hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
クルマエビの病原微生物感染に対する防御機構に関する研究

血球凝集因子を活性化する酵素TGaseの標的としたRNA干渉により、血球凝集システムと免疫関連遺伝子発現制御に何らかの関連があることが分かった。クルマエビの抗菌タンパク質は体内に侵入して来た細菌の増殖抑制に重要であることが明らかとなった。非特異的2本鎖RNAを接種したクルマエビでは非特異的に病原微生物に対してある程度の抗病性を示し、新規遺伝子が関与していることが示唆された。クルマエビ遺伝子の発現を網羅的に解析するマイクロアレイを開発した。(1)血球凝集因子の発現をRNA干渉(RNAi)法により抑制した際に、遺伝子発現が抑制される遺伝子の特定と、そのメカニズムの解明(2)RNA干渉(RNAi)法により、これまでにクローン化して来た生体防御関連遺伝子をノックダウン(遺伝子産物発現抑制)し、これら生体防御関連遺伝子の生体内機能の解析を行うとともに、(3)2本鎖RNA投与による微生物感染に対する感受性変化の検討ならびに耐病性との関係について検討(4)クルマエビ類の生体防御関連遺伝子発現制御ネットワークの解明血球凝集因子を活性化する酵素TGaseの標的としたRNA干渉により、血球凝集システムと免疫関連遺伝子発現制御に何らかの関連があることが分かった。血球凝集因子を活性化する酵素TGaseの標的としたRNA干渉により、血球凝集が抑制されたクルマエビを作出し、このクルマエビ血球における遺伝子発現変動について、我々が開発したクルマエビ類の遺伝子発現解析用マイクロアレイにて約2,000種類の遺伝子発現変動を調べたところ、いくつかの免疫関連遺伝子において発現に変化が見られた。このことから、血球凝集システムと免疫関連遺伝子発現制御に何らかの関連があることが分かり、今後、エビ類の免疫研究に重要な情報を得ることが出来た。クルマエビよりクローン化した抗菌タンパク質(Crustin、Penaeidin、Lysozyme)遺伝子のサイレンシングを行ったところ、病原微生物の感染無しにクルマエビの斃死がみられたことから、抗菌タンパク質は通常のエビの生存に重要な因子であることが示唆された。さらに、これら遺伝子のサイレンシング後に血中の細胞数が減少することと、血中の細菌が増加していることが分かった。これらのことより、抗菌タンパク質は体内に侵入して来た細菌の増殖抑制に重要であることが示唆された。2本鎖RNAを接種したエビは非特異的に病原微生物に対してある程度の耐性を示すことから、2本鎖RNAを接種したエビ血球で特異的に発現上昇が見られた遺伝子のcDNA断片をクローン化し、塩基配列を決定した。決定した塩基配列は既知の配列とは相同性が見られなかったことから、新規遺伝子であることが示唆された。クルマエビの抗菌タンパク質をRNA干渉によりノックダウンすると病原微生物の攻撃試験しなくともエビが死亡することを昨年度明らかにした。今年度はそのメカニズムについて検討した。まず、抗菌タンパク質をノックダウンすると血球数が減少することを明らかにした。減少した研究が他の抗菌タンパク質の発現も行っているか、さらには残っている血球が抗菌タンパク質を発現しているかについて細胞レベルでの遺伝子発現を調べた。抗菌タンパク質遺伝子としてリゾチウムをノックダウンすると他の抗菌タンパク質を発現する細胞の比率が増加することが明らかとなった。また、血液中の細菌数は抗菌タンパク質ノックダウン後増加し、2日目に最大になることがわかった。さらに、抗菌剤入りの飼育水で抗菌タンパク質をノックダウンしたクルマエビを飼育すると死亡が抑制されたことから、血中に存在する細菌と免疫担当の血球がバランスを取っており、そのバランスが崩れると体内細菌が増加し、クルマエビを死に至らしめることが考えられた。クルマエビ類の免疫関連因子であるプロフェノールオキシダーゼをノックダウンすると同様な結果が得られた。これらのことから、クルマエビの免疫システムは環境中に存在し、体内に侵入してくる細菌や体内に棲息している細菌とバランスを保ち、エビの健康を維持していることが示唆された。クルマエビの血球凝集活性化因子であるトランスグルタミナーゼをノックダウンすると複数の免疫関連遺伝子の発現が抑制されることがマイクロアレイによる大規模遺伝子発現解析で明らかとなった。このことから、トランスグルタミナーゼは何らかの形で、免疫関連遺伝子の発現を調整していると考えられた。RNA干渉法によりクルマエビリゾチームの機能が抑制されても他の遺伝子の発現は抑制されないことを、マイクロアレイを用いて網羅的に解析したところ、3倍以上の発現低下を示した遺伝子は、二本鎖RNA接種後1日目および3日目ともに、リゾチーム遺伝子以外認められなかった。さらに、クルマエビ血リンパ中の細菌叢を明らかにするために、細菌特異的な16SリボソームDNAの塩基配列を解析したところ、その約9割がグラム陰性菌由来であった。クルマエビ血リンパをHI寒天培地上で培養するとグラム陰性菌であるビブリオ属が優占することからも、クルマエビリゾチームはグラム陰性菌に対して重要な役割があると推察される。そこで、グラム陰性菌とクルマエビリゾチームとの関連を確かめるために、クルマエビに蛍光標識した大腸菌を接種し、クルマエビ血リンパを経時的にサンプリングし、蛍光顕微鏡下で細菌数を計測した。

結果、リゾチームノックダウンクルマエビでは大腸菌に対する排除能を低下させ、さらにクルマエビ血リンパ中での増殖を可能にした。以上のことから、クルマエビリゾチームは生体内で少なくともグラム陰性菌の制御に重要な役割を果たしていることが示唆された。抗菌タンパク質のクラスチン様タンパク質をノックダウンするとリゾチウムのノックダウンの際と同じような結果が見られたことから、クルマエビ類では一つ一つの抗菌タンパク質が免疫に重要な役割を果たしていることが示唆された。クルマエビ類の遺伝子配列情報を蓄積するために大規模EST解析を行い、約8万配列を得た。これらを基にマイクロアレイを作製することが可能となった。
パニックディスオーダーの病態生理と治療に関する研究

