hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
RacGAP因子FilGAPによる細胞運動,接着,極性形成に関する研究

FilGAPは低分子量GTP結合タンパク質Racを特異的に不活化する因子である。本研究でFilGAPの細胞内活性制御機構を解析した。(1)FilGAPのリン酸化を介した制御機構として、非リン酸化型FilGAPに特異的に結合する複数の結合タンパク質を同定した。(2)FilGAPはROCKによって6ヶ所リン酸化されるが、402番目のセリン残基のリン酸化がFilGAPの活性化に重要であることを明らかにした。(3)FilGAPのPHドメインはPIP3と結合するがFilGAPの活性はPI3キナーゼに依存しないことがわかった。また低分子量GTP結合タンパク質Arf6がPHドメインに結合しFilGAPを活性化することが明らかになった。Arf6はFilGAPを介してRacに依存した細胞運動を制御していると考えられる。以上から、FilGAPはRhoとArf6の下流でRacを制御していることが明らかになった。平成19年度には、FilGAPのリン酸化による活性化機構を明らかにすることを目標に研究を行い、以下の成果を得ることができた。1非リン酸化型状態で細胞接着班に局在するのに必要なFilGAP最小ドメインの同定FilGAPのリン酸化部位とcoiled-coilドメインを含むC端(a.a.372-748)が細胞接着班に局在する最小ドメインであることがわかった。そこで、リン酸化型、非リン酸化型FilGAPに特異的に結合する因子の検索はこのドメインを使って行った。2リン酸化型、非リン酸化型FilGAPに特異的に結合する因子の単離同定リン酸化型FilGAP(ST/D)と非リン酸化型FiIGAP(ST/A)をGST融合タンパク質として大腸菌で作成し、これをリガンドに用い、HEK細胞抽出液中でリガンドに結合する分子を検索した。また別に、リン酸化型FilGAPと非リン酸化型FilGAPをGST融合タンパク質としてHEK細胞内で発現させ,細胞を破砕後、GST融合タンパク質を回収し、それに結合しているタンパク質を分離した。両方法ともに複数のタンパク質を分離することができた。現在、結合したタンパク質を質量分析によって同定中である。3 FilGAPの活性制御に重要なリン酸化部位の同定FilGAPのROCKによる6箇所のリン酸化部位のうち、どれが活性制御に重要であるか検討した。非リン酸化型FilGAPを導入した細胞は、細胞外マトリックス上に接着後、葉状仮足を形成しながら速やかに進展する。この現象を利用して6箇所のリン酸化部位をそれぞれアラニンに置換したFilGAP変異体を作成し、HeLa細胞に導入し、細胞の細胞外マトリックス上への進展を検討した。その結果402番目のセリン残基をアラニンに置換した変異体が一番速やかに基質上に進展することが明らかになった。平成20年度には、FilGAPのリン酸化による活性化機構とFilGAPのPHドメインの機能を明らかにすることを目標に研究を行い、以下の成果を得ることができた。1非リン酸化型FilGAPに特異的に結合する因子の同定リン酸化型FilGAPと非リン酸化型FilGAPをGST融合タンパク質としてHEK細胞内で発現させ,GST融合タンパク質を回収し、それに結合しているタンパク質を分離した。質量分析により非リン酸化型FilGAPに特異的に結合する分子が同定できた。結合分子の遺伝子全長を単離し、大腸菌でタンパク質として発現させ精製したところ、この因子は非リン酸化型FilGAPに直接結合することが明らかになった。現在,この因子によるFilGAPの阻害効果を検討中である。2FilGAPの特異的抗リン酸化抗体の作製FilGAPのROCKによる6箇所のリン酸化部位のうち、402番目のセリン残基がFilGAPの活性化に重要である。そこで402番目のセリンがリン酸化されているFilGAPを特異的に認識する抗体を作成した。この抗体を用いてFilGAPの細胞内でのリン酸化の解析を進めている。3FilGAPのPHドメインの機能解析FilGAPの活性がPI3キナーゼの下流にあるかどうか検討した。FilGAPを細胞内で過剰発現させたときにできるBleb構造は、PI3キナーゼの特異的阻害剤処理で消失しなかった。また、39番目のアルギニンをシステインに置換し,PIP3に結合しない変異FilGAP(R39C)を作成し,細胞内で過剰発現させたところ、この変異体もBleb構造を形成した。以上から、FilGAPのPHドメインはPIP3以外の因子と結合していることが示唆された。

現在、FilGAPのPHドメインに特異的に結合するタンパク質を検索中である。平成21年度には、20年度に引き続きFilGAPのPHドメインの機能解析を行い、以下の成果を得ることができた。1 FilGAPのPHドメインに特異的に結合するタンパク質の同定FilGAPの細胞内過剰発現による細胞形態の変化(Bleb形成)がPIP3非依存性であることからFilGAPのPHドメインに結合するタンパク質の単離を試みた。FilGAPのPHドメインはsmallGTPase Arf6のGEFであるARNOのPHドメインと相同性が高い。ANROのPHドメインは活性型Arf6と直接結合するので、FilGAPのPHドメインもArf6と結合するか検討した。2 FilGAPとArf6の結合解析3 FilGAPとArf6の機能連関の解析ARf6はRacを介してアクチン系細胞骨格を再構築し細胞形態や細胞運動を制御している。そこでFilGAPが、Arf6を介したRacの活性制御に関与しているか検討した。第一に、活性型Arf6はFilGAPのGAP活性を亢進させ、細胞内のGTP型Racを減少させた。第二に、ヒト乳がん細胞MDA-MB-231に活性型Arf6を導入すると細胞は葉状仮足を形成し、伸長した形態になる。この細胞において内在性FilGAPの発現をsiRNAで抑制すると、伸長した細胞数が増加した。以上から,FilGAPはArf6の下流でRacを負に制御している因子であることが示唆された。
人口減少社会におけるコンパクトシティの健康への影響に関する疫学研究

