hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
1930年代パリと外国人芸術家-「パリ神話」の変容と都市表象

当該研究は、平成八年度科学研究費補助金[奨励研究A]を得て行った研究「一九三〇年代パリと外国人芸術家」を受け、それをさらに発展、完成する目的をもって平成九-十一年度に行われたものである。当初の予定通り、平成九年度に三本の論文をまとめた時点で、平成八年度までの十本の論文と共に集大成し、平成十年度に単著として公刊した(その際さらに二本の論文を書き下ろした。詳細は本報告書に転載した同書巻末の「初出一覧」参照)『パリ・貧困と街路の詩学--一九三〇年代外国人芸術家たち』(都市出版、平成十年五月、総計五〇〇ページ)と題したこの著者は、「ナチズムと不況の時代」下、芸術的には不毛とされてきたこの時代に、パリに亡命した多くの外国人芸術家たちによって、驚くほど豊で、また共通する都市表象が生み出されていたことを、文学、絵画、写真のジャンルを越境して解明したものである。以上のような(平成九、十年度)研究を通して、次第に明らかになったことは、十九-二〇世紀の「パリ神話」の変容を考えるにあたって、〈写真〉というメディアについての研究が不可欠であるという事実である。十九世紀後半に、パリという都市自体に生まれた〈写真〉メディアは、都市表象そのものの形成に深く関与している。また十九-二〇世紀パリでは文学者と写真家のコラボレーションによる作品が数多く成功したという興味深い事例が散見されるのである。そこで最終年度(平成十一年)は、「パリ表象をめぐる文学と写真」というさらに発展的テーマに取り組んで別記のような論文にまとめ、本研究の総括にすると同時に、さらに次の著書を公刊する準備段階へと進んでいる。今年度は、1930年代パリに関わる芸術家たちのうち、従来研究の進んでいなかった作家--特にジョージ・オ-ウェルと金子光晴について、重点的に研究を進め、別記のように単独論文にまとめて公表することができた。オ-ウェルについては、ロンドン、パリの対比の中で、英米社会進化論の影響下にある「貧困観」と、それを追究する「ドキュメンタリー」と言う文学的言説の発生について考察した。また金子光晴については、晩年自伝的三部作に至るまでの光晴の散文の文体について詳細に解析し、〈時代〉の語り方と、そこから析出される30年代パリの神話的姿について再考した。また日本人画家佐伯祐三についても実地調査、研究を行ない、同様に単独論文にまとめた。とかく真贋論争のみに片寄る研究から一歩距離を置き、佐伯作品を、むしろ同時代パリ写真との類縁から探ったこの論文は、美術史的にも新見地を提出したと言う点で、専門領域で評価されるに至っている。今年度の成果を含め、この数年にわたる研究の一端として、1998年5月刊行予定の単著を現在準備中である。同書『パリ・貧困と街路の詩学--1930年代外国人芸術家たち』(都市出版、総頁約500ページ)では、大不況とファシズムの時代にあって、パリの街を放浪する中から、独自の都市美学を紡ぎ上げた外国人芸術家たちについて、思想家、作家、画家、写真家の別を問わずに論じている。その中から、ヴェルター・ベンヤミンをはじめとする外国人芸術家たちが、新たなる「パリ神話」を表象している事実が浮かび上がってくるであろう。平成9年度から本格的に進展した本研究課題は、本年度(平成10年5月29日刊)に、単著として公刊することができた。『パリ・貧困と街路の詩学ー1930年代外国人芸術家たち』(都市出版)と題した本書は、総計500頁、既出論文13本に書き下ろし2本を加えた論文を再構成し、書き改めて刊行したものである。本書は、3部構成である。

第一部「亡命地パリの意味」では、ナチス政権成立後、ドイツ亡命者たちにとってパリが果たした役割と、文化的不毛性について、歴史的資料に基いて詳細に再検証し、さらにベンヤミン『パサージュ論』を本書の方法序説として分析した。第二部「街路・断片・写真」では、主に中央ヨーロッパ出身の亡命写真家たちによって、パリのフォト・ジャーナリズムが活況を呈し、その中から街路をめぐる新たな美学が生まれた点を追及した。そして第三部「貧困という制度」では、不況とナチズムの危機の時代に、亡命芸術家たちがパリの<浮浪者>に自らのアイデンティティを仮託した点をオーウェルとロートの作品から分析した。本書の目的は、本科研費の課題と同じく、1930年代の危機の時代に、パリに亡命した多ジャンルの芸術家たちにとって、なぜ〈パリ〉が重要なテーマそのものとなり得たのかを考察したものである。政治、文学、絵画、写真の他領域を横断する際に、比較文学の方法を駆使し、芸術史上、従来もっぱら「不毛の時代」「政治参加の時代」と捉えられていた1930年代に、全く別の光を当てることに成功した。本課題の最終年度にあたる平成11年度には、本書からさらに発展して、<パリ神話>の成立をめぐる文学/写真の相互関係に焦点をしぼり、もう一冊の単著を執筆する予定である。平成9年度より開始した本研究は、平成10年度に集大成して刊行した単著『パリ・貧困と街路の詩学--1930年代外国人芸術家たち』(都市出版、総計500ページ)によって、一応の成果を達成した。この著書は、「ナチズムと不況の時代」下、芸術的には不毛とされてきたこの時代に、パリに亡命した多くの外国人芸術家たちによって、驚くほど豊かで、また共通する都市表象が生み出されていたことを、文学、絵画、写真のジャンルを越境して解明したものである。以上のような(平成九、十年度)研究を通して、次第に明らかになったことは、十九-二〇世紀の「パリ神話」の変容を考えるにあたって、<写真>というメディアについての研究が不可欠であるという事実である。十九世紀後半に、パリという都市自体に生まれた<写真>メディアは、都市表象そのものの形成に深く関与している。また十九-二〇世紀パリでは文学者と写真家のコラボレーションによる作品が数多く成功したという興味深い事例が散見されるのである。そこで最終年度(平成十一年)は「パリ表象をめぐる文学と写真」というさらに発展的テーマに取り組んで別記のような論文にまとめ、本研究の総括にすると同時に、さらに次の著書を公刊する準備段階へと進んでいる。
水頭症発症に関わる分子メカニズムの解明

