hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
過密空間における震災時の人間行動

以下に、この4年間における各班の研究実績を列挙する。(1)震災時における群集の行動に関する調査研究班は、(1)駅・デパートなど不特定多数収容施設におけるパニックの事例研究、(2)大規模地下街での通行者に対するアンケート調査、(3)大都市震災時における避難所運営のあり方についての行政聞き取り調査、(4)帰宅困難者問題を中心とした企業防災アンケート、(5)大地震直後のラジオを中心とした放送による緊急コメントのあり方についての研究、(6)災害情報の伝達のあり方を考える素材をつかむためのJCO臨界事故の実態調査などを実施した。(2)社会的混乱の制御法に関する調査班は、(1)地方自治体における災害情報システムの現状・緊急時の伝達計画などに関する調査、(2)CATVとコミュニテイFM放送局における災害情報伝達システムと緊急時における情報伝達計画などに関する調査、(3)阪神・淡路大震災以後の若者の防災意識の変化についてのアンケート調査、(4)仮設住宅から恒久住宅に移転した被災高齢者の生活実態調査などを実施した。(3)被災者への住環境提供・管理システムに関する研究班では、(1)雲仙普賢岳噴火後の島原市における避難生活の実態と問題点に関する研究、(2)島原市の復旧・復興過程に関する研究、(3)阪神・淡路大震災における応急仮設住宅の提供及び管理に関する研究、(4)神戸市における応急仮設住宅解消期における諸問題の研究、(5)神戸市における被災者の住宅再建プロセスの研究などを実施した。(4)被災者の心的外傷ストレスとその軽減法に関する研究班では、(1)4年間にわたり、継続して一般住民、高校生、および高齢者などを対象にどのような次期にどのようなストレスが顕在化するかなどに関する調査、(2)被災地において行われているボランテイア活動の実態と問題点について調査した。(5)災害復旧情報の提供システムに関する研究班では、(1)復旧戦略をたてるうえで不可欠な震災被害の実態を把握するため、公共施設だけでなく、住家被害、家財被害、人的被害も含めた総合的な被害額の算定法を確立するための調査を中心に実施した。本年度における調査研究の概要は以下の通りである。震災時における群衆の行動に関する調査研究としては、液・デパート、娯楽場などの不特定多数収容施設におけるパニックの事例、現行の地震対策とその問題点について、聞き取り調査を実施した。社会的混乱の制御法に関する研究としては、全国の地方自治体(都道府県、市区町村)に対して、災害情報システムの整備状況、災害情報収集・伝達計画、復旧情報の伝達計画などに関するアンケート調査を行なった。被災者への住環境提供・管理システムに関する研究としては、雲仙普賢岳噴火後の島原市における避難生活の問題点の摘出と改善策の提起を行なった。被災者の心的外傷後ストレスとその軽減法に関する研究としては、阪神・淡路大震災の事例を中心に、一般住宅と仮説住宅に居住する成人、神戸市立高校生、および高齢者を対称に調査を継続的に実施し、そのデータ解析を通じて心的ストレスの実態を明らかにした。災害復旧情報の提供システムに関する研究としては、復旧戦略を立てるうえで不可欠な震災被害の実態を把握するため、公共施設だけでなく、住家被害、家財被害、人的被害を含めた総合的な被害額の算定法を確立することを目的に各種調査を実施した。本年度における調査研究の概要は、以下の通りである。震災時における群衆の行動に関する調査研究としては、東京・大阪における大規模地下街、ターミナル、大規模集客施設など、不特定多数の集合する施設において大地震にあったらどうするかを通行者に対し詳細なアンケート調査を実施した。

社会的混乱の制御法に関する研究としては、前年度に引き続き、全国の地方自治体に対して災害情報システム、災害情報収集・伝達計画、復旧情報の伝達計画等に関するアンケート調査、および阪神・淡路大震災における被災者、被災自治体、被災企業の対応実体に関する聞き取り調査を行った。被災者への住環境提供・管理システムに関する研究としては、雲仙普賢岳噴火後の島原市における避難生活の実態と問題点を究明するとともに、阪神・淡路大震災における避難生活についての問題点を時系列的に整理した。被災者の心的外傷ストレスとその軽減法に関する研究としては、一般住宅と仮説住宅に居住する成人、神戸市内の高校生、および高齢者を対象に、前年度から継続している調査を実施するとともに、避難生活に大きく貢献するボランテイア活動とそのあり方についても予備的調査を実施した。災害復旧情報の提供システムに関する研究としては、前年度に引き続き、復旧戦略を立てるうえで不可欠な震災被害の実態を把握するため、公共施設だけでなく、住家被害、家財被害、人的被害も含めた総合的な被害額の算定法を確立することを目的に、各種の調査を行った。なお、本年度は上記の研究に加えて、新たに、大都市災害時に大量に発生すると予想される帰宅困難者対策と安否情報を含めた情報提供システムのあり方についての研究にも着手した。(1)震災時における群衆の行動に関する調査研究としては、東京23区内において震災時に大量に発生すると予想される避難者への対策に関し、避難所運営の実態と在り方について行攻機関に聞き取り調査を行うとともに、住民に対するアンケート調査を実施した。また、震災時に370万人以上発生すると想定されている帰宅困難者対策について、交通機関、宿泊施設を中心に在京企業にアンケート調査を行った。(2)社会的混乱の制御法に関する研究としては、制御の可否を左右する情報の実態と在り方に土江、とくにCATVとコミュニティFM放送局について、その災害対策の実態と災害関連情報をいかに放送するかを調査した。また、阪神・淡路大震災以後の仮設住宅から恒久住宅へ移転した高齢者の抱える問題や課題について実態調査も実施した。(3)被災者への住環境提供・管理システムの研究としては、雲仙普賢岳噴火以後の避難生活に関する前年度の調査に引き続き、島原市全域にわたって、復興・振興がどのような形で進んでおり、どこに問題が残っているかを系統的に調査した。(4)被災者の心的外傷ストレスとその軽減法に関する調査としては、以前から継続している一般住民、高校生、および高齢者等を対象としたアンケート調査を実施するとともに、震災後4年を経過しても行われているボランティア活動の実態調査を行った。(5)災害復旧情報の提供システムに関する研究としては、阪神・淡路大震災からの復旧におけるヒアリングを行い、仮設住宅建設にあたってどのような情報が不足していたのか、その不足をどのようにして克服したのかについて調べた。
ローカルエリアにおける慢性病患者の在宅療養を支える総合看護外来の組織化と実践評価

