hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
低酸素を標的とした新たながん転移治療の開発

新たに開発したマウスの肺転移モデルにて肺転移形成時の腫瘍増大が一定の速度で進行するのではなく、一過性の低酸素応答因子の上昇により急速増大することを明らかにした。この一過性の低酸素応答因子の誘導は、腫瘍内低酸素ではなく活性酸素によるものであり、それに応じてミトコンドリア酸化的リン酸化から乳酸発酵への細胞内代謝の変化が起きていた。HIF-1阻害剤の投与により一過性の低酸素応答因子の誘導を抑制すると肺転移の形成を有意に抑えられることを明らかにした。低酸素応答性のルシフェラーゼ遺伝子を導入した、マウスの肺転移モデルを作成し、肺転移形成時の腫瘍内低酸素を光イメージングで経時的、非侵襲的に観察可能にする。また、低酸素応答因子阻害剤や血管新生阻害剤が転移巣の低酸素や転移の抑制効果についてこのモデルを用いて評価することが本研究の目的である。平成22年度には、尾静脈注射から肺転移が形成されるマウス乳がん細胞にルシフェラーゼ遺伝子、あるいは低酸素誘導性のルシフェラーゼ遺伝子を導入し、IVIS[○!R]Imaging Systemを用い肺転移の光イメージングか可能となるマウスモデルを確立した。低酸素誘導性のルシフェラーゼ遺伝子と同時に恒常的に分泌型のルシフェラーゼ遺伝子を発現させることによって、腫瘍量と腫瘍内の低酸素を同時に定量的に評価できるシステムを確立することに成功した。このモデルを用いることによって肺転移の増大が一定の速度で進行するのではなく、一過性の低酸素応答因子の上昇が肺転移の急速増大に影響をあたえることを明らかにした。また低酸素誘導因子阻害剤の投与により、イメージング上、肺転移の増大が抑えられ、実際の肺転移の個数やサイズが抑制されることを確認している。また、一過性の低酸素応答因子の誘導が、腫瘍内低酸素とは無関係に起きていることが明らかになったため、現在、肺転移形成時の腫瘍内環境について免疫組織学的な検討を開始したところである。これらの研究内容は癌の転移のメカニズムのうち、特に他臓器に到着したのちの腫瘍の増殖のメカニズムに迫るものであり、このメカニズムの解明は癌転移の新たな治療の確立に有意義なものである。これまで、尾静脈注射から肺転移が形成されるマウス乳がん細胞にルシフェラーゼ遺伝子、あるいは低酸素誘導性のルシフェラーゼ遺伝子を導入し、IVIS[○!R]Imaging Systemを用い肺転移の光イメージングか可能となるマウスモデルを作成した。新規の取り組みとして低酸素誘導性のルシフェラーゼ遺伝子と同時に恒常的に分泌型のルシフェラーゼ遺伝子を発現させることによって、腫瘍量と腫瘍内の低酸素を同時に定量的に評価できるシステムを確立することに成功した。このモデルを用いることによって肺転移の増大が一定の速度で進行するのではなく、一過性の低酸素応答因子の上昇が肺転移の急速増大に影響をあたえることを明らかにし、また低酸素誘導因子阻害剤の投与により、イメージング上、肺転移の増大が抑えられることを認め、実際に肺を摘出し肺転移の個数やサイズが抑制されることを確認している。平成23年度は、免疫組織学的な検討からの過性の低酸素応答因子の誘導が、腫瘍内低酸素とは無関係に起きていることが明らかになったため、肺転移形成時の細胞内の代謝について検討を加えた。肺転移巣が増大する過程において腫瘍細胞内でlactate dehydrogenase A (LDHA)の発現及び、pyruvate dehydrogenaseのE1サブユニットのリン酸化が誘導されることにより、ミトコンドリア酸化的リン酸化から乳酸発酵への細胞内代謝の変化が起きており、この現象が低酸素に起因しない一過性の低酸素応答因子の誘導につながることを明らかにした。
IRFファミリー転写因子を介した感染防御の分子機構

これまで多くのIRFファミリーメンバーが病原体認識受容体下流で活性化を受け,宿主細胞における自然免疫応答に関与することを示してきた.昨年度, IRF-3やIRF-7の活性化を誘導する細胞質型DNA認識受容体の候補分子としてDAI(DML-1/ZBP1)を同定するに至ったが,本年度は,このDAIに関する研究をさらに進め, DAIのリガンド特性や活性化機構の解析を行った.その結果,リコンビナントのDAI (DML-1/ZBP1)タンパク質を作製し, in vitroの系においてB型DNAとの直接的な結合を示すことができ,かつこの結合はB型DNAをはじめ, ISD (IFN-stimulatory DNA)や, Z-DNAをとることが知られているpoly(dG-dC)の過剰投与によって競合されることが示された.またDAI(DML-1/ZBP1)の活性化には,リガンドとして少なくとも100bp以上の長いDNAが必要であることおよび, DAI(DML-1/ZBP1)のN末側の2つのZα, Zβドメインに加え, D3ドメインの3つの領域が必要であることも見出した.さらに人工的にDAI(DML-1/ZBP1)分子の二量体を形成することでI型IFNsの発現の誘導がみとめられた.一方で,このようなDAI(DML-1/ZBP1)の細胞質DNA応答における役割はredundantなものであることを示す結果も得られた.加えて, DAIと共通の保存された領域をもつ宿主由来のタンパク質ADAR1やウイルス由来のE3Lについて検討した結果,共に細胞内DNA応答について負に制御していることが明らかとなった.「研究目的」これまで多くのIRFファミリーメンバーが病原体認識受容体下流で活性化を受け、宿主細胞における自然免疫応答に関与することを示してきた、この中ではI型IFNsの発現誘導のみならず、炎症性サイトカインやケモカインの産生誘導に関与しているものも見出してきた、更にIRF-5はウイルス感染細胞のアポトーシス誘導に関与するという新たな役割も見出しつつある、本研究では特にIRF-5に着目し、ウイルス感染時の宿主応答における新しい側面を探り、機能発現に必要な活性化経路を解明する、一方、自然免疫系における宿主側の新たな病原体認識機構を同定するために、核酸認識受容体の検索・同定を行い、感染防御系での役割を追究する。「今年度の成果」本年度、IRF-5遺伝子欠損マウスをさらに解析することによってウイルス感染におけるIRF-5の新しい側面を明らかにした、水泡性口内炎ウイルス(VSV)や単純ヘルペスウイルス(HSV-1)の感染によりIRF-5遺伝子欠損マウスは野生型マウスに比べ、感受性が高いことが示された、この場合、血清中IL-6のみならず、IFN-αの誘導レベルもIRF-5遺伝子欠損マウスの方が低下する結果となった、一方、マウス線維芽細胞(MEFs)をVSVおよびHSV-1感染させた場合、これらのサイトカインの発現は遺伝子欠損マウスと野生型マウスで違いを認めなかったが、IRF-5欠損MEFsにおいてはウイルス感染によるアポトーシスの誘導が抑制され、上清中のウイルス力価が増加していることが示された、以前報告したウイルス感染によるp53とは異なった経路で、IRF-5はウイルス感染細胞のアポトーシス誘導に関与していることが明らかとなった、一方、IRF-3や-7の活性化につながる細胞質内DNA認識機構の解析を進めた結果、IFN誘導遺伝子がコードするタンパク質の中で、細胞質内DNA受容体の候補分子としてDAI(DNA-dependent activator of IRFs)を見出すに至った、MEFsにDAIを発現させた場合、DNAの細胞内投与によるIFN-α/βの発現誘導が有意に増強された、更に、RNA干渉を用いてDAIの発現を阻害することで、その発現誘導が部分的ではあるが抑制された、FRET解析及び共沈実験によりDAIがDNAと結合することが示され、かつDNA刺激依存的にDAIがIRF-3やTBK1と会合することも見出した、これらの結果はDAIが細胞質内DNAセンサーとして機能している可能性を示唆しており、DAIの下流でTBK1-IRF-3を活性化することでI型IFN遺伝子発現を誘導すると考えている。これまで多くのIRFファミリーメンバーが病原体認識受容体下流で活性化を受け,宿主細胞における自然免疫応答に関与することを示してきた.昨年度, IRF-3やIRF-7の活性化を誘導する細胞質型DNA認識受容体の候補分子としてDAI(DML-1/ZBP1)を同定するに至ったが,本年度は,このDAIに関する研究をさらに進め, DAIのリガンド特性や活性化機構の解析を行った.その結果,リコンビナントのDAI (DML-1/ZBP1)タンパク質を作製し, in vitroの系においてB型DNAとの直接的な結合を示すことができ,かつこの結合はB型DNAをはじめ, ISD (IFN-stimulatory DNA)や, Z-DNAをとることが知られているpoly(dG-dC)の過剰投与によって競合されることが示された.またDAI(DML-1/ZBP1)の活性化には,リガンドとして少なくとも100bp以上の長いDNAが必要であることおよび, DAI(DML-1/ZBP1)のN末側の2つのZα, Zβドメインに加え, D3ドメインの3つの領域が必要であることも見出した.さらに人工的にDAI(DML-1/ZBP1)分子の二量体を形成することでI型IFNsの発現の誘導がみとめられた.

