hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
家族性高脂血症のアポ蛋白BおよびEの遺伝子DNAに関する研究

1.ApoE遺伝子の研究:ApoEのアミノ酸配列218-222番に相当する14塩基対のオリゴヌクレオチドをプローブとし、ヒト肝cDNAライブラリーよりApoEcDNAクローン(pAPCE7)を得た。ApoE欠損症患者の白血球より採取したDNAを制限酵素で切断し、サザーンブロッテイングのDNA断片を検討した。患者および正常者ともEcoRIで1.9kb、BamHIでは1.2kbバンドを認めた。このことよりApoE欠損症ではApoE遺伝子の大きな欠損や挿入などがないと考えられた。2.LDLレセプターの遺伝子の研究:LDLレセブター(LDLR)のcDNA3 ́末端側1.9kbのpLDLR-2HH1と、full lengthのpLDLR-3×S1をプローブとして家族性高コレステロール血症(FH)および正常者のLDLR遺伝子多型性を検討した。PvuIIで切断がおこらないalleleAと切断がおこるBが認められ、FHと正常者のABの頻度はそれぞれ0.88、0.13と0.92、0.08で両者間に差がなかった。2例(SO、KY)のFH患者で約6Kb短い異常遺伝子断片が見い出された。いくつかの制限酵素により、エクソン15を含む約6kbの欠損と考えられた。KYの家系11列中6例に高コレステロール血症を認め、これらの全例に異常遺伝子が認められた。一方正コレステロール血症の5例では、このような異常遺伝子は1例も見い出されなかった。SOの家系でも高コレステロール血症を示す2例(MT、CM)で異常遺伝子が見い出された。MT、CMの新生児臍帯血コレステロール(正常の59±14mg/dl)はそれぞれ78、51mg/dlであった。MTの新生児は異常遺伝子が認められFHと診断できた。この異常LDLR遺伝子を持つ症例をFH_<TONAMI>と命名した。アポ蛋白(Apo)BおよびEは、ともにアポB、Eレセプター(LDLレセプター)に結合する。LDLレセプター(LDLR)の遺伝的異常は、家族性高コレステロール血症(Familial hypercholesterolemia,FH)を発症し、高頻度に冠動脈疾患を合併する。最近LDLR遺伝子がクローン化され、全構造が解明されたので、それをプローブとしてFHのLDLR遺伝子の検討を行った。LDLRのcDNA3′末端側1,9KbのpLDLR-2HHIと、full lengthのpLDLR-3XS1をプローブとして、FHおよび正常者のLDLR遺伝子多型性を検討した。Pvu【II】で切断がおこらないalleleAと、切断がおこるBが認められ、FHと正常者のA,Bの頻度はそれぞれ0,88,0,13と0,92,0,08で両者間に差がなかった。2例(SO,KY)のFH患者で約6Kb短い異常遺伝子断片が見い出された。いくつかの制限酵素により、エクソン15を含む約6Kbの欠損と考えられた。KYの家系11例中6例に高コレステロール血症を認め、これらの全例に異常遺伝子が認められた。SOの家系でも高コレステロール血症を示す2例(MT,CM)で異常遺伝子が見い出された。

MT,CMの新生児臍帯血コレテロール(正常59±14mg/dl)はそれぞれ78,51mg/dlであった。MTの新生児は異常遺伝子が認められFHと診断できた。この異常LDLR遺伝子を持つ症例を【FH_(TONAMI)】と命名した。
多元環・群環・リー環の各表現論を駆使した環の代数構造解明に関する研究

平成9年度には第30回環論および表現論シシポジュームを開催(10月20日-23日・信州大学・長野市)し、本研究と密接な研究をしているカナダ・オンタリオ州のオタワにあるカーレトン大学のV.Dlab教授を招聘した。これらの成果は報告集にまとめられて出版されている。群環を環の立場を超えて、リー環やアソシエーションスキームの立場での考察を行った。また、表現論の手法で大切なホモロジー代数と関係して反射加群」の考察をおこなった。これらに関する研究集会や関連する研究集会で研究発表を行ったり、情報収集を積極的に行った。平成10年度は、研究発表のためにドイツで開催された第9回多元環の表現論国際シンポジューム(ICRA IX)に参加した。これに関連して、本研究のレビューを受けるため、チェコ・プラハのドラッブ教授(昨年招聘・同時にカナダ・カーレトン大学教授である)を訪問した。また、情報提供者として、誘導圏の結果を講義して貰う為に、筑波大学数学系の星野光男講師にきて貰った。昨年に引き続き、研究集会や関連する研究集会に積極的に参加し研究の推進を図った。表現論をカテゴリーを用いて環の同型性、森田同値性より広く分類でき、環の関連性をより詳細に記述出来る手法の開発に着手する方向性が見えてきた。表現論について研究上の情報交換を主に行なった。また、環論および表現論シンポジュウムを長野市(信州大学)で1997年10月20日より23日にまで開催して約100名の参加者を得て種々の研究発表が行なわれた。これにカナダよりDlab教授を招き、さらに活発な討論が行なわれた。これらの成果は近々、報告集として刊行される予定である。具体的には、群環の表現を研究をするのに、これらをふくむAssociation Schemeの導入をはかりこれらの諸性質を調べた。また、Dlab教授がquasi-hereditaryに関する基本的な性質を情報提供したのにともない、これらにまつわる未解決の問題を整理していった。また、Approximation理論に関連して出てくるホモロジー的な性質について考察をして、いくつかの結果が出ており、引き続き整理していく予定である。各種の表現論を用いた研究と情報交換を主に行なった。ドイツで開催された第9回多元環の表現論国際シンポジュームに出席し研究代表者が研究結果の発表を行なった。これに関連してチェコのチャールズ大学を訪問し、昨年度この科研賓で招聘したドラッグ教授(チャールズ大学教授兼カナダ・カートレン大学教授)に、この研究についてレビューを受けると同時に、この研究について更に議論して研究の推進を行なった。誘導圏について、昨年に引きつづき情報提供を受けた。今回は筑波大学・数学系・星野光男氏を招聘し、専門知識の提供を受けこれらの表現論への応用について模索した。代表者および分担者は環論シンポジュームはじめ京都大学数理解析研究所、九州大学等で開催された各種の表現論に関連する研究集会に参加し、講演や聴講を通じ多数の研究者と研究上の討論を行ない研究を深めた。
大脳皮質に特異的に発現する新しい遺伝子wishboneの解析

