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郷土文学受容についての通・共時的把握とその地域教養教育への活用に関する基礎的研究

以上の調査・考察の成果は、補助金によって発行した『岩手郷土文学の研究』第6号(平成18年3月20日発行)ほかにそれぞれの研究者(研究協力者を含む)名で論文化し発表している。なお、当該雑誌は全国の研究機関、研究者に送付し、その批評を仰ぎ次年度の研究に活かすことになっている。岩手における郷土文学作品を通時的・共時的に把握すること、その作業を通じて文学作品における郷土性という問題に接近することを目的として、研究会(岩手郷土文学研究会)を開催、研究方針の確定と研究者の研究状況の報告をおこなった。特に今年度は「校歌の収集と分析」「民俗芸能の地域における伝播の問題」、「農民文学・大衆文学の地域および中央における評価・受容の問題」、「方言の教育現場における取り扱いの変容」「宮澤賢治・石川啄木が教育現場や以後の文献資料にどのように取り上げられ扱われているか」といった5つの重点テーマを設定し、それを軸に各自研究・調査を進めつつ、情報の共有と連携、他者からの批評を仰ぐことを目的として2回の研究会を開催し、研究を推進した。各共同研究者においては次のような具体的調査研究を行なった。1)岩手県と周辺各県地方の方言資料を収集するとともに、教育現場における方言矯正の実体などについて『岩手学事彙報』『岩手教育』を悉皆調査し、その記事内容から方言が教育現場でどのように受容あるいは忌避されてきたかについて探った。また、郷土文学作品における方言の使用状況などの調査を行った。それは平成19年度も継続して調査・研究を行う。2)宮沢賢治の「修学旅行復命書」に見られる「郷土」「郷里」「郷」といった用語を手がかりに、生まれ故郷へ寄せた書としての当該作品の意味を再検証した。3)民俗芸能の伝播と受容に実態を仔細に検証することで、芸能の伝播と言う事態には、その担い手の共同体からの離脱という要素が考えられることなどを究明した。以上の成果のうち2)と3)については、補助金によって発行した『岩手郷土文学の研究』第7号(平成19年3月25日発行)に、それぞれの研究者名で論文化し発表している。今年度は、当初研究実施計画の中、特に「中央と地方」という切り口を重点において、それぞれ研究課題にあたることとした。年度内に研究会を以下のとおり3度開催し、それぞれ研鑚と情報の共有をはかった。第1回研究会平成19年7月12日今年度の研究計画、方法の確認、昨年度研究報告の合評。第2回研究会平成19年9月9日科学研究費補助金基盤研究Cによる共同研究「出版メディアによる(大衆)の獲得(代表庄司達也氏課題番号17520125)」の研究グループと合同研究会を開催第3回研究会平成20年1月8日研究報告報告書の発行について上記の内、9月に行った庄司氏のグループとの合同研究会は、メディア資料の重要性と資料研究を以下に読みに応用していくかという観点で、非常に有意義な研究会にあり、そこから発想された方向性が、以後の研究会の研究に少なからず好影響を与えた。具体的に研究の内容を述べると、須藤宏明はその観点から、岩手出身の作家鈴木彦次郎について新感覚派の一員として『文芸時代』を中心に先品を発表していた大正末から昭和2年にかけての雑誌文献調査を行い、それぞれ掲載誌を仔細に調査分析することによって、考察を行った。豊泉豪(研究協力者)は、日本現代詩歌文学館
Ifチャネルを指標としたヒトES細胞由来ペースメーカ細胞分取と自動能の分子基盤

今年度は、ヒト胚性幹(ES)細胞由来ペースメーカ細胞の分取精製法の確立に関して重点的に研究を行った。まず、ヒトHCN4遺伝子を含むBACベクターを使用し、HCN4遺伝子のスタートコドン部位にGFPをノックインしたBACベクターを作製した。続いて、作製したBACベクターをヒトES細胞(KhES-1細胞)へ遺伝子導入し、導入株81株を樹立した。樹立したほぼ全ての細胞株で、心筋拍動部位でのGFP発現を確認することができた。その中から、最も発現の強い5株を選び、GFP陽性細胞を分取し解析したところ、HCN4を発現し、ペースメーカ型の自動能を有していた。したがって、今回樹立したヒトES細胞株からヒトペースメーカ細胞を分取できることが分かった。さらに、マウスES細胞由来HCN4陽性ペースメーカ細胞について、以下の研究成果を得ている。(1)Caイメージングと多点電極を用いた解析から、このペースメーカ細胞が他の作業心筋細胞を駆動するペースメーカ機能を有することを見いだした(論文準備中、国際特許出願済)。(2)エピジェネティック制御因子、ヘテロクロマチンプロテイン1γの発現量変化により、効率的に心筋細胞を誘導できることを発見した(Morikawa etal, BBRC, 2013.日本心電学会誌最優秀論文賞受賞)。(3)細胞表面抗原であるプリオンタンパク質を利用し、ES細胞の心筋分化誘導系から、遺伝子改変なく心筋細胞を単離できることを見いだした(Fujii et al, Circ J, 2012.日本循環器学会雑誌最優秀賞受賞)。本研究成果により、ヒトペースメーカ細胞の分取が可能になるとともに、ペースメーカ細胞の誘導、分取法の改善および特性の解析を進めることができた。
新規ファンコニ貧血遺伝子のハンティングと機能解析

