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生体模倣型複核金属錯体を有する機能性修飾電極の開発

まず始めに金属電極表面への自己組織化単分子膜の形成を行うため、分子内にジスルフィド結合を有する新しい配位子を合成した。得られた配位子を用いて二核銅を調整し、これを常法により金電極表面へ吸着させ、目的とする修飾電極を作成した。修飾された銅錯体の定量や電気化学的応答性などの基本的な評価は常法に従って行った。次に分子状酸素の電気化学的還元反応や、塩基性条件下における水和水の酸化反応について系統的に検討を加え、従来の方法と電流効率や選択性などを比較検討した。また、電極表面に生成する活性中間体を評価するため、極低温条件下で反射吸収スペクトルや反射ラマンスペクトルを用いて検討を行うための装置を設計した。以上の結果を基にして酸素電池への応用についても検討を行った。さらに、中間体として生成する高原子価銅-酸素錯体は、高い酸化能を有しているので、それを利用した芳香族化合物やアルカン類の水酸化反応についても検討を加え、効率的な電気化学的酸素化反応システムの構築を目指した。また、銅以外の遷移金属(本年度は特にニッケル錯体に着目した)についても同様にして検討を行い、各金属間での反応性や選択性の違いについて考察を加えた。これらの成果は生化学分野の研究に対しても重要な情報を提供する。以上で得られた成果を総合的に評価して、さらに効率的な反応系の構築を目指して、新しい配分子の設計・合成を行った。
大気イオン移動度スペクトルを利用した大気微量成分測定法の開発

高分解能ドリフトチューブ型イオン移動度計を利用した、大気微量成分測定法を開発するための基礎実験を行った。まず、対流圏大気中におけるイオン-分子反応によってイオン組成が時間とともにどのように変化するのかを移動度スペクトルを用いて精密に調べた。正イオンにおいては、イオン生成後数10ms後に移動度1.8cm^2V^<-1>s^<-1>に1本のピークだけが現われ、反応時間やイオン-分子反応モデルとの比較からアンモニアイオンであると推定された。その後移動度スペクトルでは反応時間1sの間にかけて5本のピークが現れた。これらのイオン組成は現在のところ不明であるが、他の研究グループによる質量分析計の測定結果などと比較すると、アンモニアよりも陽子親和力の大きなピリジンや他のアミン類であると推定される。また、移動度が0.9cm^2V^<-1>s^<-1>付近に4本のピークが存在することも確認された。移動度の値からこれらのイオン種の質量は400amuを超えると考えられ、そのような重いイオンが対流圏において生成されるメカニズムは現在まで知られていない。移動度スペクトルに現れたこれらのイオン種を明らかにするために、移動度-質量分析システムの試作を行った。質量分析部は4重極マスフィルター、チャンネルトロン検出器およびターボ分子ポンプ(2401/s)から成る。また、ドリフトチューブ型移動度計とのインターフェース部には、ピンホールおよびスキマ-を配置し2台のロータリーポンプで排気するようにした。今後、このシステムを用いてイオン種の同定作業を進めて行く予定である。
素子のナノ構造化・単結晶化による新型有機半導体放射線検出器の開発

素子のナノ構造化による放射線測定効率の向上のため、ヘテロ型有機ホトダイオードに対してナノ構造製作を試み、その効果を検討した。X線照射実験を行ったところ、平板インプリントを行った場合に比べ、ナノ構造を持つ素子はX線誘起電流が23%増加し、ナノ構造化の効果が見られた。しかし、この効果は製作素子ごとに異なっており、溶剤によるナノ構造溶解の可能性も支援され、今後、製作プロセスの検討が必要である。一方、素子の結晶化による誘起電流の増加効果を、材料塗布後の冷却時間をパラメータとして調べた。冷却時間を150分とした場合にX線誘起電流が大きくなる傾向が見られた。今後、検討を継続する予定である。有機半導体放射線検出器の構造や組成を改良することで、放射線に対する測定効率を向上させるための研究を実施している。主な手法としては、(1)素子のナノ構造化による電荷収集効率の向上及び(2)素子材料の結晶化による電荷収集効率の向上を検討した。(1)素子のナノ構造化による電荷収集効率の向上P3HTを100nm厚さでスピンコートした後、モールドにより幅100nmの凹凸を作成した。その上からPCBMをスピンコートし、P型(P3HT)とN型(PCBM)が櫛のように凹凸形状をなす検出器を製作することに成功した。この素子に対して可視光及びX線を照射して発生電流を評価したところ、凹凸が無い場合に比べ可視光で15%程度、X線では50%近い誘起電流の増加が観測された。この結果から、ナノ構造化することで検出器の効率向上に成功したということができる。しかし、現在の素子でも発生電流の絶対値は十分ではないと考えられ、今後は厚さ、凹凸のピッチ等を変更し、より効率向上を目指す予定である。(2)素子材料の結晶化による電荷収集効率の向上バルクヘテロ型有機半導体放射線検出器の製作に当たり、スピンコートした後、乾燥するまでの時間が短いと、素子内の結晶化が十分に進まないものと考えられる。そこで、本研究では有機材料を溶解する際に高沸点溶媒を用い、乾燥をゆっくりと進めることで素子内の結晶化を促すことを試みた。実際には高沸点溶媒としてo-DCBを用いたところ、従来使用してきたトリクレンに比べ、X線照射時の誘起電流が1015%増加することが示された。今後、政策プロセスの改善を通じ、さらに効率向上を試みる予定である。素子のナノ構造化による放射線測定効率のさらなる向上のため、ヘテロ型素子に対してナノ構造モールドによるナノ構造製作を試み、その効果について検討を行った。検討にあたっては平板モールドを用いた素子も作成し、それぞれに対して可視光測定を行うとともに白色X線照射時のX線誘起電流を測定した。素子材料にはP3HT及びPCBMをそれぞれp型及びn型半導体として使用した。可視光測定の結果、最大電力点Pmaxが66%向上し、ナノ構造形成による界面増加により、感度の向上が実現できた。一方、X線照射実験においては、X線発生装置の加速電圧を50kVで固定し、管電流を0.5mA5mAまで変化させてX線誘起電流の測定を行った。その結果、平板インプリントを行った場合に比べ、X線誘起電流が23%増加し、ナノ構造化の効果が見られた。しかし、この効果は製作素子ごとに異なっており、P3HTにナノ構造形成後にPCBMをスピンコートする際に、溶剤(トリクロロエチレン)によりナノ構造が溶解する場合があることが分かった。そのため、ナノ構造製作後に蒸着によってフラーレンを成膜する方法を試みたが、期間内に十分な効果は見られなかった。P3HT:PCBMを塗布し、140°Cに熱したヒータによって4min間ベークした後、冷却時間を60分180分に設定し、真空中で徐冷を行った。それらの素子を用いてX線誘起電流を測定したところ、データにばらつきが大きいものの冷却時間とした場合にX線誘起電流が大きくなる傾向が見られた。他のパラメータの最適化も含め、今後、検討を継続する予定である。原子力プラントでの被曝線量管理や放射線利用医療における線量計測等に適用することを念頭に、有機半導体で構成され、十分な効率を持つ放射線検出器について研究を行った。ナノ構造を持つ有機半導体光検出器に関しては、PEDOT:PSS、P3HT、PCBMから構成され、サブマイクロメートルサイズのナノ構造を持つ素子を製作し、X線照射実験を行った。実験にはX線発生装置(160MF4)を用い、X線エネルギー:30keV100keV、管電流:0.5mA5mAの範囲で条件を変化させ実験した。

