hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
脳腫瘍幹細胞に対するDEPDC1を標的とした新規治療法の開発

FACSおよび免疫染色を用いた解析でPD-1抗体併用によりT細胞浸潤が増加する可能性が示唆された。再発/進行悪性神経膠腫患者に対するカクテルペプチドワクチン臨床試験の結果解析では、3例の長期SD/CR例を認め、合併症は認めていなかった。今後さらなる臨床研究の必要があるが、現時点での結果についてJournal of Clinical Medicieに報告した。これまでDEPDC1の機能解析をすすめるため、in vitroでの脳腫瘍幹細胞における影響を調べた。継続して、分化細胞および幹細胞における機能差に注目して実験を行う。まずin vitroでshDEPDC1導入imBTSCをシングルセルクローニングし、分化細胞を採取する。分化した細胞の機能解析をおこない、control細胞と比較し、脳腫瘍幹細胞との差を比較する。さらにNFκBシグナルおよび細胞周期にあたえる影響を解析する予定である。ヒトを対象としたワクチン療法の治療実験として、GL261を用いた膠芽腫マウスモデルを用いたペプチドワクチンとPD-1抗体併用実験を行う。まずはGL261を用いたモデルマウスの確立を行う。次にワクチン投与タイミングを前倒しし、またアジュバントとして破傷風トキソイドやPoly-ICを用いて実験を継続する。その後、ワクチンとPD-1抗体投与併用群との生存期間解析、組織解析を行う。(理由)抗体や培養試薬などの消耗品についてはこれまでの実験で使用してきたものを使いながら適宜補充を行い、遺伝子抑制実験なども行った。in vivoの動物実験については、次年度にさらに多く実験することが予想され、高額となると考えられることから、繰り越して使用することとした。(使用計画)in vitroでのDEPDC1のiBTSCおよび分化細胞における機能解析をすすめる。また、GL261を用いた膠芽腫マウスモデルを用いたペプチドワクチンとPD-1抗体併用実験をさらにすすめる予定である。
ロシア帝国併合前後の中央アジアにおけるイスラームと地域社会の変容に関する研究

本研究は、コーカンド・ハーン国期からロシア帝国統治期にかけての比較的長期間のフェルガナ盆地のイスラームと地域社会の動態を、収集史料を含む一次史料に基づいて、具体的な諸事件を鍵としながら分析し、中央アジアにおけるイスラームの変容を究明することを目的としている。本年度は第一に、コーカンド・ハーン国期のタリーカに関する重要史料、ムハンマド・ハキーム・ハーン著『選史』の改訂出版に向けての編集作業を進めた。4月には、本書のメッカ巡礼記のイラン旅行部分に関して、イランのカスピ海沿岸地域で実地調査を行い、本書に記述されているように、シーア派が大多数であるイラン社会においてこの地域に一定のスンナ派コミュニティーが存在し、現在に至るまでその状況が継続していることを確認することができた。本調査は、本書の史料価値の高さを確認する上でも有意義であった。第二に、ロシアのサンクトペテルブルグにおいて史料収集を行った。ロシア科学アカデミー東洋写本研究所では、『選史』の最初期のペルシア語写本およびこれまで未調査であったチャガタイ語写本2点を調査し、写本複写系統を検討した。ロシア国立図書館においては、ロシア帝国統治期に作成された中央アジアの地図を複写収集することができた。第三に、ウズベキスタンのフェルガナ盆地において現地調査を実施した。コーカンド・ハーン国期のナクシュバンディー教団ムジャッディディーヤ派に属する有力な指導者ミヤーン・ファズル・アフマドの子孫宅では、アフマド死後の遺産相続文書の写しや保管してあるアフマドの遺品を調査した。また、ムジャッディディーヤ派の別の指導者ハキーム・ハリーファの子孫宅では、ハキーム・ハリーファに関する免許状を複写した。さらに、コーカンド・ハーン国の歴史家・詩人であるシャウキーの学界に未知の詩集と思われる史料が見つかり、複写することができた。本年度の研究においては、コーカンド・ハーン国期のタリーカに関する重要史料『選史』の改訂出版に向けて作業を大きく進めることができた。具体的には、編集作業の他、イランでの実地調査とサンクトペテルブルクにおける写本調査を実施し、関連研究を深化させることができた。また、フェルガナ盆地におけるタリーカ関連文書資料の調査・収集など、多方面からこの課題について研究活動をすることができたと考える。本年度は、コーカンド・ハーン国期のタリーカに関する重要史料『選史』の改訂出版に向けて作業を大きく進めることができたが、最終年度である来年度には作業を完了させ、出版に漕ぎ着けたい。また、コーカンド・ハーン国期のタリーカの活動については比較的順調に研究を進めることができたが、ロシア帝国併合後のタリーカの状況についても十分な分析を行いたい。本研究は、コーカンド・ハーン国期からロシア帝国統治期にかけての比較的長期間のフェルガナ盆地のイスラームと地域社会の動態を、収集史料を含む一次史料に基づいて、具体的な諸事件を鍵としながら分析し、中央アジアにおけるイスラームの変容を究明することを目的とした。本年度は第一に、コーカンド・ハーン国末期にフェルガナ盆地の主要都市マルギランで、タリーカの有力指導者ワリー・ハーン・トラが主導した民衆蜂起についてこれまで進めてきた研究を英語で論文にまとめた。