本年度の研究実績としては本研究に用いる遺伝子欠損マウスが部位特異的な神経系への異常が示唆され、当初繊毛異常のみに着目していたが、繊毛の異常あるいは繊毛の運動制御に関連すると考えていたタンパク質が脳組織、神経形成にも何らかの影響を与えている可能性が浮上してきた。特に現段階で有力と考えられるのは、当該タンパク質が細胞・組織外からの栄養因子またはカルシウムシグナルなどを伝達し、神経の発生、維持に関与しているという仮説である。この仮説を証明するため胎仔や新生仔の解析を行い、少なくとも胎生期には成獣に認められるような形態的、タンパク質レベルで大きな差は認められないことが明らかになった。また、成獣において脳組織の免疫組織染色を行なった結果、神経細胞のマーカータンパク質であるNeuNやMAP2や、グリア(アストロサイト)細胞のマーカータンパク質であるGFAPが減少していることもわかった。このことに関し、これらのタンパク質の減少が海馬周辺の大脳皮質では認められず、脳組織吻側(前交連上部)の大脳皮質でのみ認められた。また本年度は当該遺伝子欠損マウスから細胞を取得し、不死化細胞の作成、多能性幹細胞(iPSおよびES)細胞の樹立を試みた。これらの実験は申請者自身経験がなく、初めての試みだったこともあり不死化細胞の樹立およびES細胞の作成は達成することができなかった。ただし、iPS細胞は樹立することができた。この細胞を用い、神経細胞やグリア細胞といった脳組織を構成する細胞への分化誘導を試み、in vivoで観察されるような細胞の減少を確認したいと考えている。これによりin vitroの実験系を樹立し分子レベルでのメカニズムの解明につなげる狙いである。平成30年度は(1)脳室内繊毛の運動時期の解明と(2)繊毛の運動制御の解明を計画していた。まず、(1)の課題については研究協力者のサポートもあり繊毛の有無、形態、長さについて解析をすることができた。その結果、成獣においては野生型と遺伝子欠損個体の間に有意な差は認められなかった。ただし、計画では実施するはずだった新生仔期の脳室内繊毛については成獣において繊毛に形態的にも運動性にも異常が認められないことから、異常はないことが予想されたため実施しなかった。繊毛運動の詳細な解析および評価については運動性は確認したものの、数値化できるほどの詳細な解析は行えなかった。これは撮影条件や摘出した組織の培養条件の検討などに時間がかかってしまったためである。このデータは遺伝子欠損個体の繊毛に異常がないことを証明するためにも必要なデータであることから最終年度である平成31年度に完成させる必要がある。次に(2)の繊毛の運動制御の解明の課題については、野生型個体、遺伝子欠損個体から細胞を採取し不死化細胞と人工多能性幹細胞(iPS: induced pluripotent stem cells)の作成を試みた。その結果、iPS細胞を作成することができた。計画よりも早く作成することができたので、神経細胞への分化誘導実験を前倒しして進めている。また初年度である平成29年度に計画していたコンピュータ断層撮影(CT)を用いた脳室拡大時期の特定は機器の性能上、新生仔には対応することができなく、切片標本から脳組織と脳室の比率を算出することで実施した。しかし平成30年度に他組織との研究協力により高分解能の装置と染色方法を組み合わせることにより詳細な画像を取得することができたため、この方法を新生仔に適用し3次元的な脳室の容積を算出するとともに組織の比較を実施する予定である。まずはCTによる新生仔期の脳室容積の画像を取得し、野生型と遺伝子欠損型を比較することで拡大の時期を特定する。このことはこれまでの水頭症モデルマウスとの比較にも重要なデータであり、当該マウスの有意性を示す上でも重要である。すでにこれまでの当該マウスの解析の結果から、これまでの水頭症モデルマウスとは異なることが明らかであり、ヒト疾患および脳形成についての新たな知見が得られるものと考えている。次に2年目の実施項目として計画していたが、実施することのできなかった繊毛運動の解析を実施する。これまでに装置、機器のセッティングは完了しており、摘出した組織の培養条件も整っており、次年度の早い時期にハイスピードカメラでの繊毛運動の撮影、ビーズの流動画像を獲得する。その後の解析に時間を要することが予想されるが、画像解析に関する専門家に協力していただくことでデータの獲得を目指す。最終年度である本年度では最終的に外部への発表を目指す。論文投稿を目指したいが、時間的にはデータをまとめ草稿の作成までが現実的である。外部発表としては夏に開催される日本神経科学会及び、年末に開催される分子生物学会でのポスター発表を計画しており、多くの研究者とのディスカッションにより論文発表へ繋げていきたい。本研究計画初年度である平成29年度は遺伝子欠損マウスに対し、脳室拡大時期の特定および細胞新生と細胞死のバランスを明らかにすることを目指した。まず、脳室拡大の時期の特定については生後3週齢時点ではすでに野生型に対し有意に脳室が拡大していることが、組織切片による解析から明らかになった。そこでさらに遡り時期の特定を行なったが、若齢になるに従い個体差も大きいことがわかった。胎齢14日では著しい違いは認められなかったが、胎齢16日では野生型では閉鎖する領域が遺伝子欠損型マウスのいくつかでは閉鎖していない状況が認められた。さらに個体数を調べ表現型であることを確実にするとともに、この領域の解剖学的な場所を特定しその後の成長への影響についても検討したい。

次に細胞新生と細胞死のバランスについては、BrdUを用いた細胞新生の評価においては野生型と遺伝子欠損型マウスに大きな差は認められなかった。一方でTUNEL解析による細胞死の評価ではやや遺伝子欠損型マウスの上衣細胞でシグナルが多く認められたが有意な差ではなかった。しかし、TUNEL解析とアストロサイトのマーカーであるGFAP(Glial fibrillary acidic protein)の免疫染色の二重染色を行なった結果、GFAPのシグナルとTUNELのシグナルがマージしておりアストロサイトが細胞死していることが示唆された。初年度の計画である脳室拡大時期の特定と細胞新生と細胞死のバランスについてはそれぞれ結果を得ることができた。しかしながら、脳室拡大時期の特定については3週齢より若齢では個体差や組織が未発達であることなどから解析が難しい。3週齢の時点ですでに脳室の大きさに有意な差が認められることから、おそらくそれ以前から徐々に変化が生じていることが予想される。この点、時期の特定という計画においては完全な計画の達成とは言えず、その達成度は自己評価として60-70%と言ったところである。初年度のもう一つの課題である細胞新生と細胞死のバランスについては細胞新生には差は認められないものの、細胞死という点でやや遺伝子欠損マウスで亢進していることが示された。このことからほぼ計画は達成されたものといえる。さらに、この課題については細胞死する細胞がアストロサイトであることが免疫染色により示され、死んでいる細胞の種類を特定することができた。総合して初年度の進捗はおおむね順調に進展しているといえる。本年度の研究実績としては本研究に用いる遺伝子欠損マウスが部位特異的な神経系への異常が示唆され、当初繊毛異常のみに着目していたが、繊毛の異常あるいは繊毛の運動制御に関連すると考えていたタンパク質が脳組織、神経形成にも何らかの影響を与えている可能性が浮上してきた。特に現段階で有力と考えられるのは、当該タンパク質が細胞・組織外からの栄養因子またはカルシウムシグナルなどを伝達し、神経の発生、維持に関与しているという仮説である。この仮説を証明するため胎仔や新生仔の解析を行い、少なくとも胎生期には成獣に認められるような形態的、タンパク質レベルで大きな差は認められないことが明らかになった。また、成獣において脳組織の免疫組織染色を行なった結果、神経細胞のマーカータンパク質であるNeuNやMAP2や、グリア(アストロサイト)細胞のマーカータンパク質であるGFAPが減少していることもわかった。このことに関し、これらのタンパク質の減少が海馬周辺の大脳皮質では認められず、脳組織吻側(前交連上部)の大脳皮質でのみ認められた。また本年度は当該遺伝子欠損マウスから細胞を取得し、不死化細胞の作成、多能性幹細胞(iPSおよびES)細胞の樹立を試みた。これらの実験は申請者自身経験がなく、初めての試みだったこともあり不死化細胞の樹立およびES細胞の作成は達成することができなかった。ただし、iPS細胞は樹立することができた。
ウィリス動脈輪閉塞症における内膜下血管平滑筋細胞の増殖制御