その結果、ナノ構造を持たないヘテロ型素子よりも1.2倍程度、X線誘起電流が大きい結果が得られた。また、ナノ構造を持たない素子と異なり、X線照射中にX線誘起電流が減少しない傾向が見られた。これはナノ構造化することで励起子生成位置からPN界面までの距離が短くなり、X線照射中の電荷の蓄積(チャージアップ)が小さくなったためではないかと考えている。今後は素子製作におけるパラメータを最適化するとともに実験を繰り返し、ナノ構造化の効果の検証やよりX線誘起電流の大きい素子の開発を試みる。シミュレーションによる素子構造の最適化に関しては、EGS5コードを用いて実施中である。現在までのところ、ナノ構造を持たない素子について計算結果と実験結果の比較を行っており、X線による有機半導体へのエネルギー付与の多くが、ITO電極における相互作用に起因するものである可能性を示した。生体等価な検出器開発のために有機電極の採用も検討する予定である。シンチレータのナノ構造化については平成23年度に実施することが困難であった。平成24年度以降に検討を行いたい。素子のナノ構造化に関してはヘテロ型でナノ構造をもたない素子に比べ、効率向上を確認しており、概ね順調に成果を上げることができている。一方、結晶化に関しては高沸点溶媒の使用により効率が向上する見込みを得た。今後、データの蓄積を通じて再現性を確認するとともに、実験条件のさらなる最適化を行う予定である。ナノ構造型素子の開発においては、素子の特性が予想以上に安定しなかったため、X線照射実験の結果を比較することが難しい状態であった。平成23年度末に素子性能の安定化が行えつつあり、今後、X線測定に適した素子の開発を行う予定である。ナノ構造化した有機半導体PDの製作を優先して行ったため、ナノ構造シンチレータについては現状のところ検討が行えていない状況にある。PD製作が軌道に乗った時点でシンチレータへのナノ構造製作についても試作を開始したい。また、有機半導体材料の結晶化については年間を通じて検討を行ったが、結晶化の条件出しが難しく現在までに結晶化までに至っていない。平成24年度以降も継続して結晶化方法を検討することが必要となった。平成24年度までに、ナノ構造化及び結晶化ともにある程度の成果を上げ、研究の方向性を決定することができている。平成25年度にはこれまでの成果をもとに、下のような研究を進める予定である。(1)素子のナノ構造化による電荷収集効率の向上素子のナノ構造化及びそれによる効率向上の可能性は示したので、今後はさらに素子構造に工夫を行い、形状等の最適化を行う予定である。また、これまではヘテロ型素子との効率比較を主に行ってきたので、今後はバルクヘテロ型素子並みの効率を目標とし、検討を行う予定である。(2)素子材料の結晶化による電荷収集効率の向上結晶化による効果は確認したが、データ数が十分ではない。そこで、同様の条件で再現性をチェックするとともに、製作条件の最適化を行う予定である。ナノ構造を有する有機半導体については、今後、製作数を増やすとともに、よりX線測定に適した素子形状について検討を行う。その際、EGS5、GEANT4といったシミュレーションを併用して素子へのエネルギー付与とX線誘起電流の関係を評価し、構造の最適化を並行して行う予定である。
沖縄本島における収穫祭祀舞踊の伝承

2011年度は、沖縄本島の本部町の字伊豆味と今帰仁村の字謝名の豊年祭の踊りを調査した。また、宮古と八重山の重要な祭りの芸能の名所と環境についてのフィールドワークを行った。沖縄本島では、師匠や踊り手のインタビューを行った。これで、踊りの伝承がよく理解できた。先島における調査では、沖縄の全地域の芸能の把握も進んだ。これで、モースの「身体の技」という概念を利用して、民族的なアプローチで村ウドゥイの伝承の勉強を始めた。踊り手、師匠または音楽家だけでなく、舞台の組み立て、化粧・衣装の担当者も重要な役割を果たす。彼らも字の伝統の保存を伝承するから、彼らにも話をうかがった。この調査で、沖縄の字の住民にとって、踊りや豊年祭の踊りを練習すること、また、踊ること自体にはどのような役割があるかが徐々にわかってきた。たとえば、リゾートホテルに勤務している女性や、農業従事者からは、踊りの能力を得ることの過程とその意義をうかがった。また、沖縄の北方の集落の行事も研究した。特に安田のシヌグ、与那の海上、奥のシヌグのフィールドワークを始めた。豊年祭の歴史も研究したいため、それぞれの村ウドゥイのミークバイチョウ(面賦帳)を調べ始めた。この資料には演目と配役、役員、指導者などが記されており、私の研究には重要なものである。2年間、沖縄本島と離島の行事と祭りを深く研究してきた。区長または担当者と連絡ができて、将来の研究にも重要な基礎・足がかりができた。2009年度、沖縄本島の名護市の字宮里と本部町の字伊豆味の豊年祭の踊りを調査した。また、宮古と八重山の重要な祭の芸能の名所と環境についてのフィールドワークを行った。沖縄本島では師匠や踊り手のインタビューを行った。これで、踊りの伝承の理解がよくできた。また、2010年の豊年祭のフィールドワークの準備もできた。先島においての調査では、沖縄の全地域の芸能の把握も進んだ。これで、モースの「身体の技」という概念を利用して、民族的なアプローチでムラウドゥイの伝承の勉強を始めた。踊り手、師匠または音楽家だけではなく、舞台の組み立て、化粧・衣装の担当者も重要な役割を果たす。彼らも集落の伝統の保存を伝承するから、彼らにも話をうかがった。この調査で、沖縄の集落の住民にとって、踊りや豊年祭の踊りを練習すること、また、踊ること自体にはどのような役割があるかが段々わかる。例えば、リゾートホテルに勤務している女性または、農業従事者からは、踊りの能力を得ることの過程、意義をうかがった。そして、豊年祭の歴史も研究したいため、各自のムラウドゥイのミークバイチョウ(面賦帳)を調べ始めた。この資料には演目と配役、役員、指導者などが記されており、私の研究には重要な要素であると思う。結論として、外国人特別研究員として行った半年の研究はよく進んだと思う。まだ、述べたり、発展させたりする様々なポイントがあるが、将来の結果はいい形になると思う。研究代表者は法政大学沖縄文化研究所所長の屋嘉宗彦教授である。2008・2009年にすでに沖縄で研究を進めていたので、屋嘉所長にお目にかかって、自らの研究を紹介して研究所に申し込みをした。法政大学沖縄文化研究所は日本国に始めて出来た沖縄研究所で、沖縄学の中心である。欧州の研究員として、その研究所で研究が出来るのは最善なことである。私の研究分野は民俗芸能で、今回の研究のテーマに関して、沖縄の地方、特に北部にある恩納村、名護市そして今帰仁でフィールドワークを行った。また、沖縄の芸能文化の全体を把握するために、宮古島、八重山と渡嘉敷島にもフィールドワークに行った。そこでは、旧暦の秋の穀物の収穫の時、神々に感謝を表現する村人は拝みをして、遊びを上演する。これは集落の活動の中最強の一つの行事である。確かに共同地の全グループは青年会、婦人会、老人会、成人会が舞台に上がって、踊りを踊ったり、演技をしたり、歌を歌ったりするのが素人である彼らには特別で繊細な技がひつようである。この芸能は単なる遊びではなく、神々に奉納するものだから、動き・言葉・衣装が準備され最大の練習が行われる。研究の中心は沖縄本島の豊年祭で、以上の名護市、恩納村、宜野座村の歴史、資料を調べた。これをすると、各集落の住民の歩み、経済を理解して、包括的なイメージができた。そして、平成22年の豊年祭には、名護市の字田井良、宮里、中山、仲尾次、真喜屋、屋部、喜瀬、数久田に行った。恩納村の字瀬良垣、名嘉真、恩納にも行った。そして、宜野座村の字宜野座、松田、漢名にも行った。すべての豊年踊りのヴィデオを撮ったから、映像データ・ベースを制作した。これに基づいて沖縄の豊年踊りを分類したり、分析したりするつもりである。また、フィールドワークの大きい部分が研究補助金で出来たことを強調しておきたい。渡嘉敷島にせよ、先島にせよ遠くて宿泊が高い場所であるが、補助金がなければ、このプロジェクトはできないと思う。日本学術振興会の特別研究員のプログラムの研究補助金は研究者にとても重要な要素だといえる。

