hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高齢者コーホートを用いた長寿に関連する血中マーカーの解明

研究初年度に当たる平成26年度は、主として研究対象者の抽出と血液検体の測定を実施した。平成26年度に学会発表等に必要な旅費を計上していたが、解析結果が出揃う平成27年度に旅費を一部繰り越すこととした。平成28年度に繰り越した旅費は、得られる成果を第27回日本疫学会学術総会(山梨県甲府市2017.1開催予定)で発表するために使用予定である。平成26年度の血液検体分析結果をもとに、平成27年度以降は統計解析を実施する。平成26年度に繰り越した旅費は、得られる成果を第74回日本公衆衛生学会総会(長崎市)で発表するために使用予定である。
重症閉塞型睡眠時無呼吸症候群に対するnasal CPAP療法の長期効果

重症の閉塞型睡眠時無呼吸症候群(OSAS)例に対し、nasal CPAP (NCPAP)療法を行い、その長期的な臨床効果について検討した。1)OSAS例における高感度CRP (h-CRP)に対するNCPAPの効果OSAS患者の心血管障害発症に関するhCRPの役割を検討し、NCPAPのhCRPに対する影響を検討した、96例のOSAS患者のhCRPを測定し、その後9か月間のNCPAP治療を行ってhCRPの変化を検討した。治療前のhCRPは平均1824μg/dlで、OSASの重症度とは関連せず、body mass index (BMI)とのみ有意に相関した。また、NCPAP治療後にhCRPは有意な変化を認めなかったことから、hCRPは、OSASより、むしろ肥満に関連すると考えられた。2)OSAS例における、脳性ナトリウム利尿ペプチヂ(BNP)値とそれに及ぼすNCPAPの効果血清BNP値は心不全のマーカーとして循環器領域では繁用されているが、OSAS例での検討は少ない。そこで、52例のOSASを対象として、BNP値を測定した後、約6か月のNCPAP治療を行いその変化を検討した。治療前のBNP値は大多数で正常範囲内であり、睡眠時の無呼吸、低酸素血症とは関連を認めなかった。また、NCPAP治療後にも有意な変化を認めなかった。これらの結果から、OSAS例では明らかな心不全は惹起され難く、NCPAPも大きな影響を与えないと考えられた。3)NCPAP治療がOSAS患者のQOL、精神神経機能に及ぼす臨床的効果重症なOSAS患者では、睡眠障害により、日中に鬱などの精神神経症状が出現し、生活の質(QOL)が低下することが報告されているが、これらに対するNCPAPの有効性を検証した。132例のOSASと38例の健常コントロールを対象に、Sort-Form 36(SF-36)でQOLを、Self-rating Depression Scale (SDS)で鬱状態、Epworth Sleepiness Scale (ESS)で日中の眠気の評価を行い、NCPAP治療前後でのこれらの変化を検討した。治療前のOSAS群は、健常者に比し、SF-36、SDS、ESSとも有意に障害されていた。しかし、NCPAP治療8週後では、全ての指標とも有意に改善していた。これらの結果から、無治療のOSAS患者のQOLや精神神経機能は明らかに障害されているが、NCPAPにより、健常者と同等にまで回復すると考えられた。1)Nasal CPAPが重症OSAS患者の日中眠気、うつ状態、QOLに及ぼす影響OSASと心循環障害との関連が喧伝されており、高感度CRP(hCRP)がその指標になると報告されている。そこで比較的多数例のOSAS患者を対象に、健常者との比較検討を行い、さらに長期のnasal CPAP治療がhCRPに及ぼす影響を検討した。

96例のOSAS患者のhCRPは1924.5mg/dlと上昇していた。HCRPはbody mass index(BMI)と有意に相関したが、OSASの重症度とは相関しなかった。9か月間のCPAP治療後では、BMI、hCRPとも有意な変化を認めなかった。以上の結果より、hCRPは、OSASと直接的に関連するのではなく、肥満度と関連する可能性が示唆された。3)理想的CPAP圧の予測式に関する検討。適切なCPAP圧の設定は治療のコンプライアンスを高めるために重要な問題であるが、これまでの研究は欧米人が中心で肥満を含めた体格がもっとも関連するとされてきた。そこで、日本人を対象に理想CPAP圧を規定する因子を検討した。170例で検討した結果、BMI、AHI、平均SaO2に加え、顔面形態を表すセファロメトリーの指標が有意に関連することがわかった。この結果は、日本人では体格の他に頭部顔面形態の異常がOSASに関連することを間接的に示唆している。1)重症閉塞型睡眠時無呼吸症候群患者の血清BNP値とそれに及ぼすnasal CPAP治療の長期効果Brain natriuretic peptide(BN)は、心室から分泌されるペプタイドで、循環器領域では心不全の診断に汎用されている。閉塞型睡眠時無呼吸症候群(OSAS)は、睡眠中にくり返される上気道閉塞により強い陰圧が発生して心に大きな影響を及ぼし、同時に無呼吸の結果起こる著明な低酸素血症も心循環動態に悪影響を及ぼす。従って重症なOSAS患者では潜在的に心不全状態を呈している可能性が考えられる。そこで、52例のOSASを対象として、nasal CPAP治療前後の血清BNP値を比較検討した。治療前のBNP値から、正常群(1群27例)、上昇群(II群17例)、上昇+心疾患群(III群8例)の3群に分け比較検討した。3群間でOSASの重症度は差を認めなかった。血清のBNP値はOSASの重症度と有意な関連を認めなかった。約6か月間、nasal CPAP治療を行いBNP値を再検したが、3群のいずれも有意な変化を認めなかった。以上の結果から、OSAS患者においては、血清BNP値はその心機能の評価に有用でないことが示唆された。OHSは、肥満と日中の高炭酸ガス血症を伴った重症のOSASであるが、予後の悪いことが知られており、その臨床的特徴を知ることは有意義であろうと考えられる。そこで、多施設合同でOSAS患者の登録を行い、全体のOSASの中でOHSが占める割合を調査した。OHSは7施設611例のOSAS中55例(9%)に認められた。OHSは他のOSASに比し、より若く、肥満が強く、過眠傾向で、OSASが重症で、肝障害が強く、コレステロール値が高かった。また、肺機能検査では、より拘束性障害が強かった。しかし、体重を補正すると、拘束性換気障害を除いてこれらの差は消失した。日中の高炭酸ガス血症は、肺機能と血液ガスと有意に関連した。OHSにおいて、PaCO2は、%肺活量(VC)ともっとも良い相関をしめした。以上の結果より、OSAS中でOHSが占める割合は高くなく、その異常の多くは肥満に依存していると考えられた。また、OHS患者における日中の高炭酸ガス血症の存在は、肺機能、特に肺活量の低下に依存すると考えられた。
ヘリコバクターピロリ感染および除菌が腸内細菌叢に与える影響を解明する大規模研究

