hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
患者由来iPS細胞を用いた糖尿病病態生理の解明と治療法の開発

ミトコンドリア糖尿病、脂肪萎縮性糖尿病患者等から疾患特異的iPS細胞を樹立した。ミトコンドリア糖尿病患者由来iPS細胞ではミトコンドリア遺伝子A3243G変異の比率(ヘテロプラスミー)が感度以下または大幅に増加した細胞が得られた。変異比率はiPS細胞樹立やインスリン産生細胞分化に影響はなかった。セイピン遺伝子変異を有する先天性全身性脂肪萎縮症患者由来iPS細胞と由来する分化細胞では脂肪滴の蓄積が少なく患者の病態を反映していた。小胞体から脂肪滴への脂肪輸送を担うペリリピンの細胞内局在が変化しており、病因遺伝子セイピンがペリリピンの局在を規定していることが示唆された。脂肪萎縮症は、遺伝子変異に伴って生じる先天性脂肪萎縮症と自己免疫や薬剤性の機序が推定される後天性脂肪萎縮症とに分けられる。後天性脂肪萎縮症については、外的要因の評価が難しく病態生理の解明を行うことは困難である。先天性脂肪萎縮症は、いくつかの遺伝子における変異が報告されており、遺伝子の機能変化・喪失が主要なメカニズムであると予想され、患者由来細胞による病態生理の解明が期待される。我々は、先天性脂肪萎縮症患者の中で、LaminA/C遺伝子変異を有する先天性部分性脂肪萎縮症患者の女性から疾患特異的iPS細胞樹立を試みた。インフォームドコンセントを得た女性患者1名の皮膚を生検した。組織をトリミングした後、カバーグラスを上から覆い培養ディッシュ上へ接着させることにより、線維芽細胞が付着細胞として増殖した。線維芽細胞へOCT3/4, SOX2, KLF4, c-MYCを発現するレトロウイルスを感染させた。1カ月程で辺縁整で円形のヒトES様コロニーが出現し、9クローンをピックアップして継代培養を行った。樹立した9クローンのうち3クローンを詳細に解析した。まず、未分化マーカーであるSSEA-4, NANOGの発現を免疫染色で確認した。またアルカリフォスファターゼ活性を染色により確認した。更に多分化能をチェックするために浮遊培養にて胚様体を形成させた後付着培養に切り替えて神経(β3チューブリン)、筋肉(αsmooth muscle actin)、腸(Foxa2)への分化が生じることを免疫染色で確認した。更に免疫不全マウス(SCIDマウス)の精巣内へ細胞を移植して2-3ヵ月後に形成された奇形腫を組織的に確認した所色素上皮、軟骨、腸管構造等を確認することができた。iPS細胞のLaminA/C遺伝子はR482Q変異を維持していた。以上から先天性部分性脂肪萎縮症患者iPS細胞の樹立が確認できた。我々は、先天性脂肪萎縮症患者の中で、LaminA/C遺伝子変異を有する先天性部分性脂肪萎縮症患者の女性患者1名及び、BSCL2(Seipin)遺伝子変異を有する先天性全身性脂肪萎縮症患者の男性患者1名及び女性患者1名から、それぞれ複数の疾患特異的iPS細胞クローンを樹立し、未分化状態(NANOG, SSEA-4,ALP活性)・多分化能(胚様体分化法やSCIDマウスでの奇形腫における三胚葉分化)を確認し、患者の体細胞におけるLAMINA/C遺伝子変異R482Q, BSCL2遺伝子変異(E189X, R275X)が各クローンにおいて正確に保持されていることを確認した。以上から先天性部分性及び先天性全身性脂肪萎縮症患者からの疾患特異的iPS細胞の樹立を世界で初めて行うことができた。BSCL2遺伝子変異を有するiPS細胞について、分化を誘導したところ、正常対照のiPS細胞に比べて、脂質蓄積能の喪失やPPARγ遺伝子発現の低下を認めた。野生型のBSCL2遺伝子を強制発現させることにより脂質蓄積能は回復した。脂肪滴関連蛋白の発現を検討した。正常対照では、ADRP(Perilipin2)の細胞内局在が描く周辺の小胞体周辺に局在するのに対し、脂肪萎縮症細胞では細胞質全体に散在しており、少なくとも脂肪分解を阻害するADRP(Perilipin2)の局在変化が生じていることが確認できた。疾患によってはiPS細胞の樹立が困難である例が報告されている。しかし、ミトコンドリア病や脂肪萎縮症患者からの樹立クローンについては、未分化状態を維持しながら継代培養が可能であり、vitro(胚様体形成法)及びvivo(奇形腫形成法)において多分化能(全能性)を確認することができている。ミトコンドリア病iPS細胞においてはミトコンドリア遺伝子変異の変異比率(ヘテロプラスミー)の消失や増大が認められているが、核ゲノムの遺伝子変異である先天性脂肪萎縮症においてはiPS細胞においても患者で認められた遺伝子変異が保持されていることが確認できており、疾患特異的iPS細胞の正確な樹立ができたことが示されている。BSCL2(Seipin)遺伝子変異を有する先天性全身性脂肪萎縮症においては、欠損したSeipin蛋白を強制発現により回復させることにより脂肪蓄積能が回復することを示し

BSCL2(Seipin)そのものがやはり脂肪萎縮症の根本原因であることを確認した。また今までBSCL2(Seipin)の作用機構や病態の多くは未解明であったが、脂肪分解を抑制する働きを有するADRP(Perilipin2)の局在変化などが関連している可能性を示すことができた。2型糖尿病、肥満症、脂肪萎縮症は、脂肪細胞の機能異常が共通する代謝疾患である。遺伝子変異に伴って生じる先天性脂肪萎縮症については、いくつかの遺伝子変異が報告されており、自己免疫等の外的な要因が関係する後天性脂肪萎縮症に比べ、病態の本質に迫りやすいと考えられた。我々は、先天性脂肪萎縮症患者の中で、LamionA/C遺伝子に変異を有する先天性部分性脂肪萎縮症の女性患者1名及び、BSCL2(Seipin)遺伝子変異を有する先天性全身性脂肪萎縮症の男性患者1名、女性患者1名から、複数のiPS細胞クローンを樹立し、未分化状態・多分化能・遺伝子変異を確認し、脂肪萎縮症iPS細胞の樹立に世界に先駆けて成功した。BSCL2遺伝子変異を有するiPS細胞(BSCL2-iPS)については、分化・未分化状態によらず、脂肪染色や透過型電子顕微鏡解析により脂肪滴の著しい減少を確認した。脂肪滴関連蛋白の発現を検討したところ、正常対照では、ADRP(Perilipin2)の細胞内局在が小胞体に近い脂肪滴周囲に存在するのに対し、脂肪萎縮症細胞では細胞質全体に散在していた。ADRP(Perilipin2)は、脂肪分化に伴い発現が上昇してくることが知られており、また成熟脂肪細胞ではカテコラミン刺激などによる脂肪分解を阻害することが知られている。発現ベクター導入により野生型のBSCL2蛋白を復元するとADRP(Perilipin2)の局在と脂質蓄積能の回復が認められた。BSCL2(Seipin)はADRP(Perilipin2)の脂肪滴への局在を規定しており、BSCL2遺伝子変異に伴う脂肪萎縮症では、分化障害や脂肪分解の亢進が抑制できず脂肪蓄積不全を呈すると推定された。ミトコンドリア糖尿病2名、脂肪萎縮性糖尿病患者2名を含む糖尿病患者から、皮膚由来の線維芽細胞へ山中4因子を発現するレトロ(レンチ)ウイルスベクターを感染させて疾患特異的iPS細胞を樹立した。ミトコンドリア糖尿病患者由来iPS細胞ではミトコンドリア遺伝子A3243G変異の比率(ヘテロプラスミー)が感度以下または大幅に増加した細胞が得られた。変異比率は、いったん樹立された後は継代や分化によってもそれ以上大きく変化することはなかった。また、変異比率の多少による、未分化維持、三胚葉系への分化、膵内分泌細胞への分化に影響は認められなかった。ミトコンドリアA3243G変異は、ロイシンtRNAの付加異常を起こすが、呼吸鎖複合体蛋白の低下を変異比率の高いiPSクローンで認めた。異なるセイピン遺伝子変異を有する先天性全身性脂肪萎縮症患者由来iPS細胞を樹立した。
中国六世紀の詩文総集『文選』の写本・版本と当時の別集との関係

