hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
べき零拡大に対する素閉測地線の密度定理と熱核の漸近挙動

コンパクト多様体のHeisenberg被覆多様体上の熱核の長時間漸近挙動および定負曲率コンパクトリーマン面のHeisenberg拡大に関する素閉測地線の長さに関するChebotarev型の密度定理について研究した.両者はある程度の部分は共通の考え方で取り扱うことが可能である.すなわちBloch-Floquet理論の非可換化を,離散Heisenberg群およびHeisenbergリー群の表現論を結び付けることにより考察し,半古典解析の考え方を用いてそれらの漸近挙動を調べるという方法である.これは可換の場合をモデルにしてはいるものの非可換化により,困難は飛躍的に増大する.これに関しては現在,漸近展開も込めて,論文を執筆中である.漸近挙動の主要部に関してはほぼ完成しているが,高次の漸近挙動についてはもう少し研究が必要である.もう一つ,博士課程院生との共同研究で,リッチ曲率がほぼ非正のコンパクトリーマン多様体のキリングベクトル場に関する剛性定理を示した.これはBochnerの古典的定理の一般化であり,さらにリッチ曲率がほぼ非負のコンパクトリーマン多様体における第一Betti数に関するColdingおよびCheeger-Coldingの剛性定理の非正曲率版とのいえる.後者の結果との結果との違いは,証明にGromov-Hausdorff収束に関するコンパクト性定理を用いていない分,証明はシンプルであるが,ほぼ非正リッチ曲率,つまりある程度は正であってもよいのであるが,その大きさを具体的に評価できる点にある.熱核の漸近挙動と素閉測地線の密度定理に関しては,おおむね計画通りであるが,漸近展開まで込めて論文を執筆中であり,高次の漸近挙動に関する部分で詳細について少し検討が必要である.キリングベクトル場の剛性定理に関しては,共著論文をまとめることができた.まずは,熱核と素測地線に関する論文を完成させることを第一目標とする.これが終わったら,素測地線の密度定理に関して,曲率一定とは限らない負曲率多様体への拡張を考える.さらにそれも完成したらHeisenberg群を一般のべき零群に拡張することに挑戦する.コンパクト多様体のHeisenberg被覆多様体上の熱核の長時間漸近挙動および定負曲率コンパクトリーマン面のHeisenberg拡大に関する素閉測地線の長さに関するChebotarev型の密度定理について研究した.両者はある程度の部分は共通の考え方で取り扱うことが可能である.すなわちBloch-Floquet理論の非可換化を,離散Heisenberg群およびHeisenbergリー群の表現論を結び付けることにより考察し,半古典解析の考え方を用いてそれらの漸近挙動を調べるという方法である.これは可換の場合をモデルにしてはいるものの非可換化により,困難は飛躍的に増大する.これに関しては現在,漸近展開も込めて,論文を執筆中である.漸近挙動の主要部に関してはほぼ完成しているが,高次の漸近挙動についてはもう少し研究が必要である.もう一つ,博士課程院生との共同研究で,リッチ曲率がほぼ非正のコンパクトリーマン多様体のキリングベクトル場に関する剛性定理を示した.これはBochnerの古典的定理の一般化であり,さらにリッチ曲率がほぼ非負のコンパクトリーマン多様体における第一Betti数に関するColdingおよびCheeger-Coldingの剛性定理の非正曲率版とのいえる.後者の結果との結果との違いは,証明にGromov-Hausdorff収束に関するコンパクト性定理を用いていない分,証明はシンプルであるが,ほぼ非正リッチ曲率,つまりある程度は正であってもよいのであるが,その大きさを具体的に評価できる点にある.熱核の漸近挙動と素閉測地線の密度定理に関しては,おおむね計画通りであるが,漸近展開まで込めて論文を執筆中であり,高次の漸近挙動に関する部分で詳細について少し検討が必要である.キリングベクトル場の剛性定理に関しては,共著論文をまとめることができた.まずは,熱核と素測地線に関する論文を完成させることを第一目標とする.これが終わったら,素測地線の密度定理に関して,曲率一定とは限らない負曲率多様体への拡張を考える.さらにそれも完成したらHeisenberg群を一般のべき零群に拡張することに挑戦する.
誘導型NO合成酵素発現の特異的阻害による敗血症性ショックの遺伝子治療

心血管系で過剰に生成された一酸化窒素(NO)は敗血症性ショックの発症の原因と考えられることから、誘導型NO合成酵素(iNOS)の発現を特異的に阻害する遺伝子治療の可能性を検討した。ヒトiNOS遺伝子のアンチセンスオリゴマー(ASO)および対照としてミスマッチとスクランブルオリゴマーをホスホチオレートで修飾して作製し、培養ラット血管平滑筋細胞(VSMC)ヘリポフェクチン法で遺伝子導入した。炎症性サイトカイン(IL-1,TNF-α)で刺激したVSMCではiNOS遺伝子の発現誘導がみられ、著明なNO生成がみられたが、ASOを導入した細胞ではiNOSのmRNAと蛋白発現ならびにNO生成の抑制が用量依存性(1-10μg)にみられた。しかし低濃度(1-5μg)の対照オリゴマー導入では抑制効果はみられなかったが、高濃度(10μg)では非特異的に抑制(50%)がみられた。濃度と導入時間を検討した結果、ASO(5μg)で12時間の反応時間で約10%の導入効率であった。以上のin vitroの成績を元にin vivoでiNOS遺伝子のASO導入効率を解析中であり、ラット敗血症性ショックモデルを用いてiNOSの特異的発現阻害による血行動態への効果を明らかにする予定である。
肺癌細胞のアポトーシスにおける脂質メディエーターの役割

