hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
がんワクチン効果増強分子メカニズムに関する研究

4T1細胞株はマウスの乳がん細胞株であるが、免疫原性が低いことで知られていた。しかし我々は偶然、事前にマウスに接種しておくと、後の同細胞の成長を完全にブロックするような特殊な株を見出し4T1-S細胞と名付けた。4T1-S細胞をマウスに打つと、局所リンパ節の腫脹が見られ、CD8細胞やミエロイド細胞の増加が認められた。4T1-S細胞による腫瘍抑制作用はヌードマウスでは見られず、T細胞依存的と考えられた。この細胞を用いて新しい腫瘍抗原が発見される可能性がある。近年、がん治療における免疫反応の重要性が以前にも増して認識されるようになって来た。そのひとつとして、がんに特異的に発現する抗原を標的としたがんワクチンがあげられる。しかし、多くのがんワクチンが開発・報告されている一方で十分な効果を示した報告はいまだ認められない。その原因として、腫瘍による免疫逃避機構の理解やアジュバントを始めとするがんワクチン増強の分子メカニズムの理解が完全ではないことがあげられる。我々は最近、がんワクチン効果において非常に興味深い特徴を持つがん細胞亜株を樹立した。乳がん細胞株4T1のうち、従来世界において広く使用されてきたATCCより入手可能な乳がん細胞株(4T1-ATCC)にはがんワクチン効果は見られない。一方、我々がサブクローニングした株(4T1-Sapporo株)を放射線照射した後野生型マウス生体に投与すると、その後4T1の生着を許さなかった。一方、ヌードマウスで同じ実験を行うとこの効果は見られなかった。即ち、T細胞依存的に強いがんワクチン効果を有する細胞亜株であることが判明した。我々はこれらの細胞株の分子発現を比較検討することにより、がんワクチンの効果増強に関するメカニズムが明らかになる可能性があると考えた。現在までに、これら二つの細胞株間においてマイクロアレイを用いた網羅的遺伝子解析を行い、4T1-Sapporo株に強く発現している分子を5つ以上同定した。それらの分子は、Thbs3、NCAM1, Cyp1b1, Oas1a,である。また、4T1-Sapporoを生体に接種した後の免疫学的変化を調べた。すると、所属リンパ節の優位な増大、CD8T細胞中のCD69発現の上昇、また顆粒球の増大が認められた。今後はこれらの免疫学的変化をもたらした分子を特定して行く予定である。4T1乳がん細胞株の中でも特異的に強い免疫原性を持つ4T1-Sを同定した。比較対象として、ATCCから入手した4T1-Aを用いた。同細胞に特異的に発現する分子、特に抗原を検索する意味で、4T1-Aと4T1-SのゲノムDNAをmRNAを次世代シークエンサーで比較した。その結果、十分な発現量があり、mutationを持つ遺伝子が4つ同定された。そのうち一番発現量の高かった分子のcDNAのシークエンスを改めて行ったが、mutationを持つ分子としては発現が見られなかった。ついで2ー4番目の分子について検討を行う。4T1-S細胞の免疫学的特性をさらに解析し、T細胞依存性に腫瘍の拒絶が起きること、接種した場合所属リンパ節の腫脹が起き、CD8陽性T細胞やCD11b陽性細胞の増加が見られること、遠隔リンパ節ではそのような反応が見られないことが分かった。今後は、mutationを持つ分子が抗原として提示されるのか、またその分子により上述したような免疫反応が起きるのかどうかについ確認する必要がある。4T1ーSapporo株の免疫学的特性について多くのことが判明した。がんワクチン自体を増強する因子の特定にはいたっていないが、中間段階としてはおおむね順調ではないかと考えている。免疫学4T1-Sapporoを生体に接種した後の免疫学的変化をもとに、この現象を司る分子メカニズムの特定を試みる。具体的にはSapporo株で特異的に発現する抗原の特定を、MHC class Iに対する抗体を用い、質量分析にて行う予定。
大型ダイヤモンド複合体アンビルのヒップ合成と高圧液体の構造・物性研究での実用化

大容量HIP装置を用いてアンビルを作製し、放射光施設での高圧実験により40GPaの圧力発生を達成した。このアンビルは2000K程度の高温高圧実験に繰返し使用でき、また、X線ラジオグラフィーにも利用できることを示した。さらに、単色X線を用いた回折およびラジオグラフィーにも使用できることを示した。これらの結果は、本研究で開発したアンビルが、高温高圧下での様々なその場観察実験に応用できることを示す。また中性子線に対する透過性試験を行い、今後J-PARCでの高圧中性子実験に使用可能なことを示した。既存のダイヤモンド焼結体アンビルに比べ約8倍の体積を持つ大型diamond-SiC複合体アンビルを、我々が開発したHIP(Hot Isostatic Pressing)を利用する新しい合成方法を用いて作製し、その高温高圧実験での実用化を行う。そして、このアンビルの高いX線透過性、および市販のダイヤモンド焼結体アンビル並みの高い圧力発生能力を利用して、高温高圧下での放射光を用いたその場観察実験、特に高圧液体を対象としたラジオグラフィー実験技術の開発を行うことを目的に研究を行っている。平成19年度の研究業績を以下に述べる。(1)26mm角のdiamond-SiC複合体アンビルのHIP合成条件の最適化:龍谷大学に既設の小型のHIP装置を用いて26mm角のdiamond-SiC複合体アンビルの合成を行い、反応温度・時間、出発試料の粒径等の最適化を行った。形状のそろったアンビルを再現性よく量産するため、(1)HIP処理前の鋳型の精密成型および(2)HIP処理後の表面仕上げおよび品質管理技術の確立を試み、一応の成功を収めた。一方、我々が従来作製してきた14mm角アンビルの場合と同じ出発試料のダイヤモンド粉末を使用すると、うまく反応焼結ができないことがわかり、出発試料の粒径を新たに最適化する必要があった。(2)大容量HIPを用いたアンビルの生産:最適なHIP合成条件が得られた後、神戸製鋼所の大容量HIP装置を使用し、アンビルの生産(24個)を行った。(3)放射光施設での高温高圧発生実験:SPring-8のBL04B1に設置されたマルチアンビルプレスSPEED1500を用いて、高温高圧発生実験を行った。X線ラジオグラフィーにより、アンビルに対する放射光の透過性などを検証した。平成20年度の研究業績を以下に述べる。(1)大容量HIPを用いたアンビルの生産最適なHIP合成条件を検討し、神戸製鋼所の大容量HIP装置を用いて、アンビルの生産を行った。(2)放射光施設での圧発生実験SPring-8のBL04B1に設置されたマルチアンビルプレスSPEED1500を用いて、高温高圧発生実験を行った。トランケーション3mmで40GPaの発生を達成した。(3)放射光施設でのX線ラジオグラフィー実験SPring-8のBL04B1に設置されたマルチアンビルプレスSPEED1500を用いて、X線ラジオグラフィー実験を行った。さらに、単色X線を用いた、回折実験およびラジオグラフィーシステムの立ち上げを開始した。既存のダイヤモンド焼結体アンビルに比べ約8倍の体積を持つ大型diamond-SiC複合体アンビルを、我々が開発したHIP (Hot Isostatic Pressing)を利用する新しい合成方法を用いて作製し、その高温高圧実験での実用化を行う。平成21年度の研究業績を以下に述べる。(2)放射光施設での圧発生実験SPeing-8のBLO4B1に設置されたマルチアンビルプレスSPEED1500を用いて、高温高圧発生実験を行った。我々のアンビルは1700K程度の高温高圧実験に繰り返し使用できることを示した。

