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ハンセン病研究の新視角―〈隔離〉の知から〈つながり〉の知へ

(1)療養所および「社会」での病者の医療ケアをめぐる困難、(2)総力戦下におけるハンセン病療養所の事例研究、(3)駿河療養所の文芸誌『山椒』の総目次等の整理と内容の考察、(4)ハンセン病と日本近代文学、(5)ハンセン病関係資料の保存公開と長島愛生園歴史館の現状と課題、(6)大島青松園の歴史資料について、(7)沖縄の復帰とハンセン病者の退所・在宅治療制度。研究会は、社会学、歴史学、文学の研究者と現場の実践者との交流の場となり、その結果、参加者全員でハンセン病問題に関する複層的・複合的な視点を共有することができた。本年度の研究実績は、ハンセン病市民学会ほか複数の学会における成果報告、A療養所自治会所蔵の史資料調査の継続、ハンセン病文学読書会の実施、ハンセン病文学の書き手への聞き取り調査等から成る。5月に開催された第10回ハンセン病市民学会総会・交流集会in群馬草津にて、研究協力者のひとりが分科会「ハンセン病文学と読書会の可能性」を企画・報告し、研究分担者が司会を務めた。文学作品に描かれる細やかな情景や心理の読み解きは一面的なハンセン病問題理解を凌駕するちからを持ち、ある意味、最良の啓発のひとつであることが示された。8月にはA療養所の資料調査を行い、目録を一部作成した。この作業は、歴史学におけるアーカイブズ学の議論と相互反映的な関係にある。9月には、文学・歴史学担当の研究協力者たちが鹿児島、熊本を訪ね、文学作品の執筆者に聞き取りを行うとともに九州におけるハンセン病関連施設および療養所を巡り、理解を深めた。また、2015年1月には、日本財団の「ハンセン病に対するスティグマと差別をなくすためのグローバル・アピール」に研究代表者と研究分担者が出席し、国内外の現状を知るとともに多くの関係者と対面的なつながりを持った。夏と春の2回の研究会では、上記の成果報告に加えて、ハンセン病啓発映像の分析の報告、ハンセン病差別を乗り越えるワークキャンプの可能性を問う報告、病者のライフヒストリーについての報告、そして、社会学や隣接領域における最新の成果の吟味を行った。26年度が最終年度であるため、記入しない。社会学26年度が最終年度であるため、記入しない。当初の計画通り、A療養所における資史料収集に着手することができたこと、また、ハンセン病者の経験に関する文学および歴史学における最新の研究成果について、研究会開催をとおして研究メンバー各自が理解し、問題意識を共有することができたこと、さらに保健医療従事者としてハンセン病対策にかかわった者へのアクセスのてがかりが得られたことから判断した。研究計画では、公衆衛生看護学の分野からのハンセン病問題研究をひとつの柱に据えてきたが、調査対象とするべき「ハンセン病問題にかかわった経験をもつ保健師の把握とアプローチ」が今までのところ不成功に終わっているためである。所在を把握しても高齢化のため亡くなっていたり、話を聞けなくなったりしているからである。また、A療養所の文書資料・史料のまとめの作業が、写真が不明瞭であったことで、追加調査が必要な事態になっているため。本年度計画していた療養所勤務経験のある保健師や看護師に対するアプローチができていないこと、A療養所の資料調査が進展していないことが全体の進捗を遅らせている理由であるが、個々のメンバーの研究は進み、また、海外からもゲストを招いて研究集会を開催できたことは、それを補ってあまりあることだと思われる。この状況には、メンバー個々の勤務状況などが影響していることは確かである。
銅(II)イオン検出のためのシグナル増幅系11B NMR/MRIプローブの創製

生体内微量金属イオンは生体機能の維持に重要な役割を果たしており、疾患等によりその濃度は増減する事が知られている。中でも、銅(II)イオンは遺伝性疾患やがん、アルツハイマー病などの多くの疾患との関与が報告されている。そのため、銅(II)イオンの非侵襲的な検出法の開発は種々の生命現象の解析及び種々の疾患の診断において非常に有用である。そこで、本研究では銅(II)イオンによるカルボラン分解反応に基づき設計した銅(II)イオン検出のための11B NMR/MRI分子プローブの開発研究を行った。本研究課題では、oーカルボランが銅イオン存在下において水溶液中で分解反応を引き起こすことを利用した銅イオンの11B NMR検出プローブの開発に向けて、より迅速な検出を可能にするべく、化学的に修飾したカルボラン誘導体を合成し、その反応性の向上を目的としている。上記の目的に対する新たなアプローチの一つとして、昨年度はo-カルボラン誘導体の炭素上の置換基が銅イオンによる分解反応速度に与える影響を精査した。具体的には、o-カルボランの炭素上に導入する置換基として、電子供与基である水酸基及び銅イオンと錯体形成可能なジアミン型配位子を選択し、それらを個別に導入した化合物を設計、合成し、その分解反応性を評価した。炭素上に水酸基を導入したo-カルボランのnido体を合成し、その反応性を評価したところ、置換基のない誘導体よりも早く分解することが示唆された。これは、o-カルボランへの水酸基の導入が共鳴効果を介して、炭素原子上のπ電子密度を上昇し、銅イオンとの反応性を向上したためと考えられた。更に、炭素上にジアミン配位子を導入した誘導体の銅イオンとの反応性を評価したところ、予想通りの反応速度の向上がみられた。これは、水溶液中の銅イオンを補足することにより、分子内酸化反応が進行するためであると考えられた。今後は、これらの知見を踏まえ、より迅速な検出が可能な銅イオン検出のための11B NMRプローブを設計する。当初の研究計画にて目的としたカルボラン誘導体の構造とは少し異なるものの、炭素上に電子供与基(OH基)やジアミン型配位子を導入したカルボラン誘導体を合成に成功した。また、反応性を評価したところ、これらの化学修飾が反応速度の向上に寄与することが示唆された。このため、現在のところおおむね順調に進展していると考えられる。これまでに我々は、o-カルボランが銅イオン存在下において水溶液中で分解反応を引き起こし複数のホウ酸分子を放出することを見出している。本研究課題では、このカルボラン分解反応を利用した銅イオン検出のための11B NMR化学プローブの開発を目指した。昨年度、o-carborane骨格にトリメチルエチレンジアミン配位子を導入したプローブ分子が銅イオン存在下において、分子間反応と比較して10倍以上の速度で分解反応を引き起こすことを明らかにした。また、本プローブ分子を用いた11B NMR及びMRIによる銅イオンの検出にも成功している。本年度は、更なる反応速度の向上を目的として新規プローブ分子の合成及び反応性の評価を行った。以前の知見から、電子供与基を導入することにより、酸化還元電位が負電荷方向にシフトし、酸化反応の進行がより起こりやすくなるのではないかと予想された。そこで、電子供与基としてカルボラン炭素上にオキシエーテル結合を介してキレート部分を導入したプローブの設計及び合成を行った。また、プローブの水溶性向上のため、キレート部分にこれまでのトリメチルエチレンジアミンよりも水溶性が高いトリメチルプロパンジアミンを選択した。合成したプローブ分子の銅イオン存在下での反応性を評価するため、アゾメチンHを用いた反応追跡を行った。しかしながら、新プローブの分解反応速度は昨年度合成したプローブよりも低いことが示唆された。今後は昨年度に得られたカルボランの置換基導入の効果に関する検討結果を踏まえて、より迅速に分解されるプローブを設計、合成していく。また、合成した化合物のの細胞内の取り込み量についても評価する予定である。薬学いくつかの試薬(特にホウ素化合物)について購入先を精査したところ、海外メーカーからより安価な値段で入手できたため。持ち越した使用額で、昨年度に得られた化合物の化学・生物評価用の試薬の購入を予定している。
膵島移植における遺伝子導入による拒絶反応抵抗性移植膵島の開発

