hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
AE法による紙の破壊のプロセスの研究

アコ-スティックエミッショッン(AE)法による紙の破壊プロセスの研究の一環として、本研究では走査電子顕鏡(SEM)内に引張装置を取り付け、紙の引張破壊過程をビデオ装置により記録すると共にAEを測定して、引張に伴う破壊の進行状況とAE発生との関連を検討しようとした。1.SEM内での紙の引張およびその動的観察画像の記録(山内、佐伯)引張装置は元来金属用であり、その試片サイズは幅2mmスパン長10/15mmと大変小さい。そのため紙のような薄い材料を、応力履歴無しの状態で装置に取り付けることに腐心した。種々試みた末、厚手のフィルムでフレ-ムを作り、これに2mm×25mmの紙試片を取り付けて後、金蒸着した。試片をフレ-ムと共に引張装置に取り付ける際、紙は押さえ板で直接装置に付け、引張直前にフレ-ムを切断した。以上により紙は“チャックすべり"することなく引張できた。用いた紙試料は、NBKPより作製した坪量の異なる一連の手抄き紙であり、坪量約20g/m^2のそれが観察に最も適していることが分かった。なお観察箇所で破壊が生じるように、試片には前もって切り欠きを入れた。また破壊に伴いチャ-ジアップが生じ易いため、試片には予め帯電防止剤を軽く噴霧塗布し、さらに加速電圧5kVで観察した。以上の結果、観察倍率100/200倍で明瞭なビデオ画像を得ることができた。紙の引張過程をSEMによりビデオ画像で記録したのは日本では本研究が最初である。観察の結果、明らかな破壊は極く短時間で生じ、ミクロな変形挙動を明らかにするには、試片になんらかのマ-キングを行い、その動きをデ-タ化する必要があると思われる。これにはSEM鏡筒内から外へのAEセンサケ-ブルの接続、ノイズ対策および張力の同時測定の必要も認められた。現在100gf程度の低応力用のロ-ドセルを取り付け、AEとの同時測定研究を進めている。
中世の顕密仏教とその建築空間-浄土教建築の位置付けを中心に-

当年度は、(1)浄土教建築・伽藍の背景となる理念の実態をとらえるべく分析をおこない、また(2)その位置づけの基盤となる中世顕密仏教の描く宗教的世界観を探求した。それぞれ得られた主な成果は以下のとおりである。(1)浄土伽藍の建築造形と理念-平安浄土教伽藍の系譜に位置づけられていた建築が、実態としては東大寺や東寺など古代伽藍の展開したものであることを論証した。また、前年度につづき、平等院鳳凰堂仏後壁の浄土図を検討し、そこに法成寺・法勝寺のような鎮護国家伽藍と、平等院や平安後期に隆盛する勝光明院など阿弥陀堂を中心とする伽藍が対置されており、当時の貴族が描く理想の伽藍観、さらには伽藍建立の実態が反映されていることを明らかにした。本研究の成果は、学術論文:「平安時代後期における浄土のイメージと建築造形」および学術講演::冨島義幸「平安時代後期京都の伽藍と毛越寺・嘉祥寺」(第5回平泉文化フォーラム、2005年2月)にも反映されている。(2)中世顕密主義の宗教的世界観-院政期を中心に、国家・仏教さらには神祇を含む顕密体制において、両界曼荼羅を基盤とした宗教的世界観が共有され、それが顕密主義の正統な論理となっていたとする説を提唱した。また、この論理にもとついて平安浄土教建築を捉えなおすべく、常行堂や阿弥陀堂の本尊である阿弥陀五尊の史的変遷を検討し、平安中期以降浄土教化されたとする従来の説に対し、平安末期の真言密教における阿弥陀信仰の論理化・体系化にともない、密教の両界曼荼羅にもとづく阿弥陀五尊が顕現し、そこに顕教の阿弥陀五尊が統合されたことを明かにした。本研究の成果は、学術論文:「両界曼茶羅と中世神仏世界」および学術講演:冨島義幸「建築空間にみる両界曼荼羅の展開と中世神仏世界の形成」(第2期第5回日本宗教史懇話会サマーセミナー、2004年8月)として発表した。当年度は、主として(1)浄土教建築の実態をとらえるべく、阿弥陀堂・常行堂を中心に史料の収集・分析を行うとともに、(2)その位置づけの基盤となる中世顕密仏教の建築空間を、領域・時代いずれのうえでもより広くとらえるべく、南北朝から室町初期における顕密仏教の建築空間について研究をおこなった。それぞれの研究で得られた主な成果は、以下のとおりである。(1)阿弥陀堂の建立と教団-これまで平安後期の浄土教建築隆盛は、平安初期から中期に体系化された天台浄土教学をもって描かれてきたが、平安後期の真言教団には新たな展開が認められる。平安後期の阿弥陀堂の造菅過程、供養会や法会の空間を分析することで、阿弥陀堂の建立、そこでの法会活動において、真言教団が深く関わっていたことを明らかにした。平安後期に阿弥陀堂造営が隆盛した背景には、天台教団の活躍だけではなく、院と真言密教の密接な関わりがあったことが明らかになりつつある。現在、その成果を学術論文として投稿・発表する準備をおこなっている。(2)室町幕府の顕密仏事とその建築・空間-中世顕密仏教の建築空間のより広い像をつかむべく、室町時代における顕密仏教の空間の研究を開始している。すでに禅院たる相国寺での七重塔供養会の,空問に、院政期の顕密仏教の建築空問に特徴的な構成が継承されていたことを明らかにしたが、それに続き、平安浄土信仰からの流れととらえられる武家の法華八講に注目し、対象とする時代を尊氏期から義満期に広げ、その会場となった建築およびその空間を具体的に明らかにした。また、そこでおこなわれた顕密仏事空間の実態を検討し、それが僧団の自立的な教学活動の結果生まれたものではなく、むしろ「法会の空間装置」と評される院政期御願寺と近いものであったことを明らかにした。本研究の成果は、まもなく学術論文として投稿するところである。当年度は、主として(1)浄土教建築の造形とその背景となる理念の実態をとらえるべく、阿弥陀堂を中心に分析を行い、(2)その位置づけの基盤となる中世顕密仏教の建築空間をより広くとらえるべく、南北朝から室町初期における顕密仏教の建築空間について研究をおこなった。(1)浄土伽藍の建築造形とその理念-平安後期の浄土教建築および伽藍の造形について、平等院鳳凰堂など阿弥陀堂の仏後壁に描かれた浄土図と比較・検討し、阿弥陀堂仏後壁の浄土図の伽藍が法勝寺・平等院をはじめとする平安時代後期の伽藍、さらには大極殿を中心とする平安宮朝堂院をモデルとしていたこと、平等院鳳凰堂仏後壁の浄土図には四神相応思想など、仏教以外の理念が反映されていることなどを明らかにした。本研究の成果は、学術講演:冨島義幸「平安時代後期における浄土のイメージと建築造形」(第4回平泉文化フォーラム、2004年3月14日)にも反映されている。(2)室町幕府の顕密仏事とその建築・空間-室町時代の等持寺仏殿・相国寺八講堂の建築と仏事について検討した。これらの建築では、平安時代の阿弥陀堂でも盛んに修された顕教仏事である武家八講(法華八講)をはじめ、追善仏事として曼茶羅供・結縁潅頂という密教法会も修されていた。建築としてみると、尊氏・直義により創建された等持寺仏殿の形態は、室町幕府め公的儀礼空間として相国寺八講堂に継承された。

