hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
PACAPによるアストロサイト活性化制御機構の解明

虚血性神経細胞死誘導後に認められるグリオーシス(アストロサイトの活性)におけるPACAPの作用を検討した。PACAP受容体は神経損傷領域を取り囲むアストロサイトにおいて強く発現し、培養細胞を用いた実験により、PACAPはアストロサイトの増殖を促進する作用を有することが明らかになった。本研究により、PACAPがアストロサイト活性化およびグリオーシス形成機構に重要な役割を担うと考えられる。これまでの我々の研究により、PACAPがアストロサイトの活性化促進因子である可能性が示唆された。しかし、PACAPが生体内でアストロサイトの活性化因子として機能するか、またPACAP処理されたアストロサイトがどのような動態を示すかについては不明な点が多い。そこで本研究では虚血性神経細胞死誘導後に認められるアストロサイトの活性(グリオーシス)におけるPACAPの生理的作用を検討した。野生型マウスを用い、海馬に遅発性神経細胞死が誘導される一過性前脳虚血モデルを用い、アストロサイト活性化領域(海馬領域)でのPACIR発現量と発現細胞種の経時的変化をウェスタンブロッティング法および免疫染色法により比較した。その結果、PACIRは脳虚血1日後に免疫陽性反応がピークとなり、その後緩やかに低下して56日後には正常値に戻った。またPACIR免疫陽性反応は、脳虚血1日目では主に神経細胞マーカーと重なったが、虚血3日後からはアストロサイトと一部重なるようになり、7日後には海馬の広範囲においてPACIR免疫陽性のアストロサイトが観察された。その後、PACIR陽性のアストロサイトは海馬の神経細胞死領域のみに限局した。次に培養アストロサイトに掻き傷を作成し、反応性アストロサイトを誘導する培養実験を確立し、そこにPACAPを添加した。PACAPを10^<-15>から10^<-7>M添加したところ、PACAP10^<-11>、l0^<-13>M添加群では傷害領域周辺部の増殖している反応性アストロサイトの割合が溶媒添加群の約2倍に増加した。以上の結果から、PACIRは神経損傷領域を取り囲むアストロサイトにおいて強く発現し、PACAPは反応性アストロサイトの増殖を促進する作用を有することが明らかとなった。翌年度はようやく安定して繁殖可能となったEGFP-GFAP Tgマウスを用いてアストロサイト活性化制御機構を引き続き解析する。PACAPが生体内でアストロサイトの活性化因子として機能するか、またPACAP処理されたアストロサイトがどのような動態を示すかについては不明な点が多い。そこで本研究では虚血性神経細胞死誘導後に認められるアストロサイトの活性におけるPACAPの作用を検討した。野生型マウスを用い、海馬に遅発性神経細胞死が誘導される一過性前脳虚血を施し、アストロサイト活性化領域(海馬領域)でのPAC1R発現量と発現細胞種の経時的変化をリアルタイムPCR法、ウェスタンブロッティング法および免疫染色法により比較した。その結果、PACAP受容体(PAC1R)mRMAは脳虚血12時間後、PAC1R免疫陽性反応は脳虚血1日後に発現がピークとなり、その後緩やかに低下して56日後には正常値に戻った。またPAC1R免疫陽性反応は、脳虚血1日目では主に神経細胞マーカーと重なったが、虚血3日後からはアストロサイトと一部重なるようになり、7日後には海馬の広範囲においてPAC1R免疫陽性のアストロサイトが観察された。次に培養アストロサイトに掻き傷を作成し、反応性アストロサイトを誘導する培養実験を確立した。掻き傷作成2日後には傷の周辺に強いPAC1R免疫陽性反応を示す反応性アストロサイトが観察された。そこで掻き傷作成後に最終濃度10^<-15>から10^<-7>MになるようにPACAPを添加したところ、PACAP10^<-11>、10^<-13>M添加群では傷害領域周辺部の増殖している反応性アストロサイトの割合が溶媒添加群の約2倍に増加した。さらにPAC1RアンタゴニストをPACAPと同時に投与することにより、PACAP誘導性のアストロサイトの増殖が有意に抑制された。以上の結果から、PAC1Rは神経損傷領域を取り囲むアストロサイトにおいて強く発現し、PACAPは反応性アストロサイトの増殖を促進する作用を有することが明らかになった。
十八世紀フランスにおけるデカルト主義の思想史的研究

十七世紀後半に祖国フランスを迎えられたデカルトの思想は、十八世紀にはその影響力を失ったとされる。このこと自体は間違いないのだが、デカルトの思想がこの時期において死に絶えたわけではない。十九世紀フランスにおいて、デカルト・ルネサンスといべき事態が生じた。そうであるとすれば、十八世紀フランスにおいて、デカルト主義が何らかの形で継承されていなければならない。どのようにデカルトの思想が継承されたかという問題を、デカルト神話の形成と発展を検討しながら論証する。1)フォントネルに継承されたデカルトの批判的方法の展開。十八世紀フランスにデカルト思想を伝達したフォントネルの思想文献にどのようにデカルトの方法にある批判性が継承され、具体的な問題に適用されたかを検討した。2)デカルト神話と称される場合の神話概念の検討。ロラン・バルトやギルバート・ライルなどの神話概念を批判的検討を通して、十八世紀フランスにおけるデカルト主義に関する思想史的研究におけるデカルト神話という概念を定位した。3)これまでの研究成果の再検討と補正。十八世紀フランス思想史に関する研究を参照し、本研究の充実を図った。例えば、デカルトとフェミニズムの問題は、エリカ・ハースの『デカルト的女性と旧体制における合理的言説の変異と転倒』(1992)によって、再検討した。4)デカルト・ルネサンス。十九世紀から二十世紀に復興したデカルト思想をデカルト神話という視点から概観した。5)文献目録。これまでのデカルト神話に関する研究の網羅的文献目録を作成し、また本研究の資料を整備した。5)文献目録。(1)デカルト神話という概念における「神話」の意味の確定。多義的な神話概念を検討し、とくにロラン・バルトの神話概念を参考に、本研究における神話概念を検討した。(2)オランダにおけるデカルト神話の生成に関わる状況の精査。1641年の『省察』出版以降、オランダにおけるデカルトの名声とそれに比例して生じた批判が、どのようにデカルト神話と関連するのかを、伝記的事実とそれに関連する「神話」的表現との比較検討を行なった。(3)これまでの研究の補正。同一主題の研究は出現していないが、デカルト研究、十八世紀フランス思想研究文献のうちで、この主題に関係するものを検討し、批判的に摂取することに努めた。(4)十九世紀前半のフランスにおけるデカルト像の検討。ヴィクトール・ク-ザンを中心とするデカルト主義研究のうちにみられる新しいデカルト理解の検討を行なうと同時に、こうした新解釈を可能にした思想史的状況の検討を行なった。しかしこの課題はすでに、十八世紀におけるデカルト像という問題を超え、次の新しい課題(十九世紀フランスにおける哲学と思想の制度的研究)の設定を促した。以上のような成果を総合して、できるだけ早い機会にこれまでの研究をまとめ、出版する計画である。十七世紀後半にフランスを座捲したデカルトの思想は、十八世紀にはその影響力を弱めたとされる。十九世紀においてデカルト思想の再評価が行われる。本年度は以下の3つのテーマについて考察ならびに基礎的な資料研究を行った。ロラン・バルトなどの神話概念を批判的検討を通して、十八世紀フランスにおけるデカルト主義に関する思想史的研究におけるデカルト神話という概念を基礎的定位した。