2011年度は、沖縄本島の本部町の字伊豆味と今帰仁村の字謝名の豊年祭の踊りを調査した。また、宮古と八重山の重要な祭りの芸能の名所と環境についてのフィールドワークを行った。沖縄本島では、師匠や踊り手のインタビューを行った。これで、踊りの伝承がよく理解できた。先島における調査では、沖縄の全地域の芸能の把握も進んだ。これで、モースの「身体の技」という概念を利用して、民族的なアプローチで村ウドゥイの伝承の勉強を始めた。踊り手、師匠または音楽家だけでなく、舞台の組み立て、化粧・衣装の担当者も重要な役割を果たす。彼らも字の伝統の保存を伝承するから、彼らにも話をうかがった。この調査で、沖縄の字の住民にとって、踊りや豊年祭の踊りを練習すること、また、踊ること自体にはどのような役割があるかが徐々にわかってきた。たとえば、リゾートホテルに勤務している女性や、農業従事者からは、踊りの能力を得ることの過程とその意義をうかがった。また、沖縄の北方の集落の行事も研究した。特に安田のシヌグ、与那の海上、奥のシヌグのフィールドワークを始めた。豊年祭の歴史も研究したいため、それぞれの村ウドゥイのミークバイチョウ(面賦帳)を調べ始めた。この資料には演目と配役、役員、指導者などが記されており、私の研究には重要なものである。2年間、沖縄本島と離島の行事と祭りを深く研究してきた。区長または担当者と連絡ができて、将来の研究にも重要な基礎・足がかりができた。
人工酸素運搬体及び類縁体を用いた呼吸・循環器不全に対する実験的治療

本研究は、1)リポゾーム封入タクロリスム(LET/静岡県立大)、2)コバルトヘム(CoHeme/千葉大)、3) Hemo-Cyclodextrin(HemoCD/同志社大)及び下記の国際連携(4ー8)をふまえて、単に輸血用の血液代替物としてではなく(Kawaguchi A, Artif Organs 2017)、循環・呼吸に起因する広汎で多様な病態に最適な人工酸素運搬体を開発することを基本課題としている。2017年度は、1)LETを用いた全脳虚血、2) CoHemeの改変を行い(Neya, 2017, Etrahedron)、3) HemoCD3 (Kitagishi, 2018, Chemical Science)の量産が可能となり、4) SanguinateRを用いた心筋梗塞(投稿中)、脳梗塞(投稿準備中)、肺高血圧症の実験的検討を行った。糖尿病血管障害にも有効であり(Fukui, Artif Organs 2017)、酸素親和性(Kawaguchi A, Artif Organs 2017)や一酸化炭素(Kitagishi, JACS 2017)との共存(Kitagishi, Artif Organs 2017)が重要なことも示した。また、生体内酸素代謝動態の検出法として、A)近赤外光を用いた組織内酸素状態検出装置を作成し、悪性腫瘍での酸素化を証明し(Kawaguchi F, Artif Organs 2017)、非侵襲性を活かして健常者や脳卒中患者に応用できる診断装置を試作した。また、B)小型人工心肺システムを作製して体外循環充填液としての効果・有用性の検討を開始した。一方、人工酸素運搬体の臨床的使用法の実験的検討として、α)脳梗塞後の脳還流障害の緩和、β)心筋虚血後の虚血心機能の改善(投稿中)、γ)虚血骨格筋における効果および、δ)正常動物における運動負荷時の心肺機能への効果(投稿準備中)の発表準備を進めている。本研究では、薬学・理工学の研究者と協力し、国際的連携(前述の18)をふまえて、循環および呼吸に起因する広汎で多様な病態それぞれに最適な性能を有する人工赤血球及び酸素代謝改善薬を開発する。この目的で、共同研究ベースでそれぞれの特性を検討する契約を交わし、サンプルを用いて実験的検討を開始している(先述の15)。また共同研究先のサンプルが入手でき次第、実験的研究に入る準備ができている(先述の6ー8)。研究方針として、上記の人工酸素運搬体およびその類縁体を用いて、呼吸・循環機能のうち、酸素摂取の「肺」、ポンプとしての「心臓」、回路としての「血管」に対する従来の直接治療と異なり、そこを流れる「血液」の側からの新たな体系的なアプローチを行う。それぞれの機能不全、すなわち呼吸不全、心不全、還流不全のモデルで検討し、従来の治療法と併用して相乗効果も期待できる革新的な治療体系の構築を目指す。本研究では、薬学(静岡県立大のリポゾーム封入タクロリムス(LET)、千葉大のコバルトヘム(Co-Heme))・工学(同志社大学のHemo-Cyclodextrin(HemoCD))の研究者と協力し、国際的連携(※)をふまえて、循環および呼吸に起因する広汎で多様な病態それぞれに最適な性能を有する人工赤血球及び酸素代謝改善薬を開発する。この過程で、2015年度は、1.酸素抱合・放出に際してのピリジン基の加工による機能改善を検討、2.コバルトヘムの改変の検討を行って酸素運搬体としての可能性を検討し、3.光触媒による吸入気のウイルス滅菌効果および有毒ガス解毒効果を検討した。一方、方法論として、生体内酸素代謝動態の検出法として、4.超小型人工心肺システムを作製して体外循環充填液としての効果・有用性を検討する方法や、5.近赤外光を用いた脳内酸素状態検出装置を作成した。人工酸素運搬体を用いた臨床的使用法の実験的検討として、6.脳梗塞後の脳還流障害の緩和、7.糖尿病動物における創傷治癒の改善、8.虚血骨格筋での収縮機能における効果、および、9.正常動物における運動負荷時の心肺機能への効果を報告した。本研究は、1)リポゾーム封入タクロリスム(LET/静岡県立大)、2)コバルトヘム(CoHeme/千葉大)、3) Hemo-Cyclodextrin(HemoCD/同志社大)及び下記の国際連携(4ー8)をふまえて、循環・呼吸に起因する広汎で多様な病態に最適な人工酸素運搬体を開発することを基本課題としている。2016年度は、1)LETを用いた全脳虚血、2)コバルトヘムの改変の検討を行い、3)HemoCD3の量産が可能となり、4)SanguinateTMを用いた心筋梗塞、脳梗塞、肺高血圧症の実験的検討を開始した。また、方法論として、生体内酸素代謝動態の検出法として、A)近赤外光を用いた組織内酸素状態検出装置を作成し、悪性腫瘍での酸素化を証明し(村山、PLOS1)、非侵襲性を活かして健常者や脳卒中患者に応用できる診断装置を試作した。また、B)超小型人工心肺システムを作製して体外循環充填液としての効果・有用性の検討を開始した。一方、人工酸素運搬体を用いた臨床的使用法の実験的検討として、α)脳梗塞後の脳還流障害の緩和、β)糖尿病動物における創傷治癒の改善、γ)虚血骨格筋における効果、および、δ)正常動物における運動負荷時の心肺機能への効果を報告した。

