hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
微生物による抗酸化剤及びトコフェロール相乗剤の生産とその安全性

1.糸状菌約240株についてスクリーニングした.麦芽培地で静置培養(24°C, 23週間)した菌体及び濾液の有機溶媒抽出物のトコフェロール(Toc)との相乗効果をラードを基質とするAOMで検討した.活性の高い菌株については大量培養し,抽出物はシリカゲルクロマト,ゲル濾過, TLC等にかけ,有効成分を単離,同定した.抽出物の中には,精製過程で相乗効果が認められなくなるものもあった.Penicillium communeの生産する抗酸化剤はgentisyl aicohol(AOM約160時間, 0.025%)であった.しかし, Tocとの相乗効果は示さなかった.Penicillium sp.の生産する2種の有効成分はisoherqueinone及びそのAr-HがAr-OHに置換された物質であり,後者の抗酸化性並びに相乗効果が顕著であった.別のPenicillium sp.の生産する物質としてcitrinin(AOM約210時間, 0.1%)を単離したが, Tocとの相乗効果は顕著でなっかた.未同定の菌株の生産する有効成分はxanthone系の化合物で顕著な効果(AOM約310時間, 0.1%;相乗効果のときのAOM700時間)を示し, Tocの酸化分解を著しく抑制した.その他の有効な菌株についても検討したが,現在まで構造決定に至っていない.2.放線菌約170株についてスクリーニングした.振盪培養(28°C, 4日間)した濾液の酢酸エチル抽出物についてはTocとの相乗効果をラードを基質とする重量法で試験した.比較的高い相乗効果を示す菌株が認められたが,代謝産物の生産量が著しく少ないため,培養条件の検討やmono sporeの評価などを行ったのち,有効成分を単離,同定したい.1.糸状菌約240株についてスクリーニングした.麦芽培地で静置培養(24°C, 23週間)した菌体及び濾液の有機溶媒抽出物のトコフェロール(Toc)との相乗効果をラードを基質とするAOMで検討した.活性の高い菌株については大量培養し,抽出物はシリカゲルクロマト,ゲル濾過, TLC等にかけ,有効成分を単離,同定した.抽出物の中には,精製過程で相乗効果が認められなくなるものもあった.Penicillium communeの生産する抗酸化剤はgentisyl aicohol(AOM約160時間, 0.025%)であった.しかし, Tocとの相乗効果は示さなかった.Penicillium sp.の生産する2種の有効成分はisoherqueinone及びそのAr-HがAr-OHに置換された物質であり,後者の抗酸化性並びに相乗効果が顕著であった.別のPenicillium sp.の生産する物質としてcitrinin(AOM約210時間, 0.1%)を単離したが, Tocとの相乗効果は顕著でなっかた.未同定の菌株の生産する有効成分はxanthone系の化合物で顕著な効果(AOM約310時間, 0.1%;相乗効果のときのAOM700時間)を示し, Tocの酸化分解を著しく抑制した.その他の有効な菌株についても検討したが,現在まで構造決定に至っていない.2.放線菌約170株についてスクリーニングした.振盪培養(28°C, 4日間)した濾液の酢酸エチル抽出物についてはTocとの相乗効果をラードを基質とする重量法で試験した.比較的高い相乗効果を示す菌株が認められたが,代謝産物の生産量が著しく少ないため,培養条件の検討やmono sporeの評価などを行ったのち,有効成分を単離,同定したい.1.糸状菌(保存株及び野生株)約100株についてスクリーニングした。麦芽培地で静置培養(24゚C,23週間)した菌体及び濾液の有機溶媒抽出物のトコフエロール(Toc)との相乗効果を、ラードを基質とするAOMで検討した。活性の高い菌株(約10株)については麦芽培地で大量培養し、抽出物はシリカゲルクロマト,TLC,ゲル濾過等にかけて有効成分を単離,同定した。Penicillium communeの生産する有効成分の元素組成は【C_7】【H_8】【O_3】で機器分析並びに合成品とのスペクトル比較の結果、gevtisyl alcoholと同定した。本物質の抗酸化性は、ラードに0.025%添加した時AOM約160時間であったが、Pocとの相乗効果は余り認められなかった。Penicillium sp.の生産する2種の有効成分は、P.herqueiの代謝産物であるherqueinone誘導体であった。また、別のPenicillium sp.の生産する物質としてcitrininを単離した。本物質の抗酸化性は、ラード0.1%添加でAOM約210時間であったが、Tocとの相乗効果は余り顕著でなかった。顕著な相乗効果を示すxanthone系化合物を未同定株より単離したが、現在構造を検討中である。本物質の抗酸化性はラード0.1%添加でAOM約310時間,Toc(0.04%)との相乗効果においてAOM約700時間であった。2.放線菌(野生株)約80株についてスクリーニングした。振盪培養(28゚C,4日間)した濾液の酢酸エチル抽出物についてTocとの相乗効果を、リノール酸メチルを用いる重量法とAOM(ラード)で試験したが、数種の菌株について有効性が認められたものの、糸状菌と比較して著しく弱かった。

3.Salmonellatyphimurium TA98,TA100を用い、+S-9,-S-9系で変異原性試験を行った。gentisylalcoholは強い抗菌力を示した。cotrininをはじめ、その他の単離した物質について、プレート当り11000μgの範囲で変異原性は認められなかった。
極低出生体重児におけるカンガルーケアの効果に関する行動研究

カンガルーケアは、赤ちゃんを母親の裸の胸に抱いて皮膚と皮膚を接触させる育児方法で、濃密な母子接触により、極低出生体重児の生存率を高め、養育遺棄を減らす効果があると言われている。NICUにおいてカンガルーケア(KC)を体験した極低出生体重児とその母親(KC群)、体験しなかった極低出生体重児とその母親(対照群)の行動を、保護者の同意を得た上で、修正1歳半の発達検査場面でVTRに記録し、サンプリング間隔5秒のワンゼロサンプリング法を用いて定量的な分析を行った。35組の母子については、さらに長期の予後を調べるために修正3歳の時点での観察も行った。1歳半に関しては両群合わせて84例のサンプルが得られたが、児の体調や同伴者の有無など条件をそろえると、分析可能なのはKC群30組と対照群31組であった。分析の結果、KC群の母親は、対照群に比べ、児への語りかけの量に差はなかったが、内容では、共鳴・共感の発話が多く(P<0.005)、否定や疑問の発話が少ない(P<0.005)という特徴の他に、笑いが多く見られた(P<0.01)。一方、検査場面で検査の実施が困難になるほどの泣きは、対照群では6名(19.4%)見られたが、KC群には見られず、逆に、微笑みが多く見られた(P<0.05)。さらに、1歳半と3歳のデータが共に得られた母子10組について、年齢間で相関をとると、母親の行動の全てが有意(P<0.05)あるいは有意に近い(P<0.1)正の相関を示した。本研究の結果は、カンガルーケアが、1歳半の時点での母子関係を促進する効果があることを実証的に示している。また、その効果は3歳になっても維持される可能性が示された。さらに、本研究の結果は、生後初期のカンガルーケアが、母親の受容的・共感的な応答性を高めることにより、安定した母子の愛着形成に寄与する可能性を示唆するものと考える。NICUにおいてカンガルーケアを体験した極低出生体重児とその母親(カンガルーケア実施群:以後KC群と呼ぶ)、体験しなかった極低出生体重児とその母親(対照群)の行動を、修正年齢1歳半の定期検診の発達検査場面でVTRに記録し、サンプリング間隔5秒のワンゼロサンプリング法を用いて定量的な分析を行った。現時点でKC群18例対照群39例のサンプルが得られており、そのうち、KC群11組と対照群18組について予備的分析を行った。その結果、KC群は対照群に比べ、検査場面で激しい泣きが少なく、発声や微笑みを多く示し(P=0.05、P=0.1)、一方、母親に関しては、笑いや児への語りかけが多く(P<0.05,P<0.1)、語りかけの内容は、共鳴・共感の発話が多く(P<0.05)、否定・疑問の発話が少ない(P<0.05)などの特徴が見られた。母親の行動指標を用いて判別分析を行ったところ、分類の正答率は全体で92%に達し、行動上からカンガルーケアの効果が判別可能であることが示された。