慢性疾患患者の増加や在院日数短縮化によってセルフマネジメントが確立していない状態で退院する患者も増え、外来には医療依存度が高い患者が増加している。患者とその家族は、急性期からほどなく退院し在宅療養への移行を余儀なくされ困難性が生じる。また、セルフマネジメントが十分でない状況は、慢性疾患の重症化や再入院を招く要因であるため、外来での看護は重要である。本研究では、「看護外来の組織化」に向けた基礎的研究に位置づけ、各診療科外来における専門看護師や認定看護師など専門領域の高度な知識技術を有する看護師のケア実践とその効果と課題を明らかにすることを目的とした。2017年度は「看護外来推進研究会」を立ち上げ研究遂行の基盤づくりを行い、2018年より8領域の診療科外来における看護ケアの実態調査を開始し、現在も継続的に調査を実施している。その中で、整形外科外来における骨粗鬆症患者への看護ケアの実態、およびがん治療センターにおける化学療法を受けるがん患者への看護ケアの実態を明らかにした。その結果、「病気・治療に関する質問への対応」「症状に関する質問への対応」「日常生活に関する指導」が最も多く、次いで「在宅療養に関する困難事」「病気・症状に対する悩み」「療養生活と症状・治療の折り合い」への対応、「治療処置」などであった。在宅医療へと移行が進む中で、患者および家族が治療継続をしていくためには、専門的な知識を持つ看護師の看護外来おいて、日々の生活の中で起こる様々な事柄へのセルフマネジメントへの支援が重要である。外来におけるリンパ浮腫看護、骨粗鬆症予防看護、糖尿病足病変予防フットケア、ストーマケア、糖尿病看護、がん放射線療法看護、がん化学療法看護の実態調査を実施中であり、2019年12月まで継続する。引き続き外来におけるリンパ浮腫看護、骨粗鬆症予防看護、糖尿病足病変予防フットケア、ストーマケア、糖尿病看護、がん放射線療法看護、がん化学療法看護の実態調査を継続する。また、急性期医療病院においてTransitional Care(移行期ケア)の視点をもち、慢性疾患の患者および家族への在宅療養支援について、「外来ー病棟ー外来」の各移行期での看護ケア事例を通して明らかにしていく。さらに、看護外来(看護専門外来)の看護ケアプログラムを作成に着手する。慢性疾患患者の増加や在院日数短縮化によってセルフマネジメント力が確立していない状況で退院する患者も増え、外来には医療依存度が高い患者が増加している。患者とその家族は、急性期からほどなく退院し在宅療養への移行を余儀なくされるため困難性が生じる。セルフマネジメントが確立していない状況での在宅療養は慢性疾患の重症化、再入院を招く要因となるため、専門看護師や認定看護師など専門領域の高度な知識・技術を有する看護師の外来での看護は重要である。本研究では外来における看護師のケアの実態を調査するとともに、実践事例から専門看護師、認定看護師、学会等認定資格取得看護師による専門領域の高度な知識・技術を有するケアの効果と課題を明らかにすることが重要と考え研究に着手した。本研究は「看護外来の組織化」に向けた基礎的研究に位置づける。平成29年度は調査施設において「看護外来推進研究会」を立ち上げ研究遂行の基盤となる組織づくりを行った。また、講演会を開催しセルフケア看護、病棟と外来との連携、看護外来の取り組みについて理解を深めた。さらに、研究1として、専門看護師、認定看護師および学会等承認資格保有看護師が関連する診療科の外来医師と連携し、患者とその家族に対して疾病に伴う症状の改善や自己管理の療養生活指導、他職種との調整など提供したケアについて、後方視的に電子カルテや外来看護記録より情報を得て、外来におけるケアの実態と外来看護の課題を明らかにすることを目的に8領域(リンパ浮腫、骨粗鬆症予防、糖尿病足病変予防フットケア、ストーマ管理、自己導尿、糖尿病療養支援、がん放射線療法、がん化学療法外来看護)の外来看護の実態調査を開始した。研究者所属機関および調査施設の倫理委員会の承認を受け、調査を開始した。今後、調査結果の分析を行い外来看護の実態と課題を明らかにする。また「看護外来推進研究会」を定期的に開催し事例検討を行いながら、看護外來の組織化に向けた看護実践の意味づけを行う。

その結果、「病気・治療に関する質問への対応」「症状に関する質問への対応」「日常生活に関する指導」が最も多く、次いで「在宅療養に関する困難事」「病気・症状に対する悩み」「療養生活と症状・治療の折り合い」への対応、「治療処置」などであった。在宅医療へと移行が進む中で、患者および家族が治療継続をしていくためには、専門的な知識を持つ看護師の看護外来おいて、日々の生活の中で起こる様々な事柄へのセルフマネジメントへの支援が重要である。外来におけるリンパ浮腫看護、骨粗鬆症予防看護、糖尿病足病変予防フットケア、ストーマケア、糖尿病看護、がん放射線療法看護、がん化学療法看護の実態調査を実施中であり、2019年12月まで継続する。調査を継続し外来看護の実態と課題を明らかにし結果を公表していく。また「看護外来推進研究会」を定期的に開催し事例検討を行いながら、看護外來の組織化に向けた看護実践の意味づけを行っていく。引き続き外来におけるリンパ浮腫看護、骨粗鬆症予防看護、糖尿病足病変予防フットケア、ストーマケア、糖尿病看護、がん放射線療法看護、がん化学療法看護の実態調査を継続する。また、急性期医療病院においてTransitional Care(移行期ケア)の視点をもち、慢性疾患の患者および家族への在宅療養支援について、「外来ー病棟ー外来」の各移行期での看護ケア事例を通して明らかにしていく。さらに、看護外来(看護専門外来)の看護ケアプログラムを作成に着手する。学会参加人数が予定より少なかったことで交通費、参加費に余剰が生じた。平成30年度は研究結果の公表を計画していることと、外来においてデータ収集をスムーズに実施するためにPC購入を予定している。海外における移行期ケアの実際の視察を予定していたが実施しなかった。国内において移行理論の第一人者であるアフアフI.メイレス博士の講演を研究分担者、研究協力者と共に聴講し理解を深めた。今年度は引き続き実態調査を継続し、その研究成果を海外の学会で発表する予定である。
ns2型発光中心を含有したガラス蛍光体における局所構造と発光特性の制御

