hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
プレコンディショニングの虚血耐性増強におけるミトコンドリア内Ca^<2+>変化

ミトコンドリア内Ca^<2+>変化を直接測定し、虚血耐性の増強にミトコンドリア内Ca^<2+>変化が関係しているかを解明するために、本年度の研究では、ミトコンドリアCa^<2+>過負荷をミトコンドリアATP依存性Kchannelの開口がミトコンドリア膜電位を脱分極させて、ミトコンドリアのCa^<2+>過負荷を軽減するを検討した。[方法]心室筋細胞のミトコンドリアのCa^<2+>濃度およびミトコンドリア膜電位は、Ca^<2+>蛍光指示薬Rhod-2および電位感受性色素JC-1を用いニポウ式共焦点顕微鏡で観察した。[結果]30分間のouabain(1mM)の添加により、Rhod-2の蛍光は添加前の173±16%に著しく増加し、ミトコンドリアのCa^<2+>過負荷が観察された。ミトコンドリアK_<ATP>開口薬であるdiazoxideとnicorandilは、ouabainによるミトコンドリアCa^<2+>過負荷を抑制した。さらに、diazoxideとnicorandilは、JC-1の蛍光を減少させた。これらのdiazoxideやnicorandilの作用は、ミトコンドリアK_<ATP>チャンネル・ブロッカーである5-hydroxydecanoateによって抑制された。[結論]これらの結果から、ミトコンドリアK_<ATP>チャンネル開口によるミトコンドリアの脱分極がミトコンドリアCa^<2+>過負荷を抑制して虚血障害から心筋を保護することが示唆された。ミトコンドリアK_<ATP>開口薬であるdiazoxide(100μM)は、ouabainによるミトコンドリアCa^<2+>過負荷を抑制した(131±10%,p<0.001vs ouabain)。さらに、diazoxideはJC-1の蛍光を減少させた(89±2%,p<0.05)。これらのdiazoxideの作用は、ミトコンドリアK_<ATP>チャンネル・ブロッカーである5-hydroxydecanoate(500μM)によって抑制された。[結論]これらの結果から、ミトコンドリアK_<ATP>チャンネル開口によるミトコンドリアの脱分極がミトコンドリアCa^<2+>過負荷を抑制して虚血障害から心筋を保護することが示唆されました。これらの結果は、第74回米国心臓学会、第18回国際心臓研究会日本部会第、75回日本薬理学会で発表された。ミトコンドリア内Ca^<2+>変化を直接測定し、虚血耐性の増強にミトコンドリア内Ca^<2+>変化が関係しているかを解明するために、本年度の研究では、細胞内Ca^<2+>動態へのミトコンドリアの影響を検討した。[方法]心室筋細胞のミトコンドリアのCa^<2+>濃度および細胞内のCa^<2+>濃度はCa^

<2+>蛍光指示薬Rhod-2およびfluo-3を用いニポウ式共焦点顕微鏡で観察した。ミトコンドリアのCa^<2+>unipoterの阻害剤はR360を用いた。[結果]Caffeineの部分的添加で局所的に上昇したCa^<2+>は、細胞内を伝播しなかった(n=10)。一方、ミトコンドリアのCa^<2+>uniporterの阻害剤Ru360(5μM)添加時では、caffeineによる局所的Ca^<2+>上昇は伝播した(n=9)。Ru360の添加により静止時の細胞内Ca^<2+>濃度が100nMから134nMに上昇し、筋小胞体のCa^<2+>貯蔵量も1.4倍に増加した。しかし、細胞外液Ca^<2+>濃度の上昇(1.08mMから3.24mM)による静止時の細胞内Ca^<2+>濃度上昇(130nM)や筋小胞体のCa^<2+>貯蔵量の増加では、caffeineによる局所的Ca^<2+>上昇は伝播しなかった(n=9)。さらに、細胞外液Ca^<2+>濃度を0.54mMに減少して、Ru360添加後の静止時の細胞内Ca^<2+>濃度が上昇しない場合でも、caffeineによる局所的Ca^<2+>上昇は伝播した。[結論]これらの結果から、心室筋細胞においてミトコンドリアがCa^<2+>unipoterを介して細胞内Ca^<2+>に関与していることが示唆された。これらの結果は、第46回米国生物物理学会、第19回国際心臓研究会日本部会で発表された。Nicorandilは、ATP依存性K channelの臨床的開口薬として知られているが、その詳細は解明されていない。一方、ミトコンドリアATP-sensitive K channelの開口によりミトコンドリアが脱分極して、ミトコンドリア内へのCa^<2+>過剰流入を抑制することが報告されつつある。われわれは、ATP依存性K channelの臨床的開口薬であるNicorandilでも、ミトコンドリア内へのCa^<2+>過剰流入を抑制するかを検討した。方法ラット(SD)成獣心から単離した心室筋細胞にミトコンドリア内Ca^<2+>の選択的蛍光指示薬rhod-2をloadingし、ニポウ式共焦点顕微鏡で観察、Baseline(添加前)の蛍光に対する%変化で数値化した。ミトコンドリア内Ca^<2+>過負荷は、1mM Ouabainで作成した。結果結語Nicorandilは、ミトコンドリアATP-sensitive K channelの開口を介してミトコンドリア内Ca^<2+>の過負荷を抑制した。ミトコンドリア内Ca^<2+>過負荷抑制がNicorandilの薬理学的虚血耐性の機序の一因と示唆された。
10～13世紀ユーラシア東北域における仏教の史的展開

【研究目的】本研究は,唐の伝統的な教宗仏教(華厳・唯識・律・密教等)の保存と継承に重要な位置を占めた契丹(遼)の仏教信仰に焦点をあて,その版図内ーとくには契丹族原住圏(主に内蒙古東南部と遼西方面)ーにおけるこの教宗仏教の展開の様相を提示することを目的とした。【研究方法】本研究では,とくに密教をとりあげ,一部の知識人(学僧)の占有物となった「教学」とは別に,契丹の一般社会における「信仰」としての在り方を考察した。まず契丹社会一般の状況を探るべく,僧俗を問わない,あらゆる人々の信仰的行為といえる菩薩戒の受戒に注目し,房山石経収蔵の授戒儀(授戒作法書)『発菩提心戒一本』の分析を試みた。本授戒儀は経典類と共に刻石された点よりみて,契丹社会において一定の普遍性をもって通行したものと考えられるのである。上記の分析を経て,つぎに契丹族原住圏における状況を考察した。ここにおいては,契丹時代に建立された密教系仏塔(密教尊を壁面に設置)の代表格といえる中京大塔(赤峰市寧城県)をとりあげ,現地調査で得た知見を踏まえて,その初層壁面に配置された尊像を中心とする装飾の分析を行った。【研究成果】まず『発菩提心戒一本』については,これが唐・不空の訳出にかかる密教の入壇潅頂前授戒儀『受菩提心戒儀』を下敷きとし,これを一般的な菩薩戒の作法書へと改作したものであることを明らかとした。一方,中京大塔に関しては,その壁面装飾が金剛界法(『金剛頂経』系統密教)を基盤として,同じく不空の訳出した『八大菩薩曼荼羅経』に説く八大菩薩曼荼羅を表現していることをつきとめ,さらにこの壁面装飾の様式が遼西方面より伝達されたものであることを明らかとした。仏塔が最も可視的な信仰モニュメントであることに思いを致すとき,契丹族原住圏において不空系統の密教が信仰として展開していた状況を読み取ることができる。これは不空系授戒儀に影響を受けた『発菩提心戒一本』の存在と符合する。本研究にて,契丹における「信仰」としての不空系密教の展開を確認し得た。
ミリ波VLBIによる晩期型星SiOメーザーの研究

