hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
耳石輪紋形成の分子機構の解明―基質タンパク二種の分布とmRNA発現の比較

1は、耳石膜ゼラチン層に強い免疫陽性反応を認めたが、耳石基質内には微弱な反応しか認められなかった。このことから、ゼラチン層と耳石基質内では、Otolin-1の三次元構造が異なるか、もしくはOtolin-1に結合するタンパク質の種類・量が大きく異なるなどの違いがあるものと考えられた。さらに、RT-PCR法を用いて、ニジマスの個体ごとに両タンパク質のmRNA発現量を定量するための技術開発に取り掛かった。市販の微量mRNA採集キツトを用いることにより、RT-PCRに充分な量のmRNAをニジマス1個体の小嚢より抽出できることが確認された。現在、定量的PCRをおこなうため、プライマーの特異性の検定をおこなっている。昨年度、ニジマスの耳石の主要な基質タンパク二種(OMP-1,Otolin-1)の免疫組織化学により、ニジマス内耳におけるOMP-1産生細胞は扁平上皮細胞と移行上皮細胞の一部、Otolin-1産生細胞は感覚上皮細胞に接する円筒形の背の高い細胞であることを明らかにした。さらに、OMP-1が耳石にのみに含まれるのに対し、Otolin-1は耳石と耳石膜ゼラチン層の両方に含まれることを明らかにした。本年度は、さらに詳細な電顕観察(TEM/SEM)を行い、耳石基質が厚いシート状の基質とその間の微細な網目状の基質の二種類からなること、網目状の基質の密度の濃淡により日周輪が形成されること、OMP-1,Otolin-1ともに微細な網目状基質内に分布すること、したがって両基質の産生・沈着量の日周変動により日周輪が形成される可能性があること、を明らかにした。さらに、リアルタイムPCR法を用いて、ニジマスの個体ごとに両タンパク質のmRNA発現量を定量するための技術開発に取り掛かった。まず、内部標準遺伝子としてニジマスβ-actin cDNAの部分配列を決定した。決定したβ-actin cDNA部分配列、OMP-1およびOtolin-1 cDNAの全長を元にして、定量PCRに用いるプライマーを設計し、目的遺伝子が増幅されることを確認した。次に、各目的遺伝子を含むプラスミドDNAの希釈系列(10^1-10^8コピー)を作成し、これらを鋳型にしてRT-PCRを行って各遺伝子の増幅曲線を得、各mRNAのコピー数算出を可能とした。個体毎に発現量を定量するため、一個体から得られる二つの内耳小嚢からRNA抽出を行い、これを鋳型にしてPCR増幅を行い、目的部分のみが増幅することを確認した。このように、本年度の研究でニジマス個体ごとのOMP-1,Otolin-1発現量の定量法を確立することが出来た。
江戸時代における陽明学資料の流入およびその影響について

研究期間中において、「『鄒守益集』未収詩輯佚;内閣文庫蔵『鄒東廓先生詩集』より」(一三)においては、江戸時代に日本に流入した『鄒東廓先生詩集』によって、中国で刊行された『鄒守益集』に収められていない詩を十万字余り翻刻したことは、学界において高く評価され、『鄒守益集』の改訂版においては、永富の成果が収録されることが決定している。また、論文「佐藤一斎是否一個朱子学者ー従『欄外書』中的記載談起」においては、佐藤一斎が、中国から輸入された陽明学資料を基に、いかにして陽明学を理解し、陽明学の信奉者となっていったかを実証的に解明し、中日韓三国の学者に対してそれを示すことができた。2014年度においては、日本国内に流入した王守仁の著作、真筆の調査を行った。その際の発見をもとに、論文「白鹿洞本『伝習録』について」(『陽明学』25、2015年3月)を執筆した。本書は日本の九州大学文学部図書館のみに現存する、中国国内には完本が現存していない、いわゆる逸存書であるにもかかわらず、従来ほとんど注目されていなかったが、同論文においては、同書が王守仁の著作の成立を考えるうえで不可欠の存在であることを立証した。また、王守仁の著作の調査と並行して、王守仁の弟子たちの日本への流入についても調査を行い、論文「内閣文庫蔵『鄒東廓先生詩集』について」を執筆した。内閣文庫蔵『鄒東廓先生詩集』については、近年刊行された鄒東廓の全集にも収録されていない逸存書であるため、内外の学界から注目された。上述のごとく、同書は翻刻もなされていないため、前年度に引き続き、「『鄒守益集』未収詩輯佚(二)ー内閣文庫蔵『鄒東廓先生詩集』よりー」(『人文社会科学研究』55、2015年3月)として翻刻を行い、その内容を公開した。本翻刻も学界より好評を持って受け止められている。なお、これらの文献学的考察の準備作業として、欧米における近年の研究の翻訳を行ってきたが、それらは『中国書籍史のパースペクティブ出版・流通への新しいアプローチ』として勉誠出版より刊行が確定している(ISBN: 978-585-29097-1)。本研究は、日本における陽明学資料の流入・流布の経路およびその影響の具体的な過程を解明し、日本における陽明学の受容史を文献考察の角度から明らかにすることを目的とするものである。方法としては、日本国内の公私収蔵機関に所蔵されている王守仁およびその後学たちの著作の中国版および日本の和刻本や日本人による注釈書・解説書などの文献資料に関する網羅的な調査を行い、基礎的な文献に対する着実な研究に基づき、日本における陽明学の受容の実相を明らかにする。平成27年度においては、従来全く言及されることのなかった、陽明後学に関する重要資料である、国立公文書館に現存する『鄒東廓先生詩集』の翻刻である「『鄒守益集』未収詩輯佚(三)」を発表した。これによって、『鄒東廓先生詩集』の翻刻は完成し、その内容は、中国で刊行予定の、『鄒守益集』(増訂版)への収録が打診されている。また、新発見の文献を利用して陽明後学の講学活動と日常生活について考察し、研究論文「陽明後学の講学活動と日常ー鄒守益の詩文より見たるー」(『「心見/身心」と環境の哲学ー東アジアの伝統思想を媒介に考えるー』、汲古書院、pp.67-84、2016.3)を発表した。さらに、中国の清華大学(「日本における陽明学研究の回顧ー江戸期より二十世紀までー」、清華大学日本研究中心『日中学術交流的現状和展望』、pp.108-119、2015.10)と復旦大学(「佐藤一斎是否一個朱子学者ー従『欄外書』中的記載談起」【「佐藤一斎は朱子学者かー『欄外書』の記載より見たるー】、復旦大学哲学学院『東亜朱子学国際学術検討会ー日韓朱子学的伝承与創新』、pp.371-390、2015.12)での関連学会でそれぞれ研究発表を行った。その他、『中国書籍史のパースペクティブー出版・流通への新しいアプローチ』を編集・翻訳し、勉誠出版より出版した(全359頁、2015.6)。本年度は平成26年に引き続き、日本各地の公私図書館・文庫に所蔵されている王守仁およびその後学たちの著作の中国版と和刻本を調査し、江戸期において日本に渡来した王守仁著作の目録を作成すると同時に、前年度において調査を開始した和刻本の所蔵目録を完成した。また、引き続き陽明後学の重要な学者であり鄒守益に関する重要資料である、国立公文書館に現存する『鄒東廓先生詩集』の翻刻を行い、本年をもって完成した。なお、調査の成果と新発見を利用して研究論文を作成し、日本の学術雑誌や中国の専門学会で発表し、海外の学界に向けて発信した。以上によって、本研究課題の進捗状況は、おおむね順調に進展しているものと認められるものである。

