hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
硫黄官能基のα-カルボアニオンの効率的エナンチオ選択的反抗

本研究課題は、有機硫黄化合物を用い、従来法とは異なる概念に基づいた不斉合成反応を新たに開発することを目的として、平成11年度より行われてきた。平成11年度はβ-シリルエチルスルホキシドから生成したα-スルフィニルカルボアニオンと種々の求電子剤と反応を検討し、いづれも単一ジアステレオマーを与えるという非常に高い立体選択性を実現することができた。平成12年度は、これまでほとんど立体選択的反応が検討されていないスルフィドのα-カルボアニオンのエナンチオ選択的反応について検討した。α-スタンニルベンジルフェニルスルフィドをクメン中、ブチルリチウムおよびビスオキサゾリンと反応させることにより得られたα-スルフェニルカルボアニオンを求電子剤と反応させた。求電子剤としてケトン、アルデヒド、トリフルオロスルホン酸メチル、塩化トリメチルシリル、二酸化炭素など高エナンチオ選択的に反応が進行した。ラセミ混合物のα-スタンニルベンジルフェニルスルフィドを用いていることや種々反応条件で検討し、この立体選択性の発現機構は、dynamic kinetic resolutionによることを明らかにした。一方、2-ピリジルベンジルスルフィドから生成したαースルフェニルカルボアニオンは誘起される立体化学がフェニルスルフェニルカルボアニオンの場合と完全に逆転した生成物を高エナンチオ選択的に与えることがわかった。この反応のエナンチオ選択性はdynamic thermodynamic resolutionで発現することを、分子軌道計算を用いた解析などから明らかにした。このようにスルフィド上の置換基によって立体選択性発現機構が全く異なり、それぞれ、立体保持および立体反転で進行するという極めて興味深い反応を見いだした。また、かさ高いアリールスルフィニル基を用いた炭素-硫黄結合軸の回転障壁による新しい不斉合成反応を検討し、2,4,6-トリイソプロピルフェニルスルフィニル基を有する1-スルフィニル-2-ホルミルおよび2-アシルナフタレンへの求核付加、向山アルドール反応および還元反応は高立体選択的に進行することを見いだした。得られた選択性はC-S軸の回転障壁に起因することが^1H NMRおよびX線結晶構造解析の結果から示唆された。得られた生成物は比較的容易に脱スルフィニル化を行うことができ、光学活性アルコールの合成に有効であることを示した。本研究課題は、有機硫黄化合物を用い、従来法とは異なる概念に基づいた不斉合成反応を新たに開発することを目的として行われた。これまでに、β-シリルエチルスルホキシドから発生させたα-スルフィニルカルボアニオンと種々の求電子剤との反応を検討した。その結果、アセトン、アルデヒド、ホスホン酸トリメチルとの反応では、生じたα-炭素の立体選択性は極めて高い。また、α,β-不飽和エステルとの反応では、生成する2つのキラル中心を完全に制御することができ、単一ジアステレオマーを与えることがわかった。さらに、生成したエノラートを水で処理せず、ハロゲン化アルキル、あるいはアルデヒドと反応させると、完全に立体制御された単一ジアステレオマーを与えた。β-ハロアルキルーα,β-不飽和エステルとの反応では、完全に立体制御されたシクロアルカンカルボキシラートが得られ、この方法は、光学活性rans-菊酸前駆体の簡便な合成法になった。

以上の驚くべき高立体選択性について、スルホキシドのβ位の置換基の検討、および、遷移状態の分子軌道計算結果から、立体選択性発現にはβ位のシリル基が必要であり、ケイ素とカルボニル酸素が相互作用した6員環遷移状態を経由して反応が進行するという全く新しい反応機構を提唱することができた。また、スルフィドのα-カルボアニオンのエナンチオ選択的反応を行い、不斉配位子としてビスオキサゾリン化合物を用いた時、ケトンとの反応で99%eeと極めて高いエナンチオ選択性を示した。2-ピリジルスルフィドの反応では、誘起される立体化学が逆転するという極めて珍しい立体選択性を示した。この現象を、反応機構の違いによって説明することができた。来年度は、さらに新しい概念の不斉合成反応について研究発展させていく。本研究課題は、有機硫黄化合物を用い、従来法とは異なる概念に基づいた不斉合成反応を新たに開発することを目的として、平成11年度より行われてきた。平成11年度はβ-シリルエチルスルホキシドから生成したα-スルフィニルカルボアニオンと種々の求電子剤と反応を検討し、いづれも単一ジアステレオマーを与えるという非常に高い立体選択性を実現することができた。平成12年度は、これまでほとんど立体選択的反応が検討されていないスルフィドのα-カルボアニオンのエナンチオ選択的反応について検討した。α-スタンニルベンジルフェニルスルフィドをクメン中、ブチルリチウムおよびビスオキサゾリンと反応させることにより得られたα-スルフェニルカルボアニオンを求電子剤と反応させた。求電子剤としてケトン、アルデヒド、トリフルオロスルホン酸メチル、塩化トリメチルシリル、二酸化炭素など高エナンチオ選択的に反応が進行した。ラセミ混合物のα-スタンニルベンジルフェニルスルフィドを用いていることや種々反応条件で検討し、この立体選択性の発現機構は、dynamic kinetic resolutionによることを明らかにした。一方、2-ピリジルベンジルスルフィドから生成したα-スルフェニルカルボアニオンは誘起される立体化学がフェニルスルフェニルカルボアニオンの場合と完全に逆転した生成物を高エナンチオ選択的に与えることがわかった。この反応のエナンチオ選択性はdynamic thermodynamic resolutionで発現することを、分子軌道計算を用いた解析などから明らかにした。このようにスルフィド上の置換基によって立体選択性発現機構が全く異なり、それぞれ、立体保持および立体反転で進行するという極めて興味深い反応を見いだした。また、かさ高いアリールスルフィニル基を用いた炭素-硫黄結合軸の回転障壁による新しい不斉合成反応を検討し、2,4,6-トリイソプロピルフェニルスルフィニル基を有する1-スルフィニル-2-ホルミルおよび2-アシルナフタレンへの求核付加、向山アルドール反応および還元反応は高立体選択的に進行することを見いだした。得られた選択性はC-S軸の回転障壁に起因することが^1H NMRおよびX線結晶構造解析の結果から示唆された。
残留応力場における3次元表面き裂の伝ぱ寿命予測法

