hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
歯科CAD/CAM技術に対応する光切断による歯列形状高速計測・解析システムの開発

この中でも、ソフトウェアの開発については、現在までの研究成果により、データの可視化技術等について十分な蓄積が得られている.したがって、本年はおもに光切断法による計測技術の開発と、その精度の検証が主な研究課題と考えられた.このため、実際には計測用に用いる6自由度特殊ステージの作製と、要素技術である光切断法について検討を行った。その結果、6自由度特殊ステージについては稼働する状態となり、光切断法については、光切断のみならず、クロスパターン投影や多値パターン投影など、より高度な手法についても、実際の歯列模型を用いて検討を加えることができた。次年度では、残る計測データの処理/解析方法の検討を行った後、1.システム全体の統合、2.実際の計測事例への応用、3.システムの検証、4.今後の課題の検討、などを行う予定である.特に、将来に向けての検討では、本技術を応用した口腔内直接計測技術(すなわち、歯科治療の際に、従来行っているような患者の口腔内の型を取らずにすむような方法)へ向けての可能性を探る予定である.本研究は、高密度CCDを使用したデジタルスチルカメラを応用し、光切断法による面形状一括計測システムの開発を目指すと共に、将来に向けての口腔内での直接形状計測システムに対する検討を行うことを目的としたものである。本年度では、1.計測データの処理/解析方法の検討、2.実際の計測事例への応用、3.システムの検証と今後の課題の検討、を行った.その結果,1.については,画像処理の段階で,不要なデータの除去に一部手作業による処理を残したものの,距離画像の撮影から画像の取り込み,アクティブなスレッショルドを用いて濃淡が変化しても確実に投影パターンを処理できる技術,光学系のセッティングによる画像のゆがみとそれに伴う誤差,などについて考察を加えることが出来た.2.については,上顎正常歯列の臼歯部を対象に,パターンの投影方向に対するカメラの視線方向のセッティングの影響,形状に依存する実際の計測可能範囲、模型の色や周囲環境の光の状況などについて検証し,咬合面形態のラフな形状であれば比較的容易に計測できることが確認された.しかし,支台歯模型など,精度が要求される部分においては、不十分であり,3.において、被計測物である歯列模型のサイズと被写界深度による画像のボケ,撮影方向の誤差やレンズ系に由来する画像のゆがみなどとともに、必要とされる精度を満たすための条件について整理することが出来た.将来、本技術を応用した口腔内直接計測(すなわち、歯科治療の際に、従来行っているような患者の口腔内の型を取らずにすむような方法)を行う可能性につては,これらの条件をいかに口腔内に持ち込めるサイズにまとめあげることがきるか否かがポイントであり,何らかのプレイクスルーとなる技術が必要であることがで示唆された.
高濃度二酸化炭素と窒素施肥が農耕地土壌有機物の化学特性や元素滞留に与える影響

大気中の炭酸ガス濃度の増加と窒素施肥が、土壌中の窒素・炭素化合物の化学的特性変化や代謝速度に与える影響を解析した。CO2濃度が高まると、土壌中の有機窒素化合物濃度が高まる。また窒素施肥量を高めると、さらに有機窒素化合物濃度が高まるため、土壌の肥沃度が高くなり、農業生産に有利になることが明らかとなった。土壌腐植物質の主成分であるフェノール酸の13C存在割合を調べたところ、エーテル結合フェノール酸は、エステル結合フェノール酸より大気炭素の取り込み速度が速いことが明らかとなった。また高濃度CO2ほどフェノール酸の炭素回転率が高くなる傾向もはっきり確認された。施肥窒素の影響はほとんど受けなかった。本年度は、本課題の2つ目の課題であるSwiss FACE土壌(スイスの草地土壌においてマメ科あるいは非マメ科草種を栽培し、重炭素ラベル二酸化炭素および2水準の重窒素肥料を10年間連続施用した土壌)中の腐植物質、特にフェノール酸の分画を行い、最終的にGC-IRMS分析を行い、各フェノール酸の13C同位体濃度を測定することができた。フェノール酸については、エステル結合、エーテル結合、水抽出、EDTA抽出の4種類の抽出法を用いて、特性の異なるフェノール酸の抽出を行った。サンプル調製やガスクロマトグラフィーの測定条件の検討に非常な時間を要したが、最終的に存在が予想される主要フェノール酸物質を精度高く測定することができた。しかしながら水抽出については、色々試みたがフェノール酸ピークを確認することができず、草地土壌である本サンプルではごく微量しか含まれないことが明らかとなった。GC-IRMSによる分析からは非常に多くの数値データが得られたため、今後これらのデータからデータマイニングする必要がある。また次年度、システムダイナミクス理論による炭素動態解析を行うための基礎データを揃えることができた。初年度に行った実験のまとめは、カリフォルニア大学デービス校のVan Kessel教授らと連絡をとりながら行っており、Soil Biology and Biochemistryに投稿することが決定し、近く投稿する予定である。安定同位体炭素(13C)でラベルした高濃度二酸化炭素を連続暴露し、安定同位体窒素15Nを10年間連続施用した圃場において牧草を栽培し、高濃度二酸化炭素状態と施肥が土壌炭素動態に与える影響について研究を行った。二酸化炭素濃度が10年間上昇しても土壌中の炭素含量は有意に変化しなかった。サンプル土壌中の各種窒素化合物中の窒素量が全窒素量に占める割合は、高い方から順にアミノ酸、アミド、非加水分解物、アミノ糖、硝酸、アンモニアの順になった。無機態窒素と易分解性窒素化合物を合わせた割合が8割程度を占め、高いことが示された。高濃度CO2条件下において、暴露されたCO2は土壌に蓄積され、非加水分解性有機化合物画分へ優先的に蓄積する傾向が見られた。窒素施用効果については、窒素施肥量を高めるほど、肥料窒素濃度が高まるが、その割合は、高濃度CO2条件の方が高かった。アミノ酸、アミド、アミノ糖については、高濃度CO2と高窒素の交互作用も見られた。エステル結合フェノール酸およびエーテル結合フェノール酸については、複数のピークが観察された。最も高いピークはバニリン酸であった。他の主要な成分として、バニリン、シリンガアルデヒド、4-ヒドロキシベンズアルデヒド、アセトシリンゴン、シリング酸、フェルラ酸、フェノールが同定された。抽出法により成分比率の違いがやや認められた。エーテル結合フェノール酸は、エステル結合フェノール酸よりδ13Cが低く、大気炭素の取り込み速度が速いことが明らかとなった。しかしながら、施肥窒素の影響はほとんど受けないと言える。本研究は、地球温暖化に伴う土壌中の有機物分解速度の増加、大気炭酸ガス濃度の増加、土壌生物活性の変化、さらに施肥や作物種等が、土壌中の窒素・炭素化合物の化学的特性変化や代謝回転率、炭素・窒素の元素蓄積に及ぼす複雑な影響を解析することを目的としている。具体的には、安定同位体元素(13C,15N)を圃場に10年間施用した非常に貴重な土壌サンプルを用いて、土壌中の各種炭素・窒素化合物を分画し、精密測定や安定同位体による元素動態モデル解析を行うものであり、カリフォルニア大学デービス校と連携しながら研究を国際的に遂行するものである。平成23年度は、予備試験としてまず、土壌炭素・窒素化合物の分画、13C、15N安定同位体分析サンプル調製法の条件検討を行い、十分な精度が得られることが判明し、実験方法の確立に至った。予定以上に研究が進捗したことから、本年度から実際のサンプルを用いて、まずSwiss FACE土壌中の炭素・窒素化合物の分画を行った。

