hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
転写因子を標的とする蛍光相関分光法を用いた新規病態検査法の開発

(1)蛍光相関分光法を用いて、転写因子活性の測定法の基礎的検討を行った。既存のELISA法とほぼ変わらないものであった。(2)既存のELISA法を用いて、関節リウマチ患者の末梢血単核球における転写因子活性を測定した。転写因子NFkBはRA患者で様々な値を取り、STAT3は高値の傾向があった。そこで、生物製剤投与前後で、4人の患者で啓示的に転写因子NFkB、STAT3、AP-1、NFATを測定したところ、NFkBが活動性を反映すると考えられた。そこで、NFkBファミリー5種類について測定したところ、p50とp65のみが末梢血で上昇しており、この2者は相関することが判明した。結果として、RAに指標にはNfkBp65が最も適切な転写因子と考えられた。(3)そこで、RA患者の治療前後で臨床指標と、転写因子活性を測定したところ、現在のところ良好な相関が得られた。今後症例の蓄積により、反応性予測へと結び付けたい。1,蛍光相関分光法(Fluorescence Correlation Spectroscopy; FCS)を用いた測定系の確立のため転写因子活性の測定系の基礎的検討を行った。主にリコンビナント蛋白を用いて行い良好な標準曲線を得た。2,CSによる健常人培養リンパ球核抽出液を用いた転写因子活性測定系の確立。さまざまな条件化で正常人リンパ球を活性化し、核抽出物を単離し転写因子活性を測定した。同時に市販の転写因子ELISAを用いてその確からしさを検討した。3,FCSによる健常人及び患者末梢血単核球の転写因子活性測定。その予備段階として、関節リウマチ患者末梢血から単核球を採取し、核内蛋白を抽出し、さまざまな転写因子をELISA系で測定した。同時に健常人をコントロールとした。測定項目は、NFkB、NFAT、AP-1、STAT1、STAT3、IRF-1である。なかでもRA患者においてはNFkB、STAT3の高値例が存在することが明らかとなった。そこで、さまざまな治療群における転写因子活性を測定する計画とし検体を採取している。4,来年度は未治療RA群の検討、生物製剤治療前後の検討、生物製剤使用郡における反応性との関連に焦点を当てて検討していく予定である。(1)蛍光相関分光法(Fluorescence Correlation Spectroscopy;FCS)を用いた測定系の確立のため転写因子活性の測定系の基礎的検討を行った。(2)FCSによる健常人培養リンパ球核抽出液を用いた転写因子活性測定系の確立。(3)FCSによる健常人及び患者末梢血単核球の転写因子活性測定。そこで、さまざまな治療群における転写因子活性を測定する計画とし検体を採取した。(4)生物製剤投与前後の平時的変化を5名の患者で観察したところ、NFkBの活性が低下する例が見られた。しかしながら、STAT、AP-1では著明な変化は認めなかった。(5)そこでNFkBのいずれが活性変化するのかを数種類のキットを用いて検討するために、サンプルを収集した。(1)蛍光相関分光法(Fluorescence Correlation Spectroscopy ; FCS)を用いた測定系の確立のため、転写因子活性の測定系の基礎的検討を行った。さまざまな条件化で、正常人リンパ球を活性化し、核抽出物を単離し転写因子活性を測定した。

その予備段階として、関節リウマチ患者末梢血から単核球を採取し、核内蛋白を抽出し、さまざまな転写因子をELISA系で測定した。同時に、健常人をコントロールとした。測定項目は、NFkB、NFAT、AP-1、STAT1、STAT3、IRF-1である。なかでもRA患者においてはNFkB、STAT3の高値例が存在することが明らかとなった。(4)生物製剤投与前後の平時的変化を10名の患者で観察したところ、NFkBの活性が低下する例が見られた(5)NFkBのいずれが活性変化するのかを数種類のキットを用いて検討するために、サンプルを収集した。P65ga主たる活性化NfkBであることが判明した。
光学的手法によるナノスケールシリコン結晶中の不純物の電子状態に関する研究

量子サイズ効果が顕著にあらわれるサイズ領域の半導体に不純物をドーピングすると、その振る舞いはバルク結晶にドーピングしたものと大きく異なる。特に、ドナー、アクセプターのイオン化エネルギーの増大等の本質的な変化が顕著に現れる。本研究は、ボトムアップ方式により不純物をドーピングしたシリコンナノ結晶を作成し、シリコンナノ結晶中の不純物原子の電子状態について基礎的な情報を得ることを目的とする。本研究が対象とするサイズ領域では電気的な評価が非常に困難であるため、光(電磁波)を用いた研究が重要になる。本年度は不純物をドーピングしたシリコンナノ結晶の電子スピン共鳴(ESR)測定よりその電子状態について知見を得ることを目的に研究を行った。その結果,以下のことが明らかになった。(1)シリコンナノ結晶では、不純物濃度が非常に高い状況においても、ESRの温度依存性はCurie則に従う。これは、シリコンナノ結晶が縮退半導体にならないことを示唆している。(2)P,B同時ドーピングシリコンナノ結晶のESRの線幅は単独ドーピングの場合に比べて広い。特に、キャリアが補償されているであろう状況において最大となる。これは、n型とp型の不純物をドーピングしたシリコンナノ結晶においては、キャリアが強く局在することを示唆している。これには、不純物の静電場による局在と量子閉じ込め効果による局在の両方が関与していると考えられる。(3)この強い局在が、室温におけるD-Aペアの強い発光の起源であると考えられる。
ダイヤモンド工具の研磨に関する研究

