hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
出芽酵母DNAポリメラーゼεとその補助因子のDNA修復における役割

出芽酵母の染色体DNA複製に必須なDNAポリメラーゼII(ε)(Pol II)と相互作用するDPB11は、染色体DNA複製とチェックポイント機構に関与している。さらに、dpb11-1温度感受性変異株は紫外線やMMSにも感受性であるが、これが修復系の欠損によるのかダメ-ジチェックポイントの欠損によるのかは分かっていない。そこでまずDpb11の機能を知るため、Dpb11と相互作用する因子を遺伝学的に同定した。一般に相互作用する因子の変異を同時に持つ株を作ることはできないため、dpb11-1変異と同時に起こると致死となるsld変異を分離し、これら変異を相補するSLD1-5遺伝子を同定した。SLD1遺伝子は、Pol IIのサブユニット遺伝子DPB3と、SLD4遺伝子はDNA複製開始に必要なCDC45遺伝子と同一であった。これは、Dpb11がPol IIと相互作用すること、複製開始に関与することを示唆している。SLD2,3,5遺伝子は共に新規の遺伝子で増殖に必須であった。そして、2ハイブリッド系でDpb11とSld2の相互作用が観察された。さらに、DPB11遺伝子とSLD2遺伝子を昆虫細胞中で共発現させると、Dpb11/Sld2複合体が観察された。またMMSや紫外線により修復に関与する遺伝子の発現が誘導される。誘導される遺伝子の1つであるRNR3遺伝子の誘導を調べると、pol2-11変異ではこの誘導が起こらないことが報告されている。そこで、dpb2-1,dpb3Δ,dpb11-1,sld2-1変異株で調べると、RNR3の誘導レベルが1/2-1/10に低下していた。従って、これらPol II,Dpb11/Sld2複合体がDNA損傷を検知し、修復関連遺伝子の発現を誘導する機構に関与していると結論できる。
新世代長鎖複合ペプチドがんワクチンの基盤開発とTreg制御による免疫増強

タンパクの有する多価抗原性とペプチドの簡便性を合わせ持ち、抗原提示能に優れた長鎖複合ペプチドワクチンを用いて臨床試験を実施した。NY-ESO-1f長鎖ペプチドについて、抗原提示細胞(APC)によるエピトープ提示機構を明らかにし、がんワクチンとして用いて臨床試験を実施し、免疫効果を明らかにした。これらの知見をもとに、4種類の長鎖オーバーラップペプチドを混合したNY-ESO-1OLP長鎖複合ペプチドについても臨床試験を実施し、免疫効果を明らかにした。さらに、新しいがん抗原XAGE-1bについても同様に解析した。1. NY-ESO-lf長鎖ペプチドの抗原提示細胞(APC)による処理とエプトープ提示機構の解析NY-ESO-lfペプチド特異的CD4およびCD8 T細胞クローンを用いて、20-merのNY-ESO-lf(NY-ESO-191-110)長鎖ペプチドの認識に細胞内取り込みと抗原処理が必要である事を明らかにした。即ち、抗原提示細胞にペプチドをパルスする際、4°Cでは抗原が提示されず、37°Cでのみ抗原が提示された。また、サイトカラシンDにより細胞内取り込みを阻止すると抗原が提示されないことを明らかにした。一方、蛍光ラベルペプチドを用いてペプチドの細胞内局在を明らかにした。NY-ESO-lfペプチドをワクチンとして用いた臨床試験を開始した。ピシバニールおよびモンタナイドと共に3週おきに皮下注射した。現在までに10症例に投与したが、有害事象としては注射部位局所の皮膚反応を認めたが軽快した。用いたペプチドによると考えられる有害事象は認めなかった。10症例の解析では、すべての症例でペプチドに対する抗体価の上昇を認め、同時にタンパクに対する反応も認めた。このことは、自然なエピトープに対する抗体価の上昇と考えられる。CD4およびCD8 T細胞の反応上昇もすべての症例に認められ、一例では非常に強い反応を認めた。T細胞反応の詳細は解析中である。1)CD4およびCD8T細胞モニタリングCD4およびCD8T細胞の反応をIFNγキャプチャーアッセイで測定した。CD4T細胞の反応は10例中9例で認められた。CD8T細胞の反応も同様に10例中9例で認められた。このことは、20merのNY-ESO-1fペプチドは、その配列の中に、CD4およびCD8T細胞が認識する多数のHLAクラスIIおよびクラスI結合エピトープを含むことを示唆している。これらのエピトープの同定は、テトラマーの作製にとっても重要である。2)NY-ESO-1fペプチドワクチン臨床試験における免疫モニタリングと臨床反応との関連考察10症例のすべてで免疫染色により、NY-ESO-1抗原の発現を確認した。MHCクラスIの免疫染色も同時に行い、その発現を確認した。ワクチン前抗体陽性者は2例であった。ワクチン後抗体陽性者は9例であった。ワクチン後、CD4反応陽性者は9例であった。CD8反応陽性者も9例であった。臨床反応は10例中3例でRECIST基準によりSDを観察した。残り7例はPDであった。抗体反応、あるいはCD4およびCD8T細胞反応を示す症例がSDであった。NY-ESO-1OLPワクチンは、NY-ESO-1タンパクの過半を占める4種類の長鎖ペプチドからなるワクチンである。これまでの登録症例は9例である。免疫モニタリングは、現在、解析中である。1.NY-ESO-1f長鎖ペプチドがんワクチン臨床試験の継続: NY-ESO-1f長鎖ペプチドワクチン臨床試験を継続した。ペプチドはOK-432をアジュバントに用い、モンタナイドに懸濁して6回皮下投与した。主目的は安全性の評価およびNY-ESO-1に対する免疫反応の検出で、副次目的は臨床反応の評価である。本臨床試験の予定登録症例は30例であるが、昨年度までの登録数19例に加えて、本年度は、4例登録した。そのうち、ワクチン投与を完遂したのは1例のみであった。NY-ESO-1f長鎖ペプチドワクチン投与患者の血清および末梢血リンパ球を用いて解析し、NY-ESO-1に対する特異的免疫反応の強い誘導効果を明らかにした。強い免疫応答を検出した症例に、臨床反応が認められた。2.NY-ESO-1OLP長鎖複合ペプチドワクチン臨床試験の実施: 4種類のNY-ESO-1オーバーラップペプチド(OLP)混合物を用いて臨床試験を実施した。ペプチドは、NY-ESO-1 79-108(30-mer)、100-129(30-mer)、121-150(30-mer)および142-173(32-mer)である。ペプチド混合物1mgをOK-432およびモンタナイドと共に皮下投与した。登録症例数は、食道癌7例、悪性黒色腫1例、肺癌1例の9症例であった。