平成29年度に行った弘前大学大学院医学研究科の岩木プロジェクトで回収した血清および便サンプルの解析を行った。採取された血清は同プロジェクトの検査項目に加えて、本研究の抗ヘリコバクターIgG抗体価とペプシノーゲンIとIIと便サンプルから測定した便中ピロリ菌抗原の結果から、参加者をピロリ菌現感染者、既感染者、未感染者に分類し、ペプシノーゲンの値からは胃酸分泌能を推定した。腸内細菌叢については次世代シーケンサーのMiseqを用い16SrRNA遺伝子塩基配列より検体に由来する菌群の帰属を推定した。また、他の結果の一部についても学会にて報告した。現在の結果をさらに解析し、関連したデータについても発表や論文化する。平成29年5月27日から行われた弘前大学大学院医学研究科の岩木プロジェクトに参加し、約1000人分の血清および便サンプルを収集した。採血された血清は同プロジェクトで測定される検査項目の他に、当研究で用いる血清ペプシノーゲン濃度と抗ヘリコバクターピロリIgG抗体の抗体価を測定した。また、便サンプルからは便中ピロリ菌抗原検査を施行した。抗ヘリコバクターピロリIgG抗体と便中ピロリ菌抗原検査を組み合わせて、ピロリ菌の未感染者と感染者を診断した。また血清ペプシノーゲン濃度から胃粘膜萎縮の程度を診断した。腸内細菌叢については糞便を用いて次世代シークエンス解析とテクノスルガ・ラボ微生物同定データベース推定(16SrDNA部分解析)を用いて評価した。現在結果を解析中である。また、参加者を対象に同プロジェクトで行っている既往歴や生活習慣アンケート調査、栄養調査、嗜好調査の他に、他に当研究に関連するピロリ菌除菌の有無や時期、内服薬、乳製品の摂取についても全対象者で確認した。これらの得られた結果をもとに、ピロリ菌の現感染者と未感染者の腸内細菌叢の違いを検討し、ピロリ菌感染が腸内細菌に与える影響を検討する予定である。また、アンケート調査による除菌時期を参考に、過去の岩木プロジェクトの腸内細菌叢のデータも用いて、ピロリ菌除菌前後での腸内細菌叢への影響や経時的な変化を評価していく予定である。さらにピロリ菌除菌後の胃粘膜萎縮の改善の程度が腸内細菌叢におよぼす影響も評価したいと考えている。本年度に予定されていた調査は終了し、測定については血清および便サンプルは終了した。同プロジェクトの他の検査項目も測定終了している。しかしながら、腸内細菌叢についてはまだ解析中であり、結果が未着である。2017年度の腸内細菌叢の解析終了後、速やかにヘリコバクターピロリ感染と腸内細菌叢の関連について検討を行う予定である。本年度は解析結果が出ていないため、岩木プロジェクトの過去のヘリコバクターピロリ感染と腸内細菌叢の関連についての解析も並行して行ったが、今後も引き続き行う。また、過去と2017年の腸内細菌叢の推移についても比較検討する。(理由)予算の執行計画を見直し、大幅に測定費用を節約することができたため。また人件費も大学院生をボランティアとして手伝ってもらい、支払う必要がなくなったため。(使用計画)学会発表や論文校正費、論文投稿費の増額今年度は計画通り使用したが、前年度で予算執行計画を見直し、大幅に節約することができたため。(使用計画)学会発表、論文校正費、論文投稿料
カエル卵母細胞の無細胞系を用いた体細胞核初期化の解析システム

除核した成熟卵に移植された体細胞核によって胚発生がなされるためには、移植後の最初の体細胞分裂周期においてゲノムDNAが正常に複製されることが不可欠である。正常なDNA複製の有無は分裂期に正常な染色体が形成されるか否かによって判定できる。私達は、成熟期の卵母細胞(減数第一分裂中期)と成熟卵(減数第二分裂中期)から調製した細胞質抽出液で赤血球核を処理し、この核が受精卵の細胞周期を再現する賦活卵抽出液中でDNA複製と分裂期の染色体形成を行うかを調べ、次の点を明らかにした。前処理せずに賦活卵抽出液に加えた赤血球核は、凝縮した形態を維持し、DNA複製、分裂期の染色体形成が全く見られないのに対し、成熟卵の抽出液で前処理したものは、一部が賦活卵抽出液中で成長した核を形成してDNA複製を行い、分裂期には核膜が崩壊してクロマチンが凝縮するが、染色体は形成されない。一方、卵母細胞抽出液で前処理したものは、一部がよく成長した核を形成してDNA複製を行い、さらに、分裂期には正常な染色体を形成する。したがって、成熟卵より卵母細胞の方が、赤血球核のゲノムDNAの複製を可能にする核のリモデリングを誘起する能力が高いことが判明した。さらに、体細胞核と受精卵で異なることが知られているリンカーヒストン(クロマチン)に関して、体細胞型から受精卵型への置換の程度とDNA複製が関連するかについて、特異抗体を用いて解析した。その結果、卵母細胞と成熟卵のどちらの抽出液でも、赤血球核からの体細胞型リンカーヒストンの除去および、初期胚型リンカーヒストンの結合が誘起されることが示され、DNA複製との直接的な関連性は認められなかった。今後は両者を程度を量的に調べ、定量的な解析をする必要がある。除核した成熟卵に体細胞核を移植することによってクローン動物が作出されることは、分化した細胞の核が卵内で全能性を回復しうる、つまり初期化されうることを示す。本研究は、成熟期のアフリカツメガエル卵母細胞から調製した細胞質抽出液を用いて赤血球核の初期化をもたらすリモデリングを誘起し、その制御因子を解明することを目的とする。体細胞核の初期化の有無は、それを移植した除核卵の胚発生の有無よって最終的には確認されるが、まずは移植後の最初の体細胞分裂周期においてゲノムDNAが正常に複製されなければならない。正常なDNA複製の有無は分裂期における正常に凝縮した染色体の形成の有無によって知ることができる。そこで私達は成熟期の卵母細胞(減数第一分裂中期)と成熟卵(減数第二分裂中期)から調製した細胞質抽出液中で赤血球核(細胞膜を透過処理した赤血球)をインキュベートし、引き続いて受精卵の細胞周期を再現する卵抽出液(賦活卵抽出液)に移して、核形成およびDNA複製の有無および分裂期における染色体形成の有無を調べた。対照として、卵抽出液の前処理をせずに賦活卵抽出液中でインキュベートした赤血球核についても同様の観察を行った。その結果、前処理せずに賦活卵抽出液に加えた赤血球核は、凝縮した形態を維持し、DNA複製、分裂期の染色体形成が全く見られなかった。それに対して成熟卵の抽出液で前処理したものは、その一部が賦活卵抽出液中でよく成長した核を形成してDNA複製を行った。しかし、分裂期に核膜が崩壊しクロマチンが凝縮したが染色体は形成されなかった。一方、卵母細胞抽出液で前処理したものは、一部がよく成長した核を形成してDNA複製を行い、さらに、分裂期には正常な染色体を形成した。この赤血球核の一連の形態変化は、賦活卵抽出液における精子クロマチンの形態変化に比肩しうるものである。これらの結果は、赤血球核のリモデリングを誘起する能力において、成熟卵より卵母細胞の方が優れていることを支持するものといえる。

