hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
関節リウマチおよびその動物モデルにおける GM-CSF 産生 CD4T 細胞の役割

関節リウマチの病態において、GM-CSFを産生するCD4T細胞の役割を明らかにするために、ヒトリンパ球および動物モデルを用いて実験を行った。末梢血ナイーブCD4T細胞を滑膜線維芽細胞と共培養する実験により、線維芽細胞表面上に発現しCD4T細胞のGM-CSF産生を誘導する分子を同定した。また、自然発症の関節炎モデルマウスにおいて、CD4T細胞の産生するGM-CSFが、IL-6, IL-1, TNFαなどの炎症性サイトカイン産生を亢進させる役割をはたしていることを見出した。ヒト関節リウマチ(RA)患者のCD4T細胞を細胞内サイトカイン染色で評価した。RA患者末梢血では、CD4T細胞の510%がGM-CSFを産生しており、その割合は健常人と比較して有意差がなかったが、関節炎局所ではその割合が増大していた。関節局所でGM-CSF産生CD4T細胞が増大するメカニズムを解明するため、健常者のnaive CD4T細胞をin vitroで抗CD3/28抗体刺激し、RA患者の滑膜細胞(FLS)とともに共培養したところ、著明なGM-CSF産生の誘導がみられた。この共培養系におけるGM-CSF産生の誘導には、FLSとCD4T細胞の細胞接触が重要であることを見出し、その分化誘導にかかわる分子を同定した。この分子の阻害は関節リウマチに対する新規治療につながる可能性がある。また、動物モデルにおいては、関節炎モデルマウスであるSKGマウスを用いて実験を行った。関節炎を生じたSKGマウスの関節炎局所では、IL-17産生細胞の増大とともに、GM-CSF産生分画が増大していた。そこで、GM-CSFノックアウトSKGマウスを作成したところ、このマウスは関節炎抵抗性となった。SKGマウスのドナーCD4T細胞をレシピエントのRAGノックアウトマウスに移入する実験において、ドナー、レシピエントいずれのGM-CSFが欠損しても関節炎の重症度が低下しため、CD4T細胞の産生するGM-CSFのみならず、CD4T細胞以外の細胞が産生するGM-CSFも関節炎発症に重要であることが分かった。SKGマウスの関節炎発症にGM-CSFが関与するメカニズムについて、引き続き実験をすすめる予定である。I.関節リウマチモデルマウス・SKGマウスにおけるGM-CSF産生CD4T細胞の役割を検討した。通常のSKGマウスに関節炎を惹起できる種々の環境因子により、GM-CSFノックアウトSKGマウスでは関節炎が全く発症しなかったため、GM-CSFはSKGマウスの関節炎発症に必須のサイトカインであることが分かった。また、CD4T細胞の産生するGM-CSF産生と、CD4T細胞以外の産生するGM-CSFのどちらが重要であるかを明らかにするために、SKGマウスのCD4T細胞をRAG2KOマウスに移入する実験を行ったところ、donorとrecipientの両者がGM-CSFを欠損した場合に、関節炎発症が完全に抑制されたため、CD4T細胞とそれ以外の細胞の産生するGM-CSFの両者が関節炎発症に重要であることを見出した。II.naive CD4T細胞をin vitroで刺激して、GM-CSF産生を誘導するための条件を検討した。種々の補助刺激因子や種々のサイトカインの存在下でnaive CD4T細胞を培養したところ、ある特定の補助刺激因子とサイトカインの組み合わせにより、GM-CSF産生が強く誘導されることを見出した。IV.ヒトリウマチ患者におけるGM-CSF産生CD4T細胞の解析を行った。患者の末梢血では、CD4T細胞の510%がGM-CSFを産生しており、関節炎局所ではその割合が1020%に増大するため、関節リウマチにおいてGM-CSF産生CD4T細胞が病的役割を果たしていることが示唆された。マウスモデル、ヒト関節リウマチ患者の両者の解析において、GM-CSF産生CD4T細胞が自己免疫関節炎の病態に寄与することを示すデータが得られているため。マウスモデルにおいては、GM-CSF産生CD4T細胞が関節炎に寄与するメカニズムにつき、より詳細に検討する。特に、種々の自然免疫の活性化物質により、GM-CSF産生CD4T細胞が誘導、増殖する過程に焦点をおき研究する。ヒト関節リウマチ患者においては、関節局所において、GM-CSF産生がより誘導されるメカニズムを明らかにするとともに、RA患者のなかで、GM-CSF産生CD4T細胞がより多くみられる症例にどのような臨床的特徴があるか解析していく予定。おもに、細胞内サイトカイン染色や、ELISAなどのための試薬のために使用する予定
フラーレン薄膜のヘテロ接合による電子機能素子の作製

C60薄膜で電界効果トランジスタFETを作成し、FETのデバイスの性能を明らかするのみでなく、伝導機構のパラメータとしてのキャリアの種類、濃度、移動度を見積った。測定の結果、蒸着薄膜は、n型キャリアの密度10^<14>cm^<-3>、移動度10^<-4>cm^2/Vs、電導度10^<-9>S/cmであることが明らかになった。これらは純度、ゲート電圧の大きさによって多少値が変わると思われる。また、温度依存性よりキャリアの伝導が分子間ホッピング伝導であることを明らかにした。C60の電導度は結晶や蒸着膜の間でばらつきが大きい。その要因として、純度、結晶性あるいは測定の雰囲気などが考えられる。結晶性と電導度の関係を明らかにするため、蒸着薄膜のX線回折パターンによりその結晶性と電導度の関係を調べた。結晶性は蒸着基板の温度に依存するので、基板温度を0°C,室温および50°Cで蒸着した薄膜のX-線回折プロファイルと電導度、発光スペクトルの関係を調べた。結晶性は基板温度によって一意義には決まらないが、概ね高い基板温度ほど高い結晶性の薄膜が得られる事が分かった。電導度は結晶性が良いほど顕著に高いことが明らかになった。また、よりアモルファスに近い試料ほど高電界現象、即ち、空間電荷制限電流の特性が見られた。また、薄膜の結晶性と発光スペクトルの関係は、Arレーザーで励起による発光スペクトルとその温度依存性から調べた。結晶性の高い薄膜ほど発光はレッドシフトし、発光効率も高いことが分かった。
RNA機能の発現機構

