hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
脳内の軸索再伸長をターゲットとしたアルツハイマー病の根本的治療法の開発

アルツハイマー病(AD)では、脳内でAβが沈着することによって神経回路が破綻し、記憶障害が引き起こされる。本研究では、神経回路の再形成を困難にしている“萎縮した軸索"に着目し、脳の軸索を再伸長させることがADの記憶回復に重要であることを証明する。これにより、現代社会の急増するAD患者に対して有効な治療法を開発するとともに、脳の軸索がつながるべき部位に再伸長する現象とそれに関わる分子メカニズムを解明し、神経科学分野の発展に貢献することを目指す。
マルチオミクス解析に基づく肝癌幹細胞を標的とした新規治療法開発

本研究では、肝細胞癌患者予後と密接に相関を示す肝癌幹細胞マーカーとしてCD44を見出した。また、肝癌幹細胞と肝癌細胞間での網羅的な遺伝子発現/miRNA発現解析を実施した。これらのデータを用いた統合解析の結果、cell adhesion molecule、apoptosis、ABC transportersなどに関わる遺伝子、miRNA群が変動しており、肝細胞癌患者における悪性度の進展にCD44陽性肝癌幹細胞が関与していることが示唆された。さらに、CD44陽性肝癌幹細胞で高発現していたDKK1、miR-137は肝細胞癌患者予後と関連を示し、独立した予後予測因子となることが明かとなった。本研究では、肝癌幹細胞と肝幹細胞を比較することで、肝癌幹細胞に特徴的な遺伝子発現や代謝経路を明らかにすることで、肝癌幹細胞の発生メカニズム、幹細胞性維持機構を解明し、新規腫瘍制御技術を開発することを目的としている。現在までに、マウスに0.1% DDC食を4週間与えることで肝障害を誘導することが可能であり、DDC食を与えたマウスではコントロール食を与えたマウスと比較して肝再生の指標とされる肝/体重比の増加が認められることが明かとなった。また、0.1% DDC食を5週間与えたマウス肝臓からコラゲナーゼ還流法を用いて非実質細胞を分取し、Flow cytometryによる解析を行った結果、EpCAM陽性肝幹細胞、CD44陽性肝幹細胞の割合はそれぞれ全体の0.1%であった。さらに、癌細胞における予備的検討として、ヒト肝癌細胞株HuH7を用いたsphereformation assayを行った結果、CD44陽性細胞はCD44陰性細胞と比較してsphere形成能が有意に高いことが明かとなった。本研究では、肝臓組織内の癌幹細胞と幹細胞における違いを比較検討することで、肝癌幹細胞に特徴的な分子を明らかにし、肝癌幹細胞の幹細胞性維持機構や発生メカニズムの解明に基づいた新規腫瘍制御技術を開発することを目的としている。これまでに、マウスにおける肝障害誘導法として0.1% DDC食の4週間投与が有用であり、DDC食投与マウスでは肝再生の指標とされる肝/体重比がコントロール食のマウスと比較して増加することが明かとなった。また、0.1% DDC食を5週間与えたマウス肝臓組織内には、EpCAM陽性肝幹細胞、CD44陽性肝幹細胞がそれぞれ0.1%ほど存在していることが、Flow cytometryによる解析によって明らかになった。さらに、ヒト肝癌組織の癌部におけるEpCAM発現、CD44発現を免疫組織化学染色法によって検討し、患者予後との相関について解析した結果、EpCAM陽性の肝癌患者は、陰性患者と比較して予後不良な傾向にあること、CD44陽性患者は、陰性患者と比較して有意に予後不良であることが明かとなった。この結果から、CD44発現は肝幹細胞マーカーのみでなく、臨床病理学的にも重要な癌幹細胞マーカーであることが示唆された。マウス肝障害モデルとして0.1%DDC食を使用することで、肝障害及び肝幹細胞の誘導が可能であることを確認できたが、肝臓組織からの肝幹細胞、肝癌幹細胞回収に必要なコラゲナーゼ還流法の手技取得に時間を要した為、研究の実施に遅れが生じている。また、0.1%DDCを用いた肝障害マウスモデルにおけるEpCAM陽性、CD44陽性肝幹細胞の割合は、0.1%と極めて少なく、網羅的な解析に必要な細胞の回収に時間がかかっている。本研究は、肝細胞癌患者予後に密接に関与していると考えられている癌幹細胞特異的な分子を同定することによって、肝細胞癌に対する新規治療法や診断法を開発することを目的としている。0.1%DDC食をマウスに対して4週投与することで、肝再生の指標とされる肝/体重比がコントロール群と比較して有意に増加することを明らかにし、0.1%DDC食の使用が肝障害誘導モデルとして有用であることが示唆された。このモデルを用いて肝障害を誘導した肝臓内のEpCAM陽性肝幹細胞、CD44陽性肝幹細胞の割合をFlow cytometryによって解析した結果、それぞれ0.1%ほどの非常に稀な細胞集団として存在していることが明かとなった。さらに、ヒト肝癌組織を用いたEpCAM及びCD44発現に対する免疫組織化学染色による臨床病理学的検討の結果、EpCAM発現は予後との有意な相関を認めないが、CD44陽性患者は、陰性患者と比較して有意に予後不良であること、独立した予後予測因子となりうることを明かにし、CD44発現は肝幹細胞マーカーのみでなく、臨床病理学的にも重要な癌幹細胞マーカーであることが示唆された。これらの検討結果に基づいて、CD44陽性肝癌幹細胞株、CD44陰性肝癌細胞株にける遺伝子、miRNA発現を、マイクロアレイを用いた統合解析によって比較したところ、CD44陽性肝癌幹細胞において発現が増加している遺伝子を604個、miRNAを71個同定した。さらに、これらの遺伝子、miRNAのなかで、miR-137、DKK1は共に肝癌患者予後と有意な相関を示し、独立した予後予測因子であることを明らかにした。これらの結果より、今回同定した遺伝子、miRNAの中に肝癌幹細胞に対する新規治療法、診断法の標的となる分子が含まれている可能性が示唆された。また、肝癌幹細胞と肝癌細胞間での網羅的な遺伝子発現/miRNA

