hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
抗酸化ビタミンによるサルコペニア・フレイルティ予防効果の検証

実験1.ビタミンE摂取が骨代謝に及ぼす影響ラットにビタミンEを摂取させたときの骨代謝を明らかにする目的で実験を行った。Wistar系雄性ラットにビタミンE無添加飼料、基本飼料、またはビタミンEを基本飼料の10倍量添加した飼料を与えて17週間飼育した。本年度は動物実験で得られた骨サンプルの解析を進めたところ、ビタミンEは成長期ラットの骨構造および骨の遺伝子に影響を及ぼさないことが示唆された。実験2.ビタミンEとCの摂取が骨代謝に及ぼす影響ラットにビタミンEとCを摂取させたときの骨代謝への影響を明らかにする目的で実験を行った。ビタミンEを合成できないODS od/odラット(雄性)をビタミンEとCの異なる含量の飼料で2ヶ月間飼育した。現在飼育は終了しており、臓器中のビタミンEおよびC濃度、血中骨代謝マーカー、骨密度、骨代謝・筋萎縮関連遺伝子発現量の測定を進めているところである。実験3.ビタミンE摂取が老齢ラットの骨代謝・筋重量に及ぼす影響加齢による筋萎縮や骨密度減少に対してビタミンE摂取が及ぼす影響を、骨密度の低下が始まる老齢ラットを用いて検討した。本実験では6ヶ月齢のWistar系雄性ラットをビタミンE添加量が異なる飼料を与えてさらに9ヶ月間飼育した(15ヶ月齢)。15ヶ月齢のラットのヒラメ筋と足底筋の体重あたりの重量は6ヶ月齢と同程度であったが、15ヶ月齢の体重あたりの腓腹筋量は6ヶ月齢に比べて低下していた。しかし、15ヶ月齢の腓腹筋重量は、9ヶ月間のビタミンE摂取量の違いによる影響を全く受けなかった。現在採取した臓器のビタミンE濃度、血中骨代謝マーカー、骨密度、骨代謝・筋萎縮関連遺伝子発現量の測定を進めている。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、抗酸化ビタミン摂取によるサルコペニア・フレイルティ予防効果を明らかにすることを目的として、平成28年度は、実験動物を用いて、抗酸化ビタミン摂取が筋萎縮および骨代謝に及ぼす影響を調べた。実験1では、抗酸化ビタミン摂取が、坐骨神経切除による筋萎縮を抑制するかどうかを検討した。また、申請時は、実験1に加えて老齢ラットを用いた実験を計画していたが、実験に用いる数の確保が困難であったため、動物実験を実施出来なかった。そこで、実験2として、抗酸化ビタミン摂取が、サルコペニア・フレイルティに関わる重要な組織の1つである骨に及ぼす影響を検討した。実験1:ラットを用いて、ビタミンE摂取が坐骨神経切除による筋萎縮を抑制するかどうかを検討した。また、本実験では、摂取するタンパク質の違いおよび抗酸化能を持つクルクミン摂取が、筋萎縮に及ぼす影響も併せて検討した。偽手術を行った群を対照群とし、坐骨神経を切除した群を実験群とした。実験群をさらに5つに分け、ビタミンE、カゼインタンパク質、ホエイタンパク質、卵白タンパク質またはクルクミンを含む飼料を与えて1週間飼育した。解剖によって筋肉(腓腹筋、足底筋、ヒラメ筋、前脛骨筋および長趾伸筋)を採取し、重量を測定した。筋重量は、対照群と比較して実験群で低下していたが、実験群間の飼料の違いによる差は見られなかった。実験2:ラットを用いて、ビタミンE摂取が骨代謝に及ぼす影響を検討した。ラットに、ビタミンE添加量の異なる飼料を与えて17週間飼育し、解剖によって大腿骨を採取した。マイクロCTを用いて測定した大腿骨の骨密度は、ビタミンE摂取量の違いによる影響を受けなかった。また、骨代謝マーカーの血中オステオカルシン濃度も変動しなかった。実験1:ビタミンE摂取が坐骨神経切除による筋萎縮に及ぼす影響を検討した。現在のところ、坐骨神経切除一週間後に採取した筋肉の重量は、ビタミンE摂取によって変動しないことを見出している。また、採取した筋肉からRNAを抽出し、cDNAの作製を行った。そして、内部標準となる18Sおよびαアクチンを測定し、その結果から、作製したcDNAがリアルタイムPCRで用いられるクオリティであることを確認している。実験2:ビタミンE摂取がサルコペニア・フレイルティに関わる重要な組織の1つである骨に及ぼす影響を検討した。現在のところ、ビタミンE摂取によって、大腿骨の骨密度および骨代謝マーカーの血中オステオカルシン濃度は変わらないことを見出している。また、動物実験によって採取した大腿骨からRNAを抽出し、cDNAの作製を行った。そして、内部標準となる18SおよびGapdhを測定し、その結果から、作製したcDNAがリアルタイムPCRで用いられるクオリティであることを確認している。

現在飼育は終了しており、臓器中のビタミンEおよびC濃度、血中骨代謝マーカー、骨密度、骨代謝・筋萎縮関連遺伝子発現量の測定を進めているところである。実験3.ビタミンE摂取が老齢ラットの骨代謝・筋重量に及ぼす影響加齢による筋萎縮や骨密度減少に対してビタミンE摂取が及ぼす影響を、骨密度の低下が始まる老齢ラットを用いて検討した。本実験では6ヶ月齢のWistar系雄性ラットをビタミンE添加量が異なる飼料を与えてさらに9ヶ月間飼育した(15ヶ月齢)。15ヶ月齢のラットのヒラメ筋と足底筋の体重あたりの重量は6ヶ月齢と同程度であったが、15ヶ月齢の体重あたりの腓腹筋量は6ヶ月齢に比べて低下していた。しかし、15ヶ月齢の腓腹筋重量は、9ヶ月間のビタミンE摂取量の違いによる影響を全く受けなかった。現在採取した臓器のビタミンE濃度、血中骨代謝マーカー、骨密度、骨代謝・筋萎縮関連遺伝子発現量の測定を進めている。今後は、平成28年度の実験1で得られた筋肉サンプルを用いて、筋タンパク質合成系、筋タンパク質分解系および抗酸化に関わる遺伝子の発現を、リアルタイムPCRによって定量する。また、実験2で得られた骨サンプルを用いて、骨形成および骨吸収に関わる遺伝子発現を、リアルタイムPCRによって解析する。さらに、実験動物を用いて、実験3および実験4を行う。実験3:老齢ラットを購入し、ビタミンE添加量の異なる飼料を与えて一定期間飼育する。飼育期間終了後、筋肉(腓腹筋、足底筋、ヒラメ筋、前脛骨筋および長趾伸筋)を採取し、重量を測定する。また、大腿骨および脛骨・腓骨を採取し、骨密度などの骨形態をマイクロCTによって測定する。骨代謝マーカーの血中オステオカルシン濃度の測定を行う。動物実験によって得られた筋肉サンプルおよび骨サンプルの遺伝子発現を、実験1・2と同様に解析する。実験4:ビタミンCを合成できないODSラットの坐骨神経を切除し、その後、ビタミンC添加量の異なる飼料を一週間与える。これらの実験により得られた結果から、抗酸化ビタミン摂取が、筋萎縮および骨代謝に及ぼす影響を明らかにし、サルコペニア・フレイルティ予防に繋がるかどうかを検討する。29年度が最終年度であるため、記入しない。
イギリス・フェミニズム運動における国際的連携構想の研究