その結果、多くの情報が得られたが、主要成果は次の通りである。(1)二酸化炭素濃度が10年間上昇しても土壌中の炭素含量は有意に変化しなかった。(2)二酸化炭素濃度が高い方が土壌中の炭素代謝(回転率)が高くなった。(3)二酸化炭素は非加水分解性有機化合物画分に優先的に蓄積する傾向が見られた。(4)窒素肥料施用量を増加すると、土壌中への炭素蓄積が減少した。(5)二酸化炭素増加により硝酸、アンモニア、アミノ酸画分が増加した。これらは過去に報告されていない研究成果である。本研究成果についてカリフォルニア大学デービス校のvan Kessel教授らと相談した結果、Soil Biology and Biochemistryに投稿することになった。当初の予定通りに1年目はSwiss FACE土壌の易分解性有機物質の分画が完了し、2年目に当たる今年もフェノール酸分析とGC-IRMSによる13C測定が完了し、実験が予定通り推進された。しかしながら、GC-IRMS分析では非常に多くの数値データが得られたため、データマイニングは次年度に持ち越された。本年度は、測定法の確立のため、予備実験を中心に行う予定であったが、順調に土壌中の窒素化合物の分画方法や15N分析試料作成技術の確立が行えた。そして回収率などを入念にチェックし、十分な精度を保ちながら測定が行えることを確認できたため、Swill FACE土壌を用いた本実験を行うことができた。データの解釈については、カリフォルニア大学デービス校のvan Kessel教授とディスカッションを行い、本研究から本研究領域において十分な価値を持つデータが得られたことを確認した。そしてSoil Biology and Biochemistryに投稿することになった。今年度までに、必要となる基本データは全て測定することができたので、今後はこれらのデータを用いたデータマイニングを行うとともに、システムダイナミクス理論を元にしたモデリングを行い、炭素・窒素の回転率など詳細な動態解明を行う。また、関係する分野の学会に出席して、最新研究について知見を深めると共に、学術雑誌に投稿を行う。さらに、土壌中の炭素や窒素動態に大きく影響を与える土壌微生物の機能について検証を深めるために微生物学的な補足検証を行う。今後は、今年度で得られたデータを精査して論文を執筆すると共に、残された課題である土壌腐植中のフェノール化合物に対する高濃度二酸化炭素や異なる窒素施肥量の影響について集中して研究を行う。さらに日本の作物栽培土壌を研究対象に加えることにより研究を拡充し、本年度の研究成果との対比を試みる。また、土壌中の炭素、窒素の動態について、シミュレーションモデルを作成し、高濃度二酸化炭素が土壌有機態窒素化合物に含まれる炭素と窒素が長期的にどのように変化しうるのかについて解析を行う。カリフォルニア大学デービス校のvan Kessel教授らと研究データについてディスカッションを行う。また国内外の関連学会に出席して、本研究分野の最新情報を入手して、研究の深化を図る。次年度は、最終年度であるため、データのとりまとめが主体となる。
インプラント治療におけるiPS細胞を用いた再生骨の長期安全性に関する研究

京都大学再生医科学研究所の中村らはビーグル犬の胎児の皮膚の細胞に4つの遺伝子(Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc)と4つの化合物を加えてiPS細胞を作製することに世界で初めて成功している。そこで,中村らの方法に従ってビーグル犬のiPS細胞の樹立を試みたが、安定したiPS細胞の樹立結果が得えられていない.樹立後の細胞による骨再生方法を検討するため,スフェロイド化した骨芽細胞の移植による骨再生方法を試みた.その結果,ラットの頭蓋骨の骨欠損モデルにおいてスフェロイド化した骨芽細胞の移植によって骨の再生スピードが有意に早く,骨量も多いことが確認された.臨床で使用されているインプラントに類似した形態で,犬下顎骨への埋入を考慮した形態を検討した結果,直径2.5 mm長さ8 mmで,スレッドタイプとシリンダータイプの両方を試作することとした.また,臨床で使用されているインプラントは表面粗さ2μm程度の「中糖度の粗さ」に分類されるものが良好な臨床成績が報告されているため,実験用インプラントにも適度な粗さを与える方法が検討された.チタン製インプラントにブラスト処理と酸エッチング処理を行い,シリコン印象材にて陰型を作成して,樹脂を注入しプラスチックインプラントを完成した.この表面にスパッタリング法によってチタン薄膜をコーティングしたところ,約100 nmのチタン薄膜が電子顕微鏡で確認され,表面性状もオリジナルのチタンインプラントの性状を忠実に複製していた.この粗面の実験用インプラントをラット脛骨に埋入して組織学的に評価したところ骨とチタン薄膜の間に直接の接触が確認された.また,インプラント周囲の骨の密度を評価したところ,滑面のインプラントと比較して,よりインプラント表面に近い部で骨密度が高くなることが観察された.研究分担者である京都大学再生医科学研究所の中村らはビーグル犬の胎児の皮膚の細胞に4つの遺伝子(Oct3/4, Sox2, K1f4, c-Myc)と4つの化合物を加えてiPS細胞を作成することに世界で初めて成功している。そこで、中村らの方法に従ってビーグル犬のiPS細胞の樹立を試みたが、骨芽細胞への分化が困難で骨再生の実験に使用できる状態ではない。そこで、iPS細胞の骨芽細胞への分化が成功した状態を想定して、スフェロイド化した骨芽再防音移植による骨再生方法を試みた。その結果、ラットの頭蓋骨の骨欠損モデルにおいてスフェロイド化した骨芽細胞の移植によって骨の再生スピードが有意に速く、骨量も多きことが確認された。このことはiPS細胞から分化させた骨芽細胞にも応用可能であり、iPS細胞を使った骨再生の安定性に寄与できるた考える。現在、スフェロイド化による骨再生の向上に関する機序について、autophagyを中心に解析中である。また、効率的なiPS細胞の分化誘導と骨再生療法への応用を目的に、Autophagy阻害剤(3MA)を用いてマウスiPS細胞の骨分化誘導へのAutophagyの影響を検証している。その結果、Autophagyを抑制することで、マウスiPS細胞は、未分化を維持する傾向にあり、骨分化誘導を行うと、骨分化誘導を促進する傾向にあることが示唆された。よって、Autophagyは、多分化能の促進に関与する可能性があり、特異的な分化誘導にはAutophagyによって引き起こされた多分化能を抑制する必要があるのではないかと考えられる。この結果はビーグル犬から樹立したiPS細胞にも応用が可能であると考えられる。京都大学再生医学研究所の中村らはビーグル犬の胎児の皮膚の細胞に4つの遺伝子(Oct3/4, Sox2, Kif4,, c-Myc)と4つの化合物を加えてiPS細胞を樹立することに世界で初めて成功したと報告している。そこでこの方法に準じてビーグル犬のiPS細胞の樹立を試みているが、安定した樹立が未だ困難であり、骨芽細胞への効率的な分化が達成できないため犬顎骨の再生に使用することが難しい状況である。そこでiPS細胞の骨が細胞への分化が達成した状況を想定して、効率的な細胞による骨再生方法を検討している。その一つとしてスフェロイド化した骨芽細胞をマトリクスと一緒に移植する方法を検討した。ラット頭蓋骨の骨欠損モデルにスフェロイド化した骨芽細胞を移植し骨の再生を観察したところ骨再生のスピードが速く、再生骨の骨量が多いことが確認された。このことはiPS細胞から分化させた骨芽細胞に応用が可能であると考えられ、スフェロイド化自体が骨芽細胞への分化を促す可能性についても検討する必要がある。また、効率的なiPS細胞の骨芽細胞への分化誘導と骨再生療法への応用を目的としてAutophagyの関与について検討してきた。Autophagy阻害剤(3MA)うぃ用いてマウスiPS細胞の骨分化誘導への影響を検証した。その結果、Autophagyを抑制することでマウスiPS細胞は未分化を維持する傾向があり、Autophagyは多分化能の促進に関与する可能性があり、特異的な分化誘導にはAutophagyによってき起こされた多分化能を抑制する必要があると考えられた。これらの結果をふまえ、iPS細胞から分化した骨芽細胞を使用して骨再生を行い、ラットにおける長期的な安全性について検討している。