本研究では、残留応力場における3次元表面疲労き裂の伝ぱ寿命予測法確立のための最も基本的な問題として、き裂面に垂直な残留応力場中を伝ぱするモードI繰返し荷重下の3次元表面疲労き裂を対象とし、弾性解析による負荷の重ね合せとき裂開閉口挙動の取込みを基礎とする、2次元き裂に対する推定法を、3次元表面き裂の場合に拡張し、その有効性を実験により検証した。得られた主な結論は以下のとおりである。1.残留応力場のおける3次元き裂の疲労き裂伝ぱに関する寿命推定法を提案した。き裂面の部分弾性接触がある場合も取り扱えるようにした。この方法では、残留応力と繰返し荷重を重ね合せ、応力拡大係数Kで表されたき裂前縁各点の実効弾性負荷(ΔK、応力比R)を弾性解析する。その実効弾性負荷を基に、2次元貫通疲労き裂の資料を用いてき裂前縁各点のき裂先端各点の開口比U=ΔKeff/ΔKを推定し、有効応力拡大係数幅ΔKeffを求める。さらに、ΔKeffとき裂伝ぱ速度の一価関数関係を用いて、き裂前縁各点の伝ぱ速度を推定する。2.溶接残留応力を有する試験片における表面き裂の伝ぱを実験的に調べ、その結果を本寿命推定法による結果と比較することにより推定法の適用性を調べた。寿命推定にあたっては、き裂は半楕円形状を保ちながら伝ぱするものとした。Kに対する残留応力の寄与は、白鳥のよる影響関数法により求めた。その結果、き裂深さが板の半幅をこえない範囲では、本法によりき裂伝ぱ挙動が推定できることがわかった。3.残留応力を有する爆接クラッド材のおける表面き裂の伝ぱ挙動を本寿命推定法によリ推定し、実験結果と比較した。表面きが引張り残留応力側、圧縮残留応力側のいずれから伝ばするかの違いが、表面き裂のアスペクト比の変化およびき裂伝ぱ曲線の及ぼす傾向を、本推定法により合理的に説明することができた。
葉緑体形成制御に関わるサイトカイニンの情報伝達機構

本年度は計画に従い、次の実験を行った。1.キュウリのNPR遺伝子転写開始上流2.3kbpから180bpまでのいくつかの欠失領域とルシフェラーゼ遺伝子との融合遺伝子を構築し、パーティクル・ガンでキュウリ黄化子葉に打ち込み、暗所でベンジルアデニン(BA)処理を行いシス領域の解析を行った。その結果、455bpと180bpの間にシス領域が存在することが示唆された。2.600bpから90bpの間で約50bpの長さで順次欠失を持つコンストラクトを構築し、1と同様の実験を行った(リンカースキャン)が、BA処理に目立って不応答な箇所は見出されなかった。このことから、455bpと180bpのあいだの複数の領域の相互作用でBAに対する応答性が生じることが示唆された。3.MGDG合成酵素でも、転写開始点上流約2.3kbpを含む領域とルシフェラーゼ遺伝子との融合遺伝子を構築して、1と同様な実験を行ったところ、此の領域にBA応答性のシス領域の存在が示された。4.今後はDNAフットプリントやゲルシフトアッセイなどの方法によってシス領域を同定する予定である。
東南アジア産食糧の食品栄養学的研究ーパ-ムシュガの鉄の利用性と脂質代謝に及ぼす影響

目的:インドネシアおよびその周辺国で使用されているパ-ムシュガ-は,ヤシの樹液を鉄釜で濃縮して作る。精製度が低いため,パ-ムシュガ-中の鉄含量は高く,生物的有効性も高いものと予想される。黒砂糖と同様に,パ-ムシュガ-にも血漿コレステロ-ル低下作用が期待できる。そこで,白ネズミを使ってパ-ムシュガ-の貪血改善と血清コレステロ-ル低下作用について調べた。方法:3週間鉄欠乏食で白ネズミを飼育した後,糖質源としてパ-ムシュガ-(66%)を含む飼料を与え,3週間飼育し,血清鉄,ヘモグロビン濃度を測定した。糖質源としてパ-ムシュガ-(65.1%)を含む高コレステロ-ル食で3週間飼育した後,血清コレステロ-ル,各組織のコレステロ-ル,糞中ステロ-ル,および胆汁酸濃度を測定した。結果:3週間鉄欠乏食で飼育した白ネズミに,パ-ムシュガ-食を与えると血清鉄およびヘモグロビン濃度は基本食群の47%,88%まで回復した。このパ-ムシュガ-食は,鉄濃度が基本食の11%しか含まれていないので,硫酸第二鉄をパ-ムシュガ-食に添加し,基本食と同じ鉄濃度にし,鉄欠乏白ネズミに与えた。鉄添加パ-ムシュガ-食群の血清鉄およびヘモグロビン濃度は基本食群の109%,101%で,貪血を改善した。パ-ムシュガ-は血清コレステロ-ル量,動脈硬化指数を低下させ,肝臓のコレステロ-ル濃度も低下させた。排泄胆汁酸量はパ-ムシュガ-食群で増加した。これらの変化は有意なものであった。結論:パ-ムシュガ-中には二価鉄が多く,生物的有効性が高い。パ-ムシュガ-は,三価鉄の吸収を高め,血液中,肝臓中のコレステロ-ル濃度を低下させる機能がある。パ-ムシュガ-の広い利用は栄養改善に有益で,パ-ム(ヤシ)生産地の産業振興に役立つと考える。
クロロフィル派生物の海洋有機物プールにおける寄与-包括的分析手法による検証