本研究初年度(昭和60年度)は単結晶ダイヤモンドの研磨装置の設計・製作を行った.これによりダイヤモンドの研磨特性について実験した.研磨特性については従来からも報告はあったが,研磨力と研磨量は別個に計測されていた.本研究では,これらを同時に計測するとともに,研磨中のダイヤモンドの温度を測定しこれらとも関連づけることができた.また,ダイヤモンドは研磨中に揺動運動を加えると研磨特性が変わることもわかった.ついで,次年度(昭和61年度)では研磨装置を用いて各種金属との摩擦についても実験的検討を加え摩擦実験でも本質的に研磨と同様の結果を得た.また,ダイヤモンドの個体間差を調べるため,各種ダイヤモンドを研磨した.最終年度(昭和62年度)では,各種結晶方位をもつダイヤモンド切削工具を製作し,アルミニウム合金を切削した.これらの実験的検討から次の諸事実が判明した.1.研磨実研では, (1)ダイヤモンドの研磨は揺動の有無により研磨特性が変化し,揺動させると,させないときに比べ研磨中の接線力が低減し,研磨温度が低下し研磨量を減少する.(2)研磨中の揺動による(1)の傾向は研磨が容易とされる3結晶方位(例えば{110}面の<100>方向)よりも,困難とされる結晶方位(例えば{110}面の<100>方向)の方が顕著にあらわれる. (3)ダイヤモンドの押付応力を増大させると研磨温度は上昇するが研磨力比(接線力/押付力)は低減する.(4)ダイヤモンドを連続して長時間研磨すると,非揺動研磨では研磨量は時間に比例して増大する.しかし,揺動研磨では初期のうちは研磨が進むが,その後順次研磨が進まなくなる.(5)研磨力比の大小は研磨温度の高低とよく対応し,研磨量とは逆の対応がある.(6)ダイヤモンドの研磨面粗さは,非揺動研磨より揺動研磨の方が優れている.(7)ダイヤモンドの研磨特性はいずれの原石も同様であるが,その絶対値は個体により差がある.本研究初年度(昭和60年度)は単結晶ダイヤモンドの研磨装置の設計・製作を行った.これによりダイヤモンドの研磨特性について実験した.研磨特性については従来からも報告はあったが,研磨力と研磨量は別個に計測されていた.本研究では,これらを同時に計測するとともに,研磨中のダイヤモンドの温度を測定しこれらとも関連づけることができた.また,ダイヤモンドは研磨中に揺動運動を加えると研磨特性が変わることもわかった.ついで,次年度(昭和61年度)では研磨装置を用いて各種金属との摩擦についても実験的検討を加え摩擦実験でも本質的に研磨と同様の結果を得た.また,ダイヤモンドの個体間差を調べるため,各種ダイヤモンドを研磨した.最終年度(昭和62年度)では,各種結晶方位をもつダイヤモンド切削工具を製作し,アルミニウム合金を切削した.これらの実験的検討から次の諸事実が判明した.1.研磨実研では, (1)ダイヤモンドの研磨は揺動の有無により研磨特性が変化し,揺動させると,させないときに比べ研磨中の接線力が低減し,研磨温度が低下し研磨量を減少する.(2)研磨中の揺動による(1)の傾向は研磨が容易とされる3結晶方位(例えば{110}面の<100>方向)よりも,困難とされる結晶方位(例えば{110}面の<100>方向)の方が顕著にあらわれる. (3)ダイヤモンドの押付応力を増大させると研磨温度は上昇するが研磨力比(接線力/押付力)は低減する.(4)ダイヤモンドを連続して長時間研磨すると,非揺動研磨では研磨量は時間に比例して増大する.しかし,揺動研磨では初期のうちは研磨が進むが,その後順次研磨が進まなくなる.(5)研磨力比の大小は研磨温度の高低とよく対応し,研磨量とは逆の対応がある.(6)ダイヤモンドの研磨面粗さは,非揺動研磨より揺動研磨の方が優れている.(7)ダイヤモンドの研磨特性はいずれの原石も同様であるが,その絶対値は個体により差がある.昭和60年度に完成させたX線回折装置を用い、ダイヤモンド保持具を改造ゴニオメータに取りつけ、ダイヤモンド単結晶の研磨すべき面方位を同定して、昭和61年度初期に納入されたダイヤモンド研磨盤により、研磨時の諸計測を行ってダイヤモンドの各種研磨特性を調べた。研究の進展状況および新しく得られた知見の主なものは次のとおりである。1.研磨時にダイヤモンドを揺動させると研磨特性が変る。すなわち、研磨力比(研磨時の接線応力/押付け応力=摩擦係数に相当),研磨温度および研磨量は揺動研磨では低く、非揺動研磨では高くなる。2.結晶の代表的な面である{100}{110}{111}面について、1は常に生じるとともに、研磨力比および研磨温度の低い研磨方向で研磨量が大きくなり、高い研磨方向で研磨量は低くなる。これは従来別個の実験として報告されているが、この従来の報告と逆の特性である。しかし、ダイヤモンドの研磨の難易方位は従来の報告通りであった。3.研磨面の粗さは揺動研磨の方が、非揺動研磨よりもかなり良好になる。4.各種ダイヤモンド(天然十二,天然八,人造六面体)の研磨特性に対する明らかな差違は認められなかった。5.研磨円板はダイヤモンドの擦過により、順次変質して研磨特性に影響を及ぼす。研磨距離が増大するにつれ、研磨力比および研磨温度は少し増大して飽和するが、研磨量は違った挙動を呈する。

すなわち、揺動研磨では研磨量は飽和して、研磨が進まなくなるが、非揺動研磨では研磨距離に比例して、研磨量も増大する。6.研磨特性の異方性は、研磨方向と4つのへき開面がなす角度により生じ、研磨時の研磨面に発生する段差の形態に依存することがわかった。
超高感度近赤外磁気旋光ファイバープローブの開発