カンガルーケアは、赤ちゃんを母親の裸の胸に抱いて皮膚と皮膚を接触させる育児方法で、濃密な母子接触により、極低出生体重児の生存率を高め、養育遺棄を減らす効果があると言われている。本研究の結果はNICUにおけるカンガルーケアの体験が、1歳半の時点での母子関係を促進する効果があることを実証的に示すものとして注目に値する。本研究の結果は、生後初期のカンガルーケアが、母親の受容的・共感的な応答性を高めることにより、安定した母子の愛着形成に寄与する可能性を示唆するものと考える。なお、予め文書にて保護者に研究の目的と方法について説明し、協力を依頼して、保護者の同意が得られた場合にのみ観察を行った。観察にはSONYのビデオカメラを用い、画像をパソコンにとりこんで編集し、データ分析にSTATISTICA(統計ソフト)を用いた。昨年度に引き続き、NICUにおいてカンガルーケア(KC)を体験した極低出生体重児とその母親(KC群)、体験しなかった極低出生体重児とその母親(対照群)の行動を、保護者の同意を得た上で、修正年齢1歳半の発達検査場面でVTRに記録し、サンプリング間隔5秒のワンゼロサンプリング法を用いて定量的な分析を行った。35組の母子については、さらに長期の予後を調べるために修正年齢3歳の時点での観察も行った。1歳半に関しては両群合わせて84例のサンプルが得られたが、児の体調や同伴者の有無など条件をそろえると、分析可能なのはKC群30組と対照群31組であった。分析の結果、KC群の母親は、対照群に比べ、児への語りかけの量に差はなかったが、内容では、共鳴・共感の発話が多く(p<0.005)、否定や疑問の発話が少ない(p<0.005)などの特徴が見られた。またKC群の母親には笑いが多く見られた(p<0.01)。一方、KC群の児は、検査場面で泣くことが少なく(p<0.05)、微笑みを多く示した(p<0.05)。さらに、1歳半と3歳データが共に得られた母子は合わせて10組であったが、年齢間で相関をとると、母親の行動の全てが有意(p<0.05)あるいは有意に近い(p<0.1)正の相関を示した。カンガルーケアは、赤ちゃんを母親の裸の胸に抱いて皮膚と皮膚を接触させる育児方法で、濃密な接触により、極低出生体重児の生存率を高め、養育遺棄を減らす効果があると言われているが、本研究の結果は、カンガルーケアが、1歳半の時点での母子関係を促進する効果があることを実証的に示している。また、その効果は3歳になっても維持される可能性が示された。さらに、本研究の結果は、生後初期のカンガルーケアが、母親の受容的・共感的な応答性を高めることにより、安定した母子の愛着形成に寄与する可能性を示唆するものと考える。
細胞分裂タンパク質集合体のダイナミクス解明のための超分子リクルート技術の開拓

バクテリア細胞分裂において重要な役割を担うFtsZは、細胞膜上で集合化してリング状の構造体(Z-リング)を形成する。このFtsZはGTPの加水分解に伴い、集合構造の曲率を変化させながらZ-リングの収縮と細胞膜の分断を誘導する。このZ-リングが起点となりタンパク質群が集合化し、細胞分裂が進行する。これらの作用機序解明の点からも、FtsZの集合構造とその動的ダイナミクスは興味深い。本研究では、超分子的な相互作用を誘起するアダプタータンパク質を添加することでFtsZ集合体に外部から摂動を与え、その構造に変化を与える系を構築した。本研究は、FtsZタンパク質集合体が作り出す膜分断の『力』の発生原理の解明を目指す。細胞分裂を制御するFtsZタンパク質集合体の動的構造変化を、超分子リクルート技術により変調可能な系を創製し、溶液中における集合化挙動をAFMにより明らかにする。次に、FtsZタンパク質集合体をリポソーム二重膜上にアンカリングして、超分子リクルートがFtsZの集合化挙動とリポソーム二重膜のダイナミックな構造変化に及ぼす効果を明らかにする。本年度は、超分子リクルート技術のためのFtsZ集合体の調製と溶液状態における集合体の構造解析を実施した。FtsZタンパク質集合体を外部因子による超分子相互作用により変調可能なタンパク質ユニットを作製し、変調による構造変化を基板上での原子間力顕微鏡観察により評価を行った。まず、E. coli由来FtsZ (366残基)のC末端に脂質二重膜へのアンカリング可能な両親媒性ヘリックスペプチドをフュージョンした。また、StrepタグペプチドをN末端に導入し、ストレプトアビジンとの相互作用部位を有するFtsZを調製、精製した。まず、FtsZの溶液状態における集合体形成と安定性について、分子論的な知見を得るために、原子間力顕微鏡によりタンパク質集合体構造を溶液中で直接観察を実施した。ストレプトアビジンを添加した際の影響を濃度を変えて調べ、直鎖構造や湾曲構造の曲率に与える影響を詳細に解析を行った。本年度は、FtsZ集合体の調製や生化学的評価など計画を遂行した。特に、調製したタンパク質集合体の構造変調を通常の原子間力顕微鏡に加えて、高速原子間力顕微鏡での観察にも成功しており、ストレプトアビジンがFtsZ集合体のバンドルにまたがる形態で、相互作用することが明らかにすることに成功しており、当初計画以上に進展している。本研究は、細胞分裂を制御するFtsZタンパク質集合体が作り出す膜分断の作用機序の解明を目的として、FtsZタンパク質集合体の動的構造変化を、超分子リクルート技術により変調可能な系を創製し、溶液中における集合化挙動を原子間力顕微鏡などの手法を利用して明らかにする。具体的には、FtsZタンパク質集合体をリポソーム二重膜上にアンカリングして、超分子リクルートがFtsZの集合化挙動とリポソーム二重膜のダイナミックな構造変化に及ぼす効果を実証する。昨年度は、超分子リクルート技術のためのFtsZ集合体をリポソーム調製と溶液状態における集合体の構造解析を実施した。本年度は、リポソーム二重膜上における集合化挙動観察に取り組んだ。ジオレイルホスファチジルグリセロール、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリンとホスファチジルコリンを混合したリポソームを調製後、リポソーム二重膜へFtsZを固定化した。リポソームには蛍光ラベルした脂質を加えて可視化できるようにし、蛍光顕微鏡によりFtsZタンパク質集合体の構造を時間変化を観察した。その結果、膜相互作用ペプチドをフュージョンしているために、リポソームの表面にFtsZタンパク質集合体が存在していることを確認した。さらに、FtsZタンパク質集合体が固定化されたリポソームを含む系にストレプトアビジンを添加後、蛍光顕微鏡観察を行ったところ、ストレプトアビジンがFtsZタンパク質集合体に相互作用することにより、リポソーム膜の膜陥入が誘起されることが明らかとなった。本年度は、FtsZ集合体をリポソーム二重膜上に固定化し、蛍光顕微鏡による観察を予定通りに、計画を遂行した。当初予定に反して、FtsZを蛍光色素修飾した際には、集合体の構造変化が阻害されることが判明したために、リポソームの構造変調をリポソーム標識によるアプローチに切り替えて観察を実施したが、概ね順調に進行している。昨年度までに、超分子リクルート技術のためのFtsZ集合体をリポソーム調製と溶液状態における集合体の構造解析を実施した。本年度は、昨年度に引き続き、リポソーム二重膜上における集合化挙動観察に取り組んだ。

