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台湾「蕃地」の物語及び台湾原住民表象の生成メカニズムの解明

以上のように、地震による影響はあったものの、本研究は最終年度に掲げた目標達成に向けて、おおむね順調に進展している。平成29年度は「研究実施計画」に示した対象テクスト、特に台湾蕃地関連の文学テクストから、「ロマンス」「文明/野蛮」「神話」の表象を抽出して分析した。主に研究分析の対象としたのは、中村地平の初期作「熱帯柳の種子」「蛍」「南方郵信」「旅さきにて」「蕃界の女」「霧の蕃社」「あおば若葉」「長耳国漂流記」、真杉静枝の『南方紀行』の「蕃界の女」等の諸作、坂口れい子の「蕃婦ロポウの話」等いわゆる「蕃地もの」諸作と、坂口の未発表原稿の「樹霊(1)」及び「樹霊(2)」である。現在執筆中の論文「(仮)中村地平が描いた台湾蕃地ー南方風物と近代的自意識の揺らぎー」のなかで、佐藤春夫の台湾作品の影響を受けた中村地平の南方台湾ものにおいて、作家自身の南方憧憬や南方郷愁を、浅見淵、長嶺宏、河原功らの先行研究を基に検証し、知識人青年を通してテクストに表象される南方台湾の牧歌的で物憂い自然と人物の表象が、近代的な自意識と南方の風物との相克関係の揺らぎのなかで描かれていくことを、地平の南方文学論も参考にしてまとめているところである。本研究を通じて発掘した坂口れい子の未発表原稿「樹霊」は、「蕃婦ロポウ」執筆に向けた習作的な位置づけであることが判明してきたが、平成29年度、資料整理とデータベース化を進める中で同作家の未発表原稿「樹霊(2)」を新たに発掘し、データ化した。分析の結果、「樹霊(2)」がより直接的に「蕃婦ロポウ」に繋がる創作であった可能性が高く、これは戦後における坂口の蕃地創作を知るうえで貴重な資料となるため、この二作についても蕃地表象に関する論考として執筆を進めているところである。本研究を通じて蕃地小説におけるロマンスの枠組みを確認できた。また、その枠組みが中村地平、真杉静枝、坂口れい子の作品のなかでひとつの系譜として繋がっていくことが判明した。このことが29年度の本研究における重要な成果である。本研究は最終年度の研究目標達成に向けて、おおむね順調に進展している。当初計画通り必要な書籍と資料を収集できている。また、「研究実施計画」に掲げた対象テクストの精読と分析が計画通りに実施できている。本研究の到達目標である「「蕃地」の物語及び原住民表象生成のメカニズムの解明」に向けて、平成29年度は「(仮)中村地平が描いた台湾蕃地ー南方風物と近代的自意識の揺らぎー」を執筆中であり、この論考の中で作家の南方憧憬や南方郷愁によって表象される蕃地の風景や人物の形象をまとめているところである。また、新たに発掘した坂口れい子の蕃地作品をデータ化し、蕃地表象の分析を進め、論文を執筆している。「蕃地」関連資料の整理とデータベース化も順調に進んでいる。本研究の最終年度には戦前と戦後の文学テクストのなかに描かれた台湾山地原住民と「蕃地」の表象を解析し、その研究成果を学術研究会「現代中国語圏文芸における逸脱の表象」(6/16、金城学院大学)や学術研究会「日本統治期台湾の女性ー文学創作における山地女性表象の生成について」(1/26、熊本学園大学)で発表した。前者は中村地平の初期作品に特徴的な「南方憧憬」がテクストにおいてどのように表象されているのかという問題を考察したものである。本研究の目的の一つに掲げているテクストにおける「ロマンス」の要素が、中村の初期作品「熱帯柳の種子」においても確認されることを考察した。「南方の風景に弛緩され虚無を感じる私」(内地の知識人男性)と対照的な存在として本島人女性が描かれ、その外貌の奔放さや南方的な明るさ素朴さが、文明の衣をまとった内地出身の主人公に自省をうながし、彼女の人性を純真で高貴なものへと昇華させている。
国際比較による『利得禁止原則』の見直し～ドイツ・日本・そして東アジア～

本研究は、ドイツ法並びに東アジア法等との、比較法的研究により、損害賠償法における「利得禁止原則」の見直しを行うことを目的とする。損害賠償は「原状回復」を目的とするため、一般に、損害賠償法では、「利得禁止原則」が妥当するものと理解されている。しかし、利得禁止原則には例外が多く、この原則が普遍的に妥当することには疑問を呈さざるを得ない。「利得禁止原則」に批判的な検討を加えることで、最終的には、損害賠償の目的である「原状回復」の意義を明らかにすることにつながる。
カキエタノール生合成遺伝子発現に基づく新規脱渋理論の構築と渋ガキ品種の甘ガキ化

脱渋難易性の異なる品種を用いて、エタノール生合成経路遺伝子の発現解析を行い,ピルビン酸脱炭酸酵素遺伝子とアルコール脱水素酵素遺伝子の脱渋における役割を明らかにした。またエタノール生合成経路遺伝子とくにアルコール脱水素酵素(ADH)遺伝子の発現抑制の形質転換体を得ることに成功した。この材料は、今後カキ果実の脱渋性を決定している要因解析に利用できる貴重な素材である。本研究は、申請者が提唱した新規脱渋概念「エタノールポジティブフィードバック制御説」の理論構築を脱渋難易性の異なる品種を用いて、エタノール生合成経路遺伝子の発現解析を行い確立すると同時に、渋ガキ品種において、実際、エタノール生合成経路遺伝子の過剰発現個体や発現抑制個体を遺伝子組み換えにより作出し、渋ガキを甘ガキ化し、理論を実証することを最終目的として実験を行った。ピルビン酸脱炭酸酵素(PDC)遺伝子(DkPDC2)においては、35Sプロモーター下でセンス方向に接続したバイナリーベクターを構築した。さらにアルコール脱水素酵素(ADH)遺伝子(DkADH1)をアンチセンス方向に接続バイナリーベクターを構築した。渋ガキ品種'西条'および'平核無'、甘ガキ品種'次郎'培養シュートを用いて、アグロバクテリウム法による感染を行い、現在、選択培地にてカルスを選抜中であり、さらに組み変え体と思われるシュートを作出している。さらに、VDG (volatile Dependent Group)の中の脱渋性決定のKey遺伝子と考えられるDkPDC2について,ゲノムライブラリーから全長をクローニングし、2kbにわたるプロモーター領域の配列を、PVNA、PVA、PCAの各品種から得た。現在これらを類別する特異的な配列はまだ同定していないが、PVNA由来のプロモーター配列は、種子での遺伝子発現プロモーターとしての利用が可能である。本研究は、申請者らが提唱している新規脱渋概念「エタノールポジティブフィードバック制御説」の理論構築を脱渋難易性の異なる品種を用いて、エタノール生合成経路遺伝子の発現解析を行い確立し、脱渋性の異なる品種を見分けるMASの開発と同時に、渋ガキをエタノール生合成経路遺伝子の過剰発現個体や発現抑制個体を遺伝子組み換えにより作出し、渋ガキを甘ガキ化し、理論を実証することを最終目的として実験を行った。ピルビン酸脱炭酸酵素(PDC)遺伝子(DkPDC2)においては、センス方向に接続したバイナリーベクターを、さらにアルコール脱水素酵素(ADH)遺伝子(DkADH1)をアンチセンス方向に接続バイナリーベクターを構築し、渋ガキ品種'西条'および'平核無'、甘ガキ品種'次郎'培養シュートを用いて、アグロバクテリウム法による感染を行った。ピルビン酸脱炭酸酵素(PDC)遺伝子(DkPDC2)の過剰発現体については、まだ組み換え個体は得られていないが、アルコール脱水素酵素(ADH)遺伝子(DkADH1)においては、平核無由来の組み変え体を2個体得て、発根させることに成功した。さらに、VDG(volatile Dependent Group)の中の脱渋性決定のKey遺伝子と考えられるDkPDC2について,ゲノムライブラリーから全長をクローニングし、2kbにわたるプロモーター領域の配列を、PVNA、PVA、PCAの各品種から得て、比較を行ったところ、ゲノムのメチル化が要因として大きな役割を果たしている可能性を見いだした。PVNA由来のプロモーター配列は、種子での遺伝子発現プロモーターとしての利用が可能であり、今後の形質転換体作成実験に利用できる状態となっている。
神経栄養因子発現ベクター導入による脊髄損傷の遺伝子治療に関する基礎的研究

