hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
時期特異的PACAP受容体トランスジェニックマウスにおける脳機能解析

呼吸馴化をC57BL/6、Balb/c、ICRマウスについて検討した結果、Balb/c、ICRは生後2日(P2)までに1回換気量も増加し規則正しい呼吸となるのに対して、C57BL/6は4日(P4)程度要することが分かった。高二酸化炭素濃度、および低酸素濃度に対する反応は、Balb/c、ICRともにPOで既に応答があるのに対して、C57BL/6は二酸化炭素への応答はPOで認められたが低酸素に対する応答はP2以降であることが分かった。また、同様の応答は摘出脳幹脊髄標本でも認められたことから、中枢性の化学受容器との関連が示唆された。一方、中枢性呼吸障害を示すDSCAM KOマウスはC57BL/6背景では24時間以内に死亡するが、Balb/c背景では離乳後も生きることを報告した。また、PACAPKOマウスもC57BL/6背景では離乳前に高い死亡率を示すが、ICR背景ではほとんど死亡しない。この原因は不明であったが、今回の研究からC57BL/6の呼吸馴化が遅いことが関与する、すなわち、呼吸の不規則な状態が長く続くC57BL/6では呼吸中枢に関与する遺伝子の欠損に対してより強い表現型を示すことが示唆された。今後、PACAPの呼吸中枢における役割を明らかにして行きたい。
ケミカルプローブによるメチル化標的転写因子のプロテオミクス解析

本研究の最終的な目的は、転写調節におけるタンパク質のメチル化修飾の役割の包括的な理解のために、タンパク質メチル基転移酵素群(MTases; methyltransferases)の標的タンパク質(特に転写制御因子)を試験管内で網羅的に同定する新たなプロテオミクス技術を開発し、解析を行うことである。2年目は、自ら有機合成したメチル供与体AdoMetアナログであるAdoEnYnの精製方法の確立と、AdoEnYnからアルキニル基の特異的転移を受ける細胞内の生体高分子ターゲットの同定に注力して研究を進めた。領域班員からのアドバイス・協力もあり、SepPackを応用した簡便かつ高精度なAdoEnYn精製法を確立し、AdoEnYnの適切なハンドリングを行うことが可能となった。標的の同定に関しては、細胞内で標識される生体分子はタンパク質が主であり、核酸や他の生体分子への転移反応はほとんど起こっていないことを明らかにすることができたが、未だプロテオーム解析には至っておらず、特異的なターゲットタンパク質、担当メチル基転移酵素の同定を行うことはできていない。しかしながら、特異的な標識を受けたタンパク質画分の可溶化、免疫沈降による分離、電気泳動による可視化までの一連の技術は既に確立しており、今後は質量分析を用いたタンパク質の同定を順次行っていく予定である。本研究課題においては、標的タンパク質および担当酵素の解明という当初の計画までには到達できなかったが、メチル化タンパク質解析手法として必要な要素技術のほとんどを確立することができている。また他の生体高分子への転移反応の確認なども行っており、当該技術の今後の実用化に向けて、十分な研究を推進することができたと言える。25年度が最終年度であるため、記入しない。1年目は、SAMを分子改変した誘導体を有機合成により作製し、既存のメチル化標的タンパク質をモデル基質として、試験管内でメチル基に代わって機能性プローブを酵素特異的に付加する技術を確立することを目的として、研究を行った。機能性プローブとして、クリックケミストリーによる特異的な標識を可能とするアルキンを付加するSAM誘導体(AdoEnYn)を合成することに成功した。また、合成したAdoEnYnを培養細胞に導入し、メタノール固定の後に蛍光試薬とクリック反応を行うことで、細胞内に蛍光シグナルを検出することに成功した。また、この蛍光シグナルは、AdoEnYnの感作時間、投入濃度依存的な増強が見られたため、酵素反応的な転移に依るものである可能性が高いと言える。次年度は、転移反応が行われた分子を同定すること、また導入遺伝子特異的な転移反応を行うことを目的に更なる検討を進める。当初の予定通り、アルキニル基の転移反応を行うSAM誘導体AdoEnYnの有機合成に成功した。また、培養細胞内において、AdoEnYnの投入によって、メチル化標的分子の特異的な標識を確認することができた。これによって、おおむね順調な研究の進展が得られていると判断できる。AdoEnYnを成功裏に合成することができ、またその合成物を用いることで、培養細胞内において、メチル化修飾のターゲットと思われる分子の特異的蛍光標識に成功した。今後は、標識された生体分子が何であるのかを同定し、またメチル基転移酵素の遺伝子導入などを行うことで、この反応を制御し得る条件を検討していく必要があると思われる。また、in vitroにおける反応条件を検討することで、メチル化標的タンパク質群の同定に向けて、複数種の方法論を考案していく必要もある。
イントロンにコードされる低分子核小体RNA

核小体に存在する低分子RNA(snoRNA)が、脊椎動物において他の遺伝子のイントロン内にコードされていることが発見され、このRNAはリボソームの成熟過程でrRNAのリボースのメチル化またはウリジン残基のシュードウリジル化のためのガイドとして働いていることが明かになった。しかし、snoRNA遺伝子が入り込んでいる宿主遺伝子については、多くはリボソームタンパク質(RP)遺伝子であるということ以外、なぜ、どのようにしてそこに挿入されたのか、ほとんど研究は行われていない。そこで本研究では、細菌人工染色体(BAC)を用い、ヒトRP遺伝子に内在するsnoRNA遺伝子の系統的な解析を試みた。[結果]1.BACライブラリーを使って、80種類のRP遺伝子のうち75個の遺伝子のクローニングに成功した。2.これらBACクローンのシーケンスを行い、29個の遺伝子の完全長の塩基配列と15個の部分配列を決定した。3.これらの塩基配列を解析することにより、新たに11個のsnoRNA遺伝子の挿入部位(宿主遺伝子)を同定した。すでに塩基配列が決定されている遺伝子も含め、全部で33個のsnoRNAがRP遺伝子のイントロン内にコードされていることが分かった。4.一方、酵母のsnoRNA遺伝子は独立した遺伝子として存在するが,データベースの解析の結果、13個のsnoRNA遺伝子がゲノム上でRP遺伝子に近接していることが分かった。現在,ゲノムDNA配列が決定された線虫とショウジョウバエの宿主遺伝子の同定を行っており,宿主遺伝子そして入り込んでいるイントロン配列の特異性について解析している。今後は,このような系統的解析をふまえて,snoRNA遺伝子がどのような機構で他の遺伝子のイントロンに入り込んだのか解明して行きたい。
爆発性テトラゾール‐フタロシアニンの合成と細胞破壊型癌治療薬への展開