3)十八世紀から十九世紀にかけてのフランスカトリシズムにおけるデカルト主義受容に関する文献的基礎研究。パリのBiblotheque Nationale de Franceにおいて、このテーマに関する文献調査を行い、この問題に対する展望を開くことができた。以上のような調査研究を通して、当面の課題である「十八世紀フランスにおけるデカルト主義の思想史的研究」に一応区切りをつけ、十九世紀フランスにおけるこの問題の展開に調査研究を向ける。1)十八世紀フランスにおけるデカルト主義の思想史的研究の総括として、本研究の主題であるデカルト神話を問題にする場合の「デカルト神話」とはいかなるものであるか、またその際に用いられる「神話」という概念は従来の神話概念とどのような差異と類似をもつかを検討した。その際に、ロラン・バルト、ギルバート・ライルらの神話概念が、吟味の対象となった。2)十七世紀後半、祖国フランスに迎えられたデカルト思想は、十八世紀には疎んじられた。しかしながら十九世紀にデカルト・ルネサンスともいうべき現象が生じた。それ故に、十八世紀フランスにおいて命脈を保っているはずのデカルト主義とはいかなるものか、いかなる形態のもとでその命脈が保たれたのかという問いが可能であった。本研究はこの十八世紀フランスにおけるデカルト主義の運命を検討するものであった。それは一連の論功でなされたと信じるが、では十九世紀以降のデカルト神話はどのように展開するのかという問いも生じる。こうした問いに概略的な展望を与えた。この問題は引き続き研究されるべき主題である。3)本研究の主題はより大きな十七世紀から二十世紀にわたるデカルト主義の思想史的研究という枠組みでなされている。今回は十七世紀におけるデカルト主義の思想史的理解を深めるべく、彼の友人のメルセンヌに関する研究史的検討を行った。こうした研究により、デカルト主義に対する哲学史的理解ではなく、思想史的理解が深化される。4)三年間の研究を総括する意味でも、これまでの研究に関する網羅的ビブリオグラフィーを作成した。同様な関心を懐く研究者には、多少の便宜を与えることになれば幸いである。
リアルワールド知能システム用超高速ステレオビジョンVLSIプロセッサの開発

安全性・セキュリティの確保などを重視した「人にやさしい情報社会」のためには,家庭用サービスロボット,高安全自動車などの人間を支援する知能システムが重要となる.このような知能システムを実現するためには,環境情報を高速に取得することが望まれる.最も重要な環境情報として,物体の3次元情報(位置,姿勢,形状)があげられる.そこで,本研究では,究極的高性能化のために,計算量最小化を指向したVLSI向きアルゴリズム,高性能・低消費電力プロセッサアーキテクチャ,先進回路技術最適設計理論といった各階層における要素技術を確立・統合する.これにより,高信頼な3次元画像取得を数ミリ秒以下で行え,知能システムの実現が大きく促進される.本年度は,前年度までに提案したウィンドウサイズを可変とする高信頼アルゴリズムとプロセッサアーキテクチャを基に,高安全自動車用道路抽出プロセッサの開発を行った.フィールドプログラマブルゲートアレイ(FPGA)を用いた実装により,マイクロプロセッサでの処理と比較して,数10倍の高速化が達成できることを示した.また,ステレオビジョンのさらなる高信頼化のために,3眼ステレオピジョン用プロセッサアーキテクチャを提案した.演算スケジュールを最適化することにより,2眼カメラのハードウェア量とほぼ同じハードウェア量・処理時間で3眼ステレオビジョンの処理を達成した.0.18μCMOSプロセスを用いて,32画素x32画素のサイズの入力画像,最大ウィンドウサイズ4x4に対するテストチップを試作した.その結果,動作周波数100MHzで1000フレーム/secで動作する見積もりを得た.安全性・セキュリティの確保などを重視した「人にやさしい情報社会」のためには,家庭用サービスロボット,高安全自動車などの人間を支援する知能システムが重要となる.このような知能システムを実現するためには,環境情報を高速に取得することが望まれる.最も重要な環境情報として,物体の3次元情報(位置,姿勢,形状)があげられる.そこで,本研究では,究極的高性能化のために,計算量最小化を指向したVLSI向きアルゴリズム,高性能・低消費電力プロセッサアーキテクチャ,先進回路技術,最適設計理論といった各階層における要素技術を確立・統合する.これにより,高信頼な3次元画像取得を数ミリ秒以下で行え,知能システムの実現が大きく促進される.本年度は,以下の研究開発を行った.1.高信頼性・高速性を両立するVLSI向きアルゴリズムの確立まず,3次元情報を高速に取得する手法として中間結果を最大限活用する再帰的ステレオマッチングの検討とその信頼性の定量的評価を行った.ステレオマッチングでではマッチングに用いる画像の小領域(ウィンドウ)の大きさに応じて信頼性が変化する.そこで,最大のウィンドウで大局的にマッチングを行い,その結果を用いてウィンドウサイズを小さくしながら対応結果を改善するアルゴリズムを検討した.さらに,ウィンドウの重複をなくすることにより,計算量を最小化する手法を開発した.2.最高性能条件下でハードウェア量を最小化するアーキテクチャの確立提案する複数のウィンドウに対するマッチング結果を用いるため,それらの記憶容量が膨大となる,さらに,メモリ・演算器間のデータ転送がボトルネックとなることが予想される.そこで,アーキテクチャ設計においては,処理時間制約下で記憶容量を最小化するスケジューリング理論,メモリ・演算器間の相互結合網の複雑さを最小化するメモリ・演算器アロケーションを考案した.安全性・セキキュリティの確保などを重視した「人にやさしい情報社会」のためには,家庭用サービスロボット,高安全自動車などの人間を支援する知能システムが重要となる.このような知能システムを実現するためには,環境情報を高速に取得することが望まれる.最も重要な環境情報として,物体の3次元情報(位置,姿勢,形状)があげられる.そこで,本研究では,究極的高性能化のために,計算量最小化を指向したVLSI向きアルゴリズム,高性能・低消費電力プロセッサアーキテクチャ,先進回路技術,最適設計理論といった各階層における要素技術を確立・統合する.これにより,高信頼な3次元画像取得を数ミリ秒以下で行え,知能システムの実現が大きく促進される.本年度は,前年度までに提案したウィンドウサイズを可変とする高信頼アルゴリズムに対して,メモリ・演算器間のデータ転送がボトルネックを解消するロジックインメモリアーキテクチャを提案した.さらに,0.18μCMOSプロセスを用いて,32画素x32画素のサイズの入力画像,最大ウィンドウサイズ4x4に対するテストチップを試作した.その結果,動作周波数100MHzで1000フレーム/secで動作する見積もりを得た.安全性・セキュリティの確保などを重視した「人にやさしい情報社会」のためには,家庭用サービスロボット,高安全自動車などの人間を支援する知能システムが重要となる.このような知能システムを実現するためには,環境情報を高速に取得することが望まれる.最も重要な環境情報として,物体の3次元情報(位置,姿勢,形状)があげられる.そこで,本研究では,究極的高性能化のために,計算量最小化を指向したVLSI向きアルゴリズム,高性能・低消費電力プロセッサアーキテクチャ,先進回路技術最適設計理論といった各階層における要素技術を確立・統合する.これにより,高信頼な3次元画像取得を数ミリ秒以下で行え,知能システムの実現が大きく促進される.本年度は,前年度までに提案したウィンドウサイズを可変とする高信頼アルゴリズムとプロセッサアーキテクチャを基に,高安全自動車用道路抽出プロセッサの開発を行った.フィールドプログラマブルゲートアレイ(FPGA)を用いた実装により,マイクロプロセッサでの処理と比較して,数10倍の高速化が達成できることを示した.また,ステレオビジョンのさらなる高信頼化のために,3眼ステレオピジョン用プロセッサアーキテクチャを提案した.演算スケジュールを最適化することにより,2眼カメラのハードウェア量とほぼ同じハードウェア量・処理時間で3眼ステレオビジョンの処理を達成した.0.18μCMOSプロセスを用いて,32画素x32画素のサイズの入力画像,最大ウィンドウサイズ4x4に対するテストチップを試作した.その結果,動作周波数100MHzで1000フレーム/secで動作する見積もりを得た.
フィールドをぼかし接続する投影露光リソグラフィ技術の研究

