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定量的リスク管理における統計的方法の研究―接合関数とリスク尺度を中心に

金融機関等は,保持するポジションにより様々なリスクに直面している.それらのリスクを特定,評価,計測,管理する定量的金融リスク管理において,ポジションのリスク量を計測するリスク尺度として統計的にどのような性質をもつものが望ましいのか議論し,その幅広いクラスである歪みリスク尺度について統計的な分析を行った.さらに,複数リスク間の相互依存性をモデル化するために重要な接合関数について,その統計的推定方法とリサンプリング法の様々な性質を解明した.金融リスク管理において,用いたリスク計測モデルやリスク尺度推定手法が事後的に見て適切であったかどうかを検証することは必須である.このための統計的手法はバックテストと呼ばれるが,これについて,バリュー・アット・リスク(VaR)に対する方法が歪み尺度に対しても自然な形で拡張可能であることを示した.シミュレーション実験の結果では,まだ限定的ではあるが,バックテストのための条件付き推定が可能であるGARCHモデルの場合にはうまくいっていると考えられる.複数のリスク要因間の相互依存関係をモデル化する道具として,近年では接合関数(コピュラ)がしばしば用いられる.この接合関数に対して推定・検定を行う際に,統計量の標本分布を推定するためには何らかのリサンプリング法が必要となる.リサンプリングを行う対象分布として,離散な経験接合関数の一種の平滑化とみなせる経験ベータ接合関数を提案してきた.これが経験Bernstein接合関数の特別な場合であることを示した.経験Bernstein接合関数が真の接合関数となるための必要十分条件を導出し,経験Bernstein接合関数の漸近挙動を詳しく分析した.また,様々な接合関数を想定したシミュレーションにより,経験接合関数,ベータ経験接合関数と次数をMISE最小化の意味で最適化した経験Bernstein接合関数という3つの推定量の有限標本挙動を比較・分析した.歪みリスク尺度の統計的性質については,中心極限定理が成り立つような範囲での漸近的性質や,多数の歪み関数と分布形を仮定しての数値的挙動についてはほぼ理解されたといってよい.この点で本研究はほぼ順調に進んでいるといってよいであろう.ただし,時系列が長期記憶性を持つ場合や分布の裾が極端に長い場合の挙動はすべて解明されたわけではなく,今後の研究課題となろう.また,歪みリスク尺度に対する形式的なバックテストの統計的性質は限定的な条件の下でのみわかっている.より現実に近い条件の下での振る舞いを調べる必要がある.それは,現在議論を巻き起こしている期待ショートフォール,および歪みリスク尺度のバックテスト可能性に対する反論として不可欠である.実施可能かつ包括的なバックテストの手法を開発することが,本研究の目的である定量的金融リスク管理のための統計モデルとデータ分析手法の開発・検討に欠かせない.本研究のもう一つの柱である,接合関数を用いた金融時系列データにおける複数変量間の相互依存性のモデリングについては,本年度に集中的に取り組みたい.現時点では比較的単純なGARCH(1,1)モデルや確率ボラティリティモデルにとどまっているが,少なくとも本年度中に,接合関数と所与の時系列構造の両立可能性を理論的に吟味することへの足掛かりを得たいと考えている.現在研究中であるリサンプリング法のための経験接合関数の平滑化について,コンピュータ計算のためのコードはできており,ベルギーの研究者グループとの共同作業も進んでいる.金融リスク管理において,用いたリスク計測モデルやリスク尺度推定手法が事後的に見て妥当であったかどうかを検証するバックテストは極めて重要である.これに関して近年議論になっているバックテスト可能性(backtestability)と顕在化可能性(elicitability)の間には明確な関連はないことを論証した.バリュー・アット・リスク(VaR)や期待ショートフォールに倣った形で,歪みリスク尺度のバックテストも可能であり,その一例を示した.日本統計学会分科会「金融の計量リスク管理」との関連で,今年度の日本統計関連学会連合大会において,実務家2名と国際的に著名な理論家を招いた企画セッションを開き,バーゼルIIIなどの実務上必要とされる手法・問題についての議論を深めることができた.そのための旅費・謝金として本研究費を使用した.複数の確率変数間の相互依存関係をモデル化する道具として,近年注目されている接合関数(コピュラ)に対して,そのノンパラメトリックな推定量として経験接合関数があるが,その一種の平滑化とみなせる経験ベータ接合関数をより優れた推定量として提案した.さらに,経験ベータ接合関数は経験ベルンシュタイン接合関数の特別な場合であることを示し,かつ経験Bernstein接合関数が真の接合関数となるための必要十分条件を導出した.経験Bernstein接合関数の漸近挙動を詳しく分析した.また,様々な接合関数を想定したシミュレーションにより,経験接合関数,ベータ経験接合関数と次数を平均積分2乗誤差(MISE)最小化の意味で最適化した経験Bernstein接合関数という3つの推定量の有限標本挙動を比較・分析した.これらの結果は,共同研究者である渋谷政昭名誉教授とJohan Segersとの共著論文として,学術専門誌に投稿し,掲載された.歪みリスク尺度は顕在化可能性という性質は満たさないが,それがバックテストに関して大きな障壁となることはないことがわかったことは重要な進展である.ただし,歪みリスク尺度に対する形式的なバックテストの統計的性質は限定的な条件の下でのみわかっているだけであり,より現実に近い条件の下での振る舞いを調べる必要がある.また,バックテスト手法の最適性に関する議論が深まっておらず,その意味で良いリスク尺度はどのようなものであるのかもはっきりさせる必要がある.歪みリスク尺度についての資本賦課原理については,コンピュータを用いた計算コードも完成し,いくつかの分布・接合関数を用いたシミュレーションも行っていることから,順調な進捗であると言える.