本研究は、磁気旋光特性の分析化学的利用を目指して、磁気旋光ファイバープローブの開発に向けた基礎的研究を行ったものである。得られた成果を以下に述べる。1)633nmのレーザーを用いるSagnac効果の測定により、磁気旋光特性を評価する装置を製作した。2)磁性ナノ粒子分散液の磁気複屈折を、Sagnac効果により生ずる干渉の測定により高感度に測定できることを明らかにした。3)Sagnac効果の測定装置を用いて、磁気線二色性が測定できることを実験的に示した。4)850nmのレーザーと偏光保持ファイバーおよびファイバー型ポーラライザーを用いて、磁気Sagnac効果を測定するための基本的装置を構築した。初年度は、計画に従い以下の実験を実施した。1.旋光性を測定するためのファイバープローブの予備的検討を行い、装置の構成要素の一つである近赤外光源として、850nmの低エネルギーレーザーを使用することとした。ファイバーを用いるサーキュレーターを製作した。2.旋光性を保ちながら光を操作するために、偏光保持ファイバーを選定した。また、ファイバー型のポーラライザーの選定を行った。3.偏光保持ファイバーと光学測定系を結ぶためのデバイスを作製した。4.光学的モジュレーションを行う安価な方法として、シリンダー型圧電素子を用いる方法を検討した。26年度は、以下の研究を行った。1.磁気複屈折を高感度で観測するために、Sagnac干渉装置を製作した。光源にはHeーNeレーザーを用いた。偏光ビームスプリッターで等強度の光に分け、ミラーにより周回回路とし、再度ビームスプリッターを通して結合させ、45度に回転させてからウオーラーストーンプリズムにより二つのビームとし、干渉状態をオートバランス検出器で測定した。2.セロハンテープの複屈折を利用し、作製した装置がSagnac干渉を示すことを確認した。セロテープを機械的に伸ばすと、干渉縞の変化が明確に測定された。3.磁性ナノ粒子の分散液を試料とすると、磁場を印加したときに干渉が観測された。これは、磁気複屈折に起因することを、磁化曲線との比較、および磁気直線二色性スペクトルとの対応から確認した。4.光ファイバーによりSaganc干渉現象を観測するための装置の基本要素を製作した。平成27年度の研究実績を以下に述べる。1.3枚のミラーと一個のビームスプリッターおよび半波長板を用い、633nmのレーザーを光源として、Sagnac効果の測定装置を構築した。セルには厚さが1mmの石英セルを用いた。レーザーの光は、ビームスプリッターによりそれぞれ半分の強度で、偏光方向が90度異なる二本の偏光ビームとして互いに逆方向に周回するようにミラー等を設定し、再びビームスプリッターに集まってから半波長板をとおして干渉を生じさせ、ウオーラーストンプリズムに誘導して垂直および水平偏光に再度分岐させ光の強度を測定した。周回するレーザー光を透過するようにセルを設置し、ビームの方向に対して90度の方向から磁場を印加した。磁場の印加方法としては、当初は手動で永久磁石と試料セルの距離を変動させていたが、これをより再現性のよいモーター駆動の自動ステージを用いる方法に改良した。付属のソフトにより、光の強度の測定と連動させて自動ステージを駆動し、磁場の強度を変えてSagnac効果を観測することに成功した。このようにして、磁性ナノ粒子分散液の磁化曲線を自動的に取得する方法を作成した。2.この方法により、親水性および疎水性の磁性ナノ粒子の分散液のSagnac効果を測定する最適条件を検討した。その結果、磁場を印加する初期の条件としては、Sagnac回路を周回する二つのビームの干渉効果が最小の状態が望ましいことがわかった。この状態で磁場の印加を開始すると、比較的明確にSagnac効果を測定することができた。3.Saganc効果の測定システムについては基本的な部分の構築を完成し、ファイバーシステムを用いる測定に付いても基礎的な検討を行った。Sagnac干渉法により磁気複屈折を観測する基本的な装置を構築した。Sagnac干渉が測定できることを、幾つかの試料を用いて確認した。特に、磁性ナノ粒子の磁気複屈折が明確に測定できることを確認した。分析化学磁場の印加方法を自動化するとともに、Sagnac干渉の測定精度と感度を改善する。また、測定された磁気複屈折のSagnac干渉強度の解析法を検討する必要がある。さらに、ファイバーを用いて、Sagnac干渉の位置依存性を測定する方法を開発する。本年度は、準備段階として、光源、ファイバー型ポーラライザー、検出部の製作を完了した。物品費において端数が生じたため。

次年度は、磁気旋光を測定するための光学系を完成させ、典型的な磁性試料、および生体組織に類似した試料の測定を行う予定である。次年度の物品費を合わせて使用する予定である。展示のための費用において残額が生じたため。次年度は物品費として使用の予定。
オールセラミック修復における熱刺激に対するリスク予測システムの構築

口腔内の歯冠修復材料は,常に熱変化の刺激にさらされている.近年オールセラッククラウンの普及伴い,高強度のセラミックスが多く開発されているが,セラミックスクラウンの熱膨張係数は歯質よりも低く,また長期的予後について評価が確立されているメタルクラウンは歯質よりも熱膨張係数が高い.つまり,歯質の熱膨張係数に対して,メタルとセラミックスでは大小異なる熱膨張係数をしめすことより,修復材料と歯質との接着界面に発生する熱応力の挙動が全く異なる事が予想され,さらに界面破壊および辺縁漏洩による歯髄への影響を左右する危険性に着目した.各種セラミッククラウンを装着した歯質において,サーマルサイクルによる接着界面への影響を評価し,有限要素解析により,熱刺激がセラミッククラウンと歯牙にどのような影響を及ぼすか,またどのような問題点が生じるかを,応力と歪みで表される力学的側面から明らかにすることを目的とし,さらには,実験モデルに裏付けられた材料別の界面に影響を及ぼす応力値をもとに,一般性のあるリスク予測値として提唱可能か検証する.平成30年度は簡易歯冠モデルを有限要素ソフト上でモデリングし,異なる歯冠修復材料およびクラウンとインレー形態に関して,熱変化に伴う熱応力の分布の予備解析を行い,修復材料の形態によって異なる熱応力を示す事がわかった.さらに,実証実験における試料製作,実験材料,実験環境,計測方法に関して予備実験を行い実験方法の検証を開始した.平成30年度は簡易歯冠モデルを有限要素ソフト上でモデリングし,異なる歯冠修復材料およびクラウンとインレー形態に関して,熱変化に伴う熱応力の分布の予備解析を行った.結果として,外側から歯冠を覆うクラウンと内側にあるインレーとでは,熱応力が異なる挙動を示すことがわかった.今後厚みや材料による違いを検討する.さらに,実証実験における試料製作,実験材料,実験環境,計測方法に関して苦慮している.実証実験において,天然歯または牛歯を予定していたが,熱伝導率や熱膨張係数があらかじめ既存の材料を用いることで,まずは実験方法を確立する事とする.また,応力解析より,試料の形態にも影響をうけることがわかったことより,さらに予備解析を行った上で試料製作方法を再検討する必要がある口腔内の歯冠修復材料は,常に熱変化の刺激にさらされている.近年オールセラッククラウンの普及伴い,高強度のセラミックスが多く開発されているが,セラミックスクラウンの熱膨張係数は歯質よりも低く,また長期的予後について評価が確立されているメタルクラウンは歯質よりも熱膨張係数が高い.つまり,歯質の熱膨張係数に対して,メタルとセラミックスでは大小異なる熱膨張係数をしめすことより,修復材料と歯質との接着界面に発生する熱応力の挙動が全く異なる事が予想され,さらに界面破壊および辺縁漏洩による歯髄への影響を左右する危険性に着目した.各種セラミッククラウンを装着した歯質において,サーマルサイクルによる接着界面への影響を評価し,有限要素解析により,熱刺激がセラミッククラウンと歯牙にどのような影響を及ぼすか,またどのような問題点が生じるかを,応力と歪みで表される力学的側面から明らかにすることを目的とし,さらには,実験モデルに裏付けられた材料別の界面に影響を及ぼす応力値をもとに,一般性のあるリスク予測値として提唱可能か検証する.平成30年度は簡易歯冠モデルを有限要素ソフト上でモデリングし,異なる歯冠修復材料およびクラウンとインレー形態に関して,熱変化に伴う熱応力の分布の予備解析を行い,修復材料の形態によって異なる熱応力を示す事がわかった.さらに,実証実験における試料製作,実験材料,実験環境,計測方法に関して予備実験を行い実験方法の検証を開始した.平成30年度は簡易歯冠モデルを有限要素ソフト上でモデリングし,異なる歯冠修復材料およびクラウンとインレー形態に関して,熱変化に伴う熱応力の分布の予備解析を行った.結果として,外側から歯冠を覆うクラウンと内側にあるインレーとでは,熱応力が異なる挙動を示すことがわかった.今後厚みや材料による違いを検討する.さらに,実証実験における試料製作,実験材料,実験環境,計測方法に関して苦慮している.実証実験において,天然歯または牛歯を予定していたが,熱伝導率や熱膨張係数があらかじめ既存の材料を用いることで,まずは実験方法を確立する事とする.また,応力解析より,試料の形態にも影響をうけることがわかったことより,さらに予備解析を行った上で試料製作方法を再検討する必要がある平成30年度は,有限要素解析を中心に研究を行ってきたが,当初予算に挙げていた材料費に関しては,主に既存の試料を用いた材料試験が中心であったため,実証実験用の備品を購入したものの,試料製作の量産に至らなかったため,予算を控える形となった.次年度に本年度行うべきであった実験が実施される予定であるため,引き続き材料,消耗品等の購入に用いる予定である.また,来年度以降のデータ収集および学会での成果発表(日本補綴歯科学会)を予定している.
膝痛の局在の違いが痛覚過敏と膝周囲筋力に及ぼす影響