これらの建築は、禅院の建築でありながら、平安時代後期の御願寺建築の在り方を継承した「室町の王権」の「御願寺」ともいうべき性格をもつものであったことを明かにした。本研究の成果は、冨島義幸「等持寺仏殿と相国寺八講堂」(『仏教芸術』273、2004年3月)として発表した。当年度は、(1)浄土教建築・伽藍の背景となる理念の実態をとらえるべく分析をおこない、また(2)その位置づけの基盤となる中世顕密仏教の描く宗教的世界観を探求した。それぞれ得られた主な成果は以下のとおりである。(1)浄土伽藍の建築造形と理念-平安浄土教伽藍の系譜に位置づけられていた建築が、実態としては東大寺や東寺など古代伽藍の展開したものであることを論証した。また、前年度につづき、平等院鳳凰堂仏後壁の浄土図を検討し、そこに法成寺・法勝寺のような鎮護国家伽藍と、平等院や平安後期に隆盛する勝光明院など阿弥陀堂を中心とする伽藍が対置されており、当時の貴族が描く理想の伽藍観、さらには伽藍建立の実態が反映されていることを明らかにした。本研究の成果は、学術論文:「平安時代後期における浄土のイメージと建築造形」および学術講演::冨島義幸「平安時代後期京都の伽藍と毛越寺・嘉祥寺」(第5回平泉文化フォーラム、2005年2月)にも反映されている。(2)中世顕密主義の宗教的世界観-院政期を中心に、国家・仏教さらには神祇を含む顕密体制において、両界曼荼羅を基盤とした宗教的世界観が共有され、それが顕密主義の正統な論理となっていたとする説を提唱した。また、この論理にもとついて平安浄土教建築を捉えなおすべく、常行堂や阿弥陀堂の本尊である阿弥陀五尊の史的変遷を検討し、平安中期以降浄土教化されたとする従来の説に対し、平安末期の真言密教における阿弥陀信仰の論理化・体系化にともない、密教の両界曼荼羅にもとづく阿弥陀五尊が顕現し、そこに顕教の阿弥陀五尊が統合されたことを明かにした。本研究の成果は、学術論文:「両界曼茶羅と中世神仏世界」および学術講演:冨島義幸「建築空間にみる両界曼荼羅の展開と中世神仏世界の形成」(第2期第5回日本宗教史懇話会サマーセミナー、2004年8月)として発表した。
TS細胞を用いた、β-cateninの胎盤形成に果たす役割に関する研究

全研究にてβ-cateninノックアウトES細胞を樹立してES細胞におけるβ-catenin機能の解析をしており、本研究ではβ-cateninノックアウトTS細胞を樹立し、TS細胞におけるβ-catenin機能の解明を企図していたが、β-cateninノックアウトTS細胞は1年以上の施行においても2株のみしか樹立できておらず、さらに樹立された細胞も自己複製能は持つが奇形腫作成実験において腫瘍化を示し多分化能を持たないことがわかった。以上の結果より、β-cateninをノックアウトするとTS細胞の樹立効率が著しく落ちる、もしくは幹細胞としては樹立できないことが確認され、胎盤の形成にはβ-cateninが必要である可能性が示唆された。また新たなβ-catenin-KO胚の性質として、in vitroでの胚盤胞形成率の低下が見出された。in vivoにおいては95%以上の胚盤胞形成率が、in vitroでは20%以下と著明に低下している。in vivoとin vitroの桑実胚と胚盤胞におけるRNA発現解析を施行し、培養環境がβ-catenin機能に及ぼす影響について検討している。培養環境の差異によって発現する遺伝子は大きく異なっており、さらにその差異は特定のものではなくstochasticなものである傾向があった。それらの差異による変異がβ-cateninの欠損によって顕在化していると考えられる。今後は発現に差異のある遺伝子について精査し、その遺伝子とβ-cateninの関係についての解明を試みる。本研究においては、マウス栄養膜幹(TS)細胞を用いて、ヒトおよびマウスに共通して重要な役割を果たしていると考えられるβ-cateninの、胎盤組織への細胞分化と胎生期発生における役割を分析した。β-cateninは1991年にMcCreaらによって発見されたWnt主経路を担う重要な分子である。マウスとヒトで同等の遺伝子発現パターンは27%しか保存されていないが、Wnt経路はその内の一つであり、かつ、5つしか保存されていないシグナル伝達経路のうちのひとつである。この研究によって胎盤形成・妊娠維持管理に関わる胎盤での細胞シグナルのプロセスが解明されれば、流早産や妊娠高血圧症候群、子宮内発育遅延などの胎盤疾患についてその予防と治療への端緒となり、今後さらに重要性を増す産科医療・生殖医療の前進に貢献できる。胎盤の発生は妊娠合併症や絨毛性疾患と密接に関わっており、例えば近年増加傾向にある妊娠高血圧症候群(かつての妊娠中毒症)は胎盤形成不全と血管内皮障害と深く関わっていることが報告されている。また流早産の原因の一つとしての胞状奇胎や絨毛癌などの絨毛性疾患も染色体異常に起因する胎盤の発生異常によるものである。これらの病態について、これまでは妊娠合併症の発症に対して胎盤組織を精査することによって後方視的に研究するのみであったが、TS細胞を用いることでその発症機構について前方視的な研究をすることが可能となる。本年度はβカテニンノックアウトマウスより得られた胚盤胞から栄養膜幹細胞様の細胞を樹立することに成功した。当該細胞は通常のTS細胞とは異なる形態・増殖能を有しており、遺伝子発現についてもTS細胞とも胚性幹細胞とも異なっており、今後その細胞の特性解析を進めていく。当初の想定以上にノックアウトTS細胞の樹立が困難であったため検体を得るのに予定以上に時間を要したが、現在は複数の検体が得られている。樹立率は既報での野生型の樹立率である5%程度よりも低く0.8%であった。樹立された細胞は栄養膜幹細胞様の形態を持っているが、その発現遺伝子をリアルタイム逆転舎PCRで解析したところ、通常の栄養膜幹細胞とも胚性幹細胞とも異なる遺伝子発現パターンを示していた。マウス栄養膜幹(TS)細胞を用いて、ヒトおよびマウスに共通して重要な役割を果たしていると考えられるβ-caeninの、胎盤組織への細胞分化と胎生期発生における役割を分析した。これまでは妊娠合併症の発症に対して胎盤組織を精査することによって後方視的に研究するのみであったが、TS細胞を用いることで発症機構について前方視的な研究をすることが可能となる。昨年度はβカテニンノックアウトマウスより得られた胚盤胞から栄養膜幹細胞様の細胞を樹立することに成功した。当該細胞は通常のTS細胞とは異なる形態・増殖能を有しており、遺伝子発現についてもTS細胞とも胚性幹細胞とも異なっていた。本年度は奇形種作成実験を行ったところ、通常の幹細胞で得られるような奇形種は形成されず、胚細胞腫瘍様の細胞が得られた。今後この腫瘍細胞の特性を解析し、栄養膜幹細胞様細胞の分化能等についてもさらなる解析を試みる。