本研究のもう一つの柱である接合関数について,経験ベータ接合関数の分析は理論・シミュレーションともに完了した.現在研究継続中である経験ベータ接合関数を用いたリサンプリング法について,コンピュータ計算のためのコードはできており,ベルギーの研究者グループとの共同作業も進行中である.接合関数を用いた金融時系列データにおける複数変量間の相互依存性のモデリングについては,接合関数と所与の時系列構造の両立可能条件がまだ理論的に示されていないため,今後の課題として取り組んでいく.バックテストは,金融リスク管理において,用いたリスク計測モデルやリスク尺度推定手法が事後的に見て妥当であったかどうかを検証する重要な手順である.最近ようやく最終形が提示されたバーゼルIIIでは,バリュー・アット・リスク(VaR)によるバックテストが推奨されているが,リスク尺度としては期待ショートフォールを採用しているという指摘がある.その問題から派生して近年話題になっているバックテスト可能性(backtestability)と顕在化可能性(elicitability)の間には明確な関連はないことを論じてきたが,2017年9月にモントリオールで開催された研究集会“Risk Measurement and Regulatory Issues in Business"に出席することにより,リスク管理分野の有力な実務家・学者と,このバーゼルIIIの問題についての議論を深めることができた.さらに,バックテストの問題を一般の予測事後評価という視点から捉える「逐次予測分析(prequential analysis)」について考察を深め,そのバックテストにおける含意を探る研究を開始し現在に至っている.接合関数(コピュラ)については,単純な一様サンプリングの考え方から経験ベータ接合関数を考案し,その経験ベルンシュタイン接合関数との関係や漸近挙動を詳しく分析した.さらに,様々な接合関数を想定したシミュレーションにより,経験接合関数,経験ベータ接合関数と次数を平均積分2乗誤差(MISE)最小化の意味で最適化した経験ベルンシュタイン接合関数という3つの推定量の有限標本挙動を比較・分析した(渋谷政昭,Johan Segersとの共同研究).その研究の自然な続編として,経験ベータ接合関数からのリサンプリングについての研究をJohan Segersと進めている.金融機関等は,保持するポジションにより様々なリスクに直面している.それらのリスクを特定,評価,計測,管理する定量的金融リスク管理において,ポジションのリスク量を計測するリスク尺度として統計的にどのような性質をもつものが望ましいのか議論し,その幅広いクラスである歪みリスク尺度について統計的な分析を行った.
生後18・24ヶ月児の語彙獲得における発達変動因の研究

本研究は、初期の語彙獲得の発達変動因の解明を目的としている。中間報告(島根女子短期大学紀要第37号、50-70、1999年)により、18か月児の利き手の出現が言語獲得と有意に相関することが明らかになったため、その後被験児の月齢を追加し、最終的に18か月児・30か月児・41か月児各50名、計150名の横断研究と、他の37名による18か月から24か月までの追跡研究を構成して、以下のような研究結果を得た。この研究の成果は、International Conference on Infant Studies(Brighton,UK,18 July,2000)で報告する。(1)18か月児24か月児の語彙獲得と出生状況、利き手の出現-18か月児の言語発達得点と正の相関を示したのは観察測定されて利き手指数であった。獲得語彙数・体の部位の指示数においても有意であった。18か月児の利き手指数は分娩時間と負の相関をしめし、遅延分娩等の出産状況と左利きの強さ、さらに語彙獲得の遅れが発達的に因果関係をもつことが示唆された。18ヶ月から24ヶ月までの追跡群においても、帝王切開などの異常分娩と、18ヶ月の親質問により測定された利き手指数が負の相関を示した。さらに18ヶ月の利き手指数と追跡後の24ヶ月の助詞獲得数が有意に正の相関を示し、18ヶ月の利き手出現により24ヶ月の構文を読む言語発達が予測可能であることを示した。30ヶ月以降は、ほぼ全体が3語文以上の構文段階に達していた。これらの結果、少なくとも24ヶ月までの言語発達は出生状況・利き手の出現の2要因により変動することがわかった。(2)遺伝要因と子どもの語彙獲得の関係-18ヶ月24ヶ月の言語発達、利き手の出現、出生状況と重複する関係を示したものは親あるいはきょうだい(第1度近親)の利き手であった。18ヶ月において親の左あるいは両利き手と発達の社会領域得点は負の相関を示し、24ヶ月の第1近親の左・両利き手と言語発達得点・助詞獲得が負の相関をしめした。30ヶ月児の観察された利き手指数と第1度近親の利き手が有意な正の相関を示した。これらの結果は、24ヶ月までの語彙獲得の背景に、利き手と脳のラティラリティの遺伝的出現という発達変動因が潜在することを示している。語彙の出現は非言語的コミュニケーションから言語的コミュニケーションへの発達変動期にあたり、認知発達スクリーニング上、発達障害の発見等に不可欠な情報である。本研究では、集団一斉健康診断の行われる生後18ヶ月の言語発達スクリーニングに焦点をあて、初期の語彙獲得がどのような変数で変化するのか、周産期リスク・身体運動発育(特に口腔機能・上下肢偏側性)・認知発達段階・人的環境等により、どの程度個体差が生じているか、語彙出現までの発達変動因の解明を目的とする。

さらに同じ被験児群に24ヶ月でも発達調査書の記入と語彙チェックを依頼し、18ヶ月から24ヶ月にいたる変化を確認することで、18ヶ月時点の語彙獲得数および発達特性のもつ発達予測性を検討する。このような個人差研究の成果のもとに、言語発達スクリーニングでの発達評価法の具体的再検討を進めていきたい。平成9年度中は、乳幼児用発達テストとして標準化されている認知発達テストと利き手課題の検討を行い、日本国内での標準化テストがないため輸入版のテスト課題を検討した。日本国内では、現在までのところ、認知発達・運動機能発達・運動の偏側性については、少数の被験児による実験的報告がなされているのみであり、集団健診の場でのテスト構成にふさわしい方法が吟味されていない。研究計画では平成9年度中に本実験に入る予定であったが、本年度は準備段階での実験的検討に多大な時間を要した。今後さらに実験時間短縮のための課題選択と構成を行い、平成10年度中に本実験を行う。1歳半から3歳半までの初期言語発達期の利き手に関する調査的研究を行い、利き手の出現と性別が、記号的機能の出現にいかに関わっているか検討した。この研究の中間報告をまとめた(島根女子短期大学紀要,第37号,P5970)。被験児を追加し、結果の追跡調査を平成11年度中に行う。中間のまとめの結果は以下のとおりである。利き手の測定については、主にCrovitz&Zener,1962:Annett,1970;0ldfield,1971らの質問紙に採用されている項目について、親の面接による測定と、実際の子どもの行動観察からの測定の2つの方法で利き手指数を測定し、低年令児での利き手測定の妥当性を検討した。18ヶ月児36名、30ヶ月児36名の調査の結果、親の報告による利き手指数と観察の利き手指数は、r=0.81で強い相関を示した。観察利き手指数のLQ60以下を非右利き群、60を越えた者を右利き群とした場合、親報告と観察による利き手の群別けは一致率80.5%で高かった。低年令児の利き手測定の高い妥当性が示された。親報告と観察によるLQと言語獲得段階の得点の連関を検討した結果、生後30ヶ月児では有意な相関はなかったが、18ヶ月児の場合、観察値LQと言語得点にr=0.693(p<0.0001)、親報告LQと言語得点にr=0、606(p<0.0001)の実質的な相関があった。観察値のLQによる利き手群と性別群の言語得点を分散分析した結果、18ヶ月児の言語得点の利き手差力有意であり(p<0.05)性別が有意であった(p<0.05)Scheffeのテストの結果、右利き群が有意に高い得点を示し、女児群が有意に高い得点を示した。デンバー式スクリーニングの基準で18ヶ月児レベルの語彙獲得の遅れを示す者が、右利き男児に1名、非右利き男児に3名あった。観察による利き手測定値が、言語認知発達との連関を測定する上でも有効であることが示された。この中間のまとめは、日本発達心理学会(平成11年3月28日)で発表した。本研究は、初期の語彙獲得の発達変動因の解明を目的としている。中間報告(島根女子短期大学紀要第37号、50-70、1999年)により、18か月児の利き手の出現が言語獲得と有意に相関することが明らかになったため、その後被験児の月齢を追加し、最終的に18か月児・30か月児・41か月児各50名、計150名の横断研究と、他の37名による18ヶ月から24ヶ月までの追跡研究を構成して、以下のような研究結果を得た。この研究の成果は、International Conference on Infant Studies (Brighton,UK,18 July,2000)で報告する。
TiNi系形状記憶合金の表層強加工による非晶質化の機構と生体適合性の評価