『文選』の古い版本には、奇妙な箇所が数カ所ある。皇帝への上表文や上司に宛てた書簡で、「私は」と一人称を称すべき所に「公は」「君は」と敬称の二人称を用いているのである。『文選』の古写本では、そうした箇所がさらに増加する。しかもそれらは南朝梁代の任〓の作品に集中して現れる。『文選』所収の任〓の作には、もうひとつ奇妙なことがある。彼の「奏弾劉整」の中間部分にある860字ほどの記述が、1000年代に筆写されたと見られる『文選集注』の正文と注に拠る限り、李善注本系であった正文では162字、陸善経注本『文選』では48字、五臣注本『文選』のみ860字余であったというのである。五臣・李善・陸善経の当時置かれていた状況を調べると、もっとも良い知的環境にあったのは陸善経であることが分かる。陸善経は、いわゆる「開元の輯書」の直後に集賢殿書院に詰めており、唐代においては空前絶後の善本の集積を前にしていた。彼の拠った『文選』が善本であったこと、彼が別集本も見ていたことは、『文選集注』から推定できる。つまり、くだんの860字は任〓の別集が収める「奏弾劉整」にあり、『文選』はそれを48字に削っていたのであり、陸善経はその双方を見たと考えられるのである。したがって860字を含む唐代の五臣注『文選』や現行の版本『文選』の正文は、別集の痕跡を残していることになる。ここで先述の奇妙な自称について再考すれば、これも、別集や家集の痕跡と見られる。別集・家集は多く子孫が編むため、父祖の名が敬称に置き換えられる。現行の『文選』に別集の痕跡があるのは、おそらくその欠失部分がかつて別集で補われたためと推測される。その痕跡が任〓の作に集中しているのは、任〓が宮中の本を補いうるほどの蔵書家であったこと、彼の死後に子供たちが没落していることと関わるだろう。1.平成15年5月に「陸機の天人対--先秦から西晋に至る対偶の一様相--」(『集刊東洋学』第八十九号)、同年夏に「陸機「演連珠」の構成上の特質」(『六朝学術学会報』第四集)、同年10月に「陸機「演連珠」五十首について--その多元性と叙情性--」(『日本中国学会報』第五十五集)、平成16年3月に「郭璞「客傲」訳注およびその位置づけ」(『中国語学中国文学論集』第八号)を発表した。2.上記四篇のうち、「陸機「演連珠」の構成上の特質」は、李善注本『文選』巻五十五が収録する、西晋の陸機(二六一年三〇二年)「演連珠」五十首とその李善注および劉孝標注を検討したものである。「演連珠」は、中国漢代から清代に至るまで作られ続けた「連珠」という文芸上の一ジャンルに属し、「珠」玉のように凝った修辞のアフォリズムから成る。該論は「演連珠」五十首の中に、従来には無い、隔句対二対と単対一対を組み合わせた長篇型連珠が含まれることに注目し、これらを前代および後代の、型は異なるがあい似た主張を持つ連珠や、後代の、同じ型の連珠と比較することによって「演連珠」のそれが、対偶間の対立と飛躍をもっとも拡大し、駢儷文としての完成度をもっとも高めたものであることを証した。かく「演連珠」は意味上の飛躍が大きいので、注釈が必須となるため、『文選』の代表的な注釈者である七世紀の李善は、「演連珠」については、六世紀前半の劉孝標の注釈をも自らの注の前に記している。李善が前人の注釈を自らの注に前置する例は、『文選』に十件あり、他の九件についての検討を併せ考えれば、李善が劉孝標の注を、先行する『文選』諸本や他の総集や陸機の別集からではなく、李善自身が当時の崇賢館でみた劉孝標の別集本から取り入れたと推量される。今は佚した『劉孝標集』の様相が李善注を介して浮かび上がる。

五臣・李善・陸善経の当時置かれていた状況を調べると、もっとも良い知的環境にあったのは陸善経であることが分かる。陸善経は、いわゆる「開元の輯書」の直後に集賢殿書院に詰めており、唐代においては空前絶後の善本の集積を前にしていた。彼の拠った『文選』が善本であったこと、彼が別集本も見ていたことは、『文選集注』から推定できる。つまり、くだんの860字は任〓の別集が収める「奏弾劉整」にあり、『文選』はそれを48字に削っていたのであり、陸善経はその双方を見たと考えられるのである。したがって860字を含む唐代の五臣注『文選』や現行の版本『文選』の正文は、別集の痕跡を残していることになる。ここで先述の奇妙な自称について再考すれば、これも、別集や家集の痕跡と見られる。別集・家集は多く子孫が編むため、父祖の名が敬称に置き換えられる。現行の『文選』に別集の痕跡があるのは、おそらくその欠失部分がかつて別集で補われたためと推測される。その痕跡が任〓の作に集中しているのは、任〓が宮中の本を補いうるほどの蔵書家であったこと、彼の死後に子供たちが没落していることと関わるだろう。
パイエル板Ｍ細胞における転写因子Ｓｐｉ－Ｂの標的遺伝子の同定とそれらの機能解析

