hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細分割曲面加工のための工具経路生成に関する研究

細分割曲面は、そのモデリングの容易さや表現力により特にCGで注目されており、CAD/CAMでの利用も期待されている。しかしそのためには乗り越えなければならない課題がある。それは、これまでの手法では細分割曲面から加工情報を生成することができないということである。なぜなら、細分割曲面はその極限においてのみ滑らかな曲面を生成するのであって、その曲面が陽に与えられているわけではないからである。本研究では工具経路を生成するための方法として、二つの方法を開発した。一つは、細分割曲面からオフセット曲面を生成する方法を開発した。これは、細分割曲面の極限曲面の性質を利用するもので、曲面の極限点において法線を評価し、その方向にオフセットするような曲面の制御点を計算するものである。生成されたオフセット曲面を分割し、それと工具をドライブする面との交線を求めて、それからCLデータを計算する。もう一つの方法は、工具と曲面との干渉を求めて、それからCLデータを生成する方法である。この場合は適当な細分割回数だけ曲面を細分割しておいた多面体に対してこの計算をおこなう。工具干渉の計算が鍵となるが、多面体が十分細かければ制度的には前者よりも期待できる。しかし、オフセット計算は実際には計算量が大きく、詳細なメッシュで行うことは効率上得策ではなかった。そこで、細分割曲面を近似的にオフセットする方法を開発した。さらに、荒加工用の工具経路を算出する方法について検討し、この近似的オフセット多面体に対して、荒加工経路を生成する手法を開発した。これらの方法によって工具経路を算出することができた。さらに、いくつかの例題について経路を生成し、加工実験を行った。細分割曲面は、そのモデリングの容易さや表現力により注目されている。しかし、CAD/CAMで広く利用されるには乗り越えなければならない大きな課題がある。本研究では工具経路を生成するための方法としていくつかの手法を試みた。1)微小三角形面による方法2)パラメトリック曲面に変換する方法1においては、データ量が大きくなるので、必要な部分だけを計算する手法を開発した。また、2については変換は理論的に近似とならざるを得なかった。その精度について課題を残している。これらに関して基礎理論をまとめ、実際にプログラムを試作した。特に1の方法については、いくつかの例題について経路を生成し、加工実験を行った。次年度以降は、さらに経路生成計算法の改良を行う。また、加工された部品形状を測定することによって、滑らかさや精度などを評価する。

工具干渉の計算が鍵となるが、多面体が十分細かければ制度的には前者よりも期待できるだろう。これらの方法によって生成した微小三角形面によって工具経路を算出することができた。さらに、いくつかの例題について経路を生成し、加工実験を行った。今後の課題として、荒加工の工具経路を算出する方法について検討し、手法とシステムを開発する予定である。細分割曲面は、そのモデリングの容易さや表現力により特にCGで注目されており、CAD/CAMでの利用も期待されている。しかしそのためには乗り越えなければならない課題がある。それは、これまでの手法では細分割曲面から加工情報を生成することができないということである。なぜなら、細分割曲面はその極限においてのみ滑らかな曲面を生成するのであって、その曲面が陽に与えられているわけではないからである。本研究では工具経路を生成するための方法として、二つの方法を開発した。一つは、細分割曲面からオフセット曲面を生成する方法を開発した。これは、細分割曲面の極限曲面の性質を利用するもので、曲面の極限点において法線を評価し、その方向にオフセットするような曲面の制御点を計算するものである。生成されたオフセット曲面を分割し、それと工具をドライブする面との交線を求めて、それからCLデータを計算する。もう一つの方法は、工具と曲面との干渉を求めて、それからCLデータを生成する方法である。この場合は適当な細分割回数だけ曲面を細分割しておいた多面体に対してこの計算をおこなう。工具干渉の計算が鍵となるが、多面体が十分細かければ制度的には前者よりも期待できる。しかし、オフセット計算は実際には計算量が大きく、詳細なメッシュで行うことは効率上得策ではなかった。そこで、細分割曲面を近似的にオフセットする方法を開発した。さらに、荒加工用の工具経路を算出する方法について検討し、この近似的オフセット多面体に対して、荒加工経路を生成する手法を開発した。これらの方法によって工具経路を算出することができた。
我が国および世界の諸地域の歌を題材とした「声の使い分け」の学習の研究

1研究目的現行の中学校学習指導要領では、音楽科の指導事項のひとつとして「曲種に応じた発声により、言葉の特性を生かして歌うこと」が指導事項として示されているが、実際の授業においてはどんなジャンルの楽曲であっても頭声的な発声で歌わせていることがほとんどである。音楽授業のなかに「多様な発声を使い分ける」という学習を導入することにより、子どもたちが音楽的な成長を遂げていく姿を期待したい。2研究方法(1)音楽授業の中でモジュール制を導入し.「曲種に応じた発声」に関する指導を継続的に行っていく。また、それにより、生徒の表現力がどのように高まっていくかについて、録音や録画によって記録し、音楽的な成長を調査した。(2)研究内容の一部を取り入れた授業実践を近隣の学校に依頼したり、本校での研究成果を研修会で紹介したりするなど、地域の学校との連携を深めながら研究を進めた。(3)我が国の伝統的な音楽(長唄等)や世界の諸地域の音楽(ホーミー等)に関する講習会やワークショップに参加し,演奏体験を重ねていくなかで文化的な背景についての理解を深めたり、歌唱技能を習得したりした。3研究成果我が国および世界の諸地域の「歌」だけではなく、歌に限定しない声の表現(例えば物干竿売りが行う「口上」や相撲の呼出が行う「呼び上げ」のように、独特の節回しや発声の仕方で表現するもの)を教材として幅広く発掘することができた。そして、多様な発声を使い分ける学習を通して、子どもたちが自分の声を磨き、表現力の向上につながることを確認できた。
骨細胞におけるリンの感知と低リンくる病責任分子の発現制御：Pit1の関与について

