hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
悪性腫瘍由来CKと組織ミトコンドリアCKの研究

悪性腫瘍患者血清中には、腫瘍に関連して3つのクレアチンキナ-ゼ(CK)が出現する。1つは通常では血清中に認められないCK-BBであり、もう1つは免疫グロブリン結合CK、そして残りの1つが細胞内ミトコンドリアに存在するミトコンドリアCK(m-CK)に近似した性状を有するCKで、これを腫瘍産生CKと考えている。牛脳を酵素材料として種々の操作によりミトコンドリア分画を分離・精製し、この分画のCKの物理・化学的性状を検索した。この結果、この分画のCKは分子量が数十万と細胞質上清分画のCKとして比較して大きく、活性化エネルギ-も75kJ/mol以上であり、macro CK type 2に近似した性状であった。しかし、熱安定性には乏しく、これはmacro CK type 2と相違した性状であった。また、臨床的に悪性腫瘍の存在が確認されている悪性腫瘍276例を対象として、血清CKの物理・化学的性状を検索した。この結果、276例中46例(16.7%)にm-CKの存在が確認され、24例(3.7%)にはCK-BBが存在していた。m-CKが高率に認められたのは、肝癌の33.3%であり、大腸・直腸癌、胃癌、乳癌などの腺癌では14.622.6%の高率に認められたが、扁平上皮癌での陽性率は低値であった。また、大腸・直腸癌での進行度とm-CKの関係は早期のstage I II IIIでの出現例はなくstage IVで21.9%に認められただけであり、悪性腫瘍の早期診断指標としてのm-CKの有用性は低いことが明らかとなった。また、血清中の酵素のなかでm-CKとの関連が認められたのはGLDHであり、腫瘍の浸潤により肝細胞が高度に障害されるとm-CKが血中に出現する機序が推測された。目的:細胞内ミトコンドリア分画に存在するミトコンドリアCK(m-CK)を精製・純化し,その物理化学的性状を検索する.そして,ヒト悪性腫瘍中にしばしば認められるこれと近似したCKとの免疫学的異同を解明する.今年度はヒトに適応する前の予備実験として牛脳を用いて酵素の純化を行なった.すなわち,脳にはCKの4つのアイソザイム, CK-MM, CK-MB, CK-BBおよびm-CKのうち前2者はほとんど存在しておらず, CK-BBとm-CKが豊富に存在している.しかもCK-BBとm-CKは等電点が異なるためaifinityshromagraphyによる分離が容易であり,かつ電気的易動度が著しく異なるために電気泳動での確認が容易である.結果,牛脳100gを従来法にしたがってホモジナイスし,超遠心分離によりミトコンドリア分画を得る.続いて,この分画を用いSephacryl S-200カラムさらにDEAEjeohadex C-6Bカラムによりm-CK分画を精製・純化した.以上の操作により牛脳100gからの収率は39%であり,淡白1mgあたりのCK活性は5414〓/mgであった.この精製CK分画のミカエリス恒数(Km)は0.55mM活性化エネルギーは87.2KJ/mble, 45°C, 20分間の加温処理後の残存CK活性は79.0%であった.

さらに,ポリアクリルアミドゲル電気泳動から算出した分子量は約3000ダルトンであった.次年度は,この精製・純化したm-CKを家兎に免疫し,ヒト血中に出現するm-CKとの異同を検索する予定である.目的:細胞内ミトコンドリア分画に存在するミトコンドリアCK(mーCK)を精製・純化し、家兎に免疫して抗体を作製する。そして、悪性腫瘍患者血中に出現するミトコンドリア由来CKとの差異を免疫化学的に鑑別する。結果:前年度、牛脳よりミトコンドリアCKを分離・精製し、その物理化学的性状を検討した。今年度も同様のaffinity chromatography、ゲル濾過などにより牛脳よりmーCKを分離・精製し、これを家兎に免疫して抗体を得ようと試みた。しかし、mーCKの保存安定性は極めて不良であり、精製後1日で活性は約50%に減少してしまい、免疫には多量のmーCKの精製が必要であった。このため、牛脳1,000gを一度にホモジネートし、ゲル濾過、affinity chromatographyなどにより多量に精製したmーCKを家兎に免疫したところ、十分な抗mーCK抗体は得られなかった。現在、新たな牛脳を用いてmーCKを精製し、家兎に免疫を行なっている。悪性腫瘍患者血清中には、腫瘍に関連して3つのクレアチンキナ-ゼ(CK)が出現する。1つは通常では血清中に認められないCK-BBであり、もう1つは免疫グロブリン結合CK、そして残りの1つが細胞内ミトコンドリアに存在するミトコンドリアCK(m-CK)に近似した性状を有するCKで、これを腫瘍産生CKと考えている。牛脳を酵素材料として種々の操作によりミトコンドリア分画を分離・精製し、この分画のCKのCKの物理・化学的性状を検索した。この結果、この分画のCKは分子量が数十万と細胞質上清分画のCKとして比較して大きく、活性化エネルギ-も75kJ/mol以上であり、macro CK type2に近似した性状であった。しかし、熱安定性には乏しく、これはmacro CK type2と相違した性状であった。また、臨床的に悪性腫瘍の存在が確認されている悪性腫瘍276例を対象として、血清CKの物理・化学的性状を検索した。この結果、276例中46例(16.7%)にm-CKの存在が確認され、24例(8.7%)にはCK-BBが存在していた。m-CKが高率に認められたのは、肝癌の33.3%であり、大腸・直腸癌、胃癌、乳癌などの腺癌では14.622.6%の高率に認められたが、扁平上皮癌での陽性率は低値であった。また、大腸・直腸癌での進行度とm-CKの関係は早期のstage I II IIIでの出現例はなく、stage IVで21.9%に認められただけであり、悪性腫瘍の早期診断指標としてのm-CKの有用性は低いことが明らかとなった。また、血清中の酵素のなかでm-CKとの関連が認められたのはGLDHであり、腫瘍の浸潤により肝細胞が高度に障害されるとm-CKが血中に出現する機序が推測された。
成虫休眠の脳-アラタ体による制御