血清および末梢血リンパ球を用いて解析し、OLPワクチンの強い免疫原性を明らかにした。3.XAGE-1b長鎖複合ペプチドワクチンの基盤開発:肺癌患者のXAGE-1bに対する抗体、CD4およびCD8 T細胞の反応を解析し、約10%に抗体反応を、また、そのうち約90%にCD4T細胞の、約70%にCD8T細胞の反応を認め、XAGE-1bの強い抗原性を明らかにした。24年度が最終年度であるため、記入しない。当初予定していたCCR4抗体投与とがんワクチンの併用療法の基盤開発については、CCR4抗体単剤投与による臨床試験をまず実施し、その後に併用療法を行う予定である。
Biotube 成長への挑戦　～若齢ビーグル犬モデルの作製から実証へ～

本研究は体内で作製可能な再生型人工血管Biotubeにおける成長性について追求した。得たい形状の組織体を型どる鋳型を生体皮下に2ヶ月程度埋め込み、その後に摘出すると鋳型の計上に沿った自己結合組織のみから形成される移植用組織体を得られる再生医療技術である生体内組織形成術(IBTA)を用いた研究である。この技術を用いて作製した人工血管Biotubeは生体血管に移植するとその領域で生着し、組織再構築が起こり血管様構造へと再生する。これを若齢ビーグル犬頚動脈に移殖すると移植後に生体血管の成長に追従して口径および長さが拡大し、Biotube自体が生体血管とともに成長することが本研究でわかった。本研究は、我々の研究グルーブが提唱する「生体内組織形成術」を用いて開発した自己組織から形成される移植用管状組織体バイオチューブが成長期の生体内に移植された場合にその体内で自己の臓器と共に成長性を発揮するかを調査することが目的である。これまで、バイオチューブはラットやウサギなどの超小型動物への移植実験を行ってきた。本研究ではモデル動物を体格の大きいビーグル犬としたため、従来のバイオチューブの作成法では得られるバイオチューブの壁厚が薄く、生体血管との壁厚差が著しいため、壁厚を増したバイオチューブの開発を先ず行った。これにはバイオチューブ作成の元となる鋳型の形状を研究協力者である工学研究者と連携して3Dプリンターを駆使して立体構造を持った設計にした。作成した鋳型をビーグルの背部皮下に1ヶ月間程度埋め込み、その後取り出すと得られた従来のバイオチューブよりも壁の厚い新型バイオチューブが得られた。これについて、物性評価を行うとともにビーグル犬の大腿動脈に移植して開存率を評価した。物性評価は菅腔保持試験、コンプライアンス試験(β値測定)、耐圧性試験を行ったところ、従来型バイオチューブよりも丈夫であることが証明され、移植実験より開存率も良好であることが証明された。上記の新型バイオチューブを用いて成長性を評価するために、若齢ビーグル犬をモデル動物に選択し、頚動脈へのバイオチューブ移植後、経時的変化を動物の成長過程と共に血管造影画像にて記録した。なお、バイオチューブは移植前はコラーゲン線維を主体とした組織体であるため、移植直後から成長性を発揮することは不可能と考え、移植後少なくとも1から3ヶ月の自己血管化にかかる期間を想定して移植時には自己血管よりやや口径の大きいバイオチューブを準備し、移植を行った。現在移植後のバイオチューブと自己血管の口径を経時的に記録している段階である。本研究は移植に用いるバイオチューブ自体の開発を先ず行った。鋳型の試作を数個にわたって行ったが、当該年度の前半の期間で鋳型の設計を決定させることができ、本研究に用いるに十分な形状・丈夫さを兼ね揃えたバイオチューブを開発することが可能であった。よって移植実験に当初の予定より早く移行することが可能であり、モデル動物への移植後の経過を追う期間をより長く確保することが可能であった。実際の移植実験については、移植後の開存性は概ね良好であり、数例の動物モデルを移植後1ヶ月毎に血管造影を実施して造影画像を記録して画像上でバイオチューブと自己血管の口径を計測している。この画像上でも記録および計測を可能な限り正確に行うために移植部にマーカーを設置したり血管造影カテーテルのマーカーを利用してその対比から計測値を得ることとした。当初はそれぞれの口径、つまり横方向への成長のみに着目していたが、経時的に変化を追っていく中で、バイオチューブの縦方向へのサイズ拡大も起こっている可能性が考えられた。このことにより、移植実験開始した初期のモデル動物においてはバイオチューブの移植後の経時的変化について記録上の推移を計測値として詳細に示すことが困難であったため、現在は移植後可能な限りバイオチューブの縦方向および横方向へのサイズ拡大を記録するためのマーカーを設置し、同様に経時的に血管造影を行ってサイズ変化を記録している。本研究は、我々の研究グループが提唱する「生体内組織形成術」を用いて開発した自己組織からなる人工血管バイオチューブが成長期の生体に移植された場合、その体内で自己の血管と共に成長性を発揮するかを調査することが目的である。一方で小児心血管外科領域において、何らかの心奇形を持って生まれる新生児は1%と言われており、その中でも外科手術が必要な症例に対して、成人に使用する移植体ではサイズミスマッチが起こるため、移植時期の検討に慎重を要したり、繰り返しの手術が必要となることがある。バイオチューブの成長性が証明されれば、小児心血管外科領域に大きく貢献できる。本研究では、まず初年度に鋳型の設計を工夫してこれまでのバイオチューブとは異なり、チューブの壁厚を所望の厚みに設定でき、より丈夫さをもった新型の「Type Cバイオチューブ」を開発した。本研究のバイオチューブの成長性の評価にはビーグル犬をモデル動物としているが、人と比較してビーグル犬も成長期は約1年の間に完了してしまう。バイオチューブは本来、自己組織で作成するが、作製期間に12ヶ月の期間を有するため、この間にも若齢ビーグル犬の成長が進んでしまうことを考慮し、あらかじめ成犬ビーグル犬でType Cバイオチューブを作成し、同種バイオチューブを若齢ビーグル犬の頚動脈に移植を行うこととした。移植後1ヶ月時点で組織学的評価を行ったところ、同種移植されたバイオチューブは特に弊害なく生体血管に定着し、血管様構造への再構築が認められた。