その結果、卵母細胞と成熟卵のどちらの抽出液でも、赤血球核からの体細胞型リンカーヒストンの除去および、初期胚型リンカーヒストンの結合が誘起されることが示され、DNA複製との直接的な関連性は認められなかった。今後は両者を程度を量的に調べ、定量的な解析をする必要がある。
In situ膜蛋白質間相互作用NMR検出技術

動的複合体状態は生命現象を理解する上で極めて重要であるが、原子レベル精度でそれらを解析するのは未だに困難である。特に膜蛋白質では足場としての膜自身の役割が大きく、in situでの動的複合体の解析が必須と考えられる。そこで本研究では膜蛋白質複合体を生きている細胞のまま原子レベル精度で解析可能なNMR技術を開発する。具体的には、生きている大腸菌で相互作用を観測したい膜蛋白質のみを安定同位体標識する技術を開発し、生きている細胞へDNP法を適用して測定感度を大幅向上させることで、in situで膜蛋白質問の動的相互作用を原子レベル精度で解析する。平成24年度は、生きている大腸菌で相互作用を観測したい膜蛋白質のみを安定同位体標識する技術を開発した。生きている細胞のまま膜蛋白質を検出するには、生きている細胞に安定同位体を取り込ませ、膜蛋白質のみを安定同位体標識する技術が不可欠である。そこで2回膜貫通型蛋白質pHtrIIの大腸菌大量発現系において、培養時に非標識培地を、誘導時に安定同位体標識培地を用いることで、観測したい膜蛋白質のみを安定同位体標識することとした。従来法では,バックグラウンドとなる大腸菌由来の目的膜蛋白質以外のNMR信号が検出され、大きな問題となっていた。そこで、バックグラウンドとなる目的蛋白質以外の新規蛋白質合成を完全に阻害することが可能な大菌のSPPシステムを用いることで、目的膜蛋白質のみを安定同位体標識することに成功し、生きている大腸菌での観測にも成功した。
ラットにおける自家静脈間置による門脈-下大静脈交差吻合モデルの検討

(1)体重増加および血清学的検査(2)肝下部下大静脈圧P群では3,5,10週後にそれぞれ8.4±3.8,7.6±1.1,7.1±2.0(cmH_2O)であり,C群の平均5.8cmH_2Oと比較して有意に高圧であった.またP群では術後経過とともに減少する傾向がみられた.下肢静脈から造影すると,腰静脈を主とした下大静脈の側副血行路が描出された.(n=6)(3)シャント率肝下部下大静脈に著明なシャントが形成され,ほとんど肝が描出されないシャント率が100%近いものも多かった.比較的シャントが少ない例を人為的に選択すると,シャント率は48.8±34.5(3週),50.4±20.5(5週),40.7±13.4(10週)(%)であった.(n=5)2.頸静脈間置法によるPCT変法における結果具体的な数値は示さないが,結果的にはPCT原法と比較してシャント率はまったく改善しなかった.体重増加および血清学的検査結果は原法に比較して有意差はなく,また肝下部下大静脈圧にも有意差はなかった.(n=5)肉眼的には間置した自家静脈グラフトは萎縮しpatencyに乏しく,原法と同様に腰静脈を介した側副血行路が認められた。
平面上の幾何学的グラフの変形同値性とその周辺問題

