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西鶴以降の浮世草子の総合的研究

佐伯孝弘は「日本の幽霊・妖怪」と題して前年度に行った講演を活字化した(『浅草寺仏教文化講座』第62集、平成30年8月、pp7691)。1以上である。なお、科研費の研究作業項目のうち、学術誌『浮世草子研究』創刊号の刊行、及び未翻刻作品の翻刻作業は行えなかった。研究作業項目のうち、『御前於伽』の註釈は進みつつあるが、例会開催が予定より2回程少なくなった(会場や発表担当者の都合)ため、若干遅れている。西鶴・浮世草子の研究目録作成作業は、予定通り再開し、進行中。学術誌『浮世草子研究』刊行は代表者佐伯の校務過多の状態のため遅れてしまっている。浮世草子と他ジャンルとの関連に関する各メンバーの研究は、やはりメンバー各人が年代的に勤務校で多忙になってしまっているため、所期の予定通り順調に研究を進め成果を活字化(発表)できているとは言い難い。その他、註釈や研究目録作業の遅れの原因には、浮世草子研究会のメンバーの高齢化、新入会員不足による、人手不足という状況も関連している。『御前於伽』註釈作業は次年度中には終え、発表へ向け確認作業に移る予定。「西鶴と浮世草子研究目録」作成作業は、次年度夏に追加作業の取り纏めを行い、Webでの公表をする予定で、Web作業を代行してもらう文学通信社と相談中。学術誌『浮世草子研究』は大きく遅延しているが、未入稿部分を次年度前期中に揃え、前期末には目途を付け、刊行・発送を行いたい。印刷・製本業者とスケジュールの再調整も行う。目録作成作業の遅れを補うため、浮世草子研究会会員以外にも、作業協力者を募っている。作業がやや遅れたことにより少額の残額が発生したため、それは次年度に繰越。
変形岩中流体のぬれ特性と地震発生への影響

地球内部の流体(水溶液)は,物質の粘性・強度や拡散の速さに大きく影響し,地球内部の動的過程を支配している.特に岩石の変形において,結晶粒界に存在する流体の連結度などは,それを介しての物質移動(拡散や浸透)を大きく左右し,結果として岩石の変形速度や断層運動さらには地震活動に大きな影響を及ぼしていると考えられている.そこで,ここではまず,流体の化学組成や温度などが流体の構造やぬれにどのように影響するかを,主に赤外分光法によって調べた.まず,地殻流体の代表として,純水,NaCl,炭酸水溶液などの人工的な水溶液を作成し,減衰全反射(ATR)赤外分光法を用いて,赤外スペクトルを測定し,OH伸縮振動赤外吸収帯の変化を定量的に解析し,流体の構造と性質(かたさ,やわらかさ)を調べた.その結果,みかけのピーク位置は,高波数側から順にKCl,NaCl,CaCl_2>Na_2SO_4>純水,NaHCO_3,Na_2CO_3となり,ピーク相対強度比3250/3350は値が大きい方から,Na_2CO_3>純水>NaHCO_3,Na_2sO_4,MgCl_2>NaCl,KCl,CaCl_2の順となり,異なる水溶液の特性を評価することができた.また,これら人工水溶液の加熱測定を加熱減衰全反射赤外分光法によって行しいOH伸縮振動赤外吸収帯などの変化を定量的に解析した.その結果,200°Cまで加熱するにつれ,すべての水溶液でみかけのピーク位置,ピーク強度比3630/3350,平均水素結合距離が増加した.純水の値が最も大きく変化し,高温では純水が最も大きな値をとった.また4成分面積比では第1成分が最も変化し,水素結合距離が長いクラスターの割合が増えていく.しかしながら水分子以外の溶存物質が存在すると,温度の上昇に伴う本来の水分子の動きを溶存物質が束縛し,純水ほど水素結合距離が長いクラスターの割合が大きくならないと考えられる.さらに,現在及び過去の地震発生帯と考えられる地域の予備調査を開始し、岩石試料中流体包有物の顕微ラマン分光法,顕微赤外分光法による測定の準備を行った.今後,上記の人工水溶液の結果と比較し,流体の岩石へのぬれ,物質移動特性を考察していく.なお,本年度の研究経費において高額の外国旅費を申請し,現在の地震発生帯パプアニューギニアでの長期間の地質調査を計画していたが,ビザ申請に時間がかかり,年度内に調査を行えなかったので,ご了承頂きたい.地球内部の流体(水溶液)は,物質の粘性・強度や拡散の速さに大きく影響し,地球内部の動的過程を支配している.特に岩石の変形において,結晶粒界に存在する流体の連結度などは,それを介しての物質移動(拡散や浸透)を大きく左右し,結果として岩石の変形速度や断層運動さらには地震活動に大きな影響を及ぼしていると考えられている.そこで,ここではまず,流体の化学組成や温度などが流体の構造やぬれにどのように影響するかを,主に赤外分光法によって調べた.まず,地殻流体の代表として,純水,NaCl,炭酸水溶液などの人工的な水溶液を作成し,減衰全反射(ATR)赤外分光法を用いて,赤外スペクトルを測定し,OH伸縮振動赤外吸収帯の変化を定量的に解析し,流体の構造と性質(かたさ,やわらかさ)を調べた.その結果,みかけのピーク位置は,高波数側から順にKCl,NaCl,CaCl_2>Na_2SO_4>純水,NaHCO_3,Na_2CO_3となり,ピーク相対強度比3250/3350は値が大きい方から,Na_2CO_3>純水>NaHCO_3,Na_2sO_4,MgCl_2>NaCl,KCl,CaCl_2の順となり,異なる水溶液の特性を評価することができた.また,これら人工水溶液の加熱測定を加熱減衰全反射赤外分光法によって行しいOH伸縮振動赤外吸収帯などの変化を定量的に解析した.その結果,200°Cまで加熱するにつれ,すべての水溶液でみかけのピーク位置,ピーク強度比3630/3350,平均水素結合距離が増加した.純水の値が最も大きく変化し,高温では純水が最も大きな値をとった.また4成分面積比では第1成分が最も変化し,水素結合距離が長いクラスターの割合が増えていく.しかしながら水分子以外の溶存物質が存在すると,温度の上昇に伴う本来の水分子の動きを溶存物質が束縛し,純水ほど水素結合距離が長いクラスターの割合が大きくならないと考えられる.さらに,現在及び過去の地震発生帯と考えられる地域の予備調査を開始し、岩石試料中流体包有物の顕微ラマン分光法,顕微赤外分光法による測定の準備を行った.今後,上記の人工水溶液の結果と比較し,流体の岩石へのぬれ,物質移動特性を考察していく.なお,本年度の研究経費において高額の外国旅費を申請し,現在の地震発生帯パプアニューギニアでの長期間の地質調査を計画していたが,ビザ申請に時間がかかり,年度内に調査を行えなかったので,ご了承頂きたい.
超高速・超広帯域モバイルネットワーク実現のための基盤研究

