hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
社会ネットワークを考慮した、ゲームの数理モデリングと協力行動の解析

ネットワーク上の進化ダイナミクスについて,フラクタル的なネットワーク上の囚人のジレンマ,方向のあるネットワーク上の適応度が定数である場合の進化ダイナミクス,適応度が定数かつ各状態において等しい場合のダイナミクスなどの解析を行った.その結果,ネットワーク上の進化ダイナミクスの様々な側面が明らかになった.協力行動の解析については,ネットワークの場合のみならず,学習のある直接互恵性や平均場相互作用の場合の間接互恵性などについても解析を行った.その結果,社会ネットワークと進化ダイナミクスの様々な接点が総合的に明らかにされた.ネットワーク上の進化ダイナミクスについて,フラクタル的なネットワーク上の囚人のジレンマ,方向のあるネットワーク上の適応度が定数である場合の進化ダイナミクス,適応度が定数かつ各状態において等しい場合のダイナミクスなどの解析を行った.その結果,ネットワーク上の進化ダイナミクスの様々な側面が明らかになった.協力行動の解析については,ネットワークの場合のみならず,学習のある直接互恵性や平均場相互作用の場合の間接互恵性などについても解析を行った.その結果,社会ネットワークと進化ダイナミクスの様々な接点が総合的に明らかにされた.本年度は、ネットワークの形、参加コストの有無、個体の行動力の差などに加えて、得られた利得に基づいて個体がどの他の個体の行動様式を真似するかという更新ルールが、ゲームのダイナミクスに大きな影響を及ぼすことを明らかにした。この更新ルールによる差は次数が一様なネットワークでも見られることが知られている。また、現実世界によく見られるような次数が非一様なネットワーク(例:スケールフリー・ネットワーク)において、その傾向はより顕著であるという予備的な数値計算結果を得た。上記と平行して、ゲームの利得行列が非常に単純でジレンマがない場合についてのネットワーク上の集団ダイナミクスを詳しく調べた。具体的には、ダイグラフ(枝に方向がついているグラフ)上のダイナミクスを解析した。各頂点(個人)vは、AまたはBの状態をとる。Vは、自分の上流にいる反対の状態(意見、戦略などと見なせる)を持つの頂点が多いと、自分の状態を変更しやすい。固定確率とは、最終的にネットワーク全体が状態Aになる確率である。方向無しのネットワークでは、あるvのみがAである状況から出発する固定確率は、vの次数で書かれる。しかし、ダイグラフでは、vの次数だけでなくネットワークの大域構造が固定確率に大きく影響することを示した。このことを状態AとBに優劣差がない場合については一般的に示した。状態AとBに優劣差があってよりゲーム的状況に近い場合については、数値計算と単純なグラフの解析を行った。また、ネットワークの生成モデルの数学的解析と、ネットワーク上の興奮系ダイナミクスの解析も多少行った。これらは、ネットワーク上のゲームダイナミクスを構築・理解するための補助的成果、と位置づけられる。ネットワーク上でゲームなどの相互作用を行っているエージェントの振るまいや集団挙動を記述するために,どのプレーヤーが重要な役割を持つことを同定することは重要である.重要性の定義により,一般に中心性の問題と呼ばれる.本年度は,特に枝に方向があるネットワークにおいて,頂点の中心性を決める手法を開発し,様々なネットワークに適用した.枝に方向がある場合,枝の根側のプレーヤーが枝の先側のプレーヤーを制御ないし支配していると見なすことができる.このとき,より強いプレーヤーを支配するプレーヤーは高い中心性を持つ.グーグルの検索エンジンに使われているページランクもそのような性質をもつ中心性指標であるが,本研究では,意見形成,集団同期,侵入等のダイナミクスにおける頂点の強さを解析的に定量化することによって,そのような中心性を考案した.ネットワーク上のダイナミクスによって意味づけられる中心性であるという意味で,アドホックな定義による中心性よりも強い基盤をもつ.次に,開発した中心性指標を効率よく,あるいは,解析的に見通しよく計算する算法を整備した.具体的には,反復法や,行列木定理などを応用することによって,提案した中心性指標を効率よく計算できることを定式化した.また,ネットワークがコミュニティ構造と言われるようなグループ構造をもつときについて,中心性を効率よく近似する手法を開発した.そして,その結果をいくつかの実データに適用して,その有効性を確かめた,特に,電子メールの送受信によって定義される人間関係ネットワークに指標を適用し,有効な結果を得た.これまで関わったことのない相手と取引を行うとき,相手の評判が分かれば,非協力者に搾取されにくい.評判による間接互恵性は,新しい相手と出会う機会の多い社会(e.g.インターネット上の商取引など)における協力行動を説明することができる.特定の評判の割り当てルールのもとで,評判が集団全体に十分かつ正確に行き渡る場合に,相手の評判が良いか悪いかを区別して協力する戦略が進化ゲームにおいて安定であることが知られていた.

しかし,現実の社会では,集団内に評判が完全に伝わらず,相手の評判が分からないような不確実性が存在し得る,このような不確実性がある場合に,安定して集団の協力行動を支えるような評判の割り当てルールを理論的かつ網羅的に調べ,どのようなルールが協力行動を安定にするかを明らかにした,2つの状態をもつ投票者モデルにおいて,各個人がどちらかの状態を選考しうる場合について,その数理モデルを提案し,平均場近似と数値計算によってモデルを解析した.少数の個人が片方の状態を選好すれば,残りの多数の個人が逆の状態を選好しても,少数の個人の方の意見に全体が行き着きやすいこと,そのダイナミクスはパラメータ領域について頑健に起こることなどを明らかにした.人間は,進化ゲームが仮定するように得点の高い他者の真似を行うだけでなく,自分の過去の行動結果に基づいた学習を行うことが示唆されている.この要素は,ネットワーク上のゲームをモデル化するときにも重要となりうる.一方,学習下では協力行動が出現しにくいことがいくつかの異なる学習を用いた先行研究によって知られている.本研究では,2人ゲームの場合について,ある学習モデルを提案,数値解析した.相互協力が起こるパラメータ領域を数値的に明らかにし,多くの場合に相互協力がゲームの繰り返しを経るうちに達成されることを示した.
人の移動をどう「管理」するか-東アジアにおける非伝統的安全保障の事例研究

