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少子化社会におけるライフデザインの実践と議論に関する文化比較の医療歴史人類学研究

少子高齢化への問題意識を契機として、暮らしの可能体を再考することが緊急の課題である。本研究においては、とくに以下の3点について、現地調査研究に基づき考察を深めた。1.少子高齢社会やケア・福祉に関する議論を整理・考察する。2.時間の使い方やライフサイクルの捉え方などに表現される様々なライフスタイル(教育・家族関係)の検討に基づき、時のデザインのヴァリエーションを考察する。3.多文化・多年代の人々の往来・交流を可能とする空間の創出とアクセシビリティの工夫の実践から、諸関係性の可能性を再考する。対象地域社会として「超少子化」国たる日本と対比的に「ゆるやかな少子化」社会に移行を遂げつつある北海沿岸地域に着目し、さらに教育やライフサイクルについて特徴ある実践を試みている北米のコミュニティをとりあげ、比較文化研究を進めた。その結果、少子高齢化を経験してきた国々において、出生率が注視されているとは限らず、フランス、デンマーク、スイスなどでは、経済的支援や仕事のしかたにヴァリエーションをもたせるなど子育てへの配慮もなされる一方、移民の流入や国際養子縁組による子どもの移動にも深い関心が向けられていることが見いだされた。人々が囲いこまれることなく交流できることが、一方向的ではないケア=配慮を生みだし持続的共生を可能とする一要素と考えられる。本研究では、こうした空間の創出と柔軟な持続的活用に関し、基盤的研究と応用的研究を連関させつつ進め、今後の課題でもある「福祉」(well-being)概念の発展的再構築の基盤的知見を提示した。少子化は少子高齢化に関わる問題として論じられている。本研究では少子高齢化社会のライフデザインという観点から、「ケア」、ライフステージ観、余暇の確保や多様性のある暮らしについて、調査研究を進めた。1.基礎的資料の収集少子化傾向が縮小し注目されるデンマークを中心に基本文献を収集した。2.研究調査1)高齢化と過疎化が進行してきた徳島県上勝町における活性化の試みについて2度研究調査を行った。地域の高齢者に適合的な事業展開、事業の担い手として外部から若年層を受け入れ共に暮らすための具体的実践に関し知見を深めた。2)多文化主義の実践で注目されるカナダのトロント市において、多様な世代が共に暮らす街がいかにデザインされ実践されつつあるかについて3カ所で研究調査を行った。高齢者ケア施設が、高齢者用一般住居、子育て世代用住居、文化施設に近接して建設され、高齢者用住居からのアウトリーチとして、文化活動の地域住民への開放、自宅で生活する高齢者への支援が実践されている現状について情報収集した。いずれの施設においても複数のエスニック・グループが暮らし、エスニック・アイデンティティを尊重しつつ互いに文化的刺激を与えている様子が観察された。3.研究会開催「少子高齢化社会におけるライフデザインに向けて-ライフステージ間関係への問い」というテーマで京都文教大学において研究会を開催し研究協力者とともに報告・ディスカッションを行った。(鈴木七美「少子高齢化社会の問題性とライフデザインのゆくえ-循環的共生の模索」;山田千香子(長崎県立大学教授)「ライフステージ変化への戦略-しまの高齢化とカナダ日系移民社会の事例から」;洪賢秀(科学技術文明研究所研究員)「生殖をめぐる韓国社会の対応と課題」;コメント田中真砂子(お茶の水女子大学名誉教授)4.2.1)の研究調査に関し研究論文を執筆した。本年度は、少子高齢化時代にいかなる生き方のヴァリエーションがローカルに模索されているのか、ライフデザインに関しどのような分析基盤を提供できるのか、文化人類学の応用可能性に関して考察を深めた。たとえば、「ノーマライゼーシヨン」という語が実践においていかに解釈されているか、近年の親族研究における議論「食物を分かち合い共に暮らすという毎日を積み重ねることで紡がれるより広い人と人との関係性("relatedness")」[Carsten 2000]などを検討し、ローカルな場で豊かな生を求める人々が構築しうる関係性について考察した。1.基礎的資料の収集

1)少子化傾向が縮小しているデンマーク、多文化主義の実践を続けるカナダを中心に統計および基本文献を収集。2.研究調査バンクーバー市で日系の高齢者施設がいかにデザインされたのかを調査した。高齢者ケア施設が、高齢者用一般住居および日系博物館と共に建設され、「日本文化」に関心を抱く人々の交流の要となる現状について情報収集した。また「日本文化」に関する活動を通して交流する場としての"Tonari Gumi"について調査した。3.第2回研究経過報告会(平成18年11月23日於京都文教大学)テーマ:「少子高齢時代におけるライフデザインへの文化人類学的貢献に向けて」小林香代「『まちおこし』の実践に働く構造的拘束-否認される『政治性』、隠蔽される『政治性』」;田中真砂子「年齢階梯的社会が少子化(+嫁不足)の波に襲われるとき-三重県菅島の場合」;山田千香子「離島における出産」;洪賢秀「韓国社会における海外養子のイメージ」;鈴木七美「トロントの日系高齢者施設における試み」5.少子高齢化時代のライフデザインに関わり、「医療・身体論」『文化人類学20の理論』を執筆。
EGF様ドメインに発見された新しいオリゴ糖鎖の機能解析

我々は、血液凝固因子のFactor IX,Factor VII, Protein Zや血小板に存在する糖タンパク質のトロンボスポンジンのEGF類似ドメインに新規のO-結合型糖鎖(Xyl-Glc-O-Ser,Xyl-Xyl-Glc-O-Ser)を見出し、すでに報告した。その後、さらにヒトFactor IXの第一EGF類似ドメインのSer-61にFucを介したオリゴ糖が結合していることを見出し、それらの構造と機能について解析してきた。最近、ヒトFactor IXのAP(残基No.146-180に相当)のアミノ酸分析を行なったところ、GlcNH_2に加えてGalNH_2が定量され、O-結合型糖鎖の存在が示唆された。APは、Factor IXを組織因子存在下、VIIa因子で活性化し、逆相HPLCにより単離した。得られたAPをN-グリコシダーゼFで処理し、Asn-結合型糖鎖を除去後、エンドペプチターゼAsp-Nで断片化し、精製したペプチドについて2-アミノピリジンを用いた糖組成分析とシアル酸(SA)の定量を行った。その結果、1molのペプチド当たり、Ga1NAc,Gal,SA,それぞれ1molを含む2つのペプチド(AP157-165,AP166-176)が同定された。両ペプチドのアミノ酸配列分析を行なったところ、Thr-159とThr-169に相当するPTH-アミノ酸は全く回収されなかった。従って、これら2つのThr残基にGalNAc,Gal,SAから成るトリサッカライドが結合していると推定した。なお、ヒトFactor IXのAPは、逆相HPLCにより少なくとも3種類に分別されるが、その中で、O-結合型糖鎖を含まないAPも存在することが判明した。
ユダヤ・ルネサンスにおけるニーチェ受容と自由ユダヤ学院の思想史的研究

