hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
悪性腫瘍における樹状細胞と癌遺伝子産物発現に関する臨床病理学的研究

ついで肝細胞癌については、S-100DC出現は54例中40例に認められ、数の多いものの予後がより良好であり、又、腫瘍の増大とS-100DCの数は密接な関連を有しており、肝癌においてはS-100DCは予後判定の有用なマーカーであることを明らかにした。膀胱癌でも同様の結果が得られた。又、食道癌においても同様にS-100DCの出現数と予後は密接な相関を有していることが示された。p53については、皮脂腺癌において、転移や再発を生じたものでより高頻度に強く陽性となる所見が得られ、食道癌でもp53陽性例の予後は不良であった。このようにS-100DCは予後良好を示唆するマーカーであり、逆にp53は予後不良をあらわすマーカーであることが明らかであった。腎盂・尿管癌では、98例につき検討した結果、26例(26.54%)にp53過剰発現をみ、又、ヒト乳頭腫ウイルス(HPV)16と18型DNAも32例(32.7%)に検出され、6症例は双方が陽性であった。p53陽性例では、浸潤性非乳頭型で且つ高異型度例に頻度が高く、一方、HPV陽性例では非浸潤性乳頭型症例が統計的に高頻度であった。又、腫瘍に近接した異型上皮部もp53やHPV陽性例が各々73%、66%に見出され、これらは腫瘍細胞の増殖様式を規定するのみでなく、腫瘍化の初期変化にも関与している可能性が示唆された。又、bcl-2蛋白の過剰発現が21例(22.3%)に認められ異型上皮部にも認めたことから、腫瘍化初期において重要な役割をp53蛋白と共に果たしていると思われた。更に前立腺癌についてのMDM2蛋白、食道癌におけるサイクリンA、膀胱癌におけるサイクリンD1、Rbの各過剰発現についても検討し、いずれも不良な予後と相関することを見出し各々報告した。一方、中国側症例については、膀胱癌5例、咽頭癌8例、喉頭乳頭癌2例について、S-100DCを検討したデータでは、異型度が低いか、分化度が高い症例ではS-100DCの出現が高異型度や低分化な症例に比し数も多く、形も多彩で大型のものが認められ、日本側で得られたデータと類似の傾向が得られた。更に中国側症例では、96例の膀胱移行上皮癌の内、34例(35.4%)にp53蛋白の過剰発現をみ、18例(18.8%)にS-100DCが多数みられ、12例(12.5%)にHLA-DR陽性細胞を多く認めた。p53陽性例では高異型度のものに陽性率が高かった。又、49例の食道扁平上皮癌では、p53蛋白は21例(42.9%)に陽性であり、S-100蛋白或いはHLA-DR陽性細胞は各々9例(18.4%)、7例(14.3%)において多数認められた。p53はstage IVに高率に陽性であった。これらのデータも日本側症例と類似したものであった。最後に肉腫に関しては、日本側症例においても、中国側症例においてもS-100DCの出現は極めて乏しく、これらが予後不良を示唆しているものなのか、又、S-100DCの出現機構が癌腫とは基本的に異なっていると解釈するのか今後の検討が必要である。文献上、これに関する報告は極めて乏しい。本研究は、癌腫を中心としてS-100蛋白陽性樹状細胞(S-100DC)出現と腫瘍の悪性度、進展、予後との関連性を検討し、一部癌抑制遺伝子産物の内、p53について検索した。中国側の症例の検討は、症例数は少ないが、膀胱癌、咽頭癌を中心に若干の検討が可能であった。まず日本側で得られたデータでは、皮膚の悪性腫瘍の内、偏平上皮癌、ボ-エン病・基底細胞癌について検討し、扁平上皮癌の内分化度の高い組織内でのS-100DC出現が統計的に有意に高く、基底細胞癌では数が少なく、S-100DCの形も小型であった。ボ-エン病はこの両者の中間的性格を有していた。ついで肝細胞癌については、S-100DC出現は54例中40例に認められ、数の多いものの予後がより良好であり、又、腫瘍の増大とS-100DCの数は密接な関連を有しており、肝癌おいてはS-100DCは予後判定の有用なマーカーであることを明らかにした。
霊長類における全身構造の完全三次元デジタル化と運動機能の力学モデル構築

異なるロコモーション適応を遂げた霊長類群を選択し、各運動様式における生体諸構造間の力学的関係をデジタル空間内で確定し、適応戦略としての移動運動を定量的に記述することが、本研究の目的である。霊長目の樹上性ロコモーションは、機能形態学的進化戦略として多様性に富み、古くから肉眼解剖学の好材料とされてきたが、各進化ストラテジーを客観的に認識・比較するためには、旧来の肉眼的記載に加えて、全身構造のデジタルモデルの完成が必須である。本研究計画では、ロコモーション機構の定量的把握が急務とされる霊長類の樹上歩様運動を、力学法則に則った点集合の運動として記述し、客観性を欠くと批判されてきた従来の解剖学的手法に対して、より緻密な運動の記述を企図して、研究を進めた。17年度は、標本と凍結遺体を用いて、ロコモーション戦略の相違に関連する全身構造の三次元計測値を集積し、解析を開始した。研究対象種は、標準的な樹上適応を見せるヒト、ニホンザル、アカゲザル、チンパンジー、オランウータンなどを対象とし、比較対象として、食肉目クマ科、登攀目ツパイ科、長鼻目ゾウ科、アフリカジネズミ目テンレック科を導入した。多岐にわたる適応状態を検討対象に加えることで、霊長類の多様な運動特性の全体像を把握することが可能となってきた。各ロコモーション適応における全身の運動特を、各骨格筋の筋量や生理学的筋断面積の算出と、CT、MRIによる三次元デジタル機能形態学により解明を進めた。得られた定量的結果は、肉眼解剖学的観察結果とあわせて、霊長類およびそのほかの哺乳類の運動機構の解析に貢献しうるものである。
日本人の英語習得と聴覚認知・音韻認識能力の関係-学習障害児および健常児での検討

