hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新しいアポトーシス関連癌抑制遺伝子p19^<ARF>の泌尿器科癌における研究

PCRにより34例中8例がHDとおもわれ,これら症例では,臨床的にも予後不良であった.発現ベクターpBabepuroにp14^<ARF>をクローニングし,p14^<ARF>欠失細胞株に導入したが,いずれの細胞株でもp14^<ARF>のstable transfectantはえられず,Caki-1にのみ,p14^<ARF>のmRNA陽性クローンがえられた.しかし,蛋白レベルでの発現はみられなかった.以上,P53の遺伝子異常が認められない腎細胞癌においてはp14^<ARF>の遺伝子,あるいは転写以降の遺伝子制御の異常が癌細胞の一層の生物学的悪性度獲得に寄与しているものと思われた.p19^<ARF>(ヒトではp14^<ARF>なので以下p14^<ARF>)はp53分子分解に促進的に働くMDM2に結合し,その機能を阻害する.その結果,p53遺伝子が正常である場合にもp14^<ARF>遺伝子に異常があればMDM2によりp53が分解されその機能が発現できないことになる.本研究では前年度にの結果に基づき,腎細胞癌臨床検体での遺伝子異常の有無と臨床的諸因子の関係の解析,および,腎細胞癌細胞株でのp14^<ARF>の機能解析について,検討を行い,以下の知見を得た.1.腎細胞癌手術切除検体での免疫組織学的検討.3種類の,抗p14^<ARF>抗体を用いた検討で,腎細胞癌にはp14^<ARF>の発現は見られなかった.2.腎細胞癌手術切除検体より抽出したDNAによる検討.定量的PCRにより34例中8例にhomozygous deletionとおもわれる発現低下を認めた.さらに,homozygous deletionを認めた症例では,病理組織学的に高悪性度であり,臨床的にも予後不良であった.発現ベクターpBabepuroにp14^<ARF>をサブクローニングしたものをp14^<ARF>欠失細胞株に同遺伝子を導入した.この結果,いずれの細胞株においてもp14^<ARF>のstable transfectantはえられず,Caki-1にのみ,p14^<ARF>のmRNA陽性細胞クローンがえられた.しかし,免疫組織染色,イムノブロットによる検討では,蛋白レベルでの発現はみられなかった.以上のことより,p53の遺伝子異常が認められない腎細胞癌においてはp14^<ARF>の遺伝子,あるいは転写以降の遺伝子制御の異常が癌細胞の一層の生物学的悪性度獲得に寄与しているものと思考された.
うつ病の再発防止のためのマインドフルネスのニューロフィードバック介入法の開発

マインドフルネスのニューロフィードバックを実現するにあたって、まず日本においてマインドフルネスを向上させる訓練が有効かどうか、さらにそのメカニズムを研究する必要がある。そのメカニズムと関連する脳波の指標が、マインドフルネスを特徴づける脳波として有用であり、ニューロフィードバックのターゲットになり得るからである。そのため、2018年度は、マインドフルネスの有効性とメカニズムを検討する一連の研究を行なった。2018年度の主な成果は以下である。標準的なプログラムを基にしたマインドフルネス療法が、うつと不安に奏功するメカニズムとして、1、マインドフルネスとセルフコンパッションの向上が重要であることを示した。2、思考と現実を混同する傾向の減少と、マインドワンダリングの減少が重要であることを示した。3、現在、上記の全ての変数を測定した、ランダム化比較試験を実施中である(上記の成果は全て単群デザインによるもの)。臨床試験事前登録をし、サンプルサイズを事前に40名と設定し、現在までに24名(介入群12名、待機群12名)のデータが集まっている。現時点の予備解析では、思考と現実を混同する傾向の低さと類似した、マインドワンダリングにメタ的に気づいている状態が、待機群に比べて介入群で大きく有意に向上したことが示されている(マインドワンダリングの約2倍の効果量で向上した。)このランダム化比較試験では、2017年度に明らかにしたマインドフルネス瞑想に特徴的なデルタ波の低下も関心のある変数としている。マインドフルネスのニューロフィードバックを実現するには、マインドフルネスに特有の脳活動を同定する必要があるが、現在それを明らかにするために、厳密なランダム化比較試験を実施中である。そのパイロットスタディとしての単群介入の結果は、国際誌に原著論文として掲載された。今年度は、ランダム化比較試験のデータを目標人数まで集め、うつを改善する重要な媒介変数を同定する。その媒介変数ともっとも関連の強い、脳波の指標を抽出する(脳波は、安静時、注意課題時、マインドフルネス瞑想時のデータを取得している)。その後、その脳波の指標を高めるようなニューロフィードバックシステムを開発する。現在研究室が所有している脳波計では、ニューロフィードバックシステムを実装するのが困難であることが明らかになったため、ニューロフィードバックが可能な簡易脳波計を購入し、システムの作成を試みる予定である。本研究の目的は、今ここの体験に対して評価判断せずに注意を向けるマインドフルネスを促進するためにニューロフィードバック介入法を開発することである。そのために、マインドフルネスの状態を特徴づける神経指標を同定する必要がある。そこで、マインドフルネス瞑想を確実に実践できる瞑想熟達者を対象として、瞑想中の脳波を測定したところ、マインドフルネス瞑想を特徴づける脳波として、頭部の広範囲におけるデルタ波の低下を示した。デルタ波は、渇望と関係する動機づけと関連しているという説があり、マインドフルネス瞑想が渇望を減少するメカニズムを示唆していると考えられた。また、マインドフルネス瞑想特有の効果として、マインドワンダリング(目の前の課題から注意が逸れること)へのメタ的な気づきが高まることを示した。さらに、マインドフルネスと対応する神経指標の妥当性を検討するために、確実にマインドフルネスを高めることができる標準的なマインドフルネス介入を行える必要がある。そこで、マインドフルネスの標準的な介入プログラムの運営を担い、うつと不安が改善することを示し、さらにその改善には思考と現実を混同する傾向の減少が関連していることを示した。さらに、マインドフルネスと類似した概念として、感覚処理感受性(感覚処理の敏感さ)があるが、その調査データを解析し、両概念と心身の不適応の関連を示した論文を投稿中である。これらの知見は、マインドフルネスという概念の特徴を抽出することに寄与し、今後の研究に発展すると考えられる。マインドフルネス瞑想の熟達者をリクルートし、マインドフルネス瞑想に特徴的な脳波指標を得ることができた。また、マインドフルネスの標準的な介入を行うプログラムを運営し、安定してマインドフルネスの習得を促し、効果を出すことができるようなプログラムを作成することができた。)このランダム化比較