本研究は、日本における陽明学資料の流入・流布の経路およびその影響の具体的な過程を解明し、日本における陽明学の受容史を文献考察の角度から明らかにすることを目的とするものである。方法としては、日本国内の公私収蔵機関に所蔵されている王守仁の書跡、中国版および日本の和刻本や日本人による注釈書・解説書などの文献資料に関する網羅的な調査を行い、基礎的な文献に対する着実な研究に基づき、日本における陽明学の受容の実相を明らかにする。平成28年度においては、論文「佐藤一斎是否一個朱子学者ー従『欄外書』中的記載談起」(『歴史文献研究』第37輯、華東師範大学出版社、pp138-147、2016.9)を刊行し、江戸後期における大儒、佐藤一斎が、当時長崎から輸入された最新の陽明学文献を利用しつつ、いかにして陽明学の影響を受け、その学説を日本の環境の中で生かし、自己の学説として発表していったかを明らかにした。掲載誌『歴史文献研究』は、中国において権威ある学術誌であるため、従来この問題を知ることのなかった中国の学者からの大きな反響を得たことは、学術交流上、極めて有意義であった。日本の学界においても、従来は、資料を精査することなく、佐藤一斎を朱子学と陽明学を兼ねて受容していた、と漠然と述べられていたが、本研究によって、彼が重要な学説において、ことごとく陽明学の観点を採用していたことを明示できたことは、大きな意義を有することであった。学会発表としては、韓国、成均館大学より平成28年8月に招待を受け、「経学的源流与創新ー従歴史性与地域性視野」国際学会において「『聖蹟図』在日本江戸時代的出版与伝播」と題する発表を行った。本発表においては、江戸期において中国から日本に輸入された儒学資料が、いかに日本的に変容したうえで再生産されていったかについて、韓国、中国の学者に示すことができ、極めて有意義であった。研究期間中において、「『鄒守益集』未収詩輯佚;内閣文庫蔵『鄒東廓先生詩集』より」(一三)においては、江戸時代に日本に流入した『鄒東廓先生詩集』によって、中国で刊行された『鄒守益集』に収められていない詩を十万字余り翻刻したことは、学界において高く評価され、『鄒守益集』の改訂版においては、永富の成果が収録されることが決定している。また、論文「佐藤一斎是否一個朱子学者ー従『欄外書』中的記載談起」においては、佐藤一斎が、中国から輸入された陽明学資料を基に、いかにして陽明学を理解し、陽明学の信奉者となっていったかを実証的に解明し、中日韓三国の学者に対してそれを示すことができた。上述のごとく、未発見の文書の発見など、おおむね順調に推移していると考えられる。今後はそれらを翻刻により学界に公開する一方、その内容に関する分析もより一層進め、論文の形で発表していきたい。また、これらの発見は中国の学会よりも注目されているため、中国語での発表も並行して進めていきたい。本年度の計画としては、引き続き国内外での資料調査を進めることとともに、資料の分析も行い、それらの研究成果を、目録・口頭発表・論文の形で、日本内外の学会において発表する。具体的には、これらの成果を、随時、日本国内の研究誌において報告するとともに、国外における陽明学の発展について関心を寄せている、中国大陸および台湾の諸学会において学会発表を行い、中国の研究誌や論文集においても成果を発表する。また、それにともない、中国への出張費が必要となる。中国思想本年度同様、国内の図書館、文庫の調査を続行する。今年度は刊本の調査が中心であったが、陽明およびその後学の真筆の調査も並行して進めていきたい。次年度において、多くの図書館、文庫での調査、複写が必要とされるため。旅費および複写費、そして成果をまとめるための作業費が予定されている。
糖尿病の医療費と糖尿病対策の経済評価に関する研究

目的:糖尿病は患者数が多く、長期慢性の経過を辿って重篤な合併症が少なくないことなどから、その医療費は今後とも増加傾向を辿り、医療財源逼迫の大きな要因になると予想される。本研究では、医療経済の面から糖尿病対策の意義を明らかにする。方法:糖尿病の臨床経過をシミュレーションするシステムモデルを開発し、自覚症状から受療開始、治療法の変更、コントロール状態の変化、合併症の発症・進行、腎透析の開始、QALYの変化、医療費と生産額とのバランスシートなどについて実測値(糖尿病患者231例に対する調査結果)による係数と乱数を組み合わせてモデルのパラメータを決定し、モデルの信頼性、妥当性を検証した。結果:1)システムモデルで仮想患者を立てランダムにイベントを与える方法でシミュレートすると、性・年齢階級別生存率は実測値に近く、モデルの汎用性が検証された。感度分析によってもモデルの信頼性は高いと考えられた。2)システムモデルでは、糖尿病の年間新規罹患数は32万7千人、初診後の平均余命は一般より3.4年短い23.0年、QALYsは18.8年であった。初診時4044歳の平均余命およびQALYsは、男で各28.9年、22.9年、女で各33.3年、25.5年であった。3)罹病期間別に合併症の発生状況をみると、罹病20年未満で1つ以上の合併症を有する割合は、腎症24.1%、網膜症22.9%、神経障害11.5%、虚血性心疾患9.0%、脳血管疾患3.6%である。2つ以上の割合は、腎症と網膜症9.0%、腎症と神経障害7.2%、網膜症と神経障害7.2%などであった。4)糖尿病医療の費用便益比は、男女合計0.78(全年齢)、男1.18、女0.30と性差が大きく、女では医療費が生産額を大幅に上回った。Cost/QALYは、男女合計で166万円、男で159万円、女で177万円で、性別で大差はなかった。【目的】糖尿病は患者数が多いこと、長期慢性の経過を辿ること、重篤な合併症が少なくないことなどにより、その医療費は今後とも増加傾向を辿り、医療財源逼迫の大きな要因になることが予想される。そこで、糖尿病治療のシステムモデルを開発し、医療経済とQOLの面から糖尿病の予後経過をシミュレーションするとともに今後優先すべき糖尿病対策を明らかにし、政策決定や臨床判断の基礎資料を得る。【対象と方法】初年度は、糖尿病の臨床経過に関するシステムモデルの開発を行う。すなわち、糖尿病の臨床経過を類型化し、腎症、網膜症、神経障害、心筋梗塞、脳卒中の5種の主要な合併症がランダムに発生するとしたイベントランダム発生モデルを作成し、実際のパラメータを収集、代入してモデルの信頼性、妥当性等を検証する。【結果と考察】モデルでは発症から死亡までを1年毎にシミュレーションし、コントロール良好群と通常群の受療期間、QALY、生涯医療費、透析に至る割合などを比較した。合併症発症後の進行度は線形で推移するとし、合併症発症の累積頻度で両群を比較した。40歳に発症する男性患者では良好群と通常群それぞれが、受療期間

