hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ＨＭＧＢ１を標的分子とする脳外傷・脊髄損傷の治療法開発

ラット脳硬膜上から加えた液体衝撃により作製した脳外傷では、大脳半球の広範な領域に脳血管の透過性亢進を生じ、脳浮腫が惹起された。受傷局所では神経細胞の核内に局在しているHMGB1が細胞質領域から細胞外に放出された。同領域では、血液脳関門の構造破綻とミクログリア細胞の活性化像ならびに細胞数の増加が認められ、炎症性サイトカインの発現が上昇していた。以上の外傷誘発性の炎症応答は、抗HMGB1抗体の受傷後投与により85%抑制された。HMGB1と結合する生薬甘草中活性成分グリチルリチンは、抗体と類似の作用を示した。同様に、マウスの脊髄損傷モデルで抗HMGB1抗体は運動麻痺症状を著明に改善することができた。Wister系雄性ラットを用いて、パーカッションインジュリー装置で麻酔下に脳打撃傷害(2.2-2.6Atm)を加え、中等度の神経障害モデルを作製した。受傷直後とさらに6時間後に抗田GB1抗体を尾静脈から投与した。対照動物には、抗KLH抗体を投与した。受傷後3、6、24時間後に経時的にT2強調MRI撮像し脳浮腫を評価した。血液ー関門(BBB)の形態を、受傷3時間後に脳を固定し、アストロサイトのエンドフィート腫脹、血管基底膜からの遊離を中心に透過型電子顕微鏡で観察した。BBB透過性亢進の原因になると思われる血管基底膜構造のメタロプロテアーゼによる消化は、MMP-2/9のザイモグラフィーによる酵素活性検出で評価した。脳内炎症関連分子として、TNF-・,iNOS,MMP-2,MMP-9,HIF1・,COX-2,VEGF-A,PAI-1,IL8R,Neutrophil elastaseのmRNA量を、定量的PCRで測定した。神経学的評価は、経時的にロータロッドテストとシリンダーテストを実施した。その結果、抗HMGB1抗体の投与によって脳血管透過性亢進と脳浮腫は85%抑制された。脳内炎症関連因子では、TNF-・,iNosとPAI-1の発現抑制が著明であった。対照動物BBB形態の透過型電顕観察で、受傷後早期からのアストログリア突起の腫脹が明瞭であったが、抗HMGB1抗体の投与によって有意に抑制された。ロータロッドテストとシリンダーテストで評価された運動麻痺神経症状も、抗HMGB1抗体で高い改善効果を示した。一方、組換え体ヒトHMGB1タンパク質の投与は、脳傷害を増悪した。抗HMGB1抗体の有効治療時間帯は少なくとも6時間は得られることを確認した。内因性HMGB1の主要な作用受容体がRAGEであることを、RAGE-、TLR-4-、TLR-2-KOマウスを使って明らかにした。Fluid percussioninjuryラットモデルにおける局所血液脳関門(BBB)の障害を透過電子顕微鏡像により詳細に解析し、その構造的破綻と、抗HMGB1抗体の保護効果を定量的に明らかにした。つまり、対照動物のBBBでは、アストロサイトエンドフィートの腫脹が顕著であり、エンドフィート細胞形質膜の血管基底膜からの解離がしばしば認められた。これらの変化が抗HMGB1抗体治療を行った群では著明に抑制された。海馬錐体細胞の遅延性細胞死では、受傷後2週の時点でCA1領域の神経細胞の脱落を調べた。その結果、対照群では著明な脱落がみられたのに対し、治療群では保護効果が明らかであった。対照動物ではEpendymal cell layerの増殖像が急性期に認められたが、抗HMGB1抗体投与ラットでは抑制されていた。ピロカルピン誘発性の脳障害、てんかんモデルでも血管透過性の亢進に対する抗HMGB1投与の効果が示された。海馬錐体細胞死の抑制効果も確認された。漢方生薬中の活性成分の一つであるグリチルリチンがHMGB1に直接結合し、HMGB1-RAGE結合を抑制することを明らかにした。野生型マウスで認められたグリチルリチンの効果は、RAGE(-/-)マウスでは消失することがわかった。in vivoで脳外傷モデルに投与したグリチルリチンは、HMGB1への結合とHMGB1のRAGEへの結合阻害を介して脳外傷性障害を抑制するとの結果を得た。マウスの脊髄障害モデルを作製した。液体衝撃によるマウスの脳傷害モデルにおいて、受傷局所の活性化ミクログリア数ならびに活性化アストログリア数が、抗HMGB1抗体投与(受傷後静脈内投与)で減少することを見出した。脳障害部位における炎症性サイトカインTNF-αならびに炎症関連因子

遺伝子iNOS, MMP-9/2, PAI-1発現をリアルタイムPCRで定量化し、抗HMGB1抗体投与の抗炎症効果を証明した。これまでに得られたBBBの破綻と抗体投与による保護効果ならびに上記の実験結果を併せて、外傷性障害による神経細胞核からのHMGB1放出と、BBB破綻、脳内炎症惹起が直列的に進行すると結論された。脳外傷後の二次性炎症の原因物質としてHMGB1は極めて重要な因子であり、その制御によって最終的な脳血管透過性亢進と脳浮腫形成を85%以上抑制できる可能性が示された。マウスの脊髄損傷モデルにおいても、ラットの脳外傷モデルと同様の脊髄血管透過性の亢進(血清アルブミンの漏出)と脊髄浮腫が、抗HMGB1抗体投与によって抑制された。これに伴う後肢の麻痺軽減作用も確認された。脳外傷時の末梢血中HMGB1の上昇は、抗HMGB1抗体投与で著明に低下することを明らかにした。上述のラット脳外傷モデルにおけるグリチルリチンの抑制作用が、グリチルリチンのHMGB1への結合による受容体RAGEへの結合阻害に基づく可能性をビアコアによる結合実験ならびにRAGE-ノックアウトマウスならびにToll-like receptor-4/2(TLR-4/2)ノックアウトマウスを使った実験で明らかにした。グリチルリチンの急性効果は持続し、障害後2週目の時点でもRotarodテストで有意の効果が検出された。26年度が最終年度であるため、記入しない。医学(薬理学)26年度が最終年度であるため、記入しない。脳外傷後の脳浮腫に対する抗HMGB1抗体の作用機序を、BBBの保護にあることを明瞭に示し、関連する炎症分子の発現を解析できた。HMGB1の作用する主要な受容体を、受容体候補の遺伝子欠損マウスを用いることで明らかにした。脳外傷時のBBB破綻の形態的特徴と、HMGB1の関与を証明できた。痙攣性薬物ピロカルピンによる脳障害にHMGB1が関与することを明らかにできた。HMGB1-RAGE系に作用する薬物としてグリチルリチンを同定した。脳外傷後の神経障害の程度をより長期に評価し、抗HMGB1抗体の効果が急性脳浮腫の抑制に留まらず、外傷後神経後遺症の軽減化にも繋がっていることを実験的に証明する。抗HMGB1抗体の効果を脊髄損傷モデルやてんかんモデルに拡大する。脳外傷後の血管系変化、特にBBBの破綻とHMGB1の関係は概略を示すことができたので、他の炎症性要素としてのアストロサイトとミクログリアの活性化について解析する。マウスの脊髄損傷のモデルについても抗HMGB1抗体の効果を評価する。3月分人件費が見込額を下回ったために、直接経費の次年度使用額7,414円が生じた。平成25年度は、物品費(実験動物・試薬・器具類)1,207,414円、旅費30万円、人件費100万円、共同施設利用料等50万円の使用を見込んでいる。平成26年度は、物品費(実験動物・試薬・器具類)1,226,406円、旅費200,000円、人件費1,200,000円、その他(投稿料等)480,000円の使用を見込んでいる。
脳に潜伏するウイルスがストレスレジリエンスに影響を及ぼす機構の解明

