hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
サハリンで形成された日本語樺太方言の多様性に関する社会言語学的研究

本研究では,サハリンで形成された日本語樺太方言の多様性を,特に日本語を第二言語として習得した人たち(朝鮮人,アイヌ人,ウイルタ人,ニヴフ人)に焦点をあてて調査研究を行った。調査では,既存の文字化資料,サハリンと札幌での現地調査によって収集された音声資料を活用し,樺太方言に見られる多様性について分析を行い,日本人の樺太方言話者が用いる言語的特徴を用いることなどを確認した。音声資料については,分析に活用するものを中心に書き起しを行った。調査結果については,国内外の学会,研究会で発表した。当該年度は,昨年度に引き続き,日本語樺太方言の音声資料の継続的な収集を行った。2012年4月に北海道網走市にある北海道立北方民族博物館で,現地所蔵の日本語音声資料の収集ならびに,関連する日本語資料の収集を行った。この他には,2013年3月に北海道札幌市,2012年6月に稚内市で樺太からの永住帰国者に対する面接調査を実施し,また,2013年3月に韓国とサハリンでの日本語樺太方言に関する情報収集を実施した。この他にも当該研究課題に関連する研究成果について,Japan Anthropology Workshop 2013をはじめとする関連学会での口頭発表をを行った。収集された音声資料に関しては,基本的には書き起しを実施した。サハリン研究者の一人であるロバートアウステルリッツ氏がニヴフ人に対して昭和30年代に収集した日本語音声資料に関しては,すでに活字にされた書籍が刊行されている。この書籍の情報を手がかりとし,音声資料を聞きながら,書き起し資料の精度を高めた。この作業には,この調査に参加した話者(北海道網走市居住)と同じ地域の出身者に判定を依頼して,作業を進めている。なお,NPO日本サハリン同胞交流協会が収集してきた,現地日本人の日本語音声,録画資料に関して,目録の作成と,デジタル化された音声のカタログの作成,ならびに,音声資料の書き起しに着手した。この他には,これまでの研究成果をまとめた「サハリンに残された日本語樺太方言」(明治書院)を刊行した。同書は読売新聞,「本の雑誌」,北海道新聞等で書評,または紹介記事として取り上げられ,国立国語研究所所長賞を受賞している。本年度実施した調査研究は,(1)収集した音声資料の整理(2)永住帰国者に対する調査の実施,(3)これまでの研究成果の公表,(4)研究のまとめ,の4点を実施した。(1)収集した音声資料の整理について,本年度では,これまで収集した日本サハリン同胞交流協会,北海道立北方民族博物館所蔵の資料の中でも,音声資料について書き起しを行った。ここで扱った資料は,戦後日本に引き上げてきたウイルタ人,ニヴフ人を対象とする音声資料,ならびに1990年代から日本に永住帰国を果たした日本人による音声資料,映像資料である。(2)永住帰国者に対する調査の実施。本年度においても,日本に引き上げてきた樺太方言話者に対する調査も北海道札幌市内で継続的に実施した。調査では13人の永住帰国者を対象にした面接調査を実施している。札幌市で調査をしたのは,これは2003年以降,サハリンで調査を実施したときの話者が2010年に永住帰国したためである。調査では,北海道社会福祉協議会の協力を得た。(3)研究成果については,ニヴフ人の用いる日本語の言語的特徴について分析した結果を北海道方言研究会で発表した。また,関連する研究会(国立国語研究所共同研究プロジェクト(「日本語変種とクレオールの形成過程」)で関連するテーマについて口頭発表を行った。この他には私が主催した人間文化研究機構第21回シンポジウム「海を渡った日本語」の趣旨説明で本プロジェクトの成果を紹介した。(4)研究のまとめ。この他には,本研究期間中に実施した調査,収集した調査データ(音声資料,文献資料等)の整理を行い,全体のまとめを行った。今後の研究計画を立案した。本年度実施した調査研究は,(1)既存する音声資料の収集(2)これまでの研究成果の公表,の2点を実施した。(1)既存する音声資料の収集・探索とインタビューの実施国内外に所蔵が確認されている樺太方言の音声資料の情報収集にあたった具体的には,日本サハリン同胞交流協会,北海道立北方民族博物館,北海道大学アイヌ・先住民研究センター,二風谷アイヌ文化博物館である。いずれの機関に直接でかけていき,関係者から資料利用の条件,利用許可申請等を確認し,利用手続きを進めた。今年度は戦後日本に引き上げてきたウイルタ人,ニヴフ人を対象とする音声資料,ならびに1990年代から日本に永住帰国を果たした日本人による音声資料,映像資料である。収集した資料については一部,書き起こしを行った。日本に引き上げてきた樺太方言話者に対する調査も北海道札幌市で実施した。2003年以降,サハリンで調査を実施したときの話者が2010年に永住帰国したためである。

これまでの同様の調査を実施し,データ収集にあたった。(2)これまでの研究成果の公表これまでの調査研究の成果で本研究課題に関連する事柄について,国内外の学会,会議で研究発表を行った。国内では北海道方言研究会,移民エスニック文化研究所主催の研究会,海外では,方言学の方法論に関する国際会議(METHODS)で,それぞれ研究発表を行い,参加者との意見交換を行った。この他にも,関係者から既存はしているが知られていない音声資料の情報の収集を行った。その中で,映画学校の制作映画の素材テープで該当するものが発見され,その情報の入手に向けた調整に着手している。基本的に本調査の目的は,日本語樺太方言に関する情報の収集と現地調査による音声資料の収集である。この点については,いずれも順調に情報が収集されていると言える。収集された資料の整備,書き起し作業も進めており,おおむね順調に進展していると判断できる。既存する音声資料の収集が本研究課題の主たるテーマである。その資料を発掘し,収集に関する同意を得たことは研究を進める上では意義あることである。もちろん計画していた現地調査は,私的理由により実現できなったが,全体的に見れば研究全体は順調に進展していると言える。これまで収集した資料の継続的な整備と分析に着手することがまず方針として挙げられる。ニヴフ人調査に関しては年度中に研究会での口頭発表を実施する予定である。また,韓国安山市をはじめとして,韓国に樺太から永住帰国をした朝鮮人に対する調査を実施し,彼らの音声資料の整備を行う予定である。対象となる音声資料のデジタル化,文字化を行うのが最優先の課題である。これとともに現地での継続調査も実施したい。また,個人が収集した樺太方言に関する音声資料でまだ把握できていないものも存在すると思われる。その意味でも音声資料の収集を継続的に行っていきたい。平成23年度中,家庭の事情(子供の出産)があり,予定されていた現地調査が実施できなかった。次年度はより時間ができると考えられるため,現地調査を実施したい。研究事業を進めていく上で,平成25年度に実施が予定されている調査,書き起し資料の整備の強化を行う上で,平成24年度に交付された研究費の一部を次年度に使用すると判断した。この経費を含め,平成25年度交付予定の研究費を計画的に執行していく。平成23年度では34万円の研究費が残った。この残金は現地調査に利用する予定であった。次年度は現地調査で利用したい。また,次年度はこの他にも北海道,韓国での現地調査,イギリスでの資料調査もそれぞれ実施する予定である。資料整理も進める必要があるので,文字化のための資料整理補助者に対する謝金としての支出を予定している。
東北・北関東の農兵隊・草莽隊と戊辰戦争の実態的研究

