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ロシア問題による江戸幕府対外政策の動揺と境界領域社会

18世紀末19世紀初頭の蝦夷地におけるロシア問題が、日本にどのような影響を与え、いかなる状況変化がみられたのか、この点について、1ロシア問題に関して境界権力が行った諜報活動の実態把握、2収集した情報の活用と政策の展開、3幕府対外政策の展開と境界領域社会の変化(特に軍役、身分制)の三つを課題として、政治史の立場から検証した。そしてここで導き出された成果を踏まえて、4当該期の日本における危機管理体制再構築の時代的特質を解明した。本年度は、昨年度の成果をふまえて「幕府対外政策の展開と境界領域社会」をテーマに分析を行い、寛政文化期の関係史料を収集した。研究成果としては、1)真贋は別として対外的な危機感を日本社会に煽る情報が、対外政策に直接的な影響を及ぼしていなかったことが確認できた。検証すべき課題であるが、情報分析がどういった形であったにせよ機能していたためであろうと推測される。2)有事における対策を比較分析した結果、軍事戦略的な面だけ整備した地域もあれば、ほぼすべての住人の安全確保まで計画された事例もあり、地域によって取り組み方が違っていたことが明らかになった。これは領主の危機意識と有事対応の想定規模の違いからみられる現象と言えるが、国家的規模での有事対応策が構築されなかったところに幕藩体制の限界であったという評価もできよう。これらについては、松尾晋一『江戸幕府と国防』(講談社、2013)のなかで紹介している。なお、史料収集については、天理大学図書館、神宮文庫、県立対馬歴史民俗資料館などで調査を行った。18世紀末19世紀初頭の蝦夷地におけるロシア問題が、日本にどのような影響を与え、いかなる状況変化がみられたのか、この点について、1ロシア問題に関して境界権力が行った諜報活動の実態把握、2収集した情報の活用と政策の展開、3幕府対外政策の展開と境界領域社会の変化(特に軍役、身分制)の三つを課題として、政治史の立場から検証する。そしてここで導き出された成果を踏まえて、4当該期の日本における危機管理体制再構築の時代的特質を解明することを研究の目的とした。研究の目的を達成するため、函館市立中央図書館、東京大学史料編纂所、九州大学、県立対馬歴史民俗資料館、松浦史料博物館、韓国国史編纂委員会、天理大学図書館、神宮文庫で調査させていただき、資料撮影及び調書の作成を行い、分析を行った。その結果、この時期真贋は別として、日本社会に対外的危機感を煽る情報がかなりの量流通していたが、その分析や活用については、地域、身分などによって異なり、日本全体で考えると斑のある状態であった。これは危機意識と有事の想定規模が各々で異なり、国家的規模での対応策を幕府が構築できなかったところにあるが、幕藩体制という国家システムの限界と読み取ることもできるだろう。ただそうした中にあって、長崎のようにほぼすべての住人の安全確保まで計画された事例もあり、身分や性差などに拘らず、人命の安全確保を優先した現代に近い危機対応を構築した事例があったことには注目する必要はある。本年度は、ロシア問題に関して境界権力が行った諜報活動の実態把握を目的として史料収集および分析を行った。研究成果としては、1)大名家にとっての情報入手先は、幕府、他大名のほか、商人など幅広い階層であったことが明らかになった。2)国元では集積された情報の質が判断できず、同レベルで情報を扱う大名家が多い傾向にあることもわかった。3)国元に集積された情報が、江戸、大坂、長崎の屋敷や飛地などの出先機関へあまり流されない傾向があることが明らかになった。また、寛政9年(1797)の釜山浦への異国船漂着、対馬近海での異国船出没に関する史料がまとまって収集できたことから分析を行い、1)実際はイギリス船であったが、情報がないなかではロシア船である可能性が高いと判断して、宗家や幕府が対応したこと。2)宗家だけで対応できない時は、松浦家と大村家に援兵を求めるように幕府が指示したこと。3)対馬海峡での状況を受けて幕府は蝦夷地への警戒を強め、松前・南部・津軽の三家に警備強化を指示したこと、などが明らかになった。これらの点については、「境界領域における「異国船」問題ー寛政期の対馬海峡を事例としてー」(長崎県立大学国際情報学部研究紀要)を執筆し、研究報告「寛政期における対馬宗家の有事対応と幕府対外政策」を行った(九州史学研究会近世史部会)。また『新長崎市史第二巻近世編』(分担執筆)にも成果の一部を紹介した。なお、史料収集については、函館市中央図書館、東京大学史料編纂所、九州大学、県立対馬歴史民俗資料館、松浦史料博物館、韓国国史編纂委員会などで調査を行った。申請時の研究計画に従って史料収集や分析、成果の公開などを行ってきたが、まず史料収集は松江藩や浜田藩について十分にできなっかった。この点はすぐに着手したいと思う。次に分析だが予定通り作業を進めることができており、成果の公開についても順調なペースで行えている。

申請時の研究計画に従って史料収集や分析を行ってきたが、まず史料収集については、概ね予定通り作業を進めることができた。ただ、韓国の調査を前倒して実施した結果、日本海側で早い段階から積極的に海防強化に取り組んだ松江藩や浜田藩の史料収集ができなかった。従って次年度は、まずこの調査に着手したいと考えている。分析については、予定通り作業を進めることができており、成果報告も順調なペースで行えている。「ロシア問題に関して境界権力が行った諜報活動の実態把握」「収集した情報の活用と政策の展開(大名家を対象)」「幕府対外政策の展開と境界領域社会」といった本研究の柱になるテーマについては、史料収集・分析作業を継続して行い、研究対象時期の日本における危機管理体制再構築の時代的特質を前後の時代と比較して検討していく。ロシア問題に関して境界権力が行った諜報活動の実態把握と大名家における収集した情報の活用と政策の展開に関する分析を継続して行い、幕府対外政策の展開と境界領域社会の関係に関する分析を行っていく。具体的には、1)「津軽海峡・蝦夷地」「松江・隠岐」「対馬海峡」「長崎」の海域警戒に関係した大名家の分析を行う。2)1)の研究成果を踏まえた比較分析から境界領域としての共通性と独自性を抽出する。3)幕府対外政策の境界領域社会への影響について分析する。史料調査を計画していたものの実行できなかった分が、翌年度繰越金となった。この分も含めて、史料調査を計画的に実施したいと思う。これ以外については、昨年度に引き続き研究関連書籍の購入や史料撮影など行い、適切に研究費を使用していきたいと考えている。当初の研究費使用計画ではパソコンを購入する予定であったが、購入しなかったのでその分が翌年度繰越金となった。これは本年度購入する予定である。本年度も、昨年度に引き続き研究計画に従って北海道、東京などで調査するとともに、島根調査を実施する。また、研究関連書籍の購入も昨年度同様に行い、場合によっては史料も購入したいと考えている。
顔面補綴用内部色素の熱および紫外線安定性に関する実験的研究

