hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
光渦ドップラー分光法の開発と横方向流れ計測への応用

ガス流に対して垂直方向から光渦レーザーを導入し,2次元ドップラー吸収分光測定を行った.光渦のドップラーシフトが位相特異点からの距離に反比例するとともに,トポロジカルチャージの符号を反転させることで空間分布が反転することが確認されており,定性的には理論の予想と一致する結果が得られた.初年度は,当初の予定通り実験系全般の高安定化および低ノイズ化を行った.改良した測定系を用いて原理検証実験を行い,定性的には理論の予想と一致する結果が得られている.一方で,観測された横方向ドップラーシフトは理論で期待される値の5倍程度の大きさとなっており,その原因の解明が課題となっている.SLMで生成した光渦に重畳されている位相ノイズによるビーム位置の揺らぎの影響を確認するため,q-plateを用いて位相ノイズを含まない光渦光源を開発している.また,光渦の局所的な吸収を正確に画像計測するための光学系の設計も進めており,次年度以降の研究に向けた準備も順調に進んでいる.光渦は3次元的にねじれた位相構造を持つ電磁波であるため,その光波中を運動する粒子は3次元のドップラー効果を受ける.本研究では,光渦レーザーの特異な空間位相構造をプラズマ分光に利用することで,レーザーを横切る方向の運動に感度を持つ光渦ドップラー分光法を開発し,プラズマ中の流れ計測に応用することを目的としている.これまでの光渦ドップラー分光法の開発過程において,ビーム内に吸収率が負になる領域が観測されることが問題になっていた.光渦吸収分光ではビーム断面におけるドップラーシフトの位置依存性を利用するため,必然的に局所的な吸収による欠陥構造を観測する必要が出てくる.欠陥構造を持つ光渦の伝播に関する光学分野の先行研究において,伝播に伴うGouy位相変化で欠陥構造が回転することが報告されている.同様の効果が光渦の吸収分光に与える影響について数値計算を行い,伝播による吸収率分布の変形を確認した.伝播による吸収率分布の変形を避けるため新たに4f光学系を開発して測定系に導入することで,理論的な予想に近い吸収率分布が得られ,負の吸収率も観測されなくなった.これにより,これまで問題となっていた負の吸収率がGouy位相変化によって作り出されていたものであることが明らかとなった.測定系の改良に加え,光渦とフーリエ光学を組み合わせた生かした新たな試みとして,吸収によって生成される高次の空間構造のみを取り出すことにより,吸収分光の感度を格段に向上させる方法に関する理論解析も進めている.また,光渦LIF法の予備実験を行うとともに,受光系に求められる空間分解能等の検討を行った.大気圧ヘリウムプラズマジェットへの応用では,予備実験として1083nmのDFBレーザーを用いた通常の吸収分光法により,Heガス中を伝播するプラズマビュレットを観測し,その伝播特性を調べた.光渦分光法を確立するため,実験系の改善とともに,新たな応用に向けた理論解析等を着実に進めている.測定系に4f光学系を導入したことで吸収率分布の変形を抑えられることが明らかとなった.一方で,方位角ドップラーシフトの大きさが理論的な予想に対して数倍の大きさになっている原因については明らかになっておらず,その原因の解明が課題となっている.光渦の特徴を生かした吸収分光法の高感度化という新しい試みに加え,光渦LIF法の開発,大気圧プラズマジェットへの応用等を順調に進めている.横方向ドップラーシフトの大きさが,定量的に理論と合わないことの原因解明が今後の研究における優先課題である.
アジリジン類と遷移金属の特性を駆使した新規反応の開発と生理活性化合物合成への展開

中員環化合物の効率的合成法の開発を目的として、分子内の適当な位置に求核部位を有するブロモアレンを合成し、閉環反応を検討した。その結果、アルコール性溶媒中、触媒量のPd(0)存在下、NaORを作用させることで、環内に一つまたは二つのヘテロ原子を有する七及び八員環化合物を収率良く合成することに成功した。この時、酸素及び窒素求核部位を有するブロモアレンを用いて閉環反応を行うとcis-オレフィンを有する中員環化合物が選択的に得られた。一方、興味深いことに、炭素求核部位を有するブロモアレンを用いて閉環反応を行うとtrans-オレフィンを有する八員環化合物が選択的に得られることを明らかとした。これらの結果は、ブロモアレンを中員環合成に用いた初めての例であり,希釈条件を必要としない本反応は合成上極めて有用であると考えられる(J.Am.Chem.Soc.2004,126,8744)。さらに報告者は、本閉環反応において、ブロモアレン部分がアリルジカチオン等価体として機能していることに着目し、ブロモアレンのタンデム型環化反応について詳細に検討を行った。その結果、分子内にスルファミド部位を有するブロモアレンを用いて閉環反応を行うと、ビシクロ[4.3.0]骨格を有する二環性スルファミド類が効率良く合成できることを見出した。スルファミド骨格を有する化合物には様々な生物活性を有しているものが多く、本反応は環状スルファミド類の新規合成法として非常に有用である。またこの時、環化反応はパラジウムの有無に関わらず進行し、ブロモアレンが、パラジウム触媒非存在下でもアリルジカチオン等価体として機能しうることも新たに見出した(Angew.Chem.,Int.Ed.2005,44,1513)。当研究室では,エチニルアジリジンと有機銅試薬の反応により,降圧剤としての生理活性が期待されるアミノアレンに変換できることを明らかにしている.また,報告者は最近,2-エチニルアジリジンの立体選択的極性転換反応により1,3-アミノアルコールが高立体選択的に合成できることを見出した(J. Org. Chem. 2001,66,1867).このように,エチニルアジリジンは有機合成上,鍵中間体として非常に有用である.一方で,キラルなエチニルアジリジンの合成法はこれまで数例報告されているが,それらの合成法では高い光学純度のエチニルアジリジンを合成することは困難である.報告者は,光学的に純粋なエチニルアジリジンの立体選択的合成法の開発を目的として,軸不斉ブロモアレンの分子内アミノ化反応について詳細に検討した.その結果,アミノブロモアレンにDMF中でNaHを作用させると,いずれの軸不斉アミノブロモアレンからも2,3-cis-2-エチニルアジリジンが高立体選択的に得られることを見出した(2,3-cis : trans=79:21-91:9;Org. Lett.2001,3,2269).本反応におけるcis-選択性は反応遷移状態の安定性をB3LYP法を用いて分子軌道法により計算することで明らかにした.また,低極性溶媒であるTHFを用いることでcis-選択性を向上させることにも成功した(2,3-cis : trans=>99:1).さらに,本手法を用いることで,アゼチジンやピロリジンのcis-選択的合成にも成功した(J. Am. Chem. Soc.2002,124,15255).報告者は最近,本アミノ化反応をMeOH中,NaOMeとパラジウム触媒存在下に行うことで2,3-cis-アルケニルアジリジンが高立体選択的に合成できることも見出しており,本手法を簡便な複素環合成法に応用することを目的として現在,詳細に検討している.含窒素中員環は、さまざまな天然及び非天然物中に存在する重要な骨格であり、特に、七、八員環を有する化合物の中には非常に興味深い薬理作用を持っているものが多い。しかしながら、一般に中員環の構築はそのひずみのため困難な場合が多く、中員環化合物の効率的合成法の開発は生物学的観点だけでなく有機合成化学的にも重要な課題である。一方、ブロモアレンはその独特の構造から非常に注目されている分子であり、近年、ブロモアレンを用いた興味深い反応が多数報告されている。しかしながら、これらの反応はいずれも分子間反応であり、分子内反応についてはほとんど検討されていない。分子内反応を用いた環形成反応としては、最近、報告者が、アミノブロモアレンの分子内アミノ化反応による2,3-シス-2-エチニルアジリジンの立体選択的合成法を明らかにしている(J.Am.Chem.Soc.2002,124,15255)。さらに、報告者は本反応をMeOH中触媒量のPd(PPh_3)_4存在下NaOMeを用いて行うと、シスアルケニルアジリジンが高収率で得られることを見出した。そこで、分子内の適当な位置に求核部位を有するアミノブロモアレンを合成し、含窒素中員環化合物の新規合成法の開発を目的として、閉環反応を種々検討した。