ウィリス動脈輪閉塞症患者(モヤモヤ病)及び他の頭蓋内疾患患者の頭蓋手術時にえられた頭皮動脈より平滑筋細胞(SMC)を培養樹立した。これらSMCの一般生物学的特徴及び増殖因子に対する応答性につき比較検討した。モヤモヤ病,対照SMC共に有限分裂寿命を有し,最終分裂寿命に差はなかった。モヤモヤ病SMCでは,15%血清存在下,及び5%血清存在下でのPDGF添加による増殖応答性が対照に比し有意に低下していた。無血清により休止期に誘導したSMCへのPDGF添加では,対照SMCが有意にDNA合成を開始するのに対し,モヤモヤ病SMCではDNA合成が有意に刺激されなかった。EGF,IGFー1およびPDGFの同時添加ではモヤモヤ病SMCでもDNA合成は有意に刺激されたが,対照SMCのPDGF単独添加には及ばなかった。^<125>IーPDGFーBBによるレセプタ-アッセイでは,モヤモヤ病SMCで対照に比し有意に細胞あたりのレセプタ数が低下していた。解離定数には差が認められなかった。各レセプタ-単位毎に^<125>IーPDGFのプロセッシングを検討すると,対照とは差がなく,リガンドレセプタ-complexのプロセッシングには異常がないものと判定された。また,37°C2時間PDGFによる前処理を行った後,4°C下^<125>I・PDGFを結合させ,レセプタ-のダウンレギュレ-ションを検討した。モヤモヤ病SMCでは,低濃度のPDGD前処理により,対照に比し高度にdownregulationが起きることが明かとなった。こうした結果は,モヤモヤ病SMCでのPDGF反応性低下を示すと共に,その原因としてレセプタ-発現制御異常が存在することを示している。そして,PDGF反応性の低下は,内膜傷害修復機転の障害をもたらし,綬徐ながら,長期に渡る内膜下でのSMCの増殖を促し,内膜肥厚をきたし得るものと考えられる。ウィリス動脈輪閉塞症例に血管吻合術,及び他の頭盤手術時に得られた頭皮血管より,病理組織学的検索を行なうと共に,血管平滑筋細胞を培養し,その生物学的特性を比較検討した。位相差顕微鏡及び透過電子顕微鏡下の細胞の形態には異常がなく,Gーバンディング法による染色体の検索でも異常は認められなかった。経時的培養により,最終可能培養継代数より,培養細胞のエイジングを決定した。このエイジングを基礎とし,15%血清添加培養下における細胞増殖能を検討すると,本疾患由来の血管平滑筋細胞では,若い世代時の細胞において,有意の増殖能の低下が明らかとなった。増殖因子による細胞のDNA合成能を検討すると,血小板由来増殖因子に対する反応性低下が,ウィリス動脈輪閉塞症由来の血管平滑筋細胞に特徴であった。酸性,塩基性線維芽細胞増殖困るに対する反応性も同様に低下していた。また、上皮増殖因子,インスリン様増殖因子Iに対する反応性は、対照細胞と比べて,相異がなかった。血小板由来増殖因子の膜レセプタ-の検索を行なうと、本症平滑筋細胞では,有意のレセプタ数,結合能の低下が認められた。また,レセプタ-・リガンド複合体のインタ-ナリゼ-ションも低下していた。こうした結果は,本症血管平滑筋細胞で,血小板由来増殖因子のレセプタ-の発現異常を示唆している。また, ^<32>PーATPを使用し,増殖因子による、チロシン隣酸化を細胞膜において検討した。また,細胞膜よりSDSーPAGEにより,PDGFレセプタ-を取り出し,ウェスタンブロッティングを行なう事により、増殖因子レセプタ-異常の解明を試みた。今後は、TGFーβによる、PDGF,及びそのレセプタ-の誘導を検索する計画である。

そして,PDGF反応性の低下は,内膜傷害修復機転の障害をもたらし,綬徐ながら,長期に渡る内膜下でのSMCの増殖を促し,内膜肥厚をきたし得るものと考えられる。前年度の研究において,ウィリス動脈輪閉塞症患者由来の血管平滑筋細胞(SMC)を培養し,血清及び,PDGFに対する増殖反応性が低下していることを明らかにした。この所見は本症における内膜修復機転の障害を示唆すると考えられた。当該年度は,本症SMCのPDGF反応性低下の本態を明らかにすべく本症SMCにおけるPDGFレセプタ-の特性につき検討した。4°C,22°CのPDGFreceptor assayでは,EpEp病SMCにおいて,対照に比し有意にレセプタ数が低下していた。一方,解離定数(kd)には差がなかった。次いで,37°Cにおける^<125>ーIPDGFのKineticsを9時間迄追跡した。4°Cにおけると同様,peak receptor numberは本症SMCで低下しており,また,培養液中のTCA soluble froction(degradation)も本症SMCで低下していた。一方,単位レセプタ-毎に, ^<125>ーIPOGFのprocessingを検討すると,Internalization,degradation共に,対照SMCと有意の差を認めなかった。このことは,単位レセプタ-あたりのprocessingには異常がなく,細胞単位での^<125>ーIPDGFのprocessingの低下は,レセプタ数の低下に起因していると推定された。更に,PDGFを37°C2時間作用させた後,緩除な酸処理を行ない, ^<125>ーIPDGFを結合させることにより,レセプタ-のダウンレギュレ-ションを比較検討した。モヤモヤ病SMCでは,低濃度のPDGFの処理により,対照に比し,高度にレセプタ-のダウンレギュレ-ションが生ずることが明らかとなった。以上の結果は,本症におけるSMCのPDGF増殖反応性の低下が、PDGFレセプタ-の数の低下(細胞単位)によって説明しうると同様に,レセプタ-発現のregulationの異常も存在し得ることを示唆している。また,SMCのこうした反応性の特徴は,本症での層状の内膜肥厚(緩徐な)を説明しうるものと考えられた。
看護における仕事の文化と女性の地位に関する研究

