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中国シェイクスピア受容史の基礎的研究－民国期を中心に

民国期中国シェイクスピア受容史上での三つの重要公演に焦点を絞って研究した。上海戯劇協社『ヴェニスの商人』(1930)、上海業余実験劇団『ロミオとジュリエット』(1937)、国立劇専『ハムレット』(1942)について調査し、三公演それぞれを主題に全国学会で報告した。上海戯劇協社『ヴェニスの商人』公演、国立劇専『ハムレット』公演についてはすでに論文化した。上海業余実験劇団『ロミオとジュリエット』公演は瀬戸の体調不調などで論文の完成が遅れたが、近く公開できる見通しである。これ以外に中国シェイクスピア受容史黎明期の問題で論文執筆・公開し、関連内容で、中国の学会で報告した。・口頭発表「上海戯劇協社『ベニスの商人』について」(日本演劇学会全国大会2012年6月16日近畿大学)をおこなった。1930年5月におこなわれた中国最初の本格的シェイクスピア上演である上海戯劇協社『ベニスの商人』上演の背景、経過、その意義を分析した。日本で未紹介の同公演舞台写真、上演台本(顧仲彝訳『威尼斯商人』)表紙・奥付などを紹介した。口頭発表「国立劇専与莎士比亜演出ー以《威尼斯商人》為主」(中国語、紀念朱生豪誕辰一百年学術研討会2012年10月29日中国嘉興・沙龍国際酒店)をおこなった。実質的に中国最初の国立演劇学校である国立戯劇専科学校(国立劇専)の設立経過および中央戯劇学院に吸収されるまでの14年の経過、全卒業公演をシェイクスピア作品でおこなうことをめざした国立劇専が第一回卒業公演として1937年6月におこなった『ベニスの商人』上演の特徴を分析した。口頭発表「中国・国立劇専『ハムレット』公演(1942)について」(日本比較文学会第48回関西大会2012年11月17日立命館大学衣笠校舎)をおこなった。中国最初の『ハムレット』上演である国立劇専『ハムレット』上演について、その経過と上演の特徴を分析した。この発表では、中国四川省江安県・国立劇専史料江安陳列館を2012年8月に訪問し収集した同公演の舞台写真、プログラムなど関連資料を、日本国内はもちろん世界で最初に公開の場で紹介した。論文「中国シェイクスピア受容の黎明」(『摂大人文科学』19号摂南大学外国語学部2012年7月*形式上の奥付は12年2月だが、実際の刊行は7月)を発表した。清末から五四運動以前の中国シェイクスピア受容について分析した。口頭発表についてもその内容を論文化したが、刊行は次年度を待つこととなった。昨年度に口頭発表した上海戯劇協社『ヴェニスの商人』公演(1930年)、国立劇専『ハムレット』公演(1942年)、について引き続き研究し、論文化し公開した。上海戯劇協社『ヴェニスの商人』公演(1930年)は中国最初の厳格な『ヴェニスの商人』上演であるが、翻案劇ではない厳格な翻訳劇上演としても中国で最も早い上演の一つでありその意義はこれまで考えられていたよりも大きいことを明らかにした。『ヴェニスの商人』は、清末から民国期の中国で最も好まれたシェイクスピア作品であるが、その理由は人肉質入れに対する興味、女性の能力発揮、裁判劇への関心であることを指摘した。国立劇専『ハムレット』公演は中国最初の厳格な『ハムレット』上演であるが、抗日戦争(日中戦争)が長期化した中で、ハムレットの性格と抗日戦争中の知識人の役割を結びつけて解釈されたこと、現実は暗黒であるという認識が知識階層の中で一般化していく中でその認識が反映された上演であることを明らかにした。ニューヨークタイムスに掲載されたこの公演の劇評を探し出し、シェイクスピア研究者の協力を得て日本語化し主要部分を紹介した。上記二つの論文は、学術誌に発表した後、掲載誌の同意を得て瀬戸宏の個人HPに転載した。上海業余実験劇団『ロミオとジュリエット』公演(1937年)について研究し、全国学会大会で口頭発表した。左翼系劇団である上海業余実験劇団が『ロミオとジュリエット』を上演するに至る過程を考察し、これまで成功とされてきたこの公演が、上演時の劇評では失敗とされていることを明らかにした。このほか、1980年代以降の中国伝統演劇でのシェイクスピア上演の問題や日本のシェイクスピア受容についても研究し、関連する口頭発表をおこなった。・研究代表者の個人研究HP内に本科研費専用ページを開設した。

・曹樹鈞上海戯劇学院教授(中国シェイクスピア研究会副会長)を招聘し、早稻田大学演劇博物館で2011年12月10日に「中国の舞台におけるシェイクスピアの伝播と受容」と題する特別講義(中国語、通訳付き)をおこなった。中国シェイクスピア受容に対する認識を深めることができたと同時に、英文学研究出身の中国語を解しない研究者との交流も行うことができ、たいへん有益であった。・『摂大人文科学』19号に論文「中国シェイクスピア受容の黎明」を寄稿した(2012年4月16日現在未刊行)。中国にシェイクスピアの名が伝わった最初から、主に文明戯時期におけるシェイクスピア上演など、清末から民国初期にかけての中国シェイクスピア受容の黎明期の内容を考察したものである。中国にシェイクスピアの名が伝わった最初期の状況について、最新の研究成果を踏まえ、これまでの定説を訂正した。・武漢大学芸術学系で2012年3月7日に講演「多様化的莎士比亜演出在日本舞台上」(日本の舞台における多様化されたシェイクスピア上演、中国語)をおこなった。武漢大学の中国演劇研究者、シェイクスピア研究者と講演内容について交流できたうえに、日本人研究者として自国のシェイクスピア受容に対する認識を深めることができ、たいへん有益であった。・2011年12月23日-2012年1月6日、ロンドン、ストラットフォードおよび北京で中国シェイクスピア受容に関する資料調査をおこなった。特にイギリスの調査では、シェイクスピア生誕地・隠遁地のストラトフォード訪問とロンドンでの『ハムレット』上演(ヤングビック劇場)観劇を実現でき、シェイクスピア認識が大いに深まった。2011年度は、科研費決定の遅れや分割支給の影響で安定した研究実施計画を立てられず、学会での口頭発表を行えなかったので、当初の研究計画の遅れを取り戻すために当該年度は国内学会発表を二回おこなった。また当初の研究計画にはなかったが、中国語による国外学会発表を一回おこなった。ハードなスケジュールであったが、実行することができた。日本演劇学会全国大会、日本比較文学会関西大会という二回の国内学会発表はいずれも活発な討論が行われ、好評であった。この二つの学会はいずれも中国専門学会ではなく、日本での中国シェイクスピア受容の普及、紹介という面からも意義のあるものであった。紀念朱生豪誕辰一百年学術研討会での国外学会発表は、日中関係が緊張し日中文化交流が次々に取り消された時期であったが、中国側関係者の配慮および日中学術交流に対する瀬戸宏の熱意により、予定通り実行できた。この学会では、朱生豪旧居見学、朱生豪遺族との面談さらに中国のシェイクスピア研究者との交流も行うことができ、極めて有意義であった。これは当初の計画にはなかったものである。論文「中国シェイクスピア受容の黎明」では、中国最初のシェイクスピア紹介について、最新の研究成果もふまえ、通説の1956年ミュアヘッド訳『大英国志』ではなく1844年魏海編『海国図志』であることを、日本に紹介することができ、また五四運動以前の清末民初における中国シェイクスピア受容を体系を持って記述することができた。研究実績の概要で述べたように、口頭発表の論文化刊行は当該年度には間に合わなかったが、これらは次年度に予定されている。全体として、当該年度の研究は当初の研究目的の内容を達成できているといってよいであろう。
抗酸化健康食品,特にコエンザイムQ,の遺伝子損傷性に基づく安全性・有効性の評価

