hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
原核生物のストレス蛋白質の構造と機能

熱のストレスによってより多量に生産される熱ショック蛋白質(HSP;Heat Shock Protein)は細胞内蛋白質の大きな立体構造変化に関与し,細胞機能に重要な役割を果している。これら熱ショック蛋白質の中の,in vitroでも蛋白質の立体構造・高次構造形成に関与する大腸菌のシャペロニンGroE(GroEL(Hsp60),GroES(Hsp10))の構造と機能について研究を行なった。1.シャペロニンGroEの構造大腸菌のシャペロニンGroELのX線結晶構造解析がYale大学のグループによってごく最近なされた。GroELは分子量5万8千のサブユニットの14量体からなる巨大オリゴマー蛋白質である。中央に直径45Aの穴をもつ特徴のあるGroELは分子量1万のサブユニットの7量体からなる同様な構造をしたGroESとATP,ADP存在下で複合体を形成する。このGroEL-GroES複合体形成をキャピラリー電気泳動を利用して,シャペロニン活性に有効であることがすでに確かめられている他のヌクレオチド(CTP,UTP,ATP-γ-S,AMP-PNP)存在下でも同様に調べた。すべてのヌクレオチド存在下でGroEL14とGroES7は1対1で複合体を形成することが明らかになった。2.シャペロニンGroEの機能発現シャペロニンGroEの機能発現について,様々な酵素を“基質"として詳細に調べた。また,その機能に重要な働きをするヌクレオチドについても詳細な検討を行った。GroELは様々な蛋白質の再生中間体と複合体を形成し,一時的にその再生反応を止める。この複合体はATPの添加によって解離し,解離した再生中間体は効率よく再生する。GroE分子は様々な種類の蛋白質の構造形成にかなり広範囲にわたって機能するものと考えられる。一方、GroELのヌクレオチド特異性を調べたところ,GroESが存在するとATPだけではなくADP,CTP,UTPによっても再生中間体は効率よくGroELから解離し,活性を回復することが明らかになった。ADPはGroELによって加水分解されないので,ATPの加水分解エネルギーを利用してGroEは機能しているのではなく,ヌクレオチドのGroELへの結合が重要であると思われる。ヌクレオチドがGroELに結合することにより,GroELのコンホメーションが変化し再生中間体がスムーズに解離し正しい立体構造が形成するものと考えられる。GroESはこのとき,ADP,CTP,UTPの結合によるGroELのコンホメーション変化をさらに強めるような役割をしていると考えられる。
自発的な胚発生誘導システムを搭載した植物遺伝子組換えベクターの開発

植物の遺伝子組換え技術は、基礎研究においては遺伝子機能解析を、応用研究においては新形質の付与を可能とするなど、植物科学研究の発展には極めて重要な技術である。しかし多くの植物種では遺伝子組換えを可能にする適切な条件を設定することが難しい。本研究は、細胞からの植物体再生系確立における障害を克服するために、遺伝子導入用ベクターに自発的に不定胚形成を誘導する遺伝子を座乗させ、目的遺伝子導入と植物体再生を可能にする基盤システムを構築することを目的としている。前年度までに、シロイヌナズナ由来のBabyboom (BBM)遺伝子を用い、タバコへ導入して一過的発現による効果を調査した結果、植物体再生にプラスの効果をもたらさなかった。そこで当該年度においては、さらに別の胚発生関連遺伝子であるLEC1,WIND,WUS遺伝子を採用することにした。まずこれらの遺伝子をすべてシロイヌナズナよりクローニングし、遺伝子導入用ベクターに座乗させた。その際に、BBMを基本としてLEC1,WIND,WUSをそれぞれ追加した発現コンストラクトとした。さらに、BBMともう一つの胚発生遺伝子は、両方向の転写を行うMASプロモーターによって転写が制御されるデザインとした。当該年度ではまずBBMとLEC1を組み合わせた遺伝子発現カセットを、アグロバクテリウムを介してタバコ葉組織に導入した。その結果、コントロールとして比較して植物体再生においてネガティブな効果を示した。しかしホルモンに対する感受性が異なる結果となり、胚発生関連遺伝子と植物ホルモン間の関係性を示した。次年度は、別の胚発生関連遺伝子間とBBMの効果を検証しつつ、植物体再生に正の効果をもたらす条件を明らかにし、システムの構築を目指す。本研究では胚発生に関与する転写因子であるシロイヌナズナのBBMおよびLEC1を利用し、BBMのみを発現、またはBBMおよびLEC1を同時に発現させる遺伝子発現カセットを組み込んだバイナリーベクターを作製した。これらバイナリーベクターをアグロバクテリウムEHA105株に導入し、タバコ葉切片に接種して、影響を調査した。タバコで最適なシュート再生条件(NAA 0.1 mg/L, BA 1.0mg/L)においてはBBMを導入した影響は見られなかったが,培地中のBA濃度を低下させたときに,BBMの再分化頻度上昇の影響が見られた。この結果からBBMが再分化におけるサイトカイニン作用経路に関与している可能性が示唆された.またBBM・LEC1を同時発現させたタバコの葉切片では再分化が著しく抑制され,再分化におけるタバコの内在性ホルモン作用経路に負の効果をもたらしたと考えられた。そこで別の胚形成関連遺伝子WUSを用いて,更なる解析を行うために、BBMとWUSを同時発現させるバイナリーベクターの構築に着手した。本年度は、BBM単体の遺伝発現カセットをコントロールとして、転写活性因子を付加したBBM遺伝子発現カセットおよびBBMおよびWUSを同時発現する遺伝子発現カセットを完成させ、タバコ葉切片へのアグロバクテリウム接種により導入する。さらに導入後の培養条件を検討し、各胚発生遺伝子の影響とホルモンの関係を明らかにすると共に、胚発生遺伝子を導入することで不定胚または不定芽分化が促進されるかについて評価する。一般に植物で遺伝子組換え体を作出するためには、体細胞へ遺伝子を導入し、組み換え細胞から再び植物体を再生させるプロセスが必要である。しかし多くの植物種ではこれらのプロセスを可能にする適切な条件を設定することが難しい。それゆえ、遺伝子組換えが困難な非モデル植物種を用いた植物科学研究展開の妨げとなっている。本研究では遺伝子導入用ベクターに、自発的に不定胚形成を誘導する遺伝子を座乗させ、目的遺伝子導入と植物体再生を可能にする基盤システムを構築することを目的とした。シロイヌナズナにおいてはこれまでに複数種の胚発生関連遺伝子が同定されている。それらを導入したT1世代以降の組換え植物体において、導入遺伝子の効果を調査した報告はいくつかあるが、胚発生関連遺伝子を導入した外植片の培養中における反応を調査した例は少ない。そこで本研究では、まずシロイヌナズナ由来の胚発生関連遺伝子を複数種クローニングし、それぞれアグロバクテリウム法によってタバコ葉切片へ導入して効果を検証した。その結果、1遺伝子のみの効果では有意な再分化率の上昇には至らなかった。また、2つの胚発生関連遺伝子を発現させた場合に、再分化において抑制的な効果を示す組合せもあった。また、これらの遺伝子を導入した際、コントロールと比較して植物ホルモンに対する反応性が異なることが見出された。今後は外植片で発現するこれら胚発生遺伝子の相互効果について調査すると共に、効率的な遺伝子組換え体作出技術の開発を行う。胚発生関連遺伝子を外植片に導入し、再分化個体を得るまでの過程において遺伝子の効果を検証した報告はほとんどない。本研究では、胚発生に重要とされる複数遺伝子のクローニングとベクター構築を行い、その効果を検証できた。また、組合せによっては期待とは異なるが、再分化を抑制する効果も見出され、胚発生関連遺伝子の新規の効果であることを示唆した。当該年度の成果をもとに、次年度で行う評価実験に使用するベクターシステムの考案にも繋がっている。