1、肺癌細胞株におけるアポトーシスの検討肺癌細胞株PC-9及びそのシスプラチン耐性細胞株PC-9/CDDPを用い実験を行った。それぞれの細胞株をシスプラチンに2時間接触させて後、24時間培養し、細胞を回収した。シスプラチンにより誘導されるアポトーシスはPC-9において有意に多く、さらに脂質メディエーターであるトロンポキサンA2(TXA2)拮抗薬、合成酵素阻害薬を併用したところ、シスプラチンにより誘導されるアポトーシスは有意に増強した。即ち、TXA2の機能を阻害する事でシスプラチン誘導細胞死が増加した。血小板活性化因子(PAF)拮抗薬についても同様の結果を得た。2、細胞死に関するプロテアーゼの解析TXA2拮抗薬の併用により、シスプラチン誘導アポトーシスの増強が確認されたので、細胞死に関わるシステインプロテアーゼであるカズパーゼについて検討した。ウェスタンブロット法を用い、蛋白量を検討したところ、TXA2拮抗薬の処理によってカスパーゼ2が誘導された。PAF拮抗薬ではカスパーゼ1が誘導された。TXA2拮抗薬、PAF拮抗薬のシスプラチン誘導細胞死の増強機序を解析するために脂質メディエーターと深く関わりを持つMAPKが果たす役割を検討した。活性化状態のMAPKを確認する抗リン酸化抗体を用いウェスタンブロット法で検討したが、TXA2拮抗薬、PAF拮抗薬、共に影響を与えなかった。以上の結果から、脂質メディエーターであるTXA2、PAFを阻害する事によりシスプラチン誘導アポトーシスが増強し、これはカズパーゼ蛋白を誘導する事に起因すると考えられた。シスプラチンにより誘導されるアポトーシスはPC-9において有意に多く、さらにTXA2拮抗薬、合成酵素阻害薬を併用したところ、シスプラチンにより誘導されるアポトーシスは有意に増強した。即ち、TXA2の機能を阻害する事によりシスプラチン誘導細胞死が増加した。2、細胞死に関わるプロテアーゼの解析TXA2拮抗薬の併用により、シスプラチン誘導アポトーシスの増強が確認されたので、細胞死に関わるシステインプロテアーゼであるカスパーゼについて検討した。ウエスタンブロット法を用い、蛋白量を検討したところ、TXA2拮抗薬の2時間接触によってカスパーゼ2が誘導された。カスパーゼ3の2時間接触によってカスパーゼ2が誘導された。カスパーゼ3はいずれの場合も変化を受けなかった。活性化状態のMAPKを認識する抗リン酸化抗体を用いウエスタンブロット法で検討したが、TXA2拮抗薬、PAF拮抗薬共に、影響を与えなかった。以上の結果から、脂質メディエーターであるTXA2、PAFを阻害する事によりシスプラチン誘導アポトーシスが増強し、これはシステインプロテアーゼであるカスパーゼ蛋白を誘導する事に起因すると考えられた。
音声合成における発話様式・感情表現の多様化とその応用

音声合成システムを擬人化対話エージェントやバーチャルアクターなどの様々なアプリケーションで幅広く利用するために,多様な感情表現や発話様式を含む音声を様々な声で合成できることが望まれている.本年度はこれまでに提案した平均声モデルとモデル適応手法を用いた重回帰隠れセミマルコフモデル(重回帰HSMM)にもとづく合成音声のスタイル制御手法の有効性を,様々な話者やスタイルに適用し評価を行った,その結果,プロのナレータの音声データだけでなく,新たに収録を行った一般話者の「平静(読上げ)」「悲しげ」「楽しげ」「不安」「嫌悪」「怒り」といったスタイルにおいても,50文章(およそ35分)の目標話者・目標スタイルの音声データから,その目標話者・目標スタイルの音声を合成可能であることを示し,多様な感情表現を含む音声合成を様々な話者の声で容易に実現することが可能となった.また,ユーザの好みの声で話すことのできる音声合成システムを実現するために,合成音声の声質制御手法を提案した.この手法では「太い-細い」といった制御対象とする声質について,学習に用いる複数の話者の声質の印象と学習データの音響的特徴の関係を重回帰HSMMにより学習することで,合成時の声質の印象を「少し太い声」「やや細い声」といったユーザの好みに応じて直観的に変化させることが可能である.また,平均声モデルと話者適応を用いたモデル学習を取り入れたことで,より様々な声質特徴を制御対象とすることが可能となった.これにより,仮想のキャラクタの声のような目標話者のデータが得られない場合にも,所望の合成音声を容易に作ることができると考えられる.さらに,これまで提案した少量の目標話者の音声データからの重回帰HSMMの学習法を,音声認識システムや発話様式・感情表現の表出度合の推定に利用することで,自然発話や対話といった様々な感情表現が含まれる音声の認識システムの性能向上に有効である可能性が示されており,今後の音声合成・音声認識システムの発展に寄与すると考えられる.擬人化エージェントなどのヒューマンインタフェースに音声合成システムを利用するためには、多様な発話様式・感情表現を含んだ音声を様々な話者の声で実現できる必要がある。そこで本年度は、隠れマルコフモデル(HMM)に基づく音声合成システムにおいて、合成音声の発話様式・感情表現と話者性の多様化に関する研究を重点的に行った。まず、これまでの研究で検討を行ってきた「平静(読み上げ)」、「楽しい」、「悲嘆」、「ぞんざい」の4種類以外の発話様式・感情表現(スタイル)についての多様性の検討を行うため、新たに「嫌悪」、「安心」、「不安」、「怒り」といったスタイルを持つ音声データの収録およびデータベースの整備を行った。また、このデータを用いて、スタイルの特徴と話者性を同時に多様化することを目的に、複数の話者の「平静」調の音声で学習した音響モデル(平均声モデル)を、目標話者・目標スタイルの音響モデルへと変換する話者・スタイルの同時適応手法を提案した。その結果、50文章(およそ35分)の目標話者・目標スタイルのデータを用いることで、その話者性とスタイルの特徴をある程度再現できることを示した。さらに、このようにして変換されたモデルを重回帰隠れセミマルコフモデルに基づくスタイル制御手法に利用することを提案し、様々な話者の合成音声においで、そのスタイルの表出/強調度合の制御が、従来の特定話者の音声データで学習したモデルからの変換手法に比べて、自然に実現できることを示した。また、この話者・スタイル適応手法を、人間の発話した音声に含まれる感情表現・発話様式の識別に利用することで、収録を行ったスタイルを含む音声データに対して、目標話者の数文章程度の少量のデータから、人間の識別能力と同程度にスタイルを識別することが可能であることを示した。音声合成システムを擬人化対話エージェントやバーチャルアクターなどの様々なアプリケーションで幅広く利用するために,多様な感情表現や発話様式を含む音声を様々な声で合成できることが望まれている.本年度はこれまでに提案した平均声モデルとモデル適応手法を用いた重回帰隠れセミマルコフモデル(重回帰HSMM)にもとづく合成音声のスタイル制御手法の有効性を,様々な話者やスタイルに適用し評価を行った,その結果,プロのナレータの音声データだけでなく,新たに収録を行った一般話者の「平静(読上げ)」「悲しげ」「楽しげ」「不安」「嫌悪」「怒り」といったスタイルにおいても,50文章(およそ35分)の目標話者・目標スタイルの音声データから,その目標話者・目標スタイルの音声を合成可能であることを示し,多様な感情表現を含む音声合成を様々な話者の声で容易に実現することが可能となった.また,ユーザの好みの声で話すことのできる音声合成システムを実現するために,合成音声の声質制御手法を提案した.この手法では「太い-細い」といった制御対象とする声質について,学習に用いる複数の話者の声質の印象と学習データの音響的特徴の関係を重回帰HSMMにより学習することで,合成時の声質の印象を「少し太い声」「やや細い声」といったユーザの好みに応じて直観的に変化させることが可能である.また,平均声モデルと話者適応を用いたモデル学習を取り入れたことで,より様々な声質特徴を制御対象とすることが可能となった.これにより,仮想のキャラクタの声のような目標話者のデータが得られない場合にも,所望の合成音声を容易に作ることができると考えられる.さらに,これまで提案した少量の目標