平成9年度および平成10年度は首都圏のI大学病院における看護士へのインタビュー調査およびK病院における看護婦への面接調査、地方都市でS病院における看護婦並びに看護士へのインタビュー調査、M公立病院とS国立病院で計200名の質問票調査をおこない、平成11年度および平成12年度は質問票調査についての集計、分析をおこなったものである。平成12年度はさらに集計分析をすすめ、これらの結果について報告書にまとめた。分析結果の概要(1)社会的評価が高い、あるいはやり甲斐のある仕事であるという理由で看護職を選んでいるが、その年収はそれほど高くなく、また結婚を機に退職した後の再就職が難しいという状況はこれからの看護職のありようにとっての課題を提供するものである。(2)男性看護士の面接調査の結果について、録音されたものをトランスクリプトし、言説分析をおこなった。その場合、まず、男性看護士と女性看護婦との差異、および関係についてジェンダーの次元について、言及していると思われる面接の成功例を、典型的な事例とみなし、それについて、どのようなアーギュメントが見出されるか、分析した。とりわけ、女性が多数派を占める看護職において、なお男性の優位というテーマがみいだされた点に留意し、考察をこころみた。「医療とジェンダー」をテーマに東京首都圏の二つの大病院と仙台にある大病院を対象に面接調査を実施した。1)S病院において、非管理職3名、管理職3名、男性3名のグループにわけて看護スタッフに、かくグループにつき、1から2時間のインタビューを実施した。2)I大学病院において、男性看護士4名に各自1から2時間のインタビューを実施した。3)K病院において看護婦(看護部長、副部長を含む)19名、看護士3名に面接調査を実施した。4)a)看護職への男性の進出はまだ数は少ないが、女性の側からはそれほど違和感なしに受入れられている。b)看護士は外科とか精神科とかまだ活用の分野が限られているが、力の違いもあるので、男性とチーム・ワークを組むことは仕事を容易にすると考えられている。管理職からも積極的登用が求められている。c)看護職と医師の間ではチーム・ワークは割にうまくとられている。初めから職種の違い、仕事の違いが分かっているので、特に主従関係を意識することはない。d)女性は看護職を専門職としてその任にあることを自ら評価していて、賃金面の待遇に余り不満はない。一方男性は職に不満はないが、その待遇が一般に低いとされる女性のレベルに下げられているので、他の職種の男性に比べてそれが低いことに問題を感じている。今後もう少しインタビューの対象を拡げて、ジェンダーの観点から問題をふかめていきたい。1.東京の大病院で面接調査の実施東京の大病院で、昨年度面接調査を実施した対象者(看護婦、看護士)に継続して面接をおこなった。とりわけ、ジェンダーの問題をめぐって、詳細な聞き取りの必要のある者を選びだしておこなった。2.地方の大病院でアンケート調査の実施A)公立M病院で看護婦(士)120名にアンケート調査B)公立S病院で看護婦(士)80名にアンケート調査(1)看護士の数は殆どなく、積極的な意見の開示はなかったが、看護婦の側からは男性との共同作業を積極的に評価する回答が多かった。(2)医師と看護婦の関係については概ね医療チームのメムバーとして協力的な対等関係にあるとみているが、主従関係を指摘するものもある。特定の病院内での調査における回答で、回答者は匿名でも、病院の状況は明らかになるので積極的には否定的な意見は控えられたとの見方もなりたつところであり、次に医師の側への調査を実施したいと思う。(3)殆どの看護婦は看護職の社会的評価、あるいはその仕事の意義について満足している。したがって一般の職業において女性が自分の仕事の評価を十分受けられず、男女の格差に関心が高いのに比べて積極的な不平等感は見えてこない。3. 1998年7月、カナダ・モントリオールにおける第14回国際社会学会に参加。原山は現地病院を訪問、プロフェッションとジェンダーの問題について研究交流をおこなった。樋口は当学会で,「看護婦の労働条件と平等意識」と題して調査研究の中間報告として、研究報告をおこなった。1。

平成10年度に行ったアンケートについて集計、分析を行った。調査票196女性192(97.96%)男性4(2.04%)対象病院Aベッド数700看護婦(士)約300 Bベッド数約320看護婦(士)約1502。対象者の概要1)年令20代95(48.47%),30代45(22.96%),40代39(19.90%),50代17(8.67%)2)婚姻未婚106(54.08%),既婚89(45.41%),無回答1(0.51%)3)出身校看護婦専門学校171(87.24%),准看護学校10(5.10%),医療系短大6(3.06%),高校衛生看護学科5(2.55%),4年制大1(0.51%),無回答3(1.53%)4)経験年数11年以上85(43.37%),1-3年50(25.51%),4-6年35(17.86%),7-10年23(11.73%),無回答3(1.53%)5)年収300-400万未満58(29.73%),400-500万33(16.80%),600-800万27(13.78%),600未満22(11.22%)800-1000万1(0.51%),無回答55(28.06%)3。分析結果の概要社会的評価が高い、あるいはやり甲斐のある仕事であるという理由で看護職を選んでいるが、その年収はそれほど高くなく、また結婚を機に退職する者も多いということ、さらに一度退職した後の再就職が難しいという状況はこれからの看護職のありようにとっての課題を提供するものとなろう。平成9年度および平成10年度は首都圏のI大学病院における看護士へのインタビュー調査およびK病院における看護婦への面接調査、地方都市でS病院における看護婦並びに看護士へのインタビュー調査、M公立病院とS国立病院で計200名の質問票調査をおこない、平成11年度および平成12年度は質問票調査についての集計、分析をおこなったものである。平成12年度はさらに集計分析をすすめ、これらの結果について報告書にまとめた。分析結果の概要(1)社会的評価が高い、あるいはやり甲斐のある仕事であるという理由で看護職を選んでいるが、その年収はそれほど高くなく、また結婚を機に退職した後の再就職が難しいという状況はこれからの看護職のありようにとっての課題を提供するものである。(2)男性看護士の面接調査の結果について、録音されたものをトランスクリプトし、言説分析をおこなった。その場合、まず、男性看護士と女性看護婦との差異、および関係についてジェンダーの次元について、言及していると思われる面接の成功例を、典型的な事例とみなし、それについて、どのようなアーギュメントが見出されるか、分析した。とりわけ、女牲が多数派を占める看護職において、なお男性の優位というテーマがみいだされた点に留意し、考察をこころみた。
ケラチノサイトの細胞間接着装置に局在するMAPKKKキナーゼの機能解析

