hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
バセドウ病の成因に関する研究

これらリンパ球の機能を調べた、B cellとCD4^+を甲状腺内と未梢血中よりそれぞれ分離レインキュベート後、培養液中のIgG産生量を測定した。この系にCD8^+を加えて、IgG産生が抑制されるかどうか調べた。未梢血中から得られたCD8^+は明らかにIgG産生を抑制し、suppreson機能のあることを示したがバセドウ病甲状腺のCD8^+はIgG産生を抑制しなかった。未梢血中CD8^+によるIgG産生抑制はバセドウ病甲状腺B cell、CD4^+を用いた場合、未梢血中B cell、CD4^+の場合よりも抑制率が低下していた。これからバセドウ病甲状腺内のCD4^+のsuppreson functionの低下が推測された。以下のことから甲状腺内のリンパ球は、suppreson機構の低下により自己抗体の産生が促進されていることが推察された。次にバラドウ病甲状腺細胞はDR抗原を表示しており、これがT cellを活性化する。甲状腺細胞DR表示にはインターフェロンγの関与が示唆された。インターフェロンγの甲状腺細胞のT_3、サイログロブリン分泌機能に及ぼす影響を検索したところ、インターフェロンγは甲状腺細胞のDR抗原を表現させるがTSHによるT_3、サイログロブリンの分泌を抑制した。この作用部位はCーAMP産主前後の両者の段階にあることが推察された。手術時得られたバセドウ甲状腺の細胞培養を行い、TSH,DBCAMPで培養液中に【T_3】、サイログロブリンの分泌する培養系を確立した。この系にバセドウIgGを加えても【T_3】の分泌増加はみられなかった。インターフェロンγを加えると、明らかに甲状腺細胞膜にDR抗原が出現した。一方【T_3】,サイログロブリンの分泌は明らかに抑制された。このホルモン分泌抑制とDR抗原の出現は正の相関がみられた。TSHを加えた場合も、DBCAMPを加えた場合いずれもインターフェロンγはホルモンの分泌を抑制した。インターフェロンγはCAMP産生後のステップに作用してホルモンの分泌を抑えると思われる。バセドウ病甲状腺細胞には一部、DR抗原陽性細胞が存在しているが、これら細胞はホルモン分泌機構は低下していることが予想され、ホルモン分泌亢進はDR陰性の細胞によると思われる。一方橋本病では甲状腺細胞の多くはDR抗原陽性であり、これら細胞のホルモン分泌低下のため、機能低下症をきたすと考えられる。バセドウ病甲状腺内リンパ球はサプレッサーT細胞が末梢細胞に比較して明らかに減少し、サプレッサー機能も低下していた。バセドウ病甲状腺細胞と末梢T細胞を混合培養すると、バセドウ病細胞も、T細胞いずれもお互いに活性化され、細胞表面にDR抗原が出現した。バセドウ病甲状腺細胞が何らかの原因で(インターフェロンγなどで)DR抗原を発現するようになり、これがT細胞を活性化し、これ自体もまた、甲状腺細胞に作用して甲状腺細胞を活性化すると同時に、バセドウ病甲状腺内で甲状腺刺激抗体を産生するように作用し、DR陰性の甲状腺細胞が刺激されホルモンが多量に分泌され甲状腺機能亢進症を惹起するものと考えられた。バセドウ病の成因として自己免疫応答反応が重要視されている.甲状腺細胞内にリンパ球に浸潤がみられ,これらリンパ球から放出されるリンホカインによる影響が注目されている.自己免疫応答に重要な役割を演じているとされる甲状腺細胞表面へのDR抗原の発現もこのリンホカインの一つ,インターフェロンrによることが推測されている.そこでこの自己免疫応答に関与しているリンホカイン, DR抗原がバセドウ病の発現,すなわち,甲状腺から多量のホルモンの分泌を促進さすように作用しているのかどうか検索した.手術で得られたバセドウ甲状腺の甲状腺細胞培養を行った.この培養系ではTSHにより培養中へのT_3, Tgの分泌促進,およびCーAMPの産生の増加がみられる.甲状腺細胞をインターフェロンrで4日間培養し,細胞表面に明らかなDR抗原の発現がみられた.

ついでインターフェロンrを除去後, TSH,あるいは, DBCーAMPを加えると,インターフェロンrの前処理のないものに比較して明らかに, T_3, Tgの分泌が抑制され,これはインターフェロンrに濃度依存性であった.インターフェロンrとTSH,あるいはDBCーAMPを同時に加えると同様にT_3, Tg分泌はインターフェロンr濃度依存性に抑制された.一方, TSHによるCーAMP産生はインターフェロンrの前処理の場合には抑制されたが,同時添加では抑制されなかった.インターフェロンrはこのようにDR抗原を発現さすか,細胞そのものはむしろホルモン分泌を抑制することが認められた.その作用部位はCーAMP合成前,後いずれにもあることが推察された.バセドウ病ではDR抗原陽性甲状腺細胞は橋本病甲状腺に比較して少なく,この細胞はTSHレセプター抗原提示細胞の役割を果しているが,機能そのものは低下しているとが予想された.
スピン・軌道多体効果の展開と変貌する伝導電子-f電子化合物混晶による研究

1.Ce_xLa_<1-x>B_6およびPr_xLa_<1-x>B_6の混晶系において、dHvA効果測定、および電気伝導測定を行い、以下のようなことを明らかにした。Ce_xLa_<1-x>B_6においては、主要フェルミ面はCe濃度ともに大きく変化する。また、電子の有効質量もCe濃度に比例して増大する。また、有効質量は高磁場から低磁場に向かって増大するが、低磁場相が秩序相の場合は一定値に落ち着く。一方、低磁場が無秩序相の場合では有効質量は発散的に増大するとともに、さらに低磁場側では非フェルミ液体的な伝導挙動が現れる。また、Ceの低濃度側ではアップとダウンのスピンの伝導電子で有効質量は異ならないが、Ce濃度の増加とともに両者の違いは増大する。一方Pr_xLa_<1-x>B_6においてはPr濃度に対するフェルミ面、有効質量の変化も小さく、また、上記のようにCe_xLa_<1-x>B_6で見られた有効質量、伝導に関する異常なふるまいは見られなかった。2.CeRu_2(Si_<1-x>Ge_x)_2混晶系ではxを系統的に変えdHvA効果の測定および磁気測定による磁気相図の決定を行った。どの試料においてもdHvA効果の観測に成功した。これによりこの系の磁気相図、メタ磁性転移、量子臨界点と電子状態、特にf電子の遍歴-局在との関係を明らかにした。3.そのほかPr_<1-x>La_xPb_3混晶系や他の強相関f電子化合物においてもdHvA効果の測定に成功し、電子状態を明らかにした。4.圧力セルを改良し、dHvA測定ができる最高印加圧力を3GPa以上とした。これにより、圧力誘起超伝導体CeIn_3の圧力による電子状態変化、遍歴弱強磁性体ZrZn_2の圧力による磁性状態変化を明らかにした。同じ手法を利用し、圧力誘起超伝導を起こす遍歴強磁性体UGe_2、反転対称性のない超伝導体CeRhSi_3の電子状態、超伝導特性を明らかにした。希釈冷凍機と比熱測定システムの整備を行い、極低温での比熱測定を可能にした。また、PrPb_3などの混晶の作製に着手した。Ce_xLa_<1-x>B_6およびPr_xLA_<1-x>B_6化合物において、電気伝導、ド・ハース-ファン・アルフェン(dHvA)効果の測定を系統的に行った。Ce_xLa_<1-x>B_6化合物においてはフェルミ面の大きさおよび有効質量の大きさはCe濃度に比例すること、また、有効質量の磁場依存性はCe濃度でスケールすると、濃度に依存せず同じ依存性を示すことを明らかにした。また、Pr_xLA_<1-x>

