hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
TGF-βシグナルを制御するユビキチンリガーゼの異常と癌のメカニズムに関する研究

配列Smurf1(5'-AAGAACCUUGCAAAGAAAGA),Arkadia(5'-AAGUGGGGAAUGAAUUCUCUC)を含むTetオペレーターをもつ誘導型siRNAベクターpSUPERIOR(Oligo Engine)を遺伝子導入し、テトラサイクリン添加によるRNAi発現細胞株を作製した。次年度は作製したベクターおよび細胞株を用い、詳細なプロモーター解析を行う予定である。TGF-βは多くの細胞の増殖を抑制することから、癌抑制因子として知られている。一方で細胞外マトリックスの蓄積や血管新生、免疫抑制などを引き起こすことから、癌化を促進する因子としても注目されている。抑制型SmadであるSmad7,および、そのユビキチンリガーゼであるSmurf1,Smurf2,Arkadiaの転写調節と蛋白発現調節を調べるため研究をおこない、以下の結果を得た。ユビキチンリガーゼであるSmurf1、Smurf2、Arkadiaの詳細な転写解析をおこなうため、それぞれのプロモーターをGFPベクター(緑)に組み込み、リポフェクタミンにより各種癌細胞に遺伝子導入をおこなった。GFPベクターはユビキチン化をうけるdest配列をもつpTurboGEP vectorを用いて検討した。各々のプロモーターはTGF-β、IFN-γ、TNF-αによリ転写活性はあるもののわずかな上昇のみであった。(2)テトラサイクリン誘導型RNAiシステムによるユビキチンリガーゼの調節とその影響大腸癌細胞株HCT116およびSW480にユビキチンリガーゼSmurf1、Smurf2、ArkadiaのリポフェクタミンによるオリゴRNAiを作用させmRNA発現をRT-PCRやReal time RT-PCR法を用いて発現低下することが確認された。次に大腸癌細胞株HCT116およびSW480にテトラサイクリン添加によるRNAi発現細胞株を作製し、mRNA発現をRT-PCRやReal time RT-PCR法を用いて発現低下することが確認された。テトラサイクリン誘導型RNAiシステムにより他のmRNA発現を検討したが有意な発現低下・発現上昇はみられなかった。TGF-βシグナリング経路は癌化において正と負の両面に関与している。Smadに関しては様々な癌種での発現異常が報告されている。近年、ユビキチンリガーゼであるSmurf1とSmurf2が、抑制型SmadであるSmad7と結合することによりTGF-βシグナリングを負に調節する作用のあることがわかった。Smurf1とSmurf2について癌組織での発現についての報告はほとんどなく、本研究では、固形癌、特に大腸癌と乳癌を中心にSmurf1とSmurf2の発現を免疫組織学的方法にて検索した。大腸癌、乳癌ともに癌組織でのSmurf1とSmurf2の発現亢進を認める症例が認められた。現在、症例数を増やし臨床病理学的背景因子との相関を解析している。またSmad7やβ-カテニンなどSmurf1とSmurf2に関連する遺伝子群との発現との相関についても解析する予定である。
明代より清代にかけての考証学の展開ーー特に古文尚書への疑問を中心としてーー

現行の「尚書」五十八篇のうち、漢代より伝わったいわゆる今文系の諸篇を除いた二十五篇の、古文系統の部分は、まず宋代の呉〓・朱熹などによって、それが後世の何者かによる偽作ではないかとの疑いがもたれた。その後、元・明と代々の学者の中には、さらにその疑惑を深めていった人もいる。しかし、そのいずれもが今文・古文の両系統の表面的な文体上の差異に注目したに止まり、その内容にまで立ち入って、研究した例は殆どない。ところが明代も中期以後になると、後にいわれる考証学的な気風が起り、一層緻密な研究方法がとられるようになった。そして「尚書」に関しては梅〓がその著「尚書考異」によって、古文尚書二十五篇は、先秦時代の各書物の中の文句の断片をとり集めて作られたものと、ほぼ完全に考証した。そしてその作者として西晋の皇甫謐の名を挙げている。本研究では、梅〓の学問が先行する諸学者のそれと、どのような点で異るのか、また梅〓自身の内部において、その初期と後期ではどのように学問が変化したか、あるいは梅〓の学問に兄の梅鶚の影響はあるのか、などに注目した。その結果、梅〓の著述とされるもう一つの「尚書譜」には、いま仮に甲本・乙本と名づける二種のものが流布していたこと、後者は前者より一層内容が詳密になっていること、それが発展して「尚書考異」となったこと、また彼の学問には、今ではその著作が全く伝わらない兄の梅鶚の見解が反映していることなど、多くの新知見を得た。また、清朝考証学の最高峰の一つとされる閻若〓の「尚書古文疏証」の中に、多くの点で梅〓の説が取り入れられることを見出し、明代の考証学的研究の成果は、決して無視することができないものであると判明した。本研究はさらに偽古文尚書そのものの作者の特定、及びそれが作られた目的にまで考えを及ぼし、近くその成果を発表する予定である。
戦間期文学の〈複合ジャンル性〉に関する研究―散文詩と〈歌詞テクスト〉を中心に―