骨芽細胞・骨細胞には複数の低リン血症性くる病責任分子が発現しているが、リンの過不足を感知する機構については不明である。本研究では、CRISPR/Casシステムを利用し、III型ナトリウム-リン酸共輸送担体であるPit-1およびPit-2をノックアウトした骨芽細胞株を樹立し、骨芽細胞におけるリン酸シグナルの受容とリン代謝関連分子の発現制御におけるPit-1およびPit-2の役割を解析した。Pit-1の欠損は細胞外無機リン酸応答性に影響を与え、またPit-2はリン酸取り込みを介して長期的なリンの作用に関与していることが示唆され、Pit-1とPit-2は異なった役割を有することが推察された。骨芽細胞・骨細胞には複数の遺伝性低リン血症性くる病責任分子が発現しており、リン代謝において重要な役割をはたすが、骨芽細胞・骨細胞が体内のリンの過不足を感知する機構については不明である。本研究においては、ゲノム編集のCRISPR/Casシステムを利用し、リンを細胞内へと輸送するIII型ナトリウム-リン酸共輸送担体であるPit-1をノックアウトした細胞(Pit-1 KO細胞)を作成し、リン惹起シグナル受容におけるPit-1の役割について解析している。Invitrogen社のGeneArt CRISPR Nucleasevectorを使用し、標的DNA部位に一致する20bpのguide sequencesをクローニングした。マウス骨芽細胞株であるMC3T3-E1細胞に導入後、クローンを単離した。各クローンのPit-1遺伝子配列をシーケンサーにて確認し、欠損、変異が生じフレームシフトが生じてPit-1遺伝子がノックアウトされているクローンを選択した。また遺伝子修復によりPit-1遺伝子に変異が生じていないコントロール細胞も同時に選択した。32Pを用いたリン酸輸送アッセイにより、Pit-1 KO細胞においてはリン酸の取り込みが減弱していることを確認した。7 mMリン酸刺激によりコントロール細胞ではdentin matrix protein 1 (Dmp1)の発現が強く誘導されたが、Pit-1 KO細胞においてはこの発現誘導が減弱していた。またリン酸とアスコルビン酸により8週間分化誘導したところ、コントロール細胞ではリン酸により発現が誘導されるOsteopontinの発現が有意に上昇したが、Pit-1 KOでは明確な差は見られなかった。これらのことから、Pit-1遺伝子の欠損が、骨芽細胞の細胞外無機リン酸応答性に影響を及ぼすことが示唆された。Pit-1 KO細胞の樹立が終了し、その解析を進めることができている。MC3T3-E1細胞親株を使用したリン酸応答性の検討が順調に進んでいるため、Pit-1 KO細胞を使用したリン酸刺激により惹起されるシグナル受容やリン代謝関連遺伝子の発現の比較検討を順調に進めることができている。我々はこれまで、骨芽細胞などの種々の細胞種において、細胞外無機リン酸(Pi)刺激がIII型ナトリウム-リン酸(Na+/Pi)共輸送担体Pit-1やFGF受容体を介して細胞内にシグナルを惹起し、遺伝子発現を制御することを報告してきた。本研究においては、CRISPR/Casシステムを用いたゲノム編集により、Pit-1およびもう一つのIII型Na+/Pi共輸送担体であるPit-2遺伝子をノックアウトした骨芽細胞株を樹立し、骨芽細胞・骨細胞におけるリン酸シグナルの受容およびリン代謝関連分子の発現制御におけるPit-1とPit-2の役割を解析している。マウス骨芽細胞系細胞株MC3T3-E1 Subclone4を使用し、ゲノム編集によりPit-1ノックアウト(Pit1-KO)およびPit2ノックアウト(Pit2-KO)クローンを単離した。各クローンのPit-1およびPit-2遺伝子配列をシーケンスし、欠損や変異が生じフレームシフトをきたしPit-1およびPit-2遺伝子がノックアウトされたクローンを選択し、今年度はPit2-KO細胞の解析を行った。Pit2-KO細胞ではPi取り込み能が減弱していることを確認した。分化誘導培地で8週間培養したところ、Pit2-KO細胞とコントロール細胞との間で石灰化能に違いは見られなかったが、遺伝子発現変化を検討したところ、コントロール細胞においてはPit-1、osteopontin、Fgf23の発現が培養期間中に上昇を示したのに対し、Pit2-KO細胞では明確な発現変化を認めなかった。Pit2-KO細胞において、分化誘導培地での長期培養における遺伝子発現誘導が認められなかったことから、慢性的なPi負荷の作用はPi取込みの減少により減弱することが推察された。Pit-1およびPit-2 KO細胞の樹立がすでに終了し、その解析を進めることができている。今回、Pi存在下で培養することにより良好な石灰化を示すマウス骨芽細胞系細胞株MC3T3-E1 Subclone4を使用し、長期的および短期的なリン酸応答性の検討をDmp1、Fgf23といった低リン血症性くる病責任遺伝子の発現を指標とし順調に進めることができている。骨芽細胞の形質膜および基質小胞の膜上にはIII型ナトリウム/リン酸(Na+/Pi)共輸送担体であるPit-1やPit-2が存在する。基質小胞におけるNa+/Pi共輸送担体は、Piの取り込みにより骨格の石灰化に寄与すると考えられている。一方、細胞外Pi濃度の上昇は、Pit-1を介して細胞内にシグナルを惹起し、遺伝子発現変化をもたらす。

今回、ゲノム編集により作製したPit2欠損骨芽細胞株を用いて、基質小胞性石灰化および骨芽細胞機能におけるPit2の機能について解析を試みた。分化能を有する骨芽細胞系細胞株MC3T3-E1 Subclone4にCRISPR/Casシステムを適用することにより、Pit2ノックアウト(Pit2-KO)細胞を樹立した。Pit2-KO細胞ではPi取り込み能が減弱していることを確認した。3 mM Pi存在下で8週間培養したところ、Pit2-KO細胞もコントロール細胞とほぼ同等の石灰化を示した。次に、細胞自身へのPiの作用を検討した。Pit2-KO細胞およびコントロール細胞を1、4、7 mM Pi存在下で48時間培養することにより、短期的なPi刺激が遺伝子発現に及ぼす影響を検討したところ、いずれの細胞においても48時間の7 mM Pi刺激によりDmp1およびFgf2の発現が上昇した。また、Pit2-KO細胞およびコントロール細胞を1, 4, 7 mM Pi存在下で24時間培養し、細胞内外のATPを測定した。その結果、細胞内ATPには明確な差を認めなかったが、すべてのPi濃度において、Pit2-KO細胞では細胞外ATP濃度がコントロール細胞に比し上昇していた。以上の結果から、Pit2は基質小胞性石灰化においては必須ではないが、細胞自身の機能には実質的に関与していることが推察された。骨芽細胞・骨細胞には複数の低リン血症性くる病責任分子が発現しているが、リンの過不足を感知する機構については不明である。本研究では、CRISPR/Casシステムを利用し、III型ナトリウム-リン酸共輸送担体であるPit-1およびPit-2をノックアウトした骨芽細胞株を樹立し、骨芽細胞におけるリン酸シグナルの受容とリン代謝関連分子の発現制御におけるPit-1およびPit-2の役割を解析した。Pit-1の欠損は細胞外無機リン酸応答性に影響を与え、またPit-2はリン酸取り込みを介して長期的なリンの作用に関与していることが示唆され、Pit-1とPit-2は異なった役割を有することが推察された。リン酸輸送能を欠くPit-1変異体を用いて、リン酸惹起シグナルにおけるPit-1の機能がリン酸の細胞内取り込みに依存した機能であるのか否かを検討する。リン酸輸送能を欠く変異体Pit-1 S132Aをレンチウイルスベクターにクローニングし、樹立したPit-1 KO細胞へ導入する。Pit-1の発現を確認後、この変異体がリン酸輸送能を欠くことを上述のリン酸輸送アッセイにより確認する。リン酸応答性をDmp1の発現を指標に検討し、また様々な濃度のリン酸存在下でリン代謝関連遺伝子の発現を解析する。またCRISPR/Casシステムを使用し、同じくIII型ナトリウム-リン酸共輸送担体であるPit-2をノックアウトした細胞を樹立し、リン代謝制御におけるPit-1とPit-2の機能の違いを明確にする。Pit-2過剰発現レンチウイルスベクターを作成しPit2-KO細胞にて発現させ、Pit2-KO細胞で見られた結果がレスキューされるか検討する。またPit-1に関しては、リン酸輸送に必要なアミノ酸が同定されているため、リン酸輸送能を欠くPit-1変異体を、ゲノム編集の際
マウスフレンド細胞における細胞分化脱癌化因子に関する研究