本研究課題では,新規作用機構による癌治療が期待される爆発性テトラゾール-フタロシアニンの合成を目指した。具体的には,高エネルギー物質であるテトラゾールが分解する際に発する大量の窒素ガスにより,物理的に癌細胞を破壊することで治療を行う。そこで目的化合物を1光吸収による活性化と薬物輸送を担う含フッ素フタロシアニン部位,2窒素ガスによる癌治療を行うテトラゾール部位,3細胞認識を担う光学活性な反応活性部位の3パートに分割し,順次目標化合物へ向けた反応開発を行うこととした。そこで平成24年度,平成25年度では最も合成が困難な光学活性な反応活性部位3の合成法開発を行い,森田-ベイリス-ヒルマンアリルフルオリドを鍵中間体とする不斉合成法の開発に成功した。そこで3年計画最終年度であるH26年度では,開発に成功した基幹反応を応用し,光学活性テトラゾール誘導体の合成法開発を行った。その結果,高立体選択的に目的のテトラゾール誘導体23を得ることに成功した。本反応開発を達成するにあたり,通常森田-ベイリス-ヒルマン付加体への置換反応で多用されてきたアセテート保護体,カーボネート保護体では目的物は全く得られず,私が本研究課題遂行時に見出した森田-ベイリス-ヒルマンアリルフルオリドの採用が必要不可欠であった点は非常に興味深い。さらに得られた光学活性テトラゾール誘導体23をアルキン骨格を持った含フッ素フタロシアニン1とヒュスゲン環化反応で結合し,最終目的生成物である光学活性な爆発性テトラゾール-フタロシアニン123の合成に成功した。これらの研究成果は,今後の癌治療研究における有用な知見として期待される。26年度が最終年度であるため、記入しない。今回我々は癌細胞以外の正常細胞への副作用が少なく,さらに薬剤耐性腫瘍に対する効力を持った新たな抗癌剤として,含フッ素フタロシアニンを基軸とする超エネルギー物質テトラゾールを用いた「腫瘍破壊型殺癌剤」の開発を目指す。テトラゾールは五員環構造にN原子を4つ持つ複素環化合物であり,熱や衝撃に不安定であることから,5位にアミノ基を持つものは車のエアバッグの火薬として使われる。私はテトラゾール環の精密な構造制御と安定性との相関に注目し,医薬品として適度な安定性を有しながら,光やレーザーなどにより,活性化エネルギーを受けることで容易に分解するテトラゾール誘導体が合成出来れば,テトラゾールが分解する際に爆発的に発生する窒素ガスによって物理的に癌細胞を攻撃し,殺癌作用を発揮できるのではないかと考えた。そこで我々が注目した化合物がトリフルオロエトキシフタロシアニンである。テトラゾールと結合することでフッ素官能基から得られる高い電子吸引性によりテトラゾール環内の電子密度を減らし,熱や衝撃に対する安定性を高めることができる。さらにフタロシアニンが持つ癌集積性を利用して標的腫瘍へ輸送し,PDTと同じ要領で光照射することでフタロシアニンがテトラゾールへエネルギーを流し込み,分解を誘発できる。そこで初年度ではフタロシアニンとテトラゾールを化学的に結合することを目標とした。その結果,クリックケミストリーにより合成されるトリアゾール結合をリンカーに選択することでその合成が可能であることを見出した。さらに細胞認識効果を期待した光学活性部位の合成法開発にも着手し,その基幹反応として森田-ベイリス-ヒルマン付加体に対するアリル位選択的不斉トリフルオロメチル化反応を見出すことに成功した。細胞破壊型という新しい作用機序を示す癌治療薬の開発をめざし,光吸収部位である含フッ素フタロシアニン,爆発性超エネルギー物質であるテトラゾール,細胞を認識させる光学活性化合物の3パートを組み合わせた化合物を設計した。3年計画の初年度である平成24年度では,合成上最も柔軟な光学活性化合物部位の合成反応に注力し,その基幹反応としてC-F結合の活性化を伴うアリル位選択的不斉トリフルオロメチル化反応を見出している。そこで平成25年度では,まず,この基幹反応の精査を行い,一般性と反応機構の解明に着手した。その結果,求核的トリフルオロメチル化試薬Me_3SiCF_3のケイ素が強固なC-F結合活性化の鍵となっていることが判明した。すなわち,フッ素と親和性の高いケイ素がフッ素原子に配位し,それが引き金となってC-F結合の切断が開始することが明らかとなった。その際,共存させている不斉触媒(シンコアアルカロイド)が,フッ素原子の絶対配置を識別し,一方の光学異性体のC-F結合のみが切断されやすくなることがわかった。続いてこの反応を用いて,テトラゾール部位との連結反応を検討した。脱離基としてより強力な塩基が生じるtert-ブトキシカルボニル基(Bcc基)を採用し,爆発性超エネルギー物質であるテトラゾールとのアリル位求核置換反応を試みたが,目的物は得られなかった。今後さらなる条件精査が必要である。一方,光吸収部位であるフタロシアニンとサブフタロシアニンをそれぞれ連結させたアミノテトラゾールを合成し,光照射下での細胞毒性試験を行った。その結果,いずれも光照射下でのみ強い細胞毒性を示し,光非照射下では細胞毒性がないことがわかった。