日本人分類不能ファンコニ貧血症例の多くで、エクソーム解析で見逃されていたスプライス異常によって既知のFA遺伝子に異常が生じていることが判明した。インド人FA患者サンプル合計20例を解析し、特異なFANCL遺伝子変異が多発することを発見した(20%程度)。FA蛋白質FANCTとFANCD2の変異ゼブラフィッシュを作成し、100%オス化するということを見出した。ドイツのグループと共同研究し、E3ユビキチン化酵素RFWD3が新規のFA遺伝子FANCWでありそのターゲットが相同組換え経路の重要因子RPAとRAD51であることを証明した。1.日本人分類不能FA症例9例のサンプル解析。分類不能FA症例9例は、様々な努力によっても既知のFA原因遺伝子の変異による発症が確定出来なかった症例である。細胞の入手可能であった3例においてRNAseqを行い、現在解析を行っている。また、FAAP20の変異を認めた例からの細胞にFAAP20をレンチウイルスによって導入した。FANCI、FANCMのヘテロ変異を認めた例に対応する遺伝子を導入した。現在発現の確認と相補の有無をテストしている。2.インド人FA患者サンプルの解析による新規FA遺伝子ハンティング。二国間交流事業によってインド、ムンバイを訪問し、サンプルの輸送について相談し同意を得た。しかし、インド政府の認可がおりず、年度内にサンプルの輸送を行えなかった。やっと認可が出たので、サンプル輸送を開始する。3.同定された新規FA蛋白質機能の詳細な解析。研究分担者の佐藤博士(早稲田大学胡桃坂研究室)によって変異型UBE2Tのインビトロ酵素活性低下と、FANCLとの会合の低下が確定した。また、ゼブラフィッシュFAモデルの作成と解析。UBE2Tのノックアウトゼブラフィッシュを作成については、ヘテロ変異をもつ個体を得る事に成功し、現在ホモ個体を得るべく掛け合わせを行っている。日本人患者の解析は順調に推移しているが、インド人患者の解析は遅れている。これは、インドからのサンプル送付や研究打ち合わせのための来日などが、インド政府が認可せず、H27年度内にほとんど進める事が出来なかったためである。ようやく認可が出たので、サンプルの輸送が開始でき、今後の進展は期待できる。1.日本人分類不能FA症例9例のサンプル解析を実施している。RNAシーケンス、全ゲノムシーケンス、エクソーム解析結果の見なおし等を行い、これらの症例の多くで、実はこれまで見逃されていたシノニマス変異によるスプライス異常によって既知のFA遺伝子に異常が生じていることが判明した。しかし、二例の兄弟例で、新規のDNA損傷応答関連遺伝子に両アレル変異を見出した。今後の解析が重要である。2.インド人FA患者サンプルの解析による新規FA遺伝子ハンティングを継続している。二国間交流事業によってインド、ムンバイからのサンプルを解析した。まだ例数は少ないが、インドやパキスタンといった地域でのFA症例に、特異なFANCL遺伝子変異が多発することを見出した(おそらく症例の20%程度に登ると考えられる)。この変異自体は、以前に一例のみ報告されているが、他の民族地域でのFANCL変異は非常に稀であり、民族的特殊性を示すと考えられる。3.同定された新規FA蛋白質機能の詳細な解析を目指し、ゼブラフィッシュFAモデルの作成と解析を行っている。UBE2T, FANCD2, FANCLのノックアウトゼブラフィッシュの作成を試み、前二者については作成できた。FANCLについては、すでに報告された変異体を入手した。UBE2Tについては、生まれる魚の全てがオス化するという結果となり、さらに早老症を思わせる早期死亡を認めている。研究分担者の佐藤博士(早稲田大学胡桃坂研究室)によってFANCD2とRAD51(FANCR)の会合とその機能的関連を解析し、論文発表した(NAR 2016 Dec 15;44(22):10758-10771)。インド人患者の解析は解析済みの例数としては、目標からいって遅れているが日本人患者の解析は順調に推移し、新規遺伝子候補の同定に至った。論文も出ており、ゼブラフィッシュの解析では、新たな表現型が同定された可能性がある。1.日本人分類不能FA症例9例のサンプル解析を実施した。二例の兄弟例で、新規のDNA損傷応答関連遺伝子に両アレル変異を見出した。合計20例を解析し、インドやパキスタンといった地域でのFA症例に、特異なFANCL遺伝子変異が多発することを見出した(おそらく症例の20%程度にのぼると考えられる)。FANCL変異は非常に稀であり、民族的特殊性を示すと考えられる。このFANCL変異によって、下流の基質FANCD2のものユビキチン化が消失することが確認された。米国NIHのグループとハプロタイプ解析を共同研究してデータ待ちである。データが揃い次第、論文投稿する。3.ゼブラフィッシュFAモデルの作成と解析を行った。

生まれる魚の全てがオス化するという結果となり、機能解析を継続している。4.ドイツ、ビュルツブルグ大のグループと共同研究し、E3ユビキチン化酵素RFWD3が新規のFA遺伝子FANCWであることを確定させ、さらにそのターゲットが相同組換え経路の重要因子RPAとRAD51であることを証明した。RFWD3はRAD51とRPAを局所から除去することで、その後の相同組換え反応を推進すると結論した(Inano et al. Mol Cell 2017; Knies et al. JCI 2017)。日本人分類不能ファンコニ貧血症例の多くで、エクソーム解析で見逃されていたスプライス異常によって既知のFA遺伝子に異常が生じていることが判明した。インド人FA患者サンプル合計20例を解析し、特異なFANCL遺伝子変異が多発することを発見した(20%程度)。FA蛋白質FANCTとFANCD2の変異ゼブラフィッシュを作成し、100%オス化するということを見出した。ドイツのグループと共同研究し、E3ユビキチン化酵素RFWD3が新規のFA遺伝子FANCWでありそのターゲットが相同組換え経路の重要因子RPAとRAD51であることを証明した。インドの症例の解析を効率良く進めるため、細胞株の作成を試みる。EBVのトランスフォーメーション法が簡便でよいと考え、オランダ、米国のグループからプロトコールと必要なEBVのソース細胞(B95-8)を入手した。これにより、変異をみとめた遺伝子による相補が簡便に行えることが期待できる。他のプロジェクトで進めているヒトiPS細胞インビトロ造血分化系の利用によって、マウスやゼブラとは違う次元でヒトのFA遺伝子異常の機能検索が可能になってきた。この系にゲノム編集技術を組み合わせ、より広範に応用することを考えている。29年度が最終年度であるため、記入しない。放射線分子生物学、化学物質影響科学、29年度が最終年度であるため、記入しない。
税と社会保障の負担構造に関する一体的研究