本研究は膵島移植における拒絶反応抵抗性膵島の開発を目的としている。(1)本研究ではまず、IFN-gレセプター(IFN-gR)発現を抑制した膵β細胞遺伝子導入株による、炎症性サイトカイン刺激下での移植抗原(MHC抗原)発現抑制について検討した。IFN-gR発現を抑制した膵β細胞遺伝子導入株では、炎症性サイトカイン刺激下でのMHC分子発現増強はwild typeと比較して約30%減弱したもののMHC発現を完全に抑制するまでにはいたらないことが確認された。このことは移植時の膵島細胞障害には多種類のサイトカインが働いており、1種類のサイトカインの影響を排除するだけでは不十分であることを示唆している。(2)そこで、炎症性サイトカインによる膵島細胞障害を軽減するための次の方策として、炎症性サイトカイン誘導性酸化ストレスの軽減について検討した。平成15年度までの本研究において、インスリン及び上皮増殖因子が活性酸素による膵島細胞障害を軽減することを明らかにした(業績参照)。しかし炎症性サイトカインにて誘導される細胞障害は、一酸化窒素(NO)産生を介し、48時間以降に遅発性に現れることから、今回効果が短時間であるインスリンやEGFに換えてラジカルスカベンジャーMCI-186(エダラボン)の膵島細胞保護効果について検討した。ラット膵島を用いin vitroにてIL-1bを添加し48時間培養、この系にMCI-186を加え同時にNO産生を測定した。IL-1b添加により膵島細胞障害が誘導され、MCI-186前処置にてこの細胞障害の軽減が得られた。この効果は過酸化水素添加による細胞障害においても同様に認められた。これらのことからラジカルスカベンジャー添加は活性酸素による影響のみならず炎症性サイトカインによる細胞障害も軽減することが確認され、移植前後の膵島保護に有用性が高いと考えられた。膵島移植は重症糖尿病に対する治療法として近年注目されている細胞移植療法である.この膵島移植の成否を決定する上で大きな問題は移植後の拒絶反応による膵島のダメージをいかに抑制するかということである.本研究は膵島の拒絶反応に大きく関与しているインターフェロンγ(IFN-γ)に対する膵島細胞上のレセプター発現を遺伝子導入を用いて抑制することで拒絶反応を受けにくい移植膵島の開発をすすめるものである.【方法】IFN-γRのヘテロ二量体のうちの一つであるIFN-γR1のプロモーター領域の転写因子の結合部位に相当するshort sequence DNAを複数個配列した遺伝子コンストラクトを作成し,膵ベータ細胞株であるBTCを用いて遺伝子導入を行い,トランスフェクタント細胞株を樹立した.【結果】作成したトランスフェクタントは,wild typeと同様の増殖能を有していた.このことはこの遺伝子導入により他の遺伝子転写への影響が少ないことを示唆している.また,IFN-γR発現抑制をウェスタンブロティング法にて解析し,wild typeと比較してIFN-γRの発現が抑制されていることを確認した.現在,移植拒絶反応時のIFN-γR発現増強に関するサイトカインをin vitroにて添加し,MHCクラスIおよびクラスII抗原の発現抑制について検討しているところである.また,このBTC細胞ならびにトランスフェクタントをマウス腎被膜下へ移植するin vivo実験を現在すすめている.本研究は、膵島移植時の細胞障害抑制による拒絶反応抵抗性膵島の誘導を目的としている。今回IFN-・等の炎症性サイトカイン誘導性酸化ストレスでの膵ベータ細胞障害に関して、そのメカニズムの解析及び抑制に関する研究を行った。移植膵島は,膵島周囲に浸潤する宿主側の炎症性細胞から産生されるIL-1・,IFN-・、TNF-・などの炎症性サイトカインの影響を受ける。今回膵ベータ細胞株を用いて,各種炎症性サイトカインによるベータ細胞障害について検討し、さらに抗アポトーシス効果をもつEGF(上皮増殖因子)の細胞障害抑制効果についても検討した。【方法】ラット膵ベータ細胞株RINm5Fおよびマウス膵ベータ細胞株BTCを用いin vitroにてリコンビナントヒトIL-1・、IFN-・,TNF-・を添加し,その細胞障害についてMTT法を用いて検討した。またこの系にリコンビナントヒトEGFを添加し,細胞障害抑制効果について検討した。【結果】RINm5Fの系では、IL-1・およびIFN-・の添加によって細胞障害が誘導され、特に48時間以降において顕著にみられた。この細胞障害はiNOSの阻害剤であるNG-Methyl-L-Arginineの添加によって阻害され、また培養上清中のNO(一酸化窒素)産生も細胞障害とともに上昇したことから、この細胞障害には炎症性サイトカインによるNO誘導が関与していることが示唆された。EGFの添加による細胞障害抑制は添加後24時間では認められたが、それ以降では効果は減弱した。移植後の膵島保護のためには、IFN-・等の炎症性サイトカイン、また誘導されるNOに対する対策が必要であると考えられ、現在IFN-・R発現抑制のための遺伝子導入に関する基礎的実験を進めている。

このことは移植時の膵島細胞障害には多種類のサイトカインが働いており、1種類のサイトカインの影響を排除するだけでは不十分であることを示唆している。(2)そこで、炎症性サイトカインによる膵島細胞障害を軽減するための次の方策として、炎症性サイトカイン誘導性酸化ストレスの軽減について検討した。平成15年度までの本研究において、インスリン及び上皮増殖因子が活性酸素による膵島細胞障害を軽減することを明らかにした(業績参照)。しかし炎症性サイトカインにて誘導される細胞障害は、一酸化窒素(NO)産生を介し、48時間以降に遅発性に現れることから、今回効果が短時間であるインスリンやEGFに換えてラジカルスカベンジャーMCI-186(エダラボン)の膵島細胞保護効果について検討した。ラット膵島を用いin vitroにてIL-1bを添加し48時間培養、この系にMCI-186を加え同時にNO産生を測定した。IL-1b添加により膵島細胞障害が誘導され、MCI-186前処置にてこの細胞障害の軽減が得られた。この効果は過酸化水素添加による細胞障害においても同様に認められた。これらのことからラジカルスカベンジャー添加は活性酸素による影響のみならず炎症性サイトカインによる細胞障害も軽減することが確認され、移植前後の膵島保護に有用性が高いと考えられた。
リアルタイム脳波波形処理法を利用した脳波インタフェースの基礎研究

