hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アルツハイマー病患者の脳神経再生を志向した安全性の高い神経分化誘導物質の創製

本研究は、脳内で神経幹細胞をニューロンへ分化させる作用をもつ低分子化合物の創製を目的としている。我々はこれまでの先行研究でin vitro試験により、神経分化誘導作用を有する物質としてビタミンKを見出しているが、in vivo試験に応用するにはさらなる作用の増強が必要であった。そこで、ビタミンKの側鎖末端にフェニル基を含む様々な官能基を導入した誘導体の合成を行ったところ、そのいくつかに分化誘導作用の増強が認められた。また興味深いことに、ニューロンへの分化を促進するものと、反対に強く抑制するものが得られた。しかし、当初目指していたEC50がnMレベルの強力な作用を有する誘導体は得られなかった。そこで、ビタミンKやその誘導体がどのようなタンパク質に作用して神経分化誘導を発現しているのかを明らかにして、それに強く作用するリガンドを設計することにした。まず、作用発現に関係するタンパク質を捉えるためのリガンドを合成した。すなわち、最も強い分化誘導作用を示した誘導体にリンカーを介してビオチン標識した化合物を合成し、これをアビジン標識した磁気ビーズと結合させて、pull-down法によって結合タンパク質を捉える試みを行っている。さらに、細胞・組織内動態を明らかにするために、ビタミンKの蛍光標識体の合成も同時に行い、細胞内のビタミンK特異的結合タンパク質であるsteroid and xenobiotic receptorと結合することを確かめた。現在これらのリガンドを用いて、神経分化に関係するビタミンK誘導体の作用タンパク質の解析を進めている。今後、作用タンパク質であると予想されたものに関して、計算化学の手法も用いさらに強力な神経分化誘導作用をもつ誘導体を創製していく予定である。本研究は再生医療で行われている幹細胞からニューロンへの分化を、従来の遺伝子導入によらず、低分子の「神経分化誘導物質」によって制御することを目指している。我々はすでにニューロン選択的に分化を誘導する物質としてビタミンKを見出しているため、この化学構造を基にして、作用発現に重要であると予想される置換基や、既知の神経分化誘導物質の部分構造を取り入れて強い分化誘導作用を有する誘導体を探索している。現在までにビタミンKのひとつであるメナキノン類の側鎖末端にベンゼン環を導入すると、マウス胎仔大脳由来の神経幹細胞をニューロンへの分化を選択的に誘導することを見出している。そこで今回はさらに分化誘導活性を高めるために、作用タンパク質との相互作用を期待して、メナキノン類の側鎖部分にベンゼン環とともにヘテロ原子を導入した誘導体を合成し、ニューロンへの分化誘導活性を測定した。その結果、パラ位にフッ素原子を導入したアニリン化合物を側鎖末端に結合させたメナキノンー2誘導体に強い分化誘導活性が見られ、かつコントロール群に比べて3倍以上のニューロンへの分化の選択性が見られた。現在は上記とは異なる手法により新たなビタミンKの誘導体合成を行っており、引き続き化合物ライブラリーを構築する予定である。一方で、これらビタミンK誘導体の作用発現に関係するタンパク質をpull-down法によって明らかにするためのリガンド合成や、細胞・組織内動態を明らかにするための蛍光標識体の合成も同時に行っている。当初の目標であった化合物ライブラリーの一部を作製することができた。今回はビタミンKの側鎖末端部に脂溶性の官能基として、置換基をもつベンゼン環とヘテロ原子を同時に導入することで、脳神経に対する作用の増強を狙うと同時に作用タンパク質との相互作用による分化誘導活性の向上を目指した。今回はビタミンK同族体のひとつであるメナキノン類をリード化合物として、上記の構造修飾を行うことにより、天然体より強い活性を持つ誘導体を数種類見出すことができた。一方、脳神経幹細胞からニューロン、アストロサイト、オリゴデンドロサイトへの分化誘導活性の測定方法として、これまでに行っていた免疫蛍光染色による観察に加えて、新たにPCR法による高感度な評価方法を開発した。さらに、in silicoでのQSAR解析により、化合物の分化誘導活性を予測できる手法を見出した。これらのことから、我々の研究はおおむね順調に進展していると考えられる。本研究は、幹細胞をニューロンへ分化誘導させる作用をもつ低分子化合物の創製を目的としている。我々はこれまでにニューロンへの分化を誘導する化合物としてビタミンKを見出しており、作用の増強を狙って側鎖末端に様々な官能基を導入した誘導体を合成してきた。その結果、側鎖末端にベンゼン環をもつ化合物に強い分化誘導作用が認められた。そこで、さらなる分化誘導活性の増強を期待して、このベンゼン環に幾つかのメチル基を導入した化合物を合成した。得られた化合物の分化誘導活性は、メチル基を結合させた数と位置によって異なることが明らかとなった。興味深いことに、メチル基を2つ導入した化合物の中には、ニューロンへの分化を促進するものと、反対に強く抑制するものが見られた。そこで、これらの化合物がどのようなメカニズムで幹細胞の分化を制御しているのかを調べるために、作用発現に関係するタンパク質をpull-down法によって探索するためのリガンドを合成した。すなわち、最も分化を誘導した誘導体と、反対に最も分化を抑制した誘導体にリンカーを介してビオチンで標識した化合物を得た。さらに、細胞・組織内動態を明らかにするためにビタミンKの蛍光標識体の合成も同時に行い、細胞内のビタミンK特異的結合タンパク質であるsteroid and xenobiotic receptorと結合することを確かめた。今年度は側鎖末端にベンゼン環をもつビタミンKに、23個のメチル基を有する誘導体を新たに合成し、化合物ライブラリーの充足を行うことができた。