βカテニンノックアウト栄養膜幹細胞様細胞の特性解析として奇形種作成実験を行ったところ、通常の幹細胞で得られるような奇形種は形成されず、胚細胞腫瘍様の細胞が得られた。想定されていた細胞腫ではなかったため解釈が困難であったが、腫瘍細胞のさらなる特性解析を進め、当該細胞の分化能についての知見を深める予定である。β-cateninが幹細胞においては多分化能獲得に必須であり、栄養膜細胞系列では胎盤形成と着床維持に関与していることが推察される。この機能について、胎盤を構成する栄養膜細胞系列の幹細胞であるTS細胞を用いて詳細に解析することにより、発生学や生殖医療の発展向上を目指した基礎研究として貢献し、その成果の臨床への応用を目指す。マウス胚においてβ-cateninをノックアウトすると三胚葉への分化運命が決定する原腸形成期(胎生6.5日目)に胚致死となる。そのため我々はコンディショナルノックアウト法を用いてβ-catenin-KO-ES細胞の樹立に成功した。さらに今回、β-catenin-KO-TS細胞を樹立し、β-cateninが胎盤形成や着床維持においてどのような役割を果たしているかを解明する。β-catenin-KO-TS細胞は樹立効率が極めて悪く、1年以上の施行においても2株のみしか樹立できておらず、TS細胞の樹立にはβ-cateninが必要である可能性が示唆される。そこで、WT胚とβ-catenin-KO胚のRNA発現解析を行い、β-cateninが胚盤胞の分化において果たす役割を解析している。また新たなβ-catenin-KO胚の性質として、in vitroでの胚盤胞形成率の低下が見出されており、in vivoとin vitroの桑実胚におけるRNA発現解析を施行し、培養環境がβ-catenin機能に及ぼす影響について検討し、β-cateninの胚発生に関わる機能解析をすると共に、発生不良胚の培養環境の改善に繋がる知見を見出すことを目標とする。全研究にてβ-cateninノックアウトES細胞を樹立してES細胞におけるβ-catenin機能の解析をしており、本研究ではβ-cateninノックアウトTS細胞を樹立し、TS細胞におけるβ-catenin機能の解明を企図していたが、β-cateninノックアウトTS細胞は1年以上の施行においても2株のみしか樹立できておらず、さらに樹立された細胞も自己複製能は持つが奇形腫作成実験において腫瘍化を示し多分化能を持たないことがわかった。以上の結果より、β-cateninをノックアウトするとTS細胞の樹立効率が著しく落ちる、もしくは幹細胞としては樹立できないことが確認され、胎盤の形成にはβ-cateninが必要である可能性が示唆された。また新たなβ-catenin-KO胚の性質として、in vitroでの胚盤胞形成率の低下が見出された。in vivoにおいては95%以上の胚盤胞形成率が、in vitroでは20%以下と著明に低下している。in vivoとin vitroの桑実胚と胚盤胞におけるRNA発現解析を施行し、培養環境がβ-catenin機能に及ぼす影響について検討している。
組換え酵素RAD51阻害因子PARIの細胞周期特異的制御機構の解析

本研究は研究目的として1細胞周期特異的なPARI制御機構と2NHEJによるゲノム安定性維持機構とPARIの関連について明らかにするものである。一年目は主に解析の材料となる細胞を作製することと解析のための条件検討を中心に行った。細胞周期とPARI集積について詳細に明らかにするために、CRISPR/Cas9システムを用いHCT116細胞のPari遺伝子下流にmCloverをノックインした細胞株を樹立した。またPARIのドメイン構造が機能にどのように影響するのかを調べるためにPARIに含まれるPCNA(複製複合体の足場となるタンパク質)結合ドメイン欠失させmCloverをノックインした細胞株も樹立した。今後この細胞にレーザーを照射しライブセルイメージングを行う。PARIがG1期のみでDNA損傷部位に集積するために必要な因子、もしくは修飾の探索については、これまでの研究においてすでに樹立し解析に用いて来たPARIノックアウト細胞を用いてPARIの協働因子の探索のスクリーニングを行うこととし、リードアウトの条件検討中である。そしてNHEJによるゲノム安定性維持機構とPARIの関連については、まずPARIの免疫クラススイッチ組換えへの関与という切り口から取り掛かることにし、現在クラススイッチ組換えを起こすマウスリンパ腫CH12に対してゲノム編集を用いてPariノックアウトを行い現在スクリーニング中である。申請期間は2018年4月1日2020年3月30日であったが、2018年4月1日2018年8月31日の期間に出産及び育児のため研究を中断したため、当初の計画よりやや遅れることとなった。しかし中断していない期間においては概ね順調に進捗していると言える。2年目も当初の予定通り研究を進める。1年目に得られた細胞を用いて細胞周期インジケーターFUCCI、レーザーによるDNA損傷導入を組み合わせたライブセルイメージングを行う。DNA損傷部位へのPARI集積のための会合因子を同定するため、細胞周期同調した細胞集団からPARIの免疫沈降・マススペクメトリーを行うのと同時にsiRNAライブラリーから既知のDNA損傷応答因子を中心に網羅的探索を行い、会合分子を明らかにする。免疫クラススイッチ組換えにおけるPARIの機能を解明するため、現在スクリーニング中のPariノックアウトCH12細胞を用いてクラススイッチの状況と二重鎖切断導入後のリゼクションについて評価する。2018年4月1日から2018年8月31日まで出産及び育児のため研究を中断したことにより、研究の進捗が当初予定していたよりもやや遅れ、研究室にすでにある材料及び別の財源でまかなう範囲で収まったため、次年度使用額が生じた。次年度は今年度得られた細胞を用いた解析を始めることになるため、高価なものが多い細胞の分化誘導や培養関連の阻害剤、そして抗体や実験試薬が必要になると考えられ、次年度使用額と合わせて使う予定である。
有機ケイ素化合物を用いた骨結合性を有する有機-無機複合材料の合成