本研究は、ns2型の電子配置を有するカチオン(Sn2+, In+など)を含有した酸化物ガラス、および非晶質材料を合成し、その光学特性、発光特性、および、価数などの局所状態を調査した。その結果、組成に依存したガラスのネットワークだけでなく、過冷却液体からの凍結過程に発光特性が影響を受けることを見出した。また、他の発光中心とns2型中心との差異を議論した。更に、放射線励起発光と通常の蛍光との差異を詳細に考察し、ガラスベースの発光材料における局所状態、および、ネットワーク構造が重要であることを見出した。本年度は、種々の酸化物ガラス中にドープした、Sn2+に代表されるns2型発光中心の発光特性を調査した。ホストの酸化物ガラスとして、亜鉛リン酸塩ガラスや亜鉛ホウ酸塩ガラスを選択して、蛍光スペクトルや発光減衰定数を評価したところ、組成に応じて発光挙動が異なることを見出した。また、当該ガラスを作製する雰囲気や、ガラス融液からの冷却速度によっても、発光特性や、吸収特性などの光学特性が大きく変化することを見出した。これらは、発光中心がそのまわりの局所状態を反映するためであり、融液を冷却して得られるガラスにおいて、その物性が作製条件に大きく左右される、例えば、急冷して得られるガラスと徐冷して得られるガラスでは、発光特性が大きく異なることが示唆される。平成26年度は、高温から急冷して得られるガラス蛍光体の作製【研究項目A1】を実施計画として検討していたが、雰囲気制御電気炉において、高温から室温までの温度変化に対して耐えうるセラミックス管が現状では市販されていないことが判明した。そのため、専用のセラミックス管を業者と共同して作製するところから始めたため、この検討項目については、平成27年度に持ち越しとなっている。一方、酸-塩基反応を用いたアモルファス薄膜の作製、および組成・発光の調査【研究項目A2】に関しては、研究実施後、論文を投稿することができた。これらに対して組成・発光・局所構造の調査【研究項目B】を検討した。光学特性は評価できたものの、放射光を用いたXAFS測定は課題の採択との兼ね合いで、進展が若干遅くなっている。ただ、放射光の解析結果を必要としない論文については、随時論文投稿をおこなっており、その観点は、評価に値するといえる。本年度も引き続き、ns2型発光中心を含有した酸化物ガラスを作製し、その光学特性、発光特性評価をおこなった。ns2型発光中心としてはIn+の発光中心に注目し、その発光特性評価を論文として公表した。また、Sn2+を含有した蛍光体薄膜を作成し、その発光特性に関しても論文公表をおこなった。平成27年度は、グラッシーカーボン坩堝を用いて徐冷法で作製したガラスにおける発光特性を評価し、急冷試料との差異に関する論文投稿を行った。実験としては、作製したガラスに対して、Snメスバウアー、XANES測定を用いて発光中心の価数評価を行い、得られたガラスにおける発光特性の起源を明らかにした。一方で、Sn K端XANES測定とL端XANES測定をおこなうことより、そのスペクトルから得られる情報の妥当性を議論することができた。同時に、代表的な発光中心であるCe3+を含有する酸化物ガラスについても物性評価を行い、ns2型発光中心、および、ns2型発光中心を含有する酸化物ガラスとの差異を明らかにした。一方では、共同研究者の協力の下、X線励起発光スペクトルを測定し、紫外光を用いた蛍光と放射光を用いたシンチレーション特性とを比較した。その結果、特に、ホストに起因した発光特性の差異が両者間で確認された。これは、ガラスの発光材料として応用に際して重要な知見であるといえる。ns2型発光中心を含有する酸化物ガラス蛍光体に関する研究を進め、新奇ns2型発光中心を新たに見出しただけでなく、薄膜型材料に関しても論文として公表することができた。また、ガラス材料のランダム性と発光特性との相関があることを実証し、ホスト材料そのものの研究を同時に進める必要があることを見出したことが新しい進捗として挙げることができる。当研究期間においては、前年度に引き続き、発光中心を含有する酸化物ガラスを溶融急冷法により作製し、多様な解析手法を用いて構造、および、発光特性の評価を実施した。本年度は、酸化物ガラス中にドープする発光中心として、ns2型発光中心の代表的なカチオンであるSn2+を選択した。このSn2+を含有する酸化物ガラスの構造、物性、および発光特性に関する調査を主としておこなった。大気中、あるいは、不活性雰囲気中で作製した酸化物ガラスにおける発光中心の価数に注目し、材料探索を行った。その結果、亜鉛リン酸塩ガラス中ではほぼ100%がSnの2価であるのに対して、ホウ酸塩ガラスでは、不活性雰囲気中で作製したにも関わらず、一部が酸化反応を起こして4価に変わっていることを見出した。また、作製条件により、徐冷と急冷で作製するガラスの構造、および、発光特性が異なることを見出した。その結果、急冷して作製したガラスにおいて、より液体に近い乱雑な構造で、蛍光体としての発光特性も優れることを見出した。原因としては、発光中心が徐冷中に凝集し、局所的な濃度消光が生じていることが予想される。このような知見は、発光特性を示すガラス部材の実用的な開発にとって重要であると考えられる。一方で、ガラスの弾性特性を評価することにより、ガラスネットワークと物性との相関に関する研究をスタートさせた。弾性特性は、単にガラス中のばね定数としてだけでなく、発光材料のホストとしても、重要なパラメータであることを見出した。

Snの価数に関する論文を数報投稿、受理されている。また、修士学生が、主著で論文を執筆する補助・指導をおこない、教育面でも一定の成果を上げることができた。当研究期間においては、前年度に引き続き、発光中心を含有する酸化物ガラスを溶融急冷法により作製し、多様な解析手法を用いて構造、および、発光特性の評価を実施した。本年度は、酸化物ガラス中にドープする発光中心として、ns2型発光中心の代表的なカチオンであるSn2+に加えて、同様に配位子場の影響を受けるCe3+を発光中心として選択して、それらの類似性および相違を議論した。前者はs-p遷移、後者はf-d遷移であり、共に、大気溶融によって発光不活性である高酸化数に変化するため、Ar中での溶融を実施した。また、大気中での溶融中における酸化反応を避けるため、1100°C以下で溶融可能なガラス系を選択して研究を実施した。本研究においては、特に、ガラス中における発光中心の価数に注目し、大型放射光施設SPring-8にてX線吸収微細構造(XAFS)測定を行うことによりその価数を評価し、物性との相関を議論した。本年度は、Snの価数評価に際して、L2端を用いたXAFSが、より実際の価数を反映することをSnメスバウアーの結果と比較することにより明らかにした。また、紫外光を照射して得られる蛍光以外に、X線を照射して得られるシンチレーションや遅延発光についても調査を行い、ガラスにおけるシンチレーション特性が、X線を吸収したホスト材料から発光中心に至るエネルギー輸送過程に大きく依存することを見出した。一方で、ホストガラスのネットワーク構造に注目し、多様な測定手法を基に精密なガラスの3次元モデリングを行うことに成功した。これらの成果は、将来的に、より高効率な発光特性を有するガラスベースの材料を設計するために必要な知見であると考えられる。本研究は、ns2型の電子配置を有するカチオン(Sn2+, In+など)を含有した酸化物ガラス、および非晶質材料を合成し、その光学特性、発光特性、および、価数などの局所状態を調査した。その結果、組成に依存したガラスのネットワークだけでなく、過冷却液体からの凍結過程に発光特性が影響を受けることを見出した。また、他の発光中心とns2型中心との差異を議論した。更に、放射線励起発光と通常の蛍光との差異を詳細に考察し、ガラスベースの発光材料における局所状態、および、ネットワーク構造が重要であることを見出した。ns2型発光中心を含有するガラスにおける論文を公表するだけでなく、共同研究者とのコラボレーションにより、今後の研究進展に不可欠な、ガラスのランダム性と発光特性との相関に関して、知見を得ることができたため。今後の研究推進としては、ホストの詳細な評価に基づき、発光中心を含有したガラスの物性評価を行う。まず、過冷却液体としてのガラスに注目し、ガラス化と物性との相関を明らかにしたのち、種々の発光中心をドープした酸化物ガラスの発光特性の評価を行う。同時に、ガラス融液とガラスの物性との相関についても注目して研究を進める。Sn以外の発光中心に関しても比較を行う事で、より深く科学を検討できると考えられる。
再生医療のための幹細胞凍害防止保存液