本研究は、20世紀ドイツにおけるユダヤ・ルネサンスをニーチェ思想の受容と自由ユダヤ学院の政治-教育的機能という2つの観点から考察した。第1の観点に関しては、ニーチェの近代批判が多くのユダヤ人思想家、とくにマルティン・ブーバーの思想に大きな影響を与えていたことを解明した。第2の観点に関しては、自由ユダヤ学院は19世紀のユダヤ学の成立と関係づけながら考察する必要性があることが明らかになった。この2つの結果を通して、本研究はドイツにおける近代ユダヤ教の複雑な展開を考察するための有益な手がかりを示すことができた。本年度は、フランツ・ローゼンツヴァイクとマルティン・ブーバーのテクストを、「対話の思想家」や「人格主義の哲学者」とは異なる角度から読み込むことを目的としながら、研究を進めた。その過程で2つの特筆すべき成果が得られた。1.しばらく中断を余儀なくされていた単著の執筆が科研費による研究支援によって大幅に進み、脱稿することができた(出版は2015年度予定)。そのなかでは本年度の研究目的であったローゼンツヴァイクとブーバーによる特異なニーチェ受容の解明だけでなく、カール・レーヴィットがみずからの戦争理解とニーチェを結びつけ、また当時のユダヤ教のラビたちがニーチェの思想を限りなく自分たちの立場に引き付けながら、ユダヤ教の再興のために用いようとしていたという思想史的事実を突き止めることができた。当初の計画通り、多くのユダヤ人たちがニーチェの「正しい解釈」ではなく、ニーチェの思想に自分たちの立場を上書きしていくことに専心していたことがわかった。2.本研究の「研究計画調書」を提出したのち、2014年10月にフランクフルト大学で国際ローゼンツヴァイク学会(Internationale Rosenzweig-Gesellschaft)が開催されること、また学会の共通テーマが本研究とも一致するローゼンツヴァイクの自由ユダヤ学院や教育観をめぐるものであることが判明した。本研究を順調に遂行するためにも国際学会への参加は不可欠と考え、国際ローゼンツヴァイク学会において「フランツ・ローゼンツヴァイクの教育プログラムと政治」(ドイツ語)について発表を行なった。最先端のローゼンツヴァイク研究者の発表を聞くことができ、意見を交換することもできた。結果的に本研究の遂行にとってきわめて貴重な経験ならびに研究成果を得ることができたと総括できる。本年度は19世紀から20世紀にかけてドイツに成立したユダヤ学やその諸組織を、近代ユダヤ人のアイデンティティの問題や学問理解の角度から考察した。次の2点が本年度の研究実績である。1.科研費の獲得と支援によって執筆に弾みがついたことで、26年度に脱稿した『ドイツ・ユダヤ思想の光芒』(岩波書店)が出版された。そのなかの一章で自由ユダヤ学院を集中的に論じたが、そのさい明らかになったのは自由ユダヤ学院はフランクフルト学派のような一定の理念を共有した集団というよりも、緩やかに結びついた「ユダヤ的知のネットワーク」と理解することができるという点である。またレオ・シュトラウスの議論を参照しながら、ローゼンツヴァイクの自由ユダヤ学院が彼の政治的行為であったことも明らかにし、従来の非政治的思想家というローゼンツヴァイク像を相対化することができた。2.上記の自由ユダヤ学院だけでなく、ユダヤ学促進協会という組織も検討した。これによってこれまで単独で研究されてきた自由ユダヤ学院の存在を比較制度ないしは比較思想的に分析することが可能になった。また、ユダヤ教を研究するために創設された組織は、19世紀ドイツに産声を上げたユダヤ学の性格を大きく反映させることになった点も明らかになった。ユダヤ学と組織の関係のなかには、単純にユダヤ教を歴史批判的に研究する学問運動とは言えない、非常に複雑な性格を確認することができた。それはユダヤ教の歴史批判的研究という理念とは別に、ユダヤ教を世俗的に研究することの過剰な負担によって生み出された緊張状態や学問の変容であり、20世紀のドイツ・ユダヤ思想史は19世紀のユダヤ学の成立との関係において緻密に分析されなけれなばらないことを再確認した。『ドイツ・ユダヤ思想の光芒』が出版されたことでいくつかの重要な意見を得ることができ、また研究目的として設定した自由ユダヤ学院やローゼンツヴァイクの政治的行為の内実も明らかにすることができた。くわえて宗教学会での発表を通して、より広い視点から19世紀から20世紀にかけてのドイツのユダヤ教研究とそのために設立された組織の状況について深く掘り下げることができた。最終年度になる本年度は、フランツ・ローゼンツヴァイクの自由ユダヤ学院やその周辺にいたユダヤ人たちの思想、また彼らと19世紀に誕生したユダヤ学との両義的関係を中心として、〈ユダヤ・ルネサンス〉の思想史を総合的にまとめた。そのさい、平成26年度ならびに27年度に行ったユダヤ人思想家のニーチェ受容や学術組織に関する研究成果も有機的に結びつけるように工夫した。1.京都ユダヤ思想学会と日本宗教学会において19世紀のユダヤ学と20世紀のユダヤ学批判の関係について発表した。前者ではイェルシャルミのユダヤ的記憶論を取り上げながら、彼の歴史学批判が20世紀の反歴史主義的な思想にも通じていることを指摘した。後者では19世紀のユダヤ学の成立に焦点を当てつつ、後のM.ブーバーやI.エルボーゲンがユダヤ学に対してどのような態度を取ったかをテクストや講義録を用いて考察した。これによって自由ユダヤ学院の政治-教育的機能を解明するうえでも、その周辺に集まったユダヤ人思想家の研究は必須であることを再確認できた。

