hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
肝胆道系の寄生虫感染による肝炎・肝硬変と腫瘍発生との相関性に関する研究

4.抗肝吸虫抗体価と胆管癌発生との関連性:胆管癌患者47例,胆嚢炎患者29例とコンケン地方の交通事故死例19例と日本の健常人から血清を採取し,OV成虫体抗原に対する1gG抗体価をELISA法にて測定した結果胆管癌症例では89%に,胆嚢炎では69%に,交通事故死例では42%に抗OV-IgG抗体が検出され,胆管癌に抗体陽性率が高く,しかも抗体価は胆管癌症例に最も高い値を示し,抗肝吸虫抗体価の高い症例は胆管癌の危険率が高いことが示唆された。5.肝内胆管癌の病理組織学的特徴:コンケン大学の肝内胆管癌の病理組織学的特徴を対照群の日本の症例と比較検討したところ,概ね組織学的な相違は無かったものの,腺癌のなかで髄様腺癌に類似した低分化な癌がコンケン地方の症例にのみ認められ,両者の腫瘍の形質発現に差があることが示された。この事から胆管細胞癌の発生原因や機構になんらかの違いのあることが示唆される。さらにタイ症例には胆管周囲の炎症性反応が高率にしかも強くみられ,胆管上皮の過形成が特徴的であった。また肝吸虫の感染部位に一致して初期の癌をみとめた症例もあった。6.ハムスター肝内胆管癌の発生に対する胆管の結紮の影響:OV感染が肝内胆管癌の発生を促進するが,その機序は不明である。胆管の閉塞の影響について追究するため,ハムスターにDMNを投与した後に一側の肝管を結紮したところ,胆管癌の発生はDMNと肝管結紮群のみに認められ,代償性の胆管の再生性増殖が胆管癌の発生促進に働くとが示唆された。7.肝吸虫治療薬の肝発癌に及ぼす影響:肝吸虫の治療薬であるプラジカンテルは動物実験から急性毒性は弱く,発癌性の無いことが報告されている。しかし肝発癌促進作用については未知である。この点を最近開発した肝の前癌病変を指標とする8週間の中期発癌性検索法を用いて検討した結果,肝の前癌病変の指標酵素であるGTSP陽性細胞巣は1500mg/kg bwの強制経口投与の群でDEN単独処置の対照群に比して有意な増加があったが,その投与量はヒトで用いられている量に比して著しく多く,ヒトでの危険性はほとんど無いと考えられる。以上の成果から,タイ北東部の胆管癌の高率発生には肝吸虫の反復感染に基づく長期の胆管の炎症とそれに伴う上皮の過形成が重要な要因になっていると推察される。食物中にニトロソ化合物やかび毒などの発癌性物質が積極的に関与している所見は認めらなかった。タイ東北部Khon Kaen地方はOpisthorchis viverrini(OV)の高感染地域であるが肝内胆管癌の好発地帯でもあり,胆管癌発性がOV感染と深く係わっていることが示唆されている。本研究では次の4点について研究を行った。(1) Khon Kaen大学で摘出された肝内胆管癌38例の病理組織学的特徴を名市大で剖検された肝内胆管癌22例を対照としての比較検討。(2) Khon Kaen地方の底所得者に常食されている発酵魚の一つであるPlara中の発癌物質の有無の追究。(3)OV治療薬であるPlaziquantelの肝発癌修飾作用のラットを用いての解析。(4) Khon Kaen大学の胆管細胞癌患者血清,胆嚢炎患者血清と対照としての日本の健常人血清について,OV成虫抗原に対する抗体をELISA法,Immunoblotting法で追究。その結果,(1) Khon Kaen地方の肝内胆管癌の特徴の一つは髄様構造をとる低分化型管状腺癌が多いことであり目下,症例を増加して検討中である。(2) Plaraについては6ヶ月発酵されたものの,アフラトキシンB_1,B_2,G_1,G_2,ステリグマトシスチン,オクラトキシン,ニトロソジメチルアミンおよびニトロソジエチルアミンの含有濃度を高速液体クロマトグラフ法とマスフラグメント法によって測定したが,いずれも測定限界以下であり,有意な量の発癌物質は認められなかった。
PEEPの短時間負荷により誘導される熱ショック蛋白を利用した敗血症の制御

本研究は、短時間のPEEP負荷の(1)腎虚血再灌流障害の制御に対する効果、(2)腎組織熱ショック蛋自の誘導条件、(3)流血中熱ショック蛋白に対する影響を検討し、(4)短時間のPEEP負荷が敗血症ショックモデルのサイトカイン産生や血行動態の制御効果を検討するととともに、効果をサイトカイン除去療法と比較し、(5)臨床症例における血中熱ショック蛋白濃度と疾患、高PEEP負荷の関係を明らかにすることを目的とした。[結果](1)PEEP前処置は腎虚血再灌流障害を有意に抑制した。この効果はPEEPによる循環変動(低血圧)のみでは説明できない。(2)PEEPの負荷は圧・時間依存性に腎組織HSP72陽性細胞数を増加させたが、血中HSP72を検出範囲に増加さなかった。(3)PEEPによるHO-1の誘導効果は明らかでない。(4)除去カラムによるサイトカイン除去療法は敗血症ショックモデルに対し容量依存性効果を示した。しかし、腎虚血に対し有効であったPEEP前処置は、敗血症ショックモデルに対し有意の影響を与えなかった。(5)HSP72濃度は高いPEEP負荷とは有意に関係せず、原疾患により影響された。(6)血中ストレス蛋白濃度は蘇生された心停止例の予後を反映する可能性がある。[結論]短時問のPEEP負荷は腎虚血に対し防御効果を発揮するが、敗血症に対しては有意な影響を与えなかった。PEEP負荷による血中hsp70濃度の変動:様々な条件の圧、時間でPEEPを負荷し、一定時間後に採血を行い、血中のhsp70を測定した。予測に反し、条件に関わらず、hsp70はいずれの群においても測定限界以下であった。PEEP前負荷による敗血性ショックの制御の検討:予備実験として人工呼吸管理下の敗血症モデルのサイトカイン変動を測定した。このモデルにおいて、サイトカイン吸着カラムは敗血症の病態を改善した。PEEP前負荷は、エンドトキシン投与後の血行動態に大きな影響を与えなかった。集中治療室入室患者の血中hsp70濃度の検討:72症例の保存血漿中のhsp70濃度を測定した。心肺停止患者、血流遮断を要する手術後の患者において、hsp70濃度は高値を示した。PEEPを用いた人工呼吸の影響は少なかった。本研究は、短時間のPEEP負荷の(1)腎虚血再灌流障害の制御に対する効果、(2)腎組織熱ショック蛋白の誘導条件、(3)流血中熱ショック蛋白に対する影響を検討し、(4)短時間のPEEP負荷が敗血症ショックモデルのサイトカイン産生や血行動態の制御効果を検討するととともに、効果をサイトカイン除去療法と比較し、(5)臨床症例における血中熱ショック蛋白濃度と疾患、高PEEP負荷の関係を明らかにすることを目的とした。[結論]短時間のPEEP負荷は腎虚血に対し防御効果を発揮するが、敗血症に対しては有意な影響を与えなかった。
三次元細胞培養法を用いたハイブリッド型人工骨の開発