ルリキンバエ成虫において、休眠中の脳によるアラタ体活性の抑制が、脳内のどの細胞によって担われているかを明らかにするため、パラアルデヒド-チオニン法で染色される脳間部神経分泌細胞を除去したところ、予想に反して休眠・非休眠のいずれを誘導する条件下でもすべて卵巣発達が抑制され、アラタ体が小さくなった。ルリキンバエの脳からアラタ体へ軸索を伸ばしている神経細胞を特定するために、側心体と脳を結ぶ神経あるいはアラタ体自身にニッケルイオンを注入してバックフィルを行い、脳の部分切断を併用することにより軸索の連絡経路を詳細に検討した。側心体・アラタ体を含む後脳神経複合体へは脳間部、脳側方部および食堂下神経節の細胞群が軸索を伸ばしていた。そのうち、脳間部の細胞群は側心体まで、脳側方部の細胞群はアラタ体まで軸索を伸ばしていた。以上の結果から、おそらく脳間部の細胞群はアラタ体の分泌活性を体液経由で促進しており、休眠中のアラタ体活性は脳側方部または食道下神経節の細胞によって神経経路で抑制されていると考えられた。今後、実際にアラタ体の幼若ホルモン分泌活性を測定するとともに、休眠中のアラタ体活性を抑制している細胞を特定したい。ホソヘリカメムシにおいて、休眠・非休眠成虫およびそれらのアラタ体を除去したものやアラタ体神経を切断したもので、クチクラの力学的伸展性を引っ張り試験機で、体内の脂質含量をクロロホルム・メタノールで抽出して測定した。休眠成虫では非休眠成虫のものよりクチクラの伸展性が小さく脂質の蓄積量が大きかった。アラタ体除去やアラタ体神経の切除は、この性質に影響を与えず、クチクラの伸展性と脂質の蓄積はアラタ体の分泌活性とは無関係であることが明らかになった。
ライフとキャリアの変容・維持過程の記述―臨床と教育に活きる質的研究法TEM

人のライフ(生命・生活・人生)を時間経過と文化的・社会的文脈下で捉える質的研究法、複線径路等至性モデル(TEM)を、1形態維持の視点、2関係性・集団というシステムの単位、3キャリア教育・支援への還元に留意し、研究への実践的適用と、システム論、対話的自己論、文化心理学の観点からの理論的精緻化により展開をはかった。看護学、社会学、言語学、経営学、キャリアデザイン等に及ぶTEMの可能性を追究した。(1)実践的適用(個人):子どもを望む女性のライフの検討を、著書の執筆というかたちで進めた(タイトル「不妊治療の終結をめぐる当事者の語りー生殖補助医療の進展のなかで可視化される、子をもつ願望とその相克」)。TEAを用いた分析・執筆は幾分遅れ気味であるが、学会発表というかたちで検討を進めてきた((3)を参照のこと)。(2)実践的適用(協働):TEA研究会を、6月には京都と東京で、11月には東京で、2月には京都で開催し、異分野多領域の研究者と実践的適用・理論的精緻化について議論した。現在、TEAに関する著書、『ワードマップTEA(仮)』(平成26年10月刊行予定)の作成に取り組んでいるところである。これに関わり、2月末には、その執筆原稿を持ち寄り、24の項目について議論・検討し合う合宿を福島にて実施した。(3)国内外の学会等での発表:8月には、韓国健康心理学会でポスター発表を行い、また、日本心理臨床学会と日本質的心理学会でシンポジウムを実施した。9月には、日本心理学会でシンポジウムを企画した。そして、11月には、対人援助学会でポスター発表を行い、また、シンポジウムを企画した。1月には、立命館大学人間科学研究所の年次総会・私立大学戦略的研究基盤形成支援事業公開研究会で、3月には日本発達心理学会で、ポスター発表を行った。これらの発表を通じて成果の発信を行うとともに、様々な観点からTEAに関する検討を進めた。(4)文化心理学国際セミナーへの出席:3月に、ブラジル・サルヴァドールで開催されたセミナーに参加し、グローバル・ネットワークのなかで、「触媒」をキーワードに、文化心理学や質的研究に関し、学び進めた。(1)実践的適用(個人):子どもを望む女性のライフの検討を、夫婦関係に焦点をあてて、著書の執筆(分担執筆)というかたちで進めた(章タイトル「不妊治療と夫婦関係」、2015年度刊行予定)。経験の「構造」を捉えた前記執筆を踏まえ、引き続き、TEA(TEM)を用いて、経験の「過程(プロセス)」の分析を行っていく必要があると認識することができた。また、2015年3月に刊行した『ワードマップTEA』(理論編と実践編のセット)において、計9項目執筆し、TEAの理論的・実践的な精緻化を推し進めた。(2)実践的適用(協働):TEA研究会を、5月に東京で、6月に京都で、7月と9月に福岡で、1月に東京で、2月に京都で開催した。2月の研究会ではTEAをワークとして適用するための検討も進めた。各研究会を通じて、異分野多領域の研究者とTEAの実践的適用・理論的精緻化について議論した。また、総勢40名の研究者や実践家に執筆いただいた『ワードマップTEA』(理論編と実践編のセット)の編集作業に尽力した。(3)理論的精緻化(協働):6月に日本コミュニティ心理学会で、8月に国際対話的自己学会で企画されたシンポジウムに登壇した。また、9月に日本心理学会で、10月に日本パーソナリティ心理学会および日本質的心理学会で、11月に対人援助学会で、シンポジウムを企画した。そして3月に、日本発達心理学会で2件のラウンドテーブルに登壇し、また、TEAに関する講習会の講師を担った。これらを通じて成果の発信を行うとともに、TEAに関する検討を進めた。加えて、協働で行っている“Dialogical Self Theory"の翻訳を進めた。(4)文化心理学とライフコースに関するサマースクールへの出席:8月にデンマーク・コペンハーゲンで開催された"Cultural life coursesummerschool"に参加し、TEAに関する講義も受講した。(1)実践的適用(個人):生殖にまつわるライフの分岐点としてとらえられる、流産・死産・新生児死に関する執筆(著書の一章)を行った(今年度刊行予定)。(2)実践的適用(協働):TEA研究会を、6月、8月、12月に東京で、9月に京都で開催した。言語学、臨床心理学、発達心理学、教育心理学、文化心理学、看護学、キャリアデザインなど多分野にわたる、さなざまな現象・経験を対象に、TEAによる分析をいかになしうるかについて検討・議論した。また、質的データアナリストの育成を目標に、ある企業との共創的な研究を、長期的な展望のもと進めた。(3)理論的精緻化(協働):9月に開催されたヨーロッパ発達心理学会で、「分岐点の生成」の観点から指定討論を行った。また、9月に、国際混合研究法学会アジア地域会議/第1回日本混合研究法学会で、TEAとテキストマイニングによる混合研究法に関するワークショップの講師を担当した(二人体制)。そして、9月に日本心理学会にてシンポジウムを企画し、TEAの、法心理学的事象への適用を試みた。10月には日本質的心理学会にて、キャリア教育・開発のツールとしてのTEAの実装可能性を検討するシンポジウムにて、指定討論を行った。