戊辰戦争は東西の政治勢力が激突した内戦だったが、その戦いには武士だけではなく多くの庶民が参加していた。みずからが志願して草莽隊に入った者や、領主によって徴発されて農兵となった人々などである。東西の両勢力にはいずれもこうした勢力が混在していたとされているが、その実態は十分に解明されていない。そこで本研究では主に東北と北関東を対象に、草莽隊や農兵隊の組織のされ方、参加者、活動などを実態的に把握することで、庶民による戦争参加の実態を明らかにする。これによって庶民と幕末軍事組織の関係や兵農分離論などの理論的研究の見直しも可能になる。
アジア発の抗HIV免疫情報同定及び国際HIVワクチン開発への応用

今年度はこれまで収集・解析した患者情報をまとめ、南アフリカ人HIV感染者及びタイ人HIV感染者における、臨床経過に影響を及ぼす感染者HLA-KIRの組み合わせを明らかにし、感染拡大地域毎での、臨床経過に影響を及ぼす宿主免疫系統相違の存在を明らかにした。南アフリカ人感染者312名での解析では特にHLA-C*16:01+KIR2DL3+の組み合わせ陽性者で、より悪化した臨床経過を認めることを確認した。他方タイ国感染者209名ではHLA-B*46:01+KIR2DL2+の組み合わせ陽性者で予後悪化、またHLA-C*12:03+KIR2DL2+の組み合せ陽性者で予後良好を確認した。これら両結果は論文発表に至り、両研究を踏まえ1これまで知られていた細胞傷害性T細胞(CTL細胞)を介した免疫系統だけでなく、ナチュラルキラー細胞(NK細胞)を介した免疫系統でもHIV感染後臨床経過への影響を示唆する、2ただし細胞傷害性T細胞におけるHLA-B*57のように、人種間・ウィルス型を越えウィルスを抑制するようなHLA-KIRの組み合わせは検出されなかった、3同時にこれはHLA-KIRを介したナチュラルキラー細胞による免疫系統では、HIV感染拡大地域毎でその組み合わせが異なることが示唆される、以上を明らかにした。これらの結果・考察は今後、HLA-KIRを介したワクチン開発の際に、感染拡大地域毎で効果に差異が認められる・感染拡大地域毎に合うワクチン開発が求められる可能性を示唆し、今後の薬剤・ワクチン開発の一助となることが期待される。2.南アフリカ国HIV感染者における、感染後臨床経過に影響を及ぼすHLA・KIRの組み合わせ同定:同様に南アフリカ国成人HIV感染者の臨床経過及びHLA・KIRの情報収集を行い、これまで312名の情報収集が完了した。HLA・KIRの組み合せと臨床経過の関係につき解析を行い、特定のHLA・KIR組み合わせ陽性者で有意なウィルス量増加・及び感染後の早期抗HIV内服開始を確認した。これら臨床経過に影響を及ぼすHLA・KIRの組み合わせで、タイ・南アフリカ両国間に共通する組み合わせは検出されなかった。これは各人種に分布するHLA・KIRの組み合わせの差異、及び各感染地域に存在するウィルス型の差異により、臨床経過に影響を及ぼす組み合せが異なるものと考慮された。これら各国の解析結果に対し論文化を目指し、論文原稿作成を開始している。またHLA・KIRを介したNK細胞による抗HIV免疫がウィルスに及ぼす影響の仕組み解明を目指し、現在タイ国感染者のウィルス遺伝子配列解析を実施している。今年度より開始した、研究対象者の免疫情報及び臨床経過情報の収集により、統計解析が可能な段階までの数をタイ国・南アフリカ国それぞれから確保できた。1.タイ国HIV感染者の予後を規定する因子の同定:タイ国成人HIV感染者209名を対象に解析を行い、免疫担当細胞へ病原体抗原を提示するHLAのうちHLA-B*46:01を持ち、その提示された抗原を認識するNK細胞受容体のうち細胞活性を抑制するKIR2DL2を持つ者(HLA-B*46:01+KIR2DL2+)で感染後の臨床経過悪化を確認した。特にHLA-B*46:01はアジア人固有のHLA型であり、既知のアフリカ系・欧米系を中心とした情報とは異なる新たな発見であった。これらの結果は論文化しJAIDS(Journal of AIDS)へ採択され、近日発表される予定である。2.南アフリカ国HIV感染者の予後を規定する因子の同定:同様に南アフリカ国成人HIV感染者312名を対象に解析を行い、HLA-C*16:01+KIR2DL3+陽性者での臨床経過悪化を同定した。現在これら情報は論文投稿に向け原稿を作成中である。これら結果を踏まえ、NK細胞を抑制する受容体を通じた抗原認識は免疫担当細胞を抑制し、結果HIV感染者の臨床経過を悪化させているものと思われる。近年新たな癌治療として、疲弊した免疫担当細胞を再活性化する治療法(免疫療法)が開始され、一定の成果を得ている。今後HIVに対してもこれらHLA-抑制系KIRの経路を遮断・抑制する事でより抗HIV免疫を活性化させる可能性が期待され、新たなワクチン・治療薬開発の候補として期待される。タイ国HIV感染者に関する研究で解析が完了し、投稿した原稿が採択され、近日発表される為。南アフリカ国感染者側では現在患者情報の収集を継続し、一部解析を進めている。

これら両結果は論文発表に至り、両研究を踏まえ1これまで知られていた細胞傷害性T細胞(CTL細胞)を介した免疫系統だけでなく、ナチュラルキラー細胞(NK細胞)を介した免疫系統でもHIV感染後臨床経過への影響を示唆する、2ただし細胞傷害性T細胞におけるHLA-B*57のように、人種間・ウィルス型を越えウィルスを抑制するようなHLA-KIRの組み合わせは検出されなかった、3同時にこれはHLA-KIRを介したナチュラルキラー細胞による免疫系統では、HIV感染拡大地域毎でその組み合わせが異なることが示唆される、以上を明らかにした。これらの結果・考察は今後、HLA-KIRを介したワクチン開発の際に、感染拡大地域毎で効果に差異が認められる・感染拡大地域毎に合うワクチン開発が求められる可能性を示唆し、今後の薬剤・ワクチン開発の一助となることが期待される。1収集した各国のデータ・統計解析結果より確認された、HIV感染者の臨床経過に影響を及ぼすHLA・KIRの組み合わせが、これまで世界各国の感染拡大地域から報告されたものと一致しているのか、それとも新たに発見されたものなのか、過去の報告と照合を行う。2現在進行しているタイ国HIV感染者のウィルス遺伝子配列収集を継続し、HLA・KIRの組み合わせに関連したウィルス遺伝子変異部位の特定を行う。3上記結果を踏まえ、NK細胞による抗HIV免疫の仕組みの解明、及びワクチン開発への標的となる部位の可能性を考察する。南アフリカ国感染者での患者情報収集・解析を進め、論文投稿を目指す。検体・臨床情報追加が必要な際には現地へ赴き、収集を行う予定である。南アフリカ国の結果を踏まえ、タイ国の結果と比較・解析を行い、人種間における抗HIV免疫の共通点・相違点を解明し、ワクチン開発の一助とす。タイ国及び南アフリカ国それぞれからの患者情報収集が当初の計画より進み、海外出張の機会が当初の予定より少なく済んだ。しかし論文作成・国際学会発表までの段階には至らず、それらへの経費使用には至らなかった。(理由)タイ国側の患者情報は英文校正費を含む論文作成までに至ったが、南アフリカ国側は解析のまとめ・論文作成までに至らず、それらの経費使用に至らなかった。(使用計画)南アフリカ国での患者検体・情報収集、英国でのそれら情報の解析と論文作成への使用を計画している。更なる患者情報収集・追加実験実施・統計解析の為、タイ国・南アフリカ国・英国出張を計画している。また今後、解析結果を踏まえた論文原稿作成を開始し、英文校正費・論文投稿費への使用を計画している。合わせて国際学会発表への演題採択・発表を目指し、学会参加費用への使用を計画している。
関数方程式における差分的手法と正値性とその周辺の研究