1)骨髄細胞に対するBMP、bFGFの作用ラット骨髄細胞に対するBMP、bFGFの作用を詳細に検討したところ、BMPは細胞の増殖と分化ともに促進的に作用するが、bFGFは細胞の増殖を促進するが、分化に対しては抑制的に働くことがわかった。とくに、bFGFは分化段階の低い骨源性細胞に対して強力な増殖促進作用があった。したがって、BMPとbFGFの併用を試みた場合、細胞分化の前期にbFGFを作用させ骨源性細胞の数を増加させ、後期にBMPを作用させることで分化を促進させることにより、強力に骨形成の促進作用が得られることがわかった。2)ハイブリッド型人工骨の作成サンゴ由来のハイドロキシアパタイトを足場として、骨髄細胞を繙種し培養した後、in vivoに移植することにより、異所性に新生骨の誘導が可能であることが分かった。ポリ乳酸などのポリマーを足場として検討したが、ポリマーが疎水性であるため細胞が進入しずらく十分な骨形成は認められなかった。また、in vitroで培養中にbFGF、BMPを作用させることにより、両者の作用機序は異なるものの、ともに骨形成の誘導を促進することが分かった。1)骨髄細胞に対するBMP,FGFの作用ラット大腿骨より採取した骨髄細胞の初代培養を行いOP-1(BMP-7)の作用を検討したところ100ng/ml以上の濃度で用量依存的にAlkaline Phosphatase活性を上昇させた。また、骨髄細胞は継代培養を続けるにしたがい、骨芽細胞への分化能を失うことが知られているが、3ng/mlの濃度のbFGFを培地に添加することにより、その分化能を維持できることが明らかとなり、これによって細胞数を限りなく増加することが可能になった。in vitroでの三次元的培養による骨組織誘導のための足場として、コラーゲンシート、ハニカム構造コラーゲンスポンジ、アガロースゲル、アルジネートゲル、そして多孔質ハイドロキシアパタイトを用い、骨髄細胞を繙種して2-3週間様々な因子の存在下で培養を行った。しかし、in vitroで組織学的に骨組織と認められる組織の誘導は見られなかった。そこで、in vitroでの培養後これらをラット皮下組織へと移植しin vivoでの骨誘導能を確認した。その結果、ハイドロキシアパタイト以外の材料では吸収されてしまうか線維性の結合組織で包まれるのみで骨組織の形成は認められなかったが、ハイドロキシアパタイトを足場としたものではその表面に骨組織の形成を認めた。しかし、誘導された骨組織は多孔体の深部まで侵入していなかった。今後、孔の大きさや形状、あるいは細胞の繙種法に検討を加え、また、当初計画していたPLLAとPLLAとハイドロキシアパタイトの複合材も実験に加える予定である。1)骨髄細胞に対する各種成長因子の共同作用昨年度の本研究により、ラット大腿骨由来の骨髄細胞に対しOP-1/BMP-7が用量依存的に骨芽細胞の分化促進せることを明らかにした。本年度はさらにbFGF、BMP-2、TGF-βについて検討を加えたところ、OP-1/BMP-7と同様にbFGF、BMP-2もまた用量依存的に骨芽細胞の分化を促進した。しかし、TGF-βは細胞の形態を線維芽細胞様にするが骨芽細胞の分化に影響を与えなかった。次にこれらの成長因子の共同作用を検討するために一定量のbFGF、BMP-2、TGF-βに濃度を変化させたOP-1/BMP-7を加え細胞に作用させた。その結果、OP-1/BMP-7を単独で作用させた場合と変わりなく、他の成長因子との相加作用、相乗作用は認められなかった。骨髄細胞を人工ハイドロキシアパタイトに繙種してOP-1/BMP-7の存在下で培養を行い、これをラット皮下組織へと移植したところ、ハイドロキシアパタイトの表面にのみ骨組織の形成を認め、多孔体の深部まで侵入していないことが昨年度の本研究によりわかった。そこで、気孔が完全に連続しているサンゴ由来のハイドロキシアパタイトであるinterpore200を用い同様の実験を行ったところ、孔の深部まで骨組織が形成されていた。

また、OP-1/BMP-7を加えない対照群での4週目になるとわずかに骨組織の誘導を認めたが、OP-1/BMP-7を細胞に作用させることにより、より早期に確実に骨組織を誘導することが分かった。1)骨髄細胞に対するBMP、bFGFの作用ラット骨髄細胞に対するBMP、bFGFの作用を詳細に検討したところ、BMPは細胞の増殖と分化ともに促進的に作用するが、bFGFは細胞の増殖を促進するが、分化に対しては抑制的に働くことがわかった。とくに、bFGFは分化段階の低い骨源性細胞に対して強力な増殖促進作用があった。したがって、BMPとbFGFの併用を試みた場合、細胞分化の前期にbFGFを作用させ骨源性細胞の数を増加させ、後期にBMPを作用させることで分化を促進させることにより、強力に骨形成の促進作用が得られることがわかった。2)ハイブリッド型人工骨の作成サンゴ由来のハイドロキシアパタイトを足場として、骨髄細胞を繙種し培養した後、in vivoに移植することにより、異所性に新生骨の誘導が可能であることが分かった。ポリ乳酸などのポリマーを足場として検討したが、ポリマーが疎水性であるため細胞が進入しずらく十分な骨形成は認められなかった。また、in vitroで培養中にbFGF、BMPを作用させることにより、両者の作用機序は異なるものの、ともに骨形成の誘導を促進することが分かった。
人体試料中薬毒物の超高感度分析のための大容量試料注入GC/MS装置の開発