19世紀末から20世紀前半にかけて、いわゆる第一波のフェミニズム運動の形成・発展は欧米諸国のナショナルなレベルにとどまらず、国籍・民族を超えたフェミニズムのインターナショナリズムがほぼ同時進行した。本研究の目的は、イギリスのフェミニズム、とくにサフラジズム(婦人参政権運動)とインターナショナルな運動との関係を探ること、すなわちイギリス・フェミニストたちが「国際的連携」をどのように考えていたかを探ることにあった。3年間の研究期間に、イギリス・フェミニズム側の諸々の機関誌の中に「インターナショナリズム」に関する構想を探ることと、二つの女性の主要国際団体「国際女性評議会」(ICW)と「国際婦人参政権同盟」(IWSA)の活動へのイギリス・フェミニストの関わり方を両国際団体の史料の中にさぐる調査をおこなった。イギリス国内の運動も、また国際的女性団体の運動もともに一枚岩ではなく、複雑な活動のプロセスがあり、諸々の葛藤をとおしてシスターフッドの絆を作り上げていったことを確認し得た。第一次大戦前夜のイギリスの二大婦人参政権団体(NUWSSとWSPU)のうち、組織的にICWおよびIWSAと持続的にかかわったのは、前者の穏健派であった。そのNUWSSの内部でも、フェミニズムの国際協力という構想では、時期によって微妙な変化が見られ、組織としても統一されていなかった。当該期間会長職にあったフォーセットは、同構想を諸処で説いてはいるが、現実行動としては「不熱心」に見えた。その理由は、国内の運動をまず優先させたこと、とくにWSPUとの対抗関係の激化、女性のインターナショナリズムがアメリカのサフラジストにより指導されていることを快く思わなかったこと、WSPUの過激行動を国際団体の指導部が賞賛していたこと、戦争突入後は愛国主義との葛藤などにあったことが判明した。本年度は当初の計画通りに、20世紀初頭のイギリス・フェミニストの国際協力の構想を、1904年に始まる「婦人参政権国際連盟」(IWSA)の機関誌『ジュス・サフラジャイ』の記事およびイギリスの代表的婦人参政権団体、穏健派のNUWSSの『コモン・コーズ』、過激派のWSPUの『ヴォウツ・フォア・ウィメン』、『女性の勇者』などの関連記事を最大限収集し、読破することに専念してきた。婦人参政権運動の国際化が開始されたのが、第一次大戦前夜であったから、IWSAにおける加盟各国の議論は、女権が軍国主義に対抗する母性主義と結びつけられて、非常に広い範囲で複雑な問題が提起されたのがわかってきた。大戦前夜に参政権闘争に没頭していたイギリスのフェミニストにとって、IWSAの参政権と母性と戦争をめぐる論争は複雑すぎたように思われる。とりわけイギリスが参戦するや、NUWSSもWSPUも愛国主義のうねりの中に飲み込まれていったから、フェミニズムの国際化においてイギリス・フェミニストの姿勢を考察する作業も、愛国主義と反戦平和の両陣営への分裂によってさらに錯綜したものとならざるを得ない。次年度は、考察の時期を1914年以前と以後に分けながら、上記二大組織にとどまらずイギリスの多様な女性団体の「国際化」の考えを綿密に整理し直す必要性を痛感している。本年度も昨年に引き続いて、「婦人参政権国際連盟」(IWSA)と「国際女性評議会」(ICW)の第一次大戦前夜から両大戦間期にかけての活動とイギリス・フェミニストの関わり方を、マイクロフィルム史料の読破によって調査してきた。また、英米で新たに続出してきた関連研究文献の読破と、渡英でのイギリス女性史研究者との交流およびロンドン大学での資料収集等によって、多くの知見を得ると同時に新たな疑問も生じてきた。本年度の研究実施計画に対する実績を以下に要約する。

(1)イギリスのサフラジストたちが、国際的な運動の連携をどのように構想したか。とくに「婦人参政権協会全国同盟」(NUWSS)と「女性社会政治同盟」(WSPU)の考えの相違点を探ること。--現在までの調査では、国内の運動の方針では大きく対立していた両団体に国際的連携構想の大きな相違は認められなかった。(2)上記ニ大組織にとどまらず、イギリスの多様な女性団体の「国際化」の考えを綿密に検討し、イギリス・フェミニズムがIWSAに与えた影響、逆にIWSAがイギリス・フェミニズムに与えた影響はどうか。--この点もまだ確たる結論には到達していない。しかし、大戦直前にロンドンに「国際婦人参政権サークル」(IWF)が存在し、1913年の婦人参政権活動家692名の人名録があり、その3割近くがこの会員であることがわかった。同クラブとIWSAやICWとの関係はまだ不明であるが、インターナショナリズムへの関心を多くのイギリス・フェミニストが抱いていたことは確認した。(3)多様な文化・階級・宗教・国家・民族の相違を超えた「ユニヴァーサル・シスターフッド」の概念を「英帝国」フェミニズムがどの程度共有し得たか。--イギリスの婦人参政権がまだ実現しない段階に、国家を超えた運動の提携は理念としてはあり得ても、積極的行動にまで至らなかった事情が、NUWSSの会長のM.G.フォーセットのICWへの書簡等から判明してきた。本年度も平成10、11年度に引き続き、「国際女性評議会」(ICW)と「婦人参政権国際連盟」(IWSA)の20世紀初頭から両大戦間期にかけての活動とそれら国際的女性運動へのイギリスのフェミニストの関わり方を、専らマイクロフィルム史料の読破によって調査してきた。本年度の研究実績は以下のとおりである。第一次大戦前夜のイギリスの二大婦人参政権団体(NUWSSとWSPU)のうち、組織的に上記ICWやIWSAと持続的に関わったのは、穏健派のNUWSSの方であった。しかし、NUWSSの内部でも、フェミニズムの国際的連携構想は、時期によって大きな変化が見られ、また組織として統一されてはいなかった。したがって、NUWSSの創設時から1918年まで会長職にあったM・G・フォーセットに焦点をあててマイクロフィルム史料集Women's Suffrage Collectionのパート2の'The Papers of M.G.Fawcett'からその構想を探った。時期的に国内の運動に集中せざるをえなかったという事情を考慮しても、彼女のIWSAへの初期の参与は不熱心に見えた。その理由の一端は、国際協力への疑念というよりはアメリカのサフラジストによって指導された運動への疑念にあったと判明した。さらにNUWSS内部の「インターナショナリズム」をめぐる不一致は、とりわけ諸国家間の大戦と1918年のイギリスにおける婦人参政権の成立ののちに、「ユニヴァーサル・シスターフッド」の概念のみならず、平等市民権、市民的自由の獲得、反戦平和の主張などの論議を通してより鮮明になっていった。その「不一致」の進展過程を、フォーセットと、いわゆる「民主派サフラジスト」(キャサリン・マーシャルなど)とのやりとりを通じて跡づけることができた。
分泌型microRNAによる脳血管攣縮機構の解明と新規バイオマーカーの同定