ケラチノサイトの細胞間接着にはデスモソームとタイトジャンクション様構造だけでなくアドヘレンスジャンクション(AJ)様構造も関与する。ケラチノサイトのAJには接着分子E-カドヘリンが集積しており、その細胞外ドメイン同士の結合により接着が成立する。また、細胞内ドメインはα-、β-カテニンを介してアクチンと結合する。アクチンは太いアクチン束を形成し、AJを裏打ちしている。私共は最近、ケラチノサイト培養株の細胞間接着部位にMAPKKKキナーゼの一つTNIKが局在することを見出した。私共は、TNIKが低分子量G蛋白質Rap2により活性化されて線維芽細胞のアクチン細胞骨格や基質細胞間接着を制御すること、ケラチノサイトではTNIKと同様にRap2も細胞間接着部位に局在することを見出し、これらの分子の機能解析を進めている。トランスフェクションによりTNIKのドミナントネガティブ変異体を発現させると、ケラチノサイトは偽足を伸張した特異な形態変化を示して上皮様形態を失い、隣接する細胞間の接着が障害される。また、このような細胞を免疫染色するとE-カドヘリンやβ-カテニン、p120カテニンなどのAJ分子が消失している。発現誘導型レトロウイルスベクター系を用いてTNIKを発現させたところ、内在性TNIKと同様に細胞間接着部位に局在し、E-カドヘリンの局在変化がみられた。また、親株のケラチノサイトでは見られる太いアクチン束が見られなくなった。同変異体を発現させたところ、細胞間接着に異常が認められた。RNAi実験の結果、ケラチノサイトにはRap2Bが優位に発現していることを見いだしたが、細胞接着に対する機能は不明である。現在HGF等によりノックダウン細胞を刺激し、Rap2-MAPKKKキナーゼ経路が持つ生理機能について調べている。ケラチノサイトの創傷部位への遊走や、癌細胞(有棘細胞癌など)の転移には、隣り合った細胞との接着解除が必要である。一方、私共は最近、ケラチノサイト培養株の細胞間接着部位にMAPKKKキナーゼの一つTNIKが局在することを見出した。発現誘導型レトロウイルスベクター系を用いて同変異体を発現させたところ、内在性TNIKと同様に細胞間接着部位に局在し、細胞間接着に異常が認められた。今後はTNIKやRap2をノックダウンするRNAiベクターを用いて、AJの形成・維持やアクチン細胞骨格との連結におけるTNIKの役割をさらに解析する予定である。
高齢期犯罪・受刑者の社会復帰と福祉的支援に関する調査研究

本研究は,高齢犯罪者について社会福祉および老年学の立場から実態を掴み,かれらの社会復帰について社会福祉実践の立場から可能性を探索した。高齢犯罪者は,矯正・保護での処遇が困難化して課題となり,触法障害者とともに政策面で社会福祉との連携が図られるようになった。高齢犯罪者へのインタビューを通じ,犯罪とともに社会的孤立を経験し,かれらが老年期の中で人生をやり直す課題に直面すると同時に,社会復帰を希望しても達成できないことへのあきらめを有していることが分かった。実践面では,福祉サービスによる社会復帰の支援も進む中,矯正・保護との連携は円滑でなく,福祉関係者の理解も乏しい。相互の理解と役割の明確化から,矯正・保護と社会福祉の連携が展開していくと考えられる。本研究は増加する高齢犯罪者について,その刑罰の実際および更生保護を通した社会復帰における福祉的支援について取り組むものである。平成19年度は,刑事施設および更生保護法人における職員へのインタビュー調査,保護司・教戒師など関連職へのインタビュー調査,および文献・調査報告書等の収集と分析を実施した。また本研究の専門的助言を得るため,龍谷大学矯正・保護研究センター基礎研究部門の嘱託研究員として調査研究に参加した。学会における関連事項を中心とした研究報告を計3回実施した。また次年度に向けた調査の依頼活動及び資料請求,刑事施設担当職員との継続的な意見交換及び等を実施した。また,個別的処遇に関する刑事政策および刑事施設における状況について,刑事施設1箇所から受刑者へのインタビューについての協力を得,その打合せを実施している。インタビュー調査は刑事施設7箇所のべ7回,更生保護法人3箇所のべ7回実施,また関連して教戒師1名へのインタビュー調査を実施した。このうち刑事施設では,高齢受刑者の概況・推移だけでなく,処遇(居室・作業場等)および釈放前調整における担当職員から満期釈放者の帰住先確保が困難である等,刑事施設での福祉的支援に関する具体的な課題について得ることが出来た。また識字教育を受けている高齢受刑者への指導から,受刑者の社会背景等に対する示唆が得られた。また,集団処遇を通して認知症のある高齢受刑者が処遇へ適応している現状,職員や篤志面接委員・教戒師への相談の機会が制約されていることが明らかとなった。以上の調査研究については,調査の依頼にあたり公表前の承諾を得る等の手続を踏んでいるため,年度内刊行物による報告が行えなかったが,平成20年度刊行の論文・文献を通して報告を実施することとなった。本研究は,増加する高齢犯罪者について,矯正処遇および更生保護の現状を調査し,福祉的支援のあり方の探究を目的に取り組むものである。平成20年度は,前年度に引続き刑事施設および更生保護法人を訪問し,職員へのインタビュー調査および刑事施設と地元社会福祉士による専門的助言の取り組みの構築,矯正教育プログラムの見学を行った。また更生保護施設において,高齢帰住者へのインタビュー調査を実施した。さらに,処遇について社会福祉に関する専門的意見交換の機会を得た。また本研究について専門的助言を受けるため,龍谷大学矯正・保護研究センター基礎研究部門の嘱託研究員として同センターの調査研究に参加している。研究成果として,刑事施設及び更生保護施設における処遇いずれにおいても,福祉的支援が必要とされる状況が明らかとなってきた。また国による社会福祉士の配置等政策面の対応も進む中で,刑事政策及び社会福祉の基盤的価値の葛藤が看過され,将来的な犯罪者の社会復帰への課題も顕在化しつつある。これらは,各方面の協力を得て実践しつつある矯正・保護の現場に対する専門的助言の試行,および高齢帰住者(元受刑者)に対するインタビューによる結果である。これらは次年度も継続することとなっている。以上の調査研究について,全体的状況に関する学会報告を4回,論文1本を刊行した。また刑事施設における専門的助言の試行に関する論文1本を執筆(平成21年度に刊行予定)した。さらに海外における犯罪者の社会内処遇に関する論文1本,高齢帰住者(元受刑者)へのインタビューに関する論文1本を刊行した。ただし後者は守秘義務及び協力先の許可を得る関係上,直接の結果公表でなく文学社会学の手法を通したものとせざるを得なかった。さらに全体的状況に関する論文2本を執筆現在査読中である。本研究は,増加する高齢犯罪者について,矯正処遇および更生保護の現状を調査し,福祉的支援のあり方を探求することを目的としている。平成21年度は前年度に引き続き職員や元受刑者へのインタビュー調査を実施した。また刑事施設や更生保護施設に勤務する社会福祉士等福祉職,社会福祉による刑余者の社会復帰を進める「地域生活定着支援センター」の開設が進んでおり,聞き取り調査等を実施した。

さらに,本研究に関する専門的助言を受けるため,龍谷大学矯正・保護研究センター基礎研究部門の嘱託研究員として同センターの調査研究および研究成果とりまとめに参加してきた。研究成果として,刑事施設・更生保護いずれでも福祉的支援を要する高齢犯罪者・触法障害者の社会復帰が施策として取り組まれるようになり,矯正・保護と社会福祉の連携が一層重要となってきたことが明らかとなった。これらについて,元受刑者へのインタビュー調査やアンケート調査を通して,かれら自身が老いる中で社会復帰していく生活課題が社会福祉の実践的制度的な焦点となっていることも明らかとなってきた。以上から,高齢犯罪者をはじめ福祉的支援を要する人々の社会復帰は,異なる政策・制度間の意思疎通や実践上の目標設定と実践両面で流動的な状況にあるが,社会福祉の立場から見ると深刻な「社会的排除」を解消すること,およびノーマリゼーションを実現してかれらの社会的包摂を進めていくことの必要性が明らかとなってきている。以上の研究成果について,所属する学会での研究報告を4回,論文3本,単行本1冊(分担執筆)を刊行した。また関連する研究論文を2本執筆・刊行した。さらに,関係先への講義などを行った他,更生保護・矯正に従事する社会福祉職への専門的助言を実施している。なお元受刑者へのインタビュー・アンケート調査結果については,調査協力先及び本人に対するプライバシー保護や個人情報保護の遵守を前提として実施したため,質的なデータ分析あるいは文学社会学の手法を通したものとなった。なお以上の他,研究論文3本を執筆,現在査読を受けている。
地方農村における高齢化社会への対応とその基礎条件の研究〜島根県迩摩郡仁摩町の「シルバーランド計画」の場合〜

