hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Arid1a機能喪失の子宮内膜癌化と薬剤感受性への影響の検討

子宮内膜癌の8割を占める類内膜癌の30%以上にARID1A遺伝子変異が認められることから、ARID1Aの機能喪失が内膜の癌化や進展に重要な役割を持つと考えられ、増殖能などの悪性度増強や薬剤感受性に影響している可能性が考えられるが、これを検討した報告はない。そこで本研究では、我々の共同研究者が樹立した子宮内膜特異的にArid1aノックアウトを誘導できる遺伝子改変マウスや培養細胞を用いて、ARID1A機能喪失の子宮内膜癌化・進展に及ぼす影響、薬剤感受性に及ぼす影響、それらの分子機序を検討することを目的とする。現在までマウスにおいて子宮内膜特異的にArid1a遺伝子のknock-out(KO)を導入できる遺伝子改変マウスを作成し、狙い通りにKOされることを確認した。その上でArid1a-KO導入による子宮内膜病変の有無を観察している。また、他の遺伝子AのKOや遺伝子B変異が同時に導入される遺伝子改変マウスも作成し、同様に病変の有無を観察中である。また、子宮内膜癌細胞株のARID1Aの蛋白発現とmutationの有無をWestern blottingとsequencingで確認中である。ARID1A陽性細胞株において、CRISPR法でARID1A-KO細胞を作成中であり、今後の機能解析実験に用いる予定である。さらに、ARID1A野生型の細胞株からARID1A cDNAを増幅し、pcDNA3 plasmidに連結させることでARID1A発現vectorを作成した。これをARID1A欠失細胞株に導入した細胞を作成中である。遺伝子改変マウスの妊孕性が予想以上に不良であること、BL6マウスへの戻し交配が必要であることから、想定以上に時間を要している。ARID1A-KO細胞やARID1A欠失細胞へのARID1A遺伝子を導入した細胞の作製を進めており、今後の機能解析実験に用いることが可能となる見込みである。基本的に実験計画に沿って、研究を進めていく。培養細胞を用いた実験では、ARID1A-KOおよびARID1A cDNA導入細胞での機能解析を進めていく。また、子宮内膜腺上皮特異的にArid1a-KOを誘導可能な遺伝子改変マウスでの検討を進める。Arid1a-KOと遺伝子A-KOもしくは遺伝子B変異を同時に誘導するマウスでは、子宮内膜腫瘍の発生が見られており、薬剤感受性などの検討を進める予定である。
三次元橈骨遠位端骨折変形治癒による前腕回旋制限の数値シミュレーション

本研究は,橈骨遠位端骨折後に生じる変形治癒の三次元変形量によって,前腕回内・回外の可動域および回転軸がどのように変化するかを,数値シミュレーションの手法を用いて包括的に明らかにするものである.従来の二次元変化量(単独変形)のみの評価では,可動域の過小評価となる恐れがあった.本研究結果より,臨床現場では,橈骨遠位端変形治癒の患者に対して,診察後すぐに的確な,前腕回旋制限と観血的治療の有無を評価することができる.橈骨の三次元変形治癒のパラメータとして,橈側傾斜,掌側傾斜,橈骨短縮,回旋変形の4つを選定する.平成29年度に正常な前腕回旋運動が可能でかつ精密・正確な上肢モデルを構築した。平成30年度にはそのモデルを用いて、橈側傾斜と橈骨短縮の複合変形に着目した。標準モデルの回旋角度を100%とした場合、橈側傾斜単独変形では傾斜角度20°において回内69%(58.9°)、回外96%(86.1°)であり、橈骨短縮単独変形では短縮量6mmにおいて回内73%(62.3°)、回外68%(61.1°)であった。この結果、両者の単独変形の場合、ともに日常生活可動域60°以上であった。一方、橈骨傾斜15°と橈骨短縮2mmの複合変形の場合、回内96.7%(82.4°)、回外59.1%(53.2°)であった。この場合の橈骨変形量は、両者とも単独変形量の問題の無い範囲であったが、複合変形になると回外において日常生活に支障が出るレベルとなった。平成31年度には、回旋変形と橈骨短縮に着目する予定である。橈側傾斜と橈骨短縮の複合変形モデルについて解析を行い、その結果を学会で発表した。7月に国際会議で発表を行った。1.回旋変形と橈骨短縮の複合モデル新たに、回旋変形の単独変形モデルと、回旋変形および橈骨短縮の複合モデルについてシミュレーションを行い、前腕回旋運動に影響の無い変形治癒,日常生活に影響の少ない変形治癒の領域を求める.2.成果報告既に終了している成果について、学会に論文投稿を行う。また、新しい成果については積極的に学会発表を行う。本研究は,橈骨遠位端骨折後に生じる変形治癒の三次元変形量によって,前腕回内・回外の可動域および回転軸がどのように変化するかを,数値シミュレーションの手法を用いて包括的に明らかにするものである.従来の二次元変化量(単独変形)のみの評価では,可動域の過小評価となる恐れがあった.本研究結果より,臨床現場では,橈骨遠位端変形治癒の患者に対して,診察後すぐに的確な,前腕回旋制限と観血的治療の有無を評価することができる.橈骨の三次元変形治癒のパラメータとして,橈側傾斜,掌側傾斜,橈骨短縮,回旋変形の4つを選定する.平成29年度の目標は正常な前腕回旋運動が可能でかつ精密・正確な上肢モデルを構築することであった。そのために、2つの段階が必要となった。1.前腕回旋運動が可能な上肢モデルの構築被験者1名に対して、肘関節伸展状態でCT撮影を行い、そのCT画像から骨モデルを構築した。次いで、4種の筋モデルを骨モデルに付与して、前腕回旋を可能にした。この際の筋収縮モデルはHill-typeモデルとした。次いで、前腕運動を制限する靭帯モデルを付与した。靭帯モデルは29本であった。さらに、尺骨と手根骨の間に存在する三角線維軟骨複合体をバネモデルでモデル化した。2.ヒト回旋データによる検証モデルを作成した被験者に対して、中間位から最大可動域まで30°毎にCT撮影を行い、検証用の骨モデルを構築した。シミュレーションモデルと検証用骨モデルの両方に同一な4点の特徴点を選定して、それの座標誤差を評価した。評価した結果、最大誤差は回内で4.2mmであり、回外で4.1mmであった。これより、目標値である5mm以下の誤差を実現できた。平成29年度の目標は達成できたので、さらに研究を進めて、単独変形モデルおよび複合変形モデルの解析も実施している。平成29年度には、掌側傾斜と橈骨短縮に着目した。H29年度の目標は高精度なモデル作成であった。ヒトCT画像から骨モデルを構築し、それに筋モデル、靭帯モデル、関節円板モデルを追加して、腕モデルを作成した。筋モデルにはHillタイプの筋収縮を与えた。このモデルで、正常な前腕回内・回外運動を実現できた。また、精度検証では、CT撮影で得られたヒトデータを比較して、5mm以下の誤差であることを示した。モデル作成が予定より早く終わったため、橈骨変形癒合モデルによる回旋制限をシミュレーションした。まずは、掌側傾斜と橈骨短縮に着目した。掌側傾斜の単独変形の場合、傾斜角度15度までは回旋制限が生じなかったが、20度で約44%の回旋可動域の減少を生じた。橈骨短縮の単独変形の場合、短縮5mmまでは回旋制限が生じなかったが、短縮6mmで約81%の回旋可動域の減少を生じた。