リポソームには蛍光ラベルした脂質を加えて可視化できるようにし、蛍光顕微鏡によりFtsZタンパク質集合体の構造を時間変化を、より詳細に観察した。入念な検証の結果、FtsZタンパク質集合体が固定化されたリポソームを含む系にストレプトアビジンを添加後、蛍光顕微鏡観察を行ったところ、ストレプトアビジンがFtsZタンパク質集合体に相互作用することにより、リポソーム膜の膜陥入が誘起されることを明らかにした。バクテリア細胞分裂において重要な役割を担うFtsZは、細胞膜上で集合化してリング状の構造体(Z-リング)を形成する。このFtsZはGTPの加水分解に伴い、集合構造の曲率を変化させながらZ-リングの収縮と細胞膜の分断を誘導する。このZ-リングが起点となりタンパク質群が集合化し、細胞分裂が進行する。これらの作用機序解明の点からも、FtsZの集合構造とその動的ダイナミクスは興味深い。本研究では、超分子的な相互作用を誘起するアダプタータンパク質を添加することでFtsZ集合体に外部から摂動を与え、その構造に変化を与える系を構築した。今後は、リポソーム二重膜におけるFtsZ集合体の形成と超分子相互作用による動的秩序の変調を重点的に、研究を遂行する。FtsZ集合体構造への超分子相互作用による変調の静的構造に関するこれまで知見を踏まえ、FtsZ集合体をリポソーム二重膜に固定化し、蛍光顕微鏡により膜上での動的秩序への変調を明らかにする。ジオレイルホスファチジルグリセロールDOPGとホスファチジルコリンを混合したリポソームを調製後、リポソーム二重膜へFtsZを固定化する。リポソームには蛍光ラベルした脂質を加えて可視化できるようにして、蛍光顕微鏡によりFtsZタンパク質集合体の構造を時間変化を観察する。膜上での湾曲構造やリング状構造の形成が期待されるので、その構造的な摂動を追跡する。また、マイクロフルイディクスを利用した時空間プログラミングによるFtsZ集合体の機能解明にも着手する。マイクロフルイディクスの手法を取り入れて、FtsZ集合体をリポソーム膜の内側に選択的に固定化し、また、リポソームのサイズ、構造、に加えてリポソーム内の含まれるタンパク質濃度を均質にした系において、膜構造のダイナミクスを評価する。今後は、リポソーム二重膜におけるFtsZ集合体の形成と超分子相互作用による動的秩序の変調を、蛍光標識した脂質を使ったリポソームを用いた観察する。すでに、予備的に、膜上での湾曲構造やリング状構造の形成の観察に成功しており、より詳細な時分割観察に加えて、表面電荷やサイズ、曲率の異なるリポソームを使った実験を実施し、FtsZ集合体の構造変調の特性を明らかにする。昨年度に引き続き、マイクロフルイディクスを利用した時空間プログラミングによるFtsZ集合体の機能解明にも着手する。バイオ関連化学目的とするタンパク質とその変異体を複数作製し、研究を進める予定であったが、最初に設計調製したタンパク質の機能解析および構造解析で極めて重要な知見が得られたため、その他の変異体の調製を当初の予定よりも繰り下げて研究を進めた。したがって、当初予定した物品費の使用を次年度に繰越すこととなった。
クリニカルシーケンス実現へ向けた舌癌多段階発がんモデルにおける基礎的研究

申請者がこれまで開発・応用させた舌癌モデル動物実験は,点(de novo癌や転移癌)をターゲットにしたものであった.多段階発がんのメカニズムの解明に不可欠なヒト癌で多く見られる線(Sequence癌)に対して,継続的な病理組織像や分子生物学的解析に利用可能である,最近開発されたLBC法を発展・応用させることにより,経時的に繋がるユニークな方法を見出した.そこで本研究は,正常から過形成・上皮性異形成・扁平上皮癌へと変化する過程の組織像や遺伝子変化を,LBC法を用いた最新の網羅的解析により遺伝子全体を検索することで,評価可能な新規発がん機構の解析へと展開させることが概要である.申請者がこれまで開発・応用させた舌癌モデル動物実験は,点(de novo癌や転移癌)をターゲットにしたものであった.多段階発がんのメカニズムの解明に不可欠なヒト癌で多く見られる線(Sequence癌)に対して,継続的な病理組織像や分子生物学的解析に利用可能である,最近開発されたLBC法を発展・応用させることにより,経時的に繋がるユニークな方法を見出した.そこで本研究は,正常から過形成・上皮性異形成・扁平上皮癌へと変化する過程の組織像や遺伝子変化を,LBC法を用いた最新の網羅的解析により遺伝子全体を検索することで,評価可能な新規発がん機構の解析へと展開させることが概要である.
遺伝的アルゴリズムによる概念設計解創出プロセスモデル