1.韓国天文研究院大徳電波天文台14m鏡と国立天文台野辺山宇宙電波観測所45m鏡の間で波長3.5mmのVLBI観測を行い、晩期型星VY CMaのSiO v=1 J=2-1メーザー放射の分布を世界で初めて観測することが出来た。SiO v=1 J=2-1メーザーは星の半径の2-4倍のところに分布していることが示されたが、系統的な速度構造などは見られなかった。VY CMa以外にも晩期型星12天体を観測したがフリンジが検出できなかった。観測した天体の中でVY CMaが最も遠くにあることからメーザー領域が分解されている可能性が示唆される。また2.のJ=1-0の結果と比較するとJ=2-1メーザー領域の方が大きさが大きいと考えられる。2.国立天文台天文広域精測望遠鏡計画(VERA)の20m電波望遠鏡で行われているSiO v=1,2 J=1-0メーザー(波長7mm)強度モニター観測の結果を基に、メーザー強度の強い晩期型星39天体を選択しVERAによるSiO v=1,2 J=1-0メーザーのVLBI検出観測を行った。その結果ミラ型星、OH/IR星、超巨星、半規則型星の計13天体でフリンジを検出しVLBI観測が可能であることを示した。3.上記13天体の中からミラ型星NML Tau、WX Psc、R AqrについてVERAによるSiO v=1,2 J=1-0メーザーのVLBIモニター観測を行った。NML Tauのメーザー分布は楕円リングでよくフィットでき、星の光度が極大になる前後で楕円リングの大きさや向きが変化することが示された。ただし、まだ1周期しかモニターできていないので、モニターを続けていくことが重要である。WX PscとR Aqrは現在データ解析中である。1.韓国天文研究院大徳電波天文台14m電波望遠鏡にVLBI観測装置を設置した。さらに受信機からトーン信号を注入しVLBI観測装置を通して磁気テープに記録し解析を行うことによって、14m電波望遠鏡の観測システムが十分な位相安定度を有していることを確認した。同様に国立天文台野辺山宇宙電波観測所45m鏡でも位相安定度を測定した。2.大徳電波天文台14m鏡を用いて晩期型星約30天体のSiO v=1 J=2-1 86GHzメーザーを観測した。このうち13天体が大徳-野辺山間のVLBI観測に十分な強度を示した。今後も14mによる単一鏡観測を継続して、メーザー強度のモニターを行っていく必要がある。3.2の観測候補天体のうち3天体について大徳14mと野辺山45mの間でSiO 86GHz VLBI観測を行った。この観測は3月に行われたため、まだ相関処理の途中である。4.晩期型星VY CMaのSiO 86GHzメーザー輝線を大徳14mと野辺山45mの間でVLBI観測を行った。この観測では、較正のための連続波電波源とVY CMaを交互に、約6時間に渡って観測した。相関処理は終了しており、各天体から干渉縞が検出され観測が成功したことが示されている。今後解析を進めメーザー領域の分布などを調べる予定であるが、干渉縞が検出されたことからVY CMaの距離を1.5kpcとすると大きさが1.2AU以下のメーザー領域が存在していることがわかった。

また3C273B、3C279、0420-014などのクエーサーでも干渉縞が検出され、これらの天体についても大徳-野辺山間の連続波VLBI観測が十分可能であることが実証された。1.昨年度末に野辺山宇宙電波観測所45m電波望遠鏡と韓国大徳電波天文台14m電波望遠鏡の間で行った、晩期型星VY CMaの86GHz SiOメーザーのVLBI観測結果の解析を行い、メーザースポットの分布図を作成した。この分布図はVY CMaに関しては初めてのものである。これによるとメーザーは円弧状に分布しており、その中心に星があると仮定するとメーザーは星の半径の2-4倍のところに分布していること、またダストが形成される領域よりも内側に存在していることが解った。これらの結果を論文にまとめ、現在投稿中である。2.国立天文台の天文広域精測望遠鏡VERA観測局において43GHz VLBI観測のための性能測定や試験観測を行った。これらの結果、十分な性能が達成されていることが示された。3.VERAの20m電波望遠鏡を単一鏡として使って晩期型星の43GHz SiO J=1-0 v=1,2メーザーサーベイを行った。それらの結果からメーザー放射の強い天体についてVERAを使ってVLBI観測を行った。観測された天体はVY CMa、IK Tau、R Hya、R Aqr、V1111 Ophである。これらの観測については現在解析中である。1.国立天文台の天文広域精測望遠鏡VERAを使い晩期型星NML Tau、VY CMa、R Aqrの43GHz SiO J=1-0メーザーによるVLBI観測を行った。v=1,v=2のJ=1-0遷移からの輝線を同時に観測し、それらの分布や強度を比較することによって、メーザーの励起機構やメーザー領域の物理状態を探ることを目的としている。NML Tauに関しては平成15年から8回観測が行われており、そのうち5回の観測の解析が行われ、予備的な結果として次のことが示された。(1)v=1とv=2のメーザーはすべてが同じ分布をしてはないが、同じ領域から放射されている(2)メーザー分布の大きさは5回の観測であまり変化はなく、星の変光周期によらない(3)外側に向かって減速するような速度勾配を持つスポーク上の構造が見つかった2.VERAの電波望遠鏡で晩期型星SiO v=1,2 J=1-0メーザー輝線の単一鏡モニター観測を行い、VLBI観測候補天体を探した。3.2.で選定した観測候補25天体についてVERAによるVLBIフリンジ検出試験観測を行った。これらの観測に関しては現在解析中である。4.平成16年12月に大韓民国済州で開催された日韓VLBI研究会に出席し、韓国天文研究院の共同研究者と今までの研究成果や今後の研究方針に関する議論を行った。5.野辺山宇宙電波観測所45m電波望遠鏡と韓国大徳電波天文台14m電波望遠鏡の間で行った、晩期型星VY CMa v=1 J=2-1 86GHz SiOメーザーのVLBI観測結果を論文発表した。1.国立天文台の天文広域精測望遠鏡VERAを使い晩期型星VY CMa、R Aqr、WX Psc、UX Cygの43GHz SiO J=1-0メーザーによるVLBI観測を行った。これらの天体については現在解析中である。2.晩期型星NML Tauに関しては平成15年から9回行われた観測について、ほぼ解析が終了した。主な結果は以下の通りである。
労働法における手続的・構造的アプローチの比較研究

