hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
COP1を中心とする発がん・エネルギー代謝ネットワークのリプログラミング

細胞の発がん過程において、がん細胞は自らの増殖に都合良くエネルギー代謝経路を再構築することが知られているが、その実態は明らかでない。申請者らは、E3ユビキチンリガーゼCOP1の研究から以下のことを見いだした。1)COP1-Trib1複合体によるC/EBPalphaの分解促進が分化阻害を惹起し、白血病発症の原因となる。2)白血病関連因子MLF1はCOP1を結合阻害し、C/EBPalphaおよびMLF1-COP1-p53がん抑制経路の安定化に寄与する。3)COP1の新規標的分解因子群を同定し、既知・新規ともに機能的に例外無く、発がん関連およびエネルギー代謝経路に分類される。これらの研究成果を踏まえ、本研究では、発がん過程で、がん細胞が如何にして増殖に必須の特異的エネルギー代謝機構を獲得するのかを、COP1を中心とする発がん・エネルギー代謝ネットワークの研究から明らかにすることを目的とした。初年度(平成29年度)は、E3ユビキチンリガーゼCOP1-Trib1複合体による白血病発症機構に、COP1の新規標的分解因子、特に代謝関連因子が関与する可能性を検定した。その結果、COP1-Trib1複合体は、骨髄系前駆細胞分化促進因子C/EBPalphaばかりでなくACCを含む代謝酵素群をも分解標的とすることを見いだした。主な標的代謝因子群の遺伝子クローニングと発現ベクターの構築を終えた。次年度(平成30年度)は、上記発現ベクターを用いて、細胞培養系を用いた基本的な解析(直接結合、蛋白質分解能、ユビキチン化能、欠失変異体を用いた特異的結合部位の特定)を行い、COP1-Trib1複合体による分解制御を受けにくい代謝酵素変異体を作製した。これら代謝酵素群及びその変異体が白血病発症過程に与える影響を骨髄移植マウスモデルを用いて現在、検証中である。(理由)交付申請書に記載した内容に基づいて、おおむね順調に進展している。細胞培養系実験で得られた成果を、現在、骨髄移植マウスモデルにて検証中である。コントロールマウスモデルの白血病発症に約4ヶ月以上を要するため、やや時間が必要である。計画した実験はほぼ予定どおり進行している。29年度から30年度前半で得られた細胞培養系での解析結果をもとに、COP1-Trib1複合体発現骨髄移植による白血病発症マウスモデル実験系を用いてCOP1が標的とする代謝酵素群の白血病発症機構への関与を詳細に検討中である。初年度(29年度)は、E3ユビキチンリガーゼCOP1-Trib1複合体による白血病発症機構に、COP1の新規標的分解因子、特に代謝関連因子が関与する可能性を検定した。その結果、COP1-Trib1複合体は、骨髄系前駆細胞分化促進因子C/EBPalphaばかりでなく代謝酵素群をも分解標的とすることを見いだした。主な標的代謝因子群の遺伝子クローニングと発現ベクターの構築を終わり、培養系を用いた基本的な解析(直接結合、蛋白質分解能、ユビキチン化能、欠失変異体を用いた特異的結合部位の特定)を現在、進行中である。交付申請書に記載した内容に基づいて、おおむね順調に進展している。ただ、代謝酵素群ACCは約265 kDa以上と非常に大きな蛋白質であることから、遺伝子クローニングおよび各種発現ベクター構築に予定より時間を要している。

その結果、COP1-Trib1複合体は、骨髄系前駆細胞分化促進因子C/EBPalphaばかりでなくACCを含む代謝酵素群をも分解標的とすることを見いだした。主な標的代謝因子群の遺伝子クローニングと発現ベクターの構築を終えた。次年度(平成30年度)は、上記発現ベクターを用いて、細胞培養系を用いた基本的な解析(直接結合、蛋白質分解能、ユビキチン化能、欠失変異体を用いた特異的結合部位の特定)を行い、COP1-Trib1複合体による分解制御を受けにくい代謝酵素変異体を作製した。これら代謝酵素群及びその変異体が白血病発症過程に与える影響を骨髄移植マウスモデルを用いて現在、検証中である。(理由)交付申請書に記載した内容に基づいて、おおむね順調に進展している。細胞培養系実験で得られた成果を、現在、骨髄移植マウスモデルにて検証中である。コントロールマウスモデルの白血病発症に約4ヶ月以上を要するため、やや時間が必要である。計画した実験はほぼ予定どおり進行している。29年度から30年度前半で得られる培養系での解析結果をもとに、COP1-Trib1複合体発現骨髄移植による白血病発症マウスモデル実験系を用いてCOP1が標的とする代謝酵素群の白血病発症機構を詳細に検討する予定である。29年度から30年度前半で得られた細胞培養系での解析結果をもとに、COP1-Trib1複合体発現骨髄移植による白血病発症マウスモデル実験系を用いてCOP1が標的とする代謝酵素群の白血病発症機構への関与を詳細に検討中である。(理由)COP1が標的とする代謝酵素群は約265 kDa以上と非常に大きな蛋白質であることから、遺伝子クローニングおよび各種発現ベクター構築に予定より時間を要し、骨髄移植による白血病発症マウスモデル実験の開始が遅れたため。(使用計画)実験結果自体は当初の予想以上の結果が得られていることから、30年度以降、マウスモデル実験を主体とした代謝経路の解析を行う予定である。(理由)COP1が標的とする代謝酵素群は約265 kDa以上と非常に大きな蛋白質群を含むことから、一部因子とその変異体の遺伝子クローニングおよび各種発現ベクター構築に予定より時間を要した。さらに、変異体を含む多因子群の骨髄移植による白血病発症マウスモデルの解析が必要になった。(使用計画)実験結果自体は当初の予想以上の成果が得られていることから、31年度(令和元年)以降は、さらにマウスモデル実験を主体とした代謝経路の解析を行い、臨床応用の可能性に繋げたい。
HTLV-I遺伝子導入動物を用いたHTLV-I関連疾患の発症機構の解析