顔面補綴物の急速な色調変化を引き起こす原因のひとつと考えられている内部色素に関し、既にその三原色である〔赤〕と〔青〕については定量法を確立し、その変化の動態を明らかにした。今回は、その定量法か未解決であった〔黄〕について、新たに微分スペクトル法を応用し、臨床に即した各種の製作時加熱条件ならびに製作後紫外線照射による負荷実験を行い、これらによる変化を存在量の定量から検討し、これまでに得られている〔赤〕、〔青〕との比較を行った。負荷条件は、製作時の加熱では、75°Cで加熱時間80、140、200、260分の4群、125°Cで40、70、100、130分の4群で、これらを室温72時間硬化群をコントロールとした存在率で評価した。また、紫外線照射では、75°C260分群、125°C130分群に対し計1008時間の照射を行った。測定は144時間照射ごとに計7回行い、照射前をコントロールとした存在率で評価した。今回の研究によって得られた結果をまとめると以下のとおりである。1.加熱では、75°Cの各群とも存在率に変化は認められず、〔赤〕、〔青〕と同様であった。また、125°Cの各群も存在率にほとんど変化は認められず、130分加熱で96%であった〔赤〕、93%であった〔青〕と異なった。2.紫外線照射では、75°C260分群は照射時間の増加に伴なって存在率の減少が認められ、最終の1008時間照射時で存在率91%であった。これを〔赤〕、〔青〕と比較すると、70%であった〔赤〕より大きく、91%であった〔青〕とは同様であった。また、125°C130分群を照射時間の増加に伴なって存在率の減少が認められ、最終の1008時間照射時で存在率80%であった。同様に〔赤〕、〔青〕と比較すると、74%であった〔赤〕より大きく、95%であった〔青〕より小さかった。以上より、内部色素〔黄〕は製作時の加熱、製作後の紫外線照射により、〔赤〕、〔青〕と異なる変化をすることが明らかとなった。
動脈硬化形成における生体内ストレス応答調節機構の解明

動脈硬化の形成には小胞体(ER)ストレス応答や炎症反応、酸化ストレス反応といった生体内反応が相互に影響を及ぼしあうことが重要である。ERストレスを抑制性に調節しているWFS1は血管壁構成細胞やMφに発現していることから、WFS1欠損マウス(KO)を用いて動脈硬化における生体内ストレス応答の役割を検討した。WFS1 KOではカフ傷害による血管リモデリングと粥状動脈硬化進展が増悪しており、血管の生体内ストレス応答の亢進が認められた。WFS1はERストレスを調節しているのみならず、in vitroの検討から生体内ストレス応答を直接抑制しており、動脈硬化形成に対して抑制的に働いていると考えられた。本研究の目的は、動脈硬化の形成における、小胞体ストレス応答や炎症反応、酸化ストレス反応といった生体内反応が相互に影響を及ぼしあうことの重要性を検討することである。二年目である平成25年度は、これまでに得られたWFS1欠損マウスの動脈硬化進展傾向を確認するため、検体数を増加し検討を行った。即ち、カフ傷害による内膜肥厚モデルとアポE欠損マウスを背景にした粥状動脈硬化モデルについて、それぞれ50匹以上の検討を重ね、WFS1欠損群において有意な内膜肥厚と粥状動脈硬化面積の増加を認めた。培養細胞を用いたWFS1遺伝子のノックダウンによる検討や、単離マクロファージを用いた検討では、WFS1発現抑制あるいは欠損細胞において、酸化ストレスや炎症反応、小胞体ストレス応答の亢進を認め、WFS1欠損マウスの動脈硬化進展の表現型の機序のひとつであると考えられた。動脈硬化進展において、血管壁構成因子あるいは血球構成因子のいずれのWFS1の寄与度が大きいか検討するために、骨髄移植を行い解析をおこなった。カフ傷害による反応性内膜肥厚を検討したところ、血球細胞にWFS1を欠損したマウスでは、内膜肥厚が有意に進行していたことから、炎症反応性血管リモデリングには骨髄細胞由来のWFS1が重要であると考えられた。また同様の骨髄移植による検討を粥状動脈硬化モデルでおこなったところ、血球細胞のみにWFS1を有するモデルでも、血球細胞にのみWFS1を欠損したモデルでもほぼ同等の動脈硬化を認めたことから、粥状動脈硬化の進展に対しては血球、血管双方のWFS1が同程度寄与していることが示唆された。H25年度の研究から、血管障害・動脈硬化の進展においてWFS1が重要な役割を果たしており、炎症反応性血管リモデリングと粥状動脈硬化の進展に対しては、異なった組織のWFS1が作用していると考えられた。本研究の目的は、動脈硬化の形成における、小胞体ストレス応答や炎症反応、酸化ストレス反応といった生体内反応が相互に影響を及ぼしあうことの重要性を、その調節メカニズムも含めて詳細に検討することである。初年度である平成24年度は、これまでに得られた予備実験のデータを基に、実験回数を増やし表現型を確認することから始めた。まず8週齢のWFS1欠損マウスを用いて、片側の大腿動脈にカフ傷害を施し、3週間後に同部位の動脈を採取、内膜の肥厚度の検討や免疫組織学的検討を行ったところ、WFS1欠損群で有意に肥厚が増大していた。また、カフ留置部位の血管からmRNAを抽出し、炎症反応や小胞体ストレス、酸化ストレス応答に関連した分子の発現を検討したところ、同部位における動脈硬化惹起性の分子の発現が増強していることが確認された。以上から、WFS1を欠損することで、炎症に由来する血管リモデリングが増強され、血管病変の進展を増悪する方向に作用していることが示唆された。次に、高コレステロール食を負荷したWFS1・アポE二重欠損マウスを作成し、粥状動脈硬化におけるWFS1の役割を検討した。大動脈全体の内面を脂肪染色を用いて動脈硬化病変を定量化したところ、20週齢を過ぎた時点からWFS1欠損群で著しい動脈硬化の進展を認めた。次に、in vivoでの検討では、反応の因果関係を含め詳細な分子メカニズムを明らかにするのは難しいため、動脈硬化形成に強く関与しているMφや血管内皮、平滑筋の各培養細胞を用いて様々な検討を行った。siRNAの手法を用いてWFS1をノックダウンしたところ、各種培養細胞における酸化ストレスや炎症反応、小胞体ストレス反応が増悪する傾向を認め、やはりWFS1は血管保護的に作用している可能性が、培養細胞レベルでも示唆された。最終年度である平成26年度は、これまでカフ傷害モデルや粥状動脈硬化モデルから得られたWFS1欠損マウスの動脈硬化進展のメカニズムを解析するため、血管壁での遺伝子解析と培養細胞における検討に多くの時間をかけた。