【研究の目的】変形性関節症(膝OA)の有症状者は本邦で800万人以上と報告されており、多くの患者の主訴は膝の痛みである。臨床で遭遇する頻度が高いのは膝内側に比較的限局した痛みが多く、その理由として下肢のアライメント異常に代表される生体力学的異常が重視されてきた。しかし、生体力学的異常が目立つ例にといて膝痛がないことは珍しくなく、別の疼痛発生機序の関与が考えられる。膝内側が他部位と比べて痛みの感受性が高いとの仮説をたて、高張食塩水を使ったヒト膝痛モデルを作成し、膝内側痛モデルの痛み特性および痛みが筋力に与える影響について、膝外側痛モデルを対照として比較検討した。【方法】対象は健常成人14名とし、高張食塩水(1mEq/ml) 0.5mlを膝内側痛モデルでは内側側副靭帯の脛骨付着部に、膝外側痛モデルでは腸脛靭帯の脛骨付着部に注射した。痛みの評価として、痛み強度、持続時間、分布、圧痛閾値を、筋力評価として、両側膝伸展筋力および握力を計測した。【結果】膝内側痛モデルでは、外側痛モデルと比べてより限局性の強い痛みが発生した。圧痛閾値の検討では、膝内側痛モデルのほうが広い範囲に圧痛閾値の低下を認めた。また、両モデルともに両側性の膝伸展筋力および握力の低下を認めたが、膝内側痛モデルの方が有意に筋力は低下していた。【結論】膝内側は外側と比べて痛みの感受性が強く、同じ侵害刺激であってもより強い限局性の痛みを発生する。また、膝周囲圧痛閾値の低下や遠隔部位にまでおよぶ筋力低下など脊髄より中枢の神経系に与える影響もより強く生じることが明らかになった。膝痛を有する患者の関節可動域エクササイズや筋力トレーニングを行う際に、痛みの局在を詳細に問診することの診断学的有用性の立証や、そこに潜む痛覚過敏の程度や拡がりを念頭に置く事で、これまでにない一歩進んだ理学療法が可能になる根拠の一つになったと考える。
配置を精密に制御した高分子量ヘモグロビン集合体（人工酸素運搬体）の創製

新しい分子構造を持つ人工酸素運搬体の創製を目指し、赤血球から単離したヘモグロビン(Hb)を四分岐PEGの末端に結合させ、複数のHbが精密に配置、分子間架橋された高分子量Hb集合体(aligned megadalton Hb; AM-Hb)を合成した。人工酸素運搬体としての性質を各種物性測定により評価したところ、合成されたAM-Hbは架橋剤の鎖長に依存した分子サイズを持つことが確認され、赤血球、Hb溶液、Hbベシクルに比べて高い粘度と高い酸素親和性を示すことが明らかとなった。本研究では、輸血用赤血球の代替となり得る人工酸素運搬体として、ヘモグロビン(Hb)の配置を精密に制御した高分子量Hb集合体(aligned megadalton Hb; AM-Hb)の創製を目的としている。本研究では、合成方法の探索、物性測定、動物投与試験という三段階のステップにより、合成したAM-Hbの人工酸素運搬体としての性能を評価し、得られた結果を分子設計に反映して分子構造を最適化していく。ポリエチレングリコール鎖(PEG鎖)を架橋剤として用いたAM-Hbと、デンプンなどの多糖類を架橋剤として用いたAM-Hbについて、達成された成果を個別に報告する。<PEG鎖を架橋剤として用いたAM-Hb>末端に官能基が導入されたPEG誘導体をHbと反応させて、Hbを多量化することに成功した。Hbの配置を精密に制御するために原料Hbは過剰に加えられており、これを目的物であるAM-Hbから分離することに困難を伴ったものの、複数の精製方法を組み合わせることで原料Hbの除去方法を確立した。物性測定により、AM-HbはHbに比べて高分子量化していることが確認され、濃度をHb換算で約2 g/dL程度まで濃縮することに成功した。<多糖類を架橋剤として用いたAM-Hb> HESと呼ばれるデンプン誘導体の側鎖を、タンパクとアミド結合で結合し得る官能基に化学修飾し、高純度の粉末として精製することに成功した。しかしながら、精製されたHES誘導体についてHbとのカップリングを試みたところ、いずれもHbの配置を精密に制御した多量化には成功しなかった。想定した通りの反応が進行しなかった理由は活性の不足にあると考え、分子設計にフィードバックし、現在、HES側鎖に活性のより高い残基を導入する試みを行っている。平成26年度までに、末端に官能基が導入されたPEG誘導体を過剰のHbと反応させることで、分子量が精密に制御された1種類のAM-Hbを合成、精製する方法を確立した。平成27年度では、分子設計に立ち返り、架橋剤として用いるPEG誘導体を変更することで、数種類のAM-Hbを得ることに成功した。合成されたAM-Hbを電気泳動法とサイズ排除カラムクロマトグラフ法で分析したところ、架橋剤の鎖長によりAM-Hbの分子サイズを任意に制御できる可能性が示された。また、平成26年度に合成されたAM-Hbでは、精製、濃縮後の濃度がHb換算で2 g/Lと低く、人工酸素運搬体として要求される濃度(7 g/dL以上)を達成していないことが問題であったが、平成27年度では、異なる濃縮手法を適用することで、濃度を7.3 g/dLまで増大させることに成功した。一方、平成26年度に合成されたAM-Hbを月単位で長期保存する過程において、メト化や変性に起因するHbの質の劣化が観測された。また、AM-Hbを動物投与試験に使用するために、合成過程における菌の混入を防ぐ方法、あるいは合成後に滅菌する方法を確立する必要が生じた。これら、AM-Hbの保存方法と滅菌方法の確立は、申請時には予期しなかった課題であり、動物投与試験を行うために解決する必要がある。平成26年度の研究成果報告書にて設定した、平成27年度以降の研究推進方策の内容に則って、進捗状況を報告する。研究の推進方策に従い、まずは合成、精製されたAM-Hbについて、物理化学的性質を調べ、目的に即した性質となるように分子設計や合成方法の改良を行った。平成27年度に分析されたAM-HbのHb濃度、粘度、分子量測定を行い、特に濃度において、要求される7 g/dLという基準値を達成可能な合成、精製、濃縮方法を確立した。また、分子量測定の結果を分子設計にフィードバックして、異なる架橋剤を用いたAM-Hbの合成を行い、架橋剤とAM-Hbの分子サイズとの関係性について知見を得た。これらの結果から、AM-Hbの分子設計と合成法の最適化については、設定した研究推進方策通り順調に研究が進行していると評価できる。また、平成26年度の研究成果報告書では、合成されたAM-Hbについて動物投与試験により一般毒性試験や血中半減期の測定を行い、毒性の有無を調べ、肝臓や腎臓などの機能へ与える影響を追跡することを計画した。