人口減少は、日本のみならず国際的にも多くの国が直面する重要な課題である。地域においては、地域組織の崩壊、商店や医療施設を始めとした生活関連施設の維持困難によるアクセシビリティ低下等の問題が生じ、活動性や健康への負の影響が懸念される。そこで、その対応策としてコンパクトシティが注目されている。主として経済、地域社会・都市計画、社会保障、財政の分野において議論されることが多い。コンパクトシティの推進により、歩行時間の増加、適切な栄養状態、社会活動への参加、就労機会などのメリットがある可能性がある。しかしながら、人口減少の健康影響や、コンパクトシティの健康への効果などに関する研究は数える程である。この研究の目的は、(1)地域の人口減少の健康への影響及びその機序、(2)転居の健康への正及び負の影響、(3)都市機能充実の健康への影響及び人口減少との交互作用をそれぞれ明らかにすることである。交互作用については、人口減少が健康への負の影響をもたらし、市町村全体の人口が減少していても、中心市街地の都市機能が充実することによって健康への負の影響が抑制されるかをみる。研究デザインはコホート研究である。これまでのコホート研究は、生活習慣や遺伝子と健康の関連を見るものが多かった。近年は社会疫学の関心が高まり、所得や教育、ソーシャル・キャピタルなどの健康の社会的決定要因に関するコホート研究も増えている。人口減少や都市機能は健康の社会的決定要因としての重要な要素であると考えられる。研究の全体計画として、人口減少、転居、都市機能等を曝露及び交互作用として、健康状態やそれに影響を与える中間的な因子をアウトカムとした分析を行う。この研究は、人口減少や、コンパクトシティについて、健康の面から本格的に検討する日本で初めての大規模実証研究である点に学術独自性がある。研究計画に沿って、(1)文献等の情報収集、(2)既存データの整理、(3)追跡と予備的分析、(4)新規調査項目の検討等の4本柱を進めた。文献等の情報収集としては、人口減少、コンパクトシティなどに関する国内外の文献収集、またそれらに対する各市町村での取り組み状況の情報収集を行った。既存データの整理としては、本研究の対象地域について、国勢調査による人口データの整理を進めている。さらに、これらの地域における店舗、公民館・集会所、医療機関、鉄道駅等についての情報を把握し、データベース化を進めた。追跡と予備的な分析としては、我々は、日本老年学的評価研究(Japan Gerontological Evaluation Study, JAGES)の一貫として、2010年度に全国28市町村の要介護認定を受けていない在宅の65歳以上の高齢者16万9千人を対象に自記式郵送調査を行い、11万2千人の回答(回収率66.3%)を得た。その後、2013年、2016年に、自記式郵送調査を行った。2018年度は、申請者らが蓄積したこれらのデータについて、本研究の視点から整理を行い、予備的な分析を進めてきた。新規調査項目の検討等としては、2019年度に対象地域の高齢者の健康状態やそれに関連する因子の状況を把握するための大規模郵送調査を予定しており、それに向けて、調査すべき事項の検討、調査対象市町村との調整などを進めた。2019年度は、地域在住高齢者への大規模郵送調査が主要な実施内容である。この調査は、高齢者の健康状態等のアウトカムの把握と、今後の追跡に向けてのベースライン状態の把握という大きく2つの意義をもつ。アウトカムの把握に関しては、これまでの調査に回答してコホート研究に参加している高齢者の現在の健康状態等の調査を行う。健康状態に関する調査項目としては、治療中疾患の有無及び種類、主観的健康観、Geriatric Depression Scale (GDS)による抑うつ状態の程度、老研式活動能力指標による手段的日常生活動作(IADL)などである。また、健康状態と関連が強い要因として、痩せ(身長・体重)、過去1年間の転倒、外出頻度(閉じこもりか否か)、歩行時間、趣味の会・スポーツの会など種々の活動への参加状況などが含まれる。一方で、ベースラインの変数としては、最近の転居の有無(現在地の居住年数)、持ち家の状況、所得、家族構成、近所づきあいの程度、友人・知人と会う頻度、社会的支援の受領及び提供の状況、自動車の運転を始めとした利用している交通手段、公共交通機関・公共施設・商店の充実度等の地域の状況などが含まれる。なお、これらの変数はアウトカムや共変量等としても使用する。また、市町村の介護保険賦課情報の提供を受け要介護認定、死亡、転居等の追跡を継続的に行っていく。死亡については、死亡票の二次利用申請を行い、死因についても把握する。

この研究の目的は、(1)地域の人口減少の健康への影響及びその機序、(2)転居の健康への正及び負の影響、(3)都市機能充実の健康への影響及び人口減少との交互作用をそれぞれ明らかにすることである。交互作用については、人口減少が健康への負の影響をもたらし、市町村全体の人口が減少していても、中心市街地の都市機能が充実することによって健康への負の影響が抑制されるかをみる。研究デザインはコホート研究である。これまでのコホート研究は、生活習慣や遺伝子と健康の関連を見るものが多かった。近年は社会疫学の関心が高まり、所得や教育、ソーシャル・キャピタルなどの健康の社会的決定要因に関するコホート研究も増えている。人口減少や都市機能は健康の社会的決定要因としての重要な要素であると考えられる。研究の全体計画として、人口減少、転居、都市機能等を曝露及び交互作用として、健康状態やそれに影響を与える中間的な因子をアウトカムとした分析を行う。この研究は、人口減少や、コンパクトシティについて、健康の面から本格的に検討する日本で初めての大規模実証研究である点に学術独自性がある。研究計画に沿って、(1)文献等の情報収集、(2)既存データの整理、(3)追跡と予備的分析、(4)新規調査項目の検討等の4本柱を進めた。文献等の情報収集としては、人口減少、コンパクトシティなどに関する国内外の文献収集、またそれらに対する各市町村での取り組み状況の情報収集を行った。既存データの整理としては、本研究の対象地域について、国勢調査による人口データの整理を進めている。さらに、これらの地域における店舗、公民館・集会所、医療機関、鉄道駅等についての情報を把握し、データベース化を進めた。追跡と予備的な分析としては、我々は、日本老年学的評価研究(Japan Gerontological Evaluation Study, JAGES)の一貫として、2010年度に全国28市町村の要介護認定を受けていない在宅の65歳以上の高齢者16万9千人を対象に自記式郵送調査を行い、11万2千人の回答(回収率66.3%)を得た。その後、2013年、2016年に、自記式郵送調査を行った。2018年度は、申請者らが蓄積したこれらのデータについて、本研究の視点から整理を行い、予備的な分析を進めてきた。新規調査項目の検討等としては、2019年度に対象地域の高齢者の健康状態やそれに関連する因子の状況を把握するための大規模郵送調査を予定しており、それに向けて、調査すべき事項の検討、調査対象市町村との調整などを進めた。2019年度は、地域在住高齢者への大規模郵送調査が主要な実施内容である。この調査は、高齢者の健康状態等のアウトカムの把握と、今後の追跡に向けてのベースライン状態の把握という大きく2つの意義をもつ。アウトカムの把握に関しては、これまでの調査に回答してコホート研究に参加している高齢者の現在の健康状態等の調査を行う。健康状態に関する調査項目としては、治療中疾患の有無及び種類、主観的健康観、Geriatric Depression Scale (GDS)による抑うつ状態の程度、老研式活動能力指標による手段的日常生活動作(IADL)などである。
救急初療看護における合意形成をめざした対話的行為に関する研究

