hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
自閉症は大人になっても治せるか？

本研究は自閉症の発症時期、責任部位、責任細胞種を特定すると共に、自閉症の発症メカニズムを解明し、新しい疾患治療法の確立を目指すことを目的としている。最近、自閉スペクトラム症の最も有力な原因候補遺伝子としてこのCHD8が同定され、世界中で大きな反響を呼んでいるが、われわれはヒト自閉症患者のCHD8変異を再現したモデルマウスを作製し行動解析を行ったところ、このマウスが自閉症様の行動異常を再現することを確認した。この自閉症モデルマウスを用いて、自閉症が発症するメカニズムをトランスオミクス解析によって調べたところ、遺伝子変異によってCHD8の発現量が減少すると神経発生に重要な制御因子であるRESTが異常に活性化され、その結果として神経の発生遅延が起こることがわかった。CHD8ヘテロ欠損マウスで脳内の遺伝子発現解析を行ったところ、オリゴデンドロサイト関連遺伝子の発現が顕著に低下していたことから、われわれはオリゴデンドロサイトにおけるCHD8の機能に着目した。オリゴデンドロサイト特異的CHD8欠損マウスを作製したところ、これらのマウスはオリゴデンドロサイトの分化障害によるミエリン形成不全によって、生後まもなく死亡することが判明した。さらに、オリゴデンドロサイト特異的CHD8へテロ欠損マウスの行動解析を行い、CHD8変異による自閉症モデルマウスで観察された自閉症様行動の一部である不安様行動の増加と社会的行動の異常が再現されることが明らかになった。いくつかのグリア細胞においてCHD8の欠損によりグリア細胞の機能が障害することが判明し、CHD8によるグリア細胞制御の重要性が明らかになりつつある。特に、CHD8はオリゴデンドロサイトの分化を制御しており、CHD8変異によるオリゴデンドロサイトの機能異常が自閉症発症の一因を担っている可能性が示唆された。これらの知見は当初の研究目的に適っており、順調に達成されつつあると考えられる。プロテオーム、ChIP-SeqおよびRNA-Seq解析によって、グリア細胞におけるCHD8の標的遺伝子を網羅的に探索することで、CHD8によるグリア細胞の制御機構を解明する。グリア細胞特異的にCHD8を発現誘導できるトランスジェニックマウスを作製し、自閉症モデルマウスと交配することによって、自閉症様の行動異常が改善されるかどうかを検討する。
数値的方法による有限温度格子量子色力学の研究

本研究は格子上の量子色力学の大規模数値シミュレーションによって、ハドロン相からクォークグルオンプラズマ相への相転移の性質並びに高温相の物理的特徴の解明を行うことを目標としたものである。計画初年度には、相転移自身の性質についての研究を実施し、続いて2年目・3年目には高温相に関する基礎的情報である状態方程式の計算を行った。その結果得られた成果は以下のとおりである。1.現実の有限温度相転移の性質を知る上でup,downクォークの質量m_<ud>とstrangeクォークの質量m_sが異なることによる影響を知ることは非常に重要である。Kogut-Susskindクォーク作用を用いて(m_<ud>,m_s)平面上での相転移の同定を系統的に行い、一次転移が消える臨界クォーク質量を評価した。さらm_<ud>とm_sが等しいSU(3)対称な場合について、詳細な解析を行い、一次転移が消失する点は二次転移となっており、さらにそこではフレーバー一重項のσ粒子が質量ゼロとなることを示した。2.状態方程式については従来専らKogut-Susskind作用が用いられてきた。本研究ではスピン・フレーバーについて遥かに自然な定式化であるWilson型作用を用いてフレーバー数2の場合の計算を行った。この計算は動的クォークを含むため計算量が膨大であるので、グルオン場・クォーク場共に改善された作用を用い、計算法としては積分法を用いた。準備のために純グルオン理論での状態方程式決定を行い、エネルギー・圧力を温度の関数として求めて連続極限を取り、従来の標準作用により得られていた結果と約3%の精度で一致する結果を得た。クォークを含む場合について積分法を用いるため、(K,β)面での相図解析を行ってカイラル極限とパリティ破れ相を同定した。この後時間方向格子点数N_t=4と6の場合について主として空間サイズ16^3の格子を用いたシミュレーションを行い、m_π/m_ρ=0.6-0.95に対応するクォーク質量領域で、圧力及びエネルギー密度を温度の関数として決定して。この結果に見られる主要な特徴は、(1)クォーク質量がm_π/m_ρ=0.9よりも軽くなるとクォーク質量依存性は殆ど見られないこと、(2)N_t=6の結果はT/T_c=2以上では連続理論のStefan-Boltzmann極限にほぼ一致することであり、今後より大きな時間サイズを用いてスケーリングの破れの解析を行うことが重要である。数値シミュレーションによる有限温度格子量子色力学の研究を行った。本年度に得られた主な結果は以下のとおりである。1. up-downクォークとstangeクォークの質量が異なる場合の有限温度QCDの相図は、現実世界の有限温度相転移の理解に重要であるにも拘わらず、散発的にしか調べられていない。