B_6化合物においてはフェルミ面の大きさおよび有効質量の大きさのPr濃度に対する変化はCe_xLa_<1-x>B_6化合物のCe濃度に対する変化に比べて小さいこと、しかし、PrB_6となり磁気秩序が生じると、上向きのスピンのフェルミ面と下向きのスピンのフェルミ面に分裂することを明らかにした。また、ccommensurate相、およびincommensurate相の両方でdHvA効果の測定に成功し、両者ではフェルミ面は変化しないが、有効質量、散乱が大きく変化することを明らかにした。また、圧力効果と混晶効果との比較を行うためにCeIn_3において圧力下のdHvA効果を行い、量子臨界圧力を超える3GPaまでdHvA効果の観測に成功した。フェルミ面は4つの特徴的な圧力P1-P4で顕著な変化を示すことを明らかにした。また、有効質量が磁場の強さと伝導電子のスピンの向きに依存すること、有効質量は低圧では磁場の増加とともに増加するが、P1で減少に転じ、また、同じ圧力近傍でより大きい有効質量を持つ伝導電子のスピンの向きは反対になること、さらに、P4を越えると有効質量の磁場依存性およびスピン依存性も消失することを明らかにした。前年に引き続きCe_xLa_<1-x>B_6およびPr_xLa_<1-x>B_6化合物において、電気伝導、ド・ハースーファン・アルフェン(dHvA)効果の測定を系統的に行った。Ce_xLa_<1-x>B_6化合物では磁場の低下とともに、有効質量が急激に増大するが、基底状態が秩序状態の場合は大きな一定値に落ち着く。一方、無秩序状態では非フェルミ液体的な振る舞いを示すことが明らかとなった。また、秩序-無秩序状態の境界近傍に向かって有効質量は発散的に増大するとともに、ディングル温度の測定から準粒子の寿命は有限に保ちながら、平均自由行程がゼロに漸近することを明らかにした。また、CeB_6においてはdHvA効果の測定を詳細に進め、今まで観測されていなかったもうひとつのスピンからの信号が存在することを明らかにした。Pr_xLa_<1-x>B_6化合物において有効質量のスピン依存性を調べた結果、Ce_xLa_<1-x>B_6化合物ほど大きな相違がないことが明らかとなった。CeIn_3においてはdHvA周波数および有効質量の方位依存性を明らかにするとともに、有効質量のスピン依存性が方位、周波数によってどのように変化するかを明らかにした。PrPb_3およびUPd_3の混晶の純良試料作製を継続するとともに、新たに、CeRu_2(Si_<1-x>Ge_x)_2の単結晶試料作製に着手した。混晶にも関わらず極めて明瞭なdHvA信号の観測に成功した。これまで、約15%までのGe濃度の試料について磁性、dHvA効果の測定がほぼ完成しており、量子臨界点近傍での電子状態、磁性の変化が明らかになりつつある。a.CeB_6、PrB_6およびそれらの混晶化合物:これらの化合物、およびその混晶の実験結果については論文に取りまとめ、公表を行った。PrPb_3およびLaが1%Prと置換された混晶についてdHvA効果の測定の測定をおこなった。0.5T近傍の低磁場までdHvA信号の観測に成功した。温度の低下とともに信号強度が増大し、また周波数が顕著に変化することが明らかとなった。
公共政策としての法学：エビデンス・ベースの政策評価

本研究は,解釈論を中心としてきた法学に対し,法を一定の政策目的の実現のためのツールとして位置付けた上で,近時,教育経済学・医療経済学・労働経済学・都市経済学・環境経済学などの分野において発展してきた,データに基づいた政策評価の手法を導入することで,データに基づいた客観的な評価を会社法以外の法学分野にも導入・展開することを目指すものである。研究計画の3年目に該当する平成30年度においては,実験を初めて実施するなどデータ収集に依然として力を注ぎつつ,次第にデータの分析およびそれによって得られた研究成果の公表を図る予定であった。研究代表者である森田による本年度の中心的な業績は,医療過誤に基づく刑事訴追の分析したものや,青少年保護育成条例のもたらした効果の分析であり,前者は「法と経済学」系国際ジャーナルにて公表することができた。このほか,株主総会制度をめぐる実証分析に関する成果も公表している。研究分担者井深は,医療経済学分野を中心に研究を進め,ワクチン接種政策・行動についての分析を国際ジャーナルにて公表することができた。研究分担者尾野は,サーベイ実験を活用するなどして,政治過程の分析を進め,政治家の性差などのステレオタイプによって有権者のサポートがどのように異なってくるかを明らかにした。具体的には,1エビデンス・ベースの政策評価に必要となるデータセットの構築を行い,2その上でデータセットに基づいて統計的手法による分析と政策評価を実施することになる。平成30年度は,1に加えて2についても次第に進める予定であったが,当初の予定通り,いくつかの分析についてはある程度進めることができ,国際学会での報告や,論文という形での成果公表を行うことができている。これらの作業のうち,1が特に困難なものになるが,本研究においては,平成30年度においてほぼ計画通りの進捗を実現することができ,さらには部分的に研究成果の報告も行うことができた。したがって,今後も,当初の研究計画に沿って,本研究を推進していく予定である。本研究は,解釈論を中心としてきた法学に対し,法を一定の政策目的の実現のためのツールとして位置づけた上で,近時,教育経済学・医療経済学・労働経済学・都市経済学・環境経済学などの分野で発展してきた,データに基づいた政策評価の手法を導入することで,データに基づいた客観的な評価を会社法以外の法学分野にも導入・展開することを目指すものである。初年度である平成28年度は,サーベイやデータ収集を主眼に据える予定だったが,分析結果の伴った研究成果もいくつか公表することができた。研究代表者森田による本年度の業績は,医療過誤に基づく刑事訴追が医師の供給に深刻な影響を与えることを示した実証分析であり,近時社会的な問題となってきている医師の刑事訴追について,謙抑的な運用を提案するものとなっている。森田にはこのほか,会社法についての実証分析および統計的手法の活用上の注意点に関する検討,および,立法過程についての政治学的な分析についての業績がある。研究分担者井深には,わが国で現在行われている市町村レベルでのワクチン接種(予防接種)という政策について分析した業績がある。研究分担者日引には,さまざまな環境問題(気候変動,土壌流出対策,珊瑚礁)に関する実証分析のほか,集合責任(連帯責任)という法ルールがどのようなインプリケーションを持つのかについて理論的に分析した業績がある。研究分担者尾野は,東日本大震災後の政治家の行動を題材にすることによって政治家の行動を実証的に分析した業績のほか,投票者の行動メカニズムについて実証的に解明する業績や,国会の行動のあり方に関する実証分析,サーベイ実験において「分かりません」という反応をどのように処理すべきかという実証分析における方法論的問題を取り扱った業績がある。具体的には,1エビデンス・ベースの政策評価にあたって必要となるデータセットの構築を行い,2その上で当該データセットに基づいて統計的手法による分析と政策評価を実施することになる。平成28年度は,これらのうち,1の作業を中心に行うとともに,その前段階の準備作業として,先行研究のサーベイや理論モデルの構築を行う計画であった。1の作業は,特にデータの収集が難しいわが国においては困難な作業となることが事前に予想されていたにもかかわらず,ほぼ当初の実施計画通りに実施することができている。

