hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
カードゲームの構造に関する知識整理に基づいた学習ゲーム生成システムの開発

一般の教師や学生のような,専門知識や経験のないユーザでも,要求に応じた学習カードゲームを機械的に生成可能なシステムを開発した.機械的な生成を可能とするため学習カードゲーム構成要素の知識を構築した.この知識は既存学習ゲームの分析や改良などにも利用可能である.システムの使用実験では487個と多数の学習用ゲーム生成を確認し,専門知識のない被験者でも学習ゲーム生成が可能なことを確認した.一般の教師や学生のような,専門知識や経験のないユーザでも,要求に応じた学習カードゲームを機械的に生成可能なシステムを開発した.機械的な生成を可能とするため学習カードゲーム構成要素の知識を構築した.この知識は既存学習ゲームの分析や改良などにも利用可能である.システムの使用実験では487個と多数の学習用ゲーム生成を確認し,専門知識のない被験者でも学習ゲーム生成が可能なことを確認した.カードゲーム形式で問題を解かせるドリル型の学習教材について,その構成に関する知識整理[1]と,その整理された知識に基づいて開発された,学習教材を教師や学習者の要求に応じて生成するシステム[2]を,研究成果として実現した.[1]学習用カードゲームの構成要素オントロジーの構築カードゲームを構成する要素を,その性質や機能で整理し,要素間の類似関係や包含関係などの関係性を記述した知識を構築した.また,その知識を用いて,カードゲームの構成パターンを整理した.さらに,別研究の成果である,既存ゲームへの学習要素組み込み手法を組み込み,学習用カードゲームの構成要素を整理した知識へと発展させた.[2]学習カードゲーム生成システムの開発パーツを組み合わせる形式でベースとなるゲームのルールを入力し,さらに学習者に解かせたい問題を入力することで,Webブラウザ上で動作する学習教材を生成するシステムを開発した,入力用のパーツや,その組み合わせをゲームとして動作させる機構の開発は,学習用カードゲームの構成要素オントロジーを元にして実現されている.これらの成果により,ユーザはWebブラウザ上で動作する学習教材を簡単に入手することができるようになった.通常ならば学習用ゲームの開発には,ベースとなるゲームの考案と,そのゲームに学習活動を組み込む方法の考案,そしてプログラミングによるシステムの実装が必要であり,それらに関する経験やセンスを必要とする.しかし今回開発したシステムでは,その経験やセンスの持ち合わせがないユーザであっても学習教材を機械的な作業で生成することができる.カードゲーム形式で問題を解かせるドリル型の学習教材について,その構成に関する知識整理[1][2][3]を行い,その知識に基づいて,学習教材を教師や学習者の要求に応じて生成・分析するシステム[4]を,研究成果として実現した.[1]学習用カードゲームのルール記述語句の整理これまでの研究で,学習用カードゲームを構成する要素を性質や機能で整理した知識の構築を達成していた.その整理された知識と,一般的にカードゲーム世界の説明に用いられる文章との間にあるギャップをis-aやpart-ofなどの関係を用いて埋め,学習用カードゲームに親しみのない者にも理解が可能となるよう整理した.[2]学習発生要因の解明およびその要因と学習用ゲームの構成要素との関係の整理実験等を通して,学習用ゲームにおいて学習はなぜ発生するのかを明らかにした.さらに学習発生要因と学習用ゲームの構成要素の関係を整理した.[3]学習発生要因に関する分析を行うアルゴリズムの構築と実装学習発生要因についての知識を利用し,実際の学習用ゲームを学習活動の発生という観点から分析するアルゴリズムを構築した.[4]学習用カードゲーム生成システムの改良と実践的評価実験上記の成果を,以前開発した学習用カードゲーム生成システムに組み込み,改良した.また,その有用性を実戦使用により確かめた.これらの成果により,特に知識のないユーザであっても,Webブラウザ上で動作する学習教材を,機械的な入力作業で簡単に入手することができるようになった.また,このシステムで生成された学習用カードゲームに加え,既存の学習用カードゲームであっても,その学習発生要因について特徴分析ができるようになった.運用が容易になることに加え,改良にも役立てることができる.
サルモネラ腸炎発症メカニズムの解明

サルモネラによる腸炎には本菌がもつ3つのIII型分泌機構(T3SS)、SalmonellaPathogenicity Island(SPI)-1、SPI-2および鞭毛構成タンパク質が関与する。しかしながら、SPI-2によるサルモネラ腸炎のメカニズムは不明な点が多い。本研究ではSPI-2による腸炎の分子メカニズムを明らかにする目的でサルモネラ腸炎に関わるSPI-2エフェクターを同定することを試みた。しかしながら、このようなエフェクターを同定することはできなかった。一方、SPI-1およびSPI-2の両方から分泌されるIII型エフェクターSpvCが感染初期の炎症を回避する機能をもち、これによって全身への本菌の拡散を可能することが示唆された。1.III型分泌機構とサルモネラ腸炎との関連非チフス性サルモネラによる腸炎に関わる3つのIII型分泌機構(鞭毛、SPI-1およびSPI-2)をそれぞれ欠失した3種類の変異株(ΔfliC、ΔSPI-1およびΔSPI-2)、またそれらの組み合わせの変異株(ΔSPI-1ΔSPI-2、ΔfliCΔSPI-1、fliCΔSPI-2およびΔfliCΔSPI-1ΔSPI-2)を作成し、マウス腸炎モデルの盲腸の炎症の程度を評価した。その結果、感染3日後の腸炎には鞭毛およびSPI-1が関わることを確認した。一方、感染5日後の腸炎では、SPI-2のみが関与することを明らかにした。2.腸炎に関わる新規エフェクターの同定サルモネラ腸炎に関わる新規エフェクターを同定するため、機能未知のエフェクタータンパク質について各種変異株を作成し、マウス腸炎モデルによりこれらエフェクターがサルモネラ腸炎に関わるか否かを明らかにすることを試みた。これまで、3種のエフェクター変異株についてマウス腸炎モデルによる解析を行ったが、腸炎に関わる新規エフェクターは同定されていない。しかし、SPI-1およびSPI-2の両方のIII型分泌機構より分泌されることが報告されているエフェクターSpvCがサルモネラ腸炎の抑制に関わることを明らかにした。SpvCはphosphothrenoine lyase活性を持ち、感染宿主のmitogen activated protein kinases (MAPKs)を不活化することが報告されている。現在、MAPKsの不活化と腸炎抑制メカニズムの関連性を詳細に解析している。前年度の当該研究において、サルモネラ感染後期の腸炎にはSPI-2 III型分泌機構が重要な役割を果たすことを明らかとした。そこで、SPI-2による腸炎に関わるIII型エフェクターを同定するため、これまで報告されているエフェクターの欠失変異株をマウス腸炎モデルに感染し、感染マウスの盲腸における炎症程度を野生株感染マウスと比較した。しかしながら、用いた全てのエフェクター変異株において、感染マウスの盲腸の炎症の程度は、野生株感染マウスとそれと同程度であったことから、腸炎に関わるエフェクターを同定することはできなかった。一方、SPI-1およびSPI-2 III型分泌機構の両方から分泌されるSpvCについてはその酵素活性(リン酸化スレオニンリアーゼ:PTL)が既に他のグループによって報告されていたが、サルモネラ感染におけるSpvCの機能は不明であった。そこで、マウス腸炎モデルを用いてSpvCの機能を詳細に解析した。その結果、サルモネラはPTL活性により宿主のmitogen-activated protein kinases(MAPKs)を脱リン酸化(不活化)し、感染初期の炎症を回避することで全身への菌の拡散を可能にすることが示され、サルモネラ感染におけるSpvC役割のひとつが明らかとなった。
抗てんかん薬バルプロ酸胎生期暴露による脳構築及び行動異常解析

