hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
完全長lbcプロトオンコジーンの同定と細胞内における機能の解析

lbcは白血病細胞のDNAからNIH3T3細胞をトランスフォームする癌遺伝子として同定されたが、その細胞由来の完全長cellular lbc遺伝子(c-lbc)を同定した。c-lbcは2813アミノ酸からなる推定分子量309kDaの巨大タンパク質をコードしており、このなかにはPKA制御サブユニットRIIと結合するタンパク質断片として同定されたアンカータンパク質Ht-31を含むほか、シグナル伝達に関わると考えられる領域が複数見出された。はじめに同定されたonc-lbcには強いトランスフォーメーション能が認められたがc-lbcにはほとんど認められなかったことから、onc-lbcはシグナルを伝える上でのいわば制御領域を失うことによってトランスフォーメーション能を獲得したと考えられた。lbcを細胞内で強制発現させるとstress fiberを形成したことからlbcはrhoを介したアクチン骨格型の制御に重要な働きをしていることが判明した。c-Lbcは細胞質に局在しており、また、c-Lbc内カルボキシル末端領域にHt-31以外にRIIと結合する領域を新たに見出した。
コンクリートの破壊進行領域と引張軟化挙動のモデル化及びシミュレーションに関する研究

有限要素法に代表される数値解析手法は設計への適用という局面を向かえている。現在未解決な問題の一因に、コンクリート内部の微細なひび割れの挙動があり、その現象を記述するものとして、微細なひび割れの全過程ー破壊進行領域ーの力学的表現である引張軟化構成則と破壊エネルギが有力なものとして注目されている。しかし、破壊進行領域の実体的な特性がまだ明らかにはされておらず、破壊エネルギの寸法依存性の問題などが未解決になっている。破壊進行領域がどのような様態で進展し引張軟化挙動が生じるかを調べ、数値解析に結果を反映させることは現在極めて重要な課題である。本研究は、破壊進行領域とここに生じる引張軟化挙動を適切に記述するモデルと計算法を開発することを目的としている。現在の破壊エネルギおよび引張軟化則は、破壊進行領域の特性をリガメント上で平均的に評価して得られるものになっているが、本研究では、破壊進行領域の特性はリガメント上で変動することもあり得るとみなす考え方に基づいている。主な成果は以下の通りである。1.破壊進行領域に非一様な形状の軟化モデルを配置させるために、そのモデル形状のパラメータを求める逆問題を区間最適化手法として構成した。この方法を寸法依存性を示す破壊エネルギ試験(CT試験)に適用して引張軟化モデルのパラメータを求め、その変化性状から、局所的な破壊エネルギの特性、さらに、破壊進行領域が一様幅ではなく膨らみながら進展する特性があることを明らかにした。2.ひび割れ帯モデルは非局所理論を導入することにより実験から予想される破壊進行領域の進展特性を表現できるが、現在非局所性の発生条件は明らかではない。本研究では次の2つの非局所条件という考え方を導入した。・骨材粒径などを考慮した幾何学的条件・応力の拡散を考慮した力学的条件この条件に基づいてひずみの平均化を行なう非局所ひび割れ帯モデルを有限要素法の計算モデルとして構成した。この方法を寸法依存性を示す破壊エネルギ試験(CT試験)に適用した結果、定性的にではあるが、1の破壊進行領域の進展過程を表現できた。
計算機ネットワークの発展支援機構に関する研究

発展機構を備えたソフトウェアを構築する場合、プラットフォームとしてのネットワークが発展する点も考慮しなければならない。ネットワークの発展としては、新たなハードウェアの追加などが考えられるが、この場合にそのハードウェアを利用可能にするには管理者による設定が必要である。この管理の手間を省くために、アプリケーションの自動インストールに注目した。昨年度は、アプリケーションの設定をサイト内でどのように配布するのかについて研究を行った。今年度は、実際にアプリケーションをインストールする方法について研究を行った。今年度開発したシステムAPPCSは、インストールの際に行われるファイル書換やオプション指定などの情報を保存し、その情報をネットワーク内に配布することによりインストール作業を支援する。ユーザがネットワーク内のいずれか一台のホストでアプリケーションを手動でインストールすれば残りのプラットフォームに関してはそのホストで行われたファイル書換やオプション指定の情報を元に、APPCSがアプリケーションを自動でインストールする。APPCSはネットワークの全てのホストで常時動作しており、ユーザが行うインストール作業を監視しインストール手順の情報を集める。この情報を他のホストのAPPCSに送信し各ホストでこの情報を元に自動でアプリケーションをインストールする。このとき上位機のみ起動している時に上位機が仮インストールを行い、下位機が復帰した時に再度インストールする事でアプリケーションの可用性を高めるように設計した。我々はこのAPPCSを実装し、3種類の異なるプラットフォーム持つネットワーク環境において実験を行い、共有ディレクトリ毎にアプリケーションをインストールする方法と比べインストールの手間が省ける事及びアプリケーニションの可用性が高まる事を確認した。
宇宙の再加熱時における揺らぎの非線形効果と時空構造

前年度は、スカラ一場の非線形効果(パラメーター共鳴)による計量の長波長ゆらぎへの影響を、繰り込み群の方法を用いて評価し、その宇宙論的な影響を議論した。本年度は、前年度用いたゆらぎの解析方法に関する理論的定式化をより完全にする方向で研究を進めた。1)宇宙論的な長波長摂動の一般的な定式化:一様等方宇宙からの長波長摂動は、背景時空の情報(背景解の積分定数)だけから、その振る舞いを決定することができる。これをハミルトン-ヤコビの方法を用いることで一般的に証明し、ゲージ不変摂動解の具体形を与えた。この方法を用いると、任意の膨張則を持つ宇宙でのゲージ不変長波長摂動の振る舞いを、非常に簡単な手続きで求めることが可能となる。2)繰り込み群の方法の性質:再加熱時の解析において用いた、繰り込み群の方法自身の性質について解析を行った。その結果、ハミルトン系において、背景解の変数分離性と、繰り込み群方程式の正準性との間に関係があることを発見した。長波長摂動と繰り込み群を組み合わせる方法は、宇宙論における非線形現象を摂動論的に解析する新しい方法であり、宇宙論におけるさまざまな非線形現象に適用可能であると期待される。本研究はインフレーション宇宙後の再加熱時の様子を様子を時空構造(重力)まで含めた立場から理解しようとするものである。本年度は再加熱のもっとも簡単なモデルである一様等方宇宙の上で非線形相互作用する2つのスカラー場(インフラトン場と輻射場)の系に対して、宇宙論的ゲージ不変形式に基づく線形摂動の解析を行った。基礎方程式は2つのゲージ不変量に対する時間に関して2階の連立微分方程式となる。最初に宇宙論的に興味のある長波長極限の解のみに着目することで、ゲージ不変量の厳密解を構成した。この解はバックグランドの解のみを用いて表現されており、その振る舞いを繰り込み群を用いた近似的方法、および数値計算により解析することで再加熱時におけるゲージ不変量の振る舞いを定性的、定量的に把握することに成功した。その結果として以下の事が明かとなった。1)再加熱時におけるパラメーター共鳴の効果により、重力場の揺らぎとして非断熱的揺らぎが新しく生成される。したがってインフレーション時における断熱揺らぎのみならず、再加熱時の非断熱揺らぎの進化が、宇宙の大規模構造形成に大きく影響を与える。2)現在の宇宙背景輻射の揺らぎの観測結果を用いることにより、再加熱時における2つの場の相互作用の大きさが強く制限を受ける。つまり再加熱のモデル設定に対する制限を加える事ができる。
沖縄県における健康・長寿の要因に関する研究