パニックディスオーダー(PD)患者群を対象に、聴覚事象関連電位のP300成分と、空間恐怖・治療反応性について検討した。対象患者群はDSMIII-Rの診断基準を満たし、目的・方法を説明し同意を得た35名(男13名、女22名、平均35.9±7.3才)で、対照群は健康成人17名(男13名、女4名、平均32.4±2.1才)とした。1)空間恐怖の有無による認知機能の電気生理学的特徴の検討。患者群の亜型分類は、空間恐怖を伴う群(A+群)18名、伴わない群(A-群)17名。検査は服薬前又は1週間の未服薬期間をおいて実施し、病像の評価は問診とSDS,STAI,HRSD,HRSAにより施行した。事象関連電位は音刺激によるodd-ball課題とし、目標刺激の計数課題を遂行させた。頭皮上Fz、Cz、Pzの3部位から導出した波形をNeuropac k8(日本光電製)を用いて、帯域周波数150Hzで30回加算平均した。P300の潜時と電位は、A+群、A-群、対照群の順に、Fzでは350.8±19.4msec,6.8μV、333.6±16.1msec,7.3μV、325.8±14.6msec,7.6μV、Czでは356.2±24.9msec,8.8μV、335.8±20.3msec,8.1μV、331.9±23.0msec,10.7μV、Pzでは364.8±19.2msec,11.1μV、345.1±20.6msec,10.2μV、337.9±23.0msec,12.8μVであった。潜時についてA+群は、A-群及び対照群との間にFz,Cz,Pzの3部位で有意差を認めた。患者群の病像の評価点は2群間で差がなかった。2)P300潜時の治療による変化。アルプラゾラムを4週間投与し、PD症状の改善した患者群(A+群12名、AP-群10名)において、P300成分潜時、電位の4週間の変化を測定したが、P300潜時・電位の変化分については両群で有意差はなかった。1)2)より、A+群は電気生理学的に把握可能な認知機能障害を有した群であり、PD患者の空間恐怖の素因規定性の可能性が示唆された。今後は認知療法を適用した患者群についても治療反応性と生理学的測度の変化を検討し、電気生理学的特徴からの亜型分類を試みる。
発達障害のある高校生の認知処理支援のための情報提供に関する研究

日本版DN-CAS認知評価システム(DN-CAS)は,適用年齢が5歳から17歳までと幅広く,検査で測定できるプランニング,注意,同時処理,継次処理の4つの認知処理能力は,幼児児童生徒の「個別の教育支援計画」や「個別の指導計画」の立案の際に重要な情報を提供する。本検査結果の分析と解釈は,現在喫緊の課題である発達障害を有する高校生の支援も含め,特別の教育的支援を必要とする幼児児童生徒を教育する学校現場にとって,大きな示唆をもたらすものであると考える。そこで本研究では,DN-CASの分析を学校現場が実施しやすくするためのツールとして,「学校向けDN-CAS用所見作成マニュアル」を開発した。発達障害を有する幼児児童生徒について検査を実施し,データを得た。2認知尺度のパターン化学習障害(LD),注意欠陥多動性障害(ADHD),広汎性発達障害(ASD)について,PASSプロフィール,下位検査プロフィール,使用した方略の特徴についてパターン化を行った。なお,統計処理にあたっては,SPSS Statistics 19を使用した。プランニング,同時処理,注意,継次処理のプロフィールとして,LDは注意は高くならず,継次処理は低くならないこと,ADHDは「N字型」を示すこと,ASDは「逆N字型」を示すことが示唆された。また,下位検査のプロフィールとして,LDは「図形の推理」「関係の理解」「表出の制御」が,ADHDは「表出の制御」が,ASDは「発語の速さ/統語の理解」が相対的に低くなる傾向が示唆された。3「学校向けDN-CAS用所見作成マニュアル」の開発日本特殊教育学会第48回大会(長崎大学),日本LD学会第19回大会(愛知県立大学)でポスター発表を行うと同時に,情報収集を行った。また,第39回発達神経心理学研究懇話会(DN-CAS事例検討会)においても情報収集を行い,得られた知見を総合して,Microsot Excelにより「学校向けDN-CAS用所見作成マニュアル」を開発した。開発にあたっては,試作版を青森県総合学校教育センター特別支援教育課,日本版DN-CAS作成者で評価した。公開については,現在関係者間で検討中である。
腸内細菌叢による炎症性腸疾患修飾におけるPRRとサイトカインの役割の解析

平成23年度にDectin-1遺伝子欠損マウスに急性大腸炎を誘導し、急性大腸炎の発症程度が野生型マウスより減軽することを確認した。メタゲノム解析法で野生型マウスに比べDectin-1欠損マウスの腸内細菌叢の中にグラム陰性細菌の割合が亢進していることが分かって、増加した細菌はDectin-1下流に誘導されている抗菌ペプチドレベル変化と関係することも明らかとなった。Dectin-1のアンタゴニスト糖鎖物質の投与実験を行い、Dectin-1を標的とした急性大腸炎の予防法は効果があることを明らかにした。平成23年度に得られた結果を基にして、平成24年度に急性大腸炎と異なる獲得免疫系のTh細胞の分化と増殖が発症要因とした慢性大腸炎の発症におけるDectin-1の役割を検討し、Dectin-1の欠損宿主でnaiveT細胞から制御性T細胞、Th17細胞への分化が顕著に亢進し、Th1細胞への分化が低下したことが分かった。それは原因でDectn-1欠損マウスの慢性大腸炎の発症が軽減し、Dectin-1は腸管Th細胞分化のバランスを制御していることが明らかとなった。ApcMin-Dectin-1欠損マウスを作出し、腸管ポリープ形成におけるDectin-1の機能ついて検討したところ、Dectin-1欠損によってポリープの形成は著しく亢進していたことが分かった。消化管に原因不明の炎症を引き起こす炎症性腸疾患や大腸がんの予防法及び新たな治療法の開発が強く求められている。申請者は、βグルカン受容体Dectin-1に注目し、炎症性腸疾患および腸管ポリープ形成修飾における腸管内細菌叢のDectin-1を介したシグナルと自然免疫および獲得免疫系調節機構の解明を目指した。Dectin-1リガンド物質を投与し、腸管ポリープ・腫瘍形成の抑制効果を検討し、現在まで有意な予防・治療効果がまだ再確認する必要がある。消化管に原因不明の炎症を引き起こす炎症性腸疾患や大腸がんは、近年日本において罹患率が大きく上昇していることから、その予防法及び新たな治療法の開発が強く求められている。これら腸疾患の発症には腸内細菌叢と免疫細胞の相互作用が極めて重要であることが知られている。そこで申請者は、βグルカン認識に関わるC型レクチン受容体Dectin-1に注目し、炎症性腸疾患および腸管ポリープ形成修飾における腸管内細菌叢のDectin-1を介したシグナルと自然免疫および獲得免疫系調節機構の解明を目指す。本研究では遺伝子欠損マウスを用いた誘導型大腸炎やポリープ自然発症モデルのin vivo解析と腸内細菌叢のメタゲノム解析を組み合わせて行い、最終的には腸疾患の予防、治療法の開発などの創薬への応用の可能性を探る。平成23年度にDSS飲料水内投与によってDectin-