研究者自身が救急初療看護の場面に参加しながら、対象者(救急初療担当看護師)が救急初療を受ける患者との合意形成を図るためにどのような関わりを実施しているのか、参加観察し直接観察できない対象者の意図について面接で補った。また、救急看護認定看護師にこれまでの経験をふり返り、患者が自身の状況を理解するため看護師はどのような関わりを実践したか、旨くいかなかった時どのように対応したのか、何が問題でありどのような対応が必要であったと考えているのか語ってもらった。それぞれの面接で得られた情報を記述化しグラウンデッドセオリーを用いて分析した。救急初療を担う救急担当看護師、および救急看護認定看護師の特徴的な関わりを構造化した。患者と看護師の合意形成は医療専門職である看護師側からの主体的、かつ積極的な介入なくしては成立し得ない。本研究においては看護師に焦点を当てて、救急初療看護において看護師は限られた時間の中で患者を理解し受け入れるために、どのような積極的な介入行動を行っているのかを明らかにするために、救急担当看護師と救急看護認定看護師に対して面接調査を行った。平成18年度に得られた救急初療看護の患者の体験を基盤におき、つまり患者が戸惑いと困惑の中で生を求める実態を中心に据えながら、看護師は患者の視点に立ってその場の患者をどのように捉え、どのような意図をもって患者との関わりを行っていたのか看護師の言葉や表情、振る舞いに注意して分析する。認定看護師のインタビューを記述化して、同様に患者の体験を念頭におきながら認定看護師の患者と看護師間における理解と納得を得るための熟練の技を明らかにする。(1)と(2)をそれぞれに分析を行い、その後統合して看護師の合意形成をめざしたコミュニケーション的技能の特質について明らかにする。またこのそれぞれの分析過程において、臨床実績の蓄積で培われる事柄と体系的教育によって修得される事柄について検討することで教育内容やその方法についても考察を加える。今年度において大凡のデータ収集を完了し分析段階である。今後、分析を継続しつつ、その妥当性について対象者らと意見交換しながら、その妥当性に努めた。今後は、継続して分析の妥当性を確保する作業を行いつつ、最終的なまとめを行う。患者と看護師の合意形成は医療専門職である看護師側からの主体的、かつ積極的な介入なくしては成立しない。本研究において救急初療を担う看護師に焦点化して、救急初療看護におい用て看護師は限られた時間の中で患者を理解し受け入れるために、どのような積極的な介入を行っているのかを明らかにするために、救急看護認定看護師と救急看護担当看護師に対して面接調査を行った。その結果、救急看護認定看護師の介入は、4つのカテゴリーとコアカテゴリーが導き出された。救急看護認定看護師は、患者が自己の健康に関わる『問題に向き合う態勢を支える』ための前向きな思いが包含されていた。また、救急担当看護師の介入は、4つのカテゴリーとコアカテゴリーが導き出された。救急担当看護師は、患者に寄り添いながら『一体感を維持し安心を保障する』関わりであった。これらの結果より、今後看護継続教育においてこれらのスキルを修得すべく教育プログラムの構築、教育方法の検討が必要不可欠である事が示唆された。
パルススパッタ堆積法による単結晶薄膜で形成されたFBAR の作製

高周波数帯域で高い性能を示す周波数フィルタであるFABRの高品質化を実現する方法として、単結晶薄膜の利用が考えられる。本研究ではスループットの高い結晶成長手法であるパルススパッタ堆積法を用いてSi基板上へAlNの成長を行った。Si基板上へ直接AlNを成長するとクラックが導入される。そこで、超格子を用いることでクラックを抑制して単結晶AlN薄膜の成長を実現し、高品質FBARに必要な結晶成長手法を確立した。パルススパッタ堆積(PSD)法を用いてSi(111)基板上およびSi(110)基板上にAINの成長を行ったところ、いずれもAIN(0001)面のシャープな反射高速電子回折(RHEED)像が得られ、エピタキシャル成長が確認された。Si(110)基板とAIN(0001)薄膜の電子後方散乱回折(EBSD)測定結果から、面内配向関係はAIN[10-10]//Si[001]であり、AINバッファー層とSi[001]方向の格子不整が0.7%と小さくなる配向が実現されていることが分かった。また、AIN<10-12>EBSD極点図が明瞭な6回回転対称性を持つことから、30度回転ドメインの無い良質なAIN結晶が成長していることが確かめられた。Si(111)基板上に成長したAIN薄膜には引張り応力に起因してクラックの発生が確認された。そこでクラック抑制のためにAIN/GaN超格子構造の導入を検討した。AIN/GaN超格子を10ペア挿入したところ、クラックは抑制されることが分かった。一方、Si(110)上に関しては、格子不整が小さいことに起因して、超格子バッファーのあるなしに関わらずクラックの発生はなかった。この超格子バッファー上に成長したGaNの評価をX線回折により行ったところ、超格子に起因する明瞭なサテライトピークが確認され、作製した超格子構造は急峻な界面を有することが確かめられた。また、GaN0002およびGaN10-12回折のロッキングカーブ半値幅はそれぞれ0.39°、0.52°であり、良好な結晶性を有する薄膜が成長していることが分かった。以上の結果から、パルススパッタ堆積法によりSi基板上にクラックフリーAINの成長を実現し、単結晶で構成されたFBARを作製する基本的な手法を確立した。パルススパッタ堆積(PSD)法を用いて(100),(111),(110)の面方位を有する各Mo基板上へHfNバリア層の成長を行った。Mo(100)基板上へHfNの成長を行った結果、HfN(100)のエピタキシャル成長した。一方、Mo(111)基板上へHfNの成長を行った場合には、120°回転した3つの等価なドメインが、HfN<100>軸をMo(111)面から20°傾けて成長していることが分かった。Mo(111)の原子密度が低いことから表面エネルギーが高くなり不安定な面であることに起因していると考えられる。続いて、Mo(110)基板上へHfNを成長した場合には、HfN(111)がエピタキシャル成長した。ウルツ鉱構造であるAlNやGaNの(0001)面を成長するには、対称性の観点からHfN(111)/Mo(110)が適している。実際、700°CにおいてGaNの成長を行ったところ、GaN(0001)のエピタキシャル成長を実現した。このとき、GaN表面へのHfやMoの拡散は見られなかったことから、HfNが拡散バリア層として機能していることが分かった。また、単結晶金属基板上へのAlNなどのIII族窒化物エピタキシャル成長の実現には結晶成長初期過程の理解が重要となる。これまでにRh(111)上へAlGaN(0001)のエピタキシャル成長を実現しているが、結晶成長初期過程のメカニズムは不明であった。N、Al、Gaの3原子について、Rh(111)基板上の対称性の高い4つのサイト(on top, bridge, fcc hollow, hcp hollow)への吸着エネルギーを第一原理計算により求めた。その結果、窒素がhcp hollowに吸着する場合が最安定であり、AlGaN薄膜の第一層が窒素で構成されると考えられる。この窒素を第一層とした場合の面内配向関係は実験結果と一致することが分かった。
知覚体制化の実験現象学的研究

