hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
好中球、血小板の大量培養法の開発と臨床応用への検討

in vitroの系で造血系細胞、特に成熟血球の増幅を支持する系の開発を目的に研究を行った。マウスの骨髄ストロマ細胞と骨髄細胞の共培養系では、サイトカインとしてG-CSFを添加する系で、マウス成熟顆粒球の著明な増幅系(週2回の倍地交換毎に顆粒球が1x10^6個以上産生し、およそ6-7週間にわたってこの系が維持される)が確立された。ヒトの臍帯血由来CD34陽性細胞を免疫磁気ビーズ法で純化し、ヒト骨髄由来のストロマ細胞と共培養したが、ストロマ細胞がロット毎に機能が一定せず、かつ造血細胞の産生は小規模にとどまった。そこでヒト造血を支持することが知られているマウスストロマ細胞株MS5とCD34陽性細胞を共培養したところ、顆粒球細胞の増幅は培養初期のごく早期のみに限られ、予想外にG-CSFとSCFの存在下にヒトプレB細胞の著明な増幅が認められた。培養液を1週間毎に交換するたびに約1x10^6個の細胞が回収できた。B細胞は現在までの解析ではCD10、CD19、CD20などの未分化な成熟段階のマーカーを表現するのみで、細胞表面免疫グロブリンなどの発現はない。in vitroの系で血小板を作成するため、マウス巨核球の分化誘導を試み、巨核球細胞の胞体突起形成を指標に各種サイトカイン、プロテオグリカンの作用を検討したところ、IL-6が巨核球の細胞骨格、チュブリンの成熟を誘導すること、硫酸基を有するプロテオグリカンが胞体突起形成を誘導することなど、新しい現象を報告できた。ヒト造血幹細胞、前駆細胞を培養し大量の成熟顆粒球を産生する系を確立するため、まずヒト骨髄細胞を造血サイトカインの存在下で短期培養した。顆粒球の産生は一過性で培養系は容易に単球、マクロファージに置き換わり、造血前駆細胞の一部が生存するものの培養系全体が顆粒球になることは考えられなかった。骨髄ストロマ細胞と骨髄細胞の共培養系に顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)を添加したところ、浮遊培養系に現れてくる細胞の大部分が、造血前駆細胞、未熟骨髄系細胞、成熟顆粒球で占められることが判明した。培養は約2-3週間安定し、骨髄細胞1x10^6個から出発し、週2回の培養液交換の度に1x10^6個の成熟顆粒球が回収できる状態であった。系を大規模にするためにはヒト骨髄ストロマ細胞を大量に増殖させる必要があるため、培地にストロマ関連増殖因子を添加し培養を試みたが、EGF、FGF、IGFなどには血清成分に対する上乗せ効果はあるものの強力に増殖を誘導する働きが認められなかった。培養器具表面をコラーゲン、ラミニン、フィブロネクチンなどでコーティングし細胞増殖の支持を図ったが、細胞形態変化を誘導するものの決定的な増殖は認められなかった。ヒト造血を支持するマウス由来のストロマ細胞株を現在検討中である。生体内でG-CSF刺激で大量に増幅した顆粒球を採取し、それらが体外で一定期間機能を有したまま生存維持できないが検討したが、顆粒球の体外での寿命は短い各種サイトカインを添加しても2-4日程度しか維持できなかった。顆粒球を凍結保存することの試みは、通常のDMSOを凍結保護剤として用いたプログラムフリージングでは失敗し、運動能を有する精子や卵子の凍結用保存液、冬眠昆虫の凍結予防体液組成を真似た保存液など考案し試みたが、十分な効果が今のところ得られていない。マウスの骨髄ストロマ細胞と骨髄細胞の共

培養系では、サイトカインとしてG-CSFを添加する系で、マウス成熟顆粒球の著明な増幅系(週2回の培地交換毎に顆粒球がlx10^6個以上産生し、およそ6-7週間にわたってこの系が維持される)が確立された。ヒトの臍帯血由来CD34陽性細胞を免疫磁気ビーズ法で純化し、ヒト骨髄由来のストロマ細胞と共培養したが、ストロマ細胞がロット毎に機能が一定せず、かつ造血細胞の産生は小規模にとどまった。そこでヒト造血を支持することが知られているマウスストロマ細胞株MS5とCD34陽性細胞を共培養したところ、顆粒球細胞の増幅は培養初期のごく早期のみに限られ、予想外にG-CSFとSCFの存在下にヒトプレB細胞の著明な増幅が認められた。培養液を1週間毎に交換するたびに約lx10^6個の細胞が回収できた。B細胞は現在までの解析ではCD10、CD19、CD20などの未分化な成熟段階のマーカーを表現するのみで、細胞表面免疫グロブリンなどの発現はない。in vitroの系で血小板を作成するため、マウス巨核球の分化誘導を試み、巨核球細胞の胞体突起形成を指標に各種サイトカイン、プロテオグリカンの作用を検討したところ、IL-6が巨核球の細胞骨格、チュブリンの成熟を誘導すること、硫酸基を有するプロテオグリカンが胞体突起形成を誘導することなど、新しい現象を報告できた。
脈絡膜新生血管成熟と神経終末カルシウムチャネルの関係に立脚した新規治療戦略の樹立

滲出型加齢黄斑変性の病態の本体は脈絡膜新生血管である。脈絡膜新生血管に対して臨床的には抗血管内皮増殖因子抗体治療が効果的であるが、無効例、治療中の線維瘢痕化、一度抑制された新生血管の再燃、継続的な治療の必要性など克服されるべき課題は多い。脈絡膜新生血管研究は、その動物モデルである実験的アルゴンレーザー誘発脈絡膜新生血管モデルを用いた血管新生抑制やその誘因となる炎症の抑制のための研究が活発に行われている。一般に新生血管は解剖学的に未熟な血管であるが、その血管周囲に存在する神経支配を介した新生血管の成熟による血管外漏出減少と出血の抑制に着目した研究は報告されていない。マウスレーザー誘発脈絡膜血管新生はレーザー後1-2週で最大となり、その後退縮していくモデルであり臨床的にみられる脈絡膜新生血管の自然過程とは異なるために、まずはマウスレーザー誘発脈絡膜新生血管程の退縮に関与する因子の検討を行った。マウスレーザー誘発脈絡膜新生血管の成熟過程や退縮過程における因子を主に免疫組織学的に検討し順調に進行中である。計画通りに研究を進めていく予定である。マウス使用引数が予定よりすくない結果であったため、次年度と合わせた予算執行予定である。
単結晶高品位化に資する，非定常表面張力差対流の新規制御法のための物理モデリング