神経幹細胞及びそれから分化・産生されるニューロン、アストロサイト、オリゴデンドロサイトは、脳神経系を形成する主要な細胞種である。近年、DNAメチル化やアセチル化を含むヒストン修飾などによるエピジェネティクス機構が、これら細胞の機能発現に重要であることが明らかにされつつある。我々は以前に、抗てんかん薬かつヒストンアセチル化酵素(HDAC)阻害剤であるバルプロ酸が、神経幹細胞からニューロンへの分化を促進できることを示した。またこの作用を利用して、神経幹細胞移植とバルプロ酸投与の併用により、新しくニューロンを補充することで、損傷脊髄の機能を改善させる新規治療法の報告も行った1。しかし、バルプロ酸には良い作用ばかりがあるわけではなく、例えば、バルプロ酸を服用した妊婦てんかん患者の産児においては記憶障害が認められている2。そこで我々はこの問題解明に神経幹細胞の増殖・分化制御の観点から着手した。妊娠マウスにバルプロ酸を経口投与したところ、胎仔脳内におけるヒストンアセチル化が亢進し、神経幹細胞からニューロンへの分化が促進されることが分かった。その結果、本来ならば維持されているべき神経幹細胞数が減少し、成体海馬におけるニューロン新生が減少することを見出した。さらに、胎仔期バルプロ酸曝露成体マウスでは、おそらくこの海馬神経幹細胞数減少が原因と推察される学習記憶障害が観察された。また、成体海馬ニューロン新生を促進することが知られる自発的運動をバルプロ酸暴露マウスに行わせたところ、実際に海馬におけるニューロン新生が亢進するとともに、学習記憶障害の一部を改善できることがわかった。以上の結果は、胎仔期のエピジェネティック撹乱は晩発性に悪影響を及ぼすこと、しかしそれは改善できる可能性があることを示唆している。26年度が最終年度であるため、記入しない。抗てんかん薬バルプロ酸(VPA)の妊娠初期の服用は奇形及び自閉症発症頻度が上昇させることが知られている。VPA服用による自閉症発症の原因としては、齧歯類を用いた研究から、神経伝達物質、例えばセロトニンの海馬における濃度上昇やドーパミンの前頭葉皮質での濃度上昇等の影響が示唆されているが、本代表者が今回提案した神経幹細胞の増殖・分化制御の観点からの研究はほとんどなされていない。そこでこれまでに、妊娠1214日目マウスにVPAを300mg/kg/dayで投与し、胎生15日目と生後7日目のニューロン分化と層構造解析を行った。その結果、バルプロ酸の投与によって、神経幹細胞からニューロンへの分化が促進されると同時に、深層ニューロンの産生が減少しかつ浅層ニューロンの産生が亢進することが分かった。また、培養系においても発生段階依存的な神経幹細胞の性質変化をある程度再現できるES細胞を用いた実験において、VPAに上述と同様の作用、つまり、深層ニューロン産生を減少させ、浅層ニューロ産生を亢進させる作用が観察された(Neurosci Res 2012)。さらに本年度は、VPAと同じくヒストン脱アセチル化酵素阻害在としての機能が知られる、Suberoylanilide hydroxamic acid(SAHA)を同様に妊娠マウスに投与したところ、VPA投与の場合と非常に類似した表現型が観察された。加えて、VPAの類似体でヒストン脱アセチル化酵素阻害作用を持たないバルプロミド(VPM)にはこのような表現型は見られなかったとことから、以上の結果は、神経幹細胞が深層ニューロン産生から浅層ニューロン産生へと性質を変化させる際に、ヒストン脱アセチル化酵素が重要な役割を果たしているものと考察される。

バルプロ酸胎生期暴露による脳層形成異常も確認され、またその産仔が成体へと成長後の行動異常も確認できた。さらに層形成異常に関してはバルプロ酸と同じくHDAC阻害活性をもつSAHAにおいても同様の効果が観察されたことから、これらはHDAC阻害による作用であることが確認されため。今後は、行動異常の原因が何であるかを明らかとするとともに、薬剤などを用いてその異常を改善できるかどうかを検討する。
近世笑話本に関する総合的研究

