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言語の政治学についての政治思想史的研究

研究課題について、社会思想史学会で二度の「政治と文学」研究セッションを組織したほか(2008、2009年)、芥川賞作家の平野啓一郎氏をゲストに招いて「政治と文学」座談会を実施した(2010年)。また、それぞれのメンバーが研究課題についての個別研究を刊行した。代表的なものとして小野紀明『ハイデガーの政治哲学』(岩波書店、2010年)と森川輝一『〈始まり〉のアーレント』)岩波書店、2010年)が挙げられる。(a)言語の政治学についての政治理論的研究-言語の政治学・総論本研究の総論部分については、数回の打ち合わせとメーリングリストによって情報交換を行った。具体的な成果としては、分担者の小田川が、政治理論における言語論の重要性を強調するチャールズ・テイラーの自由論についての研究報告を政治思想学会2008年度研究大会(於岡山大学)で行い、また関連する小田川の論文が学会誌『社会思想史研究』第32号(2008年9月)に掲載された。(b)「政治と言語」「政治と文学」についての政治思想史的研究-言語の政治学・各論本研究の各論部分についての学会報告としては、社会思想史学会2008年度研究大会(於慶応大学)で「政治思想と文学」セッションを開催し、分担者の堀田と森川が研究報告を行ったほか、森川がボストンで開催された国際学会で研究報告を行った。また、関連する森川の論文が『政治思想史研究』第8号(2008年5月)と『理想』第682号(2009年2月)に掲載されたほか、関連する翻訳として、分担者の藤田が関わったウォルツァー『正しい戦争と不正な戦争』(共訳、風行社、2008年)と、協力者の乙部が関わったコノリー『プルーラリズム』(共訳、岩波書店、2008年)が刊行された。(a)言語の政治学についての政治理論的研究ー言語の政治学・総論本研究の総論部分については、数回の打ち合わせとメーリングリストによって情報交換を行なった。具体的な成果としては、分担者の小田川が、政治理論における言語論の重要性を強調するジョージ・ケイティブの民主的個人性論についての研究報告を社会思想史学会2009年度研究大会(於神戸大学)で行ない、メンバー間での情報交換、問題意識の共有に努めた。また関連する小田川の論文が荒木勝・鐸木道剛編『東アジアの「もの」と「秩序」』(大学教育出版、2010年3月)に収録された。(b)「政治と言語」「政治と文学」についての政治思想史的研究ー言語の政治学・各論本研究の各論部分については、まず著作として、研究代表者である小野紀明が『ハイデガーの政治哲学』(岩波書店、2010年)を刊行した。また、論文としては、堀田新五郎「倫理から政治へーサルトルは何故『倫理学ノート』を放棄したのか?」(『奈良県立大学研究季報地域創造学研究』20巻1号、2009年)、藤田潤一郎「情念とその浄化ー『創世記』を巡る一考察」(『創文』525号、2009年)、森川輝一「ジョージ・ケイティブの政治理論についてーそのアーレント批判を手がかりに」(『名城法学』59巻2号、2009年)が公刊された。(a)言語の政治学についての政治理論的研究-言語の政治学・総論本研究の総論部分については、数回の打ち合わせとメーリングリストによって情報を交換しつつ、理論的な研究を進めていった。著作としては、研究代表者である小野紀明が『ヒューマニティーズ古典を読む』(岩波書店、2010年)を、森川輝一が『<始まり>のアーレント』(岩波書店、2010年)を刊行した。関連する論文として小田川大典「充実の変容と危機」が荒木勝ほか編『東北アジアの幸福観』(岡山大学出版会、2011年)に、また藤田潤一郎「書評:『人権の政治思想』」が『無教会研究』13巻(2010年)に、森川輝一「政治と連帯の間」が齋藤純一編『政治の発見第3巻支える-連帯と再分配の政治学』(風行社、2011年)に収録された。(b)「政治と言語」「政治と文学」についての政治思想史的研究-言語の政治学・各論本研究の各論部分については、2010年9月17日に作家の平野啓一郎氏を招き座談会「政治と文学」を京都大学吉田キャンパスで開催した(その成果は2011年度中に冊子にまとめられる予定である)。関連する論文として、堀田新五郎「20世紀精神史における「実存」の境位」が『地域創造学研究(奈良県立大学研究季報)』21巻(2010年)に、森川輝一「「物語る」ことをめぐって-デモクラシー時代の「政治と文学」」が『名城法学』60巻別冊(2010年)に収録された。
動脈硬化の全身および心臓・脳へ与える影響

本研究の目的は、全身に重度の動脈硬化症をきたし得る末梢動脈疾患に対し、血管の炎症反応や石灰化を中心に各種臨床指標において、有用なバイオマーカーの検索や全身および主要臓器へ与える影響を網羅的・包括的に探究することである。本研究により、動脈硬化症の本質を理解すると共に、将来的に早期介入を行い、未然に致死的な心血管合併症を予防することを期待する。本研究は自治医科大学附属病院循環器内科に外来受診もしくは入院し、精査にて末梢動脈疾患と診断された20歳以上の症例を対象としている。高度の全身性動脈硬化を帰す症例において、全身(大動脈含む)および主要臓器である心臓・脳へ与える影響を中心に検討する。エンドポイントとして全死亡ならびに脳卒中・心筋梗塞・心不全・大動脈解離・大動脈瘤での入院と定義し、各種臨床指標が予後に与える影響を評価する。本年度の目標は、症例登録時でのベースラインでの各種臨床指標の評価項目およびその内容を共同研究者と共に十分に検討し、その後詳細な評価方法の決定を行い、当院での臨床研究計画書を作成し、倫理審査委員会へ提出し、認可が下りた後に症例登録を行うことである。現在倫理審査委員会の承認を待ちである。その間、すでに当院の倫理審査委員会に承認を得ている「当院における末梢動脈疾患患者の後ろ向き予後研究」については同時にデータベースを作成しているところであり、2007年1月現在まで500例以上の症例が登録されている。前向き研究である本研究と並行して研究を進めていき、将来的には末梢動脈疾患における経年的変化や本研究との対比などの詳細な検討を行っていく予定である。共同研究者内での評価方法の詳細につき検討していたが、日常診療の合間に検討していたこと、他の臨床研究や基礎実験との兼ね合いなどの点から、当初予定していた通りには進行せず、やや遅れている状態である。また、当院での倫理審査委員会の承認などの期間も含めると、今後も進行状況としてはやや遅延することが予想される。当院での倫理審査委員会の認可が下り次第、本研究を進行出来るよう事前の準備を進めていく予定である。研究の進捗が遅延したため、次年度使用が生じたもの。次年度以降は、血清マーカーの測定費用、研究補助員の人件費、研究に係る情報収集のための学会参加費や出張費に充当する予定である。
腎癌の生物学的悪性度に関連するシアリルトランスフェラーゼの発現クローニング