年次計画に従い、今年度は、Kogut-Susskindクォーク作用を用いて、up-downクォーク質量m_<ud>とstrangeクォーク質量m_sが異なる場合の有限温度QCDの相図の分析を行った。格子サイズ8^3×4のシミュレーションにより、(m_<ud>,Ki,m_5)平面上を系統的に調べ、相転移線を同定した。さらに、m_<ud>とm_5が等しい場合について、16^3×4格子を含む詳細な計算を行い、軽いクォークに対しては1次転移であるが、ある臨界質量で一次転移が消失すること、この臨界質量値では2次転移が存在し、フレーバー一重項のシグマ中間子が質量ゼロになる証拠を見いだした。以上の結果は理論的に予想されながら、現在までその正否が未解決であった事柄である。2. Wilson型クォーク作用に基づく有限温度量子色力学の研究について、連続極限への収束が早くなるように工夫された「改善された作用」による研究を推進した。このような作用に対してエネルギー密度・圧力などの熱力学量を見いだす方法のテストケースとして、クォークを無視した純グルオン系のシミュレーションを行い、標準的な作用を用いて得られた結果と連続極限において一致する結果を得た。異なる作用を用いて、連続極限における一致を直接確認した数少ない例である。また、クォークを含む場合について、プログラム開発及び予備計算を行い、次年度以降に予定する大規模計算のための準備を整えた。Wilson型クォーク作用に基づく有限温度量子色力学の研究を継続した。本計画では、連続極限への収束が早くなるように、繰り込み群により改善されたグルオン作用と、所謂クローバークォーク作用を用いている。主要な結果は以下のとおりである。1.(β,κ)面上での有限温度相構造について、パリティが自発的に破れた青木相の存在とその領域境界を決定した。相転移温度及びカイラルオーダーパラメータのスケーリング則の検討を行い、転移温度としてT【approximately equal】160MeV、臨界指数に対して概ね期待されるO(4)予測との一致を見た。2.クォーク・グルオン・プラズマの物理特性の決定には、エネルギー密度・圧力などの熱力学量が重要である。平成10年度より行ってきた純グルオン系の積分法による計算を完成させ、標準的な作用を用いて得られた結果と連続極限において約3%の計算誤差の範囲で完全に一致する結果を得た。3.クォークを含む場合について積分法を用いるため、8^3×4格子を用いた準備計算を行い、(β,κ)面上での最適な積分路を決定した。続いて16^3×4格子を用いた本格計算を行い、m_π/m_p【approximately equal】0.65-0.95に対応するクォーク質量領域で、圧力及びエネルギー密度を温度及びクォーク質量の関数として求めた。結果はクォーク質量にはあまり依らない来年度は以上のN_t=4の結果をN_t=6へ拡張し、両者から連続極限を求める予定である。本研究は格子上の量子色力学の大規模数値シミュレーションによって、ハドロン相からクォークグルオンプラズマ相への相転移の性質並びに高温相の物理的特徴の解明を行うことを目標としたものである。計画初年度には、相転移自身の性質についての研究を実施し、続いて2年目・3年目には高温相に関する基礎的情報である状態方程式の計算を行った。その結果得られた成果は以下のとおりである。1.現実の有限温度相転移の性質を知る上でup,downクォークの質量m
ヒト軟骨細胞の培養とtissue engineering

ヒト培養軟骨細胞(耳介、肋軟骨)をヒトへの移植を可能とし、臨床レベルへ実用化することを目的として本研究をおこなった。すでに我々は独自の培養法によるヒト軟骨(耳介、肋軟骨)の大量培養を成功させた。この方法を用いて培養したヒト軟骨(耳介、肋軟骨)の培地中のアルカリフォスフアターゼ活性とコンドロカルシンの測定を行った結果、control(培地のみ)はほとんど検出されないのに対し、ヒト軟骨細胞培養系は高(ALP40IU/L,100ng/ml)を示した。さらにヒト軟骨細胞(単独群)とヒト軟骨細胞+キャリアー(アルギン酸ファイバー)をヌードマウスへ移植後、1カ月、3カ月、6カ月後の軟骨形成を組織学的に検討した。その結果、移植後形成された耳介軟骨は弾性軟骨の特徴であるEVG染色、アルシアンブルーPAS染色に強く染まった。移植後形成された肋軟骨はガラス軟骨の特徴であるアルシアンブルーに染色されたが、EVG染色およびPASには弱く染まった。ヌードマウスに移植後、形成された軟骨(耳介、肋軟骨)はヒト軟骨細胞のマーカーであるcollagen type IIのmRNAの発現が検出された。ヒト軟骨細胞を3次元培養し、ヌードマウスおよヌードラットの背部皮下に移植し、ヒト耳介型の再生をおこなった。移植個体は6検体であるがいずれも耳介型は形成された。今後、臨床に応用するにあたり、重要なことはアルギン酸ファイバーなどのキャリアーの炎症反応が免疫不全実験動物では確認できないことである。また移植された軟骨の吸収の問題も検討される必要がある。<ヒト軟骨細胞の培養法><培養軟骨細胞の支持体の検討>培養軟骨細胞を人工物(ポリグリコール酸、アルギン酸塩、コラーゲンスポンジ)と組み合わせを検討した結果、ポリグリコール酸が最も適した。その結果、培養軟骨細胞とポリグリコール酸メッシュを組み合わせ、人工的に作製した軟骨細胞組織塊を得た。<培養軟骨細胞の移植実験>ヌードラット背部に上記軟骨細胞組織塊を埋植し経時的(1ヵ月、2ヵ月、3ヵ月、6ヵ月)にbiopsyを行って軟骨形成片を観察した。(n=19/20,軟骨形成率95%)<組織学的検討>トルイジンブルー染色、アルシアンンブルーPAS染色で軟骨に特異的な組織像を検出した。その結果、移植後の培養軟骨細胞塊の軟骨形成が認められた。<分子生物学的検討>培養軟骨細胞塊移植後の組織片よりtRNAを抽出し、ヒト軟骨内マーカーであるtypeIIcollagenのmRNAの発現を検出した。以上の結果をまとめ、1998年10月第7回日本形成外科学会基礎学術集会、宿題報告で発表した。<培養軟骨細胞の移植実験>ヌードラット背部に上記軟骨細胞組織塊を埋植し経時的(1カ月、2カ月、3カ月、6カ月)にbiopsyを行って軟骨形成片を観察した。平成10年度はn=19/20、軟骨形成率95%であったが、本年は個体数を増やし、n=50、軟骨形成率は約100%となった。<組織学的検討>トルイジンブルー染色、アルシアンンブルーPAS染色で軟骨に特異的な組織像を検出した。現在、論文作成中である。

今後、臨床に応用するにあたり、重要なことはアルギン酸ファイバーなどのキャリアーの炎症反応が免疫不全実験動物では確認できないことである。また移植された軟骨の吸収の問題も検討される必要がある。
人工知能で目指すアミノ酸配列類似性検索法の高速化および高感度化研究