くわえて、政治哲学研究会の雑誌『政治哲学』にローゼンツヴァイクの著書『ヘーゲルと国家』について書いたことで、当時のドイツ性とユダヤ性に関する複雑な状況を考えるための重要な視点を獲得できた。2.平成27年度に出版した『ドイツ・ユダヤ思想の光芒』(岩波書店)は本研究を進めるうえで大きな役割を果たしたが、拙著についていくつかの反響を得ることができた。とくに広島比較文化研究会では、拙著が成立した背景について話す機会を得た。日本のドイツ・ユダヤ思想史研究のすぐれた業績を振り返りながら、拙著がなぜ〈ユダヤ・ルネサンス〉に注目し、近代ユダヤ人の新しいアイデンティティを論じたかを説明した。また当時の脱宗教化した社会と宗教に目覚める若手世代の関係について議論できたことは、本研究をまとめるうえでも有益だった。本研究は、20世紀ドイツにおけるユダヤ・ルネサンスをニーチェ思想の受容と自由ユダヤ学院の政治-教育的機能という2つの観点から考察した。第1の観点に関しては、ニーチェの近代批判が多くのユダヤ人思想家、とくにマルティン・ブーバーの思想に大きな影響を与えていたことを解明した。第2の観点に関しては、自由ユダヤ学院は19世紀のユダヤ学の成立と関係づけながら考察する必要性があることが明らかになった。この2つの結果を通して、本研究はドイツにおける近代ユダヤ教の複雑な展開を考察するための有益な手がかりを示すことができた。当初予定していなかった国際ローゼンツヴァイク学会への参加ならびに研究発表と単著の完成(脱稿)は予想以上の成果だったと判断できる。これに加えて、これまで注目されてこなかったレオ・シュトラウスのフロイト理解と政治的シオニズムの関係について論文を執筆し、また政治哲学研究会においてシュトラウスの名著『自然権と歴史』に暗い影を落としている「歴史主義の問題」について発表することができた。当初の研究計画にしたがって研究を進める。とくにユダヤ・ルネサンスが近代への応答という意味での批判的役割を果たしていたことやその現代的意義を総合的にまとめる予定である。思想史・宗教学当初の計画にしたがって研究を進める。とくに「ユダヤ教学の大衆化」と自由ユダヤ学院の関係、政治的行為としての自由ユダヤ学院の内実について考察する予定である。また、その成果を宗教学会等で発表することも計画している。当初の予定よりも物品費が若干ではあるが節約できたため、次年度使用額が生じた。平成27年度の物品費(関連図書の購入)に組み込むことを計画している。
キレート生成を用いたキラル塩基のデザインとその不斉合成への応用

高選択的不斉合成反応の開拓は現代有機合成化学の中心課題の一つである.本研究は,不斉塩基を用いるエナンチオ選択的脱プロトン化反応の開発を目的とした.キラルリチウムアミド(2)を用いる.4-置換シクロヘキサノン類(1)のエナンチオ選択的脱プロトン化反応を行い,キラルなリチウムエノレート(3)を生成させ,対応するシリルエノールエーテル体(4)を高いエナンチオ選択性で得ている.本反応の条件を詳細に検討することにより,以下の諸点が判明した.1.立体選択性は,キラルアミド(2)の構造に大きく依存する.特に,窒素原子のα位の置換基の影響が顕著であり, R^1または, R^2がフェニル基の時に高い立体選択性を示す.2.シクロヘキサノン類(1)の4位の置換基が,立体的に峯高いほど立体選択性が高い. 1のアキシアル,エクアトリアルのコンホメーションの固定の度合によるものと考えられる.3.五員環キレート構造を想定したキラルアミド(2:R^1=OR or NR_2)では,各種溶媒により異なった選択性を示す.しかし, HMPAの添加により,選択性が各種溶媒で一定となり,かつ向上する.これは, HMPAの添加により, 2のモノメリックな反応になるためと考えられる.高選択的不斉合成反応の開拓は現代有機合成化学の中心課題の一つである.本研究は,不斉塩基を用いるエナンチオ選択的脱プロトン化反応の開発を目的とした.キラルリチウムアミド(2)を用いる.4-置換シクロヘキサノン類(1)のエナンチオ選択的脱プロトン化反応を行い,キラルなリチウムエノレート(3)を生成させ,対応するシリルエノールエーテル体(4)を高いエナンチオ選択性で得ている.本反応の条件を詳細に検討することにより,以下の諸点が判明した.1.立体選択性は,キラルアミド(2)の構造に大きく依存する.特に,窒素原子のα位の置換基の影響が顕著であり, R^1または, R^2がフェニル基の時に高い立体選択性を示す.2.シクロヘキサノン類(1)の4位の置換基が,立体的に峯高いほど立体選択性が高い. 1のアキシアル,エクアトリアルのコンホメーションの固定の度合によるものと考えられる.3.五員環キレート構造を想定したキラルアミド(2:R^1=OR or NR_2)では,各種溶媒により異なった選択性を示す.しかし, HMPAの添加により,選択性が各種溶媒で一定となり,かつ向上する.これは, HMPAの添加により, 2のモノメリックな反応になるためと考えられる.
乏幹細胞状態の皮膚軟部組織への移植に最適な幹細胞系統の探索研究

高い再生力を持った組織は豊富な血流と十分な数の組織局在性の幹細胞が特徴である。組織局在性幹細胞は再生中の組織に必要な細胞を迅速大量に供給することが可能である。このような組織局在性幹細胞が豊富で良好な治癒機転にある組織では、外来性の幹細胞補充の必要性は殆どない。しかし、形成外科領域では、重度の障害を受け血流・組織局在性幹細胞とも乏しい組織の治療の必要性に直面する。しかし、重度に治癒力が低下した皮膚軟部組織にに移植する幹細胞として何が適しているのか、移植された幹細胞が何になるのか、幹細胞が創傷治癒力を発揮する機序が何であるか、は明らかではなく、治療効果も不明である。本研究の目的は、形成外科領域の再生力低下組織に移植された、各種幹細胞の生着と分化および組織再構築能の違いを比較することである。従来のアプローチでは根本的な改善は困難である。再生力の低下した乏幹細胞状態部位や、元来幹細胞が存在せず再生力のない部位に対する幹細胞補充療法については、世界中で様々な研究が行われている。しかし、マウスは創傷治癒力や細菌感染に対する抵抗性が極めて高く、難治性創傷モデルや感染モデルが作成しづらいことが知られている。そこで、我々はマウス頭蓋骨に一定以上の組織欠損を生じさせたモデルを作成し、マイクロCTおよび組織学的検討を行ったところ、24週時点でも自然治癒は生じず難治性創傷モデルとして使用しうることを明らかにした。同モデルマウスを用いて、創傷に対する幹細胞移植として、シアニン系近赤外蛍光色素で染色したマウス自家脂肪組織由来間葉系幹細胞をフィブリン糊を足場として移植し、生体イメージング法による観察を行った結果、移植細胞が未だ不安定である移植初期において移植細胞が安定して移植部位に留まることが確認された。今後、幹細胞移植によって創傷治癒を促進することができる具体的条件を明らかにしたい。
癌浸潤リンパ球と末梢血液細胞の包括的遺伝子発現解析による癌免疫動態の解明

