hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
専門教育を多人数教育として実現するための知識ベースと自律型チーム学習の研究

本研究は,大学の多人数教育を改善することを目的として2000年以来継続して研究している教育技術であり,その間に毎年研究成果を主にヨーロッパにおいて発表してきている.わが国では失業者,生活保護世帯,外国人労働者などの本人ならび家族にどのように高等教育を提供するかについてはあまり研究されていないが,ヨーロッパ諸国にとっては重要な課題であるので,研究成果の発表についてはヨーロッパの方が反響は大きい.2000年から10年にわたる実践的研究の成果としてつぎのような仮説が得られている.仮説:学習過程の設計は,メタファー,イメージ,モデルおよび命題の集合体として記述できる.このように記述できれば,これを知識として蓄積,流通することができる.とくにメタファー,イメージ,モデルを利用することについては,まったく新しい授業を開発するためには集団思考が不可欠であり,そのためには長期にわたるチーム学習が必要になる.このチーム学習では学習者が授業進行の主導権を握るのでその設計,管理にはさまざまな配慮が必要である.学生をチームとして構成した場合には,チーム内での人間関係はきわめて重要であり,それに関する研究成果がえられた.本研究は,大学の多人数教育を改善することを目的として2000年以来継続して研究している教育技術であり,その間に毎年研究成果を主にヨーロッパにおいて発表してきている.わが国では失業者,生活保護世帯,外国人労働者などの本人ならび家族にどのように高等教育を提供するかについてはあまり研究されていないが,ヨーロッパ諸国にとっては重要な課題であるので,研究成果の発表についてはヨーロッパの方が反響は大きい.2000年から10年にわたる実践的研究の成果としてつぎのような仮説が得られている.仮説:学習過程の設計は,メタファー,イメージ,モデルおよび命題の集合体として記述できる.このように記述できれば,これを知識として蓄積,流通することができる.とくにメタファー,イメージ,モデルを利用することについては,まったく新しい授業を開発するためには集団思考が不可欠であり,そのためには長期にわたるチーム学習が必要になる.このチーム学習では学習者が授業進行の主導権を握るのでその設計,管理にはさまざまな配慮が必要である.学生をチームとして構成した場合には,チーム内での人間関係はきわめて重要であり,それに関する研究成果がえられた.わが国は大学の授業料の高騰ならびに教員の資質向上などの問題に当面しているが,従来のキャンパス学習を中心とした授業形態では,多様化する高等教育のニーズに十分に対応することができない.これまでの研究で大学学部における多人数教育でのチーム学習を基本とする協調自律学習についての成果を出版物としてミネルヴァ書房から公刊することができた.これを教科書として授業を進めるとともに,佛教大学大学院,滋賀大学大学院ならびに岐阜大学大学院の授業において一部を遠隔学習で実施した.佛教大学と滋賀大学の場合はインターネットを活用した授業であり,岐阜大学の場合はビデオ会議システムを活用したサテライトを含む遠隔授業である.受講者が慣れていない点もあったが実施そのものは一昨年よりも格段に改善された.しかしなお,学習意欲を維持するためにはさらなる改善が必要である.一つにはキャンパス学習と遠隔学習とを関連付けるためのテーマの設定である.現職教員は日常業務に追われているので課題をさらに日常業務を組織的合理的に改善するようなテーマにするとともに研究方法についても改善を要する.とくに実践的な教育研究では,従来,数量的分析による科学的知見を得ることを重視していたが,むしろ実態を改善するための技術的研究方法を開発発展する必要がある.この研究成果を受けて2008年度については滋賀大学教育学部,京都市教育委員会の初任者研修ならびに京田辺市教育委員会の情報教育に関する研修などに適用してその改善を図る.従来の授業研究においては,科学的な視点が重視されていたので,実施した結果については少数の命題として表現することが一般的であった.とくに科学的研究としての普遍性を主張するために統計的な処理によって命題を検証することが重視された.また質的分析手法を採用する場合においても科学的研究としての解釈の厳密性が重視され,さらに研究成果が普遍性をもつことが科学的であると考えられてきた.しかしながら授業研究においてはこのような科学的な方法には限界がある.最近のインターネットの発達は,世界的規模で事例を参照することができるようになり,映像も含めて授業過程をそのまま記録したり伝達したりすることが可能になってきた.さらに教育問題は複雑で流動的であるので自然科学のように知見を論理的に構築していくことが困難である.ところで授業設計は予測体系を表現したものであること,実施時においても時間とともに消滅していく過程であることがその特徴である.したがってこのような動的過程をどのように記述するかが課題である.西之園らが試みたのはそれをシンボリズムの視点からメタァー,イメージ,モデル,命題の集合体として記述することをこころみてきた.このような記述方法は,従来の研究成果としての論文としてではなく,授業過程を単なる事象の記述でもなく,設計との対応においての認識,判断をともなう記述方法であるといえる.その成果について海外でも発表してきた.また宮田はモバイルを活用して多人数授業での論理的思考の学習に利用して効果をあげてきた.
カルボニルストレス関連分子をバイオマーカーとした統合失調症の病態解明

