hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
急性、慢性放射線腸障害におけるダイイングコードの解明

本研究課題は、マウスの慢性放射線腸炎モデルを用いて、これまで有効な治療法のなかった放射線腸障害に対する全く新しい治療戦略の開発を目指した。好酸球を欠損しているΔdblGATAマウスにγ線腹部限局照射を行うと、12週における線維化が著明に抑制されていることが明らかになり、放射線による線維化に好酸球が必須の役割を果たすことが分かった。放射線照射によって、急性期だけでなく、慢性期にも陰窩部の細胞死が誘導されることが分かった。興味深いことに、急性期はアポトーシスであるのに対して、慢性期はネクローシスが誘導されていることがわかった。そして、ネクローシスによって死細胞成分が漏出し、中でもATPが陰窩直下に存在するα-SMA陽性の筋線維芽細胞を活性化し、好酸球遊走因子のeotaxinを誘導していることが明らかになった。そして、このeotaxinによって好酸球が粘膜下層に浸潤していた。筋線維芽細胞は、ATPに活性化されて、eotaxinだけでなく、GM-CSFを産生しており、これが粘膜下に浸潤してきた好酸球を著しく活性化し、その結果線維化の促進因子であるTGF-βの産生を誘導した。好酸球由来のTGF-βは、筋線維芽細胞からcollagen 1の産生を惹起した。一方、GM-CSFとeotaxinの共刺激によって、好酸球は脱顆粒した。脱顆粒成分の中でECPは筋線維芽細胞を活性化し、eotaxinを誘導するとともにTGF-βを活性化するMMP3,7,9を誘導することがわかった。Eotaxinはさらなる好酸球の遊走を、MMP3,7,9はTGF-βの作用増強によって線維化をさらに促進することが考えられた。以上のことから粘膜下層での好酸球と筋線維芽細胞の相互作用によって、positive feedback loopが形成され、放射線照射後の慢性期において線維化が段階的に進んでいくことが明らかになった。28年度が最終年度であるため、記入しない。我々は、TLR3欠損マウスが急性放射線症候群に抵抗性を示す事を見出した。平成27年度は、急性放射線腸障害におけるTLR3のリガンドの検索を行った。in vitroで培養した腸管上皮オルガノイドにガンマ線を照射し漏出する内因性RNAのうち200bp以上のものがTLR3の活性化があった。現在、特異的な配列がないか検索を進めている。TLR3の新規阻害剤に関しては、TLR3の構造解析が終わっているので、構造解析の観点から新規の阻害剤を作成できないか検討を進めている。γ線腹部限局照射12週のBalb/Cのマウスにおいて、線維化している漿膜下の粘膜下層に好酸球の著明な浸潤が認められる。解析の結果、陰窩の細胞死によってATPが遊離し、これによって活性化された筋線維芽細胞がCCL11を誘導して好酸球を遊走させていることが分かった。GATA-1は未熟な骨髄系の前駆細胞から赤芽球、巨核球、好酸球への分化に必須の転写因子である。GATA-1の発現を正にオートレギュレーションするエンハンサーのGATA結合領域(dblGATA)を欠損させたマウスΔdblGATAマウスでは、好酸球が特異的に消失している(Dyer K.D.,et al. J. Immunol. 179:1693,2007)。我々は、ΔdblGATAマウスを解析の結果、腸管粘膜固有層の好酸球が完全に消失していることを確認した。興味深いことに、ΔdblGATAマウスにγ線腹部限局照射を行うと、12週における線維化が顕著に抑制されていることが明らかになり、放射線による線維化に好酸球が促進的に働いていることが分かった。好酸球の活性化には、T細胞や自然リンパ球の関与がないことが実験から明らかになった。平成27年度に計画をしていた急性放射線腸障害におけるTLR3のリガンドの同定に関して、ガンマ線照射後にp53依存的に細胞死を誘導した細胞から漏出してくる200bp以上の内因性RNAがリガンドとなりうることを確認している。おそらく、ステムループ構造をとるものがリガンドになりうると考えられ、今後急性放射線障害の治療のための阻害剤作成にとって有益な情報を得ることができている。このように、TLR3を標的とした急性放射線腸障害の治療法の確立に関して順調に研究計画は進捗していると考えられる。γ線腹部限局照射によって誘導される腸管線維化における好酸球の役割の解析においては、7週齢のBalb/Cのマウスに15 Gyのγ線を腹部に限局照射(腹部以外は3cmの鉛板で遮蔽)することによって慢性腸炎を惹起し、腸管の顕著な線維化が誘導出来る。照射12週後には回腸組織のアザン染色において漿膜下の粘膜下層において間質のコラーゲン沈着のために肥厚する晩発性放射線腸炎の非常に良いマウスモデルを構築できている。平成27年度はこのモデルを用いて非常に興味深い結果を得ている。γ線腹部限局照射後に、陰窩の細胞が恒常的に細胞死、しかもネクローシスを起こしていることが明らかになった。このネクローシスによって、陰窩に接する筋線維芽細胞が著しく活性化されており、線維化が誘導されていることが分かった。

これに伴い、粘膜下層の線維化組織において、好酸球の浸潤が誘導されることを明らかにできた。そして、活性化した筋線維芽細胞との相互作用によって好酸球は活性化し、線維化を強力にドライブすることがわかった。このように順調に好酸球の粘膜下への遊走機構、好酸球の活性化機構、トリガーとなる細胞死の様式など研究成果が出ていると考えられる。本研究課題は、マウスの慢性放射線腸炎モデルを用いて、これまで有効な治療法のなかった放射線腸障害に対する全く新しい治療戦略の開発を目指した。好酸球を欠損しているΔdblGATAマウスにγ線腹部限局照射を行うと、12週における線維化が著明に抑制されていることが明らかになり、放射線による線維化に好酸球が必須の役割を果たすことが分かった。放射線照射によって、急性期だけでなく、慢性期にも陰窩部の細胞死が誘導されることが分かった。興味深いことに、急性期はアポトーシスであるのに対して、慢性期はネクローシスが誘導されていることがわかった。そして、ネクローシスによって死細胞成分が漏出し、中でもATPが陰窩直下に存在するα-SMA陽性の筋線維芽細胞を活性化し、好酸球遊走因子のeotaxinを誘導していることが明らかになった。そして、このeotaxinによって好酸球が粘膜下層に浸潤していた。筋線維芽細胞は、ATPに活性化されて、eotaxinだけでなく、GM-CSFを産生しており、これが粘膜下に浸潤してきた好酸球を著しく活性化し、その結果線維化の促進因子であるTGF-βの産生を誘導した。好酸球由来のTGF-βは、筋線維芽細胞からcollagen 1の産生を惹起した。一方、GM-CSFとeotaxinの共刺激によって、好酸球は脱顆粒した。脱顆粒成分の中でECPは筋線維芽細胞を活性化し、eotaxinを誘導するとともにTGF-βを活性化するMMP3,7,9を誘導することがわかった。Eotaxinはさらなる好酸球の遊走を、MMP3,7,9はTGF-βの作用増強によって線維化をさらに促進することが考えられた。以上のことから粘膜下層での好酸球と筋線維芽細胞の相互作用によって、positive feedback loopが形成され、放射線照射後の慢性期において線維化が段階的に進んでいくことが明らかになった。平成28年度は、TLR3を標的とした急性放射線口腔粘膜炎の治療法の確立というテーマに着手する。頭頸部腫瘍に対する放射線照射後に、急性の放射線口腔粘膜炎が頻発することが知られているが、その病態機構は良く分かっていない。TLR3欠損マウスの頭部にγ線照射を行い、口腔粘膜炎が軽減するかを検討する。また、TLR3-RNA結合阻害剤が、マウスにおいてγ線照射後の口腔粘膜炎の症状を改善するかを検討する。TLR3-RNA結合阻害剤に関して、放射線腹部照射後の急性放射線障害の治療に加えて、放射線口腔粘膜炎に対しても治療適応の拡大が出来るか検討を行う。γ線腹部限局照射によって誘導される腸管線維化における自然免疫細胞の役割の解析においては、好酸球を標的として治療が可能なことも検証し、論文発表を考えいる。さらに、腸管線維化に関して腸管粘膜固有層のCD11cintCD11bintレジデントマクロファージの機能解析を行う。腸管粘膜固有層のCD11cintCD11bintは、CD4+マクロファージで、ケモカイン受容体のCX3CR1を特異的に発現している。
キノコ・植物の生体調節機能発現に関わる鍵物質の探索と作用機序