1遺伝子欠損(Clec7a-/-)マウスに急性大腸炎を誘導し、急性大腸炎の発症程度が野生型マウスより減軽することを確認した。メタゲノム解析法で野生型とDectin-1欠損マウスの腸内細菌叢の中にβグルカン産生性細菌、真菌などが存在するか検討し、細菌でなく、真菌が存在することが明らかとなった。野生型とDectin-1欠損マウスの腸内細菌叢を回収し、作製した無菌Dectin-1欠損マウスに経口感染させてから大腸炎を誘導し、その病態を評価することにより、野生型マウスよりDectin-1欠損マウスの腸内細菌叢に割合が顕著に増加した細菌はDectin-1の欠損による抗菌ペプチドレベル変化と関係することを明らかにした。また、大腸炎モデルにおけるDectin-1シグナルのTh細胞分化への影響も検討した。最後に急性大腸炎の発症を防ぐためにDectin-1のアンタゴニスト糖鎖物質の投与実験を行い、Dectin-1を標的とした予防法は効果があることを明らかにした。平成23年度にDSS飲料水内投与によって誘導されたDectin-1欠損マウスの急性大腸炎の発症程度が野生型マウスと比べ減軽することを確認し、そのメカニズムについては、当初予想していたβグルカン産生性細菌、真菌などが存在すること以外は、regulatoryT細胞がDectin-1欠損によって有意に増加し、炎症を抑えることも見出した。メタゲノム解析法でマウスの腸内細菌叢の中にβグルカン産生性細菌でなく、βグルカンを持つ真菌が存在することが明らかとなって、また当初に予想していなかった野生型マウスと比べDectin-1欠損マウスの腸内細菌叢に割合が著しく増加した細菌を同定した。野生型とDectin-1欠損マウスの腸内細菌叢を回収し、自作した無菌Dectin-1欠損マウスに経口感染させてから大腸炎を誘導し、Dectin-1の欠損で変化した細菌叢の炎症抑制性が移入ホストのDectin-1シグナルに依存していなく、つまり野生型マウスでも示したことを見出した。Dectin-1欠損マウスの腸内細菌叢に割合が顕著に増加した細菌はDectin-1の欠損による抗菌ペプチドレベル変化と関係することが明らかとなって、当初の計画により大幅に進んでいた。また、平成24年度に予定していた大腸炎モデルにおけるDectin-1シグナルのTh細胞分化への影響も一部検討した。最後に急性大腸炎の発症を防ぐためにDectin-1のアンタゴニスト糖鎖物質の投与実験を行い、Dectin-1を標的とした予防法は効果があることも明らかにしたため、当初の予定より全体的に計画以上に進展している。平成23年度に得られた結果を基にして、平成24年度に自然免疫細胞及びそれらが産生するサイトカインが病態形成を担っている急性大腸炎と異なる獲得免疫系のTh細胞の分化と増殖、そしてTh細胞から産生されるサイトカインが発症要因とした慢性大腸炎の発症におけるDectin-1の役割を検討する。続いてApcMin-Clec7a-/-マウスを作出し、腸管ポリープ形成におけるDectin-1の機能ついて検討する。
クロムおよび白金族元素鉱床の統一的成因論および探査/評価システムの確立

クロマイトの成因に関しては,オマーンオフィオライトの地殻部のポディフォームクロミタイトの研究により,飛躍的な発展をとげたと考える.このクロミタイトは後期貫入岩とそれに取り込まれたガブロの部分溶融メルト(シリカに富む)の境界付近にレンズ状に生じており,産状的にはポディフォームである.一方,スピネルは細粒で完全な自形であり,マトリックスには斜長石が卓越する.スピネルはクロム,鉄に富んでいる.これらの特徴は層状貫入岩体の層状クロミタイトのものと一致する.すなわち,このクロミタイトは今まで記載されたことのない,オフィオライトで層序的に最上位のポディフォームクロミタイトであり,層状クロミタイトの特徴も合わせ持つ,両者の中間的なものである.この層状クロミタイトに組成の類似したクロミタイトは,後期貫入岩を作った玄武岩質マクマとガブロの部分溶融メルトの混合により形成されたと解釈できる.従って,層状クロミタイトはIrvine(1975)が最初に主張したように,玄武岩質マグマとマグマ溜りの周囲の地殻岩が部分溶融したシリシックメルトの混合でできたものであろう.Arai and Yurimoto(1994)のかんらん岩中のポディフォームクロミタイトの成因論を合わせ考えると,クロミタイトの生成にはそのタイプを問わず,2種類のマグマの混合が不可欠であることがわかる.一方はかんらん石-スピネルに飽和した玄武岩質のものであり,他方はシリカに富むメルト(通常のポディフォームクロミタイトではマントル斜方輝石の分解溶融によるもの,層状クロミタイトでは地殻の岩石の部分溶融メルト)である.また,マントルのポディフォームクロミタイトの生成は,斜方輝石か非調和融解するような最上部マントルの方がより効果的に行われると思われる.白金族元素鉱物の生成にも2種類のマグマの混合は有利てある.玄武岩マグマが白金族元素を,シリカに富むメルトは硫黄を供給する.クロマイトの成因に関しては,オマーンオフィオライトの地殻部のポディフォームクロミタイトの研究により,飛躍的な発展をとげたと考える.このクロミタイトは後期貫入岩とそれに取り込まれたガブロの部分溶融メルト(シリカに富む)の境界付近にレンズ状に生じており,産状的にはポディフォームである.一方,スピネルは細粒で完全な自形であり,マトリックスには斜長石が卓越する.スピネルはクロム,鉄に富んでいる.これらの特徴は層状貫入岩体の層状クロミタイトのものと一致する.すなわち,このクロミタイトは今まで記載されたことのない,オフィオライトで層序的に最上位のポディフォームクロミタイトであり,層状クロミタイトの特徴も合わせ持つ,両者の中間的なものである.この層状クロミタイトに組成の類似したクロミタイトは,後期貫入岩を作った玄武岩質マクマとガブロの部分溶融メルトの混合により形成されたと解釈できる.従って,層状クロミタイトはIrvine(1975)が最初に主張したように,玄武岩質マグマとマグマ溜りの周囲の地殻岩が部分溶融したシリシックメルトの混合でできたものであろう.Arai and Yurimoto(1994)のかんらん岩中のポディフォームクロミタイトの成因論を合わせ考えると,クロミタイトの生成にはそのタイプを問わず,2種類のマグマの混合が不可欠であることがわかる.一方はかんらん石-スピネルに飽和した玄武岩質のものであり,他方はシリカに富むメルト(通常のポディフォームクロミタイトではマントル斜方輝石の分解溶融によるもの,層状クロミタイトでは地殻の岩石の部分溶融メルト)である.また,マントルのポディフォームクロミタイトの生成は,斜方輝石か非調和融解するような最上部マントルの方がより効果的に行われると思われる.白金族元素鉱物の生成にも2種類のマグマの混合は有利てある.玄武岩マグマが白金族元素を,シリカに富むメルトは硫黄を供給する.オマーン・オフィオライトでのポディフォーム・クロミタイトの分類と成因の解明,および白金族元素濃集との関連はほぼ明かとなった.ポデイフォーム・クロミタイト形成(マントルにおけるCrの濃集)のメカニズムの精密化のために多里-三坂かんらん岩体の若松鉱山周辺においてクロミタイト・ポッドのサイズと構成鉱物の組成の相関関係の有無を調べた.同岩体はハルツバーガイトが岩体を通してほぼ同一の性質を有しているため,クロミタイト形成において重要な変数である壁岩の組成が一定であるという利点がある.国内最大のポッドである七号鉱体はクロムスピネルがもっともCrに富んでいる(Cr#が高い)ことは判明したが明瞭な相関関係は見出せなかった.従って,資源上もっとも重要なポッドのサイズを支配する要因の解明は今後の問題として残った.また,軽微な蛇紋岩化を受けたオマーンのクロミタイトに,特徴的なOs-Ir-Ru酸化物が見い出された.これは初生的な硫化物(主としてRuの硫化物であるローライト)の変質により生成されたことが形状,産状から明らかになった.この酸化物のOs-Ir-Ru比は初生的な硫化物と変わらないことから,蛇紋岩化の条件(300°C程度以下?)ではこれらの白金族元素はほとんど移動しないことが判明した.ニュージーランド北島においてクロムスピネルに富むダナイトの捕獲岩が予察的に見い出された.

