から57pixe1 (1.52.0mm)へと大幅に向上させた.(2)メンタルイメージ生成に関する基本性能確認実験指先誘導マニピュレータを用いて,簡単な図形の形状を知覚させるメンタルイメージ生成に関する心理物理実験を健常者に対して行い,構築したシステムを評価した.
血清プロテオミクス解析を用いた閉経後骨粗鬆症診断法の確立

現在の骨粗鬆症の診断はDXA,pQCTなどの画像による骨量測定,及びB-ALPやDPD,NTX,CTXなどの骨代謝マーカーの測定によって行われている。しかし,骨量測定は骨粗鬆症が確立した時に初めて診断されるものであり測定誤差も大きい。また,骨代謝マーカーも骨吸収,骨形成を各々反映しているに過ぎない。本研究では動物モデルと臨床検体を組み合わせて,異なる質量分析装置を用いた血清のプロテオミクスアプローチにより血清タンパク質発現パターンによる骨動態を反映した診断法の確立,新たな骨粗鬆症特異的マーカーの同定を行うことを目指した。本研究の特色であるプロテオミクス解析は,骨粗鬆症の分野ではほとんど行われておらず血清プロテオミクス解析を応用すること自体が重要な成果である。骨は常に骨吸収,骨形成を繰り返しリモデリングを行っている動的な臓器である。現存する骨代謝マーカーによる診断は骨吸収,骨形成をそれぞれ反映したものにすぎない。年齢,性別,基礎疾患によっては骨吸収の亢進あるいは骨形成の低下がすぐ骨量低下を表すものではない。この問題を解決するべく,骨動態を反映する候補分子を複数同定し,現在生物学的な意義を検証している。現在の骨粗鬆症の診断はDXA、pQCTなどの画像による骨量測定、及びB-ALPやDPD、NTX、CTXなどの骨代謝マーカーの測定によって行われている。しかし、骨量測定は骨粗鬆症が確立した時に初めて診断されるものであり測定誤差も大きい。また、骨代謝マーカーも骨吸収、骨形成を各々反映しているに過ぎない。本研究では動物モデルと臨床検体を組み合わせて、異なる質量分析装置を用いた血清のプロテオミクスアプローチにより血清タンパク質発現パターンによる骨動態を反映した診断法の確立、新たな骨粗鬆症特異的マーカーの同定を行うことが目的である。18年度は以下の実験を行った。動物モデルの作成:閉経後骨粗鬆症モデルをマウスで作成する。とくに成長の影響を除外するために、まずマウスにおけるピークボーンマスの同定と骨代謝関連サイトカインの動態を成長、卵巣摘除において経時的に検討し、さらに骨粗鬆症の確認のため骨代謝マーカーの測定およびDEXAによるBMD測定を行いサンプルの最適化と系統的なサンプル血清収集を行った。1)動物モデルにおけるマーカー候補の選定:次に初期的検討として、閉経後骨粗鬆症モデルマウスの血清を種々の前処理後、SELDI-TOF-MS、LC/MS、2次元電気泳動等によるDifferential Displayを施行する。コントロール群との比較によって選定されたペプチド群の骨吸収抑制剤による変動を統計的に検討し、より骨代謝を特異的に反映するペプチド群を選定のこころみを行った。(642文字)現在の骨粗鬆症の診断はDXA,pQCTなどの画像による骨量測定,及びB-ALPやDPD,NTX,CTXなどの骨代謝マーカーの測定によって行われている。
島嶼空間における民間知識の民族誌的調査研究

