hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
根管の自動拡大装置の実用化に関する研究

また臨床における根尖孔の検出能力も抜去歯と同様に優れたものであった(1989年、春季保存学会)。本研究は歯科治療で難点とされる根管拡大の自動化を計るもので、電気的根管長測定器と根管拡大装置とを連動させる機構を採用し、この装置の開発研究である。本研究は3年次にわたり、装置の実用化の完成を求めた。1)研究の1年次は市販の自動切削装置ピオオ-トファイルをモデルとし、この装置を用いた場合の根管の自動拡大の精度を検討した。しかし、これまでの電気的根管長測定装置は湿潤状態での測定が不可能で、本システムの最大の難点である事を指適した。2)2年次はこの問題を解決するため湿潤根管での根管長測定の開発と実用化を中心に研究を進めた。根管内は根管滲出液や抜髄時の出血あるいは清掃液である15%の次亜塩素酸ナトリウムなどが存在するので,条件の異なる根管で正確に根管長を測定するために従来から利用されてきたインピ-ダンス読み取り方式は利用することが出来ない。この問題を解決するために本研究グル-プは根管孔指示値(インピ-ダンス)が周波数に依存することに注目し、2つの異なる周波数を根管に流し、この2つの周波数に応答する電流の差を利用して根尖孔の位置を求めることとした。(相対値法による根尖孔の検出法)。3)3年次は、この2つの異なる周波数応答の相対値から求める根管長測定器が市販品として入手出来るようになったので、これに基づいて臨床に準拠した根管環境を設定して検討を加え、その成績を第90回および第91回保存学会に以下の成績を報告した。(1)根管内に電導性の血液、膿汁5%NaOClが存在しても根管長が検出できた。(2)根尖孔の太さが#15#40では検出値に変化がなかった。(3)根管電極の太さを変えても根尖到達度に影響がなかった。
新規眼内血管内皮成長因子のクローニングとその機能解析

1インターロイキン6(IL-6)レセプター/gp130およびTie1遺伝子のクローニングマウス繊維芽細胞からRNAを抽出し、gp130特異的プライマーを用い、PCR法によりgp130細胞内領域を得た。また、ヒト血管内皮細胞(HUVEC)よりRNAを抽出し、Tie1特異的プライマーによりPCR法を行い、Tie1細胞外領域を単離した。2 gp130-Tie1キメラ遺伝子の作成と細胞への導入得られたフラグメントを発現ベクターpcDNA3に挿入し、gp130/Tie1キメラ発現プラスミドを構築した。このプラスミドをIL-3依存性プロB細胞Ba/F3にエレクトロポレーション法で導入し、その発現を抗体で確認したが、高発現株を得ることが出来なかった。RNAレヴェルでは、その発現が確認できているので、キメラ蛋白が不安定である可能性が考えられる。3 gp130により活性化される遺伝子のクローニング血管内皮増殖に関連していると考えられるIL-6により誘導される遺伝子をサブトラクション法によりクローニングしたところ、その内の1クローンはRal guanine nucleotide dissociation stimulator(RalGDS)であった。興味あることに、その発現はStat3依存性であった。現在、RalGDSのgp130のシグナル伝達における役割を解析している。4血管内皮増殖因子,TNFαのシグナル伝達の抑制分子単離の試みTNFαのNIH3T3細胞に対するアポプトーシス誘導活性を指標として、TNFα耐性v-Src-NIH3T3細胞から作成したレトロウイルスライブラリーを用い、樹立したTNFα耐性クローンを複数解析したところ、新規フォスファターゼの一部をアンチセンスで得た。そのcDNA全長をクローンニングし、PETと命名した。そのアンチセンス発現プラスミドをNIH3T3細胞に導入したところ、弱いながらTNFαに対して抵抗性を獲得した。現在その組織での発現、機能を解析中である。1インターロイキン6レセプター/gp130およびTie1遺伝子のクローニングマウス繊維芽細胞からRNAを抽出し、逆転写酵素によりcDNAを作成した。これをテンプレートにして、gp130特異的プライマーを用い、PCR法により増幅した。得られたDNA断片をシークエンスして、gp130細胞内領域を含むことを確認した。また、ヒト血管内皮細胞(HUVEC)よりRNAを抽出し、同様にcDNAを作成した。これをテンプレートにして、Tie1特異的プライマーによりPCR法を行い、得られたフラグメントをシークエンスし、細胞外領域を含むことを確認した。2インターロイキン6レセプター/gp130-Tie1キメラ遺伝子の作成と細胞への導入得られたフラグメントを制限酵素で処理し、発現ベクターpCDNA3に挿入し,gp130/Tic1キメラ発現プラスミドを構築した。このプラスミドをIL-3依存性プロB細胞Ba/F3にエレクトロポレーション法で導入し、現在その発現を検討中である。3血管内皮増殖因子TNFα,TGFβのシグナル伝達の抑制分子単離の試み(1)TNFαのNIH3T3細胞に対するアポプトーシス誘導活性を指標として、TNFα耐性v-src-NIH細胞から作成したレトロウイルスライブラリーを用い、TNFα耐性クローンを複数得て、現在解析中である。(2)TGFβのミンク肺がん細胞に対する増殖抑制活性を指標として、同じくレトロウイルスライブラリーを用い、TGFβ耐性クローンををスクリーニング中である。4ヒト血管内皮細胞HUVECの温度感受性株の樹立ヒト初代血管内皮

培養細胞に温度感受性変異SV40T抗原を導入し、長期培養可能な安定株を得ることに成功した。この細胞株を今後の解析に使用していく予定である。1 gp130/Tie1キメラ遺伝子の細胞への導入とその発現の解析gp130/Tie1キメラ発現プラスミドをIL-3依存性プロB細胞Ba/F3にエレクトロポレーション法で導入した後、ネオマイシンで選択し、複数の安定株を得た。その発現を抗gp130の細胞内領域を認識する抗体を用いてウエスタンブロット法で解析したが、明らかな発現を確認することが出来なかった。そこで、これらの細胞からRNAを抽出して、ノーザンブロット法で確認したところ、RNAレヴェルでは強い発現が確認できた。これらの事実より、なんらかの理由でキメラ蛋白が不安定である可能性が考えられる。このため、他の導入細胞を用いるか、あるいはキメラ遺伝子融合のデザインを変更する必要があると思われる。2 gp130により活性化される遺伝子のクローニングIL-6が血管内皮増殖に関連しているという報告がいくつかなされている。そこでIL-6により誘導される遺伝子を明らかにする目的でマウスM1細胞を用いたサブトラクションクローニング法を試みたところ、Ral guanine nucleotide dissociation stimulator(RalGDS)を単離した。興味あることに、その発現はStat3依存性であった。更に、Stat3依存性にRalA small G proteinが活性化し、またそれはRasの活性にも依存していた。現在、gp130におけるRalGDS/Ralの機能を解析中である。3血管内皮増殖因子,TNFαのシグナル伝達の抑制分子単離の試みTNFα耐性v-Src-NIH3T3細胞から作成したレトロウイルスライブラリーを用いて樹立したTNFα耐性クローンを複数解析したところ、新規フォスファターゼの一部をアンチセンスで得た。そのcDNA全長をクローンニングし、PETと命名した。そのアンチセンス発現プラスミドNIH3T3細胞に導入したところ、弱いながらTNFαに対して抵抗性を獲得した。現在その組織での発現、機能を解析中である。
その場測定法によるナノ微粒子の成長機構に関する研究