非定常な温度差マランゴニ対流によって単結晶材に欠陥が生じるという課題が残されている.非定常対流のメカニズムは未解明であり,未だ有効な制御手段が確立されていない.そこで本研究では,効果的な制御手法を確立することを目標として対流場と温度場を詳細に調査し,これらをもとに制御用の物理モデルの構築を行う.H30年度は物理モデルを構築するための基礎データとして,対流場と温度場の時空間構造を引き続き調査し,以下の結果を明らかにした.液柱上下部の位相は臨界点近傍では同相であるが,Maの増加に伴って次第に不規則になる.液柱上下の周期について,マランゴニ数に依らず主となる周波数は同一であるが,細かい周波数成分は異なる.温度場と対流場の双方において脈動流や回転流が観察され,振動流のパターンは一致する.その上,脈動の節の位置や回転の方向が時々刻々変化する複雑な構造である.さらに,数理モデルを構築およびその検証用の基礎データを取得することを目的として,フルゾーン液柱の基礎モデルである薄液膜に対して,非定常マランゴニ対流の粒子画像流速計測法および数値シミュレーションを実施した.実験の結果としては,2次元2成分粒子画像流速計測法を用いて,対流場を再構築できるようになった.数値シミュレーションの結果としては,非定常流の1つであるハイドロサーマルウェーブを再現でき,その波数や伝播角度などの非線形的な特徴が先行実験と概ね一致することがわかった.実験と同等の条件において,これまで数値解析では再現できなかった非定常流(振動ロール流れ)を再現できることを示した.H30年度にて対流場と温度場の時系列構造に関するデータをほぼ取得できたが,制御に有効な物理モデルの構築まで至らなかったため.物理モデル候補を最適フィードバック制御に絞ることができており,引き続き数理モデルを構築する.フルゾーン液柱の全ての情報(対流場および温度場)が利用できるのが望ましいが,実験で得られる情報は限りがあるので,その情報を用いて推定する式を構築する.可能であれば実時間で推定,フィードバック制御できるような簡略化した式の構築を行う.さらに実データをもとに評価を実施する.非定常な温度差マランゴニ対流によって単結晶材に欠陥が生じるという課題が残されている.非定常対流のメカニズムは未解明であり,未だ有効な制御手法が確立されていない.そこで本研究では,効果的な制御手法を確立することを目標として対流場と温度場を詳細に調査し,これらをもとに制御用の物理モデルの構築を行う.H29年度は物理モデルを構築するための基礎データとして,対流場と温度場の時空間構造を調査した.その結果として,地上実験では非定常流において,液柱上下で異なる振動モードを有すること明らかにした.さらに非定常流(乱流)に遷移するマランゴニ数を評価し,臨界マランゴニ数のおよそ24倍とわかった.この場合,乱流化するマランゴニ数は液柱のアスペクト比に依って異なることを示した.またマランゴニ数を増加させるに伴い,定常流,非定常流(周期),非定常流(準周期)へ分岐し,最終的に乱流化することを明らかにした.非定常流(振動流乱流)における対流場および温度場のデータを広範囲に取得した.さらにFZ液柱の基礎モデルである薄液膜における,非定常流マランゴニ対流の数値シミュレーションも新たに実施した.以上をHZ液柱で得られている先行結果と比較する.まず乱流に遷移する際のマランゴニ数と臨界マランゴニ数の比はFZ液柱とHZ液柱でほぼ同じであることがわかった.さらに乱流化するマランゴニ数がアスペクト比に依存することもFZ液柱とHZ液柱で同様である.また定常流から乱流ヘの遷移過程もFZ液柱とHZ液柱で同様であることが明らかになった.申請書に記載した通り,H29年度にて対流場と温度場の時空間構造の調査の途中まで(乱流化するマランゴニ数の特定,対流場と温度場の時系列データの取得)実験データを取得できた。FZ液柱の基礎モデルである薄液膜における,非定常流マランゴニ対流の数値シミュレーションも新たに実施した.本成果は関東学生会第57回学生員卒業研究発表講演会(2018年3月)に報告し,また日本伝熱シンポジウム(2018年5月)および日本流体力学会年会2018(2018年9月)で報告予定である.非定常な温度差マランゴニ対流によって単結晶材に欠陥が生じるという課題が残されている.非定常対流のメカニズムは未解明であり,未だ有効な制御手段が確立されていない.そこで本研究では,効果的な制御手法を確立することを目標として対流場と温度場を詳細に調査し,これらをもとに制御用の物理モデルの構築を行う.H30年度は物理モデルを構築するための基礎データとして,対流場と温度場の時空間構造を引き続き調査し,以下の結果を明らかにした.液柱上下部の位相は臨界点近傍では同相であるが,Maの増加に伴って次第に不規則になる.液柱上下の周期について,マランゴニ数に依らず主となる周波数は同一であるが,細かい周波数成分は異なる.温度場と対流場の双方において脈動流や回転流が観察され,振動流のパターンは一致する.その上,脈動の節の位置や回転の方向が時々刻々変化する複雑な構造である.

さらに,数理モデルを構築およびその検証用の基礎データを取得することを目的として,フルゾーン液柱の基礎モデルである薄液膜に対して,非定常マランゴニ対流の粒子画像流速計測法および数値シミュレーションを実施した.実験の結果としては,2次元2成分粒子画像流速計測法を用いて,対流場を再構築できるようになった.数値シミュレーションの結果としては,非定常流の1つであるハイドロサーマルウェーブを再現でき,その波数や伝播角度などの非線形的な特徴が先行実験と概ね一致することがわかった.実験と同等の条件において,これまで数値解析では再現できなかった非定常流(振動ロール流れ)を再現できることを示した.H30年度にて対流場と温度場の時系列構造に関するデータをほぼ取得できたが,制御に有効な物理モデルの構築まで至らなかったため.研究の進捗は順調であり,このまま当初の研究計画に従って研究を推進する.H30年度は引き続き対流場と温度場の詳細なデータを取得し終え,数理モデル化に着手する.さらに対流場と温度場の詳細なデータを解析し,学会での報告し,かつ査読付き論文に投稿する.物理モデル候補を最適フィードバック制御に絞ることができており,引き続き数理モデルを構築する.フルゾーン液柱の全ての情報(対流場および温度場)が利用できるのが望ましいが,実験で得られる情報は限りがあるので,その情報を用いて推定する式を構築する.可能であれば実時間で推定,フィードバック制御できるような簡略化した式の構築を行う.さらに実データをもとに評価を実施する.購入品の当初予定額と差が生じたため.次年度の物品もしくは旅費に充てる.購入品の当初予定額と差が生じたため.次年度の物品もしくは旅費に充てる.
植物におけるポストゴルジオルガネラが担う環境ストレス応答機構の包括的解明