その結果、アルコール性溶媒中、触媒量のパラジウム存在下に反応を行うと、位置選択的に閉環反応が進行し、環内に二つのヘテロ原子を有する含窒素七及び八員環化合物が収率良く得られることを見出した(Angew.Chem.,Int.Ed.2003,42,1749)。また、本閉環反応は酸素及び窒素原子を一つだけ有する中員環化合物の合成にも有効であり、azocine、azepine、oxocine、及びoxepine誘導体の新規合成法として有用であることも見出した(Heterocycles 2003,61,65)。本閉環反応は、ブロモアレン部分がアリルジカチオン等価体として機能し、二度の求核攻撃を引き起こしながら中員環を合成できる極めて有用な反応であり、現在、タンデム型閉環反応への応用を検討している。中員環化合物の効率的合成法の開発を目的として、分子内の適当な位置に求核部位を有するブロモアレンを合成し、閉環反応を検討した。その結果、アルコール性溶媒中、触媒量のPd(0)存在下、NaORを作用させることで、環内に一つまたは二つのヘテロ原子を有する七及び八員環化合物を収率良く合成することに成功した。この時、酸素及び窒素求核部位を有するブロモアレンを用いて閉環反応を行うとcis-オレフィンを有する中員環化合物が選択的に得られた。一方、興味深いことに、炭素求核部位を有するブロモアレンを用いて閉環反応を行うとtrans-オレフィンを有する八員環化合物が選択的に得られることを明らかとした。これらの結果は、ブロモアレンを中員環合成に用いた初めての例であり,希釈条件を必要としない本反応は合成上極めて有用であると考えられる(J.Am.Chem.Soc.2004,126,8744)。さらに報告者は、本閉環反応において、ブロモアレン部分がアリルジカチオン等価体として機能していることに着目し、ブロモアレンのタンデム型環化反応について詳細に検討を行った。その結果、分子内にスルファミド部位を有するブロモアレンを用いて閉環反応を行うと、ビシクロ[4.3.0]骨格を有する二環性スルファミド類が効率良く合成できることを見出した。スルファミド骨格を有する化合物には様々な生物活性を有しているものが多く、本反応は環状スルファミド類の新規合成法として非常に有用である。またこの時、環化反応はパラジウムの有無に関わらず進行し、ブロモアレンが、パラジウム触媒非存在下でもアリルジカチオン等価体として機能しうることも新たに見出した(Angew.Chem.,Int.Ed.2005,44,1513)。
1890年-1930年のドイツ語圏の文化・芸術の解体と融合

本研究は、「1890年-1930年のドイツ語圏の文化・芸術の解体と融合」というタイトルで、美術・音楽・舞踊・文学・モードなどの幅広い観点から、世紀末から20世紀初頭にかけてのドイツ語圏の文化・芸術の変革運動を考察してきた。その際、以下のように研究を分担した。藤井:音楽における解体と融合、西川:美術における解体と融合、山口:舞踊における解体と融合、古田:商業主義と芸術の融合。各自はさらにテーマの絞込みを行い、最終年度である2007年度には、藤井はシェーンベルクの調性システムを、西川はウィーン分離派、特にその第14回展覧会を、山口はラスカー=シューラーを、そして古田は雑誌『ユーゲント』を取り上げ、分析してきた。この2年間の研究成果は「研究成果報告書」などの形でまとめたが、そこでは19世紀末から20世紀初頭の芸術運動が、単にそれまでの規範を打ち壊してしまったのではなく、実は芸術のアウラ再生の試みであったり、あるいはその後の新たな芸術を生み出していくマトリックスとして機能したことなどを指摘した。研究スタート時の計画書で挙げた各自の目的は一応達することができたと考えているが、この研究を契機として新たな問題意識(例えば、古田の「ユーゲント」誌の芸術性という観点からのアプローチ)も生じ、また今回の研究では扱いきれなかったテーマ(例えば、西川の「総合芸術」というテーマ)も残った。そうした点については今後も各自取り組んでいくつもりである。19世紀後半から20世紀前半にかけて、ヨーロッパでは様々な分野の文化・芸術において革新運動が起こった。本研究では、1890年から1930年のドイツ語圏での文化・芸術に焦点を絞り、それを解体と融合という観点から分析しようというものである。美術、文学、音楽、舞踏あるいは当時の文芸誌、美術雑誌などの個別の分析を統合し、当時の文化・芸術に通底する共通点を探り出し、ひいては、ヨーロッパの「近代」から「現代」への転換の結果引き起こされた世界像の変化を解明しようというのが、最終的な目的である。今年度は、資料の収集の面では、西川、古田がウィーンやミュンヘンなどに赴き、当時の美術・文芸誌や文献の複写、19世紀末芸術の研究書や美術展カタログの購入などを行い、一次・二次資料収集に努めた。他方で、「1890年-1930年のドイツ語圏の文化・芸術の解体と融合」という本研究の総合テーマとの整合性を考えながらも、各自の研究の特殊性を発揮できるように、各自研究テーマの絞込みを行い、西川は1902年にウィーンで開かれた第14回分離派展(ベートーヴェン展)を、藤井はシェーンベルクの音楽理論と建築家アドルフ・ロースの理論との関係を、山口はエルゼ・ラスカー=シューラーにおける図像性を、古田は当時の雑誌「ユーゲント」の分析を行うことにした。また、平田達治氏を招き、「環状道路(リングシュトラーセ)の建設からユーゲントシュティールのウィーンへ-汎ヨーロッパ的視点をも交えて-」というタイトルで講演会を開き、知見を深めることができた。本研究は「1890年-1930年のドイツ語圏の文化・芸術の解体と融合」というタイトルで、美術・音楽・舞踊・文学・モードなどの幅広い観点から、世紀末から20世紀初頭にかけてのドイツ語圏の文化・芸術の変革運動を考察してきた。今年度は、資料収集の面では、山口がドイツに赴き、舞踊関係を中心に文献や資料の収集を行った。また、7月には立教大学の前田英樹氏に「20世紀の到来と様式の解体」というタイトルで講演をしていただき、世紀末フランスの芸術運動などを中心に知見を深めることができた。一方で各自研究テーマの絞込みを行い、藤井はシェーンベルクの調性システムを、西川はウィーン分離派、特にその第14回展覧会を、山口はエルゼ・ラスカー=シューラーを、そして古田は雑誌『ユーゲント』を取り上げ、分析してきた。