カフ傷害によって内膜が肥厚した部位での遺伝子発現をWFS1の有無で検討したところ、肥厚の進展しているWFS1欠損群においてMCP-1やIL-6といった炎症性因子、またSDF-1αやPDGF-Bといった平滑筋増殖因子の発現が増強していることが明らかとなった。一方で、粥状動脈硬化の進展がみられる高コレステロール血症WFS1欠損群の大動脈では、同様にMCP-1などの炎症性因子の発現が増強していた。さらにNADPHoxidaseのサブユニットの発現が増強していたことから血管における酸化ストレスの増強が推察され、その結果と思われるがSODやcatalaseといった酸化ストレス消去系の発現上昇も認められた。また小胞体ストレス応答関連因子もWFS1欠損群の血管で発現上昇が認められ、WFS1が血管における酸化ストレスや小胞体ストレス応答を調節し、動脈硬化の進展にも重要な役割を果たしていると考えられた。また血管内皮細胞や血管平滑筋細胞といった培養細胞において、siRNAを用いてWFS1をノックダウンしたところ、内皮細胞では接着因子の発現亢進が、平滑筋細胞では増殖因子の発現亢進が認められ、in vitroの検討からもWFS1が動脈硬化に関連する様々な因子の調節に関わっていることが明らかになった。H25年度の研究から、血管障害・動脈硬化の進展においてWFS1が重要な役割を果たしており、炎症反応性血管リモデリングと粥状動脈硬化の進展に対しては、異なった組織のWFS1が作用していると考えられた。医歯薬学交付申請書に記載した研究目的は、おおむね順調に達成していると判断している。WFS1欠損が動脈硬化惹起性に作用することを数多くのマウスを用いた実験を行うことで確かな傾向を得て、自信を持って研究を進めることができた。また骨髄移植の検討により、血管障害・動脈硬化の進展における、異なった細胞・組織のWFS1の役割について解析を進めることができたのは、大きな進歩であると考えている。粥状動脈硬化モデルであるWFS1・アポE二重欠損マウスの育成には時間を要するため、骨髄移植に供することができた匹数は少なかったが、次年度はさらに解析可能な検体が増え、データを蓄積していけるものと考えている。交付申請書に記載した研究目的は、おおむね順調に達成していると判断している。以前から行っていた予備実験で得られている傾向を、30ー40匹を用いた検討で傾向を確認することができ、仮説に自信を持って研究を進めることができる。カフ傷害を施す検討は、安定した結果を得るためには、手技に習熟することが肝要であるが、繰り返し実験を行うことで実験に信頼性をすでに確保している。また申請時には既にWFS1・アポE二重欠損マウスは完成していたが、粥状動脈硬化の検討は半年前後を要するため、結果が得られるのに時間を要する。この点に関しても、該当年度の後半から解析が可能となり結果が得られている。次年度以降はさらに解析可能な検体が増え、データを蓄積していけるものと考えている。マウス血管壁全体における、生体内ストレス応答遺伝子の発現を検討してきたが、今後はレーザーマイクロダイセクションの手法を用いて、内膜肥厚部や粥状動脈硬化部を限局して採取し、遺伝子発現を検討していきたいと考えている。
隋唐時代の仏舎利信仰と荘厳に関する総合的調査研究

隋唐時代の仏舎利信仰と荘厳に関して〔場所〕、〔表現〕、〔受容〕という従来にない独創的な観点から、以下のような研究成果をあげることができた。〔場所〕仁寿元(601)年に隋文帝が建立を指示した16の寺院のうち7ヶ寺の起塔地を特定した。〔表現〕仁寿舎利塔の現存唯一の遺物である陝西省耀州神徳寺址出土の舎利石函の図様が儒仏道の習合という観点から分析される必要があることをつきとめた。〔受容〕仁寿舎利塔址に遺存する碑文や舎利容器の器形変化の分析を通して、「仁寿舎利塔をめぐる後代の受容史」という、新たな問題の重要性が明らかとなった。本年度は以下のような調査研究を実施した。1.事前協議及び交渉年度初めに研究代表者(加島)が中国陜西省西安市に赴き、中国側研究協力者と本年度の現地調査に関して協議を行なった。2.現地調査平成21年9月及び平成22年2月に中国陜西省及び河南省において、(1)仁寿舎利塔起塔寺院、(2)仁寿舎利塔址出土遺物と隋代関連遺物、(3)慶山寺舎利塔址出土遺物、(4)関連岳廟と墳墓壁画に関する調査を行なった。3.収集データの整理と解析現地調査で得られたデータ(測位データ、調書、画像、銘文、材質分析等)を整理し、ハードディスク上に蓄積し、研究分担者の各専門分野からの解析を行なった。4.研究会年度後半に研究代表者及び研究分担者の参加による研究会を行ない、本年度の調査結果を共同で分析した上で、意見交換により問題点を整理し、次年度の調査研究に備えた。本調査研究は、隋唐時代の舎利荘厳に注目し、その実際を美術史(彫刻史、絵画史、工芸史)、考古学、歴史学、保存科学を専門とする研究分担者が詳細に調査し、基礎資料を集積するとともに、造形美術を通して浮かび上がる信仰と思想について総合的に考察を加え解明することを目的としている。1.現地調査:年度半ばに中国山東省・河北省・山西省・陝西省を対象地域とし、(1)仁寿舎利塔起塔寺院実査、(2)仁寿舎利塔出土遺物と隋代関連遺物、(3)唐代舎利塔寺院実査、(4)唐代出土関連遺物、(5)関連岳廟・墳墓壁画に関する調査を行なった。2.収集データの整理と解析:(1)現地調査で得られたデータ(測位データ、調書、画像、銘文、材質分析等)を整理し、コンピュータ上に蓄積した。(2)蓄積された調査データについて研究代表者、共同して美術史(彫刻史、絵画史、工芸史)、考古学、歴史学、保存科学の各分野からの解析を行なった。3.研究会:収集データの整理と解析終了後、研究代表者及び研究分担者の参加による研究会を行ない、これによって得られた結果を共同で分析した上で、意見交換により、問題点を整理し次年度(最終年度)の調査研究に備えた。本調査研究は隋唐時代の舎利荘厳に注目し、その実際を美術史(彫刻史、絵画史、工芸史)、考古学、歴史学、保存科学を専門とする研究分担者が詳細に調査し、基礎資料を集積するとともに、造形美術を通して浮かび上がる信仰と思想について総合的に考察を加え解明することを目的としている。1.現地調査:年度半ばに中国甘粛省・青海省・江蘇省・浙江省を対象地域とし、(1)仁寿舎利塔起塔寺院実査、(2)仁寿舎利塔出土遺物と晴代関連遺物、(3)唐代舎利塔寺院実査、(4)唐代出土関連遺物、(5)関連岳廟・墳墓壁画に関する調査を行なった。3.研究会:収集データの整理と解析終了後、研究代表者及び研究分担者の参加による研究会を行ない、これによって得られた結果を共同で分析した上で、意見交換により、問題点を整理した。保年度は本研究の最終年度なので、3カ年の研究成果を研究成果報告書(概報)にまとめた。
放射線治療における臨床的QAのためのデジタル画像照射野照合システムの研究

