hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
微小転移における網羅的遺伝子解析とその結果に基づく新規癌転移抑制療法の開発

【背景・目的】微小転移は、癌転移において重要な役割りを果たしていることが明らかになっている。しかし微小転移の診断治療法はなく、微小転移のメカニズムなどの基礎的研究は不十分である。本研究では分離した転移癌細胞の網羅的遺伝子解析により微小転移関連遺伝子を同定し、分子標的治療およびバイオマーカーの開発を行うことを目的とする。【研究成果】・浸潤転移関連遺伝子を標的にしたsiRNAの開発浸潤転移関連遺伝子であるFAK(focal adhesion kinase)を標的にしたsiRNAを作成した。FAKを標的にしたsiRNAを乳癌細胞株MCF7、Hs578T、MDA-MB231に導入し、ウェスタンブロティング法により、そのFAKタンパクの発現抑制を確認した。いずれの細胞株においてもFAKタンパクは抑制された。・乳癌細胞株を用いたsiRNAの機能解析、とくに副作用などの検討FAKを標的にしたsiRNAを乳癌細胞株MCF7、Hs578T、MDA-MB231に導入し、スクラッチアッセイ法によりその運動能について検討した。FAKを標的にしたsiRNAの導入により、乳癌細胞株は非導入の乳癌細胞株と比較して有意に運動能の低下を認めた。【意義・重要性】現在、リンパ節転移を用いた網羅的遺伝子解析を行なっており、新たな転移関連遺伝子の同定される可能性がある。またFAKを標的にしたsiRNAと配列の異なるsiRNA、小分子化合物の開発も進めている。微小転移関連遺伝子を標的にした新たな分子標的治療の開発、バイオマーカーによる微小転移の早期診断が可能となれば癌転移の治療成績を向上させることでき、本研究は意義のある研究である。【背景・目的】近年の癌研究の進歩により、微小転移の存在が明らかになり、癌転移おける重要性が認識されるようになってきた。しかし微小転移の病態などに関する基礎的研究はいまだ不十分である。本研究の目的は分離した転移癌細胞の網羅的遺伝子解析により微小転移関連遺伝子を同定し、分子標的治療およびバイオマーカーの開発を行うことである。【研究成果】・乳癌切除標本よりEpCAMに対する磁気ビーズを用いて、EpCAM陽性乳癌細胞と陰性乳癌細胞の分離を行った。EpCAM陽性乳癌細胞と陰性乳癌細胞におけるウェスタンブロティング法によりEpCAM発現の有無と複数の癌特異的遺伝子の発現との間に有意差を認めた。現在、その機能解析を行っている。【意義・重要性】リンパ節転移からの乳癌細胞の分離を進めており、新たな転移関連遺伝子の同定される可能性がある。微小転移関連遺伝子の機能が解明されれば、それらを標的にした新たな分子標的治療の開発、バイオマーカーによる微小転移の早期診断が可能となる。癌転移の治療成績を向上させることが期待でき、本研究は意義のある研究である。浸潤転移関連遺伝子であるFAK(focal adhesion kinase)を標的にしたsiRNAを乳癌細胞株MCF7、Hs578T、MDA-MB231に導入し、増殖能、浸潤能について検討した。FAKの抑制により、いずれの乳癌細胞株において浸潤の抑制が可能であった。乳癌症例101例に関してKi67、Girdinの免疫染色を行ない、臨床病理学的検討を行なった。これら101例において乳癌のマーカーとして通常用いられるER、PR、Her2とリンパ節転移には相関を認めなかった。Ki67陽性例は陰性例と比較してリンパ節転移との相関を認めた。Girdin陽性例もリンパ節転移との相関を認め、Girdin陽性例はKi67陽性例よりもリンパ節転移に関して強い相関を示した。次に乳癌症例101例のうち73例のルミナールタイプについて検討した。ルミナールタイプにおいてもKi67単独陽性例およびGirdin単独陽性例はリンパ節転移と相関を認めた。またKi67とGirdinが陽性であった症例では、それぞれの単独陽性例よりリンパ節転移と強い相関を示した。またKi67とGirdinが陽性であった症例は、それ以外の症例と比較して5年無再発生存率が低かった。Girdinは乳癌リンパ節転移のマーカーになる可能性が示唆された。現在、Girdinを標的に作成したsiRNAを乳癌細胞株へ導入し、ウェスタンブロティング法、PCR法によりその抑制効果およびその関連分子に関する研究を行っており、Girdinの分子機構について研究を進める予定である。リンパ節からの乳癌細胞の分離が困難であったためやや遅れているが、乳癌組織からの分離はできており今後の順調な進展が可能と考えられる。24年度が最終年度であるため、記入しない。リンパ節から分離した転移癌細胞に対して網羅的遺伝子解析をおこない、転移関連遺伝子を同定する。転移関連遺伝子を標的に作成したsiRNAを乳癌細胞株へ導入し、ウェスタンブロティング法、PCR法によりその抑制効果を明らかにし、増殖能、浸潤能などへの効果を明らかにする。乳癌細胞株への転移関連遺伝子を標的にしたsiRNAの投与後、DNAアレイ法による網羅的遺伝子解析をおこない、シグナル伝達系について検討する。
「餌-シロアリ-腸内細菌叢」系を用いたタカサゴシロアリ腸内細菌叢の解析とその利用

餌成分の制御が可能な人工餌の開発を行い、餌成分に用いた木材構成成分である炭素源の種類がタカサゴシロアリ共生系に及ぼす影響を評価した。その結果、与えた単一炭素源(セルロース、セロビオース、グルコース、キシラン、キシロース)によりシロアリの生存率が大きく異なり、特にキシランを用いた時に高い生存率が維持されるという新規な現象を捉えた。また、摂食した炭素源の分解に関与する酵素の活性がシロアリ腸内で高くなる事を明らかとした。以上の結果より、タカサゴシロアリが木材に含まれるキシランに対して高い代謝能を有している可能性が示唆されると伴に、タカサゴシロアリ共生系の特性が餌成分に応じて変化する事が示唆された。次に、各種人工餌で飼育したタカサゴシロアリの腸内細菌群集構造を、クローンライブラリ法、T-RFLP法および定量PCR法を用いて解析し、餌成分が腸内細菌叢の群集構造に及ぼす影響を比較した。その結果、摂食した餌成分に応じで、domain Bacteriaに関しては腸内細菌叢の群集構造が門レベルで劇的に変化することが明らかとなった。一方、domain Bacteriaに関しては、キシラン以外の単一炭素源を用いて飼育を行ったシロアリ腸内の古細菌叢の群集構造が木材摂食シロアリ腸内の群集構造と類似していた。このことから、単一炭素源は腸内古細菌叢に大きな影響を及ぼさない事が示され、シロアリと腸内古細菌叢は餌成分の変化に対して変動を受けない、密接な共生関係にあることが示唆された。本研究で得られた知見は、今後、シロアリ腸内細菌叢の機能を活用した木質系バイオマスの新規前処理法の開発に活用される事が期待される。また、昆虫-腸内微生物共生系における未知微生物探索への基盤技術として利用される事も期待できる。
白血病治療における神経軸索ガイダンス分子の役割