生体組織を置換する材料には,組織に対する高い生物学的親和性に加え,種々の力学的特性が要求される。本研究では,シラノール基とカルシウムイオンを含む無機高分子中に,有機鎖(-C-C-)またはメチル基(-CH_3)を分子レベルで導入した有機-無機複合材料をゾル-ゲル法により合成する条件を追求し,新規生体活性材料を設計する指針を明らかにすることを目的とした。1.ビニルトリメトキシシランを出発原料に用いた生体活性有機-無機複合材料の合成ビニルトリメトキシシラン(H_2C=CHSi(OCH_3)_3 : VTS-M)のビニル基を重合させた後,加水分解によりメトキシ基をシラノール基(-SiOH)とし,加水分解と重合の過程においてカルシウムイオンをCa(CH_3COO)_2やCa(No_3)_2を用いて構造中に取り込ませることで,生体活性を有する有機-無機複合材料が得られることが明らかになった。2.ポリジメチルシロキサンとTEOSを用いた生体活性有機-無機複合材料の合成メチル基(-CH_3)により有機修飾したセラミックスを得るために,ポリジメチルシロキサン(-Si(CH_3)_2O-)n : PDMS)とテトラエチルオルトシリケート(Si(OC_2H_5)_4 : TEOS)の共重合体を基本組成に選び,これにCa(NO_3)_2を用いてカルシウムイオンを導入した。その結果,カルシウムを添加しない条件で合成したゲルは疑似体液中で30日経過後もアパタイトを形成しないのに対して,TEOS : PDMS : HCI : H_2O : Ca(NO_3)_2=1:1.67〈モノマー換算〉:0.05:3:0.05(モル比)の組成比で合成した試料は17日でアパタイト層を形成し,生体活性を示すことが明らかになった。さらに合成時のHCI量やCa(NO_3)_2量は,試料のアパタイト形成能に大きな影響を与えることが明らかになった。これは,合成条件により有機-無機複合体中のシリカマトリックス中に取り込まれるカルシウムの量が異なり,その結果疑似体液中でカルシウム溶出により表面に生成する水和シリカの形成量が異なったことが大きく影響したと考えられた。これまでの研究から,CaOとSiO2とを基本とするガラス等のセラミックスは,体液環境中でCaイオンを液中に放出しアパタイトに対する体液の過飽和度を高め,その表面に残った水和ケイ酸層がアパタイトの結晶化を促進することが知られている。したがって,有機高分子構造中にシラノール基とカルシウムイオンとをミクロに複合化させれば,高分子の持つしなやかさとセラミックスの持つ硬さとが併せられた,より自然骨に近い力学的性質と生体活性とを同時に有する材料が得られると,期待される。本研究では,ビニルトリメトキシシラン(VTS-M)を重合させると同時に,それにいくつかのカルシウム塩をゾル-ゲル法を用いて添加した,有機複合高分子の合成を試みるとともに,その生体活性を擬似体液法により調べた。その結果,酢酸カルシウムを添加した高分子は,擬似体液に浸漬して1日以内にその表面にアパタイト結晶被膜を析出させることが,薄膜X-線回析およびFT-IRスペクトル法によって明らかとなり,高い生体活性を持つことがわかった。

しかし,塩化カルシウムなどそれ以外の塩を添加した複合高分子は生体活性を示さなかった。これはカルシウムイオンが均一に複合体中に分散していないためであると考えた。さらに,シラノール基の含有量を増加させるために,テトラエトキシシランの加水分解で得たシリカゾルをVTS-M重合体に混合すると,直後にゲル化一固化し,しかも生体活性を示さない固体が得られた。これは,VTS-M重合体とシリカゾルのシラノール基同士が縮合して,アパタイトの核生成に必要なシラノール基が消費されてしまったためと,結論した。ビニル基および-Si(OR)_3を有するビニルトリメトキシシラン(H_2C=CHSi(OCH_3)_3)をビニル基において重合させ、有機鎖(C-C)を導入し、同時にSiO_2の前駆体であるSi(OR)_4との間で高強度のC-Si-O-Si結合を形成させるため、ゾル-ゲル法によってテトラエトキシシランまたはテトラメトキシシラン(Si(OR)_4:R=CH_3,C_2H_5)とCa(CH_3COO)_2・エタノールおよび蒸留水を種々の混合比で混合し、還流下で加水分解・重合させることによってCa(II)を導入したゲル化複合体を合成した。GPCで全分子量分布を測定すると共に、^<13>C-NMRおよび^<29>Si-NMRによってC-Cの重合度や-Si(OR)_3基およびSi(OR)_4の加水分解度またはSi-O-Si結合密度について系統的に検討した。擬似体液を用いたIn vitro試験により、ゲル化複合体の生体活性を擬似体液ならびに赤外反射スペクトル・走査型電子顕微鏡および薄膜X線回析を用いて調べた結果、アパタイト層析出が観察された。しかし、上記ゲル化複合体は、カルシウム源として用いたCa(CH_3COO)_2が粒状に残存し、不均一な試料となった。この点を解決するためカルシウム源として水及びエタノールの両方に易溶性のCa(NO_3)_2を用いることによって均一かつ透明なゲル化複合体を合成することに成功した。このゲル化複合体は擬似体液中で7日間以内にアパタイトを形成した。また、テトラエトキシシランを含まないアルコキシシランゲル化体においても同様の結果を得た。蒸留水の量を変化させることによってゲル化体の柔軟性を制御できることがわかった。以上により、アルコキシシランとテトラエトキシシラン及びカルシウム源としてCa(NO_3)_2を用いることによって分子レベルで生体活性発現の起源となるSi-OH基及びCa(II)の導入に成功し、アパタイト形成能の付与に成功した。今後、ゲル化複合体の機械的性質、特に高靭性を実現することを目的として、各結合密度、重合度の最適化が望まれる。
RNA修飾酵素によるRNA分子種特異的・部位特異的作用の基本原理の理解