試験では、2017年度に明らかにしたマインドフルネス瞑想に特徴的なデルタ波の低下も関心のある変数としている。マインドフルネスのニューロフィードバックを実現するには、マインドフルネスに特有の脳活動を同定する必要があるが、現在それを明らかにするために、厳密なランダム化比較試験を実施中である。そのパイロットスタディとしての単群介入の結果は、国際誌に原著論文として掲載された。今後は、実際の標準的なマインドフルネスの介入において、マインドフルネスの習得に伴ってどのような神経指標が変化しているかが明らかでないため、これまでの研究から候補となる変数を特定し、その変化を検討する。これまでの研究から、デルタ波の低減がマインドフルネス瞑想に特徴的であると考えられたが、これはマインドフルネスの「気づき」の要素と対応していると考えられ、もう一つの重要な要素である「反応しない」要素と対応する神経指標は明らかでない。そのため、それらを明らかにするような実験課題を作成し、マインドフルネスを特徴づける神経指標をさらに特定することを進めるとともに、それらの指標がマインドフルネス介入によって変化するかどうかを確認する。今年度は、ランダム化比較試験のデータを目標人数まで集め、うつを改善する重要な媒介変数を同定する。その媒介変数ともっとも関連の強い、脳波の指標を抽出する(脳波は、安静時、注意課題時、マインドフルネス瞑想時のデータを取得している)。その後、その脳波の指標を高めるようなニューロフィードバックシステムを開発する。現在研究室が所有している脳波計では、ニューロフィードバックシステムを実装するのが困難であることが明らかになったため、ニューロフィードバックが可能な簡易脳波計を購入し、システムの作成を試みる予定である。
新規蛋白メチル化酵素によるインスリン抵抗性発現機序の解明

インスリン受容体の発見から40年余、インスリンシグナルの上流はチロシン/セリン残基のリン酸化反応によって伝達され、下流はGTP/GDP変換(Rho GTPase等)によって伝達されると考えられている。今回、脂肪細胞に発現する蛋白質の網羅的検討から、新規メチル化酵素を発見した。さらに同分子が、複数のシグナル分子のメチル化を介して、糖輸送を調節していることが判明した。その反応時間は比較的早く、旧来信じられていたメチル化の非可逆的、あるいは、ゆっくりとした反応とは全く違う機序による生体調節機構であると考えられた。具体的には、メチル化をその阻害薬やメチル化酵素をノックダウンした細胞で検討すると、インスリンシグナルが亢進した。同時にGLUT4の膜へのトランスロケーションも亢進した。一方、酵素を過剰に発現した脂肪細胞では、インスリンシグナルが抑制され、GLUT4小胞の膜への輸送も抑制された。同時に細胞骨格の形態の変化を観察すると、様々な変化を観察することができた。インスリンシグナルの分子伝達における細胞骨格の役割が重要視されている昨今、興味深い結果である。以上の結果から、新規メチル化酵素によるシグナル分子の蛋白翻訳後調節としての役割が明らかとなった。本酵素は、短時間の内にインスリンシグナルを変調することから、生体における新たなシグナル調節機構の発見と考えられる。臨床的にも有意義で、当該メチル化酵素は糖尿病の新たな治療ターゲットとなる可能性を内包していると思われる。
脳由来神経栄養因子の受容体遺伝子多型が歯周組織再生能に及ぼす影響

本研究は、BDNFによる歯周組織再生における個体の感受性、さらにその再生のメカニズムを解明していくことを目的とした。In vivoにおいて、術後2週のBDNF/ HA複合体充填群では、歯周組織再生はまだ十分でないものの、露出象牙質近傍や再生歯槽骨周囲にBDNF受容体であるtrkBの陽性細胞が観察された。さらに、それらの細胞は、細胞増殖マーカーPCNAや骨分化マーカーOPNも発現しており、歯周組織再生早期において、BDNFは増殖や分化といった細胞機能を制御することで組織再生を促進していることが示唆された。さらに、アルツハイマー病との関係が示唆されている3つのtrkBのSNPに関して、10個体のゲノムDNAを用いてSNP解析を行った。本研究は、脳由来神経栄養因子(BDNF)/高分子ヒアルロン酸複合体の歯周組織再生治療薬としての臨床応用を達成するために、(1)BDNFによる歯周組織再生の詳細なカスケード、(2)BDNFによる歯周組織再生における個体の感受性を解明していくことを目的とした。本年度は(1)に関して、実験的歯周炎を惹起させたビーグル犬III級根分岐部歯周組織欠損モデルを用いてBDNF(50μg/ml)高分子ヒアルロン酸複合体投与2週間後の組織観察を行った。HE染色では、投与2週間後において歯槽骨再生はまだ十分ではないが、著しい炎症性細胞浸潤や根分岐部直下への上皮細胞の浸潤は認められなかった。細胞増殖マーカーであるPCNAの免疫染色では、欠損底部付近の結合組織中にPCNA陽性細胞が多く観察された。神経細胞マーカーであるPGP9.5の免疫染色では、欠損部象牙質付近の結合組織中や再生歯槽骨最上部の血管が豊富な結合組織中にPGP9.5陽性細胞が観察された。In vitroにおいては、ヒト歯周靭帯細胞における接着分子インテグリン発現に及ぼすBDNFの影響を検討し、BDNF(50ng/ml)はインテグリンα2,αv, β1,β3のmRNA発現を促進することが明らかとなった。(2)BDNFによる歯周組織再生における個体の感受性の解明に関しては、細胞応答(インテグリン発現)とtrkB受容体遺伝子多型の相関解析のために、智歯抜歯時に患者から歯と歯周組織の提供を受け、細胞分離、培養、凍結保存を行なった。同一個体からの、歯周靭帯細胞、歯肉線維芽細胞、歯肉上皮細胞を分離・培養、凍結保存を4個体において行った。本研究は、脳由来神経栄養因子(BDNF)/高分子ピアルロン酸複合体の歯周組織再生治療薬としての臨床応用を達成するために、(1)BDNFによる歯周組織再生の詳細なカスケード、(2)BDNFによる歯周組織再生における個体の感受性を解明していくことを目的とした。本年度(1)に関しては、現在実験的歯周炎を惹起させたビーグル犬III級根分岐部歯周組織欠損モデルを用いてBDNF(50μg/ml)/高分子ピアルロン酸複合体投与1週間後のサンプルを現在脱灰中である。脱灰終了後速やかに、HE染色、BDNFの受容体trkB、細胞増殖マーカーであるPCNAの免疫染色を行っていく。BDNF(50μg/ml)/高分子ピアルロン酸複合体投与2週間後のサンプルに関しては組織観察まで終了した。HE染色では、投与2週間後において歯周組織再生はまだ十分ではないが、著しい炎症性細胞浸潤や根分岐部直下への上皮細胞の浸潤は認められなかった。BDNF受容体であるtrkBの免疫染色では、欠損底部付近の結合組織中や欠損部象牙質付近の結合組織中にtrkB陽性細胞が観察された。(2)BDNFによる歯周組織再生における個体の感受性の解明に関しては、trkB受容体遺伝子多型の相関解析のために、智歯抜歯時に患者から歯と歯周組織の提供を受け、細胞分離、培養、凍結保存を行なった。同一個体からの、歯周靭帯細胞、歯肉線維芽細胞、歯肉上皮細胞を分離・培養、凍結保存を6個体において行った。研究期間を通して10個体のゲノムDNAを獲得した。アルツハイマー病との関係が示唆されている3つのtrkBのSNP(rs1624327、rs1443445、rs3780645、Zuomin Chen et al.2008)に関して、StepOne Realtime PCR Systemを用いたSNP解析を行った。
G蛋白βγが誘導する神経細胞死標的の同定-アルツハイマー病原因遺伝子の標的-