近年種々の生活習慣病や老化への酸化ストレスの関与が示唆されるようになり、抗酸化物質の疾病予防効果に大きな期待が寄せられている。特に食品由来成分は安全性が高いとみられ、いわゆる健康食品として広く一般に摂取されている。しかし、特定の抗酸化物質を健康食品等の形態で多量に摂取する有効性・安全性については未だ科学的根拠に乏しく、しかもβ・カロテンを用いた疫学介入試験では、肺がん罹患率が上昇したとの報告がある。本研究では、健康食品のなかでも最近特に関心の高いコエンザイムQ10(CoQ10)を中心に、遺伝子損傷性を指標として生体に及ぼす影響を解析し、抗酸化食品の安全かつ有効な利用について検討することを目的とした。遺伝子損傷性はヒトがん原遺伝子のDNA断片を用いてMaxam-Gilbert法の原理を応用して解析した。また酸化的DNA損傷の指標である8-oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine(8-oxodG)量をHPLC-ECDにより定量した。その結果、CoQ10の存在下にUVAを照射するとDNA損傷が引き起こされる可能性が示唆された。また還元型CoQ10はCu(II)の存在下で濃度依存的にcalf thymus DNAの8-oxodG量を増加することがわかった。更に、CoQ10含有サプリメント(60mg/日)摂取が尿中酸化ストレスバイオマーカー8-oxodGに及ぼす影響を健常ボランティア31名を対象に検討した。8週間にわたるクロスオーバー試験を実施した結果、CoQ10摂取期間の尿中8-oxodG値は対照期間に対して有意な低下を示した(対応があるt検定、P<0.05)。これらの知見をもとに、CoQ10およびその他の抗酸化健康食品の生体影響について今度更なる研究が必要である。近年、高齢化の進展や健康意識の高まりから、健康効果を謳う多種多様な食品やサプリメントが注目を集めている。とりわけ、生活習慣病や老化に酸化ストレスの関与が示唆されていることから、抗酸化食品の積極的な摂取が推奨されている。しかし、抗酸化物質の過量摂取による健康障害の可能性も大規模疫学研究において示されており、申請者らは抗酸化食品が生体内で酸化的にDNAを損傷する機構を明らかにしている[J.Biol.Chem(2000),Biochemistry(2004)]。本研究は、抗酸化健康食品の健康影響について、最近特に関心が高いコエンザイムQ_<10>(CoQ_<10>)を中心に、遺伝子損傷性を指標として安全性を評価し、更に遺伝子損傷の抑制効果を解析し有効性を検討することを目的としている。本年度は主にCoQ_<10>の安全性評価のための基礎的研究を実施した。CoQ_<10>で処理したヒト由来細胞(HL-60)からDNAを抽出し、酸化生成物8-hydroxydeoxyguanosine(8-OHdG)を電気化学検出器付HPLCを用いて検討したところ、細胞内8-OHdG量の増加を示唆する予備結果が得られた。またcalf thymus DNAを用いた実験からもCoQ_<10>が8-OHdG生成量の増加に関与する可能性が示唆された。ヒトがん関連遺伝子のDNA断片を用いた解析では、CoQ_<10>に紫外線を照射するとCu(II)の存在下で酸化的DNA損傷が認められた。現在、遺伝子傷性及び損傷機構をより詳細に解析するための実験が継続されている。また、生体試料中の8-OHdGを指標としたヒト短期介入試験による抗酸化食品の安全性・有効性評価法の確立を目指して、サンプリングや分析方法、健常者の正常値、交絡因子などについても検討を行った。

更に、健常ボランティア8名を対象にしたCoQ_<10>摂取による予備介入試験では興味深い結果を得ており、現在信頼性の高い介入試験の実施に向けて詳細を検討中である。今後は上記の安全性評価の研究とともに、遺伝子損傷の抑制効果の解析による有効性評価の研究にも着手し、CoQ_<10>の生体影響について総合的に考察する予定である。多くの病気や病態において酸化ストレスの関与が示唆されるようになり、この酸化ストレスから生体を防御する抗酸化物の役割に関心が高まっている。特に食物由来の抗酸化物は安全性が高いとみなされ、いわゆる健康食品として安易に摂取される傾向にある。しかし、特定の抗酸化物を多量に摂取する有効性・安全性については未だ科学的根拠に乏しく、抗酸化物を利用する際には、生体内の酸化ストレス状態にどのような影響を及ぼすかを注意深く解析することが極めて重要である。本研究は、健康食品のなかでも最近特に関心の高いコエンザイムQ10(CoQ10)を中心に、遺伝子損傷性を指標として生体内酸化ストレスに及ぼす影響を明らかにすることを目的とした。本年度は特に、酸化ストレスバイオマーカー8-hydroxydeoxyguanosine(8-OHdG)による、CoQ10のヒト短期介入試験を実施した。対象者は三重大学の倫理委員会で承認された文書により同意を得た20歳代の健常ボランティア30名で、無作為に2群に分け、市販CoQ10含有サプリメントを1日2錠(60mg)、3週間ずつ摂取するクロス実験をおこなった。両群とも摂取期と対照期に尿をそれぞれ3回採取した。得られた尿試料は、プレカラムを接続したHPLC-ECDにより8-OHdGを定量し、同時にクレアチニン量の測定をおこない8-OHdG量を補正した。併せて生活習慣に関するアンケート調査を実施した。現在結果の解析を進めているが、尿中8-OHdG/Cr値は摂取期で有意に低下する傾向を示している。今後更に生活習慣と尿中8-OHdGの関連性についても検討したのち、投稿の予定である。また、単離DNAを用いた解析では、還元型CoQ10が金属イオン存在下で用量依存的に酸化的DNA損傷を引き起こすことを確認した。
農薬機能をもつ微生物肥料の実用化試験