本研究では,シランプラズマ中の微粒子の核発生と初期成長過程を調べることを目的とし,新たに創案した光脱離法,光イオン化法を用いて高周波シランプラズマ中のサブナノSi微粒子の成長過程を調べ,以下の成果を得た.1)新たに創案した光脱離法,光イオン化法を用いることによって,従来できなかったサブナノSi微粒子成長のその場観察を可能とした.2)高周波シランプラズマ中のサブナノSi微粒子は核発生,初期成長の段階から,短寿命ラジカル密度の高い高周波電極側のプラズマシース境界領域で成長することを見出した.3)放電周波数を6.5から28MHzに増加すると,短寿命ラジカルの発生が増加し,それに伴いサブナノSi微粒子の成長速度も速くなることを見出した。4)2),3)の結果は,短寿命ラジカルが微粒子発生のキ-ラジカルであり,しかも,一つの微粒子の発生に短寿命ラジカルが多数個関与していることを示唆している.本研究では,シランプラズマ中の微粒子の核発生と初期成長過程を調べることを目的とし,新たに創案した光脱離法,光イオン化法を用いて高周波シランプラズマ中のサブナノSi微粒子の成長過程を調べ,以下の成果を得た.1)新たに創案した光脱離法,光イオン化法を用いることによって,従来できなかったサブナノSi微粒子成長のその場観察を可能とした.2)高周波シランプラズマ中のサブナノSi微粒子は核発生,初期成長の段階から,短寿命ラジカル密度の高い高周波電極側のプラズマシース境界領域で成長することを見出した.3)放電周波数を6.5から28MHzに増加すると,短寿命ラジカルの発生が増加し,それに伴いサブナノSi微粒子の成長速度も速くなることを見出した。4)2),3)の結果は,短寿命ラジカルが微粒子発生のキ-ラジカルであり,しかも,一つの微粒子の発生に短寿命ラジカルが多数個関与していることを示唆している.
歴史的建造物内部で展開される多様な利用形態が建物や収蔵文化財に与える影響

様々な用途で活用されている歴史的建造物において、建物内の空気質の測定を行ない、活用形態との関係を調査した。その結果、活用形態に応じた空気質の相違が確認できた。特に人の出入りが激しい空間ではアルカリ成分が多く認められた。また音源を伴うイベント開催時や観光客により発生する振動の調査を実施し、建物の構成材料による振動特ォを明らかにした。歴史的建造物は建築学的な評価を受けることにより価値づけられ、その後の活用されてからの利用形態がどのようは影響が建造物に生じているかのモニタリングは意識されてこなかった。飲食店、アパレルなどのショップ、イベントスペースに利用されるときの発生する環境汚染物質の把握と文化財展示・収蔵施設に利用されるときに展示・収蔵文化財が施設から受ける影響、来館者による様々なインパクト因子の調査をおこない、利用形態ごとの劣化因子を明らかにすることを目的としている。本年度は歴史的建造物の環境調査と行ない、曝露試料台と標準試料の選定および試作を行った。環境調査は、2箇所で実施した。国指定史跡旧富岡製糸場(群馬県富岡市)では温度湿度環境モニタリングを中心に、公開活用中の国指定重要文化財建造物と未公開の同じく重要文化財の建造物の比較検討を開始した。他方、レストランや展示施設に用いられる建造物の空気質調査を行った。調査項目は文化財への劣化因子として挙げられる次の項目で行なった。有機酸(酢酸、ギ酸)、無機酸(Cl-、NO2-、NO3-、SO42-)、NH4+、TOC、アルデヒド類、浮遊菌(細菌、真菌)、酸性度、温度、湿度。調査対象としたレストランに活用中の建造物では有機酸、無機酸、アルカリ(NH4+)が他の場所よりも濃度が高い結果であったが、問題のあるレベルではなかった。また展示室に利用されている箇所では酸性雰囲気であったが、その原因物質については調査中である。環境モニターのための標準試料の作成を試みた。金属片と漆を候補とし、それらを設置する曝露台を試作した。建造物の活用における文化財汚染物質の把握と来館者による様々なインパクト因子の調査をおこない、利用形態ごとの劣化因子を明らかにすることを目的としている。本年度は昨年度に引き続き歴史的建造物の環境調査を行った。昨年度温湿度などの環境モニタリングを開始した国指定史跡旧富岡製糸場(群馬県富岡市)にて空気質調査をお行なった。有機酸(酢酸、ギ酸)、無機酸(C1-、NO2-、NO3-、SO42-)、NH4+、TOC、アルデヒド類、浮遊菌(細菌、真菌)、酸性度、温度、湿度。また今年度はCO2濃度センサーによるモニタリングを活用、未活用建造物のそれぞれで実施した。展示スペースやイベントスペースで若干アルカリ(NH4+)値が高い値を示した。これは来館者に由来する。CO2濃度については開館時間に上昇がみられるものの閉館後には元の状態(未活用時)に回復し、ガス濃度が蓄積する傾向はみられなかった。これまでの調査においてはおおむね文化財収蔵環境としておおきな問題がある建造物はみられていない。今までの調査項目が博物館環境における空気質を念頭に選定しており、次年度は測定項目を選定し直し、建造物に特化した調査を行なう予定である。国指定重要文化財舞鶴市赤レンガ博物館および市政記念館、まいつるちえ蔵、国三棟などにて空気質調査をお行なった。有機酸(酢酸、ギ酸)、無機酸(Cl-、NO2-、NO3-、SO42-)、NH4+、TOC、アルデヒド類、浮遊菌(細菌、真菌)、酸性度である。この結果、イベントスペースに利活用している空間においてアルカリ成分、有機TOC、ギ酸などが他の個所と比較して高い値を示した。また、施設近くを走る幹線道路の影響や展示利用施設では展示パネルからの放散と思われる成分が検出されるなど立地や活用形態に見合った結果を確認できた。歴史的建造物では観光客の増加と活用の一環として敷地内でコンサートを開催している施設も多い。観光客のコンサートで発生する音(振動)がどのように建物に伝播するのか昨年度空気質調査を実施した富岡製糸場にて調査を行った。加速度センサーと振動センサーを構成材に設置し、得られたデータを高速フーリエ変換(FFT)することにより、振動の周波数成分を解析した。建物を構成する素材の振動特性を明らかにすることができ、観光客やコンサートで発せられる振動の伝播特性を把握できた。今後はこれらの振動が素材の劣化などにどのような影響を与えるのか調査する必要がある。活用にあたってその建造物の構成材料が持つ振動特性を把握することは、適切な管理運営に必要となる。
消え去る歴史-日本占領期インドネシアにおける印欧人社会