本研究の最終年次の追求課題は、調査地域(大宜味村)の老人の精神心理的側面の特徴、各種指標と加齢との関連性、死亡構造の特徴、児童・生徒の健康像を明らかにすることであった。調査はおおむね順調にすすめられ、成績は以下のごとく要約される。1.調査地域の老人のモラ-ルに関する要因についての調査結果から(1)男性ではADL障害の有無、女性では健康度自己評価が、モラ-ルに大きな影響を及ぼす。(2)対人関係の依存パタ-ンの分析結果から、男性は子供・配偶者が重要であり、女性は友人関係であった。このことから特に女性老人の場合、家族以外の人と親密な関係をもつことがモラ-ルを高める大きな要因となることが示唆された。2.調査地域の過去10年の集検の成績より(1)身長は男女共に年齢とともに低下し、特に女性では顕著であった。(2)体重は男女共に加齢による減少は見られず、女性の40歳、50歳代では逆に増加していた。(3)血圧は収縮期血圧は加齢とともに上昇傾向を示し、拡張期血圧は40歳代では上昇し、逆に50歳以降は加齢とともに減少傾向を示した。3.調査地域住民の過去10年間の死亡の特徴は、男性が女性よりかなり高く、70歳代まで有意差が見られた。また死因の特徴は男性では40歳69歳、70歳以上の両群で悪性新生物が多く、女性では40歳69歳で多かった悪性新生物が、70歳以上では特に少なかった。4.小・中・高校生を対象とした検診成績から成人病予防の観点から何らかの指導・管理を要すると思われる者が15%程みられた。血液生化学値を肥満度別に検討した結果、性、年齢を問わず肥満群は非肥満群に比べ、高血圧、高脂血症などの成人病発生のリスクが高いことが示唆された。本県北部の大宜味村において表題の調査研究を実施した.本年度の研究は村内存住の65才以上の老人904名を対象に検診による一般健康状況と各種の生理・生化学検査並びに既往歴,生活習慣,食生活などの面接聞き取り調査を中心に進められた.調査結果の概略はおよそ次のごとくである.1.検診受診率並びに聞き取り調査の参加率は,それぞれ87.2% 89.2%と極めて高く,評価に充分耐え得る成果が得られた.2.健康度の自己評価については75%の者が健康と答えており,その割合は年令の上昇によっても大きな変化はみられない.また性別では男性に健康と答えた者の割合が多い.3.ADLの高い者の比率は年令と共に減少はするが,高令になってもかなり高いレベルで機能が保たれている.また年令の上昇に伴う機能の低下は女性より男性が早い.4.血圧値は必ずしも低値ではないが,Hb値,血清総コレステロール値,HDLコレステロール値は極めて良好な値を保っている.5.日常生活における食品摂取状況は,ごはん,卵,油脂類,緑黄色野菜類の摂取が比較的多く,逆につけもの,肉類,めん類,いも類,牛乳の摂取量は比較的少ない.6.記憶力などは年令に上昇につれてかなり低下しているが,日常生活への基本的適応能力は保たれており,また別居子との交流,近隣との交流も充分に保たれている.7.90才以上の長寿者群はBreslowらの「7つの健康習慣」の実行率が高い.次年度はこれらの成果を基に食生活,社会的活動状況,適応力などの面をさらに深く明らかにしていく予定である.本年度の研究の大きな柱は栄養摂取状況と社会生活適応性を明らかにすることであったが、両調査とも大きな成果を得ることができた。調査結果の概略はおよそ次のごとくである。1.初年度調査以来、20名の死亡者が出たが、女性に比べ圧倒的に男性の死亡者が多く、死因は脳血管疾患、悪性新生物、老衰が多い。過去10年間の死亡データからみた地域の特徴については次年度で詳細に分析する。2.栄養調査は聞き取り調査を中心に買いあげ方式も加味して実施したが、両者ともほぼ同様な結果が得られ、信頼度の高さを裏づけた。イ)たんばく質や脂質の摂取については動物性のものの占める割合が高い。ロ)ナトリウムの摂取量が低く、カリウム、カルシウム等の摂取量は高い。ハ)ビタミンA,Cの摂取量が特に多い。3.初年度の血圧測定値が若干高値の傾向がみられたので、再チェックをした結果、コレステロール値、ヘモグロビン値同様に血圧値も良好であることが確認された。4.家族関係、別居子および近隣との交流状況については、本村は1人暮し老人や老人世帯が多いが、別居子、兄弟や近隣、友人との接触頻度が非常に高い。4.老人クラブの参加率が高く、知人や友人の数やつきあいの頻度も高く、広い範囲にわたっての交流情況が保たれている。5.エゴグラムから本村老人のパーソナリティーはNP値が特に高く、対人関係で受容的、世話好きな性格が示唆された。1.調査地域の老人のモラ-

ルに関する要因についての調査結果から(1)男性ではADL障害の有無、女性では健康度自己評価が、モラ-ルに大きな影響を及ぼす。(2)対人関係の依存パタ-ンの分析結果から、男性は子供・配偶者が重要であり、女性は友人関係であった。このことから特に女性老人の場合、家族以外の人と親密な関係をもつことがモラ-ルを高める大きな要因となることが示唆された。2.調査地域の過去10年の集検の成績より(1)身長は男女共に年齢とともに低下し、特に女性では顕著であった。(2)体重は男女共に加齢による減少は見られず、女性の40歳、50歳代では逆に増加していた。(3)血圧は収縮期血圧は加齢とともに上昇傾向を示し、拡張期血圧は40歳代では上昇し、逆に50歳以降は加齢とともに減少傾向を示した。3.調査地域住民の過去10年間の死亡の特徴は、男性が女性よりかなり高く、70歳代まで有意差が見られた。また死因の特徴は男性では40歳69歳、70歳以上の両群で悪性新生物が多く、女性では40歳69歳で多かった悪性新生物が、70歳以上では特に少なかった。4.小・中・高校生を対象とした検診成績から成人病予防の観点から何らかの指導・管理を要すると思われる者が15%程みられた。血液生化学値を肥満度別に検討した結果、性、年齢を問わず肥満群は非肥満群に比べ、高血圧、高脂血症などの成人病発生のリスクが高いことが示唆された。
フラビウイルスの媒介節足動物種特異性に関する研究