【目的】損傷を受けた脊髄組織では損傷部とその近傍部における神経細胞、グリア細胞が神経栄養因子(BDNF,NT-3)を強く発現しその機能維持、再生に関与していると考えられている。今回我々はリポフェクチン法により損傷部位に直接神経栄養因子発現ベクターを導入、その遺伝子の脊髄内発現動態を免疫組織学的に調べた。【方法】神経栄養因子発現ベクターであるBDNF-Myc-His/pIRES-EGFPvectorを作製した。14-16週齢雄性Wister Ratを用い、硬膜外より60gの重錘で1分間圧迫し脊髄不全損傷モデルを作製した。損傷直後ベクターをLipofectAMINEと混合(lipofectin method)、損傷部位へマイクロシリンジで1μl min^<-1>(total 10μl)の髄内投与を行った。HE染色、Nissl染色を行い、抗BDNF抗体、抗GFAP抗体による蛍光免疫染色で評価した。コントロール群と比較検討し、経時的に観察した。【結果】抗BDNF抗体陽性細胞は損傷後増加、以後プラトーとなっており、損傷後3、5日では全GFP陽性細胞が抗BDNF抗体陽性となっていた(陽性率100%)。抗GFAP抗体陽性細胞も同様に損傷後3、5日で増加し8日目ではGFP陽性細胞よりも有意に増加、14日ではGFP陰性細胞が45%65%を占めていた。【考察および結論】脊髄損傷に対する遺伝子治療の試みとしてはその導入効率の点からウイルスベクターを用いたものが散見される。しかしながら今回行ったリポフェクチン法による脊髄組織への直接注入でもある程度の導入が可能であることが明らかになった。損傷によって出現した反応性アストロサイトにも内因性BDNFが発現すると予想されるが、この研究では導入された遺伝子はその殆どが反応性アストロサイトに貪食され、BDNF発現の増強効果に関与するものと考えられた。1)損傷モデルラットの作製とベクター注入:14-16週齢雄性Wister Rat(体重:400-500g)を用い、麻酔下にTh8,Th9椎弓切除を行い、硬膜外より60gの重錘で1分間圧迫し脊髄不全損傷モデルを作製した。損傷直後、BDNF-Myc-His/pIRES-EGFPvectorを損傷部位へマイクロシリンジで1μlmin^<-1>(total 10μl)の髄内投与を行った。2)組織化学的観察:損傷後、24hr、3day、5day、8day、11day、14day後に灌流固定を行い、凍結連続横断切片を作製し、免疫組織学的に観察した。注入された試薬(GFP陽性領域)は灰白質内に停滞しており、経時的に減少していった。その周囲の灰白質、白質にはGFP陽性細胞が散在しており、その数は損傷後3、5日でピークでありその後減少していった。抗BDNF抗体陽性細胞は損傷後増加、以後プラトーとなっており、損傷後3、5日では全GFP陽性細胞が抗BDNF抗体陽性となっていた(陽性率100%)。抗GFAP抗体陽性細胞も同様に損傷後3、5日で増加し8日目ではGFP陽性細胞よりも有意に増加、14日ではGFP陰性細胞が46%65%を占めていた。脊髄損傷に対する遺伝子治療の試みとしてはその導入効率の点からウイルスベクターを用いたものが散見される。損傷によって出現した反応性アストロサイトにも内因性BDNFが発現すると予想されるが、今回の検討では導入された遺伝子はその殆どが反応性アストロサイトに貧食され、BDNF発現の増強効果に関与するものと考えられた。アストロサイト-ニューロンの細胞間情報伝達を考慮すれば、導入された遺伝子は神経細胞の生存維持と可塑性に寄与する可能性が実験的に示唆された。

しかしながら今回行ったリポフェクチン法による脊髄組織への直接注入でもある程度の導入が可能であることが明らかになった。損傷によって出現した反応性アストロサイトにも内因性BDNFが発現すると予想されるが、この研究では導入された遺伝子はその殆どが反応性アストロサイトに貪食され、BDNF発現の増強効果に関与するものと考えられた。
二次元量子可積分系の研究

今年度は,研究計画に従い,場の理論におけるYangian対称性を調べた.その結果,特に次の二つの新しい知見を得た.1.可解格子模型におけるスペクトル分解とCFTにおけるYangian対称性との関連について:vertex模型と呼ばれる格子模型が局所ネネルギー関数と呼ばれるcorner transfer matrixの不変量を持つことに注目し,そのスペクトル分解の様子を完全に決定した.その結果得られたスペクトルの縮退の様子は,対応するWZW模型においてBouwknegt等が予想したYangian多重項の様子と全く一致することが明らかになった.この結果はWZW模型におけるYangian対称性の存在を強く裏付ける状況証拠といえる.結果はプレプリントとして発表ずみ.2.A型以外の一般のWZW模型における量子群対称性を調べるためには,L作用素のなす代数の中心を決定することが最初の非自明な問題となる.我々はこれを求める方法を確立した.これに関してはもっか研究を継続中である.今年度は,研究計画に従い,場の理論におけるYangian対称性を調べた.その結果,特に次の二つの新しい知見を得た.1.可解格子模型におけるスペクトル分解とCFTにおけるYangian対称性との関連について:vertex模型と呼ばれる格子模型が局所ネネルギー関数と呼ばれるcorner transfer matrixの不変量を持つことに注目し,そのスペクトル分解の様子を完全に決定した.その結果得られたスペクトルの縮退の様子は,対応するWZW模型においてBouwknegt等が予想したYangian多重項の様子と全く一致することが明らかになった.この結果はWZW模型におけるYangian対称性の存在を強く裏付ける状況証拠といえる.結果はプレプリントとして発表ずみ.2.A型以外の一般のWZW模型における量子群対称性を調べるためには,L作用素のなす代数の中心を決定することが最初の非自明な問題となる.我々はこれを求める方法を確立した.これに関してはもっか研究を継続中である.
安全運転支援のためのスペクトル拡散方式を用いた可視光車車間通信・測距統合システム