この考察により、ロシア帝国の侵攻がせまるなか、ハーン国の民衆は、イスラーム国家の長としての責務を果たしきれないハーンに代わってワリー・ハーン・トラにムスリム社会を導く役割を期待したこと、彼の影響力がハーン国崩壊後も衰えなかったことを解明した。第二に、ロシア帝国期のフェルガナ盆地の現地事情についての資料を収集すべく、オーストラリアのニュー・サウス・ウェールズ州立図書館ミッチェル図書館において、モリソン文庫を調査した。当初期待していたような、モリソンのロシア領トルキスタン滞在時の文書資料はほとんど残されていなかったが、旅行時に撮影された写真資料、ロシア統治期のトルキスタン総督府領の写真などの画像資料を収集することができた。第三に、コーカンド・ハーン国期のタリーカに関する重要史料、ムハンマド・ハキーム・ハーン著『選史』の改訂出版に向けての編集作業を進めることができた。あわせて、当該資料のメッカ巡礼旅行記のイラン旅行部分に関して、イラン各地で実地調査を行い、『選史』の記述がかなり高い精度でなされているという確信を得ることができた。このことは、史料全体の価値を判断する上でも有意義であった。本研究により、フェルガナ盆地では、ロシア帝国併合前後において、タリーカが地域社会の動向を左右する大きな鍵となっていたことが確認された。本年度の研究においては、ロシア帝国併合前後の時期のフェルガナ盆地において、タリーカが地域社会の動向を左右する大きな鍵となっていたことを実証的に確認することができた。特に、具体的事件に関する検討の成果として、タリーカの有力指導者ワリー・ハーン・トラが主導した民衆蜂起について、英語論文まとめることができた。また、オーストラリアにおけるロシア領中央アジア関連資料の収集、ムハンマド・ハキーム・ハーン著『選史』の改訂出版に向けての編集作業の推進など、多方面からこの課題に取り組み、研究活動を行なったと考える。本年度は、コーカンド・ハーン国期のタリーカに関する重要史料『選史』の改訂出版に向けて作業を大きく進めることができたが、最終年度である来年度には作業を完了させ、出版に漕ぎ着けたい。また、コーカンド・ハーン国期のタリーカの活動については比較的順調に研究を進めることができたが、ロシア帝国併合後のタリーカの状況についても十分な分析を行いたい。本年度は、ロシア帝国併合前の中央アジアにおけるタリーカの状況に関して研究を進めることができた。一方で、ロシア帝国併合後の状況に関しては史料の収集に前進はあったものの、十分な検討を加えることができなかった。このため、今後はロシア帝国併合後のタリーカの活動について分析を進めたい。
戦後期「新国劇」と映画・テレビ・ラジオの相関性の研究

12017年12月11日14日に実施した劇団「新国劇」最初期の劇作家・行友李風の遺品群(尾道市文学記念室蔵)調査成果を整理した上、研究報告「新国劇『国定忠治』成立史:行友李風の位置付けの再検討を中心に」(日本演劇学会全国大会、神戸松蔭女子学院大学、2018年7月1日)、資料紹介「脚本草稿『國定忠次』(尾道市文学記念室蔵)翻刻」(『人文科学研究』第143輯[2018年]19頁79頁)、同「行友李風宛=澤田正二郎書簡(尾道市文学記念室蔵)翻刻」(『演劇研究』第42号[2019年]163頁173頁)にまとめた。22018年7月28日、旧・新国劇座員の滝洸一郎(宮本曠二朗書生)・伊村和子(初瀬乙羽書生)夫妻に提供を受けた膨大な映像群を整理した上、調査成果を研究報告「揚幕の視線、修業者の視線:新国劇『中間的』映像に見る大劇場の時空間」(日本演劇学会研究集会、2018年11月11日、静岡文化芸術大学)にまとめた。同時に旧・新国劇座員の山田貫太郎(島田正吾書生)聞き取り調査(2018年11月12日)、旧・新国劇座員の緒形拳(辰巳柳太郎書生)遺品群を整理中の「緒形拳研究会」(東海大学)調査(2018年11月13日)を実施した。3映画『日本のいちばん長い日』(岡本喜八監督、1967年)を巡り、当時の新国劇座員の配役にも着目しつつ、研究報告「岡本喜八『日本のいちばん長い日』の天皇表象を読み直す:音声と配役を手掛りに」(日本映画学会全国大会、大阪大学、2018年12月8日)を実施した。4上記「緒形拳研究会」(東海大学)調査を通じ、時代考証学会の招聘を受け、研究報告「幕末=明治維新表象と地域性:河井継之助(越後長岡藩)を事例に」(時代考証学会、明治大学、2019年3月23日)を実施した。以上4件の研究報告は2019年度に論文化の予定である。当初に計画した旧・新国劇座員の聞き取り調査を通じ、様々な映像群が新たに資料化された。本研究は、新国劇座員が出演した映画・テレビ・ラジオなどの研究を通じ、戦後期日本の芸能界における演劇と大衆的コミュニケーションの相関性を解明するのが主目的であるが、当時の座員が自身、録画・録音した映像・音声資料を通じ、被写体の立場に加え、記録者の立場の研究も可能化した。実際、旧・座員に提供を受けた資料群は、1自身や劇団の先輩・同輩・後輩が出演した映画・テレビ・ラジオの録画・録音などの大衆的コミュニケーション資料、2演劇公演の内部者用の記録や結婚式・祝賀会の記録などの中間的コミュニケーション資料、3自身の私生活の記録などの個人的コミュニケーション資料と重層的である。この重層性への接近は研究の深化の重要な一歩である。無論「研究実績の概要」3の研究報告「岡本喜八『日本のいちばん長い日』の天皇表象を読み直す:音声と配役を手掛りに」のように被写体の立場を巡る研究も進展中である。「研究実績の概要」に申し述べた通り、2019年度は蓄積された研究成果の論文化を完遂する計画である。本研究の最終年度2020年度における全成果の単著化を目指し、諸学会・諸機関の学術誌に投稿する予定である。同時に聞き取り調査・資料調査の対象の展開も計画中である。新国劇100年の節目に当る2017年度、本研究は多角的な進展を示した。1新国劇と映画の関係性を考察する論文「新国劇の演劇映像学『国定忠治』の原像を探る』(『人文科学研究』第141輯[2017年]、69頁-86頁)を刊行した。2シンガポール・ラサール芸術大学における国際共同討議『Archiving Popular Culture』(2018年3月)に招待され、本研究の中間報告を交えつつ講演「Archiving a Theatrical Company: An Interdisciplinary Attempt at the Centennial of Shinkokugeki」を実施した。32017年12月、尾道市文学記念室を訪問し、新国劇の財産演目『国定忠治』『月形半平太』『大菩薩峠』などを手掛けた劇作家行友李風(1877年-1959年)の遺品資料を体系的に調査した。本調査の成果は日本演劇学会2018年度全国大会における研究報告「新国劇『国定忠治』成立史行友李風の位置付けの再検討を中心に」(神戸松蔭女子学院大学、2018年7月1日[採択済])に発表予定である。また草稿や書簡の翻刻も準備中である。4新国劇の元座員を中心に結成された劇団若獅子事務局(東京都世田谷区)を訪問し、新国劇とテレビの関係性を考察するための貴重な一次資料である演劇中継『極付国定忠治』『極付月形半平太』(NHK総合、1976年)録画テープ類を収集し、NHK『番組発掘プロジェクト』協力の下にデジタル化した。5新国劇100年を記念した劇団若獅子公演『夢の澤