冷戦終結後、とりわけ9.11アメリカ同時テロ以降、国境を越えて移動する人やモノ、カネ、情報を対象にした非伝統的安全保障が問題となっている。アジアにおいてもジャマー・イスラミーアや蛇頭、SARSや鳥インフルエンザにいかに対処するのかが大きな課題である。しかしこの非伝統的安全保障の問題は現代に特有なものではなく、1920年代から30年代にアジアの地域秩序を形成していたイギリスや日本にとっても重要な問題であった。本研究は戦間期に上海を中心にアジア各地に張り巡らされていた国際共産主義運動のネットワークを、イギリスを中心とした列強がいかに取り締まろうとしたのかを、旅券管理制度と政治警察の活動、ならびに列強間の情報交換に焦点を当てて明らかにすることを目的とした。本年度は、ワシントンDC、ならびにオーストラリアのキャンベラ、シンガポールで資料調査を行った。ワシントンDCでは国立公文書記録管理局で主に上海工部局警察資料とCIA文書の調査を行った。加えて議会図書館でフィリピン関連史料に関する予備調査も実施した。キャンベラでは国立公文書館で主にオーストラリア外務省、内務省関連資料の予備的調査を行った。今回の調査でオーストラリアが戦間期の共産主義運動に関連する資料をかなり持っていることが判明したことは収穫であった。シンガポールではシンガポール国立大学図書館所蔵の英領マラヤ関連史料の調査を行った。コレラの調査の成果としては、2007年12月にバンコクで開催された国際ワークショップの席上で口頭発表をしたほか、現在、単著としてまとめる準備を行っている。また、今年度からオックスフォード大学の研究プロジェクト"International Identification"のメンバーとして、本研究で得られた成果を英語で広く発信していく予定である。本研究は戦間期に上海を中心にアジア各地に張り巡らされていた国際共産主義運動のネットワークを、イギリスを中心とした列強がいかに取り締まろうとしたのかを、旅券管理制度と政治警察の活動、ならびに列強間の情報交換に焦点を当てて明らかにするものである。本年度はこうした目的を踏まえ、ロンドン、シンガポール、東京で調査を行った。ロンドンでは公文書館所蔵のイギリス外務省、植民省、情報警察関連の資料の調査を行った。シンガポールではシンガポール国立大学図書館で、イギリス海峡植民地関連資料の調査を行うと同時に、Asian Research Instituteのスタッフと研究に関する意見交換を実施した。最後に東京では外交史料館で所蔵資料の予備調査を行った。本年度に公表した業績としては、『国際政治』に「ヌーラン事件-戦間期アジアにおける国際共産主義運動とイギリス帝国治安維持システム-」と題する論文が掲載された。また、調査で収集した資料の分析を通じて、イギリス帝国内での旅券管理制度の導入に関する考察を行った。
修飾核酸の分子動力学計算のための基盤構築

本研究課題の目的は、分子動力学シミュレーションで修飾入り核酸のシミュレーションを行うために必要となる、力場パラメータと呼ばれる値を決定することにある。2017年度までの研究では力場パラメータ作成を自動化するためのパイプラインを作成し、イノシン・N6-メチルアデニンと呼ばれる修飾入り核酸の力場パラメータの作成と検証、ならびにバイオインフォマティクス領域への応用を行った。2018年度ではこれまでの研究で見つかったいくつかの問題を修正し、パラメータの再決定と応用研究の展開を行った。(1)これまでに作成したパイプラインではRNA塩基の糖結合部分の電荷が若干強く出る問題があった。この問題に対策を取り、電荷の決定プロセスを修正した。(2)イノシンの力場パラメータを用いて、実験的に得られた二量体形成に伴う自由エネルギー差を再現出来るかの検証を行った。昨年度まではエネルギー差の再現に問題があることがわかっていたが、計算上の種々の問題に対し一つ一つ対策を取ったことで、実験値を非常に正確に再現できることが明らかとなった。本研究結果については論文を投稿した(プレプリントbioRxiv: 10.1101/454124 )が、後に進捗状況に述べる理由により不採録となったため再編し再投稿の予定である。(3)本研究計画では自由エネルギー計算を用いた検証を修飾核酸用パラメータ開発の柱の一つとしている。自由エネルギー計算を加速する手法として、2017年度までにREST2法の実装と検証を行ったが、本年度はこれをさらに副次的に展開させた。より一般的な変異に対して利用可なようにツールを整備したことで、核酸の一塩基変異に限らずタンパク質の一残基変異などより一般的な変異に対し自由エネルギー差の計算が可能になった。下記の2つの問題が起きたことから研究計画に遅延が生じた。1.計算に使用していたソフトウェアであるGaussianの新版のバグにより、これまで可能であった計算のいくつかが実行不可能となり、当該機能を自分で再作成する必要が生じたこと2.イノシンの結合安定性を自由エネルギー計算により予測する論文を投稿したが、投稿のタイミングで全く別グループから出版された論文と内容の一部が重なったため、論文内容を大きく修正して再投稿せざるを得なくなったこと2019年度では2018年度までの結果の論文としての出版を目指す。また、パラメータの計算コミュニティへの浸透と、ツールの公開を目指して研究活動を推進する。本研究課題の目的は、分子動力学シミュレーションで修飾入り核酸をシミュレーションするため、力場パラメータと呼ばれる値を決定することにある。リボ核酸は生体内で多くの種類の修飾が入った状態で機能することが知られており、本研究課題ではこれを古典分子動力学でシミュレーションするため、パラメータを決定する。2016年度はイノシン(I)ならびにN6-メチルアデノシン(m6A)と呼ばれる修飾核酸塩基について、分子動力学シミュレーションのための力場パラメータの作成を行った。量子化学計算によって計算されたエネルギーの値を再現するように、修飾核酸塩基の各原子の電荷ならびに核酸-糖の間の結合まわりの二面角の回転に関わるパラメータを決定した。またこの力場決定プロセスを繰り返し行うことに備え、修飾核酸の構造情報を与えると量子化学計算を行い、AMBER分子動力学パッケージ用の力場ファイルを出力する、半自動化されたパイプラインを作成した。2016年3月末時点で、これら作成した力場を使いシミュレーションを行った場合、シミュレーション結果が実験結果と一致するかを検証している。これは、I / m6Aを含む核酸についてその実験的に知られている構造が正しくシミュレーションで再現されるか、また結合定数の実測値と、同じ塩基配列をシミュレーションし自由エネルギー計算を行った場合の結合定数が一致するか、のそれぞれを検証するものである。調書での当初計画では初年度に2塩基のパラメータ決定と検証を行う予定であった。しかし予算の削減により、利用可能な計算機の台数が半減したため、交付申請書にて計画を修正し、2016年度はイノシンのみのパラメータ決定を行うことを計画していた。2016年度中にN6-メチルアデノシンの重要性が増したため、計画を変更し2塩基のパラメータ決定を先に行い、検証を後でまとめて行うこととなった。多少の変更はあるものの、交付時の修正計画からは概ね順調に進捗している。2016年度までは力場パラメータ作成を自動化するためのパイプラインを作成し、多様な修飾塩基に対してパラメータ作成を自動で行うことが可能になった。これを用い、イノシン・N6-メチルアデニンと呼ばれる修飾入り核酸の力場パラメータの作成を行った。2017年度はこれを引き継ぎ、(1)イノシン力場パラメータの検証(2)検証計算のための技術開発を行った。また、本研究の応用方面への発展として、(3)修飾核酸シミュレーションとバイオインフォマティクス的解析との融合手法の開発を行った。(1) 2016年度に開発したイノシンの力場パラメータを用い、実験的に得られた二量体形成に伴う自由エネルギー差を再現出来るかの検証を行った。検証の結果、一部の配列で計算が非常に不安定となり、検証自体が困難であることが明らかになった。特に末端に存在するイノシン塩基の構造が不安定であり、実験的なエネルギーの再現を難しくしている事が分かったため、検証計算のための新規計算手法の開発が必要であることが明らかになった。(2)上記の検証計算の手法