(3)放射光施設でのX線ラジオグラフィー実験SPring-8のBLO4B1に設置されたマルチアンビルプレスSPEED1500を用いて、X線ラジオグラフィー実験を行った。さらに、単色X線を用いた、回折実験およびラジオグラフィー実験を行い、アンビルを通してデバイリングを観察できること・単色光でのラジオグラフィーが可能であることを示した。これらの結果は、開発したアンビルが、高圧下での差応力測定や変形実験さらに結晶成長過程の観察の研究に応用できることを示す。最後に、予備的実験として、中性子線に対する透過性をテストし、今後J-PARCでの高圧実験に十分使用可能であることが示された。
青年期後期人口におけるうつ病既往の実態と発症と関連する諸要因についての調査研究

平成16年度に行った研究は、大学生を対象とした被養育体験内容と精神症状の関連についての検討である。平成16年度の徳島大学新入生を対象として、調査時点での不安・抑うつ症状、被養育体験内容について、それぞれ、Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS)、Parental Bonding Instrument (PBI)を用いて調査した。対象者は研究の内容について文書を用いて説明し、同意が得られた440名(男性239名、女性201名、平均年齢18.6±1.5歳)であった。結果は、PBIのPaternal Care、Paternal Protection、Maternal Care、Maternal Protectionの各スコアは、それぞれ、24.4±6.8、13.2±4.9、28.2±6.4、10.6±6.6であった。HADSのAnxiety、Depressionの各子コアは、それぞれ、8.9±3.2、9.9±3.7であった。また、PBIのPaternal CareはHADSのAnvietyスケールとの間に有意な負の相関が認められた<r=-0.150、p=0.0018>。さらに、PBIのPaternal CareはHADSのDepressionスケールとの間に有意な負の相関が認められた(r=-0,0153、p=0.0014)。PBIのPaternal Protection、Maternal Care、Maternal Protectionついては、HADSスコアとは有意な相関が認められなかった。これらの結果は、大学生の不安、抑うつ症状と子ども時代の父親のCareの低さが関係している可能性を示唆している。これらの結果から、青年期になってからの不安、抑うつ症状の予防について、子ども時代の父親の愛情に満ちた養育態度が重要であると考えられる。PBIを考案したPakerらの研究グループは、成人後の不安、抑うつ症状は、低い親のCareや高いprotection(つまり、過干渉な養育態度)と関係していることを報告しているが、日本人を対象とした我々の研究でもほぼ矛盾しない結果であった。
音声解析による音楽表現の評価に関する研究

本研究の音声解析は、FFTによる倍音構造の分析手法により、女声について行なった。歌唱表現の評価において、音声の質的な変化に焦点づけて検討した。すなわち、評価対象となる「声の質的な変化」を「倍音構造の変化」という視点で捉えた。さらに、初心者における倍音構造を複数の熟練者の倍音構造と比較し、その位置関係を計算し、音声の質的変容の方向性について示す方法を見出した。(1.客観的な観点の設定)異なる音域によるポルタメント等の標本を採取し分析を行なうと、既知の様に特定の周波数に共鳴する位置がある。しかしその位置には個体差が存在した。各人が固有に有している倍音構造がどの様に変容するかは、音声の質的変容の過程を見る上で、重要な視点であると考えた。(2.質的変容の明示方法)単に倍音構造の分布を示す1次データだけでは、指導上さほど有益ではない。その変化がどの方向性であるかが示されて、はじめて有用なデータとなる。この方向性は、先の倍音構造データを因子分析及びクラスター分析処理を行なうことにより示される。(3.今後の課題)声楽の学習上、音声の変化を継続的に注視することが重要である。そのためには、熟練者及び学習者の倍音構造データの蓄積が不可欠である。近年、光ディスクが小型化されてきていることから、この点のデータベース作成は容易である。また、これらのデータ蓄積は、声種判断のためにも有用であると考えられる。
芍薬甘草湯の鎮痛作用機序の解明

筋けいれんを伴う疼痛治療薬である芍薬甘草湯の作用機序を解明するため、骨格筋に分化する心筋由来のH9c2細胞のホールセルパッチ・クランプ法を用いて、電位依存性K+電流(IKur)に対する効果を検討した。芍薬甘草湯は、濃度依存的にIKurを阻害し、50%抑制濃度は1.3mg/ml、ヒル係数は1.2であった。芍薬甘草湯の成分別では、IKurを阻害する強さは、甘草、芍薬甘草湯、芍薬であったが、甘草の主成分であるグリチルリジンはIKurを阻害しなかった。本研究結果は、芍薬甘草湯がIKurを阻害してK+流出を減らすことによって、細胞内外のK+バランスを正常化し、筋肉痛を軽減することを示唆する。芍薬甘草湯は、こむらがえりや椎間板ヘルニアなど急激に起こる筋肉のけいれんを伴う痛みの特効薬としてよく用いられる漢方薬である。芍薬甘草湯は芍薬と甘草が1: 1の割合で混合されている。甘草および、その一成分であるisoliquiritigeninはポタシウム電流を低濃度で抑制するが、芍薬と甘草はそれぞれ単剤としてではなく、合剤にすることではじめて筋収縮を抑制する。本研究の目的は、骨格筋のポタシウムイオンチャネルに対する芍薬甘草湯の作用を明らかにし、その鎮痛作用機序は明らかにすることである。骨格筋に分化するラット心筋由来の培養細胞株H9c2細胞を用いて、ホールセルクランプ法でH9c2細胞のultra-rapid型電位依存性ポタシウム電流(IKur)に対する芍薬甘草湯、芍薬、ならびに甘草それぞれの効果を調べた。芍薬甘草湯はH9c2細胞のポタシウム電流を抑制した。そのIC50値は約1.3mg/mlで、Hill係数は1.2であった。このポタシウム電流抑制作用について、芍薬甘草湯、芍薬、甘草をそれぞれ10mg/mlの濃度で比較すると、甘草>芍薬甘草湯>芍薬の順に抑制効果が強かった。甘草の主成分であるグリチルリチンについても調べたが、抑制効果はみられなかった。H9c2細胞のIKurの遺伝子について、RNA干渉法にて検討したところ、Kv2.1である可能性が高いことが確認できた。また、RT-PCR法によりラットの骨格筋にKv2.1のmRNAの発現を認めた。以上のことから、芍薬甘草湯のこむらがえりを改善する機序のひとつとして、骨格筋のポタシウム電流を抑制することにより、筋線維からのポタシウム流出量を減らし、その間にNa-Kポンプによるポタシウム流入を優位にすることにより、細胞間隙に蓄積したポタシウムイオン濃度を減少させ、細胞内外のポタシウムバランスを正常化することが考えられた。芍薬甘草湯は、こむらがえりや椎間板ヘルニアなど急激に起こる筋肉の痙攣を伴う疼痛の特効薬としてよく用いられる漢方薬である。本研究の目的は、骨格筋のイオンチャネルに対する芍薬甘草湯の作用を解明し、その鎮痛機序を明らかすることである。芍薬甘草湯は、芍薬と甘草が1:1で混合されている。われわれの教室では、甘草とその一成分であるisoliquiritigeninが、ラット心筋由来の培養細胞株H9c2細胞のポタシウムイオンチャネルの一つKv2.1電流を抑制することを見出した。そこで、本研究ではH9c2細胞のポタシウム電流に対する芍薬甘草湯、ならびに芍薬と甘草それぞれの作用を調べた。H9c2細胞のポタシウム電流をホールセルクランプ法で測定した結果、芍薬甘草湯は、濃度依存性にH9c2細胞のポタシウム電流を抑制した。芍薬甘草湯10mg/mlがポタシウム電流をほぼ100%抑制するとして算出したIC50値は約1mg/mlであった。芍薬は10mg/mlの濃度でピーク電流を平均30±8%抑制したが、その抑制効果は芍薬甘草湯に比べて弱かった。また、甘草は10mg/mlの濃度でピーク電流を平均79±18%抑制し、その抑制効果は芍薬甘草湯に比べて強力であった。さらに、甘草の主成分であるグリチルリチン100μMはポタシウム電流を抑制しなかった。