本研究では、(1)フランスにおける手続的アプローチ(「法の手続化」理論)の理論的基盤・具体的手法・社会的影響、(2)アメリカにおける構造的アプローチの理論的基盤・具体的手法・社会的影響を明らかにしながら、(3)フランスとアメリカのアプローチを比較分析し「手続的・構造的アプローチ」の融合的研究を行った。さらに、これらの研究を踏まえながら、(4)このアプローチが日本の社会や労働法制のあり方に与える意味を考察し、日本における「手続的・構造的アプローチ」理論の構築を図ることを試みた。(1)(3)の比較研究からは、フランスの手続的アプローチとアメリカの構造的アプローチは、その理論的基盤を異にするものであるが、その背景・手法・社会的影響の点で共通する特徴を多くもっていること、さらに、両者は相互に排他的なものではなく、むしろ両者を相互補完的に融合させながら1つのモデルを構築することが可能であることが明らかになった。これらを融合させた新たな法システムのモデルを端的にいえば、「公正」で「効率的」な社会を当事者の「参加(集団的なコミュニケーション)」によって実現しようとするものということができる。このモデル牽もとに、日本における新たな労働法システムのあり方(手続的・構造的アプローチの具体化)も提示された。この具体化にあたって特に日本で問題となるのは、日本の伝統的な労使関係に内在してきた閉鎖性・非民主性である。社会の多様化・複雑化に対応しうる新たな労働法システムを構築するときには、その基盤となる「集団的コミュニケーション」が開放的で透明なものであることが求められる。本研究の成果を集約したものとして『労働法』(有斐閣、2007年)、同〔第2版〕(有斐閣、2008年)が公刊されたが、そのなかで示された具体的な解釈論・立法論のなかには、これらの視点や留意点が盛り込まれている。平成17年度には、従来から継続して研究してきたアメリカの労働法制の歴史的動態と論理的動向をまとめ、そのなかで「構造的アプローチ」の歴史的・理論的意義を明らかにした『集団の再生』(有斐閣)を出版・公表した。この研究成果により、アメリカにおける経済学、人事管理、労使関係と法との関係が動態的に明らかにされ、比較研究の基盤が築かれた。また、フランスに短期間出張し、文献・資料を渉猟するとともに、研究者、企業や労働組合の人事労務担当者等へのインタビューを行った。これによって、フランスにおける「法の手続化」の動向や運用実態がかなりの程度明らかになった。これを更に精査に分析・考察することによって、哲学や労使関係と法の関係を動態的に明らかにし、比較研究の素材を提供することが今後の課題である。さらに、日本の労働法制や社会のあり方に関する文献・資料を現在渉猟中であり、これらの分析・考察を通じて、未だ十分にはなされていない日本の労働法制の歴史的基盤研究を行うことも今後に残された課題である。現在、日本労働法の基盤研究のための文献・資料収集とともに、フランス、アメリカ等と日本の労働法制の比較研究、これらの法制の哲学、社会学、経済学、人事管理、労使関係等の観点からの複眼的・総合的研究も並行して進めている。これらの成果を有機的に結びつけることによって、これまでにない労働法制の比較研究が可能となる。これらの作業を引き続き精力的にとりおこない、社会の変化に対応しうる新しい労働法制のモデルとなる「手続的・構造的アプローチ」理論を提示することが、今後2年の研究に残された課題である。平成17年度から18年度にかけて、フランスやアメリカを中心とする欧米諸国の関係文献・資料の収集を継続するとともに、フランスの「法の手続化」とアメリカの「構造的アプローチ」との異同に焦点をあてながら両者を比較研究し、その基盤、手法、影響に関する総合的分析作業を行った。また、日本の社会と労働法制のあり方に関する文献・資料を収集・分析しつつ、国内で開催される社会や労働法制のあり方に関する学会、研究会、講演会などに参加する。さらに、日本における思想・哲学と法との関係、日本企業における新たな人事管理の手法と法との関係を解明するために、法学・哲学・人事管理の研究者や企業の人事労務担当者等と面談し聞き取り調査を行った。以上の基礎作業をもとに、「手続的・構造的アプローチ」の多角的・融合的研究を行い、このアプローチが日本の社会や労働法制のあり方に与える意味を考察した。その成果の一部(萌芽的部分)は、水町勇一郎編『個人か集団か?変わる労働と法』(勁草書房、2006)のなかで公表した。そこでは、日本の労働法制のなかに既にみられる「手続的・構造的アプローチ」の分析、そこに内在する問題点、今後の労働法制における改革の方向性と留意点などが示されている。また、2006年9月にパリで開催された国際労働法社会保障法学会世界会議の場で「生産現場の分権化と法」に関するコメントを行い、「手続的・構造的アプローチ」のもつ国際的な含意と可能性について発表した。これらの基礎的・萌芽的な比較分析をもとに、「手続的・構造的アプローチ」を基盤とした労働法制のあり方を体系的に示す作業を、現在継続的に行っているところである。

さらに、これらの研究を踏まえながら、(4)このアプローチが日本の社会や労働法制のあり方に与える意味を考察し、日本における「手続的・構造的アプローチ」理論の構築を図ることを試みた。(1)(3)の比較研究からは、フランスの手続的アプローチとアメリカの構造的アプローチは、その理論的基盤を異にするものであるが、その背景・手法・社会的影響の点で共通する特徴を多くもっていること、さらに、両者は相互に排他的なものではなく、むしろ両者を相互補完的に融合させながら1つのモデルを構築することが可能であることが明らかになった。これらを融合させた新たな法システムのモデルを端的にいえば、「公正」で「効率的」な社会を当事者の「参加(集団的なコミュニケーション)」によって実現しようとするものということができる。このモデル牽もとに、日本における新たな労働法システムのあり方(手続的・構造的アプローチの具体化)も提示された。この具体化にあたって特に日本で問題となるのは、日本の伝統的な労使関係に内在してきた閉鎖性・非民主性である。社会の多様化・複雑化に対応しうる新たな労働法システムを構築するときには、その基盤となる「集団的コミュニケーション」が開放的で透明なものであることが求められる。本研究の成果を集約したものとして『労働法』(有斐閣、2007年)、同〔第2版〕(有斐閣、2008年)が公刊されたが、そのなかで示された具体的な解釈論・立法論のなかには、これらの視点や留意点が盛り込まれている。
ナノチャネルにおける極性イオン多変量イメージング法と連動した電気二重層選択的制御