開発のため、分子動力学シミュレーションプログラムであるGROMACSに機能を追加し、(2a)自由エネルギー計算を加速する技法としてREST2と呼ばれる手法を実装し、(2b)分子動力学シミュレーション自体を加速するための零多重極子和法と呼ばれる手法を開発した。(3)修飾入り核酸塩基パラメータを用いたシミュレーションをバイオインフォマティクス解析と組み合わせる手法の開発と検証を行った。シミュレーションを併用する核酸二次構造予測の結果は実用的に充分な正確さを持ち、実験の回数を劇的に減らすことが可能である事が明らかになった。当初課題の目的は、修飾入り核酸塩基のパラメータを作成・検証し公開することであるが、厳密な検証を行うには当初想定していた以上の計算と、手法そのもの開発が必要である事が明らかになった。修飾入り核酸塩基パラメータを相次いで検証することが難しくなったため、2017年度はこれを打開すべく、自由エネルギー計算を高速・正確に行うための手法ならびにプログラムを開発した。このため、当初目標としていた「2017年度までに3修飾塩基のパラメータ決定と検証を行う」という目標からは若干の遅れが生じている状況である。本研究課題の目的は、分子動力学シミュレーションで修飾入り核酸のシミュレーションを行うために必要となる、力場パラメータと呼ばれる値を決定することにある。2017年度までの研究では力場パラメータ作成を自動化するためのパイプラインを作成し、イノシン・N6-メチルアデニンと呼ばれる修飾入り核酸の力場パラメータの作成と検証、ならびにバイオインフォマティクス領域への応用を行った。2018年度ではこれまでの研究で見つかったいくつかの問題を修正し、パラメータの再決定と応用研究の展開を行った。(1)これまでに作成したパイプラインではRNA塩基の糖結合部分の電荷が若干強く出る問題があった。この問題に対策を取り、電荷の決定プロセスを修正した。(2)イノシンの力場パラメータを用いて、実験的に得られた二量体形成に伴う自由エネルギー差を再現出来るかの検証を行った。昨年度まではエネルギー差の再現に問題があることがわかっていたが、計算上の種々の問題に対し一つ一つ対策を取ったことで、実験値を非常に正確に再現できることが明らかとなった。本研究結果については論文を投稿した(プレプリントbioRxiv: 10.1101/454124 )が、後に進捗状況に述べる理由により不採録となったため再編し再投稿の予定である。(3)本研究計画では自由エネルギー計算を用いた検証を修飾核酸用パラメータ開発の柱の一つとしている。自由エネルギー計算を加速する手法として、2017年度までにREST2法の実装と検証を行ったが、本年度はこれをさらに副次的に展開させた。より一般的な変異に対して利用可なようにツールを整備したことで、核酸の一塩基変異に限らずタンパク質の一残基変異などより一般的な変異に対し自由エネルギー差の計算が可能になった。下記の2つの問題が起きたことから研究計画に遅延が生じた。
市長村が実施する地域農業構造政策の特質とその推進手法に関する研究

調査対象市町村における地域農業構造政策のポイントを整理すると、(1)推進主体の確立・体制整備、(2)集落・旧村からの政策の積み上げ・システム化、(3)担い手に関する長期的展望・方向付けへの地域合意形成、の三点があげられる。(1)については特に市町村農業公社に注目した調査から得られた知見である。そこでは農業公社を核に自治体・農協・普及センターが地域農業構造政策の合意形成を図り、推進するにあたって役割分担を明確にしている。また多くの農業公社が公的財政支援を必要としているが、公社運営に地域農業の担い手や生産者組織を参画させることで公益性を担保していることが注目される(秋田県琴丘町、島根県斐川町、鳥取県岩美町、栃木県今市市、山口県周東町)。(2)については政策形成システムを重視する自治体の取り組みに関する調査から得られた知見である。そこでは集落や旧村レベルにおける課題発見と政策形成が重視され、そうした地域の自主性と責任の上に自治体・農協・普及センターが相互に協力しながら支援している。「集落や旧村レベルの地域農業プランなきところに政策支援なし」と特徴づけることができる(長野県飯田市、青森県農政)。(3)については農地利用集積に関する調査から得られた知見である。国の農政は農地流動化の加速を最大の課題としているが、市町村では現実に存在する多様な担い手と、世代交代を契機とする長期的担い手の育成という短期・長期の担い手政策にうえに、農地利用集積を位置づけている。地域農業の担い手再編と利用集積の方向付け、その方向の地域合意形成が重視されたいる(宮城県河北町、岐阜県海津町、上記の市町村農業公社のある市町村)。本年度は地域農業構造政策の主体として市町村農業公社を対象に調査を実施した。農地の流動化や担い手創出を目的としたタイプとして島根県斐川町農業公社や秋田県琴丘町農業公社、さらに大分県の市町村農業公社育成の取組がある。特に斐川町では流動化体制の整備という点で大きな成果がみられる。すなわち行政・農業委員会・農協・普及センター・農業公社が一体となって町農業の基本方向について合意形成するとともに、各機関がその実現のための役割分担を明確にしている。逆に琴丘町では農協の広域合併という問題を背景に行政主体で取り組まざるを得す、とりわけ中山間地域の担い手創出・農地利用促進という課題に限界がみられる。要するに地域農業構造政策には関連する農業団体・組織の合意形成と役割分担が不可欠なのである。さらに農作業受委託推進が中心の市町村農業公社として日光地区農業公社があり、また岩手県盛岡市のJA都南もある。そこでの問題はまさに農作業受委託料金問題である。日光地区は自作意向の強い地区であり、受委託が農業構造政策の主要な手段となっており、作業集積のみならず、作業料金が認定農業者の所得確保の上で大きな問題となっている。しかし委託農家と受託担い手農家との間には激しい対立があり、担い手サイドに立つ農業公社・農協と委託農家サイドに立つ農業委員会の間で合意形成がなされておらず、問題に直面している。こうした作業料金問題という経済問題は、上述の農業公社においても標準小作料問題として発現している。特に米価が下落傾向の中で、あるべき小作料水準をめぐって、農業委員会と合理化事業を担う農業公社との間での合意を困難にしている。以上のように地域農業構造政策の課題は推進体制の整備とともに、小作料や作業料金という経済問題の解決に大きなポイントがあることが解明された。