未納・未加入問題や年金記録問題を機に基礎年金の全額消費税方式化の議論が高まっている。政府も社会保障国民会議を設置して具体的な検討を行っているが、公表された試算は前提や他の税制との整合性などに課題を残しており、制度の移行を具体的に考えた場合には十分なものとはいえない。本研究では、社会保障国民会議の試算の構造を明らかにし、税と社会保険料の一体的構造を考慮すると税方式移行時に付随的に増税を含む政府増収が生じることなどを明らかにした。研究成果は査読誌に掲載された。近年、わが国では高齢化の進展とともに国民負担における社会保険料負担のウェイトが高まっており、税制改革の議論において税と社会保障の一体的な制度設計が課題となっている。わが国の税と社会保険料は、所得課税において社会保険料控除が認められているだけでなく、課税ベースを共有しているなど互いに密接に関係している。本研究では、こうした税制と社会保障負担のあり方に関する議論に資するべく、消費税の年金目的税化など現在議論となっている課題について、税と社会保険料を合わせた負担への影響を二年間で分析することを目的としている。研究初年度にあたる平成20年度は、当初の計画通り、基礎年金の消費税方式化が税・社会保険料の負担に対して与える影響を分析した。基礎年金の消費税方式化は、平成20年1月に政府内に設置された社会保障国民会議において具体的にその影響が検討され、5月に試算結果とバックデータが公開された。しかし、本研究が課題とする消費税方式移行時に生じる社会保険料控除の減少とそれに伴う所得課税の負担増については分析されていない。そこで平成20年度の研究では、各種統計からこの二次的に生じる負担増の規模を算出し、その規模が小さくないことを明らかにした。同時に、社会保障国民会議のバックデータを用いて収入階級別、世帯類型別の影響を分析し、国民会議の試算と異なる影響が生じることを明らかにした。その際、負担増の発生を消費税の増税幅を抑えることで中立化した場合の影響についても分析した。分析結果は学会にて報告を行った。基礎年金の消費税方式化が社会的に注目された時期に、同じテーマに関する研究成果を発表できた意義は非常に大きい。特に社会保障国民会議で示されていなかった影響を明らかにしたことは、基礎年金の消費税方式を具体的に検討する際の基礎的研究として貢献できるものと考える。わが国の税と社会保険料は、所得課税において社会保険料控除が認められているなど互いに密接に関係しており、近年は社会保険料負担の上昇に伴い、税と社会保障の一体的な制度設計が課題となっている。研究最終年度にあたる平成21年度は、前年度に行った基礎年金の消費税方式化の税・社会保険料の負担への影響に関する分析結果のまとめを行った。基礎年金の消費税方式化は、平成20年に政府内に設置された社会保障国民会議において具体的にその影響が検討された。しかし前提や他の税制との整合性などに課題を残しており、制度の移行を具体的に考えた場合には十分なものとはいえない。本研究では、こうした具体的な制度移行を考えた場合に生じる影響を年金制度以外も含めて分析し、成果は査読誌に掲載された。本年度は、さらにその成果を発展させる形で、消費税方式移行時に付随的に生じる影響の緩和策について分析したほか、基礎年金の改革とともに議論されている最低保障・所得比例年金の特徴と制度移行時の課題等についても取り組んだ。具体的には、政府試算の前提で制度的に生じる影響の緩和手段として消費税と個人所得課税を検討し、必要な消費税率や給与所得控除の変更幅を定量的に明らかにした。また最低保障年金の減額基準や所得比例年金移行時の課税ベースの統一方法について検討し、定量的に分析した。これらの研究成果は学会の研究会で報告した。基礎年金の消費税方式化や最低保障・所得比例年金が社会的に注目された時期に、同じテーマに関する研究成果を発表できた意義は非常に大きく、制度移行を具体的に検討する際の基礎的研究として貢献できるものと考える。
ミトコンドリアDNA多型からみた現生人類の拡散

本研究では、現在論争となっている縄文人の「東南アジア起源」あるいは「北東アジア起源」の仮説を検証すため、東南アジアおよび北東アジアの集団にに着目した、タイの3集団(コンケン、チェンマイ、少数民族サカイ)、マレーシアおよびインドネシア集団を含む東南アジアの5人類集団について、ミトコンドリアDNAのDループ領域の塩基配列を分析した。159人の東南アジア人について563bpの塩基配列を比較したところ、119の異なる配列のタイプが見られた。これらのうち98タイプは、それぞれの集団に特有のものであり、残りの21タイプは集団間に共通して見られた。系統樹分析によって、東南アジア人は少なくとも6個の単系統クラスターに分類されるが、5集団からの系統は各クラスター中に完全に混じりあっていた。昨年報告した東アジアの5集団以外に、新たに分析したハルピンの中国人(60人)、アフリカ人、ヨーロッパ人、アメリカ先住民のデータを併せて解析した。塩基多様度のネット値(DA)に基づき集団の系統樹を作成したところ、東アジアと東南アジアの各集団は単系統クラスターを形成するが、さらに南と北のグループに分割される傾向が読み取れた。平均距離法による系統樹では、南グループには台湾中国人、インドネシア人とタイ人が含まれ、北グループには、本土日本人、韓国人、ハルピンの中国人、琉球人とアイヌが含まれた。しかし近隣結合法による系統樹では、アイヌは南グループと北グループの中間に現われるという微妙な系統的位置を示した。本研究では、現在論争となっている縄文人の「東南アジア起源」あるいは「北東アジア起源」の仮設を検証すため、東南アジアおよび北東アジアの集団にに着目した、タイの3集団(コンケン、チェンマイ、少数民族サカイ)、マレーシアおよびインドネシア集団を含む東南アジアの5人類集団について、ミトコンドリアDNAのDループ領域の塩基配列を分析した。しかし近隣結合法による系統樹では、アイヌは南グループと北グループの中間に現れるという微妙な系統的位置を示した。本研究では、現在論争となっている縄文人の「東南アジア起源」あるいは「北東アジア起源」の仮説を検証するため、東南アジアおよび北東アジアの集団に着目した、タイの3集団(コンケン、チェンマイ、少数民族サカイ)、マレーシアおよびインドネシア集団を含む東南アジアの5人類集団について、ミトコンドリアDNAのDループ領域の塩基配列を分析した。159人の東南アジア人についえ563bpの塩基配列を比較したところ、119の異なる配列のタイプが見られた。
ナノスケール材料の力学的挙動に対するマイクロメカニックス的解析

本研究の目的は、ナノスケール構造物ひいてはナノストラクチャ材料の力学的挙動を解明し、その挙動の変化を予測することができる理論を構築することにある。特に本研究では界面エネルギ、界面物体力を考慮した力の平衡方程式を用いる。本年度は、ナノストラクチャ材料の力学的特性(超塑性、高弾性)を解明するための解析を行った。これらの力学的特性に対する理論的検討はほとんど行われていない。そこで、ここでは結晶粒界(界面エネルギによる表面応力が存在している)と転位の関係を2次元異方性の基本解を用いた境界要素法を用いて調べた。ナノ構造材料は、ナノメータサイズの微細結晶粒が多数集まった構造をしている。そのようなモデルで解析することは、計算時間および記憶容量の点で問題があり、様々な影響因子について調べることが難しくなる。そこで前年度におけるモデルであるナノ微粒子複合材料を用いて、その粒子中に転位を導入し、材料寸法、転位の大きさを種々に変え、界面エネルギの有無による微粒子内部の応力分布、界面形状の変化の様子を調べた。その結果以下のことがわかった。微粒子の半径を大きくすると粒子内部の応力分布は、ほとんど界面応力の影響を受けなくなり、小さくすると大きく受けるようになる。転位に対する作用力は、バーガースベクトルおよび転位位置により大きく変化し、転位が界面近傍にある場合には転位が消滅する方向に力が作用する。その結果、転位を導入した微粒子の平衡形状は滑らかなものとなり、バーガースベクトルが減少したことを示した。以上のことから、ナノ微粒子の降伏応力は増加することが予想される。また、ナノインデンテーションで降伏応力は増大することが知られており、たとえナノ微粒子でなくとも、微小なバーガースベクトルが関与する現象では、見かけ上降伏応力が大きくなると考えられる。近年ナノ構造材料に関して多くの研究が行われ,この材料が高い弾性的性質,高降伏応力,超塑性などの力学的性質を有するばかりでなく,磁気特性などにも優れていることがわかってきた.しかし,その性能の発現のメカニズムはまだ未解明であり,それを明らかにすることは材料の作製,特性の予測などのために重要である.本研究の目的は,ナノ構造材料すなわちナノストラクチャ材料の力学的特性の発現機構を解明し、特性を予測することのできる理論を構築し、検証することにある。本年度はまず、超微粒子複合材料およびナノストラクチャ材料の応力解析を行った。はじめに、ナノスケール超微粒子を複合した材料を考え、界面の曲率(表面応力は曲率に関係する)を考慮して、変形・応力解析を行った。この解析は,本年度計上した経費で購入した高速なワークステーション(メインメモリ:128MB)を用いて行った.粒径が10nm以下のナノ微粒子を分散した複合材料の見かけの弾性率は、10nm以上の粒径で同じ含有率の材料のそれに対して、大きく異なってくることがわかった。また、微粒子を楕円体とし界面応力を考慮して粒子内部の応力分布を調べた。その結果、楕円体内部では界面の曲率変化の影響を受けて、内部応力は一様にならないことがわかった。さらに、5nm以下の粒径の場合には、外部に材料全体に引張応力が作用していても界面応力のために粒子内部に圧縮の応力が作用していることがわかった。マイクロメカニックスでは介在物内部の応力分布が一定であることを利用して、複合材料中の介在物を固有ひずみで置き換え、様々な複合材料の弾性定数テンソルを誘導することができた。しかし、界面応力を考慮した場合には内部で応力は一定ではなく、複雑に変化している。したがって、応力分布に何らかの平均化を施して、マイクロメカニックスの考え方を導入して、界面エネルギ、微粒子の体積率、形状を考慮した理論を構築する必要があることがわかった。