本研究は白血病の治療向上につなげることを目的とし、治療抵抗性を獲得している白血病細胞のメカニズムを解析してきた。約20種類の細胞移動に関する遺伝子に注目し、数種類の白血病細胞株でその発現をRT-PCRで解析したところ、数種類の遺伝子において強い発現を確認した。極めて強く発現していた遺伝子は、患者白血病芽球においても強く発現していた。そこで、その遺伝子発現量と予後との関連性を解析したところ、発現が強いものほど予後が悪いことがわかった。この遺伝子の発現量を測定することにより予後予測が可能になること、また、この遺伝子の機能を阻害することにより、白血病治療の向上につながる可能性があると考えている。1.白血病細胞株に発現している遺伝子の役割。当該遺伝子を高発現している細胞株と低発現細胞株で薬品による刺激を行ったところ、高発現している細胞株の方が細胞死が起こりやすいことを確認した。当該遺伝子が原因であるのか調べるためSiRNAによるノックダウンを行い、仮説を検証しているところである。ノックダウンが確実に行われているのか定量的PCR法とウエスタンブロットによるタンパク質を検出することで行っている。細胞の状態により結果が変わることがあるので、真実を見極めるために、引き続き解析を進めていく方針である。2.治療抵抗性を獲得している白血病細胞のメカニズム解析当該遺伝子を高発現している細胞株の方が、低発現細胞株よりも細胞傷害性のある薬品投与によりある化合物の増加を認めた。この化合物は多くの細胞でもそのその増加による細胞死を認めている物質である。当該遺伝子が原因かどうかSiRNAによるノックダウンにて検討中である。上記結果をもとに、実際に起こっている現象をつかみ、メカニズムが理解できれば、さらなる解明につながると考えている。我々の最終目標である白血病細胞根絶の原因に近づき、効果的な治療薬の開発につなげたいと考えている。エンドポイント1:白血病細胞株、ニッチ構成細胞における遺伝子発現解析。■細胞移動に関与する分子、約20種類に関して白血病細胞に発現しているのか、白血病細胞株数10種類を用いてスクリーニングを行ったところ、数種類の遺伝子において強い発現を認めた。よって、この強い発現を認めた数種類の遺伝子に焦点をあて、引き続き解析を行っている。さらに、これらのリガンドまたは受容体についてもニッチ構成細胞に発現が認められるため、それらの関連性、作用機序について、解析を進めていく方針である。エンドポイント2:患者血液悪性腫瘍細胞における細胞移動に関与する分子の発現解析と予後との関連性を解析する。■前述の白血病細胞株において強い発現を認めた数種類の遺伝子に関して、患者血液悪性腫瘍細胞における発現解析を行ったところ、これらの遺伝子の発現を確認することができた。さらに、いくつかの遺伝子において、遺伝子発現と患者予後との相関を調べたところ相関があることがわかった。エンドポイント1とエンドポイント2の結果をもとに、現在はこれらの遺伝子がどのようなメカニズムで予後を規定しているのか解析を行っている。候補分子においてin vitro、in vivoの機能アッセイを組み合わせることによって、我々が立てた仮説を検証していく。そのメカニズムについて深く検証することで、我々が最終目標にしている白血病細胞を根絶するための根本的な原因に近づいていき、安全でかつより効果的な新しい治療法の開発につなげたいと考えている。本研究は治療抵抗性を獲得している白血病細胞のメカニズムを解析することで、白血病の治療向上につなげることを目的とし解明してきた。約20種類の細胞移動に関する遺伝子に注目し、数10種類の白血病細胞株でその発現を定量的RT-PCR法で解析したところ、数種類の遺伝子において強い発現を確認した。さらに患者血液悪性腫瘍細胞において、遺伝子発現を最も強く認めた分子の発現解析と予後との関連性を解析したところ、発現が強いものほど予後が悪いことがわかった。その遺伝子にはサブタイプがいくつかあり、そのサブタイプの解析により、白血病患者の予後ともっとも関係があると予想されるサブタイプを選び、その標的遺伝子の遺伝子改変マウスを作製した。今回は、この遺伝子改変マウスの作成で研究を終了したが、今後、このマウスの血液細胞を使用し研究を続けることにより、最終目標である白血病治療の予後改善の手掛かりとなると考えている。また、当該遺伝子高発現の細胞株に抗がん剤を添加したところ、添加しない場合に比べ、発現率が高くなる傾向があることもつかんでおり、白血病細胞における当該遺伝子の発現がどのようなメカニズムで調節されているのか解明していく予定である。血液内科学候補遺伝子の発現と患者予後との関連は見つけることができたが、そのメカニズムについての証明に難渋している。確実な結果を出すために、試行錯誤しながら実験を行っているため、やや遅れていると判断した。上記のように候補遺伝子の発現と患者予後との関連を見つけることができ、おおむね順調に進展していると考える。1.抗がん剤投与による影響。白血病細胞株に高発現している当該遺伝子が抗がん剤投与によりどのような影響を与えているのか調べる。

さらに当該遺伝子をノックダウンした際、同様に抗がん剤投与による変化を確認し、細胞に与える影響の違いを見極める。2.当該遺伝子発現による生体内での影響を探る。当該遺伝子が血球に高発現しているトランスジェニックマウスを作製し、当該遺伝子高発現による生体内の影響を検証する。3.当該遺伝子高発現白血病細胞の幹細胞としての能力を確認する。患者白血病芽球のおいて当該遺伝子が高発現している幹細胞分画を単離し、免疫不全マウスに移植する。少ない細胞数でも当該遺伝子が高発現していれば、白血病を発症しうるのかどうか、また生存率はどうなるのかを検証する。エンドポイント3 :当該遺伝子高発現白血病細胞株が化学療法抵抗性を獲得しているのか確認する。■当該遺伝子高発現の細胞株と低発現の細胞株に抗がん剤を投与し細胞死がどれくらい起こっているのかを確認する。次にSiRNAで当該遺伝子をノックダウンし、抗がん剤投与後の細胞死量の増減を確かめる。エンドポイント4 :当該遺伝子発現白血病細胞株における治療抵抗性のメカニズムを探る。■細胞内代謝などを調べることにより、標的となる分子を見つける。さらに当該遺伝子をSiRNAでノックダウンすることで標的分子の変化を調べ、その相関性を確認する。エンドポイント5 :患者芽球を使用し、当該遺伝子発現細胞の幹細胞能力を見極める。■患者芽球において当該遺伝子が発現している分画を単離し、これを免疫不全マウスに移植する。少ない細胞数でも白血病を発症しうるのか、また生存率はどうなるのかを確認する。このことを確認することで白血病に対する治療薬の開発につながると考えている。平成25年度にin vitroで標的遺伝子を分析し、その作用を解明した上でin vivoにおける標的遺伝子の作用を検証することを予定していた。しかしながら実験の進行が遅れ、当該遺伝子を血球に高発現したトランスジェニックマウス作製のために予算を確保していたが、作製開始時期が遅れたため、未使用額が生じた。当該遺伝子を血球系に高発現したトランスジェニックマウスの作成を次年度にかけて行うこととし、未使用額はその経費にあて、実験を遂行していく予定である。■試薬、抗体、細胞培養関連物品、動物実験。まず、白血病細胞株を用いた候補遺伝子発現による化学療法抵抗性とそのメカニズムを探るため、細胞培養に必要な物品、実験をすすめるための各種試薬、各種抗体の購入は必須である。また、ヒト白血病モデルマウスを用いた実験を行うため、実験動物の購入は必須である。さらに、実験動物は神戸大学医学部の動物実験施設で適切に管理するため、実験動物の飼育管理のために費用を要する。試薬、実験動物に関する費用は試行錯誤しながら実験が進行するため、使用する費用の大部分を占めることが予想される。■機器使用料。
エピクロス派・ストア派が勧める生の内実の研究