発現解析を実施した。これらのデータを用いた統合解析の結果、cell adhesion molecule、apoptosis、ABC transportersなどに関わる遺伝子、miRNA群が変動しており、肝細胞癌患者における悪性度の進展にCD44陽性肝癌幹細胞が関与していることが示唆された。さらに、CD44陽性肝癌幹細胞で高発現していたDKK1、miR-137は肝細胞癌患者予後と関連を示し、独立した予後予測因子となることが明かとなった。研究実績の概要で示した通り、肝幹細胞分取のために、肝障害マウスモデルを作成してEpCAM陽性、CD44陽性肝幹細胞の割合を検討した結果、その割合は0.1%と極めて少なく、解析に必要な細胞の回収に時間がかかっている。また、癌幹細胞分取の為の肝癌モデルマウスは現在DEN投与により作成中である。今後の予定として、使用するマウスの数を増加することで、マウス肝障害モデル、肝発癌モデルから肝幹細胞、肝癌幹細胞を効率良く回収し、遺伝子発現、代謝経路を比較し、癌幹細胞に特徴的な遺伝子発現、代謝経路を明らかにする。また、マウスでの解析と並行して、ヒト初代培養肝細胞やヒト肝癌細胞株を用いた分子生物学的、網羅的な解析も実施する。これらの解析をもとに、癌幹細胞における治療標的となる分子の探索も行う予定である。腫瘍病理学今後の予定として、コラゲナーゼ還流法等における手技向上を行うことで、マウス肝障害モデル、肝発癌モデルから肝幹細胞、肝癌幹細胞を効率良く回収し、遺伝子発現、代謝経路を比較することで、癌幹細胞に特徴的な遺伝子発現、代謝経路を明らかにする。また、これらの解析をもとに、癌幹細胞における治療標的となる分子の探索も行う予定である。肝組織からの細胞回収の為のコラゲナーゼ還流法の技術習得に時間を要し、また当初の想定よりも回収できた細胞が少なかったために、網羅的な解析に必要な細胞数を十分に確保ができず、これらの解析が実施出来なかったために使用額が予定より下回った。本年度は当初の想定よりも回収できた細胞が少ないために、遺伝子発現、代謝経路の網羅的な解析に必要な細胞数を十分に確保ができず、これらの解析が実施出来なかったために使用額が予定より下回った。これまで実施出来なかった肝癌幹細胞と肝幹細胞の網羅的比較解析に予算を当てると共に、培地などの細胞培養用試薬、RNA干渉等の分子生物学的実験に使用する消耗品を物品費として使用する。今年度は、昨年度実施出来なかった遺伝子発現等の網羅的解析に予算を当てると共に、培地などの細胞培養用試薬及び器具、RNA干渉等の分子生物学的実験に使用する消耗品を物品費として使用する。
新合成構築材5員芳香族複素環が縮環したスルホレンの合成と反応およびその応用

I.フラン縮環スルホレンJA01KA2.末端にdienophileを有するacyl側鎖を1の2位に導入し、カルボニル基の保護後、分子内D-A反応を行い、重要な3環性合成中間体の合成に成功した。更に引続き分子間D-A反応により4環性化合物に導くルートを確立した。尚、そのD-A反応における配向性と立体を一部制御できる知見を得た。(下図)3.2位にアシル基を導入した2-アシルフランスルホレンのアルキル化反応を検討し、用いるbaseにより位置選択的にスルホレン部の4位又は6位がアルキル化されることを発見した。これによりフラン部での分子内D-A反応を組み合わせることにより官能基化された5環化合物の合成が可能となった。(下図)JA02KA4.1を用いる新しい抗ウィールス性ヌクレオシドの合成を試みているが成功していない。5.末端にオレフィンを有するN-アシルピロールスルホレンの分子内D-Aに成功した(左図)1.フラン縮環スルホレン(1__)のフラン部への置換基の導入とD-A反応2-acetylfuranはD-A付加体を与えない。(Heterocycles参照)2.1__の超高圧下での分子間D-A反応新たに1__のフラン部のみでD-A反応を起こした生成物を選択的に合成した。3.ピロール縮環スルホレン(2__)の一般合成法の確立とそのD-A反応酸化剤としてchemical MnO_2(CMD-U)を発見した。(23回複素環化学討論会(1992.10名古屋)p245) N-置換基および反応條件(温度,圧力)によりこれらが選択的に得られた。4.2位にアシル基を有する1__の分子内D-A反応と選択的アルキル化反応テルペンステロイドの短工程構築(1993年反応と合成の進歩シンポジウム発表予定)I.フラン縮環スルホレンJA01KA2.末端にdienophileを有するacyl側鎖を1の2位に導入し、カルボニル基の保護後、分子内D-A反応を行い、重要な3環性合成中間体の合成に成功した。5.末端にオレフィンを有するN-アシルピロールスルホレンの分子内D-Aに成功した(左図)
SNPの数理解析とSNP利用研究のための新規統計解析手法の開発

本研究の第一の目的は、ゲノムワイド関連解析において、研究コストを勘案した上で、最も効率よく疾患感受性遺伝子を同定しうる(検出力の高い)SNPマーカー数とサンプルサイズを求めるアルゴリズムを開発することであった。以下に成果内容を要約する。Saito and Kamatani(2002)が開発した2段階による段階的絞込み法を応用した。第1段階で必要なサンプルサイズと有意水準をN_1およびa_1とし、第2段階で必要なサンプルサイズと有意水準をN_2およびa_2とした。また、ゲノム中の候補SNP総数をnとし、実際に調べるSNP数をmと仮定した。第1段階の検出力をP_1、第2段階の検出力をP_2とし、遺伝子タイピングコスト、サンプル収集コスト、研究の総資金を、それぞれC_g、C_p、Bとおいた。このような状況下では、Q=mP_1P_2/nを最大化することが研究の最大効率となる。そこで、研究全体の有意水準を0.05に保ち、Qが最大となるように、を満たすパラメタ範囲で、マーカー数およびサンプルサイズを求めるアルゴリズム開発を行った。サンプルサイズは整数であるので、グリッドサーチを用いてサンプルサイズを決定した。本研究の第二の目的は、SNPによって規定される連鎖不平衡の程度を計算し、その結果に基づいて疾患感受性変異が存在するゲノム領域を最尤法によって予測する新規統計学的手法の開発を行うことであった。解析手法の開発は現在も継続中であるが、実在集団を対象とする連鎖不平衡解析およびVisual Basicによるシミュレーションプログラムの開発は完了した。
魚類レクチンの分子家系と生物機能の統合的解析