29.7年、25.2年、生涯医療費1368万円、1538万円、QALY29.0年、24.2年などとなる。合併症別では、網膜症合併の受療期間は各23.2年、20.2年、QALYは22.4年、19.4年、また、循環系疾患合併の受療期間は各16.0年、13.6年、QALYは14.8年、12.8年などとなる。今後、このモデルを用いて、医療政策の変更や治療成績の改善による医療資源の必要量の変動、糖尿病患者数や重症合併症の増加に伴う糖尿病医療費総額の将来予測、糖尿病対策の医療費削減効果などを検討する予定である。【目的】糖尿病治療に関するシステムモデルを開発し、医療経済とQOLの面から予後経過をシミュレーションするとともに今後優先すべき糖尿病対策を明らかにし、政策決定や臨床判断の基礎資料をうる。【対象と方法】患者調査、国民生活基礎調査等により、昨年度開発した糖尿病の臨床経過に関するシステムモデルの精緻化を行った。また、糖尿病診療を精力的に実施する2施設で231名の糖尿病患者の受療期間、治療法、コントロール状況などを調査し、モデルの信頼性、妥当性を検証した。【結果と考察】(1)モデルから、糖尿病の年間新規罹患数は32万7千人、初診後の平均余命は一般よりも3.4年短い23.0年、QALYs(質で調製した生存年)は18.8年、Cost/QALYは63万円である。(2)罹病期間別に合併症の発生状況をみると、罹病20年未満で1つ以上の合併症を有する割合は、腎症24.1%、網膜症22.9%、神経障害11.5%、虚血性心疾患9.0%、脳血管疾患3.6%である。同じく2つ以上の割合は、腎症と網膜症9.0%、腎症と神経障害7.3%、網膜症と神経障害7.3%などである。(3)モデルを用いて死因分析を行ったところ、脳血管疾患11.9%、虚血性心疾患11.5%、糖尿病性腎症4.8%となる。若年層では糖尿病による死が多く、罹病期間が短いため腎症に罹らず血管疾患で亡くなる場合が少なくない。年齢が進につれ一般死の割合が増え、糖尿病と合併症の進行により腎症による死亡者数の数が増える。(4)糖尿病の生涯医療費と生産額とのバランスシートを算出すると、男の便益比は2.49、女は0.61と性差が大きく、女では医療費が生産額を上回る。(5)モデルで得られた結果を先行研究と比較すると、昨今の治療法の進歩を斟酌すれば本モデルの各種パラメータのバランスは妥当であり、感度分析によってもモデルの信頼性は高いと考えられる。目的:糖尿病は患者数が多く、長期慢性の経過を辿って重篤な合併症が少なくないことなどから、その医療費は今後とも増加傾向を辿り、医療財源逼迫の大きな要因になると予想される。本研究では医療政策の変更や治療成績の改善による医療資源の必要量の変動、糖尿病患者数や重症合併症の増加に伴う糖尿病医療費の将来予測など、医療経済の面から糖尿病対策の意義を明らかにする。方法:糖尿病の臨床経過をシミュレーションするシステムモデルを開発し、自覚症状から受療開始、治療法の変更、コントロール状態の変化、合併症の発症・進行、腎透析の開始、QALYの変化、医療費と生産額とのバランスシートなどについて実測値(糖尿病患者231例に対する調査結果)による係数と乱数を組み合わせてモデルのパラメータを決定し、モデルの信頼性、妥当性を検証した。結果:1.システムモデルでシミュレータに仮想患者(性・年齢別500人)を立て、ランダムにイベント(日本人一般の死と合併症の血管障害による死)を与える方法でシミュレートすると、モデル出力による性・年齢階級別生存率は実測値に近く、モデルの汎用性が検証された。2.複数の糖尿病合併症を有する確率は、完全な独立関係と完全な主従関係の間にあるが、数式を仮定することで係数によりその相関の具合を決定することができた。
血管新生標的因子を用いた虚血および腫瘍の分子画像診断法の展開

【目的】肝細胞増殖因子(HGF)の特異的な受容体である、c-Metは、腫瘍や虚血性疾患の治療薬開発の重要な標的として注目されている。細胞表面のc-Metを画像化することにより、腫瘍では、悪性度診断や治療方針決定に、虚血性疾患では、治療薬の効果的な投与部位の決定に有益な情報となりうると考え、c-Metを標的とする分子イメージング剤の開発を目指した。【方法】プローブの基本構造は、HGFのα鎖N末端側のヘパリン結合部位を含む配列の73aaのポリペプチド(HGF(11-83))であり、この^<125>Iおよび^<123>I標識体を評価に用いた。【結果/考察】標識プローブは、ヘパリン結合活性およびc-Met結合活性を保持していることが、ヘパリンカラム法およびc-Met発現癌細胞を用いたin vitro評価で確認された。c-Met発現癌細胞移植ゼノグラフトモデルにて標識プローブの腫瘍への高い集積が観察された。また、心筋虚血モデルでは、c-Metの発現が亢進しているとされる梗塞境界領域への集積が観察された。本プローブは、腫瘍および虚血性疾患のc-Metの発現を非侵襲的にイメージングできることから、臨床診断や治療的モニタリングに有用であり、c-Metを標的とする薬剤や治療法の開発促進に貢献できると思われる。[1]ラット下肢虚血モデルにおける検討ラット下肢虚血モデルを作成し、^<125>I-標識HGFトレーサの集積部位がHGFレセプターの発現部位と一致するのか、C-Metの発現状態を免疫細織染色法で、また毛細血管数の増加を抗CD-31抗体(血管内皮細胞マーカーに対する抗体)を用いて検討した。さらに^<99m>Tc-sestamibiなどの血流トレーサを併用しDual autoradiographyを行い、下肢血流との比較を行った。さらに^<123>I-標識HGFトレーサを創成しHGFプラスミド筋注後、経時的に^<99m>Tc-sestamibiによる下肢血流の改善程度と本トレーサの分布を比較することにより、血管新生標的分子画像としての有用性を確立した。[2]ラット心筋虚血モデルにおける検討ラット心筋虚血モデルを作成し、下肢虚血モデルと同様の手法を用いて、本トレーサの有用性を検討した。さらにラット心筋虚血モデルにおいて虚血心筋周辺に且HGFプラスミドを注入した。次いで、[1]と同様にDual isotope autoradiographyを行いHGFプラスミド投与後における心筋血管新生療法の効果判定が行えるか検討した。[3]腫瘍移植モデルマウスにおける検討MC-RH777ラット肝臓癌由来、およびHUCCT1ヒト胆管癌由来の移植細胞を用い、腫瘍移植モデルマウス作成、移植後、腫瘍の成長した12-28日後に^<125>I-HGFトレーサを投与、autoradiographyを行い、^<125>I-HGFトレーサの集積と、C-Metの発現を免疫組織染色で確認した。次いで、腫瘍部位における血流および糖代謝の程度を^<99m>Tc-sestamibiおよび^<14>C-DGの分布と比較するためDual autoradiohraphyを行った。さらに血管新生阻害剤(たとえばBevacizumab)を用いて癌休眠療法をラット担癌モデルにて行い、投与前後におけるHGFおよび血流・代謝状態について比較した。このことにより血管新生抑制療法の効果判定が行えるのか検討した。(1)本年度で行ったラット下肢虚血モデル、ラット心筋虚血モデル、腫瘍移植モデルマウスにおける実験のうち、特に各種動物実験における本トレーサを用いた血管新生標的分子画像とC-MetによるHGFレセプター発現との対比、および血流トレーサとの比較などに関して本年度から最終年度前半にかけて平行して研究計画に沿って実験を進めている。