投影露光を用いる光リソグラフィは半導体デバイス製造のキーテクノロジィであり、さらなる微細化に対応できる技術への改革が求められている。しかしながら、光の回折によって解像限界が決まっており、デバイスの高性能化、高機能化に伴ってチップ面積が増大している。このため、投影レンズの露光フィールドをできるだけ大きくしたいが、フィールドの拡大は解像度低下やパタン位置精度の低下につながり好ましくない。本研究では、高解像度を得易い小さいフィールドの投影レンズでも大きいチップが露光できるように、フィールドを滑らかに接続する方法を提案し、その有効性を検討した。フィールドを単純に隣接させて露光したのでは、如何に精度良く接続したつもりでも、つなぎめに露光量の過不足やパタン形状の不連続を生じてしまう。そこで、台形の光束を用いてフィールドの片側を台形の斜辺により露光量を連続的に変化させて走査露光し、次に隣のフィールドの接続部分を逆の連続的に変化する露光量分布で再度露光するぼかし接続を考えた。光強度分布計算によってぼかし接続部のパタン接続状況の改善を予測した後、ぼかし接続ができるg線1/10縮小スキャン投影露光実験装置を自作して実際に接続状況を調べた。まず、露光量にほぼ比例して現像深さが変化するレジストを用いてレチクル面における接続部の露光むらを評価した結果、むらは0.5%以下の小さい値であった。次に、走査投影露光時のパタン接続を評価した。その結果、第1の露光と第2の露光間で、露光光束の接続やフィールド間のパタン重ね合わせに多少の誤差があっても、接続部でパタンの形成状況が急変したり不連続となることは無く、極めてなめらかにパタンが接続できることを実証できた。小さい露光フィールドを接続して大きなチップを露光可能とするため、滑らかに露光フィールド間を接続できるようにすることが,本研究の目的である。それには、接続部で露光量が変化しないようにすることとパタン位置が精度良く接続されることが必要である。そこで、スキャンする時の光束の一端の幅が斜め直線状に減少する2つの逆向き台形光束を用い、2つの逆向きの台形光束の斜辺部を重ねて二重露光する「ぼかし接続」を行って接続状況を調べた。なお、本期間においては、まず、投影光学系の影響を除外して、照明光束の重ね精度と接続状況との関係を明らかにするため、レチクル位置で評価を行った。具体的には、自作したレチクルスキャンステージ上にレジストを塗布したウエハを置いてスキャン露光を行い、パタン形状を評価する場合には、テストレチクルをウエハ上においてソフトコンタクトで露光した。レチクル上を形状精度の高い台形光束で照明する必要があるため、角の丸みが小さい台形スリットを作ってその光像をレチクル上に形成した。露光フィールドを露光光束の端どうしが単純に接するように接続すると、どのような間隙で2つの光束を接しても接続境界に露光オーバーや露光アンダーの境界が現れ、境界上のパタンの平面形状にはくびれやふくらみ等を生ずる。これに対し、「ぼかし接続」を行うと接続境界は極めて滑らかになり、仮に故意に光束どうしを50μm程度ずらしても露光状況やパタン寸法、パタン形状はほとんど変化しないことが分かった。接続部の露光むらの原因としては、2つの台形スリットの位置制御誤差、2つの露光光束の形状誤差、スキャン経路誤差等が考えられるが、自作レベルの簡便な装置でも全部の誤差を総合した露光むらを約±1-0.5%以下とできる見通しである。投影露光を用いる光リソグラフィは半導体デバイス製造のキーテクノロジィである。