次世代の超高速・超広帯域モバイルネットワークを実現するための屋内伝搬推定及び回線設計に有効な数値計算法に関する基礎的研究を実施した.研究成果として,時間領域差分法に基づく屋内伝搬推定ツール,屋外から屋内への侵入波伝搬推定ツール及び回線設計法を開発した.さらに,大規模計算機システムを利用した数値シミュレーションから,大規模なモデルに関しても合理的な時間内で高精度な数値結果が得られることを確認した.次世代の超高速・超広帯域モバイルネットワークを実現するための屋内伝搬推定及び回線設計に有効な数値計算法に関する基礎的研究を実施した.研究成果として,時間領域差分法に基づく屋内伝搬推定ツール,屋外から屋内への侵入波伝搬推定ツール及び回線設計法を開発した.さらに,大規模計算機システムを利用した数値シミュレーションから,大規模なモデルに関しても合理的な時間内で高精度な数値結果が得られることを確認した.1本基盤研究は,次世代の超高速・超広帯域モバイルネットワークを実現するための屋内電波伝搬推定および回線設計を可能にする技術の開発を目的としている.平成21年度は,時間領域差分(FDTD)法に基づく電波伝搬特性推定のための,大規模かつ高速な解析を実現するソフトウエアの開発を行った.解析ソフトウエアには,解析対象を任意の座標軸方向に領域分割して並列計算するための手法,軸方向に長い解析モデルの高精度解析を実現するためのCPML吸収境界条件の実装を行った.また,波源として,建物侵入波および無線送受信用アンテナの解析的取り扱いを可能にしたことで,ほとんどの無線環境での解析に対応した.2電波伝搬特性推定の評価に有効な次に示す3種類の高精度数値解析モデルの開発を行い,数値解析と実験結果との比較検討に適用した.(1)本学情報科学研究科棟9階フロア,(2)本学情報基盤センター北館2階から4階,(3)市街地モデル.前述の解析モデル(1)および(2)は,いずれも2.4GHz帯センサネットワークおよび無線LANシステムに適用するため空間分解能10mmで製作し,床下,天井裏および壁面内部の構造と建築材料のモデリングを行った.また,前述の解析モデル(3)は空間分解能50mmとした.3上記1および2で開発を行った解析ソフトウエアおよび解析モデルを用いた数値シミュレーションを行い,その結果を実験結果と比較することで,開発した解析ソフトウエアと解析モデルの有効性を検証した.センサネットワークの伝搬特性について,解析結果は実験結果をよく推定することを明らかにした.市街地伝搬特性推定では,これまでレイトレーショング法では困難であったUHF帯での解析が,本提案手法を利用することで可能であることを示した.無線LAN伝搬特性解析では,実験結果との比較検討から,無線LAN装置設置場所の他に隣接する部屋内部の金属製什器などを考慮すべきであることを明らかにした.1本基盤研究は,超高速・超広帯域モバイルネットワークを実現するための屋内電波伝搬推定および回線設計を可能にする技術の開発を目的としている.平成22年度は,前年度開発を行った時間領域差分(FDTD)法に基づく電波伝搬特性推定用ソフトウエアの有効性を確認するため,IEEE802.11n規格に基づく市販の無線LANシステムを利用した測定結果との比較検討を行った.さらに,屋内伝搬特性推定のための設計法を提案した.2 2.4GHz帯における屋内伝搬特性の測定を次の3種類の環境で行った.(1)大規模オフィス環境(本学情報科学研究科棟9階と2階),(2)一般的なオフィス環境(本学情報基盤センター北館2階から4階),(3)戸建住宅.はじめに,測定手法および特性評価方法について提案を行った.測定に利用した市販品の特性は受信電界強度とスループットが線形な関係にあることを明らかにした.導出した直線の式は上記屋内環境すべてに対して同一である.これは,市販品ではデザインおよびコストの観点から無線LAN機器に寸法などの物理的な制約があり,期待されるMIMO特性が十分実現されていないためである.また,測定結果を推定可能な数値モデルを開発し,計算機シミュレーションにより屋内の任意の場所での電界強度値を推定することで,近似式を利用したスループット値の推定法を提案した.3 5GHz帯における屋内伝搬特性について,上記(2)および(3)の環境における測定を行った.その結果,受信電界強度とスループットの関係は直線の周囲に分布することが明らかになった.これは,波長が短くなったことによって市販品においてもIEEE802.11n規格に基づくMIMO OFDMの伝送特性が得られていることを意味する.今後,数値シミュレーションのためのソフトウエアに,広帯域伝送特性の評価手法を実装する予定である.(1)本基盤研究は,次世代の超高速・超広帯域モバイルネットワークを実現するための屋内電波伝搬特性推定および無線回線設計を可能にする技術の開発を目的としている.平成23年度は本研究で開発を行った時間領域差分(FDTD)法に基づく電波伝搬特性推定ソフトウエアについて,MIMO-OFDM通信方式の特性評価に有効な遅延プロファイルおよび遅延スプレッドを定量的に推定する計算アルゴリズムを提案し,その実装を行った.提案手法は,時間領域解析データと可視化システムを組み合わせて,観測面内の任意の点を指定することで遅延プロファイルを描画し,同時に遅延時間を決定する.その手法を戸建住宅モデルに適用し,シミュレーション結果の妥当性について議論した.(2)平成23年11月からは,理論ピーク性能172TFlops,総主記憶容量17TBの大型計算機システムが利用可能になったことから,本研究で開発を行った解析ソフトウエアの移植とチューニングを行った.