申請者はキノコや植物が関わる生物現象鍵物質に関して以下の研究を目指した.1)子実体形成を司る鍵物質子実体形成物質について,バイオアッセイ系の確立を試み,子実体形成物質の単離を目指した。その結果,エノキタケやヒラタケを用いたバイオアッセイ系の確立に成功した。そして,このアッセイを用いて,ゴマから子実体形成物質の単離に成功した(投稿準備中)。2)肝障害抑制物質スクリーニングによっていくつかの植物に肝障害を抑制する効果を見出した.その中から,ナツメグからの活性物質の単離を試み,強い活性を有する化合物の精製に成功した(論文印刷中).3)カキシメジの胃腸毒三大中毒キノコであるカキシメジは誤食すると激しい下痢や嘔吐を起こす.しかし,その毒本体は未解明のままであった。そこで,マウスに対する毒性を指標に毒物質の単離を試み,結果的に,毒本体としてウスタル酸と命名した新規物質を得ることに成功した。同時に4種の類縁体の単離,構造決定に成功した。4)ホテイシメジの悪酔い毒ホテイシメジはアルコールとともに摂取すると悪酔いを起こす.これはアルコールの代謝産物であるアセトアルデヒドが体内に蓄積するためと考えた。すなわち,このキノコにはアルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害物質の存在を考えた。そこで,抽出物のこの酵素に対する阻害活性を測定したところ,予想通り,脂溶性画分に活性があった。この活阻害性を指標に化合物の単離を試み,数種の酸化された脂肪酸の単離に成功した。キノコや植物が関わる生物現象鍵物質に関して以下の研究を行った。1)子実体形成を司る鍵物質子実体形成物質について,バイオアッセイ系の確立を試み,成功した。現在,このアッセイ系を用いて,子実体形成物質の単離を目指している。2)肝障害抑制物質いくつかの香辛料に肝障害を抑制する効果を見出し,その中で極めて強い活性を示したナツメグからの肝障害抑制物質の単離・精製,構造決定を目的に実験を行った。その結果,活性画分から,いくつかの化合物を単離し,構造決定をを行った。現在,単離された化合物の肝障害抑制活性を検討中である。4)摂食抑制物質摂食抑制物質の遺伝子のクローニングを試み,mRNAを得、さらにcDNAライプラリーを構築した。5)未解明キノコ毒の解明三大中毒キノコであるカキシメジの毒は未解明のままであり,誤食すると激しい下痢や嘔吐を起こす。また,ホテイシメジはアルコールとともに摂取すると悪酔いを起こす。これらの原因物質を明らかにすることを目的として実験を行った。その結果,カキシメジからはウスタル酸と命名した毒本体とその関連化合物の単離,構造決定に成功した。ウスタル酸は,経口投与によって,マウスに毒性(体の異常なふるえ等の後に死亡)を示し,ウスタル酸とその関連化合物は全てNA^+,K^+-ATPasaに阻害活性を示した。ホテイシメジからはアルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害物質として数種の新規脂肪酸の単離,構造決定に成功した。
ヘッジホッグ経路抑制によるエナメル上皮腫の新規治療法の探索

本研究ではエナメル上皮腫のHHシグナル経路阻害による増殖抑制とアポトーシス誘導により新たな治療法を開発することを目的としています。次にHHシグナル経路阻害薬がAM-1における増殖に与える影響についての検索を行いました。細胞増殖実験WSTアッセイおよびBrdU取り込み実験を行い、HHシグナル経路阻害薬により増殖抑制を確認しました。またHHシグナル経路阻害薬によるアポトーシス誘導能の検索では1)TUNEL法によるアポトーシス陽性細胞率の比較2)Annexin V陽性細胞率の比較を行い、アポトーシスに与える影響の観察において有意にアポトーシスを誘導することが確認されました。またアポトーシス関連遺伝子であるBcl-2、BAXについての検索では、HHシグナル経路阻害薬によりBcl-2の発現抑制とBAXの発現上昇を認め、細胞死が誘導されることが示唆されました。AM-1に加えてAM-3でも解析を進め、その結果、種々のHHシグナル阻害薬(Cyclopamine, GDC-0449 (vismodegib) : SMOinhibitors, GANT-61, JQ-1: GLI inhibitors.)により細胞増殖が抑制されるとともに、細胞死が誘導されることを確認しました。AM-1はBRAF遺伝子の変異を有していますが、HHシグナル阻害薬により腫瘍の増殖を抑制し、細胞死を誘導する作用が得られる可能性が示唆されたことは、本腫瘍の治療に当たり有用な結果であると思われます。HHシグナル経路阻害薬がAM-1における増殖に与える影響についての検索を行い、細胞増殖実験WSTアッセイおよびBrdU取り込み実験を行い、各HHシグナル経路阻害薬により増殖抑制を確認した。また各HHシグナル経路阻害薬によるアポトーシス誘導能の検索では1)TUNEL法によるアポトーシス陽性細胞率の比較2)Annexin V陽性細胞率の比較を行い、アポトーシスに与える影響を観察において有意にアポトーシスを誘導することが確認された。またアポトーシス関連遺伝子であるBcl-2、BAXについての検索では、HHシグナル経路阻害薬によりBcl-2の発現抑制とBAXの発現上昇を認め、細胞死が誘導されることが示唆された。エナメル上皮腫細胞株を用いたSHHシグナル経路遺伝子およびタンパクの発現を確認し、AM-1を用いた検索では各種HHシグナル経路阻害薬による効果の観察が予定通りに進んでいる。エナメル上皮腫は良性の歯原性腫瘍であるが局所的に顎骨に浸潤増殖し、しばしば再発するため、顎骨切除といった根治的な治療によりQOLを低下させる。それゆえ新規の治療法の開発が望まれている。その候補としてSonic hedgehog(SHH)シグナル経路の阻害薬に着目した。SHHは胎生期の細胞の分化や組織の形態形成に関与している。また、近年SHHシグナル経路の異常が基底細胞癌や髄芽腫などの悪性腫瘍の発生へ関与していることが明らかになった。申請者らはエナメル上皮腫においても同様にSHHシグナル経路が腫瘍の増殖に重要な役割を担っており、その阻害による増殖の抑制が可能であることを明らかにした。本研究ではHHシグナル経路阻害による増殖抑制とアポトーシス誘導により新たな治療法を開発することを目的とする。次にHHシグナル経路阻害薬がAM-1における増殖に与える影響についての検索を行い、細胞増殖実験WSTアッセイおよびBrdU取り込み実験を行い、HHシグナル経路阻害薬により増殖抑制を確認した。またHHシグナル経路阻害薬によるアポトーシス誘導能の検索では1)TUNEL法によるアポトーシス陽性細胞率の比較2)Annexin V陽性細胞率の比較を行い、アポトーシスに与える影響を観察において有意にアポトーシスを誘導することが確認された。HHシグナル阻害薬の種類を増やして、AMー1に加えてAMー3でも解析を進めている。エナメル上皮腫細胞株を用いたSHHシグナル経路遺伝子およびタンパクの発現を確認した。AM-1に加えてAMー3を用いた検索では各種HHシグナル経路阻害薬による効果の観察が予定通りに進んでいる。エナメル上皮腫は良性の歯原性腫瘍ですが局所的に顎骨に浸潤増殖し、しばしば再発するため、顎骨切除といった根治的な治療によりQOLを低下させます。それゆえ新規の治療法の開発が望まれています。本研究ではその候補としてSonic hedgehog(SHH)シグナル経路の阻害薬に着目しました。SHHは胎生期の細胞の分化や組織の形態形成に関与しています。また、近年SHHシグナル経路の異常が基底細胞癌や髄芽腫などの悪性腫瘍の発生へ関与していることが明らかになりました。申請者らはエナメル上皮腫においても同様にSHHシグナル経路が腫瘍の増殖に重要な役割を担っており、その阻害による増殖の抑制が可能であることを明らかにしてきました。本研究ではHHシグナル経路阻害による増殖抑制とアポトーシス誘導により新たな治療法を開発することを目的としています。