同じく日本質的心理学会にて、TEAとの理論的・実践的接合可能性を検討しつつある対話的自己論に関するシンポジウムを企画した。これらを通じて成果の発信を行うとともに、TEAに関する理論的精緻化を推し進めた。加えて、社会実装につなげることに焦点化し、著書『TEAでひろがる社会実装ーライフの充実』の出版企画を進めた(現在執筆中)。人のライフ(生命・生活・人生)を時間経過と文化的・社会的文脈下で捉える質的研究法、複線径路等至性モデル(TEM)を、1形態維持の視点、2関係性・集団というシステムの単位、3キャリア教育・支援への還元に留意し、研究への実践的適用と、システム論、対話的自己論、文化心理学の観点からの理論的精緻化により展開をはかった。看護学、社会学、言語学、経営学、キャリアデザイン等に及ぶTEMの可能性を追究した。各地で多数の研究会を実施し、また、各種学会で複数の成果発信を行いつつ、加えて、『ワードマップTEA』を、理論編と実践編とセットで刊行することができた。『ワードマップTEA』では、理論編と実践編にまたがり、TEAに関する論考を広くまた精緻にまとめることができた。実践的適用(個人)の作業がいくぶん遅れてはいるものの、それをカバーできるほどの成果をあげることができていると考える。臨床心理学、生涯発達心理学、質的心理学本年度は本研究課題の最終年度であるが、もう一冊TEAに関する出版計画を進め、TEAのさらなる新たな可能性の探究を進めていく。いくぶん遅れている「実践的適用(個人)」についてはスケジュールの若干の調整を行い、本年度は以下のように本研究課題を推進する。(1)実践的適用(個人):子どもを望む女性のライフについて、TEAの考え方を枠組みにし、変容が捉えれる分岐点に焦点をあてて捉え、論文化する。(2)実践的適用(協働):各研究者や各実践家が関心を寄せているさまざまな現象を対象に検討を行う、TEA研究会を開催する。とりわけ、思考枠組みとしてのTEAの側面により焦点をあて、適用可能性について検討を進める。(3)理論的精緻化:社会実装につなげることに強調点をおき、TEAに関する著書刊行の企画を進める。またTEAのさらなるグローバル展開を見据え、9月には、研究分担者であるサトウタツヤ教授(立命館大学)とともに、ポルトガル・ブラガで開催されるヨーロッパ発達心理学会に出席し、シンポジウムに登壇する。他、国際混合研究法学会アジア地域会議(9月)、対人援助学会(11月)でも、シンポジウムなどの形式による登壇を予定する。そして、TEAとの接合可能性が検討されている『対話的自己論』について、翻訳完成に向けた作業を進める。当初予定していなかった著書(『ワードマップTEA(仮)』、共編著)の作成・刊行の話を平成25年度の初秋にいただき、次年度(平成26年度)の秋の出版に向けて、急遽企画することとなった。目次をたて、多くの執筆者に原稿の執筆を依頼し、2月末には執筆検討会合宿を実施して、現在、鋭意編集作業などを進めているところである。このこと自体、質的研究法TEAの精緻化という点でも、質的研究法TEAをいかに使用するかを協働的に学ぶという教育的な観点からも、本研究課題を進めるうえでの重要かつ大きな成果である。ただし、予定していなかったことに相当のエネルギーを注ぐ必要が生じたため、その分、当初計画していたことが幾分遅延気味になっている。
認知症高齢者の摂食困難に対する施設職員の認識と多職種連携を促進させる要因

本研究は、認知症高齢者の摂食困難における多職種連携を促進させる教育的要因を明らかにすることを目的としている。認知症高齢者は本人の意思確認が難しく、介護者側が主体となったケアに傾く可能性がある。そのため、多職種の専門性の見地から判断した情報を共有し、対象者を多面的に理解していくことが求められる。多職種で情報共有するためには、互いの専門性を超えるための何らかの教育的な基盤づくりが必要と考えて開始した。多職種の国家試験の出題基準をみると、認知症をキーワードとした出題項目数には差があり、認知症に関する教育内容の比重は異なる。そこで、平成30年度は認知症高齢者への食支援に携わる多職種の基礎教育で使用するテキストの記載内容を整理し、多職種連携を促進するための教育的課題について検討した。介護福祉士・看護師・管理栄養士の基礎教育から、認知症高齢者の食支援として9つの項目を明らかにした。多職種の専門性に応じて「食事の観察と評価」、「栄養状態の維持と悪化予防」の観察と対応に違いがあった。また、すべての職種のテキストに認知症高齢者の食事摂取量の減少という記述はあったが、食事摂取量のよりどころとなる考えは示されていなかった。食事摂取は全量摂取がベストであるという認識から、職員が認知症高齢者へ食事を無理強いさせると指摘されている。以上のことから、多職種間で認知症高齢者への食事介助を終了する目安や食事摂取量の設定についての共通理解を図るための教育的課題が見出された。上記の文献検討と並行し、介護老人保健施設の施設職員を対象に、多職種連携により認知症高齢者の摂食困難のケアへの認識にもたらした変化についてインタビュー調査を開始している。現在、4施設でのインタビュー調査を終了した段階である。現在までに、看護師・管理栄養士・介護福祉士の3つの職種の基礎教育において、認知症者への食事支援に関する教育内容の違いに関する文献検討は終了し、学会発表の準備を終えている。また、介護老人保健施設にいる看護師・介護士・管理栄養士へのインタビュー調査は計12名終えていることから、概ね順調に進展していると評価する。ただし、今後、論文執筆作業やデータ分析作業が遅延する可能性もゼロではないため、適宜計画の進行をチェックしながら進めていきたい。平成30年度に引き続き、インタビュー調査を行い、多職種連携による施設職員の認識の変化について明らかにする。また本年度に予定している事例検討会は、多職種によるディスカッションの場を通した認識変化を調査する目的で計画している。この検討会のテーマ選定にあたり、インタビュー調査の質問項目にある「カンファレンスを行った認知症高齢者の事例で印象に残っているエピソード」の回答を参考とする。年度内には研究1年目及び2年目で得た結果を基に、研究分担者と質問紙調査の準備を進める。

年度内には研究1年目及び2年目で得た結果を基に、研究分担者と質問紙調査の準備を進める。次年度以降のインタビュー調査及び分析検討をするための旅費と人件費に充てる予定である。
肺癌におけるR-spondin-Lgr6シグナル系の発現・機能解析

