hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
大規模な言語リソースを用いた自然言語処理による学習支援システムの開発

本研究で用いているコーパスの中には、学習言語による作文に対して母語訳が併記されているものがある。そこで母語が併記された学習者の文を自動で抽出する手法を提案した。母語訳が付いているもの以外も抽出しているところがあるため、今後さらなる改善が必要である。26年度が最終年度であるため、記入しない。当初予定していた3つのサブタスクのうち2つ目の途中まで進めたため順調といえる。25年度は日本語対象ではなく英語を対象として行なっているが、言語が違うだけで適用自体は容易なため、概ね順調である。25年度は英語を対象として誤り訂正を行なった。また、(2)の一部や(3)については実施していない。そのため、今年度は行なうことは以下の通りである。(a)誤り訂正、誤り訂正ルール獲得を日本語対象で行なう(b)母語の誤り傾向の獲得と推定を日本語対象で行なう(c)日本語学習支援システムの開発
日本中世を中心とする寺院生活史の研究

第1に、日宋・日元の貿易および文化交流に関する研究を行なった。(1)日宋交流史の観点から、日本に請来され、現在も京都市内の寺院に伝わる2つの仏牙舎利の来歴と相承の過程について探った。その結果、平安後期の入宋僧を介して、仏牙信仰が北宋から日本へと展開したことが明らかになった。(2)日宋・日元貿易について、鎌倉幕府の貿易関与に注目して研究を進めた。まず源実朝渡宋説話の展開を貿易の視点から再考し、幕府による貿易使の派遣をめぐる論点を見出した。次に唐物が博多津から京都へと運ばれる過程に焦点を当て、平安後期から鎌倉前期にかけて、京都の領主と博多綱首がどのような関係を築いたかを探った。以上をふまえ、唐物が鎌倉へと運ばれる径路や貿易使の派遣を考察し、鎌倉中期から幕府が唐船による貿易に積極的に関与し始めた実態を明らかにした。第2に、中世の律家に関する研究を行なった。(1)摂津国における律家の展開について探り、一遍が兵庫津にあった光明福寺という律院で没し、同寺の住持が、現存する一遍墓塔(石造五輪塔)の造立に関与した可能性が高いことを明らかにした。(2)かつて鎌倉極楽寺の末寺であった播磨国の報恩寺(兵庫県加古川市)に注目し、極楽寺流律家の西国への展開について探った。まず西大寺流の山陽地方への展開について確認した上で、報恩寺文書や西大寺末寺帳を基に、西大寺流や極楽寺流の播磨国への展開について考察し、後宇多上皇の協力があったことを明らかにした。また国分寺の興行などに注目し、極楽寺流がどのように西国に末寺を展開させたかを分析した。(3)鎌倉時代の南都における律法興行の実態を把握するため、仏典の出版活動について探った。その結果、西大寺流が興福寺の春日版を積極的に利用していたこと、泉涌寺のみならず、南都や鎌倉の律家でも輸入宋版を利用しており、覆宋版が刊行された可能性が高いことなどが明らかになった。第一に、日本中世における一切経の書写と宋版一切経の輸入に関わる研究を実施した。寺院生活史の深化を目指す当研究において、この研究は、中世寺院で一切経がどのように受容されたかを考える前提として非常に重要である。また、世俗権力による寺院への一切経の寄進は当時の政治状況を色濃く反映すると考えられるし、宋版一切経の輸入は日宋貿易研究の有効な素材となり得る。こうした関心から、本年度は、平安後期から南北朝期における一切経の書写、輸入、寄進に関わる史料を網羅的に収集し、現存する一切経と合わせて検討を進めた。その結果、書写一切経と宋版一切経の相違点、宋版一切経の輸入・寄進主体の変化などが明らかになった。第二に、中世の神社における神仏習合の実態を空間から読み取る研究を実施した。神身離脱説や本地垂迹説が流布する中で、寺院の僧侶集団がそれと関係の深い神社に影響力を及ぼした結果、神社が神前法会の場となるなど、神社の境内に仏教的な空間が形成されていった。これは、神社が寺院生活の一部に組み込まれるようになったことを意味する。こうした関心から、本年度は、奈良の春日社に形成された仏教的空間を主な対象とし、春日曼茶羅などの境内図を参照しつつ、関連史料の収集と分析を進めた。その結果、春日社における仏教的空間の歴史的展開、神前法会の執行を通じて興福寺が春日社に及ぼした影響力などが明らかになった。第三に、泉涌寺(京都市)および金剛寺(大阪府河内長野市)で聖教の調査・撮影を実施し、あわせて伽藍構成を把握するための景観調査を行なった。聖教調査では、律院における寺院生活で最も重要な行事の一つである布薩に関係する新出の西大寺版版本が数点見出され、その分析を進めた。第一に前年度に引き続き、中世における一切経の書写と輸入に関する研究を進めた。一切経の書写としては、主に愛知県新城市の徳運寺に所蔵される139巻の古写経を対象とした。前年度に国際仏教学大学院大学学術フロンティア事業の研究協力者として参加した調査で撮影したデジタル画像、書誌情報に基づいて目録を作成するとともに、それぞれの書誌的な分析を進めた。その成果は、国際仏教学大学院大学学術フロンティア実行委員会編『愛知県新城市徳運寺古写経調査報告書徳運寺の古写経』で発表した。次に、一切経の輸入に関しては、平安末期から鎌倉時代における宋版一切経の輸入についての研究を進めた。現存する一切経に加えて、史料上で確認できる輸入の事例を網羅的に集成し、寺社への寄進の主体、輸入者の変化に着目して分析した。その成果は、「宋版一切経の輸入と受容」と題して公表する予定である。また、前年度に調査した名古屋市の七寺一切経に含まれる北宋新訳仏典の分析を進め、「七寺一切経中の北宋新訳仏典」と題して公表した。第二に、鎌倉時代の寺院生活史を考える上で不可欠の要素である日宋交流史に関する研究を進めた。