この化合物ライブラリーからニューロンへの分化を強く誘導・抑制する誘導体が得られたため、当初から計画していた通り、それらの化合物についてニューロンへの分化を制御するメカニズムを明らかにするためのツールに応用した。その手法として、最も分化を誘導した化合物と最も抑制した化合物について、リンカーを介してビオチンで標識体を合成し、pull-down法によってビタミンK誘導体に結合するタンパク質を単離・同定する方法を試みている。また、ビタミンKに蛍光物質を結合させた標識化合物も合成を完了している。これがビタミンKの性質を保持しており、細胞内のビタミンK特異的結合タンパク質に結合することを確かめた。これらの標識化合物を用いて、ビタミンKが関係している幹細胞からニューロンへの分化に関するタンパク質の解析を進めている。これらのことから、我々の研究はおおむね順調に進展していると考えられる。本研究は、脳内で神経幹細胞をニューロンへ分化させる作用をもつ低分子化合物の創製を目的としている。我々はこれまでの先行研究でin vitro試験により、神経分化誘導作用を有する物質としてビタミンKを見出しているが、in vivo試験に応用するにはさらなる作用の増強が必要であった。そこで、ビタミンKの側鎖末端にフェニル基を含む様々な官能基を導入した誘導体の合成を行ったところ、そのいくつかに分化誘導作用の増強が認められた。また興味深いことに、ニューロンへの分化を促進するものと、反対に強く抑制するものが得られた。しかし、当初目指していたEC50がnMレベルの強力な作用を有する誘導体は得られなかった。そこで、ビタミンKやその誘導体がどのようなタンパク質に作用して神経分化誘導を発現しているのかを明らかにして、それに強く作用するリガンドを設計することにした。まず、作用発現に関係するタンパク質を捉えるためのリガンドを合成した。すなわち、最も強い分化誘導作用を示した誘導体にリンカーを介してビオチン標識した化合物を合成し、これをアビジン標識した磁気ビーズと結合させて、pull-down法によって結合タンパク質を捉える試みを行っている。さらに、細胞・組織内動態を明らかにするために、ビタミンKの蛍光標識体の合成も同時に行い、細胞内のビタミンK特異的結合タンパク質であるsteroid and xenobiotic receptorと結合することを確かめた。現在これらのリガンドを用いて、神経分化に関係するビタミンK誘導体の作用タンパク質の解析を進めている。今後、作用タンパク質であると予想されたものに関して、計算化学の手法も用いさらに強力な神経分化誘導作用をもつ誘導体を創製していく予定である。今回までに得られた知見を基にして、ビタミンKをリード化合物とした誘導体の化合物ライブラリーを作製し、より強力な分化誘導活性をもつ化合物を見出す予定である。
メタボリック症候群のバイオマーカーとしてのコレステロール炎症性酸化物の新規同定

動脈硬化症の危険性を高める要素の一つにメタボリック症候群があり、肥満に認められる肥大化した脂肪細胞力ら分泌されるアディポサイトカインの作用による炎症細胞の活性化と血管や脂肪組織の損傷を伴う慢性炎症が重要な役割を果たしている。炎症部位では、様々な活性酸素種が生成され、生体の防御反応に役立っているが、一方、正常な組織に障害を起こし、動脈硬化症やがんなど様々な疾病の原因ともなり得る。最近、ヒト好中球が炎症部位においてオゾン様活性酸素を生成するという報告が出たが、その生成機構等については未だ不明である。そこで、本研究では、オゾンがコレステロールを酸化し特異的に生成するatheronal-Aおよびatheronal-Bをバイオマーカーとして、ヒト炎症細胞がオゾン様活性酸素を生成するかどうか、生化学的手法により確立することを目的として、atheronal類の(1)合成、(2)蛍光誘導体化試薬であるdansyl hydrazineを用いた分析法の確立、(3)ヒト炎症細胞(HL-60)による生成(オゾン発生)機構の解明、(4)生物活性、特にアポプトーシス誘導能、(5)糖尿病誘発ラットの組織(肝臓、脂肪組織など)での検出、などの研究を行った。今回開発した蛍光分析法は、従来の分析法よも約千倍高感度であり、fmolレベルでの定量分析が可能である。この方法を用いて、フォルボールエステルにより活性化した好中球様分化HL60細胞が、活性化していない細胞に比べて、atheronal類をより大量に生成することを明らかにした。この生成はオゾン酸化を阻害する化合物によってのみ特異的に抑制されることから、細胞によるオゾン産生の関与が強く示唆された。また、atheronal類は強い細胞毒性誘導能を示し、さらに、糖尿病ラットの肝臓から、正常ラットより高濃度のatheronal類が検出されたことから、メタボリック症候群の新規バイオマーカーになり得る可能性が示唆された。動脈硬化症の危険性を高める要素の一つにメタボリック症候群があり、肥満に認められる肥大化した脂肪細胞から分泌されるアディポサイトカインの作用による血管や脂肪組織の慢性炎症が重要な役割を果たしている。最近、慢性炎症下で好中球がオゾン様活性酸素を発生し、生体内のコレステロールと反応してオゾンに特異的な酸化物を生成すること、また、オゾン特異的コレステロール酸化物が粥状動脈硬化病変組織やアルツハイマー病変組織に存在していることが報告された。そこで、本研究では、コレステロールのオソン特異的酸化物の合成、化学的構造解析、高感度検出法の開発、活性化した好中球による生成、生物活性などについて検討を行った。オゾン発生器を用いてコレステロールを酸化することにより、2つの主要な生成物、3β-hydroxy-5-oxo-5,6-secocholesterol-6-al(secosterol)と3β-hydroxy-5β-hydroxy-B-norcholestane-6β-carboxaldehydeを合成した。これらオゾン酸化コレステロール類をdansylhydrazine誘導体とし、HPLC-蛍光検出器で高感度分析する方法を開発した。この方法を用いて、フォルボールエステルにより活性化した好中球様細胞が、活性化していない細胞に比べて、オゾン酸化コレステロール類をより多量に生成することを明らかにした。また、secosterolの生物活性を調べたところ、他の酸化コレステロールよりも低濃度(2-3μM)で、数種の細胞に対して毒性を示しアポトーシスを誘導した。この細胞死には、secosterolの細胞内への取り込みとそれに伴う細胞内での活性酸素種の生成が重要であることが明らかになった。現在、好中球によるコレステロールのオゾン酸化および細胞死誘導の分子機構についてさらに詳細に検討している。

動脈硬化症の危険性を高める要素の一つにメタボリック症候群があり、肥満に認められる肥大化した脂肪細胞から分泌されるアディポサイトカインの作用による炎症細胞の活性化と血管や脂肪組織の損傷を伴う慢性炎症が重要な役割を果たしている。昨年度、HL-60細胞を好中球様細胞に分化させ、フォルボールエステルで活性化すると、オゾン酸化に特徴的なコレステロール酸化物atheronal-Bが生成することを明らかにし、活性化した好中球様細胞がオゾンを発生している可能性を示唆した。そこでatheronal-A,-Bをdansyl hydrazineで誘導体化し、HPLC-蛍光検出器またはHPLC-質量分析計で検出する高感度分析法を開発し、HL-60細胞によるatheronal-B生成機構解明の研究に応用した。atherona1-Bの生成増加は、HL-60細胞をマクロファージや好酸球様に分化した場合には見られず、好中球様細胞に分化した後、フォルボールエステルで活性化した場合にのみ観察された。さらに、スーパオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、アジ化ナトリウム(ミエロパーオキシダーゼ阻害剤)の存在下ではatheronal-Bの生成には影響が認められず、オゾン酸化の阻害剤であるvinylbenzoicacidの存在下でのみatherona1-Bの生成の阻害が見られた。このことから、活性化した好中球様細胞によるatheronal-Bの生成には、スーパオキシド、過酸化水素、次亜塩素酸ではなくオゾンの関与することが強く示唆された。現在、自然発症糖尿病ラットの各種臓器やヒト血清中のatheronal-A,-Bの分析を行い、メタボリック症候群のマーカーとして有効かどうか検討中である。
太陽熱による炭酸ガス再資源化のための高温型多孔質集熱要素のモデリングと最適化