最近のGC/MS装置は小型化し、ベンチトップ型としてスペースをとらず、操作なども随分楽になった。しかし、510mlのガス試料や10μl以上の有機溶媒試料を注入すると直ちにイオン源の気圧が上がってしまい、自動的に装置が停止してしまう。特に高感度分析を必要とする場合には大容量注入装置が必須と考えられるが、現在までに便利な装置は開発されなかった。平成16年度から17年度の本研究の進展を述べる。1)構築したシステムの問題点:既に当教室に設置されているGC/MS装置(島津製作所製、GC/MS-QP50550Aを改変し、バルコ社製シャフト付きスイッチングバルブをGCオーブン内に取り付け、実験を開始したが色々の問題点が明らかとなった。(1)専用特殊フェラルを用いて、死腔を生じさせないように、溶融シリカキャピラリーカラムをスイッチングバルブに装着するにはかなりの器用さと技術が必要であることが判明した。(2)GCオーブン温度がマイナス30°Cからプラス300°Cへと広温度領域を上下するため、金属シャフトバルブの膨張と収縮が生じ、さらに付随して使用されている特殊プラスチックもその様な広領域温度変化に対応できるものでなかった。したがって、数回使用するとスイッチングバルブに不具合が生じ、度々バルブを分解して、再度構築する必要が生じ、余りにも実用的でないことが判明した。2)平成17年度における再検討と問題点の克服:以上の問題点を大幅に見直し、しかも自動システムを下記のごとく構築した。(1)ジーエルサイエンスの技術者と今迄の問題点を討議し、シャフト付きスイッチングバルブはGCオーブン外にボックスを設け、ヒーターによって約300°Cで一定温度に保つ。これによって、シャフト金属やプラスチックも安定に保たれ、多数回の使用に耐えることが分かった。(2)バルブ切り替え操作はパソコンによって自動的に行える様に設定した。大容量試料導入後、いつ切り替えるかはパソコンにあらかじめ入力しておけば自由な時間に行うことができ、十分不純物を除いた上で、目的物質画分のみをMSに導入することが可能となった。(3)システムを改変後、ナフタレン、青酸、2-クロロアセトフェノンにつき実験を行ったが、シャープなピークを認め、定量的にも問題なく良好な結果を得たところである。本システムの特許申請も考慮しており、実験を継続中である。研究プロジェクトとしては概ね成功したものと思われる。ミドルボアキャピラリーGC/MSの欠点のつとして、1=2μLの有機溶媒もしくは精々0.1mL程度の気体サンプルしか注入できないことが挙げられる。これまでは、これ以上のサンプルを注入する場合にはスプリット法といって、一定の比率でカラム導入以前に大半を排気し、その数パーセント程度をカラム内に導入する方法しかなかった。今回の研究の特徴は大容量のサンプル中の目的物質の全量をカラム内に導入可能とし、感度を飛躍的に向上させる事を目的とするものである。1)主要設備:すでに当教室に設置されているGC/MS装置(島津製作所製、GC/MS-QP5050A)を大胆に改修した。GC装置の上部金属板に丸い穴をあけ、ジャフト付きバルブをオーブン内に取り付けた。2)スイッチングバルブの選定:ミドルボアキャピラリーGCでは流路に、たとえ10μLの死腔があってもピークが変形し、高感度検出ができなくなることが分かった。そのためスイッチングは極力死腔容量が小さいものを選定する必要がある。さらに、GCオーブン温度は0°C近くの低温から300°C近くの高温の使用に耐えられるものでなくてはならない。種々のメーカーのものを検討した結果、バルコ社製のGCキャビラリー用スイッチングバルブ以外には使用できるものはないことが判明した。その中でも最も構造が単純な3ポジション型で,しかも高温耐熱タイプを選定した。3)スイッチングバルブの取り付けの工夫:もしスイッチングバルブがGCオーブンの外に取り付けることができれば,バルブの切り替えが容易である。GCキャビラリーカラムの遠位端を金属キャビラリーと接続し,断熱的にしながらオーブン外に金属キャビラリーを引き出し,小型恒温槽内のスイッチングバルブに導き,再びオーブンに戻し,MSに導入するシステムを考え実験を行った。ところが,このシステムでは接続部位が4箇所と多く流路に漏れが生じ,しかもナフタレンを試料とした場合には金属キャピラリーにおける少々の冷却でもナフタレンのピークが著名に小さくなり,GCオーブン外スイッチングシステムは総合的に不可能であることが判明した。結局は上記の通り,GC装置の上部金属板に丸い穴を開けシャフト付3ポジション高温バルブを取り付けることにより,一応ナフタレンのシャープなピークを得ることに成功した。次年度では続けてナフタレンを試料として用い,このシステムがどの程度優れているかを検証する予定である。平成15年度には、既に当教室に装置されているGC/MS装置(島津製作所製、GC/MS-QP50550A)を改変し、シャフト付きスイッチングバルブをオーブン内に取り付けた。平成16年度の研究実績は以下のとおりである。1)血中ナフタレンのヘッドスペース(HS)抽出による分析:ナフタレンは単純な構造を有し、EIマススペクトルでm/z128に基準ピークを与え、有機物質の分析モデル実験に使用するのに最適である。しかもオーブン温度50°CでHSガス中のナフタレンを低温オーブントラッピングを用いる事なく、全量カラム内に捕捉できる事を確認した。

全血中でのナフタレンが血球膜の脂質に容易に溶け込む事から、HS法による抽出効率は良好ではなく、1mLのHSガスを従来法で注入した検出限界が100ng/mL程度であったのに対し、本システムでは感度を約5倍上げる事に成功した。2)ナフタレンのアセトニトリル溶液の大容量注入の試み:上記の実験は目的物質を含む大量のガスを注入するものであった。次の目標はやはり目的物質を含む大量の有機溶媒液を注入可能にする事である。通常のGCでは12μLの溶媒液を注入しているが、できる事なら10100μLを注入し、そこに含まれている目的物質全量をMSに導入するのが理想的である。これによりバイアル中の目的物質を効率良くGCに注入する事となり、その分感度が上昇するはずである。まず100ng/mLのアセトニトリル溶液を調整し、溶液の5,10,20,50μLをそれぞれ注入する事を試みた。10μL程度までは問題ないが、それ以上の量では、注入口内とカラム内の気圧が極度に上昇し、接続部分から気体の漏れが生じ始めることが判明した。しかし10μL注入でも従来法に比べて510倍量を注入する事ができ、感度はその分上昇した。現在血中にナフタレンを添加し、シクロヘキサンで液-液抽出した有機層を用いて同様の実験を行いつつある。3)本システムの短所:GCカラムを交換する度にスイッチングバルブを付け替え、フェラールを適当な圧力で絞め直し、各接続部分からの気体の漏れを完全に防止しなくてはならないが、それに慣れるまで技術面で多少時間を要する。スイッチングバルブからのMS導入部分にかけて、少しでも死腔が生じると、検出ピークの立ち上がり部分がブロードになり、測定不能となってしまう。4)短所克服への試み:以上の装置は全て手作りで操作も全てマニュアルで行わなければいけない。好結果、特に再現性を良くするためにバルブの切り替えを自動的にできる装置を開発する必要があり、今後の課題である。最近のGC/MS装置は小型化し、ベンチトップ型としてスペースをとらず、操作なども随分楽になった。しかし、510mlのガス試料や10μl以上の有機溶媒試料を注入すると直ちにイオン源の気圧が上がってしまい、自動的に装置が停止してしまう。特に高感度分析を必要とする場合には大容量注入装置が必須と考えられるが、現在までに便利な装置は開発されなかった。平成16年度から17年度の本研究の進展を述べる。1)構築したシステムの問題点:既に当教室に設置されているGC/MS装置(島津製作所製、GC/MS-QP50550Aを改変し、バルコ社製シャフト付きスイッチングバルブをGCオーブン内に取り付け、実験を開始したが色々の問題点が明らかとなった。(1)専用特殊フェラルを用いて、死腔を生じさせないように、溶融シリカキャピラリーカラムをスイッチングバルブに装着するにはかなりの器用さと技術が必要であることが判明した。(2)GCオーブン温度がマイナス30°Cからプラス300°Cへと広温度領域を上下するため、金属シャフトバルブの膨張と収縮が生じ、さらに付随して使用されている特殊プラスチックもその様な広領域温度変化に対応できるものでなかった。
ヘパラン硫酸による視神経投射機構の解明