本研究においては、多様な日常の知覚現象を直視し、日常経験する現象から問題を見出だし、それを厳密に記述、分析し、その結果として包括的原理ないしは理論を導きだすという知覚心理学本来の姿を取り戻すことを主張する。我々は、知覚心理学独自の方法論の確立をめざし、具体的な実験を通して、実験現象学的アプローチ、ゲシュタルト心理学の必要性を検討した。この立場のいっそうの理論的明確化、方法論的意義を、国際シンポジウムや日本心理学会大会における円卓討議において問うた。理論の明確化の根拠としての実験的事実は、図一地分節、層化、対比、透明視、運動視、聴覚における音脈分業、事象の知覚(風の知覚を含む)など、広範に及んでいる。それぞれの実験的検討の中で、実験現象学的アプローチ、ゲシュタルト心理学のとってきた道を再検討し、現象学的・記述的アプローチの意義を問うている。今日の知覚心理学の問題領域は拡大し、その分析手段も多岐にわたって進行している。我々が経験する物や出来事の体験が、固有の脳の情報処理機能の結果であることは否定できない。それらを生理学的事実を基礎としたモデル、計算論的モデル、へルムホルツの復活を思わせる構成主義的モデル、によって説明しようと、多くの研究者の関心が向けられている。しかし、これらの知覚心理学の研究の進め方を展望すると、多くの心理学者は古典的科学主義、還元主義に陥り、また学際的研究の名のもとに知覚研究の内容は多様化する一方で、理論的には非常に狭い視角の中で議論が進められていることは否定できない。こうした中で、具体的な観察ないし実験的事実から知覚心理学の固有の問題を見いだしていく方法論は、現象学的アプローチないし記述的アプローチ以外に道はないと考える。実験現象学的立場から実験を行い、その結果に基づいて諸現象生起の基礎にある法則の発見と、その妥当性について吟味してきた。今年度は、主として非感性的完結化(amodal completion)の問題と層化の現象について観察・実験を行った。その結果、幾つかの重要な事実を見出した。これらの成果の一部はすでに内外の学会及び雑誌に発表した(日本基礎心理学会、European Conference on Visual Perceptionおよび雑誌;Percepturl and Motor Skills(1993)など)。結果を要約すれば、(1)単純な輪郭図形にあっても、その内部を線分によって分割すると、単に内部に線分を有するひとつの平面という体制化ではなく、線分を境界として図と地の関係が生まれる。この時、ルビンの杯にみられるのと同様の明るさの差異の強調化が観察される。この強調化は線分の形と幅に依存して変化する。これは“もの"が知覚される最も原初的な発生形態を示すものと考えられる。(2)同一輝度でありながら連続した二つの形態が重なって見える非感性的完結を示す面において、それが静止している場合と運動している場合では現象的様相がまったく異なる。静止と運動における体制化の過程を考察する際に充分考慮されるべきである。(3)Ehrenstein,W.,Spillmann,I.等の研究にみられる、neon color spreadingをロッドで構成した十字形で観察した結果、紙やCRT上の二次元的な配置の場合と同様、層化の仕方が異なると、非感性的完結化、すなわち、ロッドはスリットとして現れ、その背後に色彩円形の存在が明瞭に観察されることが明らかとなった。さらに多様な現象を観察、吟味し、現在の分類をより精緻化することによりさらに完成された法則性を導くことができるであろう。初年度の計画書に述べたごとく、それぞれの分担にしたがって実験現象学的立場から実験を行い、その結果に基づいて諸現象の生起の基礎にある諸法則の発見と、その妥当性について吟味してきた。

本研究は知覚の体制化の問題の中でも主として非感性的完結化(amodal completion)と層化(stratification)の現象に絞り、すでに幾つかの重要な事実を見いだした。幾つかの実験のうち特に重要と考えられる結果の一部を要約すれば、1)いわゆる単純な一様な明度の輪郭図形であってもその内部が他の線分により分割されると、多くの場合、2領域は線分を含む同一平面として知覚されるより、むしろ図-地の関係を生み、同時に図として現れる面はビンの杯にみられるように地と異なる明るさの差を生じる。更に、図として観察される部分は地と比較して、その肌理が密(堅い)で、前方に突出し(層化)、色合いは鮮やかで、一般に明るく見える。これは“もの"が知覚される最も原初的な発生形態を示すものと考えられる。2)同一輝度でありながら2領域が重なって見える非感性的完結化を示す面において、それが静止している場合と運動している時では現象的様相を全く異にする。この事実は、実際に色または輝度の異なる相互に重なり合う複数の対象において観察される静止と運動における体制化の過程と同一原理に従うものと考えられる。さらに多様な現象を観察、吟味することにより、現在の分離をより精緻化することが出来るであろう。3)層化の現象は明るさの変化のみならず、形、大きさの変化をも生じさせる。例えば、二つのパターンを重ね合わすことにより両パターンの位置関係に依存して、パターン内に新しい分凝が生じ、その部分の全体に対する機能(帰属性)に変化をもたらし、同時に部分の現れ方も変わる。今後、運動知覚等を含む多様な現象を観察、吟味し、現在の分類をより精緻化することにより、さらにより完成された知覚の法則性を導き、その本質に近づくことが出来るであろう。
高温耐性ラットであるＦＯＫラットの高温環境下での遺伝子発現・制御システムの解明

