hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
筋強直性ジストロフィーにおける選択的スプライシング異常とその分子機構の解明

本研究では、筋強直性ジストロフィー(DM)の選択的スプラシング異常に着目して研究を行い、特にABLIM1の選択的スプライシングの分子機構について培養細胞を用いて調べた。すると、PTBP1というスプライシング因子をマウス筋芽細胞C2C12に過剰発現させると、ABLIM1のスプライシングは、DM患者で見られる異常なスプライシングに変化した。逆にsiRNAでPTBP1の発現量をノックダウンさせると、ABLIM1のスプライシングは正常型へと発現が変化した。以上のことより、DM患者やDMモデルマウスの骨格筋ではPTBP1の発現量が通常の骨格筋より増加している可能性があると考え、PTBP1のタンパク質とmRNAの発現量を、それぞれウェスタンブロットとリアルタイムPCRで定量した。すると、PTBP1のタンパク質発現量は、DMモデルマウスでは、正常のマウスより有意に発現量の増加が見られ、同様にDM患者においても、PTBP1タンパク質発現量の増加傾向が見られた。しかし、PTBP1のmRNAの発現量は、DM患者、DMモデルマウスの両者において、正常の骨格筋と比べて発現量の増加は見られなかった。以上のことから、DM患者の骨格筋では、PTBP1の発現量がタンパク質レベル増加しており、それによってABLIM1など様々な遺伝子で選択的スプライシング異常が引き起こっている可能性がある。したがって、PTBP1のタンパク質発現量を減少させるような薬剤を見つけることができれば、スプライシングを正常化させる新規治療法の開発につながる。また、どのようにPTBP1のタンパク質発現量がDM患者で増加しているのか、その分子機構を調べることができれば、そこをターゲットとした薬物治療も可能になることから、本研究のスプライシング分子機構の研究は、治療法開発につながる意義のある研究である。26年度が最終年度であるため、記入しない。最初の研究計画と多少異なる方法で実験を進めているが、目的は同様であり、結果が出始めているため。なお、リピート伸長のメカニズムの解析は、今回の研究目的から除外している。当初、うまくいっていると思っていたノックダウン実験がうまくいっていなかったことから、条件検討やノックダウン方法の手法を変更していたら、実験がやや遅れてしまった。今後、PDLIM3においては、マス解析の方法を確立することが今後の方策であり、タンパク質が同定でき次第、そのタンパク質間結合が症状とどのように関係しているかを探求していく。ABLIM1においては論文にまとめることが目標だが、RBM20の発現量がDM患者の心臓で異常になっていないかどうか調べることも重要であるリピートの伸長因子を解析するためのアッセイを確立することを計画の一つにしていたが、実験量、方法も非常に難しく、時間がかかるため、今回は削除することとした。スプライシング因子の過剰発現系によるABHM1のスプライシングを制御している因子を同定できたので、今後はノックダウン実験でもこれらを確認する。
小腸の酸化的ストレスの防御機構

小腸は消化吸収を担う器官であるため生体外異物に暴露される機会が多いと考えられるが、今回単離したラット小腸を用いて鉄-EDTAによる酸化的ストレスの影響を検討した。新鮮なラット小腸を取り出し縦に二分、一方を対照とし他方を鉄-EDTA溶液内で保温、これを酸化的ストレスの試料とした。たくさんのラット小腸の試料を取り扱う上で卓上夛本架遠心機は大いに役だった。指標として選んだ酵素は細胞内チオールの恒常性という観点から主としてグルタチオン関連酵素である。小腸のこれら酵素の研究はほとんどなされておらず、先ず分子量ならびに等電点など諸性質を明かにした。ラット小腸の還元型グルタチオン含量は酸化型のそれに比べて200倍も多くラット小腸は極力還元状態に保たれていることがわかった。単離したラット小腸に鉄-EDTAによる酸化的ストレスを負荷すると、乳酸脱水素酵素及びグルタチオンS-トランスフェラーゼの失活が観察された。この時、グルタチオンの還元型は減少し酸化型が増加したが、大部分の還元型は依然として残存していたので還元型グルタチオンは抗酸化剤ではあるものの、酸化的ストレスを防御するオールマイテイではないことを示唆している。なお、チオールトランスフェラーゼ、グルタチオンレダクターゼ、グルタチオンパーオキシダーゼ、チオレドキシンレダクターゼ、G6P脱水素酵素はいずれもその活性に変動はなかった。以上の結果から、酸化的ストレス下におかれた小腸ではグルタチオンレダクターゼ、チオレドキシンレダクターゼ,及びG6P脱水素酵素など失活しない酵素が相互に機能して還元等量を準備しつつ細胞内チオールの恒常性を保持し、一方では失活する酵素、乳酸脱水素酵素及びグルタチオンS-トランスフェラーゼ等は還元型グルタチオンがそうであるように、自らの犠牲のもと酸化的ストレスに対して防御的に働くことを予測させる。
アート錯体を用いる遷移金属触媒反応の開発

五員環生理活性化合物を合成する方法として,簡単な構造の五員環化合物上に原子団(側鎖)を入れていくやり方は最も効率的である。"簡単な構造の五員環化合物"として入手容易な4-cyclopentene-1,3-diolmonoacetate(1)に注目し,1への側鎖導入の可能性を研究した。近年我々の研究室ではアリルアルコール誘導体(acetate,carbonate)と容易に反応するホウ素アート錯体(相当する3価のボロネートエステルにMeLiを作用させて簡単に調製できる)を見いだしている。そこでこの種のアート錯体と1との反応を検討することにした。反応の検討にはフェニルボロネートエステルとMeLiから調製したフェニルホウ素アート錯体を用いた。初めに鎖状のアリル化合物に対して最適だった条件下(NiCl_2(PPh_3)_2(10mol%),THF、room temp.)でこの反応を試みたところ,望む生成物は全く得られずcyclopentenoneや3-phenylcyclopentanoneが副生するのみであった。種々検討した結果,フェニルボロネートエステルとn-BuLiから調製した新しいボレートを用い、さらにt-BuCN,Nalを共存させた系で反応を行うとtrans 2-cyclopentene-4-phenyl-1-olが位置選択的(13:1)かつ立体特異的に得られることが判明した。この新しい反応系を用いるとフェニル基以外のアリールホウ素アート錯体やアルケニルホウ素アート錯体も1と効率的に反応し,五員環上にアリール基やアルケニル基を選択的に導入できた。この反応を活用して光学活性なPGA_2合成中間体の合成に成功した。
(プロ)レニン受容体を介した膵管癌の進化メカニズムの解明