その研究成果は「研究成果報告書」などの形でまとめたが、そこでは19世紀末から20世紀初頭の芸術運動が、単にそれまでの規範を打ち壊してしまったのではなく、実は芸術のアウラ再生の試みであったり、あるいはその後の新たな芸術を生み出していくマトリックスとして機能したことなどを指摘した。研究スタート時の計画書で挙げた各自の目的は-応達することができたと考えているが、この研究を契機として新たな問題意識(例えば、古田の「ユーゲント」誌の芸術性という観点からのアプローチ)も生じ、また今回の研究では扱いきれなかったテーマ(例えば、西川の「総合芸術」というテーマ)も残った。そうした点については今後も各自取り組んでいくつもりである。
免疫性神経疾患における糖鎖へのＢリンパ球応答のネガティブレギュレーターの解析

糖脂質抗体陽性の免疫性神経疾患症例について、糖鎖への免疫反応を制御する分子の遺伝子解析を行ったところ、糖脂質抗体陽性のギラン・バレー症候群(GBS)の一部で特有の遺伝子変異がみられた。また各種糖脂質抗体陽性疾患の臨床特徴を調べたところ、ヒトの末梢神経のミエリンに局在するLM1関連抗原に対する抗体陽性の慢性ニューロパチー(CIDP)では脳神経障害が少なく運動失調が多いこと、ミエリンの抗原であるGal-Cに対する抗体陽性のGBSは脱髄型が多いことがわかった。IgMパラプロテイン血症を伴う末梢神経障害では、IgM M蛋白の反応特異性と臨床病型が関連することが明らかとなった。ギラン・バレー症候群(GBS)やIgMパラプロテイン血症を伴うニューロパチー(IgM-N)では、シアル酸を糖鎖にもつガングリオシドや硫酸基をもつスルファチドあるいは硫酸化グルクロン酸基含有複合糖質などに対する抗体が高頻度にみられる。また多発性硬化症や慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー(CIDP)でも、抗体上昇が報告されている。これら糖鎖に対する自己抗体の検討を行うとともに、陽性例におけるBリンパ球の上記糖鎖への免疫応答の抑制因子の解析を行った。われわれは、従来標的抗原が明らかでなかった、脱髄型のGBSやCIDPにおいて、末梢神経ミエリンに局在しシアル酸を糖鎖にもつ糖脂質であるLM1およびLM1を含む複合体(LM1/GM1,LM1/GD1b)に対する抗体上昇を見出したが、今年度これらの抗体陽性のCIDPの臨床像を詳細に解析して、脳神経障害を伴わず感覚障害性運動失調を高頻度にきたすこと、それらはLM1の分布と関連することを明らかにした。GBSにおける新たな標的抗原としてGM1/GalNAc-GD1a複合体に着目し、抗体陽性例を検討したところ、純粋運動型で神経幹中間部に伝導ブロックが高頻度にみられることが明らかとなった。GBSにおけるガングリオシド抗体の反応に対するリン脂質の効果について詳細に解析した。IgM-Nにおいて、硫酸化グルクロン酸基をもつ二つの複合糖質であるmyelin-associated glycoprotein(MAG)とphosphacanに対するIgM M蛋白の反応の強さを調べたところ、phosphacanに対する反応がMAGに比べて相対的に強いケースは症状増悪しやすい傾向がみられた。糖鎖へのBリンパ球応答の抑制因子であるCD72遺伝子の解析を行ったところ、IgM-Nにおいて特定のハプロタイプとの関連が示唆される結果が得られており、今後さらに症例数を増やして検討する予定である。また中枢神経の免疫疾患である多発性硬化症との関連も検討中である。ギラン・バレー症候群(GBS)やIgMパラプロテイン血症を伴うニューロパチーでは、シアル酸を糖鎖に有するガングリオシドや硫酸基をもつスルファチドおよび硫酸化グルクロン酸基含有複合糖質などに対する抗体が高頻度にみられる。ガラクトセレブロシド(Gal-C)はミエリンの主要な糖脂質であり、Gal-Cに対する抗体は動物実験で脱髄因子として働くことが示されている。ヒトのGBSでは、マイコプラズマ肺炎後の症例で抗Gal-C抗体陽性例が多いこと、病原因子であるMycoplasma pneumoniaeにはGal-C様糖鎖があり抗体産生は分子相同性機序によると考えられることなどが報告されていたが、多数例の解析は行われていなかった。今回抗Gal-C抗体陽性GBSの47例の解析により、同抗体陽性例は脱髄型GBSが多いこと、感覚障害と自律神経障害を伴うことが多いことが明らかとなった。また、抗ガングリオシド抗体の陽性頻度が高いGBSについて、わが国の症例の特徴について全国調査をして検討した。その結果、全体としては脱髄型が多いが、欧米と比べると軸索型の頻度が高いこと、抗GQ1b抗体がほとんどの例で陽性となる亜型であるフィッシャー症候群の頻度が、GBS全体の26%であり欧米の頻度と比べて高いことが明らかとなった。また軸索型と抗GM1抗体陽性が関連することも確認された。糖鎖へのBリンパ球応答の抑制因子としてSiglecに着目して、遺伝子の解析を行ったところ、GBSの一部で遺伝子変異の存在が見出された。今後さらに症例数を増やして検討する予定である。ギラン・バレー症候群(GBS)やIgMパラプロテイン血症を伴うニューロパチー(IgM-N)では、シアル酸を糖鎖に有するガングリオシドや硫酸基をもつスルファチドおよび硫酸化グルクロン酸基含有複合糖質などに対する抗体が高頻度にみられる。