一方で,このようなDAI(DML-1/ZBP1)の細胞質DNA応答における役割はredundantなものであることを示す結果も得られた.加えて, DAIと共通の保存された領域をもつ宿主由来のタンパク質ADAR1やウイルス由来のE3Lについて検討した結果,共に細胞内DNA応答について負に制御していることが明らかとなった.
計画的細胞死におけるDADIタンパクの機能

計画的細胞死の分子レベルでの研究が最近スタートした。細胞死はこれまでの生物学の分野で分子レベルの研究が遅れたものの一つである。しかし、その現象は免疫機構の確立、発生と分化、癌の治療と多方面に関連をもつ大切な生命現象であることが、明らかにされている。我々は本研究において、この問題にアポトーシスの抑制の分子機構と言う、新しい局面より切り込みを入れた。アポトーシスは多細胞生物が個体を形成するときに必須な制御機構である。アポトーシスによる細胞死には多様な経路があると推測されており、現実に色々な細胞死促進因子が同定されつつある。これらの因子の相互関係を分子レベルで明らかにするにはアポトーシスに至る経路の遺伝解析が必須である。アポトーシスの経路にはこれを抑制する機構と促進する機構があると推定される。後者の欠損は細胞のアポトーシスからの回復つまり細胞の長期生存をもたらすものと思われるが、前者の欠損は細胞の死をもたらすのでその変異は細胞増殖の温度感受性変異として分離され得る。我々はこれまでに我々の手でハムスター由来のHK21細胞より分離された細胞増殖の温度感受性変異株を用いて細胞周期の制御機構を研究してきた。最近、これらの変異株のあるものは制限温度でアポトーシスを起こして死ぬことを発見した。そしてその内の一つである、タンパク合成依存的に制限温度でアポトーシスをおこす変異tsBN7を相補するヒト遺伝子DAD1を分離した。tsBN7株ではこの遺伝子が変異しており高温でDAD1タンパクは失われる。その結果、アポトーシスが起こった。タンパクが消失することでアポトーシスが起こったのでこのタンパクは細胞死の抑制に寄与していると推定された。このことを証明するため、Rothman博士のグループとの共同研究でこの遺伝子を線虫で過剰発現した。するとBd遺伝子ほど強力ではないが線虫の神経組織の計画的細胞死が明らかに有意に抑制されることが明らかになった。Rothman博士らはさらに線虫においてこの遺伝子を破壊して線虫の計画的細胞死の抑制に機能していることを証明するため、線虫のDAD1遺伝子相同体を分離している。我々はこの線虫DAD1がtsBN7変異を相補することを明らかにした。その上で、Rothman博士等は線虫のDAD1遺伝子破壊株を作成することを本年度において鋭意努力したが目的の破壊株はまだ得られていない。もしこれが分離されるとDAD1遺伝子が計画的細胞死に関与しているか否かが証明されその上で、DAD1破壊株より細胞死を起こさない変異株を新たに分離し、DAD1遺伝子の下流で実際に細胞死を起こしている遺伝子を明らかにされることが期待されている。我々は動物細胞におけるDAD1の機能を明らかにするために、これと相互作用するタンパクを酵母のtwo-hybridシステムを用いて分離することを試みたがこれはまだ成功していない。昨年、DAD1タンパクが酵母のN-linkedglycosylationの欠損をもたらすost2変異を相補するOST2遺伝子によってコードされるタンパクと相同であることが他のグループより明かにされた。彼らは犬細胞のOST複合体を分離精製していたので我々のDAD1タンパクを送って確かにDAD1がこの複合体の一因子であることが証明された。そこで、我々はtsBN7細胞を制限温度に置いた時にglycosylationの阻害が起こるか否かを調べ確かに高温でglycosylationが阻害されていることが判明した。この結果、tsBN7はglycosylationの温度感受性変異であることが確定した。つまり、細胞死の抑制もさることながらこの変異株は糖鎖修飾の生理的意義を研究するに適した変異株であるといえる。さらに、詳細にDAD1タンパクの細胞内の部位をしらべER膜にあることがほぼ確定された。DAD1がglycosylationに関与することが明らかになったことに鑑み、夫々のグループがこの観点よりもう一度、DAD1タンパクの機構を調べその結果を持ち寄って今後の研究方針を討論することにし11月に福岡で全ての共同研究者が一同に会した。そこでは糖鎖修飾とアポトーシスの関連が問題になったが糖鎖修飾の阻害剤でもやはりアポトーシスが誘導されるか否かを西本等は研究しRothman博士のグループはDAD1遺伝子破壊を持つ線虫の作成を継続することにして別れた。