スペクトル拡散方式を用いた車車間通信・測距統合システム(ブーメラン方式)に可視光通信を用いる可視光ブーメラン方式に関して検討した。まず、LED化されつつあるヘッドライトとテールランプを用いる方法について検討した。次にマンチェスタ符号化を用いる可視光マンチェスタブーメラン方式に関しても検討した。さらに、既存の車載レーザレーダを組み合わせた、レーザレーダ可視光ブーメラン方式を提案した。最後に、レーザレーダ可視光ブーメラン方式の双方向通信型を提案した。いずれの方式も計算機シミュレーションで特性を評価し、ある程度の干渉光が存在しても車車間通信と車間距離計測が同時に行えることを確認した。2013年度はまず,直接拡散方式(DS方式)を用いる従来のブーメラン方式を可視光通信に適用する場合を考えた.この場合,光変調としては,信号0と信号1の2値でディジタル変調するON-OFFキーイングと,信号の振幅(強度)に応じてアナログ変調を行う光強度変調の利用が考えられる.いずれにしろ,干渉光が加わった場合,信号レベルが低い信号が信号レベルの高い信号に誤ることはあるが,その逆はない.また,信号が存在しない非通信状態と信号0という信号または信号レベルの低い信号が連続している通信状態の区別がつきにくい.これらにより,正負のレベルがある電気変調のブーメラン方式と可視光ブーメラン方式の特性が変わる可能性がある.そこで本研究では,光ファイバ通信によく用いられるマンチャスタ符号を用いた可視光マンチェスタブーメラン方式の検討を行った.シミュレーションの結果,他車からの干渉光がある場合の特性は従来の直接拡散方式を用いた可視光ブーメラン方式よりも,若干ではあるが,向上することが確認された.また,簡単なモデル化をした背景光が干渉光として混入しても特性に影響がないことも確認された.この検討により,昨年度行うはずだった背景光に対する検討の一部が行われたことになる.2013本年度では次に,可視光ブーメラン方式と既存の車載レーザレーダを組み合わせた,レーザレーダ可視光ブーメラン方式を提案しその評価を行った.本方式は,レーザレーダで測距を行うと同時にテールランプを用いて車車間通信及び測距を行うものである.スペクトル拡散としてはレーザレーダに親和性のあるタイムホッピング方式を使用した.シミュレーション結果から,ある程度の干渉が加わっても,車車間通信と測距が可能であることが確認された.スペクトル拡散方式を用いた車車間通信・測距統合システム(ブーメラン方式)に可視光通信を用いる可視光ブーメラン方式に関して検討した。本年度では,ヘッドライト,テールランプといったLED化されつつある車載光源を利用したスペクトル拡散方式を用いた可視光車車間通信・測距統合システム(可視光ブーメラン方式)の一検討について報告した.ヘッドライトやテールランプを利用した光変調を行う場合,信号0と信号1の2値でディジタル変調するON-OFFキーイングと,信号の振幅(強度)に応じてアナログ変調を行う光強度変調,フレーム内の信号(パルス)の位置でディジタル変調を行うパルス位置変調(PPM変調)が考えられる.ブーメラン方式で利用するスペクトル拡散方式(SS方式)は直接拡散方式(DS方式),周波数ホッピング方式(FH方式),時間ホッピング方式(TH方式)がある.上記の3つの光変調のうち,ON-OFFキーイングと光強度変調はDS方式が,PPM変調はTH方式が対応できる.本年度は,TH方式の可視光ブーメラン方式を検討した.本年度のシミュレーションで採用したTH方式は,1bitを4frameに分割し,各frameに32個のslotを用意し,A車で設定したホッピングパターンに従い,frame毎にあるslotだけを点灯(ON)し,他のスロットは消灯(OFF)とする方式とした.また,B車での拡散(情報変調)方法は,情報が“1"(あるいは“+1")のときは,受信パルスを1slotだけ遅延させ,その信号を受信パルスに引き続き送信し,情報が“0"(あるいは“-1")のときは,受信パルスを2slot遅延させ,受信パルスとその遅延信号を送信する方式とした.A車での逆拡散(情報復調)と測距はマッチドフィルタの出力を用いる方法とした.シミュレーションの結果,タイムホッピング(TH)方式を採用することで,干渉光の強弱にはあまり影響を受けないが,干渉パルスの混入確率によって特性が劣化することが確認された.本研究では、ヘッドライト、テールランプといったLED化されつつある車載光源を利用したスペクトル拡散方式を用いた可視光車車間通信・測距統合システム(可視光ブーメラン方式)の検討を行ってきた。本システムのベースとなる基本型ブーメラン方式では、前後して走行するA車、B車において、まず、A車がスペクトル拡散方式(SS方式)のPN信号をB車に向けて送出する。B車はそのPN信号にB車の車両情報を乗算するSS変調を行い、A車に向けて送り返す。A車は自車の有するPN信号を用いてSS復調することでB車の情報を得ると同時に、SSレーダと同様な原理でPN信号の往復時間から二車両間の車間距離を測定する。可視光ブーメラン方式では、前方B車→後方A車はLEDテールランプを光源とする可視光通信を行うことにした。後方A車→前方B

