hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
遺伝子・タンパク質発現解析に基づく腎癌治療薬の創薬ターゲットの探索

腎臓癌は、外科的療法が一般的に行われるが、化学療法や放射線療法の奏功率が他の癌に比べて著しく低いこと、有用な診断マーカーが存在しないことが問題となっている。そこで抗癌剤に対する耐性メカニズムの解明や新規創薬ターゲット診断マーカーの探索を目指して、摘出腎癌における癌部・非癌部のトランスクリプトーム・プロテオーム解析を行った。昨年度、癌部において多剤耐性に関わるSorcinの発現量が低下していることを明らかにしたが、癌細胞増殖における役割をRNA干渉の手法により検討した。すなわち、腎臓癌細胞Caki-1において、SorcinをsiRNAによってノックダウンさせると、癌の増殖、進展に重要な役割を果たしている血管内皮増殖因子(vascular endothelial growth factor ; VEGF)の発現が誘導されることが明らかとなった。したがって、Sorcinの低下によりVEGFの発現が誘導されることにより、癌の増殖が促進されることが示唆された。腎臓癌の癌部・非癌部におけるタンパク発現の網羅的な解析を目的として、それぞれの試料を^<12>Cおよび^<13>Cをそれぞれ6原子持つ2-Nitorobenzenesulfonyl chlorideにて修飾した後、MALDI-TOF/Msに解析した。質量差6Daのピークの高さにより、癌部で発現の上昇あるいは低下しているタンパクを検出し、同定した。その結果、これまで腎臓癌で発現上昇が認められているタンパクに加えて、未知のタンパクも同定することができた。腎癌は、外科的療法が一般的に行われるが、化学療法や放射線療法の奏功率が他の癌に比べて著しく低いこと、有用な診断マーカーが存在しないことが問題となっている。そこで抗癌剤に対する抵抗性メカニズムの解明や新規創薬ターゲット診断マーカーの探索を目指して、摘出腎癌における癌部・非癌部のトランスクリプトーム・プロテオーム解析を行った。抗癌剤の多剤耐性に関わることが知られているMDR1およびMDR1と同時に発現していることが知られているsorcinのmRNA発現量を検討したところ、MDR1の発現量は癌部・非癌部で変化は認められなかったが、Sorcinの発現量は有意に低下していることが明らかとなった。また、MDR1の発現量が変動することが知られているC3435T、G2677A, Tの発現量におよぼす影響を検討した。非癌部におけるMDR1の発現量は3435位がTT遺伝子型を持つ患者において、CT/TT群に比べ、有意に上昇していることが認められた。一方、癌部においては遺伝子型による差は認められなかった。さらに、最近非小細胞肺癌のゲフィチニブに対する感受性を規定することが報告されたEGFRの体細胞変異に関して、腎癌部分の体細胞変異の検出ならびにmRNAの発現量を測定した。その結果、mRNA発現量の上昇は確認できたものの、体細胞変異は1例も認められなかった。また、癌部・非癌部におけるタンパク質の発現の差について検討を加えた。すなわち、両部位から抽出したタンパク質を二次元電気泳動(等電点・分子量)を行い、画像解析後、癌部にのみ発現しているタンパク質ならびに有意に発現量が亢進しているタンパク質のスポットをペプチドマスフィンガープリンティング法により同定を行った。その結果、14種類のタンパク質が同定できた。

したがって、Sorcinの低下によりVEGFの発現が誘導されることにより、癌の増殖が促進されることが示唆された。腎臓癌の癌部・非癌部におけるタンパク発現の網羅的な解析を目的として、それぞれの試料を^<12>Cおよび^<13>Cをそれぞれ6原子持つ2-Nitorobenzenesulfonyl chlorideにて修飾した後、MALDI-TOF/Msに解析した。質量差6Daのピークの高さにより、癌部で発現の上昇あるいは低下しているタンパクを検出し、同定した。その結果、これまで腎臓癌で発現上昇が認められているタンパクに加えて、未知のタンパクも同定することができた。
代数的構造及び幾何学的構造の物性論における意義と応用

本年度は物性理論における代数的、幾何学的効果としての観点から以下の点に関して新しい研究成果を得た。(1)代数的効果としての量子臨界現象における対称性の効果についてスケーリングの議論による詳しい解析を行いその結果を論文として発表した。具体的には乱れた系における量子臨界点における分数次元のオームの法則としてまとめられる。(2)量子ホール効果における非局在状態の代数幾何学的意味に注目し、位相不変量を計算することにより、いわゆるプラトー間転移及びフローテイングの議論に関する新しい結果を得た。そこではホール伝導度の総和則と平均操作が重要な意味を持つ。その結果は現在論文として投稿中である。(3)乱れたと電子相関の共存効果に関してランダムハバードモデルに関して数値計算を行い重要な結果を得た。具体的にはアンダーソン絶縁体とモット絶縁体間の転移を示し、論文として発表した。(4)量子群の表現を用いた磁場中の電子系でのブロッホ電子に関し、いわゆる弱磁場の極限すなわち準古典近似において厳密な計算を進めた。その結果は現在論文としてまとめつつある。物性理論における代数的、幾何学的効果としての観点から本年度は以下の点に関して新しい研究成果を得た。(1)量子群の表現を用いた磁場中の電子系でのブロッホ電子に関するベ-テ仮設方程式の議論を用い、準周期系における量子群の表現論を応用した。その結果、準周期的な数係数を持つ多項式をあらわに因数分解することができた。その時でてくる数因子は単位円上にマルチフラクタル的にならびいわゆるq定数は1の冪根(ただしその次数は無限大)の場合に対応する。またこのような解析的手法のつかえない場合についても数値的な詳しい検討を加えた。(2)代数的効果として、臨界現象、特に量子臨界現象における対称性の効果について詳しい検討を加えた。その結果2次元のディラック電子、(高温超伝導体、2次元グラファイト等で有効的に実現されるとされる。)における臨界状態を構成した。この手法は乱れがある場合についても有効であり、乱れた系における量子臨界現象における対称性の影響という新しい分野を開拓できた。(3)排他的分数統計の概念を用い量子ホール効果における熱力学を構成し具体的成果を得た。(4)長距離の強い電子相関を持つ系において、相互作用の効果によるエネルギーギャップ形成について数値的、解析的手法を用い研究を進め、その基底状態に関しする相図を得た。それはフラクタルとなり、通常の固体物理における興味深い新しい概念をもたらした。以上の各分野に関して、さらに次年度は新しい概念を用い理論の拡張、応用を図る予定である。
進化する医療光学技術に対応する新しい消化器解剖図の作成－腸間膜可視化プロジェクト