一部の統合失調症におけるカルボニルストレスの亢進について、新たな大規模コホートで再現性を確認した。統合失調症156名、健常者221名で検証した結果、患者群でのペントシジンの有意な上昇とビタミンB6の有意な低下を再確認した。また、カルボニルストレスが亢進している患者群について、「入院患者の割合が高い」、「入院期間が長期に及ぶ」、「抗精神病薬の量が多い」という治療抵抗性に類似した臨床特徴を抽出した。さらにビタミンB6と精神症状が負に相関することを見出した。本研究の成果は、治療抵抗性統合失調症におけるビタミンB6の治療が、安全かつ有効な治療法となる可能性を示唆していると考えられた。平成25年度には、ペントシジン、ビタミンB6などのカルボニルストレス関連分子バイオマーカーの挙動を統合失調症患者、健常者の血液を用いて解析した。その結果、上記バイオマーカーが健常者と比較して一部の統合失調症で顕著に亢進していることが再確認された。以上の結果をPsychiatry and Clinical Neuroscienceに発表した。また、カルボニルストレスを呈する統合失調症の臨床特徴をまとめた。その結果、カルボニルストレスが亢進している患者は、カルボニルストレスのない患者さんと比較して、入院患者の割合が多く、入院期間が長く、大量の抗精神病薬を服薬していることを明らかにした。また、血清ビタミンB6がPANSSで評価される統合失調症の症状と逆相関することを同定した。以上から、カルボニルストレスを呈する統合失調症患者は、Kaneらが定義する治療抵抗性統合失調症の臨床症状、経過に類似することを明らかにし、ビタミンB6がクロザピンと同様に同疾患の治療薬となる可能性が示唆された。以上の結果をSchizophrenia Bulletinに投稿し、受理された。その後、カルボニルストレスと統合失調症との因果関係にまで踏み込んで関連を検討するため、カルボニルストレスを反映するバイオマーカー(ペントシジン、ビタミンB6)の入院時、退院時における縦断的変化と臨床症状との関連を調査しているところであり、現在までいくつかのサンプルでデータを集積しているところである。現段階までに、主に信州大学医学部附属病院精神科病棟と精神科外来において、倫理委員会で承認されたプロトコールに則って研究の概要を説明し、協力の同意が得られた患者さんから血液検体、尿検体の収集を行っている。カルボニルストレス関連分子群は炎症との関連が指摘されており、体温を測定するなど炎症反応の影響を十分に考慮して行っている。サンプリングの対象となる精神疾患は、主に統合失調症であるが、うつ病や躁うつ病などの感情障害圏、パニック障害や適応障害などの神経症圏の患者さんからも幅広く協力が得られている。発症年齢、罹病期間、入院回数、入院期間、薬物療法の詳細、合併症などの臨床データも同時に収集し、個人情報の取り扱いに十分に注意を払いつつ関連解析を行っている。必要に応じて、心理検査も実施しており、知的能力や認知機能とカルボニルストレスの関連も鋭意検討を行っている。現在得られている解析が実施可能な限られた症例群においては、入院時及び退院時でのカルボニルストレス関連マーカー分子(血漿ペントシジン、ピリドキサミン、ピリドキサール、ピリドキシンなど)に有意な変化は見出されていない。しかしながら、症例数が少ないこともあり、適切な統計解析を実施できる段階にないことから、更なる研究計画の延長を申請し、承認を受けたところである。今後は統合失調症を中心にこれまで以上に症例数を増やし、カルボニルストレス関連分子群の候補マーカーの変動を検証する予定である。糖尿病、腎機能障害を除外した上で、年齢を調整した統合失調症156名、健常者221名でカルボニルストレス亢進の再現性を検証した。その結果、健常群と比較して患者群では、血漿ペントシジン濃度の有意な上昇、血清ビタミンB6濃度の有意な低下を認めた。以上から、一部の統合失調症におけるカルボニルストレスの亢進は再現性の高い現象であり、ペントシジンのバイオマーカーとしての有用性が改めて実証された。また、カルボニルストレスを呈する患者群では、カルボニルストレスの無い患者群と比較して、「入院患者の割合が高い」、「入院期間が4.2倍と長期に及ぶ」、「抗精神病薬の量が多い」という特徴を明らかにした。この特徴はKaneらが定義する治療抵抗性統合失調症の特徴に類似していると考えられた。さらにPANSS面接の同意が得られた49名の患者群で、年齢、抗精神病薬投与量、治療環境(入院・外来)などの交絡因子を独立変数として組み入れた上で、ペントシジン、ビタミンB6とPANSSスコアとの関連を多重回帰分析で検討した。その結果、PANSSのトータルスコア、陽性症状スコア、総合精神病理スコアにおいて、ビタミンB6が独立した負の相関因子であり得ることも見出した。現在、治療抵抗性統合失調症に対して科学的根拠を有する有効な治療薬は、クロザピンだけである。しかしながら、無顆粒球症や糖代謝異常など致死的な副作用を生じることが稀ではない。本研究の成果は、治療抵抗性統合失調症におけるビタミンB6の治療が、安全かつ有効な治療法となる可能性を示唆している。最後に、採血時に入院していた患者74名を対象に、退院の可否を調査した。

前向き調査の結果、採血時にペントシジンが正常であった群と比較して、ペントシジン高値群では、退院できなかった患者の割合が2.7倍に達すること見出した(p=.0083, Fisher's Exact test)。一部の統合失調症におけるカルボニルストレスの亢進について、新たな大規模コホートで再現性を確認した。統合失調症156名、健常者221名で検証した結果、患者群でのペントシジンの有意な上昇とビタミンB6の有意な低下を再確認した。また、カルボニルストレスが亢進している患者群について、「入院患者の割合が高い」、「入院期間が長期に及ぶ」、「抗精神病薬の量が多い」という治療抵抗性に類似した臨床特徴を抽出した。さらにビタミンB6と精神症状が負に相関することを見出した。本研究の成果は、治療抵抗性統合失調症におけるビタミンB6の治療が、安全かつ有効な治療法となる可能性を示唆していると考えられた。現在、目的のサンプル数に向けて鋭意努力しているところであるが、残念ながら症例数が不十分であり、解析できるデータが不足している。以上により、やや遅れている、と評価した。内因性精神疾患研究本研究のデザインを考慮すると、症例数が一定以上確保されることができれば、データの解析は複雑ではない。今後も、症例数を確保する努力を続ける予定である。当該研究の組み入れ基準に沿った症例の確保に努めているが、現段階では十分なサンプルデータがそろっていない。症例サンプル数の確保が十分ではないため、サンプルのデータ解析に必要な費用や実験消耗品などの予算に次年度使用額が生じた。研究計画の組み入れ基準に沿った症例の確保につとめる。症例の血液検査をタイムスケジュールに則って実施し、カルボニルストレス関連分子の血液中のデータを縦断的に追跡する。同時に、PANSSに代表される臨床症状を縦断的に評価し、候補バイオマーカー分子との関連を詳細に検討する。検討結果をまとめて論文とし、英文ジャーナルに投稿する。次年度には目標とするサンプル数の確保をめざしており、生じた次年度使用額は解析費用、物品費用、必要に応じて人件費などに充てる予定である。当該年度において、当研究へ参加する被験者の確保が計画通りにいかなかったことが主な理由である。そのため、第三者による臨床評価への謝金の支払いがほとんどなく、次年度使用額が生じた。次年度においては、次年度使用額に相当する被験者数を、次年度予定サンプル数に追加して解析を実施する予定であり、次年度使用額と次年度経費を合わせた予算で対応する計画である。
吸入麻酔薬による臓器障害の分子生物学的機序