4倍以上の高速化を実現するとともに,より大規模な解析対象に対して最大20時間程度で解析結果が得られることを確認した.(3)開発されたシミュレータを使用して戸建住宅および一般的なオフィス環境において,IEEE802.11n規格に基づく市販の2.4/5GHz帯デュアルバンド無線LANシステムを利用した屋内伝搬特性の数値解析を行った.数値シミュレーションでは,空間分解能5mmとして,構造物および什器等の伝搬環境の数値モデル化を行った.これら数値モデルを利用して得られた電界強度分布(RSSI)に関する数値解析結果と実験結果を比較検討し,周波数2.4GHz帯と同様に5GHz帯においても両者がよく一致することを確認した.(4)最後に,3年間の研究において得られた成果と残された課題についてまとめを行った.
微生物のグリタチオン代謝関連酵素およびその遺伝子に関する基礎および応用研究

(1)大腸菌γーグルタミルトランスペプチダ-ゼ(GGT)の遺伝子ggtをGGT欠損大腸菌にセルフクロ-ニングした。本クロ-ニング株は野生株同様20°Cでの培養でGGTを高発現し、37°Cでは低い活性しか示さなかった。ウエスタンおよびノザンブロッティングを行い、GGTの低温依存性発現が、プロセッシング段階ではなく転写段階で調節されているとの結論を得た。(2)大腸菌のペリプラスムタンパク漏出株に、ggtをクロ-ニングし、GGT漏出変異株を作成、迅速大量精製を行った。(3)X線解析に適したGGT結晶の作成条件を検討し、長さ2mmの棒状結晶および板状結晶を得た。(4)Arg571をAlaに変えた変異GGTは活性を示さず、プロGGTのままでペリプラスムに局在することを明らかにした。(5)酵母Issatchenkia orientalisからグルタチオンSートランスフェラ-ゼ(GST)のmRNAを精製し、GSTcDNA遺伝子を大腸菌にクロ-ニングし、この株がGSTを高発現していることを確認、さらにGSTcDNAのヌクレオチド配列を明らかにした。またGSTの誘導生成が、転写レベルで行われていることを明らかにした。(6)I.orientalisのグルタチオン抱合体代謝経路について検討し、システイン抱合体にまで分解されることを解明した。この代謝にカルボキシペプチダ-ゼ様酵素が関与することを明らかにした。(8)細胞分画および、凍結切片・免疫電顕法によりI.orientalisGSTがその細胞の表層に局在することを確認した。1.大腸菌γーグルタミルトランスペプチダ-ゼ(GGT)の遺伝子<ggt>___ーをプラスミドpKK223ー3に組み込み、これをGGT欠損大腸菌株にクロ-ニングした。本クロ-ニング株は20°Cの培養でGGTを高発現するが、37°Cでは低い活性しか得られず、またIPTGによる誘導生成も見られなかった。これは、<ggt>___ーが有するプロモ-タ-部分の影響の結果と考えられ、この部分の除去に部位特異的変異による方法を適用中である。これとは別にGGTを大量に生産する目的で、大腸菌のペリプラスムタンパク漏出変異株に、<ggt>___ーを持つプラスミドを導入し、GGT漏出変異株を作成した。本株は、12mg/LのGGTを培地中に漏出し、この培地から、収率50%、150倍の精製でGGTの単一標品を得ることが出来た。2.大腸菌からGGTを精製し、X線解析に適したGGT結晶の作成条件を検討しているが、未だに適当な結晶は得られていない。3.<Issatchenkia orientalis>___ーからグルタチオンSートランスフェラ-ゼ(GST)のmRNAを精製し、そのcDNAのライブラリ-を大腸菌で作成、GST遺伝子のクロ-ニング株を得た。本大腸菌株が、GSTを高発現していることを活性測定及び免疫学的方法(Western blot)により確認した。4.<I.orientalis>___ーの細胞及び無細胞抽出液を用いて、ジニトロベンゼンのグルタチオン抱合体の代謝を進行せしめ、その産物を単離同定した。これをNMRやMSスペクトロメトリ-により、構造決定し、グルタチオン抱合体がシステイン包合体に分解されることを解明した。(1)E.colikー12は、低温(20°C)培養でγーグルタミルトランスペプチダ-ゼ(GGT)の高活性を示す。

その機構を解明する目的で、野生株およびGGT遺伝子(ggt)のクロ-ニング株を20°C、37°C、42°Cで培養し、ウエスタンおよびノザンブロッテングを行い、GGTの低温依存性発現が、転写段階で調節されているとの結論を得た。GGTの低温依存性発現はggtのプロモ-タ-部分の機能の結果と考えられ、この部分の除去及び高発現プロモ-タ-への置換を種々の方法で試みて来たがいまだに成功していない。(2)活性中心と予測されるアミノ酸残基のひとつArg571を部位特異的によりAlaに変換したところ、変異GGTは活性を持たず、またプロセッシングを受けずにプロGGTのままでペリプラスムに局在していることが明らかになった。(3)E.coliKー12からGGTを精製し、X線解析に適したGGT結晶の作成条件を検討し、2×0.2×0.2mmの棒状結晶、および2×1×0.2の板状結晶を得るに到っている。今後これらの結晶を用いて、X線解析を行っていく予定である。(4)グルタチオン抱合体をさらに代謝分解する酵素として、金属依存性のカルボキシペプチダ-ゼ様酵素の関与を明らかにし、そのIssatchenkia orientalisからの精製、性質の解明を行っている。(5)さきに調製したグルタチオンSートランスフェラ-ゼ(GST)のcDNAを、プラスミドpYM2のEcoRIサイトに挿入、この組換えベクタ-を用いて、S.cerevisiae/EH13ー15の形質転換を行った。得られた形質転換株は、GSTを発現し宿主株の約15倍の活性を示した。(6)細胞分画および、凍結切片法一免疫電顕により本酵素がI.orientalis細胞の表層に局在することを確認した。
試験管内反応系を用いた高等真核細胞でのDNA鎖切断再結合反応の解析

