hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
法医鑑定における薬物分析のシステム化とフィールドスタディ

標準物質を用いなくても薬物の確認と濃度推定が可能なGC/MSによる画期的スクリーニング法を開発し、法医実務に応用した。さらに催眠鎮静剤43種についてLC/MSによる高感度定量法を確立した。2003年から2006年の4年間の中毒死関連の2つの統計データを用い、我が国の中毒発生状況の実態について調査を行った。さらにフィンランドのすぐれた薬物分析システムを調査することで、実務的な側面からわが国に最も適した薬物分析システムの構築を試みた。法医解剖に伴う薬毒物分析において、トライエージなどの簡易なスクリーニング検査に引き続いて行われるべき確認検査や定量分析は、不十分な分析設備と専門家の不足により一部の法医学教室でしか行えず、薬物の分析レベルは施設によって大きな隔たりがあるのが現状である.本研究では、(1)乱用薬物と睡眠薬に特化した精度の高いスクリーニング法を完成させ、研究協力機関を募って全国規模のフィールドスタディを行うことで、わが国の法医解剖における薬物鑑定の現状とニーズを把握する。(2)さらにわが国と同様の解剖体制をとっているフィンランドのすぐれた分析システムを調査する。(3)実務的な側面からわが国に最も適した薬物分析システムを構築する。1)乱用薬物および催眠鎮静剤のGC/MSによるスクリーニング法の確立確立した30種の乱用薬物の一斉スクリーニング法をもとに、ざらに25種の催眠鎮静剤を加え、各薬物の(1)保持時間と(2)質量スペクトルさらに(3)イオン強度の比をGC/MSの精度管理・相対定量ソフトウエアNAGINATA^<TM>を用いてデータベース化した。このデータベースを用いて標準物質を所持しなくても薬物が存在するかどうかを迅速に判定し、試料中濃度も概算可能な画期的なスクリーニング法を確立した。2)フィンランドの薬物分析システムの調査フィンランドヘルシンキ大学法医学教室中毒部門、Erkki Vuori教授、トゥルク大学Pekka Saukko教授の協力の下、法医鑑定に伴う薬毒物の分析ジステムについて、主に下記の点について調査を行った。(1)解剖機関での試料の採取、送付の方法(2)分析機関での試料の搬入、保存、分析、データの集積、結果の解釈、報告書作成、結果の報告、試料の破棄までの実際の流れ(3)個々の薬物群ごとの実際の分析方法(4)法医解剖独特な特殊試料(腐敗臓器、骨髄など)の分析(5)分析試料数、勤務者人数、分析費用の捻出先、去年間予算(6)分析結果が裁判で争われる時の対応方法催眠鎮静剤およびその代謝物計43種を同時に高回収率で抽出可能な方法を確立した。さらにLC/MSによる分析条件の検討も行った。1)標準物質を必要としないガスクロマトグラフィー・質量分析(GC/MS)によるスクリーニング法の開発わが国の中毒起因物質の調査結果を元に絞り込んだ約250種類の分析対象薬物のうち、医薬品について、127種の遊離体に加え、156種のアセチル化反応物の薬物情報を、新たに開発されたGC/MS分析のための精度管理・相対定量ソフトウェアNAGINATAを用いて登録し、2種の薬毒物データベースを構築した。このデータベースを用いて薬毒物の添加血液および解剖試料について分析を行ったところ、極めて短時間に正確な薬毒物スクリーニングが可能であることが判明した。本スクリーニング法は標準物質を必要とせずに薬毒物の存在の有無とおおよその濃度が簡単な操作で確認できることから、法医鑑定、鑑識科学、臨床医学の分野で幅広く応用可能と考えられる。2)フィンランドにおける法医鑑定に伴う薬物分析システムの調査報告書の作成前年度に行った「フィンランドにおける法医鑑定に伴う薬物分析システムの調査研究」の結果を詳細にまとめて論文として公表した。この調査結果により、わが国の望まれる薬物分析体制についての大きな指針が得られたことは、将来のわが国にとって意義あることと考える。3)液体クロマトグラフィー・質量分析(LC/MS)による催眠鎮静剤の一斉分析法の確立催眠鎮静剤およびその代謝物の分析は、薬物が微量であるため困難を伴うことが多い。今年度は計43種の催眠鎮静剤を同時に高感度で定量できる画期的なLC/MSによる分析法を確立して鑑定に応用することが出来た。この方法は高感度であるため犯罪目的で用いられた微量の睡眠薬の検出にも大きな成果が得られた。1)わが国における中毒発生状況の調査と分析対象薬毒物の絞込み前年度までに、156種の医薬品および乱用薬物についてガスクロマトグラフ・質量分析法(GC/MS)のためのデータベースを構築した。そこで今年度はデータベースの拡充をすることとしたが、それに先立ち、わが国の中毒発生状況を正確に把握する必要があると考えた。そこで中毒死関連の2つのデータ(科学警察研究所編:薬物による中毒事故等の発生状況、日本法医学会編:鑑定例概要)の2003年から2006年の4年間について中毒起因物質の種類とその出現頻度について調査を行った。

その結果、分析が必要な最重要薬毒物として314種を選定することに成功した。その内訳は揮発性毒物36種、乱用薬物14種、医薬品170種、農薬60種、天然毒13種、その他21種類である。上記の研究結果に基づき、薬毒物のデータベースへの追加を試みた。まず候補となる薬毒物約70種類をGC/MSに導入、分析を試みた。その中からGC/MSで分析可能であった塩基性薬物について遊離体30種アセチル化体50種について、保持時間と質量スペクトル、検量線情報をNAGINATAのソフトウェアを用いて登録し、データベースの追加を行った。続いて、酸性薬物約30種類について現在検討中である。3)生体試料からの酸性薬毒物の抽出法の確立非ステロイド性抗炎症薬および大麻の代謝物などのカルボキシル基を含む酸性薬物を効率よく抽出可能な方法を検討した。その結果、Focusカラムを用い、抽出溶媒を工夫することで、効率のよい酸性薬物の抽出法を考案した。酸性薬物30種類、農薬80種類についてGC/MSに導入、分析を試みた。その中からGC/MSで分析可能であった酸性薬物20種、農薬70種について、酸性薬物はTMS化体、農薬は遊離体として、保持時間と質量スペクトル、検量線情報をNAGINATAのソフトウェアを用いて登録し、データベースの追加を行った。これにより、本データベースの登録薬毒物は約300種類となり、多成分同時スクリーニングが可能となった。2)生体試料からの酸性薬毒物および農薬の抽出法の確立非ステロイド性抗炎症薬および大麻の代謝物などのカルボキシル基を含む酸性薬物を効率よく抽出可能な方法を検討した。その結果、逆相-陰イオン交換ミックスモードカラム(OASIS MAX)を用い、抽出溶媒を工夫することで、血液中から効率よく酸性薬物を抽出可能な方法を確立した。引き続き農薬中の抽出法について検討、酸性条件下での液々抽出法とFocusカラムを用いた固相抽出法のいずれにおいても良好な結果を得ることができた。3)薬物分析支援のためのネットワークの構築本研究の成果である薬毒物データベースを用いたスクリーニング法は、12大学の法医学教室を含め17機関で稼働することとなった。そこで、これらのすべての施設での薬毒物検査を支援するため、利用者相互の情報交換を目的としたメーリングリストの立ち上げを行った。さらに分析者の知識と技術の向上を目的とした講習会を開催することで、薬物分析機関を支援するシステムの構築に成功した。
ErドープSi量子井戸発光デバイスの開拓