海洋におけるクロロフィル派生物の有機物プールに対する寄与を明らかにするスめ、クロム酸酸化によりクロロフィルから生じたクロリン環を定量する手法を開発した。標品を用いた方法の検討において、良い定量性を示した。植物プランクトンが有するクロロフィルaの分解実験を実施し、蛍光を有するクロロフィルaおよびその派生物は急速に減少する事が明らかになった。一方、蛍光を失った派生物は比較的長期間残存することが確認された。また、東シナ海を中心に実施した海洋観測では、蛍光を失ったクロロフィル派生物が、蛍光を有するクロロフィル派生物の20倍程度の濃度で存在していることが明らかとなった。しかしながら、懸濁態有機炭素に対するクロロフィル派生物の寄与は数%程度であり、懸濁態有機物プールへの寄与は限定的であった。今後、溶存態クロロフィルの研究を進める必要性が示唆された。海洋環境中で植物プランクトンにより生産されるクロロフィルaの物質循環における重要性を明らかにするため、下記の2点に関して研究を行った。1.クロロフィルa派生物の包括的定量法の確立クロロフィルaの部分的分解により生ずる派生物を包括的に定量するため、クロロフィルaおよびその派生物の標準品を用いて、分析法の検討を実施した。色素を部分的に分解するクロム酸による酸化法の検討、分解産物の抽出法、およびガスクロマトグラフによる分析条件等を検討する事により、定量性を確認できた。更に、ガスクロマトグラフ/質量分析計を用いることにより、より微量の濃度についての分析が可能となった。2.クロロフィルa派生物のHPLCによる定性・定量法の確立クロロフィルaおよびその派生物を個別に定量するため、高速液体クロマトグラフ(HPPLC)を用いて分析した。その結果、複数の派生物を分離・定量する事が可能となった。1により得られた結果とあわせて、クロロフィル派生物を、クロロフィルaからの変性ステップの数により、1、2、3および4ステップ以上の、4種類に分別できた。3.クロロフィルaの分解過程の実験的解析クロロフィルaの分解過程を追跡するため、植物プランクトンの培養および分解実験を実施した。沿岸植物プランクトン群集を含む海水試料に栄養塩を添加し、植物プランクトンを増殖させ、クロロフィルa濃度を増加させた。その後、90日にわたり培養系を暗中に放置し、クロロフィルaの分解を生じさせた。随時、試料を採取し個々のクロロフィル派生物濃度および全派生物量を測定した。1.クロロフィルaの分解過程を詳細に追跡するため、沿岸自然植物プランクトン群集の培養、分解実験を実施した。静岡県下田市の大浦湾から得た海水試料に栄養塩を添加した後、太陽光下で培養を行い、クロロフィルaを生産させた。その後、暗所に設置し、バクテリアにより分解させた。随時試料を採取し、得られた試料について、全クロロフィル∂派生物濃度と、高速液体クロマトグラフ(HPLC)による個々の派生物濃度を明らかにした。その結果、分解が進むにつれてHPLCにより測定可能な派生物は急速に濃度が減少するのに対し、全派生物濃度の減少は緩やかであった。これは、蛍光を発しない派生物が長期残存していることを示し、有機炭素プールへの一定の寄与を示唆している。2.研究船「淡青丸」に乗船し、黒潮域から東シナ海にかけた測点において、表層から低層までの、数層にわたり試料を採取した。この試料について、1.と同様に、クロロフィル∂派生物の濃度を測定した。その結果、深度の増加につれて、クロロフィルaからの構造変化の段階が増す傾向が認められ、また蛍光を有しない派生物の割合も増加した。これは、深度の増加と共に、有機物の分解過程が進む事を裏付ける結果である。これらの結果から、蛍光を有しないクロロフィルa派生物は、比較的長期まで残存し、分解性が低いことが確認された。しかし、炭素ベースで換算した結果、懸濁態有機炭素の構成分としては、数%を占めるのみであった。さらに、溶存態有機炭素プールへの寄与について検討する必要がある。
唾液腺癌の分化誘導療法に関する研究

1.in vitro及びヌードマウスで増殖しているヒト唾液腺癌細胞(HSGとHSY)の増殖は、Hexamethylene bisacetamide(HMBA)或いは8-chloroadenosine3':5'-cyclic monophosphate(8-Cl-cAMP)で処理すると、著明に抑制された。2.HSG細胞を5-azacytidineで処理すると、筋上皮細胞(HSG-AZA1)と腺房細胞(HSG-AZA3)に分化誘導されることを、すでに我々は明らかにしている。このHSG-AZA1細胞をプロテイン・キナーゼCのinhibitorである1-(5-isoquinolinylsulfonyl)-2-methylpiperazine(H-7)で処理すると、ニューロン様細胞に分化誘導されることを明らかにした。なお、HSG-AZA1細胞はプロテオン・キナーゼCのタイプI,II,IIIのすべてを発現していること、H-7で処理するとタイプIIプロテイン・キナーゼCの発現が低下することを明らかにした。また、HSG-AZA1細胞はdibutyryl cAMPで処理するとニューロン様細胞に分化誘導することを明らかにした。3.HSG細胞をHuIFN-αで処理すると細胞のEGFレセプター数が有意に減少することを明らかにした。4.HSG及びHSG-AZA1細胞をHMBAで処理すると、DNA hypomethylationが生じタイプIIプロテイン・キナーゼCの発現低下を認め、グリア細胞に向う分化誘導の生じることが示唆された。5.HSG或いはHSY細胞を8-Cl-cAMPで処理すると、cAMP依存性プロテイン・キナーゼAレセプターと選択的に8-Cl-cAMPが結合し、著明な増殖抑制の生じることが示唆された。6.HSG細胞をDNAトポイソメラーゼII阻害剤であるエトポシドで処理すると、α-smooth muscle actin,ミオフィラメントを発現し平滑筋細胞に分化誘導され、ras癌遺伝子の発現の低下を示唆する実験結果を得た。7.HSG細胞をN-methyl-N-nitrosoureaで処理して高転移性HSG細胞(mHSG)を調製して、分化誘導療法のmHSG細胞の増殖・分化、転移、浸潤能に及ぼす影響を解析できる実験系を確立した。また、不死化した正常ヒト唾液腺細胞を調製した。1.in vitro及びヌ-ドマウスで増殖しているヒト唾液腺癌細胞(HSGとHSY)の増殖は、Hexamethylene bisacetamide(HMBA)或いは8ーchloroadenosine 3':5'ーcyclic monophosphate(8ーClーcAMP)で処理すると,単層培養での増殖,anchorageーindependent growth及びanchorageーdependent growthは著明に抑制された。また,ヌ-ドマウス背部皮下で増殖しているHSG或いは、HSY腫瘍にHMBA,8ーClーcAMPを投与すると増殖は有意に抑制された。一方,ヌ-ドマウス腹腔にヒト唾液腺癌細胞を移植して調製した担癌ヌ-ドマウスに8ーClーcAMPを投与すると生存期間は有意に延長したが、HMBAでは生存期間の延長は認めなかった。2.HSG細胞を5ーazacytidineで処理すると、筋上皮細胞(HSGーAZA1)と腺房細胞(HSGーAZA3)に分化誘導されることを、すでに我々は明らかにしている。