概念設計は高度に創造的な活動であるため、その計算機支援は非常に困難とされている。本研究は、要求機能に対する設計解をいくつか提示するという支援方法をとる。まず、機能系統図(Functional Diagram:FD)と呼ばれるダイヤグラムによって、実在設計物をモデル化する。これを、説明に基づく学習システムの説明木生成エンジンを変更することによって実現した。FDの末端においては物理因果関係が連鎖を形成しており、個々の物理因果関係にはその成立の構造的条件が付与されている。FDを一般化した後その部分木をチャンク化することによって、断片的な設計知識が獲得される。次に、この知識を再構成することによって新たな設計解を表すFDを作成する。この時、組合せ爆発の回避と、概念設計解の“良さ"の定量的な評価が困難なことを考慮して、遺伝的アルゴリズム(Genetic Algorithm:GA)の枠組を導入した。再構成されたいくつかのFDを一つの世代とし、発現する物理因果連鎖(ならびに構造的制約条件の集合)がシンプルなほど次世代の親となる確率を高くする。木構造をFDに対しては部分木の入れ換えによって遺伝子の交叉が実現できる。世代が進むにつれて、同じ機能を達成する中でもシンプルな設計案が生成される。以上のGAに基づく概念設計解候補生成システムを計算機上に試作して動作確認を行った結果を、学会の論文集に投稿中である。
１９世紀初頭・長編小説生成期における構成・素材・記述に関する総合的研究

今年度は計画通り二回、愛知県立大学と奈良大学にて研究会を行った。解題を作成した作品名は以下の通り。『稚枝鳩』『安達原』『報讐十八公栄』『自来也説話』『絵本雪鏡譚』『絵本彦山権現霊験記』『絵本義勇伝』『阿波濃鳴門』『絵本胡蝶夢』『墨田川梅柳新書』『園の雪』『霜夜星』『絵本孝婦伝』『放家僧談』『絵本浪華男』『小説東都紫』『峰の雪吹』『相馬太郎武勇旗上』『天橋立』『通俗西湖佳話』『昔話稲妻表紙』、曲亭馬琴『四天王剿盗異録』『絵本西遊全伝』、曲亭馬琴『敵討誰也行灯』、芍薬亭長根『国字鵺物語』、石川雅望『近江県物語』、手塚兎月『聚義雑法談』、速水春暁斎『絵本金毘羅神霊記』、小枝繁『高野薙髪刀』、月花亭東漁『異本楮生譚』、曲亭馬琴『敵討枕石夜話』、盛田小塩『石井物語』各自、本研究の対象としている享和元文化年間前期の期間の読本作品についての解題作成を推進し、相互に問題点を検証し合った。これにより、共通の問題意識を有することができた。それと同時に、最終年度に作成予定の報告書について、内容はもちろん、書式や様式など細かな点の確認を行い、原稿提出の期限も設定した。報告書において設定したテーマは、「中国小説(白話系)からの影響」、「京伝と後続作者(小枝繁)」、「手塚兎月」「曲亭馬琴(『著作堂旧作略自評摘要』を軸に)」、「演劇との距離」、「中本・世話もの(一九を軸に)」、「歴史(図会・軍書・軍記)と読本」、「実録と読本」、「短編奇談」、「江戸初期読本」である。ほぼ計画通り、解題作成を中心に研究が進んでいる。また、各自の研究成果も着実に発表され、今後のスケジュールについても余裕をもって進められる予定でいるため。最終年度である来年度は、前半に研究会を開催予定であり、この折に、本研究の総括を行う。また、予定通り報告書を作成するが、各担当や執筆項目、全体のページ割、ボリュームや予算措置なども既に行っている。研究を進める上で、年2回の研究会を実施した。具体的には、計画通り、まずは対象とする年代の初期にあたる享和年間(18014)に刊行された読本作品の解題を各自が執筆し、それを集積し、問題点などを議論した。こうした検討を通して得られた共通の認識として、いまだ読本というジャンルが明確に定まっていない時期ゆえの作品としての多様性が認められた。以下、「研究目的」に記した、作品を分析するにあたっての3つのポイントに沿って、今年度の実績をまとめておく。〈構成(骨組み・屋台骨にあたる部分)〉この点に関しては、強い構成力を有する作品はそれほど多くなく、基本的には、中国の話や実録といった、原拠となる作品をベースにしていることが認められた。これは後述する〈素材〉の問題とも関わるが、読本という確固としたジャンルがあるわけではなく、既製の長編の物語群を読みものとして多少加工を施す、というレベルのものが多いといえる。ただし、中には長編においてテーマを焦点化しようとする傾向も認められた。また、この時期は習作段階であるが、曲亭馬琴の読本(『小説比翼文』)は、他の同時期の作品に比して、構成意識が強く感じられた。〈素材(〈構成〉〈記述〉する際の元になった種)〉素材については、中国の話や日本の実録、軍記が採用されることが多い。そこに絵という付加価値を加えた絵本が多い。演劇との接点はそれほど大きくはない。〈記述(物語を具体的に押し進めていく駆動部分)〉叙述については、作品内の時間の流れ方が、叙述の順序と一致していることが多く、物語展開が比較的素直であった。以上、ジャンルとしての揺籃期ならではの特色が認められた。当初の計画通り、年度内に研究会を2回開催することができた。1回目は、九州産業大学において、2016年9月4、5日に、2回目は、尾道市立大学において、2017年3月26、27日に行った。第一回開催にあたっては、事前に本研究の4年間のスケジュールをはじめ、これに伴う諸々のディティール(研究会の進行計画、原稿の書式の統一化)などをメールにより相互に確認した上で臨んだ。その準備の成果もあり、研究会は初回から順調にスタートすることができた。今年度の基本方針は、享和年間(18011804年)に刊行された読本について、各自がフォーマットに則って解題を執筆し、研究会で報告、その問題点などを議論する、とした。それぞれの回で解題の対象とした作品は、以下の通りである。【第一回】『[灯火戯墨]玉之枝』(享和2)、『絵本伊賀越孝勇伝』(享和2)『[中古奇談]双葉草』(享和2)、『小野小町一代記』(享和2)、『絵本二島英雄記』(享和3)、『絵本加々見山列女功』(享和3)、『絵本拾遺信長記』(享和3、文化1)、『小説比翼文』(享和4)、『絵本発功伝』(享和4)、以上9点。【第二回】

