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糖尿病性腎症におけるId2の機能解析

糖尿病性腎症は糸球体硬化症をきたす疾患であり,その機序としてメサンギウム細胞の形質転換が提唱されている.この糖尿病腎症発症進展におけるId2の役割について,in vitro, in vivoで検討を加えた.まず, in vitroにおいて,メサンギウム細胞の形質転換に深くかかわっていると考えられているTGFβを刺激因子として検討を加えた.まず,実験系として正常マウスからメサンギウム細胞を分離し,培養細胞系を樹立した.このメサンギウム細胞が特異的な蛋白を発現していることを免疫組織学的に検討し,確認した.一般的に,培養メサンギウム細胞にTGFβ刺激を加えることで, collagen IVをはじめ実際の腎症において発現している蛋白の増加が認められる.このような変化が認められることを確認して実験系を確立した.その上で, TGFβ刺激におけるId2の挙動について検討した.この結果,Id2については濃度依存的に蛋白量が低下することが明らかとなった.そのメカニズムとして,mRNA量をRT-PCR法およびRnase protection assay法にて検討したが,mRNA発現量はかわなかった.一方で,蛋白量の低下が認められることからそのRNAの安定性を検討したところ,低下が認められた.おそらくTGFβを介してId2mRNAの半減期が短くなり結果として,Id2蛋白量の低下につながると考えられた.一方で,in vivoにおいては,糖尿病腎症をId2ノックアウトマウスに誘導したが,正常マウスとの明らかな差異が確認されず,in vitroにおいて有意な変化がin vivoにおいては認められなかった.糖尿病性腎症は糸球体硬化症をきたす疾患であり,その機序としてメサンギウム細胞の形質転換が提唱されている.この糖尿病腎症発症進展におけるId2の役割について,in vitro, in vivoで検討を加えた.まず, in vitroにおいて,メサンギウム細胞の形質転換に深くかかわっていると考えられているTGFβを刺激因子として検討を加えた.まず,実験系として正常マウスからメサンギウム細胞を分離し,培養細胞系を樹立した.このメサンギウム細胞が特異的な蛋白を発現していることを免疫組織学的に検討し,確認した.一般的に,培養メサンギウム細胞にTGFβ刺激を加えることで, collagen IVをはじめ実際の腎症において発現している蛋白の増加が認められる.このような変化が認められることを確認して実験系を確立した.その上で, TGFβ刺激におけるId2の挙動について検討した.この結果,Id2については濃度依存的に蛋白量が低下することが明らかとなった.そのメカニズムとして,mRNA量をRT-PCR法およびRnase protection assay法にて検討したが,mRNA発現量はかわなかった.一方で,蛋白量の低下が認められることからそのRNAの安定性を検討したところ,低下が認められた.おそらくTGFβを介してId2mRNAの半減期が短くなり結果として,Id2蛋白量の低下につながると考えられた.一方で,in vivoにおいては,糖尿病腎症をId2ノックアウトマウスに誘導したが,正常マウスとの明らかな差異が確認されず,in vitroにおいて有意な変化がin vivoにおいては認められなかった.
原子力発電の発展とその問題点

原子力発電は、それに関連する種々の問題を解決しながら,各国において定着していることは周知の通りである。これに伴い,核燃料サイクルの一部としての原子力発電所における使用済核燃料の再処理を巡る問題が生じてきた。自国内にラウン資源が豊富であるか,他のエネルギ-資源が多く存在し原子力に重点を置く必要のない国はともかくとして,核燃料資源に恵まれない国にとっては再処理を含む核燃料サイクルを確立することは,核燃料の安定供給と効率的利用を図る上で重要な課題である。わが国は,原子力発電に必要な燃料であるウランを海外に依存している。従って,ウラン資源の利用効率を向上させ,原子力発電の安定供給に資する観点からは使用済燃料を再処理し,回収されるプルトニウム及びウランをエネルギ-資源として活用することは重要なことであり,また,核不拡散上の面からみても,プルトニウムを適切な管理の下で平和利用として軽水炉,高速増殖炉の燃料として活用することは望ましいことである。また,再処理能力を上回る使用済燃料を再処理するまでの間,それを一時貯蔵することは,現在軽水炉が定着しさらに軽水炉の高度化が予測されるほか新型転換炉や高速増殖炉に対する経済的環境が厳しくなっている上,プルトニウムの需要動向は低迷している状況を考慮すると,プルトニウムを燃料として必要な時期に必要な量を物理的防護の下で得る上で柔軟性のある対応であると言える。再処理に対する対応は各国が置かれている諸環境の相違によってそれぞれ異なるものである。わが国は,原子力を巡る境環の変化を見誤ることなく,平和利用に徹しわが国の再処理事業の定着化を図ることが重要である。
多国間移動と複雑化するトランスナショナリズム