アミノ酸プロファイルまたは位置特異的置換行列(position specific scoring matrix (PSSM))は対象のアミノ酸配列の各座位における進化情報を内包する行列データである.配列類似性検索や進化解析をはじめとする様々な下流の解析に用いられており,バイオインフォマティクスの研究に必要不可欠である.その構築過程で,対象配列を雑多な配列データベースに対して繰り返し検索する必要があるため,構築時間はデータベースのサイズに依存する.そのため,昨今の利用可能な配列データの爆発的な増加によって,PSSMの構築には大量の計算時間が必要となっている.そんな中,深層学習が様々な研究分野で注目を集めている.中でも,長短期記憶(LSTM)は時系列(文脈)という,自然界に存在する最も基本的なデータ構造のひとつを学習できる枠組みであり,機械学習の範疇に収まらず,人工知能をはじめとする様々な分野で応用されている.アミノ酸配列を配列たらしめる最も基本的な要素のひとつはその文脈であるが,その観点からLSTMはアミノ酸配列の機械学習に適した枠組みであるといえる.本研究ではLSTMを用い,大量のPSSMを網羅的に学習することで,1本のアミノ酸配列からPSSMを生成する手法,SPBuildを開発している.開発手法のPSSMの生成に要する計算量は配列長に対し線形であり,高速にプロファイルを生成可能であった.また,本研究で開発した手法によって生成させたプロファイルで,配列類似性検索法の感度を測定したところ,BLAST,CSBuild,RPS-BLAST等の既存の類似性検索法より高い感度を示した.本手法は,プロファイル比較法をはじめとする下流の解析法に応用することで,その計算時間の短縮および性能向上に寄与することが期待される.これまでに,人工知能技術を利用してたった1本の配列からアミノ酸プロファイルを生成する画期的な手法を世界に先駆けて開発することに成功した.今後は,本手法を界隈に周知し,より多くの研究者に使用してもらうための活動を行う.具体的には,現在ソフトウェアとして公開している本手法をサーバーとしてインターネット上で公開することである.これに関して,東北大学大学院情報科学研究科の木下賢吾先生と産業技術総合研究所の富井健太郎先生と共同でサーバー化の作業を進めている.アミノ酸プロファイルまたは位置特異的置換行列(position specific scoring matrix (PSSM))は対象のアミノ酸配列の各座位における進化情報を内包する行列データである.配列類似性検索や進化解析をはじめとする様々な下流の解析に用いられており,バイオインフォマティクスの研究に必要不可欠である.その構築過程で,対象配列を雑多な配列データベースに対して繰り返し検索する必要があるため,構築時間はデータベースのサイズに依存する.そのため,昨今の利用可能な配列データの爆発的な増加によって,PSSMの構築には大量の計算時間が必要となっている.そんな中,深層学習が様々な研究分野で注目を集めている.中でも,長短期記憶(LSTM)は時系列(文脈)という,自然界に存在する最も基本的なデータ構造のひとつを学習できる枠組みであり,機械学習の範疇に収まらず,人工知能をはじめとする様々な分野で応用されている.アミノ酸配列を配列たらしめる最も基本的な要素のひとつはその文脈であるが,その観点からLSTMはアミノ酸配列の機械学習に適した枠組みであるといえる.本研究ではLSTMを用い,大量のPSSMを網羅的に学習することで,1本のアミノ酸配列からPSSMを生成する手法,SPBuildを開発している.開発手法のPSSMの生成に要する計算量は配列長に対し線形であり,高速にプロファイルを生成可能であった.また,本研究で開発した手法によって生成させたプロファイルで,配列類似性検索法の感度を測定したところ,BLAST,CSBuild,RPS-BLAST等の既存の類似性検索法より高い感度を示した.本手法は,プロファイル比較法をはじめとする下流の解析法に応用することで,その計算時間の短縮および性能向上に寄与することが期待される.これまでに,人工知能技術を利用してたった1本の配列からアミノ酸プロファイルを生成する画期的な手法を世界に先駆けて開発することに成功した.今後は,本手法を界隈に周知し,より多くの研究者に使用してもらうための活動を行う.具体的には,現在ソフトウェアとして公開している本手法をサーバーとしてインターネット上で公開することである.これに関して,東北大学大学院情報科学研究科の木下賢吾先生と産業技術総合研究所の富井健太郎先生と共同でサーバー化の作業を進めている.当初の予定では計算機を購入しようとしていたが,まだ現役で使えそうであるため,ディスプレイの購入のみにとどまり,未だ計算機を新調していないために物品費に予定との差額が生じた.差額は10万円程度であり,次年度において計算機を新たに購入しなければならない状況が生じた場合は,そのままスライドで使用する予定である.
超解像によるNMDA受容体サブユニット局在調整機構解析

高次脳機能の実現において重要な役割を果たす要素の一つであるNMDA型グルタミン酸受容体は様々なサブユニットを持ち、各サブユニットの局在変化がシナプス機能へ影響を及ぼす。本研究では興奮性シナプスを構成する樹状突起スパインにおける各サブユニットの局在の経時変化を明らかにすると同時に、神経活動依存的にその局在を変えるドレブリンやシナプス足場タンパク質との相互関係を明らかにすることを目的とした。ドレブリンはNMDA受容体サブユニット輸送を制御する要因の1つである可能性が示唆されている。本研究ではドレブリンノックアウト動物を用いた検証を行い、ドレブリンがNMDA受容体各サブユニットに及ぼす影響を示した。高次脳機能の実現において重要な役割を果たす要素の一つであるNMDA型グルタミン酸受容体は様々なサブユニットを持ち、各サブユニットの局在変化がシナプス機能・可塑性へ影響を及ぼすことが知られている。本研究では樹状突起スパインにおける各サブユニットの局在の経時変化を明らかにすると同時に、神経活動依存的にその局在を変えるドレブリンやシナプス足場タンパク質との相互関係を明らかにすることを目的としている。ドレブリンはNMDA受容体サブユニット輸送を制御する要因の1つである可能性が考えられており、本研究では特に超解像顕微鏡を用いて樹状突起スパインという微小環境における受容体やドレブリンの局在について着目する。さらに、ヒトiPS細胞由来神経細胞についてもNMDA受容体サブユニット等の局在解析を目指し、種差を超えた共通のシナプス機能機構の解明につなげたい。そのためには、ヒトiPS細胞由来神経細胞の培養方法を確立させていくことも重要である。これまでに、NMDA型グルタミン酸受容体サブユニットの発現についてドレブリンノックアウト動物を用いた検証を行ってきた。ドレブリンはE型アイソフォームとA型アイソフォームがあるが、A型アイソフォーム特異的ノックアウト動物(DAKO)と、E型・A型両アイソフォームノックアウト動物(DXKO)を通常個体(WT)と比較することにより、NMDAR各サブユニットとドレブリンE型・A型アイソフォームとの相互関係を概観してきた。各マウス(WT、DAKO、DXKO)から調整した初代培養神経細胞を用いて経時的に各サブユニットの発現数を計測した。また、超解像顕微鏡による局在解析を行うための色素等も検討し、様々なシナプスタンパク質(ドレブリン、シナプシンI、PSD-95)の局在解析が進んでいる。これまでに、1NMDA型グルタミン酸受容体サブユニットの発現についてドレブリンノックアウト動物を用いた検証、2生化学的手法による各サブユニットの発現量検証、3超解像顕微鏡によるタンパク質局在解析手法の改善、4ヒトiPS細胞由来神経細胞の培養法の確立、を行ってきた。1については、ドレブリンはE型アイソフォームとA型アイソフォームがあるが、A型アイソフォーム特異的ノックアウト動物(DAKO)と、E型・A型両アイソフォームノックアウト動物(DXKO)を通常個体(WT)と比較することにより、NMDAR各サブユニットとドレブリンE型・A型アイソフォームとの相互関係を概観してきた。具体的には、各マウス(WT、DAKO、DXKO)から調整した初代培養神経細胞を用いて経時的に各サブユニットの発現数を計測した。2は各動物から脳を摘出し、ウェスタンブロッティング法により各サブユニットの発現量を定量した。3については、超解像顕微鏡による局在解析を行うために、まずは細胞の培養条件を検討し、適切なチャンバーを選定した。さらに色素等も検討し、ダイレクトラベリングも行えるようになっている。既にいくつかのシナプスタンパク質、ドレブリンやシナプシンI、PSD-95などの局在解析が進んでいる。4は、いくつかのヒトiPS細胞由来神経細胞を用いて培養を試み、その方法を検討中である。高次脳機能の実現において重要な役割を果たす要素の一つであるNMDA型グルタミン酸受容体は様々なサブユニットを持ち、各サブユニットの局在変化がシナプス機能・可塑性へ影響を及ぼす。さらに、ヒトiPS細胞由来神経細胞についてもNMDA受容体サブユニット等の局在解析を目指し、ヒトiPS細胞由来神経細胞の培養方法を確立させていくことも重要である。前年度はNMDA型グルタミン酸受容体サブユニットの発現についてドレブリンノックアウト動物を用いた検証を行い、NMDAR各サブユニットとドレブリンE型・A型アイソフォームとの相互関係を概観してきた。今年度はさらに、足場タンパク質との関連を検証するため、主にPSD-95に着目した解析行った。超解像顕微鏡でもドレブリン、シナプシンI、PSD-95などのシナプスタンパク質の樹状突起スパイン内局在を解析し、さらに、NMDA型グルタミン酸受容体を刺激した時のそれらのタンパク質の局在変化についても解析を進めた。グルタミン酸による刺激でドレブリンは劇的にその局在を変化させ、樹状突起スパインン頭部から樹状突起へと明確な局在の移動が観察された。ヒトiPS細胞由来神経細胞の培養方法は様々な種類の細胞、培地等を検討した結果、培養の最適化が進んだ。