この研究推進方策に従い、平成27年度ではAM-Hbを用いた動物投与試験の実施を目指した。動物投与試験の実施に際しては、実績の項にて報告したHb品質の低下が問題となる。また、合成、精製、濃縮に用いた試薬や器具は、濃縮Hb以外はすべて滅菌されていないものを用いているため、混入した雑菌が実験動物に与える影響が大きな問題になる。そこで平成27年度は、合成したAM-Hbを滅菌する方法の模索と、合成経路すべてを滅菌条件下で行う方法の検討という2種類のアプローチによりこの問題の解決を図った。動物投与試験の実施については設定した研究推進方策に従って実験準備を行っている段階であると評価できる。以上の結果から、動物投与試験の実施には至っていないものの、研究は概ね順調に進展していると評価できる。本研究では、輸血用赤血球の代替となり得る人工酸素運搬体として、ヘモグロビン(Hb)の配置を精密に制御した高分子量Hb集合体(aligned megadalton Hb; AM-Hb)の創製を目的としている。本研究では合成したAM-Hbの人工酸素運搬体としての性能を各種物性測定により評価し、得られた結果を設計に反映して分子構造を最適化する。平成27年度までに、末端に官能基が導入されたPEG誘導体を過剰のHbと反応させることで、分子サイズが精密に制御されたAM-Hbを合成、精製、濃縮する方法を確立した。また、架橋剤として用いるPEG誘導体を変更することで、数種類のAM-Hbを得ることに成功した。合成されたAM-Hbを電気泳動法とサイズ排除カラムクロマトグラフ法で分析したところ、架橋剤の鎖長によりAM-Hbの分子サイズを制御できることが明らかとなった。平成28年度では、得られたAM-Hbのうち、四分岐PEG鎖を使用したAM-Hbについて、人工酸素運搬体としての性能を評価するために各種分析を行った。動的光散乱測定の結果、得られた粒子径はHbが7.7 nmに対しAM-Hbが14.3 nmと、Hbの約2倍の粒子径を持つことが明らかになった。また、酸素結合解離曲線(oxygen equilibrium curve, OEC)測定の結果、AM-HbはHbに比べて高い酸素親和性を持つが、協同性(アロステリック効果)は低下していることが確認された。さらに、コーンプレート回転法による粘度測定の結果、AM-Hbの粘度は8.2 cPと、Hb(1.5 cP)や血液(34 cP)に比べて高い値を示した。上記の通り、合成したAM-HbはHbや血液に比べて高い酸素親和性と粘度を持つため、虚血部位への酸素運搬や増粘剤に利用可能であると考えられる。平成28年度では得られた結果をまとめ、学会発表を行った。新しい分子構造を持つ人工酸素運搬体の創製を目指し、赤血球から単離したヘモグロビン(Hb)を四分岐PEGの末端に結合させ、複数のHbが精密に配置、分子間架橋された高分子量Hb集合体(aligned megadalton Hb; AM-Hb)を合成した。人工酸素運搬体としての性質を各種物性測定により評価したところ、合成されたAM-Hbは架橋剤の鎖長に依存した分子サイズを持つことが確認され、赤血球、Hb溶液、Hbベシクルに比べて高い粘度と高い酸素親和性を示すことが明らかとなった。交付申請書の研究実施計画では、平成26年度において2つの達成目標を設定した。目標1AM-Hbの合成・精製方法の確立ー設計したAM-Hbそれぞれについて、数mL数十mLの小スケールで合成を行い、分子量を精密に制御するための合成条件や、有害な不純物を除去するための精製方法を調べる。目標2AM-Hbの物性測定ー
学校と地域による協働教育に関する研究-協働教育の支援システム開発のための基盤研究

本研究の成果は以下の通りである。1.高知県内の小学校・中学校・高等学校における住まい・まち・環境教育と協働教育の実態を明らかにした。2.各地の多くの協働教育事例について、その内容・方法・子どもたちの感想などの詳細調査を行い、協働教育の実態の詳細と意義・効果を明らかにした。3.協働教育に対する児童・生徒および教師の評価などから、協働教育に必要な支援について明らかにした。4.以上の結果にもとづいて、協働教育の普及のための課題を明らかにした。2001年度は、協働教育のユニークな事例収集と、学校教育現場における協働教育への取り組み・教師の意識調査などを中心に行った。実践事例の面接記録調査は、北海道の札幌市・室蘭市、栃木県の鹿沼市、石川県の金沢市、福井県の福井市、徳島県の穴吹町・脇町など延べ20ヶ所で行った。学校現場に対する調査は郵送による配票調査を高知県内の全小・中・高校に対して行った。調査票の配布数は540票である。また北海道江別市の江別高校では、協働型の住まい・まち・環境教育の実施への協力と、実践の記録調査を行った。以上の調査結果の分析等を行っており、2002年度は、これらの調査結果にもとづいて、協働型の授業実践の詳細調査を行い、協働教育の教育効果・それに必要かつ有効な支援等について明らかにする予定である。2002年度は、以下のことを行った。1.協働教育の実践事例についての実践記録調査・面接記録調査・資料収集これについては以下の地域で学校・教育委員会・研究所等に対して各種調査をおこなった。(1)実践記録調査:兵庫県姫路市(2)面接記録調査:兵庫県姫路市、新潟県青梅町、同糸魚川市、同頸城村、同小千谷市、岩手県盛岡市、秋田県角館町、宮城県仙台市、北海道旭川市(3)資料収集:上記(1)および(2)の各地域、および福岡県篠栗町2.協働教育の実践事例についての実践記録・面接記録・収集資料等にもとづく分析これについては、おおむね以下にのことをおこなった。(1)協働教育の企画・実施等の経緯(2)協働教育の内容・方法等の実態(3)協働教育の協働・参加者の内容等(4)協働教育の効果3.高知県内の小学校・中学校・高等学校に対する住教育・協働教育に関する配票調査結果の分析(配票調査は2001年度に実施ずみ)4.以上の分析等にもとづいて、協働教育の実態、協働教育の意義・効果等について明らかにし、その支援の在り方等について整理・検討した。
タンパク質内エネルギー散逸の時空間マッピング

