hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
中国市場における日本企業のグローバル・カスタマイゼーション戦略

本研究は日本企業が中国に進出する際、国内のマーケティング戦略の様式を維持する「標準化」を行うか、維持しない「適応化」を行うか、という伝統的なグローバル・マーケティング問題を源流に持ついわば「マクロレベルのカスタマイゼーション問題」と、日中において「適応化」を行うものの、中国においては「標準化」を推進するか、「適応化」を推進するか、という「ミクロレベルのカスタマイゼーション問題」を融合させた「グローバル・カスタマイゼーション」研究を展開し、実証研究による理論モデルを構築した。顧客のニーズに合わせて製品をカスタマイズするだけでなく、カスタマイゼーションシステムをカスタマイズすることが重要である。本研究は、急速に拡大する中国市場に対して日本企業がいかにして進出するかという現実的な課題に関連し、日本国内の製品・価格・広告・流通の諸戦略の様式を維持する「標準化」を行うか、それとも、中国市場の潜在ニーズに適応して諸戦略の様式を変更する「適応化」を行うか、という伝統的なグローバル・マーケティング問題を源流に持ついわば「マクロレベルのカスタマイゼーション問題」と、日中において異なる戦略を採用するという意味では「適応化」を行うものの、中国市場内においては「標準化」を推進するか、それとも、中国市場内においても個々のニーズに対応して「適応化」を推進するか、という比較的新しい「ミクロレベルのカスタマイゼーション問題」を融合させた「グローバル・カスタマイゼーション」研究を展開することを目的としている。平成25年度は、研究計画の通り、これまで研究してきたグローバル・マーケティングおける適応化・標準化、およびマス・カスタマイゼーションにかかわる研究を整理・統治し、また、他の同テーマに関する既存研究を再吟味することができた。さらに、既存研究に類を見たい、本研究独自のグローバル・カスタマイゼーションの概念モデルを構築した。また、そのモデルを検証するため、中国市場で日本の自動車を販売しているディーラーを対象にして予備調査を実施した。これらの研究内容をまとめ、海外で開かれた2つの国際学会に2本の論文を投稿し、査読を経て発表することによって、フィードバックを得ることにも成功した。平成24年度は、研究計画の通りでこれまで研究してきたグローバル・マーケティングおける適応化・標準化、およびマス・カスタマイゼーションにかかわる研究を整理し、また、他の同テーマに関する既存研究を再吟味することができた。こうしたことによって、それらの関連性を模索し、本研究の目的であるグローバル・カスタマイゼーションの概念モデルの構築を試みた。これらの研究内容をまとめ、海外で開かれる2つの国際学会において2本の論文を発表した。本事業の最終年度にあたる平成26年度の研究目的は、中国市場に対して日本企業がいかにして進出するかという現実的な課題に関連して、一定の成果を得ることにあった。具体的には、前年度までに構築して国際学会において評価を得た理論モデルを経験的にテストするために、中国市場における日本企業のマーケティング活動に関する貴重なデータを収集し、また、そのデータを解析して英文論文にまとめ、国際会議に投稿して査読を経て学会報告権を得、学会にて報告を行うことによって、再び審査員および聴衆からのフィードバックを得ることであった。まず、理論モデルを整序して調査仮説を設定したのちに、計画どおり、中国市場において製品をカスタマイズする日本企業の取り組みに関するデータを収集するために、中国市場において日本の自動車を販売しているディーラーを対象にして、インタビュー調査ならびに、インタビューを通じての定量データの収集を行った。さらに、データを解析し、その結果を英文論文にまとめ、投稿・査読を経て国際会議で発表した。その研究の知見は、以下の通りである。すなわち、日本市場においては高度なカスタマイゼーション・システムを導入して個々の顧客の細かな嗜好に応えるカスタム製品を供給している自動車産業であるが、中国においては、大衆車については初めて自動車を手に入れたいという基本的なニーズが、また、高級車についてもより高級な車種の自動車を手に入れたいという基本的なニーズが満たされることが優先される結果として、細かな部品のカスタマイゼーションが実施されにくいというものであった。顧客のニーズに合わせて製品をカスタマイズするだけでなく、カスタマイゼーション・システムをカスタマイズすることの重要性を含意するこの知見は、グローバル・マーケティング研究と、カスタマイゼーション研究の双方の視点から一定の評価を得ることができた。

マーケティング本研究は、研究代表者および分担者がこれまで蓄積してきたグローバル・マーケティング研究およびマス・カスタマイゼーション研究を、上記に示す具体的な方向性をもって、独創的な新概念である「グローバル・カスタマイゼーション」の枠組のもとで体系化させ、グローバル・マーケティング研究の分野において研究貢献を成す計画である。そのための方法として、広大な中国市場に様々な戦略を伴って進出しようとする日本企業に焦点を合わせて、多層的な階層を成す「グローバル・カスタマイゼーション」の実践ないし非実践を巡る企業行動および消費者行動に関する包括的なモデルの構築と実証を目指した。具体的には、初年度と次年度においてこれまで研究してきたグローバル・マーケティングおける適応化・標準化、およびマス・カスタマイゼーションにかかわる研究を整理・統治し、本研究の主たる目的であるグローバル・カスタマイゼーションの概念モデルを構築する作業を、最終年を待たずして行うことができた。さらに、中国に進出している日本企業を調査することを通じて、グローバル・カスタマイゼーション概念モデルの精緻化を目指した。こうした活動に照らして、現在までの2ヶ年の間、研究は当初の計画通りに進められてきたと評価しうるであろう。さらに、これらの研究の中間的な成果を論文の形にまとめ、平成25年度中だけでも、2つの国際学会にて2本の論文を査読を経て発表することができた。ただし、中国市場調査においては、十分に満足できるデータ収集および分析結果を得ることができたわけではなかった。この点は中国市場のことであるから想定内であるが、平成26年度においては、調査方法を更に工夫した上で、大規模調査を実施する目論見である。本研究は、研究代表者がこれまで蓄積してきたグローバル・マーケティング研究を、本研究における具体的な方向性をもって、独創的な新概念である「グローバル・カスタマイゼーション」の枠組のもとで体系化させ、グローバル・マーケティング研究の分野において研究貢献を成す計画である。そのための方法として、広大な中国市場に様々な戦略を伴って進出しようとする日本企業に焦点を合わせて、多層的な階層を成す「グローバル・カスタマイゼーション」の実践ないし非実践を巡る企業行動および消費者行動に関する包括的なモデルの構築と実証を目指すものである。また、初年度において、これまで研究してきたグローバル・マーケティングおける適応化・標準化、およびマス・カスタマイゼーションにかかわる研究を整理し、他の同テーマに関する既存研究を再吟味する。そうすることによって、それらの関連性を模索し、本研究の目的であるグローバル・カスタマイゼーションの概念モデルを構築する。その際、日本または中国において中国に進出している日本企業を調査することを通じて、グローバル・カスタマイゼーション概念モデルの精緻化を目指すものである。現在1年が経過し、研究が当初計画の通りで進められている。
オートファゴソーム形成を駆動するユビキチン様タンパク質脂質化反応機構の解明