抗原取り込みに特化していると考えられているM細胞の機能発現メカニズムを明らかにする目的で、M細胞分化に必須である転写因子Spi-Bの標的遺伝子群の同定を行い、最終的に3つの遺伝子を同定した。その中の1つに関して、KOマウスを用いたin vivoにおける抗原取り込み能に関して解析を行った。その結果、このKOマウスでは野生型に比べ、ビーズの取り込み、およびエルシニア菌の取り込みが有意に低下していた。このことから、候補分子1はレセプターを介さないM細胞のTranscytosis能に関わっており、また、エルシニア菌のレセプターとされるβ1インテグリンの発現もしくは活性化に関与していることが予想された。M細胞におけるSpi-B標的遺伝子群の同定を目的とし、当初は申請者らが作製したSpib-GFPマウスのホモ、ヘテロを用いて、GFPを指標としてM細胞を単離する予定であった。しかし、抗GFP抗体を用いた免疫染色ではGFPの発現は確認出来たものの、フローサイトメーターではGFPの発現を確認することが出来ず、このマウスを用いたM細胞の単離は不可能である事が明らかになった。そこで、コンベンショナルなSpiB欠損マウスとコントロールマウスから、パイエル板FAEを実体顕微鏡下で分離し、そこからtotal RNAを調整後、DNAマイクロアレイによる発現解析を行った。得られた数十種類の候補に付いては、定量的RT-PCRでSpiBのターゲットであることを確認し、最終的に3つの新たなM細胞特異的発現遺伝子を同定した。そのうちの1つに関しては、コンベンショナルな欠損マウスと、免疫染色に使用出来る市販抗体が入手可能であったため、実際にその分子が腸管上皮細胞群の中ではM細胞に特異的に発現していることと、SpiB欠損マウスでは発現が完全に消失する事を確認した。現在、欠損マウスのコロニーを広げ、抗原取り込み能に変化があるかどうか、また、変化があった場合は、その分子のM細胞における機能解析を進める予定である。他の2つの分子関しては、すでにコンディショナル欠損マウスの作製を進めており、どちらも変異アレルのGerm-line transmissionが確認されている。これに関しても欠損マウスが得られ次第、同様の解析を進めていく。昨年度までに新たに同定した、3つのSpi-B依存的M細胞特異的発現分子の解析を行った。候補分子1に関しては、コンベンショナルな欠損マウスが入手可能であったため、今年度は欠損マウスのコロニーを広げ、抗原取り込み能に変化があるかどうかを検討した。蛍光標識したマイクロビーズ(直径200 nm)をゾンデで経口投与し、2時間後に十二指腸側のパイエル板内に取り込まれているビーズ数を計測、比較した。計測には連続凍結切片を蛍光顕微鏡下で観察することで行った。その結果、候補遺伝子1の欠損マウスでは野生型に比べ、ビーズの取り込み量が有意に低下していた。このことから、候補分子1はレセプターを介さないM細胞のTranscytosis能に関わっていると予想している。候補分子2、3に関しては、コンディショナル欠損マウスの作製が終わり、コロニーを広げている最中である。候補分子2のコンベンショナルノックアウトマウスも同時に作製したが、このマウスはメンデルの法則に従って生まれ、生殖能も有しており見た目は正常であった。このマウスにおいてもビーズの取り込み能を比較したが有意な差は認められなかった。現在、サルモネラ菌とエルシニア菌をモデルとして、病原体の取り込み実験を計画している。また、Marcksl1発現細胞をM細胞として分取し、FAE中のそれ以外の細胞(Marcksl1を発現しない細胞)と遺伝子発現パターンを比較したところ、さらに2つのM細胞特異的発現分子の候補を得た(候補分子4、5)。これらの分子についても、コンディショナルノックアウトマウスの作製を進めている。粘膜免疫学研究実績の概要で述べたように、当初予定したSpib-GFPマウスを利用することが出来ないというトラブルに見舞われたが、純度は落ちるものの、FAEをサンプルとして用いることで、この問題を回避し、実際に3つの候補遺伝子の同定に成功した。また、解析に必要な遺伝子欠損マウス、抗体に関しても、一つの分子に関しては入手可能であり、ある程度の結果が得られているため。研究実績の概要で述べたように、今年度同定に成功した3つの分子について、M細胞における機能解析を進める。Spib-GFPマウスと同様の手法で作製したMarcksl1-GFPマウス(Marcksl1はM細胞特異的発現分子であるが、その発現はSpiB非依存的である)は、フローサイトメーターでGFPの発現を検出することが可能であり、このマウスのパイエル板上皮細胞から、GFP陽性細胞をMarcksl1発現細胞(=M細胞)として分取した。次年度では、この細胞群の遺伝子発現解析を行い、さらにM細胞特異的発現分子の同定と、その機能解析を並行して進める予定である。
高度生殖医療を受けた妊婦の母親役割獲得を促す看護介入プログラムの開発と実用化

研究目的は、1.高度生殖医療(ART : Artificial Reproductive Treatment)による妊娠をした女性の母親役割獲得過程の予期的段階を円滑に促す看護介入プログラムを考案・開発し、2.開発した看護介入プログラムを実施するための研修を行い、その方法が習得できるように工夫して実施し、その評価を行うことである。そして、3.上記の研修を受けた看護職者とART治療後妊娠の妊婦について、看護介入場面と妊娠期の母親役割獲得状況を把握し、開発した看護介入プログラムの効果を検証し、それにより、有効な看護介入プログラムとして提示することである。そこで、以下の4つの研究を行う。【研究1】看護介入プログラムの開発のための基礎的研究、【研究2】開発した看護介入プログラムを展開するための看護研修の実施とその評価研究、【研究3】本看護介入プログラムの効果を実証する研究、【研究4】本看護介入プログラムの改良と実用化に関する研究である。高度生殖医療による妊娠をした女性の母親役割獲得過程の予期的段階を円滑に促す看護介入プログラムを考案し、開発するための基礎的研究である【研究1】に森が主担当となり全員で取り組んだ。学会における情報収集を得て、国内外の文献検討結果と森らの先行研究成果に基づき、看護介入プログラムの枠組みを検討したのち、高度生殖医療を受けて妊娠した女性に適応した先駆性の高い、妊娠期に行う看護介入プロラム(看護介入の目標:不妊経験や不妊治療経験を肯定的に認知し、不妊である自己の膨張を防ぎ、母親としての自己の形成を促す)を考案し、具体的内容や実施手順の記述等を検討した。妊娠初期・胎動初覚前、胎動初覚後の妊娠中期、妊娠末期にわけて具体的内容を整理し、妊婦ポートフォリオを使用した介入方法を作成した。さらに、日本全国の不妊看護専門家(不妊看護認定看護師等)4名に、この【研究1】で考案した看護介入プログラムを提示・説明して、内容の妥当性等について意見を聴取(専門家会議の開催)し、妥当性と臨床応用性を確保し、看護介入プログラムの最終案を作成した。この成果、看護介入プログラムを平成21年6月20日に開催される、第11回日本母性看護学学術集会の交流集会で発表する。さらに、【研究2】開発した看護介入プログラムを展開するための看護研修の実施とその評価研究と【研究3】本看護介入プログラムの効果を実証する研究の2つの研究計画立案のために、文献収集と文献検討を行った。本年度は【研究2】開発した看護介入プログラムを展開するための看護研修の実施とその評価研究と【研究3】本看護介入プログラムの効果を実証する研究へと、以下のように順次進めた。1.本看護介入プログラムの充実【研究1】により作成された看護介入プログラムの具体的内容を記述し、妊婦用ポートフォーリオを作成して、看護研修に向けて準備した。2.研究協力者兼研究対象者についての依頼倫理審査委員会で承認を受けた後、不妊看護や母性看護関連の看護系学会等を通じて、不妊看護専門家、助産師に対して、【研究2】についての研修に参加することや、【研究3】についての研究協力者兼研究対象者となること、並びに【研究4】については研究対象者となることを文書並びに口頭、もしくは郵送で依頼した。また、【研究2】の研究対象者であり、【研3】の研究協力者兼研究対象者の候補者になる人について紹介を依頼した。その結果、看護研修会参加者、【研究2】の研究対象者を11名の承諾を得た。3.看護介入プログラム展開のための看護研修の企画と【研究2】の計画立案・実施看護研修会の計画通り、2回1クールで、2グループで実施した。そして、アンケート、フォーカスインタビューにより研究データを得ることができた。結局、2回とも参加できた研究対象者は9名であり、そのデータを分析中である。4.本看護介入プログラムの効果を実証する研究【研究3】の依頼【研究3】について依頼し、3つの研究協力施設の承諾を得た。これらの施設に勤務している、看護研修会を終了した研究協力者に、研究データ収集手順について説明した。【研究1】の看護介入プログラムの開発のための基礎的研究は、日本母性看護学会誌に原著論文として投稿し、受理された。【研究2】の開発した看護介入プログラムを展開するための看護研修会は今年度も2回1クールで行い、合計3クールにおいてデータ収集をした。研究対象者は合計で12名の看護師、助産師であった。ビジュアルアナログスケールの結果では「看護介入プログラムの概要は理解できた」「看護介入を実践する上でMPの使い方が理解できた」に1回目と2回目では有意差がみられた。フォーカスグループインタビューにおいては、「複数回ロールプレイを行ったことで不妊治療後妊婦の心理面に対する理解がより深まった」