脳血管攣縮は、くも膜下出血後発生する脳動脈の可逆的収縮であり、くも膜下出血患者の予後を規定する重大な合併症である。動物モデルにおける脳血管、脳におけるmiRNA/mRNA発現解析により、くも膜下出血後のMMP-9、miR-21の発現上昇、TIMP3、miR-351の発現低下とその関連性を同定した。また、くも膜下出血後、血管で高発現したRelaxinが、血清、髄液中でもその発現に相関がみられる事を明らかにした。本研究結果は、miRNA/mRNA発現プロファイルに基づく解析が、新たな脳血管攣縮機構の解明と新規バイオマーカー同定に繋がることを明らかにした。ラットくも膜下出血(SAH)モデル作成:網羅的microRNA解析を目的にラットSAHモデル作成に着手した。SAHモデル作成に用いたラットは42匹、control群などに用いたラットは17匹、麻酔死などで使用できなかったラットが3匹であった。外頸動脈からナイロン糸を挿入し、順行性に内頸動脈分岐部を損傷した。SAH群のラットは、20分,1,3, 6, 24, 48時間経過した時点で灌流固定を行った。Sham群では死亡したラットは存在しなかったが、SAH群のラットでは全42匹中8匹で死亡した(mortality 19%)。死亡した8匹のうち、3匹はほぼ即死であり、20分以内の死亡数は8匹のうち3匹であった(mortality 38%)。24時間経過した時点でのラットの死亡数は、全6匹中5匹であり(mortality 83%)、最も死亡率が高かった。その他のtime pointで死亡したラットは存在しなかった。血腫の量、分布はラット毎にかなりのばらつきがあったが、全42匹のうち14匹(41%)のラットで中等度以上のSAH発症に成功した。動物モデルより全血採取および分泌型microRNA発現解析:ラットSAHモデル、マウス脳腫瘍モデルより心房穿刺にて全血を採取し、microRNA抽出、分泌型microRNA発現解析が可能かを検証した。マウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍特異的miR-21の高発現を同定することができた。ラットSAHモデル作成:300-350gの雄性SDラットを用い、endovascular perforation model (EP model)を作成した。24時間後にSAH評価を行い、Sugawaraらのスコアリングでmoderate以上の6サンプルを解析した。miR-21, -145関連遺伝子、MMP-9関連miRNAの発現解析:データベースより標的遺伝子、miRNA候補を選出し、マイクロアレイデータを再検討した。新規遺伝子は同定できなかったが、新たにMMP-9関連miRNAとしてmiR-351が同定され、validationをおこない、その関連性が示唆された。その発現形式は、脳の解析部位により異なることも明らかとなった。血管、血液中のmiRNA発現解析:血管でも同様に解析を行なり、miR-21の発現亢進、TIMP-3の発現低下、MMP-9の発現亢進が明らかとなった。血中miR-21発現解析を行ったが、対照群と明らかな差を同定することはできなかった。脳神経外科ラットSAHモデル作成に着手したが、安定したSAHモデル作成を確立するために時間と費用を要した。しかし、動物モデルからの全血採取、microRNA発現解析は腫瘍モデルで確立し、SAHモデルでも解析可能な状態である。くも膜下出血、脳血管攣縮の病態解明、バイオマーカー同定を目指し、今後はearly brain injuryにも着目し、研究を進める。Earlybrain injuryの指標として、中枢神経系に豊富に含まれるmiR-124, -9, -128等を候補microRNAとし、動物モデル、臨床検体(血清、髄液)を用いて発現解析を進める。順調に解析が進めば、網羅的microRNA発現解析を基に、新たな候補microRNAを同定する。動物モデル、臨床検体を用いた研究であり、最終的に次年度使用額が生じた。今年度、動物モデル、解析法は、ほぼ確立しており、同様に動物モデル、臨床検体を用いて解析を継続する。
金属結合タンパク質メタロチオネインは肥満の性差発現を規定する

本年度は、メタロチオネイン(MT)欠損マウスの易肥満性及びその性差の原因解明のため、まず、雌雄MT欠損および野生型マウスの新生児(生後7日目)の皮下脂肪重量の比較をおこなった。さらに、生後5日目の雌雄のMT欠損および野生型マウスから脂肪細胞の基となる細胞を取り出し、MT遺伝子の(1)脂肪細胞分化に対する関与、(2)脂肪細胞分化過程における制御因子の同定、(3)脂肪細胞分化における性差発現メカニズムを解析した。結果、MT欠損マウスは野生型マウスと比較して、雌雄とも生後7日目では皮下脂肪組織重量の有意な増加を示したが、性差は認められなかった。このことから、MT欠損は基底レベルにおいて脂肪細胞重量に影響を与える可能性が示唆された。次に、MT遺伝子の脂肪細胞化分化に対する感受性を検討したところ、雌雄共にMT欠損マウス由来の細胞は野生型細胞と比較して約2.1-3.8倍高かった。さらに、MT欠損マウス由来の雌性の細胞はその雄性より約4.6倍高く、初年度で行った高脂肪食を与えた動物実験と相関していた。また、脂肪細胞化分化の主要制御因子であるC/EBPα, PPARγ2遺伝子発現量は、雌性ではMT欠損マウス由来の細胞で高く、雄性では野生型マウス由来の細胞で増加傾向であった。また、脂肪細胞肥大化因子として知られるMest遺伝子mRNA発現量は、分化誘導後6日をピークに増加したが、その発現量の増加割合はMT欠損マウス由来の細胞でより顕著であったことから、MT遺伝子は脂肪細胞肥大化を司るMestの制御に関与する可能性が示唆された。以上、MT欠損による易肥満性は、初期増殖促進、分化刺激感受性の増強、およびMest発現の上昇などを介した脂肪細胞化分化促進等によることが示唆された。また、雌性は雄性より高い分化感受性を示したため、性差を規定する因子のさらなる解析が必要と考えられた。非アルコール性脂肪性肝疾患は環境因子や遺伝的要因が重要であることが指摘されてきたが、性ステロイドと遺伝的な素因との直接的な関係については未解明な部分が多い。前年度では、雄性メタロチオネイン(MT)欠損マウスへの高脂肪食負荷により、野生型マウスと比較して著しい脂肪肝が生じることを見出した。また、男性ホルモンであるテストステロンは、脂肪肝発症に対して抑制的に機能することが報告されているがMT遺伝子との関連性については不明である。本研究では、MT欠損マウスに去勢処置を施し、MT欠損で増強される脂肪肝に対するテストステロンの影響を検討した。MT欠損マウスの去勢群は偽処置群と比較して、(1)有意な肝臓重量の減少と肝臓中脂肪滴の著しい沈着、(2)WAT重量の著しい増加と脂肪細胞サイズの肥大化、(3)血中ALT値の有意な増加、(4)脂質合成関連遺伝子である脂肪酸合成酵素(FAS)およびステアロイルCoA不飽和化酵素(SCD-1)mRNA発現量の有意な増加を認めた。これらの結果はテストステロンの補充によって濃度依存的な回復や正常化が認められた。しかし、(5)β-酸化関連遺伝子であるアシルCoA酸化酵素1(ACOX-1)および脱共役タンパク質2(UCP2) mRNA発現量は去勢群、偽処置群および補充群との間で有意な差は認められなかった。さらに、WTマウスで同様の解析をおこなったところ、去勢処置やテストステロンの補充による臓器重量やmRNA発現量に有意な差は認められなかった。また、WTマウスはMT欠損マウスと比較して、去勢による脂肪肝の症状や頻度は軽度であり、より低用量のテストステロン補充で脂肪滴の減少が認められた。以上、MT欠損マウスはWTマウスと比較して、低テストステロン条件下での脂肪肝に対する感受性が強いことを確認し、テストステロン補充は用量依存的に脂肪肝形成を回復させることを示した。メタボリックシンドローム発症の最も上流に位置する異常は、内臓脂肪の過剰な蓄積(肥満)であるが、この肥満発症には性差の問題がある。我々は雌性メタロチオネイン(MT)欠損マウスが長期間の高脂肪食摂取により、野生型と比較して易肥満性であることを報告している。本研究では、雌雄の野生型およびMT欠損マウスに標準食および高脂肪食を35週間自由摂食させ、肥満発症の性差の有無、さらに耐糖能機能や動脈硬化発症リスクを検討した。(1)体重および腹腔内の白色脂肪組織重量より、雌性MT欠損マウスの高脂肪食群で易肥満性、雄性で肥満抵抗性を示した。また、雌性MT欠損マウスの高脂肪食群は野生型マウスと比較し、白色脂肪組織中において脂質取り込み因子であるVLDL受容体および肥満関連遺伝子Mest mRNA発現量の著しい増加が認められたが、雄性では両遺伝子の増加抑制を認めた。このことから、性別によりMT遺伝子は白色脂肪組織の脂質取り込みに対し異なる影響を与えることが示唆された。(2)雌雄ともにMT欠損マウスの高脂肪食群は野生型マウスと比較して、肝臓で多数の脂肪滴を認めた。(3)糖負荷試験より、雌雄ともMT欠損マウスの高脂肪食群は、野生型マウスより耐糖能異常が軽微であった。さらに、MT欠損マウスは野生型と比較して、血症インスリン値の有意な上昇を認めたことから、高脂肪食摂食に対する代償性インスリン分泌が影響した可能性が示唆された。(4)MT欠損マウスは、両性とも動脈硬化発症に関与するPAI-1 mRNA発現量の基底レベルの増加が認められた。