TiNi系形状記憶合金は、医療デバイスへの応用が急速に拡大しており、生体内環境におけるNiイオンの溶出を抑える表面処理法の開発が急務である。本研究ではショットピーニングによる表層非晶質化の条件、非晶質化による耐食性の変化を調べ、その機構を明らかにすることで生体適合性の向上を目指す。今年度は昨年度行った鋳鋼,WCショットに加え,鉄系金属ガラスショットを用いたピーニングによる微細組織の変化,及び耐食性の変化を明らかにすることに重点をおいた研究を行った。金属ガラス製のショットを用い、空気式ショットピーニング装置を用いて噴射圧0.4MPa,0.7MPaで10秒から120秒までピーニングを行った。鋳鋼・WCと比べて金属ガラスショットの方が短時間で組織微細化が進むことが明らかになった。しかし噴射圧が高い場合は表面の摩耗が著しいことも明らかになった。また,加工層の断面TEM観察の結果,鋳鋼で10秒程度のピーニングで表層約100nmの領域が非晶質/ナノ結晶化すること,またその下層のB2相には多量の{114},{112}変形双晶が生成することが明らかになった。別な試料のTEM観察では{114}面に平行な非晶質層の生成が確認された。以上のことより,TiNiの強加工による非晶質化には従来から言われていた転位密度の上昇のみならず,変形双晶の生成が関与する場合もあると考えられる。また,ショット後(鋳鋼,0.4MPa)の試料についてその耐食性を評価するため,1規定の硝酸水溶液中での分極曲線測定を行った。その結果,ショット前の試料と比較すると,不動態保持電流密度が一桁程度低下し,耐食性の向上が確認された。今年度は特に表層非晶質化のためのショットピーニング条件(ピーニングメディア、空気圧、ショット径等)の定量的検討と、表層非晶質化過程における微細内部組織の変化を明らかにすることに重点をおいた研究を行った。鋳鋼、WCのピーニングメディア(ショット)を用い、10秒から120秒までピーニングを行った。X線回折の結果、10秒のピーニングで既に回折ピーク強度の低下、ピーク幅の増大が起こった。B2相の(110)ピークの半価幅から結晶子サイズを求めた。結晶子サイズはピーニング時間と共に減少し、60秒後は1015nmであった。WCショットを用いた場合は表面にWCが多量にめり込んで残存することがわかった。ピーニングした面をコーティングして裏面から電解研磨することで、加工層のTEM観察を行った。その結果、10秒という短時間のショットピーニングでも既に一部非晶質化が起こり、非晶質中に粒径20nm程度のナノ結晶が分散した組織となっていることが明らかになった。X線回折の結果と併せて考えると、表層非晶質化は10秒程度の短時間のショットでも起こるが、ピーニング時間の増大と共に非晶質層厚が増加していると考えられる。
糖尿病合併症早期マーカープロレニンの病態生化学的意義の解明:日印番共同研究

社会環境や生活習慣の変化により世界の糖尿病人口は爆発的に増加している。自覚症状が乏しいまま糖尿病が進行し合併症(網膜症や腎症)を併発すると、患者は失明や人工透析を余儀なくされる。糖尿病合併症の早期発見や予見ができれば、悪化の前に効果的な治療法を施すことが可能となり、人々の生活の質の向上と医療費削減が実現できる。本研究では、糖尿病合併症の早期マーカーである血中プロレニンに着目し、糖尿病病態におけるプロレニンの生化学的な意義を日印番3カ国国際共同研究によって解明する。予防医療に向けた到達目標は、ユニバーサルデザイン性を備えた臨床現場即時検査法(Point-of-care testing; POCT)をプロレニンに対して開発することである。[1] POCTの開発プロレニン標準品の生産系確立を目的としてインド工科大学グワハティ校(IITG)のシバプラカーサム准教授の研究室に岐阜大学の学生を派遣し、研究を実施した。IITGでの研究を岐阜大学で継続する。さらに、抗体に代わる新規分子認識物質の創出ついて、IITGのボラ教授と意見交換を行った。[2]糖尿病患者の病態と遺伝子多型(SNP)との相関解析バングラデシュ・ダッカ大のナビ教授を岐阜大学に招聘し、SNP解析の対象となる糖尿病関連遺伝子の選別ならびにダッカ大で実施予定のSNP実験に関する意見交換を行った。さらに、バングラデシュ人を対象として、高血圧ならびに糖尿病併発型高血圧に対して危険因子となりうる複数のSNPをレニン遺伝子と(プロ)レニン受容体遺伝子の非コード領域に見出した。[3]糖尿病患者の病態と血中プロレニン濃度との相関解析研究分担者とともに研究対象とする微小血管内皮細胞に関する情報収集を行った。さらに、プロレニンの病態生化学的意義解明の一環として、生体内におけるレニン・アンジオテンシン・アルドステロン系と酸化ストレスのクロストークについて総説をまとめた。次年度に向けた研究の準備ならびに研究遂行に向けた意見交換ができた。研究実績の概要で記載した[1] POCTの開発、[2]糖尿病患者の病態とSNPとの相関解析、[3]糖尿病患者の病態と血中プロレニン濃度との相関解析について、岐阜大学、IITG、ダッカ大の間で、学生および研究者の派遣・招聘を推進し、密な意見交換に基づく研究を推進する。当初ダッカ大に導入予定の定量PCR装置(SNP実験用の装置)の価格が平成30年度の予算額を大幅に超えることが判明した。研究目的に合致し且つ予算範囲内に収まる代替品を見出すことができたので、次年度に購入し、ダッカ大でのSNP研究を推進する。
哺乳類精子の室温保存法の開発