室温動作するSi系1.5μm帯発光素子実現に向け、ErをドープしたSi量子井戸を作製し、発光特性評価を行った。検討した2種類の方法のうち、SiO2上へのErドープSi成長を利用する方法により、多結晶ではあるがErドープSi量子井戸の作製に成功した。フォトルミネセンス測定の結果、Erの内殻遷移による1.54μmの室温発光を得ることができた。Siの量子井戸化により温度消光が低減されるという本研究提案が実証できた可能性がある。本研究では,室温動作するSi/SiO2系1.5μm帯発光素子実現に向け,(1)ErをドープしたSi量子井戸をSOI構造を用いて作製(2)フォトルミネセンス測定により,ErドープSi量子井戸の発光特性を評価することを目的としている。平成19年度は上記(1),すなわちErをドープしたSi量子井戸をSOI構造を用いて作製することを目指して研究してきた。主要な結果は以下のとおりである。・熱酸化炉を設備備品として購入し,立ち上げを行った。バルクSiウエハを均一に酸化できることはもとより,UNIBONDと呼ばれる市販(001)SOIウエハを均一に薄層化することが可能となった。・SOIウエハを熱酸化により薄層化することで,23nmの厚さのSi量子井戸構造を実現した(原子間力顕微鏡およびエリプソメトリにより確認)。現在,フォトルミネセンス測定を進めている。また,透過電子顕微鏡などによりSi井戸の構造をより精密に評価する予定である。・100nmの厚さのSOIウエハ上にErおよびOを同時ドープしたSiエピタキシャル結晶層を分子線エピタキシ法により形成できることを確認した。今後,上記のSi量子井戸作製技術とEr:OドープSiエピタキシャル成長技術を融合し,ErドープSi量子井戸を作製し,1.5μm帯発光を評価していく。本研究では、室温動作するSi/SiO2系1.5μm帯発光素子実現に向け、・ErをドープしたSi量子井戸をSOI構造を用いて作製・フォトルミネセンス測定により、ErドープSi量子井戸の発光特性を評価することを目的としている。前年度までにSOIウエハを熱酸化により薄層化することで、23nmの厚さのSi量子井戸構造を実現している。平成20年度は、熱酸化による薄層化プロセスに加えて、(1)ErドープSiエピタキシャル成長と貼り合わせプロセス(2)SiO2上へのErドープ多結晶Si成長の2種類の方法を利用したErドープSi量子井戸の作製と評価を行った。量子井戸は、(1)の方法では単結晶、(2)では多結晶となる。(1)については、ErドープSiエピタキシャル層の表面粗れが大きいことに起因して、貼り合わせの歩留まりが低く、量子井戸形成領域が1mm以下の非常に狭い領域に限られたため、発光評価に至らなかった。ErドープSi層の表面粗れの低減が重要である。(2)では、多結晶ではあるがErドープSi量子井戸の作製に成功した。フォトルミネセンス測定の結果、Erの内殻遷移による1.54ミクロンの室温発光を得ることができた。ただし、Si量子井戸上のSiO2中に含まれるErが発光している可能性もあり、この判別が今後の課題である。
低酸素による心筋細胞でのHIF1α活性化を中心にした虚血性心疾患の発症機序の解明

本研究にて、転写因子であるhypoxia-inducible factor(HIF)-1αを過剰発現する細胞を作成することができた。HIF-1αは、常に分解されており、この分解される部分に遺伝子操作を加え、上記の細胞を作成した。また、心筋エネルギー代謝の異常の関与として、以下に記す知見が得られた。すなわち、不全心筋におけるエンドセリン(ET)-1遺伝子の著明な発現増大は、不全心筋にみられるミトコンドリアの機能障害に伴うエネルギー不足がその原因として寄与し、その際、転写因子であるHIF-1αの発現増大を介してET-1遺伝子の発現は増大することを示すデータが得られた。つまり、不全心筋では脂肪酸代謝障害(β酸化の障害)によりエネルギー不足状態にあり、その代償として解糖系酵素群の遺伝子発現を増大させる転写因子であるHIF-1αが誘導される。ET-1遺伝子5'上流にはHIF-1αの認識配列が存在する。種々の実験により、不全心筋におけるエネルギー産生障害が、HIF-1αの誘導を介してET-1発現を転写レベルで亢進させて心不全を悪化させる分子メカニズムが存在することが判明した。また、この心筋エネルギー産生障害によって引き起こされるET-1遺伝子の発現増大は、ET-1遺伝子のHIF-1αの認識サイトに対するアンチセンス投与によって著明に抑制された。これらのデータにより、心不全において、ET-1に対する全く新しい核酸医薬の開発の可能性が示唆された。また、心臓の適応と破綻におけるエンドセリンの役割として、エネルギー不足状態にある不全心筋では、その不足を補うために嫌気性代謝を司る酵素群の遺伝子を増大させるHIF1αが代償として誘導されるが、HIF1αはET-1遺伝子発現増大作用も有するため、誘導されたET-1が不全心筋の悪化・破綻を進行させてしまうメカニズムが存在することが示された。
抗体を模倣した^<99m>Tc 標識プローブ