マウスフレンド細胞再分化誘導反応は2つの反応(DNA sideとmembraneside)の組み合わせで起こることを我々はすでに明らかにし、更にこれらの反応をになう蛋白性因子(DIF-【I】,DIF-【II】)の存在を明らかにした。本年度は各種分化誘導剤で処理した細胞抽出液よりこの両因子を精製することに成功し、かなり精製度のすすんだ標品を調製することができた。しかし、末端ペプチド分析をする純度には至っておらず、従ってこれらを抗原とし、抗体を作製することを行なった。このDIF-【I】、DIF-【II】は共にマウスの培養細胞より得たものであり、マウス、ラットに対しての抗原性は低く力価の高い抗体は得られなかったので、マウス膵臓細胞を用いた試験管内免疫法を確立しこれによりDIF-【I】、DIF-【II】に対するモノクローナル抗体を得ようとした。得られたハイブリドーマ466株のうち6株がDIF-【I】に対する中和活性を示し、又DIF-【II】に対しては2株が中和活性を示していた。しかし、これが果してDIF-【I】.DIF-【II】と特異的に反応する抗体を産生しているかどうかは更なる検討を要する。又、DIF-【I】について以下の実験事実が明らかとなったDIF-【I】をDNA topoisomerase【I】と共存させるとDNA topoisomerase【I】活性が上昇するということである。DNA topoisomerase【I】はTF【II】(transcriptionfactor【II】)と同一であるという報告も出されており、DIF-【I】が広範囲に存在すること(マウス肝臓、胎児、膵臓組織)と考えあわせると新たな遺伝子発現の場においての役割を示唆する生化学的な活性として注目されるものである。又組織特異的な存在を示すDIF-【II】はDIF-【I】存在下、新たにDIF-【III】と呼べる活性因子を生成する。このDIF-【III】は、他の2因子とカラムクロマト上での挙動が異なり、DIF-【I】、【II】の複合体が形成されたものと考えられ、現在、その点について検討中である。
ウシ胚伸長培養系の確立および体外伸長胚の遺伝子機能解析

体外受精後14,17,20および23日の体外発生胚について、網羅的遺伝子解析を行い、胎盤特異的に発現する遺伝子が培養時間の経過とともに増加することを明らかにした。BMP4添加実験により、BMP4が胚や栄養膜細胞の分化を促進させる可能性を示した。また、体内発生胚の遺伝子発現量を体外培養胚と比較した。本研究では、ウシ伸長胚を安定的かつ高率に得られる培養系の確立および培養により伸長した胚について遺伝子発現解析等を行い、この時期に胚で起こる各細胞の分化や着床にむけた胚の準備状況を分子生物学的に解明することを目的としている。本年度は、高率にウシ胚が伸長する培養方法を検討するために、卵子を体外成熟、体外受精後、発生培地にウシ血清を5%添加して、その後の発生率と伸長率を調べた。また、体外受精後8日の孵化胚盤胞、11日の孵化胚盤胞、14日の4mmおよび6mmの伸長培養胚、15日の12mmの伸長培養胚および17日の9mmの伸長培養胚からRNAを抽出し、発生段階の指標となる分化マーカー遺伝子、CDX2、HANDl、IFNtauおよびPRPlについて遣伝子発現を調べた。発生培地に血清を添加したところ、胚盤胞形成率は、無血清区で13.9%、血清添加区で20.2%であり、血清添加区で有意に高かった。胚盤胞艀化率、伸長率には有意な差がみられず、伸長胚の平均生存日数も無血清区で19.2日、血清添加区で18.9日とほほ同じであった。伸長胚の平均の長さは、無血清区で4.7mm、血清添加区で6,4mmであった。これらの結果から、発生培地への血清の添加は、胚盤胞形成率と、伸長胚の長さを改善する効果のみられる可能性が示唆きれた。一方、体外伸長胚においで、胎盤の形成に役割を果たすCDX2、胎盤細胞の分化を促進するHANDl、ウシで妊娠初期に母体の妊娠黄体を継続させる役割を果たすIFNtauについては、体外受精後15および17日の伸長胚で、高い発現を示す強いバンドかみられるようになった。胎盤に分化した2核細胞特異的にみられるPRPlの発現を示すバンドは、調べたどの胚にもみられなかった。これらのことから体外伸長胚は、体内伸長胚と似た遺伝子発現を示すよいモデルになりうると考えられた。ウシ胚伸長培養系を改良するために、IVD101(裸化受精卵培養液)、SOF(合成卵管液)、dMEM(細胞培養培地)およびKOMEM(ES細胞培養培地)の4種類の培地に10%ウシ血清を添加して、胚盤胞の孵化率とその後の生存を調べた。さらにKOMEMに必須および非必須アミノ酸を添加して、22日目まで培養し、胚の大きさを比較した。また、体外伸長胚が正常に分化しているかどうか調べるために、体外受精後8、11および14日の孵化胚盤胞、14および17日の伸長培養胚および人工授精後14日の孵化胚盤胞、18日の体内伸長胚からRNAを抽出し、リアルタイムRT-PCR法により、ウシで妊娠初期に母体の黄体機能を維持するといわれるインターフェロンτ遺伝子の発現量を調べた。IVD101、SOF、dMEMおよびKOMEMに血清を添加した培地で胚盤胞を培養したところ、それぞれ12.5、8.2、5.8および42.5%が孵化したが、IVD101、SOFおよびdMEMでは孵化胚盤胞は体外受精後10日ですべてが退行した。これらの培地で培養した胚の平均生存日数は、7.13日(n=48)、7.22日(n=147)、7.17日(n=86)および9.33日(n=156)であり基礎培地としてKOMEMが適していると考えられた。体外受精後22日の胚の平均直径は、KOMEMに血清を添加した対照区(1.5±0.1mm)よりもアミノ酸添加区で培養した胚(2.2±0.17mm)で有意に大きかった(P<0.05)。これらの結果、今年度は伸長胚をより高率に、長く、大きくさせる培養系を開発することができた。インターフェロンτ遺伝子の発現は、体外受精後の培養日数の経過に伴い増加していく傾向がみられ、体内で発育した胚よりも発現量は少ないものの、体外培養胚においても、ある程度体内での発生・分化の過程を再現できていると考えられた。本年度は、これまでに検討したウシ胚伸長培養をさらに改良するために、KOMEMに10%ウシ血清を添加した基礎培地への、LIF、hFGFあるいはβ-メルカプトエタノール添加が胚の孵化率とその後の生存、胚の大きさ等に及ぼす影響を調べた。また、体外受精後14,17および20日の胚からRNAを抽出し、マイクロアレイ解析を行って、遺伝子発現の変化を調べた。培地にLIF、hFGF、あるいはこれらに加えてβ-メルカプトエタノールを添加したところ、胚の平均生存日数が有意に伸びた(対照vs LIF vshFGF vs