これら糖鎖に対する自己抗体の検討を行うとともに、陽性例におけるBリンパ球の上記糖鎖への免疫応答の抑制因子の解析を行った。IgM-Nでは、約半数でIgM M蛋白がmyelin-associated glycoprotein (MAG)およびsulfated glucuronylparagloboside (SGPG)に対する抗体活性をもつ。一方、MAG/SGPGに対する反応が陰性の症例については解析が十分行われていなかった。今回MAG/SGPGに対する反応が陰性のIgM M蛋白をもつ症例の臨床的特徴と血清学的検討を行った。その結果、陰性例全体としてみた場合には臨床的に有意な特徴は見いだされなかった。一方陰性例の血中糖脂質抗体を検討したところ、一部の症例でガングリオシドに対するIgM抗体反応がみられた。最も多かったのはGM1抗体であり約4割でみられた、一方GD1bなどのジシアロシル基をもつガングリオシドに対する抗体活性も約4分の1の症例にみられた。GM1抗体は血清を希釈すると反応性は低下したが、ジシアロシル基に対する抗体は希釈することで抗体活性の上昇がみられた。またGM1抗体軽鎖はM蛋白の軽鎖と必ずしも一致しなかったが、ジシアロシル基に対する抗体の軽鎖はM蛋白のものと一致していた。以上よりIgM M蛋白そのものがジシアロシル基を認識すると考えられた。ジシアロシル基に対する抗体陽性例では、運動失調が高頻度でありIVIgによる治療に反応する例が多く、比較的均質な特徴を示した。糖鎖へのBリンパ球応答の抑制因子としてSiglecに着目して、遺伝子の解析を行ったところ、GBSの一部でSiglec 10の遺伝子変異の存在が見出され、GBS発症機序との関連が示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。医歯薬学26年度が最終年度であるため、記入しない。解析サンプルは順調に集積しており、糖鎖に対する抗体活性の解析も順調にすすめられている。遺伝子解析も予定通りの進捗を示しており、連携研究者との連携もスムーズである。遺伝子解析は担当者が数か月不在の時期がありやや遅れが生じたが、平成26年度には当初予定のペースに十分戻すことができる。連携研究者との連携もスムーズである。当初の研究計画通り、抗体解析、遺伝子解析とリンパ球表面マーカー解析をすすめる。平成24年度は遺伝子解析およびリンパ球表面マーカー解析の立ち上げまでにやや時間がかかり経費が予想をやや下回ったが、次年度は年度はじめからフル稼働となるため、予定通りの経費を必要とすると考えられる。遺伝子解析は担当者が数か月不在の時期がありやや遅れが生じ、その分予定の経費をやや下回る使用額となった。平成26年度には、上記の分を含めて予定通りの経費が必要となる。
高温性バチルスのウレアーゼ遺伝子の発現と同酵素の成熟活性化の遺伝生化学的研究

高温性バチルス属TB-90株よりクローン化したTB-90ウレアーゼ遺伝子クラスターに関して昨年度まで解析を行ってきた。本年度はいくつかの事情からそのデータの再解析と確認を行った。大腸菌でTB-90ウレアーゼを発現させるには、TB-90株染色体DNAの6.5kbの断片が必要であった。この断片中には9個のオープンリーディングフレーム(ORF、ureAureIと命名)が存在し、その翻訳方向、および転写開始、終結シグナルの検索の結果から、これらは1個のオペロンを形成していると結論できた。このオペロンの5′端部3個のORF(ureABC)は順にTB-90ウレアーゼの3個のサブユニット(11,12,61kDa)をコードする構造遺伝子であった。この下流の6個のORFのコードするアミノ酸配列とデーターベースとのホモロジー検索を行ったところ、4個のORFはグラム陰性細菌のウレアーゼ遺伝子クラスター中のアクセサリータンパクと高い相同性があることが判明し、ureEFGDという配置もHelicobacter pyloriとは同一であった。現在のところアクセサリー遺伝子の機能は不明であるが、大腸菌中でのウレアーゼ活性発現に対する必要性を解析した結果、ureFGDの3個は活性発現に必須であったが、ureEに欠失を導入してもウレアーゼ活性には大きな変化は認められなかった。この現象はKlebsiella aerogenesの場合と同一であった。一方、3′末端部2個のORF(ureHI)は従来知られているウレアーゼ遺伝子とは相同性を示さなかったが、UreHタンパクはAlcaligenes eutorophusのHoxNタンパクと相同性を示した。またureHI欠損は培地中に高濃度のニッケルイオン添加することで回復することから、この2個のタンパクで高親和性nickel transporterを構成していると考える。以上、グラム陽性菌におけるアクセサリー遺伝子を持つウレアーゼ遺伝子クラスターの存在とnickel transporterの存在を初めて明らかにした。(1)ウレアーゼ遺伝子の大腸菌内での発現高温性バチルス属TB-90株ウレアーゼ遺伝子は3種の構造遺伝子ureABCと6種の非構造遺伝子ureDEFGHIで構成されている。この9個の遺伝子を大腸菌に導入してウレアーゼを生産させた場合、発現したウレアーゼの大部分は不溶性の細胞内顆粒を形成してしまい、活性を持つ可溶性タンパクとして回収される量はわずかであった。ただしこの回収量は培地条件や培養時間に応じて変化したので、種々の調節タンパクによる影響を調べるための前段階として、培養条件の検討を行った。その結果、LB培地では可溶性ウレアーゼは全く生産させられなかったのに対し、アンモニアを含まないM9培地にLB培地を10%添加した培地では培養後1416時間目に大腸菌可溶性タンパク1mg当たり約35Uの比活性でウレアーゼを安定して生産させることができた。なおこの比活性を得るには、形質転換直後の大腸菌を培養する必要があった。(2)ウレアーゼタンパクの翻訳段階における調節ureA遺伝子のオープンリーディングフレーム(ORF)の5′末端領域にβ-ガラクトシダーゼ遺伝子のORFをインフレームで挿入し、ureA遺伝子の転写・翻訳量をβ-ガラクトシダーゼ活性を指標として定量的に測定できる系を構築した。この系で、ureEFG3種の遺伝子にそれぞれ個別にフレームシフトを導入し、それぞれの場合に発現されるβ-ガラクトシダーゼ活性を測定したところ、その活性はureEFGすべてが正常なときの活性と変化が認められなかった。

すなわち、ureEFG遺伝子産物はureA遺伝子上流のプロモータならびにSD配列からの転写・翻訳には全く関与していないことが示された。これより、ureEFG遺伝子産物はウレアーゼタンパクの翻訳後の成熟過程に関与しているものと推定できる。高温性バチルス属TB-90株よりクローン化したTB-90ウレアーゼ遺伝子クラスターに関して昨年度まで解析を行ってきた。本年度はいくつかの事情からそのデータの再解析と確認を行った。大腸菌でTB-90ウレアーゼを発現させるには、TB-90株染色体DNAの6.5kbの断片が必要であった。この断片中には9個のオープンリーディングフレーム(ORF、ureAureIと命名)が存在し、その翻訳方向、および転写開始、終結シグナルの検索の結果から、これらは1個のオペロンを形成していると結論できた。このオペロンの5'端部3個のORF(ureABC)は順にTB-90ウレアーゼの3個のサブユニット(11,12,61kDa)をコードする構造遺伝子であった。この下流の6個のORFのコードするアミノ酸配列とデーターベースとのホモロジー検索を行ったところ、4個のORFはグラム陰性細菌のウレアーゼ遺伝子クラスター中のアクセサリータンパクと高い相同性があることが判明し、ureEFGDという配置もHelicobacter pyloriとは同一であった。現在のところアクセサリー遺伝子の機能は不明であるが、大腸菌中でのウレアーゼ活性発現に対する必要性を解析した結果、ureFGDの3個は活性発現に必須であったが、ureEに欠失を導入してもウレアーゼ活性には大きな変化は認められなかった。この現象はKlebsiella aerogenesの場合と同一であった。一方、3'末端部2個のORF(ureHI)は従来知られているウレアーゼ遺伝子とは相同性を示さなかったが、UreHタンパクはAlcaligenes eutorophusのHoxNタンパクと相同性を示した。またureHI欠損は培地中に高濃度のニッケルイオン添加することで回復することから、この2個のタンパクで高親和性nickel transporterを構成していると考える。以上、グラム陽性菌におけるアクセサリー遺伝子を持つウレアーゼ遺伝子クラスターの存在とnickel transporterの存在を初めて明らかにした。
NK細胞活性化制御による腫瘍監視の増強