(2) HGFを用いたラット下肢虚血、心筋虚血モデルにおける血管新生療法の治療効果の判定、および血管新生阻害剤を用いた腫瘍移植モデルマウスの治療効果判定に関する研究計画に関しては本年度後半から最終年度にかけて実験を進めている。(3)最近、心筋炎や心不全の病態において血管新生の役割が認められつつあり、これらの疾患におけるHGF投与の有用性が報告されている。そこでラット自己免疫性心筋炎モデル(ミオシン抗体感作による)やBio 14.6ハムスター(拡張型心筋症モデル)を用いたHGFレセプター・イメージングと免疫組織染色、血流トレーサとの対比など、一連の実験を同様の手法で推進する。また、HGF治療による評価についても同様の手法で実験を進めている。平成20年度(初年度)で行ったラット下肢虚血モデル、ラット心筋虚血モデル、腫瘍移植モデルマウスにおける実験のうち、特に各種動物実験における本トレーサを用いた血管新生標的分子画像とC-MetによるHGFレセプター発現との対比、および血流トレーサとの比較などに関して昨年度(2年度)から進めている実験を、本年度前半にかけて研究計画に沿って進めた。HGFを用いたラット下肢虚血、心筋虚血モデルにおける血管新生療法の治療効果の判定、および血管新生阻害剤を用いた腫瘍移植モデルマウスの治療効果判定に関する研究計画に関しては昨年度後半進めている実験を本年度も進めた。また、(1)下肢虚血モデル、(2)心筋虚血モデルおよび(3)腫瘍モデルにおいてHGFトレーサの取り込みは、(3)>(2)>(1)の順であり、このことからHGFトレーサの臨床応用として腫瘍における血管新生イメージングとしての評価と腫瘍の休眠療法において、今後有用になることが示唆された。
萬葉学の中世-古典学の再構築に向けて-

研究期間中に、高岡市万葉歴史館、お茶の水図書館、刈谷市立図書館、石川県立図書館他等に資料調査に赴いた。これらの調査により、なお中世萬葉テキストの所在確認の必要なことが確かめられた。また、合宿を京都市、金沢市、松山市、福岡市等で行い、京都女子大学、石川県立図書館、松山市立子規記念博物館、福岡県立図書館他の資料を調査収集し、本研究の成果と新たな課題を確認した。『一葉抄』の伝本調査とその校本作成については、諸本の校異を確認し、お茶の水図書館蔵本の一部を除き、すでにデータは全て収集済みで、データベース化してある。新校本については、お茶の水図書館蔵本の調査の終了を待って、成稿の予定である。報告書には諸本研究の成果として、千艘秋男「京都大学附属図書館蔵本『万葉一葉抄』について」、西田正宏「国文学研究資料館史料館蔵清水谷家文書本『万葉一葉抄』の本文について」の2編と、『新校本一葉抄』作成に向けて、その方向を確かめる資料として、自筆本のみに存する部分を含む巻3の一部の校異の状況を掲げた。千艘論文は『一葉抄』の伝本についての基礎調査であり、本研究の基本となるものである。また、西田論文は、清水谷本の本文考証をとおして、一葉抄の諸本系統に問題を提起し、中世萬葉集の伝来形態に新たな問題を提起するものである。さらに、一葉抄との関連が注意される『校正一葉抄』については、監修者である賀茂季鷹門下の松田直兄書き入れの『古万葉集』(高岡市万葉歴史館蔵)や、同じく門下で『校正一葉抄』の伝来に関わる服部敏夏の編になる『萬葉集類句』の稿本と目されるものが神宮文庫に所蔵されているなど、新たな手がかりが得られつつある。これらの究明を通して、中世萬葉テキストの実態を確かめる手がかりが得られると思う。約800字研究期間中に、高岡市万葉歴史館、お茶の水図書館、刈谷市立図書館、石川県立図書館他等に資料調査に赴いた。約800字本年度は3年間の研究期間の初年度にあたり、作業全般の準備と、作業の一部に着手した。まず、作業全般の準備として、データの集積と整理の必要から、以下の通り、PCおよび周辺機器を整備した。1、デスクトップ型PCおよび、ディスプレー各1台。2、ノート型PC4台。3、カラープリンター卓上型2台、携帯型1台。4、スキャナー(携帯型)1台。5、デジタルカメラ1台。6、新編国歌大観CD-ROM1部。などである。携帯型PCをも併せて購入したのは、資料調査に赴くときの便を考慮したためである。次に、予定した作業のうち、(1)中世に「万葉」として引用されるテキスト群の集成・類聚、については、(1)『一葉抄』諸本の校定は、高松宮本、清水谷本の写真をもとに、各自分担して校定を進めつつあり、お茶の水本については、お茶の水図書館の再開を待って、在京のメンバーが中心となって実施することとした。(2)新校本の作成の作業は、データ記入用紙を作成し、『一葉抄』諸本の校定の進んだところから、アルバイトも使いながらデータの記入を開始した。現在はデータを記入しながら、記入上の問題点をチェックし、記入用紙を改訂し、マニュアルを補訂して、作業効率の向上と作業の正確化を追求している所である。