LIF+hFGF+β-メルカプトエタノール;9.3^a vs 10.8^b vs 11.7^b vs 19.7^c日)。また、LIF、bFGFに加え、β-メルカプトエタノールを添加したところ、胚盤胞孵化率が著しく向上した(対照vsLIF+hFGF+β-メルカプトエタノール;39.4%vs74.1%)。これらの培地で培養した胚について、11k自家作成オリゴヌクレオチドアレイで遺伝子発現量を解析したところ、妊娠維持に関わる遺伝子interferon tau (IFNtau)、未分化マーカーであるPOU class 5 homeobox 1(POU5F1 ; OCT3 ; OCT4)胎盤の単核細胞に発現する妊娠関連遺伝子pregnancy-associated glycoprotein 2, 11(PAG2, PAG11)のNormalized signa1量の胚の初育に伴う変化は、これまでvivo胚で確認されている変化と同様であった。また、培養20日のウシ胚を核染色したところ、胎盤特異的な二核細胞が認められた。これらのことから、体外培養胚においても、ある程度体内での発生・分化および着床過程を再現できる系を開発できたと考えられた。
BMP誘導性骨芽細胞分化の分子メカニズムの解明

本研究では、骨形成因子BMP2による骨形成の分子メカニズム、特に近年、BMP2により発現誘導されるOsterixによる骨形成機構を解明することを目的とした。前年度において、Osterixの発現はBMP2シグナルの下流において、骨芽細胞分化に必須であるRunx2依存的およびRunx2非依存的な二つの経路によって制御されていることを明らかにした。本年度では、さらに詳細なOsterix発現メカニズムを明らかにした。具体的には、Runx2遺伝子欠損細胞にアデノウイルスによりSmad1/4を過剰発現させるとBMP2により誘導されるOsterixの発現を増強された。さらに、Smad6の過剰発現によりBMP2に誘導されるOsterixの発現が抑制された。また、BMP2/SmadシグナルによりRunx2非依存的に発現誘導されるMsx2の過剰発現はRunx2遺伝子欠損細胞におけるOsterixの発現を誘導し、siRNAによるMsx2のノックダウンにより、BMP2により誘導されるOsterixの発現は抑制された。以上の結果より、BMP2がSmad1/4を介して、Msx2の発現を誘導することによってOsterixがRunx2非依存的に発現誘導されることが明らかになった。また、前年度にOsterixの機能として、未分化間葉系細胞の骨芽細胞分化を誘導することを明らかにしたが、本年度において、マイクロアレイ解析により、オステオカルシンのようにOsterixとRunx2とがともに発現誘導する分子が存在するが、それ以外に、Osterixでは発現誘導されないが、Runx2により発現誘導される分子、あるいはRunx2では発現誘導されないが、Osterixにより発現誘導される分子が存在することを明らかにした。まず、Osterixの骨芽細胞分化における役割を検討する目的で未分化間葉系細胞にOsterixを過剰発現した結果、Osterixの過剰発現により骨芽細胞分化マーカーのアルカリフォスファターゼ活性上昇およびオステオカルシンの発現を認めた。さらに、マウス頭蓋冠由来の初代骨芽細胞にOsterixを過剰発現させると、石灰化の指標であるアリザリンレッドにより染色された。次に、骨形成において主導的な役割を果たすRunx2とOsterixの関係を検討する目的で、Runx2欠損マウス由来の未分化間葉系細胞(Runx2欠損細胞)を用いた。Runx2欠損細胞にOsterixを過剰発現させた結果、アルカリフォスファターゼ活性が上昇し、オステォカルシンの発現が増加した。以上の結果により、Osterixは骨芽細胞分化を誘導し、石灰化を促進することが明らかとなった。また、Osterixによる骨芽細胞合化誘導はRunx2非存在下においても誘導されることが示唆された。次に、Osterixの発現を制御する分子を検討した結果、未分化間葉系細胞へのBMP2刺激あるいはRunx2の過剰発現によりOsterixの発現が誘導された。この結果より、OsterixはBMP2およびその下流で作用するRunx2により発現が誘導されていることが明らかとなった。興味深いことに、Runx2欠損細胞においてもBMP2刺激によりOsterixの発現が誘導された。以上の結果により、Osterixの発現はBMP2シグナルの下流において、Runx2依存的およびRunx2非依存的な二つの経路によって制御されていることが示唆された。
心因性発熱に関与する脳内部位の解明

