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自然分娩における分娩第Ⅱ期持続時間が母児の周産期リスクの発生率に及ぼす影響

分娩第II期持続時間と母児のリスク発生率との関連については、初産婦を対象とした後方視的コホート研究により、4時間以上を要した群では、帝王切開術や第III度、IV度の会陰裂傷が高い割合で出現したこと、新生児については、新生児仮死の割合やNICU入院率に差を認めなかったことが報告されている。また、2時間以上を要した群では、羊水混濁が有意に出現したことが明らかになっている。本研究は、自然分娩の初産婦を対象に、分娩第II期持続時間が、母体および新生児の周産期リスクの発生率に及ぼす影響を明らかにすることを目的としている。正期産・頭位・単胎で自然分娩をした日本人の初産婦1,240名を対象とした後方視的観察研究である。2017年に慶應義塾大学大学院研究倫理審査委員会の承認を得たが、今年度は、対象のオプトアウトに関して専門家等の意見を踏まえ、より詳細な実施計画を策定した。また、文献検討結果について学会報告を行った。研究実施施設の倫理審査であるが、当該施設は、2018年3月30日に臨床研究審査委員会に認定された関連医療機関であり、審査手続きおよび申請書類等が一新され、従来とは異なる対応が必要となった。そのため申請準備に時間を要した。これにより、研究全体の進捗に遅れが生じ、2019年2月に倫理申請(迅速審査)し、承認通知を2019年4月1日に受領した。当初の計画を完遂するため、大学院研究倫理審査委員会に研究期間の変更を申請し、承認を得たうえで、研究実施施設(変更申請)の許可を受け研究を継続する予定である。1985年WHOによる周産期ケアの見直しを契機に、分娩を病態と捉えてリスクの低減を目指す医療的分娩から、正常経過においては、生理的機能の多様性と女性の主体性を尊重する分娩へとそのあり方が変化した。しかし、実際には、正常経過についても、子宮口全開大から出産までの分娩第II期の持続時間には上限が設けられ医療介入がなされている。Cesario(2004)は、正常分娩を対象に各期の平均時間を再評価すること、分娩時間と母子のリスク発生率との関連を明らかにすることを目的に横断研究を行っている。分娩各期の平均時間は、1954年のフリードマンの子宮開大曲線と同様であったが、初産婦のなかには分娩第II期が2時間を越えても母児ともに良好に出産したケースが存在したことから、対象の特徴や技術の進歩に応じた分娩進行時間の改訂の必要性を提案した。アメリカ産婦人科学会(2014)は、Zang(2010)らの大規模研究をレビューし、現代の初産婦の子宮頸管開大速度はフリードマンの標準速度より緩徐であり、これを容認するならば医療介入が低減し、ひいてはリスク低下に繋がる可能性があるとの見解を示した。分娩第II期持続時間とリスク発生率との関連については、Chengら(2004a)やJanni(2002)が初産婦を対象に後方視的コホート研究を行い、分娩第II期が2時間以上の群では、帝王切開および会陰切開率、オキシトシン使用率、分娩時異常出血の割合が高かったことを報告している。しかし、分娩第II期持続時間と新生児リスクとの関連について見解は一定していない。また、自然分娩を対象にした研究はほとんど認められない。今年度は研究方法を確定した。分娩第II期持続時間を2時間未満と2時間以上に層別し、サンプルサイズを1240名とした。研究計画ならびに研究倫理申請書を慶應義塾大学大学院健康マネジメント研究科研究倫理審査委員会に提出した。分娩第II期持続時間と母体・新生児の周産期リスク発生率に関する国内外の文献評価、分娩第II期持続時間に影響する要因、分娩第II期持続時間の延長と母体・新生児のリスク発生のメカニズムに関する文献検討など、計画どおり進んでいる。慶應義塾大学大学院研究倫理審査委員会へ研究倫理申請書を提出した。あわせて研究協力施設への申請準備も進めている。分娩第II期持続時間と周産期リスク発生率との関連については、初産婦を対象に後方視的コホート研究により、4時間以上を要した群では、帝王切開術や第III度・IV度の会陰裂傷の割合が高いことが報告されている。本研究は、日本人を対象に自然分娩における分娩第II期持続時間が母体および新生児の周産期リスクの発生率に及ぼす影響を明らかにすることを目的としている。正期産・頭位・単胎で自然分娩をした初産婦1,240名を対象に後方視的観察研究を実施する。分娩第II期持続時間を2時間未満、2時間以上の2群に分け、従属変数を母体・新生児の周産期リスク「分娩時出血量」「第III・IV度の会陰裂傷」「羊水混濁」「1分・5分後のアプガースコア<7点」「臍帯動脈血血液ガスpH<7.2、BE>ー12」「NICUへの入院」としてロジスティック回帰分析を予定してる。調査項目については、産婦人科専門医より妥当性について意見をもとに調査票の作成を済ませたところである。個人情報保護方針について、専門家の助言を受けながら方法論を確定し、慶應義塾大学大学院研究倫理審査委員会の承認を得た。研究実施施設の共同倫理審査委員会への申請に先立ち、対象のオプトアウトに関して、研究倫理の専門家の助言を受け具体的に検討を進めている。

また、分娩第II期持続時間と母体・新生児の周産期リスク発生率に関する国内外の文献評価、分娩第II期持続時間に影響する要因、分娩第II期持続時間の延長と母体・新生児のリスク発生のメカニズムに関する文献検討も継続している。研究実施施設の倫理審査委員会認定に伴う審査システムや申請書類等の変更への対応、および後方視的観察研究であり対象の同意取得(オプトアウト)に関する検討に時間を要した。分娩第II期持続時間と母児のリスク発生率との関連については、初産婦を対象とした後方視的コホート研究により、4時間以上を要した群では、帝王切開術や第III度、IV度の会陰裂傷が高い割合で出現したこと、新生児については、新生児仮死の割合やNICU入院率に差を認めなかったことが報告されている。また、2時間以上を要した群では、羊水混濁が有意に出現したことが明らかになっている。本研究は、自然分娩の初産婦を対象に、分娩第II期持続時間が、母体および新生児の周産期リスクの発生率に及ぼす影響を明らかにすることを目的としている。正期産・頭位・単胎で自然分娩をした日本人の初産婦1,240名を対象とした後方視的観察研究である。2017年に慶應義塾大学大学院研究倫理審査委員会の承認を得たが、今年度は、対象のオプトアウトに関して専門家等の意見を踏まえ、より詳細な実施計画を策定した。また、文献検討結果について学会報告を行った。研究実施施設の倫理審査であるが、当該施設は、2018年3月30日に臨床研究審査委員会に認定された関連医療機関であり、審査手続きおよび申請書類等が一新され、従来とは異なる対応が必要となった。そのため申請準備に時間を要した。これにより、研究全体の進捗に遅れが生じ、2019年2月に倫理申請(迅速審査)し、承認通知を2019年4月1日に受領した。当初の計画を完遂するため、大学院研究倫理審査委員会に研究期間の変更を申請し、承認を得たうえで、研究実施施設(変更申請)の許可を受け研究を継続する予定である。慶應義塾大学大学院研究倫理審査委員会の承認を得る。研究方法および個人情報保護方針について、専門家の助言を得ながら方法論を確定する。その後、研究協力施設の倫理審査委員会へ申請書を提出し承認を得る。神奈川県内の総合病院お産センターおよびバースクリニックにおいてデータ収集を行う。データの中間集計と分析をすすめ、関連学会に成果を報告する。研究実施施設の共同倫理審査委員会に申請書を提出し承認を得る。神奈川県内の総合病院およびバースクリニックにおいてデータ収集を行う。データの中間集計と分析、考察をすすめ、関連学会に成果を報告する。年度当初の計画時よりも、研究に必要な物品等の調達を安価に行うことができたため、次年度に使用する研究費が生じた。研究実施施設の倫理審査委員会認定に伴い、申請時期を平成30年度に延期したため、データ収集、分析、成果報告等に伴う費用として予定していた研究費を次年度に使用する。1国内での研究成果の発表、施設(神奈川県内)との研究打合せ、臨床試験審査委員会への出席および1,300例のデータ収集のための交通費として支出する。2収集したデータならびに資料をPDF化して保存するためスキャナ、および資料印刷のためのプリンタ、資料廃棄のためシュレッダーを購入する。3統計解析に関する専門家への協力依頼、データ収集等、研究補助者への謝金として支出する。
自由ヴァルドルフ学校における造形教育の世界的展開に関する研究