Differential display法を用いて脳内部位特異的発現を示す因子を探索し、大脳皮質に優勢発現する新規遺伝子群(申請書ではwishboneと仮に名前を付けたが、現在その分布様式をもとにpancortinと呼んでいる)を得た。クローニングの結果この分子群、中央部分に共通部(B部分)を有し、5′側に2種類(A1もしくはA2)、3′側に2種類(C1,C2)の都合4種類からなることが判明した(組み合わせは、A1-B-C1,A1-B-C2,A2-B-C1,A2-B-C2であり順にpancortin-1,-2,-3,-4とする)。ノーザンブロット解析にてその発現を確認後、pancortinの神経組織での遺伝子発現様式を合成DNAプローブを用い(プローブはA1,A2,C1,C2部分に対応するもの)、in situハイブリダイゼーション法にてそれぞれの遺伝子部分ごとに検討した。その結果、嗅球、中隔野内側亜核、大脳皮質(特に2-6層)、海馬(CA1-3,歯状回)、内側手綱核、橋核において、ほぼ同じ部位にA1,C1,C2の強い発現を観察した。一方A2の発現も同様に観察されたが、そのシグナルは弱かった。この事実はpancortin-3,-4と比較し、pancortin-1,-2が同部位にて優勢に発現していることを示す。同時に背側視床(特に腹側核)にてA1,C1,C2の弱い発現を確認した。なお、この視床での発現については、個体発生を迫った検討より、生直後で強く発現した後、成長に伴い減少し、成体にて弱い発現を維持していることを確認した。又、B部分に対応するペプチドを合成、抗体を作成した。成熟マウス大脳組織に対し、ウエスタンブロット解析を行い、それぞれのPancortin蛋白質に対応すると思われる約180,140,60,40(kDa)の陽性バンドを確認した。
イネ根端メリステムの発生と異形根性の制御機構

イネやトウモロコシといったイネ科植物の根系は、その成長過程において順次形成される多くの不定根(冠根)によって特徴づけられる。我々はこれまでに、冠根の発生にはAS2/LOBタンパク質をコードするCROWN ROOTLESS1 (CRL1)が重要であることを明らかにした。加えて、AP2ドメインを2つ持つAP2型転写因子であるCRL5も同様に冠根の発生に必要不可欠であるが、CRL1とは異なる遺伝的経路上で冠根の発生を制御していることを見出した。本年度はCRL5の機能解析を通して、イネにおける冠根形成の分子機構を解析した。crl5変異体は著しく冠根数が減少する。この原因遺伝子CRL5はオーキシン早期誘導性であり、またオーキシンシグナル伝達を制御する転写因子AUXIN RESPONSE FACTOR (ARF)の直接のターゲット因子であることが判明した。CRL5過剰発現体は冠根数の増加が認められ、かつ高濃度のサイトカイニンによる冠根形成の抑制作用に対して耐性を示した。そこで、サイトカイニンシグナル伝達に関与する遺伝子群の発現解析を行った結果、負の制御因子であるOsRR1などのType-A Response Regulatorの発現が野生型にくらべcrl5変異体で低く、逆にCRL5過剰発現体で高かった。さらに、crl5変異体においてCRL5プロモーター下でOsRR1を発現させた形質転換体では、crl5変異体の冠根数の減少がある程度回復していた。したがって、オーキシンにより誘導を受けたCRL5は、サイトカイニンシグナルを負に制御することにより冠根の発生を促すと考えられる。冠根の発生に関わる新たな遺伝子を明らかにするために、日本型イネ由来であり、冠根数が著しく減少するcr17変異体とインド型イネkasalathとの交雑F_2集団を用い、マップベースクローニングによりcrl7変異体の原因遺伝子の単離を試みた。その結果、CRL7遺伝子は第6染色体の約13cMに座乗するリボヌクレオシド二リン酸レダクターゼ大サブユニットをコードしていることが判明した。crl7変異体では幼根の分裂組織の維持に異常が見られ、また冠根原基形成時にはその発生の途中段階で分化が停止していた。一方、茎頂や液芽分裂組織は帯化する傾向が認められた。そのため、今後は分裂組織の発生・分化、および維持機構を制御する遣伝子の転写型遺伝子サイレンシング等について解析を進めていきたい。AP2型転写因子の変異に起因するcrl5変異体は、冠根原基のinitiation自体が進行しないため著しく冠根数が減少する。CRL5過剰発現体の作出を試みた結果、再分化培地ではベクターコントロールに比べ著しく不定根が形成される一方、不定芽形成は抑制されたため、CRLS過剰発現体ではサイトカイニン感受性の低下が示唆された。そこで、サイトカイニンシグナル伝達に関与する遺伝子群の発現解析を行った結果、負の制御因子であるOsRR1などのタイプAレスポンスレギュレーターの発現が野生型にくらべcrl5変異体で低く、逆にCRLS過剰発現体で高い傾向が認められた。したがって、CRL5遺伝子はサイトカイニンシグナルを負に制御することにより、冠根原基のinitiationを促すものと考えられた。
日本語学習者の説明文理解におけるメタ認知の機能に関する実証的研究

読解過程において重要な働きをするのが、読みの目的に応じて理解状況をモニターし、どう読むかを調節するメタ認知である。本研究では、読解中のメタ認知の促進をねらった2種類の質問活動が,第2言語としての日本語文章の理解度に及ぼす影響を比較し,メタ認知の働きの実証を試みた。なお,質問作成では,読み手が主体的に質問となる箇所を選んで質問を作るため,質問解答と比べてモニタリングをより働かせる必要があり,その結果文章の要点情報の整理や精緻化が促されると考えられる。調査は,国内外の中国語を母語とする日本語学習者を対象に行い,重要な部分を選んで質問を作る「質問作成」と重要な部分に関する与えられた質問に答える「質問解答」が,日本語学習者のモニタリングおよび文章理解に及ぼす影響を検討した。その結果,文章理解への影響は課題によって異なり,「質問解答」では文章に明示された再認理解に,「質問作成」では要点理解や因果関係の推論などの再生に,それぞれ効果があることが明らかになった。「質問作成」の要点理解への効果は,文章から「自分で」質問となるところを探し出すプロセスが,文章全体の内容把握に注意を向けさせたことによると考えられた。さらに,読解におけるメタ認知技能を指導する方法として協働学習に着目し,学習者ペアが話し合いながら「質問作成」を行う過程を分析した。その結果,文章の構成や文章理解,互い質問に関するストラテジーを共有し,対話を通して文章理解が変容し,深まる過程がみられた。学習プロセスにおいて他者の視点の導入や作業プロセスの意識化がおこったことから,協働的な学習を通して,質問作成過程で用いられるメタ認知技能をより明示的な形で体験させることができると考えられた。本結果は,読解におけるメタ認知の働きの一端を実証し,読解指導への具体的示唆を得るものである。本研究では、読解中のメタ認知の促進をねらった2種類の質問活動(「与えられた質問に答える活動(質問解答)」「質問を自分で作成する活動(質問作成)」)が,第2言語としての日本語文章の理解度に及ぼす影響を比較し,メタ認知の働きの実証を試みた。これまでに第2言語の読解では,質問作成が理解に及ぼす効果は十分に検討されていない。調査は,国内の日本語学校に通う中国出身の日本語学習者(質問群・解答群・統制群)を対象に行った。読後課題の「正誤判断問題」の得点を分散分析によって分析した結果,解答群の成績は無質問群よりも有意に高く(P<.05),質問解答が再認理解を促進することが示された。続いて実施した,「自由再生」の得点では,再生数においては群間に有意な差はなく,質問作成や質問解答の効果がみられなかった。しかし,自由再生を質的に分析すると,作成群は他の群よりも要点部分をより多く再生し(p<.05),さらに材料文の中で明示されない因果関係等の推論を再生した人数が多いことが示された(p<.01,x^2検定)。モニタリング活性化の違い(質問作成と質問解答)によって異なる理解が促進されることが示された。質問解答が,文章情報を整理させ,明示的な内容に対する理解を促進する一方,質問作成は,材料文に明示された各文の理解や記憶よりも,要点情報の整理や文章情報の関係付け(因果関係など)を促進すると考えられる。
光学活性スピロ環の新構築法の開発と抗腫瘍活性ラクトナマイシン類の不斉全合成研究