1. Lgr6は正常気管支上皮においては明確な発現がみられなかったが、肺腺癌、肺・口腔扁平上皮癌において明確な発現がみられ、発癌との関連が示唆された。2. Lgr6は上皮間葉転換;EMTへの関与も示唆された。3.ヒト肺腺癌細胞株PC9においてLgr6遺伝子のExon3, 20に有意な変異が認められ、Exon16, 20にはサイレント変異も認められた。4. Lgr6プロモーター領域におけるメチル化がヒト肺腺癌細胞株A549において認められた。以上の結果より、Lgr6の遺伝子変異、プロモーター領域のメチル化、EMTへの関与が、肺癌や口腔癌の発癌・進展機序に加担していることが考えられた。[目的]R-spondin/Lgr6(ヒト肺幹細胞マーカー)受容体シグナルはWnt/β-cateninシグナルを増強する。本研究では肺癌(幹)細胞における同シグナル系の遺伝子変異解析と機能解析を目的とする。[材料と方法]初年度は、まず、Lgr6の構成exonに対するPCR用プライマーを作成し、ヒト肺腺癌細胞株(A549、PC9)およびヒト非肺癌細胞株(VA10、BEAS2B)に対し、Lgr6の変異解析をdirect sequence法にて行った。次に、Lgr6プロモーター領域の非メチル化、メチル化特異的PCR用のプライマーを設計し、それらのPCR解析を行った。[結果]Lgr6すべてのexonのdirect sequence解析から、exon3、exon16に1ヵ所、exon20に3ヵ所の一塩基置換変異を認めた。このうち、exon16の1ヵ所、exon20の2ヵ所はsilent mutationであったが、exon3、exon20の1ヵ所はこれまでに報告のない新たな有意な1塩基置換変異であった。また、メチル化特異的PCR解析から、A549はメチル化のパターンが有意である結果を得た。以上の結果より、肺癌細胞においては、Lgr6遺伝子が変異によりあるいはそのプロモーター領域のメチル化のパターンにより発現の特異性が制御されている可能性が示唆された。2年目から実際のヒト肺癌症例からのDNAサンプルの収集を開始し、これらを対象に細胞株と同様にLgr6の変異解析を施行中である。また、Lgr6の野生型遺伝子をpIRESpuro3 (Clontech)に組込み、野生型Lgr6の発現プラスミド作成を試みているところである。[結果]Lgr6遺伝子exon120のすべての領域のdirect sequence解析から、exon3、exon16に1ヵ所、exon20に3ヵ所の一塩基置換変異を認めた。以上の結果より、肺癌細胞においては、Lgr6遺伝子が変異によりあるいはそのプロモーター領域のメチル化のパターンにより発現の特異性が制御されている可能性が示唆されている。H27年1月1日付で熊本大学医学部機能病理学(准教授職)から福岡歯科大学病態構造学(教授職)へ異動となったため、新しい環境下での研究体制の立ち上げに時間を要したため。[目的]R-spondin/Lgr6(ヒト幹細胞マーカー)受容体シグナルはWnt/β-cateninシグナル伝達系を増強する。本研究では肺癌(幹)細胞におけるR-spondin/Lgr6シグナル伝達系の発現ならびに遺伝子変異解析を目的とする。[材料と方法]Lgr6遺伝子の各構成exonに対するプライマーを作成し、ヒト肺癌細胞株(A549, PC9)およびヒト気道上皮細胞株(VA10, BEAS2B)からgenomic DNAを抽出し、Lgr6遺伝子の全exonに対する変異解析をdirect sequencing法を用いて行う。次に、Lgr6プロモーター領域の非メチル化、メチル化特異的PCRプライマーを設計し、各PCRによるメチル化解析を行う。また、ヒト肺癌症例からgenomic DNA抽出を行い同様のLgr6変異解析を行う。最後に、Lgr6の野生型遺伝子のクローニングと、前述の解析で得られた新たな変異部位を含む変異型Lgr6遺伝子のクローニングを行い、Lgr6の肺癌(幹)細胞における機能と意義につき考察する。[結果と考察]Lgr6遺伝子のexon120に対する全exon解析から、exon3, exon16に1カ所、exon20に3カ所の一塩基置換型の変異を認めた。

このうち、exon16の一か所、exon20の二カ所はsilent mutationであったが、exon3, exon20の一か所はこれまでに報告の無い新たな有意な一塩基置換型の変異であった。また、メチル化特異的PCR解析から、A549ヒト肺腺癌細胞株においてLgr6プロモーター領域のメチル化が検出された。以上の結果より、肺癌においては、Lgr6遺伝子の変異あるいはプロモーター領域のメチル化の機構によりLgr6発現が抑制されていることが考えられ、Lgr6遺伝子発現抑制機構の機序の一端を解明できた。1. Lgr6は正常気管支上皮においては明確な発現がみられなかったが、肺腺癌、肺・口腔扁平上皮癌において明確な発現がみられ、発癌との関連が示唆された。2. Lgr6は上皮間葉転換;EMTへの関与も示唆された。3.ヒト肺腺癌細胞株PC9においてLgr6遺伝子のExon3, 20に有意な変異が認められ、Exon16, 20にはサイレント変異も認められた。4. Lgr6プロモーター領域におけるメチル化がヒト肺腺癌細胞株A549において認められた。以上の結果より、Lgr6の遺伝子変異、プロモーター領域のメチル化、EMTへの関与が、肺癌や口腔癌の発癌・進展機序に加担していることが考えられた。研究実績の概要の[結果]の項で示したように、肺癌細胞株に対する予備実験においてLgr6遺伝子の全exon120をターゲットとしたそれぞれの至適PCR条件の設定もうまくいき、direct sequence解析も問題なく遂行することが出来ている。その結果、Lgr6 variant3のexon3の1ヵ所とvariant1のexon20の1ヵ所に有意な1塩基置換変異を見い出し、これまでに報告のない新たな結果を得ることが出来た。また、メチル化特異的PCR解析もうまくいくことを示し、これにより、肺癌細胞株A549のLgr6遺伝子のプロモーター領域のメチル化の優位性を明らかにした。これらの結果より、肺癌細胞のLgr6遺伝子が変異によりあるいはそのプロモーター領域のメチル化のパターンにより発現の特異性が制御されている可能性を示し、これまでに報告のない新たなヒト肺癌におけるLgr6発現制御機構の可能性を示すことが出来、有意義な結果を得ている。以上のような理由から、判定は、(2)おおむね順調に進展している、と自己評価した。ヒト肺癌症例癌細胞および非癌部細胞からのDNAサンプル数を増やし、これまでに行ったヒト肺癌細胞株を対象とした基礎実験より得られた条件をもとに、Lgr6の全exon PCR解析に基づくdirect sequence解析、およびメチル化特異的PCRによるLgr6プロモーター領域のメチル化解析を行い、ヒト肺癌症例を対象とした臨床研究を進めていく。また、現在、Lgr6の野生型遺伝子をpIRESpuro3 (Clontech)に組込み、野生型Lgr6の発現プラスミド作成を試みているところであり、これをもとに野生型Lgr6から変異型Lgr6遺伝子をQuikChange site-directed mutagenesis kit (Stratagene)を用いて作成する。これら、野生型、および、変異型Lgr6遺伝子プラスミドをVA10およびBEAS2B、ならびに肺癌細胞株に導入し、それぞれの細胞動態、発現遺伝子動態、発現蛋白動態を解析し、Lgr6の肺癌細胞における機能を明らかにすることを目標とする。
幾何構造のモジュライと変形の研究