西南日本弧と併せて,島弧下マントルでのクロムの濃集が確認されたことになる.ポディフォーム・クロミタイトの成因を一般的に理解するために,オマーン・オフィオライトにおいて我々が発見した最も層序的に浅所に形成されたポディフォーム・クロミタイトを詳しく検討した.このクロミタイトはいわゆる後期貫入岩体に属するダナイト中のペグマタイト的ガブロのネットワーク状の脈に伴って産する.このダナイト岩体はオフィオライト層序のガブロ最上部(等方性ガブロ)とシート状岩脈群にまたがって貫入している.通常のガブロがモホ遷移帯マントルに産することを考えると,上中部地殻に産する特異なものである.クロミタイは単斜輝石および斜長石をマトリックスとして含み,クロムスピネルは比較的細粒で自形である.この点では通常のポディフォーム・クロミタイトよりも層状クロミタイトに類似する.スピネルはフロゴパイト,パーガス閃石,斜方輝石の包有物に富む.スピネルのCr#は0.6前後,TiO_2、含有量は1wt%前後である.後期貫入岩体は周囲の岩石を取り込むことが普通であるので,ダナイト中にのみ認められるガブロ脈はダナイトを形成したクリスタル・マッシュに取り込まれて融解したマフィック岩塊に由来すると思われる.クロミウムはクリスタル・マッシュ中のメルトに由来すると思われる.すなわち,ここでも比較的分化した組成を有するガブロ・メルトとマッシュの未分化メルトとの混合が重要な役割を果たしていたことになる.この未分化メルト(クロマイト成分に飽和)と分化メルト(比較的シリカに富む)との混合こそがポディフォーム・クロミタイトの生成に共通の要素である.また,このクロミタイトのPGE分布パターンはオマーン・オフィオライトのモホ遷移帯中のものに一致しており同一の成因を示唆する.オマーンオフィオライトの地殻部の新たなタイプのポディフォーム・クロミタイトを記載し,クロム鉱床の成因論に対して新たな提言を行った.あらゆるタイプのクロム鉱床の生成に,未分化マグマと分化マグマの混合が重要な役割を果たしていることが明らかになった.同オフィオライトのマントル部分のクロミタイトの調査をワジ・ラジミ地域を中心に行った.その結果,今まで検討されたことのないいくつかのポッドについて新たな知見を得ることが出来た.そのいくつかは白金族元素に富んでいることが予想される.これらのポッドはダナイトの脈に「貫かれている」が,それはスピネル+かんらん石のマッシュからかんらん石のみが分離して生成したように見える.現在化学組成を検討中であり,クロム鉱床成因論に修正を迫る結果が出つつある.原生代のオフィオライトのうちもっともその層序が保存されているとされる,モロッコのボウ・アゼールオフィオライトのかんらん岩およびクロミタイトの予察的研究を行った.その結果,かんらん岩の原岩はハルツバーガイトおよびダナイトであり,スピネルのCr#は0.8以上と高いことが判明した.また,ハルツバーガイトの斜方輝石のモードは比較的低い.クロミタイトのスピネルも同様にCrに富む.今までの我々のエジプトおよびイランの同時代のオフィオライトもほぼ同様の性質を有することから,原生代のオフィオライトのマントル部は顕生代のものに比べて全体的に枯渇度が高いことが判明した.この環境は,クロミタイト鉱床のCr/Al比を高めるためには好都合であるが,大規模な鉱床を作るには不利である.また,この違いは地球の熱史を反映している可能性がある.
藍の発酵建の機構の解明

伝統的な藍染は、発酵建と称し、すくもに含まれるインジゴ分が、発酵によって還元されて染色が行われている。しかし、この古くから行われている藍の発酵建は、藍以外の添加物の力を借りて還元が起こるのはわかっているが、その添加物にもともと還元力があるのか、発酵することによって還元物質が生成するのか、添加物がすくも中の微生物の栄養となりその微生物が還元を行うのか、詳しくはわかっていない。そこで、日本で代表的な添加物であるふすまと、どの様な理由で使用されているか不明だが、西洋で添加物として使用されていたという西洋茜を使用し、藍の発酵建を小規模で実現するとともに、その添加物の効果について調べた。藍の発酵建は、インジゴの還元体が空気酸化を受けやすいために、小規模では困難とされているが、脱酸素等の厳密な管理を行うことで、極めて小規模の試験管内での発酵建てを実現することができた。添加物として、まずふすまを用いて発酵建てを行ったところ、時間や量の増加と共によく還元された。また、ふすま抽出液を利用して発酵建てを行うこともできた。西洋茜でも同様の傾向が見られた。ふすまは小麦から小麦粉をとったカスで、麦芽にはアミラーゼが含まれている事から、ふすま抽出液中のアミラーゼの有無を調べたところその含有が認められ、アミラーゼがふすま中の多糖類を還元糖分解してインジゴ還元が起こっているのではないかと考察された。
p53による癌転移抑制メカニズムの解明