(目的)ヒト幹細胞の臨床応用で安定な細胞の保存は重要課題の1つである。保存剤として良く使われるDAP213はDMSOの細胞毒性が無視できないため、代替物を用いた凍結保存液が望ましい。我々はすでにDMSOを含まない新規不凍ポリアミノ酸含有保存剤でヒトiPS細胞をガラス化法で凍結保存することを報告した。今年度はこの保存液がhES細胞で同様の保存効果が得られるかを検討した。(方法)hES細胞をコロニー状態でカルボキシル化PLLとEthylene glycolとSucroseを含む新規凍結保存剤で液体窒素中で急速凍結した。保存後、再び解凍しSNLフィーダー細胞上で培養後、細胞の形態学的観察を行い、また未分化能力の指標となるアルカリホスファターゼ染色、幹細胞マーカーに対する免疫染色を検討した。また核型解析を行い染色体に異常がないかを確認した。(結果)不凍ポリアミノ酸を含む凍結保存剤で凍結したhES細胞は、DAP213(DMSO:Acetamide:Propylene Glycol=2:1:3)に比べると、コロニー状態ではDMSOを用いた保存剤の細胞より不凍ポリアミノ酸含有保存剤の方がコロニーの成長が早く、細胞数も2倍近くあった。マトリゲルコートディッシュに播種したhES細胞でも不凍ポリアミノ酸含有保存剤は翌日から細胞の生着が見られたが、DAP213ではわずかしか生着しなかった。不凍ポリアミノ酸凍結保存剤で保存したhES細胞はアルカリフォスファターゼ染色も正常で、免疫染色では未分化マーカーは正常に発現していた。核型解析でも異常は認められなかった。これよりhES細胞において新規不凍ポリアミノ酸含有凍結保存剤はDAP213に代わり得るものと確信できた。さらにhES細胞の臨床応用を考えると、将来的には細胞の凍結は緩慢凍結法が望ましく検討を重ねていきたい。毒性の高いジメチルスルホキシド(DMSO)に代わる新しい凍害防御剤の開発を試みた。食品添加物として広く使用されているε-ポリ-L-リジン(PLL)のアミノ基を一部無水コハク酸と反応させることにより、両性高分子電解質を合成した。このカルボキシル化ポリリジン(COOH-PLL)は、カルボキシル基の導入率に応じてそれ単体で細胞の凍害防御効果を示すことを明らかにした。これはヒト間葉系幹細胞を含むその他多数の細胞に対しても同様に起こり、DMSOに代わる新規な細胞毒性の低い凍害防御剤として有用であった。この保存剤を用いて間葉系幹細胞などの体制幹細胞は容易に凍結保存可能であったが、霊長類ESやヒトのiPS細胞のコロニーを緩慢凍結法にて凍結することはDMSOなどの通常の凍害防御剤と同様困難であった。そこで、上記COOH-PLLの氷の再結晶化抑制効果を利用して、ガラス化液のガラス状態の安定化を試みた。まず分化に影響を及ぼすとされるDMSOと発ガン性のあるアセトアミドを使用(DAP213)せず、畜産業界や生殖医療現場で良く用いられているエチレングリコール(EG)とスクロースの組み合わせによりガラス化液を調整した。これは200μLという液量でもガラス化が可能であった。そこにPLL(0.65)を10%添加したものを同時に作成し、既存のDAP213とヒトiPS細胞のガラス化凍結保存について比較検討した。ヒトiPS細胞をガラス化保存し、解凍後のコロニー接着率と培養4日目の細胞数を凍結しなかった系と比較したところ、明らかにDAP213や、EGおよびスクロースのみの系に比べ、PLL(0.65)を添加することで有意に高い値が得られることが確認できた。また、解凍後の培養においてもアルカリフォスファターゼやOct-4、SSEA-4、TRA-1-6などの未分化マーカーの発現も維持していることがわかった。
延髄腹側の局所的血流遮断ならびに呼吸刺激因子の注入による中枢性化学受容野の解明

