hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マクロファージの活性化を制御する天然化合物のガン免疫療法への応用

3経路の阻害によりM2Mφへの分化を抑制し癌細胞の増殖を抑える間接的作用が存在することが示唆された。つまり、候補化合物と各種抗癌剤の併用により、癌細胞増殖の重要な制御因子であるM2Mφへの分化抑制作用がさらに加わり、癌の進展に関わる微小環境を変化させる可能性が考えられた。ゆえに、Onionin Aをはじめとした候補化合物は、STAT3経路をターゲットとすることで癌細胞への直接的作用だけではなく、がん微小環境もコントロール癌根治を目指す、新規治療戦略となりうる可能性が示唆された。近年、ガンの発症や進展に影響を与えるマクロファージの活性化制御(ガン治療に有効なオルタナティブ活性化から古典的活性化への制御)が新たなガン治療戦略になることが知られている。本研究では、そのマクロファージの活性化を制御する候補化合物(Corosolic acid, Oleanolic acid, Soyasapogeol等)を同定した。さらに、それら候補化合物がガン移植モデルマウスにおいても有効性を示すことを証明したことから、本研究にて同定した候補化合物が将来的にガン予防・治療に応用できる可能性を明らかにした。本年度の実験計画における大きな目標としては、候補化合物(Onionin A, Garlicnin CおよびCorosolic acid)のリンパ球やミエロイド由来免疫抑制細胞(MDSC)に対する作用を評価することであった。本年度の研究では、まず候補化合物の骨肉腫移植モデルマウスへの投与により皮下腫瘍の進展の有意な抑制が認められたことならびに、候補化合物投与群では皮下腫瘍中のCD4およびCD8陽性T細胞の増加が認められたことから候補化合物はT細胞の活性化にも関与していることを明らかにした。また、Ex vivoでの実験において候補化合物はMDSCの活性化を抑制することで、ガンにおける抗腫瘍免疫の低下を抑制していることを明らかにした。さらに、in vitroでの実験にて、候補化合物と既知抗ガン剤との併用効果を検討したところ、ヒト骨肉腫細胞株ならびにヒト脳腫瘍細胞株において候補化合物ならびに既知抗ガン剤単独では有効性が認められない条件下においても両者の併用では有効性が認められることが明らかとなった。ゆえに、本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。医歯薬学今後の研究の推進方策としては、まずは候補化合物(Onionin A, Garlicnin CおよびCorosolic acid)の腫瘍移植モデルマウスにおける既知抗ガン剤との併用効果を検討する。具体的には、マウス骨肉腫およびマウス卵巣癌移植モデルマウスに候補化合物(Onionin A, Garlicnin CおよびCorosolic acid)とシスプラチンを投与し、腫瘍の発育・転移ならびにマウスの生存率を比較する。また、腫瘍組織におけるマクロファージの活性化状態や、その他の腫瘍免疫関連細胞への影響を評価する。さらに、候補化合物であるOnionin A
音読・要約を核にしたシステム英語指導法の提案―「名人教師」の分析をもとにして―

研究の目的は「受験指導とコミュニケーション能力向上のための指導」を両立している「高校名人教師」の指導法を参考に、「音読・要約を核にした指導法」を確立することであった。安木(2014)で高専における音読指導を中心とした授業の実践例と、それを一般化し、システムとして授業を行う方法を提案した。しかしスローラーナーの中に授業に興味を失うものがあった。安木(2016)で、質的側面から分析し、スローラーナーへの指導法としてスピーキングが有効であることが判明した。安木(2017)でスローラーナーの指導にも配慮した指導法を提案した。最終年度には研究成果を還元するためのフォーラムを開催した。「高校英語教育における名人教師の教授方略・授業観・学習観」について授業観察の後に面接調査をすることにより明らかにした。教師へのアンケートを参考に作成した項目より、受験指導とコミュニケーション能力の指導を両立するための要因を大きく指導技術と発想と教材の3つに分けた。それらの点について名人教師3名に面接調査することにより明らかにした。指導技術で注目すべきなのはいずれの教師もリーディングを核にしなからもその他の技術、特にスピーキングの大切さを主張していることである。教材に関しては、3名の内2名が教科書や既存の教材が中心であるのに対して、1名はテーマ学習の中で自作プリントを活用している。発想で特徴的なのは、「受験指導」や「コミュニケーション能力」といった小さな範疇だけでは英語教育を捉えておらず、更に大きな人間教育や言語教育の中で英語教育を捉えていることである。上記の中で特に本研究のテーマである「音読指導」について考察を深めた。音読を核にした授業のために必要な音読指導の方法に関して、名人教師の音読指導法を先行研究並びに、大学生へのアンケートと比較し、音読指導を中心とした指導を行う際の留意点を確認した。調査の結果名人の指導法は、大学生が高校時代に受けた指導法より、先行研究で有効性が実証された指導法に近いことがわかった。これを元に高等専門学校の教室で使用できるシステムとしての音読指導法を提案した。上記2点を明らかにすることで、高校での受験指導とコミュニケーション能力育成の指導の両立、更に高専でのTOEIC指導とコミュニケーション指導の両立についての概念的なバックグラウンドや具体低指導法をある一定のレベルまで明らかにすることができた。両研究とも学会にて報告し、後者の音読指導に関しては全国高等専門学校英語教育学会研究論集に掲載された。現場教師への一助となるであろう。平成26年度は主に以下の研究を実施した。まず昨年度名人教師3名へのインタビューを実施し、それについて英語授業研究学会で発表したが、更に分析を深めた。指導技術で注目すべきなのはいずれの教師もリーディングを核にしながらもその他の技術、特にスピーキングの大切さを主張していることであった。教材に関しては、教師A、教師Bが教科書や既存の教材の中心であるのに対して、教師Cはテーマ学習の中で自作プリントを活用している。しかし教師A、教師Bも教科書や入試問題をベースに、教材を広げる活動を様々なステージで行いテーマを重視している。また「英語の授業を英語で教える」ことに関して、いくつかの観点から慎重な態度をとっていることもSELHiですべて英語による授業を実施し、高い評価を得た教員の意見であるので特筆に値する。生徒の成長を確かな方向へ導くしっかりした人間観、社会観、言語観が根底にあり、技術論はその先にあると感じられた。これらの点を深めるために3名の内1名の授業観察と面接調査を再度実施し更なる分析を実施中である。これらの分析を元に高等専門学校の授業においてスピーキングをペア活動やグループ活動の中で実施することで動機付けする方法を吟味した。この結果特に有効であった指導法は「ネイティブぴったし音読」「インテイクリーディング」「列毎発表音読」「輪読」であった。また事前テストと事後テストにおいて「理解を伴ったリーディングスピード」は有意に向上した。これに関しては全国高等専門学校英語教育学会において「高専英語授業におけるスピーキング指導の工夫;高校名人教師の分析をもとにして」のタイトルで発表した。研究から出てきた高校英語教育における名人教師の指導法に関してインタビューした内容を論文にまとめることと、名人教師の指導法の分析から出てきた指導法を、高等専門学校における英語指導の中で実施し、指導法を完成することを目指した。更に実践の中から出て来た問題点に関して探索した。名人教師へのインタビュー結果については津山工業高等専門学校紀要第57号に「高校英語教育における名人教師の教授方略・授業観・学習観の研究」のタイトルで発表した。安木(2013)並びに昨年度の本報告を元にしている。名人教師の指導法を高等専門学校の授業の中で実施することに関しては、インタビューの中から動機付けの鍵として出できたスピーキング指導を軸に実践を行い、全国高等専門学校英語教育学会で「高専の英語授業で有効な指導法の研究ー高校名人教師の分析をもとにしてー」のタイトルで発表した。実践の結果理解を伴ったリーディングスピードが有意に向上した。