話者の音声データからの重回帰HSMMの学習法を,音声認識システムや発話様式・感情表現の表出度合の推定に利用することで,自然発話や対話といった様々な感情表現が含まれる音声の認識システムの性能向上に有効である可能性が示されており,今後の音声合成・音声認識システムの発展に寄与すると考えられる.
DNA塩基配列および化学成分を考慮したコショウ科サダソウ属の同定システムの構築

コショウ科サダソウ属の利用開発に資するため、現地および栽培品からサダソウ属の多様性をカバーするようなサンプリングを行ない、迅速な同定の手がかりとして、形態形質、化学成分の比較とDNA塩基配列に基づく系統樹の作成を行なった。形質の観察と記録は生植物を栽培して行ない、データベースにまとめつつあるが、開花に至らないものも多く、進行中である。化学成分のスクリーニングの結果、セコリグナン等、多様性を示す同定に有望な成分がいくつか特定できた。分子系統解析は予想外の技術的困難があったが、既知の29種類の配列を加えた69配列について系統樹を作成することができた。1)資料の収集:サダソウ属は園芸の目的で多くの種類が輸入されているので、それらを国内の植物園から分譲して頂き、さらに栽培業者から購入して収集した。平成19年11月に邑田裕子がインド南西部にてサダソウ属の調査を行った。標本、生植物、DNA抽出用サンプルを採集し、生態、生育調査を行った。またコルカタ植物園の標本館で標本調査を行った。収集した生植物は摂南大学薬用植物園および東京大学大学院理学系研究科附属植物園に植えて、挿し穂などで個体を増殖し、PNA抽出用、化学成分分析に用いる。2)化学成分分析:これについては摂南大学薬学部および岐阜薬科大学において今年度は主に稲冨と田中が行った。まず大量に材料の入手出来たPeperomia obtusifoliaを用いて、含有される化学成分の単離構造解析をおこなった。この結果3種類の化合物については詳細な構造を明らかにすることが出来た。これらの化学成分を指標の一つとして他の種類の比較研究をおこなう。またPeperomia obtusifoliaの現在までに構造解析の終わっていない成分についても引き続き解析を行っている。3)DNA塩基配列解析:DNA塩基配列解析は分担者邑田仁が東京大学附属植物園において大学院生とともに行った。DNAを抽出し、最近ハワイ産のサダソウ属植物の系統解析で有効性が確かめられている核DNAのITS領域、およびコショウ属の系統解析に有効であった葉緑体DNAmatK遺伝子領域などの塩基配列の解析を継続中である。今年度は約50検体について解析を開始し、25検体について得られた配列情報から系統解析を行った。1)資料の収集:サダソウ属植物は園芸の目的で多くの種類が導入されているので、それらを栽培業者から購入して収集した。平成20年11月に邑田裕子が中国に出張し、標本調査、自生地調査を行った。平成21年2月に邑田裕子、田中稔幸、研究協力者の大山雅義が鹿児島県熊毛郡種子島に出張し、自生地調査を行い、研究材料の採集を行った。その際に(独)医薬基盤研究所薬用植物資源研究センター種子島研究部にて、資料の分譲を依頼した。昨年から栽培している種類については花の時期の標本を作成すると共に、花の形態観察用に花序の液浸標本の作成を開始した。DNA用のサンプルも適宜採集した。また化学成分研究用に播種・挿し木などによって、植物の増殖を開始し、資料の収集を計った。2)化学成分分析:これについては摂南大学薬学部及び岐阜薬科大学において、主に稲冨由香、田中稔幸が行い、昨年に引き続き、Peperomia obtusifoliaの成分のさらなる解析を行い、詳細な成分検索を行った。またホンジュラス産の種類について解析を開始した。3)DNA塩基配列解析:これについては東京大学理学系研究科附属植物園において邑田仁が大学院生と共に行った。ハワイ産のサダソウ属植物の系統解析の為に有効であった核DNAのITS領域、及びコショウ属の系統解析に有効であった葉緑体DNAmatK遺伝子領域などの塩基配列の解析を継続中である。昨年度解析出来なかった種類の解析を行うと共に、今年度新たに導入した種類についても解析を開始している。1)資料の収集:サダソウ属植物は園芸の目的で導入されている種類も多いので、京都府立植物園で栽培している種類の中から、現在までに採集していない種類について分譲を受けて、栽培を開始した。平成21年8月に沖縄県石垣島、宮古島にて邑田裕子、田中稔幸、研究協力者大山雅義がサダソウの自生地調査を行い、研究材料の採集を行った。平成22年1月に邑田裕子が沖縄県沖縄本島にて、サダソウの自生地調査を行い、資料の収集を行った。また鹿児島県佐多岬のサダソウの資料も入手することが出来た。園芸業者からも数種類を導入することが出来た。これらの植物を栽培し、花の形態観察用に花序の液浸標本を作製した。また化学成分研究用に挿し木などを行い、植物の増殖を開始し、資料の収集も行った。

2)化学成分分析:これについては摂南大学薬学部および岐阜薬科大学において、主に稲冨由香、田中稔幸が行い、昨年までの種類に加えて主にサダソウ、シマゴショウなどの成分検索を開始した。3)DNA塩基配列解析:これについては東京大学理学系研究科附属植物園において邑田仁が行った。ハワイ産のサダソウ属植物の系統解析の為に有効であった核ITS領域、及びコショウ属の系統解析に有効であった葉緑体DNAmatK遺伝子領域などの塩基配列の解析を今年度新たに入手した種類や昨年解析出来なかった種類について継続中である。サダソウ属植物の種類の中にはDNAの抽出・増幅がうまくいかない種類もあり、今後の技術的課題である。
卵子の成熟と妊娠の成立を支配する新しい生理活性物質の生産システム開発とその応用