・研究課題を遂行するための基盤整備として、PC、レコードプレーヤー等の設備を購入し、比治山大学に設置した。・当初は2018年度に散文詩関連の調査を行い、2019年度に〈歌詞テクスト〉関連の調査を行う予定であったが、これを変更し、より大規模な調査を要する〈歌詞テクスト〉関連の調査を先行して行った。具体的には、NHKラヂオ・テキスト『国民歌謡』全78冊のうち74冊の実物の購入、『国民歌謡』のうち実物を入手できない号を複写するための調査出張等を遂行した。・上述の調査の成果として、単著学術論文、小林洋介「〈歌詞テクスト〉の戦前・戦中ーNHKラヂオ・テキスト『国民歌謡』とその周辺ー」(『日本文学研究ジャーナル』2018/3)を発表した。本論文では、1936年から1941年までNHKラジオで放送された番組「国民歌謡」、およびそれと並行して出版された小冊子『国民歌謡』を扱い、〈歌詞テクスト〉が詩と地続きであり文学の一部に位置づけることが可能であること、〈歌詞テクスト〉からは時代の思想的動向を抽出できること、〈歌詞テクスト〉における七五調定型の存続に着目するとき、従来の文学史を書き換えられる可能性があることを論証した。・散文詩については2019年度に研究成果を公表することとしたため、2018年度中の研究成果の公表はなかった。ただし、『文芸時評体系』等、散文詩研究のために必要な書籍の購入は2018年中から開始した。さらに、『青空』『ゲエ・ギムギガム・プルルル・ギムゲム』『薔薇・魔術・学説』といった戦間期の詩誌(詩の雑誌)(復刻版)を購入し、その内容に関する網羅的な調査を開始した。・当初は2018年度に散文詩関連の目録作成とウェブ公開を行い、2019年度に〈歌詞テクスト〉関連の目録作成とウェブ公開を行う予定であった。これを変更し、2018年度に〈歌詞テクスト〉関連の研究成果を発表した。その理由は、第一に、〈歌詞テクスト〉のほうが長期にわたる大規模な調査が必要であると判断したこと、第二に、2018年度刊行の雑誌『日本文学研究ジャーナル』から原稿依頼があり、それが〈歌詞テクスト〉関連の論文を発表するための絶好の機会であったことである。これに伴い、当初2018年度中に予定していた散文詩関連の調査は遅れている。ただし、この場合の予定の変更は順序の変更であるので、研究課題全体はおおむね順調に進展していると言える。・当初予定していたデータ公開は実施できなかった。主な理由は、当初2018年度中には予定していなかった論文の刊行を実施し、データ公開のための時間が確保できなかったためである。・〈歌詞テクスト〉については引き続き調査を行う。その成果の公表手段として、国際学会EAJS(European Association of Japanese Studies)の大会、EAJS Conferences in Japan(2019/9、筑波大)での口頭発表を行う予定である(応募済、審査中)。なお、2018年度に行った調査の結果、戦間期のレコードの発行年月について正確な情報を得ることが困難であることが判明した。そこで、当初2019年度中の公開を予定していた〈歌詞テクスト〉の目録については、それを作成することの是非を含め、改めて検討する。・散文詩については、特に雑誌『詩と詩論』と作家・梶井基次郎に着目し、「詩」または「散文詩」として発表されたテクストの目録作成とウェブ公開に着手する予定である。なお、その目録を分析した成果としての論文の公表は、当初計画どおり、2020年度に行う予定である。

・当初は2018年度に散文詩関連の目録作成とウェブ公開を行い、2019年度に〈歌詞テクスト〉関連の目録作成とウェブ公開を行う予定であった。これを変更し、2018年度に〈歌詞テクスト〉関連の研究成果を発表した。その理由は、第一に、〈歌詞テクスト〉のほうが長期にわたる大規模な調査が必要であると判断したこと、第二に、2018年度刊行の雑誌『日本文学研究ジャーナル』から原稿依頼があり、それが〈歌詞テクスト〉関連の論文を発表するための絶好の機会であったことである。これに伴い、当初2018年度中に予定していた散文詩関連の調査は遅れている。ただし、この場合の予定の変更は順序の変更であるので、研究課題全体はおおむね順調に進展していると言える。・当初予定していたデータ公開は実施できなかった。主な理由は、当初2018年度中には予定していなかった論文の刊行を実施し、データ公開のための時間が確保できなかったためである。・〈歌詞テクスト〉については引き続き調査を行う。その成果の公表手段として、国際学会EAJS(European Association of Japanese Studies)の大会、EAJS Conferences in Japan(2019/9、筑波大)での口頭発表を行う予定である(応募済、審査中)。なお、2018年度に行った調査の結果、戦間期のレコードの発行年月について正確な情報を得ることが困難であることが判明した。そこで、当初2019年度中の公開を予定していた〈歌詞テクスト〉の目録については、それを作成することの是非を含め、改めて検討する。・散文詩については、特に雑誌『詩と詩論』と作家・梶井基次郎に着目し、「詩」または「散文詩」として発表されたテクストの目録作成とウェブ公開に着手する予定である。なお、その目録を分析した成果としての論文の公表は、当初計画どおり、2020年度に行う予定である。研究を遂行する過程で、次年度以降に本研究課題に関連して国際学会への出席が必要になる可能性が生じた。その場合、当初の計画にはなかった海外旅費の支出が発生することになる。そこで、その費用を捻出するため、本研究課題にかかる支出の一部を学内研究費で賄うなどの方法により、意図的に2018年度支出を圧縮し、次年度使用額を生じさせることとした。したがって、次年度使用額が生じた理由は研究の遅延ではない。
コリネ型細菌による木質系バイオマスの高効率分解

コリネ型細菌は枯草菌などと比較して菌体外分泌物が少なく、旺盛な増殖力と溶菌しにくいという特性のため、外来遺伝子の発現宿主として非常に高い能力を有している。本年度は当初の目的であるClostridium cellulovorans由来のセルラーゼ複合体であるセルロソームの分泌、再構築を試みた。しかし、通常のセルラーゼの分泌は確認できたが、セルロソームを構成するセルラーゼの分泌は確認できなかった。そこで本研究のもうひとつの目的である、コリネ型細菌のより良いシグナル配列を取得ため、コンピューター解析からシグナル配列を持つ遺伝子を310種類抽出した。それらの遺伝子のシグナル配列をα-アミラーゼ遺伝子と融合させ、ヨウ素でんぷん反応によって検出したところ、22種類の遺伝子の分泌能を確認した。その中で9種類がTatシグナルであると予想された。Tat分泌経路は他の分泌経路とは違い、細胞内で蛋白質が折りたたまれた後、分泌される。従ってプロテアーゼによる分解を受けにくく、加えて細胞内シャペロンを利用することによって、機能的な蛋白質が得られる可能性が高い。現在、どのTatシグナルが一番セルロソームを構成するセルラーゼの分泌に最適かを選定中である。本研究室ではCglutamicum R株の遺伝子破壊株ライブラリーを作製済みである。分泌能を確認した遺伝子の破壊株を顕微鏡で観察したところ、cgR1596破壊株が野生株と比較して3倍程度に伸びた形態変化を示した。染色体分配に異常は認められないことから、CgR1596は細胞分離に関与すると考えられた。本タンパク質はC末端にはエンドペプチダーゼドメインが存在する。本ドメインを同じく有するcgR2070を併せて破壊するとより長い形態を示し、一個体中の核様体数も4.1個に増加した。従ってこれら二つの遺伝子がコリネ型細菌の細胞分離に重要であると考えられた。コリネ型細菌はアミノ酸生産等の分野で最も多用される産業微生物である。本菌は溶菌しにくく、増殖力が高い、また、菌体外プロテアーゼ等の分泌がほとんど認められないことから異種タンパク質生産の宿主として非常に有能であると考えられる。高いセルロース分解活性を有するセルラーゼ複合体としてClostridium属が産生するセルロソームが知られている。しかし、C.cellulovoransは嫌気性細菌であるため、増殖力等の問題から実用化は困難である。そこで本研究はセルロースを高効率に分解するコリネ型細菌の作製のため、C.glutamicumにおけるC.cellulovorans由来のセルロソームの発現分泌系確立を目的としている。本年度はC.glutamicumの細胞表層タンパク質PS2のシグナルペブチドを用いてTrichoderma reesei由来のendoglucanaseの分泌発現を試みた。T.reeseiの有するendoglucanase III、IV、Vをクローニングし、クロスオーバーPCR法を用いてシグナル配列との融合遺伝子を作製してC.glutamicum R株に導入した。CMCを基質とし、Congo redを用いたplate assayによりendoglucanase IIIの分泌、セルラーゼ活性を確認した。また、α-アミラーゼの分泌をヨウ素でんぷん反応で検出するスクリーニング系により、コンピュータプログラムで分泌シグナルの存在が予測された310遺伝子のうち、88個が分泌能を有することが分かった。そのうち22個は他と比較して高い分泌能力を有していた。今後はC.cellulovoransの有するセルロソーム遺伝子群(CbpA、EngB等)と高分泌シグナル配列との融合遺伝子を作製し、分泌、セルラーゼ活性を確認する予定である。
妊娠を契機に禁煙した女性喫煙者に対する地域の禁煙サポートに関する研究