腎癌悪性進展に関連するグロボシリーズガングリオシドの出発物質であるmonosialosyl galactosyl globoside(MSGG)を規定するα2,3-sialyltransferaseのクローニングを目的として、まず、発現クローニング法、次いでPCR法の両面から試みた。これまでのところは結果的に、発現クローニング法によりシアリルトランスフェラーゼは得られなかったが、濃縮されたcDNAとして5' precursor of rRNA,Placental transforming growth factor β,unknown cDNA,etc.が同定された。これらとMSGGの関連については、現在検討中である。一方、PCR法によりhST3Gal I,hST3Gal IVが同定された。hST3Gal Iはノーザンブロッティング上、腎癌の癌化や悪性化との明らかな関連は認められなかった。また、調べた限りのstable transfectantのうちMSGGの発現を示すものは見られなかった。hST3Gal IVのstable transfectantはmoderateながら、MSGGを発現した。腎癌組織のノーザンブロッティングにて、正常腎組織の殆どでhST3Gal IV transcriptの発現が亢進しており、逆に癌組織ではその殆どで発現が低下し、発現上昇の見られた症例の予後は良好であった。以上より、hST3Gal IVは分化に関連していることが示唆された。したがって、MSGGの合成に関わるα2,3-sialyltransferaseは他にも存在することが予想され、おそらくそれが腎癌の悪性進展とのかかわりを有するものと考えられるため、現在もなおそのcDNAを探索中である。尚、本研究過程で、以前われわれが報告したdisialosyl galactosyl globoside(DSGG)の他、同じ移動度にN-acetyl-galactosaminyl disialosyl type1 chain paragloboside(GalNAc DSPG-1)があることを見出した。また、DSGGは中胚葉由来の組織に分布することを見出した。更に、腎癌ではMSGGとGM3の発現が癌細胞の増殖程度に応じて逆相関することを見出した。腎癌の転移能に関連するglobo-series gangliosidesの合成経路上の出発点となるmonosialosyl galactosylgloboside(MSGG)を規定するシアリルトランスフェラーゼをクローニングするため、MSGGを発現している腎癌細胞株ACHNよりmRNAを抽出し、cDNAを作成、これをmammalian expression vectorのpME18Sに組み込み、約2x10^6の組み換え体を有するcDNA libraryを作成した。MSGGの前駆物質であるgalactosyl globosideを有するCOS-7 cellsにlibrary plasmid約30μgをtransfectionし、三日後にMSGGを特異的に認識するモノクローナル抗体RM1を用いたパニング法により、細胞を回収し、Hirt solutionによりplasmidを抽出する操作を8サンプルについて施行。これら8サンプル分のプラスミドを大腸菌にtransformationし増幅、それをまたCOS-7 cellsにtransfection、細胞を回収しplasmidを抽出する操作を4回繰り返した。その後、500 clonesをサブグループにわけ、COS-7 cellsへのtransient transfectionおよびFACS analysisにより、現在目的とするシアリルトランスフェラーゼの候補を検討中である。腎細胞癌の転移能と関連するグロボシリーズガングリオシドの出発物質であるmonosia10

sylgalactosylg10boside(MSGG)を規定するシアリルトランスフェラーゼをクローニングするため、平成9年度より腎癌細胞から発現ベクターに組み込んだcDNAhbraryを作成し、これをCOS-7CenSにトランスフェクションしてMSGGに特異的なモノクローナル抗体RMlを用いて回収する方法を繰り返すことにより目的とするcDNAを濃縮した。TransienttransfectionとFACSを用いたsibhngselectionにより候補と考えられたcDNAがいくつか得られたため、それぞれについてstabletransfectionを施行しFACS解析を施行した。このcDNAの選択ならびに絞込みの過程は非常に解析が困難で長期間を要したが、最近stabletransfectionにてMSGGを合成するcDNAが見出された。これが目的とするα2,3sialyltransferaseのcDNAであるのが、あるいは間接的にMSGGを合成するcDNAであるのかにつき現在更に解析を進めているところである。一方、今回の発現クローニング法の他にもシアリルモチーフを利用したホモロジークローニングも施行し、全長約3kbで約1kbのOpenreadingfi-ameを有するcDNAが得られた。シーケンスの結果からα2,3sialyltransferaseと考えられたため、これについても現在目的とするシアリルトランスフェラーゼか否かについて検討中である。腎癌悪性進展に関連するグロボシリーズガングリオシドの出発物質であるmonosialosyl galactosyl globoside(MSGG)を規定するα2,3-sialyltransferaseのクローニングのため、発現クローニング法およびホモロジークローニング法の両面から試みた結果、最近ようやくstable transfectantでMSGG発現を惹起するcDNAを同定することができた。このcDNAはシアリルモチーフを有していた。今後更にシアリルトランスフェラーゼ測定による活性確認およびノーザンプロッティングにより発現をみる他、腎癌の悪性度との関連についても研究を進める予定である。その他、発現クローニング法により二次的にMSGG発現を惹起するcDNAを二種類クローニングした。これらはいずれも報告されていない新しいDNA配列を有しており、今後それらの性質についても解析を進めていく予定である。尚、本研究の副産物として腎癌より新しいdisialosyl galactosyl globoside(DSGG)を同定した。
酵母遺伝学を用いたTORC2キナーゼ複合体下流シグナルの解析