本研究は高度外国人材および留学生の多国間移動について考察したものである。詳細な文献調査に加え、112名の高度外国人材・留学生への質的面接調査、および121名の留学生へのアンケート調査、23名の政府・企業関係者らへのヒアリング等を行い、高度外国人材・留学生がなぜ最初の受け入れ国に定住せず第三国へ移動しようとするのかについてその要因および志向性を分析した。またその結果に基づき日本の外国人受け入れ政策の課題を明らかにすると同時に、国際人口移動の分野における理論的知見を明らかにした。平成21年度は、主に(1)国際労働移動・シティズンシップ・トランスナショナリズムに関する近年の文献の収集、特に多国間移動に関する文献の収集と整理、(2)多国間移動に関するデータ収集、(3)社会保障制度・租税制度の外国人への適用に関するデータ収集、(4)多国間移動者に対する調査票作成を行った。(1)に関しては、国際移動・社会学・経済学・地政学関係の学術書および論文を検索・レビューを行ったが、当初から予想していた通り、多国間移動そのものについての文献は非常に少なかった。そのため、多国間移動の関連分野に範囲を広げて文献研究を行ったところ、「頭脳還流・循環」といった文脈で関連の深い研究が行われていることが分かった。平成22年度は、知識経済の発展過程における頭脳還流・循環という概念の中に多国間移動を位置づけ、更に文献研究を深めていく予定である。(2)に関しては、OECDのデータを入手することができたが、途上国に関するデータを得ることは出来なかった。一般的に先進国以外で国際移動に関する詳細データを持つ国々は多くないため、来年度もデータの入手が困難な場合にはOECDのデータのみをもとに分析を行う予定である。(3)に関しては、外国人への「社会的包摂」のレベルが多国間移動プロセスに影響を及ぼしているのではないかという仮説に基づき、社会保障制度の外国人への適用状況を調査した。これまでの調査では、先進国の多くが近年、受給資格を大幅に短縮・緩和し、短期滞在の外国人でも健康保険や年金制度への加入が可能になっていることが分かった。租税制度に関してはまだ一部の先進国のみのデータしか入手できていないため、平成22年度も引き続きデータ収集を行う予定である。(4)に関しては、以上の文献調査をもとに多国間移住者に対する調査票を作成した。実際の面接調査は平成22年度の8月より実施予定である。平成22年度は、平成21年度に引き続き(1)国際労働移動・シティズンシップ・トランスナショナリズムに関する近年の文献の収集、特に多国間移動に関する文献の収集と整理、(2)多国間移動に関するデータ収集を行った。(1)に関しては今年度は「頭脳還流・頭脳循環」だけでなく「高度人材の国際移動」全般についての文献研究を行った。特に頭脳循環と高度人材の国際移動において多国間移動が多くみられることから、特にこれらに関する学術研究のみならず政策の分野において先進各国でどのような展開が見られているのかについても考察を行った。日本国内における高度外国人材の受入れ政策および受入れ状況についても研究を行い、現在多国間移動研究の中で明らかになってきた事実等も踏まえながら日本国内や米国において中間成果を発表し高い評価を得ることが出来た。また平成22年度は調査票を作成し、首都圏在住の多国間移住者に対して9月より面接調査を開始した。多国間移住者は予想以上に特定することが難しいことが明らかになったため、対象者枠を社会人から留学生にまで広げて調査を継続している。現在のところ12名の調査を完了しその分析を進めている。平成23年度も引き続き多国間移住者を特定し、ライフステージごとの移動要因や、制度的要因、キャリア開発要因等、どのような要因がどのように多国間移動を誘引しているのかについてより深く探っていきたいと考えている。昨年の秋に国際学会でオーストラリアとニュージーランドの研究者が非常に内容的に共通点の多い研究を現在行っていることが分かったため、今年の夏にシドニーおよびウェリントンを訪問し今後の共同研究の可能性などについてもその研究者たちと話し合う予定となっている。その際、もし対象者を特定することができれば両国における多国間移動者への面接調査も行いたいと考えている。平成23年度も前年度に引き続き、多国間移動の経験を持つ高度外国人材・留学生に対して面接調査を行った。しかし前年度同様、多国間移動経験者の特定が容易でなかったことから、23年度は一般の高度外国人材および留学生の両方に対して調査対象者を拡大した。その上で日本への定住意思のない対象者に対し他国へ移住予定および理由について面接調査を行いその志向性について分析を行った。3月の東日本大震災によって多数の外国人が日本から海外に流出したこともあり、大震災の影響についても調査票の質問事項に含めることとした。8月にはメディアでは主要な外国人の流出先として取り上げられていた香港に赴き約2週間にわたって調査を行った。

震災後の日本からの流入者を直接特定することはできなかったが、震災前に日本から移住した高度外国人材を含む多国間移住者を12名特定することができ、全員に各60-90分におよぶ面接調査を行い多くの知見を得ることができた。また現地の研究者へのインタビューを通じて香港政府が震災によって日本から出国しようとする高度外国人材を出来るだけ多く獲得するため特別な政策を取っていたという情報を得ることができグローバルな入材獲得競争の政策的含意について理解を深めることができた。これらのデータに加え、現地の研究者らへの聞き取りなどからも現在の研究を大きく前進させることができた。平成23年度も前年度に引き続き高度人材の国際移動に関する文献研究を行い、特に日本におけるどのような問題が高度外国人材の第三国への流出を招いているのかについて政策的な考察を行った。研究代表者が平成23年度「外国人高度人材に関するポイント制導入の際の基準等に関する検討会」(厚生労働省)および「訪日外国人2500万人時代における出入国管理行政検討会議」(法務省)の委員に任命されたこともありこうした政府の政策議論の中で本研究プロジェクトから得られた知見を直接役立てることができた。
大学英語教育でのパラグラフ・ライティングを促進する評価及び指導ツールの開発

本研究では,大学・短大で行われる英語教育においてパラグラフ・ライティング指導が促進されることを目標として,研究I研究IVの一連の研究を行い,当研究グループがこれまで開発・検証してきた英語ライティング・ルーブリック(評価ガイドライン)を補足し説明する,評価基準の具体的な解釈と作文サンプルを作成した。同時に本来評価ツールであるルーブリックをライティング指導のために活用する方策を考案し実施した。本研究では,高等教育での英語教育におけるパラグラフ・ライティング指導を促進するツールと方策を開発することを目的とし,当研究グループが開発・検証してきた英語ライティング・ルーブリック(評価基準)「ルーブリック2009」に対してこれを補完する,評価基準の具体的な解釈一覧と作文サンプル一覧を作成,これにより汎用性の高い評価ツールを開発する。同時に,本来評価ツールであるルーブリックをライティング指導のために活用する方策を探る。「ルーブリック2009」の解釈一覧を作成するためには,「ルーブリック2009」に関するさまざまな量的・質的データが有用かつ必要であり,そのデータとして「ルーブリック2009」を使用した評価と同時に,これを使用しない評価も重要である。そこで今年度は「ルーブリック2009」を使用しない評価データとして,第三者の英語母語話者の大学教員4名がルーブリックを用いずに英作文を評価した際の自由記述データの分析を行った。具体的には,質的手法であるグラウンデッド・セオリー・アプローチ(GTA)で自由記述データを切片化し,それらを類似性に基づき分類した内容とルーブリックの項目内容とを比較した。その結果,GTAの分類内容とルーブリックの内容は基本的に同様であることが確認されたが,同時にルーブリックを用いる際に説明を補うべき事柄も見いだされた。次に「ルーブリック2009」を用いた評価のデータとして,昨年度収集・分析を行ったものと同様の「ルーブリック2009」の下位項目についてのデータをさらに収集することとした。そのために,第三者の日本人の大学教員3名から,ある授業で集められた英作文18編に対する下位項目ごと6段階の評価(量的データ)と,このルーブリックを使用したパラグラフ・ライティングの評価についての自由記述(質的データ)を得た。今年度は解釈一覧と作文サンプル一覧作成に向けて次のことを行った。まず,解釈一覧を作成するために有用かつ必要な,「ルーブリック2009」に関する量的・質的データについて検討しその結果,ある授業から集められたパラグラフ・ライティングの作文18編を使って「ルーブリック2009」の下位項目について分析を行うこととした。「ルーブリック2009」の5項目はそれぞれ25つの下位項目によって具体的に規定されているが,第3者の大学教員にこの下位項目ごとに6段階の評価を求め,その量的データを外部評価との比較を含めて分析した。ここではまた評価者から「ルーブリック2009」を使用したパラグラフ・ライティングの評価について詳細に記述した質的データを得た。同時に,作文サンプル一覧を作成するために必要とされる作文データの収集については,これまでの研究で分析した作文データに加えて新たに作文データの収集を開始した。作文サンプル作成にはさまざまな種類の作文が必要と考え,作文を書くときの条件や作文のトピックは統一せず,それぞれのカリキュラム・授業の中で書かれた作文をそのまま集めることとした。一方,英語力の指針としてクローズテストの一種であるCテストは統一して実施することとした。今年度はまず当研究グループメンバーの担当する授業から,異なる学部の学生の作文を収集した。本研究の目的は,高等教育での英語教育におけるパラグラフ・ライティング指導を促進するツールと方策として,当研究グループが開発・検証してきた英語ライティング・ルーブリック(評価基準)「ルーブリック2009」を補完する,評価基準の具体的な解釈一覧と作文サンプル一覧を作成すること,同時に本来評価ツールであるルーブリックをライティング指導のために活用する方策を探ることである。今年度は,これまでに収集したデータの分析に基づいて「ルーブリック2009」の解釈一覧の草稿を行った。特に重要となったのは,日本人大学生の作文を6人の第三者が独立して「ルーブリック2009」の下位項目ごとに評価を行ったことから得た量的データと質的データの分析である。量的データ・質的データともにそれぞれ,異なる項目の下位項目間で問題となる重なりを分析し,その結果,補足的な説明が必要であるのは「構成」の3つの下位項目であることが明らかとなった。そこで解釈は「構成」の3つの下位項目と他の項目との関係性がより明確に理解されるように作成された。