本研究班は構造を視点としたRNA機能の発現機構の解明を目的として研究を進めてきた。その内容は2つに大別され、一方はスプライシングとtRNAを主たるターゲットとしてそれらの機能発現機構と機能構造を研究するグループと、他方はRNAの機能構造を主として高分解能NMRにより解析するための方法論を確立するグループである。スプライシンググループではスプライソゾーム中で触媒活性を担うと考えられているU6snRNAと基質であるmRNA前駆体との直接的な相互作用を世界で初めて検出し、ショウジョウバエにおけるオルタナテイブスプライシングの制御機構を、それに関わる種々の遺伝子産物(tra、sxl蛋白質など)とmRNA前駆体の特殊配列との相互作用として捉えることに成功した。tRNAグループは主として異常な二次構造を持つ動物ミトコンドリアの立体構造解析と非普遍暗号解読機構の解明を集中して行った。前者ではtRNA分子内部の3次的な相互作用により、片方の腕を欠いた異常tRNAでもアンチコドンとCCA末端という2つの機能部位の相対配置を一定に保つ機構が働いて、リボソーム上で他の正常なtRNAと同等に機能するという新しい概念を創出した。後者では非普遍暗号解読に関わるtRNAの特にアンチコドン領域を解析し、アンチコドン1字目(及び時には2字目)の修飾ヌクレオシド(5-ホルミルシチジン、7-メチルグアノシン、プソイドウリジンなど)が新規塩基対合に密接に関わることを明らかにした。NMRグループは任意の箇所に安定同位体標識を導入した望みの塩基配列をもつRNAの人工合成法を確立した。それを利用してグループIイントロンの基質認識部位や、sxl蛋白質とこれが認識する短鎖配列のRNAとの相互作用の解析に成功した。またsxl蛋白質自身のNMRによる詳細な構造解析から、RNA鎖との結合に必要なアミノ酸部位の特性を明らかにした。スプライシンググループ(志村,坂本)mRNA前駆体のスプライシング過程において,U6snRNAが基質であるmRNA前駆体と直接的な分子間相互作用をしていることを,UVクロスリンク法によって世界ではじめて明かにした。また,ショウジョウバエ体細胞性決定遺伝子における性特異的スプライシングの制御機構に関して,tra遺伝子産物とtra-2遺伝子産物がdsx mRNA前駆体のシス配列に特異的に結合すること,およびこれら2つの産物の間に分子間相互作用が存在することを明かにした。さらに,Sx1遺伝子のスプライシング制御機構が,Sx1雌型産物による負のスプライシング制御によるものであることを明かにした。tRNAグループ(渡辺,西川,河合)Dアームを殆ど欠失したウシミトコンドリアのセリンtRNAについて,唯一の修飾ヌクレオチドであるt^6A(37)の前後の配列を持つRNA断片,およびpt^6Apをそれぞれ有機化学的に調製した。これらを酵素的に連結し,NMRによる構造解析が可能な量のtRNA^<Ser>分子を調製中である。一方,HPLCや元気永動法を駆使して,RNA断片を数mg単位で分離精製する方法について検討するとともに,特にRNAリガーゼによるRNA断片の連結反応の高収率化のための条件検討を行った。NMRグループ(横山,武藤,河合)すでに,大腸菌による^<15>N標識および酵母による^<13>C, ^<15>N標識を行い,得られた標識rRNAを酵素的に加水分解し,得られた標識NMPをそれぞれ酵素的にリン酸化することにより,各十数mgの^<15>N標識GTP,UTP,および各数mgの4種の^<13>C, ^<15>N標識NTPを調製した。

一方,ショウジョウバエの性決定に関するSx1蛋白質のふたつの連続したRNA結合ドメインについて,単独および連続してものの大量発現系の構築を行った。とくにd2ドメインについては,NMRによる測定を行ない構造解析を進めている。1.スプライシング(1)マウスの免疫グロブリンμ鎖(IgM)遺伝子の膜結合型のエキソンM2の中に,その上流のエキソンM1との間のスプライシングを促進する配列があることを発見した.(2)二分子のRNAから構成されるリボザイムによるスプライシングシステムを開発した.(3)mRNAの5'末端のキャップ構造に特異的に結合する分子量80キロダルトンの核蛋白質(NCBP)について,ほぼ全長と思われるcDNAクローンを得た.2.tRNA(1)Dアームを殆ど欠失した牛ミトコンドリアのセリンtRNAについて,in vitroの転写系によって数mgのセリン受容能のあるtRNA分子を得ることに成功した.一方,Tアームを欠失した線虫ミトコンドリアのメチオニンtRNAについては,合成機によって合成した半分子を酵素的に連結することによって構築した.(2)アンチコドン1字目に安定同位体標識ウリジンを持つアンチコドンアームを作成することを目標に,アンチコドンアームの5'側および3'側の配列を持つRNAを合成し,さらに,安定同位体標識pUpを調製した.(3)高度好熱菌のグリシンtRNAを大量に調製し,その塩基配列を決定した.このtRNAの部分分子を用いた解析によって,アンチコドンアームを完全に欠く欠損tRNA分子がグリシン受容能を持つことを明かにした.3.NMR(1)グループ1イントロンの活性部位の配列をもつ[^<13>C,^<15>N]RNAを調製し,そのRNAスペクトルの解析を進めている.(2)立体構造モデリングの結果,二次構造の異なるミトコンドリアのtRNAにおいても,アンチコドンとCCA末端の位置関係が,標準的なtRNAと同じであることが示唆された.(3)ショウジョウバエの性決定を担うオルタナティブ・スプライシングを制御するSxl蛋白質のもつRNA結合ドメインの一つについて,異核種多次元NMRを用いてその立体構造を決定した.スプライシンググループ(1)mRNAスプライシングの分子機構ポリプリン配列がスプライシング反応のエンハンサーとして機能することを明らかにした。また、スプライシング反応に関与するRNAヘリカーゼをコードするものと考えられるcDNA配列をHeLa細胞から分離同定した。さらに、80KDaの核由来キャップ構造結合タンパク質を分離し、このタンパク質をコードするcDNAの全塩基配列を決定した。(2)リボザイムの機能構造の研究フットプリティング法、反応速度論による解析などを通じて、二分子のRNAから構成されるリボザイムにおけるRNA間の相互作用を解明した。一方、in vitro selection法によって異なるメカニズムでリボザイムの活性化をおこなうRNAを得た。tRNAグループ(1)異常構造をとるミトコンドリアtRNAの機能構造Dアームを殆ど欠失した牛ミトコンドリアのtRNA^<Ser>_<GCU>についてはT7
多成分系ゾル-ゲル合成法の最適化とセラミックス合成の低温化

ゾル-ゲル法は均質性の高い材料が得られるなど、様々な特長をもつが、多成分からなるセラミックスの合成には、金属アルコキシドによってその加水分解及び縮重合反応速度が大きく異なるために、ゲルの均一性などに問題が生じることが多い。そこで、様々な金属元素とケイ素のアルコキシドとのゾル-ゲル反応をNMRを用いて調べ、金属イオンがゾル-ゲル合成法に及ぼす影響を検討した。さらに高い均質性をもつキセロゲルを得るために、合成条件の最適化を行うとともに、熱処理温度の低温化などを含む物性面からも、合成条件の検討を行った。1.ケイ素と金属元素との反応過程の測定と結合生成の最適化金属イオンとしてNa^+、K^+、Li^+などのアルカリ金属イオンについて検討した結果、これらのイオンはケイ素に対して修飾イオンとしてのみ利用すること、また反応溶液のpHを13.1以上にすることによってSi-O-M(M:Na,K,Li)の結合が得られること、さらにSi-O-Liの結合がSi-O-NaやSi-O-Kと比較して、若干強い結合が得られることがわかった。さらに今後、他のカチオンと比較検討することによって、様々な種類のイオンがゲル生成に及ぼす影響の違いを定量的に検討できるだけでなく、多成分系における合成条件の最適化への近道となる情報が得られることが示唆された。2.キセロゲルからの結晶化過程多成分からなるセラミックスの例として、Na_2O-Y_2O_3-P_2O_5-SiO_2系ナトリウムイオン導電体を用いた。焼結体の諸物性を含めて低温合成等を目的とした合成条件の最適化について検討した結果、熱処理後に試料内部に残留する有機物やOH残基などもその物性に影響を及ぼし、単に含まれるカチオンが均一に分布しているだけでなく、骨格となるゲルの3次元ネットワークが十分に発達していることも非常に重要であることがわかった。
記憶検索における前頭連合野からのトップダウンシグナルに関する神経生理学的研究