またアポトーシス関連遺伝子であるBcl-2、BAXについての検索では、HHシグナル経路阻害薬によりBcl-2の発現抑制とBAXの発現上昇を認め、細胞死が誘導されることが示唆されました。HHシグナル阻害薬の種類を増やして、AM-1に加えてAM-3でも解析を進めています。研究協力者である大学院生の帰国によりデータの解析がやや遅れています。また、追加実験および論文作成のための時間が予定よりも必要となっています。エナメル上皮腫細胞株AM-1, AM-3のBRAF、SHH関連遺伝子の変異の確認を追加実験として予定しています。本研究ではエナメル上皮腫のHHシグナル経路阻害による増殖抑制とアポトーシス誘導により新たな治療法を開発することを目的としています。次にHHシグナル経路阻害薬がAM-1における増殖に与える影響についての検索を行いました。細胞増殖実験WSTアッセイおよびBrdU取り込み実験を行い、HHシグナル経路阻害薬により増殖抑制を確認しました。またHHシグナル経路阻害薬によるアポトーシス誘導能の検索では1)TUNEL法によるアポトーシス陽性細胞率の比較2)Annexin V陽性細胞率の比較を行い、アポトーシスに与える影響の観察において有意にアポトーシスを誘導することが確認されました。AM-1に加えてAM-3でも解析を進め、その結果、種々のHHシグナル阻害薬(Cyclopamine, GDC-0449 (vismodegib) : SMOinhibitors, GANT-61, JQ-1: GLI inhibitors.)により細胞増殖が抑制されるとともに、細胞死が誘導されることを確認しました。AM-1はBRAF遺伝子の変異を有していますが、HHシグナル阻害薬により腫瘍の増殖を抑制し、細胞死を誘導する作用が得られる可能性が示唆されたことは、本腫瘍の治療に当たり有用な結果であると思われます。今後はエナメル上皮腫細胞株AM-3を用いた検索もすすめながら、学会での報告や誌上発表の準備を進めていく予定である。エナメル上皮腫細胞株AM-1, AM-3のBRAF、SHH関連遺伝子の変異の確認を追加実験として行い、論文作成を行う予定です。比較的順調に研究が順調であったため、消耗品の支出が予定より少なくなっている。当該年度の物品費が予定より少なく進行したため、次年度使用額が生じた。(理由)当該年度の物品費が予定より少なく進行したため、次年度使用額が生じました。(使用計画)研究の継続にあたり、物品費の支出および誌上発表の準備のための支出、学会発表を予定しています。
戦場の〈肉弾〉―日露戦争を中心とした近代日本における戦死表象の研究

本研究は、近代日本における戦死の表象について、〈肉弾〉という身体の破壊表現に注目し、視覚表象とメディア言説とを対象とした資料調査をもとに実証的に考察するものである。調査の成果から、英雄的かつ悲劇的な物語への共感とともに、戦死者たちが美しく描写された様相が明らかとなった。この共感の背景には、大量の犠牲をうむ戦場のリアリティをとらえんとする姿勢が見られる。この戦死表象は、2つの言説から生じている。熱狂される武士の戦の物語と、新しいエネルギーとテクノロジーとを操作し得る能力を裏付ける近代戦の描写である。血と肉に粉砕される兵士の身体は、この2つの言説の交点に、近代的国民の象徴として横たわっている。本研究は、近代日本における戦死の表象について、とくに〈肉弾〉という観点に注目し、視覚表現と言説との双方を対象とした資料調査をもとに、実証的に考察するものである。具体的には、〈肉弾〉という言葉の生まれた日露戦争期を中心に、戊辰戦争から太平洋戦争までの戦死描写と比較するとともに、当時描かれた歴史上および海外の戦争における戦死の表象を考察の範囲とした調査分析が研究の主要な方向性である。2013年度においては、前年度における一次資料の収集と分析を継続しつつ、対象の時代における戦死表象の調査とデータ採集、資料の考察を中心に研究をすすめた。また2月には九州地方において廣瀬・橘両軍神・知覧における特攻戦死者・長崎の戦争犠牲者にまつわる記念施設、アーカイブ、表象文化の実地調査を行った。その成果は、8月にHuman Bullets: Images of Wounded Soldiers in the Russo-Japanese Warという題目で、The 5th East Asia Conference on Slavic-Eurasian Studies(大阪経済法科大学)において口頭発表を行った。本発表では、次の点を明らかにした。「肉弾」という言葉が流行する土台となった、軍神広瀬の"壮烈“な戦死の物語、“屍山血河"と描写される戦場と講談的英雄譚、またその戦場にもっとも肉薄した存在としての『肉弾』作家・兵士桜井忠温について考察をすすめ、その血と肉と脳漿の飛散る戦場のイメージの展開を整理した。その砕け散る肉体は、命を賭し自らの肉体を刃ー砲弾にさらしてたたかう戦記物の英雄的として〈武士〉言説と、ひとを木っ端微塵に消滅させ得るエネルギーと科学の塊である近代兵器および近代戦の言説とが交わる点に横たわっている。現在以上の成果をもとに、その後の調査成果を盛り込み、論文を執筆している。2012年度においては、一次資料の収集と分析を重視し、応募者のこれまでの戦争についての視覚表象研究の蓄積をいかしながら、日露戦争期を中心とした調査とデータ採集、資料の考察に重点を置いて研究をすすめた。具体的には、新聞、雑誌、書籍等複製メディア、また桜井忠温著『肉弾』の多様な版における戦死表象を中心に、について、調査を行った。その成果は、7月に「肉弾ー日露戦争における戦死の表象」と題して、戦争のメモリー・スケープ研究会(北海道大学)において発表した。本研究の最終的な目標は、血と肉とを華々しく散らして死ぬ将兵の身体の表象が、従軍する軍人のセルフイメージのみならず、銃後の人々の精神的動員に果たした意義をとらえ、近代における戦争と表象の関係性を、死と身体をめぐる政治の美学的側面から探る点にある。こうした目標にむけて、戦時下の身体をめぐる思想を重視して考察を深めた。この考察は、13年度に口頭発表を行い、論文として報告する予定である。本研究の対象である、戦死表象の大衆的な資料の多くは散逸し、限られた復刻を除いては整備されておらず、存在そのものも等閑視されがちであるが現状である。そのため2012年度においては、先述の通り一次資料の収集と調査・分析を中心として研究を進めた。とくに、定期刊行物・書籍資料について、各地の図書館等を中心に調査を行ったほか、古書市場にて直接資料を収集した。