増殖から消褪までの特徴を示すマウス皮下肝癌モデルを用いて、癌局所の浸潤炎症細胞と末梢血液細胞の遺伝子発現プロファイルの解析を行った。末梢血液細胞の遺伝子発現プロファイルは、経時的グループ別に類似性を示した。腫瘍径がピーク期の際の腫瘍内炎症細胞と末梢血液細胞の遺伝子発現の共通した特徴には、IL-6シグナル、変性蛋白に対する応答が示された。また、各々の特徴的なプロセスには、腫瘍内炎症細胞では、インターフェロンシグナル、NK細胞傷害性、補体系が、末梢血液細胞ではIL-10応答、アンフォテリン応答がそれぞれ示された。包括的遺伝子発現解析によって、癌における局所と全身の炎症の共通および各々に特徴的な応答を解明できる可能性が示された。マウス肝癌細胞株Hepa1-6を1×10^7個、C57BL/6(♀、8週齢)の背部皮下に接種し、皮下Hepa1-6肝癌モデルの作成を試みた。経時的に腫瘍径を計測したところ、15日目に最大径(直径約10mm大)の腫瘍を形成した後、漸次縮小し、25日目には、完全に消失した。一方、Balb/c無胸腺マウスに、Hepa1-6を1×l0^7個、皮下に接種した場合、Hepa1-6皮下腫瘍は漸次増大し、消退は示さなかった。このことより、C57B1/6マウス皮下Hepa1-6腫瘍の消退には、T細胞を主とする免疫応答が関与していることが示唆された。皮下にHepa1-6肝癌細胞株を接種したC57BL/6マウス(n=5)より、接種前(day 0)、接種後10日(day 10)、15日(day 15)、20日(day 20)、25日(day 25)に末梢血液細胞RNAを経時的に抽出し、DNAマイクロアレイWhole Mouse Genome 4×44K Array(Agilent Technologies)を用いて遺伝子発現プロファイルを解析したところ、非教師付階層クラスタリングによって、day0, day 25, day 10, day 15, day 20の完全なクラスターが形成された。このことは、皮下における腫瘍の増大、および消退における局所免疫応答が、全身を循環する末梢血液細胞に影響し、遺伝子発現プロファイル変化にその特徴が反映されていると考えられた。現在さらにプロファイルの特徴、およびその機序の解析を進めている。Hepal-6マウス肝癌細胞株をC57B1/6Jマウス皮下に1×10^7個接種したモデルにおいては、腫瘍組織は1015日目まで増殖を示し、その後縮小し25日目頃に消失するが、この過程において皮下腫瘍における炎症細胞が浸潤し、腫瘍の増殖消褪に関与していることが示唆されている。Hepal-6皮下腫瘍増殖時における生体の応答について、腫瘍局所の応答として皮下腫瘍内における炎症細胞を、全身の応答として血液中の細胞に着目し、その遺伝子発現変化をDNAマイクロアレイを用いて包括的に解析した。Hepal-6を1×10^7個C57B1/6Jマウス皮下に接種後(n=8)、10日目において、腫瘍を切除、破砕後フィコールを用いて炎症細胞を分離した。また、同じマウスより血液を採取、即時RNAを安定化するRNAlaterと混和した。それぞれRNAを分離精製し、DNAマイクロアレイWhole Mouse Genome 4×44K Array(Agilent Technologies)を用いて遺伝子発現プロファイルを解析した。リファレンスとしての遺伝子発現には、無処置のC57B1/6Jマウスの血液RNAを用いた。腫瘍内炎症細胞について、リファレンスより発現が上昇した遺伝子は、1.5倍以上では4833個、1.8倍以上では3493個、2.0倍以上では2851個であった。また、血液細胞RNAについては、1.5倍以上では2474個、1.8倍以上では、962遺伝子、2.0倍以上では489個であった。皮下腫瘍形成マウスの腫瘍内炎症細胞および血液細胞双方において共通して発現が上昇した遺伝子は、1.5倍以上で243個、1.8倍以上で113個、2.0倍以上で65個であった。腫瘍内炎症細胞と血液細胞との間で共通した発現変化を示した遺伝子群の生物学的特徴について解析を行っている。C57Bl/6Jマウスへの、Hepa1-6マウス肝癌細胞株皮下移植による腫瘍モデルは、経過中移植後10日15日まで増殖し、その後縮小消失するが、この過程に腫瘍局所の著明な炎症反応が生じる。

癌局所における免疫反応と、全身応答を反映すると考えられる末梢血液細胞について、包括的遺伝子発現解析によるその特徴、類似相違の解析のため、本モデルを用いた。1×10^7個のHepa1-6肝癌細胞を移植した後、10日目に、末梢全血RNAを採取、また、腫瘍内炎症細胞をフィコールを用いて分離、RNAを抽出、DNAマイクロアレイWhole Mouse Genome 4×44K Arrayを用いて遺伝子発現プロファイルを解析した。リファレンスには無処置のC57Bl/6Jマウスの末梢全血液RNAの遺伝子発現を用いた。全血においてリファレンスより1.5倍以上の発現亢進を示した遺伝子2474個について、および腫瘍浸潤炎症細胞において1.8倍以上の発現亢進を示し、Hepa1-6細胞では1.8倍未満の発現量の遺伝子738個について、MetaCoreを用いてパスウェイマップ解析、プロセス解析を行った。両者共通に免疫系応答、アポトーシス、DNA損傷応答、組織再構築ならびに損傷修復のマップが示された。プロセスでは、炎症について、IL-6シグナルが共通し、血液細胞ではIL-10応答、アンフォテリン応答が、腫瘍炎症細胞では、インターフェロンシグナル、NK細胞傷害性、補体系がそれぞれ示された。また、変性蛋白に対する応答が共通したプロセスとして示された。包括的遺伝子発現解析によって、腫瘍局所の炎症反応と末梢血液細胞の応答の共通した応答および各々の特徴的な応答を解明できる可能性が示された。
熱帯・亜熱帯に分布する火山灰土壌の腐植複合体と荷電特性に関する研究