ラジオアイソトープ標識抗体が分子イメージングやアイソトープ治療に使用されている。標識抗体は、大過剰の非標識抗体と共に投与されるため、標的分子への標識抗体の結合を非標識抗体が阻害することが想定される。本研究では、<99m>^Tcの錯形成反応を利用することで、標識に使用した<99m>^Tcと同じ比放射能の標識抗体を与える方法を開発した。本<99m>^Tc標識抗体をアルブミンやF(ab')_2と同時投与しても体内動態に相違は観られず、高比放射能標識抗体の分子イメージング応用への更なる研究が期待される。BHamをキレート構造とするマレイミド誘導体をFab'フラグメントに結合し、テクネチウム-99m(Tc)との錯形成反応により2分子のFab'がTc-BHam2錯体により架橋されたTc標識Fab2の作製を行った。このとき、Fab'フラグメント1分子に導入したBHamの分子数、Fab'-BHam conjugate濃度、標識前駆体であるTc-glucoheptonate(GH)中のGH濃度、Tc標識反応pHを検討し、最適条件を求めた。その結果、Fab'1分子に平均2分子のBHamが結合したconjugateを4 mg/mL使用し、反応pH 5.0、GH濃度10 mg/mLの反応条件において約23%の放射化学的収率で目的とする2価のTc標識Fab2を得ることに成功した。本標識抗体を分子ふるいHPLCで分析したところ、2価Tc抗体の溶出時間のUV 280 nmの吸収は検出限界以下であり、本Tc標識抗体はこれまでのRI標識抗体とは異なり、遊離の抗体が存在しない、比放射能の大変高いTc標識抗体であると考えられる。分子ふるいHPLCで精製した本Tc標識抗体を、非放射性のヒト血清アルブミン20 ugあるいは抗体Fab'フラグメント20 ugに溶液として実験動物に投与したところ、キャリアタンパク質の種類にかかわらず、両者は同じ体内動態を示した。更に、その血液からの消失速度は、放射性ヨウ素標識F(ab')2に比べて有意に遅延した。これらの結果から、本標識抗体は生体内で安定な2価の構造を維持することを示す。また、従来、標識抗体を生体に投与した際の肝臓などへの非特異的な集積の低減にキャリア抗体が必須とされてきたが、本研究成果から、キャリア抗体は体内動態に影響を及ぼさないことを初めて明らかにした。今後腫瘍集積に及ぼすキャリア抗体の影響を検討する予定である。当初、BHam誘導体にRGDペプチドを導入した化合物を用いて、新たな2価99mTc標識薬剤を作製し、その標識合成、標的分子との結合親和性、体内動態を、現在進めているPenicillamine(Pen)を母体とする2価99mTc標識薬剤と比較する計画であった。しかし、Penを母体とする99mTc標識体が、標的分子のみならず肝臓への高い集積を示すことから、Penに比べて脂溶性の高いBHamの利用は適切ではない。また、BHamの大きな特長は、99mTcとのキレート形成原子にチオール基を有さないため、分子内にジスルフィド結合を有する生体分子への応用が可能であることである。その候補としてscFvやFab等の抗体フラグメントやアフィボディが挙げられることから、本研究では分子サイズの最も大きい抗体Fab'フラグメントを用いた検討を行った。BHamの窒素のモノアルキル化から、エチレン構造あるいは3ユニットのエチレングリコール構造を介してマレイミド基を有する化合物を合成した。抗体にハーセプチンを選択し、そのFab'フラグメントを作製した。現在、Fab'とBHamとを結合したconjugateを作製し、その99mTcとの錯形成反応条件の探索を進めている。必要に応じて、BHamとマレイミド基とのスペーサ構造やFab'に導入するBHamの分子数についての検討を加え、99mTcがBHamとの錯形成を介して2分子のFab'を架橋した99mTc標識2価抗体の作製を行う。本化合物を未反応のFab'から精製すれば、1分子のF(ab')2に1原子の99mTcが部位特異的に結合した従来にない標識抗体が得られる。本標識体を高い収率で与える反応条件を選出し、腫瘍移植モデルマウスにおける体内動態を従来の標識抗体と比較する。以上より、腫瘍への集積を向上する標識抗体の薬剤設計についての基礎的指針を確立する。Benzaldehyde oximeとNCSとの反応によるN-hydroxybenzimidoyl chlorideの合成、本化合物と片側のアミノ基をBocで保護したジアミン化合物との反応、生成した化合物の脱BocとN-methoxycarbonyl maleimideとの反応により、BHamの1級アミノ基から任意のスペーサを介してマレイミド基を導入した化合物の合成方法を確立した。

これにより、BHam構造と抗体との結合距離を任意に制御することが可能となり、99mTcとの錯形成反応の及ぼすFab'分子の立体障害の影響等についての検討が可能となった。また、Fab'抗体フラグメントン作製においても、生成するチオール基の数を再現性良く制御することが可能となり、部位特異的(おそらくヒンジ部位)にスペーサを介してBHamを導入することが可能と考えられる。本成果により、今年度に予定している99mTc錯体で架橋したF(ab')2の作製に対する準備が整い、今後、99mTc標識2価抗体を与える至適条件の探索、生成した99mTc標識F(ab')2の体内動態、とりわけ腫瘍集積性について検討する。なお、本99mTc標識抗体は、1原子の99mTcが1分子のF(ab')2と1:1のモル比で結合した、これまでにない標識抗体であり、従来の標識抗体とのその体内動態の比較から、腫瘍への集積に及ぼす抗体分子数(抗体量)の影響についての新たな知見を与えると考えられる。BHamを導入したFab'と99mTcとの錯形成反応により、99mTc-BHam錯体を介して2分子のFab'が結合した、これまでにない99mTc標識2価抗体の作製を行う。95%以上の放射化学的収率で99mTc標識2価抗体を与える標識条件として、抗体濃度(BHam濃度)、BHam/抗体結合比、スペーサ構造、反応pHなどを検討し、その至適条件を探索する。95%以上の放射化学的収率で目的とする99mTc標識2価抗体が得られた場合、直接実験動物に投与した時の99mTc標識2価抗体の体内動態、とりわけ、腫瘍集積性、血液クリアランス、肝臓集積性を、RIがランダムに結合した抗体と共に、RIの結合していない未修飾抗体を大量に含む従来の方法で作製した1価および2価抗体と比較する。サイズ排除HPLCを用いて99mTc標識2価抗体から原料であるBHam-Fab'を除去した場合の体内動態についても検討を加え、その比較から、体内動態(特に腫瘍集積)に及ぼす過剰の1価抗体の影響を明らかにする。過剰の1価抗体を除去した99mTc標識2価抗体投与後に、外部から腫瘍部位に超音波刺激あるいは温熱処理を行った場合の腫瘍への集積増加効果についても併せて検討を行う。なお、99mTc標識反応において95%以上の放射化学的収率が達成されなかった場合、サイズ排除HPLCによりBHam-Fab'を除去して99mTc標識2価抗体を単離する。本標識抗体には未修飾の抗体が含まれておらず、これを用いて上記の検討を行う。現在、臨床使用されている標識抗体では大量の未修飾抗体を含むが、これが必要とされる原因を明らかにすると共に、RI標識抗体の腫瘍集積性を向上する新たな標識抗体の設計についての基礎的知見が得られると考えている。研究費は、本研究においてモデル抗体として用いるハーセプチンの購入、細胞培養試薬、合成のための試薬と溶媒、99Mo-99mTcジェネレター、サイズ排除HPLC用のカラム、実験動物などすべて消耗品の購入費用に充てる。なお、超音波による外部刺激の実験は、機器会社から超音波発生装置を借用することで合意している。
アクティブラーニングからグローバル人材育成への授業展開研究