平面に点配置Pを与え,その凸包の境界を外領域とし,すべての点を頂点とし,すべての辺が直線分であるような三角形分割をPの幾何学的三角形分割という.点配置の幾何学的三角形分割の研究は,ボロノイ図やドロネー三角形分割との関連で,これまで多くの研究がなされてきた.そして,それらの実社会への応用も多岐にわたる.また,与えられた点配置の異なる幾何学的三角形分割が対角変形と呼ばれる局所変形で互いに移り合うことが知られており,特に,ドロネー三角形分割を基本形として,幾何学的三角形分割の変形可能性を主張する定理が知られている.一方,数学的には同様の問題が四角形分割についても考えられるが,凸包に現れる頂点の偶奇性に気をつけなければならない.そして,その条件を満たせば,平面上の点配置の四角形分割が存在することは容易にわかる,しかしながら,平面の四角形分割は2部グラフであることから,あらかじめすべての点に白と黒の色を与え,同色の点は結ばないような四角形分割を構成しようとすると,問題は一気に難しくなり,そもそも,その条件では四角形分割は必ずしも存在しない.その場合,シュタイナー点と呼ばれる補助的な点を導入することにより,問題が解決されるが,与えられた点配置に対して,必要なシュタイナー点の個数の評価は最良には至っていない.本研究では,平面に与えられた点配置に対する四角形分割の可能性に関する問題を扱うことにする.シュタイナー点の個数の評価を改良したいと考えており,本年度では,それに関する情報収集を行った.一方,点配置の四角形分割の体格変形に関する結果はとっかかりがなく,解決の糸口を見いだすことができないでいる.したがって,本年度の研究としては,平面に凸でない偶角形Pを与え,それが幾何学的四角形分割可能か,また,2つの幾何学的四角形分割が互いに移り合うかについて考えた.平面上に必ずしも凸でない偶多角形Pを与え,それが幾何学的四角形分割できるかについては,Pの凹み具合をコントロールする不変量「spirality」を定義し,それを用いて幾何学的四角形分割可能性を述べることに成功した.その結果において,spiralityの条件は最良のものが得られており,改善が不可能な定理となった.一方,対角変形による変形可能性については,現在までのところ,変形不可能な幾何学的四角形分割の例が存在する多角形のspiralityと,どんな幾何学的四角形分割も変形可能となる多角形のspiralityの評価に差があり,それを埋める努力を行っている.証明のための方針自体は確立できているが,細かい場合分けが必要となってしまっており,そのあたりを包括的に議論するためのアイデアが欠落した状態である.これまでに共同研究者たちと,かなり緻密な議論を重ね,少しずつ良いアイデアが出つつあるが,まだ解決には至っていない.次年度にはその部分を攻略するための研究を行いたいと考えている.その変形可能性の問題になかなか完全な解答が与えられないなか,偶多角形の四角形分割可能性を単にspiralityの高さのみで与えるのではなく,spiralityとそれに応じた個数のシュタイナー点の追加により,行うという問題を設定を行うことができ,最近,その解決に取り組み始めた.平面の偶多角形の幾何学的四角形分割の対角変形による変形可能性について,場合分けが発散するという問題をうまく解決するための議論を行う.これについては,計算機処理などの可能性も考えてみたいと考えている.そして,本研究の許された期間内で何とか解決できるよう努力したいと思う.また,上にも述べたが偶多角形Pの幾何学的四角形分割可能性を凹みとシュタイナー点の追加で行うという問題について,いろいろと研究をしてみたいと考えている.例えば,spiralityが高い偶多角形はspiralityは,spiralityが低い偶多角形に綺麗に分割できるか.その事実が証明できれば,問題はある程度簡単に解決されるはずである.その方向性から問題の攻略に挑みたいと考えている.平面に点配置Pを与え,その凸包の境界を外領域とし,すべての点を頂点とし,すべての辺が直線分であるような三角形分割をPの幾何学的三角形分割という.点配置の幾何学的三角形分割の研究は,ボロノイ図やドロネー三角形分割との関連で,これまで多くの研究がなされてきた.そして,それらの実社会への応用も多岐にわたる.また,与えられた点配置の異なる幾何学的三角形分割が対角変形と呼ばれる局所変形で互いに移り合うことが知られており,特に,ドロネー三角形分割を基本形として,幾何学的三角形分割の変形可能性を主張する定理が知られている.一方,数学的には同様の問題が四角形分割についても考えられるが,凸包に現れる頂点の偶奇性に気をつけなければならない.そして,その条件を満たせば,平面上の点配置の四角形分割が存在することは容易にわかる,しかしながら,平面の四角形分割は2部グラフであることから,あらかじめすべての点に白と黒の色を与え,同色の点は結ばないような四角形分割を構成しようとすると,問題は一気に難しくなり,そもそも,その条件では四角形分割は必ずしも存在しない.その場合,シュタイナー点と呼ばれる補助的な点を導入することにより,問題が解決されるが,与えられた点配置に対して,必要なシュタイナー点の個数の評価は最良には至っていない.本研究では,平面に与えられた点配置に対する四角形分割の可能性に関する問題を扱うことにする.シュタイナー点の個数の評価を改良したいと考えており,本年度では,それに関する情報収集を行った.一方,点配置の四角形分割の体格変形に関する結果はとっかかりがなく,解決の糸口を見いだすことができないでいる.

したがって,本年度の研究としては,平面に凸でない偶角形Pを与え,それが幾何学的四角形分割可能か,また,2つの幾何学的四角形分割が互いに移り合うかについて考えた.平面上に必ずしも凸でない偶多角形Pを与え,それが幾何学的四角形分割できるかについては,Pの凹み具合をコントロールする不変量「spirality」を定義し,それを用いて幾何学的四角形分割可能性を述べることに成功した.その結果において,spiralityの条件は最良のものが得られており,改善が不可能な定理となった.一方,対角変形による変形可能性については,現在までのところ,変形不可能な幾何学的四角形分割の例が存在する多角形のspiralityと,どんな幾何学的四角形分割も変形可能となる多角形のspiralityの評価に差があり,それを埋める努力を行っている.証明のための方針自体は確立できているが,細かい場合分けが必要となってしまっており,そのあたりを包括的に議論するためのアイデアが欠落した状態である.これまでに共同研究者たちと,かなり緻密な議論を重ね,少しずつ良いアイデアが出つつあるが,まだ解決には至っていない.次年度にはその部分を攻略するための研究を行いたいと考えている.その変形可能性の問題になかなか完全な解答が与えられないなか,偶多角形の四角形分割可能性を単にspiralityの高さのみで与えるのではなく,spiralityとそれに応じた個数のシュタイナー点の追加により,行うという問題を設定を行うことができ,最近,その解決に取り組み始めた.平面の偶多角形の幾何学的四角形分割の対角変形による変形可能性について,場合分けが発散するという問題をうまく解決するための議論を行う.これについては,計算機処理などの可能性も考えてみたいと考えている.そして,本研究の許された期間内で何とか解決できるよう努力したいと思う.また,上にも述べたが偶多角形Pの幾何学的四角形分割可能性を凹みとシュタイナー点の追加で行うという問題について,いろいろと研究をしてみたいと考えている.例えば,spiralityが高い偶多角形はspiralityは,spiralityが低い偶多角形に綺麗に分割できるか.その事実が証明できれば,問題はある程度簡単に解決されるはずである.その方向性から問題の攻略に挑みたいと考えている.
消化器癌根絶を目指した革新的核酸医薬品の開発