SLP-76ファミリーに属するシグナル分子であるMISTおよびSP-76分子を単独あるいは二重に欠損したNK細胞を用いて、NK細胞の細胞障害活性ならびにIFN-γ産生について解析を行い、これら2つのSLP-76ファミリー分子はNK細胞受容体シグナル伝達にそれぞれ個別ならびに相互依存的な役割をもつことを明らかにした。第一に、MISTはSrcファミリーキナーゼであるFgrと結合することにより、IFN-γ産生に必要なNK細胞受容体シグナルを抑制することを明らかにした。Fgrを発現していないNKT細胞にFgrを異所的に発現させたところ、MISTを発現するNKT細胞ではNK細胞受容体を介したIFN-γ産生が低下したが、MIST欠損NKT細胞ではそのようなIFN-γ産生の低下が認められなかった。またFgr欠損NK細胞においても、MIST欠損NK細胞と同様、NK細胞受容体刺激によるIFN-γ産生の亢進が認められ、Fgf欠損NK細胞に野生型Fgrを導入すると、そのIFN-γ産生の亢進は野生型レベルまで低下したが、MISTと結合できないSH3ドメイン変異型ではそのような抑制が認められないことから、MISTとFgrが協調して機能することが、NK細胞受容体シグナルの抑制に必須であることが判明した。第二に、SLP-76/MIST二重欠損細胞を用いた解析から、NK細胞の細胞傷害活性の発現にはSLP-76とMISTを介したシグナルが必須であるが、IFN-γの産生には必須でないことが判明し、NK細胞受容体を介したNK細胞の細胞障害活性とIFN-γ産生はMISTとSLP-76によって異なる制御を受けていることが明らかになった。
抗悪性黒色腫モノクローナル抗体を用いた抗体結合抗癌剤の実験的化学療法

当科で樹立,維持しているヒト悪性黒色腫細胞株(HMG)に対するモノクロナール抗体(IA6-C2)および同抗体をペプシン処理後、還元したFab'をシスプラチン封入リポソームに結合し(Ab-Lip-CDDP,Fab'-Lip-CDDP)、悪性黒色腫細胞に対する抗腫瘍効果をin vitroでシスプラチン封入リポソーム(Lip-CDDP)、シスプラチン(CDDP)と比較検討した.また,担悪性黒色腫(HMG)ヌードマウスに投与しプラチナの組織内濃度を測定した.モノクローナル抗体はプロテインAアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製した。抗体とリポソームの結合にはS-S結合架橋剤であるSPDPを用いたが,Fab'では抗体のSH基を利用した.リポソームは構成脂質として卵黄フォスファチジルコリン,コレステロール,フォスファチジルエタノールアミンとSPDPの合成物質(DPT-DPPE)をモル比26:10:0.4で作成した.封入シスプラチン量を原子吸光分光光度計によるPt定量から測定し,封入効率は約3%であった.さらに,安定性について,放出シスプラチン量を経時的に測定し,37°C培養液(RPMI 1640+20%FBS)中では,24時間後に封入量の56%,48時間後には72%が放出された。4°CPBS中では24時間後に12%,48時間後で14%の放出がみられ,最低48時間は保存状態で安定であることが示された。in vitroで悪性黒色腫細胞と正常線維芽細胞にPBS封入リポソームを投与したが,細胞動態に変化はみられず,リポソームの構成成分に毒性はみとめられなかった。in vitroでのHMGに対するAb-Lip-CDDPの抗腫瘍効果は,Lip-CDDPの約2.1倍,CDDPの約20倍であり,他の2群に比し有意差を認めた.しかしFab'-Lip-CDDPでは,CDDPと同等の効果であった.in vivoにおけるAb-Lip-CDDP投与時のプラチナの組織内濃度は腫瘍でLip-CDDPの約1.4倍,CDDPの約2倍であった.腎臓ではLip-CDDPの約0.7倍,CDDPの約0.5倍に減少した.当科で樹立,維持しているヒト悪性黒色腫細胞株(HMG)に対するモノクロナール抗体(IA6-C2)および同抗体をペプシン処理後、還元したFab'をシスプラチン封入リポソームに結合し(Ab-Lip-CDDP,Fab'-Lip-CDDP)、悪性黒色腫細胞に対する抗腫瘍効果をin vitroでシスプラチン封入リポソーム(Lip-CDDP)、シスプラチン(CDDP)と比較検討した.また,担悪性黒色腫(HMG)ヌードマウスに投与しプラチナの組織内濃度を測定した.モノクローナル抗体はプロテインAアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製した。in vitroでのHMGに対するAb-Lip-CDDPの抗腫瘍効果は,Lip-CDDPの約2.1倍,CDDPの約20倍であり,他の2群に比し有意差を認めた.しかしFab'-Lip-CDDPでは,CDDPと同等の効果であった.in vivoにおけるAb-Lip-CDDP投与時のプラチナの組織内濃度は腫瘍でLip-CDDPの約1.4倍,CDDPの約2倍であった.腎臓ではLip-CDDPの約0.7倍,CDDPの約0.5倍に減少した.卵黄フォスファチジルコリンおよびコレステロール(モル比5:2)をリポソームの構成脂質として使用し,超音波処理(80w,5分)によりシスプラチン封入リポソームを作製した。封入シスプラチン量を原子吸光分光光度計によるPt定量から測定し,封入効率を算出すると約3%であった。さらにシスプラチン封入リポソームの安定性について,放出シスプラチン量を経時的に測定し検討した。37°C培養液(RPMI1640+20%FBS)中では24時間後に封入量の56%,48時間後には72%が放出された。4°CPBS中では24時間後に12%,48時間後で14%の放出がみとめられたのみであり、最低48時間は保存状態で安定であることが示された。in vitroで悪性黒色腫細胞と正常線維芽