また実践の中から問題点として出てきたスローラーナーの指導に関しても研究を開始し、2015年度中国地区英語教育学会で発表を行うと同時に、同学会の紀要に「英語学習者の文法上のつまずきを減らすための提案ー中学校英語教科書基本文テストの分析から考えるー」のタイトルで投稿し、掲載された。これらの研究を元に中高の現場の先生に研究成果を還元するために、2016年3月に外国語教育メディア学会の中高の先生対象の1日セミナーで具体的な授業方法について提案した。名人教師への面接調査、指導法の質的分析、研究から出てきた指導法を元にした高等専門学校での実践、研究結果の学会での発表や、社会貢献のための、現場の先生方が参加する講習会やセミナーでの発表と概ね順調に実施できた。本年度は研究に基づいて行った授業において出てきた問題点を修正し行った新たな授業実践について学会で発表し、論文にまとめることと、問題点として残った名人教師の内容理解方略について考察することである。前年度までの研究を踏まえ、未解決部分を補完した上で、研究成果を社会に還元し、最終的なモデルを提示することを目標とした。未解決部分の一つは内容理解の方法であった。QAによるだけではなく、グラフィック・オーガナイザーの使用と、アウトプット活動においてストーリー・リプロダクションを行うこと自体が内容理解の確認になるという方向性を得た。研究成果に関しては、論文や講習会で、開発した指導技術を伝えると共に、研究協力者の高校教員の協力を得て、『「受験指導とコミュニケーション能力育成を両立する熟練高校教師」から学ぶ英語教育フォーラム』を開催した。P(Presentation)→C(Comprehension)→P(Practice)→P(Production)による指導を更に細分化し、中高の教科書を使用したモデルとして以下のように提案した。まず「概要学習」は、「Presentation1」で本文の重要文法事項に関する導入、本文全体の重要単語の導入、本文の内容の導入を行う。「個別学習(各セクション毎に実施)」は、「Warm-up」で授業に学生が入り込めるようにするための様々な活動を行い、「Presentation2」でそのセクションに入るためのプレゼンテーションを行い、「Comprehension」で「概要→詳細」の原則に基づく本文の内容理解と文法項目や重要表現を含む例文提示を行う。「Practice」で様々な音読を実施し「Production1」で本文の内容をスピーキング活動につなげるために、まとめの活動を行う。「発展学習」では「Production 2」で1課の本文全体の発展学習を行い、「Interview Test」などの評価活動と連携した評価を行う。この指導法を高等専門学校2年生の授業で検定教科書を用いて9ヶ月実施し、学生の読解力向上を確認した。研究の目的は「受験指導とコミュニケーション能力向上のための指導」を両立している「高校名人教師」の指導法を参考に、「音読・要約を核にした指導法」を確立することであった。安木(2014)で高専における音読指導を中心とした授業の実践例と、それを一般化し、システムとして授業を行う方法を提案した。しかしスローラーナーの中に授業に興味を失うものがあった。安木(2016)で、質的側面から分析し、スローラーナーへの指導法としてスピーキングが有効であることが判明した。
成人呼吸窮迫症候群(ARDS)後に生じる肺線維化と増殖因子

【背景及び方法】急性呼吸促迫症候群(ARDS)がlate phaseに陥ると不可逆的な呼吸不全となり,致死率が高くなる.ARDSのlate phaseの病態、とくに細胞外マトリックスの変化を明らかにするために、我々はLPSの持続静注と高濃度酸素曝露(FiO_275%)10日間による,ARDS subacute phaseのラットモデルを作製し(O+L群),肺組織中のコラーゲン量を肺の構造を裏打ちしている細胞外マトリックス変化の指標とし,肺障害と再生に関与しているTGF-β1,マトリックス分解酵素(MMP)との関連を検討した.【結果】肺組織中のhydroxyproline量はコントロール(C)群1.71±0.28(μg/mg tissue)であったのに対し,酸素曝露群(O群)では1.32±0.19と有意に低下し(p=0.0075),LPS投与群(L群)では2.01±0.34と有意に増加していた(p=0.0352).O+L群では1.55±0.11であった.肺組織中のTGF-β1はC群352±143(pg/mg tissue)であったのに対し,O群でのみ558±243と有意に低下し(p=0.0392),L群では311±37,O+L群では334±52であった.BAL中のcollagenase活性とgeratinase活性はO群とO+L群ではC群と比較して有意に高値であった。組織学的検討では,O群とO+L群とで正常肺胞構造の破壊が認められた.L群では肺胞壁の肥厚が著明であった.O+L群では肺胞構造の破壊が著明な部分と肺胞壁の肥厚が認められる部分とが混在していた.【考察及び結果】肺組織中のコラーゲン量と組織学的所見より,高濃度酸素曝露とLPS持続静注は細胞外マトリックスに対して相対する影響をもたらすことが分かった.高濃度酸素曝露は肺組織中のコラーゲン量を減少させ気腫化生じ,LPS持続静注はコラーゲン量を増加させ線維化を生じさせた.酸素曝露+LPS投与群では相殺するかたちで中間の値をとり.線維化と気腫化の混在が認められた.細胞外マトリックスの変化にはMMPやTGF-β1の関与が示唆された.本年度はARDS亜急性期の検討のため、急性肺障害およびその後の肺組織修復を評価するための動物モデル作成を試みた。1.方法実験動物はラット(ウイスター)を用いた。肺障害はエンドトキシンを静注し、その後ラット体内に小型浸透圧ポンプを埋め込み、さらにエンドトキシンを10日間持続静注し、75%酸素に暴露した。これらのラット障害肺に対し、肺血管、上皮透過性の指標として肺胞洗浄液血漿アルブミン濃度比、肺線維化の指標として肺組織hydroxyproline量を測定した。2.結果障害肺では、コントロール肺(未処置肺)に比べ、肺組織洗浄液血漿アルブミン濃度比が高く(p<0.05)、肺組織hydroxyproline量が少なかった(p<0.05)。なお肺胞洗浄液に好中球の増多を認めた(p<0.05)。3.考案エンドトキシンの持続投与により、好中球の集積、血管および上皮透過性亢進をともなう肺障害を生じた。また組織hydroxyproline量が減少したことは肺組織のコラーゲン分解を示すものと考えられた。このモデルが急性肺障害後の肺組織損傷と修復の検討に有用である可能性が示された。今後肺組織損傷と、TNF、IL-6、FGF、TGFなどのサイトカインや増殖因子との関連を詳細に検討する予定である。組織学的検討では,O群とO+L群とで正常肺胞構造の破壊が認められた.L群では肺胞壁の肥厚が著明であった.