そこでは農業公社を核に自治体・農協・普及センターが地域農業構造政策の合意形成を図り、推進にあたっての役割分担を明確にしている。また多くの農業公社が公的財政支援を必要としているが、公社運営に地域農業の担い手や生産者組織を参画させることで公益性を担保していることが注目される(秋田県琴丘町、島根県斐川町、鳥取県岩美町、栃木県今市市、山口県周東町)。(2)については政策形成システムを重視する自治体の取り組みに関する調査から得られた知見である。そこでは集落や旧村レベルにおける課題発見と政策形成が重視され、そうした地域の自主性と責任の上に自治体・農協・普及センターが相互に協力しながら支援している。「集落や旧村レベルの地域農業プランなきところに政策支援なし」と特徴づけることができる(長野県飯田市、青森県農政)。(3)については農地利用集積に関する調査から得られた知見である。国の農政は農地流動化の加速を最大の課題としているが、市町村では現実に存在する多様な担い手と、世代交代を契機とする長期的担い手の育成という短期・長期の担い手政策のうえに、農地利用集積を位置づけている。地域農業の担い手再編と利用集積の方向付け、その方向の地域合意形成が重視されている(宮城県河北町、岐阜県海津町、上記の市町村農業公社のある市町村)。
コロナウイルスの増殖特性を利用した阻害剤の開発

3年間の研究期間中に、300種類を超える合成化合物、植物及び藻類に由来する天然物質を対象にして、抗ヒトコロナウイルス(HCoV)活性試験を実施した。その結果、藻類由来酸性多糖体の中に、きわめて高い阻害活性を示す物質を見い出した。また、幾つかの低分子物質についても高い活性を示すものが存在した。これらの物質について抗HCoV作用標的を解明するため、種々の条件下で検定を行い、以下の結果を得た。1)吸着阻害効果:ウイルスの感染・増殖の初期段階である宿主細胞レセプターとウイルスとの吸着に対する阻害効果を評価した。高い抗HCoV活性を示したラムナン硫酸、デキストラン硫酸、ジギトキシン、ジゴキシン、ブファリンなどはいずれも、ウイルス増殖阻害効果を示す濃度範囲では、HCoVと宿主細胞との吸着を阻害しなかった。2)侵入阻害効果:宿主細胞に吸着したウイルスは、短時間のうちに細胞内へ侵入する。この段階に対する阻害効果を検討したところ、上記1)に挙げた物質はいずれも、侵入阻害作用を示した。ラムナン硫酸は最も強力な抗HCoV活性を示したが、その主たる作用標的が侵入段階であることを特定できた。3)殺ウイルス活性:直接的にウイルスを不活化させる効果(=殺ウイルス活性)は、HCoVの増殖の場である呼吸器において、外部から入る病原体の感染力を消失させうると期待できる。そこで、この活性を検討したところ、phenoxazinesの一種に強力な殺HCoV作用を確認できた。現在、そのメカニズムを検討中である。4)ウイルス蛋白合成阻害効果:HCoVのモノクローナル抗体を利用して、イムノブロット法によってウイルス特異的蛋白を検出した。これまでに、ラムナン硫酸が、ウイルス感染時に存在すれば、濃度依存的にHCoV蛋白合成を阻害することが明らかになっている。1.ヒトコロナウイルスの増殖阻害効果検定方法の検討標準株(229E株)を米国ATCCから購入し、そのデータシートに従ってヒト胎児肺細胞で増殖させて、ストックを調製した。多数の物質を対象として抗ウイルス活性をスクリーニング評価するためには、できる限り簡便な方法が望ましい。幾つかの文献ではプラークアッセイが可能とされていたが、その中で用いられている条件では計数可能なプラーク形成は起こらなかった。そこで、様々な細胞株と培地の組み合わせでプラーク形成の条件を探ったが、確実に判定できる条件を見出せなかった。結果的には、プラークアッセイは不可能であるが、ヒト胎児肺細胞に感染させた時のCPE(細胞変性効果)に基づいたウイルス量の測定は可能であることがわかった。2.モノクローナル抗体の作成コロナウイルスの感染成立や宿主細胞内での増殖・成熟過程に必須の役割を果たす3種類の糖蛋白質(S蛋白質、M蛋白質、ATPase活性を担う糖蛋白質)のアミノ酸配列の中で、抗原性を有する領域を選択して、その部分を合成した。BALB/cマウスにこれらの合成オリゴペプチドを免疫し、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを得た。現在、クローニングを行なっている。今後は、マウス腹腔へのハイブリドーマ接種によるモノクローナル抗体の大量生産とaffinity purificationを予定している。3.抗コロナウイルス活性物質のスクリーニング(1)コロナウイルスと同様にエンベロープを有するウイルスに対して、宿主細胞への吸着・侵入段階を阻害する物質、(2)宿主細胞内での糖鎖プロセッシングを阻害することが知られている化合物、(3)ATPase阻害物質を候補にして、上記1)の方法に従って、ヒトコロナウイルスの増殖抑制効果を評価してきた。これまでのところ、それぞれのグループについても、活性のある有望な物質を見い出している。1.コロナウイルス