Lactonamycinは優れた抗菌抗腫瘍活性を持つ創薬リード化合物として期待されており、発見から15年以上経た今も全合成研究が盛んに行われている。一方、誘導体合成や不斉合成を可能とする効率的な合成法が開発できれば創薬研究へと役立つが、十分な報告例が無い。この理由として、六環性の高度に酸素官能基化された脱芳香族型キラルスピロラクトン骨格の存在が合成を困難としている。初年度は六環性のアグリコン部の効果的な合成法の開発に成功したので、当該年度の申請者の取り組みは本天然物の合成に応用可能な不斉スピロ環構築法の開発を目的とした。申請者の所属する研究室では、超原子価ヨウ素反応剤を利用した、グリーンケミストリーを意識した新規反応の開発を行っている。また、構造的な修飾を施したキラル有機ヨウ素触媒を用いた、高立体選択的な不斉スピロラクトン化反応の開発に成功している。一方、本法を標的天然物へと応用した場合、高い立体選択性が望めないことが初年度の研究により明らかとなった。そこで当該年度は新しいアプローチとして、アルキン側鎖活性化型のスピロ環構築法に着目し、不斉反応へと展開した。結果として、当研究室で開発したキラルヨウ素化合物はアルキン側鎖活性化型スピロ環構築にも有用で、高立体選択的な反応を開発した。本結果は、ヨウ素を用いた炭素ー炭素結合形成を伴う不斉反応において、現在最も高いエナンチオ選択性を発現している。本新手法は芳香環から側鎖アルキンへの求核攻撃により反応が進行するため、電子豊富な芳香環由来の酸化ユニットを含む目的天然物の不斉合成への応用が期待できる。26年度が最終年度であるため、記入しない。抗菌抗腫瘍活性lactonamycinは新しい作用機構を持つ抗生物質として期待される天然物である。誘導体合成や不斉合成を可能とする効率的な合成法が開発できれば創薬研究へと役立つが、高度に酸素化されたCDEF環を含む六環性のアグリコン部と第四級不斉炭素を持つスピロラクトン骨格を有することが合成を困難なものにしており、構造多様な類縁体合成に十分な合成報告例が無い。このような背景下、申請者は有機分子酸化触媒としてキラル超原子価ヨウ素を用いた光学活性スピロ環構築法を開発し、本天然物のDEF環構築を行うことを計画した。最近当研究室では独自に開発したキラルヨウ素反応剤を用いたフェノール類からの不斉オルト位スピロラクトン化反応を見出している。しかし、キラルヨウ素化合物は量論量必要で、触媒条件下では不斉収率が減少するという課題があり、不斉誘起の機構も未解明のままであった。そこで申請者は構造修飾を施したキラルヨウ素触媒類縁体を各種合成し、本不斉環化反応における立体選択性の影響を精査した。結果、ヨウ素のオルト位にエチル基を導入することでエナンチオ過剰率が大幅に向上し、触媒的利用においても高いレベルの不斉誘起を実現した。生成物の不斉収率と触媒構造との相関を基に、更に不斉誘起のメカニズムを明らかにした。続いて、不斉環化体を当研究室が以前に開発した位置選択的なDiels-Alder型反応を用いて別途合成したホモフタル酸無水物と反応させる全合成経路を計画し、環化付加の相手となるAB環ユニットの新規ルート開発に着手した。まず、シアノ基とエステル基が隣接位に共存するB環を5工程で合成し、これを還元することでA環ラクタムを一挙に構築した。以上の方法を経て、最終的に市販品から9工程、全収率22%で目的のAB環ユニットを合成することに成功した。

26年度が最終年度であるため、記入しない。採用初年度目は、新規光学活性スピロ環構築法の開発とホモフタル酸無水物AB環の高効率的な新規合成ルートの開拓を検討した。スピロ環構築では、当研究室で最近見出した超原子価ヨウ素触媒の不斉誘起のメカニズムを初めて明らかとした。この知見を頼りに今後も新規不斉スピロ環構築法の発展が期待できる。また、ホモフタル酸無水物の短工程合成法を計画通りに進め、新規合成ルートの開拓に成功した。以上の研究成果を査読付英語論文2報としてまとめ、複数の学会発表を行っている。このように本年度の研究に関して、期待通り研究が進展したものと判断する。当研究室で見出したアルキン側鎖活性化型スピロ環化反応(Org. Biomol. Chem., 2011, 9, 6899.)に構造修飾型キラルヨウ素類縁体を応用し、立体選択性への影響を検討する。さらに中間体ヨードニウム塩のX線結晶構造解析を行い、得られた構造的知見を頼りに効果的な不斉反応剤の構造最適化を行い、不斉スピロ炭素の新規構築法を実現する。その後、本天然物の光学活性なDEF環を構築する。一方で、別途高効率的に合成したホモフタル酸無水物AB環を用いて、当研究室で見出したDiels-Alder型環化付加反応(J. Org. Chem., 1985, 50, 2273.)を精査する。すなわち本天然物の類縁体合成を見据え、より効果的な環化付加反応への展開を計画している。
脳幹反射を利用した下顎運動機能障害に対する診断基準の確立