本研究は重度肢体不自由者用のインタフェースとして脳波インタフェースが近年注目を集めている.脳波インタフェース構築のためには,リアルタイムで脳波を計測し,その脳波を適切に信号処理する必要がある.この信号処理方法においては,一般的にα波等の周波数に着目した信号処理方法が一般的であるが,本手法においては脳波波形そのものに着目した信号処理方法を提案した.その結果,眼球運動に関連する脳波波形の抽出を準オンライン処理で可能とすることができた.本研究は重度肢体不自由者用のインタフェースとして脳波インタフェースが近年注目を集めている.脳波インタフェース構築のためには,リアルタイムで脳波を計測し,その脳波を適切に信号処理する必要がある.この信号処理方法においては,一般的にα波等の周波数に着目した信号処理方法が一般的であるが,本手法においては脳波波形そのものに着目した信号処理方法を提案した.その結果,眼球運動に関連する脳波波形の抽出を準オンライン処理で可能とすることができた.今期は,記憶誘導性眼球運動の計測とそのデータを単一試行ごとに解析することを行った.主に,理化学研究所の電磁シールドがしてありノイズの少ないデータにおける解析である.シールドルーム下での計測は,眼球運動前の脳波と眼球運動の関連性を詳細に検討するためには重要なことである.この解析の結果,記憶誘導性の眼球運動と視覚誘導性の眼球運動とでは,眼球運動に特有な脳波波形に差が見られることを明らかにした.また,この差は眼球運動の意志決定機構の影響であると言うことも明らかにした.この結果について,生体医工学分野の国際会議である,World Congress on Medical Physical and Biomedical Engineering(WC2006)等にて発表を行った.上記の研究と平行して,計測した脳波の単一試行下での解析を行った.単一試行時の脳波解析には独立成分解析を使用した.この結果,単一試行時の脳波解析時でも眼球運動に関連した脳波が抽出することができることを明らかにした.このことは,本課題のリアルタイム脳波波形処理に向けた第一歩となる.この結果は,生体医工学分野の国際会議である,2006 IEEE Engineering in Medicine and Biology 28th Annual Conference等で発表を行った.本年においては,昨年度に引き続き眼球運動直前に発生する脳波の解析を行った.特に,独立成分解析を使用し,眼球運動に関連する脳波を単一試行解析によって抽出できるかを検討した.使用した独立成分解析は,リファレンス信号を使用したFastICAと一般的に使用される独立成分解析である,その結果,眼球運動に関連していると思われる独立な成分を抽出することが可能であった.また,眼球運動を行っていない際には同様の独立な成分が抽出することが可能でないために,この独立な成分を眼球運動に関連している成分だと特定した.次に,眼球運動に関連している独立な成分を抽出するにはどのようなアルゴリズムを使用することが適切であるかを考察するために,AMUSE, NG-FICA, FastICA, JADEを使用して眼球運動に関連する独立な成分の抽出を試みた.その結果,FastICAとJADEを使用した際の眼球運動に関連する独立な成分の抽出率は90%以上であった.AMUSEでは,眼球運動に関連しない独立な成分が多く抽出された.NG-FICAにおいては,抽出された眼球運動に関連する独立な成分は4種類の独立成分解析のアルゴリズムの中で最も適切なものを抽出したが,独立な成分を抽出する率が著しく悪かった.本研究においては,インタフェースへの入力信号となる眼球運動に関連する独立な成分を抽出することが一番の目的となるために,FastICAとJADEが本目的に対して適切であるということができる.また,眼球運動に関連する独立な成分を1つのみ抽出することが必要であると考えた場合,FastICAはそのような拡張をすることが可能であるが,JADEはそのような拡張をすることが難しい.よって本研究においては,FastICAが最も目的に呈していると結論づけた.本年度は,昨年からの続きとして,眼球運動に関連する脳波の抽出のための信号処理方法の検討と,その信号処理方法をどのようにオンライン処理用の信号処理手法として使用するかを検討した.昨年度の結果よりFastICAが眼球運動に関連する独立な成分を抽出するのには適切であることが明らかになっている.この信号処理をオンライン処理するために,観測信号のフレーム化を行い,その際の抽出確率を明らかにすることを試みた.今回使用したフレームサイズは, 1000[ms], 750[ms], 500[ms], 250[ms], 100[ms]である.このフレームサイズの中でもっとも眼球運動に関連する脳波を抽出するために適切なフレームサイズは, 100[ms]であった.また,このフレームの中に眼電位からのノイズの影響を受けている脳波を使用した際と眼電位からのノイズの影響がない脳波を使用した際の結果を比較した.その結果,眼電位からのノイズの影響がある脳波を使用した際には眼球運動に関連する脳波の抽出率が著しく下がることが明らかになった.そこで,独立成分解析の中でも使用者が意図した信号を抽出することのできる独立成分解析であるFastICA with Reference signalを使用して,眼球運動に関連した脳波の抽出を試みた.その結果,適切な参照信号を利用することにより眼電位の影響を受けている脳波を使用した際でも,眼球運動に関連する脳波を抽出することができた.
写実から可動へ-自在置物の歴史およびその構造の復元的研究

自在置物は、動物や昆虫など、それらが本来的に持っている体を動かせる機能までも動かせるように作った置物である。本研究は、自在置物の歴史の探求と、それがいかにして動かすことができるかを理解するための復元にある。歴史の研究については、昨年度、メトロポリタン美術館、フライングクレインアンティークス、オリエンテーションギャラリー、ボストン美術館、ヒギンス・アーマリー博物館など海外の作品を調査したが、17年度は日本国内の遺品調査に重点を置いた。石川県立美術館では蛇、佐賀県鍋島報公会では龍、清水三年坂美術館では鯉、鯱、蝉、かまきり、蝶、蜂、カミキリムシなど総計で15点調査をするとともに、写真撮影を行った。これらの調査により明珍性の甲冑師の作品については、作者によって得意とする分野があり、たとえば明珍宗長は手長海老やヤドカリ、明珍吉久は鯉を複数製作していることなどが確認できた。また京都の高瀬好山工房の歴代の作家の作品を知ることができた。復元的研究については、16年度、明治時代以来自在置物を作っている工人の家に生まれた京都在住の冨木章(工人名は宗行)氏に伊勢海老の部品の制作を依頼するとともに、その制作過程を映像記録した。17年度はその完成品の制作を依頼し、完了した。これによって伊勢海老については、その制作法が明らかとなり、今後鍛金、彫金の専門家であれば、だれでもこの伊勢海老が作れることとなり、技術の伝承が可能となった。本研究は、自在置物が、いかにして動かすことが出来るかを理解するための復元と、その歴史の探求にある。復元的研究については,本年度、海老置物について、明治時代以来この種の置物を作っている工人の家に生まれた京都在住の冨木章氏に、その1匹分の部品の制作を依頼し、完成品を受け取り、東京国立博物館で保管している。これによって、伊勢海老に関しては、その制作法が明らかとなった。今後は鍛、彫金の専門家であれば、だれでも同一の伊勢海老を作ることが可能となり、技術の伝承を行うことができた。また、歴史については、京都の三年坂美術館所蔵品(鷹、鯉、蛇、伊勢海老、手長海老、蝉、クワガタ、カブト虫、蜂)、東京の蛭田氏、藤沢氏、岡田氏、渡辺氏所蔵の伊勢海老、手長海老などを調査した。また米国のニューヨークでは、メトロポリタン美術館、フライングクレインアンティーク、オリエンテーションギャラリーの所蔵する、龍、伊勢海老、手長海老、鯉、鵜、カマキリ、蝉、トンボなどを調査した。またボストンでは、ボストン美術館で龍、伊勢海老、ボストン郊外のヒギンス・アーマリー博物館では、龍、蛇、ヤドカリ、バッタはじめ、総数で30点の自在置物を調査した。これらの調査では、ボストン美術館の龍は210センチもあるこの種の置物では最大なもので、これが明治時代の制作であることがわかった。このほかにも明治時代の作者として宗一、豊洗堂いった今までに見たことがなかった工人の作品も知ることが出来た。江戸時代には明珍派の甲冑師がこの置物を多く作っていたが、ヤドカリ、鵜などこれまでに知られていなかった作品も発見することが出来た。
関西圏における「ネオ方言」談話の収集