また、ナノインデンテーションで降伏応力は増大することが知られており、たとえナノ微粒子でなくとも、微小なバーガースベクトルが関与する現象では、見かけ上降伏応力が大きくなると考えられる。
脂肪組織由来間葉系幹細胞を用いた、放射線による唾液腺障害の回復に関する研究

脂肪組織由来間葉系幹細胞(ADSC)を用いて放射線性唾液腺障害の回復をはかることを第一の目的とした。最初に放射線性唾液腺障害モデルマウスの作成を行い、照射線量依存性に唾液分泌低下が起こることを確認した。放射線照射後に唾液腺へADSCの投与をしても唾液分泌低下の改善はみられず、当初の予想とは反したものの、唾液腺障害の一因として神経障害の可能性を予想外に見出した。今後は神経障害の観点からの唾液腺機能改善の研究をしていきたいと考えている。頭頸部は呼吸や摂食嚥下、発声に関わる重要な部位であり、その頭頸部癌は全癌患者のうち約5%を占める。頭頸部癌における根治的放射線治療の副作用として唾液腺分泌障害が問題となるが、根本的な治療法は現在存在しない。そこで安全かつ容易に大量に採取できる脂肪組織由来間葉系幹細胞(ADSC)を用いて放射線性唾液腺障害の回復をはかるとともに、そのメカニズムの解明を第一の目的とする。さらにADSCによる頭頸部癌への影響についても明らかにする。初年度は、まず先行論文に倣い、マウスの唾液腺から唾液腺細胞を接着培養系に移すことを試み、それに成功した。それらの細胞は唾液腺細胞のマーカーとされるアクアポリンの遺伝子発現が高くなっていた。次に、唾液腺細胞のクロノジェニックサバイバルアッセイを行った(210Gy)。ここで、ADSCを数日培養しその培養液を採取し、放射線障害を受けた唾液腺細胞の培地にその培養液を加えた。これによって放射線障害された唾液腺細胞が、ADSCによる傍分泌作用によって放射線障害から回復するかどうかを明らかにし、また回復が認められた場合、ADSCの培養液に含まれる液性因子をフローサイトメトリーを用いて解析して含有物質を特定しようとした。しかしながら、唾液腺細胞のクロノジェニックサバイバルアッセイの際に、ADSCの培養上清を加えた場合には、予想に反して有意な改善は認められなかった。当初、唾液腺細胞の培養に難渋し、in vitroでの実験がうまく立ち上がらなかった。試行錯誤の結果、1年かけてようやく唾液腺細胞の放射線耐性を確認できるようになった。今年度は、マウスの唾液腺に限局して様々な線量の放射線を照射し、以後定期的に(照射前、照射後020週間程度)麻酔下でマウス口腔内にコットンを含ませ、そのコットンに含まれる唾液重量を精密に測定する方法をまず確立し、唾液分泌が有意に減ることを確認した。また、マウスをサクリファイスして唾液腺組織のHE染色を行ってマウスの唾液腺を観察し、腺房細胞や腺管細胞の炎症、線維化、閉塞を観察した。その結果、マウス唾液腺機能廃絶に適当な線量として8Gy程度は必要かと考えられた。また現在、唾液腺は2次元的な切片では解析が難しいと感じており、3次元的な構造の解析の可能なホールマウント免疫染色法を新たに取り入れて、抗体の濃度などを検討しているところである。解析項目としては血管、神経、唾液腺幹細胞などである。また、放射線障害されたマウス唾液腺に対してADSCを注入する手術を行い、唾液分泌量をみているが、先行報告のように明らかな唾液分泌量の改善は認められなかった。この原因として手技の習熟もあるかと考えられるので平成29年度に2回目の実験を予定している。先行報告にならって、放射線障害されたマウス唾液腺に対してADSCを注入する手術を行い、唾液分泌量をみたものの、明らかな唾液分泌量の改善は認められなかった。この原因として手技の習熟もあるかと考えられ、平成29年度に3度、再実験を行ったが放射線唾液腺障害による唾液分泌量の回復は認められなかった。脂肪組織

由来間葉系幹細胞(ADSC)を用いて放射線性唾液腺障害の回復をはかることを第一の目的とした。最初に放射線性唾液腺障害モデルマウスの作成を行い、照射線量依存性に唾液分泌低下が起こることを確認した。放射線照射後に唾液腺へADSCの投与をしても唾液分泌低下の改善はみられず、当初の予想とは反したものの、唾液腺障害の一因として神経障害の可能性を予想外に見出した。今後は神経障害の観点からの唾液腺機能改善の研究をしていきたいと考えている。今後は、マウスの唾液腺に限局して様々な線量の放射線を照射し、以後定期的に(照射前、照射後020週間程度)麻酔下でマウス口腔内にコットンを含ませ、そのコットンに含まれる唾液重量を精密に測定する方法を確立する。最後にマウスをサクリファイスして唾液腺組織のHE染色を行ってマウスの唾液腺を観察し、腺房細胞や腺管細胞の炎症、線維化、閉塞を観察する。その結果からマウス唾液腺機能廃絶に適当な線量を決定する。その後、実際に放射線照射時にADSCを投与すると唾液腺機能が温存されるかどうかを確認していきたい。またADSCの細胞だけではなく液性因子としていくつかの成長因子を文献的考察により同定したのでADSCの接種に加えて、これらの液性因子の投与によっても唾液腺機能回復が得られないかを検討したい。放射線科学当初の予定通りに研究が進まず、予定していた試薬などの購入を見送ったため。次年度では、予定通り試薬の購入を進められる見込みであり、適切な予算執行ができると考えられる。
前癌病変および早期癌における微細構造ならびに癌浸潤様式に関する三次元的観察