我々の樹立したenv-pXトランスジェニックラットは、HTLV-I感染患者に見られる様々な疾患(関節炎、シェーグレン症候群類似の慢性唾液腺炎像など)を発症することからHTLV-I関連疾患の発症機序解明のための有用なモデル動物であると考えられる。以前よりHTLV-I感染患者はATLをはじめ様々な血液細胞系譜への影響が報告されており、ATL患者の多くに破骨細胞の活性化を伴う高カルシウム血症や顆粒球症あるいは単核球増多が認められている。そこでenv-pXラットの血液細胞系譜へのHTLV-Iの直接的影響と疾患による二次的な影響について検討した。(1) env-pXラットのリンパ球に見られるCD80/86やICAM-Iの発現増強疾患による二次的影響(1)好中球数の増加と高ガンマグロブリン血症:関節炎を有するenv-pXラットには高率にリウマチ因子をはじめとする自己抗体の産生が認められた。(2)疾患発症に伴う顆粒球、マクロファージの増加:間接炎発症がCFU-MおよびCFU-GMの増加に影響する以上からenv-pXラットの血液細胞系譜にみられた現象を、二つに分類することができる。破骨細胞およびT,B細胞に対する影響はenv-pX伝子による直接的な影響、顆粒球やマクロファージに対する影響は疾患発症による二次的なものと考えられた。また、発症以前より免疫担当細胞であるT細胞やB細胞が活性化されていることから、遺伝子導入による標的臓器の変化が発症に関与するばかりでなく、導入遺伝子による免疫細胞側の変化が疾患の発症の直接の引き金になりうると考えられる。[目的]我々が作製したヒトT細胞白血病ウイルス(HTLV-I)、env-pXトランスジェニックラットにおいて、関節炎をはじめとする様々なCollagen vascular diseasesの発症や、末梢血中の顆粒球の増多や血清中のリウマチ因子など自己抗体の産生が認められた。また、以前よりATLの患者に高率に高カルシウム血症が存在し、HTLV-Iによる破骨細胞の活性化が示唆されてきた。今回我々は、遺伝子導入による血液細胞、特に破骨細胞とB細胞の分化増殖に関わる影響を調べたので報告する。[方法]1.破骨細胞:大腿骨より骨髄細胞を採取し、マウス血液支持細胞ST-2上でVitaminDおよびDexamethadoneを添加後6日間培養し、TRAP(酒石酸抵抗性酸フォスファターゼ)染色により、破骨細胞の出現頻度および細胞数を測定した。さらに、関節炎発症env-pXラットと未発症env-pXラットとの比較、コントロールとしてアジュバンド関節炎発症ラットを用いて、関節炎発症における破骨細胞の反応性を検討した。2.B前駆細胞:骨髄細胞をST-2上でmll,-7添加後6日間培養し、出現頻度を測定した。[結果と考案]env-pXラットでは破骨細胞数および破骨細胞の頻度、B前駆細胞の頻度が増加していた。関節炎発症env-pXラットでは、未発症env-pXラットに比べ破骨細胞数および破骨細胞の頻度の増加を認めたが、アジュバンド関節炎発症ラットでは、破骨細胞の頻度およびB前駆細胞の頻度は変わらなかった。以上より、関節炎による破骨細胞の分化の促進、env-pX遺伝子導入によるOsteoclastogenesisとB lymphopoiesisの両者への影響を認め、env-pX遺伝子が血液細胞の分化の比較的初期に影響を与えている可能性が示唆された。[目的]env-pX領域遺伝子導入ラット(env-pXラット)で誘導される関節炎及び心筋炎の発症に関与するサイトカイン遺伝子の発現の有無や役割を同定するために、HTLV-I以外の非特異的炎症群として、adjuvant arthritisとmyosin induced myocarditisのモデルラットを作製し、さらに同遺伝子導入ラットの未発症群を対象群とし実験した。[方法]作製したモデルラットの関節部、心筋よりRNAを採取し、RT-PCR法により導入遺伝子及び様々な炎症性サイトカインの発現の有無を検定した。[結果と考察]関節炎部、心筋炎部ともに特異的炎症群に比べてenv-pXラットでIL-2及びIFNrの発現が亢進していた。また未発症のenv-pXラットに比べ炎症群でも発現の亢進がみられた。導入遺伝子の発現増強とそれにより誘導される炎症性サイトカインの発現亢進が関節炎や心筋炎の発症に深く関与している可能性が示唆された。(2)疾患発症に伴う顆粒球、マクロファージの増加:

間接炎発症がCFU-MおよびCFU-GMの増加に影響する以上からenv-pXラットの血液細胞系譜にみられた現象を、二つに分類することができる。破骨細胞およびT,B細胞に対する影響はenv-pX伝子による直接的な影響、顆粒球やマクロファージに対する影響は疾患発症による二次的なものと考えられた。また、発症以前より免疫担当細胞であるT細胞やB細胞が活性化されていることから、遺伝子導入による標的臓器の変化が発症に関与するばかりでなく、導入遺伝子による免疫細胞側の変化が疾患の発症の直接の引き金になりうると考えられる。
チオラト金属錯体をベースとする多重キラル効果の自在制御

1.これまで、含硫アミノ酸であるD-ペニシラミン(D-H_2pen)と6個のMイオン(M=Ni^<II>,Pd^<II>)および8個のM'イオン(M'=Cu^I,Ag^I)からなるクラスター([M_6M'_8(D-pen)_<12>Cl]^<5->)と、La^<3+>イオンとの反応を検討してきた。その際、銅イオンを持つクラスターは、二次元平面型のキラル分子集合体を形成するのに対し、銀イオンを持つクラスターは、一次元らせん鎖型のキラル分子集合体を形成することが明らかとなった。今回、これら2種類のキラル分子集合体の誘電特性を調査したところ、極性結晶である二次元平面型の集合体は、高温-低周波領域において誘電応答を示すのに対し、非極性結晶であるらせん型の集合体は、誘電応答を示さないことが判明した。これにより、キラル分子集合体中におけるクラスターの次元配列の違いが、集合体の誘電特性に影響を与えるという興味深い知見が得られた。2.Λ-[Co^<III>(L-Hcys)(en)_2]^<2+>(L-H_2cys=L-cysteine)とm-ジブロモキシレンとの反応により、2つのΛ-[Co^<III>(L-cys)(en)_2]^+ユニットがm-キシリル基により連結されたCo^<III>二核錯体を合成した。単結晶X線解析の結果、この二核錯体は、相補的な水素結合により連結された環状二量体構造を形成することがわかった。また、この二核錯体に[HgBr_4]^<2->を添加した場合には、二量体構造に加えて、一次元らせん構造も形成された。再現実験を繰り返した結果、これら2種類の集合体はランダムかつ排他的に生成することがわかった。これにより、2つの異なる超分子集合体における「超分子オートカタリシス現象」が初めて確認された。1.含硫アミノ酸であるD-ペニシラミン(D-H_2pen)がコバルト(III)イオンに配位した単核錯体([Co(D-pen)_2]-)は、チオラト硫黄原子を介して硫黄架橋構造を形成できるために、キラル分子集合体の設計・構築に有用である。本研究では、[Co(D-pen)_2」-に塩化銅(I)を反応させると、コバルトから銅への配位子転移反応および酸化還元反応が進行し、D-ペニシラミン12分子と14個の銅イオンからなる混合原子価キラル銅14核クラスター([Cu^I_8Cu^<II>_6(D-pen)_<12>Cl]^<5->)が形成されることを見出した。一連のクラスターは、それぞれ12個のカルボキシル基を持ち、これらを介して金属イオンにより連結することが可能である。今回、反応溶液のpHおよび添加する金属イオンを変えることにより、クラスターの次元配列の異なる4種の高次集積構造(ディスクリート8量体、ABC二次元積層、AB二次元積層、一次元らせん鎖)を制御することに成功した。また、それらの結晶構造をX線解析により決定するとともに、分光学的性質や磁気的性質などを明らかにした。塩化物イオンの代わりに、臭化物イオンおよびヨウ化物イオンを用いた場合にも類似の銅14核クラスターが得られた。2.2つの非架橋チオラト基を末端に持つ硫黄架橋Co^<III>M^<II>Co^<III>三核錯体([M{Co(aet)_3}_2]^<2+>,aet=2-aminoethanethiolate)とm-ジブロモキシレンとの水中での反応により、三核ユニットが加m-キシリル基によって連結された環状のCo^<III>_4M^<II>_2六核錯体の合成に成功した。形成される環状錯体には、キラル配置の異なるメソ体とラセミ体が存在し、いずれも環構造に4つの水分子からなる水クラスターを包接することがわかった。X線解析の結果、取り込まれた水クラスターの水素結合様式は、環状錯体のキラル配置に依存して変化することが明らかとなった。1.これまで、含硫アミノ酸であるD-ペニシラミン(D-H_2pen)と14個の銅イオンからなるクラスター([Cu_<14>(D-pen)_<12>Cl]^<5->)が、種々の金属イオンにより連結されて、多様なキラル分子集合体を与えることを明らかにしてきた。今回、2つのD-H_2penを持つPd^<II>単核錯体(K_2[Pd(D-pen)_2])を新たに合成し、銀(I)および銅(I)イオンと反応させたところ、6つのPd^<II>イオンと8個のM^Iイオンからなる混合金属型14核クラスター([Pd^<II>_6M^I_8(D-pen)_<12>Cl]^<5->,M=Ag,Cu)が生成することがわかった。得られた2種類の混合金属型14核クラスターにランタン(III)イオンを添加したところ、銀イオンを持つクラスターは右巻き4回らせん鎖状に配列するのに対して、銅イオンを持つクラスターは二次元平面状に配列することがわかった。以上の結果より、クラスターのコア金属(Ag^I vs.Cu^I)の違いにより、14核クラスターの次元配列が大きく変化するという興味深い知見が得られた。