タンパク質中の活性部位に発生した余剰エネルギーは、活性部位から周囲のタンパク質部分へと伝わり、タンパク質内を散逸する。タンパク質内のエネルギー散逸過程を実験的に観測することは難しく、その機構は現在のところほとんどわかっていない。われわれはアンチスト-クスラマンバンド強度が分子の余剰エネルギーの大きさを反映することを利用して、エネルギー散逸過程を観測することを試みた。その結果、チトクロムcおよびミオグロビンについて、アミノ酸残基単位でエネルギーの流れをとらえることに初めて成功した。タンパク質内エネルギー散逸を時空間マッピングするというのが本研究の目的である。ヘムタンパク質内のヘムを、光励起により振動励起し、ヘムから周囲のアミノ酸残基への振動エネルギー移動をトリプトファン残基のアンチストークスラマンスペクトルによって観測する。最初に、微弱なアンチストークスラマン散乱光を高感度に観測するために、フィルター分光器を用いた検出系を製作した。1.チトクロムcチトクロムcはトリプトファン残基を1残基含み、かつそれはヘム近傍にある。このため、ヘムからのエネルギー移動をプローブする系としては最適である。しかし、酸化型チトクロムcを光励起すると、測定中光還元によりわずかながら還元型が試料中に蓄積することがわかった。そこで、試料中にチトクロム酸化酵素をチトクロムcに対して1/1000量加え、還元型チトクロムcを再酸化するようにした。これによって、還元型の蓄積量を無視できる程度に抑えることができた。トリプトファン残基由来のアンチストークスラマンバンドには、ヘムの光励起後、過渡的な強度増大と減少が観測された。また、強度増大の時定数はヘムの冷却時定数とほぼ一致した。これらの結果は、観測されたバンド強度変化が、ヘムからのエネルギー移動によるものであることを示している。2.ミオグロビンタンパク質内エネルギー移動の観測に適したミオグロビン変異体を作成した。この試料について測定を行ったところ、チトクロムcと同様にアンチストークスラマンバンドの過渡的な強度増大と減少が観測された。以上のように、今年度の研究によって、タンパク質内エネルギー散逸を観測する系を確立することができた。今後は、トリプトファン残基の導入位置を変え、エネルギー移動の速度がどのように依存するかを調べていく予定である。光励起により、ヘムタンパク質内のヘムを振動励起し、ヘムから周囲のアミノ酸残基への振動エネルギー移動をトリプトファン残基のアンチストークスラマンスペクトルによって観測した。1.チトクロムcチトクロムcはトリプトファン残基を1残基含み、かつそれはヘム近傍にあるため、ヘムからのエネルギー移動をプローブする系としては最適である。このトリプトファン残基由来のアンチストークスラマンバンドには、ヘムの光励起後、過渡的な強度増大と減少が観測された。昨年度に予備的な測定を行ったが、今年度はさらにS/N比を向上させた結果、強度増大の時定数はヘムの冷却時定数と異なることが明らかになった。この結果は、モード間の間接的なエネルギー移動を示している。また、ポンプ光波長に依存して、トリプトファンの振動モードにおける励起エネルギー分布が異なることが明らかになった。この結果は、ヘムからトリプトファン残基へのエネルギー移動の時間スケールで、励起エネルギー分布に平衡化が完了していないことを示している。いくつかの変異体では、大腸菌中での発現量が低く、時間分解スペクトル測定に必要な量の試料を作成することができなかった。これらに関しては、培養条件、ベクターの交換など試料調製条件の最適化を行っている。試料には、立体構造が詳細に調べられているマッコウクジラ由来のミオグロビンを用いた。このミオグロビンにはトリプトファぞが2残基含まれているため、まずこれらをラマン散乱強度の弱いチロシン、フェニルアラニンに置換した変異体を作製した。その際、大腸菌での発現量が著しく低下したため、ベクターの交換、培養条件の最適化を行った。これによって、収量を約10倍に改善することができた。この変異体にトリプトファン残基を1残基導入し、ヘムからトリプトファン残基への振動エネルギー移動を、トリプトファン残基の時間分解アンチストークス共鳴ラマンスペクトルによって観測した。ヘムから同じ方向で、かつ距離の異なった位置にトリプトファンを導入した変異体2種、V68Wおよび128W変異体、を作製し、ヘムからのエネルギー伝搬について、距離依存性を調べた(ヘムからトリプトファン残基までの距離は、それぞれ約6および12オングストロームである)。振動励起状態の生成および減衰の時定数は、V68Wおよび128W変異体において、それぞれ3および4ピコ秒であった。

また、V68W変異体に比べ128W変異体では、アンチストークスラマンバンドの強度変化の大ききが小さかった。これらの結果は、ヘムからの距離が離れるほどエネルギー伝搬に時間がかかり、かつ空間的なエネルギー密度が低下するという予想と一致する。得られた結果を、古典的な熱拡散モデルで解析したところ、実験結果を定量的に再現するためには、位置によって異なる熱拡散率を仮定しなければならない、あるいはタンパク質の熱拡散率として水と同程度の高い値を仮定しなければならないことがわかった。古典的な熱拡散の描像では、タンパク質内のエネルギー移動を定量的に説明するのは難しいように思われる。
内耳性難聴における蝸牛細胞の応答に関する情報伝達系の研究