長期的に記憶した情報を検索する際、前頭連合野から後部の脳領域に向けて送られるトップダウン信号が重要な役割を担っている可能性が、多くの先行研究により示唆されている。本研究の目的は、記憶検索時の前頭連合野ニューロンの活動を解析し、その役割を明らかにすることである。この目的のために、2頭のサルに長期記憶を必要とする「対連合課題」を学習させ、前頭連合野外側部から単一ニューロン活動を記録した。この課題では、サルがレバーを押すと、視覚刺激ペアのどちらか一方がサンプル刺激としてCRT画面上に0.5秒間呈示され、5秒間の遅延期を置いてから、ペアのもう一方(ターゲット)か、または妨害刺激のどちらかが呈示される。ターゲットが呈示された場合、サルはレバーを離し、妨害刺激が呈示された場合は、レバーを押し続けなければならない。これまでに、両方のサルから約200個のニューロン活動を記録し、サンプル刺激呈示期と遅延期における活動傾向を解析した。サンプル刺激呈示期には、多くのニューロンが一過性に発火頻度を増加させ、そのうちの一部は特定の視覚刺激に対して選択的に反応する傾向があった。さらに、刺激選択性を示したニューロンの一部は、特定の刺激ペアに対して特に強く反応する傾向が観察された。このような活動は、先行研究により下部側頭葉において観察された対符号化ニューロン(Sakai & Miyashita, 1991)の活動と類似したものである。この結果を基に作成した論文は、学術誌「Brain and Cognition」に受理された。また、遅延期においては、多くのニューロンが漸次的に発火頻度を増加させる傾向が観察され、その一部は刺激選択性を示した。このような活動傾向は、前頭連合野ニューロンが記憶情報の検索プロセスに積極的に関与していることを示唆しており、現在は、遅延期活動に関する詳細な解析を行い、論文にまとめる作業を進めている。記憶情報の検索において、前頭連合野から後部の脳領域に対して送られるトップダウン信号が重要な役割を担っていることが、多くの先行研究により示唆されている。本研究の目的は、記憶検索プロセスにおける前頭連合野ニューロンの活動を解析し、その役割を明らかにすることである。この目的のために、2頭のサルに長期記憶を必要とする対連合課題を学習させ、前頭連合野外側部から単一ニューロン活動を記録した。この課題では、サルがレバーを押すと、視覚刺激ペアのどちらか一方がサンプル刺激としてCRT画面上に500ミリ秒間呈示され、5秒間の遅延を置いてから、ペアのもう一方(ターゲット)か、または妨害刺激のどちらかが呈示される。本年度は、両方のサルから約100個のニューロン活動を記録し、サンプル呈示期と遅延期間における活動傾向を解析した。サンプル呈示期には、多くのニューロンが視覚刺激に対して反応し、その一部は特定の視覚刺激に対して選択的に反応する傾向があった。このような活動は、先行研究により下部側頭葉において発見された対符号化ニューロン(Sakai & Miyashita,1991)の活動と類似したものである。また、遅延期間においては、多くのニューロンが漸次的に発火頻度を増大させる傾向が観察された。より詳細な解析が必要ではあるが、このような活動傾向は、前頭連合野ニューロンが記憶情報の検索プロセスに積極的に関与していることを示唆している。これら結果から、前頭連合野ニューロンが視覚刺激ペアの情報をコード化し、後部の脳領域ヘトップダウン信号を送ることにより、長期記憶の検索を行っている可能性が示唆された。

このような活動傾向は、前頭連合野ニューロンが記憶情報の検索プロセスに積極的に関与していることを示唆しており、現在は、遅延期活動に関する詳細な解析を行い、論文にまとめる作業を進めている。
18世紀アイルランドにおける英語文化の移入とその形成発展

18世紀のアイルランドは、近代ヨーロッパ社会の成立を考察するうえでとても意義深い時代である。イギリス帝国主義がアイルランドの前近代的社会を一掃し、新たな時代を確立したからである。それは1800年から「連合」という名の下で始まる植民地化につながる。言語では、ゲール語の使用を禁じ、宗教ではイギリス国教会の制度を強制し宗教禁止令の発布に伴いカトリック教徒の活動を厳しく抑制した。この局面をイギリスの側から、ミルトンによるクロムエル支持を取り上げて、清教主義と共和制の立場とを考える。またアイルランドの側からはジャコバン派の論理と王室支持、さらに市井ではジョナサン・スィフトやエドマンド・バークの主張、さらにグラタンの議会演説などを資料とする。トマス・ウルフはフランス革命に乗じ、革命をダブリンで試みた。その結果、後者の論調は世紀を越えてトマス・デイヴィスやダニエル・オコネルの活動につながっていく。そのとき彼らは宗教においても言語においてもイギリス帝国の趣旨に同調するようにみせる。しかし政治的には、帝国主義に激しく敵対し、「連合」廃止を強く求める。一方では帝国の都ロンドンに出かけて誰よりもイギリスの人間になろうとする者も現れた。劇作家のコングリーヴ、ゴールドスミスなどである。スイフト自身もダブリン大学を卒業すると、ロンドンに出て貴族の館に身を寄せるようになった。しかしその庇護も失うと、ダブリンに戻り態度も反イギリス帝国となり、経済的に弱者の立場に置かれている祖国を弁護し、イギリスを攻撃した。皮肉なことには、彼が用いた英語がその後祖国の言葉として定着することになった。
ラット脊髄後根神経節細胞に対する麻酔作用の共焦点レーザー顕微鏡による画像解析