以上、MT欠損は高脂肪食摂食時に耐糖能や脂肪肝に対して各々特異的な作用を有するだけでなく、雌性では肥満発症を促進する一方、雄性では抑制作用を示した。従って、MT遺伝子は高脂肪食摂取時のメタボリックシンドロームの性差発現に対する新たな制御因子となりうる可能性が示唆された。本年度は、メタロチオネイン(MT)欠損マウスの易肥満性及びその性差の原因解明のため、まず、雌雄MT欠損および野生型マウスの新生児(生後7日目)の皮下脂肪重量の比較をおこなった。さらに、生後5日目の雌雄のMT欠損および野生型マウスから脂肪細胞の基となる細胞を取り出し、MT遺伝子の(1)脂肪細胞分化に対する関与、(2)脂肪細胞分化過程における制御因子の同定、(3)脂肪細胞分化における性差発現メカニズムを解析した。結果、MT欠損マウスは野生型マウスと比較して、雌雄とも生後7日目では皮下脂肪組織重量の有意な増加を示したが、性差は認められなかった。このことから、MT欠損は基底レベルにおいて脂肪細胞重量に影響を与える可能性が示唆された。次に、MT遺伝子の脂肪細胞化分化に対する感受性を検討したところ、雌雄共にMT欠損マウス由来の細胞は野生型細胞と比較して約2.1-3.8倍高かった。さらに、MT欠損マウス由来の雌性の細胞はその雄性より約4.6倍高く、初年度で行った高脂肪食を与えた動物実験と相関していた。また、脂肪細胞化分化の主要制御因子であるC/EBPα, PPARγ2遺伝子発現量は、雌性ではMT欠損マウス由来の細胞で高く、雄性では野生型マウス由来の細胞で増加傾向であった。また、脂肪細胞肥大化因子として知られるMest遺伝子mRNA発現量は、分化誘導後6日をピークに増加したが、その発現量の増加割合はMT欠損マウス由来の細胞でより顕著であったことから、MT遺伝子は脂肪細胞肥大化を司るMestの制御に関与する可能性が示唆された。以上、MT欠損による易肥満性は、初期増殖促進、分化刺激感受性の増強、およびMest発現の上昇などを介した脂肪細胞化分化促進等によることが示唆された。また、雌性は雄性より高い分化感受性を示したため、性差を規定する因子のさらなる解析が必要と考えられた。研究目的の一つである去勢MT欠損マウスを用いたテストステロン濃度変化による肥満・脂肪肝への影響解析を行った。研究実績の概要において述べたように、メタロチオネイン遺伝子は、雄性において高脂肪食誘導性の脂肪蓄積や脂肪肝発症に対してテストステロンが有する抑制作用を促進する可能性を示し、メタボリックシンドローム発症メカニズムの一端が明らかになったことから、当初の目的を達成しており、おおむね順調に進展していると判断できる。本研究では、当初の予定通り雌雄の野生型およびMT欠損マウスに短期(8週間)、中期(16週間)および長期間(35週間)高脂肪食を摂取させたモデル動物を作製した。主に長期間摂取させた雌雄両系統マウスの血中生理活性物質、肝臓および脂肪組織切片作製、脂肪組織における脂肪細胞機能制御遺伝子の比較解析をおこなった。これらの解析から長期間の高脂肪食摂食下のMT欠損マウスは雌性では肥満の発症、雄性では肥満抵抗性であることを示し、それには脂肪組織における脂質取り込み能や肥大化遺伝子発現量の差が認められたことから、肥満発症の性差メカニズムの解析上、有用なモデル動物であることを確認することができ、初年度の計画としておおむね予定通りの進行と判断することができる。
小児の陽子線全脳全脊髄照射における標的外線量のポリマーゲル線量計を用いた評価

脳腫瘍の治療法の一つである全脳全脊髄照射は、脳全体と脊髄および脊髄液を標的とするため照射範囲が広く、特に長い予後が期待される小児患者では正常組織の被ばくによる有害事象が問題となる。陽子線を用いた全脳全脊髄照射は、その特性から正常組織への線量を大幅に低減することができるが、一方で高い精度が求められるため、線量分布検証を行い精度を担保する必要がある。正常組織の被ばく線量は、治療中または治療直後の放射線障害だけでなく二次発がんの要因となるため、予後の生活の質に関わる極めて重要な要素である。本研究では、ポリマーゲル線量計を用いて簡便かつ高精度に線量評価を行うことを目的とする。
破骨細胞形成におけるRANK/TRAF6シグナルの解明及び骨疾患治療への応用