本研究は、ヒト感覚閾値と運動機能(咀嚼筋反射)の関連を検討し、下顎運動機能障害患者の診断の可能性を検索するものである。咬筋抑制反射には、潜時15マイクロ秒あたりの一次反射と、潜時30マイクロ秒あたりの二次反射がある。これまでの研究過程で、患者に対する応用に十分可能である結果を得たが、咬合接触関係がこの咬筋抑制反射に与える影響は検討されておらず、咬合接触検査による条件付けは必須であり、末梢におけるコンディションを整えることで、下顎運動機能障害患者に対する、中枢からの影響の検討が可能になると考えられた。したがって、その後の研究は、咬合接触関係の客観的評価を行うことを主眼として行われた。本研究は、ヒト感覚閾値と運動機能(筋反射)の関連を検討し、さらに心理学的データと比較検討し、筋の反射という運動機能に関して、心理学的要因によってこれらが変化する可能性について検索するものであるが、その一部については既に昨年度報告した。しかしながらこれまでの研究過程で、両者を安定して発現させるためには、高強度の電気刺激が必要であり、その際に極度の疼痛を伴うことが判明した。したがって、経皮下での電気刺激では、これからの課題である、実際の患者に対して、同様の実験は困難であるとの結論に達した。そこで、文献検索を行ったところ、経頭蓋磁気刺激装置が無痛での咬筋抑制反射発現に有効であることが判明した。これまでも、この経頭蓋磁気刺激装置を、咬筋抑制反射の発現に応用した研究が行われているが、いずれの研究でも、刺激に伴う疼痛は、経皮的電気刺激に比較して弱いことが報告されている。一昨年度までは、この経頭蓋磁気刺激装置を購入、実験を開始し、経皮的電気刺激に対して、疼痛の少ない刺激強度で、咬筋抑制反射を発現させることに成功した。また、患者に対する応用にも十分可能である結果を得て、その内容を英文誌に投稿し、受理され、発行された。昨年度はこれをさらに応用した形で、年齢による影響に関する測定を終了し、その内容を学会発表し、学術雑誌に投稿し受理された。今後はこれをさらに応用した形で、実際の患者での測定結果を学会発表し、学術雑誌に投稿していく予定である。そこで、経頭蓋磁気刺激装置が無痛での咬筋抑制反射発現に有効であることより、この経頭蓋磁気刺激装置を購入、実験を開始し、経皮的電気刺激に対して、疼痛の少ない刺激強度で、咬筋抑制反射を発現させることに成功した。一昨年度はこれをさらに応用した形で、年齢による影響に関する測定を終了し、その内容を学会発表し、学術雑誌に投稿し受理された。その後、下顎運動機能障害患者への応用を試みたが、末梢における咬合接触関係がこの咬筋抑制反射に与える影響は検討されておらず、咬合関連疾患において咬筋抑制反射の様相を分析するにあたって、咬合接触検査による条件付けは必須であり、末梢におけるコンディションを整えることで、下顎運動機能障害患者に対する、中枢からの影響の検討が可能になると考えられた。したがって、その後の研究は、咬合接触関係の客観的評価を行うことを主眼として行われ、その内容を英文誌に投稿し、受理され、2編の論文が発行された。咬筋抑制反射は、体性感覚神経刺激により咬筋の自発的収縮が抑制される反射である。この反射は、外受容性抑制反射(Exteroceptive Suppression:ES)とも呼ばれており、オトガイ神経領域を刺激すると、早発性および遅発性の2相性に筋活動の抑制が観察される。早発性の咬筋抑制反射(ES1)は刺激から9-15ms後、遅延性の咬筋抑制反射(ES2)は刺激から40-60ms後に発現し、脳幹反射と考えられている。近年、顎関節症や緊張型頭痛、三叉神経痛における病的状態を反映すると報告されているが、臨床応用においては、まだ信頼性や妥当性の検討が必要とされている。

これまでの研究において、刺激強度の標準化が行われ、その発現閾値における男女差について報告されている。今年度においては、磁気刺激に対する咬筋抑制反射を発現させ、その発現様相と年齢の関連を検索するとともに、咀嚼筋の筋・筋膜痛患者や、各種疼痛性疾患を有する患者群の評価において、咬筋の反射を利用した客観的な診断の基準値を示すことを目的とした。これまでに、若年群と高齢群に分け実験を行い、ES1は若年群、高齢群のどちらにも発現したが、ES2は高齢群には発現せず、年齢の影響を示唆する結果を得た。さらに、その原因や意義を解析し、触覚閾値、疼痛閾値の測定を同時に行い合わせて検討した。これまでに得られた結果を基にして、さらに被験者からのデータを追加、収集し,その後最終的なデータ処理を行っている。また確立した方法論や実験結果に関して,日本補綴歯科学会や日本顎関節学会,あるいは国際歯科学会などにて学会発表を行った。さらに臨床における患者データの収集に向けて、外来の基本データもまとめ、論文として発表しており、おおむね順調に進展していると考えられる。平成24年度に行った学会発表での検討に基づき、実験を追加し、データの補完を行う。また分析方法も再検討し、データの整理を終了させる。これらの追加検討をもとに、さらに海外での学会発表を行い、海外協力研究者とディスカッションを重ね、得られた結果をとりまとめ国際学術雑誌に成果の発表を行う。今後は、正常被験者と機能障害を有する患者群において触覚閾値,疼痛閾値,および咬筋抑制反射の連続磁気刺激に対する回復度を比較し、機能障害の客観的診断のための基準値ならびにその症状改善に伴う変化様相を検索する。さらに被験者からのデータを追加、収集し,その後最終的なデータ処理を行う。すなわち触覚閾値,疼痛閾値,および各磁気反復刺激間隔に対する咬筋抑制反射の回復度の平均値と標準偏差を計算し、得られた平均値に対して対照群と実験群を比較するための分散分析を行い、下顎運動機能障害患者の特異性を検討し、さらにその治癒過程での数値の変化を検討していく。また確立した方法論や実験結果に関して,日本補綴歯科学会や日本顎関節学会,あるいは国際歯科学会などにて学会発表を行う。今年度の研究費は、平成24年度に行った学会発表での検討に基づき、実験を追加し、データの補完を行う。その際の実験機器の消耗品の購入に使用する。また、海外での学会発表を行い、海外協力研究者とディスカッションを重ね、得られた結果をとりまとめ国際学術雑誌に成果の発表を行うために、学会参加費、および投稿に伴う諸経費として使用する。筋電図計測をはじめとする各種実験に必要な消耗品およびデータ解析のためのパーソナルコンピュータを購入予定である。また、得られた結果を国内外で学会発表するための旅費、交通費や学会参加費として使用する予定である。
19世紀前半イギリスにおける技術教育政策と産業問題