そこで目的化合物を1光吸収による活性化と薬物輸送を担う含フッ素フタロシアニン部位,2窒素ガスによる癌治療を行うテトラゾール部位,3細胞認識を担う光学活性な反応活性部位の3パートに分割し,順次目標化合物へ向けた反応開発を行うこととした。そこで平成24年度,平成25年度では最も合成が困難な光学活性な反応活性部位3の合成法開発を行い,森田-ベイリス-ヒルマンアリルフルオリドを鍵中間体とする不斉合成法の開発に成功した。そこで3年計画最終年度であるH26年度では,開発に成功した基幹反応を応用し,光学活性テトラゾール誘導体の合成法開発を行った。その結果,高立体選択的に目的のテトラゾール誘導体23を得ることに成功した。本反応開発を達成するにあたり,通常森田-ベイリス-ヒルマン付加体への置換反応で多用されてきたアセテート保護体,カーボネート保護体では目的物は全く得られず,私が本研究課題遂行時に見出した森田-ベイリス-ヒルマンアリルフルオリドの採用が必要不可欠であった点は非常に興味深い。さらに得られた光学活性テトラゾール誘導体23をアルキン骨格を持った含フッ素フタロシアニン1とヒュスゲン環化反応で結合し,最終目的生成物である光学活性な爆発性テトラゾール-フタロシアニン123の合成に成功した。これらの研究成果は,今後の癌治療研究における有用な知見として期待される。26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は今後の研究の足掛かりを掴む非常に重要な段階であったが,目的物の合成,単離に成功したことは非常に大きな一歩である。また,テトラゾールの連結に向けた基幹反応として森田-ベイリス-ヒルマン反応を利用する目途がたった。よって本研究計画はおおむね順調に進行していると言える。細胞を認識させる光学活性化合物の合成法において, C-F結合活性化という合成化学的に重要な反応を取り入れ,独自に工夫を凝らし成功した。また,含フッ素フタロシアニン部位は光照射下でのみ強い細胞毒性を示すという知見も得た。このことから本研究課題解決に向け,おおむね順調に進展している判断した。テトラゾール-フタロシアニンの物性や生理活性評価を行い,そのデータを元に,より活性の高い構造を見出すことを次年度の目標とする。さらに大きな展開として,7800nm付近の長波長の光を吸収するフタロシアニンに代わり,500nm付近の短波長の光を吸収するサブフタロシアニンを起爆トリガーとして用いる予定である。細胞深部に透過しにくい短波長の光を用いることで表面組織の癌細胞に対する生理活性が期待される。さらには合成した化合物群のin vitroでの抗腫瘍活性試験を行い,その有用性を確認する。さらに,連結に使用する森田-ベイリス-ヒルマン付加反応を,生理活性発現が期待されるフッ素化やトリフルオロメチル化にも適応できるか調べるとともに,テトラゾール部位の導入へと展開する。26年度は最終年度となる。これまでの成果を踏まえ,標的化合物の合成を達成したい。しかし,テトラゾール部位を求核種としたアリル位置換反応には成功していないので,特にこの反応開発が鍵となってくる。脱離基の選択が重要で,その点を留意した上で反応の精査を実施する。
マウスの探索及び自発的交替行動を利用した新規不安測定装置の開発

1.研究目的:遺伝子改変マウスの表現型解析や薬物の薬効評価を目的とした行動解析法は多く確立され使用されている。しかし各行動試験は同じものを評価しているわけではなく、解析には多岐にわたる試験を行うことが必要だと考えられている。そこで本研究では既存の装置とは異なった情動性に基づいた行動評価を行うことを目的として新規迷路装置を作成し、その有用性を検討した。2.研究方法:直径40cm、高さ20cmの円筒の内側に直径8cmの円筒を設置した、塩化ビニル製の装置を作成し、底辺に通路となる穴を設けた仕切り板を用いて、連続した区画を作った。実験の計測時間は3分とし、ビデオカメラにより画像を取得した。被検体はC57B1/6J系統を用いた。本研究における動物実験は理化学研究所動物実験指針に従い、同動物実験委員会の承認のもとで行った。3.研究成果:(1)多区画存在下でのマウスの行動の特徴をつかむため、2,3,4,6,8区画の迷路を用いて行動の比較実験を行った。その結果観察された本迷路特有の行動を基に、「周回開始潜時」「方向転換率」「右回り移動率」と、新たな観察項目を定義した。このように本研究にて既存の装置では計測できない行動を指標とした行動解析を行える可能性が見出せたといえる。(2)次に多くの区画を持ち、さらに行動評価の行いやすい6区画の迷路を使用して、薬物投与実験を行った。スコポラミン、フルボキサミンの高・中・低用量群とコントロール群を用いてそれぞれ比較した。その結果、スコポラミンでは高用量群で立ち上がり行動が減少し、右回り移動率が増加した。またフルボキサミンでは高用量群で周回開始潜時が短縮し、右回り移動率が増加した。以上のように各薬物によって特徴的な変化が観察されたことから、これらの研究は、薬物の薬効評価において本装置が有効であることを示唆している。
新規MR転写共役因子CASZ1による高血圧発症メカニズムの解明

ミネラルコルチコイド受容体活性化機構解明のため、生化学的手法を用いたMR相互作用因子の探索でcorepressorであるCASZ1を同定した。そこでこの蛋白質の生理学的な重要性を解明するために尿細管特異的CASZ1ノックアウトマウスを作製した。このマウスはDOCA+salt負荷において、対照群と比較して血圧が有意に高く、尿中K排泄も有意に増加していた。このことからノックアウトマウス群ではアルドステロン作用が増強されることが示唆される。以上からCASZ1がMRの転写活性を通じて高血圧発症に重要な役割を果たすことが示唆された。CASZ1のfloxマウスを作成するにあたり、既にターゲッテイングベクターを遺伝子導入されているマウス組み換えES細胞株をEUCOMMより購入した。次に、8細胞期胚とES細胞のアグリゲーションを行い、キメラマウスの作出を試みた。その結果、得られたオスマウスは30%キメラ、10%キメラの2匹であった。そこでF1ヘテロマウスの作出を行うべく、これらのキメラマウスを野生型のメスマウスと交配させ、生まれたマウスの遺伝子型を調べたが、germline transmissionは確認出来なかった。ここまでの結果から、germline transmissionが成功しない理由として、アグリゲーション後のキメラマウスのキメラ率が極めて低いことが考えられ、その理由としてES細胞の質の低下が考えられた。そのため、新たに組み換えES細胞を作成することとした。新たに相同組み換えベクターのデザイン、ベクター構築、ES細胞へのベクター導入を行い、薬剤選択、PCR、サザンブロットにより組み換えES細胞株の樹立を確認した。得られたES細胞と8細胞期胚をアグリゲーションに供したところ、今度は100%キメラのオスマウスが複数得られた。このオスのキメラマウスをメスの野生型マウスと交配し、生まれたマウスの遺伝子型を調べた結果、複数のマウスでgermline transmissionが確認できた。さらに、このF1ヘテロマウス中に含まれるFRT-neo-FRT配列を飛ばすために、FRT/FLPeシステムを用い、F1ヘテロマウスをFLPeトランスジェニックマウスと交配させた。Genotypingの結果、複数のマウスでFRT-neo-FRT配列が排除されていることが確認できた。さらにこれらのマウスを野生型マウスと交配させ、目的のCASZ1のfloxマウスの完成を確認できたところである。CASZ1のfloxマウスを作成するにあたり、キメラマウスをメスの野生型マウスと交配し、生まれたマウスの遺伝子型を調べた結果、複数のマウスでgermline transmissionが確認できた。次にこのF1ヘテロマウスをFLPeトランスジェニックマウス、野生型マウスと順に交配させて、CASZ1 (f/+)マウスの作出に成功した。そしてCASZ1(f/+)マウス同士を交配させることで、CASZ1(f/f)マウスの作出にも成功した。最終的に、遠位尿細管集合管にCreを発現するKsp-1-Creトランスジェニックマウスとの交配も行うことで、尿細管特異的CASZ1ノックアウトマウス(以下cKOマウス)の作出に成功した。現在、8週齢になったcKOマウスをコントロール群とともに10匹づつ正常食、減塩食、高塩食で代謝ケージ内で10日間飼育し、毎日体重を測定し、飲水量および蓄尿にて尿量も測定しているところである。我々はこれまで細胞レベルでCASZ1の機能解析を進め、CASZ1はミネラルコルチコイド受容体MRの転写共役因子であり、ヒストン脱アセチル化(HDAC)活性を有する転写抑制性複合体Mi-2/NuRD複合体とMRの両者をbridgingするアダプターとして機能し、ヒストン脱アセチル化を介したエピゲノム制御によりMR標的遺伝子ENaCαやSGK1の発現を抑制することを明らかにしている。従って、cKOマウスでは、MRを介した転写活性が過剰となり、ナトリウムの再吸収が亢進し高血圧を呈することが推測される。このcKOマウスが実際に高血圧を呈することが示されれば、高血圧の発症にMR転写共役因子を介したエピゲノム制御が関与することを証明した世界で初めての報告となる。さらには、高血圧患者のCASZ1遺伝子のeSNP解析を行うことにより、遺伝的に規定される腎臓MR活性が予測でき、MR拮抗薬の早期介入のメリットのある患者像を明らかにできる可能性があり、高血圧症の新しいテーラーメイド治療を確立できると期待される。高血圧は、脳卒中や心血管疾患の最大のリスクファクターである。高血圧は環境因子と遺伝因子がその発症に関与することが知られているがそのうち遺伝因子についてはほとんどが不明のままである。我々は、MRの作用を制御する新規転写共役因子の同定を質量分析計を用いて世界で初めて試み、MR安定発現腎由来細胞を樹立し、核抽出液から抗体精製にてMR相互作用因子を取得し、LC-MS/MSを用いて網羅的に同定した。そn結果、機能未知因子CASZ1を同定した。CASZ1は、最近のゲノムワイドの高血圧関連SNP探索研究の結果から、高血圧発症関連因子であることが示され(Nature Genetics, 2011)、さらに機能解析を進めたところ、CASZ1は遠位尿細管細胞の核内でMRと共発現し、ヒストン脱アセチル化を促進してMR標的遺伝子発現を抑制することで血圧調節に関わる蛋白であることを明らかとした。そこで生体での機能を証明するために、作成したCASZ1の尿細管