周期線形微分方程式の周期写像の反復写像で生成される線形差分方程式の解をスペクトル分解した。応用として周期線形微分方程式の解のリヤプーノフ指数を与えた。周期係数線形差分方程式の場合に拡大し、解のフロッケ表現を得た。線形積分微分方程式の解が正値性を保つ条件を決定し、解のロバスト安定性と漸近安定性のついての条件を得た。周辺研究として差分方程式の周期解の存在、高階双曲型偏微分方程式の解の一意性、非線形解析的差分方程式について新しい結果を得た。非同次線形差分方程式の解を係数行列の固有空間成分に分解し、初期値により解の漸近挙動がすぐわかるような解の新表現形式を与えた。そして係数行列が行列の指数関数である場合の先行結果との対応関係を、組み合わせ論的な計算手法を用いて明らかにした。その結果として差分方程式の解の後退方向の新表現形式を導出した。周期係数線形微分方程式の解を周期写像により差分化して解析することにより、本研究の成果は周期係数の非同次線形微分方程式の解の新表現に応用され、解の漸近挙動と初期値に関する新公式を得た。また他の応用として解のリャプーノフ数を初期値との関係において表す新公式を得た。正値性の問題に関しては、線形差分方程式の解半群の正値性に関する係数行列の条件を導出し、その条件を満たす場合のペロンーフロペニウス型の定理を証明し、解の安定性、漸近安定性に関するスペクトル条件を得た。またロバスト安定性に関する摂動系の安定半径の公式を得た。バナッハ空間上の関数微分方程式とボルテラ差分方程式に対し、方程式系と同程度の滑らかさをもつ不変多様体の存在定理を確立した。また、バナッハ空間上の線形関数微分方程式に対して、解の漸近挙動を研究し、有限次元方程式に対するペロン型定理の拡張版を確立した。非線形2連立差分システムの、線形項の係数行列の固有値が2つとも1でかつ非対角化行列の場合について考察を行った。その結果、このシステムに関して、解析解の存在性を示し、その解の表示を得る事ができた。対角可能な場合は一つの解を得る事ができたのに対し、この場合は二つの解を得る事ができた。1)周期係数の線形連立差分方程式の解の表現について、常微分方程式におけるフロッケ理論に相当する結果を得た。2)不安定な周期解をもつ微分方程式に、遅れ差分を含む制御項により摂動された方程式が同じ周期解をもつようにできる。その制御項の新しい取り方を考案して、周期解の特性定数の変化を捉えることができた。また特性定数の非退化性について一般的な結果を得ることができた。3)遅れをもたない周期的差分方程式と有限の遅れをもつ周期的差分方程式の周期解の存在を、ブラウダーの不動点定理を用いて示すと共に、例を与えた。4)無限次元空間内において、コンパクト作用素を係数にもつ線形ヴォルテラ差分方程式を考え、その正値性に対する特徴づけを確立した。また、正の線形ヴォルテラ差分方程式に対し、零解の一様漸近安定性を立証が比較的容易なある条件によって特徴づけた。さらに、摂動方程式が安定性を保持するための摂動の大きさに対する公式を確立した。5)2階非線形差分方程式の2つの固有値の絶対値が共に1でなく、かつ異なる場合に関して、均衡点へ収束する解の存在性とその解の表示を得た。さらに、はじめに得た一つの解から一般解への拡張を、この論文では新しい手法として構築した。6)主部の表象の特性根についての可解性条件を或る荷重関数によって与えて,時間変数係数の高階線形双曲型方程式に対する初期値問題の一意可解性に関する従来の結果の一部を拡張し,特に特性根が1点で無限次退化する場合をも扱えるような新たな証明法を考案した.差分的手法についての実績概要:線形周期微分方程式の周期解作用素を差分的手法について解析する方法の最終報告著書をほぼ完成することができ、平成22年度中に刊行する予定になった。微分方程式の不安定周期解を差分遅れ項で摂動して安定化する問題については、周期解の特性乗数の摂動について正確な結果を得た。その応用としてレスラー方程式の場合に安定化する摂動係数の最適範囲を決めた。遅れをもたない自励的差分方程式や有限の遅れをもつ自励的差分方程式の周期解の存在についてシャウダーの不動点定理を用いて論じて、非可付番無限個の周期解を含む周期解の存在を示すと共に、幾つかの例を与えた。関数微分方程式に対する相空間における定数変化法の公式を利用して,摂動項をもつ関数微分方程式の解の漸近挙動を調べた.正値性についての実績概要:積分微分方程式を中心に,方程式の正値性を調べ,正値方程式に対する安定条件をより明確な形で与えた.

周辺研究の実績概要:時間変数係数の高階線形双曲型方程式に対する初期値問題の一意可解性に関して,ある荷重関数のクラスにおいて有限次退化の場合の既存の結果を一般化した.時空間変数の2階半線形双曲型方程式に対する初期境界値問題の解の振動性について,振動解と正値解になる条件をそれぞれ与えた.非線形2階差分方程式の固有値2つが等しくなる場合と、2つが共に1となる場合の解析解の存在証明とその導出方法を構築し、人口モデルなどへ応用した。
高密度リポタンパク質(HDL)形成を担うABCタンパク質の生化学研究