『保元平治闘図会』(享和元)、『深窓奇談』(享和2)、『立身竜之天上』(享和2)『環双紙』(享和3)、『蜑捨草』(享和3)、『絵本箱根山霊応記』(享和3)、『絵本亀山話』(享和3)『聖徳太子伝図会』(享和4)、『播州舞子浜』(享和4)、『敵討朝妻舟』(文化3)、以上10点。当初の計画通り、各メンバーがそれぞれのテーマごとのチェック役をも兼ねており、「研究実績の概要」もそのフィードバックに基づいており、研究体制も取り立てて見直す点は認められない。方向性、内容ともにおおむね順調に進んでいると認められる。当初の計画通り、年度内に研究会を2回開催することができた。1回目は、山口県立大学において、2017年9月24日、25日に、2回目は、島根大学において、2018年3月27、28日に行った。事前に解題執筆要項を確認し、優先する書目を決めて臨んだ。それぞれの回で解題の対象とした作品は以下の通りである。【第一回】『遠山奇談後編』(享和元年刊)、『怪婦録』(享和3年刊)、『怪物輿論』(享和3年刊)、『前太平記図会』(享和3年刊)、『絵本曾我物語』(享和3年刊)、『一閑人』(文化元年刊)、『今古奇談』(文化2年刊)、『絵本玉藻譚』(文化2年刊)、『阿也可之譚』(文化3年刊)、『四季物語春編』(文化3年刊)、『復讐鴫立沢』(文化3年刊)、『月花惟孝』(文化3年刊)、『敵討孝烈伝』(文化4年刊)、『絵本敵討孝感伝』(文化5年刊)、以上14点。【第二回】『絵本楠公記(二編)』(享和元年刊)、『[熊坂伝記]東海道松之白浪』(文化元年刊)、『絵本敵討松山話』(文化元年刊)、『白狐伝』(文化元年刊)、『聞書雨夜の友』(文化2年刊)、『絵本合邦辻』(文化2年刊)、『絵本浅草霊験記』(文化3年刊)『善知安方忠義伝』(文化3年刊)、『絵本沈香亭』(文化3年刊)、『敵討女夫似我蜂』(文化3年刊)、『競奇遺聞』(文化3年刊)、『濡衣艸紙』(文化3年刊)、『盆石皿山記』(文化3・4年刊)、『古志路の章』前後編(文化3、5年刊)、『柳可美』(文化4年刊)、『倭琴高誌』(文化4年刊)、『蟹猿奇談』(文化4年刊)、『完義武逸談』(文化4年刊)、『敵討裏見葛葉』(文化4年刊)、『石堂丸苅萱物語(苅萱後伝玉櫛笥)』(文化4年刊)、『甲州鰍沢報讐』(文化4年刊)、『翁丸物語』(文化4年刊)、『奴の小万』(文化4、5年刊)、以上23点。事前に優先する書目を決めて臨んだ。その準備の成果もあり、研究会を順調に開催することができた。今年度の基本方針は、文化元年・2年刊の作品を中心に、下限を原則文化4年に設定し、各自がフォーマットに則って解題を執筆し、研究会で報告、その問題点などを議論する、とした。年度途中に、予定より多くの解題作品のノルマを設定したが、新たな計画どおりに進み、極めて順調に進んでいる。今年度は計画通り二回、愛知県立大学と奈良大学にて研究会を行った。解題を作成した作品名は以下の通り。『稚枝鳩』『安達原』『報讐十八公栄』『自来也説話』『絵本雪鏡譚』『絵本彦山権現霊験記』『絵本義勇伝』『阿波濃鳴門』『絵本胡蝶夢』『墨田川梅柳新書』『園の雪』『霜夜星』『絵本孝婦伝』『放家僧談』『絵本浪華男』『小説東都紫』『峰の雪吹』『相馬太郎武勇旗上』『天橋立』『通俗西湖佳話』『昔話稲妻表紙』、曲亭馬琴『四天王剿盗異録』『絵本西遊全伝』、曲亭馬琴『敵討誰也行灯』、芍薬亭長根『国字鵺物語』、石川雅望『近江県物語』、手塚兎月『聚義雑法談』、速水春暁斎『絵本金毘羅神霊記』、小枝繁『高野薙髪刀』、月花亭
不全心筋におけるナトリウム利尿ペプチドホルモンによる細胞内カルシウム制御

ナトリウム利尿ペプチドホルモン(ANP、BNP、CNP)による心保護作用は、Na利尿作用、血管拡張作用、レニン-アンギオテンシン-アルドステロン系(RAAS)の抑制作用、血管新生作用などがしられている。一方、不全心では心臓局所のRAAS系が活性化しており、心筋細胞の肥大や線維化、活性酸素の産生、アルドステロン産生によるRAAS系に対する正のfeedbackにより、悪循環を形成することが知られている。ANPやBNPは、心筋における局所RAAS系を抑制し、直接的な心保護作用を発揮する可能性が指摘されており、細胞内Ca^<2+>過負荷の軽減作用により心保護作用を発揮する可能性がある。過剰な細胞内Ca^<2+>抑制については、RAAS系の抑制の他にcyclicGMP(cGMP)を介した.L-型Ca^<2+>チャネル電流抑制作用や筋小胞体Caポンプ活性化などによる細胞質Ca^<2+>濃度低下作用等が考えられ、この際のNa^+/Ca^<2+>交換機構やNa^+1H^+交換機構への影響を含めたCa^<2+>調節機構は興味深い。平成17年度は、正常モルモット心筋細胞において、ANP・BNPの細胞内Ca^<2+>transientと収縮に及ぼす効果をKB-R7943,SEAO400,など、Na^+/Ca^<2+>交換に特異的な阻害薬を使用し、Na^+/Ca^<2+>交換との関連において相互作用を検討したが、利尿ペプチドにおける変力作用の有意な変化は得られなかった。平成18年度は、Na^+/Ca^<2+>交換阻害薬のひとつであるSEAO400を用いたラット虚血/再灌流心において、エネルギー代謝や収縮を回復及び促進させる効果が認められ、ANPはこの効果を助長し、細胞内アシドーシスを予防する傾向を示したが、不全心細胞における同様の効果は、検討中である。今回の研究により、Na利尿ペプチド(ANP・BNP)は、虚血再灌流心や心不全細胞におけるCa^<2+>代謝異常に対して、Na^+/Ca^<2+>交換機構およびNa^+1H^+交換機構を介した心保護作用を有する可能性が示された。今後我々は、Na利尿ペプチドの臨床応用への可能性を踏まえて、さらに検討する予定である。(A)L-型Ca^<2+>チャネルへの効果を検討するために、単離心室筋細胞へのANP、BNP灌流前後において、voltage clamp法にて電気刺激時の細胞膜Ca^<2+>電流の変化を検討中である。(B)筋小胞体Ca^<2+>ポンプへの効果を検討するために、ANP、BNP灌流前後において、CaTの減衰速度の促進について用量依存性効果を検討中である。(C)細胞膜Na^+/Ca^<2+>交換機構への効果を検討するために、ANP、BNP灌流前後において、電気刺激時のNa^+/Ca^<2+>交換電流に対する用量依存性効果を検討中である。