高等学校新学習要領の改訂に伴い、外国語科では、「授業は英語で行うことを基本とする」こととなった。本申請者は、2012年よりグループ活動を英語で行うための中間言語語用論研究を行ってきた。実際にイギリスの大学を訪れ、現地の学生のグループ活動の様子をビデオで撮影し、そのビデオデータを利用してグループ活動のためのモデルiPad教材を作成した。さらに、中間言語語用論研究をもとに、語用論的能力と言語習得を促進させるための指導図を作成し、5回で完結するグループ活動のための指導方法を開発した。そして、その教材と指導方法を大学と高校にて実践した。これまでの研究では、Bachman & Palmer (1996)のコミュニケーション能力の構成要素(1)言語能力、(2)方略的能力、(3)精神生理学的作用のうち、(1)言語能力の「知識」を得るための教材と教授法の研究をしてきたが、本研究では、言語能力とは独立した構成要素の(2)方略的能力に注目し、「知識」習得だけではなく、実際にグループ活動を円滑に遂行する「能力」を研究する。本研究ではICTを利用して実際に海外の学生と共同でグループ活動を行い、その様子をビデオ録画により観察する。つまり、学習者はアクティブラーニングを通して言語能力の「知識」を教室内にて学習した後、今度は実際に海外の学生とインターネットをつないで異文化間で共同グループ活動を行う授業展開を試みる。言語能力だけでなく、方略的能力を検証することによりグローバルな人材育成のための授業を構築する。1年目は、シンガポールの学生とネットを利用した合同授業ができるように、環境を整える。2年目はシンガポールの学生によるグループ活動の分析教材を作成する。3年目は方略的能力の習得、遂行の観察・確認の方法を研究し、分析を行う。研究1年目の2018年度は、実際にインターネットを利用して海外の学生と共同作業ができるようネット環境を整え、事前に確認作業を行った。シンガポールの大学の教員と打ち合わせを行い、ネットを繋げる時間帯を決めて、半期に2回インターネットを通じて合同授業を行った。シンガポールの学生と合同授業をするための事前準備として、まず、日本人同士で英語によるグループ活動を行った。平成27年度平成29年度の若手研究(B)の研究で作成したグループ活動のタスクと指導方で日本人同士4名1組のグループを4組作り、グループ活動を行った。「言いたくても言えなかった英語表現」を習得する際には、スマートフォンのアプリを利用してインプット活動を行い、学習後は習得確認テストを行った。100点満点中60点以上獲得するまで何度も試験を行い、表現をインプットしていった。日本人同士でグループ活動を練習した後、インターネット上で日本人学生2名とシンガポールの学生2名、合計4名1組の異文化混合グループを8組作った。大学のパソコンにはネット通信アプリのスカイプをダウンロードすることができないため、8つのiPad (AH)にそれぞれスカイプをダウンロードした。1回目のネット合同授業では、スカイプを利用して各グループでそれぞれメンバーと音声の調整やネット環境の確認をしながら英語で自己紹介を行った。そして、2回目の合同授業では、スカイプを通じてシンガポールの学生、日本人の学生それぞれが作成してきた4コマストーリーを見せ合い、話し合い、共同で新たな作品を1つ創作するグループ活動を実践した。機材によっては音声の不具合のためデータが取れなかったグループや、録画を忘れたグループがいくつかあった。iPadやイヤフォン等の購入をすること、学生への録画の方法を確実に伝える必要がある。実際にシンガポールの学校と日本の大学とでインターネットを繋げて合同授業を試した結果、2か国間での授業時間の調整が可能であること、マイクとイヤフォンの性能を上げれば教室内で共同グループ活動をすることが可能であると確認できた。また、グループ活動のためのハンドアウトをわかりやすくまとめてシンガポールの先生にメール添付で送って内容を確認するなど、事前準備の重要性を感じた。今後の計画としては、学習者がシンガポールの英語に慣れるため、シンガポールの学生同士がグループ活動を行う様子をビデオで録画し、そのビデオデータを利用してiPad教材を作成する予定である。しかし、その教材を利用しても日本人がシンガポールの学生の英語に慣れるまでに相当な時間を費やすと考えられる。そのため、教室内だけでなく、教室外でも多く学習の機会を与える工夫が必要である。また、今回の事前確認では、筆記テストで良い点数を取った学生がグループ活動を行う際により多くの習得表現を利用していたわけではないこともわかった。もともと英語が話せる学生よりも、英語レベルが低い学生のほうが学んだ英語表現を最大限利用しようとする意欲が見られる傾向にあった。このことから、テストの結果だけでなくビデオ録画の観察、アンケートやインタビューによる検証により学習者個々の方略的能力を調査し、能力に合った指導方法を作成する予定である。これまでの研究では、Bachman & Palmer (1996)のコミュニケーション能力の構成要素