生物気候条件を異にする7ヶ国の火山灰土壌(アラスカ、アメリカ、日本、パプアニュ-ギニア、インドネシア、西サモア、エクアドル、チリ、ニュ-ジ-ランド)の合計100ペドン(文献調査を含む)を用いて、(1)腐植の集積とAl(Fe)腐植複合体の生成、(2)腐植複合体の性状、(3)複合体の生成上の意義について次のことが明らかとなった。1.土壌中の腐植の集積量と年代の関係およびピロリン酸抽出のAl(Fe)と炭素量間の高い相関は、火山灰土壌における腐植の集積と安定化が生物気候条件の相違に関係なくAl(Fe)腐植複合体の生成とともに進行することを示唆していた。2.上記のことは、アロフェンやフェリハイドライト由来のAl(Fe)量と全炭素量との間に相関関係が明らかに低いことからも示唆された。3.集積したAl(Fe)腐植複合体は、Alpyr/Cpyr比が0.14,(Al+Fe)pyr/Cpyr比が0.17となり、単量体のAl(Fe)に加えて、重合体のものも腐植複合体の生成に寄与していると考えられた。4.腐植の集積は、アロフェンやイモゴライトの生成を抑制することが示唆された。このことは全炭素量と(Al+1/2Fe)pyr/(Al+1/2Fe)ox比との間の高い正の相関から推定され、腐植としては火山灰土壌でもその類縁土壌中のものが抑制効果が高いことが明らかとなった。5.熱帯・亜熱帯に存在する火山灰土壌の一般的理化学性のうち、塩基飽和度は、主に新鮮灰の供給と乾季の存在によって影響されていることが示唆され、また腐植の存在形態は植生条件(草本と森林)によって影響をうけることが明らかとなった。昭和62年度の研究経過は,ほぼ交付申請書の研究実施計画に沿って進められた.すなわち,インドネシアジャワ島及びスマトラ島,パプアニューギニア,西サモアなどから採取された土壌試料について一般的理化学性を調べた.成果の一部はすでに公表した(昭和62年度日本土壌肥料学会於札幌).これらの土壌の一般的理化学性は,地域,年代,植生などの相違により異なったが試料中には日本の火山灰土壌では見受けられないOxisolsやSpodosolsへの移行段階にある粘土鉱物組成等が異なる試料が見出され興味深い.腐植複合体については第9回国際土壌分類ワークショップ(1987,87月)で発表したように既存のデータと今年度分析を行なった約30点の試料(合計100ペドン)のとりまとめを行なった.その結果,気候,母材,植生などの影響をある程度受けるものの基本的にはピロリン酸抽出のアルミニウムと全炭素や抽出炭素量の間には非常に高い相関が認められ,この形態のAlが腐植の集積にとり重要であることが認められた.昭和63年度の研究経過は、ほぼ交付申請書の研究実施計画に沿って進められた。すなわち土壌の荷電特性については研究代表者の転任のため研究目的のため購入したイオンクロマトグラフが使用不可能となった。しかしその他の項目については以下の成果が得られた。1.今年度新たにフィジー、バヌアツおよび西サモアの試料について、それらの一般的理化学性が明らかとなった。とくに西サモアの試料では、オキシソルへの移行段階と考えられる鉄(ゲーサイト、ヘマタイト)とアルミニウム(ギプサイト)に富む火山灰土壌の存在が明らかとなった。このことは分類上意義深いと思われる。2.フィジーとバヌアツの試料については、ほぼ我国の土壌と似た性質を示したが、これは熱帯・亜熱帯の気候下でも母材が若ければ温帯気候下の火山灰土壌と同様な風化過程を通ることを示すものと考えた。

3.腐植の存在形態については、ピロリン酸抽出に関する限り温帯のものとよく似た組成(アルミニウムと鉄の合量/炭素量)を示した。ただし西サモアのように非晶質のアルミニウムや鉄の多い試料では、ピロリン酸で抽出する際分散した形態の除去が必須であることが明らかとなった。4.腐植の腐植化度は、一般に我国のものより低く、態田の分類ではB型あるいはP型が多く存在した。5.試料に存在する粘土鉱物のうち、非晶質成分について選択溶解処理を行ないその形態を化学分析と赤外吸収スペクトルによっ同定することを試みた。その結果、とくに西サモアの土壌で、従来から報告されているアロフェン、フェリハイドライトあるいは結晶度の非常に悪いハロイサイトなどとは異なる合水鉄アルミニウムゲルの存在が示唆され、今後の研究が期待される。6.腐植の集積は主にピロリン酸抽出の鉄とAlによって支配されていた。1.パプアニュ-ギニアとインドネシアの試料について、その形態分析を腐植について行った結果、次のことが明らかになった。(1)Kunai grasslamdが主体であったパプアニュ-ギニアでは、我国の火山灰土壌と同様腐植複合体を形成している腐植の形態はA型であった。(2)インドネシアの森林植生下の火山灰土壌の腐植の形態は、B型を主体とし、Pg画分を多量に含んでいた。2.昭和62年度および63年度において分析した土壌試料について、そのアロフェン含量およびフェリハイドライト含量を調べた結果、次のことが明らかになった。(1)塩基飽和度が高い(50%以上)試料では、アロフェンの生成が抑制される傾向にあったが、フェリハイドライトの生成はその限りではなかった。土壌pHを規定しる生成環境の相違の影響が重要と考えられた。(2)生成年代が古い火山灰土でも、アロフェンは安定に多量に存在しており、フルボ酸も多量に存在することから、これらの複合体は土壌中に比較的安定な形態で長期間存在するものと考えた。3.西サモアの粘土鉱物についてさらに詳細な分析を行なった結果次のことが明らかとなった。(1)ケイ素含量(オキザレ-ト抽出)は低いが、同時に抽出されたアルミニュ-ムや鉄とよい相関を示し、フェリハイドライトやアルミニュ-ムゲルの一部にケイ素との結合を持つ非晶質粘土鉱物の存在が示唆された。このような鉱物はいままでの報告には見当らない。4.本年度が本研究の最終年度になるため、これまでの研究成果を別紙様式1としてまとめた。
源氏物語別本諸本の基礎的研究