高温耐性ラットであるFOKラットについて、細胞レベルにおいても高温耐性かどうかFOKおよびコントロールラットであるWKAHラットの皮膚から単離した線維芽細胞を用いて高温環境下での細胞生存率に関して比較検討を行った。結果は、45°Cで15分、30分の高温環境下でFOKの線維芽細胞の方がコントロールの細胞に比べて生存率が高い傾向を認めた。また、高温環境下に置く10時間前に45°C8分間の熱処理(Pre-heating)を行うと、45°C45分、60分、75分においてもコントロール細胞に比べて生存率が高まる傾向を認めた。以上により、細胞レベルにおいても高温耐性の可能性が示唆された。FOKラット及びコントロールラットの皮膚組織から線維芽細胞の単離・培養を行い、高温環境下と非高温環境下で細胞培養を行い細胞増殖の程度を比較検討したが両者においてとくに差は認められなかった。その原因として実験手法によることも考えられるため再度実験手法も含めた検討を行った。このFOKラットは高温環境に耐性のみならず、低温環境にも比較的耐性であるとの報告があることからストレス環境下全般的に耐性の可能性があること、さらに細胞は高温環境下ではDNAの二重鎖切断を受けるとの報告もあることから、DNAの二重鎖切断を引き起こすようなストレス環境下においてもFOKラットは耐性の可能性が高いと考えた。そこで上記2種類のラットの線維芽細胞に対して二重鎖切断を引き起こすと報告されているドキソルビシン処理を行い、上記2種類のラット間で細胞増殖の程度を比較検討したところコントロールラットに比べてFOKラットの線維芽細胞の方がドキソルビシン処理による細胞増殖抑制効果があきらかに小さく両者間において差を認めた実験結果であった。これは、おそらくコントロールラットの線維芽細胞の方がドキソルビシンによるDNAの二重鎖切断によってアポトーシスに至った細胞の割合が多かったためと予想され、すなわち二重鎖切断を引き起こすようなストレス環境下においてもこのFOKラットは一般的なラットと比較して耐性の可能性があることが示唆された結果であると考える。平成24年度ではFOKラット及びコントロールラットの皮膚組織から線維芽細胞の単離・培養を行い、高温環境下と非高温環境下での細胞増殖能を比較検討したが両者において差を認めなかったと報告した。そこで平成25年度では、1.高温環境下と非高温環境下で差を認めなかった原因としてその実験手法に問題がある可能性を考慮して、いくつかの論文を参考にしながら、実際に実験を重ねて実験系を確立した。2.また、FOKラットはDNAの二重鎖切断を引き起こすようなストレス環境下においても耐性の可能性が高いと考え、平成25年度においてFOKラット及びコントロールラットの皮膚組織から単離した線維芽細胞に対してDNA二重鎖切断を引き起こすと報告されているドキソルビシン処理を行い両者間での細胞増殖能の比較実験を重ねたが差があるデータと差がないデータが混在する結果となった。3.上記1. 2.で用いる細胞について、組織から単離した線維芽細胞を(1)そのまま比較実験に使用する、(2)細胞数を増やし-80度に凍結保存した後に実験計画にあわせて細胞を融解し実験に用いる、以上の2つの選択肢があった。本来なら(1)が望ましいと考えられたが、実験を行うたびにラットの個体組織より細胞を単離しなければならず、(2)では実験計画にあわせて細胞を使えることができるが、凍結融解による細胞障害の可能性もあると考えられた。当初は研究のエフォートの関係上(2)の方法で実験を行ったが、凍結保存してから時間が経過するに従い細胞増殖能が低下する印象を認め、(1)の方法で実験を行う必要があると判断した。当初の予定では、平成23年度に1)FOKラットの皮膚組織から線維芽細胞を単離・培養を行う。2)そのFOKラット線維芽細胞を、高温環境下と非高温環境下で培養を行い、DNAマイクロアレイ法を用いた遺伝子レベルでの比較解析を行う。さらにコントロールラットにおいても同様に線維芽細胞を単離・培養し、高温環境下と非高温環境下での遺伝子レベルでの比較解析を行う。の2項目を行う予定であった。また申請時には、この研究を行うためのエフォートは40%と申請を行った。しかしながら、2011年3月に開設した臨床シミュレーションセンターの副センター長に任命されたため、この研究以外のエフォートの割合が90%以上となってしまい、またFOKラットの使用のめどもたたなかったため、平成23年度は研究を行うことができなかった。平成23年度年度末近くよりこの研究を行うための体制を整え、FOKラット使用も可能となったため、平成24年度は上記1)2)を行う予定である。高温耐性ラットであるFOKラットについて、細胞レベルにおいても高温耐性の性質を保持しているかどうか未だ報告されていない。そこで、まず、FOKラット及びコントロールラットであるWKAHラットの胸

腹壁の皮膚から線維芽細胞を単離・培養し、両者において高温環境下での細胞生存率を調べる実験系を確立した。その実験系とは、40°C、42.5°C、45°Cに設定した恒温槽に、線維芽細胞を培養している6cmシャーレを沈まない程度に15分、30分、45分、60分、75分間浸した。その後、細胞を集めて96ウェルプレートに5000個ずつ移し、24時間、48時間、72時間後に480nmの吸光度測定することで線維芽細胞の細胞生存率を測定した。実験結果は、40°C、42.5°Cの高温環境下では、むしろFOKラットよりWKAHラットの線維芽細胞の生存率の方が高い傾向を認めた。45°Cの高温環境下では15分、30分処理後の24時間、48時間後の細胞生存率においてFOKラットの線維芽細胞の方がWKAHラットより高い傾向を認めた。さらに、上記6cmシャーレを45°Cの高温環境下に置く約10時間前に45°Cの恒温槽に8分間浸したところ(Pre-heating)、細胞生存率は両者とも改善し、さらにWKAHラットに比べてFOKラットの線維芽細胞の方が45°C15分、30分、45分、60分、75分のすべてにおいて生存率が高い傾向を認めた。文献によればこの「Pre-heating」を行うことで熱によるDNA障害に対する修復能を高める効果があるとされている。以上の結果より、1)45°C、15分、30分の高温環境下ではFOKラットの線維芽細胞の方がコントロールラットの細胞に比べて生存率が高まる傾向があること、2)「Pre-heating」を行った実験結果から、1)の傾向について、熱にるDNA障害に対する修復能が関与している可能性が示唆された。今後、当初の研究目的にあったDNAマイクロアレイ法を用いた遺伝子レベルでの比較解析を行うことを検討中である。救急医学、実験動物学申請時にはこの研究を行うためのエフォートは40%と申請を行った。しかしながら、初年度においてこの研究以外のエフォートの割合が90%以上となってしまったため平成23年度は研究を行うことができなかった。平成23年度の年度末近くになってこの研究を行うための体制を整えることができたため平成24年度は実験を開始することが可能となった。ただし、FOKラットの繁殖系統維持は自施設で行っているため実験に使用する35週齢のラットを一定間隔をおいてしか入手できなかったため初年度に予定していたDNAマイクロアレイの実験までは到達できなかった。FOKラットの個体レベルにおいては高温耐性であることが既に確立されているが、それに対して細胞レベルでも高温耐性かどうかの実験は、1)細胞株化されている細胞と異なり組織から単離した細胞を用いるため、細胞増殖能が無限ではなく12回の継代で増殖能や細胞の形が微妙に変化してしまうため、実験を行うためにはその都度組織から細胞を単離培養して実験を行う必要があった2)細胞レベルにおいても高温耐性を有するかどうかの比較するための実験系の確立のため様々な条件で実験を行う必要があった。以上の2項目が大きな理由である。申請時には、この研究を行うためのエフォートは40%と申請を行った。
中等教育段階における「思考力・判断力」に影響を与えるメタ認知能力の実践的研究