(1)ずれ(セットアップエラー)検出の基礎として、頭部ファントムを用いて、全脳照射を例に左右方向の撮影を例として、イメージ面に平行なx、yの2方向(頭-足、腹-背方向)の移動、及びx、y、x3軸に対する回転のずれ(ピッチ、ヨー、ロール)に関するリニアックグラフィーでの目視による検出能について調べた。移動のずれよりも回転のずれが検出しにくかった。イメージ面と垂直な軸での回転(ヨーイング)で検出能が高く、その他の2軸では低くなった。(2)位置決め画像及び、リニアックグラフィーそれぞれに対しる補正を適性にするための検討を行った。軟部陰影に起因するベースの露出の差は、フーリエ変換による周波数空間での低周波成分の除去と逆フーリエ変換により補正可能であった。投影像であることに因する拡大率の補正の校正のため頭部ファントムに金属マーカを用いて行った。(3)照射範囲確認の手がかりとなる骨の特徴的形状について検討した。側面像における骨の特徴的形状として、特に頭-足軸まわりの回転(ローリング)及び、腹-背軸まわりの回転(ヨーイング)のずれに関しては、骨性耳道の上下,左右のずれとして検出可能で骨性耳道が像として確認できれば、金属マーカと同程度の精度でずれの検出が可能であった。(4)以上の手法を臨床に応用するため、実際に全脳照射が行われた臨床症例15例に対し、そのシミュレータによる位置決め画像とリニアックグラフィーに対し、セットアップエラーを測定した。目視によっても骨の特徴的形状が見難い症例もあり、自動認識関しては骨の特徴的形状の抽出が困難であった。(1)慶應義塾大学放射線科において放射線治療を受けた症例の中から、頭部に放射線治療を受けた症例を50例選び出した。フィルムデジタイザを用いて、症例それぞれに対して、シミュレータを用いて撮影された位置決め写真、リニアックによるポータルフィルムをすべてデジタル化した。これらのデジタル画像をもとに、今後の検索にも供せるように臨床データも一部加えて、研究対象症例の画像データベースを作成した。(2)位置決め画像及び、リニアックグラフィーそれぞれに対し、投影像であることに起因する拡大率の補正を行い、露出の差を階調処理で補正しnormalizeした。リニアック装置特有の半影を検出するための周波数処理を試行した。さらに局所的な露出の差を補って部分的な明暗を少なくするために局所的ヒストグラム均等化法を施した。まず、人の目視により照射範囲確認の手がかりとなる骨の特徴的形状や照射野枠を確認し、判別法を検討した。システムによる照射野枠の自動認識のためのフィルタについて、エッジ強調を中心に周波数処理等を実施し、各種の手法の有用性について検討した。(3)対象症例各例について、目視によって確認された骨格等の特徴点のシステムへの入力法、照射野枠の入力法について、特にマンマシンインターフェースの観点から検討を行い、処理された画像をもとに、人の目視で、特徴点等を入力し、これをもとに照射野のずれの程度を測定するプログラムを試作した。このプログラムの出力結果の妥当性の検証とともに、ずれの起こる原因について検討した。(2)前年度に引き続き、位置決め画像及び、リニアックグラフィーそれぞれに対しる補正を適性にするための検討を行った。

投影像であることに因する拡大率の補正の校正のため頭部ファントムに金属マーカを用いて行った。(3)照射範囲確認の手がかりとなる骨の特徴的形状について検討した。側面像における骨の特徴的形状として、特に頭-足軸まわりの回転(ローリング)及び、腹-背軸まわりの回転(ヨーイング)のずれに関しては、骨性耳道の上下,左右のずれとして検出可能で骨性耳道が像として確認できれば、金属マーカと同程度の精度でずれの検出が可能であった。(4)以上の手法を臨床に応用するため、実際に全脳照射が行われた臨床症例15例に対し、そのシミュレータによる位置決め画像とリニアックグラフィーに対し、セットアップエラーを測定した。目視によっても骨の特徴的形状が見難い症例もあり、自動認識関しては骨の特徴的形状の抽出が困難であった。
モダリティ表現を中心に日本人英語の語用論的特徴を同定する国際英語論的研究

本研究の目的は、1)日本人英語における「主観性=モダリティ」の表れ方に焦点を当て、学習段階と習熟段階における、日本人英語の文法・語用論的特徴を比較し、「中間言語段階以降も日本人英語に持続的に見られる日本的モダリティ表現」を抽出すること、また2)国際英語論の観点からEC圏に属するアジア諸英語との比較を通して、日本人英語の文法や語用論における独自特徴を同定することである。本研究は理論的研究と実践的研究を平行的に行うものであり、平成30年度の研究実施計画では、理論手的研究として、1国際英語論関連のWorld Englishes(WE)理論やEnglish as a Lingua Franca (ELF)理論の最新動向と日本人英語の関係に関する研究(平成30年度、31年度実施)2日英語の対照や、文法・語用論におけるモダリティ関連の文献分析(平成30年度実施)3英語の中間言語分析に関する文献研究(平成30年度実施)、実践的研究として、4アジアの英語学習者を対象とするコーパス“The International Corpus Network of Asian学習者英語の特徴の比較(平成30年度、31年度実施)、を挙げた。平成30年度はこの計画に沿い、国際英語論におけるproficiencyの問題をDALP理論の視点から動的に捉える研究を行い、日本人英語の諸特徴の評価への応用を行った。本研究では、「日本語と英語は『主観性=モダリティ』の現れ方に根本的な相違がある」という認識を前提に、「習熟段階の日本人英語に見られる日本的な主観性の表れ」事例の分析が必要であると考えており、日本人英語におけるモダリティの諸相をコーパスを用いて一定程度、抽出できたことが平成30年度の成果である。また、国際英語論的視点から、「言語の流暢性」を文脈の中で変化する動的なものとして捉えるDALP理論を日本人英語の分析に適用することで、データ分析における理論的な枠組みの設定が可能となり、研究上の進展がみられた。5習熟段階の日本人英語使用者が執筆した英文に含まれる「母語話者英語と異なるモダリティ表現」の抽出と機能的動機の分析。(平成31年度実施)6学習者段階にある日本人大学生が執筆した英文に含まれる「母語話者英語と異なる」モダリティ表現の抽出と機能的動機の分析。(平成31年度実施)を実施する。2018年3月末に国際学会に参加し、その旅費の精算が2019年度の支出となったため。
アメロジェニン蛋白の組織内動態に関する比較発生学的研究