オートファジーは、細胞質構成成分のバルクな分解系であり、神経変性疾患や肝疾患、がん、糖尿病などと深く関連する。オートファジーが進行する過程には、被分解物を包み込む二重膜小胞「オートファゴソーム」の形成が必須である。本研究では、オートファジー関連因子の一つAtg3がオートファゴソーム形成中間体に局在することを明らかにし、局在を変化させた際のオートファゴソーム形成への影響を調べることによって、Atg3のオートファゴソーム形成における機能について検討した。オートファジーによる分解には被分解物を包み込む二重膜胞オートファゴソームの形成が必須であり、そこではユビキチン様タンパク質Atg8と脂質分子ホスファチジルエタノールアミン(PE)が結合したAtg8-PEが重要な役割を果たす。Atg8は、E1酵素およびE2酵素を介するユビキチン結合反応と同様の反応を経てPEと結合する。興味深いことに、Atg8のE2酵素Atg3からPEへの転移を促進するE3酵素は、ユビキチン様タンパク質Atg12とAtg5の結合体Atg12-Atg5である。我々は最近、Atg12-Atg5結合体がAtg3の活性中心に構造変化を引き起こし、その活性を上昇させることを見出した(Sakoh-Nakatogawa et al., 2013)。本研究では、活性化の作用機序を明らかにするため、Atg12-Atg5結合体とAtg3の複合体の結晶構造解析に取り組む。まず、Atg12-Atg5Atg3複合体を安定化させるため、化学架橋剤による結合を試みた。Atg12とAtg3の相互作用に重要なアミノ酸残基に立体的に近接する残基をCys残基に置換したAtg12-Atg5結合体の変異体とAtg3変異体を精製し、最適な化学架橋剤を検討した。その結果、およそ50%の効率でAtg12-Atg5Atg3の架橋産物を得ることに成功した。さらにHisタグ精製、イオン交換カラム、ゲル濾過カラムによる精製を行うことでAtg12-Atg5Atg3架橋産物の精製にも成功し、現在、より高純度の精製サンプルを得る条件を検討している。オートファジーとは、真核生物に高度に保存された細胞内の分解システムである。オートファジーによる分解の対象物は、オートファゴソームと呼ばれる二重膜小胞内に隔離され、リソソームあるいは液胞に輸送され、分解される。ユビキチン様タンパク質であるAtg12とAtg5の結合体は、Atg8というユビキチン様タンパク質のE2酵素であるAtg3を活性化するE3酵素活性を持ち、このE3酵素活性はオートファゴソームの形成に必須である。Atg12-Atg5によるAtg3の活性化機構を解明するため、Atg12-Atg5とAtg3の複合体の結晶構造解析に取り組んだ。前年度においてAtg12-Atg5およびAtg3をそれぞれ精製し、混合液を用いて結晶化を試みたが結晶は得られなかった。Atg12-Atg5とAtg3の相互作用が弱いことが考えられたため、今年度は、Atg12-Atg5とAtg3を混合後、化学架橋剤で処理し、条件検討の後、化学架橋産物を効率良く得ることに成功した。Atg12-Atg5とAtg3の化学架橋産物を、タグ精製、イオン交換カラム、ゲル濾過カラムを通して精製したが、結晶化のスクリーニングを行うには精製度が不十分であったため、今後さらなる条件検討(精製プロトコールの改善や、異なる生物種由来のタンパク質への変更など)が必要な状況である。結晶化に用いるため実験をスケールアップをしたところ、化学架橋の反応効率が下がってしまった。そのため大きなスケールで再度条件検討するのに時間を要した。また、化学架橋産物を精製するのに、架橋されなかったAtg3が上手く分離出来ず、精製方法を検討する必要があった。Atg8は、Atg7をE1酵素、Atg3をE2酵素とするユビキチン結合反応を経てPEと結合する。私は以前、オートファジー関連タンパク質Atg12とAtg5の結合体がAtg3の活性中心に構造変化を引き起こし、その活性を上昇させることを生化学的手法により示した。本研究では、Atg12-Atg5結合体によるAtg3の活性化の作用機序を明らかにするため、Atg12-Atg5結合体とAtg3の化学架橋産物の結晶構造解析に取り組んだ。前年度までにAtg12-Atg5-Atg3化学架橋産物を効率よく形成させることに成功し、高純度の精製サンプルを得る条件を整えた。しかしながら、化学架橋実験をスケールアップして行ったところ、架橋効率が下がり、架橋産物を高純度で得ることが難しくなった。今年度引き続き精製条件を検討したが、高純度で精製することはできなかった。低純度の精製サンプルを用いて、およそ500種類の条件で結晶化スクリーニングを行ったが、結晶を得ることはできなかった。

本研究では、オートファジー関連因子の一つAtg3がオートファゴソーム形成中間体に局在することを明らかにし、局在を変化させた際のオートファゴソーム形成への影響を調べることによって、Atg3のオートファゴソーム形成における機能について検討した。Atg12-Atg5結合体とAtg3の相互作用が弱い可能性を考慮し、これらの化学架橋産物の結晶構造解析に取り組んでいる。変異体および化学架橋剤の検討によって架橋産物を得ることに成功したが、Atg3単体の等電点や分子量が架橋産物と近いため、Atg12-Atg5Atg3架橋産物の精製サンプルに混入したAtg3単体の分離に難航している。単体のAtg3の混入を回避するため、Atg12とAtg3あるいはAtg3とAtg5をタンデムに繋げたコンストラクションを用いる。同時に熱耐性酵母K. marxianus等他生物種由来タンパク質を用いた解析について検討する。生物学Atg12-Atg5Atg3架橋産物とAtg3単体を分離させるため、精製条件を検討する。具体的には、バッファー組成や精製タグを検討する。あるいは、Atg12とAtg3をタンデムに繋いだ変異体の作成、耐熱性酵母K. maarxianusなどに種を変えて精製を試みる。予想していなかった問題が起こり、計画通りに実験が進まなかったため。この理由に加え、出産・育児のためにおよそ半年間研究を行うことが出来なかったため。精製に用いる試薬の購入、結晶化スクリーニングキットの購入などに使用予定。
小児の日常場面におけるストレスに起因する睡眠時歯ぎしりの解明