同時にそれらの下位項目の問題を説明できる例として,評価対象の作文を改変し,問題点の説明を付けて作文サンプルとした。「構成」はライティングにおいて大変重要である一方で,その要因を理解し評価することが難しい面を持つことが明らかになり,その点に焦点をおいて解釈説明と作文例を作成することができたことは意義深いと考える。同時に,評価ツールである「ルーブリック2009」を教室での指導に組み入れた実践を行った。これは英語ライティングの授業において学生が自分自身およびクラスメートの作文を「ルーブリック2009」の下位項目ごとに評価したものである。学習者による相互評価と自己評価を取り入れることは,彼らのライティングに関する「気づき」が促されると考えられ,その効果については今夏,学会で発表予定である。英語教育本研究の目的は,高等教育での英語教育におけるパラグラフ・ライティング指導を促進するツールと方策を開発することである。具体的には(1)当研究グループが開発・検証してきた英語ライティング・ルーブリック(評価基準)「ルーブリック2009」をより汎用性の高い評価ツールとするためにこれを補完する評価基準の具体的な解釈一覧と作文サンプル一覧を作成すること,そして(2)本来評価ツールであるルーブリックをライティング指導のために活用する方策を探ることを計画している。(1)の「ルーブリック2009」の具体的な解釈一覧の作成は,「ルーブリック2009」に関するさまざまな量的・質的データの分析に基づく必要がある。今年度は「ルーブリック2009」を使わないで行った評価データをグラウンデッド・セオリー・アプローチ(GTA)に基づいて分析することで,「ルーブリック2009」を用いる際に説明を補うべき事柄を見いだすことができた。この分析から得られた示唆は,昨年度得られた外部評価との比較を含めた分析と共に,解釈一覧の中心となるものである。解釈一覧作成に向けてはさらに下位項目ごとの詳細な量的および質的データが得られ,順調に進んでいる。また,作文サンプル一覧については,解釈一覧についてのデータ分析を進めていく中で具体的に必要とされるものが明確になってきており,昨年度順調に作文データが収集できたことも考慮して順調に進んでいると言える。昨年同様今年も(1)を優先して研究を進めることとなったが,これまでに既に「ルーブリック2009」をライティング指導のために活用したパイロットスタディは行っていること,また研究グループのメンバーの担当する授業では実際に「ルーブリック2009」を教員・学生の双方で使用していることから(2)についてもおおよその方向性は見えている。従って全体としておおむね順調であると言える。本研究の目的は,高等教育での英語教育におけるパラグラフ・ライティング指導を促進するツールと方策を開発することである。
T. cruzi 感染刺激による宿主オートリソソーム形成抑制機構の解明

シャーガス病の原因となるTrypanosomacruziには、宿主防御反応を回避し、自らが生き残る機構が存在するという仮説を立て、宿主の病原体排除機構「オートファジー」に着目した。これまでに、原虫感染細胞では宿主オートファジーが抑制され、特にオートリソソーム形成が進行しないことを明らかにした。そこで、オートリソソーム形成に関わるSNARE複合体(Stx17, VAMP8, SNAP29)に焦点をあて、複合体と相互作用する因子を探索する。その機能をin vitro、in vivoの実験系を用いて解析し、原虫感染率、病態に対する影響を評価する。
肺がん治療を目的とした経肺投与ナノ製剤の開発

肺がん治療用経肺投与ナノ粒子製剤の開発を行った。ナノ粒子の肺深部到達性を向上させるため、製剤調製時に賦形剤を添加した。賦形剤としてアミノ酸であるアルギニンとグルタミンを用いた場合、最も肺深部到達性が高くなった。製剤を肺がん細胞に投与したところ、投与量に依存して取込粒子数が増加し、400nmと比較して100、200nmのナノ粒子の取込量が高くなった。賦形剤及び粒子径を変化させることで肺内局所到達性を制御できる可能性が示唆された。肺疾患治療を目的とした経肺投与ナノ粒子製剤の開発を目的とし、ナノ粒子を経肺投与製剤化したナノコンポジット(NC)粒子を調製した。装置へ充填したNC粒子量に対する、放出されたNC粒子量の割合(ED値)及び肺深部へのNC粒子到達性(FPF値)を改善するために製剤への修飾検討を行った。従来法でナノ粒子調製時に分散安定剤として用いていたポリビニルアルコール(PVA)を、アルギニン(Arg)に変更した。PVAを用いた場合(ED値96%、FPF値15%)と異なり、Argを用いて得られたナノ粒子懸濁液をそのままスプレードライしてもNC粒子を得ることが可能であったが、ED値、FPF値共にPVAを用いた場合より低下した(ED値48.5%、FPF値5.5%)。一方、スプレードライ時に様々な種類の賦形剤(トレハロース(Tre)、バリン(Val)、トレオニン(Thr)、グルタミン(Gln))を加えてNC粒子を調製したところ、Valを除く賦形剤を加えた場合に、水に再分散が可能なNC粒子調製が可能であった。ED値及びFPF値を比較してみたところ、何れもアルギニン単独より高いED値を示し(Tre:93.0%、Thr:75.3%、Gln:90.6%)、また、FPF値はTreを用いた場合に最高値を示した(Tre:25.3%、Thr:17.6%、Gln:23.7%)。次にスプレードライ時に水へ懸濁及び溶解させるナノ粒子、賦形剤の合計濃度を変化させてNC粒子を調製したところ、濃度が1.0%の時にFPF値は最大となった(濃度:FPF=0.5%:19.7%、1.0%:30.2%、1.5%:24.5%、2.0%:25.3%)。高濃度ではNC粒子密度が上がり、空気力学的粒子径は増加するためFPF値は低下し、逆に密度が低すぎるとでは空気力学的粒子径が減少しすぎるため、最適値が存在したと考えられる。肺がん治療を目的とした経肺投与用ナノ粒子製剤の開発を行った。製剤が肺深部へ到達した後に、疾患部位への指向性を向上させるため、肺がん細胞標的化へ向けての検討を行った。具体的にはナノ粒子の粒子径及び投与量が与える肺がん細胞内到達能への影響についてを検討した。クマリン6で蛍光標識した100、200、400nmの粒子径を有するPLGAナノ粒子を、ヒト肺腺がん細胞株であるA549細胞に投与した。細胞一つ当たりに対する投与ナノ粒子個数を変化させて投与した(100nmでは3,0001,500,000、200nmでは3,000500,000、400nmでは3,00050,000)。ナノ粒子投与後、30分間37°Cでインキュベーションし、細胞内からクマリン6を抽出して定量したところ、粒子取り込み数は投与個数濃度に依存して増加した。4°Cでも同様の検討を行い、ナノ粒子取り込み数を算出して37°Cの結果から差を取ってみたところ、各粒子径において飽和取り込み個数が存在することが確認され、100nmでは約80,000個/細胞、200nmでは約14,000個/細胞、400nmでは約1,300個/細胞となった。投与個数に対する取込効率も粒子径が小さい粒子のほうが比較的高いことが確認された。各粒子径のナノ粒子投与量を一定にして投与してみたところ(0.011ng/cell)、400nmより100nm、200nmの粒子細胞内到達量は高かったが、100nm、200nmの二者間に有意差は確認されなかった。
看護専門能力の育成とマンパワー確保に関する研究

