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安山岩採掘に関する歴史・民俗学的研究

本研究では、経験者の高齢化により今まさに失われようとしている機械化以前の安山岩採掘技術と、それにともなう文化を明らかにし、記録することを目的とし、こうした民俗学的成果を考古学や文献史学へも反映させることを試みた。具体的には、伊豆半島地域を対象とし、安山岩の採掘業者への聞き取りと作業内容のビデオ撮影をおこない、記録した。また、徳川林政史研究所所蔵の「駿州・豆州・相州御石場絵図」とその付属文書について、その全帖の写真と翻刻を掲載し、地元の研究者による現在までの研究成果をそえた報告書を作成した。昨年度はまず、8月に静岡県沼津市内浦重寺および同市西浦久料・足保で検出された近世の安山岩採掘遺跡の調査を行なった。これは、民俗学的手法によって確認することができる近現代の石材採掘技術の歴史的な位置づけを確認する作業である。この調査の際、徳川林政史研究所所蔵の尾張家の石丁場に関する史料である「駿州豆州相州御石場絵図」を参照しながら現地比定の作業を行なった。その結果、当該絵図およびその付属文書が近世における御用丁場の管理方法や丁場の具体的範囲、石材の規格、採掘技術、さらにこうした石材採掘にかかわる伝承等を明らかにする上で非常に重要な資料であることが明らかとなった。しかしながら、これまでその活用は断片的であった。その原因としては原資料が徳川林政史研究所に所蔵されており、全編にわたる翻刻作業が行なわれていないことがあげられる。そこで研究代表者は、全編にわたる翻刻作業を行ない、報告書として刊行することが急がれるという認識にいたった。こうした経緯から、昨年10月には駿河・伊豆・相模の石丁場遺跡に詳しい現地の文化財担当者および文献史学の研究者の協力を得て、徳川林政史研究所において当該史料の原本の実見調査を行なった。さらに、近世史の研究者に依頼して絵図および付属文書の大まかな翻刻作業を昨年度内に終了した。また3月には、今後、翻刻内容の確認を行ない、報告書として刊行するための作業工程について、現地の文化財担当者と打ち合わせを行なった。今年度は当初目標としていた神奈川県真鶴町をおもなフィールドとした研究の2つの柱,すなわち,1安山岩採掘職人からの聞き取り調査および採掘現場での作業の観察を通して,採掘作業の全体的な工程を把握する,2安山岩採掘職人の労働組織や技術伝承のあり方,信仰,日常生活など,技術以外の文化的側面について,聞き取り調査から明らかにする,に加えて,3昨年完了した「駿州豆州相州御石場絵図」とその付属文書の翻刻内容を確認し,絵図の現地比定の作業も進めることとした。上記1および2については,神奈川県真鶴町の採石業者の採石場,小割場の調査を行なった。安山岩採掘と小割現場の観察,聞き取り調査を通して,採掘作業の全体像を把握し,各作業工程における職人の技術と安山岩という岩石の特性との関係が,部分的にではあるが明らかとなった。すなわち,花崗岩のように母岩から大きく割り取ることのできない岩石においては,石の節理を利用して割ることよりも,より大きな石材を割り取ることのできる面を優先して割るということである。こうした割り方は,安山岩の節理が花崗岩ほどには強いものではなく,節理とは異なる面で割ることが比較的容易であることによって可能となっているのである。つぎに3については,絵図を所蔵する徳川林政史研究所において翻刻内容の最終確認を行なったほか,絵図に描かれた神奈川県真鶴町,静岡県伊東市,同県熱海市において現地比定作業を行なった。その結果,従来確認されていた石丁場があらためて確認されたほか,真鶴町においては絵図に描かれた石丁場と考えられる場所を新たに確認するにいたった。その他,上記3つの作業を進めるための参考として、神奈川県南足柄市の安山岩石丁場跡と,香川県小豆島町の花崗岩石丁場跡の調査も行なった。安山岩採掘に関する近世の古文書の整理については,対象となる古文書を変更することとなったが,その成果は目録の作成にとどまらず,翻刻と報告書の作成という形で、予定以上の成果が見込まれる状況となっている。これは,研究計画書の「研究計画・方法」で具体的な工夫としてあげた考古学や文献史学の研究者との研究協業の成果と言うことができる。一方,上記の作業に優先的に取り組んでいたため,安山岩採掘職人からの聞き取り調査および採掘作業の記録については,当初の計画よりも若干遅れている。とくに,機械化以前の技術に関する調査については,経験者の高齢化の問題もあり,当初予定していた成果を上げ得ていない。引き続き,調査地である真鶴町に詳しい協力者と連携しながら,話者の確保と調査に努めたい。本研究では、経験者の高齢化により、今まさに失われようとしている機械化以前の安山岩採掘技術と、それにともなう文化を明らかにし、記録することを目的とし、その成果を考古学や文献史学へも反映させることが試みられた。研究の成果としては第一に、安山岩の採掘技術の観察と記録があげられる。神奈川県真鶴町で産出される小松石を題材とし、安山岩の採石技術について採石業者へインタビュー調査をおこなったほか、小割についてビデオ撮影をおこない記録した。こうした作業は、伝統に根ざした技を含む安山岩採掘技術を記録保存するものであると同時に、中世および近世の石材採掘技術の再現に取り組む考古学や歴史学の研究にも還元されるものである。