細胞にPBS封入リポソームを投与したが、細胞動態に変化はみられず,リポソームの構成成分に毒性はみとめられなかった。さらに,原子吸光分光光度計によるPt定量値を基に各種濃度に調整したシスプラチン封入リポソームとフリーシスプラチンを48時間作用させ,悪性黒色腫細胞に対する抗腫瘍効果を比較,検討すると,シスプラチン封入リポソームの方が低値を示した。その原因として,リポソーム内に封入されたままの末放出シスプラチンが存在し細胞に作用しなかったことが考えられた。またこのリポソームには腫瘍細胞に対する選択性がなく,細胞によるリポソームの取り込みが少なかったことも,抗腫瘍効果の低下した原因と考えられた。今後,腫瘍選択性を増すためモノクロナール抗体結合リポソームを作製し、実験を行なっていく予定である。細胞は当科で樹立,維持しているHMGを用いた.モノクローナル抗体は悪性黒色腫細胞の表面抗原を認識するマウスIgG抗体でHMGに結合能を示し,ハイブリドーマ培養上清よりプロテインAアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製した。抗体とリポソームの結合にはS-S結合架橋剤であるSPDPを用いたが,Fab'では抗体のSH基を利用した.リポソームは構成脂質として卵黄フォスファチジルコリン(PC),コレステロール(CH),フォスファチジルエタノールアミンとSPDPの合成物質(DTP-DPPE)をモル比26:10:0.4とした.in vitroでのHMGに対するAb-Lip-CDDPの抗腫瘍効果は,Lip-CDDPの約2.5倍,CDDPの約20倍であり,他の2群に比し有意差を認めた.しかしFab'-Lip-CDDPでは,CDDPと同等の効果であった.in vivoにおけるAb-Lip-CDDP投与時のプラチナの組織内濃度は腫瘍でLip-CDDPの約1.4倍,CDDPの約2倍であった.腎臓ではLip-CDDPの約70%,CDDPの約50%に減少した.これらの結果からモノクロナール抗体結合抗癌剤封入リポソームによる化学療法は,腫瘍組織に対する特異性を高めると共に副作用の軽減を目的としたターゲット療法として,非常に有用であると考えられた.
siRNAを用いたサイトカイン制御による円形脱毛症治療法の開発

円形脱毛症の新規の治療法を模索するために、円形脱毛症の活動期の毛包周囲に浸潤している細胞の種類を免疫組織化学法によって検討したところ、CD4陽性CCR5陽性細胞がCD4陽性CCR4陽性細胞より有意に多く、Th1型の反応がTh2型の反応より優位であると考えられた。続いて円形脱毛症モデルマウスC3H/HeJマウスを用いた実験を行った。このマウスは加齢とともに脱毛斑を自然発症し、毛包周囲にCD4陽性リンパ球、CD8陽性リンパ球が浸潤し、局所免疫療法が奏効し、ヒトの円形脱毛症に似た症状を呈す。このマウスの脱毛斑にインターロイキン4を毎日3週間局所注射すると、コントロールと比較し、脱毛の改善率は高かった。さらに抗インターフェロンガンマ中和抗体をC3H/HeJマウスの脱毛部に1週間毎日局所注射すると、ラットIgGを注射したコントロール群と比較し、脱毛斑の改善率が高かった。次にT-box21という遺伝子に着目した。T-box21蛋白はTh1リンパ球への分化に非常に重要な役割を果たす転写因子である。このT-box21遺伝子を欠損したマウスではTh1リンパ球への分化にが抑制され、Th1型の免疫反応が減弱している。さらに、T-box21蛋白はTh1リンパ球への分化に重要なインターフェロンガンマのプロモーターに結合し、インターフェロンガンマ遺伝子の発現を増強していることが報告されている。2日に一度C3H/HeJマウスにこのT-bet蛋白の発現を抑制するT-box21アンチセンスオリゴヌクレオチドを7回注射したところ、コントロール群と比較し、脱毛斑の改善率が高かった。さらにT-box21遺伝子siRNAをゼラチンを用いて徐放化させると、マウスの脱毛斑が改善した。これらの結果はヒトの円形脱毛症の新規の治療法につながる可能性があると考えた。このマウスの脱毛斑にインターロイキン4を毎日3週間局所注射すると、コントロールの生理食塩水を局所注射した場合と比較し、脱毛の改善率は高かった。また、半定量的RT-PCR法により、脱毛部では有毛部よりインターフェロンガンマの発現が高いが、インターロイキン4により発現が抑制されることが確認された。次にT-betという遺伝子に着目した。T-bet蛋白はTh1リンパ球への分化に非常に重要な役割を果たす転写因子である。このT-bet遺伝子を欠損したマウスではTh1リンパ球への分化が抑制され、Th1型の免疫反応が減弱している。

さらに、T-bet蛋白はTh1リンパ球への分化に重要なインターフェロンガンマのプロモーターに結合し、インターフェロンガンマ遺伝子の発現を増強していることが報告されている。2日に一度C3H/HeJマウスにこのT-bet蛋白の発現を抑制するT-betアンチセンスオリゴヌクレオチドを7回注射したところ、コントロール群と比較し、脱毛斑の改善率が高かった。これらの結果はヒトの円形脱毛症の新規の治療法につながる可能性があると考えた。円形脱毛症の新規の治療法を模索するために、円形脱毛症の活動期の毛包周囲に浸潤している細胞の種類を免疫組織化学法によって検討したところ、CD4陽性CCR5陽性細胞がCD4陽性CCR4陽性細胞より有意に多く、Th1型の反応がTh2型の反応より優位であると考えられた。続いて円形脱毛症モデルマウスC3H/HeJマウスを用いた実験を行った。このマウスは加齢とともに脱毛斑を自然発症し、毛包周囲にCD4陽性リンパ球、CD8陽性リンパ球が浸潤し、局所免疫療法が奏効し、ヒトの円形脱毛症に似た症状を呈す。このマウスの脱毛斑にインターロイキン4を毎日3週間局所注射すると、コントロールと比較し、脱毛の改善率は高かった。さらに抗インターフェロンガンマ中和抗体をC3H/HeJマウスの脱毛部に1週間毎日局所注射すると、ラットIgGを注射したコントロール群と比較し、脱毛斑の改善率が高かった。次にT-box21という遺伝子に着目した。T-box21蛋白はTh1リンパ球への分化に非常に重要な役割を果たす転写因子である。このT-box21遺伝子を欠損したマウスではTh1リンパ球への分化が抑制され、Th1型の免疫反応が減弱している。さらに、T-box21蛋白はTh1リンパ球への分化に重要なインターフェロンガンマのプロモーターに結合し、インターフェロンガンマ遺伝子の発現を増強していることが報告されている。2日に一度C3H/HeJマウスにこのT-bet蛋白の発現を抑制するT-box21アンチセンスオリゴヌクレオチドを7回注射したところ、コントロール群と比較し、脱毛斑の改善率が高かった。さらにT-box21遺伝子siRNAをゼラチンを用いて徐放化させると、マウスの脱毛斑が改善した。
光・熱変換により薬剤放出を制御する機能性金ナノ粒子の開発