特異的モノクローナル抗体の作成コロナウイルスの増殖阻害効果を解析するための手段としてモノクローナル抗体を作成した。具体的には、3種類の糖蛋白質(S蛋白質、M蛋白質、ATPase活性を担う糖蛋白質)のアミノ酸配列から抗原性を有する部分を選択して、オリゴペプチドを合成し、免疫原とした。現在、それぞれの抗原に対するモノクローナル抗体が、マウス腹水の状態で得られていて、次項に挙げる活性物質の作用標的を特定したり、作用の特性を明らかにするために利用する予定である。2.コロナウイルス増殖詐害活性物質の検索S蛋白質、M蛋白質、ATPase活性を担う糖蛋白質のそれぞれの機能を標的とした増殖阻害活性物質を検索してきた。S蛋白質はウイルスのエンベロープに存在し、コロナウイルスが宿主細胞に吸着、侵入するために必要とされるウイルス成分である。これまでに他のエンベロープを有するウイルスの吸着及び侵入を阻止することが知られている物質を検定したところ、選択指数(細胞毒性を示す濃度とウイルス増殖阻害濃度との比)が10,000を超すというきわめて強力な活性を有する化合物を突き止めた。これは、硫酸化多糖体の一種であり、高分子物質である。従来の考え方では、高分子は生体に投与した時に吸収などの体内動態の上で薬剤としては難点があるとされてきた。しかし、コロナウイルスは、気道感染症を起こす病原体であり、その増殖の場へのアプローチは必ずしも体内(血中)からと限定されることはなく、体内への吸収、分布を介さずに"内なる外"である気道に直接的に接することは可能である。このような視点に立って、今後、候補物質の作用特性を解明するとともに、実際の治療への応用を念頭に置いた有効利用のための条件を検討する予定である。また、感染細胞内でのウイルス糖鎖プロセッシングに関与する物質や、ATPase阻害効果が期待される物質をこれまでに幾つか得ており、これらについても、上記のモノクローナル抗体を用いて作用機序の解明を行なっていく。1)ヒトコロナウイルス増殖段階の評価方法の検討これまでに、ヒトコロナウイルスの増殖を阻害する候補物質を幾つか同定してきた。その中で最も強力な阻害効果を示した物質は、ウイルス増殖の初期段階、すなわち宿主細胞へのウイルスの結合(吸着)及びその直後に起こる細胞内への侵入、またはその一方を干渉する可能性が高いことが示唆された。しかし、コロナウイルスの吸着段階や侵入段階に対する阻害効果を確実に評価できる方法はこれまでに報告がない。そこで、ヘルペスウイルスで用いられている手法を基本にして、吸着及び侵入の各段階の評価系を検討した。その結果、プラークアッセイが可能なヘルペスウイルスに比べて操作が煩雑ではあるが、コロナウイルス感染細胞の希釈系列を作成した上で、細胞変性効果(CPE)を指標にすることによって、これらの増殖段階を個別的に、かつ、再現性をもって評価できることを確認した。2)コロナウイルス増殖阻害物質の作用標的の解析
L2学習者のリーディングモチベーション研究と読解指導モデル(認知・情意面)の構築

本研究の第一の目的は、L2学習者のL2リーディングに対するモチベーションをアンケート調査・分析し、その結果に基づいて、リーディング・モチベーション(RM)を高めるL2読解指導法を考案することである。第二の目的は、L1におけるRM研究を調査し、L1リーディングの研究成果をどのようにL2リーディングに取り入れるかを研究することである。本研究の結果、以下のことが明らかになった。(1)L2学習者のL2RMは、複数の要因(L2リーディングに対する内発的動機、自信、価値感、外発的動機など)から成り立っていることが明らかになった。(3)研究代表者の行ったリーディング指導の実践から、絵本を用いたL2リーディング指導がL2学習者のRMを高めるために効果的であることも明らかになった。本研究の目的は、L1リーディング研究の成果・指導実践を踏まえて,L2学習者の「リーディング・モチベーション」と「読解力」の関係を探求し,その結果に基づいて,認知面と情意面サポートを組み込んだ「L2読解指導法のモデル」を構築することである。具体的には、1)日本人大学生のリーディング・モチベーショ.ンの構成要因を調査し,これらの要因と読解力との関係を明らかにすること、2)リーディング・モチベーションの個人差(英語熟達度・専攻・性別)を明らかにすることである。最終的には,本研究の成果に基づいて,認知面と情意面の双方を統合した形で織り込んだ「L2学習者のための読解指導法モデル」を構築して包括的なL2学習者の読解指導法の確立を目指す。本年度の研究は、以下にあげる4つの活動を中心に進めた。【1.リーディング・モチベーション(RM)アンケート調査)】代表者・分担者・連携者がRMアンケートおよび読解テストを実施した。参加者は、延べ1062名となった。現在、データは入力済みで、統計的な処理を行っている途中である。結果については、平成23年度のJACET(大学英語教育学会)及びAILA(国際応用言語学学会)にて、発表を行う予定である。【4.論文・学会発表】林が研究の途中成果について、学会発表と論文執筆を行った。平成23年度は、以上の研究成果をさらに発展させて、モチベーションを高める効果的なリーディング指導について研究する。本研究には主に2つの目的がある。まず、第一言語における情意面を重視した読解指導法(CORI:Concept Oriented Reading Instruction)について研究し、その内容を第二言語学習者の読解指導に応用する可能性を探求することである。もう一つの目的は、L2学習者のリーディング・モチベーションと読解力の関係を調査し,その結果に基づいて、認知面と情意面サポートを組み込んだL2における読解指導法を考案することである。具体的な研究内容は、1)日本人大学生が英語を読むことに対するモチベーションの構成要因を調査し,これらの要因と読解力との関係を明らかにすること、2)リーディング・モチベーションの個人差(英語熟達度・専攻・性別)を明らかにすることである。最終的には、本研究の成果に基づいて、認知面と情意面の双方を統合した形で織り込んだ「L2学習者のための読解指導法」を構築して包括的なL2学習者の読解指導法の確立を目指す。本年度の研究は、以下にあげる5つの活動を中心に進めた。(1)リーディング・モチベーションのアンケート調査:代表者・分担者がRMアンケートおよび読解テストを実施し、参加者は、延べ1062名となった。途中結果については平成23年度のJACET(大学英語教育学会)及びAILA(国際応用言語学学会)にて、発表を行なった。(3)CORIの提唱者であるJohn Guthrie教授のシンポジウム参加。(日本図書学会主催、平成24年3月25日品川にて開催)(4)CORIについての学会発表:平成23年11月19日にJALT(東京)でCORIについての研究発表。(5)CORIに関する文献の読書会。三年間にわたる本研究の最終年度の研究活動として、本年度は以下にあげる4点の研究活動を行った。1)L1におけるリーディングモチベーションとConcept Oriented Reading Instructionの調査:過去二年間にわたって米国で視察・調査した結果をまとめ、論文執筆および学会発表(JACET)を行った。2)モチベーションを高めるL2リーディングの指導法研究:L1からの示唆を踏まえて、日本人大学生ののL2(英語)リーディングモチベーションを高めるのに効果的な読解指導法について研究・実践し、論文執筆および学会発表を行った。