エナメル蛋白の主要物質アメロジェニンの系統発生学的性質を解明する目的で、爬虫類および両生類のアメロジェニン遺伝子のmRNAの塩基配列から一次構造を解読し、その部位特異抗体を作製して、免疫組織化学的に歯胚組織内における各ドメインの動態を観察することを目的とした。研究対象は爬虫類からイグアナ(Iguana iguana)、両生類からはイモリ(Triturus pyrrhogaster)を選択し、N末端、中央、およびC末端の各ドメインのアミノ酸配列8-12残基を抗原として特異抗体の作製を行った。結果として、合計6種類の抗体価の高い抗体を得て、これらを用い当該種と近縁種の歯胚組織における免疫反応の検出を行った。実験の結果、各抗体はいずれもエナメル質基質およびエナメル芽細胞の分泌経路の細胞内小器官に強陽性に反応し、アメロジェニン蛋白の細胞内合成と分泌の過程を明らかにした。しかし、哺乳類で解明されているような各ドメインの組織内における局在変化は、今回の爬虫類や両生類では明瞭に観察されず、各反応はエナメル質基質内に均一に分布する傾向にあった。唯一、イモリのC末端特異抗体の反応はエナメル質基質の表層部位に集中する傾向にあり、この点においてはUchida, et. al.(1991)がブタのエナメル質基質で観察している所見に似ている。ウェスターンブロッティングによる解析は、各抗体に反応する21-22kDaの共通したバンドの検出はできたものの、それより低分子量のバンドの存在は証明できなかった。爬虫類および両生類のアメロジェニン蛋白は哺乳類に匹敵する性質を持っていると推察されるが、これを分解・修飾するメカニズムは哺乳類に比べまだ未発達なのかもしれない。エナメル蛋白の主要物質アメロジェニンの系統発生学的性質を解明する目的で、爬虫類および両生類の一次構造を解読し、その部位特異抗体を作製して、免疫組織化学的に歯胚組織内における各ペプチドの動態を観察することを目的とした。本年度は、まだ一次構造の配列の解読が暫定的であった有尾両生類三種の配列の確定から行った。さらに、これまでまったくアメロジェニン遺伝子情報の無かった、無足類二種のcDNA配列の解読にも成功し、両生類の三つの目(Order)すべての遺伝子情報がそろった。それぞれの目の間での相同性は45-55%で、この値は両生類とヒトとの値に相当する。したがって、同じ両生類間にあってもそれぞれの目の間でかなり遺伝的な距離のあることが明らかになった。しかし、このような低い相同性にもかかわらず、N末端の21残基さらにC末端の17残基はほぼ一致し、きわめて高い相同性を示すことが明らかになった。次いで、遺伝子の三つのドメインの中で、それぞれの目に共通の10-12残基の配列を用いて、部位特異抗体の作製を依頼し(Sigma-Aldrich)、結果としてC端特異抗体だけが高い抗体価を示して、免疫組織化学に用いることができた。他の二つの部位の特異抗体の作製は来年度の課題となった。免疫組織化学による解析の結果、このC端特異抗体は有尾両生類の歯胚におけるエナメル芽細胞の分泌顆粒とエナメル基質に反応し、興味深いことに、エナメル芽細胞間にも強い反応が見られた。かつて哺乳類のcrudeな抗体を用いた研究ではこの現象は見られないことから、有尾両生類においては本蛋白が分泌後に、すみやかにC末端が切断され、それらの一部は細胞間隙に取り込まれている可能性がうかがわれる。また、このC末端特異抗体は魚類のガーパイクのエナメル質、さらにはこれらの鱗のガノイン層にも反応し、魚類のエナメル質やガノイン層を構成する物質と共通のドメインを共有することが明らかになった。なお、爬虫類の部位

特異抗体は中央ドメインのものだけが高抗体価が得られたが、N末端とC末端のものは作製できず、免疫組織化学の解析と共に来年度の課題にしたい。エナメル蛋白の主要物質アメロジェニンの系統発生学的性質を解明する目的で、爬虫類および両生類のアメロジェニン遺伝子のmRNAの塩基配列から一次構造を解読し、その部位特異抗体を作製して、免疫組織化学的に歯胚組織内における各ドメインの動態を観察することを目的とした。研究対象は爬虫類からイグアナ(Iguana iguana)、両生類からはイモリ(Triturus pyrrhogaster)を選択し、N末端、中央、およびC末端の各ドメインのアミノ酸配列9-14残基を抗原として特異抗体の作製を行った。結果として、合計7種類の抗体価の高い抗体を得て、これらを用い当該種と近縁種の歯胚組織における免疫反応の検出を行った。実験の結果、各抗体はいずれもエナメル質基質およびエナメル芽細胞の分泌経路の細胞内小器官に強陽性に反応し、アメロジェニン蛋白の細胞内合成と分泌の過程を明らかにした。しかし、哺乳類で解明されているような各ドメインの組織内における局在変化は、今回の爬虫類や両生類では明瞭に観察されず、各反応はエナメル質基質内に均一に分布する傾向にあった。唯一、イモリのC末端特異抗体の反応はエナメル質基質の表層部位に集中する傾向にあり、この点においてはUchida, et. al.(1991)がブタのエナメル質基質で観察している所見に似ている。基本的に、爬虫類や両生類のエナメル質発生は哺乳類に類似しているものの、その形成メカニズムは哺乳類に比べやや未発達で、複雑な蛋白の修飾現象を獲得していない可能性が高いことが明らかになった。
トランスポゾンを用いた遺伝子トラップ法による脊椎動物初期発生遺伝子の網羅的研究

(1)Tol2コンストラクトをもつプラスミドDNAと転移酵素をコードするmRNAをゼブラフィッシュ受精卵に微量注入することにより、ゼブラフィッシュ生殖細胞ゲノムにトランスポゾン挿入を非常に効率よく作製することができる方法の開発に成功した。この方法は、トランスジェニックフィッシュ作製のためのスタンダードな方法として、世界中の研究室でひろく用いられるようになった。(2)Tol2ベクターの内部にスプライスアクセプターとGFP遺伝子を組み込んだ遺伝子トラップコンストラクトを構築した。このコンストラクトをゼブラフィッシュゲノムにランダムに組み込ませた。我々は、ゲノム上の遺伝子の転写が挿入されたコンストラクト上のスプライスアクセプターによりトラップされると、GFPがその遺伝子の発現様式にしたがって組織・細胞・器官特異的に発現されることを示した。この成果は、ゼブラフィッシュでの初めての遺伝子トラップの成功となった。(3)トランスポゾン転移によるゼブラフィッシュの遺伝子導入法を、論文発表、会議発表、総説執筆、講習会開催、共同研究等によって普及させた。(4)ゼブラフィッシュにおけるトランスポゾン研究の副産物として、Tol2がマウス、及びゼノパス細胞中でも転移することを見いだした。Tol2は、これらのモデル脊椎動物でも遺伝子導入ベクターとして有用である。(1)メダカトランスポゾンTo12因子を基に、スプライスアクセプター部位、リポーター遺伝子であるGFP遺伝子、SV40のポリAシグナルをも遺伝子トラップベクターを構築した。転移酵素をコードするmRNAを試験管内で合成した。この遺伝子トラップベクタープラスミドDNAを転移酵素mRNAとともに、ゼブラフィッシュ受精卵へ微量注入した。(2)微量注入を施されたゼブラフィッシュを成魚に育て、かけあわせにより次世代のゼブラフィッシュ胚を得た。それら次世代ゼブラフィッシュ胚を実体蛍光顕微鏡下で観察することにより、GFPを時空間特異的に発現する遺伝子トラップゼブラフィッシュを多数分離することができた。(3)遺伝子トラップゼブラフィッシュのうちの1つでは、GFPが心臓特異的に発現していた。この遺伝子トラップゼブラフィッシュをかけあわせることにより、単一のトランスポゾン挿入を有するゼブラフィッシュ系統を確立した。サザン解析により、心臓特異的発現の原因となるトランスポゾン挿入を特定することができた。トランスポゾン挿入近傍のゲノムDNAをインバースPCR法によりクローニングし、塩基配列を決定した。また、5'RACE法を行い、トランスポゾン挿入によりG蛋白質アルファ12サブユニット遺伝子がトラップされていることを明らかにした。(4)この他に単一のトランスポゾン挿入を有する遺伝子トラップゼブラフィッシュを15系統確立し、インバースPCRによる近傍ゲノムの解析を行った。また、これらのうち7系統について5'RACE法によりトラップされている転写物を明らかにした。(1)メダカTol2因子を改変し、トランスポゾンベクターの開発を行った。このトランスポゾンベクターにスプライスアクセプター部位、リポーター遺伝子であるGFP遺伝子を組み込んだ遺伝子トラップベクター及びHSPプロモーターとGFP遺伝子を組み込んだエンハンサートラップベクターを構築した。次に転移酵素をコードするmRNAを試験管内で合成し、これらトラップベクターをもつプラスミドDNAとともに、ゼブラフィッシュ受精卵内へ微量注入により導入した。(2)微量注入を施された胚を成魚にまで育て、かけあわせにより次世代のゼブラフィッシュを得た。それら次世代ゼブラフィッシュ胚を実体蛍光顕微鏡下で観察することにより、GFPを組織特異的、器官特異的に発現するトランスジェニックゼブラフィッシュを合計91系統分離した。(3)これらゼブラフィッシュ系統について、トランスポゾン挿入部位のインバースPCRによる解析を行った。その結果、合計67のトランスポゾン挿入をゼブラフィッシュゲノム上にマップすることができた。(4)これらトランスポゾン挿入をもつヘテロ2倍体フィッシュをかけあわせ、ホモ2倍体胚を作製し、表現型の解析を行った。その結果、劣性致死、及びヒレの形態形成異常を引き起こすトランスポゾン挿入を同定した。ヒレ形成異常変異についてはwntシグナル伝達経路の転写因子をコードする遺伝子へのトランスポゾン挿入が原因であることを明らかにした。(1)トランスポゾンにhsp70プロモーターとGFP遺伝子を組み込んだベクターを構築し、エンハンサートラップ法を確立した。エンハンサートラップベクターはゼブラフィッシュゲノムに挿入されると、挿入部位近傍のエンハンサーによりhsp70プロモーターが活性化され、GFPを組織