そこでこの方法に準じてビーグル犬のiPS細胞の樹立を試みているが、安定した樹立が未だ困難であり、骨芽細胞への効率的な分化が達成できないため犬顎骨の再生に使用することが難しいからである。その結果,グループ1の通常培養では,ALP染色にて、Control群と比較して、3MA群の方がコロニー形態を保ち、ALP陽性細胞が多く見られる傾向にあり、WB法では、3MA群においてLC3-IIの発現が減少したのに対し、Nanogの発現が増加した。グループ2の骨分化誘導では,qRT-PCRにて、Control群と比較して3MA群の方がRunx2、Osterixの増加を認めた。また、ICCにて3MA群の方が、Osterix陽性細胞が多く見られる傾向にあった。AutophagyはiPS細胞の性状維持に関与することが示唆された。3MAを用いてAutophagyを抑制すると、通常培養下では、未分化を維持する傾向にあり、骨分化誘導下では、骨分化誘導を促進する傾向にあることが示唆された。研究分担者である京都大学再生医科学研究所の中村らはビーグル犬の胎児の皮膚の細胞に4つの遺伝子(Oct3/4, Sox2, K1f4, c-Myc)と4つの化合物を加えてiPS細胞を作成することに世界で初めて成功している。そこで、中村らの方法に従ってビーグル犬のiPS細胞の樹立を試みたが、骨芽細胞への分化が困難で骨再生の実験に使用できる状態ではないからである。小動物と比較して犬を使用した実験は長期間の観察が可能となるため、ビーグル犬の使用は骨再生の長期的な安全性の評価に有効であると考えられた。しかし、ビーグル犬からの安定したiPS細胞の樹立が今のところ困難である。そこでビーグル犬からのiPS細胞も継続して行うが、ラットモデルを主体とした実験を行い、できるだけ長期的な安全性の評価を行う予定である。今後はラットのiPS細胞を骨芽細胞へ分化させ、スフェロイド化したものをラット頭蓋骨欠損モデルに移植し、骨再生状態の観察と長期的な安全性の評価を行う。歯科インプラント小動物と比較して犬を使用した実験は長期間の観察が可能になるため、ビーグル犬のiPS細胞の使用は、骨再生の長期的な安全性の評価に有効であると考えられる。したがって、引き続きビーグル犬のiPS細胞の樹立を試みる。しかし、細胞の樹立が難しい場合を考慮して、すでに樹立方法が確立しているラットモデルによる実験を開始している。京都大学再生医科学研究所の中村らはビーグル犬の胎児の皮膚の細胞に4つの遺伝子(Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc)と4つの化合物を加えてiPS細胞を作製することに世界で初めて成功している。そこで,中村らの方法に従ってビーグル犬のiPS細胞の樹立を試みたが、安定したiPS細胞の樹立結果が得えられていないためである.予定していた海外学会での報告を国内の学会で行ったので旅費等が予定より圧縮された。また、予定していたiPS細胞から分化させた骨芽細胞による安全性の動物実験を次年度に行うため、次年度使用額が生じた。
PPARγ刺激薬による新規膵臓がん治療法の開発