源氏物語別本諸本の基礎的な研究として、分量が膨大なだけに、まず今年度はいくつかの伝本の調査と、具体的に用いられている作品の本文の分析に努めた。以下、その研究実績と経過の一部について報告しておく。1)文化庁蔵保坂潤治旧蔵本の調査浮舟巻を欠く53帖で、桐壷巻から絵合巻までの17帖は室町期の補写、残りの36帖は鎌倉期の古写本である。初めの17帖は桐壷巻が定法寺公助、帚木巻が中御門宣秀筆、ほかに飛鳥井雅康・三条西実隆などの伝称筆者名が付される。古写の36帖には、薄雲・初音・椎本・宿木・手習・夢浮橋の各巻を慈鎮とし、藤袴・竹河を冷泉為相筆とするだけで、それ以外には極札は付されていない。また、この36帖のうち、松風と蛍が河内本で、あとは別本である。これほど別本がまとまって伝来している例はあまりないので、本文研究において貴重な存在と言えよう。2)定家所持本の検討青表紙本が校訂される以前、定家はどのような源氏物語を所持していたのか、その実態を知るため『物語二百番歌合』の本文の性格を考察することにした。それによると、和歌は青表紙本系統、詞書は明らかに別本の本文によってダイジェスト化されていると知られる。初めは別本で作成し、青表紙本の校訂とともに、和歌だけは改訂したと思われる。3耕雲本の調査天理図書館蔵薄雲・朝顔・東洋大学図書館蔵玉鬘巻を調査し、その本文の性格・書き入れ注記について考察した。4陽明文庫本(別本)のいくつかの巻をパーソナルコンピューター(PC9801VM)に入力し、文節ごとに区切って、青表紙本(大島本)との比較を進めている。
表面増強ラマン散乱によるヒトの病気に関連したタンパク質の超高感度検出

本年度は表面増強ラマン散乱(Surface-enhanced Raman Scattering;SERS)法の高感度生体分析の応用としてフェノール性エストロゲンの研究を行った。過剰のエストロゲンはいろいろな重篤な病気を引き起こす可能性がある。そこで安全基準以下のエストロゲンの迅速簡便な高感度分析法の確立が必要となるが、現在用いられている方法は感度では十分であるものの必ずしも迅速簡便というわけではない。報告者らはSERS法を用いてエストロゲンの高感度分析を行うことを考えたが、エストロゲンそのものは弱いSERSしか与えない。そこでPauly's試薬によるカップリング反応を用いてエストロゲンのアゾ化合物を合成し、そのSERSスペクトルを測定した。カップリング反応は1分以内で終了し、得られたアゾ化合物は500nm付近に強い吸収を示すことがわかった。したがって514.5nmや488.0nmのレーザー光を用いてスペクトルを測定するとSurface-enhanced resonance Raman scattering(SERRS)スペクトルが得られた。この方法を用いた時の検出限界は0.1ppb(0.1μg/kg)であった。この値はマススペクトルやSurface Plasmon resonance(SPR)を用いた時と同程度である。この方法の利点は、簡便(カップリング反応の後特別な処理は必要ない)、迅速(カップリング反応とSERS測定を併せて2分)、高感度、高選択性、汎用性(いろいろな種類のフェノール性エストロゲンに使える)という点で今後色々なフェノール性化合物に応用できそうである。表面増強ラマン散乱(SERS)を用いた高感度タンパク質検出の新しい例として、タンパク質の定量法として有名なBradford assayとSERS法を組み合わせた方法を提案した。Bradford assayはCoomassie brilliantblue G-250(CBBG)がタンパク質と結合したときに吸収帯が465nmから595nmにシフトすることを利用するものである。この方法は簡便、迅速、比較的高感度という利点を持つが、直線的な濃度領域が比較的狭い(0.2-20μg/mL)という欠点がある。Bradford assay-SERS法は、この欠点を克服し、かつはるかに高感度を提供するものである。タンパク質-CBBG混合液では、タンパク質の量が増えるとともにタンパク質に結合していないCBBG分子が減り、それに銀ナノ粒子を加えるとタンパク質に結合していないCBBGのSERS強度とタンパク質濃度の間に直接的な関係があることを見出だした。言い換えれば、非結合CBBG分子のSERS強度からタンパク質濃度を決定できることがわかった。この定量には、シリコンの520cm^<-1>のバンドの強度が内部基準として用いられた。この方法では、10^<-5>-10^<-9>g/mLの範囲でタンパク質の定量が可能で、その検出限界は1ng/mLであることがわかった。この方法は幅広いタンパク質に応用が可能である。アビジン誘起表面増強ラマン散乱を用いたラベルフリー間接イムノアッセイ法表面増強ラマン(SERS)分光法によって生体分子の非破壊かつ超感度な同定が容易となり、DNA、タンパク質、細胞、細菌などの研究を含む生命科学分野の関心を高めている。ラマン色素ラベルイムノアッセイとして知られるラマン活性ラベルを用いた高感度な方法の開発に焦点をおいた研究もいくつかある。しかしながら、ラマンレポーターの非特異的吸着は、しばしば擬陽性の結果をもたらすことがあるため、免疫反応解明に対してラベルフリー法を開発する必要がある。SERSによるラベルフリーイムノアッセイ法を行う前に、以下のような2つの重要な側面を考慮すべきである。それは、免疫複合体は通常、ラマン散乱強度が低いこと、また、金属ナノ粒子への吸着後における抗体または抗原の生体活性の維持がきわめて重要なことである。現在用いられているSERS活性基質は、生体親和性と高感度の組み合わせが困難なため、SERSを用いたラベルフリーイムノアッセイ法の開発は、いまだ重要な課題である。われわれはアビジン会合コロイドを用いたSERSによるラベルフリーイムノアッセイ法のための簡易かつ効率的なプロトコルを開発した。銀ナノ粒子は、アビジンとの強力な静電相互作用によって凝集を誘発され、その結果、ビオチン-アビジン特異的認識によってビオチン共役タンパク質は銀会合体と結合する。SERSは、とりわけ吸着物やその配向物の第1層に高感度なため、われわれはSERSスペクトルにおける抗原が関与する前後の差が溶液中のアビジン誘起銀ナノ粒子会合体で生じるタンパクータンパク結合の解明に用いることができるのではないかと推測する。本プロトコルで最も重要な側面は、銀ナノ粒子の会合や、銀表面への抗体の吸着の様子である。これらのことは、これまのでの関連する方法に比べ、抗原(ヒトのIgGでは10^<-10>M)の高感度検出や、より生体に親和性の高いタンパク質の検出を可能とする。

カップリング反応は1分以内で終了し、得られたアゾ化合物は500nm付近に強い吸収を示すことがわかった。したがって514.5nmや488.0nmのレーザー光を用いてスペクトルを測定するとSurface-enhanced resonance Raman scattering(SERRS)スペクトルが得られた。この方法を用いた時の検出限界は0.1ppb(0.1μg/kg)であった。この値はマススペクトルやSurface Plasmon resonance(SPR)を用いた時と同程度である。この方法の利点は、簡便(カップリング反応の後特別な処理は必要ない)、迅速(カップリング反応とSERS測定を併せて2分)、高感度、高選択性、汎用性(いろいろな種類のフェノール性エストロゲンに使える)という点で今後色々なフェノール性化合物に応用できそうである。
CWL不変量の応用に関する総合的研究