特異的ノックアウトマウスの表現型解析を行い、血圧、内分泌ホルモン、心血管組織リモデリングなどにつき検討した。具体的には26週齢のオスのCASZ1の尿細管特異的ノックアウトマウスと対照群のマウスにDOCA+salt負荷を2週間与えた。その間、1週間おきに血圧測定と蓄尿による電解質、アルドステロンなどのパラメータ解析を行った。2週間投与を終えたところで採血、解剖を行い、血清電解質やアルドステロン値、腎臓でのMR標的遺伝子でナトリウム再吸収に関わるENaCやSGK1などの遺伝子の解析や免疫染色による組織障害の有無を確認した。その結果、CASZ1の尿細管特異的ノックアウトマウスではMR作用亢進状態によって高血圧および尿中K排泄の増加をきたすことが確認できた。ミネラルコルチコイド受容体活性化機構解明のため、生化学的手法を用いたMR相互作用因子の探索でcorepressorであるCASZ1を同定した。そこでこの蛋白質の生理学的な重要性を解明するために尿細管特異的CASZ1ノックアウトマウスを作製した。このマウスはDOCA+salt負荷において、対照群と比較して血圧が有意に高く、尿中K排泄も有意に増加していた。このことからノックアウトマウス群ではアルドステロン作用が増強されることが示唆される。以上からCASZ1がMRの転写活性を通じて高血圧発症に重要な役割を果たすことが示唆された。これまで問題が生ずることなく順調に目的の尿細管特異的CASZ1ノックアウトマウスが多数誕生しており、予定している表現型解析にも移れることが明らかで、ほぼ当初の予定通り進行しているため。高血圧尿細管特異的CASZ1ノックアウトマウスの表現型解析を行う。具体的には、正常食、減塩食、高塩食負荷やDOCA/salt負荷を行い、血液や蓄尿中の電解質や各種ホルモンを測定することで、生体でのCASZ1の高次機能を明らかにし、ひいては本態性高血圧症への関与を明らかにすることで、臨床応用としてMR拮抗薬の早期介入のメリットのある患者像を明らかにし、高血圧症の新しいテーラーメイド治療を確立したいと考えている。当初の組み換えES細胞においては、germline transmissionには至らなかったが、再度作成しなおしたES細胞ではgermline transmissionのみならず、大きなトラブルもなく最終的にはfloxマウスまで作出でき、ほぼ当初の予定通りで研究が進んでいると考えられるため。これまでの1年でCASZ1のfloxマウスの作成が成功している。一方、尿細管特異的にCreを発現するトランスジェニックマウスも既に手元にある。そこでこれらのマウスを交配させ、尿細管特異的CASZ1ノックアウトマウスの作出が目前であり、得られたマウスの表現系解析を行う。、具体的には血圧、血液・尿サンプルから血中尿中電解質、各種ホルモン、浸透圧など様々な生理学的パラメータを測定し、さらに心血管組織リモデリングなどについても検討し、このノックアウトマウスが食塩感受性高血圧となり、アルドステロン作用過剰状態を呈していることを証明する。当初の予定よりトラブルなく順調にflox
複数開口を有するRC造耐震壁のせん断強度評価に関する研究