また、これが特異的な電流変化であることを確定するために、Na^+/Ca^<2+>交換機構の選択的阻害剤であるSEA0400の効果を検討中である。我々は、共焦点レーザー顕微鏡(LSCM)、落射蛍光装置とプラチナ電極による電気刺激装置を現有し、薬剤投与のための急速灌流装置と活動電位記録のためのパッチクランプ装置を使用している。これらを用いて単一心筋細胞を分離し、LSCMによる[Na^+]_iの測定、チャネル及びトランスポーターの電流測定を行っている。(A)L-型Ca^<2+>チャネルへの効果を検討するために、単離心室筋細胞へのANP、BNP灌流前後において、voltage clamp法にて電気刺激時の細胞膜Ca^<2+>電流の変化を検討中である。(B)筋小胞体Ca^<2+>ポンプへの効果を検討するために、ANP、BNP灌流前後において、CaTの減衰速度の促進について用量依存性効果を検討中である。(C)細胞膜Na^+/Ca^<2+>交換機構への効果を検討するために、ANP、BNP灌流前後において、電気刺激時のNa^+/Ca^<2+>交換電流に対する用量依存性効果を検討中である。また、これが特異的な電流変化であることを確定するために、Na^+/Ca^<2+>交換機構の選択的阻害剤であるSEAO400の効果を検討中である。これらを用いて単一心筋細胞を分離し、LSCMによる[Na^+]_iの測定、チャネル及びトランスポーターの電流測定を試みている。H18年度では、さらに不全心におけるNa^+/Ca^<2+>交換機構を介した[Na^+]_iや[Ca^<2+>]_iの測定を試みてきた。
統合形設計支援システムにおける解析シミュレーション技術の融合化に関する研究

本研究は,今日の設計環境にみられるような製品機能の高度化や開発サイクルの短縮化に対応して,設計シンセシスを支援するための統合的な設計支援手法を研究し,体系化しようとするものである.具体的には,解析シミュレーション技術をインテリジェントCADや最適設計などの設計シンセシスのための支援技術に融合化していくことにより,統合的な設計支援のための環境と方法論を構築することを目的としている.本研究課題による研究成果は以下のとおりである.1.設計における階層的対象モデリング...解析シミュレーション技術を融合化していくための基盤として,"形態"による対象モデリングの方法を構成した.さらに,空調機における配線配管設計に適用し,機器の配置や配管処理を統合的に支援できることや解析シミュレーションとの統合化を有効に行えることを確認して,その妥当性を検証した.2.エージェント方式による設計支援システムの分散化...大規模なシステムの設計における各種処理を分散させる一方,それらをネットワーク通信を用いて統合化することにより,いわゆるコンカレント・エンジニアリングの方法論を設計支援システムとして構成するための,エージェント方式による分散並行型システムのアーキテクチャを構成し,船舶の基本設計を対象としたプロトタイプシステムを構築した.3.解析シミュレーション技術との融合化による最適設計...機械システムにおける対象現象は多峰性を含んでいたり,解析シミュレーションに多くの計算時間を要するなどのことにより,旧来の数理計画法による最適設計の適用が困難であったが,そのような問題に対して有効な手法となる遺伝的アルゴリズムによる最適設計法を構築した.4.機械システムの設計問題を対象とした統合形モデリングについての検討...上記の各処理よりも上流に位置する設計プロセスをも含めた統合的な支援システムを構成するためには,対象モデリングにおける課題が重要であり,そのような内容に関しても,メカニズムシステムの設計問題を取り上げて,概念設計と形態設計との統合化に関する検討を行った.本研究は,今日の設計環境にみられるような製品機能の高度化や開発サイクルの短縮化に対応して,設計シンセシスを支援するための統合的な設計支援手法を研究し,体系化しようとするものである.具体的には,解析シミュレーション技術をインテリジェントCADや最適設計などの設計シンセシスのための支援技術に融合化していくことにより,統合的な設計支援のための環境と方法論を構築することを目的としている.本研究課題による研究成果は以下のとおりである.1.設計における階層的対象モデリング...解析シミュレーション技術を融合化していくための基盤として,"形態"による対象モデリングの方法を構成した.さらに,空調機における配線配管設計に適用し,機器の配置や配管処理を統合的に支援できることや解析シミュレーションとの統合化を有効に行えることを確認して,その妥当性を検証した.2.エージェント方式による設計支援システムの分散化...大規模なシステムの設計における各種処理を分散させる一方,それらをネットワーク通信を用いて統合化することにより,いわゆるコンカレント・エンジニアリングの方法論を設計支援システムとして構成するための,エージェント方式による分散並行型システムのアーキテクチャを構成し,船舶の基本設計を対象としたプロトタイプシステムを構築した.3.解析シミュレーション技術との融合化による最適設計...機械システムにおける対象現象は多峰性を含んでいたり,解析シミュレーションに多くの計算時間を要するなどのことにより,旧来の数理計画法による最適設計の適用が困難であったが,そのような問題に対して有効な手法となる遺伝的アルゴリズムによる最適設計法を構築した.4.機械システムの設計問題を対象とした統合形モデリングについての検討...上記の各処理よりも上流に位置する設計プロセスをも含めた統合的な支援システムを構成するためには,対象モデリングにおける課題が重要であり,そのような内容に関しても,メカニズムシステムの設計問題を取り上げて,概念設計と形態設計との統合化に関する検討を行った.本研究は,今日の設計環境にみられるような製品機能の高度化や開発サイクルの短縮化に対応して,設計シンセシスを支援するための統合的な設計支援手法を研究し,体系化しようとするものである.具体的には,解析シミュレーションのためのCAEツールをインテリジェントCADや設計最適化などの設計シンセシスのための支援技術に融合化していくことにより,統合的な設計支援のための環境と方法論を構築することを目的としている.本年度における研究実績は次のとおりである.1.設計におけるシンセシスとアナリシスについての階層的構造のモデリング...解析シミュレーション技術を融合化していくための基盤として,設計プロセス全体を通じてのシンセシスとアナリシスとの相互関係を分析し,その結果に基づいて“形態"による対象モデリングの方法を構成した.さらに,空調機における配置配管設計や機構システムの形態シンセシスのについてのモデリングの構造を明確にして,その妥当性を検証した.2.設計支援技術を統合するためのエージェント通信技術の開発...ネットワーク上の分散した,解析シミュレーション技術をはじめとする各種の設計支援技術を統合化するための手段として,分散並行協調型設計システムのためのエージェント通信による統合化法を構築し,船舶の基本設計を取り上げて実験システムを構築した.3.CAEツールのエージェント化...上記のエージェント通信技術に対応して,CAEツールをエージェット化により統合システムに組み込んだ場合の設計処理として,構造解析や部品形状最適化などの処理を取り上げ,融合化時の効果についての検討を行なった.本研究は,今日の設計環境にみられるような製品機能や高度化や開発サイクルの短縮化に対応して,設計シンセシスを支援するための統合的な設計支援手法を研究し,体系化しようとするものである.具体的には,解析シミュレーション技術をインテリジェントCADや最適設計などの設計シンセシスのための支援技術に融合化していくことにより,統合的な設計支援のための環境と方法論を構築することを目的としている.本年度における研究実績は以下のとおりである.