スフィンゴ脂質は、生体膜を構成する必須の脂質であり、それ自身がセカンドメッセンジャーとなって細胞内の様々なシグナル伝達経路を制御することが知られている。私は、TORC2と呼ばれるタンパク質リン酸化酵素がその下流のSlm1/Slm2という分子を通して、スフィンゴ脂質代謝経路を制御することを見出している。本研究では、Slm1/Slm2がどのようにしてスフィンゴ脂質代謝経路を制御しているかを、酵母細胞を用いて遺伝学的、細胞生物学的に解析した。TORキナーゼは真核生物全般に保存されたセリン/スレオニンキナーゼであり、細胞内ではTORC1とTORC2という2種類の複合体を形成することが知られている。TORC1は、免疫抑制剤ラパマイシン処理により見られる細胞の増殖抑制に関連した機能を担い、一方、TORC2は、ラパマイシン処理では見られないアクチン細胞骨格制御に関連した機能を担うことが明らかにされている。TORC1の機能についてはラパマイシン処理による表現型を元により詳細な解析がされているが、TORC2の機能につてはその詳細は未だ不明な点も多い。申請者は、TORC2の下流因子として見出したS1m1/S1m2という2つの分子が、さらにその下流に存在するIsc1という形質膜にあるイノシトールリン酸セラミド(IPC)というスフィンゴ脂質の一つを分解するリパーゼを負に制御することにより結果としてアクチン細胞骨格を制御することを見出した。しかし、S1m1/S1m2とIsc1との直接的な相互作用は見出されておらず、S1M1/S1m2とIsc1との間には更に別の分子が存在することが示唆された。本研究では、このS1m1/S1m2とIsc1をつなぐ未知分子を遺伝学的、生化学的に同定することを目的としている。平成19年度は、生化学的にS1m1/S1m2とIsc1の間にある未知分子を同定するために、S1m1とIsc1のC末端に6xHis-tag-TEVプロテアーゼ切断部位-GFPまたはmRFPからなるタグを融合したプラスミドを作製し、それぞれをS1m1Δ/S1m2Δ/isc1Δ三重破壊株に導入した株を作製した。今年度は、この株を用いてS1m1、Isc1のそれぞれ結合するタンパク質を精製し、質量分析により同定することによりS1m1とIsc1の間にある未知分子の同定を試みる予定である。ORキナーゼは、真核生物全般に保存されたセリン・スレオニンキナーゼでありTORC1とTORC2という2つの複合体を形成してそれぞれ異なる細胞内シグナル伝達経路を制御している。本研究では、TORC2複合体の下流シグナルを、酵母遺伝学を用いて明らかにすることを目的として、解析を行ってきた。TORC2複合体の下流因子としてSlm1/Slm2という相同分子とIscl呼ばれるスフィンゴ脂質分解酵素を鍵因子として解析を行った。まず、Isc1とSlm1/Slm2とが細胞内でどのような分布をするかを調べたところ、Isc1は、主に細胞膜に局在したが、Slm1で見られるようなドット状の局在を示さず、これら2つの分子は、細胞内では全く異なる場所で機能することが予測された。また、遺伝学的な解析からSlm1-Isc1シグナル経路は、TORC2複合体の下流においてPkh1-Ypk1という2つのタンパク質キナーゼからなるシグナル伝達経路と平行して、最終的にスフィンゴ脂質代謝経路をそれぞれ分解と合成という相反する反応により制御するが示唆された。これらの結果から、熱ショックなどの細胞外ストレスに対して、スフィンゴ脂質代謝経路が、TORC2複合体下流シグナルであるSlm1-Isc1経路とPkh1-Ypk1経路をそれぞれ独立して自身の分解反応と合成反応により時間的・空間的に制御し、最終的にアクチン細胞骨格を制御ていることが考えられた。
空間的に非一様な回転流れ場における超臨界,亜臨界分岐と攪乱発達過程の特定

回転二重円柱周りの流れにおいて,渦の発生過程を追跡するためのツールを作成し,その有効性を確かめた.これにより,非一意な最終モードに至るまでの発達過程の分類を行うとともに,望ましい流れ状態を実現するための運転制御法の開発への道を開いた.回転二重円柱周りの流れにおいて,鉛直方向に回転軸を持ち,上側に自由表面がある流れの分岐を,数値的に調べた.数値的に予測されたHopf分岐発生レイノルズ数は,実験的に観測された3次元化発現のレイノルズ数に対応した.回転二重円柱周りの流れにおいて,クエット流を与えた場合と,減衰した一様撹乱の流れを与えた場合に対して,流れモード決定への影響を解析し,初期条件の影響を調べた.両者の場合とも,最終状態の複数モードの存在を予測できた.特に,一様撹乱を与えた場合には,実験的に発現するモードの確率分布との良い一致を確認した.ケーシング内で回転する円盤周りの流れでは,回転により発生する遠心力駆動流の分岐と,その流れ場全体への影響を調べた.数値的に予測される流れが非対称となるHopf分岐の発生を見極めるための,非軸対称性指標を導入し,その有効性を,実験結果との比較を通して示した.分岐が発生するレイノルズ数は,円盤の幾何形状の影響を受けにくいことを見出した.オープンキャビティの流れにおいて,流れモードの分岐と,その分岐における渦の発生と消滅過程の役割を明らかにした.また,振動流を抑える動的制御法を提案した.回転二重円柱周りの流れにおいて,渦の発生過程を追跡するためのツールを作成し,その有効性を確かめた.これにより,非一意な最終モードに至るまでの発達過程の分類を行うとともに,望ましい流れ状態を実現するための運転制御法の開発への道を開いた.回転二重円柱周りの流れにおいて,鉛直方向に回転軸を持ち,上側に自由表面がある流れの分岐を,数値的に調べた.数値的に予測されたHopf分岐発生レイノルズ数は,実験的に観測された3次元化発現のレイノルズ数に対応した.回転二重円柱周りの流れにおいて,クエット流を与えた場合と,減衰した一様撹乱の流れを与えた場合に対して,流れモード決定への影響を解析し,初期条件の影響を調べた.両者の場合とも,最終状態の複数モードの存在を予測できた.特に,一様撹乱を与えた場合には,実験的に発現するモードの確率分布との良い一致を確認した.ケーシング内で回転する円盤周りの流れでは,回転により発生する遠心力駆動流の分岐と,その流れ場全体への影響を調べた.数値的に予測される流れが非対称となるHopf分岐の発生を見極めるための,非軸対称性指標を導入し,その有効性を,実験結果との比較を通して示した.分岐が発生するレイノルズ数は,円盤の幾何形状の影響を受けにくいことを見出した.オープンキャビティの流れにおいて,流れモードの分岐と,その分岐における渦の発生と消滅過程の役割を明らかにした.また,振動流を抑える動的制御法を提案した.平成18年度は,振動流の発生臨界の特定,自由表面を持つ回転流の分岐線図の決定,実画像およびシミュレーション結果からの撹乱発達過程の追跡を行うためのシステムの開発を行った.自由空間に置かれた凹矩形キャビティで発生する振動流の特性と,その抑制制御法を調べた.矩形キャビティ内の流れでは,これまでにも,モデル2とモデル3の振動モードが卓越することが,実験的に知られている.本研究は,近似を高めた高精度計算により,モデル2の振動モードの挙動を,数値的に確かめた.その上で,振動を低減する方法として,矩形キャビティの底面を主流速度に沿った方向に移動させる,動的制御法を提案した.底面の移動により,矩形キャビティ内での渦構造が大きく変化する.そして,この構造変化が,流れ場全体の振動流の抑制をもたらす.これらのメカニズムを数値的に予測し,最適な制御方法を探った.有限長の回転2重円柱間のテイラー渦流れにおいて,新しく,上端面が自由表面である場合の分岐構造を調べた.流れのモデルでは,重力効果と表面張力効果を取り入れた.発達した非定常流において,実験的測定と数値的予測の結果が,よく一致することを確かめた.その上で,正規3セル流と正規1セル流および正規5セル流と正規3セル流の間の分岐線図を特定した.非定常な流れの発達を定量的に把握するために,可視化した流れの時系列情報から,渦の発生,消滅,融合を追跡する方法を提案した.また,この追跡方法を人の運動の把握にも適用し,その有用性を確認した.これらの成果は,雑誌論文などで公表した.回転二重円柱周りの流れにおいて,より自由度を高めて,鉛直方向に回転軸を持ち,上側に自由表面がある流れの分岐を,数値的に調べた.正規1セルと3セル,および,正規3セルと5セルの詳細な分岐線図を明らかにした.また,定常状態から非定常状態に移るHopf分岐の発生を,運動エネルギと自由表面変位の時間分散より見積もった.数値的に予測されたHopf分岐発生レイノルズ数は,実験的に観測された3次元化発現のレイノルズ数に対応した.最終的な流れモードに至るまでの分岐過程を決定する要因の一つに,初期速度分布がある.