このHSGーAZA1細胞をプロテイン・キナ-ゼCのinhibitorである1ー(5ーisoquinolinylsulfonyl)ー2ーmethylpiperazine(Hー7)で処理すると、ニュ-ロン細胞に分化誘導されることを明らかにした。すなわち、HSG細胞をHー7で処理すると、豊富な微細線維とミクロチュブル束を保有する長い細胞突起を形成し、ニュ-ロフィラメントとニュ-ロン特異的エノラ-ゼの発現増強並びにシナプトフィジン及びカテコラミンの発現を認めた。HSGーAZA1細胞のプロテイン・キナ-ゼCの発現動態を解析すると、HSGーAZA1細胞はプロテイン・キナ-ゼのタイプI,II,IIIのすべてを発現していること,Hー7で処理するとタイプIIプロテイン・キナ-ゼCの発現が低下することを明らかにした。また、HSGーAZA1細胞はdibutyryl cAMPで処理するとニュ-ロン細胞に分化することを明らかにした。3.HSG細胞は活性型Haーras癌遺伝子を発現していること、またHSG細胞をHuIFNーαで処理すると細胞のEGFレセプタ-数が有意に減少することを明らかにした。なお、がん遺伝子変異の解析のために、Thermal sequencer TSRー300を購入し活用している。2.HSG,HSY細胞をHMBA或いは8-Cl-cAMPで処理するとMHCのクラスIとII抗原の発現増強とras癌遺伝子産物p21の発現低下を示唆する所見を得た。また、8-Cl-cAMPで処理したHSG,HSY細胞に対するヒト末梢血より調製したNK細胞の障害活性は、未処理HSG,HSY細胞に対してよりも、高値を示すことが、示唆された。3.HSG細胞をN-methyl-N-nitrosoureaで処理して高転移性HSG細胞(mHSG)を調製した。このmHSG細胞をMatrigelを用いてin vitroで培養し、またヌードハウス背部皮下でMatrigel共存下で、増殖させることにより、mHSG細胞の増殖・分化、転移・浸潤能の解析システムを確立した。4.手術で得た顎下腺を培養し、増殖してきた正常唾液腺細胞にSV40 ori-mutant DNAをtransfectionして、不死化した正常ヒト唾液腺細胞を調製した。この培養細胞を更にクローニングすることにより、正常ヒト唾液腺に存在する導管細胞、腺房細胞、筋上皮細胞、扁平上皮細胞に近似した表現形質と超微構造を保有する細胞を得た。
軟弱地盤上構造物の上・下部構造一体設計に関する研究

本研究の目的は,軟弱地盤上に建設される構造物の沈下に対する最適設計案探索手順の構築である。最適化の基本的考え方は,沈下抑制の効果を必ずしも基礎(下部構造)のみに負担させるのではなく,上部構造の剛性を増加させるなどして上部構造にも負担させる。分担の度合いは,例えば上部構造と下部構造を合せた構造物全体の建設費が最小となるように決定する。すなわち,構造物を上部構造と下部構造から成る一体システムと考え,システムにとって最適な上・下部構造設計案の組み合わせを探索する。研究目的達成のための重要な技術課題に,最適設計探索のアルゴリズムの構築と不同沈下予測法の開発の2つがある。前者の課題については上部構造と下部構造の設計空間を一体化し,一体システムに対して作成された制約条件や評価関数に基づいて最適案を選択する。後者の課題については,地盤に弾・粘塑性構成式を組み込んだ有限要素法を適用し,軟弱地盤上の盛土や構造物の施工の履歴も考慮して変形を解析し,構造物の不同沈下を算定する。沈下が実測されている神戸六甲アイランドのある既設構造物に適用したところ、予測値と実測値が概ね一致したので,予測法は十分な精度を有していると考えられる。さらに,最適決定手順を上下部構造間のバランスがとれていると判断される同じ既設構造物の計算モデルに適用したところ,最適計算値と既設構造物で採用された実施設計値が概ね一致した。決定手順は有効であると判断できる。なお,本手順を用いて最適と判断された神戸六甲アイランドの既設構造物は,平成7年1月の兵庫県南部地震によっても上部構造物にほとんど被害が生じなかった。上下部構造間の剛性のバランスを考えた設計は耐震的にも有効であると推測される。そこで,上・下部構造一体設計を地震荷重に対しても適用できるように拡張を計画している。
クロイツフェルト・ヤコブ病の発症因子と発症機序の解明

我々は当該研究期間内に、未だ実体不明のクロイツフェルト・ヤコブ病(CJD)の発症因子に関しできるだけ多くの情報を得ること、プリオシタンパク(PrP)し発症能との関係を明確にすること及び関連疾患と比較しつつ、その発生機序の異同を解析することを目的とした。1.CJD発症因子画分とPrPとの関係:CJDマウス脳をプリオン調製法に基づいて10画分に分離し、各画分について感染力価を測定した結果、プリオン画分のみではなく、電気泳動的にPrPを検出し得ない画分にも高感染力価が検出された。従ってPrPの存在が発症の必須条件ではないと結論した。2.CJD発症因子画分の濃縮:我々は先にCJDマウスの亜細胞分画実験よりミクロソームが高い感染能を示すことを見出だしているので、当該画分を用いて可溶化処理を行い発症因子の濃縮を試みた。現在感染力価測定中で、結論は得られていない。3.プリオン画分とガングリオシドとの免疫学的親和性をELISA法で検索した結果、両者の間に軽度の親和性が観察された。4.発症因子の不活性化条件の確立:実験室内における完全不活化法を確立するため種々の条件を検討した結果、132°C、60分のオートクレーブ(AC)処理、あるいは1N NaOH60分処理後121°C60分ACにて感染能は完全に消失することを見出だした。一方、121°CACのみの場合は120分処理でも少量の感染能が残存した。5.亜急性硬化性全脳炎(SSPE)およびZitterラット(遺伝性海綿状脳症ラット)とCJD脳とのガングリオシド組成の比較:SSPE成人例の大脳皮質、白質、被殻、脳染のガングリオシド組成およびZitterラットの脂質組成を詳細に検索した結果、分子種や長鎖塩基組成がCJDと異なっていることがわかった。本実験より各疾患におけるガングリオシドや他の脂質の変化がそれぞれの病態と関係していることが示唆された。62年度に計画した実験はほぼ予定通り遂行ずることができた.1.プリオンタンパクが発症の必須因子であるか否か.発症マウス脳をプリオン調製法に基づいて10画分に分離した.これともとの脳ホモジネーとを加えた11画分につき,タンパク質量あたりの感染力価を測定した.電気泳動および抗合成プリオンペプチド抗体との反応から分子量19,22,27Kdのいわゆるプリオンタンパクを含む画分が調製されていることを確めた.感染力価を測定した結果,プリオン画分のみならず,プリオンタンパクを検出し得ない画分にも高い感染能が検出された.以上の結果から,プリオンタンパクの存在が発症の必須条件ではないと結論した.2.プリオンタンパクとガングリオシドとの免疫学的関係.プリオン画分を用いてガングリオシドとの親和性をELISA法で検索した結果,総ガングリオシドによる軽度の親和性が観察された.この結果の特異性およびこれが特定のガングリオシド分子種によるものかどうかを明らかにすべく,現在実験を行っている.3.発症因子の不活化条件の確立.減菌清毒法を確立するため種々の条件下で感染能の変化を調べた.オートクレーブ121°,30,60,60×2,および120分処理では潜伏期間は延長し,感染力価も低下するが10%脳