本研究は,小児において,日常的なストレスに対して適応的に生じると考えられる歯ぎしりとストレスの関連について明らかにすることを目的とした。特に,福島市における親子の低線量被曝によるストレスと睡眠習慣との関連を明らかにした。また,小児において,日常的な心理的ストレスによって増悪されると考えられる歯ぎしりは,睡眠の質を低下させ,睡眠・生活習慣の悪化を引き起こすことが示唆された。本研究は,小児の睡眠健康・精神的健康と歯ぎしりの機能に及ぼす日常的ストレスの影響を明確に示すことを目指し,フィールドの日常的なストレスに対して同様に適応的に生じると予測される小児の歯ぎしりのパターンと睡眠・覚醒リズムとの関係を直接的に解明することを目的としている。本年度も引き続き,福島市に住む幼稚園,保育園,小学生とその保護者を対象とした,震災後の心理的ストレスと睡眠習慣に関する大規模調査を実施し,震災の記憶が薄れいく中でのストレスの影響の変化を解析した。子どもたちの心理的ストレスは母親の感じている心身のストレスと密接に関係しており,更に,子どもたちの示すストレス行動は,睡眠問題と高く相関していた。中でも,睡眠習慣の乱れや,歯ぎしりや悪夢といった睡眠時随伴症の症状がストレスと関連していることも示すことができた。この相関は,震災後3年間の調査の中で徐々に低くなってきていたが,本年度は東北圏以外の県外の親子にも同様の調査を行って比較した結果,かなり高いストレスレベルで留まっており,その影響が睡眠習慣にも見られることが分かった。このことについては,震災後の県内の子どもたちの肥満率や体力テストの成績の低下が危惧されることなどを含めて,研究協力者として日本心理学会で,また日本発達心理学会大会のシンポジウムの中で報告した。一方で,フィールド実験に協力していただく親たちの選定と機器の準備をようやく完了することができたので,引き続き実験と解析を進めていくものである。本年度は,福島市に住む幼稚園,保育園,小学生を対象とした,睡眠習慣と心理的ストレスに関する大規模調査を実施した。子どもたちの心理的ストレスは母親の感じている心身のストレスと密接に関係していることが分かり,更に,子どもたちの示すストレス行動は,睡眠問題と高く相関していることが分かった。本研究については,東京医科大学の駒田博士の協力も得,東京で2009年に行われた同様の調査の値と比較した。その結果,東京の子どもたちと比較すると睡眠主観の乱れは顕著ではなかったにもかかわらず,上記の睡眠時随伴症に関連する項目や夜間中途覚醒の項目得点が高く,福島市の子どもたちの心理的ストレスとそれに深く関連する睡眠問題について緊急に取り組んでいく必要があることが示唆された。以上の結果について,ヨーロッパ睡眠学会等で成果報告を行った。本研究では,小児の睡眠健康・精神的健康と歯ぎしりの機能に及ぼす日常的ストレスの影響を明らかにすることを目指し,フィールドにおいて日常的なストレスに対して適応的に生じると予測される小児の歯ぎしりのパターンと睡眠覚醒リズムとの関係を直接敵に示すことを目的としている。福島市に住む幼稚園,保育園,小学生とその保護者を対象とした,震災後の心理的ストレスと睡眠習慣に関する大規模調査の解析から,子どもたちの心理的ストレス行動得点(抑うつ,イライラ・集中困難,不安・恐怖,甘え・退行)は母親の感じている心身のストレスと密接に関連しており,子どもたちの示すストレス行動は睡眠問題と高く相関していた。中でも,睡眠習慣の乱れや,歯ぎしりや悪夢といった睡眠随伴症の症状がそういったストレスと関連していることを示した。この相関は,震災後3年間の調査の中で徐々に低くなっており,保護者の放射線に対する不安行動得点やストレス得点も年ごとに減少していた。子どものストレス得点は,不安・恐怖,甘え・退行が2回目の調査から減少傾向であったのに対し,抑うつ,イライラ・集中困難の得点は下がり始めが遅くなっていたが,着実に減少していた。しかし,福島以外の県外の親子の調査との比較では,福島の親子のストレスレベルや睡眠問題得点は依然高いままで留まっており,その影響が続いていることが示唆された。フィールド実験に関しては,引き続き調査と解析を進めていくものである。本研究では,小児の睡眠健康・精神的健康と歯ぎしりの機能に及ぼす日常的ストレスの影響を明らかにすることを目指し,フィールドにおいて日常的なストレスに対して適応的に生じると予測される小児の歯ぎしりのパターンと睡眠覚醒リズムとの関係を直接的に示すことを目的とした。福島市に住む幼稚園,保育園,小学生とその保護者を対象とした,震災後の心理的ストレスと睡眠習慣に関する大規模調査の解析と福島以外の県外の親子に対する同調査との比較から,福島の親子のストレスレベルや睡眠問題得点は震災後3年経過後も依然高いままで留まっており,その影響が続いていることが示唆された。また,福島市内に住む親子を対象として,日常的なストレスと睡眠習慣との関連を調べるための長期実験を行った。2週間にわたり,マットレス型の睡眠計測機器を用いて小児の睡眠覚醒リズムを測定し,さらに保護者に日誌をつけてもらうことで,睡眠習慣の評価を行った。同時に,実験期間中は,毎朝起床直後および30分後に小児の唾液をサリベットにより収集した。