本研究では、魚類に存在するレクチンの分子家系(ファミリー)を統合的に解析し,これらレクチンの生体防御機構などにおける生物機能の解明に資することを目的にして以下の研究成果を得た。加速進化による機能獲得仮説を基に,マアナゴ・ガレクチン(Con1, Con2)の祖先型変異体を設計・作成し,耐熱性や糖鎖ライブラリーとの相互作用を詳細に検討して構造安定性や糖鎖結合特異性に関与する構造要素を特定した。水産甲殻類フジツボのマルチプル・レクチン(BRA1, BRA2, BRA3)の糖鎖結合特異性をフロンタルアフィニティークロマトグラフィーで精密解析するとともに,カルシウム塩結晶化調節作用を解析して生石灰化におけるレクチンの機能特性を明らかにした。複数の魚種の卵から新規の動物レクチンファミリーであるラムノース結合特異性レクチン(RBL)を単離し,糖鎖結合特異性や1次構造などの生化学的特性を明らかにした。とくに本研究では,RBL糖鎖認識結合ドメインに存在する4本のSS結合ループ構造を決定した。RBLの生物機能をニジマス由来の培養細胞である繊維芽細胞(RTG-2)及び腹腔内マクロファージ細胞(RTM5)を用いて調べた。RBLは細胞表面の糖脂質糖鎖Gb3に特異的に結合して炎症性サイトカイン遺伝子の発現を誘導することをRT-PCRにより明らかにした。また, RBLを予めマイクロビーズに固定化するとRTM-5のビーズに対する貪食能が高まり,同時に細胞内では活性酸素の産生能の増強がみられることを明らかにした。これらの結果は,RBLが異物除去を促進し,さらに炎症性サイトカインの発現を増加させることにより生体防御機構に関与していることを示す。さらに,RBLのオプソニン活性は細胞表面糖鎖Gb3を介して行われることを証明した。一方,RBLの活性酸素産生能はリガンド糖では阻害されず, RBL分子には糖鎖認識結合ドメイン以外にも細胞の活性化に関わる部位が存在することを明らかにした。本研究では,魚類に存在するレクチンの分子家系(ファミリー)を統合的に解析し,これらレクチンの生体防御機構などにおける生物機能の解明に資することを目的にしている。マアナゴ体表から単離した複数のガレクチン(Con1,Con2)の変異体を作成し,加速進化による温度耐性や糖鎖結合特異性の新規機能性の獲得を明らかにした。また,同じウナギ目ウツボの体表からはガレクチン・ファミリーだけでなくCタイプ・レクチンを単離して生化学的性状を調べた。さらに,サケ科魚類卵からはラムノース結合特異性レクチン(RBL)ファミリーを単離し,RBLファミリーが卵巣と肝臓で生合成されること,複数RBLがグラム陰性菌や陽性菌とリポ多糖・リポテイコ酸を介して相互作用することや,グルゲア症原因微胞子虫Glugea plecoglossiと濃度依存的に結合することを明らかにした。グルゲア胞子の膜表面糖脂質をHPTLCで分離し,PVDF膜に転写後,レクチンブロットにより,RBLは胞子膜表面糖タンパク質と糖脂質の両方に結合性を示すことを明らかにした。この結合に対してL-ラムノースは弱い阻害作用しか示さなかった。変性RBLには結合性がなく,胞子との強い結合性はRBL特有の膜構造に起因し,親和性の高い結合サイトが胞子には複数存在していると考えられる。次に,ニジマス生殖腺由来の繊維芽細胞(RTG-2)に対するRBLの作用を調べ,RTG-2細胞へのFITCラベルRBLの結合性を共焦点レーザー顕微鏡で観察した。

またRTG-2にRBLを添加後,20°Cで24時間インキュベートしてインターロイキン(IL)-8とIL-1βの発現量をRT-PCRにより半定量し,RBLがRTG-2細胞に結合し,0.5μM以上で濃度依存的にIL-8の発現を誘導すること,しかしIL-1βの発現には影響を持たないことを明らかにした。本研究では,魚類に存在するレクチンの分子家系(ファミリー)を統合的に解析し,これらレクチンの生体防御機構などにおける生物機能の解明に資することを目的にしている。加速進化による機能獲得仮説を基に,マアナヨ・ガレクチン(Con1,Con2)の変異体を設計・作成し,温度耐性や糖鎖結合特異性の改変を行った。水産甲殻類フジツボのマルチプル・レクチン(BRA1,BRA2,BRA3)の糖鎖認識能をフロンタルアフィニティークロマトグラフィー(FC)と100種類のオリゴ糖鎖ライブラリーを用いて精密解析し,糖鎖へのシアル酸付加が親和性に大きな影響を及ぼすことを明らかにした。サケ科魚類卵から単離したラムノース結合特異性レクチン(RBL)ファミリーの生物機能をニジマス由来の培養細胞を用いて調べた。RBLは繊維芽細胞(RTG-2)に結合し,0.5μM以上で濃度依存的にインターロイキン(IL)-8の発現を誘導すること,しかしIL-1βの発現には影響を持たないことを明らかにした。また,PBLは腹腔内マクロファージ細胞(PTM-5)に対してもサイトカイン誘導活性を示した。このとき,細胞内では活性酸素の産生能の増強がみられ,PBLが生体防御に関与していることが示唆された。次に,細胞表面のRBLレセプターを共焦点レーザー顕微鏡とFCによって解析した。RBLには細胞表面に存在する糖脂質糖鎖Gb3への特異的結合がみられ,RBLはラフト上のGb3を介してサイトカイン誘導や活性酸素産生に働いていることが分かった。サバ科サワラ卵から糖タンパク質であるRBLを単離し,糖鎖構造およびジスルフィド結合位置を含む全構造をRBLとして初めて決定した。本研究では、魚類に存在するレクチンの分子家系(ファミリー)を統合的に解析し、これらレクチンの生体防御機構などにおける生物機能の解明に資することを目的にし、今年度の研究実績はつぎの通りである。加速進化による機能獲得仮説を基に、マアナゴ・ガレクチン(Con1,Con2)の祖先型変異体を設計・作成し、耐熱性や糖鎖ライブラリーとの相互作用を詳細に検討して構造安定性や糖鎖結合特異性に関与する構造要素を推測した。水産甲殻類フジツボのマルチプル・レクチン(BRA1,BRA2,BRA3)のカルシウム塩結晶化調節作用を解析し、生石灰化におけるレクチンの機能を提案した。魚類卵から単離したラムノース結合特異性レクチン(RBL)ファミリーの生物機能をニジマス由来の培養細胞を用いて調べた。RBLは、繊維芽細胞(RTG-2)及び腹腔内マクロファージ細胞(RTM5)表面の糖脂質糖鎖Gb3に特異的に結合して炎症性サイトカインであるインターロイキン(IL)-8やTNF-αなどの遺伝子発現を誘導することをRT-PCRにより明らかにした。また,RBLを予めマイクロビーズに固定化するとRTM-5のビーズに対する貪食能が高まり、同時に細胞内では活性酸素の産生能の増強がみられることを明らかにした。
ドキシサイクリンはNF-kBを抑制し、細胞死を誘導する