本研究課題では,開口を有するRC造耐震壁の定量的評価手法の構築を念頭において,ストラット・タイモデルに基づいたせん断強度算定法の開発研究に取り組んできた。前年度までの研究成果として,当初目標としていた有開口耐震壁のせん断強度評価式の提案と提案式および既存の曲げ終局強度算定式を活用することにより耐震壁の破壊モードを推定可能であることを示した。本年度は,曲げ降伏型となる有開口耐震壁の基本的な構造性能を把握することを目的としたFEMによるパラメトリック解析を実施することを念頭において,大変形領域の挙動再現が可能となるようなモデル化手法を提案し,妥当性の検証を行った。その結果,当該モデル手法は曲げ降伏型有開口RC造耐震壁の復元力特性,破壊性状および脚部のひずみ性状など実験時の挙動を精度よく再現することができることを確認し,せん断破壊型耐震壁についても同様に実験結果を再現可能であることを確認した。また,昨年度実験の結果において,曲げ降伏型有開口耐震壁として設計したにも関わらず変形性能の向上が認められなかった試験体を対象にパラメトリック解析を実施した。その結果,開口が側柱脚部に隣接した耐震壁では他方の開口位置および個数の違いが圧縮ストラットに影響を及ぼし,開口が隣接する側柱脚部に圧縮応力が集中し当該部位がせん断破壊に至る場合があることを示した。以上のように,本年度で得られた研究成果は曲げ降伏型の有開口耐震壁における基本的構造性能を把握する上で必要な解析方法の確立や,昨年度実験結果に対して解析的アプローチにより検証を行ったものであり,今後実施予定の曲げ降伏型有開口耐震壁に対する開口位置および個数を変数としたパラメトリック解析に寄与しうる重要な成果を示した。本研究では,開口を有する鉄筋コンクリート(RC)造耐震壁の合理的な耐震性能評価手法の開発を念頭におき,複数開口を有するRC造耐震壁の構造実験およびFEM解析を実施し、開口の条件が耐震壁の破壊モードおよび耐震壁内部の応力伝達メカニズムに及ぼす影響を明らかにする。その上で耐震壁内部の応力状態に即した適合条件を選定し,これらに基づいたせん断強度算定式を構築することを目的としている。本年度は開口位置を変数としたバラメトリック解析の結果から,耐震壁の壁板におけるストラット形成状況や各壁板のせん断力負担状況を把握した。この結果に基づいて壁板のせん断抵抗メカニズムを仮定し,壁板長やストラットの角度に応じてせん断強度を評価する算定式を提案した。また,壁板に側柱が付帯する場合の算定手法およびコンクリートの圧縮強度やせん断スパン比などが耐震壁のせん断強度に及ぼす影響を反映させる手法を考案し,一般的な耐震壁にも適用できるよう提案式の修正を行った。筆者らの既往の実験で用いた有開口耐震壁試験体に対して提案式による算定を行い,提案式が有開口耐震壁のせん断強度を概ね評価できることを示した。また,破壊モードが曲げ降伏先行型となる複数開口耐震壁の構造実験を行い,当該耐震壁の構造特性を検討した。2010年度の実験ではせん断スパン比1.8の有開口耐震壁試験体ではせん断破壊の様相を呈した結果となったため,本年度実験では側柱の曲げ降伏が先行するよう,側柱の主筋量および鋼種を再設計し実験を行った。その結果,開口が側柱脚部に隣接する耐震壁では,側柱の主筋降伏後から曲げ降伏先行型耐震壁と同様の復元力特性を示したものの,開口が隣接する圧縮側柱脚部のせん断破壊によって急激な耐力低下がみられた。また,せん断終局強度の算定に提案式を用いた有開口耐震壁試験体のせん断余裕度の評価を行い,当該耐震壁における破壊モードの判定が概ね可能であることを示した。本研究の目的は複数開口を有する耐震壁に対する合理的で簡便なせん断強度評価手法を構築することである。本年度までに,壁板における基本的なせん断抵抗モデルを提案した。

また,壁板に側柱が付帯する場合の算定手法などを考案し,一般的な耐震壁にも適用できるよう提案式の修正を行った。修正式による算定結果は一定の算定精度を有しており,本研究は研究目的に対しおおむね順調に進展しているといえる。提案式による算定結果より,開口が縦長になる耐震壁や開口が対角に配置された耐震壁に対しては算定精度が低下する傾向があることがわかっている。これらの耐震壁に対しては壁板に形成されるストラットの仮定などを再検討し,提案式の算定精度向上に務める。
Intelligent Bandwidth Consumption Scheduler Considering WiFi/Femtocell Connectivity and Users' Preferences with Dynamic Pricing

本研究では,通信速度をリアルタイムに可視化するサービスが提供されることを前提として,帯域幅消費スケジューラの設計と実装について検討を行った.セルラーネットワークに輻輳が起きた場合に,スケジューラはユーザの便益を考慮し,トラフィックをオフピーク時間にシフトさせるか,無線LAN /フェムトセルネットワークにオフロードするか,またはそのまま維持するか,適切な判断を行う.また,その際にユーザの便益を定義するために,利用可能帯域幅や待ち時間に対するユーザの支払意思額関数を用いた.ピーク時の輻輳が効率的に緩和されることが分かった.本研究では,通信速度をリアルタイムに可視化するサービスが提供されることを前提として,帯域幅消費スケジューラの設計と実装について検討を行った.セルラーネットワークに輻輳が起きた場合に,スケジューラはユーザの便益を考慮し,トラフィックをオフピーク時間にシフトさせるか,無線LAN /フェムトセルネットワークにオフロードするか,またはそのまま維持するか,適切な判断を行う.また,その際にユーザの便益を定義するために,利用可能帯域幅や待ち時間に対するユーザの支払意思額関数を用いた.ピーク時の輻輳が効率的に緩和されることが分かった.通信・ネットワーク工学
白血病細胞純化システムを用いた急性骨髄性白血病の新規予後因子探索