骨吸収を担う破骨細胞の分化・活性化は、受容体RANK及びそれに結合するアダプター分子TRAF6によって制御されるが、RANK/TRAF6シグナルの分子機構には不明な点が多い。申請者は、昨年度の本研究課題において、TRAF6シグナルの増強を担い、破骨細胞分化誘導に必須であるRANK細胞質領域を発見した。本年度は、この領域の欠損RANK変異体を用いた解析及びこの領域への結合因子の同定を行うことにより、RANKによるTRAF6シグナル増強機構の解明を試み、以下の成果を得た。RANKのTRAF6シグナル増強領域を欠損させると、刺激初期における転写因子NFκBの活性化には影響がみられないが、野生型RANKで観察される長期にわたるNFκB活性化が消失した。さらに、野生型RANK及び欠損変異体の細胞内での局在を解析したところ、野生型RANKでは刺激後、細胞膜上から細胞内に取り込まれエンドソームに局在するのに対して、欠損変異体ではエンドソームに移行せず細胞膜上に局在したままであった。一方、TRAF6シグナル増強領域に結合する因子を、既知の破骨細胞形成制御因子の中から免疫沈降法により探索したところ、幾つかの結合因子を同定することができた。これらの結果から、RANKのシグナル増強領域は幾つかの結合因子を介してRANKのインターナリゼイションを促進させることで、TRAF6シグナルの増強を担っている可能性が示唆された。このことは、受容体の局在の変化がシグナルめ質を決定することを示しており、破骨細胞形成の分子機構の解明に新たな知見を与えるだけでなく、骨疾患治療における新しい分子標的の候補の発見に繋がると考えられる。骨吸収を担う破骨細胞の分化・成熟は、受容体RANKとアダプター分子TRAF6によるシグナル伝達機構によって制御されている。本研究は、RANK/TRAF6シグナルの全体像を明らかにすることにより、破骨細胞が関与する骨疾患治療への応用を目的とする。以下に本年度の研究によって得られた成果を報告する。1.TRAF6シグナルの増強を担うRANK細胞質領域の決定申請者は以前、ヒトCD40受容体の細胞外領域とマウスRANK細胞内領域からなるキメラ受容体をマウス破骨前駆細胞に発現させ、抗ヒトCD40抗体で刺激し破骨細胞形成を誘導する実験系を確立した。さらに、RANKにはTRAF6結合部位以外にも分化誘導に必要な領域が存在し、それはTRAF6シグナルを増強する結果を得ている。そこで、その領域を決定するために、キメラ受容体のTRAF6結合部位以外を80a.a.ずつ欠損させた変異体を作成し、破骨細胞分化誘導能を評価した。その結果、424-529a.a.領域欠損変異体でのみ分化誘導活性が消失した。しかし、この領域の欠損は、TRAF6下流の転写因子NFκBの活性化には影響を与えなかった。よって、424-529a.a.領域は、破骨細胞形成を制御する新たなRANK細胞質領域であることが明らかとなった。2.RANK/TRAF6シグナル依存的に発現制御される遺伝子の同定ラット由来破骨前駆細胞をRANK-ligandで刺激し、6、24時間及び破骨細胞が形成する48時間後にmRNAを回収し、ラット由来DNAチップを用いて解析した。その結果、4倍以上発現が誘導された遺伝子として156遺伝子を同定した。そのうち、破骨細胞形成への関与が未報告の遺伝子は104遺伝子であった。現在、これらの遺伝子に対してRNA干渉によるknockdownを行い、破骨細胞形成に必須の遺伝子の探索を進めている。
細胞キメリズム誘導腎同時移植による膵ランゲルハンス島移植の成績向上に関する研究

1.研究目的:インスリン依存性糖尿病患者に対して諸外国において臨床応用されている根治的治療法は現在のところ,膵(臓器)腎同時移植が唯一のものだが,膵移植は合併症も多く,侵襲的である。より理想的でありながら,かつ現実的な本患者の治療法は腎移植時に膵ランゲルハンス島(以下ラ島)移植を併用することである。膵ランゲルハンス島(以下ラ島)移植で,あらかじめレシピエント細胞を導入して細胞キメリズム(micro cell chimerism)を誘導した腎臓を同時に移植することで,ラ島生着延長が得られるか否かを検討する。2.新たに得られた知見等の成果:純系ラットF344からLEWで,ドナーに510Gyの非致死量の全身照射を行い,その1週後に,レシピエント骨髄細胞および牌細胞を移植しchimerismを誘導した。更に,その4週後にこのラットの腎臓および,別に分離したF344のラ島を同時に移植した。(1)非chimerism誘導群:ラ島の生着日数(高血糖にて判定)は714日で,いずれも血糖は500g/dl以上に上昇したが,ラ島単独移植群と比較すると延長効果が認められた。(2)Chimerism誘導群:一方,Chimerism誘導群の生着日数は1125日であり,更に,生着延長する可能性が示唆された。これらの結果から,ドナーTBIとレシピエント骨髄細胞および脾細胞を移植によるchimerism誘導graftで,免疫学的トレランスが誘導される可能性が示唆された。3.今後の予定,及び課題:現在,生着日数から,照射線量,骨髄細胞数,その時期等につき至適条件を検討中である。さらに,microcell chimerismの程度および強さと生着延長効果の関連を検索して,その機序を解明中である。1.研究目的:膵ランゲルハンス島(以下ラ島)移植で,あらかじめレシピエント細胞を導入して細胞キメリズム(micro cell chimerism)を誘導した腎臓を同時に移植することで,ラ島生着延長が得られるか否かを検討する。2.新たに得られた知見等の成果:純系ラットF344からLEWで,ドナーに510Gyの非致死量の全身照射を行い,その1週後に,レシピエント骨髄細胞および脾細胞を移植しchimerismを誘導した。更に、その4週間後にこのラットの腎臓および,別に分離したF344のラ島を同時に移植した。さらに,microcell chimerismの程度および強さと生着延長効果の関連を検索して、その機序を解明する計画である。インスリン依存性糖尿病患者は,厳密なインスリンによる血糖管理を行ったとしても,糖尿病性腎症のため腎移植を必要とするに至る。諸外国において臨床応用されている根治的治療法は現在のところ,膵(臓器)腎同時移植が唯一のものだが,膵移植は合併症も多く,侵襲的である。