本研究では吸入麻酔薬の肝毒性のメカニズムをラットモデルと培養細胞を用いて明らかにした。まず、フェノバルビタール投与により肝に薬物代謝酵素チトクロームP450(CYP)を誘導した後、低酸素下にハロタンを吸入させると低酸素下ハロタン吸入直後にCYP量が減少し、再酸素化後、肝細胞の遊離ヘム量の増加に引き続きHeme Oxygenase-1(HO-1) mRNAの誘導が認められた。さらに、このモデルにおいて低酸素ハロタン吸入前にHO-1の強力な誘導物質であるヘミン投与によりHO-1活性を上昇させると肝障害の改善が見られたことから、ヘム依存性酸化的ストレスがハロタン肝障害の原因となり、誘導されたHO-1は細胞毒である遊離ヘムを分解することにより生体防御的に機能すると考えられた。次にラットに低酸素下にイソフルランあるいはハロタンを投与したときの、肝HSP70とHO-1の発現を比較検討した。その結果、HSP70の誘導は、イソフルランがハロタンに比べて小さかった。また、肝障害の程度はHSP70と同様、イソフルランがハロタンに比べて軽度であった。一方、HO-1の発現はハロタン投与でのみ認められた。以上より、イソフルランはハロタンに比べて肝に対する酸化的ストレスが小さいことが示唆された。次に、CYP2E1遺伝子を導入した肝細胞(HLE/2E1)を用いて吸入麻酔薬と同じハロゲン化炭素である四塩化炭素の毒性を非導入細胞(HLE)と比較検討した。その結果、四塩化炭素の細胞毒性は、HLE/2E1でHLEに比べて有意に増加した。また、HSP70の発現はHLE/2E1でHLEに比べて著しく増加した。以上の結果より、HLE/2E1における四塩化炭素の毒性には、CYP2E1を介する酸化的ストレスが大きな役割を果たし、HLE/2E1が吸入麻酔薬の毒性を検討するためのモデルとして有用であることが示唆された。雄性ラットにフェノバルビタールを投与することによって肝ミクロゾームにヘム蛋白である薬物代謝酵素:チトクロームP450(CYP)を誘導した後、低濃度酸素下にハロタンを吸入投与するとハロタンの還元的代謝に伴い吸入直後に(CYP)の量と酵素活性の両者が減少し吸入終了24時間後に著しい肝障害が認められる(ラットハロタン肝障害モデル)。このことからハロタン肝障害にはヘム代謝が重要な役割を果たしていると考えられる。ヘムは鉄-ポルフィリン体であり、CYPの必須構成要素であるが、CYPより遊離したヘムは脂溶性の鉄含有物質としてラジカル生成反応を増幅させることにより細胞毒性を有することが示唆されている。へムオキシゲナーゼ(Heme Oxygenase:HO)は、ヘム分解の律速酵素であると同時にその遺伝子解析によりストレス蛋白でもあることが明らかとなっており、基質であるへムのみならず虚血-再還流、酸化的ストレス等によって誘導されることが報告されている。以上より申請者らは、へム代謝の律速酵素であるHOがハロタン肝障害においてもストレス蛋白として生体防御的に機能しているのではないかと考え、まず、ラットハロタン肝障害モデルにおけるHOの誘導を転写レベルで検討した。その結果、低酸素下ハロタン吸入直後にCYP量が減少し、再酸素化後、肝細胞の遊離ヘム量の増加に引き統きHO mRNAの誘導が認められた。

さらに、このモデルにおいて低酸素ハロタン吸入前にHOの強力な誘導物質であるへミン投与によりHO活性を上昇させると著明な肝障害の改善が見られたことから、へム依存性酸化的ストレスがハロタン肝障害の原因となり、誘導されたHOは細胞毒である遊離ヘムを分解することにより生体防御的に機能していると考えられた(Biochemical Pharmacology,2000印刷中)。吸入麻酔薬イソフルランはハロタンに比べて、有害中間代謝産物の産生量が少ないこと、肝血流量を良好に維持することから、肝毒性の小さい吸入麻酔薬であると考えられている。したがって、イソフルランは、肝移植のような肝への虚血侵襲が頻回に起こる大手術において使用することが推奨されている。また、上腹部手術においては、手術侵襲によって総肝血流量が正常時の60%にまで減少することがよく知られている。しかしながら、低酸素下での吸入麻酔薬の肝毒性については未だに完全には解明されていない。本研究では、ラットに低酸素下に吸入麻酔薬イソフルランあるいはハロタンを投与したときの、肝ヒートショックプロテイン70(HSP70)及びヘムオキシゲナーゼ-1(HO-1)の発現を比較検討した。フェノバルビタール前処置ラットではHSP70の誘導は、イソフルラン、ハロタン投与の両者で認められ、その発現の強さはイソフルランがハロタンに比べて小さかった。また、肝障害の程度はHSP70と同様にイソフルランがハロタンに比べて軽度であった。HO-1の発現はハロタン投与においてのみ認められた。一方、無処置ラットでは両麻酔薬によりHSPの誘導も肝障害も見られなかった。以上より、両麻酔薬の肝障害とHSP誘導に及ぼす効果は異なることが示された。また、イソフルランはハロタンに比べて安全性の高い吸入麻酔薬であることが知られているが、その一因としてイソフルランがハロタンに比べて酸化的ストレスが小さいことが考えられる。吸入麻酔薬による肝障害はまれであるが、その発生を予期できないこと、また、一旦発症すると劇症肝炎になる可能性があることから、臨床的に大きな問題である。吸入麻酔薬の肝毒性には肝の薬物代謝酵素:チトクロームP450、特にそのアイソザイム2E1(CYP2E1)を介して産生される毒性中間代謝産物がその病態に大きな役割を果たしている。我々はこれまで、ラットモデルを用いて、吸入麻酔薬の肝毒性について検討してきた。しかし、ラット肝障害モデルは吸入麻酔薬による呼吸・循環抑制の影響を考慮しなければならず、また、動物種がラットであるためヒトの肝障害を直接反映しているとは言い難い。一方、四塩化炭素は、吸入麻酔薬と同じくハロゲン化炭素であり、その毒性はCYP2E1を介して生成されるラジカルによる脂質過酸化に由来すると考えられている。そこで、本研究では、ヒトの吸入麻酔薬による肝障害のメカニズムを明らかにするために、CYP2E1遺伝子を導入した肝細胞(HLE/2E1)を用いて四塩化炭素の毒性を非導入細胞(HLE)と比較検討した。その結果、四塩化炭素の細胞毒性は、CYP2E1導入細胞で非導入細胞に比べて有意に増加した。また、酸化的ストレスの指標として用いたHSP70 mRNAの発現はCYP2E1導入細胞で非導入細胞に比べて著しく増加した。以上の結果より、CYP2E1導入細胞における四塩化炭素の毒性には、CYP2E1を介する酸化的ストレスが大きな役割を果たすことが示唆されるとともに、CYP2E1導入細胞が吸入麻酔薬の毒性を検討するためのモデルとして有用であることが示された。
α-synucleinキナーゼの同定とα-synuclein凝集機序の解析