・TGNが関与する高塩ストレスの「受容」と「応答」を単離することによる、高塩ストレス応答の分子メカニズムの解明:TGNに局在するNa/Hアンチポーターの局在を観察すためNHX5/NHX6にGFP, YFP, mRFPを融合させたタンパク質を発現する形質転換体を作出し、TGN機能が損なわれた変異体syp4にNHX5-GFP, NHX6-GFPを発現する形質転換体も作出した。塩ストレス処理後の挙動について解析を行い、野生型ではNHX5/6が塩処理後に液胞膜に局在を変えるが、変異体ではその局在変化が起こらないことを発見した。・塩ストレス応答におけるオルガネラ動態の解明:各ポストゴルジオルガネラの塩ストレス応答時の挙動を観察した。その結果TGNが小さくなっていることが確認された。超高感度高速のライブイメージング顕微境を用いて長時間の塩ストレス応答の観察システムの構築を試みたが、長時間同じ細胞を観察することができなかった。H29年度は超解像ライブイメージング顕微鏡ではない顕微鏡をもちいて、塩処理開始から6時間は観察する実験システムを構築した。・病原菌抵抗性におけるTGNのダイナミクスと生理機能の解明:シロイヌナズナに感染することが出来ないうどんこ病菌(Blumeria graminis)を用いて、syp4変異体でのうどんこ病菌に対する応答を詳細に解析した。その結果、ゴルジ体から独立したTGNが分泌経路で機能することを見出した。また、病原菌侵入時の分泌タンパク質を同定するために、細胞間隙のタンパク質を単離しプロテオミクス実験を行い、バイオインフォマティック的解析により数種類の候補分泌タンパク質を同定した。平成29年度が最終年度であるため、記入しない。・塩ストレス応答におけるオルガネラ動態の解明:研究室で開発された超高感度高速のライブイメージン顕微境を用いて長時間の塩ストレス応答の観察システムの構築を試みたが、根の成長により焦点面がずれるため長時間同じ細胞を観察することができなかった。H28年度も長時間ライブイメージングの構築を試みる。・TGNが関与する高塩ストレスの「受容」と「応答」を単離することによる、高塩ストレス応答の分子メカニズムの解明:TGNに局在するNa/Hアンチポーターの局在を観察すためNHX5/NHX6にGFP, YFP, mRFPを融合させたタンパク質を発現する形質転換体を作出し、野生型ではTGNに局在することを確認した。また、TGN機能が損なわれた変異体syp4にNHX5-GFP, NHX6-GFPを発現する形質転換体も作出した。・病原菌抵抗性におけるTGNのダイナミクスと生理機能の解明:シロイヌナズナに感染することが出来ないうどんこ病菌(Blumeria graminis)を用いて、syp4変異体でのうえどんこ病菌に対する応答を詳細に解析した。うどんこ病菌侵入時にはゴルジ体から独立したトランスゴルジ網(TGN)の数が増殖することを発見した。更に、ゴルジ体から独立したTGNは分泌経路で機能することを見出したことにより、ゴルジ体から独立したTGNによって運ばれる物質が病原菌応答に大切であることが示唆された。そこで病原菌侵入時の分泌タンパク質を同定するために、細胞間隙のタンパク質を単離しプロテオミクス解析を行った。・TGNが担う環境ストレス下での葉緑体の機能発現機構の解明:syp4変異体の葉の黄化・白化の表現形が抑圧される変異体について、次世代シーケンシングにより原因遺伝子を同定する準備実験をおこなった。塩ストレス応答のオルガネラ動態を超解像ライブイメージングにより観察するシステムの構築には時間がかかっているが、病原菌応答におけるTGNの生理機能に関しては大きく研究が進捗した。超高感度高速のライブイメージン顕微境を用いて長時間の塩ストレス応答の観察システムの構築を試みたが、昨年より根の成長による焦点面のズレは解消したが、まだ長時間同じ細胞を観察することができなかった。H29年度も長時間ライブイメージングの構築を試みる。塩ストレス処理後の挙動について解析を行う予定である。そこで病原菌侵入時の分泌タンパク質を同定するために、細胞間隙のタンパク質を単離しプロテオミクス実験を行い、バイオインフォマティック的解析をおこなった。数種類の候補分泌タンパク質を同定した。・TGNが担う環境

ストレス下での葉緑体の機能発現機構の解明:昨年と同様にsyp4変異体の葉の黄化・白化の表現形が抑圧される変異体について、次世代シーケンシングにより原因遺伝子を同定する準備実験をおこなった。塩ストレス応答のオルガネラ動態を超解像ライブイメージングにより観察するシステムの構築には時間がかかっているが、病原菌応答におけるTGNの生理機能に関してはプロテーオーム解析を行うことで積荷タンパク質の候補が得られたため大きく研究が進捗した。・TGNが関与する高塩ストレスの「受容」と「応答」を単離することによる、高塩ストレス応答の分子メカニズムの解明:TGNに局在するNa/Hアンチポーターの局在を観察すためNHX5/NHX6にGFP, YFP, mRFPを融合させたタンパク質を発現する形質転換体を作出し、TGN機能が損なわれた変異体syp4にNHX5-GFP, NHX6-GFPを発現する形質転換体も作出した。塩ストレス処理後の挙動について解析を行い、野生型ではNHX5/6が塩処理後に液胞膜に局在を変えるが、変異体ではその局在変化が起こらないことを発見した。・塩ストレス応答におけるオルガネラ動態の解明:各ポストゴルジオルガネラの塩ストレス応答時の挙動を観察した。その結果TGNが小さくなっていることが確認された。超高感度高速のライブイメージング顕微境を用いて長時間の塩ストレス応答の観察システムの構築を試みたが、長時間同じ細胞を観察することができなかった。H29年度は超解像ライブイメージング顕微鏡ではない顕微鏡をもちいて、塩処理開始から6時間は観察する実験システムを構築した。・病原菌抵抗性におけるTGNのダイナミクスと生理機能の解明:シロイヌナズナに感染することが出来ないうどんこ病菌(Blumeria graminis)を用いて、syp4変異体でのうどんこ病菌に対する応答を詳細に解析した。その結果、ゴルジ体から独立したTGNが分泌経路で機能することを見出した。また、病原菌侵入時の分泌タンパク質を同定するために、細胞間隙のタンパク質を単離しプロテオミクス実験を行い、バイオインフォマティック的解析により数種類の候補分泌タンパク質を同定した。病原菌感染時に実際に分泌されているタンパク質を同定し、それらのダイナミクスをライブイメージングにより観察することで、病原菌応答におけるTGNが担う機能を分子レベルで明らかにする。病原菌感染時に実際に分泌されているタンパク質を確定し、それらのダイナミクスをライブイメージングにより観察することで、病原菌応答におけるTGNが担う機能を分子レベルで明らかにする。平成29年度が最終年度であるため、記入しない。
タンデム自転車エルゴメータを用いた受動動作による末梢及び中枢血流応答