平成30年度は、「定本笑話本・小話本書目年表(一)(二)」に記載される元和から元禄に刊行された笑話本について、国文学研究資料館のWebサイトおよび各研究機関のWebサイトの検索機能を利用して行った。この作業を踏まえて、インターネット上に画像として公開されている資料の収集を行った。画像が公開されていない資料については、実地調査を行い、書誌情報およびデジタルカメラによる画像の収集を行った。これらの研究については、島田大助と藤井史果が行った。資料の調査・収集の他に、浮世草子と笑話についての検討を行った。井原西鶴の『西鶴諸国はなし』を対象とした研究成果を、島田大助が東海近世文学会で発表した(「『西鶴諸国はなし』巻一の六「雲中の腕押」試論ー越後騒動との関係から」・「『西鶴諸国はなし』巻三の六「八畳敷の蓮の葉」試論ー「安土宗論」・狩野派「戯画図巻」との関係からー」)。佐伯孝弘は、多田南嶺の『世間母親容気』に描かれる母親についての分析から、笑話としての要素を研究した。研究成果は、「多田南嶺『世間母親容気』論」(『日本文学』67巻10号)として発表した。また、佐伯孝弘は、怪談の中の笑話性についても「近世怪異譚の多様性」(国際日本文化研究センター機関拠点型基幹プロジェクト「大衆文化の通時的・国際的研究による新しい日本像の創出」)で発表した。山口満は、「新笑話本書目年表」作成のため、公開用Webサーバを構築し、Webページデザイン(データベース設計を含む)の検討を行った。Webページに求められる機能やインターフェースの検討に注力した結果として、主要部分の開発はおおむね完了した。平成30年度は、以上の研究を行った。諸本調査は、今後も作業を継続し、研究成果がまとまり次第、Webページで公開する。平成30年度は、「定本笑話本・小話本書目年表(一)(二)」に記載される元和から元禄に刊行された笑話本について、調査・収集を行った。これに併せて、従来、笑話本とは見なされていない作品について検討を行い、笑話として読むことが可能か検討を行った。平成30年度中に、元和から元禄に刊行された笑話本について調査を完了し、「新笑話本書目年表」として公開する予定であったが、調査が年度末になったこと、Webページの検討作業などからできなかった。論文1、研究発表3の成果はあったが、この点を踏まえ、「やや遅れていると」と判断する。平成31年度は、宝永から寛延に刊行された笑話本について、調査・収集を行う。刊記未記載により刊年が確定できていない笑話本についての研究を行う。未翻刻の笑話本を翻刻し、公開する。笑話本の調査・収集は、島田大助、佐伯孝弘、藤井史果が行い、笑話本の翻刻は島田大助、藤井史果が行う。浮世草子作品など、従来、笑話本と見なされていない作品についての研究も継続して行う。これは、島田大助、佐伯孝弘、藤井史果が行う。山口満は「新笑話本書目年表」の公開を担当する。

これに併せて、従来、笑話本とは見なされていない作品について検討を行い、笑話として読むことが可能か検討を行った。平成30年度中に、元和から元禄に刊行された笑話本について調査を完了し、「新笑話本書目年表」として公開する予定であったが、調査が年度末になったこと、Webページの検討作業などからできなかった。論文1、研究発表3の成果はあったが、この点を踏まえ、「やや遅れていると」と判断する。平成31年度は、宝永から寛延に刊行された笑話本について、調査・収集を行う。刊記未記載により刊年が確定できていない笑話本についての研究を行う。未翻刻の笑話本を翻刻し、公開する。笑話本の調査・収集は、島田大助、佐伯孝弘、藤井史果が行い、笑話本の翻刻は島田大助、藤井史果が行う。浮世草子作品など、従来、笑話本と見なされていない作品についての研究も継続して行う。これは、島田大助、佐伯孝弘、藤井史果が行う。山口満は「新笑話本書目年表」の公開を担当する。資料の調査・収集を年度末まで継続したこと、Webページの検討作業などから、データ作成のために支出を予定していた人件費が執行できなかった。次年度は、2年分のデータ作成が必要となる。今年度執行できなかった人件費の予算と合わせて執行し、公開データの作成を行う。
リン脂質過酸化物によるラット胎児脳培細胞に対する老化要因の追求

本研究の目的は、リン脂質酸化物(LPO)の細胞老化への影響をラット胎児脳細胞を用いて検討することである。ここでは老化は、細胞骨格機能の低下に伴い起こると考えている。本研究者は前年度までに、調製したLPOの同定を行い、細胞骨格タンパク質への影響を検討した。I.培養細胞の選択培養細胞としては、PC12細胞を用いた。PC12細胞は、神経成長因子(NGF)の存在で、微小管より形成される突起を伸長させる。LPOによる微小管への影響が直接観察できる。II.培養細胞(PC12)へのLPOの及ぼす影響LPOは、PC12細胞に対して濃度依存的に細胞毒性を示すことが改良MTT法より、また濃度依存的に膜損傷を起こすことがLDH活性測定結果より、示された。リン脂質画分の分析では、ヒドロペルオキシドの存在が確認された。また、細胞膜由来脂質に過酸化が進んでいることが、HPLC分析およびマススペクトル分析により確認された。IV.細胞の形態に及ぼすLPOの影響位相差顕微鏡法より、LPOは細胞間ネットワークを崩壊させ、新たな神経突起の形成も阻害することが認められた。また、チューブリン抗体染色蛍光顕微鏡観察では、LPOによって形態変化が起っていたことが認められた。以上のことにより、脳内においてLPOは、微小管に作用し、神経突起形成を阻害し、次に細胞骨格を劣化させ細胞体が障害され、ニューロン全体を損傷させることが示唆された。本研究の主題は、リン脂質過酸化物(LPO)の細胞老化への影響をラット胎児脳細胞を用いて検討することである。そこで、LPOの細胞骨格への影響を以下の順で明らかにすることを計画した。I.調製したLPOの同定II.細胞骨格タンパク質(Tb)へのLPOの影響III.培養細胞へのLPOの及ぼす影響IV.ラット胎児脳細胞へのLPOの及ぼす影響現在の進ちょく状況を以下に示す。I.調製したLPOの同定LPOは、二次生成物まで進んでいない、フォスファチジルコリンに酸素が1分子結合したモノヒドロペルオキシドであることが同定された(紫外吸収差スペクトル測定、HPLCによる共役ジエンを持たない異性体の電気化学検出、マススペクトル測定、TLC測定により確認)。II.細胞骨格タンパク質(Tb)へのLPOとの影響(1)LPOはTbと相互作用してTbの立体構造を変化させた(蛍光スペクトル、紫外吸収差スペクトルおよびCDスペクトルにより確認)。(2)TbのGTPase活性はLPOの添加により低下させられた。(3)以上から、LPOはTbを劣化させ、細胞老化を導くと考えられた。III.培養細胞へのLPOの及ぼす影響(特に細胞骨格への影響)培養細胞中の細胞骨格への影響を検討するためラット副腎由来PC-12細胞を培養中。培養液中にLPOを添加したところ、細胞膜由来脂質に過酸化が進んでいることが確認された(HPLC分析およびマススペクトル分析)。また、生育も無添加に比べて劣った。IV.ラット胎児脳細胞へのLPOの及ぼす影響ラット胎児脳細胞そのものの生存や細胞骨格へのLPOの影響ついては、今後、検討する予定である。LPOは、PC12細胞に対して濃度依存的に細胞毒性を示すことが改良MTT法より、また濃度依存的に膜損傷を起こすことがLDH活性測定結果より、示された。
イギリスにおける裁量的証拠排除論の研究～「適切な大人」制度との関係を中心に～