本研究は、細胞からの植物体再生系確立における障害を克服するために、遺伝子導入用ベクターに自発的に不定胚形成を誘導する遺伝子を座乗させ、目的遺伝子導入と植物体再生を可能にする基盤システムを構築することを目的としている。前年度までに、シロイヌナズナ由来のBabyboom (BBM)遺伝子を用い、タバコへ導入して一過的発現による効果を調査した結果、植物体再生にプラスの効果をもたらさなかった。そこで当該年度においては、さらに別の胚発生関連遺伝子であるLEC1,WIND,WUS遺伝子を採用することにした。まずこれらの遺伝子をすべてシロイヌナズナよりクローニングし、遺伝子導入用ベクターに座乗させた。その際に、BBMを基本としてLEC1,WIND,WUSをそれぞれ追加した発現コンストラクトとした。さらに、BBMともう一つの胚発生遺伝子は、両方向の転写を行うMASプロモーターによって転写が制御されるデザインとした。当該年度ではまずBBMとLEC1を組み合わせた遺伝子発現カセットを、アグロバクテリウムを介してタバコ葉組織に導入した。その結果、コントロールとして比較して植物体再生においてネガティブな効果を示した。しかしホルモンに対する感受性が異なる結果となり、胚発生関連遺伝子と植物ホルモン間の関係性を示した。次年度は、別の胚発生関連遺伝子間とBBMの効果を検証しつつ、植物体再生に正の効果をもたらす条件を明らかにし、システムの構築を目指す。本研究では胚発生に関与する転写因子であるシロイヌナズナのBBMおよびLEC1を利用し、BBMのみを発現、またはBBMおよびLEC1を同時に発現させる遺伝子発現カセットを組み込んだバイナリーベクターを作製した。これらバイナリーベクターをアグロバクテリウムEHA105株に導入し、タバコ葉切片に接種して、影響を調査した。タバコで最適なシュート再生条件(NAA 0.1 mg/L, BA 1.0mg/L)においてはBBMを導入した影響は見られなかったが,培地中のBA濃度を低下させたときに,BBMの再分化頻度上昇の影響が見られた。この結果からBBMが再分化におけるサイトカイニン作用経路に関与している可能性が示唆された.またBBM・LEC1を同時発現させたタバコの葉切片では再分化が著しく抑制され,再分化におけるタバコの内在性ホルモン作用経路に負の効果をもたらしたと考えられた。そこで別の胚形成関連遺伝子WUSを用いて,更なる解析を行うために、BBMとWUSを同時発現させるバイナリーベクターの構築に着手した。胚発生関連遺伝子を外植片に導入した後、再分化が誘導されるまでのプロセスにおいて遺伝子の効果を検証した報告は少なかったが、当該年度の結果によって、使用する胚発生遺伝子が複数必要であること、またその組合せが重要であることが見出された。そこで、複数の胚発生遺伝子を様々な組合せで発現させるベクターの構築に着手したところである。今後はそれらの評価法をベースとして、再分化促進に有効なシステムを構築するとともに、胚発生関連遺伝子の相互効果についてもさらに追究する。
EBV関連胃癌における癌幹細胞の同定および機能解析

EBV関連胃癌における癌幹細胞の同定を目的として、手術により摘出された胃癌組織検体を用いたtissue microarrayを構築し、癌幹細胞のマーカーとなりうる分子の発現を免疫組織化学的に検討した。特に胎児型形質を反映するマーカーの発現に着目して解析した結果、胃癌が3つのグループに分けられることが明らかになった。このうち、胎児マーカーを発現するグループは悪性度の高い腸型の形質を示す一方、EBV関連胃癌においてはこれらの胎児マーカーの発現は低頻度であり、EBV関連胃癌の癌幹細胞性における、胎児形質に関連する分子の関与は限定的であることが示唆された。Epstein-Barr virus(EBV)関連胃癌における癌幹細胞を同定することを目的に、本年度は申請者の所属する大学の医学部附属病院において外科的に切除された胃癌組織検体を用いて、tissue microarray(TMA)を作成した。申請者の所属する研究室で既に構築していた約250例の症例に加え、新たに約600例についてTMAを構築した。これらのTMAを用いて、EBER in situ hybridization法により胃癌細胞におけるEBV感染の有無を検索した。さらに癌幹細胞に関する既報告を参考として、胃癌における癌幹細胞のマーカーの候補となりうる分子を10種類程度選定し、それらについて胃癌組織における発現を免疫組織化学的に検討するため、染色条件を決定し、染色を行った。これらの分子の発現と臨床病理学的因子との相関について統計学的解析を行った結果、特定の分子において、胃癌の予後不良因子となることが明らかになった。通常型の胃癌に比べ、EBV関連胃癌に特異的に高い発現を示す分子の有無については、現在解析を行っている。これらに加えて、細胞株レベルでの検討も並行して進めている。EBV関連胃癌由来の細胞株から癌幹細胞の候補となりうる特定の分子を発現している集団をフローサイトメトリーにより分離し、マウスに移植することにより、より高率に癌が生着することが明らかになった。この分子に関してもさらに解析を進めている途上である。多数の胃癌症例を用いた検討により、癌幹細胞のマーカーを特定する解析が進んでいる。EBV関連胃癌における癌幹細胞の同定を目的として、手術により摘出された胃癌組織検体を用いたtissue microarray(TMA)を構築し、癌幹細胞のマーカーとなりうる分子の発現を免疫組織化学的に検討した。対象とした症例は研究代表者の所属する研究室においてすでに構築されていた250例に加え、新たに約800例を追加し、TMAを構築した。まず、これらの症例についてEBER in situ hybridization法を用いてEBV関連胃癌の抽出を行った。次いで、癌幹細胞のマーカーとなる遺伝子や胃癌の発生・進展に重要な遺伝子の発現について、免疫組織化学的に網羅的な検討を行った。これらの遺伝子の発現と臨床病理学的因子の関連について解析を行ったところ、ある種の分子の発現が胃癌の悪性度に関連することが明らかになった。それらの分子の中でも、特に胎児型形質を反映するマーカー(SALL4、AFP、CLDN6、GPC3)の発現に着目して解析を進めた結果、これらの分子の発現パターンにより、胃癌が3つのグループに分けられることが明らかになった。このうち、胎児マーカーを発現するグループは悪性度の高い腸型の形質を示す一方、EBV関連胃癌においてはこれらの胎児マーカーの発現は低頻度であった。さらにデータベースとして公開されている、胃癌における網羅的遺伝子解析の結果を参照したところ、本研究の結果と同様の傾向であることが示された。本研究で検索した分子の中では、EBV関連胃癌に特異的である癌幹細胞マーカーを特定するには至らなかったが、少なくとも、EBV関連胃癌の癌幹細胞性における、胎児形質に関連する分子の関与は限定的であることが示唆された。TMAを用いた免疫組織化学的検討の結果をもとに、EBV関連胃癌に特異的な癌幹細胞のマーカーを特定する。特定されたマーカーについて細胞株を用いた検証を行い、その分子機序を明らかにするべく、研究を継続する予定である。胃癌本年度は主にTMAの作成と免疫染色の実施を重点的に行ったため、当初計画していた細胞株を用いた実験にかかる費用の一部が未使用のままとなった。さらに遠方で行われる学会への参加がなかったため、旅費として予定していた分を使用しなかった。申請した研究計画を遂行するにあたり、次年度は本年度に比べ、基礎的実験に必要となる金額が増加することが予想され、上記の未使用の金額について、実験にかかる費用および学会参加の旅費、成果発表(論文投稿)に関連する費用に充填する予定である。
20世紀台湾の言語・文学・演劇映画に関する総合的研究