α-synucleinはパーキンソン病の発症に関与する重要な蛋白として注目を集めている。近年、α-synucleinが細胞内でリン酸化、ニトロ化、ユビキチン化、糖化など様々な修飾を受けることが明らかにされている。細胞ストレスに応じてリン酸化、脱リン酸化、ニトロ化、さらにニトロ化による重合を起こすチロシン残基は、α-synucleinのコンフォメーション変化に重要な役割を持つと考えられている。われわれは細胞内においてα-synucleinをチロシンリン酸化するチロシンキナーゼの検索を行い、さらに各チロシン残基がα-synucleinの重合に与える影響について検討した。wild typeおよび常染色体優性遺伝性パーキンソン病で報告されたA30PおよびA53T変異型や、チロシン残基(Y)をフェニルアラニン残基(F)に置換したY39F、Y125F、Y133F、Y136F変異型のα-synuclein cDNAを作成した。COS7細胞にα-synucleinとともにチロシンキナーゼを共発現させ、α-synucleinのリン酸化状態を解析した。c-SrcなどのSrcファミリーキナーゼはα-synucleinのY125を特異的にリン酸化し、wild type、A30P、A53T変異型の間で程度に差は認めなかった。OsmoticstressによるチロシンキナーゼPyk2/RAFTKの活性化により、α-synucleinは細胞内においてチロシンリン酸化され、ドミナントネガティブ型Pyk2を発現させることによりリン酸化は消失した。Pyk2は細胞内においてα-synucleinのリン酸化に関わっている可能性が示唆された。さらに、これらのチロシン残基のニトロ化による影響を検討した。Y toF変異を持つ様々な変異型α-synuclein蛋白を使って、peroxynitriteによりチロシン残基をニトロ化した時のα-synucleinのdimer形成への影響を検討した。wild type、A30P、A53T変異型α-synuclein蛋白はニトロ化され、いずれもdimerを形成し、その程度は蛋白間で差はみられなかったが、Y125F変異のある蛋白ではいずれもdimer形成がみられなかった。α-synucleinのニトロ化は重合促進の原因となり、dimer形成の効率は関与するチロシン残基により異なることが明らかとなった。チロシン125のリン酸化やニトロ化は、α-synucleinのコンフォメーション変化を考える上で重要であると考えられた。
看護学生‐患者間における心理的距離尺度の開発と臨地実習指導体制の構築への実用化

本研究は、臨地実習における看護学生と患者との間にある心理的距離に影響を及ぼす要因を明らかにし、看護学生が患者と看護援助関係をよりよく築くことができる臨地実習の指導体制を構築することを目的とする。結果、【看護学生としてのステレオタイプ的認知】【自己と患者の同一化】【臨地実習という未知の体験に対する関心】【能動的解釈からくる回避的思考】【能動表出による歪み】【患者の本音と向き合うことへの躊躇】【患者の病気に対する躊躇】【自己の未熟なコミュニケーション能力】【患者から拒絶されることへの恐怖】の9つのカテゴリーが生成された。本研究は学生が患者とよりよい看護援助関係を築くために心理的距離に着眼し、さらに対人スキルとストレス対処能力の影響をふまえ検討し、看護実践能力を向上する臨地実習指導体制を構築することを目的とする。初年度である平成25年度は、名古屋市立大学看護学部の倫理員会の承認を得て、看護学生-患者間における心理的距離の構成要素抽出のための調査を行う体制を整えた。調査は看護系大学の学生を対象に半構成的面接法を用いて行った。調査内容は、入院に対する好感的イメージや嫌悪的イメージ、協調性あるいは劣等感や神経質などの外交的・内向的性格特性、向社会的行動、臨地実習中の自己側の心理的状態や思考の変化やそれに伴う行動、患者に対する思いや患者の行動に対する認識の変化である。結果、臨地実習を終えてから2か月3か月目の看護学生12名から調査協力が得られ、データを収集し心理的距離に関連する要因について検討した。今後、今回の結果をもとに健康障害を有する対象と健康障害がない対象の間における心理的距離に関連する要因を検討し、患者と看護学生間の心理的距離において新たな側面があるのか、先行研究の4側面とあわせて検討し、看護学生と患者間における心理的距離の尺度として適応できるのか検討を重ねる予定である。臨地実習は看護実践能力の基盤となる医療人としての職業倫理や看護観を見出していく過程において極めて重要である。しかし、学生のストレス対処能力を事前に確認するなどの取り組みは十分になされておらず、ストレスを蓄積し臨地実習において有意義に経験が積むことができない学生や、ストレスに対処できずにドロップアウトしてしまう学生が現れている。そのため、学生の年齢に応じたストレス対処能力や対人スキルを踏まえた臨地実習の在り方についての検討が必要となっている。2年目である平成26年度は半構成的面接法を用いて得られたデータの分析結果について、スーパーパイズを受けて再度分析を行い、心理的距離の尺度開発に向けたアンケート項目を抽出した。さらに、臨地実習を行っている時期が学校によって異なっている現状があり、履修科目や上級学生や同学年との関係などの要因が臨地実習を臨む際に影響を及ぼしていると考えられた。よって、アンケート対象とする学校の選定を行う上で実習時期も併せて考慮し、今後アンケート調査を行っていく予定である。本研究は学生が患者とよりよい看護援助関係を築くために心理的距離に着眼し、看護学生の看護実践能力をより向上する臨地実習指導体制を構築することを目的としている。3年目となる平成28年度は前年度の取り組みに引き続いて、看護系大学での教育実践の経験が3年6年目の教員3名、経験豊かな看護系大学教員1名の協力を得て、心理的距離の概念枠組みの検討を行った。その結果、学生は、臨地実習の初期段階において【自己と患者の同一化】や【自己本位な解釈からくる回避】により、距離を図っていた。また、【学生としての固定観念】【臨地実習という未知の体験に対する関心】【患者の本音と向き合うことへの躊躇】【患者の病気に対する躊躇】【自己の未熟なコミュニケーション能力】【患者から拒絶されることへの恐怖】という学生の抱く心理が患者との心理的距離に影響していた。さらに、看護系大学における教育実践が10年以上の教員にスーパーバイズを受け、1心理的距離に影響を及ぼす要因や中核概念となる要因を明らかにするには、当初計画段階で調査対象としていた看護系大学の学生よりも、客観的に学生と患者の関わりを把握することができる教員へと変更すること、2実際に教育を実践している大学教員の合意を得ることで、段階的な心理的距離の変化や影響要因が明らかになると考えられたためデルファイ法による質問紙調査を行うことの2点を踏まえた研究デザインの修正を行った。次年度は、看護学生と患者間における心理的距離尺度を測定するためのデータ収集を島根大学医学部看護研究倫理委員会の承認を受けた後に実施する予定である。平成27年度は、平成26年度の実績を踏まえて、看護学生と患者間における心理的距離の概念や影響する要因について明確にする計画であった。スーパーバイズを受け、研究デザインの変更を行ったが、尺度開発に向け、概念や要因を整理することができたため当初の予定通りである。本研究は看護学の初学者である看護系大学1・2年次の学生が臨床実習において患者とよりよい看護援助関係を築くために心理的距離に着眼し、看護学生の看護実践能力をより向上する実習指導体制を構築することを目的としている。今年度は、前年度の計画修正を受けて【自己と患者の同一化】【自己本位な解釈からくる回避】【学生としての固定観念】