近年、金ナノ粒子など無機材料が機能性バイオマテリアルとして注目されている。棒状の金ナノ粒子である金ナノロッドは近赤外域(800-1,000nm)の強い吸収をもち、近赤外光照射による発熱といった特性を有している。また。近赤外光は生体へのダメージが非常に少なく非侵襲的な外部刺激として適している。本研究では、金ナノロッドを温度感受性ポリマーで内包したナノゲルを作製し、近赤外光刺激によって薬物放出、蓄積を実現するDDSを提案する。金ナノロッドをpoly N-isopropylacrylamide(PNIPAM)のナノゲルで修飾するため、その重合反応に耐えうるための表面を作製する必要がある。そこでまず金ナノロッドをシリカでコートすることを試み、シリカ表面をもつ金ナノロッドの作製に成功した。次に表面にメタクリル基を導入し、沈殿重合によりPNIPAMゲルで表面を被覆し、HF処理によりシリカを除去することで、NIPAM修飾金ナノロッドを得た。このNIPAM修飾金ナノロッドは金ナノロッド特有の近赤外域に強い吸収を持ち、金ナノロッドが安定に存在し、TEM観察により金ナノロッドがPNIPAMゲルで内包されていることが認められた。NIPAMの濃度や架橋剤の濃度を変化させることでそのNIPAM修飾金ナノロッドの粒径を変化することを確認し、粒径の変化を容易に調製できた。また、NIPAM修飾金ナノロッドが可逆的に温度によって相転移することも確認した。また、近赤外光照射に応答して膨潤・伸縮挙動を示し、かつ可逆的であった。ダンシルアミドを利用して薬物の内包を確認した。NIPAM修飾金ナノロッドをマウスに投与し、近赤外光を標的組織に照射することにより、金ナノロッドを照射部位に蓄積でき、外部刺激によって体内に投与された金ナノロッドの動態制御に成功した。また、近赤外光は生体へのダメージが非常に少なく非侵襲的な外部刺激として適している。本研究では、金ナノロッドを温度感受性ポリマーで内包したナノゲルを作製し、光刺激によって薬物放出を実現するDDSを提案する。金ナノロッドをpoly N-isopropylacrylamide(pNIPAAm)のナノゲルで修飾するため、その重合反応に耐えうるための表面を作製する必要がある。次に表面にメタクリル基を導入し、沈殿重合によりpNIPAMゲルで表面を被覆し、HF処理によりシリカを除去することで、金ナノロッド内包pNIPAAmナノゲルを得た。このナノゲルは金ナノロッド特有の近赤外域に強い吸収を持ち、金ナノロッドが安定に存在し、TEM観察により金ナノロッドがpNIPAAmゲルで内包されていることが認められた。NIPAMの濃度や架橋剤の濃度を変化させることでそのpNIPAMゲルの粒径を変化することを確認し、粒径の変化を容易に調製できた。また、このナノゲルが可逆的に温度によって相転移することも確認した。今後、近赤外レーザーを照射し、薬剤放出の有無を確認し、培養細胞、動物実験を重ねて、ドラッグデリバリーの可能性を検討する。また。
成長ホルモンの卵巣作用に関する臨床ならびに基礎的研究

本年度は、体外受精患者の採卵時に得られた顆粒膜細胞における成長ホルモンリセプターのmRNA発現をRT-PCRにて観察し、卵胞液中ならびに血清中の成長ホルモン結合蛋白との相関を検討した。GnRHアナログ併用下でhMGによる卵胞刺激をおこない、卵胞成熟を確認後hCGを投与、36時間後に採卵した。得られた卵胞液を遠心分離し、顆粒膜細胞よりRNAを抽出した。primerは成長ホルモンリセプターの細胞内ドメイン領域の578bp断片を増幅するべく考案した。またhouse keeping geneとしてGAPDHを用いた。この結果、成長ホルモンリセプターの顆粒膜細胞でのmRNA発現を観察しえたが、その発現の過程と血清ならびに卵胞液中の成長ホルモン結合蛋白との相関は見出せなかった。また一個体における複数の卵胞液間で成長ホルモン結合蛋白濃度に強い相関があること、ならびに卵胞液中と血清中でも強い相関があることから、卵胞液中の成長ホルモン結合蛋白の主な由来は顆粒膜細胞ではなく他臓器(肝臓など)であることが推測された。成長ホルモンの卵巣作用の解明の一助として、ヒト対外受精患者における血清中ならびに卵巣液中における成長ホルモン(GH)、成長ホルモン結合蛋白(GHBP)、インシュリン様成長因子(IGF-1)の動態につき検討した。主な研究成績として、1卵巣液中には3-32ng/mlの濃度でGHBPが存在した。2ヒト対外受精患者において、採卵時における血清ならびに卵胞液中におけるGHBPならびにIGF-1は各々ほぼ同量に存在しかつ卵胞間の差異がなく、卵胞液中におけるGHBPならびにIGF-1の由来は主として血清よりの移行であると考えられた。同一患者での過排卵刺激中の血清GHBP濃度はE2の上昇には関係なくほぼ一定に推移した。4採卵時における血清GHBP濃度20ng/ml以上の患者群(n=4)および20ng/ml以下の患者群(n=14)を比較すると、採卵数は前者で2.0±1.4、後者で7.7±1.4と有意に(p<0.05)前者において少なく、血清E2濃度も前者で580±409、後者で1092±1350ng/mlと低い傾向が認められた。また両群において採卵時血清IGF-1濃度および卵胞期初期の血清FSH濃度ならびにGH濃度に差は認められなかった。以上の成績から血清中ならびに卵胞液中のGHBPは、GHの作用modulateしている可能性が示された。GHの肝臓からのIGF-1分泌を介する機序の他に、直接的な卵巣への作用が示唆された。また体外受精患者におけるpoor responderの予測として卵巣機能の低下の指標となる可能性が示された。poor responderの一部の患者においてGHPBが血清および卵胞液中に過剰に存在するためにGH作用が相対的に抑制され、卵胞発育が障害されている可能性が示された。本年度は卵巣における成長ホルモンリセプターのmRNA発現を観察した。ヒトの場合、成長ホルモンリセプターの細胞外ドメインの分離により、可溶性の成長ホルモン結合蛋白が生じ、成長ホルモン作用をmodulateすると考えられている。まずはじめに患者(5名)の同意の上、手術時に採取した卵巣組織より総RNAを抽出した。RNA(5μg)をReverge TranscriptionしcDNAを作成、PCR反応に供した。プライマーの選択には、成長ホルモンリセプターの細胞内ドメインを増幅、578bp断片DNAを得るべく考案した。これにより、全例において卵巣内における成長ホルモンリセプターのmRNA発現が検出された。続いて、体外受精患者の採卵時に得られた顆粒膜細胞における成長ホルモンリセプターのmRNA発現を観察した。またhouse keeping geueとしてGAPDHを用いた。この結果、全例にmRNA発現を観察しえたが、卵胞液中、血清中の成長ホルモン結合蛋白との相関算の解析には、症例数の増加(現在7名)が必要である。primerは成長ホルモンリセプターの細胞内ドメイン領域の578bp断片を増幅するべく考案の目的した。

