hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
量子臨界点近傍のフェルミ・非フェルミ液体共存新奇状態

重い電子系YbRh2Si2のスピンエコー減衰の磁場・温度依存を、29Si同位体を52%濃縮した高品質の単結晶試料を用いて測定した。この単結晶試料を用いて、NMRスピンエコー減衰の測定を行った。減衰曲線には、通常のGauss型、Lorentz型の減衰に加えて、明確な振動項が現れた。これはRK相互作用と擬双極子相互作用によるものと考えられる。この振動数には低温20K以下で大きな温度変化が見られた。これは、20K以下でフェルミ面の大きな変化あることを示している。YbRh2Si2では、70mKまで大きなフェルミ面の変化はないと考えられてきたが、本研究により、高温から変化があることを明らかにした。研究代表者はYbRh2Si2で新しいフェルミ液体と非フェルミ液体の混合状態を見いだした。今年度は、その新しい混合状態の磁場に対する異方性に関して明らかにした。新しい混合状態は磁場下で現れる。今まで磁場をc軸方向にかけた実験だけ報告してきた。そこで、今年度は磁場をa軸方向にかけて実験を行った。単結晶試料を用いて、NMRスピン格子緩和時間T1測定を行った。この化合物では、H//c軸では0.66T、H//a軸では0.06Tで量子臨界点近傍になっていると推測されている。今回は、低温45mKまでのスピン-格子緩和時間をH//a軸の磁場依存を測定した。そして新しい混合状態は、磁場方向に対して強い異方性があることを初めて明らかにした。また、その異方性は、いままで報告されてきた異方性と矛盾ないものであった。NMR核である29Si同位体を52%濃縮した高品質のYbRh2Si2を作成した。29Si同位体の自然存在比は、4%程度なので、この濃縮により測定積算時間を100分の1程度に短縮できる。この単結晶試料を用いて、NMRスピンエコー減衰の測定も行った。これはRKKY相互作用と擬双極子相互作用によるものと考えられる。上述のようにH//c軸では0.66T、H//a軸では0.06Tで量子臨界点近傍になっていると推測されており、電子系の異方性が強いと考えられる。それを反映して、振動周波数にも大きな異方性が見られた。また、低周波での実験を行うため、NMR装置の整備も行った。初年度で、異方性の成果がでたため、おおむね順調に進展していると考えられる。異方性の確認は、混合状態の正当性を確実にするものであるからである。また、高周波アンプの設置も順調に行われ、次年度での実験の準備も順調に進んでいる。今年度は、YbRh2Si2のスピンエコー減衰測定をさらに詳細に行った。減衰曲線には、通常のGauss型、Lorentz型の減衰に加えて、顕著な振動が見られることは昨年度既に明らかになっていた。そこで今年度は、さらにその温度依存を精密に測定したところ、300Kから20Kまではほとんど変化はないが、20K以下で振動周波数が大きく変化することがわかった。スピンエコー振動周波数は、Ruderman-Kittel相互作用を通じて、状態密度やフェルミ面の形状と関連している。従って、スピンエコー振動周波数が変化するということは、状態密度やフェルミ面の形状が変化していることを示唆している。そこでRuderman-KittelやBloembergen-Rowlandの議論に基づいて、測定されたスピンエコー振動周波数の変化からRuderman-Kittel相互作用定数及び、擬双極子相互作用定数の温度依存を求めた。これらの温度依存から、考えられる状態密度やフェルミ面の形状が変化を明らかにした。これらの考察から、NMRスピンエコー減衰の測定が、状態密度やフェルミ面の形状について明らかできる手法であることを確立した。また、圧力下の実験のために、小型のNMR測定用圧力セルを整備した。この圧力セルを用いれば、2GPa程度までの圧力下でのNMR実験が低温dilution領域で可能になる。YbRh2Si2の量子臨界研究では、フェルミ面の情報を得ることが大事であるが、スピンエコー減衰の測定によりそれがプローブできることがわかり、研究が進展した。また圧力下の実験の整備も進んでいる。量子臨界ゆらぎが支配するT=0Kでの相転移は、量子相転移と呼ばれ、従来の相転移と異なった様相を示すため、精力的に研究が行われている。また量子臨界点付近で超伝導が誘起される場合もあり、超伝導機構解明の観点からも興味が持たれている。典型的な量子相転移系のひとつが、重い電子系の磁気相転移である。近藤効果とRKKY相互作用が拮抗するため、磁気相転移が低温になりやすいからである。実際、多くの重い電子系Ce化合物で量子相転移現象が報告されている。

一方、2002年、ドレスデンのグループが、重い電子系YbRh2Si2の磁気誘起量子相転移では磁気秩序と同時に電子の局在化がおきるため、従来と異なる新奇の量子相転移: "局所量子相転移"になっている可能性を報告した。その後、多くの研究がなされ、量子相転移の様相は明らかになってきたが、局所量子相転移の決定的な証拠は得られていなかった。重い電子系YbRh2Si2のスピンエコー減衰の磁場・温度依存を、高品質の単結晶試料を用いて測定した。NMR核である29Si同位体を52%濃縮した高品質の単結晶YbRh2Si2試料を作成した。29Si同位体の自然存在比は、4%程度なので、この濃縮により測定積算時間を100分の1程度に短縮できる。この単結晶試料を用いて、NMRスピンエコー減衰の測定を行った。減衰曲線には、通常のGauss型、Lorentz型の減衰に加えて、明確な振動項が現れた。これはRK相互作用と擬双極子相互作用によるものと考えられる。この振動数には低温20K以下で大きな温度変化が見られた。これは、20K以下でフェルミ面の大きな変化あることを示している。YbRh2Si2では、70mKまで大きなフェルミ面の変化はないと考えられてきたが、本研究により、高温から変化があることを明らかにした。重い電子系YbRh2Si2のスピンエコー減衰の磁場・温度依存を、29Si同位体を52%濃縮した高品質の単結晶試料を用いて測定した。低周波での実験をまず第一に推進する。低周波ではS/Nが下がってしまう。S/Nが悪いと、測定時間がその二乗で増大するので、雑音の低減が主な課題である。また圧力下の実験は困難であると考えられるので、研究の推進はステップbyステップと思われる。圧力下の実験を行う。圧力下の実験は、測定時間がかかるため、なるべく早く実験を開始する。固体物性物理液体He等、消耗品の使用を次年度に回す方がより有効となったため。クライオスタットの運転計画に遅延が生じたため、消耗品冷剤(液体He、窒素)が当初予定ほど必要なかったため。液体He等、消耗品に使用する。圧力実験に必要な消耗品(圧力媒体、ガスケット等)や冷剤(液体He、窒素)に使用する予定である。
フミン質のPAHsの干渉が生物濃縮と微生物に与える影響