内耳にstressが加わり難聴を起こす実験系は内リンパ水腫の作成、過大音響の負荷、耳毒性薬物(アミノ配糖体系抗生剤など)の投与などがある。このうち比較的症例が多く、臨床に近い病態を作成できるのは耳毒性薬物を使用した実験と思われる。近年アミノ配糖体系抗生剤は内耳の細胞をアポトーシスに導くことが報告された。したがってどのような情報が細胞表面受容体がら核内転写因子へ伝達され細胞の自然死に導かれるのか興味深い。そこでまずアミノ配糖系抗生剤がどのようなしくみで内耳細胞に取り込まれて行くのかを研究目的とした。アミノ配糖系抗生剤は耳毒性と腎毒性を共有しており、腎尿細管ではreceptor-mediatedなendocytosisにより取り込まれ細胞障害を惹起する。しかし内耳では取り込みの機構はよくわかっていない。平成9年度は腎でアミノ配糖系抗生剤の取り込みに関連するメガリンの蝸牛での分布を電顕レベルで調べた。今年度は蝸牛と前庭のアミノ配糖系抗生剤に対する共通毒性から、前庭での分布を調べた。メガリンは前庭卵形嚢や半規管膨大部の暗細胞の内リンパに面した膜とその直下に存在した。同時に調べた腎近位尿細管における分布ときわめて酷似していた。このことは暗細胞が尿細管細胞と同様にendocytosisを行いアミノ配糖系抗生剤を取り込む可能性があることを示唆していた。これとは対照的にアミノ配糖系抗生剤による障害の主な部位である前庭有毛細胞(I型、II型)にはメガリンの分布はなかった。同じ毒性を共存しながら尿細管と蝸牛と前庭の有毛細胞ではアミノ配糖系抗生剤の取り込み機構は違うものと思われた。メガリンは内リンパ嚢上皮にも分布していることが予想される。内耳における機能や病態への関連が今後の研究課題と思われ、研究を進めて行く予定である。
気相光解離反応の外部磁場効果への多光子イオン化法の応用

光解離反応過程における外部磁場効果を観測する目的で、共鳴多光子イオン化(REMPI)法とレーザー誘起けい光(LIF)法を併用して解離生成物をモニターすることを試みた。まず、真空チェンバー内で、磁場中に挿入した電極に十分に強い電場をかけてREMPIで生成したイオンを測定し、光解離生成物をモニターする装置を製作した。NOの磁場消光が観測されている系でNOのREMPIシグナルの外部磁場依存性を予備実験として行った。(この実験は分子科学研究所小林敬道助手(現在、無機材質研究所)の援助を受けた。)その結果、観測したイオン電流は磁場強度と試料ガス圧との複雑な関数となった。このことは、REMPIで生成したイオンと試料ガスとの反応が無視できないことを示しており、直接には外部磁場効果を正確に反映してはいないことがわかった。今回観測された生成イオンの二次反応を避けるめには、反応生成物のサンプリングを行い、低圧で磁場フリーの領域でのREMPIを試みることが必要であると思われる。SO_2の光解離反応の外部磁場効果に関しては、解離生成物である0原子をREMPI法でモニターする方法とSOラジカルをLIF法で観測する方法がある。今回はREMPI法の有効性をチェックする対照実験としてLIF法による実験を行った。しかし、今のところ既知のけい光の磁場消光に対応する大きな磁場効果は確認できていない。ただし、わずかな磁場効果が観測されている可能性は否定できないので、現在詳細な解析を継続中である。その磁場効果が観測されにくかった理由の一つは、親分子の強いけい光がSOのモニターを妨害しているためである。そこで、分子ジェットにより親分子からの発光による妨害を避ける実験を計画中である。
現代社会型犯罪における機能的考察に基づく故意概念の再構成

刑法上、故意は、犯罪成立のための要件のひとつであるが、故意の内容は犯罪類型によって大きく異なる。ところが、刑法学における従来の故意論は、薬物犯罪、環境犯罪、サイバー犯罪などの現代社会型犯罪の登場に対して、十分に対応することができていない。このような問題意識から、本研究では、現代社会型犯罪それぞれの故意の特徴を比較・分析することで、規制する国家の側と規制される市民の側の双方の視点に配慮しつつ、犯罪成立のために要求されるべき故意の内容を具体的に提示することを予定している。研究にあたっては、ドイツ法の知見の参照や、様々な犯罪類型の判例分析といった手法を用いる予定である。
コンピューター利用によりペスタロッチの道徳・宗教教育思想形成史の研究

平成3年度、4年度にわたり、コンピューター利用によるペスタロッチの道徳・宗教教育思想形成史の研究を行った。その際、ペスタロッチの原典そのままをテキストファイル化し、効率的な検索に利用する手段をとった。具体的には、Johann Heinrich Pestalozzi.Saemtliche Briefe.Herg.vom Pestalozzianum13Bde.1946-1971の全巻、及び、Peatalozzi.Saemtliche Werke.Kritische Ausgabe.1927ff.30 Bde.のうちの10巻分につき、暫定的なテキストファイル化を完了した。このデータベースの利用と、ペスタロッチの宗教、道徳教育思想研究の古典的文献の分析とを組み合わせ用いることにより、研究課題に即する一定の研究成果を得た。その一部は論文で発表したが、今後も順次,学会誌等に発表する予定である。この研究で得られた知見の若干を挙げれば、次の通りである。1.ペスタロッチの宗教、信仰観は当時の時代背景の中で独特な位置を占める,きわめて実践的、かつ根源的なものであった。2.ペスタロッチにおける道徳教育思想は、いわゆるきれい事に留まらず、人間の自然本性の諸相を踏まえた、きわめて実存的なものであった。道徳と立法との関係、道徳と人間の衝動との関係、道徳と国家権力との関係等に関する彼の洞察はきわめて鋭く、今日でもなお示唆的である。ペスタロッチは自分の学園での教育において、宗教教育を重視しながらも、宗派主義的な宗教教育に固執せず、超宗派的な宗教教育を志向した。特にカトリック教徒に対する柔軟な姿勢は、時代をはるかに超えていた。4.ペスタロッチの道徳・宗教教育思想は、わが国に受容される際に、独特なかたちで日本化された。ペスタロッチの書簡全集及び著作全集のデ-タベ-スを進めるのに必要なコンピュ-タ等の機器類、及び、文字認識ソフトなどのソフトウェア-類を購入した。そして、早速、原典テキストの読み取り作業を開始した。文字認識ソフトは予算範囲内で購入可能な最も優秀と思われるハンガリ-製のものを購入したが、使いこなすのに相当な時間と労力を要した。しかも原典テキストをMSーDOSテキストファイルに変換しても、とてもそのままでは実用に絶えうる精度のものとはならない。これを100%の正確さではないまでも、とにかく研究に活用できるだけの精度に高めるまでの手だてを見出すのにも相当な時間を要した。しかし、試行錯誤の結果、一応の作業手順が立てられ、現在までにペスタロッチ書簡全集全13巻のうち、9巻分の暫定版デ-タベ-スの作成を完了した。この作業を随時継続しながら、これと並行して、暫定版デ-タベ-スを利用した実際的研究をも進めてきた。ペスタロッチは自分の学園での教育において、宗教教育を重視しながらも、当時の一般的風潮とは異なる実践をしていた。つまり、宗派主義的な宗教教育に固執せず、むしろ宗派を超えた宗教教育を志向していた。この書簡全集のデ-タベ-スを利用することで、その根底にある彼の思想や態度を明らかにする作業が現在進行中であり、この面で新たな発見が期待できると考えている。なお、文献研究については、ペスタロッチの宗教、道徳教育思想研究の古典的文献を集め、その分析を進めてきた。1.昨年度に引き続き、ペスタロッチの書簡集及び著作全集のテキストファイル化を進めた。書簡集全13巻及び、校訂版ペスタロッチ全集全30巻のうち、とりあえず研究題目に密接に関連する6巻について読みとり作業を完了した。