本研究によって、脊髄後根神経節(DRG)に存在する種々の細胞におけるATP刺激に対する反応から、神経細胞、衛星細胞のいずれにもP2XあるいはP2Y受容体が機能発現していることが明らかとなった。しかし神経細胞ではP2受容体が機能している細胞は少なく、一方衛星細胞では多くの細胞でP2受容体が機能していた。成熟ラットと未熟ラットでは、神経細胞の反応は同様であったが、衛星細胞では異なり、生後の成熟発達段階においてATPに対する[Ca^<2+>]i変動機構が変化していることが示された。局所麻酔薬リドカインは、神経細胞の脱分極だけでなく、神経細胞および衛星細胞のATPによる反応も強く抑制した。次に、感覚神経特異的に発現し侵害刺激受容の中心的役割を担っている受容体TRPV1についてカプサイシンをもちいて検討した。結果、以下の事項が示唆された。1.カプサイシン刺激に対する反応は、DRGの神経細胞の型によって異なり、少なくとも小型の神経細胞においてカプサイシン感受性のレセプターが発現、機能していることが示唆された。2.これまで未解明であったDRGの衛星細胞において、カプサイシン感受性のレセプターが発現、機能していることが示唆された。3.神経細胞と衛星細胞では、[Cat+]i濃度を減少させる機構が異なる可能性が示された。4.カプサイシン刺激によって上昇する[Ca2+]i濃度のCa2+は細胞外のCat+に由来すると考えられた。5.局所麻酔薬リドカインは、カプサイシンによる反応を強く抑制した。本年度では、ラット脊髄後根神経節(DRG)細胞で組織本来の形態を保った標本作成が可能となった。またDRGに対する蛍光カルシウムイオン指示薬Indo-1の適切な負荷条件を検索し決定した(コラゲナーゼによる結合組織の消化後Indo-1/AMを25°Cで90分負荷)。これにより得られたDRG細胞標本にATPを還流しリアルタイム共焦点レーザー顕微鏡により細胞内カルシウムイオン濃度変化の画像解析を行った。DRGには大型の細胞と小型の細胞が混在しており、その二者による反応性の違いが論じられることが多い。事実今回、高カリウム刺激に対する反応では、大型の細胞が小型の細胞より早く細胞内カルシウムイオン濃度の上昇が起こることがわかった。しかしATP投与では、細胞の大きさにかかわらず、細胞内カルシウムイオン濃度上昇が生じる細胞と変化しない細胞があることがわかった。またこの反応はリドカインにより抑制された(「ラット末梢神経節細胞のATPによる細胞内カルシウムイオン濃度上昇に対するリドカインの効果」日本歯科麻酔学会総会にて発表)。われわれはこのDRG細胞のATPに対する反応性の違いに着目し、生後0日のラットよりDRG標本を作製しATPを投与した。すると生後0日のDRGでは細胞の大きさはほぼ均一で、ATPに対する反応性も一様であることがわかった。今後は細胞群の分化の時期と反応性の変化についてさらに研究する予定である。前年度、脊髄後根神経節(DRG)の神経細胞では、その細胞のタイプ(大型・小型)によってATP刺激に対する反応性が異なる可能性が示唆された。そこで本年度では、成熟・分化の過程におけるDRG神経細胞のATP刺激に対する反応性の変化を明らかにするために、成熟ラットと胎齢20日(出生直前)のラット(未熟ラット)の両者からDRGを摘出、標本を作成し、各種刺激薬を投与してカルシウムイメージングを行った。それにより得られた結果を示す。1.DRG神経細胞では、ATP刺激に対して成熟・未熟ラットともに細胞内カルシウムイオン濃度([Ca2+]i)増加が観察された。しかし反応する細胞は少なく、1視野中未熟ラットでは約0.5%、成熟ラットで約3%の細胞で[Ca2+]i上昇がみられた。DRGにおいてP2受容体が機能している神経細胞は少ないことが示唆された。3.神経細胞に比べ、成熟未熟にかかわらず多くの衛星細胞がATP刺激に対して[Ca2+]i変動を示した(約4043%)。

衛星細胞が機能的にも有害刺激から神経細胞を防護するバリアとして働くことが示唆された。4.衛星細胞で、未熟ラットではATPに対する反応は単発性であったが、成熟ラットではスパイク状の変動が律動的に繰り返される現象がしばしば観察された。衛星細胞では、成熟発達段階で[Ca2+]i変動機構が変化している可能性があると考えられた。6.今後は、以上の結果をふまえて、成熟/未熟DRG神経細胞・衛星細胞に対する麻酔作用の画像解析を行う。これまで、脊髄後根神経節(DRG)に存在する種々の細胞においてその細胞のタイプによりATP刺激に対して反応性が異なる、すなわちP2受容体の機能的発現に違いが有ることが明らかになった。本年度では、麻酔作用を解明する前段階として、主に感覚神経特異的に発現し侵害刺激受容の中心的役割を担っている受容体TRPV1について、その刺激物質カプサイシンをもちいて検討した。それにより得られた結果を以下に示す。1.カプサイシンにより、細胞内カルシウムイオン([Ca2+]i)濃度が上昇する小型の神経細胞が認められた。2.カプサイシン刺激に反応する大型の神経細胞は確認できなかった。3.カプサイシンにより、[Ca2+]i濃度が上昇する衛星細胞が認められた。4.神経細胞と衛星細胞では、[Ca2+]i濃度変化の波形が、特に[Ca2+]i濃度減少時において異なっていた。5.細胞外にCa2+が存在しない条件下では神経細胞と衛星細胞の両者ともカプサイシンによる[Ca2+]i濃度上昇は見られなかった。この結果より、以下の事項が示唆された。1.カプサイシン刺激に対する反応は、DRGの神経細胞の型によって異なり、少なくとも小型の神経細胞においてカプサイシン感受性のレセプターが発現・機能していることが示唆された。2.これまで未解明であったDRGの衛星細胞において、カプサイシン感受性のレセプターが発現・機能していることが示唆された。3.神経細胞と衛星細胞では、[Ca2+]i濃度を減少させる機構が異なる可能性が示された。4.カプサイシン刺激によって上昇する[Ca2+]i濃度のCa2+は細胞外のCa2+に由来すると考えられた。
高性能液晶型モニタの医療画像への応用とその画像評価