口腔粘膜の正常部,前癌病変,癌病変の上皮基底側を,60°Cに加温した6N水酸化ナトリウム消化法を用いて試料作製し走査型電子顕微鏡を用いて研究した.この消化法によって基底膜と膠原線維は完全に除去されて上皮層のみが剥離し,上皮の基底側を広範囲にわたって三次元的に観察することができた.正常粘膜の基底面は,結合識乳頭をいれていた円形陥凹構造が認められた.陥凹は,正常組織では規則的に配列していた.強拡大像では,多数の基底突起と基底隆起が上皮基底面に認められた.これらの細胞基底側の突出構造は,膠原線維を避けるように下方に伸びだした構造物であり,正常上皮の自由表面に観察される微小隆起とはことなる構造物である.前癌病変,および癌病変部の基底面では,上皮の基底面には基底突起の蜂巣状構造物が認められた.この蜂巣状構造は本研究によって初めて明らかにされたものであり,今後の前癌病変の微細形態学的特徴として診断に用いる可能性が示唆された.上皮内癌の基底面には,癌細胞とその突起が基底上皮細胞の間に認められた.早期の微小浸潤癌では,癌細胞は基底側に球状突起物を有していた.癌胞巣の外面では,癌胞巣を結びつけられていると思われる花弁状の構造物が認められた.本研究で得られた結果は,平成6年8月にパリ国際電子顕微鏡学会に発表し,雑誌論文として,Medical Electron Microscopyと米子医学雑誌に発表した.口腔粘膜の正常部,前癌病変,癌病変の上皮基底側を,60°Cに加温した6N水酸化ナトリウム消化法を用いて試料作製し走査型電子顕微鏡を用いて研究した.この消化法によって基底膜と膠原線維は完全に除去されて上皮層のみが剥離し,上皮の基底側を広範囲にわたって三次元的に観察することができた.正常粘膜の基底面は,結合識乳頭をいれていた円形陥凹構造が認められた.陥凹は,正常組織では規則的に配列していた.強拡大像では,多数の基底突起と基底隆起が上皮基底面に認められた.これらの細胞基底側の突出構造は,膠原線維を避けるように下方に伸びだした構造物であり,正常上皮の自由表面に観察される微小隆起とはことなる構造物である.前癌病変,および癌病変部の基底面では,上皮の基底面には基底突起の蜂巣状構造物が認められた.この蜂巣状構造は本研究によって初めて明らかにされたものであり,今後の前癌病変の微細形態学的特徴として診断に用いる可能性が示唆された.上皮内癌の基底面には,癌細胞とその突起が基底上皮細胞の間に認められた.早期の微小浸潤癌では,癌細胞は基底側に球状突起物を有していた.癌胞巣の外面では,癌胞巣を結びつけられていると思われる花弁状の構造物が認められた.本研究で得られた結果は,平成6年8月にパリ国際電子顕微鏡学会に発表し,雑誌論文として,Medical Electron Microscopyと米子医学雑誌に発表した.
閉経後骨粗鬆症の病態解明と運動と薬物療法による治療効果について

1.閉経後骨粗鬆症の病態解明について:カニクイザルに卵巣摘出(OX)と偽手術(SHM)を行った。骨吸収量に対する骨形成量の比はOX後32週で減少したため、皮質骨組織全体の骨実質の比率がOX後32週で減少した。骨内膜面では分画吸収面はOX後16週で術前より増加、石灰化面はOX後16週で術前より減少した。石灰化速度は不変であったが、補正石灰化速度と骨形成率はOX後16週で減少し、SHM群より低値となった。OXによる骨吸収の増加はなく、骨吸収後に骨形成が低下し、その発生機序としては、骨吸収から骨形成への逆転停滞と、類骨石灰化機構障害が考えられた。2.運動の効果について:安静時、60分走負荷後30分、90分経過時に、血液を採取し、骨代謝に関与する生化学因子を測定した。低骨密度群では正常骨密度群より、ALPとカルシトニンが高く、IGF-1は低値となった。PTHは安静時のみ高値であった。疲労骨折者では安静時ALP、全てのPTH、90分後コルチゾールが平均+2SDを超え、30分、90分時Ca、全てのIGF-が平均-2SDを下回った。正常骨密度者と低骨密度者では、同様の運動負荷でも骨に対する影響が異なり、疲労骨折者と非骨折者でも反応が違うことが推測された。3.ビタミンD受容体(VDR)サブタイプについて:VDRにはBとbのサブタイプがある。欧米人ではBBよりbbタイプの方が骨塩量が高い傾向がある。日本人にはBの遺伝子が少なく、同様の結果が出るかどうかが明らかではなかった。腰椎骨密度、脊椎圧迫骨折の有無とVDRサブタイプの比較により、日本人でもVDRのBタイプは低骨密度と脊椎圧迫骨折の危険因子であることを明らかにした。
腸管上皮細胞の糖鎖修飾を介した感染防御機構の解明