ヘレニズム時代のエピクロス派とストア派が勧める生の内実を、プラトン、アリストテレスや現代の哲学者との対比を通じて明らかにし、これらの生を現代人に対し、注目すべき生き方の例として提示した。両派に共通する、生の理性的設計の思想は、衝撃的事態に見舞われた場合の態勢の立て直しに有効であろう。死にさいして魂は消滅するというエピクロス派の説は、現代の科学的世界像と調和し、死生観としても独自の魅力をもつだろう。自己は宇宙の一部だとするストア派の思想は、"報復しない倫理"に道を開くだろう。エピクロス派・ストア派の観める生の研究文献を選定・購入した。大学院生に資料の整理を依頼した。9月に東北大学にて近藤智彦(秋田大学)と研究打ち合わせ集会を行なった。青山学院大学(6月)、首都大学東京(9月2回、10月、3月2回)京都大学(9月、ll月)、新潟大学(10月)、東京大学(10月)、慶応義塾大学(12月)に出張し、金山弥平(名古屋大学)、神崎繁(専修大学)、金南斗(ソウル大学)、ジョヴァンニ・フェラーリ(カリフォルニア大学バークレイ校)らとの意見交換や、資料調査を行なった。電子メールにより、デイヴィド・セドリー(ケンブリジ大学)らと意見交換を行なった。国際プラトン学会大会(ダブリン、トリニティ・カレッジ)にて、エピクロス派・ストア派の善き生をめぐる哲学と関連の深い、プラトン『ピレボス』篇の快楽論について「『ピレボス』の快楽分析における魂と身体の対比」と題する発表(英語)を行なった。生の場面における徳と理性のありようを探ったジョン・マクダウェルの古典的論文「徳と理性」(難解なため論及が避けられてきた)の邦訳と、この論文への導入的論文「われわれがしていることにめまいをおぼえてはならない」を執筆した(『思想』2008年7月号掲載予定。前者は出版社に再校を戻し、後者は初校を戻した)。カール・マルクスのエピクロス哲学解釈の方法のとれまで気づかれてこなかった重要な一側面を明らかにする論文「カール・マルクスの博士論文における方法の一側面」を東北大学文学会『文化』に投稿した(初校はまだ出ず)。エピクロス派・ストア派の勧める生の研究文献を選定・購入した。8月に韓国のTonghwasa Templeにて開催のInternational Colloquium of Ancient philosophy and Greco-Roman Studiesで'The Epicurean Attitude to Death'と題する発表を、12月に中央大学駿河台記念館にて開催の多摩哲学会で「死に対するエピクロス的態度」と題する発表を行ない、ニコラス・スミス(ルイス・クラーク・カレッジ)、エドワード・ハルパー(ジョージア大学)、アルノ・マセ(ブザンソン大学)、土橋茂樹(中央大学)らとの討議を通じてエピクロス派的経験主義の問題点への理解を深めた。またプラトンとの関連については、9月に首都大学東京で'The Analogy between legislation and medicine in Plato's Laws'と題する発表を、3月に山梨県石和で'Some Remarks on the Accounts of the Tripartite Psychology in Plato's Republic'と題する発表を行ない、マルコム・スコフィールド(ケンブリジ大学)、クリストファ・ギル(エクセター大学)、加藤信朗(首都大学東京)、納富信留(慶応義塾)らとの闘技を通じて主題への理解を深め、エピクロス派・ストア派との比較の基盤を固めた。1月に東北大学にて近藤智彦(秋田大学)と研究打ち合わせ集会を行ない、アリストテレスの自己目的的活動の概念とストア派との関連、エピクロスにおける快楽計算の思想について理解を深めた。3月に慶應義塾にてギルからヘレニズム倫理学に関する専門的知識の提供を受け、エピクロス派の徳論という研究テーマをはじめ、貴重な示唆を受けた。ヘレニズム倫理学に関する研究図書を選定・購入した。4月2327日、台湾にて「理性と徳-プラトン、エピクロス、マクダウェル」と題する一連の講演会(英語)を開催した(淡水の真理大学にて「ギリシア文明」、「エピクロスの生死観」、台北の台北大学にて「マクダウェルの倫理学」、台北の中国文化大学にて「プラトン『国家』第2巻冒頭における、兄弟の、ソクラテスへの挑戦」)。6月26日、ギリシア、デルフィのデルフィ・センターにてシンポジウム「ソクラテス以前の哲学者とプラトン(チャールズ・カーンの名誉のために)」に参加し、「『ピレボス』における虚偽の快楽」と題する講演(英語)を行なった。6月25日、ブリュッセル自由大学のスィルヴァン・デルコミネット氏を東北大学に招待し、「プラトンとヘレニズム倫理学」と題するシンポジウムを開催した。9月1213日、京都大学にてギリシア哲学における感情の問題について研究意見交換を行なった。9月1719日、イギリスのオクスフォード大学にてデイヴィド・セドリー、アレグザンダ・ネハマスらとギリシア倫理学について研究意見交換を行なった。