本研究は,幾何構造のモデュライと変形に関連する多様体上の種々の非線型問題を大域的変分問題の立場から研究することを目的とし,次の成果を得た。1.板東重稔は,アインシュタイン・ケーラー計量/エルミート計量の存在問題を複素多様体/正則ベルトル束のモデュライ空間の問題,あるいは退化の問題と関連付けて研究し,複素部射影空間内の超曲面に対してChow安定性とアインシュタイン・ケーラー計量が関係するというG.Tianによる最近の結果を,等質空間の場合へ拡張した.2.中川泰宏は,アインシュタイン・ケーラー計量の存在問題を商特異点を許容する多様化について考案し,反標準因子が豊富なカルテイエ因子となる2次元トーリック軌道体に対して,アインシュタイン・ケーラー計量が存在するための必要十分条件は二木変量が消えることであることを証明した。3.一方,石田正典は離散的付値環上の順トーリック多様体の理論を用いて,マスターフィンによる非アルキメデス的単位球面による一意化の改善をすることに成功した.4.中島啓は,ALE空間上の反自己双対接続のモデュライ空間を一般化して箙多様体の概念を導入し,その上の構成可能関数の空間上にカッツ・ムーディ環の表現を構成した.また.A_nのALE空間上の反自己双対接続のモデュライ空間に対して,そのコホモロジーの次元を計算するアルゴリズムをヤング図式の言葉で与えた.5.立澤一哉は,離散スペクトルのみを持つシュレディンガー作用素に対して,その固有値の漸近的評価を,ウイルソン基底を利用して,表象から定義される量によって与えた.また,新井仁之は,強擬凸領域上の正則ブロック関数のいくつかの特徴付けを証明し,その境界挙動を解明した.本研究は,幾何構造のモデュライと変形に関連する多様体上の種々の非線型問題を大域的変分問題の立場から研究することを目的とし,次の成果を得た。3.一方,石田正典は離散的付値環上の順トーリック多様体の理論を用いて,マスターフィンによる非アルキメデス的単位球面による一意化の改善をすることに成功した.4.中島啓は,ALE空間上の反自己双対接続のモデュライ空間を一般化して箙多様体の概念を導入し,その上の構成可能関数の空間上にカッツ・ムーディ環の表現を構成した.また.A_nのALE空間上の反自己双対接続のモデュライ空間に対して,そのコホモロジーの次元を計算するアルゴリズムをヤング図式の言葉で与えた.5.立澤一哉は,離散スペクトルのみを持つシュレディンガー作用素に対して,その固有値の漸近的評価を,ウイルソン基底を利用して,表象から定義される量によって与えた.また,新井仁之は,強擬凸領域上の正則ブロック関数のいくつかの特徴付けを証明し,その境界挙動を解明した.
異文化理解教育その利用をめざした、女性・少女漫画の分析

本研究の目的は,日本の少女・女性マンガを素材として日本人学生と留学生を対象に,日本文化と日本語についての理解と考察を深めそれを明確に言語化する能力の涵養を目指す「異文化理解コース」のための教材を開発することである。行った主な活動とその成果を次にあげる。1.日本マンガの特徴の分析:海外のマンガとの比較によって日本マンガの特徴を検証し,また,日本マンガが他の国のマンガや他の表現分野に与えた影響を考察した。(→平成14年に単行本『(仮題)世界マンガ事情』として刊行予定。)2.マンガ作品研究:日本の現代社会を理解する鍵となると考えられる作品を中心に主題分析を行った。単行本『マンガのススメ』を刊行した。また,学習者用の手引きを執筆した(→報告書所収)3.マンガ言語の分析:社会的な文脈の中での「ていねいさ」の表現,女性語の使用,口語表現に特に焦点を当てて行った。4.教材化の方法論研究:教材選定のための基準,コース・デザイン,タスク作成方法などについて考察した。5.教材作成:コース用教材2学期分と発展研究用資料を執筆し,研究代表者の所属する機関で試用した。(→報告書所収)以上の研究成果は,3本の論文,2冊の単行本,3つの口頭発表によって発表した。論文は作成した教材とともに報告書に収録し,留学生教育,国際化教育に携わる関係諸機関に送付する。1資料の収集:平成11年6月12月日本国内、タイ、中国、韓国などで漫画作品を収集した。また、日本語談話分析、異文化理解教育、社会現語学などの文献を収集した。2作品の選定:平成11年8月平成12年1月具体的な教材化の候補を3つの基準で選定した。(1)日本の少女が直面する内面的問題を扱ったもの(『イグアナの娘』『桜の園』他)(2)女性の仕事が描かれているもの(『9時から5時半まで』『ピタゴラスの定理』『4階のミス桜子』『うちのママのいうことには』他)(3)漫画という表現手段の独自の可能性を示す手法を用いたもの(『8月の貘』『綿の国星』他)3主題分析:漫画の中に描かれている等身大の現代日本人像、現代社会における日本人の親子関係、男女関係、家族の関係の分析、及び諸外国との比較などを行なった。成果の一つは『漫画界のススメ』(日下みどり著)として結実した。4言語分析:平成11年4月7月日本語学習者にとって最も理解しにくい特徴は、親密さを示す場合にも丁寧体会話が維持されることである。これを理解させ運用に結びつけるには、実証的データの集積と明瞭な提示方法の開発が必要である。前者のために、我々は、3タイプ12種類以上の自然な日本語会話を文字化し、親しさを示す「ポライトネス・ストラテジー」及び「わきまえ」の典型例を抽出し、11月と12月の二度、国際学会において発表した。後者のためには、漫画作品の中でも我々の分析結果と一致する原則が観察されることを検証し、最もよくその特徴を表す部分を教材化候補部分として抽出した。5外国人の漫画作品の理解に関する調査:平成11年11月平成12年3月タイ、韓国、中国、ヨーロッパにおいて漫画がどのように受容されているかを、留学生、海外の日本語学習者、海外に滞在した日本人研究者を対象にアンケート及び聞取り調査を行なった。平成12年度は、平成11年度に続き、資料収集と教材化に向けた作品の選定、選定した作品を用いた教材の試作と試用を行なう一方、海外におけるマンガの受容についての調査も継続して行なった。(1)資料の収集と分類:平成12年4月9月昨年収集した資料の整理資料収集と整理。会社で働く女性、女性の社会進出と並行して起こった家庭環境の変化、少女と女性特有の成長と心理、など、日本社会の理解につながる幾つか主題に沿って、教材化に適当と思われる作品を選定した。(2)選定した作品の分析及び教材化と試用:平成12年10月平成13年3月作品の主題分析、言語的分析に基づいてタスクを作成し、留学生センターの日本語コースで試用した。(3)マンガの受容についての調査台湾、韓国、香港、中国、タイ、フランスなど、海外におけるマンガの出版事情、日本マンガの受容などについての調査を行なった。(4)以上の活動について発表するための準備を行なった。