ピスト式のタンデム自転車エルゴメータを作製した.ピスト式のこの機器を用いれば,後乗りが能動ペダル運動を行うことにより,前乗りの受動ペダル運動が可能となる.能動ペダル運動時と受動ペダル運動時では,前頭前野の活動性が必ずしも一致しないと予測する.そこで,タンデム自転車エルゴメータと近赤外線分光法を用いれば受動ペダル運動時の前頭前野の血液量・酸素動態を評価できると考えた.本研究は,受動運動と前頭前野酸化ヘモグロビン濃度の関連性を明らかにすることを目的とした.被験者は健康な成人男性2名(前乗り(年齢;27歳,最高酸素摂取量;39.4ml/kg/min),後乗り(年齢;23歳,最高酸素摂取量;44.6ml/kg/min))とした.被験者から研究参加の同意を得て実施した.測定項目は,前頭前野の酸化ヘモグロビン濃度変化とした.酸化ヘモグロビン濃度変化の測定は,全頭測定型functional NIRS装置を用いて行なった.運動課題は,前乗りが受動ペダル運動とした.後乗りは、能動ペダル運動とし、1.5kpの負荷とし、18分間行った.ペダル回転数は40rpmから開始し,3分ごとに10rpmずつ90rpmまで増加させた.前乗り受動ペダル運動における心拍数は,ペダル回転数の増加に伴い増加した.前乗り受動ペダル運動の酸化ヘモグロビン濃度変化は,運動前に比べ40rpmおよび50rpmにおいて増加した.この増加は,前乗り受動ペダル運動者が後乗り能動ペダル運動に同調する受動動作のためであると考えられた.後乗り能動ペダル運動者の酸化ヘモグロビン濃度変化は,ペダル回転数の増加に伴い抑制された.自転車エルゴメータのペダリング運動は、自動化された運動であるため前頭前野の脳血流量が抑制されたものと考えられた.同時に運動野における血流増加による前頭前野の血流抑制の可能性を明らかにした.いわゆる一人乗り自転車エルゴメータを用いた能動的な動作(passive pedaling movement)では、運動強度を高めれば筋血流が増大し、筋温も上昇し、心拍数や酸素摂取量も増大する。いわゆる一人乗り自転車エルゴメータでは、受動的な動作(passive pedaling movement)を行うことが不可能である。しかしながら、タンデム自転車エルゴメータを用いれば能動的な動作(active pedaling movement)と受動的な動作(passive pedaling movement)を同時に行うことができ、2つの動作の生理的指標を比較することができる。研究計画においてタンデム自転車エルゴメータを用い、ペダリング動作における受動的運動時(passive pedaling movement)の1.筋血流量の定量(令和元年度、片山および荻田が担当)、2.筋血流量と脳血流量の定量(令和2年度、片山、荻田、彦坂、細川および斎藤が担当)などを行うこととしている。本研究は、PDCAサイクル方式による好循環が成り立つように実験結果のフィードバックを研究者間で共有する研究計画を立案している。概ね順調に研究計画沿って実験が進捗している。なお、平成30年度に実施した脳血流の予備実験が非常に順調に進んだため、同じく平成30年度に予定していた筋血流の予備実験は次年度に実施することにした。本研究は、PDCAサイクル方式による好循環が成り立つ研究計画とする。研究計画に沿って実験を行い、学会発表し、評価を問う。評価に基づき再実験を行い、再び学会発表する。ECSS(European College of Sport Science)などで第三者評価を得た段階で論文投稿する。国際的な評価を得るために欧文誌に投稿する。学術的な成果をインターネットで公表し、将来ビジョンの実現を目指す。ピスト式のタンデム自転車エルゴメータを作製した.ピスト式のこの機器を用いれば,後乗りが能動ペダル運動を行うことにより,前乗りの受動ペダル運動が可能となる.能動ペダル運動時と受動ペダル運動時では,前頭前野の活動性が必ずしも一致しないと予測する.そこで,タンデム自転車エルゴメータと近赤外線分光法を用いれば受動ペダル運動時の前頭前野の血液量・酸素動態を評価できると考えた.本研究は,受動運動と前頭前野酸化ヘモグロビン濃度の関連性を明らかにすることを目的とした.被験者は健康な成人男性2名(前乗り(年齢;27歳,最高酸素摂取量;39.4ml/kg/min),後乗り(年齢;23歳,最高酸素摂取量;44.6ml/kg/min))とした.被験者から研究参加の同意を得て実施した.測定項目は,前頭前野の酸化ヘモグロビン濃度変化とした.酸化ヘモグロビン濃度変化の測定は,全頭測定型functional NIRS装置を用いて行なった.運動課題は,前乗りが受動ペダル運動とした.後乗りは、能動ペダル運動とし、1.5kpの負荷とし、18分間行った.ペダル回転数は40rpmから開始し,3分ごとに10rpmずつ90rpmまで増加させた.前乗り