(1)言語能力、(2)方略的能力、(3)精神生理学的作用のうち、(1)言語能力の「知識」を得るための教材と教授法の研究をしてきたが、本研究では、言語能力とは独立した構成要素の(2)方略的能力に注目し、「知識」習得だけではなく、実際にグループ活動を円滑に遂行する「能力」を研究する。本研究ではICTを利用して実際に海外の学生と共同でグループ活動を行い、その様子をビデオ録画により観察する。つまり、学習者はアクティブラーニングを通して言語能力の「知識」を教室内にて学習した後、今度は実際に海外の学生とインターネットをつないで異文化間で共同グループ活動を行う授業展開を試みる。言語能力だけでなく、方略的能力を検証することによりグローバルな人材育成のための授業を構築する。1年目は、シンガポールの学生とネットを利用した合同授業ができるように、環境を整える。2年目はシンガポールの学生によるグループ活動の分析教材を作成する。3年目は方略的能力の習得、遂行の観察・確認の方法を研究し、分析を行う。研究1年目の2018年度は、実際にインターネットを利用して海外の学生と共同作業ができるようネット環境を整え、事前に確認作業を行った。シンガポールの大学の教員と打ち合わせを行い、ネットを繋げる時間帯を決めて、半期に2回インターネットを通じて合同授業を行った。シンガポールの学生と合同授業をするための事前準備として、まず、日本人同士で英語によるグループ活動を行った。平成27年度平成29年度の若手研究(B)の研究で作成したグループ活動のタスクと指導方で日本人同士4名1組のグループを4組作り、グループ活動を行った。「言いたくても言えなかった英語表現」を習得する際には、スマートフォンのアプリを利用してインプット活動を行い、学習後は習得確認テストを行った。100点満点中60点以上獲得するまで何度も試験を行い、表現をインプットしていった。日本人同士でグループ活動を練習した後、インターネット上で日本人学生2名とシンガポールの学生2名、合計4名1組の異文化混合グループを8組作った。大学のパソコンにはネット通信アプリのスカイプをダウンロードすることができないため、8つのiPad (AH)にそれぞれスカイプをダウンロードした。1回目のネット合同授業では、スカイプを利用して各グループでそれぞれメンバーと音声の調整やネット環境の確認をしながら英語で自己紹介を行った。そして、2回目の合同授業では、スカイプを通じてシンガポールの学生、日本人の学生それぞれが作成してきた4コマストーリーを見せ合い、話し合い、共同で新たな作品を1つ創作するグループ活動を実践した。機材によっては音声の不具合のためデータが取れなかったグループや、録画を忘れたグループがいくつかあった。iPadやイヤフォン等の購入をすること、学生への録画の方法を確実に伝える必要がある。
減光刺激によって誘発される仔魚の魚体運動の開始に関わる松果体-脊髄経路の研究

DiI及びHRPを用い、エンゼルフィッシュ仔魚における松果体ニューロンの脳内投射パターンを調べたところ、間脳及び中脳被蓋に多数の投射が観察された。また、標識された線維の多くにバリコシティー様の構造が見られたことから、松果体ニューロンはこの領域で光情報を出力している可能性が示唆された。特に注目すべき点は、中脳被蓋の内側縦束核と思われる領域に多数の線維が投射していたという結果である。内側縦束核ニューロンは、軸索を内側縦束経由で脊髄へと送っており、遊泳運動の発現に深く関わっていると考えられており、減光情報が、ここでニューロンを乗り換えて脊髄へと伝えられている可能性がある。また、特に孵化後13日目の仔魚においては、松果体ニューロンは延随へもかなりの数の線維を投射しており、孵化後間もない仔魚は減光刺激に対して特に大きな反応を示すことから、これらが、減光刺激によって誘発される運動の発現に関わっている可能性が高い。松果体ニューロンの活動と、脳内各所の神経活動の細胞外同時記録を行ったところ、減光刺激に対する松果体ニューロンの反応に続いて若干の遅延を持った神経活動が、内側縦束付近で導出された。上記の形態学的観察結果とあわせて考えると、エンゼルフィッシュ仔魚における松果体からの出力が、内側縦束核・内側縦束を経て脊髄内の神経回路を賦活していることが考えられる。ただし、孵化後5日以上経過し、減光刺激に対して顕著な反応を示さなくなった仔魚においても、松果体から内側縦束核付近への投射や、減光に対応した神経活動が内側縦束付近で導出されることから、上述の経路が、松果体に端を発する経路固有のものなのか、あるいは徐々に発達してきた側眼からの経路も同様の経路をたどるのかという点について、今後詳しく調べていく必要がある。
日本近代における映像表現と活字文化・文学の重層的な相関を対象とする史的研究

本研究では、以下の三つの領域の重層的な関係を探究した。1、大正期から昭和期にかけての小説とその挿し絵の関係の歴史的変容を、小説の成立過程、造本形態、検閲とそれに対する対応から明らかにした。2、明治末から昭和期にかけての映画における映像とセリフの関係を、サイレレントとトーキーの差異、シナリオと文学作品の相互作用、検閲とそれに対する対応から解明した。3、映像表現と文学的表現の差異を示すために、映画に関する理論的な考察を行った。特に構造主義と記号学に関する理論の再考と、ポストモダニズムに関する理論の再構築を行い、映画史への適応可能性を示した。この結果、明らかになったのは、以下の三点である。A、純文学の小説作品が検閲に対する過剰な反応の結果、挿し絵をほとんど用いなくなり、言語による風景や人物の描写を主眼とする一方で、発達する印刷技術を生かした大衆小説は、会話中心の小説に次第に比重をおきはじめる歴史的経緯が明らかになった。B、当初、純文学作家が占めていた映画のシナリオライターの地位は、次第に大衆作家にとって変わられるようになるが、このことは、大衆小説が会話中心の小説技法を洗練されてゆくことと密接に関係している。また映画における場面転換における大胆な時空間の省略も、大衆小説の技法を受け継いだものといえる。C、このような大衆小説の技法を取り入れた映画は、更にその技法を洗練させ、小津安二郎に代表されるような、大胆な省略の映画を生むにいたる。しかし、それは日本的な現象ではなく、映画の時空間の表現を大きく変えるものであることが、理論的かつ具体的な考察の面からも明らかになった。二年間の研究期間の一年目にあたる本年度は、次年度における研究内容の総合化を前提に、研究代表者および分担者が以下の個別的な研究を行った。1、絵画表現から映像表現への史的展開を究明ことを目的とする、明治期・大正期の絵画・映像に関する資料収集と分析。この領域での研究により、絵画表現が芸術として認知されるようになるに従って、法的、社会的な規制が、たとえばヌードなどの表現に強い影響を与えるようになるのに対して、大正前半期までは風俗的な取り締まりの対象とされる映像表現には強い規制がはたらかず、題材、表現技法の面で欧米のものとの交流関係を維持しながら、大胆な実験が試みられたことが明らかになった。2、活字文化および文学と映像表現との諸関係の究明をめざす、大正・昭和期の出版状況、大衆文化状況およびシナリオと映像表現に関する重層的な分析と資料収集。この領域では、「文芸春秋」や「キング」などの雑誌の興隆が、読者参加型の出版形態を大衆化するにつれて、文学者の側の対読者意識が変質し、川端康成や横光利一などにみられるように、大衆向けメディアとしての映像表現の創造に関与する活動が活発化し、映像に即したシナリオ文学が本格的に形成される一方で、それが小説の時空間の表現などの表現技法に利用されてゆく様態が具体的に究明された。3、映像表現の原理的性質に関する究明。映像表現の限界の探求と、その変革をめざしたフランス・ヌーヴェルヴアーグの作家の作品分析を行うことで、それ以前の世界的な規模での映像表現にいかなる反省的な意識が芽生え、その限界の打開が試みられたかを探ることにより、巨視的な視野から、日本でそれ以前に試みられた種々の実験的な映像表現の位置づける上での基礎的な知見が得られた。二年間の研究期間の最終年にあたる本年度は、研究代表者および分担者が個別に研究を進める一方で、研究内容の総合化を行った。この双方の内容をまとめると以下の通りになる。1、個別的な研究の第1の軸として、特に大正から昭和初期にかけてのメディア戦略と書物の造本形態の研究が進められた。これは大衆小説と純文学の間に、一定の共通点が認められ、それが挿し絵などの図像の問題とも密接に関連することが明らかになった。