本研究は、中等教育段階の生徒が、「意見文を書く」という過程の中で、どのようなメタ認知を行っているかを明らかにしようとするものである。また、「意見文を書く」ための調査活動と「意見文」(発信された文章)との関係を分析し、調査能力と発信能力の相関関係を明らかにしようとした。まず、調査能力と発信能力の相関関係を分析したが、当初想定していた相関関係はほとんど認められなかった。すなわち、調査能力の違いが意見文(発信能力)の違いとなって現れているものと想定していた。しかし、意見文が変化していく過程に深く関わっているのは、メタ認知能力であることがわかってきた。ただし、この結果は、3年次・4年次の生徒を対象として実践研究の結果であり、中等教育段階のすべての生徒に言えるわけではない。次に、生徒の「思考力・判断力」に影響を与えるメタ認知能力を明らかにするため、生徒の振り返りの言葉から自己を客観化した事例を分析した。その結果、自己を客観化した言葉を残した生徒ほど、意見を深めていくことがわかってきた。さらに、生徒の振り返りの言葉からわかってきたのは、他者から認められることで自分自身に自信が持てるようになり、そのことによって他者からの批判(異なる意見)も受けとめられるようになっているということである。自己を客観化するためにも他者との意見交流の機会を「意見文を書く」過程に組み込むことが重要となる。本研究では、自己を客観化する能力を「メタ認知能力」と限定して使っているが、メタ認知能力が「思考力・判断力」に影響を与えることが明らかになった。今後の課題は、メタ認知能力を育成するプログラムについて研究を進めることである。
低分子量Gタンパク質Krev-1の機能解析

Krev-1-は、Rasのトランスフォーメーション活性を抑制する活性を持つ因子として我々が同定した、Rasに約50%の相同性を示す低分子量Gタンパク質である。Krev-1の機能を探索する上での1つの方法としてイーストtwo-hybridアッセイを用いマウス脳cDNAライブラリーをスクリーニングしKrev-1結合因子の探索を試みた結果、Ras及びKrev-1に結合する既知の因子の他に未同定のralGDS関連因子(クローン328)も得られた。一方、Krev-1に対してのみ非常に強い結合活性を示すクローンが2つ(クローン24及び30)得られた。クローン24及び30についてさらに他の低分子量Gタンパク質(R-Ras、Ral、Rho)との結合活性を調べたが、結合活性は見られなかった。次にKrev-1/H-Rasキメラ遺伝子を用いて結合に関与する領域の同定を試みた結果、Krev-1のN末側の60アミノ酸残基が重要であることが示唆された。上述の3クローンに関し、別のcDNAライブラリーから全長のcDNAを単離し構造の解析を進めた。その結果、クローン328とクローン30はそれぞれ約700アミノ酸からなるタンパク質をまたクローン24は約1500アミノ酸からなるタンパク質をコードすることが示唆された。現在、NIH3T3細胞やRasでトランスフォームしたDT細胞へ、単独のトランスフェクションあるいはKrcv-1とのコトランスフェクションを試みてどのような生物活性を示すかの検討を進めており、それらの結果を通じてこれらのクローン自身の機能やKrev-1及びRasとの関係について考察したい。Krev-1は、Rasのトランスフォーメーション活性を抑制する活性を持つ因子として我々が同定した、Rasに約50%の相同性を示す低分子量Gタンパク質である。Krev-1の機能を探索する上での1つの方法としてイ-ストtwo-hybridアッセイを用いKrev-1結合因子の同定を試みることとした。baitタンパク質として、マウスあるいは線虫のKrev-1活性型(G12VあるいはG13E)を用い、マウス及び線虫cDNAライブラリーをスクリーニングした。さらに、得られたクローンに関して、エフェクター結合ドメイン変異型Krev-1(D38NあるいはD38A)との結合、Ras及び線虫のRasに相当するLet-60との結合を調べて見た。部分的なcDNA構造解析の結果、Krev-1とRasに結合するものとして、既知のralGDS、Rlf、RGLといったヌクレオチド解離因子、A-Raf、B-Rafといったセリンスレオニンキナーゼ、及びAF-6が得られたことがわかった。また、未同定のralGDS関連因子も得られた。一方、Krev-1に対してのみ非常に強い結合活性を示すクローンが2つ得られた。今後、上述のクローンに関し、全長のcDNAを単離し、単独のトランスフェクションあるいはRasまたはKrev-1とのコトランスフェクションにより、どのような生物活性が見られるか検討し、それら自身の機能やKrev-1及びRasとの関係について考察したい。
IoTデバイスのための組込みアプリケーションへの自動適応化技術

汎用的な従来のCPUおよびOSを見直し,個々の機器に適応して必要最小限の機能と適切なスケジューリング機構を自動的に提供する適応化技術を研究する.開発期間を延長することなく電力およびコストの削減,実行効率向上を達成することで,今後のIoT時代における機器設計・開発の在り方を示す.本研究の成果となる設計開発技術はASICチップ製造に適用可能であるが,本研究では,即時適応化可能性を提供するために,ハードウェア論理を変更可能なFPGA (Field Programmable Gate Array)デバイスを対象とする.CPUとOSの一体化された適応化技術が本研究の特色である.汎用的な従来のCPUおよびOSを見直し,個々の機器に適応して必要最小限の機能と適切なスケジューリング機構を自動的に提供する適応化技術を研究する.開発期間を延長することなく電力およびコストの削減,実行効率向上を達成することで,今後のIoT時代における機器設計・開発の在り方を示す.本研究の成果となる設計開発技術はASICチップ製造に適用可能であるが,本研究では,即時適応化可能性を提供するために,ハードウェア論理を変更可能なFPGA (Field Programmable Gate Array)デバイスを対象とする.CPUとOSの一体化された適応化技術が本研究の特色である.
糖尿病患者の心理社会経済的な側面と糖尿病アウトカムに関する前向きコホート研究