受動ペダル運動における心拍数は,ペダル回転数の増加に伴い増加した.前乗り受動ペダル運動の酸化ヘモグロビン濃度変化は,運動前に比べ40rpmおよび50rpmにおいて増加した.この増加は,前乗り受動ペダル運動者が後乗り能動ペダル運動に同調する受動動作のためであると考えられた.後乗り能動ペダル運動者の酸化ヘモグロビン濃度変化は,ペダル回転数の増加に伴い抑制された.自転車エルゴメータのペダリング運動は、自動化された運動であるため前頭前野の脳血流量が抑制されたものと考えられた.同時に運動野における血流増加による前頭前野の血流抑制の可能性を明らかにした.いわゆる一人乗り自転車エルゴメータを用いた能動的な動作(passive pedaling movement)では、運動強度を高めれば筋血流が増大し、筋温も上昇し、心拍数や酸素摂取量も増大する。いわゆる一人乗り自転車エルゴメータでは、受動的な動作(passive pedaling movement)を行うことが不可能である。しかしながら、タンデム自転車エルゴメータを用いれば能動的な動作(active pedaling movement)と受動的な動作(passive pedaling movement)を同時に行うことができ、2つの動作の生理的指標を比較することができる。研究計画においてタンデム自転車エルゴメータを用い、ペダリング動作における受動的運動時(passive pedaling movement)の1.筋血流量の定量(令和元年度、片山および荻田が担当)、2.筋血流量と脳血流量の定量(令和2年度、片山、荻田、彦坂、細川および斎藤が担当)などを行うこととしている。本研究は、PDCAサイクル方式による好循環が成り立つように実験結果のフィードバックを研究者間で共有する研究計画を立案している。概ね順調に研究計画沿って実験が進捗している。なお、平成30年度に実施した脳血流の予備実験が非常に順調に進んだため、同じく平成30年度に予定していた筋血流の予備実験は次年度に実施することにした。本研究は、PDCAサイクル方式による好循環が成り立つ研究計画とする。研究計画に沿って実験を行い、学会発表し、評価を問う。評価に基づき再実験を行い、再び学会発表する。ECSS(European College of Sport Science)などで第三者評価を得た段階で論文投稿する。国際的な評価を得るために欧文誌に投稿する。学術的な成果をインターネットで公表し、将来ビジョンの実現を目指す。筋血流計の購入を次年度に繰り越したため、次年度使用額が生じた。令和元年度に、受動的運動時の筋血流量を定量する。購入した筋血流計による筋血流の変化を国際誌に投稿する。そのための投稿料、英文校正料として使用する。令和2年度に、筋血流量と脳血流量の定量を同時に行う。得られた資料を国際学会にて発表し、論文として投稿する。そのための旅費及び投稿料として使用する。
頚動脈小体におけるセロトニンによる低酸素応答の増強

動脈血中の酸素分圧低下を受容する頚動脈小体の活性は、組織内在性のセロトニン(5-HT)により興奮性の調節を受けていることが推測されている。本研究では、ラット頚動脈小体における5-HTによる化学受容活性調節機構を明らかにすることを目的とした。RT-PCR法による解析では頚動脈小体に5-HT合成律速酵素と5-HT輸送蛋白の遺伝子発現が認められ、免疫組織化学的解析では両分子が化学受容細胞と血管周囲の交感神経線維に分布していた。化学受容細胞を用いたカルシウムイメージングによって、5-HTは5-HT2受容体を介して化学受容細胞の低酸素反応性を増強していることが示唆された。低酸素ガスの吸入暴露実験では低酸素状態で頚部交感神経幹の活動増加が認められ、頚動脈小体は反射的に交感神経による調節を受ける可能性が示された。血管組織標本を用いたカルシウムイメージングでは、5-HTは毛細血管の周皮細胞に対して収縮性に作用することが分かり、その反応には5-HT2受容体が介在していた。以上の結果から、5-HTは化学受容細胞と交感神経線維において合成・分泌され、化学受容細胞の興奮増強と毛細血管の血流制御という2つの調節経路を介して頚動脈小体の活性を増強していることが示唆された。27年度が最終年度であるため、記入しない。頚動脈小体の低酸素応答はセロトニン(5-HT)によって興奮性に調節されており、5-HTは化学受容細胞および交感神経で産生されている。本研究の目的は、化学受容細胞と交感神経の5-HTによる生理機能を捉え、頚動脈小体の低酸素応答調節機構を明らかにすることである。化学受容細胞に対する5-HTの作用を、細胞内カルシウム濃度変化を興奮の指標として解析した。Wistarラットから頚動脈小体を採材後、酵素消化によって化学受容細胞の分離培養標本を作製してカルシウム濃度変化を記録した。定常酸素状態(21%酸素)では、5-HTを適用しても化学受容細胞のカルシウム濃度に変化は認められなかった。一方、低酸素刺激液(1%酸素)を灌流している間、化学受容細胞において間歇的なカルシウム上昇が認められ、低酸素と5-HTの同時刺激によって化学受容細胞におけるカルシウム上昇の頻度が増加した。この化学受容細胞の低酸素応答に対する5-HTの作用は、5-HT2受容体拮抗薬ketanserin存在下で抑制された。以上の結果から、化学受容細胞の低酸素応答は5-HTによって興奮性に調節されていることが明らかとなり、化学受容細胞の5-HTは自身の低酸素反応性を増強していると推測された。この成果は論文投稿中である。頚動脈小体から血管組織標本を分離後、平滑筋細胞および周皮細胞の細胞内カルシウム濃度に対する5-HTの作用を解析した。細動脈では、5-HTを適用しても平滑筋細胞のカルシウム濃度は変化しなかった。一方、毛細血管では、5-HTによって周皮細胞のカルシウム上昇が観察され、この反応はketanserin存在下で抑制された。以上の結果から、5-HTは毛細血管内の血流調節を介して頚動脈小体の活性を増強していると推測された。また、低酸素反応時には生体ラット頚部交感神経幹の神経活動が増加していることが明らかとなり、頚動脈小体は反射的に交感神経による調節を受ける可能性が示された。これらの成果は論文発表した。化学受容細胞や血管組織標本を用いた実験によって、頚動脈小体の低酸素応答における化学受容細胞と交感神経の5-HTによる新しい調節経路の存在を示すことができた。一方で、当初の研究計画にある生体レベルの電気生理学的解析がやや遅れているが、低酸素ガス吸入実験系のセットアップは概ね終了した。低酸素状態における呼吸変化を調べるため、低酸素ガスを吸入暴露した際の、生体ラットの呼吸器パラメーター(呼吸数、一回換気量、分時換気量)の解析および血中ガス分圧の測定を行う。また同時に、頚動脈小体を支配する交感神経の切除や頚動脈への5-HT受容体拮抗薬の注入が、頚動脈小体の感覚神経活性や生体の呼吸活動にどのような影響を与えるのかを検討する。
モデル前駆体蛋白質を用いた小胞体膜透過の分子機構の解明