ホモジネートでは100%の発症を見た. 132°,60分処理で完全不活化となった.1NNaOH,60分処理では充分量の感染能が存在することがわかった.これは米国神経学会の観告に反する知見で,早急に改訂の必要があることを意味している.1NNaOH60分処理後に121°60分オートクレーブを行うと感染能は完全に消失した.我々はこの条件を発症因子の不活化法として推漿したい.1.発症因子の部分精製実験:我々は先にCJDマウス脳の亜細胞分画実験より、感染能がミクロリーム膜画分に高濃度に分布することを見出したので、当核画分を可溶化、再分画を行って発症因子の部分精製を試みた。CJDマウス脳より調整したミクロリーム画分を10%サルコシル処理し、22000_<xg>遠心、同上清を215,000_<xg>遠心した沈渣をさらに10%Nacl存在下で再遠心をくり返した。この過程で得られた沈渣画分と上清画分について、感染力価の測定を行っている。一部の画分について発症を認めているが、現時点では未だ結論は得られていない。2.ヒトCJD脳におけるガングリオシド変化と発症機序との関係:我々は先に、ヒトCJD脳のガングリオシド構成成分に異常が存在することを見出したが、これをさらに確認するため亜急性硬化性全脳炎(SSPE)成人例(26歳)の脳ガングリオシドについてその構成成分を分析してCJDとの異同について検索した。ガングリオシド含有量は組織学的変化の少ない大脳皮質と被殻で減少し、グリオーシスの顕著な白質と脳梁で増加していた。ガングリオシドの2次元TLCの結果、GD_3、GD_2、の増加がいずれの部位でも観察されたが、GM_1、GDla、GDlbは被殻を除く部位で減少していた。ガングリオシド長鎖塩基組成の変化は脳梁においてのみ顕著で、他の部位では著しい変化は認められず、GD_3とGD_2の増加や病理組織像の知見とも対応していなかった。以上の結果から、SSPEとCJDはそれぞれ独自のガングリオシド変化を示していることが明らかとなり、CJDにおけるガングリオシドと病態との関係が強く示唆された。3.CJDマウスの脾臓細胞とマウスミエローマのハイブリドーマを作製する実験を開始した。現在増殖中であり、実験の成否については結論は得られていない。
癌患者の腎機能低下に伴うモルヒネ代謝の変化と投与量の調節

モルヒネの持続投与を受け、1週間以上安定した鎮痛が得られている症例(延べ25症例)について、傾眠傾向と腎機能およびモルヒネの活性代謝物であるM6Gの血中濃度と尿中排泄量を測定した。傾眠傾向を認めた症例群の24時間Ccrの平均値は34.75ml/min,傾眠傾向を認めなかった群では79.92ml/minであり、傾眠傾向を認めた群では有意に24時間Ccrの低下を認めた。同様に傾眠傾向を認めた群のM6G腎クリアランスは39.26ml/minであり傾眠傾向を認めなかった群の170.87ml/minに対して有意に低下が見られた。M6Gの腎クリアランスは24時間Ccrと相関し、腎機能低下によってM6Gが蓄積することが確認された。一方、傾眠傾向を認めた群では尿量も有意に減少し、尿量の減少はM6G腎クリアランスと相関した。従って尿量の維持によりM6G腎クリアランスを維持することが可能であることが示唆された。同一症例における追加観察では、尿量が540ml/日と減少が見られた時点では強い傾眠を訴えたが、尿量が1648ml/日となった時点では傾眠傾向は全く認められなかった。それぞれの24時間Ccrは96.6,90ml/minと差がなく、M6G腎クリアランスは119.8ml/minから295ml/minと尿量の増加に伴って改善が認められた。今回の研究から、傾眠傾向などのモルヒネの副作用は尿量の減少と関わりが深いことが明らかになった。従って、進行癌患者では、尿量を維持することにより、傾眠傾向をある程度回避できる可能性があることが示唆された。現在、M6Gの鎮痛作用の有無については議論がなされているが、今後M6Gの鎮痛力価が特定されれば、尿量からM6Gの蓄積の程度を予測し、モルヒネの投与量を調節することができる。今後、更に症例数を増やして、尿量とM6Gの関係を明確にする必要があると思われた。
ナノパターン表面への生体分子の固定化とバイオチップへの応用

ナノ構造配列基板上の生体分子の固定により、DNAチップの感度向上とタンパク機能を利用した新機能センサの開発を目指して、以下(1)(3)の目標を掲げた。(1)ナノ領域に固定したDNAと高感度希土類蛍光ラベルを有するDNAにより、DNA検出の高感度化と高密度化を行う。(2)ナノトランジスタのチャネル部位にDNAやタンパクを固定し、ハイブリダイゼーションや抗原・抗体反応による表面電位の変化をトランジスタレベルの微小領域で行う。(3)ナノ構造配列を利用したチップクロマトグラフィーの基礎検討を行う。(1)DNAの固定と検出に関して、自己組織化単分子膜を形成するシランカップリング剤を代替レジスト兼テンプレート(パッシベーション膜)として用いることにより、100nm以下のサイズの超高密度配列に固定し蛍光検出できることを、すでに15年度に達成している。本年度は、さらに、CH_3-やCF_3-など異なる末端基を有する自己組織化単分子膜をテンプレートとして用い、非特異的吸着量を同定して半導体基板間相互作用のデータベースを拡充した。(2)15年度は比較的耐環境性の高いモデルタンパクをナノ構造配列上に固定し、蛍光ラベル検出することに成功したが、本年度は実用的なバイオチップへの応用を目指して、モデルタンパクではなく、実際の抗体(IgG)を固定して検出すること成功した。数十nmのサイズに、特異的な吸着を示すことがAFMにより検出できることを示した。(3)種々の末端基を有するシランカップリング修飾表面上への、特異的吸着と非特異的吸着量をナノレベルで比較し、データベースとすることにより、アフィニティクロマトグラフィチップや一分子タンパクチップへの可能性を示した。
着床前期胚特異的遺伝子を用いたiPS細胞のpotencyと安全性に関する検討