こむらがえりに対する芍薬甘草湯の薬理学的機序のひとつとして、細胞内外のポタシウム濃度バランスの正常化が関与している可能性が示唆された。本年度の研究実施計画通りにラット心室筋由来の培養細胞株H9c2細胞を用いて、ホールセルクランプ法によりポタシウムイオンチャネル電流の測定を行い、芍薬甘草湯の成分である芍薬と甘草それぞれの作用を明らかにすることができた。当教室の以前の成果と合わせ、本年度の目標はおおむね達成されたと考え、上記の評価とした。本年度の研究は、当初の計画通り以前から研究手法が確立しているラットの心筋由来培養細胞株を用いたが、今後は、芍薬甘草湯の標的臓器である骨格筋をもちいた研究を進める。具体的には、芍薬甘草湯をラットに3日間経口投与した後、足から骨格筋を摘出し、RNAを抽出し、それをマイクロアレイ法にて解析し、骨格筋の遺伝子発現に対する芍薬甘草湯の作用を明らかにする。また、血管平滑筋細胞を用いてカレントクランプ法で膜電位を調べ、骨格筋内の血管拡張作用があるかを検討する。本年度の研究遂行はおおむね順調であり、次年度使用額は29円の少額となった。これは、翌年度に請求する研究費の補完として使用する。
精神遅滞関連蛋白質ＰＱＢＰ－１の揺らぎと機能の解明

24年度が最終年度であるため、記入しない。PQBP-1の欠損変異体の発現プラスミドを準備した。欠損変異体は、82-222欠損変異(Δ82-222)と98-192欠損変異(Δ98-192)とした。Δ82-222はX連鎖精神遅滞に関与するスプライシングバリアントである。Δ82-222とΔ98-192は、Hisタグ融合タンパク質として発現させた。発現ベクターは、Δ82-222とΔ98-192をコードするDNA配列をpOPベクターに挿入して得た。目的タンパク質は、Ni-NTAレジンによって精製し、さらにゲルろ過クロマトグラフィーによって精製した。また、Δ82-222とΔ98-192を蛍光分子であるFlAsHで標識するために、FlAsH結合配列をN末端に不可したタンパク質の発現系も構築した。また、PQBP-1のΔ1-35、Δ1-93、Δ95-265、Δ115-265、Δ135-265も準備した。Δ1-35とΔ1-93はGST融合タンパク質として発現し、3Cプロテアーゼによって目的タンパク質を切り離し、ゲルろ過クロマトグラフィーによって精製した。Δ95-265、Δ115-265、Δ135-265はHisタグ融合タンパク質として発現・精製した。Δ95-265、Δ115-265、Δ135-265の^<15>Nラベル体のNMRスペクトルを測定した結果、PQBP-1のWWドメインと他のドメインとの分子内相互作用を示唆するデータが得られた。さらに、PQBP-1の分子内FRETの観測を試みたところ、NMRと同様に分子内相互作用の存在を示唆していた。PQBP-1のターゲット分子であるU5-15kDを準備した。N末端にHisタグを付加したU5-15kDを大腸菌で発現させ、Ni-NTAレジンとゲルろ過クロマトグラフィーによって精製した。本研究ではPQBP-1の揺らぎについて研究を進める。研究計画に記載したとおり、PQBP-1の欠損変異体を多数準備し、NMR測定や蛍光測定を行った。今年度に得られた結果から考えると、PQBP-1の天然変性蛋白質領域が分子内相互作用をしている可能性が考えられる。また、分子内相互作用は複雑で複数のパターンがあることを示唆していた。今後は、この複雑な分子内相互作用がPQBP-1の機能とどのように関連するのかを明らかにする必要がある。
高耐食性急速凝固マグネシウム合金の創製