本研究は、「RNA修飾酵素がどのようにして、RNA分子種・部位特異的に作用するのかを解明する」ことを究極の目標としています。平成30年度は、3年計画の最終年度にあたります。本年度は、葉酸依存性tRNAメチル化酵素のtRNA修飾ネットワークにおける役割の研究から派生して、細胞内の葉酸代謝経路の中でtRNAメチル化酵素はどのぐらいの葉酸誘導体を消費するのかについて報告しました。また、好熱菌のtRNA修飾と修飾酵素およびThermus thermophilusのtRNA修飾の制御因子に関する2つの総説を発表しました。他に、(1)超好熱菌が高温環境で生育する上で2, 2-ジメチルグアノシンの修飾が必須なこと、(2)真核生物のマルチサブユニットtRNAメチル化酵素Trm7-Trm734の認識部位が、アンチコドンアームの修飾とその配列だけでなく、D-アーム上にも存在し、それがTrm734との接触領域となっており、それらを考慮すると、少なくとも酵母の場合はすべてのtRNAの修飾パターンの説明がつくこと、また、Trm734は従来知られていなかったWD40リピートを3つ持つタンパク質であること(3)真核生物のTrm11-Trm112は、メチル化部位(G10)の周辺領域だけでなく、アンチコドンアーム領域をTrm112を介して認識することなどを論文としてまとめ、投稿しましたが、いずれも現在、追加実験求むの裁定になっており、詰めを急いでいます。理化学研究所・横浜研究所との共同研究では、(1)サブユニットを解離させずにヒトm6Aメチル化酵素複合体を調製することができ、(2)16SリボソーマルRNAのシュードウリジル化が少なくとも2つの遺伝子産物によることを明らかにしましたが、未報告の状態です。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成28年度は、3年計画の初年度に当たります。以下のような事例について、投稿論文としてまとめ、報告しました。(1)葉酸依存性tRNAメチル化酵素のtRNA修飾ネットワークにおける役割(2)ポリアミンがRNAの維持および修飾に及ぼす作用(3)THUMPドメインを持つtRNAメチル化酵素のCCA末端を基準としたメチル化サイトの決定機構。また、タンパク質ノット構造を持つtRNAメチル化酵素とその修飾ヌクレオシドに関する最新の知見をまとめた総説を記載しました。学会発表は国内外合わせて10件です。これらの学会では、(1)(3)に加えて、マルチサイト特異性tRNAグアニントランスグリコシラーゼの基質RNA認識、tRNA m1A58メチル化酵素のtRNA認識機構、タンパク質ノット型RNAメチル化酵素の非基質RNA排除機構、新規m5Cメチル化酵素の基質RNAの探索について報告しました。本計画の採択に合わせて、理化学研究所・横浜研究所との共同研究として、ヒトmRNAおよび長鎖non-coding RNAに作用するRNAメチル化酵素複合体および16SリボソーマルRNAのアンチシャインダルガーノ配列領域に存在するシュードウリジンの生合成機構の解明にも着手しましたが、いずれもタンパク質発現系や遺伝子破壊株を準備するなど予備実験の段階であり、学会発表には至っておりません。当初予想されなかった結果として、一部の古細菌が新規な4-チオウリジン合成経路を持つと思われるデータを得ました。少し掘り下げて研究を行う必要があると感じています。本研究計画を立案した時点で、ある程度、成果が得られていた課題について、その細部を詰めることができました。これらを、順次、投稿論文としてまとめることができ、ほぼ予定通り、研究成果を公開できています。また、タンパク質ノット型tRNAメチル化酵素の非基質RNAの排除機構およびエクストラ・ドメインによる基質RNAの選択機構に関して、かなり予想外の知見が集積しつつあり、これらの一部は国内外の学会で発表することができました。また、岐阜大学、群馬大学との共同研究で、マルチサイト特異性tRNAグアニントランスグリコシダーゼの基質RNA認識機構について国際学会で発表することができました。さらに、幾つかの真核生物マルチサブユニットRNAメチル化酵素については、その性質の概要をほぼ明らかにすることができ、平成29年度にはその一部について報告できるのではないかと期待しております。加えて、理化学研究所との共同研究がスタートし、ヒトmRNAおよび長鎖non-coding RNAに作用するRNAメチル化酵素複合体の各サブユニット発現系を構築しつつあり、イオウ修飾系に関して新規な生合成経路が存在するのでは?と思わせる知見が得られています。これらを総合し、研究計画は、「おおむね順調に進展している」と判断しました。本研究は、「RNA修飾酵素がどのようにして、RNA分子種・部位特異的に作用するのか」を解明することを究極の目標としています。平成29年度は、3年計画の2年目にあたります。以下の事例に関して、投稿論文としてまとめ、報告しました。ポリアミンが、少なくとも試験管内の実験では、RNA修飾酵素の活性に影響を及ぼすことを2015年に報告しました。そこで、ポリアミン合成系の遺伝子破壊株のtRNA修飾はどのように変化するのかを調べました。意外なことに、tRNA修飾自身は野生株と遺伝子破壊株に顕著な差はなく、その代わり、高温環境下では一部のtRNAとリボソームが分解され、タンパク質合成系が停止することを見出しました。

本研究は、日本ポリアミン学会機関誌「ポリアミン」の「最新研究の紹介」欄にて紹介されました。続いて、tRNAメチル化酵素TrmBのtRNA結合部位と反応機構を提案する論文をまとめました。TrmBは、海外のグループが指摘した活性中心を破壊しても酵素活性がゼロにはならず、その触媒機構に関して諸説ありました。本研究では、活性中心が基質RNAのグアニン塩基の7位窒素原子自身であると考えると、内外のグループの実験結果を矛盾なく説明できることを報告しました。さらに、葉酸依存性RNAメチル化酵素TrmFOが貧栄養環境下で葉酸代謝系にどのような影響を及ぼすのか報告しました。限られた栄養分しかない時、それを好熱菌がRNA修飾系に優先的に使用しているという論文でもあります。学会発表は10件、うち2件は招待(依頼)講演です。本研究の申請時に、ある程度、成果を得られていた幾つかの課題について、その細部を詰めることができ、論文発表に至りました。また、研究遂行中に、望外の成果として、古細菌4-チオウリジン合成に関わるタンパク質を発見したり、Trm56のtRNA認識部位が触媒ドメインの中にあることを見出しました。さらに、長鎖RNAの配列を修飾を含めて直接的に分析する手法を考案しました。これらは、学会でその一部について発表しました。加えて、真核生物のマルチサブユニットRNA修飾酵素の研究(複数)は、いずれも投稿直前の最終段階に入っています。これらを総合し、「おおむね順調に進展している。」と判断しました。本研究は、「RNA修飾酵素がどのようにして、RNA分子種・部位特異的に作用するのかを解明する」ことを究極の目標としています。平成30年度は、3年計画の最終年度にあたります。本年度は、葉酸依存性tRNAメチル化酵素のtRNA修飾ネットワークにおける役割の研究から派生して、細胞内の葉酸代謝経路の中でtRNAメチル化酵素はどのぐらいの葉酸誘導体を消費するのかについて報告しました。また、好熱菌のtRNA修飾と修飾酵素およびThermus thermophilusのtRNA修飾の制御因子に関する2つの総説を発表しました。他に、(1)超好熱菌が高温環境で生育する上で2, 2-ジメチルグアノシンの修飾が必須なこと、(2)真核生物のマルチサブユニットtRNAメチル化酵素Trm7-Trm734の認識部位が、アンチコドンアームの修飾とその配列だけでなく、D-アーム上にも存在し、それがTrm734との接触領域となっており、それらを考慮すると、少なくとも酵母の場合はすべてのtRNAの修飾パターンの説明がつくこと、また、Trm734は従来知られていなかったWD40リピートを3つ持つタンパク質であること(3)真核生物のTrm11-Trm112は、メチル化部位(G10)の周辺領域だけでなく、アンチコドンアーム領域をTrm112を介して認識することなどを論文としてまとめ、投稿しましたが、いずれも現在、追加実験求むの裁定になっており、詰めを急いでいます。
シクロスポリン及びタクロリムスによる振戦・けいれんの発現機序