「不妊治療後妊婦への看護の必要性がさらに理解できた」「研修会の合間の練習で理解したつもりだったが、2回目の研修会で十分に実践できていないことに気づいた」等があった。これらの結果よりロールプレイを行い体験的に技術や知識を習得し、2回の研修会の間に介入プログラムを実践し技術の質を高める内容が効果的であったと考える。この看護研修の評価研究は第30回日本看護科学学会学術集会に発表した。質的データをKJ法にて分析し投稿準備中である。【研究3】の本看護介入プログラムの効果を実証する研究は、対照群44名からデータ収集をすることができ、開発した看護介入プログラムに基づく看護を提供する看護介入群については15名の妊娠中期(第2回目)研究データ収集が終了している。対照群、介入群のデータ収集できた研究データのコーディングとデータ分析を行っている。
胸腺における甲状腺刺激ホルモン受容体の発現に関する研究

私達は、バセドウ病患者において有意な胸腺の腫大が認められ、抗甲状腺剤による治療により胸腺が著明に縮小することを明らかにし、ヒト胸腺に甲状腺刺激ホルモン(TSH)受容体が存在することを見出した。本研究においては、バセドウ病患者における胸腺腫大ならびに抗甲状腺剤の治療による胸腺の縮小の機序の解明、胸腺における甲状腺ホルモンの作用機構の解明、胸腺におけるTSH受容体の局在と機能ならびに調節機構の解明を目的とする。成長段階における胸腺のTSH受容体の発現の変化をラットを用いて検討したところ、5日齢の幼若ラットで既にその発現が確認され、成熟ラットにおいても発現が認められた。また、ラット胸腺上皮細胞の初代培養を行い検討したところ、RT-PCRにより胸腺上皮細胞にTSH受容体の発現が確認された。さらに、胸腺上皮細胞をTSHで刺激したところcAMPの増加反応が認められた。これらの結果より、胸腺上皮細胞に機能的なTSH受容体が発現していることが明らかとなり、T細胞の選択におけるTSH受容体の役割が推測された。次に、バセドウ病患者における胸腺腫大が抗甲状腺剤による治療により縮小する機序を検討する目的で、ラットに甲状腺摘除あるいは抗甲状腺剤投与を行ったところ、何れのラットにおいても対照に比し有意な胸腺の縮小を認め、胸腺組織におけるアポトーシス細胞の増加傾向を認めた。これらの結果より、バセドウ患者における治療後の胸腺の縮小に抗甲状腺剤による甲状腺ホルモンの低下を介する胸腺細胞のアポトーシスの亢進が関与していることが推測された。甲状腺ホルモンの作用の発現には甲状腺から分泌されたT_4が活性型のT_3に変換される必要があり、その活性化にII型甲状腺ホルモン脱ヨード酵素(DII)が関与するが、近年ラット胸腺にDIIが存在することが報告された。今回の私達の検討によりバセドウ病患者の胸腺組織にDIIの発現が認められ、ヒト胸腺における甲状腺ホルモンの作用発現にDII関与していることが示唆された。私達は、ヒトDII遺伝子の発現調節機構の解明を目的としてヒトDII遺伝子のクローニングを試み、DII遺伝子の全長をクローニングすることに成功した。私達は、DII遺伝子の染色体位置を同定し、DII遺伝子のプロモーター領域の解析を行いその発現調節機構を解明した。私達は,バセドウ病患者において,有意な胸腺の腫大が認められ,抗甲状腺剤による治療により胸腺が著名に縮小することをCTを用いて明らかにし,ヒト胸腺にTSH受容体が存在することを見出した。T細胞の成熟に重要な胸腺にTSH受容体が存在する事実は,TSH受容体に対する自己抗体がその病因であるバセドウ病の病態への関与を示唆するものと考えられる。本研究においては,胸腺におけるTSH受容体の局在と機能,成長段階における発現の変化,ならびに調節機構を解明することを目的とする。まず,ラットを各週齢に分け,TSH受容体mRNAの発現をRT-PCRびより検討した。その結果,5日齢の幼若ラットで既にその発現が確認された。