本研究は、芸術を学校教育全体に浸透させるという思想の下で教育活動を行っている自由ヴァルドルフ学校における造形教育に着目し、そのカリキュラムと具体的な造形教育の内容を国内外の学校の比較分析から、造形教育の本質と各国における造形教育の独自性と展開を解明することを目的とする。学校が創設されてから100周年を迎えるヴァルドルフ学校は、現在世界に67か国1150校に広がっている。各国での自由ヴァルドルフ学校において造形教育がどのように展開されているのかを明らかにすることで、日本の公教育における教科によって細分化されたコマ切れの教育へ警笛を鳴らすとともに、今後の造形教育に対して新たな示唆を得ることを目指す。
電位依存性ナトリウム・カリウムチャネルの神経障害性疼痛に伴う発現異常の分子機構

研究経過・結果は以下の通りである。1.ラット膜電位依存性カリウムチャネルの構成サブユニット(Kv1.1とKv1.2)のアミノ酸配列にもとずく合成ペプチドをウサギに免疫し、抗血清を抗原ペプチド結合カラムクロマトグラフィーによって精製した。2.上記抗体を用いてKv1.1あるいはKv1.2の相補DNAを導入したCOS-7細胞で特異的な免疫染色が認められた。いずれの抗体でも、ラット小脳膜分画を用いたウエスタンブロット解析において、特異的なバンドを検出された。3.ラット腰部脊髄後根神経節と三叉神経節を酵素抗体法によって染色したところ、Kv1.1あるいはKv1.2の免疫反応性は中型から大型の神経細胞体で観察された。これらの細胞体の50%以上はニューロフィラメント(RT97)陽性であった。ペリフェリンと同時陽性の細胞は僅かであった。4.脊髄後角では、Kv1.1、Kv1.2の免疫反応性は深部III-IV層で顕著であった。5.ヒラメ筋では、Kv1.1およびKv1.2の免疫反応性が螺旋状の構造物に認められ、抗ニューロフィラメント抗体にも反応性を示したことから感覚ニューロンの末梢側受容体であることが示唆された。6.下肢皮下への蛍光標識金コロイド注入後に標識されるL4後根神経節内の細胞体の一部はKv1.1あるいはKv1.2陽性であり、皮膚感覚ニューロンの少なくとも一部にこれらのチャネルが発現していることが示された。7.坐骨神経切断後の腰部脊髄後根神経節でKv1.1およびKv1.2の免疫反応性の低下が認められた。したがって、生理的状態でKv.1.1、Kv1.2チャネルは筋および皮膚に分布する非侵害性感覚受容ニューロンにおける活動電位の大きさ、頻度、伝播等を調節していると示唆された。同時に、これらのチャネルの発現低下は神経損傷後の痛覚過敏、アロディニアの一因となる可能性が推測された。1.ラット膜電位依存性カリウム(K^+)チャネルの構成サブユニット(Kv1.1およびKv1.2)のアミノ(N)末端のアミノ酸配列にもとずくペプチドを合成し、カブトガニヘモシアニンに結合させてウサギに免疫した。得られた抗血清を抗原ペプチドを結合した親和カラムクロマトグラフィーによって精製した。2.次に、上記1の抗Kv1.1抗体および抗Kv1.2抗体の特異性の検定を行った。Kv1.1あるいはKv1.2の相補DNAをCOS-7細胞に導入し間接蛍抗体法にて染色したところ、対応する相補DNAを導入した細胞においてのみ特異的な染色が認められた。抗Kv1.1抗体、抗Kv1.2抗体の間に交差反応は認められなかった。また、抗Kv1.1抗体および抗Kv1.2抗体いずれもラット小脳膜分画を用いたウエスタンブロット解析において、ほぼ単一のバンドを検出した。3.得られた抗Kv1.1抗体および抗Kv1.2抗体を用いてラット腰部脊髄後根神経節を酵素抗体法によって免疫染色したところ、中型から大型の神経細胞体に強い染色が観察された4.上記3と同様に、ラット三叉神経節の免疫染色を行ったところ、中型から大型の細胞体に強い染色が観察された。