また、第二の成果としては『徳川林政史研究所所蔵「駿州・豆州・相州御石場絵図」の研究』の刊行があげられる。本報告書では、徳川林政史研究所所蔵「駿州・豆州・相州御石場絵図」およびその付属文書について、その全帖の写真を掲載し(絵図についてはカラー)、翻刻をそえた。さらに、現地での研究に取り組む研究者の協力のもと、それぞれの丁場に関する最新の研究成果も掲載した。本報告書の刊行のために、前年度も考古学や文献史学の研究者とともに現地比定作業を進めてきたが、今年度も前年度に引き続き現地比定調査をおこなった。また、昨年度よりおこなっていた絵図および付属文書の翻刻作業も、引き続き歴史学の研究者の協力を得ながら進めた。今年度後半には報告書の刊行に向けた編集作業をおこない、3月30日に報告書が完成した。『徳川林政史研究所所蔵「駿州・豆州・相州御石場絵図」の研究』の刊行は、近年盛んとなっている江戸城の石垣用石材の産地としての伊豆半島地域の研究に大きく貢献するものであり、民俗学的にも、伊豆半島の生業や社会組織の歴史的変遷を考えるうえで重要な成果となった。本研究では、経験者の高齢化により今まさに失われようとしている機械化以前の安山岩採掘技術と、それにともなう文化を明らかにし、記録することを目的とし、こうした民俗学的成果を考古学や文献史学へも反映させることを試みた。具体的には、伊豆半島地域を対象とし、安山岩の採掘業者への聞き取りと作業内容のビデオ撮影をおこない、記録した。また、徳川林政史研究所所蔵の「駿州・豆州・相州御石場絵図」とその付属文書について、その全帖の写真と翻刻を掲載し、地元の研究者による現在までの研究成果をそえた報告書を作成した。研究期間の3年間を通した本研究の目的は、1.安山岩の採掘・加工技術の解明、2.石材採掘・加工職人の文化の解明、3.映像記録の作成、4、科学的分析への発展の可能性の模索、の4点である。このうち、1年目にあたる昨年度の研究計画は神奈川県真鶴町を主なフィールドとして、1安山岩採掘職人からの聞き取り調査および採掘現場での作業の観察を通して、採掘作業の全体的な工程を把握する、2安山岩採掘職人の労働組織や技術伝承のあり方、信仰、日常生活など、技術以外の文化的側面について、聞き取り調査から明らかにする、という2点を柱としていた。また、こうした作業と並行して、3他地域でも積極的な調査を行なうことで安山岩採掘技術の地域差について検討し、安山岩以外の岩石の採掘技術についても比較の素材として情報収集を行なう、4石材の採掘や使用に関連する遺跡について積極的に調査・見学を行ない、民俗学的手法によって確認することのできる近現代の採掘技術の歴史的な位置づけを明確化することも目標としていた。ただし、昨年度の研究を進める過程で、上述した近世の絵図および付属文書の翻刻と内容の解読といった作業が、当時の技術を示す採掘遺跡を把握する上でも、また、安山岩産出地域における近代への採掘にともなう文化の伝承過程を解明する上でも不可欠であることが判明した。そこで、昨年度は12にかえて、上記作業を優先して行なうこととした。したがって、交付申請書に記載した「研究の目的」に対する達成度としてはかならずしも順調に進展しているとは言い難いが、関連文書の整理は当初より2年目以降に予定していたため、結果的に前倒しをして研究を行なうこととなった。本研究課題の最終年度の研究は,大きく分けて二つの方向性を有する。まず,一つ目は,「駿州豆州相州御石場絵図」およびその付属文書に関する報告書の作成である。
白血病における白血球インテグリンMac-1に介在する線溶機序の検討

1.目的:今回、各種白血病細胞ホモジネートにおける凝固・線溶系活性化能を測定したので報告する。2.成績:(1)Procoagulant activity(PCA)の測定:白血病細胞ホモジネートに正常血漿とCa^<2+>を加え凝固時間を測定した。骨髄系白血病細胞ではリンパ球腫瘍に比べて、PCAは高値傾向を示した。特に、DICを合併した急性前骨髄性白血病(APL)では著しい高値を示す症例が多く、その他の急性骨髄性白血病(AML)例でも高値を示した。一方、慢性骨髄性白血病(CML)はchronic phaseでは低値であるが、急性転化を示すと高値となった。(2)第X因子活性化能の測定:白血病細胞ホモジネートに第X因子を加えインキュベート後、発色合成基質S2222を加え、吸光度の変化により活性化第X因子の生成を測定した。AMLやALLでやや増加していたが、各病型で有意な差はみられなかった。また、DIC症例と非DIC症例との比較においても差を認めなかった。(3)プラスミノゲン活性化能の測定:白血病細胞ホモジネートにプラスミノゲンを加えインキュベート後、発色合成基質S2251を加え、吸光度の変化によりプラスミン生成量を測定した。DICを合併したAPLで著増例が多く、APL以外のAML、ALLでもDIC合併例では高値を示す症例も認めた。(4)好中球エラスターゼ活性の測定:APL、CML、AMMoLで高値を示し、リンパ系白血病では低値であった。また、DIC症例と非DIC症例との比較において差を認めなかった。3.考察:白血病におけるPCAとしては、組織因子依存性あるいは第X因子活性化経路が考えられる。DIC合併APLではPCAは有意に高値であったが、第X因子活性化能は各病型で有意差がないことより、白血病におけるDICの原因としては腫瘍細胞中の組織因子の関与が大きいものと思われる。一方で、APLなどではプラスミノゲン活性化能が有意に高値であり、線溶亢進がDIC発症に重要であることが示された。
心理療法における医療と臨床心理の連携に関する研究

精神科臨床と臨床心理臨床はその対象によっては同一対象を共有することがあり、その際には適切な連携が必要となることが多い.その際両者の方法論的な差異や診断体系の差が対象に対して少なからざる影響を与えることがあるため、その連携のあり方や紹介のしかたなどに工夫が必要となる.今回本研究が目的としたのはこれらの点であり、おおむね次のようなことが明らかとなった。1)精神科臨床で用いている診断体系は精神病範畴において詳細を極めるにもかかわらず、ちょうど心理臨床が対象とする児童生徒のさまざまな問題や青年あるいは成人に関してもスペクトルが広く適切な対象記載が豊言であるとはいえない今后の研究がまたれるところである2)単に病状記載や状態像記載にとどまらず、自然状態や防衛の強さ対象をつつむ家庭や社会の状況の把握が適切になされねばならない3)リファーの仕方や治療者選択の方法に工夫が必要である4)教育現場や他のケアシステムとの連携も必要であり、濃密なネットワークが必要である、一方、クライエントの元体性を重視する必要がある精神科臨床と臨床心理臨床はその対象によっては同一対象を共有することがあり、その際には適切な連携が必要となることが多い.その際両者の方法論的な差異や診断体系の差が対象に対して少なからざる影響を与えることがあるため、その連携のあり方や紹介のしかたなどに工夫が必要となる.今回本研究が目的としたのはこれらの点であり、おおむね次のようなことが明らかとなった。1)精神科臨床で用いている診断体系は精神病範畴において詳細を極めるにもかかわらず、ちょうど心理臨床が対象とする児童生徒のさまざまな問題や青年あるいは成人に関してもスペクトルが広く適切な対象記載が豊言であるとはいえない今后の研究がまたれるところである2)単に病状記載や状態像記載にとどまらず、自然状態や防衛の強さ対象をつつむ家庭や社会の状況の把握が適切になされねばならない3)リファーの仕方や治療者選択の方法に工夫が必要である4)教育現場や他のケアシステムとの連携も必要であり、濃密なネットワークが必要である、一方、クライエントの元体性を重視する必要がある
ウルシオール-オリゴ糖配糖体の合成と作用機構の解明