さらに,データの収集が部分的に早く終わった分野については,2の分析作業を行い,その分析結果ー多くは未だ暫定的な結果であるがーを,国際学会などにおいて報告し,多くのフィードバックを得てきている。また,準備作業である,先行研究のサーベイや理論モデルの構築についても,いくつかの分野で実行し,その成果を公表してきている。本研究は,解釈論を中心としてきた法学に対し,法を一定の政策目的の実現のためのツールとして位置付けた上で,近時,教育経済学・医療経済学・労働経済学・都市経済学・環境経済学などの分野において発展してきた,データに基づいた政策評価の手法を導入することで,データに基づいた客観的な評価を会社法以外の法学分野にも導入・展開することを目指すものである。研究計画の2年目に該当する平成29年度においては,データ収集に依然として力を注ぎつつ,次第にデータの分析およびそれによって得られた研究成果の公表を図る予定であった。研究代表者である森田による本年度の業績は,医療過誤に基づく刑事訴追が医師の供給および医療レベルにどのような影響を及ぼすかを分析したもの,および,青少年保護育成条例のもたらした効果を分析するものであり,いくつかの国際学会における報告を行った。森田はこのほか,会社法制定過程の政治学的・実証的な分析,および,近時注目の集まっているAIについてどのような視角から法ルール設計をすべきかについて経済学を活用した分析の成果もある。研究分担者日引は,環境経済学の立場から,再生可能エネルギーの普及策(FIT制度とRPS制度)の比較分析,自治体の再生可能エネルギーのインセンティブについて分析した。その結果,どのような要因が自治体の政策採用インセンティヴに影響しているかを解明することができた。研究分担者尾野は,サーベイ実験を活用するなどして,政治過程の分析を進め,政治家の性差によって有権者のサポートがどのように異なってくるかを明らかにした。日引の研究では,女性議員の数が政策採用の重要な要因になっていることが明らかにされており,日引と尾野の研究をあわせ読むことで,重要な政策的インプリケーションが得られよう。具体的には,1エビデンス・ベースの政策評価に必要となるデータセットの構築を行い,2その上でデータセットに基づいて統計的手法による分析と政策評価を実施することになる。平成29年度は,1に加えて2についても次第に進める予定であったが,当初の予定通り,いくつかの分析についてはある程度進めることができ,国際学会での報告や,論文という形での成果公表を行うことができている。
Supercomputed dataによる物理的地震被害推定人工知能構築手法開発

本研究課題では,大規模解析により得られたsupercomputed dataと物理的考察を踏まえた学習により,地震による物理的な被害(構造物や地面の揺れ等)推定のための人工知能構築手法を開発し,その有効性を示す.このようなアプローチは他分野への拡張も可能と考えられるため,特に汎用性を意識しながら開発を行うこととしている.本年度は,物理的考察を踏まえた学習手法の開発とsupercomputed data創出のための大規模解析手法の開発を行った.具体的には,支配方程式の性質と離散化条件を入力データとして離散方程式の局所的なill-posedな領域を抽出する人工知能を構築した.これは離散方程式の求解自体の高速化につながり,より大規模な解析をより高速に解くことを可能とすると期待される.また,地震による物理的な被害を詳細に評価するためには,3次元有限要素法による地盤増幅解析が有効とされているが,その3次元有限要素モデル構築コストや解析コストが膨大となることから,難しいとされている.そのため,これを解決し,より高速に大規模な3次元有限要素法による地盤増幅解析を実施可能な手法を開発し,多数回の三次元地盤増幅解析が可能なことを示した.これは,多数の入力パラメータ(=多数のケース)に対して多数の三次元解析地盤増幅解析を行うことを可能としたことになり,本研究課題で指向している人工知能構築のためのsupercomputed dataの創出に不可欠な手法が開発されたことを意味している.申請書に記載の計画に従って,順調に進展している.いままでのところ,申請書に記載の通り,順調に進展してきている.今後は,申請書に記載されている通り,開発した手法によるSupercomputed dataの創出とこれを用いた人口知能構築を行い,これらの有効性を検証していく予定にしている.本研究課題では,大規模解析により得られたsupercomputed dataと物理的考察を踏まえた学習により,地震による物理的な被害(構造物や地面の揺れ等)推定のための人工知能構築手法を開発し,その有効性を示す.このようなアプローチは他分野への拡張も可能と考えられるため,特に汎用性を意識しながら開発を行うこととしている.本年度は,物理的考察を踏まえた学習手法の開発とsupercomputed data創出のための大規模解析手法の開発を行った.具体的には,支配方程式の性質と離散化条件を入力データとして離散方程式の局所的なill-posedな領域を抽出する人工知能を構築した.これは離散方程式の求解自体の高速化につながり,より大規模な解析をより高速に解くことを可能とすると期待される.また,地震による物理的な被害を詳細に評価するためには,3次元有限要素法による地盤増幅解析が有効とされているが,その3次元有限要素モデル構築コストや解析コストが膨大となることから,難しいとされている.そのため,これを解決し,より高速に大規模な3次元有限要素法による地盤増幅解析を実施可能な手法を開発し,多数回の三次元地盤増幅解析が可能なことを示した.これは,多数の入力パラメータ(=多数のケース)に対して多数の三次元解析地盤増幅解析を行うことを可能としたことになり,本研究課題で指向している人工知能構築のためのsupercomputed dataの創出に不可欠な手法が開発されたことを意味している.申請書に記載の計画に従って,順調に進展している.いままでのところ,申請書に記載の通り,順調に進展してきている.今後は,申請書に記載されている通り,開発した手法によるSupercomputed dataの創出とこれを用いた人口知能構築を行い,これらの有効性を検証していく予定にしている.本研究課題では,supercomputed dataを正則化することが必須となり,これを実施するための「データ正則化用計算機サーバー」を2019年度に購入することとしている.本「次年度使用額」は,計画時の申請額からのやや減額分を勘案し,当初予定通りの計算機サーバーを購入するために充当することを予定している.
化学分類学を利用した有用クラブアップル品種創成の試み