5.以上の結果から、Kv1.1およびKv1.2は生理的条件下において、触覚、振動覚等の特定の感覚の伝達に大きく関与する膜電位依存症K^+チャネルの構成成分であることが示唆された。下記1-6の結果が得られた。1.ラット膜電位依存性カリウム(K^+)チャネルの構成サブユニット(Kv1.1およびKv1.2)のアミノ(N)末端のアミノ酸配列にもとずく合成ペプチドをカブトガニヘモシアニンに結合させてウサギに免疫した。抗原ぺプチドを結合した親和クロマトグラフィーにて特異的抗体を精製した。2.得られた抗Kv1.1抗体および抗Kv1.2抗体を用いてラット腰部脊髄後根神経節を酵素抗体法によって免疫染色したところ、中型から大型の神経細胞体に強い染色が観察された。3.二重染色を行うと、Kv1.1強陽性の細胞体の50%以上は抗ニューロフィラメント(RT97)抗体と強い反応性を示した。逆に、RT97陽性細胞は大部分Kv1.1強陽性であった。4.抗ペリフェリン(peripherin)抗体と抗Kv1.1抗体を用いた二重染色において、同時に強陽性を示す細胞はほとんど認められなかった。5.抗Kv1.2抗体を用いた組織染色の結果も上記(1)(4)と同様であった。6.脊髄後角において、Kv1.1、Kv1.2の免疫反応性は深部III-IV層で顕著であった。一般に中大型の細胞体をもつ末梢感覚ニューロンは運動位置覚、固有感覚触圧覚などの非侵害性感覚を伝導し、A群の太い有髄線維を脊髄後角深部III-IV層に投射する。また、多くのRT97陽性ニューロンは筋組織、関節の非侵害性受容器を支配するのに対して、小中型のペリフェリン陽性ニューロンは侵害受容ニューロンを多く含むことが知られている。したがって今回の結果から、Kv1.1、Kv1.2チャネルは筋感覚等の体性感覚受容ニューロンの興奮調節に関与することが示唆される。以下の結果が得られた。1.ラット膜電位依存性カリウム(K^+)チャネルの構成サブユニット(Kv1.1およびKv1.2)のアミノ(N)末端に対する特異的抗体を作製した。これらを用いてラット坐骨神経およびヒラメ筋の免疫組織染色を行った。2.酵素抗体法による免疫染色に続いて電子顕微鏡観察を行ったところ、Kv1.1免疫反応性は坐骨神経有髄線維のparanodal領域の形質膜に一致して認められた。3.Kv1.1免疫反応性はヒラメ筋切片中の螺旋状の構造物にも認められた。二重染色を行うと、抗ニューロフィラメント(RT97)抗体と同時反応性を示した。4.抗Kv1.2抗体を用いた組織染色の結果も上記(2),(3)と同様であった。一般に中大型の細胞体をもつ有髄性末梢感覚ニューロンは運動位置覚、固有感覚触圧覚などの非侵害性感覚を伝導し、A群の太い有髄線維を脊髄後角深部III-IV層に投射するとされている。多くのRT97陽性ニューロンは筋組織、関節の非侵害性受容器を支配することも知られている。したがって、Kv1.1、Kv1.2の免疫反応性は腰部脊髄後根神経節の中大型のRT97陽性細胞細胞体、脊髄後角深部IIIV層で顕著であるという昨年度までの実験結果とあわせると、Kv.1.1、Kv1.2チャネルは筋感覚受容体およびその近傍における活動電位の大きさ、頻度、中枢への伝播等を調節することが示唆される。ラット膜電位依存性カリウム(K+)チャネルの構成サブユニット(Kv1.1およびKv1.2)のアミノ(N)末端に対する特異的抗体を用いてラット脊髄後根神経節およびヒラメ筋の免疫組織染色を行った。
脂質代謝と概日リズムの異常が軟骨変性におよぼす影響に関する検討

変形性膝関節症(膝OA)の発症と進行には肥満が危険因子となる。体重増加による軟骨への物理的負荷だけでなく、脂肪細胞から放出されるアディポカインが炎症や軟骨変性を惹起することが明らかとなりつつある。膝OA軟骨では健常軟骨と比べ概日リズムを司る遺伝子の発現が低下していることが知られ、炎症反応や軟骨の恒常性に関わる経路に影響を与える。概日リズム遺伝子は脂質代謝の制御も司ることが知られており、肥満に伴う膝OAの病態に関与している可能性がある。本研究では、概日リズム遺伝子の機能に着目して脂質代謝異常および肥満と、軟骨変性および膝OAの関連を明らかにすることを目的とする。
バーチャルリアリティーを用いたOCT深部情報表示による内視鏡手術検査支援システム

内視鏡画像とOCTを同時に撮影できる新規光学系を設計・作成した。OCT断層像群から内部情報を抽出し、表面から見た画像に変換して内視鏡画像に重ねて表示するためのプログラムを作成中である。動物実験モデルとして嗅覚障害マウスを用いて、OCTによる嗅覚機能評価が可能であることを検証した。これを用いて、また、マウスの蝸牛内部の病的構造を抽出するプログラムを作成した。内視鏡画像にOCT情報を重畳することで、内部構造や機能をわかりやすく表示可能であることを示す。手術において切除するかどうか、検査において生検するかどうかなどは、非常に重要な判断であるが、頭頸部領域では聴覚、嗅覚、味覚などの感覚受容や言語の表出、嚥下などの機能臓器が多数あるため、その決定は新調にならざるを得ない。その場面において、内視鏡は狭い領域にも安全に進入でき、近接画像で観察できるというメリットがある。しかしその情報は表面の情報であり、真に決定的な情報は取ってみるまで分からない。光コヒーレントトモグラフィー(OCT)は近赤外光の組織透過性を利用して、組織内部からの反射光を検出して画像化するという非侵襲的断層撮影法である。515マイクロメートルというOCTの高い解像度によって、OCTによる非侵襲的組織診断が提唱されている。我々は、OCTによって得られる深部情報を内視鏡画像に組み合わせることで、有用になると考え、本研究を行った。本年度は、可視光線による内視鏡画像と近赤外光によるOCT画像を同時に取得できるような内視鏡光学系を設計した。また、動物内耳を用いたサンプルを用いて、OCTを用いて深さ方向にどのような情報が得られるかを検討した。手術切除後の腫瘍サンプルを用いて、OCTで腫瘍部分が描出可能であることも確認した。また実験光学系の生データから画像データを抽出するプログラムや、生体組織内の物体の位置関係を抽出するプログラムを作成し、生体組織内部情報を抽出する系を順次作成中である。手術において切除するかどうか、検査において生検するかどうかなどは、非常に重要な判断であるが、頭頸部領域では聴覚、嗅覚、味覚などの感覚受容や言語の表出、嚥下などの機能臓器が多数あるため、その決定は慎重にならざるを得ない。光コヒーレンストモグラフィー(OCT)は近赤外光の組織透過性を利用して、組織内部からの反射光を検出して画像化するという非侵襲的断層撮影法である。昨年度、可視光線による内視鏡画像と近赤外光によるOCT画像を同時に取得できるような内視鏡光学系を設計した。本年度は、昨年度設計したOCT内視鏡システムについて、アダプタを作成し、内視鏡とともに光学系を実装した。またファントムを作成し、OCT画像を取得してOCT Info像に変換するためのプログラムを設計した。モデル動物として嗅覚障害モデルマウスを作成し、OCTを用いて嗅覚機能評価を行うための実証実験を行った。また、マウス蝸牛の内部構造から病的形態の情報を抽出するプログラムを作成した。耳鼻咽喉科・頭頸部外科もっと困難が予想された新規光学系の設計について、目処が立ったため。またこれが困難になった場合も既存の実験光学系で少なくともOCT画像に対する情報処理が出来るようなデータ抽出が可能になっているため。新規光学系を構築する。既存の実験光学系および作成した光学系を用いて、ファントム、動物サンプル、ヒトサンプルを用いてOCTと内視鏡画像の取得を行い、深部情報として着目すべき内容を抽出し、は後処理で重ね合わせが出来るようにプログラム開発を行い、その後リアルタイムかを試みる。新規光学系の設計が完了し、構築中であるが、この支払いがまだ完了していないため。新規光学系の構築とともに使用が進む予定である。
TERT導入ストローマ・クローン細胞による効率的な造血幹細胞の体外増幅法の開発