JCCG(日本小児がん研究グループ)AML委員会による臨床試験AML-05に登録された小児MLL再構成AML症例の余剰検体を用いて、次世代シークエンサーを用いた網羅的な遺伝子解析(全エクソンシークエンス9例、ターゲットシークエンス56例)を行った。その結果、約9%においてCCND3遺伝子変異を同定し、さらに成人MLL再構成AMLの追加解析でも約3%の症例に変異がみられた。CCND3遺伝子はタンパク質cyclin D3をコードしており、CDK4/6と複合体を形成することで細胞周期(G1期→S期)を正に制御している。今回同定した全てのCCND3遺伝子変異は、PESTドメインという、タンパク質の分解に関わる領域に局在していたことから、PESTドメインの変異によりcyclin D3が安定化し、MLL再構成AML細胞の増殖を促進していると考えられた。そこで、CCND3をsiRNAを用いてノックダウンしたところ、細胞増殖および細胞周期が有意に抑制された。次に、CDK4/6が治療ターゲットとなる可能性を考え、乳がんで近年臨床応用されているCDK4/6阻害剤のうち代表的な2種類(Palbociclib、Abemaciclib)を、CCND3遺伝子変異を持つMLL再構成AML細胞株であるML-2に添加したところ、細胞増殖・細胞周期を著明に抑制することが明らかになった。よってCCND3変異陽性のMLL再構成AML治療において、CDK4/6阻害剤が有望であると考えられた。さらに、MLL-MLLT3再構成AMLのうち共存変異を有する症例(n=16)は、共存変異を持たない症例(n=9)と比較して無再発生存率、全生存率ともに有意に低く(P=0.048、0.046)、共存変異の存在が予後不良因子となることが明らかになった。小児急性骨髄性白血病(AML)の予後は、遺伝子染色体異常等に基づく治療層別化により改善してきた。しかし、依然として低リスク群・標準リスク群であっても難治・再発例がみられ、それらの予後は不良である。よって、さらなる治療層別化につながる新規予後因子の同定が急務である。今回248例の小児AMLの臨床検体を用いて、CXCR4遺伝子の発現量と予後との関連を調べた。その結果、低リスク群においてCXCR4高発現群は低発現群と比較して全生存率が有意に低かった。さらに低リスク群の中で最も頻度の高かったt(8;21)AMLのうち、CXCR4高発現群は髄外浸潤の指標である臓器腫大の割合が有意に高かった。よって、CXCR4高発現は少なくとも低リスク群のAMLにおいて予後不良因子となり、そのメカニズムとして白血病細胞の髄外浸潤が関与する可能性が考えられた。CXCR4は治療ターゲットとなりうることが知られており、従来の抗がん剤とCXCR4拮抗剤を併用したAML治療は有望である可能性がある。上記成果に関し、論文発表を行った(Matsuo H, et al. Pediatr Blood Cancer. 2016;63:1394-9.)。また、従来の予後因子解析では、骨髄液中の白血病細胞割合が低い症例において正常細胞の混入が遺伝子異常検出の障害となっていた。そこで、レーザーマイクロダイセクション(LMD)を応用し、スメア標本より血球形態に基づいて白血病細胞を純化する新しい手法を開発した。本成果に関しても論文発表を行った(Matsuo H, et al. Int J Hematol. 2017, in press)。理由は下記の3点である。1)小児AMLの新規予後不良因子として既にCXCR4高発現を同定し論文発表していること、2)LMDを用いた高精度な予後因子解析についても検体収集の目途が立っていること、3)別途行っている小児AML検体の全エクソン解析により、新規予後因子の候補となる遺伝子変異を複数同定していること。小児白血病の予後は、遺伝子・染色体の異常等に基づくリスク層別化治療により改善してきた。しかし、依然として急性骨髄性白血病(AML)は小児白血病の中でも予後不良であり、低リスク群・標準リスク群に分類されていても難治・再発する場合も多い。従来の予後因子解析は、特に骨髄液中の白血病細胞割合が低いAML症例においては正常細胞が大部分を占めることから、正確な遺伝子変異解析や遺伝子発現量測定が行えないという問題があった。そこで研究代表者は、レーザーマイクロダイセクション(LMD)を応用し、スメア標本より血球形態に基づいて白血病細胞を純化する新しい手法を開発し、報告した(Matsuo H, et al. Int J Hematol. 2017 Jul;106(1):55-59.)。本研究課題は、上記手法を用いて、正確な予後因子解析を行うことが主目的である。本年度は、小児AMLの予後因子の候補となる新規遺伝子変異を見出すため、日本小児白血病リンパ腫研究グループ(JPLSG) AML-05臨床試験における余剰検体を用いて、9例の全エクソンシークエンス、および56例のターゲットシークエンスを行った。その結果、MLL再構成AMLにおいて新規遺伝子変異を見出した(論文投稿中)。

また京大病院を中心として全国の医療施設から送付された小児AMLの骨髄検体より、LMDにて白血病細胞を純化し、予後因子の候補遺伝子についてmRNA発現量解析を継続的に行い、データを蓄積している。予後解析に必要な臨床検体は順調に収集できている。これまで研究代表者は京大病院内の共同利用機器であるLMDを使用してきたが、年度中に故障し、古い機種であり部品交換ができないため、新機種が導入されるまで使用不可となるトラブルが発生した。しかしながら、学内の他研究室のご厚意でLMDを借していただけることになり、本研究の遂行に大きな影響はないと考えられる。JCCG(日本小児がん研究グループ)AML委員会による臨床試験AML-05に登録された小児MLL再構成AML症例の余剰検体を用いて、次世代シークエンサーを用いた網羅的な遺伝子解析(全エクソンシークエンス9例、ターゲットシークエンス56例)を行った。その結果、約9%においてCCND3遺伝子変異を同定し、さらに成人MLL再構成AMLの追加解析でも約3%の症例に変異がみられた。CCND3遺伝子はタンパク質cyclin D3をコードしており、CDK4/6と複合体を形成することで細胞周期(G1期→S期)を正に制御している。今回同定した全てのCCND3遺伝子変異は、PESTドメインという、タンパク質の分解に関わる領域に局在していたことから、PESTドメインの変異によりcyclin D3が安定化し、MLL再構成AML細胞の増殖を促進していると考えられた。そこで、CCND3をsiRNAを用いてノックダウンしたところ、細胞増殖および細胞周期が有意に抑制された。次に、CDK4/6が治療ターゲットとなる可能性を考え、乳がんで近年臨床応用されているCDK4/6阻害剤のうち代表的な2種類(Palbociclib、Abemaciclib)を、CCND3遺伝子変異を持つMLL再構成AML細胞株であるML-2に添加したところ、細胞増殖・細胞周期を著明に抑制することが明らかになった。よってCCND3変異陽性のMLL再構成AML治療において、CDK4/6阻害剤が有望であると考えられた。さらに、MLL-MLLT3再構成AMLのうち共存変異を有する症例(n=16)は、共存変異を持たない症例(n=9)と比較して無再発生存率、全生存率ともに有意に低く(P=0.048、0.046)、共存変異の存在が予後不良因子となることが明らかになった。全エクソン解析で見出した新規予後因子の候補について、多数検体でターゲットシーケンスを行う。白血病細胞割合が低い症例においてはLMDを用いた手法を適用し解析を行う。ターゲットシーケンス結果を用いて、臨床情報(再発、死亡)との比較、および代表者が報告してきた既知の予後因子(CEBPA、EVI1、CXCR4など)のデータを加えた多変量解析により、予後因子としての有用性を明らかにする。その後、小児AMLのきめ細かな治療層別化につながる予後予測モデルを構築する。引き続き、LMDを用いた白血病細胞純化および遺伝子発現量解析を行う。本結果を用いて、臨床情報(再発、死亡)との比較、および研究代表者が報告してきた既知の予後因子(CEBPA、EVI1、CXCR4など)のデータを加えた多変量解析により、予後因子としての有用性を明らかにする。MLL再構成AMLにおいて見出した新規遺伝子変異については、本変異を有するMLL再構成
昼行性生物と夜行性生物における概日光受容体メラノプシンの機能解析