高密度リポタンパク質(HDL)は末梢細胞から肝臓へとコレステロールを輸送する唯一の経路であり、その血中量や産生能力が動脈硬化症の発症と負に相関することから、善玉コレステロールとしても広く認知されている。本研究ではHDLを形成するATP依存的な脂質輸送体ABCA1について生化学的な解析を実施し、ABCA1とapoA-Iの相互作用解析を行った。また、ABCA1が細胞外領域に蓄積した脂質を用いてHDL形成を行うことを明らかにした。さらに脂質を輸送するABCタンパク質の精製を行い、輸送基質特異性の検討を実施した。本研究は善玉コレステロールとして知られる高密度リポタンパク質(HDL)の形成機構を分子レベルで解明しようとするものであり、精製タンパク質を用いた再構成系による生化学的解析を中心に研究を遂行している。HDLは脂質輸送型のABCタンパク質(ABCA1,ABCG1)がApoA-Iに脂質を輸送して形成される。本研究ではこの輸送過程を解析し、HDLが形成される反応の初期段階を明らかにする。平成27年度の研究ではナノディスク再構成系の構築と、再構成した脂質輸送型ABCタンパク質とApoA-Iとの相互作用を評価する実験系の構築を行った。このうち脂質輸送体型ABCタンパク質のナノディスクへの再構成ではヒトABCA1について重点的に再構成手法の最適化を行った。この結果、精製ABCA1とディスクを形成する膜足場タンパク質(MSP)のストイキオメトリーを調節する事で、安定的にディスクを形成させる手法が確立できた。また膜足場タンパク質の種類についても検討を行い、一般的に使われる足場タンパク質よりも大きな粒径のディスクを形成する足場タンパク質を用いた場合に高い再構成効率を示すことを見出した。さらに再構成したディスク中でABCA1のATP加水分解活性を検出できたことから、活性な3次元構造を保った状態でABCA1を再構成できていることが確認できた。以上の結果から、初年度に予定していたナノディスクへの再構成系確立は期待以上の進捗が得られた。そこで、当初2年度目に予定していたナノディスクに再構成したABCA1とApoA-Iとの親和性測定を開始した。相互作用はSPR法で解析しており、ナノディスクをセンサー上に固定するところまでは再現性が得られているが、ApoA-Iの非特異的吸着等が問題となり、親和性の測定には至っていない。現在、結合条件の精査を行っている。平成27年度の研究では当初予定していたナノディスク再構成系をほぼ確立できた。また、2年度目に予定していたApoA-Iとの相互作用解析の予備実験を開始できたことから、概ね順調に推進できたと考えている。一方、ApoA-Iとの相互作用解析ではApoA-IのSPR分析が困難な現状であり、当初予定していなかったSPR法以外の解析手法の検討が必要であることが明らかとなった。現状では予想以上の進捗を得られているが、概ね順調に進捗していると評価している。本研究は精製タンパク質を用いた生化学的解析を主軸とし、善玉コレステロールとして知られる高密度リポタンパク質(high density lipoprotein: HDL)の形成機構を分子レベルで明らかにしようとするものである。末梢組織で過剰となったコレステロールはHDLの形で肝臓へと輸送される。HDLは脂質輸送体として機能する2種類のABCタンパク質(ABCA1、ABCG1)がアポリポタンパク質A-I(apoA-I)にリン脂質やコレステロールを輸送することで形成される。HDLは末梢組織からコレステロールを輸送する唯一の経路であり、血中濃度が動脈硬化発症リスクと負に相関することからHDL形成メカニズムの解明は動脈硬化症などの予防薬開発に重要である。平成28年度の研究ではABCA1とapoA-Iの相互作用解析を中心に、ABCG1と近縁で神経組織における脂質恒常性に寄与すると予想されるABCG4についても解析を行った。このうちABCA1を用いた解析では、当初脂質2重膜構造に再構成したABCA1とapoA-Iとの相互作用を検討する予定であったが、実験系が安定せず、確実な結果を得ることが困難であった。そこで細胞膜上でABCA1とapoA-Iの相互作用を解析する新たな実験系の構築に着手し、ABCA1とapoA-Iの相互作用に重要な領域の決定を試みている。また、ABCG1と高い相同性を示し、コレステロール輸送体として機能するABCG4についても解析を開始し、ABCG4がコレステロールを認識するのに必要なモチーフ構造の同定を試みている。さらに脂質輸送体の生化学研究で培ったノウハウを提供し、細胞が細胞膜裏打ち構造を介して細胞外基質の硬さを感知する機構の解析にも参画した。平成28年度までの研究を通して、ナノディスク再構成系など脂質輸送体を解析する上で重要な手法を確立し、コレステロール輸送体のコレステロール認識部位を絞り込む実験成果を得ていることから、概ね順調に進捗していると考えている。一方でABCA1とapoA-Iの相互作用解析では研究初年度に確立した手法での検討が困難であることが明らかとなったため、再構成系ではなく細胞膜上での相互作用解析を検討する実験系開発を開始した。またコレステロール輸送体の研究ではコレステロール結合部位を推定する結果を得ていることなどから、当初予定していた計画とほぼ同様に進行していると考えている。高密度リポタンパク質(high density lipoprotein; HDL)は血中量が動脈硬化症の発症と負に相関することから、その形成メカニズムの解明は動脈硬化症発症機構の解明につながると共に、動脈硬化症治療薬開発において重要な知見となる。HDLは膜脂質輸送体であるABCA

1がATP結合・加水分解によって能動的に血中のアポリポ蛋白質(apoA-I)にリン脂質とコレステロールを輸送することによって形成されるが、その詳細は不明である。平成29年度の研究ではHDL形成の基点反応となるABCA1とapoA-Iの相互作用機構の解析、およびABCA1による脂質輸送機構の解析をおこなった。またABCA1と同じく膜脂質輸送体として機能するABCB4について輸送機構の解析を行った。ABCA1とapoA-Iの相互作用領域の解析では、apoA-Iとの相互作用領域を標識する方法を開発し、相互作用部位を部分的に絞り込むことに成功した。また、ABCA1が輸送した脂質を細胞外領域に一過的に蓄積し、apoA-Iに受け渡す新規機構を明らかにした。本研究結果はABCA1による輸送機構が一般的な脂質輸送体とは大きく異なることを示唆しており、HDL形成反応の解明に重要な知見である。ABCB4の解析では、輸送機構の解明が進展している相同性の高い薬剤輸送体(ABCB1)で明らかにした輸送基質取り込みメカニズムがABCB4にも存在するかを検討した。その結果、ABCB4とABCB1は共に共通のメカニズムで輸送基質を取り込むものの、その部位が異なっていることを示唆する結果を得た。本知見は薬剤輸送体と脂質輸送体がどの様に機能を分化し、進化してきたかを明らかにする上で重要な情報である。高密度リポタンパク質(HDL)は末梢細胞から肝臓へとコレステロールを輸送する唯一の経路であり、その血中量や産生能力が動脈硬化症の発症と負に相関することから、善玉コレステロールとしても広く認知されている。本研究ではHDLを形成するATP依存的な脂質輸送体ABCA1について生化学的な解析を実施し、ABCA1とapoA-Iの相互作用解析を行った。また、ABCA1が細胞外領域に蓄積した脂質を用いてHDL形成を行うことを明らかにした。さらに脂質を輸送するABCタンパク質の精製を行い、輸送基質特異性の検討を実施した。平成28年度の研究ではナノディスク再構成ABCA1のApoA-Iとの相互作用様式の解明とHDL形成時の活性測定を予定している。HDL形成時の活性測定に関しては、再構成するナノディスクの脂質成分をコントロールし、どの様な脂質が優先的に輸送されるかをATP加水分解活性を指標に検討する。一方、相互作用様式の解明においては、上記項目にも記したようにABCA1とApoA-Iの相互作用をSPR法で現状検出できていないことから、SPR法の条件検討を最重点課題として取り組むと共に、クロスリンク法など全く原理が異なる手法の検討も行う。研究最終年度ではこれまで確立した技術を活用し、HDL形成メカニズムを明らかにする研究を遂行する。具体的な研究項目として、ABCA1とapoA-Iの相互作用機構の解析、脂質トランスポーターと薬物トランスポーターの機能分化の機構解明などを予定している。生化学研究初年度ではナノディスク再構成系の構築が予定よりも早く終了し、培地等の消耗品費が予想よりも少なかった。
１８世紀中葉におけるライプツィヒ派の演劇改革とザクセン喜劇の生成および受容