本年度は、Salmonella typhimuriumの感染に対する上皮細胞が発現するa1,2-フコースの役割について解析を進めた。in vitroにおいてFut2ならびにa1, 2-フコースを恒常的に発現した上皮細胞を作製し、S. typhimuriumと共培養することで、S. typhimuriumの上皮細胞への接着について検討した。その結果、Fut2ならびにa1, 2-フコースを発現した上皮細胞および非発現細胞では、S. typhimuriumの接着が確認されたものの、Fut2ならびにa1, 2-フコースを発現した上皮細胞において接着が低下することを見出した。このことから、腸管上皮細胞のa1, 2-フコースはS. typhimuriumの接着を阻害する機能を有することが示された。本年度はS. typhimuriumにくわえて、病原性真菌であるCandida albicansの腸管定着機構についても検討した。C. albicansは腸管上皮細胞にFut2ならびにa1, 2-フコースを誘導することを見出している。興味深いことに、野生型マウスにC. albicansを経口投与したところ腸管から完全に排除された。一方、アンピシリンを自由飲水で投与したマウスではC. albicansが腸管に定着した。このことから、アンピシリンに感受性を示す腸内細菌が、C. albicansの腸管への定着を阻害していると考えられる。さらに、C. albicansが腸管に定着したマウスに腸内細菌を戻すことで、C. albicansが腸管から排除された。この結果から、腸管の真菌感染症に対する腸内細菌の防御効果が示された。以上の研究成果は、国際誌であるMicrobiology and Immunology誌に掲載される予定となっている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究ではSalmonella typhimurium感染に対する腸管上皮細胞が発現するalpha1, 2-フコースの感染防御効果を検証することを目的としている。平成28年度は上皮細胞のalpha1, 2-フコースがS. typhimuriumに直接的な防御作用を示す可能性を検証するため、villinプロモーターにFut2遺伝子とエンハンサーを繋いだベクターを作製し、腸管上皮細胞特異的にFut2を発現させた遺伝子改変マウスを作製した。これらのマウスでは、腸管上皮細胞において恒常的にalpha1, 2-フコースが高発現していた。現在、Fut2遺伝子改変マウスの無菌化をすすめており、本年度はビニールアイソレーターにおいてS.tyhimuriumを感染させ、感染状態を野生型無菌マウスと比較検討する予定である。一方、マウスではセグメント細菌が腸管上皮細胞のalpha1, 2-フコースを誘導するが、これまでalpha1, 2-フコースを誘導するヒト腸内細菌は不明であった。本年度はalpha1, 2-フコースを誘導するヒト腸内細菌を同定するために、ヒト腸内フローラマウスを樹立した。これまでに、樹立したヒト腸内フローラマウスにおいてフコシル化上皮細胞の誘導を観察している。上皮細胞のalpha1, 2-フコースは、3型自然リンパ球によって誘導されることが知られているが、Th17細胞の関与についての情報は限定的であった。本年度は、alpha1, 2-フコース誘導におけるTh17細胞の役割を明らかにするために、T細胞欠損マウスにRorgammat欠損マウス由来のT細胞を移入することでTh17細胞特異的欠損マウスを作製した。その結果、野生型T細胞を移入した場合と同等のFut2の発現ならびにalpha1, 2-フコシル化上皮細胞が観察された。これまでに、Salmonella typhimurium感染に対するalpha1, 2-フコースの直接的な防御作用を示す可能性を検証するため、腸管上皮細胞においてalpha1, 2-フコースを恒常的に発現する遺伝子改変マウスを樹立し、実際に腸管上皮細胞においてalpha1, 2-フコースが恒常的に発現していることを確認した。現在、このマウスの無菌化を進めており、順調に研究は進展している。また、腸管上皮細胞においてalpha1, 2-フコース発現を誘導するヒト腸内細菌を同定するために、ヒトフローラマウスを作製し、抗生物質処理法を用いて実験を進めている。また嫌気培養装置を使い、alpha1, 2-フコースを誘導する腸内細菌の単離も進めており、研究は順調に進んでいると考えられる。さらに、腸管上皮細胞のalpha1, 2-フコース発現におけるTh17細胞の役割を明らかにするために、Th17細胞特異的欠損マウスを作製しalpha1, 2-フコースの発現を観察したところ、コントロールと差がみられなかったことから、Th17細胞はalpha1, 2-フコースの発現には必要ではなく、3型自然リンパ球が重要であることが示された。alpha1, 2-フコースを誘導するサイトカインであるIL-22はILC3とTh17細胞から産生されることが知られており、なぜILC3が特異的にalpha1, 2-フコースを誘導するのか大変興味深く、重要な知見と言える。以上の結果から、研究は順調に進んでいると言える。

平成29年度は、alpha1, 2-フコースによる腸内細菌を介した感染防御効果について検討するため、Fut2欠損マウスの腸管各部位における腸内細菌叢の解析を行った。その結果、野生型マウスと比較してFut2欠損マウスでは腸内細菌叢が変化しており、特にLactobacillusの割合および数量が減少していることを見出した。さらに、これまでに嫌気培養装置を用いてLactobacillusを含む様々な腸内細菌を分離・同定している。また、in vitroにおいてフコシル化上皮細胞とS. typhimuriumの共培養系を確立するため、腸管上皮細胞株にFut2遺伝子を発現させることでalpha1, 2-フコースを恒常的に発現した腸管上皮細胞株を樹立した。これまでに、樹立した細胞株は恒常的にalpha1, 2-フコースを発現していることを確認するとともに、発現量の異なる細胞株を得ている。一方、Th17細胞と3型自然リンパ球(Group 3 innate lymphoid cells, ILC3)におけるIL-22の発現機構について解析を行ったところ、Th17細胞と比較してILC3ではIL-22が恒常的に極めて高く発現しており、抗生物質による処理を行うとその発現が大きく減弱することを見出した。この結果から、腸管ではILC3が主なIL-22の産生源であり、その発現は腸内細菌に依存的であることが明らかとなった。腸管上皮細胞のalpha1, 2-フコースが腸内細菌を介してS. typhimuriumの感染を防御する可能性を検証するため、Fut2欠損マウスにおける腸内細菌叢について詳細な解析を試みた。これまでに野生型およびFut2欠損マウスにおける腸内細菌叢を、次世代シークエンサーならびに定量的PCR法を用いて解析した。その結果、Fut2欠損マウスの腸管各部位においてLactobacillusの割合ならびに数量が減少していることを見出している。また嫌気培養装置を用い、これまでにLactobacillusを含む腸内細菌を様々な培地を用いて分離・同定した。一方、腸管上皮細胞のalpha1, 2-フコースがS. typhimuriumの感染に対し、直接的な防御効果を示す可能性を検証するため、in vitroにおいて腸管上皮細胞株であるMODE-KにFut2遺伝子を発現させ、alpha1, 2-フコース発現MODE-Kを作製した。これまでにフローサイトメトリーを用いて、細胞表面においてalpha1, 2-フコースの発現パターンが異なる株を確立している。また、上皮細胞のalpha1, 2-フコースを誘導するサイトカインの一つとしてIL-22が知られているが、Th17および3型自然リンパ球(Group 3 innate lymphoid cells : ILC3)のそれぞれから産生されることが知られている。これまでにTh17およびILC3におけるIL-22の発現量を比較解析したところ、小腸ではIL-22の発現はTh17細胞と比較してILC3において恒常的に極めて高く、抗生物質処理を行うとその発現が極めて減弱することを見出した。この結果から、IL-22は主に腸内細菌依存的にILC3から産生されていることが明らかとなった。
地域で生活する精神障害者の対人関係能力の育成による自立支援システムの構築