回転二重円柱周りの流れにおいて,クエット流を与えた場合と,減衰した一様撹乱の流れを与えた場合に対して,流れモード決定への影響を調べた.両者の場合とも,最終状態の複数モードの存在を予測できた.特に,一様撹乱を与えた場合には,実験的に発現するモードの確率分布との良い一致を確認した.ケーシング内で回転する円盤周りの流れでは,ケーシング内面と円盤端面の間の隙間で発生する遠心力駆動流の分岐と,その流れ場全体への影響を調べた.遠心力駆動の流れは,波面角度が負となる螺旋渦を与える.これは,コリオリカ,速度変曲点不安定性により発生する螺旋渦とは異なった性質を持つことを示した.また,軸方向隙間の大きさが,構成される渦の数と渦発生分岐に及ぼす影響を調べ,隙間が狭くなるに従い,渦の数が増大する傾向を示した.オープンキャビティの流れでは,キャビティの長さが増えることにより発生する,モードIIからモードIIIへの分岐過程を,数値的に詳細に予測した.また各モードにおける振動流を抑えるための,動的制御法を提案した。
ミツバチのカースト分化におけるエピッジェネティック制御機構の解析

ロイヤラクチンはミツバチの女王蜂分化を誘導する。ロイヤラクチンによって誘導される女王蜂の表現型の中で発生期間の短縮における分子メカニズムを解析した。その結果、ミツバチにおいてもショウジョウバエにおいてもHR38が個体の体サイズや卵巣の発達には影響を与えず発生期間を制御する因子であることが明らかとなった。また、ショウジョウバエを対象とした解析から、HR38は表皮形成に関与する因子、imaginal discの形成に関与する因子、larval heart developmentに関与する因子など多数の因子の遺伝子発現を増加させ、脱皮や幼虫の成長を促進させていることが明らかとなった。1、女王蜂は、働き蜂に比べて体サイズが1.5倍以上あるにも関わらず、発生期間が短く早く羽化する。通常、生物個体において大きい個体は遅く羽化し、小さい個体は早く羽化する。女王蜂は一般的な生物の法則に反している。女王蜂が体サイズが大きいにも関わらず早く羽化してくるメカニズムを明らかにするため、この現象に関与する因子を探索した。本申請者は、これまでにロイヤラクチンあるいはローヤルゼリー(RJ)が、ショウジョウバエに女王蜂様の表現型(体サイズの増加、発生期間の短縮、産卵数の増加、寿命の延長)を誘導することを明らかにした。このRJを用いたショウジョウバエ飼育系を使って女王蜂の発生期間の短縮化に関与する因子を探索した。その結果、DHR38がRJによるショウジョウバエの発生期間の短縮を誘導する決定因子であることが明らかとなった。次に、DHR38のミツバチのオルソログであるHR38のRNAiを行った結果、HR38のRNAiにより女王蜂の体サイズや卵巣の発達はそのままで発生期間だけを長くすることが明らかとなった。この結果は、HR38が女王蜂の発生期間を短くするための重要な因子であることを示唆していた。現在、ハエにおいてDHR38の過剰発現により体サイズはそのままで発生期間のみが短くなるかどうかについて検証を行っている。さらに、今後、DHR38の下流で発生期間の短縮化に関与する実行因子をマイクロアレイ解析などを用いて探索していく予定である。2、ロイヤラクチンによるショウジョウバエの女王蜂様表現型の誘導のメカニズムを明らかにするため、UAS-royalactin、ppl>royalactinとpp1>royalactin+EGFRRNAiの間での遺伝子発現の違いをマイクロアレイを用いて解析した。その結果、ロイヤラクチンの発現により卵形成に関する様々な因子の遺伝子発現が上昇していた。今回は、ホルモン代謝の亢進などが見られた孵化後4日目においてアレイ解析を行ったが、さらに今後、孵化後3日目、孵化後5日目のアレイ解析を行いそれらの結果と今回の結果を比較することで、ホルモン代謝の亢進や様々な因子の遺伝子発現の上昇などが多く見られる孵化後4日目においてのみ発現が誘導され、ロイヤラクチンの下流で女王蜂様表現型の誘導に関与する内因性の決定因子を同定していきたいと考えている。3、ロイヤラクチンによるショウジョウバエの産卵能増加の作用メカニズムを解析した結果、ロイヤラクチンはショウジョウバエの卵巣管の数や卵室の大きさには影響を与えず、卵形成のスピードが速くなることによって産卵数を増加させていたことが分った。これまでにこのような形で産卵数を増加させるような例はなく、新しいタイプの生殖機能向上のためのメカニズムであると考えられた。1.女王蜂の発生期間短縮機構の解析女王蜂は、働き蜂に比べて体サイズが1.5倍以上あるにも関わらず、発生期間が短く早く羽化する。通常、生物個体において大きい個体は遅く羽化し、小さい個体は早く羽化するが、女王蜂は一般的な生物の法則に反している。本申請者は、これまでにロイヤラクチンあるいはローヤルゼリー(RJ)が、ショウジョウバエに発生期間の短縮化をはじめとた女王蜂様の表現型を誘導することを明らかにしている。さらに、女王蜂の発生期間の短縮化に関与する因子を探索した結果、DHR38或いはDHR38のミツバチのオルソログであるHR38がミツバチのカースト分化における発生期間の短縮化を誘導する重要な因子であることも明らかにしている。本年度はさらに女王蜂における発生期間の短縮化のメカニズムの解析を行った。その結果、発生期間の短縮化にかかわるDHR38の発現は唾液腺に限られていることが分かった。また、Gal4/UASシステムにて唾液腺だけでDHR38を発現させた場合に発生期間の短縮化が見られた。これらの結果から、HR38が昆虫の発生期間を制御する重要な因子であることが明らかになった。2、女王蜂の寿命制御機構の解析ロイヤラクチンをショウジョウバエの脂肪体で強制発現させると個体の寿命が延長する。