HHV-6由来のSITH-1タンパク質がストレスレジリエンスに影響を及ぼすメカニズムを解明するために、中枢神経系にSITH-1タンパク質を発現させたマウス(SITH-1発現マウス)の表現型を解析していく。これによって、中枢神経系におけるSITH-1の発現がどの神経経路を介してストレスレジリエンスを低下させるのかを明らかにする。
超低温領域における強相関電子系物質の電子状態の解明

絶対零度における相転移点である量子臨界点(QCP)近傍では、量子ゆらぎの発達による異常物性が観測されている。とりわけ、f電子を含む重い電子系化合物ではQCP近傍で多彩な電子状態が実現している。しかし、重い電子系化合物は相転移を起こす温度スケールが非常に低く、従来の希釈冷凍機温度までの物性測定では相図を理解することが困難であった。本研究は、YbRh2Si2やCeCoIn5などの重い電子系化合物が磁場下で示す量子臨界挙動を解明することを目的とする。そのために、数mKの超低温度領域まで試料を冷却した上で磁場を印加できる測定システムを構築する。本研究によって超低温度領域の物性測定のノウハウを確立することができれば、その測定技術を様々な強相関電子系物質に応用することが可能であり、強相関電子系物質の研究にブレークスルーを起こすことができる。今年度は、核断熱消磁冷凍機の試料スペースに角度回転機構を取り付けることで、試料を冷やしたまま磁場角度を変化することを可能とした。これによって、キャパシタンス法を用いた磁気トルク測定を広い磁場角度範囲で行えるようになるため、今後、量子振動の角度依存性から、量子臨界挙動を精査することが可能となる。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
Ｔ細胞におけるＢｃｌ１１ｂの役割

がん抑制遺伝子Bcl11bはジンクフィンガー転写因子をコードしており、T細胞分化のさまざまな段階において機能する。本研究で、成熟段階でのBcl11bの役割を調べるために、胸腺CD8+細胞でBcl11bの活性を低下させた。その結果、活性化マーカーを発現し、マイトジェン刺激でIFN-gammaを迅速に産生する自然免疫CD8+胸腺T細胞が分化した。Bcl11bを欠損した初期T細胞が運命転換し、自然免疫に属するリンパ球、NK細胞になることと併せて考えると、Bcl11bがT細胞の“自然免疫化"を阻止している可能性を示している。申請者らは、亜鉛フィンガー転写因子Bcl11bがT細胞分化初期において、自然免疫に属するNK細胞分化を阻止し、T細胞への運命を維持することを明らかにしてきた。さらに、さまざまなT細胞小集団が分化する際のBcl11bの役割を検討するため、T細胞特異的Creトランスジーンによる条件欠損マウスや、Bcl11bに826番目のセリンをグリシンに置換する変異を導入したマウスを解析してきた。その結果、Bcl11bの活性低下によってCD8+細胞やNKT細胞の分化が阻害されること、さらに、胸腺CD8+細胞においては、Bcl11bの機能が低下すると、活性化マーカーCD44やCD122が発現上昇し、マイトジェン刺激によって迅速にIFN-gammaが産生されること、くわえてCD122やIFN-gammaの発現を制御する転写因子Eomesも発現していることを明らかにしてきた。これらは、胸腺CD8+細胞の活性化を示していると考えられる。これらの結果を踏まえ、25年度は、Bcl11bの活性が低下している胸腺CD8+細胞の転写産物をマイクロアレイ法により網羅的に解析した。この結果、上にあげた以外にもCD8+T細胞の活性化を示す遺伝子の上昇が認められるたものの、細胞増殖と関連する遺伝子群の発現は低下していたことから、抗原刺激に応答して増殖するエフェクターT細胞とは区別されることが明らかになった。一方、自然免疫を担うTリンパ球に特徴的な遺伝子群の発現が上昇していたことが判明した。これらの結果は、Bcl11bは、T細胞分化の初期のみならず、さまざなT細胞小集団に分化する際にも自然免疫的な性質の発現を抑制することを示唆している。申請者らは、亜鉛フィンガー転写因子Bcl11bがT細胞分化初期においてNK細胞分化を阻止し、T細胞への運命を維持することを明らかにしてきた。さらに、昨年度までに、T細胞特異的Creトランスジーンを用いた条件欠損マウスや、Bcl11bにS826G変異を導入したマウスを使用し、さまざまなT細胞集団の分化においてBcl11bの役割を検討してきた。その結果、Bcl11bの活性低下によってCD8+細胞やNKT細胞の分化が顕著に阻害されることが判明した。Bcl11bは、NKT細胞の正の選択の段階で機能していることが従来より知られていたが、昨年度の解析において、CD44<high>NK1.1<low>からCD44<high>NK1.1<high>に移行する成熟段階においても機能していることが判明した。また、胸腺CD8+細胞においては、Bcl11bの機能が低下すると、活性化マーカーCD44や自然免疫を担うリンパ球に特徴的なCD122の発現上昇が認められ、マイトジェン刺激によって容易にIFN-gammaを産生することを明らかにしてきたが、さらに、昨年度はこれらに加え、CD122やIFN-gammaの発現を制御する転写因子、Eomesが発現する一方、エフェクター細胞を特徴づけるCD25が発現しないことを見出した。これらのことによりCD8+細胞が自然免疫様細胞に分化している可能性が示唆された。自然免疫様CD8+ T細胞はNKT細胞もしくはgammadeltaNKT細胞から産生されるIL-4が必要とされ、いくつかのモデルマウスでは、IL-4産生細胞の増加の結果、自然免疫様CD8+T細胞が増加することが知られる。しかし、Bcl11b変異マウスでは、むしろNKT細胞が減少しており、gammadeltaNKT細胞も増加していないことから細胞自律的に自然免疫様の性状を獲得していると考えられた。現在論文執筆が概ね終了し、関連分野の海外の研究者の意見を伺ったところ、良好な評価を頂いたが、補足データの必要性を指摘された。したがって、研究の方向性は妥当であり、骨格となるデータは揃ったと考えている。また、動物実験施設が半年間に渡って全面改修中であり、動物施設関係者の尽力のお陰で実験が中断する事態には至っていないが、実験の進行に不自由を感じている。昨年度に引き続き、今年度も、自然免疫様CD8+胸腺T細胞が分化した原因を解析する。