本研究では臓器横断的な消化器解剖図の作成をテーマに,とくに1食道間膜,2食道胃接合部(以下; EGJ),3肛門管前壁における内視鏡手術に必要な微細解剖の解明を行ってきた。1については,胸腔鏡およびロボット支援下の精細な手術画像をもとに食道周囲の反回神経,気管との微細解剖を明らかにすることで「Mesoesophagus」の図化を完成させ,論文発表した。2については,手術の際にEGJの右側で遭遇する閉鎖腔が,網嚢の発生過程において分離される心臓下包(infracardiac bursa,以下ICB)という空間と解剖学的な位置関係が一致することを胎児の切片とMRIで確認し,また成人Cadaverにおいてはその閉鎖腔が食道裂孔から心嚢のレベルに存在し,内腔が中皮で覆われていることを前年度までに示してきた。本年度は手術標本の閉鎖腔も組織学的に内腔が中皮で覆われていることを示し,手術ビデオをもとに閉鎖腔(=ICB)の局所解剖を正確に示した解剖図を作成した。またこの解剖図をもとに手術を行うことでICBの同定率は69%から94%に上昇し, ICBはほぼ全例に存在する微細解剖であることが示唆された。当初の目的を達し,これらの知見を論文発表し,国際学会においても情報を発信した。3男性の直腸癌手術で問題となる尿道損傷や腫瘍マージン陽性を回避するために,Cadaverと患者MRI画像を用いて横紋筋と平滑筋の構造に焦点を当て構造を解明してきた。これらの解剖所見に基づいて,肛門管前壁構造を4つのレベルに分け,各レベルでの切離方法を提案し,国内外の学会で発表した。直腸と境界のない直腸尿道筋の切離には尿道損傷に注意する必要があることを強調した(論文投稿中)。現在,より確実に尿道損傷を予防するために発光ファイバーを用いて術中に尿道を可視化する臨床研究を立案し,症例集積中である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は,益々進化する光学技術を取り入れた内視鏡手術を実施するための詳細な臨床消化器解剖図の作成をゴールとしている。H28年度は食道胃接合部と骨盤底における微細解剖の解明を中心に研究を開始した。CadaverをCTと同様にスライスする手法を確立させ、愛媛大学のThiel固定法2体とホルマリン固定法9体の成人Cadaverを解剖した。食道胃接合部においては手術でしばしば認めるが名称が確立されていない“閉鎖腔"の周辺解剖構造を成人Cadaverスライスで同定し、閉鎖腔が発生学でのinfracardiac bursaにあたると仮説を立てた。仮説の検証のため成人Cadaverの検証に加えて胎児標本(109症例)や手術ビデオ(43例)の検証を開始し、閉鎖腔もinfracardiac bursaも共に食道胃接合部と右横隔膜の間に存在し、背側に右迷走神経が走行していることが確認された。骨盤底においてはAutopsy imaging(Ai)CTから得られたCT画像と、スライスから得られた肉眼写真(高解像度カメラを使用)・組織切片を対比させ、3D構築ソフトを使用して解析・地図作成を進めている。Thiel法固定の検体では、筋肉の発色が良いため肉眼での骨盤底筋群の解剖構造の理解には有用であったが、組織切片では横紋筋・平滑筋繊維の断裂、核の脱落、免疫染色での抗原失活が見られ組織評価に値しないことがわかった。そのため現在はホルマリン固定法の検体を中心に解析を進めている。初年度はCadaverをCTと同様にスライスし、目的組織を薄切して染色することが実施可能であり、予定どおり解明したい微細解剖を評価することができると考えている。食道胃接合部と骨盤底に関しては組織採取が概ね完了しており、引き続き組織の薄切・染色やそこから得られた解剖の手術・画像との対比が実施可能であると考えている。本研究では未だ確立されていない内視鏡手術に必要な外科解剖を明らかにすることを目的としている。具体的には男性の肛門管前壁における横紋筋と平滑筋の立体筋構造と食道胃接合部の右側に存在する閉鎖腔(infracardiac bursa)の解剖を解明することに取り組んでいる。H28年度には解剖体の各スライス(水平断、矢状断、前額断)を作成する方法を確立することでまず肉眼解剖を細かく観察した。さらに、スライスされた解剖体の標的部位を組織切片とし、染色することで目的部位の組織学的な評価を行った。H29年度には骨盤底解剖では解剖体から得られたデータと臨床画像(3D-T2 MRI)を照合し、患者個々の肛門管周囲の筋構造を抽出することで、術前の3Dシミュレーション画像の作成が可能となった。食道胃接合部解剖では解剖学的知見に加え、京都大学先天異常標本解析センター所蔵のヒト胚子・胎児標本(Kyoto collection)を観察することで閉鎖腔の正体がinfracardiac bursaであることを確認した。これらの知見に食道亜全摘術の手術動画を照らし合わせることで手術に有用な解剖図の作成に取り組んだ。H30年度はいままでに得られた解剖学、画像解析、発生学、外科学の知識をリンクすることで新たな局所解剖図の完成とそれに基づいた手術手技の提案を行う。さらには論文化と結果公表によって外科医の間で知識の共有を図ることを目指していく。

現在までの研究において、骨盤底解剖では、男性の肛門管前壁を横紋筋と平滑筋の構造から4つのレベル(肛門側から、横紋筋が前方に突出し球海綿体筋の尾側に伸びる(i)皮下外括約筋レベル、球海綿体筋と会陰横筋、外括約筋が交錯する(ii)外括約筋レベル、横紋筋が1時から11時方向まで亜全周性に直腸を取り囲み、12時方では直腸縦走筋から連続する平滑筋(直腸尿道筋)が尿道後方に広がる(iii)恥骨直腸筋レベル、そしてNVBが1時11時方向を走行する(iv)前立レベル)に分けることで複雑な立体筋構造を理解しやすくなり、手術に応用できることがわかってきた。また、食道胃接合部解剖では、infracardiac bursaが成人の生体においても胎児同様に食道右側1/3周かつ横隔膜右脚の頭側に位置し、その内腔が中皮で覆われていることが解明された。これらの知見から当初の目的である内視鏡手術に有用な新たな解剖図を作成・公表する段階になっているためおおむね順調に進展していると考えている。本研究では臓器横断的な消化器解剖図の作成をテーマに,とくに1食道間膜,2食道胃接合部(以下; EGJ),3肛門管前壁における内視鏡手術に必要な微細解剖の解明を行ってきた。1については,胸腔鏡およびロボット支援下の精細な手術画像をもとに食道周囲の反回神経,気管との微細解剖を明らかにすることで「Mesoesophagus」の図化を完成させ,論文発表した。2については,手術の際にEGJの右側で遭遇する閉鎖腔が,網嚢の発生過程において分離される心臓下包(infracardiac bursa,以下ICB)という空間と解剖学的な位置関係が一致することを胎児の切片とMRIで確認し,また成人Cadaverにおいてはその閉鎖腔が食道裂孔から心嚢のレベルに存在し,内腔が中皮で覆われていることを前年度までに示してきた。本年度は手術標本の閉鎖腔も組織学的に内腔が中皮で覆われていることを示し,手術ビデオをもとに閉鎖腔(=ICB)の局所解剖を正確に示した解剖図を作成した。またこの解剖図をもとに手術を行うことでICBの同定率は69%から94%に上昇し, ICBはほぼ全例に存在する微細解剖であることが示唆された。当初の目的を達し,これらの知見を論文発表し,国際学会においても情報を発信した。3男性の直腸癌手術で問題となる尿道損傷や腫瘍マージン陽性を回避するために,Cadaverと患者MRI画像を用いて横紋筋と平滑筋の構造に焦点を当て構造を解明してきた。これらの解剖所見に基づいて,肛門管前壁構造を4つのレベルに分け,各レベルでの切離方法を提案し,国内外の学会で発表した。直腸と境界のない直腸尿道筋の切離には尿道損傷に注意する必要があることを強調した(論文投稿中)。現在,より確実に尿道損傷を予防するために発光ファイバーを用いて術中に尿道を可視化する臨床研究を立案し,症例集積中である。当初はTheil法固定のCadaverで解剖を解明する予定であったが、Thiel法固定のCadaverから採取した組織は固定に伴う組織の変性や抗原性の失活を認めたため、代わりに10%ホルマリン固定のCadaverにて微細解剖の解明を行うこととした。10%ホルマリンのCadaverから得られた組織は免疫染色の抗原性も保持されており、組織として評価可能であったため、Cadaverから微細解剖を解明し、手術・画像との整合性を図ることで内視鏡手術を施行する外科医に有用な新たな解剖図を作成していく予定である。
ギャップ結合が細胞集団の大きさと細胞集団間の距離を決める機構の解明