最近、これらの変異株のあるものは制限温度でアポトーシスを起こして死ぬことを発見した。そしてその内の一つである、タンパク合成依存的に制限温度でアポトーシスをおこす変異tsBN7を相補するヒト遺伝子DAD1を分離した。tsBN7株ではこの遺伝子が変異しており高温でDAD1タンパクは失われる。その結果、アポトーシスが起こった。タンパクが消失することでアポトーシスが起こったのでこのタンパクは細胞死の抑制に寄与していると推定された。このことを証明するため、Rothman博士のグループとの共同研究でこの遺伝子を線虫で過剰発現した。するとBd遺伝子ほど強力ではないが線虫の神経組織の計画的細胞死が明らかに有意に抑制されることが明らかになった。Rothman博士らはさらに線虫においてこの遺伝子を破壊して線虫の計画的細胞死の抑制に機能していることを証明するため、線虫のDAD1遺伝子相同体を分離している。我々はこの線虫DAD1がtsBN7変異を相補することを明らかにした。その上で、Rothman博士等は線虫のDAD1遺伝子破壊株を作成することを本年度において鋭意努力したが目的の破壊株はまだ得られていない。もしこれが分離されるとDAD1遺伝子が計画的細胞死に関与しているか否かが証明されその上で、DAD1破壊株より細胞死を起こさない変異株を新たに分離し、DAD1遺伝子の下流で実際に細胞死を起こしている遺伝子を明らかにされることが期待されている。我々は動物細胞におけるDAD1の機能を明らかにするために、これと相互作用するタンパクを酵母のtwo-hybridシステムを用いて分離することを試みたがこれはまだ成功していない。昨年、DAD1タンパクが酵母のN-linkedglycosylationの欠損をもたらすost2変異を相補するOST2遺伝子によってコードされるタンパクと相同であることが他のグループより明かにされた。彼らは犬細胞のOST複合体を分離精製していたので我々のDAD1タンパクを送って確かにDAD1がこの複合体の一因子であることが証明された。そこで、我々はtsBN7細胞を制限温度に置いた時にglycosylationの阻害が起こるか否かを調べ確かに高温でglycosylationが阻害されていることが判明した。この結果、tsBN7はglycosylationの温度感受性変異であることが確定した。つまり、細胞死の抑制もさることながらこの変異株は糖鎖修飾の生理的意義を研究するに適した変異株であるといえる。さらに、詳細にDAD1タンパクの細胞内の部位をしらべER膜にあることがほぼ確定された。DAD1がglycosylationに関与することが明らかになったことに鑑み、夫々のグループがこの観点よりもう一度、DAD1タンパクの機構を調べその結果を持ち寄って今後の研究方針を討論することにし11月に福岡で全ての共同研究者が一同に会した。
学校現場におけるアオガンピ栽培の教材化に関する研究

日本の手すき和紙技術は、ユネスコの無形文化遺産に登録されるなど世界に発信できる日本独自の文化である。特に南西諸島および台湾に生息するアオカガンピ(青雁皮)を原料とする琉球紙の製造技術は、沖縄県独自のテーマとして特色のある教材となるが、原料調達が困難なため持続可能な教材として未だに確立していない。本研究では、学校現場での原料調達を可能にすべく、中学校技術科の生物育成領域の学習教材として取り扱えるよう、アオガンピの栽培方法やコスト、学習指導計画等を提案し、沖縄県独自の和紙製造技術を教材科する事を目的としている。平成30年度は、平成29年度に発芽に成功し、水分管理を行いながら育苗を行った。西氏によれば、育苗ポッドなどでも20cm程度まで育苗することが可能とのことであるが、本研究室での育苗では、直径20cm程度の鉢を用いても10cm程度しか成長しなかった。しかし苗の根っこは下に垂直に伸びる直根性で、長いものでは20cm程度まで根が伸びているものもあった。本研究ではここで露地栽培に切りかえ、現在半年程度栽培を行っているが、葉の数が増えるものの、期待した成長は得られていない。そこで、研究申請時に「予定通りに研究結果が得られない場合」に行う研究として想定していた、栽培データの計測・制御の教材開発も同時に行うこととし、教育プログラミング教材を開発しているプロジェクトチーム、「MITメディアラボ」を訪問し、教材開発のハード面も含めた情報交換を行った。メディアラボの一部のチームでは食物を対象とした植物栽培の自動化を対象とした教材開発が行われていた(具体的な内容は非公開)。本研究では、日本の中学校技術科学習指導要領でも適用できる教材開発を行う必要がある。発芽に成功し、育苗するところまでは可能となったが、露地栽培に切りかえた苗の成長が思わしくなく、当初予定であった和紙原料化まで行うことが難しくなったため。栽培管理の方法を計測・制御分野の教材開発としてまとめていく。中学校技術科で利用できるようにするため、プログラミング教育教材を用いた教材設計を行い、実践結果をまとめる。また、ガンピとアオガンピの類似点・相違点などに焦点を当て、アオガンピ栽培の基礎データをまとめる。日本の手漉き和紙技術は、ユネスコの無形文化遺産に登録されるなど世界に発信できる日本独自の文化である。特に南西諸島及び台湾に生息するアオガンピ(青雁皮)を原料とする琉球紙の製造技術は、沖縄県独自のテーマとして特色のある教材となるが、原料の調達が困難なため持続可能な教材として未だに確立していない。本研究では、学校現場での原料調達を可能にすべく、中学校技術科の生物育成領域の学習教材として取り扱えるようアオガンピの栽培方法やコスト、学習指導計画等を提案し、沖縄県独自の和紙製造技術を教材化することを目的としている。平成28年度は、沖縄本島南部の自生地域より琉球大学教育学部構内に移植されたアオガンピより、2ヶ月間で約20個の種子採集に成功した。苗の管理を考慮し、約23ヶ月程度常温保存したのち播種を行ったため、種子の処理を行ったにも関わらず発芽には至らなかった。しかし、本年度行っていたアオガンピの開花時期の観察などから、沖縄本島では9月中旬にアオガンピが開花し、10月下旬には種子が採取できる事が分かった。これは西表島の採集時期より約1ヶ月早い時期である。種子が採集できる時期が2ヶ月程度ある事から、種子の処理を行うのは1週間程度とし、採集時期に合わせて播種する方法を選ぶことが、発芽率を高めると考えられる。また高い発芽率をもつ西表島の砂と沖縄本島で入手が容易な市販の川砂を比較した結果、播種を行う砂も重要な要素であり、砂の粒径は水はけや保水量に直接影響することから、慎重に選別しなければならないことが分かった。さらに、西表島のアオガンピ自生地域の調査から、紙の原料としてアオガンピを利用するには、自生環境とは異なる環境で育成しなければならないことも明らかになった。そのため平成29年度は予定していた苗を育成することができなくなった。現在は種子の処理だけではなく、高発芽率をもつ西表島の砂と市販の砂の粒径や保水量などを調査している。特に南西諸島および台湾に生息するアオガンピ(青雁皮)を原料とする琉球紙の製造技術は、沖縄県独自のテーマとして特色のある教材となるが、原料調達が困難なため持続可能な教材として未だに確立していない。平成29年度は、平成28年度に採取し、播種したが発芽には至らなかった種子について、土中水分量を40%程度に保ちながら日光に当てることにより、発芽率80%で発芽させることに成功した。発芽については、土中の栄養分よりも、水分量と日光が重要であることがわかった。また、沖縄県内の中学校に対するアンケート調査の結果、生物育成領域の学習環境には地域差があり、露地栽培を行える地域とそうでない地域があるため、容器栽培(プランター、ペットボトルなど)を行っているところも多いことがわかった。