1.妊娠初期の生殖器官内における生理活性物質の分布を免疫組織化学によって調べた。インヒビンαサブユニットは、甲状腺と膵島にのみ発現したが、その他の臓器には陽性所見は示されなかった(但し、生殖器については検索していない)。βAとβBサブユニット及びホリスタチンは、胎子の全身諸器官に広範囲に分布していた。特に陽性所見が顕著に認められた器官は、神経系の神経細胞(特に脊髄神経節神経細胞)、歯牙、肝臓、膵島等の各器官であった。また、心臓及び血管平滑筋ではβAサブユニット及びホリスタチンの発現が顕著であった。皮膚では、表皮にβAとβBサブユニットの発現を確認し、ホリスタチンは真皮層により強く発現していた。2.マウスの幼若期における卵胞の発育は卵母細胞の発育段階と顆粒層細胞の増殖段階の2つの段階から成り立っていると考えられた。この結果を基にして、各種ホルモンや細胞成長因子を添加して卵胞培養および卵巣培養を行い、それぞれの卵母細胞や卵胞の発育に対する有効性を検討した。卵胞培養系において、培養開始時点の卵胞直径が140μm以上の2次卵胞と、卵胞を複数で培養したものでは、卵胞の著明な発育が認められた。特に、FSH添加で顕著な卵胞の発育が認められた。しかし、培養開始時の卵胞の直径が140μm未満では卵胞の発育は認められなかった。また、卵巣の器官培養系において、in vivoと同等までに大きくなった卵胞が認められるものが存在した。3.マウスとウシの卵母細胞を用いて、IVM・IVF・IVCに対し有効な卵胞液及びウシ胎児血清中の活性分画の同定を行った。1)大量の牛の卵胞液を採集し、牛インヒビンの単クローン抗体を用いた免疫吸着クロマトによりウシインヒビンを大量に精製した。そのサイドフラクションからアクチビン結合蛋白質をヘパリンセルロファイン、スパーデクッス200によるゲルロカ、および逆相のHPLCにより精製した。精製したアクチビン結合蛋白質を用いて、2種類のアクチビンを精製した。これらの2種類の生理活性物質の抗体を作成し、超高感度の測定系を開発を行っているところである。2)妊娠後半の胎児から新生児のマウスの性腺におけるインヒビン、アクチビンとホリスタチン蛋白質の発現時期を免疫組織化学の手法によって明らかにし、それらの物質の発現と卵胞の発育の関係を明らかにした。3)各時期の卵巣を器官培養し、生理活性物質を添加し、卵胞と卵母細胞の発達に対する影響について現在検討中である。。前述のように、本年度に予定していた検討事項はほぼ順調に消化されている。ウシの卵胞液からインヒビンA、アクチビンAとABが精製されたが、インヒビンBとアクチビンBはウシの卵胞液に殆ど含まれていなかった。そこでブタの卵胞液あるいは精巣網液からそれらを精製することを試みている。また、CHO細胞にインヒビンBの遺伝子を導入しリコンビナイトインヒビンBとアクチビンBを生産することも試みている。ウシの卵胞液からフォリスタチンはかなりの量精製されたので、それを用いて抗体を作成し免疫測定法を確立することを試みているが、ウシのフォリスタチンとは反応するが、構造が非常に似ているにも拘わらず、他の動物種と交差しないようであり、非常に困惑している。1.ウシの卵胞液からアクチビン結合蛋白質をヘパリンセルロファイン、スパーデクッス200によるゲルロカ、および逆相のHPLCにより精製した。2.妊娠初期の生殖器官内における生理活性物質の分布を免疫組織

化学によって調べた。インヒビンαサブユニットは、甲状腺と脾島にのみ発現した。βAとβBサブユニット及びホリスタチンは、胎子の全身諸器官に広範囲に分布していた。特に陽性所見が顕著に認められた器官は、神経系の神経細胞、歯牙、肝臓、脾島等の各器官であった。また、心臓及び血管平滑筋ではβAサブユニット及びホリスタチンの発現が顕著であった。3.マウスの幼若期における卵胞の発育は卵母細胞の発育段階と顆粒層細胞の増殖段階の2つの段階から成り立っていると考えられた。卵胞培養系において、培養開始時点の卵胞直径が140μm以上の2次卵胞と、卵胞を複数で培養したものでは、卵胞の著明な発育が認められた。特に、FSH添加で顕著な卵胞の発育が認められた。また、卵巣の器官培養系において、in vivoと同等までに大きくなった卵胞が認められるものが存在した。4.マウスとウシの卵母細胞を用いて、IVM.IVF.IVCに対し有効な卵胞液及びウシ胎児血清中の活性分画の同定を行った。5.GnRH遺伝子欠損マウスにアクチビンを投与すると、下垂体のゴナドトロピンの分泌能と卵巣の機能を亢進することができた。
B.forsythusの酵素および主要抗原の精製、クローニング

辺縁性歯周炎は歯肉溝に棲息する細菌によって引き起こされる感染症で、いくつかのグラム陰性細菌がその原因菌として注目されている。一方、歯周疾患の多様性や単一感染の動物実験の困難さ等から、歯周炎はいくつかの歯周炎関連細菌の混合感染によって引き起こされると考えられている。中でもBacterojdesforsythusはPorphyromonas gingivalisと共に活動性の歯周炎局所から高頻度に分離され、重要な歯周炎関連細菌のひとつだと考えられているが、これまで培養が非常に困難であったため、その性質や病原性についての解析はあまり行われていない。我々は、まず本菌の抗原性について検索した。本菌の超音波抽出物を抗原に、患者血清を一次抗体にWestern b1otを行った結果、重度の歯周炎患者の血清は本菌と強く反応し、特にいくつかの濃いバンドが現れることが明らかになった。部分精製したプロテアーゼを抗原にしても濃いバンドが出現したことから、本酵素が抗原となっている可能性が示唆された。今後は、精製した酵素を用いて抗原物質との異同を検索していく予定である。また、歯周炎患者のグループでも患者間でバンドのパターンに差があり、本菌に対する生体の反応に個人差があると考えられる。さらに、本菌の生体防御機構に及ぼす影響を調べるため、菌体抽出物でヒト好中球を処理し、表面レセプターの変化を検索したところ、複数のレセプターの発現が減少した。この作用がP.gingivalis同様プロテアーゼによるものかどうか、現在検討中である。また、B.forsythusのin vivoにおける病原性を調べるため、マウスを用いた膿瘍実験モデルを確立した。その結果、本菌は濃度依存性に膿瘍形成することが明らかになったが、さらに、P.gingivalisとの混合感染で膿瘍の大きさが増大するという興味深い結果も得た。今後は、in vitroの生物活性と合わせて、in vivoでの病原性についても検索していく予定である。Bacter oides for sythusは活動性の歯周炎局所から高頻度に分離され、歯周炎の発症に強く関わっていると考えられるが、培養が非常に困難なため、その性質や病原性についての解析は殆ど行われていない。我々は、B.for sythusが、歯周炎の病態とどの程度関っているかを明らかにするため、歯周炎患者の血清を採取し免疫学的に検索した。まず、B.for sythusの全菌体を抗原にしてELISAを行なったところ、歯周炎患者の血清は高い抗体価を有することが明らかになった。また、同抗原を用いてWestern Blotを行なったところ、数種類の抗原性の強い物質が存在することがわかった。今後はこの抗原物質を分離精製し、本物質をコードする遺伝子をクローニングしていく予定である。さらに、本菌に対して特異的なプローブを作製し、我々の研究室で行っているPCRを用いた歯周炎関連細菌の検出に応用していきたい。一方、我々の予備実験の結果、B.for sythusの菌体抽出液が、ヒトの多形核白血球のレセプターを変化させることも明らかになっており、本抑制因子と抗原物質との異同についての検索も行なっていく予定である。
d・PATを用いた脳脊髄損傷に関する実験的研究