近年、日本の各地域で、若年層において、従来の伝統的方言とは異々った新しいローカルスピーチスタイルが発生しつつある。本研究においては、特にそれが顕著に認められる関西圏を中心とする西日本域を対象に、その実態を明らかにすることをめざした。本年度(最終年度)は、これまで関西圏を中心とする西日本域において大量に収録した、若年層同士の自然談話データの文字化作業を継続し、その結果の一部をまとめてデータ集を作成した。書名は、次の通りである。『関西・若年層における談話データ集』(150ページ)なお、これまで収集したデータは、すべて録音テープに収録している。それぞれにつき、約30分の談話データである。本年度はさらに、西日本の重点地域において補充データを収集するとともに、この方面での調査・研究の中核として活動している国立国語研究所・情報資料研究部の研究官と相互に情報を交換した。今後ともデータの文字化作業を継続するとともに、並行して、データを語彙、語法、アクセントなどの面から詳細に分析し、老年層での伝統的方言とも対照しつつ、新しいローカルスピーチスタイルの実体を解明していきたいと考えている。現在、日本の各地で、若年層において、従来の伝統的方言とは異なる新しいローカルスピーチスタイルが発生しつつある。本研究は、特にそれが顕著に認められる関西圏に焦点を当てて、その実態を明らかにすることをめざすものである。本年度は、関西生え抜きおよび関西在住の若年層同士、100組を対象に、自然談話データを収集した。データは、すべて録音テープに記録している。本年度はそのうちの40組について、主要部分を10分程度忠実に文字化し、文字化資料を作成し、若干の分析を試みた。また、この方面の調査・研究を中心に展開している国立国語研究所・情報資料研究部の研究者と相互に情報を交換した。この研究は、来年度も継続の予定なので、さらに談話データを大量に収集するとともに、並行して文字化を進め、語彙、語法、アクセントなどの面から詳細な分析を施し、若年層のスピーチスタイルの実態を解明したいと考えている。
近代日本による沖縄と台湾の「旧慣」調査と統治政策の形成―田代安定資料を中心に

本研究は、沖縄と台湾において「旧慣」調査を行った田代安定が遺した一次史料に基づいて、両地域の「旧慣」調査の類似点と相違点を考察して特質を明らかにし、「旧慣」調査がいかに沖縄と台湾の統治政策の形成に繋がっていたのかを解明することを目的としている。本研究では、台湾大学所蔵「田代文庫」所収「沖縄関係資料」の全文翻刻を進展させ、特に、国内外に分散所蔵される八重山開拓「植民」論に関する田代の建議案を比較して各種建議書の最終版を確定した。本研究の意義は、沖縄と台湾の田代の「旧慣」調査を比較研究することによって、沖縄の「旧慣」調査が日本の植民地統治政策の形成の原型となったという仮説的結論を得たことにある。初年度にあたる今年度は、台湾大学図書館特蔵室所蔵「田代安定関係資料」(=「田代文庫」)に収録される沖縄関係資料の筆写による収集と翻刻を行った。特に、「手稿類」のうち、比較的保存状態のよい史料から優先的に筆写して翻刻した。国内外各地に分散所蔵される田代関係資料の調査および収集も積極的に行った。当初計画時には想定していなかったが、田代の調査地であった沖縄・八重山に、田代の関係資料が個人から寄贈されたため、急遽、調査を追加した。さらに、若手研究Bの研究活動時に、申請者が見出した田代関係の新史料(鹿児島大学所蔵)についても継続調査を行った。これらの田代関係資料の収集および翻刻は、電子データ化して目録と関連づけておいた。今年度の研究内容のうち、田代の沖縄・八重山諸島に関する「旧慣」調査と台湾・東南地域の「原住民」に関する「旧慣」調査の比較については、国際フォーラム「第七屆台日原住民族研究論壇」(台湾・国立政治大学原住民族研究センター主催)において、(台風による遅延のため、代読にて)研究発表を行い、報告内容は、同国際フォーラムの論文集に掲載された。今年度は、前年度までの台湾大学図書館特蔵室所蔵「田代安定関係資料」(=「田代文庫」)に収録される沖縄関係資料の調査・収集によって得られた資料の翻刻作業を重点的に行った。また、国内各地に分散所蔵される田代安定関係資料について、青森調査や沖縄・八重山における継続調査等によって新たに得られた関係資料を目録に追加して、電子データと関連づける作業を行った。本研究期間の中間にあたる今年度は、田代安定に関する研究報告を、国内では、「日本台湾学会第17回学術大会」(於東北大学)にて行い、海外では、「第8回台日原住民族研究フォーラム・太魯閣族抗日戦争史国際シンポジウム」(於台湾・花蓮縣秀林郷)にて行った。後者の報告内容は同国際フォーラム・国際シンポジウム論文集に掲載された。また、田代にも関連する研究として、『平和と安全保障を考える事典』(広島市立大学平和研究所)の台湾における日本植民地統治期に関する項目執筆を担当し、『史學雑誌』(史学会)の「2014年度回顧と展望」(日本史近現代史分野)の「教育・移民・植民地」の項目執筆を担当した。さらに、「「近代東亞的教育與社會」国際シンポジウム」(於台湾・國立臺灣師範大學)にて報告を行い、報告内容は同国際シンポジウム論文集に掲載された。当初計画では今年度中にロシア科学アカデミーコマロフ植物学研究所の調査を行う予定であったが、ウクライナ情勢による影響を勘案して見送ることにした。しかし、すでに調査・収集していた「田代文庫」(台湾大学図書館蔵)所収の「沖縄関係資料」についての翻刻作業および国内に分散所蔵される田代安定関係資料の目録作成については比較的順調に進んでいる。最終年度である今年度は、台湾大学図書館所蔵「田代文庫」所収の「沖縄関係資料」の翻刻を可能な限り進展させるための補充調査を行った。国内では、国立公文書館所蔵の公文書や国立国会図書館憲政資料室所蔵の個人資料に収録される田代関係資料の収集と翻刻の補完作業を行った。国内外の補充調査においても、田代や沖縄と台湾の「旧慣」調査に関する新史料を見出した。これらの新史料は、目録に追加して電子データと関連づけ、将来的な総合目録の完成に備えた。現時点における本研究の到達点として、田代安定による沖縄と台湾における「旧慣」調査と統治政策の形成の比較に関する研究報告を国際シンポジウム「第九屆臺灣總督府學術研討會」(於台湾・國史館臺灣文獻館)にて行い、報告内容は同国際シンポジウム論文集に掲載が決定している。本研究の研究成果としては、まず、国内外に分散所蔵される田代関係資料の調査により、複数の新史料を見出したことである。国際情勢の影響により、本研究期間中には実施できなかったロシア科学アカデミーコマロフ植物学研究所の調査については今後に期し、将来的に田代関係資料の総合目録の完成を目指したい。次に、「田代文庫」所収の「沖縄関係資料」のうち、比較的保存状態の良好な「旧慣」調査資料の翻刻が格段に進展したことである。いうまでもなく、これらの「沖縄関係資料」は沖縄には現存せず、沖縄にとっては貴重な一次史料である。翻刻の進展により、沖縄・八重山諸島の「旧慣」調査の実態が明らかになるのみならず、明治政府による沖縄への「旧慣温存」政策が「温存」された理由が明らかになる可能性につながる。さらに、田代を通して、日本による沖縄と台湾における「旧慣」調査と統治政策の形成の連関を部分的に明らかにすることができたことである。

