hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
内因性親電子物質を介するレドックスシグナル伝達の制御メカニズム

本研究において、活性酸素やそのシグナル伝達における2次メッセンジャーである8-nitroguanosine 3',5'-cyclic monophosphate (8-nitro-cGMP)を代謝する新規制御因子として、システインチオール基(Cys-SH)にさらに過剰なイオウ原子が付加したシステインパースルフィド(Cys-SSH)を同定した。システインパースルフィドは、酸化ストレス制御にきわめて重要な役割を担っている可能性があり、今後、その生体内での発現制御機構や生理活性の解析が期待される。活性酸素は、酸化ストレスを介した毒性因子としてだけでなく、精密に制御されたシグナル伝達機構の担い手であることが明らかになりつつある。活性酸素の代謝から生成する親電子性物質は、活性酸素シグナル受容蛋白質のシステイン残基の翻訳後修飾をもたらし、シグナル制御において重要な役割を果たしている。本研究では、親電子性物質に対する新しい分解・代謝制御分子として、硫化水素および関連化合物に注目し、活性酸素シグナルの制御における役割を明らかにすることを目的としている。ニトロ化環状ヌクレオチドである8-nitro-cGMPは、細胞内の活性酸素・一酸化窒素の産生亢進にともなって生成するユニークな内因性の親電子物質である。本年度は、この8-nitro-cGMPと硫化水素との反応を解析した。試験管内で、8-nitro-cGMPと硫化水素ナトリウムを反応させると、8-nitro-cGMPが減少するとともに、新しい反応産物が生成した。吸収スペクトルならびに精密質量分析から、この反応産物が、ニトロ基がメルカプト基に置き換わった8-SH-cGMPであることが明らかとなった。さらに、8-SH-cGMPの生成は、重金属(鉄など)と他の低分子量チオール化合物(グルタチオンなど)の添加により著しく増強した。このことから、硫化水素、金属、チオール化合物から、8-nitro-cGMPの分解に関わる活性種が生成していることが示唆された。8-nitro-cGMPから8-SH-cGMPへの変換は、各種培養細胞においても確認され、さらにその活性は、システイン代謝酵素であるシスタチオニンbetaシンテース(CBS)および、シスタチオニンgammaライエース(CSE)に大きく依存していた。以上のことから、硫化水素による親電子シグナルの制御機構として、親電子物質のスルフヒドリル化(SH化)が重要であることをはじめて明らかにした。前年度まで、8-nitro-cGMPと硫化水素との反応から8-SH-cGMPが生成し、さらに8-SH-cGMPの生成は、反応系に低分子チオールと金属が共存すると著しく促進することを報告した。そこで、硫化水素、低分子チオール、金属の反応から生成する活性種の同定を試みた。その結果、上記反応において、低分子チオールにイオウが付加したパースルフィドが生成していることが質量分析による解析から明らかとなった。さらに生成したパースルフィドが強力に8-nitro-cGMPから8-SH-cGMPへの変換をもたらすことがわかった。これらの結果は、親電子物質によるレドックスシグナル伝達においてパースルフィドが重要な役割を担っている可能性を示唆している。活性酸素は生体内のエネルギー代謝(呼吸鎖)や感染防御過程において発生する一連の反応性分子種である。これまで活性酸素は酸素毒性の要因となる有害物質として取り扱われてきたが、近年になり、活性酸素が細胞内シグナル制御をはじめとする多彩な生理活性を持つことが明らかとなってきた。さらに我々は最近、活性酸素の作用を負に調節する制御因子の探索を行う中で、システイン代謝に関わる酵素であるcystathionine β-synthase (CBS)とcystathionine γ-lyase (CSE)が活性酸素シグナルの制御に密接に関わることを発見した。本研究において、CBSやCSEによる活性酸素シグナルの制御機構を解析した結果、両酵素がシステインの酸化型2量体であるシスチンを基質として、システインチオール基(Cys-SH)にさらに過剰なイオウ原子が付加したシステインパースルフィド(Cys-SSH)を生成していることを発見した。

そこで、タンデム質量分析法に当該分子のケミカルライブラリーを用いた網羅的な同定・解析システムを構築してより詳細に解析したところ、驚くべきことに、生体内には、システインのみならず、ホモシステイン、グルタチオン、さらにはタンパク質システイン側鎖など様々な分子様態でパースルフィドが存在することや、その細胞内濃度がサブミリモーラーで豊富に存在すること、また付加するイオウ原子が複数あるもの(Cys-S(S)nH;ポリスルフィド)も存在することが明らかとなった。これらの結果は、細胞内におけるパースルフィドの存在を、分子種・濃度レベルで明らかにした初めてのものであるとともに、酸化ストレスの極めて重要な制御分子であることを示しており、今後のさらなる検討が期待される。26年度が最終年度であるため、記入しない。医歯薬学26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度交付申請時に計画であった8-nitro-cGMPと硫化水素との反応機構を明らかにし、さらにその反応から生成する新規な化合物(8-SH-cGMP)を世界に先駆けて明らかにした。親電子物質を分解代謝する新規な物質としてパースルフィドを同定できたため。1.硫化水素ならびに関連チオール化合物に対する精密定量分析法を確立し、それを用いて細胞からの硫化水素イオン生成の定量解析を行う。パースルフィドによるシグナル伝達経路の解析を行う。上述のように8-nitro-cGMPの分解に対して、硫化水素の作用が共存する金属とチオール化合物によって促進することが分かった。そのため、その活性種の合成を開始したが、その合成が年度をまたいでいるため、予算の一部を次年度に繰越した。次年度は、これら新規化合物を含めて解析を行う。パースルフィドの同定に必要な標準試料の合成を開始したが、その合成が年度をまたいでいるため、予算の一部を次年度に持ち越した。次年度はパースルフィドなどの新規化合物を含めてそれらによるシグナル伝達の解析を行う。このための標準物質合成に用いる出発原料と有機溶媒及び分析カラムの購入にあてる予定である。
高減衰・高機能流体を用いた同調液体ダンパーの性能向上