ディスレクシア児,健常児者を対象に日本人の英語習得と聴覚認知・音韻能力の関連を検討した。ディスレクシア児では聴覚認知課題のうち振幅変化課題が不良であったが,中学進学後はその成績に関わらず全例が英語学習に困難を認めた。成人の音韻能力は仮名の音読速度と相関したが,英語能力とは相関を認めなかった。外国語としての英語の習得には動機の影響が大きく,認知的要因の解明のためには第二言語環境にある例での検討が重要と考えられた。日本人ディスクレクシア児13名,同年齢対照児19名を対象にGoswamiらの作成した聴覚認知課題(音圧変化-単音(rise time),音圧変化-連続音(P-centre),音の長さ(duration),音の間隔(gap detection),音圧(intensity))を行った。さらにディスレクシア群には(2)音読課題,(3)音韻課題(モーラ分解,単語逆唱,母音比較)を行った。対照児群と比較しディスレクシア群で有意に不良であった課題はrisetimeのみであった(t検定,p=0.003)。課題成績が対照群平均の1.5SD以下である者の割合はrisetimeとP-centreではディスレクシア群の30.8%であり,対照群の5.3%に比べ有意に多かった(χ2検定,p=0.051)。P-centreは対照児群での標準偏差が最も大きい課題であった。ディスレクシア群においてgap detectionと音韻課題の単語逆唱,母音比較に相関(r=0.591,0.562)を認めたが,同時に対照課題である形態比較とも強い相関(r=0.705)を認め,注意力など音韻能力以外の因子を反映していると考えられた。対照群との有意差を認めたrisetimeは音読課題,音韻課題との相関を認めなかった。音読課題と相関を認めたものはなかった。以上より,日本人ディスレクシア児においても英語圏のディスレクシア児と同様,音圧変化の認知が不良であることが示唆されたが,この能力が仮名の読み能力に関与しているという結果は得られなかった。しかし対照群での能力差も大きいことから,この能力が仮名の読みには関与しないが英語の習得には関連している可能性が残る。中学生以上のディスレクシア児3名のうち通常学級在籍の2名はともに英語の学習困難を認めた。今後,2021年度に中学生となる者を含めて評価を行い,英語習得と聴覚認知・音韻能力との関連を検討する。今年度は中学生のディスレクシア児と健常児、および成人を対象とする調査を行った。(1)成入を対象とする日本語・英語の読みと音韻認識能力評価日本語における読み書き障害の既往のない健常成入18名(男7名:女11名、平均38.5歳)、英語の読み困難を主訴とするディスレクシア疑い例1名を対象として検査を行った。小児用に作成された読字障害診断検査を用いて日本語の読み能力を評価した。ディスレクシア疑い例では健常群に比べ仮名単音連続読み、単語の音読時間が有意に長く、成人では音読速度が読字困難の有用な指標となると考えられた。また、音韻認識課題(母音比較)の成績は単音連続読みの音読速度と強い相関を示し、成人においても音韻認識能力が仮名のデコーディング能力と関連していることが明らかになった。一方、英語圏での標準検査から作成した英語能力検査の各項目は音韻認識課題成績と有意な関連を認めず、音韻認識能力が第二言語としての英語の読字能力の決定的要因ではないことが示唆された。(2)中学生のディスレクシア児および健常児を対象とする日本語・英語の読みと音韻認識能力評価中学校に進学したディスレクシア児が少なく十分な数の検査が行えなかったため、個別の聞き取り調査を行い、ディスレクシア児に特徴的な困難を抽出するためのアンケートを作成した。このアンケートを用いて、来年度に規模を拡大して調査を行う予定である。日本人の英語習得と音韻課題・聴見認知の関係を検討するため、ディスレクシア児の追跡調査、成人の英語習得能力に関する調査に加え、バイリンガル環境にある英語習得困難児の音韻認識能力を評価した。1)ディスレクシア児の英語習得と音韻認識・聴覚認知能力仮名の困難を認めたディスレクシア児のうち中学に進学した7名全例が英語習得にも困難を認めた。全例が小学生時の音韻課題成績が不良であったが、聴覚認知課題が不良であったものは2課題における各2名(述べ3名)のみであり、聴覚認知障害の関与は低いと思われた。2)健常成人の英語習得能力と音韻認識能力成人の音韻認識能力(母音比較)と仮名・英語の読字能力の関連を検討した。母音比較の反応時間は、仮名文字・単語・非単語の音読時間、非単語の誤読数と相関し、音韻認識能力と仮名のデコロディジグ能力の関連が示唆された。

一方、母音比較課題は音素レベルの分解を求める課題であるが、英語のデコーディング課題(非単語の音読・つづり)とは全く相関を示さなかった。英語課題間では、非単語音読以外の4課題は互いに強く相関したが、非単語音読は単語音読のみと相関し、非単語つづりとも全く相関を示さなかった。このことから日本人成人は音素-書記素対応規則ではなく単語との類似性に基づいて非単語を読んでいる可能性が示唆された。非単語つづりは英語能力の高い者でも一様に不良であり、日本人成人の音素認識能力は限定的であると考えられた。3)バイリンガル環境にある英語習得困難児の音韻認識能力(症例報告)対象児(小学5年生)は渡米後3年を経過しても英語習得が不良であった。日本語の理解語彙が-1.9SDと不良であったが、音韻認識・デコーディング能力には英語・日本語とも学年相当であった。本児の英語習得困難には、音韻認識能力障害ではなく母語における語彙能力の弱さが関与していることが示唆された。
D-糖ラクトン体を用いるL-糖の新規合成法の開発

L-糖は、いくつかの生物活性物質の活性を左右する重要な構造であることが知られている。しかしながら、その自然界での希少性、ならびに化学合成による供給が十分ではないため、医薬化学の分野への適用はほとんどなされていない。そこで、L-糖の実用性の高い化学合成法の開発をめざした。昨年すでに、本合成法の鍵反応となるD-糖ラクトン体のアミド化による開環反応と、それに続いて光延反応を利用した5位の反転を伴う再閉環反応を開発している。本法はD-グルコース、D-ガラクトース、D-マンノースからそれぞれ対応するL-糖ラクトン誘導体を高い収率で与え、続く加水分解、還元反応を経てL-イドース、L-アルトロース、L-グロース誘導体を容易に供給するものである。これにより、当初の目的であるL-ピラノースの実用性の高い化学合成法の開発に成功した。そこで本年は、本法のフラノースへの適用をめざし、L-リボースの合成を行った。入手容易なD-マンノノラクトンについて上記のアミド化、再閉環を行い、非常に高い収率でL-リボノラクトン誘導体を合成した。さらに、数ステップを経ることにより、極めて効率の良いL-リボースの化学合成法の開発に成功した。L-リボースはDNAやRNAの構成糖であるD-リボースの鏡像体であり、その生物活性は非常に興味深い。今後、抗ウイルス剤、制癌剤、さらにはエナンチオDNA創製などに展開させていく予定である。しかしながら、その自然界での希少性、ならびに化学合成による供給が十分ではないために医薬化学の分野への適用はほとんどなされていない。本年度は、本合成法の鍵反応となるD-糖ラクトン体のアミド化による開環反応と、それに続いて光延反応を利用した5位の反転を伴う再閉環反応を検討した。D-糖の5位の反転は、希少性の高いL-糖を与えるものであるが、いかにして反転を成し遂げるかが重要な課題であった。初めに、D-グルコース、D-ガラクトース、D-マンノース由来の糖ラクトン体を原料として用い、ルイス酸触媒によるヒドロキシアミド化反応を試みた。これまでに糖ラクトン体のヒドロキシアミド化による開環反応は全く検討されていなかったが、トリメチルアルミニウムを共存させることによって、開環体であるヒドロキサム酸誘導体が収率良く得られることを見いだした。続いて光延反応によるこれらヒドロキサム酸誘導体の閉環反応を検討した。これまでヒドロキサム酸誘導体を用いた光延型の閉環反応はアミノ酸由来の4員環化合物について検討されており、アミドの窒素が求核攻撃したラクタム誘導体の生成が報告されている。しかしながら、糖由来の6員環化合物の場合には酸素が攻撃したラクトン誘導体が主として得られた。光延反応においてはSN2型の求核置換反応が進行することが知られており、この場合もそれによって閉環と同時に5位の反転も起きていることも確認された。この結果に基づき、得られたラクトン誘導体を続く加水分解、還元反応に供し、L-イドース、L-アルトロース、L-グロース誘導体に導くことに成功した。以上のような方法によって当初の目的であるL-糖の実用性の高い化学合成法の開発に成功した。
生体ゲルの構造揺らぎと力学的性質