今年度主に対象としたのが、明恵が高山寺を拠点に形成した僧侶集団と南宋との関わりで、公刊されている高山寺の聖教目録を基にして、現在高山寺に所蔵されている南宋版の章疏を検出し、蔵印から他所に流出したことが判明する分、そして写本として残っている分を合わせて集成した。次に、高山寺に残る鎌倉時代の石造宝篋印塔の図像的な背景についての検討を進めた。以上の成果の一部は、「高山寺の明恵集団と宋人」と題して公表した。これまでに挙げた研究の他、博士論文「中世僧侶集団の成立史的研究-律家および三鈷寺流を中心に-」を基にして、僧侶集団や仏教観、寺院文化などに注目した新仏教の成立史に関わるこれまでの研究成果をまとめ、著書『中世禅律仏教論』を刊行した。第1に、日宋・日元の貿易および文化交流に関する研究を行なった。(1)日宋交流史の観点から、日本に請来され、現在も京都市内の寺院に伝わる2つの仏牙舎利の来歴と相承の過程について探った。その結果、平安後期の入宋僧を介して、仏牙信仰が北宋から日本へと展開したことが明らかになった。(2)日宋・日元貿易について、鎌倉幕府の貿易関与に注目して研究を進めた。まず源実朝渡宋説話の展開を貿易の視点から再考し、幕府による貿易使の派遣をめぐる論点を見出した。次に唐物が博多津から京都へと運ばれる過程に焦点を当て、平安後期から鎌倉前期にかけて、京都の領主と博多綱首がどのような関係を築いたかを探った。以上をふまえ、唐物が鎌倉へと運ばれる径路や貿易使の派遣を考察し、鎌倉中期から幕府が唐船による貿易に積極的に関与し始めた実態を明らかにした。第2に、中世の律家に関する研究を行なった。(1)摂津国における律家の展開について探り、一遍が兵庫津にあった光明福寺という律院で没し、同寺の住持が、現存する一遍墓塔(石造五輪塔)の造立に関与した可能性が高いことを明らかにした。(2)かつて鎌倉極楽寺の末寺であった播磨国の報恩寺(兵庫県加古川市)に注目し、極楽寺流律家の西国への展開について探った。まず西大寺流の山陽地方への展開について確認した上で、報恩寺文書や西大寺末寺帳を基に、西大寺流や極楽寺流の播磨国への展開について考察し、後宇多上皇の協力があったことを明らかにした。また国分寺の興行などに注目し、極楽寺流がどのように西国に末寺を展開させたかを分析した。(3)鎌倉時代の南都における律法興行の実態を把握するため、仏典の出版活動について探った。その結果、西大寺流が興福寺の春日版を積極的に利用していたこと、泉涌寺のみならず、南都や鎌倉の律家でも輸入宋版を利用しており、覆宋版が刊行された可能性が高いことなどが明らかになった。
金属間化合物の水素誘起脆化におよぼす結晶構造と組織の効果

環境から浸透した水素に起因する金属間化合物の脆化現象におよぼす粒界上での構造と組成ならびに結晶粒径,第2相の存在等の組織因子の影響と機構について,主としてNi_3(Si,Ti)とCo_3Tiの金属間化合物を用いて研究を行い以下のような結果を得た.1.Ni_3(Si,Ti)の大気中での水分による脆化とこの合金の粒界上での原子組成との相関をAuger分光分析により解析した結果,そこでのボロン元素や構成元素濃度に直接依存していることを見い出した.水分子の分解あるいは水素原子移動/凝集のkineticsと粒界組成が密接に関連していることが明らかにされた.2.Nbを含む第2相分散物がNi_3(Si,Ti)合金を強化しつつも著しく環境脆化を抑制することを見い出した.第2相が特有な組織(形状,寸法,組成)を有する時,水素が第2相内部もしくは界面に,あるいはまた変形中に第2相分散物周囲に形成する塑性領域にトラップもしくはscavengingするために生じている考えを提唱した.本知見に基づき,低温高靭性と高温高強度を併せ持つ耐環境性に優れた新規の高温構造材料の開発を可能にすることができた.3.Co_3Tiの微細粒組織が環境脆化感受性を著しく低下させることを観察した.また,極めて遅い変形速度域になると環境脆化が再び低減する現象を観察した.この機構として,超低速域では合金表面に生じる酸化膜が水素原子浸透を抑制するためとの考えを提唱した.環境から浸透した水素に起因する金属間化合物の脆化現象におよぼす粒界上での構造と組成ならびに結晶粒径,第2相の存在等の組織因子の影響と機構について,主としてNi_3(Si,Ti)とCo_3Tiの金属間化合物を用いて研究を行い以下のような結果を得た.1.Ni_3(Si,Ti)の大気中での水分による脆化とこの合金の粒界上での原子組成との相関をAuger分光分析により解析した結果,そこでのボロン元素や構成元素濃度に直接依存していることを見い出した.水分子の分解あるいは水素原子移動/凝集のkineticsと粒界組成が密接に関連していることが明らかにされた.2.Nbを含む第2相分散物がNi_3(Si,Ti)合金を強化しつつも著しく環境脆化を抑制することを見い出した.第2相が特有な組織(形状,寸法,組成)を有する時,水素が第2相内部もしくは界面に,あるいはまた変形中に第2相分散物周囲に形成する塑性領域にトラップもしくはscavengingするために生じている考えを提唱した.本知見に基づき,低温高靭性と高温高強度を併せ持つ耐環境性に優れた新規の高温構造材料の開発を可能にすることができた.3.Co_3Tiの微細粒組織が環境脆化感受性を著しく低下させることを観察した.また,極めて遅い変形速度域になると環境脆化が再び低減する現象を観察した.この機構として,超低速域では合金表面に生じる酸化膜が水素原子浸透を抑制するためとの考えを提唱した.環境から浸透した水素に起因する金属間化合物の脆化現象における結晶構造および結晶粒界構造と組成ならびに結晶粒径,第2相の存在等の組織因子の影響とその機構について、主としてNi_3(Si,Ti)ならびCo_3TiのLl_2型金属間化合物について研究を行った.その結果,本年度は以下のような結果を得ることができた.(1) Ni_3(Si,Ti)の大気中での水分による脆化とこの合金の結晶粒界上での原子組成との相関をAuger分光分析により解析した結果,粒界上に偏析しているboron元素と構成元素であるTiやSi元素濃度に直接依存していることが分かった.ある臨界の濃度で環境脆化の脆性-延性遷移が引き起こされることを見い出し,水素のkineticsに及ぼす結晶粒界原子組成との関連性を考察し,その機構を提唱した.(2) Ni_3(Si,TI)の大気中での水分による脆化に及ぼす第2相分散物の影響を調査した結果,ある特有な第2相(Nbを含む金属間化合物)の存在が著しく本脆化を抑制することを見い出した.対応するmicro機構として,第2相への水素のscavenging効果あるいは第2相/マトリックス界面への水素のトラップ効果に基づく考えを提唱した.(3) CO_3Tiの大気中での水分による脆化に及ぼす結晶粒径の効果を調べた.その結果,本脆化が著しく結晶粒径に依存する事実を観察すると共に,結晶粒微細化が本脆化の抑制に極めて有効な組織因子であることを見い出した.本年度は,大気中に含まれる水分が分解して合金内部に浸透した水素によって引き起こされる環境脆化におよぼす主要な組織因子として結晶粒径(寸法)および第2相の影響について詳細な調査をした.前者の因子については,Co_3Ti金属間化合物を用いて調査研究を試みた.その結果,微細粒組織が環境脆化感受性を著しく低下させることを観察した.また,極めて遅い変形速度域(すなわち遅れ破壊領域)になると環境脆化が再び低減する現象を観察した.この環境脆化の異常な変形速度依存性は試験温度が上昇するにつれまた微細な結晶粒組織ほど顕著にあらわれることを観察した.この機構として,超低速域では合金表面に生じる酸化膜が水素原子浸透を抑制するためとの考えを提唱した.後者の因子については,Ni_3(Si,Ti)にNbを合金添加した金属間化合物を用いて調査研究を行った.