(3)『一葉抄』以外に、「万葉」として引用されるテキスト群の集成・類聚については、各所で資料収集・調査を試みた。5月、10月、12月と高岡市万葉歴史館において、館所蔵の中世万葉関係資料の調査・中世万葉関係研究文献の収集を行い、併せて、『校正一葉抄』関連の調査を行った。同館所蔵の『古萬葉集』は、正宗文庫所蔵の賀茂季鷹書入本を松田直兄が書写し、自身の説を書入れたものとされ、賀茂季鷹監修の『校正一葉抄』との関連を調査中である。(2)連歌師による万葉集注釈書のテキストの整備についでは、目下資料収集調査の計画検討と、一部調査に取り掛かったところである。国文学研究資料館、名古屋市立鶴舞中央図書館、鹿児島大学附属図書館玉里文庫等に調査に赴いた。また、これらの調査・作業を円滑に進め、全体の調整を図るため、9月と1月、3月の3回全体の打ち合わせ会を開催した。本年度は三年間の研究期間の二年目に当たり、前年度の準備を踏まえて、具体的な作業を推し進めた。1中世に「萬葉」として引用されるテキスト群の集成・類聚について、(1)『一葉抄』の校定は、京都大学本を底本として、高松宮本・清水谷本の写真をもととして、各自分担して進めつつある。その過程で、高松宮本とされる渋谷氏校本の底本は、高松宮本をもとに漢字を仮名に開いたり逆に仮名を漢字に直したりした、一種の校定本文であるという、翻刻上の問題点も明らかになってきた。お茶の水図書館本については、直接閲覧の必要があるため、在京のメンバーを中心として作業を進めることを合意し、来年度集中的に行うことにした。(2)新校本作成作業は、『一葉抄』諸本の校定の進んだ所から、アルバイトによってデータを蓄積しつつある。現在、巻三五については、お茶の水図書館本を除き、ほぼデータが揃っており、他の巻についても、進行しつつある。(3)『一葉抄』以外に「萬葉」として引用されるテキスト群の集成・類聚については、なお以下の各所で調査・収集に努めた。調査地は、(1)9月17日(金)9月21日(火)、県立長野図書館、(2)12月19日(日)12月22日(水)、石川県立図書館(李花亭文庫)、(3)12月26日(日)12月29日(水)、石川県立図書館(李花亭文庫)、(4)平成17年2月4日(金)2月7日(日)、弘前市立図書館、(5)3月15日(火)3月18日(金)、松山市立子規記念博物館、(6)3月28日(月)3月31日(木)、松山市立子規記念博物館、等である。収集した資料の内必要なものについては、所蔵者の許可を得た上で、翻刻あるいは影印等で紹介するつもりである。2連歌師による万葉集注釈書のテキストの整備については、宗祇の『万葉抄』や、由阿の『詞林采葉抄』などを中心に、調査・収集に取りかかった所である。3以上の作業を円滑に進めるため、8月10日(火)に第1回(東洋大学)、12月19日(日)に第2回(石川県金沢市)、平成17年3月15日(火)に第3回(愛媛県松山市)の計3回、研究打ち合わせ会を開催した。本年度な研究期間の最終年度にあたり、研究成果のまとめと新たな研究課題の確認を行った。8月18日19日と、10月7日11日に京都で研究打ち合わせと資料調査の合宿を行った。また3月26日31日に最後の合宿を福岡市で行い、九州国立博物館他の資料調査と本研究の成果と新たな課題の確認を行った。『一葉抄』の伝本調査とその校本作成については、諸本の校異を確認し、お茶の水図書館蔵本の一部を除き、すでにデータは全て収集済みで、データベース化してある。校本については、お茶の水図書館蔵本の調査の終了を待って、成稿の予定である。報告書には諸本研究の成果として、千艘秋男「京都大学附属図書館蔵本『万葉一葉抄』について」、西田正宏「国文学研究資料館史料館
量子力学の準古典近似の研究

当初の目標は散乱振幅の準古典近似の研究,および,多体シュレーディンガー作用素の固有関数展開であった.当研究は目標の研究をほぼ達成した.むしろ予想以上の成果があったといってよい.以下上記二つの研究について箇条書きに記す.1.準古典近似の研究,これについては谷島賢二氏と中村周氏の貢献が大きい.谷島氏は平均収束の意味での散乱振幅の準古典近似の表式を与えた.これはいわゆるノン・トラッピング条件なしの結果である.中村氏は共鳴エネルギーの近くでの散乱振幅の準古典近似の表式を与えた.これは非常に弱いノン・トラッピング条件のもとで与えられており,この分野での世界最新の結果である.2.多体シュレーディンガー作用素の固有関数展開,これは研究代表者によって一般的な解決が与えられた.方法はシュレーディンガー方程式の時間に関して大域的な基本解の構成を行ない,それの時間が無限大の時の挙動を調べることによる.結果は非常に包括的であり,二体の場合でも重要な新結果を含んでいる.当初の目標は散乱振幅の準古典近似の研究,および,多体シュレーディンガー作用素の固有関数展開であった.当研究は目標の研究をほぼ達成した.むしろ予想以上の成果があったといってよい.以下上記二つの研究について箇条書きに記す.1.準古典近似の研究,これについては谷島賢二氏と中村周氏の貢献が大きい.谷島氏は平均収束の意味での散乱振幅の準古典近似の表式を与えた.これはいわゆるノン・トラッピング条件なしの結果である.中村氏は共鳴エネルギーの近くでの散乱振幅の準古典近似の表式を与えた.これは非常に弱いノン・トラッピング条件のもとで与えられており,この分野での世界最新の結果である.2.多体シュレーディンガー作用素の固有関数展開,これは研究代表者によって一般的な解決が与えられた.方法はシュレーディンガー方程式の時間に関して大域的な基本解の構成を行ない,それの時間が無限大の時の挙動を調べることによる.結果は非常に包括的であり,二体の場合でも重要な新結果を含んでいる.
心理リハビリテーションを活用した重度・重複障害児に対する人間関係の形成