今年度は、従来から行ってきたゲルの基礎的物性研究を以下の3つの方向に発展させた。(1)広い周波数範囲での弾性定数及び弾性損失の測定:超音波パルス法によりMHz領域での音速及び吸収を測定した。対象とした試料はNIPAゲルであり、室温の脈潤相での体積弾性率は、静的に測定された値(浸透弾性率)に比較して約10^5倍も大きい事が分かった。収縮相での測定及び体積相転移における弾性異常の測定は現在続行中である。(2)バイオゲルの機械的性質の測定:新たに生体質由来のゲルの物性測定を開始した。まず、試料の調整が容易なカラジーナン、アガロース、ゼラチンの各ゲルについて、超音波法による音速、吸収の測定を行った。カラジーナンでは、ゲル化点近傍で、音波吸収が極小となる現象が見いだされた。これは、ゾル-ゲル転移の動力学の観点から極めて興味深く、現在理論的な解明の可能性を検討している。(3)ゾル-ゲル転移の運動学的研究:種々の合成及び生体高分子のゾル-ゲル転移を、濁度及び施光能の測定によって調べ、ゾル-ゲル転移の進行速度によって、ゲル化機溝を考察した。NIPA/WATER系では、ゾル-ゲル転移は1秒以下で起る事が分かった。この事から、スピノーダル分解による架橋点形成というモデルが提出された。
視聴覚器材システムによる生物教材の開発と指導法の研究

視聴覚機材システムによる生物教材の開発と有効な指導法についての研究で、いくつかの教材の開発とその効果についての検討を行った。教材の開発では、当大学内に設置した自然観察路のガイダンスに機材システムの活用を行い、また、妙高周辺の野外観察路についても、同様のプランで活用化をはかった。また、当大学内の池沼の小動物を水槽で飼育し、映像とその解説を含めた器材化を考察した。この種のシステムとしては、顕微鏡の使用技術を高める視聴覚器材システムが、かなり有効な結果をもたらすことを、中学校生徒を対象とする実践研究によって確かめることが出来た。映像化による概念形成の新分野を開拓するために、時間・空間概念の提示とその効果についての調査を行い、これは、さらに今後、いろいろな角度から発展させえる資料が得られた。これらの教材は生物・地学の領域における進化などの学習に適用できると考えている。理科の学習指導には、直接体験が重要であることは論を待たないが、授業展開の中で体験させることが困難なものが多く、映像資料を授業の流れの中でシステム化していく研究は、今後、いっそう必要になると思われる。さらに、実験・観察を行わせる場合でも、その導入あるいは方法のガイダンスにおいて、システム化された映像資料の活用が大いに期待できる。また、児童の海藻分類の着目傾向を調査した例のように、児童・生徒の学習心理学的な行動分析にも、器材システムの活用が考えられ、今後に期待できる分野であることが確認された。その他、探究学習に科学史の事例を取り上げることの有効性についても、検討され科学史の事例の提示に、ビデオやOHPシ-トを含んだモジュ-ルの利用も、有効な課題であることが確かめられた。視聴覚器材システムによる生物教材の開発を行うため,モニターテレビ・ビデオコーダー・カラーディスプレイなどを利用して,視聴覚資料をどのように編集し,提示したら教育効果が得られるかという点について検討した.一方,システム化するための素材として,ビデオ・スライドの作成とその準備を進めた.システム化によって効果があげられると考えられる視聴覚教材は,個別的なものではなく,関連した現象を,解説や指導の過程を加えて有効に配列する必要がある.このため,実験や観察の仕方などを加えながら,その結果を影響で示すような組み合わせのもの,あるいは播種から発芽・成長・開花・結実の一連の過程を,時期的な説明を入れて植物の生活環を理解させるもの,特別な開花の様式をもつ植物で,授業内で直接にそのようすを提示することができないものなどの具体例が検討された.実験・観察とその結果を理解させるシステムとして,スンブ法とコバルト紙法による実験と,顕微鏡による観察結果を組み合わせた植物の蒸散の教材,また,植物の生活環についてはオクラを用いた影像教材が作成された.いずれも初等教育で扱えるように,わかり易く提示する試みがなされている.特に後者は,アサガオの生活環など,従来から用いられているものと併用することによって,児童の生物に対する多様な理解に役立つ効果が期待された.また,ビデオを用い,教室で直接観察できない教材をとりあげた例として,夜間に開発するツキミソウの開花過程を録画し,短時間に編集して,授業で提示できるような教材を作成した.これらの結果をもとにして,次年度ではさらに新しい視聴覚器材システムを作成し,さらに指導法を検討して,実際に授業による児童の学習の効果を測定する方法を研究中である.視聴覚器材システムによる生物教材の開発と有効な指導法についての研究を継続している。適用範囲を拡げるため、一つは野外教材のシステム化を計画した。学内に自然観察路を設定し、それぞれの場面での観察の対象・教材的意義・生態学的な理解が得られるガイダンスの役割を持つ映像を撮影し、目下、編集中である。また、学内の沼地に生息するメダカを水槽で飼育し、これを映像化して、授業などで展開することのできる教材を製作中である。

一方、顕微鏡の利用と関連して、ビデオおよび視聴覚機器の役割の拡大のため、いくつかの試作品を製作中である。また、顕微鏡使用の効率を高めるため、観察の方法および技術の向上に資するプレパラートを試作した。これは、児童・生徒が顕微鏡使用上のネックになっている技法について、解釈・向上を目指したものである。また、植物プレパラートを観察した際の小部分の順次拡大を展開するスライドおよび、それらを組み合わせたビデオ教材の作成を行っている。映像化による概念形成の新分野を開拓するために、時間概念もとりあげた。時系列を平面的に提示する場合、どのように配置するのが適当であるかという点について調査を行った。本調査では、本助成によって購入した作成機器及び、提示機器を用いて被見者に様々な映像提示を行っている。たとえば、配置を上から下へ、右から左へ、過去から現在、もしくは現在から過去にというように行った場合の、被検者の時代認識における反応時間、正誤の件数などを調査したもので、視聴覚教材の指導法について新しい手がかりが得られると考えている。なお、外国における教科書などからのさし絵などにヒントを得た教材作成の可能性についても検討している。視聴覚器材システム研究の3年目として、この研究成果の概括と、その意義について検討した。本研究費によって購入した視聴覚器材並びに顕微鏡関係の器具を、システム化することによって、授業展開や、その他、児童・生徒の学習指導にどのように活用できるかという、可能性について考察を行った。理科の学習指導には、できるだけ、直接体験をとり入れることが望ましいのであるが、生物教材の中には、なかなか授業展開の中で直接体験が困難なものがある。これについての映像資料を、授業の流れの中にとり入れて、全体をシステム化した指導資料をつくることが目的である。この構想のもとに、初年度及び2年度について、いくつかの実践を行った。次に、実験・観察の指導過程を、実験器具の使用とその解説を含めて、システム化することを計画し、特に顕微鏡の使用の技能の達成をはかる器材システムを構成したが、これについてはかなりの効果が期待できた。また、このときの過程、そのものをビデオ化することによって、児童・生徒の技能面でのつまずきの傾向などを分析する資料も入手でき、今後、この分野での教育研究に活用できることが期待できるようになった。その事例としては、児童の海藻分類の着目傾向などを、観察場面の撮影により、詳細に検討することのできる資料として造ることができた。その他、科学史などの事例を探究学習にとり入れる授業展開において科学史の実験例を提供するシ-トを作成し、これをあらかじめ、中学校生徒に与えてから、探究の能力を評価したところ、変数の同定などの探究のスキルについて、有効な能力の上昇が得られた実践例などをもとに、進化などの教材についても、新しいシステムを検討・計画している。
環境歴史学からみた「森」と「原」「野」に関する研究-日本の古代・中世を中心に-