移植後は3ヶ月毎に1年間血管造影にてバイオチューブの形状およびサイズの変化を観察および記録し、生体血管と比較することでバイオチューブの成長性を評価している。また、1年時の組織学的変化についても調査を行っている。本年度は、前年度に開発したバイオチューブを実際に若齢ビーグル犬に移植し、その後の形状およびバイオチューブの口径変化を経時的に血管造影にて観察した。移植後3ヶ月までには生体血管において急速な成長が認められたが、バイオチューブについては口径変化がほとんど認められなかった。しかし、その後は生体血管の成長に追従するようにバイオチューブの口径の拡大が認められ、個体差があるものの移植1年時には生体血管とバイオチューブの口径がほぼ同程度となるケースが多く認められた。また、移植した全例において観察期間中狭窄、瘤化および膨化などの有害事象を認めることなく良好に開存性の維持が可能であった。また、移植1年時には実際に肉眼的観察を行っているが、移植したバイオチューブにおいて縦方向への伸長が認められ、口径ばかりでなく長さについても移植後に体内でサイズ拡大が可能であることが証明された。組織学的評価を行ったところ、移植前はほぼコラーゲン線維で形成されていたバイオチューブが移植1年時にはバイオチューブの内腔は全長において内皮細胞で覆われ、また、エラスチン層が認められるなど、血管様構造への再構築が認められた。現在までのところで移植後1年を超えて観察を続けているが、全例について開存性を維持していること、生体血管の成長を妨げることなく形状を維持できるということが確認できている。現在は移植後2年を超えて観察を継続している。本研究では再生型人工血管Biotubeの成長性について動物モデルを用いて調査した。先天性心疾患は新生児の約1%とその発生率は決して少なくはなく、重症度によっては早期の外科治療が必要となるケースがある。その中には人工血管や人工シート材料を使わざるを得ないケースもある。しかし、小児血管外科治療において、成長期前の患者に人工物を使用すると、成長に伴い生体血管または臓器とのサイズミスマッチが生じるため、成長段階に合わせて繰り返しの手術が必要となり、患者にとっての負担が大きい。一方で我々が提唱する生体内組織形成術(IBTA)を用いて作製する自己組織から形成される人工血管Biotubeは、生体適合性が高く、血管領域に移植すると数ヶ月内には生体に生着し、血管様構造へと組織再構築されることがこれまでの研究からわかっている。その後は体内で成長性の有することが期待されていたが、これまでに実際に検証されていなかった。そこで本研究では若齢ビーグル犬の頚動脈部にBiotubeを移植し、その後の経過を生体の成長とともに観察した。動物の成長は人と異なり短期間に急速に進み、短期間のうちに終了してしまうため、本研究では観察期間に重点をあてるために予め成犬ビーグルで作製した他家Biotuheを同種移殖したが、移植後1ヶ月程度で生体血管に生着した。経過観察として3ヶ月ごとの血管造影を行い、生体血管とBiotubeの口径を計測した。移植後3ヶ月までは生体血管が急速に成長していたのに対し、Biotubeの口径は変化に乏しかったが、その後は生体血管の口径拡大に追従するようにBiotubeの口径拡大が起こり、移植1年後にはほぼ口径差がなくなった。
造影剤による急性腎不全発現に関する研究 -特に血管作動性物質の関与について-

【目的】水溶性ヨード造影剤を用いた造影検査は現在の画像診断の中で必要不可欠なものである。急性腎不全は臨床上重篤な副作用のひとつであるが、その発生機序にかんしては未だ不明である。近年、血管作動性物質の存在が造影剤投与後の腎障害に関わっているという報告が見られている。今回我々は血管造影検査前後においてEndothelin(ET-1)、Nitric Oxide(NO)、Arterial Natriuretic Peptide(ANP)の測定を行ない、その血中動態の変化を検討したので報告する。【対象・方法】対象は腹部血管造影検査施行患者13名(男性6名、女性7名、年齢43-72歳・平均58歳)。造影剤はIopamidol 300mgI/mlを用いた。方法はセルジンガー法にて大腿動脈・静脈よりアプローチした。造影剤投与直前・投与中・最終造影終了後に腎静脈に留置したカテーテルより採血し、ET-1、NO、ANPを測定した。【結果】ET-1は造影剤投与中、および投与直後に有意な上昇を認めた。(造影前:1.45±0.12、造影中:2.28±0.17*、造影後:1.95±0.14*)(*P>0.05)。NOは造影後において有意な低下を認めた(34.56±2.33、33.17±3.56、28.28±2.50*)(*P>0.05)。ANPは直後において有意な上昇を認めた(11.43±1.68、14.41±1.22、21.28±2.88*)(*P>0.05)。【まとめ】近年動物実験レベルにおいて、造影剤投与により血管作動性物質が働くことが示されてきている。その結果、腎血管の収縮が腎に虚血性変化をひきおこし、腎糸球体、尿細管機能を低下させるということが報告されている。今回、血管造影において、ET-1産生・NOの産生抑制およびANPの産生が認められたことより、造影剤投与後の腎障害の発現に血管作動性物質が関与している可能性が推測された。
個性的ジェンダーのニューロン機構