そのために、H2-Ab1欠損マウスやHY TCRトランスジェニックマウス、ThPokGFPマウス(ThPok遺伝子にGFP遺伝子をノックインしたマウス)と交配し、表現型を解析する。また、Bcl11b条件欠損マウスより特定の分化段階のT細胞をセルソーターや磁気ビーズにより分画し、細胞を培養してその性状を検討するとともに、RNAやタンパク質を抽出して遺伝子の発現や細胞内シグナル伝達の変化を調べる。関連分野の研究者(米国)のもとで研究に必要な実験手法を学んできたため、予定より使用額が少なかった。(学長裁量経費による渡航)物品費として、抗体、培養液等に100万円程度、研究成果発表、情報収集として学会、研究会などに出席するための費用として旅費26万円程度、動物施設使用料、胚操作依頼に要する費用としてその他110万円程度を見込んでいる。
熱緩和分散法(RAD法)による超微粒子分散傾斜材料の創製

我々はこれまで金属の超微粒子分散化を伴う金属/非晶質材料の加熱による構造緩和機構に関する研究を行い、非晶質材料の持つ準安定性が超微粒子の分散に及ぼす影響について検討し、非晶質材料の結晶化過程を利用するという新しい傾斜材料作製法について検討を行ってきた。本研究では金属/半導体積層体として金/非晶質ゲルマニウム積層体を作成し、金を加熱分散させた。熱分析の結果、Au薄膜を積層した試料では250-270°Cにてゲルマニウムの結晶転移に基づく発熱ピークが生じた。また、Au-Geの共晶点に相当する365°CにおいてAu-Ge合金の融解にともなうわずかな吸熱ピークが見られた後、370-420°Cにおいて生じた液相の再結晶化によるものと考えられる発熱ピークがみられた。このことから、昇温時においてゲルマニウム上に積層された金が加熱により段階的に浸入することが予想される。その金属の深さ方向の組成分布をXPSによって測定し、その特異な結晶化プロセスについて検討した。加熱によって金は表層付近から内部に分散するが、初期においてはクラスター状の金が表層付近に存在していることが明らかとなった。これに対して、250-275°C付近で生じるゲルマニウムの結晶化に伴い、金は特異な濃度プロファイルを示しながら原子状態でゲルマニウム層に浸透するものと考えられる。その結果、金とゲルマニウムは分相しており、融解によって生ずる合金相が生成するまで、それぞれ結晶を構成していることがわかった。このように、金のゲルマニウム層への浸入は2つの過程によって生じ、ゲルマニウムの結晶化を促進するとともに、特異なプロファイルを示すことが明らかとなった。この方法は、深さ方向に特異な組成分布を伴う新たな傾斜材料の1つの調製方法として期待しうる。
東南大学知識人の思想に関する研究

平成16年度から17年度にかけて、東南大学知識人の概要をまとめた。これを基礎として17年度から本年度にかけて東南大学知識人の個別的具体的研究に入り、本年度は、その成果を2件の学術論文にまとめ、公表した。1件は、論文「南京時期の唐君毅について」である。唐君毅は、現代新儒家の代表格であり、その思想については台湾・香港において盛んに研究されているが、筆者は、唐君毅が19歳から28歳までの多感な青年時代を南京の国立中央大学において過ごしたことに着目し、それに関する資料を収集し、若き唐君毅の思想形成歴程を詳細に調査した。その結果、東南大学から引き続き国立中央大学の教席にあった方東美と宗白華から唐が多大な影響を受けていたこと、さらには唐が東南大学の学風を北京大学のそれと比較して高く評価していたことが明らかになった。唐君毅は、1949年に香港に移り、香港・台湾の教育界に大きな業績を残すが、その思想の根本に東南大学が存在するという点は重要であると考える。唐君毅に関する具体的研究によって、東南大学の歴史的意義も明らかになった。もう1件は、論文「劉伯明の思想」である。劉伯明は、今では無名の人物であるが、当時においては中国を代表する哲学者であった。同時に劉は、東南大学の領袖としてその教師・学生に大きな影響を与えた人物で、いわば東南大学の礎石を築いた人物である。筆者は、劉の思想の根本に「科学的精神」があり、東南大学に教鞭をとり、学衡派に属していたが、劉の思想は決して守旧反動でなかったことを明らかにした。さらには、これを通して東南大学や学衡派の負のイメージを払拭することもできた。資料は、16・17年度に南京で収集したものを使用した。本年度は本課題の最終年度なので、今まで公表した論文を基本にして研究成果報告書を作成した。これをもって東南大学知識人の基礎的研究がほぼ達成された。平成16年度は、東南大学の研究を開始するにあたり、「東南大学知識人の概要を把握し、その研究方向を策定する」ことを第一の目標に掲げた。そのために、平成16年度交付金で近現代思想史研究に関する図書を購入し、同時に南京大学図書館の資料調査(1月3日10日)を実施した。南京大学図書館の調査は、東南大学政治系主任張祥浩教授の協力を得て、順調に行われた。南京大学図書館には、民国時期に南京で刊行された学報(雑誌)が多く所蔵されていて、わずか数日間の調査ではあったが、東南大学知識人を知るうえで、有益な資料を多数収集できた。これをもとに、東南大学知識人の概要および東南大学の歴史的意義を考察し、「民国時期の東南大学について(下)」を脱稿した。本稿は、『東洋古典学研究』第19集(2005年5月)に掲載予定である。平成16年度の研究において得た新知見は、東南大学の建学精神が実は後世に大きな影響を与えたということである。特にその「通識教育(教養教育)」を重視する伝統は、東南大学の出身者たちによって香港・台湾へ伝播し、新亞書院(香港中文大学)・台湾中央大学の教育課程に活かされていることが明らかになった。なお当初の目標に掲げた「東南大学知識人の個別具体的研究」は、東南大学知識人の全体像の把握に思いのほか時間がかかり、成果発表には至らず、その準備段階に止まった。成果の発表は、17年度以降の課題となる。今後、主要知識人の具体的で実証的な研究を積み重ねていく。昨年度、東南大学の知識人に関する概要を調査研究し、その成果を「民国時期の東南大学について(下)」(東洋古典学研究19、2005.5)として上梓した。本論文では、東南大学で教鞭をとった知識人の生涯と思想について論述するとともに、その思想が後世にどのような影響を与えたのか、すなわち東南大学の歴史的意義についても自らの見解を示した。その思想を後世に伝えた思想家として、筆者が最も注目している人物は、現代新儒家として著名な唐君毅である。唐は晩年、東南大学の建学精神を高く評価する発言を残している。唐君毅はその多感な青年期を東南大学・国立中央大学で過ごしていて、唐の思想形成において南京の思想空間が大きな影響を与えたことが推測される。筆者は現在その論証にとりくんでいる。来年度には、これを完成させる予定である。唐君毅研究は、東南大学精神の後世への継承を考えるうえで重要であるが、一方で、東南大学の基礎を築いた人物に対して、深い考察を加える必要がある。その人物は、劉伯明と柳詒徴である。そこで、今回はこの両者の著作の調査を主な目的として、平成18年1月2日9日、東南大学人文学院の張祥浩教授の協力を得て南京図書館古籍部を訪問した。南京図書館古籍部は、柳詒徴が館長を務めた国学図書館の蔵書をもち、民国時期の多くの著作を所蔵している。筆者はここで、劉・柳の著作を閲覧し、貴重な資料を写真撮影した。来年度、これらの資料をもとにまずは劉伯明の思想についてまとめたいと考えている。今回、張教授に方東美研究で著名な蒋国保教授を紹介いただき、蒋教授には貴重な助言と励ましをいただいた。