脊髄の虚血性変化や変形性脊椎症に伴う圧迫性障害では、FDG-PETによる糖代謝の亢進が報告されており、viabihtyの有無を機能画像による代謝の変化で予測可能であることが示唆される。一般に脳神経細胞における虚血時の糖代謝亢進は様々な基礎研究により確認されており、脊髄においても同様の変化が予想されるが、脊髄組織の虚血や障害による代謝変化と病理組織学的な変化の詳細な検討はまだ行われていない。本研究ではラットの脳脊髄を取り出し、ex vivoで組織を生存させたまま、虚血状態、低酸素状態における糖代謝の変化と病理組織学的変化との対比を行い、in vivoでの脳脊髄障害と同様のモデル実験が可能か検討した上で、それぞれの状態における糖代謝変化を観察した。これらの基礎実験に基づき、脳脊髄障害モデルラットを作成し、ポジトロンCT(PET)による糖代謝の変化をin vivoで確認した後、モデルラットの脳脊髄組織とPET画像を対比することで、ex vivoにおける実験モデルの確認を行った。当初脳脊髄損傷に関する研究であったが、dPATは薬剤の神経組織ブドウ糖代謝への影響を観察する非常に優れた実験系であるので、様々な薬剤に対する脳脊髄切片の代謝変化も計測した。神経毒性・保護効果が報告されている薬剤を加えた際の糖代謝変化をex vivo(dPAT)で観察し、in vivo PETでの検討と対比するため、薬剤投与後の脳代謝の変化をFDG-PETを用いて確認した。脊髄の虚血性変化や変形性脊椎症に伴う圧迫性障害では、FDG-PETによる糖代謝の亢進が報告されており、viabilityの有無を機能画像による代謝の変化で予測可能であることが示唆される。一般に脳神経細胞における虚血時の糖代謝亢進は様々な基礎研究により確認されており、脳脊髄においても同様の変化が予想されるが、脊髄組織の虚血や障害による代謝変化と病理組織学的な変化の詳細な検討はまだ行われていない。本研究では、ラットの脳脊髄を取り出し、ex vivoで組織を生存させたまま、低酸素状態、虚血状態(低酸素+低栄養)、外的圧迫状態における糖代謝の変化と病理組織学的変化との対比を行い、in vivoでの脳脊髄障害と同様のモデル実験が可能か検討した上で、それぞれの状態における糖代謝変化の意義を考察する。これらの基礎実験に基づき、脳脊髄障害モデルラットを作成し、ポジトロンCT(PET)による血流・代謝の変化をin vivoで確認した後、モデルラットの脳脊髄組織とPET画像の対比することで、ex vivoにおける実験モデルの確認を行う。ex vivo実験モデルとしては、リンゲル液中に脳脊髄切片を入れ、F-18標識フルオロデオキシグルコース(FDG)の組織内取り込み率を糖代謝の指標とする手法(dPAT)を用いた。本研究では、神経保護効果を有する様々な薬剤に対する脳脊髄切片の代謝変化も同時に計測する。系のような、直接脳神経系への薬剤移行が起こるexvivo実験(dPAT)の結果と、生体で行うin vivo PETの結果を比較することは、今後のex vivo実験系の意義付けと、正しい利用のために重要である。
戦前の日伯スポーツ交流が1964年東京五輪の招致決定に与えた影響

本研究は戦前から続いた日本とブラジルのスポーツ交流が、1964年東京五輪の招致決定に与えた影響について探ることを目的としている。日本とブラジルの公式なスポーツ交流は、1933年の「日本陸上選手団」の南米遠征をきっかけに始まった。1964年の東京五輪招致決定には、南米の集票を依頼された日系二世のフレッド・和田勇の功績が大きい。そこで本研究では、特に彼のブラジルでの招致行動を中心に実証的に検証した。その結果、戦前からの日系移民とブラジルスポーツ界の信頼関係、南部忠平の声かけで設立された「Ate a vista会」が、フレッド和田の招致活動を支えていたことが分かった。本研究は「南米派遣日本陸上選手団(1933年)」(以下、南米遠征)を契機に始まった、日本とブラジル両国のトップアスリートによる交流に着目し、その後に続く選手らの交流が1964年東京五輪決定の際の南米票に、どのような影響を与えたのか否かに関して史料や文献、聞き取り調査をもとに歴史的に遡り、実証的に明らかにしていくことを目的としている。特に遠征メンバーとして南米諸国から熱望されながらも、参加ができなかった南部忠平選手(陸上・三段跳、1932年ロサンゼルス五輪優勝)と、ブラジルのシルビオ・パジリア選手(陸上・400m障害、1932年と1936年の五輪に出場(5位)、IOC委員No.267)の戦前から戦後に至る交流に焦点をあて調査を進めている。平成26年度は、本研究のべースとなる1933年の南米遠征に関して、その足跡と成果を明らかにすることにあった。そのため国外調査では、ブラジルを中心に選手団の遠征先において、資料収集及び証言者(日系移民及びコロニア陸上界)探しと、聞き取り調査を実施した。国内調査では南部忠平の出身地北海道で資料収集、聞き取り調査を行った。その結果、ブラジルの東山農場に選手訪問の足跡が残っており、一部不明だった選手の行動内容が明らかとなり、南米遠征の足跡はほぼ解明できた。また1933年に南部忠平がコーチとして渡伯した際の足取りも、少しずつ分かってきている。さらに1964年の東京五輪招致に関係したロサンゼルス在住の日系二世フレッド・和田勇と、南部忠平の関係を証言する貴重な聞き取り調査ができたことで、次年度への研究の弾みがついた。本研究は、「日本陸上選手団」が1933年に初めて公式に南米遠征に派遣されたことが契機となり始まった、日本とブラジルの陸上選手の「スポーツ交流」に着目し、戦後も続いた交流が、1964年のオリンピック東京大会の招致決定の際の「南米票」にどのような影響を与えたのかを、史料や文献、聞き取り調査をもとに歴史を遡り解明していくことを目的としている。研究は、第1段階として、戦前の日伯スポーツ交流について、日本スポーツ界初の公式遠征となった「南米派遣陸上選手団」に焦点をあて、戦前の「日伯スポーツ交流」がいかなる成果をあげたのかを明らかにする。第2段階は、上述したスポーツ交流で培った人脈が、1964年の東京五輪招致の際の「南米票」に、いかなる影響を与えていたのかを明らかにする。2014度は、1933年に日本選手団が南米遠征で訪問した国々の新聞記事や文献の収集、および遠征をアテンドした日系移民の方に聞き取り調査をするために、ブラジルを中心に情報やデータの収集をした。2015年度は、前年に収集した史料や聞き取り調査データをもとに、「南米派遣日本陸上選手団(1933年)の足跡と遠征の成果」(広島国際研究第21巻:査読あり)で発表した。さらに戦前の陸上競技を通じた日伯スポーツ交流で親しくなった元ブラジル選手(後のIOC委員)の存在が、1964年の東京五輪招致の際の「南米票」に影響を与えていたことを確認することができたため、再度ブラジルで聞き取り調査をした結果、重要なエビデンスとなる人物の言質を得ることができた。当初の予定通り調査が進み、第1段階での結果を論文にして発表した。平成28年度は、平成27年度の研究成果(「南米派遣日本陸上選手団(1933年)の足跡と遠征の成果」広島国際研究第21巻、pp.117-140.査読付)をベースにして、派遣選手の一人であり、1964年東京五輪招致に深く関わった、大島鎌吉氏の戦後の活動に焦点を当て調査を実施した。その研究成果は「日本人戦没オリンピアン名をめぐる混乱とその真相-ベルリンに届けられた大島鎌吉の作成名簿更新の試み-」(広島国際研究22巻、pp.117-130.査読付)で明らかにした。上述した研究の調査過程で、大島氏と陸上競技連盟、水泳連盟との関係、北米・南米移民と1964年東京五輪招致の関係の全体像が見えてきた。さらに、1949年の全米水泳選手権で水泳選手団の宿泊先となったフレッド・和田勇氏と北米移民による「日本水泳選手団招致委員会」と南米移民との関係も、これまで明らかにされていなかった「事実」があることが分かった。当初の研究目的(1933年の日伯スポーツ交流が1964年東京五輪の招致決定に与えた影響を明らかにする)は、歴史をさかのぼって日系移民の関係性を「スポーツ」というキーワードで整理したことにより、わが国のスポーツ史にこれまでとは異なった新しい局面を開く興味深い研究となる可能性が出てきた。平成28年度はサンパウロの聞き取り調査対象者を紙面で紹介し(読売新聞