【臨地実習という未知の体験に対する関心】【患者の本音と向き合うことへの躊躇】【患者の病気に対する躊躇】【自己の未熟なコミュニケーション能力】【患者から拒絶されることへの恐怖】の8つのカテゴリーを看護系大学1・2年次の臨地実習を指導した5名で再度検討を行った。臨床実習を構築する立場からの意見を集積し、統一するために再度オープンコーディングした初期のデータの見直し、解釈の統一を行い、実施したインタビュー調査の結果をMーGTAを用い分析した。その結果、前カテゴリーの【自己本位な解釈からくる回避】を【能動的解釈からくる回避】と変更し、新たに【能動表象による歪み】を加えた。また、カテゴリー間の関係を意味においてつなぎ、その関係性も含め検討した後、質問紙調査を作成した。本研究は、臨地実習における看護学生と患者との間にある心理的距離に影響を及ぼす要因を明らかにし、看護学生が患者と看護援助関係をよりよく築くことができる臨地実習の指導体制を構築することを目的とする。結果、【看護学生としてのステレオタイプ的認知】【自己と患者の同一化】【臨地実習という未知の体験に対する関心】【能動的解釈からくる回避的思考】【能動表出による歪み】【患者の本音と向き合うことへの躊躇】【患者の病気に対する躊躇】【自己の未熟なコミュニケーション能力】【患者から拒絶されることへの恐怖】の9つのカテゴリーが生成された。今年度はインタビュー調査から得られた分析結果を基にアンケート調査を大学2校において行う予定であったが、臨地実習の実施時期が各学校によって異なっていた。そのため、臨地実習の時期などが与える影響を考慮し、アンケートを行う必要が明らかになった。そのため、アンケート時期が遅くなり、達成段階はやや遅れている状況である。看護系大学の教員を対象に質問紙調査を行い、看護学生と患者間における心理的距離について検討し、論文発表していく予定である。看護教育看護系大学の1年次および2年次の学生を対象にアンケート調査の実施、データ分析を行い、学生が患者とよりよい看護援助関係を築くために心理的距離について検討してく予定である。当初予定していたインタビュー調査人数よりもやや少ない人数であるが理論的飽和に至っており、患者と看護学生間の心理的距離の構成要素の抽出に進んでいる。研究デザインを変更し、質問紙調査の郵送を平成28年度に変更したため次年度使用額が生じた。インタビュー調査のデータ分析が遅れており、アンケート調査の実施時期を次年度にしたため使用額の変更が生じた。生じた次年度使用額については平成28年度の質問紙調査の郵送費として使用する予定である。初年度にインタビュー調査を行い抽出された心理的距離の構成要素をもとに、看護学生と患者間における心理的距離の測定尺度の開発に向けて質問項目を作成し、その中から適切な質問項目を選定する。質問項目の作成枠組みには、心理的距離の4つの側面で明らかになった成果と学生の対人関係を形成する上で情動的共感性とストレス対処能力をふまえて概念間の検討を行う。今年度の710月に行う予定のアンケート調査に伴うアンケート用紙の印刷、郵送料、謝金、データ入力に関わる業務において研究費を使用する予定である。
音声特徴抽出手法の高度化に関する研究

音声の特徴抽出手法の高度化のため,言語情報や個人性,自然性がいかなる形で音声波に含まれるかを検討した.成果は下記の通りである.1)相互情報量を指標として,多種類の音響特徴量を多角的・階層的に用いて音韻性を決定する枠組みを確立した。話者性の特徴量を用いて多種類のコードブックを制御することによる話者適応の可能性を示した。2)ピッチ対同期形のPSE分析法の適用による母音部のPSE分析結果と,一般的声道モデルに近似的な声道形と音源位置を与えて計算した伝達特性との類似性から,PSEと音声生成糸との関係を明らかにした.3)口形情報を用い,音声認識の性能向上を図った.母音の識別を行う際,認識に有効な画像特徴の種類やレベルを明らかにした.4)難聴者の聴神経刺激による時系列信号の知覚特性を調べ,人工喉頭の研究からピッチや波形ゆらぎの役割を明確にし,さらにホルマント遷移によって生じる結合音の知覚特性を明らかにした.5)LPC分析精度の改善と特徴パラメータの時間的遷移を考慮に入れることによる音韻識別の改善を行った.6)ニューラルネットワークで特徴抽出を行うための諸方式を検討した.7)範躊間の依存関係扱える数量化理論を提案し,これを用いて範囲音韻の弁別素性の観点から音韻スペクトルの変形をモデル化した.8)ニューラルネットによる音素認識に基づいて,状態遷移網により表現された単語辞書により,単語認識を行う方式を提案した.9)連想を含む高次の知識を総動員して特徴抽出,認識を行うために洒落の一種である「地口」の検出法および連想の枠組みを明らかにした.10)話者認識システムに必要となる個人性表現能力の高い特徴量を得るため,特徴量の統計的性質と認識性能との関係を明らかにした.11)調音パラメタの高速抽出をニューラルネットを用いて行った.音声の特徴抽出手法の高度化のため,言語情報や個人性,自然性がいかなる形で音声波に含まれるかを検討した.成果は下記の通りである.1)相互情報量を指標として,多種類の音響特徴量を多角的・階層的に用いて音韻性を決定する枠組みを確立した。2)ピッチ対同期形のPSE分析法の適用による母音部のPSE分析結果と,一般的声道モデルに近似的な声道形と音源位置を与えて計算した伝達特性との類似性から,PSEと音声生成糸との関係を明らかにした.3)口形情報を用い,音声認識の性能向上を図った.母音の識別を行う際,認識に有効な画像特徴の種類やレベルを明らかにした.4)難聴者の聴神経刺激による時系列信号の知覚特性を調べ,人工喉頭の研究からピッチや波形ゆらぎの役割を明確にし,さらにホルマント遷移によって生じる結合音の知覚特性を明らかにした.5)LPC分析精度の改善と特徴パラメータの時間的遷移を考慮に入れることによる音韻識別の改善を行った.6)ニューラルネットワークで特徴抽出を行うための諸方式を検討した.7)範躊間の依存関係扱える数量化理論を提案し,これを用いて範囲音韻の弁別素性の観点から音韻スペクトルの変形をモデル化した.8)ニューラルネットによる音素認識に基づいて,状態遷移網により表現された単語辞書により,単語認識を行う方式を提案した.9)連想を含む高次の知識を総動員して特徴抽出,認識を行うために洒落の一種である「地口」の検出法および連想の枠組みを明らかにした.10)話者認識システムに必要となる個人性表現能力の高い特徴量を得るため,特徴量の統計的性質と認識性能との関係を明らかにした.11)調音パラメタの高速抽出をニューラルネットを用いて行った.
熱帯林断片化の系統的多様性・系統的群集構造に与える影響評価と将来予測