今年度は臨床の画像システムでの実践的評価として、手術場での画像表示環境における液晶モニタの画質評価を施行した。方法:対象画像は北大附属病院手術部内で撮像され、専用ネットワークを介し画像サーバーに保管されたX線画像29例である。対象は部位別に(a)中心静脈チューブを挿入した胸部X線写真8例、(b)術中胆道造影画像5例、(c)金属デバイス装着後の四肢の術中写真8例、(d)脊椎手術の際の椎体レベル確認用X線画像8例に分けて評価し、評価者は、医師5名と放射線技師1名(b群は0)とした。医師は各種画像を日常術場で判断している臨床専門医すなわちa群;麻酔科医、b群;消化器外科医c,d群整形外科医とした。画像は液晶モニタ(16.1′′)と通常のパソコン用17インチモニタ/各1280x1024matrix,24bitカラー表示、およびFCRハードコピー画像にて別個に読影した。但し、ハードコピーに比し、液晶モニタおよび通常CRTの画像は1020分の一の圧縮が行われている。評価は評価者の時間の制限から、画像上、臨床的に重要な構造に着目したスコア評価とし、a群についてはIVHカテ気管チューブの位置が、b群では胆管分枝が、c群ではデバイスと椎体または関節との関係が、d群では椎体レベルがそれぞれ3;よくわかる2;何とかわかる、1;わからない、設定した。別の表示法でみた同一症例の記憶の影響を相殺するため、3つの表示法での読影順序が観察者間で異なるように設定し、それぞれの表示法での画像提示順序もランダマイズした。結果;液晶モニタでの画像評価はハードコピーとほぼ同等で、通常型CRTより常によい平均スコアを示した。c群の椎体レベル判定画像のみ、液晶およびはハードコピーの平均スコア2.7より劣ったが、スコアは2.27であった。結論:高精細液晶モニタは手術場で読影、判定されるX線写真の表示系として使用可能と考えられ、その省スペース等の利点から、院内の各所において利用が期待される。ファントムによる検討TFTカラー液晶モにタ-装置(1024×768ドット、1619万色対応、重量6Kg)を用いてファントム実験をおこなった。バーガーファントム、矩形波チャート(KYOKKOX線テストチャートtypeNo.3Nr.30069)での評価では、正面像では17インチ、液晶モニタ間に差はなかったが、斜め60度および45度からの観察では読影者3名のうち2名が液晶の方が一段階解像度が劣ると評価した。シリコンとゴムを用いた4種類の肺野疑似結節を配置した胸部ファントムを用いた7名の読影者によるROC解析では、いずれのタイプの結節の検出にも有意差はみられず、pooling法による検定では全結節に関する検出のp-valueは0.59であった。(2)臨床評価脳内に梗塞巣のある症例20症例のCT画像について従来型CRTと液晶モニターとの比較読影実験をおこなった。液晶モニタはTFTカラー液晶モニター装置(17インチ相当、1024×768ドット)を用い、MRIのT2強調画像をgoldenstandardとして従来型CRTモニター画像との間で、7名の読影者により脳を10の領域に分割した場合の病変の存在確信度についてROC解析を施行した。Az値による両群間のp-valueは0.92(average法)であり、有意差はみられなかった。以上の結果により、液晶モニタは胸部結節影や脳梗塞など基本的なCT画像に関しては通常型CRTモニタに匹敵する画像診断能を提供できると推測されるが、平成10年度はMRIなど他のモダリティーや動画での評価、スペースなどが制限される病院内の特殊な環境における実験や評価を施行する予定である。

結果;液晶モニタでの画像評価はハードコピーとほぼ同等で、通常型CRTより常によい平均スコアを示した。c群の椎体レベル判定画像のみ、液晶およびはハードコピーの平均スコア2.7より劣ったが、スコアは2.27であった。結論:高精細液晶モニタは手術場で読影、判定されるX線写真の表示系として使用可能と考えられ、その省スペース等の利点から、院内の各所において利用が期待される。
リピドミクス技術を用いた新規有害物質生物検定バイオマーカーの開発と応用

有害物質による環境汚染が発生した際には、汚染の環境影響を評価するために、その原因物質を正確かつ迅速に特定することが重要である。生物は環境変化に対応して生体成分を調節して適応する能力を備えている。本研究では、生物が有害物質に応答した時に見せる特異的な脂質成分組成変化パターン(バイオマーカー)を捉える方法を開発し、新しい環境分析手段とすることを目指した。水圏環境指標生物である微細藻類の一種であるラン藻の脂質をLC-MS/MSを用いて多数の脂質成分を一斉に解析する手法を開発した。また、有害金属に応答する脂質バイオマーカーを探索することが可能であることを実証した。生体における脂質成分修飾や発現は、生体の恒常性の維持や、外来の生物や物質からの生体防御など、外部環境の変化に素早く応答している。脂質レベルで環境ストレスを検出し、その影響の程度を評価する手法を開発することは、新たなバイオアッセイ手段として応用できる可能性がある。近年、クロマトグラフィー手法による脂質分離と、質量分析計による検出同定解析を高度に融合させた、生体脂質成分を高感度に一斉解析するリピドミクス技術が目覚ましく発展し、医科学分野で疾病や感染の脂質バイオマーカーの開発などに多数の実績を挙げている。本研究では、この先端的リピドミクス技術を新たに化学物質の環境モニタリングに適用して、既知の有害物質への環境指標モデル生物の脂質応答パターンの収集方法を確立し、環境中の有害物質を迅速に検出する特異性の高い新規のバイオマーカーを探索し、バイオマーカーの発現プロファイルから未知の物質であっても有害性を評価できるアッセイ法の開発を目指している。本年度は、水圏環境指標生物である微細藻類の一種であるラン藻の脂質をLC-MS/MSを用いて一斉に解析する分析条件について検討し、最適化した分析法を確立した。さらに、確立した分析方法を用いて数種類の既知有害金属イオンへの生体応答プロファイルを解析し、重金属に応答する脂質バイオマーカーを探索することが可能であるか検証したところ、被検物質の違いを反映するバイオマーカー候補となるシグナルを多数捕らえることに成功した。環境中で有害物質による汚染が疑われた場合、原因となる物質の同定や定量が必要となる。疑われる汚染物質が膨大な数に及ぶとき、その特定に多くの時間と労力がかかることから、汚染原因物質を迅速に推定する手段の開発が望まれている。生物は光や温度、化学物質など様々なストレスに対して異なる応答をすることが知られている。ストレスごとの応答の違いを利用することにより、汚染原因物質を推定できると考えられる。水圏生態系における一次生産者である微細藻類は生育環境に敏感に応答して、脂質やタンパク質などの生体物質組成が変化すると報告されている。本年は、液体クロマトグラフタンデム型質量分析計(LC-MS/MS)を用いて、有害物質に曝された微細藻類の脂質組成プロファイルを蓄積し、バイオマーカー候補のデーターベース構築に着手した。また、脂質分析にあたり、サンプル量が限られる場合、微量サンプルから高感度に分析する必要があることから、生体膜脂質をさらに高感度分析する条件について検討した。ラン藻から抽出した全脂質をLC-MS/MSで一斉分析すると、PositiveでMGDG、DGDG、SQDGが、NegativeでSQDG、PGが主に検出できる。このときPositive検出では、同一の脂質分子種よりNa+、K+、NH4+が付加した複数の分子関連イオンが検出された。脂質分子関連イオンを感度よく検出するため、また後の解析を単純化するために付加するカチオンをコントロールする必要がある。そこで、脂質分子種をPositive検出する時のイオンソースにおける脱溶媒温度、移動相のpHがカチオン付加に及ぼす影響について検討した。その結果、脱溶媒温度及び移動相のpHを最適化し、最もNH4+付加イオンが強く検出する分析条件を見いだした。有害物質による環境汚染が発生した際には、汚染の環境影響を評価し、汚染に対する最適な除染法を決定するために、その汚染物質を正確かつ迅速に特定することが必要不可欠である。脂質レベルで環境ストレスを検出し、その影響の程度を評価する手法を開発することは、未知の環境汚染源物質の特定を迅速かつ簡便に行うことができる実用的な環境汚染源物質のモニタリング手段として応用できる可能性がある。本研究では、先端的リピドミクス技術を化学物質の環境モニタリングに適用して、平成26年度までに、液体クロマトグラフタンデム型質量分析計を用いて、水圏生態系における第一次生産者である微細藻類の一種シアノバクテリアSynechocystissp. PCC6803の生体膜脂質プロファイルを高感度分析する手法を開発し、有害金属に曝されたシアノバクテリアの脂質組成プロファイルから有害物質に応答する脂質バイオマーカー候補を見出すことに成功した。本年度は、暴露する化学物質の種類を拡大して脂質組成プロファイルを蓄積し、新たに多変量解析手法の一種である主成分分析手法を利用することで、暴露した化学物質ごとの脂質プロファイルの特徴を抽出できることを実証した。また、脂質プロファイリング手法のさらなる高感度化を目指して、糖脂質類を選択的に回収して精製するためのフェニルボロン酸型カラムを試作し、回収率に改善の余地はあるが糖脂質類を捕集することに成功した。本研究で得られた成果は、化学物質の生物影響に関する基礎知見を提供するとともに、化学物質の環境モニタリングの効率的な実施に貢献する基盤技術となると考えられる。