台湾は現在、21紀の世界文化に独自の領域を築きつつある。また台湾において近年"台湾意識"と称されるナショナリズムが盛んになるとともに、台湾および日本・韓国・欧米の台湾文化研究はめざましい勢いで成長中である。このような国際的台湾文化研究の潮流の中にあって、本研究では研究代表者および研究分担者計6名が協力して、2002年度から三年間にわたって20世紀における台湾の言語・文学・演劇・映画に関する総合的研究を行った。その主な成果は以下の通りである。(1)国際シンポジウムの開催:東京台湾文学研究会と「台湾文学における佐藤春夫とその系譜」(日本台湾学会大会2002年)、「如何に台湾を理解するのか-「他者」及び「自己」の目に映された台湾の文学と歴史」(同2003)を共催し、「東大中文・現代台湾文学国際シンポ」(東大山上会館2003)を主催し、台湾・中央研究院文哲研究所と「ワークショップ20世紀台湾文化総合研究」(同2004)を共催した。(2)台湾人作家講演会の開催:葉石涛(2002)、楊牧(2004)の講演会(東大文学部)、李昂と上野千鶴子とのトークショー(三省堂本店)を主催した。(3)日本・台湾・中国・韓国・アメリカにおける国際シンポジウムに参加して、約20本の報告を行った。(4)約20本の論文・批評を国内外の雑誌・新聞に発表し、5冊の著書を刊行した。(5)東大中文の大学院生を指導し、台湾文学に関する修論・博論各一本を完成させた。以上の活動により、20世紀台湾文化が先住民文化、伝統中国、近現代の中国・日本・欧米・香港など複雑な言語文化の影響を受けつつ、豊かな台湾独自の文学・映画・演劇を生み出しており、そのよりな20世紀台湾文化が現在の台湾アイデンティティ形成を支えている点を明らかにした。本研究は3年間にわたり20世紀台湾の言語・文学・演劇映画に関する総合的研究を行うものであり、初年度には資料収集のほか以下の研究活動とそれに基づくシンポジウム・講演会の開会および論文集刊行を行った。1 5、10、12、2月に各1回、東京台湾文学研究会と協力して研究会を東大中文研究室にて開催し、台湾文学史の著述、李昂論など現代文学論などについて討議した。2 6月に東京台湾文学研究会と協力して、日本台湾学会大会(名古屋国際会議場)にてシンポジウム「台湾文学における佐藤春夫とその系譜」を開催し、河原功(成蹊高等学校教諭)を座長としてフェイ・クリーマン(アメリカ・コロラド大学助教授)らが報告「西川満と佐藤春夫-歴史と物語の間」などを行い、邸若山(台湾・静宜大学専任講師)、藤井省三(東京大学教授)らがコメントをして、佐藤春夫の戦前期台湾文学への影響の深さを明らかにした。3 6月に台湾日本語文学の長老作家である葉石涛氏と台湾・成功大学教授の林瑞明氏とをお招きして、東大文学部にて講演会を行った。葉講演「私と台湾文学60年」は文芸誌『新潮』9月号およびその中国語訳は台湾の文芸誌『文学台湾』にそれぞれ掲載された。4 11月に成功大学主催「台湾文学史記述シンポ」と3月にAAS(米国アジア学会)主催「台北30年代文化シンポ」に藤井が参加してそれぞれ「外来諸政権の文化政策と台湾アイデンティティ」(原文:中国語)と「台北シネマリーグの興亡一一一九三〇年代モダン都市における"映画界革命"の形成」(原文:英語)との報告を行った。