同調液体ダンパーは,容器内流体のスロッシング振動数を同調させることによって構造物の振動を制御する制振装置であり,これまで,その性能を向上させるために,不凍液や重泥水などの比重や粘性が大きい流体や磁性流体等の高粘性・高機能流体を使用するという試みがなされてきた.しかしながら,上述のような高粘性・高機能流体では,従来同調液体ダンパーの設計に用いられてきたポテンシャル流理論では扱えない粘性の影響が大きいため,定量的性能予測が困難である.そこで,本研究では,高機能流体を対象として,そのスロッシング挙動とそれに伴うエネルギー散逸メカニズムを解明することを目的として研究を行った.これまで,高機能流体のスロッシング現象については,詳細な実験結果が不足していたため,精緻な数値モデルを構築することが困難であった.そこで,年度前半において,トレーサを用いた画像計測によって内部の流速分布と自由表面形状を,流速場を乱すことなく面的に計測する手法を構築した.しかしながら,前述の方法で計測した流速場は,計測の欠落点や誤差を含んでいたため,年度後半において,連続の式を用いて計測データを補完することによって,精度の高い流速場を得るデータ処理方法を考案した.さらに,その結果を用いて,高機能流体,特に高粘性流体のスロッシング挙動を精緻に把握し,粘性の違いによるエネルギー散逸メカニズムの変化を捉えることに成功した.今後,画像計測の精度を向上させると共に,本結果を数値流体モデルに取り込むことで,精緻な性能予測手法を確立すると共に,幅広いパラメトリックスタディを行い,高機能流体を用いた同調液体ダンパーの振動制御設計法を構築したいと考えている.同調液体ダンパーは,容器内流体のスロッシング振動数を同調させることによって構造物の振動を制御する制振装置であり,これまで,その性能を向上させるために,不凍液や重泥水などの比重や粘性が大きい流体や磁性流体等の高粘性・高機能流体を使用するという試みがなされてきた.しかしながら,上述のような高粘性・高機能流体では,従来同調液体ダンパーの設計に用いられてきたポテンシャル流理論では扱えない粘性の影響が大きいため,定量的性能予測が困難である.そこで,本研究では,高機能流体を対象として,そのスロッシング挙動とそれに伴うエネルギー散逸メカニズムを解明することを目的として研究を行った.これまで,高機能流体のスロッシング現象については,詳細な実験結果が不足していたため,精緻な数値モデルを構築することが困難であった.そこで,年度前半において,トレーサを用いた画像計測によって内部の流速分布と自由表面形状を,流速場を乱すことなく面的に計測する手法を構築した.しかしながら,前述の方法で計測した流速場は,計測の欠落点や誤差を含んでいたため,年度後半において,連続の式を用いて計測データを補完することによって,精度の高い流速場を得るデータ処理方法を考案した.さらに,その結果を用いて,高機能流体,特に高粘性流体のスロッシング挙動を精緻に把握し,粘性の違いによるエネルギー散逸メカニズムの変化を捉えることに成功した.今後,画像計測の精度を向上させると共に,本結果を数値流体モデルに取り込むことで,精緻な性能予測手法を確立すると共に,幅広いパラメトリックスタディを行い,高機能流体を用いた同調液体ダンパーの振動制御設計法を構築したいと考えている.
ヘルスツーリズムの基盤づくり－地形療法コースの策定－に関する研究

緑の多い森林環境内で呼吸代謝計測システム(K4b2)を装着して、通常のウォーキング(GW)とストックを用いたノルディックウォーキング(NW)を行ったところ、NWがGWよりエネルギー消費量が増加していた。またNWを繰り返し行うことで、快感情の増加や動脈硬化指数の改善が認められ、NWは生活習慣病の予防・改善に有効であることが示唆された。大滝NWコース、定山渓温泉森林浴コースなどで歩行時の消費カロリーを測定し、ウォーキングマップを作成することで、当地での提供プログラムに反映させた。北海道大学内にも同様のマップを作成した。地元住民、観光客の健康づくりの参考になるものを完成させることができた。昨年の成果であるノルディックウォーキングとウォーキングの比較に関する研究成果は、International Society of Medical Hydrology and Climatology(ISMH)学術総会(スペイン)にて発表し、多くの質問を得た。今回は北海道大学のキャンパス内に、『森林浴』に相応しいルートを探し、距離、歩行時間、運動強度と消費エネルギーなどを測定することにより、4つのウォーキングコースを設定し、北大森林浴マップを作成した。今回の運動強度は平均心拍数が110拍/分前後であり、中等度やや軽めの運動であり、のんびりとした散策よりは強度が強いが、スタスタ歩き程度の運動強度と考えられ、観光客のみならず、市民の健康づくりにも応用できる成果と考えられる。実際の歩行距離は3.1-3.6km、歩行時間は30-42分であり、消費カロリーとしては108-151kcalであり、平均3.5METS程度の運動強度に相当する歩行距離となっている。普段生活している人工的な環境から離れ、北海道大学構内の緑豊かな環境の中、約130年の歴史に溢れる構内を歩行すると、身体運動量を増加させると同時に、疲れた心も癒されると思われる。北海道大学には多くの観光客が訪れており、構内マップを参考にして散策している姿を見かけるが、それには目的地までの所要時間、距離などは記載されていない。北海道大学の敷地は地下鉄駅で4駅に相当する広がりを持っており、このようなマップが出来上がるととても便利であると同時に、このマップを活用することにより、カロリーの消費や1日1万歩の目標が実現でき、健康づくりに役立つと考えられる。初年度は自然環境、特に緑の多い森林環境の中で行う歩行運動の効果を測定するため、千歳市にある泉沢自然の森と緑が豊かで森林浴コースもある北海道大学構内で歩行実験を行った。泉沢自然の森ではデータロガー式(呼吸)代謝計測システム(K4b2)を装着して、通常のウォーキングとストックを用いたノルディックウォーキングを行い、代謝量を測定して両者を比較検討した。その結果、30分間の歩行では、ノルディックウォーキングを行うことにより、通常のウォーキングより、1分当たり約210ml酸素摂取量が増加していた。これは1.2METS(身体活動強度)の増強に相当しており、ノルディックウォーキングの特性が現れている。さらに北海道大学構内で行った実験結果では、歩行運動を繰り返し行う場合、ノルディックウォーキングに快感情の増加や動脈硬化指数の改善が認められており、同じ森林浴を行う場合、ノルディックウォーキングの方が生活習慣病の予防、改善に有効であることが示唆された。最終年度は、1大滝ノルディックウォーキングコースで歩行時の消費カロリーを測定し、当地での提供プログラムに反映させた。2定山渓温泉での健康づくりのため、消費カロリーを考慮したウォーキングマップを作成した。海外からの環境客を誘致するまでには至らなかったが、地元住民、国内観光客の健康づくりの参考となるマップが完成できた。【歩行コース設定とウォーキングの種類】自然環境、特に緑の多い森林環境の中で行う歩行運動の効果を測定するため、まず初めに歩行コースを二カ所設定した。一カ所目は北海道千歳市にある泉沢自然の森で、千歳空港から近いことと、中高齢者の健康増進教室を行っていたことからである。二カ所目は北海道大学構内であり、その理由は敷地面積は一つのまとまったキャンパスとしては旧国立大学の中で一番広く、緑が豊かで、その一部は森林浴コースにもなっているからである。千歳市ではデータロガー式(呼吸)代謝計測システム(K4b2)を装着して、通常のウォーキングとストックを用いたノルディックウォーキングを行い、代謝量を測定して両者を比較検討した。ノルディックウォーキングは歩行時にストックを後方へ押し出すようにすることにより、上半身の筋力増強に役立つとともに、歩行時の安定感が増し、さらに下半身への体重負荷が減ることにより、膝・腰などに比較的負担をかけずに運動を行うことが可能で、現在健康づくり教室では広く推奨されている歩行法である。【歩行結果】泉沢自然の森で行った30分間の歩行比較実験では、ノルディックウォーキングを行うことにより、ストックを用いない通常のウォーキングより、1分当たり約210mlの酸素摂取量が増加していた。これは身体活動強度(MET)からみれば、およそ1.2METSの増強に相当しており、ノルディックウォーキングの特性が現れている。