目に存在する光受容細胞は桿体・錐体だけではない。網膜神経節に存在する一部の細胞は光受容タンパク質であるメラノプシンを発現し、概日時計の光応答や瞳孔収縮などの視覚以外の光応答、すなわち非視覚応答を引き起こす。メラノプシンを最も感度よく活性化させるのはブルーライトである。これまでの基礎研究は主に、夜行性であるマウスを用いて行われてきた。地球上にはヒトをはじめとする昼行性動物も存在し、光の効果は両者で大きく異なる。そこで、ヒトの健康へ研究を応用することを見据え、昼行性霊長類も用いてメラノプシンの機能理解に挑む。
宇宙天気予報のための惑星間空間の三次元的な物理状態の推定

現在の技術ではコロナ磁場の直接観測は不可能である。そこで従来から,コロナ中には電流が流れていないと仮定するコロナ磁場の「ポテンシャルモデル」を用いて,太陽光球磁場の観測値からコロナ磁場を推定する方法が用いられてきた。この研究では,太陽光球磁場が太陽表面に垂直であるという仮定を採用した新しいタイプのコロナ磁場のポテンシャルモデル(RFモデル)を開発した。このRFモデルを光球磁場観測値に適用し,太陽活動度の比較的低い期間にあたる1909カリントンローテーション(CR1909)のコロナ磁場の三次元構造を可視化し,この期間における磁場膨張係数のシノプティックマップ描いた。一方,コンピュータトモグラフィの方法を用いて,惑星間シンチレーションの観測値から,同じCR1909の太陽風速度のシノプティックマップも作成した。これ等二種類のマップの,同じ緯度経度上(180×360点)のデータを用いて散布図を描いたところ,コロナ磁場の膨張係数と太陽風速度との間には非常に良い負の相関のあることが分かった。単純相関係数は-0.72と高く,統計的に非常に有意である。これは,コロナ磁場の膨張が大きい領域からは低速太陽風が吹き出し,磁場の膨張が小さい領域からは高速太陽風が吹き出していることを示している。この研究結果が太陽活動周期のどの期間でも常に成り立てば,磁場膨張係数と太陽風速度の間の関係を示す経験式を用いて磁場膨張係数から太陽風速度を推定することが出来る。今後の研究では,太陽活動度の高い期間のデータを用いて同じ解析を行い,今回の結果と比較することにより,コロナ磁場膨張係数と太陽風速度との間の関係式を導出することを試みる。CR1870の光球磁場視線成分とポテンシャルモデルとを用いてコロナ磁場の三次元構造を調べた。光球面上とソース面上の経度90°±30°,緯度0°±20°の限られた領域で,緯度,経度共に,1度毎に磁力線をトレースした。その結果,カリントン経度90°付近のコロナ中に,はっきりした平面磁場構造を発見した。光球上の複数の小領域から出た磁力管が,経度方向に広がり平面磁場構造を作るのが分った。コロナ平面磁場構造と太陽赤道面との傾斜角は,ソース面上で約30°であった。この傾斜角は,惑星間空間の同じ経度で発見された,惑星間平面磁場構造の傾斜角とほぼ同じであった。コロナ平面磁場構造は空間的に非常に大きいので,これが吹き出して惑星間平面磁場構造になるとは考えにくい。コロナ平面磁場構造の足元の光球に閉じた磁力線の活動領域のある事が分かった。もし捻じれている閉じた磁力線がコロナ平面磁場の開いた磁力線の足元付近から上昇すると,両者の磁力線の結合が起こり,磁力線の捻じれが開いた磁力線に沿って惑星間空間へと開放される可能性がある。同じ活動領域内の異なる部分から上昇した磁力線でも,コロナ平面磁場に沿って上昇し,ほぼ同じ経度から惑星間空間へと出て行く。そのため,コロナ平面磁場の寿命が長いと,同じ経度からコロナの物質が吹き出す回帰性の現象が観察されると考えられる。コロナ平面磁場の磁力管の断面は,コロナ底部では円形に近い形でも,ソース面に近づくにつれ平面状に広がるので,捻じれた磁力線の断面も平らになることが予想される。このような現象が活動領域の中で続けて起これば,多くの捻じれた磁力線が同じ経度から連続して惑星間空間へと出て行くであろう。この考えは人工衛生により観測された惑星間平面磁場構造の性質をうまく説明できる。

この研究では,太陽光球磁場が太陽表面に垂直であるという仮定を採用した新しいタイプのコロナ磁場のポテンシャルモデル(RFモデル)を開発した。このRFモデルを光球磁場観測値に適用し,太陽活動度の比較的低い期間にあたる1909カリントンローテーション(CR1909)のコロナ磁場の三次元構造を可視化し,この期間における磁場膨張係数のシノプティックマップ描いた。ー方,コンピュータトモグラフィの方法を用いて,惑星間シンチレーションの観測値から,同じCR1909の太陽風速度のシノプティックマップも作成した。これ等二種類のマップの,同じ緯度経度上(180×360点)のデータを用いて散布図を描いたところ,コロナ磁場の膨張係数と太陽風速度との間には非常に良い負の相関のあることが分かった。単純相関係数は-0.72と高く,統計的に非常に有意である。これは,コロナ磁場の膨張が大きい領域からは低速太陽風が吹き出し,磁場の膨張が小さい領域からは高速太陽風が吹き出していることを示している。この研究結果が太陽活動周期のどの期間でも常に成り立てば,磁場膨張係数と太陽風速度の間の関係を示す経験式を用いて磁場膨張係数から太陽風速度を推定することが出来る。今後の研究では,太陽活動度の高い期間のデータを用いて同じ解析を行い,今回の結果と比較することにより,コロナ磁場膨張係数と太陽風速度との間の関係式を導出することを試みる。
金属酸化物半導体の光エネルギー変換機能の向上をめざした表面光反応機構の解明