P1ニューロン群は、我々が世界で初めてキイロショウジョウバエにおいて同定した雄の求愛開始意志決定ニューロン集団である。P1ニューロンは、片半球あたり20個の雄特異的介在ニューロンで形成されている(Kimura et al., 2008,Neuron 59, 759-769)。実際、本来は雄特異的はP1ニューロンを雌の脳内に人為的に発生させれば、その雌が雄の求愛行動をするようになる。また、野生型成虫羽化後の集団生活経験による雄の求愛行動の抑制も、P1ニューロンの機能的可塑性に依存して生ずる。現在、複数の研究グループの努力によりP1ニューロンに求愛制御のほぼすべての情報が収斂して統合され、P1が主要な求愛決定中枢として働くことが確立しつつあるが、このようにP1がこの特権的機能を発揮できる理由は不明である。野生型の雄を成虫羽化後、数日間隔離して育てると、複数の雄の集団の中で育てた場合に比べて雌への求愛が著しく増強される。この背景にP1ニューロンの行動惹起閾値の低下(受けた刺激が弱くても行動出力をトリガする)があることは、optogeneticsとCa2+ imagingによって示唆されていた(Inagaki et al., 2014, Nat. Methods 11, 325-332)。我々はP1にin vivo patch clampを施し、膜電位固定下で記録される膜電流のうち遅延整流性外向きK+電流(ID)のみが、特異的に集団生活によって、一部のP1ニューロンで劇的に増加することを明らかにした。このことから、羽化直後からの数日を臨界期(臨界点)として社会経験を膜電流に刻印するP1ニューロンが存在し、その働きで求愛行動の経験依存的変容が生ずると推察された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。キイロショウジョウバエのfruitless遺伝子座はニューロンの性決定因子(雄化因子)として機能するタンパク質、Fruitlessをコードしている。この遺伝子の機能喪失型変異(例えばsatori突然変異体: frusat)では、雄が雄に求愛する同性愛行動が高頻度で生ずる。この同性間求愛は、frusat変異体の雄が他の雄個体と生活を共にしたのちに顕在化し、単独飼育により社会経験を剥奪すると著名に抑制される。したがって、遺伝子型と経験とによる個性の表出と見做すことができる。集団satori変異体雄は、動く縞模様刺激に対しても同様に求愛することから、この行動は視覚刺激によって惹起されることがわかる。そこで、求愛意思決定ニューロンであるP1ニューロンに、求愛開始刺激を送り込むニューロンをCa2+ imagingとニューロンの強制活性化によって探索し、特定の高次視覚性介在ニューロン群に絞り込むことができた。こららの視覚性介在ニューロンは、いくつかのサブグループに分類され、求愛行動に関わるのは、そのうちの一つだけである可能性が29年度の実験結果から推定された。そのニューロン集団は形態的特徴から、求愛意思決定ニューロンであるP1に入力する可能性がある。この点を明確にするには、視覚性介在ニューロン群をチャンネルロドプシンを介して刺激し、P1ニューロンからCa2+ imagingを行なってシナプス後応答の存否を検討することが考えられる。より直接的な方法は、P1から電気的応答を記録することであり、次年度にはこのアプローチを試みる。Janelia Farm Research Instituteによって作成された一連のflylight系統の中から、形態的にP1ニューロンへの入力が期待される高次視覚性介在ニューロンに特異的発現を有するものを選びたし、発現交差法を用いて少数のニューロンにチャンネルロドプシンのChrimsonを発現させた。これらを光照射により活性化させたところ、雌を追跡して求愛する際に特徴的なクイックな側方へのターニングを誘発する細胞が見出された。これらを強制活性化させた場合には、ターニングの方向と一致した方向性のある片翅バイブレーションを随伴することから、間違いなく求愛行動の構成要素であると判断される。また、GRASP法によるGFP機能的再構成に基づく解剖学的実験からも、このニューロン群とP1ニューロンとがシナプス接続をする可能性が示唆された。

この背景にP1ニューロンの行動惹起閾値の低下(受けた刺激が弱くても行動出力をトリガする)があることは、optogeneticsとCa2+ imagingによって示唆されていた(Inagaki et al., 2014, Nat. Methods 11, 325-332)。我々はP1にin vivo patch clampを施し、膜電位固定下で記録される膜電流のうち遅延整流性外向きK+電流(ID)のみが、特異的に集団生活によって、一部のP1ニューロンで劇的に増加することを明らかにした。このことから、羽化直後からの数日を臨界期(臨界点)として社会経験を膜電流に刻印するP1ニューロンが存在し、その働きで求愛行動の経験依存的変容が生ずると推察された。平成30年度には、社会経験によって生ずP1ニューロンの特性変化の実体解明に重点を置く。具体的には、体の中に脳がある状態でP1ニューロンをパッチクランプし、in vivoでの生理的特性を明らかにする。特に、集団生活後にはP1ニューロンがより求愛行動を惹起しやすくなると推察されることから、K+チャンネルの機能に負の修飾がかかる可能性を想定し、whole cell clamp下でのK+電流の挙動を、実験個体の社会経験の有無と対応づけながら解析する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
生体成分組成の解析に基づくAAアミロイドーシス発症の分子基盤の解明

AAアミロイドーシス発症には血清アミロイドA(SAA)の血中濃度上昇のほか、SAAと他の生体成分との相互作用が寄与する。しかしながら、これら相互作用と疾患の発症とを直接結びつける分子基盤は不明であった。本研究では、グリコサミノグリカンや高密度リポタンパク質(HDL)の構成脂質が同症の発症に与える影響を明らかにすることを目的とした。その結果、ヘパラン硫酸の高硫酸化ドメインやHDL中のホスファチジン酸濃度が影響を与えることを明らかにした。今後も引き続き、SAAが形成する凝集体の細胞毒性などについて評価することで、AAアミロイドーシスの発症機構を分子レベルで解明することを目指す。まず、臓器由来グリコサミノグリカン(GAG)の組成解析に関して、臓器切片より抽出される超微量のGAGから、その組成を高速液体クロマトグラフィーによって解析が可能であるかを調べた。1枚の臓器切片よりGAGを抽出し、酵素により二糖に分解した後、蛍光標識を行った。その結果、抽出方法や用いる酵素などに工夫や注意が必要であるが、超微量のGAGでも解析できる可能性が示された。そこで、アミロイドーシスモデルマウスを作製し、アミロイド沈着した臓器(肝臓)の凍結切片を得た。切片をアミロイド蛍光染色剤であるチオフラビンSで染色し、アミロイド沈着および非沈着部位をレーザーマイクロダイセクションによりそれぞれ回収した。今後、GAGを抽出し、組成解析を行う予定である。一方、高密度リポタンパク質(HDL)構成脂質の組成解析に関して、正常および炎症マウスより血液を採取した。炎症マウスでは、血清アミロイドA(SAA)の血中濃度上昇をELISAで確認した。超遠心により血液からHDLを分離し、酵素定量法や液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析装置を用いて解析を試みたが、いずれの方法でも上手くいかなかった。その過程で、炎症に伴いHDL中のホスファチジン酸の濃度が上昇するという報告(Atherosclerosis 2014; 237: 652-60.)を発見した。そこで、ホスファチジン酸を含むSAA-HDLモデル粒子を再構成により作製した。その結果、ホスファチジルコリンのみからなるSAA-HDLモデル粒子と比較して、粒子自体のサイズや安定性およびSAAの二次構造や熱安定性などに大きな差異はなかったが、酵素消化に対する安定性の差異が認められ、SAAの局所構造に違いがあることが示唆された。一部、当初計画通りに進んでいないところもあるが、解決に向けた方向性が見えつつあるところや新たな展開が見込めるところもあり、全体としてはおおむね順調に進展しているといえる。アミロイドーシスモデルマウスの臓器(肝臓)からアミロイド沈着および非沈着部位をレーザーマイクロダイセクション(LMD)によりそれぞれ回収し、グリコサミノグリカン(GAG)の組成解析を行った。その結果、非沈着部位と比較して、沈着部位においては硫酸化されていないGAGの割合が有意に低く、予想通りGAGの硫酸基含有量がAAアミロイドーシス発症を制御し得ることが示された。しかしながら、別個体を用いた解析では再現性が確認されず、作業工程の煩雑さを考慮し、解析を一旦中断することにした。それに代わり、現在、高硫酸化したGAGを認識する抗体を用いた組織染色を試みている。また、AAアミロイドーシスの沈着部位には、血清アミロイドA(SAA、104残基)のN末端断片(主に76残基)が検出される。そこで、2つのペプチドブロックのライゲーション反応と脱硫反応の組み合わせによりSAA(1ー76)ペプチドを化学合成し、線維形成を評価した。アミロイド線維に特異的に結合する蛍光色素(ThT)を用いた蛍光測定、円二色性(CD)や赤外吸収(IR)スペクトル測定による二次構造評価、顕微鏡観察などにより、線維形成能および線維形態を評価した。その結果、中性条件において、SAA(1ー76)ペプチドにGAGを添加した場合、ThT蛍光強度の経時的な増加が認められた。このとき、CD測定からは典型的なβシート構造を示すスペクトルは得られなかったが、IR測定によりβシート構造の形成が明確に示され、原子間力顕微鏡で線維状の凝集体が観察された。この結果は、中性条件ではThT蛍光強度の増加やβシート構造の形成が認められなかった全長SAAの場合とは異なるものとなった。すなわち、SAA分子のC末端部分(77ー104残基)の切断が、中性条件でのアミロイド線維の形成を促進する可能性が示された。臓器由来GAGの組成解析では再現性がとれずに苦労しているものの、臓器沈着するSAAペプチドのライゲーション反応による合成法を確立するなど全体としてはおおむね順調に進展しているといえる。また、昨年度実施した研究成果の一部については、論文として報告した。アミロイド沈着部位と硫酸化度の高いヘパラン硫酸の局在との関連性を調べるために、ヘパラン硫酸の高硫酸化部位を認識する抗体(HepSS-1)を用いた組織染色を行った。AAアミロイドーシスモデルマウスより作製した肝臓切片に対し、ビオチン化したHepSS-1を反応させ、R-PE標識ストレプトアビジンにより染色し、共焦点顕微鏡で観察した。その結果、チオフラビンSで染色されるアミロイド沈着部位の周辺に、ヘパラン硫酸の高硫酸化ドメインが存在していることが示された。また、前年度までに確立した方法により、AAアミロイドーシスに関連する主なアイソフォームに相当するSAA(1ー76)ペプチドを化学合成し、それらの線維形成能を比較した。