O+L群では肺胞構造の破壊が著明な部分と肺胞壁の肥厚が認められる部分とが混在していた.【考察及び結果】肺組織中のコラーゲン量と組織学的所見より,高濃度酸素曝露とLPS持続静注は細胞外マトリックスに対して相対する影響をもたらすことが分かった.高濃度酸素曝露は肺組織中のコラーゲン量を減少させ気腫化生じ,LPS持続静注はコラーゲン量を増加させ線維化を生じさせた.酸素曝露+LPS投与群では相殺するかたちで中間の値をとり.線維化と気腫化の混在が認められた.細胞外マトリックスの変化にはMMPやTGF-β1の関与が示唆された.
有機二価イオンの分子認識能解明と分子スイッチ構築への応用

有機化合物の連続的還元過程で生成するは二価イオンは電子供与体として活性であるが、中性の場合と活性軌道を異にするため、分子認識能及び生成する錯体構造の変化が期待される。本研究の目的は、有機π電子系二価イオンの分子化合物生成能に対する新規な分子認識機構の提案と、その実証及びそれを利用した電位掃引に伴う分子スイッチの構築である。具体的には以下の点を明らかにした。1.パラキノン類二価イオンはメタノールと互いに識別できる1:2および1:4水素結合錯体を生成することを明らかにした。そして、分光学的測定と分子軌道計算から、これらの水素結合は強いn-σ型の電荷移動相互作用に起因していることを分かった。この結果は、キノン類のredox statesが仲介する生体内での電子移動を水素結合が制御していることを示唆するものであった。2.テトラシアノエチレン、クララニル、ブロマニル等の電子受容体分子の二価イオンは、二価イオンの軌道対称性に基づき4nπ系炭化水素類のみを効率よく認識し、中性の場合と異なった構造のπ-π型電荷移動相互作用による分子化合物を生成することを明らかにした。また、この分子化合物の特異的な電荷移動吸収帯を観測することに成功した。そして、中性の場合と二価イオンの場合で、生成する錯体の構造が変化することおよび分子認識が活性軌道の相の違い(対称性)に起因することを明らかにした。3.2の結果を基に、電位掃引に伴い4nπ電子系のみを認識して構造と色の異なる錯体生成に基づく酸化還元仲介型分子認識系を創出し、これを利用した分子スイッチ構築の可否を論じた。以上の結果は、基礎的な化学的現象(分子認識機構)の解明のみならず、有機あるいは生物反応への概念の適用、実用的分子スイッチへの応用に基礎を与えるものと考えられる。本研究の目的は、π電子系二価イオンの分子化合物生成能に対応する新規な分子認識機構の提案と、その実証及びそれを利用した電位掃引に伴う分子スイッチの構築である。本年度はこの目的達成のために、有機二価イオンの相互作用を測定するための分光電気化学方法を確立し、キノン類二価イオンの水素結合に関する分子認識と、テトラシアノエチレン(TCNE、電子受容体分子)二価イオンの炭化水素類π電子系に対する分子認識能を明らかにした。パラキノン類二価イオンはメタノールと互いに識別できる1:2及び1:4水素結合錯体を生成し、これらの生成エネルギーは76.6および118.9kj/mol(1,4-benzoquinoneに対して)と非常に大きいものであった。そして、分光学的測定と分子軌道計算から、この水素結合は強いn-σ型の電荷移動相互作用に起因していることが明らかとなった。この結果は、キノン類のredox statesが仲介する生体内での電子移動を水素結合が制御していることを示唆するものである。一方、TCNE二価イオンは4nπ電子系のビフェニレンのみを分子認識能し、π-π型分子間相互作用に基づく分子間電荷移動吸収帯を持つ分子化合物を生成することが明らかとなった。有機二価イオンの、π-π型の相互作用が、本研究によって初めて観測された。この分子化合物生成は4nπ電子系分子の特異的キャラクターを分子軌道レベルで認識し、中性のTCNE鎖体とは異なる構造を与えることが明らかとなった。この結果、TCNE-ビフェニレン系では、電位掃引に伴う2つの安定分子化合物生成系が確立され、その色の変化および鎖体構造の変化は分子スイッチ構築への基礎的知見を与えた。

本研究の目的は、π電子系二価イオンの分子化合物生成能に対する新規な分子認識機構の提案と、その実証及びそれを利用した電位掃引に伴う分子スイッチの構築である。本年度はこの目的達成のために、電子受容体分子であるテトラシアノエチレン(TCNE)やクロラニル(CA)二価イオンが炭化水素類π電子系と相互作用して電荷移動(CT)錯体を生成するときの分子認識能を明らかにした。電気化学的測定により有機二価イオンはビフェニレンのような4nπ電子系分子のみを認識して相互作用することが明らかとなった。そして、分光電気化学的測定により有機二価イオンの分子間CT吸収帯を観測し、この相互作用がπ-π型CT相互作用に基づくことを証明した。本研究により有機二価イオンのCT相互作用が初めて観測された。そして、有機二価イオンの分子化合物生成は、有機二価イオンが電子供与体として4nπ電子系分子の特異的キャラクターを分子軌道レベルで認識していることを明らかとした。また、二価イオンが生成するTCNE錯体やCA錯体は中性のときとは異なる構造を与えることを明らかにした。これは中性の場合と二価イオンの場合で錯体生成に伴う電子供与体と電子受容体が入れ替わり、HOMO-LUMO相互作用が異なることに起因することがわかった。したがって、電気化学的に制御された色と構造の異なる2つの安定なπ-π型電荷移動相互作用に基づく分子化合物生成系を確立することができた。これらの結果は分子スイッチや分子デバイスに代表される機能性分子構築への基礎的知見を与えるものとして意義あるものと思われる。
心筋培養細胞株の樹立及びそれを用いた心臓の遺伝子治療の試み