掌側傾斜と橈骨短縮の複合変形の場合、短縮2mmでは、掌側傾斜15度までは回旋制限が生じなかった。しかし、短縮3mmでは、掌側傾斜15度で約15%の回旋制限が生じた。さらに、短縮4mmでは、掌側傾斜5度で約45%の回旋制限が生じた。本研究は,橈骨遠位端骨折後に生じる変形治癒の三次元変形量によって,前腕回内・回外の可動域および回転軸がどのように変化するかを,数値シミュレーションの手法を用いて包括的に明らかにするものである.従来の二次元変化量(単独変形)のみの評価では,可動域の過小評価となる恐れがあった.本研究結果より,臨床現場では,橈骨遠位端変形治癒の患者に対して,診察後すぐに的確な,前腕回旋制限と観血的治療の有無を評価することができる.橈骨の三次元変形治癒のパラメータとして,橈側傾斜,掌側傾斜,橈骨短縮,回旋変形の4つを選定する.平成29年度に正常な前腕回旋運動が可能でかつ精密・正確な上肢モデルを構築した。平成30年度にはそのモデルを用いて、橈側傾斜と橈骨短縮の複合変形に着目した。標準モデルの回旋角度を100%とした場合、橈側傾斜単独変形では傾斜角度20°において回内69%(58.9°)、回外96%(86.1°)であり、橈骨短縮単独変形では短縮量6mmにおいて回内73%(62.3°)、回外68%(61.1°)であった。この結果、両者の単独変形の場合、ともに日常生活可動域60°以上であった。一方、橈骨傾斜15°と橈骨短縮2mmの複合変形の場合、回内96.7%(82.4°)、回外59.1%(53.2°)であった。この場合の橈骨変形量は、両者とも単独変形量の問題の無い範囲であったが、複合変形になると回外において日常生活に支障が出るレベルとなった。平成31年度には、回旋変形と橈骨短縮に着目する予定である。橈側傾斜と橈骨短縮の複合変形モデルについて解析を行い、その結果を学会で発表した。7月に国際会議で発表を行った。1.正常回旋運動モデルの改良十分な精度でモデル化できたが、さらに次の改良を行う。まずは筋モデルの変更を行う。Hillタイプの筋モデルであるが、腱要素およびダンパー要素を加えない収縮要素・弾性要素並列モデルとした。そこで、より現実に近づけるためにこれらの要素も追加したモデルに改良する。靭帯モデルにおいても、バネモデルのみでモデル化したが、これにダンパー要素も追加する。必要に応じて、骨モデルの改良も行う。2.掌側傾斜および橈骨短縮の単独変形モデルと複合変形モデル昨年度も実施したが、さらに詳細に計算を行い、前腕回旋運動に影響の無い変形治癒,日常生活に影響の少ない変形治癒の領域を確定させる。3.橈側傾斜および橈骨短縮の単独変形モデルと複合変形モデル新たに、橈側傾斜の単独変形モデルと、橈側傾斜および橈骨短縮の複合変形モデルについてシミュレーションを行い、前腕回旋運動に影響の無い変形治癒,日常生活に影響の少ない変形治癒の領域を求める.4.筋出力の影響昨年度は筋出力を最大筋出力の70%、拮抗筋20%のみに設定した。本年度は筋出力を変化することによって、回旋制限の領域が変化するのかも検討する。5.成果報告いくつかの検証が終わり、積極的に成果を報告していく。現在予定しているものは、7月に国際会議へ報告する。また、論文化も早急に行う。1.回旋変形と橈骨短縮の複合モデル新たに、回旋変形の単独変形モデルと、回旋変形および橈骨短縮の複合モデルについてシミュレーションを行い、前腕回旋運動に影響の無い変形治癒,日常生活に影響の少ない変形治癒の領域を求める.2.成果報告既に終了している成果について、学会に論文投稿を行う。また、新しい成果については積極的に学会発表を行う。
外傷後急性腎障害(AKI)尿細管修復の機能予後と治療に関する分子マーカーの開発