アミロイド線維に特異的に結合する蛍光色素(ThT)を用いた蛍光測定の結果、SAA1.1(1ー76)ペプチドではほとんど蛍光強度の増大は認められず、SAA1.1が日本人において最も罹患率の低いアイソフォームであることを反映する結果であると考えられた。しかしながら、リスクファクターであると知られるSAA1.3よりも寧ろSAA1.5においてより高い蛍光強度を示した。すなわち、ThT蛍光強度の増大が必ずしもAAアミロイドーシスの発症と関連しないことが示された。なお、これまでにSAA1.3(1ー76)ペプチドでは電子顕微鏡により線維状の凝集体が観察されているが、他のアイソフォームが形成する凝集体の形態との違いや細胞に対する毒性の違いについても現在調査を継続している。AAアミロイドーシス発症には血清アミロイドA(SAA)の血中濃度上昇のほか、SAAと他の生体成分との相互作用が寄与する。しかしながら、これら相互作用と疾患の発症とを直接結びつける分子基盤は不明であった。本研究では、グリコサミノグリカンや高密度リポタンパク質(HDL)の構成脂質が同症の発症に与える影響を明らかにすることを目的とした。その結果、ヘパラン硫酸の高硫酸化ドメインやHDL中のホスファチジン酸濃度が影響を与えることを明らかにした。今後も引き続き、SAAが形成する凝集体の細胞毒性などについて評価することで、AAアミロイドーシスの発症機構を分子レベルで解明することを目指す。臓器由来GAGの組成解析に関しては、引き続き、当初計画通りに研究を推進する。HDL構成脂質の組成解析に関しては、解析が上手くいっていないので中断する。しかし、脂質組成によってSAA-HDLモデル粒子の酵素消化に対する安定性の差異が認められたため、「研究が当初計画どおりに進まない時の対応」に記載した通り、炎症との関連が示唆される脂質(スフィンゴシン-1-リン酸など)を含んだSAA-HDLモデル粒子を数種類作製し、同様に酵素消化に対する安定性を比較することを計画している。AAアミロイドーシス発症の制御因子としてのGAGの関与については、上述のように、高硫酸化したGAGを認識する抗体を用いた組織染色により引き続き検討を行う。また、SAA(1ー76)ペプチドを用いた線維形成評価では、AAアミロイドーシスの発症を司るSAAアイソフォームについても同様の評価を行い、AAアミロイドーシス発症の分子基盤の総合的な理解に向け、研究を加速させる。生物物理化学
マルチビーム測深技術を用いた浅海底地形学の開拓と防災・環境科学への応用