ギャップジャンクションは細胞間で低分子化合物の輸送にかかわるチャネル分子である。本研究では2種類のゼブラフィッシュ変異体、leopardとstoepselの解析を行った。原因遺伝子はそれぞれCx41.8とCx43である。また今回Cx39.4についても解析を行ったが、Cx39.4も別の模様変異体より単離された遺伝子である。電気生理解析により、Cx41.8とCx39.4が異なる機能を持ち、協奏的に機能していることを示した。また、Cx43のギャップジャンクション機能とヘミチャネル機能のうち、後者の活性増大によりゼブラフィッシュ脊椎骨に異常が生じることを突き止めた。生物の形態形成において、細胞が集団を作り組織を構成していく。我々のこれまでの研究により、この過程にギャップジャンクションが重要な機能を担っていることが明らかとなってきた。これまでに、ゼブラフィッシュの体表模様を指標に、そのパターン形成研究を行ってきたが、ギャップジャンクション構成蛋白の一つ、コネキシン41.8がストタイプ形成に関与していることを示してきた。また、コネキシン41.8の変異体がパターンの人為的な変換に関与していることを示してきた。更に最近、海外のグループからコネキシン39.4もパターン形成に関与していることが発表された。今回、ゼブラフィッシュのパターンを人為的に変化させる変異体、すなわち、ゼブラフィッシュの体表上で黒色素細胞の集団サイズ及び黄色素細胞との細胞間距離を変化させる変異体の機能解析及びコネキシン41.8とコネキシン39.4の機能創刊に関する解析を行った。実験計画段階ではコネキシンタンパク質複合体によるギャップジャンクションの電気生理解析のほかに、発現解析を計画していたが、電気生理解析の条件検討等に時間がかかり、一部H27年度に延長して実験を進めた。その結果、コネキシン41.8のN末ドメインを削った変異体(Cx41.8M7)ではギャップジャンクションのコンダクタンスが失われていること、更には野生型コネキシン41.8との共発現(ヘテロ12量体)でも、機能阻害を行っていることが明らかとなった。ギャップジャンクションの変異体の機能解析はアフリカツメガエル卵母細胞を用いた電気生理解析による行うことを計画していた。これは、ターゲットとするコネキシン41.8が、哺乳類培養細胞での発現が悪く、膜局在が見られず、パッチクランプ法やアップテイクアッセイなどができないためである。このため、本研究に先立ちH25年度にアメリカ・ニューヨーク州立大学を訪ね電気生理解析法を習得してきたが、一方でアフリカツメガエル卵母細胞の質に季節的要因があり、実験の遅延を招いてしまった。この件に関しては、H27年度に計画延長を行い、延長計画通りに実験結果が得られた。この結果はH27度中にJournal of Biological Chemistryに受理されることができた。上記コネキシン41.8、コネキシン39.4以外のコネキシンがゼブラフィッシュの体表模様形成及び形態形成に関与しているかどうかを明らかにする目的で、NGSを用いたトランスクリプトーム解析とCRISPRを用いたノックアウト個体の作製を行っている。発現量の多い遺伝子から順次遺伝子導入を進めており、次年度にはいくつかの結果が得られるものと期待される。ギャップジャンクションに関連して、ゼブラフィッシュの脊椎骨に異常が見られる解析の中で、コネキシン43に変異を見つけることができた。この変異がどのような機能変換を引き起こしているのかについて、解析を進める予定である。ゼブラフィッシュの体表模様を構成する色素細胞を研究対象として、細胞集団サイズ及び細胞集団間の距離を規定するギャップジャンクションの機能解明を目指した研究を進めている。また、今年度は、脊椎骨のプロポーション(パターン)を決めるギャップジャンクションの機能解析に関しても解析を行った。昨年度までに、パターン形成におけるコネキシン41.8及びコネキシン39.4の作用に関して、コネキシン41.8変異体(Cx41.8M7)を用いた電気生理解析と遺伝子組換え体の作製から、両者が協調的に機能していることを証明した。本成果をまとめた論文はJournal of Biological Chemistryに受理され2016年1月に掲載された。この過程で、コネキシン41.8の異なる変異体(MKLCx41.8)に関しても電気生理解析を行ったところ、チャネルのゲーティングに変化が生じていることが分かった。ストライプ模様を迷宮模様に変換するCx41.8M7は電流を全く流さないのに対し、電流のリークが見られる変異体ではストライプが割れるという現象(黄色素細胞からの距離を規定しているものと考えられる)が引き起こされることが分かった。脊椎骨のプロポーションを決めるコネキシン43に関しての電気生理解析では、ギャップジャンクションに異常(コンダクタンスの低下)が生じるとゼブラフィッシュの尾鰭の短縮(伸長阻害)が起こり、一方、ヘミチャネルの以上(コンダクタンスの増大)が生じると脊椎骨の短縮(伸長阻害)が起こることが明らかになった。また、他のコネキシンのゼブラフィッシュ形態形成に関与するかどうかに関して明らかにする目的で、CRISPRを用いた遺伝子破壊系統の作製を進めている。これまでにCx41.8、Cx39.4のほかに、Cx45.6, Cx48.5などアルファタイプコネキシンを中心に作製を行ってきたが、明らかな表現型は得られていない。一部、詳細な解析のために外部の研究者に系統分与を行い、解析を行っている。