本研究の目的は、19世紀前半にイギリス政府がなぜ技術教育政策を開始したかを明らかにすることである。具体的には、1837年に、イングランドにおける初めての政府立技術教育機関であるデザイン学校が設立された背景を検討する。二年にわたった本研究の最終年度にあたる本年度は、初頭にまず、イギリスで史料調査を行った。昨年度より、ロンドンとコヴェントリにおいて、当地の19世紀前半における絹業、デザイン学校に関連する史料調査を行っており、本年度初頭の調査時は、これらの調査を引き続き行った。これに加えて、エセックスで絹業を営んでいたコートールド(Courtauld)に関連する史料の調査、LSE Libraryに所蔵されているWebb Collectionに含まれる繊維産業関連の史料調査を行った。帰国後は、これらの史料の整理を行いながら、昨年度から引き続いて行っている研究の成果を論文「19世紀前半イギリスにおける技術教育政策ー「デザインの技術」振興の発想をめぐってー」(政治経済学・経済史学会『歴史と経済』2014年、所収号未定)としてまとめた。論文執筆の過程で、新たな研究視角を見出したため、本年度の後半は、当初計画していた研究内容を修正した。すなわち、これまでは、絹業を中心とした製造業自体がいかなる問題を孕んでいたかという視点から、デザイン学校の設立の背景を論じることに焦点を当てていたのであるが、デザイン学校は、美の判定能力を製造業従事者に身に付けさせるのが一義的な狙いであった点を重視するようになった。これにより、本年度の後半は、美学史・思想史上、美の判定能力の教育の捉え方がどのように変遷したことが、デザイン学校が設立される背景として働いたのかの研究に向かった。この研究成果については、来年度、研究報告会で発表する予定である。計画通り、研究成果を論文にまとめた点で、本年度の計画は順調に進展している。また、この論文執筆の過程で、計画時点においては予想していなかった、今後研究を進めていくための新たな視角の発見、視野の広がりが可能となった。この点で、研究は,当初の計画以上の進展を見せているといえる。当初の研究計画では、デザイン学校に端を発する技術教育政策が、当時のイギリスの製造業にいかなる問題点が発見されたからこそ開始されたのか.という点を明らかにすることに主眼を置いていた。しかし、今後は、これについて、より大きな視点、すなわち、当時、美がどのようなものとして捉えられ、また美の判定能力の教育の仕方がどうあるべきと考えられたからこそ、デザイン学校が設立されたのか、という点を明らかにしていくことが課題であると考えている。そこで、研究計画には変更が生じ、まず、美の判定能力の教育に関する考え方が、政治経済学思想史上、どのような変遷を辿ったのかを明らかにしつつ、そのなかで、デザイン学校を設立した人々の思想を歴史的文脈に位置付けていくという研究方策を取る。本研究の目的は、19世紀前半にイギリスで行われた技術教育への国家介入と、当時の製造業上の問題との関連性を明らかにすることである。そのために本年度行った研究内容は二つである。第一に、イングランドにおける初の政府立技術教育機関であるデザイン学校(School of Design)を中心に、1830年代に「デザインの技術(arts of design)」の振興運動が教育政策として結実した背景を考察した。デザイン学校の設立の動きをどう理解するかは、その多面的な性格ゆえに、現在も論争中である。報告者は、デザイン学校評議会議事録や、デザイン学校校長の個人文書(本年度末の史料調査時に収集)等を用い、デザイン学校設立の目的が絹業の振興にあることを明示し、当時のイギリスにおける絹業の位置付けを行いつつある。第二に、デザイン学校設立の発端となった絹業が当時いかなる問題を抱えていたのかを分析するための基礎的作業を進めた。先行研究の収集・整理、データの収集・入力を行い、イギリス絹業の様相を描き出すことを試みた。また関連しうる文書館への問い合わせにより、史料の所在の情報を集めた。その後、具体的にいかなる地域、企業を対象にするのが適当であるか、対象の特定に努めた。これらの作業をふまえ、年度末にはロンドンとコヴェントリにおいて史料収集を行った。コヴェントリ・ヒストリー・センターでは、アーキヴィストや、同センターが位置するハーバート・ミュージアムのキュレーターの方の協力を得ながら調査を進めており、来年度にも継続予定である。

論文執筆の過程で、新たな研究視角を見出したため、本年度の後半は、当初計画していた研究内容を修正した。すなわち、これまでは、絹業を中心とした製造業自体がいかなる問題を孕んでいたかという視点から、デザイン学校の設立の背景を論じることに焦点を当てていたのであるが、デザイン学校は、美の判定能力を製造業従事者に身に付けさせるのが一義的な狙いであった点を重視するようになった。これにより、本年度の後半は、美学史・思想史上、美の判定能力の教育の捉え方がどのように変遷したことが、デザイン学校が設立される背景として働いたのかの研究に向かった。この研究成果については、来年度、研究報告会で発表する予定である。項目9の第一の点、すなわち技術教育政策分析について、論文執筆を通じて今年度中に結論を下すという、当初掲げていた目標には至らなかった。計画通り、研究成果を論文にまとめた点で、本年度の計画は順調に進展している。また、この論文執筆の過程で、計画時点においては予想していなかった、今後研究を進めていくための新たな視角の発見、視野の広がりが可能となった。この点で、研究は,当初の計画以上の進展を見せているといえる。項目10で言及した、新たに存在についての情報を得たコヴェントリの絹業に関連する史料を中心に、史料調査を来年度初めに行う。また、項目11で述べた通り、技術教育政策についての考察に区切りが付いていないため、この作業に専念する時期を設ける。今年度末の史料調査で新たに入手した史料を使うことで考察の結果が出る見込みである。当初の研究計画では、デザイン学校に端を発する技術教育政策が、当時のイギリスの製造業にいかなる問題点が発見されたからこそ開始されたのか.という点を明らかにすることに主眼を置いていた。しかし、今後は、これについて、より大きな視点、すなわち、当時、美がどのようなものとして捉えられ、また美の判定能力の教育の仕方がどうあるべきと考えられたからこそ、デザイン学校が設立されたのか、という点を明らかにしていくことが課題であると考えている。そこで、研究計画には変更が生じ、まず、美の判定能力の教育に関する考え方が、政治経済学思想史上、どのような変遷を辿ったのかを明らかにしつつ、そのなかで、デザイン学校を設立した人々の思想を歴史的文脈に位置付けていくという研究方策を取る。
メチシリン耐性の転移メカニズム