平成17年度は,妊娠を契機に禁煙した、あるいは喫煙を継続した女性喫煙者の「たばこに対する思い」を因子探索的に分析した。その結果,出産後まで禁煙を継続した女性では「子どものため,自分のため,他の人のために喫煙はやめるべき」という規範的意職と,「出産後のいたずら喫煙,育児の負担がなければ喫煙しない」という将来の再喫煙を避けるための対策の因子が抽出された。一方,再喫煙した女性では「また吸ってしまうかもしれない」という再喫煙の予感,「止めたいが止められない」という禁煙困難,「禁煙は考えていない」という無関心の因子が抽出された。「子どもと喫煙」に関するラベル数の割合が,禁煙継統群は喫煙再開群よりも明らかに高く,PRECEDEPROCEEDモデルの「実現要因」である喫煙環塊への対策に加えて,「前提要因」である「喫煙による子どもへの影響の認知」を高めるために,「強化要因」である医療関係者の役割の璽要性が示唆された。平成18年度は,地域における禁煙サポート源として看護職者が機能するために,看護職者よる禁煙・防煙支援の実態と関連要因を解明を目的とする質問紙調査を実施した。Y県内の55施設,所属する看護職1414名を分析対象とした。その結果、禁煙・防煙支援が業務としての位置づけられている407名(28.8%)、禁煙・防煙支援の経験あり267名(18.9%)と低率であり、禁煙支援・防煙支援の困難は189名(70.8%)が感じていた。同時に、禁煙・防煙支援の講習会の参加は250名(17.7%)に留まった。業務の位置づけがある群で支援経験ありは38.3%,位置づけが無い群では11.0%,しかし位置づけがあっても支援経験なしが61.7%を占めた。禁煙支援の自己効力感は100点満点で平均14.4(±12.3)点と低かった。以上の結果から,看護職者は禁煙支援・防煙支援を業務として位置づけられていても実施していない割合が高く,支援の自己効力感が低い点が課題であることが明らかとなった。平成16年度は,妊娠を契機に禁煙した妊婦が禁煙を継続できる要因を探索し,GreenによるPRECEDE PROCEEDモデルの「前提要因」,「実現要因」,「強化要因」に分類した。平成13年度平成15年度科学研究費補助金の助成を受けた研究結果を分析し,妊娠初期,妊娠末期,出産後の喫煙と禁煙に共通する関連要因は,「同居の喫煙者の有無」と「友人など身近な喫煙者の有無」で,いずれも「強化要因」であった。また,妊娠判明時に禁煙して妊娠中も禁煙を継続する関連要因は,「妊娠初期の禁煙の自己効力感が高い」ことであり,「前提要因」であった。さらに,妊娠判明時に禁煙して妊娠中から出産後まで禁煙を継続する関連要因は,「妊娠前の喫煙本数が少ない」ことであった。この要因は,過去の喫煙歴であるため前提要因,実現要因,強化要因のいずれにもあてはまり難く,PRECEDE PROCEEDモデルでは,第3段階の「(過去の)行動とライフスタイルの診断」に該当すると考える。次に,ホームページ上で禁煙支援を希望した女性を対象に,禁煙成功の要因を分析した結果,「ホームページ上での看護介入あり」,「ニコチン依存度が低い」群で成功率が高かった。

前者は「強化要因」であるが,後者は喫煙歴であるため,PRECEDE PROCEEDモデルの「行動とライフスタイルの診断」に該当すると考える。また,参加者が自由に書き込める「日記の部屋」を作成し,書き込みをした参加者の禁煙成功率が50%60%強と一般的な禁煙支援成功率よりも高くなった。その理由としては,日記を書くことによるセルフモニタリング効果,禁煙成功者の具体的行動を知る,成功したことへの賞賛,個別の目標設定と達成の経験による「禁煙の自己効力感の高まり」(前提要因)が推察される。さらに,ホームページへのアクセスは無料であり,インターネットができる環境にいれば手軽である。そして,「禁煙しようとしている女性」という共通点で結びついており,こういったホームページの特徴は「実現要因」に結びつくと考える。平成17年度は,妊娠を契機に禁煙した女性が出産後まで禁煙を継続できる要因を探索するために,平成1315年度科学研究費助成研究に協力を得た対象者の内,(1)妊娠を契機に禁煙した経験のある女性43名を出産後までの禁煙・喫煙状況別に群別し,たばこに関する自由記述に基づき「たばこに対する思い」について因子探索的に分析した。また,(2)妊娠が判明しても喫煙を継続した女性12名を対象に,同様に分析した。さらに,(3)妊娠前の喫煙経験者で,妊娠・出産・育児を経験した女性3名にインタビューを行い,(2)の分析結果を検証した。その結果,出産後まで禁煙を継続した女性の特徴として,「子どものため,自分のため,他の人のために喫煙はやめるべきである」という規範的意識と,「出産後のいたずら喫煙,育児の負担がなければ喫煙しない」という将来の再喫煙を避けるための対策に関する因子が抽出された。これに対して,妊娠中・出産後再喫煙した女性では,「また吸ってしまうかもしれない」という再喫煙の予感,「止めたいが止められない」という禁煙困難,「禁煙は考えていない」という無関心の因子が抽出された。「子どもと喫煙」に関するラベル数の割合が,禁煙継続群は喫煙再開群よりも明らかに高く,PRECEDE PROCEEDモデルの「実現要因」である喫煙環境への対策に加えて,「前提要因」である「喫煙による子どもへの影響の認知」を高めるために,「強化要因」である医療関係者の役割の重要性が示唆された。次に,インターネットを活用した女性の禁煙支援の効果を分析した。ホームページ上に,たばこに限らず自由に思いや意見を書き込むことができる「日記の部屋」を作成したところ,継続的に書き込みをしている参加者は時間の経過とともに減少するが,高い禁煙成功率であることが明らかとなった。また,看護職者から支援を受けた参加者が,別の参加者の禁煙を支援しており,ピア・サポートグループへと成長していることが示唆された。同時に,参加者には常に動きがあり,ネット上のグループダイナミックスによってはネガティブな影響も否定できず,看護職者の介入のあり方が課題である。平成18年度は,地域における禁煙サポート源として看護職者が機能するために,看護職者よる禁煙支援,防煙支援の実態と関連要因を明らかにすることを目的とする質問紙調査を実施した。Y県内の施設から無作為系統抽出法により55施設を抽出し,所属するすべての保健師,助産師,看護師,准看護師1414名(有効回答率70.5%)を分析対象とした。対象者の年齢は19歳63歳まで,平均36.0(±10.0)歳,女性1313名(92.9%),男性98名(6.9%),主な業務は看護師1137名(80.4%),准看護師131名(9.3%),保健師78名(5.5%),助産師37名(2.6%)。禁煙支援・防煙支援が業務としての位置づけあり407名(28.8%)。
分裂酵母の減数分裂進行に関わる新規Cdc7/Dbf4様キナーゼ複合体の解析