より理想的でありながら,かつ現実的な本患者の治療法は腎移植時に膵ランゲルハンス島(以下ラ島)移植を併用することである。そこで,膵ランゲルハンス島(以下ラ島)移植で,あらかじめレシピエント細胞を導入して細胞キメリズム(micro cell chimerism)を誘導した腎臓を同時に移植することで,ラ島生着延長が得られるか否かを検討した。純系ラットF344からLEWで,ドナーに510Gyの非致死量の全身照射を行い,その1週後に,レシピエント骨髄細胞および脾細胞を移植しchimerismを誘導した。更に,その4週後にこのラットの腎臓および,別に分離したF344のラ島を同時に移植した。非chimerism誘導群ではラ島の生着日数(高血糖にて判定)は714日で,いずれも血糖は500g/dl以上に上昇したが,ラ島単独移植群と比較すると延長効果が認められた。一方,Chimerism誘導群では,Chimerism誘導群の生着日数は1125日であり,更に,生着延長する可能性が示唆された。これらの結果から,ドナーTBIとレシピエント骨髄細胞および脾細胞を移植によるchimerism誘導graftで,免疫学的トレランスが誘導される可能性が示唆された。さらに,生着日数から,照射線量,骨髄細胞数,その時期等につき至適条件を検討中である。さらに,microcell chimerismの程度および強さと生着延長効果の関連を検索して,その機序を解明中である。
単原子層物質のナノスケール特異構造制御による新奇光デバイスの創成

本研究では、特異構造を走査型プローブ顕微鏡技術およびナノ分光計測技術を駆使し、化合物半導体表面に特異構造を誘起し、その特異構造が光物性に与える影響をナノスケールで分光分析する。この技術は領域内の他の半導体デバイスのオペランド分析にも活用されることが期待される。
パンルヴェ方程式とその仲間たちについての解析的研究

1.Pain leve I型方程式を含むような非線形常微方程式方程式のある系列で準Pain leve性,すなわち,一般解の動く特異点は代数的分岐点であるという性質をもつようなものを見い出した。そしてその解の大域的多価性について論じた。また,Pain leve II型方程式を含む非線形常微分方程式の系列で同様な性質をもつようなものも見つけた。2.Pain leve V型方程式の解について角領域における値分布を調べた。ある条件下では極を含めてすべての値を同程度に無限回とることを示した。4.Filonacci数の逆数和により定義される各種の数列について,代数的独立性,代数関係式を求めた。またこれらの逆数和とゼータ関数の値との間の関係を調べた。・二重週期係数をもつRiccati型方程式を考え,特にその有理型関数解の解析的性質を調べた。解の位数,値分布そして週期解の個数等に関する結果が得られた。・準パンフヴェ性とは,Painleve方程式やRiccati方程式の解のみたす性質,すなわち,すべての解の動く特異点は極であるという性質を弱めたものである.準パルンヴェ性をもつような一つの方程式のクラスを与え,その解の性質,代数関数解の存在,非存在等について調べた。・多くの変形パラメーターをもつFuchs型方程式についてのモノドロミー保存変形により得られるGarnier系はPainleve方程式の拡張とみなされる.Garnier系より得られる高階Painleve方程式を考え,確定型特異点のまわりにおいて,2つのパラメーターをもつ解の族を与えた。この結果は,以前,Painleve VI型方程式について得られていた結果の高階版への拡張とみなすことができる.1.PainleveI型方程式をその特別な場合として含むようなある2階非線型方程式の系列を与え,その準Painleve性を証明した。また,その解の多価性,超越性について論じた。2.Painleve VI型方程式をその特別な場合として含むような高階方程式の系列をGarnier系を1次元複素直線に制限することにより求めた。そして,その確定型特異点の近くでの収束解の族を求めた。これはPainleve VI型方程式の収束解の自然な拡張となっている。3.Painleve I型方程式の拡張としての2次元退化Garnier系を考え,その不確定型特異点の近くでの漸近解の族を求めた。4.Fibonacci数の逆数和として表示された実数のつくる系列について,その中に含まれる数の超越性,複数個の数の間の代数的独立性,代数関係式を調べた。非線型方程式の級数解の係数の間に成立する近接関係式が重要な役割をはたす。Painleve I型方程式を含むような非線形常微分方程式のある系列で準Painleve性,すなわち,一般解のすべての動く特異点は代数的分岐点であるという性質をもつようなものを見い出した。そしてその解の大域的多価性について議論をした。また,Painleve II型方程式を含むような非線形常微分方程式の系列で同様な性質をもつようなものも見つけた。Painleve V型方程式の解について角領域における値分布を調べた。ある条件下では極も含めてすべての値を同程度に無限回とることを示した.Fibonacci数の逆数和により定義さいる各種の数列について,代数的独立性,代数関係式を求めた。また,こちらの逆数和とゼータ関数の値との間の関係を調べた。
水稲の耐冷性QTLの作用機構の解析

東北地域における冷水温条件では、花粉数が多い品種は稔実率が高い傾向が認められた。耐冷性QTLのqCTB8を保有する系統は、花粉数が多く、稔実率が高かったが、耐冷性QTLのCtb1を保有する系統は、稔実率を高める効果が認められなかった。北海道における小胞子初期の低温処理試験では、Ctb1・Ctb2およびqCTB8を保有する系統は、花粉数が多く、稔実率が高い傾向が認められた。以上のように、耐冷性QTLは、花粉数の増加を介して稔実率を高めることが多かったが、個々の耐冷性QTLの効果は小さかった。耐冷性の強い水稲品種を効率的に育成するために、耐冷性を4つの受粉構成要素に分解し、その耐冷性QTLとの対応関係を明確にする。その端緒として、本年度は、花粉数と稔実率の関係に着目した。1.東北地域における主要4品種および耐冷性5系統における花粉数および稔実率を調査した。葯長が長いほど花粉数が多いという関係が認められた。花粉数は、中国雲南省の耐冷性品種「麗江新団黒谷」が最も多かった。しかし、麗江新団黒谷由来の耐冷性QTL(qCTB3)を導入した「奥羽415号」の花粉数は「ひとめぼれ」と同程度であった。冷水圃場における稔実率は、花粉数の減少に伴い低下した。花粉数は少ないが稔実率は高いという品種・系統を発見することはできなかった。2.「北海IL3」(耐冷性QTL:qCTB8およびctb1を保有)に「ふくひびき」を2回戻し交配した4系統、FK81(qCTB8有、ctb1有)FK80(qCTB8有、ctb1無)FK01(qCTB8無、ctb1有)FK00(qCTB8無、ctb1無)を用いて、耐冷性QTLのqCTB8およびctb1の有無が花粉数および稔実率に及ぼす影響を調査した。ctb1の有無による花粉数および稔実率の変化は認められなかったが、qCTB8は花粉数を多くし、稔実率を高める効果が認められた。また、qCTB8は出穂期をやや遅らせる効果、qCTB8およびctb1ともに稈長を長くする効果が認められた。1)東北農研(秋田県大仙市)において、東北地域における主要4品種および耐冷性5系統における花粉数および稔実率を調査した。冷水田における稔実率の高い品種・系統は、葯長が長く、花粉数が多いという関係が認められた。2)東北農研において「北海IL3」(耐冷性QTL:qCTB8およびCtb1を保有)に「ふくひびき」を2回戻し交配した4系統、FK81(qCTB8有、Ctb1有)FK80(qCTB8有、Ctb1無)FK01(qCTB8無、Ctb1有)FK00(qCTB8無、Ctb1無)を用いて、耐冷性QTLのqCTB8およびCtb1の有無が花粉数および稔実率に及ぼす影響を調査した。初年度と同様に、Ctb1の有無による花粉数および稔実率の変化は認められなかったが、qCTB8は花粉数を多くし、稔実率を高める効果が認められた。また、初年度は、qCTB8およびCtb1ともに稈を長くする効果が認められたが、本年度は、qCTB8のみに、稈を長くする効果が認められた。3)北海道農研(札幌市)では、北海287号(耐冷性やや強)およびほしのゆめ(耐冷性強)を遺伝背景とした系統について通常栽培条件における葯長および花粉数を調査した。「ふくひびき」のNIL同様、Ctb1により葯長、花粉数が増大する傾向がみられたが、qCTB8およびqFLT6を導入した系統ではCtb1のような増加は認められなかった。Ctb1による葯長の増加は東北品種と北海道品種で一致したが、qCTB8については異なる結果となった。4)東北および北海道の試験結果から、qCTB8の効果は親の遺伝的背景あるいは気象条件によって異なることが示唆された。1)東北農研(秋田県大仙市)において、東北地域における主要4品種および耐冷性5系統における花粉数および稔実率を3年間調査し、花粉数が多い品種・系統は、稔実率が高いことを確認した。2)東北農研において、耐冷性QTLの効果を3年間調査したところ、qCTB8を保有する系統は、保有しない系統と比較して、花粉数が有意でないが17%多く、稔実率が有意に高かった。耐冷性qLTB3を保有する系統は、親品種と比較して、花粉数が統計的に有意ではないが28%多く、稔実率が有意ではないが9%高かった。3)北海道農研(札幌市)では、北海道品種に耐冷性QTLを集積した準同質遺伝子系統を用いて、穂ばらみ期の中でも特定の穎花をターゲットに小胞子初期に特化した低温処理を行った。Ctb1、qCTB8を保有した系統は保有しない系統より花粉数が増加し低温による花粉数の減少が抑えられ有意ではないものの耐冷性の向上が認められた。Ctb1, Ctb2, qCTB8, qFLT6を集積した系統は、花粉数が増加し、低温により保有しない系統とほぼ同数まで花粉数が減少したものの、稔実歩合は最も高かった。