呼吸調節に関与する中枢性化学受容野の所在とその特性を明らかにするためネコで実験を行い次のような結果が得られた.麻酔したネコの迷走神経は両側とも切断し,非可動化したのち人工呼吸器で換気を維持した.吸息活動の指標として電気的に積分したPhrenic N,のActivityを用いた.1.両側の外頚動脈と,前下小脳動脈のレベルよりも上部で脳底動脈を閉塞すると閉塞部位よりも下流の血圧は約15mmHgに下降し, PNAは閉塞後1分内に完全に消失した.化学的呼吸刺激因子(Pco_2,Po_2)としての強さが大きい程PNAの抑制効果は軽減する.しかし,延髄よりも上位から延髄の呼吸調節機構に対して強力な呼吸促進経路のあることを示唆している.今後,この促進経路を電気生理学的に明らかにする予定である.2.末梢の化学受容器を除去した状態で,肺胞Po_2を6040TorrにするとPNAは急速に抑制され, Pco_2-刺激閾値は高くなる.しかし, Pco_2-PNA応答曲線の傾斜は空気あるいはO_2呼吸時のそれと殆んど差のないことがわかった.したがって,低酸素による中枢性化学受容野の抑制は他の一般組織の抑制とは異った性質のものであることがわかった.3.延髄腹側の前下小脳動脈へ局所的に高CO_2血液を注入すると吸息活動は増加する.この血管の支配下にあると思われる部位へマイクロpHガラス電極を刺入しpHを測定するとその変化は前下小脳動脈から注入する高CO_2血液に応じて低下することがわかった.更に,この状態でCO_2を吸入させ血液のPco_2を高くするとIntermediate areaや延髄の尾側のpHは低下するが前下小脳動脈の付近のpHならびPNAは変化しなかった.また,前下小脳動脈へ局所的にIndia inkを注入するとinkは延髄の吻側の血管にあることがわかった.以上から,中枢性化学受容野は前下小脳動脈からの血液を受けている部位にあることがほぼ確実になった.呼吸調節に関与する中枢性化学受容野の所在とその特性を明らかにするためネコで実験を行い次のような結果が得られた.麻酔したネコの迷走神経は両側とも切断し,非可動化したのち人工呼吸器で換気を維持した.吸息活動の指標として電気的に積分したPhrenic N,のActivityを用いた.1.両側の外頚動脈と,前下小脳動脈のレベルよりも上部で脳底動脈を閉塞すると閉塞部位よりも下流の血圧は約15mmHgに下降し, PNAは閉塞後1分内に完全に消失した.化学的呼吸刺激因子(Pco_2,Po_2)としての強さが大きい程PNAの抑制効果は軽減する.しかし,延髄よりも上位から延髄の呼吸調節機構に対して強力な呼吸促進経路のあることを示唆している.今後,この促進経路を電気生理学的に明らかにする予定である.2.末梢の化学受容器を除去した状態で,肺胞Po_2を6040TorrにするとPNAは急速に抑制され, Pco_2-刺激閾値は高くなる.しかし, Pco_2-PNA応答曲線の傾斜は空気あるいはO_2呼吸時のそれと殆んど差のないことがわかった.したがって,低酸素による中枢性化学受容野の抑制は他の一般組織の抑制とは異った性質のものであることがわかった.3.延髄腹側の前下小脳動脈へ局所的に高CO_2血液を注入すると吸息活動は増加する.この血管の支配下にあると思われる部位へマイクロpHガラス電極を刺入しpHを測定するとその変化は前下小脳動脈から注入する高CO_2血液に応じて低下することがわかった.更に,この状態でCO_2を吸入させ血液のPco_2を高くするとIntermediate areaや延髄の尾側のpHは低下するが前下小脳動脈の付近のpHならびPNAは変化しなかった.また,前下小脳動脈へ局所的にIndia inkを注入するとinkは延髄の吻側の血管にあることがわかった.以上から,中枢性化学受容野は前下小脳動脈からの血液を受けている部位にあることがほぼ確実になった.呼吸調節に関与する中枢性化学受容野の所在を明らかにすることを目的として動物(ネコ)実験を開始した。1.脳幹上部への血流遮断と吸息活動:前下小脳動脈のレベルよりも上部の脳底動脈と両側の外頸動脈を閉塞すると延髄よりも上部への血流を完全に遮断できることが明らかになった。(1)血流遮断によって吸息活動は1分間以内に完全に消失する。但し、血流遮断による吸息活動の抑制効果は血流を遮断する直前の血液【P_(c02)】が高い程軽減する。(2)外頸動脈で閉塞する部位よりも末梢(頭部側)の血圧を側定しこれを頭部の血圧の指標にした。血流を完全に遮断しなくてもここの血圧が約15mmHg以下になると吸息活動が完全に消失することが明らかになった。一般に、延髄の呼吸機能に対して橋の機能は必ずしも必要でないと言われているが我々の結果は、血液の化学的呼吸刺激因子のレベルが低い程、延髄の機能はそれよりも上位の機能に依存する程度が大きくなることを意味している。これらの結果から、恐らく橋から延髄への呼吸促進経路のあることを示唆しているが今後この経路を明らかにしていく予定である。2.高【CO_2】血液の局所的注入実験:(1)高【CO_2】

血液を外頸動脈へ注入してもあるいは延髄よりも上位の脳底動脈に注入しても吸息活動は変化しないことが明らかになった。(2)延髄では、後下小脳動脈への注入で吸息活動は増加するが、最も効果的なのは前下小脳動脈へ高【CO_2】血液を注入した場合であることが判った。今後は前下小脳動脈の細枝へ高【CO_2】血液を注入して中枢性化学受容野を支配する最小限の血管を明らかにして行く予定である。
心筋細胞不死化と長時間心保存法への応用

本研究は虚血による内因性心筋保護因子活性化と薬物による内因性心筋保護因子活性化が、長時間心保存に応用可能か否かを検討することを目的とした。単離心筋細胞レベルの研究でPKC(Protein Kinase C)が内因性心筋保護効果を促進し、心筋虚血再灌流障害を抑制することを証明してきた。その機序においてはPKCを長時間虚血前投与することにより、虚血再灌流時における細胞内カルシウムイオン過負荷を軽減し、カルシウムイオン過負荷によるアポトーシス誘発を軽減することによりものであることが証明された。ラット摘出心を用いて、内因性心筋保護因子活性化による虚血耐性獲得が長時間心保存に影響を与えるかについて、心機能変化の観点から研究をおこなった。心機能評価はLangendorff灌流装置(Fig.1)により、心機能を測定した。虚血耐性獲得は短時間虚血および再灌流によるischemic preconditioningとした。短時間虚血(5分間)短時間再灌流(5分間)によるpreconditioningを行い、St.Thomas液にて心停止を得た後、50mlの心保存液内に単純浸せき法で保存した(Fig.2)。心保存液としては細胞外液型のKrebs-Henselite solution,心筋保護液のSt.Thomas solution,および生理食塩水の3種類を用いた。心機能については左室拡張末期圧(LVEDP)、左室圧(LVDP)、左室収縮能(LVdP/dT max)、左室拡張能(LVdP/dT min)、心拍数(HR)、冠血流量(coronary flow)を検討した(Fig2)。4時間保存後の心機能はischemic preconditioningを施した群が有意に保たれていることが判明した(Table1、Table2)。3種類の心保存液間では有意な差は認められなかった。心機能についてはLVEDP、LVDP、LVdP/dT、HRを改善させたが、coronary flowについては改善が認められなかった。ミトコンドリア選択的Kチャンネル開口薬(Diazoxide)および免疫抑制剤(シクロスポリン)によるPreconditioning効果の検討、さらに心筋テロメアーゼ活性との虚血耐性の関係については今回の実験では技術的問題が多く検討に値する結果を得ることができなかった。本研究では、心筋不死化の機序をミトコンドリアと細胞内シグナル伝達系の両面から解明するとともに、心筋不死化を施した上で、心機能の維持と長時間心保存の可能性を検討している。内因性心筋保護因子賦活化による心筋細胞不死化は独立したミトコンドリア経路と細胞質内Caイオン依存経路があると考えられている。そのうち細胞質内Caイオン依存経路においては不死化に関わるテロメラーゼ活性に関与していると考えられているが、心筋におけるテロメラーゼ活性については不明な点が多い。したがって、細胞質内Caイオン依存経路およびミトコンドリア経路の2つの経路から心筋細胞不死化の機序を明らかにすることが、心筋再生および長時間心保存といった新たな治療法に結びつくと考えられる。本年度は、ラット摘出心を用いてin vivoでのMyocardial Preconditioningの評価を行った。成熟ラット心臓のLangendorff灌流による虚血再灌流障害耐性の獲得について検討した。