起床後の唾液中に含まれるコルチゾールレベルは急激に上昇することが知られており,ストレスとの関連が示唆されている。実験期間中に幼稚園から小学校へ進学する期間を含めることで,小児の日常的なストレスを評価することとした。本研究の結果から,小児の日常的なストレスレベルの変動に従い,その睡眠習慣も影響を受けることが示唆された。本研究は,小児において,日常的なストレスに対して適応的に生じると考えられる歯ぎしりとストレスの関連について明らかにすることを目的とした。特に,福島市における親子の低線量被曝によるストレスと睡眠習慣との関連を明らかにした。また,小児において,日常的な心理的ストレスによって増悪されると考えられる歯ぎしりは,睡眠の質を低下させ,睡眠・生活習慣の悪化を引き起こすことが示唆された。使用予定の機器に関する不測の事態を受け,代替機器の選定や改めて被験者の選定を行うことに時間がかかったため。矯正・小児系歯学小児を対象とする在宅での長期測定実験の例数を増やし,解析を行いつつ,成果の学会発表を行っていく。使用を予定していた歯ぎしり測定のための機器が発売されなくなったという不測の事態を受け,代替機器の選定に時間が掛かった。代わりとなる実験を開始する準備は引き続き進めている。一方で,他大学との共同研究や海外での研修を積極的に行い,本研究を実施するにあたって,解析協力者を得るなど非常に有益となる活動を精力的に行った。今年度は,使用を予定していた歯ぎしり測定のための機器が発売されなくなったという不測の事態により,実際の実験に着手し始めることが困難であった。急遽,福島における子どもたちの心理的ストレスを睡眠に関する大規模調査を行うこととした他,代わりとなる実験を開始する準備は引き続き進めている。使用予定の機器の発売延期といった不測の事態を受け,代替機器の選定や計画の見直しに時間がかかっていた。改めて協力してくれる被験者を求め,実施を継続しているため,次年度も使用するものである。引き続き,小児を対象とする在宅での長期測定実験の例数を増やしていく。普段睡眠をとっているベッドのマットレス下に非装着型の睡眠・覚醒リズム評価装置を設置し,最低14日間測定する。その間,保護者にはストレス事態などの日誌と5段階評価をつけてもらう。就寝前と起床後には,唾液を採取し,ストレスと関連したコルチゾルリズムを測定する。同時に,可能な協力者に対しては,長期記録型の咬筋活動評価装置と簡易型歯ぎしり評価および睡眠ポリグラフ測定を2回行い,詳細な歯ぎしりパタンと睡眠内容を確認する。日常ストレスの評価の変動については,母親による評価と,客観的なELISA(酵素免疫測定法)による唾液中コルチゾル濃度を用い,就寝前後の唾液中コルチゾル濃度変動を測定する。唾液のホルモン量測定に関しては,長岡技術科学大学の協力を得て行う。睡眠時歯ぎしりの変動評価に関しては,実験期間中に2回測定を行い,相当の協力謝金を支払う。脳波や筋活動の測定には,ポリメイト(ティアック社)やSleepProfiler(MAGnet社)を使用する。
左右軸決定遺伝子invの機能解析と腎形成への関わり

計画年度期間中に以下の成果を達成し得た。本計画中の大きな骨子であったヒトの遺伝子決定については、マウス遺伝子のクローニングと同時に進行したヒトでの遺伝子クローニングに成功し、遺伝子全長の決定を終了、mutation症例の事例をあわせて、平成14年度に報告した(Hum Genet 110,157,2002)。臨床的には内臓逆位の症例に嚢胞を合併することはまれであり、ヒトではマウスと異なる遺伝子レベルのメカニズムが存在することが推定された。機能解析、発現については、基本的にinvのmRNA発現は腎尿細管の細胞質に認められ、胎生15日頃より発現がみられ、生後も発現が継続した。骨格蛋白して、上皮細胞の機能に関わる可能性が示唆された。また、この間に、取得した遺伝子クローンのさまざまな修飾を行い、まず方法で提示したノックアウトマウス作製のためのターゲッティングベクターを構築した。さらに、発現の検討のため、GFP蛋白やlacZなどの標識蛋白を発現する遺伝子プログラミングをおこなった。蛋白発現の検討のため、作製したモノクローナル抗体のcharacterizationを行い、ノックアウトマウスでの発現消失の確認や、他の相互作用のある蛋白群の検索に用いる予定である。また、正常全長クローンをそのまま、発現ベクターに挿入し、尿細管細胞内へ導入をした。この細胞を用いてcDNA arrayにより発現遺伝子群のprofileの変化を観察する予定である。研究者らは挿入変異(insertional muatgenesis)により新たに発生した左右内臓逆位、嚢胞腎を有するトランスジェニックマウスの組織学的、分子生物学的検討を行い、左右決定遺伝子invのクローニングに成功した。1.ヒトinv遺伝子:inv遺伝子の決定後、ヒトhomologueの遺伝子配列を確定。転写領域の全長のcDNAをクローニングすることに成功した。ヒト遺伝子構造上においてもankyr in配列が認められたため、細胞骨格蛋白である可能性が示唆された。内臓逆位の家系でのmutation検索を行い、一部の症例でmutationが特定された(未発表データ)。2.抗invモノクローナル抗体:アミノ酸配列によりoligoおよびfusion proteinをもとにして、polyclonal抗体を作製しているが、主として腎尿細管の細胞質に染色性を認めた。この成績を背景に、ラットリンパ節法によりmonoclonal抗体の作製を行っており、fusion proteinを抗原として2回作製、一部のハイブリドーマ細胞での上清がWestern blottingおよび組織染色で陽性であったため、細胞のクローン化を行っている。3.ラット腎での遺伝子発現:in situ hybridizationを施行。ラット腎では胎生15日より出現。尿細管の細胞内に局在がみられ、出生以後も発現が継続していた。今後は、1)抗体の完成により発現、局在の検討を進めること、2)蛋白機能を明らかにするために細胞内遺伝子導入を行い細胞生物学的意義を検討する計画である。また、ヒトにおいては内臓逆位家系でのmutationの同定により、本遺伝子の体幹形成での役割を明らかにすることが可能と考えられるが、さらに腎の低形成、胆道閉鎖などの上皮細胞の異常に起因すると考えられる疾患群での本遺伝子の関わりを検討する。本年度は以下の研究結果が得られた。1.ヒトinv遺伝子:inv遺伝子の決定後、ヒトhomo logueの遺伝子配列を確定。ヒト遺伝子構造上においてもankyrin配列が認められたため、細胞骨格蛋白である可能性が推定された。内臓逆位の家系でのmutation検索を行い、一部の症例でmutationが特定されたため公表した(Human Genetics誌印刷中)。2.全長クローンの取得:ヒトおよびマウスの全長クローンをライブラリーより取得した。これを発現ベクターに搭載すると伴に、一部のexon配列を除去し、ノックアウトマウス作製の準備状況を整えた。