1.エージェント技術による設計支援システムの分散化...大規模なシステムの設計における解析技術を含む各種の設計処理を分散させる一方,それらをネットワーク通信を用いて統合化することにより,いわゆるコンカレント・エンジニアリングの方法論を設計支援システムとして構成するための,エージェント方式による分散並行型設計支援システムのアーキテクチャを構成し,船舶の基本設計を対象としたプロトタイプシステムを構築した.2.解析シミュレーション技術との融合化による最適設計...機械システムにおける対象現象は多峰性を含んでいたり,解析シミュレーションに多くの計算時間を要するなどのことにより,旧来の数理計画法による最適設計の適用が困難であったが,そのような問題に対して有効な手法となる遺伝的アルゴリズムによる最適設計法を構築した.3.機械システムの設計問題を対象とした統合形モデリングについて検討...一方,上記の各処理よりも上流に位置する設計プロセスをも含めた統合的な支援システムを構成するためには,対象デモリングにおける課題が重要であり,そのような内容に関しても,メカニズムシステムの設計問題を取り上げて,概念設計と形態設計との統合化に関する検討を行った.
トリウム229アイソマー極低エネルギー準位の決定とその特異性の究明

原子核としては異常に小さいeVオーダーのトリウム-229アイソマー準位を,高輝度放射光X線および高速検出器系による核共鳴散乱を用いた新しい手法で探索した。そのための高時間分解能高速応答X線計測システム,高性能標的システム,X線集光システムを開発し,従来では困難であった1 ns以下の短い寿命の高精度な核共鳴データを取得することに成功した。本年度は、トリウム229のアイソマー観測に必要な機器の開発を行い、実際の実験環境においてテストを行い、その性能評価を行った。1) K40の核共鳴散乱の観測およびその寿命の測定: 5mgの塩化カリウム(K40を5.5%濃縮)をペレット状に加工した標的試料を用いて、29.83keVの核共鳴散乱の観測をおこなった。共鳴散乱エネルギーにおいて得られた時間スペクトルでは、プロンプトに続く指数関数的な減少が観測され、約4 nsのK40の半減期が精度よく求められた。現在、詳細な解析を進めており、論文にまとめる予定である。2)Th-229核共鳴散乱の探索:K40核共鳴散乱と同様のセットアップでTh-229アイソマー回転励起準位(29.2 keV)核共鳴散乱の探索を行った。核共鳴散乱の信号の観測を行うことはできなかったが、X線照射した際のMCP測定器の応答(時間分解能、バックグランド)についての、有益な知見を得ることができた。3)真空紫外光集光システムのビームを用いた集光性能:新たに開発した楕円ミラーを用いた集光光学系の性能評価を、Nd:LaF3シンチレータ(ピーク波長170 nm)にビームを照射することにより行った。真空紫外光のみ感度を有するダイアモンド光電子増倍管でシンチレーション光を検出しながらミラー調整を行うことにより、光学系が設計通りの性能を有していることを確認した。光学系の最適化を行った後、CaF2(Thドープなし)にビームを照射して光電子増倍管で検出を行うことにより、ビーム照射中および照射後のCaF2からの蛍光および燐光(残光)を測定し、ビーム照射中においても真空紫外光領域にバックグランドがないことが確認できた。当初計画していた実験装置の開発は順調に進んでいる。MCP検出器については期待通りの性能を発揮し、目標としていた50 psの時間分解を達成することができた。一方、トリウム229の核共鳴散乱を観測する際のバックグランドとなる事象も観測され、現在その原因究明と対策を行っている。真空紫外集光システムについては、ビーム環境下での動作を確認することができ、その評価を行うことができ、ビーム照射時に発生する光を遮断するための、シャッターの必要性等の改良点も見つかり、現在、その改良を行っているところである。また、放射光を用いた実験では、X線集光システムを利用することで、より高輝度なX線ビームを利用できることがわかり、実験感度を高めるのに大きな進捗をもたらしている。本年度はトリウム229の核共鳴散乱の観測に必要な高時間分解能X線観測システムの開発を行い、実際の実験環境において性能評価を行なった。1)高時間分解能X線観測システムの開発:0.2 ns程度と極めて短い半減期を持つトリウム229の核共鳴散乱観測には、50 psの高い時間分解能を持ち、かつバックグランドが極めて少ない測定器が必要となる。6個の高速なアバランシュフォトダイオード(APD)をアレイ状に配置し、その信号の時間とエネルギーを高速に読み出す電子回路を開発した。APDについては2種類の径(1mm, 0.5 mm)のものをテストをし、時間分解能、バックグランドの観点から、0.5mmの径のものを採用した。放射光施設において性能試験行い、50 ps,の時間分解能が得られてており、ビーム起因のバックグランドについても、核共鳴散乱測定に影響のないレベルであることが確認した。2) Hg-201の核共鳴散乱の観測、および寿命の測定:高時間分解能X線観測システムの性能評価として、Hg-201の核共鳴散乱の観測を行い、その寿命を測定した。標的には、5mgの硫化水銀(Hg-201を13%含有)をペレット状に加工したものを用いた。26.3keVの核共鳴散乱の観測に成功し、指数関数的に減少する時間分布から約0.6 nsのHg-201の半減期を精度よく求めた。3)標的試料の改良とX線集光システムの性能評価:トリウム標的試料の密封方法を改良し、ベリリウムを使用したことにより、X線の散乱を減少させ、バックグランドを劇的に減少させることに成功した。また、キャピラリーによるX線集光システムのテストも行い、X線が約100umのスポットに集光できていることを確認した。今後標的試料を小径化することにより、現行の10倍以上の感度での観測が可能であることが確かめられた。高速X線測定システムの開発については、順調に進展している。APDをアレイ状に配置したプロトタイプは目標の性能を達成し、基礎開発を終了した。そのデータを元に、メーカーと共同で実機のAPDアレイセンサーの製作を行なっている。X線集光システムについては、目標としている性能が得られていることが確認できている。