さらに北海道大学構内で行った実験結果では、歩行運動を繰り返し行う場合、ノルディックウォーキングに快感情の増加や動脈硬化指数の改善が認められており、同じ森林浴を行う場合、ノルディックウォーキングの方が生活習慣病の予防、改善に有効であることが示唆された。地方都市での測定は中止したが、北大キャンパス内での森林浴マップ作成が順調に進んだことと、成果の一部を国際学会で発表できたので。代謝測定装置の準備、装着、測定解析は熟練を要し、失敗のデータを得ることもある。装置が1台しかないので、中々測定データを増やすことができない。しかし、装置を装着しないで行った北海道大学での実験は論文化を予定しており、順調に進展している。屋外での作業なので、どうしても天候に左右される。特に北国札幌での実験であり、実際に実験可能な期間は6月から10月くらいであるので、実験回数が限られデータの収集に困難なことが多かった。北大内歩行コースをさらに増やし、マップをより詳細に作成する。データをさらに分析して学術総会で発表し、論文化する。今後はいかにして代謝測定装置を有効に活用するかが最大の課題である。そのため、代謝測定装置装着時に、心拍数から代謝量を推定する装置を購入したのでその装置も同時に装着し、両者の相関を検討して、代謝測定装置装着者と非装着者が同時に森林歩行をできる体制にして、測定データを増やしていきたい。また、千歳市へ出向くよりも、身近で観光地化している緑豊かな北海道大学構内での測定を優先し、森林浴マップを作成して当初の目的を達成するのが現実的な方策と思われ、推進していきたい。北大内の歩行マップの制作に関わる費用とその成果発表のための旅費を使用する予定である。23年度の謝金として3万8千円未使用額が生じた。これは屋外での調査実験であるため天候に左右されることと、特に謝金が発生しない状況下での実験を行ったことによる。この未使用分は24年度の予算と合わせて謝金として使用したい。
糖尿病性心筋症の発症機序における心筋ホルモン感受性リパーゼの機能解析

本研究では、心筋HSLの過剰発現や欠損が糖尿病性心筋症に与える影響を検討するため、心筋特異的にHSLを過剰発現するトランスジェニック(Tg)マウスとHSL-ノックアウト(KO)マウスを用いて解析した。1.心筋特異的HSL過剰発現マウス:MHC-HSLの作製、解析マウス心筋特異的プロモーターMHCa下流にratHSL cDNAを挿入してtransgeneを作製し、心筋特異的HSL過剰発現マウスを作製した。ファウンダーをC57BL/6マウスに戻し交配し、高発現TgマウスMH-1系を確立した。ヘテロ型F2マウスでHSL活性、蛋白量とも心筋特異的に野生型マウス(Wt)の8-10倍増加を認めた。F6、F7マウスにSTZを投与して糖尿病を誘発し、3週間後に屠殺して心筋を電子顕微鏡にて解析した。Wtではミトコンドリア周囲に著明な脂肪滴の蓄積を認め、心筋トリグリセリド(TAG)とジアシルグリセロール含量が増加したが、Tgではこれら脂質の蓄積は認めず、過酸化脂質の含量もWtの1/2であった。またPPAR-a, NF-kB, iNOS, TGF-B, Collagen typeI, IIIなど糖尿病性心筋症のマーカーとなる遺伝子発現はTg心筋で低下していた。更にWt心筋は糖尿病に伴い間質の線維化を来したが、Tgでは認めなかった。以上より心筋HSLの過剰発現は、糖尿病に伴う脂肪毒性を減弱し、糖尿病性心筋症を抑制すると考えられた(論文1)。HSL-KOマウス心筋の脂質代謝について検討した結果、心筋HSLは心筋のcholesteryl esterase活性をほぼ100%担うこと、心筋にHSL以外のTG lipaseが発現、機能していること、HSL-KOマウスの心筋では絶食時にリポ蛋白リパーゼ活性が2.5倍増加し、超低比重リポ蛋白(VLDL)を過剰に取り込むこと、絶食後再摂食時に脂肪滴を蓄積することなどを確認し、現在論文の投稿準備中である。本研究では、心筋HSLの過剰発現や欠損が糖尿病性心筋症に与える影響を検討するため、心筋特異的にHSLを過剰発現するトランスジェニック(Tg)マウス、HSL-ノックアウト(KO)マウスを用いて解析している。1.心筋特異的HSL過剰発現マウス:MHC-HSLの作製マウス心筋特異的プロモーターMHCα下流にrat HSL cDNAを挿入してtransgeneを作製し、心筋特異的HSL過剰発現マウスを作製した。2.糖尿病の誘導、心筋の解析F6、F7マウスにSTZにより糖尿病を誘発し、3週間後に屠殺して心筋を電子顕微鏡にて解析した。Wtではミトコンドリア周囲に著明な脂肪滴の蓄積を認めたが、Tgでは認められなかった。HSLは細胞内の脂肪分解を促進して心筋細胞内の脂肪蓄積を抑制したと考えられる。