未分化胚細胞(ES細胞)を浮遊培養してエンブリオイドボデイ(EB)にし、8日目頃より数十%のEBが自立拍動を開始するという心筋細胞の分化系を確立した。次にEBよりRNAを抽出しノーザンブロット解析を行ったところ、心筋に発現している転写因子としては心筋特異的ホメオボックスであるCsx及びジンクフィンガーモチーフをもった転写因子であるGATA4の発現が6日目より認められた。構造蛋白としてはミオシン重鎖の発現が10日目より認められた。また心筋細胞分化における細胞内シグナルの役割を検討するためにまずMAPキナーゼの心筋の分化、発生における役割について解析した。MAPキナーゼの脱リン酸化酵素であるMKPをES細胞に導入後ネオマイシンにて選択して細胞株を単離した。MKDを過剰発現したES細胞株は浮遊培養しても心筋に分化するが極めて低かったことより、MAPキナーゼが心筋の分化に必須であることが明らかとなった。一般に癌抑制遺伝子は細胞の分裂に抑制的に働いている。逆に癌抑制遺伝子の機能を喪失した細胞では永久に分裂能を獲得したり、癌化する。そこで、癌抑制遺伝子の一つであるp53欠損マウスから心筋細胞の株化を試みたが、成功しなかった。また心筋細胞分化における細胞増殖因子の役割を検討するためにまずTGFβの心筋の分化、発生における作用について解析した。II型TGFβ受容体のキナーゼの領域を欠失させたコンストラクトを作成し、ES細胞に導入後ネオマイシンにて選択して細胞株を単離した。TGFβの作用を制御した場合に心筋に分化するか否かをEBの自律拍動する率をもとめるとともに前述した転写因子や構造蛋白の発現を示標に明らかにしていこうと考えている。そこで、癌抑制遺伝子の一つであるp53欠損マウスから心筋細胞の株化を試みている。1)心筋特異的ホメオボックス遺伝子の過剰発現による心筋細胞分化の解析in vitroの実験によりCSXが心房性Naの利尿ペプチドや脳型クレアチンキナ-セの遺伝子を活性化することが明らかとなった。またアフリカツメガエルやゼブラティッシュを使った研究で、CSXの過剰発現により心臓の巨大化や異所性心筋が形成されたことより、CSXは心臓の発生・分化にとって極めて重要な役割を果していることが明らかになってきた。そこでヒトCSXcDNAをサイトメガロウイルス(CMV)プロモーターやelongation factor(EF)プロモーターの下流に接続し、未分化胚細胞(ES細胞)に導入し、過剰発現細胞株を得た。現在その細胞株を用い、心筋細胞への分化について解析中である。2)未分化胚細胞の心臓への移植ES細胞にEFプロモーターを使ってLacZ遺伝子を過剰発現させ、細胞株を得た。その細胞を同系統のマウス心臓に注入し、心筋に分化するか否かを解析した。ES細胞を導入した領域にはリンパ球等の血液細胞の浸潤が強かった。切片をβgal染色及びミオシンに対する抗体を用いて染色したところ移植されたES細胞は心筋細胞には分化していなかった。現在、培養皿上でES細胞をある程度分化させ、心筋中へ注入し、生着するか否かについて検討している。3)p53ノックアウトマウスより心筋細胞株樹立の試みp53ノックアウトマウスの新生仔心筋細胞を培養したが、細胞株を得ることはできなかった。現在胎仔早期の心臓よりの培養を考慮中である。

未分化胚細胞(ES細胞)を浮遊培養してエンブリオイドボディ(EB)にし、8日目頃より数十%のEBが自立拍動を開始するという心筋細胞の分化系を確立した。次にEBよりRNAを抽出しノーザンフロット解析を行ったところ、心筋に発現している転写因子としては心筋特異的ホメオボックスであるCsx及びジンクフィンガーモチーフをもった転写因子であるGATA4の発現が6日目より認められた。構造蛋白としてはミオシン重鎖の発現が10日目より認められた。また心筋細胞分化における細胞内シグナルの役割を検討するためにまずMAPキナーゼの心筋の分化、発生における役割について解析した。MAPキナーゼの脱リン酸化酵素であるMKPをES細胞に導入後ネオマイシンにて選択して細胞株を単離した。MKDを過剰発現したES細胞株は浮遊培養しても心筋に分化するが極めて低かったことより、MAPキナーゼが心筋の分化に必須であることが明らかとなった。一般に癌抑制遺伝子は細胞の分裂に抑制的に働いている。逆に癌抑制遺伝子の機能を喪失した細胞では永久に分裂能を獲得したり、癌化する。そこで、癌抑制遺伝子の一つであるp53欠損マウスから心筋細胞の株化を試みたが、成功しなかった。
アメリカにおける1930年代までの女性雑誌研究

アメリカ白人の中流階級女性を対象にした大衆雑誌Ladies' Home Journalのディスコースをとおして、1930年代までの女性文化を継続して考察した。多層なディスコースの中から、今年度は女性文化の中の「家庭」の役割を中心に考察した。消費社会が女性を有力な顧客として発展していく中で、家庭や家事に関する記事や広告は、「家庭の天使」としての女性のジェンダーロールを強固にすることに関与した。Catharine Beecherは1869年に「アメリカン・ウーマンズ・ホーム」を設計し、家事空間に女性を取り込むような魅力的な家事空間を提唱した。こうした提案に便乗し、女性大衆雑誌は言説や関連広告などで魅力的な家庭をつくるためのさまざまな手段や考えを提供している。その一方で、同誌は大衆雑誌の中で唯一協同家事を提唱し、新らしい女性と家庭の関係を読者に紹介している。こうした女性と家庭との関係の変化に関わるイデオロギーと、同誌に収録されている他のディスコースの関係を考察した。また、大衆女性雑誌の家庭観を深めるため、アメリカ婦人参政権協会(AWSA)の公的機関雑誌であり、女性作家たちも寄稿しているThe Womans' Journalの比較をすすめた。女性の日常生活における家庭や家事との関係をみることは、ジェンダーロールが揺らぐ時期の女性の空間の構築過程を知るために有効であることが認識できた。正統とされてきたアメリカ文学史や周縁作家が見直される気運の中、近年、アメリカ文学研究において、1850年代に売り上げを伸ばしていた女性作家の作品、すなわち、家庭/感傷小説とよばれる領域への関心が高まっている。当時、ベストセラーとなった作品と数人の女性作家の再評価がすすめられる中、本研究は、著書という形態をとった女性作家作品研究に焦点をあてるのではなく、同時期に存在していた白人中流階級の女性向けに創刊された大衆雑誌におけるディスコースを資料として、女性作家の執筆の軌跡、女性文化、ジェンダーイデオロギーの解析を試みようとするものである。著書を出版した女性作家の多くは、金銭的に有利な女性大衆雑誌に作品を掲載していた。それらの大衆雑誌は、編集者のイデオロギーを繁栄したものである以上、彼女たちの作品も自ずからそれらに絡みとられたものであり、芸術作品として単体で存在するわけではなかった。今年度の研究では、19世紀に読者層の多かったGodey's MagazinとLadies' Home Journalを1次資料に選び、ディスコース分析を行なった。白人中流階級の女性向けに創刊された女性大衆雑誌は、「家庭の天使」であることが強要されていた当時の女性たちに、自分の考えを述ぺ、そのことによって収入を得させるという社会への解放の媒体であった。しかし、一方で、育児、料理、裁縫を中心としたディスコースは、当時の中流階級の女性達に「家庭の天使」像を流布し、そして理想化することで、その像を強固な現実として提示する媒体としても機能していた。ディスコースばかりでなく、19世紀末の資本主義社会の到来に向けて誌面の多くを占めるようになる広告も、貴婦人にふさわしい服装や、家事への関心を高める製品を毎号繰り返し掲載することで、視覚的に伝統的で家庭的な理想像を助成に強要することに加担していた。大衆雑誌は、女性作家や読者にとって女性文化の構築に貢献するだけでなく、ジェンダーイデオロギーに関する解放と束縛という二面性を提示することによって、彼女たちの文化を翻弄した一面もある。
オートファジーによる慢性閉塞性肺疾患の増悪メカニズムの検討