本研究の目的は、有理ホモロジー3球面へのCWL不変量について、(1)代表者の過去のCWL(キャッソンー、ウォーカー、レスコップ)不変量に関する研究を継続的に深化させ、(2)Reidemeister-Turaev(ライでミスター-トゥラエフ)torsionと組み合わせて適用することの有効性をさらに検証し、(3)Seiberg-Witten(サイバーグ・ウィッテン)不変量やKnot Flore(フロア)ホモロジー群等の他の不変量との関係を視野に入れた具体的な研究を加え、CWL不変量が捉える幾何学的現象を記述していくことである。(1)については、2成分絡み輪の手術で得られる有理ホモロジー球面のCWL不変量公式(2013年)の応用に関して、2成分絡み輪の手術の特性を利用して、参照絡み輪と参照多様体という概念を導入し、参照多様体との距離(λー距離)をCWL不変量により定義し、λー距離の公式の導出、その距離の整数性を示し、応用としてλー距離による任意の整数の実現可能性や代数的分離絡み輪に沿ったレンズ空間手術可能性について、その位数が5以下の場合の制約条件をλー距離を用いて導出し、CWL不変量を3次元多様体の向き付の同相類全体の集合上の有理数値写像としての全射性について部分的解決を与えた。2019年3月発行の研究代表者所属大学の研究紀要に掲載された。また、CWL不変量の計算方法を改良し、Liscaによる有理的に0と同境なレンズ空間の分類定理で得られた結果を、CWL不変量の観点からλ値がある不等式を満たすことを示した論文を投稿し査読待機中。(3)について、スピンC構造を持つ有理型ホモロジー球面に対して、Reidemeister-Turaev torsionから導かれる関数を4次元交叉形式から得られる極形式のGauss(ガウス)和で調整したものとCWLとの関係を研究した。平成30年度は平成29年度の研究の挽回と全体の研究計画の遂行を目標にして進めたが、概要に述べた通り、3つの内容の論文執筆を行い、進捗があった。ただし、研究打ち合わせは、平成30年8月に1回行ったが、国内外の研究集会等への参加が出来なかったため記載の通りの評価とした。今年度は、平成30年度研究実績の概容で述べた(3)に関するテーマを完成させることを中心に進める。現在、スピンC構造を持つ有理型ホモロジー球面に対して、Reidemeister-Turaev torsionから導かれるRT関数を4次元交叉形式から得られるGauss(ガウス)和で調整したものが位相不変量となり、CWLをホモロジー群の位数で除したものと整数をモデュロにして等式で結ばれていることをホモロジーレンズ空間まで証明できており、一般化までの方針は把握していると考えている。一般化のためには、RT-torsionの性質に関する更なる研究が必要で、具体的問題として定式化ができたと思われるので、それについて研究を進める。この研究に際しては、これまで共同研究を行ってきたRT-torsionの優れた実績を持つ門上晃久氏(金沢大学)との研究交流が欠かせないと考え、研究交流の機会を設ける計画である。最終年度であるから、今後の研究課題の抽出を進めるため、国内外の研究集会への参加の機会を捉えるよう努める。本研究の目的は、有理ホモロジー3球面へのCWL(Casson-Walker-Lescop)不変量について、(1)申請者のこれまでのCWL不変量に関する研究を継続的に深化させ、(2)Reidemeister-Turaev torsionと組み合わせて適用することの有効性をさらに検証し、(3)Seiberg-Witten(サイバーグ・ウィッテン)不変量やKnot Flore(フロア)ホモロジー群等の他の不変量との関係を視野に入れた具体的な研究を加え、CWL不変量が捉える幾何学的現象を記述していくことである。(1)については、平成27年度末から平成28年度当初に、申請時の予備的研究のうち、CWL不変量の小数部分の研究を深め、ホモロジーレンズ空間の1次元ホモロジー群上に定義される絡み形式を完全に分類するための不変量一式を与えるという新しい結果を得て、平成28年4月に学術雑誌Topology and its applicationに掲載された。また、同じく予備的研究として挙げた「有理ホモロジー3球面の分布」という概念、即ち有理ホモロジー3球面に、その1次元ホモロジー群の位数とCWL不変量の値を組にして平面上にプロットし、結び目の改変、同境関係など様々な幾何学的状況を平面上で視覚的に表現するアイディアの応用では、平成28年度に不変量の値をカメラのズームインで絞り込んでいくような不等式のシステムを発見し、Rasmussenによるレンズ空間のウォカー不変量を用いた判定法の簡明な別証明を与えることができ、平成29年度に学術雑誌Knot theory and its ramificationに掲載されることになった。これは(3)の研究にも将来的に関係を持つと推察している。(2)については、平成28年度末に、門上晃久(金沢大学)と酒井健(日本大学)と共著を書き現在投稿中である。申請時に列挙したCWL不変量に関する予備的研究をさらに進め、CWL不変量の役割の一端を明らかにすることができた。分布の論文"A distribution of rational homology 3-spherescaptured by the CWL invariant"(学術雑誌受理