ヘパラン硫酸(HS)/ヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)は、網膜視神経組織の発生過程において時間空間的に発現が調節されていることや、軸索ガイダンスに関与する接着因子や受容体、細胞外基質、成長因子のうち多くの分子が結合することから、HS/HSPGが視神経の軸索ガイダンスに重要な因子であると考え、我々は軸索ガンダンスにおける役割に関する研究をおこなった。視神経発生における軸索誘導に関連する因子とHS/HSPGとの相互作用をあきらかにするために、生体内のHS合成に必須の酵素であるEXT1をコンディショナルにノックアウトするEXT1floxマウスを作成した。網膜特異的にCreが発現するトランスジェニックマウス(Dkk3-Cre)とEXT1floxマウスとかけ合わせ、視神経が眼内の視神経乳頭に投射する時期から、網膜組織特異的にEXT1を欠損させることにより、HSの消失した網膜組織における視神経乳頭への軸索投射を観察した。KOマウス(Dkk3-EXT1-nul1)では、著しい視神経乳頭の低形成が見られ、軸索が異所性に網膜を縦断する現象がみられた。さらに、異所性に縦断した視神経は、網膜色素上皮の外側を網目状に異常な投射を示していた。しかし、網膜神経節細胞や視細胞の配列はほとんど異常がなく、網膜の層構造は保たれていた。このようなミスガイダンスは、HS親和性のガイダンス分子であるNetrin-1のKOマウスの表現型と酷似していた。また、脊髄のcommissural axonの投射が、HSとnetrin-1とのinteractionに依存することがEXT1遺伝子改変マウスを用いた実験でしめされ、netrin-1によるガイダンス作用にはHSが密接に関わっていることが示唆された。軸索誘導に関与する接着因子や受容体、細胞外基質、成長因子のうち多くのガンダンス分子が、ヘパラン硫酸(HS)/ヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)に結合する。生体内において、HS/HSPGは、ヘパラン結合性たんぱく質の作用を修飾していることがしられているうえに、我々の研究グループにおいて、HS/HSPGが網膜視神経組織の発生過程で時間空間的に著しく発現上昇していることを示した。したがって、視神経発生における軸索誘導に関連する因子とHS/HSPG殿相互作用をあきらかにするために、生体内のHS合成に必須の酵素であるEXTIをコンディショナルにノックアウトするEXT1遺伝子改変マウスを作成し、視神経の軸索誘導の変化を観察した。網膜特異的にCreをDKK3-CreトランスジェニックマウスをEXT1oxマウスと交配させ、網膜神経節細胞の軸索が伸長し始めた時期特異的にEXT1を欠損させ、視神経乳頭へのガイダンスを評価したところ、視神経乳頭への軸索投射が障害され、視神経乳頭低形成を生じることがしめされた。また、視交叉形成期にEXT1を欠損させると、視交叉を通過した後、対側眼の視神経軸索に沿って逆行性の異常なガイダンス異常を呈することが示され、さらにガイダンス分子のSlitの作用がヘパラン硫酸の欠損により阻害され、視交叉の形成が障害されていることが示された。
カリクレイン・キニン系の研究:遺伝的キニノゲン欠損ラットを用いた解析

1.肝臓からのキニノゲンの分泌異常に関する研究:キニノゲン欠損ラットおよび正常ラットの肝臓細胞のプライマリ-カルチャーの実験において^<35>S-メチオニンの取込み後免疫沈降、SDS-PAGEによって解析した結果、両ラットともに高分子、底分子キニノゲンの生合成においては差はみられなかったが、明らかに欠損ラットの肝細胞では上清へのキニノゲンの分泌量が殆どみられず細胞内により多い量が認められた。また細胞内の局在を調べたところリソソーム分画に多いことが示された。これらの事実からB/N-Katholiek ratの肝臓ではキニノゲンは合成されるが、血中への分泌に異常があることがわかった。2.遺伝的キニノゲン欠損ラットB/N-KatholiekのキニノゲンのcDNAクローニングとCOS細胞における発現の研究:キニノゲン欠損B/N-Katholiek ratおよび正常の同じストレーンのB/N-Kitasato ratの肝臓より、RNAをとりだし、既に報告された正常ラットの高分子キニノゲンcDNA配列を参考にプローブを作成してPCR法により、両ラットの高分子キニノゲンのcDNAを得た。両ラットのcDNA塩基配列の解析により、B/N-Katholiek ratの487番目の塩基のGからAへの変異がみいだされた。従ってこれから、高分子キニノゲンの163番目のアミノ酸においてアラニンからスレオニンへの点変異であることがわかった。そこでこの部位特異的変異を導入したプラスミドを構築しCOS-1細胞に導入し正常と変異キニノゲンの分泌を調べた。その結果A変異体を導入した細胞では高分子キニノゲンは分泌されず細胞内に多いのに対し、Gを含むプラスミドを導入した細胞では高分子キニノゲンは正常の場合同様培養上清中に分泌され、この一アミノ酸置換が分泌異常の原因であると推定された。3.高分子キニノゲンおよび低分子キニノゲンの生体内での役割についての検討:カラゲニン胸膜炎の胸腔滲出液中のキニノゲンについてL鎖を認識する抗体を用いてウエスタンブロットを行った結果、高分子キニノゲンからキニンを遊離したキニノゲンが検出された。一方、ラットの尿中キニンはどのキニノゲン由来であるかを調べるために、キニノゲン欠損ラットを用いてキニノゲンをinfusionし、尿中にあらわれるキニン量を測定した。その結果、底分子キニノゲンをinfusionした場合が高分子キニノゲンの場合に比し、キニン量が有意に高値を示し、ラット尿キニンは血中の底分子キニノゲン由来であると推定された。(1)キニノゲン欠損ラットのB/N-Katholiekの繁殖や生理値また欠損の遺伝形式について;B/N-Katholiekは正常の同系のB/N-Kitasatoと比較して生長曲線、繁殖仔数等において大きな差は認められなかった。両ストレーン間の交配を行い、F_1世代を得た。