卵子及び精子の凍結保存には定期的な液体窒素の補充が不可欠であり、長期間安全に維持するためには膨大な経費が必要である。そこで我々は精子および卵子の簡便な室温(非凍結)保存法の開発を試みた。従来の凍結保存に使われている試薬(グリセロールなど)は非凍結保存では毒性を示し、保存後の精子から産子を作ることはできなかった。しかし我々は高濃度のNaClを保存液に加えると精子の保存性が促進されることを発見した。この「塩漬け」方法では、保存中の精子の先体部が破けるなどのダメージが生じ、すべての精子が保存直後に死滅してしまうが、顕微受精技術によってそれらの精子を卵子内へ注入することで室温では10日間、4°Cでは2ヶ月間保存しても高率に産子へ発育させることが可能になった(Thaun et al., 2005)。これは従来の記録(室温で3日、4°Cで1週間)を大幅に塗り替えている。以前我々は精子の凍結乾燥法を開発したが、今回の方法は高価な凍結乾燥機を必要とせず、より簡便な方法である。一方我々はこの方法が卵子にも効果があるかどうか検討してみた。その結果室温で24時間保存した卵子から顕微受精によって産子を作出することに世界で始めて成功した(Wakayama et al., 2004)。これまで卵子の室温保存は数時間が限度とされていたことから、本方法は精子だけでなく卵子においても有効であることが示されている。これらの研究から生殖細胞の保存にはDNAにダメージがなければ、細胞の生き死には重要ではないことが明らかとなった。また我々は生殖細胞を持たない不妊マウスからでも、体細胞核移植技術などを利用して子孫を作出する方法も開発中である(Wakayama et al., 2005)。精子の室温保存方法を確立するため、最初に培養液の開発を行った。通常の保存では精子の生存が不可欠だが、顕微授精技術を用いることで死んだ精子からでも産子を得ることが可能になる。そのため精子の生存性は無視し、顕微授精後に産子を得られるかどうかを検討した。通常の培養液では精子は数日で死に、顕微授精しても1週間が産子の得られる限度であった。4°Cで保存しても、10日から15日が限界であった。次に、保存用培養液の開発として、塩分濃度を上げ、塩漬けにしたらどうなるか検討した。塩分濃度を上げ、通常の培養液の浸透圧272mOsmを800mOsmまで上昇した場合、精子は直ちに運動を停止し死滅してしまうが、顕微授精後の産子への発育率は飛躍的に上昇した。その結果、60日間保存しても40%以上の高率で産子が得られるようになった。現在はさらに保存期間を延ばすために、酸化防止剤の添加、空気を不活性ガスとの交換、保存容器などを検討している。一方、ミュータントマウスや事故で精子をなくしたマウスからでも産子を得ることを目的に、さまざまな実験を行っている。妊娠中期で流産してしまうマウスを救済するために、12.5dpcの胎児の精巣から生殖細胞を取り、ヌードマウスの皮下および精巣内に移植したところ、精子発生を確認したので顕微授精した結果、正常な産子を得ることに世界で始めて成功した。さらに我々は、精子どころか生殖細胞を完全に持たない不妊オスマウスから、核移植およびES細胞の技術を組み合わせることで、尻尾から体細胞由来ES細胞を作ることに成功した。そのES細胞からキメラマウスを作出し、交配試験をしたところ、不妊マウスの体細胞由来ES細胞はキメラマウスの精巣内で精子に分化し、次世代を作ることに成功した。
現代社会における心理主義化に関する社会学的総合研究

2000年代に入り、日本社会においては災害等に対して「心のケア」がすぐ唱えられたり、あるいは企業・学校等々がカウンセラーを設置するなど、心理学的な知が普及し、それによって「社会問題」を解決することが目指されるようになってきた。本研究では、社会学的な観点から、それがいつ・どのような時期から進展していったのか、並びになぜ特に現代社会において広く普及しているのか、さらにはその功罪を感情社会学の知見から明らかにした。本年度は、当初の研究計画を元に、主として日本社会において、さまざまな社会問題を個人の「心」の問題に還元する心理主義の進展に関する資料収集と分析を、1)我が国における明治・大正期における心理学の受容の過程、並びに2)現代の社会問題分析における心理学の浸透という側面から行った。それの成果の1つが拙稿『社会病理診断と実践的介入』であり、現代日本の社会学分野における社会病理・社会問題分析への心理学的な視点の不用意な混入と、心理主義の浸透による社会学的な視座の後退を示したものである。また、心理主義の浸透に関するアメリカ等諸外国との比較的な視座を得るために、当該分野の第一人者であるA・R・ホクシールド教授の研究に関する学会・シンポジウムに参加し、情報交換を行った。また、感情をいかに・社会調査の方法論の対象にすることが可能であるのか、具体的には「社会学」の分析的な語彙に感情が回収され、生きられた感情経験そのものが見失われる可能性に対抗する試みとして、対話的構成主義を導入する方法論や、ケア職等を中心とした感情労働における心理主義の浸透に関わるメカニズムについても考察を試みた。さらに、スクール・カウンセラー等の臨床心理に携わる人々に対する質的調査の準備もおこなった。これらの研究の成果の幾つかは、既にシンポジウム講演という形で発表されていたり、印刷に回っているものもある。次年度は、上述した研究を継続しつつ、幾つかの編著書を出版する予定である。本年度は、主として臨床心理学の技法がどのような形で、本・メディア媒体、対人援助領域においてなされているのか、そしてそれらを「批判」するための社会学的視座の確立を目指した。また、それに向けた社会調査のあり方について検討を加えた。具体的には「EQ」に代表されるような書物や、自己啓発・カウンセリングに関わる書物の言説分析を行う中で、心理学的な知がどのような媒体に転用されてきたのか、という点に関する系譜学的な考察を行った。さらに、その時代変遷をみる中で、「心」を対人関係や職務での成功を収めるための用具に化していくありさまを分析した。そのことを通して、心理学的な知が<上>から人々を統制するのではなく、逆に心理学的な知を応用した技法を通して、人々が他者との「心」の交流や、「人間力」といった言葉に代表されるように、「心」のあり方に常にリフレクシブであり続けるように、誘導される点に、現代の「心」と権力作用との関連を見いだした。これらの観点から、現代社会における心理主義分析・さらにはその批判は、これまでなされてきたような、「本当の・自然な」心からの疎外という論点では分析することが出来ないことを示した。それよりは、むしろ社会意識の変動の中で、人々が「本当の・自然な」心を作為的に作り上げていく中で、いわば<積極的な疎外>として分析されねばならないことを前提とした上で、いかに社会学的な批判の視座が確立出来るのか?といった点についての考察を深めた。さらには、具体的な調査を行うに際して、「心」といった事象にどのようにアプローチが可能であるのかを、主として理論的に検討を行った。「心」は個人の「内面」にあるため、しばしば調査が困難であり、秘技化されやすいが。だが、論理的には他の事柄と等価でありうることを示した。本年度は、主としてこれまでの成果を結実し、日本における心理主義化の系譜学的考察を行った。その中では、1990年代と2000年代との間で、それまでの「心構え」を説く抽象的なものから、心理学的手法が次第にTPOに併せたものに変化し、より具体化されていることを、同時代のマナーブックや雑誌の記事の言説分析を通して明らかにした。その上で、感情を巡る知の有無が選別基準となり、社会階層を規定していく有り様を分析する一方で、他方では社会ばかりではなく人々がそれを望む面があり、従来の「知」による統制といった方向での批判では限界があることを指摘し、なぜ・どのように人々が感情を巡る知を欲するのかを検討する必要があることを示した。さらに、これまでの感情労働論を精査する中で、それが感情規則に呼応した限定的なものであり、むしろ多様な感情を分析する際にはさらなる概念の精査が必要であることを示しつた。具体的には、日英のホスピスにおける感情労働の実証的調査を行い、それを具体化することに努めた。具体的には、感情規則といった固有の感情では語りきれない多様な自己感情の存在を指摘した。