慢性閉塞性肺疾患(COPD)増悪の主原因は感染だが、メカニズムは不明である.NOD1,2の機能にて菌を認識するも,オートファジーを介した免疫機構が不全、増悪を引き起こすという仮説をたて、検証した。ATG16L1の増悪関連遺伝子型を有するCOPD患者単球ではインフルエンザ桿菌死菌刺激でのIL10発現量が多かった。NOD1の一塩基多型rs2075820は呼吸機能での閉塞性障害と関連、in vitroではNOD1刺激によりP38経路が活性化、菌の気道へのcolonizationがp38経路活性化を介してCOPDの病状進行に関与している可能性が示唆された。ATG16L1において、増悪頻度と関連の見られたSNP(rs2241880)の変化により細胞のLPSなどへの反応の変化があると仮定。検証のためにATG16L1の同SNPの野生型、変異型のstable transfectantを単球系および好中球系cell lineにて作成中。3.オートファジーの細菌への免疫応答への関与のin vitroでの検証:LC3-GFPのstable transfectantをTHP-1細胞で作成中。NODs,オートファジー関連蛋白ATG16L1の遺伝子多型とCOPD増悪頻度の関連:増悪頻度データのあるCOPD 150症例において、NOD1, NOD2,ATG16L1のSNPの遺伝子型と増悪頻度との関連を検証した。NOD1のcSNPの一つであるRs2075820は、増悪頻度との有意な関連を認めなかった。ただ、本SNPのCアレルの頻度はCOPDの閉塞性障害の程度(FEV1%pred)と有意に関連していた(p = 0.0128.年齢、性別、pack-yearsで補正)。同SNPは、増悪を介さずCOPDの閉塞性障害そのものとの関連があると考えている。NOD1経路のCOPDの病態への関与メカニズムの検討:NOD1の刺激でCOPDの気道病変の形成が進むと推測したため、好中球系細胞にてNOD1の刺激により有意に変化する遺伝子にCOPDの病態関連遺伝子があると仮定。そこで、好中球のモデル細胞の一つであるHL-60をNOD1 stimulant (M-TriDAP)で刺激、有意にmRNA発現の変動する遺伝子をマイクロアレイで検討。発現が2倍以上増加した遺伝子が29遺伝子、2倍以上発現が減少していた遺伝子が111遺伝子見られた。2. ATG16L1経路のCOPDの病態への関与メカニズムの検討:ATG16L1において、増悪頻度と関連の見られたSNP(rs2241880)の変化により細胞のインフルエンザ桿菌死菌への反応の変化があるか検証することとした。COPD患者のrs2241880の遺伝子型を決定、また同患者の末梢血単球を抽出しインフルエンザ桿菌死菌を加えてIL1b, TNF, IL10, IL8などのサイトカインの発現パターンを検討したところ、同SNPはIL10の発現パターンと有意に関連していた(p = 0.04)。呼吸器内科学当初の昨年度研究計画としては、NODs及びATG16L1のSNPにて増悪と関連が見出された場合、そのメカニズム検討のために培養細胞およびCOPD患者からの細胞を用いて検証をしていくこととなっている。COPD増悪ではないが、細菌のcolonizationによる慢性炎症からのCOPDの進行にNOD1のSNPの関与が示唆され、可能性の高い経路としてp38経路が新規に見出された。COPDの病態進行について新知見を、関与するSNPを交えて見出すことが可能になってきている。本件およびATG16L1の増悪への関与を検証するための細胞系の構築がやや遅れているが、細菌感染を引き金にしたCOPDの病態進行メカニズムの、geneticsの観点からの解明には近づいており、当初仮説よりやや仮説が広がりを見せているが、順調にすすんでいると考える。当初の昨年度研究計画としては、NODs及びATG16L1のSNPと増悪との関連検討、及びメカニズムの検討のため培養細胞モデルの構築やヒト細胞での検討のための系の作成となっている。NODsとATG16L1のcSNPとCOPD増悪との関連は昨年度までで検討済みである。ATG16L1のSNPと増悪は関連したものの、残念ながらNODsのSNPとの関連は見られなかったため、NOD-ATG16L1の系と増悪との関連の可能性は低いと思われる。ただし、ATG16L1自体が増悪と関連するメカニズムの解明は、ATG16L1と相互作用の報告されたTLR2 or TMEM59について、引き続き探索する予定である(下記、来年度推進方策に詳細)。

研究の比較的早期の段階でNODの経路の可能性を否定し他のATG16L1関連の経路の可能性を模索できることになり、ATG16L1関連増悪メカニズムの探索を引き続き進められると考えられる。また、同研究の結果として、新規にNOD1のcSNPとCOPD自体との関連が見出され、その関係を梃にCOPDの病態に関与しているNOD1からの経路の探索を開始した。COPDにおいて増悪を介さない病態進行のメカニズム解明の可能性が見込まれる。増悪へのオートファジー関連メカニズム探索のための細胞での系の構築はやや遅れているが進めており、ヒト単球の分離培養はできるようになっている。NOD1, NOD2,およびATG16L1の候補SNPと増悪頻度との関連は総じて検討済である。ただ、先日、LPSによるNOD2の発現誘導を変化させるSNPが見出されており、増悪頻度との関連が疑われることから、追加検討の予定としている。COPDと関連したNOD1 SNPの野生型、変異型の遺伝子導入細胞を用いて、NOD1 stimulantによる刺激でp38経路活性化の程度が同SNPにより異なるか検証予定である。COPD増悪と関連したATG16L1 SNPの野生型、変異型の遺伝子導入細胞を用いて、LPSなどによる刺激で炎症性サイトカイン(IL8, TNF-alhaなど)発現の程度が同SNPにより異なるか検証予定である。COPD患者サンプルによる検討も行えればと考えている。NODsとATG16L1のcSNPとCOPD増悪との関連は検討し、結果が得られている。ATG16L1のSNPと増悪は関連したものの、残念ながらNODsのSNPとの関連は見られなかった。よってNOD-ATG16L1の系と増悪との関連の可能性は低いと思われる。ただし、ATG16L1自体が増悪と関連するメカニズムの解明は引き続き行う予定である。本研究費申請ののち、新たにTLR2, TMEM59はATG16L1とinteractionし、後者は黄色ブドウ球菌感染への反応をオートファジーを介して行うことが報告されており(Boada-Romero E, et al.EMBO J. 32: 566-582; 2013)、TLR2 or TMEM59-ATG16L1経路と増悪との関連可能性を引き続き探索する予定である。研究の比較的早期の段階でNODの経路の可能性を否定し他のATG16L1関連の経路の可能性を模索できることになり、順調に増悪メカニズムの探索を進められていると考えられる。NOD1により有意に発現量が変動し、かつCOPDの病態進行を抑制するとされるfluticason, vitamin Dなどによる発現変動の抑制のかかる遺伝子を探索し、COPD病態関連遺伝子の絞り込みを行う予定としている。オートファジーを介した増悪メカニズムの細胞系を用いた解析は、まずは系の構築を引き続き進める予定としている。増悪との関連可能性のあるSNPの候補が見出されたものの、発注から納品までの行程が25年度内に間に合わないと判断されたため、26年度に繰越。
高イオン伝導を達成するための有機シェル／無機コアナノ粒子の最密充填配列手法の構築