特異的・器官特異的に発現するゼブラフィッシュが非常に効率よく得られる。(2)トランスポゾンにhsp70プロモーターと酵母転写因子Gal4を組み込んだGal4エンハンサートラップベクターを構築し、ゲノムにランダムに挿入させた。これらGal4系統をGal4結合配列であるUASの下流にGFPをもつUAS-GFPリポータートランスジェニックフィッシュとかけあわせ、GFPが組織特異的・器官特異的に発現されるゼブラフィッシュを効率よく得ることができた。(3)トランスポゾンを用いた遺伝子トラップ法、エンハンサートラップ法、Gal4エンハンサートラップ法を実施し、GFPあるいはGal4を組織特異的・器官特異的に発現するゼブラフィッシュ200系統を樹立した。(4)これらトラップ系統中のトランスポゾン挿入をインバースPCR法などで解析し、100系統についてトランスポゾン挿入部位の塩基配列を決定した。(5)エンハンサートラップベクター挿入の1つは、Wntシグナル伝達経路の転写因子Tcf7をコードする遺伝子を破壊していた。エンハンサートラップベクター挿入のホモ2倍体を作製したところ、ヒレの形態形成に異常がみられた。この結果からエンハンサートラップ法が器官形成に重要な遺伝子を同定するために有用な方法であることが示された。(6)遺伝子トラップベクター挿入の1つは、核孔を構成する蛋白質の1つNup214をコードする遺伝子を破壊していた。この挿入のホモ2倍体胚は、頭部と目の発生に異常を示し、胚致死となった。
Lymphokineの単一有髄神経の跳躍伝導に与える影響

抗ガンクリオシド抗体は、軸索を侵すギランバレー症候群や筋婪縮を主微とする多巣性運動ニューロパチー(MMN)で高値を示すことが知られている。GM_1やGD_1bなどがガングリオシドは軸索表面にも存在するため、これらの抗体により伝導ブロックやWaller変性を来す可能性がある。しかし、従来これらの生理学的研究は複合筋又は神経伝導電位を用いて行われたため、結果の解釈は困難で、また伝導ブロックの生成機序も不明のままであった。我々は、本研究を通して1980年代にBostockらが開発した方法を用いて、ラットの単一前根線維のVレベルで上記血清が伝導ブロックを引き起こすが否か、また起こすとすればどの様な機序し(脱髄性かNaチャネル不活化によるものか)を明らかにした。高抗体価を示すウサギ血清を用いた場合、38本中2本のみが伝導ブロックを示した。うち1本で膜電位を検討したところ脱髄性であった。また、高抗体価の患者血清ではブロックは1本も見られず、抗GM_1抗体高値を示した患者のリンパ球が生成する1ymphokineは25本中1本で不活化による伝導ブロックを起こすとされていた説を否定するものであり、他の要因が働いているものと考えられた。今年度は方法論と確立することを主眼としてラット前根を用いた単一神経有髄線維においてin vivoにて跳躍伝導を連続的に記録することに成功した。具体的にはウイスターラット約30匹を用いてlaminectomy〓にパラフィンプール下に馬尾神経を露出し尾部筋を支配する前根(S_2以下)から微小双極電極(プラチナ製、電極間距離0.4mm)を用いて外側縦向電流を各髄節から記録すると同時に、隣接する電極対からの電流の差をとることにより膜電流をreal timeに計測することが出来た。さらに予備実験としてMultifocal Motor Neuropathy患者の血清で抗GM1抗体の超高値(24000λ)を示すものに、同患者の培養リンパ球(Tcell)に抗原(GM1)をchallengeした際に得られるlymphokineを含んだ上澄を混入して跳躍伝導を調べたところ、Na chunnel blockによると考えられる伝導ブロックを見出した。次年度はさらに例数を増やして追試を行なう予定である。抗ガングリオシド抗体は、軸索を侵すギランバレー症候群や筋萎縮を主徴とする多巣性運動ニューロパチー(MMN)で高値を示すことが知られている。GM1やGD1bなどのガングリオシドは軸索表面にも存在するため、これらの抗体により伝導ブロックやWaller変性を来す可能性がある。我々は、本研究を通して1980年代にBostockらが開発した方法を用いて、ラットの単一前根線維のレベルで上記血清が伝導ブロックを引き起こすか否か、また起こすとすればどの様な機序(脱髄性かNaチャネル不活化によるものか)を明らかにした。また、高抗体価の患者血清ではブロックは1本も見られず、抗GM1抗体高値を示した患者のリンパ球が生成するlymphokineは25本中1本で脱髄性ブロックを生じたのみであった。我々の結果は、従来これら血清がNaチャネルの不活化による伝導ブロックを起こすとされていた説を否定するものであり、他の要因が働いているものと考えられた。
細胞共生による原生生物の同所的種分化の可能性