高次脳機能の実現において重要な役割を果たす要素の一つであるNMDA型グルタミン酸受容体は様々なサブユニットを持ち、各サブユニットの局在変化がシナプス機能へ影響を及ぼす。本研究では興奮性シナプスを構成する樹状突起スパインにおける各サブユニットの局在の経時変化を明らかにすると同時に、神経活動依存的にその局在を変えるドレブリンやシナプス足場タンパク質との相互関係を明らかにすることを目的とした。ドレブリンはNMDA受容体サブユニット輸送を制御する要因の1つである可能性が示唆されている。本研究ではドレブリンノックアウト動物を用いた検証を行い、ドレブリンがNMDA受容体各サブユニットに及ぼす影響を示した。今後は超解像顕微鏡による各サブユニット局在の詳細検討、並びに足場タンパク質の関与について検証を行っていく。また、ヒトiPS細胞由来神経細胞についても同様の解析を検討していく。神経科学超解像顕微鏡を用いた解析において、条件検討に少し時間を費やす結果となった。加えて、超解像顕微鏡解析ではデータサイズが大きいため、画像取得・ならびに画像解析に時間がかかる。そのため、当初予定していたほど抗体等の消費が進まなかった。超解像顕微鏡を使用する際の条件がほぼ確定したので、今後は超解像顕微鏡の解析が中心となっていく。そのため抗体や封入剤等の消費が前年度よりは多くなることが見込まれるので、その分に充てていく。
空間1次元の活性化因子-抑制化因子系の安定定常解の構造の研究

今回の若手研究では、以下のような反応拡散系(FitzHugh-Nagumo方程式)の定常問題について考えた:ただし、f(u)=u-u^3のような形を仮定した。この方程式は、いわゆるチューリング不安定性による形態形成が起こるもっとも単純なものの一つである。しかしながら、この方程式には、εが十分小さければ、非常にたくさんの定常解が存在することも証明されていた。それらは、内部遷移層と呼ばれる空間構造を持つ解達であり、我々はそれら多くの定常解達の中から、どれが選ばれやすいかという問題をとりあげ、計算機シミュレーションを繰り返し、その構造について一定の知見を得た。いろいろなモードの摂動を自明解に与えたとき、この方程式の時間発展により、最終的に実現する定常解のモードを系統的に調べ、その結果、それが理論的なチューリング不安定性から示唆されるモードと統計的な関係を持ちうることが解った。年度、初頭、及び、中頃に、2度、アメリカのSLAM及び、ライデン大学へ出張して、情報を収集すると同時に、中間報告的な発表を行った。とくにライデンでの発表は有意義であり、アムステルダム大学のドールマン教授とかなり深い議論ができ、今後の展開にある方向性を見るけることができた。国内でも北海道大学電子科学研究所や東京大学数理科学研究科の保野先生が、主催される秋の学校、九州で行われた国際研究会で、本研究の研究成果の一部分を公開させていただいた。計算機によるシミュレーションで、解の構造がかなり良く解ってきた。一部を水野督一君の修士論文の一部とさせていただいたが、別の一部分は、京都大学数理解析研究所で行われた国際研究会で、報告すると同時に、その講究録に掲載させていただいた。本年度は、CPUメモリーの値段が一時期下がっていたこともあり、効率的な計算機の購入を行えたと思う。
プロスタグランジン受容体の発現誘導に関する生物薬学的研究