また,ラット胸腺におけるTSH受容体の局在を明らかにする目的で,胸腺上皮細胞の初代培養を行い検討したところで,RT-PCRによりTSH受容体の発現が確認された。この結果より,胸腺上皮細胞にTSH受容体が発現していることが明らかとなり,T細胞の選択におけるTSH受容体の役割が推測された。次に,バセドウ病患者における胸腺腫大が,抗甲状腺剤による治療により縮小する機序を検討する目的で,ラットに甲状腺摘除あるいは抗甲状腺剤投与を行い,胸腺の変化を検討したところ,どちらのラットにおいても対照に比し有意な胸腺の縮小を認め,胸腺組織におけるアポトーシス細胞の増加傾向を認めた。この結果より,バセドウ患者における治療による胸腺の縮小に抗甲状腺剤による甲状腺ホルモンの低下による胸腺細胞のアポトーシスの亢進が関与していることが推測された。更にその機序を検討する目的で,現在,種々の因子による胸腺細胞のアポトーシスにおよぼす甲状腺ホルモンの抑制効果の有無について検討を行っている。さらに,TSH受容体cDNAをプローブとしてヒト胸腺cDNAライブラリーのスクリーニングを行っている。私達は,バセドウ病患者において,有意な胸腺の腫大が認められ,抗甲状腺剤による治療により胸腺が著明に縮小することをCTを用いて明らかにし,ヒト胸腺にTSH受容体が存在することを見出した。本研究においては,バセドウ病患者における胸腺腫大ならびに治療による縮小の機序の解明,胸腺におけるTSH受容体の局在と機能ならびに調節機構を解明することを目的とする。ラットにおけるTSH受容体mRNAの発現を胸腺上皮細胞の初代培養を行いRT-PCRを用いて検討したところ,胸腺上皮細胞にTSH受容体の発現が確認され,T細胞の選択におけるTSH受容体の役割が推測された。また,バセドウ病患者における胸腺腫大が抗甲状腺剤による治療により縮小する機序を解明する目的で,甲状腺機能低下ラットにおける胸腺の変化を検討したところ,胸腺の有意な縮小を認め,胸腺組織におけるアポトーシス細胞の増加傾向を認めた。さらに,培養胸腺細胞を用いて検討したところ,甲状腺ホルモンによる胸腺細胞のアポトーシスの抑制傾向が認められた。これらの結果より,バセドウ患者の治療中にみられる胸腺の縮小に甲状腺ホルモンの低下による胸腺細胞のアポトーシスの亢進が関与していることが推測された。甲状腺ホルモンの作用の発現には甲状腺から分泌されたT4が活性型のT3に変換される必要がり,その活性化にII型甲状腺ホルモン脱ヨード酵素(DII)が関与するが,近年ラット胸腺にDIIが存在することが報告され,その胸腺における役割が注目されている。ヒト胸腺における甲状腺ホルモン作用の解析には胸腺におけるDIIの発現の解析が必須であり,私達はヒトDII遺伝子のクローニングを試みた。その結果,ヒトgenomic libraryのスクリーニングにより,DII遺伝子の全長をクローニングすることに成功し,その染色体位置を同定した。現在,DII遺伝子の胸腺における発現ならびにその転写調節領域の解析を行っている。私達は,バセドウ病患者において有意な胸腺の腫大が認められ,抗甲状腺剤による治療により胸腺が著明に縮小することをCTを用いて明らかにし,ヒト胸腺に甲状腺刺激ホルモン(TSH)受容体が存在することを見出した。本研究においては,バセドウ病患者における胸腺腫大ならびに治療による縮小の機序の解明,胸腺におけるTSH受容体の局在と機能を解明することを目的とする。ラット胸腺
ストレスが顎関節に与える影響について

本研究は,顎関節において咬合圧に抵抗し,顎運動を円滑に行わせるように機能しているといわれているグリコサミノグリカンおよび機械的刺激に抵抗するコラーゲン線維が,精神的ストレスの過程でどのような変化を示すかについて検索し,その変化が顎関節の組織構築にどのような影響をもたらすかについて考察を加えたものである。また一般的にストレスに対してカルシウムの摂取が各種ストレス疾患に効果があると言われているが,顎関節症に対する効果はさだかでない。こういった点についても検討した。平成5年度ではSDラットに拘束ストレスを与え,顎関節の組織学的変化を生化学的ならびに免疫組織学的に検索した。その結果,正常群のラット顎関節の細胞外マトリックスの基本的な動態は,1)関節円板,下顎頭表層および骨組織にI型コラーゲンがみられ、軟骨部ではII型コラーゲンがみられた。2)コラーゲン量は加齢にともなって増加した。3)下顎頭表層にデルマタン硫酸が,下層にコンドロイチン硫酸とケラタン硫酸が多くみられた。4)加齢にともなってヒアルロン酸とコンドロイチン硫酸が減少し,デルマタン硫酸とケラタン硫酸が増加した。これに対して,拘束ストレスラットは,正常ラットに比べ基本的な細胞外マトリックスの構成はほぼ同じであったが,コラーゲン線維の微増とグリコサミノグリカンの全体量が減少していた。特に関節円板と下顎頭表層における質的変化が明らかに認められた。平成6年度では,拘束ストレスラットにカルシウムを過剰投与した場合の顎関節の組織学的変化を生化学的ならびに免疫組織学的に検索した。その結果,全ての検索法で拘束ストレス群とほとんど同様の結果がえられ,本実験では,カルシウム投与によるに特質すべき影響が観察されなかった。精神的ストレスが顎関節に悪影響を及ぼすことは古くから言われているが、それを証明した研究や作用機序についての報告はほとんどなく、特にストレスと顎関節構成成分の大部分を占めるコラーゲン線維やグリコサミノグリカンとの関係については、全く解明されていない。これらの構成成分は顎関節において機械的刺激に抵抗させ、顎運動をスムーズに行わせる重要な働きをする。平成5年度ではSDラットに拘束ストレスを与え、顎関節の組織学的変化を生化学的ならびに免疫組織学的に検索してきた。その結果、ラット顎関節の細胞外マトリックスの基本的な構成は、1.関節円板、下顎頭表層および骨組織にI型コラーゲンがみられ、軟骨部ではII型コラーゲンがみられた。2.コラーゲン量は加齢にともなって増加した。3.下顎頭表層にデルマタン硫酸が、下層にコンドロイチン硫酸とケラタン硫酸が多くみられた。4.加齢にともなってヒアルロン酸とコンドロイチン硫酸が減少し、デルマタン硫酸とケラタン硫酸が増加した。拘束ストレスラットは、正常ラットに比べ、基本的な細胞外マトリックスの構成はほぼ同じであったが、コラーゲン線維とグリコサミノグリカンの全体量が減少していた。これらの変化は、拘束ストレスが顎関節に緊張を発生させ、異常な機械的刺激となって顎関節に伝わり、細胞外マトリックスの破壊に発展した結果によると考えられる。またその破壊は、機械的刺激が集中する関節円板や下顎頭表層に強くあらわれていると考えられる。ただし、拘束ストレスラット群の体重が正常ラット群に比べ510%減少していた。ただし、拘束ストレスによって生じたものか、あるいは、拘束時間が長いために飼料の摂取時間が短いことによるものなのか、今後検討を要する。

精神的ストレスに対する顎関節細胞外基質の動態を知る目的で10週齢のラットに拘束ストレスを与えたものと拘束ストレスをあたえながらカルシウムの過剰投与を行ったものを比較しながら顎関節グリコサミノグリカンおよびコラーゲンの局在を組織化学的および免疫組織化学的に観察するとともに,生化学的にも分析を行った.その結果,両実験群におけるラット顎関節の細胞外マトリックスの基本的な構成は,1)関節円板,下顎頭表層および骨組織にI型コラーゲンがみられ,軟骨部ではII型コラーゲンがみられた.2)コラーゲン量は加齢にともなって増加した.3)下顎頭表層にデルマタン硫酸が,下層にコンドロイチン硫酸とケラタン硫酸が多くみられた.4)加齢にともなってヒアルロン酸とコンドロイチン硫酸が減少し,デルマタン硫酸とケラタン硫酸が増加した.拘束ストレス群およびカルシウム投与ストレス群の間には特に相違はなく,正常群と比べても基本的な細胞外基質の構成はほぼ同じであったが,コラーゲン線維の微増とグリコサミノグリカンの全体量が減少した.特に関節円板と下顎頭表層における質的変化が明らかに認められた.これらの変化は,拘束ストレスが顎関節に緊張を発生させ,異常な機械的刺激となって顎関節に伝わり,細胞外基質の構造変化に発展した結果によると考えられる.また,カルシウム投与によって,精神的ストレスの諸症状が緩和するという報告があるが,この点について本研究では,拘束ストレスに対する細胞間基質の変化の検索を行ったが,ストレス授与時、カルシウムを与えたグループとそうでないグループに組織学的改善に差は認められなかった.
その場測定法を用いた電極表面のＯＨ吸着機構解明およびその電極触媒開発への応用