その結果,Nbを含む第2相分散物が合金を強化しつつも著しく環境脆化を抑制することを見い出した.第2相が特有な組織(形状,寸法,組成)を有する時,水素が第2相あるいは界面にトラップもしくはscavengingするために生じている考えを提唱した.このように,2つの金属間化合物において,高温構造材料としての性質を損なわずにむしろこれまで以上に性質を向上させながら,大気中に含まれる水分による環境脆化を抑制低減できることを見い出した.
プロバイオティクス摂取が腸管免疫と腸内細菌のトランスジェネレーションへ及ぼす影響

近年「ヒトの胎児期における環境要因が何らかの形で記憶され、成人後のさまざまな疾患の罹患率に影響を与える可能性」、すなわちトランスジェネレーションが注目されている。本研究の目的は、伝統的発酵食品である鮒鮨(ふなずし)より単離したプロバイオティクス投与によって影響を受けた親の腸管免疫系と腸内細菌が、その子供たちにいかなる影響を及ぼすか(トランスジェネレーション)を検討し、それがどのような機序をもって実験大腸炎の病態に関与するかを解明する事である。本研究によって、親の食生活が、その子供たちにいかなる影響を及ぼすかが解明され、世代間を通じた炎症性腸疾患の予防と治療への応用が可能になると考えられる。
韓国語習得研究のための汎用的な韓国語文法能力測定テストの開発

本研究は韓国語学習者の母語に関係なく,必要最小限度の問題項目数の解答で,学習者の韓国語能力を推測的に測定する,即ち,学習者の言語能力を推測的に予測する文法テストの開発が目的である。そのために,72問からなる文法テストを作成し,平均年齢20.5歳(SD=1.54)、学習期間平均22.9ヶ月(SD=8.09)の中国語母語話者114名(男24名,女95名),平均年齢20.1歳(SD=1.03)、学習期間平均21.04ヶ月(SD=12.08)の日本語母語話者72名(男11名,女51名)を対象に,テストを実施した。レベルは学習期間を基準に,1218ヶ月を下位群,2430ヶ月を上位群と見なした。問題項目は,下位項目として,形態素変化(活用),局所依存(助詞),表現(接続語尾や文末表現など),3項目で,それぞれ24問を用意した。この72問のうち,測定力の高い問題を各下位項目から12問ずつ抽出し,36問からなる文法テストを作成する。被験者のデータを、T-DAP(Test Data Analysis Program)で分析し、標準項目適切度の高い順に36問の項目を選抜し、文法能力測定テストを完成させた。その36問の得点を、各レベルごとに一元配置の分散分析によって、上位群と下位群のさを検定したところ、全項目において、上位群と下位群の間に有意差があった。この結果は、レベルの弁別が可能であることを示している。加えて、各下位項目別の得点を反復測定の単純対比の方法で測定したところ、下位群ではそれぞれの間に差が見られなかった。上位群では、活用の得点のみ高かったが、他の項目では差が見られなかった。この結果は、形態素変化、局所依存、表現の3つの下位項目が等しく学習者の能力を測定できることを示した。最後に、PROXで正当確率について検証し、本研究は韓国語文法能力を測定する36項目のテストを開発した。中国内にある大学の韓国語学科で韓国語を第二外国語として学習している中国語母語話者114名(男24、女95)を対象に2016年12月に調査を実施した。被験者の平均年齢は245.36ヶ月歳(SD=18.59)、学習期間は22.91ヶ月(SD=8.09)であった。紙形式の四肢選択問題を試験監督の下、90分の時間内で一斉に回答させた。被験者は学習暦1年(12ヶ月18ヶ月)を下位群(n=54)、学習暦2年(24ヶ月30ヶ月)を上位群(n=60)とした。テストは、形態素変化(活用)24問、局所依存(助詞)24問、表現(接続助詞・文末表現)24問の72問から成る。形態素変化は規則活用と不規則活用がある。局所依存は初級範囲(主格・対格・向格・処格・具格)、中級範囲(与格・奪格・起点格・限定)、上級範囲(非限定・でも・強調)がある。表現は初級範囲(義務・経験・目的・禁止)、中級範囲(能力・準備・完了・変化)、上級範囲(習慣・価値・特例・様態)がある。クロンバックの信頼性係数はα=.840であった。下位群と上位群の2レベル間の各文法項目の得点差を独立したサンプルのt検定で検証した結果、表現の中級範囲でのみ有意差がなかったが、それ以外の全項目では有意差があり、レベルの弁別力が確認された。項目間で得点差が出るか、反復測定の単純対比で検証したところ、下位群は、形態素変化(M=17.67,SD=.30)>局所依存(M=15.95,SD=.35)=表現(M=.15.63,SD=.47)、上位群は、形態素変化(M=19.40,SD=.30)=局所依存(M=18.90,SD=.37)>表現(M=17.71,SD=.50)となり、中国語母語話者でも形態素変化(活用)の得点が高く、局所依存(助詞)が次いでいた。この結果から36問からなる韓国語文法能力テストを項目を絞り込んで作成していく。H28年度に予定していた日本での調査が未達成ではあるが、H29年度に計画していた中国での調査が前倒ししてH28年度内に実施できたことは大きな成果であった。国内の調査は今後十分に挽回できる。日本語母語話者の分析と、中国語母語話者の分析の作業順番が逆になっただけであり、研究の進行の上では殆ど問題はない。初年度に中国大連にある大学で韓国語を第二言語として学習する中国語母語話者114名(男24、女95)に対して、文法72問、読解20問の大規模な設問紙調査を実施した。このテストの結果を、入力しデータ化し、SPSSとT-DAPで分析を行った。PROX法による検証の結果、下位項目(形態素変化、局所依存、表現)の3項目の間で、上位群においてはほぼ同じ正答確率が得られ、下位群においては形態素変化でやや難易度が低かったものの局所依存と表現の間では同じ正答確率が得られた。中国語母語話者のデータは概ね学習者能力を反映した結果が得られた。