東南大学出身の著名学者である方東美の研究についても収穫を得られ、実に有意義な現地調査であった。その他、備品としては近現代思想家の著作全集、近代中国教育関係資料を多数購入し、資料は昨年以上に充実した。平成16年度から17年度にかけて、東南大学知識人の概要をまとめた。これを基礎として17年度から本年度にかけて東南大学知識人の個別的具体的研究に入り、本年度は、その成果を2件の学術論文にまとめ、公表した。1件は、論文「南京時期の唐君毅について」である。唐君毅は、現代新儒家の代表格であり、その思想については台湾・香港において盛んに研究されているが、筆者は、唐君毅が19歳から28歳までの多感な青年時代を南京の国立中央大学において過ごしたことに着目し、それに関する資料を収集し、若き唐君毅の思想形成歴程を詳細に調査した。その結果、東南大学から引き続き国立中央大学の教席にあった方東美と宗白華から唐が多大な影響を受けていたこと、さらには唐が東南大学の学風を北京大学のそれと比較して高く評価していたことが明らかになった。唐君毅は、1949年に香港に移り、香港・台湾の教育界に大きな業績を残すが、その思想の根本に東南大学が存在するという点は重要であると考える。唐君毅に関する具体的研究によって、東南大学の歴史的意義も明らかになった。もう1件は、論文「劉伯明の思想」である。劉伯明は、今では無名の人物であるが、当時においては中国を代表する哲学者であった。同時に劉は、東南大学の領袖としてその教師・学生に大きな影響を与えた人物で、いわば東南大学の礎石を築いた人物である。筆者は、劉の思想の根本に「科学的精神」があり、東南大学に教鞭をとり、学衡派に属していたが、劉の思想は決して守旧反動でなかったことを明らかにした。さらには、これを通して東南大学や学衡派の負のイメージを払拭することもできた。資料は、16・17年度に南京で収集したものを使用した。本年度は本課題の最終年度なので、今まで公表した論文を基本にして研究成果報告書を作成した。これをもって東南大学知識人の基礎的研究がほぼ達成された。
RNA結合蛋白質による寿命制御機構の解明

我々は、RNA結合タンパク質Mex-3Bの欠損マウスの寿命が延長していることを見出し、その分子機構の解明を試みた。Mex-3B欠損マウスは肥満に抵抗性を有し、カロリー制限を行ったマウスの脂肪組織では、Mex-3Bの発現抑制が認められた。この結果から、Mex-3Bの代謝機能臓器が脂肪組織であること、およびMex-3B欠損マウスはカロリー制限と類似した機構で寿命延長している可能性が示唆された。さらに、脂肪細胞分化誘導実験を行った結果、Mex-3Bの欠損により、脂肪細胞分化が抑制されることが明らかになった。この結果から、Mex-3B欠損マウスの表現型の原因として、脂肪細胞分化の抑制が示唆された。RNA結合タンパク質Mex-3Bの欠損マウスが雄特異的に寿命延長していることを見出し、Mex-3Bによる寿命制御機構の解明を試みた。1)Mex-3B欠損マウスの表現系の解析を行ったところ、Mex-3B欠損マウスは加齢に伴う肥満に抵抗性で、特に脂肪組織量の顕著な減少が確認された。Mex-3Bはマウス、ヒトの両方において、全身にユビキタスに発現していることが確認されたが、絶食再摂食刺激や肥満負荷によるMex-3Bの遺伝子発現量の変化は、特に脂肪組織において顕著に認められた。以上の結果から、Mex-3Bの代謝機能臓器を脂肪組織であると仮定し、さらなる解析を行った。3)さらに、Mex-3Bを欠損させた状態で3T3-L1細胞やMEFを脂肪細胞分化誘導させたところ脂肪細胞分化の抑制が確認されたため、Mex-3B欠損マウスがやせ型の表現系を示す原因として、脂肪細胞分化の減少が示唆された。4)カロリー制限を行ったマウスの脂肪組織では、Mex-3BのmRNA、タンパク質レベルでの発現抑制が認められたことから、Mex-3B欠損マウスがカロリー制限を模倣して寿命延長の表現型を呈していることが示唆された。医歯薬学
コカインによる心筋障害におけるカルパインの関与

ウィスター系ラット雄に、生理食塩水に溶かしたコカインを毎日20mg/kg体重、7日間連続して腹腔内投与した後、フェノバルビタール麻酔下に心臓を摘出し、生理食塩水にて軽く血液を洗い流した後、EGTAを含むトリス中性緩衝液に入れ、ポリトロンホモジナイザーで破砕。1,000g、100,000gで順次遠心分離し、膜分画と細胞質分画に分けた。対照群としては、生理食塩水を同様に亜急性投与した群を用いた。次いで、コカイン亜急性投与によるカルパインの合成誘導の有無と程度をみる目的で、100,000gの上清画分について、DEAE-セルロースカラムを用いてm-カルパインを分離し、カルシウムイオンを添加によるアゾカゼインの分解産物であるペプチドを分光光度計を用いてみる方法で、m-カルパイン活性を測定した。その結果、m-カルパイン活性は、コカイン亜急性投与群で4.48±0.33(SD)U/mg protein、生理食塩水投与群で4.47±0.34(SD)U/mg proteinであり、両者間には差が認められなかった。したがって、コカイン亜急性投与による心筋におけるカルパインの合成誘導は、なされない可能性が強く示唆された。今後は、細胞質分画及び膜分画について、それぞれ、ポリアクリルアミド電気泳動法・ウェスタンブロッティング法に従い、カルパイン抗体を用いて、カルパインの膜分画への転移の有無を調べ、フォドリン抗体を用いることで、フォドリンの分解の有無を検索し、プロテインキナーゼCアイソザイムに対する抗体を用いることで、プロテインキナーゼCの活性化および転移を検討し、総合的に、コカインによる心筋障害へのカルパインの関与について検討して行きたい。
人為的攪乱を受けやすい礁池のサンゴ類の持続可能な移植事業モデルの開発