正100年の名場面』(初演:早稲田小劇場どらま館[東京]、2017年4月/再演:国立文楽劇場[大阪]、2018年1月)に脚本協力し、好評を博した。6早稲田大学エクステンションセンター『新国劇の名優達』全7回(2017年7月-9月)を実施し、好評を博した。「研究実績の概要」欄に記した尾道市文学記念室蔵の行友李風遺品資料、劇団若獅子旧蔵『極付国定忠治』『極付月形半平太』(NHK総合、1976年)録画テープ類などに加え、新国劇の元座員、元座員の遺族に様々な資料提供を受けるなど、新国劇研究を前進させる貴重な一次資料に遭遇し、当初の研究計画以上の成果を得る具体的な見通しを得た。12017年12月11日14日に実施した劇団「新国劇」最初期の劇作家・行友李風の遺品群(尾道市文学記念室蔵)調査成果を整理した上、研究報告「新国劇『国定忠治』成立史:行友李風の位置付けの再検討を中心に」(日本演劇学会全国大会、神戸松蔭女子学院大学、2018年7月1日)、資料紹介「脚本草稿『國定忠次』(尾道市文学記念室蔵)翻刻」(『人文科学研究』第143輯[2018年]19頁79頁)、同「行友李風宛=澤田正二郎書簡(尾道市文学記念室蔵)翻刻」(『演劇研究』第42号[2019年]163頁173頁)にまとめた。22018年7月28日、旧・新国劇座員の滝洸一郎(宮本曠二朗書生)・伊村和子(初瀬乙羽書生)夫妻に提供を受けた膨大な映像群を整理した上、調査成果を研究報告「揚幕の視線、修業者の視線:新国劇『中間的』映像に見る大劇場の時空間」(日本演劇学会研究集会、2018年11月11日、静岡文化芸術大学)にまとめた。同時に旧・新国劇座員の山田貫太郎(島田正吾書生)聞き取り調査(2018年11月12日)、旧・新国劇座員の緒形拳(辰巳柳太郎書生)遺品群を整理中の「緒形拳研究会」(東海大学)調査(2018年11月13日)を実施した。3映画『日本のいちばん長い日』(岡本喜八監督、1967年)を巡り、当時の新国劇座員の配役にも着目しつつ、研究報告「岡本喜八『日本のいちばん長い日』の天皇表象を読み直す:音声と配役を手掛りに」(日本映画学会全国大会、大阪大学、2018年12月8日)を実施した。4上記「緒形拳研究会」(東海大学)調査を通じ、時代考証学会の招聘を受け、研究報告「幕末=明治維新表象と地域性:河井継之助(越後長岡藩)を事例に」(時代考証学会、明治大学、2019年3月23日)を実施した。以上4件の研究報告は2019年度に論文化の予定である。当初に計画した旧・新国劇座員の聞き取り調査を通じ、様々な映像群が新たに資料化された。本研究は、新国劇座員が出演した映画・テレビ・ラジオなどの研究を通じ、戦後期日本の芸能界における演劇と大衆的コミュニケーションの相関性を解明するのが主目的であるが、当時の座員が自身、録画・録音した映像・音声資料を通じ、被写体の立場に加え、記録者の立場の研究も可能化した。実際、旧・座員に提供を受けた資料群は、1自身や劇団の先輩・同輩・後輩が出演した映画・テレビ・ラジオの録画・録音などの大衆的コミュニケーション資料、2演劇公演の内部者用の記録や結婚式・祝賀会の記録などの中間的コミュニケーション資料、3自身の私生活の記録などの個人的コミュニケーション資料と重層的である。この重層性への接近は研究の深化の重要な一歩である。無論「研究実績の概要」3の研究報告「岡本喜八『日本のいちばん長い日』の天皇表象を読み直す:音声と配役を手掛りに」のように被写体の立場を巡る研究も進展中である。「研究実績の概要」欄に記した研究報告「新国劇『国定忠治』成立史行友李風の位置付けの再検討を中心に」(神戸松蔭女子学院大学、2018年7月1日[採択済])を足掛りに、「現在までの進捗状況」欄に記した一次資料を最大限に活用しつつ、研究を継続する予定である。また行友李風遺品資料に含まれる草稿や書簡の翻刻も積極的に推進する。
銅触媒下で行なうタンデム反応を利用したセレン含有誘導体の一般合成法の開発

セレン(Se:周期表16族第4周期元素)は,生体内で必須微量元素として機能している.また,創薬においても有機セレン化合物が着目されはじめている.しかしながら,従来まで複素環を持つジアリールセレニドの合成では,Se源の調整が繁雑で簡単な一般合成法はこれまで確立されていなかった.本申請課題では,安価で取り扱い容易なSe末をSe源に利用した触媒的CーH活性化とクロスカップリング反応を基軸とした三成分反応を含むタンデム型ダブルセラニル化を確立する.これによりSe原子に複素環を含む任意の置換基の導入が可能となり,新規な非対称ジアリールセレニドの一般合成法を新たに開発する.セレン(Se:周期表16族第4周期元素)は,生体内で必須微量元素として機能している.また,創薬においても有機セレン化合物が着目されはじめている.しかしながら,従来まで複素環を持つジアリールセレニドの合成では,Se源の調整が繁雑で簡単な一般合成法はこれまで確立されていなかった.本申請課題では,安価で取り扱い容易なSe末をSe源に利用した触媒的CーH活性化とクロスカップリング反応を基軸とした三成分反応を含むタンデム型ダブルセラニル化を確立する.これによりSe原子に複素環を含む任意の置換基の導入が可能となり,新規な非対称ジアリールセレニドの一般合成法を新たに開発する.
機能的核磁気共鳴画像法(fMRI)による一過性脳虚血における血液動態の解析