今年度は研究領域を拡大させ、燃料電池に加えてLi-空気電池の電極特性へのOH種の影響を検討した。燃料電池関連の検討では、システムの実用化を考慮し、空気極に大気を、燃料極にアンモニア分解によって得られた水素を供給するアニオン交換膜形燃料電池システムを検討した。In situでの表面増強効果を用いた赤外分光測定により、CO2存在下ではPt触媒表面上に被毒種となるCO関連種が生成し、性能低下を引き起こしていることが明らかとなった。興味深いことに、微量のNH3とCO2が共存する場合には、Pt触媒表面上へのCO関連種の生成が抑制された。これは、NH3共存下で炭酸種(吸着HCO3種)の電極表面上における吸着CO種と吸着OH種への解離反応が抑制されたためである。CO2による性能低下は、アニオン交換膜形燃料電池の大きな課題であるが、NH3分解反応によって生じた水素(微量のNH3を含む水素)を燃料として利用することで、これらの課題を解決できることが明らかとなった。Li-空気電池の検討では、電荷移動過程を促進することが知られているLiIをレドックス媒体として利用したシステムについて検討した。その放電時の機構を、種々の測定により評価した結果、生成するLi2O2のモルフォロジーに加えて、系中への水の含有量が反応過程に大きく影響することが示唆された。具体的には、LiIを添加することで系中の水分子のOH結合特性が変化し、水の脱プロトン化反応を促進することによってLiOHの生成が優位になる。また、系中の水:LiI存在比を上昇させると水の酸性度が低下し、主生成物がLiOHからLi2O2、LiOOH水和物、LiOH水和物からなる混合物へと変化した。これらの結果から、電解質中の水分子のOH結合特性が、系中で進行する(電気)化学プロセス、さらにはLi空気電池特性に大きな影響を与えていることが明らかになった。29年度が最終年度であるため、記入しない。電極反応過程にOHが関与する反応として、Pt上でのアンモニア酸化反応がある。そこで、アンモニア酸化反応を用いて、反応活性種であるOH吸着種が電極活性に与える影響の解明を試みた。反応活性種となるOH種の供給を促進するため、表面に豊富なOH種が存在していることが知られているCeO2に着目し、そのPt電極上への添加による効果を検討した。CeO2修飾Pt電極においてCeO2上に存在するOH種、さらにPt上に吸脱着するOH種の2つのOHの存在が確認された。また、CeO2修飾Pt電極において、Pt上へのOH吸着が促進されていることが明らかとなった。さらなる検討の結果、Pt上に修飾したCeO2上のOH基が、電解質中のOHイオンや水と相互作用することによって、電極近傍のOHイオン存在量が増加していることが示唆された。これらのCeO2修飾Pt電極上でアンモニア酸化反応を行ったところ、その活性は従来比で30%ほど向上した。これより、酸化物表面上に存在するOH基と溶液中のOHイオン、水との相互作用が、電極上で進行する電気化学反応活性に影響を与えることが明らかとなった。塩基性条件下でのアルコール酸化反応にもOH種が関与する。しかしながら、その反応機構の詳細が解明されているのは一部のアルコールに限られる。今後OH種の吸着を制御しこれらの反応に応用するためには、目的反応の機構解明も重要である。そこで、アルコールとして2ープロパノールに着目し、Pt上での酸化反応機構の解明も試みた。その結果、初期活性が高いPt電極上では、生成したアセトンがOH種との触媒的な反応を経てエノラート吸着種へと変換され、そのエノラート吸着種が電極被毒種となることが示唆された。今後OH種の吸着量を制御することによって、Pt上でのエノラート吸着種生成を抑制できれば、2ープロパノールの燃料適応性の大幅な向上が期待される。酸化物添加系の電極触媒については、今年度目標としていた項目をおおむね達成できた。具体的には、酸化物添加触媒において、表面OH基が電極表面近傍のOH、水の構造に与える影響を明らかにした。さらにこれらの構造変化が電極上で進行する酸化反応活性にも影響を与えることを示し、触媒設計への応用も可能となりつつある。

その放電時の機構を、種々の測定により評価した結果、生成するLi2O2のモルフォロジーに加えて、系中への水の含有量が反応過程に大きく影響することが示唆された。具体的には、LiIを添加することで系中の水分子のOH結合特性が変化し、水の脱プロトン化反応を促進することによってLiOHの生成が優位になる。また、系中の水:LiI存在比を上昇させると水の酸性度が低下し、主生成物がLiOHからLi2O2、LiOOH水和物、LiOH水和物からなる混合物へと変化した。これらの結果から、電解質中の水分子のOH結合特性が、系中で進行する(電気)化学プロセス、さらにはLi空気電池特性に大きな影響を与えていることが明らかになった。今後は適用電極反応の範囲を広げる。また、in situ赤外分光測定に加えて、その他のin situ測定法を組み合わせることで、電極上へのOH吸着機構に関してさらなる知見を得る。また、同位体等を用いた測定により、赤外分光測定で得られたピークの帰属をより強固なものとし、今後の分析へと応用する。29年度が最終年度であるため、記入しない。
海外取材放送ライブラリーを使用した簡易型CALL教材の開発