埋め立てなどの公共工事の際に移植リストに掲載されることがある礁池のサンゴ2属3種について,沖縄島集団の繁殖様式や遺伝的多様性を調べた。ヤッコアミメサンゴは7-9月,トガリシコロサンゴは7-10月,シコロサンゴは11-12月に産卵が見られた。また種子島から西表島までの各地域では,集団により遺伝的多様度は非常に異なっていた。サンゴの移植の際には遺伝的撹乱を起こすことがないよう配慮し,また移植の実施時期もそれぞれの種の繁殖期を避けて行うことが望ましい。本研究では琉球列島の人為的撹乱を受けやすい礁池の造礁性サンゴ類を対象として,1)いつ(=季節,時刻など),どのような様式で(=雌雄同体または雌雄異体,放卵放精型または幼生保育型),有性生殖を行うのか,という繁殖様式を解明し,2)個体識別のためのマイクロサテライト(MS)マーカーの開発と,3)琉球列島のサンゴ群集の集団遺伝学的解析から集団内および集団間の遺伝的多様性を明らかにする.それらを基に,比較的近距離での礁池のサンゴ移植の最適モデルを提唱することを目的としている.対象種は沖縄島や琉球列島の礁池に普通に見られる種で,公共工事等の影響を考慮したサンゴの移植リストに掲載されることがある,ヤッコアミメサンゴ(Psammocora contigua),トガリシコロサンゴ(Pavona divaricata),シコロサンゴ(Pavona decussata)とする.サンゴは細胞内に渦鞭毛藻の一種(Symbiodinium sp.)を共生しているため,MSマーカー開発の為のサンゴのみのゲノムDNAを得ることは難しい.上記3種の精子由来のDNAを得るためにも有性生殖様式を解明する必要がある.平成25年度は1)有性生殖様式の解明として,これまでの調査から産卵時期と産卵様式がほぼ確定できたので,採集した標本の組織片の作成,観察を行い,生殖巣の発達・成熟を行う期間・時期の特定を進めた.3)集団遺伝学的解析のために,沖縄島,宮古島,と比較のために鹿児島・種子島,台湾・緑島で調査・採集を行った.台湾・緑島は礁池が発達せず,調査対象としているサンゴ種はほとんど見つからなかった.種子島では,比較的高緯度まで分布することが知られているシコロサンゴを充分量採集することができた.本研究では琉球列島の人為的撹乱を受けやすい礁池の造礁性サンゴ類を対象として,1)いつ,どのような様式で有性生殖を行うのか,という繁殖様式を解明し,2)マイクロサテライト(MS)マーカーの開発と,3)サンゴ群集の集団遺伝学的解析から集団内および集団間の遺伝的多様性を明らかにする。それらを基に,礁池のサンゴ移植の最適モデルを提唱することを目的としている。対象種は沖縄島礁池に普通に見られる種で,公共工事等の影響を考慮したサンゴの移植リストに掲載されることがある,ヤッコアミメサンゴ(Psammocora contigua),トガリシコロサンゴ(Pavona divaricata),シコロサンゴ(Pavona decussata)とする。サンゴは細胞内に共生藻を保持するため,MSマーカー開発の為のサンゴのみのゲノムDNAを得ることは難しい.上記3種の精子由来のDNAを得るためにも有性生殖様式を解明する必要がある。平成24年度は有性生殖様式の解明として,これまでの調査から産卵が予想される7月上旬に沖縄島周辺域でヤッコアミメサンゴとトガリシコロサンゴのサンゴ群体を採集し,琉球大学熱帯生物圏研究センター瀬底実験所にて飼育しながら,産卵時期,時刻の特定を行った。同様に,11月下旬にシコロサンゴの産卵様式の観察を行った。いずれの種もこれまでの観察とほぼ同じ月齢,時刻に放卵・放精が見られ,これらのサンゴの有性生殖時期の特定を確実にした。放出された精子を遠心により集め,エタノールで固定し,MSマーカー開発のための材料を得ることができた。本研究の予備調査中に,トガリシコロサンゴ,ヤッコアミメサンゴなどに棲み込む群体性ヒドロ虫の未記載種を見いだした為,Zanclea sango(サンゴスズフリクラゲ)として新種記載した(Hirose and Hirose 2012)。本研究では赤土や生活排水の流入,また公共工事の影響など琉球列島の人為的撹乱を受けやすい礁池の造礁性サンゴ類を対象として,1)いつ(=季節,時刻など),どのように(=雌雄同体または雌雄異体,放卵放精型または幼生保育型)有性生殖を行うのか,という繁殖様式を解明し,2)個体識別のためのマイクロサテライト(MS)マーカーの開発と,3)琉球列島のサンゴ群集の集団遺伝学的解析から集団内および集団間の遺伝的多様性を明らかにする.それらを基に,「人為的撹乱を起こすことのないような」礁池のサンゴ移植の最適モデルを提唱することを目的としている.対象種は主に沖縄島の礁池に普通に見られる種で,公共工事等の影響を考慮したサンゴの移植リストに掲載されることがある,

ヤッコアミメサンゴ(Psammocora contigua),シコロサンゴ(Pavona decussata),トガリシコロサンゴ(Pavona divaricata)とする.サンゴは細胞内に渦鞭毛藻の一種(Symbiodinium sp.)を保持(共生)しているため,成体からMSマーカー開発の為のサンゴのゲノムDNAを得ることは難しい.上記3種のサンゴの精子由来のDNAを得るためにも有性生殖様式を解明する必要がある.平成26年度は1)有性生殖様式の解明として,これまでの調査から産卵時期と産卵様式がほぼ確定できているシコロサンゴとトガリシコロサンゴの周年サンプリングを行った標本の組織切片の作成が完了した.3)集団遺伝学的解析のために,これまで採集している沖縄県・沖縄島・今帰仁,沖縄県・西表島・住吉で採集した.これにより,シコロサンゴ類は7カ所,ヤッコアミメサンゴは5カ所から解析に十分な標本数が得られた.2)のMSマーカー開発の予備実験を行った.本研究では赤土や生活排水の流入,また公共工事の影響など琉球列島の人為的撹乱を受けやすい礁池の造礁性サンゴ類を対象として,1)繁殖様式の解明と,2)DNA塩基配列情報からの集団遺伝学的解析を行った。それらを基に移植に適している時期や,「人為的撹乱を起こすことのないような」礁池のサンゴ移植の最適モデルを提唱することを目的としている。対象種は主に沖縄島の礁池に普通に見られる種のヤッコアミメサンゴ(Psammocora contigua),シコロサンゴ(Pavona decussata),トガリシコロサンゴ(Pavona divaricata)とした。沖縄島北部に同所的に生息するシコロサンゴとトガリシコロサンゴの組織切片と直接観察から両種の有性生殖期を明らかにした。トガリシコロサンゴは夏季に,シコロサンゴは初冬に産卵が見られた。沖縄周辺域で初冬に産卵するサンゴの初報告である。沖縄島中部に生息するシコロサンゴは夏季の4ヶ月ほど産卵が見られた。放卵放精型のサンゴでこれだけ長期間産卵する例は珍しい。上記3種は沿岸部礁池に大きな集団として見られるが,破片化による無性生殖と思われる群体も多くみられる。したがって,移植に適している種と考えられているが集団内・集団間の遺伝的多様性は不明であった。種子島,沖縄島,宮古島,西表島の合計11地点から採集したサンゴ3種425個体のITS領域の解析から,生息地により遺伝的多様性の低い集団と比較的遺伝的交流がみられる集団があることが分かった。公共工事等の影響を考慮したサンゴの移植リストに掲載されることがあるこれらの種は,初冬を含む長い繁殖期と場所によってはかなり遺伝的多様性の低い集団であることから,移植の時期や移植先の選定には,これまで提唱されてきたガイドラインだけでは不十分であることが示唆された。埋め立てなどの公共工事の際に移植リストに掲載されることがある礁池のサンゴ2属3種について,沖縄島集団の繁殖様式や遺伝的多様性を調べた。ヤッコアミメサンゴは7-9月,トガリシコロサンゴは7-10月,シコロサンゴは11-12月に産卵が見られた。また種子島から西表島までの各地域では,集団により遺伝的多様度は非常に異なっていた。サンゴの移植の際には遺伝的撹乱を起こすことがないよう配慮し,また移植の実施時期もそれぞれの種の繁殖期を避けて行うことが望ましい。申請時と異なり,平成24年度8月から千葉県館山市にあるお茶の水女子大学湾岸生物教育研究センターに異動となった.そのため,一部研究計画の変更している.サンゴの産卵時期の特定は完了している.組織切片による有性生殖期間の特定はおよそ半分完了した.集団遺伝学的調査のための採集も完了した.サンゴ礁生物学組織学的観察の続きと,マイクロサテライトマーカーの開発および集団遺伝学的調査を順次進めて行く。
開カラビ・ヤウ多様体の境界構造をこめてのミラー・シンメトリー予想について