受容体様の構造をもったアルツハイマー前駆体(APP)は広汎な神経細胞死をおこすアルツハイマー病(ア病)やダウン症の病原遺伝子の一つであるが、その作用機構は未解明であった。私達の研究室では、APPが機能としても受容体様に作用する可能性を世界に先駆けて示し、三量体GTP結合蛋白質(G蛋白質)のGo、さらにそのβ2γ2サブユニットを介して細胞死シグナルを伝えることを発見している。ア病に伴う細胞死を解明するためには、APPの受容体機能のさらなる解明が重要である。β2遺伝子をベイトとする酵母ツーハイブリッド法による標的蛋白質の探索ではAPLP1が得られたが、リコンビナントを作成してもβ2γ2との結合を示唆する結果が得られなかった。そこでAPPに結合する別の蛋白因子が関与する可能性を考え、APPの細胞内領域の標的蛋白質を検索した結果、新規の結合蛋白質としてマウスおよびヒトJIP-1bを得た。JIP-1bはJNK結合蛋白質のJIP-1に47残基のアミノ酸配列が挿入された形であり、そのために、JIP-1と違って、リン酸化チロシン結合ドメイン(PID)を持つ。今回のスクリーニングで得られた既知のAPP結合蛋白質、すなわち、Fe65、Fe65L、X11、mDab1は、すべてPIDを持ち、APPの細胞内領域に存在するGYENPTYモチーフと結合することが知られている。酵母ツーハイブリッド法、リコンビナントによる結合実験、培養細胞による免疫沈降を用いて、JIP-1bがAPPと同様な機構を使って結合していることを示し、さらにJNK-JIP-APPが三者複合体を作ることを示した(投稿中)。JIP-1bはMLK/DLK、MKK7、JNKをスカフォールドし、JNK経路を制御することが知られているので、APPとJIP-1bの結合がどのようにJNK経路に関与するのかを検討している。受容体様の構造をもった一回膜貫通型の膜蛋白である、アルツハイマー前駆体(APP)は広汎な神経細胞死をおこすアルツハイマー病(ア病)やダウン症の病原遺伝子の一つであることが知られているが、その機能は未解明であった。私達の研究室では、APPが三量体GTP結合蛋白質(G蛋白質)のGoを介して、細胞死シグナルを伝えること、そのシグナルがGo αではなく、β2とγ2の組み合わせで伝えられていることを発見している。したがって、ア病に伴う細胞死を解明するためにはG蛋白質のβ2に特異的な標的蛋白質の解明が重要である。本研究ではヒトGβ2遺伝子全長をベイトとしてヒト胎児脳ライブラリの200万クローンと、成体マウス脳ライブラリの500万クローンを検索し、複数のGβ2標的分子クローンの候補を得た。マウス脳のライブラリから、6つの異なる断片が得られた、APPのホモログである、APLP1について初めに解析した。APLP1の細胞内ドメインとGSTとの融合蛋白をグルタチオンビーズに固層化し、β2,γ2を発現させたCOS細胞の抽出液を沈降させたところ、β2 γ2結合を確認できなかった。マウス脳からRT-PCRによって、APLP1のcDNA全長をクローニングし、COS細胞で、APLP1,β2,γ2を発現させて抗γ2抗体で免疫沈降したが、APLP1とβ2 γ2の結合は確認できなかった。それまでに試した実験条件では、β2 γ2との結合を示唆する蛋白レベルでの実験結果が得られなかったので、APPの細胞内ドメインを含む領域と結合する別の蛋白因子が、β2 γ2とAPLP1などの結合に関与する可能性を考え、マウスAPPの細胞内ドメインを含む複数のベイトを作成し、成体マウス脳のライブラリとア病患者脳のライブラリを検索し、既知の物を含む複数の標的クローンの候補を得た。現在そのcDNAの全長および蛋白発現による解析を行っている。

酵母ツーハイブリッド法、リコンビナントによる結合実験、培養細胞による免疫沈降を用いて、JIP-1bがAPPと同様な機構を使って結合していることを示し、さらにJNK-JIP-APPが三者複合体を作ることを示した(投稿中)。JIP-1bはMLK/DLK、MKK7、JNKをスカフォールドし、JNK経路を制御することが知られているので、APPとJIP-1bの結合がどのようにJNK経路に関与するのかを検討している。
眼内血管平滑筋に対する生理薬理的研究

視神経乳頭を養う後毛様動脈の血管トーヌスを測定するため摘出白色家兎後毛様動脈を用い薬理学的に当尺性収縮を記録した。今回、緑内障治療薬であるチモロール、ベタキソロール、カルテオロール、プロスタグランディンF2α誘導体を作用させ同血管に及ぼす影響を比較、検討した。摘出動脈はα-交感神経作用薬(フェニレフリン)で濃度依存的に収縮を示し、さらにα-受容体拮抗薬にて収縮は抑制された。しかしβ-交感神経作用薬は全く効果を示さなかった。ゆえに同血管にはα-受容体は存在するものの、β-受容体はほとんど存在しないと考えられた。高濃度ヒスタミンにて前収縮させアセチルコリンを投与すると弛緩を示した。この反応は内皮を機械的に除去することで抑制されたため内皮依存性のNO(一酸化窒素)の放出が考えられた。さらに前収縮状態でフィールド刺激を加えると一過性の弛緩を示した。この弛緩はNO合成阻害剤であるN-ニトロ-L-アルギニンメチルエステルで抑制され、L-アルギニンの投与により再増加し、さらに内皮除去にて変化を認めなかったため一酸化窒素(NO)合成酵素を含む神経線維の存在が示された。同様に、チモロール、ベタキソロールは前収縮した同血管を弛緩させたがこの弛緩にはN-ニトロ-L-アルギニンメチルエステルは全く影響がなく、さらに血管内皮の除去にも影響を受けなかった。これらの弛緩反応パターンはCa channel阻害薬であるDiltiazemの弛緩と類似していることよりCa channel阻害作用等が考えられた。さらにプロスタグランディンF_2α誘導体にも同血管の弛緩作用を認めるもののそのメカニズムについては今回解明出来なかった。以上の結果よりチモロール、ベタキソロール、プロスタグランディンF_2α誘導体には若干の血流改善作用を有する事が予想された。臨床的に緑内障、虚血性視神経症の治療に応用が期待され更に詳しい実験を推進して行く予定である。眼動脈より末梢の血管トーヌスを測定する目的で実験を計画し、さらに研究計画調書を提出したが、それに従い今回、緑内障治療薬であるチモロール、ベタキソロールの白色家兎の摘出後毛様動脈に及ぼす影響を等尺性収縮記録法を用い比較、検討した。白色家兎を屠殺した後、眼球を摘出し、顕微鏡下で視神経と平行して走る後毛様動脈を摘出した。この血管を微小血管収縮測定装置Myograph System(J.P.Trading社。デンマーク)に固定し薬剤に対する効果を調べた。この血管はα-交感神経作用薬(フェニレフリン)で濃度依存的に収縮を示したがβ-交感神経作用薬(イソプロテレノール)は全く効果を示さなかった。ゆえにこの血管にはα-受容体は存在するものの、β-受容体はほとんど存在しないと思われた。さらに高K溶液で収縮させた状態でβ-受容体拮抗薬、緑内障治療薬であるチモロール、ベタキソロールは血管を弛緩させた。この弛緩はNO合成阻害剤であるN-ニトローL-アルギニンメチルエステルは全く効果がなかった。この血管にβ-受容体はほとんど存在しない事、弛緩にNOがほとんど関与しない事より考察すると、これらの薬剤の弛緩反応はCa channel阻害作用等が考えられた。以上の結果よりチモロール、ベタキソロールには若干の血流改善作用を有する事が予想された。当初、眼循環を主に調節する物質はエンドセリン、プロスタグランディン等のペプチドと考えていたが今回の実験よりβ-受容体拮抗薬の作用は基礎的にも、臨床的にも非常に重要で更に詳しい実験を推進して行く予定である。