B/N-Katholiekの♂とB/N-Kitasatoの♀との交配、又はその逆の組合せの交配を行い、F_1同志から次世代のF_2を得、キニノゲン欠損の出現を血漿中高分子キニノゲン量をRIAで測定して調べた。F_1世代では正常の約50%のキニノゲン量であったが、F_2世代では、キニノゲン量が正常値のもの、中間の値のもの、欠損のものという様に3つのグループに分れた。欠損の出現率は雄性24.2%、雌性で23.3%、平均で23.8%であり、メンデルの常染色体劣性と推定された。(2)B/N-KitasatoとB/N-Kathobikラットの血圧変動:無麻酔下及び麻酔下の観血的血圧測定の結果両ストレーン共に生後8週令から30週令まで大きな変動はみられず、またストレーン間に差は認められなかった。しかし飲料水中に2%の食塩を負荷したところ、B/N-Katholiekラットでは開始後14週後あたりから血圧上昇が認められたが、正常のB/N-Kifasatoラットでは変化が認められなかった。この実験から、高血圧発症の初期にキニンが血圧上昇に防衛的にはたらいている可能性が推定された。(3)大腸菌エンドトキシン(リポポリサッカライド)による血管透過性亢進におけるキニンの関与:エンドトキシンを正常およびキニノゲン欠損ラットの脊部皮内に注射した時にあらわれる血管透過性亢進の程度を、あらかじめ静脈内投与した色素の漏出量で評価すると、キニノゲン欠損ラットでは正常の約50%であった。また正常ラットのエンドトキシンによる色素漏出量は、ブラジキニン受容体拮抗薬のHoe140の併用によって、有意に抑制された。從ってエンドトキシンによる血管透過性亢進に、内因性のキニンの関与が推定された。(日本薬理学会発表予定)〔1〕キニノゲンの病態生理的役割:平成4年度までのキニノゲン欠損ラットを用いた研究によって、カラゲニンやカオリン胸膜炎の胸腔内滲出液貯溜にカリクレイン・キニン系の関与が推定された。そこで本年度はこの胸膜炎の炎症局所において、実際にキニノゲンからキニンが遊離されていることを証明するために、胸膜炎の炎症滲出液中のキニノゲンについてSDS-PAGE後イムノブロットを行った。まず滲出液をゲル濾過クロマトグラフィーにかけ、高分子キニノゲン(HK)分画と低分子キニノゲン(LK)分画をとり、HKのL鎖抗体(HK特異的)およびHK,LK両者を認識する抗体を用いて検討した。その結果滲出液中のHKは、還元パターンではL鎖H鎖に分れブラジキニンを遊離した形で存在するが、LKはインタクトであった。即ちカオリン、カラゲニン胸膜炎ではキニン遊離があるが、ザイモサン、ホルボルエステル胸膜炎ではキニン遊離は認められず、キニノゲン欠損ラットでの結果とよく符合した。〔2〕キニノゲンの生理的役割(尿中キニン):ラットの尿中ではキニン分解活性がヒト尿に比べて強く、またブラジキニンの抗体に反応する蛋白が多く含まれるため、正確なキニン量の測定報告がなかった。今回ラットを麻酔下で輸尿管より尿を採取し、その尿中のキニンを微量定量する方法、即ちSep-pak処理後酵素免疫測定法を用いる方法を確立した。これを用いて測定すると、キニノゲン欠損ラットの尿中キニンは正常に対して有意に低値であった。
新しいゲノム遺伝子相関を創出する脊椎動物特有の遠位エンハンサーによる進化

新奇器官が進化するとき、既存の遺伝子が新たな発現を獲得し新しいネットワークが生まれ器官の発生制御プログラムが完成する。そこでは高度に調律されたシス調節因子の成立が必要である。哺乳類進化にとって重要なステップである胎盤進化はこのモデル系として最適である。胎盤発生とその進化に重要な役割を果たしているHoxA13遺伝子およびDlx3-4遺伝子とその胎盤エンハンサー関連領域を解析するため、まず近年急速に発展しているゲノム編集技術の改良を進めた。連携研究者の理研・岡田康志チームリーダーとの共同研究により独自の改良を加えたsuperTALENによるマウス受精卵への高効率直接ゲノム編集法を確立することに成功した。さらにCRISPR/Cas9システムの改良によりF0世代でほぼ100%ノックアウトを実現する技術を確立した(Sunagawa, Sumiyama et al. Cell reports 2016, Tatsuki et al. Neuron 2016)。この技術を応用してHoxA13遺伝子およびDlx3-4遺伝子コード領域・非コード領域双方の主要因子の各種ノックアウト・ノックインマウス作製を進め、これまでに複数の系統確立に成功した。第一世代のDlx3, Dlx4の遺伝子コード領域ノックアウトマウスの表現型は、Dlx3で胎盤の形成不全・毛の発生異常など、これまでの報告および予想と一致するものであった。今後は非コード領域のノックイン・ノックアウトマウスの作製をさらに進めるとともに、すでに樹立した非コード領域ノックアウトマウスとコード領域ノックアウトマウスとの表現型比較を行い、エンハンサー領域毎の表現型の解析を進めてその進化過程についての考察をまとめていく予定である。27年度が最終年度であるため、記入しない。哺乳類進化にとって重要なステップである胎盤進化は、遺伝子発現制御機構進化のモデル系として非常に興味深い研究対象である。本研究はゲノム編集技術の技術改良を進め、その応用により胎盤発生およびその進化に大変重要な役割を果たしているHoxA13遺伝子、およびDlx3-4遺伝子の胎盤エンハンサーの胎盤独自の機能とその進化を明らかにすることを目的とする。各胎盤エンハンサー領域およびその関連領域を、私たち独自の改良型TALENおよびCRISPR/Cas9システムにより、欠失あるいはコア配列の書換えを行うことで胎盤でのエンハンサー機能が獲得された進化過程を明らかにすることを目指す。本年度は主にゲノム編集技術の改良に焦点を絞り、非コード領域の転写調節領域の欠失や書き換えを行うには既存の技術では時間と手間がかかりすぎるという問題点を克服するため、効率や特異性を高めて交配無しにF0世代での解析を可能にすることを目指した研究を行った。哺乳類での使用により適した性能を持つSuper-active TALENを開発し、これを用いて標準的な実験系統であるC57BL/6Nマウスで30%以上のホモノックアウト個体を細胞質へのmRNA微量注入法により得ることができた。また、CRISPR/Cas9を用いた新しい実験系を確立し、ほぼ100%のホモノックアウト個体をコンスタントに得ることに成功した(論文投稿中)。CRISPR/Cas9は標的配列選定の自由度が低く、ピンポイントにゲノム編集を行うにはTALENが向いていることから、今後さらにSuper-active TALENの改良を進め効率を上げる努力を行う。この技術を用いて、来年度は実際にHoxA13遺伝子およびDlx3-4遺伝子の非コード領域のゲノム編集を行い機能解析する予定である。各胎盤エンハンサー領域およびその関連領域を独自の改良型TALENおよびCRISPR/Cas9システムにより欠失あるいはコア配列の書換えを行うことにより機能解析することを目指す。今年度は特に技術改良により哺乳類での使用により適した性能を持つSuper-active TALENを開発し、これを用いて標準的な実験系統であるC57BL/6NマウスでF0世代で、細胞質へのmRNA微量注入法により30%以上のホモノックアウト個体を得ることができた。