今年度は昨年度にひきつづき、南島研究および伊豆研究の成果に関する文献収集および整理を継続した。これにもとづき、南西諸島においては本年度は沖縄本島と宮古諸島を調査地として選定した。現地調査においては、昨年度の問題点であった日常の空間活動に焦点をあて、ひきつづき山原船とよばれる物資運搬船による海上交通の経験を聞き書き採集した。昨年度の山原船航路調査にもとづき、今年度は勝連町字平安名、および宜野座村字松田などで聞き取りをおこない、山原船の航行は海上の経験だけでなく、寄港地の社会経済生活に少なからぬ影響をおよぼしていることを確認した。すなわち、物資運搬に携わる人々は、勝連半島などに集中し、そこではマチヤとよばれる商店が住民の消費生活を支えていた。したがって海の彼方から訪れる「よきもの」のイメージは、山原船によってきわめてリアルなものとして了解されていた。いっぽう伊豆諸島調査(神津島)においては、空間に関する個人の儀礼的経験の調査を継続し、儀礼的経験の偏差は個々人の空間の経験によると判断される資料を収集した。すなわち、常に外部世界との交渉・交流をおこなってきたことによって、社会的知識が生成され、それがじっさいに島世界の認識にも運用される。ここから、生活の構成に関わってそれに指針を与えるような推進力としての世界観の重要性が浮かび上がってくる。この点に関しては、いまだ仮説の段階であるが、じゅうらいのコスモロジカルな空間概念という観点との関連性などとともに、今後追究していくべき課題である。今年度は、まずこれまでの南島研究、伊豆研究の成果に関する文献収集および整理をおこなった。これにもとづき、南島研究、とくに沖縄本島の研究に関しては世界観研究など、島世界を大枠でとらえる視点が研究の大半を占めていることから、現地調査にあたっては島民の実質的な日常活動を押さえた上で世界観研究とリンクさせていく方向性を探った。この点で興味深いことは、昭和初期まで、山原船とよばれる物質運搬船が国頭から島尻、ときには奄美や宮古・八重山まで航行していたことである。山原船はまた平安座船とも呼び慣わされることからもわかるとおり、その製作の中心は与那城村平安座島であり、物資運搬に携わる人々も勝連半島に集中していた。この物資運搬の流れは、平安座出発→山原で材木を採取、一泊→平安座帰港、一泊→与那原、佐敷などの島尻地方、また糸満・那覇へ材木を運搬→日用品を仕入れ、帰りの風を待って出発→平安座帰港、といったものであった。今年度の調査により、今後の山原船の調査地として、平安座島、与那原町、また西海岸では読谷村比謝橋などが有力であることが確認された。いっぽう伊豆諸島調査においては、これまで年中行事などの儀礼伝承にかんする資料蓄積があるものの、本研究で課題としている伝承を担う個人レベルでの儀礼シンボルの運用など、ミクロな視点からの民間知識に関しては蓄積が少ないことなどから、空間に関する個人の儀礼的経験を微細に調査することをめざした。日程の関係上十分な時間がとれなかったものの、神津島において二十五日様に関する聞き書きをおこなった。伊豆諸島全般には日忌様、カンナンボウシ、カイナンボウシなどと呼ばれる物忌み行事が分布しているが、七島の開発にともない、その儀礼の変容は多様である。この開発の現状と、儀礼的経験の偏差を記述することが来年度の課題である。
皮膚炎に対するMaresin 1の抗炎症効果

Maresin 1の皮膚炎に対する抗炎症効果を検討するため、イミキモド誘導乾癬モデルに対する抗炎症効果を検討した。Maresin 1投与群において有意に皮膚炎が減弱し、IL-17A産生γδT細胞ならびにTh17細胞が減少していた。Maresin 1はγδT細胞ならびにTh17細胞のRoRγtならびにIL-23受容体のinternalizationを介してIL-23受容体の発現を減弱することが確認できた。したがって、乾癬モデルにおいてMaresin 1はそれらのメカニズムを介して乾癬モデルでの抗炎症効果を発揮していると考えられた。今後は他の皮膚疾患モデルを用いたさらなる解析を進める予定である。オメガ3脂肪酸は主に魚油から摂取される脂質である。オメガ3脂肪酸における抗炎症効果については様々な報告がされているが、その詳細なメカニズムについては依然として不明な点が多い。そのなかでも、Maresin 1はドコサヘキサエン酸由来の脂質メディエーターで抗炎症作用を有していることが知られているが皮膚炎については不明であった。本研究では、様々な皮膚炎モデルにおいてMaresin 1が抗炎症効果を有しているか検証する。接触皮膚炎モデルにおけるMaresin 1の効果を検討すると感作相において抑制効果を確認した。また、Maresin 1投与により感作後の所属リンパ節におけるエフェクターT細胞が減少しているため、膠原特異的反応を減弱していると考えられた。乾癬モデルにおいてMaresin 1は抗炎症効果を有していることを確認した。Maresin 1の投与により皮膚におけるIL-17の発現が低下していることを確認しているため、今後は、in vitro実験において詳細な作用メカニズム解明を進めていくことを考えている。具体的には、IL-23の産生にかかわる細胞として樹状細胞、また、IL-17産生細胞であるγδT細胞への作用について検討を行うことを予定しており、骨髄細胞から樹状細胞を誘導し作成した骨髄由来樹状細胞から産生されるIL-23が、Maresin 1で抑制されることをELISAもしくはPCRにて検討を行う。また、Maresin 1のIL-17産生への影響を評価するため、皮膚に存在する細胞を回収し、IL-17産生がMaresin 1で抑制されていることをフローサイトメーターを用いて検討を行う。現在接触皮膚炎モデル並びに乾癬モデルにおいてMaresin 1が皮膚炎減弱に作用することを確認している。したがって、残りの研究期間を用いてin vitroでの作用機序解明に注力できるため、おおむね順調に進展していると考える。Maresin 1の皮膚炎に対する抗炎症効果を検討するため、まずイミキモド誘導乾癬モデルに対する抗炎症効果を検討した。Maresin 1投与群において有意にイミキモド誘導皮膚炎の減弱効果を認めた。フローサイトメーターによる皮膚組織中における免疫細胞のプロファイル解析にて、IL-17A産生γδT細胞ならびにTh17細胞がMaresin 1投与群において減少していた。加えて、PCRによるサイトカインプロファイル解析では、IL-17Aの発現低下を認めるものの、IL-23p19の発現に差は認めなかった。以上の結果より、Maresin 1はIL-23p19より下流のシグナルを阻害している可能性が考えられた。その現象をより詳細に観察するため、IL-23皮下注による乾癬モデルにおいて、Maresin1の効果を検討すると、同様の現象が観察された。したがって、Maresin 1によりIL-23に対する反応性が低下している可能性が示唆された。続いて、γδT細胞とTh17細胞のIL-23受容体の発現を検討した。Maresin 1の刺激により、IL-23受容体の発現が減弱していることが分かった。そのメカニズムとして。Th17細胞ならびにγδT細胞のRoRγtの発現低下を生じる事、IL-23受容体そのものに対してクラスリン依存性のinternalizationを生じることを確認した。生体内におけるMaresin 1の作用点を確認しており、今後はin vitro実験にて詳細な作用機序のメカニズム解明を行う。IL-23の産生にかかわる細胞として樹状細胞、またIL-17産生細胞であるγδT細胞への作用について検討を行うことを予定している。具体的には、骨髄細胞から樹状細胞を誘導し作成した骨髄由来樹状細胞から産生されるIL-23が、Maresin 1で抑制されることをELISAもしくはPCRにて検討を行う。皮膚免疫本年度はMaresin 1の抗炎症効果について、接触皮膚炎モデルならびに乾癬モデルについて検討を行い、in vivoでの効果を確認したが、研究の遂行がおおむね順調に進み、次年度使用額が生じた。