ストレス性体温上昇反応(SIH)に、発熱反応と同様、淡蒼縫線核領域からのVGLUT3陽性交感神経プレモーターニューロンが関与するか検討した。心理的ストレスを受けたラットでは核心温が上昇し、VGLUT3陽性細胞でのFos(神経細胞活性化のマーカー)の発現が増加した。ジアゼパム(抗不安薬)で前処置するとSIHの程度、および淡蒼縫線核領域のFosの発現が抑制された。SIHには淡蒼縫線核領域からの交感神経プレモーターニューロンが関与すると考えられる。平成22年度は、(1)まず雄ウイスターラットに急性型心因性発熱モデルとして社会的敗北ストレス(後述)を1時間加えた時の体温変化を観察した。実験2週間前に、ウイスターラットの腹腔内にテレメトリー送信機を埋め込む手術を行ない、その後、テレメトリーシステムを用いて腹腔温度(Tc)を連続測定した。実験当目、雄ロングエバンスラット(400-500g)のケージの中にウイスターラット(200-250g)を入れ、ウイスターラットが明らかに服従的な行動を示した時点で、2匹を金網で仕切り、1時間後にホームケージに戻すというストレス(社会的敗北ストレス)を加えた。ウイスターラットのTcはストレス負荷中、約2°C上昇した。(2)次に別のウイスターラットを用いて上記と同様のストレスを負荷し、負荷終了15分後に4%パラフォルムアルデヒドを還流し脳を固定。厚さ30mmの脳切片を作成しFos染色を行った。ストレス群では、ストレス非負荷群に比べて淡蒼縫線核、大縫線核を中心とする吻側延髄縫線核領域(主要な発熱媒介物質であるプロスタグランディンE2を脳内投与した時に活性化する脳内部位)に有意に多くのFos陽性細胞が発現していた。(3)さらに、社会的敗北ストレスを加える1時間前にジアゼパム4mg/kg腹腔内投与した群とvehicleを投与した群とで、Tcの変化と吻側延髄縫線核領域でのFos陽性細胞の数を比較した。ジアゼパム群ではvehicle群に比べて、ストレス性Tc上昇と吻側延髄縫線核領域でのFos陽性細胞の数が有意に抑制された。(4)社会的敗北ストレスを加える1時間前にインドメタシン5mg/kg腹腔内投与したが、Tc上昇は抑制されなかった。したがって、発熱と社会的敗北ストレスによるTc上昇とでは機序が異なるものの、共通して吻側延髄縫線核領域を活性化することがわかった。平成23年度は、(1)心理的ストレス性高体温反応に交感神経活動の亢進、次いでβ3受容体を介した褐色脂肪組織の活性化という機序が関与するか、(2)心理的ストレスが褐色脂肪組織を活性化させる吻側延髄縫線核領域のプレモーターニューロンを活性化させるかどうかを検討した。具体的には(1)体温を測定するための発信器を体内に埋め込んだウイスターラットを、ロングエバンスラットのケージに1時間(ロングエバンスラットから攻撃を受けたら、ついたてで仕切る)入れるという社会的敗北ストレスをウイスターラットに加えたところ、ウイスターラットの体温は約2°C上昇した。この体温上昇はジアゼパム4mg/kg、またSR59230A 5mg/kg(β3受容体アンタゴニスト)の腹腔内前投与によって有意に抑制された。(2)次に別のラットを用いて、社会的敗北ストレスを負荷したラットの脳を還流固定し、厚さ30μmの切片を作成。Fos(神経活動のマーカー)およびvesicular glutamatetransporter 3(VGLUT3、褐色脂肪組織に投射する交感神経プレモーターニューロンのマーカーで、感染症による発熱時に活性化する)染色を行なった。ストレス群では淡蒼縫線核を中心とする延髄縫線核領域におけるVGLUT3陽性細胞の50-70%にFosが発現したが、diazepam処置群では10%前後と有意に少なかった。これらのことから、ストレス性体温上昇反応には、感染症による発熱と同様、延髄縫線核領域の交感神経プレモーターニューロン-交感神経-β3受容体を介した褐色脂肪組織の活性化が重要な役割を演じることが示唆された。心理的ストレス性高体温反応に関連して活性化する吻側延髄縫線核領域より中枢側の脳内部位を検討し、感染による発熱モデルによって活性化する脳内部位と比較した。具体的には雄ウイスターラットを用いて(1)vehicle/stress群:vehicle腹腔内投与後、社会的敗北ストレスに1時間暴露する(ロングエバンスラットのケージに入れ、攻撃を受けたら、ついたてで仕切る)、(2)diazepam/stress群:ジアゼパム4 mg/kg腹腔内投与後、社会的敗北ストレスに暴露する、(3)vehicle /sham stress群、(4) diazepam/sham

stress群、(5) lipopolysaccharide (LPS) 5&#61549;g/kg投与群の間で、Fos(神経活動のマーカー)の発現を比較した。社会的敗北ストレスに暴露されたラットは約2°Cの体温上昇を生じたが、この体温上昇はdiazepamの前処置により減弱した。Fosの発現がストレスによって増加し、diazepamの前処置により減弱した部位には、下辺縁皮質、島皮質、分界条床核、側坐核、内側視索前野、視床下部背内側部(DMH)、脳弓周囲野、背側縫線核、中脳水道周囲灰白質などがあった。その一方でLPSによる発熱時にFosが顕著に発現する部位のうち、終板器官と正中視索前核では、社会的敗北ストレスやdiazepamによりFosの発現は変化しなかった。したがってストレス性体温上昇には、(1)末梢組織での炎症性情報を中枢に伝える終板器官や正中視索前核は関与しないこと、(2)情動、ストレス、覚醒、自律神経機能に関与する多くの脳内部位が関与し、特に、(3)感染性発熱を伝えるDMH(DMHから吻側延髄縫線核領域に興奮性の神経が投射)は、心理的ストレスによる体温上昇にも重要な役割を果たす可能性が示唆された。吻側延髄縫線核領域より上位の脳部位でのFos発現部位については、今回の報告書では言及していないが、すでに染色は完了しており、現在、解析中である。慢性ストレス負荷群での検討はまだ行えていない。24年度が最終年度であるため、記入しない。これまでの研究でストレス性高体温反応には、感染症に伴う発熱反応と同様、吻側延髄縫線核領域交感神経プレモーターニューロン-交感神経-褐色脂肪組織での非ふるえ熱産生が重要であることを示した。今後は、(1)吻側延髄縫線核領域に投射する、より上位の脳部位の関与について検討を進めてゆくと同時に、(2)急性ストレス性高体温反応だけでなく、慢性ストレス状況による慢性高体温反応にも、この機序が関与するかどうかについて検討を進めてゆく。
贈与税および住宅ローン負担が生前贈与額に与える影響についての実証分析