本研究は、重度・重複障害児を対象とした人間関係の形成を目指した支援プログラムの開発を目的とした。動作法よる相互交渉を活用した三項関係の形成と身体遊びを介した模倣・逆模倣関係の形成といった発達支援の方法について検討を行った。大人からの模倣を活用した指導の成果を検討し、他者への注視やポジティブな情動を引き出すことを明らかにした。また保護者が重度・重複障害児に抱くニーズについて調査した。その結果、身体の動きや健康の保持は、幼少期にニーズが高く、その後人間関係の形成や社会生活体験といったニーズが高まってくることを明らかにした。また家庭療育をサポートすることの必要性と専門家の役割について検討した。本研究の目的は、重度・重複障害児を対象とした「人間関係の形成」を目指した支援プログラムの開発である。このプログラムは、「人間関係の形成」の主たる要素である社会性の初期発達を中心領域とする。また重度・重複障害児にとって重要な生活の場である特別支援学校と家庭のふたつの場において、教師と保護者によって協同的かつ包括的に実施されるところに特徴がある。具体的には、動作法よる身体運動的相互交渉を活用した三項関係の形成と身体遊びを介した模倣・逆模倣関係の形成といった社会的認知を育む発達支援の方法について開発・検討を行う。ここまで学校や家庭での指導実践を積み重ねてきている。また重度・重複障害児が年齢経過とともにもっているニーズについて保護者への質問紙および聞き取りから明らかにするデータを取り終えた。今後、これらについてまとめ、発表等を行っていく。研究計画としては以下の5つの研究を予定している。研究1.重度・重複障害児に対する社会性の初期発達支援を目指した動作法と模倣を活用したアプローチによる事例研究研究2.特別支援学校での「人間関係の形成」を目指した自立活動の指導についての授業に参加しながらのアクションリサーチ研究研究3.重度・重複障害児への「人間関係の形成」を目指した家庭での保護者のかかわりとその効果についての事例研究予備研究1.重度・重複障害児の社会性発達の実態を把握するための評価表の作成予備研究2.重度・重複障害児をもつ保護者の家庭での療育等に関するニーズ調査研究現在の研究実績として進捗状況をそれぞれにあげる。研究1については、現在事例への指導を継続中である。研究2については、研究協力校としてすでに2校の特別支援学校と連携・協力を開始しており、今年度さらに1校増える予定である。研究3については、すでにいくつかの家庭と研究協力の承諾を得ている。また予備研究2については、すでに質問紙および聞き取り調査を開始し、すでにその一部は第50回特殊教育学会においてポスター発表を行っている。本研究の目的は、重度・重複障害児を対象とした「人間関係の形成」を目指した支援プログラムの開発であった。具体的には、動作法よる身体運動的相互交渉を活用した三項関係の形成と身体遊びを介した模倣・逆模倣関係の形成といった社会的認知を育む発達支援の方法について開発・検討を行った。実際のプログラムとしては、重度重複障害児への大人からの模倣を活用した指導の成果を検討した。その結果、大人からの模倣が、他者への注視やポジティブな情動を引き出すことが明らかになった。学校教育(教師)への還元としては、この研究機関に10校を超える学校に対して指導助言、研究や研修への協力、実践の提示として成果を還元した。また教育センターでの研修にも生かすこととなった。保護者との協働については、保護者が重度・重複障害児に抱く「人間関係の形成」を含む療育のニーズについて、年代をおって調査した。また心理リハビリテイション(動作法)を実施している保護者の家庭での実施状況を調査し、家庭療育をサポートすることの必要性と、そこで求められる専門家の役割について検討した。具体的には、親子関係のなかで実施できる狙いや課題の提案が求められていた。特別支援教育ここまでの期間において、研究協力者を確保したうえで、多くの指導実践を積み重ねてきており、まとめる段階に達しつつある。重度・重複障害のある子どもの人間関係の形成などを含む指導ニーズについて調査が完了し、現在分析中である。

本研究の目的は、重度・重複障害児を対象とした「人間関係の形成」を目指した支援プログラムの開発である。また重度・重複障害児にとって重要な生活の場である特別支援学校と家庭のふたつの場において、教師と保護者によって協同的かつ包括的に実施されるところに特徴がある。そのため、複数の協力者が必要であり、対象者が障害のある子どもであることから、代理承諾として家族の同意を得る必要がある。現時点で、複数人の協力者の家族から研究協力の同意をえて、すでに指導等の研究が進んでいることから順調といえる。また特別支援学校における指導も本研究におけるひとつのフィールドと考えているが、その点においても現在2校の学校と密な連携・協力関係を結んでおり、すでに研究協力についての同意を得ている段階である。この点においても研の進捗は順調である。家族のもってきたニーズ等についての調査に関してはすでに開始しており、一部をまとめ、学会発表も行っており、研究が進んでいる。今後、これまで積み重ねてきた指導実践についてまとめていく保護者や当人が持っている指導ニーズについての調査研究について論文として発表を行うすでに協力関係にある子どもとその家庭を対象として、指導を積み重ねていくことによって事例研究が実施される。学校での指導等に参加をすでに行っているが、そこから研究的な視点での介入やまとめを行っていく予定である。また家族の持ってきたニーズ等についての調査についても今後さらに進めていく予定である。研究は3年計画であり、今年度はまとめの段階となる。そのため学会参加や情報収集が必要であり、使用の予定である文具類の購入と学会参加のための旅費、および資料整理のための人件費を計画している研究に必要なデータ等を収集し、分析するために消耗品等が必要であるまた情報収集及びすでにまとまった時点での研究発表のために学会等へ参加するための出張費は必要である研究データの分析のために、知見のある研究者と意見交換を行う必要が生じた場合の謝金、およびデータ分析に学生などの助力を得た場合の謝金等が必要となるかもしれない
C型肝炎ウイルスによる肝発癌機構のトランスジュニックマウスを用いた解明

C型肝炎ウイルス(HCV)による発癌機構のモデルとして、HCV遺伝子導入トランスジェニックマウスを作製するため、まずHCVの構造遺伝子領域のうちコア蛋白とエンベロープ蛋白部分を発現するための導入遺伝子を準備した。国立予研宮村博士より供与されたHCVクローンpSR39x、pSR824xからそれぞれ切り出したPstI-EcoRI断片をT4DNAポリメラーゼを用いてblunt end化した後、BglIIリンカーを用いて既報の肝特異発現ベクターpBEPxのBglII酵素部位に挿入した。このようにして作製されたプラスミドpBEP39,pBEP824を用いて、まず培養細胞での発現を検討した。一過性発現のシステムでコア、エンベロープ蛋白ともに発現していることが、単クローン抗体を用いたウェスタンブロットで明らかになった。次いでこれらのプラスミドからベクター部分を取り除いて精製したDNA断片をマウス授精卵に導入した。導入マウスとしていは今回はCD-1マウスを用いた。出生してきたマウスの尾からDNAを抽出し、PCRを用いてスクリーニングし、陽性サンプルについてサザンブロットで確認し導入コピー数などを検討した。現在これらの初代マウスをCD-1の掛け合わせてF1マウスを作製しているところである。
アルファ線核医学治療を視野に入れたアクチニウム－225線源製造とその応用の試み

本研究では、まず、非アルファ放出核種であるBaやMo,Cu,Ge,等を用いて電子線による医療用放射性同位体の生成断面積等を実験及びシミュレーション両面から検討を行いう。また、これらの核データ取得から得られるパラメータをもとに、ウラン系列の放射性廃棄物として多量に存在するラジウム-226(Ra-226)を、高エネルギーガンマ線を用いて前立腺がん等の核医学治療に有効なAc-225の製造の基礎検討を行う[Ra-226(γ,n)Ra-225→β壊変→Ac-225]。さらに将来的に有用とされるDDSを目指したRIナノコンテナなどへの応用を探ることを目指す。
自発集積による超分子ナノ光科学