2、一方、個別的な研究の第二の軸となったのは、映画における表現形態と内容とを相関的に問う方法としてのテマティスムに関して、その理論的有効性を検証し、また小津安二郎などの固有の対象を設定して、分析を実践することで、その理論の実効性を示すことである。前者においては、19世紀以降の言語と映像の関係の変容とこの理論が密接に関連することが究明され、後者においては、特にアクション繋ぎをめぐる表現の歴史性の照明に関する、この方法の有効性が提示された。3、更に昨年度の成果と綜合しつつ、書物の造本形態と図像、メディア戦略と映画のシナリオの関係が並行的に考察されるとともに、検閲と絵画表現および省略と編集をめぐる映像表現、映画におけるメタ・フィクションともいうべき映像への反省意識が相関的に追求された。その結果、特に大正期以降、検閲、造本形態、図像表現の相互作用的な変化が言語と映像表現に構造的な変容をもたらし、それが以後、長期間にわたるシナリオや映像の古典的な形式として支配的な位置をしめるが、それは戦後において、反省的な意識に晒されて、第二の変革期を迎えることが明らかになった。
視床下部ニューロンにおける樹状突起特異的接着因子OBCAMの機能解析

OBCAMは、免疫グロブリンスーパーファミリーのIgLONサブグループに属する接着因子であり、免疫グロブリン様ドメインを3個持ち、GPIアンカーにより細胞膜に結合している。本科学研究費による研究では、OBCAMの機能とりわけニューロンの樹状突起への選択的局在と機能を解析することを目的としている。本研究期間内に得られた研究成果は以下である。1)OBCAM及び同じサブグループに属するKilonの結合解析を行い、これらの接着因子が同種性、異種性結合することが判明した。2)OBCAMは視床下部のバソプレッシン神経の樹状突起に特異的に存在するが、神経ペプチドである分泌顆粒に特異的に局在し開口放出により細胞膜へ移行することが判明した。3)視床下部のバソプレッシン神経樹状突起には、OBCAMだけでなくKilonも神経ペプチドである分泌顆粒に選択的に局在することが分かり、両者が共存することが判明した。4)OBCAMは、視床下部ニューロン樹状突起だけでなく培養した大脳、海馬ニューロンにおいても樹状突起に選択的に局在することが判明した。ただし、大脳や海馬においてはシナプス後膜に局在しておりシナプスでの可塑性に関与することが考えられる。この事実は、当初OBCAMが視床下部ニューロンに特異的な樹状突起選択的接着因子であると考えられてきたが、中枢神経系全般のニューロンに普遍的に存在する選択的接着因子であることが判明した。OBCAMは、視床下部ニューロンだけでなく、大脳や海馬などの記憶学習に関与した部位に豊富に存在していることから神経系の顔製に関与した分子であると推測される。さらに、神経活動に依存した変化をすることから、接着因子が"静"に機能した細胞接着機能だけでなく、"動"的に働く因子であることが分かった。OBCAMは、免疫グロブリンスーパーファミリーのIgLONサブグループに属する接着因子である。本科学研究費補助ではOBCAMの機能とりわけ樹状突起への選択的局在と機能を解析することを目的としている。14年度で得られた知見は以下である。以上の結果は、OBCAMを含むIgLONサブグループは樹状突起のシナプス後膜で神経活動に依存した可塑的変化に関与する分子と考えられる。Opioid-binding Cell Adhesion Molecule (OBCAM)は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属す接着因子である。OBCAMは、免疫グロブリン様ドメインを3個持ち、GPIアンカーを介して細胞膜に結合している。本研究においては、OBCAMがニューロンの樹状突起に特異的に局在し、神経活動に依存してダイナミックな挙動を示し、神経系の可塑性に関与していることが示された。1)視床下部視索上核のバソプレッシンニューロンにおけるOBCAMの局在を調べたところ、樹状突起に特異的に存在することが明らかになった。

電子顕微鏡レベルの観察では、バソプレッシンを含む神経分泌顆粒に存在することが分かった。さらに、興味深いことに、神経刺激を与えてバソプレッシンの樹状突起分泌を促進すると、exocytosisにより細胞膜側に移動することが判明した。このことは、接着因子が神経活動に依存してダイナミックに局在を変え神経系の可塑性に絡んでいることを示唆している。2)上で見出された事実は、視床下部における特殊なニューロンでの現象である。そこで、OBCAMが大脳や海馬などの一般的な部位においても、樹状突起に特異的に存在するのか、培養大脳、海馬ニューロンにおいてOBCAMの局在を調べた。OBCAMは、これらの培養細胞では樹状突起のシナプス部位、特にスパインに特異的存在し、Triton X-100に非可溶であることからラフトに局在するものと考えられた。3)大脳、海馬において、OBCAMの光学顕微鏡、電子顕微鏡レベルでの局在を調べたところ、樹状突起スパインのシナプス後膜側に存在することを見出した。発生過程における発現パターンは、脳の成熟に伴い発現量が増加することを見出した。また、OBCAMは同属タンパクのKilonと相互作用することも明らかになった。
量子ビームを用いた酸化物超イオン伝導体に潜む強誘電性の微視的発現機構の解明