脂肪体でロイヤラクチンを発現させた系統(ppl>royalactin)とコントロール系統(UAS-royalactin)の間での3齢幼虫(孵化後6日目)におけるクロマチン修飾の違いをヒストンH3とH4のメチル化、アセチル化抗体(14種類)を用いて解析した。その結果、脂肪体でロイヤラクチンを発現させた系統においてコントロールに比べH3K4のメチル化とH4R3のメチル化が抑制されていた。これらのメチル化部位は、メチル化抑制によりヘテロクロマチンになることから、寿命制御に関与している可能性が考えられた。通常、生物個体において体サイズが大きい個体は遅く羽化し、小さい個体は早く羽化する。この法則に反して女王蜂は体サイズが大きいにも関わらず早く羽化してくるが、そのしくみはこれまでに明らかになっていない。そこで、女王蜂における発生期間の短縮に関与する因子を探索した。その結果、ミツバチのHR38(amHR38)が女王蜂の体サイズや卵巣の発達には影響を与えず発生期間を制御する因子であることが明らかとなった(図参照)。さらに、ショウジョウバエにおいても唾液腺でのDHR38の発現が発生期間の制御に関与していた。唾液腺特異的にDHR38を過剰発現させた系統(sgs3>DHR38)は、UAS-DHR38より7日間の幼虫期間を約1日も短縮していた。sgs3>DHR38とUAS-DHR38の間の遺伝子発現の違いをDNAマイクロアレイにより解析した結果、唾液腺でのDHR38の発現により、tweedleタンパク質ファミリー(8種類)やcuticleタンパク質関連因子(8種類)などの幼虫の表皮形成に関与する因子、imaginal discの形成に関与する因子(6種類)、larval heart developmentに関与する因子など多数の因子の遺伝子発現が増加していた。この様に、唾液腺のHR38だけで表皮タンパク質やimaginal disc形成因子など幼虫期の変態や器官形成に関与する多数の因子の発現を誘導し脱皮を促進させていたいことは、HR38が未だ明らかになっていない昆虫の脱皮過程の上流で鍵因子として機能し、発生期間を制御していることを示唆している。このような発生期間或いは脱皮の制御因子はこれまで報告されておらず、今回が初めてのものとなる。26年度が最終年度であるため、記入しない。発生生物学26年度が最終年度であるため、記入しない。ミツバチのDNAやヒストンのメチル化を解析する技術を確立することに時間を要した結果、計画よりやや遅れている。今後は確立したミツバチのDNAやピストンのメチル化解析法を用いて、ロイヤラクチンによるミツバチのヒストン修飾の制御機構を解析して行く予定である。ミツバチのヒストンのメチル化、アセチル化を解析するための組織切片を用いた組織化学的解析法を確立することに時間を要しており、計画よりやや遅れている。また、ミツバチのDNAのメチル化の解析を行うため次世代シークエンサーを用いた解析の体制整備にも時間を要した。しかし、現在までに基礎生物学研究所と共同で次世代シークエンサーを用いたミツバチのDNAメチル化を解析できる体制も整っている。今後は確立したミツバチのヒストンメチル化の組織
躁鬱病原因遺伝子の探索

我々は21番染色体完全決定の一翼を担って34Mbのシーケンスを完成させ、コンピュータ解析により225個の遺伝子を発見した(Nature 405:311-319(2000))。これらの遺伝子のエキソンを増幅するPCRプライマーを作製し、21番染色体上にマップされている疾患の患者家系特異的な変異の検索を行った。その結果、躁鬱病と同様に21q22.3上にマップされていた家族性聴覚障害(DFNB8/10)の原因遺伝子TMPRSS3を特定することができた(Nature Genet.27:59-63(2001))。現在、躁鬱病についても引き続き患者特異的な変異の検索を進めている。またシーケンスデータから予測された遺伝子の存在を実験的に検定するのとともに、これまででコンピュータ解析で予測できなかった遺伝子の存在についても、比較ゲノム解析、実験によって検証を進め、同領域の遺伝カタログを完成させる予定である。新たに遺伝子が得られれば、それらについても患者特異的変異の検索を行い、躁鬱病原因遺伝子の特定を目指したい。1.21q 22.3そううつ病領域のBAC/コスミドコンティグ作成と塩基配列決定躁鬱病の原因遺伝子がマップされている21q 22.3上のマーカーMXI-D21S1259-D21S171間の約3.5Mbの領域をカバーするため、我々が作製したヒトゲノムBACライブラリーと21番染色体特異的コスミドライブラリーを活用して、BAC/コスミドコンティング(整列クローン)を作成した。それらのコンティグ中の各クローンを出発材料にしてショットガンシーケンス法により3.5Mbの塩基配列を完全に決定した。シーケンシングは99.99%以上の精度で行った。2.コンピュータを用いた遺伝子断片の探索現在、各遺伝子の各エキソンを増幅するPCRプライマーを作製し、これらの遺伝子の中で躁鬱病患者に特異的な変異が存在するかどうか検索を進めている。
森林の持続可能性と林産物貿易に関する国際的枠組みについての政治経済学的分析