昨今の癌ゲノムの大規模なシーケンス研究により、ドライバー遺伝子のみならず、クロマチン・エピゲノム関連の制御因子の体細胞突然変異、染色体レベルではゲノムの多様化を創出するクロモスリプシスの発見を導いた。しかし、どのような分子メカニズムで癌の多様化が生じるのか?という命題に対する回答は、依然として不明のままである。申請者らは、H2829の挑戦的萌芽研究において、ヒト膵管上皮細胞に(プロ)レニン受容体[以下, (P)RR]を過剰発現させると、全ゲノムレベルで大規模なゲノム不安性が生じることを見出した。本研究では、(P)RR過剰発現ヒト膵管上皮細胞を用いて膵管癌の進化メカニズムを解明する。
ヒ素高蓄積植物モエジマシダ根圏で亜ヒ酸酸化活性を担う新規亜ヒ酸酸化細菌の解析

土壌や水のヒ素汚染を浄化する方法として、植物を用いた浄化方法(ファイトレメディエーション)が有効な手段の一つとして考えられている。シダ植物の一種であるモエジマシダは、ヒ素高蓄積植物として知られており、環境中のヒ酸を根から吸収するが、亜ヒ酸はヒ酸に酸化してから吸収する。申請者は、モエジマシダ根圏から、亜ヒ酸酸化反応を行う細菌Pandoraea sp. NE5株を単離した。しかし、NE5株は従来知られている亜ヒ酸酸化酵素遺伝子を保持していない。そこで本研究では、NE5株の亜ヒ酸酸化機構や根圏でのヒ素吸収への関与の仕方を明らかにすることで、モエジマシダを用いたヒ素汚染浄化方法の開発に貢献する。
モノクロタリン誘発性肺高血圧における血管病態の解明

研究目的は、モノクロタリン誘発性肺高血圧における血管病態を解明することである。モノクロタリンによる肺高血圧の機序として、血管拡張作用の減弱が起こっていることが予測されるため、作用機序の異なる血管拡張作用をもつ新しい心筋梗塞治療薬であるJTV-519やNa^+/Ca^<2+>交換機構阻害薬のKB-R7943の肺血管拡張作用の変化を検討することにした。雄性ウイスターラットにモノクロタリンを皮下注し、3週間後に肺高血圧を発症しているのを確認した。そのモノクロタリン誘発性肺高血圧ラットの肺動脈を取り出し、23mmの血管リングを作製した。マイクロイージーマグヌスを用い、酸素95%二酸化炭素5%で通気したKrebs-Henseleit液中で最適の静止張力を与え定常状態をえた。ノルエピネフリンで収縮させた肺動脈リングに、新しい心筋梗塞治療薬であるJTV-519を段階的に投与し容量反応曲線を描き、NOS阻害薬やGlibenclamideの前投与の影響も調べた。またNa^+/Ca^<2+>交換機構阻害薬KB-R7943も段階的に投与し容量反応曲線を描いた。結果は、JTV-519はコントロール群で容量依存性に血管拡張を示した。その拡張作用はNOS阻害薬やGlibenclamideに影響されなかった。またモノクロタリン群ではコントロール群に比べ拡張作用が抑制された。またKB-R7943は肺血管拡張作用を示さなかった。これらの実験結果より、モノクロタリンはJTV-519の肺血管拡張作用の感受性を変化させることがわかった。JTV-519の血管拡張の機序は、NOやATP感受性カリウムチャンネルの可能性は低くその他の機序が考えられた。また肺血管のトーヌスの調節にはNa^+/Ca^<2+>交換機構は関与していないことが示唆された。モノクロタリンによる肺高血圧の機序として、血管拡張作用の減弱または血管収縮機転の強弱が起こっていることが予測される。そこでまず血管拡張作用により血管平滑筋のトーヌスを調節している因子であるATP感受性カリウムチャンネルやフォスフォジエステラーゼの関与を検討することにした。ノルエピネフリンで収縮させた肺動脈リングに、新しいATP感受性カリウムチャンネル作動薬であるJTV506を段階的に投与し容量反応曲線を描き、NOS阻害薬の前投与の影響も調べた。またフォスフォジエステラーゼV阻害薬であるZaprinastやDipyridamoleも段階的に投与し、それぞれコントロール群と比較した。結果は、JTV506は10^<-5.5>M以上の濃度でコントロール群に比べ有意に血管拡張作用を示し、その増強作用はNOS阻害薬により消失した。またZaprinastやDipyridamoleも血管拡張作用を示したが、コントロールとの差は認められなかった。これらの実験結果より、モノクロタリンはフォスフォジエステラーゼV阻害薬の感受性は変化させなかったがATP感受性カリウムチャンネルへ何らかの作用をきたしていることが考えられ、その機序にNOが関与していることがうかがわれる。臨床的に考えるとATP感受性カリウムチャンネル作動薬やフォスフォジエステラーゼV阻害薬の肺高血圧への治療薬としての可能性が示唆される。
中国書画の表装に関する基礎的研究

『装〓史』明・周嘉冑などの中国歴代の文献から、書画の表装に関する記載を収集・整理した。また、プリンストン大学付属美術館・香港中文大学文物館・京都国立博物館・大阪市立美術館・五島美術館・三井記念美術館・台東区立書道博物館等に所蔵される主として中国の書画を調査し、表装の諸データおよび画像データを収集した。文献調査・『歴代名画記』唐・張彦遠、『書史』・『画史』北宋・米〓、『南村輟耕録』元・陶宗儀等から、書画の表装に関する記載を収集・整理した。作品調査・北京故宮博物院「清宮善本碑帖特展」を視察、清朝宮廷作品46件を調査した。・香港中文大学文物館の所蔵する漢碑「夏承碑」「西嶽華山廟碑」2件を調査した。・三井記念美術館の所蔵する中国書跡14件を調査した。・五島美術館の所蔵する中国書跡2件を調査した。・京都国立博物館の所蔵する中国書画8件を調査した。・大阪市立美術館の所蔵する中国書画11件を調査した。・東京国立博物館の所蔵する墨蹟(日本表装)8件を調査した。本研究において得られた成果の一部を、東京国立博物館と台東区立書道博物館の連携企画展である「拓本とその流転」に反映させ、論文「游丞相蔵玉泉本蘭亭序について游似の蘭亭序コレクション」(『拓本とその流転』)として発表した。また、北京故宮博物院における清宮蔵善本碑帖特展専題座談会において、「日本に現存する清朝宮蔵の拓本についてとして発表した。将来的には、毎年継続して実施している中国書画の修理においても、修理方針を検討する際の基礎データとして有効な資料となりうる。文献調査・『書史』『画史』北宋・米〓、『南村輟耕録』元・陶宗儀、『斉東野語』南宋・周密等から、書画の表装に関する記載を収集・整理した。作品調査・北京故宮博物院「蘭亭特展」を視察、清朝宮廷作品約50件を調査した。・遼寧省博物館の所蔵する中国書跡50件を調査した。・大阪市立美術館の所蔵する中国書画5件を調査した。・京都国立博物館の所蔵する中国書画20件を調査した。・台東区立書道博物館の所蔵する中国書跡12件を調査した。・東京国立博物館の所蔵する中国書跡6件を調査した。上記の成果に基づいて、国内国外の研究会で発表し、東京国立博物館と台東区立書道博物館の連携企画展に反映させた。本研究は、中国の諸文献から表装に関する記述を整理し、歴史的な様式の変遷を明らかにしつつ、日本および中国に収蔵される中国書画を実際に調査し、「中国表装」および「日本表装」の双方について、時代や地域ごとの様式や素材のデータを網羅的に収集・整理し、表装の変遷に関する体系的な調査研究を進めようとするものである。『装コウ史』明・周嘉冑などの中国歴代の文献から、書画の表装に関する記載を収集・整理した。また、プリンストン大学付属美術館・香港中文大学文物館・京都国立博物館・大阪市立美術館・五島美術館・三井記念美術館・台東区立書道博物館に所蔵される主として中国の書画を調査し、表装の諸データおよび画像データを収集した。本研究は3年計画の2年目にあたり、文献の整理および内外に現存する作品調査から得られたデータは着実に増え、その成果の一部を、東京国立博物館と台東区立書道博物館の連携企画展や、国内・国外における研究発表会において公表することができた。将来的には、毎年継続して実施している中国書画の修理において、修理方針を検討する際の基礎データとして有効な資料となりうる。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は本研究の最終年にあたる。研究計画に基づいた調査を実施するとともに、過去2年間で蓄積されたデータを整理・分析していきたい。また可能であれば、科学的な主張も用いながら継続して研究を進めたい。
一般相対論の総合的研究