1)脳虚血用MRI特殊脳定位固定装置およびラジオ波照射・測定用特殊プローブの開発・作製を行い,脳虚血時に安定したMRIのデータを得ることに成功した.2)ラットの中耳内に2.5%Polyvinylpyrrolidoneを注入して中耳内の空気の影響を取り除くことにより,高磁場での静磁場の乱れを最小限に抑えることができた.これにより,高磁場での脳のMRIを安定して撮像することに成功した.3)レーザー血流計を用いて,MRI撮像中の虚血方法と同じ条件下で脳内の血流量を測定し,MRIデータと比較・解析するデータを得た.4)一過性脳虚血ラットのモデルを用いて,Rapid Inversion Recovery(RIR)法(T1強調画像),Gradient Echo(GE)法(T2^*強調画像)およびSpin Echo(SE)法(T2強調画像)による一過性脳虚血に対する脳内血行動態の解析を行なった.T1強調画像では,信号強度は,脳虚血直後から脳の全体にわたり減少し,脳虚血後約10分には著しく減少した.血流再開後,信号強度はすぐに虚血前の値にまで回復し,約10分から60分後には脳虚血前の値よりも増加した.脳虚血後2日と7日では,脳虚血前と比較して信号強度の変化は明かではなかった.一方,T2^*強調画像では,脳虚血による信号強度の変化はほとんどみられなかった.さらに,T2強調画像では,脳虚血後2時間の信号強度は,いずれの領域でも変化しなかったが,脳虚血後2日および7日では,海馬体の信号強度が増加し,海馬体が選択的に障害されていることが判明した.5)以上の結果から,RIR法によるT1強調画像は,脳虚血に対して過敏に反応し,血流の変化を測定するのに適しているが,GE法によるT2^*強調画像は,脳虚血に対して感受性が劣っていることが証明された.また,SE法によるT2強調画像は,脳虚血に対して反応しなかったが,神経細胞壊死などの組織学的病変の検出に適していることが明らかとなった.1)脳虚血用MRI特殊脳定位固定装置およびラジオ波照射・測定用特殊プローブの開発・作製を行い,脳虚血時に安定したMRIのデータを得ることに成功した.2)ラットの中耳内に2.5%Polyvinylpyrrolidoneを注入して中耳内の空気の影響を取り除くことにより,高磁場での静磁場の乱れを最小限に抑えることができた.これにより,高磁場での脳のMRIを安定して撮像することに成功した.3)レーザー血流計を用いて,MRI撮像中の虚血方法と同じ条件下で脳内の血流量を測定し,MRIデータと比較・解析するデータを得た.4)一過性脳虚血ラットのモデルを用いて,Rapid Inversion Recovery(RIR)法(T1強調画像),Gradient Echo(GE)法(T2^*強調画像)およびSpin Echo(SE)法(T2強調画像)による一過性脳虚血に対する脳内血行動態の解析を行なった.T1強調画像では,信号強度は,脳虚血直後から脳の全体にわたり減少し,脳虚血後約10分には著しく減少した.血流再開後,信号強度はすぐに虚血前の値にまで回復し,約10分から60分後には脳虚血前の値よりも増加した.脳虚血後2日と7日では,脳虚血前と比較して信号強度の変化は明かではなかった.一方,T2^*強調画像では,脳虚血による信号強度の変化はほとんどみられなかった.さらに,T2強調画像では,脳虚血後2時間の信号強度は,いずれの領域でも変化しなかったが,脳虚血後2日および7日では,海馬体の信号強度が増加し,海馬体が選択的に障害されていることが判明した.5)以上の結果から,RIR法によるT1強調画像は,脳虚血に対して過敏に反応し,血流の変化を測定するのに適しているが,GE法によるT2^*強調画像は,脳虚血に対して感受性が劣っていることが証明された.また,SE法によるT2強調画像は,脳虚血に対して反応しなかったが,神経細胞壊死などの組織学的病変の検出に適していることが明らかとなった.
AMPA受容体PETイメージングを利用した機能回復ネットワークの解明

リハビリテーションは非傷害脳領域における機能的再構成の過程で神経可塑性に依拠している.リハビリテーション過程で出現する代償脳領域が他の脳領域とどのような解剖学的・機能的結合を持つのかをAMPA受容体PETイメージング,拡散テンソル画像,安静時機能的MRIを組み合わせて解明し,脳卒中片麻痺・パーキンソン病・脊髄小脳変性症のリハビリテーションによる機能代償に伴う神経回路再編機構を解明する.リハビリテーションは非傷害脳領域における機能的再構成の過程で神経可塑性に依拠している.リハビリテーション過程で出現する代償脳領域が他の脳領域とどのような解剖学的・機能的結合を持つのかをAMPA受容体PETイメージング,拡散テンソル画像,安静時機能的MRIを組み合わせて解明し,脳卒中片麻痺・パーキンソン病・脊髄小脳変性症のリハビリテーションによる機能代償に伴う神経回路再編機構を解明する.
黒鉛層間を利用した金属ナノシートの調製と触媒作用

粉末黒鉛と塩化白金との混合物を高圧高圧の塩素下で処理することで塩化白金を黒鉛層間に挿入した(PtClx-GIC).黒鉛の(002)強度は塩化白金挿入量(115wt%)と共に減少することを確認した.PtClx-GICを水素還元処理することでシート状の白金微粒子が黒鉛層間で形成される(Pt-GIC)ことを電子顕微鏡観察により明らかにした.白金ナノシートは数nmの厚みで幅が数十数百nmであること,内部に六角形の穴を多数有し,ま120&ordm;に折れ曲がった縁を多数有することがわかった.シートの形状は白金挿入量に無関係であった..黒鉛層間にある白金ナノシート(Pt-GIC)の触媒作用を,黒鉛表面に担持した白金微粒子(Pt/Gmix)と比較した.超臨界二酸化炭素溶媒を用いるシンナムアルデヒドの水素化反応で比較した.Pt/GmixはPt-GICよりも高い活性(シンナムアルデヒド消費速度)を示したが,Pt-GICは高いシンナミルアルコール選択性を示した.Pt-GICでは白金が黒鉛層内にあるため,シンナムアルデヒド分子の吸着が規制されるために,Pt-GICが高いシンナミルアルコール選択性を示したものと考えられる.また新たに塩化イリジウムを出発物質とすることで金属イリジウムを黒鉛層内に有する化合物の調製を試みた.演歌イリジウムと粉末黒鉛の混合物を高温高圧の塩素下で処理しさらに水素還元を行った.塩素処理の圧力と温度,水素処理の温度と圧力について検討し,723 K, 0.46 MPaの塩素で1週間処理し,773K, 40kPaの水素で処理することで,厚み数nmで,幅が10 nm以下のdisk状のイリジウム金属微粒子が黒鉛層間に形成できることを明らかにした黒鉛層間への白金ナノシート合成とその触媒利用に成功した.白金ナノシート合成で得られた知見をもとに塩化イリジウムを用いて,イリジウム金属微粒子を含む黒鉛層間化合物の合成に成功した.金属の特性のためと考えられるが,白金では厚みが数nmで幅が数百nmであるシート状の粒子が形成されたが,イリジウムでは厚みが数nmで幅が10 nm以下のディスク状の微粒子が形成されることを明らかにした.今回合成に成功した金属イリジウム微粒子を層間に有する黒鉛層間化合物の触媒利用について検討する.更にパラジウム,ロジウム金属を挿入した黒鉛層間化合物の調製と触媒作用研究へと展開する.粉末黒鉛と塩化白金との混合物を高圧高圧の塩素下で処理することで塩化白金を黒鉛層間に挿入した(PtClx-GIC).黒鉛の(002)強度は塩化白金挿入量(115wt%)と共に減少することを確認した.PtClx-GICを水素還元処理することでシート状の白金微粒子が黒鉛層間で形成される(Pt-GIC)ことを電子顕微鏡観察により明らかにした.白金ナノシートは数nmの厚みで幅が数十数百nmであること,内部に六角形の穴を多数有し,ま120&ordm;に折れ曲がった縁を多数有することがわかった.シートの形状は白金挿入量に無関係であった..黒鉛層間にある白金ナノシート(Pt-GIC)の触媒作用を,黒鉛表面に担持した白金微粒子(Pt/Gmix)と比較した.超臨界二酸化炭素溶媒を用いるシンナムアルデヒドの水素化反応で比較した.Pt/GmixはPt-GICよりも高い活性(シンナムアルデヒド消費速度)を示したが,Pt-GICは高いシンナミルアルコール選択性を示した.Pt-GICでは白金が黒鉛層内にあるため,シンナムアルデヒド分子の吸着が規制されるために,Pt-GICが高いシンナミルアルコール選択性を示したものと考えられる.また新たに塩化イリジウムを出発物質とすることで金属イリジウムを黒鉛層内に有する化合物の調製を試みた.演歌イリジウムと粉末黒鉛の混合物を高温高圧の塩素下で処理しさらに水素還元を行った.塩素処理の圧力と温度,水素処理の温度と圧力について検討し,723 K, 0.46 MPaの塩素で1週間処理し,773K, 40kPaの水素で処理することで,厚み数nmで,幅が10 nm以下のdisk状のイリジウム金属微粒子が黒鉛層間に形成できることを明らかにした黒鉛層間への白金ナノシート合成とその触媒利用に成功した.白金ナノシート合成で得られた知見をもとに塩化イリジウムを用いて,イリジウム金属微粒子を含む黒鉛層間化合物の合成に成功した.金属の特性のためと考えられるが,白金では厚みが数nmで幅が数百nmであるシート状の粒子が形成されたが,イリジウムでは厚みが数nmで幅が10 nm以下のディスク状の微粒子が形成されることを明らかにした.今回合成に成功した金属イリジウム微粒子を層間に有する黒鉛層間化合物の触媒利用について検討する.更にパラジウム,ロジウム金属を挿入した黒鉛層間化合物の調製と触媒作用研究へと展開する.
医療、健康,技術変化,社会資本の公共経済学的研究