ディーゼル排ガスなどにより排出された多環芳香族炭化水素類(PAHs)は、道路粉塵として路面に堆積し、雨が降ると水環境に放出される。PAHsは生物濃縮により魚類や鳥類に蓄積し、DNAに付加体を形成すると考えられる。高速液体クロマトグラフタンデム質量分析器を用いて、DNA付加体を網羅的に解析する手法を開発した。付加体デオキシヌクレオシドの多くはエレクトロスプレーイオン化法により、プロトンが1個付加したM+1(Mは質量数)のプラスイオンを生じる。このイオンが衝突セルに導入されると、多くの場合、デオキシリボースと塩基間のグリコシド結合が開裂し、塩基部分の質量+1のプラスイオンを生じる。このときデオキシリボースの方はイオン化しない。デオキシリボース部分の質量は116なので、塩基部分の質量は必ずデオキシヌクレオシドの質量-116になる。そこで、親イオンと娘イオンの質量差を常に116に保ちながら、様々な質量について網羅的に解析することにより、未知のDNA付加体を網羅的に検出できる。この手法をDNAアダクトームと名づけた。また、ベンゾ(a)ピレンや1-ニトロピレン、3-ニトロベンツアンスロンなどのPAHsが誘発するDNA付加体の定量系を確立した。また、アクリルアミドゲルを利用した^<32>Pポストラベル法を用いて、様々な多環芳香族のDNA付加体を解析した。これらの手法は非常に高感度であり、今後、水質汚染のモニタリングや、フミン質による生物濃縮への影響を調べる上で非常に役に立つと考えられる。環境中の、特に湾や湖における多環芳香族炭化水素や内分泌撹乱物質は、人間や野生生物の健康に影響を与える可能性がある。水中におけるこれらの物質の挙動は、フミン質などによって影響を受けると考えられる。本研究の目的は、(1)環境中において、重要な毒性物質であるPAHsの毒性を評価しうるバイオアッセイの系を確立し、(2)微量汚染物質の毒性がフミン質の共存によってどのような影響を受けるかを明らかにし、(3)さらに、微量汚染物質の生分解や生物濃縮に共存フミン質がどのような影響を及ぼすか明らかにすることである。本年度は重要な環境汚染物質である多環芳香族炭化水素類(PAHs)が引き起こすDNA損傷をLC/MS/MS法を用いて測定する手法を検討した。PAHsを曝露した細胞からDNAを精製し、ホスホジエステラーゼとマイクロコッカスヌクレアーゼ及びアルカリホスファターゼによってヌクレオシドまで分解し、LC/MS/MSのMRMモードで定量する系を構築中した。PAHsのそれぞれの標準品が引き起こすDNA損傷のパターンを調べ、様々な環境試料の引き起こすDNA損傷パターンと比較することにより、環境中で重要なPAHsが何か明らかになる。ベンゾ(a)ピレン、ベンゾ(b)フルオランテン、ベンゾ(k)フルオランテン、ベンゾ(a)アントラセン、ジベンズ(a,h)アントラセン、クリセンについて、それらのDNA付加体の標準品の作成に着手した。この手法を用いて、ベンゾ(a)ピレンや1-ニトロピレンなどのPAHsが誘発するDNA付加体の解析を行った。また、アクリルアミドゲルを利用した32pポストラベル法を用いて、様々な多環芳香族のDNA付加体を解析した。ディーゼル粉塵や、大阪湾の低泥の抽出物をヒト肝臓がん細胞株HepG2に曝露し、32pポストラベル法でDNA付加体の解析を行った。また、食物連鎖の頂点にあるカワウの肝臓のDNA付加体をLC/MS/MS法と32pポストラベル法で解析した。

そこで、親イオンと娘イオンの質量差を常に116に保ちながら、様々な質量について網羅的に解析することにより、未知のDNA付加体を網羅的に検出できる。この手法をDNAアダクトームと名づけた。また、ベンゾ(a)ピレンや1-ニトロピレン、3-ニトロベンツアンスロンなどのPAHsが誘発するDNA付加体の定量系を確立した。また、アクリルアミドゲルを利用した^<32>Pポストラベル法を用いて、様々な多環芳香族のDNA付加体を解析した。これらの手法は非常に高感度であり、今後、水質汚染のモニタリングや、フミン質による生物濃縮への影響を調べる上で非常に役に立つと考えられる。
奥行き融合と両眼視差融合による新しい立体知覚とその3次元表示への応用に関する研究

本研究では疲れの少ないHMDの実現を目指して、視差画像を従来の両眼視差方式の立体ディスプレイと同様に左右別々の画像によって与え、かつ左右それぞれの画像に対し、奥行き融合を生じさせた場合の立体知覚について研究を行った。今期間中は本研究の第1ステップとして、主として以下の点を明らかにすることを目的とした。1)右限、左1恨にそれぞれ独立に重畳パタンを提示したときに奥行き融合が生じることを確認する、2)両眼視差融合と奥行き融合を同時に生じさせた場合、奥行き知覚に対し支配的に作用する要因を明らかにする、3)片眼ずつ独立に重畳して立体像が知覚される視覚モデルを構築する。主観評価およびローパスフィルタモデルのシミュレーションの結果から、以下のことを明らかにした。(1)観察距離に比べて前後の原パタンの間隔が10%程度以下と狭い場合は、前後の原パタンは融合して一つのパタンとして見える。しかし、原パタンの間隔が10%程度以上では前後のパタンは融合しない。(2)上記(1)の融合像の奥行き知覚位置は前後の原パタンの奥行き知覚位置と輝度比に依存する。(3)上記(2)の融合像の奥行き知覚位置はDFDディスプレイの奥行き融合の説明に用いられているローパスフィルタモデルにより説明できる。(4)上記(1)で述べた前後パタンが融合しない場合、前後のパタンの奥行き知覚位置は原パタンの知覚位置と異なる。これは、両眼での対応点マッチングにおいて、誤った組合せのマッチングを行うことによる。今後は、眼の調節位置を明らかにするとともに、本3次元ディスプレイでは眼精疲労が軽減されるかを明らかにしていく。本研究は、疲労のない自然な立体視ができるVR用映像端末の実現を目指し、人間の視覚系に各々片目に独立に重畳パタンを提示した場合の立体知覚について研究を行うものであり、16年度は初年度として、実験システムの構築や、計画段階で仮定した本研究における基本的事項を確認した。1.実験光学系構築:各々片目に独立に重畳パタンを提示できる光学系として、2枚のパララックスバリア方式の眼鏡なし立体ディスプレイとハーフミラー(20cm x 20cm)を使用した実験システムを構築し、最適観察条件等を明らかにした。2.評価画像生成システムの構築:上記1の光学系に立体画像としての評価画像を表示するための評価画像生成プログラムを作成した。3.基本事項の評価・確認:以上の実験システムと評価画像生成システムを用いて、主観評価により以下の基本事項を評価・確認した。(1)各々片目に独立に重畳パタンを提示した場合でも奥行き融合が生じることを確認した。ただし、奥行き位置の知覚は両眼の協調作業によることがわかった。以上の結果より、本研究の光学系では、両眼融合と奥行き融合を同時に生じるという知見を得た。(2)両眼融合と奥行き融合を同時に生じる状況において、視覚系が知覚する3次元像の奥行き位置については、各々の立体ディスプレイが与える視差によって、奥行きの範囲が決まり、そして、その範囲内において、奥行き融合による奥行き位置が決まることを明らかにした。すなわち、奥行き位置は、両眼視差と奥行き融合の双方に依存することを明らかにした。本研究は、疲労のない自然な立体視ができるVR用映像端末の実現を目指し、各々片目に独立に重畳パタンを提示した場合の立体知覚について研究を行うものであり、17年度は、16度に明らかにした両眼融合と奥行き融合が同時に生じる視覚現象のモデル化を行い、その正当性を実験により検証した。また、両眼融合と奥行き融合が同時に生じる条件を明らかにした。さらに、3次元像を知覚する場合の目のピント位置の測定方法を検討した。1.立体知覚のモデル化:従来のDFDディスプレイでは前後二つのパタンが融合するのに対し、本研究が対象とする立体知覚では前後にそれぞれ左目用、右目用のパタンがあり、4つのパタンが1つに融合する。