本研究では、薬学・理工学の研究者と協力し、国際的連携(前述の18)をふまえて、循環および呼吸に起因する広汎で多様な病態それぞれに最適な性能を有する人工赤血球及び酸素代謝改善薬を開発する。この目的で、共同研究ベースでそれぞれの特性を検討する契約を交わし、サンプルを用いて実験的検討にかかっている(先述の15)。また共同研究を予定している(先述の6ー8)状況である。本研究は、1)リポゾーム封入タクロリスム(LET/静岡県立大)、2)コバルトヘム(CoHeme/千葉大)、3) Hemo-Cyclodextrin(HemoCD/同志社大)及び下記の国際連携(4ー8)をふまえて、単に輸血用の血液代替物としてではなく(Kawaguchi A, Artif Organs 2017)、循環・呼吸に起因する広汎で多様な病態に最適な人工酸素運搬体を開発することを基本課題としている。2017年度は、1)LETを用いた全脳虚血、2) CoHemeの改変を行い(Neya, 2017, Etrahedron)、3) HemoCD3 (Kitagishi, 2018, Chemical Science)の量産が可能となり、4) SanguinateRを用いた心筋梗塞(投稿中)、脳梗塞(投稿準備中)、肺高血圧症の実験的検討を行った。糖尿病血管障害にも有効であり(Fukui, Artif Organs 2017)、酸素親和性(Kawaguchi A, Artif Organs 2017)や一酸化炭素(Kitagishi, JACS 2017)との共存(Kitagishi, Artif Organs 2017)が重要なことも示した。また、生体内酸素代謝動態の検出法として、A)近赤外光を用いた組織内酸素状態検出装置を作成し、悪性腫瘍での酸素化を証明し(Kawaguchi F, Artif Organs 2017)、非侵襲性を活かして健常者や脳卒中患者に応用できる診断装置を試作した。また、B)小型人工心肺システムを作製して体外循環充填液としての効果・有用性の検討を開始した。一方、人工酸素運搬体の臨床的使用法の実験的検討として、α)脳梗塞後の脳還流障害の緩和、β)心筋虚血後の虚血心機能の改善(投稿中)、γ)虚血骨格筋における効果および、δ)正常動物における運動負荷時の心肺機能への効果(投稿準備中)の発表準備を進めている。この目的で、共同研究ベースでそれぞれの特性を検討する契約を交わし、サンプルを用いて実験的検討を開始している(先述の15)。また共同研究先のサンプルが入手でき次第、実験的研究に入る準備ができている(先述の6ー8)。研究方針として、上記の人工酸素運搬体およびその類縁体を用いて、呼吸・循環機能のうち、流酸素摂取の「肺」、ポンプとしての「心臓」、回路としての「血管」に対する従来の直接治療と異なり、そこを流れる「血液」の側からの新たな体系的なアプローチを行う。それぞれの機能不全、すなわち呼吸不全、心不全、還流不全のモデルで検討し、従来の治療法と併用して相乗効果も期待できる革新的な治療体系の構築を目指す。研究方針として、上記の人工酸素運搬体およびその類縁体を用いて、呼吸・循環機能のうち、酸素摂取の「肺」、ポンプとしての「心臓」、回路としての「血管」に対する従来の直接治療と異なり、そこを流れる「血液」の側からの新たな体系的なアプローチを行う。
cDNAマイクロアレイによるサイトメガロウイルス複製に関与する宿主遺伝子の同定

平成12年度は、マイクロアレイを用いる実験系の確立を目的として、まずオリゴDNAを市販のスライドガラス上に効率良く固相化する方法を開発した。次に、均質なマイクロアレイを一度に84枚作製できるマイクロアレイ作製装置およびプログラムソフトウェアを開発した。さらに、2,708ヒト遺伝子について80merのポリヌクレオチドを設計・合成・アレイ化し、ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)を対象としてウイルス感染に伴って変化する宿主遺伝子発現変化を解析し,12年度目標の達成を確認した。ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)の複製に関与する宿主遺伝子を網羅的に同定することを目標として、平成13年度は以下のことを行った。平成13年7月までにhumanRefSeq 9,600遺伝子、平成14年1月までにhuman RefSeq 12,000遺伝子からなる合成DNAマイクロアレイの作製を完了した。合成DNAマイクロアレイに特化したハイブリダイゼーションにおいてシグナル・ノイズ比を極大化する装置を開発し、特許出願した。HCMVおよびUV不活化HCMV感染後4、8、24、48、72時間のヒト正常線維芽細胞からmRNAを抽出し、作製した合成DNAマイクロアレイとハイブリダイズさせ、遺伝子発現プロファイルを取得した。これらのプロファイルを集積してクラスタ解析を行い、HCMV粒子の細胞への結合・侵入が急速な宿主細胞応答をひき起こし、細胞外に放出される種々の宿主因子の遺伝子発現が上昇すること、さらにそれらの宿主反応はウイルス遺伝子の発現に従属して低下することを明らかにした。すなわち、これらの結果は、HCMV遺伝子の発現によりそれに先立っておきる宿主側の応答が抑制されることを示している。HCMV粒子の許容細胞表面への結合あるいは細胞内への侵入を契機として主として炎症に関与する多くの宿主遺伝子が発現され、ウイルス遺伝子の発現および複製サイクルの始動がない場合はそれらの高発現レベルが維持されることから、これらの宿主反応を抑制できるどうかがHCMVの複製が効率良く行われるためのひとつの指標となるのではないかと考える。さらに、宿主細胞応答が沈静化した感染後72時間の時点で発現レベルの上昇している遺伝子群が、HCMVの複製に直接的に関与している可能性が考えられるため、これらの遺伝子群を特に注目しながらHCMV複製非許容細胞におけるHCMV感染後のトランスクリプトーム解析を現在進めている。次に、均質なマイクロアレイを一度に84枚作製できるマイクロアレイ作製装置およびプログラムソフトウエアを開発した。さらに、2708ヒト遺伝子について80merのヌクレオチドを設計・合成・アレイ化し、ヒトサイトメガロウイルスを対象としてウイルス感染に伴って変化する宿主遺伝子発現変化を解析し、今年度目標の達成を確認した。以上の結果をもととして、合成DNAマイクロアレイ技術に関する以下の特許申請を行った。A:発明の名称:試料チップ作製用分注針の洗浄方法願書番号:特願2000-53109号B:発明の名称:ポリヌクレオチドマイクロアレイの作製方法、作製装置ならびにポリヌクレオチドマイクロアレイ願書番号:特願2000-139926号C:発明の名称:試料チップ作製方法