5東京台湾文学研究会と協力して、『台湾の「大東亜戦争」』(東京大学出版会)と『講座台湾文学』(国書刊行会)の論文集二冊を刊行して、前者では太平洋戦争と台湾文化との関わり、後者では清代から現代に至るまでの台湾文学の歴史を明らかにした。資料収集のほか以下の研究活動を行った。(1)4、7、9、11、2月に各1回、東京台湾文学研究会と協力して研究会を東大中文研究室にて開催し、「清朝時代の台湾社会」「佐藤春夫と台湾」等を討議した。(2)6月に東台文研と協力して、日本台湾学会大会(関西大)にてシンポ「如何に台湾を理解するのか-「他者」及び「自己」の目に映された台湾の文学と歴史」を開催、藤井を座長として、廖炳恵・清華大「離散與流寓:明清来台文人的旅行詩抄解讀」(代読)、Leo Ching・デューク大学"The Musha Rebellionas theUnthinkable: Coloniality, Aboriginality and the Epistemology of Colonial Difference"、蕭阿勤・中央研究院「台湾文学的本土化典範:歴史叙事・策略的本質主義、與国家暴力」(代読)、黄英哲・愛知大「歴史、記憶與書寫-論朱天心<古都>」の報告が行われた。(3)11月に「東大中文・現代台湾文学国際シンポ」を東大山上会館で開催し、討論「施叔青と香港」(司会:山口守・日大、報告者:辻原登・作家、彭小妍・中央研究院、黄英哲、關詩珮・ロンドン大大学院生、野崎歓・東大)及び「日台作家対談:李昂vs小川洋子」、講演「李昂文学とフェミニズム」(上野千鶴子・東大)、討論「李昂文学とは何か」(司会:藤井省三、報告者:邱貴芬・中興大、上野、小山鉄郎・共同通信社、茅野裕城子・作家)を行った。その成果の一部は、李昂「海峡を渡る幽霊」(小説、藤井訳)、小川洋子「海」、小川洋子vs李昂、司会:藤井省三「対談わたしたちの海」として『新潮』2004年2月号に発表された。(4)藤井が11月に北京大vsコロンビア大共催国際シンポ「北京:都市想像与文化記憶」(北京大)にて講演「芥川龍之介「湖南の扇」和佐藤春夫「女誡扇綺譚」」を、12月に台北・現代文化基金会主催国際シンポ「"想像の共同体"の再検討」にてBenedict Andersonへのコメント「中国語圏文学史の構想と"想像の共同体"理論」を行った。(1)東京台湾文学研究会と協力して研究会を東大中文研究室にて5回開催した。(2)9月28日10月1日に東大山上会館において台湾・中央研究院文哲研究所との共催で「ワークショップ20世紀台湾文化総合研究」を開催し、台湾・香港・欧米から13名、日本国内から約10名の台湾文化研究者を招聘した。主な報告は以下の通り。柯慶明(台湾大)「台湾「現代主義」小説序論」、陳芳明(政治大)「台灣文壇向左轉」、とう捷(東大)「他者的凝視」、和泉司(慶應大院生)「作爲文本的周金波<志願兵>」、張文薫(東大院生)「《福爾摩沙》再定位」、曾永義(台湾大)『台灣歌仔戲之過去、現在與未來」、王〓玲(中研院)「藝術品味與文化風尚」、Faye Kleeman(アメリカ・コロラド大)「來自寶島的明信片」、黄淑嫺(香港・嶺南大)「重讀劉吶鴎的電影觀」、林〓儀(中研院)「臺灣詞學研究之回顧與展望」、廖肇亨(中研院)「臺靜農先生的明清文化史觀」、陳万益(清華大)「楊逵小説創作的起死>為點」、李郁〓(立命館大)
微細オープンポアを有する生体用硬組織代替セラミックの反応合成

計算により求めた断熱燃焼温度と燃焼合成により得られた組織との相関関係の調査燃焼合成時の反応エンタルピー変化量とポーラスTi基多相材料中の分散相(TiB2, TiCなど)の生成形態(形状,大きさ,分布,割合など)を詳細に調査し,次に示す結果を得た.1.反応エンタルピー変化量と分散相形態の相関関係反応エンタルピー変化量が大きい場合には,燃焼合成時にセラミックが融解するため,その形態はアスペクト比が1にちかくなり,サイズは粗大化(5-10ミクロン程度)する,その反対に,反応熱希釈剤を用い,断熱燃焼温度を低下させると,生成するTiB2のアスペクト比は10以上となり,またサイズはサブミクロンオーダーとなる.2.効率的な反応エンタルピー制御手法の開発原料粉末混合体中に反応熱を希釈する目的で,TiC粉末を添加した.その結果,適切なサイズのTiC粉末を用いれば,反応熱の希釈効果は十分にみられ,それによって断熱燃焼温度のコントロールが可能になり,組織制御を行うことが可能になった.3.多相系中の分散相形態を任意に制御する手法の確立ポーラスTi基複合材料中に生成するTiB2, TiCは反応熱量制御により形態制御が可能であることが明らかになった.反応熱量希釈剤の使用により,サブミクロンオーダーの分散相を生成・分散させることが可能である.ただし,反応熱量希釈剤を多量に使用すると燃焼合成反応自体が生じなくなる.そのため,反応熱量希釈剤の添加量に関しては,その原料系の発熱量に応じて適切な量を選択する必要があることが明らかとなった.当該研究に関して本年度は次に示す実績を得た.1.試料作製方法の確立原料粉末(Ti:44μm以下,B_4C:平均粒径10μm)を所定量秤量し(モルTi/B_4C比:3-10),混合した.混合粉末は石英パイプ内への充填または圧粉成型により円柱状グリーン体(10g)を得た.この時,パイプ内への粉末充填荷重または,圧粉荷重を変化させ,異なる空隙率(18-60%)を有するグリーン体を作製した.このグリーン体を高周波誘導によりアルゴン雰囲気下にて加熱し燃焼合成反応を誘起した.2.セラミックの反応合成の確認反応生成物の状態を観察するため,燃焼合成後試料のミクロ組織をSEMにより観察した.TiB,TiCから構成される組織が観察され,本系にて燃焼合成反応が生じること確認できた3.グリーン体空隙率,Ti/B_4C比が空隙性状に及ぼす影響Ti/B_4C比が3の場合には,グリーン体空隙率の上昇とともに燃焼合成後試料空隙率も増加するが,同比が10の場合は,低下する.また,Ti/B_4C比が3,グリーン体空隙率40%以上の試料では開気孔が生成し,それ以外の試料では閉気孔が生成した.4.気孔生成の形状制御Ti/B_4C比を小さくし,グリーン体空隙率を大きくして作製することにより,数百ミクロン程度の気孔が生じていることが確認できる.また,試料外部からの樹脂含浸を試みた結果,試料中央部までの浸透が確認できた.よって,この写真に見られる気孔は貫通気孔であると考えられる.Ti/B_4C比を大きくし,グリーン体空隙率を小さくして作製した試料は,球状の閉気孔が生成することも確認した.計算により求めた断熱燃焼温度と燃焼合成により得られた組織との相関関係の調査燃焼合成時の反応エンタルピー変化量とポーラスTi基多相材料中の分散相(TiB2, TiCなど)の生成形態(形状,大きさ,分布,割合など)を詳細に調査し,次に示す結果を得た.1.反応エンタルピー変化量と分散相形態の相関関係反応エンタルピー変化量が大きい場合には,燃焼合成時にセラミックが融解するため,その形態はアスペクト比が1にちかくなり,サイズは粗大化(5-10ミクロン程度)する,その反対に,反応熱希釈剤を用い,断熱燃焼温度を低下させると,生成するTiB2のアスペクト比は10以上となり,またサイズはサブミクロンオーダーとなる.2.効率的な反応エンタルピー制御手法の開発原料粉末混合体中に反応熱を希釈する目的で,TiC粉末を添加した.その結果,適切なサイズのTiC粉末を用いれば,反応熱の希釈効果は十分にみられ,それによって断熱燃焼温度のコントロールが可能になり,組織制御を行うことが可能になった.3.多相系中の分散相形態を任意に制御する手法の確立ポーラスTi基複合材料中に生成するTiB2, TiCは反応熱量制御により形態制御が可能であることが明らかになった.反応熱量希釈剤の使用により,サブミクロンオーダーの分散相を生成・分散させることが可能である.ただし,反応熱量希釈剤を多量に使用すると燃焼合成反応自体が生じなくなる.そのため,反応熱量希釈剤の添加量に関しては,その原料系の発熱量に応じて適切な量を選択する必要があることが明らかとなった.
エボシガイ類における矮雄と雌雄同体の精子間競争