世界的なエネルギー需要の高まりから、各国で太陽熱による水素や合成ガス製造について研究が行われている。多孔質構造を持つレシーバにて集光太陽光を熱エネルギーに変換し、それを反応炉の熱源へと利用する。酸化金属による触媒効果を利用する手法では、反応炉を1000°C以上の高温に保つ必要がある。本研究では、多孔質レシーバを想定にし、強ふく射・高温場に設置される多孔質体の連成熱伝達数値シミュレーションと形状最適化手法の開発を行う。また、最適化された形状を持つレシーバを試作し、実験による性能評価を行う。
患者幸福のための、救急・集中治療領域における説明同意過程の標準化に関する研究

診療技術は手技的なもののみならず、五感で感じ取る非デジタル化データを含めた膨大な情報をどう解釈して治療を行っていくかという判断技術そのものでもある。医事データ(DPCデータを含む)を構造化データとして利用する方法が発達し、応用が試みられているが、これは医療行為のみを対象とする方法であることから、これのみでは判断技術を表現できているとはいえない。現在までに、判断技術、すなわち医師の情報処理(頭の中)をデータベース化し解析する試みはない。これは緊急性・複雑性を伴う救急集中治療領域においては特に重要な課題である。初年度には、ABCD-INR-FTアプローチ(診療アプローチの標準化、織田2013、2015)の各項ごとに、「理由(計画)→行為→評価」を小単位として記録し、経時的に蓄積した。これにより、構造化データセットを作成した。また、入力インターフェイス(ダイナミックテンプレート)を使用して診療録記載時の使用感を損なわず、むしろより向上させるような入力支援システムを開発した。これは定型フォームへのいくつかの入力により、必要な項目だけが展開し、クリックを主とした入力方法により、別ウインドウに自由文様の文字列が生成されるものである。内部データ形式としては定型フォームに沿った、各項に構造化された形式で保持されているため二次利用できる。この定型フォーム部分のバリエーションを数種(例:ER、集中治療室、一般入院)作り込むことにより、高いカバー率で記録可能となることが確認された。本年度は研究実施計画に沿って、特に教育に応用すべく実績をあげた。研修者(初期研修医)に対する教育効果で、本データベースの要約を示すことにより、理解が深まることが確認された。学習者自身のプレゼンテーション能力向上にも効果が確認された。最終的には医療安全に配慮できる教材作りに応用することができた。インフォームド・コンセント(IC)は、患者中心の医療において根本をなす概念として強調されて久しいが、現場での工夫の域をなかなか超えず、真に納得を共有するためのプロセスとなっているとは言えない。特に救急・集中治療領域では病態多様性・具体的イメージの困難さ・時間的制約から、説明のすれ違いが係争の原因となる事例が未だに多い。本研究では、医療の複雑化と高齢化が急速に進む中、「こんなはずではなかった」をなくすために、医療(医学)のみならず、社会学(コミュニケーション)、法学(法的・人権担保)、デザイン学(文書や図表の視覚効果)の各領域の融合により、多数の医療行為や方針決定について、社会に求められるICを学術研究として確立し、具体的ツールを制作・提供することを目的とするものである。初年度である本年度の成果として以下のものが得られた。・診療報酬点数表のJ・Kコードに相当する処置/手術のうち、現状で、書面による説明と同意を得る手順を経ている・経ていないにかかわらず、特に専門診療科に関わらず頻用される、一般処置・救急処置・小外科手術を中心とした100余りの上位項目を抽出した。・これに、造影剤のような薬剤使用リスクのあるものや、輸血実施に伴う同意と書類、DNAR(Do Not Attempt Resuscitation)、移植医療に関わるものなど重大と感じられる方針決定に関わる同意形成を加えた。・IC書式を収集して、コーパス(言語研究データベース)の考え方により、Nグラム(全文解析による単語ごとの出現頻度分析)を使用して、書類に使用されている全単語とその頻度を抽出した。・IC書式収集とコーパスの考え方によってNグラムを使用して、全単語抽出と頻度の比較を行うことができた。・上記に伴う研究経費使用についても極めて適正に執行することができた。・今後多施設のものを収集して、より標準的で信頼できる内容にしていく必要がある。・進捗としては、順調に伸展している。初年度には診療報酬点数表のJ・Kコードに相当する処置/手術のうち、現状で、書面による説明と同意を得る手順を経ている・経ていないにかかわらず、特に専門診療科に関わらず頻用される、一般処置・救急処置・小外科手術を中心とした100余りの上位項目を抽出した。これにより根拠に基づいた頻出する処置が選択できた。本年度には、造影剤のような薬剤使用リスクのあるものや、輸血実施に伴う同意と書類、DNAR(Do Not Attempt Resuscitation)、移植医療と意思決定に関わるものなど重大と感じられる方針決定に関わる同意形成を加えた。さらにIC書式を収集して、コーパス(言語研究データベース)の考え方により、Nグラム(全文解析による単語ごとの出現頻度分析)を使用して、書類に使用されている全単語とその頻度を抽出した。実際に有害事象が発生する可能性が高い部分との比較を行い、妥当性を検討した。

・IC書式収集とコーパスの考え方によってNグラムを使用して、全単語抽出と頻度の比較を行うことができた。・上記に伴う研究経費使用についても極めて適正に執行することができた。・多施設のものを収集して、より標準的で信頼できる内容にできた。・進捗としては、順調に進展している。診療技術は手技的なもののみならず、五感で感じ取る非デジタル化データを含めた膨大な情報をどう解釈して治療を行っていくかという判断技術そのものでもある。医事データ(DPCデータを含む)を構造化データとして利用する方法が発達し、応用が試みられているが、これは医療行為のみを対象とする方法であることから、これのみでは判断技術を表現できているとはいえない。現在までに、判断技術、すなわち医師の情報処理(頭の中)をデータベース化し解析する試みはない。これは緊急性・複雑性を伴う救急集中治療領域においては特に重要な課題である。初年度には、ABCD-INR-FTアプローチ(診療アプローチの標準化、織田2013、2015)の各項ごとに、「理由(計画)→行為→評価」を小単位として記録し、経時的に蓄積した。これにより、構造化データセットを作成した。また、入力インターフェイス(ダイナミックテンプレート)を使用して診療録記載時の使用感を損なわず、むしろより向上させるような入力支援システムを開発した。これは定型フォームへのいくつかの入力により、必要な項目だけが展開し、クリックを主とした入力方法により、別ウインドウに自由文様の文字列が生成されるものである。内部データ形式としては定型フォームに沿った、各項に構造化された形式で保持されているため二次利用できる。この定型フォーム部分のバリエーションを数種(例:ER、集中治療室、一般入院)作り込むことにより、高いカバー率で記録可能となることが確認された。本年度は研究実施計画に沿って、特に教育に応用すべく実績をあげた。研修者(初期研修医)に対する教育効果で、本データベースの要約を示すことにより、理解が深まることが確認された。学習者自身のプレゼンテーション能力向上にも効果が確認された。最終的には医療安全に配慮できる教材作りに応用することができた。研究計画段階に比較して、医療安全、ICに求められる条件がますます広く深くなってきており、本研究の意義が増してきている。できるだけ早く、現場で使えるツールを公表・還元できるよう推進する。本年度は、未だ国内で一定の死亡例が散見される、中心静脈カテーテル挿入術に注目して、他施設での標準化を行った。・形態素解析(Nグラム)を行うためのシステムについて、本年度必要な部分については、これまでの研究グループで開発したものを使用して研究可能であったため。・海外学会発表に係る支出が次年度となるため。
革命ロシアにおけるネップ体制の成立過程に関する研究