18世紀中葉のドイツのライプツィヒは先進的な啓蒙文化都市であり、豊かな演劇文化が栄えた。ゴットシェート教授を理論的な柱とするライプツィヒ派の劇作家らは、法学生、医学生、官吏、翻訳家等の知識層である。彼らはハルレキーン役を廃止して、偏った性癖を持つ類型化した人物を諷刺的に描き、良徳を称える一方、悪徳を戒める類型諷刺喜劇の創作を得意としていた。カロリーネ・ノイバーの劇団は、当初ゴットシェートの演劇改革に与していたが、自らも喜劇の脚本を書き、倒産を経てハルレキーン役を復活させ、1740年代には独自に演劇改良を進めた。仏英の劇に加え、ライプツィヒ派のザクセン喜劇の上演と受容に大きく貢献した。2012年度は、ザクセン喜劇の受容の諸相とその時代の代表的劇団ノイバー座の活動についての調査や、収集した資料を読破、解析することに重点を置いた。8月19日8月24日、中国の北京にて開催されたアジア・ゲルマニスト会議に参加し、8月19日司会を務め、8月24日には口頭発表を行なった。9月12日9月23日、ドイツのヴォルフェンビュッテルとライプツィヒ、カーメンツおよびケルンにおいて、現地調査と文献収集を行なった。ヴォルフェンビュッテルの図書館では、演劇史の資料を紐解き、必要な文献を収集した。当時の文学新聞のマイクロフィッチも閲覧し、複写した。ザクセン州カーメンツのレッシング博物館も訪ね、初期レッシングの喜劇とノイバー座との関連やその一座の移動劇団としての活動について示唆を受けた。8月19日にはノルトライン・ヴェストファーレン州のデューレン=ユーリッヒ・クラブの招きを受け、ユーリッヒ市のカイザーホーフにて、最近の研究成果から講演を行なった。ドイツのロータリー・クラブの人々より多くの反響があり、質疑応答も活発であった。11月10日、日本独文学会中国四国支部研究発表会(於広島大学)においては、ノイバー座の活動と演劇改革について口頭発表を行なった。最終年度はレーデン=エスベック著のノイバー夫人に関する伝記やー座の興行記録を調べ、演劇改革の推移を年表にまとめた。ノイバー夫人による『ドイツの序幕』(1734)と演劇綱領、代表作『羊飼いの祝祭あるいは秋の喜び』(1753)を解析し、演劇人としてのノイバー夫人の活躍を明らかにした。5月、口頭発表「ノイバー座の演劇改革とザクセン喜劇の受容をめぐって」を日本独文学会で行った。6月、「宮廷喜劇俳優カロリーネ・ノイバーの演劇改革の試みと演劇綱領ー『ドイツの序幕』を中心に」と題し、一座のライプツィヒでの興行内容と各地を巡る移動劇団としての活動、ハルレキーンを巡る対立、若手俳優育成の功績を日本演劇学会で発表した。11月、日本独文学会北陸支部発表会で、ライプツィヒ派の若手劇作家テオドール・ヨハン・クヴィストルプの喜劇における下僕役の変遷と喜劇性について発表した。7月、広島市立舟入高校で「ドイツ啓蒙の時代とレッシングの演劇」と題する講演をした。以下は今年度の主な論文成果である。1)「宮廷喜劇俳優カロリーネ・ノイバーの演劇改革の試みと演劇綱領ー『ドイツの序幕』を中心に」『演劇学論集』第58号(日本演劇学会2014年8月)ザクセン喜劇の対照となるゲラート作『優しい姉妹』とヴァイセ作『尺には尺を』はまだ解析中で、「啓蒙喜劇におけるコメディア・ゲラルテの影響と現代性」について西洋比較演劇研究会で2014年7月発表予定であり、本研究成果を著書にしたい。ゴットシェートの『批判的詩学の試み』(1730)における喜劇論を考察した。ザクセン喜劇を収めた『ドイツ戯曲集』からクヴィストルプの『山羊裁判』(1744)を中心に裁きと諷刺の特性を、ゴットシェート夫人作『遺言状』『フランス女家庭教師』と比較考察し、論文「ザクセン類型喜劇における「裁き」と諷刺ークヴィストルプの『山羊裁判』とゴットシェート夫人の『遺言状』を例に」を発表した。(「ドイツ語文化圏研究」9号日本独文学会北陸支部編2011年)クヴィストルプ作『心気症の男』(1745)、ゴットシェート夫人作『身分違いの結婚』『フランス女家庭教師』、ゲラート作『病妻』等におけるヒポコンドリー描写の諸相と、喜劇に反映した医学的知識を明らかにした。迷信と科学や理性万能主義の間で、不安定な精神状態やヒポコンドリーになる人が相当いたことを「ザクセン喜劇におけるヒポコンドリーの諸相と医学」の中で発表した。(「広島大学大学院文学研究科論集」第71号2011年) 8月