前年度の研究結果より、肺線がんにおいて、p53によって抑制制御される4回膜貫通型タンパク質TS-Xは、細胞運動や浸潤の促進に関与し、マウスにおける肺転移制御にも関与することを示した。また、TS-Xの結合因子探索を試みたところ、数種のインテグリンやADAM10、MT1-MMP、CD44等が結合することがわかった。これらの因子は、TS-Xと同じ4回膜貫通型タンパク質のファミリーで転移抑制性の因子として知られるCD82には結合しなかった。そこで、本年度においてはTS-X結合因子から、TS-Xによる細胞運動や浸潤の促進機構について解析を進めた。p53変異体がインテグリンのリサイクリングを促進し、細胞運動や浸潤の亢進を導くという報告より、TS-Xがインテグリンのリサイクリングを促進するか検討したが、有意な影響は認められなかった。次に、ADAM10やMT1-MMPがCD44の細胞外ドメインの切断を行うことで細胞運動や浸潤を促進するという報告より、TS-XのCD44切断への関与を検討したが、有意差は得られなかった。そこで、CD44が細胞内活性酸素種(ROS)の低下を誘導し、がんの悪性化に寄与するという報告から、TS-XによるCD44を介した細胞内ROS制御への関与を検討した。TS-Xの発現抑制により、過酸化水素による細胞内ROSの誘導が促進され、また、CD44の発現抑制による細胞内ROSレベルの上昇、同時に細胞浸潤能の低下が見られた。そして、ROS除去剤による細胞運動や浸潤能の亢進、及び酸化誘導剤による細胞運動や浸潤能の低下も観察された。これより、TS-XがCD44を介した細胞内ROSレベルの制御を行うことで、細胞運動や浸潤の亢進に効いていることが示唆された。以上の結果より、TS-Xの働きを効率よく阻害する抗体は、将来、肺がんの抗転移薬となることが期待できる。本年はTS-Xによる細胞の運動や浸潤の制御メカニズムの解明を主な目的としていたので、概ね達成することができた。TS-Xを介したがん転移抑制機序開発のために、さらなる詳細なTS-Xによる細胞運動や浸潤制御のメカニズムの解明、また、抗体等のTS-X機能阻害剤の開発を推進する必要がある。また、臨床検体を用いた解析を通して、臨床上における研究意義をさらに追究していきたい。まず、不死化したヒト正常肺細気管支上皮細胞(hSAEC)を用いて、肺癌モデル実験系を樹立することができた。具体的には、活性化型K-Rasと同時に、p53経路およびRB経路などを不活性化することが知られるSV40ウイルス由来のLarge T抗原及びSmall T抗原を発現させたhSAEC (hSAEC^<LT/ST>)を作製したところ、免疫不全マウスにおいて造腫瘍能が見られた。また、尾静脈注射による肺転移能も検討したところ、効率良く肺に細胞が生着することがわかった。これは、ヒト肺上皮細胞が、がん化及び悪性化する過程と類似しており、意義深い実験系の確立と言える。一方、私たちはp53によって抑制制御される細胞運動・浸潤促進に関与する4回膜貫通型タンパク質TS-Xを同定している。p53変異体のがん細胞株やhSAEC^<LT/ST>において、TS-Xの発現を抑制すると、in vitroにおける細胞運動能や浸潤能が低下した。TS-Xを安定的に発現抑制させたhSAEC^<LT/ST>を作製し、上記の尾静脈注射による肺転移モデル実験を行ったところ、TS-Xの発現抑制により、肺転移の抑制、マウス生存率の上昇が認められた。TS-Xが細胞運動や浸潤を促進するメカニズムを追究するために、TS-Xに結合する因子の探索を試みたところ、数種のインテグリンやADSM10、MT1-MMP、CD44などが結合することがわかった。TS-Xとそれら因子との相互作用が、TS-Xによる細胞運動・浸潤の促進機構に関与しているか、またその詳細なメカニズムについては現在検討中である。TS-Xに対する抗体の作製については、(株)免疫生物研究所との共同研究で、現在開発中であり、TS-Xの働きを効率よく阻害する抗体は、将来、肺がんの抗転移薬となることが期待できる。

そこで、CD44が細胞内活性酸素種(ROS)の低下を誘導し、がんの悪性化に寄与するという報告から、TS-XによるCD44を介した細胞内ROS制御への関与を検討した。TS-Xの発現抑制により、過酸化水素による細胞内ROSの誘導が促進され、また、CD44の発現抑制による細胞内ROSレベルの上昇、同時に細胞浸潤能の低下が見られた。そして、ROS除去剤による細胞運動や浸潤能の亢進、及び酸化誘導剤による細胞運動や浸潤能の低下も観察された。これより、TS-XがCD44を介した細胞内ROSレベルの制御を行うことで、細胞運動や浸潤の亢進に効いていることが示唆された。以上の結果より、TS-Xの働きを効率よく阻害する抗体は、将来、肺がんの抗転移薬となることが期待できる。本年はTS-Xによる細胞の運動や浸潤の制御メカニズムの解明を主な目的としていたので、概ね達成することができた。TS-Xを介したがん転移抑制機序開発のために、さらなる詳細なTS-Xによる細胞運動や浸潤制御のメカニズムの解明、また、抗体等のTS-X機能阻害剤の開発を推進する必要がある。また、臨床検体を用いた解析を通して、臨床上における研究意義をさらに追究していきたい。
温度をパラメータとした水素ダイナミクスの実空間観測

温度可変のSTMを導入することで,水素や水分子が関与する表面反応を捉えることを目標にした。まず,Cu(110)においてSHとOHのフリップ運動を観測し,その活性化障壁を見積もることに成功した(PCCP18, 4541,2016)。さらに,硫化水素と酸素原子の間の水素移動反応を直接観測した。加えて一酸化窒素のフリップ運動の温度依存ダイナミクス(J. Chem. Phys. 140, 214706, 2014)。その後,一酸化窒素と水分子の反応について研究を進めた。表面温度100 Kに増加すると,Cu(111)に吸着するNOの3量体が水分子によって分解して4量体を作製することが明らかとなった。本年度は走査トンネル顕微鏡を温度可変に改良し,それを一酸化窒素の反応ダイナミクスに適用した.Cu(110)表面上で一酸化窒素は直立構造と表面平行構造の2種類をとることが既に分かっている.前者は準安定で後者が安定構造である.50 K以上の温度では後者が観測され,80 K付近になると平行構造の一酸化窒素はフリップ運動を始めることがわかった.さらに160 K付近で一酸化窒素は酸素と窒素に分解することもわかった.一酸化窒素は直立から平行構造を経て(前駆体),解離に至る反応経路が明らかとなった.フリップ運動に関して80 Kから90 Kの温度範囲でその頻度を測定したところ,アレニウス的に温度依存することが明らかとなり,そのプロットから活性化障壁を170 meV,頻度因子を10^12 Hzと決定した.一酸化窒素の反応ダイナミクスの単一分子分析は,世界で初めての研究であり,本結果を論文としてまとめJ. Chem. Phys.誌に投稿した.さらに、水分子と一酸化窒素の反応についても単分子レベルで調べた。低温(12 K)において一酸化窒素は2この水分子と反応し、解離することが明らかとなった。次に面方位による吸着温度変化の依存性を調べるために、Cu(111),Cu(100)表面において同様の観測を行っている。その結果、一酸化窒素の吸着状態は表面構造に大きく影響を受けることが明らかとなった。まず、Cu(111)表面では予想と反してトライマー構造(3量体)が安定であることがわかった。一酸化窒素は不対電子の存在に起因して2量体を好むことはよく知られているが、3量体が観測されたのは初めてである。一方、Cu(100)表面では2量体でさえ形成しにくく、単量体が多く観察された。これらの違いは表面構造とその対称性の違いに起因すると予想される。STMを用いてCu(110)表面における水分子、一酸化窒素、硫化水素、アルカリ原子の反応を単一分子レベルで明らかにした。これらは触媒反応における重要な分子であり、金属表面における振る舞いはほとんどわかっていない。本年度は特に水分子に着目して酸化反応、還元反応のメカニズムを解明した。(1.水分子と一酸化窒素の反応)低温(6K)において水分子が一酸化窒素と自発的に反応し、窒素ー酸素結合の解離と窒素の還元反応が進行することを発見した(Chem. Sci. 5, 2014)。水分子と一酸化窒素の間に水素結合が作用して引力が働き、基板から一酸化窒素に電子が移動することにより一酸化窒素の分子内結合が弱められることがわかった。このような低温において一酸化窒素の還元反応が進行することは予想外であり、水分子が触媒反応において重要な役割を果たすことを明らかにした。(2.水分子と硫化水素の相互作用)硫化水素は毒性があり、触媒を用いて還元・無毒化されている。そのメカニズムを探るため、Cu(110)において水分子およびその解離物(水酸基および酸素原子)と硫化水素の反応をSTMを用いて調べた。その結果、硫化水素は酸素や水酸基と反応・分解することを明らかにし、その過程を原子レベルで可視化することに成功した(投稿準備中)。ここでは水素の原子間移動が進行しており、酸素と硫黄の電気陰性度の違いにより起因すると考えられる。水素原子が原子間を移動する過程を捉えた初めての研究である。(3.水分子とアルカリ原子の相互作用)アルカリ原子は触媒促進剤としても工業的に用いられており、そのメカニズムの解明が重要とされている。本研究ではCu(110)における水分子とアルカリ原子の相互作用をSTMを用いて調べた。その結果、水分子はアルカリ原子に対して2つまで配位すること、水分子が配位することでアルカリ原子の表面移動が促進されることを明らかにした(論文投稿中)本年度は主に二つの課題について研究を行った。(1)水分子と硫化水素分子の反応水酸基と硫化水素の反応については、前年度にSTMを用いた水素移動反応の観測を行ったが、本年度はDFT計算による反応過程の解析を進めた。その結果、STMで観測された反応中間体の構造を決定することに成功した。同様に酸素原子と硫化水素の反応についても、反応過程の解明を行った。これらを纏めて投稿し,発表した(Phys.Chem.Chem.Phys.18, 4541-4546 (2016))。(2)水分子と一酸化窒素の反応前年度にCu(110)表面に吸着した一酸化窒素が水分子によって低温(10 K)で還元されることを見出した。本年度はその一般性を調べるために、Cu(111)表面における反応を調べた。