次世代のマイクロ・ナノ流体デバイスにおける革新的な機能創製の鍵を握るのは,マイクロ・ナノチャネル壁面極近傍に形成される極性イオンの層,即ち,電気二重層(あるいは壁面ゼータ電位)の選択的制御である.本研究では壁面ゼータ電位時空間分布センシングを可能とするナノスケール・レーザ誘起蛍光(ナノLIF)法,および壁面ゼータ電位選択的制御技術の開発し,ナノスケール流動現象の解明を行った.緩衝液中にてイオン化する蛍光色素,およびチャネル壁面極近傍のみを励起可能とするエバネッセント波に基づいたナノLIF法により,チャネル内緩衝液中のイオン挙動に応じた壁面ゼータ電位時空間構造の解明を行った.イオンの対流および拡散によりゼータ電位形成過程の違いを流体力学的観点に基づいて解明を行った.この実験結果に基づいて,チャネル壁面に単分子膜による化学表面修飾を施し,壁面ゼータ電位を変化させ,チャネル内電気浸透流流動構造制御を行った.電気二重層形成過程の過渡特性を実験的に明らかにした上で,表面修飾パターンを数値シミュレーションによって最適化を行うことにより,選択的に壁面ゼータ電位(あるいは電気二重層厚さ)の制御が可能となり,電気浸透流によるマイクロ・ナノ空間混合促進等の性能の劇的な向上が可能であることが示唆された.マイクロ・ナノチャネル壁面ゼータ電位制御により,チャネル内緩衝液中のイオン挙動制御,そしてバルク流動構造制御が可能となった.近い将来,マイクロデバイスに代わってナノデバイスが普及してくるのは明らかであるが,ナノスケール特有の物理現象を解明しないことには,ナノテクノロジーの進展は望めない.通常,電解質に接する固体壁面は負に帯電するため,電解質中の陽イオンが界面近傍に引き寄せられ,厚さ数十百ナノメートルのイオン層,即ち,電気二重層を形成する.本研究では,電気二重層の影響が対向壁にまで及ぶナノチャネルを対象として,電気二重層の時空間構造の実験的解明を行い,電気二重層構造のみを制御することによる革新的なマイクロ・ナノ空間流動制御技術の確立を行う.本年度は,電気二重層厚さ,そして壁面ゼータ電位二次元分布時系列計測を可能とする,ナノ・レーザ誘起蛍光(Nanoscale laser induced fluorescence=ナノLIF)法の開発を行い,壁面ゼータ電位二次元分布の計測に世界で初めて成功した.レーザ光導入用プリズム及びレーザ光放出用可動プリズムを用いて,カバーガラス内で全反射を繰り返し,広視野にてエバネッセント光を照射するシステムの開発を行った.作動流体にイオン化する蛍光色素を混入し,カリウムイオン濃度を調節することにより,イオン濃度が異なる混合場を形成した.電気二重層厚さ,あるいは壁面ゼータ電位は,電気二重層付近に存在する蛍光色素からの蛍光強度と強い相関関係にあることから,CCDカメラにて撮像した蛍光強度分布から,二次元分布を求めた.流体の対流および拡散によるイオン挙動が,電気二重層形成に直接的に関わっていることが明らかとなった.MEMSやNEMSの進展によって化学分析やウィルス分析を超小型デバイス上で行うマイクロTASが実用化されており,近い将来のテイラーメイド医療等の具現化が期待されている.デバイス上にはマイクロチャネル,そしてナノチャネルが多数配置され,反応,混合や分離等の様々な機能が集約されており,今後は飛躍的な機能効率向上が望まれている.本研究では,様々な機能に関与する流体(緩衝液)中のイオン挙動に着目し,マイクロチャネルおよびナノチャネル壁面極近傍極性イオン挙動の多変量ナノスケール計測システムの開発を行い,電界印加による電気浸透流のナノスケール流動構造の解明を行った.チャネル壁面は緩衝液と接すると負極に帯電し,緩衝液中の正極イオンが壁面極近傍に集中することにより電気二重層を形成する.電気二重層内の固定層および拡散層との境界面における電位,即ち,ゼータ電位がマイクロチャネルおよびナノチャネル内流動構造を決定づけることが,研究代表者の一連の研究で明らかにされている.屈折率の異なる石英ガラス壁面および緩衝液間にレーザ光の全反射によるエバネッセント波を発生させ,ナノスケール蛍光粒子の移動距離から電気浸透流速度を計測するナノPIV(粒子画像流速計),そして蛍光強度が壁面ゼータ電位に依存する1価の蛍光色素を用いて壁面ゼータ電位を計測するナノLIF(レーザ誘起蛍光法)を開発し,壁面極近傍の電気浸透流速度および壁面ゼータ電位の同時計測を行った.電気浸透流速度分布が壁面ゼータ電位分布に依存していることが明らかとなり,新たな理論構築に貢献することが期待される.次世代のマイクロ・ナノ流体デバイスにおける革新的な機能創製の鍵を握るのは,マイクロ・ナノチャネル壁面極近傍に形成される極性イオンの層,即ち,電気二重層(あるいは壁面ゼータ電位)の選択的制御である.本研究では壁面ゼータ電位時空間分布センシングを可能とするナノスケール・レーザ誘起蛍光(ナノLIF)法,および壁面ゼータ電位選択的制御技術の開発し,ナノスケール流動現象の解明を行った.緩衝液中にてイオン化する蛍光色素,およびチャネル壁面極近傍のみを励起可能とするエバネッセント波に基づいたナノLIF法により,チャネル内緩衝液中のイオン挙動に応じた壁面ゼータ電位時空間構造の解明を行った.イオンの対流および拡散によりゼータ電位形成過程の違いを流体力学的観点に基づいて解明を行った.この実験結果に基づいて,チャネル壁面に単分子膜による化学表面修飾を施し,壁面ゼータ電位を変化させ,チャネル内電気浸透流流動構造制御を行った.