5.教材作成:コース用教材2学期分と発展研究用資料を執筆し,研究代表者の所属する機関で試用した。(→報告書所収)以上の研究成果は,3本の論文,2冊の単行本,3つの口頭発表によって発表した。論文は作成した教材とともに報告書に収録し,留学生教育,国際化教育に携わる関係諸機関に送付する。
腎皮質集合管における細胞容積調節に寄与する陰イオンチャネルの分子同定

低浸透圧刺激時の細胞容積調節にはK^+チャネル、陰イオンチャネル及びそれらの調節因子として細胞内カルシウムが重要な役割を果たすと考えられている。本研究では細胞内カルシウム濃度変化と陰イオンチャネルコンダクタンスについて、ラット皮質集合管新鮮単離標本を用いて蛍光レシオイメージング及び電気生理学的解析を行うことにより、1)低浸透圧刺激時の細胞内カルシウム濃度上昇機構にニカルジピン感受性の細胞外カルシウム流入経路が関与する、2)低浸透圧刺激によってNPPB感受性、グリベンクラミド非感受性のCl-電流が活性化することが明らかとなった。腎集合管は最終的な尿の量と組成の決定に関わり、体液の恒常性の維持に重要な機能的役割を持つ。皮質部の集合管に流入する管内液の浸透圧は比較的低く、その値は水の再吸収量の調節の過程で大きく変動する。そのため皮質集合管では浸透圧の変動に応答した細胞容積調節メカニズムが常に働き上皮細胞の機能と恒常性の維持に重要な役割を果たしている可能性が考えられる。本研究課題ではこの皮質集合管における低浸透圧刺激時の調節性容積減少(RVD)に寄与する陰イオンコンダクタンスの詳細な電気生理学的性質を明らかにし、その分子実体を同定することを目指している。平成20年度はラットの腎臓を用いた皮質集合管の新鮮単離標本の作製と皮質集合管主細胞へのホールセルパッチクランプ法による全細胞電流の測定を行った。電極内液にCs-glutamateに富む溶液を使用し、さらに細胞外液中のNa^+及びK^+をNMDGに置換することにより陽イオンチャネル電流の混入を抑制した条件で実験を行った。ホールセル電位固定記録下で保持電位-30mVからステップパルス(-100mVから+70mV)を与えたところ、時間依存性に素早く不活化する外向き整流性電流が観察された。この電流は細胞外のCl^-をglutamateに置換することにより大幅に減少したことからCl^-電流であることが確認された。さらに-100mVから+100mVまでのランプパルスを与えながら細胞外液を低浸透圧溶液に置換したところ、Cl^-電流の振幅の増大が観察された。今後この低浸透圧刺激で増大したCl^-電流についてその電気生理学的性質とRVDへの寄与を詳細に検討する予定である。平成22年度は皮質集合管(CCD)新鮮単離標本を用いて、1.低浸透圧刺激による細胞内Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]_i)上昇メカニズム、2.非刺激時および低浸透圧刺激によって活性化するCl^-電流の薬理学的性質を調べた。1.CCDを低浸透圧刺激すると主細胞の[Ca^<2+>]_iが一過性に上昇し、この[Ca^<2+>]_i上昇は細胞外Ca^<2+>の除去により顕著に抑制された。電位依存性Ca^<2+>チャネルの阻害剤であるニカルジピンは、この[Ca^<2+>]_i上昇を有意に抑制した。さらにMn^<2+>クエンチ法を用いることで、低浸透圧刺激によって細胞外Ca^<2+>の流入が引き起こされることが明らかになった。このCa^<2+>流入はニカルジピンによって有意に抑制された。以上の結果から、低浸透圧刺激時の[Ca^<2+>]_i上昇にはニカルジピン感受性の細胞外Ca^<2+>流入経路が関与していることが示唆された。2.電極内液にCs-glutamate溶液、細胞外液としてNMDG-Cl溶液を用いてホールセル電流の測定を行った所、内向き、外向きともに時間依存性に素早く不活性化する外向き整流性のCl^-電流が観察された。このCl^-電流はNPPB(100μM)およびDIDS(1mM)によってそれぞれ75%,40%抑制されたがグリベンクラミド(200μM)には非感受性だった。細胞外液を低浸透圧溶液に置換すると、Cl^-電流の振幅が+90mVで30%、-90mVで87%増大した。さらに低浸透圧刺激後に内向き電流の不活性化速度の遅延が観察された。低浸透圧刺激によるCl^-電流の振幅の増大はNPPBによって大幅に減少したがグリベンクラミドには影響を受けなかった。Cl^-チャネルの阻害剤は特異性が高くないため薬理学的性質のみから分子を特定することはできない。詳細なイオン選択性及び細胞内調節因子、特に細胞内Ca^<2+>による調節の有無等の検討は今後の課題である。
ブドウ糖希釈法による体液量評価の検討-予後改善効果

少量のブドウ糖(5g)静注後、5分以内に簡単に算出可能なブドウ糖初期分布容量(IDVG)は重症患者における心臓前負荷の新たな間接的な指標として我々は提唱してきた。今回、IDVGを指標とし輸液管理する群(I群)と従来の循環系パラメータを指標として輸液管理する群(C群)に無作為に分け、ICU滞在中の低血圧等の合併症発生、滞在日数、予後等が改善されるか否か検討した。平成18年10月から平成20年3月までICUに3日以上滞在し動脈ライン中心静脈ラインを有する患者を対象とした。C群は延べ126名、I群は132名であった。I群で検討中に輸液・循環管理が危険となり、途中でI群から脱落した症例はなかったが、C群では途中からI群とし救命できた症例が1例あった。このうち心臓・大血管手術を受けた患者は各42名,39名、食道癌手術術後13名,13名、敗血症17名,12名、うっ血性心不全18名,9名であり、その他36名、58名であった。心臓・大血管手術、食道癌手術以外は対象患者数が十分でなく、このため統計学検討はこの2つの術後に限った。結果:両手術ともAPACHE IIスコアは両群に差がなく、またICUでの死亡率、滞在日数、人工呼吸期間、肺酸素化能(P/F ratio)、腎不全、心房細動発生頻度には有意差はなかった。しかしICU滞在中の処置を要する低血圧発生回数は何れの手術ともI群で低かった(P〈0.05)。また心臓・大血管手術ではICU退室時の体重はI群ではC群に比し有意に低下した(平均2.7kg,p=0.002)。結論:統計処理が可能であった心臓・大血管手術、食道癌手術では、IDVGを指標とする輸液管理は、人工呼吸期間、ICU滞在日数等の短縮はなかったが、体液貯留軽減の面から有利であり血圧低下頻度も少なく、侵襲の大きな手術の術後体液管理に安全に使用できることが示唆された。研究目的少量のブドウ糖投与後、5分以内に簡単に算出可能なブドウ糖初期分布容量(IDVG)は重症患者における心臓前負荷の新たな間接的な指標とされる。今回、IDVGを指標とし輸液管理する群(IDVG群)と従来の循環系パラメータを指標として輸液管理する群(対照群)に分け、ICU滞在中の低血圧等の合併症発生、滞在日数、予後等が改善されるか否か検討している。平成18年度の実績平成18年度は購入したブドウ糖測定装置が実際使用可能となった18年10月よりデータ収集を開始した。即ち、研究のインフォームドコンセントが得られたICUの成人患者でICU滞在が3日以上の患者を対象として、無作為に両群に分けた。IDVG群では入室日から1週間目までIDVGを少なくとも連日測定し、日々の体液管理の指標とし輸液量、循環作動薬、利尿薬使用を決定した。対照群ではIDVG以外は通常の指標を用いて体液管理を行った。術後患者、非術後患者を含め平成19年3月末日まで、IDVG群は計38名、対照群は計37名であった。患者の重症度を示す