細胞核からの抽出液を用いて線状プラスミドDNAを基質とし、DNA2本鎖切断再結合の効率及び誤りの頻度の両方を測定することができる試験管内反応系を構築した。ヒト高発癌性劣性遺伝病アタキシア・テランジェクタシア患者細胞では、再結合反応の正確度が正常細胞よりも低く、しかも特定の欠失が多く見られた。欠失切断点には、非相同組換えに特徴的な数塩基の短い反復配列が見られた。また、別の高発癌性劣性遺伝病であるブルーム症候群(BS)患者由来細胞では、正常細胞よりも大きな欠失が多く見られたが、約40%では、欠失切断点に反復配列が見られなかった。以上のことから、これら遺伝病細胞ではDNA2本鎖切断の再結合に何らかの異常があるものと考えられる。他方、放射線照射したマウス培養細胞の細胞核抽出液では、照射線量などの違いによって再結合反応の効率と正確度に変動が見られた。このことは、放射線照射などの外界からの刺激を受けた細胞内情報伝達系によって、再結合反応機構が制御されていることを示している。しかし、同様の解析をp53遺伝子欠損マウス由来の細胞を用いて行うと、このような放射線照射による変動が見られなかった。したがって、放射線照射等のストレスによって、非相同組換え機構の修飾がp53依存的に誘導されることが明らかになった。また、ニワトリ由来の細胞株DT40を用いて、種々の相同的組換え関連遺伝子の欠損細胞での染色体異常について解析し、この細胞株では、染色体異常の生成には、相同的組換えが主要な役割を果たし、非相同的組換えはそのバックアップ機構として働いていることが明らかになった。また相同組換え機構は姉妹染色分体交換(SCE)形成にも関与しており、このことがBS細胞での高頻度SCEの原因であると考えられた。DNA鎖切断の再結合反応を解析するために、細胞核からの抽出液を用いた試験管内反応系を構築した。この反応系は、制限酵素処理によって2本鎖切断を導入した線状プラスミドDNAを基質とし、これに細胞核の抽出液を加えて修復反応を行わせ、その反応生成物を解析するものである。再結合反応の効率を解析することができるだけでなく、用いるプラスミドにはDNA配列の変化を検出するマーカーがあるため、再結合反応の誤りの頻度も検出することができる。ヒト高発癌性遺伝病アタキシア・アランジェクタシア(AT)由来細胞の核抽出液では、DNA鎖切断再結合反応の効率は正常細胞の核抽出液と変わらなかったが、再結合の誤りによる変異プラスミドの頻度が正常細胞の核抽出液に比べて約5倍高かった。変異プラスミドの塩基配列の解析から、変異は欠失によるものであり、特にAT細胞核抽出液では特定の欠失が多かった。欠失の殆ど全てが数塩基の繰り返し配列のところで生じており、非相同的組換え機構によって欠失が生じているものと考えられる。さらに、やはり高発癌性遺伝病であるブルーム症候群(BS)の患者由来の細胞株の核抽出液では変異頻度は正常細胞とさほど変わらなかったが、正常細胞よりも大きい欠失が多く、しかも約40%の変異プラスミドの欠失切断点に繰り返し配列が見られなかった。BS患者細胞では欠失突然変異の生成機構に何らかの異常があるものと考えられる。細胞核からの抽出液を用いて線状プラスミドDNAを基質とした、DNA2本鎖切断再結合の試験管内反応系を構築した。この反応系は、再結合反応の効率だけでなく、再結合時の誤りの頻度も検出することができる。ヒト高発癌性劣性遺伝病アタキシア・テランジェクタシア

患者細胞では、再結合反応の正確度が正常細胞よりも低く、しかも特定の欠失が多く見られた。このときの欠失切断点の塩基配列を調べると、数塩基の短い反復配列が見られた。また、別の高発癌性劣性遺伝病であるブルーム症候群患者由来細胞では、正常細胞よりも大きな欠失が多く見られたが、約40%では、欠失切断点に反復配列が見られなかった。以上のことから、これら遺伝病細胞ではDNA2本鎖切断の再結合に何らかの異常があるものと考えられる。他方、マウス培養細胞に放射線を照射し、そこから細胞核抽出液を調製し、試験管内DNA2本鎖切断再結合を調べると、照射線量などの違いによって再結合反応の効率と正確度に変動が見られた。このことは、放射線照射などの外界からの刺激を受けた細胞内情報伝達系によって、再結合反応機構が制御されていることを示している。しかし、同様の解析をp53遺伝子欠損マウス由来の細胞を用いて行うと、このような放射線照射による変動が見られなかった。したがって、放射線照射の様なストレスによって、非相同組換え機構を修飾する機能が誘導され、それはp53遺伝子産物によって制御されていることが明らかになった。また、ニワトリ由来の細胞株DT40を用いて、種々の相同的組換え関連遺伝子の欠損細胞での染色体異常について解析し、この細胞株では、染色体異常の生成には、相同的組換えが主要な役割を果たし、非相同的組換えはそのバックアップ機構として働いていることが明らかになった。DNAの2本鎖切断は放射線によって生じるDNA損傷の中で生物学的に最も重要な損傷であると考えられている。DNA2本鎖切断の試験管内再結合反応系を用いて、放射線照射した細胞の核抽出液のDNA切断再結合活性を検討した。マウス培養細胞に3GyX線を照射した直後に調整した核抽出液の再結合反応の効率及び正確度は、共に非照射に比べて大きく低下していた。X線照射後一定時間培養を行った後調整した核抽出液では、培養時間とともに、再結合の効率も正確度も共に上昇した。再結合の誤りは、殆ど全て切断点周辺のDNA領域の欠失によるものである。照射直後の抽出液による誤った再結合では欠失の範囲が非照射細胞の抽出液による欠失よりも大きく、照射後培養を行うと、欠失領域は照射前の程度に回復した。一方、細胞に低線量の放射線を予め照射すると、その後の高線量の放射線照射に対して抵抗性となる現象が知られており、放射線適応応答を呼ばれている。2cGyの低線量放射線を予め照射し5時間後に3Gyを照射した細胞の核抽出液では、上述の未照射の細胞への3Gy照射直後とは異なり、DNA切断再結合反応の効率と正確度は低下せず、非照射の場合とほぼ同程度の高率であった。従って、この試験管内反応の結果は細胞で見られる適応応答の結果と良く一致している。放射線照射などの刺激を受けると、細胞機能の変化が生じることにより、DNA切断再結合反応は制御されていることを示している。また、DNAエンドジョイニングは放射線適応応答過程に関与する非常に重要な要因の一つであることが明らかになった。大腸菌RecQヘリケースのヒトホモログの1つであるBLM遺伝子に欠損を持つブルーム症候群(BS)患者由来細胞の試験管内DNA切断再結合について解析したBS細胞は一般に培養がきわめて困難であるため、これまで比較的増殖が良好なリンパ芽球様細胞を用いて検討を行ってきた。
レーザー励起-ICP質量分析装置による介在物組成および粒径の迅速測定