具体的には、主要新聞(『東京朝日新聞』『大阪毎日新聞』『読売新聞』『萬朝報』『都新聞』『東京日日新聞』『時事新報』『中央新聞』等)を閲覧し、戦死についての記事を採集するほか、戦争雑誌(『日清戦争実記』等実記、『日露戦争写真画報』『軍国画報』等画報雑誌)や、『太陽』『風俗画報』等一般誌、『文藝倶楽部』『新小説』等文芸誌、『絵画叢誌』『美術新報』『写真月報』等美術誌・写真誌等を参照した。また、桜井忠温『肉弾』の各版をはじめ、田山花袋『第二軍従征日記』、志賀重昴『大役小志』、森鴎外『うた日記』等、従軍した人々によるもの、各師団等の記録、『明治三十七八年戦役忠勇美譚』など戦死美談の書籍を概観した。また日清戦争において戦死した英雄である木口小平・白神源次郎については、郷里岡山へ出張し、その記念碑等の現状を調査することができた。こうした調査の成果は、7月に「肉弾ー日露戦争における戦死の表象」と題して、戦争のメモリー・スケープ研究会(北海道大学)において口頭発表を行った。7月に行った口頭発表と、その後の調査の進展から、日露戦争当時の〈肉弾〉表象を探ってゆくと、その描写に通底する言説として死力を尽してたたかう精神・姿勢を重んじる「武士の戦い」と、身体を容易に破砕し得る近代的軍隊運動およびエネルギーのあらわれである「近代兵器の戦い」が想定されることがはっきりとしてきた。〈肉弾〉は、それぞれの語りの交点として考えることが可能である。今年度は、こうした知見をもとに、より調査の範囲と分析の精度を増し、比較検討を行ってゆく。その際、(ア)近代における戦死表象、(イ)歴史上の戦死表象、(ウ)海外の戦死表象の3つの方向性に基づいて比較を行う。これは比較を目的とするため、悉皆調査を目指す物ではないが、基本的には12年度の日露戦争調査と同様に一次資料を重視して参照する。さらに、戦死した兵士である軍神・英霊を祀った神社、記念館等への調査を予定している。また、本研究の最終的な目標は、血と肉とを華々しく散らして死ぬ将兵の身体の表象が、従軍する軍人のセルフイメージのみならず、銃後の人々の精神的動員に果たした意義をとらえ、近代における戦争と表象の関係性を、死と身体をめぐる政治の美学的側面から探る点にある。こうした目標にむけて、戦時下の身体をめぐる思想を重視して考察を深め、13年度に口頭発表を行い、論文として報告する予定である。13年度は、引き続き作品・資料調査を続けながら、初年度の補遺を補うとともに、他の戦争の戦死表象を調査しつつ考察を進め、完成年度として成果をまとめる。研究費は、主に次の4点に配分される。(1)資料の複写・購入/さきに述べた(ア)近代、(イ)歴史上、(ウ)海外のそれぞれの戦死表象との比較を行うため、資料を複写・購入して収集する。(2)軍神・英霊関係施設・展示の現地調査/広瀬武夫ら、軍神・英霊を祀る神社や記念館等に赴き、記念碑や展示、図書資料等を調査する。現在のところ、広島県呉市の大和ミュージアムにおける「海戦記録画」展、京都霊山護国神社、九州の広瀬神社へ出張する予定である。そのほか、調査の進展や関連展覧会の開催に従い、適宜調査地を増やしてゆく。昨年度からの引き継いだ研究費については、主にこの目的に用いる。(3)考察を深めるのための二次文献/戦死表象分析のための視野を広げ、比較を通じて考察を深めてゆくために、積極的に二次文献の複写・購入を行う。(4)口頭発表、論文投稿のための費用/口頭発表・論文投稿のため、研究費を用いる。
高圧培養による深海底由来メタン生成菌を使ったメタン炭素同位体比の再評価

南海トラフの深海底表層堆積物を植種源とするバッチ集積培養から分離したMethanosarcina sp. NT-MS1株を圧力培養した。増殖は15 MPaで最も良好であり、分離源と同じ圧力(25 MPa)下でも、高い増殖能を有していることが確認された。生成されたメタンは、炭素同位体比(Δ^<13>C-CH_4)が-81-63‰の「同位体的に軽い」メタンであり、NT-MS1株は高井らにより報告されたMethanopyrus kandleri 116株のように「同位体的に重い」メタンを生成しなかった。深海底堆積物から生成される生物学的メタン生成メカニズムを解明する為のアプローチとして、我々は、深海底堆積物からメタン生成菌を培養し、その多様性および生理学的・遺伝学的特徴を捉えることが必要であると考えている。ただし、深海底堆積物から分離したメタン生成菌を高圧条件下、特に海底下のような低温(2-4°C)高圧条件で培養する際、増殖に長時間を要することが予想される。そこで、まずは大気圧下における生育可能温度,至適生育pH,増殖速度や基質利用性などを調べ、その増殖特性を把握しておく必要がある。また、これらの表現型の情報に加え、16S rRNA遺伝子およびmcrA遺伝子の塩基配列などの遺伝学的情報も、近縁微生物種との比較において重要になる。当該年度は、高圧培養に供試する深海底堆積物由来メタン生成アーキアのうち4菌株について、これらの基礎的なデータの収集を完了した。得られた知見を以下に要約する。16S rRNA遺伝子の塩基配列の情報から、これらのアーキアは、Methanosarcina属あるいはMethanobacterium属のメタン生成アーキアと遺伝学的に近縁であることが明らかになった。いずれの菌株も至適生育温度が37°Cであったが、深海底と同等の2-4°Cでメタン生成を伴う増殖が可能であった。また、圧力培養を行ったところ、分離源と同じ水圧下(南海トラフ:25Mpa,日本海溝:60Mpa)で増殖が可能であった。加えて、興味深い特徴として、いずれの菌株も海水の塩濃度の半分以下の塩濃度で最も生育が良好であった。この低塩濃度で生育できるという特徴は、南海トラフでは海底下深部から塩濃度が低い湧水の存在が知られていることを考えると理に適っていると考えられた。昨年度の研究で得られた分離菌株の基礎的なデータをもとに、最も増殖能力の高い南海トラフ深海底堆積物由来のMethanosarcina属の菌株を選び出し、異なる圧力条件下での増殖(圧力応答)に関するデータを収集した。水素およびメタノールをメタン生成基質として培養したところ、それぞれの基質で異なる圧力応答が示された。メタノールを基質として加圧培養すると、供試菌株の分離環境とほぼ同じ25MPaまでは常圧下よりも高い増殖能を示し、最も増殖が早かった15MPaにおける最大比増殖速度は、常圧下の2倍以上であった。一方、水素を基質として加圧培養した場合は、圧力の増加に伴い増殖が阻害された。この結果は、基質により圧力応答が異なることを顕著に示している。この原因については、現在、考察中である。