APACHE IIスコアはIDVG群で22±6(SD)点、対照群で20±5点であり、現在まで重症度に有意差は認められず、順調にデータ収集が進んでいる。IDVG測定が患者管理に有利か否か未だ現段階では統計処理するにはデータ数が不足しており、また種々の病態が異なる患者が多く、結論は19年度に持ち越さざるをえない。現在までのところIDVGを指標として行った場合、患者の輸液管理が危険な方向に導かれ、ICU専任医師、主治医等から危険と判断され、IDVG指標とした輸液管理を中止せざるをえない場合は経験していない。今後も現在のデータ収集を続けていくが、最終的な処理では、各患者の病態が大きく異なる場合が多く、病態をグループ分けして検討する予定である。少量のブドウ糖(5g)静注後、5分以内に簡単に算出可能なブドウ糖初期分布容量(IDVG)は重症患者における心臓前負荷の新たな間接的な指標として我々は提唱してきた。今回、IDVGを指標とし輸液管理する群(I群)と従来の循環系パラメータを指標として輸液管理する群(C群)に無作為に分け、ICU滞在中の低血圧等の合併症発生、滞在日数、予後等が改善されるか否か検討した。平成18年10月から平成20年3月までICUに3日以上滞在し動脈ライン中心静脈ラインを有する患者を対象とした。C群は延べ126名、I群は132名であった。I群で検討中に輸液・循環管理が危険となり、途中でI群から脱落した症例はなかったが、C群では1患者で途中からI群とし救命できた症例が1例あった。このうち心臓・大血管手術を受けた患者は各42,39名、敗血症17,12名、食道癌手術13,13名、うっ血性心不全18,9名であり、その他36、58名であった。このため当該年度の統計学検討は心臓・大血管手術に限った。結果:APACHEIIスコアは両群に差がなく、またICUでの死亡率、滞在日数、人工呼吸期間、肺酸素化能(P/F ratio)、腎不全、心房細動発生頻度には有意差はなかった。しかしICU滞在中の何らかの処置を要する低血圧発生頻度は中央値でI群はC群の1/2であり(P<0.05)であった。また入室時に比し退室時の体重減少は中央値でI群はC群に比し-2.7kg低下した(p=0.002)。結論:当該期間の対象者は入室理由が多種多様であり、統計処理した心臓・大血管手術では、IDVGを指標とする輸液管理は、ICU滞在日数等は入室時の病態の影響が大きく、その優位性を証明できなかったが、体液貯留減少の面から優位であり、血圧低下頻度も少なく、本法により危険に陥った機会もなく、心臓・大血管手術患者の体液管理には有効である。
根管内細菌のプロファイリングに基づく根尖性歯周炎の客観的診断と治療法の確立

根尖性歯周炎を発症した根管壁象牙質試料を微生物迅速検査装置、嫌気培養法、16SrRNA遺伝子を標的としたPCR法により解析し、治療前後の根管内細菌叢を質的・量的に評価した。その結果、機械的拡大と抗菌剤による洗浄消毒で感染源をほぼ排除できること、また、拡大消毒後も残存検出されやすい菌種や根尖部不快症状との相関が推察される菌種が判明した。術前にこれらの菌の感染が疑われる場合には、特異的抗菌療法を併用するとMinimumInterventionを実現できる可能性がある。根尖性歯周炎は根管内に生息する多種多様な細菌により惹起され、根管の機械的拡大と抗菌剤による洗浄消毒が治療の基本である。必要最小限の根管拡大で感染源を除去すれば患歯を長期保全できる。そのためには治療前後の根管内細菌叢を質的・量的に把握することが重要である。本研究の目的は、嫌気培養法と16SrRNA遺伝子を標的としたPCR法からなる根管内細菌検査を通じ、根尖性歯周炎における主たる病原性菌種を追究し、特異的抗菌療法を駆使し必要最小限の根管拡大で臨床症状を早期に解消できる合理的な治療プロトコールを確立することである。根尖性歯周炎の治療を目的に東北大学病院を受診した患者からインフォームドコンセントを得て検索した。その結果、根管内細菌叢は症例により大きく異なり、同一個人でも治療歴や急性症状、口腔との交通の有無等により差のあることが判明した。治療前の細菌量logCFUは平均6.18(1.907.06)で、Olsenella,Mogibacterium,Pseudoramibacter,Propionibacterium,Parvimonas属の検出頻度が高かった。中でもOlsenella,とMogibacteriumは根尖部圧痛との関連が示唆され、今後、各種臨床症状と細菌種との相関を検証する必要を認めた。治療歴のない症例では、治療歴を有する症例に比べ根管内に存在する細菌の量とその種類が多い傾向にあった。肉眼的健康象牙質の出現を指標としNaOCl浴下で拡大後710日間Ca(OH)_2を根管貼薬すると、ほとんどの症例で嫌気培養結果は陰性となり、従来の標準プロトコールで根管内の感染はほぼ制御されることが判明した。必要最小限の根管拡大で感染源を除去できれば、患歯を長期保全できる。本研究の目的は、嫌気培養法と16S rRNA遺伝子を標的としたPCR法からなる根管内細菌検査を通じ、根尖性歯周炎における主たる病原性菌種を追究し、特異的抗菌療法を駆使し必要最小限の根管拡大で臨床症状を早期に解消できる合理的な治療プロトコールを確立することである。根尖性歯周炎の治療を目的に東北大学病院歯周病科を受診した患者からインフォームドコンセントを得て検索した。その結果、根管内細菌叢は症例により大きく異なり、同一個人でも根管治療の既往歴や急性症状、口腔との交通の有無等により差のあることが判明した。術前の根管壁象牙質からは、Olsenella,Mogibacterium,Pseudoramibacter,Propionbacterium,Parvimonasなどが高頻度で検出され、治療歴のない症例ほど根管内細菌の量と種類が多い傾向にあった。肉眼的健康象牙質を指標にNaOCl浴下で根管を拡大し710日間Ca(OH)_2を根管貼薬すると、ほとんどの症例で嫌気培養結果が陰性となった。微生物迅速検査装置を用いてサンプル中の生菌数をカウントしたところ、1mL中の菌数が1700個以下となると培養陰性となることも判明した。根尖性歯周炎は根管内に生息する多種多様な細菌により惹起され、根管の機械的拡大と抗菌剤による洗浄消毒を柱とする菌非特異的アプローチが標準治療である。本研究の目的は、感染根管治療前後の根管内細菌叢を嫌気培養法と16S rRNA遺伝子を標的としたPCR法を通じて質的・量的に解析して根尖性歯周炎における主たる病原性菌種を追究し、チェアーサイドの根管内細菌検査結果に基づく特異的抗菌療法を駆使した合理的な治療プロトコールを確立することである。本年度は蛍光フィルターを利用した微生物迅速検査装置を根管内細菌検査に応用できないか、検討を重ねた。根尖性歯周炎の治療を目的に東北大学病院歯周病科を受診した患者からインフォームドコンセントを得て、治療前、根管拡大後、抗菌剤貼薬後の根管壁象牙質を検索した。