今後、糖尿病性心筋症の指標となるセラミド、iNOS、ROS、apoptosisやBNPなどの心筋障害のマーカー、DAG、PKC活性や超音波による心機能検査、グルコースや脂肪酸の取り込み、心筋遺伝子発現などについて解析していく予定である。HSL-KOマウス心筋の脂質代謝について検討した結果、心筋HSLは心筋のcholesteryl esterase活性をほぼ100%担うこと、心筋にHSL以外のTG lipaseが発現、機能していること、HSL-KOマウスの心筋では絶食時にリポ蛋白リパーゼ活性が2.5倍増加し、超低比重リポ蛋白(VLDL)を過剰に取り込むこと、絶食後再摂食時に脂肪滴を蓄積することなどを確認し、現在論文の投稿準備中である。本研究では、心筋HSLの過剰発現や欠損が糖尿病性心筋症に与える影響を検討するため、心筋特異的にHSLを過剰発現するトランスジェニック(Tg)マウスとHSL-ノックアウト(KO)マウスを用いて解析している。1.心筋特異的HSL過剰発現マウス:MHC-HSLの作製、解析マウス心筋特異的プロモーターMHCα下流にrat HSL cDNAを挿入してtransgeneを作製し、心筋特異的HSL過剰発現マウスを作製した。ファウンダーをC57BL/6マウスに戻し交配し、高発現TgマウスMH-1系を確立した。ヘテロ型F2マウスでHSL活性、蛋白量とも心筋特異的に野生型マウス(Wt)の8-10倍増加を認めた。F6、F7マウスにSTZを投与して糖尿病を誘発し、3週間後に屠殺して心筋を電子顕微鏡にて解析した。Wtではミトコンドリア周囲に著明な脂肪滴の蓄積を認めたが、Tgでは認められなかった。蓄積した脂質はトリグリセリドとジアシルグリセロールであった。HSLは細胞内の脂肪分解を促進して心筋細胞内の脂肪蓄積を抑制したと考えられる。また心筋のmRNA発現を解析した結果、NF-kB, iNOS, NOX2,TGF-Bなど心筋障害のマーカーとなる遺伝子発現はTg心筋で低下していた。以上より心筋HSLの過剰発現は、糖尿病に伴う脂肪毒性を抑制する方向に機能すると考えられた。今後、PKC活性や超音波による心機能検査、グルコースや脂肪酸の取り込み等を検討し、論文を投稿する予定である。本研究では、心筋HSLの過剰発現や欠損が糖尿病性心筋症に与える影響を検討するため、心筋特異的にHSLを過剰発現するトランスジェニック(Tg)マウスとHSL-ノックアウト(KO)マウスを用いて解析した。1.心筋特異的HSL過剰発現マウス:MHC-HSLの作製、解析マウス心筋特異的プロモーターMHCa下流にratHSL cDNAを挿入してtransgeneを作製し、心筋特異的HSL過剰発現マウスを作製した。*e*F6、F7マウスにSTZを投与して糖尿病を誘発し、3週間後に屠殺して心筋を電子顕微鏡にて解析した。
非天然アミノ酸を利用した人工構造モチーフ構築に基づく人工蛋白質の創出

本研究では、金属イオンに配位し得る非天然アミノ酸として5'-アミノ-2,2'-ビピリジル-5-カルボン酸を複数導入したペプチドを合成し、金属イオンへの配位結合を介して、人工的な構造モチーフをもつ人工蛋白質を創製することを目的としている。これまでに非天然アミノ酸の合成方法を確立したが、ペプチドへの導入は非天然アミノ酸のアミノ基の反応性が低いために、通常のペプチド固相合成法では困難であった。そこで、非天然アミノ酸のアミノ基に天然アミノ酸を導入したジペプチドユニットを別途合成し、それをペプチド合成に用いたところ、非天然アミノ酸導入ペプチドが高効率、高収率で得られることを見出した。この方法を用.いて、非天然アミノ酸を3残基含む21残基ペプチドが合成できるようになった。さらに、この21残基ペプチドを鉄(II)イオンと反応させ、541nmにMetal-to-Ligand Charge Transfer(MLCT)基づく吸収を観測することにより、鉄(II)錯体の生成を確認することができた。一方、金属にルテニウム(II)イオンを用いると、得られる人工蛋白質のコア部分は、ルテニウムトリス(ビピリジン)型錯体となり、光機能の発現が期待される。しかし、5,5'-位に置換基を有するルテニウム(II)トリス(2,2'-ビピリジン)型錯体の研究例は少ないことから、非天然アミノ酸誘導体や5,5'-位にアミド基を有するルテニウム錯体を種々合成し、モデル錯体として、その光化学的性質を検討した。特に、これらの錯体の3つの配位子に接続するアミド基水素(NH)が、各種アニオンに対して協同的に水素結合し、アニオンセンサーとして作用することを見出した。我々は、非天然アミノ酸をペプチドへ導入し、ペプチドのコンフォーメーションを制御することによって、特定の高次構造をもつ人工蛋白質の開発を目指している。本研究では、金属配位性の非天然アミノ酸を導入したペプチドを合成し、金属イオンへの配位を介して、人工的にペプチドを折り畳ませ、人工的な構造モチーフをもつ人工蛋白質を得ようとしている。このような人工蛋白質は、ペプチドのもつ機能に加えて、中心の金属錯体の機能もあわせて発揮することが期待される。本研究では、多様な金属に配置可能な2,2'-ビピリジンを骨格に有する非天然アミノ酸である5'-アミノー2,2'-ビピリジル-5-カルボン酸を合成した。この場合、金属イオンにルテニウムを用いると、中心の金属錯体は発光特性・光電子移動など様々な光機能を有するルテニウムトリス(ビピリジン)型錯体となり、得られる人工蛋白質も光機能を発揮することが期待される。しかしながら、本研究で対象とする2,2'-ビピリジンの5,5'-位にアミド基を有するルテニウムトリス(ビピリジン)型錯体は、その光化学的性質が知られていなかったため、モデル錯体としてこれらの錯体を合成して、その光化学的性質を詳細に検討した。その結果、アミド基の向きの違い(-C(O)NHRまたは-NHC(O)R)によって発光特性が大きく異なり、-NHC(O)R型錯体が長寿命、高量子収率であることを明らかとした。また、これらアミド基を有する錯体は、ハロゲン或いは酢酸イオンのようなアニオン種と強く結合し、発光強度を変化させることによりアニオンセンシング分子として作用することを見出した。さらにこれらの研究に派生して、2,2'-ビピリジンの5,5'-位にベンズイミダゾールを接続した化合物が、高効率な青色蛍光物質であることを見出した。我々は、非天然アミノ酸をペプチドに導入し、ペプチドのコンフォーメーションを制御することによって、特定の高次構造をもつ人工蛋白質の開発を目指している。