また、沖縄県内では免許外の教員による指導(臨時免許)も多いことから、学習内容にも差があることが示唆された。さらに、和紙製品を取り扱っている東京の2社(榛原、小津和紙)では、アオガンピの製品は扱っておらず、ガンピ紙も三俣や楮にはない光沢を持つが高価なため需要も供給も縮小傾向にあることがわかった。アオガンピ紙の用途として、卒業証書だけではない新たな製品開発も必要だということがわかった。発芽に成功したことにより、これらのデータを基にして栽培方法の基礎データをまとめることができるようになったため。日本の手すき和紙技術は、ユネスコの無形文化遺産に登録されるなど世界に発信できる日本独自の文化である。特に南西諸島および台湾に生息するアオカガンピ(青雁皮)を原料とする琉球紙の製造技術は、沖縄県独自のテーマとして特色のある教材となるが、原料調達が困難なため持続可能な教材として未だに確立していない。本研究では、学校現場での原料調達を可能にすべく、中学校技術科の生物育成領域の学習教材として取り扱えるよう、アオガンピの栽培方法やコスト、学習指導計画等を提案し、沖縄県独自の和紙製造技術を教材科する事を目的としている。平成30年度は、平成29年度に発芽に成功し、水分管理を行いながら育苗を行った。西氏によれば、育苗ポッドなどでも20cm程度まで育苗することが可能とのことであるが、本研究室での育苗では、直径20cm程度の鉢を用いても10cm程度しか成長しなかった。しかし苗の根っこは下に垂直に伸びる直根性で、長いものでは20cm程度まで根が伸びているものもあった。本研究ではここで露地栽培に切りかえ、現在半年程度栽培を行っているが、葉の数が増えるものの、期待した成長は得られていない。そこで、研究申請時に「予定通りに研究結果が得られない場合」に行う研究として想定していた、栽培データの計測・制御の教材開発も同時に行うこととし、教育プログラミング教材を開発しているプロジェクトチーム、「MITメディアラボ」を訪問し、教材開発のハード面も含めた情報交換を行った。メディアラボの一部のチームでは食物を対象とした植物栽培の自動化を対象とした教材開発が行われていた(具体的な内容は非公開)。本研究では、日本の中学校技術科学習指導要領でも適用できる教材開発を行う必要がある。発芽に成功し、育苗するところまでは可能となったが、露地栽培に切りかえた苗の成長が思わしくなく、当初予定であった和紙原料化まで行うことが難しくなったため。発芽率を高める条件をあきらかにする調査を引き続き行い、平成29年度の種子採集に向けて準備を進める。また構内に移植したアオガンピを用いて、校庭における露地栽培に必要な育成条件の計測、記録をひきつづき継続する。種々のデータ計測方法については、技術科の情報分野のテーマとなるため、教材としての活用を検討する。露地栽培に行こうした際の管理方法について、引き続きデータを蓄積していく。また、西表島のアオガンピ生育環境との比較を行っていく。また、原料化を行う際の実験なども行っていく。栽培管理の方法を計測・制御分野の教材開発としてまとめていく。中学校技術科で利用できるようにするため、プログラミング教育教材を用いた教材設計を行い、実践結果をまとめる。また、ガンピとアオガンピの類似点・相違点などに焦点を当て、アオガンピ栽培の基礎データをまとめる。
浸透圧ストレス条件下における側根形成に関する遺伝子発現および作物生理学的解析

本研究では,1)作物根系の大部分を占める側根原基ならびにその周辺組織における,浸透圧ストレス条件下での発現遺伝子ならびに代謝物質の変動の網羅的解析,2)冠根および側根数が著しく減少するイネ突然変異体の特徴の解明と,その原因遺伝子の単離および機能解析,3)糖代謝関連酵素の根系形成への関与の解明,4)オーキシンやサイトカイニンの働きを制御する腫瘍誘発遺伝子群の一つである6b遺伝子を導入した植物体での根系形成やホルモンの分配の解明を行った.本研究では,1)作物根系の大部分を占める側根原基ならびにその周辺組織における,浸透圧ストレス条件下での発現遺伝子ならびに代謝物質の変動の網羅的解析,2)冠根および側根数が著しく減少するイネ突然変異体の特徴の解明と,その原因遺伝子の単離および機能解析,3)糖代謝関連酵素の根系形成への関与の解明,4)オーキシンやサイトカイニンの働きを制御する腫瘍誘発遺伝子群の一つである6b遺伝子を導入した植物体での根系形成やホルモンの分配の解明を行った.トウモロコシ種子根軸上の部位別に,糖類含有量,スクロースの代謝に関わる酵素の活性およびin situでの局在性について調査した.スクロース,グルコース,フルクトースの含有量は根端から0-1cm部位で他の部位よりも3から5倍高かった.インベルターゼとスクロースシンターゼの活性も根端から0-1cm部位で他の部位よりも高かった.インベルターゼの局在性は,種子根細胞伸長部位において検出された.スクロースシンターゼの局在性は,種子根伸長部位と側根の根端で検出された.これらの結果は,スクロースが種子根伸長部位や側根根端に輸送され,インベルターゼやスクロースシンターゼによってグルコース,フルクトース,UDP-グルコースに代謝されることを示していた.スクロースは,エネルギー源や細胞壁の炭素源,または細胞伸長のための適合溶質の源となることで,根系形成に寄与していると考えられた.トウモロコシの側根原基形成部位における,浸透圧ストレスによって生じる遺伝子発現の変化を捉えるためにマイクロアレイ実験を行った.ストレス条件下では輸送に関する遺伝子に発現上昇の傾向が見られた.またストレス応答およびオーキシン関連遺伝子の発現にも上昇傾向が見られた.オーキシンの作用を高めることが知られているジベレリンに関連する遺伝子の発現も上昇傾向にあることから,ストレス状況下の側根では,オーキシンの活性が高まっている可能性が示唆された.植物体内におけるオーキシンの分布に影響を与えるとされるアグロバクテリウム由来の6b (AK-6b)遺伝子をデキサメタゾン(Dex)誘発性のプロモーターつなぎ,タバコおよびイネに導入した.タバコについてはT2世代を得ることが出来た.その芽生えの解析から,野生型の根が主根系であるのに対しDex存在下の組み換え体ではひげ根系に近い形態を示すことが明らかとなった.トウモロコシの側根原基形成部位における,浸透圧ストレスによって生じる遺伝子発現の変化を捉えるために,側根原基をレーザーマイクロダイセクションを用いて回収し,マイクロアレイ実験を行った.ストレス条件下では輸送に関する遺伝子に発現上昇の傾向が見られた.AK-6b遺伝子を導入,発現するタバコの根の切片を作製し,根内部の解析を行った.主根系である野生型に比べ太く短いひげ根系であった.細胞数は増加し,維管束はほぼ均等に分岐していた.これらはオーキシン輸送阻害剤NPA処理をした野生型根の形態と類似していた.オーキシン応答性レポーター遺伝子DR5:GUSを導入して調べたところ,オーキシンレベルは低下していることがわかった.Reduced root length 3(rrl3)突然変異体は短根以外にも葉色に異常を示すことを明らかにした.そこでこの形質を利用し,RRL3遺伝子の候補領域(142Kb)を更に絞るため,新たな組み換え体の選抜を試みた.その結果,313個体を調査し,39個体の組み換え体を得た.得られた組換え体の数は従来のほぼ倍の数であり,今後調査個体数を3倍程度に増やし候補領域を絞る予定である.イネには質的に異なるL型とS型側根が存在し,特に浸透圧ストレス耐性にはL型側根の誘導が重要である.その誘導機構の解明を試みた結果,浸透圧ストレス下では側根形成部位でのオーキシン感受性が高まり,メリステムサイズ決定に関わるLMSI遺伝子発現が誘導されることにより,L型側根数が増加することが判明した.側根原基形成部位組織,およびレーザーマイクロダイセクション法を用いて顕微鏡下で採取した側根原基,それぞれにおいて,マイクロアレイ法により浸透圧ストレス条件下での両組織の発現変動遺伝子の網羅的解析をおこなった.さらに側根原基形成部位組織において,浸透圧ストレス処理による組織内代謝物質の変動を解析する目的でメタボローム解析をおこなった.側根原基の周辺組織では浸透圧ストレスに対応するべく地上部と連携して物質の輸送や糖の転流・代謝活性を上昇させ浸透圧維持を優先的に行っていると推測された.かつ細胞の維持や分裂活性の維持継続も行っていた.側根原基では物質の輸送や糖などの代謝を止め,ストレスに応答しつつ細胞の維持や分裂活性の維持継続を優先的に行っていた.