本研究は1991年6月に京都で開かれる一般相対論に関する第6回マ-セルグロスマン会議を準備するに際してわが国における一般相対論研究のすそ野をひろめることを目的としていた.すそ野の具体的方向としては一つは日本における宇宙及び重力に関する観測・実験であり,もう一つは素粒子の理論である.国際会議の準備とも関連して一般相対論の研究動向について討論が行なわれ,それを学会のワ-クショップの種類、招待構演者の選定などに参考した.以下では本研究の経費が使用された活動を中心に研究実績の概要を記す.本年度は重力波の測定を目指した日本での計画が出発した年であった.レ-ザ-干渉計の建設を中心課題とする重点領域の準備研究とも関連をもってこの研究は進められた.特に重力波発生に関して,拡張インフレ-ションモデルと原始重力波といった宇宙論的問題や二重星パルサ-の終末と重力波といった天体物理の問題について議論された.また,干渉計が出来た場合の第五の力をさぐる実験方法などについて議論された.このように実験家と一般相対論の理論家合同の議論なされるようになったことは,今後の新しい研究領域の開拓に役立つものと考えられる.最近の素粒子論研究の中で重力を含む統一理論が大きな課題になっている.この研究は目的として一般相対論と重なるものであるのみならず最近の研究はその手法においても一般相対論で培われてきた数学的方法と関連するものも多い.この結果,国際会議においてもこの分野を取り込むかたちになっている.本研究は1991年6月に京都で開かれる一般相対論に関する第6回マ-セルグロスマン会議を準備するに際してわが国における一般相対論研究のすそ野をひろめることを目的としていた.すそ野の具体的方向としては一つは日本における宇宙及び重力に関する観測・実験であり,もう一つは素粒子の理論である.国際会議の準備とも関連して一般相対論の研究動向について討論が行なわれ,それを学会のワ-クショップの種類、招待構演者の選定などに参考した.以下では本研究の経費が使用された活動を中心に研究実績の概要を記す.本年度は重力波の測定を目指した日本での計画が出発した年であった.レ-ザ-干渉計の建設を中心課題とする重点領域の準備研究とも関連をもってこの研究は進められた.特に重力波発生に関して,拡張インフレ-ションモデルと原始重力波といった宇宙論的問題や二重星パルサ-の終末と重力波といった天体物理の問題について議論された.また,干渉計が出来た場合の第五の力をさぐる実験方法などについて議論された.このように実験家と一般相対論の理論家合同の議論なされるようになったことは,今後の新しい研究領域の開拓に役立つものと考えられる.最近の素粒子論研究の中で重力を含む統一理論が大きな課題になっている.この研究は目的として一般相対論と重なるものであるのみならず最近の研究はその手法においても一般相対論で培われてきた数学的方法と関連するものも多い.この結果,国際会議においてもこの分野を取り込むかたちになっている.
がん遺伝子産物による細胞間接着の破壊と細胞運動亢進の制御機構

細胞間接着と細胞の増殖・運動の制御機構の間には密接なクロストークが存在しており、その破綻が、がん細胞の増殖・浸潤・転移をひき起こす。RasやSrc等のがん遺伝子産物は細胞の異常増殖をひき起こすとともに、Rhoファミリー低分子量G蛋白質とクロストークしながら細胞間接着の破壊とがん細胞の運動能を亢進させている。しかし、がん遺伝子産物による細胞間接着の破壊機構やRhoファミリー低分子量G蛋白質とのクロストークの分子機構は不明である。私どもは、新しい細胞間接着機構ネクチン-アファディン系を見出し、この系が細胞間接着の形成を調節していること、さらにRhoファミリー低分子量G蛋白質を活性化して細胞間接着と細胞の運動を制御することを明らかにした。そこで、RasやSrc等のがん遺伝子産物とネクチン-アファディン系との相互作用および、ネクチン-アファディン系とRhoファミリー低分子量G蛋白質との相互作用の分子機構を解析することで、がん遺伝子産物により細胞間接着の破壊と細胞運動亢進の制御機構を解明することを試みる。本年度は以下の結果を得た。1.ネクチンが、がん遺伝子産物c-Srcをリクルートし活性化することを明らかにした。2.ネクチン依存性に活性化されるCdc42とRacの分子機構について検討し、それぞれの活性化制御因子として、FRGとVav2を同定した。これらは活性化されたc-Srcによって直接リン酸化されることを明らかにした。3.また、活性化されたc-Srcは、Crk, C3Gを介してRap1を活性化することを明らかにした。細胞間接着と細胞の増殖・運動の制御機構の間には密接なクロストークが存在しており、その破綻が、がん細胞の増殖・浸潤・転移を引き起こす。RasやSrc等のがん遺伝子産物は細胞の異常増殖を引き起こすとともに、Rhoファミリー低分子量G蛋白質とクロストークしながら細胞間接着の破壊とがん細胞の運動能を亢進させている。そこで、RasやSrc等のがん遺伝子産物とネクチン-アファディン系との相互作用および、ネクチン-アファディン系とRhoファミリー低分子量G蛋白質との相互作用の分子機構を解析することで、がん遺伝子産物による細胞間接着の破壊と細胞運動亢進の制御機構を解明することを試みる。1.ネクチンが、がん遺伝子産物c-Srcを活性化することを明らかにした。さらにこのc-Srcの活性化がCdc42の活性化とそれに引き続き起こる細胞間接着形成に必須であることも明らかにした(リバイス中)。2.ネクチンによるCdc42の活性化が、カドヘリンによるRacの活性化と細胞間接着装置であるアドヘレンスジャンクションの形成、さらにタイトジャンクションの形成に必須であることを明らかにした。3.ネクチン活性化物質を用いて、ネクチンがCdc42とRacを介して転写因子制御蛋白質c-Jun N-terminal kinaseを活性化することを明らかにした。4.ネクチン依存性に活性化されるCdc42の活性化制御因子(GEF)検索し、FRGを同定した(リバイス中)。
光学活性ピリジン類をビルディングブロックとする超分子機能素子の開発