3)報告書の作成:三年間の研究実績をまとめて、「L2学習者のリーディングモチベーション研究と読解モデル(認知・情意面)の構築(科学研究費補助金研究成果報告書)」を作成し、研究成果を報告した。4)アンケート調査の分析:L2学習者のリーディングモチベーションアンケートの結果を統計を用いて、分析した。結果については今後学会発表を行う。現在、本研究は継続中であるが、三年間の研究成果として、以下のことが明確になった。1)L1リーディングと同様に、L2リーディングに対するモチベーションは、学習者の読解力を伸ばすために重要な役割を果たすこと、2)モチベーションを高めるためのL2リーディング授業を行うことにより、L2リーディングモチベーションが大きく変化すること、特に、絵本や児童文学を教材として導入することにより、学習者のモチベーションが高まった、3)L1における読解指導法(CORI)からの示唆がL2における読解指導にも効果がある、などである。今後も研究を継続し、L2学習者の読解力を高めるために効果的な「L2リーディングモチベーションを高める指導法」について研究と実践を行う所存である。アメリカにおけるCORIの授業視察と日本人大学生のリーディン・グモチベーション調査が2つの大きな柱であるが、どちらも順調に進んでいる。授業視察は、平成23年と24年にアメリカの大学と中学校で行なった。また、L1の研究者とも連携を行なっている。アンケート調査は、データ収集を終えて、統計分析を行なっているところである。24年度が最終年度であるため、記入しない。今年度は、過去二年間にわたる研究の成果を報告書にまとめる。まず、CORIの授業視察について、詳しいレポートを作成する。次に、統計による分析に基づいて、日本人大学生のリーディン・モチベーションのプロファイルを作成し、読解力とリーディング・モチベーションの関係について考察する。両者の結果を踏まえて、日本人大学生の読解力を伸ばすために効果的な読解指導法を提案する。
HIVーenv 遺伝子発現ヒト細胞株を用いたHIV感染致死機構の研究

エイズの直接の死因は種々の感染症に起因するがその原因はHIV感染によるCD4^+T細胞の著しい減少に基づく個体免疫機構の破綻による。我々はこれまでHIVーenv遺伝子発現細胞株を用いてHIVに感染した細胞の致死機序の解明に従事してきた。これまでに明らかになったのは、(1)envタンパクが細胞内でCD4分子との結合により複合体を形成することがHIVーenvによる細胞致死の原因となっていること。(2)電顕を用いた検索により、それらenvーCD4複合体は細胞内で凝集塊を形成して分布し核膜孔周囲に蓄積していることが明らかになった。核膜孔は細胞質と核との間の選択的物質輸送の通路であることから沈着したenvーCD4複合体により核膜孔を介した細胞内物質輸送が阻害され、このことがenvーCD4複合体による細胞致死の直接の原因となっていることが示唆された。本年度はこの細胞質・核間物質輸送阻害が、HIVーenvにより細胞障害を生じている細胞に実際に発生していることの証明を試みた。SVー40ラ-ジT抗原の核移行シグナルを持つ合成ペプチドを赤血球ゴ-スト法によりHIVーenv発現細胞株に細胞内注入したところまだ細胞障害の徴候がまったく現れていない極めて早期において核移行性合成ペプチドの核への輸送が阻害されていることが実証された。以上の実験結果よりHIV感染により細胞内に発現されたenvタンパクがCD4分子と結合して複合体を形成し、核膜孔周囲に蓄積することにより核膜孔物質輸送を阻害しその結果、細胞を死にいたらしめることが考えられた。
大腿筋肉量スケールによる高齢者の転倒防止と寝たきり予防

大腿筋肉量を測定すれば断面積のみであっても筋肉量の推定が可能になり、高齢者のバランスがわかる。このことから転倒のしやすさにつながる指標であることが明らかになった。つまり比較的簡便にかつ非侵襲的なCT検査を行うことで大腿筋肉量の変化が高齢者のQOLを評価しうる指標である。大腿筋肉量を維持・増加させることが骨折の予防に繋がること、高齢者の寝たきり予防につなげていくことができる。研究計画に記載したとおりに以下のように研究をすすめている。対象となるのは愛媛大学附属病院抗加齢センターにおける抗加齢ドックを受けた受診者である。平成19年度中に約300名の受診者があり90%で研究の同意を得た。(1)大腿筋肉量の測定抗加齢ドック時にGE社製24列CTを用いて大腿近位1/3の部分にマーキングし、この部位の断層撮影を行う。筋肉のCT値を標準化したのち全例に同じ条件で施行する。(2)骨密度量の測定抗加齢センターに所有するエルク社製超音波骨密度測定装置CM-100を用いる測定部位は踵骨で中心周波数500kHzの超音波パルス透過法を用いて骨内伝播速度を測定するもので測定時間は約10秒であり検診に一次スクリーニングに最適な機器である。(3)重心動揺検査愛媛大学附属病院臨床検査室に所有するアニマ社製重心動揺計「システムグラビコーダ」を用いて行う。重心動揺検査は、直立時の足圧中心の動きから身体動揺を客観的、数量的に捉える検査で動揺の程度、性質、方向等を測定する。これにより開・閉眼直立の差を調べ、平衡機能の総合判定に利用されている。標準的検査法は日本平衡神経科学会により定められた方法で行う。現在までにメタボリックシンドロームを有する場合に転倒をおこしやすいことを示唆するデータが得られている。今後症例をふやしてこれらの検証をすすめていく予定である。本研究の目的としては交付申請書に記載したように「大腿筋肉量と骨密度、身体バランス機能の相関」を明らかにすることであった。具体的には一般診療にて用いられているCT装置を用いて造影剤も用いず非侵襲的に施行が可能である大腿近位部1/3におけるCT画像を撮像する。このデータをもとにインターネットでも自由に使用可能なフリーソフトウェアを用いて測定可能な筋肉量を産出し、これとともに身長、体重などの指標をあわせて相対的な筋肉量を算出して、高齢者の日常行動範に関するQOLを評価しうる指標になることを検証することであった。平成19年度から20年度までの実施期間中に抗加齢ドックを受診した診で研究同意を得たものにつきデータ解析した結果、計画目標通りに本研究期間に1)大腿筋肉量の変化が高齢者のQOLを評価しうる指標になる2)大腿筋肉量の維持・増加させることが転倒による骨折め予防に繋がる。3)メタボリックシンドロームと大腿筋肉量の評価を組み合わせて臨床的な指標とし、(QOL)および予後の改善につなげていくことができる。ことを明らかにした。その成果は日本内科学会総会、日本老年医学会学術集会他の学会報告、またJournal of HypertensionあるいはCirc Journalといった国内外の英文論文等にその成果を発表した。今回の結果から大腿筋肉量を維持・増加させることが骨折の予防に繋がることを明らかにできた。さらにメタボリックシンドロームにおける内臓脂肪量との組み合わせで高齢者の予後の改善につながる可能性を示し、これらにより医療経済の是正に貢献できると結論づけられた。
発生工学的手法を用いた糖尿病性血管合併症発症機構の解明