そして、そのような多様な自己感情が一方で、その上でそれが単に社会的に・言語的に構成されているだけではなく、さまざまな装置(空間・時間の意識・相互行為装置など)に支えられながら紡ぎ出されていることを明らかにした。本年度の研究成果は下記に示されるが、上記の研究課題に関する本年度の成果である一方、他方では次年度以降も科研費などを用い、さらに調査・精査すべき課題である。
ショウジョウバエの器官アイデンティティーを決定するプログラムの網羅的解析

本研究では、代表者が確立した器官改変系を用いて、器官特異性が決定されるまでに必要な遺伝子発現のカスケードと、それらの遺伝子間のクロストークを明らかにすることを目的としている。そのために、酵母の転写因子GAL4のターゲット配列UASをランダムに導入したショウジョウバエ系統(遺伝子サーチシステム)を用いて、複眼原基で活性化型Notchレセプターと同時に発現させたときに、複眼から翅、触角あるいは肢へと器官変換を誘導できる、UASの下流に存在する遺伝子を同定することにした。昨年度の結果より、器官改変が誘導される系統は全て、Notchシグナリングの活性化を伴わない場合、複眼の形成不全を引き起こすことが明らかとなった。そこで本研究では、Notchシグナリングの活性化を敢えて行わないで予備スクリーニングを行い、スクリーニングの効率化を図った。現在までに3645系統の解析を終え、複眼の形成不全を引き起こした系統について、Notchシグナリングの活性化を伴った場合に、器官改変を誘導するかどうか調べた。その結果、複眼が翅へと変換する系統を2系統、肢へと変換する系統を10系統、触角に変わる系統を22系統同定した。複眼が翅に変換する系統で解析を行い、Notchシグナリングが、異なるステップで、異なる遺伝子と共に働き、異なる遺伝子の発現を誘導することで、器官の改変を誘導することを明らかにした。このことは、器官形成のリプログラムのためには、多段階でNotchシグナリングが必要とされることを示唆している本研究では、代表者が確立した器官改変系を用いて、器官特異性が決定されるまでに必要な遺伝子発現のカスケードと、それらの遺伝子間のクロストークを明らかにすることを目的としている。このことは、器官形成のリプログラムのためには、多段階でNotchシグナリングが必要とされることを示唆している
ヒト歯髄細胞からの機能性肝細胞の分化誘導と肝疾患モデルによる新規細胞医療法の開発

本研究は、子宮頸部扁平上皮癌(SKGII)由来添加物であるembryotrophic factors(ETFs)を用いてヒト歯髄細胞から肝細胞の分化誘導をおこない、肝細胞を分離することを目的とする。また、樹立した歯髄由来肝細胞を、肝障害、肝硬変モデル動物に移植し肝機能を回復する新たな再生医療を創出する。初年度は、申請時に用いていたETFsに不活性化が認められたため、ETFsの作製をおこない、分化誘導法を検討した。また、樹立したヒト歯髄肝細胞を用いてSCIDマウスに移植し、移植後の細胞の局在を免疫染色を用いて検討した。本研究は、ヒト歯髄から肝細胞を分離する分化誘導法を開発し、コロニアルクローニング法により肝細胞を採取後、肝障害または肝硬変モデル動物に移植し肝機能を回復する新たな再生医療の創出を目的とする。ヒト歯髄細胞より肝細胞を分化させ細胞を採取するためには、子宮頸部扁平上皮癌由来細胞の培養上清(ETFs)が必須となる。初年度は、申請時に用いていたETFsに不活性化が認められたため、ETFsを作製するため無血清培地で培養可能な子宮頸部扁平上皮癌由来細胞の樹立を行った。今年度は、新しく作製したETFsをもちいて肝細胞の分化に必要な濃度を検討した。しかし、上皮様の肝細胞が観察される確立は低く、今後も引き続き検討を続けている。歯髄には幹細胞が存在し、再生医療の細胞源として機能を有する細胞への分化誘導法の研究が進められている。近年、磁気ビーズを用いて歯髄細胞からCD117陽性細胞を分離し、HGF、ETFなどの誘導物質の添加した誘導培地により肝細胞へと分化誘導したことが報告された。しかしながら、この手法では誘導物質の添加を続けなければ肝細胞の性質を維持できない。誘導物質の添加を続けなければ肝細胞の性質を維持できない細胞を移植すると、移植後に生体内で機能を維持する細胞が減少する可能性がある。機能性肝細胞の誘導法を確立することは、移植後肝臓の再生を促進すると考えられる。そこで我々は、歯髄細胞にETFsのみを数回作用させて肝細胞の分化を行い、誘導後は通常培地にて維持可能なアルブミンを産生する肝細胞の分離に成功した。これまで用いていたETFsでは、50%の効率で歯髄細胞を肝細胞に誘導したが、徐々に効果が減退したため、申請者は新しいETFsの作製を行った。従来、ETFsは、Ham's F-12で作製されていた。新しいETFsの作製方法は、まず15%FBS、DMEM/F12で培養していたSKGIIの血清量を漸減し、無血清DMEM/F12にて培養可能なSKGII-SF細胞株を樹立した。次に、培養上清を凍結乾燥させ、その粉末をPBSに溶解させた後、脱塩を行い、新しいETFsの作製を行った。今回、新しいETFsにDMEM/F12を用いたのは、維持していたSKGIIがDMEM/F12により培養していたからである。ETFsは、歯髄細胞を肝細胞へと分化させる必要不可欠な生理活性物質である。しかし、従来用いていたETFsは、精製後の時間経過により歯髄幹細胞を肝細胞へと分化させる活性が減少していた。ETFsは、子宮頸部類扁平上皮癌細胞株(SKGII)を無血清培養した培養上清である。そのため、SKGIIを無血清DMEM/F12にて培養し、SKGII-SF細胞を樹立することは本研究の成功のためには必須なことである。また、歯髄細胞を肝細胞へとより効率よく分化させるETFsの作製は、その成分を同定し人工ETFsを作製するためにも必要である。ETFsは、SKGIIという癌細胞の培養上清から作製される。そのため、培養上清の中にタンパク以外の未知なペプチドなどの存在の可能性がある。どの成分が歯髄幹細胞を肝細胞へと分化させるかは明らかになっていない。歯髄細胞を肝細胞へより効率よく分化させるETFsをSKGII-SFの培養上清から精製し、その成分解析を行うことにより明らかになった生理活性物質をヒト組換え型タンパクで置きかえ、人工ETFsを作製する。これにより、分化が既知、または未知の成分により誘導されたかが明らかになると考えている。さらに、申請者は本研究でも用いられる濾紙による細胞分離法を確立し2013年2月(Differrentiation, Volume 85, Issue 3, February 2013, 91-100)に報告を行った。この手法は、目的の細胞を分離するため、0.25%トリプシン-0.02%EDTA