H26年度計画がH27年度にずれ込んだこと、脊椎骨のプロポーションを決めるギャップジャンクション蛋白であるコネキシン43の解析に時間を割いた事から、Cx41.8変異体に関するin vitro解析の一部に進展の遅れが生じた。しかし、脊椎骨と尾鰭のプロポーション決定に関するコネキシン43機能の研究に関しては大きな進展があった。コネキシン43の解析に関しては、過去の研究からギャップジャンクションのコンダクタンス低下が尾鰭の伸長阻害を引き起こすことは分かっていたが、なぜ脊椎骨の伸長阻害を引き起こすのかは不明であった。今回の電気生理解析により、ギャップジャンクションが担う複数の機能がそれぞれ重要な役割を担っていることが明らかになった。さらに、チャネルの多様機能が生物の多様化に関与している可能性が示唆された。本結果に関しては現在論文投稿中である。コネキシン41.8機能解明に向けた色素細胞のin vitro解析に関しては、アガロース加工ディッシュを用いて行う培養・細胞間相互作用解析の予備実験を行い、48時間程度のタイムラプス観察が行う条件が整った。これを用いて、細胞間相互作用の解析とともに、ギャップジャンクションが仲介する低分子合物の同定を目指していく予定である。遺伝子破壊系統の作製に関しては、コネキシンを中心に進めているが、この他にも膜蛋白質を中心に破壊系統の作成を進めている。このうち、F0世代で変化が現れたものに関してはF1世代、F2世代の作製に移っている。本研究は生物の形態形成、特に成体の「形づくり」におけるギャップジャンクションの機能解明を目標とした。これまでの研究により、ゼブラフィッシュの表現型の一つである体表模様の形成には、2種類の色素細胞、黒色素胞と黄色素胞間の相互作用が重要であること、この相互作用により細胞自律的なパターン形成が起こっておりことを示してきた。本研究では、遺伝子発現解析、及び遺伝子破壊解析を行い、39種類存在するコネキシン遺伝子のうちコネキシン41.8とコネキシン39.4のみが体表模様のパターン形成に関与していること、が分かった。特に、黒色素細胞間の相互作用にはコネキシン39.4が、黄色素胞から黒色素胞への相互作用にはコネキシン41.8が機能している可能性を示した。このことは、ギャップジャンクションを介した黄色素胞>黒色素胞>黒色素胞という方向性の決まったシグナルリレーの存在を示すものである。また、形態(骨格)のバリエーションを生じさせる因子としてコネキシン43に着目し、チャネルの特性(ギャップジャンクション及びヘミチャネル)の違いが、尾鰭あるいは脊椎骨の伸長に別々に関与していることを示し、論文として発表した。コネキシンの進化に関しては、ゲノムの重複に起因する遺伝子数の増加により魚類には哺乳類の2倍、約40種類のコネキシンが存在することが予想されていた。今回データベースの解析によりにより、他の魚類ゲノムにもゼブラフィッシュのコネキシン数に近い数のコネキシン遺伝子が存在することが分かった。
産褥早期の育児負担感の軽減を目的とした訪問指導体制試案とoutcome評価

産褥早期の母親の育児負担感を軽減するために、家庭訪問による育児支援システムを強化・再構築する目的で、訪問指導条件を統制することによる指導効果を、受け手である母親側の不安軽減outcome評価から比較し、新システム構築の可能性を探る目的で、家庭訪問指導を実施し、指導効果を評価した。本年は、出産後12週までの母親の不安や具体的な心配の内容を明らかにし、母親の不安軽減の観点から適切な指導内容について検討した。これまでの研究の積み重ねで、乳児期では経産の母親も初産の母親と同様に育児に対して不安を感じており、初産の母親への育児支援と同様に1か月健診前後から経産の母親への支援を積極的に考えていく必要があることを見出した。また、本研究の結果から明らかになったことは、多くの母親が心配していた心配項目でも、状態不安との相関がなかった項目、一方、多くの母親が心配ないとした項目でも、状態不安との相関が認められた項目があった。初産の乳児期と経産の新生児期における不安は、育児に関する具体的な心配事の影響が考えられたが、初産の新生児期では、これらの影響はほとんど認められず、他の要因が母親の不安に影響している可能性が示唆された。したがって、各時期における指導内容としては、母親の不安と関連が認められた心配項目を適切な指導内容として考えた。これらのうち少数の母親しか心配していない心配項目や、母親の心配の程度によって不安との関連が異なる項目を明らかにしたことで、指導時の注意点が示唆された。わが国の妊産婦に対する家庭訪問指導の効果については、条件を統制し、かつ具体的な評価指標を用いての評価研究はされていない。本研究は産褥早期の母親の育児負担感を軽減するために、家庭訪問による育児支援システムを強化・再構築する目的で、訪問指導条件を統制することによる指導効果を、受け手である母親側の満足度、outcome評価から比較し、新システム構築の可能性を探ろうとするものであるが、本年度は看護専門職による訪問指導のoutcome評価のための条件設定をおこなうとともに、そもそも母親の育児負担感がどの程度のものであるかの測定を試みた。(1)訪問指導の最適形態(訪問時期、訪問回数)を文献や資料等から検討した。その結果、訪問時期は、産褥14日以前に1回訪問のグループ、産褥14日以前と産褥60日以前に各1回、合計2回のグループを設定した。(2)家庭訪問の効果の評価時期を決定した。識者を交えての検討の末に、評価時期は訪問前と訪問後1週間以内に母親のストレスを測定することとした。また、コントロールとして、訪問を希望しなかった母親のその理由とストレスを測定することとした。(3)出産後の母親のストレスを測定した。母親のストレスを、生理学的および心理学的指標により測定した。前者は唾液中の分泌型免疫グロブリンAおよびコルチゾール、後者はSTAI、育児負担感の自覚を出産後1,2,4,8,12週と経時的に測定した。所属機関の倫理委員会の承認に時間がかかり、H18年3月現在で15例の収集に留まっている。唾液の分析とデータ入力は終わっているが、相互の関連についての検討にまで至っていない。今後3040例の追加を考えているが、次年度に繰り越したい。本研究は産褥早期の母親の育児負担感を軽減するために、家庭訪問による育児支援システムを強化・再構築する目的で、訪問指導条件を統制することによる指導効果を、受け手である母親側の満足度、outcome評価から比較し、新システム構築の可能性を探ろうとするものである。本年度は分娩後2週目の母親の育児ストレスを測定し、産褥経過とともにそれがどのように変化するのか、またどのような母親が強いストレスを感じているかを特定し、効率の良い訪問指導時期を推定しようと考えた。その結果、「年齢2035歳、合併症がない、喫煙者ではない、正常妊娠・分娩・産褥経過を辿った」母親群に対し、家庭訪問した。初産婦12名と経産婦10名の平均年齢は29.1±3.7歳、分娩週数は39.4±0.8週、分娩所要時間は531.4±465.4分、分娩時出血量は285.0±120.8ml、妊娠中体重増加は10.3±2.3kg、非妊時BMIは20.3±1.9、出生時の児体重は3069,3±314.2gであった。生化学的指標として収集した検体では、同一の母親では唾液中のSIgA濃度と母乳中のSIgA濃度には有意な正の相関がみられたが、唾液中のcortisol濃度、母乳中のSIgA濃度、母乳中の白血球細胞数には互いに相関はみられなかった。唾液中のSIgA、cortisol濃度、母乳中のSIgA濃度、母乳中の白血球細胞数は各物質の産生部位や分泌機序等が異なることから、ストレスを受けてから反応し、濃度の変動が起きるまでに免疫物質問に時間差があったと考えられる。そのため互いの濃度に差が生じたものと思われた。分析方法の決定と分析技術のトレーニングに時間がかかったため、同一時期の母親のみのデータ収集で終わり、訪問指導のための最適時期や、訪問指導が必要な対象モデルを特定するまでに至らなかった。産褥早期の母親の育児負担感を軽減するために、家庭訪問による育児支援システムを強化