電気二重層形成過程の過渡特性を実験的に明らかにした上で,表面修飾パターンを数値シミュレーションによって最適化を行うことにより,選択的に壁面ゼータ電位(あるいは電気二重層厚さ)の制御が可能となり,電気浸透流によるマイクロ・ナノ空間混合促進等の性能の劇的な向上が可能であることが示唆された.マイクロ・ナノチャネル壁面ゼータ電位制御により,チャネル内緩衝液中のイオン挙動制御,そしてバルク流動構造制御が可能となった.
車輌ディスパッチ・システムにおける最適化コードの開発

本研究により得られた成果及び新しい知見をまとめれば以下のようになる。(1)本研究では、厳密解が得られる総当たり法を基本にしているために複数の車輌と複数の乗客のすべての組み合わせを数え上げる必要がある。これを高速に実現するために2種類のオペレーターを導入し、if文を一切使用しないアルゴリズム開発した。(2)ネットワーク規模が大きくなると車輌と乗客の組み合わせ数が増大する。これらの組み合わせのすべてをメモリー容量が制限されたパーソナルコンピュータで保存することは不可能である。このため逐次添加アルゴリズムを導入し、対象とする都市の組み合わせを分割することによって計算過程において必要となるメモリー容量を削減し、中規模のネットワークを扱えるようにアルゴリズムを改良した。(3)経路の組み合わせだけでなく、車両台数と各車両に乗車させる乗客の組み合わせを考慮しなければならない。通常の巡回セールスマン問題よりもネットワーク規模が大きくなると、組み合わせの数は更に多くなってしまう。この点を解決するために、幾何学的な情報をもとにした遠近率と呼ぶ一種の評価関数を導入することにより領域分割を行う手法を開発した。(4)(4)前述の手法を適用する際に、都市同士の距離関係を調べ互いに最近傍となる位置関係の都市は、同一の車両が訪問するという制約条件を設けることにより実質的に検索するための都市数を減らすことが出来た。(5)上記の(4)及び(5)の2つにより、車両と訪問する都市の組み合わせを短時間で決定することが出来るようになった。(6)経路決定において時間を要する原因は、経路の距離比較を行うことにある。従って、この点を考慮して、ヒューリスティックな手法の一つである最近傍検索を適用することにした。これにより経路の距離比較を行うことなしに経路決定が行え、計算時間を飛躍的に短縮することが出来た。(7)具体的なデータの量は十分とは云えないが、現在までに得られた遺伝的アルゴリズムや分枝限定法などと比較したデータからは、本手法が計算時間の面では圧倒的に短く、計算精度の面でも遺伝的アルゴリズムよりも優れているという結果を得ている。今年度得られた成果及び新しい知見をまとめれば以下のようになる。(1)本研究は、厳密解が得られる総当たり法を基本としているために複数の車輌と複数の乗客のすべての組合せを数え上げる必要がある。これを高速に実現するための2種類のオペレータを導入し、if文を一切使用しないアルゴリズムを揮発した。(2)ネットワーク規模が大きくなると車輌と乗客の組合せ数が増大する。これらの組合せのすべてをメモリ容量が制限されたパソコンで保存することは不可能である。このため逐次添加アルゴリズムを導入し、都市を分割することによって計算過程において必要となるメモリ容量を削減し、中規模のネットワークを扱えるようにアルゴリズムを改良した。(3)使用する車輌の台数の変化に対して、全車輌の走行距離の和とその内の最大走行距離の関係は、互いにトレードオフの関係にあることが明らかになった。(4)当初、使用する車輌の台数は、ある任意の台数に固定した形の問題設定としていた。しかし、前項(3)で明らかになったトレードオフの関係から評価関数を構築し、区間縮少法的な考え方を導入することにより最適な車輌台数の探索が能率的に行える可能性のあることが明らかになった。現在、パーソナルコンピュータを使用して中規模のネットワークを扱えるようになった。さらに処理時間の短縮のためにトランスピュータによる並列計算に適したプログラムの開発を行っている。

また、前項(3)の検討を行うために様々な乗客の配置データを用いて実験を行った。その際、一般に使用する車輌の台数と全車輌の走行距離の和は比例関係にあるが、ある程度都市数が多くなると使用台数が多くても逆に走行距離の総和が少なくなる事例があることが分かった。この現象を理論的に検討する場合、使用する車輌の台数が異なった場合の走行距離の大小関係のみを比較すれば良い。このため距離の測度をユークリッド距離でなく、マンハッタン距離を用いて現在検討を行っている。今年度得られた成果及び新しい知見をまとめれば以下のようになる。1ネットワーク規模が大きくなると車輌台数と各車輌に乗車させる乗客の組合せにより、ニューラルネットワークにおいて複数回のマトリクス計算が必要になる。この点を解決するために仮想的な都市を追加することによりニューラルネットワークにおけるマトリクス計算で場合分けを行わず計算を1回だけで済ませるダミ-ポイント法を開発した。2前年度、使用する車輌の台数の変化に対して、全車輌の走行距離の和とその内の最大走行距離の関係は、互いにトレードオフの関係にあることから評価関数を構築し、検討を行ったが最適な車輌台数の探索には不都合な点があることが明らかになった。3前項2の結果から最適な車輌台数を探索するための手法として階層分析法(Analytic Hierarchy Process)を適応することにより最適な車輌台数の決定が行える可能性のあることが分かった。現在までに中規模のネットワークを用いて、ダミ-ポイント法が有効であることを確認している。今後このダミ-ポイント法の有効範囲を確認するために様々な乗客の配置データを用いて実験を行う必要がある。また、階層分析法の適応に関しても現在詳細な検討を行っている。1.本課題では、経路の組み合わせだけでなく、車両台数と各車両に乗車させる乗客の組み合わせを考慮しなければならない。通常の巡回セールスマン問題よりもネットワーク規模が大きくなると、組み合わせの数は更に多くなってしまう。この点を解決するために、幾何学的な情報をもとにした遠近率と呼ぶ一種の評価関数を導入することにより領域分割を行う手法を開発した。2.前述の手法を適用する際に,都市同士の距離関係を調べ互いに最近傍となる位置関係の都市は,同一の車両が訪問するという制約条件を設けることにより実質的に検索するための都市数を減らすことが出来た。上記の2点により,車両と訪問する都市の組み合わせを短時間で決定することが出来るようになった。3.経路決定において時間を要する原因は,経路の距離比較を行うことにある。従って,この点を考慮して,ヒューリスティックな手法の一つである最近傍検索を適用することにした。これにより経路の距離比較を行うこと無しに経路決定を行うことが出来た。
システム信頼性理論に基づく既存建物の耐震安全性評価と耐震性向上に関する研究