2.fac-[Rh^<III>(aet)_3](aet=NH_2CH_2CH_2S^-)と、等モル量の2,2'-bis-(bromomethyl)-1,1'-biphenylとのDMF中における反応から、fac-[Rh(aet)_3]部位に(C_<14>H_<12>)^<2+>基が結合したRh^<III>単核錯体を合成した。各種分析の結果、この単核錯体は、金属イオン周りのキラリティーと置換ビフェニル基のアトロプ異性との組み合わせから生じる4種の異性体の混合物であることがわかった。これらの異性体をカラム操作により分離・分割したところ、いずれの異性体も室温・水溶液中において1か月以上安定であることが判明した。1.これまで、含硫アミノ酸であるD-ペニシラミン(D-H_2pen)と6個のMイオン(M=Ni^<II>,Pd^<II>)および8個のM'イオン(M'=Cu^I,Ag^I)からなるクラスター([M_6M'_8(D-pen)_<12>Cl]^<5->)と、La^<3+>イオンとの反応を検討してきた。その際、銅イオンを持つクラスターは、二次元平面型のキラル分子集合体を形成するのに対し、銀イオンを持つクラスターは、一次元らせん鎖型のキラル分子集合体を形成することが明らかとなった。今回、これら2種類のキラル分子集合体の誘電特性を調査したところ、極性結晶である二次元平面型の集合体は、高温-低周波領域において誘電応答を示すのに対し、非極性結晶であるらせん型の集合体は、誘電応答を示さないことが判明した。これにより、キラル分子集合体中におけるクラスターの次元配列の違いが、集合体の誘電特性に影響を与えるという興味深い知見が得られた。2.Λ-[Co^<III>(L-Hcys)(en)_2]^<2+>(L-H_2cys=L-cysteine)とm-ジブロモキシレンとの反応により、2つのΛ-[Co^<III>(L-cys)(en)_2]^+ユニットがm-キシリル基により連結されたCo^<III>二核錯体を合成した。単結晶X線解析の結果、この二核錯体は、相補的な水素結合により連結された環状二量体構造を形成することがわかった。また、この二核錯体に[HgBr_4]^<2->を添加した場合には、二量体構造に加えて、一次元らせん構造も形成された。再現実験を繰り返した結果、これら2種類の集合体はランダムかつ排他的に生成することがわかった。これにより、2つの異なる超分子集合体における「超分子オートカタリシス現象」が初めて確認された。
TCR-pMHC結合エネルギーの精密計算に基づく胸腺内T細胞選択の原理の解明