親世代の贈与を通じた住宅取得支援は子世代のマイホーム取得の夢の実現に向けて大きな役割を果たすと考えられる。それでは、政府からの住宅取得支援が期待できる場合においても、親世代は子世代に対して追加的な資金を提供するだろうか。そこで本研究は、政府の住宅取得支援策である住宅ローン減税および贈与税減税をケーススタディとして、これらのインセンティブが親世代の贈与行動にどのような影響を及ぼすかを実証的に検証した。検証に用いたデータは2000年代に都市圏に一戸建て住宅を購入した家計の個票データ(約24,000家計)である。分析の結果、住宅ローン減税は贈与を受け取る子世代の家計数を減少させるだけでなく、子世代が受け取る贈与額も減少させる傾向が示された。一方、贈与税減税は、贈与を受け取る子世代の家計数を増加させ、かつ子世代が受け取る贈与額も増加させる効果を持ち合わせていることが示された。親世代の贈与を通じた住宅取得支援は子世代のマイホーム取得の夢の実現に向けて大きな役割を果たすと考えられる.それでは,政府からの住宅取得支援が期待できる場合においても,親世代は子世代に対して追加的な資金を提供するだろうか.そこで本研究は,政府の住宅取得支援策である住宅ローンの税控除と贈与税緩和をケーススタディとして,これらのインセンティブが親世代の贈与行動にどのような影響を及ぼすかを実証的に検証した.検証に用いたデータは2000年代に都市圏に一戸建て住宅を購入した家計の個票データ(約24,000家計)である.分析の結果,住宅ローンの税控除は贈与を受け取る子世代の家計数を減少させるだけでなく,子世代が受け取る贈与額も減少させる傾向が示された.特に,控除額の100万円増加は,贈与額を95万7千円減少させる結果を得た.このことは,住宅ローンの税控除は親の贈与を押しのける効果を持ち合わせると言えよう.一方,贈与税率の1%の緩和は,子世代が親世代から受け取る贈与額を16.7万円増加させる傾向が示された.このことは,贈与税率の低下は親世代から受け取った税引き後の贈与額を増やすだけでなく,親世代から受け取る税引き前の贈与額も増やすことを意味する.親世代の贈与を通じた住宅取得支援は子世代のマイホーム取得の夢の実現に向けて大きな役割を果たすと考えられる。政府はここ数年景気刺激策の一環として住宅取得資金の贈与に対する贈与税率を緩和し、生前贈与の促進を通じて住宅消費の拡大を目指している。しかし、本当にこの政策は親からの生前贈与の増加に貢献しているだろうか。本年度は、贈与額と贈与税率の関係について、まず理論的に考え、その後実際のデータを用いて、その関係を実証的に検証した。理論的に考えると、贈与税率の変化が親の贈与額に与える影響は確定しない。贈与税率が低下すると、子は有利になった贈与をより多く求めるようになる。親はその期待に応えようと、贈与額を増やそうとするだろう。しかし一方で、贈与税率の低下は、子の所得の増加と同じ効果を同時にもたらす。利他的な親は一般に所得が低い子を助けようとする。このため、先とは逆に贈与税率の低下は贈与額を減らす働きも持ち合わせる。以上から、贈与税率の緩和は必ずしも贈与を増やすとは限らない。さらには、贈与税率の緩和により、所得改善効果が大きくなると、贈与税率の緩和がむしろ贈与額の減少を招くというクラウディング・アウト現象を引き起こす可能性もある。そこで、本研究では、「戸建て注文住宅の顧客実態調査」の2001年から2008年までの個票データ(サンプル数は8年間で22,387)を用いて、贈与税率の低下が親の贈与額に与える影響を実証的に検証した。この調査は、住宅生産団体連合会が東京圏、名古屋圏、大阪圏、地方都市圏の戸建て住宅メーカーに調査票を配布し、その顧客に対して贈与額を尋ねている。したがって、この調査の個票データから本研究が注目する変数を手に入れることができる。また、2001年から2008年の時期は贈与税率が制度変更を通じて緩和された時期と一致する。実証研究の結果、贈与税率の緩和が贈与額に与える影響は確定しないことが確認された。「研究実績概要」で述べたデータのサンプルを用いて、贈与額関数を推定した。推定法については次の点を考慮した。第一に、贈与については贈与を与えない親も観察される。このとこを考慮して、贈与額関数はトービット型の推定を行った。第二に、贈与税の実効税率は親が提供する贈与額に依存するため、内生性がある。そこで、観測時期および観測地点毎の平均的な贈与税率を計算し、平均贈与税率を操作変数として用いて実効税率を推定し、内生問題を解決するように努めた。

贈与税率同様に、住宅ローン減税や住宅ローン金利低下も子の住宅消費額を変化させるため、親の生前贈与額に影響を与えると思われる。そこで、贈与税率の代わりに子の住宅ローンの負担に関わる変数である住宅ローン減税の規模や住宅ローンの金利が親の贈与額に与える影響を今年度同様に理論的に実証的に分析する。国際学会参加費、および英語校閲費として主に使用する計画である。
ムスカリン受容体作動性陽イオンチャネルとその調節系の分子実体解明

副交感神経支配の効果器の典型である毛様体筋において、受容体作動性非選択性陽イオンチャネル(NSCC)の分子候補としてのTRPC(4種)とOrai1、およびそれらの調節に関与する可能性のある分子としてのG_(q/11)、STIM1、RhoA/kinase、rianodine受容体などの存在と細胞内局在を明らかにした。さらに、それらの機能的意義を検討した。本研究は、副交感神経支配の効果器、特に毛様体筋や分泌腺細胞における、ムスカリン受容体作動性非選択性陽イオンチャネルと、その活性化に至る信号伝達メ力ニズムの分子実体を解明することを目的としている。初年度の研究で次のような成果を得た:1.培養細胞から共同研究者(宮津)が開発した方法によりsemi-intact形質膜標本を作成、免疫染色法により細胞膜において、M_3型ムスカリン受容体、G_<q/11>、およびTRPサブタイプが高密度(>1個/μm^2)に分布することを実証した。2. G_<q/11>のαサブユニットに特異的に結合し、その信号伝達能を失活させることが知られている細菌由来毒素YM-254890を用いた実験により、毛様体筋においてはムスカリン受容体からの信号が専らG_<q/11>を経由して下流に伝えられることを強く示唆する知見を得た。3. M_3受容体からの信号は、従来知られている、細胞内貯蔵部位からの遊離と非選択性陽イオンチャネルを介する流入に伴う細胞内Ca^<2+>濃度上昇に加え、RhoA/Rho kinase系を介する収縮蛋白系のCa^<2+>感受性の上昇も引き起こすことを示した。今後、RNAiによる信号伝達系蛋白ノックダウンや、TRPC分子の細胞外ドメインを認識する抗体の細胞外投与によるチャネル活性の抑制などを試み、さらに毛様体筋における信号伝達経路の実体に迫る知見が得られるよう努めたい。本研究は、副交感神経支配の効果器、特に毛様体筋や分泌腺細胞における、ムスカリン受容体作動性非選択性陽イオンチャネルと、その活性化に至る信号伝達メカニズムの分子実体を解明することを目的として実施した。2年間の研究で次のような成果を得た。1.培養細胞から共同研究者(宮津)が開発した方法によりsemi-htact形質膜標本を作成、免疫染色法により細胞膜において、H_3型ムスカリン受容体、G_<q/11>、およびTRPサブタイプが高密度(>1個/μm^2)に分布することを実証した。2. G_<q/11>のαサブユニットに特異的に結合し、その信号伝達能を失活させることが知られている細菌由来毒素YM-254890を用いた実験により、毛様体筋においてはムスカリン受容体からの信号が専らG_<q/11>を経由して下流に伝えられることを確定的に示した。4.毛様体筋において持続的M_3受容体刺激によりtonicな収縮が起る時には、いわゆる容量性Ca^<2+>流入経路(SOC)が活性化されることを示した。SOCの分子実体として注目されている、STIM1およびOrai1蛋白が筋細胞膜/細胞内小胞体膜領域に多く発現していることを証明した。
角膜疾患におけるapolipoprotein Jの関与に関する研究