既存不適確建築物の耐震性向上は,緊急を要する社会問題であり,その施策の第1段階として,まず,建物(構造システム)の安全性を定量的に評価する必要がある。システムが,その供用期間中に安全を損なう確率(限界状態超過確率)を評価するには,システムの性能にかかわる基本確率変数Xiの結合確率密度関数を機能損失空間において多重積分することにより求められる。しかし,基本確率変数が非正規変数を含む場合は,一般的には多重確率積分は解析的には不可能であり,数値積分も困難となる。モンテカルロ法は汎用的な数値確率計算法であるが,一般的な構造システムの信頼性評価手法には,多大な計算コストがかかる。本研究では,統計的に独立な非正規多変数の和については,離散高速フーリエ変換法による確率解析法を適用することにより,効率良くかつ精確に評価することができることに着目し,構造システムの機能損失空間と機能維持空間の境界である限界状態面を,独立な確率変数の和で表わされる超平面で近似する手法とその妥当性と適用性について考察を行った。限界状態面は,まず,基本確率変数の2次関数で表わされる曲面で近似され,続いて,各基本確率変数の1次項と2次項の和を新たな確率変数Yiに置き換えることにより,基本確率変数の2次関数を独立な確率変数の線形和として表わされる。この変換により,確率変数Yiの確率密度関数は,必ずしも滑らかな関数とはならないが,確率密度関数の離散化の際に,適切な刻み幅を設定することにより,離散高速フーリエ変換法による確率解析法は十分適用可能であることを示した。限界状態面の適切な近似法として,本研究では,真の限界状態面と近似限界状態面との誤差を最小とする手法を提案し,既存の手法と比べ,誤差のばらつきが小さいことを示した。誤差の評価点およびその重みの設定法について,今後はさらに検討を加える必要がある。
Bound graphとsimplicial vertexの関連について

Upper bound graph, double bound graph, semibound graph等のbound graphは,posetの要素の上界間の関係から構成されたグラフである.これらのグラフの族に対して,non-maximal cliqueによるedge coverにおいて現れるsimplicial vertexの性質を研究しcliqueの分解の様々な性質を解明してきた.それらの結果を利用してupper bound graphとdouble bound graphの中間に位置するsemi bound graphの構造を研究し,semi bound graphの新たな特徴付けを与えた.また,同じsemi bound graphを持つcanonical posetが同型であるposet間の変換に関する性質を解明し,poset間の距離の上限を与えた.また,得られたsimplicial vertexの性質に基づいてupper bound graphの構造を構成法の観点から研究し,upper bound graphの構成方法を得た。また,C_n2K_2等のtriangle-free graphをclique分解の観点から捉え,これらのgraphをforbidden subgraphとして持つdouble bound graphのposet的性質を解明した.これらの結果を用いてsplitdouble boundgraph, threshold double bound graph及びdiffrencedouble bound graph等のグラフの族をclique分解の観点から研究し,これらのグラフ族に対するfbrbidden subposetの言葉を用いた特徴付けを得ることができた.Upper bound graph, double bound graph, semibound graph等のbound graphは,posetの要素の上界間の関係から構成されたグラフである.これらのグラフの族に対して,non-maximal cliqueによるedge coverにおいて現れるsimplicial vertexの性質を研究しcliqueの分解の様々な性質を解明してきた.それらの結果を利用してupper bound graphとdouble bound graphの中間に位置するsemi bound graphの構造を研究し,semi bound graphの新たな特徴付けを与えた.また,同じsemi bound graphを持つcanonical posetが同型であるposet間の変換に関する性質を解明し,poset間の距離の上限を与えた.また,得られたsimplicial vertexの性質に基づいてupper bound graphの構造を構成法の観点から研究し,upper bound graphの構成方法を得た。また,C_n2K_2等のtriangle-free graphをclique分解の観点から捉え,これらのgraphをforbidden subgraphとして持つdouble bound graphのposet的性質を解明した.これらの結果を用いてsplitdouble boundgraph, threshold double bound graph及びdiffrencedouble bound graph等のグラフの族をclique分解の観点から研究し,これらのグラフ族に対するfbrbidden subposetの言葉を用いた特徴付けを得ることができた.Upper bound graph, double bound graph, semi bound graph等のbound graphは,posetの要素の上界間の関係から構成されたグラフである。これらのグラフの族に対して,non-maximal cliqueによるedge coverにおいて現れるsimplicial vertexの性質を研究し,様々な半順序集合論的な性質を解明した.それらの結果を利用してupper bound graphとdouble bound graphの中間に位置するsemi bound graphの構造を研究し,semi bound graphの新たな特徴付けを与えた.また,同じsemi bound graphを持つcanonical posetが同型であるposet間の変換に関する性質を解明し,poset間の距離の上限を与えた.また,得られたsimplicial vertexの性質に基づいてupper bound graphの構造を構成法の観点から研究し,upper bound graphの構成方法を得た。Upper bound graph, double bound graph, semi bound graph等のbound graphは,posetの要素の上界間の関係から構成されたグラフである.これらのグラフの族に対して,simplicial vertexの特徴に基づくcliqueの分解の様々な性質を解明してきた.これらの成果と同じsemi bound graphを持つposetをdouble canonicalposetの観点から分類を用いることにより,同一の類内のposet間の変換に関する性質を得ることができた.さらに,同一類内のposet間の距離及び直径に関する性質の解明ができた.グラフの部分構造(induced subgraph, forbidden subgraph等)の観点からupper bound graph及びdouble bound graphにおけるsimplicial vertexの性質に対する研究を行った.Simplicial vertexによるcoverの観点からgraphのedge coverを捉え,fbrbidden subgraphで特徴付けられているグラフの族のupper bound graph性やdouble bound graph性を研究した.Upper bound graph及びdouble bound graphのinduced subgraphとm-subposet及び(n,m)-subposetの関係を利用して,forbidden subgraphのposet的性質を捉えた.特に,C_n,2K_2等のtriangle-free graphをclique分解の観点から捉え,これらのgraphをforbidden subgraphとして持つdouble bound graphのposet的性質を解明した.これらの結果を用いてsplit double bound graph, threshold double bound graph及びdifference double bound graph等のグラフの族をclique分解の観点から研究し,これらのグラフ族に対するforbidden subposetの言葉を用いた特徴づけを得ることができた.
哺乳類のメラニン生成の遺伝的および非遺伝的調節機構