車の伝送方式として、初年度にはLEDヘッドライトの利用を、2年目には車載レーザレーダの利用を考え、計算機シミュレーションでそれぞれの可能性を検討してきた。最終年度では、まず、後方A車→前方B車の伝送方式としてLEDヘッドライト方式が良いのか車載レーザレーダ方式が良いのかを比較検討した。その結果、レーザレーダでの測距結果とブーメラン方式での測距結果が相互に補完できる点や昼間でのヘッドライト点灯が不要な点などから車載レーザレーダ方式の方が優れていると判断した。次に、車載レーザレーダ方式の双方向通信化を図った。本方式は、車載レーザレーダ方式で後方A車が前方B車との車車間通信を行う際に、B車指定のタイムホッピングパターン(THP)情報を取得した後、A車では指定されたTHPでA車情報をB車に送信、B車でA車情報を復調、同期・再生することで双方向車車間通信を可能にした。シミュレーションの結果から、ある程度の干渉が加わっても、双方向車車間通信と測距が可能であることが確認された。情報通信工学2013年度は,まず,2012昨年度計画で実施されていなかった検討システムの背景光に対する特性を明らかにすることから始めた.そのためにまず,直接拡散スペクトル拡散方式(DS方式)をそのまま用いた従来型可視光ブーメラン方式と可視光通信に親和性があると考えられたマンチェスタ符号化を適用した提案型可視光マンチェスタブーメラン方式の背景子雑音に対する特性も含めた耐干渉波特性を評価した.しかし,タイムホッピング方式を用いた検討システムの背景光特性についての評価はまだ行っていないので,「やや遅れている」と判断した.しかし,2013年度実施予定であった「車載レーダとテールランプを用いる可視光ブーメラン方式の検討」はほぼ予定通り行え,レーザレーダと可視光タイムホッピングブーメラン方式を組み合わせた方式を提案し,その特性を評価した.この部分に関しては「おおむね順調に進展している」と言えそうである.以上の結果,本年度は「やや遅れている」とした.研究計画の段階では,検討システムに混入する干渉波として背景光の場合まで検討する予定であったが,現段階では,同じシステムからの干渉波のみの検討までになっている.この理由は,検討システムのシミュレーション用プログラミングに予定よりも時間がかかったこと,ここまでのシミュレーション結果が予想していた結果ほど良くなく,結果の検討に時間がかかったことなどが上げられる.2014年度ののメインテーマは「2年間の検討の総合評価と双方向通信化の可能性の検討」である.そこでまずは,2013年度に提案したレーザレーダと可視光タイムホッピングブーメラン方式を組み合わせた方式の改良から行う予定である.本方式のシミュレーションに用いたタイムホッピングスペクトル拡散復調部が簡易すぎるため,本方式の特性が十分とは言えないものとなっている.そこで,この復調部の改良を中心に検討する.また,改良する方式の特性評価に背景光に対する評価を加え,遅れを取り戻すつもりである.次に,改良した検討システムの双方向通信化の可能性を検討する.
フレイルと健常の境界域の解明：なぜフレイルになるのか？

超高齢社会のわが国では、要介護の入り口ともいえる健常とプレフレイルの境界を探ることで、介護予防への効果が期待できる。健康な状態からフレイルまたはプレフレイル状態へと陥る高齢者の特徴や、それに関する背景因子を明らかにするためにコホート調査を行い、横断および縦断的に解析を行った。調査の結果、男性に比べて女性の1年後のプレフレイル有症率のオッズ比は2.524(95%CI:1.153 ー5.972、P = 0.021)であった。その他、健常な高齢者がプレフレイル状態に陥る背景には、いくつかの性差が関わっていることが明らかになった。なぜ健常な高齢者がプレフレイルとなり、ゆくゆくはフレイル、要介護状態へと陥るかを明らかにすることで、要介護を未然に防ぐことが出来る。とりわけ、超高齢社会の我が国では、その入り口に当たる健常とプレフレイルの境界を探ることで大規模な予防効果が期待できる。2016年度の研究に参加し、調査項目に欠損のある者を除いた65歳以上の高齢男女465名のうち、プレフレイル高齢者204名を対象とし横断解析を行った。フレイルの分類はFriedらの身体的フレイルの基準を用い、5項目のうち3項目以上該当した者をフレイル、12項目該当した者をプレフレイルとした。プレフレイル高齢者を性別により二分し、その特徴を比較した。465名の内、プレフレイル高齢者は男性80人(41.7%)、女性124人(45.4%)であり有意差はなかった(P = 0.534)。プレフレイル高齢者の男女比較では、フレイル分類の疲労感(男性25.0%、女性40.3%、P = 0.034)は女性が有意に高く、同様に、握力低下(男性10.0%、女性19.4%、P = 0.079)も女性で有意に高い傾向があった。また、活動量低下(男性56.3%、女性42.7%、P = 0.064)は男性で有意に高い傾向があった。他、プレフレイル高齢者の特徴では、男性で「飲酒習慣」「日用品の買物をしていない」「預貯金の出し入れをしていない」「友人の家を訪ねていない」、女性で「独居生活」「配偶者無し」「低教育暦」「尿漏れ」「睡眠時間の低下」「階段を手すりや壁をつたわらずにのぼれない」「椅子から何もつかまらずに立ち上がれない」「転倒に対する不安が大きい」の割合が有意に大きかった。このように、プレフレイルの特徴に性差がみられる項目も多く、診断項目の該当率にも性差が見られることが明らかとなった。2016年度の研究計画では、夏季と冬季の2回にわたり調査を実施する予定であったが、冬季の実施ができなかった。理由として、夏季に取得したデータの入力、解析等に時間を要したためである。当初の予定では600名を対象としていたが、研究同意数は731名であったことも要因である。一方、1回の実施となったが、十分な研究データを確保することができた。超高齢社会のわが国では、要介護の入り口とも言える健常とプレフレイルの境界を探ることで、介護予防への効果が期待できる。2年間のコホート調査を実施し、2016年度(ベースライン)は504名、2017年度(1年後)は432名、延べ536名の健常な高齢者を調査した。2年間追跡できた400名のうち調査項目に欠損のある者を除いた65歳以上の高齢男女331名を対象に横断および縦断的解析を行った。フレイルの分類はJCHS基準を用い、5項目のうち3項目以上該当した者をフレイル、12項目該当した者をプレフレイルとした。ベースラインのフレイル有症者は7名(2.1%)、プレフレイル有症者は141名(42.6%)、非有症者は183名(55.3%)であった。プレフレイル有症者(141名、男性64名、女性77名)の特徴を性別で比較すると、各診断項目の該当率において身体活動の低下(男性54.7%、女性33.8%、P = 0.017)は男性で有意に高く、疲労感(男性23.4%、女性46.8%、P = 0.005)は女性で有意に高く、性差が見られた。また、ベースラインでフレイルまたはプレフレイルの非有症者183名のうち、37名が1年間の追跡で新たにプレフレイルに分類された。該当理由としては体重減少が最も多く32.6%であり、順に身体活動低下25.6%、疲労感25.6%、握力低下9.3%、歩行速度低下7.0%であった。また、男性に対し女性の1年後にプレフレイルとなる年齢調整後のオッズ比は2.524(95%CI:1.153 ー5.972、P = 0.021)であり、性差が見られた。このように、プレフレイルの特徴や、健常からプレフレイルへの移行には性差が見られることが明らかになった。