H29年度は、題材とする原生生物種が、メタン菌の細胞内共生の有無によって実際には2種に識別可能であることを、細胞形態の一貫した相違と原生生物18S rRNA配列の分子系統学的解析により証明することができた。H30年度は、まずオーストラリアで宿主シロアリのサンプリングを行った。メタン菌保有タイプの同原生生物は、飼育下1週間程で速やかに消失してしまうため、新鮮な試料を得ることが必要であった。この現象自体が非常に興味深いが、もしかすると宿主シロアリが飼育下では巣内よりも高い酸素分圧に晒されることと関係するのかもしれない。前年度に引き続いて、1細胞転写産物解析の条件最適化を試み、現在解析中である。また、メタン菌共生タイプと非共生タイプの大きな相違であるメタン菌自身の機能を解明するため、細胞内共生微生物叢のメタゲノム解析を行い、同メタン菌の高完成度のドラフトゲノムの情報解析を実施した。その結果、ゲノムサイズは近縁の自由生活型系統とほとんど変わらず、メタン生成経路も含めて、代謝系にも大きな差異は見られなかった。このことは、本課題の仮説のとおり、比較的最近に細胞内共生が生じ、それによって種分化を引き起こしたことを支持している。また、同メタン菌と同時共生しているEndomicrobium属細菌のドラフトゲノム解析も実施した結果、近縁の同属細菌系統とは、水素代謝系に大きな相違があった。これは、同メタン菌の共生が、他の共生細菌も含めた宿主の生理に大きな影響を与えたことを示唆している。本課題は、シロアリ腸内共生原生生物を題材として、原核生物の細胞共生によって原生生物の同所的種分化が生じたという研究代表者・本郷の仮説を検証するものである。ただし、同原生生物群は培養不能であるため、培養を介さずに、基本的には1細胞レベルでの解析を必要とする技術上も挑戦的な課題である。H29年度は、ムカシシロアリ腸内原生生物の1種、Mixotricha paradoxaが、メタン生成アーキア(メタン菌)の細胞内共生の有無によって実際には2種に分類可能であることの証明を主題とした。そのため、同原生生物種を1細胞ずつマイクロマニピュレーションで物理的に単離し、メタン菌の有無判定と形態学的データ取得を行うとともに、全ゲノム増幅法によってDNAを調製した。DNA試料から分類マーカーである18S rRNA遺伝子配列をPCR増幅して分子系統解析を行い、形態データと比較したところ、メタン菌保有Mixotricha細胞群と非保有細胞群は系統学的に明確に分離し、平均1.5%の配列差異があった。核の位置や細胞のサイズ、形状など、形態学的にも識別可能であった。これは1933年の原記載論文以来、1属1種とされてきた定説を覆す発見である。これら2種に分離されたMixotrichaについて、宿主原生生物の機能の差異の評価を目的とする、1細胞転写産物解析の条件検討を行った。少なくとも市販の1細胞用キットを使用した通常のプロトコルでは高い品質のRNAを調製できない可能性を見出しており、条件最適化が必要である。さらに、共生細菌も包含した「super-organism」としてのMixotricha2種の顕著な違いであるメタン菌に着目し、そのゲノム配列取得を目指した。原生生物1細胞試料を用いてメタゲノム解析を行った結果、同メタン菌の高完成度のドラフトゲノム再構築に成功した。現在、詳細な情報解析を行っている。H29年度は、計画通りに研究が進んでいる。1細胞からの転写産物解析が困難であることは想定内であり、その最適化を進めている。H30年度は、共生メタン菌ゲノムの情報解析による機能推定を進めるとともに、宿主原生生物の2種間での機能の差異を、1細胞転写産物解析で評価する。出発RNA量が微小であり、非モデル生物の同原生生物では失敗する可能性もあるが、上手くいかない場合、複数細胞を回収して比較する。

1細胞ごとの方が情報量は多いが、複数細胞同士の比較でも、ある程度の評価は可能なはずである。さらに、1細胞(あるいは複数細胞の)メタボローム解析を試みていく。また、当初計画には含めていなかったが、別の原生生物系統群(oxymonads)でも、同所的種分化の研究モデルとなり得るケースを見出したので、その基礎的研究も行う。共生菌のゲノム配列取得がが予想以上に順調に進んだため、その費用が少なく済み、また同共生菌のゲノム情報解析を前倒しで進めたために、並行してすすめている転写産物解析の試行回数は少なめに抑えた。H30年度は、この次年度使用額と合わせて、転写産物解析を精力的に行う予定である。
2系統の家禽を用いた動物の食行動誘起機構の解明

現代の肉用鶏は速い体重増加速度と高い産肉性により選抜されてきたのに対して、卵用鶏は高い産卵性により選抜されてきた。それ故、遺伝的選抜は2品種間における成長率の差を広げた。成長率の違いの一部は2品種間における摂食量の違いにより説明付けられる。数十年を超える研究により哺乳類及び鳥類における摂食を調節する脳内神経化学システムが調べられ、食行動に寄与すると思われる多くの神経伝達物質が同定された。最近、鶏の摂食調節機構は哺乳動物のそれと類似することが認識されてきた。それ故、本研究は肉用鶏と卵用鶏の摂食行動の比較により、高等動物の摂食調節機構を解明する目的で実施された。初めに、我々は強力な摂食促進因子であるニューロペプチドY(NPY)及び摂食抑制因子であるコカイン・アンフェタミン誘導転写産物が肉用鶏と卵用鶏の摂食に及ぼす影響について調べ、NPYに対する反応性が2品種間でやや異なることを示した。更に、鶏の摂食を調節する中枢神経系において、CARTがNPYと相互作用することを示唆した。次に、我々は肉用鶏と卵用鶏の新生雛における視床下部カテコールアミン代謝とガンマアミノ酪酸(GABA)受容体アゴニスト並びにアンタゴニストの効果の違いについて調べ、カテコールアミン代謝とGABA作動系において、2品種間に幾つかの違いがあることを示した。最後に、我々は、肉用鶏及び卵用鶏の視床下部におけるNPY遺伝子の発現とペプチド含有量の変動について調べ、視床下部におけるNPY遺伝子の発現とペプチドの含有量は、血漿代謝産物と同様に、摂食条件により変動することを示した。これらの結果は、NPY遺伝子の発現が、血糖値やNPY遺伝子の発現調節に役割を果たす可能性のあるレプチンの様な他の因子により調節される可能性を示唆した。以上より、2品種問の摂食行動の違いの一部は、NPYに対する反応性、視床下部カテコールアミン代謝、及びGABA作動系の違いに基づく可能性がある。[本年度の研究目的・研究実施計画]動物の食行動誘起機構の解明を最終目的として、2系統の家禽(肉用鶏と卵用鶏)を用いて、まず、脳おけるNPY並びにNPY受容体の存在とそれらの産生神経核を確認する。次に、脳におけるNPYの薬理作用の検討を行う。[研究によって得られた新たな知見等の成果]肉用鶏においては、産卵鶏に比べ、NPY並びにその受容体の発現量が相対的にかなり高いことが充分予想されたことから、1.及び2.の対象を肉用鶏とし、3.のそれを卵用鶏とした。1.脳におけるNPYの存在とその産生神経核の確認肉用鶏の脳からNPYのcDNAをクローニングして、脳の各神経核におけるそのmRNAの定量を基に、その産生部位、即ちNPYの産生神経核を明らかにすると共に、その遺伝子構造を解析した。また、NPYに対する抗体を用いて、その脳内分布を免疫組織学的に確認した。2.脳におけるNPYの受容体の存在とその標的神経核の確認肉用鶏の脳からNPY受容体のcDNAをクローニングして、脳の各神経核におけるそのmRNAの定量を基に、その産生部位、即ちNPYの標的神経核を明らかにすると共に、その遺伝子構造を解析した。また、蛍光色素或いは^<125>Iで標識したNPYを用い、その受容体の脳内分布を組織化学的に確認した。3.脳におけるNPYの薬理作用の検討