KTiOPO4(KTP)に代表されるAMOXO4(A:アルカリ金属, M = Ti, Zr, etc., X = P, As )は超イオン伝導性と強誘電性をあわせもつ物質である。これまでAMOXO4は変位型強誘電体とされてきたが、近年、秩序-無秩序型との共存が示唆されている。しかしながら、既存の結晶構造解析手法では、イオン拡散経路中にある自発分極の秩序化過程を決定する上で未だ不明な点も多く、その解明には新しい視点からのアプローチが必要である。本研究では、初年度において密度分布解析に対する新規手法の開発を進めた。具体的には、最大エントロピー法のソフトウェアを構築し、X線回折と中性子回折から得られた結晶構造因子に対してMott-Bethe法を適用したX-N静電ポテンシャルMEM法を確立した。最終年度において、これら手法をもとにJ-PARC MLF BL09SPICAにてKTiOPO4の低温下中性子粉末回折を実施した。結果、200K以上からK+ cationの原子変位パラメータにおいて顕著な変化がとらえられた。原子変位パラメータは原子・イオンの熱的挙動を反映することから、200Kを境にイオン導電体としての物性が顕著になると考えられる。実際、誘電測定における誘電損失が200Kより増大する結果と一致しており、中性子粉末回折を通して微視的機構を観測することができた。以上の成果を踏まえ、本研究では最大エントロピー法ソフトウェアZ-MEMに関する論文としてまとめた。また、X-N静電ポテンシャルMEM法については、2019年度中の成果報告に向けて準備を進めている。今後の研究において、原子変位パラメータの精度向上を目的とした中性子単結晶回折を実施する予定である。KTiOPO4(KTP)に代表されるAMOXO4は強誘電性とイオン伝導性をあわせ持つ物質として知られている。強誘電性の起源としてA+カチオンの微小変位が酸素八面体の歪みに影響を与えることが示唆されているが、イオン拡散経路中のA+カチオンの挙動について未だ不明な点が多い。本研究では、放射光X線及び中性子回折を相補的に用いて、非調和原子変位パラメータ(Atomic Displacement Parameters : ADPs)及び最大エントロビー法(MEM)から酸化物超イオン伝導体と強誘電体の微視的起源を明らかにすることを目指す。これら研究目的を達成するために、本課題ではA+カチオン及び酸素八面体に寄与する遷移金属の固溶体を作成し、解析に用いるソフトウェア開発を中心に研究を進める。また、作成した試料を元に回折実験及び精密構造解析を実施する。具体的には、1解析手法としてのMEMソフトウェアの作成を行い成果を報告した。2KTiOPO4を中心に試料を合成し、物性評価を進めた。さらに、A+についてRbをドープした試料を作成した。3これら作成した試料を用いて、強誘電性が主となる低温下の放射光X線及び中性子回折を実施した。構造解析の結果より、10 Kから250 Kの間でc軸方向に顕著な変化が見られた。具体的には、Ti-Oの一次元鎖及び垂直成分のボンド長さ及びADPsを比較した際、Ti-O一次元鎖及び近接するK+の昇温に伴って有意に増大した。また、ADPs及び誘電損失の温度変化との比較より、イオン伝導性が有意に働く200Kよりも低い温度で一次元鎖が歪み、200 Kより上でK+カチオンの原子変位パラメータが大きく増大することが判明した。1本研究で用いる最大エントロピー法プログラムについてアルゴリズムの高速化に成功した。これらの結果をまとめ、国際学会で発表を行なった。2試料合成について、A+カチオンに用いたA2CO3が溶融することで固相反応時の均一な反応ができることがわかり、純度の高い合成方法を確立することができた。一方で、酸素八面体を担うTiO6に対する遷移金属置換について、不純物が有意に生ずる課題を見出した。主な要因として、原料粉の化学安定性に由来すると考えており、別種の合成手法も含めて検討を進めている。3中性子回折について、低温下の精密構造解析より軽元素であるK+の挙動について特徴を見いだすことができた。今後、A+カチオンのドープ効果の研究を進めることで成果につなげることができると考えている。以上より、おおむね順調に進展していると評価した。

原子変位パラメータは原子・イオンの熱的挙動を反映することから、200Kを境にイオン導電体としての物性が顕著になると考えられる。実際、誘電測定における誘電損失が200Kより増大する結果と一致しており、中性子粉末回折を通して微視的機構を観測することができた。以上の成果を踏まえ、本研究では最大エントロピー法ソフトウェアZ-MEMに関する論文としてまとめた。また、X-N静電ポテンシャルMEM法については、2019年度中の成果報告に向けて準備を進めている。今後の研究において、原子変位パラメータの精度向上を目的とした中性子単結晶回折を実施する予定である。KTiOPO4については基礎的なデータを得ることができ、構造解析も順調に進んでいる。引き続き、A+カチオンのドープ量を変えた複数の試料について、中性子回折を実施することでイオン拡散経路中のA+カチオンの挙動の詳細を明らかにする。今後、超イオン伝導性の寄与が主体となる高温下の中性子回折実験を実施して、原子変位パラメータの詳細について明らかにすし、酸素八面体中の原子変位との関係を明らかする予定である。AMOXO4の超イオン伝導性及び強誘電性について、国際会議や国内学会などで収集しながら、得られた成果を可能な限り早期に公表することを目指す。物品費として計上していた試料合成及び誘電測定用の治具について、製作期間が当該年度内に間に合わなかったため、次年度に発注をすることとした。図面等はすでに完成しており、これから発注を進める予定である。
C型肝炎患者の進展に及ぼす生体側因子の検討