3.抗invモノクローナル抗体:ラットリンパ節法によりmonoclonal抗体の作製を行っており、fusion proteinを抗原として2回作製、一部のハイブリドーマ細胞での上清がWestern blottingおよび組織染色で陽性で、細胞のクローン化を行った。今後は、1)蛋白機能を明らかにするために全長クローンを搭載した発現ベクターを用いて細胞内遺伝子導入を行い細胞生物学的意義を検討する、2)一部のexonをのぞいたクローンでノックアウトマウスを作製し、改めて嚢胞腎の形成、体軸異常、胆道閉鎖モデルの検討を行う予定である。最終年度は、ノックアウトマウス作製のためのターゲッティングベクターの構築と全長クローンを幾つかの発現ベクターに挿入た。従来の科研費期間中により作製していた、最も表現型発現が確実と考えられるexon1から2にかけて欠失させたinv遺伝子によりターゲッティングベクターを構築した。コンストラクト作製の際にEGFPもしくはlacZ遺伝子を連結させ構築し、発現の段階で発色もしくはX galによる判別が可能として、キメラマウスなど含めて部位や時間的変化を観察できるようにした。相同組み換え体同定のためのサザン解析用のプローブおよびPCRプライマーをこれまでの助成期間で作製してあるため、実際に有効かどうかを判定。各プローブ、プライマーとも機能した。ES細胞の培養、管理から遺伝子導入などの実際の工程では、筑波大学生命科学動物資源センター資源開発分野高橋智教授の指導を受け実行した。表現型の相違が生じることを想定して、幾つかのターゲッティングベクターを構築したが、胆道閉鎖がコンスタントに発現する構築は疾患モデルの成立と考えられる。基本的にankyrin repeat部と3'側のinv遺伝子に特異性の高い部分の二カ所を中心とした遺伝子のmodulationを行いベクターを作製した。また、細胞内局在を同定するためGreen fluorescence protein(GFP)を接続した遺伝子の作製と細胞内導入の予備実験を行った。inv遺伝子のサイズは大きくないため、発現ベクターをmammalian cellに遺伝子導入を行い、細胞形態の変化、膜蛋白、主としてNa/K ATPaseなどの酵素活性、遺伝子発現profileの変化を観察した。
膜脂質に着目した好熱性古細菌の耐熱性に関する多角的アプローチ

(1)特徴的な5員環の炭素環構造をもつカルジトールの生合成の解明に関し、炭素環を作る過程の反応機構の追跡に関し、部位特異的に標識したグルコースを用いて、生成物の追跡を行った。本化合物の取込み率はきわめて高く1H NMRで,定量的な取込み率の観測が可能であった。結果グルコース6位,1位,4位水素がそれぞれカルジトール6位ヒドロキシメチレン,1位,4位水素に取り込まれることが明らかとなった。本結果はカルジトールがグルコースの1位と5位で環化して生成することを示し,その際にミオイノシトールに類似するような生成機構で生成することを強く示唆するものである。(2)古細菌脂質の最も単純なモデルである直鎖イソプレノイドリン酸構造体の飽和度の異なる3種として,完全飽和体,フィトール類似の一つの二重結合をもったタイプ,ゲラニルゲラニオールから合成される4つの二重結合をもったタイプを合成し,この脂質からリポソームを形成させ,本リポソームの安定性を,蛍光物質カルセインのリポソームからの漏出を安定度の指標として用い検討した。本脂質はホスファチジルコリンからなる通常生物の脂質より再構成した膜脂質の30%程度という若干弱いものの同等な安定度を示し,またフィトールの疎水基部分に相当する一つの二重結合をもった脂質から調製したリポソームが最も安定であるという結果を得た。本結果は古細菌脂質やクロロフィルの分子進化に対し間題提起となると思われる。1)[カルジトールの生合成の反応の解明]好熱性古細菌の主要な一群の膜脂質に特徴的な5員環の炭素環構造をもつカルジトールの生合成の解明に関し、炭素環を作る過程とエーテル結合形成を行う生体反応の2つの反応機構の追跡に関し、種々の部位特異的に標識した基質を用いて、生成物の追跡を行った。1位、6位重水素標識グルコースを合成し、取込み実験を行ったところ、それぞれの重水素標識が高い効率で炭素5員環の特定の部位に取り込まれることを発見した。本化合物はグルコースの1位と5位の間で炭素環が形成し、この菌の細胞膜脂質の極性基部分に多く見られるミオイノシトールの生合成にごく類似した過程で生成するものと思われる。また1位(重)水素が失われないことより、炭素環が形成した後に、エーテル結合が形成されることを示唆する結果を得た。現在論文投稿を準備中である。2)[古細菌膜脂質のモデル化による"原始細胞膜"形成]古細菌膜脂質は飽和イソプレノイド体であるのに比して、イソプレノイドの生合成の前駆体はもともと二重結合を持った不飽和体である。古細菌脂質の最も単純なモデルである直鎖イソプレノイドリン酸エステル構造体について、飽和度をかえたもの(二重結合の有無を変化させたもの)を合成し、これらから形成されるリポソーム(MLV)の酸ならびに熱安定性を検討した。蛍光物質の保持率の時間経過を指標にすると、保持率が最も高いのは、pHに関しては4.5付近であった。一方、飽和度をかえたもので比較すると、フィトールに同じ構造を疎水基とする、1つ二重結合を持ったものから調製したMLVが最も保持率が高かった。通常生物の膜脂質はグリセロールジエステルであり、極性基からβ位に置換基が存在し配座を規制する因子がある。今回の結果の二重結合の位置(極性基からβ位)という点では同様の意味があるものと思われ興味深い結果である。
南米原産の外来植物が東南アジアに創出する新しい環境の総合的研究