漆カブレはウルシオールにより引き起こされる遅廷性アレルギー反応である。一方、漆との接触を繰り返すと免疫寛容(トレランス)が誘導されカブレに強くなる現象が認められている。このトレランスを積極的に誘導するためには本研究では、ウルシオール-マルトオリゴ糖配糖体を合成し、その作用機構について検討している。今年度は種々のウルシオール配糖体の合成と得られた生成物の性質を調べた。ウルシオールは空気中で酸化され易く、水に対する溶解性は無い。しかしながら合成したウルシオール糖配糖体は空気酸化に対しては安定であり、マルトテトラオース(G4)以上のウルシオール配糖体はいずれも水溶性であることが分かった。次にウルシオール糖配糖体のモルモットの皮膚上での加水分解性を調べたところ、ウルシオール(PDC)を貼布した箇所の皮膚に紅斑、浮腫が認められたがウルシオール配糖体を貼布してもいずれも変化が無かったので皮膚での加水分解は起きていないことが分かった。現在この配糖体を用いた動物試験によりトレランスの誘導、リンパ球によるテストなどについて検討している。漆カブレ作用の解明に関連して、漆器によるカブレを検討するには漆膜の化学構造が明らかでなければならない。しかしながら漆膜は架橋ポリマーであるため化学分析法が限られている。我々は熱分解-GC/MS分析法による漆膜の結合様式と構造末端を明らかにすることができた。漆器の硬化の進行と漆カブレの関係を検討することが可能になった。また不飽和側鎖を有するウルシオールは強いカブレ作用を示す。天然のウルシオールは複雑な混合物であるので、化学合成による不飽和トリエン側鎖を有するウルシオールの合成法を検討した。不飽和トリエンウルシオールを用いる漆カブレの検討が可能になれば極めて微量な試料での漆カブレの研究が可能となった。
配偶子形成過程におけるミトコンドリア関連遺伝子の網羅的探索と生殖補助医療への応用

本研究機関では,以下の進展が得られた.(1)ミトコンドリアのヘテロプラズミー定量解析のために, whole genome amplification (WGA)-PCR-RFLP-Image Jを用いて,簡便・迅速かつ安価な診断系を構築した.(2)単一細胞におけるWGA-aCGHによるに染色体異数性解析の結果,着床前診断の際に発生した生検胚中63%に染色体数的異常が検出される結果を得た.(3)WGAの増幅効率の検討の結果,変異と連鎖する複数の遺伝子多型を同時解析し,胚がそれぞれの片親から引き継ぐ遺伝子型の組み合わせ診断(着床前ハプロタイピング)を可能とする効果をもたらした.生殖補助医療,特に体外受精-胚移植技術の成績向上を目的として,配偶子,特に卵子形成過程における減数分裂エラーと細胞内小器官であるミトコンドリア関連の病因遺伝子変異の探索を,研究の目的とした.細胞の採取について,初期分割期から胚盤胞に至る各段階での割球あるいは栄養外胚葉細胞採取の技術について検討した.初期分割期においては割球間で異なる染色体コピー数を有する体細胞モザイシズム現象が散見された.初期分割期割球由来遺伝子は稀少であるため,解析に先立ち全ゲノム増幅法を用いたDNA増幅が必要となるため,最適な増幅技術について検討した. PCRをベースとした全ゲノム増幅技術ではマイクロアレイを用いた染色体コピー数が有効であるのに対して,塩基配列レベルでの解析を要する診断系の最適化には課題を残した.一方,非PCRベースの全ゲノム増幅技術では,テンプレートDNAを解析に十分な量まで増幅し,かつ正常/変異ミトコンドリアの混在した細胞において,その正常/変異比率の一定の範囲で保ちながら増幅することを示唆する結果を得た.各種全ゲノム増幅法の検討を実施する中で,稀少細胞の解析には,細胞採取・DNA抽出法・全ゲノム増幅の最適化・解析法の選択の各段階における選択とそのマッチングの重要性が示された.今後さらに網羅的解析を行う上で,目的とする遺伝子・変異型・染色体に依存しないall in oneの診断系の構築を展開していく必要がある.本研究機関では,以下の進展が得られた.(1)ミトコンドリアのヘテロプラズミー定量解析のために, whole genome amplification (WGA)-PCR-RFLP-Image Jを用いて,簡便・迅速かつ安価な診断系を構築した.(2)単一細胞におけるWGA-aCGHによるに染色体異数性解析の結果,着床前診断の際に発生した生検胚中63%に染色体数的異常が検出される結果を得た.(3)WGAの増幅効率の検討の結果,変異と連鎖する複数の遺伝子多型を同時解析し,胚がそれぞれの片親から引き継ぐ遺伝子型の組み合わせ診断(着床前ハプロタイピング)を可能とする効果をもたらした.細胞内小器官であるミトコンドリアは,ミトコンドリアDNA(mtDNA)を有している. mtDNA異常は,エネルギー産生能の低下につながり,卵形成過程の減数分裂エラーと関わりを持つと考えられる.また,ミトコンドリア遺伝病の着床前遺伝子診断(PGD)は,体外受精における初期分割期胚の割球におけるmtDNA中に占める変異型mtDNAの率(ヘテロプラズミー比率)の低い胚を優先的に胚移植し,罹患児の妊娠を回避するものである.従来の着床前診断(PGD)技術の基盤を活用し,微量な細胞質に局在するmtDNAおよびmtDNA copy数制御関連核遺伝子の網羅的解析を行い,重要なcopy numbervariation(CNV)・1塩基多型(single nucleotide polymorphism: SNP)とヘテロプラズミー比率閾値を抽出し,さらに安全なPGD診断系を開発することを目的とする.平成24年度は稀少な肺細胞から得られる稀少遺伝子の解析の困難性を克服するために,主に全ゲノム増幅法のvalidationを行ってきた.単一細胞由来のテンプレートDNAからも,解析に十分な増幅が得られ,かつバイアスのない均一な遺伝子増幅が得られるかについての検討を行ってきた.着床前診断における全ゲノム増幅法が,標的遺伝子部位の直接解析とその変異近傍の遺伝子多型の情報からならハプロタイプ解析を可能とすることを示した.また稀少細胞のミトコンドリアコピー数解析において,全ゲノム増幅法の実施により,実用的なPGD実施が可能となることを示し,学会で報告した.mtDNAおよびミトコンドリア関連核遺伝子領域をカバーするoligonucleotide tiling arrayの設計・開発:既知の変異mtDNAに関しては, mtDNAのアミノ酸コード領域を網羅するように設計されたoligonucleotide tiling arrayを開発し, mtDNAデータベースと核ゲノムのmtDNAcopy数制御関連遺伝子の情報に基づくプローブを開発する予定であったが,その解析に先立つ全ゲノム増幅法の選択と評価についての検討までが行われている.今後はアレイ技術のみならず,新たに出現している次世代シーケンサーによる解析検討されており,当初の研究内容と実施方法について変更を考慮しているため,研究に若干の遅れを来した状態である.2.次世代シーケンサーを用いたTargeted Sequencing法により,新たなミトコンドリア・ヘテロプラスミー変異比率解析法を確立する.3. ICSI/PGDの実施上で発生した極体と余剰胚・疾患罹患胚における割球およびフラグメンテーションを用いた全ゲノム増幅法の実施とmtDNA array解析によるSNP診断の精度検討・CNV解析による増幅バイアスの評価:反復する着床不全や初期の流産の多くが受精卵の染色体異数性に起因するという論理を前提として,着床前期胚に対する染色体異数性診断: preimplantation geneticscreening(PGS)の診断系の確立を行う.