3年に及ぶ本科研費研究を一定纏める必要がある。そこでは従来の研究と視野の異なる次の3点を中心に行うことにした。第1に、辺境地、特にシベリアと北カフカースの動向が所謂「ネップ」の導入に決定的役割を果たした。第2に、割当徴発から現物税への交替はそのやり方自体は従来と殆ど変更がなかった。第3に、21年の大飢饉がネップ導入後の政策実施過程を歪曲させ、この体制の成立過程に重要な影響を及ぼしたことを解明する。この分析視角による考察で、次のことが明らかとなった。第1に、割当徴発の主要な対象地となったシベリアと北カフカースでは、割当徴発を継続するとのモスクワ中央の方針にもかかわらず、市場の展開によって自然発生的に割当徴発は停止された。このため、全ロシア的規模で現物税体制が構築されることになった。第2については、レーニンをはじめとする党指導部は現物税体制は割当徴発体制の延長で設定され、特に凶作の影響が深刻であったシベリアでは、まったく従前の強制的措置が継続された。実際、割当徴発制度と現物税制度での農産物徴収の方法を区別するのは難しい。第3に、ボリシェヴィキ指導部の想定を超えて、市場が全国的規模で展開した。これは従来は特に農民のこれまで抑圧されてきた「小ブル的心理」の発露の結果であると解釈されてきたが、それでは、当時共和国の殆ど全土を覆っていた飢饉(農民経営での余剰の欠如)の事実と完全に矛盾する。この現象は、飢餓民が食糧を求めて担ぎ屋となって全土に溢れだした結果にしかすぎず、通常の商業形態の復活とは区別されなければならない。要するに、飢饉の結果が、ネップ体制を生み出したのであり、その意味で、ネップ体制の成立は、政策理念的でなく、自然発生的である。今年度の研究により、次の3点が明らかとなった。第1に、十月革命直後から、メンシェヴィキ的食糧政策としてモスクワ、北部食糧組織が非難されたが、基本的政策としそれらの間にはほとんど差異が認められないことが確認された。すなわち、従来の研究で主張されたような中央権力内での意見の対立はほとんど存在せず、むしろ中央権力と地方との亀裂が、その後の民主運動の帰趨を決定づけた。第2に、当時公刊された農村に関する調査文献資料によれば、播種面積は20年までに著しく縮小し、より深刻なのは生産諸県でのそれは消費諸県の割合を数倍超え、明らかにロシアの穀物生産に重大な影響を及ぼしたことである。しかし、その一方で、穀物自由商業の禁止の下でも、穀物売買に関与する農民が革命前と比べてほとんど減少しなかっただけでなく、生産諸県では増加した事実である。このことは、飢餓の拡大に伴い、生産諸県の農民も穀物の購入を余儀なくされたことを物語ると同時に、内戦期に「半合法的」穀物取引のネットワークが形成されていた事実を示唆している。ネップの導入当初は穀物商業は地方的取引に限定されていたが、その後「自然発生的に」全国的規模へと商業が展開する根拠をそこに求めることができよう。第3に、シベリアの状況についてアーカイヴ資料により、次のことが確認された。割当徴発に対する不満はコムニスト細胞にさえ存在し、ネップの導入の党大会決議は反乱防止のためと認識されていた。

それにもかかわらず、ネップ導入後の数ヶ月後も食糧政策への不満は解消せず、穀物調達は進まず、それに対する抑圧的措置が継続された。ネップ体制の成立を考える場合には、一定の改善が認められた中央諸県だけでなく、ほとんど旧態依然であったシベリアの状況をその考察の対象に含める必要がある。本年度の研究により、次のことが確認された。内戦期の対立構造は基本的にはボリシェヴィキ権力と共同体農民とのそれであったとしても、それは限定的であった。なぜなら、権力や共同体が重層的敵対関係を内包していたからだけでなく、もっとも大きな理由として、対立の構造的基盤をなすはずの伝統的社会集団は大きく組み替えを余儀なくされていたからである。都市では飢えた労働者は故郷に帰り、プロレタリアートなき都市はその生産性と共に革命性を失った。農村では、帰還した労働者や動員解除兵士が一因となって、土地を巡る紛争が絶えなかった。また農村でも、飢餓民は時には村丸ごと、南東部または東部への移住民、より正確には避難民となった。徴兵と動員、内戦の激化は人口動態的な変化を生じさせ、それを、灘民、兵役忌避者、様々な流民が促した。伝染病の信じがたい猖獗があった。この人口学的、社会的変動=流動化の再編過程を、ネップ体制の基本原理と考えるなら、従来主張されているような割当徴発から現物税への移行は政策上重要な意味を持たず、都市の復興と農村住民の共同体への固定化の枠内で、この体制の成立を検討するのが妥当であろう。しかしながら、このような体制の成立は、次の二点で、中央権力の意図に反して、経済システムの分裂を促した。第一は、言うまでもなく革命以前の都市と農村との対立を復活させ、第二は、経済の中央集権的システムと地域経済の亀裂である。現物税制度は穀物調達については全国的システムを整序化することに成功したが、この制度の導入と共に供給制度を廃止したために、地方住民は国家システムではなく、地域経済への依存を余儀なくされた結果が、これであった。後者の具体的過程を検討するのが今後の課題である。1921年3月の共産党大全で採択された、割当徴発から現物税の交替に関する決議から始まる新しい体制「21年体制」をどのように捉えるかが今回の基本的研究テーマである。今年度の研究で、次のことを新しい解釈として確定することができた。第一に、従来のロシア、欧米学界ともに、現物税の導入とともに、これ以前の政策である戦時共産主義政策から断絶した政策が適用され、これにより通常では「ネップ(新経済政第)」と呼ばれる新しい体制が成立した、との主張が一般的である。だが、現物税の実施過程を見るなら、現実的には従前と殆ど同一の軍事態勢の下で徴税が行われ、抑圧的措置が頻繁に適用された。共産党指導部は、播種カムパニアにおける種子調達危機を一時的に回避するために、暫時割当徴発を停止し、現物税を導入し、この制度が恒常的であるとは、少なくともこの実施が決議された3月までは、想定されていなかった。限定しようとした「地方的取引」の範囲を超えて、市場が全国的規模で生じ、これはボリシェヴィキ指導部の想定を超えた現象であった。第二に、このような市場の大規模な展開は、従来は「小ブル的心理」により小商いを求めて担ぎ屋が交換に殺到したと説明されてきた。しかしながら、当時の公文書館資料を検討するなら、このような担ぎ屋と呼ばれる交換の担い手の多くは、飢餓民であった。すなわち、餓死から逃れようと家財道具や家畜を清算して、大量の飢餓民が食糧を求めて大きな移動を行ったのが、全国的規模での市場の展開の理由である。このことから、従来は21年の飢饉にもかかわらず、ネップが成功裡に導入されたとの主張が一般的であったが、飢饉こそがネップを生み出した最大の要因であった。
格子ボルツマン法に基づく航空機周り高レイノルズ数流れの数値空力音響解析