ヒト膵臓がん細胞に対して、トログリタゾンの作用機序を検討したところ、クロマチンの凝集、Caspase 3活性の上昇、Bax/Bcl比の増加が認められ、Caspase依存的なアポトーシスが示唆された。またこの経路の一部はJNK経路が関与していた。さらに、トログリタゾン処置により、DNA修復酵素に関与するERCC1の発現量の低下を認められた。白金製剤との併用処置にて、相乗効果が認められたが、ERCC1に変動は認められず、他の機序による相乗効果であることが考えられた。さらに、担がんマウスモデルを用いた検討において、トログリタゾン経口投与において、有意な抗腫瘍効果も認められた。膵臓がんは、最も予後の悪いがんの一つとして知られている。その原因として早期発見が困難であること、化学療法が限られていることが考えられる。手術不能例ではゲムシタビンを中心とした化学療法が行われているが、その効果は十分ではなく、新規化学療法の探索が急務の課題である。そこで、腎臓がんで抗腫瘍効果を示したPPARγ刺激薬ならびに内因性リガンドに着目し、その抗腫瘍効果ならびにその機序の解明に着手した。膵臓がん細胞株Panc-1ならびにMIA Paca-2に対する内因性リガンド15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2の抗腫瘍効果を検討したところ、濃度依存的に細胞増殖阻害効果を示した。さらに、PPARγ阻害薬であるGW9662共存下では、Panc-1細胞では生存率の有為な回復が認められた。一方、MIA Paca-2では回復は認められなかった。したがって、Panc-1細胞での抗腫瘍効果は、少なくとも一部でPPARγ依存的であることが示唆された。近年、DNA修復酵素ERCC1が高発現している膵臓がんでは予後が悪く、化学療法の効果が低下していることが示唆されている。そこで、Panc-1細胞ならびにMIA Paca-2細胞において、PPARγ刺激薬であるトログリタゾンのERCC1発現に及ぼす影響をWestern blotting法で検討したところ、その発現量は有意に低下した。そこで、MIA Paca-2細胞を背部に移植したヌードマウスにおいて、トログリタゾンを5週間経口投与した後の腫瘍を摘出し、ERCC1発現量を検討したが、ビークル投与群と変動はなかった。したがって、トログリタゾンは、予後を改善する可能性は低いことが示唆された。平成27年度では、PPARγの内因性リガンドである15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2の抗腫瘍効果ならびにその機序を明らかにする予定であった。一部、PPARγ依存性であることを示すことができた。その後、さらなる作用機序を検討する予定であったが、先にERCC1の関与について検討を行った。In vitroでは関与が示唆されたが、in vivoではその関与が低いことを示すことができた。そこで、腎臓がんで抗腫瘍効果を示したPPARγ刺激薬着目し、その抗腫瘍効果ならびにその機序の解明を目的として検討した。膵臓がん細胞株Panc-1ならびにMIA Paca-2に対して濃度依存的な細胞増殖阻害効果を示したtroglitazoneを用い、その作用機序の検討を行った。PPARγ阻害薬(GW9662)共存下では、生存率の回復は認められなかった。また、troglitazone処置によりクロマチン凝集細胞の増加が認められたことから、PPARγ非依存的なアポトーシスの誘導が示唆された。さらに、MIA Paca-2細胞ではCaspase-3の活性上昇やBax/Bcl比の上昇が認められ、カスパーゼ依存的なアポトーシスが示唆された。さらに詳細なシグナル伝達の寄与を検討したところ、MIA Paca-2細胞においては、JNK経路の関与が示唆された。また、膵臓がんの予後予測因子として知られているERCC 1の関与を検討したところ、いずれの細胞においても発現低下が認められ、何らかの関与が考えられた。次いで、MIA Paca-2細胞をヌードマウスに移植し、troglitazone経口投与の影響を検討した。その結果、顕著な副作用や体重減少が認められない条件において、腫瘍容積の増加を有意に低下させることが明らかとなり、in vivoでも抗腫瘍効果を確認することができた。平成28年度では、PPARγ刺激薬であるtroglitazoneの作用機序の解明を行った。MIA Paca-2細胞においては、カスパーゼ依存的なアポトーシスの誘導を明らかにし、そこにJNK経路の関与を示すことができた。さらに、in vivoにおける抗腫瘍効果を示すことができた。膵臓がんは早期発見が困難であり、最も予後の悪いがんの一つとして知られている。また、膵臓がんに対する薬物療法は十分ではなく、新たな薬物療法の探索が急務の課題である。そこで、本課題では膵臓がんに対するPPARγ刺激薬の抗腫瘍効果を明らかにし、新たな膵臓がん治療法への応用を目的とした。前年度までにPPARγ刺激薬であるtroglitazoneの濃度依存的な抗腫瘍効果を明らかにした。その作用機序の一部は、JNK経路依存的なアポトーシスであった。

また、担がんマウスを用いたin vivoにおける検討でも抗腫瘍効果を認めた。さらに、DNA修復酵素で膵臓がんの予後に影響することが知られているERCC1発現低下も認めた。ERCC1は白金製剤の感受性に関わることが知られている。そこで今年度は、ERCC1の関与を詳細に検討する目的で、膵臓がんで汎用されているオキサリプラチンならびに同じ白金製剤であるシスプラチンとの併用効果について検討した。その結果、Combination Indexは、troglitazone 60 μMで0.63-0.65を示し、オキサリプラチンならびにシスプラチンと相乗効果が認められた。しかし、併用処置してもERCC1の発現量は変動せず、他の機序による相乗効果と考えられた。また併せてオートファジーの指標となるLC-3発現量を検討したところ、troglitazone単独で増加したが、併用処置ではさらなる増大は認められなかった。したがって、troglitazoneの細胞死の一部にオートファジーが関与すること、相乗効果には、ERCC1やオートファジー以外の機序が関与することが考えられた。ヒト膵臓がん細胞に対して、トログリタゾンの作用機序を検討したところ、クロマチンの凝集、Caspase 3活性の上昇、Bax/Bcl比の増加が認められ、Caspase依存的なアポトーシスが示唆された。またこの経路の一部はJNK経路が関与していた。さらに、トログリタゾン処置により、DNA修復酵素に関与するERCC1の発現量の低下を認められた。白金製剤との併用処置にて、相乗効果が認められたが、ERCC1に変動は認められず、他の機序による相乗効果であることが考えられた。さらに、担がんマウスモデルを用いた検討において、トログリタゾン経口投与において、有意な抗腫瘍効果も認められた。平成28年度では、さらに詳細にトログリタゾンおよび15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2の作用機序を明らかにする予定である。さらに、転移・浸潤能への検討に着手する予定であり、すでにInvasion AssayおよびCell Migration Assayの予備検討を行っている。平成29年度では、drug repositioningの観点から、troglitazoneの抗腫瘍効果をさらに高める方法を探索する。すなわち、ERCC 1の低下が認められることから、ERCC 1が効果に関与するシスプラチン等の併用効果を検討することにより、膵臓がんの新たな治療法の開発に目指す予定である。医療薬学残金が少額のため、研究に必要な試薬等の購入ができなかった。今年度の交付額と合わせて、細胞培養用培地、各種シグナル伝達阻害薬等の購入に使用する。
平安朝物語の後宮制度・後宮文化の研究