看護職の専門能力は,卒後臨床に入ってから,多くの経験と時間,研修・指導を得て,得られる能力である。このような専門能力をもった看護職が退職してしまうということは,蓄積された能力,投入された資源を失うという意味から,当該病院・病棟として,きわめて大きな損失である。平成11年度研究では,専門性育成と退職による損失を経済的に評価しようと試みた。対象病院は,国立の総合病院の3施設,調査対象期間は平成10年度の1年間である。調査票は看護部長用と婦長用を用意した。調査票の回収率は,看護部長調査票は3病院とも回収出来,看護婦長用のそれは,各病院それぞれ,85.7%(14部署中12),100.0%(16部署中16),100.0%(28部署中28)であった。新人ナースに直接・間接に投入した資源,および退職に伴う費用は,(1)リクルート諸活動,(2)新採用に伴う活動,(3)オリエンテーション・研修,(4)新人の生産性減少に伴う支援量,(5)退職に伴う活動,(6)欠員期間の支援量の6項目のカテゴリーに分類し,それぞれの費用を算出後,その合計額を看護職が退職した場合の損失総費用とした。その結果,3つの病院の退職者1人当たり総費用は,それぞれ,1,614,9631,637,727円,1,331,5031,345,522円,1,386,3181,395,682円であった。これら総費用のうち,「(4)新人の生産性減少に伴う支援量」が総費用の84.094.5%と大きな割合を占めた。平成12年度研究では,優れた看護実践をしていると看護部が判断した「熟練ナース(臨床実習指導を経験している臨床経験5年以上のナース)」18名に面接聞き取り調査を行い,「新人」から「熟練」までの「主観的看護能力ののび」を指標化し,「熟練ナース」が退職して「新人ナース」を採用する際の能力の損失を概算した。その結果,就職してから1年目における「主観的看護能力」は,現在を100%として3.560.0%,平均23.75%(SD13.8)であった。また,現在値(100%)に達するまでの年数は4.321.0年,平均10.5年(SD4.51)であった。看護職は臨床の場において,専門能力を発揮し,日々の仕事をしている。こうした能力は,卒後臨床に入ってから,多くの経験と時間,研修・指導を得て,得られる能力である。こうした専門性育成と退職による損失を経済的に評価しようという試みが,本研究の目的である。評価のための枠組みとして,(1)リクルート諸活動,

(2)新採用に伴う活動,(3)オリエンテーション・研修,(4)新人の生産性減少に伴う支援量,(5)退職に伴う活動,(6)欠員期間の支援量の6つのカテゴリーを設定した。各カテゴリーには更に細目を設け,それぞれに投入された人員,時間,経費を調査し,これらを費用に換算し,その合計額を看護職が退職した場合に,それを補うために1年間に必要となる総費用とした。対象病院は国立の総合病院の3施設,調査対象期間は平成10年度の1年間,調査票は看護部長並びに看護婦長によって記入された。看護部長記入の調査票は3病院とも回収可能であり,看護婦長用の調査票回収率は,各病院それぞれ,85.7%(14部署中12),100.0%(16部署中16),93.3%(30部署中28)であった。現在,得られたデータの解析を行っている。看護職の専門能力は,卒後臨床に入ってから,多くの経験と時間,研修・指導を得て,得られる能力である。このような専門能力をもった看護職が退職してしまうということは,蓄積された能力,投入された資源を失うという意味から,当該病院・病棟として,きわめて大きな損失である。平成11年度研究では,専門性育成と退職による損失を経済的に評価しようと試みた。対象病院は,国立の総合病院の3施設,調査対象期間は平成10年度の1年間である。調査票は看護部長用と婦長用を用意した。調査票の回収率は,看護部長調査票は3病院とも回収出来,看護婦長用のそれは,各病院それぞれ,85.7%(14部署中12),100.0%(16部署中16),100.0%(28部署中28)であった。新人ナースに直接・間接に投入した資源,および退職に伴う費用は,(1)リクルート諸活動,(2)新採用に伴う活動,(3)オリエンテーション・研修,(4)新人の生産性減少に伴う支援量,(5)退職に伴う活動,(6)欠員期間の支援量の6項目のカテゴリーに分類し,それぞれの費用を算出後,その合計額を看護職が退職した場合の損失総費用とした。その結果,3つの病院の退職者1人当たり総費用は,それぞれ,1,614,9631,637,727円,1,331,5031,345,522円,1,386,3181,395,682円であった。これら総費用のうち,「(4)新人の生産性減少に伴う支援量」が総費用の84.094.5%と大きな割合を占めた。平成12年度研究では,優れた看護実践をしていると看護部が判断した「熟練ナース(臨床実習指導を経験している臨床経験5年以上のナース)」18名に面接聞き取り調査を行い,「新人」から「熟練」までの「主観的看護能力ののび」を指標化し,「熟練ナース」が退職して「新人ナース」を採用する際の能力の損失を概算した。その結果,就職してから1年目における「主観的看護能力」は,現在を100%として3.560.0%,平均23.75%(SD13.8)であった。また,現在値(100%)に達するまでの年数は4.321.0年,平均10.5年(SD4.51)であった。
ミダゾラムの樹状細胞に体する抑制作用の免疫応答への影響