全ゲノム増幅技術とCGH array技術を組み合わせ,迅速に多数の同時染色体数的異常の解析を行う.検体として第1極体が最大の標的となる.異数性胚の発生を調べると同時に, 1.にて開発されたmtDNAアレイによるmtDNA関連遺伝子の網羅解析を実施し, SNP・CNVおよび大規模欠失などのmt DNA遺伝子異常異常との関連解析のためのデータ収集を行う.検体には,初期分割期における割球とそのフラグメンテーション・第1極体および第2極体が用いる.未使用額が生じた理由は当初予定していたoligonucleotide tiling arrayの開発研究が遅れたためであるが, 25年度に行う予定の研究計画と合わせて実施する.主に, mtDNAおよびミトコンドリア関連核遺伝子領域をカバーするoligonucleotide tiling arrayの設計・開発に使用される.同時に次世代シーケンサーを用いたTargeted Sequencing法により,新たなミトコンドリア・ヘテロプラスミー変異比率解析法を確立するための試薬およびシーケンシングの実施に要する費用が中心となる.
口腔癌における組織培養抗癌剤感受性試験の有用性に関する研究

本研究は口腔癌の臨床腫瘍材料を対象として,組織培養法を用いた抗癌剤感受性試験Histoculture Drug Response Assay(HDRA)を施行し,その臨床的有用性を検討した.対象症例は口腔外科に受診した進行口腔扁平上皮癌患者19例23検体である.薬剤はCisplatin(CDDP),Carboplatin(CBDCA),Adriamycin(ADM)を用いた.研究方法は原発巣より可及的に無菌的に採取した生検組織,または手術時に採取した癌組織をコラーゲンゲル上で7日間薬剤接触させ培養した.培養終了時にMTTアッセイによる判定を行い,対照群に比して50%以上の抑制率が認められた場合をin vitro感受性ありとし,有効とした。薬剤cut off濃度について実験的に検討した結果,CDDP20μg/ml,CBDCA25μg/ml,ADM15μg/mlとした。HDRAは細胞間接触を保持したまま長期培養が可能であった。また,口腔扁平上皮癌ではMTTアッセイの結果として判定可能率は91.3%であった.腫瘍発育阻止率(I.I)による検討では,原発巣と転移リンパ節および原発部位別による比較ではI.Iに差は認められなかった。判定可能症例中10例にCDDPあるいはCBDCAを中心とした化学療法を行い,化学療法群と無化学療法群の生存率に有意差は認められなかったものの,抗癌剤選択の一つの視標になり得た。口腔癌症例に対して組織培養法HDRAによる抗癌剤感受性試験を行い,その基礎データを得るとともに,本法は臨床応用に有用な試験法であることが示唆された。今後も症例を追加して検討していく。本研究はHistoculture Drug Response Assay(以下HDRA)を用いて口腔癌の臨床腫瘍材料を対象に抗癌剤感受性試験の検討を行い,口腔癌に対する化学療法の効果を予測する新たな抗癌剤感受性試験法の開発を目的とする。対象症例は口腔外科に受診した進行口腔扁平上皮癌患者6例,6検体である.腫瘍の部位別内訳は舌3例,口底1例,上顎1例,頬粘膜1例であった.薬剤はcisplatin(CDDP),Carboplatin(CBDCA),Adriamycin(ADM)を用いた.研究方法は原発巣より可及的に無菌的に採取した生検組織,または手術時に採取した癌組織を1mm角に細切し,組織重量を測定したものをコラーゲンゲル上で7日間薬剤接触させ培養した.培養終了時にMTT試薬を添加し,さらに8時間培養した.培養終了時にMTT-formazanを溶解するためにdimethyl sulfoxideを加えた.2時間後に抽出液を96ウェル・マイクロプレートに移し,各ウェルの540nmにおける吸光度をMicro plate readerを用いて測定した.薬剤による抑制率Inhibition Index(%)は(1-薬剤接触検体の1g当たりの吸光度/対照検体の1g当たりの吸光度)×100より算出し,50%以上の抑制率をin vito感受性ありと判定した.薬剤のウェルは最低3ウェルとした.対照群のウェルの平均吸光度が15以上であった場合を判定可能症例とした.また,病理組織標本として培養終了時の検体にhematoxylineosin(HE)染色を行った.MTTアッセイの結果として6例中5例判定可能であり,判定可能率は83%であった.CDDP感受性が得られた2症例は術後adjuvant cheomtherapyとしてCDDP 100mg/m^2(day1),5-FU1000mg/m^2(day5)を行い,無担癌生存中である.さらに,本研究では放射線療法に少量のCDDPあるいはCBDCAの同時併用療法の有用性に着目し,HDRA抗癌剤