本研究の成果は以下の三点である。第一に、平安京内裏の建物である麗景殿が歴史上でどのように使用されていたかを調査し、『源氏物語』の麗景殿女御(花散里の姉)が平安時代の麗景殿に居住した皇妃たちをモデルとして造型されたことを明らかにした。第二に、皇妃の姉妹たちがどのような時に内裏に滞在するかを史料の調査によって明らかにし、そのことを手掛かりにして『源氏物語』の花散里の内裏滞在のあり方を考察した。第三に、平安時代には当代の帝の母でも妻でもない皇后は内裏に入ることができないという事実を見出し、源氏物語の朱雀帝の治世下で藤壺中宮が内裏外に居住した理由を明らかにした。本年度の最大の実績としては、論文「〈成立〉からみた続篇の世界ー描かれざる過去の実現としての紅梅・竹河巻ー」が挙げられる。『源氏物語』第三部の初めに位置する紅梅・竹河巻は、紅梅大納言家・髭黒大臣家の姫君たちの天皇・上皇との結婚問題を描いた巻であるが、これらの巻は第三部の他の巻から内容が遊離しており、登場人物たちの官職が他の巻と矛盾するという大きな問題も抱え、成立論的観点から紫式部とは異なる別人の作によるとの説も提出されている。申請者は、これに対して、紅梅巻に詳しく描かれる「紅梅の御方」の名が後の宇治十帖の宿木巻にも記されること、竹河巻が前提としてなければ第三部の政治的状況が読者に分かりづらいことなどから、両巻が宇治十帖の前提として描かれることを指摘し、また官職の問題についても、他の巻との矛盾を生じさせてでも、個々の場面の必然性に応じて、新たな設定を付して登場人物を据え直す物語の方法によるものであることを説いた。さらに紅梅巻・竹河巻は、かつて第一部で結婚問題が描かれた真木柱・玉鬘という二人の女君を再登場させるのだが、真木柱や玉鬘にかつて起こりえた出来事をその姫君たちの身の上に代わりに実現させるという意義を持った巻であることも論じた。この他、『源氏物語』の女君の一人、花散里の内裏住みについて考える論「皇妃の姉妹の内裏滞在ー花散里の場合ー」がある。花散里は、姉の麗景殿女御(桐壺帝の皇妃)に従って内裏に滞在していたことがあったのだが、その実態がどのようなものであったかー一時的な滞在かもしくは常駐していたかについて、史上の皇妃の姉妹の参内例と比較し、考察した。当初の計画では、『源氏物語』の紅梅巻・竹河巻など続編に見られる姫君たちの入内決定・入内断念の事例について考え、他の物語作品や史上の例とも比較しつつ、『源氏物語』ならではの入内決定・断念の論理について検討する予定であった。しかし、途中で関心がそれ、紅梅巻・竹河巻の成立過程や正編からのつながりを問う論へと変化してしまった。また、『源氏物語』に登場する後宮の建物の中で、先行研究にあまり取り扱われてこなかった二殿舎ー花散里の姉女御の使用した麗景殿、朧月夜尚侍の使用した登花殿について、史実における両殿舎の使用主の傾向と比較しつつ考察を行う予定でもあった。『源氏物語』の麗景殿に関する研究については、調査と考察まで終えているが、論文化までに至らず、登花殿についても具体的に研究を進めることができなかったのが残念であった。その一方で、麗景殿について調査を進める過程で、当初の予定になかった皇妃の姉妹の内裏居住例を見出し、論じることができたのは、大きな収穫であった。本年度最大の実績としては、『源氏物語煌めくことばの世界II』所収の論文「花散る里の女御ー麗景殿のイメージをめぐってー」が挙げられる。平安京内裏の後宮の建物の一つ、麗景殿は、『源氏物語』では光源氏の夫人、花散里の姉女御(桐壺帝の麗景殿女御)の住まいであった。しかしこの殿舎に関しては、先行研究ではあまり取り扱われることはなく、殿舎の特徴など明らかにされていない部分も多かった。本論文では、史上の麗景殿の居住者の調査から、麗景殿が後見を失ったり寵愛を失ったりして境遇の変化を経験した不安定な身の上の皇妃の住まいとなることが多かったこと、そのことが親のみならず夫の桐壺帝を失って寄る辺ない身の上になっていた花散里の姉女御の住まいを麗景殿とする決め手になったのではないかと考える。さらに具体的には、史上の村上天皇の庇護を受けて父の死後に入内した麗景殿女御荘子女王を花散里の姉女御の准拠として指摘した。この他、日本文学協会研究発表会(於新潟大学)では「『源氏物語』朱雀朝の藤壺中宮の里住みー史上の東宮母と比較してー」の題目で口頭発表した。『源氏物語』朱雀朝における藤壺中宮は、桐壺院と共に後院で生活しており、夫院の死後も里の三条宮に移って、内裏に居住する息子の東宮とは離れ離れに暮らしていたが、その原因として、当代の帝と家族関係にない中宮は内裏に住むことはもちろん入ることも許されなかったという史上の慣例があったことを指摘した。

その一方、物語の賢木巻で、朱雀朝におけるただ一度の藤壺中宮の参内場面が描かれているのが問題になるわけだが、それについては、物語は出家前の藤壺中宮に我が子の東宮に最後の別れを告げさせるために、史実に反して当代と無関係の中宮の参内場面を描いたのだと解した。本研究の成果は以下の三点である。第一に、平安京内裏の建物である麗景殿が歴史上でどのように使用されていたかを調査し、『源氏物語』の麗景殿女御(花散里の姉)が平安時代の麗景殿に居住した皇妃たちをモデルとして造型されたことを明らかにした。第二に、皇妃の姉妹たちがどのような時に内裏に滞在するかを史料の調査によって明らかにし、そのことを手掛かりにして『源氏物語』の花散里の内裏滞在のあり方を考察した。第三に、平安時代には当代の帝の母でも妻でもない皇后は内裏に入ることができないという事実を見出し、源氏物語の朱雀帝の治世下で藤壺中宮が内裏外に居住した理由を明らかにした。今後も引き続き、皇妃や後宮殿舎に関わる資料を国史・古記録などから網羅的に見つけ出し、その基礎研究を土台として、『宇津保物語』『源氏物語』を中心とした平安朝物語の皇妃・殿舎に関する設定を検討し、個々の物語における特徴をとらえ、その背後に隠れる作者の意図を明らかにすることを目指す。平成29年度は、まず、考察まで終えている『源氏物語』の麗景殿に関する論を論文化する予定である。次に、『源氏物語』の賢木巻で藤壺中宮が東宮の母后として後宮に出入りすることに注目し、天皇や東宮の母后は史上においてどの程度後宮への出入りが可能だったのか、参内は無制限に許されたのか、といったことについて考える。天皇の母后については天皇との内裏での同居が指摘されているが、東宮の母后について触れた論はあまりなく、不明な点が多いので、これを調査して明らかにし、物語の解釈につなげたい。また、平安朝物語に見られる皇族女性の入内の設定についても扱う。先行研究では、皇族女性の入内の理由について、皇位継承の正当化のために帝が先の帝の娘を娶るのだ、と説明されることが多いが、申請者は、その論理を物語にまで適用してよいのか、いささか疑念を抱いている。むしろ皇族女性の入内については、皇族の庇護というゆるやかな論理で読み解くことができるのではないか。『源氏物語』を始めとする物語の皇族女性入内の事例について一つ一つ取り上げ、考えていく。29年度が最終年度であるため、記入しない。中古文学29年度が最終年度であるため、記入しない。
憲法秩序への習律導入に関する理論的考察