過去数十年という短いタイムスケールで行われた熱帯林伐採は,数億年という長い進化的な歴史を背景に形成された植物多様性の急速な消失を引き起こし、植物群集の構造を変化させる。本研究では、進化時間スケールを考慮に入れた生物多様性の評価・将来予測を、熱帯林伐採が著しいマレーシアで行うことで、今後マレーシア(ボルネオ)で生物多様性の維持・回復に向けてどのような方法が有効かを検討する事が目的である。本年度は、野外調査、標本輸送、DNAバーコーディングを進めた。野外調査はAi Gasah、Simpang Batang、Takanに設置された4プロット、Silongに設置された1プロットの半分について、プロット樹種の種同定チェックとサンプリングを終えることができた。全部で、717本のプロット樹木の同定チェックを行い、431点の標本を作製した。それぞれに写真を撮影し、DNA抽出のための葉のサンプリング、3点の重複標本の作製を行った。標本輸送に関しては、昨年10月から実施された植物防疫の厳密化による標本の輸入問題により手続きに時間がかかったが、無事郵送することができた。送られてきたサンプルをもとにDNAバーコーディングを進めた。予備的な結果ではあるが、現地の研究者によって同定された結果と今回の調査による同定結果を比較すると科レベルで11%、属レベルで31%異なっていた。今後は種同定を進め、地域の植物相をまとめる論文を準備する予定である。また、群集系統解析を通して、誤同定が多様性評価において、どのような影響があるのかを評価する予定である。これまでを通して、プロット樹種1259個体の同定チェックを行うことができた。しかしながら、16プロットのうちの7.5プロットでしか調査を終えることができなかったため、進捗状況としてはやや遅れている。原因としては、カウンターパートが大きな予算をマレーシア国内で獲得し、本調査のためのスケジュール調整が難しかった点にある。また、植物防疫の厳密化による標本の輸入問題により、手続きに時間がかかった点にある。研究目的は変えず、解析プロット数を減らすことで時間の遅れを取り戻す予定である。また、前回は日本人2人で調査を行ったが、次回より調査人数を増やすことで、作業効率を上げる予定である。今後は、昨年度サンプリングした個体のDNAシーケンスを行い、その配列を用いて、系統解析、群集系統解析を行い、多様性に影響を与える熱帯林伐採を定量化する。特に、系統樹の不確実性を考慮した解析を行うことで、検定結果の頑健性を確かめる。本年度は、プロットデータ整理、野外調査を行った。プロットデータとして、Ai Gasah地域(1プロット、193個体)、Kumayau地域(3プロット、432個体)、Limau地域(3プロット、542個体)、Sempar Urat地域(3プロット、548個体)、Sengkala地域(3プロット、592個体)、Silong地域(1プロット、194個体)、Simpang Batang地域(2プロット215個体)、Takan地域(3プロット、429個体)のデータを整理し見直した。野外調査は、Limau地域を訪れ、3プロット542個体の同定チェックを行い、287点の標本を作製した。標本はすべてアルコールに浸けられており、輸送許可が下りるまではBotanical resarch centre, Sarawakに預けてある。予備的な結果ではあるが、現地の研究者によって同定された結果と今回の調査による同定結果を比較すると科レベルで6.2%、属レベルで9.5%異なっていた。今後は種同定、DNAバーコーディングを進め、Limau地域の植物相をまとめる論文を準備する予定である。本年度を通して、プロットデータの整備、プロット樹種542個体の同定チェックを行うことができた。しかしながら、16プロットのうちの3プロットでしか調査を終えることができなかったため、進捗状況としてはやや遅れている。また、代表者の異動に伴い、研究費が3か月ほど使えない時期が生じ、思うように進めることができなかった。

全部で、717本のプロット樹木の同定チェックを行い、431点の標本を作製した。それぞれに写真を撮影し、DNA抽出のための葉のサンプリング、3点の重複標本の作製を行った。標本輸送に関しては、昨年10月から実施された植物防疫の厳密化による標本の輸入問題により手続きに時間がかかったが、無事郵送することができた。送られてきたサンプルをもとにDNAバーコーディングを進めた。予備的な結果ではあるが、現地の研究者によって同定された結果と今回の調査による同定結果を比較すると科レベルで11%、属レベルで31%異なっていた。今後は種同定を進め、地域の植物相をまとめる論文を準備する予定である。また、群集系統解析を通して、誤同定が多様性評価において、どのような影響があるのかを評価する予定である。これまでを通して、プロット樹種1259個体の同定チェックを行うことができた。しかしながら、16プロットのうちの7.5プロットでしか調査を終えることができなかったため、進捗状況としてはやや遅れている。原因としては、カウンターパートが大きな予算をマレーシア国内で獲得し、本調査のためのスケジュール調整が難しかった点にある。また、植物防疫の厳密化による標本の輸入問題により、手続きに時間がかかった点にある。研究目的は変えず、解析プロット数を減らすことで時間の遅れを取り戻す予定である。また、前回は日本人2人で調査を行ったが、次回より調査人数を増やすことで、作業効率を上げる予定である。今後は、昨年度サンプリングした個体のDNAシーケンスを行い、その配列を用いて、系統解析、群集系統解析を行い、多様性に影響を与える熱帯林伐採を定量化する。特に、系統樹の不確実性を考慮した解析を行うことで、検定結果の頑健性を確かめる。当初の計画では、標本輸送、標本庫での同定作業のためにマレーシアに行く予定であったが、カウンターパートとのスケジュール調整がうまくいかず、断念した。また、DNA解析のためにマレーシア研究者を招聘予定であったが、代表者の異動に伴い、研究費が3か月ほど使えない時期が生じ、思うように進めることができなかった。残額は、旅費及び、DNA実験のための費用として利用する予定である。協力研究者の調査旅費を出すことで、野外調査を効率的に行えると考えられる。また代表者の異動に伴い、実験器具を新に購入する必要が出てきたので、その費用に充てたいと考えている。当初、マレーシアの研究者を日本に呼んでDNA実験をしてもらう予定になっていたが、都合がつかず日本人の実験補助を採用することにした。
転写因子MAFBによる糸球体上皮細胞のオートファジー制御機構の解明