ヌードマウス皮下膵臓癌移植モデルの作成:ヒト膵臓癌細胞株PANC-1 100万個をPBSに懸濁し、ヌードマウス60匹の左背部皮下に注入。6週間の観察の後、12匹に皮下に5mm大の腫瘍の形成を確認した。ドキシサイクリンペレットの皮下移植:12匹のヌードマウスのうち6匹に15mgのドキシサイクリンを含有した60日間徐放ペレットを、残りの6匹にはプラセボペレットを筋膜下に挿入した。抗癌剤治療:ドキシサイクリンペレット挿入群(6匹)、とプラセボペレット挿入群(6匹)に対し抗癌剤治療を行った。ペレット挿入後、Day7、14、21、35、42、49に腹腔内にPaclitaxel200μgを注入。Day60に全マウスを犠牲死させた。犠牲死させた後、腫瘍重量の測定を行ったところ腫瘍はドキシサイクリンペレット群で22±32mgでプラセボペレット群の67±12mgと比較して有意(P=0.0032)に少なかった。また抗癌剤治療開始後の腫瘍計測から算出した腫瘍容積の推移でをtwo-paired ANOVAにて比較したところ、ドキシサイクリンペレット挿入群ではプラセボペレット挿入群に比較して有意に腫瘍容積の増加が抑制された(P=0.021).摘出した腫瘍からRNAを抽出し、IL-8に対するNorthern Blotを施行したところ、Paclitaxel投与によりプラセボ群ではIL-8が発現上昇していたがドキシサイクリンペレット群では認められなかった。このことより抗癌剤耐性の原因因子であるIL-8が抑制されたことがドキシサイクリンのpaclitaxelの抗癌剤感受性を増強した因子であると考えられた。以上の研究により、ドキシサイクリンはdesensitizationによりNF-κBを抑制し,引き続くPaclitaxel投与によるNF-κBactivationを抑制したことにより細胞死を誘導したと結論づけた。1、DoxycyclineのNF-kBシグナルへの関与についての検討。2、Doxycyclineによるapoptosis誘導経路についての検討.3、DoxycyclineのNF-kB以外の因子への影響.以上の実験結果をふまえて、DoxのNFkB抑制とapoptosis誘導のメカニズムについてさらに検討を行った。その結果、Doxを投与後24hrまでは、細胞内ではNFkB活性はむしろ上昇しており、その後低下し、サイトカイン不応性となることが判明した。さらにDox投与後48時間後のTNF-R発現を検討したところ、TNF-RmRNA量がDox投与後24Hから48Hにかけて低下することがわかった。これらの検討より、Doxは本来、TNF-Rを介してNFkBを活性化するが、長時間刺激によってTNF-R不応性が生じ、これによりその後のサイトカインに対するNFkB活性化が生じなくなることがわかった。4、Doxycyclineの抗癌剤感受性増強効果の有無についての検討.これまでの結果をもとに実際にDoxが抗癌剤感受性を亢進させるかどうかについて検討した。膵臓癌細胞株にDoxで前処置を行い、アドリアマイシン、パクリタキセル等の抗癌剤を投与すると、より細胞死が誘導され、抗癌剤に対する感受性が亢進した。以上の結果から、ドキシサイクリンはTNF-R不応性を誘発し、引き続く抗癌剤刺激によるNFkB誘導を阻害することによって細胞死を増強することが判明した。
イノシトール三リン酸感受性イオンチャネルに及ぼす発癌プロモータの作用

1.Aplysiaの中枢神経節内に同定された神経細胞(R12)にイノシトール三リン酸(IP_3)を微量圧注入して発生するslow outward current (IP_3-induced current)のイオン機構を解明した。この電流はK^+イオンの平衡電位、約-80mVで逆転し、イオン置換実験より、IP_3による神経細胞内貯蔵Ca^<2+>イオンの放出によりactivatされたK^+電流であることが明らかとなった。4.ジアシルグリセロールのアナログ、1-oleoyl-2-acetyglycerol(OAG)を同様に神経細胞内発生するとIP_3-induced currentは上述と同様に抑制を受けた。上記実験結果より発癌プロモーターはプロテインキナーゼC(PKC)を活性化し、IP_3及びCa^<2+>でactivatされるK^+outward currentを抑制し、IP_3-Ca^<2+>release K^+channelのオープンに対しnegative feedbackをかけていることが明らかとなった。この効果はジアシルグリセロールのアナログ、OAGの抑制効果とも一致し、PKCの神経系における新しい生理機能を示すものであり、神経細胞内情報伝達機構に於ける重要な知見が得られた。
フランス語空間表現の文法化研究

最近の認知意味論や文法化研究で指摘されることの多い空間表現から時間表現の意味変化・意味拡張の様相について,フランス語の単純前置詞,複合前置詞,また日本語,英語の関連表現を中心にデータを収集し,通言語的共通性と各言語の特殊性について考察した.また,比較・程度表現との平行性について,特に意味の主観化との関係で考察した.最近の認知意味論や文法化研究で指摘されることの多い空間表現から時間表現の意味変化・意味拡張の様相について,フランス語の単純前置詞,複合前置詞,また日本語,英語の関連表現を中心にデータを収集し,通言語的共通性と各言語の特殊性について考察した.また,比較・程度表現との平行性について,特に意味の主観化との関係で考察した.フランス語の空間に関わる前置詞の中で,特にdevantとderriereを中心に,インターネット,CD-ROM型データベース,新聞,雑誌,文学作品などからデータ收集を行い,各使用例について整理,分類を行った.また,収集した使用例について暫定的な考察を行った.これらの前置詞について,基準点,話者の視点,対象の顕在的・潜在的運動との関係が重要であることが明らかになった.またこれらの前置詞は,空間用法だけではなく,時間用法,重要度の序列,列挙にも関わる用法が見られ,これらの場合も,基準点,話者の視点,また対照の運動が比喩として想定されており,これらは空間用法からの文法化によるものであることが強く推測された.この点は次年度以降においてより詳細な分析を試みる予定である.関連して,日本語の空間表現「あと」について,データ收集と分析を行った.この場合も,空間的意味が基準となり,ここから時間的意味が派生してきていることが明らかとなった.また話者の主観性が介在する用法と,これが希薄化しうる用法があり,基準点が発話時点になる場合と,任意の時点になる場合との違いに対応していることが明らかになった.これについては,論文を1篇執筆した.次年度以降は,こうした空間用法と時間用法などとの関係について,フランス語の複合前置詞や英語等の現象も射程に入れながら,考察を展開し,結果は学会での研究発表や論文として公表の予定である.フランス語空間表現と文法化理論、および尺度性との関わりについて、インターネット、CD-ROM型データベース、新聞、雑誌、文学作品などからデータ収集を行い、分析を施した。フランス語空間表現において、特に前置詞句においては基準点,話者の位置、対象の運動性などが重要な関与的要素となるという前年度での仮説がやはり裏付けられる結果となった。また時間への意味拡張においても、これらの空間的構図がメタファーとして保持されることが確認された。さらに言語意味変化の方向性との関連で、比較、尺度に関わる副詞、量、程度に関わる日本語の成句などの考察を進め、これらへのdesirability概念の適用可能性について考察を試みた。論文を2篇発表し、さらに2篇が公刊予定(印刷中)である。また関連する研究発表を1回、講演を1回行った。最近の認知意味論や文法化研究で指摘されることの多い空間表現から時間表現の意味変化・意味拡張の様相について,フランス語の単純前置詞,複合前置詞,また日本語,英語の関連表現を中心にデータを収集し,通言語的共通性と各言語の特殊性について考察した.また,比較・程度表現との平行性について,特に意味の主観化との関係で考察した.詳細については,「研究成果報告書」を準備中である.
特徴的なリン脂質組成形成による生体機能調節の解明

