hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
早期前立腺癌に対する監視療法の精度を高めるためのmpMRIプロトコールの確立

現在、PRIAS-JAPAN研究ではわが国で41施設が参加している。それらの施設から年間約100例の患者が前立腺癌監視療法に登録されている。2019年3月末までに合計で900例を超える症例が登録された。これはPRIAS研究全体の中でも、世界第3位の登録数を誇っている。現在、各施設におけるMRI不随研究についての参加希望状況と実施可能状況を調整中である。MRI不随研究での実臨床に即したプロトコールを作成中であり、大筋は合意できている。まずは適格規準として、監視療法開始後3ヶ月目にMRIを撮像し、PIRADS3以上の所見が認められた部位に対して狙撃生検を行う。最大3ヵ所、1ヵ所につき最大2本まで。そこでグリーソンスコアのアップグレードが認められれば、監視療法をはずれて積極的治療を勧告する。ついで監視療法の経過観察において、PSA倍過時間が10年未満になった場合、直ちに再生検をするのではなくまず1年ごとのMRIで経過を観察する。その間にもしMRIによる進行が認められた場合には、その箇所に対して狙撃生検を施行する。そうすることで生検の頻度や針の刺入本数や量も減少させられる可能性があると考える。さらに1,4,7年目のプロトコール生検時には、その直前にMRIを撮像し、PIRADSスコアが3以上の箇所がある場合には追加生検を行い、より精度を上げることを目指す。このようなプログラムに則って、MRI不随研究を進めていくことに決定している。また、そのための基礎データとして、自施設での前立腺全摘症例(年間約60例)に対する画像診断能力および病理学的所見との比較検討を継続している。着実に症例数を重ねており。精度および理解度は著しく向上してきている。われわれの施設における準備・実施状況:本施設では年間60例の前立腺全摘除術が施行されており、そのすべてにおいて放射線診断医および病理医との協力のもとで術前のMRI所見(PIRADS score)と摘出標本の病理学的所見の詳細な検討を行っている。さらに年間約20-30件施行されているMRIガイドの標的生検についても同様の解析を行っており、その診断精度は確実に向上してきている。PRIAS-JAPAN参加施設のなかでMRI不随研究に参加可能の施設において、より大規模に監視療法のアウトカムとの関連を進めていく。すなわち、監視療法継続率、PSAの動向(PSA倍加時間等)、全摘施行症例の病理学的検討などを総合的に評価していくことによって、監視療法プログラムにおけるMRIの有用性や位置づけをより明確にしていく。現在、PRIAS-JAPAN研究ではわが国で37施設が参加している。2017年末までに合計で800例を超える症例が登録された。現在、各施設におけるMRI付随研究についての参加希望状況と実施可能状況を調整中である。MRI附随研究での実臨床に即したプロトコールを作成中であり、大筋は合意できている。最大3カ所、1カ所につき最大2本まで。ついで監視療法の経過観察において、PSA倍加時間が10年未満になった場合、直ちに再生検を施行するのではなくまず1年ごとのMRIで経過を観察する。このようなプログラムに則って、MRI附随研究を進めていくことに決定している。着実に症例数を重ねており、精度および理解度は著しく向上してきている。われわれの施設における準備・実施状況:本施設では年間約60例の前立腺全摘除術が施行されており、そのすべてにおいて放射線診断医および病理医との協力のもとで術前のMRI所見(PIRADS score)と摘出標本の病理学的所見の詳細な検討を行っている。さらに年間約20-30件施行されているMRIガイドの標的生検についても同様の解析を行ってきており、その診断精度は確実に向上してきている。