この研究では国民の健康水準,医療制度,医療技術,社会的共通資本の関係を検討した。第1に国民の健康水準がどのように向上するかを検討した。本研究では,OECD諸国のサンプルを利用してそれぞれの健康生産関数を測定した。国民1人あたりの医療支出額が必ずしも健康水準の増加に直結しないことが示された。他方,医薬品消費額の増大,衛生状態,教育程度の向上と,喫煙率の低下は,有意に健康水準を増加させることが示された。また,対象を日本に限定して都道府県サンプルを使用しても同様の結果が示されることがわかった。(この検討の一部は論文にして日本経済学会大会2000年で発表した。)第2に,健康の価値推定を試みた。ここではCutler等が示した健康価値の測定方法でなく,国民の生涯の消費を尺度にし,さらに健康価値を社会的共通資本と関連させて定義,測定できることが示された。(実証研究には基本データが不足するため,現在作業中である。)第3に,保険制度と医療技術の関係を,薬価基準制度と医薬品研究開発を対象にして検討した。そこでは薬価基準制度における薬価設定によって医薬品研究開発の方向付けと水準が大きく影響されることが示された。(その内容は独立した論文として投稿準備中である。)第4に医療における研究成果が知識としてどのように国際的に移転するかを検討した。そこでは医薬品を対象にして,特許データの分析を試みた。その結果,知識の移転は同一企業や同一国家内の移転は必ずしも容易でなく,むしろ競争する研究チーム間の移転が重要であることが示された。(その内容は国際ビジネス研究学会2000年大会で報告した。)この研究では国民の健康水準,医療制度,医療技術,社会的共通資本の関係を検討した。)今年度の研究では,第1に医療制度と医療の基礎研究をそれぞれ公共経済学における社会的共通資本として位置づけ,医療制度,健康資本,技術進歩を明示化した理論化を行った。そこでは公共経済学の理論に,社会的共通資本概念を導入し,医療制度,健康,基礎研究の相互の関係を検討した。国民の健康状態を健康資本として捉え,それが消費者の効用をもたらし,さらに生産においても投入される資本として定式化した。このような理論化によって,健康資本と医療,科学技術の関係が明示され,医療に対する資源配分,所得分配の問題の評価が可能になった。第2に,医療福祉機器を事例として取り上げ,その技術開発がどのように国家レベルで公共的に形成されるかを検討した。そこでは技術変化をもたらした社会的基盤として大学等の研究機関の役割を考察し,研究機関にどのような資源配分を行うべきかの実証研究を行った。第3に,公共政策とM&Aの観点を強調して,医薬品企業のM&Aを検討した。これは医薬品の研究開発の効率性が企業規模によって影響されるかを検討する研究の一環として行った。上記の第l,第2の研究内容の一部は「医療,技術,社会的共通資本(仮題)」として共著単行本の1章として出版準備中である。第3の研究は「医薬品企業のM&Aの費用と効果-日本における企業買収の可能性-」『医療と社会』2000.5月で発表する。.この研究では国民の健康水準,医療制度,医療技術,社会的共通資本の関係を検討した。(この検討の一部は論文にして日本経済学会大会

2000年で発表した。)第2に,健康の価値推定を試みた。ここではCutler等が示した健康価値の測定方法でなく,国民の生涯の消費を尺度にし,さらに健康価値を社会的共通資本と関連させて定義,測定できることが示された。(実証研究には基本データが不足するため,現在作業中である。)第3に,保険制度と医療技術の関係を,薬価基準制度と医薬品研究開発を対象にして検討した。そこでは薬価基準制度における薬価設定によって医薬品研究開発の方向付けと水準が大きく影響されることが示された。(その内容は独立した論文として投稿準備中である。)第4に医療における研究成果が知識としてどのように国際的に移転するかを検討した。そこでは医薬品を対象にして,特許データの分析を試みた。その結果,知識の移転は同一企業や同一国家内の移転は必ずしも容易でなく,むしろ競争する研究チーム間の移転が重要であることが示された。(その内容は国際ビジネス研究学会2000年大会で報告した。)
治療室内CT画像に基づく適応放射線治療の確立