LPCAT1欠損マウスは過換気呼吸モデルで致死率が高いことがわかった。これは肺サーファクタント脂質の質が変化することにより、肺にダーメジがあり、炎症を誘発したためであった(Harayama et al. Cell Metab. 2014)。また、同論文でホスファチジルコリン生合成メカニズムの一端を報告した。18:2や22:6の脂肪酸はホスファチジン酸生合成の段階、16:0や18:1の脂肪酸はホスファチジルコリン生合成の段階で組み込まれやすいことがわかった。アラキドン酸をリン脂質に組み込む中心的酵素であるlysophosphatidylcholine acyltransferase 3 (LPCAT3)欠損マウスを作製すると新生児致死であった。小腸に脂質蓄積が観察され、血糖値も低下していた。in vitroの実験からリン脂質膜中のアラキドン酸減少により、トリアシルグリセロールの分泌が低下し、小腸での脂質が蓄積、さらに血中への輸送量が減ったと考えられた。リン脂質組成の局所的な違いが与える生命機能の一端の報告となった(Hashidate-Yoshida T et al Elife 06328. 2015)。LPCAT3欠損マウスの解析により、生体膜組成の違いが影響するトリアシルグリセロール分泌能を発表できたので、おおむね順調である。また、共同研究としてマクロファージ細胞株のM1/M2の脂質プロファイルングやLPCAT1が脂肪酸細胞毒性から保護する事も報告している。他のマウスに関しては引き続き継続している。本年度は細胞内脂肪酸可視化技術を発表した。Brラベルパルミチン酸とBrラベルステアリン酸をCHO細胞培養液に添加し、Spring 8のScanning X-ray fluorescencemicroscopyを用いてBrシグナルを検出した。細胞内の核膜、小胞体、ゴルジ体周辺でBrシグナルを検出できた。同時に脂質解析を行い、ほとんどがリン脂質由来である事、また多様なリン脂質となっている事も確認した。新しい細胞内脂質の可視化技術として、今後発展させたい。(Shimura*, Shindou*et al. FASEB J. 2016)血小板活性化因子(PAF)生合成酵素であるLPCAT2の欠損マウスを作製した。神経因性疼痛モデルであるpartial sciaticnerve ligation (PSL)解析をLPCAT2欠損マウスで行ったところ、疼痛を示さなかった。もう一方のPAF生合成酵素であるLPCAT1欠損マウスは疼痛軽減が無かった。PAFはPAF自身やATPなど細胞外の刺激で誘導される。マウス腹腔マクロファージをPAF受容体アンタゴニストABT-491やWEB2086で処理しておくと、その後のATP刺激によるPAF産生が減弱した。これは一度産生されたPAFが再びPAF産生を誘導するフィードバックループを示唆している。このループがPAF pain loopとなり疼痛を維持又は悪化させているのではないかと推測した。神経因性疼痛に対する鎮痛薬開発へ発展できる可能性がある。(Shindou*, Shiraishi*et al. FASEB J. 2017)LPCAT2の酵素学的な解析とLPCAT1欠損マウスの肺機能への影響を発表できたので、おおむね順調である。引き続き、各リゾリン脂質アシル転移酵素欠損マウスの表現型解析を継続する。また、細胞レベルでも分化によるリン脂質、生合成酵素、脂肪酸組成の違いをプロファイリングし、機能との関連を調べる。さらに、リン脂質組成の違いによる物性変化が与える生体膜機能についても解析する。脂質生化学引き続き酵素欠損マウスを用いたリン脂質代謝解析を行う。LPCAT1欠損マウス:肺疾患、LPCAT2欠損マウス:炎症モデル実験、LPCAT3欠損マウス:リン脂質中アラキドン酸機能解析また、細胞レベルでも分化によるリン脂質、生合成酵素、脂肪酸組成の違いをプロファイリングし、機能との関連を調べる。
In vitro transformationによる骨肉腫発生機序の解明

1.p53遺伝子欠損マウス由来の骨芽細胞様細胞系(MMC2)の樹立p53遺伝子欠損マウスの新生仔頭蓋冠より骨芽細胞系を樹立した。この細胞は旺盛な増殖能を示す不死化細胞であるが、接触阻止及び足場依存性の増殖を示し癌細胞としての形質は携えていない。一方アルカリフォスファターゼ活性を有し、I型コラーゲン遺伝子及びオステオカルシン遺伝子を恒常的に発現し、in vitroにおいて石灰化巣を形成するなど、骨芽細胞としての分化形質を有していた。2.MMC2に対するHPV16型E7抗原遺伝子の導入による肉腫細胞の樹立次にRB遺伝子を機能的に不活性化するためにHPV16E7遺伝子を導入後、ヌードマウスに接種し腫瘍を形成したものからin vitro細胞系を樹立した(E7TC)。E7TCではcyclin A及びthymidine kinase遺伝子の発現が細胞周期に同調せず亢進しておりRBの不活性化に伴いE2F活性が上昇していることが示唆された。一方分化形質は失われ、形成する腫瘍も未分化肉腫像を示した。3.MMC2の自然誘発変異による肉腫細胞の樹立MMC2をヌードマウスに接種し8ケ月以上経過して初めて腫瘍を形成したものがあり、これから細胞系を樹立した(TC23)。TC23は癌化形質と同時に分化形質を有しており、マウスで形成する腫瘍も典型的な骨肉腫であった。以上よりp53遺伝子欠損骨芽細胞より分化度の異なる2種類の形質転換細胞株を確立することができた。MMC2からE7TC及びTC23に至る癌化過程に伴って変化した遺伝子をDifferential displayを用いて検出した。その結果、E7TCで発現が亢進した新規遺伝子及び発現が消失した新規遺伝子をそれぞれ1種類単離することに成功し、これらの全長cDNAのクローニング及び機能解析を施行中である。1.p53欠損マウス由来骨芽細胞様細胞株の樹立p53欠損マウス(p53-l-)新生仔牛頭蓋骨より、常法に従い骨芽細胞を分離し、比較的早期の段階てクローニングを試み、ALPを指標として分化形質を携えた細胞を選択した。その結果得られた細胞系MMC2F、ALP、オステオカルシン、I型コラーゲン等を発現しており、更にin vitroにおいて石灰化を認めるなど、分化能をもつ骨芽細胞の形質を有していた。さらにBMP及びBMP受容体も発現しており、ヌードマウス皮下に接種すると、異所性骨化巣を形成すという、これまで樹立された骨芽細胞様細胞系では認められなかった特質を持つことが判明した。MMC2は不死化細胞株であるが、造腫瘍性など癌細胞としての形質は認められなかった。2.E7蛋白導入による形質転換この細胞においてRB蛋白を機能的に不活化するために、ヒトパピローマウィルスのE7抗原をレトロウィルスベクターを用いて導入した。導入された細胞では細胞密度の増加、血清要求性の低下等の変化が認められたが、寒天培地でコロニーを形成せず、またヌードマウスでの造増殖性も殆ど認められず、E7導入では、完全な癌形質は獲得出来ない可能性が示唆された。3.腫瘍形成クローンの解析一方、低頻度ではあるがヌードマウスでの腫瘍形成が認められた。同一ディッシュよりの細胞の再接種で、やはり低頻度で腫瘍形成が認められたことにより、in vivoでの突然変異により増腫瘍性が獲得されたのではなく、特定のクローンがin vivoで選択されたと考えられる。