メタボローム解析では,対照区に比べストレス処理区で有意に上昇している代謝物質が多く見られ,生体内で重要な抗酸化機能を有するグルタチオンや細胞分裂や増殖の制御に関わるポリアミンのスペルミン等,マイクロアレイの結果を反映する結果が得られた著しくL型側根数が増加する突然変異体を選抜した.興味深いことに,本変異体では種子根の皮層細胞層数が減少していた.一般に,浸透圧ストレス下では根の細胞分裂活性は低下する.本変異体でも根端での皮層細胞層の増殖能の低下が生じるため,ストレス下でのL型側根の誘導には側根原基形成時における分裂活性の低下が引き金となることが示唆されたAK-6b遺伝子を導入,発現するタバコの根はひげ根洋の表現型を示し,オーキシンレベルは低下していた.根の切片を作成し,サイトカイニンに対する抗体染色したところ、師部組織が野生型に比べ濃く染まり,サイトカイニンレベルが増加していた.イネへAK-6b遺伝子を導入したところカルス成長の促進が見られた.またオーキシン応答性を調べる目的でレポーター遺伝子DR5:YFPをイネへ導入して種子を得た
当事者の観点に基づいたカント倫理学の変換

本研究は、「当事者の観点に基づいたカント倫理学の変換」を研究課題としている。倫理学史上、曖昧にされてきた「当事者」概念や「観点」概念を分析し、それらを整理することを通して、カント倫理学に新たな解釈を与えることを目指している。この作業の延長として、「人格の尊厳」という理念が被ってきた、意味の曖昧さを整理する手引きを与えることも企図している。考察の手がかりとして参照する先行研究分野は、主に次の二つである。第一は、討議倫理学によるカント倫理学のコミュニケーション論的変換とそれをめぐる最近の論争である。第二は、現代英米圏で展開されている、カント倫理学に関する二人称的観点からの解釈と一人称的観点からの解釈の論争である。2018年度においては、カント倫理学の解釈という点には深く立ち入らず、行為者の観点に着目した議論を広く見渡すことを重視し、この作業を主に現代英米圏の諸研究を手がかりにしながら進めた。そのうち、S.ダーウォルが展開している二人称的観点の倫理学が、当事者の観点を考察するうえで多くのヒントを与えているため、その検討に多くの時間を割いた。これとともに、関連する枠組みを提供しているT.ネーゲルの議論、また一人称的な観点の構想を持つC.コースガードの議論なども同時に検討した。これらの作業を通して、理論的観点から実践的観点を区別する方法、さらにこの実践的観点から道徳的観点を区別する方法について、人称性という側面から分析を進めた。これに伴い、英米圏の必要文献の収集を進めた。ダーウォルの二人称的観点の倫理学の構想は、当事者の観点を考察するうえで、またカント倫理学を行為者の観点から理解しなおすうえで、重要な手がかりを与えている。しかしダーウォルの議論では、観点の二人称性が強調されることによって、倫理に本質的な一人称的契機が理解しにくくなっている。道徳的観点が二人称的であるという指摘は正しいとしても、その二人称的な観点は特定の誰かの観点でなければならない。したがってダーウォルの分析の意義を継承しつつ、一人称的な観点を適切な意味において規定しなおすことが必要である。この作業には、コースガードの一人称的な考察が有効な手引きとなる。現在、コースガードの一人称的観点の考え方によって、ダーウォルの議論を補う段階にある。2018年度中に英米圏の「観点」をめぐる議論を一定程度整理したことから、今年度(2019年度)はその知見をカント倫理学の解釈方法に適用していく。まずはダーウォル自身が行っているカント解釈に検討を加え、その妥当な部分と不明確な部分を分析する。不明確な部分は、もっぱら二人称性の強調による一人称的契機の弱さにある。これに関しては、コースガードのカント解釈を援用することを通して再構成を行う。なおこれらの作業を進める際に、二人称/一人称という用語法の曖昧さが根本的な問題として生じてくると予想されるため、より適切な用語法を探りながら、問題の整理を図る。2020年度以降は、討議倫理学の議論も組み合わせながら考察を深めていく。