本研究では、金属配位性のビピリジン骨格を有する非天然アミノ酸として、5'-アミノ-2,2'-ビピリジル-5-カルボン酸を複数個導入したペプチドを合成し、これらのペプチドが金属イオンと結合することにより形成する人工構造モチーフを明らかにし、さらにその構造制御因子を検討することによって、新規な高次構造・機能を有する人工蛋白質の設計・合成を行う。特に、中心金属としてルテニウム(II)イオンを用いると、人工蛋白質のコア錯体はルテニウムトリス(ビピリジン)型錯体となり、様々な光化学特性を示すことが期待される。本年度は、モデル錯体として合成した2,2'-ビピリジンの5,5'-位にアミド基を有するルテニウム錯体の発光特性が、接続するアミド基の向きによって異なる原因として、カルボン酸アミド(-C(O)NHR)の励起状態寿命が温度依存性を示さないことを見出した。また、これらの錯体が対アニオンの変化によって発光挙動を変化させるアニオンセンサーとして利用しうること、この現象が酸素へのエネルギー移動消光における拡散定数が対イオンの種類によって異なることを初めて見出した。非天然アミノ酸ならびに導入ペプチドについては非対称二座配位子であるため、六配位八面体錯体にはfac/merという二種類の異性体が存在する。導入する置換基がこれらの生成比に及ぼす効果を調べるために、非天然アミノ酸誘導体ならびに導入ペプチドのルテニウム(II)及び鉄(II)錯体を系統的に合成し、その異性体生成比について検討した。また、5'-アミノ-2,2'-ビピリジル-5-カルボン酸誘導体のルテニウムトリス(ビピリジン)型錯体を初めて合成し、そのfac/mer-錯体の合成・分離に成功した。我々は、金属イオンに配位し得る非天然アミノ酸として5'-アミノ-2,2'-ビピリジル-5-カルボン酸を複数導入したペプチドを合成し、金属イオンへの配位結合を介して、人工的な構造モチーフをもつ人工蛋白質を創製することを目指して研究を行っている。これまでに非天然アミノ酸の合成方法を確立し、その導入ペプチドの合成に成功していたが、非天然アミノ酸のアミノ基の反応性が低いために、次のアミノ酸導入の反応条件が厳しくなり、導入できるアミノ酸の種類が限定されるという欠点があった。本年度は、非天然アミノ酸のアミノ基に天然アミノ酸を導入したジペプチドユニットを別途合成し、それをペプチド合成に用いることによって、非天然アミノ酸導入ペプチドが高効率、高収率で得られることを見出した。この方法を用いて、非天然アミノ酸を1残基含むトリペプチドから、3残基含む21残基ペプチドまで多数のペプチドが合成できるようになった。本年度は、この21残基ペプチドを鉄(II)イオンと反応させ、541nmにMetal-to-Ligand Charge Transfer(MLCT)基づく吸収を観測することにより、鉄(II)錯体の生成を確認することができた。また、金属にルテニウム(II)イオンを用いると、得られる人工蛋白質のコア部分は、ルテニウムトリス(ビピリジン)型錯体となり、光機能の発現が期待されることから、ルテニウム(II)錯体については、非天然アミノ酸を1残基含むトリペプチドを配位子とする錯体を合成した。その4種類の異性体(Δ-fac,Λ-fac,Δ-mer,Λ-mer)を単離精製することに成功し、CDスペクトルを測定することによってキラル構造を決定し、それらの光化学的挙動を検討した。
勤労者の組織間キャリア発達の研究

組織間キャリア発達は組織をまたがることによって達成されるキャリア発達を意味する。組織間キャリア発達は、雇用の流動化が進行している状況で、勤労者にとって重要性を増してきている。本研究では、勤労者の組織間キャリア発達過程においてどのような要因が影響しているかを解明するため、従業員に対する質問票調査を実施した。主な結果として、職務満足が転職意思を低下させる効果は、組織間キャリア効力が高いほど減退し、組織のキャリア開発が組織間キャリア効力を高める関係は職務満足によって促進された。国際比較調査の結果、以上の過程の類似性も一部明らかにされた。今年度の実施計画は、以下の3点であった。(1)既に設計した仮説に基づき質問票等を作成する。(2)(1)に基づき、質問票調査等を行う。(3)平行して文献研究を行い、組織間キャリア発達に関する新モデルや理論の摂取に努める。(1)については、日本語版およびモンゴル語版の正規従業員に対する質問票を作成した。モンゴル語版作成にあたっては、独立行政法人国際協力機構(JICA)モンゴル事務所および国立モンゴル大学スタッフの協力を得た。(2)については、以下の3つの質問票調査を実施した。第1は、10月に、アテナ山崎京子氏およびJICAモンゴル事務所の協力により、現地企業3社、4事業部門合計238名の正規従業員データを収集した。現在、設定した仮説を検証すべく鋭意、分析中である。第2は、第1との国際比較のため、12月にインターネット調査会社であるM社に委託して、日本の正規従業員220名に対するWeb形式による質問票調査を実施した。この結果についても、同様に分析中である。第3は、専門職における傾向を分析するため、10年2月に、山梨県立大学看護学部の松下由美子先生の協力を得て、質問票調査を実施した。結果として、2124名の正看護師および所属する46施設の管理者のデータを得た。(3)については、大学研究室等において資料収集を行うとともに、7月31・8月1・2日日本労務学会(東北福祉大学)、8月29・30日産業・組織心理学会(青森・古牧温泉青森屋)、11月7・8日経営行動科学学会(東京工業大学)に参加し、多くの関連する研究者と情報交換を行った。さらに、産業・組織心理学会および経営行動科学学会では、研究成果を発表した。1.既に設計した質問票に基づいて、勤労者に対する質問票調査を行う、2.昨年等に実施した調査の結果を入力・分析し、論文執筆、学会発表を行う。3.文献研究を実施し、分析結果の解釈やモデル構築に役立てる。1については、以下の4種の質問票調査を実施した。第1は、3月に、中国の勤労者の状況を調査するため研究協力者院ティン氏の協力のもと、中国沿海部の代表的都市である上海、広州、天津、無錫在住の女性既婚勤労者に対する調査を実施し、398名のデータを得た。結果については、現在分析中である。第2は、専門職における傾向を分析するため、12月に、山梨県立大学看護学部の松下由美子先生の協力を得て、調査を実施し、478名の認定看護師のデータを得た。第3は、日本とイギリスの国際比較のため、1月にインターネット調査会社であるM社に委託して、日本企業の正規従業員400名、イギリス企業の正規従業員300名に対するインターネット調査を実施した。第4は、組織間キャリア発達の経年変化を測定する1年目の調査として、1月に同じくM社に委託して、日本企業の正規従業員400名(第3とは別)を対象にインターネット調査を実施した。2については、6月5・6日組織学会(中央大学)、7月31日・8月1日日本労務学会(神戸大学)、9月4・5日産業・組織心理学会(東京富士大学)、10月23・24日国際ビジネス研究学会(北海道大学)、10月26日日本看護学会(看護管理分科会:新潟朱鷺メッセ)に参加し、多くの関連する研究者と情報交換を行った。組織学会、産業・組織心理学会、国際ビジネス研究学会、日本看護学会では研究成果の発表も行った。3については、大学研究室等において資料収集を行った。今年度の実施計画は、以下の4点であった。1.組織間キャリア発達の経年変化を測定する追跡調査として、前年度の対象者に対して同様にインターネット調査を実施する。2.これまで実施してきた調査の結果を入力・分析し、論文執筆、学会発表を行う。3.以上の結果を報告書としてまとめ、翌年度の学会発表および論文刊行のための執筆を行う。4.文献研究を実施し、分析結果の解釈やモデル構築に役立てる。1については、2種の質問票調査を実施した。