畜産による環境汚染と、化学肥料及び農薬の多量施用による畑環境の荒廃を未然に防止して、生態系に調和した高生産性の新農業体系を確立するため、ジャガイモそうか病を標的として、まず病原菌<Streptomyces>___ー<scabies>___ー及びS__ー.<acidiscabies>___ーの両菌株に対し顕著な拮抗作用を示す放線菌2株、細菌4株を自然界から分離、選出、同定したい。次いで、豚ふん、小麦ふすま、綿実油粕をそれぞれ原料として、ウィザ-型製麺機による拮抗菌の多量培養を行い、各種の微生物肥料を調製して、その施用によるポット試験と圃場試験を反覆実施した。その結果、調製された微生物肥料は、いずれも3093%というそうか病抑制率を示したが、長期的にその効果を維持するためには、さらに施用条件が重要と認められた。すなわち、土壌への微生物肥料の大量施用は、一過性には上記の高い抑制率を示したが、反覆施用により土壌中の残留有機物の蓄積と土壌pHの上昇により、抑制率の低下を招くことが明かとなった。その対策として、毎回の微生物肥料施用量を炭素として土壌に対し、13%に抑え、同時に炭素源としては有機酸を、窒素源としては硫安を、補助的に少量施用することにより、土壌中の拮抗菌の生菌数とpHが制御され、かつその有用性が認められた。他方、Coprophilous Actinomycetesの使用による豚ふん処理並びに放線菌肥料の製造法を広く実用に供するため、これら有用な特殊菌株の処理用種菌及び飼料添加剤を大量に生産し、その使用による豚ふんの実用処理の高速化に成功した。この放線菌肥料も、施用条件の制御によって高い抑制率を示した。以上のように、農畜産廃棄物を原料として、ジャガイモそうか病に対し抑制能を有する微生物肥料を大量に連続製造することが可能となった。今後、本知見を基礎として、他の土壌病害に対しても研究を進め、広範囲の農薬機能を持つ微生物肥料の創製に努力したい。近年、馬鈴薯特産地ではジャガイモそうか病による病害が深刻化している。本研究は、そうか病に対し顕著な拮抗能を示す微生物を自然界から分離選出し、これら有用微生物の微生物学的特質を明らかにし、これを未利用資源である農畜産廃棄物に増殖・発酵させて、そうか病防除能をもつ微生物肥料を創製し、その大量生産方式を確立し、圃場試験を反覆実施して有効な施肥法を見出し、実用に供するものである。まず、そうか病菌Streptomyces scabiesに対する拮抗放線菌S.albidoflavus CHー33を選出し、これを生豚ふんに増殖させた微生物肥料BFーCHー33は、圃場試験においてり病抑制率93%という好成績を収めた。しかし、最近そうか病は、従来のS.Scabiesの他に、酸性土壌で旺盛に増殖するS.acidiscabiesの存在が報告され、CHー33株はこれに微弱な抗菌力しか示さないことが判り、より多様な微生物防除法の開発が急務となった。S.acidiscabiesに対しても抗菌力を示す細菌として、Bacillus licheniformisと同定された2菌株、HYー101及びHYーA2が選出された。これをフスマまたは豚ふんを用いて培養した結果、68×10^9CFU/gまで増殖して抗菌物質を生成した。圃場試験では、HYー101は8896%、HYーA2は6484%のり病抑制率を示した。次いで、実用化を目的として、ウィザ-型製麹機を新設し、大量培養のための諸条件を決定した。さらに、そうか病菌は資化できないが、拮抗細菌は資化できる炭素源としてヘミセルロ-スを見出し、“選択拮抗型の微生物肥料"を創製した。この選択性の賦与は新規な方法であり、これによって、有用微生物による畑地土壌の病害菌制御が可能になるものと、来年度の圃場試験に期待している。

他方、Coprophilous Actinomycetesの使用による豚ふん処理並びに放線菌肥料の製造法を広く実用に供するため、これら有用な特殊菌株の処理用種菌及び飼料添加剤を大量に生産し、その使用による豚ふんの実用処理の高速化に成功した。この放線菌肥料も、施用条件の制御によって高い抑制率を示した。以上のように、農畜産廃棄物を原料として、ジャガイモそうか病に対し抑制能を有する微生物肥料を大量に連続製造することが可能となった。今後、本知見を基礎として、他の土壌病害に対しても研究を進め、広範囲の農薬機能を持つ微生物肥料の創製に努力したい。
中世曹洞宗における地蔵信仰の受容-北陸地方を出発点に

本研本研究では中世曹洞宗に於いて地蔵信仰が受容され、活用されるようになった過程を考察した。日本曹洞宗の宗祖と云うべき道元は地蔵信仰を積極的には評価していなかった。従来、三祖義介が密教的要素を導入したと云われてきたが、そうではないことを本研究では明らかにした。曹洞宗に現世利益的要素を導入したのは義介の弟子、瑩山である。瑩山の弟子、峨山が神人化度説話を導入した。峨山の弟子には地蔵信仰を活用する者が現れた。しかし、本格的に地蔵信仰が活用されるようになるのは、峨山の孫弟子の代、即ち1400年頃である。平成17年度は、主題である曹洞宗と対比的存在である、浄土真宗の地蔵信仰受容を考察した論文を発表した。具体的には石川県旧・白峰村(現・白山市)の板碑・石仏の調査と分析を行った。(「旧・白峰村の板碑・石仏」)旧・白峰村は、敬虔な真宗地域であるが、これとは別に板碑・石仏も多数存在する。旧・白峰村の板碑・石仏はおおよそ3つに分類できる。第一は、白山下山仏である。明治の神仏分離にあたり、修験者が白山に祀っていた板碑・石仏の多くは破壊されたが、一部は麓にある白峰村に降ろされ、今日に至っている。第二は出作りの守護仏である。但し、敢えて作られたものは少なく、出作り中に山の中で拾ったものを守護仏として祀ったケースが一般的である。とすると、これも一種の白山下山仏と言える。第三は、路傍の地蔵像で、その職能は、現世利益・不慮の死を遂げた人の供養である。造立年代は江戸時代にさかのぼるものをあるが、その多くは明治以降である。明治時代にある僧侶の呼びかけによって地蔵像等の石仏が路傍に造立されるようになったとする伝承が現地に存在する。しかし、こうした宗教現象が一僧侶の呼びかけによってのみ定着したとは考えにくい。江戸時代以降における他地域との交流・明治時代以降の世俗化を考慮すべきであろう。したがって旧・白峰村の地蔵信仰は、江戸時代以降に、他地域の影響から受容されたものと言える。本研究の主題である、曹洞宗の地蔵信仰は中世に始まり、江戸時代に一般化された訳である故、浄土真宗地域の地蔵信仰は、これに遅れて受容されたものと言える。また、浄土真宗の地蔵信仰の一源流に、曹洞宗の地蔵信仰が想定される。北陸に共存した両宗派の影響関係については今後の課題としたい。本年度の研究実績は以下の2つである。1つは、曹洞宗三祖義介に関するものである。義介というと、永平寺に「密教的」要素を導入したため、永平寺を退任せざるをえなかった、と従来云われてきた。しかし、義介が永平寺に導入したものは、土地神・五躯神・粥罷諷経である。土地神・粥罷諷経は、道元も認めているものである。五躯神は、当時の禅寺で一般的に祀られていたものと考えられる。義介が導入したものは、道元を継承したものであったり、また、当時の禅寺の風習であったりする。義介は永平寺に「密教的」要素を導入した訳ではない。(「義介は永平寺に「密教的」要素を導入したのか?」東隆眞編『徹通義介禅師研究』大法輪閣平成18年)このことは義介が中国から持ち帰ったとされる五山十刹図からも分かるが、五山十刹図の分析は次年度の課題である。また、本研究成果から、地蔵信仰等の積極的導入は峨山以降と推定されるが、このことも次年度の課題である。もう一つは、中世地蔵信仰と曹洞宗の神人化度説話との関連である。中世地蔵信仰の特徴として、地蔵が生身で現れることが挙げられる。生身で現れる仏・菩薩は、地蔵のみではないが、現世の人々と密接な交流をするのは地蔵の特徴と言える。これに対し、曹洞宗が地方に展開する際に、神人化度説話を活用していたことが先行研究で指摘されている。これは、在地の神が人となって、曹洞宗の僧の前に現れ、説教を聞き、入信する、というものである。しかしながら、日本書記・古事記等を見ても、日本の神々が人の姿を取る、という現象は見られない。したがって、神が人の姿を取る、という現象の背景に生身の地蔵等仏教の化身思想を想定すべきある。(「日本古代・中世の地蔵信仰受容」第55回倫理学研究会にて口頭発表)