本研究は、「高耐食性急速凝固マグネシウム合金の創製」をテーマに、1.急速凝固法を用いた合金内部組織の制御による高強度・高耐食Mg合金の開発及び2.急速凝固Mg合金に適した表面処理技術の開発を目的としている。1.高耐食急速凝固マグネシウム合金の開発:高強度Mg-Zn-Y合金系に対して、高い耐食性が発現する合金成分の調査,耐食性に及ぼす合金作製時の冷却速度の影響の調査および合金の腐食挙動の解明を行った結果、高強度・高耐食急速凝固マグネシウム合金の開発に成功すると共に、合金作製時の冷却速度を制御することで優れた耐食性を有するマグネシウム合金の開発が可能であることがわかった。さらに、優れた耐食性を示す合金の表面には均一な皮膜が形成していることがわかった。2.表面処理技術の開発:耐食性の低い工業用純Mg金属(純度99.9%)及び商用Mg合金を飽和Mg(OH)_2水溶液に数分間浸漬した後パルスレーザーを照射することで、均質かつ耐食性の高いMgO皮膜の形成に成功した。パルスレーザーという比較的出力の低いレーザーを照射させることで、金属内部組織に熱影響を与えることなくアルカリ溶液浸漬処理で形成したMg(OH)_2前駆体皮膜をMgO保護皮膜に改質することが可能であった。以上のように、新規高耐食性急速凝固マグネシウム合金の作製に成功したとともに、急速凝固マグネシウム合金に適した表面処理技術に成功したことで、マグネシウム合金の用途拡大につながることが示唆される。1.高耐食急速凝固マグネシウム合金の開発高強度Mg-Zn-Y合金系に対して、高い耐食性が発現する合金成分の調査、耐食性に及ぼす合金作製時の冷却速度の影響の調査および合金の腐食挙動の解明を行った結果、高強度・高耐食急速凝固マグネシウム合金の開発に成功すると共に、合金作製時の冷却速度を制御することで優れた耐食性を有するマグネシウム合金の開発が可能であることがわかった。2.表面処理技術の開発耐食性の低い工業用純Mg金属(純度99.9%)及び商用Mg合金を飽和Mg(OH)_2水溶液に数分間浸漬した後、パルスレーザーを照射することで、均質かつ耐食性の高いMgO皮膜の形成に成功した。パルスレーザーという比較的出力の低いレーザーを照射させることで、金属内部組織に熱影響を与えることなくアルカリ溶液浸漬処理で形成したMg(OH)_2前駆体皮膜をMgO保護皮膜に改質することが可能であることが明らかとなった。以上のように、新規高耐食性急速凝固マグネシウム合金の作製に成功したとともに、急速凝固マグネシウム合金に適した表面処理技術の予備実験に成功したことで、マグネシウム合金の用途拡大につながることが示唆される。1.高耐食急速凝固マグネシウム合金の開発高強度Mg-Zn-Y合金系に対して、高い耐食性が発現する合金成分の調査,耐食性に及ぼす合金作製手法の影響を調査した結果、優れた耐食性を示すマグネシウム合金の開発に成功した。また、本合金の腐食挙動を電気化学的に調査した結果、マグネシウム合金にはこれまでに確認されていない不導態化現象が発現することが確認された。さらに、第四元素を添加することで更なる耐食性の向上が可能であることも明らかとなった。2.表面処理技術の開発耐食性の低い工業用純Mg金属及び商用Mg合金を飽和Mg(OH)_2水溶液に数分間浸漬した後、パルスレーザーを照射することで保護皮膜の形成を試みた結果、優れた耐食性を示す保護皮膜の形成に成功した。その保護皮膜は、均質かつ緻密に形成していることが明らかとなった。以上のように、新規高耐食性急速凝固マグネシウム合金の作製に成功したとともに、表面処理技術の開発にも成功した。

パルスレーザーという比較的出力の低いレーザーを照射させることで、金属内部組織に熱影響を与えることなくアルカリ溶液浸漬処理で形成したMg(OH)_2前駆体皮膜をMgO保護皮膜に改質することが可能であった。以上のように、新規高耐食性急速凝固マグネシウム合金の作製に成功したとともに、急速凝固マグネシウム合金に適した表面処理技術に成功したことで、マグネシウム合金の用途拡大につながることが示唆される。
胸部食道癌に対する術後至適栄養法開発のための無作為比較試験

高度侵襲早期のTPNの可否を検討する目的で、胸部食道癌患者23名を術後栄養管理法別に経腸栄養(EN)単独群12名とEN+TPN群11名にrandomizeした。検討項目は、1.窒素出納、各種栄養指標の推移、2.間接カロリメトリーによるエネルギー代謝動態把握、3.bio-impedanceによる体構成成分の経時的変化、4.大腿動静脈アミノ酸分析、5.動脈中ケトン体比と血中総ケトン体量、6.術後合併症、7.14病日までの保険点数。その結果、1.窒素出納は、EN単独群で1相性、EN+TPN群で2相性変動を示したが、正転病日は差がなかった。RTPほかの栄養指標の変動に両群間に差を認めなかったが、EN+TPN群でtriglycerideとGOTの有意な上昇を認めた。2.安静時のエネルギー消費量は、術後は術前に比しEN群で1.18倍、EN+TPN群で1.32倍まで増加した。また、EN単独群では、7病日まで脂肪の燃焼比率が増加したのに対し、EN+TPN群では5病日以降脂肪燃焼比率の低下と糖利用の増加が認められたが、蛋白燃焼比率に差はなかった。3.EN+TPN群で7病日に体脂肪の増加を認めた。4.アミノ酸動員率を算出しglutamine、alanineでみると、両群で差を認めなかった。5.AKBRは1病日に最低値を示し、以後改善した。総ケトン体量は、1病日以降低値で推移した。6.術後合併症は両群で差を認めなかった。7.保険点数は、EN単独群で安価であった。以上より侵襲早期にTPNを付加しても体脂肪率の蓄積のみで、蛋白代謝上有用性は認められず、早期より腸管を利用可能な症例ではTPNは不要と思われた。
バングラデシュにおける熟練労働力の形成－パネル調査による検証