今後も「沖縄関係資料」の翻刻を継続して全文翻刻を完成させ、さらなる研究の進展をはかりたい。本研究は、沖縄と台湾において「旧慣」調査を行った田代安定が遺した一次史料に基づいて、両地域の「旧慣」調査の類似点と相違点を考察して特質を明らかにし、「旧慣」調査がいかに沖縄と台湾の統治政策の形成に繋がっていたのかを解明することを目的としている。本研究では、台湾大学所蔵「田代文庫」所収「沖縄関係資料」の全文翻刻を進展させ、特に、国内外に分散所蔵される八重山開拓「植民」論に関する田代の建議案を比較して各種建議書の最終版を確定した。本研究の意義は、沖縄と台湾の田代の「旧慣」調査を比較研究することによって、沖縄の「旧慣」調査が日本の植民地統治政策の形成の原型となったという仮説的結論を得たことにある。本研究の目的は、大まかに三つに分けられる。第一は、沖縄と台湾において「旧慣」調査を行った官僚である田代安定が遺した資料について、国内外に分散所蔵されているものをすべて網羅した資料目録を作成し、データーベースを構築することである。第二は、台湾大学図書館特蔵室所蔵「田代文庫」中の「沖縄関係資料」を全文翻刻し、そこに含まれる八重山諸島開拓「植民」論に関する田代の建議案数種を比較分析することによって、各種建議書の最終版を確定することである。第三は、国内外に現存する田代関係資料に基づいて、沖縄と台湾における「旧慣」調査と日本の統治政策の形成との関係を比較(たとえば、田代の八重山に関する「旧慣」調査の方法と「植民」論とが台湾統治へと連続している点の解明など)することである。この三つの目的のうち、第一は全体の三分の一程度進んでおり、第二は、草書体で書かれた史料の翻刻作業は予定より時間を要しており、第三は比較研究の内容が査読を通過して全国学会での研究報告が確定している。全体的に順調なスタートができている。次年度は、最終年度のため、台湾大学図書館所蔵「田代文庫」所収の「沖縄関係資料」の翻刻を可能な限り進展させること、国内外の田代関係資料の収集、目録作成および電子データとの関連づけを完成させることを目指す。これまでの調査で構築したデータに基づく研究成果の公表として、海外における研究報告(2016年8月開催予定の第九屆臺灣總督府档案學術研討會)を予定している。例年通り、成果が得られた内容については、国内外の学会や国際シンポジウム等にて積極的に公開し、関係者との学術交流をフィードバックして調査研究へ反映させ、最終的に研究成果を研究論文としてまとめる。日本近現代史次年度以降も、台湾大学図書館特蔵室所蔵「田代文庫」中の「沖縄関係資料」の全文翻刻と、総合目録作成のための国内外史料調査を継続して、これらの目録と電子データの関連づけを行う予定である。また、次年度は、研究の中間報告として、国内の全国学会での研究報告を予定している。国内の台湾研究者を中心とする全国学会で研究報告を行うことにより、本研究の方向性や分析方法などに関する批評や助言を聴取して、以降の順調な研究遂行をはかりたい。当初予定していたロシア調査をウクライナ情勢による影響を勘案して見送ったため、執行を計画していた旅費を、翻刻作業の効率化に必要な機器の購入に振り替えて、翻刻作業を優先的に行うことにより、研究遂行への影響を最小限にとどめるよう努めた。最終的に4,221円の残額が生じたが、不要不急の執行を避けるため、次年度に使用することとした。計画的に執行してきたが、最終的に4,711円の残額が生じた。
前庭特殊細胞における複合糖質の生成とその意義