分裂酵母のSpo4はCdc7キナーセと高い構造上の相同性を持つにも関わらず、DNA複製に顕著な欠損を示さない。一方、第二減数分裂の開始、進行に顕著な欠損を示す。今回の解析でさらに胞子の細胞膜になる前胞子膜の形成開始にSpo4がはたらくことを明らかにした。Spo4の機能を高温で失うspo4-ts変異株では前胞子膜の形態が明らかに異常であった。spo4-ts変異株に前胞子膜マーカーであるGFP-Psy1、減数分裂をモニターするためにチューブリン-CFPを用いて前胞子膜形成を生細胞でタイムラプス観察した。その結果、spo4-ts変異株では明らかに前胞子膜形成の開始が遅延した。また、その後の膜の伸長も野生型株に比べて明らかに遅かった。このことから、Spo4が前胞子膜形成の開始、および伸長に関わることが明らかになった。Cdc7キナーゼが膜の形成に関わることは知られてなく、本研究が最初の例である。分裂酵母の前胞子膜形成開始のメカニズムは知られていない。本研究で前胞子膜形成に関わるタンパク質をいくつか明らかにした。前胞子膜形成はスピンドル極体(SPB)から始まるが、胞子形成欠損株の中で原因遺伝子産物がSPBに局在するものを新たに2つ取得した。これらのタンパク質Spo2,Spo13は既知のSpo15に局在が依存すること。Spo13はSpo2と、Spo2はSpo13とSpo15と物理的に相互作用することが明らかになった。また、Spo13の局在はSpo2に依存したことから、Spo15-Spo2-Spo13のヒエラルキーが存在することが明らかになった。また、Spo2は減数分裂時にバンドがシフトアップし、この時期にリン酸化を受ける可能性が示唆された。spo4破壊株では第二減数分裂時に途中で切れたような異常なスピンドルが頻繁に観察される。これがどのような原因で起こるものか、あるいは、Spo4が減数分裂制御にいかに関わるかを明らかにするため、spo4欠損株の減数分裂を詳細に観察した。YFP-チューブリン融合タンパク質を用いて、生細胞においてタイムラプス観察により、第二減数分裂の進行を詳細に解析した。スピンドルの長さを元に、第二減数分裂の各ステージを定義し、野生型株とspo4破壊株で第二減数分裂各ステージの長さを比較した。その結果、spo4破壊株では第二減数分裂中期が野生型株に比べて異常に長かった。この形質がスピンドルチェックポイントによるものか調べるためにスピンドルチェックポイント関連因子mad2とspo4の二重変異株を作製し、調べてみたところ、spo4の単独破壊株と特に形質に変化はみられなかった。また、今回観察した中には第二減数分裂中期にスピンドルが折れたり、スピンドルがのびているにもかかわらずクロマチンの分離が遅れるものなど、スピンドル形成に異常がみられる細胞が多く観察された。以上のことから、Spo4は第二減数分裂でのスピンドルの形成制御に関わっている可能性が示唆された。
B型慢性活動性肝炎の免疫病理と治療に関する研究

HBe抗原陽性B型慢性肝炎では血清中DNAポリメラーゼ活性が高く、肝組織内にHBc抗原陽性肝細胞が集簇して認められ、HBVの増殖が活発である。免疫病理学的にみると、未梢血のNK細胞活性の低下、リンパ球のinterleukin-2産生能の低下などが観察され、HBVを排除するための免疫応答が十分でないことがうかがえる。このような本疾患における免疫不全を回復する目的で、従来から各種インターフェロンの投与を行ってきたが、その効果についてはなお満足のいく成績ではない。今回、Biological response modifierとして注目をあびているInterleukin-2(IL-2)の臨床応用を試みた。すなわち、recombinant IL-2(Takeda)を投与し、臨床所見、抗ウィルス効果ならびに免疫マーカーに対する影響を検討した。10症例にIL-2治療を施行したが、重篤な副作用はなく、投与2週目に血清transaminase値の上昇を認めた。ウイルス効果では、10例中9例でDNA-P活性の低下、5例に陰性化、またe抗原の陰性化は一過性を含める3例にみられ、肝生検組織像の改善やHBs抗原、HBc抗原陽性肝細胞数の減少が5例に認められた。免疫学的にはOKT4陽性細胞数の変動、NKおよびLAK活性の上昇をIL-2投与時に認め、また肝組織内でも少数例ながらLeull陽性細胞数の増加やOKT8陽性細胞の実質への浸潤など、rIL-2投与による免疫活性化が確認された。したがって、本法は新しい免疫療法の一つとして十分期待がもてる。現在は、より効果的な治療を目標に患者数を増加し、投与方法(静注や筋注法)、投与期間、量、また抗ウイルス剤との併用の問題につき検討している。また、これら患者のリンパ球がB型急性肝炎に比しHBc抗原に対する反応性が極めて弱いことから、その意義を明らかにするとともに、治療をモニターする方法としてHBc抗原特異的T細胞の反応性についても検討中である。HBe抗原陽性B型慢性肝炎では血清中DNPポリメラーゼ活性が高く、肝組織内にHBc抗原陽性肝細胞が集簇して認められ、HBVの増殖が活発である。免疫病理学的にみると、末梢血のNK細胞活性の低下、リンパ球のinterleukin2産生能の低下などが観察され、HBVを排除するための免疫応答が十分でないことがうかがえる。肝組織内でもOKT8陽性細胞は認められるものの、Leu11陽性細胞はきわめて少ない。以上のような、本疾患における免疫不全を回復する目的で、従来から各種インターフェロンの投与を行ってきたが、その効果についてはなお満足のいく成績ではない。今回Biologicol response modifierとして注目をあびているInterleukin2(IL-2)の臨床応用を試みた。すなわち、recombinant IL-2(Takeda)を投与し、臨床所見、抗ウィルス効果、ならびに免疫マーカーに対する影響を検討した。現在、7症例につき検討を加えた結果、重篤な副作用はなく、投与2週間目に血清transaminase値の上昇を認めた。ウィルス効果では、7例中6例でDNA-P活性の低下、4例に陰性化,またe抗原の陰性化は一過性を含める例(43%)にみられ、肝生検組織像の改善やHBs抗原、HBc抗原陽性肝細胞数の減少も約60%にみるなど、今後、新しい免疫療法の一つとして十分期待のもてる成績を得た。