天理よろづ相談所病院、内分泌内科に通院する糖尿病患者を対象として、2009年から約4000名の大規模レジストリを作成している。本年度は、2018年度の患者調査を行い、検査データ、薬剤データを医療情報部から取得し、データセットを作成した。2009年からのデータと統合し、本年度は糖尿病関連の合併症との関連、特に糖尿病患者の心理的負担感と生命予後との関連について検討を行った。心理的負担感をProblem Areas in Diabetes(PAID)スコアで評価し、その後の全死因死亡リスクとの関連を調査。潜在的な交絡因子を調整したCox比例ハザードモデルを用いて、PAIDスコアと全死因死亡との独立した関連を調べた(平均追跡期間:6.1年)。研究の集団は、男性2,025例、女性1,280例、平均年齢64.9歳、平均BMI 24.6、平均HbA1c 58.7mmol/mol(7.5%)であった。多変量調整モデルにおいて、PAIDスコアの第1五分位に対する第2第5五分位の全死因死亡の多変量調整HR(95%CI)は、順に1.11(0.771.60、p=0.56)、0.87(0.561.35、p=0.524)、0.95(0.631.46、p=0.802)、1.60(1.092.36、p=0.016)であった。サブグループ解析において、男性ではPAIDスコアと全死因死亡との関連がみられた(HR:1.76、95%CI:1.262.46)が、女性では認められなかった(HR:1.09、95%CI:0.602.00)。糖尿病の心理的負担感と性別との間に、有意な関連(p=0.0336)が認められた。本研究の成果は、国際的な糖尿病専門誌であるDiabetologia誌に掲載された。本年度は、2016年度の患者調査を行い、検査データ、薬剤データを医療情報部から取得し、データセットを作成した。2009年からのデータと統合し、本年度は糖尿病関連の合併症との関連、特に血清尿酸値と糖尿病合併症との関連について検討を行った。2型糖尿病患者における血清尿酸値と尿中アルブミン尿の発症、進展に関する解析では、ベースラインの横断解析において、ベースラインの尿酸値を四分位に分類し、その後のアルブミン尿のアウトカムとの関連をコックス比例ハザードモデルを用いて解析した。多変量で調整した結果、血清尿酸値の第2四分位と比較すると、第1、第3-4四分位の尿中アルブミン尿の発症に関わるハザード比は各々0.93 (95% CI 0.73ー1.17)、1.01(95% CI 0.74ー1.37)、1.09 (95% CI 0.73ー1.63)であり、有意な関連を認めなかった。一方、第1、第3-4四分位の尿中アルブミン尿の進展に関わるハザード比多変量で調整した結果、血清尿酸値の第2四分位と比較すると、2.13(95% CI 1.07ー4.22)、1.01 (95% CI 0.74ー1.37)、3.63 (95% CI 2.05ー6.45)と尿酸値が低い群と高い群で有意な関連を認めた。本研究の成果は、国際的な糖尿病専門誌であるActa Diabetologiaに掲載された。本年度の目的は7年目調査の調査票作成とデータ収集であるが、データの収集は問題なく行われ、電子データである検査データ、及びオーダリングデータとの結合も終了した。また、収集したデータを解析した結果を論文にまとめ、国内外で発表を行っている。本年度は、2017年度の患者調査を行い、検査データ、薬剤データを医療情報部から取得し、データセットを作成した。2009年からのデータと統合し、本年度は糖尿病関連の合併症との関連、特にプロトンポンプ阻害薬と糖尿病合併症との関連について検討を行った。2011年にコホート研究に登録されている1型および2型糖尿病患者3,875人を対象とした。まず、ベースライン時に正常アルブミン尿を呈した患者群(1,711人)を対象にPPIの使用とアルブミン尿の発症〔微量アルブミン尿または顕性アルブミン尿への進展と定義〕との関連について解析したところ、中央値で4.0年の追跡期間中に599人が微量アルブミン尿を発症した。プロペンシティスコアで調整したモデルを用いた解析で、PPIの使用とアルブミン尿の発症との間には有意な関連は認められなかった(ハザード比0.88、95%信頼区間0.771.01、P=0.058)。

次に、ベースライン時に微量アルブミン尿を呈した患者群(1,279人)を対象にPPIの使用とアルブミン尿の進展との関連を解析したところ、中央値で3.7年の追跡期間中に290人でアルブミン尿の進展がみられたほか、中央値で3.8年間の追跡期間中に257人でeGFR値の40%以上の低下が認められた。傾向スコアで調整したモデルを用いた解析の結果、PPIの使用はアルブミン尿の進展(同1.24、0.871.79、P=0.236)、eGFR値の低下(同1.05、0.811.34、P=0.973)のいずれとも関連しなかった。本研究の成果は、国際的な糖尿病専門誌であるDiabetes Research and Clinical Practiceに掲載された。2017年度に予定していた患者の登録は終了し、同年度に採取したデータは全て入力、CRCによるダブルチェックを受けており、また、動粘度の検査データ、薬剤データを医療情報部から取得済みである。天理よろづ相談所病院、内分泌内科に通院する糖尿病患者を対象として、2009年から約4000名の大規模レジストリを作成している。本年度は、2018年度の患者調査を行い、検査データ、薬剤データを医療情報部から取得し、データセットを作成した。2009年からのデータと統合し、本年度は糖尿病関連の合併症との関連、特に糖尿病患者の心理的負担感と生命予後との関連について検討を行った。心理的負担感をProblem Areas in Diabetes(PAID)スコアで評価し、その後の全死因死亡リスクとの関連を調査。潜在的な交絡因子を調整したCox比例ハザードモデルを用いて、PAIDスコアと全死因死亡との独立した関連を調べた(平均追跡期間:6.1年)。研究の集団は、男性2,025例、女性1,280例、平均年齢64.9歳、平均BMI 24.6、平均HbA1c 58.7mmol/mol(7.5%)であった。多変量調整モデルにおいて、PAIDスコアの第1五分位に対する第2第5五分位の全死因死亡の多変量調整HR(95%CI)は、順に1.11(0.771.60、p=0.56)、0.87(0.561.35、p=0.524)、0.95(0.631.46、p=0.802)、1.60(1.092.36、p=0.016)であった。サブグループ解析において、男性ではPAIDスコアと全死因死亡との関連がみられた(HR:1.76、95%CI:1.262.46)が、女性では認められなかった(HR:1.09、95%CI:0.602.00)。糖尿病の心理的負担感と性別との間に、有意な関連(p=0.0336)が認められた。本研究の成果は、国際的な糖尿病専門誌であるDiabetologia誌に掲載された。平成29年度以降も継続して年度ごとに調査票の作成、データの収集を行う。また、継続してデータセットの作成、統計解析を行い、結果を論文の形にまとめ、国内外の学会(日本糖尿病学会、糖尿病合併症学会、日本内科学会等)、査読のある関連雑誌(Diabetes Care、Diabetologia、Diabetic Medicine等)に発表する予定である。平成30年度以降も継続して年度ごとに調査票の作成、データの収集を行う。研究補助者の雇用が想定していたより短期間となり、人件費・謝金の支出が想定を下回ったため。平成29年度に繰越し、29年度の研究計画の遂行に使用する計画である。
糖タンパク質エリスロポエチンの精密化学合成とその糖鎖機能解明の研究