本年の研究業績は以下の2本である。1つは、中世曹洞宗の北陸地方の展開に関してまとめたもので、本研究の前部分の集大生をならすものである。日本曹洞宗を開いた道元は晩年は越前国永平寺を中心に活動した。その道元は「只管打坐」を唱え、現世利益的要素には距離を置いた。道元没後、永平寺の運営は懐弉に任された。懐弉は基本的には道元を継承した。道元.懐弉の代に於いて、曹洞宗が積極的に寺を建てした事実は見あたらない。この永平寺に激動があったのは3代・義介においてである。義介は永平寺に土地神等新たな要素を導入しようとしたため、退任せざるをないこととなる。曹洞宗が現世利益的要素を取り入れ、全国展開する端緒を作ったのは義介の弟子、瑩山である。義介没後、大乗寺から退かざるをえなくなった瑩山は加賀国永光寺・能登国総持寺を開く。瑩山は現世利益的要素を儀式に取り入れていく。この流れを推し進める基盤を作ったのは瑩山の弟子、峨山である。峨山は永光寺・総持寺で多くの弟子を育て、その過程で破竃堕説話」(竃神の調伏)を唱えていた。峨山の弟子たちは全国各地に寺を開いている。無縁の地で檀那を獲得するために神人化度説話等奇瑞を活用したと考えられる。その過程に於いて、地蔵信仰を活用する場合もあった。即ち、中世曹洞宗は、峨山門下の全国展開に伴って、地蔵信仰を受容していったのである。(「中世曹洞宗の展開-「只管打坐」から「神人化度説話」へ」)なお、その際、地蔵がどういった役割を担っていたのか、という問題は次年度の課題としたい。こうした曹洞宗の神人化度説話は、神が人の姿を取る点に於いて、生身の地蔵と共通している。中世日本に於いて地蔵は概して生身の姿=人間の姿を取っていた。この共通性に関しては前年度口頭発表をしたが、今年度改めて、活字化した。(「日本中世における地蔵信仰の受容」)平成20年度の研究成果は以下の2点である。(1)本研究の集大成として、峨山(1275-1366)の孫弟子の地蔵信仰受容を取り上げた。というのも峨山の弟子に於いて、地蔵信仰を有する者もいたが、その職能は概して、あいまいであった。これに対し、峨山の孫弟子の地蔵信仰に於いて、その職能は明確となったからである。大徹の弟子、竺山(1344-1413)は19才の時、夢で地獄に堕ちそうになり、地蔵に救済され、これを契機に出家をした。そのため、竺山は地蔵を葬祭儀礼に活用していた。無端(?-1387)の弟子、瑞巌(1343-1424?)も地蔵を葬祭儀礼に活用していた。通幻(1322-91)の弟子、普済(1347-1408)は総持寺門前に地蔵像を造立するにあたり、当該の地蔵像を死者救済の菩薩と位置づけた。峨山の孫弟子、という時代区分がどこまで有効か留意すべきではある。しかしながら、先行研究において、曹洞宗は1400年代以降葬祭儀礼を活用されるようになったとされている。とすると、峨山の孫弟子の活動年代=1400年代前半を時代区分とすることは、ある程度首肯されよう。(2)本研究開始以来の課題であった、五山十刹図に関し、論文をまとめた。諸本を比較対照するに、大乗寺本→東福寺本という説を提唱し、将来者はやはり曹洞宗三祖義介(1219-1309)ではないか、という結論に至った。本研究との関連で云えば、五山十刹図には地蔵堂の記載がなく、曹洞宗寺院の地蔵堂は日本独自のものということが分かった。
肥満とリンパ浮腫のメカニズムを解明し、生活支援に結びつける