共通のpMHCに対し特異性の高低の差のあるTCRとの共結晶構造(3C5Z, 3C60)を用いて、MM/PB(GB)SAの計算条件を検討した。MM/PBSA, MM/GBSAいずれにおいても、計算値の変動は30kCal/mol前後におよんだ。残基間相互作用の精密解析により、TCR-pMHCの認識の特異・非特異性を理解するよう方針変更した。共通のpMHCを含むTCRとの共結晶5つについて、被提示ペプチドのP2, P3, P5, P8の部位に7、8、2、3種の変異を入れた構造を生成、構造を最適化の後FMO計算を行った。PIEDAにより残基間の相互作用の精密な解析が可能となった。(1)MDおよびMMPBSAに関する種々のパラメータの検討の結果、MMPBSAによるT細胞レセプター・pMHC間結合自由エネルギーの計算に現実的な精度および再現性が得られる見通しを得た。ようやく、MHCに提示されるペプチドの系統的な配列の変化に対する結合エネルギーの変化の計算を進める前提が満たされた。(2)MHC結合ペプチド上に系統的なミューテーションを入れたTCR-pMHC複合体の3次元モデリングをホモロジーモデリングに基づき効率的に行う手法を確立し、実際に総計数百に及ぶモデルを生成した。この手法の確立により、被提示ペプチドに系統的ミューテーションを入れた複合体のMD計算を直ちに行うことができるようになった。(3)ゲノム上のT細胞レセプターの各セグメントに対する配列に基づき、T細胞レセプター配列を構成するところまでほぼ、こぎつけた。H25年度の計画は(1)、(2)、および実際のミューテーションを含んだ総計数百に及ぶ複合体のエネルギー計算を行うことであったが、その計算を実際に行うにはいたっていない。これは、(1)に予想以上の時間を要してしまったことが理由である。一方、26年度目標の一部を先取りして行うことができたこと、従来から行っていたMiyazawa-Jernigan matrixによるエネルギー評価法に関して報告し得たことはある程度評価に値すると考える。当初、十分な精度で再現性が得られると思われたTCR-pMHC間結合自由エネルギーであるが、計算を進めるに従い、やはり再現性が得られないことが示された。MM/PB(GB)SAを用いての蛋白質・リガンド(比較的小分子)間の結合関しては現在、かなり広範に用いられているが、当課題が対象としているTCR-pMHCは220残基、420残基程度、溶媒を含め14万原子と系としてはかなり大きく、この手法の適応に、深い洞察が求められると思われた。この結合エネルギー評価に関して高い再現性が得られない理由を検討し、次の事項が問題点として考えられた。(1)MM/PB(GB)SAでは非結合性相互作用に関してL-D potential若しくはMorse-potentialを用いているが、このpotentialの精度が十分でない、(2)溶媒の連続体近似により、結合面の水分子の影響を性格に評価出来ていない、(3) MDはexplicitな水分子、各configurationのサンプリングではimplicitな扱いをしているがこの一貫性の無さが問題、(4) MDを10 nSec程度行っているが、このdurationでは、configurationのサンプリングとして十分で無い、若しくは偏りがある、といった点である。即ち、非結合性の相互作用の近似の精度と、サンプリングの問題である。これらの問題を解決すべく、種々の点から検討した。前者に関しては、力場による古典的な扱いに問題があると思われ、fragment Molecular Oobital (FMO)法による、評価を行うことを考えている。後者に関しては、極めて本質的問題で有りながら、分子シミュレーションの分野でほとんど検討されておらず、現在、根本的な点まで遡って検討中である。また、TCR-pMHCのペプチドの配列を系統的に変化させ、3D構造のモデリングを行うソフトは、ほぼ完成した。pMHCが共通で特異性の高いTCRとcomplexを形成するもの(PDBID:3C5Z)とcross-reactiveなもの(PDBID:3C60)の2つの共結晶から構造を得て、molecular dynamicsとMM/PB(GB)SAにより結合の自由エネルギーを得て、それぞれの結合ペプチドに系統的なmutationを入れることにより、それぞれのTCRに関するbinding profileを調べることが目的であった。溶媒を入れると約18万原子からなる系のmolecular dynamicsを1020nsec行い自由エネルギーを計算したが十分な再現性(数kcal以下の精度)が得られず、計算手法の再検討を行った。ここ十数年、タンパク質のような巨大分子でもその電子状態が精密かつ現実的な計算時間で求められるようになってきており(fragment molecular orbital, FMO)、リガンドとの結合の精密な評価に用いられ、創薬においても重要な手法となってきている。巨大タンパク質間の相互作用に適用するにはいくつかの問題があるが、大きな可能性を含むものとして適用を試みた。京に移植されたAbinit-MPで、前述2つのPDB fileの構造から、TCRのvariable domainとpMHCのへリックス・ペプチドを含むドメイン約400残基に関してMP2, 631-Gdの計算レベルで計算を行い、各フラグメント間の相互作用エネルギーが得られた。さらに、PIEDA計算(静電項、交換反発項、電荷移動項、分散項に分離)を行い、各残基間の相互作用を解析した。

FMOは一点計算(最安定構造のみの計算)であり、また溶媒の効果を取り込むことが巨大分子間の場合複雑となる、といった課題があり、今後検討を行う。また、原子間の動的相関により、結合の特異性を解析する方法も試みている。当初計画していた、molecular dynamicsとMM/PB(GB)SAによる結合自由エネルギー評価が十分な再現性をもたらさないのが最大の理由である。FMOによる計算は残基間相互作用に関する極めて詳細な情報をもたらすが、量子化学計算を行うにはかなり大きな系であり、計算に乗せる準備に時間がかかった。FMOは一点計算であり、溶媒の効果の取り込みが複雑なことから、実験で求められる自由エネルギーと結びつけるには検討が必要であることも、理由の一つである。ここ十数年で発展してきた、巨大分子に対する分子軌道計算法(Fragment molecular orbital)の実装の一つ、Abinit-MPが京に移植されており、蛋白質ーリガンド共結晶の電子軌道計算のプロジェクト(FMO創薬コンソーシアム、福澤薫代表)が発足していることから、等プロジェクトに参画し、TCR-pMHC相互作用の特異性・交差反応性の原理を残基間相互作用のレベルで調べることにした。共通なpMHCを認識し特異性の高いTCRとcomplexを形成するもの(PDBID:3C5Z)と交差反応的なもの(PDBID:3C60)の2つの共結晶に関して、被提示ペプチド上P2(Q), P3(K), P5(K), P8(K)に、応答に大きな差を生じたそれぞれ7種、8種、1種、3種の突然変異を入れた構造を作成し、各構造に関してFMO計算を行った。FMO計算およびPIEDAによる解析は、TCR-pMHC相互作用の解析に極めて詳細な情報をもたらした。(1) P2の変位は3C60のCDRa3の94 Thrとの相互作用にほとんど変化を来さないが、3C5Z 94Asnに対してはかなりの変化を来す。(2) P3の変位は3C60のCDRa3の94, 95との相互作用にほとんど変化を来さないが、3C5Z 94, 95に対してはかなりの変化を来す。(3) P5 K -> Pの変位は、3C60 CDRb1 28 Asn 29 Asnとの相互作用にはほとんど変化を来さないが、3C5Z 28 Asp 29 Tyrに関しては、かなり不安定化する。(4) P8 Kの変位は、3C60 CDRb1 27 His, 28 Asnとの相互作用にはほとんど変化を来さないが、3C5Z 27 His, 28 Aspに関しては、かなり不安定化する。これらの知見の一般化にはより多くの構造に関する計算が必要である。共通のpMHCに対し特異性の高低の差のあるTCRとの共結晶構造(3C5Z, 3C60)を用いて、MM/PB(GB)SAの計算条件を検討した。MM/PBSA, MM/GBSAいずれにおいても、計算値の変動は30kCal/mol前後におよんだ。残基間相互作用の精密解析により、TCR-pMHCの認識の特異・非特異性を理解するよう方針変更した。共通のpMHCを含むTCRとの共
被爆高齢者５万人のデータから得る健康長寿要因を一般高齢者に適用するためには