本研究では、環境歴史学の観点から、古代・中世においては、対極に位置づけられる森と原野について検討を行った。阿蘇での研究の結果、阿蘇神社の祭礼の中心となっていた下野地区では、野を下野と呼び、森を鷹山と呼んだ。この野と森は、阿蘇の人々の火(野焼き)と水(水田)の利用の象徴的場として機能してきたことが明らかになった。平安京でも、野と森は、都市郊外の自然空間と認識されながらも火と水の象徴地として存在していた。平安時代には、都周辺の野は火葬地となり、水源である神聖な神社の対極に位置づけられた。田舎においても、都市においても、この時期、野と火、森と水の関係は共通していたといえる。研究は、「森」と「原」「野」という対極にあるものを取り上げ、古代から中世の形成の社会の自然-人間の関係の特質を環境歴史学の視点から明らかにしようとする試みである。「森」や「原」「野」は水田や畑などの耕地に比べると、人間から遠い存在で、これまで歴史の研究の俎上にあがってこなかった。しかし、森と神社の関係、地目としての「野」の存在を考えると、自然と人間の関係を考察するもっとも重要なキーワードといえる。本研究では、歴史的アプローチと文学的アプローチを総合化し、阿蘇を中心に草原と森の関係を考察する一方、都市空間における森と野の役割を明らかにしようと考えている。本年度は飯沼が中心になり,古代中世の古文書を中心に「森」「野」「原」[野地」[狩場」「狩倉」などの語の綱羅的語彙収集を行った。その上で、当初、古代・中世の野の利用の実例として、「相良家文書」に見える熊本県人古の「狩倉」の調査を実施する予定であつだが、調査がむずかしことがわかり、「阿蘇文書」中にある「野晶」に注目し、はじめ熊本市郊外の比定地の調査を実施した。しかし、野畠の調査の方法が見出せず、別のフィールドを考えることにした。試行錯誤の過程で、「阿蘇文書」を調べるうちに、下野狩と呼ばれる中世の狩史料が中世の「野」「森」の利用を考察するのに、最適の史料であることが判明した。そこで、7月から下野狩の調査を実施することにし、現地の踏査、阿蘇神社の文書の調査を行った。この過程で、下野狩の記録で活字化されている『下野狩集説秘録』と呼ばれる近世の記録の調査を進めるうちに、熊本藩主であった細川家の文庫「永青文庫」に『下野狩集説秘録』の元本となった『下野狩日記』上・下(慶長工17年書写)、『下野狩旧記抜書』がわかり、この調査を9月に行い、『下野狩集説秘録』と関係を考察し、中世から近世への下野狩記録化の過程、狩の実像、野焼きと狩りと牧の設定、阿蘇の祭礼との関係、野と森の利用の問題などが見えはじめた。今年5月10日にはその成果の一部を熊本の研究会で発表の予定である。一方、浅野は、飯沼と連携しながら、都市周辺の「野」「森」の問題に注自し、三代集の和歌に見える「野」と「森」の史料を整理した。調査地としては、奈良の「春日野」、京都の「嵯峨野」「紫野」に焦点を当て、伊勢の斎宮、鴨社の斎王の野宮、斎院と「野」と歌謡の関係に注目し、考察を進めている。本年度は、農村部と都市部に広がる「森」と「野」の比較をしながら史料的検討と現地調査を実施した。農村部としては19年度に引き続き、阿蘇下野狩の史料(永青文庫本『下野狩日記』『下野狩旧記抜書』)の翻刻作業とその現地調査を行い、中世阿蘇神社の神事体系のおける「下野」の「野」と「森」の存在の意義をほぼ明らかにできたと考える。阿蘇山の西麓に広がる「下野」と呼ばれる「野」は、天正6年まで旧暦の2月の卯日に狩神事が行われてきた。この神事は阿蘇の春を開始する祭礼であり、そこでは、古来狩の前に野焼きが行われ、獣を火で狩猟場の三カ所の「馬場」に集め、肥後に広がる社領から勢子・狩人3500人を動員し、騎馬7080頭で猪・鹿や小物を射止めた。多くの人々がこれを見物し、この神事は殺生の神事であるが、矢に当たった獣は往生を遂げ、後に神官に生まれ変わり、見物人も参加者も獣の往生を見て、その功徳に預かれるとも説く。さらに、狩の終わった後は、この「馬場」には、阿蘇神社の神馬が放牧され、12月の神馬貢納まで育てられた。