近年急速に発展している格子ボルツマン法(LBM)は、自動車空力設計など産業界で広く用いられる空力・空力音響解析ツールとなってきているが、航空機周りに見られる高レイノルズ数乱流では、レイノルズ数依存性の強い乱流境界層が発達するため、現在の計算機性能で高精度なLES(Large-Eddy Simulation)を実施するには乱流境界層のモデル化が必須である。そこで本研究では、LBMを次世代の航空機空力設計ツールとすることを目指して、LBMに適した乱流境界層のモデル化手法の開発に取り組む。
ペプチドによる選択的ヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)3阻害剤の作製

N-CoRのdeacetylase activating domain(DAD)ペプチドを用いてHDAC3の選択的阻害剤作製のため、N-CoR/HDAC3の結合を阻害するDADフラグメント(92amino acid)を発現する発現ベクターmyc-nuc-DADとpoint mutationによりHDAC3との結合能のない発現ベクターmyc-nuc-mutDADを作製した。HeLa細胞にこれらの発現ベクターを遺伝子導入し抗myc抗体で免疫沈降を行うと、myc-nuc-DADではHDAC3が免疫沈降された。また抗N-CoR抗体で免疫沈降を行うとmyc-nuc-DADを発現させると、内因性N-CoRと共沈降される内因性HDAC3が減少することが確認できた。これらのことからDADフラグメントは細胞内で内因性N-CoRと内因性HDAC3の結合をある程度阻害できることが確認できた。またDADフラグメントの機能的なHDAC3阻害作用を検討するために。酵母転写因子であるGAL4のDNA結合ドメインに甲状腺ホルモン受容体(TR)のリガンド結合ドメインを結合させたGAL-TRを用いてルシフェラーセアッセイにて検討した。HeLa細胞においてGAL-TRはGAL4応答配列のあるプロモーター活性を抑制するが、myc-nuc-DADを共発現することによってGAL-TRの転写抑制能を軽度阻害できることが確認できた。また甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン(TRH)遺伝子は甲状腺ホルモン(T3)存在下では転写が抑制されるが、T3非存在下では転写が活性化され、この転写活性化にはN-CoRの関与が示唆されている。そのでTRHプロモーターに制御ににおけるDADフラグメントの影響を検討した。HeLa細胞において内因性のN-CoRをsiRNAでノックダウンするとT3非存在下でTRHプロモーター活性は減弱した。このことは内因性N-CoRがTRH遺伝子制御に関与していることを証明している。そこでDADフラグメントがこの作用を阻害できるか検討した。myc-nuc-DADを発現させるとT3非存在下でTRHプロモーター転写活性が減弱したが、myc-nuc-mutDADを発現さてもTRHプロモーターの転写活性には影響なかった。このことはT3によって負に制御されるTRH遺伝子において、N-CoR/HDAC3複合体がT3非存在下でのTRH遺伝子プロモーターの転写活性化に関与し、その作用をDADフラグメントが阻害できることを示唆している。nuclear receptor corepressor(N-CoR)のdeacetylase activating domain(DAD)ペプチドを用いてhistone deacetylase(HDAC)3の選択的阻害剤作製のため、N-CoR/HDAC3の結合を阻害するDADフラグメントの検討を行った。核移行シグナルを付けたDAD(92amino acid)を発現するmyc-tag発現ベクターmyc-nuc-DADとpoint mutationによりHDAC3との結合能のないと予想される発現ベクターmyc-nuc-mutDADを作製した。HeLa細胞にこれらの発現ベクターを遺伝子導入し抗myc抗体で免疫沈降を行うと、myc-nuc-DADではHDAC3が免疫沈降されるが、myc-nuc-mutDADではHDAC3が免疫沈降されなかった。このことからDADフラグメントでも細胞内でのHDAC3との結合は保たれており、現在DADフラグメントにより内因性のN-CoRとHDAC3の結合をどの程度阻害できるか検討中であり、更にDADフラグメントを短くしDADペプチドのデザインを検討している。またDADフラグメントのHDAC3阻害作用を検討するために、酵母転写因子であるGAL4のDNA結合ドメインにN-CoRを接合したGAL-N-CoRを用いてルシフェラーセアッセイにて検討した。HeLa細胞においてGAL-N-CoRはGAL4応答配列のあるUAS-tkプロモータ0活性を抑制するが、myc-nuc-mutDADを共発現することによってGAL-N-CoRの転写抑制能を阻害できることが確認できた。

そのでTRHプロモーターに制御ににおけるDADフラグメントの影響を検討した。HeLa細胞において内因性のN-CoRをsiRNAでノックダウンするとT3非存在下でTRHプロモーター活性は減弱した。このことは内因性N-CoRがTRH遺伝子制御に関与していることを証明している。そこでDADフラグメントがこの作用を阻害できるか検討した。myc-nuc-DADを発現させるとT3非存在下でTRHプロモーター転写活性が減弱したが、myc-nuc-mutDADを発現さてもTRHプロモーターの転写活性には影響なかった。このことはT3によって負に制御されるTRH遺伝子において、N-CoR/HDAC3複合体がT3非存在下でのTRH遺伝子プロモーターの転写活性化に関与し、その作用をDADフラグメントが阻害できることを示唆している。
高次元金属クラスタ-錯体の合成と物性