脂肪細胞から放出されるレプチンの作用により、リンパ管内皮細胞の形態異常を引き起こす可能性があることを、2016年6月に医学雑誌PLOSONEで報告いたしました。これにより、従来より肥満(または肥満傾向)の方はリンパ浮腫を発症しやすいというメカニズムを裏付ける原因の一つであることがわかりました。研究成果をベースに、適切な運動療法による体重減少の方法や、リンパ浮腫患者さんに対して浮腫に対する生活指導に結びつけるための普及活動、セラピスト育成の活動が実施できます。リンパ管組織を用いてレプチンを投与した状態でリンパ管内腔に与える機能異常を確認する。これまでにレプチン未刺激と高濃度刺激で一定期間細胞培養した結果、レプチン高濃度刺激によりリンパ管内腔が脆弱化することを確認していたが、透過型電子顕微鏡を用いてもリンパ管内皮細胞の形態異常を確認することができた。レプチン刺激によるリンパ管内皮細胞の機能的意義を解明するため、リンパ管内皮細胞の管腔形成能や増殖能の実験を実施したところ、レプチン高濃度刺激により管腔形成能と増殖能機能低下していることを確認した。この機能異常のメカニズムの解明に、私たちは高濃度レプチン刺激によるtight junctionの異常を考え、代表的な分子であるClaudin-5, Occludin, VE-cadherin, ZO-1のタンパク発現の確認を実施したところ、いずれの分子もレプチン高濃度刺激によるタンパク発現の変化を認めなかった。次に、レプチン刺激による血管内皮細胞の機能異常の先行報告より、炎症性サイトカインの発現変化を検討した結果、IL-6のmRNAとタンパク発現が亢進していることを確認した。レプチン刺激によるsignaling pathwayではSOCS3のタンパク発現亢進を認めた。SOCS3はJAK/STATの抑制に作用し、管腔形成能と増殖能の低下を認めたこと考えられる。しかし、IL-6単独刺激ではSOCS3のタンパクの発現亢進を認めないことから、レプチン高濃度刺激によるSOCS3とIL-6によるSCOS3が異なる経路であることが示唆された。以上の結果から、レプチン高濃度刺激により管腔形成能や増殖能が低下し、炎症性サイトカインであるIL-6の発現亢進により、肥満者にリンパ浮腫発症が多いと言われる臨床的意義の解明の1つであることが示唆された。28年4月より研究代表者の所属が変更になったが、現在のところ本研究課題はおおむね順調に進展している。詳細は昨年度の実施状況報告書で記載したとおり、レプチン高濃度刺激により管腔形成能・増殖能が低下し、炎症性サイトカイン(IL-6)発現亢進に伴い、肥満者にリンパ浮腫が多いと言われる臨床的意義の1つとなることが示唆され。脂肪細胞から分泌されるレプチンがリンパ管内皮細胞に直接影響を与える報告はこれまでになく、今回の結果に加え、今後はレプチンと反対の作用を持つアディポネクチンによる影響や脂肪細胞から分泌される他の因子についても検討にも興味が持たれる。しかし、今回の実験はあくまでin vitroの実験結果であり、リンパ浮腫患者のリンパ管内皮細胞に直接影響しているかの断定には至らない。今後は、従来のリンパ浮腫患者に対する治療は、単にドレナージや圧迫療法を含む複合的治療を提供するだけではなく、肥満管理をin vitroの視点で配慮した治療が重要視される。さらに、理学療法士を含むリンパ浮腫治療を提供する臨床家にとっても、リンパ浮腫患者にとっても、今回の肥満とリンパ浮腫のinvitroの研究は、治療する上での知識と技術の向上に結びつき、今後のリンパ浮腫患者の治療効果の向上と、生活上の安心・期待に結び付けられる可能性が期待される。28年度4月より研究代表者の所属変更に伴い、昨年度は実験を継続する事ができたが、本学には研究機材が一部整っていないものもあり、研究計画よりも若干遅れている。平成27,28年度の研究経過を踏まえて、平成29年度は引き続き細胞レベルでのリンパ管内皮細胞と肥満に関連する因子について研究を継続しており、特に脂肪細胞から産出される炎症性サイトカインのよる熱の発生とリンパ管内皮細胞の形態変化について研究を継続しており、今後の研究報告を行いたい。さらに、平成29年度は健常人をコントロール群(運動非実施)と介入群(足関節の運動実施)分類し、運動前後でリンパ浮腫の流れに関連すると報告されている、血球成分とADH(バソプレッシンというホルモン)の変化量を確認し、本研究の経過では運動による特異的な変化は認められなかった。今後は条件を再検討しながら研究を継続し、健常人での特徴が確認でき次第、リンパ浮腫患者に対しても研究を継続する方針です。生活支援へ結びつけるため、平成29年度は札幌市内で開催されいてる患者会(ベニバナの会)でリンパ浮腫と肥満との関連について、微力ながら一般市民へ報告することができた。北海道内の理学療法養成校(4校)に対し、細胞・分子レベルからリンパ浮腫の特徴を説明することができ、がん患者やリンパ浮腫患者に関わる若手育成に貢献することができた。平成30年2月には、国内のリンパ浮腫のエビデンス構築を主目的として、日本理学療法士学会のがん理学療法部門の部員(全国で13名)に推薦され、今後はリンパ浮腫の発生メカニズムに関わる研究の中でも特に運動療法との関連について基礎研究を充実させ、患者貢献、社会貢献に結びつけていきたい。

これにより、従来より肥満(または肥満傾向)の方はリンパ浮腫を発症しやすいというメカニズムを裏付ける原因の一つであることがわかりました。研究成果をベースに、適切な運動療法による体重減少の方法や、リンパ浮腫患者さんに対して浮腫に対する生活指導に結びつけるための普及活動、セラピスト育成の活動が実施できます。平成27年度の研究計画はおおむね順調に進んでいることから、次に乳癌術後患者と既存リンパ浮腫患者の血清レプチン量とリンパ浮腫の関連について研究を継続する。実際の臨床場面においては、非肥満者であってもリンパ浮腫を発症する患者が来院される。そこで、乳癌術後患者やリンパ浮腫患者から血清レプチン発現量をELISA法にて確認する。脂肪細胞から分泌される因子(レプチン等)の発現量がリンパ浮腫の発症や増悪因子となるかを探る。さらにリンパ浮腫患者の多くが炎症(蜂窩織炎)を発生する可能性が非常に高いと報告されていることから、ヒトリンパ管内皮細胞を用いた実験では、培養温度の違いによる形態(管腔形成能、増殖能など)の変化を確認し、実際のリンパ浮腫に結びつく可能性を検討する。最終的に、計画書で掲げた適切な運動療法や有効的な複合的治療による患者支援が、臨床患者におけるリンパ浮腫の発症や増悪予防や血清レプチン量にどのような影響を与えるかの関連を解析する。これまでに、リンパ浮腫と脂肪細胞との関連する因子を検討できたことから、最終年度は、実際の乳癌患者が手術直後から運動や肥満を配慮することで、実際のリンパ浮腫発症に関連があるかを検討する。我々は、既に平成27-28年度に、乳癌と診断された患者に対し、術前から術後1年まで運動療法や肥満管理などの生活指導を提供した群と、提供していない群にランダムに分類しリンパ浮腫の発症について調査を行ってきた。今年度はこの臨床データを解析し、実際に理学療法を実施することによる効果を検証したい。術前からの指導がリンパ浮腫の発症を予測した生活支援に結びつける可能性が認められれば、リンパ浮腫を事前に防ぐことができる可能性がある。一方、リンパ管内細胞の研究継続については、リンパ浮腫特異的に発症する蜂窩織炎と脂肪細胞の関連を調査するため、これまでに細胞培養温度を37°Cと39°Cで細胞の増殖能や管腔形成能の実験を行ったところ、培養温度の上昇により細胞の増殖能の低下を認める結果を得ている。今後は引き続き管腔形成能を検討し、実際に脂肪細胞から分泌されるサイトカインの影響などについて明らかにし、原因が不明な点が多い蜂窩織炎によるリンパ浮腫増悪症例に対する治療の一助をとなる基礎実験を継続したい。リハビリテーション実験拠点を札幌医科大学から本学へ移動するため、本学で必要な備品の検討していたが、実験施設の完成が2017年4月以降であったことから、28年度の研究費の使用を制限いたしました。本学においての実験施設の運用が徐々に始まっている。実験備品として現在-80°Cフリーザーがないため、これまで実験を行ってきた、凍結細胞、試薬等を札幌医科大学から運搬することができなかったが、施設準備が整ったことから、今後は備品の導入が可能となり、専用のフリーザーを準備することで、本学でも積極的に実験が実施できることから購入準備を進めます。
P.gingivalisのプロテアーゼの欠失株の作成及びその病原性の変化について