(1)免疫応答の高感度検出系の確立鶏卵白アルブミン(OVA)に対するT細胞受容体を高発現するトランスジェニックマウスを購入しこれを繁殖させた。このトランスジェニックマウスより採取したT細胞を通常マウスに移植する。このマウスに対してOVAと免疫アジュバントで免疫するトランスジェニックマウスに成立してくる免疫応答をOVAに対するテトラマー(主要組織適合抗原複合体の4量体)を用いてフローサイトメトリーによって検出する系を確立した。(2)樹状細胞を用いた免疫プロトコールの確立骨髄に由来する樹状細胞をマウス骨髄からGM-CSFによって誘導し、この樹状細胞にモデル抗原を取り込ませたのちLPSで刺激して動物に投与する。この樹状細胞の投与を1週間の間隔で2回行いマウスを免疫する。現段階では(1)の高感度の検出系による解析はまだであるが、IFN-γに対するELISPOT法を用いた検討によりこの免疫法でモデル抗原に対する免疫は成立していることが確認された。(3)上に示した新しい解析系の確立に加えて鎮静薬であるミダゾラムが骨髄に由来する樹状細胞に対して与える影響を詳細に解析し、さらに樹状細胞によって引き起こされる個体レベルでの免疫応答にミダゾラムは影響しうることを示した。さらにミダゾラムの樹状細胞に対する作用はGABA系を介したものではなく、末梢性ベンゾジアゼピン受容体のシグナル伝達を介したものであることを示唆する結果を得た。(4)敗血症が粘膜免疫応答に与える影響を解析した。マウスに敗血症を腹膜炎により誘導される敗血症を誘導する。このマウスにコレラ毒素をアジュバントとしてモデル抗原(鶏卵白アルブミン)を鼻腔粘膜に投与して系粘膜免疫を行った。誘導されてくる免疫応答は脾臓とリンパ節に誘導されてくるOVA特異的T細胞をOVAに対する主要組織適応抗原4量体(OVAテトラマー)を用いて検出した。敗血症を誘導しない偽手術を受けたマウスでは粘膜免疫応答が通常通り誘導されたのに対して、敗血症を誘導したマウスでは粘膜免疫応答の誘導は低下していた。この結果から敗血症によって粘膜免疫応答が低下することが示された。
臓器内部血流のin situ可視化にて胎児手術成績向上を目指した特殊内視鏡の開発

本研究では,臓器内部の血流,特に子宮内胎児手術の代表的な症例である,双胎間輸血症候群(TTTS)の胎盤吻合血管レーザ凝固術において,吻合血管の血流を可視化する蛍光内視鏡システムを開発した.本蛍光内視鏡にて妊娠ウサギの胎盤血流観察を行った結果,通常内視鏡より細かな血管像を確認することが可能であった.将来,この手法を用いることで双胎間の吻合血管の焼き残しなく,より適切な血管焼灼が可能となり,胎児予後の更なる改善が期待される.本研究では,臓器内部の血流,特に子宮内胎児手術の代表的な症例である,双胎間輸血症候群(TTTS)の胎盤吻合血管レーザ凝固術において,吻合血管の血流を可視化する蛍光内視鏡システムを開発した.本蛍光内視鏡にて妊娠ウサギの胎盤血流観察を行った結果,通常内視鏡より細かな血管像を確認することが可能であった.将来,この手法を用いることで双胎間の吻合血管の焼き残しなく,より適切な血管焼灼が可能となり,胎児予後の更なる改善が期待される.本研究では、ヒトを含む動物臓器内部の血流、特に子宮内胎児手術の代表的な症例である、双胎間輸血症候群(TTTS)の胎盤吻合血管レーザ凝固術において、吻合血管の血流を可視化する特殊内視鏡に関する装置開発を目的とした。生体組織中において近赤外波長領域(800900nm)に蛍光を発するインドシアニングリーン(ICG)を光造影剤として用いるICG蛍光画像化手法を利用することで、近赤外光に対して吸光度が低い血中ヘモグロビンを可視化するICG蛍光硬性鏡の開発を行った。内視鏡としては直径10mmの硬性鏡をベースとして試作を行った。光源には通常用いられるキセノン白色光源に、蛍光帯域である800nm超の長波長をカットするローパスフィルタと光量調整板を加えた。撮像部には400950nmの広い帯域に感度を有するCCDカメラを用い、カメラの直前に可視光透過用ローパスフィルタと近赤外蛍光透過用ハイパスフィルタを電気的に切り替え可能な機構を搭載した。また、取得した画像の調整用に外部コントローラを用意し、従来の内視鏡と同様のコンパクトな構成とした。蛍光ファントムを用い、可視光モード時と蛍光モード時で画像を明瞭に切り替え可能であることを確認した。また、妊娠カニクイザルから娩出した胎盤を用い、混濁した羊水に浸した状態で画像の評価を行なった。なお、この胎盤は医薬基盤研究所霊長類医科学研究センターの規定に従って採取され、供与されたものである。可視光モードでは全く見えない胎盤表面の血管が、蛍光モードに切り替えることで明瞭に観察することができた。さらに胎盤表面から数mmの深部を通る血管も観察可能であり、子宮内環境下でのTTTS治療に有効であることを確認した。成果発表としては、国内学会で1件(平成18年12月)、国際学会で1件(平成19年4月)発表を行なった。また、現在、海外論文誌への投稿を1件準備中である。本研究では、ヒトを含む動物臓器内部の血流、特に子宮内胎児手術の代表的な症例である、双胎間輸血症候群(TTTS)の胎盤吻合血管レーザ凝固術において、吻合血管の血流を可視化する特殊内視鏡に関する装置開発を目的とした。内視鏡として直径5mmの硬性鏡をベースとして試作を行った。光源は前年度より高出力のキセノン白色光源を使用した。内視鏡直径が小さくなると、前年度までの撮像用CCDカメラでは明るさが不十分になるため、高感度EM-CCDカメラの適用可能性について試作機を用いて検討を行った。また、特殊内視鏡のレンズ系とカメラ部分の焦点調整のために新たに特殊アダプターを使用した。蛍光ファントムを用い、可視光モード時と蛍光モード時で、特殊アダプターにより両者の焦点が合うことを確認した。蛍光モードにて、胎盤表面の血管が、EM-CCDカメラ試作機を用いると従来のCCDに比べ明瞭に観察することができ、本研究の目的達成のためにはEM-CCDを用いた特殊内視鏡システムが非常に有効であることを確認した。成果発表としては、国内学会で1件(平成19年10月)、国際学会で2件(平成19年5月、11月)発表を行なった。