この牧は「鷹山の牧」とも呼ばれた。鷹山は「下野」一帯の「森」を指す言葉で、「鷹山」は同じ2月に行われる田作神事の際に歳祢の神のもとに訪れる姫神の住む山でもあった。春の阿蘇の田作りは、鷹山の森の姫神が「里」の歳祢神を所を訪れ、五穀を産むといわれ、それを迎える神事が阿蘇の御前迎え(火振神事)であり、その最終段階が「田作り神事」である。中世、阿蘇の一年は、下野(鷹山ともいう)の「野」の火の神事と「森」の神事で開始される。ここに日本の「森」と「野」の役割の原型が見える。一方、昨年に続き、京都の周辺部に広がり「野」と「森」の役割、都市における機能に注目し、紫野の調査を実施した。鴨川を挟んで下賀茂社の「森」と「紫野」は存在し、密接な役割をもつ。葬送(火葬地)と御霊会(やすらえ花)が行われ、野々宮としての齋院の御所がある紫野と「ただすの森」(下賀茂の森)が隣接する関係に注目している。さらに、本研究の国文的アプローチでは、歌謡や散文にみられる「場」としての「野」や「森」、さらに、そこで歌われる「歌」の役割に注目して解明を進めている最中である。本年度も歴史的アプローチと文学的アプローチから研究を実施した。歴史的アプローチでは、本研究の基礎史料となる下野狩関係の史料の翻刻を行った。史料は、永青文庫所蔵の『下野狩日記』上・下『下野狩旧記抜書』と阿蘇家所蔵の下野狩関係の近世史料である。8月9月の夏期休暇の期間を利用し、阿蘇の下野地区の調査を行いつつ、原本・写真等から翻刻の原稿と用語や地名の解説を完成させた。この原稿を「下野狩関係史料集」と題して、11月の科研費の公開促進費に申請した。しかしながら、残念ながら結果採択されなかったが、最終年度の報告書に反映したいと考えている。文学的アプローチでは、文学資料に登場する「野」に注目し、都市周辺に広がる「野」「森」のもつ意味を明らかにする作業を進めた。資料の裏付けをするため、本年度も京都周辺の「野」、奈良周辺の「野」の現地調査を実施した。また、昨年の計画の段階では、考えていなかったが、阿蘇や近畿や各地の野や森の調査を行い、文献史料の調査検討を行ってゆく中で、東アジア世界に中で、日本の森と野の文化がどのように位置づけられるのかが課題として登場してきた。阿蘇の調査では、文献にしばしば中国のことが書かれている。そこで、3月2日7日の短い期間であったが、中国雲南省で元陽県、羅平で森と水田、畑と野の調査を行った。この成果も報告書に盛り込みたいと考えている。本年度は、4年間継続してきた研究の最終年度であった。昨年秋に申請し採択されなかった研究公開促進費を本年度秋にも申請し、本研究の基礎史料となった永青文庫所蔵の『下野狩日記』上・下『下野狩旧記抜書』と阿蘇家所蔵の下野狩関係の近世史料を『阿蘇下野狩史料集』として公開することをめざした。その準備として、夏には、翻刻史料の確認と阿蘇家関係の史料の再確認を行った。2月初めには、原稿を印刷所に入れ、3月末に報告書を完成した。報告書には、『阿蘇下野狩史料集』の一部を掲載したが、4月に公開促進費が認められ、『阿蘇下野狩史料集』の刊行が実現できることになった。4年間の研究では、農村部と都市部に広がる「森」と「野」の比較をしながら史料的検討と現地調査を実施した。農村部としては阿蘇地域を対象にした。平成19年度から本格的に取り組んだ阿蘇下野狩の史料(永青文庫本『下野狩日記』『下野狩旧記抜書』)の翻刻作業とその現地調査は4年間で大きな成果を得て、中世阿蘇神社の神事体系における「下野」の「野」と「森」の存在の意義をほぼ明らかにでき報告書に掲載できた。一方、京都などの古代・中世の都市周辺部に広がる「野」と「森」の役割、都市における機能との関係に注目し、紫野や嵯峨野の調査を実施した。例えば、鴨川を挟んで下賀茂社の「森」と「紫野」は存在し、対極の関係にあり、密接な役割をもつ。
成人期アトピー性皮膚炎患者におけるグルココルチコイド受容体の研究

成人期アトピー性皮膚炎症例の中にステロイド外用剤を用いた治療に抵抗を示す症例が多く存在するが、この抵抗の程度は症例によってまちまちである。またそれら難治例の多くはその臨床経過中に多種のステロイド外用剤を長期間にわたり使用している場合が多い。他科領域からはこれまでにグルココルチコイド受容体の個体間差異やステロイド剤によるグルココルチコイド受容体のdown regulationについて多くの報告がなされているが本症の成人難治例についてはそれらが検討された報告はなかった。そこで、ステロイド外用剤を用いた治療に抵抗を示す成人期アトピー性皮膚炎症例におけるグルココルチコイド受容体の量的なあるいは質的な変化を調べることを今回の研究の目的とした。昨年度は基礎研究として、正常成人末梢血単核球を用いて,グルココルチコイド受容体の個体間差異を検討した。本年度はこのデータをもとに難治性アトピー性皮膚炎症例において同様の検討を行い正常成人との比較検討を行なった。グルココルチコイド受容体の検討についてはRT-PCRを用いた半定量法を用いた。1.難治性アトピー性皮膚炎症例より末梢血を採取し末梢血単核球を分離2.末梢血単核球よりtRNAを抽出しmRNAを分離3.半定量的RT-PCR法を用い、グルココルチコイド受容体mRNAの発現を検討4.グルココルチコイド受容体βなどのアイソフォームについても発現を検討の1から4を行った。その結果、1.正常人においても個体間に受容体mRNA発現量に差異があり、アイソフォームも含め質的差異がある。2.患者群のグルココルチコイド受容体mRNA発現も同様に量あるいは質的差異があるが、正常人コントロールと比較してあるいは重症度と関連づけた一定の傾向は得られなかった。今後はこの結果を元にアトピー性皮膚炎患者のグルココルチコイド受容体発現の量、質的差異をもたらすファクターについてさらに検討を重ねる予定である。なお、本研究は十分なインフォームドコンセントを行い、同意の得られた患者のみを対象として施行した。成人期アトピー性皮膚炎症例の中にステロイド外用剤を用いた治療に抵抗を示す症例がしばしば存在する。この抵抗の程度は症例によってまちまちであり、また成人期アトピー性皮膚炎の難治例の多くはその臨床経過中に多種のステロイド外用剤を長期間にわたり使用している場合が多い。他科領域からはこれまでにグルココルチコイド受容体の個体間差異、ステロイド剤によるグルココルチコイド受容体のdownregulationについて多くの報告がなされているが本症の成人難治例にってはそれらが検討された報告はない。そこで我々はステロイド外用剤を用いた治療に抵抗を示す成人期アトピー性皮膚炎症例におけるグルココルチコイド受容体の量的なあるいは質的な変化を調べることを目的とした研究計画を提出し、奨励研究A10770404として採用された。第1年度の本年は当研究の基礎研究として、グルココルチコイド受容体の個体間差異について正常成人末梢血単核球を用い検討した。なおグルココルチコイド受容体の検討についてはRT-PCRを用いた半定量法を用いることとした。1.正常成人ボランティアより末梢血を採取し末梢血単核球を分離した。2.末梢血単核球よりtRNAを抽出しmRNAを分離した。3.半定量的RT-PCR法を用い、グルココルチコイド受容体mRNAの発現を検討した。4.グルココルチコイド受容体βなどのアイソフォームについても同様に検討した。その結果正常成人においても個体間に受容体mRNA発現量の差異があること、アイソフォームも含め質的差異があることが判明した。第2年度はこのデータをもとに難治性アトピー性皮膚炎症例において同様の検討を行い正常成人のそれと比較検討を行う。この結果をふまえて研究発表を行う予定である。

今後はこの結果を元にアトピー性皮膚炎患者のグルココルチコイド受容体発現の量、質的差異をもたらすファクターについてさらに検討を重ねる予定である。なお、本研究は十分なインフォームドコンセントを行い、同意の得られた患者のみを対象として施行した。
電着法によるクラストナイト厚膜の作製