デバイスの高性能化、高機能化に伴ってチップ面積が増大しており、投影レンズの露光フィールドをできるだけ大きくしたいが、フィールドの拡大は解像度低下やパタン位置精度の低下につながり好ましくない。本研究では、高解像度を得易い小さいフィールドの投影レンズでも大きいチップが露光できるように、フィールドを滑らかに接続する方法を提案し、その有効性を検討した。台形の光束を用いてフィールドの片側を台形の斜辺により露光量を連続的に変化させて走査露光し、次に隣のフィールドの接続部分を逆の連続的に変化する露光量分布で再度露光するぼかし接続について実験した。台形の斜辺傾角は80゚とした。露光量にほぼ比例して現像深さが変化するレジストを用い、レチクル面における接続部の露光むらを評価した結果、むらは0.5%以下の小さい値であった。そこで、次に、ぼかし接続ができるg線1/10縮小スキャン投影露光実験装置を自作してパタンの接続状況を調べた。投影レンズの開口数は0.35である。フィールドを単純に隣接させて露光したのでは、如何に精度良く接続したつもりでも、つなぎめに露光量の過不足を生じ、パタン形状の不連続を生じてしまう。しかし、ぼかし接続を適用すると、第1の露光と第2の露光間で、露光光束の接続やフィールド間のパタン重ね合わせに多少の誤差があっても、接続部でパタンの形成状況が急変したり不連続となることは無く、極めてなめらかにパタンが接続できることを実証できた。
上腸間膜動脈閉塞・再灌流時の腸管運動に関する検討

1.虚血再灌流時の腸管運動(非虚血時の腸管運動)5-10分間隔で単発性,spike様の収縮を認めた.(虚血時の運動)虚血5分以内に次第に増強漸減する高周波の痙攣様の強収縮波形が認められた.また,その強収縮は徐々に減弱し30分以内に消失した.(再灌流時の運動)30,60分虚血群の全例および90分虚血の一部の症例において再灌流後10-20分後よりspike様の収縮波形が散発性に出現した.出現間隔は不規則であったがその後も持続した.その他の90分虚血および120分虚血群においては収縮波形の出現は認められなかった.2.エネルギー代謝・腸管運動の比較検討ATPの変動においては虚血後30分間に急速に低下し,虚血前に比し約30%にまで低下し,その後緩慢に低下した.この変動は腸管運動の振幅の増減とよく相関するものであり興味ある結果であった.再灌流後のATPの回復程度は虚血時間と負の相関を示したが,再灌流後の収縮波の出現の有無との関係に解明にはさらなる検討が必要と思われる.腸管運動における各種薬剤の反応カルシウム拮抗薬に関しては虚血時の強収縮は有意に抑制された.同時にATPの虚血時における低下の抑制,再灌流時における良好な回復を認めた.ネオスチグミンは非虚血時において腸管の収縮を惹起した.また,再灌流時においては30,60分虚血の全例および90分虚血の一部の症例で収縮を惹起し腸管のviabilityとの関係を示唆する所見と考えた.4.組織学的検討HE染色では虚血時間が延長するに従って浮腫,絨毛の脱落,出血が認められた.S-100蛋白染色では神経線維とグリア細胞の染色性は時間の経過とともに低下し,120分ではほぼ消失していた.虚血60分以上では神経線維の膨化とグリア細胞核の空胞化および核の変形など細胞変性,壊死の変化がみられ,虚血時間とともに顕著となり,120分後には神経節細胞も変性・壊死を呈していた.1.虚血再灌流時の腸管運動(非虚血時の腸管運動)5-10分間隔で単発性,spike様の収縮を認めた.(虚血時の運動)虚血5分以内に次第に増強漸減する高周波の痙攣様の強収縮波形が認められた.また,その強収縮は徐々に減弱し30分以内に消失した.(再灌流時の運動)30,60分虚血群の全例および90分虚血の一部の症例において再灌流後10-20分後よりspike様の収縮波形が散発性に出現した.出現間隔は不規則であったがその後も持続した.その他の90分虚血および120分虚血群においては収縮波形の出現は認められなかった.2.エネルギー代謝・腸管運動の比較検討ATPの変動においては虚血後30分間に急速に低下し,虚血前に比し約30%にまで低下し,その後緩慢に低下した.この変動は腸管運動の振幅の増減とよく相関するものであり興味ある結果であった.再灌流後のATPの回復程度は虚血時間と負の相関を示したが,再灌流後の収縮波の出現の有無との関係に解明にはさらなる検討が必要と思われる.腸管運動における各種薬剤の反応カルシウム拮抗薬に関しては虚血時の強収縮は有意に抑制された.同時にATPの虚血時における低下の抑制,再灌流時における良好な回復を認めた.ネオスチグミンは非虚血時において腸管の収縮を惹起した.また,再灌流時においては30,60分虚血の全例および90分虚血の一部の症例で収縮を惹起し腸管のviabilityとの関係を示唆する所見と考えた.4.組織学的検討HE染色では虚血時間が延長するに従って浮腫,絨毛の脱落,出血が認められた.S-100蛋白染色では神経線維とグリア細胞の染色性は時間の経過とともに低下し,120分ではほぼ消失していた.虚血60分以上では神経線維の膨化とグリア細胞核の空胞化および核の変形など細胞変性,壊死の変化がみられ,虚血時間とともに顕著となり,120分後には神経節細胞も変性・壊死を呈していた.
酸化物超弾性体の開発と圧電体への応用