願書番号:特願2000-147606号D:発明の名称:核酸標識方法および核酸標識用キット願書番号:特願2000-254172号ウイルス感染に伴う細胞応答のトランスクリプトーム解析に関しては、スタンフォード大学などの創始グループが最大約8,000遺伝子について報告しており、今後、さらに対象遺伝子の数を大きくし、大量の情報を得るべく国内外を含めて凌ぎを削っている状況にある。マイクロアレイの技術そのものがいまだに発展途上にあるため、技術的な問題をいかに早く克服して質・量ともに優れたデータを集積できるかどうかに成功の鍵があるといえる。本研究は独自のマイクロアレイ技術に基盤を置くもので、量産へむけての障害をほぼ克服済みであり、今後、先行するパイオニア等に十分伍していけるものと考える。ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)の複製に関与する宿主遺伝子を網羅的に同定することを目標として、平成13年度は以下のことを行った。平成13年7月までにhuman RefSeq 9, 600遺伝子、平成14年1月までにhuman RefSeq 12, 000遺伝子からなる合成DNAマイクロアレイの作製を完了した。合成DNAマイクロァレイに特化したハイブリダイゼーションにおいてシグナル・ノイズ比を極大化する装置を開発し、特許出願した。HCMVおよびUV不活化HCMV感染後4、8、24、48、72時間のヒト正常線維芽細胞からmRNAを抽出し、作製した合成DNAマイクロアレイとハイブリダイズさせ、遺伝子発現プロファイルを取得した。これらのプロファイルを集積してクラスタ解析を行い、HCMV粒子の細胞への結合・侵入が急速な宿主細胞応答をひき起こし、細胞外に放出される種々の宿主因子の遺伝子発現が上昇すること、さらにそれらの宿主反応はウイルス遺伝子の発現に従属して低下することを明らかにした。すなわち、これらの結果は、HCMV遺伝子の発現によりそれに先立っておきる宿主側の応答が抑制されることを示している。HCMV粒子の許容細胞表面への結合あるいは細胞内への侵入を契機として主として炎症に関与する多くの宿主遺伝子が発現され、ウイルス遺伝子の発現および複製サイクルの始動がない場合はそれらの高発現レベルが維持されることから、これらの宿主反応を抑制できるどうかがHCMVの複製が効率良く行われるためのひとつの指標となるのではないかと考える。さらに、宿主細胞応答が沈静化した感染後72時間の時点で発現レベルの上昇している遺伝子群が、HCMVの複製に直接的に関与している可能性が考えられるため、これらの遺伝子群を特に注目しながらHCMV複製非許容細胞におけるHCMV感染後のトランスクリプトーム解析を現在進めている。
アレーン遷移金属錯体における立体選択的な金属配位子移動反応の開発

我々は(アレーン)クロム錯体の面不斉を利用した立体選択的クロスカップリング反応を用いて、同一の面不斉源からアトロプ異性体の両エナンチオマーを作り分けることに成功している。即ち、光学活性クロム錯体とオルトメチルフェニルホウ酸とをMeOH中、75°Cでカップリング反応を行うとSyn体のビアリール誘導体が得られ、このSyn体をxylene中で加熱還流を行うことにより、軸異性化が進行しAnti体が得られることを報告している。したがって、この両ジアステレオマーからそれぞれRおよびSの軸不斉を有するビアリール体を作り分けることができる。このような方法論を利用して、我々は軸不斉の立体化学のみが異なるコルペンスアミンA及びBのような生物活性天然有機化合物の合成研究を行ってきた。ところが、この合成研究の過程において、カップリング反応により得られたSyn体を軸異性化を経てAnti体へと変換し、コルペンスアミンBを合成しようとした際に、予想していた軸異性化が起こらず、クロムトリカルボニル基が反対の芳香環面に再配位することがわかった。そこで、このような例のない面不斉が反転するという現象に興味を持ち、検討を行なった。その結果、クロム錯体側の置換基がアルキル基や、sp^2炭素を有し、立体的に小さいアルデヒドなどの場合には軸異性化が進行するのに対し、sp^3炭素を有しベンジル位を有する置換基の場合にはクロムトリカルボニ基が反対の芳香環面に再配位し、面不斉反転することがわかった。
歯を移動するための最適矯正力の生力学的解明-生体変位測定法と有限要素法を用いて