22年度の研究で得られた分離菌株の基礎的なデータをもとに、最も増殖能力の高い南海トラフ深海底堆積物由来のMethanosarcina属の菌株(NT-MS1株)を選び出し、水素を基質として加圧培養した際の異なる圧力条件下での増殖および生成されたメタンの炭素同位体比に関するデータを収集した。NT-MS1株を加圧により培養液中の溶在水素濃度が変化しない程度の水素濃度で培養すると、メタノールを基質として培養した場合と同様に15MPaにおいて最も生育が良好であった。また、一連の加圧培養で生成されたメタンは、一般的に生物由来と考えられているメタンと同様に、12Cの比率が高い“同位体的に軽いメタン"であることが明らかとなった。この結果は、高圧下で13Cの比率が高い“同位体的に重いメタン"を生成する好熱性メタン生成菌Methanopyrusで得られた結果とは異なっていた。昨年度までの研究で、分離菌株の基礎的なデータおよび圧力応答に関するデータを取得することができた。現在、メタン炭素同位体測定システムの確立にも成功しており、培養で生成したメタンの炭素同位体比を測定する体制は整っている。24年度が最終年度であるため、記入しない。昨年度は、南海トラフ海底底堆積物由来のMethanosarcina属メタン生成アーキアのみを主な対象として実験してきたが、今年度は基質利用特性の異なる日本海溝海底底堆積物由来のMethanobacterium属メタン生成アーキアも実験対象とする。研究の流れとしては、1)それぞれの菌株の圧力応答に関するデータを揃える、2)高圧培養において生成されたメタンの炭素および水素同位体比を網羅的に測定する、を予定している。得られたデータについては、国内もしくは国際学会にて発表後、学術論文として取りまとめる。
社会性発達とオキシトシン動態の関連性に関する追跡的研究

本研究では、社会性発達においてオキシトシンが及ぼす影響について明らかにする。乳幼児期および児童青年期の児童を対象に、行動指標、脳・内分泌指標を測定し、それらの関連性について検討した。その結果、乳幼児では加齢に伴い、「目」への注視率と唾液中オキシトシン濃度がともに低下することが明らかとなった。また児童青年期では、対人関係に困難を抱える非定型発達児は定型発達児に比べて、OXTRのDNAメチル化が亢進していること、またその程度は左前頭眼窩皮質の容積と関連していることが明らかとなった。以上の結果は、社会性の発達において、特定時期のオキシトシン動態が重要な役割を果たしていることを示唆している。本申請課題では、ヒト乳幼児期および思春期における社会性発達において、社会性ホルモンが及ぼす影響について明らかにするために、乳幼児期および思春期の児童を対象に、社会的行動指標、心理指標、内分泌指標のそれぞれが互いにどのように関連し、加齢とともにそれらがどう変化してゆくかという点を明らかにする。研究1では、乳幼児を対象に研究を行い、社会的刺激に対する視線計測、母子間相互作用の測定、ホルモンおよび遺伝子多型の測定、その他環境因子の測定を行い、各指標の因果関係について明らかにする。研究2では、思春期児童を対象に、上記、行動測定、内分泌測定に加え、脳イメージングを実施し、思春期における社会性発達の内分泌-脳-行動連関について明らかにする。研究3では、発達障害児を対象に、上記指標とASD傾向や愛着形成との関連性について横断的に検討する。当該年度において、まず研究1では、乳児を対象に視線計測による社会行動指標、内分泌指標である唾液中オキシトシン濃度と発達との関連性について検討した。その結果、唾液中OTは年齢とともに低下する傾向が確認され、また視線計測では、社会的情報に対する注視時間が年齢とともに低下する傾向が確認された。そこで、両者の関連性について検討したところ、顔刺激の目領域への注視率と唾液中オキシトシンの間に有意な関連性が認められた。次に、思春期児童および発達障害児を対象とした研究2および3では、発達障害傾向を有する児童および定型発達児童を対象に、表情推定課題従事中の脳機能計測内と内分泌指標との関連性について検討した。その結果、発達障害群では、現在の社会環境(安定・不安定)による影響が見られ、内分泌動態のパターンが異なっていた。不安定群では起床時コルチゾールの上昇が見られたのに対し、安定群では入眠前オキシトシンの上昇が観察された。現在までの進捗状況において、まず研究1では、65名の乳児を対象に視線計測による社会行動指標、内分泌指標である唾液中オキシトシン濃度と発達との関連性について検討した。これは、オキシトシン濃度が目領域への注視をコントロールしている可能性を示唆しており、発達に伴い両者は低下するということを示唆している。次に、思春期児童および発達障害児を対象とした研究2および3では、発達障害傾向を有する児童38名、定型発達児童26名を対象に、表情推定課題従事中の脳機能計測内と内分泌指標(コルチゾール・オキシトシン)との関連性について検討した。定型群と比較して、不安定群では起床時コルチゾールの上昇が見られたのに対し、安定群では入眠前オキシトシンの上昇が観察された。この結果は、不安定群では、現在の状況下における社会的ストレスが起床時コルチゾールの状況を招いている可能性を示唆しており、また安定群では、安定した社会的相互作用が入眠時オキシトシン濃度の上昇をもたらしている可能性が示唆される。オキシトシンとコルチゾールは互いにネガティブな影響を及ぼすことが知られていることから(Cardoso,2014)、安定群では入眠時のオキシトシン濃度の上昇が翌朝の起床時のコルチゾールの上昇を抑制している可能性も示唆される。研究3では、非定型発達児を対象に、上記指標と社会性や愛着形成との関連性について横断的に検討する。当該年度において、まず研究1では、前年度の乳児に引き続いて、幼児を対象に視線計測による社会行動指標、内分泌指標である唾液中オキシトシン濃度と発達との関連性について検討した。その結果、乳児期と同様に唾液中OTは年齢とともに低下する傾向が確認され、また視線計測では、社会的情報に対する注視時間が年齢とともに低下する傾向が確認された。