このモデルとして、視覚系が水平方向にエッジ位置が近接する前後のパタンを同時にステレオマッチングできず、この結果、空間周波数におけるローパスフィルタを用いて、前後二つのパタンエッジを1つとみなしてステレオマッチングを行い、1つのパタンに融合するというモデルを提案した。このモデルに基づくシミュレーション結果が、視差量や前後パタンの輝度比などをパラメータとした実験結果とよく一致することを示し、モデルの正当性を確認した。2.両眼融合と奥行き融合が同時に生じる条件の明確化:視差量を一定以上に大きくするとローパスフィルタを用いても、前後のパタンエッジは1つに融合せず2つのパタンエッジとして知覚され、この結果、奥行き融合は生じないことがわかった。しかし、依然ステレオマッチングは正常に行われず、前後二つのパタンは本来より互いに接近した奥行き位置に知覚されることがわかった。3.ピント位置の測定方法の確立:本研究ではパララックスバリア方式の立体ディスプレイを用いるため、クロストークが生じない位置でディスプレイを観察する必要がある。両眼開放レフケラトメーターによりピンチ位置を測定することとして、測定可能な条件を明確にした。本研究は、疲労のない自然な立体視ができるVR用映像端末の実現を目標とし、各々片目に独立に重畳パタンを提示した場合の立体知覚について研究を行うものであり、18年度は、17年度に発見した視差量を一定以上に大きくした場合、前後二つのパタンは融合せず、しかも本来より互いに接近した奥行き位置に知覚される現象について、これが偽ステレオマッチングによることを視覚モデルより明らかにした。また、両眼融合と奥行き融合が同時に生じる条件において、3次元像を知覚する場合の目のピント位置の基礎測定を行った。1.視差量が大きい場合の立体知覚:視差量を一定以上に大きくすると、前後のパタンエッジは1つに融合せず2つのパタンエッジとして知覚され、奥行き融合は生じないが、前後二つのパタンは本来より互いに接近した奥行き位置に知覚される。この原因として、左右の目において前後パタンが入れ替わってマッチングを行っている偽ステレオマッチングが生じていると仮説を立て、数理モデルよりシミュレーションを行った。この結果、前後のパタンの奥行き知覚位置が測定値とよく一致して仮説の正当性が実証された。2.ピント位置の測定方法の確立:奥行き融合した立体像を観察するとき、被験者のピント位置がどこに合っているかは学術的にも興味深く、また工学的にも疲れの少ない立体視を実現する上で重要な知見となる。今回、基礎実験として2つの3次元像が同じ奥行きにある場合のピント位置を測定した。この結果、ピンチ位置は前後それぞれのスクリーン上ではなく、その中間にあることが分かり、従来の立体ディスプレイで眼精疲労の原因として問題となっていたピント位置と輻較位置の不一致を解決できる可能性があることがわかった。
機能性リン脂質の酵素合成におけるイオン性液体添加効果の解析

リパーゼ類のイオン液体中での酵素反応報告は多くなされているが、リン脂質代謝酵素に関しては報告例が全くなかった。そこでまず、PLD酵素がイオン液体中で安定して存在するか、8種のイオン液体を用いて検討を行った。各イオン液体と酵素溶液)in 20mM Tris-HCl)pH7.4)をそれぞれ重量比で50%になるように混合し、30度にて3日間、攪拌および保温した。その結果、初日のPLD活性を100%とし比較を行った結果、何も加えない系では1日の加温にてPLD活性は約25%まで減少するのに比較して、BminPF6およびTMPATFSIと接触させた系では、3日間の接触によっても100%の酵素活性を維持していることが明らかとなった。接触させることで酵素活性が対照実験と比較して減少する系もあることから、両者のイオン液体はPLD酵素の安定性に寄与している可能性が高い。イオン液体中でのPLD酵素の安定性が確認できたので、次にこれまでのPLD酵素では酵素失活が激しいために顕著な反応生成物が確認できなかった、水相・n-ヘキサン系へのイオン液体の添加効果)酵素安定性向上効果)を検討した。その結果、アニオンがTFSI系のイオン液体では、対照実験と比較して約2倍の酵素安定性が確認できた。また、リン脂質はイオン液体には溶解しないと事前実験より確認していたが、OminBF4系では長期に静値することでリン脂質が溶解することも確認できた。ホスホリパーゼD (PLD)は、リン脂質を基質として加水分解反応、リン酸基転移反応の二つの反応を触媒する酵素である。PLDを用いて、リン酸基転移反応を利用することで希少なリン脂質や、新規のリン脂質を合成することが可能である。あらゆる生物種に存在するPLDには、HxKxxxxD(HKDモチーフ)と呼ばれる、共通したアミノ酸配列が2回繰り返され、各HKDモチーフの下流にグリシン・グリシン(GG)、グリシン・セリン(GS)モチーフ配列が保存されている。本研究室ではこれまでにこのGG/GSモチーフへのセリン残基の導入により、変異体(G215S, G216S, G216S/S489G)を取得している。本研究では、これらのPLDを用いてPhosphatidyl-choline (PC)からPhosphatidylserine (PS)の合成系にて、基質であるPCを溶解させる溶媒に着目してPLDの反応特性を解析した。また、第三の溶媒とされるイオン液体についてもPCの溶媒としての可能性を検討した。イオン液体は不揮発性であり、水や有機溶媒と相分離するなど、今までの溶媒の特性にはない特徴を有している。高さ10cm、直径1.6cmのねじ口瓶を反応器として用い、二相系、または三相系にて反応させた。反応には、有機溶媒に溶解した3.5mMPCを1ml、水相に2.5ML-Serine 1ml、200mMPhosphate buffer (pH5.8)300・l、PLD100・lを用いた。三相系では、上記組成にイオン液体を0.5g加えた。イオン液体は、カチオンにイミダゾリウム系の化合物、アンモニウム塩などで、アニオンにBF_4^-、PF_6^-、TFSI^-などから構成される。反応温度30°Cで規定時間攪拌させ、有機相を分離後、試料を採取し、HPLC(東ソーTSK-GEL Silca-60、カラム温度37°C、流速1.1ml/min、吸光度210nm)にて定量分析を行った。また、有機溶媒やイオン液体と酵素を接触させて酵素の安定化を調べた。実験方法は、PLD500μlにそれぞれ等容量加え、数日間攪拌させた後、酵素活性を測定した。二相系において、有機溶媒にDiethyl ether、n-Hexane、n-Hexane:Aceton (8:2v/v)を用いた結果、Diethyl ether系にて高いPSの生成が確認出来た。また、変異を導入していない方が高い転換率が得られた。一方、n-HexaneではほとんどPSは合成されなかった。そこで、n-Hexaneにイオン液体を添加し三相系にて反応を行った。その結果、アニオンにTFSI^-をもつイオン液体を添加した時に、若干PSが増加した。このことから、酵素活性を阻害するn-Hexaneからイオン液体が酵素の構造(もしくは活性)を保護したことが考えられる。実際に、接触させた場合に酵素活性の向上、または不活性化の緩和がみられた。