平成4年10月29日11月3日の日程で、島根県邇摩郡仁摩町大字馬路地区において20歳以上の全住民796名を対象とする住宅意識調査を実施した。その結果、予備調査等の結果を照らし合わせ、以下の点が明らかになった。1.馬路地区の高齢化の実態はすさまじく、高齢者のみの世帯が多いが、将来、都会に出ている子供を呼び戻したり、自分自身が都会の子供のもとに行って扶養してもらいたいと考える者はほとんどいない。2.このような高齢者達の中でも、馬路地区で生まれ育った者達は、自分が生活している地域社会、人間関係及び自然への愛着が強く、例え自立した生活が不可能になっても、地域社会から離れたくないという強い意志を持っている。その結果馬路地区に大規模な老人ホームの建設を期待している。3.隣接する仁万地区での砂をテーマとする「サンド・ミュージアム」の建設と、そのシンボルとしての馬路地区の海岸の整備の結果、大量の観光客が地区を訪れるようになったが、この機会を捉えて積極的な観光開発に乗り出すべきだとする住民は少数で、むしろ、自然環境や静かな生活環境の破壊に対する不満を持つ住宅が多い。4.全体に地域的閉鎖意識が強く、仁摩町全体の中に馬路地区を位置付けて問題を解決していこうとする意識が弱い。本調査のみでは十分な提言が不可能なので、平成5年度以降も宅野、仁万、大国の各地区において同様の調査を実施するとともに、関東、関西在住の仁摩町出身者に対してもアンケート調査を実施する予定である。
在宅で看取りを行う家族への予期悲嘆介入プログラムの開発

本研究は、在宅で看取りを行う家族の予期悲嘆に焦点をあて、訪問看護師が「予期悲嘆尺度」を使用した上で行う家族支援内容を明らかにし、介入プログラムの根拠とした。その結果、尺度得点25以上では、感情を表出する場や関係調整の機会を意図的につくることや、家族が無自覚の身体的負担と根底にある死別への不安の援助を同時に実施すること、否認やアンビバレンスな感情への理解が抽出された。介入には看護師の意識の差を踏まえる重要性も示唆された。本研究は、在宅での看取りを推進するためには、保健医療福祉体制を整えることに加え、訪問看護における家族への支援が重要であると考え、そのなかでグリーフケアの一部である予期悲嘆への支援に焦点を当て、在宅で看取りを行う家族への介入プログラムを開発することを目的としている。これまでの研究で開発した在宅で看取りを行う家族に対する「予期悲嘆尺度」をスクリーニング尺度として用い、予期悲嘆の強い家族に対して、下位尺度の傾向と基本属性等から類型化された個々の家族の状況に対応できる介入プログラムを作成する。25年度はまず文献検討を行いながら、これまでの研究成果を元にした事例研究を行うための計画を立案した。研究対象者は、在宅で看取りを行う家族および、担当している訪問看護ステーションの看護師である。スクリーニング尺度を用いる対象は、訪問看護を受けながら在宅で終末期を迎える療養者の主介護者とし、療養者が予後不良の疾患に罹患しているかまたは、主治医より余命6ヶ月以内と家族に告知されている者とした。データ収集は、協力を承諾したステーションの管理者に候補者を選定してもらい、同意が得られた対象者に予期悲嘆尺度を実施してもらう。実施時期は、新規に訪問看護が開始となった事例の初回訪問から3,4回目までの可能な時期である。その後、研究者が担当看護師及び管理者に面接し、尺度得点や下位尺度の回答への意見と実施した看護について聞き取り調査を行う。これらの研究計画を整え、研究倫理審査を経て、協力施設の同意が得られた2施設の2事例について調査を実施した。現在結果を分析中であり、今後事例を増やしていく予定である。25年度に文献検討を行い、研究計画を立案したが、26年度はこの計画に基づきデータ収集と分析を実施した。データ収集の手順は以下のとおりとした。予期悲嘆尺度を用いる対象は、訪問看護を受けながら在宅で終末期を迎える療養者の主介護者とした。同意が得られた対象者に予期悲嘆尺度を実施してもらい、研究者が担当看護師及び管理者に面接し、尺度得点や下位尺度の回答への意見と実施した看護について詳しく聞き取るものである。分析は、質的統合法(KJ法)を用い、事例毎に結果をまとめている。26年度に調査を実施した事例については分析結果を公表予定である。しかし、介入プログラムを作成するにはまだ事例数が少ないと考え、今後も調査と分析を継続していき、結果をまとめていく予定である。本研究は、在宅での看取りを推進するためには、訪問看護における家族への支援が重要であると考え、そのなかでグリーフケアの一部である予期悲嘆への支援に焦点を当て、在宅で看取りを行う家族への介入プログラムを開発することを目的としている。27年度は前年度からの継続でデータ収集と分析を実施した。データ収集はほぼ終了しているが、分析結果を見ながら追加データの必要性を検討している。分析は、質的統合法(KJ法)を用い事例毎にまとめて順次公表している。その結果の一部は以下のとおりである。末期がんのA事例の妻に対するB看護師の援助は、家族の予期悲嘆が強いケースとして、亡くなっていく人に対するアンビバレンスな感情に揺れ動く場合があり、その思いを理解し、一方の感情を尊重しつつ心底の感情を看取る場面で引き出していた。訪問看護として本人のケアをスタッフに任せ、管理者が個別に家族と関わることは重要なひとつの方策と考えられる。そのためにも予期悲嘆の強さの背後にある感情を見極める援助が重要であることが示唆された。また、C事例の経験を元にしたD看護師の考えによれば、予期悲嘆尺度活用の条件は、家族の心身の状態、信頼関係、看護師間のサポート体制であり、効果として、早期に使用して時間を有効に家族と接触できること、表現しづらい気持ちの代弁と聞けない質問の答えが得られることが示された。予期悲嘆への援助として、家族が表現できない気持ちを理解して寄り添うことが必要であり、本尺度をツールとして直接は聞けない内容の回答を得ることでその意味を捉え、家族と深く関われることが示された。