第1は、1月にインターネット調査会社であるM社に委託して、前年度回答した日本企業の正規従業員402名を対象にインターネット調査を実施した。その結果、285名から回答を得た。結果については現在分析中である。第2は、2月に第1とは別の前年度に実施した調査(イギリスとの国際比較調査用)に回答した日本企業の正規従業員433名に追跡調査を実施し、305名から回答を得た。結果については同様に現在分析中である。2については、6月25・26日日本労務学会(明治大学)、9月3・4日産業・組織心理学会(中村学園大学)、11月26・27日経営行動科学学会(明治大学)に参加し、多くの関連する研究者と情報交換を行った。産業・組織心理学会、経営行動科学学会等では研究成果の発表も行った。3の学会発表については、日本労務学会、産業・組織心理学会、経営行動科学学会において発表予定であり、そのための原稿を執筆中である。報告書については執筆を終え、International Journal of Human Resource Managementへ投稿中である。4については、大学研究室等において資料収集を行った。
髄液中のα-synuclein濃度を指標とする脳変性疾患の生化学診断に関する研究

Sandwich-ELISA法を用いたα-synuclein蛋白測定系を確立し,ヒト体液における本蛋白測定を行った.対象疾患は,組織学的にα-synuclein凝集が認められるsynucleinopathy,即ちParkinson病,瀰漫性レヴィー小体病および多系統萎縮症の3疾患とした.比較対照疾患は上記以外の変性疾患(大脳皮質基底核変性症,進行性核上性麻痺),末梢神経疾患とした.全症例に対し検査趣旨を説明し同意を得た上で,腰椎穿刺により髄液を採取.細胞成分を取り除き,蛋白測定時まで-80°Cで凍結保存した.測定法は2種類の抗体を用いたsandwich-ELISA法を利用し,リコンビナント蛋白を用いて標準曲線を作成し,髄液中α-synucleinを定量した.Synucleinopathyでは他の疾患に比し,本蛋白濃度は有意に低下していた.Synucleinopathyの各々ではParkinson病>多系統萎縮症>瀰漫性レヴィー小体病の順に濃度が低下していたが有意な差は認められなかった.一方,上記対象および比較対照疾患の内,パーキンソニズムを来す疾患に関して補助診断として行った[123I]MIBG心筋シンチグラム検査では,これまでの報告と同様,レヴィー小体関連疾患即ち,Parkinson病と瀰漫性レヴィー小体病で取り込みが低下し,その他の疾患では正常であった.従って,髄液中α-synuclein濃度と[123I]MIBG心筋シンチグラムを組み合わせることにより,Parkinson病,多系統萎縮症,その他のパーキンソニズムを来す疾患,の3者を鑑別し得ることが示唆された.1020例程度の少数例の検討では特異度,敏感度共に80%以上の精度で鑑別することが可能であった.今後,統計的にも有効性を確立するため,症例数を増やし評価を継続する予定である.Sandwich-ELISA法を用いたα-synuclein蛋白測定系を確立し,ヒト体液における本蛋白測定を行った.対象疾患は,組織学的にα-synuclein凝集が認められるsynucleinopathy,即ちParkinson病,瀰漫性レヴィー小体病および多系統萎縮症の3疾患とした.比較対照疾患は上記以外の変性疾患(大脳皮質基底核変性症,進行性核上性麻痺),末梢神経疾患とした.全症例に対し検査趣旨を説明し同意を得た上で,腰椎穿刺により髄液を採取.細胞成分を取り除き,蛋白測定時まで-80°Cで凍結保存した.測定法は2種類の抗体を用いたsandwich-ELISA法を利用し,リコンビナント蛋白を用いて標準曲線を作成し,髄液中α-synucleinを定量した.Synucleinopathyでは他の疾患に比し,本蛋白濃度は有意に低下していた.Synucleinopathyの各々ではParkinson病>多系統萎縮症>瀰漫性レヴィー小体病の順に濃度が低下していたが有意な差は認められなかった.一方,上記対象および比較対照疾患の内,パーキンソニズムを来す疾患に関して補助診断として行った[123I]MIBG心筋シンチグラム検査では,これまでの報告と同様,レヴィー小体関連疾患即ち,Parkinson病と瀰漫性レヴィー小体病で取り込みが低下し,その他の疾患では正常であった.従って,髄液中α-synuclein濃度と[123I]MIBG心筋シンチグラムを組み合わせることにより,Parkinson病,多系統萎縮症,その他のパーキンソニズムを来す疾患,の3者を鑑別し得ることが示唆された.1020例程度の少数例の検討では特異度,敏感度共に80%以上の精度で鑑別することが可能であった.今後,統計的にも有効性を確立するため,症例数を増やし評価を継続する予定である.ヒト血漿および髄液を用いた先の実験で,α-synucleinはモノクローナル抗α-synuclein抗体(C-211),ポリクローナル抗α-synuclein抗体(FL-140)に良好な感受性をもち,免疫沈降法によって抽出されることが明らかになった.これに従い,一次抗体C-211,二次抗体をFL-140とするsandwich enzyme-linked immunosorbent assay(sandwich ELISA)システムを構築した.まず,大腸菌由来ヒトrecombinant α-synucleinを用いて作成した任意の希釈溶液を,今回作成したELISAシステムで測定した.その結果,各濃度における吸光度は95%以上の確率で対数関数あるいは2次関数に相関し,標準曲線として有効であること考えられた.次いで,ヒト血漿を用いて測定を行った.血漿原液では標的外蛋白濃度が高く,想定濃度との解離が目立ったため,リン酸緩衝液で2倍に希釈したところ,良好な結果を得た(20500ng/ml).更にヒト髄液を用いて測定を行ったところ,原液では測定感度に満たなかった.そこで,吸引遠心器を用いて濃度を5倍濃縮後に測定し,良好な結果を得た(1050ng/ml).同一対象では血漿,髄液中α-synuclein濃度に相関関係は認められず,本蛋白の血液脳関門通過の可能性は低いと考えられた.一方,Parkinson病患者検体を用いた測定でも良好な結果が得られ,本法のヒト体液への応用の有効性が確認された.現在,疾患別に患者体液中におけるα-synuclein濃度の定量を行っている段階である.Sandwich-ELISA法を用いたα-synuclein蛋白測定系を確立し,ヒト体液における本蛋白測定を行った.