またhouse keeping geneとしてGAPDHを用いた。この結果、成長ホルモンリセプターの顆粒膜細胞でのmRNA発現を観察しえたが、その発現の程度と血清ならびに卵胞液中の成長ホルモン結合蛋白との相関は見出せなかった。また一個体における複数の卵胞液間で成長ホルモン結合蛋白濃度に強い相関があること、ならびに卵胞液中と血清中でも強い相関があることから、卵胞液中の成長ホルモン結合蛋白の主な由来は顆粒膜細胞ではなく他臓器(肝臓など)であることが推測された。
細胞外からのシグナルの変換体としての転写制御因子Mafの生化学

Maf転写因子ファミリーは、DNA結合転写制御因子としては最も研究が進んでいる因子のひとつであり、生体内のさまざまな局面で細胞の分化・恒常性の維持にとって重要な役割を担っていることが、細胞・個体レベルであきらかにされてきている。一方で、Mafが細胞外のさまざまなシグナルに応答して活性を変化させる「シグナル変換体」としての側面を持つことが最近あきらかになりつつあるが、その調節システムはよくわかっていない。本研究は、Mafタンパク質の活性調節システムを分子レベルであきらかにすることを目的としている。これまでの研究において、Mafファミリータンパク質が細胞内でリン酸化を受ける部位をあきらかにしてきた。さらに本研究では、Mafファミリータンパク質がSUMO(Small Ubiquitin-like Modifier)タンパク質により修飾されることを見出し、その修飾部位であるリジン残基を決定した。さらに、これらのさまざまな翻訳後修飾がMafタンパク質の活性(細胞内局在、DNA結合能、転写活性化能・など)におよぼす影響について詳細に解析を行ったところ、Mafファミリー転写因子の活性は、これらの翻訳後修飾により多段階で制御されていることがわかった。例えば、SUMO修飾はMafの転写活性に対して抑制的であること、Mafタンパク質のN末端側の複数のリン酸化は、意外なことにMafのDNA結合能(C末端側のbasic leucinezipper構造が担っている)を促進すること、などである。特に外界のシグナルとの関連では、細胞外グルコース濃度に応じたMafタンパク質の安定性の変化(分解の速度の制御)が、N末端側の複数のリン酸化によって規定されていることを見出した。しかしながらこの変化は、リン酸化の程度の変化ではなく、グルコース濃度に応じた分解系の活性の変化にもとづくことがわかった。すなわち、Mafタンパク質の直接の修飾の変化ではなく、その制御機構の変化が本質であり、Maf転写因子ファミリーの活性制御機構すなわち「シグナル変換」の分子機構の解明は新しい展開を迎えつつある。
日本語諸方言の文法を総合的に記述する『全国方言文法辞典』の作成とウェブ版の構築

本研究では、日本語諸方言の文法を総合的に記述する『全国方言文法辞典』の編纂を目的として現地調査、方言文献資料調査、歴史的変異調査を行い、さらに調査データを集積するウェブシステムを構築してきた。本研究期間の研究成果として、(1)活用体系の地理的変異と歴史的変異の総合的考察をテーマとした学会発表、(2)要地方言の活用体系を記述した『全国方言文法辞典資料集(2)活用体系』の刊行、(3)条件表現・逆接表現の調査方針を示した『『全国方言文法辞典』のための条件表現・逆接表現調査ガイドブック』の刊行、(4)条件表現の地理的変異に関する学会発表を行った。『全国方言文法辞典』のための調査・研究として、以下の作業を進めた。1.条件表現・逆接表現の共通調査項目を作成した。この作業は、最終的な辞典項目記述において、接続関係、意味用法などの記述の枠組みを設定する作業につながるものである。検討の結果、条件表現は79項目、逆接表現はケレドモ・ノニ類25項目、テモ類46項目の調査項目を設けることとした。2.条件表現・逆接表現の辞典記述対象項目と共通調査要地方言の選定を行った。選定のため、国立国語研究所編『方言文法全国地図』の関連図の略図を作成し、分析を行った。その結果、条件表現については、カラ・ギー・ゴッタラ・ジャー・タッキャ・タシノ・タト・タバ・ダバ・タラ・ト・トキ・トサイガ・ナラ・ナバ・ネー・(-a)バ・(-e)バ・(-o)バ・テワ、逆接表現については、ケレドモ類:ガ・ケレドモ・シガ・ダドモ・ド(已然+ド)・ドモ・バッテ・ママイ、ノニ類:準体助詞+ニ・準体助詞単独、テモ類:カテ・タッテ・テモ・バンマイを記述対象項目とし、それぞれの形式を使用する要地方言を選定した。3.共通調査データのウェブ入力システムを構築した。本研究では異なる調査員が行った現地調査の結果を利用して辞典項目の記述を行うため、調査データは、誰でも利用できる形、すなわちデータベース化する必要がある。そこで、各地で調査を行った調査員がWebサーバーにアクセスし、調査結果報告のフォームに調査結果を入力、入力されたデータは即時にデータベース化されていくシステムを構築した。システム構築の成果を報告するものとして、情報処理学会第72回全国大会(2010年3月9日、東京大学)において、「Web版「全国方言文法辞典」の構築に向けて調査データの報告システム開発について」と題して口頭発表を行った。1.条件表現・逆接表現の共通調査項目とその解説および全国諸方言の条件表現・逆接表現の分布を概観した研究成果報告書『『全国方言文法辞典』のための条件表現・逆接表現調査ガイドブック』を刊行した。2.条件表現・逆接表現の共通調査を下記の地点で実施した(()内は調査担当者)。秋田県秋田市大町(日高水穂)・富山県中新川郡立山町芦峅寺(小西いずみ)・高知県高知市(橋本礼子)・山口県光市(橋本礼子)・長崎県壱岐市勝本町(小西いずみ)・熊本県人吉市(松丸真大)3.条件表現・逆接表現の共通調査データのウェブ入力システムの整備を行った。2で調査を終えた地点については、調査結果のウェブ入力を進めている。4.2010年9月および12月に研究打合せ会議を行い、条件表現・逆接表現の調査報告を行うとともに、諸方言の活用体系の記述のための検討を行った。日本語の文法記述を行うためには、用言の活用体系をどのようにとらえ、整合性のある記述を行うかが、重要な課題となる。諸方言の活用体系については、個々の方言を対象にした先行研究は多いが、全国方言の活用体系を同じ枠組みで記述することは十分に行われてきていない。特に、琉球方言は、本土方言とは大きく異なった活用体系をもつため、同じ枠組みで記述するためには十分な検討が必要である。また、諸方言と古典語との対照が可能な枠組みも検討する必要がある。諸方言と古典語の対照を可能にする活用体系の記述の枠組みを設定することは、本研究課題の根底に関わる部分であるため、来年度以降も引き続き検討を重ねていく予定である。平成23年度の交付申請書には、具体的な研究内容として、以下のものをあげていた。1.諸方言の活用体系の記述方針の策定と『全国方言文法辞典《活用編》』の作成。2.条件表現・逆接表現の共通調査の実施と調査結果の報告、辞典項目記述のための検討。3.格・主題・とりたて・形式名詞・接辞類の共通調査項目の検討。4.共通調査データのウェブ入力システムの運用・整備。