1。3つのタイプのSCCmecの全塩基配列の決定と遺伝子の検索。ccrA,ccrBを温度感受性plasmid pYT3にクローニングしたplasmid,pSRを作成し、N315にエレクトロポレーションで挿入した結果、SCCmecは部位特異的に脱落すること、脱落に伴って、環状中間体を生成することを見いだした。この環状中間体上のSCCmecと組み換えをおこす部位をさきのplasmid,pSRにクローニングし、pSRattを作成し、MSSAに同様にエレクトロポレーションで挿入すると、pSRattが染色体状に部位、及び方向特異的に挿入されることを見いだした。この脱落と挿入はccrA及びccrBのいづれか一方を欠落させると、起こらなくなるため、両遺伝子の存在が必要であることが証明された。CcrA,CcrB蛋白の性質、SCCmecの伝達の具体的な証明は、検討を継続中である。1。1.3つのタイプのSCCmecの全塩基配列の決定:メチシリン耐性を規定するmobilegenetic elementであるSCCmecには、少なくとも3つのタイプ(Type-I,Type-II,TypeIII)が存在する。さきに全塩基配列を決定していたType-II N315のSCCmecに加えて、Type-ISCCmecの代表株NCTC10442及びType-IIISCCmecの代表株85/2082のSCCmecの全塩基配列を決定した。これらSCCmecの中央にはmec-I-mecR1-mecA遺伝子複合体(あるいはΔmecR1-mecA複合体)が存在している。この複合体及び近辺の領域は塩基配列の上でも、非常によく一致している。これに対してその他のSCCmec上の領域はそれぞれのタイプに特徴的な構造をしている。しかし、それぞれのタイプに特有な両末端の逆向き塩基配列、ccrA,ccrB遺伝子の存在、これらが染色体上の同じORF(orfX)に挿入されている点では共通性をもっている。Type-ISCCmec上にはセリンとアスパラギンの二つのアミノ酸の繰り返し配列を持つ1698アミノ酸から構成されるORFが存在することが見いだされた。このORFはS.aureusの細胞壁に結合している表層蛋白と非常に良く似た構造をもっている。またType-III SCCmec上にはccr遺伝子と高いホモロジーを示すORFがccrA,ccrB遺伝子とは別に存在していることが明らかとなった。2。CcrA,CcrBの機能:これまでに作製したN315由来のCcrA2,CcrB2をクローニングしたプラスミドpSRに加えてCcrA3,CcrB3をシャトルベクターpYT3にクローニングしたプラスミドpSR3を作製し,N315にエレクトロポレーションで挿入し、mecの脱落を検討した。しかし、pSRの場合とは異なり、mecの脱落は殆ど見られなかった。この点は今後さらに、検討する予定である。1。2。MRSA,MSSA,MRC-NS、MSC-NSにおけるccrA,ccrB遺伝子の存在をPCR法を用いて検討した結果、MRSAの殆どは、いずれかのtypeのccrA,B遺伝子が検出されたが、MSSAでは、全く検出できなかった。MRC-NSの場合は、ccr遺伝子が検出されるものと検出されないものが存在した。また幾つかのMS-CNSにおいて、ccr遺伝子が検出された。この知見は、SCCmecの起源を明らかにする上で大変重要である。3。mecの伝達を解明する目的でSCCmecのファージによる伝達及び接合伝達の検討を行った。(1)SCCmecをphage transductionで伝達する系を確立した。このphage transductionとccr遺伝子との関連を現在検討中である。(2)SCCmecの伝達実験SCCmecの中にはtransferに関与する遺伝子は見いだされなかった。Filter matingをおこなってみたが、これまでの検討した範囲では、接合伝達は見られなかった。
矯正力による歯根膜微小血管の機能的変化と歯周組織変化との対応

本研究は、矯正力による歯根膜血管網の機能的変化および微細構造の変化、さらにそれらに引き続く歯周組織変化との関連を検討することを目的として行われ、微小循環顕微鏡システムにより血管幅径および血流速度の測定など、歯周組織の血管網の動態をリアルタイムで観察する方法を確立し、さらに連続組織切片の3次元再構築と同一切片のイオンエッチングによる歯根膜の微細構造観察により、歯根膜血管網の変化と歯周組織変化との対応を検索する方法を確立した。微小循環顕微鏡システムによる歯周組織血管網の観察については、ラットを使用し上顎右側第一臼歯の近心歯頸部歯肉にLED光をあて血管網の観察を1分間行った。得られたビデオ画像データを基に、血管径および血流速度を測定した。その結果、次の知見が得られた。1.網目状に走行する血管が多数観察され、血管内を赤血球が流れていく様子が明瞭に観察された。2.血管の直径は平均34.44±4.47μm、血流速度は平均337.70±31.24μm/sであった。また、連続組織切片の3次元再構築とイオンエッチング法による微細構造観察では、ラットを用いて歯根膜血管網の分布と生理的歯根吸収の発現との関連を検討した。下顎の右側第一・第二臼歯間歯周組織の試料を採取し、連続切片の光顕観察を行った。さらにイオンエッチングを施し、走査電顕観察し破歯細胞を同定した。連続切片はコンピュータを用いて3次元再構築し、歯根膜血管網の走行を立体的に観察した。その結果、以下の知見が得られた。1.歯根膜血管は、歯根膜のほぼ中央から歯槽骨よりに位置していた。2.生理的歯根吸収が認められる部位では、吸収窩に対応して歯根寄りに走向する血管が確認され、歯根吸収の発現は血管の走行に影響されることが示唆された。試料として、生後15週のウィスター系雄性ラット(体重平均446.5g)を2匹使用し、ジエチルエーテルによる吸入麻酔下にて実験を行った。血管の観察には、微小循環顕微鏡VCSおよびビデオ解析ソフトCapiscopeIIを用いた。また、血管径および血流速度の測定は、500倍のレンズを使用して周波数6.25Hzにて行った。ラットを仰臥位にて固定し、開口させ上顎右側第一臼歯の近心歯頸部にラットの体温とほぼ同じ温度に調節したセサミオイルを観察部位に塗布し、LED光に対して垂直にプローブをあて観察を1分間行った。得られた画像データからビデオ解析ソフトで血管径および血流速度を算出した。以上の結果、次の知見が得られた。1.観察方法について:LEDの光強度の条件を変えて操作を行い、血管を観察するために最も適した光強度をほぼ一定に定めることができた。また、ラットを仰臥位にて固定する際に固定部位を極力少なくし、血流循環が生理的条件下に近いものとなるように、強い体腔の圧迫を避けた観察法を確立した。さらに、血流速度が室温によって変化する可能性を考慮し、測定時の室温が常に一定の温度に保たれた恒温室にて測定する方法を確立した。2.観察結果について:第一臼歯近心歯頸部歯肉において、ループ状に走行する血管が多数観察された。また、血管内を赤血球が血流に沿って流れていく様子が明瞭に観察された。