生体組織中において近赤外波長領域(800900nm)に蛍光を発するインドシアニングリーン(ICG)を光造影剤として用いるICG蛍光画像化手法を利用することで、近赤外光に対して吸光度が低い血中ヘモグロビンを可視化するICG蛍光硬性鏡の開発を行った。3年計画の最終年度である本年度は、昨年度までの開発要素を組み合わせて可視光・蛍光観察モード切替機能付・高感度特殊内視鏡システムを構築し、システム総合評価と動物実験における胎盤観察評価を行った。妊娠ウサギを用いた動物実験では、昨年度までに確立した蛍光観察の実験系に基づき、可視光・蛍光モード切替時の画像比較、高感度化を確認した。また、安全性を確保するために、臍帯ではなく、妊娠母体の耳静脈からICGを注入し、胎盤血管部分の黒抜け画像観察、及び画像の時系列変化観察も並行して行った。さらに、ICGの妊娠中の投与に関する安全性は確立されていないことから、臍帯へのICG移行について評価を行った。その結果、妊娠ウサギ母体は、ヒト成人の測定で得られるようなICGの肝代謝、血漿消失のパターンを呈していた。一方、臍帯側すなわち胎仔側ではICGは検出されず、その移行はほぼ生じないと考えられた。
安静時心拍数がメタボリック症候群を進展させるかの疫学的研究

安静時心拍数がメタボリック症候群を進展させるか否かについて、一般住民検診により検討した。住民検診を実施し、受診者計1943人のデータ収集、解析を行った。受診者の安静平均心拍数は64.7±10/分で、60未満、61-69、70-79、80/分以上の4群に分けて各項目との関連について解析を行った。年齢および性で補正した安静時心拍数は、心拍数が多い群ほど、収縮期および拡張期血圧、尿酸値、空腹時血糖、インスリン値、HOMA指数、LDLコレステロール値、アルドステロン値、活性型レニン値が有意に上昇していた。安静時心拍数は、メタボリック症候群を構成する血圧、インスリン抵抗性や脂質代謝と明らかに関与しており、交感神経活性と関連するアルドステロン値、活性型レニン値とも有意な関連を認め、交感神経活性がメタボリック症候群の進展に関連している可能性が示唆された。しかし20092011年までの観察期間では、経年数が短くメタボリック症候群を発症した人数は少なく、心拍数とメタボリック症候群の発症進展に有意な関連は得られなかった。今後も追跡調査を行う予定である。心拍数の増加は心・血管病の予知因子であるという報告がある。関係の背景に、高心拍数が肥満、交感神経活性、高血圧などに有意に関連しているという点が示唆されている。この代謝異常の重積は内臓肥満を中心とした肥満症、高血圧、脂質代謝および糖代謝異常の集合体であり、近年、メタボリック症候群として注目を集めている。その基となるメカニズムは明らかにされていないが、交感神経活性がメタボリック症候群の鍵を握っている可能性がある。少数の横断研究では、高心拍数とメタボリック症候群の関係は報告されているが、縦断研究では、未だに明らかではない。そこで我々は一般住民を対象とした疫学的縦断研究を行うことにより、交感神経活性がメタボリック症候群への進展に関連しているという仮説を立て、それを実証することを本研究の目的とした。本研究に、大規模な疫学調査は必須であり、平成11年に大規模検診を行った福岡県田主丸町において、4月より約半年かけ、入念な準備のもと40歳以上の男女約2000人を対象としての大規模住民検診を実施した。受診者は計1943人で、すべての受診者に問診、各身体変量の計測、採血による脂質値、血糖値を含めた一般生化学検査、心エコー、頚動脈エコー検査、Food frequency法による栄養調査などを行った。また我々は平成14年より毎年7月に、長崎県宇久島にて住民検診を行っており、延べ1,400人の住民検診受診者のデータの集積がある。平成21年も7月に実施し、計207人の受診が得られている。この大規模検診によって得られた検査値の入力、住民へのデータの還元、データの解析、分析結果の学会発表を平成22年度に行う予定である。心拍数の増加は心・血管病の予知因子であるという報告があり、高心拍数が肥満、交感神経活性、高血圧などに有意に関連しているという点が示唆されている。この代謝異常の重積は内臓肥満を中心とした肥満症、高血圧、脂質代謝および糖代謝異常の集合体であり、メタボリック症候群として注目を集めている。その基となるメカニズムは明らかではないが、交感神経活性がメタボリック症候群の鍵を握っている可能性がある。そこで我々は一般住民を対象とした疫学的縦断研究を行い、交感神経活性がメタボリック症候群への進展に関連しているという仮説を立て、それを実証することを本研究の目的とした。福岡県田主丸町において、2009年春より約半年かけ大規模住民検診を実施した。受診者は計1943人で、全員に問診、各身体変量の計測、一般生化学検査、心エコー、頚動脈エコー検査、Food frequency法による栄養調査などを行った。受診者の安静平均心拍数は64.7±10/分で、60未満、61-69、70-79、80/分以上の4群に分けて解析を行った。

年齢および性で補正した安静時心拍数が多い群ほど、収縮期および拡張期血圧、尿酸値、空腹時血糖、インスリン値、HOMA指数、LDLコレステロール値、アルドステロン値、活性型レニン値が有意に上昇していた。つまり、安静時心拍数は、メタボリック症候群を構成するコンポーネントである血圧、インスリン抵抗性や脂質代謝と明らかに関与しており、交感神経活性と関連するアルドステロン値、活性型レニン値とも有意な関連を認め、交感神経活性がメタボリック症候群の進展に関連している可能性が示唆された。結果は我々の研究室から第33回日本高血圧学会総会で発表した。しかし20092011年までの観察期間では、経年数も短くメタボリック症候群を発症した人数も少なく、有意な関連は得られなかった。今後も追跡調査を行う予定である。
ヒトの触覚の触感覚認識機構を模倣した高機能・高感度触覚センサの開発