運動の頻度、食事摂取の多様性、社会的参加と生活の自立度との関連を検討した。超高齢者において、生活の自立度が高い人は定期的に運動し、多くの種類の食品を摂取しており、地域活動にも参加している。一方、女性より、男性の方が元気と感じており、生活の自立度も高いようである。男性より女性が長寿であるが生き延びた男性は真の健康を持つ、選りすぐりの方であるのかもしれない。女性は無理せず、介助を受けながらも長く生き延びているのではないかと推測される。平成26年度は調査対象者の選定と調査項目の検討をおこなった。まず、調査対象者の選定は2003年調査から得られた生活習慣や社会的背景がある35,035人から2011年時点において生存する85歳以上を抽出した。つぎに、郵送調査の準備のため、2003年調査の一部の項目から(1)健康状況:主観的健康状態、ADL、(2)生活習慣:食事(3食摂っているか)、お酒(頻度)、運動(30分以上)、(3)社会生活:趣味や楽しみの有無、外出、受診の項目の検討を行った。食事、飲酒、喫煙に関する問は、有無のみで量に関する情報がないことが問題であった。量に関してどのような項目を作成するか、東京都健康長寿医療センターの調査を参考にして作成することとした。面接調査での追加調査項目を決めるために東京都健康長寿医療センター「社会参加と社会貢献研究チーム」を訪問し、以下の項目について老人研における調査に関する情報収集をおこなった。(1)運動の程度と頻度(1回あたりの時間、頻度、運動の内容)、(2)食事の内容と頻度(野菜、魚、肉など)、(3)医療状況(既往症、通院、手術、骨折など)。東京都健康長寿医療センターが実施している高齢者の追跡研究に関する報告書を入手した。また大阪大学大学院人間科学研究科臨床死生学・老年行動研究分野を訪問し、被爆高齢者の調査に関するコメントをいただいた。100歳訪問調査などを実施されており、比較対照ができる可能性があることがわかった。初年度は調査項目の検討のみで決定には至らなかった。平成27年度の早期に調査項目の決定を行う予定である。平成27年度は8599歳を対象とし、2931人に郵送調査を実施した。調査票は東京都健康長寿医療センターで実施している調査項目を参考にした。郵送調査の回収は1400人。同時に100歳以上の訪問調査を実施した。68名から30名が調査に協力した。平成28年度にこれらをデータ化し、分析を行う予定である。調査の実施は平成27年10月を予定していたが、長崎市からの調査許可が平成28年1月におりたため、平成28年2月の実施となった。調査対象者の選定は2003年調査から得られた生活習慣や社会的背景がある35,035人から2011年時点において生存する85歳以上を抽出した。2003年調査の一部の項目から(1)健康状況:主観的健康状態、ADL、(2)生活習慣:食事(3食摂っているか)、お酒(頻度)、運動(30分以上)、(3)社会生活:趣味や楽しみの有無、外出、受診の項目の検討を行った。東京都健康長寿医療センターにおける調査を参考とした。(1)運動の程度と頻度(1回あたりの時間、頻度、運動の内容)、(2)食事の内容と頻度(野菜、魚、肉など)、(3)医療状況(既往症、通院、手術、骨折など)の項目を調査項目に追加し、調査票を作成した。平成28年2月に8599歳2934人に調査用紙を郵送し、2月25日を回収締め切りとした。回収後、訪問面接調査の対象を抽出する予定であったが、調査計画の遅れのため、100歳以上の75名に調査依頼の葉書を郵送した。協力が得られたのは30名であった。面接員として保健師経験者を募集し、教育を行った。幸い、ベテランの保健師経験者2名を確保でき、平成28年3月に訪問調査を実施した。平成29年3月の時点で郵送調査に回答のあった1469名に関する単純集計を行った。女性に比べ男性が比較的健康であった。平成29年度にはクロス集計を行い、養父市における調査結果で得られた自立度と運動、栄養、社会との関連を分析予定である。調査実施が平成28年の2月となり、分析と成果発表がまにあわなかった。平成28年に郵送調査を実施し、1,469人から回答を得た。回収率は50%と、これまでと比べ低率であった。平成29年度は、調査結果の解析と発表を行った。今回の解析の指標は生活の自立度とした。生活の自立度を調べるのは13項目である。手段的日常生活動作と呼ばれ、一人で外出(バス・電車)、買い物、食事の用意、支払、預貯金の出し入れ、書類の作成などについてできるかを尋ねている。また、新聞・本を読んでいるか、健康についての記事や番組への関心、友達の訪問、相談、見舞い、話しかけなどである。13項目の手段的日常生活動作に対し、できるに1点を与え、すべてできれば13点となる。

食品の種類は13種類で、魚介、肉、卵、牛乳、緑黄色野菜、海藻その他である。これらの食品をほとんど毎日食べると回答したものを1点とし、すべて該当すれば13点満点となる。9点以上が望ましいとされている。地域活動とは町内会、老人クラブ、趣味などのサークル、ボランティア活動のいずれかに参加していることとした。まず運動と生活の自立度との関連をみた。85-89歳をみてみると、運動しないは生活の自立度6.6点、月13回は7.6点、週1回以上は9.3点で、運動をする頻度が高いほど、生活の自立度が高くなっている。食品摂取の多様性スコアと生活の自立度との関連では、85-89歳では、3点以下で7.7、48点では9.0、9点以上は9.5となり、食品摂取の多様性スコアが高いほど生活の自立度が高い傾向があった。90歳以上も同様の傾向であった。運動の頻度、食事摂取の多様性、社会的参加と生活の自立度との関連を検討した。超高齢者において、生活の自立度が高い人は定期的に運動し、多くの種類の食品を摂取しており、地域活動にも参加している。一方、女性より、男性の方が元気と感じており、生活の自立度も高いようである。男性より女性が長寿であるが生き延びた男性は真の健康を持つ、選りすぐりの方であるのかもしれない。女性は無理せず、介助を受けながらも長く生き延びているのではないかと推測される。これまでの調査項目の洗い出しは完了したが、調査項目の再検討が必要と考えた。今年度は調査票からデータ作成を行い、分析する予定である。スムーズにいけば、学会発表を行う。調査結果の分析を行い、成果発表をするとともに、調査対象者へ結果を還元するためのチラシを作成し、郵送する。放射線疫学平成27年度には調査項目を決定し、郵送調査の実施を行う。回収後、訪問面接調査の対象を抽出する。面接員の募集と教育の実施が重要である。これに関しては保健師経験者を探す予定である。100歳以上の訪問調査対象者で協力を得られたのが予定の半数であったため、調査員への謝金や対象者への謝礼が少なかった。また郵送調査対象者の回収が予定より少なかったため、郵便料金も少なかった。調査が遅れたため、分析も遅れ、成果発表ができなかった。データ作成や追加調査、成果発表のための旅費、パンフレット作製などに使用する予定である。平成29年度、成果発表のための旅費と調査対象者への結果報告印刷および郵送費に使用する予定である。
第一原理オーダーN手法の開発とナノ物質への応用