フラビウイルスには多くの人畜共通感染症の原因ウイルスが含まれ、その多くは節足動物(ダニ、蚊)によって媒介される。ダニ/蚊媒介性のフラビウイルスは哺乳動物細胞では同様に感染し増殖するが、ダニ/蚊においては各々の媒介動物でしかウイルスは増殖せず、媒介動物特異的な感染・増殖様式の存在が示唆されるが詳細は明らかではない。ウイルスのゲノムより構造蛋白をコードする領域を欠損させたレプリコンは、細胞内において自己の複製は起こるが、構造蛋白が産生されないため、感染性のある粒子が放出されないため、ウイルスの複製機構の研究において有用な系として扱われている。そこでフラビウイルスの媒介動物特異的な増殖様式を解明するために、レプリコンを用いたダニ媒介性脳炎ウイルス(TBEV)および日本脳炎ウイルス(JEV:蚊媒介性)のキメラウイルス様粒子(キメラVLPs)を作成することを試みた。本研究において、ダニ媒介性フラビウイルスであるTBEVのレプリコンを北海道分離株Oshima株の感染性cDNAクローンを用いて構築し、また蚊媒介性のJEVの構造蛋白を発現するプラスミドをレプリコン導入細胞にトランスフェクトすることにより、JEV由来の粒子構造を持ちTBEVのレプリコンをゲノムとして持つキメラVLPsを分泌させた。キメラVLPsは一度のみの感染性を有しており、相補的に発現させた構造蛋白のmRNAとのrecombinationも起こしておらず、安全性にも優れていることが示された。また、キメラVLPsの節足動物由来培養細胞への感染性を検討することにより、フラビウイルスの媒介節足動物の特異性にはウイルスの侵入・増殖に関わる特異的な因子が関わっていることが示された。これらの成績はフラビウイルスの自然界における存続様式の解明に重要な知見をもたらし、今後のフラビウイルス感染症の疾病制御への展開が期待される。ウイルスの複製機構の解析において、ウイルスのゲノムより一部または全部の構造蛋白をコードする領域を欠損させることによりゲノムの複製等に関わる要因のみを保持させたレプリコンが近年フラビウイルスを含む様々なウイルスにおいて構築されてきている。レプリコンは細胞内において自己の複製は起こるが、構造蛋白が産生されないため、ゲノムのパッケージングが起こらず感染性のある粒子が放出されないため、ウイルスの複製機構の研究において有用な系として扱われている。本研究においてダニ媒介性フラビウイルスであるダニ媒介性脳炎(TBE)ウイルスのレプリコンを北海道分離株Oshima株の感染性cDNAクローンを用いて構築し、さらにレプリコンの3末非翻訳領域に外来遺伝子を挿入することによりレプリコン導入細胞において発現させることに成功した。またウイルスの構造蛋白を発現するプラスミドをレプリコン導入細胞にトランスフェクトすることにより、ウイルス構造蛋白を相補的に発現させることによって、レプリコンをパッケージングした粒子を分泌する系を構築した。分泌した粒子は一度のみの感染性を有しており、相補的に発現させた構造蛋白のmRNAとのrecombinationも起こしておらず、安全性にも優れていることが示された。さらにこの系を用いて、外来遺伝子発現ベクターとしての応用も可能だった。このレプリコン系は、TBEVのゲノムの複製およびパッケージング機構を解析していくうえでの基礎資料となるほか、新たな診断法およびワクチン開発への応用を期待できる。
実物体外観の統合質感の定量化と光学特徴量に基づく質感生起モデルの構築

本年度は、実物体を刺激として、その光沢と色度を変化させ、質感評価の実験を行なった。実物体にはポリ塩化ビニル製のプラスチック波板を用い、この実物(20 x 16 cm)を2D分光放射輝度計により撮影し、元画像(台形:底辺580,上辺512 X縦280 pix)を作成し、ピクセル毎に分光反射率を求めた。測定時に照明光と放射輝度計にそれぞれ偏向板を取り付け、この2枚の偏光板の相対角度により刺激の光沢を変化させた。刺激の色度は測定した画像の拡散反射成分のみを用いて変化させた。これにより3種類の光沢、3種類の色相、3種類の彩度からなる27枚の刺激を作成した。実験では、異なった2個の刺激を併置呈示し、被験者は刺激全体の質感の見えの差を評価して、差が大きい(4)から小さい(1)までを4段階で応答した。被験者は色覚正常者11名を用いた。実験結果として、各刺激対(全351対)に対する統合質感の差に対する応答(14)が得られ、全被験者の平均値を各刺激対の質感評価値とした。質感評価の予測式として、LAB色空間における各刺激画像の全ピクセルの輝度値(L*)と色度値(a*, b*)を計算して、その分布からn次統計量(平均値、分散、歪度、尖度)の画像特徴量を計算する。各刺激対で画像特徴量の差を求め、その差の平方和を予測値とする。質感評価の応答値と予測値の回帰直線から各画像特徴量の差の係数を決めた。本年度は、実物体を用いて統合質感評価の実験を行い、予測式を求め、極めて良好な結果が得られた。これは本研究の目的の一つである実物体外観の統合質感の定量的な評価方法の確立に極めて近いたことを意味する。さらに、偏向板を用いて、実物体の光沢と色を別々に処理する方法をここで新たに確立した。したがって、研究はおおむね順調に進展していると言える。今後は、刺激としてプラスチック波板以外の実物体を用いて、予測式の予測精度を確認する。さらに、物体表面の画像特徴量から統合質感を生起するモデルを構築して、視覚系の統合質感生起メカニズムの解明を目指す。新しい心理物理実験により質感生起モデルの検証を行う。本年度は、実物体を刺激として用いる実験の前段階として、色、光沢、テクスチャなどを制御してディスプレイ上に刺激を呈示するために、3D-CGを用いて実物体に近い刺激を作成する準備を行った。刺激として、プラスチックや金属加工品など一般的な固体素材、および植物、食品や肌のような水分を含んだ生物特有な質感を持った素材を対象とした。刺激の質感知覚に関する最近の論文や学会発表を再度確認し議論したところ、質感を現実物体のように知覚させるためには、刺激を2次元画像としてディスプレイ上に呈示するだけでは不十分であることがわかった。3D-CGを用いて、刺激に色、光沢、テクスチャを付加するだけではなく、刺激に両眼視差を与え立体視させ立体形状として呈示すること、かつ刺激に動きを与え観測角度を変化させて呈示することが必要であることが判明した。そこで、本年度は、研究実施計画を変更して、刺激作成のためのPCプログラムを新たに開発することと刺激呈示の実験手続きプログラムの準備を行うこととした。刺激呈示装置としては、高輝度有機ELディスプレイを準備し、刺激のHDR呈示を可能にした。刺激呈示用PCを準備し、刺激呈示、被験者応答の入力、実験全体の制御ができるようにした。被験者ブースを製作し、ブースの側面、背面、天井を黒の暗幕で覆って、ディスプレイによる刺激呈示の際に外部からの光を遮断できるようにした。さらに、実験装置スペースの削減のために、被験者の座る位置での光遮蔽は、可動式のブースを製作し、実験実施時のみに被験者を覆うように工夫した。被験者用アゴ台を準備し、デイスプレイ面から被験者の眼までの視距離が57cmになるように調整した。デイスプレイの光刺激のキャリブレーションのために、分光放射輝度計を使って光測定を行った。本年度は、交付申請書に記入した研究実施計画にある実験実施までには至らなかった。その理由は、第一に実験刺激の作成方法を大幅に見直したことにある。質感知覚研究は文字通り日進月歩で急速に進展している。そのため、我々は最近の学会発表や論文を参考にして、実験に用いる刺激を再度見直した。その結果、これまで考えていたような刺激呈示、つまりディスプレイ上に刺激を2次元の画像として呈示するだけでは現実感を持った質感知覚が不十分であることがわかった。刺激に両眼視差を与えて立体視できるようにすること、かつ刺激に動きを与えて観察角度を動的に変えることが重要な点であることが判明した。そこで、そのための刺激呈示プログラムを開発することを始めたが、その準備は進んでいるものの、実験実施までには至らなかった。第二の理由は、研究代表者が本年度に所属機関を変更したため、実験装置を移動する必要があったことである。移動のために時間がかかり、その分研究の進捗が遅れた。しかし、刺激の大幅な見直しによる実験結果の有効性が大きく増大し、実験装置や分光放射輝度計の準備はすでに終了しているので、(2)おおむね順調に進展していると判断した。