「適切な大人(Appropriate Adult)」制度をめぐる裁判例の検討等を契機として、日英間における自白の証拠排除の基本構造の異同、傷つきやすい被疑者の供述の自由に対する日英間の配慮の違い、ひいては虚偽自白の防止に対する日英間の裁判所の姿勢の違いを明らかにした。平成21年度は、研究計画に従い、「適切な大人(Appropriate Adult:以下、AAという)」制度に関する裁判例の収集とともに、その理論的な検討に必要とされる基本的な文献の収集に努めた。それらの文献収集にあたって、科研費がきわめて有意義であったことは言うまでもない。なお、国内での文献収集にあたっては、申請者(京)の本務校である香川大学図書館及び同法学部資料室との協力体制等のほか、Westlawなどオンライン検索を活用した。さらに国内では、国外調査への橋渡しも意識して、学会及び各種研究会での意見交換等を積極的に活用して、イギリス刑事司法に関する情報の収集に努めた。下記の「学会発表」もそのような活動実績の一つである。これらの国内での文献及び情報の収集を踏まえたうえで、2010年(平成22年)3月22日29日まで、海外調査(イギリス)を行った。具体的には、イギリス・ポーツマス大学・刑事司法研究所を中心として文献及び情報の収集に努めた。言うまでもないことだが、イギリスでは、日本では入手困難な雑誌論文が容易に入手できる。仮にその場では必ずしも入手できなくとも、現地のスタッフに依頼すれば、後で日本までコピーを郵送し、またはPDFファイルで送信してもらうこともできる。さらに、一般には非公開の政府文書ですら、関係者からの紹介等の努力次第では、閲覧することも不可能ではない。しかし、それらもすべて、実際にイギリスに赴き、当地のスタッフと意見交換をすればこそ可能なことであり、その意味で、今回の科研費により有形・無形に得られたものは、計り知れない。とりわけ、今回の海外調査で得られた数々の文献は、次年度(最終年度)において研究業績を作成・公表するうえで、いずれも不可欠なものばかりであった。このように、平成21年度は、文献収集と情報収集を活動の中心としたものであり、次年度(最終年度)への橋渡しとして、その成果を十分に拳げたものと考えられる。以上平成22年度についても、交付申請書記載の研究計画に従い、21年度同様「適切な大人(Appropriate Adult:以下、AAという)」制度に関する裁判例及び証拠法関連の文献の収集・検討に努めると共にそれらの成果については、2本の研究論文として執筆するに至った。具体的には以下の通りである。発表順に述べると、まず下記にもあるとおり、香川法学30巻3・4号98-71頁に「『適切な大人(Appropriate Adult)』の立会いなしに得られた自白の証拠能力」と題する論文を発表した。その内容は、AA制度に関する裁判例を網羅的に取り上げて検討したうえで日本法への示唆を探ったもので、日英間では、自白の証拠能力、ひいては虚偽自白の防止への姿勢に違いが見られることを、AA制度を契機として明らかにしたものである。次に、下記にもある通り、2011年9月刊行予定の『村井敏邦先生古稀祝賀論文集』(日本評論社)に「イギリスにおける自白の証拠排除の基本構造「適切な大人(Appropriate Adult)」制度を契機として」と題する論文を寄稿した(約16,000字)。これも、先の香川法学掲載の論文と同様に、AA制度を契機とするものではあるが、その違いは、先の論文が裁判例の詳細な検討を主な内容とするものであるのに対し、本論文は、むしろその前提として、日英間における自白の証拠排除の基本構造の異同について比較検討したもので、より一層理論的な傾向の強い内容である。いずれの論文においても、本研究の基本テーマであった裁量的証拠排除論が十分に取り上げられていることは言うまでもなく、日本における自白の証拠排除論の発展に貢献しうるものである。
体軸性脊椎関節炎の骨新生ならびに骨粗鬆症に関する研究

本研究では、体軸性脊椎関節炎(axSpA)の骨新生に関してを行う.AxSpAは、体軸関節の炎症とそれに引き続く骨新生による不可逆的な関節強直を主病態する難治性疾患である。一方で、病変周囲の椎体骨自体では骨粗鬆症が著しく、骨折リスクが高いことが問題である。SpAにおいてはIL-23/IL-17経路が病態に強く関与することが知られ、IL-22が骨新生に関与している可能性が報告されている。そこで本年度、申請者らはIL-22阻害が脊椎関節炎の骨新生を抑制するかを検証するため、申請者らは脊椎関節炎モデルマウスにおいてIL-22を阻害し、骨新生抑制の有無について病理学的に検討した。しかし、IL-22阻害による明らかな骨新生の抑制は認められなかった。このことから、IL-22を単独で阻害するだけでは靭帯骨化は抑えられず、IL-17などの他のサイトカインの関与が強いことが考えられた。よってIL-17とIL-22の両者を阻害し、実臨床で使用可能となったIL-17阻害単独と比較検討することを現在、考慮中である。いずれにせよ、現時点では骨新生の進行を抑制することが明らかな薬剤はないため、分子標的治療の可能性をさらに検討していく必要があると考えられる。また、破骨細胞分化抑制作用を有する抗RANKL抗体が骨粗鬆症のみならず関節リウマチの治療薬としても使用されている。AxSpAも炎症とびらん性病変がまずみれられることから抗RANKL抗体は、初期には骨破壊抑制、またその後の骨粗鬆症抑制において有用である可能性が高い。しかし椎体間の靭帯骨化を増強する可能性も危惧され、臨床でもまとまった研究はされていない。さらに抗sclerostin抗体が骨粗鬆症に使用可能となり、これらの薬剤のSpAにおける骨新生に与える影響について検討することは臨床的な意味でも重要と考えられ、次年度に研究を行う予定である。脊椎関節炎モデルマウスについて、病理学的スコアの検討および確認を行った。同マウスに抗IL-22モノクローナル抗体もしくはコントロールIgGを投与し、ヘマトキシリン・エオジン、アリザリン・レッドS、およびアリシアン・ブルーにて染色を行い、病理スコアを用いて比較検討した。抗IL-22抗体投与マウスにおいて、炎症や骨新生についてコントロール群と比較して差はみられず、当初、予測していた骨新生抑制作用は認められなかった。血液は投与前、6週、16週で採取したが、血清の炎症性サイトカインや骨代謝マーカーについては、現時点では測定しておらず検討中である。脊椎関節炎モデルマウスにおける骨新生抑制について、IL-22阻害単独では効果が得られなかったため、IL-17阻害を同時に行い、IL-17単独阻害と比較検討することを考慮中である。また、破骨細胞形成抑制作用を有する骨粗鬆症治療薬の病的骨新生に対する影響の有無について検討するため、抗RNAKL抗体1mg/kgを1回、抗sclerostin抗体5mg/kgを4週毎に投与する。16週でマウスの解剖を行い脊椎の病理標本を作製する。凍結切片を保存する。PG投与前、6週(最終投与時)、16週の血液を採取し保存する。国際学会などに積極的に参加し、他の研究者からも情報を入手する。