当研究は高次金属クラスタ-骨格を有する伝導性化合物を低温における溶液反応によって合成することを目的とした。このためにクラスタ-化合物中のμーS_2配位子からの硫黄原子引き抜きによる縮合反応の開発を研究した。ジスルフィド配位子を有する化合物(NH_4)_2[Mo_3S(S_2)_6]1とNa_2SO_3を水溶液中で反応すると、黒色の生成物を得た。これを300゚Cで5時間加熱した試料は半導体であった。亜硫酸イオンによって、1のμーS_2配位子から硫黄原子引き抜き反応がおこり、モリブデン3核クラスタ-単位が重合したことが示唆される。硫酸銅共存下に同様な反応をおこなうと、半導性を示す非晶質黒色生成物が生成する。700゚Cに加熱すると黒色単結晶が成長する。digeniteと呼ばれるCu_9S_5であることが明らかになった。1とトリアルキルホスフィンの反応により、[Mo_3S_5(PMe_3)_6]2,[Mo_4S_6(SH)_2(PMe_3)_6]3、[Mo_6S_<12>(PEt_3)_6]4を合成した。2は3個のモリブデン原子から成る正三角形クラスタ-骨格を持ち、超伝導シェブレル相中に存在する一連のMo_<3n>S_<3n+2>クラスタ-のn=1に対応する錯体の初めての例である。DVーXα法分子軌道計算により、Mo_3骨格が歪まない理由を明らかにした。3は4個のモリブテン原子が菱形をなした平面状Raft構造である。菱形を構成するモリブデンーモリブデン結合距離は等しく、モリブデン10電子系に対応する構造であることが、同じくDVーXα法計算により明らかにされた。4は6個のモリブデン原子がRaft状に結合した平面骨格を有する。モリブデンスルフィドクラスタ-において2個以上の三角面が水平方向に融合した構造を持つものとして最初の例である。当研究はシェブレル相類似の金属クラスタ-骨格を有する伝導性化合物を低温における溶液反応によって合成することを目的とした。このためにクラスタ-化合物中のμーS_2配位子から配位性のない無機試薬により硫黄原子を引き抜く新反応の開発を目論んだ。ジスルフィド配位子を有する化合物としてよく知られる(NH_4)_2[Mo_3S(S_2)_6]1とNa_2SO_3を水溶液中で反応すると、黒色の生成物を得た。室温反応の生成物は絶縁体である。還流下反応の生成物はわずかに電気を通す。この化合物を300°Cで5時間加熱した試料は半導体であった。これらの結果は、亜硫酸イオンによって、1のμーS_2配位子から硫黄原子引き抜き反応がおこり、モリブデン3核クラスタ-単位が重合したことを示すものと思われる。700°Cに加熱すると黒色単結晶が成長する。これは金属伝導性を示すが、ICP分析の結果、モリブデンを含まないことが明らかになった。

単結晶X線構造解析の予備実験として、プリセッションおよびワイセンベルグ写真を検討したところ、極めて特異な消滅則を示すので、長期間にわたり構造が不明であったが、この化合物は8個の既知銅硫化物のうち、digeniteと呼ばれるCu_9S_5であることがほぼまちがいないことが判明した。通常は銅単体と硫黄単体を9:5の比率で反応させることにより生成するが、構造は完全には解析されていない化合物である。当研究の反応条件下にこの化合物が選択的に生成する機構については検討中である。(NH_4)_2[Mo_3S(S_2)_6]とトリアルキルホスフィンの反応により、[Mo_3S_5(PMe_3)_6]1,[Mo_4S_6(SH)_2(PMe_3)_6]2、[Mo_6S_<12>(PEt_3)_6]3を合成した。単結晶X線構造解析により1は3個のモリブデン原子から成る正三角形クラスタ-骨格の上下に硫黄が面配位、各モリブデン-モリブデン稜に硫黄が架橋、各モリブデン原子に2個のトリメチルホスフィンが配位した構造が明らかになった。超伝導シェブレル相中に存在する一連のMo_<3n>S_<3n+2>クラスタ-のn=1に対応する錯体であり、初めての例である。DVーXα法分子軌道計算により、Mo_3骨格が歪まない理由を明らかにした。すなわち、8個のクラスタ-骨格電子の占有する軌道のうち、HOMOがa_1^ ̈であり、JahnーTeller歪みが起こり得ないためである。2は4個のモリブデン原子が菱形をなした平面状Raft構造である。菱形を構成するモリブデンーモリブデン結合距離は等しく、モリブデン10電子系に対応する構造であることが、同じくDVーXα法計算により明らかにされた。3は6個のモリブデン原子がRaft状に結合した平面骨格を有する。面配位硫黄は融合三角面の上下に交互に配位する。各モリブデンーモリブデン稜は硫黄により架橋される。トリエチルホスフィンが各モリブデン原子に1個ずつ配位しており、配位環境が異なるので^<31>P NMRスペクトルは3種の吸収を示す。モリブデンスルフィドクラスタ-において2個以上の三角面が水平方向に融合した構造を持つものとして最初の例である。これらのクラスタ-は同じパタ-ンの縮合反応で生成するものと推定される。更に重合度の大きい平面状クラスタ-は固体硫化物の表面を単層に切り出したものとみなせるので固体表面の反応を解析する上でも有用であり、特異な物性発現も期待される。
免疫細胞phenotype2重染色解析法による移植患者免疫抑制療法指針の確立

臓器移植を成行させるためには、個体の免疫学的抵抗性を温存しつつ、拒絶反応を抑える羅針盤となるimmuno monitoringが必要であるが、日常臨床に応用できる信頼性の高い方法は末だない。近年発達したflow cytometryと細胞形質に対する単クローン抗体は、一定の機能を持つ免疫細胞のphenotypeの解析を可能としたT helper/T suppressor比が個体の免疫抑制状態をよく反映すると報告された。しかしながら、本研究で考案した時系列解析法で検討すると、単染色法による免疫細胞サブセットの変動と移植患者臨床経過との間に、一定の相関を見出せなかった。つぎに、2種類の単クローン抗体を使う2重染色法により、より精徴な免疫細胞phenotypeの解析を行った。これらの免疫細胞サブセットの末梢血小単核中比率と、移植後期間、拒絶反応、個々の移植後経過、免疫抑制剤投与量、免疫抑制剤の種類との相関を検討したが、すべての組合せで特徴的な強い相関関係は見出せなかった。したがって、現段階では2重染色法による末梢血免疫細胞phenotype分析は、腎移植のimmuno monitoringとして有用であるとは言えない。本研究の一端として開発した、単クローン抗体と蛍光ラテックスを使った簡便な単球貧食能検査法の腎移植immuno monitoringとしての意義は現在検討中である。
深層強化学習を用いた土壌熱交換システムの最適運用・制御手法の構築とその検証