有害物質による環境汚染が発生した際には、汚染の環境影響を評価するために、その原因物質を正確かつ迅速に特定することが重要である。生物は環境変化に対応して生体成分を調節して適応する能力を備えている。本研究では、生物が有害物質に応答した時に見せる特異的な脂質成分組成変化パターン(バイオマーカー)を捉える方法を開発し、新しい環境分析手段とすることを目指した。水圏環境指標生物である微細藻類の一種であるラン藻の脂質をLC-MS/MSを用いて多数の脂質成分を一斉に解析する手法を開発した。また、有害金属に応答する脂質バイオマーカーを探索することが可能であることを実証した。本研究計画では、環境資料中の有害物質をリピドミクス技術を応用して同定・検出する技術開発を達成するために、1)環境指標生物のリピドミクス技術による生体物質プロファイリング法の確立、2)有害物質への応答プロファイルの収集、3)環境評価バイオマーカーを利用した有害物質同定データベースの構築、4)環境試料中の有害物質の検出・同定能力の評価の4つのステップを設けて研究の区切りの成果報告事項(マイルストーン)を設定している。平成26年度は当初計画の、ステップ2)およびステップ3)にあたる、環境指標生物の有害物質への応答プロファイルの収集を行い、さらに有害物質同定バイオマーカーデータベースの構築に着手した。また、脂質プロファイリング法におけるMSイオン化条件にポストカラム塩類添加法を適用し、更なる高感度分析条件を見いだしている。有害物質同定バイオマーカーデータベースはまだ情報の蓄積が不足しており、更に多くの有害物質に対応した脂質プロファイルを収集する必要性が認められるものの、研究はおおむね計画通りに順調に進展していると評価できる。生体物質分析化学環境資料中の有害物質をリピドミクス技術を応用して同定・検出する技術開発を達成するために、研究計画の最終年度となる平成27年度は、情報の蓄積が不十分な有害物質同定脂質バイオマーカーデータベースの更なる拡充を図ると共に、環境指標バイオマーカーデーターベースに対して分類統計処理を行い、化合物同定決定木を開発を行う。決定木分析は統計処理ソフトを用いて実施する。さらに、開発された決定木に対して、模擬環境試料を用いて有害物質の検出・同定能力の評価する。また、必要に応じてバイオマーカーの再選抜や決定木分析アルゴリズムを最適化して能力向上を図り、リピドミクス技術を環境中の有害物質を一斉かつ迅速に検出するバイオアッセイ手段として発展させる予定である。得られた研究成果は、必要に応じて学術雑誌・学会等を活用して公表することを計画している。本研究計画では、環境試料中の有害物質をリピドミクス技術を応用して同定・検出する技術の開発を達成するために、1)環境指標
観客の上映運動としての「地域の映画祭」の起源とその変遷

1985年に開催された広島国際アニメーションフェスティバルの成立過程の調査を行うために、広島市にある実行委員会事務局で過去のパンフレットなどを閲覧させていただいた。ただ、「反核・平和を誓う場」としても構想された映画祭を考えるにあたって、その数年前に広島市でも大規模に展開された10フィート運動を考察する必要があると思われた。そのため、「子どもたちに世界に!被爆の記録を贈る会」、「10フィート映画を上映する下関市民の会」、広島YMCAなどの関係者などに取材し、当時の文献資料の提供をいただいた。その内容について、東京工芸大学で行われた日本映像学会第44回大会で発表し、「『運動』の映画をめぐってー10フィート運動と『市民』の言説」としてまとめて、『映像学』(101号)に掲載した。1970年代半ばに始まった地域の映画祭を考えるためには、その周辺の自主上映運動についても考察する必要があるが、その範囲が広く、また様々な問いが生まれてくることから、それを考察する時間が必要となっている。研究期間延長により、2019年度にはこれまでのまとめを行いつつ、調査を行うなかで浮かび上がって来た新しい問いについて取り組んでいく予定である。1970年代に始まった地域の映画祭を自主上映運動の一つとして捉えた時、同時期に行われた他の自主上映運動についても調査を行い、比較した上でそれぞれの関係を考察する必要がある。湯布院映画祭やくまもと映画祭が誕生した1975年とは「親子映画」と呼ばれた映画館以外の会場で行われた自主上映運動が拡がり、映画センターの経営基盤を確立した年であったと言える。本年度はこれまで映画史において取り上げられることが少なかったこの運動について調査を行った。そして、湯布院映画祭が東宝争議から続く自主上映運動からの離脱であったとすれば、親子映画運動はその連続性の上に、労働組合から教師と母親たちの地域の活動へ、またその普及体として共同映画から映画センターへという移行を促した運動であったという認識に至った。研究計画の通り、調査を進めることができた。この研究課題の中心となる「地域の映画祭」に関して、学術論文を日本映像学会『映像学』に掲載した。その内容は以下の通りである。「地域の映画祭」とは何か、その〈場〉の特徴はいかなるものか、という問いは日本の映画祭の研究を行っていく上で基本的なものとなるが、その起源については日本で最も古い地方の映画祭である湯布院映画祭を通して、当時の自主上映運動のなかに探り、その変遷をたどった。その上で、アーレントやハーバーマス等の研究を参照しながら、国際映画祭(ベルリン)と比較し、公共空間(公的空間)という観点からその〈場〉の特徴を考察した。そして、欧米の国際映画祭(ベルリン)は映画祭を映画館とは異なる公共空間とみなし、映画産業からの自立を目指したのに対して、70年代半ばに誕生した、新しい映画受容の場である地域の映画祭は映画産業に依存し、(観光や地域活性化という)商業性にも強く影響され、公共空間の持つ可能性を生かせず、(消え去った映画館の代替として)国民映画の拠点となった、という結論に至った。親子映画は映画祭が始まった時期に多くの観客を獲得し、またその映画の内容も変化したことから、当初の計画のとおり、研究対象に加え、今年も関係者に対する調査を継続した。そして、親子映画とは非劇場映画の歴史において、労働組合が主導する大規模な(男性労働者の)観客動員から地域を拠点とした(女性が大きな役割を果たした)小規模な自主上映へという、歴史的な転換をもたらした注目すべき映画運動であったと結論づけて、学術論文にまとめ、日本映画学会『映画研究』に掲載した。映画祭や自主上映運動に従事した関係者と連絡が取れないことを当初は危惧していたが、住所や電話番号を知ることができ、そのなかには80歳代の方々も多くおられたが、比較的、健康状態も良好であった。さらに資料提供やインタビュー等で協力をいただいたため、順調に研究をすすめることができた。1985年から広島国際アニメーションフェスティバルが開催されることになるが、その数年前に10フィート運動が全国的に展開され、広島はその中心になった。10フィート運動とは米国公文書館に収蔵されている日本未公開の広島と長崎のカラーフィルムを複製し、そのアーカイブ映像を用いて反核映画をつくる市民運動であり、3本の映画を完成させた。この運動の拡がりは映画祭の開催に何らかの影響を与えたのではないかと考えたこと、また(テレビ、新聞、雑誌等での報道はあったものの)10フィート運動がいかに始まったのか、その経緯と背景がはっきりしなかったため調査を行うことにして、広島と東京において関係者にインタビューを行い、当時の文献を集めた。その結果、この運動の全体像を掴むことができたが、映画祭との関連というより、社会運動と映画との関係を考える上で、映画史において重要な上映運動であったと判断し、さらに下関市で10フィート運動を行ってきた市民団体の活動を調査した。10フィート運動については当初の想定とは異なる理論的枠組みで捉える必要が出てきたため、学会での発表および学術論文の執筆を行うにあたって、(予定していなかった)分野の書籍や学術論文を読むことが求められた。