ただし、数百万円の高級機械による作業と違い、購入できたOCRソフトによるテキストファイル化においては、誤字、脱字等が少なからず含まれるため、その訂正作業にかなりの時間が必要であり、現在も随時、完全なデータベース化を進めている。いずれにせよ、本年度において、市販の検索ソフト、あるいは、いわゆる「フリーソフトウェア」に含まれる優れた検索ソフト等の組み合わせにより、自由自在にベスタロッチの書簡や著作をキーワードにより検索し、効果的に検究を進めるための暫定版データベースは部分的ながら完成させることができた。2.上記の作業と並行して、ペスタロッチの宗教、道徳教育思想研究の古典的文献を集め、その分析を進めた。そこから見いだしたいくつかの視点を中心に、上記の暫定版データベースを利用した実際的研究も進めてきた。ペスタロッチは自分の学園での教育において、宗教教育を重視しながらも、当時の一般的風潮とは異なる実践をしていた。つまり、宗派主義的な宗教教育に固執せず、むしろ宗派を超えた宗教教育を志向していた。その際に、カトリック教徒に対するきわめて柔軟な彼の立場が注目されるのである。データベースの利用によりこの点を解明する手がかりを得ることができた。これらを含め、本研究の課題である「ペスタロッチの宗教・道徳教育思想形成史に関する研究」を近いうちに論文としてまとめる予定である。
決定直後マウス生殖細胞に発現する遺伝子の網羅的解析

代表研究者らは、単一細胞レベルでのマウス生殖細胞決定機構の解析系を立ち上げ、生殖細胞決定の際におこる分子生物学的変化を捉える基礎を作り上げた。これをさらに発展させる目的で、我々は単一細胞から偏りなくかつ再現性良く発現遺伝子を増幅し、High density oligonucleotide microarrayにて正確に解析する系を確立、発生3.5日目のマウス胚盤胞が2種の細胞からなることを証明した(Kurimoto et al., Nuc.Acids Res.In the press)。この方法を用いて、発生7.5日目の決定後生殖細胞とその起源を同じくするものの体細胞へと分化した細胞群の遺伝子発現を単一細胞レベルで比較した結果、生殖細胞は特異的な蛋白質リン酸化酵素群、細胞接着因子群を発現し、DNA methyltransferase活性を抑え、また重要なことに形態生成やpattern formationに関わる因子群の発現を強力に抑制していることが判明した。さらに生殖前駆細胞から、時系列に沿い、生殖細胞が決定される過程で起こる遺伝子発現動態の変遷を詳細に解析することに成功し、現在そのデータを検証している。また生殖細胞の最初期に特異的な発現を示し、その決定に重要な役割を果たす遺伝子Blimp1を同定した(Ohinata et al., 2005)。Blimp1欠損生殖細胞からの単一細胞cDNAも作成しており、これを解析することで、Blimp1の生殖細胞形成における役割を決定しつつある。これをさらに発展させる目的で、我々は単一細胞から偏りなくかつ再現性良く発現遺伝子を増幅し、High density oligonucleotide microarrayにて正確に解析する系の確立を目指し、本年度はその目的を達成したといえる。我々が開発した方法を用いて発生7.5日目の決定後生殖細胞とその起源を同じくするものの体細胞へと分化した細胞群の遺伝子発現を単一細胞レベルで比較した結果、生殖細胞は特異的な蛋白質リン酸化酵素群、細胞接着因子群を発現し、DNA methyltransferase活性が抑えられ、また重要なことに形態生成やpattern formationに関わる因子群が強力に抑制されていることが判明した。これらの過程は他のモデル生物に見られるglobalな転写抑制とは異なり、activeな転写によりなされていること、また全発現遺伝子レベルでは、生殖細胞はES細胞よりも、隣接する体細胞群により近い形質を持つことも明らかとなり、哺乳類におけるregulative germ cell specificationを強く支持する結果を得た(Kurimoto et al.,submitted)。現在、生殖前駆細胞から、時系列に沿い、生殖細胞が決定される過程で起こる遺伝子発現動態の変遷を詳細に検討しつつあり、生殖細胞決定過程及びその後のゲノムワイドなりプログラミングを起こす分子機構をシステムレベルで解き明かすことを目指している。また生殖細胞の最初期に特異的な発現を示し、その決定に重要な役割を果たす遺伝子Blimp-1を同定し(Ohinata et al.,in revision)、そのさらなる機能解析も進めている。
禅宗の展開と地域社会の研究

日本史上,もっとも多くの寺院が建立されたのは戦国期から近世初期にかけてである。禅宗とくに曹洞宗においても同様である。したがって禅宗寺院や禅僧の活動と地域社会との関連について明らかにすることは当該期の研究に必須である。そこで本研究は,つぎの三点の項目を設けて考察を試みた。まず,(1)戦国大名の宗教統制とアジ-ルの問題,在地領主と寺院との関連について考察した。長年寺(群馬県榛名町)は長野氏,多宝院(下妻市)は多賀谷氏,福昌寺(もと鹿児島市)は島津氏の菩提寺で,16世紀はじめの成立であり、走入者保護の特権を持っていた。それは領内統治上,菩提寺の聖域化が必要であったからである。しかし,戦国大名の権力が増大するにしたがって,それはさして必要でなくなり,罪人処罰が優先される至ることを明らかにした。なお,禅昌寺(山口市)は無縁所寺院として知られるが,「祠堂施入目録」によれば毛利氏や近隣の在地領主の施入がみられ,「無縁」についての今後の検討が必要であることを確認した。つぎに(2)禅僧と禅寺の活動とその地域社会に果した機能について考究した。徳勝寺(長浜市)や乾坤院(愛知県東浦町)の授戒会帳により,禅僧の行った授戒会に戦国大名・国人・農民・諸職人等が参加しており,戦国大名や国人の領内統治や村落間の交流や村落住人の結束などに影響を与えたことを明らかにした。東持寺(結城市)所蔵の禅僧の語録により,近世初期には下人下女にまで禅僧による葬儀が行われていたことが明らかとなった。戦国期に切紙の授受がさかんとなるが葬祭や祈祷による活動を行った禅僧たちの精神的支えとなったことが知られる。さらに(3)諸寺院の過去帳の分析を通じて寺檀関係の成立と展開について考察した。寛永元年ごろより,過去帳への記載がコンスタントになり,寛文元年ごろより急増する。小農民の自立と関連すると考える。