溶液に浸した2×2mm角の濾紙を細胞上に置き、その濾紙に付着する細胞を新しいシャーレにて培養し増殖させる方法である。さらに、本手法は、より純度の高い細胞集団の分離が可能である。そのため、本研究で得られた歯髄由来肝細胞もこの方法を用いて分離可能であり、計画どおり研究が進められていると考えている。従来用いていたETFsの歯髄を肝細胞へ誘導する活性が、時間の経過と共に低下したため新しくETFsを作製した。このETFsの歯髄細胞を肝細胞への分化能を検討する。歯髄由来肝細胞は、歯髄には存在しない細胞である。そのため、歯髄中の幹細胞が肝細胞に分化したと考えられる。そこで、磁気ビーズを用いて歯髄から幹細胞を分離し、幹細胞マーカーを用いてRT-PCR、免疫染色にて同定する。次に分離した幹細胞をETFsで誘導し、歯髄由来肝細胞を分化させる。分化した細胞が肝機能を有していることをPAS染色、LDL取り込み試験、薬物代謝試験を行って証明する。次に、歯髄肝細胞が細胞移植による再生医療に使えるか否かを確かめるため、誘導肝細胞を旋回培養してスフェロイドを作製し、90%の肝臓切除または、総胆管結紮により作製した肝障害モデル、および肝硬変モデル動物であるFahノックアウトマウスに移植することによってin vivoでの肝機能の回復を評価する。この時、移植した肝細胞の動態を組織切片を作製することのより解析する。また、ヒトアルブミン産生能、ヒトAFP産生能、BUN量の減少、血清総ビリルビン量の減少を指標に評価する。さらに血液凝固作用を見るため、ヘパプラスチンテストを行う。以上の結果より、肝臓が持つ蛋白産生能力、血液凝固因子産生、解毒作用を総合的に評価する。分離した歯髄由来肝細胞が正常肝細胞と同じ遺伝子を発現するかを検証するために、市販のヒト正常肝細胞(hNHepsTM)を用いて、リアルタイムPCRにより肝細胞特異的遺伝子発現プロファイルを明らかにする。以上より得られた結果は、研究をより発展させるため学会にて発表を随時行う。該当なし
アジア高山地域における比較氷河研究(第2次)

本研究の第一の目的は,過去10年にわたってネパール・ヒマラヤを中心に実施してきた氷河調査を拡大し,アジア高山地域における氷河・積雪域の分布,現在の状態,変動の傾向を各地での野外観測によって明らかにし,その地域的特徴の比較研究を行うことである.第二の目的は,アジア高山地域の湿潤および乾燥域の氷河・積雪の水資源的役割に関する基礎的研究を行なうことである.昭和60年度に実施された第1次調査の結果をふまえ,今回はヒマラヤと好対照をなすコンロン山脈を比較研究の重点地域として取りあげた.本研究の第一の目的である氷河・積雪域の地域的特性の比較研究については,今回の調査の重点地域をアジアで最も乾燥度の高い地域のひとつであるチベット高原内陸部の西崑崙山域におき,氷河比較観測を実施した.その結果,以下にあげる乾燥域氷河の特徴がわかった.1)氷河の涵養については.周辺の乾燥した平地の数倍の降水が氷河域に集中し,氷河の形成・維持に山岳地形が有料に働いていること.2)氷河の消耗に,乾燥のため蒸発が占める割合が大きいこと, 3)降雪は融ける前に蒸発するので,河川の流量に降水の占める割合が小さく,氷河の融解水が大部分を占めること.4)調査地域に多い氷帽型氷河は,涵養量と消耗量がともに小さいため,流動速度が極地氷床と同程度に小さいこと.5)気候変動にともなって地形に残される氷河の変動規模が小さいこと.なお,今後の気象データ処理,氷河掘削試料の解析,地形試料の分析により,内陸アジア乾燥域における氷河維持機構および環境変動を量的に明らかにしてゆく.また,ネパール・ヒマラヤ中部のランタン谷の基準雪氷観測所では, 1985年以来連続して気象・水文データを記録しており,現在もネパール国水文・気象局の協力によって継続中である.また,中国科学院蘭州氷河凍土研究所による天山観測所でも比較対照できるデータが継続してとられているうえ,今回亜崑崙山域に長期自動気象記録装置を設置してきた.それらの結果とあわせて,アジア高山地域の湿潤域と乾燥域における氷河積雪の水資源的役割をも明らかにするためのデータ解析をすすめる.本研究の第一の目的は,過去10年にわたってネパール・ヒマラヤを中心に実施してきた氷河調査を拡大し,アジア高山地域における氷河・積雪域の分布,現在の状態,変動の傾向を各地での野外観測によって明らかにし,その地域的特徴の比較研究を行うことである.第二の目的は,アジア高山地域の湿潤および乾燥域の氷河・積雪の水資源的役割に関する基礎的研究を行なうことである.昭和60年度に実施された第1次調査の結果をふまえ,今回はヒマラヤと好対照をなすコンロン山脈を比較研究の重点地域として取りあげた.本研究の第一の目的である氷河・積雪域の地域的特性の比較研究については,今回の調査の重点地域をアジアで最も乾燥度の高い地域のひとつであるチベット高原内陸部の西崑崙山域におき,氷河比較観測を実施した.その結果,以下にあげる乾燥域氷河の特徴がわかった.1)氷河の涵養については.周辺の乾燥した平地の数倍の降水が氷河域に集中し,氷河の形成・維持に山岳地形が有料に働いていること.2)氷河の消耗に,乾燥のため蒸発が占める割合が大きいこと, 3)降雪は融ける前に蒸発するので,河川の流量に降水の占める割合が小さく,氷河の融解水が大部分を占めること.4)調査地域に多い氷帽型氷河は,涵養量と消耗量がともに小さいため,流動速度が極地氷床と同程度に小さいこと.5)気候変動にともなって地形に残される氷河の変動規模が小さいこと.なお,今後の気象データ処理,氷河掘削試料の解析,地形試料の分析により,内陸アジア乾燥域における氷河維持機構および環境変動を量的に明らかにしてゆく.また,ネパール・ヒマラヤ中部のランタン谷の基準雪氷観測所では, 1985年以来連続して気象・水文データを記録しており,現在もネパール国水文・気象局の協力によって継続中である.また,中国科学院蘭州氷河凍土研究所による天山観測所でも比較対照できるデータが継続してとられているうえ,今回亜崑崙山域に長期自動気象記録装置を設置してきた.それらの結果とあわせて,アジア高山地域の湿潤域と乾燥域における氷河積雪の水資源的役割をも明らかにするためのデータ解析をすすめる.
抽象的双曲型ヴォルテラ方程式の理論とその応用