本研究では,最先端のマルチビーム測深を用いて作成する精密海底地形図を基に,これまでの知見がきわめて少なかった浅海底の地形とその形成について議論を行い,従来の地形学にない「浅海底地形学」を開拓するための端緒となる研究を行った。石垣島における沈水カルスト地形の発見と地形学研究がその例である。また,さらに,作成した精密海底地形図を基に,自然科学から社会・文化科学の領域にわたる学際研究を展開した。その一つとして,石垣島・屋良部沖の水中文化遺産研究においては,マルチビーム精密地形図がこれまでにない先進的成果をもたらした。本研究は,最先端のマルチビーム測深を用いて作成する精密海底地形図を基に,これまでの知見がきわめて少なかった浅海底の地形とその形成について議論を行い,従来の地形学にない「浅海底地形学」を開拓するための端緒となる研究を目指している。研究初年度である25年度は,まず,現有のマルチビーム測深機(Sonic 2022)にサイドスキャンソナー・オプション(TruePix)を装備し,底質情報を得ることができるよう改造を行った。これを用いて9月に沖縄島南東部の南城市沿岸域にてマルチビーム測深調査を行った。さらに,我々の研究グループで発見した石垣島・名蔵湾の沈水カルスト地形の地質構造とその成り立ちを解明するため,11月に当該海域にてボーリングを実施し,60mの掘進とコア採取を行った。コアについてはX線回折装置を用いた鉱物分析から実施している。また,以前実施した喜界島の測深海域について,作成した海底の精密三次元図を基にしてSCUBA潜水を行い,海底地形調査を実施した。さらに,本研究では作成した精密三次元海底地形図を利用して自然科学から社会・文化科学の領域にわたる学際研究へと発展させることを目指しているが,その一部として,石垣島沿岸域で作成した精密三次元海底地形図と当該海域における水中考古学調査をあわせて成果を出すよう,研究を進めている。本研究は,最先端のマルチビーム測深を用いて作成する精密海底地形図を基に,これまでの知見が少ない浅海底地形とその形成について議論を行う。また,作成した海底地形図を基に自然科学から社会・文化科学にわたる学際研究を行う。平成26年度は以下を実施した。まず,研究代表者の異動に伴い4月に全機材・資試料を九州大学へ移管した。今年度予定した調査地(沖縄島北西部)では事前に受け入れ体制を整えた後,8月下旬9月上旬に測深調査を実施した。測深域は本部半島沿岸や瀬底島・水納島・伊江島・古宇利島周辺など14海域である。得られたデータについては現在後処理を実行中である。さらに,測深によって発見した石垣島名蔵湾の沈水カルスト地形について論文を公表し,記者発表をおこなった(九州大学26年8月25日)。論文はオープンアクセスにして広く閲覧が可能とするとともに,今後の図版利用を自由に行えるようエルゼビア社から版権を取得した。これらの図版等の利用については,九州大学産学官連携本部知的財産グループとの話し合いをもち,共同研究実施方針を作成した。その上で,琉球大学熱帯生物圏研究センター瀬底実験場および八重山ダイビング協会と秘密保持契約を締結した上で,10月11月に名蔵湾の19カ所に潜水し生物群集調査を実施した。コドラートを用いた詳細な調査結果は現在解析中であるが,その概略は日本サンゴ礁学会および日本地理学会で発表した。名蔵湾は従来,赤土の流入が著しく造礁サンゴの被度が低い海域と認識されていたが,我々の調査では大規模かつ独特な現生サンゴ群集が湾内各所で認められた。これを受けて25年度に実施した掘削コアの岩相を解釈することが可能となり,分担者等と共同でコアの記載を実施した。潜水調査時に採取した堆積物試料についても粒度分析・X線回折実験などを実施している。本研究では,最先端のマルチビーム測深を用いて作成する精密海底地形図を基に,これまでの知見がきわめて少なかった浅海底の地形とその形成について議論を行い,従来の地形学にない「浅海底地形学」を開拓する端緒となる研究へと発展させることを目指す。さらに,作成した精密海底地形図を基に,自然科学から社会・文化科学の領域にわたる学際研究を展開することを目指している。27年度はまず,久米島ハテノハマ周辺海域を対象として,測深海域に隣接する陸域・極浅海域にて,無人航空機(UAV)およびパラモーターを用いた空中写真撮影を行った。また,ハテノハマ周辺の精密海底地形図作成海域およびその周辺海域19箇所にて,海底堆積物および現生有孔虫群集の潜水調査を実施し,試料を採取した。さらに,SCUBA潜水が難しい深度(水深50135m)の海底についてVTRを用いて観察する手法を成功させることができた。これによって,島棚および島棚斜面の精密海底地形図に現地観察を加えることが可能となった。石垣島においては,本研究で採取した名蔵湾のボーリングコア(掘削長60m)について,コアの記載を進めるとともに,同海域で地層探査を実施し,後氷期サンゴ礁堆積物と更新世石灰岩との境界を明らかにするべくデータ解析を進めている。さらに名蔵湾では,精密海底地形図を作成した海域にて9月上旬に多地点水質鉛直分布測定調査を実施し,地形に応じた水塊構造の発達とその動態を明らかにするべく,データ解析を進めている。

一方,石垣島および石西礁周囲のサンゴ礁地形,とくに礁縁部の縁脚縁溝系の地形について,海岸による違いを明らかにするための潜水調査を実施した。水中考古学と連携した石垣島屋良部沖の水中文化遺産については,マルチビーム測深による精密海底地形図を基にした分布域の把握とその解釈に関する研究が結実し,成果を公表するに至った。本研究で進めるワイドバンドマルチビーム測深機を用いた浅海底地形の三次元マッピングが,学会等で注目される成果を上げている。本研究による石垣島名蔵湾の沈水カルスト地形における大規模サンゴ群集の発見の後,27年度後半には環境省が名蔵湾でのサンゴ調査を開始するなど,当該海域の再評価が進もうとしている。本研究が目指す社会に対する貢献も形になりつつあると実感する。27年度には,これまでの測深域のうち久米島・石垣島・本部半島で作成した精密海底地形図を基にした,学際的な潜水調査等を実施した。調査は天候・海況に恵まれきわめて順調に進んだ。また,1月には福岡にて研究グループのミーティングと,メンバーによるシンポジウム「東アジア島嶼沿岸域における広領域学際研究」を2日間開催し,のべ266名の参加を得た。現地調査およびシンポジウム等を通した学際研究が軌道に乗ってきた。本研究では,最先端のマルチビーム測深を用いて作成する精密海底地形図を基に,これまでの知見がきわめて少なかった浅海底の地形とその形成について議論を行い,従来の地形学にない「浅海底地形学」を開拓するための端緒となる研究を行った。石垣島における沈水カルスト地形の発見と地形学研究がその例である。また,さらに,作成した精密海底地形図を基に,自然科学から社会・文化科学の領域にわたる学際研究を展開した。その一つとして,石垣島・屋良部沖の水中文化遺産研究においては,マルチビーム精密地形図がこれまでにない先進的成果をもたらした。ワイドバンドマルチビーム測深機を用いた浅海底地形の三次元マッピングが学会等で注目される成果を上げている。名蔵湾での沈水カルスト地形や大規模サンゴ群集の発見には,同地域で研究を重ねてきた研究者からも,今の時代にこのような大きな発見があるとは驚きであるとのコメントをいただいた。また,プレスリリースを受けて沖縄県や石垣島などでも関心が高まっている。人口約5万人の石垣島沿岸域で未知の地形と大規模な生物群集が発見されたことは,人里に近い沿岸域であっても未だ科学的知見がきわめて少ないことを示している。本研究の意義が学会はもとより一般にも認識されつつあると感じる。26年度に実施した本部半島周辺海域の測深調査は,天候・海況に恵まれきわめて順調に進んだ。結果は現在解析中であるが,良いデータが得られているものと確信する。また,年度後半に実施した生物群集調査など精密海底地形図を基にした研究も進んでいる。研究グループ内でのミーティングも重ねており,今後の学際研究についても多くの研究計画が立案された。ひきつづき,精密海底地形図を基に「浅海底地形学」を開拓する研究,自然科学から社会・文化科学の領域にわたる学際研究を展開する予定である。27年度に本部半島沖の水深40mの海底に沈む第二次大戦時の水中遺産について現地で潜水調査を行った。調査対象は第二次大戦末期の沖縄戦において日本軍特攻機の攻撃によって航行不能となり沈められたUSS Emmonsである。全長約100mの船体を撮影した1716枚の写真を用いてSfMソフトPhotoScanを用いた3Dモデルを作成した。
「国語研究所新聞記事データベース」の作成と活用に関する研究