日本軍占領下インドネシア期、収容所の外で占領期を過ごした印欧人の戦後は、日本軍に加担したのではないかという疑惑と偏見の中、あまり語られることもなく歴史から消え去ろうとしている。当研究は、和蘭BC級戦犯裁判で、邦人が裁かれ収容所外の印欧人女性が深くかかわった「さくら倶楽部」の尋問調書、裁判記録、および当時の文献資料や回想録を精査し、戦中戦後収容所の外にいた印欧人社会の状況及びこれら印欧人に対する「蘭印」西洋社会の空気を解明した。さらに、研究資料の性格上、戦犯裁判にかけられた邦人男性にも注目し、彼が戦前から蘭印へ「移民」していた邦人として、西洋人と同じ法的地位を持ち蘭印社会の一員として過ごしてきた戦前から戦後の社会状況も、交友を深めた日本人留学生の日記および当時の蘭印日本人会の記録をもとにエスノグラフィーとしてまとめることができた。当研究は、およそ15年間の蘭印・インドネシアの社会に漂う空気や緊張感を、そこで生きた個々人の経験の記述や経験を吐露した証言内容をもとに、日本占領下および戦後のインドネシアの状況に光を当て、印欧人と邦人の消えゆく歴史を記述したことに意義がある。また、歴史を語るとき往々にして忘れられてしまう市井の人々の、「声」を紡ぐ試みに着手したことにも意義がある。2007年以降安部元首相の慰安婦発言をうけ再登場した「さくら倶楽部」に関わる語りは、日本の戦後責任という言説の中、60年以上前「犯罪者」とされた当事者(含む邦人および印欧人)のプライバシーを蔑にしてきた。当研究は、当事者の生きた時代の空気を読み取ることもなく、また当時から問題点のある裁判としてとらえられていた裁判史料、記録を検証、精査することもなく「孫引き」を繰り返し、当事者のプライバシーを無視したような論考を重ねる多くの慰安婦関係の研究および出版に対し警鐘を鳴らすことにも重要な役割を果たすと考えている。
２次元乱流ダイナミクス観測のための多波長超多点観測法の開発

揺らぎと構造のマルチスケール結合の描像に基づくプラズマ乱流と輸送の理解を目指して、プラズマの自発光による乱流と構造のトモグラフィー法、多波長超多点観測法の原理実証を行った。九大の直線プラズマ装置PANTAにてプラズマ発光(可視光)を4視点から観測する132チャンネルトモグラフィシステムを完成しプラズマの断面全域に渡るダイナミクスを含めた観測が実現できた。プラズマ発光の二次元像が得られ、また十分な精度で検出光の揺らぎ成分が測定された。X線および紫外光については、シンチレータおよび蛍光ガラスによる間接検出法の基礎的な段階が終了した。トモグラフィーのアルゴリズム開発も進み原理実証が完了した。プラズマ閉じ込めの研究はプラズマ乱流および構造形成の描像について変革の時を迎えている。プラズマの構造は、局所的な乱流によってのみ決まるのではなく、ミクロ・メソ・マクロの波長スケールの異なる揺らぎの結合により形成・維持されるという描像に至っている。しかしながら、現在のトロイダルプラズマの乱流実験、特に高温プラズマ領域では基本的に局所一点観測に留まっている。乱流プラズマの「第一原理実験法則」を得るためには、この2次元かつ動的描像を確かめプラズマ全域におよぶミクロからマクロまで全てのスケールの揺らぎの同時計測が必要である。プラズマ全域に渡る乱流の2次元ダイナミクスの観測こそが今後のプラズマ乱流の物理、更には核融合学の発展には不可欠であり、本研究において2次元乱流ダイナミクスの観測法を開発する。従来のX線や紫外光の検出方法では、通常、ノイズ低減のためアンプを実装した検出器(1cm程度の大きさとなる)をプラズマに対向して並べる。そのため検出器系の大きさ自身の制約を受け数十の検出器を並べるのが限界である。一方可視光の検出はレンズと組み合わせたファイバー(1mm以下)を対向面に直接配列することで超多チャンネル化が可能である。ここで、多波長超多点検出システムにおいては、X線、紫外光の多チャンネル検出のために、X線および紫外光を可視光に変換した後、ファイバーにより伝送することを考える。これによってプラズマに対向する面に1mm間隔で検出器を配置することが可能となる。上記のような非可視光から可視光への変換を用いた超多チャンネル検出器の試作品を製作する。その基礎として、本年度はX線と紫外光の光変換部分の試作品(それぞれ40チャンネル程度)を作成した。X線はQUEST用、紫外光は直線プラズマ用である。また、直線プラズマ用の可視光の試作品も同様に製作した(40チャンネル程度)。H25年度、九州大学の直線装置PANTAにおいて、全128チャンネルからなる多点計測システムが完成した。このシステムは、赤外光、可視光(x2)、紫外光の4波長領域を観測でき45度ずつ離れた4方向の視点から、それぞれ33チャンネルの視線(計132チャンネル)が見込めるようになっている。このシステムによって、アルゴンプラズマを用いた128チャンネルの同時計測に成功した。トモグラフィーのアルゴリズム開発として、Algebraic Reconstruction Technique法、Maxime-Likelihood-expectation Maximization法、Bessel関数展開法、Filter-back projection法などが試され、可視光(ArIIライン青)において初期的なプラズマの断層図が得られている。10^8 V/Aの変換効率をもった光電圧変換アンプの開発に成功し、各チャンネルから得られる信号について十分なSNで揺らぎを観測することに成功した。コヒーレントなモードに関してはその空間構造がBessel関数展開法によって得られている。一方、X線に検出については、QUESTプラズマにて成功している。懸案事項であった、蛍光ガラスを使用した紫外線検出については、京都工繊大の協力を得て揺らぎを含めて検出に成功した。H25年度の研究において、多波長超多点観測法による乱流トモグラフィーの原理実証は本研究課題によって完了した。H23年度、多チャンネルシステムの試作品が完成し、H24年度に九州大学の直線装置PANTAにおいて、全128チャンネルからなる多点計測システムがほぼ完成している。このシステムは、赤外光、可視光(x2)、紫外光の4波長領域を観測でき、45度ずつ離れた4方向の視点から、それぞれ33チャンネルの視線(計132チャンネル)が見込めるようになっている。H24年度、このシステムが実質的に稼働可能とし、アルゴンプラズマを用いた48チャンネルの同時計測に成功した。トモグラフィー解析法としては、ART法をはじめとするいくつかの方法が試され、可視光(ArIIライン青)において初期的なプラズマの断層図が得られるに至っている。また、ハードウェアの開発としては、光電圧変換アンプについては10^8 V/Aの変換効率をもったアンプの開発に成功し、それぞれのチャンネルから得られる信号については十分なSNで揺らぎを観測することに成功した。