本年度は、実物体を刺激として、その光沢と色度を変化させ、質感評価の実験を行なった。実物体にはポリ塩化ビニル製のプラスチック波板を用い、この実物(20 x 16 cm)を2D分光放射輝度計により撮影し、元画像(台形:底辺580,上辺512 X縦280 pix)を作成し、ピクセル毎に分光反射率を求めた。測定時に照明光と放射輝度計にそれぞれ偏向板を取り付け、この2枚の偏光板の相対角度により刺激の光沢を変化させた。刺激の色度は測定した画像の拡散反射成分のみを用いて変化させた。これにより3種類の光沢、3種類の色相、3種類の彩度からなる27枚の刺激を作成した。実験では、異なった2個の刺激を併置呈示し、被験者は刺激全体の質感の見えの差を評価して、差が大きい(4)から小さい(1)までを4段階で応答した。被験者は色覚正常者11名を用いた。実験結果として、各刺激対(全351対)に対する統合質感の差に対する応答(14)が得られ、全被験者の平均値を各刺激対の質感評価値とした。質感評価の予測式として、LAB色空間における各刺激画像の全ピクセルの輝度値(L*)と色度値(a*, b*)を計算して、その分布からn次統計量(平均値、分散、歪度、尖度)の画像特徴量を計算する。各刺激対で画像特徴量の差を求め、その差の平方和を予測値とする。質感評価の応答値と予測値の回帰直線から各画像特徴量の差の係数を決めた。本年度は、実物体を用いて統合質感評価の実験を行い、予測式を求め、極めて良好な結果が得られた。これは本研究の目的の一つである実物体外観の統合質感の定量的な評価方法の確立に極めて近いたことを意味する。さらに、偏向板を用いて、実物体の光沢と色を別々に処理する方法をここで新たに確立した。したがって、研究はおおむね順調に進展していると言える。今後は、本年度は未完であった実験をまず行う。そのために刺激の作成プログラミングを完成する。その後、この実験結果を参考にして、実物体を刺激とした実験を行う。ディスプレイ実験と実物体実験の両方を今後行うことになり、実物体の準備のための時間が少なくなることが問題となるが、その対応策として、ディスプレイ実験と並行して、実物体の刺激の作製を行うことで時間を短縮する。それ以外は、特に問題がないので、予定通り研究を進める。今後は、刺激としてプラスチック波板以外の実物体を用いて、予測式の予測精度を確認する。さらに、物体表面の画像特徴量から統合質感を生起するモデルを構築して、視覚系の統合質感生起メカニズムの解明を目指す。新しい心理物理実験により質感生起モデルの検証を行う。
現代社会における死の位相

イギリスの社会学者ゴーラーが「死のポルノグラフィー」(1955)によって先鞭をつけ、アリエスが『死と歴史』(1975)によって明確に現代社会の特性として歴史的に定位した「死のタブー視」は、今や高度産業社会に共通するものとなっている。こうした事態を招いた基本的要因として、「死の医療化」と伝統的共同体の衰退が挙げられる。医療の制度化に伴い、20世紀の初頭から中葉にかけて伝統的な「在宅死」は「病院死」に取って代わられ、葬儀を担ってきた共同体の役割は「都市化」と「産業化」の進展の中で葬儀産業へと移行した。本研究はこうした事態によってもたらされる「死の意味づけ」の変化を、「医療」領域に限定することなく、(1)現代社会における多様な死のあり方に関する全体的見取り図を構築し、(2)特に家族特性-親子・配偶者・兄弟姉妹-の違いによる「意味づけ」の差異を、既存のデータの再整理を通して系統的に明らかにすることにある。この作業の中で、現時点において注目すべき事態として次の二点が挙げられる。一つは、「高齢化」と「医療化」の接点において「予期された悲嘆」(anticipatory grief)が本来の機能を喪失し、「ストックホルム・シンドローム」を発生させつつあるという点であり、第二点は「子供」概念の意味づけの変化によって、「子供の死」の意味づけが困難となってきている、という点である。
餌料プランクトン「ワムシ」の休眠卵形成機構の解明と休眠卵量産技術への展開