また、CRISPR/Cas9を用いた新しい実験系を確立し、ほぼ100%のホモノックアウト個体をコンスタントに得ることに成功した。初期の目的を達成し、この点で順調に研究は進展している。反面、研究室所在地移転の時期と重なったこともあり、本来のターゲットへの応用実験がまだ進んでおらず、今後応用に集中して実験を進める予定である。27年度が最終年度であるため、記入しない。今後はゲノム編集技術の技術改良の成果を用いて、胎盤発生およびその進化に大変重要な役割を果たしているHoxA13遺伝子、およびDlx3-4遺伝子の胎盤エンハンサーの胎盤独自の機能とその進化を明らかにすることを目的として、ゲノム編集による各胎盤エンハンサー領域およびその関連領域の欠失あるいはコア配列の書換えにより実験を進める。私たち独自の改良型TALENおよびCRISPR/Cas9システム両方を使い分けながら実験を進めるが、改良型TALENは効率の点ではCRISPR/Cas9に一歩譲るものの、任意にピンポイントでターゲットをデザインできる点と、効き方の違い(注入後非常に速く効き、その後速やかに失活する)において優れており、この長所を活かして実験のデザインを行っていく。また単純なノックアウトではほぼ100%の効率を実現できているCRISPR/Cas9システムを活用し機能解析を進め、ゲノム転写調節領域がどのような変化を経て胎盤でのエンハンサー機能を獲得進化したのかを解析していく予定である。
超高圧合成による新規遷移金属化合物の探索と結晶化学

3d遷移金属-メタロイド原子系金属間化合物は,結合の性質が金属結合性にイオン性,共有性が加味され,結晶化学,磁性や電気伝導の振る舞いにおいて興味深い物質群であり機能材料の宝庫ともいわれる.本研究では,遷移金属-メタロイド原子系化合物の超高圧・高温反応,超高圧力下における空格子サイトヘの原子挿入による新規充填構造物質の合成,の2つの視点に立ち,超高圧力下を反応場とした新規遷移金属化合物の探索研究を行い,新しい機能性無機材料の設計に資することを目的とした.1.遷移金属二アンチモン化物(TSb_2)は常圧下においてマーカサイト型構造を有しており,その結合は多分にイオン性を含み形式電荷はT^<4+>[Sb_2]^<4->で表される.超高圧力下での合成を行った結果,CrSb_2においては6GPa以上の圧力領域においてCuA1_2型構造の新規高圧相を得た.マーカサイト型常圧相における局在的な3d電子の性質は,圧力誘起相転移により遍歴性を帯び,遍歴電子による強磁性をしめすようになることを明らかにした.さらに,NiSb_2においてはNiSb_6八面体が稜共有と頂点共有で連結した新しい高圧相を合成し,これらの結果から高圧下における遷移金属プニクタイド,カルコゲナイドの高圧力下の高圧相転移を系統化した.2.体心位置に大きな空洞を有するCoSb_3の結晶格子に,超高圧力下における原子挿入を行い,一連のM_XCo_4Sb_<12>化合物を新たに合成した.特にM=Ge,Sn,Pbを挿入した実験結果から,挿入原子と骨格構造との"結合の強さ"には,挿入原子のサイズ効果が影響することを明らかにした.挿入原子は空洞内で大きな熱振動を示し,その結果として格子熱伝導率の大幅な低減が起こることが判明した.この結果は,新規熱電変換材料の開発研究に重要な指針を与えるものである.3d遷移金属-メタロイド原子系金属間化合物は,結合の性質が金属結合性にイオン性,共有性が加味され,結晶化学,磁性や電気伝導の振る舞いにおいて興味深い物質群であり機能材料の宝庫ともいわれる.本研究では,遷移金属-メタロイド原子系化合物の超高圧・高温反応,超高圧力下における空格子サイトヘの原子挿入による新規充填構造物質の合成,の2つの視点に立ち,超高圧力下を反応場とした新規遷移金属化合物の探索研究を行い,新しい機能性無機材料の設計に資することを目的とした.1.遷移金属二アンチモン化物(TSb_2)は常圧下においてマーカサイト型構造を有しており,その結合は多分にイオン性を含み形式電荷はT^<4+>[Sb_2]^<4->で表される.超高圧力下での合成を行った結果,CrSb_2においては6GPa以上の圧力領域においてCuA1_2型構造の新規高圧相を得た.マーカサイト型常圧相における局在的な3d電子の性質は,圧力誘起相転移により遍歴性を帯び,遍歴電子による強磁性をしめすようになることを明らかにした.さらに,NiSb_2においてはNiSb_6八面体が稜共有と頂点共有で連結した新しい高圧相を合成し,これらの結果から高圧下における遷移金属プニクタイド,カルコゲナイドの高圧力下の高圧相転移を系統化した.2.体心位置に大きな空洞を有するCoSb_3の結晶格子に,超高圧力下における原子挿入を行い,一連のM_XCo_4Sb_<12>化合物を新たに合成した.特にM=Ge,Sn,Pbを挿入した実験結果から,挿入原子と骨格構造との"結合の強さ"には,挿入原子のサイズ効果が影響することを明らかにした.挿入原子は空洞内で大きな熱振動を示し,その結果として格子熱伝導率の大幅な低減が起こることが判明した.この結果は,新規熱電変換材料の開発研究に重要な指針を与えるものである.3d遷移金属-メタロイド原子系金属間化合物は、結合の性質が金属結合性にイオン性、共有性が加味され、結晶化学、磁性や電気伝導の振る舞いにおいて興味深い物質群であり機能材料の宝庫ともいわれる。本研究では、超高圧力下を反応場とした新規遷移金属化合物の探索研究を行うことを目的とする。初年度にあたる本年度には、アンチモン化物を中心に新規物質の探索を行い、CrSb_2において、圧力誘起によるマ-カサイト型構造からCuAl_2型構造への相転移が起こることを明らかにした。この相転移はイオン性から金属性への結合の性質の変化を伴うものであり、電気的・磁気的性質も低圧相(マ-カサイト型)における局在性(反強磁性半導体)から高圧相(CuAl_2型)では遍歴性(強磁性金属)へと変化することが判明した。CoSb_3は、体心位置が空格子点となるスクッテルド鉱型結晶構造を有する。この構造を有する一群の化合物は熱電変換材料として有望であり、熱電特性の向上、制御を目的として、超高圧力下における空格子サイトへの原子挿入を試みた。その結果、CoSb_3の空格子サイトには金属半径で1.7Å程度までの原子挿入が可能で、挿入できる原子の量は合成圧力の上昇とともに増加してゆくことは明らかとなった。