感受性試験の結果に応じて臨床例での治療効果を検討している.症例がまた少ないが,今後も症例を追加して検討していく.本研究は口腔癌の臨床腫瘍材料を対象として,組織培養法を用いた抗癌剤感受性試験Histoculture Drug Response Assay(HDRA)を施行し,その臨床的有用性を検討した.対象症例は口腔外科に受診した進行口腔扁平上皮癌患者15例17検体である.薬剤はcisplatin(CDDP),Carboplatin(CBDCA),Adriamycin(ADM)を用いた.研究方法は原発巣より可及的に無菌的に採取した生検組織,または手術時に採取した癌組織をコラーゲンゲル上で7日間薬剤接触させ培養した.培養終了時にMTTアッセイによる判定を行い,対照群に比して50%以上の抑制率が認められた場合をin vitro感受性ありとし,有効とした.薬剤cut off濃度について実験的に検討した結果,CDDP20μg/ml,CBDCA25μg/ml,ADM15μg/mlとした。HDRAは細胞間接触を保持したまま長期培養が可能であった。また,口腔扁平上皮癌ではMTTアッセイの結果として判定可能率は88%であった.これらの判定可能症例については,CDDPあるいはCBDCAを中心とした化学療法を行い,臨床での化学療法の効果を判定した。CDDP20μg/ml I.I.50%以上の2症例はPRであった。口腔癌症例に対して組織培養法HDRAによる抗癌剤感受性試験を行い,その基礎データを得るとともに,本法は臨床応用に有用な試験法であることが示唆された。今後も症例を追加して検討していく.
抗マラリア薬アルテスネートを用いたがん予防法の開発とその分子機構の解明

がんは、日本における死因第1位として有り続け、今後も増加傾向にある。その打開策として、がんを未然に防ぐ予防に焦点を向けることが重要であると考えられる。しかし、現在、がんの予防薬と成る薬剤を用いた予防法は未だ確立されていない。本研究は、抗マラリア薬として世界中で使用されている薬剤(アルテスネート)を用い、Wntシグナル経路への影響、薬剤に直接結合する細胞内タンパク質の同定、生体における薬剤の有効性・副作用、について評価を行ない、大腸がん化学予防剤として有用であるか、について培養細胞及び動物レベルでの検討を行なう研究である。
大腸癌の抗癌剤薬剤耐性獲得におけるRbタンパクおよびE2Fの役割に関する研究

大腸癌の抗癌剤薬剤耐性獲得におけるRbタンパクおよびE2Fの役割5-fluorouracil(5-FU)は、消化器癌化学療法に汎用される抗癌剤であり、この薬剤に対する耐性獲得機構としては、5-FUの標的酵素であるthymidylate synthase (TS)の増量、同化酵素活性の低下などがいわれている。我々は、TSがその遺伝子配列のプロモーター領域に転写因子E2F-1の結合部位を有することから、E2F-1の転写活性、またそれを調節するretinoblastoma gene product (pRb)の耐性獲得への関与を検討した結果、5-FU耐性ヒト大腸癌細胞株DLD-1/5-FUにおいてはpRbのリン酸化のレベルとE2F-1の転写活性のレベルが5-FU感受性親株DLD-1に比較して上昇していることを確認、大腸癌細胞が5-FUに対する耐性獲得機構においてpRb/E2F-1を介した転写活性調節が重要な役割を演じていることを見出した。続いて5-FU耐性ヒト大腸癌細胞株DLD-1/5-FUに対して、そのE2F転写活性を低下させるべくE2F decoy oligodeoxynucleotide (ODN)をtransfectionしたところ、5-FU存在下での細胞のviabilityがODNの濃度依存性に低下、5-FUに対する感受性が回復した。耐性化した癌細胞に薬剤感受性を回復させることは、耐性克服という観点から重要な治療戦略であり、5-FU耐性ヒト大腸癌細胞株DLD-1/5-FUにおけるE2F-1転写活性の上昇は、この転写因子がDNA合成および細胞増殖に密接に関与している点から考えても新たな治療戦略の標的因子と考えられた。(International Journal of Oncology,21,309-314,2002)^<99m>Tc-MIBIはアントラサイクリン系抗癌剤に対する腫瘍の耐性獲得に寄与するP糖タンパクにより細胞外へ汲み出されるため、^<99m>Tc-MIBIシンチグラフィーは、肺や頭頚部癌のアントラサイクリン系抗癌剤に対する感受性予測に用いられている。今回我々は、^<99m>Tc-MIBIシンチグラフィーが胃癌患者においてアントラサイクリン系抗癌剤ファルモルビシンに対する感受性予測に有用であることを明らかにした。すなわち胃癌においては^<99m>Tc-MIBIの集積度とP糖タンパクの発現レベルの間には優位な逆相関が存在し、^<99m>Tc-MIBIの集積度の高い胃癌症例に対しては、現在汎用されている5-FUを中心とした化学療法より、ファルモルビシン単独療法の効果が優れていたことを報告した。(Clinical Cancer Research, in press,2004)(1)5-FU耐性ヒト大腸癌細胞株DLD-1/5-FUにおいてはpRbのリン酸化のレベルとE2F-1の転写活性のレベルが5-FU感受性親株DLD-1に比較して上昇していることを確認した。これにより大腸癌細胞が5-FUに対する耐性獲得機構においてpRb/E2F-1を介した転写活性調節が重要な役割を演じていることが示唆された。(2)耐性化した癌細胞に薬剤感受性を回復させることは、耐性克服という観点から重要な治療戦略である。5-FU耐性ヒト大腸癌細胞株DLD-1/5-FUにおけるE2F-1転写活性の上昇はこの転写因子がDNA合成および細胞増殖に密接に関与している点から考えても新たな治療戦略の標的因子と考えられる。そこで5-FU耐性ヒト大腸癌細胞株DLD-1/5-FUに対して、そのE2F転写活性を低下させるべくE2F decoy oligodeoxynucleotide(ODN)をtransfectionしたところ、5-FU存在下での細胞のviabilityがODNの濃度依存性に低下した。すなわち5-FUに対する感受性が回復した。この効果はmissenseODNのtransfectionでは認められず、E2F-1 ODN特異的な効果と考えられた。耐性化した癌細胞に薬剤感受性を回復させることは、耐性克服という観点から重要な治療戦略であり、5-FU耐性ヒト大腸癌細胞株DLD-1/5-FUにおけるE2F-