1.ワムシの両性生殖・交尾機構形態と増殖特性が異なる本種の5株を材料とし、雌雄間の両性生殖・交尾頻度を株内と株間で求めると共に、株間の遺伝的変異の定量を行った結果、従来同種とされた本種のL型、S型間には生殖隔離が存在し、既報のアイソザイム分析、核型分析結果と併せると、別種と考えるべきことが分った。また、新タイプと考えられていた熱帯産の超小型ワムシは従来のS型と同種であることも分った。休眠卵形成を実施するためには複数の培養株を混ぜないことが重要で、これにより、交尾頻度を高め、効率的な休眠卵形成を行わせることができることが分った。2.間引き培養方式を用いた休眠卵量産ワムシ休眠卵の大量生産を効率化するため、これまでに開発したバッチ培養(飼育水を交換せず、短期間で終了)による生産に対して、間引き培養方式(ワムシを収穫しながら飼育水を交換する、培養は長期)を導入し、その効果を検討した。0.5m3容水槽6面を用い、濃縮後連結したNannochloropsisを餌料として休眠卵形成に適した水温・塩分下で約20日間L型ワムシの培養を行った。水換えをしないバッチ培養を対照とし、2日に1回、および4日に1回それぞれ飼育水を交換した間引き培養との間で休眠卵形成の比較を行った単位給餌量当たりの休眠卵形成数は4日に1回水交換した間引き培養で最も多く(9万個/g(乾重))バッチ培養時の2.5倍になった。しかし、間引き培養では、ワムシ増殖を阻害する細菌が多く出現し(水換えにともなう培養環境の急変に起因すると推察される)14日目以降にワムシの増殖不良が一部の水槽で起こった。水槽内にフィルターマットを設置することによって、安定的な培養が可能となり、設置しない場合に比べて休眠卵形成効率も1.3倍になった。ワムシ抽出物の添加やバクテリアの添加効果を確認するには至らなかった。本研究では、量産技術に展開しうるような休眠卵形成の機構解明を目的として、休眠卵形成の二つのステージ、すなわち、両性生殖誘導と交尾現象に対象を絞って検討を行っている。以下に、これまでに得られた研究結果の概要を述べる。1.両性生殖誘導機構ワムシの抽出物や培養槽内から分離した細菌の添加が両性生殖誘導に対する効果を検討した結果、無菌下では両性生殖が誘導されにくいこと、添加する細菌株によっては両性生殖が無菌下に比べて5・10倍の頻度で誘導されること、逆に抑制する細菌株も存在することが明らかとなった。またワムシ抽出物の内、水溶性画分が両性生殖を誘導することも判明した。当初、活性のあった水溶性画分の分画をさらに進め、誘導物質を特定する作業の実施を目的としていたが、アッセイ試験の実施の際、同じ処理を繰り返し行った場合の、測定値のバラツキが大きく、信頼度の高いアッセイ法の確立に向けて研究を継続している。2.交尾機構形態と増殖特性が異なる本種の5株を材料とし、雌雄間の交尾頻度を株内と株間で求めると共に、株間の遺伝的変異の定量を行った結果、従来同種とされた本種のL型、S型間には生殖隔離が存在し、既報のアイソザイム分析、核型分析結果と併せると、別種と考えるべきことが分かった。

また、新タイプと考えられていた熱帯産の超小型ワムシは従来のS型と同種であることも分かった。当初、目的とした実験は終了し、休眠卵形成を実施するためには複数の培養株を混ぜないことが重要で、これにより、交尾頻度を高め、効率的な休眠卵形成を行わせることができることが分った。【目的】ワムシ休眠卵の大量生産を効率化するため、これまでに開発したバッチ培養(飼育水を交換せず、短期間で終了)による生産に対して、間引き培養方式(ワムシを収穫しながら飼育水を交換する、培養は長期)を導入し、その効果を検討した。【方法】0.5m3容水槽6面を用い、濃縮後凍結したNannochloropsisを餌料として休眠卵形成に適した水温・塩分下で約20日間L型ワムシの培養を行った。水換えをしないバッチ培養を対照とし、2日に1回、および4日に1回それぞれ飼育水を交換した間引き培養との間で休眠卵形成の比較を行った。ワムシ個体群内の両性生殖誘導と休眠卵形成の頻度は、それぞれ、ワムシ密度が約150個体/mlおよび約250-300/mlで最大となるので、間引き後の密度を150/mlになるように調節した。培養が長期にわたると、懸濁態有機物が水中に蓄積し、ワムシの培養不良が起こりやすくなる。そこで次に、懸濁物除去用のフィルターマット(日本バイリーン社製)を水中に垂下し、休眠卵形成の安定化に対する効果を検討した。【結果】単位給餌量当たりの休眠卵形成数は4日に1回水交換した間引き培養で最も多く(9万個/g(乾重))、バッチ培養時の2.5倍になった。しかし、間引き培養では、ワムシ増殖を阻害する細菌が多く出現し(水換えにともなう培養環境の急変に起因すると推察される)14日目以降にワムシの増殖不良が一部の水槽で起こった。水槽内にフィルターマットを設置することによって、安定的な培養が可能となり、設置しない場合に比べて休眠卵形成効率も1.3倍になった。
病原菌/非病原菌認識機序におけるIL-10の役割とその調節の解明

我々をとりまく環境には多種多様の微生物が存在するが、その全てが生体に病害を惹起するものではなく、生体は何らかの病原菌/非病原菌の識別能力を有していると考えられる。しかし、その識別のメカニズムは明らかになっていない。本研究では、御性サイトカインであるインターロイキン10(IL-10)の病原菌/非病原菌の識別機序への関与について検討した。その結果、腸炎を起こすタイプの菌株(C.roudentium)よりも非病原菌(Nissle 1917)のほうが、IL-10を誘導する能力が高い事が分かった。さらに、この能力は死菌ではみとめられず、非病原菌の活動性が関与する事が示唆された。我々をとりまく環境には多種多様の微生物が存在するが、その全てが生体に病害を惹起するものではない。腸内細菌など炎症を起こさない共生可能なものと、腸炎を惹起しうる病原菌を生体はどのように識別しているのか、そのメカニズムはまだ十分な解明が進んでいない。制御性サイトカインで知られるインターロイキン10(IL-10)のノックアウトマウスは無菌状態では異常を呈さないが、腸内細菌の存在下では腸炎を自然発症する。これはIL-10の非存在下では共生細菌が病原性細菌のように振舞うことを示唆している。本研究課題はIL-10が病原性/非病原性認識システムに関与しているかどうかの評価と、その機序を解明することを目標とする。当年度は、微生物の違いにより免疫細胞の応答が異なるかを評価するためにマウスのマクロファージ系細胞株であるRAW264.7細胞を使用し、グラム陰性桿菌である大腸菌株(Escherichia.coli 055:B5)とサルモネラ菌株(Salmonella. enterica minnesota)由来の菌体成分であるリポポリサッカライド(LPS)で細胞を刺激しそのサイトカインプロファイルの違いについて検討した。まず刺激量、時間などを十分検討しシステム構築を行った後、データ回収をおこなった。その結果、どちらもLPSでの刺激にもかかわらず、サイトカイン産生のバランスが同様でない可能性が確認された。また、IL-10ノックアウトマウスを使用し、本研究で使用予定であるマウス内視鏡による重症度評価のシステムセットアップを開始した。本研究は、我々をとりまく環境の中に存在する種多様の細菌類において、病原菌として認識されるものと、いわゆる共生菌として存在するものがどのように宿主に選択されているか、そのメカニズムを究明することを目的としており、特に制御性サイトカインであるIL-10(インターロイキン10)の役割に着目し開始された。昨年度までに、IL-10ノックアウトマウスの自然発症腸炎における当施設での腸炎のキネティクスを確認し、Rag-/-;IL-10-/- DKOマウスで腸炎が殆ど発症しないことを観察した。しかしその後の解析で、腸炎を発症するマウスも散見されることが分かった。IL-10の非存在下で、自然免疫細胞のみでも腸内細菌の存在のみで十分炎症が起こることが示唆される。しかし、大多数のRag-/-;IL-10-/- DKOマウスでは腸炎が観察されないことから、これらの形質の違いは、マウスごとに異なる腸内細菌叢に起因すると考えられた。このことからも、細菌類によって、炎症を惹起できる能力が異なるこを示唆すると考えている。平行してin vitro実験によって、非病原菌である大腸菌株Nissle 1917と病原菌であるCitrobacter rodentiumの死菌ないし生菌でRaw264.7細胞を刺激し、病原菌/非病原菌によって、刺激性の違いがあるか実験をすすめた。ヒトの生活環境には多種多様の微生物が存在し、その中でも細菌類は肺炎や腸炎を惹起させる病原菌と、皮膚や腸管に常在し、宿主との相互作用によって互いに恩恵を与え、宿主の免疫や組織修復に役立つ共生菌(非病原菌)の2つに大別する事ができる。しかし、その共生菌と病原菌とをどの様な機序によって宿主が識別しているかについてはメカニズムは完全に解明されていない。本研究では制御性サイトカインであるIL-10(インターロイキン10)が、その機序に関わっているかを調べるために行われた。本年度は、病原菌としてCtrobacter rodentiumと、非病原菌である大腸菌株Nissle1917の生菌を使用し、マウスのマクロファージ系細胞株Raw264.7を刺激し、発現する遺伝子のプロファイリングをマイクロアレイによって比較した。IL-10はNissle1917の刺激により、Ctrobacter rodentiumより7倍近く発現が高くなっており、昨年度までに検討した死菌での3倍と同様の傾向で、より発現に差がでている。一方で、前炎症性サイトカインのIL-1β、TNFαでは発現強度は変わらないことから、病原菌と非病原菌で免疫応答の惹起バランスに差があることが示唆された。また、S100a8やCCR1など自然免疫細胞の抗菌機能に重要な遺伝子がNissle1917よりCtrobacter rodentiumで10倍以上上昇していた。Nissle1917の生菌刺激でCtrobacter rodentiumより発現強度が6倍以上強い遺伝子が300以上検出されたため、今後はこの中からIL-10の発現を促進する可能性がある転写因子/共役因子を検索し、その遺伝子のノックダウンなどにより、上記の変化が消失するか検討する必要がある。