c-Mycのような癌遺伝子ではなく、着床前期胚に発現している新規のiPS誘導因子が安全性に重要なことである。Zscan4は胚性遺伝子が活性化される2細胞期に特異的な遺伝子の一つである。私達は、このZscan4を用いることで、マウスiPS細胞の作製効率が、短期間で大幅に改善することを示した。今回は、このZscan4を用いて作製したiPS細胞を用い、臨床応用が可能な安定的でhigh-qualityのiPS細胞を得るべく研究を行った。Zscan4ERT2をES細胞に導入することで、内因性のZscan4陽性となる頻度が上がり、幹細胞のゲノムの安定性やpotencyの維持に効いていることが示唆された。近年、着床前期胚の潜在能力を用いることにより、発生工学、幹細胞研究が著しい進歩を遂げ、胚発生の遺伝子ネットワークの解析が重要な役割を果たしてきた。着床前期胚の各ステージにおける遺伝子発現プロファイリングの解析により、二細胞期に特異的に発現する遺伝子としてZscan4が同定された。Zscan4は、二細胞期胚とES細胞に特異的に発現する遺伝子である。ES細胞において、テロメレースに依存しないテロメアの伸長、ゲノムの安定性を維持しながら不死化を維持する重要な役割を果たしている。さらには、iPS細胞作成時には、Zscan4はc-Mycの代わりになるのみならず、一日間Zscan4を活性化するのみで大幅にiPS作成効率を促進し、核型の維持にも働くことが分かった。また、Zscan4を用いたiPS作成早期において、着床前期胚特異的な遺伝子群が活性化されることが分かった。以上のことより、Zscan4がES細胞やiPS細胞のpotencyの維持に非常に重要であると考えた。Zscan4ERT2を導入することで、MC1(ES細胞)において、内因性のZscan4陽性(Emerald陽性細胞)が約3倍に増えた。V6.5にZscan4ERT2を導入しても同様に内因性のZscan4陽性細胞が3倍の比率となった。これは、Zscan4ERT2を導入することで、Zscan4陽性となる頻度が上昇していることがわかった。結婚年齢の高齢化、少子化に伴い、不妊治療の重要性は社会的にも益々増大しているが、補助生殖医療を用いても妊娠率は30%程度に留まっている。この状況にブレークスルーをもたらすには、初期胚発生における初期化の理解が必須である。初期化の理解は、近年、発生工学の進歩と相まって大きく進歩している。我々は、着床前期胚特異的遺伝子Zscan4が、今回マウスZscan4がiPS作製効率を大幅に改善し、Zscan4自体がc-Mycの代わりになるのみならず、核型安定性の維持にも働くことを報告したが、この研究が臨床応用可能なよりhigh-qualityのiPS作製につながると考えている。さらに、その理論的根拠を検証するのが当研究であり、humanのiPS細胞に関する検討も行い、臨床応用に向けて基盤となる研究を行う。我々は、Zscan4ERT2をMC1(ES細胞)に誘導することで、内因性のZscan4陽性の細胞の比率が3倍になり、また、V6.5(ES細胞)に導入しても同様に3倍になった。Zscan4ERT2を導入することで、Zscan4の頻度が上昇していた。さらに、Zscan4を誘導させたときに有意に上昇した遺伝子群のうち、3遺伝子を選択して、iPS細胞の誘導効率上昇の効果を見るために検討を行ったが、いずれもiPS作成効率は上昇しなかった。当研究に対し、マンパワーの欠如のため、進行度合いが非常に遅くなっている。結婚年齢の高齢化、少子化に伴い、不妊治療の重要性は社会的にも益々増大しているが、生殖補助医療を用いても妊娠率は30%程度にとどまっている。この状況にブレークスルーをもたらすには、初期胚発生におけるしょきかの理解が必須である。我々は、着床前期胚特異的遺伝子Zscan4が、今回マウスZscan4がiPS細胞作成効率を大幅に改善し、Zscn4自体がc-Mycの代わりになるのみならず、核型安定性の維持にも働くことを報告したが、この研究が臨床応用可能なよりhigh-qualityなiPS作成につながると考えている。我々は、Zscan4ERT2をMC1(ES細胞)に誘導することで、内因性のZscan4陽性の細胞の比率が3倍になり、またV6.5(ES細胞)に導入しても3倍になった。Zscan4ERT2を導入することで、Zscan4の発現頻度が向上した。さらに、Zscan4の誘導初期に有意に発現上昇した遺伝子群から3つの遺伝子を選択し、Zscan4の代わりにその因子を用いてiPS細胞の作成を試みたが、iPS細胞作成効率の上昇は確認されなかった。さらに、異なる研究として、子宮内膜症におけるZscan4の発現を免疫染色法にて確認した。すると、低発現ながら、子宮内膜症上皮細胞の一部に発現していることが確認された。現在さらに、その機能について検討中である。

今回は、このZscan4を用いて作製したiPS細胞を用い、臨床応用が可能な安定的でhigh-qualityのiPS細胞を得るべく研究を行った。Zscan4ERT2をES細胞に導入することで、内因性のZscan4陽性となる頻度が上がり、幹細胞のゲノムの安定性やpotencyの維持に効いていることが示唆された。現在までのところは想定の範囲内であるが、遅れている。Zscan4を用いたiPS細胞作成に関するろんぶんが多施設からも報告されてきており、異なるアプローチが必要。また、Zscan4の発現メカニズムについても報告が出てきており、それらを参考にしながら、アプローチを変えていく必要があると考えている。産婦人科学Zscan4を用いたiPS細胞作製に関する論文が他施設よりpublishされてきているため、予定の方法と異なるアプローチの追加も必要と考えている。研究の進行状況の遅れのため、その分の繰り越しとなった。研究の予定が数か月単位で遅れているため、研究費の使用が遅れている。他施設からの報告などのため、実験系の変更が必要としており、それに伴って研究費を通常の1年より必要とするため、問題はないと考える。サンプルが集まり次第、DNAメチレーション解析など検査の外部委託をする予定であり、高額になるため、速やかに使用される予定である。
青少年を対象としたインターネット依存予防教育プログラムの開発

インターネットの普及にともない,インターネット依存(Young, 1998)やGaming disorder(WHO, 2018)といった心理的問題への対応の必要性が謳われている。これまで,インターネット依存に関連する要因として,インターネットの使用に関する非適応的な認知,ストレス対処スキル等に関する問題が挙げられている。そこで本研究では,青少年におけるインターネット依存に関する非適応的な認知,ストレス対処および情動調節スキルが依存傾向に及ぼす影響について検討し,得られた結果を基に,インターネット依存の予防を目的とした心理教育プログラムの開発を目的とする。
ダウン症候群に伴う急性巨核球性白血病の多段階発症の分子機構