1.ミョウガガイScalpellum stearnsiiについて昨年度,シークエンスを行ったものを再度確認し,さらにマイクロサテライト(以下,msと略す)領域を明確にした。そのms領域をはさむように,プライマーを設計した。Tm温度が決定したもののみ,F鎖側のプライマーを蛍光にした。昨年度,作製した7つの領域に加え,さらに3つの領域の蛍光プライマーを作製した。そのプライマー10組のうち,6組では問題なく増幅した。うち1組は多型を示さず,5組で多型を示した。この5組について,ミョウガガイの父性判定に有用であると判断された。父性判定の解析には,雌12個体とそれぞれに着生している矮雄全個体(114個体),胚各16個体を使用した。矮雄の着生している位置(産卵口の近くのある点からの距離),矮雄の体積を測った。雌は柄部の筋肉から,胚と矮雄は全体からDNAを抽出した。そして,作製した蛍光プライマーを使用したフラグメント解析を行い,父性判定を行った。今回使用したmsマーカーは5組である。これらの解析により,個々の雄の授精成功を検討した。雌・矮雄・卵塊内の胚の遺伝子型を決定し,それぞれの矮雄の授精成功率を算出した。雌の卵塊ごとに父性を判定したところ,ほぼすべての雌の卵塊が複数の雄により授精されていた(multiple paternity)。次に矮雄が着生している位置(雌の開口部下端からの距離)や矮雄の大きさ(体積)と授精成功率の関係についてみると,矮雄の位置とは関係がなかったが,矮雄の体積とは負の相関があった。よって,小さい雄ほど授精成功が高いことが示唆された。ミョウガガイで開発したmsマーカー5組を使用して,父性判定を行ったところ,1組では父性判定が可能であり,1組では条件を検計すれば可能であることがわかった。今年度は,エボシガイ類の中でも雌に矮雄が付着しているミョウガガイScalpellum stearnsiiについて,以下の研究を行った。(1)個体識別ができるマイクロサテライトマーカーの開発マイクロサテライト(以下,msと略す)マーカーの開発には,99%アルコールで固定した成熟した雌の筋肉を使用した。約500から1000bp付近の切りだしたDNA断片を利用し,大腸菌Escherichia coliで形質転換させた。プローブ(GA_<12>・CA_<12>)でハイブリダイゼーションを行った。プローブに対してポジティブなシグナルを示したコロニーのみをユニバーサルプライマーM13(F&R)を使用したPCRで増やし,塩基配列をよんだ。塩基配列より,ms領域を確認し,そのms領域をはさむように,プライマーを設計した。今年度は,ms領域を14領域確認し,7つの蛍光プライマーを作製した。(2)マイクロサテライトマーカーを利用した矮雄の精子間競争の解明父性判定の解析には,雌3個体とそれぞれに着生している矮雄全個体,胚各16個体を使用した。胚の位置(左右),矮雄の着生している位置(産卵口の近くのある点からの距離),矮雄の体積を測った。その後,雌は柄部の筋肉から,胚と矮雄は全体からDNAを抽出し,作製した蛍光プライマーを使用したフラグメント解析を行い,父性判定を行った。今回使用したmsマーカーは3つである。予備的な解析の結果,着生距離と授精成功率について有意な負の関係があったことより,産卵口に近い矮雄ほど授精成功率が高いということが示唆された。また,ある一方の胚の父親は同じ側の矮雄である傾向が出たことより,矮雄の授精競争では,卵により近い矮雄が繁殖に有利と示唆された。今後,より精度の高い父性判定をするために,使用するmsマーカーを増やし,解析個体を増やす予定である。

雌の卵塊ごとに父性を判定したところ,ほぼすべての雌の卵塊が複数の雄により授精されていた(multiple paternity)。次に矮雄が着生している位置(雌の開口部下端からの距離)や矮雄の大きさ(体積)と授精成功率の関係についてみると,矮雄の位置とは関係がなかったが,矮雄の体積とは負の相関があった。よって,小さい雄ほど授精成功が高いことが示唆された。ミョウガガイで開発したmsマーカー5組を使用して,父性判定を行ったところ,1組では父性判定が可能であり,1組では条件を検計すれば可能であることがわかった。
フリーズエッチ電顕法による薬剤・遺伝子導入用ナノ粒子の細胞内取込み機構の解明

本研究の目的は、膜透過性治療薬の細胞侵入メカニズムを電子顕微鏡で可視化解析することであり、これらの試薬が細胞にエンドサイトーシスされた後に、エンドソームの構造崩壊を伴って細胞に侵入するという仮説を検証することである。エンドソーム構造の崩壊過程を可視化することは、これらの薬剤がなぜ効くのかを深く理解するのに極めて重要であるばかりでなく、現在医学における将来の改善療法の開発に指針を与える上でも大切である。ポリカチオン性高分子による「プロトン・スポンジ」やエンドソーム崩壊ペプチドによる「エンドソーム・エスケープ」と呼ばれてきた仮説を電子顕微鏡法により慎重に検証した。27年度が最終年度であるため、記入しない。細胞生物・生物物理学27年度が最終年度であるため、記入しない。
タキサン耐性ヒト前立腺癌細胞におけるサリドマイドの抗腫瘍効果に関する研究