CaSiO_3(ワラストナイト)は,生体親和性材料として知られているApatite-Wollastonite結晶化ガラスの構成成分であり、単独でも生体親和性が期待されるセラミックス材料である。しかしながらCaSiO_3を単独で使用するには、機械的性質,特に破壊靱性が不足していると予想される。そこで,高靱性を有する金属材料にCaSiO_3微粉末を電着法により厚膜状に成形,焼結させることで生体親和性と優れた機械的性質を合わせ持つ材料を作製することを試みた。CaSiO_3微粉末は共沈法により作製した。硝酸カルシウムとオルト珪酸エチルをエタノール中に溶解し(濃度:CaSiO_3について0.4mol/l)そこへ溶液と同量のアンモニア水(25%)を急速に添加して沈澱を得た。これを1000°Cで12h熱処理し,CaSiO_3単相のみから成る粉末を得た。粉末はエタノール中でSi_3N_4ポット(80ml)とボール(2mmφ)を使用した遊星回転ボールミルにより2時間微粉砕した。得られた微粉末の粒径(50%累積径)は1.60μmと,電着法に使用するのに十分微細なものが得られた。電着成形は2枚のステンレス板(SUS304,40×20×1mm)を電極とし(電極間隔10mm),これらを平行に向かい合わせて原料粉末のスラリー(濃度1g/150ml)中で直流電圧(10200V)を印加することで行った。水-エタノール混合分散媒を用いたスラリーではCaSiO_3微粉末は良好な分散性を示さなかったことからエタノールのみを分散媒として使用したところ,CaSiO_3微粉末は良好な分散性を示し、一例として印加電圧100V,5minの通電で単位面積当たり8.1mg/cm^2の厚膜が得られた。この時の膜厚は62μm,膜の相対密度は47%であった。得られた膜の焼結性,他の溶媒,電極材料についての検討は現在継続して進行中である。
木材腐朽菌－細菌モデル共生系の構築とその相互作用機構の解明

木材の腐朽に関する木材腐朽菌と細菌の微生物間相互作用機構を解明するために、細菌叢の多様性を減じた腐朽菌ー細菌モデル共培養系の構築を目指し検討を行った。腐朽菌床に共存可能な細菌叢を混入させ、木粉上で継代を繰り返すことにより、腐朽菌単独の場合よりも安定的に優れた木材分解特性を示すモデル共培養系の構築に成功した。木材分解に強く不の影響を及ぼす糸状菌の増殖を抑え、十分な培養期間を選択する事が重要であった。最終的に、木材腐朽菌純粋培養系よりも常に高いリグニン分解率を示すモデル共培養系を得ることに成功し、メタゲノムを用いて腐朽木粉抽出物に応答するバクテリア遺伝子の探索を行っている。安定的な木材腐朽菌ー細菌共培養系を確立するために、菌床を自然界の様々な場所に所定期間放置した後にサンプリングし、種々の条件下で木粉に継代培養を行い、安定的に高い木材腐朽率を示す共培養系の選抜を行った。その結果、腐朽菌単独の場合に比して有意に重量減少率が向上した共培養系を複数得ることに成功し、自然界に木材腐朽菌と細菌が共存する事で木材分解を効率的に行う機構が広く分布している可能性が示唆される結果を得ることが出来た。また、これら共培養系では、それぞれホロセルロース、リグニンあるいはその両方の分解性が向上しており、細菌叢によって異なる機構が存在する可能性も同時に示された。この時、16S rRNA遺伝子による細菌の多様性を解析したところ、細菌叢の多様性は低下しているようであった。一方で、継代の過程で木材腐朽が著しく低下する減少が観察された。これは腐朽菌以外の糸状菌が自然界より菌床中に混入しており、木材腐朽菌による木材腐朽を大きく阻害していることが原因であることを明らかとした。共培養系をチアベンダゾールのような防カビ剤などの処理により混入真菌の生育を阻害することで、継代による共培養系の木材腐朽能の低下を防げることを明らかとした。当初の予定通り、比較的安定して高い木材腐朽能を示す木材腐朽菌ー細菌共培養系の継代法を確立できたと考えており、また、共培養系によって複数の腐朽力の上昇パターンを示しており、モデル共生系を概ね確立できたと考えている。土壌由来微生物と木材腐朽菌の共培養において、抗真菌剤を用いてカビの増殖を抑えることで、木材分解特性に優れた共培養系を継代できることを27年度までに見出していたが、短期間培養後の継代では徐々に木材分解性が低下していく傾向が観察された。この原因は、木材分解の主体となる木材腐朽菌の増殖が十分ではない為であると考え、培養期間を延長したところ、継代を繰り返しても腐朽菌純粋培養よりも高い木材分解率を維持可能な共培養系を得ることが出来た。また、この木材分解特性は高い再現性を示したため、安定的な木材腐朽菌ー細菌モデル共生培養系を構築できたと考えた。しかしながら、純粋培養系、モデル共生系の木材分解産物をHPLC分析したところ、微量の産物が多数検出されHPLC上での比較は困難であり、モデル共培養系に特異的な木材腐朽代謝産物の推定・同定は今後の課題とした。分解残渣の分析を行うと、モデル共生系と純粋培養系ではホロセルロース分解率は純粋培養系と有意な差はなく、主としてリグニン分解率の向上がモデル共生系の高い木材分解率に寄与していることを明らかとした。また、リグニン分解の向上は、酸可溶性リグニン量は大きく変動せず、クラーソンリグニン量分解に起因していた。モデル共生系の細菌叢が、木材分解時にどの様な応答をしているかを調査すべく、メタゲノムライブラリの作成を試みたところ、菌床中の細菌数は僅かであり菌床からの直接ゲノム抽出では充分量の細菌ゲノムが得られなかったが、木粉を炭素源とした最少培地による集積培養を行うことで充分量のメタゲノムを得ることが可能であった。現在は、このメタゲノムを用いて、木材腐朽菌による木材分解時の産物に応答する細菌遺伝子を特定すべく、メタゲノムライブラリの作成・スクリーニングを行っている。共培養系の継代を継続し、細菌叢の変動を観察するとともに、木材成分の分析を行うことで、木材分解傾向の安定性を確認する。同時に、共培養系特異的な分解産物を特定し、木材腐朽菌純粋培養系あるいは共培養系より作出したメタゲノムライブラリに分解産物を加えることにより、木材腐朽菌および細菌間の木材腐朽における相互作用機構の解明を目指す。28年度が最終年度であるため、記入しない。応用微生物学28年度が最終年度であるため、記入しない。
日本語文型データベース作成のための基礎的研究