本研究は人的資源管理(HRM)の研究分野において、ほとんど研究対象として取り上げられてこなかったバングラデシュを選び、当国へ進出した日系製造業および現地系製造業が直面する経営上の問題点、特にHRM制度に係る問題点を明らかにした上で、どのような制度が熟練労働力の形成につながるかを検討した。本研究の最も大きな成果は応募者が2003年に行った調査結果と、バングラデシュ経済の大きな変革期である現在から得られた調査結果を比較するというパネル調査を通じて、企業の競争戦略、HRMシステム、労働者の職務意識、技能形成プロセスの変化を明らかにした。2012年度の当初に、データを収集させていただいた企業にすべて分析と結果のフィードバックを行った。多くの企業から貴重なご意見と謝辞をいただいた。また学術的には、「バングラデシュにおける熟練労働力の形成ーパネル調査による検証」『関西外国語大学研究論集第96号』、2012年9月を発刊した。2012年9月には、国士舘大学で開催された第19回アジア経営学会全国大会で、今までの研究成果を発表した。その発表の成果は2013年の6月に『アジア経営研究』から「バングラデシュにおける人的資源管理と技能形成との関係ーパネル調査による検証」というタイトルで出版されることが決定されている。本研究は2003年以前に行った調査から約10年経った現在、日系資本および現地系資本の製造業を対象に再び現地調査を行い、生産環境や競争戦略の変化、それに伴うHRMシステムや技能形成プロセスの変化を、3つの仮説を検証することを通じて考察した。査読者2名からも非常に高い評価を受けた。2013年3月には、ダッカ大学講師に依頼して、縫製業の女子労働者の技能形成と実態についてのアンケート調査を依頼した。当初、本人がバングラデシュに行く予定であったが、体調を少し崩したために、彼に依頼することになった。加えて、バングラデシュでは現在労働争議が激しいために、外国人研究者が労働問題を扱うことは難しいと思われるため、現地人研究者に委託した。これのデータを使っても新たな成果品を出す予定である。2013年度は今まで得られた調査結果をもとに、2本の論考を書き上げた。その内の1本は、「バングラデシュにおける人的資源管理と技能形成との関係ーパネル調査による検証」『アジア経営研究』No19,pp.3-18.である。その論稿の要旨は、バングラデシュの日系資本および現地系資本の製造業を対象に、生産環境や競争戦略の変化、それに伴うHRMシステムや技能形成プロセスの変化を、3つの仮説を検証することを通じて考察した。第1仮説に基づき、日系企業の内部昇進制度はほぼ完全に確立されたと言うことができた。第2仮説に基づき、日系企業,現地系企業ともに職務遂行能力に対する報酬である資格給の導入が大幅に進んでいた。第3仮説に基づき、労働者が職場内の複数の職務や関連した隣の職場の職務を経験することは、彼らの技能の幅を広げるだけではなく、機械・設備の異常に対処できる深い技能を習得することにも資することを検証した。もう1本は、「バングラデシュの中核労働者の実態ーアンケート調査からの試論」『関西外国語大学研究論集』第98号pp.1-20.である。その論稿の要旨は、バングラデシュのEPZで操業している日系および現地系の製造業を取り上げ、そこで働いている中核労働者の実態を見るために、資本形態および企業業績ごとに分けて、彼らの属人的要素、職務満足や組織への帰属心といった認識行動、技能形成に関連する項目との関係を検討した。本論で明らかになった主要なことは、第1に日系企業の労働者の入職時の平均賃金は現地系企業よりも低いのに対し、現在の平均賃金は平均勤続年数の長さにも反映されて高かったこと、第2に企業に対するコミットメントは日系企業の方が大きかったこと、第3に職務満足度は全体的に日系企業の方が大きかったこと、第4に技能促進に関わる事柄も日系企業の方が進んでいたことが発見された。バングラデシュはBRICSに次ぐ新興諸国の一つとして、その経済的潜在力は米欧の投資系銀行によって高く評価されている。同国は縫製業を中心にここ数年、7%近い経済成長率を続けてきており、YKK、ファーストリテイリング、帝人といった資本規模の大きい日本企業からも有望な投資先として注目されている。投資の自由化が軌道に乗り出した2004年、2005年はバングラデシュ経済の大きな変革期であり、この辺りを境に企業の競争戦略も一定の分岐点を迎えていると推察される。本研究は2003年以前に行った調査から約10年経った現在、日系資本および現地系資本の製造業を対象に再び現地調査を行い、生産環境や競争戦略の変化、それに伴うHRMシステムや技能形成プロセスの変化に注目した。

採用、昇給、昇進、教育訓練は企業にとって単なる人事管理の一要件ではなく、経営戦略上の重要な意義を持っており、人的資源管理(HRM)の新しい考え方である戦略的人的資源管理(SHRM)によれば、組織の戦略目標と人事機能との整合性を高める事が他の企業との差別化を図るためのコア能力になる。23年度は、10年前にも調査を行った日系企業、現地系企業を再び訪問し、経営者・管理者を対象に質問法と面談法を用いて、経営者管理者をに対してHRMシステムの変化と熟練技能の変容との関係を明らかにした。23年の8月、9月には日系企業の日本本社を訪問し、調査協力の取り付けを行った。また、同年9月にはアジア経済研究所でバングラデシュ専門家と調査に関してアドバイスを受けた。そして、24年2月から3月にかけてバングラデシュでの現地調査を行った。2014年8月にはアジア経営学会の国際学会がベトナムハノイで開催され、それに参加しロシアを含むアジア各国の識者と意見交換を行った。更に、2014年9月には日本大学で開催された第21回アジア経営学会全国大会において「バングラデシュの中核労働者の組織行動と技能形成の実態ー人的資源管理(HRM)との観点から」というテーマで発表を行った。その発表に基づいた論文は既にアジア経営学会に提出しており、2015年6月に出版される予定である。本研究では、本研究の目的は、バングラデシュのの輸出加工区(EPZ)で操業している日系および現地系の製造業を取り上げ、そこで働いている中核労働者(班長職、監督職、技術職)の実態を見るために、2つの類型(資本形態別分析、企業業績別分析)に分けて、労働者の属人的要素、職務満足や組織への帰属心といった組織行動、技能形成に関連する項目をHRMの視点を絡めて考察した。調査対象企業は日系企業が14社、現地系企業は16社の合計30社であり、2011年2月、2012年2ー3月の2回の調査で収集したデータに基づき分析を行った。また、研究実施計画にも明記したように、次の研究課題を探索するために、2015年2ー3月にべトナムとミャンマーを訪問した。そこでは現地系を中心にアパレル産業の経営者・管理者に経営に係る問題点をヒアリングした。中国にも訪問する予定であったが、2015年1月香港系のNGOがファーストリテイリングの委託工場で働く労働者の劣悪な条件を報道発表したために、訪問予定の中国の日系企業を調査することができなかった。いずれにせよ、次の課題を見つけるための有益な情報を得ることができた。経済政策バングラデシュでの研究調査は、現地ダッカ大学での発表以外ほぼ終了した。今後は、新たな十分に調査しきれなかった企業の聞き取り調査を実施すると共に、本研究に協力して頂いた各機関や企業に研究成果の還元を行う。同時に、バングラデシュでの今後の研究課題を探求する。研究の総括、報告書や学術論文を完成させ公刊する予定である。2014年1月に、調査対象国であるバングラデシュで総選挙が行われたが、野党の妨害により、首都ダッカの治安が悪くなっている。特に、外国人はダッカにある企業を訪問することは危険を伴うため、今回予定していた2ー3月の出張は見送った。そのため、研究の進度が少し遅れている。
欧米の知見を活用した日本に合った国際結婚家庭に対する心理援助の展開