Porphyromonas gingivalisは歯周炎関連細菌のひとつとして注目されている。本菌は強力なプロテアーゼ活性を有し、歯周組織を破壊するだけでなく、好中球の機能を抑制することによって歯周炎の増悪に強く関わっていると考えられている。近年、本菌のプロテアーゼの研究が進み、システインプロテアーゼのひとつであるgingipain-Rについては、遺伝子の塩基配列も明らかになった。我々は、本酵素の生物活性および病原性を追求するために、本酵素活性を欠失したP.gingivalisの変異株を作製することを試みた。まず、P.gingivalisのgingipain-Rをコードする遺伝子の一部を含むshuttle plasmid,pKEVを作製し、大腸菌にトランスフォームさせた。そして本菌とP.gingivalis381株をR-751存在下でmatingさせることによっていくつかのtranconjugantを得た。得られたtransconjugantについて酵素活性測定及びsouthern blotを行い、gingipain-Rの欠失株と確認されたものをG-102株と命名した。G-102株の酵素活性を測定すると、合成基質BAPNA(N-Benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide)の分解活性は野性株381株の49%に低下していた。ゼラチンフィルムを用いたゼラチナーゼ活性も野性株の約8分の5に低下していた。また、近年P.gingivalisのプロテアーゼと赤血球凝集活性の関係が、注目されているので、G-102株の赤血球凝集活性を野性株のものと比較検討した。その結果ヒツジ赤血球に対する凝集活性が野性株の約4分の1に減少していることが明らかになり、プロテアーゼと赤血球凝集活性をコードする遺伝子は非常に近接した位置に存在すると推察された。今後は本変異株を用いて好中球への影響を調べたり、動物実験を行ったりする予定であり、P.gingivalisのプロテアーゼの病原性がより明らかになると考えられる。
ステロイド筋症由来の筋萎縮に対する温熱刺激の効果と臨床応用の可能性を探る

本研究ではステロイド筋症モデルラットを用い,温熱刺激が筋線維萎縮の予防あるいは進行抑制に有効かを検証した.結果,ステロイド剤の投与と同時に温熱刺激による治療介入を行うと筋線維萎縮の発生を予防することが可能であることが示唆された.一方,ステロイド筋症が発症した後に温熱刺激による治療介入を行っても筋線維萎縮の進行を抑制する効果は乏しいことも明らかとなった.本研究ではステロイド筋症モデルラットを用い,温熱刺激が筋線維萎縮の予防あるいは進行抑制に有効かを検証した.結果,ステロイド剤の投与と同時に温熱刺激による治療介入を行うと筋線維萎縮の発生を予防することが可能であることが示唆された.一方,ステロイド筋症が発症した後に温熱刺激による治療介入を行っても筋線維萎縮の進行を抑制する効果は乏しいことも明らかとなった.速筋線維優位の筋萎縮を呈するステロイド筋症は,速筋にHeat shock protein(Hsp)72を顕著に誘導する温熱刺激によって予防効果が得られる可能性がある.そこで,本研究ではステロイド筋症ラットに対する温熱刺激の影響を検討した.8週齢のWistar系雄性ラット15匹を,生理食塩水を投与する群(C群),ステロイド剤を投与する群(S群),ステロイド剤を投与し温熱刺激を負荷する群(SH群)の3群に振り分けた.実験終了後は長指伸筋を摘出し,H & E染色を施し筋病理学的所見の検索,ミオシンATPase染色を施し各筋線維タイプの筋線維直径の計測,抗Hsp72抗体を用いたWbstern blot法によりHsp72発現量の測定を行った.筋病理学的所見として,壊死線維は認められなかった.平均筋線維直径を比較すると,タイプI・IIa線維ともS群はC群よりも有意に低値を示したが,SH群とC群との有意差は認められなかった.また,タイプIIb線維の平均筋線維直径はS群が最も低値で,次いでSH群,C群の順に高値となり,各群間に有意差が認められた.Hsp72発現量において,SH群は他の2群より有意に高値を示した.S群,SH群はステロイド筋症の発症が確認され,S群とSH群の平均筋線維直径を比較すると,全筋線維タイプともSH群が有意に高値であり,温熱刺激はステロイド筋症に伴う筋萎縮の進行を抑制する効果があるといえる.また,この効果はタイプIIb線維に顕著であり,温熱刺激は速筋線維優位の筋萎縮に対して効果が高いことが示唆され,筋萎縮の進行抑制効果にはHsp72の機能が関わっていると推測される.速筋線維優位の筋萎縮を呈するステロイド筋症は,速筋にHeat shock protein (Hsp)72を顕著に誘導する温熱刺激によって筋萎縮の回復促進効果が得られる可能性がある.そこで,本研究ではステロイド筋症を発症させたラットの実験モデルを用いてこの点を検討した.実験デザインとしては,(1)4週間ステロイド剤を投与する群(S群),(2)2週間ステロイド剤を投与した後,投与を継続しながら2週間温熱刺激を負荷する群(SH群),(3)これらの群の対照として4週間生理食塩水を投与する群(C群)の3群を設定した.実験終了後は長指伸筋を摘出し,H&E染色を施し筋病理学的所見の検索,ミオシンATPase染色を施し各筋線維タイプの筋線維直径の計測,抗Hsp72抗体を用いたWestern blot法によりHsp72発現量の測定を行った.結果,3群ともに壊死線維の出現や細胞浸潤などといった筋病理学的所見は認められず,平均筋線維直径を比較すると,すべての筋線維タイプともC群に比べS群,SH群は有意に低値を示した.したがって,S群とSH群にはステロイド筋症が発症していることが確認された.次に,S群とSH群の平均筋線維直径を比較するとタイプI・IIa線維においてはSH群が有意に高値を示したが,タイプIIb線維においてはSH群が有意差に低値を示した.また,Hsp72発現量においては,SH群がC群やS群より有意に高値を示した.これらのことから,温熱刺激はステロイド筋症を呈した骨格筋においてはタイプI・IIa線維の筋萎縮の進行を抑制する効果はあるものの,最も病態が顕著にみられるタイプIIb線維には効果はないと結論づけることができると思われる.そのため,今後はタイプIIb線維の筋萎縮に対する効果的な方法論について検討する必要がある
液漏れしない比較電極および琺瑯電極の開発