クラブアップル果実に存在し前駆脂肪細胞3T3-L1の脂肪蓄積を抑制する主たる活性物質は、エピカテキンとプロシアニジンB2であることを明らかにした。また、これらを多く含む有用品種を見出し、活性物質が生合成される時期を特定した。活性物質ケルセチン類の合成に関与する酵素遺伝子の解析を行い、抗がん・抗酸化作用で高い活性を示す品種から新規のケルセチン合成酵素遺伝子を複数見出し、有用品種創成への基礎知見を蓄積した。クラブアップルはバラ科リンゴ属で、その果実は食用とすることが可能であり、ポリフェノールに富んでいるので食品添加物等の利用源として注目されてきたが、まだ有効利用はされていない。そこで、機能性成分に富み食材としての適性を持つ品種の創出を目標として、化学分類学的な知識と手法の応用を試みる。ポリフェノール類は、その生合成経路が比較的良く研究されているので、この経路に関わる酵素系や遺伝配列の情報を整理し、また新規に探索する。一方、クラブアップルの品種間で機能性成分の量を比較し、その生合成酵素系の遺伝子の存在と発現の程度を解析する。このようにして機能性の高い品種を選抜し、これらの化学分類上の情報を総合して、目的とする機能性ポリフェノール成分の多い品種の創成を目的とした。18年度は、クラブアップル43種の果実エキスの前駆脂肪細胞3T3-L1に対する脂肪蓄積抑制活性と、含有するポリフェノールの種類と量の相関関係を解析し、有効成分であるエピカテキンやプロシアニジンB2、生合成中間体として重要なケルセチンの多い品種を数種類見出すことに成功した。これらの品種は、生理活性物質を効率的に生産する候補として、今後中心的な研究対象と位置付ける。生合成酵素系の遺伝子解析では、ポリフェノール類生合成上の鍵化合物としてケルセチンに着目した。クラブアップル2品種のゲノムDNAを用いて、ケルセチン合成に関連するFlavonoid3'-hydroxylase(F3'H)遺伝子のホモログをPCR法によって増幅し、クラブアップル由来のF3'H遺伝子の部分配列を決定した。推定アミノ酸による相同性検索を行ったところ、ダイズおよびブドウ由来のF3'H遺伝子と約70%の相同性が見られた。またクラブアップル品種内および品種間でF3'H遺伝子の塩基配列に違いが見られ、偽遺伝子も含めて遺伝子ファミリーの存在が示唆された。クラブアップルの一品種の果実エキスから7種の化合物を単離構造決定し、これらの前駆脂肪細胞3T3-L1に対する脂肪蓄積抑制活性を検討して、この中ではエピカテキンとプロシアニジンB2とtrans-4-ヒドロキシ桂皮酸の3種が、脂肪蓄積抑制活性に寄与していることを明らかにした。また、これら3種の化合物を多く含む1品種を見出した。さらに、33品種のクラブアップル果実について、3種の化合物の果実中の含量の季節変化を定量した。その結果、ほとんどの化合物は未熟果実からも存在が確認され、それらの果実1個あたりの含量にも大きな季節変化は無かったが、8月から10月にかけてエピカテキンが減少しプロシアニジンB2が増加する傾向が見られた。この変化は、エピカテキンからプロシアニジンB2が作られるとされる生合成経路と符合するものであり、プロシアニジン類の生成時期についての新たな知見と考えている。リンゴにおいて抗がん作用が認められているケルセチンに着目して、クラブアップルにおけるケルセチン合成に関連する酵素遺伝子の探索および構造解析を行った。既知の遺伝子情報を基に、PCR法によってクラブアップル品種'Indian Summer Crab'におけるケルセチン合成に関連する5つの酵素遺伝子の探索を行ったところ、4つの酵素遺伝子でPCR増幅産物を得ることが出来た。flavonoid3'-hydroxylase(F3'H)遺伝子に関してさらに解析を進め、部分配列を決定することができ、塩基配列の違いから2種類の遺伝子を得ることが出来た。ブドウやペチュニアのF3'H遺伝子との相同性は7380%であり、F3'H遺伝子に特徴的なアミノ酸配列やHR2ドメインも保存されていた。今後は、この2種類のF3'H遺伝子の遺伝解析や供試品種以外のクラブアソプル品種におけるF3'H遺伝子の特性評価を進めていく。昨年度までに、クラブアップルの主要な生理活性ポリフェノール化合物が、エピカテキンとプロシアニジン類であることを見出した。また、両物質の果実内含量の季節変動を調べたところ、夏から秋にかけてエピカテキンが重合してプロシアニジン類を生じている可能性が示唆された。エピカテキンからプロシアニジン類を生じる生合成酵素はまだ解明されていない。エピカテキンの物質レベルでの変換条件を検討するため、種々の条件下でエピカテキンの化学変換および生物変換を試みた。これまでにも試験管内で塩基性条件下にした時、無酵素的に重合が起こることが知られていたが、果実抽出物を加えた無細胞系では、塩基性でなくても変換されることを新たに見出し、果実内成分の関与が強く示唆された。今後の酵素探索に役立つ知見と考えている。

食物繊維については、調べた品種間では水溶性繊維は同程度だったが、不溶性繊維を特に多く含む品種が見つかった。ポリフェノール生合成系の酵素遺伝子については、クラブアップル品種のゲノムDNAを用いて、ジヒドロケルセチンからケルセチンへの代謝に関与しているFlavonol Synthase(FLS)遺伝子ホモログを、PCR法によって同定した。クラブアップル由来のFLS遺伝子の全長配列を決定した。全長約4kbpで3ヶ所のエクソンで構成され、推定アミノ酸は337個であった。リンゴ品種“ふじ"由来のFLS遺伝子やセイヨウナシ品種“Confbrence"由来のFLS遺伝子と98%以上の高い相同性を示した。また、第一エクソンでは3種類のホモログが検出され、クラブアップル由来のFLS遺伝子ファミリーの存在が示唆された。今後は、これまでの成果を論文に集約する。また、一方では果実内成分の中からのエピカテキン重合酵素の探索を進め、他方ではポリフェノール生合成系酵素の遺伝子レベルでの解析を、品種間や季節間の消長について進め、有用クラブアップル品種創出への基礎資料としてまとめていく予定である.
現代都市とイスラーム