エリスロポエチン(EPO)は赤血球増殖誘導活性を持つ、糖鎖修飾を高密度に受けた糖タンパク質である。EPOの生理活性には24、38、83位に結合した複合型シアリル糖鎖が必要であり、その糖鎖末端のシアル酸が活性増加に関与していることが知られている。しかし、主流となる糖タンパク質調製法である生物学的手法によって得られるEPOは、タンパク質構造は同じでも糖鎖構造や数が不均一な混合物となり、糖鎖構造と活性の相関関係を明らかにすることは困難であった。均一な糖鎖構造を有するEPOの有機合成は、1)シアリル糖鎖が酸性条件で不安定であること、2)高糖鎖修飾された糖タンパク質の全合成の手法が確立されていないこと、が課題となり研究は困難を極めていた。本研究は、単一構造の糖鎖をもつEPOを化学合成すること、糖鎖がEPOの血球増殖活性に与える影響を調べることを目的とし、おこなった。糖鎖は鶏卵から単離したヒト型と同じシアリル糖鎖を精製し用いた。そして、ペプチド固相合成によりシアル酸をもつシアリル糖ペプチドチオエステルに変換後、それらを連結することでEPOの全長ポリペプチドを合成した。次に、EPOのフォールディングの実施ならびにその過程を解析し、EPOがもつ糖鎖の数、位置によってフォールディングの収率が影響をうけることを考察した。そして、EPOの天然型の糖鎖付加部位を変えて誘導体も合成した。5種のEPO誘導体の生理活性評価などから、38位、83位に結合した糖鎖の重要性が示唆された。これら糖鎖は、タンパク質部位の疎水性面を覆うことでEPOの水溶性を高めたり、タンパク質間の非特異的相互作用・アグリゲーションを抑えるとともに、疎水性面を認識するプロテアーゼによる分解から保護することで、EPOの安定性を向上させ、生理活性を発現できるものと推論した。これらの結果は、糖質化学、タンパク質化学、糖鎖生物学にまたがる重要な研究成果であると考えている。26年度が最終年度であるため、記入しない。【研究目的】糖鎖構造の均一なエリスロポエチンを有機化学的手法により合成し、これを用いて活性測定をおこない、エリスロポエチンに存在する3本の糖鎖が持つ生物学的意義を解明する。その研究から、サイトカイン系糖タンパク質の糖鎖をはじめとする、タンパク質に対する糖鎖の機能を今までにない具体性をもって明確化する。【本年度の成果】本年度は、天然と同様の24番、38番、83番目に2分岐シアリル糖鎖をもつエリスロポエチンの合成を検討した。新たに24番目、38番目に糖鎖を持つシアリル糖ペプチドセグメントを本申請者が確立したBocペプチド固相合成を用いた手法により合成し、純度よく得ることに成功した。そして、6つに分けて調製したペプチド・糖ペブチドフラグメントをC末端側からNative Chemical Ligation法によりペプチド連結を繰り返し、3本のシアリル糖鎖を持つエリスロポエチン全長の糖ポリペプチド鎖の合成に成功した。しかし、最後の脱保護反応であるシステイン側鎖の保護基であるアセトアミドメチル基(Acm基)を脱保護する段階で、タンパク質問でのアグリゲーションが観測され、エリスロポエチンのタンパク質部分の3次元構築をおこなうことは出来なかった。現在は、より短い糖ペプチド鎖の段階でAcm基を脱保護するエリスロポエチンの新たな合成ルートを考案し、合成検討中である。また、糖鎖を安定化するために使用していた保護基であるシアル酸上のフェナシル基を短時間且つ収率よく脱保護する手法を検討した。新たに見出した条件を用いれば、長鎖のシアリル糖ポリペプチド鎖上のフェナシル基を緩衝溶液下で副反応を抑えながら脱保護ができ、収量向上に大きく繋がると期待できる。

これら糖鎖は、タンパク質部位の疎水性面を覆うことでEPOの水溶性を高めたり、タンパク質間の非特異的相互作用・アグリゲーションを抑えるとともに、疎水性面を認識するプロテアーゼによる分解から保護することで、EPOの安定性を向上させ、生理活性を発現できるものと推論した。これらの結果は、糖質化学、タンパク質化学、糖鎖生物学にまたがる重要な研究成果であると考えている。26年度が最終年度であるため、記入しない。以前確立した83番目にのみ糖鎖を有するエリスロポエチンの合成ルートを用いて、24、38、83番目の3カ所に糖鎖を持つエリスロポエチンの合成が容易におこなえると考えていたが、予想に反した副反応が観測された。恐らく、親水性の糖鎖付加が増加したことにより、糖ポリペプチド鎖の性質が大きく変化したことが原因であると考えられる。新たに考案したルートで合成検討中である。引き続き3本の2分岐シアリル糖鎖を有するエリスロポエチンの合成を検討する。新たな合成ルートは、前回のルートで起こった副反応を避けるべく比較的早い段階で保護基を脱保護出来るように考慮した上に、N末端側からのペプチド連結反応を可能にするペプチドヒドラジド体を利用する。これにより、約50残基のシアリル糖ペプチドを収率・純度よく調製することが可能になると期待できる。また、当研究室で部分的に15N標識した約40残基の糖ペプチドを用いたNMR測定を実施しており、有効な結果が得られている。同様の手法を利用し、部分標識したエリスロポエチンを調製し、糖鎖が無い場合、どの部位が疎水性相互作用でアグリゲーションしやすいか調べる検討も開始する。