適応放射線治療(ART)の介入時期を示す指標を明らかにするため、撮影範囲を上下30cm程度の評価が出来るMulti scan CBCT機能を用いた前向き臨床試験を行った。本研究は2017年11月29日に倫理委員会で承認された。症例登録は予定よりやや遅れ、2019年3月末時点で14例登録されている。全30例の予定であり、2019年度内での登録完了を予定している。ARTを実施するには再治療計画が必須であり、かなりの時間と熟練が必要となる。人工知能を利用したknowledge-based planning (KBP)は、これらの問題の解決策の一つである。前立腺癌に対して、一度の最適化で作成されたKBPの治療計画と実際に照射された治療計画(clinical plan: CP)との比較検証を行った。治療計画と実測の線量分布の誤差の指標の一つであるγ解析のパス率(3%/3mm)では、CPが99.0%、KBPが99.1%と同等であった。前立腺癌に対するIMRTでは、KBPは一度の最適化で、質が高く、物理的に照射可能な治療計画を提供できることが明らかになった。本研究は、Radiation Oncology 2018, 13:163に発表された。より治療計画が複雑な頭頸部癌に対するKBPについても検討した。既治療の頭頸部癌55例の治療計画データをモデルベース化し、CP15例と、同一症例にKBPで作成された治療計画を比較検討した。その結果、無調整のKBPでは、脳幹や脊髄の最大線量が高くなり、臨床使用には耐えないが、一定の線量制約を手入力してKBPで作成した87% (13/15)のプランは、実臨床で用いられた治療計画と同等あるいは優れていた。この成果は2018年に国際学会で発表し、2019年度中の論文化を目指している。適応放射線治療(ART)の介入時期を示す指標を明らかにするための前向き臨床試験の症例登録が予定よりやや遅れ2018年度内に完了できず、2019年度も研究を継続することとなった。一方、人工知能を利用したknowledge-based planning (KBP)の適応放射線治療(ART)への検討は予定通りに進んだ。研究期間を1年間延長し、適応放射線治療(ART)の介入時期を示す指標を明らかにするための前向き臨床試験の症例登録を急ぐ。2019年度の早い時点で完了させるようにする。頭頸部癌に対する人工知能を利用したknowledge-based planning (KBP)の検討結果を論文化する。治療室内CT画像を用いて、治療期間中の腫瘍体積変化、位置変化量を視覚化・定量化し、適応放射線治療(ART)の介入時期を示す指標を明らかにする臨床研究を行った。まず2015年以降two-step法IMRT (70Gy/35回)と同時併用化学療法を施行された中咽頭癌10例を対象に遡及的検討を行った。Two-step法IMRTでは50Gy以降照射野縮小をしている。そこで照射範囲が同一である5週目(day29)までの治療室内CTを検討した。治療計画用CTと週1回の治療室内CT(day1, 8, 15, 22,29)を用いた。治療計画用CTを治療室内CTへ非剛体変形(DIR: deformable image registration)させた。変形したCTをもとに再計算を行い、線量分布を計算した。Day1の治療室内CTでの値を100%とすると、アイソセンター面での体輪郭面積はday1,8,15,22,29で100%,97%,97%,96%,96%と減少傾向であった。Day22の時点で10人中5人に5%以上の変化が見られた。一方、脊髄の最大線量は100%, 101%, 102%, 101%, 104%と増加傾向にあり、Day22の時点で8人(80%)に5%以上の変化が見られた。体輪郭面積と脊髄最大線量には逆相関関係(r=-0.47)が見られた。一方、標的体積への線量評価であるD2, 50, 98は変わりなかった。本検討によりday22もしくはday29にてアイソセンター面での体輪郭面積に5%以上の変化が生じている際は脊髄線量が許容値を超える可能性があり、再治療計画の必要性があることが判明した。また、これまで治療室内CTは全照射範囲が撮影されていなかったため、撮影範囲の上下端では臨床上許容できない変形が起こり、かつ線量計算にもずれが出ることが分かった。中咽頭癌10例を対象にした遡及的研究の結果、前向き試験のプロトコール作成の問題点・課題が判明した。2016年度に行った適応放射線治療(ART)の介入時期を示す指標を明らかにする後ろ向き臨床研究によって、体輪郭面積に5%以上の変化が生じている際は脊髄線量が許容値を超える可能性があり、再計画の必要性があることが分かった。本研究の問題点として、治療室内CTは頭尾側で15cm程度しか評価出来ないため、標的体積やリスク臓器全体の線量や体積変化が評価出来なかった。2017年度は、これを改善すべく、撮影範囲を30cm程度の評価を行うことが出来るMulti scan CBCT機能を用いた前向き臨床試験を行うこととした。

臨床研究事前審査委員会でプロトコールの修正が行われ、最終的に2017年11月29日に倫理委員会で承認された。2018年3月末時点で4例登録されている。全30例の予定であり、今後6ヵ月程度での登録完了を予定している。ARTを実施するには再治療計画が必須であり、かなりの時間と熟練が必要となる。人工知能を利用したknowledge-based planning (KBP)は、これらの問題の解決策の一つである。前立腺癌に対して、一度の最適化で作成されたKBPの治療計画と実際に照射された治療計画(clinical plan: CP)との比較検証を行った。標的体積に関しては、KBPの方がCPよりも均一性が高く、優れていた。一方、リスク臓器に対する線量は、CPとKBPで同等であった。IMRTでは、多段絞り(MLC)などの機器動作が複雑であるため、治療計画と実際の線量分布の誤差を評価する必要がある。治療計画と実測の線量分布の誤差の指標の一つであるγ解析のパス率(3%/3 mm)では、CPが99.0%、KBPが99.1%と同等であった。前立腺癌に対するIMRTでは、KBPは一度の最適化で、質が高く、物理的に照射可能な治療計画を提供できることが明らかになった。本研究は、現在投稿中である。2016年度に行った後ろ向き研究の結果を基に、2017年度は適応放射線治療(ART)の介入時期を明らかにする前向き臨床試験が開始され、症例登録も順調に進んでいる。ARTに必要な人工知能を利用したknowledge-based planning (KBP)の臨床適応可能性についても、比較的治療計画が簡単な前立腺癌ではその妥当性を明らかに出来た。次年度はより治療計画が難しい頭頸部癌に対しても検討する予定である。適応放射線治療(ART)の介入時期を示す指標を明らかにするため、撮影範囲を上下30cm程度の評価が出来るMulti scan CBCT機能を用いた前向き臨床試験を行った。本研究は2017年11月29日に倫理委員会で承認された。症例登録は予定よりやや遅れ、2019年3月末時点で14例登録されている。全30例の予定であり、2019年度内での登録完了を予定している。治療計画と実測の線量分布の誤差の指標の一つであるγ解析のパス率(3%/3mm)では、CPが99.0%、KBPが99.1%と同等であった。本研究は、Radiation Oncology 2018, 13:163に発表された。より治療計画が複雑な頭頸部癌に対するKBPについても検討した。既治療の頭頸部癌55例の治療計画データをモデルベース化し、CP15例と、同一症例にKBPで作成された治療計画を比較検討した。その結果、無調整のKBPでは、脳幹や脊髄の最大線量が高くなり、臨床使用には耐えないが、一定の線量制約を手入力してKBPで作成した87% (13/15)のプランは、実臨床で用いられた治療計画と同等あるいは優れていた。この成果は2018年に国際学会で発表し、2019年度中の論文化を目指している。
自転車エルゴメーターで与える一定負荷強度は誰にでも同じ力を発揮させてはいない