本研究は,言語教育における実用上の概念として考えられることの多い「文型」を言語研究(日本語文法研究)の課題として取り上げ,文型データベースの構築を目標として,そのための基礎的な研究を行ったものである。本研究では,文型に対する様々な考え方を検討したうえで,表現文型=モダリティの表現形式をもって,文型の概念を規定することとした。具体的な成果は,以下の通りである。1.本研究では,話し言葉の表現文型研究の実践として,確認要求文と否定疑問文の類型について考察し,研究論文2編を公刊した。また,構造文型から表現文型への移行の事例として,組み立て形式スルコトガアルについて考察し,口頭発表及び論文の公刊を行った。2.本研究では,日本語記述文法研究会(代表:大阪外国語大学教授仁田義雄)と連係し,認識のモダリティを対象として,表現文型研究の成果をどのような形で教師や学習者に提示すべきかという記述文法・参照文法の視点から,実用性の高い,包括的・体系的な文法記述を試みた。3.本研究では,表現文型研究の成果をデータベース化するための方法論について試行錯誤を行い,実際に二つのタイプのデータベース(否定疑問文の述語形式を対象としたパラダイム型データベースと新聞記事コーパスにおける認識的モダリティ形式を対象とした属性指定型データベース)を試作した。4.コーパスから表現文型を自動的に抽出する技法を考案し,その過程で開発したテキスト処理ツールを公開した。本研究の研究期間の初年度にあたる本年度は、主に、文型に関する予備的考察とデータ処理環境の整備を、以下のように行った。1文型に関する過去の文献の系統的な収集に努め、文型の概念規定や文型研究の研究史・諸問題・課題について、以下の観点から整理した。(1)文型研究の意義・目的・展開-文法研究と言語教育(日本語教育・国語教育)の各領域における文型の捉え方の比較。(2)文型概念のバリエーション-いわゆる構造文型と表現文型、複合的(総合的)文型、基本文型など、文型をめぐる諸概念の整理。(3)文型研究としての複合辞研究-複合辞認定の原理についての検討、記述の現状についての把握。2本研究で利用する旨語データ(新聞記事、小説、シナリオ、対話コーパスなど)の収集、テキストデータ化を行い、効率的なデータ処理が行えるよう、コンピュータ環境を整備した。また、データベース作成の試行段階として、テキスト情報処理技術に詳しい研究者の協力を得て、テキストデータを文単位で切り出し、文末の文字列を逆順でソートする処理を自動で行うプログラムの作成を行った。3表現文型と密接に関わる意味範疇であるところのモダリテイのうち、特に、認識のモダリテイ(epistemic modality)について、日本におけるcomprehensive grammarの実践である記述文法プロジェクトと連携を図りつつ、以下の諸点について、記述的な研究を行った。(1)認識のモダリテイとは、(2)断定と推量、(3)蓋然性、(4)証拠性、(5)そのほかの認識のモダリテイの形式研究期間の2年目にあたる本年度は,前年度の考察,研究装置・資料の整備を受け,文型データベース作成の前提となる基礎的作業を下記の点について具体的に進展させた。1文型の概念の確立に基づくデータベースの基本フォーマットの策定および試行的データ入力一般に文型と言ってイメージされるのは,動詞の格支配のパターンすなわち構造文型であるが,これは'文'の型としての文型ではない。本研究では,文型を,あくまでも'文'をそのモーダルな意味・機能との相関において形式的に特徴づける型と規定し,その文法的な徴証を,動詞のムード(モダリティ)形式と状況語,主語,モーダル副詞,終助詞,従属文との共起関係のあり方に求めることとした。この枠組みに従って,データベースの基本フォーマットを以下のように策定した。本データベースは,基本的なモーダルな意味である,叙述・意志・命令・疑問の4部門に分けて,入力作業を行う。

叙述:無標のムード形式スルは,意味・用法が多様であり,文型としての特徴が出にくいことから,有標形式すなわちダロウ・ラシイなどの認識的モダリティの形式を対象とする。意志:ムード形式のシヨウを対象とする。ただし,対話では意志用法よりも勧誘用法が多用されることから,これも視野に入れる。命令:ムード形式のシロに加えて,依頼形式のシテクレを対象とする。疑問:特に否定疑問文に焦点を当てる(本年度,その類型に関する基礎的な考察を行い,論文として発表した)。本年度は,小説と新聞のコーパスを材料にし,このフォーマットに従って,試行的なデータ入力を行った。2認識的モダリティの記述的研究の総括日本語記述文法研究会のメンバーとして共同研究の形で進めてきたモダリティの記述的研究をまとめ上げ,日本語で初めての組織的・体系的・網羅的な記述文法書として公刊した。研究代表者は,認識的モダリティの記述を担当した。これによって,本研究における叙述文に対する分析の観点をほぼ確定することができた。3組み立て形式の研究文型研究の重要課題の1つとして,組み立て形式の文法化の問題がある。本年度は,ダブルテンス形式のスルコトガアルにおける,反復性といったアスペクチュアルな意味と可能性といった客観的モダリティに関わる意味との交渉について考察し,会発表を行った(第28回関西言語学会「反復性から可能性へ--現代日本語のスルコトガアル--」(2003年10月19日神戸市外国語大学)。本研究課題の研究期間の最終年度にあたる本年度は,これまでの研究成果について,論文の執筆・投稿,試作データベースの整備,研究成果報告書の作成といった形で,とりまとめを行った。1論文の執筆・投稿昨年度行った学会発表(関西言語学会)の内容を論文化して学会誌に投稿した。この論文では,組み立て的な形式が構造文型から表現文型に移行する事例としてスルコトガアルを取り上げ,反復性と可能性の交渉について時間的限定性の観点から考察した。また,話し言葉の表現文型の研究として,確認要求文の類型に関する論文を執筆し,岡山大学大学院文化科学研究科紀要に投稿した。この論文では,「ダロウ」とその類義形式を取り上げ,聞き手に対する働きかけ方と確認の対象の二つの観点から類型化した。2試作データベースの整備いくつかのタイプのデータベースを試作した後,パラダイム型データベースと属性指定型データベースの二つをプロトタイプとして採用し,前者については否定疑問形式,後者については新聞記事における認識のモダリティ形式を素材として,試作データベースを整備した。3研究成果報告書の作成3年間にわたって行ってきた本課題の研究成果を報告書(A4判181ページ)の形にまとめた。報告書には,まず,「論文編」として,1に記した2論文と,昨年度公表した否定疑問文を修正加筆のうえ収録した。また,「記述文法編」として,昨年度公刊した記述文法書のうち,研究代表者が執筆した部分に若干の修正を加えて収録した。さらに,「データベース編」として,2に記した試作データベースの一部をプリントアウトして掲載し,その作成経緯について解説した。また,本研究において開発した,コーパスから表現文型を抽出する技法についても解説した。このデータベース編で使用したテキスト処理ツールを付録CD・ROMに収録し,報告書に添付した。
特殊環境プランクトンの大量培養と有用物質生産に関する研究