昨年までに、TERT遺伝子を導入したヒトストローマ細胞(hTERTストローマ細胞、以下HTS細胞)の親株より、限界希釈法を用いて9クローンのHTS細胞を樹立し、得られたHTS-1からHTS-9の形質を解析した。その結果、すべてのHTSクローンは骨芽細胞の形質を示し、さらにHTS-4からHTS-9まではalpha-smooth muscle actin(ASMA)陽性の筋線維芽細胞の形質を併せ持つことが明らかとなった。さらに造血因子と造血抑制因子の発現を検討したところ、SCF、Wnt-5A、Ang1、N-cadherinは全てのクローンにおいて同等な発現を認めたが、TPO、FL、Il-6、Ihh、Jagged-1、BMP-2、MMP-2、MMP-9、NogginおよびCerberusの発現はクローン間で異なることが明らかとなった。本年度は、さらにHTSクローンの安定性を検討したところ、HTSクローンはHTS親株よりも安定して長期培養が可能であり、増殖速度は一定でcontact inhibitionを認めるなど、2年以上の長期培養後も初代ヒトストローマ細胞とほぼ同様な形質が保たれることが確認された。次に、HTSクローンおよび親株細胞のin vitroにおける造血支持能を、CD34陽性臍帯血細胞5000個と2週間共培養することで解析した。共培養後に得られた総血球数はHTS 9クローン間とHTS親株の間で差を認めなかったが、CD34陽性細胞、CFU-C、CFU-MixおよびHPP-CFC数に関しては、HTS-8において他のHTSクローン・HTS親株に比し高値であった。また、増幅された血液細胞の表面抗原(CD11b、GPA、CD41)をflowcytometry法で検討したが、HTSクローン・HTS親株間で顕著な差を認めなかった。つぎにHTS-8あるいはHTS親株とCD34陽性臍帯血細胞を共培養した後に得られた血液細胞をNOD/SCIDマウスに移植し、6週後のマウスの骨髄中におけるヒト造血細胞の生着率を抗ヒト特異的CD45抗体を用いて解析した。その結果、HTS-8で増幅した造血細胞は、HTS親株で増幅された造血細胞とほぼ同等の生着を示すことが明らかとなった。このことは、hTERT遺伝子で不死化したヒトストローマ細胞は、クローン化しても安定して造血前駆細胞・幹細胞の支持能を保つことを示しており、今後の臨床応用に向けて有望な結果と考えられた。本研究では、まず初めにhTERTストローマ細胞クローンの樹立を試みた。レトロウイルスBabe-hygro-hTERTを導入後80PDのストローマ細胞(初代ストローマ細胞と同様の形質)から、限界希釈法によりHuman hTERTストローマ(HTS)細胞を9クローン樹立した(HTS-1からHTS-9)。HTSクローンの表面抗原を解析したところ、いずれにおいてもCD73、CD105およびCD166が高発現しており、この発現の程度は初代ストローマ細胞と比較して差を認めなかった。またCD31、CD34およびCD45の発現は検出されなかったことより血球細胞や血管内皮細胞由来のクローン細胞の存在は否定された。次に組織染色法によりHTSクローン形質を検索した。脂肪滴をみるOil Red O染色では全く染色性を認めなかったが、骨芽細胞のマーカーであるALP染色とカルシウム沈殿をみるvon Kossa染色ではすべてのクローンで染色性を認めたことよりHTSクローンは骨芽細胞の形質を持つことが明らかとなった。興味深いことにHTS-4からHTS-9まではalpha-smooth muscle actinの染色性を認めたことより筋線維芽細胞の形質を併せ持つことが明らかとなった。次に、造血に係わるサイトカインや膜性因子の発現をRT-PCRを用いて検討した。その結果SCF、Wnt-5A、Ang1、N-cadherinは全てのクローンにおいてほぼ同等に発現を認めた。一方TPO、FL、IL-6、Ihh、Jagged-1、BMP-2、MMP-2およびMMP-9はクローン間で発現量に差を認めた。またBMPの抑制因子であるNogginや、BMPとWntの抑制因子であるCerberusもクローン間で発現に差を認めた。以上の結果からHTSクローンは造血に関わる成長因子のみならず抑制因子も異なるレベルで発現していることが明らかとなった。最後にHTSクローンを用いたlong term culture(5週間)を施行した。HTSクローン間の造血支持能を直接的に見るため、当初サイトカイン無しの条件で共培養を試みたが、いずれのHTSクローン細胞を用いてもCD34陽性細胞の増幅効果を認めなかったため、SCF 0-10 mg/ml存在下で血球細胞の増幅効果を検討した。その結果、SCF 10 mg/ml存在下において総細胞数は約80倍、CD34陽性細胞数は約12倍増幅することが示された。すなわちHTS細胞のCD34陽性細胞の造血支持能にはSCFが必須であることが明らかとなった。今後、それぞれのクローン間の造血支持能の差異を比較検討する予定である。

その結果、すべてのHTSクローンは骨芽細胞の形質を示し、さらにHTS-4からHTS-9まではalpha-smooth muscle actin(ASMA)陽性の筋線維芽細胞の形質を併せ持つことが明らかとなった。さらに造血因子と造血抑制因子の発現を検討したところ、SCF、Wnt-5A、Ang1、N-cadherinは全てのクローンにおいて同等な発現を認めたが、TPO、FL、Il-6、Ihh、Jagged-1、BMP-2、MMP-2、MMP-9、NogginおよびCerberusの発現はクローン間で異なることが明らかとなった。本年度は、さらにHTSクローンの安定性を検討したところ、HTSクローンはHTS親株よりも安定して長期培養が可能であり、増殖速度は一定でcontact inhibitionを認めるなど、2年以上の長期培養後も初代ヒトストローマ細胞とほぼ同様な形質が保たれることが確認された。次に、HTSクローンおよび親株細胞のin vitroにおける造血支持能を、CD34陽性臍帯血細胞5000個と2週間共培養することで解析した。共培養後に得られた総血球数はHTS 9クローン間とHTS親株の間で差を認めなかったが、CD34陽性細胞、CFU-C、CFU-MixおよびHPP-CFC数に関しては、HTS-8において他のHTSクローン・HTS親株に比し高値であった。また、増幅された血液細胞の表面抗原(CD11b、GPA、CD41)をflowcytometry法で検討したが、HTSクローン・HTS親株間で顕著な差を認めなかった。つぎにHTS-8あるいはHTS親株とCD34陽性臍帯血細胞を共培養した後に得られた血液細胞をNOD/SCIDマウスに移植し、6週後のマウスの骨髄中におけるヒト造血細胞の生着率を抗ヒト特異的CD45抗体を用いて解析した。その結果、HTS-8で増幅した造血細胞は、HTS親株で増幅された造血細胞とほぼ同等の生着を示すことが明らかとなった。このことは、hTERT遺伝子で不死化したヒトストローマ細胞は、クローン化しても安定して造血前駆細胞・幹細胞の支持能を保つことを示しており、今後の臨床応用に向けて有望な結果と考えられた。
エジプトの鳥インフルエンザウイルスH5N1の疫学調査とそのウイルス学的研究