1.本年度はつぎのような活動をおこなった。イスラム圏と非イスラム圏の文明の双方にわたって、広く人類学的、社会学的、政治学的資料を渉猟し、比較のための基礎をかためるためにつぎのように研究会を開催した。ことに研究者らの関心がアフリカにあるために、公募研究の「西アフリカ内陸イスラーム都市の比較研究」(代表・嶋田義仁)と連携して研究会を実施している。(1)第一回(7月9日・民博)日野舜也「東アフリカの都市とイスラム」嶋田義仁「西アフリカ内陸イスラム都市の3類型」(2)第2回(10月8日・静岡大学)米山俊直「アフリカ・イララーム研究の再検討」店田廣文「エジプトにおける都市化とイスラム」(3)第3回(11月19日・神奈川大学)比較文明学会シンポジウム「都市と文明」参加(4)第4回(12月3日・東大東文研)河邉宏「イスラムと出生行動」米山俊直「パラダイムをめぐって」(5)第5回(1月21日・民博)前田慶穂「パレスチナ問題における都市性と非都市性-その局面をめぐって-松原正毅「村から見た都市-トルコから-」(6)第6回(3月18日・東大東文研)松田素二「都市と出稼ぎ民ー東アフリカからー」和崎春日「祭りからみた都市論ー左大文字の事例ー」2.次年度は実態調査をもふくめた研究の深化をはかる予定である。
高速滑り運動する発現系車軸藻ミオシンを用いたミオシン機能解析

車軸藻ミオシンは、他のモーター蛋白質と比べて、10100倍の運動速度をもつ世界最速のモーター蛋白質である。車軸藻ミオシンは,その運動速度の大きさから,非常にユニークな蛋白質と言え,モーター蛋白質の動作原理を解明する上で,多くの知見が得られると期待されている。しかし,今までの車軸藻から生化学的に精製する方法で得られるミオシンは収量が少なく,純度もあまりよくなかったので,その酵素化学的性質を調べるのは困難であった。そこで,申請者は,分子生物学的手法を用いた蛋白質発現系により,速い運動速度をもつ車軸藻ミオシンの作成を試みた。車軸藻ミオシンは軽鎖が未同定なので,軽鎖を他のものでだいたいする方法を行った。その結果,車軸藻ミオシンはモータータンパク質の中でこれまで最大のATP分解活性を持つとされていた筋肉のミオシンの20倍もの活性を持つことがわかった。つまり車軸藻ミオシンの速い運動活性の一因は高いATP分解活性にあることがわかった(K.Ito et al. BBRC2003)。現在は,この発現系によって得られた車軸藻ミオシンを用いて,ストップドフロー装置により,ATP結合速度,ADP解離速度,アクチン解離速度等の詳細な酵素速度論的測定を行い速い運動速度の酵素学的基盤を明らかにしつつある。今までのところ,車軸藻ミオシンはアクチンとの結合時間を短くすることによってアクチン滑り速度を大きくしていることがわかった。そこで,申請者は,分子生物学的手法を用いた蛋白質発現系により,速い運動速度をもつ車軸藻ミオシンの作成を試み,平成16年に,それに成功した。つまり車軸藻ミオシンの速い運動活性の一因は高いATP分解活性にあることがわかった(K.Ito et al.BBRC2003)。現在は,この発現系によって得られた車軸藻ミオシンを用いて,ストップドフロー装置により,ATP結合速度,ADP解離速度,アクチン解離速度等の詳細な酵素速度論的測定を行い,さらに光ピンセット装置による1分子アッセイを行うことにより車軸藻ミオシンの速い運動速度の酵素学的基盤を明らかにしつつある。これまでの研究により,車軸藻ミオシンはacto-S1からのADP解離速度,ATPによるactinからのATP解離速度が非常に大きいことがわかった。つまり,車軸藻ミオシンはアクチンとの結合時間を短くすることによってアクチン滑り速度を大きくしていることがわかった(投稿準備中)。車軸藻ミオシンは、他のモーター蛋白質と比ペて、10100倍の運動速度をもつ世界最速のモーター蛋白質である。

その結果,車軸藻ミオシンはモータータンパク質の中でこれまで最大のATP分解活性を持つとされていた筋肉のミオシンの20倍もの活性を持つことがわかった。つまり車軸藻ミオシンの速い運動活性の一因は高いATP分解活性にあることがわかった(K.Ito et al. BBRC2003)。現在は,この発現系によって得られた車軸藻ミオシンを用いて,ストップドフロー装置により,ATP結合速度,ADP解離速度,アクチン解離速度等の詳細な酵素速度論的測定を行い速い運動速度の酵素学的基盤を明らかにしつつある。今までのところ,車軸藻ミオシンはアクチンとの結合時間を短くすることによってアクチン滑り速度を大きくしていることがわかった。
発達・学習支援ネットワークのデザインに関する総合的研究