接触させることで酵素活性が対照実験と比較して減少する系もあることから、両者のイオン液体はPLD酵素の安定性に寄与している可能性が高い。イオン液体中でのPLD酵素の安定性が確認できたので、次にこれまでのPLD酵素では酵素失活が激しいために顕著な反応生成物が確認できなかった、水相・n-ヘキサン系へのイオン液体の添加効果)酵素安定性向上効果)を検討した。その結果、アニオンがTFSI系のイオン液体では、対照実験と比較して約2倍の酵素安定性が確認できた。また、リン脂質はイオン液体には溶解しないと事前実験より確認していたが、OminBF4系では長期に静値することでリン脂質が溶解することも確認できた。
地方実録の生成に関する研究

実録と読本・演劇との関係という問題に重点をおいて研究を行った。宝暦14年(1764)朝鮮通信使の一員崔天宗が大坂で殺害された、いわゆる「唐人殺し」の事件は実録にも取り込まれ、『朝鮮人難波の夢』などが作られたが、このたび、大坂の作者五島清道によって制作された読本『倭韓乃染分』(文化10年(1813)刊)を調査した結果、同一事件を素材としながら、歌舞伎『韓人漢文手管始』『拳褌廓大通』に大きく依拠したものであることが判明した。五島清道は、実録の存在を知っていたと考えられるものの、敢えて演劇を利用することにより、読本としての独自性を表そうとしたと認める。五島清道は大坂東町奉行組同心とされる人物で、職業作家ではないが、実在事件に拠りながら、読本という中長編小説の備える独自の構造についても理解した上で制作を行っている。論文において、同じ五島清道の作『蛍狩宇治奇聞』(文化10年刊)についても分析を行い、やはり読本としての構造に強い配慮の働いた作であることを示した。この作は実録依拠と推測されるがその典拠は判明しておらず、引き続いて調査する必要がある。また、鳥取県琴浦町・河本家に伝存する実録本『北野聖廟霊験記』についても調査を行い、翻刻(全20巻のうち4巻)を付して公表した。この『北野聖廟霊験記』は極めて伝本の少ない実録である。この実録が栗杖亭鬼卵の読本『北野霊験二葉の梅』(文化11年(1814)刊)の典拠となったことについては以前に明らかにした。論中で、地方の旧家にかかる実録が伝存したことの背景や意義について論及した。未だ研究対象とされたことのない『宝武実情記』なる実録が、出雲国松江藩に関わる実録(地方実録)であることを把握した。実録と読本との関係、地方における実録伝存の実態の解明という当初の目的に関して、調査研究の進捗があり、論文と一部翻刻によって公表した。また、未だ研究の対象とされたことのない、出雲国松江藩に関わる実録(地方実録)の存在を把握し得た。地方実録の生成と展開の様相を通じて、実録という近世小説ジャンルそのものの特質について検討するという課題を推進できたと考える。当年度存在を把握し得た地方実録に関する本格的な調査研究を次年度の中心課題として位置付け、更に資料収集の範囲を拡げ、別の事例についても比較しつつ検証する。また次年度、実録の研究、実録と読本との関係についての研究論文を収録した著書を刊行する。論文「実録「伯州米子の城下敵討の事」について」を公表した。この実録は、近世初期(1600-1609)のみに存在した伯耆国米子藩中村氏に関するもので、同氏の歴史を根底に置きながら仮構の話と関連づけて成ったものである。後半部分は、中村氏断絶の過程で非業の死を遂げた甘利三郎左衛門なる忠義の臣を設定し、その子三郎四郎が艱難の末に敵討を成就するという話としている。なおこの敵討譚においては、忠義の士の非業の死、遺された者たちの艱難、仏神の加護と思しき援助者の出現、武術鍛錬、家来の献身的忠義等々あって敵討に至るとしており、敵討もの実録の定型に沿って構想したものと解される。続いて、甘利三郎左衛門とその敵は、互いに前生からの宿敵であったとするのは、小説的構想に一段踏み込んだものと言える。この実録において重要であるのは、藩主中村忠一が徳川家康・秀忠から厚遇されていたこと、若年の忠一が米子へ入封するが僅か9年で終わったこと、忠一の最期が頓死であったこと、断絶後の財産管理に問題のあったことなどの史実を踏まえながら、忠一の滅亡・中村家断絶の具体的経緯に関して虚構を設けている点である。作者は、米子藩中村氏の時代とはいかなるものであったのかを捉え直した上で、一つの別伝として読まれることを意図して本作を執筆したものと推定する。この実録は、東京都立中央図書館蔵の写本『報仇記談』に収められる一編で、全45丁から成る。『報仇記談』は、伊賀越敵討、勢州亀山敵討など全国的に知られた実録のほかに、当「伯州米子の城下敵討の事」のような地方の実録をも収める。このような実録の叢書的写本がこの他にも存在し、それらの中に地方実録が収められていることを当年度の調査において把握した。地方の事件を素材とし、当該の地に関わる実説に通じている作者によって制作されたと考えられる実録を新たに見出し、史実と対比しつつ、実録の特質が表れている部分を解明し、論文化した。また実録の叢書的写本の中に地方実録が収められていることを把握し、諸本の対比などを通じてその成立過程を考察する作業に入ることができた。これらは何れも当初の研究計画の段階から主たる目的と設定していた内容のものである。姫路騒動(寛延4年(1751)7月、姫路藩酒井家の家老川合勘解由左衛門が、2人の家老を討ち果たして自害した事件)の実録に関して、その生成と展開の様相を解明した。従来から『姫陽陰語』なる実録が知られているが、事件直後に原初的な形態の実録が作られ、そこから『姫陽陰語』として3つの系統に分かれ、更にそのそれぞれに対して増補が行われたということを推定した。