一方、X線や紫外光の検出方法については、可視光に変換した後、ファイバーにより伝送する方法を開発中である。QUESTプラズマでの試験に結果ではX線の検出に成功している。紫外線については、PANTAから十分な発光強度が得られなかったため今後の課題となっている。最終的にH24年度のうちに64chチャンネルの同時観測が可能となっている。H25年度には132chが可能な状態となり、直線プラズマ装置PANTAにおいて本格的なトモグラフィー計測を行う。本年度の予定として、多波長超多チャンネルシステムの構成要素であるオプティカル・フィードスルー、光受光部(コリメータ)、アンプの試作が主目的であったが、それぞれの構成要素が一組ずつほぼ予定の通り順調に製作された。また、直線装置へ取り付けるための真空容器も作成され、来年度からの実験の準備が整っている。25年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度の予定として、平成23年度に作成した多波長超多チャンネルシステムの構成要素を組上げ、直線装置PANTAにおいて、全128チャンネルからなる多点計測システムがほぼ完成している。また同システムにおいて、トモグラフィー用観測の動作テストを行った。アルゴンおよびネオンプラズマにおいて、青(ArII)、赤(NeI)。赤外(ArI)、紫外(NeII)などの光の波長領域において観測を行い、紫外領域以外、良好な観測結果を得ている。紫外については、直線プラズマからの発光強度が弱く、プラズマからの観測は現有のアンプのゲイン10^8 V/Aでは検出感度以下である。閉じこめプラズマからの紫外線を対象とした試行を近い将来行う予定である。直線プラズマに関しての測定では、もっとも良好なシグナルが得られているArIIの青を用いてトモグラフィーを64chの検出器を用いて行い、トモグラフィーによるプラズマの構造の推定に成功している。また、トモグラフィーの解析についてもART法、逐次近似法や関数展開法を用いたアルゴリズムの開発が順調に進展している。今後、現在所有の試作品に加えてトモグラフィーを行うための検出器を増やし、直線プラズマにおいて紫外光、可視光に加え、赤外光のフィルターも準備し各波長領域においてデータを収集する。トモグラフィーを行うためのいくつかの方法の再構成アルゴリズムを作成、コード化し実際の実験データにおいて行う。現在、特別な問題点はなし。計画の特別な変更もなし。これまでの準備圏で開発してきたシステムに根本的な問題はなく、適切に対象とするプラズマや観測波長領域を選択することで十分に実用に供することが示されてきた。本年度は、この直線プラズマ装置に設置したシステムを用いた多波長超多点空間観測法の開発およびプラズマの実測を主として行う。以下の観点から継続する。
IL-1受容体アンタゴニストノックアウトマウスにおける睡眠障害に関する解析

IL-1受容体アンタゴニストノックアウト(IL-1raKO)マウスを用いて、IL-1の過剰シグナルによって誘導される行動異常(うつ・不安など)発症の詳細なメカニズムについて、解析を行ってきた。IL-1ra KOマウスは通常飼育状態では同腹野生型マウスに比べ「抗うつ様行動」を示すことを観察していた。この現象は、アドレナリン受容体拮抗薬投与により改善されることから、交感神経系の過剰な活性化によるものであることが証明できた。一方、この抗うつ様行動は、軽度の慢性拘束ストレスによりうつ様行動および不安様行動を示すようになることを見いだした。すなわち、IL-1のシグナルが入りやすい状況にあるIL-1ra KOマウスでは、野生型マウスとストレス感受性が異なることを発見した。このストレス感受性の違いを利用して、IL-1raKOマウスの行動異常がどのようなメカニズムで誘導されているかについて、特に、アドレナリン受容体の発現に関して、海馬と大脳皮質におけるmRNAの発現レベルをリアルタイムPCRで比較した。その結果、ストレスを負荷したIL-1raKOマウスの海馬においては、アドレナリン受容体alpha2bの発現が、ストレス負荷なしのIL-1raKOマウスよりも有意に減少していることがわかった。またGABAA受容体サブユニットに関しては増加している傾向にあった。いっぽう、大脳皮質においてはアドレナリンalphala,2aおよび5-HT2Creceptorの発現が減少していることが確認できた。以上のことから、アドレナリン受容体シグナルを介したcAMP活性化等がストレス負荷により変化をうけていること、GABAA受容体シグナルやセロトニンシグナルに関してもバランスが崩れ、ノルアドレナリンの放出や交感神経系シグナルの質に変化が生じた結果、うつや不安様行動が誘導されていることを示唆する結果が得られ、うつや不安の発症メカニズムの要因となっていると思われる。IL-1は炎症反応において重要な役割を果たしていることはよく知られていたが、ストレスが負荷された際にも脳内でmRNAレベルでの発現が上昇することが報告されるようになり、炎症時以外でも神経系において何らかの働きを担っていることが示唆されている。当研究室ではすでに、IL-1の受容体アンタゴニストを人為的に欠損させたIL-1受容体アンタゴニストノックアウトマウスが作製されており、IL-1シグナルが恒常的にIL-1受容体に伝達されていると考えられている。このマウスを用いて、神経系に対するIL-1の役割を解析するために、さまざまな行動試験を行った。その結果、8週齢においては、野生型マウスに比べて、ノックアウトマウスおよびヘテロマウスでは強制水泳試験やtail suspension試験などにおいで、いずれも有意に不動時間が少ない傾向にあった。このことは、マウスがその状況から逃れたいという逃避行動が野生型より強い傾向にあることを示唆するものである。一方、その他の行動試験(高架式十字迷路、明暗箱移動)においては、野生型マウスに比べ、ノックアウトマウスではほとんど差がみられなかったのに対し、ヘテロマウスで不安とは逆の傾向(躁状態)を有意に示すことが明らかとなった。以上の解析結果をまとめると、IL-1受容体アンタゴニストのタンパク量が野生型より減少すると、逃避行動が増大し、さらに、減少した際のタンパク量の発現の違いにより、躁状態に傾くかどうかを決定しているということが示唆する結果となった。このことから、IL-1受容体アンタゴニストによるIL-1のシグナル量の調節が、精神疾患の発症において重要な役割を担っている可能性があり、疾病発症のメカニズムの解明につながることに期待が持てる。現在、このIL-1受容体アンタゴニストノックアウトマウスが高齢になった場合(20週齢)に、行動異常がどのように変化するのか、解析中である。その結果、8週齢においては、野生型マウスに比べて、ノックアウトマウスでは強制水泳試験(FST)やtail suspension試験(TST)などにおいて、いずれも有意に不動時間が少ない「抗うつ様行動」を示し、20週齢になると、有意に「不安様行動」を示すことが明らかとなった。この不安様行動は、抗不安薬であるジアゼパムを投与することにより改善されることから、GABA系シグナルがKOマウスでは弱くなっている可能性があり、IL-1がGABA系に影響を及ぼしていることが示唆された。また、WTとKOとで慢性拘束ストレス負荷後に異なる行動異常を誘導することを見いだした。このことは、WTとKOとでストレスに対する感受性が異なることを意味するものと思われる。IL-1シグナルがストレス感受性に関与していることが示唆されたが、詳細なメカニズムに関しては現在解析中である本研究では、ストレス負荷時に脳内に誘導されるIL-1のストレスとの関係について明らかにすることを目的とし、IL-1受容体アンタゴニストノックアウトマウスを用いて実験を行ってきた。すなわち、IL-