9月19日翌年3月末、イギリスのケシブリジ大学にてエピクロス派倫理学・神学についてデイヴィド・セドリーらと研究意見交換を行ない、資料収集を行なった。12月、共著『プラトン「ピレボス」(第8回シンポシウム・プラトニクムからの撰定論文集)』をAcadenia Verlag社より刊行した。2月12日、アイルランド、ダブリンのトリニティ・コレジにて講演「エルの神話のある字義的解釈」(英語)を行なった。3月8日、ケンブリジ大学古典学科、Bクラブにて「虚偽の快楽」と題する講演を行なった(6月の版より大幅に改訂されている)。3月23日、イギリスのエクセター大学にて「虚偽の快楽」と題する講演を行なった(3月8日の版より改訂されている)。エピクロス派倫理学の著書の刊行の準備を進めている。
自己治癒助燃材を用いた反応の連携による自己治癒促進手法の確立

自己治癒セラミックスは発生したき裂を自発的に修復可能な材料であるが,その修復能力は内包する反応物(自己治癒エージェント)に依存する.本研究では第三物質(自己治癒助燃材)の添加とその反応による自己治癒エージェントの反応促進を試みることで新たな修復能力の拡張および最適化手法を構築する.具体的にはまず助燃材の発熱挙動に着目し選定を行い,自己治癒エージェントとの混合粉末における反応促進効果を評価する.次にバルク体における修復能力に及ぼす影響を評価する.最後に有限要素法によるモデル化を実施し,定量化とその他の系への応用を試みる.自己治癒セラミックスは発生したき裂を自発的に修復可能な材料であるが,その修復能力は内包する反応物(自己治癒エージェント)に依存する.本研究では第三物質(自己治癒助燃材)の添加とその反応による自己治癒エージェントの反応促進を試みることで新たな修復能力の拡張および最適化手法を構築する.具体的にはまず助燃材の発熱挙動に着目し選定を行い,自己治癒エージェントとの混合粉末における反応促進効果を評価する.次にバルク体における修復能力に及ぼす影響を評価する.最後に有限要素法によるモデル化を実施し,定量化とその他の系への応用を試みる.
地震動の早期情報伝達にむけた大地震の破壊域の自動推定に関する研究

本研究では、地震の断層面や破壊域などの自動決定を念頭におき、3つのステップからなる自動解析システムを提案、構築した。3つのステップは、1)地震のメカニズム解の決定、2)断層面と断層長の決定、3)矩形断層でのモーメント解放量の時空間分布の決定、からなる。データは強震計波形記録を利用する。システムの動作確認には、過去の大地震の強震データを用いた。兵庫県南部地震では、ステップ1で、東西方向に圧縮軸をもつ横ずれ断層のメカニズムが決まる。ステップ2では、北東-南西走向の鉛直な面が、断層面として正しく選択される。同時に推定されるモーメント解放量分布で、顕著な値が、震源から淡路島側に約15km、神戸側に約35kmに現れ、断層長が約50kmであることを示す。ステップ3は、さらに、モーメント解放量の深さ分布を検出する。大きな解放量が震源の淡路島側隣の浅い部分にあるとともに、神戸側ではモーメントの解放が震源付近の深さにひろく起こったことがわかる。システムは、現在、強震ネットや関西地震観測研究協議会のデータを用いて稼動している。北陸・近畿から中国地方の浅い小・中地震がステップ1を起動し、モーメントテンソル解が自動決定され、電子メールやホームページで公表されている。強震ネットについては、30以上の解が決定され、約70-80%がP波初動分布やフリージア計画で決定されている解と調和的している。関西地震観測研究協議会のデータを用いたシステムでは、強震計のトリガーによって配信される電子メールを受信することによってシステムが起動する、準リアルタイム対応も実現している。7月に発生した大阪湾の地震で自動決定されたメカニズム解は、北北東-南南西走向の逆断層で、強震ネットやフリージアで決定された解とも一致する。
作物体表面電位による水分ストレス測定装置の開発

作物体内の水分状態を圃場条件下で簡易かつ正確に判定する目的で,作物体の表面電位の測定装置を試作し,種々の作物について,表面電位の測定を行い,装置の妥当性を検討した.1.試作した表面電位の試作装置は,一対の銀一塩化銀電極およびこれに接続する前置増幅器からなる.作物体のインピーダンスは著しく高いため,増幅回路には入力抵抗が10^<12>ΩのプリアンプICを用いた.作物体の茎表面の2点に各1個の電極を接触させ,それぞれの前置増幅器を介して2点間の電位差を検出し,ペンレコーダおよびデータロガーに出力,記録するものとした.2.種々の養分条件で水耕したイネおよび土壌水分条件の異なるポットで栽培したバレイショとインゲンマメについて,試作装置を用いて表面電位を接続的に測定した.異なる環境条件で栽培した個体間には,100mVをこえる表面電位の差異が検出された.また,一部の測定では,表面電位に規則的な日周期が認められた.3.試作装置を用いての,作物種あるいは環境条件を異にする数十回におよぶ表面電位の測定により,測定結果の再現性に関する幾つかの問題点が明らかとなった.すなわち,作物体のインピーダンスが当初の予想よりも高かったため,測定装置の作成の際に生じる増幅回路間の微少な差異が,測定結果に影響した.また,電極の形状や組成の影響で作物体と電極との接触面に起電力が発生し,測定結果のばらつきの原因となった.以上のことから,本研究の試作装置により,作物個体間における栄養状態あるいは水分状態の差異を,表面電位の差異として検出できるものと考えた.しかし,本研究の最終目的である圃場条件下での簡易かつ正確な測定を可能とするためには,試作装置の改良ならびに測定手法についての検討がさらに必要である.作物体内の水分状態を圃場条件下で簡易かつ正確に判定する目的で,作物体の表面電位の測定装置を試作し,種々の作物について,表面電位の測定を行い,装置の妥当性を検討した.1.試作した表面電位の試作装置は,一対の銀一塩化銀電極およびこれに接続する前置増幅器からなる.作物体のインピーダンスは著しく高いため,増幅回路には入力抵抗が10^<12>ΩのプリアンプICを用いた.作物体の茎表面の2点に各1個の電極を接触させ,それぞれの前置増幅器を介して2点間の電位差を検出し,ペンレコーダおよびデータロガーに出力,記録するものとした.2.種々の養分条件で水耕したイネおよび土壌水分条件の異なるポットで栽培したバレイショとインゲンマメについて,試作装置を用いて表面電位を接続的に測定した.異なる環境条件で栽培した個体間には,100mVをこえる表面電位の差異が検出された.また,一部の測定では,表面電位に規則的な日周期が認められた.3.試作装置を用いての,作物種あるいは環境条件を異にする数十回におよぶ表面電位の測定により,測定結果の再現性に関する幾つかの問題点が明らかとなった.すなわち,作物体のインピーダンスが当初の予想よりも高かったため,測定装置の作成の際に生じる増幅回路間の微少な差異が,測定結果に影響した.また,電極の形状や組成の影響で作物体と電極との接触面に起電力が発生し,測定結果のばらつきの原因となった.以上のことから,本研究の試作装置により,作物個体間における栄養状態あるいは水分状態の差異を,表面電位の差異として検出できるものと考えた.しかし,本研究の最終目的である圃場条件下での簡易かつ正確な測定を可能とするためには,試作装置の改良ならびに測定手法についての検討がさらに必要である.
低ホスファターゼ症に対する新規胎児遺伝子治療の確立