本研究ではセラミックス圧電体新規物質を開拓するため、超弾性体として大きな歪みを生じ得るものをターゲットとし、約600種類ある超弾性体に対して相転移点を制御することにより圧電体への応用の可能性を探った。セラミックスとして作成可能な物質として、点群422(D_4),222(D_2),622(D_6),32(D_3),23(T),4^^-2m(D_<2d>),6^^-(C_<3h>),4^^-3m(Td),^^-62 m(D_<3h>),3m(C_<3r>),4m(C_<4v>),6mm(C_<6v>)をもつ酸化物の中から室温以上で構造相転移を起こす約350の酸化物群のうちから約60個の物質をマトリックス候補物質として選定した。これらのうち、ドーピングにより大きな変形を引き起こす可能性のある16個の物質をさらに選び出して圧電性を評価した。これらのうち、Ba_<0.27>Sr_<0.75>Nb_2O_<5.78>,Li_<4.07>K_<5.7>Nb_<10.2>O_<30>,Ba_6CoNb_9O_<30>,Ba_6FeNb_9O_<30>,Mn_2Zn_2Nb_2O_9,Ba_6FeNb_9O_<30>,PbNb_2O_6,Bi_3TiNbO_9,NaVO_3,YInO_3,Ca_3GeO_<6.45>,Sr_2MnSbO_6等をマトリックスとする物質は一定の電場で一定量以上の伸びを示すことが明らかになった。これらの結晶の多くは逆圧電効果を示し、また最大変位は100kV/cmで0.12%を示すことを確認している。本研究の結果は圧電体を無毒化するために必要な戦略を提示するものである。セラミックス圧電体は多くの物質が鉛を含むため、環境汚染防止の観点から圧電体の開発が望まれている。また鉛に換わる元素としてビスマス系酸化物の開発も進行しているが、ビスマスも環境に対しては鉛と同程度の毒性をもつため、長期的視野に立てば非鉛系・非ビスマス系圧電体開発が急務である。本研究ではこのような新材料開発を目的として材料探索を開始した。従来の圧電体開発は既存の材料の元素を置き換えるという発想に基づいて行われているため、限られた構造と限られた元素を対象としてきた。しかし、より広い考えから物質探索を行うには他分野の研究とその基本設計理念を取り入れながら研究を進める必要がある。このような観点から本研究では、金属材料のうちで最も変形が大きな超弾性体に着目して物質探索を開始した。超弾性は金属のマルチンサイト変態を利用したものであり、現実に可逆的のびは9%にも達する。この超弾性を酸化物設計に取り込み、まず組織全体としての伸び易さに着目して超弾性を示しうる化学物群を拾い出し、それらのうちから候補物質を絞り込むこととした。このため、いわゆる圧電体となる700の候補物質から点群、空間群、および相転移温度に着目して約200の物質系に絞り込んだ。本研究に関連してより広い視野から設計を進めるため、2005年1月に強誘電体・圧電体研究を専門とする研究者を招聘してシンポジウムを開催した。これらの結果をもとにいくつかの物質系の合成を試み・組織および圧電性を調べた。これらのうち、Ba_<0.27>Sr_<0.75>Nb_2O_<5.78>,Li_<4.07>K_<5.7>Nb_<10.2>O_<30>,Ba_6CoNb_9O_<30>,Ba_6FeNb_9O_<30>,Mn_2Zn_2Nb_2O_9,Ba_6FeNb_9O_<30>,PbNb_2O_6,Bi_3TiNbO_9,NaVO_3,YInO_3,Ca_3GeO_<6.45>,

Sr_2MnSbO_6等をマトリックスとする物質は一定の電場で一定量以上の伸びを示すことが明らかになった。これらの結晶の多くは逆圧電効果を示し、また最大変位は100kV/cmで0.12%を示すことを確認している。本研究の結果は圧電体を無毒化するために必要な戦略を提示するものである。
マツカワメラノコルチン受容体(MCR)のヘテロマー形成の可能性

【Xenopus tropicalisを用いたメラニン凝集ホルモン(MCH)システムの解明】これまでに、X. tropicahsから4種類のメラニン凝集ホルモン受容体(XMCHR1a、1b、2a、2b)をクローン化し、細胞内シグナルを指標に受容体機能を精査した。その結果、MCHR2bのみCa^<2+>濃度、GTPγS結合能、ERK及び70S6Kリン酸化、cAMP量測定の全てにおいて、活性は認められなかった。そこで、CHO-K1細胞を用いてXMCHR2bの細胞内局在を免疫化学染色により調べたところ、他のXMCHRsと同様に細胞膜上に局在していた。さらに、XMCHRのリガンドであるXMCHを添加し、細胞内局在を調べたところ、XMCHR2bのインターナリゼーションが認められた。以上より、XMCHR2bは一般的な細胞内シグナルを活性化しないが、機能的な受容体だと考えられる。このような特徴を有するMCHRの報告は本研究が初である。興味深いことに、XMCHR2bはX. tropicalisのほぼ全ての組織で発現する。中でも、皮膚ではXMCHR1bと共に体色調節に関わる可能性を昨年度明らかにした。そこで、XMCHR1bとXMCHR2bの関係を探るべく、両受容体をCHO-K1細胞に共導入し、免疫化学染色を行った。その結果、XMCHR1bとXMCHR2bの多くが細胞膜上で共発現すること、XMCH添加により、両者のほとんどが共にインターナリゼーションすることを認めた。よって、X. tropicalisの皮膚では、XMCHR1bとXMCHR2bが相互的(2量体形成等)に体色調節に関与すると考えられる。しかしながら、少数認められたXMCHR2bの単独での挙動については謎である。【マツカワ・メラノコルチン受容体(MCR)のヘテロマー形成の可能性】昨年度までに、マツカワMC1RとMC5Rがヘテロダイマーを形成する可能性を示す多くのデータを得た。本年度は残された課題であった免疫沈降法による生化学的解析を行い、MC1Rの免疫沈降画分にMC5Rも検出されることを明らかにした。さらに、フローサイトメトリー解析により、CHO細胞発現系では、MC1RとMC5Rの極一部がヘテロダイマーを形成していることを明らかにした。(抄録なし)I.アフリカツメガエルを用いたMCHシステムの解明アフリカツメガエル(Xenopus tropicalis)において4種のMCHR(MCHR1a,MCHR1b,MCHR2a,MCHR2b)サブタイプのcDNA構造を決定した。翻訳したアミノ酸配列をもとに、MCHRの進化系統樹を作成したところR1、R2共にサブタイプaは哺乳類MCHRに、bは魚類MCHRに近い可能性が示された。即ち、Xenopus tropicalisは哺乳類と魚類のそれぞれの特徴を持つMCHRサブタイプを有する可能性が考えられた。魚類MCHR1はGqと共役し、R2はGqおよびGi/oと共役する。一方、哺乳類R1はGqおよびGi/oと共役するが、R2はGqのみと共役する。以上のように、MCHRサブタイプは哺乳類と魚類でGタンパク質選択性が異なる。そこで、各MCHR発現ベクターを構築後、培養細胞発現系(CHO細胞)を用いて受容体機能解析を行った。その結果、Xenopus tropicalis MCHR1のGタンパク質選択性が、1a(GqおよびGi/o)は哺乳類に、1b(Gq)は魚類に近いことを支持する結果を得た。また、RT-PCR法により発現組織の分布を調べたところ、摂食中枢が存在する脳では4種類のMCHRが発現しており、体色調節機能に関与する皮膚では1bの発現を認めた。H.マツカワMCRヘテロマー形成の可能性震災により、マツカワMCR挿入ベクターが消失したため、再度クローニング後、MC1RとMC5Rの発現ベクターを構築した。MCRは細胞内でGsと共役しcAMP濃度を上昇させる。そこで、HEK293T細胞にMC1RあるいはMC5R発現ベクターを一過性に導入し、α-MSH(アセチル基有り)とDes-Ac-α-MSH(アセチル基無し)を用いて刺激後cAMP量を測定した。その結果、MC1R、5R共にα-MSHの方が親和性が高く、MSH類は共にMC1Rのほうが5Rよりも親和性が高いことが示された。以上の結果は、マツカワ皮膚の培養実験から得られた「MCRが単独で発現する際にはアセチル基によりMSHの活性が増強される」という現象を支持するものである。未解明であったMCHR2aと2bに関して、百日咳毒素を用いた細胞内Ca2+測定によりGタンパク質共役能を調べた。その結果、MCHRの一次構造とGタンパク質共役能から2aは哺乳類MCHRに近いことが示唆された。一方、2bは一次構造が魚類型MCHRに近いものの、Ca2+測定系に加えて、pERK、p70S6、cAMPアッセイ等でもシグナルの変動は認められなかった。また、シングルセルPCRにより、皮膚の黒色素胞では1bと2bが発現することを明らかにした。そこで、X.tropicalis-MCHを用いて皮膚の培養実験を行ったところ、黒色素胞が低濃度で弱く凝集し、高濃度で拡散することを明らかにした。以上より、培養実験で観察された複雑な体色調節にはR1bとR2bが相補的(ダイマー形成等により)に関与していると考えられる。