免疫抑制剤cyclosporineA(CYA)及びtacrolimus(TCL)は、腎・肝・膵機能障害のみならず、中枢神経系障害の副作用を発現する。特に振戦・けいれんが最も多い。そこで、CYA及びTCLの中枢毒性である振戦・けいれんの発現機序を明らかにすることを目的として行動薬理学的及び神経化学的実験を行った。(1)マウスにCYA(50mg/kg)を単回あるいは連続投与(1日1回、7日間)すると、harmine振戦は増大したが、oxotremorine振戦は変化しなかった。(2) CYAの単回及び連続投与は、マウス脳セロトニン代謝回転を高進したが、ノルアドレナリンとドパミンのそれには影響しなかった。以上、CYAはセロトニン神経を活性化することにより振戦を発現することが示唆された。(3)マウスにCYAの単回投与すると、GABA拮抗薬、bicuculline(脳室内投与)誘発けいれんは増大したが、グルタミン酸拮抗薬のそれは変化しなかった。(4) CYAの単回投与は、マウス脳GABA代謝回転を抑制した。(5) CYA(1μM)を24時間反応させたラット培養小脳顆粒細胞において、[3H]muscimol結合の阻害が認められた。以上、CYAのけいれん発現にGABA神経活性とその受容体阻害によるGABA神経伝達の抑制が関与することがわかった。また、この阻害はCYAによるセロトニン神経活性の高進にも寄与していることが推測される。本研究は、免疫抑制剤の振戦・けいれん発現に関してセロトニン神経活性の高進と特にGABA神経伝達の阻害が重要な役割を演じている可能性を提起するものである。免疫抑制剤のcyclosporine A(CYA)及びtacrolimus(TCL)は、腎・肝・膵機能障害のみならず、中枢神経系障害の副作用を発現する。そこで、CYAとTCLの中枢性副作用である振戦の発現機序を明らかにすることを目的として実験を行った。(1)薬物誘発振戦に対する作用:CYA(50mg/kg)及びTCL(3mg/kg)をマウス腹腔内に単回あるいは連続投与(1日1回、7日間)し、1時間後にharmine(10mg/kg)及びoxotremorine(0.3mg/kg)誘発振戦を調べた。CYA及びTCLの単回投与はharmine振戦を増大し、連続投与によりこの作用はさらに著明となった。しかし、両薬物(単回及び連続投与)はoxotremorine振戦には影響を及ぼさなかった。(2)脳内モノアミン含量および代謝回転に対する作用:(1)と同様にCYA及びTCLを投与したマウスを断頭し脳を摘出後、ドパミン(DA)、ノルアドレナリン(NA)、セロトニン及びそれぞれの代謝産物を抽出し測定した。また、両薬物の投与直後、α-methyl-p-tyrosineを投与しNAあるいはDA含量を、probenesidを投与し5-hydroxyindoleacetic acid含量を、それぞれ経時的に測定することにより各モノアミンの代謝回転を算出した。両薬物を単回及び連続投与してもモノアミン及びその代謝物の含量に変化は認められなかった。CYAの単回及び連続投与はセロトニン代謝回転だけを高進した。TCL(単回及び連続投与)はどのモノアミン代謝回転にも作用しなかった。以上より、CYAの振戦発現にはセロトニン神経の活性化が重要であり、TCLのそれにはモノアミン神経系は関与しないことが示唆された。

免疫抑制剤のcyclosporine A(CYA)及びtacrolimus(TCL)は、腎・肝・膵機能障害のみならず、中枢神経系障害の副作用を発現する。特に振戦・けいれんが最も多い。そこで、CYA及びTCLの中枢毒性である振戦・けいれんの発現機序を明らかにすることを目的として行動薬理学的及び神経化学的実験を行った。(1)マウスにCYA(50mg/kg)を単回あるいは連続投与(1日1回、7日間)すると、harmine振戦は増大したが、oxotremorine振戦は変化しなかった。(2)CYAの単回及び連続投与は、マウス脳セロトニン代謝回転を高進したが、ノルアドレナリンとドパミンのそれには影響しなかった。以上、CYAはセロトニン神経を活性化することにより振戦を発現することが示唆された。(3)マウスにCYAの単回投与すると、GABA拮抗薬、bicuculline(脳室内投与)誘発けいれんは増大したが、グルタミン酸拮抗薬のそれは変化しなかった。(4)CYAの単回投与は、マウス脳GABA代謝回転を抑制した。(5)CYA(1μM)を24時間反応させたラット培養小脳顆粒細胞において、[3H]muscimol結合の阻害が認められた。以上、CYAのけいれん発現にGABA神経活性とその受容体阻害によるGABA神経伝達の抑制が関与することがわかった。また、この阻害はCYAによるセロトニン神経活性の高進にも寄与していることが推測される。本研究は、免疫抑制剤の振戦・けいれん発現に関してセロトニン神経活性の高進と特にGABA神経伝達の阻害が重要な役割を演じている可能性を提起するものである。
MYH9異常症における巨大血小板産生機序の解明

【目的】我々は、May-Hegglin異常に代表される白血球封入体を伴う巨大血小板性血小板減少症の原因遺伝子MYH9を同定し、MYH9異常が引き起こす一連の疾患群としてMYH9異常症を提唱した。本疾患群に特徴的な白血球封入体は、ドミナントネガティブ効果によるミオシン蛋白の異常集積が原因であると考えられているが、封入体が認められない血小板ではハプロ不全が示唆されている。本研究では、異常ミオシンのみを特異的に認識する抗体を作成し、血液細胞における異常ミオシンの発現とその存在様式を解析した。【方法】MYH9 5818delG変異により新たに生じるC末端側の6アミノ酸配列(MAPTKR)に対する抗ペプチド抗体を作成した。市販の抗ミオシン抗体と共に、末梢血塗抹標本における免疫蛍光染色と分画した血液細胞での免疫ブロットを施行した。また、各血液細胞での異常MYH9 mRNAの相対的発現量を解析した。【結果】免疫蛍光染色では、顆粒球以外では封入体形成を示唆する異常ミオシンの集積は認めなかった。さらに、1)好中球では異常ミオシンは封入体にのみ存在し、2)血小板では特に巨大な血小板においてのみび漫性に存在し、3)リンパ球ではび漫性に存在し、4)単球では極細顆粒状に存在した。また、異常ミオシンの発現量は、血小板においては好中球、リンパ球、単球の約1/10に低下していた。異常MYH9 mRNA発現量は、白血球では正常であったが、血小板では正常MYH9 mRNAと比較して約70%に低下していた。【結論】異常ミオシン蛋白/mRNAの発現様式は細胞により異なることが判明し、血液細胞によりその制御が異なることが示唆された。我々は、May-Hegglin anomalyに代表される白血球封入体を伴う巨大血小板性血小板減少症の原因遺伝子MYH9を同定し、MYH9異常が引き起こす一連の疾患群を総称してMYH9異常症と呼ぶことを提唱した。さらに、抗NMMHC-IIA抗体を用いた免疫蛍光染色による鑑別診断法を確立した。MYH9異常症には光顕的封入体を有しないEpstein症候群が含まれ、R702変異との関連性が指摘されている。我々が現在までに解析したMYH9異常症53家系中、4家系(4症例)でR702変異(R702CおよびR702H)を同定した。白血球封入体が認識されていた症例は1例であったが、好中球におけるNMMHC-IIA局在は全症例において異常でありII型局在を示した。II型局在は明瞭な光顕的封入体を有するR1165あるいはD1424変異においても検出されるため、光顕的封入体染色性の違いを明らかにした。明瞭な光顕的封入体を有するE1841K、D1424N、あるいはR1165C変異を有する好中球封入体にはoligo dTプローブにより認識されるpoly(A)+RNAが含まれることが判った。このpoly(A)+RNA陽性局在はRNAse処理で消失するがNMMHC-IIA局在は不変であった。一方、R702変異を有する好中球にはpoly(A)+RNA局在は染色されない。従って、光顕的封入体の染色性はNMMHC-IIA凝集部位でのpoly(A)+RNA量に規定されることが判明し、R702変異ではpoly(A)+RNA量が減少していることが明らかとなった。