血管の直径は、任意に選択した10本の血管を測定したところ、平均35.4±6.78μmであった。血流速度も同様に選択した10本の血管を測定し、平均流速334.36±69.28μm/sであった。本研究では、歯周組織の血管径および血流速度の測定に基づき、血管網の機能的変化をとらえる検査方法の確立を目的として、微小循環顕微鏡システムを利用して歯頸部歯肉血管網の観察を行っている。試料として、生後15週のウィスター系雄性ラットを14匹使用し、ジエチルエーテルによる吸入麻酔下にて実験を行った。微小循環顕微鏡VCSおよびビデオ解析ソフトCapiscope IIを用いて、上顎右側第一臼歯の近心歯頸部歯肉の血管の観察、血管径および血流速度の測定を行った。また、同部位の歯周組織を光学顕微鏡で観察するとともに、血管鋳型標本を作製して走査型電子顕微鏡にて観察した。以上の結果、次の知見が得られた。1.第一臼歯近心歯頸部歯肉において網目状に走行する血管が多数観察され、血管内を赤血球が血流に沿って流れていく様子が明瞭に観察された。2.血管の直径は平均34.44±4.47μm、血流速度は平均337.70±31.24μm/sであった。3.血管鋳型標本から、歯頸部歯肉は毛細血管が網目状に分布しており、微小循環顕微鏡システムの観察結果と一致していた。今回われわれが使用した微小循環顕微鏡システムにより歯頸部歯肉の血管網の動態をリアルタイムで観察することができた。上記の知見については第64回日本矯正歯科学会大会(2005、横浜)において報告した。今後の課題としてラットの呼吸性体動による画像のブレを少なくする固定法の確立が挙げられる。これまでに、微小循環顕微鏡システムを用いてラットの歯頚部歯肉の血管網を観察し、血管径の計測や血流速度の測定を行い、血管網の機能的変化をとらえる検査方法の確立をすすめてきた。今年度は、矯正力を加えた時に生じる歯根膜血管の形態的変化の把握を目指して、連続組織切片の3次元構築とイオンエッチング法による微細構造観察により歯根膜血管網の分布を検索し、さらに生理的歯根吸収の発現との関連を検討した。実験動物として生後6週齢のSD系ラットを用い、下顎の右側第一・第二臼歯間歯周組織の試料を採取した。試料採取後、通常の透過電顕試料作製法に準じて、固定、脱灰、脱水、エポキシ樹脂包埋した。その後0.5μm横断連続切片を作製し、トルイジンブルー染色して連続切片の光顕観察を行った。さらにイオンエッチングを施し、走査電顕観察し破歯細胞を同定した。連続切片はコンピュータを用いて3次元再構築し、歯根膜血管網の走行を立体的に観察した。その結果、歯根および歯槽骨間の歯根膜血管の分布には、以下のような特徴が観察された。1.歯根膜血管は、歯根膜のほぼ中央から歯槽骨よりに位置していた。2.生理的歯根吸収が認められる部位では、吸収窩に対応して歯根寄りに走向する血管が確認され、さらに歯根の吸収窩へ新生血管の形成がみられた。3.歯根の吸収窩に破歯細胞が認められる部位では、破歯細胞に近接する血管が確認された。連続組織切片の3次元構築と同一切片のイオンエッチングによる歯根膜の微細構造観察は、歯根膜血管網の変化と歯周組織変化との対応を検索する方法として、極めて有効であることが確認された。なお以上の知見については、第65回日本矯正歯科学会大会(2006、札幌)および第33回福岡歯科大学学会総会(2006、福岡)において報告した。
実験高血圧症の発症と進展における各種環境因子の影響:高血圧遺伝因子との関係

本研究では遺伝性の実験高血圧症の発症と進展における諸種環境因子の影響を明らかにするべく、自然発症高血圧ラット(SHR)とその対照正常血圧ラット(WKY)、両者の交雑によるF1を用いて、環境因子のうち糖尿病の合併、心理的肉体的ストレス、高食塩食負荷等の血圧、心血管合併症、致死率、循環動態やホルモンに及ぼす効果を観察し、降圧治療のストレス循環反応への効果についても検討した。ストレプトゾトシン糖尿病はSHRでのみ斃死を引き起し、代謝面の変化もSHRの方がWKYより大きく、高血圧症に糖尿病が合併するとより大きな影響を与えることが示された。重症糖尿病はSHRで冠血流予備を減弱せしめ、冠動脈疾患のリスクを高めることが示唆された。また中等度であれ糖尿病の合併は長期的には必機能を低下せしめ、心筋に大きなリスクを加えることが示された。振動ストレスやアルコール摂取、高食塩食等を単独で慢性負荷するとSHRするとSHRでのみ振動ストレスにより血圧がより大きく増大した。これと高食塩食との組み合せによりSHRでsynergisticな効果が現れた。交雑F1では血圧値と心肥大の程度は両親群の中間値に収歛したが、F2、F3では分布が広く散り、血圧は正常だが心肥大の残る群があり、アルコールや高食塩負荷など環境ストレスを加えると、振動ストレスに対して両親の中間の血圧増加反応を示した。Ca拮抗剤やβ遮断剤の長期投与はSHR群でのみ降圧と心肥大の退縮をもたらし、基礎時の血行動態とそのストレス反応を抑制した。このように各種環境因子はSHRの高血圧遺伝子に対して各々ユニークな仕方で関与する。幾つかの環境因子は高血圧を促進し、心血管合併症を増悪させるが、特に糖尿病の併発は影響が最も大きく、その適正を対処が不可欠で、この観察は臨床的にも重要な示唆を与えるものである。本能性高血圧の発症における環境因子の関与の影響を明らかにするため,遺伝的高血圧モデルである自然発症高血圧ラット(SHR)とその対照正常圧ラット(WKY)を用いて高食塩やアルコールの過剰摂取,慢性心理的肉体的ストレス,二次性糖尿病の誘発の長期慢性負荷実験を行った.これらの処置の血圧に及ぼす効果を意識下で測定し,またある実験では全身局所の血行動態や血中ホルモンを測定した.アルコールを連続及び間欠投与するとWKYでは血圧は不変だが, SHRではむしろ血圧は有意に下降しヒトの成績と異った.この処方に1%食塩を加えても血圧値には影響なく,血中カテコラミン値も変化がなかった. SHRとWKYに急性心理的肉体的ストレスを負荷すると血圧,心拍出量,全抹消抵抗及び血中カテコラミンの増加はSHRの方が過大反応を示した.このストレスを8週間反復すると両動物共徐々に反応が低下し,容易に慣れの減少を示したが,それでもSHRの方が常に血圧その他の反応が大であった.左室体重比で評価される心肥大は両群共増大したが, SHRの方が増加度が大であった.また興味深いことにこのストレス反応を年齢の関数として調べてみると老年期より若年期の方が過大であった.

更にSHRとWKYにストレプトゾトシンによる糖尿病を誘発し血圧と代謝に及ぼす効果を容量反応関係に注意し検討した. SHRでは降圧が起こると共に致死率の増加が見られたが, WKYで降圧傾向があるものの,致死率は低く,また糖尿病随伴症状もSKRの方が大であり,遺伝的高血圧と糖尿病代謝障害は相互に干渉しあうことが明らかになった.以上の研究結果より遺伝因子に依存して発症進展する高血圧への各種環境因子の影響は一様でなく,ラットモデルとヒトの高血圧症の差もあるので,多角的複眼的アプローチの必要性が示された.今年度は遺伝的高血圧での環境因子の関与を更に検討するため、自然発症高血圧ラット(SHR)とその対照正常血圧ラット(WKY)及びその交雑によるF1を用いて、環境因子の中の幾つかの慢性負荷の心血行動態、ホルモン、致死率等に及ぼす影響を観察し、降圧剤治療のストレス循環ホルモン反応への効果についても検索した。糖尿病併発はSHRでのみ斃死を引き起し、高血圧が糖尿病と合併するとより重症となることが示された。重症糖尿病はSHRで冠動脈の血流予備を減少せしめ、冠動脈のリスクを高める可能性を示した。また中等度であれ糖尿病が併発すると長期的には収縮期の特にストレス負荷時の心機能を低下せしめ、より大きなリスクをもたらすことが明らかにされた。この観察は臨床的にも重要な意義をもち、高血圧患者に糖尿病の合併がある場合、強力な治療の適応となることを示している。振動ストレスやアルコール摂取、高食塩食など単独で慢性的に負荷すると、SHR群でのみ振動ストレスにより血圧が更に増加し、これと高食塩食の組み合せではSHRでsynergisticな効果が見られた。F1では血圧値と心肥大の程度は両親の中間値に相当し、このF1ラットを用いて各種の環境ストレスを長期間負荷したところ、振動ストレスに対しては両親の中間の血圧増加反応、アルコールにたいしてはむしろ無反応、高食塩食に対しては低反応を示した。なお興味あることにF2、F3を作成して血圧と心肥大の相関をみるとある群で血圧は正常にもかかわらず心肥大が発生することが認められ、SHRの心肥大の機構につき示唆が得られた。ジルチアゼムやβ遮断剤の長期治療はSHRで降圧と心肥大退縮を来し、SHRでより大きな基礎時とストレス時の血行動態抑制効果を示した。これらの薬物治療による抗ストレス効果は主に基礎時の血行動態の抑制を介して発現することが示された。
降下テフラを指標とした斜面崩壊の長期的な発生履歴に関する研究