H5N1亜型高病原性トリインフルエンザウイルス(HPAIV H5N1)は、一部の地域において致死率の高いヒト感染例が散発的に確認され、ヒトに対してパンデミックとなる懸念が指摘されている。エジプトは現在、世界的にも多くのHPAIV感染者を出している流行国の1つである。本研究においては、エジプトで飼育されている家禽からHPAIV分離を試み、得られた遺伝子配列から分子疫学調査を実施した。その結果、エジプトにHPAIVが初めて導入された2006年に比べて、2008-09年のウイルスはヒトに感染しやすいと考えられるα2,6 SA糖鎖親和性を獲得していた。エジプトでのH5N1感染例の発生は、2006年に始まり、現在もヒト感染例・死亡例が多い。エジプトにおけるヒトへの伝播のほとんどは、死亡したニワトリ、アヒル、また野鳥への直接の接触に依っていることが明らかにされている。本研究では、このH5N1の動物(ニワトリ、アヒル、ブタ、ハト)とヒトへの感染状況をエジプトの研究グループとの連携により疫学的研究を行い、その研究から得られるサンプルを日本に移送し、詳細なウイルス学的研究を行うことにより、エジプトで蔓延しているH5N1の疫学的研究とともにそのウイルスの病原性を明らかにすることを目的としている。本年度は、日本から5名の本研究代表者と分担者が、共同研究機関であるエジプトアレキサンドリア大学獣医学部を訪問し、情報交換のためのジョイントフォーラムを開催した。また、共同研究に関する綿密な打ち合わせを行った。前年度に入手したニワトリとアヒルの各臓器から分離されたH5N1株の遺伝子解析とウイルス学的性状の解析を行なうと共に、エジプトにおけるニワトリ、アヒルに加え、ハトへのH5N1感染の可能性について進めている。現在、これらの臓器サンプルの日本への移送手続きを行なっている。H5N1亜型高病原性トリインフルエンザウイルス(HPAIV H5N1)は現在、一部の地域において感染を繰り返す流行域を獲得している。同地域においては、致死率の高いヒト感染例が散発的に確認され、重大な社会問題となると同時に、断続的なウイルス伝播が新たな変異を誘導し、HPAIVがヒトに対してパンデミックとなる懸念が指摘されている。その結果、エジプトにHPAIVが初めて導入された2006年に比べて、2008-09年のウイルスは多様な遺伝子進化を獲得していることが明らかとなった。また、分離ウイルスを用いた糖鎖親和性の解析より、系統樹において各ブランチに属するウイルスが特定の糖鎖親和性を獲得していることが示唆された。このことは、エジプトにおいて、様々な糖鎖親和性を獲得した変異ウイルスが出現しつつあることを示しており、同国におけるHPAIVのサーベイランス強化とウイルス学的解析の必要性が示された。さらに、他のHPAIV流広域においても、同様のウイルス多様性の獲得が起こっているのか注視する必要があると考えられた。本研究で明らかとなった知見は、エジプト国における防疫対策に留まらず、世界規模でHPAIV感染拡大が懸念される現状において、日本国にとっても防疫上、重要な知見であると考えられる。また、迅速診断キット(イムノクロマト法)を用いたHPAIVH5N1感染の迅速診断法を確立する前段階として、家禽サンプルを対象に同診断キットの性能を評価した。その結果、診断キットが家禽におけるHPAIV H5N1感染を高感度かつ亜型特異的に検出できることが明らかとなった。

この中には系統樹上で特定の節から派生し、高頻度でヒトから分離されている一部のウイルス群は、弱いながらもヒト型レセプターへの結合親和性を示しており、エジプトにおいて、ヒトへの感染感受性を高めた変異ウイルスが出現してくる可能性を示唆しており、同国におけるHPAIVのサーベイランス強化とウイルス学的解析の必要性が示された。さらに、他のHPAIV流広域においても、同様のウイルス多様性の獲得が起こっているのか注視する必要があると考えられた。本研究で明らかとなった知見は、エジプト国における防疫対策に留まらず、世界規模でHPAIV感染拡大が懸念される現状において、日本国にとっても防疫上、重要な知見であると考えられる。
EBウイルス関連胃癌.DNAメチル化亢進の分子機序解明と胃癌治療への展開