miR302,miR200cの天然型配列を元にガイド鎖とパッセンジャー鎖をそれぞれ20種前後、組み合わせで400種、合計800種の候補配列を設計した。これまでの経験に基づき生体内のRNA分解酵素に耐えうると予想される配列の設計を行った。スクリーニングを行い、人工架橋型miR302, 200cをそれぞれ3種類程度まで絞り込んだ。この核酸を自然膵癌及大腸癌発癌モデルマウスに投与し、治療実験を行った。癌の体積を継時的に計測及び有害事象の有無を検討した。これにより最も効果の強い人工架橋型核酸を決定した。我々は既存の抗癌剤への抵抗姓を持つ軟知性消化器癌幹細胞にこれら3種のマイクロRNAを導入するとリプログラミング効果により癌幹細胞はその性質を大きく変え、細胞死または既存の抗癌剤への感受性を獲得した細胞へと変化することを見出している。これら3種類のマイクロRNAを核酸医薬品として開発することは難治性消化器癌の根絶につながると考えられる。しかしRNAは体内に多量に存在するRNA分解酵素により速やかに分解されてしまうこと、更にマイクロRNAを核酸医薬品として扱う際は特にオフターゲット効果が高いこと等から医薬品としての効果が低いことが知られている。そこで分子安定性とオフターゲット効果の低減を実現するためには、人工架橋型分子修飾を用いた核酸医薬品の開発が最適であると考えられる。このような核酸医薬品の最適化はこれまでに類を見ない研究ではあるが核酸医薬品の発展には必須であり、早期の医薬品の実現に向けて加速的に実施する必要がある。我々はこれまでに3種類のマイクロRNAのうちmiR369から人工架橋型核酸を設計し、約400種類の改変型試作品を合成、活性を調べた。その結果、天然型に比較して標的蛋白質翻訳を抑制または亢進する候補配列が同定され、特異的な分子機構を解明した。本申請ではこの成功例を踏まえて、miR200とmiR302の人工設計を行い、天然型よりも核酸医薬品として機能が勝るシーズ最適化を進め、早期の革新的創薬を実現化する。さらにこの最適化した核酸医薬品を生体内で安全かつ有効に局所到達させる為に、核酸に最適なドラッグデリバリーシステムに搭載し、世界初の人工架橋型マイクロRNA核酸医薬品を実現化する。(i)miR302,miR200c人工修飾配列のデザインmiR302,miR200cの天然型配列を元にガイド鎖(mRNAの3'非翻訳領域に結合する鎖)とパッセンジャー鎖(ガイド鎖に結合し2本鎖マイクロRNAを形成する鎖)をそれぞれ20種前後、組み合わせで400種、合計800種の候補配列を設計した。(ii)1次スクリーニングによる最適配列の絞り込みスクリーニングはこれら設計した人工マイクロRNAを合成し、上記のルシフェラーゼレポーターアッセイを行うことでルシフェラーゼの発光量を計測した。この1次スクリーニングによりmiR302,miR200cの最適な人工架橋型配列をそれぞれ10種類程度まで絞り込んだ。(iii)抗癌作用検討による2次スクリーニング1次スクリーニングにより10種類程度まで絞り込んだmiR302, 200cをそれぞれ大腸癌、膵臓癌細胞株へ導入しその効果検討を行なった。効果検討は細胞の増殖能、細胞死の割合、また、抗がん剤(5-FUやジェムシタビン)との併用投与を行い細胞の生存率を測定した。このスクリーニングにより人工架橋型miR302, 200cをそれぞれ3種類絞り込んだ。我々が発見した3種のマイクロRNA(miR369, 302, 200c)(Cell Stem Cell 2010)は細胞のリプログラミングにおいて重要なセットである。これを癌幹細胞へ投与することで癌幹細胞の悪性度は大きく減弱することが知られている(PNAS 2010)。本研究ではこれらを核酸医薬品として最適化する為に、1人工架橋型修飾(体内での安定性亢進とオフターゲット効果の低減)、2Drug Delivery System(DDS)搭載(癌特異的に届ける)する技術を新構築する。最適化を行うことで、企業移転、臨床応用へ加速した。miR369において人工架橋型配列を使い既に配列最適化に成功済みであるので本申請では302、200cの最適化を目指した。miR302,miR200cの天然型配列を元にガイド鎖(mRNAの3'非翻訳領域に結合する鎖)とパッセンジャー鎖(ガイド鎖に結合し2本鎖マイクロRNAを形成する鎖)をそれぞれ20種前後、組み合わせで400種、合計800種の候補配列を設計した(。次に1次スクリーニングとして設計した人工マイクロRNAを合成し、上記のルシフェラーゼレポーターアッセイを行うことでルシフェラーゼの発光量を計測し、最適な人工架橋型配列をそれぞれ10種類程度まで絞り込んだ。さらに大腸癌、膵臓癌細胞株へ導入しその効果検討を行う。またDDSであるPICに2次スクリーニングで絞り込んだ人工架橋型核酸を搭載し、マウス尾静脈から投与し、癌の体積を継時的に計測した。

また同時に有害事象の有無も検討した。これにより最も効果の強い人工架橋型核酸を決定した。miR302,miR200cの天然型配列を元にガイド鎖とパッセンジャー鎖をそれぞれ20種前後、組み合わせで400種、合計800種の候補配列を設計した。これまでの経験に基づき生体内のRNA分解酵素に耐えうると予想される配列の設計を行った。スクリーニングを行い、人工架橋型miR302, 200cをそれぞれ3種類程度まで絞り込んだ。この核酸を自然膵癌及大腸癌発癌モデルマウスに投与し、治療実験を行った。癌の体積を継時的に計測及び有害事象の有無を検討した。(i)ドラッグデリバリーシステムによる動物実験自然膵癌及大腸癌発癌モデルマウス(癌組織はルシフェラーゼで発光するため動物の外部から癌を観察することが可能なマウス)を用いて治療実験を行う。治療実験には2次スクリーニングで絞り込んだ人工架橋型miR302, 200cをドラッグデリバリーシステムに搭載した形で使用する。従来のドラッグデリバリーシステムではミセル(直径約100nm)が使用されることが多かった。我々の研究グループでは、より核酸のデリバリーに最適化した10分の1程度の大きさのドラッグデリバリーシステム(ユニットPIC)を東工大の西山らと共同で開発している。このユニットPICに2次スクリーニングで絞り込んだ人工架橋型核酸を搭載する。マウス尾静脈から投与し、癌の体積を継時的に計測する。また同時に有害事象の有無も検討する。これにより最も効果の強い人工架橋型核酸を決定する。(ii)PMDA対面助言と医師主導治験への展開動物実験の結果(増腫瘍能の低下、血液検査などによる有害事象の有無)を元に独立行政法人医薬品医療機器総合機構(PMDA)対面助言を受け、医師主導型治験に向けアドバイスをいただく。また、人工架橋型核酸の知財整備(特許化)、論文化を行い難治性消化器癌に対する革新的核酸医薬品の臨床応用を目指す。腫瘍生物学
明治期宮崎県における基層青年教育機関の設立と展開に関する歴史的研究