<研究目的>虚血再潅流モデルを用いて急性腎障害(以下、AKI)重症度・AKI発症からの時期に応じて,近位尿細管細胞の増殖と再生において脱分化関連遺伝子CITED1がどのように関与しているかを明確にし、新規分子マーカーや新規遺伝子治療となり得るか検討する。<研究計画>1. Wistarラットを用いた腎虚血再潅流モデルの作製技術の習得2.重症度別腎虚血再潅流モデルにおけるAKI治癒過程の細胞増殖および脱分化の評価3. AKI治癒過程の細胞増殖および脱分化の良好な部位のCITED1、Delta-1、Noctch-Hes遺伝子発現を評価4. AKIに対する尿細管細胞増殖・分化能向上を目的としたCITED1遺伝子導入により、腎再生の促進効果検討理由<該当年度に実施した研究の成果>本研究はラットの虚血再潅流モデルを用いて脱分化関連遺伝子CITED1がどのように関与しているかを明確にし、新規分子マーカーや新規遺伝子治療となり得るか検討することである。最終的には臨床的応用を目指すものであり、高エネルギー体幹部外傷や出血性ショックに対する緊急手術の術後合併症として急性腎障害の治療に寄与できると考えている。当該年度はラットを用いた腎虚血再潅流モデルの作製技術の習得に時間がかかっており、計画は遅延している。一方で臨床的検討として2018EVT(EndoVascular resccucitation and Trauma Management)(6月、Sweden)にて『A case of traumatic shock in which hepatic hemorrhaging was controlled and the patient's life wassaved using an Intra-Aortic Balloon Occlusion catheter.』の報告を行った。また、2019年には第33回日本外傷学会(6月、八戸)にて『外傷後急性腎障害のリスク因子と劇的救命例についての検討』との報告を行う予定である。当該年度は研究計画1の「ラットを用いた腎虚血再潅流モデルの作製技術の習得」に時間がかかっており、計画は遅延している。理由としては動物実験室利用のための手続きに時間を要していることが原因である。さらに、大学病院としての臨床業務と教育業務による実験計画が遅延している。可及的速やかにこれらの問題を解決し、速やかに研究計画を進める予定である。<研究計画>1. Wistarラットを用いた腎虚血再潅流モデルの作製技術の習得(最良のAKIモデルを得るため、腎動静脈のクランプ時間は調整していく)2.重症度別腎虚血再潅流モデルにおけるAKI治癒過程の細胞増殖および脱分化の評価3. AKI治癒過程の細胞増殖および脱分化の良好な部位のCITED1、Delta-1、Noctch-Hes遺伝子発現を評価4. AKIに対する尿細管細胞増殖・分化能向上を目的としたCITED1遺伝子導入により、腎再生の促進効果検討(モデル作製3日後、10日後)<該当年度に実施した研究の成果>本研究はラットの虚血再潅流モデルを用いて脱分化関連遺伝子CITED1がどのように関与しているかを明確にし、新規分子マーカーや新規遺伝子治療となり得るか検討することである。一方で臨床的検討として、第20回臨床救急医学会総会・学術集会(5月、東京)のシンポジウムで『「地方」にある「大学附属病院」の救命救急センターが考える外傷センターのあるべき姿』、第9回Acute Care Surgery学会(9月、札幌)のパネルディスカッションで『和歌山県におけるAcute Care Surgeryの現状』との報告を行った。<該当年度に実施した研究の成果>本研究はラットの虚血再潅流モデルを用いて脱分化関連遺伝子CITED1がどのように関与しているかを明確にし、新規分子マーカーや新規遺伝子治療となり得るか検討することである。

理由としては動物実験室利用のための手続きに時間を要していることが原因である。さらに、大学病院としての臨床業務と教育業務による実験計画が遅延している。<研究目的>虚血再潅流モデルを用いて急性腎障害(以下、AKI)重症度・AKI発症からの時期に応じて,近位尿細管細胞の増殖と再生において脱分化関連遺伝子CITED1がどのように関与しているかを明確にし、新規分子マーカーや新規遺伝子治療となり得るか検討する。<研究計画>1. Wistarラットを用いた腎虚血再潅流モデルの作製技術の習得2.重症度別腎虚血再潅流モデルにおけるAKI治癒過程の細胞増殖および脱分化の評価3. AKI治癒過程の細胞増殖および脱分化の良好な部位のCITED1、Delta-1、Noctch-Hes遺伝子発現を評価4. AKIに対する尿細管細胞増殖・分化能向上を目的としたCITED1遺伝子導入により、腎再生の促進効果検討理由<該当年度に実施した研究の成果>本研究はラットの虚血再潅流モデルを用いて脱分化関連遺伝子CITED1がどのように関与しているかを明確にし、新規分子マーカーや新規遺伝子治療となり得るか検討することである。最終的には臨床的応用を目指すものであり、高エネルギー体幹部外傷や出血性ショックに対する緊急手術の術後合併症として急性腎障害の治療に寄与できると考えている。当該年度はラットを用いた腎虚血再潅流モデルの作製技術の習得に時間がかかっており、計画は遅延している。一方で臨床的検討として2018EVT(EndoVascular resccucitation and Trauma Management)(6月、Sweden)にて『A case of traumatic shock in which hepatic hemorrhaging was controlled and the patient's life wassaved using an Intra-Aortic Balloon Occlusion catheter.』の報告を行った。また、2019年には第33回日本外傷学会(6月、八戸)にて『外傷後急性腎障害のリスク因子と劇的救命例についての検討』との報告を行う予定である。当該年度は研究計画1の「ラットを用いた腎虚血再潅流モデルの作製技術の習得」に時間がかかっており、計画は遅延している。
含ホウ素開殻構造物質に関する研究

2価ホウ素ラジカル-窒素配位結合形成を基盤とする含ホウ素開殻構造物質構築のため、分子間ホウ素-窒素配位結合について精査した。核磁気共鳴スペクトル、蒸気圧浸透圧測定によるジエチル-3-ピリジルボランが環状四量体を形成するのに対し、ジエチル-4-ピリジルボランとジエチル-2-ピリジルボランはそれぞれ環状五量体、環状二量体であること、これらの夛量体は配位結合の歪みが小さいように形成されることが判明した。さらに、配位結合による会合は室温では全く安定で、80度付近で解離しはじめることも明らかとなった。また、ジエチルピリジルボランの芳香環骨格を変えることによってホウ素-窒素配位結合の強さを変化できること、およびこの配位化合物が水存在下、室温で安定に存在することを親水性置換基を導入した誘導体合成による示すことができた。ジエチル-3-ピリジルボラン環状四量体についてはJ.Chem.Soc.,Chem.Commun.に、また分子間ホウ素-窒素配位結合についてはTetrahedronの報告の中で詳細に論議した。一方、2価ホウ素ラジカルを配位させる含窒素芳香環については、非交互系である2-メルカプト-1、3-ジアザアズレンおよび2-アミノ-1、3-ジアザアズレンを合成した。前者については、現在脱硫を検討している。脱硫後、2価ホウ素ラジカルを配位させることができれば分極構造を持つ安定ラジカルの合成が可能であり、現在検討中である。申請した課題を進行中、2-アミノ-1、3-ジアザアズレンの溶媒依存蛍光挙動を見いだした。すなわち、溶媒の極性変化により若干のストークスシフトと二種のピークの出現が観測された。これは窒素原子間でのプロトン移動による互変異性に基づくものと考えられ、窒素原子での2価ホウ素ラジカル配位においても興味ある挙動が観測される可能性があることを示唆する。
ドイツにおける憲法の価値秩序に対応した私立学校法制の成立過程