健康な状態からフレイルまたはプレフレイル状態へと陥る高齢者の特徴や、それに関する背景因子を明らかにするためにコホート調査を行い、横断および縦断的に解析を行った。調査の結果、男性に比べて女性の1年後のプレフレイル有症率のオッズ比は2.524(95%CI:1.153 ー5.972、P = 0.021)であった。その他、健常な高齢者がプレフレイル状態に陥る背景には、いくつかの性差が関わっていることが明らかになった。2017年度の調査実施に向け、2016年度研究結果を解析し、追加のアンケート調査を準備中である。また、取得したデータの発表、論文化を積極的に行う予定である。老年医学2回計画していた調査実施が1回であったため研究機関の既存の備品および消耗品を一部使用したため第1回調査の実施より、より効率的に調査を進めることのできる設備を検討し、その拡充に充てる研究結果をまとめる作業が膨大になることが予想されるため、人件費に充てる
腫瘍マーカー・グルタチオントランスフェラーゼPの発現に関わる転写因子の単離と解析

われわれは、GPEIに結合する因子の解析を行い、肝癌細胞AH66と正常肝で比較検討したところ複数の因子がGPEIに結合することを見いだした。フットプリント法の結果より、1)GPEIのTRE-like配列に結合する因子、2)GPEIのTRE-like配列の20-50bp上流に結合する複数の因子を同定した。1)の因子は肝癌と正常肝でフットプリント上では差が認められないが、2)の因子は両者の間でフットプリント上で明らかな差が認められる。1)の因子はさらにDEAE-Sepharoseに結合するもの(C1)とそうでないもの(C2)に分かれる。これらの結果、GPEIに結合する因子は少なくとも4種類はあることが明らかとなった。1)の因子(C1及びC2)をDEAE-Sepharoseによって分画後、さらに二つのカラムで部分精製し、それらのDNA結合能をゲルシフト法及びフットプリント法で検討した。また、それぞれの分画をc-jun及びmafの抗体を用いたimmunoblotにて検討した。フットプリント法を用いた結合実験で、C1、C2共にGST-Pの転写に重要なcore GPEIの領域に結合することが分かった。又、ゲルシフト法及びフットプリント法で競合実験を行った結果、両因子共にcore GPEIのG→Tの点突然変異によって結合が著しく低下し、GPEI変異体の転写活性とC1、C2に対する結合活性とは特異性が一致することが分かった。さらにimmunoblotの結果、C1にはc-jun、maf共に検出されなかったが、C2にはc-junが検出された。また、C2にはmafの抗体と反応する55kDaのタンパク質が検出され、分子量より、新しいmafファミリーのタンパク質と考えられる。部分分画した再構成in vitro転写系で両因子の転写活性の検出を試みたが、GTS-Pプロモーターの活性が低いため未だ明確な結果は得られていない。以上より、C1、C2共にGST-Pの転写活性化に関与している可能性が大きく、それぞれの因子をさらに精製し、それらのcDNAを単離する予定である。
単離胚盤葉細胞の注入による鶏生殖系キメラの作成に関する研究

鳥類では標的遺伝子組換えの形質転換動物を作成するのに十分な初期胚操作技術が確立されていない。そこで、標的遺伝子組換え形質転換鳥作成法確立の為に、筆者が開発した窓開け受精卵を用いる初期胚操作法を、容易で効率良いキメラ作成法に改良することを目的とした。まず、種々のCa^<++>溶液で前処理し、色々な濃度のトリプシンを含む細胞単離溶液で回収した胚盤葉細胞の生存性、選択的接着性及びカドヘリン残存性を調べた。その結果、1mMCa^<++>を含む溶液で前処理し、低濃度トリプシンを含む細胞単離溶液で回収した鶏胚盤葉細胞は、細胞表面のカドヘリンの失活は抑制され、細胞の選択的接着性および細胞増殖能が著しく高いことが明らかになった。次に、放卵直後の横班プリマスロック受精卵からステージXの胚盤葉細胞を採取し、家兎血清を含むTCM-199培地に浮遊させ、これを24時間培養した。一方、ステージXの白色レグホン受精卵のやや鈍端よりの卵殻表面に7mm四方の枠を削り、卵殻を剥がした後、卵殻膜に5mm四方の窓を開けた。この窓を通して、マニピュレーターに装着したマイクロピペットを胚盤下腔に穿刺し、0.5μl,1500個の培養胚盤胞細胞を注入した。その後、卵殻膜付き卵殻で蓋をし、これを瞬間接着剤で固着させ、22日間孵卵し、生存率、孵化率、キメラ発生率、死亡時期のハンバーガー・ハミルトン・ステージの決定および死亡胚のアソモンドソンの体位の決定を行なった。培養0時間の胚盤葉細胞を用いた場合、平均孵化率は55.8%で、生存キメラ発生率は32.6%であった。しかし、12時間培養した胚盤葉細胞を用いた場合の生存キメラ発生率は2.5%で、24時間培養した胚盤葉細胞での生存キメラ発生率は0.0%であった。これらのことから、胚盤葉細胞は培養することにより速やかに全能性を失う事が明確にされた。また、本研究に使用された窓開け受精卵法は鳥類の初期胚操作法として極めて有効な事が明らかにされた。
ラットにおけるストレスがうつ状態を惹起するメカニズムに関する研究

近年心理社会的要因により引き起こされるうつ病の増加が著しい。ストレスにより惹起されるうつ病の神経化学的メカニズムが脳内セロトニン(5-HT)神経系の受容体のインバランスとする考えが提唱されているが、心理社会的要因と5-HT系との関連はいまだ解明されていない。本研究ではラットを用い、ストレス反応の個別差と個別差を作る因子の一つとして生育環境の影響を解析しようと研究を進めた。得た知見は以下のごとくである。1)5-HT及びその代謝産物の定量分析は従来の方法に従った。しかし、5-HT系神経系の研究上、代謝産物の迅速特異的定量分析が必須であるので、現在、簡便で特異性の高い重水素標識体逆希釈法を用いた質量分析法の開発を行っている。2)正常生育雄ラットを用い、嫌悪刺激ストレス(有害音)を与えた直後、断頭し、大脳海馬領域を摘出。試料を粉砕し、5-HT等アミン類の抽出定量を行った。ストレスにより、5-HT代謝回転の亢進が見られた。断続長期ストレス負荷による代謝回転の変化ついては現在検討中。なおこの過程で5-HT代謝物ではなかったが、未同定アミン代謝産物を発見した。3)離乳後、同腹群で飼育されたラットと単独飼育されたものについて検討しようと試みたが、生育途中での死亡数が多く、現在の所、2)との関連において統計処理数に達せず、検討続行中。4)飼育条件の異なったラットの長期断続ストレスによる受容体の変化を放射性OH-DPAT,KETASERIN及び5-HTを用いて検討を試みた。ラット海馬より得た粗膜標品では現在のところ有意差がでず検討続行中である。5)ストレス刺激の指標となるホルモン・コルチゾールについて4)と同様条件下でのストレス負荷応答の生育差分析を行いつつある。
破骨細胞の形成部位はどのようにして決まるのか？