本研究は、地域で生活している精神障害者を対象に、対人関係能力を育成して、就労や社会参加を支援するとともに、生活満足度QOLを高めることを目的としている。EQ教育、人間関係・コミュニケーションスキル教育プログラムを実施して、介入を行った結果、精神障害者の対人関係能力を向上させることができ、多くの患者の復職の支援ができた。それと同時に、患者の社会参加が増え、主観的QOLが高くなった。本研究は、地域で生活している精神障害者を対象に心の知能指数・Emotional Intelligence Quotient (EQ)の向上に向けた教育的な関わりを行って、EQ教育、人間関係・コミュニケーションスキル教育プログラムを作成し実施すると共に、就労におけるジョブコーチ制を導入したシステム作り、社会参加を促進するケアシステムの構築と実践を行う。この取り組みを通して、精神障害者の就労や社会参加を支援し、生活満足度QOLを高めることを目的とする。さらに、これらのプログラムやシステム導入の精神障害者就労支援としての評価を行い、精神障害者就労支援に有効な要素を研究期間内に明らかにすることを目指すものである。平成24年度は、まず介入群の精神障害者を対象に、1回目の対人関係能力(EQ)と生活満足度(QOL)を調査した。その6週間後に同様の2回目を調査し、その間を対照時期とした。2回目調査後、介入である教育プログラムにおる教育を90分×3回(3週間)実施し、2回目調査後から6週間後に同様の3回目調査を実施し、23回目を介入時期として、比較分析を行った。その結果、対人関係能力(EQ)では介入前後の比較において、介入時期が、下位項目では、「目標追求」「楽天主義」に、対応因子では、「対人コントロールに、最終的な3領域においては、「状況対応」において有意に高くなっていた。QOLについては、介入時期が、「13.医療」「2023.対人交流」「24.愛されている感じ」で、有意に高くなっていた。低くなっている項目は、1項目もなかった。平成24年度には、精神科クリニックデイケアにおいて、EQ教育、人間関係・コミュニケーションスキル教育プログラム(90分)を週1回の割合で3回実施し、地域で生活している精神障害者へのその教育効果について評価を行い、対人関係能力を向上させることができた。実際の就労支援として、ジョブコーチ制を導入したシステム作りを計画していたが、対象者の多くは、すでに就労をしていて、復職を目指している対象者が多かったが、その対象者の多くは、復職することができた。また、不景気の影響や土地柄にもより、就労先を獲得することが困難で、新たに就労できた人は少ないため、就労支援システムを構築することは、厳しい状況であった。平成25年度は、EQ教育、人間関係・コミュニケーションスキル教育プログラムを実施した対象者の中で、継続してデイケアに通所している対象者に対して、EQ教育、人間関係・コミュニケーションスキル教育プログラム(90分)のポイントを1回実施して(復習)、対人関係能力の強化を行なった。その後、EQと生活満足度QOLについて再調査を実施し、その教育効果を再評価した。この取り組みを通して、精神障害者の就労や社会参加を支援し、生活満足度QOL3)を高めることを目的とする。まず、1施設において、対象の精神障害者の生活満足度QOLと対人関係能力EQを調査する。その6週間後に、同様の2回目調査をし、その間を対照時期とする。2回目調査後、介入である教育ポログラムを90分×3回(3週間)実施し、2回目調査から6週間後に3回目調査をし、2回目3回目目を介入時期とする。他のもう1施設にも同じ介入をして、対象者を20人程度に増やす予定である。その後、2施設における対象者の対照時期と介入時期の比較により、プログラムの効果について比較分析する。その後、就労におけるジョブコーチ制を導入し、そのシステムと社会参加を推進するケアシステムの構築をめざし、その運営ほうほうについても検討してく予定である。

介入群の精神障害者を対象に、EQ理論と方法論を取り入れ、人間関係・コミュニケーションスキル教育を2施設で実施する予定であったが、大学の業務に終われ、今年度は、1施設の介入で終わってしまった。今後は、もう1施設においても介入を行い、対象数を増さなければならない。また、就労におけるジョブコーチ制を導入したシステム作りについては、なかなか進まず、したがって、社会参加を推進するケアシステムの構築を行なうことはできていない。平成23年度は、群馬県内の調査対象の精神障害者の施設、精神障害者共同作業所、デイケアに研究協力依頼をしたが、なかなか見つからず、困難を要した。結果的に精神科デイケア2か所が対象施設として協力していただけることとなり、各施設長の研究協力書承諾書をもらい、大学の臨床研究倫理審査を受け、承認された。まず、1施設において、1回目の生活満足度QOLと対人関係能力のEQの調査を行い、デイケアに通所している精神障害者を対象に、行う介入としてのEQ教育、人間関係・コミュニケーションスキル教育プログラムを作成した。もう1箇所の研究対象施設において、介入群の精神障害者を対象に、EQ教育、人間関係・コミュニケーションスキル教育プログラムを実施し、対象数をさらに増やすとともに、就労におけるジョブコーチ制のシステムと、社会参加を推進するケアシステムの運営を行いデータ数を増やしていく予定である。1回目の生活満足度QOLと対人関係能力のEQの調査から6週間後に2回目の調査を行い、その後、教育プログラムによる介入を行う。2回目の調査6週間後に3回目の調査を行い、教育効果についての分析評価を行う。その結果をふまえて、教育内容・方法の検討及び修正を行い、その結果を検証する。さらに内発的動機付け(障害者自身が積極的に取り組もうとするための意識付け)を高めるケアシステムの構築を行う予定である。また、就労におけるジョブコーチ制を導入したシステム作り、社会参加を促進するケアシステムの構築を行う予定である。群馬から東京の大学に転勤し、介入する施設は群馬県内にあるため、かなりの交通費と時間を要することが考えられる。(新幹線利用)介入時パソコンを使用するため、データ保存専用のノートパソコンを購入する予定である。の購入を検討している。介入によって対人関係能力と満足度の向上を目指しているが、その効果と有用性をさらに明確にするために、対象者数を増やし、研究結果を分析してまとめ、今年度中に学術学会に発表する予定である。当初多くの調査データの入力作業を予定していたが、調査が遅れてしまい、入力作業が、次年度になってしまった。現在使用しているパソコンが古いため、データ保存専用のパソコンを購入する予定である。
マウス実験胆嚢癌の粘液形質解析-ヒト胆嚢癌の生物指標の探索・分子標的治療への応用