1受容体アンタゴニストノックアウトマウスでは、IL-1シグナルが過剰に誘導されているため、ストレス負荷を実験的に模倣しているモデルマウスととらえ、このマウスに精神的な障害(不安・うつなど)が誘導されるうかどうかについて、行動試験等を指標に解析を進めた。その結果、20週齢において不安様行動を表すようになることが判明した。この不安様行動がどのように誘導されるかを解明するために、GABAシグナルを増強させることがしられているジアゼパムを投与して、高架式十字迷路試験を行った。その結果、ジアゼパム投与群において、有意に不安様行動が改善されたことから、GABAシグナルが弱くなっていることにより不安が誘導されていることが明らかとなった。すなわち、GABAの脳内における濃度が低いためにGABAシグナルが弱くなっている可能性が示唆された。濃度測定などを行う必要があるが、現在準備中である。その他、不安に関係の深いセロトニンなどのモノアミン系物質の海馬における濃度に関して測淀を行った。8週齢以降のノックアウトマウスで増加している傾向にあったが、不安を示す20週齢以外でも代謝産物が多くなっていることから、行動異常とセロトニン代謝に相関関係はないと言える。セロトニンの量に関しては、有意差はないものの、ノックアウトマウスで増加傾向にあった。IL-1受容体アンタゴニストノックアウト(IL-1raKO)マウスを用いて、IL-1の過剰シグナルによって誘導される行動異常(うつ・不安など)発症の詳細なメカニズムについて、解析を行ってきた。IL-1ra KOマウスは通常飼育状態では同腹野生型マウスに比べ「抗うつ様行動」を示すことを観察していた。この現象は、アドレナリン受容体拮抗薬投与により改善されることから、交感神経系の過剰な活性化によるものであることが証明できた。一方、この抗うつ様行動は、軽度の慢性拘束ストレスによりうつ様行動および不安様行動を示すようになることを見いだした。すなわち、IL-1のシグナルが入りやすい状況にあるIL-1ra KOマウスでは、野生型マウスとストレス感受性が異なることを発見した。このストレス感受性の違いを利用して、IL-1raKOマウスの行動異常がどのようなメカニズムで誘導されているかについて、特に、アドレナリン受容体の発現に関して、海馬と大脳皮質におけるmRNAの発現レベルをリアルタイムPCRで比較した。その結果、ストレスを負荷したIL-1raKOマウスの海馬においては、アドレナリン受容体alpha2bの発現が、ストレス負荷なしのIL-1raKOマウスよりも有意に減少していることがわかった。またGABAA受容体サブユニットに関しては増加している傾向にあった。いっぽう、大脳皮質においてはアドレナリンalphala,2aおよび5-HT2Creceptorの発現が減少していることが確認できた。
SUMO化・脱SUMO化によるタンパク質の局在および機能変換機構の網羅的解析

所属研究室において共同研究として行ってきた分裂酵母のlocalizome(全遺伝子産物の細胞内局在決定)がほぼ完了し、局在情報のデータベース化および集計・比較解析もほぼ終了するに至った。約5000の分裂酵母遺伝子産物のうち、これまでに局在報告があるものは20%に満たなかったのであるが、本研究ではさらに70%以上の遺伝子産物について新たに局在を明らかにした。また局在観察を単純に網羅的に行うに留まらず、共局在観察や遺伝子産物の発現レベル調節を取り入れた観察を集中して行ってきたため、さらなる詳細情報を追加することができた。本データベースは、タンパク質局在変化の解析に広く応用できるものと思われる。SUMO(small ubiquitin-related modifier)は低分子量の翻訳後修飾タンパク質であり、標的タンパク質と共有結合することにより、そのタンパク質の局在や機能を制御していると考えられている。分裂酵母のSUMO、SUMO化酵素および脱SUMO化酵素欠損株を作成し表現型観察を行った結果、DNA合成・修復、核分裂、細胞壁形成、核-細胞質間輸送にSUMO化が関与していることが確認された。また分裂酵母において、SUMOは核、核内ドットおよび動物細胞の中心体に相当するspindle pole body(SPB)に局在する。Localizomeにより、約500の遺伝子産物が核、約260が核内ドット、約160がSPBに局在することが分かった。これらの遺伝子産物のSUMO化・脱SUMO化欠損株における局在異常を解析し、さらにSUMOの標的であるかどうかを検討することにより、SUMO化タンパク質の局在変化を介した、様々な細胞内過程の調節機構を包括的に理解することが可能であると思われる。SUMO(small ubiquitin-related modifier)は、ユビキチン様の低分子量タンパク質であり、標的タンパク質のリシン残基に共有結合することにより、そのタンパク質の機能を調節すると考えられている。分裂酵母にはSUMOであるPmt3、SUMO化酵素(E3)であるPli1、脱SUMO化酵素であるUlp1およびUlp2が存在する。通常の細胞周期および接合から減数分裂の過程における局在を詳細に観察した結果、Pmt3、Pli1およびUlp2は核ドットを含む核内全体および動物細胞の中心体に相当するSPB(spindle pole body)に、Ulp1は核膜に局在することが確認された。またSUMO化および脱SUMO化酵素を欠損するとPmt3化タンパク質(GFP-Pmt3)の局在性に変化が見られることが分かった。一方、共同研究として行ってきた分裂酵母のlocalizome-約5000の全遺伝子ORF(open reading frame)のクローニングおよびYFP(yellow fluorescent protein)融合ORF発現ライブラリーの作成と、野生株における全遺伝子産物の局在決定の計画-が終了した。本年度において、これまでに得られたSUMOおよびSUMO化・脱SUMO化酵素欠損株にORF-YFP発現系を導入し、野生株の場合と比較して局在に変化を示すタンパク質を網羅的に検出するという本研究主要目的のための準備を整えることができた。また生化学的にSUMO化修飾タンパク質を検出するための抗体を得ることができた。
微生物のホスホリパーゼの一次構造における活性部位の分子生物学的解析