これらより、研究者が開発したこの尺度は、看取りを行う家族に簡便な方法で予期悲嘆の程度と傾向を測定できるが、新たにわかったことは、介入モデルを作成するには看護師側の要素を加味する重要性である。今後は結果を元に介入モデルを作成し検証する。本研究の方法として、事例研究を積み重ねながら、介入モデルを作成する計画で進めている。現在、データ収集は、ほぼ終わったが、分析に時間を要している。分析方法は質的統合法を採用しており、時間がかかっているところである。しかし、研究者は、この分析方法のスキルアップの研修にも参加し、より良い結果を導きたいと考えており着実に進めるつもりである。本研究は、在宅での看取りを推進するためにグリーフケアの一部である予期悲嘆への支援に焦点を当て、在宅で看取りを行う家族への介入モデルを開発することを目的としている。28年度は、これまでのデータ収集・分析を継続的に実施し、データ収集は、在宅で看取りを行う家族を支援する訪問看護ステーションの看護師で、予期悲嘆尺度を主介護者に実施してもらい、研究者が面接し、尺度得点や下位尺度の回答への意見と実施した看護について聞き取る方法をとっている。分析は質的統合法(KJ法)を用い、事例毎にまとめて順次公表している。28年度の主な結果は以下である。F看護師は、老年看護専門看護師で3事例に尺度を使用し、『在宅看護では、家族の深い気持ちを聞くことや異なる価値観への確認作業は、病状にかかわらず看護師の責任で、私は専門看護師の実習経験もあって実行できたが、看護師には一般に避けたい、踏み込めないといった躊躇する傾向が存在している。しかし、尺度使用は、ご家族の感情を想像でなくて確かめて共感することで必ず何か介入することではないので、他の看護師が心配するほど身構えなくてもよいし、ご家族の状況を知らないと自分の価値観や経験でずれた対応をしてしまうと思った』とのことであった。また、Y看護師から慢性呼吸不全のターミナル期のD氏について、『低酸素でも大好きな風呂に入るなど低迷しながらの在宅生活で5年程経過した。ご家族は上手な社会資源活用によって身体的な介護の余力をある程度を保ち、中程度の予期悲嘆の結果だったが、尺度の回答から家族は終末期を受け止めていたことがわかった。尺度活用は紙面によるメリットがあり、ターミナルに限定しない対象にも早期ケアが可能だが、呼吸器疾患のターミナルの方は、息苦しさが極限で家族も見ておれない状況になるので、家で看取るというのは難しいという考えに至った』とのことである。前年度より事例毎の分析が遅れ気味となっていたことが影響してこれらの統合分析に更なる時間を要している。1年間、期間延長を申請し承認されたため、今年度最終年度として取り組む。29年度は、これまでの事例研究を継続的に実施し、在宅で看取りを行う家族を支援する訪問看護ステーションの看護師で、予期悲嘆尺度を主介護者に実施してもらい、研究者が面接し、尺度の回答への意見と実施した看護について、質的統合法(KJ法)を用い事例毎に分析した。29年度の結果の一部は以下である。
変異p53によるIGF-Iレセプター転写制御機構の解析と子宮頚癌における臨床応用

まず野生型p53の子宮頸癌における役割をHPV陽性である子宮頸癌由来細胞を用いて検討した。SiHa細胞にHPVの初期転写蛋白であるE6を、HeLa S3細胞にE2を一過性に遺伝子導入したところ、SiHa細胞ではp53蛋白の減少とIGF-Iレセプター蛋白の増加を、そしてHeLa S3細胞ではp53蛋白の増加とIGF-Iレセプター蛋白の減少を認めた。それぞれの恒久的遺伝子発現クローンを作成して検討したところ同様の事象を確認できた。ルシフェラーゼアッセイにて、このIGF-Iレセプター蛋白発現量の変化は転写制御による事を確認した。またE6/E2遺伝子導入によるIGF-Iレセプター発現量の変化により軟寒天培地での足場非依存性増殖能やヌードマウス皮下移植での腫瘍形成能は大きく変化しており、生理的な範囲でのHPV感染によるIGF-Iレセプター発現量の変化が子宮頸癌細胞の前述の悪性度に関与していることが示唆された。次に子宮頸癌や異型上皮の臨床検体を用いて、IGF-Iレセプターの発現量とそのチロシンリン酸化を免疫組織染色にて検討した。IGF-Iレセプター発現量はCINIII以上で有意に亢進し、またそのリン酸化は病巣の進展と共に有意に亢進していた。また異型上皮病変において、その基底細胞や労基底細胞のIGF-Iレセプター発現はCINIIIでは明らかに亢進しており、HPVの染色体組み込みによるE6蛋白の異常発現を反映していると考えられた。1まずwild typeのp53蛋白が子宮頚癌細胞のIGF-Iレセプター発現に及ぼす影響を検討した。HPVを細胞あたり12コピーしか有さないため、比較的p53蛋白を発現しているSiHa細胞にHPV E6遺伝子を導入したところ、p53蛋白量は減少し、逆にIGF-Iレセプター量は増加した。またHPVを細胞あたり約50コピー有し、そのためほとんどp53蛋白の発現を認めないHeLaS3細胞に、E6の転写を抑制するHPV E2遺伝子を導入したところ、今度はp53蛋白量の増加と、IGF-Iレセプター量の減少を認めた。2次に、このIGF-IR発現量がp53による転写レベルでの調節の変動によるものかを検討するために、IGF-IRのレポーター遺伝子を用いて検討した。SiHa細胞にE6を同時に遺伝子導入すると、IGF-IRの転写の亢進を認めたため、やはりこのIGF-Iレセプター発現量の変化はp53による転写制御の変化に起因すると考えられた。3これらのことを踏まえ、次に各種変異型のp53がIGF-Iレセプターの転写に及ぼす影響の検討に移った。Site directed mutagenesisにより、培養細胞株や臨床検体での報告の多い各種のミスセンス点突然変異や、リン酸化されるセリンをフェニルアラニンに変換した変異型p53の各種cDNAを作成した。今後、これらの変異型p53をIGF-IRのレポーターと共にp53 nullであるSaos2細胞、SKOV3細胞に一過性遺伝子導入することにより、IGF-IRの転写活性の変化を検討する予定である。HPVを細胞あたり12コピーしか有さないため、比較的p53蛋白を発現しているSiHa細胞にHPV E6遺伝子を導入したところ、P53蛋白量は減少し、逆にIGF-Iレセプター量は増加した。

次に、このIGF-IR発現量がp53による転写レベルでの調節の変動によるものかを検討するために、IGF-IRのレポーター遺伝子を用いて検討した。SiHa細胞にE6を同時に遺伝子導入すると、用量依存性にIGF-IRの転写の亢進を認め、また逆にHeLa S3細胞にE2を導入するとIGF-IRの転写の減弱を認めたため、やはりこのIGF-Iレセプター発現量の変化はp53による転写制御の変化に起因すると考えられた。またこのHPV E6の変化により軟寒天培地でのコロニー形成能、ヌードマウスでの腫瘍形成能が著明に変化していることが確認された。2これらのことを踏まえ、次に各種変異型のp53がIGF-Iレセプターの転写に及ぼす影響の検討に移った。Site directed mutagenesisにより、培養細胞株や臨床検体での報告の多い各種のミスセンス点突然変異や、リン酸化されるセリンをフェニルアラニンに変換した変異型p53の各種cDNAを作成した。これらの変異型p53をIGF-IRのレポーターと共にp53 nullであるSaos2細胞、SKOV3細胞に一過性遺伝子導入してIGF-IRの転写活性を検討し、現在、恒久発現クローンを樹立して蛋白レベルの検討し、結果の取りまとめ中である。
ラット伊東細胞の機能分化を調節する因子の検索