さらにプロスタグランディンF_2α誘導体にも同血管の弛緩作用を認めるもののそのメカニズムについては今回解明出来なかった。以上の結果よりチモロール、ベタキソロール、プロスタグランディンF_2α誘導体には若干の血流改善作用を有する事が予想された。臨床的に緑内障、虚血性視神経症の治療に応用が期待され更に詳しい実験を推進して行く予定である。
日英語を中心とした情報構造上の概念についての多角的研究

本研究は、形式語用論と認知語用論という異なる角度から情報構造上の概念を洗い直し、日英語の言語事実を詳細に検討しながら、その理論的な意義を再構築しようとする試みである。日本語の「対照主題」の解釈が主題句の語彙的意味と談話解釈の一般原則との相互作用によって生み出される擬似的な概念であること、英語の冠詞や存在文の分析において「既出性」の概念によって十分な説明を与えることができないことなどを明らかにした。また、本研究の知見を教育英文法の記述に反映させるための提案を行った。本年度は、2022年度における本格的な研究のための準備となる考察をいくつか並行して行った。(1)情報構造に関係する各種の理論的な概念についての最新の動向を調査した。形式語用論の立場からは、談話や対話を扱うための形式的な道具立てについて比較検討し、情報構造を扱うにはQUDという概念に基づくモデルが依然として有益であるものの、修辞関係や会話の含意を理論内に適切に組み込む必要があることが確認された。また、認知語用論的な立場からは、関連性の概念を用いた説明の可能性が検討され、基礎的データに対して分析の方向性が示された。(2)日本語および英語のコーパスを導入し研究環境の整備を図るとともに、大規模コーパスの活用および効果的な用例の抽出方法についての検討を開始した。関連して、英語の名詞句の解釈に関する副次的な分析を行った。(3)情報構造上の概念と関係する言語現象についての先行研究の検証を行った。とりわけ、日本語の主題と修辞構造の関係および英語の冠詞と関連性、特定性とのかかわりについて予備的な考察を行い、翌年度以降の研究の方向づけを行った。21年度以降は、本年度で確定した研究方針に沿って、情報構造上の諸概念を支える言語事実を収集・検討し、両者の関連を実証的な考察を通じて解明してゆきたい。昨年度に引き続き、河村は形式語用論の立場から情報構造上の概念と韻律や談話構造との関わりを、内田は認知語用論の立場から有標構文の機能分析に占める情報構造上の概念の位置づけを中心に研究を行った。(1)河村は、形式語用論の立場から日本語の対照主題の意味論・語用論と韻律の関係を論じた。具体的には、対照主題を表す係助詞「は」を含む句が韻律的卓立をどこに置くかに応じて異なる解釈を持つことを指摘し、この「は」の解釈上の相違に対して、「は」のもつ語彙的な意味と談話解釈の一般原則との相互作用による説明を提案した。その結果、「対照主題」という概念が従来考えられていたような原始的なものでなく、既出性や韻律、修辞関係などの相互作用によって産み出される擬似的な現象である可能性が示唆された。22年度は、対象となるデータを拡張し、この仮説の整合性と通言語的な拡張可能性について検証を行う予定である。(2)内田は、認知語用論的な立場からthere構文、have型構文、be型構文の3つの存在を表す構文を取り上げ、これらの構文の間の選択原理を情報構造との関連において考察した。その結果、情報構造的な要因のほかにbe動詞とhave動詞の間の機能的相違や動詞に内在する情報の提示性の差などの要因が関与していることが明らかになった。現在、これらの要因間の相互作用についての詳細の解明と、それが情報構造上の概念に与える理論的な意味合いについて研究を進めている。昨年度に引き続き、河村は形式語用論の立場から情報構造上の概念の標示と文脈情報の繋がりを、内田は認知語用論の立場から有標構文の機能分析に占める情報構造上の概念の位置づけを中心に研究を行った。(1)河村は、形式語用論の立場から英語の名詞句の定性について論じた。その結果、様々な用例における冠詞の定性について、(ア)可算、不可算のどちらとして扱われているか、(イ)可算の場合には個体を表すか種類を表すか、(ウ)個体を表す場合は不定のtheと呼ばれる慣用的な解釈が許されているかの3点を明確にすればRobertsのいう「語用論的唯一性」の概念をもって説明できるという結論に至った。さらに、この語用論的な唯一性の概念と日本語の主題標示の関連を検討した。

また、前年度に行った日本語の対照主題の意味論についての分析が(主題を表さない)いわゆる対比の「は」の様々な分析とどのように両立しうるかについての考察を行った。(2)内田は、認知語用論的な立場から英語のthere構文を取り上げ、これを形式言語学的な分析との関連において考察した。その結果、there構文の容認性は動詞の非対格性といった語彙的統語的な特性や名詞句の定性や既出性といった情報構造上の概念だけでは決まらず、これを説明するためには意味上の主語を表す名詞句を導入するための場面設定に適した環境が整えられているかという機能的な要因を考慮に入れる必要があることが示された。さらに、この問題を聞き手の情報への関与を重視する立場から、関連性理論における最適性の問題として分析する可能性について検討した。
シャジクモ藻類の比較ゲノムと遺伝子機能解析から探る植物の多細胞体制進化