1、研究計画の3つの柱(地域調査研究、インテーフェイス・プロジェクト、国際比較研究)に基づいて、前半は士別市・士幌町、米国アマーストおよびニューヨーク、そして英国リーズでの地域試験的調査研究と札幌での2回の国際シンポジウムを実施し、これらをふまえて後半から研究領域を「若者支援教育」と『特別支援教育」に焦点化し、国内調査は札幌市および釧路市、国際比較研究を英国リーズ地域に絞って調査研究を行った。2、「若者支援教育」では以下の諸点が明らかになった。(1)政策担当者や経済団体では「雇用は厳しいが仕事はある」と現状を認識しており、仕事と若者の意識・能力のミスマッチを問題としている。(2)しかし、若者自立塾等の調査によれば、「ミスマッチ」が生ずる原因は個人に帰属するというよりは、急激な社会変動の下での家庭や学校に浸透した構造的危機にあり、社会資源の保有格差が密接に関連している。(3)こうした状況において、若者の社会的自立支援にあたる援助者たちは、協同性を再構築しつつ、人とのつながりをつくる力や自分で考える力を形成するための実践を組織しており、それは教育・福祉・法務の領域を超えて共通性を持つ。(4)以上およびリーズ市の活動との比較研究を通して、若者に即した発達学習支援ネットワークの構築の課題と方法が明らかとなった。3、「特別支援教育」では、(1)国内研究としてはとくに「特別支援教育と地域支援プログラムの展開」というテーマのもとに、地域、生涯発達、人・ネットワークといったキーワードで3回のシンポジウムを開催し、そこでの議論を踏まえて支援上の課題を明確化させた。(2)海外調査では、米国マサセッツ州アマースト近郊の諸学校ならびにニューヨーク州立大学バッファロー校の子ども家庭支援センター、英国リーズ地域の特別支援教育に関連する諸施設を調査して、特別支援教育に関わる先進諸国の共通性と日本の独自性について考察し、今後の課題と関連づけて検討した。4、以上の調査研究の成果の主たる部分を、『発達・学習支援ネットワーク研究』第1号-第7号にまとめた。調査研究のまとめとともに、研究方法として「双方向的・協同的・組織的研究」を、理論的・実践的課題としてネットワーク・デザインにかかわる「地域教育訓練計画づくり」を提起した。(1)プロジェクト全体を推進するために、公開の事務局会議=研究会を2週間に1回開催した。これらをふまえた全体的枠組みについての提起は、鈴木敏正『生涯学習の教育学-学習ネットワーキングから-』(北樹出版)として刊行される。(2)特定地域を対象とした実践的研究は、まず札幌市において、個別テーマに即した6つの小プロジェクトを立ち上げて、それぞれ予備的・実験的プロジェクトを進めた。士別市については、生涯学習を推進する行政および市民のネットワークを構築し、とくに市民ネットワーク(市民広場みなくる)と協働で、このプロジェクトの調査研究にもとづく公開講座を実施した。土幌町では、基礎的データ収集と関連機関調査を行った。(3)広域にわたる発達・学習支援ネットワークの構築に関する試験的研究においては、サーバ用コンピュータを導入し、掲示板、MLの構築、ネットワーク用ソフトの試験的活用を行った。(4)発達・学習支援ネットワークの国際比較研究については英国リーズ市調査を実施し、ネットワークとそれを支えるパートナーシップに関する資料収集とそれらの担い手に対する聞き取り調査を実施した。北アイルランドについては、3名の関連研究者を招聘して国際シンポジウム「地域づくり教育の未来」を開催する。

1、研究計画に示した、3つの柱--特定地域を対象とした調査研究、広域にわたるネットワーク構築の試験的研究、発達・学習支援ネットワークの国際比較研究--に沿って研究活動を推進した。それぞれの成果を公開するため、雑誌『発達・学習支援ネットワーク研究』を創刊し、第3号まで刊行した。2、特定地域を対象とした調査研究は、札幌市、士別市、士幌町の3地域を対象にして実施した。札幌市に関する研究では、昨年度立ち上げた6つの小プロジェクトを独自に追求するとともに、大都市における発達・学習支援ネットワークの構築にむけて各プロジェクト相互の連携に関する見通しを検討した。士別市では、昨年の実績をふまえ、若者支援の地域ネットワークづくりに焦点をすえた調査研究と、それをふまえた公開講座を行った。士幌町では、小中学生から老人にわたる各世代の生活課題とネットワークの役割、地域社会と学校の連携をめぐる先進的取り組みと課題に関する調査研究を実施した。3、広域にわたる発達・学習支援ネットワークの構築に関する試験的研究に関しては、昨年度に引き続き、ネットワーク用ソフト、メーリングリスト、掲示板等を利用したネットワーク活動の支援を試み、その中間的な報告を行った。4、発達・学習支援ネットワークの国際比較研究については、「コミュニティ再生と不利益層への学習支援ネットワークの構築」をテーマにした国際シンポジウムを開催した。このシンポジウムでは、昨年度実施した英国リーズ市調査の中間まとめをもとに、英国から招聘したリーズ大学関係の3名の関連研究者をまじえ、議論を行った。1、研究計画に示した、3つの柱--特定地域を対象とした調査研究、広域にわたるネットワーク構築の試験的研究、発達・学習支援ネットワークの国際比較研究--に沿いながら、若者支援に関わるネットワークと困難を抱える子どもたちの支援に関わるネットワークに焦点をすえて、研究活動を推進した。2、特定地域を対象とした調査研究は、札幌市周辺、釧路市の2地域を対象にして実施した。札幌市周辺に関する研究では、若者や困難を抱える子どもたちの現状と彼らを支援する様々な活動に関する調査を行った。釧路市に関する調査では、釧路の高校生を対象にした若者の就労観と将来志向に関する大量のアンケート調査を実施した。それぞれの調査結果の分析にむけ、データ整理およびデータ入力を継続中である。3、広域にわたる発達・学習支援ネットワークの構築に関する試験的研究に関しては、昨年度に引き続き、ネットワーク用ソフト、メーリングリスト、掲示板等を利用したネットワーク活動の支援を試みるとともに、全国各地に存在する若者や困難を抱える子どもたちへの先進的な支援活動についてヒアリング調査と資料収集を行った。4、発達・学習支援ネットワークの国際比較研究については、アメリカのボストンと英国のリーズを対象にした調査を行った。ボストンでは特別支援教育の実態に関する機関ヒアリング調査および資料収集を実施し、英国のリーズでは初年度から継続的に実施している若者支援の実態に関する各種調査および資料収集を行った。
プロテインC凝固制御系における分子間相互作用に関する分子生物学的研究-特に分子内機能ドメインの構造・機能相関の解析-

生命の維持・進展に不可欠な血液の流動性は、主に血管内皮細胞上での血液凝固制御機構や線維素溶解機構によって維持されている。こうした制御調節機構のなかでもプロテインC(PC)凝固制御系(Protein C anticoagulant pathway)は、この制御系因子の先天性異常症が高頻度に血栓塞栓症を来たすことから生理的に最も重要と考えられている。申請者らはこれまで、PC凝固制御系の分子機構を解明するため、主な制御系因子のPC、プロテインS(PS)、およびトロンボモジュリン(TM)の分子間相互作用について主に遺伝子工学的手法を用いて解析してきた。本年度は、PC凝固制御系の中でも特に重要な分子間相互反応である、(1)PSと活性化PC(APC)の相互作用部位、および(2)PSとXa因子、Va因子およびプロトロンビンの分子間相互作用部位を解析し、これらの因子の構造・活性相関を解析した。先ず、PSの第2EGFドメイン内にアミノ酸変異(Lys155→Glu)を有する先天性PS異常症患者血漿から精製した異常PS蛋白および同じ変異を有する組換え異常PS蛋白を作製して解析した結果、正常血漿PSや組換え正常PS蛋白と異なり、異常PS蛋白にはAPCコファクター活性と抗プロトロンビナーゼ活性の消失とともに、APC、Xa因子およびプロトロンビンの結合性の消失が認められた。しかし、この異常PS蛋白にVa因子は正常に結合した。以上の結果から、PSの第2EGFドメインのLys155残基を含む領域にAPC、Xa因子およびプロトロンビンの結合部位が存在し、PSの主要な抗凝固作用であるAPCコファクター活性と抗プロトロンビナーゼ活性を発現することが明らかになった。他方、別の実験から、PS分子上のVa因子結合部位は、PSのC末端領域であることが示唆された。現在、PSがVa因子を構成するH鎖とL鎖のどちらに結合するかを検討している。本研究によって、PC凝固制御系の分子機構の一端が解明出来、今後のより有効な抗血栓薬の開発のための蛋白質の構造と活性相関に関する基礎的情報を得ることが出来たと考える。生命の維持・進展に不可欠な血液の活動性は、主に血管内皮細胞上での血液凝固制御機構や線維素溶解機構の活性化によって維持されている。こうした制御調節機構のなかでもプロテインC凝固制御系(Protein C anticoagulant pathway)は生理的に最も重要である。申請者らはこれまで、本制御系因子のプロテインC、プロテインS(PS)などの分子間相互作用を遺伝子工学的手法やモノクローナル抗体を用いて解析してきた。本課題研究においては、プロテインC凝固制御系の中でも特に重要な分子間相互作用である、(1)PSと活性化プロテインC(APC)の相互作用部位、および(2)PSとXa因子ならびにプロトロンビンの分子間相互作用部位を解析し、これらの因子の構造・活性相関を明らかにすることを目的とした。先ず、(1)の課題であるAPCとPSの相互作用部位に関する研究においては、PSの第2EGFドメインにアミノ酸変異(Lys155→Glu)を有する先天性PS異常症患者血漿から精製した異常PS蛋白および同じ変異を有する組換え異常PS蛋白を用いて解析した。その結果、正常血漿PS蛋白や正常組換えPS蛋白と異なり、異常PS蛋白はAPCに対する補酵素活性を示さず、またこの異常PS蛋白にAPCは結合出来なかった。