伊東細胞は肝類洞周囲に局在しレチノイド貯蔵を担当する。しかし、アルコールなどによる肝障害時には貯蔵レチノイドを放出し、分裂増殖して細胞外基質を産生する筋線維芽細胞様の細胞に機能変化することが知られている。伊東細胞はコラゲナーゼ・プロナーゼ灌流で得たラット肝分散細胞をメトリザマイドの密度勾配で遠心し調製できる。ほぼ100%の純度でラット肝伊東細胞を含む8%メトリザマイド画分から伊東細胞のマーカー蛋白のデスミンを細胞質で発現している非腫瘍細胞を株化した。株化細胞はブラスチック基質上で約40時間の細胞周期で増殖し、高いI型コラーゲンα1鎖(α1(I))mRNAレベルを持つが、細胞内レチノイドの蛍光強度は分離直後の伊東細胞のそれの1%未満であった。これらの所見から本細胞は伊東細胞に由来し、筋線維芽細胞様の機能をもつ細胞であると推測された。伊東細胞の接着する基質が伊東細胞機能に与える影響を分離直後の伊東細胞、初代培養伊東細胞、株化細胞を使い、ノザン法によるα1(I) mRNAレベルを指標として調べた。分離直後の伊東細胞のα1(I) mRNAレベルを基準として比較すると、プラスチック基質上で48-96時間初代培養した伊東細胞は約40倍高いこのmRNAレベルを示した。プラスチック基質上の株化細胞のα1(I) mRNAレベルは基準より800倍以上高かったが、株化細胞の接着基質を基底膜の細胞外基質成分を含むマトリゲルに変えるとそのレベルは約40%に低下した。そして、マトリゲルと接着した株化細胞の細胞周期は約180時間に延長した。TGFβなどのサイトカインが伊東細胞の機能変化に働くとの報告があるが、本研究のこれらの結果は、伊東細胞の機能指標のα1(I)mRNAレベルや増殖速度の変化に細胞の接着基質が重要な役割を持つことを示唆する。この細胞接着で働く情報伝達因子の解明が、伊東細胞機能の調節機構を知る手掛かりになると考えられた。肝類洞でレチノイド貯蔵を担当する伊東細胞は、肝線維化に際して分裂増殖し細胞外基質を産生すると報告されている。この機能分化に働く分子機構解明のため、伊東細胞株の樹立とその性質解明を平成6年度に試みた。レチノイドの油滴を持つ伊東細胞は、コラゲナーゼとプロナーゼ灌流で分散したラット肝から肝構成細胞中最も比重の軽い細胞として分離される。メトリザマイド密度勾配遠心で、伊東細胞は8%メトリザマイド画分に95%の純度で含まれていた。この8%画分細胞の継代中、NIH3T3細胞より大きな核と細胞質を持ち、免疫組織化学で細胞質内に伊東細胞の特徴とされるデスミンが検出できる細胞を分離した。この細胞株はプラスチック基質上で約40時間の細胞周期で増殖し、高いI型コラーゲンα1鎖(α1(I))mRNAレベルを示した。細胞外基質蛋白質軟ゲルとの接触で、株化細胞の細胞周期は4倍に延長し、そのα1(I)mRNAレベルは4分の1に低下した。株化細胞をヌードマウス皮下へ移植したが腫瘍は形成しなかった。これらの結果より、樹立細胞株の増殖速度とα1(I)mRNAレベルの変化は、本細胞と細胞外基質との接触で働く情報伝達系により制御されている可能性が示唆された。

株化細胞の由来を解明するため、UVレーザーで励起され、485/45BPフィルターを通して検出できる蛍光をレチノイド由来と判断し、株化細胞のレチノイド含量を付着細胞分析分取装置で測定した。プラスチック基質上、10%牛胎児血清を含む培地で継代したコントロールの株化細胞の蛍光強度は、分離直後の伊東細胞のそれの5%以下であった。しかし、細胞外基質蛋白質軟ゲルと接触し、10%ラット血漿を含む培地中でHepG2細胞と共培養した株化細胞はコントロールより1.5-倍高い蛍光強度を示した。これらの結果から本細胞は伊東細胞由来と考えられた。細胞外基質が細胞のレチノイド貯蔵に働く事実は新しい知見である。本細胞株は、細胞の増殖やレチノイド貯蔵に果たす細胞外基質の役割や、そこで働く情報伝達因子の解明に利用可能と考えられた。伊東細胞は肝類洞周囲に局在しレチノイド貯蔵を担当する。しかし、アルコールなどによる肝障害時には貯蔵レチノイドを放出し、分裂増殖して細胞外基質を産生する筋線維芽細胞様の細胞に機能変化することが知られている。伊東細胞はコラゲナーゼ・プロナーゼ濯流で得たラット肝分散細胞をメトリザマイドの密度勾配で遠心し調製できる。ほぼ100%の純度でラット肝伊東細胞を含む8%メトリザマイド画分から伊東細胞のマーカー蛋白のデスミンを細胞質で発現している非腫瘍細胞を株化した。株化細胞はプラスチック基質上で約40時間の細胞周期で増殖し、高い型Iコラーゲンα1鎖(α1(I))mRNAレベルを持つが、細胞内レチノイドの蛍光強度は分離直後の伊東細胞のそれの1%未満であった。これらの所見から本細胞は伊東細胞に由来し、筋線維芽細胞様の機能を持つ細胞であると推測された。伊東細胞の接着する基質が伊東細胞機能に与える影響を分離直後の伊東細胞、初代培養伊東細胞、株化細胞を使い、ノザン法によるα1(I)mRANAレベルを指標として調べた。分離直後の伊東細胞のα1(I)mRNAレベルを基準として比較すると、プラスチック基質上で48-96時間初代培養した伊東細胞は約40倍高いこのmRNAレベルを示した。プラスチック基質上の株化細胞のα1(I)mRNAレベルは基準より800倍以上高かったが、株化細胞の接着基質を基底膜の細胞外基質成分を含むマトリゲルに変えるとそのレベルは約40%に低下した。そして、マトリゲルと接着した株化細胞の細胞周期は約180時間に延長した。TGFβなどのサイトカインが伊東細胞の機能変化に働くとの報告があるが、本研究のこれらの結果は、伊東細胞の機能指標のα1(I)mRNAレベルや増殖速度の変化に細胞の接着基質が重要な役割を持つことを示唆する。この細胞接着で働く情報伝達因子の解明が、伊東細胞機能の調節機構を知る手掛かりになると考えられた。