本研究は、主にイギリス憲法学における習律論や政治的憲法論を考察することにより、わが国制における習律の理論的根拠を解明するための手がかりを得るものである。第一に、わが国制にイギリスの伝統的習律論を採用する素地があるのか否かを考察する際の新たな視角を獲得した。第二に、J.A.G Griffithの政治的憲法論との対話を重ねれば、憲法典の存在が習律の否定に直結するという主張に対して何らかの応答をすることができるのではないかという示唆を得た。本研究は、1わが国制における習律の理論的根拠を探るとともに、2習律の適用範囲を画することを目的とするが、今年度は昨年度と同様1に焦点をあてた。1の考察にあたっては、J. A. G. Griffithの政治的憲法論(以下「政治的憲法論」と略称する。)との対話が有効だが、その内実は容易に把握できるものではない。そこで今年度は、Griffith以外の論者の政治的憲法論を簡単に整理するとともに、Griffith理論の諸解釈を重点的に検討することで、「政治的憲法論」との対話の前提となる条件を整えた。まず、諸解釈によれば、1の解明にあたり「政治的憲法論」に依拠しても必ずしも不適切ではないということが示唆された。第一に、Griffithの政治的憲法は「規範的」概念である。第二に、「政治的憲法論」は、裁判所による公的決定を一律には否定しないから、法律以外の規範形式の意義を一律に否定するものではない。第三に、「対立の不可避性」を「政治的憲法論」の核心とする見解が「政治」を対立の「操縦」と捉え操縦を可能にする「継続性」も政治に含まれるとしており、政治にも秩序形成の萌芽はある。次に、「政治的憲法論」に依拠すれば1を解明しうるということが示唆された。第一に、諸解釈によれば、「政治的憲法論」は「理論に対する実践の優位」を説く点で、対象への接し方を問題とする。それは、最終的に国制の単なる記述を超えてその直観までも要求するかについては解釈が分かれるものの、抽象的原理を介せず出来事を記述し或いは行為の諸伝統の暗示を探究することを要求する。実践の優位は、成文の文書の意義に変更を迫りうると考えられる。第二に、かかる実践の優位を支えるものについては、解釈が分かれている。Griffithという人物特有の反権威主義・悲観主義に求める見解もあれば、反権威主義の由来を対立の不可避性と捉え対立に求める見解もある。1本研究は、わが国のConstitutionが憲法のほかにそれから独立した規範カテゴリとして習律を認める見解を採用するものであるのかを考察することを目的とするものであるが、平成24年度において得られた知見は、大きく分けて次の二点に集約できる。2まず、習律の理論的根拠を考察するための新たな視座を得ることができた。すなわち、イギリスで近時唱えられている「政治的憲法論」の背後にある思想に着眼すれば、問いの考察が一定程度進展するということが明らかになった。開拓者J. A. G. Griffithの説く政治的憲法論の基本構造に目を向けると、その特徴は以下の三つである。第一に、政治的憲法論は、イギリス公法理論上、「機能主義」という流れに位置づけられるものである。第二に、政府に対する批判を過度に抑制することのない「開かれた政府」を実現しようとする構想を抱くものである。第三に、政治的憲法論の根底にはフランス「実証主義」の思想が横たわっており、政治的憲法論は、憲法学・憲法理論に形而上学的思弁を持ち込むことに対して否定的・懐疑的である。これらの特徴からは、Griffithの政治的憲法論が1裁判所によって形成された憲法ではなく習律を重視するものであること、2その姿勢の背後には実証主義という思想が横たわっていることを導出できるように思われ、この点は習律の理論的根拠を考察する上で非常に有意義である。3次に、近時の政治的憲法論の動向にも関心を払い、それが憲法規範の法典化についてどのような姿勢をとるものであるのかについても、新たな知見を得ることができた。特にグラスゴー大学のAdam Tomkins教授と意見交換を行い、Tomkins教授の重視する大臣の連帯・個別責任原理の性質はいかなるものか、及びそうした原理を法典化することについてどう考えるのかについて知ることができた。1平成24年度は、憲政における野党の位置づけを探ることによって習律の適用領域・具体的規範内容を検討し、さらに、習律の理論的根拠を問うべく、わが国のConstitutionに多元論を採用する余地があるのか否かを考察することを目標としていた。2しかし、前者の検討はほとんどなされておらず、平成25年度までに持ち越しとなり、今後の検討に期したいと考えている。それに対して、後者の考察については一定の進展を見せている。

当初の計画では、多元論を支えていたのが「法的主権と政治的主権を区別する」という考え方であったところから、わが国のConstitutionが法的主権と政治的主権の区別を受容しうるものか否かという点を重点的に検討していく予定であった。「政治的憲法」と「法的憲法」の区分に注目したのもそのためであったが、そこで当初問題提起していたのは、その区分が法的主権と政治的主権の区別と対応関係にあるか否かということであった。この点に関しては、両者は、必ずしも対応関係にあるものではないということが鮮明になりつつあり(前記のAdam Tomkins教授とのグラスゴー大学における意見交換に基づく)、習律の理論的根拠を問うという目的に照らして、どのように政治的憲法論を扱っていけばよいかについて、別の視座を得ることができるに至った。すなわち、J. A. G. Griffithの説いた政治的憲法論の底流に一貫してある思想が、問題を考える際の手がかりとなるのではないかという実感を得ることができたのである。3そのようなわけで、習律の適用領域・具体的規範内容についての検討はなされておらず、その意味でやや研究の歩みが遅れているという憾みがないではないが、習律の理論的根拠を問うという目的に照らして適切な問題設定・視座を得ることができたという意味で、本研究はおおむね順調に進展しているといえる。1平成25年度では、以下の三つの観点から、わが国のConstitutionにおける習律の理論的根拠を探っていく。2第一に、「日本国憲法」という憲法典の存在は習律の存在を否定するものではないかという疑念に対する応答を試みる。この問いに取り組むに当たり、平成24年度において政治的憲法論を分析することで得られた視座を最大限に活用し、憲法典の存在が直ちには習律の存在の否定にはつながらないということを示唆することにしたい。とりわけ、政治的憲法論の背景にある「機能主義」ーこれはフランス実証主義の多大な影響を受けているーという思潮を綿密に分析すれば、この点をより深く見定めることができるのではないかと推測している。3第二に、イギリス多元論を支えている法的主権と政治的主権の区別を、わが国のConstitutionが採用するものであるか否かについて検討を加える。まず、わが国の憲法論のいかなる領域を渉猟していくべきかその指針を獲得するため、従来のイギリス憲法学説が法的主権と政治的主権の区別についてどのような議論を展開し、主権論がどのような争点において援用されてきたのかを整理するとともに、イギリス憲法学説における習律の適用範囲・具体的規範内容をみていくことにする。次に、イギリス憲法学説のこのような整理を踏まえて、わが国の判例法及び憲法学説を渉猟し、法的主権と政治的主権の区別を採用する、あるいはそこまではいかなくとも採用しうる萌芽がみられるのではないか、という主張を試みる予定である。4第三に、習律の実効性の担保を究明する。多元論によれば、習律は裁判所によって強行されない規範であるから、習律には裁判所のような権威的裁定者による裁定もなければ義務的な力も存在していない。そのため習律の実効性の担保を明らかにしないかぎりは、習律の理論的根拠を説いても十分な説得力を持たないと考えるからである。1平成25年度においては、以下のように研究費を使用する予定である。2第一に、政治的憲法論の検討を中心とする以上、まず、それに関連する文献が必要となる。
心筋における細胞内レニンと（プロ）レニン受容体の役割