・再構築する目的で、訪問指導条件を統制することによる指導効果を、受け手である母親側の不安軽減outcome評価から比較し、新システム構築の可能性を探る目的で、家庭訪問指導を実施し、指導効果を評価した。本年は、出産後12週までの母親の不安や具体的な心配の内容を明らかにし、母親の不安軽減の観点から適切な指導内容について検討した。これまでの研究の積み重ねで、乳児期では経産の母親も初産の母親と同様に育児に対して不安を感じており、初産の母親への育児支援と同様に1か月健診前後から経産の母親への支援を積極的に考えていく必要があることを見出した。また、本研究の結果から明らかになったことは、多くの母親が心配していた心配項目でも、状態不安との相関がなかった項目、一方、多くの母親が心配ないとした項目でも、状態不安との相関が認められた項目があった。初産の乳児期と経産の新生児期における不安は、育児に関する具体的な心配事の影響が考えられたが、初産の新生児期では、これらの影響はほとんど認められず、他の要因が母親の不安に影響している可能性が示唆された。したがって、各時期における指導内容としては、母親の不安と関連が認められた心配項目を適切な指導内容として考えた。これらのうち少数の母親しか心配していない心配項目や、母親の心配の程度によって不安との関連が異なる項目を明らかにしたことで、指導時の注意点が示唆された。
炎症反応における細胞間シグナル・ネットワ-クー分子レベルにおける解析とその制御

本研究班の目的は炎症反応における細胞間シグナル・ネットワ-クに関し、単離細胞を用いる研究者と炎症モデルを用いる研究者が、相互に討論し、<in vitro>___ーの結果を<in vivo>___ーへ応用し、両者の結果の違いを検討しながら重点領域研究のテ-マを絞りこむことにある。第一回班会議は7月21日(土)日本炎症学会総会当日開かれ、次年度の重点領域研究の焦点に関して討論した。第二回班会議は9月27日(木),28日(金)両日、私学会館において各自が発表を行い、討論を通して重点領域研究のテ-マを絞ることを試みた。単離細胞を用いる研究者の報告としては、清水が血小坂活性化因子(PAF)受容体の単離と分子構造に関する発表を行い、水上は好中球のロイコトリエン(LT)B_4の分解様式について発表した。また加藤は腫瘍プロモ-タ-による腫瘍細胞の増殖と炎症細胞の増殖における差異を明らかにし、後者の増殖様式に示唆を与えた。永井は好中球の細胞マトリックス代謝の様式についてメタルプロテア-ゼを中心に検討した成績を発表した。これに対し炎症モデルに関しては、猪木のグル-プは炎症反応におけるtachykininの関与、カラゲニン肉芽腫で産生されるphospholipase A_2活性化ペプチドについて報告し、神原はリウマチ様関節炎患者の関節液中のマクロファ-ジ游走抑制因子について報告した。鹿取は、微小循環における好中球血管外游走機構を明らかにした。吉永は炎症巣において好中球が血管外に浸潤するとILー1を産生し始め、次いでそのinhibitorを産生すること、大石はILー1に続いてILー6が産生され肝より急性相蛋白産生を促すことを発表した。田上のグル-プは乾癬におけるサイトカインの役割を、牧野はI型アレルギ-反応におけるPAFとT細胞の役割を、鶴藤は糖質コルチコイドの作用機序につき発表した。次年度の重点領域研究は食細胞をとりあげる。
帝都東京における神社境内と「公共空間」に関する基礎的研究

本研究では、「公共空間」や「公共性」をキータームとして、神道史と都市史・都市計画史、地域社会史の分野などを接続することで、具体的な史料に基づく新たな「国家神道」研究を試みた。神社境内やその隣接空間を「公共空間」として捉え、新旧〈帝都〉である東京と京都との比較の観点を導入することによって、寺院とは異なる神社独自の「公共性」の歴史や、神社の造営と環境整備に係わる人的系譜やその相関関係について解明した。平成22年度は、主に(1)関係資料の調査・収集とその検討、(2)研究会開催と研究発信を軸にして研究推進を行った。(1)に関しては、新旧<帝都>における神社の「公共性」の歴史的展開について具体的な史料をもとに基礎的研究を行うという研究目的に鑑み、また初年度でもあるため、研究基盤整備の観点を重視した。とりわけ、近世・近代の東京・首都圏並びに京都・近畿圏を対象とする社寺・公園行政等に関する基礎的な研究文献や活字資料の収集・検討に重点を置き、当初予定していた各地の公文書館・図書館・神社等に所蔵される関係資料の調査・収集については規模を縮小して行った。それ故、複写収集は京都府立総合資料館所蔵の社寺境内・神苑・神職団体・社寺明細帳に関する資料に留めた。(2)に関しては、主に國學院大學で神社と「公共空間」研究会を4回開催(7月・9月・12月・2月)したが、当初からの参加者のみならず、随時、都市計画史、民俗学等を専攻する多彩な研究者も加わったため、より学際性が増した。第3回研究会では研究協力者・佐藤一伯の成果である『明治聖徳論の研究一明治神宮の神学一』の書評会を行い、第4回研究会は研究協力者・福島幸宏の協力を得て京都府立総合資料館で開催し、関西方面の研究者との交流も行った。また、10月23日に明治神宮国際神道文化研究所が主催した公開学術シンポジウム「明治神宮造営をめぐる人々一近代神社における環境形成の転換点一」に際しては、本研究組織は他団体とともに共催し、研究協力者・今泉宜子の司会のもと、青井哲人・畔上直樹・藤田大誠の3名が本研究の中間報告となる発題を行い、山口輝臣(九州大学)のコメントを踏まえて討議した。その他、研究成果の一部は口頭発表や論文で公表したが、研究文献リストや関係法令一覧の作成は未だ着手したばかりの段階であることから、当初予定していた本研究のウェブサイトは次年度に作成することとした。平成23年度は、(1)関係資料の調査・収集とその検討、(2)研究会開催と研究発信を軸に研究を推進した。(1)は、近世・近代の社寺・公園等に関する研究文献や活字資料、古書店所蔵資料の収集・検討に重点を置いた。但し、明治神宮をはじめとする神社関係原資料の調査・収集については本研究課題における予算で賄うことはせず、デジタル複写などによって行った。(2)は、次の如く神社と「公共空間」研究会を4回開催した。(1)第5回研究会(平成23年5月28日、於國學院大學)は、科学研究費補助金基盤研究(B)「戦争死者慰霊の関与と継承に関する国際比較研究」(研究課題番号:22320018、研究代表者:西村明)と共催で合同研究会「慰霊をめぐる人々とその空間」として開催。(2)第6回研究会(7月30日、於京都府立総合資料館)は「新旧〈帝都〉における社寺行政-公文書・法令の検討を中心に-」をテーマに開催。(3)第7回研究会(10月22日、於明治神宮外苑聖徳:記念絵画館)は、明治神宮国際神道文化研究所と共催で「明治神宮の造営前史と隣接空間」をテーマに開催。(4)第8回研究会(平成24年1月21日、於國學院大學)は、明治神宮史研究会・明治神宮国際神道文化研究所と共催で第8回明治神宮史研究会を兼ねて開催。研究会では、神道史、宗教史、建築史、造園史、都市史、地域社会史、史料学などの学際的な観点から活溌に議論が行われ、その成果の一部は論文に結実している。また、収集資料を用いて研究史や神社境内・公園行政の関係法令など各種データの整理を行い、成果の一部は論文で公表した(明治神宮史や近代神苑、公園、「国家神道」に関する研究史の整理など)。これに伴う研究文献リストと関係法令一覧については、平成24年度中に本研究のウェブサイトにて公開する予定である。なお、神社建築や造園学、都市計画行政をめぐる関係人物の相関図作成にも着手し、来年度の完成を目指して研究会で検討を続けている。最終年度の平成24年度は、研究会やシンポジウムの開催に当たり、一層の学際的な議論を目指すため、適宜他の研究組織と共催した。