人や物の移動に付随して意図せず運ばれた植物は、原産地を遠く離れた地域に定着し、世界各地で原生自然に代わる新しい環境を創り出してきた。外来植物の分布拡大の要因と影響は、個別の植物を既存の枠組みで局所的に分析するだけでは全体像を把握できないため、世界総体を単位として学際的に研究すべき「グローバル・イシュー」である。本研究の目的は、南米原産の外来植物が東南アジアに創出する新しい環境について、ミクロな生物学的分析を越えて、大陸部アジアを横断する空間的スケールで、生態、社会、文化、歴史的側面もふまえて総合的に研究し、地域に適した環境保全のあり方を考察することである。研究3年目となる2018年度には、2018年8月25日から9月7日まで、ベトナム南部メコンデルタ(カントー市とヴィンロン省)からラムドン省ダラットまでの、土地利用ごとの外来植物の分布を調査した。標高0数mのメコンデルタには水田、野菜畑、果樹園が分布し、アンナン山脈の山麓に入るとパラゴムノキ、マツ、アカシアの植林地、標高約700mを越えるとコーヒー、コショウ、チャの畑が広がっていた。自生する外来植物の分布をみると、山麓ではシロバナセンダングサ(中南米原産)、ニトベギク(中南米)、ランタナ(中南米)、Mimosa pigra(中南米)が多く、標高が上がるにつれて、ヒマワリヒヨドリ(中南米)とマルバフジバカマ(中南米)の出現が増加した。標高約1500mのダラット近郊では、温帯野菜・果樹の栽培が盛んで、標高約1900mのランビアン山山頂周辺ではナス科の1種(中南米)、ハキダメギク(中南米)、ランタナ(中南米)が確認された。ベトナム南部の土地利用は仏領期の影響を強く受けており、外来植物の分布には、気候などの環境要因のほか、土地利用の歴史や、外来植物の移入時期も影響することが示唆された本研究課題は、おおむね順調に進展していると評価される。2018年度の研究計画は、重点調査地であるラオスに加えて、ミャンマーにおいて外来植物の分布と土地利用の履歴の広域比較調査を行う予定であったが、ラオスとともにフランスの植民地となった歴史をもつベトナムに調査地を変更し、カントー大学理学部のサポートのもとで調査を遂行することができた。2019年度は最終年度のため、2018年度までの調査で不足している情報について重点的に現地調査を行う。得られた情報をもとに、大陸部アジアにおける外来植物の推定移入経路を改訂し、アジア全体に敷衍して分析する。また世界の外来植物に関する文献をレビューし、メコン川流域の特徴を明らかにする。そして4年間で得られた知見をまとめ、学会発表や論文投稿のかたちで、成果を発表する。現在、人や物の移動に付随して意図せず運ばれた植物が、原産地を遠く離れた地域に定着し、世界各地で原生自然に代わる新しい環境を創り出している。研究1年目となる2016年度には、2016年11月14-21日と2017年3月17-27日の乾季に、ラオス中部ビエンチャン県トゥラコム郡とナーサイトン郡、ラオス北部シエンクワン県ペーク郡、フアパン県サムヌア郡において、外来植物の分布の広域調査を行った。舗装された幹線道路脇にはヒマワリヒヨドリ、アゲラティナ、シロバナセンダングサ、カッコウアザミ、ナスの仲間などの外来植物が優占し、そのうち南米原産種が最も多かった。南米原産のオオバコエンドロは、家庭菜園で栽培されるだけでなく、道路脇や水田畦畔に野生し、市場でも販売されていた。麺の付け合せの野菜として葉が生食されるだけでなく、香草として料理で広く用いられていた。アフリカ原産のベニバナボロギクは、ラオス語で「日本草」や「飛行機草」など、地域によって異なる名で呼ばれ、それぞれ「第二次世界大戦時に日本軍が持ってきた」「1960-1970年代のベトナム(ラオス・アメリカ)戦争時に飛行機で種が撒かれた」と認識されていた。本研究課題は、おおむね順調に進展していると評価される。2016年度の研究計画は、東南アジアのラオスを重点調査地とし、外来植物の分布と生態について、1幹線道路沿いの広域調査、2村落調査、3文献調査を行う予定であったが、いずれも達成できた。

研究2年目となる2017年度には、2017年8月8日から8月17日まで、ベトナム南部メコンデルタ(カントー市、ソクチャン省、ヴィンロン省、チャビン省、ベンチェ省、ティエンザン省、ドンタップ省、アンザン省)において、船と車による移動で、外来植物の分布の広域調査を行った。メコンデルタに網の目状にはりめぐらされる大小の水路にはホテイアオイ(南米原産)が浮かび、岸辺にはMimosa pigra(中南米原産)やタテバチドメグサ(ヨーロッパ原産)が群生しているところがみられた。陸域の道路脇にはヒマワリヒヨドリ(中南米原産)やウスバスナゴショウ(中南米原産)、湿地にはキバナオモダカ(中南米原産)が生育していた。そのうちウスバスナゴショウとキバナオモダカは市場で野菜として販売され、植栽される事例も確認された。本研究課題は、おおむね順調に進展していると評価される。2017年度の研究計画は、ラオス中南部の幹線道路沿において、外来植物の分布と周囲の土地利用の履歴を調査する予定であったが、メコン川流域を広く俯瞰する目的で、ベトナム南部メコンデルタに調査地を変更し、データを収集した。人や物の移動に付随して意図せず運ばれた植物は、原産地を遠く離れた地域に定着し、世界各地で原生自然に代わる新しい環境を創り出してきた。外来植物の分布拡大の要因と影響は、個別の植物を既存の枠組みで局所的に分析するだけでは全体像を把握できないため、世界総体を単位として学際的に研究すべき「グローバル・イシュー」である。本研究の目的は、南米原産の外来植物が東南アジアに創出する新しい環境について、ミクロな生物学的分析を越えて、大陸部アジアを横断する空間的スケールで、生態、社会、文化、歴史的側面もふまえて総合的に研究し、地域に適した環境保全のあり方を考察することである。研究3年目となる2018年度には、2018年8月25日から9月7日まで、ベトナム南部メコンデルタ(カントー市とヴィンロン省)からラムドン省ダラットまでの、土地利用ごとの外来植物の分布を調査した。標高0数mのメコンデルタには水田、野菜畑、果樹園が分布し、アンナン山脈の山麓に入るとパラゴムノキ、マツ、アカシアの植林地、標高約700mを越えるとコーヒー、コショウ、チャの畑が広がっていた。自生する外来植物の分布をみると、山麓ではシロバナセンダングサ(中南米原産)、ニトベギク(中南米)、ランタナ(中南米)、Mimosa pigra(中南米)が多く、標高が上がるにつれて、ヒマワリヒヨドリ(中南米)とマルバフジバカマ(中南米)の出現が増加した。標高約1500mのダラット近郊では、温帯野菜・果樹の栽培が盛んで、標高約1900mのランビアン山山頂周辺ではナス科の1種(中南米)、ハキダメギク(中南米)、ランタナ(中南米)が確認された。ベトナム南部の土地利用は仏領期の影響を強く受けており、外来植物の分布には、気候などの環境要因のほか、土地利用の歴史や、外来植物の移入時期も影響することが示唆された本研究課題は、おおむね順調に進展していると評価される。2018年度の研究計画は、重点調査地であるラオスに加えて、ミャンマーにおいて外来植物の分布と土地利用の履歴の広域比較調査を行う予定であったが、ラオスとともにフランスの植民地となった歴史をもつベトナムに調査地を変更し、カントー大学理学部のサポートのもとで調査を遂行することができた。2017年度以降は、ラオスにおける重点調査を継続し、進捗状況に応じて中北部以外に南部も調査地とする。またミャンマーやベトナムにおいても広域比較調査を行う予定である。具体的には、幹線道路に沿って50-100 kmおきにプロットを設け植生調査を行うとともに、近隣住民に外来植物の移入時期と経路、有用性と有害性、現地名について確認する。
日中地震予知共同研究