この表面ではNOは三量体を形成するが、同様に三量体として水分子と相互作用することを明らかにした。10K-80Kの温度範囲で観測した結果、二種類の相互作用が存在することを発見した。さらに電子エネルギー損失分光を用いた振動分光により、水分子との相互作用によりN-O伸縮振動が低波数シフトすることを観測し、表面におけるNO還元反応が水分子により促進されることを確認した。温度可変のSTMを導入することで,水素や水分子が関与する表面反応を捉えることを目標にした。まず,Cu(110)においてSHとOHのフリップ運動を観測し,その活性化障壁を見積もることに成功した(PCCP18, 4541,2016)。さらに,硫化水素と酸素原子の間の水素移動反応を直接観測した。加えて一酸化窒素のフリップ運動の温度依存ダイナミクス(J. Chem. Phys. 140, 214706, 2014)。その後,一酸化窒素と水分子の反応について研究を進めた。表面温度100 Kに増加すると,Cu(111)に吸着するNOの3量体が水分子によって分解して4量体を作製することが明らかとなった。本研究の目的は水素がかかわる表面反応および表面ダイナミクスをSTMを用いて様々な温度で調査することである。本年度は低温(6K)において一酸化窒素が水分子により自発的に還元されることを明らかにした。触媒反応がこのような低温でも進行することを示し、そのメカニズム(水素結合の形成と電子移動によるN-O結合の解離)を明らかにすることができた。さらに、水分子と硫化水素の反応においても、低温(6K)において水素移動反応が進行することを示した。これら水素が関わる表面反応を直接捉えてそのメカニズムを解明することは、今後、触媒を解明し開発する上で重要な知見となる。従って一定の成果は得られたと考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。表面化学今回の反応系では最低温度である6Kにおいて自発的に反応が進行したため、温度を変えて調査を行わなかったが、今後は反応系を選ぶことで温度による反応の促進に研究を進める。触媒反応とは直接関係ないが、水酸基2量体のフリップ運動は6Kで凍結、78Kで活性化されていることがわかっており、ひとつのモデルとして研究を進める。装置のトラブルもあり,当初予定していた水酸基のダイナミクスの観測には至っていない.トラブルはSTM本体のねじの緩みに起因していたと考えられ,修復に半年間を要した.しかし,一酸化窒素の研究において,単一分子を対象としてダイナミクスを安定して測定することに成功し,その温度依存性を捉える事が可能となった.初めて一酸化窒素の表面分解経路を実験的に解明したことから,この成果を論文としてまとめた.従って一定の成果は得られたと考えられる.27年度が最終年度であるため、記入しない。試料の購入が翌年度に延期されたため。一酸化窒素の吸着状態が表面構造に強く依存することが明らかとなったので、今後はそれぞれについてダイナミクスや反応の温度依存性を調べる予定である。さらに、水分子との還元反応についても温度を変化させて単分子レベルで捉える予定である。本助成金を用いて新しい単結晶試料の購入を行う。真空部品(消耗品)の交換が、来年度に延期になったため。
リン脂質代謝を基盤とした大動脈疾患の機序解明と治療・予防法開発に向けての基盤構築