同マウスに抗IL-22モノクローナル抗体もしくはコントロールIgGを投与し、ヘマトキシリン・エオジン、アリザリン・レッドS、およびアリシアン・ブルーにて染色を行い、病理スコアを用いて比較検討した。抗IL-22抗体投与マウスにおいて、炎症や骨新生についてコントロール群と比較して差はみられず、当初、予測していた骨新生抑制作用は認められなかった。血液は投与前、6週、16週で採取したが、血清の炎症性サイトカインや骨代謝マーカーについては、現時点では測定しておらず検討中である。脊椎関節炎モデルマウスにおける骨新生抑制について、IL-22阻害単独では効果が得られなかったため、IL-17阻害を同時に行い、IL-17単独阻害と比較検討することを考慮中である。また、破骨細胞形成抑制作用を有する骨粗鬆症治療薬の病的骨新生に対する影響の有無について検討するため、抗RNAKL抗体1mg/kgを1回、抗sclerostin抗体5mg/kgを4週毎に投与する。16週でマウスの解剖を行い脊椎の病理標本を作製する。凍結切片を保存する。PG投与前、6週(最終投与時)、16週の血液を採取し保存する。国際学会などに積極的に参加し、他の研究者からも情報を入手する。
ナノ空間における液体の相転移およびガラス転移の熱力学的研究

1.断熱型熱量計の作製:前年度から作製に取り組んだ断熱型熱量計および自動計測システムを完成させた.試料容器の熱容量測定の結果,精度は0.1%であった.今後,断熱シールドおよび自動計測システムの改良により,さらなる精度の向上をめざしたい.2.熱容量測定:作製した断熱型熱量計を用いて,水を毛管凝縮させたMCM-41(細孔直径3.7nm)の熱容量測定を100-300Kの温度範囲で行った.その結果,236K付近に水の融解ピークを観測した.融解ピークの幅は4K程度であり,DSC測定(昇温速度5°C/min)でのピーク幅7Kに比べると小さくなった.融解ピークの幅は,DSC測定では装置および測定条件に依存して真の値より大きくなるが,今回の断熱型熱量計を用いた測定では真の値が決定できていると思われる.この試料では,後述の誘電率測定の結果,140K付近でMCM-41メソ孔表面近傍の不凍水のガラス転移が観測されることが期待されたが,その付近には明確な熱異常は観察されなかった.今後,様々な細孔径のMCM-41を用いて融解ピーク幅の細孔径依存性等を調べ,研究を進展させたい.3.誘電率測定:水を表面吸着および毛管凝縮させたMCM-41(細孔直径3.7nm)の誘電率測定を100-300Kの温度範囲で行った.その結果,表面吸着試料の水は低温でも結晶化しない不凍水であるが,バルクの非晶質氷より水分子の運動性が高いことがわかった.また,毛管凝縮試料中の水は235K付近で結晶化するが,全体の25%の水は結晶化しないことがわかった.1.試料合成:実験で使用するMCM-41 (メソ孔直径2-4nm)を合成した.均一なメソ孔が形成されていることをXRD測定,電子顕微鏡観察,窒素吸着等温線測定で確認した.2.断熱型熱量計の作製:精密熱測定用の断熱型熱量計については,自動精密デジタル測温ブリッジをはじめとした測定機器の購入,試料セル・断熱シールド等の作製・組み立てを終え,ほぼ完成している.クライオスタットおよび真空排気系は現有のものを転用した.現在,自動計測システムの構築中であり,これが完成し次第,標準試料(安息香酸)の熱容量測定により測定精度および確度を確認する予定である.3.MCM-41メソ孔内の水およびアセトニトリルの性質:断熱型熱量計による研究の準備として,水およびアセトニトリルを毛管凝縮させたMCM-41についてDSC測定および誘電率測定を行った.DSC測定の結果,メソ孔内の水およびアセトニトリルはバルクより低い融点を持つことがわかった.また,細孔サイズが小さい場合(メソ孔直径2nm)は,低温でも結晶化しないことがわかった.誘電率測定の結果,メソ孔内の水分子については,結晶化した場合でもアモルファス氷と同程度の回転緩和時間を持つことがわかった.これは,メソ孔内の氷が構造的にかなり乱れていることを示唆する結果である.また,メソ孔内のアセトニトリル分子については緩和時間の分布が大きいことがわかった.これらの系について断熱型熱量計で熱容量測定を行うと,メソ孔内での融解・ガラス転移についての精密な情報が得られると期待される.1.断熱型熱量計の作製:前年度から作製に取り組んだ断熱型熱量計および自動計測システムを完成させた.試料容器の熱容量測定の結果,精度は0.1%であった.今後,断熱シールドおよび自動計測システムの改良により,さらなる精度の向上をめざしたい.2.熱容量測定:作製した断熱型熱量計を用いて,水を毛管凝縮させたMCM-41(細孔直径3.7nm)の熱容量測定を100-300Kの温度範囲で行った.その結果,236K付近に水の融解ピークを観測した.融解ピークの幅は4K程度であり,DSC測定(昇温速度5°C/min)でのピーク幅7Kに比べると小さくなった.融解ピークの幅は,DSC測定では装置および測定条件に依存して真の値より大きくなるが,今回の断熱型熱量計を用いた測定では真の値が決定できていると思われる.この試料では,後述の誘電率測定の結果,140K付近でMCM-41メソ孔表面近傍の不凍水のガラス転移が観測されることが期待されたが,その付近には明確な熱異常は観察されなかった.今後,様々な細孔径のMCM-41を用いて融解ピーク幅の細孔径依存性等を調べ,研究を進展させたい.3.誘電率測定:水を表面吸着および毛管凝縮させたMCM-41(細孔直径3.7nm)の誘電率測定を100-300Kの温度範囲で行った.その結果,表面吸着試料の水は低温でも結晶化しない不凍水であるが,バルクの非晶質氷より水分子の運動性が高いことがわかった.また,毛管凝縮試料中の水は235K付近で結晶化するが,全体の25%の水は結晶化しないことがわかった.
保護・分離を必要とする高齢者虐待事例対応における技能養成プログラムの開発