破骨細胞はなぜ骨だけに出現するのか?「骨芽細胞が破骨細胞分化因子RANKLとM-CSFを発現するから」と考えられてきた。しかし、RANKL欠損マウスにRANKLを投与しても、M-CSF欠損のop/opマウスにM-CSFを投与しても、破骨細胞は骨組織にのみ出現する。この結果は、RANKLとM-CSFの発現部位が破骨細胞の形成部位を決めるのではないことを示す。我々は、受容体RANKを高発現した破骨細胞前駆細胞(RANK-abundant osteoclast precursors, rOP)が骨組織に特異的に出現することを見出した。rOPの局在部位が破骨細胞の形成部位であることを明らかにした。本研究では、2つの実験より、破骨細胞の形成部位決定機構を解明する。(1)破骨細胞前駆細胞(QOP)のプロテオーム解析より、骨芽細胞が特異的に発現するQOPに対する走化因子を同定する。同様に、QOPが発現する走化因子の受容体を同定する。さらに、RANK-CreマウスとOsterix-Creマウスを用いて、QOP特異的および骨芽細胞特異的に遺伝子欠損マウスを作製し、QOPホーミング機構をin vivoで解析する。(1)QOPホーミング機構の解明:当初は骨芽細胞がQOPに対する走化因子を発現していると想定した。しかし、RANK-abundant QOPの解析より、骨芽細胞がQOPに対する走化因子を発現する可能性は低いことが判明した。QOPは広く分布し、骨芽細胞の近隣のQOPのみRANK-abundant QOPになることを見出した。そのため、(1)QOPホーミング機構の解明行う予定だった1プロテオーム解析、2骨芽細胞膜蛋白質を用いた細胞走化性解析、3光子励起顕微鏡を用いたバイオイメージング解析は行わないこととした。その代わり、(2)RANK発現誘導因子のクローニングと作用機構の解析を行った。(2) RANK発現誘導因子のクローニングと作用機構の解析1RANK発現誘導因子のクローニング:RANKのプロモーターを組み込んだルシフェラーゼレポーターアッセイ系を確立した。骨芽細胞の培養上清にRANKのプロモーター活性を上昇させる因子を分泌していることを明らかにした。現在その因子の同定を行っている。その因子がまだ同定できないので、2RANK発現誘導因子の受容体解析と3RANK発現誘導シグナル解析は行っていない。研究期間全体で明らかになったことは以下のとおりである。(1)WntシグナルがQOP形成に重要な役割を果たしていること、(2)OPG欠損マウスを用いた解析より、RANK-RANKLシグナルがQOP形成に重要であることが示された。(3)RANKのプロモーターを組み込んだレポーターアッセイを確立して、RANK発現上昇因子を検索してきたが、その因子の同定は成功していない。最終年度報告(1)Wntシグナル解析:RANK発現調節因子の解析より、破骨細胞前駆細胞は破骨細胞への分化に伴い、Wnt5aの発現が急上昇することを見出した。すなわち破骨細胞の分泌するWnt5aはQOP形成因子であることが示された。一方、Wnt16、Wnt4およびWnt3aは破骨細胞形成を抑制した。Wnt4とWn3aはOPGの産生亢進を介して破骨細胞形成を抑制したのに対し、Wnt16による破骨細胞形成抑制はWnt5aシグナルで調節されていた。以上より、破骨細胞や骨芽細胞が分泌するWntが破骨細胞の形成部位決定機構に関わる可能性が示された。(2)RANK発現誘導因子の解析:RANKのプロモーターを組み込んだレポーターアッセイを確立して、RANK発現上昇因子を検索してきたが、その因子の同定は成功していない。一方、OPG欠損マウスの解析より、RANKL-RANKシグナルは、QOP形成に極めて重要であることが示された。本研究では、当初2つの目的を掲げた。(2) QOPのRANK発現を誘導する因子をクローニングし、その作用を解析する。しかし、(1)骨芽細胞がQOPに対する走化因子を発現するという考え方は誤りだった。骨芽細胞が、QOPをRANK-abundantQOPに変換する因子を出すという新しい知見を見出した。そこで、QOPのRANK発現を誘導する骨芽細胞由来因子の探索を中心に研究を行った。RANK-GFPとRANK-luciferaseをQOPに発現させて指標として用いることで、骨芽細胞のcDNAライブラリーからRANK誘導因子をクローニングする予定だったが、この実験は遅れているため、「やや遅れている」と自己評価した。

生化学我々は、受容体RANKを高発現した破骨細胞前駆細胞(RANK-abundant QOP)が骨組織に特異的に出現することを見出した。すなわち、骨芽細胞がQOPのRANK誘導因子を分泌していることが「破骨細胞が骨組織にだけ存在するため」に重要であるという結論を得た。骨芽細胞がQOPに対する走化因子を発現するという考え方は誤りであることが判明した。そのため、計画(1)破骨細胞前駆細胞(QOP)のプロテオーム解析より、骨芽細胞が特異的に発現するQOPに対する走化因子を同定する。という研究は行わないこととした。その代わり、骨芽細胞が分泌するQOPのRANK発現誘導因子の同定とその受容体の同定を中心に研究を進めることとした。さらにそのその受容体からのシグナルを解析する。これらの解析より、破骨細胞の形成部位決定機構を解明したいと考える。抗RANK抗体が予定していた価格より値引きされたため。次年度使用額38,983円は次年度の抗体購入予算に計上する。
ロバスト摂動法による非線形制御システムのパターン類別及びそのリアプノフ関数構成