本研究では植物多細胞体制の進化過程を解明するために、陸上植物とシャジクモ藻類が持つ1倍体多細胞体制と2倍体多細胞体制を遺伝子情報から比較した。その結果、シャジクモ藻類の発生段階や器官/細胞毎に特異的に発現する遺伝子を特定した。また、いくつかの遺伝子について詳細な発現解析と機能解析を実施し、その祖先的な性質と進化過程を推定し、シャジクモ藻類と陸上植物が持つ多細胞体制の進化過程を考察した。また、シャジクモのネイティブな遺伝子プロモーターを用いた外来遺伝子を発現させるコンストラクトを用い、マイクロインジェクション法、パーティクル・ボンバードメント法を用いた一過的な遺伝子導入系の検討を進めた。本研究では、シャジクモにおいて独自に確立した培養株と概要ゲノムを基礎とし、さらにシャジクモ藻類の発生段階/器官/細胞毎の発生遺伝子の発現パターンを網羅的に抽出し、どの遺伝子が各発生段階/器官/細胞に特異的に発現するのかを解明する。また、シャジクモ藻類の発生遺伝子の機能解析に向けた実験系の確立を進め、標的遺伝子がシャジクモ藻類においてどのような役割を果たしているのかを解明する。平成27年度は、シャジクモにおける発生遺伝子の発現様式を解析するため、シャジクモの発生段階/器官/細胞毎のトランスクリプトーム解析に向けた実験系の確立とRNA-seq解析を実施した。シャジクモを同調的に培養し、生殖器官形成に着目してシャジクモの生活環を発生段階/器官/細胞毎に11種の条件に分け、各条件の細胞におけるRNA抽出方法を検討し、得られたRNAの蛍光定量とキャピラリー電気泳動を行った。その結果、多糖類が多い生卵器・接合子、地中に伸びる仮根の細胞は多糖類や夾雑物を取り除く処理を必要としたが、すべての条件でトランスクリプトーム解析に十分な質と量のRNAを得ることができた。シャジクモについて条件毎に細胞を集め、3検体ずつ次世代シーケンサー(Illumina)を用いたRNA-seq解析を実施し、6条件についてシーケンシングデータを得た。また、オーストラリアシャジクモ、クレブソルミディウムについても同調的に培養したサンプルを複数の条件に分け、条件毎に細胞を集め、3検体ずつ次世代シーケンサーを用いたRNA-seq解析を実施した。平成27年度中に得られたシャジクモのシーケンシングデータについては、概要ゲノムにマッピングし、遺伝子発現量の定量を進めている。当初予定していたサンプルについて、トランスクリプトーム解析に十分な質と量のRNAを得ることができ、RNA-seq解析を進めている。平成28年度中にすべてのシーケンシングデータが得られる目途がついており、おおむね順調であると考えている。平成28年度は、シャジクモ、オーストラリアシャジクモ、クレブソルミディウムについて、前年度に抽出した発生段階/器官/細胞別のRNA(各3検体)を用い、次世代シーケンサー(Illumina)を用いたRNA-seq解析を実施した。シャジクモのシーケンスデータについては、概要ゲノムにマッピングし、遺伝子発現量の定量を行い、発生遺伝子の発現プロファイルを明らかにした。その結果、シャジクモの生殖器官形成過程や接合子(2倍体)に特徴的な発現パターンをもつ遺伝子を絞り込むことができた。また、国内外の研究機関との共同研究を実施し、特定の遺伝子についてリアルタイムPCR法、in situハイブリダイゼーション法等により発現解析を行い、遺伝子の進化過程について解析を進めた。さらに本研究で明らかになった遺伝子の発現情報をもとに恒常的に高い発現を示すネイティブな遺伝子のプロモーターを単離し、GFPまたはGUS (β-グルクロニダーゼをコードする遺伝子)を発現マーカーとした外来遺伝子を発現させるコンストラクトを作製し、シャジクモにおけるマイクロインジェクション法等を用いた一過的な遺伝子導入系の検討を進めた。また、形質転換体の薬剤選抜を可能にするため、ハイグロマイシン、ゼオシン等の抗生物質を2μg/mL50μg/mLの範囲で添加した培地にシャジクモを植え、2週間培養し、生育不全を示す抗生物質の最小濃度を明らかにした。オーストラリアシャジクモ、クレブソルミディウムのシーケンスデータについては、トランスクリプトームまたはゲノムデータへのマッピングと遺伝子発現量の定量を進めている。当初予定していたサンプルについて、RNA-seq解析によりシーケンシングデータを得ることができ、遺伝子発現量の定量を進めており、シャジクモについて生殖器官形成過程や接合子(2倍体)に特徴的な発現パターンをもつ遺伝子を絞り込むことができた。また、遺伝子機能解析に向けた遺伝子導入系の検討、in situハイブリダイゼーション法による発現解析を進めており、おおむね順調であると考えている。平成29年度は、前年度までに得られたシャジクモの次世代シーケンサー(Illumina)を用いたRNA-seqデータに基づき11種の発生段階/器官の発現変動遺伝子を比較した結果、生殖器官形成過程で多くの遺伝子の発現変動が見られ、特に雄性生殖器官と接合子で発現変動遺伝子数が多いことが明らかになった。

国内外の研究機関との共同研究を実施し、シャジクモの生殖器官形成過程と接合子に特異的な発現パターンを持つ遺伝子について陸上植物、シャジクモ藻類、緑藻類の配列を用いて分子系統解析を実施し、シャジクモの配列の系統的位置づけを明らかにした。また、これらの遺伝子についてリアルタイムPCR法、in situハイブリダイゼーション法等により発現解析を行い、遺伝子の進化過程について解析を進めた。さらに前年度までに作製したシャジクモのネイティブな遺伝子プロモーターを用いた外来遺伝子を発現させるコンストラクトを用い、シャジクモにおけるマイクロインジェクション法、パーティクル・ボンバードメント法等を用いた一過的な遺伝子導入系の検討を進めた。オーストラリアシャジクモ、クレブソルミディウムについてもRNA-seqデータに基づき遺伝子発現量の定量を進めた。本研究では植物多細胞体制の進化過程を解明するために、陸上植物とシャジクモ藻類が持つ1倍体多細胞体制と2倍体多細胞体制を遺伝子情報から比較した。その結果、シャジクモ藻類の発生段階や器官/細胞毎に特異的に発現する遺伝子を特定した。また、いくつかの遺伝子について詳細な発現解析と機能解析を実施し、その祖先的な性質と進化過程を推定し、シャジクモ藻類と陸上植物が持つ多細胞体制の進化過程を考察した。また、シャジクモのネイティブな遺伝子プロモーターを用いた外来遺伝子を発現させるコンストラクトを用い、マイクロインジェクション法、パーティクル・ボンバードメント法を用いた一過的な遺伝子導入系の検討を進めた。今後は、RNA-seq解析から得られたデータを用いて、シャジクモの発生遺伝子の発現様式を網羅的に解析する予定である。また、シャジクモの生殖器官形成等に焦点を絞り、関連する遺伝子の特定とその機能解析に向けた実験系の確立も進めていく予定である。今後は、RNA-seq解析から得られたデータの解析を進めるとともに、シャジクモの生殖器官形成等に焦点を絞り、関連する遺伝子の特定とその機能解析に向けた実験系の確立を進めていく予定である。藻類学、系統分類学微量RNAサンプルの解析を次年度に実施する可能性があるため。微量RNAサンプルの解析を次年度に実施する可能性があるため。トランスクリプトーム解析、情報解析に使用する予定である。トランスクリプトーム解析、遺伝子機能解析、情報解析に使用する予定である。
対人サービス組織における「規則語り」の会話分析的研究-学童保育を事例として-