昭和60年10月には,北京において測地学審議会の代表団と中国国家地震局の代表団が協議をおこない,それに基づいて,同年11月の日中研究協力検討小委員会で日中地震予知共同研究の検討が重ねられた。その決定に従って,東京大学地震研究所が中心となって,昭和62年から平成1年度までの3年間日中共同研究が実施された。本国際学術研究は,上記の共同研究を引き継いで単年度でなされたものである。研究経費は全て本科学研究費補助金によって賄われ,共同研究は,以下に要約されているように,4つのテ-マについてなされた。1.唐山地域におけるサイスミックマイクロゾ-ニングの研究中国唐山地域は1976年の唐山地震で甚大な被害をうけており,その際の震害分布をサイスミック・ゾ-ネ-ションの立場から明らかにしておくことは今後の震災予防にとって重要であろうと考えられている。このような観点から日中共同研究の一環として昨年度までの3年間には,人工地震を用いた地下深部探査が唐山市の北西に位置する玉田地域で行われ,大局的な地下深部構造に関する基礎資料が蓄えられてきた。本研究では,同一地域で微動測定を実施することによって,地盤震動特性の局地的な変化を把握しようと試みた。もしこのような簡便な手法が適用可能であれば,対象地域の局地的(ミクロ)な地盤特性が評価でき,前年度までの大局的(マクロ)な地盤特性の評価と併せて当地のサイスミック・ゾ-ニングの具体化に貢献できるものと考えられる。なお本研究は今年度で終了するが,この成果は京都大学防災研究所と中国国家地震局工程力学研究所が中心となって次年度から同一地域で開始される「強震動予測に関する研究(仮題)」に引き継がれるものと期待している。2.中国と日本の水管傾斜計による比較・観測研究武漢にある国家地震局地震研究所は中国における地殻変動連続観測のデ-タ全体を取り扱っている。特に水管傾斜料に関しては中国で開発したFSQ型の水管傾斜計が使用されている。地震研究所では最近,震研90型の水管傾斜計を開発した。異なるタイプの計器により比較観測することにより,観測精度・信頼性が向上するとともに計測器の改良にも役に立つと考えられる。今回中国内陸部の「宜昌」観測所に震研90型の水管傾斜計を持ち込みセットし比較観測を開始した。現在まで良好なデ-タが得られており,デ-タの蓄積を待ち解析を進める予定である。3.渭河盆地の地震活動と地殻構造の研究西安市地震局との共同事業として,渭河盆地の周辺に地震観測機器を設置し,高倍率の観測を継続中である。3年以上の連続観測の結果,渭河盆地周辺の地震活動は現在きわめて低いこと,銅川観測点の周辺では微小地震活動がやや活発であること,などが判明した。この共同観測は今後も続ける予定である。地下構造を推定し,とくに日本の地下構造との比較をおこなうため,長周期微動の観測を上海地域と西安地域で試験的におこなった。その結果,中国では長周期微動の振幅が海からはるかに離れた渭河盆地でも十分に観測できるだけの大きさであり,日本よりも微動の振幅の減衰率が低い可能性が高いことが判明した。大陸地殻と島弧の地殻の比較をおこなう上で興味深い結果である。また,渭河盆地における最近発生した地震のあとを調査し,過去の地震に関する資料を収集した。4.山西地震帯の活構造とネオテクトニクスの研究山西地震帯は,16世紀から17世紀にかけて地震活動の活発であった地域である。本研究では,山西地震帯の活構造と第四紀地質構造に関する野外調査,ならびに同地域の地震テクトニクスの実体の解明に必要な文献・資料の収集をおこなった。同地域は,地表に正断層群が発達しているにも関わらず,横ずれ型の地震が起こる地域である。山西地溝で最後に残った大同火山群の活動が約10万年以降停止していることからも,起震応力場が最近変化した可能性があることが認められた。今後は,同地域周辺のサブプレ-トの構成・渤海ホットスポットなどを中心とした上部マントル降起部の存在などに注目して,同地域のテクトニクスを再検討する必要がある。

本研究では,同一地域で微動測定を実施することによって,地盤震動特性の局地的な変化を把握しようと試みた。もしこのような簡便な手法が適用可能であれば,対象地域の局地的(ミクロ)な地盤特性が評価でき,前年度までの大局的(マクロ)な地盤特性の評価と併せて当地のサイスミック・ゾ-ニングの具体化に貢献できるものと考えられる。なお本研究は今年度で終了するが,この成果は京都大学防災研究所と中国国家地震局工程力学研究所が中心となって次年度から同一地域で開始される「強震動予測に関する研究(仮題)」に引き継がれるものと期待している。2.中国と日本の水管傾斜計による比較・観測研究武漢にある国家地震局地震研究所は中国における地殻変動連続観測のデ-タ全体を取り扱っている。特に水管傾斜料に関しては中国で開発したFSQ型の水管傾斜計が使用されている。地震研究所では最近,震研90型の水管傾斜計を開発した。異なるタイプの計器により比較観測することにより,観測精度・信頼性が向上するとともに計測器の改良にも役に立つと考えられる。今回中国内陸部の「宜昌」観測所に震研90型の水管傾斜計を持ち込みセットし比較観測を開始した。現在まで良好なデ-タが得られており,デ-タの蓄積を待ち解析を進める予定である。3.渭河盆地の地震活動と地殻構造の研究西安市地震局との共同事業として,渭河盆地の周辺に地震観測機器を設置し,高倍率の観測を継続中である。3年以上の連続観測の結果,渭河盆地周辺の地震活動は現在きわめて低いこと,銅川観測点の周辺では微小地震活動がやや活発であること,などが判明した。この共同観測は今後も続ける予定である。地下構造を推定し,とくに日本の地下構造との比較をおこなうため,長周期微動の観測を上海地域と西安地域で試験的におこなった。その結果,中国では長周期微動の振幅が海からはるかに離れた渭河盆地でも十分に観測できるだけの大きさであり,日本よりも微動の振幅の減衰率が低い可能性が高いことが判明した。大陸地殻と島弧の地殻の比較をおこなう上で興味深い結果である。また,渭河盆地における最近発生した地震のあとを調査し,過去の地震に関する資料を収集した。4.山西地震帯の活構造とネオテクトニクスの研究山西地震帯は,16世紀から17世紀にかけて地震活動の活発であった地域である。本研究では,山西地震帯の活構造と第四紀地質構造に関する野外調査,ならびに同地域の地震テクトニクスの実体の解明に必要な文献・資料の収集をおこなった。同地域は,地表に正断層群が発達しているにも関わらず,横ずれ型の地震が起こる地域である。山西地溝で最後に残った大同火山群の活動が約10万年以降停止していることからも,起震応力場が最近変化した可能性があることが認められた。今後は,同地域周辺のサブプレ-トの構成・渤海ホットスポットなどを中心とした上部マントル降起部の存在などに注目して,同地域のテクトニクスを再検討する必要がある。
運動誘発性筋損傷を抑制する発酵乳についての骨格筋における作用機序の解明