4)東北および北海道の試験結果から、耐冷性QTLは、花粉数の増加を介して、稔実率を向上させることが示唆された。しかし、その効果は小さく、統計的に有意な差異が認められないこともあった。東北地域における冷水温条件では、花粉数が多い品種は稔実率が高い傾向が認められた。耐冷性QTLのqCTB8を保有する系統は、花粉数が多く、稔実率が高かったが、耐冷性QTLのCtb1を保有する系統は、稔実率を高める効果が認められなかった。北海道における小胞子初期の低温処理試験では、Ctb1・Ctb2およびqCTB8を保有する系統は、花粉数が多く、稔実率が高い傾向が認められた。以上のように、耐冷性QTLは、花粉数の増加を介して稔実率を高めることが多かったが、個々の耐冷性QTLの効果は小さかった。耐冷性QTLと花粉数の関係が明らかになるなど順調に進捗している。ただし、研究計画を若干、変更した。すなわち、研究分担者の林高見が農研機構東北農研(盛岡市)から農研機構北海道農研(札幌市)に異動となった。このため、当初予定していた花粉の発芽に関する試験が実施できなかった。一方では、東北・北海道という気象条件の異なる地域において、同一の耐冷性QTLを評価するという新しい展開が可能となった。作物学・育種学花粉数や稔実率は年次変動が大きく、信頼性の高い結果を得るためには、3年間の試験が必要である。そこで、東北農研においては、最終年も花粉数の調査に重点を置く。北海道農研においては、設備の関係から花粉発芽の研究は休止し、qCTB8、Ctb1が花粉数、稔実率に及ぼす効果を調査し、東北農研の結果と比較する。水稲の花粉数を正確かつ迅速に測定する方法を確立することができ、研究は概ね順調に進展している。ただし、北海IL3に「ふくひびき」を戻し交配した材料に関しては、作成が遅れたために、冷水圃場への移植が遅れた。このため、花粉数や稔実率については、次年度、再確認する必要がある。次年度使用額18434円は、研究費を効率的に使用して発生した残額である。次年度の研究費とあわせて、研究計画の遂行のために使用する。研究分担者の林高見が平成26年4月から農研機構北海道農業研究センターに異動となった。北海道は、水稲の冷害が発生する地域であるが、出穂期が東北地域と異なる。そこで、研究分担者は、北海道の耐冷性品種・系統を用いて、耐冷性に関する花粉数や花粉発芽について調査を行う。そして、耐冷性QTLが、花粉数などの形質に及ぼす影響の地域間差異に関する解析を新たに行う。花粉調査のための染色液等の試薬の購入に利用する。次年度使用額79861円は、研究費を効率的に使用して発生した残額であり、次年度の研究費と合わせて、研究計画の遂行のために使用する。研究分担者が、異動となったために、新しい職場で必要な基本的試薬、資材の購入に利用する。
視機能による発達障害スクリーニングシステムの構築に関する研究