細胞内で合成される蛋白質の多くは、リボソーム上での合成にともない、膜透過システムを経て、細胞外に分泌されたり、あるいは細胞内のオルガネラへ局在化する。一般に、分泌型蛋白質の膜透過は原核細胞では細胞膜系、動物細胞では小胞体(ER)膜系をとおして行われ、両者は基本的に同じ機構で膜透過すると考えられている。そこで今年度は、当研究室の大腸菌での膜透過機構の成果をもとに、動物細胞小胞体膜透過の分子機構を解明するために以下の研究を行った。1)大腸菌モデル前駆体蛋白質を用いた膜透過実験を行うにあたり、コムギ胚芽抽出液(WG)によるin vitro蛋白質合成系を見直し、合成の最適条件を決定した。また、膜(イヌ膵臓ミクロソーム画分)透過の律速になるSRP(シグナル認識粒子)を完全精製した。これらを用いて、初めにプレプロラクチンの効率の良い透過システムを確立した。2)この透過システムを用い、大腸菌モデル前駆体蛋白質proOmpF-Lpp,proOmpA及びproOmpA-D26について調べたところ、proOmpAは効率よく膜透過したがその他はプロテアーゼ耐性が見られず、膜透過しなかった。proOmpF-Lpp,proOmpA-D26は、約80アミノ酸残基から成るためSRPに認識される前にリボソームから遊離してしまい、膜にターゲティングできなかったと思われる。今年度はSRPなどの準備、精製に多大な時間がかかってしまい当初の目的に沿った研究成果はあまり得られなかった。現在、前駆体蛋白質の長さを考慮し、proOmpFのpro部分をプロラクチンのN末端につないだキメラ蛋白質(191アミノ酸残基)を作製し膜透過を調べている。
技の形成に及ぼす知識と意識の役割について

本研究の目的は、技の形成過程に及ぼす知識と意識との関係を認知心理学的に明らかにすることである。研究成果は理論的検討と実験的検討の双方からなる。まず理論篇として、1.何故にいま技かで,(1)認識と行動,(2)認知係と行動系の関係を、2.技の構造,(1)技とは,(2)構造,(3)組み込みの構造について、3.技の形成過程では、(1)型の形成,(2)自動化と意識,(3)勘、についてそれぞれ理論的に検討した。これに対して実証篇では、1序論,(1)構造,(2)運用,(3)課題特性,の後、2.技の構造では、アーチェリー行射,古武道武,剣道それぞれのもつ構造をスクリプト手法でとり出した。3.意識と自動化では、それぞれのスクリプト項目を実際に行うさい、どの程度意識しているか,集中しているか,自動的に行なっているか,等を評定させた。4.構造と意識では、自分が意識している項目と実際に行なっている項目との範囲を記述させた。さらに5..技の構造と自己評価では、実際に技を行なったさい自からその出来具合を評価する自己評価とそれを他者が評価する他者評価とを比較した。その結果、評価の基準が重要であり、一般には相対的な基準が用いられることが明らかにされた。最後に総合論義では、資料情報と作用スキーマの関係,意識一行為範囲,あるいは評価の基準を論考した。
CMV-RNAの複製過程におけるテンプレートスイッチング機構の解明

キュウリモザイクウイルス(CMV)感染タバコ葉から全RNAを抽出し,CMVのゲノムRNAあるいはサテライトRNAの配列を基にしてプライマーを作製し,ヘテロな分子が互いに結合していると想定してRT-PCRで増幅してクローニングを行い,塩基配列を決定した。すると,CMVに存在するゲノムRNA13どうしがランダムに直鎖状になったと考えられるRNA分子が容易に検出された。しかし検出されたRNAは(+)鎖どうし,あるいは(-)鎖どうしの結合のみで,(+)(-)という結合は認められなかった。このような結合部分の塩基配列は3'末端側が欠損している場合が多く,一部に挿入も認められた。しかし純化試料からは結合したRNA分子は検出されなかった。さらにサテライトRNAを持つCMVの感染葉からは,ゲノムRNAどうしだけでなく,サテライトRNAとCMVゲノムRNAが結合した分子も検出された。同様な実験をキュウリ緑斑モザイクウイルス(CGMMV)の感染葉についても行ったところ,やはり(+)鎖どうしや(-)鎖どうしが直鎖状に結合したRNA分子が検出され,RNAウイルスが持つRNA依存RNAポリメラーゼによるテンプレートスイッチングの結果と考えられた。とくにサテライトRNAとCMVゲノムRNAの結合は,ゲノムRNAの増殖阻害を引き起こしていると考えられた。また研究の途中で,容易にウイルスRNAをPCRで検出できる簡易直接チューブRT-PCR法の開発にも成功した。さらに,結合を確認するために,感染性全長cDNAクローンも完成させた。RNAウイルスが自己のRNAを複製増殖する際には,ウイルスの遺伝情報由来のRNAポリメラーゼと宿主細胞由来のタンパク質が一体となって活性型RNAポリメラーゼとなり,鋳型RNAから子孫RNAを複製増殖する。この活性型RNAポリメラーゼが,新たに合成したRNAを離さずに鋳型鎖の別の部分から再びRNA合成を始めるのがテンプレートスイッチングである。このテンプレートスイッチングによって,さまざまなウイルスRNA分子が途中で結合していることが判明し,ウイルス進化の原動力として機能していると考えられている。しかしこの現象は最近になって見い出されたものであり,その研究は始まったばかりである。本研究では,このテンプレートスイッチングの機構の解明を目的としている。今年度は,本研究の初年度として,タバコモザイクウイルス(TMV)とキュウリモザイクウイルス(CMV)を取り上げ,その感染植物から全RNAを抽出し,PCR法によってTMVあるいはCMVのゲノムRNAが直鎖状に連続している分子の存在の有無を検定した。その結果,TMVでもCMVでもウイルスゲノムRNAが直鎖状に連続している分子が見い出されたが,予想外なことに,TMVの場合は(+)鎖の分子が,CMVの場合は(-)鎖の分子が連続しているものが非常に多く検出された。このようなウイルスゲノムRNAが連続して結合した分子の検出例は本研究が世界で初めてであり,また,ウイルスによって(+)鎖あるいは(-)鎖の差があることも初めての知見である。1.サテライトRNAを含むCMVを接種し,経時的にサテライトRNAの多量体および変異体の形成をPCR法によりモニターし,多量体や変異体の形成を調べた.2.サテライトRNA(RNA5)を含むキュウリモザイクウイルス(CMV)感染葉からは,RNA5の3'末端に5'末端が結合した分子が検出される.そこで,CMV感染葉から全RNAを抽出し,CMVゲノムRNAが連続して結合している分子の存在の有無を検討した.まず,(+)鎖の3'末端に5'末端が結合している分子を検出するため,5'末端下流に相補的なプライマーで(+)鎖を鋳型としたcDNA合成を行い,ゲノムRNA13の両末端領域に特異的なプライマーでPCRを行った.