本研究は、ダウン症の白血病発症の仕組みを明らかにするために21番染色体上の遺伝子を解析し、ERG, RUNX1, BACH1が白血病の責任候補遺伝子であることを明らかにした。また、JAK3活性化変異が約10%の前白血病状態(TMD)にみられた。GATA1遺伝子の変異はGATA1sタンパクの発現量に影響し、高発現変異をもつTMDは、白血球は少ないが白血病発症のリスクが有意に高いことが示された。21番染色体の過剰が原因であるダウン症は、最も多い染色体異常症で、約10%の症例にTransient myeloproliferative disorder(TMD)という前白血病を発症し、その2030%は生後4年以内に急性巨核球性白血病(AMKL)を発症する。最近、我々は、GATA-1遺伝子の変異がダウン症のTMDとAMKLで高率に見られ、変異GATA1(GATA1s)が発現していることを発見した。本年度は、ダウン症の白血病発症の仕組みを分子レベルでさらに明らかにすることを目的に研究を進め、以下の点について明らかにした。1.21番染色体上の遺伝子ERGの発現をRT-PCR法で解析した結果、造血幹細胞・巨核球系細胞およびTMDとDS-AMKL細胞でERGが大量に発現していた。K562細胞にERGを強制発現すると、赤血球系から巨核球系に細胞分化が誘導された。レポーター・アッセイを用いてERGが巨核球特異的な遺伝子GPIbのプロモーターを活性化することを示した。また、ChIPアッセイにより、GPIIbプロモーターにERGがin vivoで結合していることを明らかにした。この結果より、ERGの過剰発現もダウン症候群の急性巨核球性白血病の発症に重要な役割を果たしていることが示唆された。2.21番染色体上の遺伝子AML1とGATA1の結合に必要なGATA1のドメインを解析し、GATA1のzinc-finger domainがAML1との結合に重要であることを明らかにした。この結果、GATA1sがAML1と結合できないというこれまでの説を否定することができた。3.Affimetrix社のGene Chip(500K)を用いて、TMD細胞の遺伝子コピー数の解析進めた。その結果、コピー数が増加しているいくつかの領域を見出した。ダウン症は、約10%の症例にTransient myeloproliferative disorder(TMD)という前白血病を発し、その2030%は生後4年以内に急性巨核球性白血病(DS-AMKL)を発症する。本年度は、ダウン症の白血病発症の仕組みを分子レベルで明らかにするために研究を進め、以下の点について明らかにした。1.21番染色体上のTMD責任候補遺伝子の一つであるRUNX1転写因子に注目し、解析を行った。その結果、GATA1がそのzincfingerドメインを介してRUNX1と結合することを見出した。患者特異的GATA1変異体はそのzincfingerドメインを介してRUNX1と結合し、GATA1とRUNX1の結合配列を持つ巨核球特異的なGP1bαプロモーターを相乗的に活性化した。この結果より、DS-AMKLの原因は、GATA1とRUNX1の相互作用の喪失のためではないことが明らかとなった。2.TMDからAMKLに進展する時に加わるGATA1遺伝子以外の遺伝子変異を解析した。Pan JAK inhibitorによって、解析した3種類すべてのDS-AMKL細胞株の増殖と生存率が著しく低下した。そこで、JAKファミリーの遺伝子(JAK1,JAK2,JAK3,TYK2)の塩基配列を解析したところ、2つのDS-AMKL細胞株でJAK3遺伝子の変異が検出された。Ba/F3細胞にレトロウイルスベクターを用いて変異JAK3を発現させたところ、IL-3非依存性に増殖が認められ、活性化変異であることが明らかとなった。3.21番染色体上の遺伝子BACH1の過剰発現が血小板造血を抑制する仕組みを明らかにするために、BACH1の標的遺伝子をBAC刑トランスジェニックマウスとコントロールマウスの巨核球を用いてmicroarrayで解析した。その結果、多くの候補遺伝子が得られ、解析を進めている。1. GATA1変異による白血病発症の仕組みを明らかにするために、正常および変異GATA1とエストロゲン受容体とのキメラ分子をSCF依存性DS-AMKL細胞株に遺伝子導入し、タモキシフェンでGATA1活性誘導後の増殖能を解析した。正常および変異GATA1もともにKITの発現量と細胞増殖を抑制したが、標的遺伝子の制御能力に差が認められた。2. TMD細胞およびSCF依存性DS-AMKL細胞株を用いて、SCF/KITシグナル伝達系がダウン症の白血病発症に重要な役割を果たしていることを見出した。

また、SCF/KITの下流のシグナルとして、DS-AMKLではRAS/MAPKとPI3K/AKTシグナルが重要であることを見出した。3. TMDからAMKLに進展する時に加わる遺伝子変異の検索のためにJAK3変異を解析した。その結果、3株のDS-AMKL細胞株中2株でJAK3遺伝子変異が認められた。DS-AMKLでも12例中1例のJAK3変異がみられ、驚いたことにTMDでも12例中1例にJAK3の変異が認められた。DS-AMKL細胞株MGSでは同一のアレルのSH2ドメインとpsuedokinaseドメインにミスセンス変異が存在し、TMDでは受容体結合ドメインにミスセンス変異が存在した。IL-3依存性細胞株Ba/F3にレトロウイルスベクターを用いて変異JAK3を発現させたところ、IL-3非依存性増殖やSTAT5の持続的リン酸化が認められ活性化変異であることが明らかとなった。さらにDS-AMKLでもTMDとほぼ同頻度でJAK3変異が見出されることから、JAK3変異はTMDからAMKLに進展する時に起る変化ではなく、白血病発症のごく初期に起ることが明らかになった。ダウン症の白血病発症の仕組みを分子レベルで明らかにするために、本年度は以下の研究を進めた。(1)変異GATA1が、正常造血細胞の分化・増殖を障害する仕組みの解析タモキシフェンで完全長GATA1の機能的発現が誘導可能なDS-AMKL細胞株(CMKおよびKPAM1)を用いて、GATA1変異によって発現が障害されている遺伝子をreal time PCF法を用いて同定した。その結果、完全長GATA1の発現によりKITの発現が抑制されることが明らかになった。また、グロビン遺伝子は発現が誘導された。以上の結果などからKITはGATA1により正常では負に制御されているが、DS-AMKLでは発現の抑制が障害されていることが示唆された。(2)白血病発症を誘導する21番染色体上の遺伝子の同定これまでに、我々は21番染色体上の遺伝子BACH1の過剰発現がin vivoで血小板造血を抑制することを明らかにした。前年度にmicroarray解析で得られたBACH1の標的候補遺伝子の発現をBACH1トランスジェニックマウスから巨核球を純化し、real time PCRで解析した。その結果、BACH1によって発現が負あるいは正に制御されている遺伝子を複数同定した。(3) TMDがAMKLに進展する時に加わる新たな遺伝子変異の解析ほとんどのTMD細胞で、恒常的STAT3のリン酸化が認められ、TMDの発症にJAK/STAT系の分子の異常が存在することが示唆された。そこで、変異遺伝子を絞り込むために、恒常的STAT3のリン酸化の仕組みの解明を進めた。STAT3のリン酸化に関わるgp-130のシグナル伝達系に注目し、サイトカインあるいはサイトカイン受容体に対する中和抗体を用いてSTAT3のリン酸化の解析を行った。その結果、KPAM1細胞ではLIFのautocrineによって恒常的STAT3の活性化が生じていることが明らかになった。現在、臨床検体を用いてLIFや受容体の発現の解析を進めている。1. GATA
口腔癌の新規腫瘍拒絶抗原を標的としたペプチドワクチン療法の確立