本研究の目的は、このような糖尿病血管障害の発症進展とAGE-RAGE系の機能的関わりを発生工学的手法を用いてin vivoで検証することである。初年度には、RAGE過剰発現トランスジニックマウスが糖尿病腎症・網膜症の増悪を示すことを証明した。本年度はRAGE欠損マウスの作製と解析を中心に行った。その結果、1.昨年度までに選択、分離したマウスRAGE遺伝子変異導入ES細胞株とマウス8細胞期胚とを凝集させ、偽妊娠マウスの子宮に戻すことでキメラマウスを計23匹作製した。2.キメラマウスからES細胞由来の次世代が得られる生殖系列伝播をPCR解析およびサザンプロット解析により確認した。3.2で得られたマウスの中からRAGE遺伝子欠損ヘテロマウスを選別し、次にそのヘテロマウス同士をかけ合わせることによって、RAGE遺伝子欠損ホモマウスを得た。4.3で得られたRAGE遺伝子欠損ホモマウスから臓器・組織を摘出し、RT-PCR法、ウェスタン法によりRAGEの欠損を確認した。5.RAGE遺伝子欠損ホモマウスは見かけ上正常に発生・成長し、肉眼的・組織学的には主要臓器に形態異常を認めなかった。6.RAGE遺伝子欠損ホモマウスに糖尿病を誘発するためインスリン依存型糖尿病を遺伝的に発症するトランスジェニックマウスと交配した。7.6で得られた糖尿病発症RAGE遺伝子欠損ホモマウスと同腹の糖尿病発症野生マウスの腎症・網膜症につき解析を行った。以上の解析により、糖尿病合併症の発症におけるAGE-RAGE系の機能的関わりがさらに明らかにされ、本研究で開発されたトランスジェニックマウスや遺伝子欠損マウスが本疾患の病態・予防・治療解明のための有用なモデルとなると期待される。糖尿病性網膜症に代表される糖尿病細小血管障害では、血管内腔を覆う内皮細胞が増え、逆にそれを取り囲む周皮細胞は減るという特徴的な変化が起こる。山本らは、糖尿病状態で促進的に形成される後期糖化反応生成物(advanced glycation endproducts、AGE)がAGE特異受容体(receptor for AGE、RAGE)を介してこれらの細胞変化をひきおこすことを血管細胞を用いたin vitroの系で明らかにした。本研究の目的は、このような糖尿病性血管病変の発生とAGE-RAGE系の機能的関わりをin vivoで検証することである。1.血管細胞特異的なflk-1プロモーターにヒトRAGE遺伝子を連結したトランスジーンをマウス受精卵に導入し、RAGE遺伝子を血管細胞で過剰発現する複数のトランスジェニックマウス(Tg)系統を得た。2.得られたマウスでヒトRAGE蛋白の過剰発現を臓器・組織で確認した。3.RAGETgを、インスリン依存型糖尿病を発症する別系統マウスと交配し、出生後早期より血糖値600mg/dl前後、ヘモグロビンA1c値9%前後を示す顕性糖尿病マウスを得た。4.得られた同腹のダブルTg(WTg)、RAGE Tg、IDDMマウス、非Tg正常マウスの4群につき解析した。(1)血中AGE値は糖尿病群で同様に高値であった。(2)網膜症:WTgで有意な網膜電図上律動様小波潜時延長、網膜虚血野増大を認めた。(3)腎症:WTgで有意なアルブミン尿増大、血中クレアチニン値上昇、腎糸球体硬化病変を認めた。5.マウスRAGE遺伝子標的ベクターを用いて、RAGE遺伝子相同組み換えによる変異が導入されたマウスES細胞株5クローンを得た。したがって、RAGE過剰発現糖尿病マウスによってin vitroでも糖尿病性細小血管症におけるAGE-RAGE系の役割が明らかとなった。
細胞内ラジカルおよび小胞体ストレスによる膵β細胞障害機構の解析と治療への応用

1.2型糖尿モデルマウスにおける細胞内ラジカルと小胞体ストレスの同定2型糖尿病のモデルとしてレプチン遺伝子異常により糖尿病を発症するob/obマウスとレプチン受容体異常により糖尿病を発症するdb/dbマウスを用いて以下の(1)(2)の解析を行った。(1)2型糖尿病モデルマウスおけるミトコンドリア由来活性酸素種の同定生後18週の明らかに糖尿病を呈する両マウスの膵臓を単離し、免疫組織化学染色にてミトコンドリア電子伝達系の賦活化を示すMitotracker Red CC-1の発現を検討した。その結果両糖尿病マウスの膵臓にてMitotracker Red CC-1の発現がコントロールマウスに比較して増強していることが確認された。(2)2型糖尿病モデルマウスおける小胞体ストレスの同定2型糖尿病モデルマウス発症におけるミトコンドリア活性酸素種の役割をin vivoで検討するため、ミトコンドリア内の活性酸素除去酵素Manganese superoxide dismutase (Mn-SOD)を遺伝子導入したトランスジェニックマウスを作製した。3.小胞体シャペロン発現トランスジェニックマウスの樹立2型糖尿病モデルマウス発症における小胞体ストレスの役割をin vivoで検討するため、小胞体シャペロンであるGRP78(Bip)遺伝子の組織特異的発現プラスミドを導入したトランスジェニックマウスを作製した。膵β細胞の機能異常は、2型糖尿病の発症に深く関与している。本研究は、膵β細胞の機能異常の発現にミトコンドリア由来の活性酸素種(ROS)と、小胞体(ER)ストレスの関与を検討し、2型糖尿病の発症メカニズム解明、および治療応用への展開を目指すものである。1)2型糖尿病モデルマウスにおけるミトコンドリアROSとERストレスの同定2型糖尿病のモデルとして、レプチン遺伝子異常によるob/obマウスとレプチン受容体異常に起因するdb/dbマウスを用いた。生後18週にて明らかな糖尿病を呈する両マウスの膵臓を単離し、RNAを抽出した。RNAからcDNAを作成し、RT-PCRにて検討したところ両マウスにおいて、各々の対照群と比較してBip, PERK, Irelα, Calnexin, Calreticulinの発現が増強していた。また、よりインスリン分泌能の低下を示すdb/dbマウス膵にてapoptosis誘導に関与するCHOPの発現が増強していた。ミトコンドリアROSは免疫組織化学染色にて検討し、両マウスの膵臓にてミトコンドリア電子伝達系の賦活化を示すMitotracker Red CC-1の発現が増強していた。これらの結果より、両2型糖尿病モデルマウスの膵臓においてミトコンドリアROSとERストレスの増加が認められることが確認された。2)遺伝子導入マウスによるミトコンドリアROSとERストレスの解析ミトコンドリアROSを除去するMn-SODマウスは既に作成済みである。ERストレス緩和に働く分子、Bipを膵β細胞特異的に発現誘導しうる発現プラスミドコンストラクトを作成した。細胞における発現誘導実験にて、野生型の約3倍のBip発現を観察した。現在、トランスジェニックマウス作成の最終準備中である。これらのマウス、および両者をかけ合わせたマウスにおいて、高血糖などを導入し膵β細胞機能を検討する予定である。1.2型糖尿病モデルマウス発症におけるミトコンドリアROSの関与の解析(1)2型糖尿病モデルマウスにミトコンドリア内の活性酸素除去酵素Manganesesuperoxide dismutase(Mn-SOD)を遺伝子導入する。現在、Mn-SOD導入マウスを既に作製し、F0マウスで6ラインを確立している。2型糖尿病モデルマウスとしてKKAyマウスなどとの交配や高脂肪食負荷などを予定している。2.2型糖尿病モデルマウス発症におけるERストレスの関与の解析(1)2型糖尿病モデルマウスにERシャペロンであるGRP78(Bip)、GRP94、PDI、カルレティキュリン、カルネキシンを遺伝子導入する。膵β細胞特異的に発現させるため、rat insulin2 promoterを用いる予定である。現在GRP78(Bip)遺伝子の組織