別冊「ひろしま県民情報」(元陸上選手異国で成功)2016年8月24日付)、一般の方にも本研究の公表を行った。平成28年度の調査を計画通りに実施することができなかったため(リオデジャネイロ五輪の年であり、調査環境が悪化したなどの理由)、「やや遅れている」と評価したが、毎年論文を公表し成果は出ている。昨年度の研究で、新たな視点(「和歌山ネットワーク」(仮))から研究を進めており、エビデンスを求め資料収集に時間がかかっている。本研究は、1933年に南米諸国に派遣した日本初の公式選手団(「南米派遣日本陸上選手団」一行6名)の遠征を契機に始まった日本とブラジル(以下、日伯)」のスポーツ交流に着目し、戦前から始まった日伯スポーツ交流が、1964年東京五輪の招致決定に与えた影響について明らかにすることを目的としたものである。これまでの五輪報告書や文献などによれば、1964年東京五輪招致決定の勝因は、主に「外交交渉」の勝利といわれており、中でもカギを握っていたのが中南米IOC委員の票だったといわれている。この集票の任務を岸信介首相から依頼されたのが、ロサンゼルス在住の日系実業家フレッド・和田勇氏あり、自費で中南米諸国の関係者を説得に回ったことが招致につながったといわれている。しかし、日本の政府や競技団体のバックアップがあったとはいえ、中南米のスポーツ関係者に人脈を持たなかった和田氏が、各地で招致活動ができた背景には、何らかの別の支援があったことが考えられた。そこで本研究では、和田氏のブラジルでの招致行動を中心に具体的に探っていった。ブラジルでの招致行動に焦点を当てたのは、当時日本からブラジルに多くの移民が渡っていたこと、邦字新聞の記事及び日伯スポーツ交流に関する文献が残っていたこと、和田氏の訪伯時にサンパウロで立ち会った日系移民の関係者がご存命であり聞き取り調査が可能になったことによる。その結果、1933年「南米派遣日本陸上選手団」の遠征から始まった日系コロニアスポーツ界とブラジルスポーツ界の人間関係や信頼関係、そして南部忠平の声かけで設立された「Ate a vista会」の存在が、フレッド和田の招致活動を陰で支えており、1964年東京五輪招致の集票にも影響を与えていたことがわかった。本研究は戦前から続いた日本とブラジルのスポーツ交流が、1964年東京五輪の招致決定に与えた影響について探ることを目的としている。日本とブラジルの公式なスポーツ交流は、1933年の「日本陸上選手団」の南米遠征をきっかけに始まった。1964年の東京五輪招致決定には、南米の集票を依頼された日系二世のフレッド・和田勇の功績が大きい。そこで本研究では、特に彼のブラジルでの招致行動を中心に実証的に検証した。その結果、戦前からの日系移民とブラジルスポーツ界の信頼関係、南部忠平の声かけで設立された「Ate a vista会」が、フレッド和田の招致活動を支えていたことが分かった。初年度は史料・資料収集、聞き取り調査、論文投稿の準備をする計画であったが、すでに成果の一部を学会発表、一本目の論文を執筆し現在投稿中である。従って初年度は、当初の研究計画以上に目標を達成した。ただ、ブラジルで予定していたシルビオ・パジリア選手に関する資料収集が、時間的制約もあり滞在中に十分できず、次年度への持ち越しとなったので、区分は2とした。第2段階(最終結果)の成果発表に向けて、調査は順調に進んでいる。昨年度渡伯した際、聞き取り調査をした人物が保有している史料と写真がエビセンスとなるため、その入手が論文執筆に必要となる。すでに先方には、個人資料の使用について可能であることを確認している。
金星成層圏での風速変動メカニズムの解明