本研究の目的は、プロスタグランジン(PG)受容体が、どの細胞で発現誘導を受け、その受容体発現がどれくらい重要な病態・生理的意義を持つのかを明らかにすることである。以下に成果概要を列挙する。1.研究代表者らは、各EP受容体欠損マウスにアレルギー性喘息モデルを導入しその応答を調べたところ、EP3欠損マウスが喘息応答の増悪を示した。野生型マウスにEP3作動薬を投与すると、喘息応答を緩和した。EP3は肺胞上皮に発現しており、EP3作動薬により肺胞上皮のTARC発現が低下した。従って、肺胞上皮に構成的に発現するEP3受容体は、ケモカイン誘導を作用点として喘息応答を抑制することが判った。2.カゼイン誘導性腹膜炎モデルを用いて、局所で産生されたPGE2は、好中球に発現するEP2受容体を介して顆粒球刺激因子(G-CSF)放出を促進し、炎症局所への好中球リクルートに重要な役割を担うことを明らかにした。また好中球にはEP2とEP4という2種類のcAMP産生系PGE受容体が発現するが、EP4による一過性のcAMP産生では効果は小さく、EP2受容体による持続的なcAMP産生亢進が必須であることを明らかにした。3.PGF2受容体(FP)は、顆粒膜細胞から黄体細胞への分化の際に発現誘導を受け、黄体退縮に必須の役割を果たすが、PGFによる黄体退縮の分子機構は不明であった。そこで野生型とFP欠損の黄体細胞を網羅的に発現比較したところ、FP欠損ではチトクロムP-450アロマターゼに代表されるステロイド合成酵素遺伝子が高発現し、またSod2、Sod3(活性酸素ジスムターゼ)などの抗酸化遺伝子の発現が亢進していた。PGF2aによる黄体退縮には、ステロイド代謝変化とフリーラジカルスカベンジャータンパク質の発現低下が重要な鍵を握る可能性が示された。本研究の目的は、プロスタグランジン(PG)受容体の発現とその制御に着目し、分子検索ツールと受容体欠損マウスを駆使することで、PG受容体が、どの細胞で、いかなる刺激により発現誘導を受け、これがどういった分子機構によるのか、さらにはその受容体誘導がどれくらい重要な病態・生理的意義を持つのかを明らかにすることである。今年度の研究成果として、以下が挙げられる。(1)終末糖化産物は糖尿病の発症に関与することが示唆されており、イムノグロブリン様の受容体RAGEを介してサイトカインや接着分子の発現亢進を引き起こす。マクロファージ細胞株RAW264.7をRAGEアゴニストで刺激すると、COX-2ならびにEP2受容体両遺伝子の発現が非常によく似たパターンで起こることを見いだした。(2)PGD2受容体が妊娠マウス子宮に高発現すること、またこの発現は偽妊娠マウスでも見られたことから、受精卵の着床に依存せずステロイドホルモンによって制御される可能性を見いだした。(3)EP2受容体欠損マウスは受精障害を示すが、野生型の卵胞内でEP2受容体は卵丘細胞に発現誘導を受けることから、卵丘の機能不全によって卵成熟障害に陥る可能性を示唆していた。EP2欠損マウスの卵管より採取した卵の遺伝子発現を網羅的に解析したところ、タンパク質や核酸などの基本代謝に関わる遺伝子発現が顕著に減少していたことから、EP2欠損で見られた受精障害は卵の変性によるものと考えられた。一方、卵丘細胞の遺伝子発現を解析したところ、サイトカインなどの炎症関連遺伝子の発現亢進を認めた。

現在、発現亢進したサイトカインが卵に影響するか否かを検討している。本研究の目的は、プロスタグランジン(PG)受容体が、どの細胞で発現誘導を受け、その受容体発現がどれくらい重要な病態・生理的意義を持つのかを明らかにすることである。以下に成果概要を列挙する。(1)研究代表者らは、各EP受容体欠損マウスにアレルギー性喘息モデルを導入しその応答を調べたところ、EP3欠損マウスが喘息応答の増悪を示した。野生型マウスにEP3作動薬を投与すると、喘息応答を緩和した。EP3は肺胞上皮に発現しており、EP3作動薬により肺胞上皮のTARC発現が低下した。従って、肺胞上皮に構成的に発現するEP3受容体は、ケモカイン誘導を作用点として喘息応答を抑制することが判った。(2)カゼイン誘導性腹膜炎モデルを用いて、局所で産生されたPGE2は、好中球に発現するEP2受容体を介して顆粒球刺激因子(G-CSF)放出を促進し、炎症局所への好中球リクルートに重要な役割を担うことを明らかにした。また好中球にはEP2とEP4という2種類のcAMP産生系PGE受容体が発現するが、EP4による一過性のcAMP産生では効果は小さく、EP2受容体による持続的なcAMP産生亢進が必須であることを明らかにした。(3)PGF2受容体(FP)は、顆粒膜細胞から黄体細胞への分化の際に発現誘導を受け、黄体退縮に必須の役割を果たすが、PGFによる黄体退縮の分子機構は不明であった。そこで野生型とFP欠損の黄体細胞を網羅的に発現比較したところ、FP欠損ではチトクロムP-450アロマターゼに代表されるステロイド合成酵素遺伝子が高発現し、またSod2、Sod3(活性酸素ジスムターゼ)などの抗酸化遺伝子の発現が亢進していた。PGF2aによる黄体退縮には、ステロイド代謝変化とフリーラジカルスカベンジャータンパク質の発現低下が重要な鍵を握る可能性が示された。
ダイオキシン関連物質による虹彩・毛様体、網膜発現遺伝子への影響

1.ダイオキシン関連物質である3-メチルコラントレン(以下3MC)をマウスに隔日で腹腔投与し、対象にはオリーブオイルを腹腔投与した。1週間目に屠殺。虹彩毛様体、網膜をそれぞれ分離し、RNAを抽出。ダイオキシンの代謝物質であるCYP1A1が3MC投与群のみで上昇していることを確認した。前述のRNAを用いてオリゴマイクロアレイを行った。その結果、炎症系サイトカインなどの変動はなかった。EPAS-1やVEGFなどの血管新生に作用する物質が上昇していた。2.マウスに3MCを腹腔投与し、15日毎に眼底を確認した。ダイオキシンの影響は数日では現れなかった。少量のダイオキシンにて、2週間程度では病理的、肉眼的に影響は得られなかった。しかし、少量といえダイオキシンを連日投与し、基材がオリーブオイルのためか途中、マウスは死亡していったため、実験を中止した。3.次に3MCより毒素の高いTCDDを用いて実験を行った。人の網膜色素上皮細胞であるARPE-19を用いて、量依存的、時間依存的にVEGF-Aがどう変化するかウエスタンブロット、ノザンブロットを用いて実験した。発現量のVEGF-Aの蛋白が少量なのかウエスタンブロットでは結果がでなかった。ノザンブロットではTCDDの濃度を0nM,1nM,10nM,100nM,1000nMのふったのだが、10nMで発現が高かった。ある程度のダイオキシン濃度になると細胞毒性がおき、発現が減少するのではないかと考えた。時間的に0,2,6,12,18,24,48時間とふったが、18時間にて発現が高かった。4.TCDDを14日間腹腔投与、コントロールにオリーブオイルを投与。屠殺後眼球を摘出。これを用いてVEGF-A、VEGF-B、ダイオキシン代謝関連物質であるCYP1A1およびCYP1B1のリアルタイムPCRを行った。また、CYP1A1がTCDD投与群にて、虹彩毛様体と網膜において上昇していたことを確認した。今後、他のリアルタイムを進めていく予定である。1週間目に屠殺。屠殺後眼球を摘出。
同性婚をめぐる権利運動の理論分析から考える、「家族」の規範研究