1873Kで溶融したFe-10%Ni合金に所定量のFeS小片を添加して撹拌し,さらにFe-50%M(M=Mn,Ti)合金を添加した。直ちに撹拌してFe-10%Ni合金融体を脱酸・脱硫した。これをるつぼごと水中急冷することにより,脱酸および脱硫反応生成物が分散したメタル試料を作成した。また,Fe-10%Ni合金融体を脱酸・脱硫した後にメタル融体を所定の冷却速度で一方向凝固させ,るつぼごと水中急冷することによっても,メタル試料を作成した。得られたメタル試料を切断し,断面を鏡面研磨した後に,研磨面上の一次および二次介在物の組成,大きさをX線マイクロアナライザーおよび光学顕微鏡により求めた。また,メタル試料に直径約20μmのレーザー光を走査しながら照射して,メタルマトリックスおよび介在物を蒸発させ,その蒸気を高流量のアルゴンキャリアガスにより高周波誘導結合プラズマ部に導入してイオン化させた。生成したイオン量は四重極型質量分析装置により測定され,0.010.1秒毎の積分値が得られた。各照射時間における積分値と。レーザー光の走査距離との関係を図示することにより,介在物部分のイオン量は鋭いピークとなって現れた。Mn(またはTi)とSについてのピークの面積値から,介在物の組成および粒径を求めた。このようにしてレーザー励起-ICP質量分析装置を用いて得られた介在物の組成および粒径を,X線マイクロアナライザーおよび光学顕微鏡による結果と比較した。その結果,レーザー励起-ICP質量分析装置による介在物の組成および粒径の迅速測定が可能であることがわかった。また,同時にメタル中の溶質成分の定量も可能であった。MnS(またはTiS)二次介在物周辺のメタル中Mn(またはTi)およびS濃度を測定し,MnS(またはTiS)析出のための溶解度積を評価した。アーク炉であらかじめFe-10%Ni合金、Fe-X合金(X=Al,Si,Ti,ZrおよびCe)、Ni-Ca合金を溶製した。このFe-10%Ni合金を、LaCrO_3抵抗炉または黒煙発熱体高周波誘導炉を用いて、1600°C、脱酸アルゴン雰囲気下、Al_2O_3またはMgOるつぼ中で溶解した。その後、所定量のFe-X合金またはNi-Ca合金をFe-10%融体中に添加し、攪拌して一次介在物を分散させた後、直ちにるつぼごと水中急冷した。得られたメタル試料を切断し、断面を鏡面研磨した後、レーザー光を照射して、断面に存在する介在物を蒸発させた。この蒸気を、高流量のキャリアガスにより高周波誘導結合プラズマ部に導入してイオン化し、質量分析装置により、イオン量の経時変化を求めた。レーザー光の強度および走査速度を種々変化させて測定し、測定条件を詳細に検討した。得られたイオン量の経時変化曲線を積分することにより、介在物の粒径分布を求めた。また、このレーザー励起-ICP質量分析法により、介在物組成がX酸化物であることを確認した。さらに、マトリックス金属についてのレーザー励起-ICP質量分析法による測定結果から、メタル標準試料についての測定結果と対比することにより、マトリックス金属組成を求めることが可能であった。マトリックス金属組成の測定に用いた標準メタル試料は以下の方法で作成した。アーク炉であらかじめ作成したFe-10%合金、Fe-X合金(X=Al,Si,Ti,Zr,またはCe)、Ni-Ca合金を所定量混合し、再度、アーク炉で溶製して標準メタル試料とした。また、得られた合金を、黒煙発熱体高周波誘導炉を用いて、1600°C、Ar-7%H_2雰囲気下、MgOるつぼ中で溶解し、メタル底面を冷却しながら下方に引き抜く方法(一方向凝固法)により、介在物を浮上させながらメタル融体をゆっくり凝固させた。この方法により、介在物をほとんど含まない標準メタル試料を得た。

このようにしてレーザー励起-ICP質量分析装置を用いて得られた介在物の組成および粒径を,X線マイクロアナライザーおよび光学顕微鏡による結果と比較した。その結果,レーザー励起-ICP質量分析装置による介在物の組成および粒径の迅速測定が可能であることがわかった。また,同時にメタル中の溶質成分の定量も可能であった。MnS(またはTiS)二次介在物周辺のメタル中Mn(またはTi)およびS濃度を測定し,MnS(またはTiS)析出のための溶解度積を評価した。
ＥＢＶ関連血球貪食性リンパ組織球症におけるＥＢＶ感染Ｔ細胞の解析と病態解明

EBウイルス関連血球貪食性リンパ組織球症(EBV-HLH)は、EBVのCD8+ T細胞への異所性感染とそのモノクローナルな増殖により引き起こされる。我々は、EBV感染CD8陽性T細胞が特定のTCR Vβを有しCD5発現の低下した異常活性化細胞として同定可能であることを報告し、さらにサイトカインプロファイルの特徴を明らかにした。ただし活性化CD8陽性T細胞におけるCD5発現の低下自体はEBV-HLHに特異的ではないため、TCR Vβレパトア解析を併用し評価する必要がある。本研究により、これらの細胞解析とサイトカイン解析の併用はEBV-HLHの診断、病態把握に有用であることが明らかにされた。我々はこれまでに、EBV関連血球貪食性リンパ組織球症(EBV-HLH)では、EBVがCD8+ T細胞に選択的に感染し、クローン性に増殖すること、さらに感染細胞がCD5発現の低下した異常活性化CD8+ T細胞として同定可能で、診断や治療に有用であることを報告してきた。このような表面マーカーの特徴を示すCD8+ T細胞の出現が、EBV-HLHに特異的か否かを明らかにするために、本年度は、家族性HLH(FHL)の解析を行った。FHLは、細胞傷害性顆粒やその放出に関連した異常によって引き起こされる遺伝性HLHである。細胞傷害活性の低下によりウイルス感染細胞等の除去が制限され、リンパ球やマクロファージの異常活性化と高サイトカインが生じる結果、HLHが引き起こされる。対象は、FHL2型(パーフォリン欠損)5例とFHL3型(Munc13-4欠損)1例である。解析した全例において、高サイトカイン血症が存在する急性期に、CD5発現が低下した異常な活性化CD8+ T細胞が共通して存在することが明らかになった。同細胞の比率は、ネオプテリンやIFN-γなどのサイトカインに反映される炎症の程度と相関し、生存例では治療とともに減少した。T細胞レセプターレパトア解析を行ったところ、FHLで認められるCD5発現の低下した活性化CD8+ T細胞は、オリゴクローン性に反応性に増殖していることが示唆された。EBV-HLHでは、感染細胞のクローン性増殖を反映して、特定のT細胞レセプターレパトアを有することが多い点と異なっていた。以上より、活性化CD8+ T細胞におけるCD5発現低下は、EBV-HLHのみならずFHLでも認められ、EBV-HLHに特異的な所見ではないものの、レパトア解析を併用することで、EBV-HLHの診断に極めて有用であることがあらためて示された。(Hum Immunol 2013)。本年度は、Epstein-Barrウイルス(EBV)関連血球貪食性リンパ組織球症(EBV-HLH)のサイトカインプロファイルの特徴を明らかにした(Wada et al. Pediatr Blood Cancer, in press)。EBV-HLH患児11名と、コントロールとしてEBVによる伝染性単核症(IM)11名およびパーフォリン欠損による家族性血球貪食性リンパ組織球症(FHL2)4名から採取した急性期の血清もしくは血漿を用いて、炎症性ならびに抑制性サイトカイン計10種をELISAを用いて解析した。EBV-HLHではIMに比べ、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-18、ヘムオキシナーゼ-1が有意に高値を示した。しかし、これらはFHL2患児とほぼ同じプロファイルであった。したがって、EBV-HLHで認められたサイトカインプロファイルは、HLHという病態を反映しているものであり、CD8陽性T細胞に対するEBVの異所性感染に起因しているのではないことが示唆された。一方TNF-αは、EBV-HLH、IMともに上昇していた。またEBV感染細胞からviral IL-10が産生される可能性があるが、EBV-HLHにおけるIL-10高値については、FHL2と同程度であったことからviral IL-10の関与は高くないことが示唆された。これらサイトカインプロファイル解析と、フローサイトメトリーによる解析、すなわちCD8陽性T細胞におけるクローン性増殖とCD5発現低下の解析を組み合わせることは、EBV-HLHの診断、病態把握に非常に有用であることが示された。EBV関連血球貪食性リンパ組織球症(EBV-HLH)におけるEBV感染T細胞は、クローン性に増殖しCD5発現の低下した活性化CD8陽性T細胞としてフローサイトメトリーにより検出可能であることを報告してきた。しかし、CD5発現低下を伴うCD8陽性T細胞の出現自体は、EBV-HLHに特異的ではない。実際、パーフォリン欠損による家族性HLH(FHL2型)では、高サイトカイン血症が存在する急性期に、CD5発現が低下した異常な活性化