in vivoの腫瘍より樹立した細胞は、100%腫瘍を形成する完全に癌化した細胞であった。現在この癌細胞と、MMC2及び腫瘍を形成しないE7導入細胞との間で、どのような遺伝子の発現が変化しているのかをdifferential display法により解析中である。1.p53遺伝子欠損マウス由来の骨芽細胞様細胞系(MMC2)の樹立p53遺伝子欠損マウスの新生仔頭蓋冠より骨芽細胞系を樹立した。この細胞は旺盛な増殖能を示す不死化細胞であるが、接触阻止及び足場依存性の増殖を示し癌細胞としての形質は携えていない。一方アルカリフォスファターゼ活性を有し、I型コラーゲン遺伝子及びオステオカルシン遺伝子を恒常的に発現し、in vitroにおいて石灰化巣を形成するなど、骨芽細胞としての分化形質を有していた。2.MMC2に対するHPV16型E7抗原遺伝子の導入による肉腫細胞の樹立次にRB遺伝子を機能的に不活化するためにHPV16E7遺伝子を導入後、ヌードマウスに接種し腫瘍を形成したものからin vitro細胞系を樹立した(E7TC)。E7TCではcyclin A及びthymidine kinase遺伝子の発現が細胞周期に同調せず亢進しておりRBの不活化に伴いE2F活性が上昇していることが示唆された。一方分化形質は失われ、形成する腫瘍も未分化肉腫像を示した。3.MMC2の自然誘発変異による肉腫細胞の樹立MMC2をヌードマウスに接種し8ヶ月以上経過して初めて腫瘍を形成したものがあり、これから細胞系を樹立した(TC23)。TC23は癌化形質と同時に分化形質を有しており、マウスで形成する腫瘍も典型的な骨肉腫であった。以上よりp53遺伝子欠損骨芽細胞より分化度の異なる2種類の形質転換細胞株を確立することができた。MMC2からE7TC及びTC23に至る癌化過程に伴って変化した遺伝子をDifferential displayを用いて検出した。その結果、E7TCで発現が亢進した新規遺伝子及び発現が消失した新規遺伝子をそれぞれ1種類単離することに成功し、これらの全長cDNAのクローニング及び機能解析を施行中である。
歯の再生に関わる間葉組織の潜在的歯の形成能の解明

マウス下顎第一臼歯歯胚にreaggregation法を応用して、歯性間葉組織が潜在的に歯の形成能を有しているかについて検索した。Reaggregation処置6週後には象牙質、エナメル質、セメント質と歯髄を有する"歯"と歯根膜と歯槽骨の"歯周組織"が形成された。この新たに形成された歯の歯冠はinvivoのものと比較して小さく、咬頭の高さが低かったが、咬頭の分布パターンはinvivoのものと同様だった。またこの歯の歯根は単根だった。In vivoでは第一臼歯の歯根は多根である。このことから、歯冠形態形成よりも歯根形態形成のほうが歯胚を取り巻く微細環境の影響を受け易いことが示唆された。歯胚移植法は歯の再生研究でよく用いられる方法であるが、ホスト臓器の相違が移植歯胚の成長にどのような差を生じるのかほとんどわかっていない。そこでホスト臓器として用いられることの多い皮下組織と腎臓被膜下に正常歯胚を移植し、歯胚の成長過程を観察した。その結果、両部位に於ける委嘱歯胚は骨によって覆われていたが、同じ移植期間では皮下移植したものより腎臓被膜下に移植した歯胚の周囲にある骨の量のほうが多かった。また移植歯胚の石灰化状況を含む成長は腎臓被膜下に移植したもののほうが進んでいた。マウスdiastemaは切歯と第一臼歯の間の歯が存在しない領域である。しかし発生過程ではこの領域にも一過性に蕾状期に相当する時期まで成長する歯胚様構造が存在する。この歯胚様構造の上皮部分と正常歯胚の間葉部分をrecombinationしたところ、歯が形成された。このことはdiastemaの歯胚様構造も条件が整えば、歯に成長できることを示している。歯の形態形成は上皮-間葉相互作用により行われる。しかし近年上皮から受けた情報をresetされた間葉組織(1)や、enamel knotを除去した歯胚(2)も歯の形成能力を持つことが報告され、これまでの上皮-間葉相互作用の概念やenamel knotの意義について再検討する必要が生じている。マウスには切歯と臼歯の間に歯の存在しないdiastema領域が存在する。しかしこの領域にも一過性に歯胚(痕跡的歯胚)が存在するとの報告がある。そこでこの痕跡的歯胚についてMsx1とMsx2の発現を観察しさらに、痕跡的歯胚の上皮と間葉を分離して、正常な臼歯歯胚の上皮と間葉とそれぞれrecombinationを行なった。その結果、Msx1とMsx2の発現は正常歯胚と同様であった。また、痕跡的歯胚の上皮と正常歯胚の間葉とrecombinationでは歯が形成されるが、痕跡的歯胚の間葉と正常歯胚の上皮とのrecombinationでは歯は形成されなかった。これらの結果から、痕跡的歯胚の成長の阻害には他の遺伝子が関わっていること、痕跡的歯胚も間葉組織の状態により正常な歯に成長出来る可能性が示唆された。また歯根形成における上皮-間葉相互作用のはたらきを明らかにするため、歯根形成時のin vivoでのシグナル遺伝子の発現を調べた。その結果、歯根形成の際には歯冠形成とは異なるシグナル遺伝子の発現パターンが観察され、歯根形成には特殊なシグナリング遺伝子のカスケードが存在することが示唆された。参考文献

マウス下顎切歯と臼歯の間の領域であるdiastemaに一過性に、かつ短期間に観察される歯蕾様構造の上皮組織と間葉組織を分離し、第一臼歯歯胚の上皮組織、間葉組織とそれぞれrecombinationし、腎臓被膜下に移植して得られる歯の構造について検索した。Recombinationした歯胚のうち、歯が形成されたのはdiastemaの上皮組織と第一臼歯の間葉組織によるrecombination歯胚のみで、diastemaの間葉組織と第一臼歯歯胚の上皮組織とのrecombination歯胚では歯は形成されなかった。得られた歯胚は正常歯胚と比較して小さく、形態も第一臼歯とは異なっていた。また象牙前質の厚さは部位により不規則だった。一般に歯の再生実験には歯胚培養法や、歯胚移植法が用いられているが歯胚培養法と比較して歯胚移植後の歯の組織像に関する所見は少ない。そこで無処理の(正常)マウス下顎第一臼歯歯胚をマウス腎臓被膜下に移植し、歯胚の成長過程を経時的に観察した。その結果移植歯胚はin vivoで観察される同じ時期の歯胚と同じ形態を示したが、大きさは小さかった。歯に特有の強度をあたえていると考えられているエナメル質の構造について走査型電子顕微鏡観察したところ、移植歯胚にもin vivoの歯胚に観察されるようなエナメル小柱の走行の相違による3層構造が観察されたが、それぞれの層の厚さは両者の間で異なっていた。歯の硬組織形成の際に、硬組織形成細胞と歯胚全体は調和の取れた動きを行うことが観察されていることから、in vivoと移植歯胚周囲の微小環境の相違が、エナメル質構造の相違をもたらすものと考えられた。歯の間葉組織は上皮組織から受けたシグナルにより歯の形成能を獲得したと考えられる。しかし上皮組織からのシグナルを失った状態の間葉組織も歯を形成する能力を持っていることが明らかにされた(Yamamoto et al., J Electron Microsc,52:559-566,2003)。しかし歯根および歯周組織が形成されるか否かについては不明である。そこでE13.5のマウス下顎第一臼歯にYamamotoら(2003)のrecombination法を応用して歯性間葉組織が歯根および歯周組織を形成する能力を有するかについて検索した。Reaggregation歯胚をマウス腎臓被膜下移植し、6週後に移植歯胚を摘出して実体顕微鏡および走査型電子顕微鏡観察を行ったところ、reaggregation歯胚は歯根と歯周組織を形成していた。歯根はセメント質を含んでおり、歯の周囲には歯根膜と歯槽骨が形成されていた。セメント質には歯根膜線維様の線維が埋入しており、シャーピー線維様の構造が認められた。またin vivoと同様に根尖部近くに厚い細胞セメント質が観察された。しかし形成された歯根は太い単根であり、in vivoと異なっていた。更にreaggregation歯を取り囲む骨には造血機能を営んでいると考えられる骨髄が存在した。現在「歯」の再生にかかわる研究が多く行われているが、「再生歯」が「歯」として機能するためには「歯」を取り巻く歯周組織が重要である。そのためには単に「歯」を再生させるのみならず、歯と歯周組織あるいは歯と顎骨を一括して再生させることが必要である。本実験で歯根および歯根膜や歯槽骨さらには顎骨様の構造が観察されたことから、reaggregation systemは顎骨を含めた歯の再生研究に有用であると思われた。なお本データは現在投稿中である。
頭蓋顔面の形成を制御する分子ネットワークの解明