1.電動機システムに現れる非線形性を考慮し,リアプノフ法による安定性の解析を行った。具体的な電動機としては,まず、非線形性の強いステッピングモータを選び,従来線形化や数値計算に頼っていた安定判別がリアプノフの理論で効率よく行えることを示した。次に,同期電動機を対象に,非線形フィードバック制御が同期引き入れ特性の改善に有効であることを示した。安定性の確保や最適フィードバックゲインの決定にリアプノフ関数を用いることが有効である事も示した。2.電力システムはさまざまな工学システムが結合した複雑なシステムである。このような複雑なシステムの安定化制御法について提案した。安定化制御法としてはいくつか考えられるが,本研究では,スライディングモードの考えに基づくAVR・GOVファジィ協調制御方式とファジィ制御を適用した静止形無効電力補償装置による方式を提案した。3.ロバスト摂動法の基礎となるリアプノフ関数の構成について一つの手法を提案した。すなわち,未知の非線形摂動を解析するためのノミナルなシステムが非線形フィードバックシステムである場合,このシステムのリアプノフ関数が必要となるが,本研究では,ル-リエ形にとらわれない非ル-リエ形のリアプノフ関数構成法を提案した。4.電力システムにプラントパラメータ変動がある場合のシステムの安定性,すなわちロバスト安定性の解析法を示した。5.システムにパラメータ変動が存在する場合,このパラメータの許容変動幅を知ることはシステムの設計上きわめて重要である。ここでは,ル-リエ形非線形システムにパラメータ変動がある場合のパラメータの許容変動幅の求め方,並びに,非線形摂動がある場合の摂動の許容領域の導出法を提案した。6.パラメータ変動のある積形非線形システムのロバスト解析を行った。1.非線形システムのロバスト安定性の解析を行う場合、ノミナルなシステムをどのシステムと考えるかによって結果が異なってくる。本研究においては、多くのシステムが線形システムとして解析されることが多いことに鑑み、まず二次形式を基盤としたロバスト摂動法による一般ルーリエ形および積形非線形システムの安定パターンの類別を行った。その結果、ルーリエ形システムの非線形性および積形システムの非線形性には、システムが安定になるためのある種のパターンが存在することがわかった。次年度においては、ロバスト摂動法を工学上重要なLienard形非線形システム、Van der pol形非線形システムに適用し、非線形性を摂動と見なした場合の安定性の解析を行う。2.線形システムよりさらに進んだノミナルシステムを考慮するため、線形システムのリアブノフ関数である二次形成をさらに発展させた一般ルーリエ形非線形システム、積形非線形システムのリアプノフ関数構成を行った。ルーリエ形非線形システムのリアプノフ関数としてはルーリエ・ポストニコフ形関数が一般的に知られているが、本研究においては、この関数を拡張した非ルーリエ形のリアプノフ関数を構成している。次年度においては、非線形摂動システムの解析を、このリアプノフ関数を用いて行うことを試みる。3.回転機を含むシステムの非線形性の性質調査およびリアプノフ関数との関係を検討するために、同期電動機、ステッピングモータ、リラクタンスモータの非線形性を考慮したリアプノフ関数を構成し、これらのモータの安定性についても解析した。1.本年度の研究においては、ロバスト摂動法によって任意の非線形制御システムのパターン類別を行い、類別された非線形関数の性質を利用してシステムのリアプノフ関数構成を容易にした。まず、工学的によく知られた一般ル-リエ形非線形システムや積形非線形システムの独特な非線形を簡単な線形システムの非線形摂動としてとらえ、線形システムのロバスト安定条件から非線形関数のパターン類別を行った。同様な手法により、工学分野で頻出するシステムの非線形性を、安定を保持するためのパターンに分類していった。

2.上記の結果を利用して、フィードバック要素が非線形関数の積の形で与えられる、いわゆる積形非線形フィードバックシステムのロバスト安定性について、摂動伝達関数行列の正実性とリアプノフの安定判別法により解析を行った。最初にノミナルなシステムの安定性について考察を行ったが、このとき、二次形式を基盤としてシステムが安定になるための積形非線形関数の条件を導出した。次に、システムにパラメータ変動が生じた場合のロバスト安定性について、システムの摂動伝達関数行列の正実性を基に考察を行った。この摂動伝達関数行列の正実条件からシステムの一つのロバスト安定指標を導く事ができた。3.また、非線形状態フィードバック制御を同期電動機の同期引き入れ特性の改善に応用し、安定判別をリアプノフ関数を用いて行った。このリアプノフ関数を用いてフィードバックゲインの最適値の決定も行った。
口腔扁平上皮癌のリンパ節転移におけるリンパ管新生因子とケモカインレセプターの役割

口腔扁平上皮癌においてリンパ節転移は最も重要な予後決定因子である。癌細胞がリンパ管新生を促進し、癌細胞に発現するケモカィンレセプターはリンパ節転移において重要な役割を果たすと考えられている。本研究においては、これまでの研究にも使用してきた臨床材料(リンパ節転移および予後追跡の可能なもの)を用いた免疫組織学的検討を計画していたが、諸般の事情から少数例での検討に留まった。転移との関わりが最も注目されているケモカインレセプターCXCR4は、染色性の弱いもの、陽性率の低いものも含めると大部分の口腔扁平上皮癌症例に発現していた。リンパ節転移を伴う症例では、転移のない症例よりも陽性率が高い傾向を示し、また転移リンパ節の方が原発巣よりも陽性率が上昇するものが多かった。さらに、腫瘍内のlymphatic vessel density(LVD)を、リンパ管内皮の特異的マーカーとされるD2-40抗体を用いて免疫組織化学的に染色し、算出した。CXCR4と同様に、リンパ節転移を伴う症例でLVDが高値を示す傾向を認めたが、両者の相関性は必ずしも高くなかった。次に、当科で継代培養中の口腔扁平上皮癌培養細胞株におけるCXCR4の発現の有無を確認した。HSC-2、SCC25、KB、そしてKBにCOX-2 cDNAを遺伝子導入してCOX-2を過剰発現させたKB/COX2とその対照KB/Neoの計5種類の細胞で陽性であった。CXCR4のリガンドであるSDF-1の発現は確認できなかった。さらに、CXCR4が陽性であった5種類の細胞をヌードマウスのリンパ節転移モデルに応用した.同所性移植および足蹠皮下移植を実施したが、移植性の不良やリンパ節転移率が低かった.低率ながらリンパ節転移を生じたKBシリーズにおいて、対照のKB/NeoよりもCXCR4の発現が高いKB/COX2の転移率はKB/Neoと同程度であった。1)口腔癌培養細胞株として,HSC-2,HSC-3,SCC25,KBの4種類の細胞を対象として,ケモカインおよびケモカインレセプターであるCXCL12/CXCR4,リンパ管の新生に関連の深いVEGF-Cの発現について検索した.細胞表面に発現しているCXCR4を定量的に評価するために,すでにフローサイトメトリーでその発現強度の差が報告されている乳癌細胞MBA-MD-231およびその肺転移株などを陽性コントロールとして,RT-PCR法で確認したところ,HSC-3,KBは高発現,SCC25は低発現,HSC-2は発現していなかった.CXCR4のリガンドであるCXCL12の発現を確認できず,検討した4種類の細胞においてはケモカインとケモカインレセプターの共発現によるオートクライン機序での癌の悪性度の増強は認められなかった.2)上記の口腔癌培養細胞株4種類をヌードマウスのリンパ節転移モデルに応用した.同所性(口底・オトガイ下)移植および足蹠皮下移植を実施したが,SCC25はヌードマウスへの移植性が低く,SCIDマウスへの移植も試みている.他の3種類については移植性が良好であるが,HSC-3を除いて現在のところ所属リンパ節への転移を確認できず,同所性移植として咬筋部の追加やマトリジェルとの同時注入などを検討中である.3)口腔扁平上皮癌患者から得た臨床材料を用いて,ケモカインとケモカインレセプターの発現およびリンパ管新生に関連する因子であるVEGF-C, VEGFR-