まず、ischemic preconditioning modelとして37°C、15分間および30分間のischemic preconditioningをおこなった後、Langendorff灌流装置により再還流後の心拍数、左室拡張末気圧などを測定した。15分間の虚血では、コントロール群に比べ再還流後の心機能温存が静められたが、30分間の虚血では、再還流障害によると思われる心房細動を生じた。現在、虚血時間を変え、検討を重ねているところである。来年度は、Diazoxide、Cyclospolineなどを用いたpharmacological preconditioningおよびhTERT遺伝子を用いたgene transfected preconditioningの評価を行う予定である。本研究では、心筋不死化の機序をミトコンドリアと細胞内シグナル伝達系の両面から解明するとともに、心筋不死化を施した上で、心機能の維持と長時間心保存の可能性を検討している。内因性心筋保護因子賦活化による心筋細胞不死化は独立したミトコンドリア経路と細胞質内Caイオン依存経路があると考えられている。そのうち細胞質内Caイオン依存経路においては不死化に関わるテロメラーゼ活性に関与していると考えられているが、心筋におけるテロメラーゼ活性については不明な点が多い。したがって、細胞質内Caイオン依存経路およびミトコンドリア経路の2つの経路から心筋細胞不死化の機序を明らかにすることが、心筋再生および長時間心保存といった新たな治療法に結びつくと考えられる。本研究は虚血による内因性心筋保護因子活性化と薬物による内因性心筋保護因子活性化が、心移植を想定した長時間心筋保護、すなわち長時間心保存に応用可能か否かを検討することを目的とした。これまで細胞レベルの研究でPKCが内因性心筋保護効果を促進し、心筋虚血再灌流障害を抑制することを証明してきた。その機序においてはPKCを長時間虚血前投与することにより、虚血再灌流時における細胞内カルシウムイオン過負荷を軽減し、カルシウムイオン過負荷によるアポトーシス誘発を軽減することによりものであることが証明された。本年度においてはラット摘出心を用いて、このような内因性心筋保護因子活性化による虚血耐性獲得が長時間心保存にどのような影響を与えるかについて、長時間心保存前後の心機能変化の観点から研究をおこなった。心機能評価はLangendorff灌流装置により、心機能を測定した。まず虚血耐性獲得は短時間虚血および再灌流によるischemic preconditioningとした。単純虚血20分後再灌流の心機能は、有意にischemic preconditioningをほどこした群が施さない群よりも良好であった。単純虚血を細胞外液型の心保存液であるKrebs-henselite solution,心筋保護液である、St.Thomas solution,および生理食塩水で保存におきかえて、心機能を比較検討した。保存時間は2時間、4時間、8時間とした。
炎症性腸疾患の病態病因に関する研究ーneuropeptideからみた局所免疫機構の解明とその臨床応用

炎症性腸疾患においてはVIP陽性神経線維が著明に減少しており、病因、病態の遷延化に局所免疫の面から重要な役割を演じている可能性があるとの前年度の研究成果をふまえて、本年度はsubstance P(sub P)somatostatin(S)についてCrohn病(CD)33例、潰瘍性大腸炎(UC)24例、大腸癌(対照)34例の大腸組織を用いて免疫組織学的に染色し、digitalized morphometryにて定量的に解析し、IBDに於けるneuropeptidesの役割について検討した。その結果S陽性上皮細胞数はUCでは対照に比し減少していたが、炎症の程度とは相関しなかった。(対照:1.7±0.5、非炎症部:0.8±0.2,軽症:0.6±0.2、中等症:0.5±0.3、重症:1.0±0.3個/1000個)また粘膜固有層のVIPとsubP陽性神経線維の単位面積当たりの長さを対照と比較すると、VIPは減少している(3.8±0.6μm/1000μm^2:UCvs.0.9±0.6:対照)のに対し、subPは増加していた。(12.8±2.4:UCvs.5.6±1.3:対照)粘膜下、及び筋間神経節細胞のsubP陽性率もUCで上昇していた。(UC:0.33;0.28、対照0.28;0.20)さらに同一症例の直腸生検標本で再燃・緩解に伴うsubPの変化をみると、再燃時に上昇していることが明らかになった。VIP、Sは腸管免疫抑制作用を、またsubPは炎症に対して促進作用を有することが報告されており、VIP、Sの減少、subPの増加がIBDの成因、病態の変化に重要な役割を演じている可能性が示唆された。さらにmucosa1 immunityにおいて神経系(neuropeptides)と局所免疫系が互いに密接に関連して作用していることが明らかとなってきた。Crohn病(CD)33例、潰瘍性大腸炎(UC)24例、大腸癌の非癌大腸組織(control)34例の切除標本から炎症部、非炎症部にわけて組織片を採取し、免疫組織化学的手法でVIP及びS100蛋白陽性神経線維の単位面積当りの長さと神経節細胞数を画像解析装置を用いて定量的に測定した。その結果(1)粘膜固有層においてはVIP陽性神経線維はCD(3443±504,mean±SEμm/mm^2)およびUC(1556±438)ともにcontrol(8969±763)より有意に減少していた。この減少は炎症の程度に従って逆比例していた。S100蛋白陽性神経線維もCD(5272±544)、UC(3814±631)ともにcontrol(9526±629)より減少していたが、その程度はVIP陽性神経線維の減少よりわずかであった。(2)粘膜下層においてはVIP陽性神経線維はCD(446±56)、UC(365±56)ともにcontrol(714±65)より減少していた。しかしS100蛋白陽性神経線維はCD、UC、controlで有意差がなかった。(3)粘膜下神経叢(Meisner's plexus)においては、VIP陽性神経細胞はUC(23±3mean±SE個/cm)ではcontrol(37±3)、CD(39±3)に比し減少していたが、全神経節細胞数には差がなかった。(4)筋層神経叢(Auerbach's plexus)においては、VIP陽性神経節細胞数は粘膜下神経叢より少なかったが、CD、UC、controlには差がなかった。以上の結果から炎症性腸疾患ではVIP陽性神経線維が粘膜固有層でも粘膜下層でも著名に減少していることが明らかとなった。この減少はCDでもUCでもみられ、また炎症の程度に応じて減っていることから炎症に伴う二次的変化と考えられた。しかしVIPがリンパ球の増殖を抑制し、リンパ球の腸管およびPeyer's patchesΛの遊走を抑制することが報告されているので、VIPの減少が炎症性腸疾患の成因、病態の遷延化に局所免疫の面から重要な役割を演じている可能性が示唆された。(12.8±2.4:UCvs