第一原理オーダーN手法の開発を初めとして、安定構造・反応経路探索、伝導特性解析、励起状態解析等のナノ物質の解析に有効な量子論的な計算科学的手法を構築し、生体系を含むナノ物質への適用を進め、量子ドット系に対する2万原子規模の大規模第一原理計算の実現、蛋白質の安定構造、固体表面ダイナミクス、分子架橋系の新規伝導機能、水溶液中の金属酸化物の酸化還元等、ナノ物質の新規な物性・機能に関する理解と知見を獲得した。本研究課題では、ナノ物質に対する高精度・高速な第一原理シミュレーション手法を確立し、ナノバイオ系・ナノ触媒系への適用を図る。超大規模解析が可能な第一原理オーダーN手法の開発を中心として、安定構造・反応経路探索法、伝導特性解析法、励起状態解析法等のナノ物質の解析に有効な手法を確立する。超大規模シミュレーションにより、ナノ物質の新奇な物性・機能の量子論的な解析・予測、構造と機能の相関関係の解明、新奇な機能の設計とその実現のための構造の提案等、ナノ構造の機能探索・設計に関する量子論的アプローチを目指す。本年度は、オーダーN法第一原理電子状態計算を最初に適用する例として、Ge/Si(001)系の構造安定性に対する研究を行った。この研究において我々は、半経験的なTight Binding計算を用いることによりハットクラスターの構造モデリングを行い、計算条件、重要な構造、全エネルギー評価などを最初に行った。次に、それらの結果から得られたいくつかの重要な系に対してオーダーN法第一原理計算を適用する。その結果、密度汎関数法にもとづくオーダーN法第一原理計算を、約23000原子を含む系に対して、構造最適化まで安定して行えることを示した。また、大域的安定構造を求める手法として拡張アンサンブル法を用いたβ2-microglobulinの安定構造探索を行った。さらに、実時間発展TDDFTを用いた分子の光励起状態の電子-核ダイナミクス、反応経路探索法を用いたSi(111)上のF原子の拡散現象、等の研究を行った。ナノ構造全体を解析できる超大規模第一原理シミュレーション手法は、ナノ物質の示す構造・物性・機能を理解し設計するために不可欠な計算科学技術である。本研究課題では、超大規模解析が可能な第一原理オーダーN手法の開発を中心として、安定構造・反応経路探索法、伝導特性解析法、励起状態解析法等のナノ物質の解析に有効な手法を確立し、ナノバイオ系・ナノ触媒系への適用を図ることを目標としている。本年度は、オーダーN法第一原理電子状態計算の開発とそれを用いた理論研究として、前年度に引き続きGe/Si(001)系の構造安定性に対する研究を主に行った。前年度に行ったプログラムの効率化と構造モデリング、計算条件、計算精度に対する研究によって、今年度は現実のナノ構造物質において、いくつかの構造モデル、異なるサイズの系に対して第一原理計算を実現し、科学的に重要な結果を得ることに成功した。また、オーダーN手法を生体系に適用するためのテスト計算等も開始した。DNAの塩基、塩基対などに対して局在基底を用いた密度汎関数法計算を行い、量子化学計算の結果との比較などを行った。さらに本年度は、物質・材料研究機構で以前より開発してきた伝導特性解析プログラムを用いて、有機単分子架橋系の伝導特性に対する第一原理計算を行い、有機分子と金属表面の接点構造によって伝導特性が大きく変わることが分かった。また、電子移動が絡む化学反応に対する新規第一原理自由エネルギー計算手法の開発も行った。本年度は、オーダーN法第一原理計算手法の開発とそれを用いた理論研究として、生体系に対する適用を本格的に開始した。最初に、DNAの単一塩基及び塩基対に対して、様々な局在基底及び交換相関項を用いて構造最適化を行い、最適化構造と安定化エネルギーを求めた。高精度の量子化学計算との比較により、GGA-PBEの交換相関エネルギー項が水素結合に対して高精度を持つ事、小さい局在長を持ったDZP基底によっても十分な精度の計算が可能な事を示した。さらに、水和水を含むDNA-10塩基対(3439原子)からなる巨大系についてオーダーN計算の実現に成功した。密度行列のカットオフ依存性を調べた結果、密度行列最適化手法によるオーダーN法がDNA系に対して極めて高い精度を持つ事が分かった。手法、プログラム開発としては、様々な局在擬原子軌道(PAO)基底を求める手法の開発、PAO計算による安定化エネルギー誤差を補正するプログラムの導入等が行われた。さらに、以前より開発してきた伝導特性解析プログラムを用いて、有機分子架橋系の伝導特性に対する第一原理計算を行い、ビフェニル分子と金属表面間の接続原子の種類による伝導特性の変化を調べた。

また、今年度から、第一原理量子モンテカルロ法による研究も開始し、Mnダイマー、Mn酸化物クラスターに対する計算を行った。ナノ構造全体を解析できる超大規模第一原理シミュレーション手法は、ナノ物質の示す構造・物性・機能を理解し設計するために不可欠な計算科学技術である。本研究課題では、超大規模解析が可能な第一原理オーダーN手法の開発を中心として、安定構造・反応経路探索法、伝導特性解析法、励起状態解析法等のナノ物質の解析に有効な手法を確立し、ナノバイオ系・ナノ触媒系への適用を図ることを目標としている。本年度は、まずオーダーN法DFTプログラムCONQUESTを用いて、膜タンパク質gramicidin-A (gA)というイオンチャネルに対する理論研究を行った。この物質は膜タンパク質としてはとても小さいが、特殊な構造を持つ事、一価の正イオンしか透過させないという高い選択性を持つ事など興味深い性質を持つ。このタンパク質の周りの脂質分子や溶媒を含めた複雑系に対してオーダーN法第一原理計算による大規模シミュレーションを将来実現する為の準備段階として、孤立gA分子に対する研究を行った。いくつかのアミノ酸分子に対して計算に用いられる基底関数の精度を確認した後に、孤立gA分子に対する構造最適化計算を行い、実験結果との比較を行った。この系におけるオーダーN法による誤差の確認も行った。また、擬ポテンシャル、平面波基底を用いて第一原理分子動力学法とTDDFTを組み合わせた手法を用いて水溶液中の過酸化マンガンの励起エネルギーの計算を行った。実験値との比較の結果、TDDFTの計算値が実験値を過大評価するという通常とは異なる結果を得た。このため、ガス系に対する励起エネルギーを他の計算手法も用いて詳細に調べた。さらに、スピンクロスオーバー化合物に対してエントロピー効果を取り入れた計算方法を開発し、磁性状態から非磁性状態への転移における緩和過程の研究を行った。
ヒト由来異物代謝酵素発現系を用いた食品成分代謝評価システムの構築