特異的発現プラスミドを導入したトランスジェニックマウスを作製し、F0マウスで9ラインを確立している。(2)Bip遺伝子導入マウスのF1マウスも数ラインから得られており、現在導入遺伝子のコピー数検討のため導入遺伝子の定量的RT-PCRを行っている。
次世代シーケンサーを用いた重症心不全における左室逆リモデリング予測因子の探索

拡張型心筋症に代表される非虚血性の重症心不全の症例のうち、一部は適切な心筋保護薬や心臓再同期療法(CRT)による治療、また補助人工心臓による心負荷の軽減などにより、左室逆リモデリングと呼ばれる心機能の改善を認めることがある。左室逆リモデリングの機序や、その予測については詳細に解明されていない。本研究では、千葉大学医学部附属病院に入院した非虚血性の重症心不全患者から、経カテーテル的心筋生検あるいは左室補助人工心臓装着手術を始めとする開心術時に採取される左室心筋組織からRNAを抽出し、次世代シーケンサーを用いたRNA-sequenceにより組織内に発現する遺伝子を定量的に解析する。一方で患者には最大限の内科的治療、外科的治療を行い、左室逆リモデリングと呼ばれる心機能の改善を認めるか否かにより2群に分類する。2群間の発現変動遺伝子と左室逆リモデリングの有無との相関関係を解析することにより、左室逆リモデリング予測因子を探索するものである。当初目標としていた20症例のうち17症例がinclusion criteriaを満たし解析を行った。8症例で左室逆リモデリングを認め、9症例で認めなかった。2群間のRNA発現の解析において、ミトコンドリア呼吸鎖に関連する遺伝子とMAPK系を介してapoptosisに関与する遺伝子、またリボソーム関連蛋白群が発現変動遺伝子として同定された。これらの結果をまとめ、論文投稿を行っているところである。また、日本循環器学会学術集会などで発表した。拡張型心筋症に代表される非虚血性の重症心不全の症例のうち、一部は適切な心筋保護薬や心臓再同期療法(CRT)、また補助人工心臓による心負荷の軽減などにより、左室逆リモデリングと呼ばれる、心機能の改善を認めることがある。左室逆リモデリングの機序やその予測については詳細には解明されていない。本研究では、千葉大学医学部附属病院に入院した非虚血性の重症心不全患者から、合計20症例を目標に、経カテーテル的心筋生検あるいは左室補助人工心臓装着手術時に採取される左室心筋組織からRNAを抽出し、次世代シーケンサーを用いたRNA-sequenceにより組織内に発現する遺伝子を定量的に解析する。発現変動遺伝子と左室逆リモデリングの有無との相関関係を解析することにより、左室逆リモデリング予測因子を探索するものである。今年度で合計20症例の登録が完了した。上記のごとく内科・外科的な集学的治療を行い、心機能の改善について経時的に評価を行っている。20症例中、11例が補助人工心臓装着を行い、1症例は6か月経過前に心臓移植を施行した。9例は心筋生検後内科的治療で退院に至り、それぞれ経過観察中となっている。死亡症例はない。登録完了後、治療を開始し14症例で6か月評価が完了した。左室逆リモデリングを認めた症例は7例であり、ちょうど50%に相当する。一方で心筋サンプルについては順次RNA抽出を行い、次世代シーケンサーによるRNA sequenceの解析を施行している。症例の登録は当初の計画通り今年度で目標の20症例に到達した。登録の状況および治療の状況、また6か月評価については順調であると考える。次世代シーケンサーを用いた解析については、経カテーテル的心筋生検を行った場合、採取した組織が小さくRNAを十分採取できない症例があった。今後RNA sequenceを予定している一部サンプルについても、RNA濃度が低く、解析が可能かどうか評価する必要がある。解析が困難で除外せざるを得ない場合には、追加で症例登録を行うかどうか検討する。左室逆リモデリングの機序や、その予測については詳細には解明されていない。本研究では、千葉大学医学部附属病院に入院した非虚血性の重症心不全患者から、経カテーテル的心筋生検あるいは左室補助人工心臓装着手術時に採取される左室心筋組織からRNAを抽出し、次世代シーケンサーを用いたRNA-sequenceにより組織内に発現する遺伝子を定量的に解析する。当初目標としていた20症例は昨年度の時点で達成され、臨床的に左室逆リモデリングの評価と同時にRNA-sequenceによる遺伝子発現解析を行った。左室逆リモデリングと関連性が示唆される複数の因子の同定に至ったが、研究の精度を高めるために症例数を増やすこととした。今年度までで合計29症例の登録が完了し、そのうち1症例は6ヶ月以内に心臓移植実施のため除外されたが、それ以外に死亡症例等はなく、28症例について継続的に評価・解析を行っている。17症例が補助人工心臓装着症例であった。22症例が6ヶ月後心機能評価が完了した。当初20症例を目標としていたが、症例の登録が順調であること、またRNA-sequenceのコストが当初の見込みよりも少ない額で実施することができていることから、より精度を向上させるために症例登録を引き続き行うこととした。