その増補は、川合と2人の家老との対立の構図をより明確化し、事件発生の要因についてより合理的に説明するという見地からなされていることを明らかにした。また同じ事件を素材とする『忠臣川合実記』なる実録の存在を指摘し、前掲『姫陽陰語』との異同を解明した。当実録には、姫路の地名・伝承、寛延元年(1748)の大一揆などの記述が見られ、地元で作られたものと解される。かつその文章は、『姫陽陰語』に直接依拠せず独自に書かれたものと認め得る。そしてそこには、川合と2人の家老との対立の背景には、当時の姫路藩における領民統治のあり方に関わる問題があったとする独自の観点が提示されている。即ち、単に事件の経緯を叙述するものではなく、一種の社会的観点から事件を捉え、それを人物の言動を通して描き上げるという方法が認められるのであり、このことは実録のあり方の一例として重要なものであると考えられる。また事件直後における情報の拡がり、巷説の発生、そこから実録が生成する経緯についても資料によって跡付けた。以上によって、姫路騒動実録に即して、地方において実録が生成し展開していくあり方を解明した。(以上、日本近世文学会秋季大会・研究発表「姫路騒動実録の生成と展開」)出雲国母里藩において、明和3年(1766)に起こった藩主後継をめぐる御家騒動に関する実録『雲州橘之巻』の特質について記述し、当実録の伝本(島根大学附属図書館蔵本)を翻刻した。(以上、論文「『雲州橘之巻』について」)姫路騒動実録の生成と展開について解明し、日本近世文学会において研究発表を行った。この研究において、史料と関連付けながら、実録の生成過程、更には展開過程を跡付けることができたのは、本課題研究の目的に沿うものであると考える。また実録の本文の分析に拠って系統を整理し、それぞれにおける共通性と特異性について論究することができた。以上、地方実録の生成と展開の様相を通じて、実録という近世小説ジャンルそのものの特質について検討することができたと考えている。実録と読本・演劇との関係という問題に重点をおいて研究を行った。宝暦14年(1764)朝鮮通信使の一員崔天宗が大坂で殺害された、いわゆる「唐人殺し」の事件は実録にも取り込まれ、『朝鮮人難波の夢』などが作られたが、このたび、大坂の作者五島清道によって制作された読本『倭韓乃染分』(文化10年(1813)刊)を調査した結果、同一事件を素材としながら、歌舞伎『韓人漢文手管始』『拳褌廓大通』に大きく依拠したものであることが判明した。五島清道は、実録の存在を知っていたと考えられるものの、敢えて演劇を利用することにより、読本としての独自性を表そうとしたと認める。五島清道は大坂東町奉行組同心とされる人物で、職業作家ではないが、実在事件に拠りながら、読本という中長編小説の備える独自の構造についても理解した上で制作を行っている。論文において、同じ五島清道の作『蛍狩宇治奇聞』(文化10年刊)についても分析を行い、やはり読本としての構造に強い配慮の働いた作であることを示した。この作は実録依拠と推測されるがその典拠は判明しておらず、引き続いて調査する必要がある。また、鳥取県琴浦町・河本家に伝存する実録本『北野聖廟霊験記』についても調査を行い、翻刻(全20巻のうち4巻)を付して公表した。この『北野聖廟霊験記』は極めて伝本の少ない実録である。この実録が栗杖亭鬼卵の読本『北野霊験二葉の梅』(文化11年(1814)刊)の典拠となったことについては以前に明らかにした。論中で、地方の旧家にかかる実録が伝存したことの背景や意義について論及した。未だ研究対象とされたことのない『宝武実情記』なる実録が、出雲国松江藩に関わる実録(地方実録)であることを把握した。
大規模コーパスを用いた日英語言い淀みの対照研究

言い淀んだとき,日本語では「エート」などのフィラーが頻繁に用いられる。フィラーは文節境界によく現れるが,その出現率は境界直前の文節の係り先までの距離が長いほど高くなることが明らかになった。これにより,フィラーは後続発話生成の負荷と深く関連する現象であることが示唆された。すなわち,これから伝えようとするメッセージが長く複雑なほど,スムーズな言語化が困難になり,フィラーの出現率が上昇すると考えられる。一見ランダムに現れるように見える言い淀みの背後にある規則性が示された。日本語と英語における言い淀みの対照研究を可能にするため,まず,複数のコーパスを収集し,付与すべき言語情報を検討した。日本語に関しては,これまでも分析に用いてきた『日本語話し言葉コーパス(CSJ)』について検討した。言い淀み分析という視点から見たCSJの問題点として,削除,言い換え,挿入,語レベルの繰り返しなどを示すラベルのないことが挙げられる。とりわけ,語レベルの繰り返し情報の欠如は,"I"や"the"の繰り返しが頻繁に起きる英語と比較する上で問題となるため,そのラベルを付加情報として加える作業を進めている。類似の取り組みが別のプロジェクトでも行われていることが明らかになったため,このラベリングに関してはそのプロジェクトと協力して進めていく予定である。CSJにおいて,フィラーの種類別頻度を性別・生年代別に東京方言話者に限って調べたところ,方言を限定しない場合とは異なる結果が得られた。これによって,フィラーの使用にも方言差のあることが示唆されたため,英語のフィラー分析の際にも,方言を考慮する予定である。英語のコーパスに関しては,複数のコーパスを検討した結果,現時点では,"Michigan Corpus of Academic Spoken English (MICASE)"が,内容・質の面から,CSJとの対照研究に最も適しているとの結論を得た。現在,MICASEに対し,CSJのタグに匹敵するような,言い淀みのタグ付けと形態素解析方法の検討を行なっている。また,言い淀みにおける方言差を調べるために,イギリス英語の講義・講演コーパスについても,現在,調査中である。本プロジェクトでは,複数の話し言葉コーパスを用いて日本語と英語における言い淀みの対照研究を行うことによって,発話生成プロセスの言語普遍性と個別性を明らかにすることを目的としている。本年度は,日本語に関しては,談話の切れ目の深さや後続節の複雑さと,節頭の接続詞・助詞の引き延ばしやフィラーの持続時間との関連を『日本語話しことばコーパス』を用いて調べた。フィラーの持続時間は,談話の切れ目が深く後続節が複雑なほど,長い傾向のあることが明らかになった。また,副助詞「は」の持続時間にも後続節の複雑さとの相関があった。発話プラニングの認知的負荷が節境界のフィラーの出現率に影響することは知られていたが,これらの発見によって,フィラーや副助詞の持続時間にも影響することが示唆された。これらの結果の一部を,2010年9月に開かれたThe 5th Workshop on Disfluency in Spontaneous Speech (DiSS-LPSS Joint Workshop 2010)で口頭発表した。このワークショップではプログラム委員を務め,開催運営も中心となって担い,国際的な言い淀み研究の交流・進展に貢献した。英語の言い淀みに関しては,既存のコーパスに言語情報を付加し,対照研究のできるようなコーパスを作成することを試みていたが,書き起こしの精度や日本語コーパスとの対称性に問題があるため,対照研究が容易にできるような言語データを新たに収集することにした。現在,日本語のデータと内容・構成を統一したインタビューデータの収集を日米で行なっている。これと並行して,これまでよりも精緻な言い淀みの分類法を検討している。また,研究目的に沿った英語形態素解析システムの構築を進めている。本研究は,日本語と英語の大規模コーパスを用いて言い淀みの分布を比較することによって,発話生成プロセスの言語普遍性と個別性を探ることを目的とした。発話生成には,(1)発話内容の生成;(2)言語化;(3)発声という3つの段階が想定されており,言い淀みは発話生成上のどの段階でも起こりうるトラブルに関連した現象であると考えられている。筆者は,これまでの研究成果から,日本語のフィラーは発話内容の生成というよりは,よりローカルなレベルで行なわれる言語化のプロセスに密接に関連した現象ではないかと考えた。そして,次に表現しようとする内容が豊富なほど言語表現は複雑になり,フィラーの出現率は上昇するという仮説を立て,局所的な言語的複雑さとフィラーの出現率との関係を調べた。具体的には,言語化の単位としての「文節」に着目し,文節の係り先までの距離(文節数)と文節直後のフィラーの出現率の対応を『日本語話し言葉コーパス』(国立国語研究所,2006)を用いて調べた。