まずはダーウォル自身が行っているカント解釈に検討を加え、その妥当な部分と不明確な部分を分析する。不明確な部分は、もっぱら二人称性の強調による一人称的契機の弱さにある。これに関しては、コースガードのカント解釈を援用することを通して再構成を行う。なおこれらの作業を進める際に、二人称/一人称という用語法の曖昧さが根本的な問題として生じてくると予想されるため、より適切な用語法を探りながら、問題の整理を図る。2020年度以降は、討議倫理学の議論も組み合わせながら考察を深めていく。
アフィントーリック多様体上の微分作用素環とその応用

アフィントーリック多様体上の(アフィン半群環の)微分作用素環Dの構造及びその(微分作用素の)階数による次数環Gr(D)の構造の研究に関しての構造の研究に関して大きな進展があった。まず,いつもDは右ネターであることを示した。次に左ネター性についてであるが,左ネターであるための或る十分条件、或る必要条件を与え,さらに、必要十分条件を予想した。また、クリティカルD-加群の特徴付けを行い,単項生成の場合の分類を行った。さらに、Gr(D)がネター環のとき、Gr(D)の素イデアルを記述した。アフィントーリック多様体上の(アフィン半群環の)微分作用素環の構造の研究に関して大きな進展があった.最も重要な問題としてこの微分作用素環のネター性の問題がある.以前,Travesとともに微分作用素の階数に関する次数環がネターであるための必要十分条件は,そのアフィン半群環がscoredであるということを証明した.従って,scoredなときは,元の微分作用素環が右ネターかつ左ネターであることが分かっていた.まず,scoredでなくとも,いつもこの微分作用素環は右ネターであることを示した.証明はscoredな微分作用素環から出発してRobsonの補題を順次適用して,半群が生成する錐の面に平行なものを有限個抜いたものに対応する微分作用素環も右ネターであることを導くという手順である.A-超幾何系はアフィントーリック多様体上の微分作用素環の右加群と対応するので,右ネター性の証明は,A-超幾何系への応用という観点からも極めて重要である.次に左ネター性についてであるが,そのために,微分作用素環の右加群と左加群の対応を考察した.半群環がセールのS2条件を満たしているとき,canonical moduleの類似が考えられ,それを使って右左対応が得られる.さらに,S2条件よりも弱い或る条件の下でも同様のことができることが分かった.従って,この条件を満たしているとき,その半群環の微分作用素環は左ネターでもあることが分かった.さらに,左ネターであるための或る必要条件を与え,必要十分条件を予想した.アフィントーリック多様体上の(アフィン半群環の)微分作用素環Dの構造及びその(微分作用素の)階数による次数環Gr(D)の構造の研究に関して以下の進展があった.代数的トーラスの作用からDやGr(D)には自然に多重次数付けられている.以降,述べる加群やイデアルはその意味で斉次であるとする.1.クリティカルD-加群の特徴付けを行い,単項生成の場合の分類を行った:クリティカル加群というのは,簡単に言うと,同じKrull次元を持つ加群の中で,最も小さいものである.例えば,Krull次元0のクリティカル加群はまさに単純加群ということである.逆に言うと,クリティカル加群は単純加群の一般化である.従って,クリティカル加群を知ることはネター環上の加群の理論において極めて基本的である.そこでまず,D-加群のKrull次元を言い換え,それとパラメータの分類を基にクリティカルD-加群の特徴付け,単項生成の場合の分類を行った.2.半群がscoredなとき,Gr(D)のスペクトルを記述し,或る条件の下,単項生成クリティカルD-加群の特性多様体を記述した:以前,Travesと共同で,Gr(D)がネターになるための必要十分条件は半群がscoredであることを示していた.そこでその場合のGr(D)の代数幾何的考察が問題となる.その第一歩としてGr(D)の素イデアルを記述した.それらはD-加群の特性多様体の成分の候補達であるが,或る条件をみたす素イデアルは単項生成クリティカルD-加群の特性多様体に一致することを示した.Aを有限個の整数ベクトルからなる集合とし, Aから定義されるアフィントーリック多様体上の微分作用素環をD_Aとする.D_AはAにより自然に多重次数付けられている.以前,ある種の有限性を持つ多重次数付けられたD_A-加群のなす圏についてその構造を考察した.この研究を踏まえ,平成20年度では, A-超幾何系における同様の圏0を考察した。A-超幾何系はパラメーターベクトルがジェネリックなときはD-加群として(圏0の対象として)既約であるが,一般には既約でない.そこで、圏0における既約加群の研究が重要になってくる.既約加群について以下の結果を得た:1.圏0における既約加群を分類した: Aから定義されるアフィントーリック多様体のトーラス軌道とそこでのパラメータを格子で割ったもので分類される.2.圏0における既約

加群Lの多重斉次なnonzero元をvとする. Iをvのワイル代数Dにおける零化イデアルとすれば, LはD/Iと表せる.そこで, Iの有限生成系を具体的に求めるという問題について考察した.まず, Iのどの有限個のweight spaceで生成できるかということについて, Aから生成される錐の面を使った言葉で表した.これにより,計算機でIの有限生成系を具体的に求めるということが可能になった.さらに, Aから生成される半群が単体的かつscoredなときには, Iの有限生成系を具体的に記述した.
腎機能低下におけるサルコペニアの検討 -骨ミネラル代謝の観点から-

近年、老化によるサルコペニア、フレイルが問題となっているが、腎機能低下も同様に筋萎縮を起こすことが知られているが、その要因や機序はいまだ不明な点が多い。本研究では、腎機能に伴う骨ミネラル代謝異常が筋肉に影響を及ぼしているとの仮説のもと、in vitroでの検討をまず行っている。2018年度は2017年度に引き続き、骨格筋培養細胞を用いた検討を行った。ラット筋芽細胞(L6)を5-7日間培養し、筋管細胞に分化させたものを用いた。その後に標準培養液である10%fetal bovine serumを含むDMEMで培養した。コントロール(CON:Pi0.9mM)、高リン(HPi: Pi3.8mM)条件でそれぞれ10日間培養を行った。高リン条件下での筋萎縮因子の発現として昨年施行したMyostatinおよびMuRF1の再実験の他、実際に筋萎縮が起こっているかの検討のため、myosin heavy chainの測定を行ったところ、高リン条件でmyosin heavy chainの発現は減少しており、筋萎縮が実際に起こっていることが分かった。筋萎縮因子の発現では、Myostatin、MuRF1の発現の他にもAtrogin-1およびアポトーシス関連の観察のため、caspase-3の測定を行った。さらに、筋合成系に対する効果の検討を行うため、mTORシグナルの筋合成の指標として、リン酸化されたp70s6kの測定を行った。高リン条件で、骨格筋細胞は筋萎縮と、筋萎縮因子の発現増強および筋合成の抑制が認められることが分かった。骨格筋培養による筋萎縮関連因子、および筋合成関連因子の測定はほぼ完了したため、今後さらに機序解明に向けた実験を行っていく予定である。骨格筋培養実験に関しては、本年度中に学会報告、論文投稿を行う予定である。本年度では、再実験をおこない、さらに動物実験にむけて取り組んでいく予定である。予定どおり、ミネラルバランスの破綻が骨格筋にどのような影響を及ぼすか、骨格筋培養細胞を用いて検討を行った。尿毒症状態でのミネラルバランスの一つが高リン血症であり、本実験では、高リン血症の骨格筋への影響を検討するために、高リン培養下での筋委縮関連因子発現の検討を行った。さらにそのメカニズムを検討するために、細胞内へのリン酸トランスポーターであるPit-aの発現を検討した。血管平滑筋に関しては高リン培養下で発現が増強することが知られている。ラット筋芽細胞(L6)を5-7日培養し、筋管細胞へと分化させたものを用いた。その後、標準培養液である10%fetal bovine serumを含むDMEMで培養した。コントロール(CON:Pi0.9mM)と高リン(HPi:Pi3.8mM)条件でそれぞれ10日間培養を行った。測定項目としては、筋萎縮、サルコペニア関連因子としてGDF-8/11(Myostatin)およびMuRF1をwestern blot法にて測定した。結果としてHiP培養ではCONに比べて有意にMyostatinおよびMuRF1の発現がコントロール群に比し、有意に上昇していた。さらにリン酸トランスポーターであるPiT-1の測定もwestern blt法にて行った。結果、HiP培養ではPit-1発現の上昇がコントロール群に比べて有意に上昇していた。尿毒症状態における筋萎縮・サルコペニアの原因の一つに高リン血症が考えられる。骨格筋培養の実験は順調に推移しており、さらに追加も含め進行中である。骨格筋培養の結果については、来年度以降の実験成果の前段階として論文投稿予定である。引き続き、計画の通り推進していく所存である。