Epstein-Barrウイルス(EBV)関連胃癌において,プロモーター領域CpG部位のメチル化がゲノムワイドに起こっていることを明らかにした.胃癌細胞株MKN7にEBウイルスを感染させ,ゲノムワイドDNAメチル化異常を再現することに成功し,分子機構解明に重要な実験系を確立した.また,潜在期ウイルス遺伝子蛋白LMP2AがDNAメチル化異常に関与していることを明らかにするとともに,DNAメチル化,プロテオソーム等に対する阻害剤を用いたウイルス再活性化療法の可能性について検討した.胃癌の1/3は高メチル化形質を示す胃癌である.このタイプの胃癌は,癌抑制遺伝子プロモーター領域CpG繰り返し配列のシトシンにメチル化を高頻度に起こし,その下流の遺伝子発現が抑制されている.EBウイルス感染細胞がモノクローナルに増殖しているEBウイルス関連胃癌は,その代表的な存在である.本研究では,EBウイルス関連胃癌におけるDNAメチル化亢進の分子機構の詳細についてEBウイルス感染胃癌細胞系,トランスジェニックマウスなどを用いて解明する.細胞内標的分子の同定により,「高メチル化形質胃癌」の病態解明,治療法の開発につながることが期待される(1)メチル化亢進機序の解明:胃癌細胞株に組みかえEBウイルスを感染させた実験系において,PTENメチル化,PTEN発現喪失が再現された.ウイルス潜在期蛋白の中でLMP2Aが異常を引起している可能性を見出した.このため.EBウイルス感染胃癌細胞株,LMP2A遺伝子導入胃癌細胞株,ならびにEBウイルス関連胃癌細胞株SNU-719,KTを用い,細胞内機序について解析を進める(2)LMP2Aの機能解析:レトロウイルスによる上皮細胞での発現系, LMP2A胃発現トランスジェニックマウスを用い,解析を進める.とくに,胃粘膜におけるLMP2Aの長期的な効果(メチル化亢進,形質変化)を検討する(3)EBウイルス関連胃癌の細胞学的特徴:EBウイルス関連胃癌の細胞学的特徴をさらに明らかにし,メチル化形質との関係を探る.このため,EBウイルス関連胃癌細胞株,早期胃癌を主な対象として,遺伝子発現プロファイリング,メチル化遺伝子プロファイリング,遺伝子コピー数解析,さらにマイクロRNA異常の解析を進める(5)治療戦略の構築:メチル化阻害,脱メチル化など,EBウイルス関連胃癌を対象にした検討を行うことにより,「高メチル化形質胃癌」の治療法を探索するEpstein-Barrウイルス(EBV)関連胃癌において,プロモーター領域CpG部位のメチル化がゲノムワイドに起こっていることを明らかにした.胃癌細胞株MKN7にEBウイルスを感染させ,ゲノムワイドDNAメチル化異常を再現することに成功し,分子機構解明に重要な実験系を確立した.また,潜在期ウイルス遺伝子蛋白LMP2AがDNAメチル化異常に関与していることを明らかにするとともに,DNAメチル化,プロテオソーム等に対する阻害剤を用いたウイルス再活性化療法の可能性について検討した.EBウイルス関連胃癌におけるエピジェネティック異常:EBウイルス関連胃癌では,癌抑制遺伝子プロモーター領域CpG繰り返し配列のシトシンにメチル化を高頻度に起こしている.この機序を解明するため,組みかえEBウイルス感染系を用い,2卿メチル化とそれによる発現喪失が,EBウイルスを感染させた胃癌細胞株MKN1,MKN7において再現されることを見出した.さらに,潜在期ウイルス蛋白LMP2AがSTAT3発現充進,リン酸化充進を介して,DNMT1を構成的に活性化させメチル化を引起していることを証明した.培養液中のIL6濃度はむしろ低下し,IL11濃度も検出以下で,抗IL6抗体によってもSTAT3活性化に変化がない.IL6非依存性にLMP2AがSTAT3活性化を引起していると考えられた。LMP2A遺伝子導入線維芽細胞の腫瘍形成能:レトロウィルスベクターを用いてLMP2AをNIH3T3細胞に遺伝子導入した.ヌードマウス皮下移植実験で,ベクターのみを導入した対照群では11匹中1匹に腫瘍が形成されたのに対し,LMP2A-NIH3T3細胞の移植では11匹中8匹に腫瘍が形成された.この系を用いることによって,腫瘍形成初期にLMP2Aと相互作用し,癌化に働く分子を探索する。EBウイルス潜在期蛋白トランズジェニックマウスによるメチル化促進機構の解析:EBウイルス潜在期蛋白を胃特異的に発現させるため,胃壁細胞特異的H+K+-ATPaseプロモーターを用い,その下流にLMP2A,EBNA1遺伝子を結合させた組み換えベクターを構築した.このベクターを用いて作成したLMP2Aトランスジェニックマウスを長期に観察していたところ,十二指腸に異型上皮病変の発生が確認された。(連携研究者:宇於崎宏講師,坂谷貴司助教,牛久哲男助教,森川鉄平助教,日野るみ助教,菊地良直助教,仲矢丈雄特任助教)EBウイルス関連胃癌の細胞学的特徴:外科手術により摘出された胃癌組織を対象に免疫組織学的にclaudin(CLDN)分子の発現について検討した.EBウイルス関連胃癌では,CLDN18+CLDN3-の均一な発現パターンを示し,胎児,成人胃細胞に固有の形質を保持していていた.胃固有細胞へ分化する幹細胞への感染が推定された.EBウイルス関連胃癌におけるエピジェネティック異常:EBウイルス関連胃癌では,癌抑制遺伝子プロモーター領域CpG繰り返し配列のシトシンにメチル化を高頻度に起こし,その下流の遺伝子発現が抑制されている.

胃癌細胞株に組みかえEBウイルスを感染させた実験系において,PTENメチル化,PTEN発現喪失が再現された.この系では潜在期ウイルス蛋白LMP2AがSTAT3を構成的に活性化(リン酸化亢進)し,DNMT1を発現亢進させることによってPTENメチル化を引起していた.免疫組織化学的にも,EBウイルス関連胃癌組織では,pSTAT3,DNMT1がともに高発現していたことから,EBウイルス関連胃癌ではウイルス膜蛋白LMP2AがSTAT3を活性化し,エピジェネティック異常を引起しているものと考えられた.LMP2A遺伝子導入線維芽細胞の腫瘍形成能:レトロウイルスベクターを用いてLMP2AをNIH3T3細胞に遺伝子導入した.LMP2A導入細胞においては,side population(SP)分画が増加するとともに,軟寒天培地でのコロニー形成能ヌードマウス皮下腫瘍形成能の増加がみられた.現在,これらの腫瘍形成能の分子機序について検討を進めているEBウイルス潜在期蛋白トランスジェニックマウスによるメチル化促進機構の解析:LMP2Aトランスジェニックマウスを対象に,MNUを用いた発癌実験を進めている.(連携研究者:宇於崎宏講師,坂谷貴司助教,牛久哲男助教,森川鉄平助教,日野るみ助教,仲矢丈雄特任助教)EBウイルス関連胃癌の細胞学的特徴:消化管に比較的特異的な転写因子の発現を胃癌において検討した.EBウイルス関連胃癌は,SOX2(+)CDX2(-)HNF4aP1(-)のG型(77%),あるいはSOX2(-)CDX2(-)HNF4aP1(-)のN型(23%)のいずれかに分類され,転写因子発現においても特異な一群であることが示されたDNA合成に必要なribonucleotid reductaseはM1, M2のサブユニットからなり,M2(RRM2)の量によって酵素活性が制御されている.RRM2の発現を免疫組織学的に胃癌において検討すると,EBウイルス関連胃癌ではRRM2発現が88%にみられ,通常胃癌59%に比し有意に高率であった.EBウイルス関連胃癌細胞株SNU-719におけるsiRNAを用いた実験結果をあわせ,EBウイルス関連胃癌においてRRM2の発現亢進が細胞増殖に寄与していることを明らかにしたEBウイルス関連胃癌におけるマイクロRNA異常:EBウイルス関連胃癌では、microRNA 200 familyに含まれるmiR-200aとmiR-200bの発現が一般の胃癌に比べて有意に低下しており,これによってE-cadherinの転写抑制因子であるZEB1/ZEB2の発現が亢進し,結果的にE-cadherinの発現が抑制されていることを明らかにした.EBウイルス関連胃癌における発癌の初期課程において,細胞内マイクロRNA制御の撹乱により上皮間葉転換を引き起こしている可能性が示されたEBウイルス関連胃癌におけるエピジェネティック異常:EBウイルス関連胃癌では,癌抑制遺伝子プロモーター領域CpG繰り返し配列のシトシンにメチル化を高頻度に起こし,その下流の遺伝子発現が抑制されている.この現象の解明のため,EBウイルス潜在期蛋白LMP2A
アレルギー患者代替食の臨床試験のための基礎データの構築