バナッハ空間におけるある種の楕円型微分方程式の解の構造に関する研究および双曲型ヴォルテラ方程式に関連する双曲型発展方程式の適切性に関する研究を行った.バナッハ空間Xの閉凸部分集合Cを任意に与えたとき,Xにおける常微分方程式u′′(t)=f(t,u(t))の境界値問題の解集合がCと同相になるような関数fが無数に存在することを証明した.実際,そのようなfを具体的に構成することができ,境界条件に応じて(構成される)fのリプシッツ定数の範囲が特定されることがわかった.これはディリクレ境界条件の場合を考察したHerzogとLemmartの結果の拡張になっている.得られた研究成果は,本研究課題である時間発展のある双曲型ヴォルテラ方程式の理論を構築するうえで役立つものと期待される.次に,Xにおける抽象的コーシー問題(ACP;u_0)u'(t)=A(t)u(t)(t∈[0,T]),u(0)=u_0に現れる作用素の族{A(t);t∈[0,T]}に対して,差分近似理論の観点から,区間[0,T]の分割0【less than or equal】t_0<t_1<【triple bond】<t_k【less than or equal】Tの幅T_i-t_<i-1>(i=1,2,...,k)に依存する安定性条件を課して,(ACP;u_0)の適切性に関する研究を行った.この条件は双曲型発展方程式論の先駆者である加藤による安定性条件よりも真に弱いものであり,2000年に田中によって導入された.本研究では,作用素A(t)の共通の定義域Yが必ずしもXで稠密とは限らないとき,A(t)に時間tに関する適当な正則性を仮定したうえで,(ACP;u_0)の解作用素を与える発展作用素を構成することに成功した.その結果,初期値u_0に対する両立性条件u_0∈YかつA(0)u_0∈Y^^-が成り立てば,(ACP;u_0)の古典解がただ一つ存在することがわかる.これはYがXで稠密な場合でも新しい結果である.パナッハ空間Eに値をもつベクトル値関数u(t)を未知関数とする常微分方程式の境界値問題を考える.ここで,fは直積空間[0,1]×EからEへの与えられた連続関数で,第2変数についてはリプシッツ連続であると仮定する.2000年にHerzogとLemmartは,Eの任意の閉凸部分集合Cを与えたとき,上の境界値問題の解集合がCと同相になるような関数fが存在するか,という問題を提出し,リプシッツ定数がπにいくらでも近い連続関数fが存在することを証明した.彼らはそのようなfを具体的に構成している.そのような関数fはたくさん存在するのか,が我々の興味である.さらに上記問題の境界条件u(0)=u(1)=0を第3種境界条件に一般化し,境界条件に応じて当該の関数fのリプシッツ定数がどのように変化するかも考察した.得られた結果は次の通りである.まず,HerzogとLemmartで用いられたアイデアを基礎にして境界条件に見合う適当なパラメータをもつ関数を導入することにより,当該のfが無数に存在することがわかった.さらにノイマン境界条件u'(0)=u'(1)=0および混合境界条件u(0)=u'(1)=0(またはu'(0)=u(1)=0)の場合,fのリプシッツ定数がそれぞれ0,π^2/4に近いものがとれることを示した.得られた研究成果は,本研究課題である時間発展のある双曲型ヴォルテラ方程式の適切性に役立つものと期待される.本研究ではコーシー問題(CP;x)を差分近似理論の立場から考察し,作用素の族{A(t);t∈[0,T]}に対して次の安定性条件を課す.バナッハ空間におけるある種の楕円型微分方程式の解の構造に関する研究および双曲型ヴォルテラ方程式に関連する双曲型発展方程式の適切性に関する研究を行った.バナッハ空間Xの閉凸部分集合Cを任意に与えたとき,Xにおける常微分方程式u′′(t)=f(t,u(t))の境界値問題の解集合がCと同相になるような関数fが無数に存在することを証明した.実際,そのようなfを具体的に構成することができ,境界条件に応じて(構成される)fのリプシッツ定数の範囲が特定されることがわかった.これはディリクレ境界条件の場合を考察したHerzogとLemmartの結果の拡張になっている.得られた研究成果は,本研究課題である時間発展のある双曲型ヴォルテラ方程式の理論を構築するうえで役立つものと期待される.次に,Xにおける抽象的コーシー問題(ACP;u_0)u'(t)=A(t)u(t)(t∈[0,T]),u(0)=u_0に現れる作用素の族{A(t);t∈[0,T]}に対して,差分近似理論の観点から,区間[0,T]の分割0【less than or equal】t_0<t_1<【triple bond】<t_k【less than or equal】Tの幅T_i-t_<i-1>(i=1,2,...,k)に依存する安定性条件を課して,(ACP;u_0)の適切性に関する研究を行った.