本年度に見いだしたマ-カサイト型からCuAl_2型構造への相転移は新しい型の圧力誘起転移であり、次年度以降もプニクタイドやカルコゲナイドを対象に同様の相転移を示す物質系を探索する。また、スクッテルド鉱型関連化合物に関しては、熱電特性の評価にも着手する予定である。3d遷移金属-メタロイド原子系金属間化合物は、結合の性質が金属結合性にイオン性、共有性が加味され、結晶化学、磁性や電気伝導の振る舞いにおいて興味深い物質群であり機能材料の宝庫ともいわれる。本研究では、超高圧力下を反応場とした新規遷移金属化合物の探索研究を行うことを目的とする。本年度は昨年度に引き続き、アンチモン化物を中心に新規物質の探索を行い、TSb_2組成のダイアンチモナイドにおけるマーカサイト型からQIAl2型構造への圧力誘起相転移とそれに伴う非金属一金属転移を検討した。OSb_2において見出された高配位構造への圧力誘起相転移では,常圧相に固有のSb-Sb共有結合ダイマーが弱められ,より金属的な結合に移行するものと考えられた。また,体心位置に大きな空洞を有するスクッテルド鉱型結晶構造に,超高圧力下における空格子サイトへの原子挿入を試みた。その結果、CoSb_3の空格子サイトには金属半径で1.7Å程度までの原子挿入が可能で、挿入できる原子の量は合成圧力の上昇とともに増加してゆくことが明らかとなった。特にGe,Sn,Pbを挿入した一連の実験結果から,挿入原子と骨格構造との“結合の強さ"には,挿入原子のサイズ効果が影響することを明らかにした。Sn原子を挿入した場合,8GPaにおける反応では体心位置の空格子は完全にSn原子で占有され,そのSn原子は非常に大きな熱振動を示すことがリートベルト法による結晶構造解析により明らかとなった。これらの原子挿入反応は,熱電材料として有望なスクッテルダイト型化合物群の性能向上のキーポイントとなる。3d遷移金属-メタロイド原子系金属間化合物は,結合の性質が金属結合性にイオン性,共有性が加味され,結晶化学,磁性や電気伝導の振る舞いにおいて興味深い物質群であり機能材料の宝庫ともいわれる.本研究では,遷移金属-メタロイド原子系化合物の超高圧・高温反応,超高圧力下における空格子サイトへの原子挿入による新規充填構造物質の合成,の2つの視点に立ち,超高圧力下を反応場とした新規遷移金属化合物の探索研究を行い,新しい機能性無機材料の設計に資することを目的とした.1.遷移金属二アンチモン化物(TSb_2)は常圧下においてマーカサイト型構造を有しており,その結合は多分にイオン性を含み形式電荷はT^<4+>[Sb_2]^<4->で表される.超高圧力下での合成を行った結果,CrSb_2においては6GPa以上の圧力領域においてCuAl_2型構造の新規高圧相を得た.マーカサイト型常圧相における局在的な3d電子の性質は,圧力誘起相転移により遍歴性を帯び,遍歴電子による強磁性をしめすようになることを明らかにした.さらに,NiSb_2においてはNiSb_6八面体が稜共有と頂点共有で連結した新しい高圧相を合成し,これらの結果から高圧下における遷移金属プニクタイド,カルコゲナイドの高圧力下の高圧相転移を系統化した.2.体心位置に大きな空洞を有するCoSb_3の結晶格子に,超高圧力下における原子挿入を行い,一連のM_xCo_4Sb_<12>化合物を新たに合成した.特にM=Ge,Sn,Pbを挿入した実験結果から,挿入原子と骨格構造との"結合の強さ"には,挿入原子のサイズ効果が影響することを明らかにした.挿入原子は空洞内で大きな熱振動を示し,その結果として格子熱伝導率の大幅な低減が起こることが判明した.
認知症高齢者の自己決定支援に対するケアスタッフの意識・ケアの変化