本研究は、特殊な環境に生育するプランクトンを採集し、大量培養を試みるとともに、それらが産生する生理活性物質、エキス成分などの有用物質を探索し、それらの有効利用に資する目的で実施した。2.得られた藻体の脂溶性画分については抗菌・抗カビ性,棘皮動物受精卵の卵割阻害活性を、水溶性画分については酵素阻害活性を調べた。3.脂溶性画分に強い活性が認められたG.pseudogoniaulaxの主要活性物質を単離精製した。このものの構造決定を試み、新奇なポリエーテルマクロライドであることが判明し、Goniodomin Aと命名した。4.水溶性画分に強い活性が認められたD.bardawilについては、まずその含窒素エキス成分の分析を行い、遊離アミノ酸、低級ペプチド、核酸関連物質、ヘタインなどその組成をほぼ完全に解明した。その結果、低級ペプチド類が窒素量換算で45%も含まれることが分かり、酵素阻害活性を示す物質はこのペプチド画分によることを突き止めた。以上、特殊環境に繁殖する植物プランクトンの産生する有用物質を探索し、強い抗カビ性をもつGoniodomin Aを得るとともに、それをつくる渦鞭毛藻の大量培養法を確立した。また、ペプチドを多量に産生する藻種には酵素阻害物質が検出される可能性が高いことを指摘した。今回の成果を踏まえ、さらに多くの藻種について検討することにより、特殊環境プランクトンの多角的利用に資することができると考えられる。本研究は,特殊な環境に生育するプランクトンを採集し,大量培養を試みるとともに,それらが産生する生理活性物質,エキス成分,色素などの有用物質を探索し,有用物質生産システムを確立する目的で実施した.1.靜岡県下の温泉から藍藻Oscillatoria spp.,神奈川県油壷湾の潮溜りから渦鞭毛藻Goniodomapseudogoniaulexなど20数種の植物プランクトンを採集するとともに,イスラエルから耐塩性微細緑藻Dunaliella bardaneilを入手した.2.これらの植物プランクトンにつき種別に培養条件を検討し,大半の種につき大量培養法を確立した.得られた藻体につき各種活性試験を行い,G.pseudogoriaulax,D.bardawilなど有望な数種を見出した.3.G.pseudogoniaulaxの脂溶性画分は強い抗カビ性と棘皮動物受精卵の卵割阻害活性を示したので,その主要活性物質を単離精製し,構造決定を試みた.このものはC_<43>H_<60>O_<12>の分子式をもつ新奇なポリエーテルマクロライドと構造が解明され,Goniodomin Aと命名した.4.D.bardawilについては耐塩性との関連から含窒素エキス成分の分析を行い,遊離アミノ酸,低級ペプチド,核酸関連物質,ベタインなどその組成をほぼ完全に解明した.その結果,低級ペプチド類が窒素量換算で45%も含まれることがわかった.5.D.bardawilに低級ペプチドがきわめて豊富に含まれることに着目し,藻体の水溶性画分のアンジオテンシン転換酵素阻害活性を調べたところ,かなり強い活性が認められ,ペプチドと推定される活性物質を現在精製中である.今後は,D.bardawilの活性成分の本体と明らかにし,さらに藻種を広げ有用物質の探索を行う計画である.本研究は、特殊な環境に生育するプランクトンを採集し、大量培養を試みるとともに、それらが産生する生理活性物質、エキス成分などの有用物質を探索することを目的に実施した。1.前年度に引続き国内外から各種プランクトンを入手し、種別に培養条件を検討し、多くのものにつき大量培養法を確立した。2.前年度、強い抗カビ性と棘皮動物受精卵の卵割阻害活性を示す新奇なポリエーテルマクロライドGoniodominAを分離した渦鞭毛藻Goniodomin pseudogouiaulaxの大量培養法の改良を図り、最適条件として、Provasolis ES supplementを添加した3/4濾過海水を培地とし、温度25°C、照度160μE^<-2>S^<-1>、明暗サイクル14時間明・10時間暗で静置培養する方法を確立した。

3.上記の大量培養を通じ、活性物質が多量に培養液中に分泌されていることを見出すとともに、Goniodomin Aの他にも類似の活性物質Goniodomin Bが存在することを明らかにした。4.前年度に比較的強い脂溶性生理活性物質が検出された海産藍藻Oscillctania sp-2につき大量培養を行い、活性物質を精製単離し、構造決定を試みた。この活性物質もポリエーテルマクロライド様の化合物と判明したが、構造を決定するまでには至らなかった。5.耐塩性微細緑藻Dunaliella bardanilの水溶性画分に検出されたアンジオテンシン転換酵素阻害活性物質を各種クロマトグラフィーにより精製し、ピプチドであることを確認したが、微量のためアミノ酸配列では解明できず、今後の課題となった。
膵管上皮を起源とする膵ベータ細胞幹細胞の同定とその再生機構の解明

本研究は、膵管上皮に存在する前駆細胞がβ細胞に分化するメカニズムを明らかにすることが目的である。β細胞に分化する前駆細胞は、様々な組織や細胞、あるいは膵臓内の細胞などに存在すると言われているが、申請者は、これまでの研究で膵管上皮にも前駆細胞があることを系統追跡実験により突き止めている。また再生時の膵管上皮は、膵臓発生に必須の転写因子が一過性に発現し、この発現が前駆細胞からインスリン陽性細胞になるために重要であることも他研究において知られている。そこで本研究では、その転写因子を膵管上皮特異的にノックアウトし、機能解析を行って、膵管上皮に存在する前駆細胞からβ細胞に分化するメカニズムを明らかにしていく。これまで、膵島が膵管上皮細胞に隣接して出現・存在すること、急激にβ細胞数が増加する生後の成長期と成体の組織再生時の両時期で膵管上皮細胞にインスリン陽性細胞が出現すること、ヒトの膵管上皮細胞を長期間培養するとインスリン陽性細胞が得られることなどから、膵管上皮に前駆細胞が存在する可能性が示唆されてきた。但し、これらは別の細胞経由か、あるいは性質の違う細胞から分化した可能性を含んでおり、直接、膵管上皮からβ細胞に分化するという証明には至っていなかった。そこで私達は、分子生物学的手法(Cre-loxPシステム)を用いて膵管上皮細胞そのものをDNAレベルでラベルし(系統追跡実験)、直接的な証明を試みた。結果、膵管上皮にβ細胞の前駆細胞が存在し、膵管上皮からβ細胞が供給されることを証明することに成功した。現時点で機序は不明であるが、少なくとも膵管上皮にはβ細胞の源である前駆(幹)細胞が存在するということが明らかとなった。β細胞の源となる細胞(前駆細胞や幹細胞)の同定に成功すれば、長期に渡りβ細胞を供給・維持することが可能となり、糖尿病治療に対する再生医療の実現に大きく貢献できる。今後の更なる研究の発展が期待される。
ハイドロキシアパタイトの優れた骨伝導能とバイオインテグレーションの本質を解明する

ハイドロキシアパタイトが高い骨伝導性を示す機序について検討を行う。本研究では,表面粗さや表面形状が全く同じで,材質だけが異なる試料(ハイドロキシアパタイト,チタン,ステンレスおよび金)を作製し,この上で骨芽細胞様細胞(MC3T3-E1細胞)を培養,遺伝子およびmicro(mi)RNAの発現をマイクロアレイにて解析し,ハイドロキシアパタイトの骨伝導の初期段階の分子メカニズム,トリガーを検索する。さらに,候補遺伝子およびmiRNAに対して機能阻害実験を行い,それらの生理学的意義を明らかにする。