次年度はin vitroでのMaresin 1の詳細な作用メカニズム解明を行うため、次年度使用額を用いて作用点を明らかにするため、試薬購入に充てることとした。具体的には、Maresin 1が炎症性サイトカインであるIL-17の産生を抑えることを確認するため、皮膚から採取した細胞を用いて、Maresin 1が皮膚におけるIL-17を産生する細胞であるγδT細胞などを用いて検討する。
血液検査で膵がんになりやすさを判定する方法

コピー数多型(CNP)は遺伝子多型の一つであり、数千から数万塩基にわたるDNA領域のコピー数に個人差があるというものである。このCNPは精神疾患を含めた様々な病気との関連が報告されている。これまでに膵がんとの関係についてはほとんど報告されていないため、この関係について検討した。Arraycomparative genomic hybridizationを用いて膵がん感受性CNP候補領域を探索した。膵がん感受性CNPは10カ所存在し、当該CNP出現頻度は膵がん患者で55-70%であったのに対して、コントロール群では0-7%であった。このCNPを調べることで、膵がんになりやすさを予測できる可能性が示唆された。【研究背景および目的】我が国では死亡原因の第一位はがんであり、その対策は国民の健康という観点から最重要課題となっている。がんの死亡率を低下させる基本は、がんに罹患しないことである(予防に勝る治療法はない)。各人の各種のがんに対する感受性(なりやすさ)が予め評価可能となれば、「生活習慣や生活環境」改善を含めた具体的な予防策を講ずることが可能となるばかりでなく、現行のがん検診も効率的かつ効果的に実施でき、受診率を向上させることもできる。がん感受性評価方法としては、遺伝子多型のうちSNP(1塩基多型)がこれまで注目されていた。しかしながら、個々のSNPが、がん発生に与える影響はきわめて小さいことが判明している。一方、数千から数万塩基にわたるDNAコピー数に個人差がある「コピー数多型(CNP)」が2004年に発見され、これまでに精神疾患や腎臓病など様々な病気とCNPの関係が報告されている。膵がんとのCNP関連については報告はないため、この関連を明らかにするために本研究を行った。【材料および方法】健常者80名、膵がん患者20名の末梢血よりDNAを抽出し、Roche Nimblegen社の210万プローブ搭載のDNAチップを用いてCNPを網羅的に解析した。【結果】膵がん患者と健常者のCNPを比較したところ、膵がん患者においてあるゲノム領域のコピー数が増加あるいは減少していることが分かった。すなわち、膵がん特異的なCNPが存在することが明らかとなった。この膵がん特異的なCNPは10カ所存在し、当該CNPの出現頻度は膵がん患者での55-70%であったのに対して、コントロール群では0-7%であった。【今後の展望】さらに症例数を増やして解析し、膵がん特異的CNPを明らかにしていく予定である。将来的には、低コストで高精度な膵がん感受性予測システムを構築したい。