文節境界のフィラーの出現率は,係り先までの文節数が1から10の間は線形に上昇し,その後の上昇は見られなかった。この結果は,フィラーの使用がローカルな言語化の負荷と強く関連していること,また,一時に言語化できる単位は日本語ではほぼ10文節であることを示唆している。このように,フィラーの機能を文節との関連で実証的に示した研究はこれまでに見受けられない。また,発話生成単位の大きさを具体的に提示するような研究もこれまでに行われておらず,日本語における発話生成研究を前進させるものである。
電気刺激による腫瘍血流制御を応用した新癌治療法の開発‐放射線・化

今日のがん治療において、腫瘍内低酸素領域の克服が重要な課題となっている。そこで我々は電気刺激を用いることで腫瘍内低酸素領域を改善できるのではないかと考えた。C3Hマウスの右大腿部にSquamous Cell Carcinoma-VII腫瘍(SCC-VII)を移植し、仙骨部後仙骨孔直上の皮膚表面に電気刺激を行った結果、刺激中に腫瘍表面の血流値で22%の増加、電気刺激終了から約50分後に腫瘍内部の酸素分圧で28%の増加が確認された。低酸素マーカーであるピモニダゾールを使用した結果、電気刺激終了後40分で低酸素領域は20%有意に減少した。X線を腫瘍移植部に局所照射したところ、一回照射(総線量5Gy)・分割照射(総線量7.5Gy)のいずれにおいても放射線単独群より放射線+電気刺激併用群で腫瘍の成長に遅延が認められた。腫瘍に存在する低酸素領域は、化学療法抵抗性、放射線抵抗性、など、現在の癌治療において大きな壁となっている。我々は、電気刺激による血流制御効果を利用して、腫瘍内の血流を増加させ低酸素状態を改善し、放射線や抗癌剤に対する感受性を高めることと、放射線治療や化学療法休止期には逆に腫瘍血流を抑制する事により腫瘍増殖を抑えるダブル効果を期待する新癌治療法の開発を行うことを目的とし研究を進めてきた。平成21年度では、担癌マウスに対し電気刺激を行い、腫瘍内血流変化や低酸索改善効果を見た。まず、腫瘍を移植したマウスに、腫瘍近傍と仙骨部それぞれに30Hzの電気刺激を加え、二次元レーザー血流計、ポーラログラフィーを用いて、腫瘍内血流状態と酸素濃度を調べた。その結果、(1)電気刺激により腫瘍血流量の有意な増加(1.2倍)が認められた。(2)腫瘍酸素分圧は血流量に対し、時間の遅れはあるものの増加傾向が認められ、かつ、刺激後の持続性が認められた。(3)前述の効果は腫瘍近傍での刺激よりも、仙骨部での刺激をした際に認められた。以上のことがわかった。これらの作用は、仙骨部体性神経線維群を求心性に電気刺激したニューロモジュレーション効果によるものと推定されるものである。21年度は刺激強度を変化させた場合の血流、酸素濃度変化を見る事を計画していたが、データが不足していた。22年度は、まず刺激強度を多段階に変化させた場合の腫瘍内血流・酸素濃度変化を調べ、血流制御を行うための最適な刺激強度を探したいと考えている。21年度の研究では、電気刺激により腫瘍内部の血流量増加に伴い、酸素化がなされる事が実証された。このことにより、放射線治療時化学療法時において、電気刺激により感受性が高まることが予想される。22年度はこの予想を実証させる方向で研究を進めていきたいと考えている。本研究は、電気刺激によって腫瘍内部の血流を任意にコントロールすることで、腫瘍内血流増加による低酸素状態の改善と血流減少による腫瘍成長抑制を任意のタイミングで行い、画期的な治療効果を上げようとするものである。すなわち、電気刺激のタイミング、条件等を変化させることで、腫瘍内部の酸素分圧を高くしたり低くしたりコントロールし、腫瘍を制御しようという試みである。平成22年度においては、腫瘍を移植したマウスにて、電気刺激および放射線療法を施し、電気刺激単独群・放射線療法単独群に比べ、電気刺激と放射線療法を組み合わせた群では、抗腫瘍効果が上がるか否かを、【I.最適タイミングの検討】【II.電気刺激と放射線療法の併用での治療効果の検討】の二点を中心に検証した。最適タイミングについては、電気刺激後数分で腫瘍表面における血流量の有意な増加を認めた。さらに、腫瘍表面の血流量増加に遅れること数分で、腫瘍内部の組織酸素分圧が有意に上昇する事が認められた。腫瘍表面から腫瘍内部に酸素が拡散する事によって時間遅れが生じたものと考えられるが、この腫瘍内部で酸素分圧が上昇したタイミングが、放射線照射の最適タイミングではないかと考えている。また、この腫瘍内部の酸素分圧が有意に上昇する時間を目安に、放射線照射を行う方法で放射線療法の治療効果の変化の検討を継続している。また、電気刺激と放射線療法を併用した群の効果については現在詳細に検討中である。