対象疾患は,組織学的にα-synuclein凝集が認められるsynucleinopathy,即ちParkinson病,瀰漫性レヴィー小体病および多系統萎縮症の3疾患とした.比較対照疾患は上記以外の変性疾患(大脳皮質基底核変性症,進行性核上性麻痺),末梢神経疾患とした.全症例に対し検査趣旨を説明し同意を得た上で,腰椎穿刺により髄液を採取.細胞成分を取り除き,蛋白測定時まで-80°Cで凍結保存した.測定法は2種類の抗体を用いたsandwich-ELISA法を利用し,リコンビナント蛋白を用いて標準曲線を作成し,髄液中α-synucleinを定量した.Synucleinopathyでは他の疾患に比し,本蛋白濃度は有意に低下していた.Synucleinopathyの各々ではParkinson病>多系統萎縮症>瀰漫性レヴィー小体病の順に濃度が低下していたが有意な差は認められなかった.一方,上記対象および比較対照疾患の内,パーキンソニズムを来す疾患に関して補助診断として行った[123I]MIBG心筋シンチグラム検査では,これまでの報告と同様,レヴィー小体関連疾患即ち,Parkinson病と瀰漫性レヴィー小体病で取り込みが低下し,その他の疾患では正常であった.従って,髄液中α-synuclein濃度と[123I]MIBG心筋シンチグラムを組み合わせるこにより,Parkinson病,多系統萎縮症,その他のパーキンソニズムを来す疾患,の3者を鑑別し得ることが示唆された.1020例程度の少数例の検討では特異度,敏感度共に80%以上の精度で鑑別することが可能であった.今後,統計的にも有効性を確立するため,症例数を増やし評価を継続する予定である.
クラブマネジャー行動研究-特に、マネジャーの影響力とクラブ特性の関係性について-

本研究は、総合型クラブのマネジメント主課題として目される、クラブマネジャーの行動特性について明らかにすることを目的とした。その主要結果は以下の通りであった。(1)今日の総合型クラブの発展段階を吟味した結果、5つのクラブタイプに分類することができること。(2)クラブマネジャーの仕事条件は、その殆どが資格を必要としないものの、一般会員に委ねる状況や意図はみられないこと。(3)クラブマネジャーの仕事内容は10通りに分類され、その取り組み方は多様であることであった。本年度は、至上課題である「マネジャーによる影響力の違いと、総合型クラブ間差異(クラブ特性の違い)の関連性」を解明する前段階作業として、従属変数となる総合型クラブを類型化することを研究課題に設定した。従って、本年度に計画、達成された具体的課題は2点であり、第1に仮説的構成概念とされる「総合型クラブ特性」の定立、第2にそれを主内容とした質問紙調査法による、総合型クラブの実態把握・類型化作業であった。まず「総合型クラブ特性」の定立については、文献的演繹法により総合型クラブに関する規範言説を収集し、KJ法により整理した結果、「自律性」「連帯性」「理念」「事業性」「自主資源」「ネットワーキング」「日常生活圏」の7次元を導出した。次に総合型クラブの類型化作業は、46都道府県1307クラブ(回答対象者を運営責任者に該当する者に限定)に-斉配布した後の有効回収数(率)となった597クラブ(45.7%)を分析対象として実施した。調査内容は、基本的概要、総合型クラブ特性判断、運営参加状況などである。主な分析結果の要約は、(1):「総合型クラブ特性」7次元について、5件法で求めた回答に対し主成分分析を施した結果、その仮説的構成概念の信頼性・妥当性が確認されたこと、(2):検証された7次元の側面バランスについて、主成分得点を用いてword法によるクラスター分析を施した結果、総合型クラブが5群に類型化されたこと(「積極型クラブ群」「充足型クラブ群」「基本型クラブ群」「脱・地域型クラブ群」「消極型クラブ群」と命名)、(3):5つの総合型クラブ群問の経営条件との関連性について検定した結果、特に運営参加状況との関連性について有意な相関が認められたこと、であった。次年度は、5群間の差異を産み出した因果関係について、運営委員会の実情(特にフォロワーのエンパワーメント性とマネジャーの勢力指数)に注視した調査が臨まれる。本年度は、当初の計画を変更し、CM(以下CM)の「専門職性」について文献研究を実施した。当初の計画では、類型化された総合型クラブの差異要因について、運営委員会の実情(特にCMの社会的勢力指数)を注視した調査を予定していた(質問紙調査)。しかしながら、CMの社会的勢力について考慮する際、その前提として、CMの機能的側面と、CMの構造的側面を整理する必要性が考えられた。したがって、機能的・構造的両面を俯瞰できるとする「専門職性」という視点からCM論を検討し、彼(女)ら自身の存在意義を問いながら、併せて、社会的布置を図る重要性を指摘することとした。具体的には、CMの専門職性を「社会的認知へ向けたCMとしての必要要件」と定義し、以下の目的を遂行した。(1)専門職としてのCM制度についての論議を整理する、(2)社会福祉専門職における先行研究に拠り、CMの専門職性について検討する、(3)CMに沿う新たな専門職性の観点を提起し、今後の研究課題を定める、の3点であった。(1)については、これまで、CMの専門職としての機能(センター機能)とボランタリー性との拮抗関係について逡巡せざるを得ない状況を明らかにし、それを解消する見方として、専門職観の転換にあることを説いた。つまり専門職性を、過度な科学的根拠に求めるのではなく、柔軟で変更可能な知として捉える必要を検討した。それが、実践的専門(職)性である。(2)については、総合型クラブ論と社会福祉論の両論に多くの共通性が窺えることを前提とした上で整理を試みた。ここでも、非科学的・実践的専門(職)性への注視と、協働の専門性といった観点を導出した。(3)については、今後の研究視点へと繋がるのものであり、以下のCM専門職(性)観点を9点導出した(I理論知、II代替可能な技術、III価値性、IV自律性、V自己研鑚(継続性)、VI責任性、VII協働性、VIII経験知、IX代替不能な技術)。本年度は、クラブマネジャーの理論的解題について、昨年度(22年度)にまとめたものを精緻化しつつも、それに実践性を加味するうえで、ヒアリング調査を実施した。