1転写活性の上昇は、この転写因子がDNA合成および細胞増殖に密接に関与している点から考えても新たな治療戦略の標的因子と考えられた。(International Journal of Oncology,21,309-314,2002)^<99m>Tc-MIBIはアントラサイクリン系抗癌剤に対する腫瘍の耐性獲得に寄与するP糖タンパクにより細胞外へ汲み出されるため、^<99m>Tc-MIBIシンチグラフィーは、肺や頭頚部癌のアントラサイクリン系抗癌剤に対する感受性予測に用いられている。今回我々は、^<99m>Tc-MIBIシンチグラフィーが胃癌患者においてアントラサイクリン系抗癌剤ファルモルビシンに対する感受性予測に有用であることを明らかにした。すなわち胃癌においては^<99m>Tc-MIBIの集積度とP糖タンパクの発現レベルの間には優位な逆相関が存在し、^<99m>Tc-MIBIの集積度の高い胃癌症例に対しては、現在汎用されている5-FUを中心とした化学療法より、ファルモルビシン単独療法の効果が優れていたことを報告した。(Clinical Cancer Research, in press,2004)
ヒト顔面形態の個体差および集団差に関与する遺伝子の同定

ヒトの顔の個体差および集団差に関わる遺伝子多型に関しては、数多く存在すると予想されるにもかかわらず、未だにほとんど知られていない。本研究では、ヒト顔面形態の個体差および集団差に関連する遺伝子多型を明らかにするため、(1)頭顔部を中心とした形態計測を行った上で、(2)形態形成に関与すると知られている遺伝子群の中から集団遺伝学的に候補遺伝子を絞り込み、(3)遺伝子型と表現型の関連解析を行った。その結果、EDARなどの遺伝子において、歯形態を含む顔面形態と遺伝子型との関連が検出された。本研究の目的は、ヒトの顔面形態の個体差および集団差に関連する遺伝子多型を明らかにすることにある。また、形態に関連する遺伝子に働いた選択圧の強さなどを推定する。(i)本年度は、試料および生体計測データの収集のために多くの力を注いだ。顔面形態の測定のために、3次元デジタルスキャナと解析ソフトウェアを導入し、計測項目や方法について再検討をおこなった。倫理承認を得た上で、試料およびデータ収集を継続中である。(ii)文献やデータベース(Gene、OMIM)から頭部の発生や形態形成に関わる遺伝子および頭蓋顔面異形成の原因遺伝子を200遺伝子程度選出し、これまでのゲノムワイドSNPタイピングデータおよび大規模SNPデータベースを用いて、それらの遺伝子の人類集団間における分化を調べた。その結果、ヨーロッパ系集団とアフリカ系集団の間で、頭蓋顔面異形成に関与する遺伝子群がゲノム中の他の遺伝子と比べ、より分化していることなどが示された。したがって、これらの遺伝子の中に集団間の形質の違いを担う遺伝子も含まれていると推測される。また、頭蓋顔面異形成の遺伝子領域における多様性の減少を観察することで、正の選択の有無を検証した。これらの結果をもとに、今後の関連解析において対象とする遺伝子を選定した。(iii)既存の試料を用いて、歯や毛髪の形態について遺伝子関連解析を行い、幾つかの遺伝子がこれらの形質と関連していることを見出した。歯や毛髪の形態と関連がみられた遺伝子が他の部位の形態とも関連しているのかなども含めて、今後さらなる関連解析を進めていく。ヒトの頭顔部における可視的形質に関連する遺伝子多型を明らかにするために、顔面形態・歯形態・毛髪形態を中心に表現型および遺伝子の解析を行った。顔面形態の解析は、3次元デジタルスキャナによる画像の他、頭部X線規格写真(セファログラム)を用いて行った。歯形態に関しては、歯列模型を用いて解析した。遺伝子関連解析の結果、幾つかの遺伝子においてこれらの形質と有意に関連する多型が観察された。既報の研究成果に関して特筆すべきものは、アジア人特有の毛髪の太さに関連するEDAR遺伝子の非同義多型が、「シャベル型切歯」や歯の大きさとも強く関連していることを見出したことである(Kimura et al. 2009 Am J Hum Genet)。シャベル型切歯とは、上顎中切歯の裏側の縁が隆起してシャベルのような形状をしている表現型のことであり、古人骨形態研究において、北東アジア人およびアメリカ先住民のマーカーとして用いられてきた形質であった。これまで、アジア人の太い毛髪やシャベル型切歯は、それぞれ独立に東アジアにおいて何らかの自然選択を受けて広まったと考えられることもあったが、これらの遺伝要因が同一であったことから、少なくとも一方の形質は副産物であった可能性が考えられる。また、部分的な遺物から抽出したDNA配列を基にその他の部分の形態的特徴を類推する目的で、我々の研究成果が参照されることもあり(Rasmussen M et al. 2010)、人類学研究において世界的に大きなインパクトを与えたと言える。
ヒト悪性線維性組織球腫由来細胞株におけるEBウィルス遺伝子発現の検討

1.ヒトマクロファージ細胞株のEBウィルス感染系の樹立を試みるも、成功にはいたらなかった。これら細胞株を各種分化誘導剤および各種培養細胞上清(サイトカイン)にて前処理した場合についても同様であった。2.悪性線維性組織球腫(MFH)由来細胞株におけるEBV潜伏感染遺伝子(EBNA2,LMP1)の発現をRT-PCRにて検討したが、結果は陰性であった。今回、ヒト肉腫細胞株におけるEBV遺伝子発現については、残念ながらnegativeな結果しか得られなかった。過去20年間、EBVの感染はB細胞特異的と考えられてきたが、近年一部のT細胞リンパ腫においても高率にEBV遺伝子が検出されることが報告されている。さらに最近、HIV感染後に発生した平滑筋肉腫、あるいは臓器移植患者に発生した平滑筋腫瘍において、クローナルに増幅されたEBV遺伝子が検出されている(New Engl.J.Med.1995;332:12-8および同誌1995;332:19-25)。こうした知見は、非B細胞腫瘍である肉腫の発生においてもEBVが関与するかもしれないとする我々の仮定を支持するものである。今後、こうした症例の人体材料について知見の積み重ねを図るとともに、細胞株の樹立を試み、EBVによる腫瘍化機序の詳細な解析に耐える系の作製を試みたい。
鉄筋コンクリート部材の付着割裂破壊耐力