免疫学的にはOKT4陽性細胞数の変動、NKおよびLAK活性の上昇をIL-2投与時に認め、また肝組織内でもLeu11陽性細胞数の増加や、OKT8陽性細胞の実質内への浸潤など、rIL-2投与による免疫活性化が確認された。さらに現在はより効果的な治療を目標に患者数を増加し、投与方法(静注や筋注法)、投与期間、量、また抗ウイルス剤との併用の問題につき検討している。また臨床応用に関して、そのresponseを正確にmonitorする方法を研究中であり、その一つとしてNK活性値が有用であることを見い出している。HBe抗原陽性B型慢性肝炎では血清中DNPポリメラーゼ活性が高く,肝組織内にHBc抗原陽性肝細胞が集簇して認められ, HBVの増殖が活発である.免疫病理学的にみると,末梢血のNK細胞活性の低下,リンパ球のinterleukin-2産生能の低下などが観察され, HBVを排除するための免疫応答が十分でないことがうかがえる.肝組織内でもOKT8陽性細胞は認められるものの, Leu11陽性細胞はきわめて少ない.以上のような,本疾患における免疫不全を回復する目的で,従来から各種インターフェロンの投与を行ってきたが,その効果についてはなお満足のいく成績ではない.今回, Biological response modifierとして注目をあびているInter leukin-2(IL-2)の臨床応用を試みた.すなわち, recombinant IL-2(Takeda)を投与し,臨床所見,抗ウイルス効果,ならびに免疫マーカーに対する影響を検討した.10症例にIL-2治療を施行したが,重篤な副作用はなく,投与2週目に血清transaminase値の上昇を認めた.ウイルス効果では, 10例中9例でDNA-P活性の低下, 5例に陰性化,またe抗原の陰性化は一過性を含め3例にみられ,肝生検組織像の改善やHBs抗原, HBc抗原陽性肝細胞数の減少も約6例に認められるなど,本法は新しい免疫療法の一つとして十分期待がもてる.免疫学的にはOKT4陽性細胞数の変動, NKおよびLAK活性の上昇をIL-2投与時に認め,また肝組織内でもLeu11陽性細胞数の増加やOKT8陽性細胞の実質への浸潤など, rIL-2投与による免疫活性化が確認された.現在は,より効果的な治療を目標に患者数を増加し,投与方法(静注や筋注法),投与期間,量,また抗ウイルス剤との併用の問題につき検討している.臨床応用に関して,そのresponseを正確にmonitorする方法を研究中であり,その一つとしてNK活性が有用であることを見い出している.
人工細胞を用いる細胞間情報伝達機構の解明とその医療への応用

細胞間情報伝達に糖タンパク質や糖脂質に由来する糖鎖が極めて重要な役割を演じていることが近年明らかになりつつある.本研究では細胞間情報伝達における糖鎖構造の重要性を分子レベルで解明し,得られた情報を基に細胞特異性医用材料の開発を目的とした.従来から,リポソームを天然由来多糖で被覆することによりその構造強化を達成し,しかも多糖の種類により細胞認識性を付与し得ることを報告してきた.本年度は,この細胞特異性を人為的に制御する目的で天然多糖の末端糖鎖を化学変換し,細胞認識素子としてガラクトサミン,シアル酸,マンノースー6-リン酸残基を有する多糖を合成し,その被覆リポソームの細胞特異性について検討した.肝実質細胞にはガラクトースを認識するレセプターが存在することが知られている.そこで肝細胞との特異的相互作用を期待して,ガラクトサミン残基を有する多糖で被覆したリポソームをマウスに静注して生体組織分布を調べた.ガラクトサミン修飾系は,明らかに肝臓への集積が増加した.一方,シアル酸を有する多糖で被覆したリポソームでは,単球および好中球への取り込みが顕著に抑制された.この結果は,網内系を回避して血中を微小循環する新たなリポソームの開発に向けて重要な示唆を与えるものである.線維芽細胞にはマンノースー6-リン酸に対するレセプターが存在する.マンナンを部分的にリン酸化した多糖で被覆したリポソームのマウス線維芽細胞(L-細胞)への特異性を検討した.その結果, L-細胞への特異的結合の見られたことはもち論の事,このリポソームを用いたL-細胞の無血清培養でも血清存在時よりも高い増殖性がみられた.これは糖鎖の認識機能を応用した新しい型の培養材料として注目できる.以上より天然多糖の末端糖鎖変換を行い細胞認識素子を導入することで,その被覆リポソームの細胞認識性を制御し得る事が明らかとなった.細胞間情報伝達に糖タンパク質や糖脂質に由来する糖鎖が極めて重要な役割を演じていることが近年明らかになりつつある.本研究では細胞間情報伝達における糖鎖構造の重要性を分子レベルで解明し,得られた情報を基に細胞特異性医用材料の開発を目的とした.従来から,リポソームを天然由来多糖で被覆することによりその構造強化を達成し,しかも多糖の種類により細胞認識性を付与し得ることを報告してきた.本年度は,この細胞特異性を人為的に制御する目的で天然多糖の末端糖鎖を化学変換し,細胞認識素子としてガラクトサミン,シアル酸,マンノースー6-リン酸残基を有する多糖を合成し,その被覆リポソームの細胞特異性について検討した.肝実質細胞にはガラクトースを認識するレセプターが存在することが知られている.そこで肝細胞との特異的相互作用を期待して,ガラクトサミン残基を有する多糖で被覆したリポソームをマウスに静注して生体組織分布を調べた.ガラクトサミン修飾系は,明らかに肝臓への集積が増加した.一方,シアル酸を有する多糖で被覆したリポソームでは,単球および好中球への取り込みが顕著に抑制された.この結果は,網内系を回避して血中を微小循環する新たなリポソームの開発に向けて重要な示唆を与えるものである.線維芽細胞にはマンノースー6-リン酸に対するレセプターが存在する.マンナンを部分的にリン酸化した多糖で被覆したリポソームのマウス線維芽細胞(L-細胞)への特異性を検討した.その結果, L-細胞への特異的結合の見られたことはもち論の事,このリポソームを用いたL-細胞の無血清培養でも血清存在時よりも高い増殖性がみられた.これは糖鎖の認識機能を応用した新しい型の培養材料として注目できる.以上より天然多糖の末端糖鎖変換を行い細胞認識素子を導入することで,その被覆リポソームの細胞認識性を制御し得る事が明らかとなった.
X線映画法における画像処理装置ならびに処理法の開発