同性愛者の運動の分析、とりわけ、同性婚をめぐる議論の分析を中心とした研究を通じて、彼女たちは異性愛中心主義的な家族を模倣しようとしているのではなく、社会的配分やケア関係を維持するために、「家族」を求めていることを突き止めた。さらに、ケアの倫理の社会的意義を探求することで、依存を不可避とする人間存在にとって、現代社会には、ケア関係を維持することを目的とした新しい家族概念が必要であることを提唱した。(1)本研究は、「家族」の規範性を考えることで北米における同性婚の関する議論とケアの倫理をめぐる議論を架橋する試みであり、その目的は、少子高齢社会を向かえた日本社会において、国家主義に陥ることなく、多様性に開かれた「家族」の重要性を提起しようとするものである。具体的内容については、以下三つに分かれている。(2)セクシュアル・マイノリティの権利論・運動論と、フェミニズム理論におけるケアの倫理から考える家族論の架橋をめざす。(3)異性愛中心主義や女性性を抑圧するよう作用する現在の家族制度を批判し、かつ、規範的な家族論を構築する。(4)ケアの倫理の立場からリベラリズム・資本主義を批判すること。1)資料収集について本年度は、カナダにおいて、フリージャーナリストとして、『カナダのセクシュアル・マイノリティたち-人権を求めつづけて』(教育資料出版会、2005年)を執筆した、サンダース・宮松敬子さんに研究協力をお願いし、彼女が収集した資料を受け取ることができた。また、セクシュアル・マイノリティの権利、家族に関する資料収集に努めた。2)同性婚に関する研究については、同性愛者たちが近代家族の枠組みに自ら囚われることをなぜ望むのか、あるいは、そもそも家族という制度が21世紀にも必要なのかといった、同性愛者当事者たちの問でも論争を生んでいる議論について考察を深めた。そのなかで明らかにしたのは、ひとは他者のケアなしには、一人の人間と「なる」ことはなく、全てのひとは、かつて他者からのケアを受け、また生涯にわたり、ケアされる・する関係性を続けていくことを考えれば、生死に関わるニーズを他者と分有し、満たしあう関係性は、すべてのひとに保障されるべき関係性である、という点である。そこで、そうした関係性こそが、わたしたちが互いに誰かを必要としつつ生きる基盤となる「家族」といえるのではないか、という提案を行った。その意味で本年度は、同性婚を求めるひとびとの言説とケアの倫理とを架橋することで、国民国家を支える道徳的聖域としての家族制度とは異なる、新たな「家族」像を探求する端緒を掴んだといえよう。本研究は、セクシュアル・マイノリティの権利論・運動論と、フェミニズム理論におけるケアの倫理から考える家族論の架橋をめざし、そこから規範的な家族論を構築することを目的としており、本年度は、昨年度収集した資料・文献に基づき、「家族」に対する理論的探求を試みる計画であった。今年度の研究成果で示したように、フェミニズム理論における制度的家族批判を踏まえつつ、「ケアの倫理」を経由することで、国家に回収されない新しい〈家族〉像を「家族のことば/家族の時間」において提起することができた。また、予定していたとおり、スペイン・マドリッドにおける世界女性会議にも参加し、スペインにおける同性愛者運動・同性婚を求める運動について、パネルに参加することができ、人々がなぜ、「家族」を求めているのか、また、同性婚に強く世論が反対する合衆国との違いについて、考察することが可能となった。その点については、同性愛者たちが、自分たちを排除・抑圧した「家族」をなぜ求めるかをめぐる考察として、「「女から生まれる--「家族」からの解放/「ファミリー」の解放」として発表することができた。規範的な家族論を批判しつつ、新しい家族概念の模索という点については、「家族のことば・家族の時間」において展開できた。本研究は本研究は、セクシュアル・マイノリティの権利論・運動論と、フェミニズム理論におけるケアの倫理から考える家族論の架橋をめざし、そこから規範的な家族論を構築することを目的としている。内容:平成21年度は、フェミニズム理論内におけるケアの倫理に焦点をあてつつ、家族の規範的な意義、すなわち、具体的な個人と他者の関係性において、諸個人の文脈に応じた個別具体的なニーズに応答するさいの倫理を抽出することに努めた。意義:日本におけるフェミニズム理論研究は、70年代以降のウーマン・リブの運動を経て、80年代に理論化が始まって以来、社会的政治的制度としての「家族」は、女性を抑圧し、女性の公的領域における活動力、そして自由を阻害してきたとして批判にさらされてきた。本年度申請者の研究においては、歴史的に女性たちを抑圧してきた制度としての家族の否定的側面に十分な配慮をしつつもなお、家族的な営み・親密圏における実践から、非暴力的な他者への応答のための倫理を抽出し得たことに意義がある。重要性:本研究は、規範的家族に見いだされる倫理から、政治思想史を貫く公私二元論、さらには、主権国家の暴力性を照射し、新しい社会構築の基盤を模索する点で、これまでない、フェミニズム理論の可能性を提起している。

本研究は、セクシュアル・マイノリティの権利論・運動論と、フェミニズム理論におけるケアの倫理からえる家族論の架橋をめざし、そこから規範的な家族論を構築することを目的としている。内容:平成22年度は、家族の営みを人間の条件の一つである「依存」と「他者からのケア」と捉えつつ、そこから新しい自由論を展開することを務めた。そこに、セクシュアル・マイノリティが求める新しい家族の形と、日々の家族という営みとのつながりを見いだした。意義:近代の政治思想史を振り返りつつ、近代的な家族と主権国家のありようを、暴力装置の分配、すなわち、家長に対する家族構成員への絶対的支配権と、主権者が独占する暴力装置といった視点から、両者に共通点を見いだし、両者を共に批判することで、家族制度批判と近代的な主権国家の暴力性批判を結びつけた。重要性:本研究は、従来政治思想史の分野では、ほとんど主題とさえならなかった家族論から、近代の政治思想史の規範である、自由や正義を問いなおすことで、日本において稀有な研究である。
微小管による細胞分裂面決定の分子機構