本来、クラブマネジャーの行動(意図も含め)について、受容側の視点、つまり、クラブマネジャーを取り巻く関係者の見方を重視することを企図していた。しかしながら、クラブマネジャー研究の新規性を鑑みると、まずは、クラブマネジャー自身の自己認識・自己解釈の定量的調査が必要であることを踏まえるに至った。その際、クラブマネジャーが認識している職務内容(クラブマネジメントタスク)を把握することが喫緊な課題として挙がった。したがって、クラブマネジャー業に詳しい関係者(某都道府県のクラブ育成アドバイザー)等へのヒアリング調査に従って、クラブ業務についての分析を試みた。そして、クラブマネジャーに対して職務分析シート記載による日誌法の調整を実施した。初年度に明らかとなった総合型クラブの現況は、規範的な総合型クラブ組織特性尺度によると、比較的充実しているクラブとそうではないクラブに二分化され、中でも、「日常生活圏」への配慮に差異がみられた。併せて推察されることは、事業への認識であり、それは事業規模に関連する事業性格への認識についての差異である。これら、「日常生活圏」「事業性格」の2点について特異とされるクラブを対象に、先述したクラブマネジメントタスクの差異、そして、それに伴うクラブマネジャーの従事の差異を明らかにすることを現在進行形で行っている。本年度は、総合型地域スポーツクラブにおけるクラブマネジャーの仕事特性について、日誌法により明らかにすることを目的とした探索的研究を行った。調査対象者は、一定程度の資本を有している総合型地域スポーツクラブ6クラブ8名のクラブマネジャーであり、期間は2週間以上1カ月以内で行われた。記述された577の仕事内容についての把握・分類と、その状況とされる仕事の属性、性質、条件との関連性を分析した。併せて、それぞれのクラブマネジャーによる仕事特性の差異について分析した。その結果、主要な発見的事実は以下の通りであった。第一に、クラブマネジャーの仕事性質は、その殆どが現在的業務であり、将来的な計画についてはあまり取り組まれていないこと。第二に、クラブマネジャーの仕事条件は、その殆どが資格を必要としないものの、一般会員に委ねる状況(あるいは考え方)はみられないこと。第三に、クラブマネジャーの仕事内容は10分類(「事務処理」、「会計」、「文書確認」、「文書作成」、「物品管理」、「1人検討」、「会議・議論」、「運営・参加」、「指導」、「準備・片づけ」)とされ、それは、3群(「事務的タスク群」、「創造的タスク群」、「スポーツ事業タスク群」)にカテゴライズできること。第四に、クラブマネジャーが取り組む率の高い仕事内容は、「事務処理」、「文書作成」、「会議・議論」、「指導」であること。第五に、クラブマネジャーによって仕事の取り組み方は多様であること、であった。今後は、各クラブマネジャーの仕事特性がどのような意図によって行われ、また、その特性がクラブの組織特性にどのように影響しているかの追跡調査・補強が必要とされる。クラブマネジャーに関する理論的解題に時間を要した。また、クラブマネジャーの行動(意図も含め)の検証を、受容側(その周りの関係者)視点による計画から、当事者認識に従った検証へと研究計画の変更を余儀なくされた。その調整作業のから遅れが出ている。24年度が最終年度であるため、記入しない。まずは、マネジャーの現況を把握するための日誌法調査を完遂させることである。
皮膚悪性腫瘍の発生、転移における癌関連遺伝子DNAのメチル化の解析

この手法を用い検索したところ、悪性黒色腫では母斑細胞母斑に比しCpG island-specific hypermethylationがおきていることが、基底細胞癌と有棘細胞癌では、正常表皮に比しゲノム全体のhypermethylationおよびCpG island-specific hypomethylationがおきていることがわかった。さらに、各種癌抑制遺伝子プロモーターのメチル化状態をmethylation-specific PCRで検索したところ、有棘細胞癌の約7割、基底細胞癌と悪性黒色腫の約3割でp16プロモーターのメチル化が見られた。また、有棘細胞癌のごく一部でp14プロモーターのメチル化が見られた。E-cadherinプロモーターのメチル化は普遍的に見られ、有棘細胞癌では全例、基底細胞癌と悪性黒色腫の約半数でメチル化されていた。皮膚悪性腫瘍では、ゲノムメチル化のさまざまな異常が起きていることが見いだされた。遺伝子変異によらない遺伝子発現制御(epigenetics)として、近年、DNAのメチル化による転写抑制が重要視されてきている。筆者は、12年度特定領域(C)研究でアイソトープを用いない、ゲノムDNA全体のCpG island特異的なメチレーションの定量法、non-isotopic cytosine extension assayを確立し、genome DNAが10ナノグラム以下でも濃縮操作により解析可能なレベルにまで改良した。また、代表的な自己免疫性疾患である全身性エリテマトーデス(SLE)の末梢血リンパ球ゲノムDNAでは、コントロール、円板状エリテマトーデスに比べ、CpG island methylationが亢進してると考えられ、SLEの病態の解明にせまる可能性があると考えられた。皮膚腫瘍に関し、今年度は、まず表皮ケラチノサイト、メラノサイト系腫瘍(後天性母斑細胞性母斑、悪性黒色腫)と、正常人末梢血リンパ球とではグローバルメチレーションに大きな差があることがわかった。ケラチノサイトと後天性母斑細胞性母斑では差がなかった。
自己免疫疾患制御分子PD-1およびAIDAによる炎症関連発がん制御機構の解析

腸炎に伴い腸がんを発症することが報告されているIL-10欠損マウスを用いてPD-1欠損の影響を検討したが、腸がん発症の増悪は確認できなかった。PD-1とAIDA(LAG-3)の機能を解析し、PD-1とAIDA(LAG-3)が相加的にT細胞の抗原刺激による活性化を抑制すること、また両分子を欠損する場合でも制御性T細胞の機能には大きな異常が認められないことを明らかとした。さらに、両分子を欠損させたマウスでは、Th1型の免疫応答が増強される傾向にあることを明らかとした。炎症に関連した発がんはヒトのがんの少なくとも15%以上を占めていると言われており、慢性炎症と発がんの関連は当該分野において極めて重要な課題となっている。本研究では、炎症関連発がんモデルマウスにおける免疫抑制受容体PD-1、近年自己免疫疾患自然発症モデルマウスの原因遺伝子として同定したAIDA、および体細胞突然変異導入因子AIDの役割を解析することにより、PD-1・AIDAおよびAIDによる炎症関連発がんの分子機構とその制御機構を解明することを目的とした。平成22年度は、腸炎に伴い腸がんを発症することが報告されているIL-10欠損マウスを用いて解析を行ったが、腸がんの発生において、PD-1欠損による明らかな増悪は確認できなかった。また、PD-1とAIDAの協調的な役割を解析する目的で、C57BL/6およびNOD.H2b系統において両者を欠損したマウスを作製し、胃炎およびそれに伴う胃がん様病変発症の有無を検討したが、PD-1を単独で欠損させたマウスと比較して大きな差異は確認できなかった。PD-1とAIDAの機能をより詳細に解析したところ、PD-1とAIDAが相加的にT細胞の抗原刺激による活性化を抑制すること、また両分子を欠損する場合でも制御性T細胞の機能には大きな異常が認められないことを明らかとした。さらに、両分子を欠損させたマウスでは、Th1型の免疫応答が増強される傾向にあることを明らかとしたことから、今後、Th1型の免疫応答により誘導される炎症に着目することが重要であると考えられた。