マウス毛色遺伝子の中でアグチ遺伝子の機能を調べるためC57BL/10JHir系統のブラックおよびコンジェニック系統のC57BL/10JHir-A/Aのアグチのマウスの皮膚より表皮メラノサイトを初代培養して、その増殖および分化活性を比較した。その結果、アグチではブラックに比べ表皮メラノサイトの増殖活性もメラニン生成能も変わらなかった。しかしながら、アグチのメラノサイトでは、ブラックのメラノサイトに比べ成熟した第IV期メラノソームの割合が著しく減少していた。培養液中のユーメラニンおよびフェオメラニンおよびそれらの前駆体の量にブラックとアグチで差がなかった。これらのことからアグチ遺伝子は、表皮メラノサイトにおける最終的なメラノソームの成熟化に関与していると考えられる。また、ブラックおよびアグチのマウスから皮膚を経日的に採取し、トリプシンを用いて表皮と真皮に分け、それぞれのユーメラニン、フェオメラニン量を測定した。その結果、生後3.5、5.5日のアグチの表皮においてはブラックの表皮に比べ有意にフェオメラニン量が高かった(5.5日では約100倍)。3.5、5.5日の皮膚の表皮と真皮をトリプシンで分け、それぞれをRT-PCR法でアグチ遺伝子の発現を調べたところ、真皮には発現が見られたが、表皮には見られなかった。これらの結果からアグチタンパク質は表皮では発現されず、真皮で合成されたアグチタンパク質が表皮に浸透し表皮メラノサイトのフェオメラニン合成を誘導すると考えられる。一方、ピンクアイドダイリューション遺伝子の機能を調べるために、C57BL/10JHir-p/pのマウスの皮膚より表皮メラノサイトを初代培養した。ピンクアイドダイリューションのメラノサイトはほとんどメラニンの生成がみられず、増殖活性も低かった。メラニンの原材料であるL-チロシンを加えるとメラニンの合成が始まり、培養液にエンドセリン(ET)-1,ET-2,あるいはET-3を加えるとメラノブラストの増殖活性が回復した。また、ピンクアイドダイリューションのメラノサイトはL-チロシンを加えて培養すると培養液中にユーメラニンおよびその前駆体を多く放出することがわかった。これらの結果から、ピンクアイドダイリューションマウスでは、メラノサイトの増殖に関しては、組織環境からのL-チロシンやエンドセリンの供給に異常があり、分化に関してはユーメラニンやその前駆体のメラノソーム内での保持機構に異常があると考えられる。マウス毛色遺伝子の中でアグチ遺伝子の機能を調べるため、C57BL/10JHir系統のブラックおよびコンジェニック系統のC57BL/10JHir-A/Aのアグチのマウスから皮膚を経日的に採取し、トリプシンを用いて表皮と真皮に分け、それぞれのユーメラニン、フェオメラニン量を測定した。その結果、3.5日、5.5日のアグチの表皮においてはブラックの表皮に比べ有為にフェオメラニン量が多かった(5.5日では約100倍)。

3.5日、5.5日の皮膚の表皮と真皮をトリプシンで分け、それぞれをRT-PCR法でアグチ遺伝子の発現を調べたところ、真皮には発現が見られたが、表皮には見られなかった。これらの結果からアグチタンパク質は表皮では発現されず、真皮で合成されたアグチタンパク質が表皮に浸透し表皮メラノサイトのフェオメラニン合成を誘導すると考えられる。一方、ピンクアイドダイリューション遺伝子の機能を調べるために、C57BL/10JHir-p/pのマウスの皮膚より表皮メラノサイトを初代培養した。ピンクアイドダイリューションのメラノサイトはほとんどメラニンの生成がみられず、増殖活性も低かった。メラニンの原材料であるL-チロシンを加えるとメラニンの合成が始まり、培養液にエンドセリン-1,-2,あるいは-3を加えるとメラノサイトの増殖活性が回復した。また、ピンクアイドダイリューションのメラノサイトはL-チロシンを加えて培養すると培養液中にユーメラニンの前駆体を多く放出することがわかった。これらの結果から、ピンクアイドダイリューション遺伝子は、メラノサイトの増殖制御については、組織環境からのエンドセリンの供給に異常があり、分化に関してはユーメラニンの前駆体のメラノソーム内での保持機構に異常があると考えられる。マウス毛色遺伝子の中でピンクアイドダイリューション遺伝子(p)はメラニンの生成に重要な働きをしている遺伝子と考えられている。このピンクアイドダイリューション遺伝子の機能を詳細に調べるため、ピンクアイドダイリューション遺伝子をC57BL/10JHirマウス(ブラック)に導入したコンジェニックマウス(C57BL/10JHir-p/p)の皮膚よりメラノサイトを初代培養した。純粋培養したピンクアイドダイリューションのメラノサイトを電子顕微鏡で観察するとメラニンの生成がほとんどみられず、ごくわずかの第I-II期メラノソーム(メラニンの沈着していない)しか産生していなかった。ところが、メラニンの原料であるL-チロシンを2mM加えて培養するとメラノソームの新しい形成や、メラニンの沈着した第III-IV期メラノソームが多く観察され、細胞中のユーメラニンの量も増加した。また、増殖活性を培養系で調べていくとピンクアイドダイリューションのメラノブラストは増殖活性が低かった。ところが、培養液にエンドセリン(ET)-1,ET-2,あるいはET-3を加えて初代培養するとメラノブラストの増殖活性が回復した。さらに、ピンクアイドダイリューションのメラノサイトの分化活性を詳しく培養系で調べていくと、L-チロシンを種々の濃度で加えていくとメラニンの生成が濃度に依存して始まり、メラノブラスト・メラノサイトの増殖活性も回復した。また、ピンクアイドダイリューションのメラノサイトはL-チロシンを加えて培養すると培養液中にユーメラニンおよびその前駆体を多く放出することがわかった。これらの結果から、ピンクアイドダイリューションマウスでは、メラノサイトの増殖に関しては、組織環境からのL-チロシンやETの供給に異常があり、分化に関してはユーメラニンやその前駆体のメラノソーム内での保持機構に異常があると考えられる。
皮弁生着における微小循環動態とフリーラジカルの関与の解明