本研究は、CR幾何を弦理論への応用を考えて、そのmoduliの構造を調べることを目標とした。Kapustin-OrlovによってD-braneの特殊なものとして、A-braneが提唱された。A-braneとは、複素多様体内のコンパクト実部分多様体で、その上に線束と接続が存在し、Kapustin-Orlovの関係を満たすものである。(接続と実部分多様体上のCR構造は、Kapustin-Orlovの関係があるとする)。筆者は、このA-braneのmoduliの構造(Hamiltonian flowによる部分は無視して)、特にその変形の次元を調べ、A-braneの変形のdeformation complexをつくることに成功した。これは、次元が中間次元のA-brane、すなわちLagrange submanifold(この場合は、Kapustin-Orlovの関係より接続は自明となる)のmoduliが第一コホモロジーで表現されることの一般化である。弦理論に出てくるD-brane of A-typeはKapustin-Orlovによって完全に数学的に定式化された。その幾何構造をCR幾何の立場から研究する。Wをケーラー多様体とする。そしてMをW内の部分多様体とする。さてD-brane of A-type(以下A-braneと呼ぶ)を考える。このMがA-braneとなりうるか(M上に線束と接続がありその曲率とケーラー形式より定まるM上の構造が概CR構造になるか?)を調べる。Kapustin-Orlovの研究によってMはLagrange submanifoldとは限らなくいろいろな次元があることが分っている。実超曲面型のA-braneも存在する(WがcompactのときはこのようなA-braneは完全に分類されるのではないか?)。Mが中間次元のときはLagrange submanifoldになるがそれ以外のときはWの複素構造から導入されるCR構造が関係する。具体的な目的は1)A-braneのversal familyの構成2)Lagrange submanifoldで展開されたspecial geometryの理論をA braneで展開する。上の1)の研究についてはOh, Y.-G, Park, J.-S.の先駆的仕事がある。すなわちMをA braneとする。するとKapustin-Orlovの研究によりWのcoisotropic submanifoldでW上のある線束上の接続の曲率とケーラー形式より定まる構造がM上の概CR構造となることと同値であることが分っている。彼らはcoisotropic submanifoldの変形のversal familyを構成したがMがLagrange submanifold以外のときはversal familyの次元は無限次元となる。この欠点を補うために接続も含めたかたち(本来のA-braneの)の理論が求められている。2)についてもKapustinはA-braneにたいするspecial geometryが展開できることを予想している。この予想が正しいことを証明したい。更に最近、HitchinによりGeneralized complex manifoldの理論が展開されている。まだ定式化の段階で具体的な結果はまだないと思われる。これより変形理論が展開可能になった。上記の結果は現在、投稿中である。筆者は、このA-braneのmoduliの構造(Hamiltonian flowによる部分は無視して)、特にその変形の次元を調べA-braneの変形のdeformation complexをつくることに成功した。
ダイコンの雄性不稔・稔性回復システムの分子機構とその多様性形成メカニズムの解明

ダイコンの雄性不稔と稔性回復の分子機構、ならびにこの現象に関わる遺伝子の進化を解明するため種々の実験を行った。その結果、稔性回復遺伝子の1つ、pprB遺伝子の産物がミトコンドリアの雄性不稔原因遺伝子orf138のmRNAに結合し、その2次構造の変化を通じて翻訳を阻害することがわかった。またオグラ型雄性不稔細胞質と正常型細胞質のミトコンドリアゲノムの比較から、orf138がゲノムの進化的な構造変異に伴い偶然生じた新規遺伝子であることが示された。本研究は、ダイコンの雄性不稔と稔性回復の分子機構を最新の分子生物学的方法で明らかにするとともに、ミトコンドリアの雄性不稔遺伝子と核の稔性回復遺伝子(Rf遺伝子)の多様性が産み出される原因をDNAの塩基配列レベルで明らかにすることを目的とする。そのため本年度は以下の1.5.の実験・調査を行い、所期の成果を得た。1.オグラ型雄性不稔に対するRf遺伝子の1つであるorf687遺伝子の様々なアリルから生じる変異体タンパク質と、雄性不稔の原因遺伝子であるミトコンドリアorf138/orf125遺伝子のmRNAとの結合をゲルシフトアッセイで調べた。その結果、ORF687タンパク質の結合がmRNAの2次構造形成を促進し、翻訳阻害が生じることが示唆された。またORF687タンパク質は遺伝学的に推定される機能(Rf、rf)にかかわらず、一定の強度でRNAと結合する能力を有することがわかった。2.ダイコン野生種であるR.raphanistrumからorf687ホモログを単離し、オグラ型細胞質を持つ雄性不稔ナタネに導入して、この遺伝子の稔性回復機能を検討した。その結果、この遺伝子がRfとして機能していることが証明された。3.orf687を持たないロシアのクロダイコンからRf遺伝子の候補となり得る新規PPR遺伝子を単離し構造を明らかにした。4.orf687とは異なる新規Rf遺伝子(Rft)に連鎖するSTSマーカーを作製し、ハマダイコンを花粉親として育成した190個体の交配集団を用いてRftのラフマッピングを行った。5.山口、福岡、山形の各県に自生する野生のハマダイコンの現地調査を行い、合計23個体の雄性不稔個体を採集した(これらの個体がオグラ型細胞質を持つかどうかは現在調査中である)。本年度は下記に示す成果を得た。平成23年4月に熊本県、6月に山形県、平成24年3月に宮崎県の現地調査を行い、雄性不稔を示すハマダイコンを多数採集した。これらの個体からDNAを単離し、PCR法によりミトコンドリアゲノムのタイプを調査したところ、すべてオグラ型と判定され、新規のタイプは発見できなかった。正常型とオグラ型のミトコンドリアゲノムの違いを明らかにするため、打木源助(正常型)及びMS源助(オグラ型)のmtDNAの全塩基配列を次世代シークエンサーにより解読した。その結果、正常型mtDNAは全長244,037bp、オグラ型mtDNAは全長258,426bpの環状DNA分子と考えられること、雄性不稔遺伝子orf138は、両型の分化にともなうmtDNAの大規模な再構成の過程で偶然生じた、新規遺伝子であることがわかった。ハマダイコン及びアザキダイコンの採集調査を行い、7地域約30個体からRf遺伝子(PPR-B遺伝子)のコード領域を含む全長約3.2kbのDNA断片をクローニングし、得られたDNA配列データから種内変異の量やパタンを解析した。さらにPPR-Bと連鎖するパラログ遺伝子群との比較解析を行った。その結果、各地域集団間の遺伝的な分化は認められず、中立性からの大きな逸脱も検出されなかった。領域全体の塩基多様度(0.1%)は平均的な植物集団と比べて多少低いものの、コード領域の一部に変異量の増大が認められ、染色体の不等交叉に伴う非相同配列間の遺伝子変換が、PPR-B領域の変異パタンに局所的な影響を及ぼしている可能性が示唆された。本年度の研究実績は以下の通りである。