.5.6±1.3:対照)粘膜下、及び筋間神経節細胞のsubP陽性率もUCで上昇していた。(UC:0.33;0.28、対照0.28;0.20)さらに同一症例の直腸生検標本で再燃・緩解に伴うsubPの変化をみると、再燃時に上昇していることが明らかになった。VIP、Sは腸管免疫抑制作用を、またsubPは炎症に対して促進作用を有することが報告されており、VIP、Sの減少、subPの増加がIBDの成因、病態の変化に重要な役割を演じている可能性が示唆された。さらにmucosa1 immunityにおいて神経系(neuropeptides)と局所免疫系が互いに密接に関連して作用していることが明らかとなってきた。
顔面・口腔・体幹・内臓の痛覚を伝える上行伝導路における神経活性物質受容体の機能

近年,体性感覚神経線維又はその細胞体中に多数の神経活性物質が同呈されてきたが,それらの機能については未だに推測の域を出ない.本研究はニューロンの機能的種類により受容体機能の発現が異なることを示すことを目標とした.本研究では麻酔ラットを用いて視床へ投射する,またはintrinsicな単一ニューロンの無髄線維入力に由来する反応に対するsubstance P受容体等のantagonist灌流の効果を調べた.さらに,慢性炎症動物についても,それらの動物モデルを作成して調べ,正常動物と比較した.さらに,NK-1受容体antagonist (RP67580)による抑制と下行抑制の効果を調べた.その結果,大部分の非投射ニューロンのC反応はNK-1受容体拮抗薬では抑制されたのに対して,視床投射ニューロンの大部分はそれらのC反応はNK-1受容体拮抗薬では抑制されなかった.C3迄投射していたが視床には投射していないニューロンは抑制を受けた.KA,AMPA,NMDA受容体拮抗薬はC反応を消失させたが,少数ではあるが耐性のあるニューロンもあった.慢性痛動物の1層ニューロンの性質は正常動物と比して有意な差異はなかった.さらに,大縫線核刺激によりC放電が抑制された27個とされなかった8個のニューロンを選びNK-1受容体antagonistの効果を調べると,抑制されたもののうち24個はRPにより抑制された.一方抑制されなかったものうち6個はRP耐性であった.そして両者の抑制の大きさの間には相関が見られた.以上の結果はNK-1受容体とserotonin系下行抑制の正の相関を示すものである.現在この機能的意義について検討している.これらの研究は,近年多数見い出された神経活性物質について機能的意義の解明が進展させた.近年,体性感覚神経線維又はその細胞体中に多数の神経活性物質が同呈されてきたが,それらの機能については未だに推測の域を出ない.本研究はニューロンの機能的種類により受容体機能の発現が異なることを示すことを目標とした.本研究では麻酔ラットを用いて視床へ投射する,またはintrinsicな単一ニューロンの無髄線維入力に由来する反応に対するsubstance P受容体等のantagonist灌流の効果を調べた.さらに,慢性炎症動物についても,それらの動物モデルを作成して調べ,正常動物と比較した.さらに,NK-1受容体antagonist (RP67580)による抑制と下行抑制の効果を調べた.その結果,大部分の非投射ニューロンのC反応はNK-1受容体拮抗薬では抑制されたのに対して,視床投射ニューロンの大部分はそれらのC反応はNK-1受容体拮抗薬では抑制されなかった.C3迄投射していたが視床には投射していないニューロンは抑制を受けた.KA,AMPA,NMDA受容体拮抗薬はC反応を消失させたが,少数ではあるが耐性のあるニューロンもあった.慢性痛動物の1層ニューロンの性質は正常動物と比して有意な差異はなかった.さらに,大縫線核刺激によりC放電が抑制された27個とされなかった8個のニューロンを選びNK-1受容体antagonistの効果を調べると,抑制されたもののうち24個はRPにより抑制された.一方抑制されなかったものうち6個はRP耐性であった.そして両者の抑制の大きさの間には相関が見られた.以上の結果はNK-1受容体とserotonin系下行抑制の正の相関を示すものである.現在この機能的意義について検討している.これらの研究は,近年多数見い出された神経活性物質について機能的意義の解明が進展させた.本研究の目的は,顎・顔面・口腔領域を主とする体性感覚侵害受容(痛み)情報の伝達系に重きをおいて,三叉神経感覚核及び脊髄後角ニューロンについて化学伝達物質を含む神経活性物質とその受容体についてそれらの機能を明らかにすることである.方法は:(1)麻酔したラットの脳幹または脊髄を露出して非動化後、第3頸と大縫線核髄に刺激電極を設置しておく.記録用金属微小電極を脊髄後角へ刺入する.(2)単一の体性感覚侵害受容ニューロンの電気活動を記録し、各ニューロンについて受容野へ機械,熱、電気刺激を与え,(1)受容器の種類の同定、(2)受容野の位置、大きさ、(3)受容野への電気刺激に対する潜時の測定を行い,これらに基づいて入力一次求心性神経線維の同定を行った。(3)C線維の入力が同定されたニューロンについて,(1)上位中枢への投射,(2)末梢への各種刺激にたいする反応様式,(3)インパルス発射パタン,等の検索を行った.(4)受容野の電気刺激によるC放電に対する大縫線核電気刺激の効果を調べた後,rat NK-1 receptor antagonistであるRP-67580を記録部位近辺に30-180nmol投与し,60分間以上反応を調べた.その結果,大縫線核刺激によりC放電が抑制された27個とされなかった8個のニューロンを選びRP-67580の効果を調べると,抑制されたもののうち24個はRPにより抑制された.一方抑制されなかったものうち6個はRP耐性であった.そして両者の抑制の大きさの間には相関が見られた.以上の結果はNK-1受容体とserotonin系下行抑制の正の相関を示すものである.現在この機能的意義について検討している.