我々をとりまく環境には多種多様の微生物が存在するが、その全てが生体に病害を惹起するものではなく、生体は何らかの病原菌/非病原菌の識別能力を有していると考えられる。しかし、その識別のメカニズムは明らかになっていない。本研究では、御性サイトカインであるインターロイキン10(IL-10)の病原菌/非病原菌の識別機序への関与について検討した。その結果、腸炎を起こすタイプの菌株(C.roudentium)よりも非病原菌(Nissle 1917)のほうが、IL-10を誘導する能力が高い事が分かった。さらに、この能力は死菌ではみとめられず、非病原菌の活動性が関与する事が示唆された。本年度中に、病原菌/非病原菌で刺激したRaw264.7細胞の遺伝子発現解析をマイクロアレイで進める予定であったが、Nissle1917株の取得、データの不安定さ、実験条件の設定に予想以上の時間を要してしまい、やや進行に遅れが生じた。消化器病学、免疫学マイクロアレイ用の実験において条件設定が進んでおり、現在検体回収を進めている。本年度はマイクロアレイの結果を解析し、IL-10の制御にかかる遺伝子の発現について相違があるかを解析し、ヒットする遺伝子があれば、その遺伝子のノックアウトマウスが既に作成されているかを確認し、感染実験などが可能か検討する予定である。当年度は細胞を使用したin vitro実験の条件検討と、マウスを使用したin vivo実験のシステムセットアップを中心に取り組んだ。細菌の細胞壁由来の分子であるLPSはToll-like receptorによって認識され免疫応答を惹起する。当年度のin vitro実験において、分子としてはLPSであても、由来の菌株により応答のプロファイルが異なることが示唆された。また、マウス内視鏡での観察にて当施設でのIL-10ノックアウトマウス腸炎は28週齢までには発症、増悪することを確認することが出来た。研究の進行がやや遅れているため、当該助成金が発生した。大腸菌株(Escherichia.coli 055:B5)とサルモネラ菌株(Salmonella. enterica minnesota)はともに腸炎をおこす病原体となり得ることから、今後は比較対照として非病原体である菌株による検討を行う必要がある。この際、微生物由来分子の検討の他、菌の活動性による免疫応答惹起能も重要であることから、生菌での検討を進める。IL-10ノックアウトマウスはT細胞依存性腸炎では無いため、成熟B細胞、T細胞が存在しないRag1-/-IL-10-/-でも炎症が起こるはずである。しかし、マウス内視鏡システムのセットアップ過程での観察で、我々の施設でのRag1-/-IL10-/-が腸炎を殆ど起こさないことが観察され、また腫瘍壊死因子TNFなどの炎症性サイトカインも上昇していないことが確認された。これは、成熟B細胞、T細胞の非存在下であると十分な病原体の認識が起こらないことを示唆しており非常に興味深く、今後も慎重に観察を継続する予定である。H27年度に繰り越された実験を施行する際に当該金を使用する。H25年度に計上していた学会参加の旅費などが予定より下回ったため当該助成金が生じた。H26年度に海外学会に参加するため、当該助成金を使用する予定である。
理論計算によるコイルドコイルを用いた機能性遷移金属蛋白質の演繹的デザイン