標的については、密封方法を改良することによりで物質量を減らし、バックグランドを減らすことに成功したが、従来用いて来た沈殿濾過法では0.5 mm以下の小径の標的を作ることは困難であることが判明し、電着法に切り替えて開発を行なっている。本年度は,高時間分解能X線観測システムの改良,高密度新標的の開発,X線集光システムの改良を行い,Th-229回転励起準位(29.2 keV)の核共鳴散乱信号探索を行った。(1)高時間分解能X線観測システムの改良:核共鳴散乱の信号の検出に用いる検出器として,光センサーメーカーと共同で開発した9chのアレイ状のAPD検出器を用いた。従来の6chのものに比べ,集積度,検出器アクセプタンスを向上させるとともに,バックグランドを低く抑えられた。(2)高密度新標的の開発: Th-229標的には、東北大学金属材料研究所附属量子エネルギー材料科学国際研究センター(金研大洗センター),大阪大学,および理化学研究所の共同研究者との共同研究で開発したものを用いた。直径10mm厚さ0.1mmのベリリウム基板上に電着法でφ0.5 mmのスポットサイズに集積した標的を作成した。これにより従来の標的φ1.5mmに対して,面積比にして9倍の向上を達成した。(3) X線集光システムの改良: X線集光に関してはビームラインに新しく屈折レンズが導入され,29.2 keVのビームを縦50μm,横200μmへ集光することが可能となり,従来のキャピラリを用いた集光に比べ,集光効率が格段に改善した。(4)Th-229の回転励起準位の探索: Th-229の回転励起状態として予想されるエネルギー範囲で,50 meVステップでエネルギーを変化させながら核共鳴散乱の信号を探索した。今回初めて,信号の検出が可能なレベルにまで到達し,Th-229の核共鳴散乱の信号の探索が十分に可能であることを確認することができた。原子核としては異常に小さいeVオーダーのトリウム-229アイソマー準位を,高輝度放射光X線および高速検出器系による核共鳴散乱を用いた新しい手法で探索した。そのための高時間分解能高速応答X線計測システム,高性能標的システム,X線集光システムを開発し,従来では困難であった1 ns以下の短い寿命の高精度な核共鳴データを取得することに成功した。今後、前年度の成果をさらに発展させて、引き続き以下のような手順で研究課題を推進していく。1)大面積かつ高速時間応答性能を備えたAPD検出器を開発し、高計数率状況において時間およびエネルギーを測定して核共鳴散乱時のバックグランドの低減を図る。2)ガラス管で作成したモノキャピラリーを用いてX線を集光するシステムを開発する。X線を標的サイズ0.2 mmまで集光することを目標にする。3)従来の標的試料を1.5mmのスポットサイズから0.3mmに集積した標的を開発し、X線集光システムと組み合わせることにより、反応確率を10倍以上に増加させる。4)以上の改良を施した後に、放射光X線によるビームテストを行い、トリウム229アイソマー回転励起準位への核共鳴散乱の観測を行い、励起を確実にとらえて、その半減期や励起確率、崩壊幅を正確に測定する。5)ビーム照射時の遮光用のシャッターを装備する等、真空紫外光分光器の改良を行い、アイソマー準位の脱励起からの真空紫外光の探索を行う今年度はこれまで得られた成果を元に、研究目的を達成すべく以下のような手順で研究を推進していく。1)高時間分解能X線観測システムの改良:メーカーと共同開発した9chAPDアレイシステムをテストし、その性能評価を行う。
新しい心腎連関機序：メガリンの発現抑制による腎保護を介した動脈硬化軽減作用の検証

メガリン・アポEダブルKOマウスの樹立に成功した。21週齢メガリン・アポEダブルKOマウスでは、アポE KOマウスと比較して、大動脈の動脈硬化病変が軽減している傾向を認めた。また、腎障害における動脈硬化の検討の中で、食事摂取の影響も検討した。10週齢のアポE KOマウスに片腎摘出術を行い、2群に分けて、7週間カゼイン食ないし米タンパク質食を投与した。米タンパク質(植物性タンパク質)の摂取は、カゼイン(動物性タンパク質)と比較して、片腎摘出にて腎の容積減少によって増強された動脈硬化病変を軽減していた。腎障害は心血管疾患を惹起する重大な要因であるが、そのような「心腎連関」の機序は未だ不明である。私たちは高脂肪食負荷マウスにおける腎障害において、エンドサイトーシス受容体メガリンを介する近位尿細管上皮細胞(PTEC)および間質傷害が一次的に重要であることを明らかにした。PTECはインドキシル硫酸(IS)などの血管内皮細胞傷害因子の代謝・排泄に関わることから、PTECおよび間質傷害はそれらの因子の体内蓄積を招く可能性がある。そこで本研究では、動脈硬化モデルであるアポE KOマウスを腎特異的メガリンKOマウスと交配させ、高脂肪食負荷を行って、動脈硬化の発症にメガリンを介する腎障害がどのように関与するか、ISやその他の因子の動態と併せて解析する。さらに腎メガリンの発現抑制あるいは阻害作用を有する薬剤による動脈硬化軽減効果を検討する。ApoE KOマウス(B6.129 P2-Apoe <tm1Unc> /J)の凍結胚受精卵を日本チャールス・リバー株式会社と通じてJackson laboratoryより購入したが、実際に産まれたマウスは本来の毛色と異なる灰色ないし白色のマウスだった。これらのマウスについて、問い合わせた結果、ApoE KOであることは確かであったが、系統が実際のものと異なるため、再度凍結杯受精卵を送付してもらった。出生後は、本来の黒色の毛色だった。アポEKOマウスとメガリンKOマウスのダブルノックアウトマウスの作製は当初本年度以内としていたが、やや遅れている。現在かけ合わせ準備中だが、着実に進行している。上記の検討のために以下の通り実験計画する。1) 2種類の腎特異的メガリンKOマウスをアポE KOマウスと交配し、メガリン・アポEダブルKOマウスを作製する。2)上記のマウスを用いて、腎特異的メガリンKOが動脈硬化病変の形成に与える影響を検討する。3)上記のマウスにおいて、インドキシル硫酸(IS)の血中・尿中濃度および動脈硬化病変内の沈着状態を調べ、動脈硬化病変の形成に与える影響を検討する。4)上記ダブルKOマウスと対照アポE KOマウスそれぞれの血清を採取し、血管内皮細胞、マクロファージに与える影響について培養系を用いて検討する。5)メガリン拮抗薬XないしバルドキソロンメチルをアポE KOマウスに投与し、動脈硬化病変の抑制効果について検討する。ApoE KOマウス(B6.129 P2-Apoe <tm1Unc> /J)の凍結受精卵を日本チャールス・リバー株式会社を通じてJackson laboratoryより購入したが、実際に産まれたマウスは本来の毛色と異なる灰色ないし白色のマウスだった。ApoE KOであることは確認できたが、系統が異なるものであったため、再度凍結胚受精卵を送付してもらった。さらに、大学内での動物の移動もあり、計画より遅れたが、現在、ApoE KOとメガリンKOのダブルノックアウトマウスが作製されている。現在頭数は少ないが、順次増やしていく予定である。C57BL/6のバックグラウンドを有するApoE KOマウスの凍結受精卵を日本チャールス・リバー株式会社を通じてJackson laboratoryより購入し、体外受精による繁殖を開始したが、産仔が本来の毛色と異なる灰色ないし白色であった。さらに、大学動物実験施設内での動物の移動もあり、計画より遅れたが、ApoE KOとメガリンKOのダブルKOマウスの樹立に成功した。頭数が少ないものを検討した結果、15週齢のダブルKOマウスでは、コントロールであるApoE KOと比較し変化がなかったが、21週齢ダブルKOマウスでは、ApoEとメガリンKOのダブルKOマウスでは、ApoEKOマウスと比較して、動脈硬化病変が軽減している傾向を認めた。