本研究の目的は、公立学校からの「逸脱」が最も顕著なヴァルドルフ学校(シュタイナー学校)の権利獲得を巡る運動(ヴァルドルフ学校運動)を中核に据えて、第二次世界大戦後のドイツにおける私立学校法制が、ボン基本法の価値秩序に対応すると認識されるまでに「肥沃化」してきた歴史的経緯とその教育史的意味を解明することにある。この目的達成のため、研究初年度となる平成30年度においては、次の3つの具体的な実施計画を立てて、以下の通りの研究を実施した。まず第1に、第2次世界大戦直後における私立学校の再建経緯の研究である。この実施計画に基づき、ナチズム期に全て閉鎖となっていたヴァルドルフ学校の再建経緯に関する資料収集とその分析を行った。具体的には、シュツットガルト校の再開に関する研究とテュービンゲン校の新設の経緯に関する研究を行った。この研究を通して、ボン基本法の制定に大きく関与したテオドア・ホイスとカルロ・シュミットの二人が、共に南西ドイツ地区の文部大臣として、ヴァルドルフ学校の設置認可を実施していた事実を解明した。第2に、ボン基本法、特にその第7条4項の制定経緯に関する研究である。ボン基本法の制定に至る議会評議会の議事録の分析により、テオドア・ホイスが第7条4項の「私立学校を設置する権利」の成分化に決定的に寄与したこと、その際に自身がヴァルドルフ学校の設置認可に関与した実体験が間接的に影響していたことを明らかにした。第3に、私立学校法制の「肥沃化」に果たした私立学校団体の役割の研究である。具体的には、バーデン・ヴュルテンベルク州自由学校協議議会の事務局への訪問調査を実施し、同州の私立学校法が2017年に大幅に改正されたことに、ヴァルドルフ学校及び自由学校協議議会が大きく関係していた事実を確認することができた。上記の研究実績の概要に記述した通り、当初予定していた平成30年度の研究計画は、予定通り実施することができたことになる。平成30年度の研究実績を踏まえ、今後は以下の2つの研究計画を具体的に遂行する予定である。まず第1に戦後の各州における憲法及び私立学校法の制定過程の分析tである。この研究では、基本法で規定された基本権としての「私立学校を設置する権利」が、州憲法及び私立学校法として具体化され、「肥沃化」される経緯が明らかにすること、加えて私立学校(特にヴァルドルフ学校)と私立学校団体の関与の実態を明らかにすることを目指す。第2に私立学校の権利及び自由を争点とする訴訟に関する研究である。ここでは、特に連邦行政裁判所と連邦憲法裁判所の判決が、次第に基本法の価値秩序、特に多様性(価値多元主義)を基盤とする民主主義社会の建設という憲法理念に合致した法理論が構築されていったことを明らかにする。

次年度利用額が34,348円生じた主な理由は、購入したノートパソコンが当初予定金額より約3万円ほど安く購入できたことによるものである。平成(令和)31年度は、当初配分予定の500,000円と繰越金の34,348円を合わせた金額での研究実施となる。有効に活用して、着実に研究成果をあげることができるよう努力する所存である。
代数曲面の近似・変形・補間の各操作に適する数値・数式融合計算の開発と検証

代数曲面(代数曲線を含む)は,平面や空間における形状データ生成にも使われるが,単一の代数曲面で複雑な形状を実現しようとすると,著しく高い次数の多項式が必要となってしまう。本研究課題では,数値・数式融合計算(近似GCD,近似因数分解,近似グレブナー基底など)を用いることで,様々な形で厳密な代数式を近似した形で扱えうることに着目し,代数曲面の近似・変形・補間の各操作に最適となる数値・数式融合計算の開発と検証を行う。
核コード葉緑体リボソームタンパク質遺伝子の発現調節機構

タバコで報告された塩基配列をもとに,イネの葉緑体リボソームタンパク質L12をコードする2種の核遺伝子rpl12-1,rpl12-2をクローニングした.ノーザン解析の結果,これら2種の遺伝子はともに転写されていることが明らかとなった.rpl2-1とrpl12-2との間で予想されるアミノ酸配列を比較すると,トランジットペプチド領域よりも成熟タンパク質領域で高度に保存されていた.他の植物種とのトランジットペプチド領域の相同性をもとに,L12タンパク質の系統関係を調べたところ,イネのリボソームタンパク質L12のトランジットペプチドは単子葉植物と双子葉植物が分岐したあとに獲得され,その後双子葉植物と単子葉植物で独立に遺伝子の重複が起こったと考えられた.また、葉緑体リボソームタンパク質S9をコードする核遺伝子を,植物で初めてイネで単離した.この遺伝子物産が実際に葉緑体へ輸送されることを,この遺伝子のトランジットペプチド領域の下流に緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子を結合し,融合タンパク質をイネの植物体で発現させることで確認した.さらに,この遺伝子のトランジットペプチド領域はイネのL12のトランジットペプチドと高い相同性を示すことがわかった.このことから,核に移行した葉緑体の遺伝子はその上流にあるトランジットペプチドを他の葉緑体タンパク質遺伝子と交換することによって,タンパク質発現を効率化し進化してきたことがわかった.タバコで報告された塩基配列をもとに,イネの葉緑体リボソームタンパク質L12をコードする2種の核遺伝子rpl12-1,rpl12-2をクローニングした.ノーザン解析の結果,これら2種の遺伝子はともに転写されていることが明らかとなった.rpl2-1とrpl12-2との間で予想されるアミノ酸配列を比較すると,トランジットペプチド領域よりも成熟タンパク質領域で高度に保存されていた.他の植物種とのトランジットペプチド領域の相同性をもとに,L12タンパク質の系統関係を調べたところ,イネのリボソームタンパク質L12のトランジットペプチドは単子葉植物と双子葉植物が分岐したあとに獲得され,その後双子葉植物と単子葉植物で独立に遺伝子の重複が起こったと考えられた.また、葉緑体リボソームタンパク質S9をコードする核遺伝子を,植物で初めてイネで単離した.この遺伝子物産が実際に葉緑体へ輸送されることを,この遺伝子のトランジットペプチド領域の下流に緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子を結合し,融合タンパク質をイネの植物体で発現させることで確認した.さらに,この遺伝子のトランジットペプチド領域はイネのL12のトランジットペプチドと高い相同性を示すことがわかった.このことから,核に移行した葉緑体の遺伝子はその上流にあるトランジットペプチドを他の葉緑体タンパク質遺伝子と交換することによって,タンパク質発現を効率化し進化してきたことがわかった.近年の研究から核ゲノムにコードされた光合成関連遺伝子,Rubisco小サブユニット遺伝子(rbcS)やクロロフィルa/b結合タンパク質遺伝子(cab)の転写が葉緑体側からのシグナルによる影響を受けていることが明らかになっている。カロチノイドを欠損した突然変異体や薬剤でカロチノイドの生合成を阻害した植物に強い光を当てると,励起状態のクロロフィルが生むラジカルを消去できずに,クロロフィル自身を含む葉緑体の各種成分が酸化され,その結果として葉緑体の分化が起こらず白色の植物となる。この現象は光脱色(photobleaching)と呼ばれる。このとき細胞質やミトコンドリアのタンパク質の量はほぼ正常であるが,cabやrbcSなど核コードの光合成関連遺伝子の発現が転写レベルで抑制されている。以上のような事実から葉緑体の分化が阻害されると,葉緑体から何らかのシグナルが生じ,これが核に伝わり,光合成に関連する核ゲノムコードの遺伝子の転写を止めるというモデルが提唱されている。これは葉緑体側からも核コードの葉緑体遺伝子の転写をコントロールする何らかの情報伝達経路の存在を示している。本研究においてイネの発芽時にカロチノイド生合成の阻害剤norflurazonを処理して光脱色させたイネの葉で葉緑体リボソームタンパク質遺伝子rps1,rpl21の転写物の蓄積を調べたところrbcSやcabでは未処理で育てたものと比べて光脱色させた葉では転写物の蓄積量がはっきり減少していたのに対し,rps1とrpl21では未処理の葉と光脱色させた葉で蓄積量に違いは見られなかった。このことから核コード葉緑体リボソームタンパク質遺伝子は葉において葉緑体の分化の状態に関係なく構成的に転写され,核コードの光合成関連遺伝子とは異なる転写制御を受けていると考えられる。タバコで報告された塩基配列をもとに,イネの葉緑体リボソームタンパク質L12をコードする2種の核遺伝子rpl12-1,rpl12-2をクローニングした.ノーザン解析の結果,これら2種の遺伝子はともに転写されていることが明らかとなった.rpl12-1とrpl12-2との間で予想されるアミノ酸配列を比較すると,トランジットペプチド領域よりも成熟タンパク質領域で高度に保存されていた。他の植物種とのトランジットペプチド領域の相同性をもとに,L12タンパク質の系統関係を調べたところ,イネのリボソームタンパク質L12のトランジットペプチドは単子葉植物と双子葉植物が分岐したあとに獲得され,その後双子葉植物と単子葉植物で独立に遺伝子の重複が起こったと考えられた.また,葉緑体リボソームタンパク質S9をコードする核遺伝子を,植物で初めてイネで単離した.この遺伝子産物が実際に葉緑体へ輸送されることを,この遺伝子のトランジットペプチド領域の下流に緑色蛍光タンパク質GFP)