本研究の目的は,新規にCALL教材作成システム(オーサリングシステム)を開発し,ビデオライブラリー等の素材を使用した比較的低予算の簡易型CALL教材を開発することが可能な体制を整えることである。まず,英語学習者についての実態調査の後,指導理論としては過去の特定領域研究等で高い効果をあげている三ラウンド・システムを採用することにした。教材作成システム(オーサリング・システム)については,学習者がブラウザを使用し,CD-ROMやインターネット上の教材で学習できるような仕様を策定した。仕様に基づき,動画と静止画を特定のフォルダに保存し,テキスト情報,学習のフロー等をExcelで記述し,極めて簡単な変換作業を行うことによりXML形式の教材が瞬時に作成できるシステムが完成した。過去の研究で開発したCALL教材と比較して,学習履歴の自動制御等の機能が省略されてはいるが,本研究により特殊な技術を使用せずに簡易型CALL教材の開発をすることが可能になった。次に,教材作成システムの動作検証のため,実際に教材開発を行った。素材として既存の海外取材ビデオを視野に入れながらも,本研究では,まず留学生の学業や生活についてのビデオを収録してコースウェアの開発に活用することを優先した。今回の研究成果を活用することによって将来的に多種の海外取材放送ビデオライブラリー等を使用した簡易型CALL教材の開発が可能となるはずである。今回のコースウェア開発では,素材の内容,難易度,長さ等に留意して使用箇所を厳選し,6ユニット28パートに分け,三ラウンド・システムに基づいた各種情報(タスク,ヒント,解答,解説,スクリプト等)を作成し,編集した動画,静止画とともにソフトウェア化した。開発教材を試用した学生にアンケート調査を行ったところ,高い評価が得られた。本研究の目的は,新規にオーサリングシステムを開発し,ビデオライブラリーの素材を使用した比較的低予算の簡易型CALL教材を開発することである。まず英語学習者についての実態調査の後,指導理論としては過去の特定領域研究等で効果をあげている三ラウンド・システムを採用することにした。次に素材として使用するビデオライブラリーの候補としては(1)本研究で撮影した留学生の学業や生活についてのビデオ,(2)他の研究で取材した米国の日常生活についてのビデオ,(3)国際交流を扱った既存のビデオ,の3種を選定した。(1)と(2)については使用の許可が得られ,(3)については使用権の交渉を進めている。本研究では,まず(1)について先行してコースウェアを開発し,同時にオーサリングシステムの開発をすることとし,その研究成果を活用することによって将来的に(2)と(3)も含めた多種の簡易型CALL教材の開発が可能となる。オーサリングシステムについては,学習者がブラウザを使用し,CD-ROMやインターネット上の教材で学習できるような仕様を策定した。システムの開発は業者に委託したが,動画と静止画を特定のフォルダに保存し,テキスト情報,学習のフロー等をExcelで記述し,極めて簡単な変換作業を行うことによりXML形式の教材が瞬時に作成できるシステムが完成した。コースウェア開発については,上記(1)の素材の内容,難易度,長さ等に留意して使用箇所を厳選し,6ユニット28パートに分け,三ラウンド・システムに基づいた各種情報(タスク,ヒント,解答,解説,スクリプト等)を作成し,編集した動画,静止画とともにソフトウェア化した。まず,英語学習者についての実態調査の後,指導理論としては過去の特定領域研究等で効果をあげている三ラウンド・システムを採用することにした。

教材作成システムについては,学習者がブラウザを使用し,CD-ROMやインターネット上の教材で学習できるような仕様を策定した。仕様に基づき,動画と静止画を特定のフォルダに保存し,テキスト情報,学習のフロー等をExcelで記述し,極めて簡単な変換作業を行うことによりXML形式の教材が瞬時に作成できるシステムが完成した。過去の研究で開発したCALL教材と比較して,学習履歴の自動制御等の機能が省略されてはいるが,本研究により特殊な技術を使用せずに簡易型CALL教材の開発をすることが可能になった。次に,教材作成システムの動作検証のため,実際に教材開発を行った。素材として既存の海外取材ビデオを視野に入れながらも,まずは本研究で留学生の学業や生活についてのビデオを収録してコースウェアの開発に活用することを優先した。今回の研究成果を活用することによって将来的に多種の海外取材放送ビデオライブラリー等を使用した簡易型CALL教材の開発が可能となるはずである。今回のコースウェア開発では,素材の内容,難易度,長さ等に留意して使用箇所を厳選し,6ユニット28パートに分け,三ラウンド・システムに基づいた各種情報(タスク,ヒント,解答,解説,スクリプト等)を作成し,編集した動画,静止画とともにソフトウェア化した。今年度は開発した教材の学生による試用とアンケート調査を行い,高い評価が得られた.その成果について学会で研究発表し,また開発したコースウェアの一部も含めて研究成果報告書を作成した。
弱視症例の網膜断層像形態と微小視野および多局所網膜電図による局所機能の比較研究

弱視眼は健常眼に比較して中心部の網膜感度が低く、固視微動が大きかった。また、弱視眼の機能は治療により視力良好になっても健常眼より劣っていた。不同視弱視では弱視眼の方が網膜の中心厚が薄く、網膜体積当たりの網膜電位が小さい傾向があることから、弱視眼では健常眼より視細胞の密度が小さい可能性が示唆された。そして、網膜電位と網膜感度に正の相関を認めたことから、視細胞の密度またはその活動性が、視機能に影響していると考えられた。正常であるとされる弱視眼の網膜に着目し、視力と固視、網膜画像検査、微小視野計および多局所網膜電図を比較検討し、網膜機能と形態変化について横断的に評価し、網膜局所反応と機能との相関の研究を進めている。平成21年度は研究計画にのっとった観察研究を、福島県立医科大学附属病院眼科外来に通院中の8例の片眼弱視または弱視の既往のある被検者に施行した。8例はすべて不同視弱視であり0その目標症例数を超えた。しかし、斜視弱視の被検者を得られなかった。その要因は斜視弱視例の固視が不安定のため、検査結果の信頼性に影響すると考えられたためであった。弱視眼の矯正視力は0.6から1.2であった。弱視眼でも固視不良例はなかったが、既報で固視微動や眼振が多局所網膜電図の結果に影響するとされているため、Mayo社製VERIS juniorをもちいた黄斑部多局所網膜電位記録のプログラムはその影響を受けにくい個々の刺激範囲の広いものを用い、また、Nidek社製Micro Perimeterでの微小視野検査には、多局所網膜電図に対応した測定点をプログラムし使用した。Carl ZeizzMeditec社製光干渉網膜断層計シラスHD-OCTでは、屈折による形態差を考慮し、黄斑部のみでなく視神経乳頭周囲の網膜厚の測定も行った。しかし、これまでの症例により、既報で指摘されている網膜厚の屈折度との相関を認めたが、網膜断層像での中心窩陥凹に明らかな形態異常を認めていない。多局所網膜電図では健常眼に比較し弱視眼で最大電位は低かった。測定点での各々の網膜層構造の厚みと微小視野での感度および網膜電位の相関について比較検討を進めている。研究計画の通り、平成21年度に研究発表は行わなかった。症例数を増加させ22年度にその成果を公表する予定である。正常であるとされる弱視眼の網膜に着目し、視力と固視、網膜画像検査、微小視野計および多局所網膜電図を比較検討し、網膜機能と形態変化について横断的に評価し、網膜局所反応と機能との相関の研究を行った。平成22年度は前年度に引き続き研究計画にのっとった観察研究を、弱視群は不同視弱視20例、屈折異常弱視5例、斜視弱視2例と形態覚遮断弱視5例の計32例、対象群は6例に施行した。本研究の対象である弱視のスクリーニングとして行われる3歳児健診の全受診児(10,454人)の屈折値をThe 25th Asia-Pacific Academy of Ophthalmology Congressで発表し、要精査児(104例)の視力と自然瞳孔および調節麻庫下の屈折値との相関を検討し、スクリーニングにおける自然瞳孔屈折検査は視力不良例の屈折異常の検出に有用であることを眼科臨床医報で報告した。本研究においては、不同視弱視例の脈絡膜厚を、光干渉断層計を用いて測定し、治療歴のある視力不良例の弱視眼の脈絡膜が厚いことを第85回福島眼科集談会で報告した。弱視眼の脈絡膜厚についての報告はまだなく、視力が発達しにくい先天的器質異常を反映している可能性を示唆する新知見である。二つ目に、肉眼的には中心固視安定とみられる弱視眼に固視動揺が残存するのかを微小視野計での固視検査を用いて検討し、良好な視力が獲得された弱視既往眼でも健常眼に比較すると固視微動が大きいことが確認された。本内容はThe 26th Asia-Pacific Academy of Ophthalmology Congressで発表予定であったが、直前におきた震災のため取り下げとした。また、視力予後良好であった不同視弱視の黄斑形態と機能評価について第115回日本眼科学会総会での発表を予定している。本研究成果についての学会発表と論文投稿を順次進めている。
大腸菌光回復酵素遺伝子の構造と酵素の機能