様々な物性がnmスケールで異常性を示すことが知られているが、ガラス状高分子物質の変形についても異常性の発現が予想される。しかしながら、これに関する論文はほとんど見当たらない。ナノ微粒子に力を作用させることが容易ではない(ナノ微粒子を2枚のプレートに挟んで圧縮応力を印加するような実験は不可能)ためである。その理由は、1nmスケールの大きさが均一な微粒子を作製できないこと、2用いるべきプレートがnmスケールで平滑であること、3圧縮過程での変位量をnmオーダーで正確に求める(応力ーひずみ曲線を得るために要求される)ことが不可能だからである。ゴム状高分子母相中にガラス状微粒子をちりばめたような分散系試料を作製し、これを延伸する実験を行えば2と3の問題は回避可能であるが、ガラス状微粒子と母相との界面の剥離が起きないように微粒子の表面に高分子鎖を直接化学結合したような構造が求められる。微粒子表面に高分子鎖をグラフトするような合成手法は可能ではあるが、上記1の問題が未解決のまま残る。POSS骨格を有するような元素ブロックデンドリマー型の有機/無機ハイブリッド粒子はこのような研究を行うために適している。また、ブロック共重合体が自発的に形成する球状ミクロ相分離構造も候補の一つである。この球状構造は数nm程度の半径を有する均一な超微粒子と見なすことができ、例えばポリスチレンをマイナー成分に、ポリエチレンブチレンをメジャー成分として有するようなSEBSトリブロック共重合体を用いれば、上述のような理想的な状態を創り出すことができる。トリブロック共重合体フィルムを5倍に延伸した状態で保持し、時分割2次元小角X線散乱測定を行った。その結果、時間が経過するにつれてガラス球がしだいに変形していくことがわかった。このことから、ガラス球が室温でも変形可能であることが結論づけられた。28年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、高イオン伝導を達成するための方法として、イオン伝導性を有する有機シェル/無機コアナノ粒子を薄膜状に成形し、薄膜中で粒子を空間的に最密充填配列させることを目標とする。われわれはこれまでに、球状ミクロドメインを形成するブロック共重合体に振動外場を印加することによって、BCC配列を規則化させることができることを見いだしている。これを発展させ、振動外場印加によって最密充填化させることを目的とした。用いた試料は、高いイオン伝導性を有するイオン性液体の集積化と高分子材料への固定化(すなわち、イオン性液体をフィルムに加工できるような材料にすること)を目指して作製されたものである。これはA01班の中建介教授(京都工芸繊維大学)らによって世界で初めて作製された。このデンドリマー型の有機/無機ハイブリッド粒子の最表面にはイオン伝導性の置換基が結合されている。有機シェル部は、POSS骨格からイオン伝導性の末端置換基までの距離を自在に変化させるための役割を担っており、その距離の最適化によってイオン伝導度の向上が目論まれた。しかしながら、期待されたほどのイオン伝導性が得られなかった。これまでの我々の研究によって、さらなるイオン伝導性の向上には、このようなナノパーティクルの最密充填化が必須であるという結論に達した。そこで本研究では、本来は自発的に体心立方(BCC)格子を形成するようなソフトナノパーティクル(POSSだけなら堅い粒子であるが、これに有機シェル部がハイブリッドされているため、柔らかい粒子としての特徴が発現する)を最密充填化させる(すなわち、面心立方(FCC)格子配列を実現させる)ために、周期的振動ひずみを加えるなどの振動外場を印加することを試みた。おおむね順調に進んでいる。

このことから、ガラス球が室温でも変形可能であることが結論づけられた。体心立方格子(BCC)配列や面心立方格子(FCC)配列の定量的な解析は、小角X線散乱(SAXS)測定が最適である。すなわちBCCの場合は、反射ピークが散乱ベクトルの大きさq [=(4π/ λ)sin(θ/2);λはX線の波長でθは散乱角]の相対比が1:√2:√3:√4: ...に見られるのに対して、FCC場合は、反射ピークは、1:√(4/3):√(6/3):√(8/3):...で表される位置に出現する。すなわち、1次ピークに加えて少なくとももう一つ高次のピークが見られたら、BCCとFCCの区別はつく。規則性が高いほど、より多数の高次ピークが観測される。より定量的な解析にはモデル散乱関数の計算を行う。(1)伸長・収縮、(2)交流電場、(3)周期的な交互温度勾配の印加を行いながら、処理直後の試料の状態をSAXS測定によって明らかにする。この目的のために装置をビームラインに持ち込む。28年度が最終年度であるため、記入しない。
超伝導限流器の実用化に向けた高信頼度化と合理的設計・運用に関する研究