【研究目的】サリドマイド(Tha)は多発性骨髄腫の適応で国内承認されたほか,種々の悪性腫瘍で有効性が報告されている.内分泌療法抵抗性前立腺癌においてもドセタキセル(DTX)との併用により臨床的有用性を示したとの報告があるが,その基礎的検討は十分に行われていない.そこで,ヒト前立腺癌細胞を用い,Tha単独あるいはDTXとの併用時における抗腫瘍効果について検討した.【研究方法】ヒト前立腺癌細胞は,アンドロゲン非依存性細胞株(PC-3)を用いた.PC-3は常法に従い継代培養し実験に用いた.PC-3を96穴プレートに播種後24hr培養し,Tha,DTXを単独あるいは併用にて一定時間曝露した.細胞生存率を蛍光ホモジニアス法を用いて測定し,種々の条件における抗腫瘍効果を比較した.【研究成果】1.Tha単独曝露:Thaの抗腫瘍効果は濃度・時間に非依存的であり,Tha 10μMにおける72hr曝露後の細胞生存率は約80%であった.2.DTX単独曝露:濃度・時間依存的に細胞生存率の低下を認め,DTX 10nMにおける24hrおよび72hr曝露後の細胞生存率は約60%および約40%であった.3.Tha前曝露後のTha/DTX併用曝露:DTX 10nM単独曝露群と比較して,DTX曝露期間中のみTha 10μMを併用した群では約10%,DTX曝露72hr前からThaを曝露した群では約30%,さらにDTX曝露期間中にもThaを併用した群では約50%の細胞生存率の低下を認め,Thaの前曝露およびDTXとの併用により抗腫瘍効果の増強が示された.これはThaのDTXとの併用における臨床的有用性を支持するものであった.また,DTX耐性PC-3を作製し,耐性化細胞におけるTha併用の有用性およびTha併用による抗腫瘍効果の増強メカニズムについて検討を行っている.【研究目的】サリドマイド(Tha)は多発性骨髄腫の適応で国内承認されたほか,種々の悪性腫瘍で有効性が報告されている.内分泌療法抵抗性前立腺癌においてもドセタキセル(DTX)との併用により臨床的有用性を示したとの報告があるが,その基礎的検討は十分に行われていない.そこで,ヒト前立腺癌細胞を用い,Tha単独あるいはDTXとの併用時における抗腫瘍効果について検討した.【研究方法】ヒト前立腺癌細胞は,アンドロゲン非依存性細胞株(PC-3)を用いた.PC-3は常法に従い継代培養し実験に用いた.PC-3を96穴プレートに播種後24hr培養し,Tha,DTXを単独あるいは併用にて一定時間曝露した.細胞生存率を蛍光ホモジニアス法を用いて測定し,種々の条件における抗腫瘍効果を比較した.【研究成果】1.Tha単独曝露:Thaの抗腫瘍効果は濃度・時間に非依存的であり,Tha 10μMにおける72hr曝露後の細胞生存率は約80%であった.2.DTX単独曝露:濃度・時間依存的に細胞生存率の低下を認め,DTX 10nMにおける24hrおよび72hr曝露後の細胞生存率は約60%および約40%であった.3.Tha前曝露後のTha/DTX併用曝露:DTX 10nM単独曝露群と比較して,DTX曝露期間中のみTha 10μMを併用した群では約10%,DTX曝露72hr前からThaを曝露した群では約30%,さらにDTX曝露期間中にもThaを併用した群では約50%の細胞生存率の低下を認め,Thaの前曝露およびDTXとの併用により抗腫瘍効果の増強が示された.これはThaのDTXとの併用における臨床的有用性を支持するものであった.また,DTX耐性PC-3を作製し,耐性化細胞におけるTha併用の有用性およびTha併用による抗腫瘍効果の増強メカニズムについて検討を行っている.
闘争における優劣決定の神経回路機構

手綱核内側部腹側領域(vMHb)は脚間核(IPN)にアセチルコリン(ACh)とグルタミン酸を放出している。今回、マウスvMHb-IPN回路を抑制(ACh合成阻害)または活性化(光刺激活性化、ニコチン投与による活性化)し、社会的優劣関係の検出テストを行った。その結果、回路を抑制すると勝者に、活性化すると敗者になる傾向が見られた。IPNは中央縫線核(MnR)に抑制性の神経投射をしているが、それを模倣しMnRのセロトニン神経を抑制すると、vMHb-IPN回路の活性化同様に社会的敗者になる傾向を確認した。以上より、vMHb-IPN-MnR回路が闘争行動を終了させるように働くことがわかった。平成27年度は内側手綱核(MHb)ー脚間核(IPN)回路に人為的操作を加えるためのマウスラインを確立し、社会的闘争に関わる急性行動についての結果を得た。MHb-IPN回路には互いに交雑することなく独立した神経投射である内側手綱核背側部(dMHb)-IPNおよび、内側手綱核腹側部(vMHb)-IPNの2回路がある。vMHbからIPNへはグルタミン酸(Glu)+アセチルコリン(ACh)が神経伝達物質として放出されているが、平成27年度の研究ではこの回路への介入を目指し、1AChのみを欠失したマウス、2vMHbでcreを発現するChat-creマウス、を使用した。これらのマウスは全てC56BL/6(B6)ラインで作製・維持している。社会的闘争の急性行動は直径3.2cm、長さ30cmのアクリルチューブを用いて検出した。チューブの両端から2匹のマウスを内向きに入れ、どちらが相手を押し出してチューブをくぐり抜けるかで勝敗を決め(tube test)、その2匹間の優劣関係を検出する。1ACh欠失マウス;対戦者としてB6ラインの1.5倍の体重であるCD1マウスを用いtube testを行った。多くのコントロールマウスはCD1マウスに押し出され敗戦したが、ACh欠失マウスはCD1マウスに勝利する個体が多かった。2vMHb-IPN回路の活性化を誘導するため、チャネルロドプシンをvMHb-IPR/IPC回路に特異的に発現させ、活性化誘導のためのLED光源を脳内に埋入手術したマウスを用意した。対戦者として、B6ラインよりもおとなしいC3Hマウスを用いtube testを行ったところ、コントロールマウスではC3Hマウスを押し出し勝利傾向にあったが、VMHb-IPN活性化マウスは全て敗戦した。以上より、vMHb-IPN回路は社会的闘争において、引き下がるポイントを決めていると想定された。申請時に計画していた社会的闘争の急性行動についてはvMHb-IPN回路の関与がほぼ正確に理解できたと考えている。活性化誘導のための実験として、Chatcreマウスへのチャネルロドプシンアデノ随伴ウイルスベクターのvMHb特異的感染と発現誘導、LED光源の脳内埋入手術というステップがあり、これをクリアした健康な正常マウスのみしか実験に使用できないため、条件検討に少し時間がかかると想像していたが、27年度中に技術を取得し、条件を決定することができ、またその実験結果も得られた。その一方、当初27年度に計画していた、MHb-IPN-中脳灰白質(PAG)回路の、詳細な解剖学的同定や、その回路の電気生理学的な知見を得るところまでは到達できなかった。平成28年度は前年度の研究を進展させ、学会発表、論文作成を行った。また論文投稿準備中である。MHbは背側部と腹側部(dMH及びvMHb)に分けられるが、背側部からはグルタミン酸(Glu)とサブスタンスPが、腹側部からはGluとアセチルコリン(ACh)がそれぞれ別々に放出され、標的領域もIPNの周辺部と中心部と異なっている。研究代表者が所属する研究室では、この二回路が社会的闘争時にそれぞれアクセル及びブレーキとして働くことを、ゼブラフィッシュの相同回路を用いて平成28年度に発表した。哺乳類でも同様にvMHb-IPN回路は闘争時のブレーキの役割を果たしており、AChの合成を阻害(ACh合成酵素の領域特異的欠失マウスを用いた)すると急性闘争時に勝利しやすくなり、vMHb-IPN回路を活性化(光操作性レセプター活性型をvMHb-IPN特異的に発現誘導)すると急性闘争時に敗戦しやすくなった。vMHbから放出されるACh及びGluはIPNニューロンを活性化することが報告されており、研究代表者の実験でも確認した。IPNのニューロンは比較的高濃度のニコチンの体内投与により活性化されることがわかっている。そこで、ニコチンを体内投与し、vMHbの下流となるIPNのニューロンに強制的に活性化したマウスが急性社会的闘争時に敗戦しやすくなるかどうかを確認した。マウスの急性社会的闘争時の行動は、30cmのアクリルチューブの両端から2匹のマウスを向かい合わせに入れ、どちらのマウスが相手を押し出すかで2匹の優劣関係を検出する(チューブテスト)。ニコチンを投与したマウスは、vMHb-IPN回路を光刺激で活性化した時と同様、穏やかな性格を持つことがわかっているC3Hラインマウスにも敗戦しやすいことがわかった。