昨年度に引続き、測定システムの装置・ソフトの修正作業、および精度確認の予備実験を実施した。このシステムは現時点でほぼ完成に至り、いくつかの本実験より本研究申請時の目的に沿ったデータが得られ始めている。それらの一部は論文および学会等に発表公開し、議論を重ねてきている。以下に研究実績の概要を記す。自転車エルゴメーターを用いた個人の体力評価法が普及している。この際の設定負荷はクランクに対して直角方向の力(:接線方向の力)のみを基に設定されている。しかしながら、実際には運動者はそれ以外の方向へも力を発揮しているので同じ設定負荷(接線方向の力に基づいた負荷)であっても、ペダリングスキルに個人差があれば、実際に発揮する力(:ペダルへの合成荷重または全踏力)にも個人差が生じる。このことは従来の設定負荷-生理応答関係より求める体力評価値の妥当性を損なわせる可能性があると推察している。本研究では、20歳代男性7名を対象に、ペダルに対する全踏力およびクランクに対する接線方向の踏力より仕事量(30,50,70%Vo2max)を求めた。Vo2と両仕事量の関係からもとめた体力評価値は、必ずしも一致しなかった。このことより従来の評価法により妥当な評価がなされていない個人が存在することが証明された。その要因を探るために、ペダリングスキルの指標として力の効率指数(=接線方向の踏力/全踏力×100)を求めると、明確な個人間差が現れた。また、力の効率指数は相対負荷増加に伴い、増加する傾向にあったが、負荷増加に対するその変化(Vo2-仕事量関係の回帰直線傾斜)にも個人間差が認められた。本研究の被験者集団とは異なる性、年齢の母集団では更なる個人間差が広がることも予測でき、今後の調査により従来の体力評価値の修正法に関するアプローチが可能になると考えられる。広範に用いられている自転車エルゴメーターを用いた体力評価法(漸増負荷テストなど)では機械的仕事-生理反応の関係より個々の評価値を求めているが、実際のペダリング運動では機械的仕事を遂行するよりもかなり大きな力発揮が必要となる。さらにこの差はペダリング技術の個人差に影響される。本研究では、このペダリング技術の差を定量化し、従来の体力評価法の精度を確認することである。以下に交付申請書の実施計画に基づいて遂行し、得た成果を記す。1.自転車駆動時のペダル踏力測定システム本研究の測定システムについて既製装置は存在しないため、以下の測定システムを構築した。ペダリング中のクランクに対する接線方向および法線方向の力を測定するためにクランク軸とペダルの連結部にストレンゲージを貼付し、この電圧信号をブリッジ回路と増幅アンプを介してパソコンに入力した。既知重量-電圧関係式を導きペダリング踏力を得た。作成ソフトにより、これらの力データから有効踏力、合成踏力、力の効率等のパラメーターを導いた。2.予備実験以下に示した4項目の予備実験の結果、踏力検出部分においては再現性、妥当性が確認された。踏力ソフトは、一部の計算式(特に一定時間の平均処理、角度データの補正など)を改良中であるが、同時に体力評価の予備実験を実施した。その結果、力の効率(ペダリング技術の指標)は負荷漸増に対して増加していくこと、また個人間差があることが判明した。すなわち、従来法の体力評価法は、個々の体力評価値を過小、または過大評価している可能性が確認された。(1)クランクに対する接線方向と法線方向の力の干渉度の検討(2)本実験システムのパワー測定精度の検討(3)踏力計算ソフトの検定(4)従来の体力評価法を用いた負荷-心拍数関係の測定昨年度に引続き、測定システムの装置・ソフトの修正作業、および精度確認の予備実験を実施した。本研究の被験者

集団とは異なる性、年齢の母集団では更なる個人間差が広がることも予測でき、今後の調査により従来の体力評価値の修正法に関するアプローチが可能になると考えられる。
糖鎖を標的とした肝癌遺伝子治療戦略