ただ、「反核・平和を誓う場」としても構想された映画祭を考えるにあたって、その数年前に広島市でも大規模に展開された10フィート運動を考察する必要があると思われた。そのため、「子どもたちに世界に!被爆の記録を贈る会」、「10フィート映画を上映する下関市民の会」、広島YMCAなどの関係者などに取材し、当時の文献資料の提供をいただいた。その内容について、東京工芸大学で行われた日本映像学会第44回大会で発表し、「『運動』の映画をめぐってー10フィート運動と『市民』の言説」としてまとめて、『映像学』(101号)に掲載した。1970年代半ばに始まった地域の映画祭を考えるためには、その周辺の自主上映運動についても考察する必要があるが、その範囲が広く、また様々な問いが生まれてくることから、それを考察する時間が必要となっている。国内の映画祭についての調査を進めながら、海外での調査を進めていく予定である。前年までの研究で親子映画において、70年代半ばに第二次世界大戦の表象に大きな変化が生じたことがわかった。それは原爆映画においても同様で、10フィート映画運動が研究対象として浮上した。この運動についても調査・研究をすすめていくつもりである。10フィート運動に関して、まずは学会発表を行い、学術論文を執筆する予定であり、地域の映画祭(とそれに付随する自主上映運動)について調査を継続していく。研究期間延長により、2019年度にはこれまでのまとめを行いつつ、調査を行うなかで浮かび上がって来た新しい問いについて取り組んでいく予定である。新しい大学に赴任し、職場環境が変わったことにより、海外での調査・研究を行うために必要な期間を伴う出張を行わなかったため。日本の地域の映画祭(自主上映運動)の調査を先に行っており、海外の映画祭の調査が遅れているため10フィート運動に関する論文執筆が遅れたため、計画していた地域の調査を行うことができなかった。そのため、2019年度においては、その地域での自主上映運動等に関する聞き取り調査を行い、またこれまでの収集してきた、さまざまな資料(文献、画像、音声、映像)の整理・分析をしつつ、これまでの研究を継続し、学会発表等を行っていく予定である。今年度において、海外での調査・研究を行う予定である。
オスマン朝下の高工民と同職組合に関する研究 ―18世紀イスタンブルを中心に―

本研究の目的は、18世紀イスタンブルの事例をもとにオスマン帝国下の都市における商工民・同職組合の実態を解明することにある。従来、商工民・同職組合史研究の問題点としてその史料的制約が挙げられてきた。そこで、これまで国内外を問わず充分に活用されてこなかったイスタンブル・シャリーア法廷台帳に着目し、そこに記された商工民・同職組合に関する1,000点以上の記録の収集とデータベース化作業を行った。その成果の一部は2008年イスタンブルで開催された「第6回国際ウスキュダル学会」において発表した。また、その発表で取り上げた内容のうち、イスタンブルの中心地区と郊外の商工民の関係や食糧・物資の流通に関する問題に的を絞り、大幅に加筆を施した論考を『史学』誌上において発表した。これによって、商工民・同職組合史研究を始めとする社会史研究におけるイスタンブル・シャリーア法廷台帳の史料的重要性と問題点が、食糧・物資流通などの諸問題の考察を通して具体的に示されたと考えられる。今後は以上の研究を踏まえ、構築されたデータベースに基づくより踏み込んだ実証的考察を進めることが課題となる。交付申請書に記載したとおり、トルコ・オスマン帝国下の商工民・同職組合史研究の基礎的作業として、平成20年3月までにトルコ共和国で調査・収集した資料の解読とデータベース化の作業を中心に行った。具体的には、18世紀イスタンブルのイスラーム法廷記録のなかから商工民・同職組合に関する記述を抽出・解読し、今後の雑誌論文や博士論文作成に必要な資料をより踏み込んだかたちで厳選してゆくという作業である。その他に、平成20年3月までのトルコ共和国留学期間中には入手・参照が困難であった日本および欧米の最新の研究を収集してその成果を把握しつつ、学会における自身の研究の位置付けを明確化させる作業も並行して行った。こうした作業の経過報告として、平成20年11月にはトルコ共和国イスタンブルで開催された第6回国際ウスキュダル学会にて、「ウスキュダル商工民・同職組合史におけるイスタンブル法廷記録の重要性」という題目で学会発表を行った。これは、自身の調査・収集したイスラーム法廷記録の中からイスタンブルの郊外にあたるウスキュダル地区の商工民・同職組合に関する事例を取り上げて紹介し、商工民・同職組合研究におけるイスラーム法廷記録の史料的重要性を示したものである。また、ウスキュダル学会をとおして行った研究者との意見交換などを踏まえ、先述の学会発表の一部を加筆・修正した論文「18世紀イスタンブルにおける食料・物資供給と商工民・同職組合の諸相-ウスキュダルの果物・皮革・花卉の供給をめぐって-」を『史学』誌(三田史学会)に投稿した。これについては現在、審査継続中である。
明末蘇州の思想界