すなわち、電気刺激のタイミング、条件等を変化させることで、腫瘍内部の酸素分圧を高くしたり低くしたりコントロールし、腫瘍を制御しようという試みである。最終年度である平成23年度においては、C3Hマウスの右大腿部にSquamous Cell Carcinoma-VII腫瘍(SCC-VII)を移植し、仙骨部後仙骨孔直上の皮膚表面に電気刺激を行った結果、刺激中に腫瘍表面の血流値で22%の増加、電気刺激終了から約50分後に腫瘍内部の酸素分圧で28%の増加が確認された。低酸素マーカーであるピモニダゾールを使用した結果、コントロール群で53.4±30.4%、刺激直後投与群で53.4±18.1%、刺激40分後投与群で42.3±17.5%となり、電気刺激終了直後では低酸素領域の減少は見られなかったが、電気刺激終了後40分で低酸素領域は約20%有意に減少し、組織的に低酸素状態の改善が確認できた。X線を腫瘍移植部に局所照射したところ、一回照射(総線量5Gy)・分割照射(総線量7.5Gy)のいずれにおいても放射線単独群より放射線+電気刺激併用群で腫瘍の成長に遅延が見られた。しかし、電気刺激の刺激電圧のちがいによる効果の差異は明らかにはならなかった。本研究により、電気刺激によって腫瘍内低酸素領域を改善でき、放射線照射による治療成績が向上できる可能性が示された。
下等真核細胞の遺伝的制御系

本研究は、すべて酵母を用いて行った。大嶋は、種々のホスファターゼ系調節遺伝子の転写と翻訳の様相について調べ、調節系の上位にある遺伝子は、低レベル構成性の発現を行うが、最下位にあり、直接代謝因子の検出を行うと考えられている調節因子生産遺伝子の発現は、自身を含めた調節遺伝子の支配下にあることを認めた。深沢も、ガラクトース代謝系の調節遺伝子で、同様の結論を得ており、遺伝子発現調節系は、調節タンパク質相互間の干渉と、調節遺伝子の転写調節により連結される閉鎖環を形成することが判った。深沢はまた、負の調節因子タンパク質の活性ドメインについて、モデルの検証を行った。下田と山本は分裂酵母について、栄養増殖から胞子形成への切替機構に関係する遺伝子の検索に努め、培地中の窒素源の枯渇信号を受けながら、減数分裂を抑制する機能を持つpat1遺伝子と、正に働くmei2遺伝子を中心として、減数分裂に直接必要なmes1と多くのspo遺伝子、また、pat1の上位で、これを駆動するmatとmei3、その間に介在すると思われるsum11とsum12など、多くの遺伝子を検出した。さらに、減数分裂におけるCAMPの機能に関連するca11とca12遺伝子、発ガン遺伝子のRASと類似塩基配列をもつras1やカルモデュリン遺伝子の変異体を分離した。安楽は、細胞内調節因子としての【Ca^(2+)】の役割についての研究を目的として、【Ca^(2+)】感受性と依存性変異【Ca^(2+)】の輸送に欠陥を持つ変異、【Ca^(2+)】に依存して出芽過程に欠陥をもつ変異などを分離し、その内の一つに、細胞分裂不能変異であるcdc24と同一遺伝子座変異を認めた。宇野は酵母におけるCAMPカスケード系の機能について研究し、ホスファターゼ遺伝子の転写に、CAMP依存性タンパク質のリン酸化が必要であると認めた。また、CAMP依存性プロティンキナーゼが核内に分布することを確認した。今後、各研究系が共通のポイントを見つけ、結合されて行くことを期待している。
破骨細胞をモデルとしたリン脂質動態による細胞融合制御機構の解明

本研究は、破骨細胞分化における膜脂質動態に焦点を当て、分化過程における破骨細胞の融合・多核化の機構の解明に取り組んでいる。現在までのところ、破骨細胞の融合過程において、PE輸送トランスポーター・ABCB4とABCG1による細胞膜上のPE局在変化と、脂質合成酵素・LPEAT2によるPEの生合成増加が必須であることを明らかにしている。これらの成果に引き続き、リン脂質代謝酵素の一種・sPLA2-XIIAが、破骨細胞形成、ならびに破骨細胞により重篤化する関節炎発症に関わる可能性を新たに見出し、本酵素と破骨細胞形成・関節炎発症のメカニズムの解明を目的としている。また、細胞融合は破骨細胞に限らず特定の細胞種に観察される特異的かつ重要な生命現象であることから、破骨細胞融合で観察された脂質動態が、他の細胞融合現象にも関わるか否かという疑問は、生命化学の基礎研究の観点から興味深い命題である。そこで我々は、骨髄細胞から分化・融合する、多核マクロファージについて解析したところ、融合期に細胞膜外層のPEは増加するものの、その増加の度合いは破骨細胞融合に比べて弱いことを明らかにした。さらにABCG1の遺伝子発現が上昇し、この分子が多核マクロファージ形成に関わる可能性があるものの、破骨細胞のような脂質動態と細胞融合の明確な関係性を見出すことはできなかった。今後は他の細胞融合系である筋芽細胞融合についても解析を進める予定である。さらに、関節炎発症について、我々が見出した脂質動態分子群の核酸医薬による治療法の開発を見据えた応用研究を、本年度新たに開始した。現在のところ基礎的知見の段階ではあるが、核酸医薬siRNAの有効な安定化方法を見出すことに成功し、特許出願を行った。以上のように、破骨細胞融合と脂質動態分子を基にして、基礎研究から応用研究まで枝葉を広げて新しい展開を目指している。前年度までの研究により、リン脂質の合成酵素の一種であるsPLA2-XIIAが、破骨細胞形成や関節炎発症に関わる可能性を見出している。本年度の研究で、リコンビナントsPLA2-XIIAの酵素活性を測定したところ、高度不飽和脂肪酸を含有するPEを基質にする傾向が強いことが明らかとなった。また、sPLA2-XIIAを破骨細胞前駆体に過剰発現すると破骨細胞の融合多核化が促進されることを見出した。これらの結果と、我々が既に見出している破骨細胞形成にPEの局在変化や高度脂肪酸合成が必須であるという知見との関連を今後明らかにする必要がある。また、我々が見出した破骨細胞を分化誘導する脂質関連分子について、関節炎治療に応用することが最終的な大きな目標となる。脂質関連分子を治療に応用できないかと模索していたところ、当初は予定していなかったことではあるが、siRNAを用いて脂質関連分子を発現制御することによって新奇関節炎治療法を開発できるのではないかと思い立った。本年度新たにsiRNA医薬品を研究している有機化学者と共同研究することとなり、関節炎への応用を目指し、手始めとして彼らが新奇合成したsiRNA安定化化合物のin vitroの生化学的な物性を解析した。その結果、この化合物とsiRNA化学修飾を組み合わせることにより、生体内で極めて不安定なsiRNAが飛躍的に安定化することを見出し、特許出願した。この結果は申請時の計画とは若干方向性が異なるものの、骨疾患における脂質関連分子をターゲットとした治療法の開発という観点からは新しい一歩であり、比較的進捗状況が良かったので、本年度はこの内容で学会発表を行った。昨年度までの研究に引き続き、破骨細胞以外の細胞融合現象における脂質動態の責任分子の同定を来年度も進め、筋芽細胞融合過程における脂質動態分子の解析を行う。これらの解析により、種々の細胞融合過程において共通の脂質動態機構が働いているか否か明らかにする予定である。次に、sPLA2-XIIAの解析を進める。sPLA2-XIIA欠損マウスにおいて、関節炎モデル実験を施行し、足の腫脹や炎症マーカー発現などの関節炎病態をスコアリングし、この病態モデルにおける炎症マーカーの発現を解析し、病態モデルにおける脂質動態分子の役割を明らかにしていく。続いて、破骨細胞融合期において偽足様突起同士が接触することが、破骨細胞融合に必須であることを既に研究代表者は見出しているので、破骨細胞融合過程における偽足様突起形成を担う分子の探索を行う。既存の突起形成への関与が知られている分子に重点を置き、遺伝子発現解析を行うことにより突起形成の候補遺伝子を探索し、脂質動態による膜の構造変化がもたらす破骨細胞の機能的変化を明らかにする。最後に、昨年度に引き続き、脂質動態分子のsiRNA医薬品への応用に向けた基礎的研究を行う。昨年度、特許出願した内容について、国内優先権主張出願や国際特許出願に向けて追加実験を行う。さらに、将来的な関節炎へのin vivoにおけるsiRNA適用のために、関節炎に関わる滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞前駆細胞といった細胞にin vitroでsiRNA/安定化化合物複合体を作用させて挙動を解析する。本研究は、破骨細胞分化における膜脂質動態に焦点を当て、分化過程における破骨細胞の融合・多核化の機構を解明してきた。破骨細胞分化過程において、リン脂質の一種であるホスファチジルエタノールアミン(PE)の生合成が増加し、さらにPEが細胞膜二重層内層から外層へ移行することにより、破骨細胞融合が促進されることを見出すとともに、これらPE動態の責任分子を同定した。本年度、この研究成果を論文発表するとともに、学会等において発表した。