本研究では,AFPをはじめとするフコシル化糖蛋白とその酵素学的背景であるFut8発現を指標として,肝癌組織中の糖鎖転移酵素遺伝子高発現および低発現遺伝子をスクリーニングし,それらの遺伝子ならびにその糖蛋白の同定を試みた.まず,Fut8活性抑制による糖鎖構造変化と,それに伴う肝癌細胞の浸潤動態の変化を細胞系列の樹立によって評価した.Fut8アンチセンスRNAによる発現抑制実験を行い,アンチセンスRNAをHepG2細胞にリポフェクションした系のフコシル化分画は抑制されている事を確認した.次に,Fut8に対するsiRNAの持続発現により,AFPのフコシル化が安定して抑制されるsiRNA持続発現株の樹立を試みた.Fut8 mRNAの1002塩基のAA配列に続く19塩基配列からなる配列を,polymerase-III H1-RNA gene promotorの制御下に,ポリA配列を欠き3'端にUU突出を有するRNAが転写されるベクターであるpSUPER.retro(OligoEngine, USA)にクローニングした.また,配列特異的発現抑制を確認するため,19配列の第9塩基をGからAに置換した変異配列も同時にクローニングした.そして,これらのベクターをHepG2細胞に感染させ,持続発現株を樹立した.つぎに,Fut8に対する持続的siRNA発現細胞株の樹立を試みたが,ターゲット配列を発現するpSUPER.AFTが導入された安定細胞系列を樹立することが困難であった.その原因を明らかとする目的で,B型肝炎ウイルスHBx領域を対象として上述と同様のステップを踏み,pSUPER.HBxを含めた持続安定発現細胞系列が樹立可能であった.次にHBx発現トランスジェニックマウスの尾静脈よりHydrodynamic gene delivery法による肝細胞へのプラスミドの導入を行い,pSUPER.HBxによる特異的なHBxの著明な発現抑制が確認された.次に,アンチセンスオリゴRNAによるFut8メッセージのノックダウンを試みた.その結果,アンチセンス群がFuGENE6群に比較して有意に低値をとっていた以外,他の群間に有意な差異は認められなかった.以上より,持続的なノックダウン細胞が樹立できなかった最大の原因はオフターゲット効果によることが示唆された.本研究では,AFPをはじめとするフコシル化糖蛋白とその酵素学的背景であるFut8発現を指標として,肝癌組織中の糖鎖転移酵素遺伝子高発現および低発現遺伝子をスクリーニングし,それらの遺伝子ならびにその糖蛋白の同定を試みた.まず,Fut8活性抑制による糖鎖構造変化と,それに伴う肝癌細胞の浸潤動態の変化を細胞系列の樹立によって評価した.Fut8アンチセンスRNAによる発現抑制実験を行い,アンチセンスRNAをHepG2細胞にリポフェクションした系のフコシル化分画は抑制されている事を確認した.次に,Fut8に対するsiRNAの持続発現により,AFPのフコシル化が安定して抑制されるsiRNA持続発現株の樹立を試みた.Fut8 mRNAの1002塩基のAA配列に続く19塩基配列からなる配列を,polymerase-III H1-RNA gene promotorの制御下に,ポリA配列を欠き3'端にUU突出を有するRNAが転写されるベクターであるpSUPER.retro(OligoEngine, USA)にクローニングした.また,配列特異的発現抑制を確認するため,19配列の第9塩基をGからAに置換した変異配列も同時にクローニングした.そして,これらのベクターをHepG2細胞に感染させ,持続発現株を樹立した.つぎに,Fut8に対する持続的siRNA発現細胞株の樹立を試みたが,ターゲット配列を発現するpSUPER.AFTが導入された安定細胞系列を樹立することが困難であった.その原因を明らかとする目的で,B型肝炎ウイルスHBx領域を対象として上述と同様のステップを踏み,pSUPER.HBxを含めた持続安定発現細胞系列が樹立可能であった.次にHBx発現トランスジェニックマウスの尾静脈よりHydrodynamic gene delivery法による肝細胞へのプラスミドの導入を行い,pSUPER.HBxによる特異的なHBxの著明な発現抑制が確認された.次に,アンチセンスオリゴRNAによるFut8メッセージのノックダウンを試みた.その結果,アンチセンス群がFuGENE6群に比較して有意に低値をとっていた以外,他の群間に有意な差異は認められなかった.以上より,持続的なノックダウン細胞が樹立できなかった最大の原因はオフターゲット効果によることが示唆された.本研究では,αーフェトプロテイン(AFP)をはじめとするフコシル化糖蛋白とその酵素学的背景であるα1-6フコース転移酵素(AFT)およびV型グルコサミン糖転移酵素(GnT-V)の発現を指標として,肝癌組織中の糖鎖転移酵素遺伝子群を含む高発現および低発現遺伝子をスクリーニングし,遺伝子ならびにその糖蛋白の同定を試みた.次に,これらの遺伝子群の抑制ならびに活性化による肝癌細胞biological behaviorの調節手技の確立を同時に思考した.前段階として,AFT活性抑制による糖鎖構造変化と,それに伴う肝癌細胞の浸潤動態の変化を細胞系列を樹立することによって評価することを行った.AFTアンチセンスRNAによる発現抑制実験として,本酵素のmRNAの861874塩基,5'-CACTCATCTTGGA-3',に対するセンスおよびにアンチセンス合成RNAを用いた.HepG2細胞を48時間培養後の培養上清中のフコシル化AFP分画は80%以上の高値であった.FnGENE6(Roche, USA)を用いて前記のセンス,アンチセンスRNAをHepG2細胞にリポフェクションにより導入した

24,48時間後のフコシル化分画は,それぞれ,77%,80%(センス),80%,71%(アンチセンス),であり,アンチセンス導入群の48時間後の培養上清中でフコシル化が抑制されている事が示された.次にα16FTに対するsmall interfering RNA(siRNA)の持続発現により,AFPのフコシル化が安定して抑制されるsiRNA持続発現株の樹立を試みた.α16FT mRNAの1002塩基のAA配列に続く19塩基配列からなる配列を,polymerase-III H1-RNA gene promotorの制御下に,ポリA配列を欠き3'端にUU突出を有するRNAが転写されるベクターであるpSUPERretro(OligoEngine, USA)にクローニングしたまた,配列特異的発現抑制を確認するため,19配列の第9塩基をGからAに置換した変異配列も同時にクローニングした.そして,これらのベクターをHepG2細胞に感染させ,持続発現株を樹立した.現在,同様の操作をGnT-Vについて行っている.本研究では,AFPなどのフコシル化糖蛋白とその酵素学的背景であるFUT8を指標として,肝癌組織中のFUT8を含む高発現および低発現遺伝子をスクリーニングし,遺伝子ならびにその糖蛋白の同定を試みた.さらに,変化を示す遺伝子群の抑制ならびに活性化による肝癌細胞biological behaviorの調節手技の確立を試みた.はじめに,FUT8活性抑制による糖鎖構造変化と,それに伴う肝癌細胞の浸潤動態の変化を,細胞系列の樹立によって評価した.FUT8アンチセンスRNAによる発現抑制実験として,mRNAの861874塩基に対するセンス,アンチセンス合成RNAを用いた.HepG2細胞の培養上清中のフコシル化AFP分画は80%以上の高値であった.FuGENE6を用いてアンチセンスRNAをHepG2細胞にリポフェクション後,フコシル化分画の抑制を確認した.次にFUT8に対するsiRNAによる抑制発現株の樹立を試みた.mRNAの1002塩基のAA配列に続く19塩基配列をpolymerase-III H1-RNA gene promotorの制御下に,ポリA配列を欠き3'端にUU突出を有するRNAが転写されるベクターであるpSUPER.retroにクローニングした.また,配列特異的発現抑制を確認するため,9塩基をGA置換の変異配列もクローニングした.本ベクターをHepG2細胞に感染させ、持続発現株の樹立を試行したが,選択薬剤であるpuromycin添加により細胞が死滅する現象を認めた.そのため,negative-control用vectorをtransfectionする系を作製し,同様のselectionを試みたが、siRNA発現ベクターを感染させた細胞は,negative-control vector感染細胞よりも低濃度のpuromycinでも死滅する結果で,現在この点の解決を行っている.今年度はAFT(Fut8)に対する持続的shRNA発現細胞株の樹立を試みたが,ターゲット配列を発現するpSUPER.AFTが導入された安定細胞系列を樹立することが困難であった.