合成色素分子の集積による会合体や配位不飽和な合成錯体への自発配位による超錯体に基づく超分子ナノ構造体の光科学に関する企画調査研究を、13名の国内研究者と1名の海外共同研究者によって、以下のような5回(1回は予定)の会合において行った。1)2004.6.16-18:本企画調査の研究組織員に、国内外の研究者を加えて、国際研究集会「化学的にプログラムされた合成色素類の超分子ナノ科学」を、立命館大学で開催し、「自己集積体と超錯体による超分子ナノ光科学の研究」を検討した。2)2004.8.6:第17回配位化合物の光化学討論会(大分・湯布院)にあわせて、討論会の前日に研究組織員が集合して、2005年度に開催予定の国際研究集会の企画について議論した。3)2004.10.31:2004年度光化学討論会(つくば)にあわせて、討論会の前日に研究組織員が集合して、2005年度に開催予定の国際研究集会の企画や研究内容について議論した。4)2005.2.18-19:本企画調査のまとめを立命館大学で行い、2005年度に開催予定の国際研究集会で議論すべき研究内容の準備を行った。5)2005.3.26:日本化学会第85春季年会(横浜・神奈川大学)において、研究組織員が集合して、特別企画「高分解能分光計測の複合系への展開」を開催し、複合系の高分解能の分光計測に関する検討行い、2005年度に開催予定の国際研究集会の検討内容を深める。以上の会合によって、2005.6.6-8に立命館大学びわこ・くさつキャンパスで開催予定の国際研究集会第2回「化学的にプログラムされた合成色素類の超分子ナノ科学」(SNCPP05)と、2005.12.13-15に米国・ハワイ島コナで開催予定の2005環太平洋国際化学会議(Pacifichem2005)のプレコンファレンスの内容がほぼ確定した。
能動騒音制御における戸外での騒音伝搬防止

道路交通騒音の低減方法として、能動的騒音制御の適用可能性について研究を行った。本研究の第一の課題は音場に関する能動的騒音制御の問題であった。本研究において目指している戸外での能動的騒音制御において、主要な空間的形態を占めると考えられるものは3次元的空間であり,実験的、理論的(主に数値シミュレーションによる)に道路交通騒音の音源である自動車を点音源とみなした場合、また3次元的空間が半自由空間である場合について検討した。本研究の理論的な基板であるJMC(Jessel-Mangninate-Canevet)理論を実際に展開しうるようにするためには、JMC理論の中で考えられている2次音源の配置を離散的にすること、及び個々の2次音源であるtripole(三極子)を構成するmonopole(単極子)間を有限な距離で配置しなければならない。本研究においては無響室内における実験,また数値シミュレーションによって、その影響について考察した。また、解析的な理論展開も行った。本研究の第二の課題は実際の実験システムに関するディジタル信号処理技術上での問題である、tripole(三極子)を多チャンネル構成となるように配置し、その出力の位相、振幅をコントロールする技術を開発することである。本年度ではこの課題に関しては基礎的なアルゴリズムを進展させるための検討を行ったが、その実際的な適用については本研究が自動車という大幅なスペクトル変動があり,さらに音源の動きが引き起こす風を含め,風に対する追従性などシステムの安定性についてなお検討が必要である。道路交通騒音の低減手法としての能動的騒音制御に対して基礎的な知見を得ることが出来,さらに進展すべき課題も残っているが,今後この技術がさらに進展し,実際の道路交通騒音の制御に適用されることは確実であると結論づけたい。本研究において目指している戸外での能動的騒音制御において、主要な空間的形態を占めると考えられるものは3次元的空間であるが、本年度においては実験的、理論的(主に数値シミュレーションによる)に道路交通騒音の音源である自動車を点音源とみなした場合、また3次元的空間が半自由空間である場合について検討した。本研究の論理的な基盤であるJMC(Jessel-Manginate-Canevet)理論を実際に展開しうるようにするためには、JMC理論の中で考えられている2次音源の配置を離散的にすること、及び個々の2次音源であるtripole(三極子)を構成するmonopole(単極子)間を有限な距離で配置しなければならない。本年度においては数値シミュレーションによって、その適当な間隔の条件について明らかにした。本年度ではこの課題に関しては基礎的な、従来、本研究者が行った手法を簡単化するためのアルゴリズムについて検討を行ったが、なお検討が必要である。しかし、本研究の科学研究費によってその開発環境が改善され、進捗が著しいのは喜ばしいことである。

本研究の理論的な基盤であるJMC(Jessel-Manginate-Canevet)理論を実際に展開しうるようにするためには、JMC理論の中で考えられている2次音源の配置を離散的にすること、及び個々の2次音源であるtripole(三極子)を構成するmonopole(単極子)間を有限な距離で配置しなければならない。本研究においては無響室内における実験,また数値シミュレーションによって、その影響について考察した。また、解析的な理論展開も行った。本研究の第二の課題は実際の実験システムに関するディジタル信号処理技術上での問題である、tripole(三極子)を多チャンネル構成となるように配置し、その出力の位相、振幅をコントロールする技術を開発することである。本年度ではこの課題に関しては基礎的なアルゴリズムを進展させるための検討を行ったが、その実際的な適用については本研究が自動車という大幅なスペクトル変動があり,さらに音源の動きが引き起こす風を含め,風に対する追従性などシステムの安定性についてなお検討が必要である。道路交通騒音の低減手法としての能動的騒音制御に対して基礎的な知見を得ることが出来,さらに進展すべき課題も残っているが,今後この技術がさらに発展し,実際の道路交通騒音の制御に適用されることは確実であると結論づけたい。
メカニカルストレスを応用したビスフォスフォネート製剤関連顎骨壊死の病態解明