二酸化チタンに代表される金属酸化物半導体は、光エネルギー変換に適した光触媒として、多くの研究がなされている。真に高性能な光反応系を実現するためには、金属酸化物表面で起こる光反応の機構を明らかにし、それを踏まえた材料開発を行う必要がある。以上の観点から、本研究では「表面反応中間体の分光学的in situ直接観察」および「金属酸化物表面構造の原子レベル制御」の2点から研究方法の開拓を進め、これを通じて反応機構の解明を行ってきた。特に光機能界面として最も重要であるTiO_2/水溶液界面における水の光酸化・酸素発生反応に焦点をあて、この反応の機構を原子・分子のレベルで解明を行った。以下に主な結果を述べる。(1)新しい表面処理法であるHF浸漬-高温焼成法を用いることで、原子レベルで平坦でかつ安定なTiO_2ルチル表面を作製することに成功した。その結果、表面バンドエネルギーや価電子帯正孔の反応性がTiO_2の表面原子構造配列に依存することを世界で初めて明らかにした。さらに、in situ PL法を用いて、水の光酸化反応の前駆体である表面捕捉正孔を捉え、この原子レベルでの構造やエネルギーの面依存性を明らかにした。(2)金属酸化物上での結果を踏まえて、窒素含有・金属酸化物上における可視光照射下での光酸素発生反応の機構の検討を行った。TaON微粒子粉末を用いて薄膜光電極を作成し、種々の還元剤添加による光電流作用スペクトルの変化の詳細な検討から、可視光照射下での水の酸化反応は"電子移動機構"で進行するのではなく、"水分子の求核攻撃機構"によって進行することを明確に示した。(3)さらに、多電子移動触媒であるIrO_2、および光合成のPSII中心のモデル触媒としてMn二核錯体の合成を行い、水の酸化反応が上と同様に"水分子の求核攻撃機構"で反応が進むという重要な結果を明らかにしつつある。二酸化チタンに代表される金属酸化物半導体は、光エネルギー変換や光環境浄化に適した光触媒として、多くの研究がなされている。特に最近では、窒素などの他元素のドープ等による可視光応答化の研究が行われ、効率の向上がはかられている。しかし、この場合、どこまで可視光化できるかという問題とともに、光活性や耐久性の低下が心配されている。これらの問題を解決し、真に高性能な光反応系を実現するためには、金属酸化物や窒酸化物表面で起こる光反応の機構を明らかにし、それを踏まえた材料開発を行う必要がある。以上の観点から、私は分子レベルでの明確な反応機構の確立を目的に、表面反応の中間体の分光学的in situ直接観察および金属酸化物表面構造の原子レベル制御の2点から研究方法の開拓を進め、これを通じて反応機構の解明を行ってきた。本年度は、特に光機能界面として最も重要であるTiO_2微粒子/水溶液界面における水の光酸化(酸素発生)反応(2H_2O+4h^+→O_2+4H^+)に焦点をあて、この反応の機構を原子・分子のレベルで解明を行った。その結果、光酸素発生反応の開始反応とし"水分子の求核攻撃機構(ルイス酸・塩基機構)"を提案した。これは、水の光酸化反応が"電子移動型の酸化機構"によって進行するという従来の常識を大きく覆す結果であり、可視光応答性光触媒の活性化と安定化、さらには過電圧の低下が切望されている酸素電極反応の高効率化の研究に重要になると考えられる。
流通・市場・交通の歴史発展モデル：ゲートウェーの実証的検証

本研究では、交通と流通の要となる都市の「ゲートウェー」機能が歴史的にいかに発展していったかを解明した。ネーデルランドの港湾都市を出発点に、イタリア・北欧・フランス都市を視野に入れた分析を行い、交通史と流通史のアプローチの統合を試み、同時に都市ネットワークの動的な形成を見る分析手段を提案した。今年度の成果は以下の通りである。1.中近世ヨーロッパのゲートウェー機能を交通・流通面からさぐる共同研究セッションラ・フォスカリ大学のGiovanni Favero准教授、ライデン大学のMichael Serruys氏と8月に3日間にわたる編集会議を開いた。2010年4月ESSHC(ヨーロッパ社会経済史学会)、2010年9月のEAUA(ヨーロッパ都市史学会)、2011年1月のヴェニス・ラフォスカリ大学における研究会の実施を決定。2012年刊行にむけて著者を選別し、構成を話し合った。同時に編集者3人が理論的枠組みを提示する導入論文を書くことにきめ、共通認識のすり合わせを行った。2.ゲートウェー都市の消費者・流通業者の創造性についての国際会議を、香港大学で開催歴史・文化人類学・社会学・実務家の参加する学際的なワークショップを開催した。近世オランダのワイン流通と消費4)創造性についてペーパーを発表した。歴史研究を主体とした成果を編集中である。問題提起とネーデルランドをはじめとした中近世ヨーロッパ消費史研究の展望を行う3.アムステルダムのワイン商の未刊行日記(アルマナック)のデジタル化・出版プロジェクトユトレヒト大学のJeroen Salman教授の推進する上記プロジェクトは判読・うちこみがほぼ終了した。この史料は近世の内国商人の日常の記録であり、大変貴重なものである。私の研究の核となるワイン商の実態解明につながり、今後の自身の分析をすすめていく。4.近世オランダのワイン消費・流通についての研究交流18世紀のオランダ・フラシス間のワイン交易の研究家であるソルボンヌ大学のAnne Wegener Sleeswik氏と、研究交流をすすめた。同氏の未刊行の成果を翻訳し、編集本で紹介し、自身の研究との接点や違いについて話し合い、史料面で助言をもらった。5.近世オランダのワイン・コーパーの公証人記録・税記録・破産記録・結婚契約・遺書などについて史料調査-身上の都合(妊娠・出産)で自分で調査できなくなったが、ユトレヒト大学のRuben Schalk氏を助手にアムステルダム史料館の公証人文書を体系的に調査した。6.「港湾都市と後背地」論文集に論文を加筆修正・応募2006年リヴァプール大学の研究会議に参加時の論文を加筆修正して応募した。論文集は来年か再来年のRoutledgeからの出版が決定し、内容と構成を来年度改める予定。本プロジェクトは「15世紀から19世紀にかけての商業と交通の要となった北西ヨーロッパ諸都市のネットワーク機能を「ゲートウェー」をキーワードに、交通・流通の諸側面を統合・比較しながら分析することを目的とした。具体的成果としては、代表者自身の博士論文(2004年)研究を発展深化させる論文を発表するとともに、2008年から開催してきた研究セッションを総合する論文集をベルギーとイタリアの交通史研究者(Ca Foscari大学との共同編集し、さらに共著の形で理論的枠組みを発表する作業を行ってきた。科研費年度の後半にあたる2012年度は、論文集および共著論文の理論的枠組みの是非を問うかたちでのヴェニスのカ・フォスカリ大学で国際ワークショップを二日間にわたって開催(2011年1月)した。さらにFavero氏とSerruys氏とともに、参加13論文を共同作業で校正し、理論的枠組を付議するため、編集ミーティング(2011年4月)を行い、個別著者との打ち合わせを繰り返し(2011年6月-9月、2012年1月までに第二稿を得た。このような活動によって、自身の研究においても、視野を広げ、理論的支柱のある議論ができるようになった。2012年1月のアジア地域の商館を中心とした研究会では「仲買人」を視点にアムステルダムの商業機能を比較可能に提示し、4月の建築史の研究会では、筆者の本来専門ではない、オランダの別地方、フリースラントの都市ネットワークについて、別ヴィジョンを提示することができた。