日常臨床に於いてめまいはよく見られる疾患であり、その病因については種々の原因が考えられている。しかし内耳感覚受容器に生じる障害の初期的な変化がいかにして起こるかについては、今なお不明な点が少なくない。前庭器においては、平衡斑支持細胞の細胞の中には耳石生成に関与する物質がみられる。また、一方、半規管膨大部稜支持細胞ではクプラの栄養に関係する複合糖質を生成している。本研究は耳毒性薬物を投与した際の複合糖質の変化と感覚毛変化との関係、また支持細胞、暗細胞における複合糖質の生成とその機能を解明する事により、初期の前庭器障害のメカニズムを解明する事を目的とする。本研究を行うに当たり実験動物にはモルモットを使用し、試料作製にあたっては内耳の複合糖質を染め出す為にルテニウム赤染色を初めとする特殊染色を応用し、更に内耳の複合糖質の三次元立体構造の観察の為に新開発の超高分解能走査電子顕微鏡を利用した。また複合糖質に含まれる各種糖鎖の同定の為にはレクチンによる免疫染色を利用し光顕並びに電顕レベルでの観察を施行した。本研究の結果、前庭感覚上皮を構成する感覚細胞、支持細胞、暗細胞などの細胞表面はすべて複合糖質から構成されるglycocalyxで覆われており、その機能は感覚細胞では感覚毛の形態の保持、感覚細胞興奮機構への関与、支持細胞では細胞の保護、暗細胞では耳石の吸収や内リンパ液のイオン環境の調節等に働いていることが明らかになった。さらにglycocalyx、耳石膜に含まれる糖の種類をレクチンを用いることで明らかにすることができた。これらの実験動物で得られた結果はすべて、ヒトの前庭器でも同様に観察され、このような複合糖質の内耳での局在、あるいはその機能は哺乳動物に共通なものであることが判明した。食細胞は炎症巣に遊走し、貧食作用を営み、活性酸素を産生し、ライソゾーム酵素を放出するなど生体防御に重要な役割を果している。食細胞がこれらの機能を発揮する際に細胞内Ca^<2+>濃度の上昇が必須であると考えられている。しかしながら食細胞におけるCa^<2+>動態は不明であった本研究では主にモルモットマクロファージ(Mφ)を用いて以下の研究を推進した。1.Mφが含有する遊離可能なCa^<2+>量を求め、そしてサポニン漏出細胞におけるCa^<2+>貯蔵部位の定量を行なった。これらの定量的研究から通常Mφ小胞体内にCa^<2+>が局在していることが明らかとなった。合成走化性ペプチド(fMLP)でMφを刺激することにより小胞体から動員されるCa^<2+>量は、イノシトール1,4,5ー三燐酸(IP_3)により漏出細胞小胞体から遊離されるCa^<2+>量とほぼ同じでIP_3の生理的意義が認識された。2.fMLP刺激によるIP_3生成の時間経過を検討し、かつIP_3生成に百日咳毒素感受性GTP結合性蛋白が関与していることが明らかになった。3.IP_3による小胞体Ca^<2+>放出の機構解明のため小胞体上のIP_3受容体の同定を試みた。IP_3のアジド誘導体を合成し、紫外線照射により分子量50K、27K、18KDaの三種の蛋白がIP_3結合蛋白として強く標識された。4、1P_3は特異的キナーゼの作用でイノシトール1,3,4,5ー四燐酸に変換される。この特異的キナーゼの精製を試みた。酵素活性の大部分は可溶性分画に存在し、生理的濃度範囲(10^<-7>10^<-6>M)の遊離Ca^<2+>により活性化された。ところが、クロールプロマジン等のカルモデュリン(CaM)阻害剤により抑制された。各種クロマトグラフィーによりCaMと酵素活性の分離を行なったところ、Ca^<2+>感受性を失なったが、外因性にCaMを添加すると再びCa^<2+>感受性を回復した。本年度はLKB、ヒストレンジミクロトームを備品として購入した。本機を用いてモルモット卵形嚢、半規管膨大部のJB-4包埋切片の作製、それを利用した、免疫染色による前庭複合糖質の検索が可能となった。すなわち、前庭耳石器及びクプラにはシアル酸、N-アセチルグルコサミン、マンノース、フコースが存在し、それらは前庭の支持細胞により生成されることが証明された。さらに、前庭感覚器はその表面を複合糖質であるGlycocalyxにおおわれており、それが感覚毛の運動性に関与していること、感覚毛の融合を防いでいることをルラニウム赤染色、タンニン酸染色により明らかにした。さらに、これらの複合糖質の生成機構について、タンニン酸染色を用いることにより、複合糖質が小胞体、ゴルジ装置で作られ、coated vesicleを介して細胞外に放出されることを明らかにした。これらの結果は山梨県で開催された第36回日本基礎耳科学会で発表したとともに5編の論文にまとめられた。

前庭器においては、平衡斑支持細胞の細胞の中には耳石生成に関与する物質がみられる。また、一方、半規管膨大部稜支持細胞ではクプラの栄養に関係する複合糖質を生成している。本研究は耳毒性薬物を投与した際の複合糖質の変化と感覚毛変化との関係、また支持細胞、暗細胞における複合糖質の生成とその機能を解明する事により、初期の前庭器障害のメカニズムを解明する事を目的とする。本研究を行うに当たり実験動物にはモルモットを使用し、試料作製にあたっては内耳の複合糖質を染め出す為にルテニウム赤染色を初めとする特殊染色を応用し、更に内耳の複合糖質の三次元立体構造の観察の為に新開発の超高分解能走査電子顕微鏡を利用した。また複合糖質に含まれる各種糖鎖の同定の為にはレクチンによる免疫染色を利用し光顕並びに電顕レベルでの観察を施行した。本研究の結果、前庭感覚上皮を構成する感覚細胞、支持細胞、暗細胞などの細胞表面はすべて複合糖質から構成されるglycocalyxで覆われており、その機能は感覚細胞では感覚毛の形態の保持、感覚細胞興奮機構への関与、支持細胞では細胞の保護、暗細胞では耳石の吸収や内リンパ液のイオン環境の調節等に働いていることが明らかになった。さらにglycocalyx、耳石膜に含まれる糖の種類をレクチンを用いることで明らかにすることができた。これらの実験動物で得られた結果はすべて、ヒトの前庭器でも同様に観察され、このような複合糖質の内耳での局在、あるいはその機能は哺乳動物に共通なものであることが判明した。本年度は昭和63年度に引き続き前庭器における複合糖質の分布とその意義について検討した。この結果、これまでの実験動物において得られた所見に加えて、ヒト前庭器にもモルモットと同様のGlycocalyxによる感覚毛連結機構が存在し、感覚毛の保持、あるいは感覚細胞の興奮機構に関与していることが明らかとなった。また、前庭特殊細胞における複合糖質の意義について、今年度は前庭暗細胞について検討した結果、前庭暗細胞の複合糖質は、耳石の吸収、水分輸送、内リンパ中のカルシウムの調節に強く関係していることが明らかとなった。これら正常動物の結果に加えて、今年度は病態との関連において、騒音負荷により、内耳の複合糖質に変化が生じ蝸牛有毛細胞の障害を中心とする変化が起きることを明らかにし、騒音性難聴の原因を解明するとともにアミノ配糖体による前庭器障害のメカニズムをこれまでにない詳細さをもって検討した。これに引き続き、各種薬剤による耳毒性を軽減させることを目的として、バイオマイシン誘導体を用い、その化学構造と耳毒性の強さとの関連を明らかにし、加えて薬剤投与法(1日2回投与と1日1回投与)により耳毒性の軽減が計れることを確認した。これらの結果は、第37回日本基礎耳科学会、第21回日本臨床電子顕微鏡学会、第48回日本平衡神経科学会、第90回日本耳鼻咽喉科学会総会で発表したとともに6編の論文にまとめられた。本年度は昭和63年度、平成元年度に引き続いて前庭特殊細胞に於ける複合糖質の生成とその意義を明らかにする為に最初に、内耳に存在する複合糖質の種類とその分布を4種類のlectinーgold(WGA,Con A,APA,LFA)を使用し電顕レベルでの観察を行った。その結果、WGAは感覚細胞のグライコカリックスおよび感覚毛連結繊維を強く標識し、Con A,APA,LFAは感覚毛連結繊維をより特異的に標識することが明らかとなった。さらに、耳石膜、クプラは4種類のレクチンのいずれでも強く標識された。
3次元断層ナノ空間分光測定システムの開発と応用