大腸菌光回復酵素は、分子量約5万の蛋白質で、254nm紫外線で形成されるDNAの損傷、シクロブタン型ピリミジン二量体(二量体)、に特異的に結合する。光吸収体としてフラビンを持つため、380nm波長光を吸収し、二量体を単量体へと修復する。光回復酵素には従って、二量体結合部位と、光吸収体結合部位の少くとも2つの活性中心が存在すると考えられる。本研究は、12塩基対リンカー挿入による部位特異的突然変異誘発によって作成した変異光回復遺伝子の解析によって、各活性中心の位置を知り、そのことで、光受容の仕組みを理解しようとするものである。遺伝子の22ヶ所に、1.2塩基対HindIIIリンカーを挿入することに成功した。挿入位置は、HindIII及び他の制限酵素との二重、三重消化によって決定した。各変異プラスミドが作る酵素の生物活性をinvivoで調べた所、14株は、リンカー挿入を持たない正常プラスミドと等しい活性を示した。活性中心と無関係の位置にリンカーが挿入された結果、正常でない蛋白質が作られるが、酵素作用としては正常となっている考えられる。この14株については、これ以上の解析は行っていない。残りの8株をリンカー挿入位置と変異酵素の特性より、3つのグループに分類した。C末端に近い部分の100塩基対の間隔にリンカーが挿入された4株は、全く同程度に光回復活性の欠損を示した。二重体結合能に欠損があると考えると都合のよい変異体である。N端に近い部分に挿入のある1株は、二量体結合能は正常だが、光吸収体結合能の変異と考えられる変異株であった。残り3株は、N端に近い部分に挿入があり、よく似た特質を持つ変異株であった。各グループから代表的なプラスミドを選び、それぞれが作る変異酵素を抽出精製し、in vitroでの特性を明らかにすべく研究が進行中である。
日本語学習者の語彙力向上のための連語指導の開発とその方法

連語はその性質上、習慣的、形式的なつながりが強く、学習者の記憶におうところが大きい。そのような連語を定着させる方法を開発するのがこの研究の目的である。平成6年度はまず、初級から中級にかけて必要だと思われる、主に「名詞+動詞」からなる連語を主要日本語教科書、外国人のための日本語辞書などから約1000収集した。そして、それを日常生活、学習などの分野別にリストアップするとともに、学習者の定着をはかるために、ドリルやイラストをふんだんに利用した初・中級用の連語のテキストを作成した。ところで、次の問題を考えてみたい。問題「なおす」が「なおる」になるものを選びなさい。(1)病気を--(2)機嫌を--(3)パンクを--(4)ドルを円に--通常であれば、自然現象としての(1)(2)は、「なおる」ものだという認知性が働き、(3)(4)は人為的な作用による現象だという認知性が働く。しかし、言語的な区分では、直さなければならない(3)の「パンクを直す」までが、「直る」に置換され、「ドルを円に直す」は、「直る」に置換されえない。このように認知的に自然であろう区分と言語的な区分とは、往々にして、一致するものではない。極言すれば、述語の一つ一つが、それぞれ固有の振る舞いを見せると言っても過言ではない。この視点に立ったとき、ことばとことばのつながりを組織的に眺めていく必要があった。そこで、平成7年度は、「名詞+動詞」型連語を『15万例文成句現代国語用例辞典』と『基本動詞用例辞典』から393語の基本和語動詞を中心に集め、動詞が本義として用いられる場合と連語として用いられる場合のずれを格関係の面から明らかにするために第一次資料(本義連語編)を作成した。次に、第一次資料を基に、コンピュータを駆使して、連語を《処世》《移動》などの意味別、分野別に分類し、連語のシソ-ラスの作成を試みた。その意味では、この第二次資料(意味編)は簡易版連語類語辞典でもあり、自学自習用教材支援ソフトの資料集の作成も不可欠であると考えて、これを添付することにした。平成6年度に行った研究による成果1.初級レベルの連語の整理「名詞+動詞」からなる連語を中心に、5種類の初級日本語教科書と辞書などから、日常よく使用される連語を収集し、項目別に分類した。そして、日本語学習者がそれらを習得しやすいように整理し、教材を作成した。学習者の誤用をなくすために、英語、中国語、韓国語、タイ語のネイティブスピーカーと対面調査し、他言語との連語上の相違を示して、その結果を教材作成に組み入れた。また、言語で説明しにくいものには、随時専門家によるイラストを加えることによりビジュアルな面からも学習者の便宜を図った。2.連語をなす語と語の共起関係を明らかにするコンピューターを用いて、新聞や国語辞書から連語を収集し、そのうち、「名詞+(を)+する」からなる初級レベルの連語で、「する」が他の動詞と交換可能なものを選び出した。そのデータを利用して以下の2点について考察した。

(1)どのような性質の名詞がどのような性質の動詞と共起するのかを明らかにしてきた。(2)同じ名詞が「する」と共起する場合とほかの動詞と共起する場合での、連語性の程度を調べ、最終的には、結合の程度が何に由来しているのかを明らかにしつつある。従来の連語研究は、一定の項を先見的に要求支配する述語と格の枠組みの体制に比重が多くかかっていた。しかし、言語は認知意味論的なレベルと必ずしも合致するものでもない。特に連語はその性質上、形式的つながりが強く、日本語学習者の記憶におうところが大きい領域である。例えば、次の問題を考えてみたい。(問題)「なおす」が「なおる」になるものを選びなさい。(1)病気-(2)機嫌を-(3)パンクを-(4)ドルを円に-通常であれば、自然現象としての(1)(2)は、「なおる」ものだという認知性が働き、(3)(4)は人為的な作用による現象だという認知性が働く。そのために、(1)(2)と(3)(4)との間に、認知的な区分が生じていると見るのが自然であろう。しかし、言語的な区分では、直さなければならない(3)「パンクを直す」までが、「直る」に置換され、「ドルを円に直す」は、「直る」に置換されえない。つまり、認知的に自然であろう区分と言語的な区分とは、往々にして、一致するものではない。極言すれば、述語の一つ一つが、それぞれ固有の振る舞いを見せると言っても過言ではない。この視点に立ったとき、ことばとことばのつながりを組織的に眺めていく必要があった。本研究では、「名詞+動詞」型連語を『15万例文成句現代国語用例辞典』と『基本動詞用例辞典』から基本動詞を中心に集め、本義として用いられる場合を連語として用いられる場合のずれを格体制の面から明らかにするために第一次資料を作成した。次に、第一次資料を基に、コンピュータを駆使して、連語を≪処世≫≪移動≫などの意味別、分野別に分類し、連語のシソ-ラスの作成を試みた。その意味では、第二次資料は簡易版連語類語辞典でもあり、自学自習用教材支援ソフトの作成も不可欠であると考えて、これを添付することにした。