乳幼児に発症頻度が高く成長してもアレルギー症状が解消されにくい鶏卵アレルギーの原因物質オボアルブミン^<1)>とオボムコイド^<2)>(hen egg ovalbumin・ovomucoid : H-OVA・H-OM)は日本ウズラ卵オボアルブミン^<3)>とオボムコイド^<4)>(Japanese quail eggovalbumin ovomucid:JQ-OVA・JQ-OM)の一次構造においてそれぞれ88.3%、75.8%の相同性がある。しかしInhibiti ELISA法で測定した抗原性はJQ-OVAがH-OVAの6.8%、JQ-OMがH-OMの0.04%であった。これは、わずかのアミノ酸残基が置換しても抗体との結合が著しく低下することを意味する。そこで本研究では鶏卵とウズラ卵のアレルゲン構造の相違を明らかにすることを目的とした。まずJQ-OVAを硫安分画およびゲルろ過クロマトグラフィーで精製し、ウサギに免疫して抗体を作成した。JQ-OVAをS. aureus V8プロテアーゼ、TPCK-トリプシン、TLCK-キモトリプシンおよびペプシンで消化、消化物をトリシンSDS電気泳動および二次元電気泳動で分離、イムノブロット法で抗JQ-OVA・ウサギ血清IgG抗体と結合するペプチドを検出した。分子量2.510kDaの抗原性を示すペプチドをプロティンシークエンサーでN末端アミノ酸配列分析し、電気泳動で求めた分子量と各タンパク質分解酵素の基質特異性を考慮して一次構造を推定したところ、JQ-OVAの抗原決定基(エピトープ)は17-28、72-84、120-124、132-149、160-175、206-211、219-226、233-242、244-253、298-308に存在することが示唆された。これらの部位はすでに報告されているH-OVAのエピトープ部位とは異なる部位であった。また、鶏卵とウズラ卵で離乳食(茶わん蒸し、カスタードプディング、卵ボーロ、かき玉汁)を作成し2点嗜好試験法で官能検査を行ったところ香り、味、口触り、総合評価の項目において有意差が認められなかった。以上の結果から、鶏卵アレルギー患者の代替食品としてウズラ卵の利用は十分可能であると考えられた。卵アレルギー患者の代替食の開発を目指し、ウズラ卵白タンパク質の約50%を占めるオボアルブミンの抗原決定基(エピトープ)構造を明らかにすることを目的に研究を行った。まず、ウズラ卵白アルブミン(JQ-OVA)の精製を行った。すなわちウズラ卵白を硫安分画したのち、Sephadex G-100カラムで粗JQ-OVAを得、次いでDEAE-Sephadex A-50カラムで精製した。得られたJQ-OVA画分を凍結乾燥し、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で単一バンドであることを確認した。

次いでJQ-OVAに対する抗体(抗JQ-OVAウサギ血清IgG)をウサギ(ニュージーランドホワイト種)に免疫して作成した。血清の抗体価をドットブロット法により求めたところ、5回目の免疫で2,000倍の抗体価が得られた。次にJQ-OVAのエピトープを分析するため、JQ-OVAを消化しペプチドを得た。消化条件は2mgのJQ-OVAを1.0mlの0.01M HCl、pH2.0、0.1Mぎ酸/アンモニウム緩衝液、pH8.5と同緩衝液、pH8.0に溶かし0.02mgのペプシン、TPCK-トリプシン、TLCK-キモトリプシンを加え37°Cで24時間反応させた。得られたペプチドを凍結乾燥したのち二次元電気泳動で分離した。本法は一次元目にIPGphor等電点電気泳動装置、二次元目にSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動装置を用いるため、性質の似通ったペプチドを細かく分離するのに有効であった。JQ-OVAのペプシン、TPCK-トリプシン、TLCK-キモトリプシン消化ペプチドのスポットは、それぞれ34、36、30検出された。次いでイムノブロット法によりゲル内のペプチドをPVDF膜にブロットし抗JQ-OVA-ウサギ血清IgG抗体と結合するペプチドを検出したところ、それぞれ25、28、21であった。今後これらのペプチドの一次構造を分析することでエピトープ構造を明らかにしていく予定である。ウズラ卵白アルブミン(JQ-OvA)^<1)>は鶏卵白アルブミン(H-OvA)^<2)>とアミノ酸配列において88.9%の相同性がある。しかしJQ-OvAの抗H-OVA-ウサギ血清IgG抗体に対する抗原性はH-OVAの僅か6.8%であった。これは、わずかのアミノ酸残基が置換しても抗体との結合が著しく低下することを意味する。このことから鶏卵アレルギー患者の代替食品としてウズラ卵の使用が可能と考えた。そこでウズラ卵白アルブミン(JQ-OVA)を精製し、ウサギに免疫して抗体を作成し、JQ-OVAをタンパク質分解酵素で消化して得られるペプチドのうち抗体と反応するもののアミノ酸配列を分析することでJQ-OVAの抗原決定基(エピトープ)の構造を明らかにすると同時にJQ-OVAとH-OVAのエピトープ間の交差抗原性を知ることを目的に研究を行った。鶏卵白タンパク質の54%を占め栄養価が高くかつアレルゲン性の高いオボアルブミン(H-OVA)のアミノ酸配列はウズラ卵白オボアルブミン(JQ-OVA)と88.9%の相同性があり、H-OVAのIgG抗体と結合するエピトープ構造は94.8%もの高い相同性が認められた。また鶏卵白タンパク質の中で最もアレルゲン性の強いオボムコイド(H-OM)の一次構造はウズラ卵白オボムコイド(JQ-OM)と75.8%の相同性があり、H-OMのIgGエピトープは73.5%の相同性が認められた。しかしJQ-OVAの抗H-OVA-ウサギ血清IgGとの結合性をInhibition ELISA法で測定するとH-OVAの6.8%であり、JQ-OMの抗H-OM-ウサギ血清IgGとの結合性はH-OMの僅か0.OO4%であった。これはわずかのアミノ酸残基が置換しても抗体との結合が著しく低下することを意味する。鶏卵アレルギー患者の代替食品としてウズラ卵を用いた料理を作り、食味および抗原性について検討した。ウズラ卵と鶏卵で調製した試料4品目について2点嗜好試験法で官能検査をした。卵ボーロ・カスタードプディング・茶碗蒸は、色のみ鶏卵試料が有意に好まれた(P<0.001、P<0.01、P<0.01)。しかし香り・味・口触り・総合評価で差は認められなかった。
アンドレ・ブルトンの芸術空間―神話発生のオートマティスムと記号の反転