現在はこの現象解明のために、タグを付加した各MCHR発言ベクターを構築している。【マツカワ・メラノコルチン受容体(MCR)のヘテロマー形成の可能性】ヘテロマー形成を探るためにMC1Rおよび5RのN末端にタグ(FlagまたはHA)を付加したプラスミドを作成し、タグ付加により受容体機能が変わらないことを確認した。これらをCHO細胞に単導入あるいは共導入後、MCRの細胞内シグナルとして一般的なcAMP量の測定により、MSR類に対する作用を評価した。その結果、MC1R、5Rそれぞれに対し、α-MSHはDes-Ac-α-MSHと比べてEC50値が10倍以上低い、より鋭敏な反応を示した。受容体共導入時では、Des-Ac-α-MSHは各受容体の単導入時と比べてcAMP産生を増強した。一方、α-MSHを添加した場合、逆にcAMP産生は大きく低下した。これらの結果は、皮膚における培養実験の結果と一致する。さらに、共導入時において両受容体が細胞膜に共局在し、加えて、免疫沈降法による生化学的解析により、MC5Rの免疫沈降画分にMC1Rも検出された。即ち、MC1Rと5Rが共導入時にヘテロダイマーを形成すること、そしてこれに対するα-MSHを介した情報伝達系活性が低下することを示唆する結果を得た。以上より、本研究で見出したマツカワ皮膚における生理作用には、様々な要因の関与が推察されるが、「MC1Rと5Rのヘテロダイマー形成」が重要な役割の一端を担うと考えられる。【Xenopus tropicalisを用いたメラニン凝集ホルモン(MCH)システムの解明】これまでに、X. tropicahsから4種類のメラニン凝集ホルモン受容体(XMCHR1a、1b、2a、2b)をクローン化し、細胞内シグナルを指標に受容体機能を精査した。その結果、MCHR2bのみCa^<2+>濃度、GTPγS結合能、ERK及び70S6Kリン酸化、cAMP量測定の全てにおいて、活性は認められなかった。そこで、CHO-K1細胞を用いてXMCHR2bの細胞内局在を免疫化学染色により調べたところ、他のXMCHRsと同様に細胞膜上に局在していた。さらに、XMCHRのリガンドであるXMCHを添加し、細胞内局在を調べたところ、XMCHR2bのインターナリゼーションが認められた。以上より、XMCHR2bは一般的な細胞内シグナルを活性化しないが、機能的な受容体だと考えられる。このような特徴を有するMCHRの報告は本研究が初である。興味深いことに、XMCHR2bはX. tropicalisのほぼ全ての組織で発現する。中でも、皮膚ではXMCHR1bと共に体色調節に関わる可能性を昨年度明らかにした。そこで、XMCHR1bとXMCHR2bの関係を探るべく、両受容体をCHO-K1細胞に共導入し、免疫化学染色を行った。その結果、XMCHR1bとXMCHR2bの多くが細胞膜上で共発現すること、XMCH添加により、両者のほとんどが共にインターナリゼーションすることを認めた。よって、X. tropicalisの皮膚では、XMCHR1bとXMCHR2bが相互的(2量体形成等)に体色調節に関与すると考えられる。しかしながら、少数認められたXMCHR2bの単独での挙動については謎である。【マツカワ・メラノコルチン受容体(MCR)のヘテロマー形成の可能性】
培養による検出が不可能状態にある水中病原細菌の検出法の開発と生態学的研究