X線映画像の画像データをディジタル化し,画像処理装置,及びコンピュータへ転送する一連の糸を設計開発した.本システムは,テレビカメラを入力装置とし高速画像処理装置とコンピュータにより各種の画像処理を行い,それを固定磁気ディスクに記録することによって動画像の抽出を可能にした.開発した本システムを用いてX線映画像の各コマに種々の画像処理を行い画像改善の可能性を追求した.システムの画質特性の解析を行った結果,入力装置としてのテレビカメラで鮮鋭度の低下を生じ,画質に大きな影響を与えることがわかった.そこでCT装置に附属の高精細フィルムディジタイザー(レーザースキャナ)を用いてあらたに画質を調べた結果,医療用X線画像のディジタル化にはテレビカメラは不十分であり,レーザースキャナのような,高精細で広い濃度分解能を持つ装置を用いることが望ましいことがわかった.X線映画像に適した画像処理法として,非鮮鋭マスク処理(ansharp masking technigue),対数階調変換によるコントラストの強調が有効であった.本法はマスクサイズ,強調の度合いを変えることにより,種々のX線画像に適用が可能となることから,現在他の撮影法への応用を試み,いくつかの撮影法でよい結果を得ている.さらに嚥下運動のアニメーション化は,同運動機能の解析の有効な手段として評価され, X線映画像にも画像処理が有効であることが確認された.X線映画像の画像データをディジタル化し,画像処理装置,及びコンピュータへ転送する一連の糸を設計開発した.本システムは,テレビカメラを入力装置とし高速画像処理装置とコンピュータにより各種の画像処理を行い,それを固定磁気ディスクに記録することによって動画像の抽出を可能にした.開発した本システムを用いてX線映画像の各コマに種々の画像処理を行い画像改善の可能性を追求した.システムの画質特性の解析を行った結果,入力装置としてのテレビカメラで鮮鋭度の低下を生じ,画質に大きな影響を与えることがわかった.そこでCT装置に附属の高精細フィルムディジタイザー(レーザースキャナ)を用いてあらたに画質を調べた結果,医療用X線画像のディジタル化にはテレビカメラは不十分であり,レーザースキャナのような,高精細で広い濃度分解能を持つ装置を用いることが望ましいことがわかった.X線映画像に適した画像処理法として,非鮮鋭マスク処理(ansharp masking technigue),対数階調変換によるコントラストの強調が有効であった.本法はマスクサイズ,強調の度合いを変えることにより,種々のX線画像に適用が可能となることから,現在他の撮影法への応用を試み,いくつかの撮影法でよい結果を得ている.さらに嚥下運動のアニメーション化は,同運動機能の解析の有効な手段として評価され, X線映画像にも画像処理が有効であることが確認された.昭和61年度は、必要な設備を導入し、主として基礎的研究を行った。すなわち、X線シネ解析装置よりのX線映画の画像データーをディジタルデーターとして画像処理装置およびコンピューターへ転送する一連の系を設定し、X線映画像の各駒の画像処理の可能性を追求した。次いで種々の処理法を駆使して検討を加え、特に輝度階調変換によるコントラストの強調、エツジの強調による画像の鮮鋭化、平滑化フィルターによる雑音の除去などの画像処理を試みた。また画像は固定ディスクに記録することができるようになった。その結果X線映画像にも画像処理が有効であること、そして目的に応じた処理法の特長を見出すことができた。さらに、嚥下運動のアニメーション化を行い、同運動機能の解析の有効な手段を得た。これらの成果は、歯科放射線学会誌第26巻4号に発表した。しかし、画像の入力にテレビカメラを用いているので入力の段階でかなり画像の劣化が生じてしまうことがわかった。また、処理後の画像解析の正確性の点でまだ不十分な点も残っており、今後、より望ましい画像の入力法および処理法を検討・開発して行きたいと考えている。また、アニメーションの作成は現時点では人手によるトレースにたよらざるを得ないが、自動的にエッジを描出できるような方法を開発しより簡便に製作できるようにしたいと考えている。
有界対称領域上のカスプ形式の明示的次元公式

まず本研究の成果として、splitなQ-形式およびnon-splitなQ-形式に関するフルモジュラー群とその主合同部分群について、2次のベクトル値ジーゲルカスプ形式の空間の明示的次元公式を決定した。splitなQ-形式の場合はTsushimaがすでに計算しており我々の結果はその別証明である。non-splitなQ-形式に関する結果は新しい。またスカラー値の場合は過去に多くの研究者によって、すでに研究されてる。我々の結果はスカラー値での結果および証明をベクトル値へ一般化したものとなっている。この研究を通じて次元公式に現れる軌道積分の数値を表現論的に解釈することを学んだ。次に本研究では、レベル3以上の主合同部分群に関する一般次数のスカラー値ジーゲルカスプ形式の次元公式の予想をセルバーグ跡公式によって研究してきた。この予想の根拠は,跡公式での次元公式の計算における中心的冪単共役類の寄与がIbukiyama-Saitoにより明示的に与えられたことと,他の共役類の寄与がゼロになると予想されていることである.つまり本研究の目標は、その寄与のゼロを証明することである.その証明のために我々が取り組んだことは、従来の計算手法だけでなく表現論的な手法を取り入れることであった。計算における主な問題は(i)実共役類の分類と中心化群の明示的決定、(ii)跡公式における積分と無限和との交換の問題、(iii)各共役類の寄与の明示的計算、の3つである。ただし(iii)については(ii)の問題の解決の仕方によるので、まだ取り組んでいない。まず(i)の実共役類の分類は従来の手法で計算できている。そして、中心化群に関してはLie環の上では一般論で明らかなので、ほとんどが解決した。(ii)の問題が最も難しい。従来通りの手法では上手に(iii)の解決に結びつかないので、表現論的な手法である、アーサー跡公式の手法を取り入れる研究を続けている。
1分子レベルのDNA-タンパク質間相互作用の解明