土壌熱交換システムは、外気の予冷・予熱効果等の性能予測手法や運用方法が確立されておらず、システム内における結露に伴った空気質汚染も指摘されている。そこで本研究では、土壌熱交換システム(特に地下ピット方式)を利用した際の年周期の省エネ効果やピット内の結露性状を高精度に推定可能となるシミュレータを開発すると共に、同シミュレータによる複数年にわたる解析データを用いて、結露の発生を抑制しつつ、高い省エネ性能を実現する動的制御モデルを深層強化学習により構築する。また実測調査を通じて、システム内の空気質汚染と結露性状との関係を定量的に明らかにする。
炭素繊維強化プラスチックの高能率・高品質ドライ研削加工技術の開発研究

CFRPの研削雰囲気が研削結果に及ぼす影響を明らかにすることを試みた.CFRPのドライ研削の比較するため,ウエット研削実験を実施した.その結果,ドライ研削に比べてウエット研削では研削抵抗および研削温度もかなり小さくなることが確認された.また,仕上げ面粗さもドライ研削の目づまりが発生する以前の場合と大きく異なることなく,ドライ研削による仕上げ面粗さよりも若干小さくなることが明らかになった.さらに,走査型電子顕微鏡で仕上げ面を観察した結果,ウエット研削による仕上げ面では,ドライ研削による仕上げ面には見られない表面のカーボン繊維の微細な破砕が確認された.このことは,CFRPのドライ研削の優位性を示唆しているものと考え,ウエット研削におけるカーボン繊維破砕のメカニズムを明らかにするため,研削点での環境を模擬したカーボン繊維の加熱急冷ならびに局所的荷重負荷実験によって検討を続けている.また,CFRPのドライ研削と同時にドライアイスジェットを砥石作用面に噴射させ,研削により砥石表面に付着するCFRPの切りくずをインプロセスで除去する実験も実施した.その結果,砥石の研削に関与する領域に対してノズルを精度よく位置決め設置する必要のあることが明らかになり,実験装置の改善を行った.また,トライアイスジェットを継続して砥石作用面に噴射させると,砥石自体の温度低下によってドライアイスジェットによる付着切りくずの除去効果の低下することが明らかになった.CFRPのウエット研削によるカーボン繊維の微細な破砕が確認されたため,ウエット研削に対するドライ研削の優位性を明らかにすることに思いのほか時間を要していることに加えて,当初予測できなかったドライアイスジェットの噴射による砥石の大幅な温度低下による切りくず除去性能の低下を克服する解決策の考案にやや時間を要しているため.ドライアイスジェット噴射の最適条件を明らかにし,効率的なCFRPの目づまり切りくずを除去を実現する.その最適条件によっても切りくず除去性能を大幅に低下させる砥石の温度低下が発生する場合は,ドライアイスジェットの作用点の前の砥石表面を加熱することによって切りくず除去性能の向上を試みる.CFRPの平面研削を対象として,平面研削盤において砥石表面にドライアイス粒子を高速投射するシステムを試作した.砥石表面の複雑かつ微罪な凹凸形状に付着した切りくず除去の効果やドライアイスの取り扱い性などを考慮して,液化二酸化炭素からドライアイスの微粉を精製し,アシストガスとともに砥石表面に高圧投射(ブラスト)する方式を採用した.ドライアイスブラストを実施しない通常のドライ研削の場合と比較検討した.その結果,通常ドライ研削では直ちに砥石表面への目づまりが発生し,研削不能となるとともにCFRPの加工面に著しいデラミネーションなどの品質低下が見られたものの,研削中にドライアイスブラストを実施した場合は,砥石の目づまりがほとんど発生せず初期の研削性能が持続することが明らかになった.このことから,CFRPのドライ研削加工においてドライアイスブラストによる目づまり抑制効果が認められた.また,研削現象の面からドライアイスブラストによる目づまり抑制効果を検討するため,研削加工におけるCFRPと研削砥石の接触面の温度を測定した.測定にはCFRPにコンスタンタンの微細被覆ワイヤを埋め込み,研削面においてコンスタンタンとカーボン繊維により構成させる接点の熱起電力を測定することにより研削点の温度を求めた.その結果,研削の初期においては,研削温度に大きな違いは認められなかったが,通常ドライ研削で目づまりが発生すると研削温度が急激に上昇し,マトリックス樹脂のガラス転移点を大きく上回ることが明らかになった.さらに,研削抵抗の推移についても検討し,研削温度同様にドライアイスブラストにより研削抵抗も初期の値が持続することが明らかになった.ドライアイスブラストの最適な投射条件についてはまだ検討の余地があるものの,本研究の主旨であるCFRPのドライ研削加工における目づまり抑制効果を立証することができ,おおむね順調に研究が推進していると考える.CFRPの研削雰囲気が研削結果に及ぼす影響を明らかにすることを試みた.CFRPのドライ研削の比較するため,ウエット研削実験を実施した.その結果,ドライ研削に比べてウエット研削では研削抵抗および研削温度もかなり小さくなることが確認された.また,仕上げ面粗さもドライ研削の目づまりが発生する以前の場合と大きく異なることなく,ドライ研削による仕上げ面粗さよりも若干小さくなることが明らかになった.さらに,走査型電子顕微鏡で仕上げ面を観察した結果,ウエット研削による仕上げ面では,ドライ研削による仕上げ面には見られない表面のカーボン繊維の微細な破砕が確認された.このことは,CFRPのドライ研削の優位性を示唆しているものと考え,ウエット研削におけるカーボン繊維破砕のメカニズムを明らかにするため,研削点での環境を模擬したカーボン繊維の加熱急冷ならびに局所的荷重負荷実験によって検討を続けている.また,CFRPのドライ研削と同時にドライアイスジェットを砥石作用面に噴射させ,研削により砥石表面に付着するCFRPの切りくずをインプロセスで除去する実験も実施した.その結果,砥石の研削に関与する領域に対してノズルを精度よく位置決め設置する必要のあることが明らかになり,実験装置の改善を行った.また,トライアイスジェットを継続して砥石作用面に噴射させると,砥石自体の温度低下によってドライアイスジェットによる付着切りくずの除去効果の低下することが明らかになった.