明治・大正期において、小学校を卒業した青年たちの学力を維持するのは喫緊の課題であった。青年を教育する機関として実業補習学校が存在したが、明治後期に文部省が各府県に対し設置を強く求めた時には徹底されなかった。実業補習学校の設置を進めた地域もあったが、生徒が集まらず従来から地域の教育を担っていた夜学会を改めて設置するところもあった。実業補習学校の総数は増加しているが、一律ではなく、地域によって大きな差があったのである。大正期に入ってもその傾向に変化は見られなかった。大正6年宮崎県では各郡より成績優秀な実業補習学校と夜学会とを区別せず推薦していることからも、実業補習学校と夜学会とは同様の役割を持ち続けていたことが分かるのである。また、実業補習学校や夜学会の中には、23年ではなく徴兵年齢まで継続した教育を企図したものも存在した。これは昭和10年に始まる青年学校の先駆といえるかもしれない。しかし、第一次世界大戦による世界情勢の変化とそれに伴う国内の変化により、国はさらに質のよい軍人や労働者の確保が急務となった。その意識を上からだけでなく、村のレベルで認識するようになったのが、大正7年頃であり、その時から夜学会が消滅し実業補習学校が設置されるようになった。実業補習学校が地域の社会教育・青年教育を担う教育機関であると認識されるようになったのである。その変化を踏まえて、大正9年に実業補習学校規程が改正された。そこでは「土地の状況に依り」という一文が消えている。地域の実情に合わせた教育を行うという実業補習学校が持っていた特性が消滅しているのである。「土地の状況に依り」が消えたことは、夜学会が存続する余地がなくなったことを示していたのであり、画一的な教育課程を持つようになった実業補習学校の増加を促したのであった。
西アフリカ・ダン村落社会の結社組織の情報操作表現にみられる国民国家像の研究

フランス植民地期および共和国独立後の地方史についてのダン語録音資料を解析した結果にもとづき、平成9年3月中に、論文2篇を発表する予定である。うち一つは「西アフリカ大西洋中央地域(CWA)とポロ結社の史的考察-シエラレオネ、リベリア、ギニア、コードディヴォワール」(アジア・アフリカ言語文化研究53号所収)と題する論考である(400字詰め原稿で約300枚分)。これは、西アフリカ大西洋岸における13世紀以来の住民移住プロセスを再構成しながら、対象地域における結社文化史を19世紀後半以後の植民地期・国民国家期にいたるまで、マクロな視点から考察した論文である。また一つは「ダナネ地方南部・ダン族の神話-歴史伝承群-45の事例」(東京外国語大学アジア・アフリカ言語文化研究所)と題する資料集成である(400字詰め原稿で約400枚)。この論考では、対象をダン族の一地方に限定したうえで、植民地期以前からフランス植民地期にいたるまでの歴史事象を語る口頭伝承を音声表記ならびに日本語翻訳で紹介し、ダン社会における伝統的な政治表象・植民地表象を本格的に考察するうえでの一次データを公表した。一方、人類学の聞き取り調査における、言語表現(語彙やレトリック)を介した情報操作の特徴的なパターンの抽出作業、および情報理論や発話の関連性理論をめぐる国内外の文献研究からは、成果として3篇の論考が得られた。この3篇は、平成9年前半に公表されるべく、目下、印刷中である。うち一つは、「憑依と楽屋-情報論による演劇モデル批判」(岩波書店)、また「身体動作とことば」(平凡社)、さらに研究成果の国際的な公表をめざした"Voix de Masque sans Visage"(東京外国語大学アジア・アフリカ言語文化研究所)である。これらは、社会学、言語学、認知科学など、人類学の隣接分野における最新の研究成果を、ダン社会のコミュニケーションプロセスの分析に理論的に適用するうえでの、理論的な基盤を公表した論考群である。
視交叉上核神経細胞におけるサーカディアンリズムの発現とPAS関連時計遺伝子

1.視交叉上核サーカディアンリズムの発現とPAS関連時計遺伝子の役割(1)恒常暗で行動リズムが消失するClock変異マウスの視交叉上核神経細胞の電気活動概日リズムを個別に測定し、個々のニューロンではリズムは消失せず、周期が延長していることを明らかにし、行動リズムの消失が細胞間コミュニケーションの不調によるものであることを明らかにした。(2)ラット生物時計の生後発育と母子同調のメカニズムを、仔ラット視交叉上核に発現する時計遺伝子、Per1とPer2を指標として解析した。その結果、幼弱ラットでは視交叉上核時計遺伝子が光以外の因子の調節を受けること、母ラットの授乳時刻が概日リズム位相の決定に重要であることが明らかになった。2.PAS関連時計遺伝子産物の代謝回転とフィードバック機構(1)分泌型および非分泌型ルシフェレースによる遺伝子発現の生物発光レポーターシステムを開発し、2つの異なる遺伝子発現を同時にリアルタイムで計測できることを理論的に確立した。(2)bHLH型転写調節因子をコードする新規時計遺伝子DEC1,DEC2を発見し、ラット視交叉上核で強く発現し、リズム変動していること、CLOCK/BMAL1によるPer遺伝子の転写促進作用を強く抑制すること、光に反応して転写が亢進することを明らかにした。3.サーカデイアンリズムの同調に於けるPAS関連時計遺伝子産物の役割(1)出生後1週間、母ラットを明期の12時間盲目仔ラットから隔離すると、仔ラットの行動リズム、視交叉上核の時計遺伝子発現リズムが逆転することを明らかにし、母子同調に視交叉上核の生物時計が関与していることを明らかにした。(2)行動量の減少、行動リズムの周期延長がみられるヒスタミン欠損マウスでは、視交叉上核のPer1,2,3発現リズムに変化はないが、大脳皮質や線条体の時計遺伝子リズムの振幅が著しく低下しており、行動リズムとの関係が示唆された。1.視交叉上核サーカディアンリズムの発現とPAS関連時計遺伝子の役割新生児ラットから得た視交叉上核の分散培養および組織培養系を用いて、AVP,VIP,興奮性アミノ酸のサーカディアンリズム測定し、ニューロン間相互同調はVIPニューロンよりAVPユーロンでよりの強いこと、また興奮性アミノ酸分泌リズムはCaイオンに依存しないことを明らかにした。また、個々のニューロンレベルにおける発射活動リズムには視交叉上核内で部位特異性のあることが判明した。2.PAS関連時計遺伝子産物の代謝回転とフィードバック機構ラット網膜のPAS関連時計遺伝子発現リズム(rPer1,2,rBMAL1,rClock)をin situ hybridization法を用いて測定し、視交叉上核における時計遺伝子発現リズムと比較した結果、視交叉上核で振動していたBMAL1遺伝子発現は振動しておらず、視交叉上核で振動していなかったClock遺伝子発現が振動していた。網膜振動体ではリズム発振に関与するフィードバック機構における時計遺伝子の役割が異なることを示唆する。3.サーカディアンリズムの同調に於けるPAS関連時計遺伝子産物の役割視交叉上核サーかディアンリズムと行動リズムが乖離するメタンフェミン慢性投与ラットにおいて、PAS関連時計遺伝子の発現リズムを視交叉上核とその他の脳部位で比較検討した。その結果、メタンフェミン投与により行動リズムが脱同調した時点でのリズムは、視交叉上核においては対照群と変わらず明暗サイクルに同調していたが、一部のドパミン系脳部位ではリズムが脱同調していた。これは、リズム同調機構が視交叉上核と行動リズムでは異なることを示唆する。また、光によるrPer遺伝子発現の程度と行動リズムの位相反応に乖離のあることが判明した。4.PAS関連時計遺伝子のノックアウト動物の視交叉上核リズム解析PAS関連時計遺伝子の1つであるmBMAL1遺伝子のゲノム解析を行い、3種類のスプライシング変異体があることが判明した。1.視交叉上核サーカディアンリズムの発現とPAS関連時計遺伝子の役割新生児ラットから得た視交叉上核分散培養系および組織培養系を用いて神経活動リズムを長期間測定し、(1)時計ニューロン間のリズム同調にシナプス連絡が必要である、(2)TTXは時計ニューロン間の脱同調だけでなく、リズム周期や位相も変化させる、(3)視交叉上核腹外側部と背内側部では時計ニューロンの密度、安定性が異なることを明らかにした。2.PAS関連時計遺伝子産物の代謝回転とフィードバック機構視交叉上核および網膜における時計遺伝子(Per1,2,Clock,BMAL1)をin situ hybridization法やノーザンブロット法で計測し、(1)光による視交叉上核Per1の発現はフリーラン周期に依存して変化する、(2)網膜における時計遺伝子の発現パターンはPer2を除いて視交叉上核とは異なり、また光反性も異なっている、(3)網膜におけるPer1,Per2の発現はアマクリン細胞のある内顆粒層に強く、視細胞のある外顆粒層では弱い、ことを明らかにした3.サーカディアンリズムの同調に於けるPAS関連時計遺伝子産物の役割メタンフェタミン(MAP)慢性投与ラットや行動リズムが分離するSCマウスを用いて、時計遺伝子の発現をin situ hybridization法で解析し、(1)MAP処置ラットではメラトニンリズムや視交叉上核のPer1,Per2発現リズムが行動リズムから乖離する、(2)頭頂皮質や線条体のPer