本研究は三部構成からなり、本年度は第三部の執筆を中心に行った。特に、アンドレ・ブルトン独自の神話理論の射程を測るために、1947年にパリで開催されたシュルレアリスム国際展を具体的なモデルケースとして取り上げ、神話発生のオートマティスムの機能構造を分析した。その概要は以下の通りである。展覧会場の一番奥の部屋には、12個の「祭壇」が立てられ、12体のオブジェ作品が設置された。会場で販売されたカタログによれば、「祭壇」のテーマは、詩や小説に登場する、今後「神話」として機能する潜在性を備えているかもしれない特徴的な人物・動物などのイメージである。ブルトンはあらかじめその核となる12個のイメージを手紙でシュルレアリストたちに伝え、最終的に12人の造形作家が各「祭壇」を制作したのだった。ここで行われているのは、大がかりな伝言ゲームである。輪郭の不明瞭な「神話」、が提示されることで、作品内容の伝達経路にノイズが挿入され、横滑りのヴァリアントが生産される。つまり、参照元の作品からブルトンへ、ブルトンから「祭壇」制作担当者へ、「祭壇」から観客へと伝達される際に、三段階にわたってノイズが増幅されるのである。ブルトンが1935年に発表した「ヴァリアントのオートマティスム」では伝言ゲームがオートマティスム発生のモデルとして報告されていた。1947年の国際展の会場でも「ヴァリアントのオートマティスム」の発生が期待されており、「神話」の無数のヴァリアントが会場を満たすことで「万人で作る詩」とでも呼ぶべき、シュルレアリスム的共同体が生まれるのである。ここで注意すべきは、この潜在的伝言ゲームを可能にしているのが、カタログに掲載されているブルトンの文章だという点である。こうして観客は、カタログと祭壇=オブジェの間に開かれる磁場にとらえられ、神話発生のオートマティスムの要素のひとつとなるのである。本研究の目的は1947年のパリ・シュルレアリスム国際展の分析を通して、アンドレ・ブルトンの芸術空間の独自性を明らかにすることである。本研究の成果は三部構成の論文として発表される予定であり、本年度は第一部にあたる以下の主題を中心に研究を進めた。すなわち、ブルトンにおけるオートマティスムの概念が1930年代以降からその領域を拡大すること、及びこの領域拡大が造形芸術・言語芸術の両分野において並行して起きていることを実証し、その推移をたどることで、絶えず生成状態にあるブルトンの詩学の全体像を、動的な状態のまま浮き上がらせる、という主題である。本年度は、研究指導委託によりリヨン第二大学(フランス)において研究活動を行った。研究活動は資料収集および論文執筆を中心に進められた。また、現地の研究者との個別の意見交換を通して、研究の客観性と妥当性の獲得を図った。特に、シュルレアリスム研究の第一人者であるドミニック・カルラ氏と定期的に討論の場を設けることができたことは、大きな収穫であった。本研究では、アンドレ・ブルトンの詩作品に対する正確な解釈が求められる。恣意性を排除し、解釈の客観性・妥当性を向上させ、解釈の精度を高めるには、専門的知識を備えたフランス語圏の研究者の反応を確認する必要があるため、テーマごとにフランス語で論文執筆を行い、フランス語を母国語とする専門研究者たちの反応を確かめた。本年度の出版物に関しては、2010年4月に平凡社より出版された『〈前衛〉とはなにか?<後衛>とはなにか?』において、日本学術振興会特別研究員として、論文執筆及びカルラ氏の論文翻訳を行った。また、8月には日本フランス語フランス文学会の全国学会誌に、やはり日本学術振興会特別研究員として、査読論文が掲載された。本研究の成果は三部構成の論文として発表される予定であり、本年度は第二部にあたる以下の主題を中心に研究を進めた。すなわち、造形的イメージが詩的言説の横濫を誘発する一方で、詩的言説は造形的イメージに含まれる潜在的機能を発動させるという、ブルトンの芸術空間の特性に着目し、各時期のブルトンの詩法がそこにどのように反映されているのかを分析した。具体的にはまず、ブルトン・コレクションのオークション・カタログや、ブルトンの造形作品の図版資料集などのコーパスの中から、ブルトンの言語活動がイメージに隣接しているモデルを選別し、時系列に沿って整理した。次に、言語とイメージの接近が、ブルトン自身の作品内のみでおきている場合、そしてブルトンの言語活動に他者の作品が関わる場合、の二種類に大別し、それぞれ発表媒体によって分類した。こうして、ブルトンの造形作品における、言語とイメージとの間の緊張関係の分析を行った結果、詩的テクストと立体的オブジェが組み合わせられた「ポエム=オブジェ」と呼ばれる一連の造形作品において、テクストとイメージそれぞれの領域が、時代を下るほどに作品空間内で複雑に錯綜し浸透しあう、という通時的変化が明らかになった。さらに、言語的要素と造形的要素が、どちらも他方の「説明」に陥ることなく機能する、つまりテクストがオブジェの解説文となったり、テクストの内容をオブジェが図示したりはしない、ブルトン独自の芸術空間を可能にする詩法の分析を行った。その結果、外部の可視的現実を不可視の想像界に取りこみ、詩的現実に昇華した上でそれを再び外部の現実空間へと重ね合わせるという、特殊な創作過程が明らかになった。

本研究は三部構成からなり、本年度は第三部の執筆を中心に行った。特に、アンドレ・ブルトン独自の神話理論の射程を測るために、1947年にパリで開催されたシュルレアリスム国際展を具体的なモデルケースとして取り上げ、神話発生のオートマティスムの機能構造を分析した。その概要は以下の通りである。展覧会場の一番奥の部屋には、12個の「祭壇」が立てられ、12体のオブジェ作品が設置された。会場で販売されたカタログによれば、「祭壇」のテーマは、詩や小説に登場する、今後「神話」として機能する潜在性を備えているかもしれない特徴的な人物・動物などのイメージである。ブルトンはあらかじめその核となる12個のイメージを手紙でシュルレアリストたちに伝え、最終的に12人の造形作家が各「祭壇」を制作したのだった。ここで行われているのは、大がかりな伝言ゲームである。輪郭の不明瞭な「神話」、が提示されることで、作品内容の伝達経路にノイズが挿入され、横滑りのヴァリアントが生産される。つまり、参照元の作品からブルトンへ、ブルトンから「祭壇」制作担当者へ、「祭壇」から観客へと伝達される際に、三段階にわたってノイズが増幅されるのである。ブルトンが1935年に発表した「ヴァリアントのオートマティスム」では伝言ゲームがオートマティスム発生のモデルとして報告されていた。1947年の国際展の会場でも「ヴァリアントのオートマティスム」の発生が期待されており、「神話」の無数のヴァリアントが会場を満たすことで「万人で作る詩」とでも呼ぶべき、シュルレアリスム的共同体が生まれるのである。ここで注意すべきは、この潜在的伝言ゲームを可能にしているのが、カタログに掲載されているブルトンの文章だという点である。こうして観客は、カタログと祭壇=オブジェの間に開かれる磁場にとらえられ、神話発生のオートマティスムの要素のひとつとなるのである。研究指導委託によりフランスに海外渡航を行い、日本では閲覧の難しい、あるいは不可能な一次資料を多数入手できたこと、さらにシュルレアリスム研究の第一人者、ドミニック・カルラ氏と定期的に意見交換を行えたことが、研究を大いに発展、深化させたため。また、新しい発見をなしつつも、その研究の発展・深化が、おおむね期待された方向に向かっているため。研究計画に変更はなく、当初の予定通りの方針に従って研究を続行する。これまで行ってきた研究を下地に、本課題の中心的テーマである、1947年のパリ・シュルレアリスム国際展の分析を行う。その際に、ブルトンの言う「集合的神話」および「親しい神話」を「肥大化したオートマティスム」という観点から検討し、国際展で何が問題になっていたのかを明らかにする。第二次世界大戦の終戦直後に、ブルトンがどのような世界の出現を求め、シュルレアリスム運動になにを期待していたのかを論証し、戦後のシュルレアリスム運動の射程をはかる。