平成24年の開花シーズン(3月中旬7月初旬)に、宮崎県、鹿児島県、和歌山県、沖縄県、福井県、神奈川県、三重県、愛知県、石川県、高知県、徳島県、香川県、青森県、秋田県、および北海道にてハマダイコンの調査を行い、現地で実際に雄性不稔を示している個体を多数(84個体)採取した。これらの個体からDNAを単離し、PCR法によりミトコンドリアゲノムのタイプを調査したところ、すべてオグラ型と判定され、新規雄性不稔細胞質は発見できなかった。また、上記雄性不稔個体とともに現地で採取した、ハマダイコンの可稔490個体のミトコンドリアゲノムも合わせて調査したところ、385個体がオグラ型、22個体がコセナ型と判定され、正常型細胞質を持つものは83個体のみであった。このことから、日本のハマダイコンには、オグラ型/コセナ型雄性不稔細胞質が高頻度に存在する一方、核には雄性不稔の発現を抑制する何らかの稔性回復遺伝子が広く分布していることがわかった。コセナ型雄性不稔の原因遺伝子であるミトコンドリアのorf125遺伝子の多型をシークエンシングにより調べたところ、三重県の1個体に、東北地方を中心に日本で広く観察されるオリジナルorf125配列と比べ1つのSNPが観察された。三重県のハマダイコンの集団には、同じSNPを有するオグラ型も存在したことから、オグラ型orf138遺伝子からコセナ型orf125遺伝子を生じる欠失変異は日本各地で多元的に生じていることが示唆された。オグラ型と正常型の2種類についてダイコンミトコンドリアゲノムの構造を初めて決定することができた。また稔性回復遺伝子を含む、核のゲノム領域のDNA塩基配列の分子集団遺伝学的解析から、稔性回復遺伝子の多様性が産み出される機構の一端が明らかとなった。一方、ハマダイコンの集団中に存在すると予測された、新規雄性不稔細胞質を発見すること未だできていない。24年度が最終年度であるため、記入しない。代表者、分担者間の役割分担も含めて研究の推進方策に特に問題はない。今年度の調査で得られるデータを加えてこれまでの成果を論文にまとめ公表する。
魚類の生殖腺発達に関与する光情報伝達系の解明

これまでの研究から、脳に存在するロドプシンが生殖腺発達を制御することが考えられた。この仮説を明らかにするために、まずアユの眼球・松果体以外に存在する光受容組織が生殖腺発達の制御に関与することの証明を試みた。その結果,眼球・松果体を摘出しても雌雄共に短日処理群では生殖腺体重比が長日処理群と比較して有意な増加が確認された。生殖腺の発達を制御する性ステロイドの血中量も、雌雄共に日長の短日化により有意に増加した。生殖腺を組織レベルで観察したところ、精巣では短日処理群において精原細胞の盛んな増殖分裂が確認されたのに対し,長日処理群では精原細胞の増殖分裂がほとんど確認できなかった。卵巣では短日処理群において卵の成熟段階が最終成熟まで進行していたのに対し,長日処理群では実験開始時と変わらず,主に周辺仁期の卵が観察された。これらの結果から、アユにおいて眼球・松果体以外の未知の光受容部位が生殖腺発達の制御に関与していることが明らかとなった。次にアユロドプシンに特異的な抗体を作製し、脳において免疫組織化学を行い、脳内ロドプシンの生殖腺発達制御への関与を調べた。その結果,視索前野のnucleus preopticus magnocellularis, nucleus preopticus parvocellularisにおいて免疫陽性反応が観察された。これらの神経核には生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン(GnRH)に対する免疫陽性反応がアユにおいて確認されており,ロドプシンの性成熟制御への関与が示唆された。興味深いことに、嗅球、終脳、間脳、中脳、さらに延髄における複数の神経核においてもロドプシンに対する免疫陽性反応が見られ、脳内ロドプシンは生殖腺の発達制御以外に活動リズムや体色変化、生物時計の同調などの機能の制御にも関与していることが示唆された。これまでの研究により,アユの脳内においてロドプシンcDNAの全長塩基配列を明らかにしたが,本年度は脳内ロドプシン遺伝子が,網膜に発現しているロドプシン遺伝子と同一であることを示した.また,免疫組織科学的手法によりロドプシンが脳内のどの部位に局在しているかを明らかにしたところ,視索前野に存在していることが示された.このことから,ロドプシンが下垂体からの内分泌を制御していることが示唆された.一方,これまでの研究から,アユの生殖腺発達が既知光受容体である眼球及び松果体しても長日条件で抑制されることは示されていたが,短日化により生殖腺発達が促進されるという報告は無かった.そこで,眼球および松果体を摘出したアユを長日条件において1週間飼育した後,長日条件または短日条件に切り替え3週間飼育し,生殖腺の発達状態を調べることで,既知の光受容体が無くとも性成熟が日長によりコントロールされているかを調べた.日長を変えた日をDay0として,Day0と21に生殖腺を採取した.生殖腺体重比(GSI)を算出したところ,短日条件に切り替えたアユではDay21では雌雄ともにDay0に比べGSIが有意に増加していた.また,長日条件で飼育を継続していたアユのメスでは,Day0に比べGSIが有意な増加は見られなかったが,オスでは有意に増加していた.一方,Day21において短日処理群は,長日処理群に比して有意にGSIが増加していた.以上のことから,眼球と松果体以外の未知光受容部位がアユの生殖腺発達の制御に関与しているとが明らかとなった.以上,本年度の研究結果より,脳内において発現している光受容体であるロドプシンが生殖腺発達に関与しいることが強く示唆された.これまでの研究から、脳に存在するロドプシンが生殖腺発達を制御することが考えられた。
心拍変動スペクトル解析によるカウンセリング効果の分析