生体系に匹敵する優れた選択性を有する分子認識系や不斉錯体触媒系、さらに多重らせん構造系など高次集積分子系を構成する超分子素子の開発は、新機能分子の創生に不可欠であるとともに、生体機能への化学的なアプローチとしても大きな意義を持ち、分子科学・物質科学・材料工学などの分野で基礎・応用両面にわたり重要な研究課題である。筆者らは、加水分解酵素リパーゼを用いるとラセミピリジンアルコール誘導体を効率良く光学分割できること、さらにさまざまな光学活性なピリジン誘導体へと変換できることを先に見い出した。またこれら不斉ピリジン誘導体を基盤として、銀イオンに対して実用レベルでの優れた選択性を示す非環状ポダンドの化学合成等に成功を収めてきた。本年度特定領域研究では、光学活性ピリジン類のビルディングブロックとしての特性を活用して、対HIV活性を示すPNU-142721の不斉合成や、新しい錯体触媒の構築に有効なトリボート型不斉配位子の合成へと展開した。PNU-142721の不斉合成:リパーゼ(Can di da ant arctica lipase)を用いる光学分割は種々のピリジルエタノール誘導体に対して適用可能であり、これをMorrisらによって合成対HIV治療薬として報告されているPNU-142721の不斉合成へと適用した。その結果総収率は20%で、優れた不斉選択性をもつ合成法を確立した。トリポード型不斉配位子の合成:光学活性ピリジルエタノールから誘導される光学活性メシル体とエチルアミン体とのカップリング反応によって、メチル置換基をもつトリポード型不斉配位子の光学異性体を系統的に合成することを明らかとし、不斉酸化反応などのための新たな金属錯体触媒の構築が可能となった。
新たな血小板機能評価方法の開発と緑茶カテキンによる血小板への影響についての検討

血栓性疾患や心血管疾患の発症機序の一つである血小板機能亢進の防止は、疾病の発症・進行防止に有効であり、近年、さまざまな抗血小板薬が開発され、治療に汎用されている。しかし、これら薬剤によって出血傾向などの副作用が発生し、重篤化すれば、致命的になることがある。よって、より副作用の少ない抗血小板薬の開発が必要である。本研究では、白血球などさまざまな細胞の機能に対する抑制作用の報告がある緑茶カテキン、特に生理活性の最も強いepigallocatechin gallate(EGCG)に注目し、血小板機能に及ぼす影響について検討した。その結果、EGCGは濃度依存的に血小板の凝集反応を抑制した。この作用は、EGCG添加後5分より認められ、2時間後も持続していた。この作用機序を解明するため、血小板表面に発現し、血小板の凝集および接着に深く関与するインテグリンに注目し、これらの発現及び機能に及ぼす影響を検討した。その結果、EGCGの濃度依存的にGPIIbIIIaの発現低下が認められた。GPIIbIIIa発現低下の作用時間は、血小板凝集抑制反応時と同様、作用後5分より認められたが、血小板洗浄によってEGCGを除去することによりGPIIbIIIa発現は回復した。しかし、その他のインテグリン(GPIaIIa、GPIb、GPIV)の発現変化は認められなかった。本研究では、EGCGは血小板表面上のGPIIbIIIaと結合し、その結果、血小板凝集惹起物質との結合を阻害し、血小板凝集を抑制すると考えられた。これまで、EGCGはリンパ球上のインテグリンと結合し、その機能を抑制・阻害することが報告されており、血小板に対しても同様の作用があると考えられた。また、血小板洗浄によってEGCG効果が消失することから、比較的弱い結合であると考えられた。EGCGを含む緑茶カテキンは特定保健用食品として認可を受けており、安全性、有効性は証明されている。よって、EGCGは血栓性疾患や心血管疾患の予防薬または治療薬として期待できる。
オルガネラ膜融合・膜分裂を制御する分子マシナリー

酵母から高等動物・ヒトに至る全ての真核生物は、多様な機能と形態を持つ細胞小器官「オルガネラ」をその細胞内に有する。各オルガネラは、細胞周期や細胞外環境などの生育状態に応じて、その形態つまりは「オルガネラ膜」をダイナミックに変化させるが、この「細胞内オルガネラ膜ダイナミクス」は、個々のオルガネラ固有の生命機能とも密接に相関し、細胞の生命活動の根幹を担う現象である。本研究課題では、「細胞内オルガネラ膜ダイナミクス」における2つの必須かつ根源的な生体反応、(1)膜融合と(2)膜出芽・分裂、これらの細胞内動作原理を分子レベルで統合的に理解することに挑戦した。そしてその達成のために、従来の「生きた細胞」を用いた遺伝学・細胞生物学的手法や、「細胞より単離したオルガネラ」を用いる生化学的手法ではなく、戦略的に「精製・純化した生体膜構成要素(膜タンパク質・脂質)」から人工的に機能的なオルガネラ膜を構築する「試験管内“完全"再構成系」を実験手法の中心に据えた。具体的には、当該年度において、出芽酵母およびヒト細胞における細胞内膜交通ネットワークをモデルに、小胞体ER・ゴルジ体・エンドソーム・リソソーム(液胞)のオルガネラ膜動態に働くSNAREファミリータンパク質、Sec1/Munc18ファミリータンパク質、そしてRab/Ypt GTPaseファミリーについて、組換えタンパク質の大量発現・精製から再構成プロテオリポソーム実験系の確立を達成し、それらを用いたin vitro膜ダイナミクス機能解析等により「オルガネラ膜融合・膜テザリング」過程における新たな分子機構を明らかにしている。24年度が最終年度であるため、記入しない。例えば、細胞内小胞輸送・メンブレントラフィック、オルガネラ継承、シナプス神経伝達、ホルモン分泌、エンドサイトーシス、そしてオートファジーなども細胞内オルガネラ膜ダイナミクスの一つである。本研究課題では、「細胞内オルガネラ膜ダイナミクス」における2つの必須かつ根源的な生体反応である、(1)膜融合と(2)膜出芽・分裂、これら二つの反応の細胞内動作原理を分子レベルで統合的に理解することに挑戦している。実験アプローチとしては、従来の「生きた細胞」を用いた遺伝学・細胞生物学的手法や、「細胞より単離したオルガネラ」を用いる生化学的手法ではなく、戦略的に「精製・純化した生体膜構成要素(膜タンパク質・脂質)」から人工的に機能的なオルガネラ膜を構築する「試験管内"完全"再構成系」を中心に据えている。当初の予定どおり、出芽酵母エンドソーム・リソソーム(液胞)系膜交通に関与するタンパク質因子群について、それらの大量発現・精製のための実験系の確立が順調に進展している。また、SNAREタンパク質群については、再構成プロテオリポソーム調製と膜融合アッセイ等を行い、多くの機能解析データが蓄積している。オルガネラ膜融合の分子機構に関わる研究プロジェクトについては、既存のSNAREタンパク質群に加えて、今後はSNAREシャペロンおよびテザリング複合体を含めた、より細胞内の生理的環境に近づく再構成系の構築を目標とする。オルガネラ膜出芽・分裂の理解を目指すプロジェクトにおいては、平成23年度から継続して、膜出芽のタンパク質因子群の大量発現・精製系の確立を中心に、実験の材料・物質的基盤の整備を最重要課題とする。
電気光学変調光周波数コムを用いたリアルタイム計測装置の開発