磁気センサを応用した多点同時計測システムを開発し、矯正力作用時の歯の移動を並進運動,回転運動に分離して解析する算出ソフトウエアを作成した.さらに,歯の歯軸上の回転中心,剛体の運動の変換軸として表現される瞬時的回転中心の位置を算出可能とした.変位センサとして、8個のホール素子と永久磁石を組み合わせた.変位センサは,被験歯の唇側と口蓋側の2箇所に配置し,標点となる2個の磁石の変位を同時測定した.被験者は咬合に異常のない,成人女性とした.被験歯は上顎中切歯とし、荷重点は切端から4.5mmの位置から2mm間隔で歯根方向へ8個設定した。50g,100g,150g,200gの舌側方向への矯正力を負荷した.被験歯の前後に配置された2点の磁石の垂直方向の変位が一致する荷重点が抵抗中心に相当する位置と考えられ,ブラケット相当位置から8.4mm歯頚側寄りに観察された.さらに,2点の磁石の変位より,回転中心の位置を算出した.その結果,ブラケット位置に相当する,切端から4.5mmの位置に矯正力を負荷すると、回転中心はほぼ歯頚線から根尖に向かって,歯根長の44%の位置に観察された。荷重位置を根尖方向へ2mmづつ移動すると、回転中心は根尖方向へ移動した.荷重位置を、ブラケット位置から10mm歯根側へ移動すると,回転中心位は歯根側から歯冠側へ逆転した。次に、荷重の大きさが回転中心の位置へ与える影響を検討した.ブラケット位置における荷重では,荷重の増加にともなって、歯の回転中心は歯冠側へ移動することがわかった。しかしながら,荷重位置を歯頚側よりの位置へ移動すると,荷重量と回転中心位の明らかな相関関係は認められなかった。ブラケット位置においては,小さい力よりも大きい力を用いた時に、歯は傾斜移動しやすいという傾向が示唆された。磁気センサを応用した変位測定システムを用いて、矯正力作用時の歯の回転中心および抵抗中心の位置を生体を対象に測定した。まず、8個のホール素子とサマリウム・コバルト磁石を組み合わせた変位センサを作製し、被験歯上の1点の変位測定を行い、回転中心位を算出した。被験歯は上顎中切歯とし、荷重は種々の水平荷重位置について、舌側方向へそれぞれ50g,100g,150gの負荷を行った。水平荷重位置は,切端から4.5mmの位置から2mm間隔で歯根方向へ8個設定した。ブラケット位置に相当する,切端から4.5mmの位置に矯正力を負荷すると、回転中心はほぼ歯根中央部に観察された。荷重位置を根尖方向へ2mmづつ移動すると、回転中心は根尖方向へ移動し、さらには歯根側から歯冠側へ位置が逆転した。また、荷重量を大きくするにしたがって、回転中心位は歯冠側へ移動し、傾斜移動の傾向が強められることが明らかになった。次に、多点同時計測システムを開発し、被験歯上の2点の変位測定を行い、矯正力作用時の歯の抵抗中心の位置を求めた。その結果、荷重の増加にともなって、歯の抵抗中心は歯根側へ移動することがわかった。以上より、小さい力よりも大きい力を用いた時に、歯はより傾斜移動しやすいという傾向が示唆された。歯体移動に近い歯の移動様式が望まれる場合には、小さい矯正力を適用することが推奨される。現在、広島大学歯学部歯科矯正学講座と共同で、有限要素法を用いて歯の変位量を解析し、生体変位測定法の結果との比較を行っている。今後、両実験系を統合させることにより、より生体に近い状態での歯の移動のシミュレーション・システムを開発し、骨のリモデリングを経た経時的な歯の移動を解析したい。次に、荷重の大きさが回転中心の位置へ与える影響を検討した.

ブラケット位置における荷重では,荷重の増加にともなって、歯の回転中心は歯冠側へ移動することがわかった。しかしながら,荷重位置を歯頚側よりの位置へ移動すると,荷重量と回転中心位の明らかな相関関係は認められなかった。ブラケット位置においては,小さい力よりも大きい力を用いた時に、歯は傾斜移動しやすいという傾向が示唆された。
ラット頭部Whiplash shakingモデルにおける脳脊髄損傷に関する研究

Shaken baby syndrome(SBS)は、頭部を前後に強く揺する虐待行為により、乳児に死亡または重篤な神経系後遺症をもたらす予後不良な病態である。しかし、本症の特徴的所見である急性硬膜下血腫や眼底出血、その後に生じる脳萎縮が、頭部震盪のみで生じるのか否かという議論はいまだ解決していない。本研究はSBSの動物モデルを作製し、脳障害の病態生理学的機序を探ることを目的とする。頭部に加速度計を装着した生後3週齢・4適齢ラットの頭部を、10Gの加速度で前後に毎分300回、10分間震盪すると、動物は強いチアノーゼ、無呼吸、失調性呼吸を呈し、約2割が死亡した。震盪終了直後の血中酸素濃度低下は一過性で約10分後には回復したが、脳内酸素濃度および脳内血流量の低下は30分以上継続した。生後6日齢の幼弱ラット(震盪群、n=5)に3日間連続で頭部震盪を行い、3週間後に対照群と比較したところ体重および脳重量は有意に低値を示した。脳損傷の有無を検査するため、脳を灌流固定後、作製した凍結切片を用いて、HE染色、鉄染色、および免疫組織学的検索:ABC法(抗GFAP、抗βAPP)を行った。震盪群5例中3例に軽度のくも膜下出血の痕跡が確認されたが、大脳皮質・白質、脳幹部、上位頚髄いずれの実質内にも出血、梗塞等の損傷は認められなかった。また免疫組織学的検索でも、reactive astrocyteの出現、軸索の異常腫脹や断裂、神経細胞障害等の異常所見は認められなかった。近年報告されたSBSの動物実験数件の結果は、震盪条件や使用される動物種、適齢の違いのため、その結果は一致していない。今回の実験では、中枢神経系の実質損傷を病理組織学的に証明し得なかったが、脳重量の減少は何等かの異常を示唆しており、今後更なる検討が必要である。また、呼吸障害による脳低酸素症がSBSの病態に強く関与することが示唆された。1.頭部震盪モデル作製6日齢SDラット(平均体重13.8g、震盪群n=5)を麻酔下で震盪機に取り付け、頭部に小型加速度計を設置した上で10分間震盪した。頭部には前後方向の鞭打ち運動(毎分約180回)が観測され、その際の加速度は約10Gと測定された。これを連続3日間負荷し、3週間後に屠殺し震盪群とした。麻酔覚醒後の両群動物に行動上の有意差は認められなかった。2.頭部震盪の動脈血ガス等に対する影響8週齢の雄性SDラット(n=5)を用い、あらかじめ動脈内に留置したカテーテルより震盪前と震盪直後の動脈血を採取し、各種ガス分析を行った。その結果、pH、pO_2、sO_2の各測定平均値が震盪前では7.38、122.9、97.1であるのに対し、震盪直後は7.35、106.8、95.3といずれも有意(P<0.05)に低下した。この変化は5分後にほぼ震盪前の値に回復した。3.体重および脳重量の変化

震盪後3週間における震盪群/対象群の平均増加体重を比較したところ、震盪群63.8g、対象群66.0gであり両群間に統計的有意差(P<0.05)が認められた。一方、摘出した全脳の平均重量を比較したところ、震盪群1.66g、対象群1.71gであり両群間に統計的有意差(Pく0.05)が認められた。4.病理組織学的検討摘出脳の凍結切片(20μ)を作製し、HE染色および鉄染色を施し病理学的に検討した。その結果、震盪群・対象群ともにクモ膜下および実質内には出血の痕跡はなく、またグリア細胞の増殖も明らかでなかった。[考察]本頭部震盪モデルの加速度は約10Gであり、脳への負荷としては充分と考えられたが、ヒトの急性期にみられる高度脳損傷は再現されなかった。しかし受傷後3週間での脳重量低下は有意であることから、何等かの病理学的異常が内在する可能性は高い。今後さらに免疫組織学的技法を加え、病理学的所見の検討を予定している。1.頭部震盪モデル作製棒状セルロイドの先端に装着した金属製装具にラットを軽麻酔下にて固定した。頭部への加速度が10Gとなるよう加速度計でモニターしつつ、毎分300回、10分間の震盪を3日間連続で行った。6日齢ラットでは震盪直後に強いチアノーゼが認められたが、3・4週齢ラットでは震盪終了後の無呼吸や失調性呼吸が強く、約2割程度が死亡した。これらの結果は、頭部震盪が何等かの機序を介して呼吸障害を発来する可能性を示唆した。2.頭部震盪による血中酸素濃度および脳内酸素濃度・血流量の変化1)血中酸素濃度:右大腿静脈に採血用チューブを挿入後、上記の通り頭部を震盪し、震盪前後のPaO_2、PaCO_2、HCO_3、O_2Sat、pHを同時測定した。麻酔深度の影響等により一定傾向は得られなかったが、震盪直後には概ね一過性の高度低酸素血症とアシドーシスの所見が得られた。2)脳内酸素濃度および脳内血流量:震盪直後に脳内にプローブを挿入し、震盪直後からの酸素濃度と相対的血流量を測定したところ、酸素濃度については震盪群が対照群より数mmHg低値を30分以上継続し、相対的血流量にも低下傾向が認められた。3.頭部震盪による体重・脳重の変化震盪後の体重増加および震盪3週間後の脳重を比較したところ、体重増加は震盪群が対照群より有意に悪く、また脳重についても有意に低値(対照群1.47g:震盪群1.35g)を示した。4.病理組織学的変化今年度再検討の結果、くも膜下腔の一部に陳旧性出血の所見は認められた、大脳皮質・白質、脳幹部、上位頚髄いずれの実質内にも出血、梗塞等の損傷は認めらなかった。また、免疫組織学的手法(ABC法)を用いてGFAP、βAPPの発現状況を検討したが、reactive astrocyteの出現、軸索の異常腫脹や断裂、神経細胞障害等の異常所見は認められなかった。
成島家を中心とする近世中後期幕臣文化圏の研究