この文法テストの検証に付随して、設問文と回答項目の間で、パッチムの有無による得点差が生じるかどうかを日本語母語話者30名(男2、女28)を対象に検証を行った。その結果、設問文と回答項目の間でパッチムがヒントになり、不当に得点が得られてしまう現象が確認され、この結果は既に査読誌に掲載済みである。本研究の目的は、母語に関係なく必要最小限の問題項目数で学習者能力を予測する文法テストの開発であるため、この結果を日本語母語話者と比較する必要があり、H29年度末には21名のデータを収集したが、数値分析には不足しているため、60から80名程度のデータを収集する必要があり、H30年度前半に更に日本語母語話者のデータを採集する必要がある。その結果を、中国語母語話者の分析と同様に、SPSSとT-DAPで分析したのちに、両言語間の差が出ないことを検証する。設問項目は72問であるが、最終的には測定力の高い36問に絞る。レベル間と母語間の得点差が出ないことを確認し、汎用的な文法テストの開発を進めていく。日本語母語話者のデータ取集をH29年度までに終える予定であったが、テスト作成が学期中に間に合わなかったため、現在、目標とする数の3分の1程度に留まっている。H30年度前半にこれらのデータ収集を行い、分析を進めたい。本研究は韓国語学習者の母語に関係なく,必要最小限度の問題項目数の解答で,学習者の韓国語能力を推測的に測定する,即ち,学習者の言語能力を推測的に予測する文法テストの開発が目的である。そのために,72問からなる文法テストを作成し,平均年齢20.5歳(SD=1.54)、学習期間平均22.9ヶ月(SD=8.09)の中国語母語話者114名(男24名,女95名),平均年齢20.1歳(SD=1.03)、学習期間平均21.04ヶ月(SD=12.08)の日本語母語話者72名(男11名,女51名)を対象に,テストを実施した。レベルは学習期間を基準に,1218ヶ月を下位群,2430ヶ月を上位群と見なした。問題項目は,下位項目として,形態素変化(活用),局所依存(助詞),表現(接続語尾や文末表現など),3項目で,それぞれ24問を用意した。この72問のうち,測定力の高い問題を各下位項目から12問ずつ抽出し,36問からなる文法テストを作成する。被験者のデータを、T-DAP(Test Data Analysis Program)で分析し、標準項目適切度の高い順に36問の項目を選抜し、文法能力測定テストを完成させた。その36問の得点を、各レベルごとに一元配置の分散分析によって、上位群と下位群のさを検定したところ、全項目において、上位群と下位群の間に有意差があった。この結果は、レベルの弁別が可能であることを示している。加えて、各下位項目別の得点を反復測定の単純対比の方法で測定したところ、下位群ではそれぞれの間に差が見られなかった。上位群では、活用の得点のみ高かったが、他の項目では差が見られなかった。この結果は、形態素変化、局所依存、表現の3つの下位項目が等しく学習者の能力を測定できることを示した。最後に、PROXで正当確率について検証し、本研究は韓国語文法能力を測定する36項目のテストを開発した。H28年度内に実施できなかった日本国内の韓国語学習者を対象に調査を実施する予定である。既に、韓国語文法能力テストは中国で実施しており、このテストの信頼性の再検討のために、日本語母語話者との比較を行う。文法能力と同時に、韓国語の読解能力も測定するために、韓国語能力試験(TOPIK)を参照した読解試験(初級・中級・中上級・上級)を実施し、文法と読解との関連性を分析する。分析方法は、T-DAPによる項目分析と、AMOSによる構造解析を行う予定である。H30年度7月までに日本語母語話者のデータ収集を終え、8月にデータ化を行う予定である。数値分析は8月から9月に行う。
看護師のレジリエンスを高めるサポートシステムに関する研究

2015年度は既存のレジリエンスプログラムを用いて、介入研究を行い、2016年に、国際学会で発表した。2016年度は、看護師を対象にレジリエンスの講演や研修を行い、普及に努めた。2017年度は、レジリエンスと共に、セルフコンパッションをアウトカムに含めたLoving-kindness Meditation(LKM)の介入研究を行った。その結果、LKMも本プログラムの内容に組み込んだ。LKM研究は、国際学会で発表を行った。完成させたレジリエンスプログラムを、病院看護職に施行し、その結果は、2018年に国内学会で発表予定である。また、ポジティブ心理学・看護学研究会を設立し、雑誌で報告した。本研究の目的は、看護師のレジリエンスを高めるプログラムを作成し、それを実行することで、看護師の幸福度を向上させ、継続勤務意欲を高めることが可能なシステムを確立することである。その初年度として、2015年度は文献レビューを行い、レジリエンス研究の概要や既存の介入方法を調べた。また、既存のSPARK Resilience Programを用いて、看護学生を対象に介入研究を行った。看護学生18名(最終解析は11名)に既存のSPARK Resilience Programを行なったところ、最初のセッション(強みの発見や気分転換のグループワーク)において、ネガティブ感情が有意に低下し、資質的レジリエンスが有意に向上した。ネガティブ感情の低下は8週間後も有意傾向が見られた。学生の感想シートの質的分析の結果、強みや気分転換のグループワークで、自分の知らなかった新たな自分を発見したことや、ネガティブ感情を持っているときは物事の捉え方を見直すなど、ネガティブ感情に対処する方法を得られてよかったことが語られた。この内容は、2016年6月に、8th European Conference on Positive Psychologyにて発表予定である。また、2015年12月に広島で行われた日本看護科学学会では、「看護師のレジリエンスを高めるためのセルフケア-ポジティブ心理学の技法を用いて-」というタイトルで交流集会を開いた。レジリエンスとは何か、レジリエンスを高めるアプローチとはどんなことかを解説し、ポジティブ心理学を応用したセルフケアの技法を身につけ、看護の現場でどのように活かせるか共に考えていくことを目的とした。100名近く参加者が来場し、何かストレスとなることが起こった時、どのようにしてネガティブな感情のループから抜け出すか等ワークを通して、レジリエンスについて普及する機会とした。文献レビューに関しては、当初レビュー論文か学会発表を予定していたが、まだ行っていない。しかし、看護学生に対して、既存のSPARK Resilience Programを用いた介入研究は、予定通り実行しできた。2016年6月に学会発表出来る予定である。看護科学学会での交流集会は、当初は予定していなかったが、ぜひレジリエンスやレジリエンスを高める方法を普及したいという思いから、計画し実行できた。文献レビューの発表に関しては計画していたものから遅れはあるが、おおむね順調に進展していると言える。昨年度は、「レジリエンス」という概念とポジティブ心理学の手法の普及に努めた。レジリエンスとポジティブ心理学の手法に関する講演は、看護師を対象に4病院、市民を対象に1回、理系研究者を対象に1回行った。また、業者による看護師対象の研修を2回行った。その結果、レジリエンスについて「言葉は聞いたことがあるが内容は知らなかったので、知ることができて良かった」という感想を多く頂き、ポジティブ心理学についても「こういうアプローチの仕方があるのだとわかった」「ぜひもっと学びたい」という意見をいただいた。研究発表については、昨年度に行ったSPARK resilienceのプログラムを用いた介入研究を国際学会で発表できた。そしてその他3編ほど学会発表を行った(詳細は研究発表参照)。また、レジリエンスプログラム作成に向けて、マインドフルネスを用いた介入研究を平成29年度に予定しているが、その前段階である、マインドフルネスののエビデンスのレビューを学会の交流集会で発表し、雑誌でも発表した。昨年度にできていなかった文献レビューは、マインドフルネスの部分だけ行い、学会と雑誌で発表することができた。昨年度に行った、看護学生に対しての既存のSPARK resilience program介入は海外の学会で発表を行うことができた。当初の計画からは、レジリエンスプログラムの完成までに遅れが見られるが、昨年度に、レジリエンスプログラムの完成年度延長を検討し、計画を変更したので、そのペースで考えれば、概ね順調に進展していると言える。2017年度も学会、講演、研修等でレジリエンスの重要性やポジティブ心理学の手法を用いることの効果について普及に努めた。また先行研究から、レジリエンスとセルフコンパッション(自己への思いやり)の関連が指摘され、レジリエンスプログラムに「愛と優しさの瞑想」(Loving-kindnessMeditation: LKM)を含めることを検討し、今年度は、レジリエンスと共に、セルフコンパッションをアウトカムに含めた介入研究をおこなった。その結果、LKMはセルフコンパッション向上に有効であることが示された。また唾液中のアミラーゼとコルチゾールについても測定した。