頭蓋骨は正常な膜性骨化と頭蓋縫合の維持により形成され、その発生異常は頭蓋・顎顔面における形態異常や審美障害、咬合異常、脳神経系の発達遅延など様々な臨床的問題を生ずる。頭蓋骨の発生を制御する分子ネットワークは複雑であり詳細な分子機序の解明が望まれる中、申請者はIhh/Pth1rという2つの分子に着目して研究を実施した。頭蓋未分化間葉系細胞特異的なconditional knockoutマウス、Prx1-Cre;Ihhfl/flおよびPrx1-Cre;Pth1rfl/flを作成し生後以降の頭蓋骨の表現型を解析した結果、Prx1-Cre;Pth1rfl/flで顕著な表現型が見出された。頭蓋骨は正常な膜性骨化と頭蓋縫合の維持により形成され、その発生異常は頭蓋・顎顔面における形態異常や審美障害、咬合異常、脳神経系の発達遅延など様々な臨床的問題に通じると考えられる。頭蓋骨の発生を制御する分子ネットワークは複雑であるため詳細な分子機序は十分に明らかにされていない。KAKEN若手B研究費の支援の下、申請者はIhh/Pth1rという2つの分子に着目して研究を実施している。本研究では、in vivoにおけるmouse geneticsを駆使し、頭蓋未分化間葉系細胞特異的なconditional knockoutマウス、Prx1-Cre;Ihhfl/flおよびPrx1-Cre;Pth1rfl/flを作成しその頭蓋骨の表現型を解析する計画であった。本年の実績報告としては、まずマウス資源やin vivoにおける解析材料を獲得して、セットアップできたことが挙げられる。FloxマウスやCreマウスについて、研究協力者であるBeate Lanske博士(Harvard School of Dental Medicine、教授)およびJackson Laboratoryから輸入または購入し、申請者の動物実験スペースにて現在、飼育繁殖されている。繁殖計画は予定通り進行して現在はFinal Breeding Pairを維持している状態である。また、条件検討を通じて安定してGenotypingが可能になったことやPhenotypingに用いるシステムを研究室内にセットアップできたことが進捗である。今年度は変異体の解析を精力的に行い、これら2分子の膜性骨化と頭蓋縫合の維持における機能や重要性を解明していきたいと考えている。遺伝子組み換え実験計画書や動物実験計画書に関して、認可が下りるまで一定の時間を費やさざるを得なかったが、遺伝子改変マウスの搬入や繁殖、研究室内のセットアップは現在のところとくに問題なく進行している。頭蓋骨の発生を制御する分子ネットワークは複雑であるため詳細な分子機序は十分に解明されていない。KAKEN若手B研究費の支援の下、申請者はIhh/Pth1rという2つの分子に着目して研究を実施した。本研究では、in vivoにおけるmouse geneticsを駆使し、頭蓋未分化間葉系細胞特異的なconditional knockoutマウス、Prx1-Cre;Ihhfl/flおよびPrx1-Cre;Pth1rfl/flを作成しその頭蓋骨の表現型を解析することを計画した。平成28年度では主に解析マウスの準備を行った。本年度は表現型の解析に努めることができた。解析はおもにアリザリンレッド・アルシアンブルーを用いた骨格標本の作製、マイクロCT撮影による形態学的評価とホルマリン固定パラフィン切片作製による組織学的評価で実施した。両マウスではFosteringにより生後以降の観察も可能であったことが新規的な表現型の観察に繋がっている。Prx1Cre;Ihhfl/flの新生仔の頭蓋骨では頭蓋縫合の閉鎖遅延が観察された。1週齢(Alcian Blue/ Alizarin Red染色)もしくは3週齢(MicroCT)の観察では表現型は回復し、明確な形成異常は見出されなかった。一方、Prx1Cre;Pth1rfl/flの頭蓋骨を新生仔、1週齢、3週齢で評価を行った結果、頭蓋骨で著明な表現型が見出された。今後さらに詳細に検討していきたいと考えている。当初の研究計画どおり、本年は変異体の頭蓋骨の発生について詳細な解析を行っていきたいと考えている子マウスにおいてPrx1-Cre;Ihhfl/flおよびPrx1-Cre;Pth1rfl/flといった変異体が安定して採取できるようになっており、形態学的解析、組織学的解析、分子生物学的解析をすすめていく予定である。口腔外科
魏晋六朝文学における美と聖性