1,Per2発現リズムは視交叉上核リズムから乖離し、行動リズムと同調を維持する、また、(3)SCスプリットマウスにおいて行動リズムが分離している時期と連続している時期では、Per1,2,3発現リズムは視交叉上核では本質的に差が無いが、頭頂皮質では行動リズムの分離に対応して遺伝子発現リズムが2相性となることを明らかにした1.視交叉上核サーカディアンリズムの発現とPAS関連時計遺伝子の役割新生児ラットおよびマウスから得た視交叉上核分散培養系や組織培養系を用いて、バソプレッシン(AVP)、血管作動性胃腸ペプチド(VIP)および神経活動を長期間測定し、(1)AVPリズムはVIPリズムに比較し安定で、かつデッシュ間で同調していた。(2)視交叉上核腹外側部と背内側部では概日振動ニューロンの密度、安定性が異なることを明らかにした。(3)Clock変異マウスの視交叉上核細胞の電気活動に周期が延長したリズムのあることを明らかにした。2.PAS関連時計遺伝子産物の代謝回転とフィードバック機構(1)分泌型ルシフェレースによる遺伝子発現の生物発光レポーターシステムを開発した。(2)バゾプレッシンと成長ホルモンの遺伝子発現を異なる波長の生物発光レポーターを用いて同時に測定するシステムを開発した。3.サーカディアンリズムの同調に於けるPAS関連時計遺伝子産物の役割メタンフェタミン(MAP)慢性投与ラットや行動リズムが分離するSCマウスを用いて、時計遺伝子の発現をin situ hybridization法で解析し、(1)行動リズムが消失しているClock変異マウスにMAP処置を行うと周期の長い行動リズムが出現し、MAP性行動リズムにClock蛋白は必要のないことを明らかにした。(2)SCスプリットマウスにおいて、Per1,2,3発現リズムが視交叉上核と頭頂皮質で解離し、行動リズムを直接駆動している振動体が視交叉上核外にあることを明らかにした。(3)ヒスタミン欠損マウスでは行動量の減少、行動リズムの周期延長がみられたが、視交叉上核のPer1,2,3発現リズムには変化はなく、行動リズムとの解離を明らかにした。1.視交叉上核サーカディアンリズムの発現とPAS関連時計遺伝子の役割(1)恒常暗で行動リズムが消失するClock変異マウスの視交叉上核神経細胞の電気活動概日リズムを個別に測定し、個々のニューロンではリズムは消失せず、周期が延長していることを明らかにし、行動リズムの消失が細胞間コミュニケーションの不調によるものであることを明らかにした。(2)ラット生物時計の生後発育と母子同調のメカニズムを、仔ラット視交叉上核に発現する時計遺伝子、Per1とPer2を指標として解析した。その結果、幼弱ラットでは視交叉上核時計遺伝子が光以外の因子の調節を受けること、母ラットの授乳時刻が概日リズム位相の決定に重要であることが明らかになった。2.PAS関連時計遺伝子産物の代謝回転とフィードバック機構
新規抗体医薬適用患者における免疫モニタリング法の整備とその臨床応用に関する研究