本研究では蛍光染色したDNAを蛍光顕微鏡視野内において1分子レベルで観察・形態制御し、溶液中のDNAとタンパク質との間で起こる生化学反応をリアルタイム1分子観察することを目的としている。前年度までに溶液交換・DNAの伸張/弛緩の制御が可能なマイクロ流路の構築や、構築した実験系を用いたDNA消化反応の1分子直接観察に成功した。また、リン脂質2重膜を用いたガラス基板修飾に着目し、上記の実験系への適用に着手した。今年度はこのリン脂質2重膜の性質と1分子DNA蛍光観察の関係について興味深い実験結果を得た。これまでにリン脂質2重膜を用いるとガラス基板表面を親水的でかつDNAおよびタンパク質の非特異的吸着を抑制できることが明らかにされた。これらに加えて、DNAに結合した蛍光色素の退色が抑制されることが見出された。この結果は蛍光顕微鏡視野内において個々のDNAを連続的に蛍光観察し、その間の蛍光強度の経時変化を数値化して得られた。リン脂質2重膜を用いない場合には約2分以内でDNAの蛍光像が判別できなくなったが、リン脂質2重膜を用いると3分以上に渡って退色が認められなかった。これは蛍光観察時に発生する活性酸素種による影響が蛍光色素よりも先にリン脂質2重膜で起こっているからではないかと考えられる。通常DNAの蛍光観察には抗酸化剤などの退色防止剤を用いるが、この退色防止剤はDNA-タンパク質間相互作用を阻害する場合がある。また脂肪酸の不飽和度を変えることでより退色抑制効果の高いリン脂質2重膜を構成できる可能性もある。従って本研究で得られた結果は1分子レベルでDNA-タンパク質間相互作用を長時間観察する上で極めて有益であると考えられる。本研究では、DNAを1分子レベルで蛍光実時間観察することで、そこに作用するタンパク質の詳細な機能を明らかにすることを目的としている。特にDNAの形態(伸張・弛緩)とタンパク質機能との関係は、従来法で明らかにすることが極めて困難であり、本研究ではこの点に着目して研究を進めている。20年度はリン脂質2重膜を用いたガラス基板修飾法を検討し、この方法を用いると親水的でかつDNAおよびタンパク質の非特異的吸着を抑制できることが明らかにされた。続いてこの方法を用いて、DNA消化酵素の一種であるλexonucleaseによるDNA消化反応の観察を試みた。その結果、DNA消化酵素が直鎖状DNAを端から消化してゆく様子を直接観察することができ、DNAを伸張させた場合には弛緩させた場合と比較してDNA消化速度が2倍程度速くなることが示された。我々は同じくDNA消化酵素exonucleaseIIIに対しても同様の解析を既に行っており、この場合においてもDNAを伸張させた場合には2倍程度消化速度が速いことが示されており、興味深い結果が得られたものと考えられる。また、大腸菌核様体タンパク質の機能解析に1分子観察法を適用し、数種のタンパク質に関して解析を進めた。その結果、興味深いことにガラス基板表面の性質(親水/疎水)によりDNAとの結合の仕方が異なるタンパク質が見出され、今後さらに詳細な解析を進める予定である。
ヒキガエル利用からホタル利用へ：毒源を変化させたヘビ類の進化過程の探求

本助成金の使用が可能となったのは後期からであり、ヘビの野外での活動性が下がる冬季であったので、本年度は、中国の共同研究者との研究実施計画の詳細な打ち合わせ、既存の標本を用いた頭骨形態および頸腺の観察、既存の化学サンプルの予備的分析を主に行った。相手国共同研究者の所属する成都生物研究所に森(哲)、城野、竹内、および協力研究者の大学院生1名が2月に訪問し、Cao教授、Chen助教、およびDing准教授に対して現段階における研究の進捗状況の詳細な説明を行い、2019年度に実施する採集調査と室内実験について具体的な計画を詰めた。主な対象種をレオナルドヤマカガシ、ミゾクビヤマカガシ、およびイツウロコヤマカガシの3種に絞り、四川省、雲南省、ならびに重慶を中心に6月7月と9月10月に現地調査を行うことで合意した。また、Cao教授とChen助教は6月から中長期の訪問研究員として京都大学を訪れ、現地調査やデータ分析を共同で進めていくことを確認した。Ding准教授からは、中国産種の分子系統解析の最新の情報を享受し、毒源となる餌の推移進化過程を推察する上で必要な重要な知識を得た。さらに、新しく得られたヤマカガシ属の標本を解剖し、頸腺形態の確認を行なった。一方、日本においては、液体クロマトグラフおよびガスクロマトグラフ質量分析計を用いて既存の化学サンプルを分析し、ヒキガエル毒の地理的変異についての予備的知見を得た。また、分子系統解析に向けての機器類の準備と整備を行なった。特に大きな支障はなく、予定通り進んでいる。中国大陸産の3種(レオナルドヤマカガシ、ミゾクビヤマカガシ、イツウロコヤマカガシ)を主な対象種とし、種間比較だけでなく、個体群レベルでの種内比較も取り入れ、餌毒再利用の微小進化過程を究明することに努める。その際には、野外で実際に食べている餌動物を把握するとともに、各地域に存在する餌資源相や量も推定し、さらに、ヘビの餌に対する嗜好性も合わせて評価する。これらと各個体の頸腺に含まれる毒成分を対照することにより、ヒキガエル食からホタル食への移行にどのような至近的要因が関わっているのかを推察する。さらに、ヒキガエルとホタルに共通する化学成分(匂い成分)の検出を試み、どのような至近的メカニズムがホタル利用への移行を可能にしたかを推定する。以上の考察には各種や個体群間の詳細な分子系統関係の解明が必要であるので、DNA解析も精力的に進める。一方、餌毒利用の微小進化が進行している可能性が考えられる台湾産のスウィンホーヤマカガシについても、可能な範囲で調査、分析を実行する。得られた成果は2020年1月にニュージーランドで開催予定の国際爬虫両棲類会議をはじめ、関連学会で随時発表していく。