その結果、LKMは看護職の身体的・精神的健康の向上に有効であると判断し、LKMもプログラムの内容に組み込み、レジリエンスプログラムを完成させた。このLKMの介入研究については、2018年のEuropean Conference on Positive Psychologyにて発表予定である。完成させたレジリエンスプログラムを、関東地方、東北地方の2病院の新人研修で行い、その前後のレジリエンスやセルフコンパッションを測定したところ、レジリエンス・セルフコンパッション共に有意に向上した。この結果に関しては、2018年8月の学会に発表するために投稿したところである(結果待ち)。3月にポジティブ心理学・看護学研究会を設立し、その場で、この3年間の本研究課題の経過と結果について一部発表した。その模様は、産業保健と看護、ナーシングビジネスの誌上で紹介され、保健師ジャーナルの6月号に「保健師活動におけるポジティブ心理学の可能性」が掲載された。2015年度は既存のレジリエンスプログラムを用いて、介入研究を行い、2016年に、国際学会で発表した。2016年度は、看護師を対象にレジリエンスの講演や研修を行い、普及に努めた。2017年度は、レジリエンスと共に、セルフコンパッションをアウトカムに含めたLoving-kindness Meditation(LKM)の介入研究を行った。その結果、LKMも本プログラムの内容に組み込んだ。LKM研究は、国際学会で発表を行った。完成させたレジリエンスプログラムを、病院看護職に施行し、その結果は、2018年に国内学会で発表予定である。また、ポジティブ心理学・看護学研究会を設立し、雑誌で報告した。2016年度は、当初、看護師を対象とした質的研究を行うこととレジリエンスプログラムを確定する予定であった。しかし、プログラムの確定年度は2017年度に延長することとした。理由は、マインドフルネスの技法も取り入れることを検討しているので、看護学生を対象としたマインドフルネスの効果についての介入研究と看護学生を対象としたレジリエンス講義の効果について検証したいと考え、これらを行った上で、レジリエンスプログラムを確定したいと考えているからである。レジリエンスプログラム確定は、2017年度に持ち越すことを検討している。さらに、実施病院を増やしたいので、研究期間を延長し、本研究で完成したプログラムの介入は2018年度を構想している。平成29年度は、看護学生に対し、マインドフルネスの効果についての介入研究とレジリエンスの講義の効果についての介入研究を行う予定である。また、看護職と同様に、人をケアする仕事である介護職を対象に質的研究を行い「人をケアする」ことの本質について検討する予定である。結果は、レジリエンスプログラム作成に反映させる予定である。
歯牙および歯髄腔の超音波画像解析に関する研究

有髄歯を支台歯形成する際に、形成面と歯髄との接近度を測定することは、術中の露髄を察知したり、術後経過を予測したりする上で重要な意義がある。筆者らは、従来から、超音波パルス反射法を応用して、残存象牙質の厚さ測定に検討を加えており、測定を希望する部位に超音波探触子を当てれば、その直下の残像象牙質の厚さ測定が可能な歯科用超音波診断装置を開発した。この機能をさらに充実させ、歯髄の形態を画像表示すると同時に、各部位における残像象牙質の厚さを判定することができれば、臨床的に大いに役立つ。そこで、現在のAモード表示方法を再度検討して歯牙組織の超音波特性を探り、有髄支台歯の超音波画像表示の可能性を検討した。超音波画像表示の可能性を検討するために、薄板状に作製したヒト象牙質に丸底および平底型の欠損を形成して、各欠損の形状と反射波の強度に関する超音波学的測定を行った。その結果、超音波は入射波に対して直交する面の面積が大きいほど反射波の強度が大きくなった。したがって、同一径の欠損状態では平底型に比べて、丸底型の反射強度は小さく、また、超音波ビームの中心が欠損中央部から遠ざかるにつれ反射波の強度は低下した。しかし、丸底型ては欠損形態にほぼ一致して反射強度が低下するのに対して、平底型では欠損辺縁部の外側にビームの中心が移動してもなお反射波が得られた。そのため、今回使用した分解能の振動子では広い面積をもつ反射源の形状を性格に表現することはできなかった。そこで、グレイスケール表示法によって反射源の形状表示したところ、欠損が生じている範囲を画像にすることは比較的正確にできた。しかし、超音波ビームの走査方法の開発およびグレイスケール表示の明瞭化は残された問題であろう。有髄歯を支台歯形成する際に,形成面と歯髄との接近の程度,すなわち残存象牙質の厚さを定量的に測定することは,術中の露髄を察知したり,術後経過を予測したりする上で重要な意義がある.筆者は,従来から,超音波パルス反射法を応用して,残存象牙質の厚さ測定に検討を加えており,測定したい部位に超音波探触子を当てれば,その直下の残存象牙質の厚さ測定を可能にした.しかし,この方法では測定の対象が点に限られ,形成面上のいずれの部位が歯髄との最接近部であるかを正確に把握することは困難である.その意味から,歯髄の形態を超音波的に作図すると同時に,各部位における残存象牙質の厚さを判定することができれば,臨床的に大いに役立つ.そこで,筆者は,形成面上から歯髄腔の位置を判定することを目的として昭和62年度は,基礎的実験段階として,履歴の明かな新鮮抜去歯牙に支台歯形成を行ない,その形成面上からの画像作製を試みた.まず,現有している歯科用超音波厚さ測定装置の探触子(10MHz)を形成面上の一方向に一定速度で移動させ,いわゆるスキャニングを行なった.そして,得られた形成面と歯髄腔面からの超音波的なデータをパーソナルコンピューターを介して画像処理し,同時に各部位の残存象牙質量をディジタル表示させた.その後,超音波画像解析を行なった試料を切断して,実際の残存象牙質の厚さを計測し,表示されたディジタル値との比較検討を行なった.その結果,現時点では,形成面から歯髄までの距離および位置関係を高い精度で表現することが可能であることが明かとなっている.昭和63年度は上記の結果を参考にして,臨床的な検討を試みる予定である.