細胞質分裂では分離した染色体間の細胞表層に分裂面が決定され,収縮環が形成される.分裂後期の微小管が何らかのメカニズムで細胞表層に分裂面を決定し,収縮環形成に導くシグナルを伝えると考えられてきたが,シグナルの実体は不明のままだった.本研究課題では, Rhoシグナルを指標として,分裂シグナルをライブセルイメージングにより可視化して動態を観察し,微小管による細胞分裂面決定の分子機構を解析した.細胞質分裂では分離した染色体間の細胞表層に分裂面が決定され,収縮環が形成される.分裂後期の微小管が何らかのメカニズムで細胞表層に分裂面を決定し,収縮環形成に導くシグナルを伝えると考えられてきたが,シグナルの実体は不明のままだった.本研究課題では, Rhoシグナルを指標として,分裂シグナルをライブセルイメージングにより可視化して動態を観察し,微小管による細胞分裂面決定の分子機構を解析した.哺乳動物細胞では,分裂後期の微小管が収縮環を形成し分裂溝を誘導するのに重要であることが知られている.従来,細胞分裂には双極紡錘体の構造が分裂面決定に最低必要な構造であると考えられてきた.ところが,近年,単極紡錘体のみを持つ細胞(単極細胞)を分裂後期に導くと,一部の微小管が染色体を越えて伸び,その先端近くの細胞表層に分裂溝が形成されることが報告された.これは,染色体と微小管との位置関係によって,分裂溝を誘導する特定の微小管が決定されるためと考えられるが,その分子機構はよくわかっていない.私たちは,単極細胞にCdk1阻害剤を作用させることにより紡錘体チェックポイントを乗り越えて分裂後期を誘導し,分裂溝が形成される系を開発した.この系を用いた解析により,単極細胞においても双極細胞と同様に,分裂溝の位置決定には低分子量Gタンパク質Rhoが必須で,Rhoの局在は染色体を越えて伸びる微小管先端に局在するRho調節因子複合体(ECT2,MgcRacGAP,MKLP1)によって制御されていることがわかった.そこで,Rhoシグナルの指標となる分裂期キネシンMKLP1とEGFPとの融合タンパク質を恒常的に発現する細胞株を樹立し,単極細胞のライブイメージングをおこなったところ,EGFP-MKLP1は染色体付近で微小管に結合したあと,微小管先端に集積し,その周囲の細胞表層に分裂溝が形成された.分裂期キナーゼAurora Bの阻害剤を加えると,微小管へのEGFP-MKLP1の結合が抑制され,分裂溝も形成されなかった.さらに,Aurora B RNAiでも,単極紡錘体細胞の分裂溝形成が抑制された.以上のことから,Aurora Bキナーゼが分裂溝を誘導する微小管の決定に重要で,MKLP1が分裂溝を誘導する微小管への結合するのを制御していることが示唆された.動物細胞では,染色体の分離後,染色体間の細胞表層に,収縮環が形成され,その収縮によって分裂溝が生じて細胞がくびれ, 2つの娘細胞が分離する.分裂後期の微小管のうち,染色体間の微小管(中央紡錘体および星状体微小管の一部)が,収縮環の位置(分裂面)を決定し,収縮環形成を促進する"分裂シグナル"を供給するモデルが提唱されているが,その分子実体はよくわかっていなかった.これまでに私たちは, Rhoシグナル経路が,分裂シグナルの分子実体として働くことを明らかにした.さらに, Rhoシグナル経路の構成分子MKLP1(キネシン)とEGFPの融合タンパク質(EGFP-MKLP1)を恒常的に発現する細胞株を確立し,ライブイメージングによって,分裂シグナルを可視化する方法を開発した. EGFP-MKLP1は,染色体分離後,染色体間の微小管に局在するので,この局在を指標として,分裂シグナルを制御する因子の探索を行った.この細胞に, Aurora B RNAiまたはAurora阻害剤処理を行うと, MKLP1の染色体間の微小管への局在が失われ,分裂溝の形成も阻害された.Aurora Bは染色体パッセンジャータンパク質とも呼ばれ,分裂中期までは染色体,その後,ミッドゾーンに移行することから, Aurora Bの活性が, MKLP1の局在を制御することを示している.これは,これまで謎であった,染色体間の微小管が,どのようにして分裂シグナルを供給するかを解明する糸口となる結果である.また, Aurora Bのほかに,微小管結合因子PRCl RNAiによっても, MKLP1の染色体間の微小管への結合が阻害された, PRC1は,分裂後期に染色体間の微小管に集積することから, MKLP1との分子間の相互作用の存在が推定される.また,これら分裂シグナルの起源となる染色体間の微小管の形成に影響を与える因子を探索したところ, tubulin RNAiによって,中央紡錘体および分裂溝の形成が阻害された.このことから,分裂シグナルを制御する微小管の形成には, □tubulinが重要な役割を担っていることが示唆された.
分子イメージング法を用いた紅藻ソゾ属のハロゲン元素動態の検討

<研究目的>本研究は、紅藻ソゾ属における臭素代謝機構の検討のため、臭素化合物の安定同位体分析と放射性同位体分析の両面からハロゲン取込みや生体内分布、含有ハロゲン化合物等の解析を行い、ハロゲン代謝物の動態を検討することを目的とした。<研究方法>採取したウラソゾ(Laurencia nipponica)をメタノール、エーテル、ヘキサンで連続抽出し、LC/MS、GC/MS分析に付して含有成分を解析した。同時にウラソゾ本体を質量分析イメージング分析に付し、これらの化合物の生体内分布の測定・解析を行った。また、既に報告した臭素-ヨウ素置換反応を利用した放射性ヨウ素を用いた臭素化合物のRI分子イメージング法(平成23年度科学研究費(奨励研究))で用いた手法と合わせてハロゲン代謝物の動態を検討した。<研究結果>LC/MS分析の結果、本種の含有臭素化合物の主成分はlaurencin, diacetyllaurencinであった。引き続き実施した質量分析イメージング分析によって、両化合物は体表面近傍に高濃度で存在する他、藻体内部の細胞にも存在が示唆される結果となった。一方、RI分子イメージング法を用いた解析により、臭素化合物の生成は藻体表面、特に先端部等で著しいことが示唆されている。従来、これらの化合物は表面細胞内のサクランボ小体中で生成、蓄積されることが報告されており、今後、生成と蓄積、あるいはその後の挙動を含めた検討が必要である。ソゾ属におけるハロゲン化合物の分析、合成経路の研究等は既に多くの報告がある。しかし、これらの物質の2次元分布(イメージング)に関する報告はほとんどなく、本研究で実施した安定/放射性同位体の分子イメージング研究は、臭素化合物の動態等を解明するうえで極めて有効な手法であると考えられる。本法を用いて、より多くの臭素化合物・前駆体等の同定と分子イメージングを実施することにより、ハロゲン代謝物の動態解明につながることが期待できる。
妊娠中期ヒト胎児肺の構造分析からみた生育限界と低形成肺の病態に関する研究