本研究では,カーボンマイクロコイル(CMC)を用いた触覚センサの応答特性を評価する装置を開発して,CMCセンサ素子を数μmから数十μm微小に圧縮変形したときの力と出力信号の関係を明らかにした.またヒトの触感覚認識機構については,指先の指紋の縞模様に着目し,ステップ状の数μmの微小な段差を指先に呈示し弁別する心理物理実験を行って,指紋の縞模様が触感覚認識機構に及ぼす影響を定量的に明らかにした.本研究では,カーボンマイクロコイル(CMC)を用いた触覚センサの応答特性を評価する装置を開発して,CMCセンサ素子を数μmから数十μm微小に圧縮変形したときの力と出力信号の関係を明らかにした.またヒトの触感覚認識機構については,指先の指紋の縞模様に着目し,ステップ状の数μmの微小な段差を指先に呈示し弁別する心理物理実験を行って,指紋の縞模様が触感覚認識機構に及ぼす影響を定量的に明らかにした.ヒトの触覚が得意とする「つるつる・ざらざら」といった数μmの微小な凹凸のセンシングや,物体把持のときに重要と考えられる微小な初期滑りのセンシングなど,ヒトの触覚の高機能・高感度な触感覚認識機構を解明し,その認識機構の仕組みをカーボンマイクロコイル(CMC)を用いた触覚センサのセンサ素子の設計・開発に役立て,ヒトの触覚の触覚認識機構を模倣した高機能・高感度な触覚センサを開発することを本研究の目的とする。本研究では,心理物理実験法によるヒトの触覚の触感覚認識機構の解明,およびCMCセンサ素子における数μmから数十μmの微小な機械的変形に対する応答特性の評価を行う。これら一連の研究により,微小な凹凸や滑りなどのセンシングに適した構造をもつCMCセンサ素子を開発して,ヒトの触感覚認識機構を模倣した高機能・高感度な触覚センサを開発する。本研究ではまず,CMCセンサ素子の数μmの微小な刺激に対する触覚・圧覚特性を定量的に評価する装置を新しく開発した。本装置では,ハーモニックギヤ付の高精度モータを組み合わせた高精度楔形Zステージ,および高精度X-Yテーブルを用いて,CMCセンサ素子の圧縮方向,せん断方向それぞれの変形量および変形速度の4つのパラメータを同時に制御可能とした。また,高精度力覚センサあるいはロードセルを用いて,CMCセンサ素子への接触荷重をリアルタイムに計測可能として,CMCセンサ素子と微小な凹凸を表面に設けた対象物との相対的な運動に対して,接触荷重,移動速度および移動方向の三つのパラメータを同時に制御可能とした。このように,CMCセンサ素子の圧覚特性および触覚特性を定量的に測定可能な評価装置を開発した。なお,測定精度の向上を図るため,高精度レーザ測定器を利用し,変位量を非接触で測定して,X-YテーブルやZステージに生じるガタツキや誤差を補正できように工夫してある。ヒトの触覚が得意とする「つるつる・ざらざら」といった数μmの微小な凹凸のセンシングや,物体把持のときに重要と考えられる微小な初期滑りのセンシングなど,ヒトの触覚の高機能・高感度な触感覚認識機構を解明し,その認識機構の仕組みをカーボンマイクロコイル(CMC)を用いた触覚センサのセンサ素子の設計・開発に役立て,ヒトの触覚の触覚認識機構を模倣した高機能・高感度な触覚センサを開発することを本研究の目的とする.本研究では,心理物理実験法によるヒトの触覚の触感覚認識機構の解明,およびCMCセンサ素子における数μmから数十μmの微小な機械的変形に対する応答特性の評価を行った,まずCMCセンサ素子の圧覚特性については, CMCセンサ素子を微小に圧縮変形させたときの力と出力信号の関係を明らかにした.実験では, CMCセンサ素子をアクリル平板に数μmから500μm程度垂直に押し付けて圧縮変形させて,そのときのCMCセンサ素子とこの素子の下に設置した力覚センサの出力信号をそれぞれ測定した.その結果,数μmの微小変形に対する出力信号の変化幅が圧縮量に依存し,その変化幅は圧縮量が大きくなるほども大きくなることがわかった.さらにこの特性はセンサ素子にかかる力と相関があることがわかった,つぎにヒトの触感覚認識機構については,触運動の方向により指先の変形の仕方が異なる点に着目し,ステップ状の数μmの微小な段差を呈示することが可能な微小段差呈示装置を用いた心理物理実験を行って,触運動の方向が触感覚認識機構に及ぼす影響を定量的に明らかにした.実験では, 10μm程度の微小段差を指の長手方向に対して垂直に移動させた場合と並行に移動させた場合の弁別閾を求めた,その結果,垂直に移動させる場合よりも並行に移動させる場合のほうが弁別閾は小さくなり,指先を指の長手方向に動かすほうが微小な刺激を弁別しやすいことが示唆された.
心肺停止後症候群の予後における脳障害の経時的炎症病態と多元的評価

心肺停止は最も重症の病態であり、様々な試みにより経年的に予後は改善傾向とはいえ、1か月生存率は10%程度である。また自己心拍再開後に生存退院し、社会復帰できる患者は極めて少ない。低酸素性脳症など、高サイトカイン血症を主体とした心停止後症候群(Post Cardiac Arrest Syndrome: PCAS)により、救命困難、社会復帰不可能な状態に陥るのが現状である。PCAS早期に生命・神経学的予後を予測するモデルを作ることを目的に、持続脳波モニタリングや脳損傷のマーカーであるNSE測定、視神経鞘径測定により多元的な評価と、神経細胞障害から浮腫に至るまでの経時的炎症病態の変化を非侵襲的に細胞解析も併用して解明する。
正標数代数多様体の変形族の構造と標数0への持ち上げ可能性

有理曲線上の自明な代数曲線束によって純非分離被覆される非特異極小代数曲面の分類について,自明な曲線束がもつ2方向の自然な射影から誘導される2方向のファイブレーション(有理曲線上の代数曲線ファイブレーションと,代数曲線上の有理曲線ファイブレーション)およびアルバネーゼ射を活用することで,対象とする曲面の大まかな分類を得た。一般の代数曲線束の詳細な分類については今後さらなる研究が必要である。有理曲線上の自明な代数曲線束によって純非分離被覆される代数曲面の分類に向けて,いくつかの準備的研究を行った。まずは分類の手法として,以前楕円曲線束に用いた手法と類似のものの有効性を検討した。楕円曲線束の場合のポイントは,アルバネーゼ射によるファイバー構造を楕円ファイブレーションとともに用いること,純非分離射を重複度が標数pと等しい射の合成に分解して,度数pの純非分離射で被覆される曲面の組の系列に対し各々の組にRudakov-Shafarevich理論を適用すること,の2点であった。本研究で扱う,有理曲線上の代数曲線束で純非分離的に被覆される曲面においても,有理曲線からアーベル多様体への写像が定数写像しかないことより,楕円曲線束の場合の手法の2つのポイントは本研究の対象でも同様に適用可能であると思われたが,楕円曲線束の場合と違い,一般の代数曲線束ではアルバネーゼ多様体の次元は2以上となってしまうので,純非分離射へのRudakov-Shafarevich理論の適用による分類が難しくなることが問題であった。今年度の研究における考察により,自明な代数曲線束で純非分離的に被覆される場合は,自明な束の射影射から誘導される曲線への写像とアルバネーゼ射を組にして扱うことで,この困難を乗り越られそうだとの見通しをつけるごとができた。また,アルバネーゼ多様体が2次元となる場合の例を具体的に計算する方法の検討を検討し,微分加群層へのp閉ベクトル場の作用の計算を開始した。有理曲線上の自明な代数曲線束によって純非分離被覆される代数曲面の分類に向けての準備的研究を行った。昨年度に引き続き,分類の手法として,以前楕円曲線束に用いた手法と類似のものの有効性を検討した。本研究で扱う,有理曲線上の代数曲線束で純非分離的に被覆される曲面においても,有理曲線からアーベル多様体への写像が定数写像しかないことより,楕円曲線束の場合の手法の2つのポイントは本研究の対象でも同様に適用可能であると思われたが,楕円曲線束の場合と違い,一般の代数曲線束ではアルバネーゼ多様体の次元は2以上となるため,楕円曲線束の場合には比較的容易に証明できた補助命題を一般曲線の場合に一般化することが難しく,この障害を克服できるかどうかが重要なポイントとなっていた。今年度の研究では,自明な代数曲線束で純非分離的に被覆される場合に。自明な束の射影射から誘導される曲線への写像とアルバネーゼ射を組にして扱うことでこの困難を乗り越ようとしたが,完全な解決には至らなかった。ただし,一部の補題については。楕円曲線束での主張がそのまま一般化できることを確認できた。有理曲線上の代数曲線束によって純非分離被覆される代数曲面の分類を行うことを目標とし,楕円曲線東の場合の研究において有効な手法であった,アルバネーゼ射によるファイバー構造を有理曲線上のファイブレーションとともに用いること,純非分離射を重複度が標数pと等しい射の合成に分解して,度数pの純非分離射で被覆される曲面の組の系列に対し各々の組にRudakov-Shafarevich理論を適用すること,の2つの手法の一般化を足がかりにして,有理曲線上の自明な代数曲線束に対して度数pの純非分離射の合成射を適用して得られる像がどのような曲面になるかの分類を進めた。その結果として,自明な曲線束がもつ2方向の自然な射影から誘導されるを方向のファイブレーション(有理曲線上の代数曲線ファイブレーションと,代数曲線上の有理曲線ファイブレーション)を利用するとともに,アルバネーゼ射も活用することで,得られる非特異極小曲面についての大まかな分類が得られた。この分類が得られた後, p閉ベクトル場の作用を具体的に調べて事例を整理し,一般の代数曲線束についての詳細な分類にとりかかる予定であったが,これについては,研究期間の間には十分な結果が得ちれなかった。また,一般の有理繊織曲面の場合にはどのような性質をもつ一般型代数曲面が生み出されることになるのかや,商多様体の非特異モデルの各種不変量がどのようになるかについでも一部の不変量の計算を除いて十分な結果を得ることができなかった。これらについては今後さらなる研究が必要である。
ヒストンH3メチル化酵素Whsc1による転写ネットワーク制御