低ホスファターゼ症は硬組織の石灰化不全、呼吸困難、痙攣発作を主徴とする遺伝性疾患である。本邦においては重症型の頻度が高く、これらは胎生期に症状が進行し、死産または出生直後に死亡、あるいは出生した場合でも、重篤な呼吸機能不全を伴うことが一般的である。現在、酵素補充療法が行われているが、長期反復投与の必要があり、また侵襲性も高い。そこで、アデノ随伴ウイルスベクターによる胎児治療実験が行われたが、組織非特異的プロモーター制御であるために予期せぬ副作用がおこる可能性がある。したがって本研究課題では、筋特異的プロモーター制御下に胎児遺伝子治療を行うことで、治療効果および安全性に関して検証する。
核内蛋白HMGB1の成長因子としての骨分化におけるメカニズムの解明

近年、DNAとヒストンの複合体であるクロマティンとその制御ファクターによるエピジェネティックな遺伝子発現調節が、発生を制御する重要な因子として注目されている。本研究は、クロマティン蛋白であるHMGB-1(High mobility group box protein)が、同時に肥大軟骨細胞より細胞外へ分泌される知見から、HMGB-1の未知の機能を解明し、内軟骨性骨化メカニズムと核内クロマティン蛋白質の新たな機能を明らかにすることを目的とする。これまでの我々の研究により、以下の結果が得られた。HMGB-1欠損マウス胎仔の解析より、軟骨成熟により内軟骨性骨化の始まる胎生16日において外観的に四肢の短小を認めた。その骨格形成に及ぼす影響を詳しく検討した結果、骨芽細胞への分化は認められず、内軟骨性骨化に影響を与えることを発見した。正常マウス胎仔の四肢におけるHMGB-1の免疫染色の結果、軟骨増殖層では発現が認められないが、前肥大層から肥大層にかけては、その顕著な発現を認め、その局在の多くは細胞質内であった。核内蛋白であるHMGB-1が核外細胞質内、さらには細胞外にも移行し、成長因子として作用、その血管誘導能がある可能性を見出した。正常マウス胎仔の長管骨器官培養により、その培養上清中にHMGB-1が分泌されていることを確認した。現在、in vitro系を用い、軟骨細胞内における局在の変化による影響、軟骨・骨芽細胞への分化への影響、野生型マウスとHMGB-1ノックアウトマウスの骨髄より単離した間葉系幹細胞細胞を用いて、骨芽細胞、軟骨細胞へ分化誘導することによりHMGB-1の分化能に対する影響を解析中である。我々のデータから、HMGB-1の、骨分化(内軟骨性骨化)に対する成長因子としての重要な役割が推察される。
新有機光非線形材料を用いた超高速光スイッチング素子の研究

超高速で応答し、光非線形性の大きなポリマーを合成し、この薄膜を用いた光非線形デバイスを実現することを目的に研究を行い、以下の2点について成果を得た。(1)側鎖基が規則的に配列したポリマーの合成・薄膜化と光学特性酸化カップリング重合によて、Poly [3-(4-dodecyl phenyl)-2, 5-thienylen]を合成した。触媒量のバナジル錯体を酸化剤として用いることにより、側鎖基が規則的に配列したポリマー(head-to-tail)を、酸化鉄を用いることにより配列しないポリマー(random)を合成した。スピンコート法などにより、これらのポリマーを数μm数10μm厚の薄膜にした。配列制御されたPolymer (head-to-tail)は配列が不規則なPolymer (random)に比べ吸収ピークが約50nm低エネルギーにシフトした。又、Polymer (head-to-tail)の吸収ピークは、クロロホルム蒸気にさらし配向を整えることにより、さらに約50nm低エネルギーにシフトした。(2)非共鳴波長領域の光非線形性の評価アルゴレーザ励起チタンサファイヤフェムト秒可変波長レーザ(波長775nm)を用いて、前方4光波混合法により、吸収端よりも長波長の非共鳴の波長領域でのχ^<(3)>を測定した。その結果、Polymer (head-to-tail)ではχ^<(3)>=5.3×10^<-10>esu、Polymer (random)ではχ^<(3)>=3.5×10^<-10>esuであり、Polymer (head-to-tail)の方が約1.5倍χ^<(3)>が大きくなることがわかった。2つのポンプ光を同時に入射し、試料中に過渡的回折格子を形成し、可変の遅延時間をもつプロープ光を入射し、過渡回折格子で回折されたシグナル光を測定した。その結果、過渡的回折格子の緩和時間を励起光のパルス幅(140fs)以下と極めて高速であることがわかった。
原子直視電子線ホログラフィ-顕微鏡用0.1μm極細線電子線バイプリズムの試作

本研究は0.1μm極細線電子バイプリズムの試作を行い、解像度が高く干渉領域の広い原子直視電子線ホログラフィ-顕微鏡を実現することをその目的として平成元年度と2年度の2年間にわたって実施され、以下の成果が得られた。(1)線引き法により直径0.3μmの白金極細線を直接製作することができた。(2)イオン・シニング法により0.3μm以下の太さまで白金を細線化することができた。特に集束さたGaイオンビ-ムを照射することにより厚さ0.1μmのPt極細線を作ることができた。この方法は、研麿中の白金線の像を二次電子像として観察できるため、細線化に最も適した方法である。(3)高解像度、広干渉領域の原子直視電子線ホログラフィ-顕微鏡を実現するためには、照射ビ-ムの開き角を小さくすることが最重要であることを理論的に明らかにした。(4)加速電圧200kVLaB_6電子銃を備えた通常の高分解能電子顕微鏡においても電子ビ-ム照射角度を調整することにより有効な電子線ホログラフィ-実験が可能であることを示した。(5)加速電圧400kVの原子直視電子顕微鏡においては、200kVの時と比べて電子線の輝度が高くなるため電子線ホログムの観察に適しているが、蛍光塗料のコントラストは低下する。これを補償するため、TVカメラを電子線ホログラフィ-顕微鏡につなぎ電子線ホログラム像の高感度・高解像度観察が行なえるようにした。(6)さらにこのTVカメラシステムをミニコンにつなぎ、電子線ホログラムのオンライン再生処理も行なえるようにした。以上より、電子線バイプリズム用の直径0.1ー0.3μm白金極細線の試作に成功し、これを用いた高解像度高感度の電子線ホログラフィ-顕微鏡実現の方法が明らかになり、当研究の目的は達成された。本研究は直径0.3μm以下の極細線バイプリズムを開発するとともにこれを加速電圧400kVの原子直視電子顕微鏡に取りつけて、原子直視ホログラフィ-電子顕微鏡を実現することを目的としている。電子線ホログラフィ-を加速電圧400kVの電子顕微鏡に応用するのは本研究が最初であるためまず予備実験を行った。実際に観察してみると蛍光板の感度が低下しており、正焦点位置の決定が大変困難であることが分かった。これを解決するためには高感度、高分解能TVカメラシステムを導入することが不可欠となったためこれを導入すると共に、400kV用バイプリズムホルダ-についてはこれを自作により開発した。これに直径0.6と0.3μmの白金極細線を張り加速電圧400kVで安定して電子線ホログラムが得られることを確認した。これにより所期の目的の第1段階を完了できたが、同時に以下のような問題点も明らかになった。直径0.3μmの極細線をバイプリズム用のフィラメントとしてホルダ-に取りつけることが極めて困難であった。これは極細線の直径が可視光線の波長よりも短く極めて細いものであることに起因している。従って、この取りつけ作業を肉眼でクリア-に確認しながら進めることが困難なため、張られたバイプリズムフィラメントはたるみが充分に取り除かれていなかったものと思われる。これの改善策を検討する必要がある。応用研究としてはGaAs結晶表面に現れた欠陥の電子線ホログラムを観察し解析した。