細菌の中にはBacillus属やClostridium属など,好ましくない環境に遭遇すると芽胞を形成して休眠するものがあるが,近年いくつかの細菌で,芽胞は形成しないが,形態機能を変化させて環境変化に耐える細菌が存在すると考えられるようになった。このような細菌は,明らかに生きてはいるが培養では検出できない状態(Viable but non-culturable:VNC)で存在している。水中の細菌のうちの一部は病原性を示し,その多くは通常は培地による培養法で検出可能であるが,非流行期に病原菌が検出されない原因や大腸菌0157の汚染ルートが特定しにくい原因としてVNCの状態で存在する可能性が考えられる。ビブリオ属菌のVNCの遺伝学的あるいは免疫学的な検出法を開発して,生態学的研究を行いVNCの病原学的意義を明らかにすることを目的として本研究を行った。特にVNC状態の腸炎ビブリオ(Vibrio parahaemolyticus)検出法の開発を目的とした特異検査法の検討を行った。すなわち,その側毛性鞭毛が種特異抗原物質であり,遺伝子配列も明らかにされていることを利用して,polymerase chain reactibo(PCR)による高感度の検出法を検討した。なお改良の余地はあるものの実用的な方法になったと考えている。一方,これと併行して腸炎ビブリオの生態学的な予備調査を行った。本菌の生態学的調査でも,臨床検査に用いられる選択性のある培地がよく用いられるが,選択性のない培地で培養した菌からレプリカ法で検査した場合と比較すると,著しく本菌の数が少ないことが明らかになり,ストレス状態あるいはダメージを受けた1種のVNC状態の菌が相当数存在することが示された。水中には多くの細菌が生息して有機物の分解者としての役割を担っているが,中にはビブリオ属菌のように水環境を本来の住処とする病原種がある。このような細菌は,通常は培地による培養法で検出可能であるが,近年いくつかの細菌で,明らかに生きてはいるが培養では検出できない状態(Viable but non-culturable:VBNC)での存在が示唆されている。VBNCの遺伝学的あるいは免疫学的な検出法を開発して,生態学的研究を行いVBNCの病原学的意義を明らかにすることが本研究の目的である。本年度は、ストレス環境下におけるVibrio parahaemolyticusの生存に及ぼす栄養条件および平板培地での培養時におけるnonculturable状態からculturable状態への復帰条件等についてに検討を加えた。V.parahaemolyticusの新鮮培養菌は低温・飢餓ストレス環境下で保存すると、生菌数が減少するが,顕微鏡下で観察すると桿菌から球形細胞への形態の変化はあるものの,個体数は数十日に渡ってあまり変化せず,VBNCの形成が推測される。この際,低温ストレス条件は変化させず、栄養条件のみを変化させて生菌数の変化を見ると、本菌が利用可能な糖であるGlucoseとGalactoseの間で生菌数の変化パターンに違いが生じた。このことは、低温ストレス条件下における糖の取り込みがGlucoseとGalactoseで異なる可能性を示唆していた。同様に、低温・飢餓ストレス環境下にある懸濁菌液に各種複合窒素源を添加した場合の生菌数変化は、無添加の場合とは異なり著しい生菌数の減少を示さず、さらに窒素源の種類による相違も示唆された。また,ラジカルスカベンジング効果を有する物質(BHA、BHT、Querucetin、Serum、BSA、Glycecrol)を培地に添加すると得られるコロニー数が増加する事が明らかになり,活性酸素の影響が推定された。

このような細菌は,通常は培地による培養法で検出可能であるが,近年いくつかの細菌で,明らかに生きてはいるが培養では検出できない状態(Viable but non-culturable:VNC)での存在が示唆されている。本研究は,我が国の食中毒起因菌として最も分離頻度の高い腸炎ビブリオ(Vibrio parahaemolyticus)のVNCに関する情報を得ることを目的としている。前年度の研究において,ストレス環境下におけるV.parahaemolyticusの生存に及ぼす栄養条件および平板培地での培養時におけるnonculturable状態からculturable状態への復帰条件等についてに検討を加え,低温・飢餓ストレス環境下での生存,栄養条件の影響,窒素化合物の影響,ラジカルスカベンジンジャー(BHA、BHT、Querucetin、Serum、BSA、Glycerol)の影響等について検討した。これらの知見を基に,本年度は実際の環境からの分離における種々の因子についての影響について検討した。V.parahaemolyticusを分離する場合には,通常はアルカリ性ペプトン水やTCBS培地などの選択性のある培地を使うが,環境中でストレスを受けている細菌は培地のpHや界面活性剤などの影響で,増殖が抑制される可能性がある。海水からの分離に際して,アルカリ性ペプトン水による増菌培養を行う最確数法及び普通寒天培地に生じた集落をTCBS培地にレプリカする方法を比較すると季節とは無関係に常にレプリカ法の方が高いV.parahaemolyticus数が得られ,広い意味でVNCと呼べる細胞の中には選択性のない培地を用いれば培養可能のものが含まれると言える。細菌の中にはBacillus属やClostridium属など,好ましくない環境に遭遇すると芽胞を形成して休眠するものがあるが,近年いくつかの細菌で,芽胞は形成しないが,形態機能を変化させて環境変化に耐える細菌が存在すると考えられるようになった。このような細菌は,明らかに生きてはいるが培養では検出できない状態(Viable but non-culturable:VNC)で存在している。本研究は,我が国の食中毒起因菌としての腸炎ビブリオなどのVNCに関する情報を得ることを目的としている。前年度までの研究において,ストレス環境下における腸炎ビブリオの生存に及ぼす栄養条件,実際の環境からの分離における種々の因子についての影響について検討したが,本年度はそれを継続して総合的とりまとめを行った。腸炎ビブリオを分離する場合には,通常はアルカリ性ペプトン水やTCBS培地などの選択性のある培地を使うが,環境中でストレスを受けている細菌は培地のpHや界面活性剤などに感受性が高く,増殖が抑制される。しかし,普通寒天培地に生じた集落をTCBS培地にレプリカする方法と直接選択培地を使う方法を比較すると常にレプリカ法の方が高い腸炎ビブリオ数が得られ,広い意味でVNCと呼べる細胞の中には選択性のない培地を用いれば培養可能のものが含まれることが示された。したがって,環境調査や食品衛生調査においては,臨床検査用の培地ではなく,ストレスの少ない培地の利用が必要と言えるが,操作が複雑になってしまう。
側枝血管の確実な血流維持を可能とする脳動脈治療用カバーステント開発における孔設計