具体的には、第9回第12回の神社と「公共空間」研究会を開催し(於國學院大學、明治神宮、京都府立総合資料館)、さらに9月開催の日本宗教学会第71回学術大会(於皇學館大学)でパネル発表を行い、10月には、本研究の総括的な公開シンポジウムを開催した(於明治神宮社務所講堂)。各種調査・資料収集、研究会・学会発表・シンポジウムの実施など、本研究で計画していた諸事業は、本研究参加者の尽力と的確な経費の執行によって概ね順調に実行され、その研究計画を全うすることができた。なお、比較的コンスタントに活字記録を公表し、さらに各自の口頭発表、学術論文等において研究発信が順調になされていたことや、管理者の繁忙もあり、当初研究発信の主なツールの一つとして想定していたウェブサイトは、随時の内容更新が適わなかったことが反省材料として挙げられる。しかし、それにも拘らず、本研究推進上、とりわけ大きな比重をかけて開催してきた神社と「公共空間」研究会をはじめ、学会パネル発表やシンポジウムなどの議論の場では、これまで同様、或いはそれ以上に多様な観点(神道史、宗教史、建築史、造園史、都市史、地域社会史、教育史、美術史、史料学、社会学、民俗学、林学、政治学など)や学際的観点から活発に討議が行われた。そしてこれらを踏まえ、研究成果報告書を作成した。報告書には、東京・京都・熊本の神社関係公文書の一覧、神社・公園に関する法令一覧、神社建築、造園・都市行政、内務省、宮内省などにおける関係人物や関係部局の基礎的データを収録し(一部相関図として提示)、それぞれに解題や検討を加えたのみならず、研究代表者・研究分担者を中心に、研究史を踏まえた現時点での到達点の確認や集大成となる論考を多数掲載した。当初の計画通り、関係資料の収集・検討を行うとともに、年1回の京都出張調査及び年4回の神社と「公共空間」研究会(公開研究会含む)も着実に開催し、充実した学際的議論が出来ているだけでなく、その研究成果が研究メンバー各自による多数の学術論文に結実しているため。なお、平成22年度実績報告書で課題に挙げていたウェブサイトにおける成果公開についても作成に漕ぎ付けており、順次研究内容の紹介や成果の発信に努めている。24年度が最終年度であるため、記入しない。研究計画の大幅な変更は特に考えていない。最終年度である平成24年度は、第9回第12回の神社と「公共空間」研究会を開催し(於國學院大學、明治神宮、京都府立総合資料館)、さらに9月開催の日本宗教学会第71回学術大会(於皇學館大学)でパネル発表「「国家神道」における公共性と宗教性-昭和戦前期を中心に-」を行い、10月には、本研究の総括的な公開シンポジウムを開催する(於明治神宮社務所講堂)。これらを踏まえ、当初の計画通り、これまでの本研究における成果をまとめた報告書(研究の概要、論文編、資料編〔研究文献リスト、関係法令一覧、関係人物相関図〕)を作成する予定である。なお、研究会やシンポジウムの開催に当たっては、より一層の学際的な議論を目指すため、適宜、明治神宮史研究会及び明治神宮国際神道文化研究所、平成24年度科学研究費助成事業(学術研究助成基金助成金)基盤研究(C)「近現代日本の宗教とナショナリズム-国家神道論を軸にした学際的総合検討の試み-」(研究課題番号:23520079、研究代表者:小島伸之)と共催する予定になっている。
植栽及び自然景観の認知と人間の生理機能変化との関係の明確化

人間の心理的機能は視覚的刺激の変化に影響され、それに伴い生理的機能も変化すると言われている。また、植物から発散される香気成分によっても人間の生理的機能が影響を受けることも研究されつつある。このような状況の中、本研究では都市内に存在する緑地を題材に、その見え方の違い、すなわち視認状況の相違や香りなど緑地との接触形態の違いによる人間の生理的機能の変化についてストレスの緩和という指標により医学的見地を交えて明らかにすることを目的とした。視認状況の違いによる調査では、都市内において撮影された緑視状況の異なる複数の景観写真を用いて室内評定実験によりストレス緩和状況を計測した。計測には唾液コルチゾール測定キットおよび唾液アミラーゼを指標とした計測キットを用いた。その結果、唾液コルチゾールを指標としたストレス緩和実験からは、緑地景観と都市景観では短時間でのストレス緩和効果の明確な違いは確認出来なかった。但し、ストレス反応の変化率が緑地景観を視認した被験者群の方が小さい傾向があり、生理反応を安定化させる可能性が示唆された。唾液アミラーゼを指標としたストレス緩和実験からは、緑地景観は短時間でのストレス緩和効果がある可能性が示唆された。緑地との接触形態の相違による調査では、ラベンダー畑等の植栽地内部での検証実験として、血圧、脈拍、唾液アミラーゼ濃度といった生理的指標およびSD法による印象評価による心理的指標から検証した結果、芝生地は「休息」の場所として、ラベンダー畑は「気分転換」の場所として評価できると考えられた。両実験を通じて、緑地には一定の癒し効果がある可能性が示唆されるものの、唾液によるストレス反応は短時間での反応計測を行うことは難しく、一定時間以上の作業や実験時間が必要であると考えられた。今後、植栽パターンを追加した実験により詳細な検証が可能と考えられた。人間の心理的機能は視覚的刺激の変化、すなわち異なった植栽景観を見ることによって変化することは多くの研究から明らかである。これらの心理的機能の変化に伴い生理的機能も変化すると言われている。このような状況の中、本研究では都市内に存在する緑地を題材に、その見え方の違い、すなわち視認状況の相違や緑地との接触形態の違いによる、人間の生理的機能の変化についてストレスの緩和という指標により医学的見地を交えて明らかにし、今後のヒューマンスケールでの緑地デザイン指針作成のための基礎的知見を得ることを目的とした。ストレス計測には唾液コルチゾール測定キットを用い行った。また、近年ストレス反応物質として捉えられつつある唾液アミラーゼを指標とした計測キットも試験的に用いるものとした。その結果、(1)唾液コルチゾールを指標としたストレス緩和実験からは、緑地景観と都市景観では短時間でのストレス緩和効果は確認出来なかった。(2)唾液アミラーゼを指標としたストレス緩和実験からは、緑地景観は短時間でのストレス緩和効果がある可能性が示唆された。両実験を通じて、唾液によるストレス反応は短時間での反応計測を行うことは難しく、一定時間以上の作業や実験時間が必要であると考えられた。