1987年の肺サーファクタント製剤の発売を契機に超早産児の予後が改善され、1991年には母体保護法(旧優生保護法)における"生育"限界の解釈が妊娠24週から妊娠22週に変更された。以降、新生児科医が妊娠22-23週の出生児の分娩に立ち会う機会が増えた。欧米先進国において、妊娠23週出生児に対する蘇生、治療介入は一部の国を除きコンセンサスを得ていると思われる。一方、妊娠22週出生児に対する蘇生、治療介入については否定的な考え方が多いようである。現に、American Academy of PediatricsとAmerican Heart Associationが出している新生児蘇生マニュアルには、早産児の蘇生、治療介入("生育"限界)の対象を妊娠23週以降と記載しており、米国において妊娠22週出生児に対する蘇生、治療介入は事実上行われていないと思われる。おそらく世界中で我が国の新生児科医が妊娠22週出生児に対する蘇生、治療介入を行っているのではないかと推測される。以上のような、超早産児の増加を背景に、研究課題の胎児肺の成熟を中心に研究を行った。さらに、研究期間内に新生児領域の晩期循環不全が話題になったこともあり、超早産児の中期予後と関連のある胎児副腎の成熟についても検討を加えた。研究代表者が本研究期間内において、検討した項目の概要は以下の通りである。1."生育"限界について(1)妊娠中期流産児の肺上皮細胞のmaturationを検討し、"生育"限界の科学的妥当性を検証する。(2)妊娠22-23週出生児の短期予後調査(3)出生体重500グラム未満の短期予後調査(4)胎児副腎のmaturationに関する検討2.実験的な検討(1)胎内感染合併が、ムチン蛋白、KL-6の産生を含めた胎児肺のmaturationに与える影響。(2)(超早期産児の)肺炎予防にラクトフェリンが有効か検証する基礎的検討。本研究は、妊娠21週流産児を中心とした"生育"限界付近の児の肺上皮細胞を形態学的・生化学的に分析し、妊娠21週児が生育する可能性、"生育"限界の指標となりうる肺成熟マーカー、を検討することを主目的として開始された。現在まで、胎児肺上皮細胞のmaturationのマーカーとしてKL-6の妥当性について検討してきた。今年度は引き続き、超早期産児の合併症として多い新生児慢性肺疾患のマーカーとして利用されているKL-6の動態について分析した。血清KL-6は成人の間質性肺炎のマーカーとしてのみならず、新生児慢性肺疾患の病勢マーカーとしても有用である。しかし、その機序については不明な点が多い。今年度、in vitroの実験系を用いてどのような因子がKL-6の産生に影響を及ぼすか、胎内感染、高濃度酸素環境、メカニカルストレスなど新生児慢性肺疾患のリスクファクターとして知られている因子を中心に検討した。まず、NCI-H441細胞が恒常的にKL-6を発現していることを確認した。その後、IL-6,TNF-aなどの炎症性サイトカイン、高濃度酸素、過酸化水素水、振動刺激などを加え、H441細胞のKL-6産生がどのように影響されるか検討した。その結果、肺上皮細胞におけるKL-6産生は、胎内感染により増加する。この機序には炎症性サイトカインが関与する。高濃度酸素環境により増加する。メカニカルストレスによって増加する。ことが示された。

1.今年度も引き続き妊娠中期流産児あるいは新生児早期死亡児の病理解剖例の集積を行うとともに、lobectomyを行った外科手術症例の検体集積も行った。2.(1)妊娠中期流産児の気管・気管支上皮細胞を透過型電子顕微鏡によって観察し、ciliogenesisの完成した直後の胎児期におけるatypical ciliaの出現率に関するデータを得た。妊娠21-22週胎児線毛におけるatypical cilia出現率は2.4%で、compound ciliaが最も多かった。(2)また、atypical ciliaの出現率が加齢に伴い増加するか否かを、実験動物(マウス)を用いて検討した。妊娠17.5日目のマウス胎仔の気管線毛におけるatypical cilia出現率は1.8%、月齢24ヶ月のマウスでは4.2%、と加齢によりその出現率は増加した。以上より、ヒト、マウスともに胎児期のatypical cilia出現率は成人に比し有意に少なく、加齢マウスにおけるatypical cilia出現率はRossmanらの成人における報告と差がないことから、atypical ciliaの出現率は加齢により影響されると考えられた。しかし一方で、胎児においてもatypical ciliaの出現は無視できるものではないことがわかった。今回のデータは、primary ciliary dyskinesiaが疑われる胎児症例の診断に有用であると考えられた。3.胎児低形成肺におけるFGFの役割をFGFレセプター発現の面から解明するため、母獣にnitrofenを投与して作成した実験的低形成肺におけるFGFレセプター-1.2.3.4.の発現をそれぞれ免疫染色によって検討した。perinatalperiodに発現するFGFレセプター-1.2.3.の発現はいずれも低下していた。今年度も引き続き妊娠中期流産児、新生児早期死亡児の病理解剖例、肺葉切除を行った外科手術症例の検体集積を行った。また、以下の研究成果を海外の学会において発表した。1.(1)妊娠中期流産児の気管・気管支上皮細胞を透過型電子顕微鏡によって観察して得たciliogenesisの完成した直後の胎児期におけるatypical ciliaの出現率に関するデータ、(2)atypical ciliaの出現率が加齢に伴い増加するか否かを、実験動物(マウス)を用いて行った検討:胎児期においても一定の割合でatypical ciliaが出現する、ことを提示した。2.ラクトフェリン前投与が実験的緑膿菌肺炎を予防できるか否かについての検討ウシラクトフェリン10micro g緑膿菌投与前約1-2時間前に投与して、24時間後の症状、肺ホモジェネートの菌定量、気管支肺胞洗浄液中(BAL)の細胞分析、脾臓ホモジェネートにおける菌定量を行った。緑膿菌投与24時間後の症状、肺ホモジェネートの菌数、気管支肺胞洗浄液中(BAL)の細胞分析、脾臓ホモジェネートにおける菌数、いずれもラクトフェリン投与群と非投与群の間に有意差を認めなかった。Akinbiらは、ヒトリゾチームを気道内に前投与して緑膿菌肺炎に対する予防効果を示している。今回の検討は、緑膿菌感染予防効果に関する限り、リゾチームの有用性のほうがラクトフェリンより高い可能性を示唆する。