最大3ヵ所、1ヵ所につき最大2本まで。そこでグリーソンスコアのアップグレードが認められれば、監視療法をはずれて積極的治療を勧告する。ついで監視療法の経過観察において、PSA倍過時間が10年未満になった場合、直ちに再生検をするのではなくまず1年ごとのMRIで経過を観察する。その間にもしMRIによる進行が認められた場合には、その箇所に対して狙撃生検を施行する。そうすることで生検の頻度や針の刺入本数や量も減少させられる可能性があると考える。さらに1,4,7年目のプロトコール生検時には、その直前にMRIを撮像し、PIRADSスコアが3以上の箇所がある場合には追加生検を行い、より精度を上げることを目指す。このようなプログラムに則って、MRI不随研究を進めていくことに決定している。また、そのための基礎データとして、自施設での前立腺全摘症例(年間約60例)に対する画像診断能力および病理学的所見との比較検討を継続している。着実に症例数を重ねており。精度および理解度は著しく向上してきている。われわれの施設における準備・実施状況:本施設では年間60例の前立腺全摘除術が施行されており、そのすべてにおいて放射線診断医および病理医との協力のもとで術前のMRI所見(PIRADS score)と摘出標本の病理学的所見の詳細な検討を行っている。さらに年間約20-30件施行されているMRIガイドの標的生検についても同様の解析を行っており、その診断精度は確実に向上してきている。PRIAS-JAPAN参加施設のなかでMRI不随研究に参加可能の施設において、より大規模に監視療法のアウトカムとの関連を進めていく。すなわち、監視療法継続率、PSAの動向(PSA倍加時間等)、全摘施行症例の病理学的検討などを総合的に評価していくことによって、監視療法プログラムにおけるMRIの有用性や位置づけをより明確にしていく。研究は順調に推移しているが、急務でやむを得ず予定していた学会に出席出来なかったり、実験室で既に整備されている機材を用いて遂行しているため、実際の実験経費は予定していた経費よりものよりも少なかった。
旧琉球王国首里王城祭祀・久高島祭祀の祭場についての空間論的研究

「平成6年度交付申請書」に記した「研究実施計画」の項目順に報告する。1)首里城祭祀資料の研究:琉球王国首里王城祭祀史料の解読・分析、既往研究の検討作業は現在進行中であるが、本年度中には完了できない。写真・図像資料の複写については、所蔵機関によっては、原版未整理につき着手できていない。現在準備中の論文に添付の必要のあるものから複写を行なった。2)久高島年中祭祀調査:「申請書」に計画した旧暦6、9月行事調査のうち前者の調査を行なった。後者は、祭祀司祭が不在のため、儀礼の変容が顕著で調査の意義が少ないと判断し、過去の調査記録で代用することとした。また、平成4年度に行なった旧8月行事の未見部分を補足調査した。こうして3箇年で農漁事暦祭祀の概略についての参与観察を終了した。3)戦前の久高島年中祭祀祭場の写真を各方面に照会し、収集した。また、戦前に島を訪れた調査者に面談し、戦前の祭場の様子を復元する参考とした。4)収集済みの図絵・写真資料の電算機入力は、記憶装置(MOデイスク)の世界規格変更の予定(1995年度中)があるため、装置購入(科研費外予算)を中止し従来通りの保存に変更した。5)研究論文執筆:別記(研究発表)2編の論文を執筆。さらに1編を執筆中。久高島の年中行事の祭場についての論文執筆が、未だ完了していない(執筆中の1編を加え、合計2編の予定)ため、首里城の祭場についての論文執筆に取り掛かっていない。平成7年度中に、後者の論文を学会誌もしくは機関誌に投稿予定である。そのため、久高島と首里城の両者の祭場研究として申請した本研究の報告書の提出は、1年延期する。「平成4年度交付申請書」に記したように、久高島年中行事調査と首里王城祭祀の文献、図絵調査とを同時並行して進めるよう、当初研究計画を変更した。1久高島年中祭祀については、「交付申請書」の計画通り3回の調査(旧暦8、11、1月行事)を行った。また、島の祭祀についての広範な既往研究を調査した。それにより、従来の論者が触れることの少なかった祭場鋪設について、国家祭祀との関わりの点で重要な知見を得たが、さらに他の大きな年中祭祀である旧暦3、4、6、7月行事について、祭場の様態を参与観察する必要が生じた。これらの調査を平成5年度と6年度に行う予定である。本研究計画全体の序論として、琉球王国国家祭祀において久高島が果たした聖なる島としての空間的な意味について考察する論文をまとめた。申請者所属機関の研究紀要『人間・環境学』第2号(1993.3.)に発表の予定。また、祭場についての中間報告を1993年4月の民族芸術学会で行う予定。2首里城年中祭祀関係の史料・文献・図絵の調査は、上記久高島調査時に、主に那覇で行った。所蔵場所が広範なため、なお調査・閲覧の段階にある。1)首里城正殿復元考証グループの方々のご好意により、関係資料の所在について貴重な情報を得た。そのうち、沖縄県立芸術大学所蔵の「鎌倉芳太郎資料」の閲覧を始めているが、さらに平成5年度と6年度に続行する予定。2)沖縄県立博物館、県立図書館、琉球大学附属図書館などの所蔵の王城祭祀史料・文献調査にも着手しており、平成5年度と6年度に続行の予定。3)平成5年度後半より、収集した史料・絵図などの分析に取り掛かり、平成6年度に補足調査を行う予定。全般的に言って、王城の祭場の研究のために久高島の年中祭祀を媒介にすることの妥当なことが確認されたのは、大きな成果である。「平成5年度交付申請書」に記した「本年度の研究実施計画」の項目順に報告する。1)沖縄県立芸術大学所蔵の「鎌倉芳太郎資料」の調査は、ほぼ完了した。現在、当該資料の分析研究に取り掛かっている。しかし、本研究にとって重要な写真資料の閲覧については、原版未整理につき着手できていない。平成6年度に芸術大学関係者と閲覧交渉を行う予定である。また、他機関所蔵の絵図類のうち、研究報告書・論文等に添付の必要のあるものについて、その複写を6年度に行う予定。2)久高島年中祭祀調査:「交付申請書」に計画した3回の調査(旧暦4、9、10月行事)の内、4、10月分は、本務と重なり中止した。代わりに旧正月と2月行事の調査を行った。平成6年度に、4、6、10月行事について参与観察する予定。3)祭祀の簡略化が進む久高島の年中祭祀の現状に鑑み、過去に撮影された祭祀の映像記録を調査の対象に加えた。東京出張を2回行い、国学院大学折口記念古代研究所とヴィジュアル・フォークロア社で、写真資料(前者)、16ミリ及びヴィデオ資料(後者)の閲覧を始めた。4)収集済みの図絵・写真資料の電算機入力を行うため、フィルム・スキャナーを導入した。5)研究成果:発表:1)「沖縄久高島の年中祭祀の祭場」(民族芸術学会大会、1993.4.、福岡)、2)「琉球王国祭祀儀礼の空間:聞得大君御新下り儀礼と地方年中祭祀儀礼に見る儀礼原則」(国際日本文化研究センター「日本文化の深層と沖縄」研究班、1994.1.)