その結果、根管内細菌叢は症例により大きく異なり、治療前の根管壁象牙質からは、Olsenella, Mogibacterium, Pseudoramibacter, Propionibacterium, Parvimonasなどが高頻度で検出され、治療歴のない症例ほど根管内細菌の量と種類が多い傾向にあった。また打診痛など急性症状を有する根管は細菌量が多く、Olsenella, Mogibacterium, Parvimonasが頻出した。微生物迅速検査装置を用いると試料中の生菌が20分以内に計数可能で、しかも小型であるためチェアーサイドでの臨床検査として非常に有用であることが判明した。計数結果は嫌気培養で得られたCFU/mLの10100倍で、1mL中の生菌数が1700個以下となると嫌気培養陰性となることも判明した。また、根管拡大後および抗菌剤貼薬後の試料は殆どの場合培養陰性であったが、Propionibacteriumは根管拡大後も検出されることが多かった。根管内の菌叢を構成する菌種は症例により大きく異なるが、治療前の試料から分離される頻度が高く、根尖性歯周炎の発症・成立に寄与している可能性の高い菌種が複数見つかった。また、微生物迅速検査装置による菌数カウントで、嫌気培養法とPCRを組み合わせた根管内細菌検査の有用性も確認できた。24年度が最終年度であるため、記入しない。OlsenellaやPseudoramibacterなど、治療前の試料から分離される頻度の高い菌種をターゲットに選び、菌特異的プライマーを用いたリアルタイムPCR法により全菌叢に占める割合を検索し、臨床症状との関連を探る。
活性化NKT細胞による肺癌切除術後再発転移の抑制に関する検討

原発性肺癌患者の末梢血NKT細胞の解析を施行し、その機能測定システムを確立した。その結果、肺癌患者では末梢血NKT細胞数は減少しているものの、残存するNKT細胞の機能は保存されており、さらに末梢血の単核球から作製した抗原提示細胞のα-GalCer提示能はほぼ正常であることが判明した。マウス肺で存在するNKT細胞の絶対数(臓器重量あたり)より多くのNKT細胞がヒト肺内に存在し、さらに腫瘍組織では高い集積が見られることが明らかとなった。さらにマウス樹状細胞にα-GalCerをパルスし静脈注射すると、肺内に集積し、反応した肺内NKT細胞は次の日には一過性に減少するものの数日後には10倍以上に上昇し、その上昇は約1週間続くことが明らかになった(Motohashi et al.2002; Int.Cancer)。平成13年度より、米国FDAの細胞調整基準を遵守し、かつGMP基準での品質管理、品質保証下に、患者本人の樹状細胞にα-GalCerをパルス提示したものを投与し、安全性の検討を行う第一相試験を施行した。細胞投与に関連するGrade3以上の重篤な有害事象は認めなかった。Grade2以下の有害事象としては、頭痛、顔面紅潮、血清カリウムの上昇、血清クレアチニンの上昇、血清総ビリルビンの上昇を認めた症例があったもののいずれも軽快した。レベル1,2においては、α-GalCerパルス樹状細胞投与と末梢血NKT細胞数の変化およびNKT細胞特異的なIFN-γ産生能の間には有意な相関を認めなかった。レベル3では、α-GalCerパルス樹状細胞投与と関連し、末梢血NKT細胞数が劇的に増加した症例を1例認めた。3ヶ月の観察期間内に明らかな抗腫瘍効果を示した例を認めていない。今後、第二相試験へ展開する予定となっている。これまでの研究によりT細胞マーカーとNK細胞マーカーの両方をもつNKT細胞は第4のリンパ球系列として注目されており、α-ガラクトシルセラミドで活性化されることによりマウスにおいて、肝転移および肺転移を劇的に抑制することが明らかにされてきた。本研究は肺癌患者に対し、自己のNKT細胞ならびに樹状細胞をin vitroで、α-ガラクトシルセラミドならびにその他の増殖因子で増殖活性化させ、これを体内に戻し、肺癌術後再発転移、特に肺内転移の抑制により肺癌の治療成績を向上させることを目的とするものである。本年度は研究初年度であるが、肺癌患者における切除材料や末梢血を用いて検討し、肺癌宿主におけるNKT細胞の分布と組織学的検討から、ヒトにおけるNKT細胞ならびに樹状細胞の役割と意義につき明らかにしてきた。また臨床応用に向け、NKT細胞ならびに樹状細胞を、インターロイキン2,インターロイキン4,GM-CSF等の増殖因子とともに大量培養する方法を検討し、現在これを確立しつつある。治療用NKT細胞ならびに樹状細胞は自家の系で,in vitroにて増殖活性化させ患者自身に戻す操作が必要である。本法はこれまでに試みられていない治療法であり,その詳細な計画を本学倫理委員会に提出し慎重な討議を行った結果、その計画施行について許可を得た。現在肺癌進行切除不能例に対し、NKT細胞ならびに樹状細胞をα-ガラクトシルセラミドにより刺激し,投与することを計画中である。NKT細胞はα-galactosylceramide(以下α-GalCer)により特異的に活性化され、強力な細胞傷害活性を発揮する。本研究では、NKT細胞を利用した肺癌に対する免疫治療を行うため平成11年度に始まった。