レニン・アンジオテンシン・アルドステロン系(RAAS系)は、高血圧や心肥大の病態に関与している。RAAS系の酵素であるレニンは、腎臓で産生され血漿中に分泌されるが、心筋では非分泌型レニンのみが産生される。我々は、糖尿病心筋では、虚血時に細胞質とミトコンドリアで細胞内レニンの発現が増加していること、この細胞内レニンはミトコンドリアの機能を保つように働くことで、心筋を保護する役割を果たすことを示した。これらの結果は、従来のRAAS系を介した経路とは異なる、細胞内レニンの新しい作用機構を明らかにするとともに、心筋虚血に対する新しい治療法の確立にも役立つものと考えられる。前年度までの研究で、糖尿病ラットの灌流心を用いた虚血再灌流実験において、糖尿病心筋では虚血再灌流障害がコントロールに比べて少ない事を報告した。また、糖尿病心では虚血時の組織内のプロレニン、レニン濃度が有意に増加していることも報告した。本年度は、糖尿病心の虚血時の組織内レニンの分布を電子顕微鏡を用いた金コロイド法により検討し、細胞質とミトコンドリアにレニンが発現していることを明らかにした。ウエスタンブロティング法でも同様に、細胞質分画、ミトコンドリア分画においてレニンの発現を確認した。さらに、レニンの発現による細胞障害の機構を検討するために、再灌流実験において直接レニン阻害剤(DRI)とアンギオテンシン受容体拮抗薬(ARB)を投与し、DRIが糖尿病心筋の虚血再灌流障害耐性を抑制し、ARBでは抑制されないことを明らかにした。この結果より、レニン・アンギオテンシン・アルドステロン系を介した経路よりは、レニンによる直接作用の関与が考えられた。今後は、組織レニンが、糖尿病心の虚血再灌流障害の耐性を発現する機構について、ミトコンドリアとの関連について詳細に検討する予定である。前年度までの研究で、糖尿病ラットの灌流心を用いた実験において、糖尿病心筋では非糖尿病心筋に比べて虚血による心筋障害が少ない(虚血耐性を有する)こと、虚血時に心筋細胞内の細胞質とミトコンドリアにレニンが発現し、特にミトコンドリアでの発現が亢進していることを明らかにした。この糖尿病心筋におけるレニンの発現による虚血耐性は、アンギオテンシン受容体拮抗薬(ARB)によって抑制されなかったが、直接レニン阻害剤(DRI)により抑制された。これらの結果は、糖尿病心筋の虚血耐性には、レニン・アンギオテンシン・アルドステロン系を介した経路とは異なる、細胞内レニンによる直接効果が関与していることを示唆している。最終年度は、糖尿病心心筋の虚血耐性に細胞内レニンが関与する機構を明らかにするために、ミトコンドリア機能と細胞内レニンとの関連について検討した。虚血中に発現が増加しミトコンドリアの膜電位を脱分極させる脱共役タンパク質(UCP2)は糖尿心筋では発現が抑制されていた。心筋細胞にレニンを投与するとUCP2の発現は抑制され、一方で、酸化的リン酸化の指標となるNADP/NADPH比はレニンの投与により増加した。さらに、レニンは心筋の生存に必要な高エネルギーリン酸(ATP)の産生を保持することも明らかにした。これらの結果は、レニンがUCP2の抑制と酸化的リン酸化の活性化により、虚血中のミトコンドリア膜電位の脱分極を抑制してミトコンドリア機能を保持することを示唆している。本研究により、糖尿病心筋では、細胞内レニンがミトコンドリア機能の保持と細胞死の予防に関与していることが明らかになり、従来のレニン・アンギオテンシン・アルドステロン系とは異なる細胞内レニンによる生理的および病態生理的役割という新しい概念を提唱している。ラット灌流心を用いた実験系において、虚血再灌流モデルを作成した。Wisterラットの心筋では、虚血中および再灌流時のいずれにおいても、細胞内のプロレニン、レニンの濃度が上昇していることを、組織免疫染色法とウェスタンブロティング法において確認した。次に、増加したプロレニン、レニンの細胞内分布を明らかにするために、電子顕微鏡をもちいて金コロイド免疫法による細胞内の分布についての検討を行っている。一方、プロレニン、レニンの上昇が病態に関与していると考えられる糖尿病ラットモデルを用いて、同様の灌流実験を行った。その結果、糖尿病モデルにおいては、虚血再灌流障害の程度がコントロールに比べて少ない事が明らかとなった。さらに、糖尿病心では、特に虚血時の組織内のプロレニン、レニン濃度がより増加していることを確認した。現在、糖尿病心における虚血再灌流障害に対する耐性と組織内のプロレニン、レニンとの相関について、詳しい解析をしている。

今後は、糖尿病心における虚血再灌流障害に対する耐性と組織内のプロレニン、レニンの分布との関係を明らかにする。また、今年度は検討できなかった、プロレニンレセプターの関与についても新たに検討する。さらに、組織内レニンのmRNAをPCR法で同定し、いわゆる分泌型レニンとの相違についても検討し、病態時における組織プロレニン、レニンレの関与について明らかにする予定である。糖尿病心の虚血再灌流モデルにおいて、細胞質及びミトコンドリアにおけるレニンの発現の増加が、細胞障害を軽減する事を明らかにした。また、糖尿病心における虚血耐性へのレニンの作用機構として、レニン・アンギオテンシン・アルドステロン系を介した経路ではなく、レニンによる直接効果の可能性がたかいことを明らかにした。病態モデルとして灌流心をもちいた虚血再灌流モデルを確立し、コントロール群と糖尿病群について、比較検討する事で、組織内プロレニン、レニンが関与していることを明らかにした。今までの我々の研究結果は、糖尿病心の虚血再灌流障害において、心筋の細胞質とミトコンドリアに発現した組織レニンが、心筋保護的に働くことを明らかにした。このことは、糖尿病心筋の虚血再灌流障害の新たな病態解明に寄与することが期待される。今後は、組織レニンの増加が心筋を保護する機構について明らかにし、新しい虚血再灌流障害の治療戦略の確立について模索する。今年度の我々の研究結果は、虚血再灌流障害において、組織プロレニン、レニンが心筋保護的に働く可能性があることを示唆しており、心筋の虚血再灌流障害のあらたな病態の解明が期待される。今後は、組織プロレニン、レニンの増加がどのように病態に関与しているかを明らかにして、新しい虚血再灌流障害の治療戦略の確立について模索する。次年度は、組織レニンの増加が心筋を保護する機構について明らかにする目的で、組織内レニンのミトコンドリアに及ぼす効果について1単離ミトコンドリアを用いたミトコンドリア膜電位の検討、2膜除去心筋細胞を用いた膜電位、ATPの測定、脱共益蛋白、酸化還元状態の変化について、より詳細な検討し、レニンによる細胞保護機構を明らかにする。組織内プロレニン、レニンの分布について、(1)電子顕微鏡を用いた金コロイド染色法、(2)PCR法によるmRNAの同定を行い、組織レニンと分泌型レニンとの相違について、より詳細な検討を行う。直接レニン阻害薬やアンギオテンシンレセプター阻害薬を投与時の、虚血再灌流障害と組織内プロレニン、レニンとの関連について検討し、プロレニン、レニンの虚血再灌流障害への関与について、明らかにする。
胎児発育におけるIGF-IおよびIGF結合蛋白の生理学的意義の研究