CD8陽性T細胞が出現することを既に報告した。本年度は、このような表面マーカーの特徴を示すCD8陽性T細胞が、Munc13-4欠損による家族性HLH(FHL3型)でも認められることを報告した(Pediatr Int 2014)。細胞傷害性顆粒やその放出に関連した異常によって引き起こされるFHLでは、細胞傷害活性の低下によりウイルス感染細胞等の除去が制限され、リンパ球やマクロファージの異常活性化と高サイトカインが生じる結果、HLHが引き起こされる。一方、EBV-HLHでは、EBVがCD8陽性T細胞に異所性に感染し、クローン性に異常増殖することでHLHが引き起こされる。これら発症病態の異なるFHLとEBV-HLHにおいて、表面マーカーの同様の特徴を示すCD8陽性T細胞が出現することは興味深い。血清のサイトカイン解析でもFHLとEBV-HLHは同様のプロファイルを示すことが判明しており、両者には共通する異常免疫応答が存在する可能性がある。しかし、EBV-HLHではEBV感染CD8陽性T細胞がクローン性に増殖することを反映し、特定のT細胞レセプターVβを有したCD8陽性T細胞のみにCD5発現低下と異常活性化がみられる点がFHLと異なる。したがって、EBV-HLHが疑われる際には、T細胞レセプターVβレパトア解析を併用した総合的な解析が必要であることが示された。医師薬学本研究は、EBV-HLHの臨床に役立てるために、症例の検討、患児由来の細胞や血清を用いた細胞分子生物学的解析から、EBV-HLHの病態を解明することを目的としている。これまでに、CD5発現やT細胞レセプターレパトア解析等を組み合わせた細胞解析とサイトカインプロファイル解析を駆使することで、EBV-HLHの免疫学的な特徴を明らかにしてきた。また本研究は、実際の診療にも役立っている。以上のことから、本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。本研究は、EBV-HLHの臨床的検討、患児由来の細胞や血清を用いた細胞分子生物学的解析から、EBV-HLHの病態を解明し、臨床に役立てることを目的としている。これまでに細胞解析とサイトカイン解析の組み合わせが、EBV-HLH診療の極めて良い指標となることを明らかにしてきており、おおむね順調に進展していると考えている。今後もEBV-HLH症例のみならず、多様なHLHを解析することによりEBV-HLHの病態を解明していく。特にEBV-HLHのEBV感染CD8+ T細胞やFHLの活性化CD8+ T細胞で認められるCD5発現低下の機序を解明したいと考えている。FHLでは、治療により全身炎症が落ち着くと、CD5発現の低下した異常活性化CD8+ T細胞は消失し、通常のphenotypeであるCD5を発現するCD8+ T細胞のみとなる。これらのCD8+ T細胞は、遺伝子異常を有しているにもかからず、in vitroで刺激してもCD5の発現は低下しない(Wada T, et al. Hum Immunol 2013)。
オーストラリア多文化主義下のトンガ系子弟の中等学校教育に関する社会人類学的研究

本年度は、研究課題「オーストラリア多文化主義下のトンガ系子弟の中等学校教育に関する社会人類学的研究」の最終年度として、オーストラリア、メルボルンにおける長期調査を重点的に行った。4月から6月にかけては、長期調査に向かうための準備、計画を整えると共に、昨年度の調査データを元にした投稿論文の執筆に努め、その成果を京都大学で実施された日本文化人類学会の研究大会において発表した(発表題目:コミュニケーション・ツールから見た第二世代のトンガ人のネットワークーオーストラリア・メルボルンにおける調査から)。本研究が主要な研究対象としている10代のトンガ系子弟は、インターネットを通じたコミュニケーションを大変重要視している。特にトンガ文化の文脈において外出の自由が制限されている女子にとって、家庭にいながら友人と交流することができるツールとして、インターネットは重要な位置にある。研究者はインターネットの意義をトンガ人子弟のおかれている文化的文脈の中から考察した。また、7月から3月までの計8ヶ月では、オーストラリア国メルボルン市において文献資料の収集と、トンガ系住民を対象としたフィールドワークを行った。文献資料の収集は主に現地所属機関であるラトルーブ大学の図書館と、ヴィクトリア州立図書館において行った。フィールドワークは、ラトルーブ大学のヘレン・リー上級講師の指導の下、トンガ系住民の通うメルボルン市内西部の教会にて行った。また、11月にはトンガ王国での三週間の短期調査を実施し、統計局での資料収集と、各高等学校の同窓会事務局担当者にインタビューを行い、海外移住者からの同窓会援助の実態について調査した。本年度は、研究課題「オーストラリア多文化主義下のトンガ系子弟の中等学校教育に関する社会人類学的研究」を遂行するために必要な基礎情報の収集と文献の精読に努めた。前期(4月10月)は、平成18年3月に提出した修士論文を基に、投稿論文の執筆を進めた。これは2007年に発行される『社会人類学年報』に掲載予定である。また、11月からの海外調査に備え、先行研究を再整理し、問題点を明確化した。後期、11月から3月までの計4ヶ月では、オーストラリア国メルボルン市において文献資料の収集と、トンガ系住民を対象としたフィールドワークを行った。トンガ人に関連する統計資料を中心的に収集した。また、11月にラトルーブ大学で開催された「太平洋諸島民のトランスナショナリズム」というシンポジウムに出席し、海外の研究者と交流を深めた。世帯調査では、各世帯の成員を調べると共に、世帯収入や成員の学歴、第一世代のオーストラリアの移住の経緯についての口述資料を収集した。この調査で収集した資料は、2007年7月にトンガ王国で行われるTonga Research Associationの研究大会で発表する予定である。本年度は、研究課題「オーストラリア多文化主義下のトンガ系子弟の中等学校教育に関する社会人類学的研究」を遂行するために必要な事例収集と文献の精読に努めた。前期(4月10月)は、昨年度の第一次調査において収集した事例と文献を用いて、投稿論文の執筆を進めた。同様に、7月13日にはトンガ王国の首都ヌクアロファ市で開催されたTonga Research Associationの研究大会にて第一次調査における研究の成果を発表する機会を得ることができた。アメリカやイギリス、オーストラリアやニュージーランド在住のトンガ人研究者と意見交換をすることができ、そのときのコメントをもとにして、"Mobile Phones and the Internet:Transnational and Local Networks of Second-generation Tongan Females in Melbourne,Australia"という調査報告論文をTonga Research Associationに投稿した。これは2009年に出版予定である。トンガ王国には三週間滞在し、村落調査を行い、在豪トンガ人との本国のトンガ人とを比較するための資料を収集した。後期、10月から3月までの計6ヶ月では、オーストラリア国メルボルン市において文献資料の収集と、トンガ系住民を対象としたフィールドワークを行った。