以上のことから、社会的闘争時、vMHbの活性化→IPNの活性化が降参ポイントを決定することが示された。本年度は論文の受理を目指し、データの解析及び論文作成に時間をかけた。また学会発表をし、外部への報告も行ったため、実験の進展は多少滞った。そのため、急性社会的闘争の結果、その関係性が慢性化していく際のvMHb-IPN回路及びそこに含まれるニューロンの反応の変化についての知見はまだ得られていない。一方、vMHb-IPN回路の急性社会的闘争時における役割については、他者による部分的知見ともよく合致し、仮説の信頼性がさらに上がったと考えられる。現在は急性期から慢性期への行動の変遷を検出する系を模索中である。どのくらいの時間で慢性期の関係性を受け入れるようになるのか、またその際のvMHb及びIPNの細胞の反応性がどう変化するのか、その反応性の変化が何に起因するものなのかの解析を順次行っている最中である。さらにvMHb-IPN回路への介入を行うことで、上記の関係性がどう変化するかも観察中である。また、本年度は論文受理が達成できなかったので、上記解析を加えて受理を目指す。手綱核(Hb)はヒト脳最深中心部にある、間脳視床の主要神経核である。哺乳類では内側(MHb)と外側(LHb)に分かれ、内側部はさらに背側(dMHb)と腹側(vMHb)に分けられる。MHbからの投射はほぼ全て中脳脚間核(IPN)に入力し、dMHbはIPNの辺縁部に、vMHbはPN中央部に神経伝達することがわかっている。我々は魚類であるゼブラフィッシュを用い、哺乳類MHbに相当する2つの背側手綱核が社会的闘争時、2つの背側手綱核が関与するという知見を得ていたが、本研究ではヒトにより近いマウスを用いて社会的闘争時のvMHbの役割を検討した。vMHb-IPN回路は神経伝達物質としてアセチルコリン(ACh)を含むが、そのACh投射を抑制したマウスを作成し、力が強く大きな別系統マウスとの間での社会的優劣関係を確認したところ、AChを抑制することで強い相手マウスにも勝つ傾向にあった。逆に、vMHbからIPN中央部への投射を光遺伝学的に増強したマウスと、IPN中央部の神経細胞をニコチンで活性化したマウスを作成し、性格がより穏やかとされる別系統マウスとの間での社会的優劣関係を確認した。その結果vMHb-IPN経路を活性化することで弱い相手マウスにも負ける傾向にあった。以上の結果より、vMHb-IPN回路は本来闘争行動のブレーキであり、これを抑制すると社会的階層の優位に、活性化すると劣位に立ちやすくなることが確認された。社会的劣位が長期的に続くことで抑うつ傾向になることが知られているが、この知見が社会的抑圧による精神疾患治療への基礎知見となる可能性がある。また逆に、慢性的な闘争的精神状態が社会集団や個人を疲弊させると考えられるが、それを解決するための基礎知見になると期待している。現在は、この結果をさらに発展させ、その下流として報告されている中央縫線核の役割を確認している。手綱核内側部腹側領域(vMHb)は脚間核(IPN)にアセチルコリン(ACh)とグルタミン酸を放出している。今回、マウスvMHb-IPN回路を抑制(ACh合成阻害)または活性化(光刺激活性化、ニコチン投与による活性化)し、社会的優劣関係の検出テストを行った。その結果、回路を抑制すると勝者に、活性化すると敗者になる傾向が見られた。IPNは中央縫線核(MnR)に抑制性の神経投射をしているが、それを模倣しMnRのセロトニン神経を抑制すると、vMHb-IPN回路の活性化同様に社会的敗者になる傾向を確認した。
IL3とGM-CSFの併用投与による脳梗塞病態の改善：脳と骨髄をつなぐ研究

私は、このサイトカインIL3とGM-CSFの組み合わせに関心を持ち、6-OHDA誘発パーキンソン病モデルに対し、IL3とGM-CSFの皮下注射を試みたところ、黒質緻密部ドーパミン神経細胞死が顕著に防がれ、極めて良好な転帰を得た(Choudhury et al. Brain and Behavior, 2011)。この研究において、それぞれのサイトカイン単剤を比較したところ、混合剤の方が、マイクログリアの神経保護作用や、神経細胞の抗アポトーシス因子Bcl-xL発現の増強作用が単剤に比べ勝っていた。本研究では、ラット中大脳動脈一過性閉塞モデルに対し、翌日からIL-3とGM-CSFの混合物の皮下投与を5日間行ったところ、3ヶ月目までに脳喪失体積の減少、認知行動能力(水迷路、オープンフィールド、回転棒試験)の改善を見た。我々は、多くの薬物・成長因子類の投与をMCAOモデルに対し行ってきたが、翌日投与でこれほどの改善を見たものは他にない。次にメカニズムであるが、パーキンソン病モデル研究から判明した抗アポトーシス因子Bcl-xLの発現変化を調べた。その結果、驚くべきことに、対照群の虚血辺縁部(ペナンブラ)ではマイクログリアにBcl-xL発現が見られてのに対し、IL-3とGM-CSF混合投与群では神経細胞にBcl-xLが発現し、マイクログリアでの発現は消失していた。これらの結果は、IL-3とGM-CSFが神経細胞のアポトーシスを抑制する結果、eat-me signalであるフォスファチジルセリンの神経細胞外部への露出が減少し、マイクログリアの活性化が抑制され、マイクログリアの貪食による神経細胞死の促進(phagoptosis)が抑制され、予後改善に至ったと結論した。生後2ヶ月例の一過性(90分)MCAOによるラット脳梗塞モデルでは、梗塞巣コアの単球(骨髄)由来マクロファージの集積は虚血7日後にピークとなり、極めて高い密度での集積がみられる(Matsumoto et al. JCBFM, 2008)。我々は少なくとも虚血イベントより3-4日経過以降は、NG2コンドロイチン硫酸プロテオグリカン(NG2)を発現する好ましいフェノタイプ(Smirkin et al. JCBFM 2010; Matsumoto et al. J Neuroimmunology 2015)を持つマクロファージ(BINCs)が優勢となると考え、脳梗塞巣での骨髄由来マクロファージの集積を促進する治療法を試してきた。特に、高齢者の脳梗塞巣にはBINCsの集積が希薄となることから、骨髄からの単球動員を促進させて、急性期にBINCs前駆細胞を集積する必要があると考えてきた。そこで、骨髄活性化剤として、IL-3とGM-CSFを混合し、その皮下注射投与をtMCAOモデルに行なった。その結果、水迷路試験で学習記憶能力が高いレベルで改善を示し、回転棒試験で運動能の改善も確認した。梗塞による脳組織喪失体積も大きく減少していた。これらは、STAIR前臨床試験推奨宣言(Fisher et al. Stroke 2019)に従い、中間ポイントを複数設けた上で、3ヶ月後までの予後を追跡した。この長期追跡によっても、予後は大幅に改善していた。末梢血の分析では、IL-3とGM-CSF投与により白血球数が約2倍に増え、骨髄の刺激効果は明らかであると確認している。脳組織の定量的RT-PCRでIL-3とGM-CSFそれぞれの単剤投与よりも2剤混合投与の方が、NG2の発現が高く、逆に好ましくないマクロファージのマーカーであると考えられるCD200の発現は減少していた。これまでに、IL-3とGM-CSFの混合皮下注射投与がラット脳梗塞モデルの長期予後を大きく改善させることを示してきた。そのメカニズムとして、骨髄からのBINCs前駆細胞の動員増加のほか、脳梗塞巣コアでのNG2の発現増大、CD200の減少、起炎症性サイトカインIL-1b、TNFa、誘導型一酸化窒素合成酵素iNOSの発現抑制が考えられる。長期予後の改善効果が大きいため、これ以外のメカニズムの存在も十分考えられるが、これまでの結果を取りまとめ、論文作成に着手する予定である。