グローバル化が進んでいるにも関わらず、日本の臨床心理学では国際結婚家庭の構成員(1国際結婚家庭の親の立場にある者、および、2子の立場にある者)をはじめ、社会的マイノリティの実態は充分に明らかになっておらず、かれらに対する支援が困難な状況にある。本研究は、国際結婚家庭の構成員に対する心理援助を通して、1国際結婚家庭の構成員の課題および支援のあり方、2日本にあった多文化間カウンセリングのあり方、3事例研究を軸とした実践にもとづく研究法のあり方を示すことを目的とする。平成30年度はまず、日本における国際結婚家庭の状況を理解するために、国際結婚夫婦の組み合わせに対する民族とジェンダーの交差性の影響を、日本全国・東京都区部・名古屋市・大阪市の19962015年統計データをもとに検討した成果を学会にて報告した。この過程を通して、国際結婚の組み合わせに対して、日本社会に通底するような民族とジェンダーの交差性の影響があることが示唆された。また、国際結婚の組み合わせに対して、エリア特有の影響があることも示唆された。さらに、平成30年度は、間接的ながらも本研究課題と関連するものとして、書籍の分担執筆者として携わり、ナラティヴ・アプローチについて解説したものが発表された。この解説を通して、ナラティヴ・アプローチの理論的背景、心理援助における活用の仕方等が整理された。上記以外にも、平成30年度は、本研究課題のための資料収集にも力を注いだ。平成30年度は、学内の倫理審査を経て、国際結婚家庭の構成員に対する心理援助にもとづく研究を開始する予定であった。しかし、年度途中に、平成31年度より他大学に赴任することが決まった。本研究課題では、国際結婚家庭の構成員に対する心理援助から得られる情報が主要なデータとなる予定である。しかし、支援を求める方々に対する募集活動に時間を要することが予想されることに加え、心理援助は一定期間に渡って行われることが一般的である。これらの点から、心理援助を受ける立場の方々に不利益が生じないよう、平成30年度の学内倫理審査の申請を見送った。その結果、遅れが生じている。平成31年度は、学内の倫理審査を経て、心理援助にもとづく研究を開始する予定である。また、引き続き、海外の動向把握にも努め、日本に合った多文化間カウンセリングのあり方についても検討する意向である。さらに、日本の国際結婚の実情の把握も引き続き行う計画である。加えて、事例研究法を軸としながら、一層の方法論に関する検討も行う考えである。平成29年度はまず、複数の人種的背景を持つ人々(multiracial people)を対象とした心理援助をもとにした臨床的事例研究のレビュー論文を執筆した。この過程を通して、欧米における複数の人種的背景を持つ人々を対象とした心理援助の傾向、および、臨床的事例研究法の状況を把握することが可能となった。次に平成29年度は、日本における国際結婚家庭の状況を理解するために、外国人の増減にともない国際結婚も増減するのかを、日本全国・東京都区部・名古屋市・大阪市の19962015年統計データをもとに検討した成果を学会にて報告した。この過程を通して、「外国人の増減にともない国際結婚も増減する」という仮説は一部支持されたものの,エリアや性別の違いによっては支持されないことも明らかになった。さらに平成29年度は、間接的ながらも本研究課題と関連するものとして、産業/組織/労働と文化との関係を扱った心理学的研究の展望を、計量テキスト分析を活用しながら行い、その成果を論文としてまとめた。この過程を通して、産業/組織/労働と文化との関係を扱った心理学的研究において、対象となりやすいテーマやサンプル、および、用いられることが多い方法等が明らかとなった。上記以外にも、平成29年度は、本研究課題のための資料収集にも力を注いだ。海外の動向を把握し、情報発信を行うことが本研究課題の目的の一つであったが、その点に関しては、2本のレビュー論文を発表したことで、当初の計画以上の成果を上げている。また、日本社会における国際結婚の実情を把握する作業をもとに、学会報告を行ったことも、当初の研究計画以上の成果である。その一方で、実際の心理援助の展開に関しては、使用する尺度の許可を海外から得るために想定していたよりも時間がかかったこと等があり、やや遅れている面もある。

平成30年度はまず、日本における国際結婚家庭の状況を理解するために、国際結婚夫婦の組み合わせに対する民族とジェンダーの交差性の影響を、日本全国・東京都区部・名古屋市・大阪市の19962015年統計データをもとに検討した成果を学会にて報告した。この過程を通して、国際結婚の組み合わせに対して、日本社会に通底するような民族とジェンダーの交差性の影響があることが示唆された。また、国際結婚の組み合わせに対して、エリア特有の影響があることも示唆された。さらに、平成30年度は、間接的ながらも本研究課題と関連するものとして、書籍の分担執筆者として携わり、ナラティヴ・アプローチについて解説したものが発表された。この解説を通して、ナラティヴ・アプローチの理論的背景、心理援助における活用の仕方等が整理された。上記以外にも、平成30年度は、本研究課題のための資料収集にも力を注いだ。平成30年度は、学内の倫理審査を経て、国際結婚家庭の構成員に対する心理援助にもとづく研究を開始する予定であった。しかし、年度途中に、平成31年度より他大学に赴任することが決まった。本研究課題では、国際結婚家庭の構成員に対する心理援助から得られる情報が主要なデータとなる予定である。しかし、支援を求める方々に対する募集活動に時間を要することが予想されることに加え、心理援助は一定期間に渡って行われることが一般的である。これらの点から、心理援助を受ける立場の方々に不利益が生じないよう、平成30年度の学内倫理審査の申請を見送った。その結果、遅れが生じている。平成30年度は、学内の倫理審査を経て、心理援助にもとづく研究を開始する予定である。また、引き続き、海外の動向把握にも努め、日本に合った多文化間カウンセリングのあり方についても検討する意向である。さらに、日本の国際結婚の実情の把握も引き続き行う計画である。加えて、事例研究法を軸としながら、一層の方法論に関する検討も行う考えである。平成31年度は、学内の倫理審査を経て、心理援助にもとづく研究を開始する予定である。平成29年度は、当初の想定よりも資料収集に費用がかからなかったことに加え、心理援助にもとづく研究を実施しなかったため、機材や録音/録画データの文字化等の費用もかからなかった。平成30年度以降は適宜、必要な資料や機材等の購入、および、録音/録画データの文字化等を行う予定である。平成30年度は、当初の想定よりも資料収集に費用がかからなかったことに加え、心理援助にもとづく研究を実施しなかったため、機材や録音/録画データの文字化等の費用もかからなかった。平成31年度以降は適宜、必要な資料や機材等の購入、および、録音/録画データの文字化等を行う予定である。
異方性超分子格子の開発と機能性分子の導入による物性制御