今年度行った主要な研究は、明代の科挙制度と経学(特に礼学、春秋学)との関係に関するものである。当初の計画からすると、やや横道に外れるように思えるかも知れないが、昨年度の研究を通じて、明末蘇州の思想界について考えるためには、明代の「五経」学を明らかにすることが不可欠であると考えた結果、このような方向に研究を進めることとなった。明代科挙と「五経」学との関係については、昨年度の研究で、「五経」学の地域性の問題が明らかとなり、少なからぬ新知見を論文に発表した((1)「明代科挙における専経について」)。その成果を踏まえて、本年度は明代科挙と『礼記』学との関係についての考察をまず行い、陽明学発祥の地である浙江省紹興府餘姚県では、『礼記』の選択者が他地域に比べて際だって多かったという重要な事実を明らかにした((2)「『礼記』を選んだ人達の事情-明代科挙と礼学」)。そして、その後、(1)(2)の論文執筆を通じて明確になった「五経」学の地域性について、本研究の対象地域である蘇州についても考察を進めた。蘇州については、『易経』学や『春秋』学に特色がありそうなことを既に明らかにしているが、その内、『春秋』学の方が他地域との比較の問題も含め、研究の手がかりが多かったことから、まず『春秋』学の問題から着手し、現在論文を準備中である。この『春秋』学をめぐる研究においては、明末の思想家馮夢龍を主な考察対象の一人としてとりあげ、蘇州の文人の経学・思想についても出来る限り詳細に明らかにする予定である。本年度の研究成果は大きく次の二点にまとめることができる。一点めは、明末の蘇州府にあった書院(和靖書院、学道書院、鶴山書院、甫里書院、文正書院、金郷書院等)における思想活動の実態を、地方誌をはじめとする史料をもとに整理したことである。なお、その際の副産物として、中国における書院研究資料の整理状況を文献紹介のかたちで簡略にまとめた文章を発表した。また、もう一点は、明末蘇州の思想界の特色を鮮明に描き出すための基礎作業として、蘇州の士人たちが官吏登用試験である科挙にどう関わったかという点、すなわち、彼らが科挙に受験勉強を通じてどのような学問観を身につけたかという点についての分析を行ったことである。この分析を通じて、明代の蘇州では『易経』『春秋』が他地域に比べて特に好まれていたことが明らかにできた。だが、このことが明末の蘇州の思想界にどういう意味を持ったのかという問題については次年度の課題である。とはいえ、この考察は本年度の研究実績計画を良い意味で脱線し、結果として明代科挙と明代思想との関連についての論文を生むことにも繋がった。
掃除魚擬態の真相：地域間比較と種間比較で謎を解く

サンゴ礁にすむニセクロスジギンポは、掃除魚ホンソメワケベラとそっくりの体形・体色をしており、脊椎動物の中でもっとも精巧な擬態として知られている。研究代表者は37年前に沖縄県瀬底島で本種の摂餌行動と食性に関する定量的野外調査を実施し、この擬態の進化に関する仮説を提唱したが、未だ実証されていない。本研究では、瀬底島より南方に位置し、餌条件が異なる宮古島との地域間比較、及び、唯一の同属種で擬態していないクロスジギンポとの種間比較により、掃除魚擬態の真相を解明する。
糖転移酵素ＬＡＲＧＥを用いたジストログリカンの機能亢進による新規癌治療法の開発

各種の癌ではα-ジストログリカン(α-DG)の糖鎖修飾不全によりラミニン結合能が低下しており、糖転移酵素LARGEはα-DGの糖鎖修飾を亢進しラミニン結合能を増強することが明らかにされてきた。そこで本研究ではLARGEの癌治療への応用の可能性を検討した。その結果LARGEによるα-DGの糖鎖修飾の亢進はラミニン結合能の増強に加えて細胞遊走その他に関わる多くの遺伝子郡の発現変動を介して癌細胞の増殖、浸潤能を抑制することが明らかとなった。しかし細胞種によっては分化を抑制する場合もあることから、生体への応用に際してはさらなる検討が必要と考えられた。基底膜のラミニンと結合する膜表在性蛋白質のα-ジストログリカン(α-DG)は基底膜と細胞骨格を連携することで細胞膜を安定化し、細胞内外のシグナルトランスダクションに関与している。近年各種の癌においてα-DGの糖鎖修飾不全によりラミニン結合能をはじめとする機能低下が惹起されている事が見い出され注目を集めている。一方、糖転移酵素と考えられている蛋白質LARGEによりα-DGの糖鎖修飾が著明に亢進しその機能が増強する事が最近の研究から明らかとなった。本研究はこのLARGEの持つα-DGの機能亢進作用を利用した癌に対する新規治療法の開発を目指すものである。申請者らは予備実験においてHeLa細胞へLARGE遺伝子を安定発現させることでHeLa細胞の増殖性、浸潤性が大きく減弱することを見いだしている。平成25年度には同様の効果がマウスを用いたin vivoの系でも得られるかどうかを検討するための準備実験を行った。すなわち、ヌードマウスにHeLa細胞を移植してin vivoイメージングによりHeLa細胞の浸潤を観察するために、LARGEを安定発現するHeLa細胞株と野生型のHeLa細胞株に対してluciferase遺伝子を導入し安定発現細胞株を得た。現在これら細胞株をヌードマウスの皮下に接種してLARGE発現の有無でHeLa細胞の浸潤能に変化が生じるかどうかの検討を開始するところである。一方でLARGEが癌細胞以外の正常細胞に対してどのような作用を発揮するか検討するために、LARGEトランスジェニックマウスを用いて骨格筋に対する過剰発現の影響を調べた。この結果LARGEの過剰発現は急性および慢性の骨格筋損傷に際して筋再生を遅延させる作用を有することが明らかとなった。ジストログリカン(DG)はジストロフィン糖蛋白複合体の構成蛋白質であり、基底膜のラミニンと結合する膜表在性蛋白質のα-ジストログリカン(α-DG)と、細胞内においてジストロフィンと結合する膜貫通性蛋白質のβ-ジストログリカン(β-DG)から成っている。DGは基底膜と細胞骨格を連携することで細胞膜を安定化し、細胞内外のシグナルトランスダクションに関与している。初年度の平成24年度には同様の効果がin vivoの系でも得られるかどうかを検討するためにマウスを用いた実験を開始した。すなわち、申請者らが作出したLARGEトランスジェニックマウスと乳癌発症マウスとの交配を行いLARGEの過剰発現に伴うα-DGのラミニン結合能亢進によって、乳癌発症マウスにおける癌の発症、浸潤、転移などがどのように変化するかを検討している。現在まだ実験がが終了しつつある段階で、データの解析を急いでいる。近年各種の癌においてα-ジストログリカン(α-DG)の糖鎖修飾不全によるラミニン結合能の低下が見い出された。一方、糖転移酵素LARGEはα-DGの糖鎖修飾を亢進しラミニン結合能を増強する。本研究はこのLARGEの作用を利用した癌に対する新規治療法の開発を目指すものであり、以下に示す新たな知見を得た。1)LARGE遺伝子を安定高発現するHeLa細胞株を作製し、細胞の接着能、増殖能、浸潤能を検討した。この結果野生型HeLa細胞に比してLARGE高発現HeLa細胞は接着能が2.75倍に増強した一方で、増殖能は60%に減弱、さらに浸潤能は5.59%と著減することを明らかにした。