フィールドワークは、ラトルーブ大学のヘレン・リー上級講師の指導の下、トンガ系住民の通うメルボルン市内西部の教会にて行った。また、11月にはトンガ王国での三週間の短期調査を実施し、統計局での資料収集と、各高等学校の同窓会事務局担当者にインタビューを行い、海外移住者からの同窓会援助の実態について調査した。
ネットワーク上でのルーティングとスケジューリングに対する近似保証アルゴリズム

ネットワーク上でのルーティングとスケジューリングの問題を、ネットワーク回線および情報送信優先権の参加者によるオークション形式の資源配分問題(すなわち、組合せオークション)としてとらえて、ナッシュ均衡解(安定解)の存在を近似アルゴリズムの観点から研究した。具体的には、各参加者の評価関数が対称的で劣加法性を満たすときに、ナッシュ均衡解が存在するための必要十分条件を与えた。これからナッシュ均衡解が存在するかどうかを判定するアルゴリズムも得られる。さらに、評価関数が対称的で劣モジュラー性を満たすときには、常にナッシュ均衡が存在し、その解も多項式時間で得られることも示した。ネットワーク上でのルーティングとスケジューリングに関連して生じる様々なNP-困難問題に対して、緩和最適解に対するラウンディング手法に基づく近似保証アルゴリズムの提案と、ユニークゲーム予想に基づいて近似保証の限界を究明することが、本研究の目的であるので、以下の研究計画に基づいて研究分担者と討論しながら研究を実行した。1.近似保証アルゴリズム設計の系統的設計法である数理計画法に基づいた定式化から得られる最適小数解を、品質を保ちながら整数解に近似するラウンディング手法に注目して研究調査した。とくに、確率的方法、主双対法、双対フィット法、最大フロー法、一般メトリック空間埋め込み法などのラウンディング手法により、近似保証が大幅に改善されてきているので、手法の有効性を分類・整理・検討した。さらに、ユニークゲーム予想の適用法を研究調査し、その有効性を分類・整理・検討した。2.情報ネットワークシステムやウェブ上の情報検索に対する基礎技術・応用技術をルーティングとスケジューリングの観点から高品質な近似保証アルゴリズムの適用可能性と限界を詳細に検討した。3.近似保証アルゴリズムとWeb情報検索の分野で最先端の研究をしている内外の研究者と情報・アイデア交換をした。とくに、インターネットオークション(組合せオークション)における最適解と高品質なナッシュ均衡解の存在に関して、最新の研究動向の調査と研究成果に対する情報・アイデア交換を精力的に実行した。4.以上の調査・検討に基づき、情報通信ネットワークやウェブ情報検索の分野で要求度の高い問題に対して、高品質な近似保証アルゴリズムを提案した。さらに、アルゴリズムの有効性を大規模な実物データで計算機実験を通して検証した。得られた成果の一部をすでに学会等で発表しているが、さらに学術書等でも発表する予定である。とくに、確率的方法、主双対法、双対フィット法、一般メトリック空間埋め込み法などのラウンディング手法により、近似保証が大幅に改善されてきているので、手法の有効性を分類・整理・検討した。とくに、組合せオークションにおける最適解と高品質なナッシュ均衡解の存在に関して、最新の研究動向の調査と研究成果に対する情報・アイデア交換を精力的に実行した。得られた成果をすでに学会等で発表しているが、さらにそれらの有効性を学術書等でも発表する予定であり、この分野の研究の発展につながることを期待している。さらに、ユニークゲーム予想により近似保証の限界の確立が成功をおさめているので、ユニークゲーム予想の適用法を研究調査し、その有効性を分類・整理・検討した。

2.情報ネットワークシステムやウェブ上の情報検索に対する基礎技術・応用技術をルーティングとスケジューリングの観点から高品質な近似保証アルゴリズムの適用可能性と限界を詳細に検討した。3.近似保証アルゴリズムとWeb情報検索の分野で最先端の研究をしている内外の研究者と情報・アイデア交換をした。とくに、ISAAC2011のプログラム委員長として、最新の研究動向と研究成果に対する情報とアイデアの交換を精力的に実行した。4.以上の調査・検討に基づき、ルーティングとスケジューリングを中心に、情報通信ネットワークやウェブ情報検索の分野で要求度の高い問題に対して、高品質な近似保証アルゴリズムを提案した。さらに、アルゴリズムの有効性を大規模な実物データで計算機実験を通して検証した。得られた成果は、近々、学術書や学会等で発表する予定である。「研究実績の概要」で述べたように、本研究の目的は、ネットワーク上でのルーティングとスケジューリングに関連して生じる様々なNP-困難問題に対して、緩和最適解に対するラウンディング手法に基づく近似保証アルゴリズムの提案と、ユニークゲーム予想に基づいて近似保証の限界を究明することである。その目的を達成するための研究が平成24年度研究計画であった。そこで、インターネットオークション(組合せオークション)における最適解と高品質なナッシュ均衡解の存在に関して研究を遂行するとともに、最新の研究動向の調査と研究成果に対する情報・アイデア交換を精力的に実行した。また、この分野で最先端の研究を行っているCornell大学のJon Kleinberg教授およびDavid Williamson教授と情報交換をした内容の最先端の研究成果の調査報告を研究分担者とともに日本語として出版することも予定している。近似保証アルゴリズムの提案と計算機実験による品質検証も順調に進んでいる。また、ユニークゲームとも関係する組合せオークションについての研究成果も得られている。これらの成果についても、学会等で発表している。その目的を達成するための研究調査が平成23年度研究計画であった。そこで、ISAAC2011のプログラム委員長として、この研究分野の投稿論文の審査を通して、さらには、発表者との研究討論を通して、詳細にこの分野の研究の重要性と課題を整理・検討した。また、この分野で最先端の研究を行っているCornell
シンチレ-ションファイバ-を用いた核融合反応中性子の連続型空間分布計測系の開発