本研究では、二段配筋された梁部材における内側主筋位置での付着割裂破壊に関するものである。当研究室では、内側主筋位置での付着割裂強度は、藤井・森田式による値よりもかなり低いことを確認している。そこで、片持ち梁型試験体を用いて主筋径db、横補強筋量、内側主筋総引張力に対する外側主筋総引張力の比γを変動させて実験を行った。その結果、加力比γが高くなると、無補強の場合の内側主筋位置での付着割裂強度及び横補強筋を配した場合の補強効果は低下した。また同一加力比において、横補強筋量が多い程、付着割裂強度及び耐力時の主筋滑り量が大きいことを確認した。内側主筋の付着割裂強度は外側主筋引張力によるせん断力により低減される.また,横補強筋の効果も外側主筋と比べ大幅に低い.これらの見解を元に,内側主筋位置でのひび割れ発生時の条件を整理し,実験結果によって係数を定めて,無補強試験体の二段配筋内側主筋位置での付着割裂強度算定式を導き出した.また,二段配筋の内側主筋付着割裂強度を外側主筋引張力による作用せん断応力と補強筋量等を指標として定式化し,実験式が梁形式実験を含めて既往の実験結果とよく適合することを確認した.本研究では、二段配筋された梁部材における内側主筋位置での付着割裂破壊に関するものである。内側主筋の付着割裂強度は外側主筋引張力によるせん断力により低減される.また,横補強筋の効果も外側主筋と比べ大幅に低い.これらの見解を元に,内側主筋位置でのひび割れ発生時の条件を整理し,実験結果によって係数を定めて,無補強試験体の二段配筋内側主筋位置での付着割裂強度算定式を導き出した.また,二段配筋の内側主筋付着割裂強度を外側主筋引張力による作用せん断応力と補強筋量等を指標として定式化し,実験式が梁形式実験を含めて既往の実験結果とよく適合することを確認した.一段配筋の試験体について,横補強筋に生じている引張力と付着強度の関係は,横補強筋に初期に引き上げ力を与えた試験体は,引き上げ力の増加によって付着割裂強度が上昇し,初期に引き上げ力を与えない試験体はその傾向が見られないことから,横補強筋の引き上げ力の効果が認められた。また各区間の付着強度に横補強筋比の違いは影響を与えない結果となった。二段配筋の試験体について,内側主筋の付着割裂破壊により耐力に主った試験体は,一般配筋で同じ横補強筋の試験体に対してよりも付着割裂強度は大きな値を示した。この理由としては,外側主筋を含む厚いコンクリ-ト部分と横補強筋により,内側主筋周りに生じるコンクリ-トの浮き上がりが抑制されたこと,また二段配筋では一段配筋に比べせん断ひび割れが多く発生したことによって横補強筋に生じる引張力が大きくなり,横補強筋による拘束効果が一層増加したことによるものと考えられる。また,本実験では二段配筋で外側主筋に引張力を加えると内側主筋位置での見かけの付着耐力が低下することを予想して実験を行ったが,これらの試験体はいずれも付着割裂破壊に至らず,主筋方向のせん断破壊を生じたと判断したため,予定した検討を行うことが出来なかった。この主筋方向のせん断破壊については,検討の結果,主筋に与える引張力による割裂低抗面に生じる曲げモ-メントに支配され,横補強筋の引張力は割裂面に対して軸方向力として作用することが判明し,カンチレバ-型加力方法による付着試験の検討課題となることが分った。RC部材での高強度鉄筋の使用に関連して、脆性的な破壊である付着破壊が問題となる。横補強筋が主筋を拘束して、この付着劣化を防ぐ効果が指摘されてきているが明確な結果は出ていない。また、二段配筋された部材の付着性状も未だ十分解明されておらず、前年度報告した実験ではほとんどの試験体が明瞭な付着破壊を起こさなかった。本年度の研究は、主筋拘束に効果が有ると考えられている中子筋を含む横補強筋による拘束効果と付着割裂強度の関係、二段配筋における外側主筋引張力が内側主筋の付着強度に及ぼす影響、二段配筋における横補強筋が内側主筋の付着性状に及ぼす影響を解明することを目的に行った。試験体は前年度と同様の梁の一部を模したキャンティレバー型とし、11シリーズ34体を計画し実験を行った。本年度は付着破壊以外の破壊が生じないように特に留意し、工夫して試験体の製作に当った。破壊は4体を除き全て付着割裂破壊となり、初期の検討を行うための以下の知見が得られた.1)U字筋により人工的に引き上げ力を与えた場合は通常の横補強筋より最大耐力時の滑り量が小さい。

2)二段配筋において、内側主筋に横補強筋を掛けることは靭性確保に効果がある。3)一段配筋した試験体において、横補強筋による強度増分は指針式を上回り特に中子筋を用いた場合、その傾向は顕著であった。4)隅主筋の横補強筋による強度増分は中主筋の拘束の程度により大きく影響される。5)横補強筋に引き上げ力を与えた場合、Pw Jwt.maxの増加に伴い付着強度は比例的に上昇する。6)二段配筋した場合、内側主筋の付着強度は外側主筋加力、内側・外側横補強筋により影響を受ける。耐震設計の合理化のために高配筋、高強度主筋などの利用が目指されるようになり、異形鉄筋の周辺で生じる付着割裂破壊の問題が一層重要となった。本研究は主筋が二段配筋された場合の内側主筋位置で生じる付着割裂の強度を明らかにしようとするものである。昨年度の研究成果では、片持ち梁形式試験法を用いて、二段配筋の内側主筋の付着割裂強度に及ぼす要因について検討した結果以下のことを明らかにした。(1)横補強筋の無い場合、内側主筋のみに加力したときの付着割裂強度は藤井・森田による算定式とほぼ一致する。(2)内側主筋の付着割裂強度は、ひび割れ強度も終局強度も、外側主筋の引張力によって内側主筋割裂面に生じるせん断応力の影響で著しく低下する。(3)外側主筋を囲むように横補強筋を配置すると、補強筋が内側主筋の付着割裂強度を増加する効果は外側主筋に対するものより大きいが、補強筋の効果は外側主筋の引張力が大きいほど低下する。これらの知見に基づき、本年度は更に実験結果をつけ加えて総合的な検討を行い以下のことを明らかにした。(1)ひび割れ発生強度と無補強試験体の付着割裂強度は同等であり、ひびわれ発生時の条件を整理して、無補強試験体の二段配筋内側主筋位置での付着割裂強度算定式を導きだした。(2)二段配筋の内側主筋付着割裂強度を外側主筋引張力による作用せん断応力を指標として定式化し、実験式が梁形式実験を含めて既往の実験結果と良く適合することから、その有効性を確認した。
DNAと結合した銀ナノ粒子の作製と発光メカニズムの解明