本研究の目的は,(1)液漏れしない比較電極および(2)琺瑯電極の開発である。(1)現在,流通しているpH複合電極は,pH応答する作用電極とpH応答しない比較電極から構成されている。比較電極は内部液をわずかながら流出させることで被検液との電気的接触を実現している。これまでに前例のない液漏れしない比較電極の実現は,被検液の汚染を嫌うバイオ系や創薬開発の分野での潜在的ニーズが多いと考えられる重要課題である。これまでに申請者が見出した比較電極になり得るFe2O3-Bi2O3ガラスを作製し,そのpH応答性能を評価して比較電極用ガラス組成を決定する。(2)ガラスと金属の長所を兼ね揃えた琺瑯電極を作製するため,作用電極として実績のあるFe2O3-Bi2O3-GeO2ガラスをステンレス(SUS)上に成膜・融着し,琺瑯電極の試作とpH応答の評価を行う。液漏れしない比較電極に関しては,これまでに開発したFe2O3-Bi2O3ガラスが,高い比抵抗を持つために見かけ上低いpH感度を示したためであり,比較電極として使用することが困難であることが明らかになった。そこで新たに比較電極用ガラスの開発が必要となった。一般にAg/AgClが比較電極に用いられていることからAg2Oを含むガラスに着目した。Ag2Oを含むガラスの一部で比較的低いpH感度を示すガラスが見出された。琺瑯電極に関しては,作用電極として実績のあるFe2O3-Bi2O3-GeO2ガラスを用いて琺瑯電極を作製することを試みたが,融着温度が高く,ステンレス上での琺瑯電極作製は困難であった。そこで,より低融性のFe2O3-TeO2ガラスに着目した。今回は乾式のドクターブレード法でガラス粉末を塗布した後,融着を行った。比較的比抵抗が高いが良好な融着状態の琺瑯電極の作製に成功した。液漏れしない比較電極に関しては,新規のAg2Oを含むガラスが比較電極用ガラスとして有力であることがわかった。一方,低いpH感度を示す範囲が狭いのと,pH感度が十分低くないという課題が残ったため。琺瑯電極に関しては,伝導性と低融性を兼ね揃えたFe2O3-TeO2ガラスとステンレスを用いて琺瑯電極を作製し,pH応答性能を評価できた。一方,琺瑯電極のpH感度は,元のガラスのpH感度より若干低く,また,剥離しやすいという課題が残ったため。液漏れしない比較電極に関しては,Ag2Oを含むガラスにおいて,より低いpH感度を示すガラスを探求する。琺瑯電極に関しては,一般的な琺瑯では,接着性を高めるためにNiOやCoOが添加されているので,これら成分を添加したFe2O3-NiO-Bi2O3やFe2O3-CoO-Bi2O3ガラスを用いた琺瑯電極の作製を試みる。また,湿式法による琺瑯作製も検討する。琺瑯電極に関しては,伝導性と低融性を兼ね揃えたFe2O3-TeO2

ガラスとステンレスを用いて琺瑯電極を作製し,pH応答性能を評価できた。一方,琺瑯電極のpH感度は,元のガラスのpH感度より若干低く,また,剥離しやすいという課題が残ったため。液漏れしない比較電極に関しては,Ag2Oを含むガラスにおいて,より低いpH感度を示すガラスを探求する。琺瑯電極に関しては,一般的な琺瑯では,接着性を高めるためにNiOやCoOが添加されているので,これら成分を添加したFe2O3-NiO-Bi2O3やFe2O3-CoO-Bi2O3ガラスを用いた琺瑯電極の作製を試みる。また,湿式法による琺瑯作製も検討する。投稿論文のオープンアクセス経費の拠出を予定していたが,論文掲載日(4/1)が三月末日に決定したため,年度内に処理できなったため。
自閉症スペクトラム児をもつ母親の養育行動を支える神経基盤に関する研究

本研究では、2ー3歳の定型発達児を持つ母親を対象に、子どもの食行動に伴う母親の脳活動を機能的磁気共鳴画像(fMRI)で計測した。さらに母親自身の自閉症的行動特徴や育児ストレスなどを評価し、脳活動との関連性を検討した。その結果、母親の育児ストレスの程度が養育行動を動機付ける脳領域の活動と関係していることが明らかになった。以上より、本研究では実質的な育児支援のエビデンスとして有益な知見が得られた。本研究の目的は、子どもの表情知覚に伴う母親の脳活動を機能的磁気共鳴画像法(以下fMRI)で計測し、1養育環境(自閉症スペクトラム障害児/定型発達児)の違いによる養育行動に関する脳機能を検討し、さらに2母親個々人の特性と脳機能との関連性を検討することで、養育行動の神経科学的メカニズムを明らかにすることである。本年度は、昨年度に構築した実験システムに基づき、下記のように遂行した。1.被験者のリクルート:自閉症スペクトラム障害児の母親については、すでに応募者所属の研究機関において行われている別の研究に対する協力者に対し、本研究の概要を記載した協力者募集の用紙を手渡し、応答を待機している状態である。これと並行して、リクルート先を拡大するための打ち合わせを行っている。定型発達児の母親については、十数例集まった。2.実験システムの構築:fMRI実験の提示刺激の作成にあたり、計画に沿って購入した撮影機器、編集ソフトを用いて、子どもの動画を撮影し、それぞれ編集作業を行った。現在リクルートされた被験者の子どもの動画撮影と編集については、昨年度に決定した方法により、適切に遂行された。3.本実験:現在リクルートされた被験者に対し、昨年度に構築した実験デザインを用いてfMRI実験を行った。また、同被験者について、昨年度に選定された評価尺度を用い、個々人の認知特性や自閉症的行動特徴、育児ストレス、子どもへの愛着、親の不安状態などの評価を行った。1.目的:感受性の高い養育行動は、子どもの社会的発達の観点からその重要性は高い。親の対人認知や情動制御の問題あるいは育児ストレスは、適切な養育行動を妨げる要因となりうる。要支援の親に対する科学的な理解に基づいた育児支援は重要であるが、親個々人の特性と養育行動に関する脳機能の関係性は、ほとんど解明されていない。本研究では、24年度より加えた推進方策に従い特に親の個人特性に着目し、親の養育行動に関する脳機能との関連性を検討することを目的とした。2.方法: 2ー3歳の定型発達児を持つ健常な母親(35.14 ±4.86歳)28名を対象とし、母親の脳活動を機能的磁気共鳴画像法(以下fMRI)で計測した。fMRI実験ではわが子と見知らぬ子の動画をランダムに提示し、それぞれに伴う脳活動を比較することで、わが子に対する母親の脳活動を解析した。さらに母親自身の自閉症的行動特徴、育児ストレス、子どもへの愛着の程度を評価し、脳活動との関係性を検討した。3.成果:わが子に対して有意に活動した脳領域は、先行研究で示された「養育行動の動機付け」に関する右前頭眼窩皮質、右島皮質、中脳水道周囲灰白質、基底核に加え、「適切な養育行動」に重要な右後部上側頭溝、紡錘状回、下前頭回などであった(p<0.05, FWE)。さらに脳活動と個人特性について相関解析を行った結果、育児ストレスが強いほど、右前頭眼窩皮質、小脳半球、小脳虫部の活動が低いことが示された(p<0.05)。特に右前頭眼窩皮質は母親の愛情や養育行動の動機付けと関係しており、この活動低下は育児ストレスを強めることが推察される。自閉症的行動特徴および子どもへの愛着の程度と脳活動には有意な相関が示されなかった。以上より、本研究では母親の育児ストレスが養育行動に関する脳機能に影響を及ぼすことが示され、実質的な育児支援のエビデンスとして有益な知見が得られた。本研究の目的は、子どもの表情知覚に伴う母親の脳活動を機能的磁気共鳴画像法(以下fMRI)で計測し、(1)養育環境(自閉症スペクトラム障害児/定型発達児)の違いによる養育行動に関する脳機能を検討し、さらに(2)母親個々人の特性と脳機能との関連性を検討することで、養育行動の神経科学的メカニズムを明らかにすることである。本年度は、次年度に計画している本実験に向けて、適切なシステムを構築する重要な事項を下記のように遂行した。定型発達児の母親については、数名集まっており、自閉症スペクトラム障害児の母親と年齢、性、利き手などでマッチングさせるために詳細情報を収集している。2.実験システムの構築:fMRI実験の提示刺激の作成にあたり、撮影機器、編集ソフトを準備した。