C型肝炎ウイルス(HCV)は、診断法に関しては明らかとなってきたが、進行に係わる生体側因子の検討は不充分であり、治療としておこなわれているIFN治療に関しても、その効果に関する生体側因子の解析は不充分である。C型肝炎の進行にかかわる要素として、TNF-alpha,lymphotoxin-alpha,IL-10,MxA遺伝子の多様性とHLA-haplotypeをC型肝炎178例において検討した。その結果、lymphotoxin-alphaのfirst intron Nco1 polymorphism siteのGenotypeが、B1/B1で、HLA-DRB1のハプロタイプが、*0901の保有者にALT値がほぼ正常値で推移するC無症候キャリアーが多いことを見いだした。また、肝生検の線維化が軽度の群では、lymphotoxin-alphaのGenotypeがB1/B1でかつ、IL-10の遺伝子多型が、IL-10の産生量が中等度から高度のgenotypeが多いことを明らかにした。また、IFN+リバビリンの併用療法を施行した患者のうち無効例で、lymphotoxin-alphaのGenotypeがB2/B2およびMxA遺伝子の-88の多型がG/Gの保有者が有意に多いことを見出した。以上、C型肝炎の進行、治療にいくつかの遺伝子多型が関与してきることを明らかにした。C型肝炎ウイルス(HCV)は、その構造、特徴、診断法に関しては明らかとなってきたが、その進行、治療に係わる生体側因子の検討は不充分である。まずは、我々は、肝臓の炎症に係わる炎症性サイトカインであるTNF-alpha, TNF-betaの産生に係わる遺伝子多様性、HLA-DRB1ハプロタイプを検討した。その結果、TNF-betaのfirst intron Nco1 polymorphism siteのGenotypeが、B1/B1の保有者に有意にC型肝炎の無症候キャリアーが多く、HLA-DRB1のハプロタイプでは、*0901の保有者にC型肝炎の無症候キャリアーが多いことを明らかにした。またその両者の組み合わせにより、さらにC型肝炎の進行性との関係が示された。また、炎症に抑制的に働くサイトカインであるIL-10の遺伝子多様性とC型肝炎の関係に関して検討したところ、promoter region position-592,-819,-1082がATA/ATAの保有率が、肝臓癌で多く、またインタフェロン+リバビリンの併用療法を施行した患者のうちATA/ATAの保有者は、無効例が多かった。今後は、インタフェロン+リバビリンの作用機序とIL-10の遺伝子多様性との関係を明らかにしてゆきたい。昨年度までに、我々は、TNF-betaのfirst intron Ncol polymorphism siteのGenotypeが、B1/B1の保有者で、HLA-DRB1のハプロタイプが、*0901の保有者にC型肝炎の無症候キャリアーが多いことを見いだした。今年度は、IFN+リパピリンの併用療法を施行した患者のうち、効果とTNF alpha gene, TNF beta gene, IL-10 gene, MxA geneとの多型性を検討したが、無効例で、TNF beta geneがB2/B2のGeno typeを持つ患者が多いことを明かにした。また、C型劇症肝炎より樹立した、JFH-1 cloneをレプリコンsystemを用いて解析し、通常の1b型のcloneと比較したところ、ウイルスの複製能力が高く、今後ウイルスの複製過程、病態に及ぼす影響に関してさらに検討してゆく予定である。C型肝炎の進行にかかわる要素として、TNF-alpha, lymphotoxin-alpha, IL-10,MxA遺伝子の多様性とHLA-haplotypeをC型肝炎178例において検討した。

その結果、lymphotoxin-alphaのfirst intron Nco1 polymorphism siteのGenotypeが、B1/B1で、HLA-DRB1のハプロタイプが、*0901の保有者にALT値がほぼ正常値で推移するC無症候キャリアーが多いことを見いだした。また、肝生検の線維化が軽度の群では、lymphotoxin-alphaのGenotypeがB1/B1でかつ、IL-10の遺伝子多型が、IL-10の産生量が中等度から高度のgenotypeが多いことを明らかにした。また、IFN+リバビリンの併用療法を施行した患者のうち無効例で、lymphotoxin-alphaのGenotypeがB2/B2およびMxA遺伝子の-88の多型がG/Gの保有者が有意に多いことを見出した。以上、C型肝炎の進行、治療にいくつかの遺伝子多型が関与してきることを明らかにした。
環境観と地域住民活動-静清バイパス沿線住民調査-

1.まず、静清バイパス道路建設をめぐる行政および住民の動向を関係者へのヒヤリング、資料等で把握した。2.つぎに、静岡、清水両地区の住民を対象として、標本調査を実施した。調査概要は以下のとおりである。a調査対象地区、静岡市瀬名千代田地区清水市飯田地区b調査対象者数と対象者の抽出、調査対象者は選挙人名簿から、明治生まれの高令者を除く20才以上の男女個人を静岡地区1082人、清水地区1126人抽出した。c調査方法、留置、自計式であるが、調査票の配布、回収は、調査員が行った。d調査実施期間昭和60年12月6日12月12日e回収結果有効回収票は静岡地区806票清水地区846票である。f主要な調査項目、自然親和的ライフスタイル、周辺の環境の評価と重要度、環境保全と地域経済開発の価値づけを問う環境観、環境保全意識、環境保全型ライフスタイル、より一般的なライフスタイル、コミュニティ意識、行政に対する態度、住民運動に対する一般的態度、地域活動へのコミットメント、静清バイパスのメリットとデメリット、道路の受益圏・受苦圏、道路建設に対する態度住民運動への協力形態、住民運動への共鳴度、社会的不公平感、移動歴、環境問題からの被害体験、集団参加の程度、政党支持、学歴、職業収入である。3.調査結果の分析をとおして次のような仮説を検証する。静岡地区におけるバイパス建設反対運動参加者と清水地区におけるコミュニティ活動参加者との間には、社会的属性からみて極めて似かよった傾向が見られるか否か。静岡地区と清水地区のバイパス建設に対する態度の相異は、主として、地区住民の環境観の相異で説明され得るか否か。静清バイパスという特定の道路に対する評価を決定する要因には、他にどのようなものが考えられるのか。両地区の行動の相異を住民の意識構造でどこまで説明し得るのか。
乱用が危惧されるフェネチルアミン系化合物の分析法および代謝に関する研究

研究目的本研究では、麻薬ブロランフェタミンと化学構造が類似した乱用薬物である、4-クロロ-2,5-ジメトキシアンフェタミン(DOC)および2,5-ジメトキシ-4-ヨードアンフェタミン(DOI)について、生体試料中代謝物を含めた分析法を確立することを目的とした。研究方法本研究では、DOC、DOIや代謝物は市販されていないため、それらと化学構造が類似した市販の試薬を用いて、目的の二薬物および予想される代謝物を化学合成する。(2)化学合成したDOC、DOIおよび代謝物の機器分析化学合成した標準品を、ガスクロマトグラフ-質量分析計や液体クロマトグラフ-質量分析計を用いて分析し、保持時間や得られる各質量スペクトルのデータを集める。(3)生体試料中DOC、DOIおよび代謝物の分析尿試料の実検体から、DOC、DOIおよび代謝物が検出されることを確認する。また、生体試料からの前処理法を検討し、前処理から機器分析までの一連の操作を含む、包括的な分析法を確立する。という方法で研究を進めた。研究成果標準品として、DOC、DOIのほか、それらの2位脱メチル体および5位脱メチル体を合成し、各種機器分析を行った。DOC、DOI摂取者の尿試料の抽出物を同様に分析し、標準品について得られた結果と比較したところ、未変化体DOC、DOIのほか、2位脱メチル体および5位脱メチル体が検出された。また、それらの代謝物は抱合体としても尿中へ排泄されており、尿試料の前処理の際には、抽出を行う前にHelix pomatia由来β-グルクロニダーゼを用いた加水分解を行うことが有効であった。