また、(2)の課題についても(1)と同様に異常PS蛋白を用いて検討した結果、異常PS蛋白は抗凝固活性を示さず、また、この異常PS蛋白にXa因子もプロトロンビンも結合出来なかった。以上の結果から、PSの第2EGFドメインのLys155残基を含む領域はAPC、Xa因子およびプロトロンビンの結合部位として機能し、PSの凝固制御活性の発現に極めて重要なことが明らかになった。今回の研究によって、血液凝固制御調節反応の分子機構の一端を解明出来、今後の有効な抗血栓薬の開発のための蛋白質の構造・活性相関に関する基礎的情報を提示することが出来たと考える。生命の維持・進展に不可欠な血液の流動性は、主に血管内皮細胞上での血液凝固制御機構や線維素溶解機構によって維持されている。こうした制御調節機構のなかでもプロテインC(CP)凝固制御系(Protein C anticoagulant pathway)は、この制御系因子の先天性異常症が高頻度に血栓塞栓症を来たすることから生理的に最も重要と考えられている。申請者らはこれまで、PC凝固制御系の分子機構を解明するため、主な制御系因子のPC、プロテインS(PS)、およびトロンボモジュリン(TM)の分子間相互作用について主に遺伝子工学的手法を用いて解析してきた。本年度は、PC凝固制御系の中でも特に重要な分子間相互反応である、(1)PSと活性化PC(APC)の相互作用部位、および(2)PSとXa因子、Va因子およびプロトロンビンの分子間相互作用部位を解析し、これらの因子の構造・活性相関を解析した。先ず、PSの第2EGFドメイン内にアミノ酸変異(Lys155→Glu)を有する先天性PS異常症患者血漿から精製した異常PS蛋白および同じ変異を有する組換え異常PS蛋白を作製して解析した結果、正常血漿PSや組換え正常PS蛋白と異なり、異常PS蛋白にはAPCコファクター活性と抗プロトロンビナーゼ活性の消失とともに、APC、Xa因子およびプロトロンビンの結合性の消失が認められた。しかし、この異常PS蛋白にVa因子は正常に結合した。以上の結果から、PSの第2EGFドメインのLys155残基を含む領域にAPC、Xa因子およびプロトロンビンの結合部位が存在し、PSの主要な抗凝固作用であるAPCコファクター活性と抗プロトロンビナーゼ活性を発現することが明らかになった。他方、別の実験から、PS分子上のVa因子結合部位は、PSのC末端領域であることが示唆された。現在、PSがVa因子を構成するH鎖とL鎖のどちらに結合するかを検討している。本研究によって、PC凝固制御系の分子機構の一端が解明出来、今後のより有効な抗血栓薬の開発のための蛋白質の構造と活性相関に関する基礎的情報を得ることが出来たと考える。
パーキンソン病の病態におけるＳ１Ｐ受容体シグナルおよびエキソソーム放出の関与

蛍光ラベルした細胞外αーシヌクレイン(αーSyn)を細胞外に添加することで,αーSynがエンドサイトーシスで細胞内に取り込まれた後,後期エンドソーム様の細胞内小胞に集積することを見いだした。この後期エンドソーム様の小胞は細胞外に放出されるエクソソームを生成する多胞性エンドソームであった。我々は以前にS1P1受容体シグナル経路が多胞性エンドソーム上でのエクソソームへのタンパク質ソーティングにおいて重要な機能を担っていることを報告している。また,αーSynがS1P1受容体とGiタンパク質の共役を阻害することも報告している。これらの結果から,細胞外αーSynが多胞性エンドソームでのタンパク質ソーティングを阻害することが予測されたが,検討の結果,エクソソームマーカーとしてよく用いられるCD63のソーティングがαーSynによって阻害されることが示された。また,遺伝子導入により発現させたαーSynーmCherryは細胞質に分布しているが,一部は多胞性エンドソームでエクソソームにソーティングされることが知られている。極めて興味深いことに,細胞外に組換えαーSynを添加することで,細胞内のαーSynーmCherryのソーティングが阻害された。αーSynのエクソソームへのソーティングおよび細胞外放出はαーSynのクリアランス経路であるという報告もあり,今回の結果は,細胞外αーSynが細胞内αーSynのクリアランスを阻害する可能性を示唆している。実験計画で記載した蛍光ラベルαーSynの細胞内への取り込みおよび多胞性エンドソームへの集積を示すことができ,また,その場でのタンパク質ソーティングがαーSynにより阻害されることも示すことができた。αーSynは血中や脳脊髄液中など,細胞外にも存在することはよく知られているが,その生理学的/病理学的意義は全く不明である。今回の結果は,細胞外αーSynの生理的役割を考える上でね極めて興味深いものであると考えている。今回までに,細胞外αーSynが細胞内に取り込まれ,多胞性エンドソームに集積すること,そしてその場でのタンパク質ソーティングを阻害していることを示すことができた。さらにその中でもαーSyn自身のエクソソームへのソーティングが阻害されているという事実は非常に重要であり,もしそのソーティングがαーSynのクリアランス経路であるという仮説が正しいならば,その阻害により細胞質には異常なレベルのαーSynが集積し,その結果として凝集を生じる可能性があり,パーキンソン病の病理を考える上で非常に興味深い。今後,細胞質αーSynの凝集を検出できる実験系を確立し,細胞外αーSynの作用について検討を行う予定である。次年度使用額は64円であり,おおむね実験計画通りの使用金額であったと考えている。
APOBEC3欠損によるリンパ腫発生機構の解析-内在性レトロウイルスとの関連性-