被験者の負担を最小限にし、効果的な提示刺激を作成するための撮影方法、編集方法を吟味するために数名の幼児の撮影を行い、編集作業の試行を行った。また、個々人の認知特性や自閉症的行動特徴を評価するための対人応答性尺度、育児ストレスなどを評価するための育児ストレスインデックス、さらに個人特性として不安尺度など具体的な評価尺度を選定した。3.予備実験:効果的な実験パラダイムを構築するため、被験者の負担にならない撮像時間と必要な画像データ量のバランスが取れるパラメーターを調整した。本研究の対象者である自閉症スペクトラム障害児を持つ母親の確保がされていないが、計画に沿ってリクルートしており、現在待機状態である。これと並行して、リクルート先を拡大するための打ち合わせを行っている。その他、リクルートされた被験者に対し、順次、本実験を開始しており、当初の計画に沿っておおむね順調に展開している。その他、本実験のための準備は適宜進めており、当初の計画に沿って概ね順調に展開している。今後の研究を有効に遂行するための重要な研究方策として、自閉症スペクトラム障害児を持つ母親の確保が著しく困難な場合の対策を検討する。すなわち定型発達児を持つ親グループから親の自閉症的傾向と養育行動に関する脳機能の関係性を検討すること、または子どもの問題特性と親の養育行動に関する脳機能の関係性を検討するなど、育児環境を多面的に解析することで、有益な知見を得られる解析方法を検討する。その際、さらに被験者のリクルートが必要となる。いずれの場合も被験者が集まり次第、順次本実験を行い、解析を進めていく。当初23年度に計画していた被験者のリクルートに関し、次年度も継続して募集を続けることとする。被験者への謝金は、実験終了後の支払になるため、23年度に未使用となった謝金を次年度以降に使用する。今後、被験者のリクルートが予定通り進まない場合は、リクルート先の拡大を図ることとする。そのため情報収集や打ち合わせを積極的に実施する。また、実験に使用する質問紙などを整え、本実験に向けたシステム構築を具体化する。被験者リクルートの継続、または定型発達児の親のリクルート数を増やすことで、本実験が必要となるため、24年度の残高を25年度に繰り越し、被験者謝金として用いる。また追加される質問紙の購入に充てる。さらに解析ソフトの購入や研究成果の発表(国際会議や学術論文)にかかる経費を25年度使用額と併せて使用する。当初23年度に主に予定していた謝金および旅費について24年度以降に請求することとした。リクルート先の拡大を図る際にかかる情報収集や打ち合わせの経費を次年度使用額と翌年度以降の請求額を合わせて使用する。また、実験に使用する質問紙、解析に必要なソフトなどの購入も次年度以降に進めていく。
親水性有機溶媒を用いた二相分離液-液抽出法の開発と応用

基礎実験として水相と有機溶媒相の二相に分離する条件を親水性有機溶媒の種類と添加する塩の種類との関係およびpHとの関係について調べ,このデータを基礎として応用性について検討した。1.塩処理による二相分離親水性有機溶媒を用いた二相分離の液-液抽出法で使用できる有機溶媒と塩類の組合せを数組作ることが出来た。これによって使用する塩類によってpH調整することを可能として操作の簡便化を図ることが出来た。また高速液体クロマトグラフ質量分析計に対応する塩類として酢酸アンモニウムが見出された。2.応用の検討(1)ベンゾジアゼピン系薬物やバルビツール酸系薬物,血圧降下薬などへの応用barbital, Phenobarbital, pentobarbital, secobarbital, nitrazepam, diazepam, bromovalerylurea, apronalide, prazosinなどについて検討した。その結果,二相分離した親水性有機溶媒に選択的に移行した。また本抽出法で抽出した抽出液を濃縮処理することなく直接紫外吸収検出器-高速液体クロマトグラフで分析して定量性について検討した。その結果,再現性,検量線および検出限界は実用性のある結果が得られ,中毒レベルの濃度測定への応用性が認められた。また薬物によっては治療レベルに対応が可能であった。定性では測定波長を変えたクロマトグラムのピーク面積比を比較する方法を考案し,紫外吸収検出器の欠点であった定性能に改良を加えた。これによって定量・定性精度を向上させることが可能であった。(2)Triage検査試料の前処理としての応用Triageは尿を対象とした濫用薬物簡易検査キットである。しかし事例によっては胃内容や血清を検査対象として検査する必要がある。前処理はNaCl-アセトニトリル抽出液を遠心濃縮して乾固後,等量の純水で再溶解させた。これを用いてTriage検査を実施した。その結果,抽出した結果が無処理の結果に比較してHPLCの定量結果と矛盾が認められなかった。このことから抽出処理の有効性が確認された。基礎実験として水相と有機溶媒相の二相に分離する条件を親水性有機溶媒の種類と添加する塩の種類との関係およびpHとの関係について調べ,このデータを基礎として応用性について実験を行った。これによって使用する塩類によって他の酸や塩基性物質を用いずにpH調整することを可能とした事で操作の簡便化を図ることが出来た。問題点としてはLC/MSに応用できる塩類が酢酸アンモニウムしか見つけられていないのでLC/MS装置に影響を及ぼさない塩類の発見が必要である。2.応用の検討1)向精神薬ではベンゾジアゼピン系薬物やバルビツール酸系薬物など8種類(バルビタール,フェノバルビタール,ペントバルビタール,セコバルビタール,ニトラゼパム,ジアゼパム,ブロムワレリル尿素,アプロナイド)について検討した。その結果,水溶液では十分に抽出可能で,なおかつ効率的な処理法の開発の可能性が示唆されるデータが得られた。2)フェニルメチルアミノプロパンの分析では,2-プロパノールを溶媒としてNaCl処理をすることによって二相に分離させ,30μlの2-プロパノール