得られた成果は2020年1月にニュージーランドで開催予定の国際爬虫両棲類会議をはじめ、関連学会で随時発表していく。中国渡航を計画していた分担者1名が参加できなかったこと、および、中国での滞在期間が予定していたよりも短縮されたことが主な理由である。また、化学分析用に計上していた経費が予定よりも安価ですませられたことも理由である。次年度はこの繰越し金を使用して、中国での滞在期間を長くして現地調査と実験を充実させるとともに、1月に開催予定の国際会議への参加・発表者数を増やす予定である。
インテグリン活性化制御分子における機能部位の同定と新たな治療法への展開

インテグリン活性化制御機構における、インテグリン活性化複合体(IAC)の役割を検討した。まず、ヒト巨核球系細胞株CMKを用いて、内因性インテグリンαIIbβ3の活性化を解析する実験系を確立した。次に、目的分子の発現を安定的に低下させたクローン化CMKを作製し、IACの構成分子を発現させて、kindlin-3とtalin-1によるαIIbβ3の活性化制御機構を明らかにした。さらに、ILK、PINCH、parvinが複合体を形成し、インテグリン活性化状態を安定化させることを示した。これらの研究結果は学術雑誌Experimental HematologyとPLoS Oneに発表した。平成24年度は、新たにgene-silencingの手法を用いて、目的分子の発現をknock-downさせたクローン化CMK細胞株を作製することに成功した。Talin-1とkindlin-3はインテグリン活性化複合体(IAC)を構成するインテグリン活性化のkey分子であるが、それらを欠損したCMKを用いて、インテグリンαIIbβ3の活性化を解析したところ、kindlin-3はtalin-1によるαIIbβ3の活性化のco-factorであることが明らかとなった。この研究成果は、Experimental Hematology. 2013Jan ; 41(1): 79-90.に発表した。この成果を基盤に、創薬への実用化に向けて、低分子コンパウンドの配列決定のため、talin-1やkindlin-3とβ3インテグリンとの結合部位を阻害するパルミチル化ペプチドを作製してインテグリンαIIbβ3の活性化のメカニズムの詳細な検討を進めている。また、Pf4Cre-LoxP systemを用いた巨核球-血小板系のコンディショナルノックアウトマウスの解析やコンディショナルノックアウトマウスの骨髄から巨核球を培養し、巨核球、血小板の機能を解析することに成功し、巨核球-血小板におけるMcl-1 and Bcl-xLの役割をCell Death Differ. 2012 Nov;19(11):1856-1869.に発表した。本研究の意義は、インテグリン活性化制御を担うインテグリン活性化複合体(IAC)に注目して、インテグリン活性化制御シグナルを詳細に検討し、インテグリンと細胞外基質との相互作用が関与する疾患の発症機序および増悪化の機序を解明することである。平成23年度は、IACを構成するtalin-1とkindlin-3に注目して、ヒト巨核球系細胞株CMKにおけるインテグリンαIIbβ3の活性化を解析する実験系を確立した。平成24年度は、新たにgene-silencingの手法を用いて、目的分子の発現をknock-downさせたクローン化CMK細胞株を作成することに成功した。これらのクローン化CMK細胞株に、IACを構成するいくつかのkeyとなる分子を発現させ、インテグリンαIIbβ3の活性化を評価した。その結果、これまで注目されていた、talin-1とkindlin-3の役割に新知見を加えることができた。その一つとして、kindlin-3はtalin-1によるαIIbβ3の活性化のco-factorであることが明らかとなった。平成24年度中に、これらの成果をまとめ、Experimental Hematology. 2013Jan; 41(1): 79-90.に発表した。平成25年度には、IACを構成するIntegrin-linked kinase(ILK)の役割を解析した。その結果、ILK, PINCH, Parvinが複合体を形成し、インテグリン活性化状態を安定化させることを支持する知見を得ることでき、PLoS One. 2013 Dec 23;8(12):e85498.に発表した。平成25年度は、さらに、IACを構成する細胞骨格蛋白がどのようなネットワークを形成し、インテグリンを制御しているのかを明らかにするため、新たな実験に着手し、解析を進めた。インテグリン活性化複合体(IAC)のkey分子によるインテグリン活性化制御機序を解明することができ、学術集会や学術誌に発表することができた。また、本研究課題で確立した手法を用いて、共同研究で血小板-巨核球の細胞死に関する新たな治験を得ることができ、学術集会や学術誌に発表した。培養巨核球を用いたtalin-1、kindlin-3、α-actinin、VASPなどインテグリン活性化複合体(IAC)の機能解析が、今年度、新たに成功した目的分子の発現をknock-downさせたクローン化CMK細胞株の作成によっておおむね順調に進んでいる。これらの細胞にIACを構成するいくつかのkeyとなる分子を発現させ、インテグリンの活性化を評価することが可能となった。その成果の一部は国際学会で発表した。

インテグリン活性化制御を担うIAC構成分子の発現をknock-downさせたクローン化CMK細胞株を順次作製する。さらには、インテグリン活性化を制御する低分子コンパウンドを作製し、創薬への実用化をめざすべく、talin-1、kindlin-3、α-actininとβ3インテグリンとの結合部位を阻害するパルミチル化ペプチドを用いて、インテグリン活性化制御機序の解析を進めていく。Chinese HamsterOvary細胞やHEK293細胞ではtalin headdomainを過剰発現させるとインテグリンαIIbβ3が活性化する。しかしながら、CMK細胞ではアゴニストのシグナルが入らないとtalin head domainを過剰発現させてもインテグリンαIIbβ3は活性化しない。血小板や培養巨核球同様、CMK細胞におけるインテグリンαIIbβ3は非活性化型がdefault状態である。なぜこれらの細胞ではアゴニストのシグナルが入らないとαIIbβ3が活性化しないのかについて引き続き検討する。平成24度はtalin-1、kindlin-3とインテグリンとの結合およびインテグリンの活性化を担うアミノ酸残基、α-actininとインテグリンとの結合部位、ならびにインテグリンの活性化を制御するα-actininの残基を同定する。それぞれのアミノ酸をalanineやphenylalanineに置換した変異型talin-1、kindlin-3、α-actinin、β3 tailを発現ベクターに組み込み、巨核球細胞株であるCMK細胞におけるインテグリンの活性化を解析する。なぜこれらの細胞ではアゴニストのシグナルが入らないとαIIbβ3が活性化しないのかについて解明していく。細胞培養に必要な試薬、遺伝子導入のための試薬と発現ベクター、インテグリンの活性化の評価に用いる抗体(PAC-1など)やインテグリンとの結合部位を阻害するパルミチル化ペプチドの購入を予定している。細胞培養に必要な試薬、遺伝子導入のための試薬と発現ベクター、インテグリンの活性化の評価に用いる抗体(PAC-1など)の購入を予定している。