1.Bacilluscereusのスフィンゴミエリナーゼの一次構造と活性の相関の解析。部位特異的変異によりアミノ酸を1個だけ別のアミノ酸に置換する手法で、このホスホリパーゼの一次構造のうち、4アスパラギン酸残基をグリシンに、2ヒスチジン残基をアラニンにそれぞれ変換した6箇の変異体酵素をつくり、それぞれの酵素活性と溶血活性を測定した。本酵素と牛膵デオキシリボヌクレアーゼIとの構造上の相同性が判明したので、比較参照して解析した結果、151位,296位のヒスチジン、295位のアスパラギン酸は酵素の触媒活性および溶血活性に必須で、233位のアスパラギン酸は296位ヒスチジンと水素結合して酵素活性に影響を与え、126位および156位のアスパラギン酸は基質の認識に関与していることが明らかとなった。2.真菌Penicillium notatumのホスホリパーゼBのGPIアンカー蛋白質としての構造特異性および遺伝子の発現。本酵素の遺伝子を大腸菌にトランスフェクトして、不活性型の蛋白質として発現させることに成功した。一方、本酵素がC末端に疎水性ペプチド領域を持ち、分子内にイノシトールを含むGPIアンカー蛋白質であることを見出し、かつ本酵素が菌のプロトプラストの膜表面から自己触媒的分解により遊離されてくることを証明した。3.Bacillus thuringiensisのホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼC(PIPLC)の大量生産系の構築。Bacillus brevisのホストーベクター系を用い、本酵素の遺伝子を発現させて、大量に酵素を産生させ、構造-活性相関の研究を行うのに充分な素地をつくった。収量はもとのB thuringiensisの培養に比べ、薬500倍となった。1.Bacillus cereusのスフィンゴミエリナーゼの一次構造と活性の相関の解析。E.coliHB101に保持されているプラスミドpPLB18中のホスホリパーゼB遺伝子を鋳型として、PCR法によりpLB18中の53bpの不要なインサートを除去し、Bacillus brevi47用発現ベクターpNU211へのクローニングのための制限酵素サイトを導入した。次にこのPCR断片をpNU211へ導入し、そのトランスフォーマントを得た。これを用いて発現を試みたが、72時間の培養においてもホスホリパーゼBに対応する遺伝子由来の蛋白の発現は認められなかった。同様の方法で真核細胞発現ベクターpSVLにホスホリパーゼB遺伝子を導入したベクターpSVBを構築した。これを用いてCOS-1細胞内での発現を試みたが、ホスホリパーゼB活性は検出感度以下であった。上記2つの発現系においては、ホスホリパーゼBに細胞膜溶解作用があるため困難であると考えられるので、現在in vitro系での発現を検討している。各種蛋白修飾試薬による化学修飾の実験から、酸性アミノ酸(アスパラギン酸,グルタミン酸)を修飾するWoodward'sK試薬がスフィンゴミエリナーゼ活性を阻害することが示され、酵素活性にこれらアミノ酸が関与していることが示唆された。そこで他の細菌スフィンゴミエリナーゼと相同なアスパラギン酸のうち4つの部位を選び、グリシンに変えた変異体をつくり、B.brevis47のトランスフォーマントを得、酵素化学的性質を検討中である。大腸菌用発現ベクターpKK232-2を用い、ホスホリパーゼBの遺伝子を組みこんだ発現ベクターpKKPBを構築し、大腸菌E.coliJM109内で糖鎖を含まない65KDaの不活性型で発現させることができた。また、研究の過程で本酵素がGPIアンカー型膜蛋白質で、P.notatumのスフェロプラストから自己消化的に膜より遊離されることが判明した(FEBS Letters投稿予定)。

さらに真核細胞での発現を試みている。2.Bacillus cereusのスフィンゴミエリナーゼの一次構造における活性部位の解析-部位特異的に作成した変異型酵素の発現。他の細菌スフィンゴミエリナーゼと相同な部位の4つのアスパラギン酸残基を1つずつ変えた変異体をつくり、B.brevis 47の大量生産系で発現させて調べた結果、C末端に近く、Hisの隣にあるアスパラギン酸残基が活性に必須であることがわかった。また、他の変異体では基質特異性の変化が認められた(Biochem.J.掲載予定)。3.Bacillus thuringiensisのPI特異的ホスホリパーゼCの大量発現系の構築と変異型酵素の発現。本酵素の遺伝子を発現ベクターpNU211に組みこんだベクターpNUPI1-1をB.brevis 47で大量発現させることに成功した(FEMS Letters投稿予定)。この系で変異型酵素を発現させる計画である。PDBのデータに基づき、スフィンゴミエリナーゼの一次構造を既知の蛋白質のものと比較した結果、本酵素の構造は、牛膵デオキシリボヌクレアーゼI(DNase I)と相同性があることが示された。X線結晶解析により判明しているDNase Iの三次構造上に本酵素の一次配列を3D-1D法により乗せて調べた結果、151,296位のヒスチジン、295位のアスパラギン酸が活性に重要である可能性が示された。そこで、ヒスチジンをアラニンに、アスパラギン酸をグリシンに変えた3つの変異体酸素を、部位特異的変位により作製し検討したところ、これらのアミノ酸が触媒活性および溶血活性に必須であることが明らかとなった。本酵素の遺伝子を大腸菌に導入し、抗体で調べた結果、不活性型の蛋白質として発現していることが確認された。また、GC-MSによる分析から、本酵素が分子内にイノシトールを含むGPIアンカー蛋白質であることが示された。一方、本酵素がスフェロプラストの膜表面上で自己のアンカーを分解し、自己触媒的に膜から遊離することを明らかにした。本酵素遺伝子をBacillus brevisのホストーベクター系で発現させ、蛋白質としてもとの菌の培養の約500倍の収率で得ることが出来た。
高度経済成長の枠組の形成-岸内閣の経済政策