遺伝子を結合し,融合タンパク質をイネの植物体で発現させることで確認した.さらに,この遺伝子のトランジットペプチド領域はイネのL12のトランジットペプチドと高い相同性を示すことがわかった.このことから,核に移行した葉緑体の遺伝子はその上流にあるトランジットペプチドを他の葉緑体タンパク質遺伝子と交換することによって,タンパク質発現を効率化し進化してきたことがわかった.
ナノサイズのアパタイト粒子を応用した硬組織伝導デバイスの開発

ナノサイズのアパタイト粒子を医療用コラーゲンに配合し,ラットの頭蓋骨欠損部に埋入して骨再生の程度をマイクロCTと組織観察によって評価した.その結果,スポンジ状では4週で得られた骨形成能が8週で失われたが,プレス加工を施し高密度化すると,4週,8週と経時的に骨伝導能が維持され,新規の骨補填材として有用と思われた.また,ナノ・アパタイト粒子をBMP配合/架橋型ヒアルロン酸ハイドロゲルに混和した複合体を調製し,マウスの頭蓋部皮下,大腿部筋肉および背部皮下に注入し,組織反応(骨形成)を評価した所,いずれも高確率で新生骨形成が得られ,注入型(ゾルーゲル反応式)硬組織伝導デバイスになりうると考えられた.アパタイト骨補填材は高い生体親和性と骨伝導能からインプラント治療で多用されている.しかしながら,既存のアパタイト骨補填材は粒子径が大きく代謝性が低いために新生骨との置換に長期間を要する欠点を有している.本研究では,粒子径がナノサイズのアパタイト(nHap, 40 nm径品, SofSera)が早期骨伝導能を示す可能性があると考え,同粒子を医療用コラーゲンに配合し,ラットの頭蓋骨欠損部に埋入して骨再生の程度をマイクロCTと組織観察によって評価することによって,新規骨補填材の開発を企図した.nHAp(0.3g)を中和した医療用コラーゲン(1g/水28ml)に混練し,ー80°C3時間の予備凍結後,12時間凍結乾燥し, 6mmφ×1mmの円盤状試料に打ち抜いた(nHAp/Col)。対照としてコラーゲンのみの試料(Col)も作製した.動物実験倫理委員会の承認を得た後,雄性Wistarラット10週齢12匹の頭蓋骨に対して直径6mmのトレフィンバーを用いて骨欠損部を形成した.頭蓋骨欠損部には2種類の試料を各3匹ずつ埋入し縫合した.術後,4週および8週経過後、ラットを安楽死させ,マイクロCTによるエックス線学的評価を行った.非脱灰薄切研磨標本のビラヌエバ染色による組織学的評価も行った.4W,8Wに至る骨欠損部における骨再生の程度は,複合体(nHAp/Col)埋入ケースで大きく,Col単独埋入ケースで相対的に小さかった.複合体(nHAp/Col)埋入時,新生骨量は4Wで最大となり8Wで減少した.この減少は破骨細胞の活動が緩慢なことと,マクロファージのnHAP粒子の貪食が活発なためと考えられた.複合体(nHap/Col)は頭蓋骨欠損部において早期骨伝導能を有するものの,その維持・増加には別の因子の導入(例,マクロアパタイトの併用)が必要と考えられた.以上の組み合わせによって,複合体(nHap/Col)は新規骨補填材に有用と考えられた.本年度は,合成コラーゲンにナノサイズの合成アパタイト(n-HAP)を分散させたプレス複合体を調製し,ラット頭蓋骨欠損部における硬組織反応について検討を加え,非動物由来の安全な硬組織伝導デバイスの開発を目指した.プロリン,ハイドロキシプロリンとグリシンから成るポリペプチドを出発材料とし,カルボジイミドによる化学架橋とHOBT(1-ヒドロキシベンゾトリアゾール)による縮合を行い合成コラーゲン試料とした.n-HAPを混和した複合体の調製は凍結乾燥法により行った.成形(6x1 mm)は一軸加圧、抜き打ちで行い,オートクレーブによる最終滅菌を施した.Wistarラットの頭蓋骨に6 mmの骨欠損部を形成し,試料を埋入した。4週及び8週後、イソフロラン麻酔下、マイクロフォーカスX線CTによって骨の再生状態に検討を加えた.その結果,複合体は欠損部から浮き上がりやすく、0週から4週、8週にかけての経時的な骨再生挙動が些少で明瞭には確認できなかった。合成コラーゲンは親水性が高く,これまでの動物由来コラーゲンと異なる生体反応を惹起したと思われた.合成コラーゲン自体は貪食系細胞によって経時的に代謝され,炎症の程度は軽微であった.今後,術式と生体材料の適応方法の改善で骨伝導の改善が見込まれると推察された.本年度は,さらにジオキサンに溶解したポリ乳酸グリコール酸共重合体にn-HAPと抗生物質(エルスロマイシン)を配合し,凍結乾燥によってスポンジ体としてから,一軸加工を行ったメンブレン状の複合材料の試作も併せ行った.ナノ・アパタイト粒子をBMP配合/架橋型ヒアルロン酸ハイドロゲルに混和した複合体を調製した.同生体材料をマウス頭蓋部皮下,大腿部筋肉および背部皮下に注入し,組織反応(骨形成)を評価し,外科的侵襲の少ない注入型(ゾルーゲル反応式)硬組織伝導デバイスの開発を試みた.ゲルにはヒアルロン酸ベースハイドロゲル(Hystem)を用い,脱ガス水に溶解した.ナノサイズのアパタイト粉末には(40 nm径品)(n-HAP)を用いた.BMPは1ml中に8μgとした. n-HAPはゲルに事前に配合し,BMPも予め脱ガス水に溶解した.試験材は,Hystem・n-HAP・BMPで,対象材はHystem・n-HAPおよびHystem・BMPであった.