ボトムアップ手法を利用した分子磁性体の構築及びその物性制御に主眼を置き、本研究では二次元磁気層の層間に機能性分子を導入した異方性超分子格子の合成、特異的物性の発現、及び制御を目指している。本年度では、二次元磁気層の層間に対して異なる常磁性種を導入した際にもたらされる効果についての結論を導く事ができた。Paddlewheel型のRu二核錯体とTCNQラジカルアニオンが成す二次元層は、[Ru2]-TCNQ間に働く強い磁気交換相互作用により低温で二次元磁気層として働く。その層間に対して常磁性種[MCp*2] (M = Co, Fe, Cr)を導入することで、メタロセンの中心金属種の違いを利用した異なるスピン状態を誘発できる。得られた擬三次元構造は全て同構造体であり、また溶媒分子の脱離によって脱溶媒体を形成することが確かめられた。これらの化合物について磁気挙動を測定すると、合成直後の化合物ではフェリ磁性由来の強磁性転移が発現した。一方、脱溶媒体においては層間常磁性種の違いによって反強磁性相からフェリ磁性由来の強磁性相へと変化することが明らかとなった。これは、二次元層間の磁気相互作用と二次元層ーメタロセン間の磁気相互作用がある種のフラストレートな状態を取ることで、層間常磁性種の違いによるバルク挙動の変化が誘発されたものと考えられる。このような相互作用が競合する系では僅かな結晶構造の歪みや相互作用の違いがバルク挙動に対して影響を及ぼすが、その全てについて一定の解釈を与えることができた。29年度が最終年度であるため、記入しない。具体的な設計指針としてπ-スタック等の超分子相互作用を利用することを提案し、その計画に基づいた今年度の取り組みは、主に以下の二つに分けられる:a)すでに合成に成功した化合物の物性探索b)今後を見据えた新規化合物の合成である。a)の点においてはPaddlewheel型Ru二核錯体([Ru2])とTCNQが成す異方性二次元磁気層の層間に挟み込まれた[MCp*2]+ (M = Co, Fe, Cr)のスピンがバルク磁性に与える影響について、圧力測定の結果等から化合物内にあるスピン同士の相互作用がどのようなものかについて徐々に明らかとなってきた。当初予想していたよりも複雑な結果であったが、丁寧に情報を集めてゆくことで、スピン同士にある種のフラストレートと言える負荷がかかっているという全体像が見えてきている。この過程において学会発表も行っており、次年度に向けて確かな前進ができたものと考えている。b)の点においては、特定の[Ru2]を用いた異方性二次元磁気層に対して様々カチオンを挿入することに成功した。本手法を用いることでアンモニウムカチオンからクラウンエーテルに含有された金属イオンまでを導入することが可能であり、本研究計画で述べた異方性超分子格子の構築法が確かに有用であることを確かめた。二次元磁気層の層間に[MCp*2](デカメチルメタロセン、M = Co, Fe, Cr)を有する系を中心に、異方性超分子格子における磁気特性について詳細な検討を行った。これらの化合物の挙動は当初予想していたよりも複雑であったが、詳細な実験検討を行うことで全体像が明らかとなってきた。また、新しい超分子格子の開発についても、様々なカチオンを導入した新規化合物の合成に成功していることから、概ね順調に進展しているものと判断した。

メタロセン導入系の挙動が明らかとなってきたことで、異方性超分子格子における磁気構造について徐々に全体像が見えてきている。今後は今ある仮説を確かなものとするための追加実験を行い、成果として纏める予定である。また、[Ru2]を用いない二次元磁気層にカチオンを導入した、新規超分子格子の開発にも本格的に着手する。29年度が最終年度であるため、記入しない。
日本人および英国白人喘息患者におけるケモカイン受容体遺伝子クラスターの検討

平成12年度にPCR-SSCP法によるスクリーニングと直接塩基配列決定法によりCCR3遺伝子について2つのミスセンス変異と一つのサイレント変異を見いだし、さらに英国白人においてCCR3遺伝子内のサイレント変異が喘息と関連すること、その関連はアトピーと独立であることをロジスティック解析等により明らかにした。このことから平成13年度はCCR3遺伝子の近傍に喘息の候補遺伝子が存在する可能性を考え、その候補としてCCR3遺伝子とクラスターを形成しTh1リンパ球特異的に発現するCCR5遺伝子について検討を行った。CCR5遺伝子についてはすでにミスセンス変異(CCR5 Δ32)の存在が明らかにされており、またこの遺伝子変異はHallら^<1)>が白人で検討した結果、喘息との関連を示唆すると報告している。そこで我々は日本人においてこの遺伝子変異と喘息との関連解析をおこなうと同時に、CCR3遺伝子のサイレント変異との連鎖不均衡について、日本人391名(喘息患者210名)と英国白人234名(喘息患者142名)においてハプロタイプ解析をおこなった。しかし、日本人において喘息との関連は認められず、また二つの遺伝子変異の連鎖不均衡は両人種間で認めなかった。ケモカインとは細胞遊走能を有するサイトカイン(chemotactic cytokine)の総称であり、このうちCCケモカインに属するRANTES、エオタキシン、MCP-2、MCP-3、MCP-4は強い好酸球遊走作用を発揮している。また特定のCCケモカイン受容体がTh1/Th2リンパ球特異的に発現していることも明らかとなってきた。さらに多くのCCケモカイン受容体遺伝子が存在する染色体3p21領域に喘息原因遺伝子の存在が示唆されている。これらの事実をふまえ、本研究ではCCケモカイン受容体遺伝子群の異常が気管支喘息の発症、病態に関与しているかどうかを検討している。平成12年度はPCR-SSCP法によるスクリーニングと直接塩基配列決定法によりCCR3遺伝子について2つのミスセンス変異と一つのサイレント変異を見いだした。これを日本人391名(喘息患者210名)と英国白人234名(喘息患者142名)においてスクリーニングし、英国白人においてCCR3遺伝子内のサイレント変異が喘息と関連すること、その関連はアトピーとは独立であることをロジスティック解析等により明らかにした。CCR3遺伝子内のサイレント変異が喘息と関連したことは、その近傍の遺伝子に喘息と直接関連する遺伝子多型が存在する可能性を示唆する。次年度はさらにCCR3遺伝子とクラスターを形成しTh2リンパ球特異的に発現するCCR4遺伝子とTh1リンパ球特異的に発現するCCR5遺伝子について、同様のアプローチにより検討を行う予定である。
足細胞障害と保護の分子機序の解明