腸管膜血管モデルと大動脈血管モデルを用いて生体内に存在するアンギオテンシンIIを刺激剤として血管収縮時のフリーラジカルの関与について検討した。腸管膜血管モデル:実験1 ;腸間膜血管に血流が停止する濃度のアンギオテンシンIIを添加すれば血流は停止するが、この停止は1次的なもので、すぐ血流の再開通が起こる。この血流停止条件下でスーパーオキサイドジスムターゼを添加すると、停止に至る時間が延長し、再開通の時間が短縮した。実験2 ;腸管膜血管を摘出し、MCLAを添加した緩衝液と培養し、アンギオテンシンIIを添加した所、スーパーオキサイドの産生を示す発光が見られた。実験3 ;スーパーオキサイドジスムターゼはアンギオテンシンIIによる腸管膜血管の収縮を有意に減弱させた。以上よりアンギオテンシンIIによる腸管膜血管の収縮にはスーパーオキサイドが発生し、かつ血管収縮に関与している可能性があることが判明した。大動脈血管モデル:実験1 ;アンギオテンシンIIの添加によって起こる血圧上昇に対して、スーパーオキサイドジスムターゼは血圧上昇を減少させた。実験2 ;大動脈血管を摘出し、MCLAを添加した緩衝液と培養し、アンギオテンシンIIを添加した所、スーパーオキサイドの産生を示す発光が見られた。実験3 ;スーパーオキサイドジスムターゼはアンギオテンシンIIによる大動脈血管の収縮を減弱させた。以上より大動脈血管でもアンギオテンシンIIによる収縮時にスーパーオキサイドが発生し、血圧上昇に関与している可能性があることが判明した。今回の実験より血管からスーパーオキサイドが産生されるという極めて特異な知見を得た。スーパーオキサイドは細胞増殖作用があるという最近の報告もあり、今回の結果と合わせるとアンギオテンシンIIはスーパーオキサイドをメヂエイターとして血管平滑筋増殖を促進していることが示唆された。元来、皮膚は大気中の酸素に直接さらされており、更に紫外線にも暴露されているため、他臓器と比較して、酸素ストレスは極めて高いことが知られている。また、活性酸素やフリーラジカルの研究が急速に進歩してきた結果、それらは生体に対し、功罪の二面性を持っており、皮弁作成時に生じる炎症、虚血.再潅流創傷治癒の各種病態において出現していると考えられるようになったが、その詳細は明らかでない部分が多い。つまり、微小循環動態において、酸素や活性酸素、フリーラジカルの間には、微妙なバランス関係の存在が示唆されており、国内外でそれらの関係を検討した報告が散見されている。我々は、微小循環モニタリングにおいて、顕微鏡下での連続微小血流循環動態の観察とその動態解析の必要性を痛感してきたので、高速ビデオカメラシステムと流体解析システムを今年度セットアップできた。これらのシステムにより、血管幅、血流速度のみならず、乱流等、瞬時に起こる血流動態のダイナミックな変化が観察可能となった。また、アンギオテンシンIIによる血管収縮時において、スーパーオキサイドが特異的に発生するを発見し、アンギオテンシンIIとフリーラジカル、NOさらには、高血圧に関して現在研究をin vivo,in vitro実験系にて進めており、その内容は現在投稿準備中である。今後、さらにこれらの内容について、更に検討を加えていく予定である。腸管膜血管モデル:実験1;腸間膜血管に血流が停止する濃度のアンギオテンシンIIを添加すれば血流は停止するが、この停止は1次的なもので、すぐ血流の再開通が起こる。

この血流停止条件下でスーパーオキサイドジスムターゼを添加すると、停止に至る時間が延長し、再開通の時間が短縮した。実験2;腸管膜血管を摘出し、MCLAを添加した緩衝液と培養し、アンギオテンシンIIを添加した所、スーパーオキサイドの産生を示す発光が見られた。実験3;スーパーオキサイドジムスターゼはアンギオテンシンIIによる腸管膜血管の収縮を有意に減弱させた。以上よりアンギオテンシンIIによる腸管膜血管の収縮にはスーパーオキサイドが発生し、かつ血管収縮に関与している可能性があることが判明した。大動脈血管モデル:実験1;アンギオテンシンIIの添加によって起こる血圧上昇に対して、スーパーオキサイドジムスターゼは血圧上昇を減少させた。実験2;大動脈血管を摘出し、MCLAを添加した緩衝液と培養し、アンギオテンシンIIを添加した所、スーパーオキサイドの産生を示す発光が見られた。実験3;スーパーオキサイドジムスターゼはアンギオテンシンIIによる大動脈血管の収縮を減弱させた。以上より大動脈血管でもアンギオテンシンIIによる収縮時にスーパーオキサイドが発生し、血圧上昇に関与している可能性があることが判明した。今回の実験より血管からスーパーオキサイドが産生されるという極めて特異な知見を得た。スーパーオキサイドは細胞増殖作用があるという最近の報告もあり、今回の結果と合わせるとアンギオテンシンIIはスーパーオキサイドをメヂエイターとして血管平滑筋増殖を促進していることが示唆された。
転写因子の欠損に直接起因する発がんにおける基本転写因子TFIIEとTFIIHの役割

1.TFIIEβの一本鎖DNA結合活性の発見とTFIIEβ内の結合領域の同定転写開始の際、プロモーターが転写開始点付近で二本鎖から一本鎖に開裂することで、PolIIが転写を開始する。TFIIEは、TFIIHと共にこの転写開始段階及び、転写伸長への移行段階に機能している。本年度、我々は2つのTFIIEサブユニットのDNAへの結合性を解析し、TFIIEβが単独で一本鎖DNAと結合子うることを見出した。そこで、TFIIEβ内のこれらの結合領域を上記同様に欠質変異体を用い、解析した。すると、TFIIBとTFIIFβと同様に、2つ並んだ塩基性領域のうち、C末側の方に結合することが明らかとなった。2.TFIIHのキナーゼ活性によるPolIIリン酸化の解析とTFIIEβによるその促進の解析TFIIEβについて、PolIIのCTDリン酸化との関連を解析すると、転写活性とPolIIの最大サブユニットのIIa型からIIo型への完全な移行が強い相関性を有することが示された。3.TFIIHとその一部よりなる細胞周期制御因子CAKのキナーゼの基質特異性と転写活性との相関性の検討TFIIHはPolIIのCTDキナーゼ活性を有する。一方、その9サブユニットの3個は遊離型のCAK複合体を形成し、細胞周期制御因子として機能する。CAKの方は、その基質特異性がTFIIHと異なり、制御も細胞周期でTFIIHの行う転写制御とは異なることから、我々の精製したTFIIHとCAK複合体でのin vitroでのキナーゼ活性と転写活性の比較を行った。その結果、TFIIHはCTDリン酸化を行い、CAKの基質であるCDK4のリン酸化は行わないこと、一方CAKはCTDリン酸化は行わず、CDK4をリン酸化することが示された。また転写の方は、TFIIHのみが担い、CAKにはその活性がないことがはっきり示された。