ゾルはマウス頭蓋部皮下,大腿部筋肉内および背部皮下の3箇所に22Gの注射筒を用い1から2.5mlの分量にて注入し,生体内でゲル化(約20分)させた.注入後1週,4週,8週に渡りμCTにて不透過像の経過を観察した.8週経過時には、残存材料を含む生体組織を摘出し通法に従い組織像の観察を行なった.Hystem・n-HAP・BMP複合体は,マウス頭蓋骨皮下,大腿部筋肉内および背部皮下において(約35%確率),経時的にμCT像上での不透過度を増加させる事を確認した. HE組織像から,複合体材料が生体内で一部吸収され,軟組織を主体とする硬組織前駆状態であった.一方,Hystem・n-HAPおよびHystem・BMPの対照材注入部では、μCT上での不透過像はほとんど得られなかった.試験材ではBMPはn-HAPに保持,徐放され長期骨形成能が維持されうると考えられた.また,注入部位での創傷治癒に伴う血管新生が顕著な場合に骨形成が有意と考えられた.今後の本研究が発展し,臨床応用に繋がることが期待された.ナノサイズのアパタイト粒子を医療用コラーゲンに配合し,ラットの頭蓋骨欠損部に埋入して骨再生の程度をマイクロCTと組織観察によって評価した.その結果,スポンジ状では4週で得られた骨形成能が8週で失われたが,プレス加工を施し高密度化すると,4週,8週と経時的に骨伝導能が維持され,新規の骨補填材として有用と思われた.また,ナノ・アパタイト粒子をBMP配合/架橋型ヒアルロン酸ハイドロゲルに混和した複合体を調製し,マウスの頭蓋部皮下,大腿部筋肉および背部皮下に注入し,組織反応(骨形成)を評価した所,いずれも高確率で新生骨形成が得られ,注入型(ゾルーゲル反応式)硬組織伝導デバイスになりうると考えられた.実験計画書に記載の項目のうち重要部分の研究は昨年度に達成されている.本年度は,有毒なウイルスやプリオンの混入が懸念される動物由来コラーゲン悪使用を控え,合成コラーゲンを使用したナノアパタイト/コラーゲン複合体による硬組織再生デバイスの開発を目指した.合成コラーゲンの架橋方法についてはいくつか試み最善のカルボジイミドとHOBTの組み合わせを採択した.別に,グルタルアルデヒドを使用したがアルデヒド基が残留し安全性に問題があった.合成コラーゲンは親水性に富みナノアパタイト(n-HAP)と比較的容易に混和が可能であった.合成コラーゲンは耐熱温度が動物由来コラーゲンよりも80°C以上と高く,オートクレーブ滅菌が可能であり,通常のエチレンオキサイドガス滅菌を避けられる利点も認められた.また,コラーゲン以外に.ポリ乳酸グリコール酸共重合体を用いたナノアパタイト配合複合体の調製にも成功した.歯科理工学1)ナノハイドロキシアパタイト・人工合成コラーゲン複合材料の試料等に関して,骨芽細胞を用いた培養実験を行い,細胞増殖や骨系分化誘導の効率について検討を加える.2)ナノアパタイトの表面に化学修飾を行いBMPやb-FGF等の成長因子を直接担持させ,結合の程度を理工学ならびに組織学的に検討する.3)調製されたナノアパタイト配合複合材料をラット頭蓋骨欠損部に埋入し,骨再生修復の程度をX線学的並びに組織学的に評価する.4)以上の知見を総括し,ナノサイズのアパタイト粒子を応用した硬組織伝導デバイスの開発を実現する.実験計画書に記載の項目のうち重要部分の研究は達成された.ナノアパタイト(nHap)の材料学的評価(TEM,粒度分析)も行った.ナノアパタイトの圧粉体は砕け易いため骨欠損部での埋入をあきらめた.ナノアパタイトの骨欠損部への埋入はコラーゲン(Col)との複合化が必要であった.コラーゲンは欠損部で血液成分を吸収し,欠損部での埋入材料の保持や骨系細胞の足場として有用であった.欠損部への埋入実験は一部のラットで12Wまで行い8Wでの知見の確認も行った.さらに,骨芽細胞を用いてnHap/
ＢＲＣＡ遺伝子変異による組織依存的な癌発症メカニズムの解明