また、よりコヒ-レンス度の高い電子線源を得るための基礎実験としてLaB_6単結晶陰極を熱電界放射領域で動作させたときのエミッション特性についても検討を行った。本研究は0.1μm極細線電子線バイプリズムの試作を行い、高輝度電子銃をもつ電子顕微鏡にこれを取りつけてその解析を行ない、解像度が高く干渉領域の広い原子直視電子線ホログラフィ-顕微鏡を実現することをその目的としている。本年度はこの研究の最終年度であり以下の研究を実施した。(1)線引き法により直径0.3μmの白金極細線を直接製作することができた。(2)イオン・シニング法により0.1ー0.3μmの太さまで白金を細線化することができた。(3)高解像度、広干渉領域の原子直視電子線ホログラフィ-顕微鏡を実現するためには、バイプリズム・フィラメントの直径を細くするだけでなく、照射ビ-ムの開き角を小さくする方が効率のよいことも理論的に明らかにした。(4)加速電圧200kVのLaB_6電子銃を備えた通常の高分解能電子顕微鏡においても電子ビ-ム照射角度を調整することにより有効な電子線ホログラフィ-実験が可能であることを示した。また加速電圧400kVの原子直視電子顕微鏡においては、200kVの時と比べて干渉縞のコントラストが高く、電子線ホログラムの観察に適していることも確認できた。(5)TVカメラを電子線ホログラフィ-顕微鏡につなぎこれの高感度・高解像化をはかるとともに、これのオンライン処理も行なえるようになった。以上より、電子線バイプリズム用の直径0.1ー0.3μm白金極細線の試作に成功し、これを用いた高解像高感度の電子線ホログラフィ-顕微鏡実現の方法が明らかになり、当研究の目的は達成された。
低線量率照射による二本鎖切断残存および誤修復を利用した放射線感受性予測法の開発

放射線感受性の異なる正常線維芽細胞、Ataxia Telangiectasia細胞を用いて低線量率照射後の感受性を染色体異常から解析した。細胞はG0期の状態で0.5 Gy/dayの線量率で1-3 Gy照射した。1 Gy当たりの線量で正常細胞では0.36個、AT細胞では3.3個の染色体断片が見られた。3 Gy照射後にG0期染色体とG2期染色体解析を行ったところ、G2期では染色体の誤修復である転座数はG2期で増加がみられたが、8割の誤修復はG0期で見られておりAT細胞ではG0期で多くの誤修復が見られたことからAT細胞では染色体断片の認識に遅れがあり高線量率と同様な感受性を呈することが示唆された。福島原発の低線量被曝の問題から個人の放射線感受性を計るアッセイの開発は重要と考えている。昨年度より癌細胞および正常組織細胞の放射線感受性を治療前に予測するpredictive assayを低線量率照射による染色体損傷解析を用いて解析してきた。高線量率を使用したpredictive assayは他施設でも試みられているが、十分な成果が得られていない。低線量率照射で生じるDNA2本鎖切断は、蓄積される傾向があり、細胞によりその認知が異なることが予測され、predictive assayに役立つことが期待される。昨年度は高線量率(2 Gy/min)のX線を正常線維芽細胞に照射し、高線量率照射による初期損傷を未熟染色体凝集法を用いて解析した。今年度は、0.5Gy/dayの低線量率照射で正常線維芽細胞、Ataxia Telangiectasia由来の線維芽細胞に照射を行い染色体解析を行った。高線量率照射ではギムザ染色によるG0/G1期染色体損傷は正常人の線維芽細胞もAT由来の細胞でも差異が見られなかったが、低線量率ではAT細胞では明らかに修復されずに残存する染色体断片数が正常細胞より多くAT細胞では低線量率では修復されずに残存する染色体断片が多いことが観察された。染色体損傷修復における誤修復の頻度を調べるためにFISH法による解析をG0期と継代後のG2期で比較検討した。正常細胞でもAT細胞でもG0/G1期でも誤修復はほぼ完成していることが観察された。AT細胞の放射線感受性のメカニズムとしてG1/S期のチェックポイント機能の低下が示唆されているが本研究からは低線量率での誤修復そのものが高感受性のメカニズムと考えられた。癌細胞で同様な実験を行ったが長期間G0期での培養では、正常細胞と異なり定着せず浮遊したため、現在のところ解析が困難であり今後も改善を加え検討を行いたい。本研究の成果は国際学会誌に投稿する予定でいる。がん細胞および正常組織細胞の放射線感受性を治療前に予測するpredictive assayを低線量率照射による染色体損傷解析を用いて解析する方法から確立することを目的とする。高線量率を使用したpredictive assayはこれまで十分な成果が得られていない。本年度は高線量率(2 Gy/min)のX線を正常線維芽細胞に照射し、高線量率照射による初期損傷を未熟染色体凝集法を用いて解析した。今年度、使用した正常細胞は、正常人の線維芽細胞とAtaxia Telangiectasia由来の線維芽細胞である。後者の細胞は特に放射線感受性が高いことが知られており、高線量率照射での初期損傷が正常人の線維芽細胞とどのように違うかを解析した。ギムザ染色によるG0/G1期染色体損傷は正常人の線維芽細胞もAT由来の細胞でも差異が見られなかった。一方、蛍光染色法を用いたFISH(fluorescence in situ hybridization)法での誤修復を解析したところ。AT細胞では正常人の細胞と比較して著しい誤修復が見られ、高線量率での高感受性の原因と考えられた。低線量率の感受性を検討するためには、高線量率との比較が不可欠であり、来年度の研究につなげたい。低線量率照射による放射線感受性測定のために、本年度は高線量率の実験を行った。高線量率での実験は、低線量率での修復と比較するために必要な情報と考えており、おおむね順調と考えている。低線量率の実験は放射線医学総合研究所の低線量照射装置を用いて行う予定である。低線量照射後には静止期と細胞周期を進行させた状態で染色体解析を行う。未使用額の発生は効率的な物品調達を行った結果であり、翌年度の消耗品購入に充てる予定である。
環境質制御薄膜用機械的特性評価試験機の試作