近年,体性感覚神経線維又はその細胞体中に多数の神経活性物質が同呈されてきたが,それらの機能については未だに推測の域を出ない.本研究はニューロンの機能的種類により受容体機能の発現が異なることを示すことを目標とした.本研究では麻酔ラットを用いて視床へ投射する,またはintrinsicな単一ニューロンの無髄線維入力に由来する反応に対するsubstance P,glutamate等受容体のagonist,antagonist灌流の効果を調べた.さらに,慢性炎症動物についても,それらの動物モデルを作成して調べ,正常動物と比較した.方法は:(1)麻酔したラット脊髄後角1層から単一の体性感覚侵害受容ニューロンの電気活動を記録し,各ニューロンについて入力一次求心性神経線維の同定を行った.(2)C線維の入力が同定されたニューロンについて,(1)上位中枢への投射,(2)末梢への各種刺激にたいする反応様式の検索を行った.(3)反応を記録しつつ,そのニューロンを各種薬物(agonist,antagonist)で灌流して各種刺激に対する反応の経時的変化を追跡した.(4)Freund complete adjuvandを用い,足底部の慢性炎症動物モデルラットを作成した.その結果,大部分の非投影ニューロンのC反応はNK-1受容体拮抗薬では抑制されたのに対して,視床投射ニューロンの大部分はそれらのC反応はNK-1受容体拮抗薬では抑制されなかった.C3迄投射していたが視床には投射していないニューロンは抑制を受けた.KA,AMPA,NMDA受容体拮抗薬はC反応を消失させたが,少数ではあるが耐性のあるニューロンもあった.慢性痛動物の1層ニューロンの性質は正常動物と比して有意な差異はなかった.この研究により,近年多数見い出された神経活性物質について機能的意義の解明が進んだ.さらに,炎症などの病的状態における動態は1層と5層では差異があることが想定される.
ヘパラン硫酸・Ryudocanの器官形成における機能ならびに発現制御解析

卵巣組織におけるRyudocan(細胞膜貫通型HSPGであるSyndecanファミリーの一つ; Syndecan-4)の発現についてin situハイブリダイゼーション法にて解析した。Ryudocan mRNAの発現は、新生4週期マウスの各発育卵胞のうち3b-5型および閉鎖卵胞において表面上皮ならびに顆粒膜細胞層に明らかな観察され、成熟マウス卵巣においても卵胞液を産生しはじめる時期から顆粒膜細胞層でも卵胞液に接する最内側に限局する傾向にあった。これらの結果からRyudocanは明らかに卵巣顆粒膜細胞で産生されており、卵子を取り巻く卵胞液の流動性維持に働くHSPGの候補の一つであることが判明した。一方、種々培養細胞株を用いてHypoxia刺激によるRyudocanの発現制御解析を行った結果、いずれの細胞株においてもRyudocan mRNAの発現増強が観察された。そこで、Ryudocanのクローニングに用いたマウスLTA細胞にてさらに解析を進めた結果、Hypoxia刺激のみならずCoC_<12>処理でもVEGFと同様にRyudocan mRNAの発現増強が認められた。Ryudocan mRNAinstability解析では、Ryudocan mRNAはVEGF mRNAに比べて安定で、Hypoxia刺激によりVEGF mRNAが安定化したのに対しでRyudocan mRNAは不変(むしろやや不安定化傾向)であり、両者のHypoxia刺激時の発現増強機序が異なることが判明した。一方、我々が既に単離に成功しているマウスRyudocanゲノム遺伝子5'側非転写領域についてのLusiferase reporter assayを行ったところ、VEGFで報告されているようなHypoxia response配列の同定はできなかった。これは、解析したRyudocanゲノム以外例えば、イントロンあるいは3'側非転写領域などにその配列が存在する可能性があり、今後さらに詳細な検討が必要となった。卵巣組織の卵胞を構成する無血管構成成分である顆粒膜細胞は、ヘパリン様糖鎖を持つヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)を産生することが知られている。これまでにも卵胞が破裂して卵子が放出されるまで卵胞液の流動性を維持するために存在すると考えられている卵胞HSPGの抗凝固活性について数多くの研究がなされてきた。しかしながら、抗凝固活性を持つ顆粒膜細胞HSPGの正確な分子種については未だに同定されでいない。Ryudocanは細胞膜貫通型HSPGであるSyndecanファミリーメンバーの一つ(Syndecan-4)で、我々は今回マウス卵巣組織におけるRyudocanを含むのsyndecanファミリーメンバーHSPG発現についてin situハイブリダイゼーション法にて解析した。新生4週期マウスの各発育卵胞のうち3b-5型および閉鎖卵胞において表面上皮ならびに顆粒膜細胞層に明らかなRyudocani mRNAの発現が観察された。成熟マウス卵巣においては、卵胞液を産生じはじめる時期から、そのRyudocan mRNAは顆粒膜細胞層でも卵胞液に接する最内側に限局する傾向にあった。これらの所見は各性周期で差異は認められなかった。Syndecan-1および-3の発現は、Ryudocanの同様な発現傾向を示したが、閉鎖卵胞ならびに黄体に強い発現が認められた。昨年度、本研究ではryudocan(細胞膜貫通型ヘパラン硫酸プロテオグリカンであるsyndecanファミリーメンバーの一つ;syndecan-4)のマウス卵巣組織における発現について、他のsyndecanファミリーメンバーとともにin situハイブリダイゼーション法による解析を報告した。今年度は、種々培養細胞株を用いてHypoxia刺激によるryudocanの発現制御解析を行った。

その結果、いずれの細胞株においてもryudocan mRNAの発現増強が観察された。そこで、ryudocanのクローニングに用いたマウスLTA細胞にてさらに解析を進めた結果、Hypoxia刺激のみならずCoC_<12>処理でもVEGFと同様にryudocan mRNAの発現増強が認められた。ryudocan mRNA instability解析(Northern blot)を行ったところ、ryudocan mRNAはVEGF mRNAに比べて安定であった。しかし、Hypoxia刺激によりVEGF mRNAが安定化したのに対しでryudocan mRNAは不変(むしろやや不安定化傾向)であり、両者のHypoxia刺激時の発現増強機序が異なることが判明した。一方、我々が既に単離に成功しているマウスryudocanゲノム遺伝子5'側非転写領域についてのLusiferase reporter assayを行ったところ、VEGFで報告されているようなHypoxia response配列の同定はできなかった。これは、解析したryudocanゲノム以外例えば、イントロンあるいは3'側非転写領域などにその配列が存在する可能性があり、今後さらに詳細な検討が必要となった。