本研究では、保護や分離を要する高齢者虐待事例対応における技能開発プログラム作成の第一段階として専門職のアセスメントや介入の差異性と共通性を明らかにする。【方法】地域包括支援センター(センター)の社会福祉士・看護職(2職種)の各2グループ16名を対象に、介入の視点等に関するフォーカスグループ・ディスカッションを実施し質的に分析した。次に141か所のセンター2職種を対象に、自記式質問紙調査にて技能実践状況を把握した。【結果】2職種の介入の共通性として、4つのカテゴリが抽出され、看護職独自では、5つのカテゴリが、社会福祉士独自では、3つのカテゴリが抽出された。質問紙調査は126名の回答が得られた。平成26年度は、海外文献を中心に先行研究の文献レビューを実施した。一つは高齢者虐待における各専門職(保健師、訪問看護師、ソーシャルワーカー)のアセスメントや介入項目に焦点を当て、職種ごとの特徴や、職種の共通性について整理し、質問紙作成の第一段階とした。二つ目は高齢者虐待対応の教育・研修プログラムについてレビューを実施した。この結果については学術誌に投稿予定である。また、虐待対応において先駆的に取り組んでいるA市の専門職にヒアリングを実施し個別インタビュー項目についての検討材料とした。1.保護や分離が求められる虐待事例の介入・アセスメントにおいて、地域包括支援センター3職種の特徴(差異と共通性)を明らかにすることを目的とした。実際は保健師(看護師含む)と社会福祉士の専門性の差異と共通性を抽出した。(地域包括支援センターの主任介護支援専門員については、保護や分離を要する虐待事例についての関与が少ないことが、本研究プロセスにおいて明確となったため、調査対象から外した。)各専門職に対して、フォーカスグループディスカッションを実施し以下の内容を明らかにした。保健師は、医学モデル(生命の危機状況を身体面から予測)を基盤としつつ、具体的な介護状況から家族の関係性や高齢者の予後を予測していた。社会福祉士は、高齢者をとりまく環境(家族やサービス調整等)への介入を基盤とし、生命予後に関しては、医療職と連携協働するなかで把握していた。2.保護や分離が求められる虐待事例への技能養成方法について、これまでの知見からどのような方法・プログラムに効果があるかの現状把握を行った。関東・東海と地域や研修体制の異なる直営の地域包括支援センター1か所および地域包括支援センターの専門職の研修等を担う行政管轄部署の専門職に対して、フォーカスグループディスカッションを行った。研修体制・内容は自治体により組織化されているところとそうではないところとあった。共通点として、現在進行形の高齢者虐待の事例検討、専門職教育のための模擬事例の検討等、事例検討によって事例理解を深め、具体的対応を実践的に体験することが、技能養成に繋がるという結果が得られた。3.今後の研究の展開本研究の前段階での調査(課題番号23593404:保護や分離の検討や対応過程に重要なアセスメント・介入技能項目)の結果から明らかとなった各専門職のアセスメントや介入の実施の有無と今回の調査結果を統合し評価・考察する。1年次の調査の遅れ(欠員等の職場環境により、研究に割く時間が限定された)を取り戻すべく努力を図っているが、進行としては当初計画案よりやや遅れている状況である。1年次に明らかにすべき事項(地域包括支援センター3職種の専門性の違いと共通性)が、2年次に持ち越されている。ただし、技能獲得においてどのようなプログラムが効果的かについて実践現場へのインタビューから一定程度の方向性を見出すことができた。保護・分離が求められる高齢者虐待対応(虐待対応)における地域包括支援センター各専門職の専門性について、アセスメント・介入、これらの技能をどのように獲得しているか(研修や事例検討等)に焦点をあてインタビューを実施した。インタビュー対象は、虐待対応において先駆的取組を行っている自治体の直営型および委託型の地域包括支援センター専門職とした。社会福祉士は福島県、東京都新宿区で実施、保健師等は福井県、東京都東久留米市で実施、包括支援センターチームとしては東京都豊島区で実施した。得られたデータは質的帰納的に分析し、支援過程における各専門職のアセスメントや介入の特徴、2職種の差異と共通性を抽出した。また、技能の習得方法について確認した。保健師等の介入の特徴は、ヘルス事業や児童などの訪問を介入の糸口とし、高齢者の身体面や食事内容などの生活全般から生命の危機状態を予測、トリアージし、脱水等の見えにくい虐待について他職種に緊急性を喚起していた。社会福祉士は介護者家族の支援を介入の糸口とし、世代や性差、経済といったように虐待の要因に関わる全体像を把握していることが明らかとなった。保護・分離事例では、保健師等と社会福祉士の複数訪問がなされていることもあり、各々期待する、される役割を担っていた。一方、経験や保護分離の実践数の多いチームでは、職種として期待される役割は果たしつつも他専門職の技能を実践の中で獲得し双方の視点をもつ状況があった。技能の習得に関しては、集合研修では基礎的な知識を、事例検討では実際の事例の事後の振り返りを行い実践に反映させていた。成功事例などの体験は、判断のパタン化を生じさせることからチームで関わりパタン的思考を是正する機会としていた。分析結果(保健師)については、看護科学学会で成果発表(示説)を行った。昨年度は、やや遅れている状況であったが、今年度は計画的に調査活動を行い、おおむね順調に進展している。