その結果,RNA1-RNA1のようにホモロガスな組み合わせで結合する分子とともに,RNA1-RNA2やRNA1-RNA3といったヘテロロガスな組み合わせで結合した分子の存在が判明した.同様に,(-)鎖を鋳型としたcDNAからPCRを行ったところ,やはり(-)鎖CMVゲノムRNAがホモロガスまたはヘテロロガスの組み合わせで結合した分子の存在が判明した.さらに,同様の実験をRNA5を含むCMVの感染葉から抽出したRNA試料で行ったところ,RNA5とCMVゲノムRNAが結合している分子も検出された.3.以上の結果に基づき,次年度は多量体や変異体の経時的消長を追究し,それらの形成が最大になる時期と複製増殖が停止する時期を特定し,さらに,多数の変異体の塩基配列を決定し,欠損しやすい領域あるいは他の配列中に挿入されやすい領域を決定する.また,CMVのサテライトRNAに特異的に結合するタンパク質を分離し,テンプレートスイッチングや増殖停止といったウイルス増殖の定常期に引き起こされるウイルスRNAの変異のメカニズムを探る.キュウリモザイクウイルス(CMV)感染タバコ葉から全RNAを抽出し,CMVのゲノムRNAあるいはサテライトRNAの配列を基にしてプライマーを作製し,ヘテロな分子が互いに結合していると想定してRT-PCRで増幅してクローニングを行い,塩基配列を決定した。すると,CMVに存在するゲノムRNA13どうしがランダムに直鎖状になったと考えられるRNA分子が容易に検出された。しかし検出されたRNAは(+)鎖どうし,あるいは(-)鎖どうしの結合のみで,(+)(-)という結合は認められなかった。このような結合部分の塩基配列は3'末端側が欠損している場合が多く,一部に挿入も認められた。しかし純化試料からは結合したRNA分子は検出されなかった。さらにサテライトRNAを持つCMVの感染葉からは,ゲノムRNAどうしだけでなく,サテライトRNAとCMVゲノムRNAが結合した分子も検出された。同様な実験をキュウリ緑斑モザイクウイルス(CGMMV)の感染葉についても行ったところ,やはり(+)鎖どうしや(-)鎖どうしが直鎖状に結合したRNA分子が検出され,RNAウイルスが持つRNA依存RNAポリメラーゼによるテンプレートスイッチングの結果と考えられた。とくにサテライトRNAとCMVゲノムRNAの結合は,ゲノムRNAの増殖阻害を引き起こしていると考えられた。また研究の途中で,容易にウイルスRNAをPCRで検出できる簡易直接チューブRT-PCR法の開発にも成功した。さらに,結合を確認するために,感染性全長cDNAクローンも完成させた。
カルシウム透過性チャネルの制御による血管平滑筋細胞増殖のコントロール

「カルシウム透過性チャネル拮抗剤による増殖抑制の機序」細胞増殖には細胞外からのカルシウム流入が必須であり,増殖因子はカルシウム透過性チャネルを活性化して持続的なカルシウム流入を惹起する。我々はこのカルシウム透過性チャネルを抑制する薬物としてtranilastを見出し,この薬物が血管平滑筋細胞の増殖を抑えることを既に明らかにしてきた。本年度は,このtranilastが細胞周期のプログレッションを抑制する機構について検討を行った。培養血管平滑筋細胞A10を用い,tranilastがG_1期プログレッションをどの様に抑制するかを検討した。A10細胞において,増殖因子とともにtranilastを添加するとS期およびG_2/M期の細胞数が減少し,G_1期の細胞が増加し、実際G_1停止が起こっていることが確認された。tranilastの添加によりサイクリンDの発現は大きく抑制され,またRB蛋白の燐酸化が抑制されたことから,tranilastによるG_1プログレッション抑制作用はおもにこれによるものと思われた。さらにRB以降のステップに作用するかを明らかにする目的で,転写因子E2F1を遺伝子導入により発現させ,これによって惹起されるDNA合成にtranilastが有効かを検討したところ、tranilastはこのE2F1によるDNA合成をも抑制した。したがって、カルシウム透過性チャネル拮抗薬はRB蛋白の燐酸化と、さらにRB蛋白以降のステップに作用して増殖を抑制することが明らかになった。
新生児集中治療室に入院する子どもの家族向けヘルスリテラシー向上をめざすツール開発