このような状況の中、本研究では都市内に存在する緑地を題材に、その見え方の違い、すなわち視認状況の相違や香りなど緑地との接触形態の違いによる人間の生理的機能の変化についてストレスの緩和という指標により医学的見地を交えて明らかにすることを目的とした。視認状況の違いによる調査では、都市内において撮影された緑視状況の異なる複数の景観写真を用いて室内評定実験によりストレス緩和状況を計測した。計測には唾液コルチゾール測定キットおよび唾液アミラーゼを指標とした計測キットを用いた。その結果、唾液コルチゾールを指標としたストレス緩和実験からは、緑地景観と都市景観では短時間でのストレス緩和効果の明確な違いは確認出来なかった。但し、ストレス反応の変化率が緑地景観を視認した被験者群の方が小さい傾向があり、生理反応を安定化させる可能性が示唆された。唾液アミラーゼを指標としたストレス緩和実験からは、緑地景観は短時間でのストレス緩和効果がある可能性が示唆された。緑地との接触形態の相違による調査では、ラベンダー畑等の植栽地内部での検証実験として、血圧、脈拍、唾液アミラーゼ濃度といった生理的指標およびSD法による印象評価による心理的指標から検証した結果、芝生地は「休息」の場所として、ラベンダー畑は「気分転換」の場所として評価できると考えられた。両実験を通じて、緑地には一定の癒し効果がある可能性が示唆されるものの、唾液によるストレス反応は短時間での反応計測を行うことは難しく、一定時間以上の作業や実験時間が必要であると考えられた。今後、植栽パターンを追加した実験により詳細な検証が可能と考えられた。
高密度格子欠陥を有する純Ｆｅを利用した水素脆化メカニズムと支配因子の検討

単純な組織である純Feを、巨大ひずみ加工の一つであるHPT(高圧下ねじり)加工により、高密度に格子欠陥を導入すると共に高強度化し、水素脆化の特徴を顕在化させた。10 -3 10 +3 s-1の広い歪速度範囲で引張試験を行なうことで、格子欠陥と水素との変形中における動的な相互作用に注目して水素脆化挙動を調査した。また、その痕跡となる破面・破断形態の系統的な調査を行ない、破壊に及ぼす水素のミクロな作用とマクロな破壊現象・力学特性とを関連付けて、水素脆化メカニズムを考察した。金属の高強度化を阻害する最大の要因となっている、水素脆化のメカニズムと支配因子を明らかにすることを目的とする。供試材として、組織が単純であり、また、合金元素や析出物の影響を排除できる、純Fe(極低炭素鋼)を用いた。純Feを巨大ひずみ加工の一つであるHPT(High-Pressure Torsion).加工することで、高密度格子欠陥の導入と共に高強度化できたことから、水素脆化の特徴を顕在化させることに成功した。HPT加工まま材に陰極水素チャージすることで、20 massppm程度もの水素を吸蔵できることが明らかとなった(無加工材ではく1 massppm Hである)。水素脆化は、水素と格子欠陥との相互作用が重要な役割を担うことが知られている。そのため、HPT加工まま材における格子欠陥(微細組織)の定量化を、SEM-EBSD法(粒界密度,結晶方位差(GN転位密度)等),X線回折法(結晶子サイズ,転位密度等)により行なった。また、X線・中性子小角散乱法により、水素添加による微細組織の変化についても調査した。格子欠陥と水素との変形中における動的な相互作用および協調運動に注目し、10^<-3>10^3s^<-1>の広い歪速度範囲で引張試験を室温にて行なった。10^010^2s^<-1>の間で脆性破壊から延性破壊へ遷移することが明らかとなった。破面・破断形態の定量的な調査を行ない、HPT加工まま材の微細組織と比較することで、破壊に友ぼす水素のミクロな作用とマクロな破壊現象・力学特性との関連付けを進めている。高歪速度(10^3s^<-1>)での引張試験では、引張変形破壊に及ぼす水素の力学応答への影響が見られないものの、水素チャージ材では破面のディンプルサイズが著しく小さくなる等、興味深い現象が観察されている。金属の高強度化を阻害する最大の要因の一つとなっている水素脆化のメカニズムと支配因子を明らかにすることを目的とする。純Feを巨大ひずみ加工の一つであるHPT加工することで、高密度格子欠陥の導入と共に高強度化でき、また、陰極水素チャージにより20 mass ppm程度もの水素を吸蔵できることから、水素脆化の特徴を顕在化させることに成功した。HPT加工およびその後の熱処理により、格子欠陥種・量を変化させた試料について調査した。また、水素チャージ後真空脱気することで、試料中の水素量を変化させた。これらの試料について、格子欠陥と水素との変形中における動的な相互作用および協調運動に注目し、10 -3 10 +3 s -1の広い歪速度範囲で引張試験を行なった。引張試験後の破面付近の組織観察の結果、延性的な破壊を示した試料(高歪速度)では、ボイドの数密度が未水素チャージ材と比べて多かったことから、水素がボイドの形成を助長することが明らかとなった。これにより、水素チャージ材では破面のディンプルサイズが著しく小さくなったと考えられる。また、この現象は初期転位密度を減らしたHPT加工後熱処理材においても認められた。このことから、TDS分析の結果を踏まえ、水素のトラップサイトは結晶粒界を構成する空孔クラスターであることが示唆された。一方で、低歪速度での引張試験では、応力誘起拡散で濃化した水素の影響によってボイド縁のすべり変形が生じるため、脆性的な力学応答となり、セパレーションの破面形態を示したと考えられる。このことは、水素チャージ後真空脱気した試料の結果と矛盾しない。純Feを巨大ひずみ加工の一つであるHPT(High-Pressure Torsion)加工することで、高密度格子欠陥の導入と共に高強度化できたことから、水素脆化の特徴を顕在化させることに成功した。