最終年度は、保護や分離を要する高齢者虐待事例対応における技能開発プログラム作成の第一段階として看護職(保健師)や社会福祉士のアセスメントや介入の差異性と共通性を明らかにした。【方法】地域包括支援センター(センター)の社会福祉士や保健師の各2グループ16名を対象に、介入の視点等に関するフォーカスグループ・ディスカッションを実施し質的に分析した。次に141か所のセンター2職種を対象に、自記式質問紙(保護・分離に求められる専門職の技能60項目(Fuki.O.et al:2016))について5段階リカートスケール(非常に重要である5、重要である4、どちらとも言えない3、あまり重要でない2、重要でない1)を尋ね技能実践状況を把握した。【結果】保健師と社会福祉士の介入の共通性に関わるカテゴリは、4つのカテゴリと15のサブカテゴリ-が抽出された。保健師独自では、5つのカテゴリと10のサブカテゴリが、社会福祉士独自では、3つのカテゴリと6つのサブカテゴリが抽出された。介入の共通性では、【介入のための多様な手段を駆使・活用】、【環境から介護状況を予測する】、【家族アセスメント】、【他職種の強みを認識し、役割分担をする】の4つのカテゴリが抽出された。保健師の介入の特徴として、【心身状況に対する違和感】、【高齢者の予後予測の見立てる】、【緊急性の判断、トリアージ】【見えにくい虐待について気づきを促す、緊急性を喚起する】が抽出された。社会福祉士の介入の特徴として、【関係を途切らせない】、【事例と適正な距離をとる】、【他職種に対し波長合わせを行いながら対応スキルを得る】が抽出された。質問紙調査は126名の回答が得られた。本研究では、保護や分離を要する高齢者虐待事例対応における技能開発プログラム作成の第一段階として専門職のアセスメントや介入の差異性と共通性を明らかにする。【方法】地域包括支援センター(センター)の社会福祉士・看護職(2職種)の各2グループ16名を対象に、介入の視点等に関するフォーカスグループ・ディスカッションを実施し質的に分析した。次に141か所のセンター2職種を対象に、自記式質問紙調査にて技能実践状況を把握した。【結果】2職種の介入の共通性として、4つのカテゴリが抽出され、看護職独自では、5つのカテゴリが、社会福祉士独自では、3つのカテゴリが抽出された。大学業務の繁忙さから研究時間の確保が難しく、研究遂行は予定より大幅に遅れた。具体的には予定していた専門職へのインタビュー実施とインタビュー結果から質問紙を作成する作業には至らなかった。当初予定していた各専門職へのインタビューに関しては、次年度早急に実施予定である。3年次には、2年次で明らかになった、職種ごとのアセスメントや介入の特徴、技能養成方法についてデルファイプロセスを用い、内容妥当性を検証する。最終年度は、地域包括支援センター専門職と対象としたフォーカスグループインタビュー結果を質的帰納的に分析し保健師等、社会福祉士の高齢者虐待対応における保護や分離事例のアセスメントおよび介入の特徴を明らかにする。
尋常性乾癬における細胞膜を介する情報伝達機構の研究

本年度は3年間の研究の最後の年度にあたるため統括もあわせて行う。われわれの研究によりprotein kinase C依存性シグナルと乾癬においてみられる情報伝達系の異常との類似が明らかになった。protein kinase C活性化により引き起こされるbeta-adrenergic adenylate cyclase反応性の低下やインボルクリンの誘導はその代表的な例である。われわれの研究結果は表皮細胞においてcornifiedcell envelopeの形成が極めて優先順位の高いシステムとして細胞増殖亢進時にも強く保持されていることを示している。インボルクリンを中心とするcornifiedcell envelope形成機構の解析はprotein kinase Cを軸として、さらに検討されるべきものと考えられる(Iizuka,Takahashi:Int J Dermatol 32:333-338,1993)。本年度の研究結果で特記すべきものとしてレチノイドのFRSK細胞におよぼす作用があげられる。すでに、われわれはレチノイドが豚表皮の器官培養系においてbeta-adrenergic adenylate cyclase反応性の増強をきたすことを報告しているが、ラット胎児表皮細胞由来のFRSK細胞を用いた系では、レチノイドは逆にbeta-adrenergic adenylate cyclase反応性の低下を起こすことが示された(Takahashi,Iizuka:J Dermatol Sci 5:122-129,1993)。この作用はthymidine取り込みの亢進と連動しておりbeta-adrenergic adenylate cyclase反応性と表皮細胞増殖の間には負の相関があることが推定される(豚表皮ではレチノイドは細胞増殖を低下させる)。従来からレチノイドは培養条件により、増殖亢進と低下の相反する作用を示すことが知られている。われわれの結果はレチノイド作用の解析にあたり、表皮細胞の増殖状態が重要な因子であることを示唆している。I.乾癬表皮ではβーadrenergic adenylate cyclaseの反応性の低下とG蛋白質を介するcyclic AMP産生の増強が認められている。従来,グルココルチコイドが乾癬表皮に対して治療効果を示すこと,その際βーadrenergic adenylate cyclaseの反応性の上昇がもたらされることが分かっていた。当該年度の研究においては,角化能をもつラット胎児関来の表皮細胞であるFRSK細胞を用いてこのグルココルチコイド作用の解析を行なった。その結果(1)FRSK細胞がglucocorticoid処理によりβーadrenergic adenylate cyclaseの反応性を上昇させること(2)この作用が蛋白合成系を介しており,またglucocorticoid特異的であること(3)このβresponseの上昇はβ_2ーadrenergic受容体の発現増強を介していることが示された(Takahashi&Iizuka,Br J Dermatol 124:341ー347,1991)。他のいくつかの細胞系でglucocorticoidによるβーadrenergic受容体の発現調節が示されているが,表皮細胞でははじめての証明である。II.すでに述べたように乾癬表皮ではβーadrenergic responseの低下とともにG蛋白質(ならびに酵素本体)を介する反応性の上昇が認められる。このメカニズムとしてprotein kinase Cを介するものが従来から知られていたが,当該年度の研究により受容体刺激にともなう反応性低下(desensitization,refractoriness)でもβーresponseの低下と連動した類似の変化がおこることが明らかとなった(Iizuka et al,Biochim Biophys Acta 1093:95ー101,1991)。両者は独立したメカニズムで表皮adenylate cyclaseの反応性を制御しており,作用機序は全く異なるものと推定される。