有髄歯を支台歯形成する際に、形成面と歯髄との接近度を測定することは,術中の露髄を察知したり、術後経過を予測したりする上で重要な意義がある。筆者らは、従来から、超音波パルス反射法を応用して、残存象牙質の厚さ測定に検討を加えており,測定を希望する部位に超音波探触子を当てれば、その直下の残存象牙質の厚さ測定が可能な歯科用超音波診断装置を開発した。この機能をさらに充実させ、歯髄の形態を画像表示すると同時に、各部位における残存象牙質の厚さを判定することができれば、臨床的に大いに役立つ。そこで,現在のAモード表示方法を再度検討して歯牙硬組織の超音波特性を探り、有髄支台歯の超音波画像表示の可能性を検討した。今年度は、主としては、画像の表示方法について検討した。表示される画像の精度は振動子の分解能によって決定される。今回使用した振動子はビームの直径を絞り、測定部位を限定しやすいように設計されている。そのため、対象からの反射波形のエネルギーの違いを用いて対象の形状を画像表示したところ、面積の広い反射源の画像を正確に表示することは困難であった。そこで、反射波をその振幅値に応じて輝度変換してCRTに表示するグレイスケール表示法によって反射源の形状表示したところ、反射源の形状を正確に表示することはできないが,欠損が生じている範囲を画像にすることは可能であった。しかし,画像をさらに正確に表示するためには、超音波ビームの走査方法の開発およびグレイスケール表示の明瞭化が必要であり、これらは今後に残された問題であろう。
新しいDifferential display法の開発とその応用

mRNAの制限酵素による3'末端をgel displayすることにより、ヒト胎児と成人の大脳に発現しているmRNAを比較した。ヒト胎児脳に有意義に高く発現した26個の候補cDNA断片を得た。そのうちの一個、A31 mRNAはBLAST分析によりそのDNA配列が既知のそれとホモロジーが認められなかった。RT-PCRおよびノーザーン・ブロッティング分析により胎生期19週大脳のみに発現が認められた。しかもそのバンドの大きさは9kbであった。また胎生期の細胞・臓器における発現分布では大脳と脳幹に認められ、心臓、肝臓、腎臓などでは認められなかった。DIG-ラベルのcRNAによるin situ hybridizationで調べたところ、組織のレベルでは大脳皮質、基底核、視床にラベルされ、細胞レベルでは皮質層の神経細胞体と樹状突起に発現していた。樹状突起の発生・分化に関係していることが示唆された。(2)ヒト胎児および成人脳からえた蛋白チロシンキナーゼcDNAのdifferential display法の開発蛋白チロシンキナーゼの発現をプロファイルするdifferential display法を開発し、それをヒト胎児および成人大脳からえた蛋白チロシンキナーゼcDNAに応用した。その方法はキナーゼの触媒ドメインのDNA配列がチロシンキナーゼ・ファミリーの中で保存されていることに基づく。BstY IとBsiHKAIを用いたキナーゼのdisplayでは72と63バンドのうち、65%と59%がそれぞれ蛋白チロシンキナーゼであった。全体として27種類のキナーゼが同定された。これはヒトゲノム中に存在すると仮定される蛋白チロシンキナーゼの12%24%に相当する。さらにcDNAの発現の程度をlight cyclerで測定した結果、displayのキナーゼの発現レベルはそれと比肩するものであった。この方法は細胞・組織を問わず、遺伝子ファミリーをdisplayする比較的特異的な方法を提供すると考えられる。われわれが開発したDifferential display法をヒト胎児脳(19胎生週)と成人脳(60才)に発現している遺伝子に適用した。胎児脳に強く発現している26個のcDNAのうち、3個が既知の遺伝子で、22個がESTであった。しかしA31と名付けたクローンはどのシーケンスとも有意義なホモロジーを示さなかった。この長さは343bpでterminal signal(AAUAAA)を持っていたが、open reading frameは認められなかった。またAUUUAモチーフを持っていた。RT-PCRおよびnorthern解析によるとA31は胎児脳にのみ発現し、約9Kbの単一バンドであった。また発現を時期的にみると、12から19胎生週まで発現し、23胎生週から新生児期および老年期にはノーザン解析で検出されなかった。また19胎生週の各組織では大脳と脳幹にのみ発現し、肺臓、心臓、肝臓、すい臓、脾臓などでは検出されなかった。次にin situ hybridizationにより、19胎生週の大脳におけるA31 mRNAの発現分布を調べた。脳の冠状断の切片をDIG-labelldcRNAでhybridizeした。sennse cRNAprobeでは微弱なシグナルしか認められなかった。antisennse cRNAprobeでは胎児脳の特定の領域に顕著に発現していた。大脳ではcortical plateとventricularzoneの未熟なneuronに存在していた。またhippocampusとcerebellumの皮質にも存在していた。細胞レベルではmRNAはneuronの細胞体とdendriteに発現していた。

その発現パターンは不均一で、核よりも細胞質、そしてとくにdendriteの近位に最も強く、axonには存在しなかった。protein tyrosine kinaseの保存された活性ドメインを利用することにより、ヒト胎児大脳と成人のそれに発現しているprotein tyrosine kinaseのdisplay法を開発した。現在までに各バンドのDNAシーケンスの解析を終えたが、60%位がprotein tyrosine kinaseであることが同定された。janus kinase、epidermalgrowthfactor receptor,Eph,Eph-like receptor tyrosine kinaseなど47種のkinaseであった。既知のkinase以外の遺伝子は1015%で、残りは未知の遺伝子であった。このように未知の遺伝子が多いのはジーンバンクに登録されているDNAシーケンスはmRNAの3'末端部ESTが大部分を占めているためであると考えられる。2)ヒト胎児大脳の発生初期樹状突起に一過性に発現するA31mRNAについてヒト胎児大脳に特異的に発現する未知の遺伝子、A31をmRNA differential display法により得、RT-PCRおよびNorthern blottingにより確認した。in situ hybridizationによりA31は神経細胞の細胞体および樹状突起に発現していた。以上ヒト大脳の胎生中期おける樹状突起の発生に関係していることが示唆された。
恒星進化終末期の赤外観測に基づく銀河の構造と進化の研究