これまでに森林の持続可能性を確保するには林産物貿易は制御すべきことを理論的に導いてきたが、実際には森林の持続可能性についての国際交渉は一向に進まない。この大きな原因は林産物産業の政治過程にある、と考えられる。そこで林産物の素材市場の需要寡占、製品市場の供給寡占の構造と貿易についてまず理論的に分析し、さらにDUP活動の原資になると考えられる寡占によるレントの計測方法をレビューし、モデル構築を試みた。今年度、まずレントシーキングや産業組織論の分野から、林産物多国籍企業の活動を分析するべくリサーチを始めた。アメリカの林産物多国籍企業の会計などを少し調べたが、レントシーキングについては理論的には分析できても、実証に耐えうるデータを取得するのはかなり至難の業である、ということが徐々に明らかになってきた。産業組織論的なモデルについても、需要寡占構造を理論的に扱うことはできても、なかなか実証レベルで扱うのは困難であることが明らかになってきた。また調べていくうちに、貿易による分配変化や、多国籍企業による貿易利益が誰に帰着するのか、というアプローチのほうが、各国の政策や政治構造に与える影響を分析する切り口としては、適切なのではないか、と考えるようになった。そこで、多国籍企業の経済利益はどの国で課税されるのか、またタックスヘブンの問題や移転価格の問題がどの程度多国籍企業の企業立地に影響を与えるのか、という問題について調べた。その結果、例えば日本の多国籍企業の海外直接投資は、特に製造業では海外子会社の収益が本社の収益の3割程度までになっており、しかも海外子会社の収益の内部留保は7割にも及ぶことがわかった。この分は日本の法人税課税が留保されることになる、ということである。このような多国籍企業と国家利益の関係、そして経常収支均衡を確保できない国際通貨システム、これらを踏まえてどのような実証モデルを構築できるのか、ということを分析することが次年度の課題であると認識している。昨年度のリサーチから、多国籍企業のレントを計測する実証モデルを構築するにとが今年度の主要課題となった。そこで、まず年度の前半で、一般的な供給寡占と資源産業で特に問題になる原材料についての需要寡占についての理論・実証分析のレビューを行った。その結果、供給寡占や需要寡占についての理論的分析のみならず実証的分析についてそれなりの先行研究が存在することがわかった。特に後者の原材料についての重要寡占については、その典型として林産業について分析しているものがいくつかあることも発見した。寡占価格の形成やレントの計測について、需要寡占をベースとしたモデルの中で、動学的にこれを求めているものがあった。これは、カナダの林産業について動学的な寡占価格形成の有無を検証しているもので、理論的には変分法を使っており、この手法を応用すれば動学的なレントの計測が可能ではないかと考えられる。そこで、この論文をベースにレントの計測を試みるためのデータ収集を開始した。カナダの林産業の財務データ、費用データと生産・出荷データである。これらはすべてStatistics Canadaという政府のサイトに集約的に存在し、データの欠損はあるものの、およそ30年分収集できることがわかった。そこで、インターネットでアクセスし、木材加工業と紙パルプ産業について、財務データ、費用データ、生産・出荷データを有料でダウンロードした。今後、上記の論文の枠組みを基礎に、レント計測のモデルを構築し、これらのデータを用いて、実際に推定を行うのが、次年度の課題と考えている。森林の持続可能性と林産物貿易の関係の産業組織論的・政治経済学的分析を行っている。世界の主要な林産物輸出国の林産加工業は非常に寡占化しており、欧米では多国籍化したこれらの企業またはその業界団体の各国の政府や国際的枠組みの交渉に及ぼす政治力の大きさを指摘する研究もある。そこで林産物輸出国の産業組織論的特質や国際的な価格支配力の理論的・実証的分析を試みている。特に、その中での林産物に関する多国籍企業のレントを計測する実証モデルの構築し、将来的にはレントの政治過程への影響を考えていくベースとしたい。寡占価格の形成やレントの計測については、供給寡占をベースとしたもの、需要寡占をベースとしたもの、また両方を組み込んだものがあり、さらにモデル構築を静学的に行っているものもあれば、動学的にこれを求めているものもある。長期的なレントの影響を考える時には、動学的な超過利潤を考えるほうが有効であると考え、カナダの林産業について動学的な寡占価格形成の有無を検証しているBernstein,J.I.(1992)のモデルをベースにレントの計測を行うことにした。昨年度カナダの林産業の財務データ、費用データと生産・出荷データについて探索を行い、Statistics Canadaという政府のサイトから、木材加工業と紙パルプ産業について、財務データ、費用データ、生産・出荷データを有料でダウンロードした。今年度は、これらのデータと上記論文の枠組みを基礎に、実際にレントの推定モデルの構築を試みた。

Bernstein,J.I.(1992)のモデルは非線形の同時方程式体系で3SLSによって分析されているが、非線形の3SLSの統計パッケージの発見が困難であるため、統計パッケージソフトSTATAで、ひとまず非線形の同時方程式体系をseemingly unrelated regressionを用いて計測している過程である。
出土文献を用いた西夏王国の交通制度に関する研究

1113世紀に、中国西北部のユーラシア大陸の東西を結ぶ交易路を支配していた西夏王国が実施していた交通制度、特に西夏の公的な使者が所持していた身分証(符牌)の制度について、西夏時代の遺跡から出土した西夏語の文献を用いて研究を行なった。本研究によって、西夏の身分証の制度のいくつかが、前近代の中央ユーラシア諸国家の制度と共通している点があること、またいくつかの制度には西夏独自のものもあることが明らかになった。本研究では、10世紀末13世紀初頭の中国西北部にあった西夏王国における交通制度を解明していく。具体的には、駅伝制度や旅行者が携行する通行手形の種類とその使い分けがどのようになされているか等を、制度面については法令資料から、制度の実際の運用状況については行政文書群から解明する。そして、広大かつ乾燥した砂漠地帯が支配地域の大部分を占める西夏の交通制度が環境・風土に応じた特色を有しているのか、西夏を征服したモンゴル帝国が西夏の交通制度を継承していたのか否か両者の相違点を検証する。本年度はまず、12世紀中葉の西夏で編纂された法令集『天盛禁令』の交通制度に関連する条文計48条(全文西夏語)を既刊のテキスト写真版をもとに読み進めた。しかし、写真版での画像は不鮮明であるうえ、未公刊のテキストも存在することから、平成22年1月にテキストのマイクロフィルムを所蔵する東京の財団法人東洋文庫で調査画像を閲覧し、さらに平成22年2月にはテキストの現物を収蔵するロシア科学アカデミー東方文献研究所(サンクト=ペテルブルク市)で実見調査を行なって、最終的かつ完壁な録文を作成することができた。調査の結果、既刊の写真版からは判読できなかった箇所を新たに解読することができ、先行研究による条文の解釈に誤りがあることが判明した。そして、通行手形を表現する西夏語が複数あること、公的旅行をする者が「頭子」なる書式の文書を携行していたこと等が明らかになった。東京・ロシアでの調査を経たうえで、条文を再度読み直し、その訳注を学術雑誌に投稿した(平成22年5月末刊行予定)。また、行政文書の一部についても既刊の写真版を基に検討し、そのなかの「頭子」という語句の現れる文書の解釈について平成22年3月に学会報告を行なった。本年度は、平成21年度に行った法令集『天盛禁令』の交通制度に関連する条文の訳注作業を基に、条文の内容の考察を進めた。その結果、1)西夏王国の中央政府から派遣された使者は道中、「牌」「符」とよばれるものを所持していたこと、2)「牌」は、使者一般が所持するもので、旅行の途上で騎乗するための駄獣を調達できる通行手形としての機能を有したこと、3)「符」は、挙兵の伝達を行う使者が所持する身分証であり、「符」単独では駄獣を調達ができず、「牌」を同時に携行する必要があったことを明らかにした。さらに、「符」については、a)中央政府から地方の軍管区の役所へ挙兵の知らせを伝達する際に用いるもの、b)それとは別に、地方の軍管区から管轄下の軍団に挙兵の知らせを伝達する際に用いるもの、c)宮中で働く者が使者として派遣される場合に持つ「刀符」と呼ばれるもの、以上の3種類があることを明らかにした。一方、法令が規定通りに運用されていたのか検証するため、行政文書群の解読を行った。当初の予定では、写真版からの予備調査を経て、平成22年度中に文書群を所蔵するロシアの研究機関で実見調査を行う予定であったが、難解な草書体の文字の解読に手間取ったために予備調査が遅れ、平成23年夏に実見調査を実施した(渡航費は、平成22年度分の繰越金を充当)。調査の結果、1)中央政府から地方へ派遣された使者、ならびに地方へ赴任した官僚が、法令集の規定通りに、「牌」と同時に「頭子」と呼ばれる書状を所持して旅行していたこと、2)「牌」には法令集に現れる銀牌や鍮牌のほかにも、金牌が存在し、金牌は高位高官が所持していたことが確認された。この考察結果は、平成24年春に中国から刊行される学術誌『西夏研究』に中国語で発表掲載される予定である。本年度は、平成21・22年度の研究によって得られた成果をもとに、西夏王国の交通制度、特に政府から派遣された使者が携行する「符」や「牌」等の使用方法(符牌制度)が、同時代及び前後の時代の東アジア・中央ユーラシア諸国家の制度と比較して、どのような特徴を有しているのか比較、考察した。