本研究では,次世代の革新的・高機能型電力機器として期待されている「超伝導限流器」について,実用化の要である高信頼度化と合理的な設計・運用に資する技術的指針を提示することを目的としている.本年度(2年次)の主な研究成果は,以下の通りである.1.過去に取得済みの球ー平板電極(準平等電界),昨年度に取得した超伝導限流器の基礎的なターン間モデルおよび実機形状を模擬したパンケーキコイルモデル(不平等電界),さらに他研究機関の文献データに基づいて,液体窒素の静的/動的絶縁性能を体積効果の観点から総合的に評価・体系化した.2.昨年度のパンケーキコイルモデルに使用したニクロムテープを超伝導(GdBCO)テープに置換し,超伝導テープに臨界電流以上の大電流を過渡的に通電することによって実際にクエンチを発生させることにより,従来よりも大きい熱流束下での動的絶縁性能を取得し,その下限値を見出した.3.IEEE14母線モデルシステムに複数の超伝導限流器の導入を想定して故障解析と過渡安定度解析を行い,限流協調を考慮した超伝導限流器の適正配置や動作パラメータについて検討した.交付申請書に記載した研究実施計画に従って,おおむね順調に進展している.昨年度(1年次)および本年度(2年次)の研究成果により,学術論文誌(IEEE)1件が掲載決定となるとともに,国際会議1件,国内学会3件を発表した.さらに,次年度(3年次)の国際会議2件の発表を申込済みである.超伝導限流器の限流動作時における熱/電界複合ストレス環境下の放電・絶縁破壊現象に関する論文発表が,国際会議等でドイツやフランスの研究機関などから増えつつある.これらの論文の研究成果と本研究の最新の成果を取りまとめて,高信頼度かつ合理的な超伝導限流器の絶縁設計指針を提示する.また,昨年度に開始した超伝導限流器の導入を想定したIEEE 14母線モデルシステムの故障解析と過渡安定度解析を発展させ,導入する超伝導限流器の数・配置をパラメータとして,各超伝導限流器の温度上昇(限流)・冷却(復帰)特性を評価に加える.さらに,超伝導限流器相互の限流協調の観点から,超伝導限流器の最適設計への反映と電力システムにおける超伝導限流器の適正配置・運用に関する技術的指針を提示する.本研究では,次世代の革新的・高機能型電力機器として期待されている「超伝導限流器」について,実用化の要である高信頼度と合理的な設計・運用に資する技術的指針を提示することを目的としている.本年度の研究成果は以下の通りである.抵抗型超伝導限流器コイルのターン間を模擬した基礎絶縁モデル(ターン間モデル)を液体窒素中に浸漬し,気泡のない定常状態における静的絶縁性能を評価した.また,抵抗型超伝導限流器のクエンチ・限流動作時における絶縁環境を模擬し,ターン間モデルの高電界空間に突発的に気泡を発生させることにより過渡状態における動的絶縁性能を評価し,静的絶縁性能と比較した.さらに,超伝導限流器の実器形状を模擬したパンケーコイルキモデルをニクロムテープを用いて設計・製作し,静的/動的絶縁性能を評価・比較するとともに,ターン間モデルの静的/動的絶縁性能と比較した.高電圧導体ー接地導体間のギャップ長は2mmおよび6mm,印加電圧は交流60Hz,動的絶縁性能を評価する熱ストレスは5W/cm2×1秒,液体窒素の温度は77K,圧力は0.1MPa(絶対圧)とした.ターン間モデルおよびパンケーキコイルモデルの静的絶縁破壊電圧(BDVsta)および動的絶縁破壊電圧(BDVdyn)を測定し,両者の比BDVdyn/BDVstaを求めた.BDVdyn/BDVstaは,先行研究における球ー平板電極のBDVdyn/BDVstaよりも上昇した.これは,テープエッジ部の局所高電界により,エッジ近傍の気泡がグラディエント力を受けて高電界領域から排除されるためと考えられる.また,パンケーキコイルモデルのBDVdyn/BDVstaは,球ー平板電極と同様に,ギャップ長の増加に伴い上昇した.これは,不平等電界下においても,準平等電界下と同様にギャップ長の確保が抵抗型超伝導限流器の動的絶縁性能向上に資することを示している.初年度の交付申請書に記載した研究実施計画に従って,おおむね順調に進展している.また,初年度の基礎絶縁モデルと次年度のパンケーキコイルモデル(YBCOテープ使用)との間にパンケーキコイルモデル(ニクロムテープ使用)を用いることにより,次年度のパンケーキコイルモデル(YBCOテープ使用)による実験への展開を容易にすることができた.本研究では,次世代の革新的・高機能型電力機器として期待されている「超伝導限流器」について,実用化の要である高信頼度化と合理的な設計・運用に資する技術的指針を提示することを目的としている.本年度(2年次)の主な研究成果は,以下の通りである.1.過去に取得済みの球ー平板電極(準平等電界),昨年度に取得した超伝導限流器の基礎的なターン間モデルおよび実機形状を模擬したパンケーキコイルモデル(不平等電界),さらに他研究機関の文献データに基づいて,液体窒素の静的/動的絶縁性能を体積効果の観点から総合的に評価・体系化した.

2.昨年度のパンケーキコイルモデルに使用したニクロムテープを超伝導(GdBCO)テープに置換し,超伝導テープに臨界電流以上の大電流を過渡的に通電することによって実際にクエンチを発生させることにより,従来よりも大きい熱流束下での動的絶縁性能を取得し,その下限値を見出した.3.IEEE14母線モデルシステムに複数の超伝導限流器の導入を想定して故障解析と過渡安定度解析を行い,限流協調を考慮した超伝導限流器の適正配置や動作パラメータについて検討した.交付申請書に記載した研究実施計画に従って,おおむね順調に進展している.昨年度(1年次)および本年度(2年次)の研究成果により,学術論文誌(IEEE)1件が掲載決定となるとともに,国際会議1件,国内学会3件を発表した.さらに,次年度(3年次)の国際会議2件の発表を申込済みである.次世代型YBCOテープを用いて,超伝導限流器を構成するパンケーキコイルモデルを設計・製作する.製作したパンケーキコイルモデルを液体窒素中に浸漬し,静的/動的絶縁性能を評価し,前年度の基礎絶縁モデルおよびパンケーキコイルモデル(ニクロムテープ使用)との相違を明らかにするとともに,それらの要因を解明する.前年度の基礎絶縁モデルおよびパンケーキコイルモデル(ニクロムテープ使用),本年度のパンケーキコイルモデル(YBCOテープ使用)における静的/動的絶縁性能より,超伝導限流器の絶縁設計に資するデータベースを構築する.また,超伝導限流器の限流・復帰動作はインピーダンスの発生と消滅を伴い,限流動作時のみならず復帰動作時においても,電力システム全体としての安定性(過渡安定度)の低下が懸念される.そこで,申請者らがこれまでに実測した超伝導線材の過電流通電時における発生抵抗の電界依存性と温度依存性に関するデータベースを過渡安定度解析プログラムに組み込み,IEEEや電気学会の標準的な系統解析モデルの複数線路に超伝導限流器の導入を想定し,超伝導限流器の限流・復帰動作時における電力システム全体としての安定性を評価する.超伝導限流器の限流動作時における熱/電界複合ストレス環境下の放電・絶縁破壊現象に関する論文発表が,国際会議等でドイツやフランスの研究機関などから増えつつある.これらの論文の研究成果と本研究の最新の成果を取りまとめて,高信頼度かつ合理的な超伝導限流器の絶縁設計指針を提示する.また,昨年度に開始した超伝導限流器の導入を想定したIEEE 14母線モデルシステムの故障解析と過渡安定度解析を発展させ,導入する超伝導限流器の数・配置をパラメータとして,各超伝導限流器の温度上昇(限流)・冷却(復帰)特性を評価に加える.さらに,超伝導限流器相互の限流協調の観点から,超伝導限流器の最適設計への反映と電力システムにおける超伝導限流器の適正配置・運用に関する技術的指針を提示する.
新しい免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜タンパク質の機能解析