本研究の目的は、恒星進化終末期の赤外線観測を基礎として銀河の構造と進化を調べることであった。近年の赤外2次元検出器の急速な発展はこれら低温度星の研究、およびそれらをプローブとする銀河の骨格構造の研究が本格的に進められる状況を作りつつある。まず、PtSi1040×1040アレイを検出器とする近赤外カメラ及び分光器の開発を進めた。制御系は、国立天文台で開発したCCD駆動システム(Messia)をもとに、ADコンバータ部分を高速・高精度化した汎用な新しいシステムを設計・製作した。この制御系によって駆動される大型アレイを内蔵した観測装置として、1)木曽観測所105cmシュミット望遠鏡用広視野近赤外カメラと、2)岡山天文台188cm望遠鏡ク-デ焦点近赤外分光器を開発した。現在のところ、検出器の雑音レベルが設計値より大きく、この改善とハード・ソフト両面での最終調整を行っている。さらに、まとまった大規模なデータセットであるIRASデータ解析システムの構築を進めた。この膨大なデータは本計画研究を進める際の重要な基本データであるが、さらに、その解析システムの構築は、上記赤外装置や、近々打ち上げ予定のISOがうみだすであろう膨大なデータを能率よく解析する際に不可欠である。さらにこれをもとにして、ISOデータの解析アリゴリズム及びモデル解析プログラムの開発を始めており、微光天体検出のための像再生アルゴリズムの比較検討を行い、ISOによる赤外線銀河探査に備えている。本研究の目的は、恒星進化終末期の赤外線観測を基礎として銀河の構造と進化を調べることである。近年の赤外2次元検出器の急速な発展は低温度星(赤色巨星・AGB星・赤色超巨星)の研究及びそれらをプローブとする銀河の骨格構造の研究が本格的に進められる状況をつくりつつある。今年度は、まずPtSi1040×1040アレイを検出器とする近赤外カメラ及び分光器の開発を進めた。制御系は両者に共通な新しいシステムを設計・製作し、ほぼ完成した。近赤外カメラは木曽観測所105cmシュミット望遠鏡に取り付けられ、バルジの低温度星及び系外銀河の観測に用いられる。一方、近赤外分光器は岡山観測所188cm望遠鏡のクーデ分光器の一部として設計され、波長分解能10^4をもつ。これは種々の進化段階にある恒星及び系外銀河のスペクトル観測に用いられる。モザイク赤外カメラの開発は、近赤外カメラ及び分光器の制御系の高性能化に伴う予算不足のため断念せざるを得なかったが、上で述べたように、近赤外カメラ及び分光器の開発にめどがつき、本研究の目的を達成するための基本的な観測は行えるものと期待している。これらの新しい観測に備えて、可視域のCCDや近赤外域のFTSによる高分解析スペクトルの解析により、モデルの構築及び解析方法の検討を行うと共に、多数の赤色巨星について炭素及び珪素の同位体組成比を決定した。ISOデータの解析アルゴリズム及びモデル解析プログラムの開発を始めており、さらに微光天体検出のための像再生アルゴリズムの比較検討を行い、ISOによる赤外線銀河探査に備えている。近年の赤外2次元検出器の急速な進歩とスペースからの赤外線観測により、低温度星(赤色巨星・AGB星・赤色超巨星)の研究及びそれらをプローブとする銀河の骨格構造の研究が本格的に進められる状況をつくりつつある。大フォーマット赤外2次元アレイを用いて、地上観測の手段として前年度開発に着手した近赤外分光器及びカメラはほぼ完成し、それぞれ岡山天体物理観測所の188cm望遠鏡及び木曾観測所105cmシュミット望遠鏡に取り付け、調整を行った。残念ながら今年度は天候に恵まれず、現在のところテスト観測にとどまっており、来年度本格的な観測を開始する。

これら新しい観測に備えて、可視域CCDや近赤外域FTSによる高分解能スペクトル解析より、低温度星大気、星周域のモデルの構築及び観測結果の整約方法の検討を行った。また、多数の低温度星の珪素の同位体比を決定し、それらの星の進化について考察した。さらに、銀河バルジ中の低温度星の電波観測から、バルジの構造を明らかにするとともに、銀河の骨格をなすバルジ・ディスク構造と銀河の形成、進化について考察した。IRAS衛星データ及び地上赤外線観測の大量のデータベースを解析するための高速計算機とデータストレージを導入し、今年度は、IRASデータの解析・管理システムの構築に着手し、ほぼ完了した。これら遠赤外線データを基に、低温度星星周領域の物理、化学構造を明らかにし、質量放出現象を解明する研究を開始した。同時に昨年度に引続き、ISO衛星、地上観測データの解析アルゴリズム及びモデル解析プログラムの開発を進めた。本研究の目的は、恒星進化終末期の赤外線観測を基礎として銀河の構造と進化を調べることであった。近年の赤外2次元検出器の急速な発展はこれら低温度星の研究、およびそれらをプローブとする銀河の骨格構造の研究が本格的に進められる状況を作りつつある。まず、PtSi1040×1040アレイを検出器とする近赤外カメラ及び分光器の開発を進めた。制御系は、国立天文台で開発したCCD駆動システム(Messia)をもとに、ADコンバータ部分を高速・高精度化した汎用な新しいシステムを設計・製作した。この制御系によって駆動される大型アレイを内蔵した観測装置として、1)木曽観測所105cmシュミット望遠鏡用広視野近赤外カメラと、2)岡山天文台188cm望遠鏡ク-デ焦点近赤外分光器を開発した。現在のところ、検出器の雑音レベルが設計値より大きく、この改善とハード・ソフト両面での最終調整を行っている。さらに、まとまった大規模なデータセットであるIRASデータ解析システムの構築を進めた。この膨大なデータは本計画研究を進める際の重要な基本データであるが、さらに、その解析システムの構築は、上記赤外装置や、近々打ち上げ予定のISOがうみだすであろう膨大なデータを能率よく解析する際に不可欠である。さらにこれをもとにして、ISOデータの解析アルゴリズム及びモデル解析プログラムの開発を始めており、微光天体検出のための像再生アルゴリズムの比較検討を行い、ISOによる赤外線銀河探査に備えている。
作物葉の老化とRuBisCOの分解