最終年度を迎え、成島信遍とその周辺の資料収集、信遍の伝記事項の調査、そして年譜形式による伝記研究の進展に研究の主眼を置いた。継続して発表している「成島信遍年譜稿」は延享2年(1745)3月の「八講私記」執筆まで記述を及ぼし、ようやく余す所15年ほどで信遍の全生涯を辿ることができるとの見通しを得るに至った。さらに、信遍の門人であった津村正恭の和文集『片玉集』の主要部分の複写を行い、信遍の周辺に位置したあらゆる階層の文人の著述を一覧できるようになったことは、信遍の相対化を図るうえで何よりの便宜を与えられたことになる。もう一つの継続的な作業として、大田南畝編『ひともと草』の注釈を通して、近世中期の江戸の武士たちの和文・和歌の教養の水準を知るというものがある。今年度の注釈対象は唐衣橘洲「上野山花」であり、常識的な教養を身につけた中下層の武士が求めたのは、一般向けではない穿ち過ぎの表現ではなく、適度に分かりやすい典拠をちりばめた文章だったのではないかとの見通しを得た。南畝を始めとする戯作者が凝りに凝った修辞を見せ付ける穿ちの戯文とは異なる味わいを好む層が確かに存在したと考えられ、これまでとは異なる見方を近世中期の幕臣文化圏に適用することの必要性を痛感した。幸い、次年度より「成島信遍研究ー幕臣文人の事績を通して見る近世中期江戸文壇の特徴ー」という課題で科学研究費補助金を得られることとなり、これまでに得られた情報を最大限投入することで信遍研究の完成を期することができる。成島家を中心とする幕臣文化圏は、近世中期から幕末にかけて、歴代の活動とともに展開したが、ある程度の資料の蓄積は行ってるものの、まだ未入手の資料が多数存する。今年度は東京その他への地への資料収集の旅行を実施したほか、幕臣の和歌和文の注釈、京の堂上家の歌学が地方へと伝播する状況の把握、地方大名の和歌活動などを中心に研究を進めた。具体的には、大田南畝編の和文集『ひともと草』の注釈を継続して進めたほか、出雲大社に隣接する杵築の地での手銭家を中心とする歌壇形成、八戸藩南部家の和歌資料と藩主たちとの関わりなどについて論文を執筆した。今後は、資料調査をさらに多角的に進め、成島氏の位置を総体として見定める作業に入って行くつもりである。成島信遍・和鼎・峰雄・司直・良譲らの人脈に沿って幕臣文化圏の資料研究に従事した。その過程で福井藩の松平慶永や柳川藩の立花鑑寛と良譲との接点が見出せたことは、近世中後期の幕臣文化圏において田安徳川家が重きを成し、田安家と各藩との連絡役を成島家が勤めたという見通しを可能にした点でまことに有意義であった。つまり、田安文化圏という視点で幕末の幕臣と諸大名とが展開する文学活動を大きく把握することが、当時の実態に即した有効な方法であることを確認したのである。また、成島信遍の伝記研究を年譜形式で継続して行うことは従前どおりである。八戸藩南部家資料や中野三敏九州大学名誉教授御所蔵の資料に基づき、幕臣山岡家や三井親和門の武士石井氏との関係を新たに導く形で元文年間の事績を追補し得たのは大きな成果となった。なお、大田南畝編『ひともと草』の詳注を通して、寛政期の幕臣たちの表現意識を具体的に検討する作業も継続して行っている。資料調査は東京や高松などにおいて実施した。研究成果の一端は、平成27年度日本近世文学会春季大会(於東京藝術大学)において口頭発表したほか、八戸藩南部家や柳川藩立花家に関する論文を発表した。成島信遍以下の成島家歴代の資料調査が、伝存する資料の多さのために必ずしも計画通りに進んでいない点がある。特に司直に関する資料の数は厖大であるため、効率よく収集する方法を考慮し、次年度以降に集中して実施する必要がある。前年度に引き続き、まず江戸冷泉派歌壇の中心であった成島信遍の伝記研究を進めた。寛保元年の信遍の事績としては、竹千代(後の十代将軍家治)の元服祝賀の後の江戸湾での舟遊びを描いた和文「海づと」の執筆や、冷泉為久との交流、藤巻教真の教えに基づく新田開発法の提唱など、文学活動に限定されない、まさに幕臣文人としての幅広い活動の跡を辿ることができた。江戸時代の文学が広く人文社会科学全般を基盤としていたことが明瞭に見て取れる。次に、江戸幕臣文壇の成果の一つである大田南畝編の和文集『ひともと草』の詳細な注釈を発表した。酒月米人は大田南畝周辺の狂歌師であるが、狂歌師が幕臣と共通の文化圏に位置し、慣れないながらも和文を綴るという行為に喜びを見出し、雅文壇の一角にあることを楽しんでいる様子が文面から伝わってくる。資料収集としては、成島信遍の曾孫に当たる成島司直の著述を中心に収集し、伝本相互の影響関係などを考究する足掛かりを得た。特に2度にわたる日光社参随行が生み出した2編の紀行文を分析することで、幕臣にとっての日光行きの持つ意義などが今後解明されていくことを期している。