本研究では金星大気中に存在する惑星規模大気波動の発生、伝搬、そしてスーパーローテーションと呼ばれる金星特有の高速東西風への影響に着目をして、データ解析と理論両面から研究を実施した。我が国の金星探査機「あかつき」の熱赤外観測データ、および地上大型望遠鏡を用いた金星の熱放射観測により、地形に固定された巨大な波動現象が雲頂高度に現れること、それが何度も発生していることを初めて明らかにした。加えて従来から知られていたケルビン波、ロスビー波においても、東西風速の時間変化に合わせて伝搬のしやすさを変え、異なる時期に異なる加速・減速を金星大気に与えうることを理論・観測両面から新たに示した。本研究課題はこれまで安定と思われてきた金星大気スーパーローテーションに近年見出された時間変動性について、観測的事実・理論の両面からその成因を探ることを目的としている。初年度は1.大気の加速・減速に寄与しうる惑星規模の波動に着目し、地上大型望遠鏡による中間赤外を用いた雲頂での温度擾乱観測の実施、2. VenusExpress/Venus Monitoring Camera(VMC)が捉えた紫外吸収模様の時間変動性と風速変動に見られた大気波動との関連性調査を実施した。加えて金星探査機あかつきの熱赤外線カメラデータから熱潮汐構造を抽出するための解析、熱赤外観測データ解析から得られた知見をもとに衛星画像内の熱的特異点検知可能性への研究展開を行った。1.金星観測好機にハワイ・マウナケア山にあるIRTF望遠鏡搭載のSpeX装置を利用し、5um波長帯による金星夜面からの赤外線放射を観測した。その結果、赤道域から中高緯度帯に伸びる惑星規模の温度擾乱構造が時折発生していることを見出した。その成因はまだ不明であるが温度擾乱をもたらす惑星大気に着目をして解析を進めている。また小スケール擾乱構造の調査から、秒速100mで流れる大気の中で地面に固定されたかのような成分の存在を見出した。この成分は従来考えられてきた金星大気モデルでは説明できないものであり、新しい理論構築を要請するものである。2.大気波動のもたらす大気への影響を調査するため、風速変動がみられる時期においてVMCが捉えた紫外吸収模様変化の周期解析を行った。その結果風速変動と全く同じ周期に雲の明暗変化が現れることを見出し、惑星規模での明暗変化が波動の伝搬に依存していることを示した。またこの知見は他の大型望遠鏡でも見られた紫外模様の周期的変動の成因に説明を与え、金星大気中での惑星規模大気波動の定常的な存在について示唆を得られている。金星観測に合わせ予定していた大型望遠鏡観測を実施し、良好なデータが得られた。そのデータからは定在構造というこれまで知られていなかった現象を見出すことができた。またこの現象について海外の研究者と議論を重ね共同で研究を進められている。加えて本研究で得られた惑星規模構造についての知見を活かし、地上望遠鏡で得られた紫外模様の周期的変動性について説明を与えることができた。このように観測成果に基づく研究について議論を深めることが出来た一方、観測成果をより理解するため数値計算による理論的研究も進めている。本年度は現実的な金星大気を模したシミュレーション空間の中に観測されたような波動を導入することができている。研究の中で作成した解析プログラム、ツールについて、これらの応用展開により金星探査機あかつきのデータ解析体制を充実させることができたことに加え、現象が類似する異なるターゲットへのデータ解析へ展開を持つことができた。以上のことから本年度は順調な研究展開ができたものと考えている。本年度は1.現実的な金星大気場のなかで東西風速に取りえる変動を与え、惑星スケールのKelvin波、Rossby波の伝搬特性の違いを可視化、2.金星軌道に投入されたあかつき取得の金星画像解析から、地形に固定された定在構造が大気に存在することを発見、3.あかつきデータ処理に用いたジオメトリ計算を応用し、地球観測衛星においてもこの計算が有効に利用できることを示した。1.過去の観測から金星雲頂高度において、東西風速に30m/sもの変動が存在することが報告されている。この観測事実に基づき、風速が速い時期と遅い時期を模擬し、さらに中緯度ジェットの有無を加えて金星大気をモデル化し、その中をKelvin波、Rossby波どう伝搬するかを調査した。この結果風速の速い、遅いと中緯度ジェットの有無が合わさってKelvin波、Rossby波の伝搬性に影響を与えることを示し、それぞれ異なる大気加速をもたらすことを示した。2.金星軌道投入時の観測であかつきが発見した巨大な弓状構造について、その後の中間赤外線カメラ(LIR)のデータ解析により、この構造が背景風に流されず定在する波動的現象であることを見出した。これまで見逃されていた風速を減速させうる現象であり、あかつきの主要な成果として発表されている。3.あかつきの画像データ解析で用いられるジオメトリ計算を地球観測衛星に応用し、可視画像に写る地形の位置関係から衛星の姿勢を決定する手法を開発した。惑星探査起源のデータ解析手法が地球観測衛星を含む衛星一般にも適応可能であることを示した。

我が国の金星探査機「あかつき」の熱赤外観測データ、および地上大型望遠鏡を用いた金星の熱放射観測により、地形に固定された巨大な波動現象が雲頂高度に現れること、それが何度も発生していることを初めて明らかにした。加えて従来から知られていたケルビン波、ロスビー波においても、東西風速の時間変化に合わせて伝搬のしやすさを変え、異なる時期に異なる加速・減速を金星大気に与えうることを理論・観測両面から新たに示した。観測成果を理解するため、金星大気を模した数値計算の実施を進める。また続々とデータが増えてきている金星探査機あかつきの観測結果と、これまでの研究で得られた地上観測成果を組み合わせ、周期的変動性に着目した解析を進める。惑星大気波動の特性を明らかにすることで、金星大気成層圏で生じている風速変動(スーパーローテーションに対する加速・減速量)へ大気波動がもたらす影響について定量的な評価を行い、その解明を目指す。惑星気象学地上観測データ解析・データ保持に購入予定であったデータストレージ用機材について、所属機関により配分された機材が利用可能となった。そのため当初申請していた研究費用の一部が削減されたため次年度使用額が生じた。金星探査機あかつきが成功裏に軌道投入に成功したことから国内外に研究協力の枠組みが広がっており、研究計画当初に比べ増加が見込まれる研究打ち合わせ、成果発表のための旅費・成果発表費として使用することを計画している。
紫外線損傷塩基を識別する抗体分子を用いたDNA修復機構の研究

以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.(1)シクロブタン型チミンダイマーまたは(6-4)光産物を特異的に認識する1本鎖抗体(TDM2scFv抗体または64M5scFv抗体)を大腸菌システムにより大量調製し,バイオセンサー(BICcore)を用いて,損傷塩基を含む合成オリゴヌクレオチドとの相互作用を速度論的に解析した.両scFv抗体とも,特異的な結合が観察され、結合速度定数kass,解離速度定数kdissならびに解離定数Kdが得られた.TDM2scFvおよび64M5scFv抗体の抗原アナログd8merに対するKd値は,それぞれ7.9±0.1×10^<-11>,1.0±0.1×10^<-10>となった.また,抗原アナログの鎖長を変化させて得られたkassおよびkdiss値から,scFv抗体はFab抗体同様の抗原結合特性を有していることが分かった.また,塩濃度変化の実験から,TDM2scFv抗体の抗原結合には静電相互作用が重要であり,疎水的相互作用が結合を安定化しているという結果が示唆された.このような解析,評価法は抗体分子の改変を進めていく上で有効であることが確認された.(2)TDM2scFv抗体のHCDR3へのランダム変異導入により,天然型TDM2scFv抗体と同程度の抗原結合活性を持つクローンがいくつか得られ,その中にわずかながら天然型scFvより強い活性を持つものがあった.(3)TDM2scFv抗体および64M5scFv抗体にSV40のVP2のNLSを含む42アミノ酸領域を融合させ,真核細胞の核への導入が可能なscFv抗体分子の作製を行っている.VP2のNLS領域の遺伝子合成は完了しており,現在,scFv抗体遺伝子発現ベクターの構築を行っている.以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.(1)シクロブタン型チミンダイマーまたは(6-4)光産物を特異的に認識する1本鎖抗体(TDM2scFv抗体または64M5scFv抗体)を大腸菌システムにより大量調製し,バイオセンサー(BICcore)を用いて,損傷塩基を含む合成オリゴヌクレオチドとの相互作用を速度論的に解析した.両scFv抗体とも,特異的な結合が観察され、結合速度定数kass,解離速度定数kdissならびに解離定数Kdが得られた.TDM2scFvおよび64M5scFv抗体の抗原アナログd8merに対するKd値は,それぞれ7.9±0.1×10^<-11>,1.0±0.1×10^<-10>となった.また,抗原アナログの鎖長を変化させて得られたkassおよびkdiss値から,scFv抗体はFab抗体同様の抗原結合特性を有していることが分かった.また,塩濃度変化の実験から,TDM2scFv抗体の抗原結合には静電相互作用が重要であり,疎水的相互作用が結合を安定化しているという結果が示唆された.このような解析,評価法は抗体分子の改変を進めていく上で有効であることが確認された.(2)TDM2scFv抗体のHCDR3へのランダム変異導入により,天然型TDM2scFv抗体と同程度の抗原結合活性を持つクローンがいくつか得られ,その中にわずかながら天然型scFvより強い活性を持つものがあった.(3)TDM2scFv抗体および64M5scFv抗体にSV40のVP2のNLSを含む42アミノ酸領域を融合させ,真核細胞の核への導入が可能なscFv抗体分子の作製を行っている.VP2のNLS領域の遺伝子合成は完了しており,現在,scFv抗体遺伝子発現ベクターの構築を行っている.
肝癌の浸潤・転移環境を標的とした複合遺伝子治療