大学において発達障害の特性のある学生が増加したことは、学生相談・カウンセリングに質的な変化をもたらしたと言える。申請者は、何らかの悩みや問題を抱えたクライエントはどういう状態にあり、カウンセリングでどう変化していくのかをノンバーバルに心拍変動のスペクトル解析で分析してみたいと考えた。本研究では、1回45分のカウンセリング中のクライエントとカウンセラーの脈派を同時に測定し、心拍変動スペクトル解析によってそのハーモニーが調和する方向に変化していくかどうかを分析し、質問紙で得られた気分の変化、満足度との一致を確認することを目的とする。平成30年度は前年度同様、1日目に被験者学生の安静時の脈波の測定を行い、2日目に実験用に雇用したカウンセラーが被験者学生と行ったカウンセリング時の脈波の同時測定を行った。最終的に、学生相談利用者24名、非利用者39名、合計63名分のデータを収集した。耳朶脈派はカウンセリングの最初4分と最後4分のデータを取り出し、分析に用いた。全体では、不安検査STAIの状態不安得点は、カウンセリング後に有意に低下した。気分プロフィール検査(POMS2)のネガティブな気分状態を測定する得点も、有意に低下した。自律神経指標は、副交感神経の活性度を表すHF(高周波:Hi Frequency)が有意に上昇し、HR(心拍数:Heart Rate)が有意に低下した。交感神経の活性度を表すLF(低周波:Low Frequency)、LF/HFは有意な変化はなかった。CVRR(心臓副交感神経機能:Coefficient of Variation of R-R interval)は有意に上昇した。カウンセラーもカウンセリング後にリラックスする傾向が見られたが、全体として両者の脈波が調和することは確認できなかった。特徴のある事例について個別に結果を解釈することが今後の課題である。学生相談活動や、カウンセリングの効果について評価する研究が増えているが、利用者の満足度を質問するという方法が多く、バーバルに表現できない学生もいると考えられる。申請者は、何らかの悩みや問題を抱えたクライエントはどういう状態にあり、カウンセリングでどう変化していくのかをノンバーバルに脈派で分析してみたいと考えた。平成28年度は、クライエントとカウンセラーの脈派を同時に長時間測定する方法について情報を集め、研究者間でディスカッションを行い、測定機器や測定器具、解析ソフトの設定・準備を行った。研究計画当初は、カウンセリング中にクライエントとカウンセラーの脈波を同時に測定するという設定上、無線の装置を使用する予定であったが、質の高い無線の装置の開発が遅れていること、現時点では無線より有線のほうが確実にデータを取得できることから、耳朶脈派を有線で測定することにした。また、使用する質問紙の選定を行った。データ測定のテストを行い、データを収集する準備を進めているところである。研究計画当初は、カウンセリング中にクライエントとカウンセラーの脈波を同時に測定するという設定上、無線の装置を使用する予定であったが、質の高い無線の装置の開発が遅れていること、現時点では無線より有線のほうが確実にデータを取得できることから、研究者間でディスカッションを行い、研究計画を一部修正して、測定機器や測定器具、解析ソフトの設定・準備を行った。10月からの研究開始となったこともあり、データ測定のテストを行い、データを収集する準備を進めているところである。平成29年度は、医学倫理委員会の審査・承認を受け、1日目に被験者学生の安静時の脈波の測定を行い、2日目に実験用に雇用したカウンセラーが被験者学生と行ったカウンセリング時の脈波の同時測定を行うというデザインで実験を実施した。カウンセリングの前後に不安検査(新版STAI状態ー特性不安検査)と気分プロフィール検査(POMS2)を実施し、データ処理を進めているところである。途中センサーの故障や、同時測定時の設定に解析ソフトの限界があるなど問題が生じたが、解決できたため、現在までに42人分のデータを収集した。平成30年度前半もデータ収集を継続する予定である。実験用カウンセラーの選定や被験者学生の募集、脈波のテスト測定など、データ収集を始めるまでに時間がかかったが、データ収集を始めてからは順調にデータ数を増やしている。途中センサーの故障や、同時測定時の設定に問題が生じたが、解決できたため、現在までに42人分のデータを収集している。質問紙で得られた気分の変化、満足度もデータ処理を進めているところである。

大学において発達障害の特性のある学生が増加したことは、学生相談・カウンセリングに質的な変化をもたらしたと言える。申請者は、何らかの悩みや問題を抱えたクライエントはどういう状態にあり、カウンセリングでどう変化していくのかをノンバーバルに心拍変動のスペクトル解析で分析してみたいと考えた。本研究では、1回45分のカウンセリング中のクライエントとカウンセラーの脈派を同時に測定し、心拍変動スペクトル解析によってそのハーモニーが調和する方向に変化していくかどうかを分析し、質問紙で得られた気分の変化、満足度との一致を確認することを目的とする。平成30年度は前年度同様、1日目に被験者学生の安静時の脈波の測定を行い、2日目に実験用に雇用したカウンセラーが被験者学生と行ったカウンセリング時の脈波の同時測定を行った。最終的に、学生相談利用者24名、非利用者39名、合計63名分のデータを収集した。耳朶脈派はカウンセリングの最初4分と最後4分のデータを取り出し、分析に用いた。全体では、不安検査STAIの状態不安得点は、カウンセリング後に有意に低下した。気分プロフィール検査(POMS2)のネガティブな気分状態を測定する得点も、有意に低下した。自律神経指標は、副交感神経の活性度を表すHF(高周波:Hi Frequency)が有意に上昇し、HR(心拍数:Heart Rate)が有意に低下した。交感神経の活性度を表すLF(低周波:Low Frequency)、LF/HFは有意な変化はなかった。CVRR(心臓副交感神経機能:Coefficient of Variation of R-R interval)は有意に上昇した。カウンセラーもカウンセリング後にリラックスする傾向が見られたが、全体として両者の脈波が調和することは確認できなかった。特徴のある事例について個別に結果を解釈することが今後の課題である。被験者を順調に確保することが、最も重要である。カウンセリングを受けていない学生については、研究責任者や研究分担者が担当する授業や課外プログラムで被験者を募集する。カウンセリングを受けている学生については、研究責任者が担当している学生の中から被験者を募集する。これまでに収集したデータは、カウンセリングを受けたことのない学生のものが多い。研究責任者が過去にカウンセリングを担当した学生にも被験者として声をかける予定である。収集した脈波のデータは3045分の長いデータであるため、適切にデータクリーニングを行う。クライエントとカウンセラーのデータに変化があるところを一部切り取って分析をすることも予定している。研究計画を一部修正して、測定機器や測定器具、解析ソフトの設定・準備を行ったこと、10月からの研究開始となったことから、データ収集を次年度に行うため、被験者の謝金を次年度に繰り越すことになった。