ケルン大学で文献調査を、ライプツィヒで現地調査をし、ザクセン喜劇ゆかりの場所を探索した。歴史博物館を見学し、サロン文化の様子を探求した。啓蒙喜劇では演劇改革でハルレキーン役が消滅し、レッシングでは召使リゼッテがその代役を努め、他の劇作家はラテン語を解する賢い下僕を描いた。家僕が喜劇性と理性も担う役に変化することを"Botschaft der Komik oder Uebermittelungvon Vernunft?ーZu Dienerfiguren in fruehaufklaererischen Komoedien"と題し日本独文学会文化ゼミナールにて2012年3月口頭発表した。2011年11月には「啓蒙の寓話における擬人化ーレッシングとリチャードソンにおける描写の比較」を日本独文学会中国四国支部学会で口頭発表した。2012年度は研究図書の購入と文献解析をすすめ、口頭発表を2回と講演を1回積極的に行なった。特に海外における研究発表が2回となり、事前の準備に多くの時間をかけることとなった。ザクセン喜劇の主要作品のうち、ゴットシェート夫人の『身分違いの結婚』(1743)、レッシングの『若い学者』(1747)、『老嬢』(1748)、『女嫌い』(1748)を中心に作品の喜劇性や諷刺性と上演記録を調べた。ノイバー劇団の活動と上演レパートリーについて、昨年収集した資料から解析をすすめてみた。さらに、ノイバーの劇『ドイツの序幕』(1737)について精読して、当時の演劇改革におけるノイバー座の演劇綱領を明らかにした。ノイバー起草の喜劇『羊飼いの祝祭あるいは秋の友人』(1753)については、原書の読破と解析を昨年から継続してすすめているが、予想以上に大作であり、最後まで分析するにはいま少し時間が必要である。北京の学会で水が原因で胃腸を壊したり、帰国後過労から体調を崩して治療に専念した時期があった。そのため、ノイバー作の劇作品やクリューガー作『候補者あるいは官吏に至る手段』(1748)に関する解析作業が一時中断してしまった。2013年度にノイバー夫人の劇作品と演劇改革について日本独文学会全国学会で口頭発表をすることが決まっており、鋭意取り組んでいる。カロリーネ・ノイバーの劇作家としての活動と作品は演劇史において解明が待たれる分野であるが、ドイツでもまだあまり研究がなされてこなかったので、是非研究を前進させたいと考えている。2011年度は研究書の購入、文献収集と調査を積極的に行なった。大学図書館の相互貸借もよく利用した。ザクセン喜劇の主要作品のうち、クヴィストルプの『心気症の男』、『山羊裁判』、ゴットシェート夫人の『遺言状』『フランス女主人』、レッシング作『女嫌い』を分析した。2011年8月、ライプツィヒで現地調査を行ない、ゴットシェート教授夫妻の住居跡、ゲラートの像、若きレッシングの下宿跡、カロリーネ・ノイバーが構えた劇団跡やその後の移動劇団跡地を歩いて回り、当時の生活空間における位置関係を確認することができた。ライプツィヒの国立図書館やニーダーザクセンの図書館が改修中のため、一部の文献しか閲覧を許されず、収集の点では達成度が高いとは言えなかった。しかしながらレッシング・アカデミーを訪ねて、レッシング喜劇の当時の上演資料や舞台批評に関する資料を閲覧できた上に、ノイバー博物館の存在を教えてもらい、予定外の博物館をザクセン州ライヒェンバッハまで訪ねた。演劇史では記述が少ないノイバー夫人の生涯、功績、脚本について学んだ。
コバルト酸化物の電子状態制御と新規超伝導研究

強相関電子系の開拓的研究を、銅酸化物超伝導体研究で累積された知識をガイドラインにして、物質の作成・評価から、巨視的物性量の測定、さらには中性子散乱や核磁気共鳴(NMR)等の微視的手法を適用して進めた。数多くの物質の開発を旨としたが、微視的研究に至ったものの多くについては単結晶試料を作成し手実験に用い、信頼性の高いデータを発表することが出来た。成果が得られた主な課題は、(1)高温超伝導体に残っていた問題のほか、(2)Na_xCoO_2yH_2O(y1.3)の超伝導機構、(3)nontrivialな磁気構造を持つ系の特異な異常ホール効果、(4)パイロクロア型化合物Hg_2Cu_2F_6Sが有する量子スピン系のスピン液体状態、(5)Co酸化物のスピン状態制御、(6)擬ハニカム格子系のスピンギャップ現象や新型相転移、(7)一次元量子スピン系で初めてのmultiferroic物質(磁気転移と強誘電転移が同時に生じる物質)LiVCuO_4の発見と類似系の研究、等々があるが、多くの場合、物質開拓と新規物性現象の発見が表裏一体となっている。さらに具体的に例示すれば、(2)に関して、Coの三角格子が示す超伝導が、singlet Cooper対を持つことを示し多くの主張をくつがえしたこと、転移温度T_c-ν_Qの相図(ν_Q:NMR四重極周波数)を完成したこと、中性子磁気非弾性散乱によって磁気特性を理解するキー情報を得たこと、(3)に関して、長い間未解決の問題であった異常ホール効果の発現機構にスピンカイラリティがどう関与しているか、Nd_2Mo_2O_7やスピングラス系を用いて精密で本質的情報を提供したこと、(7)スピンs=1/2multiferroic系LiVCuO_4の発見をもとにした一連の研究で、その微視的研究の一方の糸口を開いたこと、などである。CoO_2の三角格子をもつ水和物Na_xCoO_2・yH_2Oに発見された超伝導の起源解明を念頭に研究を進めた。この系に新規な超伝導が現れているのか、その磁気フラストレーションが、銅酸化物の場合と同様、超伝導発現に重要な意味を持つのか、さらにはCoのスピン状態変化(軌道励起)が寄与しているのか等、の疑問に答えることを目的のひとつにした。そこではNa_xCoO_2・yH_2Oばかりでなく、母物質であるNa_xCoO_2や銅酸化物を含めた他の強相関電子を持つ物質系をも対象に、広い視野から物性研究を進めた。超伝導をもたらすものを広く総合的に理解することが、全体の物性を理解する鍵となることが多いからである。まず、試料の作成とその評価を行った後、磁気・熱・輸送の各特性を巨視的実験手段で調べ、さらにNMRナイトシフト、核磁気縦緩和率、中性子散乱という微視的手法を用いて、常伝導状態における物性およびNa_xCoO_2・yH_2Oや銅酸化物高温超伝導体については、その超伝導相の性質を調べた。銅酸化物では、"ストライプ"という1次元的電荷秩序の動的揺らぎの出現が超伝導発現に対してどんな影響をもつかを解明した。Na_xCoO_2・yH_2Oでは、結晶軸を揃えた試料を用いてNMRナイトシフトを詳しく研究し、クーパー対がsinglet状態にあることをあきらかにした。Na_xCoO_2の常伝導相の物性研究結果もこれを支持する。