Rubisco(ribuloseー1,5ーbisphosphate carboxylaseloxygenase)は,光合成の炭酸固定を担う重要な酵素であり,緑葉の全可溶性タンパク質の50%を占めている。私達とDallingらのグル-プ(豪)は,以前コムギを材料に,葉の老化に伴いこのRubiscoが葉緑体数より早く減少することを見い出していた。このことは,すなわちRubiscoが葉緑体中で分解されることを意味する。そこで,本国際学術研究では,私達はコムギを,Huffakerらのグル-プはオオムギを,そしてThomasらのグル-プはLoriumを中心に,葉緑体を機械的に単離し,パ-コ-ル密度匂配遠Sにより精製し,その精製葉緑体中でのRubisco分解について,様々な検討を行なった。この葉緑体中でのRubisco分解活性は,その後,液胞プロテア-ゼをRubiscoタンパクに作用させた場合の活性と非常に似たものであることがわかった。さらに,他のプロテア-ゼであるトリプシンやVー8プロテア-ゼによるRubisco分解,あるいは活性酸素による物理化学的なRubisco分解活性と比較したところ、それらの分解は,葉緑体中に見い出された分解活性とは明らかに異なっており,これは,Rubiscoタンパク側に分解されやすい部位があるゆえに液胞プロテア-ゼによる分解と似ていたわけではないことを示唆した。次に,葉緑体をサ-モリシン処理し,葉緑体外胞膜に吸着または存在するタンパク質を消化すると,そのRubisco分解活性がまったく消失してしまうことがわかった。以上のことは,精製葉緑体中に見い出されたRubisco分解活性が,その単離精製過程で非特異的に外胞膜に吸着してくる液胞プロテア-ゼのコンタミによるものであることを意味した(Miyadai et al.1990)。しかしながら,その後,SDSーPAGE/Western blottingに供する葉緑体タンパク質量を多くすることにより,液胞プロテア-ゼの作用とは明らかに異なるRubisco分解物様ポリペプチドを検出するに至った。精製抗Rubisco抗体をリガンドとしたアフィニティクロマトを作製し,このペプチドを精製し,Vー8プロテア-ゼによるペプチドマッピングを調べたところ,Rubiscoタンパク質のそれと多くが一致し,Rubisco分解物であることが証明された。また,このペプチドは,精製葉緑体のサ-モリシン処理にかかわらず存在することから,葉緑体中にRubisco分解を担うプロテア-ゼが存在することを強く裏付けた(Suzuki et al.投稿準備中)。他方,老化に伴う葉緑体タンパク質の消長と光環境の影響について,イネおよびLoriumを中心に詳細に調べた。その結果,光化学系に関与する各種チラコイドタンパク質は,陰葉型植物にみられる光環境条件に適応した消長を示した(Hidema et al.投稿中,Mae et al.投稿準備中)のに対し,Rubiscoを代表とするストロ-マ酵素群は,葉の老化に伴い,いずれの光環境ストレス下でも,同調した消長を示した。このストロ-マ酵素群の同調的な変動は生合成の活発な若い葉においては見られず,このことは,Rubiscoを含めたストロ-マ酵素群には,各々の酵素に特異的な分解系が存在するのではなく,すなわち,Rubiscoに対する特異的な分解系が存在しないことを示唆する結果を与えた(Hidema et al.投稿中)。以上の結果より,葉緑体中にはRubiscoを分解するプロテア-ゼは存在するが,それはRubiscoのみを特異的に分解するのではなく,いわゆる多機能型プロテア-ゼとして存在していると考えられる。

しかしながら,その後,SDSーPAGE/Western blottingに供する葉緑体タンパク質量を多くすることにより,液胞プロテア-ゼの作用とは明らかに異なるRubisco分解物様ポリペプチドを検出するに至った。精製抗Rubisco抗体をリガンドとしたアフィニティクロマトを作製し,このペプチドを精製し,Vー8プロテア-ゼによるペプチドマッピングを調べたところ,Rubiscoタンパク質のそれと多くが一致し,Rubisco分解物であることが証明された。また,このペプチドは,精製葉緑体のサ-モリシン処理にかかわらず存在することから,葉緑体中にRubisco分解を担うプロテア-ゼが存在することを強く裏付けた(Suzuki et al.投稿準備中)。他方,老化に伴う葉緑体タンパク質の消長と光環境の影響について,イネおよびLoriumを中心に詳細に調べた。その結果,光化学系に関与する各種チラコイドタンパク質は,陰葉型植物にみられる光環境条件に適応した消長を示した(Hidema et al.投稿中,Mae et al.投稿準備中)のに対し,Rubiscoを代表とするストロ-マ酵素群は,葉の老化に伴い,いずれの光環境ストレス下でも,同調した消長を示した。このストロ-マ酵素群の同調的な変動は生合成の活発な若い葉においては見られず,このことは,Rubiscoを含めたストロ-マ酵素群には,各々の酵素に特異的な分解系が存在するのではなく,すなわち,Rubiscoに対する特異的な分解系が存在しないことを示唆する結果を与えた(Hidema et al.投稿中)。以上の結果より,葉緑体中にはRubiscoを分解するプロテア-ゼは存在するが,それはRubiscoのみを特異的に分解するのではなく,いわゆる多機能型プロテア-ゼとして存在していると考えられる。
微小環境を伴うヒト膵癌三次元組織創出に基づく革新的薬剤評価系の構築

当特別研究員は、既存ヒト膵癌細胞株・ヒト間葉系幹細胞(hMSC)、ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)より、間質を有するヒト膵癌組織の再構成法を確立し、膵癌オルガノイドは膵癌の治療抵抗性を再現する上で、極めて有益であることを明らかにしている。そこで次なる目標として、実際に膵癌オルガノイドを用いたハイスループットな薬剤スクリーニングを行い、膵癌の新規治療標的の同定を試みる。生体内での薬剤感受性を正確に再現するためには、原発巣中の膵癌細胞との特性の乖離が少ない膵癌細胞を用いる必要がある。この様な状況の中、近年、プライマリヒト膵癌細胞の樹立方法が確立された(Boj F, et al. Cell. 2015)。さらに、当特別研究員はこの方法を改良することにより安定した樹立・拡大培養技術の開発に成功している。本年度は複数患者に由来するオルガノイドを用いた複数の薬剤評価を行い、患者間の薬剤耐性評価を行った。その結果、膵癌細胞単体群は患者間の薬剤感受性の違いにあまり違いが見られなかったのに対し、膵癌オルガノイドの薬剤感受性は患者ごとに大きな違いを見せた。さらに、これらの患者ごとによるオルガノイドの治療抵抗性の違いは、実際の膵癌患者の無再発生存期間と相関することが明らかとなった。したがって、間質豊富な膵癌オルガノイドは、治療標的分子は探索する上でも極めて有用なモデルであることが示唆される。さらに、これらのオルガノイドを用いて治療抵抗性メカニズムの探索にも至っている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本年度はこれまでに確立した膵癌患者由来プライマリ膵癌細胞の樹立方法を元に、複数検体からの樹立によるライブラリー構築およびプライマリ膵癌オルガノイドの創出方法の検討を主に行った。さらに、複数患者に由来するオルガノイドを用いた薬剤評価を行い、患者間の薬剤耐性の層別化するに至っている。1.ヒトプライマリ膵癌細胞ライブラリーの構築とプライマリヒト膵癌オルガノイドの再構成に関しては、神奈川県立がんセンターとの共同研究において提供されるヒト膵癌手術摘出検体等よりプライマリ癌細胞の樹立をすすめ、特性を評価した。2.プライマリヒト膵癌オルガイドの大量創出および薬剤感受性の評価に関しては、樹立されたヒトプライマリ膵癌細胞をストロマ細胞と共培養し、膵癌患者毎にヒト膵癌オルガノイドを再構成した。多量創出のための至適条件の検討を行うとともに、各々の膵癌患者由来癌オルガノイドの薬剤感受性を評価した。また、各患者のプライマリ癌オルガノイドの間で、薬剤感受性に違いがあるか否かを検討し、次年度以降の腫瘍微小環境の実態解明に向けた検討のための予備的知見を得した。プライマリ膵癌オルガノイドを対象とした腫瘍微小環境の解析に関しては、抗癌剤存在下で培養した膵癌オルガノイド内で残存する各種細胞の遺伝子発現等を明らかにする。