CFRPのウエット研削によるカーボン繊維の微細な破砕が確認されたため,ウエット研削に対するドライ研削の優位性を明らかにすることに思いのほか時間を要していることに加えて,当初予測できなかったドライアイスジェットの噴射による砥石の大幅な温度低下による切りくず除去性能の低下を克服する解決策の考案にやや時間を要しているため.ドライアイスブラストの最適な投射条件について流動解析等も含めてさらに検討を継続するとともに,研削温度がCFRPの加工面近傍に及ぼす影響についても検討する.その結果も踏まえてドライアイスブラストの効果を検討する.また,ドライアイスブラストの適用により砥石表面の温度低下が生じ,ドライアイスブラストの継続的な効果に影響を及ぼすことが想定されるため,ドライアイスブラストの効果を維持する技術についても検討を加えていきたい.ドライアイスジェット噴射の最適条件を明らかにし,効率的なCFRPの目づまり切りくずを除去を実現する.その最適条件によっても切りくず除去性能を大幅に低下させる砥石の温度低下が発生する場合は,ドライアイスジェットの作用点の前の砥石表面を加熱することによって切りくず除去性能の向上を試みる.CFRPとダイヤモンド砥石の仕様決定に時期を要したことと,それらの納期が希望どおりにならなかったため次年度使用額が大きくなった.ただし,実験には手持ちでわずかに保有していたダイヤモンド砥石とCFRPを使用しており,当該年度の研究成果に大きな影響は生じなかった.CFRPとダイヤモンド砥石の仕様が定まったので,実験に使用する消耗品を中心に計画的に使用する.また,国際会議での発表も予定しており,その他の学会も含めて積極的な成果発表の旅費,参加登録費等に使用する.砥石の温度低下を抑制し,さらにドライアイスジェットの目づまり切りくず除去効果を高めるための砥石加熱装置の検討過程において,金額的にレーザ加熱装置の購入が不可能であっため,その構想にやや時間を要し,次年度使用額が生じた.次年度早々に方式,仕様等を確定し,加熱装置と砥石等の実験の消耗品,また成果発表のための国際会議旅費ならびに参加登録費として使用するよう計画している.
cGMP系関連遺伝子多型に基づいた循環器疾患遺伝的要因の解明とその医療への応用

邦人に多発する冠攣縮性狭心症の成因を研究する上で、この成因にeNOS遺伝子異常が関与しているとの仮説に基づき、冠攣縮性狭心症と健常対象者それぞれ10名のDNAを用いて、eNOS遺伝子全エクソンと5'転写調節領域1.6Kbpにわたり、SSCP法で点変異を検索した。その結果、エクソン7のミスセンス変異(Glu298Asp変異)と、5'転写調節領域に、3カ所の点変異(T-786C,G-922C,T-1468A変異)を見つけた。5'転写調節領域の3つの変異は同一対立遺伝子上に存在していたが、ゲルシフトアッセイ等の検討によりg-786C変異が機能的であることが示唆された。さらに、T-786C変異部位を11bp欠失させた変異リポーターを作製してルシフェラーゼアッセイを行ったところ、この欠失クローンは野生型クローンと同等までルシフェラーゼ活性が回復した。これらの結果より、T-786C変異にサプレッサー蛋白質が結合していることが示唆された。T-786C変異近傍は既知の転写調節配列と相同性が認められず、このサプレッサーを精製することにした。この蛋白質を精製するにあたりHela細胞の核蛋白質を300mg調整し、2段階のイオン交換クロマトグラフィー、アフィニティービーズにて、SDS-PAGE上50Kdのシングルバンドに精製することに成功した。この蛋白質をゲルより抽出し、アミノ酸配列を決定した。この決定されたアミノ酸配列はreplication protein A(RPA)の部分配列と100%一致した。さらにゲルシフトのシフトバンドはRPAに対する抗体でスーパーシフトし、また、リコンビナントRPAを用いても同様のゲルシフトが確認された。さらに、RPAの転写開始点付近の塩基配列を基にしたアンチセンスをHUVECに導入すると変異型リポーター活性が有意に回復することが確認された。これらの一連の結果より変異型eNOS遺伝子の転写はRPAを介して抑制されていることが証明された。
ビブリオ属細菌の環境適応機構の包括的解析

ビブリオ属細菌の環境適応機構を理解するために、以下の二つの面から解析を行った。1.抗菌薬トランスポーター(多剤排出ポンプ)の遺伝子クローニングおよび抗菌薬耐性変異株の作成グラム陰性菌では重要であると考えられているRND型多剤排出ポンプについて、腸炎ビブリオ、Vibrio cholerae non-01のゲノム上に推定される計18個をクローニングし、抗菌薬高感受性大腸菌に発現させて、その機能を解析した。その一部については論文で報告した。腸炎ビブリオについてはそれら全て破壊した12重破壊株を作成した。この株は種々の抗菌性物質に対して強い感受性を示したので、12個のRND型多剤排出ポンプをこの株に発現させて解析を行った。その結果、計9個のものが実際に宿主細胞に抗菌物質耐性を与えることがわかった。また12重破壊株では細胞の鉄獲得において重要なシデロフォアの産生量が低下していることを新たに見出した。これらの成果の一部は、計4つの学会で報告した。2.腸炎ビブリオのNa^+耐性に関わる輸送系の探索Na^+/H^+アンチポーター以外のNa^+耐性に関係する輸送系と予想した呼吸鎖Na^+ポンプについてその遺伝子破壊株の構築を試みた。理由は不明だが、Na^+/H^+アンチポーターと呼吸鎖Na^+ポンプを両方欠損した株は得られなかった。このことは両者が機能しないことは細胞にとって致死的である可能性が高いことを意味する。そこですでに得られている呼吸鎖Na^+ポンプを欠損した株について解析を行った。この株は栄養培地でさえも生育の遅延が見られ、呼吸鎖Na^+ポンプの重要性があらためて示された。この株はNa^+感受性が幾分増大していたが、劇的な変化とは言いがたいものであった。やはり両者の破壊株を得ることが重要であると考えられる。現在、別のアプローチから目的の遺伝子破壊株の構築を試みている。ビブリオ属細菌の環境適応機構を理解するために、二つの面から解析を行った。一つは、多剤排出ポンプの解析である。グラム陰性菌では重要であると考えられているRND型多剤排出ポンプについて、腸炎ビブリオ、Vibrio cholerase non-01のゲノム上に推定される計18個をクローニングし、抗菌薬高感受性大腸菌に発現させて、その機能を解析した。このうち抗菌性物質の最小生育阻止濃度の上昇が見られたものは、計5個であった。しかし腸炎ビブリオ又はV.choleraeの外膜タンパク質VpoC又はTolC_<Vc>と同時に発現させると、計11個が多剤排出ポンプとしての性質を示した。腸炎ビブリオについてはこれら12個のポンプ遺伝子を全て破壊した12重破壊株を作成した。この株は種々の抗菌性物質に対して強い感受性を示していた。現在この破壊株における抗菌性物質感受性以外の性質を詳細に解析している。成果の一部は、第80回日本細菌学会総会にて発表する。もう一つの腸炎ビブリオのNa^+耐性に関する輸送系の解析については、すでに解析しているNa^+/H^+アンチポーター以外の輸送系に着目して解析を行った。第一候補としての呼吸鎖Na^+ポンプについてその遺伝子破壊株を構築した。現在この破壊株のNaCl耐性などについて解析を行っている。腸炎ビブリオのイオン輸送系においてパッチクランプ法を適用した電気生理学的な解析を行うために、第一段階として腸炎ビブリオ細胞の巨大化を行った。直径8-10μm程度の巨大化細胞を調製することには成功したが、細胞径が不均一である等、問題も見つかっており、現在さらによい巨大化条件を検討している。