その結果、驚くべきことに、対照群の虚血辺縁部(ペナンブラ)ではマイクログリアにBcl-xL発現が見られてのに対し、IL-3とGM-CSF混合投与群では神経細胞にBcl-xLが発現し、マイクログリアでの発現は消失していた。これらの結果は、IL-3とGM-CSFが神経細胞のアポトーシスを抑制する結果、eat-me signalであるフォスファチジルセリンの神経細胞外部への露出が減少し、マイクログリアの活性化が抑制され、マイクログリアの貪食による神経細胞死の促進(phagoptosis)が抑制され、予後改善に至ったと結論した。人への臨床応用を見据え、副作用の分析を行う。赤血球・白血球・血小板・ヘモグロビンなど血算、肝機能、腎機能、電解質など生化学検査、動脈血ガス分析、体温、血圧など生理学的検査、体重変化、行動の変化、脳梗塞後の繁殖能、仔の異常の有無を検討し、大きな副作用がないことを調べる。繁殖能の検査は、(通常、脳梗塞ラットは繁殖能が極めて低い)生理食塩水投与の対照群と比較し、治療の有効性が観察できるかどうかの意味もある。平成30年度は特に、IL3とGM-CSF注射による末梢血白血球分画、特に単球分画の変化(骨髄からの動員増加の有無、動員された白血球のFACSによる分析)、及び骨髄像の変化を追究し、効果発現の中心が末梢作用か脳に対する作用かを決める。また、臨床研究としてIL3とGM-CSFのヒトへの投与を考えるとき、様々なハードルがある。その、検討を各方面と相談しながら開始する。
コンピュータ・エシックスの観点から見た高度技術社会における道徳観の展望

本研究の主な課題は次の3点にあった。(1)現代倫理学から見た化学技術観、(2)コンピュータ・エシックス資料の分析、(3)現行の倫理綱領の内容調査。本研究は、単年度の申請ではあるものの、過去4年間、共同研究を分担して(第5群第4班)、上記の課題を一貫して追及した。それゆえ、以下、平成3年度から6年度に至る研究概要を記すことにしたい。(研究成果は年度ごとの論文や発表として残された)平成3年度は、、現代倫理学から見たテクノロジー観の確認(1)とコンピュータ・エシックス資料の分析(2)という二つの具体的課題を追及した。平成4年度は、前年度の研究をいっそう精緻にすることが目指された。たとえば、(1)に関する研究は、H.ヨーナスの環境倫理や脳死臨調報告の分析というかたちで考察し、(2)の課題は、「非同期性(=非共時性)」をめぐるコミュニケーション・メディアの問題を検討することで追及した。この年度は、(3)の課題をも追及しつつ、さらに前年度の方針に技術論と身体論の観点を加えた研究方向を目指したが、とりわけ身体論的アプローチからは得るところが多かった。平成5年度も、前年度の方向を堅持して、技術と身体との関わりをとりわけ時間という視点からアプローチし直した。情報化と深い関係にある変容の徴候として時間性を無視しえなかったからであり、さらには時間の視点を離れた変容という事態が考えられれなかったからである。平成6年度の研究は、それまでの研究成果を第5群全体のテーマである「分化変容」という問題にどのように組み入れるかという課題のみに絞って行われた。「情報化にともなうモラルの変容」という枠組みで研究をまとめる方向を探ったが、現在それを論文のかたちにまとめる作業に入っている。以上、4年間の共同研究を支えていただいたことに感謝したい。
線虫におけるエンドトキシン様ショック誘発物質の分離

1.犬糸状虫成虫の虫体抽出液投与によるショック(成虫ショック)の誘発物質は,虫体全体に存在する耐熱性で高分子(分子量10,000以上)の非タンパク質である。また,成虫ショックの性格は,同じく耐熱性で高分子物質のリポ多糖(エンドトキシン)を原因とするエンドトキシンショックと類似している。しかし,成虫ショックの発症には,エンドトキシンショックの主要メディエータである腫瘍壊死因子(TNF)は関与していないことを,Wehi164細胞を用いたbioassay法により明らかにした。2.成虫ショック発症前および発症後の血漿中ヒスタミン濃度を蛍光法により測定し,ショックのメディエータとしてヒスタミンが関与していることを突き止めた。3.成虫ショックは寄生虫フリーのSPF犬にも発症すること,またウサギ受け身皮膚アナフィラキシ-反応により,ショック発症犬の血清には抗犬糸状虫IgE抗体を認めないことから,成虫ショックはIgE抗体非依存性に発症することが判明した。4.イヌ粘膜型肥満細胞を用いたin vitroでのヒスタミン遊離試験において,虫体抽出液が用量依存性にヒスタミンを遊離することを明らかにした。またこの細胞培養法によるin vitro実験系が,ショック誘発物質の分離・精製において検出系として利用できることが判明した。以上の結果から,虫体抽出液に存在するショック誘発物質は,肥満細胞をIgE抗体非依存性に脱顆粒させる物質であることが新たに明らかになった。