現在広く普及しているフーリエ変換赤外分光光度計に替わる、レーザーの専門家でなくても手軽に扱え、ロバストでフィールド環境でも利用可能な、1台のフリーランニング連続発振半導体レーザーと多段の電気光学変調器を用いた電子機器と光ファイバー結合ベースの新たなリアルタイム計測装置の研究開発を行い、その広帯域高分解能高速リアルタイム計測性能を活かした、環境ガスリモートセンシング、燃焼過程モニタリング、生体反応計測、長距離超精密距離計測への普及を図る。
亡命文学と神話に関する基礎的研究：フォンダーヌとヴォロンカを中心に

2018年度の研究成果として、学術論文「変身と幽霊ーイラリエ・ヴォロンカの散文作品におけるアイデンティティ」(『日本フランス語フランス文学会中部支部論集』第50号、日本フランス語フランス文学会中部支部、2018年6月、査読有)を発表した。科研費で購入した1940年代の散文作品を考察したもので、従来のヴォロンカ研究では触れられることのなかった散文作品と詩作品との間にある緊張関係、および散文と詩に通じる神話的表現の意義を解明した。また、2017年にアルゼンチン国立図書館で実施した文献調査の結果を基にして、研究発表「フォンダーヌとアルゼンチン:もうひとつのオデュッセイア」(金沢大学人文学類シンポジウム、金沢大学、2019年3月21日)を口頭で行った。フォンダーヌがスペイン語で発表した15篇のテクストがどのような文脈において紹介されたかを分析し、フランスとスペイン語圏にまたがる詩的運動を視野に入れてフォンダーヌを論じた、おそらく初めての論文である。この発表内容を含む研究成果は、国際学術誌Alkemie(Classiques Garnier, Paris)へ「Fondane en lettres argentines」と題するフランス語学術論文として投稿済みであり、査読を通過して、2019年7月に掲載予定である。いずれも神話と亡命文学の関係を論じたものである。2019年2月には、ルーマニアのティミショアラおよびブカレストで、研究者との情報交換、および文献調査を実施し、新たな知見を得ることができた。この出張調査を通じて、ルーマニアのユダヤ文化、フランスのポスト象徴主義文学、アルゼンチンのモダニズム文学を射程に収めたうえで、神話と詩と歴史が絡み合うフォンダーヌおよびヴォロンカの全体像を解明することが今後の研究課題であることを明確にすることができた。平成27年7月11日に、市民向けに公開された金沢大学人文学類シンポジウムで口頭発表を行い、フォンダーヌの『ユリシーズ』の文学史的意義を説いた。9月6日には、金沢大学サテライトプラザの市民向けミニ講演で、ユリシーズ神話の文学的受容の歴史と実例を解説し、フォンダーヌの『ユリシーズ』を取り上げた。いずれも、来聴者からの質問を受け、議論を深める機会を得た。また、9月18日には、日本比較文学会関西支部例会で口頭発表を行った。こちらは、専門家向けの学術発表であり、ユダヤ文学の専門家などから、的確なコメントを受け、研究を深めることができた。9月8日から13日にかけて、パリの国立図書館で、フォンダーヌとヴォロンカの作品が掲載された雑誌のマイクロフィルムを閲覧し、情報を整理した。従来の研究ではほとんど触れられることのなかった文献も発見し、今後、これらを論文にまとめて発表することで、研究を推進することができる。パリでは、ヴォロンカの評伝の著者にも面会し、研究情報や書誌情報を交換した。帰国後も、購入した図書のうち、ヴォロンカの散文作品4冊について、意見を交換した。研究の国際的ネットワークの確立に向けた一歩であり、今後、こうしたネットワークを活用して、国際的な場での研究推進を図っていくことになる。3つの口頭発表では、それぞれ違った角度から、フォンダーヌとヴォロンカの作品を取り上げ、ユリシーズ神話の文学的応用について考察した。それにより、神話とユダヤ性の関係が解釈の焦点となることを解明し、今後の研究課題を絞り込むことに成功した。また、パリ国立図書館での文献調査、およびヴォロンカの評伝の著者との面会およびメールでの遣り取りによって、これまで不明瞭だったフォンダーヌとヴォロンカの関係が、かなり解明された。以上を総合すると、研究は当初の計画以上に進展していると判断できる。平成28年度の研究成果として、研究発表1本、研究者招聘1件、論文1本が挙げられる。まず、平成28年9月25日には、世界文学・語圏横断ネットワーク第5回研究大会(立命館大学)で「ルーマニア出身ユダヤ系フランス語詩人にとってのパリ:フォンダーヌとヴォロンカの場合」と題する口頭発表を行った。会場での質疑応答において、研究代表者の提示した概念が議論の中心になるなど、学会への知的貢献を果たした。平成28年10月18日には、フォンダーヌ研究の第一人者をThe Johns Hopkins University(USA)から招聘し、金沢大学角間キャンパスにて、「フォンダーヌ:深淵の縁を歩く人」と題する講演を実施した。研究代表者はフランス語で行われた同講演を日本語に通訳したほか、聴衆の理解を助けるための入念な解説を講演前に実施し、講演会の内実を高めた。聴衆との質疑応答において、日本におけるフォンダーヌ理解の問題点を把握することができたのも、大きな収穫である。また、かほく市立西田幾多郎哲学記念館を訪ね、館長および学芸員とともにフォンダーヌの思想と禅をめぐって議論し、通訳を担当した。そのほか、ルーマニア文化や神話についても、活発な議論を行った。平成28年12月刊行の共著『文学海を渡る:〈越境と変容〉の新展開』に単著論文「ユリシーズ神話の現代性:バンジャマン・フォンダーヌを中心に」を発表し、研究成果を広く社会へ提示した。同論文では、前年度の文献調査で収集した一次資料を活用し、神話を用いたフォンダーヌの『ユリシーズ』の文学史的意義を解明した。さらに平成29年2月には、別用件でフランスに渡航した機会を活用し、文献調査および研究面談を行い、次年度以降の研究へつながる準備作業を実施した。