次に、思春期児童および非定型発達児を対象とした研究2および3では、定型発達児童および非定型発達児童を対象に、表情推定課題従事中の脳機能計測内と内分泌指標との関連性について検討した。その結果、非定型発達群では、唾液中オキシトシン濃度に比例して、社会性に関わる脳領域の一つである後部側頭溝(pSTS)の活動が低下することが示唆された。今後はサンプルは得ているものの未解析であるサンプル・データを追加して、得られた結果の妥当性について検証していく。現在までの進捗状況において、まず研究1では、前年度の乳児に引き続いて、84名の幼児を対象に視線計測による社会行動指標、内分泌指標である唾液中オキシトシン濃度と発達との関連性について検討した。前年度に得られた結果を合わせ、乳幼児期全般におけるオキシトシン濃度の発達、社会的情報に対する注視時間の発達、およびそれら両者の関連性について明らかにした。唾液中OTは年齢とともに低下する傾向が確認され、また視線計測では、社会的情報に対する注視時間が年齢とともに低下する傾向が確認された。また、両者の関連性について検討したところ、顔刺激の目領域への注視率と唾液中オキシトシンの間に有意な関連性が認められた。これは、オキシトシン濃度が目領域への注視をコントロールしている可能性を示唆しており、発達に伴い両者は低下するということを示唆している。さらに、オキシトシン濃度に対する遺伝的な個人差による影響を検討するために、オキシトシン受容体多型とオキシトシン濃度および視線パターンの発達との関連性についても検討した結果、多型の違いによりオキシトシン濃度が異なることが明らかとなり、それが2歳以降の視線パターンの違いに関連することが明らかとなった。以上の結果は、英語論文として成果をまとめた。次に、思春期児童および非定型発達児を対象とした研究2および3では、非定型発達児童38名、定型発達児童26名を対象に、表情推定課題従事中の脳機能計測内と内分泌指標との関連性について検討した。またオキシトシン受容体との関連では、DNAメチル化に群間差があることが確認され、発達環境の相違を反映しているマーカーである可能性を示唆するデータも得た。本申請課題では、ヒト乳幼児期および思春期における社会性発達において、社会性ホルモンがおよぼす影響について明らかにするために、乳幼児期および思春期の児童を対象に、社会的行動指標、心理指標、内分泌指標のそれぞれが互いにどのように関連し、加齢とともにそれらがどう変化してゆくかという点を明らかにすることであった。まず、乳幼児を対象とした研究では、社会的刺激に対する視線計測を行い、内分泌指標である唾液中オキシトシン(OT)濃度と発達との関連性について検討した。その結果、唾液中OTは加齢とともに低下する傾向が確認され、また視線では、社会的情報への注視時間も加齢とともに低下する傾向が確認された。また両者の関連性について検討したところ、顔刺激の目領域への注視率と唾液中OT濃度との間に有意な関連性が認められた。これは、OT濃度が目領域への注視を制御している可能性を示唆しており、その制御は加齢とともに低下することを示唆している。
中心体・一次シリアと細胞周期

増殖休止細胞において形成される一次シリアと呼ばれる細胞内小器官の形成メカニズム及び、一次シリアによる細胞周期制御機構の解明を進めてきた。本研究により、タンパク質分解の主要経路であるユビキチン・プロテアソーム系が一次シリアの形成に必要不可欠であることを示した。さらに、上皮成長因子受容体EGFRによるシグナル伝達経路が、一次シリアの抑制因子のタンパク質分解を制御することを明らかにした。本研究成果により、一次シリアの形成と細胞周期が連関する分子メカニズムが判明した。本研究課題では、我々が同定した一次シリア制御因子であるトリコプレイン及びその類縁タンパク質群の網羅的解析を通して、中心体・一次シリアによる細胞周期チェックポイント制御機構の解明を目的としている。我々は、プロテインアレイとsiRNA法を組み合わせた網羅的なE3リガーゼスクリーニングにより、トリコプレインをポリユビキチン化するE3リガーゼとしてKCTD17を同定した。さらに、KCTD17はCul3-RING型E3リガーゼの基質認識部位として機能することを、試験管内(in vitro)再構成系および培養細胞系の両方の実験で証明することに成功した。KCTD17を介したトリコプレインのポリユビキチン化は、プロテアソーム依存的な分解を引き起こすこと、さらに、この一連のシグナルが一次シリアの形成に必要不可欠であることも明らかにした。本研究成果は、一次シリアの形成過程においてユピキチン・プロテアソーム系が必須であることを証明した初めての研究であり、特に重要性が高いといえる。また一次シリアの形成異常による疾患・発生異常の原因として、ユビキチン・プロテアソーム系が関与している可能性を示唆する。現在、この生理的意義をより明らかにするため、KCTD17ノックアウトマウスの作製を行っている。トリコプレイン類縁タンパク質群の機能的siRNAスクリーニングから、複数のシリア制御因子を同定することにも成功しており、その分子メカニズムの解析を進めている。本研究課題では、中心体・一次シリアによる細胞周期チェックポイント制御機構の解明に向けて、トリコプレイン及び、その類縁タンパク質群からアプローチしている。昨年度、トリコプレインのユビキチン化酵素(E3リガーゼ)の候補としてKCTD17を同定した。当該年度では、トリコプレインとKCTD17の関係を詳細に解析した結果、KCTD17はCul3及びRbx1と複合体(CRL3-KCTD17複合体)を形成して、トリコプレインをポリユビキチン化することをin-vitro及びin-vivoで証明した。さらに、CRL3-KCTD17が機能欠失した細胞では、トリコプレインの分解が起こらないため一次シリアの形成が著しく抑制されることも示した。本研究により、一次シリアの制御にユビキチン・プロテアソーム系が必要不可欠であることが明らかとなった。一方、昨年度、トリコプレインの類縁タンパク質群より一次シリア形成抑制因子の候補としてNdel1を同定した。当該年度ではまず一次シリア形成時のNdel1の挙動を調べた。Ndel1は血清除去後、一次シリアの形成過程で一過性に総タンパク量及び中心体局在が減少した。そこで、Ndel1を過剰発現したところ、血清飢餓条件下で一次シリア形成が抑制された。この際、トリコプレインの分解も抑制されていた。また、Ndel1のノックダウンによる一次シリア形成はKCTD17のノックダウンやトリコプレインの過剰発現によってキャンセルされたことから、Ndel1はトリコプレインの上流で一次シリア形成を抑制することが示唆された。本研究課題では、シリア・中心体系を経由した細胞内外からの情報フローが、細胞周期チェックポイントをどのようにに制御しているか、その分子機構を明らかにすることを主目的としている。これまでの研究で、一次シリアの形成抑制因子としてトリコプレイン(Trichoplein)を同定し、一次繊毛の形成には、トリコプレインのタンパク質分解が必要不可欠であることを示してきた。さらに、その分子機構として、トリコプレインはユビキチン化E3リガーゼであるCRL3-KCTD17によってポリユビキチン化され、プロテアソーム依存的に分解されることを報告明してきた。我々は今回、新たな一次シリア抑制因子としてNdel1(Nuclear distribution element-like 1)を同定し、Ndel1がCRL3-KCTD17によるトリコプレインの分解を阻害することで一次シリアを抑制する分子機構をを見出した。Ndel1低形質マウスでは一次シリアの異常による病態(肥満、腎異常)を示しており、Ndel1が生理的なシリア制御にも必須であることを証明した。さらに我々は、増殖細胞に一次シリアが形成されるとG0期停止を引き起こすことを明らかにしてきた。そこで、一次シリアから発信される増殖停止シグナルについて解析したところ、Cdk阻害因子であるp27 Kip1が一次シリアの形成依存的にタンパク質レベルで亢進することを見出し報告した。これまでの研究で、増殖細胞で一次シリアの形成を抑制するメカニズムとして、中心小体におけるトリコプレインによるAurora Aキナーゼ活性化を発見した。さらに、増殖停止に伴う一次シリアの形成メカニズムとして、ユビキチン・プロテアソーム系(CRL3-KCTD17ユビキチンE3リガーゼ)によるトリコプレインの分解を明らかにし、さらに上流で働く制御因子としてNdel1が発見され、一次シリアの形成を制御する分子基盤が着々と明らかになっている。現在、さらに脱ユビキチン化酵素による一次シリアの制御機構にアプローチしているが、既にトリコプレインの脱ユビキチン化酵素を同定することに成功している。