平成29年4月)で、「結び目の手術で得られるレンズ空間のCWL不変量の絶対値は上限を持つだろう」という予想を述べたが、これについて、結び目の手術で得られるレンズ空間のリスト(フロアホモロジー群研究者による)の7割(クラス総数10)のCWL不変量の計算を進めている。CWL不変量の絶対値の上限の存在は、有理ホモロジー同境群の構造とも関係していると推察され、同境群の中で零になるレンズ空間の上限の存在は既に証明し、論文投稿中である。2成分絡み輪の手術で得られる有理ホモロジー球面のCWL不変量公式(2013年)の応用に関する論文執筆を進めている。研究交流として、平成28年8月16日18日本務校新宿サテライト教室にて武蔵野美術大学低次元トポロジー研究会を開催した。CWL不変量の主構成要素の一つであるデデキント和の値の評価システムを講演した。共同研究者の門上晃久氏、酒井健氏らの講演もあり、余裕を持った研究交流を行うことができた。平成28年度には計画通り、Mathematicaの導入を行い、平成29年1月から文献検索機関に加入し、研究資料の閲覧や利用が可能となった。投稿論文の査読結果に基づき、新たな進展が得られているが、エフォート配分が、研究目的(3)で述べたフロアーホモロジー不変量等他の不変量と関連付けた研究への取組が手薄になったため、おおむね順調に進展していると評価した。本研究の目的は、有理ホモロジー3球面へのCWL(Casson-Walker-Lescop)不変量について、(1)申請者のこれまでのCWL不変量に関する研究を継続的に深化させ、(2)Reidemeister-Turaev torsionと組み合わせて適用することの有効性をさらに検証し、(3)Seiberg-Witten(サイバーグ・ウィッテン)不変量やKnot Flore(フロア)ホモロジー群等の他の不変量との関係を視野に入れた具体的な研究を加え、CWL不変量が捉える幾何学的現象を記述していくことである。(1)については、平成27年度末から平成28年度当初に、申請時の予備的研究のうち、CWL不変量の小数部分の研究を深め、ホモロジーレンズ空間の1次元ホモロジー群上に定義される絡み形式を完全に分類するための不変量一式を与えるという新しい結果を得て、平成28年4月に学術雑誌Topology and its applicationに掲載された。また、同じく予備的研究として挙げた「有理ホモロジー3球面の分布」という概念、即ち有理ホモロジー3球面に、その1次元ホモロジー群の位数とCWL不変量の値を組にして平面上にプロットし、結び目の改変、同境関係など様々な幾何学的状況を平面上で視覚的に表現するアイディアの応用では、平成28年度に不変量の値をカメラのズームインで絞り込んでいくような不等式のシステムを発見し、Rasmussenによるレンズ空間のウォカー不変量を用いた判定法の簡明な別証明を与えることができ、平成29年度始めに学術雑誌Knot theory and its ramificationに掲載された。これは(3)の研究にも将来的に関係を持つと推察している。(2)については、門上晃久(金沢大学)と酒井健(日本大学)との共同研究の3本目となる共著が平成29年度末にTopology and its Applicationに掲載された。また、2成分絡み輪の手術で得られる有理ホモロジー球面のCWL不変量公式(2013年)の応用に関する論文執筆を進めていたが、投稿に至っていない。
分子シャペロンの脂質二分子膜への階層的固定化による蛋白質修復システムの構築

細胞内における蛋白質の生合成においてDnaJ, DnaK, GroELなどの分子シャペロンは協同的に作用して蛋白質の立体構造形成の補助、立体構造の修復を行う。これを模倣すれば凝集した蛋白質を立体構造を修復し、機能を再生することができる。この目的のため、脂質二重膜を表面にDnaJ, DnaK, GroELを固定化したデバイスを構築したが、タンパク質修復機能を充分得ることは出来なかった。これは分子シャペロンが協同的に作用しなかった為であり、より効率的な機構を構築するためにはシャペロン単独で機能するデバイスにする必要がある。そこで本研究ではDnaK単独での機能発現を目指す研究を行った。DnaKはN末端のATPase部位とC末端の基質結合部位からなり、前者の活性により後者が構造変化して基質を脱着する。DnaKのシャペロン活性発現にはATP加水分解で得たエネルギーを用いた基質結合部位の運動が不可欠とされてきた。しかし同様の機構で働く分子シャペロンGroELでは基質結合部位断片単独でも活性を有することが知られている。そこでDnaKからATPase部位を除いた基質結合部位断片DnaK384-638のルシフェラーゼとβGalactosidaseの構造形成に対する効果を調べたDnaK基質結合部位の遺伝子を大腸菌からクローニングし蛋白質発現用ベクターに組み込み大量発現してフラグメントを作成した。基質結合部位断片の存在下でルシフェラーゼとβGalactosidaseのリフォールディングの収率が改善した。また基質結合部位断片はこれらの蛋白質の凝集を抑制することを散乱測定によって確認するとともに、蛍光標識したDnaK384-638を用いて断片が構造形成中間体と相互作用することも確認した。DnaKのシャペロン活性発現には基質認識部位のclose型とopen型の間の連続的な構造転移が必要であるが、ATPase活性のない基質結合部位断片単独でも熱揺らぎによってこの転移が生じている。そのため断片単独でも、低速度の構造形成に対してはシャペロン活性を示すと考えられる。これにより今後DnaKの基質結合部位フラグメントを脂質二重膜を表面に導入することで本研究の目的のデバイスを構築できると考えられる。細胞内における蛋白質の生合成においてDnaJ,DnaK,GroELなどの分子シャペロンは協同的に作用して蛋白質の立体構造形成の補助、立体構造の修復を行う。分子シャペロンの協同的作用を発現するため、脂質二重膜を表面にDnaJ,DnaK,GroELを固定化したデバイスを構築したが、タンパク質修復機能を充分得ることは出来なかった。これは分子シャペロンが協同的に作用しなかった為であり、より効率的な機構を構築するためには個々のシャペロンの物性に対する詳細の研究が必要である。これまでGroELの基質認識機構について詳細な知見が得られているがDnaKに関しては不明の点が多い。そこで本研究ではDnaKの基質結合部位フラグメントを用いてその基質認識機構について調べた。DnaK基質結合部位の遺伝子を大腸菌からクローニングし蛋白質発現用ベクターに組み込み大量発現してフラグメントを作成した。さらに変性タンパク質モデルとしてαラクトアルブミンを還元カルボキシル化し(CMLA)、さらにこれをFTICで蛍光標識した(FITC-CMLA)。C末端フラグメントDnaK386-638は単独でCMLAを結合することをゲルろ過クロマトグラフィーで確認できたが、このフラグメントからC末端へリックスを取り去ったDnaK386-561はCMLAを結合しなかった。このことはC末端のヘリックスが基質結合を安定化することを示しており、さらにその役割の詳細を調べるためにFITC-CM-LAとDnaK386-638の結合を偏光解消法によって解析した。GroELの基質結合部位フラグメントの変性αラクトアルブミンとの結合は室温付近で顕著な温度依存性が見られたが、DnaKの場合は温度依存性は殆どみられなかった。DnaKに関するより詳細な機構解析を次年度行う。

基質結合部位断片の存在下でルシフェラーゼとβGalactosidaseのリフォールディングの収率が改善した。また基質結合部位断片はこれらの蛋白質の凝集を抑制することを散乱測定によって確認するとともに、蛍光標識したDnaK384-638を用いて断片が構造形成中間体と相互作用することも確認した。DnaKのシャペロン活性発現には基質認識部位のclose型とopen型の間の連続的な構造転移が必要であるが、ATPase活性のない基質結合部位断片単独でも熱揺らぎによってこの転移が生じている。そのため断片単独でも、低速度の構造形成に対してはシャペロン活性を示すと考えられる。これにより今後DnaKの基質結合部位フラグメントを脂質二重膜を表面に導入することで本研究の目的のデバイスを構築できると考えられる。