本年度は測定項目も少なかったが、翌年度はさらに計画の進行に伴い、測定試薬などの支出が見込まれるため、次年度での使用が見込まれる。本年度は昨年度の繰り越しもあったが、次年度は動物実験や論文投稿などが増えることも予想され、使用が見込まれる。
クメール語のテンスとアスペクトの体系に関する研究

クメール語は、日本語と異なり動詞の形式によってテンスを表さないが、近年の言語資料では、シタ、シテイタに相当する過去のテンスを表す標識とされる語が頻繁に観察される。本研究は、クメール語資料から収集した用例を分析し、動詞句の前後に置かれテンスやアスペクトを表す標識とされる語、及び、時間を表す副詞的表現について、どのような環境で出現し、どのように用いられるかを考察した。研究過程では、用例分析及び対照研究の手法について、海外研究者の協力を得た。主な成果は、雑誌論文で発表された他、外国語教育面において今後社会に還元される。2年目である平成24年度は、研究代表者・分担者による第2回研究会(東京外国語大学)で調整した全体的なスケジュールに基づいて、海外共同研究者との打ち合わせ、近年のクメール語資料の選定および収集、収集した資料のデータ化を行った。また、既に蓄積された資料の分析を進め、本テーマに関連して論文1件を発表した。海外調査は、昨年訪問ができなかったタイ(国立カセサート大学)の海外研究協力者(Soysuda NARANONG氏、Bussaba BANCHONGMANEE氏)の訪問を5月に行い、クメール語よりも日本語との対照研究の進んでいるタイ語についてテンスとアスペクトの表現がどのように翻訳されているかを調査した。また、7月には日本で、Soysuda NARANONG氏への追加調査を行った。同じく海外調査として、11月にカンボジア(王立プノンペン大学)にて、テンスもしくはアスペクトの表現が含まれているクメール語資料を収集した。具体的には、図書、定期刊行物等の各種の文体の文献を選定して購入するとともに、被験者の許可を得て、日常会話の音声データを収集した。また、日本語とクメール語のテンスとアスペクトの表現がどのように異なるかを分析するため初年度に試訳した翻訳資料の用例分析について、同大学外国語学部日本語学科のHAK Serey氏と意見交換をした。海外調査で収集した音声データは、文字データとして変換し、翌年度以降の用例収集のために整備した。さらに、翌年度以降の用例収集のため、日本語の自伝的資料をクメール語に翻訳する作業を行い、資料集として印刷・製本した。最終年度である平成25年度は、これまでに収集したクメール語資料から収集した用例の分析を行い、本テーマについて雑誌論文1件を発表した。また、分析した用例の一部を利用して、研究グループが所属する東京外国語大学の学部学生を対象にした言語教育のために文法学習教材を作成し試用した。用例分析の過程で、追加の言語資料を整備するため、データ入力、インフォーマント調査を行った。本年度前半(9月)に、海外協力者であるカンボジア王立プノンペン大学のVAN, Sovathana氏からクメール語用例分析に関する助言を受けるとともに、クメール語文法学習に関する講演を行った。また、本年度後半(10月、1月)には、それぞれ、タイ国立カセサート大学のSoysuda NARANONG氏、Bussaba BANCHONGMANEE氏から、クメール語よりも日本語との対照研究の進んでいるタイ語研究の観点から研究成果に対する助言を受けるとともに、東京外国語大学にて対照研究と外国語教育に関する講演、研究会を開催した。平成24年度に引き続き、本研究に必要な先行研究及び資料となる書籍、記憶媒体等の消耗品を購入した。外国旅費は、海外協力者としてタイからの2名の招聘を行ったため、その旅費を支出し、海外調査のための支出はなかった。また、収集した音声資料の文字化、例文収集用のコーパス作成のためのデータ加工の外注費を支出した。初年度である平成23年度は、研究代表者・分担者による第1回研究会(東京外国語大学)で調整した3年間の研究の全体的なスケジュールに基づいて、海外共同研究者との打ち合わせ、近年のクメール語資料の選定および収集、収集した資料のデータ化、機材の購入を行った。また、既に蓄積された資料の分析を進め、本テーマについて雑誌論文2件を発表し、本テーマの外国語教育への応用について研究会で発表1件を行った。海外調査は、11月にカンボジア(王立プノンペン大学)及びタイ(国立カセサート大学)において、海外研究協力者との打ち合わせと資料収集を行う予定であったが、タイでは、洪水のため共同研究者が在籍する大学も被害を受けたため、打ち合わせを翌年度に延期し、平成23年11月19日平成23年11月24日、カンボジアのみを訪問し、テンスもしくはアスペクトの表現が含まれているクメール語資料を収集した。