4p-症候群の原因遺伝子であるヒストンメチル化酵素Whsc1の機能を、心臓形成を支配するホメオドメイン転写因子Nkx2.5とWhsc1の協調した転写制御に焦点を当てて明らかにするために、ES細胞の心筋細胞分化系を試みた。Whsc1を欠損したES細胞はHanging drop法では拍動心筋細胞への分化が抑制されたが、Flk+細胞を抗体を用いてFACSソートし、Op9細胞をフィーダー細胞に用いて、さらにCSAを添加すると、野生型ES細胞と同等に心筋細胞に分化し、単純に心筋細胞への分化が遺伝子欠損により起きる訳でないことが判明した。従って、Whsc1が単純に細胞分化に伴う遺伝子の選別に機能するのではなく、予想したように、何かの調整に機能することが示唆された。また一方で、Whsc1の細胞局在解析では、Whsc1が細胞分裂期に凝集した染色体に局在することを見出した。しかもWhsc1抗体で染色されない染色体が1本存在する。以上の結果は細胞分裂期には転写は一般には不活性化されることから、Whsc1が転写のメモリーに機能することを示唆するとともに、不活性X染色体ではWhsc1が排除されている可能性を示す。今後、細胞周期およびX染色体不活性か、再活性化過程で、Whsc1の細胞局在を追跡する目的で、Whsc1を認識するモノクローナル抗体の作成を試み、細胞染色検定により有効な抗体の絞り込みを行いつつある。
脳幹てんかん焦点モデルを用いた発作全般化機序の基礎的研究

我々は、脳幹網様体にカイニン酸を微量注入して、脳幹内にてんかん焦点を作成し、その発作は中心脳性てんかんのモデルとなりうることにより、脳幹網様体は焦点発作の二次性全般化に密接に関与していることを明らかにした。1.Nembutal麻酔下に定位脳手術を行ない、脳幹網様体にカニューレを刺入し、慢性猫を作成した。術後7日以上経ってからカニューレを介して、12μgのカイニン酸を脳幹網様体内に注入し、てんかん発作重積状態を誘発し、ビデオ記録およびデータレコーダーによる脳波記録を連続して行なった。脳波上は、全般化発作の重積状態となり発作時の行動は両側同期しておこる強直間代性発作であり、全般てんかんの様の発作の発展を示した。2.脳幹網様体内に生理的食塩水を注入したコントロール群とカイニン酸を注入したてんかん焦点群で、脳幹網様体と視床と大脳感覚運動領とのspike-relatedevoked responseを記録した。すると、脳幹のスパイク放電は15msecの潜時で視床および大脳皮質に伝播することより脳幹網様体はてんかんの二次性全般化に密接に関与していることを明らかにした。3.ラットの脳幹網様体に0.5μgのカイニン酸を注入し脳幹網様体てんかん焦点を作成し、発作の発展を^<14>C-deeoxyglucoseを用いたaut oradiographyにて局所脳糖代謝の亢進部位として観察した。すべてのラットに強直性発作を中心とした全身痙攣発作が誘発されたので、この時期にAut oradiogramを検討した。発作は、脳幹網様体から速やかに視床に伝播した後、引き続き両側大脳皮質に伝播し、てんかん性の興奮を誘発することが確認された。本研究により、脳幹網様体もてんかん発作に関与していることが明らかになり、全般てんかんや二次性全般化発作の機序の解明および治療を計画する上で、重要な情報が得られた。我々は、脳幹網様体にカイニン酸を微量注入すると、脳幹内にてんかん焦点を作成できること、またその発作は中心脳性てんかんのモデルとなりうることより、脳幹網様体は焦点発作の二次性全般化に密接していることを明らかにした。本研究では、このモデルを用いて、以下の結果が得られた。Nembutal麻酔下に定位脳手術をおこない脳幹網様体にカニュ-レを刺入し慢性猫を作成した。術後7日以上経ってからカニュ-レを介して12μgのカイニン酸を脳幹網様体内に注入してんかん発作重積状態を誘発し、ビデオ記録およびデ-タレコ-ダ-による脳波記録を連続して行なった。脳波上は、全般化発作の重積状態となり、発作時の行動は両側同期しておこる強直間代性発作であり、全般てんかんの様の発作の発展を示した。さらに、脳幹網様体内に生理的食塩水を注入したコントロ-ル群とカイニン酸を注入したてんかん焦点群で、脳幹網様体と視床と大脳感覚運動領との間でspikeーrelated evoked responseを記録した。すると、脳幹のスパイン放電は数msecの潜時で視床および大脳皮質に伝播することより脳幹網様体はてんかんの全般化に密接に関与していることを明らかにした。さらに、大脳皮質に左右6チャンネルの電極をおいて発作の広がりを、マッピング法を用いて分析したところ、発作波は殆ど左右同期して出現することから、全般てんかんと類似した発作発展を示すことを明らかにした。