本研究題目のうち「美」は文学性を、「聖性」は宗教性を指す。本研究は、魏晋六朝において「美」と「聖性」とがもっとも純化された形で交錯する文学を創造したのが謝霊運であること、ついで、謝霊運の詩語「情」が、この時期の用法とは異なって著しく仏教的色彩を帯びていることを跡づけた。その「情」を「美」へと昇華させる鍵言葉が詩語「賞」であり、「賞」の先秦以来の含意を明らかにして、その「賞」と「情」との関わりを探った。本研究の題目のうち「美」はおもに文学性を、「聖性」は宗教性を指す。両者のうちとくに前者の「美」=文学性は曖昧な観念であるため、本研究では敢えてその内実を、(1)審美観、(2)修辞、(3)詩語、の三点に絞り、それらを集中的に検討することにした。報告者はかつて2005年に、本研究が対象とする時代における代表的な詩人である孫綽と謝霊運を取り上げ、両者の作品が(2)修辞の上で連続性を持つことを指摘したが、今回はその基礎の上に立って、(2)修辞上の連続性にもかかわらず、なお顕著に認められる両者における(1)審美観の断絶性について検討した。その結果、両者の有する宗教性の相違が、その審美観の相違に帰結している様相を明らかにし、一本の論文にまとめた。孫綽の審美観は、当時の道教文献に見られる審美観に共通し、謝霊運のそれは、百数十年ほど前の招隠詩に淵源しつつも、謝道蘊という謝家の女流詩人を経て、当時の中国仏教の僧侶たちに受け継がれていく審美観に共通している。しかしそれは、当時までの翻訳仏典に見られる審美観とは異質であり、中国仏教という特殊限定的な宗教性に関わっている。(3)詩語については、この時期の山水詩に特徴的にあらわれる「賞」を取り上げ、先行研究を参考にしつつも、「賞」の出現する最初期の文献から検討し直した。その結果、この時期の鑑賞の意味の「賞」は、初期文献にある「功」に対する褒美としての「賞」と、コア・イメージの構造としてはほぼ同じであることを明らかにし、すなわち「賞」が、聖なる山水と詩人との相互交流としての内実を持つことを示し、(上)(下)に分けた二本の論文にまとめた。本研究題目のうち、「美」は文学性を、「聖性」は宗教性を指す。両者のうちとくに前者の「美」(文学性)は曖昧な観念であるため、本研究では敢えてその内実を、(1)審美観(2)修辞(3)詩語の三点に絞り、それらを集中的に考究している。そのうちの(1)審美観(2)修辞については、前年度までに幾つかの論文にまとめて発表しているため、平成20年度は、(3)詩語を、重点的に検討した。まず、魏晋六朝において「美」と「聖性」とがもっとも純化されたかたちで交錯する文学を創造したのは謝霊運であることを確認し、ついで謝霊運の詩語「情」が、この時期の一般の用法とは異なって、著しく仏教的な色彩を帯びていることを跡づけた。その「情」を「美」へと昇華させる関鍵となる詩語が「賞」であり、「情」と「賞」の関わりの解明が、この時期の「美」と「聖性」の結びつきを知るうえでもっとも重要であることを知った。そこで、まず台灣の国際学会で、謝霊運文学における「情」と「賞」に関する発表を行ったが、奇しくも学会主催者の楊儒賓教授も、思想史の面から謝霊運の「情」に関わる類似の見解を発表され、多くの有益な教示を得た。拙発表は、平成21年末に主催者側発行の『重探自然』と題する論文集に収録される予定である。また「賞」の語感をより確定的にとらえるため、六朝学術学会に要請されて「『世説新語』の「賞」」を発表した。さらに「李善注「事無高翫、而情之所賞、即以爲美」考」を『集刊東洋学』に投稿し、この5月の掲載が確定している。この3月には161頁にわたる本研究の報告書を刊行した。
わが国とアジア地域における国際環境問題科学委員会(SCOPE)に対する国際対応と研究の推進

今年度の研究成果は以下の通りである。1.SCOPE第8期は(1)持続可能な開発(2)生物地球化学的サイクル(3)地球規模の変化と生態系(4)健康と生物毒物学の4つのクラスターの下に19プロジェクトを進めている。これにどのようにアジアおよび日本が寄与していくかを検討するため現状を精査し、協力の在り方を検討した。2.これらの現状調査と協力体制の検討結果をふまえ、アジア地域で重要と思われるプロジェクトを想定し、SCOPE本部と連絡をとりつつ協力体制を確立した。3.日本とアジア地域で特有の研究課題候補を策定した。さらにアジア諸国と密接な連絡を取りつつ、検討を重ね1995年5月末、日本で開催される第9回総会に初日はアジアSCOPE分科会を開き、第9期にアジア地域から提案する新しいプロジェクトを検討し決定することが決まった。4.1995年5月29日6月3日に日本で開かれる第9回総会はアジア地域では初めてである。第9期以降アジア地域が組織的にSCOPEの活動に積極的に活動し、協力していくためには環境問題への日本の取り組みの現状を加盟各国と国際学術団体に衆知して貰うことが必要と考え、SCOPE理事会との合意を得て日本の環境科学研究の現状というテーマで半日のシンポジウムを決め、具体的な内容と演者を決定した。さらにアジア地域の組織的な今後の活動を進めるため、第9期のメインシンポジウムのテーマに「アジアにおける稲作」を取りあげ、アジア各国と協議しつつ、4つのサブテーマと演者を決定した。5.以上の作業を通じ、日本のSCOPEへの国際対応とその組織化を具体的に検討した。以上の成果を得るための全体会議4回、プログラム委員会3回、事務局会議を11回開催し、合わせてSCOPE本部と月2回連絡し、研究を遂行した。
心磁図法による虚血性心疾患早期診断法の開発

潜在性虚血性心疾患を安静時心磁図検査により効率よく発見するため研究を進めた。その結果、心周期のST部分において、健常例では電流は検出されないか左下に向かう微弱な電流が検出されるのみであるのに対し、虚血性心疾患例においては正常例とは異なる方向の異常電流が検出され、しかもこの電流方向は理論的傷害電流と一致した。また、この異常電流は運動負荷により増強し、心筋虚血に起因するものと考えられ、さらに、この異常電流を心磁図の3方向からの記録により立体的に捉えることにも成功した。また、虚血性心疾患例の冠動脈をステント治療により治療するとこの異常電流は10日ほどの経過で消失することも確認された。以上より、心磁図安静時検査は効率的に潜在性虚血性心疾患を検知できると考えられた。本研究の目的は、新しい心臓診断法である心磁図を用い、潜在する虚血性心疾患の非侵襲的早期診断法を開発することにある。平成22年は、以下の3点について検討を行った。1)正常対照例(100例)の安静時心磁図所見を明らかにする。2)虚血性心疾患患者(100例)の安静時心磁図異常所見を明らかにする。3)上記2)の対象に、さらに運動負荷心磁図検査を行い、心筋虚血を誘発した際の心磁図異常を明らかにする。その結果、1)正常例の心磁図所見が明らかとなった。すなわち、心房および心室の脱分極所見、再分極所見である。特に心房の再分極所見は心電図では観察することが出来ないため、新た知見である。さらに、異常な脱分極所見、例えば、右脚ブロック、左脚ブロック、左脚前枝ブロック、左脚後枝ブロックについても明らかにすることが出来た。また、健常例においては、ST部分においては全く電流は検出されないか左下に向かう微弱な電流が検出されるのみであることが明らかとなった。2)虚血性心疾患例においては、ST部分に於いて、正常例とは明らかに異なる方向の異常電流が、安静時心磁図に於いて既に存在することが明らかとなった。さらにこの電流は、理論的に虚血部の心内膜方向に向かうとされる傷害電流と方向がほとんどの例で一致することが確認できた。3)上述の虚血性心疾患例に特徴的な心磁図所見は、運動負荷を加えるとその所見が増強することが示され、同所見が、心筋虚血を示すものであることが明らかとなった。平成24年までに、以下の3点について検討を行った。3)上述の虚血性心疾患例に特徴的な心磁図所見は、運動負荷を加えるとその所見が増強することが示され、所見が、心筋虚血を示すものであることが明らかとなった。4)上述の異常電流を解析するため、新たに64チャンネル上の全ての電流とその強度、方向の時間経過を一望できるmulti-current diagramを開発し、これにより、虚血性心疾患例の安静時電流異常を感度よく検出できることが明らかとなった。