激しい運動や習慣性のない運動を行った後には筋損傷が生じ、筋肉痛、筋疲労および糖代謝の低下などさまざまな症状が引き起こされる。これまでに、運動誘発性筋損傷を抑制する方法として、簡便かつ効果的に実施できる「食品の摂取」に着目し、発酵乳およびその関連成分である乳カゼイン加水分解物が、筋損傷抑制作用および糖代謝改善作用を示すことをヒト試験において明らかにした。これらを背景として、本研究では、発酵乳および乳カゼイン加水分解物の筋損傷抑制および糖代謝改善の作用機序の解明および有効成分の探索を目的とし、運動誘発性筋損傷を抑制する新たな対処法の樹立をめざしている。昨年度は、マウス走運動負荷モデルを用いて、乳カゼイン加水分解物由来ペプチドが、骨格筋のNuclear factor κBシグナル伝達をはじめとする炎症関連タンパク質の動態に及ぼす影響について明らかにした。今年度は、乳カゼイン加水分解物由来ペプチドが酸化ストレス指標に及ぼす影響について生化学的手法を用いて分析を進めているところである。さらに、今年度は骨格筋培養細胞モデルを用いて、乳カゼイン加水分解物由来ペプチドが糖代謝関連タンパク質の動態に及ぼす影響について評価した。その結果、乳カゼイン加水分解物由来ペプチドのひとつが、AMP-activated protein kinaseを律速とするインスリン非依存性シグナル伝達の活性化を誘導し糖取り込みを亢進させることを明らかにした。動物試験および細胞試験を計画的に並行して実施した。動物試験については、昨年度回収した骨格筋サンプルを用いて、引き続き生化学的手法を用いて詳細な検討を実施する予定である。また、細胞試験については、乳カゼイン加水分解物由来ペプチドの至適濃度および至適培養時間を見出すことができたため、今後はこれらを踏まえて有効成分の同定を進めることが可能となった。動物試験においては、昨年度のマウス走運動負荷モデルにおいて回収した既存サンプルについて、生化学的手法を用いて、酸化ストレスの動態について引き続き測定を行い、作用機序に関する考察を深める。また、細胞試験においては、骨格筋培養細胞モデルを用いて、乳カゼイン加水分解物由来ペプチドが糖代謝シグナル伝達および糖取り込みに及ぼす影響についてさらなる検証を進める。また、これまでに得られた知見について国際学会等で発表を行う予定である。これまでに申請者らは、運動誘発性筋損傷を抑制する方法として、簡便かつ効果的に実施できる「食品の摂取」に着目し、発酵乳およびその関連成分である乳カゼイン加水分解物が、筋損傷抑制作用および糖代謝改善作用を示すことをヒト試験において明らかにした。これらを背景として、本研究では、発酵乳および乳カゼイン加水分解物の筋損傷抑制および糖代謝改善の作用機序の解明および有効成分の探索を目的とし、運動誘発性筋損傷を抑制する新たな対処法の樹立をめざす。本年度は、マウス走運動負荷モデルを用いて、運動前後の投与物の違いが、骨格筋のNuclear factor κBシグナル伝達をはじめとする炎症関連タンパク質の動態に及ぼす影響について評価した。その結果、運動2時間後において、運動前後に乳カゼイン加水分解物を投与した群では、炎症関連タンパク質のリン酸化が抑制され、乳カゼイン加水分解物は運動により生じる炎症を抑制する可能性が示唆された。さらに、骨格筋培養細胞モデルを用いて、乳カゼイン加水分解物の投与濃度および投与時間の違いが糖代謝関連タンパク質の動態に及ぼす影響について評価した。その結果、乳カゼイン加水分解物が、AMP-activated protein kinaseを律速とするインスリン非依存性シグナル伝達の活性化を誘導し糖取り込みを亢進させる至適濃度および至適培養時間を見出すことができた。動物試験については、運動2時間後の骨格筋サンプルを回収し、今後、生化学的手法を用いて詳細な検討を実施することが可能となった。また、細胞試験については、乳カゼイン加水分解物の至適濃度および至適培養時間を見出すことができたため、今後はこれらを踏まえて有効成分の探索を進めることが可能となった。

動物試験については、昨年度回収した骨格筋サンプルを用いて、引き続き生化学的手法を用いて詳細な検討を実施する予定である。また、細胞試験については、乳カゼイン加水分解物由来ペプチドの至適濃度および至適培養時間を見出すことができたため、今後はこれらを踏まえて有効成分の同定を進めることが可能となった。動物試験においては、本年度のマウス走運動負荷モデルにおいて回収した既存サンプルについて、生化学的手法を用いて、炎症関連タンパク質だけでなく酸化ストレスの動態についても測定を行い、作用機序に関する考察を深める。また、細胞試験においては、骨格筋培養細胞モデルを用いて、発酵乳由来ペプチドが糖代謝シグナル伝達および糖取り込みに及ぼす影響について検証する。特に、乳カゼイン加水分解物で効果のみられたインスリン非依存性シグナル伝達に着目し、それらの活性レベルについて評価する。動物試験においては、昨年度のマウス走運動負荷モデルにおいて回収した既存サンプルについて、生化学的手法を用いて、酸化ストレスの動態について引き続き測定を行い、作用機序に関する考察を深める。また、細胞試験においては、骨格筋培養細胞モデルを用いて、乳カゼイン加水分解物由来ペプチドが糖代謝シグナル伝達および糖取り込みに及ぼす影響についてさらなる検証を進める。また、これまでに得られた知見について国際学会等で発表を行う予定である。