金属ナノ構造体に局在化した光電場と蛍光分子が強くカップリングし、蛍光強度が大幅に増強される現象が報告されている。我々がDNAを鋳型とした銀ナノ粒子の作製を行ったところ、核酸塩基の種類によって作製される銀ナノ粒子のサイズが異なることや作製した銀ナノ粒子が光励起によって可視域に強い発光を示すことを見いだした。通常、DNAは可視域において発光しないことから銀ナノ粒子とDNA間の相互作用が発光に重要な役割を果たしていると考えられる。本研究では銀ナノ粒子の作製条件を調整してDNAと結合した銀ナノ粒子の構造制御を試みることやその発光特性についての分析を行うことにより、発光メカニズムの詳細について検討を行った。DNAが結合した銀ナノ粒子は単一塩基で構成される一本鎖DNA (オリゴヌクレオチド)を含む緩衝溶液へ硝酸銀水溶液を加えた混合溶液に紫外光を約5分間照射することにより作製した。吸収スペクトルが銀ナノ粒子の表面プラズモン吸収に由来するピークを示すことや透過電子顕微鏡(TEM)像から、粒径が10nm50nm程度の銀ナノ粒子の形成を確認した。蛍光相関分光法による測定から発光ナノ粒子のサイズが約10nmであることがわかり、TEM像の結果と併せることにより単一銀ナノ粒子が発光していることが示唆された。また、銀ナノ粒子を基板上に固定化して励起光を照射すると発光が観察されるが、照射時間が一時間程度までは発光強度が増加する現象が見られた。これは発光に寄与する成分が光照射で銀ナノ粒子上に生成するためだと考えられる。
サリドマイドの抗血管誘導効果に基づく多血肝細胞癌治療の可能性に関する実験的研究

化学発癌で誘導した多血肝細胞癌に対し、血液プール造影剤を用いた造影3D fast gradient echo法第1相上で濃染された腫瘍領域を計測したところ、サリドマイド投与、非投与両群間には濃染域のサイズに有意差を認め、さらに、治療群のサリドマイド血中濃度50ng/ml以上の群と偽薬群とを比較したところ、その有意差は大きくなった。本研究で、ラットの実験的肝細胞癌に対し、サリドマイドは従量的に血管誘導阻害作用を有することが、造影MRIに血液プール造影剤を使用して確認できた化学発癌で誘導した多血肝細胞癌に対し、血液プール造影剤を用いた造影3D fast gradient echo法第1相上で濃染された腫瘍領域を計測したところ、サリドマイド投与、非投与両群間には濃染域のサイズに有意差を認め、さらに、治療群のサリドマイド血中濃度50ng/ml以上の群と偽薬群とを比較したところ、その有意差は大きくなった。本研究で、ラットの実験的肝細胞癌に対し、サリドマイドは従量的に血管誘導阻害作用を有することが、造影MRIに血液プール造影剤を使用して確認できた平成19年度は肝細胞癌のモデルの確立を行った。当初のモデルとして、マウスを使用し、100ppmのdiethyl-nitrosoamine(DEN)を飲水に混ずることによって化学発癌を試みたが、マウスは肝細胞癌誘導以前に肝障害で死亡する例が多く、動物モデルとしては不適当と判断し、使用する動物種をマウスからラットに変更した。また、ラットの肝細胞癌の免疫組織化学染色の最適化を試みた。予備実験で少数例のラットを用いて、誘導された肝細胞癌に対して、種々と前処置やオーバーナイト染色(一次抗体)などを行って、至適抗体・染色条件を検索した。その結果、DAKO社製のCD31,CD34、factorVIIIrelated antigen,thrombomodulin,VEGF,αsmooth muscle actinのうち、CD31は全く交差反応が見られず、他の抗体はラット肝細胞癌の腫瘍血管を自動計測を可能にするほどのコントラストでは交差反応が得られなかった。最適化にあたっては広範な情報収集も行ったが、ラット肝細胞癌における血管系の免疫組織化学染色に関して成功したという報告は見いだせなかった。従って、今回の実験においては、免疫組織化学染色の結果は参考情報ということになった。並行して、動物実験を継続、5週齢の雄性F344ラット60匹に100ppmのDENを飲水に混ずることによって2ヶ月間化学発癌の誘導を行った。2ヶ月目に動物をGd-DTPA(0.1mmol/kg i.v.)による造影MRIを行い、肝硬変症は存在するが多血肝細胞癌は肝内に存在しない状態(血管誘導前の状態)にあることを確認した。ここでプロトコール通り、飲水からのDENの投与を中止し、残りの一か月間サリドマイドあるいは偽薬を飲水中に溶解して投与を開始した。昨年度、雄性F344ラットへの化学発癌誘導を開始し、diethylnitrosoamine(DEN)投与2か月目のラットを準備した(肝臓は前癌状態ではあるが多血肝細胞癌はまだ誘導されていない状態)。今年度、誘導開始から3か月目、治療薬(サリドマイド)と偽薬(サリドマイドの溶媒)を投与開始してから1か月目に再度in-vivo MR撮影した(サリドマイド投与群は14匹、偽薬投与群15匹)。撮影は全身麻酔下で行われ、3テスラMR装置に表面コイルを併用。撮像シーケンスは3DVIBEで、造影前、造影後3時相にわたって撮影を反復した。Gd-DTPA (0.1mmol/kg)を尾静脈から急速静注し、生理的食塩水でフラッシュした。同様の撮影をGd-DTPAによる造影MRIから6時間後にデンドリマー型の血液プール造影剤(0.0125mmol/kg)を用いて行った。撮影終了後、麻酔薬過量投与の深麻酔下で、心臓採血を行い、死亡確認後、全肝臓を摘出し、10%フォルマリンによる固定後、包埋を行った後、全肝の切片を作製し、全スライスのH&E染色と、腫瘍部のみの免疫組織化学染色を行い、造影MR画像(MPR再構成により任意断面作製可能)とのスライス毎の比較ができるようにした。採血した検体は、質量分析でサリドマイドの血中濃度を定量した。その結果、投与群のサリドマイド血中濃度にはバラつきがあることがわかった(全血中1.4ng/ml375ng/ml)。造影3DVIBE第1相において、MRIの各断面上で濃染された領域を計測したところ、2群には有意差を認め(p<0.05)、さらに、治療群のサリドマイド血中濃度50ng/ml以上の群と偽薬群とを比較したところ、さらにその差は大きくなった(p<0.01)。光学顕微鏡での腫瘍組織の観察では、サリドマイド治療群では過形成結節に血管の誘導されていないものが目立つ印象であった。