このことは、現在、多くの研究者間に広がる"クーパー対はtriplet状態にある"との主張を否定するものである。また、perovskite型や類似の構造を持つ酸化物のスピン状態変化がどのような因子に支配されているを明らかにした。水和物超伝導体Na_xCoO_2-yH_2O(y1.3)の超伝導発現機構の解明,Co酸化物のスピン転移に伴う劇的物性変化とその転移の制御、さらには高温超伝導体に残された問題の完全解明をめざし研究を進めた。Na_xCoO_2-yH_2Oの研究では、超伝導が新規なものかどうかを知るために、その磁気フラストレーションやCoのスピン状態変化(軌道励起)の役割の解明をめざして、銅酸化物高温超伝導体に対する研究成果をガイドラインにして研究した。Na_xCoO_2-yH_2Oばかりでなく、母物質のNa_xCoO_2や他の強相関電子を持つ物質系をも対象に広い視野から物性研究を進めた。特にNa_<0.5>CoO_2が示す二つの相転移がどのような素性のものであるかについてNMRと中性子散乱による詳細なデータを発表し、これらの電子系の特徴を明らかにしたことは、他グループを含めた多くの研究・考察に極めて大きな影響を与えた。また、超伝導相Na_xCoO_2-yH_2Oの単結晶を用いたNMR研究は他ではなし得ていないもので、そこで確立された"ナイトシフトが結晶軸と磁場方向の関係によらず、超伝導の出現に伴って消失していく"という結果は、クーパー対がsinglet状態にあることを端的に示す。研究者間に広がる"クーパー対はtriplet状態にある"との主張を否定するもので大変重要である。大型単結晶を用いた中性子非弾性散乱で磁気励起が見られないことも、これまでの実験で明らかになりつつあるが、これは、超伝導発現機構に磁性が役割を持っていないことを示す。銅酸化物高温超伝導体研究では、"ストライプ"という1次元的電荷秩序の動的揺らぎの出現が超伝導発現に対してどんな影響をもつかを最近調べてきたが,実際に"ストライプ"の静的秩序を持つ試料でのフォノン異常がどの見えるかについて結果を発表できるに至っている。(1)Na_xCqO_2・yH_2O(y1.3)の超伝導発現機構の進展、(2)honeycomb格子系Li_2RuO_3の新型相転移の発見、(3)LiVCuO_4というこれまでの系とは異なった特徴的系における磁気、強誘電同時(multiferroic)転移,さらには、(4)nontrivialな磁気構造を持つ系の異常ホール効果に関する詳細な議論等が今年度の成果の主な成果例である。(1)Na_xCoO_2・yH_2Oの研究では、超伝導が新規なものかどうかを知るために、その磁気フラストレーションやCoのスピン状態変化(軌道励起)の役割の解明をめざし、銅酸化物に対する研究成果をガイドラインに、NMRと中性子散乱による詳細なデータをとってきた。特に、クーパー対がsinglet状態にあることを明快にしてきたが、さらに、転移温度鏡のNMR四重極周波数ν_Qに対するプロットによって得られた相図に現れた、超伝導相を真っ二つに分断する非超伝導相の起源が、電荷秩序の出現によることを明らかにした段階である。(2)Li_2RuO_3では、約540Kに相転移を発見し、それがRu-Ruの分子軌道の形成を伴った新型転移であることを構造決定等を通して明らかにした。つぎに、(3)LiVCuO_4系がいわゆるmultiferroic転移を持つことを、スピン1/2の簡単な系に初めて発見した。これは今後、この現象の理解に大きき寄与するものと期待される。
嗅覚系が高度に発達した魚類の匂い受容とその特異的機能に関する基礎的研究

従来、きわめて情報量が乏しかったウナギ目魚類の嗅覚器の組織学的知見とニホンウナギのアミノ酸に対する応答性(電気生理学的および行動学的知見)に関して、次段の研究につながる種々の情報を得ることができた。また、板鰓類および全頭類の嗅覚組織および嗅球、終脳に関する多くの組織学的情報が得られ、高度な匂い情報処理機構を研究する端緒が得られた。本年度においては、主にウナギ(Anguilla japonica)の嗅覚受容と嗅覚行動の特性を明らかにするための実験を行なった。嗅覚応答測定用としては養殖業者から購入した魚を、行動実験には野生魚をそれぞれ雌雄の別なく用いた。嗅覚応答としては、露出させた嗅房上から常法に従いElectro-olfactogram(EOG)を記録した。ニオイとして、L-アミノ酸22種(Arg,Gly,Pro,Lys,Ser,His,Cys,Thr,Ile,Leu,Phe,Met,Trp,Tyr,Val,Asp,Glu,Asn,Gln,Ala)およびタウリン(Tau)、ベタイン(Bet)を用いた。行動実験では、Cys, Betおよびウナギ捕獲時に餌として用いたマハゼと市販の金魚の体表粘液をニオイ刺激とした。行動観察用の水槽として、塩ビ製チェンバー中にウナギが一定方向を向いて落ち着くための塩ビパイプを固定したものを用いた。暗黒下において飼育水を常時潅流させながら魚頭部に対してニオイ刺激溶液をパルスとして与え、その前後の挙動を水中CCDカメラ(赤外線照射型)で記録した。EOG測定の結果、Bet,Cys,Asp刺激は、他の刺激と比較して3倍以上の大きさのEOGを発現させることがわかった。このような特徴は他魚種では見られない。EOGの相対的な大きさとアミノ酸側鎖の性質との間には明確な相関は見られなかった。また、アミノ酸応答閾値濃度は10^<-8>-10^<-5>Mの間にあり、他魚種同様敏感に受容することがわかった。行動実験の結果、金魚、ハゼのニオイ刺激に対しては明らかに活動度が上昇した。他のニオイよりも大きなEOGを発現させたCysとBetの刺激に対しては、Bet刺激時のみ活動度がやや上昇した。これは、大きなEOGを発現させるニオイ物質が、単独の刺激では明確な摂餌促進効果を持つものではないことを示している。【1】ウナギ嗅覚系に関する研究:養殖淡水ウナギおよび三河湾産銀ウナギ(野生魚)からElectro-olfactogramを記録した。匂い物質としてL-アミノ酸20種およびタウリン(Tau)、ベタイン(Bet)を用いた。その結果、淡水ウナギ、銀ウナギともにAspとCys、Betの3種が大きなEOGを発現させた。しかし、銀ウナギは淡水ウナギよりも応答強度が小さく応答閾値も高い傾向が見られた。さらに、両ウナギのアミノ酸刺激に対する行動変化の観察を行った。養殖ウナギはBetに対して大きな反応を見せた一方、Cysに対しては全く行動変化を示さなかった。また、銀ウナギではCys,Arg,Betが行動変化を引き起こした。大きな嗅覚刺激効果を持つ匂いがなんらかの行動を誘起するとは限らなかった。カルボシアニン系蛍光色素(DiI,4-Di-10ASP)および水溶性蛍光色素FM1-43FXを用い、それぞれ、嗅細胞から嗅球・終脳までの神経の走行の可視化と嗅細胞活性に依存した染色を行った。その結果、ウナギ嗅球のシナプス構造がある程度明らかになり、アミノ酸刺激により繊毛型と微絨毛型の両方の嗅細胞が活性化することもわかった。【2】サメ・エイ類嗅覚系に関する研究:ウナギと同様に、蛍光色素を用いこて匂い受容に関わる神経走行の概要を明らかにすることを試みた。DiI、4-Di-10ASPにより嗅索側から嗅球を染色した結果、きわめて大型の糸球体と思われる構造を多数認めた。硬骨魚類よりもむしろより高等な脊椎動物に近と思われた。また、FM1-43FXを用いた実験では、匂い刺激強度に依存して染色された嗅細胞が確認できた。このことは、FM1-43FXが匂い応答を定量的に測定する際の有用なツールになり得ることを示しており、この方法を用いて嗅板上の嗅細胞の二次元的分布特性についても調べることが可能であることがわかった。昨年度までの研究の過程で、高度嗅覚魚の匂い受容および処理機構に関する生理学・行動学的研究を進めるためには、ある程度古典的な手法も用いて組織学的観察を徹底的に行う必要があることが明らかになった。そこで、本年度は、特にサメ類とウナギを用いて、主に嗅球の組織学的観察を行った。観察の手法としては、主に鍍銀法(ボディアン染色石川変法)および蛍光色素法(カルボシアニン系蛍光色素,DiIおよび4-Di-10-AsP;水溶性蛍光色素,FM1-43およびFM4-64)を用いた。