考察の結果、1)西夏において、通行手形である「牌」を所持する者が、「頭子」とよばれる文書を同時に携行することによって初めて道中で駄獣を調達できる制度は、西夏と同時代の宋王朝、前の時代の唐王朝にはなく、西夏を滅ぼしたモンゴル帝国には存在すること、2)中央政府から地方に挙兵を知らせる使者の身分証として用いる「符」は、西夏のみならず東アジアの各王朝でも存在するが、地方の軍管区から管轄下の軍団に挙兵を知らせる際に使者が「符」を携行する制度は、西夏の制度にしか見られないこと、3)西夏では、皇帝側近の者が使者として派遣される際に身分証として「鉄箭(鉄の矢)」を携行するが、首長の使者であることを証明するために矢を携行する制度は、510世紀の中央ユーラシア諸国家で一般的に行われており、西夏はその制度を踏襲していることが明らかになった。本研究によって、西夏の符牌制度には、この国独自の制度がみられる点があるものの、西夏の前時代の中央ユーラシア諸国家の影響を受けている側面も少なからず見られ、西夏を滅ぼしてユーラシア大陸に史上空前の大帝国を築いたモンゴル帝国に受け継がれていた制度も存在する可能性があることを明らかにすることができた。本研究の手法は、西夏王国の存在が中央ユーラシア・東アジア史の流れの中にどのように位置づけられるか、制度史の面からとらえ直す上でも意義深いものとなった。以上の考察結果は、平成24年6月にロシアから英文論文として発表する予定であり、その一部を平成24年3月に学会で報告した。
時間分解コールドスプレーイオン化質量分析法による不安定化学種の溶液動態解析

金属と有機配位子の結合を壊さないソフトなイオン化法であるコールドスプレーイオン化質量分析法(CSI-MS)を用いて,弱い相互作用で構築された化合物の反応追跡を行った.二種類の有機配位子を異なる配位子比で混合して金属溶液を加えた後,錯形成を行った.貧溶媒を加えて結晶化を行ったところ,二種類の結晶が異なる配位子比で別々に得られた.CSI-MS測定で得られたイオンピークが結晶構造変化と対応して変化することが分かった.このことからCSI-MS測定によるイオンピーク変化は溶液構造体変化と関連している.同時にソフトイオン化で検出されたピークを解析する成分組み合わせ解析の有用性を明らかにした.金属と有機配位子の結合を壊さないソフトなイオン化法であるコールドスプレーイオン化質量分析法(CSI-MS)を用いて,弱い相互作用で構築された化合物の反応追跡を行った.二種類の有機配位子を異なる配位子比で混合して金属溶液を加えた後,錯形成を行った.貧溶媒を加えて結晶化を行ったところ,二種類の結晶が異なる配位子比で別々に得られた.CSI-MS測定で得られたイオンピークが結晶構造変化と対応して変化することが分かった.このことからCSI-MS測定によるイオンピーク変化は溶液構造体変化と関連している.同時にソフトイオン化で検出されたピークを解析する成分組み合わせ解析の有用性を明らかにした.本研究は,コールドスプレーイオン化質量分析法(CSI-MS)によって観察可能な弱い相互作用からなる化合物または不安定化学種を標的とした反応追跡を行うことを目的とした.本研究で用いるCSI法は対象化学種をそのまま観測できるが,イオン化された化学種は主に溶媒やプロトン付加体として観測される.そこで申請者は,予想される生成物と溶媒の組み合わせによって精密質量を求める計算ソフトを自作した.一般に元素の組み合わせによる解析では,原理的にただ一つの解となる組成式を求められないが,本組成式解析法を用いると,解の数を減らすことができ,化学的な考察から帰属が可能であることを明らかにした.次いで,有機化学反応の不安定中間体の検出について,イミン形成反応を検討した.本反応は,アミンとカルボニル化合物を用いるが,単体におけるカルボニル基を有する化合物の検出感度が十分でない問題が生じた.また,本研究で用いた高分解能フーリエ変換型質量分析では低質量数領域の感度が装置の特性上悪い点も反応追跡の問題となった.一方で,金属と複数の配位子からなる配位化合物の追跡を行った.金属の配位環境を覆う三座配位子と金属同士を結びつける直線状配位子の割合を変化させて混合後,コバルト溶液を加えて錯形成を行い,CSI-MS法による生成物追跡が可能であるか検討した.その結果,配位子の割合に応じて,各々の配位子と金属からなる錯体に由来するイオンピークの増減が観測され,さらに異なる二つの配位子を同時に含む錯体の生成が観測された.また,ESI-MS法では,異なる配位子を同時に含む化学種は観測されなかった.本結果は,金属と配位子の種類と数を同時に決定することができ,且つ,弱い結合である配位結合を保持できるCSI-MSでのみ達成される追跡であり,一般に反応生成物の追跡で用いられるNMR法では追跡できない新しい反応追跡法であるといえる.本研究ではソフトなイオン化法であるコールドスプレーイオン化質量分析法(CSI-MS)を用いて,弱い相互作用で構築された化合物を標的とした反応追跡を行った.多成分配位高分子の可溶性配位オリゴマーを検出するために,金属間をつなぐ有機架橋配位子(連結配位子)と金属の配位環境を覆う配位子(留め具配位子)を異なる比で混合後,金属との錯形成を行い,CSI-MSにより追跡した.得られた溶液を結晶化したところ,確かに無限一次元鎖構造を持つ配位高分子と孤立分子が得られた.この構造変化の配位子比はMSスペクトルで観測されたイオンピークの変動と関連していることが分かった.つまり,結晶化によって得られる配位化合物の構造変化点をCSI-MSで観測される可溶性配位オリゴマーに帰属されるイオンピーク強度の挙動から判断出来ることが分かった.また,ソフトイオン化のスペクトルで得られるイオンピークにはフラグメンテーションが起こらないという特徴を活かした解析方法を開発,実践した.これにより多数の溶媒や塩を伴ったピークを容易に帰属することができるようになった.分析化学,錯体化学CSI-MS法によって得られるイオンピークの帰属において,新しい解析方法を提案し,それが有用である事を明らかにした.本計画における基礎的な部分であり,解析手法の準備計画は達成したといえる.また,CSI-MS法により追跡可能な反応について新しい知見が得られた.有機化学反応追跡は,用いる基質のイオン化という点が問題となっており,検討を要する点が明らかとなった.一方で,金属と配位子からなる配位化合物の追跡を行ったところ,配位子の濃度比に応じて,生成する配位化合物が変化する様子をとらえることができた.当初の計画では,反応追跡を順次行う予定であったが,反応として適切な系を見出すために順番に固執することなく取り組むことでCSI法の適用範囲や有用性を明らかにしており,計画がおおむね遂行されているといえる.新規に開発した組成式解析法はCSI法で得られたスペクトルを解析するうえで有用であるので,広く一般で用いられるようにプログラム上のエラーを検討し,ソフトの配布準備を行う.有機化学反応の不安定中間体の検出については引き続き適切な系を検討する.