研究計画書に挙げた海外研究者招聘を実現し、国際的な研究ネットワークの構築を固めた。また前年度の研究成果を学会発表や論文刊行を通じて、広く社会へ発信することも実現した。計画書に挙げたアルゼンチンへの文献調査は次年度に持ち越しになったが、フランスでの文献調査を実施し、研究者との交流も実現した。平成29年度の研究実績として、研究発表2本が挙げられる。平成29年11月4日には、石川県文教会館で開催された日本比較文学会関西大会において、シンポジウムのパネリストとして登壇し、「フォンダーヌとユリシーズ神話の現代性」と題する講演を行った。会場での質疑応答において、神話とモダニズムをめぐる議論を展開し、学界への貢献を果たした。平成28年12月2日には、富山大学で開催された日本フランス語フランス文学会中部支部大会において、「変身と幽霊ーイラリエ・ヴォロンカの散文作品におけるアイデンティティの問題について」と題する研究発表を行った。本研究は、科研費によって収集した1940年代の散文作品を基礎として作品分析を行ったものであり、「変身」と「幽霊」をキーワードに、ヴォロンカ特有のアイデンティティの揺らぎのうちにみられる希望と絶望のバランスを、一種の存在の劇として読み解いたものである。ヴォロンカによる神話の再解釈も分析対象とした。本発表を基にした投稿論文は、現在査読中である。さらに平成30年2月28日から3月5日にかけて、ブエノスアイレスに滞在し、アルゼンチン国立図書館でフォンダーヌの記事を掲載した一次資料(ブエノスアイレスで刊行された文芸誌、新聞、およびパリでアルゼンチン人が刊行したフランス語の文芸誌)をほぼすべて調査した。これにより、記事が掲載された雑誌の他の執筆者や記事の主題傾向を確認し、当時のフォンダーヌがアルゼンチン文壇においてどのような文脈で受容されたかを検証することができた。また、フォンダーヌが監督した映画『タラリラ』(1936)の原作小説のフランス語訳に関する記事も発見した。これらの成果は、平成30年度中に論文として発表する予定である。本研究はバンジャマン・フォンダーヌとイラリエ・ヴォロンカという二人のルーマニア出身のユダヤ系フランス語詩人の作品分析を通じて、亡命文学者における神話の意味を解明することを目的としている。平成29年度は研究の明らかな進捗を図ることができた。フォンダーヌ研究については、学会シンポジウムでの発表を通じて、フォンダーヌの詩集『ユリシーズ』の解釈について、ヨーロッパ文学史におけるオデュッセウス神話の変奏を視野に入れたうえで、ユダヤ人にとってのギリシア神話の意味を分析した。また、研究計画書に記したアルゼンチン国立図書館(ブエノスアイレス)での文献調査を実施した。その際、平成28年度に金沢大学に招聘したアメリカのフォンダーヌ研究者から、いくつかの助言を受けた。調査の結果、フランスとルーマニアに収まらない作品受容の広がりを確認することができた。また、ヴォロンカ研究については、平成27年度以降に収集した散文作品を中心に読解を試み、平成29年度にその成果を学会で発表した。その際、平成27年度にパリでインタビューしたヴォロンカ研究者との意見交換が大いに役立った。
関節リウマチの生物学的製剤治療による骨軟骨修復因子に関する研究

関節リウマチ(RA)の治療に対して骨関節破壊の抑制あるいは改善効果のある生物学的製剤が使用されている。そのエビデンスは手足のレントゲン上、骨びらんや関節裂隙の狭小化の改善として評価されている。しかし実際には生物学的製剤により引き起こされる骨や滑膜についての組織学的エビデンスはない。本研究において生物学的製剤により骨髄組織に変化があるか否かについて解析した。生物学的製剤インフリキシマブ使用中、人工膝関節置換術時に採取した10例、平均年齢65.3歳、平均MTX4.8mg/week、平均ステロイド量3.8mg/dayとコントロール群としてインフリキシマブ非使用中の骨組織10例、平均年齢67.6歳、平均MTX5.2mg/week、平均ステロイド量4.0mg/dayのH.E.染色およびtumor necrosis factor-α(TNF-α),intedeukin-6(IL-6)、receptor activator of nuclear(kappa)B ligand(RANKL)、osteoprotegerin(OPG)、osteopontin(OPN)の免疫染色を検討した。その結果、インフリキシマブ使用中の骨組織において骨髄中に、細胞成分に富む隔壁の肥厚を発見し、これをthickness of interstitialselptum(TIS)と名づけ、TNF-α,IL-6、RANKL、OPG、OPN陽性細胞をコントロール群と比較してすべてに有意な増加を認めた。エタネルセプトおよびトシリズマブにおいてはTISを確認できなかった。しかしながらトシリズマブにおいてOPGが陽性に染色され骨芽細胞の活性化に関与している可能性が考えられた。
雇用流動化社会での初期キャリアにおける「弱い紐帯の強さ」に関する計量社会学的研究

本研究の目的は、雇用流動化が進んでいると言われる現代の日本社会において、若年者の初期キャリアにおける上昇移動のパターンが変化したか否かを検証し、初期キャリアを規定する社会的構造を解明することである。研究目的遂行のため、本研究では1.労働市場の流動化はどこで起こっているか、2.初期キャリアにおける社会ネットワークの資源化の要因は何か、3.初期キャリアにおける社会ネットワーク効果は労働市場全体で観察されるものか、それとも局所的に観察されるものか、という3つのサブ・クエスチョンを設定し、社会調査データの実証分析を行った。まず、労働市場の流動化は非正規雇用のみならず若年正規雇用層のなかでも徐々に生じ始めているということが、職歴データの分析から明らかになった。また、本研究ではキャリア移動の社会学的理論の1つである社会ネットワーク論に着目して研究を進めた。社会ネットワーク資源を獲得できる層の特徴については、現時点での分析では十分に詳らかにはできなかったが、学歴が低いなど労働市場において不利な立場に立ちやすい者ほどネットワークを利用した求職活動を行いやすいことが明らかになった。そして、そのような社会ネットワークの効果は、若年者の転職の場面で様々な形で現れることが、テータ分析から明らかにされた。転職時に社会ネットワーク資源を保有していることは、より好条件の職場環境へのアクセスや、転職に伴う賃金低下などと関連している。以上の知見は博士論文にまとめられ、申請者は2014年3月に博士の学位を取得した。また、上記の知見と関わることがらについて国内外の学会にて研究報告を行い、研究領域を共有する他の研究者と有益な情報交換ができた。(抄録なし)本研究の目的は、雇用流動化が進んでいると言われる現代の日本社会において、若年者の初期キャリアにおける上昇移動のパターンが変化したか否かを検証し、初期キャリアを規定する社会的構造を解明することである。(抄録なし)
セルラーゼ触媒モジュールの基質との親和性を評価する