本年度は、人工蛋白質の理論設計に必要と考えられる分子構造ー電子構造ー機能相関の解明に着手した。まずX線結晶構造からCu2S2コアの構造分布を調べたところ、銅-銅間距離が2.342.59オングストローム、S-S間距離が3.764.24オングストロームと多様な分布を示していた。そこで、その分子構造構造の多様性と電子構造の関係を、密度汎関数法を用いて調べた。モデルの作成には、様々な生物種のシトクロムc酸化酵素、亜酸化窒素還元酵素で、解像度が2.0オングストローム以下の結晶構造データを用いた。モデルとしては、二核の銅イオンと架橋するシステインからできているcore modelと、CuA部位の第一配位圏までとりこんだligand modelを構築した。さまざまなCu-Cu間距離やS-S間距離を持つCuA部位のモデルに対して、電子伝達部位CuAの酸化還元電位と強く関わる物理量であるイオン化ポテンシャルを計算したところ、core modelに関しては銅-銅間距離依存性、S-S間距離依存性が確認された。またこれらの依存性は軌道相関図を用いて説明できることがわかった。一方ligand modelでは、イオン化ポテンシャルのCu-Cu間距離依存性がなくなってしまった。これは、イオン化ポテンシャルを決める軌道の軌道エネルギーを決定する要因が配位子(特にHis)とCuの相互作用によるためであると考えられる。また4本鎖コイルドコイル蛋白質へのCuA(パープル銅)部位導入に成功し、その構造評価をおこなった。蛋白質溶液は濃紫色を呈し、分光学測定においてパープル銅サイトに特徴的なスペクトルが観測された。拡張X線吸収微細構造分析(EXAFS)および理論計算によるモデリングにより、既報のパープル銅サイトに酷似した構造が得られた。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、シトクロムc酸化酵素や亜酸化窒素還元酵素にみられる電子伝達に働く金属中心である電子伝達部位Cu_Aと軟体動物や甲殻類の血液に含まれる酸素運搬蛋白質であるヘモシアニンの機能を持つ人工蛋白質の理論設計のために銅活性中心の電子構造の理論解析を行った。Cu_A部位に関しては電子移動をスムーズに行うために活性中心が強い非局在性を示すような電子構造(σ_u^*状態)をとることが知られている。その起源を解明するため密度汎関数法による電子構造の解析した結果、Cu_2S_2コアそのものはCu_A部位と異なりπ_u状態が安定になり、特徴的なσ_u^*状態をとるにはCu_2S_2コアの銅-銅間の直接相互作用に加えて、エクアトリアル位に配位子が配位することが必要であることが明らかとなった。その際、Cu_2S_2コアのσ_u^*軌道と配位子の静電相互作用、軌道相互作用により、基底状態がσ_u^*状態となり、強い非局在性を示すことが判明した。またグルタミン酸・アスパラギン酸の配位も強い負の静電相互作用を示すためにσ_u^*基底状態になると期待される。ヘモシアニンに関しては様々な配位子(アンモニア、ヒスチジンの側鎖であるメチルイミダゾール、HBpz_3(= hydrotris{3,5-diisopropyl-pyrazolyl}borate))を用いたヘモシアニンのモデルに対して密度汎関数法による理論計算を実施したところ、アンモニア、メチルイミダゾール、HBpz_3の順に酸素結合に関わる銅のd軌道エネルギーが酸素のLUMOに近づいていった。この軌道エネルギーの準位が近づくほど酸素との軌道相互作用が大きくなり酸素結合性に違いが生じていることがあきらかとなった。ヒスチジンは結合できないアンモニアモデルと不可逆な結合をするHBpz_3モデルの中間にあり、このことが可逆的な酸素結合を発現するものと考える。

拡張X線吸収微細構造分析(EXAFS)および理論計算によるモデリングにより、既報のパープル銅サイトに酷似した構造が得られた。24年度が最終年度であるため、記入しない。初年度の計画としていた機能性蛋白質のための遷移金属活性中心の設計に必要な活性中心の電子構造と分子構造の関係に関して様々な知見が得られ、次年度に計画している反応空間の設計および人工銅蛋白質の理論設計へと進めることができるため。当初の計画通りに(1)コイルドコイル中の反応空間の理論設計と(2)コイルドコイルを用いたヘモシアニン様人工銅蛋白質・Cu_A電子伝達部位の理論設計・検証に関して研究を推進する予定である。
カソードルミネッセンスによる混晶半導体薄膜のハンドギャップの揺らぎの評価

本研究は、カソードルミネッセンス(CL)法を用いて、1μm程度の位置分解能で発光スペクトルを測定することにより、微小領域における化合物半導体の組成比(Δx)と残留歪量(Δl)を定量的に評価することを目的としている。前年度では、ΔxとΔlのどちらか一方が変化している系を試料として、それぞれが発光に及ぼす効果を調べた。今年度は、局所的に組成比(Δx)と歪量(Δl)とが変化している(a)SiGe/Si薄膜、(b)InGaAsP/InP薄膜についてCL観察を行ない、発光スペクトルから両者を独立に評価する方法を模索した。装置に関しては、今年度の課題であった(1)画像処理システムを構築した。これにより、検出器のノイズ除去をはじめ、画像同士の演算、高速フーリエ変換等が可能となり、CL像の定量的な評価が実現できた。また、(2)光電子増倍管を使ったフォトンカウンティングを、長波長側に拡張した(1.1μmまで)。結果は、(a)SiGe/Si系において、残留歪によるバンドギャップ幅の異常低下を観察した。しかし、ミスフィット転位のある領域とない領域、即ち局所的な歪量の違い(Δl)による、束縛励起子のTOフォノンレプリカのピーク位置の変化は認められなかった。(b)低温液相成長法でInP基板上に成長させた4元系のInGaAsP薄膜の、相分離が生じて組成(Δx)が明らかに変化している領域でCL観察を行なったが、昨年度に発見した準安定な欠陥のために、CLではブロードなピークしか観察できず、スペクトル形状からΔxとΔlを分離して評価することはできなかった。結論として、バンドギャップの局所的な変化は発光のピーク位置のずれとして容易に観察できるが、これより組成比(Δx)と歪量(Δl)を評価するには、スペクトルが明確な構造を持っていることが必要条件である。本研究の目的は、ヘテロエピタキシャル成長させたIII-V化合物半導体薄膜の局所的な物性を、カソードルミネッセンス(CL)法を用いて評価することにある。具体的には、薄膜の組成比(△x)と残留歪量(△l)の不均一性がバンド構造にもたらす効果をCLスペクトルを用いて調べる。今年度の課題であった(1)低温での評価に関しては、冷却系の改造により試料温度を11Kまで下げられるようになった。これにより、CLスペクトルの構造がより詳細にフィットできるようになった。また、(2)スペクトルの励起強度依存性が問題となり、この不確かさを避けるため、電子ビームの励起電流量をモニターするプローバーを整備した。研究結果は、まずGaAs/Si系で、歪量の定量を行ないCLピークのシフト量と局所歪の関係を求めた。ラマン測定との対比よりCLピークのシフト量は、高感度の歪検出の手段となっていることが確認された。これを使って、ミスフィット転位における歪量を見積った。解析はまだ静水圧の近似であるが、(3)偏光子の取付けにより偏光の情報もとれるようになってきた。1次元ないしは2次元の歪の解析は次年度の課題とする。また、InGaAs/InP系薄膜の評価を始め、組成のずれとスペクトルの関係を調べた。評価した薄膜では局所的な組成の変動はみあたらず、CLスペクトルの変化は主に欠陥の分布を反映しているだけであった。