この脱ユビキチン化酵素は、増殖シグナル依存のリン酸化によって活性制御されることも見出しており、さらなる解析により一次シリアと細胞周期チェックポイントの分子基盤の解明につながると期待できる。また、一次シリアの形成がどのように細胞周期チェックポイント(G0期停止)を誘導するかの問題についても、Cdk阻害因子のp27 Kip1の発現レベル亢進を見出しており、今後の解析による進展が期待できる。以上の理由より、本研究課題はおおむね順調に進展していると評価する。トリコプレインが、血清飢餓下のRPE1/hTERT細胞において、ユビキチンープロテアソーム系により分解されることを見出した。また、細胞をプロテアソーム阻害剤で処理すると、血清飢餓後の一次シリア形成が妨げられた。これらの結果は、ユビキチンープロテアソーム系は、トリコプレインの分解を介してシリア形成に関与していることを示唆している。さらに、E3リガーゼを約1000種類搭載したE3リガーゼプロテインマイクロアレイを用いて、トリコプレインに対するE3リガーゼを結合特異性を基に探索し、KCTD17を含むいくつかのE3リガーゼを同定した。また、我々が命名した新規のドメイン(Trichohyalin/Plectin Homology Domain,TPHD)をもつTPHD蛋白質群やCCDC蛋白質群を培養細胞で強制発現してそれらの中心体局在を確認した。さらに、これらの蛋白質のsiRNAiによるノックダウン実験を行い、一次シリアの形成を詳細に観察した。一方、我々は、Plk1のSer99が、PI3K-Aktキナーゼカスケードによってリン酸化されること、そして、このリン酸化を阻害すると、染色体の整列/分離が強く障害されることを見出した。さらに、siRNAによる阻害実験から、Plk1を強くノックダウンすると全てのPlk1機能が障害されるが、不完全にノックダウンした場合には染色体の整列/分離が障害されることを明らかにした。すなわち、染色体の整列/分離には、より高いPlk1活性が必要であると示唆される。以上の結果より、Plk1はPolo-boxドメインによる基質選別だけでなく、リン酸化によるキナーゼ活性の制御によってその多彩な機能を調節していると考えられる。トリコプレインが一次シリア形成を制御するメカニズムとして、新たにユビキチンープロテアソーム系の関与を見出した。また、TPHD類縁蛋白質群の機能解析も順調に進展している。中心体は、細胞分裂期において染色体の分離・分配を制御し、静止期においては一次シリアを構成する基底小体として働くことが知られている。多細胞生物において、細胞は、内部環境(中心体など)から発生する情報と一次シリアや細胞間接着装置などを介して得た外部環境からの情報を統合して、その細胞周期チェックポイントを制御し、秩序だった増殖と分化を行い、巧みに組織や器官を形成・維持していると考えられる。
形態形成におけるヘッジホグシグナル伝達経路の解析

形態形成において重要な役割を果たすヘッジホグシグナル伝達経路において、動物細胞Gli遺伝子ファミリーの3つの遺伝子産物(GLI13)は重要な役割を果たしている。しかし、各々の機能的差異については全く分かっていなかった。私達は転写仲介因子CBPが転写因子GL13に結合し、そのコアクティベーターとして機能すること、GLI3がGli1プロモーターに結合し活性化することを明らかにした。また、GLI3がメタルフィンガー領域の後ろ側でプロセッシングを受け、N端側領域を含むリプレッサーが産生されることを明らかにした。このプロセッシングはPKAシグナルによって促進され、逆にShhシグナルによって抑制されることを示した。これらの結果から、ショウジョウバエのヘッジホグシグナル伝達経路において機能する転写因子Ciと同様の機能を、GLI3が持つことを明らかにした。ヒトのGLI3遺伝子に変異が生じると顔面・手足の奇形を伴うGreig syndromeを発症する。また手足の奇形を持つマウスXt(extra toes)変異体はGLI3遺伝子に変異を持つ。転写囚子CiおよびGLIは形態形成において重要な役割を果たすヘッジホグ(hedgehog)シグナル伝達経路上で機能し、BMP/dppなどの標的遺伝子の転写を制御している。しかし、ヘッジホグシグナルがどのようなメカニズムで転写囚子CiやGLIの活性を制御しているのかについては不明である。本研究では、ヘッジホグシグナルがどのようなメカニズムで転写囚子CiやGLlの活性を制御しているのかについて明らかにするため、転写囚子Ci/GLIおよびコアクティベ一ターCBPを介した転写制御を解析した。GLI遺伝子ファミリーは13の3つのメンバーを有している。私達はCBPがGLI3に結合してGLI3による転写活性の際にコアクティベーターとして機能することを明らかにした。一方、CBPはGLI1には結合しなかった。そして、GLI3のCBP結合ドメインを介した転写活性化能はヘッジホグからのシグナルによって、促進されることが示された。一方、GLI1の転写活性化能はヘッジホグからのシグナルによって影響されなかった。そして、GLI3は直接Gli1遺伝子のプロモーター領域に結合して、ヘッジホグからのシグナルに応じてGli1遺伝子の転写を誘導することが分かった。このように、ヘッジホグシグナル伝達系において、GLI3はシグナル伝達に関与し、一方Gli1はその標的遺伝子であることが示され、GLI遺伝子ファミリーメンバーの間で機能的分担があることが初めて示された。
心肺同時移植に関する基礎的研究