また,金属と複数の配位子からなる配位化合物の錯形成反応の追跡を行う.本系は配位化合物が金属を含むため非常にイオン化しやすいために追跡する系として非常に適していると考えられるので,具体的に追跡できる化学種や構造体の議論が可能か検討する.当該助成金は1万円以下であり,研究用途の消耗品としては一つ二つ分相当である.この金額は日々の実験で必要となる溶媒などの消耗品によって容易に消費しうるものであるが,万が一それらの溶媒が欠如した場合に実験の現状を維持できなり,それらの復旧のために数段階前に渡って実験をやり直す必要や数週間以上の日数がかかる可能性がある.つまり,この金額は研究を行う上で必要な消耗品の消費状況によって生じた金額である.上記の理由より,消耗品の消費状況で生じるものであり,この金額は消耗品の使用状況で消費する予定である.
播種性癌細胞を検出・分離する新技術の開発とその応用基盤の確立

本研究の目的は、岡山大学で開発された新規遺伝子発現システムを用いて蛍光蛋白を発現させ、播種性尿路性器癌を検出する体外診断技術の実用化に向けた基盤的研究を実施することである。当該システムによる遺伝子発現を各種細胞で調査した結果、癌細胞特異的に遺伝子発現を高めることを確認した。また、浮遊癌細胞を含む血液を模した培養液中の細胞成分に、当該システムによるGFP遺伝子発現プラスミドを導入することで、癌細胞の検出・識別が可能であった。本研究は癌特異的プロモーター活性を飛躍的に上昇させる新規遺伝子発現システムを用いて、ごくわずかな癌細胞を強力にラベルし、体外で検出する新技術のための基盤的研究である。改良型TSTAシステムについては、尿路性器癌細胞にLuciferase遺伝子高発現プラスミドをトランスフェクションして、遺伝子発現強度の測定・定量化を行った。これらの癌細胞のLuciferaseの発光強度をマイクロプレートリーダーで測定して、ELISAにより測定したhTERT活性とLuciferaseの発現量の相関を調べた。その結果、正の相関がみられた。また、通常のTSTAシステムと比較した時、hTERT活性が高い細胞ほど、改良型TSTAシステムの発現量の上昇率が高くなることが分かった。これまでに行われた研究の最新の知見を元に、さらに新規の癌特異的遺伝子高発現システムSGEが開発された。まずは、このシステムについて癌細胞検出に関する有用性を確認することとした。このシステムを用いて作成したGFP発現プラスミドと従来のhTERTプロモーターや開発段階の新システムの候補となるプロモーターを持つプラスミドをトランスフェクションして、ヒトの各種癌細胞および正常細胞におけるGFP遺伝子の発現強度を比較した。その結果、SGEシステムが、癌特異的プロモーター活性を持つことを確認した。また、新システムの候補となるものの中で、当該SGEシステムが、癌細胞において目的発現遺伝子の転写活性を最も高めることを確認した。SGEシステムについては、遺伝子発現をより高める配列順序を検証する実験も行いデータを収集している。改良型TSTAシステムに加えて、さらに新規の癌特異的遺伝子高発現システムSGEが開発され、このシステムについて癌細胞検出に関する有用性を確認することとした。従来のhTERTプロモーターや、hTERT-SGEシステムを使ったGFP遺伝子発現ベクターを作製し、これらをhTERT活性の高い細胞に導入して、遺伝子の発現強度を比較した。その結果、新システムの候補となるものの中で、当該SGEシステムが、癌細胞において目的発現遺伝子の転写活性を最も高めることを確認した。また、ヒトの各種癌細胞および正常細胞での遺伝子の発現を調査し、SGEシステムが癌特異的プロモーター活性を持つことを確認した。また、浮遊癌細胞の検出実験を、hTERT-SGEシステムによるGFP遺伝子高発現プラスミドを用いて行った。その結果、癌細胞にのみGFP発現が見られ、ごくわずかな癌細胞を検出、識別することが可能であることを確認した。今年度は、hTERT-SGEシステムの遺伝子発現上昇率と遺伝子を導入する細胞のhTERT活性との相関関係を調べることを目的として、尿路性器癌細胞のtelomerase活性をELISAで測定した。当該システムのhTERT活性依存的な遺伝子発現を確認し、本研究課題の原理的な実現性は実証できたと考える。今後は、改良型TSTAシステムとともに体外診断法の実用化に向けた実験と、それ以外の応用技術の開発についてもさらに進展を図りたい。腫瘍学研究実施計画に従っておおむね順調に進んでいる。SGEシステムに関して、ヒト血液中に希釈した癌細胞を検出する実験を行い、データをまとめる。その他の実験についても、次年度の研究実施計画に基づいて進める。健常人から提供された末梢血に、各種癌細胞を段階的に希釈して浮遊させ、分離した細胞成分にプレート上で当該プラスミドを導入し、GFPの発現状態を確認する。新規のSGEシステムについては、そのシステムの有用性の根拠となる配列位置に関する比較実験を優先させたため、今年度中に行うことができなかった。また、改良型TSTAシステムについては、これまでに行っていたが、複数の健常人血液や他の種類の癌細胞を用いての再現性に関しては検討できなかった。次年度の実験計画に加え、今年度中に行えなかった、ヒト血液中に希釈した癌細胞をSGEシステムプラスミドを用いて検出する実験を行うため、培地、試薬等を購入する予定である。