胆嚢癌は診断時には進行癌であることが多く,臨床標本よりその発癌メカニズムについて解析することは困難である.BK5.ErbB2トランスジェニックマウス(以下Tg)(Cancer Res 61:6971-6976,2001)はErbB2を過剰発現し,生後3ヶ月でほぼ100%に高分化型胆嚢癌を発症する.しかしながら,本Tgの胆嚢発癌にかかわるErbB2活性化のリガンドやErbB2シグナル伝達機構の詳細は不明である.一方,乳腺細胞ではそれ由来の粘液糖蛋白(Muc4)がErbB2と複合体を形成することより,乳癌の発生に影響することが最近報告されている.本Tgにおける胆嚢癌発生のメカニズムについて,ErbB2シグナル伝達機構の活性化の点より検討するために,Tg胆嚢癌における粘液糖蛋白の発現プロフィールを出生後より経時的変化を解析し,さらにMuc4とErbB2の複合体形成についても検討した.生後2,4,8,12週のTg胆嚢について胆嚢癌の発生頻度,ムチン遺伝子プロフィール(PCR),Muc4発現(PCR, ISH, IHC),Muc4とErbB2の複合体形成(免疫沈降)について解析を行い,ワイルドタイプマウス(Wt)と比較した.またTg胆嚢の癌部および非癌部におけるMuc4発現の比較(PCR, IHC),胆嚢癌部とErbB2の過剰発現が認められる気管,食道,前胃におけるMuc4発現の比較(IHC)についても検討した.本Tgにおける胆嚢癌の発生頻度は2週(50%),4週(43%),8週(67%),12週(100%)であった.12週Tg胆嚢癌ではWtに比して,Muc1,Muc3の転写レベルは低下していたが,Muc4は799-1732%まで増加していた.ISH・IHCの解析よりMuc4mRNAおよび蛋白はTg胆嚢癌の癌上皮に顕著に発現していた.またIHCよりMuc4はErbB2と同一癌上皮部位に発現していた.免疫沈降の結果よりMuc4はErbB2と複合体を形成していた.Tg胆嚢癌におけるMuc4発現強度の経時的変化は,生後2週では++,生後4週+++,8週+++,12週+++と2週を除いて顕著な発現を示していた.2週Tg胆嚢において,非眼上皮においても微弱なMuc4発現(+)は認められたが,癌部(++)は非癌部(+)に比してその発現は有意に増加していた.胆嚢癌部に比して,気管,食道,前胃におけるMuc4発現は微弱(+)または陰性(一)であった.本TgにおけるMuc4発現は,胆嚢癌部位のみに過剰発現が認められたこと,癌部は非癌部に比して顕著な発現が認められたこと,出生早期より高齢の胆嚢癌において顕箸な発現が認められたこと,ErbB2と複合体を形成することより考えて,胆嚢発癌またその進展にかかわるErbB2シグナル伝達機構の活性化(ErbB2のチロシンリン酸化など)に重要な役割を演じていることが推測された.胆嚢癌は診断時には進行癌であることが多く,臨床標本よりその発癌メカニズムについて解析することは困難である.BK5.ErbB2トランスジェニックマウス(以下Tg)(Cancer Res 61:6971-6976,2001)はErbB2を過剰発現し,生後3ヶ月でほぼ100%に高分化型胆嚢癌を発症する.しかしながら,本Tgの胆嚢発癌にかかわるErbB2活性化のリガンドやErbB2シグナル伝達機構の詳細は不明である.一方,乳腺細胞ではそれ由来の粘液糖蛋白(Muc4)がErbB2と複合体を形成することより,乳癌の発生に影響することが最近報告されている.本Tgにおける胆嚢癌発生のメカニズムについて,ErbB2シグナル伝達機構の活性化の点より検討するために,Tg胆嚢癌における粘液糖蛋白の発現プロフィールを出生後より経時的変化を解析し,さらにMuc4とErbB2の複合体形成についても検討した.生後2,4,8,12週のTg胆嚢について胆嚢癌の発生頻度,ムチン遺伝子プロフィール(PCR),Muc4発現(PCR, ISH, IHC),Muc4とErbB2の複合体形成(免疫沈降)について解析を行い,ワイルドタイプマウス(Wt)と比較した.またTg胆嚢の癌部および非癌部におけるMuc4発現の比較(PCR, IHC),胆嚢癌部とErbB2の過剰発現が認められる気管,食道,前胃におけるMuc4発現の比較(IHC)についても検討した.本Tgにおける胆嚢癌の発生頻度は2週(50%),4週(43%),8週(67%),12週(100%)であった.12週Tg胆嚢癌ではWtに比して,Muc1,Muc3の転写レベルは低下していたが,Muc4は799-1732%まで増加していた.ISH・IHCの解析よりMuc4mRNAおよび蛋白はTg胆嚢癌の癌上皮に顕著に発現していた.またIHCよりMuc4はErbB2と同一癌上皮部位に発現していた.

免疫沈降の結果よりMuc4はErbB2と複合体を形成していた.Tg胆嚢癌におけるMuc4発現強度の経時的変化は,生後2週では++,生後4週+++,8週+++,12週+++と2週を除いて顕著な発現を示していた.2週Tg胆嚢において,非眼上皮においても微弱なMuc4発現(+)は認められたが,癌部(++)は非癌部(+)に比してその発現は有意に増加していた.胆嚢癌部に比して,気管,食道,前胃におけるMuc4発現は微弱(+)または陰性(一)であった.本TgにおけるMuc4発現は,胆嚢癌部位のみに過剰発現が認められたこと,癌部は非癌部に比して顕著な発現が認められたこと,出生早期より高齢の胆嚢癌において顕箸な発現が認められたこと,ErbB2と複合体を形成することより考えて,胆嚢発癌またその進展にかかわるErbB2シグナル伝達機構の活性化(ErbB2のチロシンリン酸化など)に重要な役割を演じていることが推測された.胆嚢癌は診断時には進行癌であることが多く,臨床標本よりその発癌メカニズムについて解析することは困難である.BK5.ErbB2トランスジェニックマウス(以下Tg)(Cancer Res61:6971-6976,2001)はErbB2を過剰発現し,生後3ヶ月でほぼ100%に高分化型胆嚢癌を発症する.しかしながら,本Tgの胆嚢発癌にかかわるErbB2活性化のリガンドやErbB2シグナル伝達機構の詳細は不明である.一方,乳腺細胞ではそれ由来の粘液糖蛋白(Muc4)がErbB2と複合体を形成することより,乳癌の発生に影響することが最近報告されている.本Tgにおける胆嚢癌発生のメカニズムについて,ErbB2シグナル伝達機構の活性化の点より検討するために,Tg胆嚢癌における粘液糖蛋白の発現プロフィールを出生後より経時的変化を解析し,さらにMuc4とErbB2の複合体形成についても検討した.生後2,4,8,12週のTg胆嚢について胆嚢癌の発生頻度,ムチン遺伝子プロフィール(PCR),Muc4発現(PCR, ISH, IHC),Muc4とErbB2の複合体形成(免疫沈降)について解析を行い,ワイルドタイプマウス(Wt)と比較した.またTg胆嚢の癌部および非癌部におけるMuc4発現の比較(PCR, IHC),胆嚢癌部とErbB2の過剰発現が認められる気管,食道,前胃におけるMuc4発現の比較(IHC)についても検討した.本Tgにおける胆嚢癌の発生頻度は2週(50%),4週(43%),8週(67%),12週(100%)であった.12週Tg胆嚢癌ではWtに比して,Muc1,Muc3の転写レベルは低下していたが,Muc4は799-1732%まで増加していた.ISH・IHCの解析よりMuc4mRNAおよび蛋白はTg胆嚢癌の癌上皮に顕著に発現していた.またIHCよりMuc4はErbB2と同一癌上皮部位に発現していた.免疫沈降の結果よりMuc4はErbB2と複合体を形成していた.Tg胆嚢癌におけるMuc4発現強度の経時的変化は,生後2週では++,生後4週+++,8週+++,12週+++と2週を除いて顕著な発現を示していた.2週Tg胆嚢において,非眼上皮においても微弱なMuc4発現(+)は認められたが,癌部(++)は非癌部(+)に比してその発現は有意に増加していた.胆嚢癌部に比して,気管,食道,前胃におけるMuc4発現は微弱(+)または陰性(-)であった.本TgにおけるMuc4発現は,胆嚢癌部位のみに過剰発現が認められたこと,癌部は非癌部に比して顕著な発現が認められたこと,出生早期より高齢の胆嚢癌において顕著な発現が認められたこと,ErbB2と複合体を形成することより考えて,胆嚢発癌またその進展にかかわるErbB2シグナル伝達機構の活性化(ErbB2のチロシンリン酸化など)に重要な役割を演じていることが推測された.胆嚢癌は診断時には進行癌であることが多く,臨床標本よりその発癌メカニズムについて解析することは困難である.BK5.ErbB