3およびリンパ管内皮の特異的マーカーD2-40の発現について免疫組織学的染色を行った.VEGF-Cの発現頻度が高く,VEGFR-3の発現については,リンパ節転移,予後との関連について検索中である.当初研究対象と考えていた材料が諸事情により一部使用困難な状況にあり,目標サンプル数を減じざるを得ない.1)口腔癌培養細胞株として,HSC-2,HSC-3,SCC25,KBの4種類の細胞を対象として,ケモカインおよびケモカイ1ンレセプターであるCXCL12(SDF-1α)/CXCR4,リンパ管の新生に関連の深いVEGF-Cの発現について検索した,細胞表面に発現しているCXCR4を定量的に評価するために,すでにフローサイトメトリーでその発現強度の差が報告されている乳癌細胞MBA-MD-231およびその同所性移植株(TMD231)・肺転移株(LMD231)などを陽性コントロールとして,RT-PCR法で確認したところ,HSC-3,KBは高発現,SCC25は低発現,HSC-2はほとんど発現していなかった,CXCR4のリガンドであるCXCL12の発現を確認できず,検討した4種類の細胞においてはケモカインとケモカインレセプターの共発現によるオートクライン機序での癌の悪性度の増強は認められなかった.2)上記の口腔癌培養細胞株4種類をヌードマウスのリンパ節転移モデルに応用した,同所性(口底・オトガイ下)移植および足蹠皮下移植を実施したが,SCC25はヌードマウスへの移植性が低く,SCIDマウスへの移植に変更した,他の3種類については移植性が良好であるが,HSC-3を除いて所属リンパ節への転移を確認できず,咬筋部への移植を追加検討した.KBの咬筋部移植で低頻度ながらリンパ節転移を確認できたため,当科で作成したKB/COX2(KBへのCOX-2過剰発現株)も加えて検討中である,3)安定してリンパ節転移を生じるモデルの作成に手間取っており,研究の取りまとめを延長して報告したい.
前立腺癌の上皮間葉転換と去勢抵抗性のクロストーク

本研究では、前立腺癌の上皮間葉転換と去勢抵抗性の相互関係の解明およびその治療応用を目指した。研究の結果、上皮間葉転換と去勢抵抗性の間には、Twist1転写因子/アンドロゲン受容体シグナルの干渉を通じた相互作用があり、上皮間葉転換シグナルを標的とした治療により、去勢抵抗性の獲得を防止出来る可能性が示唆された。前立腺癌の進展において、上皮間葉転換(epithelial-mesenchymal transition, EMT)および去勢抵抗性は、致死的な前立腺癌に至る致命的なステップである。進行性前立腺癌は、去勢抵抗性となりやすいことが知られており、EMTのマスターレギュレーターであるTwist1が、アンドロゲン受容体(androgen receptor, AR)の発現を制御することで、前立腺癌の進展に加え去勢抵抗性の獲得にも寄与していると考えられるが、EMTと去勢抵抗性の関連についての研究はほとんど見られない。そこで、本研究では、EMTと去勢抵抗性のクロストークに焦点をあてて、本研究を行った。まず、EMT促進因子であるTGF-βの去勢抵抗性獲得への影響を検討した。TGF-β受容体発現前立腺癌細胞である22Rv1細胞にTGF-βを添加し、Twist1やARの発現を検討したところ、Twist1ならびにARの発現の亢進を認めた。また、長期間TGF-β処理した22Rv1細胞は、浸潤能の亢進と共に、アンドロゲン除去下での細胞増殖の亢進を認め、去勢抵抗性の獲得が確認された。続いて、マトリゲル被覆boyden-chamberを用いて、マトリゲルを通過した細胞群を数サイクル選択することで、マトリゲルへの浸潤性の高い22Rv1細胞派生株(22Rv1/HI)を樹立した。22Rv1/HI細胞も、浸潤能の亢進と共に、Twist1やARの発現亢進と、アンドロゲン除去下での細胞増殖の亢進を認め、去勢抵抗性の獲得が確認された。以上より、EMT形質の獲得は、去勢抵抗性の獲得を促進するものと考えられた。一方、LNCaPゼノグラフトモデルの去勢抵抗性組織においては、ARおよびTwist1、fibronectin、vimentinの発現亢進を認めるとともに、LNCaP細胞の去勢抵抗性細胞では、親株に比べ浸潤能の亢進を認めた。これらより、去勢抵抗性の獲得は、EMTを促進すると考えられ、去勢抵抗性とEMTの間には、Twist1/ARシグナルの干渉を通じた相互作用があることが示唆された。TGF-β受容体発現前立腺癌細胞である22Rv1細胞にEMT促進因子であるTGF-βを添加し、Twist1やARの発現を検討したところ、Twist1ならびにARの発現の亢進を認めた。続いて、マトリゲルへの浸潤性の高い22Rv1細胞派生株を樹立した。一方、LNCaPゼノグラフトモデルの去勢抵抗性組織においては、ARおよびTwist1の発現亢進を認めるとともに、LNCaP細胞の去勢抵抗性細胞では、親株に比べ浸潤能の亢進を認めた。また、臨床検体においても、癌におけるTwist1やARの発現亢進と被膜外浸潤を認める癌でのARおよびARバリアントの発現亢進を認めた。さらには、22Rv1のマウスゼノグラフトにて、TGF-β阻害剤であるSB525334は、去勢との併用において、有意に腫瘍増殖を抑制した。以上より、去勢抵抗性とEMTの間には、Twist1/ARシグナルの干渉を通じた相互作用があり、EMTシグナルを標的とした治療により、去勢抵抗性の獲得を防止出来る可能性が示唆された。現在までに予定している研究の半分超を終えた。その結果、研究実績の概要で示した通りの事実が明らかとなった。その結果は、おおむね当初想定していた結果に沿ったものであった。また、研究の進展度としては、おおむね予定していた研究計画の通りに進んでおり、今後も引き続き、当初の予定通り本研究を推進予定である。泌尿器腫瘍これまで、前立腺癌細胞株を用いた検討を行ってきたが、細胞株のみならず臨床検体での意義を明らかにするため、ヒト前立腺癌組織でのTwist1やAR、EMT関連マーカーの発現と臨床病理学的因子との関連およびこれら分子発現の相互関係について検討を行い、ヒトでのTwist1/ARシグナルのEMTおよび去勢抵抗性獲得における重要性について検討する。

また、EMTシグナルを標的とした治療により、EMTシグナルを通じた癌の進展の防止とともに前立腺癌の去勢抵抗性の獲得を防止出来る可能性がある。本研究の結果、TGF-βがEMTを促進すると同時に、去勢抵抗性の獲得にも寄与することが分かった。そこで、TGF-β阻害剤を用いた前立腺癌治療の可能性について、in vitroおよびin vivoモデルを用いて検討を行う予定である。また、近年、アンチセンスオリゴやナノパーティクルなどを用いた遺伝子導入技術の臨床応用が盛んに研究されている。これらのテクノロジーを用いた新規治療法の開発についても検討する。