分析対象空間の高精度位置再現性をピエゾ素子のクローズドループ制御によって実現する分光分析顕微鏡を開発した。その装置性能をラマン散乱試料としてシリコン製のフォトニッククリスタル、蛍光試料としてポリマー微粒子を用いて評価した。1μmの段差構造を有するシリコンからのラマン散乱を計測することにより、XY方向の空間分解能として200nm、Z方向の空間分解能として700nmという結果を得た。XY方向の空間分解能は光学的理論値に匹敵しており、最大のパフォーマンスを得ることに成功した。サブマイクロメートルオーダーの微細構造を持つフォトニッククリスタルの顕微ラマン測定の結果、試料の顕微ラマン画像およびスペクトルを高感度に測定できた。また、平坦部分と細孔構造が接する境界領域領域では、細孔構造のラマン強度が平坦部分より増大する現象を見いだした。これは、フォトニッククリスタルの細孔を形成する微細なSi領域に表面プラズモンが閉じ込められるため、ラマン強度が増大するのではないかと考えている。ラマン散乱という光学的な物理現象が空間の大きさに依存することは極めて興味深く、新しい分光法や分析手段への応用性を秘めていると考えられる。共焦点レーザー顕微光学系と超高精度な可動試料ステージを組み合わせ,300ナノメートルの空間分解能を有する三次元分光顕微鏡を試作した。装置は,1)光照射部,2)顕微鏡部,3)分光検出部で構成した。光照射部では,青色固体レーザーを光源として用い,共焦点用ピンホールに集光後,顕微鏡内に平行光で導入した。顕微鏡部では,試料表面上にレーザー光を集光し,位置センサーを有した高精度可動ステージで試料を数ナノメートルの精度でXY走査可能とした。また,対物レンズも位置センサーを有したスキャナーによってz軸方向の走査を可能とした。分光検出部ではノッチフィルターを2枚設置し,レーザー散乱光をほぼ完全に遮蔽し,試料から発生するラマン散乱光および蛍光のみを分光器内に導入した。検出器としてはイメージインテンシファイアー付きのCCDカメラを用いることによって,任意の波長だけを選択し,その強度情報をもとに顕微画像が得られるようにした。直径100nmの蛍光微粒子に関して,半値幅330nmのスポット像が得られ,ほぼ理想的な光学条件が達成できたことを確認した。
ランニングにおけるピッチとストライドの制限因子に関する生理バイオメカニクス的研究

ランニングスピードの制限因子は、ピッチとストライド長のどちらに起因するものなのか、またそれは生理学的にどのようなメカニズムが関与しているのかについて,以下のような実験計画により突明することを目的とした。対象は、陸上・長距離選手8名(男子大学陸上部学生):身長171.5±6.1cm,体重57.27±4.0kg、VO2max65.78±3.28ml/kg/分(59.14-67.94)(平均値±sd)とした。方法は、トレッドミル上を4速度(低速度高速度)各5分間走行させた。その後、角度を5度に固定し、速度210m/分から1分毎に速度を10m/分ずつ増加し、exhautionまで走行させた。速度変化に伴って、ランニング中のピッチ、換気量、酸素摂取量、二酸化炭素排泄量および心拍数、近赤外線分光装置を用いて脚部(大腿)の血流量および酸素濃度、ランニング動作(ビデオカメラで撮影)ランニング直後の血中乳酸濃度、がどのように変化するかを観察した。その結果、以下のような知見が得られた。1.ランニング中のピッチと血中乳酸濃度との関係は、対応関係にある者が多くみられた。2.ピッチの増加が大きくなる負荷強度を超えると、腓腹筋(外側頭)の酸素濃度が低下が顕著にみられた。その時の筋血液量は低下を示す者と示さない者の両方みられた。以上の結果より、ランニングスピードはピッチがその限界因子とされ、これは筋内の酸素濃度の低下により引き起こされることが示唆された。
コンドロイチン硫酸生合成に関わるN-アセチルガラクトサミン転移酵素の精製と性質

コンドロイチン硫酸の骨格の主要部分は、GalNAcとGcAが交互に繰り返した高分子の重合体であり、その合成のスピードは極めて速いため、各糖を転移する酵素がゴルジ膜上で複合体を形成していると考えられていた。しかし、最近、ヘパリン/ヘパラン硫酸やヒアルロン酸などの他のグリコサミノグリカンの生合成に関与する複数の酵素活性が、単一のタンパク質によって触媒される例がいくつか示されるようになった。そこで本研究では、コンドロイチン硫酸の生合成にも同様のメカニズムが存在するのではないかという仮説をたて、その生合成に関与するGalNAc転移酵素を精製し、その酵素がGlcA転移酵素活性を併せ持つかどうかを明らかにしようとした。我々は以前、血清よりCSの二糖繰り返し領域の重合に関与するGalNAc転移酵素II、GlcA転移酵素IIを見出し、活性検出法を確立している.そこでその活性検出法に従い、ウシ胎児血清を酵素源とし、K4大腸菌夾膜多糖よりオリゴ糖{GlcA-(GalNAc-GlcA)_n-anTal(n≧3)}、{GalNAc-GlcA)_n-anTal(n≧3)}を調製し、それぞれGalNAc転移酵素及びGlcA転移酵素の基質に用いた.両転移酵素とも1.6Lのウシ胎児血清からRedAアガロース、フェニル-セフ7ロース、S-セファロースにより700倍以上精製されたが、両転移酵素活性は分離されなかった。ゲル濾過クロマトグラフィーでも分離されず、両酵素は共に分子量160kDaに溶出した。このように、両酵素活性は高度に精製されたにもがかわらず、分離されなかったことから、両酵素活性は同一のタンパク質上に存在することが示唆された。コンドロイチン硫酸鎖の長さが、その二糖繰り返し領域の多様な硫酸化による修飾構造により制御されているのではないかという仮説をたて、様々に硫酸化された糖一タンパク質結合領域の化学合成品や、天然のコンドロイチンやコンドロイチン硫酸より調製したオリゴ糖を糖受容体として、ウシ胎児血清中に存在するコンドロイチン硫酸生合成に関与するN-アセチルガラクトサミン(GalNAc)転移酵素活性とグルクロン酸(GlcA)転移酵素活性を測定した。その結果、これら両酵素によるコンドロイチン硫酸生合成は、糖受容体の硫酸化の違いにより大きく影響を受けることが判明した。酵素源には、ウシ胎児血清をヘパリンセファロースにより部分精製した画分を用いた。この画分中には、コンドロイチンにβ位でGalNAcとGlcAの両方を転移させる酵素活性が含まれていたが、最近我々が見出した結合領域四糖にα位でGalNAcを転移させるα-GalNAc転移酵素は含まれなかった。コンドロイチン硫酸の二糖繰り返し領域由来の四糖を用いてGalNAc転移酵素の硫酸基の影響を調べた結果、非還元末端側のGalNAcの四位、あるいは六位が硫酸化されたものにはGalNAcは転移されたが、四位と六位が共に硫酸化されると全くGalNAcは転移されなかった。また、還元末端側のGalNAcの四位の硫酸化によって、GalNAcの転移は大きく促進された。同様に、コンドロイチン硫酸の二糖繰り返し領域由来の五糖を用いてGlcA転移酵素の硫酸基の影響を調べた結果、非還元末端側のGalNAcの四位、あるいは六位が硫酸化されていてもGlcAは転移され、特に六位が硫酸化されているとGlcAの転移は大きく促進された。一方、結合領域四糖及び結合領域三糖を糖受容体として、それぞれGalNAc転移酵素及びGlcA転移酵素活性を測定したが、全く活性は検出されず、それぞれ複数の種類が存在することが示唆された。現在、これらGalNAc転移酵素とGlcA転移酵素を精製している。