セルロース分解酵素の触媒の基質親和性について検討した。セルロース分解細菌に由来するCel5A、Cel5B、Cel5Eの三つの触媒に変異を導入して活性を失った酵素タンパク質の結合特性を分析した。その結果、同じファミリーのセルラーゼであっても、セルロースの形態の違いにより、結合量に差が生じた。酸膨潤セルロースへの結合量は、Cel5B>Cel5A>Cel5Eの順番であったが、ボールミルドセルロースに対しては、Cel5E>Cel5A>Cel5Bの順であった。同じエンドグルカナーゼに属する酵素でも、その触媒がもつ基質親和性は、基質形態で異なっていることが明らかとなった本年度は、以下の実験を行った。Clostridium thermocellumに由来する、糖質加水分解酵素ファミリー5に属する酵素のうち、Cel5A、Cel5Bについて、新たにクローニングを行い、部位特異変異導入により、これらのプロトンドナーであるグルタミン酸をグルタミンに変換した。これらの触媒ドメインの活性が失われたことを確認した上で、これらのタンパク質の不溶性基質に対する結合定数を、吸着試験とラングミュアの等温結合式より算出した。前年度に作成したCel5E、Cel44Aについても同様な試験を行った。その結果、Cel5Aは、酸膨潤セルロースに対して、5.1×10 5 M-1の結合定数で結合したが、Cel5BとCel5Eは、結合飽和が見られず、非特異的にセルロースに結合するのではないかと推定した。Cel5Aの値は、通常の糖質結合モジュールに匹敵する値で、このような酵素では、糖質結合モジュールの存在がなくても、不溶性基質に十分な活性を示すのではないかと考えた。一方、Cel44Aでは、結合定数は、9.5×10 3 M-1であり、この触媒モジュールでは、効率的な加水分解には、糖質結合モジュールの存在が不可欠になると考えられた。一方、一般的な酵素活性測定に使うタンパク質量での結合試験では、基質への結合量としてCel5E>Cel5B>Cel5Aの順であったが、活性としては、Cel5Aが一番高かった。このことは、Cel5B、Cel5Eの結合が飽和しなかったことと関連し、これらの酵素において非特異的な結合が起こっているのではないかと推定した。同じエンドグルカナーゼに属する酵素でも、その触媒がもつ基質親和性は、基質形態で異なっていることが明らかとなった本研究の目的である「触媒モジュール」の基質への結合特性を明らかにするために、本年度は以下の実験を行った。好熱性セルロース分解性細菌Clostridium thermocellumは、複数のファミリー5(GH5)のエンドグルカナーゼをもっているので、本菌のGH5酵素群を研究の対象とし、研究をスタートした。24年度は、Cel5A及び、Cel5Eの変異導入に取り組み、それぞれ、活性中心のグルタミン酸をグルタミンに換え活性を失った変異体の作成に成功した。Cel5Eについては、本年度購入したProfiniaタンパク質精製システムを利用し、大量精製することができた。精製した変異タンパク質を使って基質との結合解析を行った。当初計画では、不溶性基質に対する結合特性を解析する予定であったが、市販可溶性基質の購入がメーカーの都合で生産できなくなったため、手持ちの可溶性基質の結合特性解析を優先し、等温滴定熱量計で可溶性基質に対する結合定数を測定した。Cel5Eについて、セロヘキサオースに対して、1.0×10 5 M-1、セロペンタオースに対して、3.3×10 4 M-1の結合定数を得た。また、Cel44Aについて、同様に3.3×10 5 M-1、1.6×10 5 M-1であった。ヘキサオースから、ペンタオースで糖が1つ減少するだけで、Cel5Eでは結合定数がおよそ3分の1に、Cel44Aでは、2分の1に減少することがわかた。これらのことにより、エンドグルカナーゼがより、長い可溶性基質に対して高い親和性をもつことが分かった。これらの結果から、エンドグルカナーゼ(セルラーゼ)は、基質への結合能力が糖鎖の長さに依存することが明らかになり、例えば可溶性基質カルボキシメチルセルロースに対する酵素活性が急速に低下する現象を説明できることがわかった。本年度は、以下の実験を行った。Cel5CとCel5Dについての発現を検討したが、封入体が生じるなどして、期間内に十分な量のタンパク質を精製することができなかった。そこで、Cel5A、Cel5B、Cel5Eについて、詳細な比較検討を行った。まとめると、酸膨潤セルロースへの結合量ではCel5B > Cel5A > Cel5Eの順であったが、酸膨潤セルロースに対する酵素活性では、Cel5E > cel5A > Cel5Bの順になり、結合量が高いといっても必ずしも酵素活性に反映しないとこがわかった。

等温滴定熱量計によるセロへキサオースに対する結合定数では、Cel5A > Cel5E > Cel5Bの順であり、これも可溶性基質カルボキシメチルセルロースに対する活性順とも一致はしなかった。ただ、Cel5Aは、発熱量も多く、その基質認識に水素結合の寄与が大きく、一報、Cel5Bでは、エントロピーの寄与が大きいこともわかった。計画にあった蛍光タンパク質との融合における植物細胞壁成分への結合特性の違いを検討したが、残念ながら、有意な結合が観察されなかった。このことは、触媒モジュールの結合定数は高いものの、結合量が糖質結合モジュールに比べ少ないことから、天然の植物において、触媒モジュールが直接認識できるような露出したセルロースが少ないからと考えた。これらのことから、触媒モジュールは、様々な結合パラメータをもち、糖質結合モジュール並みの結合定数を持ちながらも、その結合可能部位は、糖質結合モジュールよりも少ないこと、また、同一ファミリー内のセルラーゼであっても、その結合特性が大きくことなっており、酵素活性にも大きな違いがあることがわかり、複数の酵素をもつ意味の一部を理解することができた。応用微生物学不溶性基質への結合が、飽和しないことを検証するために、再試を繰り返した。これに予定よりも多くの時間を要したため。当初計画では、GH5の酵素を複数解析することにより、ファミリー間の特性を解析する予定であったが、変異タンパク質の発現条件の設定に時間を要したために、GH5については、Cel5Eのみの結果となってしまった。その代わり、次年度の予定であったGH44を前倒しした。問題点として、国内メーカーが生産していた可溶性基質の生産が中止され、海外メーカーの基質が非常に高価なため、研究に制限が生まれ、遅れの原因のひとつになった。残念ながら、その部分のカバーできないので、次年度以降、若干、計画の見通しを変更したい。最終年度にあたる本年度は、それぞれの触媒タンパク質と蛍光タンパク質との融合タンパク質を作成するとともに、実際の植物細胞壁において、これらのタンパク質が、細胞壁に集まるかどうかを検証するとともに、糖質結合モジュールのような、細胞特異性を酵素触媒がもっているかを確認する。また、これらまでの結果を集約するとともに、残っているCel5CとCel5Dについての解析を同時に行う。GH5に属する酵素の解析数を増やすとともに、計画にある他のファリミーの酵素を増やしてく予定である。しかしながら、国内メーカーによる可溶性基質の製造中止により、可溶性基質が非常に高価となり、現行の研究費範囲内では、予定の研究ができなくなった。そこで、可溶性基質の関する結合特性の解析部分を割愛し、不溶性基質への結合特性の解析を中心に行う予定にする。次年度は、GH5に属する酵素を、Cel5ACel5Eまでの変異体を作成し、タンパク質発現、精製する。これらの不溶性基質に対する結合特性を、Langmuirモデルによる解析を行い、同一ファミリー内の結合特性の差異について検討する。また、蛍光タンパク質との融合による植物切片への結合試験を行う。
大学生のメンタルヘルス不調の予防のための疲労評価と微量元素欠乏・食生活状況調査