磁場閉じ込めDD/DTプラズマから発生する中性子の真空容器周辺における空間分布計測は、核燃焼プラズマプロファイル診断やプラズマ位置制御情報として非常に有効であるが、装置の構造が複雑なため、多数の中性子検出器を真空容器の近傍に広範かつ十分に配置するようなことが極めて困難である。そこで、本研究では、最近開発されたプラスチックシンチレ-ション光ファイバ-(PSF)に着目し、中性子入射により発生したシンチレ-ションパルスのファイバ-内伝播特性の位置依存性を利用したフレキシブルかつ連続的な中性子入射位置検出系の可能性を検討した。使用したPSFは、Bicron社製BCFー10で、約7m長のファイバ-両端面に光電子増倍管を取り付け、まず、γ線( ^<60>Co, ^<137>Cs)及び高速中性子( ^<252>Cf,DD/DT加速器中性子源)に対する光出力の照射位置依存性を測定した。その結果、光学的な減衰長(光伝送により出力が1/eになる距離)が1.8mになることや高速中性子により光出力がγ線よりも十分大で、光出力波高スペクトル上で識別できることが分った。また。このしきいレベルを設けた両端からの光電子増倍管出力の比を割算器を通して求めることにより、10cmの分解能相当で中性子位置検出が可能であることを見い出した。さらに、放射線入射によって生成されるであろう散乱中心からの後方散乱光の時系列を検出することに基づく位置検出原理の可能性も検討した。Erド-プ光ファイバ-に高速中性子を照射しながら、1mW、ピ-ク波長810nmのレ-ザ-ダイオ-ド光をパルス幅100nsで入射させ、アバランシェフォトダイオ-ド(APD)及び光オシロスコ-プで後方散乱光の検出を試みた結果、今回の計測系では、APD暗電流の変動に支配される検出限界を下回っているものの、入射光強度を1W以上にし、ファイバ-端面や接続部でのフレネル反射光等をカットする工夫を施せば検出可能性があるとの知見を得た。また。
栽培ギクの起源の解明

キメラ遺伝子NCED3aについて、キク属25野生種79系統、390ハプロタイプの塩基配列から、種又は地域特異的相同断片を特定し、栽培ギク10品種、48ハプロタイプと比較解析を行った。全ての栽培ギク系統はシマカンギク及びリュウノウギク群の相同断片より構成され、そのうち日本型が中国型の2倍以上の高い割合で構成されていた。以上の結果に基づいて、栽培ギクは、中国でシマカンギクとリュウノウギク群が雑種化し原始栽培ギクが生じた、又は作成された。その後日本で日本型シマカンギクまたは日本型リュウノウギク群(ノジギク)と交雑することにより現代型の栽培ギクが成立したと考える、栽培ギクの2段階起源仮説を提唱した。本課題では分子マーカーによる遺伝的多型から、栽培ギクの起源の解明を目指すものであり、本年度は予定の成果に加えて、新たな知見も得ることができた。1)多型解析による祖先種の推定1マーカーDNAの探索とゲノムDNAの多型解析と2クローニングDNAの多型解析による対立遺伝子数の決定と系統解析について、前年度解析した遺伝子のうちCmNCED3a遺伝子が親種と考えられる遺伝子を幅広く保存していることが確かめられたので、本年度はこの遺伝子に重点的をおいて、個体内の各制限酵素型の塩基配列の解析を行った。すべての倍数体種は複数種の遺伝子組換えによるキメラ遺伝子より構成されていた。栽培ギクでは品種間で非常に多型的であったが、黄花のシマカンギクと白花のリュウノウギク群、特に日本産のノジギク、サツマノギクの相同断片を多く含み、一部の品種で中国産のC. rhombifoliumとそれに近縁な六倍体ウラゲノギクの相同断片を含んでいた。栽培ギクの起源として定説とされている、白花系の片親イワギク群は極わずかの相同断片であった。この断片はシマカンギクの一部にも含まれており、イワギク群から来たものか、シマカンギクを経由してきたかについて明らかにしていく必要がある。いずれにしても、イワギク群でなく、リュウノウギク群の多大な関与があることは現時点でも明らかとなった。2)由来候補雑種染色体の分配解析からの起源種の出来方の推定のために、コルヒチン処理による人為四倍体、交雑による四倍体F1雑種と六倍体F1雑種について後代子孫を確認し、特に自殖二倍体キクタニギクの人為四倍体が自殖種子を作ることが確かめられ、後代分離解析の母本として利用できる道が開かれた。3)未知の栽培ギク起源候補の探索については、中国で採集を行い、最も重要なC. rhombifoliumと3地域のシマカンギクおよびキクタニギクの収集を行った。本課題では分子マーカーによる遺伝的多型から、栽培ギクの起源の解明を目指すものであり、本年度は予定の成果以上に進み、本研究の目的である栽培ギクの起源に関して明らかにすることができた。1)多型解析による祖先種の推定:前年度までに解析した遺伝子のうちNCED3a遺伝子はすべての倍数体種においてキメラ遺伝子より構成されており、祖先野生種を探る非常に有用な遺伝子であることが確かめられた。そこで、本年度はこの遺伝子について、さらに個体数を増やし、栽培ギク10品種、46ハプロタイプの比較を行った。黄花シマカンギク群、白花リュウノウギク群、栽培ギクの各特異的相同断片の平均的割合はそれぞれ36%、15%、22%であった。これらの各相同断片のうち、シマカンギクとリュウノウギク群では、日本型が約75%、中国型が25%を占めていた。日本型リュウノウギク群はノジギクの相同断片が品種間で幅広く見られた。一方、栽培ギク3品種で日本産サツマノギク、2品種で日本産イソギクの相同断片を多く含んでいた。以上の結果より、栽培ギクの起源について、二段階で現代の栽培ギクが作成されたと推定された。すなわち、中国のシマカンギクとリュウノウギク群の雑種化により原始的栽培ギクが作成され、その後日本のキクタニギクあるいは日本型リュウノウギク群が交配されることにより現代の栽培ギクが成立したと考えられる。そう考えると高い割合の日本型野生種の相同断片を含むことが無理なく考えられる。2)栽培ギクの起源種の出来方(キク属倍数体種の染色体の分配様式)を明らかにするために、交雑による四倍体F1雑種の子孫の分離を調べた。CCD4a遺伝子ではナカガワノギクの選択的分配、ワカサハマギクのランダム分配が確かめられた。さらに、人為的に合成した同質四倍体と部分異質四倍体のF1雑種の子孫をそろえた。