マイクロマシンやマイクロエレクトロメカニカルシステム(MEMS)の実用化は,機械としての信頼性を確保した上で初めて成り立つものである.とくに,近年では,従来は機能性材料として用いられていた厚さが数μm程度の薄膜が構造体として用いられるようになってきたが,その疲労を含む強度特性,切欠き感受性,さらには,曲げ・引張応力負荷モードの影響など,マイクロシステムを設計する上で必要不可欠な機械的特性データは皆無である.そこで,本研究ではナノインデンテーション用に開発されている超微小荷重負荷装置に,粗動用ステージおよびピエゾステージから構成される荷重負荷位置同定機構を組み込み,曲げ疲労試験が可能となる計測・制御システムを新たに開発することにより,サブμmから数μm厚さの薄膜の静的曲げ試験や疲労試験が可能となる薄膜用機械的特性評価試験機を試作した.ここでは,荷重負荷位置同定機構の導入に加えて,ナイフエッジ型圧子を導入し,AFMにより荷重負荷位置を正確に測定することにより,表面マイクロマシーニングにより作成した厚さ3.5μm,幅5μmのポリシリコン片持ちはりに対して精度良く曲げ試験ができることを確認した.さらに,曲げ・引張応力負荷モードが薄膜の破壊特性や機械的特性に及ぼす影響を検討するため,ピエゾ駆動アクチュエータを用いて薄膜に均一な一軸応力を負荷することのできる引張・疲労試験機を開発し,これによりポリシリコン薄膜に対して引張,疲労試験を行い,その破壊特性を評価できること,水中,乾燥空気中といった環境質を制御した条件下で,応力比0.1,繰返し速度10Hzでの正弦波形荷重制御下で疲労試験が可能なことを確認した.また,結晶粒の配向特性やその数,結晶粒サイズを考慮した有限要素モデルを用いて,ポリシリコン薄膜のヤング率におよぼすこれらの影響を検討し,実験で得られたヤング率と比較・検討した.マイクロマシンやマイクロエレクトロメカニカルシステム(MEMS)の実用化は,機械としての信頼性を確保した上で初めて成り立つものである.とくに,近年では,従来は機能性材料として用いられていた厚さが数μm程度の薄膜が構造体として用いられるようになってきたが,その疲労を含む強度特性,切欠き感受性,さらには,曲げ・引張応力負荷モードの影響など,マイクロシステムを設計する上で必要不可欠な機械的特性データは皆無である.そこで,本研究ではナノインデンテーション用に開発されている超微小荷重負荷装置に,粗動用ステージおよびピエゾステージから構成される荷重負荷位置同定機構を組み込み,曲げ疲労試験が可能となる計測・制御システムを新たに開発することにより,サブμmから数μm厚さの薄膜の静的曲げ試験や疲労試験が可能となる薄膜用機械的特性評価試験機を試作した.ここでは,荷重負荷位置同定機構の導入に加えて,ナイフエッジ型圧子を導入し,AFMにより荷重負荷位置を正確に測定することにより,表面マイクロマシーニングにより作成した厚さ3.5μm,幅5μmのポリシリコン片持ちはりに対して精度良く曲げ試験ができることを確認した.さらに,曲げ・引張応力負荷モードが薄膜の破壊特性や機械的特性に及ぼす影響を検討するため,ピエゾ駆動アクチュエータを用いて薄膜に均一な一軸応力を負荷することのできる引張・疲労試験機を開発し,これによりポリシリコン薄膜に対して引張,疲労試験を行い,その破壊特性を評価できること,水中,乾燥空気中といった環境質を制御した条件下で,応力比0.1,繰返し速度10Hzでの正弦波形荷重制御下で疲労試験が可能なことを確認した.また,結晶粒の配向特性やその数,結晶粒サイズを考慮した有限要素モデルを用いて,ポリシリコン薄膜のヤング率におよぼすこれらの影響を検討し,実験で得られたヤング率と比較・検討した.マイクロマシンやマイクロエレクトロメカニカルシステム(MEMS)の実用化は,機械としての信頼性を確保した上で初めて成り立つものである。近年では,Si単結晶ウェハなどを用いたバルクマシーニングによるマイクロ構造体にくわえ,従来は機能材料として用いられてきた厚さが数μm以下の薄膜が構造材として用いられるようになってきたが,その疲労を含む強度特性,切欠き感受性,さらに曲げ・引張応力負荷モードの影響など,マイクロシステムを設計する上での基本的な特性データは皆無である。本研究ではナノインデンテーション用に開発されている超微小荷重負荷装置に,荷重負荷位置同定機構および曲げ疲労試験が可能となる計測・制御システムを新たに開発・組み合わせることにより,サブμm-数μm厚さの薄膜の静的曲げ試験や疲労試験が可能となる薄膜用機械的特性評価試験機を試作することを目的とする。本年度は超微小荷重負荷装置と超精密X-Yステージを導入することにより,任意の位置に±0.5μmの精度で微小荷重を負荷できることを確認した。さらに,表面マイクロマシーニングにより厚さ3.5μm,幅5μmのポリシリコン片持ちはりを作製し,この片持ちはりの曲げ試験が行えることを確認した。また,曲げ応力下において荷重と荷重点変位の関係より薄膜の弾性係数を求めるために,荷重点変位を校正する必要があるが,これに対してはりの固定端の変形を考慮した変形シミュレーション解析を実施した。あわせて,本微小荷重負荷機構を用いた薄膜に対するナノインデンテーションが可能であることを確認し,これより求まる弾性係数と前述の荷重点変位を校正して求めた弾性係数,および別途行った引張荷重負荷条件下で求めた弾性係数を比較・検討した。さらに,曲げ応力負荷条件下において薄膜マイクロエレメントの疲労試験が可能となるように,制御ソフトウェアの開発を行っている。