本研究は、予防医学的な観点から大学生のメンタル不調予防のために、疲労を早期に見つけることを目的とし、また、心理的な要因のみでなく、微量元素欠乏という栄養学的な要因との関連に着目することに特徴がある。大学生の疲労を客観的および主観的評価により調査すると同時に、採血を行い、血中の微量元素、ミネラル成分を分析する。さらに食生活状況を質問紙により調査する。これらの結果から大学生の疲労の程度と微量元素欠乏・食生活との関連を総合的に解析し明らかにする本研究は、予防医学的な観点から大学生のメンタル不調予防のために、疲労を早期に見つけることを目的とし、また、心理的な要因のみでなく、微量元素欠乏という栄養学的な要因との関連に着目することに特徴がある。これらの結果から大学生の疲労の程度と微量元素欠乏・食生活との関連を総合的に解析し明らかにする
内分泌腫瘍のホルモン産生と増殖機構に関する分子生物学的研究

増殖機能に関する研究は、1.reg遺伝子はヒト内分泌腫瘍には発現していないが、膵小葉由来の腫瘍のマ-カ-になることをISH法を加味して証明した。2.高度悪性の神経内分泌細胞癌と低悪性度腫瘍であるカルチノイドを比較すると、前者では増殖細胞核抗原(PCNA)が腫瘍細胞の90%以上に発現し、間質のHLAーDRα陽性細胞は非常に少ないのに対し、後者はPCNA陽性腫瘍細胞は30%と少なく、HLAーDRα陽性間質細胞は多数認められた。Pー53はいずれの腫瘍でも陰性だった。すなわちPCNAとHLAーDR抗原はこれらの腫瘍の増殖と進展に関与する重要な因子と考えられた。今年度は神経芽腫群腫瘍におけるペプチドホルモンの産生と分泌機構を中心に研究を行なった。水様性下剤、低K血症、低胃酸症を症状とするWDHA症候群を伴った高分化型神経節芽腫3例を用い、Vasoactive intestinal peptide(VIP)Peptide histidihemethionine(PHM).Soma tostatin(SS),Neuropeptide Y.(NPY),M-enkephalin(M-EK),Substance P.(P),Cprticotropin releasing factor(CRF)Growth hormonereleasing factor(GRF)等の免疫染色を行なうとともに、VIPとPHMの前駆体であるpreproVIPに対するcDNAと、preprosomatostatin遺伝子のDNAに対するantisense oligonucleotide probeを用いてISHを行なった。さらに、amine precur soruptake & decanboxylation(APUD)説の基本的な概念であるペプチドホルンモンはアミンホルモンと共存するという考えを確認するために、カテコ-ルアミン合成酵素のTyrosne hy droxylase(TH).Dopamineβ-hy-droxylase(DBH),Phenylethanol amine N-methyltransferase(PNMT)に対する抗体を用いてそれらの存在の有無を検討した。その結果WDHA症候群を呈した3例のいずれの神経節芽腫の腫瘍組織においても、免疫組織化学的には、VIP,PHM,NPY,SS,M-EK,CRF,GRF,TH,DBHが大型のganglionic cellに陽性を示した。またin situ hybridization法では、VIP,SS,のmRNAがほとんどすべてのganglionic cellの胞体に認められた。VIPとPHMは同一遺伝子から作られているホルモンでありprocessingで異なったホルモンに切り出されているものであるが、他のホルモンは互いに異なった遺伝子から作られているホルモンや酵素であり、これらが同一の細胞で同時に産生されていることが明らかとなったことば“細胞の機能発現"の解明の手がかりとなる可能性が考えられる。今後ISHの手枝の改良と共に他のホルモンや酵素のmRNAの同定を試みる予定である。平成2年度はヒト神経芽細胞腫NBー1細胞の培養細胞を用いて、phorbolesterやcAMPを投与することにより、vasoactive intestinal peptide,PHM,somatostatin,substance P,ty rosine hydroxylase,mーenkephalin等のホルモン産生が亢進することを、免疫組織化学、in situ hybridization法radi immunoassay法、電顕を用いて証明し、ホルモン産生腫瘍としての形態学的特徴と機能発現を総合的に観察した^<1)>。また多数例の褐色細胞腫におけるカテコ-ルアミン合成酵素を免疫組織学的に検索し、従来組織学的には明らかに区別し得なかった機能性褐色細胞腫と非機能性褐色細胞腫の違いが、カテコ-ルアミンの律速酵素であるtyrosine hydroxylaseの有無または多少によることを明らかにした^<2)>。また同じくカテコ-ルアミン合成酵素の一つであるdopa decarboxylaseが褐色細胞腫のみならず、広くneuroendocrine tumorに包括されている下垂体腺腫、甲状腺髄様癌、副甲状腺腫、膵ラ氏島腫、カルチノイド腫瘍等に高頻度に存在し、これらの腫瘍のマ-カ-となり得ることを明らかにした^<3)>。一方再生に関与する遺伝子と示唆されているregenerating gene(reg)のcDNAを用いて、その膵における局在をin situ hybridization法で証明すると共に、その産物に対するmonoclonal抗体を用いてreg蛋白の局在と膵腫瘍における診断的価値を明らかにした^<4)>。大変稀な腫痛である褐色細胞腫と神経芽腫の混合腫瘍であるMixed neuroendocrineーneural tumorをペプタイドホルモンとカテコ-ルアミン合成酵素の有無等を検索することにより、その腫瘍の形態的特徴を明らかにした^<5)>。以上の成果を土台にして、副腎髄質腫瘍の総説を記した^<6)>。また日本病理学会、泌尿器科学会の共同作業による「副腎腫瘍取扱い規約」の中の主として副腎髄質腫瘍の項を担当した。

平成3年度は、同じ内分泌細胞の腫瘍でありながら、悪性度や予後が異なるcarcinoid tumorとneuroendocrine carcinomaについて、様々な腫瘍マ-カ-や免疫担当細胞マ-カ-、および癌遺伝子に対する抗体を用いて両者の細胞学的および組織学的相違点の解明を試みた。両者共に内分泌細胞のマ-カ-であるchromogranine陽性の腫瘍細胞から構成されているが、細胞増殖速度のマ-カ-であるproliferating cellnuclear antigen(PCNA)と、間質の抗原提示細胞であるHLAーDRの発現頻度に著しい差があることを明らかにした。癌抑制遺伝子の一つであるpー53の発現はいずれにも認められなかった。本年度は本研究のまとめの年なので過去3年間の研究を論文にまとめた。