本研究では、視覚認知に弱さをもつ子どもの早期発見のための、液晶タブレットとノートパソコンとによる視覚認知発達スクリーニング検査ツール(STVP)の開発と有効性の検証を行った。さらに、STVPに実装した課題を基に集団形式で行うことを目的とした紙媒体でのSTVPの開発と評価を行った。比較検査の結果、通常学級に通う児童と、視覚認知に弱さをもつ児童との間において有意差を確認した。STVPは研究室のホームページ上で公開している。本研究では、特に視機能に問題のある発達障害の原因の解明、早期発見、学習支援を目指し、問診や視機能検査のデータのデータベース構築と分析、視覚運動計測システムの構築、および、視覚認知機構の解明を目的とする。平成21年度は、視覚認知発達スクリーニング検査ツール(Screening Test for Visual Perceptional skills:以下,STVP)のシステムの設計及び構築を行った。また、症例の類型化のため、読み書きに困難さを訴える児童のWISC-IIIと近見視力、眼球運動の関連を調べた。以下に本年度得られた主な結果を示す。(1)視覚認知発達スクリーニング検査ツール:STVでは、反応時間関係、注意関係、眼球運動関係、記憶関係、非運動視知覚関係、視覚運動関係の6群より構成した。今年度試作した検査課題は、反応時間計測課題、眼球運動課題、注意題、模写課題、反応時間計測課題、眼球運動課題、注意課題、模写課題を設計し、実装した。STVPにより検査した被験者数は、7歳から12歳までの25人である。検査結果より、課題の難易度は適当と思われるが、詳細な分析には定常発達の子供の被験者を増やさなければいけないことが分かった。(2)症例の類型化では、読み書き学習に困難さをもつ児童で、視覚認知発達検査を希望した児童の視力および、眼球運動と知能検査との関係について分析を行った。その結果、弱視児のみならず、読み書きの弱さを主訴にしている児童に対しても視力と知能検査結果との間に関連性がみられた。またPIQとFIQではPIQのほうがより強い関連がみられたことから、動作性課題は視覚・運動的な知能、認知能力や視覚的操作能力を表していることを示した。DEMとWISC-IIIとの間にも関連性が確認できた。処理速度をみるTEST CSSとError SSをそれぞれPIQと比較したところ、TEST C SSに、より強い関連がみられた。結果から、WISC-III動作性課題には正確さよりも処理速度が大きく関与しているよう推察された。昨年度から視覚認知発達スクリーニング検査ツール(Screening Test for Visual Perception skills:STVP)の構築を行っている。本年度は、STVPの未検討課題であった連続図形記憶課題Lv2、平面図形記憶課題、「点の位置識別課題、線の傾き識別課題、線の長さ識別課題、平面図形識別課題を設計し、実装した。つぎに、視覚発達支援センターに視覚認知発達検査の受診を希望する視覚認知の弱さを主訴とする6歳から12歳の児童と近視などに起因する視力低下を主訴にかわばた眼科に受診した定型発達と思われる児童をコントロール群として、比較実験を行った。比較実験の結果から、視覚認知の弱さを主訴とする児童とコントロール群との間の成功率において有意差がみられた。しかし、年齢ごとの成功率において、単純図形記憶課題と形態識別課題において、ともに年齢による傾向はみられなかった。さらに、視覚認知の弱い児童は,弱さをもたない児童と比べ、眼球運動時の重心動揺の揺れは大きいと推測される。これは、視覚認知の弱い児童が視覚認知の弱くない児童と比べ,眼球運動が苦手だからだと考えられる。そこで本研究では、眼球運動検査において、視覚認知の弱い児童の眼球運動と重心動揺の関係を計測する、重心動揺計測システムの開発を開始した。重心動揺計測にはWiiボードを用いている。さらに、液晶タブレットとノートパソコンとによる視機能スクリーニング検査システムとを有機的に活用することにより、教育現場での簡便な視機能診断を実現も目指す。最終年度として今年度は、実施計画に基づき以下の主な項目に関して検討を行った。1.昨年度に引き続き、STVPの検査項目に、ワーキングメモリ課題としてNバック課題、複雑な併合課題の新しい課題の追加を行った。2.新しく導入した非接触式視線追尾装置によりSTVPの検査時の眼球運動計測を行ない、視線の動きから最適な課題配置方法の検証を行った。3.STVP(Screening Test for Visual Perception skills)から小学校の1時限(45分)以内にできる課題抽出を行い、紙媒体によるSTVPの作成を行った。

課題抽出は、大学生を被験者として難易度判定と共に15分以内にできる課題を選定した。その結果を基に、7課題77課題全53ページの紙版STVPを制作し、協力小学校16年の児童442名と、視覚発達センターに受診する115名の児童を対象に比較実験により妥当性の検証を行い、両軍の有意差を確認した。4.視機能と重心動揺との関係を調べるために、重心動揺計測システムを構築し、視機能に何らかの主訴のある児童と健常児との間に差があることがわかった。5.PC版STVPは、かわばた眼科付属の視覚発達センタで試験運用を開始した。最終年度として、2012年2月にPC版STVPからタッチパネル検査を除いたPC版、紙版STVPを工学院大学人間科学・福祉情報工学研究室のHPから一般公開を行い、ダウンロードできるようにした。また、今までの成果の論文投稿の準備を開始した。
「人口減少社会」という問題の社会的構築分析 ーその地域的展開の分析―

本研究は、民間団体としての「地方創生会議」の一連の文書・言説、およびそれに関連する行政省庁の政策文書および与野党の政治的文書の収集および分析を系統的に行い、さらに中部地域における地域政策への影響について具体的に検証する。また、全国紙の報道や地方紙の報道を中心に、系統的な地方創生言説の展開、政策の展開を跡付ける。同時に、中部地域における地域政策担当者、経済団体、住民リーダー、NPO関係者への聞き取り調査を通じて、人口減少問題がどのように受け止められ、影響力の構造にどのような変化があり、時系列的な重心・重点の変化・違いについて検証し、最終的に具体的な提起のあり方の提案をめざす。
放射線抵抗性腫瘍の放射線感受性増強を目的としたp53遺伝子治療の基礎的研究

細胞死の研究が進歩しアポトーシスが重要な役割を占めることが明らかになり、疾患の特性のみならず疾患の治療にも閧与しでいると考えられる。さらにアポトーシスと癌遺伝子p53との関連が明らかとなってきている。われわれはラット卵黄嚢腫瘍から得た放射線感受性細胞NMT-1と、同細胞由来の放射線抵抗性細胞NMT-1Rを用いて放射線感受性の機序とアポトーシスとの関連について研究してきた結果、放射線感受性細胞NMT-1に多くのアポトーシスが照射後発現することを確認している。照射後のp53,P21,baxの発現を検討すると、NMT-1では10Gy照射1時間後にいずれも増加しているのが確認された。これに対し放射線抵抗性細胞NMT-1Rではp53,p21,baxいずれも照射後、発現増加は認められなかった。PCR-SSCP法にて解析した結果、放射線感受性細胞NMT-1は野生型p53を発現しているのに対して、抵抗性細胞NMT-1Rでは変異型p53の発現が認められた。そこで野生型p53をベクターに組込み、放射線抵抗性細胞NMT-1Rに導入し、照射後のアポトーシスの出現を検討したところ、期待に反し出現増加は認められなかった。p53からアポトーシスに至るカスケードに問題があると考えられ、今後の検討を要する。細胞死の研究が進歩しアポトーシスが重要な役割を占めることが明らかになり、疾患の特性のみならずその治療にも関与していると考えられる。さらにアポトーシスと癌遺伝子p53との関連が明らかになりつつある。われわれはラット卵黄嚢腫瘍から得た放射線感受性細胞のNMT-1と同細胞由来の放射線抵抗性細胞のNMT-1Rを用いて放射線感受性の機序とアポトーシスとの関連について研究してきた。NMT-1はNMT-1Rに比べ1.7倍(D0値比較で)の放射線感受性を有しており、10Gy照射後1224次間後にNMT-1でアポトーシスの出現が認められている(これに対しNMT-1Rではアポトーシスは照射後ほとんど認められない)。次に照射後のp53、p21、baxの発現を検討した。放射線感受性細胞NMT-1ではp53とp21の発現が10Gy照射1時間後に増加しているのが確認された。さらにbaxの発現も増加した。これに対し放射線抵抗性細胞NMT-1Rではp53、p21、baxのいずれも照射後、発現の増加は認められなかった。PCR-SSCP法にて両細胞p53について解析した結果、放射線感受性細胞NMT-1では野生型p53を発現しているのに対して、放射線抵抗性細胞では変異型p53の発現が認められた。今年度はラット野生型p53をベクターに組み込むことが可能になりつつある。来年度はベクターに組み込んだラット野生型p53を用いて放射線抵抗性細胞NMT-1Rに導入し、放射線感受性の変化について検討し、同細胞由来NMT-1と遺伝子発現を含め比較検討する。われわれはラット卵黄嚢腫瘍から得た放射線感受性細胞のNMT-1と同細胞由来の放射線抵抗性細胞のNMT-1Rを用いて放射線感受性の機序とアポトーシスとの関連について研究してきた結果、感受性性細胞NMT-1に照射後、多くアポトーシスが発現することを確認している。