また、カンボジア王立プノンペン大学外国語学部及び同大学人文社会学部を訪問し、収集した資料を分析するための参考として、現在の言語状況の中でテンスやアスペクトの表現がどのように表層化されているかについて、海外研究協力者であるVAN Sovathana氏と意見交換をした。さらに、日本語とクメール語のテンスとアスペクトの表現がどのように異なるかを分析するために試訳した王立プノンペン大学のための日本史教科書のクメール語版について、王立プノンペン大学外国語学部日本語学科長のLOCH Leaksmy氏に助言を求めた。収集した音声データは、文字データとして変換し、翌年度以降の用例収集のために整備した。さらに、翌年度以降の用例収集のため、自伝的資料の翻訳作業を行った。2年目に予定していた、タイの海外研究協力者との打ち合わせ、カンボジアでの近年のクメール語資料の選定および収集、収集した資料のデータ化、翻訳資料の整備は予定通り達成した。また、研究成果についても、論文1件を行った。初年度に予定していた、カンボジアでの海外研究協力者との打ち合わせ、近年のクメール語資料の選定および収集、収集した資料のデータ化、翻訳資料の整備、機材の購入は予定通り達成した。また、研究成果についても、雑誌論文2件、研究会発表1件を行った。予定通りに達成できなかったこととして、タイ国の洪水被害のため、海外研究協力者の在籍する大学も被害を受け、訪問することができず、翌年度に延期した。平成24年4月から5月に実施予定である。最終年度である平成25年度は、これまでに収集したクメール語資料から収集した用例中のテンスとアスペクトを表す表現について分析を行う。また、既に整備した日本語からクメール語への翻訳資料から収集した用例の分析を行う。この二つの分析作業から、本研究の目的であったクメール語のテンスとアスペクトに関する研究成果報告書を執筆し、発表する。用例分析の過程で、追加の言語資料を整備するため、必要に応じて、データ入力、インフォーマント調査を行う。年度前半(9月を予定)に、海外協力者であるカンボジア王立プノンペン大学のVAN, Sovathana氏を招聘し、研究成果に対する助言を受けるとともに、東京外国語大学にて、研究会を開催する予定である。2年目である平成24年度は、初年度に収集したクメール語資料の用例から時制を明示する表現についての調査を行う。また、初年度に翻訳資料を整備した自伝的言語データの分析を行う。海外調査は、昨年訪問ができなかったタイ国(国立カセサート大学)の海外研究協力者(Soysuda NARANONG氏、Bussaba BANCHONGMANEE氏)を4月から5月にかけての早い時期に訪問し、クメール語よりも日本語との対照研究の進んでいるタイ語についてテンスとアスペクトの表現がどのように翻訳されているかを調査する。また、年度後半にはカンボジアでの調査を行い、初年度の研究結果としての翻訳資料の用例分析について海外共同研究者と意見を交換し、追加のクメール語資料を収集する。前年度に収集したクメール語資料中のテンスとアスペクトを表す表現について用例分析を行うとともに、翻訳した自伝的資料について翻訳可能性についての分析結果をまとめ、テンスとアスペクトを明示する表現についての言語資料と分析結果を資料集として印刷・製本する。引き続き、本研究に必要な先行研究及び資料となる書籍を購入する。また、消耗品として、データ整理に使用する記憶媒体、ソフトウエアの他、報告書作成に必要な出力用印刷用紙、プリンタ用インクトナーを購入する。
強膜層間高分子インプラントによる網脈絡膜への薬物送達システムの可能性

脂溶性低分子量化合物であるベタメサゾンを強膜内へ一定速度で徐放した場合、標的組織である硝子体や網脈絡膜への薬物送達が可能であるかを検討するとともに、経強膜的薬物送達後の網脈絡膜中における薬物濃度分布を明らかにするため、以下の検討を実施した。ベタメサゾンを含有する溶出膜制御型ディスク状インプラントを生体非分解性高分子である酢酸ビニルを用いて調製した。なお、本高分子は既に硝子体内インプラントとして製品化されているVitrasert【○!R】に使用されている高い生体適合性を有する基剤である。これを白色家兎を強膜内に移植し溶出試験、眼内薬物動態および安全性評価として電気生理学的評価と組織学的評価を実施した。ベタメサゾンはin vitroおよびin vivoにおいて4週間0時溶出を示した。in vitroとin vivo間でその溶出挙動には良好な相関関係が認められた。硝子体および網脈絡膜中には4週間の評価期間を通してベタメサゾンが検出され、網脈絡膜中では炎症抑制を目的とする薬物有効濃度を4週間にわたり維持することが可能であった。また、網脈絡膜中の薬物濃度分布を測定するため本検討では、移植部位周辺、その対側および後極部周辺の3箇所において濃度測定を実施した。その結果、評価を実施した4週間にわたって濃度勾配が認められ、その濃度は移植部位からの距離に比例して低下した。インプラントの安全性評価として実施した電気生理学的および移植部位直下の網脈絡膜の組織学的評価においては顕著な毒性は認められなかった。本システムを用いることにより経強膜的に薬物を眼内へ送達することが可能であった。また、本システムを用いて薬物を徐放した場合、標的組織のひとつである網脈絡膜中には顕著な濃度勾配が存在することから、移植部位はこれらのことを考慮して選択する必要があることが示唆された。低分子薬物であるリン酸ベタメサゾンを強膜内で徐放させ、眼内まで送達可能かであるかを検討するために以下の実験を行った。リン酸ベタメサゾンを含有させたポリ乳酸からなるインプラントを圧縮形成により作成した(直径4mm、厚さ0.5mm)。このインプラントのin vitroでの薬物放出試験をリン酸緩衝液中で行ったところ、初期バーストを認めたものの8週間以上リン酸ベタメサゾンを放出した。次に、家兎眼の強膜にポケットを作成し、インプラントを埋め込み、眼内での薬物動態と眼球に対する毒性を電気生理学的および組織学的に検討した。網脈絡膜組織および硝子体液中で8週間以上にわたり炎症反応を抑えるのに十分な薬物濃度を維持することができた。前房中には薬物は検出されなかった。インプラントは強膜内で膨潤するが明らかな炎症反応は認めず、その膨隆も徐々に減少し16週目では殆ど消失した。組織学的にはインプラント周囲組織に軽度の異物巨細胞の浸潤を認めたが、インプラントは加水分解とともに結合組織に置換されていった。網膜の構造は正常に保たれており、明らかな毒性は認められなかった。また、電気生理学的にも網膜毒性は認められなかった。このシステムを用いることにより、リン酸ベタメサゾンを強膜内から網脈絡膜組織、さらに硝子体までに送達できることが明らかになった。今後は、高分子薬物の送達や吸収促進物質の併用効果を検討していく予定である。
VR技術を用いたマーケティング・コミュニケーションの効果と没入促進要素の解明

本研究では、没入を促進する新たなマーケティング・コミュニケーション(MC)の媒体としてバーチャル・リアリティ(VR)に着目し、その効果と没入の促進要素を解明する。そのために、1)VR特有の没入促進要素の解明(2019年度)、2)既存媒体と比較したバーチャル・リアリティを用いたマーケティング・コミュニケーション(VRMC)の効果の解明(2020年度)、3)物語型のVRMCコンテンツの開発(2021年度)、及び4)開発したコンテンツの効果検証(2022年度)を行う。これらの検討によりVRMCの効果と没入促進要素を明らかにする。本研究は、VRMCの有用性を示唆するものであるとともに、効果的なVRMCのコンテンツを開発するための基盤となる。