新しい免疫グロブリンスーパーファミリーに属するポリオウイルスレセプター(PVR)の生理的な機能を明らかにするために今年度は特にPVRのマウスホモログ(mPVR)に焦点を絞り、1)mPVRリコンビナントタンパク質の大量発現、2)抗mPVRモノクローン抗体の作製、3)mPVR強制発現細胞株の樹立を行いこれら材料を用い、4)mPVRが細胞間の接着に関与しているか検討した。1)mPVRとイムノグロブリンFc領域との融合タンパク質(mPVR-Ig)をバキュロウイルスの系を用い大量発現し、Protein A、FPLCで精製した。蚕300匹より約100mgのリコンビナントタンパク質が精製できた。2)精製したmPVR-Igをラットあるいはハムスターに免疫し常法に従いモノクローン抗体を作製した。IgGクラスのモノクローン抗体を約20クローン確立した。3)得られた抗mPVRモノクローン抗体を用い各種培養細胞株におけるmPVRの発現を調べたがその発現量は少なかった。そこでmPVRの機能を調べる目的でmPVRを大量に発現しているステーブルトランスフォーマントを作製した。マウスL細胞、HeLa細胞に膜貫通型のmPVRを発現させたクローンを選択した。4)得られたmPVRステーブルトランスフォーマントはコントロールの親株に比べ顕著に細胞凝集活性が上昇しており、この細胞凝集は抗mPVRモノクローン抗体で阻害された。また、これら細胞上でmPVRは細胞間の接触部位にのみに局在しており、これらの事実よりmPVRが細胞間の接着タンパク質であることが示された。
膜型増殖因子アンフィレグリンとエピレグリンのカルボキシ末端断片シグナルの解明

アンフィレグリン(AREG)とエピレグリン(EREG)は、I型膜蛋白質proAREGとproEREGとして細胞膜表面に発現する。様々な細胞外刺激は、ectodomain shedding反応を誘導し、AREGとEREGを細胞外に放出するとともに、細胞膜にC-末端断片ペプチドAREG-CTFとEREG-CTFを残す。産生されたAREG-CTFとEREG-CTFは膜貫通ドメインを保持したまま、未切断のproAREGとproEREGとともに細胞内にエンドサイトーシスにより取り込まれ、核膜に局在変化した。さらに、AREG-CTFと未切断proAREGにつき核膜内膜への局在を明らかにした。これらはLaminA/Cと結合し、ヘテロクロマチン構造を誘導した。amphiregulinおよびepiregulinは細胞膜に発現するI型膜蛋白質であり、その細胞外領域は増殖因子活性を有する。細胞に様々な刺激が加わると、これらの膜型増殖因子はsheddimgを受け増殖因子領域を放出すると同時にカルボキシ末端断片(CTF)を産生する。本研究では、CTFと同時に、sheddimgされずに細胞膜に残るunshed対formが、共にエンドサイトーシスにより細泡内に取り込まれ、ER/核膜に局在変化することを、免疫蛍光染色ならび免疫電子顕微鏡観察により明らかにした。これらは、低分子量G蛋白質のRab5とRabllによる小胞輸送機能により、リサイクリングエンドゾームを経由して,ゴルジ装置、ERに運ばれることを明らかにした。また、ERに局在化したCTFとunshed formは核膜内膜に局在化できることを免疫電小顕微鏡観察により明らかにした。これらの結果より、膜結合型amphiregulinおよびepiregulin蛋白質が、レトログレート小胞輸送により核膜内漠に局在しうることを世界に先駆けて証明した。また、amphiregulin細胞内ドメインの結合蛋白質として、核マトリックス蛋白質LaminA/Cを同定した。amphiregulin細胞内ドメインとLaminA/Cとの結合により、ヒストン蛋白質のメチル化が抑制され、グローバルな転抑制が起こることを明らかにした。この生理学的な意味については、現在さらに解析を進め検討しているところである。細胞に様々な刺激が加わると、これらの膜型増殖因子はsheddingを受け増殖因子領域を放出すると同時にカルボキシ未端断片(CTF)を産生する。昨年までの研究でCTFと同時に、sheddingされずに細胞膜に残るunshed formが、共にエンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれER/核膜に局在変化し、ヒストン蛋白質のメチル化が抑制することでグローバルな転写抑制を起こすことを明らかにしてきた。本年度は、さらにamphiregulin CTFとunshed formのエンドサイトーシスに細胞内ドメインの蛋白質修飾、特にモノユビキチン化が関与することことを明らかにし、その修飾部位を同定した。現在ユビキチン化酵素E3リガゼーゼの同定を試みている。一方、CTF産生の重要な反応であるsheddingを制御する因子の同定を試み、amphiregulin-regulating protein 35(ARP35)を同定した。ARP35はamphiregulinとそのshedding酵素であるADAM17に結合することを明らかにした。ARP35ノックダウンではamphiregulinのsheddingが抑制されることを見いだした。さらにARP35ファミリー分子は12種のメンバーからなることから、他のメンバーに付いても同様の検討をした結果、amphiregulinとADAM17の双方に結合すARP35ファミリー分子としてさらに3つのメンバーを同定した。現在、ノックダウン等により、機能的評価を進めている。細胞に様々な刺激が加わると、これらの膜型増殖因子はsheddingを受け増殖因子領域を放出すると同時にカルボキシ末端断片(CTF)を産生する。昨年までの研究でCTFと同時に、sheddingされずに細胞膜に残るunshed formが、共にエンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれER/核膜に局在変化し、ピストン蛋白質のメチル化を抑制することでグローバルな転写抑制を起こすことを明らかにしてきた。また、CTF産生の重要な反応であるsheddingを制御する因子の同定を試み、amphiregulin-regulating protein 35 (ARP35)を同定した。ARP35ノックダウンではamphiregulinのsheddingが抑制されることを見出した。

ARP35ファミリー分子は12種のメンバーからなることから、本年度は、さらに他のメンバーについても同様の検討をした結果、amphiregulinとADAM17の双方に結合するARP35ファミリー分子としてさらに3つのメンバーARP35-2,-8および-9を同定し、その機能を解析した。その結果、ARP35-2はsheddingを抑制し、ARP35-8および-9はsheddingを活性化することを見出した。さらに、ARP35-2,-8および一9について、epiregulinに対する効果を検討した結果、amphiregulinのshedding制御とほぼ同等の結果を得た。以上のことから、ARP35はamphiregulinおよびepiregulinを含むEGFファミリーメンバーに対し、幅広く機能する可能性が示唆された。