そこで、低温液相成長法で4元系のInGaAsP-InPを作成し、相分離が生じていると見なせる試料について、△xと△lを分離して評価することを試みたが、観察場所も変えてもスペクトルのピーク位置の変化ははっきりと観察できなかった。この原因は、薄膜それ自体に固有の性質とも考えられるため、試料作成条件を変えて、研究を継続している。さらに、この試料で準安定状態を持つと考えられる発光性の欠陥を発見し、欠陥の安定性を調べた。本研究は、カソードルミネッセンス(CL)法を用いて、1μm程度の位置分解能で発光スペクトルを測定することにより、微小領域における化合物半導体の組成比(Δx)と残留歪量(Δl)を定量的に評価することを目的としている。前年度では、ΔxとΔlのどちらか一方が変化している系を試料として、それぞれが発光に及ぼす効果を調べた。今年度は、局所的に組成比(Δx)と歪量(Δl)とが変化している(a)SiGe/Si薄膜、(b)InGaAsP/InP薄膜についてCL観察を行ない、発光スペクトルから両者を独立に評価する方法を模索した。装置に関しては、今年度の課題であった(1)画像処理システムを構築した。これにより、検出器のノイズ除去をはじめ、画像同士の演算、高速フーリエ変換等が可能となり、CL像の定量的な評価が実現できた。また、(2)光電子増倍管を使ったフォトンカウンティングを、長波長側に拡張した(1.1μmまで)。結果は、(a)SiGe/Si系において、残留歪によるバンドギャップ幅の異常低下を観察した。しかし、ミスフィット転位のある領域とない領域、即ち局所的な歪量の違い(Δl)による、束縛励起子のTOフォノンレプリカのピーク位置の変化は認められなかった。(b)低温液相成長法でInP基板上に成長させた4元系のInGaAsP薄膜の、相分離が生じて組成(Δx)が明らかに変化している領域でCL観察を行なったが、昨年度に発見した準安定な欠陥のために、CLではブロードなピークしか観察できず、スペクトル形状からΔxとΔlを分離して評価することはできなかった。結論として、バンドギャップの局所的な変化は発光のピーク位置のずれとして容易に観察できるが、これより組成比(Δx)と歪量(Δl)を評価するには、スペクトルが明確な構造を持っていることが必要条件である。
遺伝性低音障害型感音性難聴の疾患遺伝子の同定

我々は長崎県一地方に集積する非症候群性低音障害型感音難聴の10家系を見出していた。今回、その中で旧厚生省のガイドラインに準拠し設置された「長崎大学ヒトゲノム・遺伝子解析倫理審査委員会」により承認された方法により、インフォームドコンセントの得られた1家系について臨床的、遺伝学的解析を行った。臨床的解析により本家系はDFNA6/14と同一もしくは類似疾患と考えられたが、特徴として耳鳴りを伴っていなかった。その時点ではDFNA6/14は遺伝子同定がなされていなかったため、連鎖解析を行った。解析には1家系30名より抽出したDNAを使用した。ヒト染色体上に既にマップされている約400種類の多型マーカーを選択し、遺伝マーカーとして全ゲノムに対して2点連鎖解析を行った。その結果、染色体4番短腕のD4S2983で組み換え率=0.05の時、LOD Scoreが最大5.36と連鎖を認めた。更にハプロタイプ解析により候補領域はD4S2366からD4S2983までの約1.3cMであると決定した。そこで候補領域内の遺伝子(FLJ11230、HMGE、KIAA0232、KIAA0935、KIAA1322、LOC93623、LOC114923、PGR1、S100P)の変異解析を行った。連鎖解析中にオランダ、ベルギー、アメリカのグループよりDFNA6/14の原因遺伝子がWFS1であるとの報告があったので、我々の家系ではハプロタイプ解析によってWFS1は候補領域外であると判断されたがWFS1の変異解析を行った。その結果、WFS1に新たな変異(K634T)を罹患者のみに認め、本家系の原因遺伝子はWFS1であることを確認した。今回見つかった変異はWFS1がコードしているwolframin蛋白の小胞体膜外側に認められる初めての変異で、本家系の罹患者に耳鳴りが全く認められないことに関連する可能性が示唆される。我々は以前に長崎県の一地方に集積する非症候群性低音障害型感音難聴の約10家系を見出していた。今回その中で、厚生省のガイドラインに準拠し設置された「長崎大学医学部遺伝子解析倫理委員会」の承認を経て、インフォームドコンセントを得られた2家系を臨床的、遺伝学的に解析した。臨床的解析により本家系は就学前に発症する非症候群性低音障害型感音難聴で、難聴は緩徐進行性もしくは非進行性であった。また、家系解析は問診、診察、検査(純音聴力検査等)完全に把握できていると考えられる家系のみを対象として、罹患者の子供について、完全補足法により解析を行った。その結果、4世代にわたる家系であること、分離比が約0.63であること、male to male transmissionを認めた。以上より、常染色体優性遺伝として矛盾を認めなかった。また、遺伝解析には紙面にて承諾の得られた52名より抽出したDNAを使用した。ヒト染色体上に既にマップされている約400種類を選択し、遺伝的マーカーとして全ゲノムに対してgenotype analysisを行い、染色体4番(4p16.3)周囲のマーカーと難聴の連鎖が示唆された。そこで、連鎖が疑われた4p16.3周囲の密に存在する多型マーカーを用いて連鎖解析を行った。その結果、臨床的解析にて本疾患と類似性を認めるDFNA6、DFNA14の連鎖領域を含む4p16.3(D4S412D4S2935)の約8.5cMとの連鎖が考えられた。

今後更に、この領域に密に存在する多型マーカーを用いて、連鎖領域を狭めていくとともに、ヒトゲノムシークエンスを利用し、位置的候補遺伝子を検索し患者の変異解析を行う予定である。我々は長崎県一地方に集積する非症候群性低音障害型感音難聴の10家系を見出していた。今回、その中で旧厚生省のガイドラインに準拠し設置された「長崎大学ヒトゲノム・遺伝子解析倫理審査委員会」により承認された方法により、インフォームドコンセントの得られた1家系について臨床的、遺伝学的解析を行った。臨床的解析により本家系はDFNA6/14と同一もしくは類似疾患と考えられたが、特徴として耳鳴りを伴っていなかった。その時点ではDFNA6/14は遺伝子同定がなされていなかったため、連鎖解析を行った。解析には1家系30名より抽出したDNAを使用した。ヒト染色体上に既にマップされている約400種類の多型マーカーを選択し、遺伝マーカーとして全ゲノムに対して2点連鎖解析を行った。その結果、染色体4番短腕のD4SZ983で組み換え率=0.05の時、LOD Scoreが最大5.36と連鎖を認めた。更にハプロタイプ解析により候補領域はD4S2366からD4S2983までの約1.3cMであると決定した。そこで候補領域内の遺伝子(FLJ11230、HMGE、KIAA0232、KIAA0935、KIAA1322、LOC93623、LOC114923、PGR1、S100P)の変異解析を行った。連鎖解析中にオランダ、ベルギー、アメリカのグループよりDFNA6/14の原因遺伝子がWFS1であるとの報告があったので、我々の家系ではハプロタイプ解析によってWFS1は候補領域外であると判断されたがWFS1の変異解析を行った。その結果、WFS1に新たな変異(K634T)を罹患者のみに認め、本家系の原因遺伝子はWFS1であることを確認した。今回見つかった変異はWFS1がコードしているwolframin蛋白の小胞体膜外側に認められる初めての変異で、本家系の罹患者に耳鳴りが全く認められないことに関連する可能性が示唆される。