なお、冷泉為村と密接な関係のあった桜町院の資料調査にも従事したが、これに関する研究成果は次年度に公表される予定である。また、前年度からの延長で、福井藩・柳川藩やその他の大名家を包括する田安文化圏という観点から幕末の歌壇を見ようとする講演を行った。成島信遍の伝記研究と幕臣文化圏の和歌・和文の表現研究が中心をなすが、そのいずれにおいても順調に成果を発表できている。さらに、桜町院との関係において新たな情報の収集ができたことで、見通しが大きく開けてきた。成島家の歴代の資料収集と伝記事項の調査研究、成島家を含む近世中期江戸文壇の文学状況とそこにおける成島家の位置づけを主なテーマとして、平成29年度の研究を行った。具体的には、成島家3代信遍の伝記研究を継続し、寛保元年から3年に至る年譜を継続して執筆した「成島信遍年譜稿(十七)、幕臣の旗本から御家人、さらには町人まで、幅広い人脈を反映した大田南畝編の和文集「ひともと草」の注釈研究「大田南畝編『ひともと草』試注(十五)ー米人「ひゝないち」(下)ー」、そして成島信遍が江戸門人を代表する形で師事した冷泉為村と、為村が心から近侍した桜町院との関係を掘り下げた「冷泉為村と桜町院」の3本の業績を上げることができた。また、東京の国文学研究資料館その他で関連資料の収集に努め、成島家と親交を持った旗本や町人の叢書類を総合的に検討する作業を継続して行っている状況である。成島家歴代の中でも信遍の伝記研究は、ようやく宝暦期の手前まで辿りつき、事項が飛躍的に増加する宝暦期の執筆の目安が立てられつつある。また、伝存資料の多い6代司直についても静嘉堂文庫蔵の歌書をフィルムなどで大量に集めることができ、これからの検討の足掛かりを作るに至った。なお、「冷泉為村と桜町院」については、現時点で刊行日時が未定のままとなっているが、校正はすべて終了して刊行を待つのみである。従来、精密な解読が行われなかった資料をもとに、二人の関係と歌壇における位置を見定めることができたことの意義は大きいと考える。重責を担う公務のために、平日はなかなか調査研究に従事できないという制限があるが、これまでに収集済みの資料などをもとに、成島信遍の伝記研究を鋭意進めるなど、相応に努力している。ただし、資料の調査にまとまった時間を取ることが難しい場合が多く、予定した資料の収集が必ずしも進んでいないのが実情である。公務の隙間を活かして調査旅行を組み入れ、遅れを取り戻すべく計画中である。最終年度を迎え、成島信遍とその周辺の資料収集、信遍の伝記事項の調査、そして年譜形式による伝記研究の進展に研究の主眼を置いた。継続して発表している「成島信遍年譜稿」は延享2年(1745)3月の「八講私記」執筆まで記述を及ぼし、ようやく余す所15年ほどで信遍の全生涯を辿ることができるとの見通しを得るに至った。さらに、信遍の門人であった津村正恭の和文集『片玉集』の主要部分の複写を行い、信遍の周辺に位置したあらゆる階層の文人の著述を一覧できるようになったことは、信遍の相対化を図るうえで何よりの便宜を与えられたことになる。もう一つの継続的な作業として、大田南畝編『ひともと草』の注釈を通して、近世中期の江戸の武士たちの和文・和歌の教養の水準を知るというものがある。今年度の注釈対象は唐衣橘洲「上野山花」であり、常識的な教養を身につけた中下層の武士が求めたのは、一般向けではない穿ち過ぎの表現ではなく、適度に分かりやすい典拠をちりばめた文章だったのではないかとの見通しを得た。南畝を始めとする戯作者が凝りに凝った修辞を見せ付ける穿ちの戯文とは異なる味わいを好む層が確かに存在したと考えられ、これまでとは異なる見方を近世中期の幕臣文化圏に適用することの必要性を痛感した。幸い、次年度より「成島信遍研究ー幕臣文人の事績を通して見る近世中期江戸文壇の特徴ー」という課題で科学研究費補助金を得られることとなり、これまでに得られた情報を最大限投入することで信遍研究の完成を期することができる。
犬の遺伝性進行性網膜萎縮の分子病態についての検討

ミニチュア・ダックスフンドにおける進行網膜萎縮(PRA)についてその原因遺伝子として報告されたRPGRIP1遺伝子の健常犬における発現、培養細胞発現系における蛋白質発現について解析を実施した。本研究は、ミニチュア・ダックスフンドにおける進行性網膜萎縮症について、疾患原因遺伝子(RPGRIP1)の異常から生じる分子病態を明らかにすること目的とし、より確実な新規診断法の開発ならびに疾患モデル動物として確立することを目指している。平成20年度は、まず正常犬の組織から抽出したtotal RNAより、犬RPGRIP1の全長の同定を試みた。その結果、犬RPGRIP1には、いくつかのアイソフォームが存在することが明らかになった。それらのC末端領域はすべて共通していたが、N末端領域にいくつかのバリエーションが存在した。共通しているC末端領域は、関連蛋白質であるRPGRとの結合部位を含み、人やマウスと比較してもよく保存されていた。一方、既報(Mellersh CS., et.al., Genomics, 88 : 293-301. 2006)で示された挿入変異が存在するExon2と予測された配列を含むアイソフォームの全長は得ることができなかった。以上のことから、犬RPGRIP1のN末端側は予測されていたN末端とは異なったものであり、そのため遺伝子型(44b挿入変異の有無)と表現型(発症の有無)が一致しない可能性が示された。これらを明らかにするために、今回得られた犬RPGRIP1について蛋白質発現を組織や培養細胞における発現解析で検討し、さらにRPGR蛋白質との結合解析、表現型に基づく遺伝子多型の探索を行う必要がある。平成21年度は以上について検証を進めていく予定である。平成21年度は前年度において得られたExon2を含まない犬RPGRIP1アイソフォームについて、培養細胞における発現系を用いて蛋白質発現についての検討を実施した。イムノブロット、免疫染色法において発現が確認された。よって犬RPGRIP1蛋白質においては、N末端側が異なりC末端領域が共通するアイソフォーム蛋白質が存在し、そのC末端領域は細胞における発現において重要であると考えられた。すなわち、既報にあるExon2における挿入変異が存在していても、他のアイソフォームの発現によって機能的に代償されている可能性が示され、変異をホモに持つ個体における表現型(発症の有無・発症時期)の差異が生じる機序の一部となっていることが示唆された。また、C末端領域の遺伝子について発症犬・非発症犬(2頭ずつ)で比較検討を実施したが本研究期間中においては明らかな違いは認められなかった。
10‐MDPとHEMAによるレジンー象牙質接着面ハイブリッド層のバイオメカニクス

接着性レジン修復の長期的維持には,象牙質-ボンディングレジン含浸層(ハイブリッド層)の力学的特性が重要である.本研究では,試作のHEMAフリーのあるいは異なる濃度のHEMAと10-MDPを含有したプライマーを試作し象牙質への接着試験を行う.ハイブリッド層の重合率は顕微ラマン分光分析により計測する.ハイブリッド層及びその周囲の力学的特性はナノインデンテーション試験によって評価する.接着性レジン修復の長期的維持には,象牙質-ボンディングレジン含浸層(ハイブリッド層)の力学的特性が重要である.本研究では,試作のHEMAフリーのあるいは異なる濃度のHEMAと10-MDPを含有したプライマーを試作し象牙質への接着試験を行う.ハイブリッド層の重合率は顕微ラマン分光分析により計測する.ハイブリッド層及びその周囲の力学的特性はナノインデンテーション試験によって評価する.