本計画では、転写因子MAFBによるオートファジー制御機構の検討を進めることにより、オートファジーの活性化を介した慢性腎臓病の新規治療法の解明を目指すものである。本年度は、動物実験へ進む前の段階として、培養系糸球体上皮細胞を用いて、MAFBの発現調整によりオートファジー活性に変化が現れうるのか確認実験を実施した。ヒト培養糸球体上皮細胞に対し、活性型・ドミナントネガティブ型・抑制型・通常型MAFBベクターをそれぞれ導入し、薬剤誘導性に転写因子MAFBの発現量を変化させることのできる細胞株を作製した。ドキシサイクリンの薬剤刺激により、これらの細胞においてMAFB蛋白の発現が調節されることをウエスタンブロッティング法で確認した。また、これらの細胞において過剰発現したMAFBが細胞核内に分布していることを免疫染色で確認した。引き続き、これらの細胞を用いて、ウエスタンブロッティング法でオートファジーの活性を評価した。オートファジーの活性化マーカーであるLC3II蛋白の発現が、MAFB過剰発現群で増加し、MAFB抑制群で減少した。この結果は、MAFBの発現が増加するとオートファジーが活性化し、MAFBの発現が減少するとオートファジーの活性が抑制されることを意味すると考えられる。これらの結果は、転写因子MAFBが転写を通じてオートファジーの活性を制御していることを示唆するものである。引き続き、当初の計画通り検討を進める。当初の計画通り、予定されていた培養細胞株の作製に成功した。また、期待されていた表現系を得ることができた。引き続き、この細胞株を用いて検討を進める。当初の計画通り実験を進めていく。
中国旧解放区における保育事業の展開 -陜甘寧辺区を事例として-

1.資料の収集整理(1)既収集の陜甘寧辺区政府公文書、戦時児童保育会、婦女連合会関係文献については、文献リストおよび記事内容データベースを作成した。(2)未収集の各級政府・団体による保育訓練班関連資料、各保育機関に関する資料は、新たに『解放日報』より収集した。2.研究成果の公開(1)所属学会での研究発表は、今回は見送り、機関誌に論文を投稿。所属機関内外の研究会での口頭発表をそれぞれ1回ずつ行った。(2)1.で整理した資料は、閲覧可能な状態で保存する予定。3.得られた新たな知見は;(1)中国旧解放区では、日本軍の空襲による戦災児童および革命参加者の遺児、抗日戦士・女性幹部の子女の保護のために、公費負担の全寮制保育が展開、子ども最優先の方針が貫かれた。また、女性幹部養成・婦人動員の必要から大学・機関内託児所が設置され、母性保護の諸施策がなされた。(2)一方、辺区の農村では乳児死亡率60%という状況であったため、(1)より遅れて、母子保健担当者の養成が、保育事業の一環として展開される。同事業は、整風運動後には、生産や識字教育、模範郷村建設などと結合した形で基層レベルの展開もみせた。(3)(1)の保育機関は、「解放」後、中央に移転し、解放区のすぐれた伝統として語りつがれる一方、(2)の農村の母子衛生の環境の劣悪さは、今日も克服すべき問題となって残っている。
脳神経外科疾患に対する脳磁図臨床応用のための基礎的研究

ヒト随意運動の発現メカニズムの解明に脳磁図を応用するにあたり、その基礎的研究の一環として経頭蓋大脳磁気刺激を用いて、随意運動発現時のヒト大脳皮質一次運動野でのcorticomotor excitabilityについて検討した。対象は健常人10名(男性4名・女性6名、平均年齢37歳)と筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者10名(男性5名・女性5名、平均年齢57歳)とした。頭皮上から左側の手の運動野(Czから外耳孔側5cm)を磁気刺激(刺激強度はmean thresholdの1.25倍)し、右のfirst dorsal interosseous muscle(FDI)から運動誘発電位(MEP)を表面電極で記録した。この時、記録されたMEPのfirst response(=direct wave;FR)の面積(negative areaとpositive areaとの面積和)と、これに引き続き連続的に記録されるsecond responses(=indirect wave;SR)の面積について比較検討した。健常人群およびALS患者群で、FRとSRの比(FR:SR)を計測したところ、健常人群におけるFR:SR値は1.04であった。一方、ALS患者群におけるFR:SR値は1.99と高値であり、これは統計学的にも有意な差(p=0.0005)であった。この結果は、運動野が興奮した際、まず錐体路を下行するinitial corticomotor descending volley(=FR)に引き続いて連続的に発生するrepetitive motorneuron firings(=SR)が、ALS患者では健常人よりも高頻度に生じているということを示唆する結果であった。以上より、ALS患者では、大脳皮質レベルあるいは脊髄レベルにおけるmotorneuronが、健常人よりも高頻度に発火していると考えられた。純音刺激により誘発される聴覚誘発脳磁場が、睡眠により如何なる変化を受けるかを解析することにより、聴覚受容と意識の関係とについて検討した。健常人10名(男性8名・女性2名、平均年齢29.7歳)に対し、右耳から70dBの純音刺激をおこない、誘発される聴覚誘発脳磁場を脳磁計にて両側大脳半球から記録した。なお、刺激音周波数は250、1000、4000Hzの3種類を用い、これら3種の純音を、覚醒状態、浅睡眠状態、深睡眠状態の3条件下で被験者に与え、それぞれの聴覚誘発脳磁場を計測した。いずれの条件下においても、潜時50、100、150、200msecのところに聴覚誘発脳磁場のピークを認め、それぞれの成分をM50、M100、M150、M200と命名した。また、いずれの成分も第1次聴覚野が発生源であった。各成分の潜時は睡眠中では延長する傾向が見られたが有意差は無かった。初期成分(M50,M100)は睡眠中には振幅が減少する傾向が見られたが有意差は無かった。逆に後期成分(M150,M200)は睡眠中には振幅が有意に増大した。初期成分の振幅変化に反し、後期成分のそれは睡眠により有意に増大したことから、睡眠中には聴覚認知を抑制する系が抑制されているものと考察した。初期成分の活動位置は睡眠中には有意に上方に移動したが、後期成分には有意な変化は見られなかったことより、両者の発生機序には相違があることが示唆された。
TMEPAIに対する特殊環状ペプチドを用いたがん治療法、診断法の開発