apolipoproteinJ(apoJ,clusterin)は種々の粘膜上皮、とくに角膜上皮で多くで産生されている糖蛋白であり、細胞外スカベンジャーなど多機能性が提唱されている物質である。本研究では、角結膜上皮疾患におけるapoJの蛋白の発現、apoJのレセプターであるgp330の発現、涙液および前房水中のapoJ濃度の測定を行い、apoJと眼表面疾患との関連性について考察した。その結果、瘢痕性角結膜上皮症であるStevens-Johnson症候群において、分化異常(角化)を示した結膜上皮でapoJの発現が著しく減弱していること、膠様滴状角膜変性症や格子状角膜変性症などの遺伝性角膜アミロイドーシスにおいて、アミロイド沈着部位にapoJが局在していることが判明した。また、正常人の標本で、gp330は輪部上皮に局在していたが、角膜上皮、結膜上皮には局在していなかった。涙液中のapoJ濃度の測定をELISA法で行ったが、涙液中に存在するなんらかの物質がapoJに結合しており、測定不可能であった。一方、前房水中のapoJの濃度は725.3±519.6となり、前房水中に多く存在している蛋白の一つであることが明らかとなった。以上の結果より、apoJは眼表面上皮の正常分化に必須の蛋白であることが示唆された。また、apoJは脳アミロイドーシスにおけるのと同様に、pathologic chaperoneとして、角膜アミロイドーシスの病態形成に関わっていることが推測された。apoJは種々の眼表面疾患に関わっており、眼表面疾患の治療の応用できる可能性が考えられた。apolipoprotein J(apoJ)は種々の粘膜上皮で産生され,細胞外のスカベンジャー機能など多機能性が提唱されている物質である。我々はこれまでに,apoJが角膜上皮で最も発現頻度の高い遺伝子産物であること,本物質が眼表面上皮で産生され眼表面上皮内に局在していることを示した。本研究では,角結膜上皮の分化異常および角膜アミロイドーシスとapoJの関連性について検討した。対象は角結膜上皮の病的角化を示すStevens-Johnson症候群,遺伝性角膜アミロイドーシス(膠様滴状角膜変性症や格子状角膜変性症)とし,健常人組織を対照とした。手術時に採取した眼組織を凍切片にして,apoJ蛋白の局在を免疫組織化学を用いて検討した。健常人において,角結膜上皮層の表層部位にapoJの局在がみられたが,角化した表皮層ではapoJの局在を認めなかった。病的角化したStevens-Johnson症候群の結膜上皮層では,apoJの局在が著しく減少していた。また,上記の角膜アミロイドーシスにおいて,角膜内のアミロイド沈着部位に一致してapoJの局在を認めた。以上の結果から,apoJは粘膜上皮を非角化状態に維持するために必須である因子である可能性が考えられた。また,脳アミロイドーシスにおいて提唱されている説と同様に,遺伝性角膜アミロイドーシスにおいても,apoJはアミロイド沈着のキャリアプロテインとして働いていることが示唆された。
青年期の聴覚障害者を対象とした障害認識を促すための指導法及び教材の開発と評価

本研究は、青年期の聴覚障害学生を対象とした「聴覚障害学」の授業を通して、望ましい障害認識を促すための新たな指導法と教材を開発し、実践の中で評価検討を加えた上で、他の教育機関にも普及させていくことを目的として行ったものである。この研究を通して次のような成果を得ることができた。1障害認識を促すために行ってきた「聴覚障害学」の授業内容、授業活動の要点、留意点、使用する教材、学生に提示するスライドなどを整理し、あるべき指導法と教材の姿を提案するための資料を作成した。2特に次の2つの課題について、指導法と教材に対する評価を詳細に行った。(1)過去から現在に至る聴覚障害者の状況を把握させた上で聴覚障害の理解を促すことを意図した授業を計画し、そこで用いる教材を構成した。それに対する学生の評価を求めたところ、選択した教材が障害認識を促す上で有効であることが明らかになった。(2)同じ障害を持つ卒業生の意見を教材として使うことについて学生に評価を求めた。その結果、先輩としての卒業生の発言が学生の心を播さぶり、刺激を与え、障害認識を深めるために有効に働くことが明らかになった。3「聴覚障害学」の授業全体に対する学生の評価について、「授業に関するアンケート調査」の結果を検討した。学生からは極めて高い評価を得ており、障害認識を促すための指導法及び教材の開発の作業がほぼ所期の目的を達していることが明らかになった。4研究の成果を普及させるために研究成果報告書を作成し、関係機関に送付した。本研究は、青年期の聴覚障害学生を対象とした「聴覚障害学」の授業を通して、望ましい障害認識を促すための新たな指導法と教材を開発し、実践の中で評価検討を加えた上で、他の教育機関にも普及させていくことを目的として行っているものである。本年度は研究の初年度として、聴覚障害学生に障害認識を促す授業のための教材の整備とそれを用いた指導法の構築を行うために、次の作業を行った。1これまでに聴覚障害学生が書いた「自分史」を通覧した結果、障害認識に至る過程で障害に関わる図書や資料、同じ障害を持つ他者からの情報が不足していることが明らかになった。2本学を卒業して社会で活躍している聴覚障害者の体験発表をビデオに収録し、字幕を挿入した後に編集してDVDに記録した。その映像を学生に視聴させ、他者の体験が障害の認識に役立つかどうかの評価を行った。現在そのデータを分析中である。3これまでに収集してきた聴覚障害者関係のテレビ番組、映像資料等を整理しつつある。その中から障害認識を促す指導の教材として使用できる資料を選択し、指導プログラムの一部を構成した。それに基づく授業を実際に試行し、用いた教材の有効性について検証を行った。現在そのデータを分析中であるが、効果的な指導法を構成する手がかりが得られつつある。4聴覚障害者及び関係者がこれまでに発表した図書、雑誌、新聞の中から障害認識に関係する記事、文章などを抽出して整理し、データベース化する作業を行ってきたが、来年度も継続する予定である。今年度は2年計画で行った研究の2年目にあたり、次のような成果を得ることができた。