【目的】進行肝癌は転移や再発が多く有効な治療法が確立されていない。中村らは、新生腫瘍血管を介して癌細胞を浸潤・転移させる作用を有する肝細胞増殖因子(HGF)を阻害するのがHGF分子内構造体であるNK4であることを報告した。治療成績向上に感染腫瘍細胞の融解壊死等の抗腫瘍効果を発揮する腫瘍融解ウイルスとNK4を用いて新たな肝癌遺伝子治療の有効性を検討する。同時に肝癌の約7割がα-フェト蛋白(AFP)産生腫瘍であることから、AFP産生腫瘍に特異的に取り込まれる腫瘍融解ウイルスを作成してより特異性の高い肝癌治療の臨床応用の実現するため本研究を行った。【方法】AFP発現制御能を付加した腫瘍融解ウイルス(AdAFPep/Rep)とNK4を組み込んだ腫瘍融解ウイルス(AdCMZ.NK4;大阪大中村先生、東北大貫和先生より供与)を作成し、肝癌細胞株を移植したヌードマウスに対する抗腫瘍効果や癌浸潤・転移に対する両腫瘍融解ウイルスの遺伝子治療効果を検討した。【成績】腫瘍融解ウイルスは肝癌細胞株(HuH-7、HepG2)のアポトーシス作用と細胞障害性を発揮したが正常肝細胞には無効であった。AdCMZ.NK4併用による遺伝子治療により相加・相乗効果を認めた。肝癌細胞のin vitro浸潤実験ではAdCMZ.NK4が肝癌細胞浸潤を強く阻害した。移植肝癌に対する抗腫瘍効果も両腫瘍融解ウイルス遺伝子治療で最も顕著に認めた。浸潤・転移能の指標となるCD31、VEGF、MMP-2、MMP-9の発現抑制はAdCMZ.NK4遺伝子治療で強く、両者の併用でそれぞれの効果が増強した。【結語】腫瘍融解ウイルスとNK4による新たな肝癌遺伝子治療は、特異性と優れた抗腫瘍効果と癌浸潤・転移に対する有効性が認められた。特に癌の浸潤・転移の阻止は生命予後を格段に改善する。1997年、中村らは、新生腫瘍血管を介して癌細胞を浸潤・転移させる作用を有する肝細胞増殖因子(HGF)を阻害するのがHGF分子内構造体であるNK4であることを報告した。そこで、治療成績向上に感染腫瘍細胞の融解壊死等の抗腫瘍効果を発揮する腫瘍融解ウイルスとNK4を用いて新たな肝癌遺伝子治療の有効性を検討する。さらに、肝癌の約7割がα-フェト蛋白(AFP)産生腫瘍であることから、AFP産生腫瘍に特異的に取り込まれる腫瘍融解ウイルスを作成してより特異性の高い肝癌治療の臨床応用の実現するため本研究を行った。【方法】AFPエンハンサー/プロモーター制御能を付加した腫瘍融解ウイルス(AdAFPep/Rep)とNK4を組み込んだ腫瘍融解ウイルス(AdCMZ.NK4;大阪大中村先生、東北大貫和先生より供与)を作成し、肝癌細胞株や肝癌細胞株を移植したヌードマウスに対する抗腫瘍効果や癌浸潤・転移に対する両腫瘍融解ウイルスの遺伝子治療効果を検討した。【成績】腫瘍融解ウイルスは肝癌細胞株(HuH-7、HepG2)の向アポトーシス作用と細胞障害性を発揮したが正常肝細胞には無効であった。特にAdCMZ.NK4併用による遺伝子治療により相加・相乗効果を認めた。がん原遺伝子c-Srcの発現抑制やDNA酸化障害指標8-OHdGの発現はin vivo、in vitro共にAdAFPep/

Rep遺伝子治療で強く、浸潤・転移能の指標となるCD31やVEGFの発現抑制はAdCMZ.NK4遺伝子治療で強く、両者の併用でそれぞれの効果が増強した。【結語】腫瘍融解ウイルスとNK4による新たな肝癌遺伝子治療は、特異性と優れた抗腫瘍効果に加えて、癌浸潤や転移に対しても高い有効性が認められた。今後さらに、in vivo実験の追試・確認と作用機序の詳細を検討する。【目的】進行肝癌は転移や再発が多く有効な治療法が確立されていない。特に癌の浸潤・転移の阻止は生命予後を格段に改善する。1997年、中村らは、新生腫瘍血管を介して癌細胞を浸潤・転移させる作用を有する肝細胞増殖因子(HGF)を阻害するのがHGF分子内構造体であるNK4であることを報告した。そこで、治療成績向上に感染腫瘍細胞の融解壊死等の抗腫瘍効果を発揮する腫瘍融解ウイルスとNK4を用いて新たな肝癌遺伝子治療の有効性を検討する。さらに、肝癌の約7割がα-フェト蛋白(AFP)産生腫瘍であることから、AFP産生腫瘍に特異的に取り込まれる腫瘍融解ウイルスを作成してより特異性の高い肝癌治療の臨床応用の実現するため本研究を行った。【方法】AFPエンハンサー/プロモーター制御能を付加した腫瘍融解ウイルス(AdAFPep/Rep)とNK4を組み込んだ腫瘍融解ウイルス(AdCMZ.NK4;大阪大中村先生、東北大貫和先生より供与)を作成し、肝癌細胞株や肝癌細胞株を移植したヌードマウスに対する抗腫瘍効果や癌浸潤・転移に対する両腫瘍融解ウイルスの遺伝子治療効果を検討した。【成績】腫瘍融解ウイルスは肝癌細胞株(HuH-7、HepG2)の向アポトーシス作用と細胞障害性を発揮したが正常肝細胞には無効であった。特にAdCMZ.NK4併用による遺伝子治療により相加・相乗効果を認めた。肝癌細胞のin vitro浸潤実験ではAdCMZ.NK4が肝癌細胞浸潤を強く阻害した。移植肝癌に対する抗腫瘍効果も両腫瘍融解ウイルス遺伝子治療で最も顕著に認めた。がん原遺伝子c-Srcの発現抑制やDNA酸化障害指標8-OHdGの発現はin vivo、in vitro共にAdAFPep/Rep遺伝子治療で強く、浸潤・転移能の指標となるCD31、VEGF、MMP-2、およびMMP-9の発現抑制はAdCMZ.NK4遺伝子治療で強く、両者の併用でそれぞれの効果が増強した。