足細胞障害の関連する分子機序として、以下の3つの点について明らかにした。1)ミゾリビンは、従来知られているIMPDH阻害とは別の機序を介してピューロマイシンアミノヌクレオシドによる足細胞障害を直接的に抑制する作用を有する。2)SIRP.の細胞内領域の欠損した変異型マウスでは、足突起の平坦化、配列の乱れが生じる。また本マウスでは糖尿病性腎症への感受性が高まることより、SIRP.とその下流のシグナル伝達系路は糖尿性腎症の進展に関連した分子と考えられる。3)培養足細胞においてTGF-β1によりWT1プロモーター領域のDNAメチル化が生じる。しかし、その程度は大きくはなく、TGF-β1によるWT1の発現抑制には今回調べた領域より上流のメチル化やWT1に関連した他の分子のメチル化など関与が推測された。足細胞におけるSIRP-αの役割を検討するために、SHP-1/2結合部位を欠失させたSIRP-αを発現する変異型マウスを用いて検討を行った。メタボリックケージを用いて正確な蓄尿を行ったところ、変異型マウスで軽微ではあるが有意なアルブミン尿の増加を認めた。光顕では腎臓の有意な形態学的変化を認めず、免疫染色でも足細胞マーカーであるnephrin、synaptopodin、podocalyxinなどの発現に変化は見られなかった。しかし電顕で観察すると、変異型では足突起の平坦化が見られ、糸球体基底膜単位長あたりの足突起数の有意な減少を認めた。この足突起の平坦化は、GLEPP1というチロシンホスファターゼ欠損マウスでも報告されているものであり、チロシンホスファターゼであるSHP-1/2経路の異常でも類似のフェノタイプが出現することは大変興味深い知見である。さらに足細胞障害時におけるSIRP-αが役割を検討するため、ストレプトゾトシンによる1型糖尿病性腎症を作成したところ、以前の予備実験でみられえたものと同様に、変異型マウスでアルブミン尿の増加が確認できた。こうした結果よりSIRP-αが足細胞の形態や機能の保持に重要であることを示すことができた。またSIRP-αに関する検討と平行して、ミゾリビンによる足細胞保護作用に関する検討を進めた。ミゾリビンの免疫抑制作用における作用機序として判明しているIMPDH抑制とは別の機序によって、ピューロマイシンによる足細胞障害が抑制されることを見いだし、論文報告(Nephron Exp Nephrol, in press)を行った。ミゾリビンはヒトのネフローゼ症候群の治療にも用いられる薬剤であり、足細胞に直接的に働く可能性を示すことができた。本研究課題は足細胞(糸球体上皮細胞)障害とその保護の分子機序の解明を目的としたものであり、SIRP-αシグナル経路を中心に検討をすすめてきた。これまでの検討で、膜結合型蛋白であるSIRP-αの細胞内領域が欠損したSIRP-αmutantマウス(MUマウス)では、健常時でも微量なアルブミン尿の排泄を認め、また光顕ではほとんど異常を認めないが、電子顕微鏡的観察では足突起の平坦化が見られることを見いだした。さらにアドリアマイシン腎症によりアルブミン尿ならびに糸球体硬化が増悪することを明らかにした。平成22度はストレプトゾトシン惹起による1型糖尿病性腎症モデルを用いて、糖尿病性腎症におけるSIRP-αの役割について解析を進めた。野生型マウス(WTマウス)、MUマウスともに平均血糖値に差はなかったが、MUマウスではWTマウスに比べてアルブミン尿の増加がみられた(600±168 vs 90±33μg/日、MU vs WT、P<0.01)。またMUマウスではより高度な糸球体過剰濾過(CCr 0.78±0.11 vs 0.41±0.16mL/分、MU vs WT、P<0.05)、GBM肥厚(0.34±0.02±vs 0.27±0.02±0.02μm、MU vs WT、P<0.05)がみられた。一方、メサンギウム領域の変化は両群で差が見られなかった。以上よりSIRP-αの細胞内シグナル経路の遮断は、高血糖によるポドサイト障害を増強し、糸球体過剰濾過を増悪させると考えられた。さらに細胞レベルでのSIRP-αの働きを詳細に検討するために、レンチウイルスを用いたsh-RNAによるSIRP-α発現が低下した足細胞株の作成、ならびにWTとMUマウスより足細胞を単離培養し、CDK4遺伝子を導入することで細胞内領域が欠損したSIRP-αを発現する培養細胞の作成に着手し、それぞれの細胞株を獲得した。

来年度はこれらの細胞株を用いて、さらに解析を進める予定である。本研究課題は足細胞(糸球体上皮細胞)障害とその保護の分子機序の解明を目的としたものである。昨年度から引き続き、SIRP-αシグナル経路を中心に検討を進めた。SIRP-αの働きを細胞レベルで詳細に解析するために、野生型とSIRP-α変異型マウスより足細胞を単離培養し、CDK4遺伝子またはSV40遺伝子をそれぞれ導入することで各細胞株を樹立した。これらの細胞を用いて足細胞におけるSIRP-αの役割について、形態、遊走能、細胞障害性などについて各細胞株を比較して検討を行った。そしてこれまでのSIRP-α変異型マウスで得られた研究成果をまとめ、国際誌へ投稿し、現在revise中である。またnephrin-CreマウスとSIRPα-loxPマウスの交配を行い、足細胞特異的なSIRPα欠損マウス作成を試みた。ジェノタイプでは目的の遺伝子が交配されたマウスを得ることができ、さらにそのマウスの糸球をSIRPαで染色したところ、足細胞でのSIRPα欠失が確認できた。まだ少数例の予備実験ではあるが、足細胞特異的SIRPαマウスでもこれまで検討してきた全身性のSIRP-α変異型マウスと同様に、電子顕微鏡的観察で足細胞の形態学的異常が確認された。またSIRP-αとは別に、腎臓の分化に重要な転写因子であり、成熟腎では足細胞に強く発現されるWilms腫瘍遺伝子(WT1)に関する検討を行った。TGF-β1は足細胞のWT1発現を抑制することが報告されているが、その機序は明らかではない。近年、DNAメチル化による遺伝子発現制御が注目されている。そこで足細胞でのTGF-β1によるWT1の発現低下機序として、プロモーター領域のDNAメチル化の関与を検討した。ヒト不死化培養足細胞を用いてWT1遺伝子のプロモーター領域のメチル化を定量的メチル化特異的PCRで検討したところ、TGF-β1添加によりメチル化の増加を認めた(14.3%vs2.9%、TGF-β1有vs無)。バイサルファイトシークエンス法でも同様の結果が得られた。以上、平成23年度は足細胞におけるSIRP-αに関する検討の継続と新規にWT1に関する解析を開始した。これらの検討は足細胞の障害とその保護の分子機序解明の一助になるものと思われる。
光干渉断層計を用いた網膜光凝固術に伴う微小変位計測

糖尿病網膜症や網膜剥離等に対し有効的な治療法の一つである網膜光凝固術は、時に過度な網膜損傷を与えてしまう恐れがある。これはレーザー照射に伴うを損傷を客観的に評価する事が難しいためである。そこで今回、定量的にかつ客観的に評価する手段として、網膜光凝固術に伴う微小変位を計測する手法を考案・提案した。本手法では、まず、光干渉断層計を用いて複数の断層画像を同位置で連続的に取得し、レーザー照射を同時に行う。次に、複数の断層画像から照射前の参照画像と照射後の標的画像を選択し、その画像間における局所変位を求める。局所変位、ここでは、二次元断層平面内の横方向ならびに縦方向変位、また、平面外方向の変位の絶対値、は新たに提案した変位計測法に基づき高速に計測される。このため、得られた複数の断層画像間から、レーザー照射に伴う変化を客観的に捉える事ができると考えられる。実際、本手法の実行可能性を確かめるため、エキソビボの豚眼を用いて検証実験を行った。結果、本手法を用いることで、通常の光干渉断層計で捉える事の難しかった組織の動きおよび微小変化を可視化する事に成功した。加えて、レーザー照射中・直後における組織の動的変化を定量的に解析する事を可能にした。これらは、レーザー照射中の組織の変化のさらなる理解を深めると同時に、その客観的評価による新しい指標を網膜光凝固術に与える可能性を示した。本研究内容は論文として出版され、また国際学会においても公表されている。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。