試魚として、ドチザメ(Sphyma zygaena)、シロシュモクザメ(Syhyna zygaella)他の板鯉類計7種、およびウナギ(AngHflla japollfca)他のウナギ目3種を用いた。観察には、光学顕微鏡、蛍光顕微鏡または共焦点レーザー顕微鏡を用いた。シロシュモクザメ、アカエイ、ユメザメでは様々な長さの樹状突起を持つ嗅細胞が見られたが、ドチザメでは比較的細胞体が大きく樹状突起が短いほぼ同じ形状の嗅細胞が同じ層に密に並んでいた。また、板鯉類の嗅球糸球体構造は硬骨魚類よりもきわめて明瞭であり、その数も格段に多いことがわかった。このことは、嗅上皮上にきわめて多くの嗅細胞が存在することとも符合し、板鯉類の嗅球における匂い情報の受容・処理機能が、硬骨魚類よりも発達していることを示唆する。また、同じ板鱒類でも種によって糸球体の分布様式が大きく異なることも明らかになった。一方、ウナギ目魚類の糸球体数は板鯉類に比べ格段に少なく、分布もランダムであり層状をなしていなかった。しかし、ウナギ目魚類は硬骨魚類の中では多くの嗅細胞を持つ種と考えられており、板鯉類との嗅球構造の違いがどのような処理機構の違いを反映したものであるかを今後調べる予定である。さらに、板鯉類、ウナギ目魚類の両種においてFM1-43を用いた匂い応答強度に依存した染色が可能であることがわかった。FM4-64は、FM1よりも脂溶性が高いこともあり定量性に問題があると思われた。今年度においては,板鯉類・ウナギ目魚類およびサケマス類の嗅覚について主に以下の研究を行なった。<板鯉類の嗅覚>板鯉類4種を用い,DiI,4-Di-10-ASPの局所投与と鍍銀法(石川変法)を用いて嗅上皮-嗅球間の神経走行を観察した。シビレエイでは嗅球内側・外側とその間の3つの部位で大きな糸球体群を形成していることが確認された。ホシザメは嗅球内側・外側で糸球体群が分かれており,それぞれに明瞭な層構造が確認された。アカエイ・シビレエイ・ホシザメの嗅球内側に挿入した4-Di-10-ASPは嗅房内側の嗅上皮へ,嗅球外側に挿入したDiIは嗅房外側の嗅上皮へ拡散していた。シロシュモクザメでは,色素投与部位周辺の糸球体に隣接する嗅房の嗅神経のみが染色された。すなわち,嗅細胞は最短距離で到達する糸球体にのみ軸索を投射していると考えられた。<ウナギ目魚類>ウナギ目10種を用い同様の観察を行った。ウナギ目魚類は大きな嗅房を持ち,ホラアナゴの嗅板表面には他の9種では見られないしわ状構造が見られた。嗅球連続切片を三次元的に再構築して観察したところ,糸球体は前部付近に多く分布しており,嗅球外側では後部まで連続して分布していた。種による大きな違いは見られず,糸球体数は少なかった。ウナギ目魚類はある程度限られた匂い物質を高感度に受容・識別している可能性が考えられた。また,ウナギ終脳前部腹側において,嗅球前部外側に挿入したDiIによって染色された細胞体群が確認された。<サケマス類の嗅覚>FM1-43FXを用い,ニジマスとアマゴをモデルとして嗅覚情報処理・記憶形成の場の特定を試みた。その結果,脳脊髄液を3μM FM1-43FXを含む人工脳脊髄液で置換することで嗅球,終脳内中心部の細胞間隙までFM1-43FXが浸透することが確かめられ,異なる匂い刺激によって終脳の異なる部位の神経群がFM1-43FXを取り込むことがわかった。本法により簡便に嗅覚情報の処理・記憶形成の場を特定することができる可能性が示された。
マウス胚性幹細胞の分化指向性における脂質シグナリングの役割の解明

細胞治療薬開発を目的とした心筋細胞の効率良い発生・増殖のためには、多能性幹細胞からの心筋分化メカニズムを理解することが必要である。心筋分化における特性が異なるP19CL6細胞サブラインを単離し、トランスクリプトーム解析により心筋分化に関連する24遺伝子(CMR遺伝子)を抽出した。マウス胚性癌細胞(EC細胞)においてRNAiによりCMR遺伝子をノックダウンし、心筋細胞に分化させたところ、18のCMR遺伝子で自発的拍動もしくは心筋特異的マーカー遺伝子発現量に影響が見られた。マウス胚性幹細胞(ES細胞)においても検討したところ、AW551984、prostamide/prostaglandin F synthase、Cd302のノックダウンによって、EC細胞とES細胞に共通して心筋分化の程度に変化が観察された。AW551984のノックダウンは、多能性および中胚葉への分化に影響を及ぼすことなく、心筋特異的転写因子であるNkx2.5の発現を抑制した。さらに、Wnt/β-cateninシグナルは胚葉体形成時におけるAW551984とNkx2.5の発現を増強した。これらのことから、AW551984はWnt/β-cateninシグナルによるNkx2.5発現を調節することにより、心筋分化を制御することが示唆された。心筋梗塞などによって引き起こされる心機能不全に対して多能性幹細胞から分化させた心筋細胞を治療薬として用いる試みがされている。多能性幹細胞から目的細胞への低い分化効率は収量の低下を招くため、効率の高い分化方法を考案することが重要であり、そのためには多能性幹細胞からの心筋分化メカニズムの解明が必要である。我々は、すでにマウス胚性癌細胞および胚性幹細胞(ES細胞)の新規の心筋分化制御遺伝子としてAW551984の同定に成功している。前年度までの研究により、AW551984は心筋前駆細胞から心筋細胞への分化の制御を行うことが明らかになっている。AW551984の遺伝子産物は、VWAドメインおよびVITドメインを有する85 kDaのタンパク質である。ヒトホモログであるvon Willebrand factorA domain containing 5A(VWA5A)はがん抑制遺伝子として報告されているが、VWA5Aの発がん抑制における分子メカニズムは不明な点が多い。AW551984による心筋分化制御メカニズムの解明のためには、AW551984と相互作用するタンパク質を同定する必要がある。AW551984VITドメインとGSTタグタンパク質との融合タンパク質を大腸菌に過剰発現させ、グルタチオンセファロースカラムによりアフィニティー精製した。このリコンビナントタンパク質を用いて、分化させたマウスES細胞の細胞溶解液よりプルダウンアッセイを行い、LC-MS/MS解析によりAW551984 VITドメイン結合タンパク質を8種類同定した。現在これらの同定されたタンパク質のマウスES細胞の心筋分化における機能解析を行っており、AW551984の心筋分化制御メカニズムの解明に将来結ぶつくことが期待される。マウス胚性癌細胞(EC細胞)であるP19CL16細胞より、DMSOによって誘導される心筋への分化の効率が異なる株を単離し、自律拍動する小結節数や心筋特異的マーカー遺伝子発現量の主成分分析により各々の株の心筋分化能を評価した。これらの細胞株の心筋分化能と分化誘導前のマイクロアレイ解析によるmRNA量との相関により、EC細胞の心筋分化能と関連のある24遺伝子を同定した。マウスEC細胞および胚性幹細胞(ES細胞)においてsiRNAによるこれらの遺伝子発現の抑制の影響を検討したところ、AW551984、2810405K02Rik(prostamide/prostaglandin F synthase)およびCD302において心筋分化制御がEC細胞とES細胞共に認められた。