マイクロマシンやマイクロエレクトロメカニカルシステム(MEMS)の実用化は,機械としての信頼性を確保した上で初めて成り立つものである.とくに,近年では,Si単結晶ウエハなどを用いたバルクマシーニングによるマイクロ構造体にくわえ,従来は機能性材料として用いられていた厚さが数μm程度の薄膜が構造体として用いられるようになってきたが,その疲労を含む強度特性,切欠き感受性,さらには,曲げ・引張応力負荷モードの影響など,マイクロシステムを設計する上で必要不可欠な機械的特性データは皆無である.そこで,本研究では,ナノインデンテーション用に開発されている超微小荷重負荷装置に,粗動用ステージおよびピエゾステージから構成される荷重負荷位置同定機構を組み込み,曲げ疲労試験が可能となる計測・制御システムを新たに開発することにより,サブμmから数μm厚さの薄膜の静的曲げ試験や疲労試験が可能となる薄膜用機械的特性評価試験機を試作した.ここでは,荷重負荷位置同定機構の導入に加えて,ナイフエッジ型圧子を導入し,AFMにより荷重負荷位置を正確に測定することにより,表面マイクロマシーニングにより作成した厚さ3.5μm,幅5μmのポリシリコン片持ちはりに対して精度良く曲げ試験ができることを確認した.さらに,曲げ・引張応力負荷モードが薄膜の破壊特性や機械的特性に及ぼす影響を検討するため,薄膜に均一な一軸応力を負荷することのできるピエゾ駆動アクチュエータを用いた引張・疲労試験機を開発し,ポリシリコン薄膜に対して引張,疲労試験を行い,その破壊特性を評価するとともに,水中,乾燥空気中といった環境質を制御した条件下で,応力比0.1,繰返し速度10Hzでの正弦波形荷重制御下で疲労試験が可能なことを確認した.また,切欠きを導入した試験片を用いて微小切欠きが破壊特性に及ぼす影響を,有限要素解析とあわせて検討した.
軽症脳卒中患者の再発予防に向けた教育支援プログラムの開発

本研究は、軽症脳卒中患者へ再発予防の教育支援プログラムを検討することを目的とした。まず、軽症脳卒中患者を対象に混合研究法による実態調査を行い、退院後の健康管理、QOL、生活上の困難と対処について明らかにした。次に、脳卒中再発予防の介入研究に関する文献検討を行い、再発予防へ介入の課題を検討した。これらの結果から、効果的なプログラムは、入院時から再発予防の必要性に関する動機づけを行うこと、退院後も行動変容を維持できること、ピアカウンセリングやセルフモニタリングを活用し、何らかのフィードバックを行ことが必要と考えられた。今後は、これらを含めたプログラムを展開し、臨床での効果について評価していく。質問紙調査およびインタンビュー調査のデータ分析を行った。質問紙調査の結果、脳卒中の発症からの期間と健康管理行動の関連では発症から3年未満の患者は血圧測定を実施しているが、発症から7年以上を経過するとあまり実施しなくなる傾向がみられた。禁煙や飲酒のコントロールは発症期間に関わらず9割が実施していた。運動は発症からの期間に関わらず、6割程度の実施であった。発症期間とQOL(SFー8)との関連では発症後3年以内は全項目において国民標準値よりも低かった。また心の健康(MH)と発症後3年以内は国民標準値より低いが、発症後7年以上を経過すると高くなる傾向がみられた。今後は、この質問紙調査の結果をさらに解釈するために、インタビューデータも活用したデータ分析を進める予定である。2.軽症脳卒中患者の再発予防を目的として教育的支援方法を検討教育支援方法の検討のために国内外の脳卒中の再発予防や、発症後の患者教育プログラムに関する文献検討を行った。本研究の目的は、入院治療を必要とした軽症脳卒中患者が、退院後も自らの健康管理を行っていくための効果的な健康支援方法を検討することである。本研究の具体的な目的は以下の2点である。1)軽症脳卒中患者が、退院後のどのように生活を再構築しているのか実態調査を行い、教育的介入を要する要因を明らかにする。2)軽症卒中患者が、再発予防や新しい生活への適応を促進するための看護介入を検討すること。平成24年度は、研究プロセスの第一段階として実態調査を行った。実態調査は研究代表者の所属先および研究対象施設での倫理審査の承認を得たあと、退院後の軽症脳卒中患者を対象として調査を行った。調査方法は混合研究法デザインを用い、自宅退院した軽症脳卒中患者の外来受診時に質問紙調査およびインタビュー調査を行った。質問紙調査の内容は退院後の日常生活動作、QOL、健康管理行動、入院時の健康教育などについて調査した。インタビュー調査は入院時および外来通院時の健康教育に関する半構成的面接を行った。調査は52名の患者の承諾を得られた。対象者の平均年齢は72.3歳、男性32名、女性20名であった。疾患名は脳梗塞が39名、脳出血が11名、その他が2名であった。脳卒中の再発を経験していた患者は3名であった。現在、質問紙調査のデータ分析、およびインタビュー調査のデータ分析を進めている。本調査結果および先行研究をもとに、軽症脳卒中患者の再発予防を目的として教育的支援方法を検討する予定である。前年度の質問紙調査の分析に引き続き、インタビューデータの分析を行った。分析の結果、軽症脳卒中発症後には生活上の困難を感じている患者と感じていない患者が存在した。生活上の困難の内容は日常生活動作の困難と精神的苦痛に分類された。日常生活動作の困難は移動やコミュニケーション、知覚の鈍さ、複数課題の遂行、記憶障害などが含まれた。精神的苦痛は自信がなくなる、再発への不安、健康な自分とのギャップ、家族への遠慮、加齢の影響などが含まれた。これらの困難に対して手段的対処と情動的対処を行い、困難を解決しようと努力していた。手段的対処としては役割を減らす、行動範囲を変える、時間をかける、メモを取る、介護用品を利用する、再発の症状に注意する、他者の意見を取り入れるなどが語られた。情動的対処は発症までの自分とは異なっているということを自分に言いきかせるなどであった。手段的対処と情動的対処を組み合わせて困難を対処しようとしているが、対処がうまくいく場合とそうでない場合がみられた。今年度はさらに、教育支援プログラムの開発準備を行った。効果的な教育支援プログラム開発のための文献検討および関連学会での情報収集を行った。具体的には、これまでの調査結果の分析に結果に加えさらに文献収集を行い、アウトカムと効果的な介入方法の検討を行った。アウトカムに関しては主要なアウトカム・副次的アウトカムの明確化を行った。これらの分析結果と文献検討結果をもとに軽症脳卒中再発予防プログラムを検討している。軽症脳卒中患者を対象とした、脳卒中の再発予防に関する量的・質的研究データの分析結果から軽症脳卒中患者の主観的健康感は発症後低下するが、時間の経過とともに改善していることが明らかになった。また、生活上の困難を感じていない者が多かった。生活上の困難を感じている者は、移動やコミュニケーションの不自由、知覚の変化などの日常生活への影響と、自信がなくなる、家族へ遠慮する、年齢の影響を感じるなど心理面の影響を感じていた。生活上の困難を感じている場合も、感じていない場合も生活への対処行動はとられており、行動範囲を変える、役割を減らす、時間をかける、再発の症状に注意するなどの手段的対処と、発症前の自分とは異なると自分に言い聞かせるなどの情緒的対処が用いられていた。