口腔癌で高頻度に高発現している新規腫瘍抗原URLC10ならびにTTKを標的としたペプチドワクチン療法の施行した:対象:1)転移あるいは局所浸潤を有する治癒切除不能の口腔癌で、化学療法もしくは放射線療法が、前治療として既に使用され、そのいずれに対しても不応となるか、もしくは副作用により投与できない患者。HLA-A^*2402を有すること。方法:合成した2種類のペプチド1mgを、それぞれ単独もしくは混合したものに、不完全フロイントアジュバントを混合し、患者頸部、腋下あるいは鼠径部付近の皮下に投与した。3)ペプチドワクチンの投与スケジュール:予備試験投与として、ワクチンを初回投与する前に10μgのペプチドを本投与する場所以外の皮下に投与して30分間経過観察した。ワクチン投与をペプチド投与量として2mgに固定した。1コースで安全性の評価をした。安全性の評価で問題がなかったので、同じ投与法で、再発が確認されるまで繰り返し投与した。10症例の分析結果で良好な免疫能の獲得が確認された。
HMGB1が有する血管新生能，幹細胞遊走能を応用した新規組織再生治療

我々は,HMGB1が炎症のコントロールおよび免疫細胞の遊走を促進することによって,抜歯後の骨治癒を促進する作用があると考え,研究を行なっている。HMGB1の機能を阻害する抗HMGB1抗体が創傷治癒を抑制するという仮説を立て,in vivoでの検討を行なった。その結果,抜歯モデルマウスに抗HMGB1抗体を投与した先行研究において,炎症強度を測定するために分子イメージングを用いて解析した結果,抗HMGB1抗体を投与した群では,抜歯後1日目,3日目,5日目そして7日目全ての時期の炎症は抑制されていた。一方,コントロール抗体投与群では,抜歯後3日目をピークに炎症が増強してその後減弱した。すなわち,抜歯窩周囲組織の歯肉上皮細胞および炎症性細胞から分泌されるHMGB1が抜歯後の初期炎症および炎症細胞の浸潤に深く関わっていたことを明らかとした。その結果,抜歯後に歯肉上皮細胞や炎症性細胞から分泌されるHMGB1がマクロファージや血管内皮細胞などを遊走促進し,血管新生の促進,骨のリモデリングの破骨細胞および骨芽細胞に深く関わり骨新生を制御していたことを明らかとした。したがって,HMGB1が誘導する初期炎症を上手くコントロールすることができるならば,生体内に存在する幹細胞を局所に誘導することによる新たな再生医療につながるのではと考えた。今後は,脛骨損傷モデルおよび抜歯モデルマウスを作製してリコンビナントHMGB1タンパクを用いて組織再生を検討する予定である。当初の予定では,リコンビナントHMGB1タンパクを用いた実験を行う予定だった。しかし,動物実験計画書などの申請受理が遅れたことと,リコンビナントHMGB1タンパクの作製および確立に時間がかかってしまい,今年度にずれ込むこととなった。しかし,動物実験計画書などの準備が整ったことから,本年度は滞りなく研究が進む予定である。リコンビナントHMGB1タンパクを用いたマウスおよびコントロールマウスを用いて脛骨損傷モデルおよび抜歯モデルマウスを作製する。その後,分子イメージングによる炎症の定量,μCTを用いた新生骨の定量,組織切片を用いた免疫染色を行う。また,組織より骨髄を採取しフローサイトメトリーを用いて遊走細胞の機能解析を行う。当該年度は,消耗品費について予定していた額よりも僅かであるが差額が生じた。残額については,次年度、解析のための消耗品の費用に使用する。
知的障害特別支援学校高等部における行動問題への包括的・階層的介入モデルの開発

本研究では、以下の4点について実施した。1知的障害特別支援学校高等部におけるASD(Autism Spectrum Disorder)、ADHD(Attention Deficit/Hyperactivity Disorder)、mID(mild Intellectual Disability)等のある生徒が示す行動問題に関する研究レビュー:知的障害特別支援学校高等部におけるASD、ADHD、mID等のある生徒の生徒指導上の課題と現状についての先行研究のレビューを行った。そのレビューでは、特別支援学校における生徒指導上の課題とその対応例として、「不登校」と「異性とのつきあい、性的な問題」に焦点を当て、一次的支援(学校全体・学年全体での通常の授業や日常的な関わりの中での支援)、二次的支援(個別的な課題に対応した小集団における支援)、三次的支援(個別的な喫緊の課題に対応した個別的な問題解決的支援)といった階層の必要性を指摘した。2知的障害特別支援学校高等部における生徒指導に関する聞き取りによる実態調査:高等特別支援学校(知的障害)2校において、関係教員からの生徒指導の現状と課題についての聞き取りを行った。その聞き取りの結果からも、日頃の授業における生徒への指導・支援の充実と個別的な問題解決的支援の必要性が示唆された。3国内における先進的な学校等への視察調査:これは学校との日程調整がつかず、実施に至らなかった。4海外の特別支援学校等における学校全体における階層性モデル(SWPBS)の情報収集:オハイオ州コロンバス(Winterset elementary school , Hamilton STEM Academy, Haugland Learning Center)への視察訪問を実施し、聞き取りをもとに、それらについて資料の整理・分析を行った。これまでに4つの研究が実施されてきている。1知的障害特別支援学校高等部におけるASD、ADHD、mID等のある生徒が示す行動問題に関する研究レビューについては、当初の系統性の高いレビュー(たとえば、障害種と行動問題種類のクロス集計)を目指していたが、該当する学術論文が少ないこともあり、それには至らなかったが、行動問題の実態、及び生徒指導の課題としての不登校と性的問題に焦点を当てたレビュー論文としてまとめることができた(井澤ら, 2019)。2知的障害特別支援学校高等部における生徒指導に関する聞き取りによる実態調査は、当初の予定通り、協力を得られた2校において実施することができた。3国内における先進的な学校等への視察調査については、視察先との日程調整が不調に終わり、実施に至らなかった。4海外の特別支援学校等における学校全体における階層性モデル(SWPBS)の情報収集が他の助成を受けることができたこともあり、今年度の予定ではなかったが、計画よりも先行して実施することができた。以上のことより、おおむね順調に進展していると評価した。引き続き、研究1研究4までを同時的に進めていく。まず、昨年度実施できなかった国内における先進的な取組を行っている知的障害特別支援学校高等部への視察(研究3)を行い、聞き取り調査及び資料の分析を行うことで、グッドプラクティスのデータを蓄積していく。併せて、昨年度実施した知的障害特別支援学校への聞き取り調査(研究2)について、昨年度に引き続き実施を行い、知的障害特別支援学校高等部における行動問題への支援の現状と課題の分析を行う。それは、関連する先行研究レビュー(研究1)と連動させ、特に「異性とのつきあい等の性的な行動動問題」に焦点を絞り、予防的支援と問題解決的支援の双方からの性教育プログラムの在り方を検討する。4海外視察については、昨年度に先行して実施したが、今年度もその実施を検討する。さらに、知的障害特別支援学校高等部における行動問題への包括的・階層的介入に関するグッドプラクティスを収集するための、及び研究1研究4に関する情報発信のためのwebを立ち上げることを計画している。