本研究では、学童保育所の指導員が「注意」や「トラブル仲裁」などの形で子供に向けて規則を語る相互行為(「規則語り」)について、会話分析の視点から分析を行い、以下のことを明らかにした。1.規則語りは主に、保育時間の構造化、保育場面における空間と身体の構造化、子どものカテゴリー化、実際的イデオロギーという4つの保育状況の構造を参照して行われる。2.注意という言語行為は、子どもの関与に「突き刺さる」とともに、自分の行動の優先的な描写権が子どもにないものとするという特徴を持つ。注意をめぐる相互行為は「対位法的行為連鎖」と呼びうる特有の形式をとる傾向がある。対位法的な行為連鎖の中で行われる抵抗は注意の「ひもとき」の契機となり、これは他の種類の「ひもとき」の契機に対して優越している。これらの結果として、注意をめぐる相互行為では「動機」が問題にならない形で規則が用いられる。3.トラブル仲裁においては、子どもはトラブルの相手の行動を「動機的に不適切な」ものとして描写する手続きを用い、指導員は「中立性」を維持するための諸手続を用いようとする。トラブル仲裁の相互行為は「召喚理由の提示と受け入れ」「出来事の特徴づけ」「動機表明」「規則との結びつけ」「謝罪とその受け入れ」という全域的構造を参照する形で展開する。この中で、子どもには動機表明が求められ、動機は規則と結びつけられ、その結びつきへの同意を踏まえて謝罪することが求められる。こうして、トラブル仲裁においては「動機」が問題となり、「規則の動機への組み込み」がひとつの相互行為手続きとして用いられる。本年度は、学童保育の様々な保育場面について70本ほどのビデオテープに記録し、現在データ整理を継続中である。これらをサーヴェイした結果、以下のような予備的知見を得ている。1.規則語りにはわずか二つの発話交換によって終了する短いものから、2時間以上に及ぶ長いものまである。長いものの場合、規則語りは組織の日常的活動の大幅な変更を伴う。2.それゆえ指導者は、児童から規範的に適切な反応を引き出すことと、日常的活動を円滑に進めることとの、ディレンマをはらんだ選択に直面する。3.特に、ひとたび開始された規則語りをいかにして終了するかが、指導員にとって実践的に重要な課題となる。規則語りを終了させるために、指導員は組織の日常的活動の諸側面を「その規則に関連したもの」として意味づけ、語りを終了させるための解釈上の資源として動員しようとする。しかし、この解釈上の操作も成功するとは限らない。規則語りにとって本質的困難とも言えるこの「終了」問題がいかに解決されているかが、次年度以降の1つの中心的探求課題となる。4.規則語りは児童と児童のあいだでも行われるが、これらは指導員と児童の規則語りとは異なった展開を見せる。特に、学年の近い児童による「規則違反の指摘」はそもそも「規則違反の指摘」として発効しない。それゆえ、規則語りにおいて、語り手の成員カテゴリーがやりとりの展開を左右する資源として常に参照されていると予想される。児童同士による規則語りは、このような成員カテゴリーの働きを考える上で重要であり、この点に注目して指導員-児童間の規則語りとの比較分析を行うこと、これがもう一つの次年度以降の探求課題である。本年度は、前年度にビデオ収録した記録テープを書き起こし、またその中で特に重要な箇所を選定してさらに精密なトランスクリプトを作成する作業を中心に行った。この作業を現在も継続中である。トランスクリプトを作成したデータの一部に関して予備的分析を行い、以下の知見を得ている。1.規則語りを開始する発話は、それがルーティーンへの「介入」であることが観察可能であるような発話連鎖上の位置で行われる。これによって、この種の発話は特異な注目の対象となる。逆に、規則語りを終了させようとするときには、ルーティーンへの復帰が交渉のリソースとして用いられる。こうして、規則語りにはそれがルーティーンに対して「挿入的なもの」であることを示し続けるという指向が働く。

2.しかし、これと拮抗する指向も働いている。今ここの場面を統御するはずの規則について語ることは、それ自体、今ここの場面の構成要素となり、場面を変化させる。子どもはしばしばこの自己言及性を利用することで、規則をめぐるやりとりを紛糾させる。規則語りを「挿入的なもの」にしようという指向は、規則語りを今ここの場面から切り離された超越的なものにしようということであり、自己言及性を利用することはこれに対抗するのである。3.指導員と子どもとの規則をめぐる交渉は、規則語りの自己言及性をどのように処理するかをめぐる交渉である、という見通しが得られる。この交渉には具体的には、自分や相手の行動を描写する発話におけるカテゴリーや、周囲の傍観者のふるまいも含めたその場にいる者たちのやりとりへの参加の諸形態などが利用される。これらのことがらの利用の実態とその論理を、さらに踏み込んで分析することが次年度に残された課題である。本研究では対人サービス組織の一種である学童保育施設において、規則語りと呼びうる一連の相互行為がどのように組織化されているのかを、会話分析的な手法を中心にして解明することが自的であった。最終年度である本年は、収集したデータを分析し、次の知見を得た。1.規則語りは、指導員が保育の中で直面する偶発性に対処可能な意味を見いだしていくために用いられている方法的構造を参照して行われることを明らかにした。この構造には、(1)保育計画の作成・修正を中心とした「時間的構造化」、(2)子どもがいる場所とそこでの身体配置に関わる「空間と身体の構造化」、(3)子どもたちへの「成員カテゴリー化」と「社会的タイプ」の形成、(4)恒常的な困難への対処を正当化する「実際的イデオロギー」が含まれる。2.ビデオデータから代表的な規則語りとして「注意をめぐる相互行為」の場面を抽出し、発話の形式的特徴、相互行為のシークエンス構造を明らかにした。注意を開始する発話は、(1)相手の関与に突き刺さる、(2)相手を発話のアドレス先にすると同時に言及世界の登場人物にする、という形式的特徴を持つ。これによって開始されるシークエンスは、異なる起点を持つ二つの行為コースが並行して進行する「対位法的行為連鎖」と呼びうる独特の形式を持つ。注意において参照される規則はしばしば相互行為の中で「ひもとかれ」るが、ひもときの契機として「抵抗」という反応が、「釈明」や「根拠質問」などよりも優越している。
拡張アメダス気象データの基づく設計気象データの開発