「高度経済成長の枠組みの形成-岸内閣の経済政策-」に関する多様な検討が進められた。1.「再軍備」に関しては、アメリカ国務省と国防省の対立の問題や朝鮮戦争勃発が日本再軍備構想に与えた影響が検討された。2.「自衛隊」に関しては、日本独特の「文官優位」の組織ができあがった経緯の分析が行われた。3.「岸内閣の中国政策」に関しては、岸内閣の「二つの中国政策」は台湾確保を前提とした考えであり、中台離反の考えである点について多角的に検討された。4.「新特需」に関しては、1950年代の日本経済の発展の一要因となった新特需について、新資料にもとづき品目別の内訳や企業別の受注の動向などが集計され分析された。5.「日中関係と東南アジア」に関しては、岸内閣期における大阪財界の対中国貿易拡大の期待と、中国「大躍進」政策の大失敗との関係が検討された。さらに本年度も前年度から引き続いて、岸内閣を知る当時の関係者へのインタビュー・テープをおこして記録に残す作業がすすめられた。インタビューを行ったのは次の方々である。(所属は当時)(1)塚本哲也(毎日新聞)(2)鶴田卓彦(日本経済新聞)(3)吉野俊彦(日本銀行)(4)大日向一郎(日本経済新聞)(5)槙枝元文(日教組)(6)宮崎吉政(読売新聞)(7)内田健三(共同通信)作業は本部分完了し、4名の関係者の再校正を残すのみである。このインタビューは、科学研究費補助金の報告書の資料編としてまとめる予定である。「高度経済成長の枠組の形成」に関する多様な検討が進められた。1.「公職追放解除(デ・パ-ジ)」に関しては、公職追放解除が50年代の政界に及ぼした影響が分析された。吉田・鳩山・石橋・岸の歴代4内閣(通算9内閣)を比較すると、鳩山内閣において追放経験者が閣僚全体に占める割合が最も高くなる。この鳩山内閣において憲法改正や再軍備化が表明され、戦前の旧国家体制への回復が求められるなどの政治的リアクションが展開される過程が検討された。2.「55年体制の形成」に関しては、政治心理学における「ライフ・サイクル変化」モデルや「世代間ギャップ」モデルや「時代状況の一時的影響」モデルなどに基づいて「55年体制」が分析された。3.「追放解除財界人と1950年代」に関しては、財界旧勢力の50年代における復帰は、日本の経済人の戦前1920年代からの国際ネットワークへの復帰を意味することが検討された。4.「中共貿易論」に関しては、大阪財界が50年初期に復興にむけて、中央の政財界とは異なった意志を持ち行動を試みた過程が分析された。大阪は、繊維産業を中心とする戦前からの産業・輸出構造に固執したものの、その最大の取引相手であった中国市場はこの時期には事実上失われていた。大阪は、50年代の国際環境のなかで対応性を見出しかねている過渡的な状況にあったと考えられる。5.「地域開発政策」に関しては、50年代の地域開発政策に関して、中央政府の「全国計画」が成立しない過渡的な状態のなかで地方独自の地域開発政策が進められた経緯が検討された。1.「地域開発政策」に関しては、60年代の九州地方における開発拠点地帯の構想が検討された。2.「50-60年代の政治意識」に関しては、日米安保や政治経済政策に関する政治意識の分析が行われた。3.さらに本年度は、岸内閣を知る当時の関係者へのインタビューを行い、テープをおこして記録に残す作業がすすめられた。(所属は当時)(1)塚本哲也(毎日新聞)

・・塚本氏は、岸信介の安全保障にかんする論理が透徹していたことや、岸の人柄が世間で言われるよりはるかに暖かく明るかったことなどを述べられた。(2)鶴田卓彦(日本経済新聞)・・鶴田氏は、岸と鮎川義介との関係などを述べられた。(3)吉野俊彦(日本銀行)・・吉野氏は、岸内閣が統制色のやや強い金融政策をおこない日本銀行を規制したことなどを述べられた。(4)大日向一郎(日本経済新聞)・・大日向氏は、岸と当時の政治家との関係を詳細に述べられた。(5)槙枝元文(日教組)・・槙枝氏は、占領期から高度成長期にかけての教育行政と日教組について、歴史的経緯を述べられた。(6)宮崎吉政(読売新聞)・・宮崎氏は、安保改定にいたる岸内閣の政治的過程について詳細に述べられた。(7)内田健三(共同通信・・内田氏は、岸内閣と池田内閣の比較し政策や政治のあり方の差異について述べられた。「高度経済成長の枠組みの形成-岸内閣の経済政策-」に関する多様な検討が進められた。1.「再軍備」に関しては、アメリカ国務省と国防省の対立の問題や朝鮮戦争勃発が日本再軍備構想に与えた影響が検討された。2.「自衛隊」に関しては、日本独特の「文官優位」の組織ができあがった経緯の分析が行われた。3.「岸内閣の中国政策」に関しては、岸内閣の「二つの中国政策」は台湾確保を前提とした考えであり、中台離反の考えである点について多角的に検討された。4.「新特需」に関しては、1950年代の日本経済の発展の一要因となった新特需について、新資料にもとづき品目別の内訳や企業別の受注の動向などが集計され分析された。5.「日中関係と東南アジア」に関しては、岸内閣期における大阪財界の対中国貿易拡大の期待と、中国「大躍進」政策の大失敗との関係が検討された。さらに本年度も前年度から引き続いて、岸内閣を知る当時の関係者へのインタビュー・テープをおこして記録に残す作業がすすめられた。インタビューを行ったのは次の方々である。(所属は当時)(1)塚本哲也(毎日新聞)(2)鶴田卓彦(日本経済新聞)(3)吉野俊彦(日本銀行)(4)大日向一郎(日本経済新聞)(5)槙枝元文(日教組)(6)宮崎吉政(読売新聞)(7)内田健三(共同通信)作業は大部分完了し、4名の関係者の再校正を残すのみである。このインタビューは、科学研究費補助金の報告書の資料編としてまとめる予定である。
遺伝子操作による心筋細胞から心筋幹細胞の作成と心筋再生治療への応用