さらに、R702変異に関連する血液学的特徴は血小板の大きさであり、末梢血塗抹標本上の平均血小板直径(6.6±0.9μm, n=4)は、他の変異を有するMYH9異常症(4.9±0.9μm, n=77)より有意に大型であった。R702変異によるMYH9異常症は、poly(A)+RNA量が乏しいことによりい光顕的に認識されない微細な白血球封入体を呈するが、NMMHC-IIA局は異常であることと、血小板サイズが他のMYH9異常を有する症例より大きいことが特徴であることが判明した。【目的】我々は、May-Hegglin異常に代表される白血球封人体を伴う巨大血小板性血小板減少症の原因遺伝子MYH9を同定し、MYH9異常が引き起こす一連の疾患群としてMYH9異常症を提唱した。本疾患群に特徴的な白血球封入体は、ドミナントネガティブ効果によるミオシン蛋白の異常集積が原因であると考えられているが、封入体が認められない血小板ではハプロ不全が示唆されている。本研究では、異常ミオシンのみを特異的に認識する抗体を作成し、血液細胞における異常ミオシンの発現とその存在様式を解析した。【方法】MYH9 5818delG変異により新たに生じるC末端側の6アミノ酸配列(MAPTKR)に対する抗ペプチド抗体を作成した。市販の抗ミオシン抗体と共に、末梢血塗抹標本における免疫蛍光染色と分画した血液細胞での免疫ブロットを施行した。また、各血液細胞での異常MYH9 mRNAの相対的発現量を解析した。【結果】免疫蛍光染色では、顆粒球以外では封入体形成を示唆する異常ミオシンの集積は認めなかった。さらに、1)好中球では異常ミオシンは封入体にのみ存在し、2)血小板では特に巨大な血小板においてのみび漫性に存在し、3)リンパ球ではび漫性に存在し、4)単球では極細顆粒状に存在した。また、異常ミオシンの発現量は、血小板においては好中球、リンパ球、単球の約1/10に低下していた。異常MYH9 mRNA発現量は、白血球では正常であったが、血小板では正常MYH9mRNAと比較して約70%に低下していた。【結論】異常ミオシン蛋白/mRNAの発現様式は細胞により異なることが判明し、血液細胞によりその制御が異なることが示唆された。
ラン藻・葉緑体チラコイド膜結合NAD(P)Hデヒドロゲナーゼの単離と生理的機能

1.チラコイド膜結合型NDH活性測定法;らん藻Synechocystis PCC 6803よりチラコイド膜を単離し、活性測定法を検討した。NDH活性はa)クロロフィル蛍光収率b)P700の酸化還元c)メチルヴィオロゲン依存のMehler反応d)340nm吸光度変化を指標として測定可能であった。3.高等植物の循環的電子伝達;光照射後のクロロフィル蛍光の一時的な上昇から、循環的電子伝達活性を推定する方法を開発した。また、トウモロコシ葉では、アンチマイシンに阻害されるチトクロムb_<559>が循環的電子伝達に関与することを明らかにした。1.NAD(P)H→チラコイド膜結合PQの酵素活性測定法ラン藻Synechocystis 6803よりチラコイド膜を単離し、酵素活性測定法の検討をした。NDH活性は、NAD(P)Hのチラコイド膜への添加時のa)クロロフィル蛍光収率の上昇、b)P700^+の還元、c)メチルヴィオロゲン依存のMehler反応の促進、d)340nm吸光度変化を指標として測定可能であった。NDHのチラコイド膜からの可溶化と単離Synechocystis 6803チラコイドよりTritonXを用いて膜タンパク質を可溶化を試みたところ、0.6-0.8%Tritonでロテノンで阻害されるNADPH-メナジオン還元活性が可溶性画分に検出された。ゲルろ過カラムで分離したところ、フィコビリプロテイン複合体と同じ高分子量のフラクションにNDH活性が見出された。またこの活性はロテノンに阻害されたことから、ミトコンドリアのComplex Iタイプの複合体であると考えられる。また手異分子量のロテノンに阻害されない活性も存在していることも明らかになった。3.高等植物プロトプラストでのストロマからプラストキノンへの電子供与に関与するタンパク質をこの活性が高いc4植物のトウモロコシ葉チラコイド膜を用いて検索したところ、アンチマイシンにより阻害されるチトクロームb559がこれに関与していることが明らかになった。すなわち高等植物では、ラン藻等のNDH依存の反応とはまったく異なる電子供与の機構が存在することが推定された。らん藻SynechocystisPCC6803の粗抽出液についてNBTを用いた活性染色を行った結果、NAD(P)Hの酸化活性を示す1本のバンドと、NADPHに特異的な6本のバンドが存在した。前者のNDH(NADPH-Plastoquinone Oxidoreductase)を菌体の可溶性画分から単離しcharacterizationを行った。単離した酵素の分子サイズはSDS-PAGEの結果から約30kDaであり、NADPH、NADHに対するKm値はそれぞれ12.4、46.8μMであった。N末配列30残基を決定し、ホモロジー検索を行ったことろSalmonellatyphimuriumのNitroreductase N末配列と46%のホモロジーがあり、FNR、DT diaphorase、Complex I typeのNDHとのホモロジーはなかった。Electron acceptorとしてはQuinone化合物に対して高い反応速度を示し、NitroreductaseのelectronacceptorであるNitrobenzeneに対してはQuinone化合物の10%程度の反応速度しか示さなかった。次に、阻害剤の効果を調べた結果、Rotenone、Amobarbital、SHAM、Dicumarolに対しては非感受性であり、NEMには感受性であった。これらの結果から単離された酵素は新規のNDHであると考えられる。今回単離されたNDHは、NAD(P)H-Quinone Oxidoreductase活性を示すことから光合成の循環的電子伝達経路で機能している可能性もある。
早産児をもつ母親の睡眠覚醒行動と産後うつ傾向およびQOLとの関連について