この成果に引き続き、さらに解析を進め、脂質動態が他の細胞融合現象にも関わるかどうか検証した。まず、破骨細胞と同様に骨髄細胞から分化・融合する多核マクロファージについて解析した。その結果、融合期に細胞膜外層のPEは増加するものの、その増加の度合いは、破骨細胞融合に比べて弱いことを確認した。また、偽足様突起先端にPEが偏在している破骨細胞とは対照的に、多核マクロファージにおいてはPEの偏在が観察されなかった。破骨細胞のPE輸送トランスポーター・ABCB4とABCG1の遺伝子発現を多核マクロファージにおいて解析したところ、ABCG1の発現量は増加していた一方で、ABCB4の発現上昇は観測されなかった。以上のことから、多核マクロファージ融合に破骨細胞融合と同様のPE動態が起こっているのか否か、現状では結論を見出すには至っておらず、今後更なる解析が必要と考えている。次に、筋芽細胞の分化・融合におけるPE動態の解析に着手した。その結果、融合前の未分化筋芽細胞は、細胞表面にPEの露出があまり見られないのに対し、融合期においては顕著にPEが露出していた。この結果は、筋芽細胞融合において、破骨細胞融合と同様のPE動態が起こっている可能性を示すものであり、今後、PE動態の責任分子を探索する予定である。当初の計画では、本年度は破骨細胞におけるPE動態の責任分子である、脂質合成酵素・LPEAT2と脂質トランスポーター・ABCB4、ABCGの遺伝子改変マウスを作成し、これら作業と平行して、培養細胞を用いたin vitroの解析を行う予定であった。しかし、遺伝子改変マウス作成の準備段階に時間を要してしまったために、遺伝子改変マウス作成は次年度以降に先送りし、本年度はin vitroの培養細胞を用いた実験を集中して行う方針に変更した。そのため、当初の研究計画のなかで本年度実施予定でありながら手付かずの部分と、逆に来年度以降に実施を予定していた実験を本年度に前倒しして行った部分が生じた。以上のような理由により、現在までの達成度としては、当初計画とは遂行する順序が異なっているものの、全体としての進捗状況は、概ね当初の計画どおりに進展しているものと判断している。また、当初は予想していなかったことではあるが、我々の予備的実験により、リン脂質の合成酵素の一種であるsPLA2-XIIAが、破骨細胞形成や関節炎発症に関わる可能性が明らかとなってきた。関節炎は、その病態の進行に破骨細胞が深く関与する炎症であり、我々の予備的知見は、破骨細胞と骨疾患病態における脂質動態関連分子の役割を理解する上で、非常に重要な発見をする可能性を秘めている。そこで、来年度以降さらに解析を進めるとともに、我々が見出している破骨細胞のPE動態とsPLA2-XIIAの関係性を明らかにする必要があると考えている。これらの解析が進めば、申請時の計画とは若干方向性が異なるものの、骨疾患における脂質動態の意義の解明という重要な研究成果を得ることが期待できる。本研究は、破骨細胞分化における膜脂質動態に焦点を当て、分化過程における破骨細胞の融合・多核化の機構の解明に取り組んでいる。
B細胞シグナル伝達機構のチロシンホスファターゼによる制御

【目的】本研究では、B細胞抗原レセプターのシグナル伝達に関与しているチロシンホスファターゼを同定し、その機能解析をすることにより、将来的に種々の病態の修復に寄与する成果をあげることを目指している。【研究成果】(1)CD45によるLynキナーゼの制御機構:WEHI-231において、LynがCD45の選択的な基質になっていること、しかもLynのチロシンリン酸化とキナーゼ活性をネガティブに制御していることを明らかにした。その機構を解明するために、WEHI-231細胞とCD45陰性クローンを^<32>Pで標識した後、Lynをcyanogen bromideで切断し、SDS-PAGEで展開して自己リン酸化部位とネガティブ制御部位のリン酸化の程度を比較した。その結果、CD45陰性クローンでは両部位のチロシンリン酸化が抗原レセプター刺激以前に亢進していることが明らかになり、Lynの酵素活性は両部位のリン酸化のバランスにより制御されている可能性が示唆された。(2)SHP-1結合蛋白の同定:WEHI-231、BAL-17において、抗原レセプター刺激後にチロシンリン酸化される少なくとも3種類(150kD、110kD、75kD)の蛋白がSHP-1-GSTと結合すること、この結合は細胞内でも同様に認められること、結合分子中の75kDの分子がSF2領域を含む造血系の分子SLP-76であり、その結合は抗原レセプター刺激以前から認められること、さらにSHP-1に結合する150kD分子はSHIPであり、この結合も構成的であることなどを明らかにした。