国立国語研究所では、昭和24年からことばに関する新聞記事を収集し、『新聞所載国語関係記事切抜集』として整理、保存している。この国語関係記事資料は、日本で唯一の資料であるとともに、研究資料としても、戦後の日本人の言語及び言語生活の歴史を見る上で貴重なものである。この蓄積記事の有効な活用方法のひとつにデータベース化がある。本研究は、(1)蓄積記事に関する基礎情報(日付、掲載紙名、見出し等)を収録した「国語研究所新聞記事データベース」(「データベース」)を作成し、あわせて、(2)蓄積記事を資料として、日本人の言語生活の研究を行うことを目的としている。本研究では、蓄積記事の基礎情報を計算機に入力し、記事内容の把握に有用な情報を付加して整備・保存した。蓄積記事は約10万件余りと膨大な量であるが、蓄積記事の基礎情報を集中的に入力・整理することによって、蓄積記事の特性や年代毎の傾向を把握することができた。ここで得られた知見をもとに、「データベース」を効率的に検索するためのキーワードの検討及び整備を行った。さらに、作成された「データベース」及び蓄積記事を資料として、新聞記事資料の活用法に関する研究を行うとともに、社会言語学・国語学の観点から「新聞記事を資料とした」言語研究・言語生活史研究に関するいくつかの事例研究を行った。「データベース」の概要及び蓄積記事を利用した研究については「「国語研究所新聞記事データベース」の作成と活用に関する研究」として報告した。国立国語研究所が昭和24年から収集、蓄積している国語関係新聞記事資料は、日本で唯一の資料であるとともに、研究資料としても、戦後の日本人の言語及び言語生活の歴史を見る上で貴重なものである。本研究は、(1)蓄積記事に関する基礎情報(日付、掲載紙名、見出し等)を記載した『国語研究所新聞記事データベース』(『データベース』)を作成し、あわせて、(2)蓄積記事を資料として、日本人の言語生活の研究を行うことを目的としている。平成4年度は、昭和62年分から遡る形で蓄積記事に入力を外注し、ほぼ当初の予定通り、全体の約2分の1について基礎的な情報の入力を終えた。入力済データはチェック、修正し、記事検索及び記事内容の把握に有用な情報を付加して整理した。膨大な量の蓄積記事を集中的に入力・整理することによって、蓄積記事の特性や年代毎の傾向をより確かに把握することができた。ここで得られた知見は、今後、分類やキーワードの整理・検討をすすめ、『データベース』を改良していく上で役立つものである。また、作成された『データベース』及び蓄積記事自体を資料として、その具体的な活用法について検討し、研究分担者が試験的な研究を行った。例えば、「投書に見られる言語意識の変化」や「国語関係新聞記事データベースの設計と活用について」などである。このうち言語意識の変化については、日本人が何を「ことばの乱れ」としてとらえてきたのか、その「乱れ」に対する意識がどのように移り変わってきたのか、社会的属性による相違はあるのか、等について資料収集及び分析を試みた。今後、『データベース』を整備し、より多くのデータを詳細に分析することによって、これまでの考察の妥当性を検討し、試験的研究の成果をまとめる予定である。平成5年度は、『データベース』の基礎情報を平成4年度に引き続いて外注入力し、記事内容の把握に有用な情報を付加して整備・保存した。データの処理はほぼ当初の予定通り行われ、蓄積記事全体の約70%に関する基礎情報を磁気媒体に保存することができた。

膨大な量の蓄積記事を集中的に入力・整理することによって、蓄積記事の特性や年代毎の傾向をより確かに把握することができた。ここで得られた知見をもとに、『データベース』を効率的に検索するための分類やキーワードの検討及び整備を重点的に行った。また、データベースシステムに関して、データの長期保存や漢字データの国際的な情報交換を視野に入れて、情報交換用4バイトコードに関する研究が行われた。さらに、作成された『データベース』及び蓄積記事自体を資料として、新聞記事資料の保存法・活用法に関する研究や「日本人のあいさつ・漢字意識」に関する事例研究を行った。これらの研究の方法及び社会言語学・国語学の観点からの分析・考察の結果は、「新聞記事を資料とした」言語研究・言語生活史研究のひとつのモデルとなるものである。国立国語研究所が昭和24年から収集、蓄積している国語関係新聞記事資料は、日本で唯一の資料であるとともに、研究資料としても、戦後の日本人の言語及び言語生活の歴史を見る上で貴重なものである。この蓄積記事の有効な活用方法のひとつにデータベース化がある。本研究は、(1)蓄積記事に関する基礎情報(日付、掲載紙名、見出し等)を収録した「国語研究所新聞記事データベース」(「データベース」)を作成し、あわせて、(2)蓄積記事を資料として、日本人の言語生活の研究を行うことを目的としている。平成6年度は、「データベース」の基礎情報を平成5年度に引き続いて外注入力し、記事内容の把握に有用な情報を付加して整備・保存した。蓄積記事は約10万余りと膨大な量であるが、蓄積記事の基礎情報を集中的に入力・整理することによって、蓄積記事の特性や年代毎の傾向をより確かに把握することができた。ここで得られた知見をもとに、「データベース」を効率的に検索するためのキーワードの検討及び整備を重点的に行った。さらに、作成された「データベース」及び蓄積記事自体を資料として、新聞記事資料の保存法・活用法に関する研究や事例研究を行った。これら研究の方法及び社会言語学・国語学の観点からの分析・考察の結果は、「新聞記事を資料とした」言語研究・言語生活史研究のひとつのモデルとなるものである。なお、これらの研究成果は「『国語研究所新聞記事データベース』の作成と活用に関する研究」として報告する。
日本住血吸虫の虫卵形成にかかわる因子の生理生化学的研究