この条件は双曲型発展方程式論の先駆者である加藤による安定性条件よりも真に弱いものであり,2000年に田中によって導入された.本研究では,作用素A(t)の共通の定義域Yが必ずしもXで稠密とは限らないとき,A(t)に時間tに関する適当な正則性を仮定したうえで,(ACP;u_0)の解作用素を与える発展作用素を構成することに成功した.その結果,初期値u_0に対する両立性条件u_0∈YかつA(0)u_0∈Y^^-が成り立てば,(ACP;u_0)の古典解がただ一つ存在することがわかる.これはYがXで稠密な場合でも新しい結果である.
Innovative architectures to simultaneously enhance organic photovoltaic device stability and efficiency

1/結晶化および分子濃度勾配を調整することによって、順型有機太陽電池の電子輸送・正孔輸送のバランスができるため、順型有機太陽電池の曲線因子を67%までに高めることができた。2/PNTz4T:PC71BMには逆構造太陽電池に適した分子配向勾配が有することにより、変換効率が10%以上の逆構造有機太陽電池を作成することができた。3/逆構造太陽電池には逆分子濃度勾配が必要となる。本研究には新たに開発した転写プロセスによる逆分子濃度勾配を作成することができた。27年度が最終年度であるため、記入しない。有機太陽電池27年度が最終年度であるため、記入しない。
スカシユリ花弁におけるアントシアニン色素の発色パターンを制御する遺伝子の同定

スカシユリ`Montrex'から3種のカルコン合成酵素遺伝子(LhCHSA, LhCHSB, LhCHSC)と1種のジヒドロフラバノール4-還元酵素遺伝子(LhDFR)遺伝子のcDNAを単離し、これらの遺伝子の器官別・時期別発現を`Montrex'(ピンクで斑点を持つ)と`Conneticut King'(黄色で斑点を持たない)の2品種で調査した。ピンク色の花被はアントシアニンを、黄色の花被はアントシアニンを持たない。花器官では、3種のCHS遺伝子は`Montrex'のアントシアニン着色した花被・花糸・花柱と`Conneticut King'の着色していない花糸・花柱で発現した。着色した葯は両品種でLhCHSCのmRNAのみを蓄積した。LhDFRは`Montrex'の着色した花被・葯・花糸・花柱と`Conneticut King'の着色した葯で多く発現した。スカシユリの花被におけるカロテノイド着色の遺伝的背景を明らかにするため、`Montrex'と`Conneticut King'の交配由来のF_1植物間のカロテノイド含量の分離と、以前に構築した`Montrex'と`Conneticut King'の分子連鎖地図上にカロテノイド着色の遺伝子座をマッピングした。F_1植物間のカロテノイド含量は連続分布し、いくつかの遺伝子がこの形質に関与していることを示した。量的形質遺伝子座(QTL)解析は`Montrex'地図の第6連鎖群上に一つのQTL qCARmon6を同定した。qCARmon6は全表現型の58.2%を説明し、この遺伝子座はカロテノイド蓄積に大きな効果を持つ。スカシユリ花弁のアントシアニン発色の制御機構を明らかにすると共に、この形質の品種間差異の原因となっている遺伝子を特定することを目的として本実験を行った。第一に、着色した'モントレー'花弁からアントシアニン生合成経路の制御遺伝子の1つであるbHLH(Myc)遺伝子を単離した。Hot borate法を用いてRNA抽出を行い、cDNAを合成後アントシアニン生合成に関連する他の植物種のbHLHで保存されている領域から縮重プライマーを設計してRT-PCRを行い、bHLHの遺伝子断片(470bp)を得た。RACE-PCRを併せて行い、全塩基配列を決定すると2種のbHLH遺伝子(LhbHLH1;2483bp, LhbHLH2;2406bp)が得られた。これらの遺伝子配列はアントシアニン生合成経路を調節するbHLHと高い相同性を示した。第二に、花弁にアントシアニンを生成する'モントレー'と生成しない'コネチカット・キング'を用いてLhbHLH1とLhbHLH2遺伝子の発現解析をRT-PCRで行った。2種のbHLH遺伝子は品種間による差はなかったが、遺伝子間では発現パターンが大きく異なっていた。LhbHLH1は若いステージの花弁や葉・茎で強く、遅いステージの花弁や球根では弱いシグナルであった。LhbHLH2は花弁ではステージが進むにつれてシグナルが強くなった。葉・茎・光でアントシアニン発色を誘導した球根でもシグナルが認められたが、暗黒下の球根ではシグナルがなかった。これらのことよりLhbHLH2は光誘導であると考えられた。しかしながら2種のbHLH遺伝子の転写量の変化はアントシアニン合成の変化と一致しておらず、他の主要な調節要因があると考えられた。スカシユリの花色に関して、交配親の選択や交雑個体の選抜など育種への応用を目的として、アントシアニン着色の調節遺伝子をSuppression Subtractive Hybridization(SSH法)で単離することを試みた。

(1)花弁のアントシアニン着色植物材料として、全く着色していないものと完全に着色している発育段階のスカシユリ'モントレー'花弁を用いた。Hot borate法により、全RNAを抽出し、oligo-dTカラムでmRNAに精製した。このmRNAを逆転写し、cDNAを合成後、二本鎖cDNAにした。制限酵素処理・アダプターの付加を行い、2種の材料由来の遺伝子プールをハイブリダイゼーションした。SSH後、さらにMyb遺伝子に対する縮重プライマーを用いてPCR増幅した。TAクローニング後、予想サイズ200bpのクローンを3個選抜し、塩基配列を決定した。2種類のイオントランスポーターと1種類のDNAヘリカーゼに対し、それぞれ66%と75%の相同性を示した。(2)斑点形質について植物材料は斑点(アントシアニンの着色した)を持つものと持たないものを用いた。SSH・TAクローニングし、13クローンを塩基配列決定した。Blastxで解析すると、9個のクローンが既知の遺伝子と相同性を示した。形態形成もしくはアントシアニン合成関連遺伝子として、キンギョソウのMyb様タンパク305とユリのLhMybに、それぞれ65%と93%の相同性を示した。今後全鎖長をクローニングし、その発現様式を調べる。実験1アントシアニン着色を制御する候補遺伝子の単離昨年度、植物材料として斑点(アントシアニンの着色した)を持つ花被と持たない花被を用いたSSHにより、キンギョソウのMyb様タンパク305とユリのLhMybに、それぞれ65%と93%の相同性を示す遺伝子が単離できた。今年度は、前者の遺伝子を候補遺伝子として全鎖長をクローニングするため、RACE-PCRを行った。393bpのコード領域と207bpの3'非翻訳領域を含む600bpの遺伝子断片が単離できた。この遺伝子をLhMyb2と命名した。LhMyb2は単子葉のユリLhMybやデンドロビウムMyb9とそれぞれ65%と71%の相同性を示した。実験2 LyMyb2の発現解析`モントレー'の花糸・葯・花柱・子房・葉・茎・りん片を用いて器官特異的な発現様式を調べると、アントシアニン着色した花器官(花糸・葯・花柱)において強く発現し、他の栄養器官とアントシアニンを生成させたりん片ではシグナルが検出できなかった。`モントレー'花被の発育ステージ別の発現を調べると、着色していないあるいは着色直後のステージでは検出できなかったが、完全に着色したあるいは開花直後のステージで強いシグナルを検出できた。アントシアニンを生成しない`コネチカット・キング'では開花直後でもLhMyb2は発現していなかった。以上の結果より、アントシアニン着色した花器官特異的な発現を示すMybが単離できたと考えられ、スカシユリの育種選抜に利用できると考えられた。