ワイドネック巨大動脈瘤の治療は非常に困難である。バルーン拡張型ステントをディップコートすることでポリウレタン薄膜を形成させ、拡張時にハニカム孔となるようにレーザー加工することでカバードステントを作製した。巨大ワイドネックの外弯側動脈瘤イヌモデルにおいて、ほぼ全ての動脈瘤はステント留置によって直後に塞栓効果が得られ、開口部は内皮細胞を含む内膜で完全に覆われた。また、分枝血管ウサギモデルにおいて、ステントを二重に留置しても分枝血管の血流はほとんど変化なかった。孔のデザインによって優れた動脈瘤の塞栓性と分枝血管の開存性が両立することを本研究で確かめることができた。(1)流体力学的機能評価:アクリル立方体を切削加工することで、瘤形状を内部に有する動脈瘤モデルを作製した。拍動流回路を用いた可視化実験によって、動脈瘤内の血流を停滞させながら、側枝血管の血流を維持できるカバーフィルムを作製し、孔の大きさ、形状、総面積の最適化を行った。臨床に則した動脈瘤モデルを作製することができた。回路には拍動流ポンプを装着させ、蛍光微粒子を流すことで流れを可視化した。流れはハイスピードカメラで観察した。(2)カバードステントの作製:得られた孔のデザインで実際にカバードステントの作製を行った。事業化を最短距離で達成することをめざして、ステントプラットフォームから独自設計を行った。ステントのカバー化は既に開発したディッピング法によって行った。装置は全てロボット化させ、再現性を高くして、膜の厚さを任意に調節可能とした。また、多孔化はエキシマレーザー加工によって精密製作を行った。頭蓋内で使用可能なバルーン拡張型ステントは市販されていない。そのため複雑に屈曲した頭蓋内血管内で誘導できる柔らかいバルーンを特別に設計した。試作したバルーンにカバードステントをハンドクリンプによってマウントした。(3)カバードステントの物性評価:柔軟性、拡張性などの物性を3点押し曲げ試験を評価した。頭蓋内での誘導性、操作性を血管内手術トレーニング評価シミュレーター(EVE)で評価した。昨年度の本研究において、カバードステント留置によって瘤の塞栓と側枝血流維持を両立できる孔設計の候補を流体力学的機能評価によって絞ることができた。本年度はその効果を調べる目的で、実験的に動脈瘤を作製した動物モデルによって検証を行った。実験的動脈瘤は、兎腕頭動脈でエラスターゼ処理することで右頸動脈を一部変性させて動脈瘤化させることで作製した。カバードステントはバルーンカテーテルにマウントし、カットダウンした大腿動脈に挿入したシースから血管内に誘導した。アンギオ室内にて血管造影しながら動脈瘤の開口部まで進め、バルーンを拡張させることでステントを留置した。ステント留置前後でMRI像を比較し、動脈瘤内並びに作製し動脈瘤近傍に元々存在していた側枝の血流変化を詳細に調べた。動脈瘤内の血流は直後に遅延し、ほぼ動脈瘤は造影されなくなり、造影上消失し、塞栓されたと判断できた。一方、側枝血管の血流はほとんど変化なかった。動脈瘤の塞栓と側枝の開存は3ヵ月後も変化なかった。昨年度行った孔設計を動物実験にて確証を得ることができた。医療機器工学当該年度交付申請当初に計画していた研究項目の全てに着手でき、予定された成果が得られたため引き続き、当初の計画に添って研究を円滑に進めていくことで、研究目的は達成できる見込みであり、特に計画の変更は必要としない。次年度使用額として、11,562円が発生したが、ほぼ計画通りに予算を執行することができた。本年度の若干の次年度使用額に関しては、次年度の物品費に加えて執行する予定である。
高齢者の温熱適応と暖身器具との関連

暖房室(20°C)に設置した暖身器具のひとつである炬燵で十分身体を暖めたのち、非暖房室(10°C)に入室し、10分後に出室、暖房室に移動するという日常生活に近い状況に実験条件を整えた。この間の高齢被験者と若年被験者の皮膚温等についての比較検討を行った。結果を要約すると下記の通りである。1.皮膚温について炬燵で暖まった下腿皮膚温と、露出している前腕皮膚温に、若年者とは異なる変動がみられた。(1)非暖房入室後、高齢者は下腿皮膚温の低下が若年者に比較して少なく、出室後の上昇も小さかった。若年者について高齢者と同じ着衣での追加実験を行ったが、同様の結果が得られた。(2)高齢者の前腕皮膚温は出室後も低下を続け、回復が遅れた。2.若年者の最高血圧は非暖房室入室後上昇し、出室後低下するが、高齢者の場合は個人差がみられ、中には入室後、急激に上昇する被験者もいた。また、暖房室に戻ってから元の値に戻るのに高齢者の方が時間を要した。3.口腔温については両群間にほとんど差は認められなかったが、脈拍については非暖房室入室直後に高齢者の方が急激に上昇した。4.感覚評価においても両群間で違いがみられた。すなわち、温冷感・快適感とも非暖房室入室後、高齢者の方が遅れて冷感・不快感を感じ、非暖房室出室後はすぐに温感・快適感を感じる傾向があった。このように、わずか10°Cの温度差の温熱環境の異なる環境下で、また、10分程度の寒冷曝露であっても、生理的にも感覚的にも若年者と異なる結果が得られた。しかし、被験者の人数が十分でないこと、また女性だけの被験者であったことなどから、今後、被験者数の増加と男性被験者の追加を行うことによって、高齢者の温熱適応と暖身器具との関連について検討を加えていきたいと考えている。
ECEL1/DINE遺伝子変異による先天性関節拘縮症発症メカニズムの解明

本研究の目的は、ECEL1/DINE遺伝子の変異がどのようにして先天性の関節拘縮症につながるのか、蓋然性の高いマウスモデルを使って解明することである。遠位型関節拘縮症で同定されたECEL1/DINEの病的変異をノックインしたモデルマウスを解析することで、変異の病的意義を個体レベルで追求した。先行研究(Nagata et al., 2016)と同様に、変異ノックインマウスと運動ニューロンがGFPラベルしたレポーター系統マウスを交配させ、胎生期マウスの運動神経の発達異常を全身性に評価した。病的変異間の差異を明らかにするためC760R、G607Sの2つの系統で同じ解析を行った。共焦点顕微鏡を使って3Dイメージを取得したところ、下肢の複数の骨格筋において運動神経の枝分かれの著しい減少が認められた。外転神経においては、軸索の伸展が停止している個体、また経路外に伸びている個体が認められた。ただし、外転神経の表現型の浸透率は100%ではなく、ノックイン系統においても2割または4割程度の個体で正常に眼球周囲に到達していた。明らかな系統間差異はなく、両系統とも同様の表現型を呈した。ただし、その後の生化学的解析により、C760Rでは、ECEL1/DINEタンパクの局在異常が検出された一方、G607Sではスプライシング異常により、mRNA発現に顕著に減少していた。また、ECEL1/DINE変異マウスの生直後の致死性克服を目指し、floxマウスの作製に取り組んだ。ゲノム編集技術により、2箇所にloxP配列を挿入した。野生型マウスと交配したところ、loxPの挿入が次世代に伝わっていた。また、in vitroのCreリコンビナーゼと反応させ、loxPの組み換えが生じることを確認した。ノックインマウスの運動神経の解析は計画通りに順調に進んでおり、必要なデータを取り終えた状態にある。また、ゲノム編集技術を利用したfloxマウス作製は初めての試みであったが、比較的短時間で系統の樹立にまで至った。ECEL1/DINEは酵素であることから、単独で機能しているとは考えにくい。変異マウスがなぜ発生学的異常を生じるのか、関連分子にまで研究対象を広げることで全貌を明らかにしていく。また、昨年度の所属機関の変更により、floxマウスに関しては当初予定していた計画遂行が困難になった。有用性が高い動物モデルであるため、共同研究ベースで維持できることは維持し、成果につなげていく。