近年、抗腫瘍免疫において、主要なエフェクター細胞であるT細胞だけでなく、単球や樹状細胞、マクロファージなどのミエロイド細胞の状態も重要であることが報告されてきている。我々はこれまでに、最大18色を同時に染色できるマルチカラーフローサイトメーターを用いて、各種Lineage細胞とT細胞を中心とした免疫担当細胞ポピュレーション解析を進めている。本研究では、解析が不十分であったミエロイド系細胞のフェノタイピング用新規パネルを作成し、バリデーションおよび解析を行っていくことを目的とする。本年度は、樹状細胞上の免疫チェックポイント分子発現を解析するパネルを作成し、バリデーションを行った後、健常人および固形がん患者末梢血中樹状細胞におけるフェノタイピングを行った。また、単球系細胞のためのフェノタイピング用パネルをいくつか作成し、現在、健常人末梢血を用いて最適パネルおよび条件をバリデーション中である。次年度も、引き続き新規パネルのバリデーションを行い、実際に、末梢血リンパ球中のフェノタイピングを行っていく予定である。ミエロイド系細胞解析用のパネルデザインおよびバリデーションは進んでおり、健常人末梢血リンパ球を用いたフェノタイピングを現在進めている。患者検体の入手については、今後も課題の1つである。本年度は、これまでに作成した単球系細胞解析用の新規パネルについて、バリデーションを完成させる。これまでの解析より、ミエロイド系細胞では、がん患者と健常人、またヒトとマウスではいくつかの分子でその分布が異なっていることが観察されており、患者だけでなく健常人におけるリンパ球フェノタイピングも重要である。よって、単球系細胞解析用パネルについても、まずは市販の健常人末梢血リンパ球を用いてフェノタイピングを行い、情報を収集する。また、患者末梢血検体が得られた場合には、随時、測定を進めていく。さらに、近年は、マルチパラメータデータの解析手法も発展していることから、解析手法および解析用ソフトウェアの導入を進める。一般的に、末梢血中における単球は"classical Mo"とよばれるinflammatory Moと、"non-classical Mo"と呼ばれるpatrolling Moの少なくとも2種類に分類でき、近年、Mo数が予後不良因子となる可能性や、non-classical Moが、がん抑制あるいは転移に関与している可能性が示唆されている。ヒトにおいては、両者を特定するmaster regulatorは同定されていないものの、CD14, CD16, CCR2およびCX3CR1などの発現で分画できるといわれている。一方、我々はこれまでに、限られた患者血液検体から多くの情報をより効率的に取得するために、最大18色を同時に染色できるマルチカラーフローサイトメーターを用いて、免疫担当細胞ポピュレーションの測定解析を進めており、これまでに、各種Lineage細胞数の変動や骨髄由来抑制性細胞(myeloid-derived suppressor cells: MDSCs)と治療効果との相関を報告している。本年度は、新たにMoのsubpopulation、phenotypeおよびfunctionを評価するために、論文情報などの最新知見を参考に、最適な抗体クローンと色素の組み合わせを決定し、Mo解析用新規パネルを立案した。さらに、抗腫瘍免疫において重要なエフェクター細胞であるT細胞のサブポピュレーションをより詳細に解析するのためのパネルの改定も行った。次年度は、これら新規Moパネル、T細胞ポピュレーションパネルのvalidationを行い、あわせて解析の安定性および再現性についても確認する。本研究により、重要であると認識されてはいるもののT細胞ほど解析が進んでいない単球などミエロイド系細胞群を解析するための新規パネルをデザインすることができた。また、日々更新されていく新しい知見をもとに、T細胞解析のためのパネルのアップデートを進めることが出来た。しかし、免疫モニタリング用血液検体の運用に関するバリデーションのための、新鮮血液検体取得の方法が確定しておらず、その点については、今後の課題である。今後は、初年度においてデザインした新規パネルについて測定プロトコール(蛍光強度や蛍光補正)などを確定し、測定のバリデーションを行う。抗腫瘍免疫におけるミエロイド系細胞の重要性は指摘されているものの、それらを解析するツールがなかったので、本パネルを用いた今後の解析が期待される。なお、今後も新たな知見が得られた場合には、随時、パネルの改定およびバリデーションを行っていく。

また、本バリデーションには市販の凍結血液検体を用いることとし、測定法の安定性および再現性を確認する。一方、血液検体の運用に関するバリデーションのための新鮮血液検体取得方法については、引き続き検討を進める。本年度は、これまでに作成した単球系細胞解析用の新規パネルについて、バリデーションを完成させる。これまでの解析より、ミエロイド系細胞では、がん患者と健常人、またヒトとマウスではいくつかの分子でその分布が異なっていることが観察されており、患者だけでなく健常人におけるリンパ球フェノタイピングも重要である。よって、単球系細胞解析用パネルについても、まずは市販の健常人末梢血リンパ球を用いてフェノタイピングを行い、情報を収集する。また、患者末梢血検体が得られた場合には、随時、測定を進めていく。さらに、近年は、マルチパラメータデータの解析手法も発展していることから、解析手法および解析用ソフトウェアの導入を進める。初年度は、新規パネルの立案については予定通り進められたが、血液検体採取方法が確定しなかったため、血液検体運用のバリデーションについては遅れが生じた。今後は、検体としては市販の凍結PBMC検体を用いることとし、新規パネルの測定条件確定や、さらなるパネル改良およびバリデーションなどを行っていく。なお、がん患者検体が得られた場合には、随時、新規パネルでの測定解析を行っていく予定である。また、マルチパラメーター解析の結果、情報量が非常に多くなるため、それらを解析するためのソフトウェアや解析機器の導入についても検討する。新規患者検体の入手については、引き続き今後の課題となるが、本年度は、パネルのアップデートを行いつつ、これまでに作ってきたパネルについて、市販の健常人末梢血リンパ球におけるフェノタイピング解析を進める。
加速進化のメカニズム解明 : 加速進化遺伝子近傍にコードされる逆転写酵素の機能解析

加速進化型遺伝子群のイントロンにコードされており、遺伝子上では偽遺伝子となっているレトロトランスポゾンの逆転写酵素部位の塩基配列を解析するため、マアナゴガレクチンCongerinI, CongerinIIおよび新規CongerinPのゲノム配列を解析した。また、この新規CongerinPの機能を明らかにするため、大腸菌でのリコンビナント発現系を構築した。種々のベクターを検討した結果、CongerinIIをタグに用いた発現系でのみ成功した。CongerinPは、これまであきらかになっているガレクチンとは全く異なり、マンノース特異性を示した。この結果は、ガレクチンの新たな機能を示唆するもので、これまでのガレクチンの定義には当てはまらない新たな知見を与える重要な結果となった。さらに、ハブゲノムについてもゲノムライブラリーを作成し、塩基配列解析をすすめた。ハブ毒PLA2ゲノム中にみられたレトロトランスポゾンの逆転写酵素部位の配列をもとに合成した祖先型逆転写酵素について、大腸菌でのリコンビナント発現を試みているが、機能をもつ祖先型逆転写酵素の発現には至っていない。その結果、CongerinIとII遺伝子は約2kb、CongerinPは1.2kbの遺伝子長であり、いずれも4つのエキソンと3つのイントロンをもつが、エキソン-イントロン接合部位は、ヒトなどほ乳類ガレクチンと同じであった。また、興味深いことに加速進化がみられたCongerinIとII遺伝子の第1イントロンにのみSINEが存在した。さらに、Congerinにみられた加速進化は、イントロンとエキソンでの進化速度は等しいが、非同義置換が同義置換よりも大きく、ハブ毒遺伝子にみられた加速進化(イントロンよりもエキソンの進化速度が速く、非同義置換が同義置換よりも大きい)とは異なることが判明した。ハブ毒PLA2ゲノム中にみられたレトロトランスポゾンの逆転写酵素部位の配列をもとに、祖先型逆転写酵素の配列を設計し合成した。大腸菌でのリコンビナント発現を試みているが、まだ発現には至っていない。