HPT加工(HPT加工まま材)およびその後の熱処理により格子欠陥種を変化させた試料(HPT加工後熱処理材)について調査した。HPT加工まま材およびHPT加工後熱処理材を用いたTDS(Thermal Desorption Spectrometer)分析の結果、水素のトラップサイトは結晶粒界を構成する空孔クラスターであることが示唆された。格子欠陥と水素との変形中における動的な相互作用および協調運動に注目し、10 -3 10 +3 s -1の広い歪速度範囲で引張試験を室温にて行なった。10 +-0 10 +2 s -1の間で脆性破壊から延性破壊へ遷移することが分かった。また、高歪速度(10 +3 s -1)での引張試験では、引張変形破壊に及ぼす水素の力学応答への影響が見られないものの、水素チャージ材では破面のディンプルサイズが著しく小さくなることが分かった。引張試験後の破面付近の組織観察の結果、水素がボイドの形成を助長することが明らかとなった。多数のボイドが変形領域に均一に形成して応力を緩和することで、延性的な力学応答を示し、ディンプルサイズが減少したと考えられる。一方で、低ひずみ速度(<10 +1 s -1)での引張試験では、ボイド縁のすべり変形が十分に生じるため、脆性的な力学応答となり、セパレーションの破面形態を示したと考えられる。平成23年度は、「HPT加工まま材を供試材として、歪速度を変えた引張試験にて、水素脆化挙動を調査する」ことを目的としており、脆性-延性遷移が生じる歪速度を明らかにする等、順調に進展している。また、HPT加工まま材の微細組織や引張試験後の破面・破断形態の定量化により、破壊に及ぼす水素のミクロな作用とマクロな破壊現象・力学特性との関連付けが進んでいる。25年度が最終年度であるため、記入しない。平成23年度は、「HPT加工まま材を供試材として、歪速度を変えた引張試験にて、水素脆化挙動を調査する」ことを目的とし、脆性-延性遷移が生じる歪速度を明らかにする等の成果が得られた。その成果に基づいて、平成24年度は、「変形・破壊に及ぼす水素のミクロな作用とマクロな変形・破壊現象(力学応答)とを関連付ける」ことを主な目的とした。HPT加工まま材の微細組織や引張試験後の破面・破断形態の定量化により、変形・破壊形態の変化に及ぼす水素の影響と力学応答とを関係付ける等、順調に進展している。また、「HPT加工まま材」およびHPT加工後に熱処理を行なって格子欠陥種を調整した「HPT加工後熱処理材」を用いることで、水素が作用する格子欠陥種が明らかとなりつつある。平成23年度は「HPT加工まま材」のみを供試材としたが、平成24年度は格子欠陥種を調整した「HPT加工後熱処理材」も供試材とする。また、水素吸蔵量を調整した試料も作製する。これらにより、水素脆化を生じさせる格子欠陥種を明らかにすると共に、破壊に及ぼす水素のミクロな作用とマク・ロな破壊現象力学特性とを関連付ける。平成23年度は主に「HPT加工まま材」を試料とし、また、平成24年度はHPT加工後に熱処理を行なって格子欠陥種を調整した「HPT加工後熱処理材」も供試材として取り扱った。引き続いて平成25年度は、「HPT加工まま材」・「HPT加工後熱処理材」における水素脆化挙動を調査することにより、水素が影響を及ぼす格子欠陥種を同定する。また、力学特性と水素の拡散挙動および格子欠陥の易動度とを関連付けて考察するため、歪速度のみならず試験温度を変えた場合の力学応答の変化も調査する。
急性期たん白質の甲状腺ホルモンによる誘導の効果

本年度において我々は以下のことを明らかにした。1)グルココルチコイドによりAGPを発現するラット肝臓由来の培養細胞を数株得た。グルココルチコイドによる遺伝子発現の機構について検討を行っている。2)甲状腺ホルモンリセプター(TR)の結合サイトを決定した。TRは第一イントロン中のパリンドローム様構造に結合し、我々の予想と一致した。3)AGP遺伝子の発現に関与していると思われる5'上流領域のDNaseI高感受性部位(HS)1および2について、各々の領域をサブクローニングした。サブクローニングしたDNA断片について、ゲルシフトアッセイにより結合するタンパク質有無を調べたところ、各々の断片に特異的に結合するタンパク質が存在した。4)上記断片のうちHS2を更に2つの断片に分け(HS2a,HS2b)各々について解析したところ、HS2a、b断片共に結合タンパク質が存在した。6)HS2に結合するタンパク質の部分精製を行った。サウスウェスタン法により分子量を求めたところ、HS2a,b共に分子量120k,77k,55kのタンパク質が検出された。このことから各断片には同一のタンパク質が結合していることが判った。7)HS2断片を用いて、上記タンパク質の結合サイトを決定したところ、2カ所のサイトが検出された。しかし、その2カ所で塩基配列は異なっていた。α1-酸性糖タンパク質(AGP)遺伝子の発現について研究計画に従い、I:ラット肝臓を中心とするin vivo系、II:培養細胞レベルでのAGP合成誘導の系、III:AGP遺伝子のin vitro発現系による研究、を行った。以下、各々の平成四年度の成果について報告する。I:(1)ラット肝臓におけるAGP遺伝子の発現について、我々はAGPがレチノイン酸(RA)によっても誘導されることを見いだした。これは今までに報告がなく、最初の発見である。(2)AGP遺伝子において、4か所のDNaseI高感受性部位が、正常ラット肝臓で検出されている。T3、RAの他AGPの誘導が報告されているグルココルチコイド、また炎症時のDNaseI高感受性部位を比較したところ、T3、RA、グルココルチコイド投与時の高感受性部位は全く同一ではないが、よく似ていた。しかし、炎症時におけるそれは幾分異なり、炎症時における発現機構とホルモンによる発現機構に差のあることが、推定された。II:T3誘導的にAGPを発現する培養細胞を得る努力を重ねているものの、まだ成功していない。III:(1)AGP遺伝子の第一イントロン中にTRE活性のあるDNA断片を得ているが、ゲルシフトアッセイにより、この断片にT3リセプターが結合することがわかった。また、フットプリント解析を行い、リセプターの結合領域を定めた。(2)AGP遺伝子のプロモーター領域をサブクローニングし、CAT遺伝子のプロモーターとしてつなぎ、CATの発現を調べたところ、転写開始点から400bp下流の領域までがT3依存的な発現に必要なことがわかった。(3)AGPがRAにより発現することが見い出されたので、RAREを検察したところ、TREがまたRAREとしても働くことがわかった。4)上記断片のうちHS2を更に2つの断片に分け(HS2a,HS2b)各々について解析したところ、HS2a,b断片共に結合タンパク質が存在した。5)HS2a,HS2b各断片とタンパク質の結合は互いに阻害し合うことから同じものであると思われた。