TMEPAIはがんで発現が亢進しているタンパク質で、近年では様々な細胞内シグナル伝達に関わることが示唆されている。また、乳がんや肺がん細胞からTMEPAIをノックアウト、ノックダウンした細胞を樹立すると腫瘍形成が低下することから、TMEPAIはがんの発生・進展にシグナル伝達を介して関わっていると考えられている。そこで、TMEPAIの機能ドメインであるPPxY (PY)モチーフやSmad interaction motif (SIM)に結合し、阻害する特殊環状ペプチドをスクリーニングし、それらの臨床応用を本研究の目的とした。まず、TMEPAIおよび、そのファミリー分子であるLDLRAD4の機能ドメインを含む細胞内領域を組み込んだ発現ベクターを作成し、大腸菌による大量合成を行った。その後、精製を行い、スクリーニングに十分な量のタンパク質を得た。次に、それらのタンパク質を用いて、RaPID (Random non-standard peptide integrated discovery)システムにより、TMEPAIまたはLDLRAD4に結合する特殊環状ペプチドの探索を行った。RaPIDシステムは、非天然アミノ酸を含む、無細胞翻訳システムを用いて翻訳された特殊環状ペプチドと翻訳の元になるmRNAをリンクすることで、ある特定のタンパク質に結合する特殊環状ペプチドの探索、活性種の濃縮、再翻訳を繰り返し行うことで、標的タンパク質に高い結合能力を持つ特殊環状ペプチドを容易に選択する方法である。現在までに、いくつかの候補ペプチドが得られており、得られた特殊環状ペプチドの大量合成、精製を行い、今後、機能を検討する予定である。TMEPAIおよびLDLRAD4の機能ドメインを含む細胞内領域をタンパク質発現ベクターに組み込み、大腸菌を用いてタンパク質を発現させ、スクリーニングに十分な量のタンパク質を得た。これらを用いて、特殊環状ペプチドのスクリーニングを行っており、それぞれTMEPAIおよびLDLRAD4に結合する特殊環状ペプチドの候補分子が得られている。TMEPAIとLDLRAD4は機能ドメインであるPYモチーフおよびSIMモチーフを含む細胞内ドメインの相同性が67%であり、両方のタンパク質に結合する特殊環状ペプチドは各機能ドメイン付近に結合する可能性が高く、TMEPAIおよびLDLRAD4の機能を阻害する可能性があると考え、LDLRAD4によるライブラリーの選択を行った後、さらにTMEPAIによる選択を行うことで、両方に結合する特殊環状ペプチドのスクリーニングも行っている。スクリーニングにより同定された特殊環状ペプチドは、ペプチド合成機による大量合成、精製を行っている。合成の際に、蛍光色素等の標識を付加したペプチドも合成しており、現在TMEPAIやLDLRAD4に対する結合性を検討している。さらに、TMEPAIやLDLRAD4は、PYやSIMモチーフを介して、それぞれNEDD4やSmad3などと結合することが知られているため、NanoBitを用いて、それらのタンパク質間結合を測定するためのシステムを構築した。今後、得られた特殊環状ペプチドのTMEPAIおよびLDLRAD4への結合性評価、および機能阻害評価を行う。機能評価については、前述したNanoBitを用いたTMEPAIおよびLDLRAD4とパートナー分子とのタンパク質間相互作用を数値化して測定すると共に、TMEPAIはがん細胞においてin vitroのスフェア形成能に関わっていることが知られていることから、TMEPAI発現亢進がん細胞を用いて、スフェア形成能に対する影響を評価する。特殊環状ペプチドは、中分子であるため、膜透過性は担保されていない。スフェア形成能試験の際には、トランスフェクション試薬を用いたり、特殊環状ペプチドの構造を維持したまま、リンカーを介して修飾することにより膜透過性を高める必要がある。また、既に得られているTMEPAIおよびLDLRAD4タンパク質を用いて、構造解析も計画している。特殊環状ペプチドを付加した状態で構造解析を行うことで、特殊環状ペプチドの結合に必要な側鎖が同定されれば、特殊環状ペプチドの最適化を行い、生体内の安定性や膜透過性を高められる可能性があり、さらに類似した構造を持つ化合物などへの発展が見込まれる。In vitroでスフェア形成能の阻害が認められた分子については、がんモデルマウスや腫瘍移植マウスを用いてin vivoでの抗腫瘍評価を行う。

これらを用いて、特殊環状ペプチドのスクリーニングを行っており、それぞれTMEPAIおよびLDLRAD4に結合する特殊環状ペプチドの候補分子が得られている。TMEPAIとLDLRAD4は機能ドメインであるPYモチーフおよびSIMモチーフを含む細胞内ドメインの相同性が67%であり、両方のタンパク質に結合する特殊環状ペプチドは各機能ドメイン付近に結合する可能性が高く、TMEPAIおよびLDLRAD4の機能を阻害する可能性があると考え、LDLRAD4によるライブラリーの選択を行った後、さらにTMEPAIによる選択を行うことで、両方に結合する特殊環状ペプチドのスクリーニングも行っている。スクリーニングにより同定された特殊環状ペプチドは、ペプチド合成機による大量合成、精製を行っている。合成の際に、蛍光色素等の標識を付加したペプチドも合成しており、現在TMEPAIやLDLRAD4に対する結合性を検討している。さらに、TMEPAIやLDLRAD4は、PYやSIMモチーフを介して、それぞれNEDD4やSmad3などと結合することが知られているため、NanoBitを用いて、それらのタンパク質間結合を測定するためのシステムを構築した。今後、得られた特殊環状ペプチドのTMEPAIおよびLDLRAD4への結合性評価、および機能阻害評価を行う。機能評価については、前述したNanoBitを用いたTMEPAIおよびLDLRAD4とパートナー分子とのタンパク質間相互作用を数値化して測定すると共に、TMEPAIはがん細胞においてin vitroのスフェア形成能に関わっていることが知られていることから、TMEPAI発現亢進がん細胞を用いて、スフェア形成能に対する影響を評価する。特殊環状ペプチドは、中分子であるため、膜透過性は担保されていない。スフェア形成能試験の際には、トランスフェクション試薬を用いたり、特殊環状ペプチドの構造を維持したまま、リンカーを介して修飾することにより膜透過性を高める必要がある。また、既に得られているTMEPAIおよびLDLRAD4タンパク質を用いて、構造解析も計画している。特殊環状ペプチドを付加した状態で構造解析を行うことで、特殊環状ペプチドの結合に必要な側鎖が同定されれば、特殊環状ペプチドの最適化を行い、生体内の安定性や膜透過性を高められる可能性があり、さらに類似した構造を持つ化合物などへの発展が見込まれる。In vitroでスフェア形成能の阻害が認められた分子については、がんモデルマウスや腫瘍移植マウスを用いてin vivoでの抗腫瘍評価を行う。