抗体中和実験1.妊娠マウスに抗IGF-I抗体および抗IGFBP-1抗体を投与し、胎仔・胎盤発育に与える影響を検討する。抗IGF-I抗体を妊娠310日および妊娠1118日に母体腹腔内に投与したときの妊娠18日の胎仔重量は、それぞれ1235.1±16.2mg、1298.6±15.0mgと同じ妊娠前半と後半に正常家兎血清を投与したコントロール群の、1470.6±12.7mg、1360.3±12.7mgと比較し有意に(p<0.001)低かった。同様に、妊娠前半および後半に抗IGFBP-1抗体を投与したときの妊娠18日の胎盤重量はそれぞれ71.6±2.1mg、74.5±2.6mgで対応したコントロールの101.9±1.9mg、105.7±4.0mgと、抗体投与群で有意に(p<0.0001)抑制された。抗IGFBP-1抗体投与では逆に胎仔重量は有意に(p<0.001)増加し、妊娠前半と後半に抗体を投与した群ではそれぞれ1430.2±13.9mg、1448.5±13.7mgであるのに対し、コントロール群では1286.7±13.4mg、1295.6±15.9mgであった。2.妊娠マウスに抗IGF-I抗体および抗IGFBP-1抗体を投与し、母体に投与したアミノ酸の胎仔への移行を検討する。胎児血中のIGF結合蛋白のligand blotによる解析では、正常発育の満期産児では、IGFBpー1,IGFBpー2,IGFBpー3,IGFBpー4の4つが確認できた。満期産の発育遅延児ではIGFBpー2,IGFBpー1が増加しており,反対にIGFBpー3は減少しているのが見られた。早産児では、IGFBPー2が著しく増加しており、IGFBpー3は減少していた。以上より、胎児の発育過程でIGF給合蛋白の動態は変動し,これら個々の結合蛋白が胎児の特定の発育時期に生物学的な意義を持っていることが推測された。又、巨大児では母体が非糖尿病性のものでは、正常発育児と同様のIGF結合蛋白の動態が見られたが、母体が糖尿病のものではIGFBpー3の増加,IGFBpー2の減少が見られた。糖尿病母体より生まれた巨大児では、体重に比べ児の未熟性が著明であることが指摘されており、IGF結合蛋白が児の成熟にも関与している可能性がうかがわれた。満期産の胎盤細胞培養系にIGFーIを添加すると、^3Hーグリシン, ^3Hーdeoxy ^ーglucoseの取り込みが促進されるのが観察された。又、時間的な経過を追うと、細胞内に取り込まれたこれらの物質が細胞より放出されることがわかった。細胞をこれらの物質で飽和しておいてからIGFーIを添加すると、コントロ-ルより有意に細胞からの放出が促進された。これらの結果より、IGFーIは胎盤細胞へのアミノ酸・糖の取り込みを促進するのみならず、取り込まれた物質の放出にも関与していることが考えられた。IGFーIのこの2相性の作用は、母体の胎盤介した栄養移送にIGFーIが関与していることを示唆するものと考える。1.胎児血中IGF結合蛋白のligandblotting臍帯血のligandblotではIGFBP-1,IGFBP-2,IGFBP-3およびIGFBP-4の4つのIGF結合蛋白が確認された。デンシトメーターによる各IGF結合蛋白の相対的濃度の解析ではIGFBP-3が最大であり、全IGF結合蛋白の7080%を占めた。早産児では満期産の正常発育児に比較しIGFBP-2濃度が多く、IGFBP-3濃度は少なかった。同様に、満期産の胎内発育遅延児では満期産正常発育児よりIGFBP-1,IGFBP-2濃度が高く、IGFBP-3濃度が低かった。満期産の巨大児ではIGFBP-3濃度が満期産正常発育児より多く、一方IGFBP-2およびIGFBP-1濃度は低かった。このように、胎児の在胎週数および発育程度に応じて胎児血中のIGF結合蛋白の動態が大きく異なることが明かとなった。2.胎盤細胞培養系における糖の取り込みに与えるIGF-Iの影響満期産の胎盤絨毛細胞にIGF-Iを添加すると、2-deoxy-D-glucoseおよびO-methyl-glucosseの胎盤細胞への取り込みが時間およびIGF-I量依存性に増加した。また、2-deoxy-D-glucoseおよび非代謝性アミノ酸であるaminoisobutyric acidをあらかじめ絨毛細胞に取り込ませておき、IGF-Iを添加すると時間依存性にこれらの物質の細胞内からの放出が促進された。これらに事実より、IGF-Iは絨毛細胞のアミノ酸、糖の取り込みおよび放出の双方に関与していることが示唆された。3.胎児血中IGF-I、インシュリン、GH、GH結合蛋白の測定臍帯血中IGF-Iは妊娠週数とともに増加し、IGF結合蛋白のうちIGFBP-1と逆相関した。また、インシュリンとIGFBP-1値の間にも逆相関がみられた。抗体中和実験

1.妊娠マウスに抗IGF-I抗体および抗IGFBP-1抗体を投与し、胎仔・胎盤発育に与える影響を検討する。抗IGF-I抗体を妊娠310日および妊娠1118日に母体腹腔内に投与したときの妊娠18日の胎仔重量は、それぞれ1235.1±16.2mg、1298.6±15.0mgと同じ妊娠前半と後半に正常家兎血清を投与したコントロール群の、1470.6±12.7mg、1360.3±12.7mgと比較し有意に(p<0.001)低かった。同様に、妊娠前半および後半に抗IGFBP-1抗体を投与したときの妊娠18日の胎盤重量はそれぞれ71.6±2.1mg、74.5±2.6mgで対応したコントロールの101.9±1.9mg、105.7±4.0mgと、抗体投与群で有意に(p<0.0001)抑制された。抗IGFBP-1抗体投与では逆に胎仔重量は有意に(p<0.001)増加し、妊娠前半と後半に抗体を投与した群ではそれぞれ1430.2±13.9mg、1448.5±13.7mgであるのに対し、コントロール群では1286.7±13.4mg、1295.6±15.9mgであった。2.妊娠マウスに抗IGF-I抗体および抗IGFBP-1抗体を投与し、母体に投与したアミノ酸の胎仔への移行を検討する。