目的:早産児及び正期産児を出産した母親の産後早期からの産後うつ傾向と睡眠に関する縦断的変化を調査し、特徴を検討した。方法:対象者を1早産児2正期産児を出産した母親とし、産後2週、1か月及び1の母親は児退院後1か月を含めた時点で調査を行った。調査内容は、睡眠指標としてアクチグラフ、睡眠日誌、心理的指標としてPSQI、EPDSを用いた。結果:1対象者3名、各指標の中央値(範囲)は、児の在胎週数33w2d(33w2d-33w5d)、児の退院時生後日数30(30-37)日であった。EPDSでは基準を超える母親が産後2週に1名いた。PSQIでは基準を超える母親が産後1か月1名、児退院後1か月1名おり、異なった母親であった。睡眠に関しては、全員睡眠効率が児の入院中より退院後の方が低下していた。2対象者6名であった。EPDSが産後1か月、PSQIは産後2週及び1か月で基準値を超える母親が1名おり、睡眠効率も産後2週に低値を示した。睡眠に関しては、産後1か月に比べ2週の方が総睡眠時間に個人差を認めた。考察:早産児は生後早期に不安定な場合が多く、今回1名が産後2週でのEPDSが高得点であり、児の状態による心理的影響が考えられた。一方他の母親のEPDSは問題なく、児の出生時週数や退院時期を考えると比較的状態が安定していた可能性もあり、母親自身の特性だけでなく児の状態も影響することが示唆された。一方で正期産の母親の場合、産後2週では児の状態に合わせた睡眠・活動パターンを獲得できないことによる睡眠時間の個人差が考えられた。産後1か月でEPDS高値を示した母親は、産後2週及び1か月のPSQIも高値であり、産後2週の総睡眠時間自体は他者と違いはないものの産後1か月では減少し、睡眠効率も低かった。これにより産後早期からの総睡眠時間だけでなく、睡眠の質の低下も産後のうつ傾向に関連する可能性が示唆された。平成29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、早産児をもつ母親と正期産児をもつ母親に対し、出産後早期から産後6か月までの期間における睡眠覚醒リズムと生活の質(Quality of life:QOL)および産後うつとの関連を調査・分析する。それによって、特に早産児をもつ母親に対する産後うつ傾向の早期発見と予防的支援につながる看護モデルの開発につなげることを研究の目的としている。産後の睡眠問題は、分娩に伴うホルモンバランスの変化から、マタニティ・ブルーズやその後の産褥うつ病とも深い関わりがあるとされている。特に児がNICUへ入院している母親の場合、予想外の出産や児の治療の必要性、思い描いていた児の姿や育児とは異なる現状に多大なストレスと不安を抱き、心理的負担が多いことが指摘されている。それらが日常生活に影響を及ぼし、睡眠障害、慢性的な疲労感、マタニティ・ブルーズや産褥うつ病へとよりつながりやすくなる要因とも考えられる。そのようなことから、子どもがNICUに入院中の早期から母児および家族への支援を行っている看護者が産後うつ傾向につながる母親の生活の変化をより早期にキャッチして予防的支援を行うことは、新たな家族の役割形成を支援し、退院後のよりよい家族生活へとつながる意義のある支援となると考える。平成28年度の調査開始にあたり、まず今までの資料を基に新たな文献検討を行った。それによって、調査開始時期である産後2週目からその後の産後6か月までの縦断的変化を検討していく「エジンバラ産後うつ病自己評価表」を統一して用いた方が縦断的調査における比較や検討が行いやすいと考えたため、調査内容の一部を変更・修正の上で本学倫理委員会へ研究内容を提出し、承認を得た。承認を得た後、調査依頼施設の看護部および対象となるNICU/GCU病棟の師長、副師長への調査依頼および調整を重ね、2月末より実際の調査を開始したところである。調査を開始したものの、施設の状況から現在までに対象となる母親が得られていない状況である。理由としては、施設での入院件数が少ない状況であること、対象となる母親は数名いるものの心理的状態から産後2週目前の時期に依頼するのは難しいことが挙げられている。その原因としては、大学病院の総合周産期センターに属するNICU/GCU病棟であることから、母親および新生児自身において他の問題や疾患を抱えたよりリスクの高い母子が入院している可能性が高いこと、また一方で母体状況が早期より管理されやすいこともあり、胎児管理が良好になされていることも入院数が少ない要因の1つとして考えられる。

PSQIでは基準を超える母親が産後1か月1名、児退院後1か月1名おり、異なった母親であった。睡眠に関しては、全員睡眠効率が児の入院中より退院後の方が低下していた。2対象者6名であった。EPDSが産後1か月、PSQIは産後2週及び1か月で基準値を超える母親が1名おり、睡眠効率も産後2週に低値を示した。睡眠に関しては、産後1か月に比べ2週の方が総睡眠時間に個人差を認めた。考察:早産児は生後早期に不安定な場合が多く、今回1名が産後2週でのEPDSが高得点であり、児の状態による心理的影響が考えられた。一方他の母親のEPDSは問題なく、児の出生時週数や退院時期を考えると比較的状態が安定していた可能性もあり、母親自身の特性だけでなく児の状態も影響することが示唆された。一方で正期産の母親の場合、産後2週では児の状態に合わせた睡眠・活動パターンを獲得できないことによる睡眠時間の個人差が考えられた。産後1か月でEPDS高値を示した母親は、産後2週及び1か月のPSQIも高値であり、産後2週の総睡眠時間自体は他者と違いはないものの産後1か月では減少し、睡眠効率も低かった。これにより産後早期からの総睡眠時間だけでなく、睡眠の質の低下も産後のうつ傾向に関連する可能性が示唆された。現在の状況から、既に依頼をしている施設に対しては対象者への初回研究依頼時期を「産後2週目から1か月」と幅を持たせた時期に変更し、新たに対象者の心理状態が少し安定してきていると思われる時期での依頼を行うこととした。更に別の施設として、他のNICU/GCU施設を対象施設として含めることとし、調査を依頼中である。また、正期産児の母親への調査依頼に関しては、現在近隣の産科クリニックへ調査依頼を行っている状況であり、今後も必要性があれば他施設への依頼を検討し、研究を進めていく予定である。平成29年度が最終年度であるため、記入しない。
Ｄｅｌｉｇｎｅ－Ｌｕｓｚｔｉｇ　多様体とＦａｒｇｕｅｓ－Ｆｏｎｔａｉｎｅ　曲線

Fargues-Fontaine曲線上において,ベクトル束とその付加構造のモジュライを考えることによってDeligne-Lusztig多様体の類似を構成する.構成した空間やそのある意味でのコンパクト化を幾何的に調べ,そのコホモロジーに局所保型誘導を幾何学的に実現する.これによって,有限体上の代数群に対するDeligne-Lusztig理論の局所体類似が構成される.Fargues-Fontaine曲線上において,ベクトル束とその付加構造のモジュライを考えることによってDeligne-Lusztig多様体の類似を構成する.構成した空間やそのある意味でのコンパクト化を幾何的に調べ,そのコホモロジーに局所保型誘導を幾何学的に実現する.これによって,有限体上の代数群に対するDeligne-Lusztig理論の局所体類似が構成される.