リン脂質は生体膜の主要な構成要素であり、その代謝物は生理活性脂質として機能する。リン脂質代謝のボトルネック酵素である分泌性ホスホリパーゼA2(sPLA2)は、発現分布・基質特異性の異なる11種類のアイソザイム(IB, IIA, IIC, IID, IIE, IIF, III, V, X, XIIA, XIIB)からなる。細胞外に分泌されたsPLA2は、基質となる生体膜リン脂質を加水分解して不飽和脂肪酸とリゾリン脂質を生成し、組織微小環境に生理活性脂質を動員する。心血管病におけるsPLA2群の真の役割を解明するため、申請者は全11種類のsPLA2遺伝子欠損マウス(所属研究室および共同研究施設所有)を用いて病態に関わるsPLA2アイソザイムを網羅的に探索する独自のプロジェクトを推進してきた。その過程において、V型sPLA2遺伝子欠損マウスでAngiotensin II誘発性の大動脈解離(大動脈壁中膜の破断)が高率に発症することを見出した。更に、1)V型sPLA2は血管内皮細胞に高発現していること、2)病態誘発刺激後のV型sPLA2遺伝子欠損マウスで動脈組織の不飽和脂肪酸が低下していること、3)それに伴い動脈壁の中膜平滑筋層におけるLysyl oxidase(細胞外マトリックスを架橋して組織を安定化する酵素)の発現・活性が抑制されていることを確認した。引き続き、V型sPLA2を起点とするリン脂質代謝が心血管病を抑制する機序を解明し、リン脂質代謝を標的とした新規の心血管病治療・予防法開発を目指して研究を継続する。本研究は、大動脈疾患に関わる細胞外分泌性ホスホリパーゼA2(sPLA2)を網羅的に探索し、当該sPLA2の病態における作用メカニズムを分子レベルで解明することを目的とする。初年度の実験計画に従い、各種sPLA2アイソザイムの遺伝子欠損マウスにAngiotensinIIを持続皮下投与したところ、sPLA2-V遺伝子欠損マウスでのみ大動脈解離を高率に発症することを確認した。免疫染色にて大動脈血管内皮細胞にsPLA2-Vの染色像を認めた。また、マウス大動脈よりCD31陽性細胞を単離してqPCRを行い、sPAL2-VのmRNAが大動脈内皮細胞に発現していることを確認した。Lysyl oxidaseは細胞外マトリックスの架橋を促進することで動脈の恒常性維持に寄与し、大動脈解離の病態においても重要な役割を果たしていることが知られている。sPLA2-V遺伝子欠損マウスでは、AngiotensinII投与後の大動脈組織において、このLysyl oxidaseのmRNA発現、タンパク発現、酵素活性が抑制されていることを見出した。それに伴い、sPLA2-V遺伝子欠損マウスのAngiotensinII投与後の大動脈組織ではCollagenの架橋が抑制され、可溶性Collagenに対する非可溶性Collagenの割合が低下していることが確認された。以上より、sPLA2-V遺伝子欠損マウスではLysyl oxidaseが低下し、細胞外マトリックスの架橋が抑制されているため、大動脈壁が脆弱となり、結果としてAngiotensinII投与に伴う大動脈解離が高率に発症するものと考えられる。今後は、培養細胞を用いた実験系やリピドミクス(脂質の網羅的質量解析)を駆使して、上記のメカニズムを明らかにしていく予定である。大動脈解離に関与する細胞外分泌性ホスホリパーゼA2(sPLA2)のアイソザイム(sPLA2-V)を特定することができた。さらに、sPLA2-Vの大動脈組織において細胞外マトリックスの架橋が抑制されていることが明らかとなり、sPLA2-Vと大動脈解離病態の関連の一端をとらえることができた。本研究は大動脈疾患に関わる細胞外分泌性ホスホリパーゼA2(sPLA2)を網羅的に探索し、当該sPLA2の病態における作用メカニズムを分子レベルで解明することを目的とする。各種sPLA2アイソザイムの遺伝子欠損マウスにAngiotensin IIを持続皮下投与したところ、sPLA2-V遺伝子欠損マウスでのみ大動脈解離を高率に発症することを確認した。qPCRおよび免疫染色によりsPLA2-Vが大動脈内皮細胞に発現することを確認した。lysyloxidase(LOX)は細胞外マトリックスの架橋を促進することで大動脈解離を抑制する作用を有する。sPLA2-V遺伝子欠損マウスでは、Angiotensin II投与後の大動脈組織において、LOXのmRNA、タンパク発現、酵素活性が抑制されていることを見出した。それに伴い、sPLA2-V遺伝子欠損マウスのAngiotensin II投与後の大動脈組織ではCollagenの架橋が抑制されていることを確認した。sPLA2-Vは血中リポ蛋白のリン脂質に作用してオレイン酸やリノール酸を切り出す作用を有することが知られている。ヒト大動脈平滑筋細胞にオレイン酸やリノール酸を添加することで、TGFβ刺激に伴うLOX発現が促進されることを確認した。今後は、大動脈組織やPlasmaのリピドミクス(脂質の網羅的質量解析)を行うことで、in vivoにおいて実際にsPLA2-Vがオレイン酸やリノール酸を動員していることを示すと共に、これらの責任脂質をマウスに投与することで大動脈解離が抑制されることを確認し、大動脈解離の新規治療に繋がる可能性を検討する予定である。

リン脂質代謝のボトルネック酵素である分泌性ホスホリパーゼA2(sPLA2)は、発現分布・基質特異性の異なる11種類のアイソザイム(IB, IIA, IIC, IID, IIE, IIF, III, V, X, XIIA, XIIB)からなる。細胞外に分泌されたsPLA2は、基質となる生体膜リン脂質を加水分解して不飽和脂肪酸とリゾリン脂質を生成し、組織微小環境に生理活性脂質を動員する。心血管病におけるsPLA2群の真の役割を解明するため、申請者は全11種類のsPLA2遺伝子欠損マウス(所属研究室および共同研究施設所有)を用いて病態に関わるsPLA2アイソザイムを網羅的に探索する独自のプロジェクトを推進してきた。その過程において、V型sPLA2遺伝子欠損マウスでAngiotensin II誘発性の大動脈解離(大動脈壁中膜の破断)が高率に発症することを見出した。更に、1)V型sPLA2は血管内皮細胞に高発現していること、2)病態誘発刺激後のV型sPLA2遺伝子欠損マウスで動脈組織の不飽和脂肪酸が低下していること、3)それに伴い動脈壁の中膜平滑筋層におけるLysyl oxidase(細胞外マトリックスを架橋して組織を安定化する酵素)の発現・活性が抑制されていることを確認した。引き続き、V型sPLA2を起点とするリン脂質代謝が心血管病を抑制する機序を解明し、リン脂質代謝を標的とした新規の心血管病治療・予防法開発を目指して研究を継続する。これまでの実験で、細胞外分泌性ホスホリパーゼA2遺伝子欠損マウスにおいてLysyl oxidaseが低下し、細胞外マトリックスの架橋が抑制されていることが明らかとなった。今後は、培養細胞を用いた実験系において、その分子レベルのメカニズムを明らかにしていく。また、リピドミクス(脂質の網羅的質量解析)を行って責任脂質を特定する。今後は、大動脈組織やPlasmaのリピドミクス(脂質の網羅的質量解析)を行うことで、in vivoにおいて実際にsPLA2-Vがオレイン酸やリノール酸を動員していることを示すと共に、これらの責任脂質をマウスに投与することで大動脈解離が抑制されることを確認し、大動脈解離の新規治療に繋がる可能性を検討する予定である。
定年退職と消費行動に関する分析