平成30年度は、主に目標1):新生児集中治療室に入院する子どものご家族が期待するコンテンツ【媒体作成】に取り組み、2種類の調査を実施した。調査(1):早産で出生して退院前の児の体動を解釈し、ケアに活かす過程を明らかにするために、新生児集中治療室に勤務する看護者3名に、修正35週以降頃の児のケア場面を想定したインタビュー調査を実施した。その結果、沐浴、授乳、元気さ、ポジショニング、覚醒状態に関連する判断した後に、ケアに活かしており、特に、沐浴、授乳、元気さ、呼吸、ポジショニングについては、家族とその過程を日常的に共有していた。調査(2):早産児の状態を反映する指標としての体動の信頼性・妥当性の検証は、工学系の専門家の助言を得て、調査(2)-1:閉鎖型保育器内に収容されている早産児16名の全身状態を器外から24時間録画し、そのうち3例(修正在胎週数32週)について、体動による差分値と看護師の直接ケアと接近について記録した。看護師は、直接ケア(7.318.7%)の他、直接ケアはしないが接近(3.36.5%)を常に一定時間行っていることが共通している一方で、個人差も大きかったが、体動とケアコンタクトとの関連を視覚的に概観できた。加えて、調査(2)-2:在胎25週で出生後、修正在胎週数28週,30週,31週,32週の4回測定した1例について、交絡因子である器内の照度と音圧の推移を検討した。想定していた昼夜による違いは照度でのみ生じ、音圧では差が生じなかった。また、装着する呼吸器の影響で、終盤は有意に高音圧に推移しており、音刺激により体動が誘発している可能性があった。以上より、平成30年度は、早産児のさまざまな時期における看護者のケア実態を明らかにしたことで、場面を想定して、児の体動による状態の解釈や環境の変化を伝えるツールを作成することで、ご家族の理解を助けると示唆された。平成30年度では、【評価指標作成】と【媒体作成】の精選するために、早産児の体動に関する先行調査を、計画通り実施した。医療職者が早産児の「体動」を児のサインとして読み取り、ケアに活かす過程を明らかにすることを目的として、1)早産児で生まれたお子さんが退院前となり、ご家族が育児を主体的に行う前の時期については、看護師へのインタビュー調査を実施した。同時に、2)早産児で生まれて保育器内で過ごすお子さんへのかかわりの実態については、保育器外にカメラを設置し、24時間録画した画像を用いて、事後に差分処理により解析した。早産児の状況と体動の特性との関連、そして、看護師が接近したり、直接ケアをしたりする様子の関連を分析している段階である。成果報告は次年度になるが、保育器内とコット移床後と、状況別での実態を明らかにすることができたことから、次年度の【評価指標作成】と【媒体作成】に向けて、概ね順調に進んでいる。平成30年度は、平成29年度に取り組んだ海外で既存のツールの他、「体動」という、児の様子を理解するのに必須だが、未だ積極的には取り組まれていない内容について吟味することができたため、ツールに加えるべく【評価指標作成】と【媒体作成】を進める予定にしている。そして最終年度の【介入研究】をめざす予定である。【媒体作成】のコンテンツについては、先行研究と先行調査より、沐浴、授乳、元気さ、ポジショニング、覚醒状態に関連する判断時にケアに活かしている実態を考慮して作成するとともに、文字のみならず、映像等についての使用も考慮して、コンテンツの試案を作成し検討する(倫理審査申請予定)。また、体動については、激しくなる際の予兆についても検証する。また、そのツールは、早産児のみならず、染色体異常、難病等の児のご家族との交流も通して、新生児集中治療に入院するお子さんのご家族の体験談を伺い、適切な情報提供を得るための相談先等についても情報収集を行う。【媒体作成】の情報提供方法としては、Booklet版とICT版の両方の作成を、標準ケアとの混乱を避けるために、研究対象施設で既に使用されているツールの確認を含め、調整を進めていく予定である。【評価指標作成】の質問紙について、お子さんの体動に関する情報を得ることは、へルスリテラシーが高まるのみならず、母親の育児への自信やメンタルヘルスの改善につながるため、関連する尺度の併用の検討も進める。引き続き、質問紙の内容とともに、使用するタイミングや負担度も考慮して精選する。新生児集中治療に入院する子どもの家族向け情報提供・活用を支援する媒体の開発を目的として、目標1)新生児集中治療室に入院する子どものご家族が期待するコンテンツ【媒体作成】をめざし内容と情報提供方法を、目標2)日本の医療・文化下での適切さを考慮した【評価指標作成】をめざし質問紙の吟味を行った。【媒体作成】のコンテンツは、UCSFが作成したBooklet(Frank, 2017)等の海外の家族向けツールの内容やデザインを検討した。一般的な情報提供の内容は、早産児の特性、1日の流れ、環境調整、お子さんの反応(睡眠を含む)、お子さんへのケア、お子さんにとってのご家族、退院後の様子等であった。

文献検討後の検討事項として、「体動」については、その重要性を強調されているが、医療者と家族との間での情報提供の実際の他、信頼性や妥当性の検証が曖昧なため、工学の専門家を交えた実態調査を経て検討する。加えて、新生児集中治療に入院するお子さんのご家族(当事者)との交流から、相談先等の具体的な情報提供の必要性も確認された。【媒体作成】の情報提供方法としては、Booklet版からICT版への移行について、看護師への事前聞き取りから実現可能性を検討した。その結果、ICT版の作成が期待されるが、院内のネット環境の制限や個人情報保護の観点から、ITの専門家の助言を経て、タブレット端末の運用で特定の病棟で進めることが現実的であることが確認された。【評価指標作成】の質問紙の検討として、医療職者との関係に関する質問紙については、清水(2010)の『看護実践測定尺度』と『エンパワーメント測定尺度』については妥当性を確認し、我が国の総合/地域周産期母子医療センターの特性をとらえるツールであることを確認した。以上より、平成29年度は、さまざまな専門家や当事者の協力を得て、内容や方法を現実的に精選することができた。平成29年度と平成30年度(次年度)での2年間で【評価指標作成】と【媒体作成】を予定していたが、当初予期せぬ、研究機関ならびに研究協力施設の倫理審査手順の変更があったため、混乱を回避するために、平成29年度の調査を次年度に見送り、平成30年度に予定していた計画を前倒して調整した。その結果、おおむね順調に進んでいる。平成30年度は、主に目標1):新生児集中治療室に入院する子どものご家族が期待するコンテンツ【媒体作成】に取り組み、2種類の調査を実施した。調査(1):早産で出生して退院前の児の体動を解釈し、ケアに活かす過程を明らかにするために、新生児集中治療室に勤務する看護者3名に、修正35週以降頃の児のケア場面を想定したインタビュー調査を実施した。その結果、沐浴、授乳、元気さ、ポジショニング、覚醒状態に関連する判断した後に、ケアに活かしており、特に、沐浴、授乳、元気さ、呼吸、ポジショニングについては、家族とその過程を日常的に共有していた。調査(2):早産児の状態を反映する指標としての体動の信頼性・妥当性の検証は、工学系の専門家の助言を得て、調査(2)-1:閉鎖型保育器内に収容されている早産児16名の全身状態を器外から24時間録画し、そのうち3例(修正在胎週数32週)について、体動による差分値と看護師の直接ケアと接近について記録した。看護師は、直接ケア(7.318.7%)の他、直接ケアはしないが接近(3.36.5%)を常に一定時間行っていることが共通している一方で、個人差も大きかったが、体動とケアコンタクトとの関連を視覚的に概観できた。加えて、調査(2)-2:在胎25週で出生後、修正在胎週数28週,30週,31週,32週の4回測定した1例について、交絡因子である器内の照度と音圧の推移を検討した。想定していた昼夜による違いは照度でのみ生じ、音圧では差が生じなかった。また、装着する呼吸器の影響で、終盤は有意に高音圧に推移しており、音刺激により体動が誘発している可能性があった。以上より、平成30年度は、早産児のさまざまな時期における看護者のケア実態を明らかにしたことで、場面を想定して、児の体動による状態の解釈や環境の変化を伝えるツールを作成することで、ご家族の理解を助けると示唆された。平成30年度では、【評価指標作成】と【媒体作成】の精選するために、早産児の体動に関する先行調査を、計画通り実施した。医療職者が早産児の「体動」を児のサインとして読み取り、ケアに活かす過程を明らかにすることを目的として、1)早産児で生まれたお子さんが退院前となり、ご家族が育児を主体的に行う前の時期については、看護師へのインタビュー調査を実施した。