このように、両酵素活性は高度に精製されたにもがかわらず、分離されなかったことから、両酵素活性は同一のタンパク質上に存在することが示唆された。
ヒトエラステンcDNAのクローニングと先天性エラスチン代謝異常症の解明への応用

本研究の目的のためにまず鶏胚動脈よりエラスチンcDNAを単離することを試みた。その結果、約1.5kbのエラスチンcDNAを単離でき、ニワトリエラスチン遺伝子の構造解析を行った。このcDNAを用いて、(1)皮膚、動脈の鶏胚発生過程におけるエラスチン遺伝子の発現について検討を行い、各々の臓器においてエラスチン遺伝子の発現は独立に調節されていることを示した。(2)動脈平滑筋細胞を用いてエラスチン合成の制御機構について研究を行った。epidumal griwth factor(EGF)は培養上清に添加するとエラスチン合成を著明に減少させ、これはエラスチンmRNAの減少と平行していた。このことはEGFはエラスチン合成にtrancnptionalに制御している可能性が指摘された。ついでニワトリエラスチンcDNAを用いてヒトエラスチンcDNAを単離する予定であったが米国においてすでに単離されていたのでこれを供与してもらい、ヒトのエラスチン代謝異常症に応用した。Anetodermaはエラスチン代謝異常が病因と考えられている疾患の一つで、組織学上、病変皮膚の弾力線維の欠損を認める。生化学的に皮膚よりエラスチンを抽出すると正常者に比してエラスチン含量が減少していた。ついで、皮膚線維芽細胞を培養しエラスチンmRNAを検討したところ正常者と差をみとめなかった。この結果は本疾患の異常はエラスチンの転写レベルにはなく、おそらく翻訳後のレベルに存在することが示唆された。1.先天性エラスチン代謝異常症の代表的な疾患である弾力線線性仮性黄色腫患者4例の皮膚を生検し,健常者皮膚3例とともに線維芽細胞を培養した.培養皮膚より全RNAを塩酸グアニジン法より抽出しオリゴdTセルロースでpolyARNAを精製した.polyARNA10μgをグリオキサールで変性後アガロースゲル電気泳動で分画しニトロセハロース膜にブロットした.ヒトエラスチンcDNA(PstIフラグメント)を^<32>Pで標識後ハイブリダイゼイションを行った.その結果患者,正常者ともいづれF24SのサイズのRNAが検出され本症では少なくともエラスチンの遺伝子レベルに異常が認められないことが示唆された.2.ニワトリエラスチンcDNAを用いて鶏胚動脈細胞によるエラスチン合成の制御機構の検討を行った.受精後12日目の鶏胚よりコラゲナーゼ/エラスターゼ処理後動脈細胞を得,細胞培養を行った. ^3Hバリンでエラスチンを標識し合成活性をエラスチン合成/全タンパク合成の比で検討した.その結果動脈細胞は継代をかさねるとエラスチン合成が低下し,少なくとも継代2代目までの細胞を使用しないと同定できないことが判明した.Aretoderma(Schwenninger-Buzzi)はエラスチンの代謝異常が病因と考えられている疾患であり、病変部皮膚を病理組織学的に検討すると弾力線維の欠損が認められる。病変部皮膚および正常者皮膚よりエラスチンを定量する目的で、hot-アルカリ法を用いて粗エラスチン画分を定量した。その結果、病変部皮膚では正常者皮膚に比して約1/2にエラスチン含量が低下していた。さらにエラスチンmRNAを測定する目的で病変部皮膚および正常者皮膚の線維芽細胞を培養し、6M塩酸グアニジンを用いてRNAを抽出した。アガロースゲル電気泳動後、DBMpaperにblotしヒトエラスチンcDNA(3'側の約1.5Kb)を^<32>Pで標識後ハイブリダイゼーションを行った。その結果病変部皮膚と正常者皮膚線維芽細胞のエラスチンmRNA量に差が認められなかった。以上の結果は本症のエラスチン代謝の異常なエラスチン遺伝子の転写のレベルには異常がなく、翻訳後の段階に異常があることが示唆された。
ガス蛍光比例計数管による新型光検出器の基礎開発

本申請では、古くて新しい放射線検出器の一つであるガス検出器と紫外線から可視光領域に感度を持つ光電子変換膜(光電面)を複合化させた『ガス光検出器』を開発し、その光電子増殖機構として、検出器の長期安定性の上で問題となる陽イオンを生成しない、ガス蛍光比例計数管の原理による信号増殖法を新たに導入し、大きな有効面積と高磁場環境下においても高い感度特性を持つ「新型光検出器」の開発研究に挑戦する。本研究で、微細加工技術や半導体製造技術を用いて製作した微小な電極から構成されるこのマイクロパターンガス検出器(MPGD)を光信号増幅にしようする。このMPGDは優れた位置分解能と高い時間分解能、そして高計数率での動作が特徴である。本年度は有限要素法電場解析シミュレーション(Maxwell-3D)とガス検出器のシミュレーションプログラム(Garfield)を用いてMPGDの設計と充填ガスの最適化を行い、アルカリ金属で形成される光電面と化学的相性のよい素材を用いた細孔型MPGDを作成した。続いてネオンガスおよびネオン混合ガス1気圧を封入し、X線ビームを用いてガス蛍光比例計数管としての基礎特性試験を行い、ガス増幅特性を調べた。
東アジア諸国における少子化の国際比較研究―理論的把握とパネルデータによる実証分析

本研究の目的は、東アジアの少子化を捉える理論枠組み・仮説をつくり、出生率が低出生力の水準を下回る国・地域を対象に、出生率を引き下げている背景要因をマイクロデータを用いて解明することである。研究の初年度に実施したことがらは次のとおりである。第一に、先行研究のサーベイを行い、その結果、アジア諸国にここまでの少子化は、若年雇用、高学歴化と教育費負担、仕事と子育ての両立、家族形成よりもキャリアや経済的豊かさを志向する価値観などの複合的な要因が重なって生じている可能性が見いだされた。第二に、日本において公開されているパネルデータを入手して、そのデータを本分析が可能であるように加工する作業を行った。また、韓国と台湾についても分析可能なパネルデータを入手して、データを加工する作業をすすめた。第三に、韓国の研究協力者を招いて、公開セミナー「東アジア諸国における少子化の国際比較研究」を実施した。韓国の少子化の背景にある、教育や若年雇用の問題について議論を行った。研究初年度に予定していた分析データの作成は順調である。また、初年度にもかかわらず、国内外の学術会議等においてえられた研究成果を直ちに発表することができた。今後は、予定していたとおり、本研究で使用するためのデータセットの作成を完成させる。データが完成次第、初年度の理論枠組みと仮説をふまえて、データセットの分析を開始する。また、2年度も、国際会議や国内学会等において、えられている成果を速やかに発表を行っていく。それらの発表をふまえて、分析内容を修正して、論文発表につなげる。