マウスAPOBEC3は外来性のレトロウイルスの複製を制御する宿主因子であり、レトロウイルス自然抵抗性のC57BL/6(B6)系統では、抗ウイルス活性の高いAPOBEC3バリアントが多く発現している。B6マウスでは生後1年までにがんを発症することは稀であるが、APOBEC3欠損下では雌個体の一部で乳癌とリンパ性白血病の発症を認め、それら発症マウスでは内在性乳癌ウイルスmouse mammary tumor virus (MMTV)の転写産物が多く発現していた。本研究は、APOBEC3が内在性レトロウイルスの発現を制御することでがん発症を抑制している可能性を示した。APOBEC3蛋白はレトロウイルスの逆転写産物を標的にしてその複製を制御する核酸変異挿入因子であるが、我々はこれまでにフレンド白血病ウイルスに感染抵抗性のマウス系統に発現するAPOBEC3バリアントが、同種由来レトロウイルスの複製を生体内で強く抑制することを示し、外来性レトロウイルス複製制御におけるAPOBEC3の生理機能を明らかにしてきた。一方、APOBEC3蛋白の内在性レトロウイルスへの影響としては、レトロトランスポゾンの転移を制御することが試験管内実験で示唆されているものの、生体内でAPOBEC3蛋白が同様に機能しているかは不明である。我々は、APOBEC3遺伝子を欠損させたC57BL/6マウスが野生型マウスに較べて高い乳がん発症率を示すことを見出し、また一部のマウスにリンパ腫および白血病の発症を認めた。APOBEC3蛋白がリンパ組織や骨髄に強く発現しており、また乳腺上皮細胞にも検出されることから、生体内でもAPOBEC3がマウス内在性レトロウイルスであるmouse mammary tumor virus(MMTV)やmouse murine leukemia virus(MuLV)の制御に働いている可能性は高いと考える。本年度は主に、APOBEC3欠損マウスの発がんまでの経過観察と、発症したマウスから摘出した組織・臓器の組織学的および免疫学的解析を行った。今後、APOBEC3欠損マウスで活性化する内在性レトロウイルスの同定へと本研究を進め、APOBEC3による発がん制御機構を明らかにする。APOBEC3蛋白はレトロウイルスの逆転写産物を標的にしてその複製を制御する核酸変異挿入因子であるが、我々はこれまでにフレンド白血病ウイルスに感染抵抗性のB6マウス系統に発現するAPOBEC3バリアントが、同種肉来レトロウイルスの複製を生体内で強く抑制することを示し、外来性レトロウイルス複製制御におけるAPOBEC3の生理機能を明らかにしてきた。我々は、APOBEC3を欠損したB6マウスでは生後8カ月を過ぎてから野生型マウスに較べて高い乳癌の発症率を示すこと、その発症は経産マウスでのみ認められることを見出した。またAPOBEC3欠損マウスの一部ではリンパ腫および白血病の発症を認めた。APOBEC3蛋白はリンパ組織や骨髄に多く発現しており、また乳腺上皮細胞にも検出されることから、APOBEC3がマウス内在性レトロウイルスであるMuLVやMMTVの発現制御に関与している可能性は大きいと考える。今年度までに我々は、発症したAPOBEC3欠損個体から腫瘍部位、骨髄、リンパ節及び末梢血細胞を採取し、組織染色や免疫染色によりがん細胞の同定を行ってきた。現在、それら臓器・組織における内在性レトロウイルスの発現を抗体染色及び分子生物学手法を用いて解析中である。これに加えて、B6マウス系統ではAPOBEC3が蛋白レベルで極めて高く発現していることをAPOBEC3遺伝子の多型部位から明らかにした。APO8EC3蛋白の発現レベルが内在性レトロウイルスの発現・転移の制御にも重要であると考える。APOBEC3はレトロウイルスの逆転写産物を標的にしてその複製を制御する核酸変異挿入因子である。我々はこれまでにフレンド白血病ウイルスに感染抵抗性のC57BL/6 (B6)マウスに発現するAPOBEC3が外来性レトロウイルス複製を生理的に制御していることを明らかにしてきたが、内在性レトロウイルスに対するその働きは不明であった。本研究では、APOBEC3を欠損したB6マウスが野生型に較べて高い乳癌の発症率を示し、それは生後7カ月以降の経産雌にのみ認められること、また一部のAPOBEC3欠損個体では胸腺やリンパ節が腫大し、リンパ性白血病を発症することを見出した。APOBEC3蛋白はリンパ組織や乳腺上皮細胞に多く発現していることから、APOBEC3は内在性レトロウイルスであるmurine mammary tumor virus (MMTV)やmurine leukemiavirus (MLV)の発現抑制に働くことで内在性レトロウイルスによる腫瘍誘発を制御していると推測された。

そこで、発症個体から腫瘍部位と胸腺やリンパ節などのリンパ組織を採取し、それらの組織における内在性MMTVの発現をRT-PCR法により解析した。その結果、乳癌部位ではMMTVの転写が強く亢進しており、また同一個体のリンパ器官には欠損変異型MMTVの発現を認めた。APOBEC3欠損の未経産雌でも、生後半年を過ぎた個体の中にはリンパ組織に欠損変異型のMMTVを強く発現するものがあり、APOBEC3を欠いた個体ではMMTVの反復感染が生じている可能性が考えられた。一方、内在性MLVの発現は抗体パネルを用いた免疫染色法により検討したが、APOBEC3欠損によるMLVの発現誘導は認められなかった。以上、本研究によりAPOBEC3が内在性MMTVの発現を抑制することで発がんを制御している可能性が示された。APOBEC欠損マウスは出産・授乳を経て、さらに生後8カ月を過ぎてからがんを発症すること、経産マウスのうちの10数パーセントという発症率であることから、サンプリングに時間が掛かる。また、レトロウイルスの様々な断片が宿主染色体には数多く存在していることから、転移活性化した内在性レトロウイルスの検出にはそれを考慮した緻密な解析が必要となる。これらの理由から本研究の進展が当初の計画よりやや遅れている。24年度が最終年度であるため、記入しない。APOBEC3欠損マウスにおいてリンパ腫だけでなく乳がんの発症を認めたことから、MuLVのみならずMMTVの検出が必要となったことが大きく変更となったところであるが、それに関しては分子生物学的解析のみならず、MMTV検出用の抗体も入手して解析を進めていく。