ビスフォスフォネート(以下bisphosphonate; BP)は骨芽細胞に対しALP活性を上昇させ、OPGに対し抑制的に作用すること、また、機械的圧縮ストレスもOPGを抑制することが明らかとなった。したがってBPはALPの上昇によって骨芽細胞分化を促進するが、OPGの低下によって破骨細胞分化も促進させると考えられる。よってBPおよび顎骨への機械的圧縮ストレスは、骨芽細胞において骨代謝回転に促進的に作用することからBPの歯槽骨および顎骨への沈着も促進していることが示唆された。本研究結果は、BRONJの病態形成メカニズムの一端を解明する上で基礎的な知見を与えるものである。本研究は、ビスフォスフォネート(以下bisphosphonate; BP)製剤関連顎骨壊死(以下Bisphosphonate-related osteonecrosis of the jaw; BRONJ)の病態解明を目的とした基礎的研究である。窒素を含むBP製剤(NBP)は、破骨細胞に特異的に取り込まれ、破骨細胞の機能を抑制し、アポトーシスを誘導することにより骨吸収を阻害するが、近年、NBPは破骨細胞のみならず、他の細胞にも取り込まれ様々な反応を示すことが明らかとなっており、骨芽細胞への影響も想定される。また、NBPはリモデンリング活性の高い部分で作用することが明らかになっており、顎骨および歯槽骨に加わる力学的負荷が周囲組織を形成する細胞へのNBPの取り込みとBRONJの発症や病態形成に強く関連していると考えている。本研究では、NBPを作用させた骨芽細胞へのメカニカルストレスの影響を解析し、分子細胞生物学的手法を用いBRONJの病態形成メカニズムの解明を試みる。H25年度は骨芽細胞へのNBPの作用とメカニカルストレスを加えた培養実験を行った。マウス骨芽細胞株MC3T3ーE1細胞を実験に用い、NBPはZoledronateを使用した。細胞(1x105/well)を6 wellプレートで培養。それぞれのBP製剤を0100ng/mlで添加し7日間培養。1, 3, 7日間培養で細胞増殖能をPremixWST-1細胞増殖アッセイシステム(タカラバイオ)を用い確認したがNBPは細胞増殖に影響を与えなかった。RANKLおよびOPGの遺伝子発現変化、蛋白産生は実験中である。NBPを添加したマウス骨芽細胞へのメカニカルストレスの負荷実験では、圧縮負荷を加えた。細胞への圧縮刺激は、当教室で作製した圧縮培養システムを用いて行い、培養皿上で培養した細胞にガラスシャーレを置いて圧縮負荷を加え、ガラスシャーレの重量により1.0g/cm2、2.0g/cm2、4.0g/cm2で圧縮強度を調節した。3日間の培養で細胞増殖は圧縮群4.0g/cm2で低下したが、有意差を認めなかった。本研究は、ビスフォスフォネート(以下BP)製剤関連顎骨壊死の病態解明を目的とした基礎的研究である。これまでの基礎的研究で窒素を含むBP製剤(NBP)の骨への沈着や破骨細胞に対する機能抑制作用は明らかとなっているが、近年、NBPは破骨細胞のみならず、他の細胞にも取り込まれ様々な反応を示すことが明らかとなっており、骨芽細胞に対する作用も想定される。また、NBPはリモデリング活性の高い部分で作用することから、会話、呼吸、咀嚼などの行為により歯槽骨および顎骨に加わる力学的負荷を想定し、BPの作用を受けた骨芽細胞の機械的圧縮ストレス刺激に対する反応を検討した。実験には、マウス由来骨芽細胞様細胞(MC3T3-E1)を用いた。Zoledronate(ZD)は骨芽細胞培養時に添加し(10ng/m,100ng/ml)、機械的圧縮ストレスは、当教室で作製した圧縮培養システムを用い、ガラスシャーレと鉛球を応用した直接的圧縮刺激にて負荷を加えた(重量:4g、8g、16g、作用時間:24時間、48時間)。細胞増殖活性はWST-1を用い、ALP活性、sRANKL、OPGの蛋白産生(ELISA)について検討した。ZDの添加、機械的圧縮ストレスは、細胞増殖、sRANKLの蛋白産生に影響を与えなかった。ALP活性はZDの添加により上昇したが、機械的圧縮ストレス下においてALP活性は明らかな変化を示さなかった。また、OPGの蛋白産生は、ZDの添加、機械的圧縮ストレス負荷により有意に低下した。これらの結果から、BPは骨芽細胞に対しALP活性を上昇させ、OPG産生抑制に作用すること、また、機械的圧縮ストレスもOPG産生を抑制することが明らかとなり、ZD投与患者では、歯槽骨および顎骨に加わる力学的負荷が骨代謝回転を増加させ、BPの骨への沈着を促進させ、特異的に病変が発症しうる可能性が示唆された。本研究は、ビスフォスフォネート製剤(以下BP)関連顎骨壊死の病態解明を目的とした基礎的研究である。近年、窒素を含むBP製剤(NBP)は破骨細胞のみならず、他の細胞にも取り込まれ様々な反応を示すことが明らかとなっており、骨芽細胞に対する作用も想定される。また、NBPはリモデリング活性の高い部分で作用することから、歯槽骨および顎骨に加わる力学的負荷を想定し、BPの作用を受けた骨芽細胞の機械的圧縮ストレス刺激に対する反応を検討した。Zoledronate(Zol)は骨芽細胞培養時に添加し(10ng/m,100ng/ml)、機械的圧縮

ストレスはガラスシャーレと鉛球を応用した直接的圧縮刺激にて負荷を加えた(重量:4g,8g,16g,作用時間:24時間,48時間)。細胞増殖活性はWST-1を用い、ALP活性、sRANKL、OPGの遺伝子発現と蛋白濃度をReal-time PCR法およびELISA法にて測定した。細胞増殖活性においてZol添加、機械的圧縮ストレス負荷において有意な変化は認めなかった。ALPはmRNA発現およびALP産生量はZolの添加(10ng/ml,100ng/ml)により有意に上昇し、RANKLはいずれの刺激においても影響を示さなかったが、OPGは、Zolの添加および機械的圧縮ストレス負荷の両方で、mRNA発現およびOPG産生量は、有意に低下した。これらの結果からBPはALPの上昇によって骨芽細胞分化を促進するが、OPGの低下によって破骨細胞分化も促進させると考えられる。よってBPおよび顎骨への機械的圧縮ストレスは、骨芽細胞において骨代謝回転に促進的に作用することからBPの歯槽骨および顎骨への沈着も促進していることが示唆され、BP投与患者では、歯槽骨および顎骨に加わるメカニカルストレスが骨形成の活性増加からBPの骨への沈着を促進し、特異的に病変が発症しうる可能性が考えられた。ビスフォスフォネート(以下bisphosphonate; BP)は骨芽細胞に対しALP活性を上昇させ、OPGに対し抑制的に作用すること、また、機械的圧縮ストレスもOPGを抑制することが明らかとなった。したがってBPはALPの上昇によって骨芽細胞分化を促進するが、OPGの低下によって破骨細胞分化も促進させると考えられる。よってBPおよび顎骨への機械的圧縮ストレスは、骨芽細胞において骨代謝回転に促進的に作用することからBPの歯槽骨および顎骨への沈着も促進していることが示唆された。本研究結果は、BRONJの病態形成メカニズムの一端を解明する上で基礎的な知見を与えるものである。昨年度の課題であった圧縮ストレスの負荷強度は設定できた。しかし、当初ヒトの骨芽細胞を用いることを想定していたが、現時点ではマウスの骨芽細胞での予備実験でのデータしか出ていない。外科系歯学圧縮方法は確立し、マウス骨芽細胞を用いた予備実験もおおむね良好であり、今後はヒトの骨芽細胞を用いた実験を中心に行う。また、NBPが骨芽細胞のアポトーシスや細胞伸展刺激に対する反応を確認する実験も計画している。圧縮ストレス実験での負荷強度の設定において、重さ5.0g/cm2以上や長期間(4,5日以上)の培養では細胞がプレートから剥がれるなどの問題が生じ、実験の進行が遅れている。蛋白検出用ELISA kitを注文したが、国内在庫がなかったため、納品に時間がかかり、今年度内での納品が不可能であったため、次年度への繰り越しとした。メカニカルストレスの伸展、圧縮方法が確立したため、今後の実験の進行は問題ないと思われる。今後は、NBP添加時、メカニカルストレス負荷時のアルカリフォスファターゼ、RANKLおよびOPGの遺伝子発現変化、蛋白産生を確認し、さらにNBPが骨芽細胞のアポトーシスへ及ぼす作用とメカニカルストレスの影響も確認する。また、ヒト正常骨芽細胞でも同様の実験を計画している。蛋白検出用ELISA kitおよび遺伝子実験用プライマー、試薬等に使用予定である。遺伝子、蛋白実験の遅れにより試薬等の購入も遅れたためである。