28年度が最終年度であるため、記入しない。乳がんの種類は主に4つに大別される。最初の3種類はそれぞれ異なる治療法に対応しており、残りの1種類は治療法がまだ確立していない、いわば最も悪性の乳がんである。このため、この種類はtriple negative (TN)と呼ばれている。ここで、TN患者の中には、少なからず、治療法が確立している3種類のがんタイプに類似し、既存の治療法が有効な患者がいる可能性がある。従って、TN患者の中から、既存の治療法が有効な患者を何らかの規則で発見できれば、臨床上非常に有効である。以上の動機に基づき、この研究では、患者の遺伝子配列データ、特にSNP(Single-nucleotide polymorphism)データから乳癌患者の種類に関する規則の発見を試みる。特に解析手法として機械学習を用いる。平成27年度は、がん患者のデータが豊富に蓄積されているTCGA(The Cancer Genome Atlas)データベースのデータを用い、3種類の機械学習手法を用いて規則の発見を試みた。計算機実験を行い、初期結果を論文としてまとめた。論文は今後改訂後、投稿予定である。同時に、関連する話題として、生命科学で脚光を浴びているlong ncRNAのデータベースおよび解析のためのバイオインフォマティクスツールに関するサーベイ論文を執筆し、投稿受理された。上記の通り、乳がん遺伝子による規則の発見・及び解析を順調に進めていると同時に、結果を論文としてまとめ、雑誌に投稿予定であるため。今後、上記の研究をさらに推進する。特に、追加実験を行いつつ、論文を完成させ、雑誌投稿及び改訂を行う予定である。
高感度・超高速MRIによる脳の動特性計測及び動的脳機能マップの作製

前年度に作製した刺激を用いて動的脳機能マップ作成のために複数のfMRI実験を行った。20Hzのチェッカパタンー刺激によるfMRI実験では、信号の立ち上がりはThalamus, Visual cortex, Insular cortexの順であった。Middle Frontal Gyrusでの信号の立ち上がりはVisual cortexに似ており、fMRI信号の立ち上がりは視覚信号の経路から見る距離とは異なった。また、Subliminal刺激による顔刺激と文字刺激の信号のpeakまでの到達時間の違いはintra parietal cortexで見られた。これらの結果からfMRIで見る信号の時間的な流れは必ずしも視覚経路上の階層構造に従うものでないことが確認された。また、チェッカパタンー刺激で周波数を変化した実験では第一視覚野での信号の立ち上がりは周波数に依存しなかったがその先の背側視覚野では周波数による立ち上がりの違いが見られ、刺激と機能領域間でのfMRI信号の動特性の違いがあることが分かった。刺激種類、機能領域、fMRI信号の動特性で多様な組み合わせができるので、動的脳機能マップの作製を単純化できる方法について検討を行った。その一つとして、resting state fMRI(rsーfMRI)信号の利用可能性について調べた。まず、multi-echo fMRI信号からrs-fMRI信号で見るfluctuationがBOLD効果を現しているかについて調べた。多くの脳領域でrs-fMRI信号がecho-timeに対して線形的な変化を示し、BOLD効果を現していることが分かった。これらの結果を踏まえて、今後rs-fMRI信号で見るfluctuationと視覚経路上の階層の情報を用いて動的脳機能マップの作製を検討中である。研究目標である動的脳機能マップの作製のための基礎データがとられ、最終年度に行う予定のマップ作製の準備が整えられた。脳の働きを理解するためには、脳の各部位で、種々のヒトの情報処理機能に対応する機能的活動信号を得る必要がある。従来の機能的MRI(fMRI)による研究の多くはこの点に着目して、ヒト脳機能マップ(静的脳機能マップ)を作成して来ている。近年は高磁場MRIにより、空間的な分解能が向上して来ているが、基本的に、脳の空間的機能特性を計測するという点では変わりはない。しかし、脳は静的なものではなく、絶えず活動している動的なものであり、脳の各部位または部位間の動的な活動に対する情報を得ることは、脳の働きを理解する上で必須不可欠である。本研究では独自に開発した超高速MRI測定法により、脳活動の速い時間的変化を検出し、動的脳機能マップの作成にむけて研究を行っている。本年度は脳波で見る速い神経活動由来の信号源がどのような形としてMRI信号へ顕現するかについて調べた。Multi-echo GE-EPI測定法で視覚刺激による脳活動の計測で、非線形的なfMRI信号を計測した。また、それをTwo-compartment modelを使って分析した結果、非線形的な信号変化はプロトン交換時間の変化による可能性が高いことが分かった。プロトン交換時間は10ミリ秒前後で、このような速い変化により脳波で見る速い神経活動がMRI信号へ顕現される可能性があると考えられた。また、速し神経活動誘発のための5,10、20Hzの刺激を作製して、高速測定法でテスト実験を行った。さらに、速い神経活動を計測する際の測定感度を改善するために表面コイルを作製しテストを行った。開発している超高速測定法による速い神経活動を計測するために必要な、速い神経活用誘発用の高速呈示用刺激が作製できた。また、測定感度を向上するために必要なヘッドコイルを作製した。さらに、信号源の推定のために行った実験によるプロトン交換時間の変化が同定できた。作製した呈示用刺激を使い、θ、α、βなどの誘発神経活動

由来のMRI信号を検出する。刺激に同期するsteady-stateな信号とbaseline変化による信号の特性を同定する。また、刺激呈示から賦活までの脳の各部位での信号の潜時を計測する。これらの信号から各部位での脳活動の動的活動の側面を同定して行く。まず、視覚刺激により賦活する脳部位でのfMRI信号の潜時の計測から動的脳機能マップを作製する。刺激の作製、コイルのテストなどを行い、学会発表回数が予定より減った。次年度には今年度作製・テストした刺激とコイルを用いて本実験を行い、その成果を複数の国際学会などで発表する予定である。
3次多項式写像族の力学系の研究(パラメータ空間の位相的構造について)