1.日本住血吸虫の成虫よりエクジステロイド(昆虫脱皮ホルモン)をラジオイムノアッセイとHPLC分析を併用して検出した。日本住血吸虫の雌雄成虫が培養液中で正常卵を産出する期間は、成虫を宿主動物から採取した後概ね0ー96時間に限定される。そこで培養96時間後の雌雄虫体のエクジステロイドを定量したところその減少率が80%に及んでいることが分かった。この期間に産出された虫卵より多くのエクジステロイドが検出され、また培養上清にも成虫からの放出が認められた。この結果はエクジステロイドが住血吸虫において、卵黄蛋白質合成や蛋白質硬化による卵殻形成の制御に関与している可能性を示した。2.虫卵形成に関与している蛋白質を見つけるために雌特異的蛋白質の検索を行ったところSDS-PAGEにより推定分子量34,000(34Kp)の成分を見いだした。特異抗体を作成し本成分の虫体における局在を蛍光抗体法で調べると雌の卵黄腺に限定していることが分かった。この蛋白成分はinvitro培養の継続により卵黄腺から消失し、合成能をも失うことが^<14>Cーアミノ酸を用いた実験により明らかとなった。3.卵黄蛋白質と考えられる34Kpの役割を明らかにする為に成虫の蛋白質を放射能活性をもつアミノ酸3種(チロシン、グリシン、メチオニン)でそれぞれラベルしSDS-PAGEと光顕組織切片でのトレサー実験を行った。その結果、雌ではチロシンが極めて速やかに卵黄腺組織の34Kpに取り込まれる事が分かった。チロシンにより成虫をラベルした後、48時間培養を継続したものについて見ると34Kpの放射能活性は非常に弱くなり、切片上の放射能活性は卵黄腺から新生虫卵の卵殻に移行していた。この事実と、新生虫卵が抗34Kp抗体にイムノブロット法で反応しなかった事とを考え合わせると34Kpは卵殻の前駆体とみなすことができる。日本住血吸虫の雌雄成虫が培養液中で正常卵を産出する期間は、成虫を宿主動物から採取した後おおむね0-96時間に限定される。このin vitro培養期間中において、エクジステロイドが雌成虫,雄成虫,虫卵,培養上清にどのように分布し、量的な変動をおこすか、主としてラジオイムノアッセイによって調べた。その結果、マウスから採取したばかりの雌雄虫体のエクジステロイド含有量を100とすれば、培養上清に放出されるエクジステロイド量は0-48時間で26、48-96時間で9であり、こ培養期間中に産出された虫卵に含まれるエクジステロイド量は49であった。そして培養96時間後の雌雄虫体に残存しているエクジステロイド量は20に激減しており、このエクジステロイド再生産系の変調が、in vitro培養下での正常卵産出期間を制限している可能性を示した。次に、エクジステロイドが卵黄蛋白質形成(ビテロジェネーシス)又は卵殻のタンニング等の虫卵形成に関与しているかどうかを検討する前提として、マウスから採取直後の雌虫体と培養1週間以後の雌虫体をSDS-PAGEによって比較した。その結果、推定分子量34.000を示すバンドが、正常卵産出能力を失なった培養1週間以後の雌虫体では消失しつつあることが明らかとなった。

このバンドはまた、【^(14)C】-アミノ酸を含む培養液で成虫を好気的条件と嫌気的条件とで飼育したとき、好気的培養の雌虫体のオートラジオグラフィにのみ強い放射能がみとめられた。この事実と嫌気的条件下では成虫による虫卵の産生が極度に抑制されることとを考えあわせると、推定分子量34.000を示す蛋白成分は正常卵産出に必須な成分であると思われる。日本住血吸虫の虫卵形成にかかわる重要な因子として,卵黄蛋白質形成(ビテロジエネーシス)と,その蛋白質を利用したおそらくはタンニングによる卵殻の形成がある.これらの過程にエクジステロイドが関与しているかどうか等,どのようにレギュレートされているのかを調べるためには,まず雌虫の卵黄腺に於ける卵黄細胞と,卵殻に包含された段階の卵黄細胞(すなわち卵殻形成後の卵黄細胞)の蛋白質構成を解析しておくことが必要であった.そこで前年度,雌虫に特異的で正常卵の産出に必須な蛋白成分は,推定分子量34,000(34Kp)であることを明らかにしたが,今年度はSDS-PAGEを行った後のゲルから34Kpを抽出し,それによって家兎を免疫して抗血清を作成した.この抗血清と雌雄虫体の凍結切片を用いた間接蛍光抗体法により34Kpが虫体のどの様な部分に局在しているかを検討した.その結果,本蛋白成分の局在は卵黄腺組織にのみ一致することが明らかになり更に,虫体を10%FCS加RPMI 1640により, in vitroで培養するとこの成分は持続しては産生されず,正常卵の産出が見られなくなると同時に消失することも確認された.従って,本蛋白成分は卵黄蛋白質を構成するものと考えられた.次に,卵殻に包含された段階での卵黄蛋白質について検討した.多数の卵黄細胞を包含する産卵直後の虫卵をin vitroで集めその蛋白成分につきイムノブロット法によって検討したところ,抗34Kp抗体に反応するバンドは認められなかった.他方で,産卵直後の虫卵に包含された卵黄細胞由来の蛋白成分を,産卵直後卵とミラシジウム形成卵とでSDS-PAGEによる比較解析したところ,産卵直後卵に特徴的で発育と共に消失するものは推定分子量66,000である事が明らかとなった.本蛋白成分と34Kpとの関係,及び虫卵形成過程での役割について更に検討したい.これまでの検討によって日本住血吸虫の虫卵形成にかかわる卵黄蛋白質は、SDS-PAGEで推定分子量34,000(34Kp)を示すものであることが明らかとなった。抗34Kp特異抗体を作成して行った実験によれば本蛋白質は雌卵黄腺内の卵黄細胞に局在しているが、新生卵殻に包含された段階での卵黄細胞にはもはやこの抗体に対する抗原性は証明されなかった。この事実は34Kpそのものが卵殻蛋白質の前駆体である可能性を示しており、卵殻形成後この蛋白質の抗原性に変化が起きたと考えるならばこの現象を合理的に解釈することができる。そこで、3種のアミノ酸(^<14>C-チロシン、^<14>C-グリシン、^<35>C-メチオニン)を用いた蛋白質のトレーサー実験を行った。即ち、培養液中のこれらアミノ酸が34Kpに取り込まれるかどうか、また光顕組織切片上での雌卵黄腺や新生卵殻に放射能活性が現れるかどうかについて調べた。その結果、^<14>C-チロシンが極めて短時間のうちに34Kpに取り込まれているのがオートラジオグラフィで観察された。^<14>C-グリシンの取り込み速度は遅く、^<35>C-メチオニンの34Kpへの取り込みは殆ど見られない。この時の組織切片でのチロシン由来の放射能活性は、雌では大部分卵黄腺組織にのみ認められた。次に^<14>C-チロシンでラベルした後、アイソトープを含まない培養液でさらに48時間培養をしたものについてみると、34Kpの放射能活性は非常に弱まっており、この時の組織切片での放射活性は卵黄腺から卵殻に移行しているのが観察された。