心臓の再生修復を目指す再生医療において、人工多能性幹細胞(iPS細胞)は有望な細胞ソースとして期待が高い。しかし、体細胞からのリプログラミングによるiPS細胞の作製、iPS細胞からの心筋細胞への分化誘導および分離純化といったステップが必要であり、コストや時間がかかるといった問題がある。また、安全性に関する問題も解決されていないのが現状である。そこで、我々は、心筋細胞への限定的な分化能(可塑性)を有する心筋幹/前駆様細胞を作製できれば、そのまま心筋再生治療に利用できる有用かつ安全な細胞ソースになるのではないかと仮説を立てた。本研究においては、遺伝子操作技術によって、体細胞から心筋幹/前駆様細胞を作製することを目的とした。心臓由来の培養cardiosphere-derived cellsや線維芽細胞に、心筋の形成や分化に必要な遺伝子(Nkx2.5 etc)や心筋幹細胞で発現が高い遺伝子(lslet-1、c-kit etc)などを組み合わせて遺伝子導入することで、心筋幹/前駆様細胞の作製を試みた。その結果、効率的に心筋細胞へ分化でき、一部が平滑筋と内皮細胞へ分化するといった心筋幹/前駆様細胞を誘導することができた。以上から、体細胞からの心筋幹/前駆様細胞の作製が可能と考えられ、心臓の再生修復における新たな細胞ソースとして期待される。また、本研究での幹/前駆様細胞の作製技術の概念は、他の臓器・組織の再生修復にも応用可能であり、再生医療全般の発展に貢献できる意義深いものと考えられる。我々は、自己細胞から部分的リプログラミングによって心筋細胞への限定的な分化能(可塑性)を有する心筋幹/前駆様細胞(Cardiac stem/progenitor-like cells)を作製することで、そのまま心筋再生治療に利用できる有用な細胞ソースになるのではないかと仮説を立てた。そこで、本研究では、部分的リプログラミングという斬新な概念に基づき、遺伝子操作技術による心筋幹/前駆様細胞の樹立および心筋再生治療への応用の可能性について検証することを目的とした。21年度は、遺伝子導入によって、心筋幹/前駆様細胞を作製できるか否かの検証を行った。心臓由来培養cardiosphere-derived cellsや線維芽細胞に、心筋の早期形成に必要な遺伝子(Nkx2.5など)、心筋幹細胞に多く発現している遺伝子(lslet-1、c-kitなど)や、内皮前駆細胞のマーカーとして知られている遺伝子(Flk-1)などをプラスミドベクターで導入することで、心筋幹/前駆様細胞の作製を試みた。Flk-1導入によって心筋や内皮への分化能を有する幹/前駆様細胞が誘導された。また、Flk-1とNkx2.5導入によって、心筋細胞への分化効率がより高く、一部が平滑筋と内皮細胞へ分化するといった幹/前駆様細胞が誘導された。一方で、Islet-1とc-kitの導入では効率的な分化能を有する幹/前駆様細胞を誘導できなかった。以上の結果から、部分的リプログラミングによって、心筋幹/前駆様細胞を作製できる可能性が示唆された。
キイロショウジョウバエにおけるdivers遺伝子の機能に関する研究

キイロショウジョウバエのX染色体に位置するdivers(dvr.1-28.1,8D8-9)の比較的強い対立遺伝子の表現型は、暗色の短い翅をもち体長も短くなる。他のX染色体の突然変異であるyellow、scute、forkedとの二重突然変異体はまた異なった翅の表現型を示し、これらの遺伝子と相互作用を示す特異な遺伝子であることが知られている。特にyellow突然変異と組み合わせると翅が反る。我々の大規模なP因子による挿入突然変異誘発実験により新規に3系統のdiversのP因子挿入突然変異を得て、これらの系統を元に遺伝学的、分子生物学的に解析した結果、以下のような点が明らかになった。P因子を再転移させて得た、divers遺伝子のnull変異は致死となる。GFPマーカーを持つようなX染色体のバランサー染色体(FM7i)を使って観察した結果、致死のステージは胚の段階である。また興味深いことに、あるY染色体(恐らくrDNA領域が増幅している)をもつ系統と致死でない、diversの機能を探る上で重要な手がかりになる。また、今までノーザンブロット法により転写産物が検出されていないこと、および大規模なcDNAライブラリーのスクリーニングによって未だにクローンが得られていないことからdvr遺伝子の転写レベルは非常に低いと考えられる。その転写ユニットは今のところ同定できていないが、P因子挿入部位近傍の約8kbの塩基配列を決定して、blastx検索を行った結果高い確率ですでにクローン化された遺伝子とヒットした。今後この領域をもとにRACEや、作製し直した初期胚cDNAライブラリを用いて転写産物を解析する。キイロショウジョウバエのX染色体に位置するdivers(dvr:1-28.1,8D8-9)の比較的強い対立遺伝子の表現型は、暗色の短い翅をもち体長も短くなる。divers遺伝子のnull変異は致死となる。この致死のステージは少なくとも1齢以前である。あるY染色体(恐らくrDNA領域が増幅している)をもつ系統とdiversを交配すると雄で致死が誘発される。yellow等の他にも相互作用を示す遺伝子が複数存在する。現在得ている、dvrのnull突然変異は1齢2齢幼虫の時期で致死になっていることから、初期胚から1齢の時期には少なくとも発現しているはずである。しかし、ノーザンブロット法により転写産物が検出されていないこと、および大規模なcDNAライブラリーのスクリーニングによっても未だにクローンが得られていないことからdvr遺伝子の転写レベルは非常に低いと考えられる。この領域をもとにRACEによって転写産物を増幅している。また初期胚、1齢幼虫からcDNAライブラリを作製し直しており、今後これをスクリーニングする予定である。キイロショウジョウバエのX染色体に位置するdivers(dvr.1-28.1,8D8-9)の弱い突然変異体の表現型は、暗色の短い翅をもち体長も短くなる。

我々の大規模なP因子による挿入突然変異誘発実験により新規に3系統のdiversのP因子挿入突然変異を得て、これらの系統を元に遺伝学的、分子生物学的に解析した結果、以下のような点が明らかになった。トランスポゼースを供給し、挿入しているP-elementを切り出すことで、divers遺伝子のloss-of-function変異を多数単離した。その結果、null変異は致死となる。この致死のステージを詳細に解析するため、GFPマーカーを持つようなX染色体のバランサー染色体(FM7i)とへテロ接合の系統を作製した。その結果致死のステージは少なくとも1齢以前であり、現在その致死胚の表現型を観察している。また、今までノーザンブロット法により転写産物が検出されていないこと、および大規模なcDNAライブラリーのスクリーニングによっても未だにクローンが得られていないことからdvr遺伝子の転写レベルは非常に低いと考えられる。その転写ユニットは今のところ同定できていないが、P因子挿入部位近傍の約8kbの塩基配列を決定して、BLAST検索を行った結果高い確率ですでにクローン化された遺伝子とヒットした。この領域をもとにRT-PCR、RACEによって転写産物を増幅している。また初期胚、1齢幼虫からcDNAライブラリを作製し直しており、今後これをスクリーニングする予定である。