本研究では、食品中非栄養成分の複雑な異物代謝経路を試験管内で予測するために、ヒト由来異物代謝酵素群の酵母内同時発現系を構築し、さまざまな食品機能性成分の代謝反応の解析を可能にすることを目指した。特にフラボノイドの生体内での代謝をヒトシトクロムP450とUDP-グルクロン酸転移酵素(UGT)による同時発現系を構築することで生体における異物代謝予測を可能にした。1.ヒトUGT遺伝子の取得及酵母発現系構築UGTは遺伝子ファミリーを形成し複数の分子種が臓器特異的に発現しており、臓器特異的な抱合能を有している。代謝予測にはこの複数のUGT分子種の代謝解析が必要である。現在、ヒトUGT遺伝子に関してはUGT1ファミリー遺伝子9種、UGT2ファミリー遺伝子12種が知られている[1]。本申請グループはこれまでに主要なUGT1分子種に関しては8種、UGT2分子種に関しては5種をすでに取得している。本年度はヒト肝臓あるいは腸管組織由来のcDNAライブラリーをよりオリゴTプライマーとUGT遺伝子特異的配列由来のプライマーを用いてPCRクローニングによってUGT2B11,17及び2B28のcDNAを得ることができ、酵母発現ベクターへの構築を行った。2.ヒトシトクロムP450(P450)及びUGT分子種の同時発現酵母株の構築び機能評価ヒト体内における食品成分の代謝予測をおこなうためにUGTに加えてP450遺伝子を同一酵母内に導入し、同時発現系を構築しヒト肝臓あるいは小腸における異物代謝系を再現する。ヒトP450に関しては、前述のp GYR発現ベクターに酵母P450還元酵素をともに挿入された分子種(12種)がすでに構築されている。そこで先に構築したp GYRプロモーター領域を含むUGT遺伝子断片を染色体組み込み型ベクターであるpAURに際挿入して酵母ゲノムに組み込んだ。現時点ではCYP1A2,2C9とUGT1A1,1A7,1A8との組み合わせによる同時発現系の構築に成功し、モデル化合物による代謝確認をおこなった。本研究では食品中の非栄養成分の機能性を評価する目的で、肝臓や小腸における複雑な異物代謝経路を試験管内で予測するために、ヒト由来異物代謝酵素群の酵母内同時発現系を構築し、さまざまな食品機能性成分の代謝反応の解析を可能にすることを目指す。1.ヒト異物代謝酵素同時発現系の構築前年度までに遺伝子クローニングしたCYP及びUGT分子種の酵母における同時発現系を構築した。その過程において、UGT分子種のうちUGT1A1, 1A4及び1A9が他の分子種にくらべ低発現であったため、シグナル配列に相当する遺伝子領域の塩基配列改変を行い高発現系への改良をおこなった(特許出願2009)。ヒトCYP分子種はCYP1A2, 2C9, 2C19, 3A4を、UGT分子種はUGT1A1, 1A3, 1A4, 1A6, 1A7, 1A8, 1A9, 1A10を選定し複数の組み合わせで同時発現系を構築した。形質転換株よりミクロソーム画分を調製して発現確認をおこなった。2.ヒトCYP及びUGT分子種の同時発現酵母株の機能評価前述の同時発現株を用いて試験管内での種々のフラボノイド代謝過程の解析をおこなった。NADPH及びUDP-グルクロン酸存在下においてモデル化合物である6OHフラボンはその抱合体と水酸化体、さらにその抱合体へ変換をうけ酵母発現CYPとUGTが機能的に連関していることが確認され、ヒト肝臓あるいは小腸における代謝を再構築する可能性を示した。1)酵母発現によるヒト異物代謝酵素群の構築前年度に引き続きヒト肝臓及び小腸で発現しているP450とUGTとの同時発現酵母株の構築をおこない、合計25種の同時発現株を取得した。抗体による発現確認、モデル基質による代謝活性測定による性能評価をおこなった。次に、硫酸基転移酵素(SULT1A1,1A3,1B1,1E1,2A1)についても遺伝子取得後、酵母における発現株を構築した。本菌体を用いることにより硫酸抱合体を直接産生することに成功した(特願2011-28515)。2)ヒト異物代謝発現系を用いた食品成分の代謝スクリーニング1)で得られた酵母発現系を用いたヒト異物代謝酵素を用いて食品成分中の機能性化合物の代謝解析をおこなった。UGTあるいはSULT単独発現系ではケルセチンやレスベラトロールを基質として菌体に添加した場合、培地中にグルクロン酸及び硫酸抱合体が分泌されてきた。また、分子種を選択することにより部位特異的な抱合体を調製することが可能であった。

P450及びUGT同時発現系による3位水酸化フラボンの代謝においては3位抱合体のほかに水酸化体及びその抱合体も検出できた。以上、これらの発現系を用いてさまざま機能性成分の代謝解析をおこなうことにより、In vitroでのヒトによる代謝予測を可能にして、食品中非栄養成分の機能性を評価する上で重要なファクターを提供すると考えている。
触媒作用を援用した化学研磨プロセスによるSiC基板表面平坦化に関する研究

近年,次世代パワー半導体デバイス用材料として,ワイドバンドギャップ半導体である単結晶シリコンカーバイド(SiC)が注目され,Siの性能を超えるデバイスの研究開発が行われている.さらなるSiCデバイスの高性能化には,単結晶SiCの結晶欠陥の低減や酸化膜界面の高品位化などの技術開発が望まれている.これらの技術開発のための基礎技術として,原子レベルで平坦かつ超清浄なSiC表面を得るための表面処理技術や表面加工技術を確立することは極めて重要である.本研究の目的は,触媒作用を援用した化学研磨プロセスによって,原子レベルで平坦,かつ結晶構造に乱れのないSiC基板表面を創成することである.今年度は,以下の項目を実施した.1単結晶4H-SiC基板の加工特性の評価触媒作用を援用した化学的研磨法を用いた時の加工速度の面方位依存性(4H-SiC(0001)面(Si面)と(000-1)面(C面)),荷重依存性,時間依存性,回転数依存性などの基礎的加工特性を基礎実験により明らかにした.2原子レベルで平滑化された4H-SiC(0001)基板表面の作製試作した簡易型加工装置を用いて,4H-SiC(0001)面(Si面)の加工を実施した.加工表面を原子間力顕微鏡(AFM)で観察した結果,表面粗さ(Peak-to-Valley)1nm以下,最小二乗平均粗さ(Root-mean-square)0.1nm以下の原子レベルで平滑な表面であることが確認できた.また,位相シフト干渉顕微鏡(ZYGO)で観察した結果,前加工面上に存在していた無数の研磨痕,表面凹凸が完全に除去されていることも確認できた.近年,次世代パワー半導体デバイス用材料として,ワイドバンドギャップ半導体であるシリコンカーバイド(SiC)単結晶が注目され,Siの性能を超えるデバイスの研究開発が行われている.さらなるデバイスの高性能化には,SiC単結晶の結晶欠陥の低減や酸化膜界面の高品位化などの技術開発が望まれている.これらの技術開発のための基礎技術として,清浄かつ平坦なSiC表面を得るための表面処理技術や表面加工技術を確立することは極めて重要である.本研究では,触媒作用を援用した化学研磨プロセスによって,原子レベルで平坦,かつ結晶構造に乱れのないSiC基板表面を実現することを目的としている.今年度は,以下の項目を実施した.1.触媒作用を援用したSiC基板の研磨に適する触媒の探索とその検討触媒作用を援用し,高能率,高精度にSiC表面を加工するためには,加工に用いる触媒の種類や活性な反応種を生成する溶媒の種類を適切に選定しなければならない.本年度は,ヒドロキシルラジカル(OH・)を生成できる遷移金属触媒(鉄など)をSiC基板表面の加工に利用し,その加工可能性を検討した.その結果,鉄などの遷移金属触媒を利用することによって,高能率かつ高精度にSiC基板表面を加工できる可能性を見出した.2.SiC基板表面創成プロセス装置の設計・試作基礎的なSiC加工実験で得られた結果をもとに,荷重制御可能な簡易加工装置を設計,試作した.これにより,加工量の荷重依存性,時間依存性の定量的評価が可能となった,近年,次世代パワー半導体デバイス用材料として,ワイドバンドギャップ半導体である単結晶シリコンカーバイド(SiC)が注目され,Siの性能を超えるデバイスの研究開発が行われている.さらなるSiCデバイスの高性能化には,単結晶SiCの結晶欠陥の低減や酸化膜界面の高品位化などの技術開発が望まれている.これらの技術開発のための基礎技術として,原子レベルで平坦かつ超清浄なSiC表面を得るための表面処理技術や表面加工技術を確立することは極めて重要である.本研究の目的は,触媒作用を援用した化学研磨プロセスによって,原子レベルで平坦,かつ結晶構造に乱れのないSiC基板表面を創成することである.今年度は,以下の項目を実施した.1単結晶4H-SiC基板の加工特性の評価触媒作用を援用した化学的研磨法を用いた時の加工速度の面方位依存性(4H-SiC(0001)面(Si面)と(000-1)面(C面)),荷重依存性,時間依存性,回転数依存性などの基礎的加工特性を基礎実験により明らかにした.2原子レベルで平滑化された4H-SiC(0001)基板表面の作製試作した簡易型加工装置を用いて,4H-SiC(0001)面(Si面)の加工を実施した.加工表面を原子間力顕微鏡(AFM)で観察した結果,表面粗さ(Peak-to-Valley)1nm以下,最小二乗平均粗さ(Root-mean-square)0.1nm以下の原子レベルで平滑な表面であることが確認できた.また,位相シフト干渉顕微鏡(ZYGO)で観察した結果,前加工面上に存在していた無数の研磨痕,表面凹凸が完全に除去されていることも確認できた.
「国際移民システム」における「永続的ソジョナー」中国人のアイデンティティ・モデル