卵用鶏を用いて、NPYの脳の各神経核への投与によるin vivo実験並びに脳神経細胞を用いたin vitro実験を行ない、NPYの摂食促進作用の用量依存性及びその作用部位(即ち、標的神経核)を確認した。[本年度の研究目的・研究実施計画]動物の食行動誘起機構の解明を最終目的とし、孵化を契機とする食行動の駆動系の変動の検討とその駆動機構の解明を目的として、2系統の家禽(肉用鶏と卵用鶏)を用い、まず、中枢並びに末梢におけるNPY或いはNPY受容体の発現(mRNA量)の変化を孵化直後から経時的に調べ、次に、MPYの中枢並びに末梢投与を行なって摂食への影響を明らかにし、更に、脳内微小透析法を用いて種々の視床下部神経核におけるNPY量について2系統間の比較検討を行なう。[研究によって得られた新たな知見等の成果]1.視床下部におけるNPYの発現に関して、自由摂食条件下では、2系統共、1日齢から発現し始め、8日齢迄有意な差は見られなかったが、21日齢で肉用鶏において有意な低下が認められた。体重の近い2系統間では、発現に有意な差は認められなかった。又、絶食条件下では、肉用鶏で48時間、卵用鶏で72時間の絶食によりそれぞれ発現に有意な増加が認められた。更に、肉用鶏の飼料摂取量を卵用鶏と等しくなる様制限給餌した条件下において、卵用鶏のそれに比べ、肉用鶏の発現に有意な増加が認められた。2.NPY受容体の発現に関して、2系統共視床下部において、1日齢からY1受容体及びY5受容体の発現が認められた。又、脂肪組織において、2系統共、Y4受容体のみの発現が認められた3.NPYの中枢投与により、肉用鶏では2日齢から、卵用鶏では4日齢から摂食量の増加が認められた。又、血糖値については、2系統間における相違は認められなかった。更に、NPYの末梢投与により、卵用鶏において投与2時間後以降に摂食量の低下が認められた。4.48時間以上の絶食により、肉用鶏の漏斗核のNPY含有率に有意な増加が、室傍核のNPY含有率に有意な低下がそれぞれ認められた。以上のことから、2系統間における摂食量の相違は、中枢でのNPYの摂食促進作用と末梢でのNPYの摂食抑制作用の双方の関与に基づくものである可能性が高いことを推察した。[本年度の研究目的・研究実施計画]動物の食行動誘起機構の全容解明を最終目的に、食行動の駆動系の詳細とその変動の引く金因子を明らかにすることを目的として、2系統の家禽(肉用鶏と卵用鶏)を用い、まず、成長に伴う中枢におけるNPYの発現(mRNA量)の変化につて、次に、絶食或いは絶水がNPYの発現に及ぼす影響について、更に、視床下部神経核におけるNPY免疫陽性細胞と免疫陽性繊維の分布について、更に又、絶食が種々の神経核NPY含量に及ぼす影響について、最後にNPYの中枢投与が直腸温や血中成分に及ぼす影響についてそれぞれ調べる。[研究によって得られた新たな知見等の成果]1.自由摂食条件下では、視床下部NPY発現量と腹腔内脂肪率との間に負の相関関係が認められた。又、制限給餌した肉用鶏においては成長に伴う腹腔内脂肪率の上昇は認められずNPYの発現量も高い値を維持した。2.7日齢の卵用鶏における48時間の絶水或いは絶食は、共に視床下部NPY及びAVTの発現量を増加させた。3.3日齢の肉用鶏の視床下部全域においてNPY免疫反応が確認され、特に第3脳室周囲に密に分布していた。又、PVN及びPHNにおけるNPY免疫反応陽性細胞数は比較的少なく、逆に、NPY陽性繊維が脳質壁周囲に密に分布していた。
長期化する西表島群発地震の成因と海底火山との関連

1991年10月に突然始まった西表島群発地震はその後断続的に活動が続けられてきた。1993年11月にM=5.2の地震が発生したのを最後に活動はしだいに弱まってきている。しかしながら、いまだ時折単発的ながら比較的大きな地震が発生しており、活動が持続していることを示している。このようなことから、西表島群発地震のメカニズム解明と地震活動の推移の監視のために当該研究が昨年度より開始された。昨年度は観測点の設置と震源パラメータの決定が行われた。西表島群発地震のメカニズムは、種々の検討の結果以下のようにまとめられた。なんらかの理由によりNEE-SWWの伸張場の西表島下にマントル起源の水が圧入し、間隙水圧が増し、群発地震が発生した。地下からの水はマグマ起源との報告があるがこの点については更なる研究が待たれる。群発地震は面状に分布したが、この面は大きく見れば破壊面(断層面)をなすものと思われる。1993年11月にM=5.2の最大の地震がこの面上に発生した。メカニズムは正断層であり、断層面は群発地震の面と一致した。本震のメカニズムは上に述べた他の微小地震とも一致しており、広域応力場の下で発生した群発地震と結論できる。このような応力場と調和的な地質構造が西表島付近に数多く形成されている。1994年に入り台湾北東部にM6クラスの地震が2つ続けて起きた。主張力軸は、NEE-SWW方向で群発地震の主張力軸に平行である。結論として、沖縄トラフ西端部に加わっていた張力場によりまず西表島に群発地震が発生し、続けて台湾に中規模の地震が発生した。これらの地震活動はこの活動を待って一応終息したものと思われる。1991年に始まり、1992年8月、9月と続いた西表島群発地震活動は、現在でも継続的に発生している。地震は西表島北西部および西部に集中している。当研究が開始された1993年4月以降は、有感地震は短発的に発生するのみで比較的活動は穏やかである。1994年1月に有感地震が1日に10個発生する事態もあったが、地震活動は急速に収まる傾向にある。地震観測は4カ所、全磁力観測は3カ所で連続観測を実施している。地震活動の位置や様相には、大きな変化は見られないが、全磁力がかなり回復してきた点が注目され、活動の終焉期に達した可能性もある。地震データの解析からは、群発地震の震源メカニズムの多くは正断層型を示し、面状に分布するとの従来の特徴も同様であった。この地震分布の面を断層面と考えると、群発地震発生前後で実施された水準測量の結果ともよく一致することが明らかになった。このような正断層は、西表島周辺の海底地形に多く見られることから、今回の群発地震は、広域応力場により形成された破壊面に集中して発生した群発地震と判断され、群発地震のメカニズム解明に大きな貢献をなしたものと思われる。今回の群発地震は、広域応力場により生じた断層に沿い地殻流体が貫入し、これに沿い多数の群発地震が発生したものと思われる。さらにこの面に沿いマグニチュード5.4の最大地震を境に、地震活動は急激に下った。