2017年度までの研究で,認知症高齢者に対する看護・介護スタッフによる日常生活における継続的な自己決定支援介入が,認知症高齢者の前頭葉機能,精神機能,生活の質を有意に向上させることを明らかにした。また支援する側のスタッフにも,認知症高齢者に対する苛立ちなどのネガティブな感情表現の低下傾向がみられるということも明らかにした。この結果から自己決定支援は,認知症高齢者だけでなく,スタッフにも良い影響を及ぼす支援である可能性が示された。しかし一方で,スタッフの支援実施に対する自記式質問紙の記述からは,多忙な日常業務の中での自己決定支援の難しさ,明確な意思を示されない方もおられる中での支援継続の困難さが示された。ゆえに,より継続的な支援の実施には,研究者と実践現場のスタッフが協働し,認知症高齢者の自己決定支援を進めていく上での課題を抽出し,解決方法を考えながらともに行動する必要があると考えられた。2018年度は,A病院の研究協力の同意を得て,認知症治療病棟の看護スタッフとの共同研究を開始した。共同研究者である看護師長・看護主任との話し合い,および研究者の3日間の病棟研修を経て,スタッフが現在抱えている課題(日常生活援助に対する拒否,ケア実施に対する負担感など)の解決なしには,「自己決定支援」に向かうことは難しいと考えられた。ゆえにまず「スタッフが今,困っていること」を抽出し,解決に向けた行動(定期的な学修会と事例検討によるケアの振り返り)の実施,評価(質問紙調査の実施)を行い,徐々に「自己決定」に焦点を当てていくこととした。2018年12月にスタッフに対する1回目の質問紙調査を実施し,現時点での困りごとは「意思疎通が難しい」「指示・説明が伝わりにくい」「介護抵抗・援助者への暴力がある」などであった。現在計3回の学修会を実施しており,今後も継続していく予定である。・自己決定支援介入の効果を検証する中で,追加調査の必要性がでたため,介護老人保健施設において追加調査を実施した・アクションリサーチとして共同研究を実施できる施設の選定に時間を要した2018年度に実施したスタッフへの質問紙調査の結果から,研究者間で現状を分析し,2019年度の研究の進め方を次のように計画している。1学修会の進め方としては,質問紙調査の中で「ケアが困難と感じる理由」「今後希望する研修会のテーマ」として挙がっていた内容の中からテーマを選定し,講義と事例検討を組み合わせて実施する。勤務状況によっては学修会に参加が難しいスタッフが居るため,多くのスタッフが参加できるように検討する。また,現時点では学修会の企画・運営は研究者が主体となっておこなっているが,徐々に,現場スタッフが主体となった学修会の実施を促していきたいと考えている。2取り組みの評価としては,45か月毎の質問紙調査を実施する。次回は56月に実施予定である。本研究では、アクションリサーチという手法を用い、認知症高齢者を取り巻く環境が変化することを目指している。当該年度の目標は、自己決定支援が目指す方向性を明確にすることであった。応募者は、昨年度までの科研費研究課題として、認知症高齢者に対する生活における自己決定支援の効果を明らかにするための研究を実施しているが、自己決定支援の方向性を明確にするためにはデータ数が不足していると考え、今年度は追加調査を実施した。研究の実施期間は平成28年5月10月で、調査対象者は高齢者施設で生活する認知症高齢者9名、および協力棟に勤務するケアスタッフ15名であった。支援方法は、渡辺の作成した「自己決定支援プロトコル」をケアスタッフに説明し、日常生活援助の中でプロトコルに沿った支援を連続8週間実践していただく、というものであった。アウトカム評価得点の前後比較を行い、介入効果を検証した。その結果、認知症の人の前頭葉機能、精神機能、生活の質を評価する尺度の有意な改善がみられた。一方で、支援者となったケアスタッフの意識を評価する尺度の有意な変化は認められなかった。以上より自己決定支援が、認知症の人の精神機能の低下を防ぎ、前頭葉機能を高め、生活の質を向上させる可能性があることを示すことができた。しかしながらケアスタッフの意識や態度は、手順にのっとったケアを実践するのみでは、十分に変化しないということもわかった。今後は、ケアスタッフの意識や態度の変化を目指し、ケアスタッフとともに支援方法を検討していく必要があると考えている。当初の計画では、平成28年度は今までの研究結果のまとめを行い、自己決定支援の目指す方向性を検討する予定であったが、追加調査を実施したため研究結果のまとめと方向性の検討は次年度以降で実施する。平成29年度は、1スタッフによる日常的な自己決定支援が認知症高齢者とスタッフ双方に及ぼす効果を検証する2認知症看護認定看護師の看護職との連携方法について明らかにする、という2点を実施した。渡辺は平成29年度までに、介護老人保健施設で生活する認知症高齢者16名に対して、スタッフ27名(看護職9名・介護職18名)の協力を得て、生活における自己決定支援介入を実施している。スタッフは、介入実施者であり研究対象者である。認知症高齢者への介入の効果としては、介入前後の前頭葉機能検査(p=0.007),精神機能障害評価票(p=0.014), QOL評価尺度(p=0.005)の有意な改善が認められた。

介入を実施したスタッフの効果としては、介入前後の労働感情尺度の「患者へのネガティブな感情表現」が低下傾向(p=0.079)にあったが、共感経験尺度などの変化はなかった。支援実施についてのスタッフアンケートより、支援の良さを感じながらも、多忙な業務の中での支援継続の難しさを感じていたことが伺えた。これらから、自己決定支援は認知症高齢者の精神、生活によい影響を与えるが、継続的な自己決定支援の実施により認知症の人を取り巻く環境の変化までを目指すためには、臨床現場で支援を実施するスタッフが主体となって、より実践可能な方法を検討することの必要性が示されたと考える。さらに、認知症看護認定看護師と、その他の看護職との協働のあり方を知るために、認知症看護認定看護師1名に対して面接調査を行った。その結果、看護実践を他看護職に伝えるために認定看護師は、他の看護職自身に実践・体験してもらうための支援、成長を促すための環境調整などを実施していることが示された。認定看護師と他の看護職との連携方法を知ることで、臨床現場で自己決定支援をすすめていくための示唆を得ることができると考え、次年度は追加の面接調査を実施する予定である。当該年度は、研究グループの立ち上げまでを行う予定であった。しかし、研究グループの立ち上げには至っていない。本研究は、臨床看護師との協働によって、実践現場に変化をもたらすことを目指す研究である。それゆえに、共同研究者となる臨床看護師のみではなく、勤務するすべての看護職の同意を得ることが必要不可欠である。しかし現時点では、全てのスタッフの積極的な参加を得るまでの関係性構築が期待できる協力施設を確保することができていない。よって、当初の計画と比較し、やや遅れていると考えている。2017年度までの研究で,認知症高齢者に対する看護・介護スタッフによる日常生活における継続的な自己決定支援介入が,認知症高齢者の前頭葉機能,精神機能,生活の質を有意に向上させることを明らかにした。また支援する側のスタッフにも,認知症高齢者に対する苛立ちなどのネガティブな感情表現の低下傾向がみられるということも明らかにした。この結果から自己決定支援は,認知症高齢者だけでなく,スタッフにも良い影響を及ぼす支援である可能性が示された。しかし一方で,スタッフの支援実施に対する自記式質問紙の記述からは,多忙な日常業務の中での自己決定支援の難しさ,明確な意思を示されない方もおられる中での支援継続の困難さが示された。ゆえに,より継続的な支援の実施には,研究者と実践現場のスタッフが協働し,認知症高齢者の自己決定支援を進めていく上での課題を抽出し,解決方法を考えながらともに行動する必要があると考えられた。2018年度は,A病院の研究協力の同意を得て,認知症治療病棟の看護スタッフとの共同研究を開始した。共同研究者である看護師長・看護主任との話し合い,および研究者の3日間の病棟研修を経て,スタッフが現在抱えている課題(日常生活援助に対する拒否,ケア実施に対する負担感など)の解決なしには,「自己決定支援」に向かうことは難しいと考えられた。ゆえにまず「スタッフが今,困っていること」を抽出し,解決に向けた行動(定期的な学修会と事例検討によるケアの振り返り)の実施,評価(質問紙調査の実施)を行い,徐々に「自己決定」に焦点を当てていくこととした。2018年12月にスタッフに対する1回目の質問紙調査を実施し,現時点での困りごとは「意思疎通が難しい」「指示・説明が伝わりにくい」