定年退職を「予期された所得の落ち込み」と捉えることで、代表的な消費理論である、恒常所得・ライフサイクル仮説が実証的にテスト可能となることが重要である。海外での先行研究が、労働市場からの退出を意味する「退職」を分析していたのに対し、本研究では「定年退職」について考察する。退職消費パズルについて検討することによって、恒常所得・ライフサイクル仮説の理論的な改善の方向性を示すことができるのである。本年度は,まず退職と消費行動の関係について,経済学的な視点から分析を行った内外の先行研究をサーベイした。予期された所得変化である退職は,消費行動を変化させないことが理論的に予想されるが,海外での先行研究(具体的にはイギリス・アメリカ・イタリア・ドイツなどの主要な先進国)によれば,理論的な予想にもかかわらず,退職に際して消費が減少するという観察が得られていた。これは,退職消費パズルと呼ばれ広く認知され,その解決が大きな関心を集めていることを確認した。それに対し,日本における先行研究は質量ともに十分ではないが,退職時の消費は必ずしも減少していないという結論が導かれる論文がいくつか存在していた。そこで、他国との相違を検討するために,日本の退職プロセスについての制度的な特徴をサーベイした。その結果,日本の退職プロセスについて,定年退職制度とそれに付随した退職一時金制度が,諸外国と比べ特殊な制度であることが分かった。また,年金制度の過去30年の変遷についても検討を行った。その結果,世代による制度的な違いは大きく,パネルデータによる分析が必要であることが強く示唆された。こうした予備的な考察を前提として,日本のミクロデータを用いた分析を開始したことが、本年度の大きな成果である。総務省統計局の協力の下,日本の家計に関する代表的な標本調査である。家計調査のミクロデータにアクセスすることに成功し,データの成型・加工に着手した・来年度以降,このデータを用いた分析を本格的に開始する予定である。本年度は、昨年度入手した、総務省統計局の公表する日本の家計に関する代表的な標本調査である「家計調査」を用いた分析を進めた。まず、日本の退職プロセスについてのマイクロデータを用いて概観した。これは、家計調査を短期パネルとして分析したことによって可能となった分析であり、大きな貢献であると考えられる。分析の結果、日本において、勤労者は60歳で退職する比率が約10%で、他の年齢に比べ、きわめて高い退職率である。これは、定年退職制度によるものと考えられた。また、定年年齢が過去30年で55歳から60歳に変更されてきたことに注意して分析を進めると、家計調査での退職プロセスが定年退職制度と変遷と整合的であることが確認できた。さらに、消費についてもパネルデータを用いて分析を進めた。その結果、日本の家計は、海外の先行研究での結果と異なり、退職時点では消費を減らしていないことが明らかになった。これは、多くの退職者が退職後の生活に十分な貯蓄を蓄えていることを示唆している。こうした結果は、日本において退職金制度が諸外国と比較して多額であることが原因として考えられる。来年度以降、この違いがどのような要因で引き起こされているかについて、さらなる分析を進める予定である。本年度は、前年までの成果である、調査された先行研究の手法・構築されたミクロデータを用いて、日本のデータにおける退職消費パズルの検証を行なった。その結果、日本においては、退職と同時に消費が減少するという意味においての「退職消費パズル」は存在しなかった。この結果を受けて、退職時に日本における特有の制度的特徴である「退職金制度」が大きな役割を果たしていることが予想された。そこで、退職金制度が大きく異なる大企業・中企業・小企業それぞれからの退職者別に推計を行なった。その結果、大企業から退職者は退職時点で消費を減らしていないのに対し、小企業からの退職者は消費を減らしていることが分かった。これは、退職金制度によって退職時の所得の変動の効果を弱める効果があることを示しており、退職金制度の経済厚生上の価値を示すものである。退職金に関する情報が極めて限定的であるため、企業規模別の推計のみ行なったが、将来の課題として、退職金に関する情報を直接活用した分析を可能としたい。
グレード2/3神経膠腫に対するWT1免疫療法の開発と抑制系/促進系免疫作用の評価

マウス担脳腫瘍(神経膠腫)モデルおよびヒト神経膠腫においてWT1ワクチン治療前後の局所での獲得性免疫動態を明らかにし、グレード2/3神経膠腫に対するWT1ワクチン治療の開発を行うことを本研究の目標としている。I:初年度から継続してC57BL/6マウスをモデルとして用い、( I )正常マウスおよび( ii )担脳腫瘍(203G由来)マウスを作成した。それらに対して脳組織でCD4陽性細胞、CD8陽性細胞を免疫組織学的に同定し、その集族や時間的動態を明らかにした。コントロールとして行った正常マウスに対して、担脳腫瘍マウスの脳では、限局性であったが免疫担当細胞の集族が認められ、局所獲得免疫細胞として評価した。II:ヒトにおいて、グレード2/3神経膠腫初回摘出時および再手術時の腫瘍組織および辺縁組織を用いて検討した。それぞれの腫瘍組織においてWT1の発現およびCD4、CD8陽性細胞を免疫組織学的に同定し、その免疫担当細胞の集族を明らかにした。全ての腫瘍細胞でWT1は発現されていたがグレード3やグレード4神経膠腫に比べ、グレード2神経膠腫に弱い傾向があった。そのなかで治療中ステロイド投与時あるいは抗けいれん剤投与時の上記免疫担当細胞の移動を検討した。初年度から研究体制の変更を要し、実験を再構築したため満足のいくものではなかった。しかしながら免疫治療の継続実績があり初年度から治療関連で学会発表や論文投稿ができた。I:初年度に継続してC57BL/6マウスをモデルとして用い、( I )正常マウスおよび( ii )担脳腫瘍(203G由来)マウスを作成した。II:初年度に継続してヒトにおいて、グレード2/3神経膠腫初回摘出時および再手術時の腫瘍組織および辺縁組織を用いて検討した。そのなかでステロイド投与時あるいは抗けいれん剤投与時の免疫担当細胞の移動を検討した。全ての腫瘍細胞でWT1は発現されていたがグレード2神経膠腫に弱い傾向があった。今後WT1ペプチド投与下での局所獲得免疫細胞を同定する。I:初年度に継続しC57BL/6マウスをモデルとして用い、( I )正常マウスおよび( ii )担脳腫瘍(203G由来)マウスを作成した。今後の方策として、マウスclass I拘束性WT1ペプチド(CTLエピトープ)を投与し、その免疫反応、組織反応を詳細に検討する。今後の推進方策として、WT1ペプチド投与下での局所獲得免疫細胞を同定する。昨年度はさらに、免疫変動因子の可能性があるステロイド併用治療時、抗てんかん薬併用治療時の免疫担当細胞の動態解析を行っており臨床的にはそれらの併用治療による動態変化解析が望まれる。I:マウス担脳腫瘍(神経膠腫)モデルは、C57BL/6マウスに限定してモデルとして用い、(i)正常マウスおよび( ii )担脳腫瘍(203Gマウスグリオーマ細胞由来)マウスを作成した。それらに対し、脳組織でCD4陽性細胞、CD8陽性キラーT細胞を免疫組織学的に同定し、その集族や時間的動態を明らかにした。それぞれの腫瘍組織においてWT1の発現およびCD4、CD8陽性キラーT細胞を免疫組織学的に同定し、その免疫担当細胞の集族を明らかにした。全ての腫瘍細胞でWT1は発現されていたが、グレード3に比べグレード2神経膠腫に弱い傾向があった。辺縁組織でも腫瘍細胞には発現が見られた。初年度の研究実績として、年度末に研究責任者の所属が変更することとなり研究体制の変更を要し、実験を再構築する必要があったため時間を要し満足のいくものではなかった。I:C57