表皮のadenylate cyclaseは,その意味で複雑な調節機構の下にあることは明らかとなったが,乾癬表皮における反応性の変動が,どちらを主としたものであるかは今後の検討課題である。昨年度までの研究により、乾癬表皮とTPA処理表皮の類似性が明らかになっている。TPAは、proein kinase Cの活性化を介してその作用をあらわすが、本年度はTPA作用の解析をインボルクリンの発現をモニターすることにより行った。インボルクリン蛋白の遺伝子は、既にクローニングされているが、我々は、本遺伝子5′上流領域を約900bp最初のexonまでCATベクターに接続し、CAT assayを行った。その結果、インボルクリン遺伝子の発現がTPAにより誘導されること、この作用が他のprotein kinase C activatorによってひきおこされること、さらに、protein kinase C阻害剤はインボルクリンの発現を抑制することが示された。TPAは、Jun/Fos複合体を介してTPA respouse element(TRE)に働き遺伝子発現を制御することが知られている。我々の系でもTPAによるインボルクリンの発現増強はJun/Fos両者のcotransfectionではおこるが、各々、単独ではおこらないことが示された。glucocorticoidはTREを介する制御系に対し、抑制的に働くことが知られている。我々の系でもglucocorticoidによる類似の抑制効果が示された。さらにTREに相当する塩基配列も、インボルクリン5′上流subclone領域内に数ヶ所固定された。以上の結果は、TPAがprotein kinase Cを活性化し、TREに働いてインボルクリンの誘導をおこしていることを示すものである。乾癬表皮の周辺帯の組成はインボルクリンのアミノ酸組成と酷似しており、乾癬におけるprotein kinase Cの活性化がインボルクリンの誘導に働いているものと推定される。本年度は3年間の研究の最後の年度にあたるため統括もあわせて行う。われわれの研究によりprotein kinase C依存性シグナルと乾癬においてみられる情報伝達系の異常との類似が明らかになった。protein kinase C活性化により引き起こされるbeta-adrenergic adenylate cyclase反応性の低下やインボルクリンの誘導はその代表的な例である。
転写ターゲティングシステム構築による膵島ホルモン分泌制御機構の解析と遺伝子治療

細胞種特異的プロモーターの活性は一般に弱く、目的の遺伝子を充分量発現させることは不可能である。そのため、本研究では、2種のアデノウイルスを組み合わせて用いる。細胞種特異的プロモーター下にCre Recombinaseを発現するものと、強力なプロモーターであるCAG下に目的の遺伝子cDNAを、発現を抑える無関係な配列を挟んで配置するものである。発現させたい細胞のみにおいてこの無関係な配列をCre Recombinaseで取り除くことにより、この細胞で特異的に発現させることができる。2.栄養源(nutrient)に対するミトコンドリア代謝活性化のエンジニアリング栄養源刺激によるインスリン分泌では、ミトコンドリア代謝の活性化が重要であるが、ほぼすべての細胞で代謝される栄養源(例:グルコース)では、特定の細胞種のみの応答を解析することは不可能である。一方、グリセロールはグリセロールキナーゼが欠如する膵ラ氏島内分泌細胞ではミトコンドリアを活性化することができない。同様にトリカルボン酸回路の中間体は細胞膜輸送担体(ジカルボン酸トランスポーター)が欠如するため、細胞内にとりこまれずミトコンドリア代謝を活性化できない。そこでグリセロールキナーゼあるいはジカルボン酸トランスポーターを解析対象の細胞種に発現させ、ミトコンドリア代謝を特異的に活性化させて、その直接効果を検討した。3.結果と結論:膵ラ島グルコース刺激時のグルカゴン分泌抑制は、β細胞からのパラクライン機構によるジカルボン酸トランスポーターをラ島の非β細胞にのみ発現させると、トリカルボン酸回路の中間体によるグルカゴン分泌は約2倍に増加した。しかし、ジカルボン酸トランスポーターをラ島全体に発現させると、トリカルボン酸回路の中間体によるグルカゴン分泌は増加しなかった。同様の現象は、グリセロールキナーゼの細胞特異的な発現でも認められた。これらより、膵ラ島グルコース刺激時のグルカゴン分泌抑制は、β細胞からのインスリン分泌がパラクライン機構でα細胞を抑制するためと考えられた。膵ランゲルハンス島の内分泌細胞間にはクロストークが存在し、互いのホルモン分泌を影響しあうことによって精妙なグルコースホメオスターシスを達成していると考えられてきた。しかし、このクロストークの存在が、それぞれの細胞応答の複雑さを増し、個々の細胞タイプの刺激に対する応答の研究、ひいては細胞間の連関の解析を困難なものにしてきた。そこで、膵ランゲルハンス島内のα、β細胞を特異的に刺激し、活性化させることにより、2つな異なるタイプの細胞の特性を明らかにし、さらに両者のクロストークについて検討した。方法としては、α、β細胞のミトコンドリア代謝を別々に活性化させるため、TCAサイクル中間体のジカルボン酸を細胞に取り込む細胞膜上の輸送担体であるジカルボン酸輸送担体(NaDC、Na依存性Dicarboxylate Transporter)をα、β細胞に特異的にアデノウイルスを用いて発現させた。またα、β細胞の解糖系を細胞種特異的に活性化させるため、グリセロール代謝の必須酵素であるグリセロールキナーゼ(GlyK)を、Rat GlyKのcDNAを組み込んだアデノウイルスを作成して発現させた。なお、これらのアデノウイルスは、細胞種特異的にCreリコンビネースを発現するアデノウイルスとの共感染により、細胞特異的に発現するようにした。TCAサイクル中間体のクエン酸、オキソグルタル酸、コハク酸、リンゴ酸などは、α、β細胞膜を透過できないため通常は代謝されない。また、グリセロールはグリセロールキナーゼの活性が低いため正常のα、β細胞では代謝されない。β細胞にGlyKを発現させた場合、膵島はグリセロールでインスリンを分泌した。β細胞にNaDCを発現させると、リンゴ酸などTCAサイクル中間体はインスリン分泌を増強し、興味深いことにグルカゴン分泌は抑制された。一方、α細胞のみにNaDCを発現させた膵島ではリンゴ酸により、グルカゴンの分泌が増加した。以上より、α細胞を特異的に直接活性化させるとグルカゴン分泌は増加するが、β細胞を活性化させると間接的にグルカゴン分泌は抑制される。α細胞の分泌がβ細胞とのクロストークにより制御されていると考えられた。

3.結果と結論:膵ラ島グルコース刺激時のグルカゴン分泌抑制は、β細胞からのパラクライン機構によるジカルボン酸トランスポーターをラ島の非β細胞にのみ発現させると、トリカルボン酸回路の中間体によるグルカゴン分泌は約2倍に増加した。しかし、ジカルボン酸トランスポーターをラ島全体に発現させると、トリカルボン酸回路の中間体によるグルカゴン分泌は増加しなかった。同様の現象は、グリセロールキナーゼの細胞特異的な発現でも認められた。これらより、膵ラ島グルコース刺激時のグルカゴン分泌抑制は、β細胞からのインスリン分泌がパラクライン機構でα細胞を抑制するためと考えられた。