本研究の成果として得られた成果は以下の通りである。(1)拡張アメダスの開発状況とその応用に関する展望(2)拡張アメダス気象データの15年間の時刻別気象データから空調設備設計用の気象データを作成する方法(3)拡張アメダス気象データに天空輝度と天空放射輝度を追加する方法(4)1995年2000年のアメダスの欠測状況とその処理方法。この作業は今後この5年間の拡張アメダス気象データを作成し、従来からの15年分とあわせて20年分のデータとするための第一段階として必要となるものである。(5)全地点の標準年拡張アメダス気象データに含まれる代用値、推定値、観測値の比率本研究の成果として得られた成果は以下の通りである。(5)全地点の標準年拡張アメダス気象データに含まれる代用値、推定値、観測値の比率今年度の研究実績は以下の通りである。1.今年度は晴天空から曇天空に至るすべての大気状態に対応できるクラウドレス・インデックスと称する指標を作成した。更にこのクラウドレス・インデックスを用い、すべての天空状態に対応可能な天空放射輝度分布モデルを作成した。今後は現在のペレツモデルに加えて、この新たなモデルも拡張アメダス気象データに組み込むことを検討する。2.発光効率に関する井川モデルとペレツモデルを比較し、井川モデルを用いて拡張アメダス気象データから照度データを計算した。このモデルを拡張アメダス気象データに組み込むことを計画している。3.拡張アメダスから設計気象データを作成するための前段階として、東京の拡張アメダス気象データを用い、特異気象が室内熱環境とエネルギー消費に与える影響について検討した。4.3都市について、1日、3日、7日といったデザインシークエンスを選択してみた。デザインシークエンスは2週間程度でその前に非定常計算の助走期間として6日を加え、20日程度が適当ではないかと考えている。次年度は、全国的にこのデザインシークエンスを作成する計画である。5.現在の拡張アメダス気象データに1996年から2000年を追加し、1981年から2000年までの拡張アメダス気象データを作成する。今年度は新たな5年間の基礎データファイルを作成した。次年度にかけて、欠測処理、要素追加等を行う計画である。(1)設計気象データの作成法設計気象データ作成のための気象選定法を検討した。日平均気温、日平均エンタルピ、日積算垂直面日射量を指標として、過酷気象日を選出する方法を提案した。また、選出された日の時別気象データから設計気象データを作成し、その特性を考察した。さらに、設計気象データを周期定常最大熱負荷計算に適用し、設計気象データが最大熱負荷計算値に与える影響について検討した。(2)アメダス気象データの欠測補充1996年2000年までのアメダス気象データに含まれる欠測を補充する方法を検討した。気温の欠測補充法として、近接するアメダス地点までの距離を媒介とし、セミバリオグラムを用いて欠測値を推定する方法を新たに提案した。また、風向、風速、日照時間、降水量の欠測については、従来の手法を適用して欠測補充を実施することとした。(3)昼光照度・天空放射輝度分布モデル天空・直達・全天日射量とそのときの太陽高度から全天空照度、直射照度、グローバル照度を推定するための、高精度で汎用性のある変換式を提案した。それにより、拡張アメダス気象データの日射量から昼光照度を推定することが可能となった。また、全ての天空状態の天空放射輝度分布を推定するAll Sky Model-Rを提案した。このモデルは、既往のモデルに比べ大幅に推定誤差が小さく・拡張アメダス気象データに適用する計画である。(4)CIB/TG21主催(2002年4月)の国際会議において、設計気象データの作成法について国外の研究者と意見交換を行った。
核マトリクス蛋白を標的としたオートファジー関連消化器難病疾患の早期診断法の開発

昨年度までの解析によって肝癌細胞株や膵癌細胞株においてオートファジーが核マトリクス蛋白発現の変化に関連する可能性が示唆された。発現増加をきたした蛋白数が膨大であったため、肝癌細胞株・膵癌細胞株においてともに発現が増加した蛋白に着目し、細胞増殖や細胞死との関係について解析を行ったところ、これらの核マトリクス蛋白は細胞増殖や細胞死誘導耐性に関連することが分かった。特にオートファジー基質蛋白p62が強発現している腫瘍細胞株においてこれらの特性は強く誘導されることから、p62蛋白発現とこれらの核マトリクス蛋白は相関・協調し細胞増殖や細胞死誘導耐性を誘導しているものと想定された。そこでp62蛋白と肝細胞増殖に関しても検証を行ったところ、リソソーム蛋白分解酵素の一部を欠損させオートファジー機能を保たせつつp62蓄積を誘導したマウスではNrf2-Notchシグナルの亢進を介して肝再生が促進していることがわかった。以上のことから、癌組織において発現が亢進しているこれらの核マトリクス蛋白はNrf2-Notchシグナルとも協調している可能性が示唆された。さらに昨年度は、ヒト検体を用いた解析を行った。ヒト肝癌組織ならびに膵癌組織においても、これら核マトリクス蛋白が核に集積する傾向にあることが分かった。またこれらの蛋白発現が核に集積している症例では、腫瘍径が大きい傾向にあり、興味深いことに臨床検体においてもこれらの蛋白発現が細胞増殖に関連している可能性が示唆された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。昨年度はオートファジー抑制が膵上皮・小腸においてどのような病態形成に結びつくのか、また核マトリクス蛋白発現がどのように変化するかを解析するための前段階として、モデルマウスとなる膵上皮・小腸特異的オートファジー欠損マウス作成を中心に行った。現在、膵上皮・小腸特異的オートファジー欠損マウスを作製し、発現型を解析中である。膵上皮・小腸特異的オートファジー欠損マウスでは、コントロールマウスと比較し、血清アミラーゼ値とリパーゼ値が増加傾向にあった。さらに膵組織は委縮傾向にあった。またこれらマウスを用いてセルレイン腹腔内投与による膵炎モデルを作製したところオートファジー欠損により血清中アミラーゼ値とリパーゼ値の増加が促進し、膵細胞壊死が増悪することが分かった。さらにcleaved-caspase3とcleaved-caspase7発現が増加することからオートファジー抑制によって膵アポトーシスが誘導されることが分かった。現在、膵組織から核マトリクス蛋白を抽出し、発現蛋白変化を解析中である。さらにコントロールマウス(Atg7 flox/flox)と膵細胞・小腸特異的オートファジー欠損マウス、肝特異的オートファジー欠損マウス(Atg7 flox/flox:Alb-Cre)より血清を採取し、発現蛋白の解析を行っている。また膵上皮・小腸特異的オートファジー欠損マウスを長期飼育し膵発癌形成が可能なのか、またどのタイミングで発癌が生じるのかについても観察中である。昨年度研究の中心となるモデルマウス作成が完了しており、このモデルマウスを使用した解析を行うことが可能な状態となったため、研究はおおむね順調に進んでいるものと考えている。昨年度の解析によって肝癌細胞株や膵癌細胞株においてオートファジー抑制が核マトリクス蛋白発現を劇的に増加させることがわかった。発現増加をきたした蛋白数が膨大であったため、これら蛋白のなかで、オートファジー抑制動物モデルにおいても発現が増加した蛋白に着目し、細胞増殖や細胞死との関係について解析を行った。これら蛋白に対するsiRNAを作成し、肝癌細胞株に添加した。細胞より蛋白を抽出しウエスタンブロット法にて蛋白発現変化を解析し、効率的に蛋白発現の抑制をきたすsiRNAを選択した。次にこのsiRNAを肝癌細胞株に添加し細胞数の経時的変化について解析を行ったところ、蛋白発現の抑制は肝癌細胞株の増殖を有意に抑制していた。さらにsiRNAによるこれら蛋白の発現抑制を行った肝癌細胞株をKrebs-Ringer Modified Buffer(低栄養環境)下で培養し、細胞死誘導に関してWSTー1アッセイにて評価を行った。これら蛋白の発現抑制を行った肝癌細胞株では細胞死が有意に強く誘導されることが分かった。以上のことから腫瘍細胞株ではオートファジー機能抑制において生じる細胞内変化に適応し、増殖促進や細胞死耐性に利用するシステムを構築している可能性が示唆された。特にオートファジー基質蛋白p62が強発現している肝癌細胞株JHH5細胞株においてこれらの特性は強く誘導されることが分かった。現在、これら蛋白の発現変化が細胞株においてどのように代謝変化をきたすのかを解析中である。膵液や胆汁中の蛋白発現解析はモデル動物から極少量の膵液、胆汁しか採取できなかった。膵液・胆汁において標的蛋白が発現しているかを検証してみたが、検出することはできなかった。蛋白検出が不能であった理由が検体の量の問題なのか蛋白発現の問題なのかの判定は難しい状況であった。そこで動物解析から癌細胞株を用いた解析に移行する方針としたところ解析のスピード化が可能となった。一方で、動物モデル解析や腫瘍細胞を用いた蛋白機能解析に時間を要したこともあり、現時点では肝癌主体の解析にとどまってしまい膵癌や胆管癌の解析がやや遅れがちとなっている。