第1象限ではC_3の境界は2木の実解析的な弧Per_1(1),Preper_<(1)1>から成る。本研究の成果として、特に第1象限内のPer_1(1)の上方にあるstretching raysに対して、その上の不変量であるBottcher vecterが整数でなければstretching rayはPer_1(1)上のどの点にも着地しない、つまり、stretching raysはsin(1/x)のグラフのように振動し、その集積点集合は非自明な弧になるという驚くべき事実が証明された。証明にはparabolic implosionの理論が応用される。この結果はC_3が局所連結でないという性質と密接に関係している。Bottcher vectorが整数のstretching rayはPer_1(1)上Fatou vectorが同じ整数の点に着地することも証明できた。Per_1(1)の下方にあるstretchingraysに関しては、Shift locus内のraysはすべてPreper_<(1)1>の点に着地し着地点の特徴づけも完全になされた。危点が一つだけescapeする場合は、実2次多項式族に対する双曲的写像の稠密性定理を用いることにより、すべてのraysが着地することが示された。このように、第1象限に関してはstretching raysの着地性は完全に解明された。ただし、4次の場合には有理数であっても着地することがある。3次の場合√<3>が無理数というのが効いているので、4次では使えない。同様の理由により3次でも第3象限では未解決の部分がある。更に、stretching raysの集積点集合の特徴付け、stretching raysのparametrizationと集積点集合との関係等、未解決の問題も残っている。以上の成果を達成する上で、本科研費による2回の海外出張が非常に有益であった。実3次多項式写像族P_<A,B>(z)=z^3-3Az+√<B>の力学系を考える。そのJulia集合が連結になるようなパラメータ(A,B)∈R^2の集合(connectedness locus)C_3の構造を解明することが目的であった。本年度の成果として、特に第1象限内のparabolicarcの上方にあるstretching raysに対して、その上の不変量であるBottcher vectorが無理数ならばstretching rayはparabolic arc上のどの点にもlandしない、つまり、stretching raysはsin(1/x)のグラフのように振動し、その集積点集合は非自明な弧になるという驚くべき事実が証明されたことが挙げられる。3次多項式族のconnectedness locusがいかに複雑かを予期させる結果でもある。この結果を、外国旅費を使って渡米しJohnMilnor教授に話したところ、非常に興味をもって下さり、彼のホームページにその解説を掲載して頂いた。(http://www.math.sunysb.edu/^jack/を参照のこと。そこには彼が作ったプログラムによるstretching raysが振動する様子が描かれている。)Bottcher vectorが整数のときはlandすることも示されるので、有理数の場合が残ったことになる。この場合はlandしないと予想しているが、まだ証明はされていない。ただし、これは3次だからであって、4次の場合には有理数であってもlandすることがある。その例として、実biquadratic mapsの族P_<a,b>(z)=(z^2+a)

^2+bがMilnor教授によって示唆された。この族の力学系の研究も今後の課題である。更に、stretching raysの集積点集合の特徴付け、stretching raysのparametrizationと集積点集合との関係等、新たな問題も提起された。総じて、科研費が非常に有効に使え、研究が進展した1年であった。複素パラメータ空間でのstretching raysの着地性についても若干の進展があった。もしstretching rayがparabolic componentの点に集積するならば、そのray上の力学系で、外周角0の外射線はある危点にぶつかることはWillumsenによって示されていたが、もう一つの危点もその外射線の逆像に含まれるだろうというのがWillumsenの予想であった。この予想がFatou coordinatesが存在するような領域を通るraysの場合は正しいことが示された。同様にparabolic component内の点に着地するならばその点のFatou vectorは実であることも示される。Real biquadratic mapsの族に対しても同様の議論が可能であることをMilnorから示唆され、それを実行した。ただ1カ所だけ違うところがある。Boettcher vectorが有理数1/2のstretching rayは着地するのである。実3次多項式族の場合は有理数でも着地しないと予想している。実3次多項式写像族のstretching raysの到達性について、これまで研究してきた。Parabolic locus Per_1(1)の上方の領域内のstretching raysはPer_1(1)のどこかに集積すること、Boettcher vectorが整数の場合はcritical orbit relationがあるので到達することはすぐわかる。Boettcher vectorが無理数の場合はparabolic implosion analysisを用いることにより、到達しない、つまりstretching raysが激しく振動して集積点集合が1点集合にならないことは証明できていた。しかし、有理数であるが整数でない場合には未解決であった。今年度、共同研究者で、Warwick大学に滞在中の大阪市立大学の小森洋平氏を訪ね、そこで議論した結果、この場合も到達しないことを証明することができた。証明にはJulia集合がparabolic fixed pointでカスプになることと、カスプで,のくさび状の領域はporousにはなり得ないことを用いる。以上の結果をそれ以前の結果と合わせて、論文"Landing property of stretchingrays for real cubic polynomials"として書き上げ、雑誌"Ergodic Theory and Dynamical Systems"に投稿することができた。Warwick大学への出張には科研費の外国旅費を使わせていただいた。
褐藻のバイオエタノール変換を目指した酵母共培養プラットフォームの構築

適応進化プロセスの解明アルギン酸及びマンニトールを炭素源とする培地にて400世代に渡り適応進化した酵母株の表現型解析を行った。適応進化前株のdoubling timeは30時間であった一方で、適応進化後株のdoubling timeはおよそ6時間まで短縮していた。次に、それら糖類からのエタノール発酵能力を好気及び嫌気条件下で評価した。好気条件下では、適応進化前後株ともにエタノール発酵能を示した。特に、適応進化後株は適応進化前株と比較し、2倍以上の糖消費速度およびエタノール発酵量を示した。また、嫌気条件下では、適応進化前株はほとんどエタノール発酵能を示さない一方で、適応進化後株は理論収量の60%以上のエタノール発酵能を示した。今後、これら表現型の背景にあるジェネティックな要因を同定するため、現在resequencingによる変異同定を進めている。また、アルギン酸及びマンニトールを炭素源とする培地での時系列トランスクリプトームによって発現変動する遺伝子の同定も同時に進めている。酵母株の蛍光標識化発酵系において酵母の局在を把握するため、蛍光タンパク質を細胞内に発現させる検討を行った。蛍光タンパク質の候補として、EGFP、mCherry、EYFPを選択し、酵母ゲノム上の栄養マーカー部位に相同組替えによりそれぞれ挿入した。顕微鏡観察により、各タンパク質の発現を観察するとともに、FACSにより蛍光強度の測定を行うことで、酵母株の蛍光標識が可能であることを確認した。本年度は、酵母株の表現型解析に焦点を当てた。発酵プロセスの検討により、適応進化前後株の表現型を評価する条件の最適化を行った。その結果、表現型の相違を評価するに最適な条件を決定することができ、次年度に行うトランスクリプトーム解析の布石を打つことができた。また、ジェネティックな相違を明らかにするため、現在resequencingを進めている。来年度はresequencing及びRNA-Seqにより、適応進化における表現型向上に寄与するジェネティックな因子の同定を目指す。バイオインフォマティックス解析により明らかにし、必要に応じて生化学実験により、同定する変異の実証を行う。