1.北海道の沙流川の支流小流域(面積0.16km^2、地質は新第三紀礫岩)を調査地として、空中写真判読によって過去30年間の崩壊発生域と面積、また降下テフラTa-b(320年前噴出)とTa-c(3000yBP噴出)の斜面での消失域と斜面微地形の調査から過去320年間および過去3000年間の崩壊発生域と面積を、それぞれ調べた。2.調査流域の全斜面において明瞭な遷急線(平均傾斜は上部斜面-32°、下部斜面-44°)が存在した。過去30年間の崩壊は全て遷急線下部斜面で発生し、30年間の平均で崩壊発生面積2400m^2/km^2/yr、崩壊土砂量1200m^3/km^2/yrであった。また、過去320年間の崩壊も全て遷急線下部斜面で発生しており、320年間の平均で崩壊発生面積1900m^2/km^2/yr、崩壊土砂量1000m^3/km^2/yrであった。この30年間と320年間との崩壊速度の良好な一致から、崩壊速度は過去320年間で変化していないことが判明した。3.遷急線上部斜面と下部斜面でのテフラ分布様式、Ta-d(8000yBP)の分布域に位置する既往調査地の結果、さらに沙流川の下刻開始年代から、遷急線上部斜面では過去8000年以上崩壊が発生しておらず、下部斜面では8000年前以降崩壊が反復してきたことがわかった。320年間の崩壊速度に基づき、遷急線下部斜面における同一部位での崩壊再現期間は365年、8000年間での崩壊反復回数は22回と計算され、さらにこの反復回数は下部斜面の8000年間の削剥深から検証された。以上と2の結果とあわせると、過去8000年間の崩壊速度は現在(過去30年)の速度と同等であり、斜面崩壊が長期間にわたって定常的に発生していることが判明した。4.既往調査地(白亜紀泥岩)では崩壊再現期間641年、反復回数12回であり、地質と調和的な崩壊頻度の相違が認められたが、8000年間の平均崩壊速度は両調査地ともに約1000m^3/km^2/yrで同等だった。
新生児期ストレスによる脳発達への影響を理解するための新戦略

本研究では、新生児期においてシナプス発達の指標となる液性因子の同定を試みている。これまでの研究から、コレステロール代謝物である24HCが発達過程におけるシナプス形成のマーカーとなる可能性が示唆されてきたが、本年度は同様のマーカーとなり得る液性因子やペプチドホルモンを探索した。具体的には、BDNFの刺激によって発達過程の神経細胞から分泌の制御が起こり得る蛋白質やペプチドの遺伝子の発現に注目し、その同定を試みた。ラット由来の初代培養神経細胞を用いてトランスクリプトーム解析を行った結果、BDNF刺激に応じて変動する複数の液性因子を確認することに成功した。これらの中には、既にBDNFによって発現誘導されることが知られる液性蛋白質やペプチドも含まれていたが、新規に誘導が確認された遺伝子を見出すことにも成功した。さらに、BDNFによって発現が減少する液性因子も確認することができた。この分子はラットの胎児期から生後初期におけるニューロンの発達に関与する分子として知られており、また脳脊髄液中にも放出されることが知られている。そのため、同分子の発現抑制がシナプス形成期の開始に関連する新しいマーカーとなる可能性が考えられた。次年度に実施する予定であった研究内容を本年度に実施し、次年度に行う予定であった研究を本年度に実施したが、全体の進捗状況としてはほぼ予定通りである。今後は、24HC合成酵素であるCYP46の機能解析と新しく見出されたマーカー候補分子とシナプス形成殿関係解明を行う。そして、実際にストレスの付加がシナプス形成に影響を及ぼすことが知られているラット母子分離モデルを用いて、各シナプスマーカー候補分子の発現とシナプス形成が相関することを実際に確認する。これまでの研究により、脳の神経細胞で主に合成され、血中へと放出される脂質の24ヒドロキシコレステロール(24HC)が、シナプス形成の誘導因子である脳由来神経栄養因子(BDNF)によって誘導されることが明らかになったことから、我々は血中の24HC量が新生児期の脳におけるシナプス発達のマーカーとなる可能性を考え、本研究を実施している。本年度は主に、24HCの合成酵素であるCYP46の発現様式の解明を目的として、ラット初代培養神経細胞を用いた解析を行った。具体的には、第一にシグナル伝達系の阻害剤を用いてCYP46の発現に関与するシグナル経路の探索を行った。その結果、予想外にも特定のシグナル伝達系の阻害によって、大脳皮質神経細胞におけるCYP46のmRNAの発現が増加するという結果が認められた。これは、特定のシグナル系の減弱がCYP46の発現に影響を与える可能性を示しているため、今後、より詳細な解析を必要とすると考えられた。また第二に、BDNF投与後に起こる24HC増加のタイムコースについて検討を行い、BDNFによって24HCの合成が明らかに増加するまでには、少なくとも2日ほどかかることを確認した。この結果は、BDNFの刺激を脂質の変化量として計測できるようになるまでには数日のタイムラグを要することを示している。さらに、CYP46のシナプスへの発現を解析するためのコンストラクトの作成なども実施し、来年度に向けた実験に備えた。ほぼ計画通り研究が進展している。今後は、CYP46の発現様式や局在の解析を行い、24HCの発現増加とシナプス形成との関係をより明確に規定できるよう研究を進展させる。具体的には、CYP46のシナプスへの局在がシナプス形成とどれほど関連しているかについての知見を求める。また、実際にストレスの付加がシナプス形成に影響を及ぼすことが知られているラット母子分離モデルを用いて、CYP46の発現とシナプス形成が相関することを実際に探索する。研究の一部を次年度に持ち越したため、そのための研究資金を次年度に持ち越した。