本研究は、国際移動研究の中で留学を契機として来日する中国人の社会的な生活世界を明らかにし、今後も来・滞日の増加が予想される彼らの行動を通して日本社会および国際関係の変容を展望するものである。中国大陸(中華人民共和国)からの留学生として入国した長期滞在者を対象に、留学生と移住労働者としての両側面から、「国際移民システム」(Kritzほか1992)にみる日本留学という移民過程、および「永続的ソジョナー(permanent sojourner)」(Uriely 1994)アイデンティティの観点から、それぞれ考察を行った。(1)中国人の日本留学にみる「国際移民システム」中国人の日本留学は、1980年代からの日中間(さらには関係諸国も含む)の政策、経済、労働市場的、社会的なネットワークから形成された「国際移民システム」の一つとして把握されうることがわかった。(2)「永続的ソジョナー」中国人のアイデンティティ滞日中国人の準拠集団との関わりと意識を整理すると、以下の5つのタイプが見出せた。(1)日本人学生と差異化の意識(2)職域における「日本人化」あるいは「同調」(3)中国の友人に対するプラス方向とマイナス方向の距離感(4)賃金・昇進についての相対的な不満感(5)観念的な知識としての「欧米社会」(=「理想的な移民社会」)を想像上の準拠フレームとし、再度相対的な不満感を形成(3)トランスナショナルな新中間層の社会的統合日本での「永住者」資格の取得や国籍取得などの中国人の行為からすると、日本滞在に対しプラグマティックな態度がみられる。しかしアイデンティティの面では、やや「硬直した」中国人アイデンティティを保持しており、「リプリゼンタティブ・エスニシティ(representative ethnicity)」と定義づけられる。これは「中国人である」と言い続けるという「たてまえ」や「論理」を使うことにより、日本と中国どちらの準拠集団に対しても「納得いく」応答として均衡を保ち、実生活とアイデンティティの溝を埋める役目を果たしていることが明らかになった。本年度は、本研究で明らかにする3つの仮説のうちの一つである、中国人の日本留学の政策的側面を明らかにするため、まず中国国家図書館において資料収集を行った。そこでは、日本留学のみならず、中国からの海外留学の1980年代からの動向や政策について、かなり詳細な文献や資料を入手することができた。分析の結果、中国人の日本留学は、80年代からの日中間(さらにはアメリカやヨーロッパといった中国人の留学希望地を含む)の政策、経済、社会的ネットワークから形成された「移民システム」の一つとしてのモデルを構築した。さらに2000年以降の新しい日本留学への流れを分析するためにも、中国における若者の日本への関心やイメージについて、日系企業の採用担当者、日本語メディア誌関係者等へ北京市においてヒアリングを行った。これらの調査結果より、「移民システム」の確立により、これから日本留学を希望する「一人っ子政策」後の若者、さらに長期の滞在の後日本から帰国する中国人、リピーターなど、中国から日本への移動をめぐる一様なパターンにとどまらない戦略的な選択肢のひろがりが散見された。もう一つの仮説である、「永続的ソジョナー」中国人の、家庭生活、子どもの教育、政治参加などの各場面における、新中間層的な生活様式への適応についての研究では、以下の知見が得られている。中国人どうしの夫婦の調査結果から、日本における中国人女性の不就労=「主婦化」は日本適応の結果としてではなく、かれらの強い「帰国志向」からすると、むしろ日本での「仮住まい」の意識を反映した行為といえることが明らかになった。中国への帰国の意思をつねに持ちながら日本での生活を送るうえで、「我慢」や「あきらめ」といった「家族戦略」の一つとしての「主婦化」と捉えるほうが正しいと判断できる。こうした行為は、中国から日本への移民過程にある滞日中国人の「家族戦略」の特徴の一つとして結論づけることができる。(1)中国人の日本留学にみる「国際移民システム」中国人の日本留学は、1980年代からの日中間(さらには関係諸国も含む)の政策、経済、労働市場的、社会的なネットワークから形成された「国際移民システム」の一つとして把握できる。そこでは、日中間の政策以外の要因も含めて、相互作用とフィードバックが繰り返され、日中間には移民送り出しと受け入れに関する差別的な選別システムが強化される流れが生成されている。日中二国間をこえて、アメリカ、カナダなどの中国人が多く留学する国と比較で選択されており、さらなる「国際移民システム」としての中国人の「日本留学ルート」の形成・拡大につながったと考えられる。滞日中国人の労働分析からは、従来の「単純労働者/専門職労働者」というとらえ方を越えて、その二つの中間に位置する、ホスト社会における「技能形成型移民」というあらたな概念も提示できる。国から国へと多国籍企業等を「渡り歩き」、欧米社会にそのまま「通用する」文化資本まで兼ね備えた移動者とは異なる、「準専門職移民(semi-professional migrant)」と定義づけることもできるだろう。(2)トランスナショナルな新中間層の社会的統合永住資格や日本国籍の取得など日本滞在に対する中国人のプラグマティックともとれる態度がみられるが、一方で言説上の「硬直した」中国人アイデンティティも脆さや矛盾を抱えていることも指摘できる。この「永続的ソジョナー」中国人の重層的アイデンティティの中核をなすものは、「リプリゼンタティブ・エスニシティ(representative ethnicity)」と定義づけることができる。