それに対する学生の評価を求めたところ、選択した教材が障害認識を促す上で有効であることが明らかになった。(2)同じ障害を持つ卒業生の意見を教材として使うことについて学生に評価を求めた。その結果、先輩としての卒業生の発言が学生の心を揺さぶり、刺激を与え、障害認識を深めるために有効に働くことが明らかになった。3「聴覚障害学」の授業全体に対する学生の評価について、「授業に関するアンケート調査」の結果を検討した。学生からは極めて高い評価を得ており、障害認識を促すための指導法及び教材の開発の作業がほぼ所期の目的を達していることが明らかになった。4研究の成果を普及させるために研究成果報告書を作成し、関係機関に送付した。
中世聖徳太子絵伝の図様展開に関する調査研究

中世の聖徳太子絵伝は、奈良近辺を中心とした聖徳太子所縁の寺院系、浄土真宗系というように図様をいくつかのグループに分けられる。本研究ではそれらを、高精細デジタル撮影し、画像データを取得。事蹟場面ごとに各作例を分類しデータベースを作成して、それをもとに図様の比較分類を行った。これにより、細部の詳細な比較を行うことが可能となり、聖徳太子絵伝の図様の伝播、継承といった展開の様相のみならず、他の説話画、仏画、絵巻作品なども含めた絵画諸作例との比較検討等に有益な基礎データを整備できた。25年度は、昨年度に調査を行った大蔵寺所蔵の二幅の作例と図様が類似する、米国・メトロポリタン美術館所蔵作品の調査を行い、同館調査の折に中世仏画や中世説話画の関連作例として「迎接曼荼羅一幅鎌倉時代1300年頃」や「春日曼荼羅一幅鎌倉時代13世紀」などの調査を進めることができた。また、聖徳太子伝諸本のうち、活字化されていない影印本を中心にして、太子伝のテキストのデータ化を昨年度に引き続き進めた。成果の発表としては、本研究が対象とする作品のうち、法隆寺献納宝物聖徳太子絵伝(国宝本)と(四幅本)に関しては、協力者の一人である阿部泰郎氏(名古屋大学教授)と共に、「法隆寺の聖徳太子伝を絵説く二つの太子絵伝障子絵伝四幅絵伝絵解きの試み」と題して、その成果の一部を沖松、土屋が講演会(於・いかるがホール)で発表した。また、四幅本については『法隆寺献納宝物特別調査概報34』「聖徳太子絵伝(四幅本)2」にその成果の一部を盛り込んで刊行した。24年度は、当館所蔵の法隆寺献納宝物4幅本(重文)をはじめ、大阪・四天王寺6幅本、奈良国立博物館本、奈良・大蔵寺本の肉眼観察及びデジタル撮影を伴う調査を実施するとともに、関連調査として太子絵伝以外の中世仏画等の調査も行った。法隆寺献納宝物4幅本に関しては、その調査成果の一部を当館刊行物「法隆寺献納宝物特別調査概報33聖徳太子絵伝(4幅本)1」に反映させて発表した。また、太子伝の諸本間のテクストをデータ化してパソコン上で検索・比較検討できるよう、データ入力作業を行った。この作業は25年度も継続となるが、後々に調査画像の図様を場面ごとに検索・比較検討する上で重要な基礎作業である。それに関連した今後の課題として、太子絵伝以外の掛幅形式の縁起絵や伝絵の全図・場面図も既存の図版をデータ化して集成し、調査時や調査が進んた後の総合的な検討の際に利用できるように準備を進めている。本研究は、日本の古代中世における大画面説話画の中でも、主題として比較的早い時期から成立し、各時代を通して多く描かれた聖徳太子絵伝の図様展開に関する研究である。40件弱の現存作例について網羅的に詳細な肉眼観察とデジタル撮影を実施し、社会的・文化的・宗教的動向、及び他の説話画や仏教絵画の制作状況などを踏まえた上で、事蹟場面の選択やそれらを表現する上での図様・表現技法の選択がどのようになされていたのかといった制作にかかわる具体相を探ろうとするものである。平成24年度から継続して行っている3年度目の平成26年度は、特別展「栄西と建仁寺」出品作品のうち中世仏画として関連する作品について調査を行い(2014年4月)、東博内で川合玉堂氏旧蔵の太子絵伝3幅について調査を行った(2014年10月上旬)。また中近世仏画の作例調査として、能登半島の結集寺院である岩倉寺や天王寺で奥能登地域の未調査の中近世仏画の調査を行った(2014年10月24日・25日)。「日本国宝展」に出品の作品についてハンディデジタルマイクロスコープで絹目の拡大写真を撮影した。(2014年12月10日)能登地域での寺院における調査では、一定空間に点在しながら行事をとおしてつながりのある寺院間での主題や図像の共通性などの傾向の一端が確認できた。収蔵品の3幅本太子絵伝の調査では、本図のみ見られる図様の詳細について確認でき、分かりやすい場面解説パネルや作品解説の作成をすることができた。また、絹目の拡大写真を集めることで、時代や制作環境の判断材料となる基礎情報の蓄積をすることができた。27年度は、6月に名古屋大・阿部泰郎教授の文化遺産テクスト学研究センター主催の井波絵解きフォーラムに共催として参加、沖松が井波総合文化センターメモリアルホールで「聖徳太子絵伝入門」、土屋が井波別院瑞泉寺で「聖徳太子絵伝鑑賞の場」と題して発表を行った。調査対象のうち茨城・妙安寺本について、これまで調査先での機動性を優先して35ミリ判相当のデジタルカメラで撮影していたものを、博物館の写真専門職員の協力を得て、博物館のデジタルアーカイブで使用している大判カメラ相当の8000万画素デジタルカメラ機材を用いての撮影も並行して実施した。それにより、より精度の高い画像を蓄積することができ、将来博物館で公開する上で、博物館の他のデジタル高精細画像との質的差をなくし、公開用データベース構築への弾みとすることができた。また、沖松が所属する博物館と上海博物館との学術交流での調査の中で、本科研の関連調査ということで衡山での実地調査を行い実際の山容や、絵伝に登場する三塔などを確認し、絵伝における衡山の描写、図様について考察するうえでの資料収集を行った。