ニホンザルを用いた心肺同時移植に関して、(1)同種同所心肺移植、(2)自家同所心肺移植、(3)同種異所心移植について実験的検討を行った。(1)については、移植後8例に3日-33日の生存を得た。これから移植後の呼吸パタ-ンが、正常と異なり速い吸気、呼気の後に無呼吸が現れる事を見出した。移植後胸部X線写真上の変化と肺の病理組織学的変化の比較検討では、術後5-8日後に一旦ピ-クに達するX線上の肺野中枢側の浸潤陰影、および間質陰影の増強が、組織学的には細胞浸潤を伴わない、肺胞の浮腫ならびに血管周囲浮腫にても起り得ることが示された。心筋と肺組織の拒絶のタイミングの不一致性について、1例で中等度の心筋拒絶が認められる一方、肺組織に拒絶所見が欠如した例、および1例で肺動脈周囲に中等度拒絶が認められる一方、心筋に拒絶所見を認めない1例を見出した。ドナ-気管と肺組織の拒絶の関係については、気管粘膜の変化は2例扁平上皮化生を示した以外は軽微であったが、粘膜下の単核球浸潤が全例に認めらられ、肺での拒絶が中-高度のものは気管粘膜下浸潤が高度な傾向にあった。(2)については、移植後7例に2-5日の生存を得た。移植後胸部X線写真上の変化と肺の病理組織学的変化を比較した。術後次第に気管支、肺動脈周囲にcuffingが出現したが、病理学的には気管・気管支周囲ならびに肺動脈周囲に術後早期から中-高度の浮腫を認めた。しかし、Allograftと比較すると同部位への単核球浸潤は著明ではなかった。肺胞壁への浸潤もAllograftに比べると軽度であった。(3)については心筋逸脱酵素のミオシン軽鎖の血漿中濃度を測定することにより、ミオシン軽鎖の心筋拒絶の早期モニタ-としての有用性を検討した。同所性心肺移植の呼吸運動に及ぼす影響をヒヒの心肺除神経モデルならびに,ニホンザルの同種同所心肺移植において検討した.ヒヒの除神経は脳骨正中切開下に行ない,心肺を胸郭ならびに後縦隔より気菅,大動脈,上下大静脈・奇静脈を除き完全に剥離した.術前・術後において動脈血ガス分析を行なうとともに,呼吸運動を日本電気三栄製胸囲型呼吸ピックアっプを用いて記録した.術前の呼吸数は28回/分吸気相と呼気相の間の喬化もなめらかであった.術後呼吸はリズミカルではあるが深くゆっくり(23回/分)となり,呼吸気組において呼吸が停止するというパターンに変化した.術前の血液ガスは, pH7.36 _1CO_249.1mmHgPO_275.8mmHg(room air)であった.術後にはpH7.23,PCO_256.9mmHgPC_2262.3mmHg(FiOe=0.5)となった.72日後に呼吸は, 20回/分とさらに遅くなったが,呼吸パターンは術当日と同様であり,動脈血はpH7.35PCO_259.4mmHg PO_279.1mmHg(room air)であった.心肺同時移植を行なって, 533日間生存したニホンザルにおいて,ヒヒにおけるのと同様の検索を行なった.検索は術後14日目まで行なった.

動脈血の炭酸ガス分圧は,術前後で有意差がなく換気能力は術後保たれていたと思われたが,呼吸数はやや減少した,呼吸パターンはヒヒ同様に変化した.呼吸サイクルに占める,呼吸時間・吸気時間の比率は術後著明に減少し,有意な差を認めた.この変化は,従来犬の点験で報告されてきた変化と類似するが,犬とは異なり,日本猿においては,生存に関して影響がなく,呼吸・(換気)運動障害による死亡は認められなかった.同所性自己心肺移植の移植心肺に与える影響を日本猿による実験学において検討した。体外循環下に体重9.412.6Kgの雄の日本猿を用いて、自己心肺移植実験を施行した。体外循環時間は103141分、大動脈遮断及び虚血保存時間は6792分であった。実験は10回行ない、うち7頭が25日生存した。7頭の死因は屠殺2頭、気胸2頭、乳胸による無気肺1頭、reimplantation resporseによると思われる肺水腫2頭であった。術後の胸部X線写真上の変化ならびに死亡時の肺の病理組織学的変化を、これらの猿について検討した。胸部X線写真上の変化としては、術後上縦隔の拡大、少量の胸水所蔵、少量の空気の胸腔内残存は全例に認められた。術翌日以降には、中等大の気管支・肺動脈周囲にcaffingが出現し、進行した。心臓および肺内部を含む、いわゆる中心陰影の増大も時間の経過とともに認められたが、心胸郭地に換算して75%以上の猿は認められなかった。末植の肺野も、暗くなる傾向を認めたが、含気の消失するような強い浸潤は認めなかった。これらの変化は最長5日間の経過中は、増悪する傾向を認めた。病理組織学的な検索の結果では、気管・気管支ならびに肺動静脈の周囲に、術後早期から中等度高度の浮腫を認めた。しかし、気管支または肺動静脈の周囲に単核球の浸潤は著名ではなかった。肺野の変化も一般に、同種心肺移植後の肺の変化よりも軽度であり、さらに単核球の浸潤は認めなかった。肺胞の浮腫、II型上皮細胞の腫大等の所見はこれを認めた。対象と方法:移植心の拒絶反応における血漿中ミオシン軽鎖濃度の診断学的意義について検討を加えた。方法としては、ニホンザル♂、レシピエント体重5.5kg-11.6kg平均9.2kgについて、腹腔内異所性心移植を計6回施工した。術式は、ドナ-心の大動脈とレシピエントの腹部大動脈、ドナ-心の肺動脈とレシピエントの下大動脈を吻合する方法を用いた。移植後免疫抑制剤は投与せず、心拍動停止をもって拒絶した。拒絶までの日数は8,9,11,12,20,27日であった。心拍動停止まで経時的に採血を施行し、血中のミオシン軽鎖をモノクロ-ナル抗体を用いた、radioimmunoassay法により定量した。結果、ミオシン軽鎖の値は移植後5日以内に一過性の最大値を示した後に低下し、その後移植心の拒絶に伴い、再度上昇を示した。すなわち移植前のミオシン軽鎖値は1.6±3.1ng/ml(n=6)、移植後5日以内の最高値は322.2±11.3,(n=3)6日以後の最低値は3.4±3.4,心拍動停止時には19.8±12.9(n=6)であった。拒絶による心拍動停止時の値は移植前の値および6日以後の最低値に比べて有意の上昇を認めた。考察:心・心肺移植後の心筋拒絶については、臨床的には心内膜生検が最も重要で信頼がおけるが、患者に対する侵襲、負担を考慮すると簡便かつ鋭敏な検査法の開発が期待されている。ミオシン軽鎖は本来壊死心筋から流出するため、心筋梗塞の診断に有用とされていたが、今回の研究では、拒絶に伴いミオシン軽鎖値が再上昇する事が示された。これは心筋拒絶にともなう心筋細胞の壊死に平行して認められる現象と考えられた。ミオシン軽鎖値は心拒絶の完成に先立ち上昇する傾向にあるため、拒絶の早期診断に有用である可能性がある。