昨年度までの解析によって肝癌細胞株や膵癌細胞株においてオートファジーが核マトリクス蛋白発現の変化に関連する可能性が示唆された。発現増加をきたした蛋白数が膨大であったため、肝癌細胞株・膵癌細胞株においてともに発現が増加した蛋白に着目し、細胞増殖や細胞死との関係について解析を行ったところ、これらの核マトリクス蛋白は細胞増殖や細胞死誘導耐性に関連することが分かった。特にオートファジー基質蛋白p62が強発現している腫瘍細胞株においてこれらの特性は強く誘導されることから、p62蛋白発現とこれらの核マトリクス蛋白は相関・協調し細胞増殖や細胞死誘導耐性を誘導しているものと想定された。そこでp62蛋白と肝細胞増殖に関しても検証を行ったところ、リソソーム蛋白分解酵素の一部を欠損させオートファジー機能を保たせつつp62蓄積を誘導したマウスではNrf2-Notchシグナルの亢進を介して肝再生が促進していることがわかった。以上のことから、癌組織において発現が亢進しているこれらの核マトリクス蛋白はNrf2-Notchシグナルとも協調している可能性が示唆された。さらに昨年度は、ヒト検体を用いた解析を行った。ヒト肝癌組織ならびに膵癌組織においても、これら核マトリクス蛋白が核に集積する傾向にあることが分かった。またこれらの蛋白発現が核に集積している症例では、腫瘍径が大きい傾向にあり、興味深いことに臨床検体においてもこれらの蛋白発現が細胞増殖に関連している可能性が示唆された。昨年度に引き続き、膵上皮・小腸特異的オートファジー欠損マウスと肝細胞特異的オートファジー欠損マウスを用いた発現蛋白変化ならびに膵、小腸における病態形成の解析を行ってゆく。またヒト由来膵細胞株、ヒト由来肝細胞株にsiRNAをもちいたAtg7遺伝子のsilencingを行い、オートファジーを抑制した時の核マトリクス蛋白発現変化が動物モデルと同様であるかを検討する。今年度は、さらにヒト検体を用いた検証を並行して行う予定である。肝オートファジー抑制によって発現が増加することがわかっている核マトリクス蛋白14-3-3ζ、Importinα4、Importinβ1蛋白が肝癌組織において正常組織(非癌部)と比較して発現が変化しているかを免疫染色によって検証する。さらにこれら蛋白に対するsiRNAを作成し、肝細胞株、膵上皮細胞株においてこれら蛋白の発現抑制を行い、低栄養環境下での細胞増殖・細胞死がどのように変化するのかを検証する。またこれら細胞株のメタボローム解析を行い、核マトリクス蛋白によって細胞内代謝がどのように変化するのかについて解析を行い、オートファジー抑制によって変化する核マトリクスが細胞内代謝にどの様にかかわっているのかについて検討を行う。今年度は、今までの解析結果を基にしてヒト検体を用いた解析を主体とする方針である。現時点では肝癌主体の解析に偏ってしまい膵癌や胆管癌の解析が遅れがちとなっているので、臨床検体解析では膵癌や胆管癌を組み込んでマーカー蛋白発現に関して発現解析を行う。さらに臨床病態との相関に関しても検討を行う予定である。また動物モデルで困難であった解析可能量の胆汁・膵液採取に関してヒト検体を用いた解析を行うことで臨床的応用の可能性を検証する方針である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
幾何学的位相変調によるナル干渉計の開発

太陽系外惑星の直接検出は、惑星系形成のメカニズムを解明する上で極めて重要であるとともに、太陽以外の恒星における地球型惑星の存在の可否を探るために必須である。系外惑星の検出法としてナル干渉法がある。ナル干渉法とは、恒星からの強い光を打ち消し合う干渉状態にし、恒星近傍の惑星からの光では強め合う干渉状態にして、惑星の光を直接検出する方法である。なお、本研究の総括的報告は、レーザー学会学術講演会第24回年次大会(2004年1月30日,於仙台)にて「ヌル干渉計を用いた太陽系外惑星の直接検出法」と題する招待講演で行った。我々は幾何学的位相変調型のナル干渉計の提案をし、ナル干渉計の高性能化に向けた実験を行ってきている。本年度の研究実績の概要は、以下のとおりである。1.恒星および惑星をシミュレートする光学系および天体干渉計の実験光学系を組み、実験を行った。2.購入したデジタルCCDカメラにより、消光比の精密な測定を行った。3.フレネル・ロム波長板の特徴が白色光でのナル干渉に及ぼす影響を調べた。4.フレネル・ロム波長板を用いた幾何学的位相変調器の有効性を、偏光干渉型ステラ-コロナグラフの実験光学系に組み入れて実証した。本年度の実験では、白色光において、2×10^<-5>の消光比が得られた。これは予備的な実験結果よりも3倍以上良い結果となっている。この実験結果については、本年8月ハワイ島で開催されるSPIEコンファレンスで発表する予定である。昨年度までの研究では、45°偏光をS偏光とP偏光との合成であるとして、共通光路での干渉実験結果であった。本年度は、S偏光およびP偏光の光波を分離させた後、合波し干渉させる実験を行った。1.分離2光波を合波した後に、幾何学的位相変調によりナル干渉させ、5×10^3の消光比を得た。2.分離2光波の片側のビームにのみ幾何学的位相変調を施し、合波ビームにおいてナル干渉させ、10^3の消光比を得た。3.分離2光波のそれぞれのビームに幾何学的位相変調を施し、合波ビームにおいてナル干渉させ、10^3の消光比を得た。本年度の実験結果により、干渉計を構成する望遠鏡からの光ビームのそれぞれについて、幾何学的位相変調法で、独立に位相変調できることを明確に示すことができた。我々は幾何学的位相変調型のナル干渉計の提案をし、ナル干渉計の高性能化に向けた実験を行ってきた。最終年度となった本年度は、深いナル干渉を達成するように実験装置の改善に努めた。その結果、分離2光波のそれぞれのビームに幾何学的位相変調を施して、合波ビームにおいてナル干渉させることで、0.8×10^4の消光比を得ることができた。