論文:「聖なる島への国家的視覚の生成-琉球王国御新下り儀礼に見る久高島の意味」京都大学人間・環境学研究科紀要『人間・環境学』巻2、1993.11.、.23-55.「平成6年度交付申請書」に記した「研究実施計画」の項目順に報告する。1)首里城祭祀資料の研究:琉球王国首里王城祭祀史料の解読・分析、既往研究の検討作業は現在進行中であるが、本年度中には完了できない。写真・図像資料の複写については、所蔵機関によっては、原版未整理につき着手できていない。現在準備中の論文に添付の必要のあるものから複写を行なった。2)久高島年中祭祀調査:「申請書」に計画した旧暦6、9月行事調査のうち前者の調査を行なった。後者は、祭祀司祭が不在のため、儀礼の変容が顕著で調査の意義が少ないと判断し、過去の調査記録で代用することとした。また、平成4年度に行なった旧8月行事の未見部分を補足調査した。こうして3箇年で農漁事暦祭祀の概略についての参与観察を終了した。3)戦前の久高島年中祭祀祭場の写真を各方面に照会し、収集した。また、戦前に島を訪れた調査者に面談し、戦前の祭場の様子を復元する参考とした。4)収集済みの図絵・写真資料の電算機入力は、記憶装置(MOデイスク)の世界規格変更の予定(1995年度中)があるため、装置購入(科研費外予算)を中止し従来通りの保存に変更した。5)研究論文執筆:別記(研究発表)2編の論文を執筆。さらに1編を執筆中。久高島の年中行事の祭場についての論文執筆が、未だ完了していない(執筆中の1編を加え、合計2編の予定)ため、首里城の祭場についての論文執筆に取り掛かっていない。平成7年度中に、後者の論文を学会誌もしくは機関誌に投稿予定である。そのため、久高島と首里城の両者の祭場研究として申請した本研究の報告書の提出は、1年延期する。
次世代アト秒・フェムト秒パルスラジオリシスに関する研究

アト秒・フェムト秒時間分解能を有する次世代パルスラジオリシス過渡吸収分光法を開発して、量子ビーム誘起超高速現象を解明することで、半導体微細加工や原子炉健全性、がん治療に役立てるために、以下の研究を行った。(a)高品質電子ビーム発生と高精度パルス圧縮により世界最短の9フェムト秒の電子ビームを発生し、THz干渉計を開発して計測に成功した。(b)電子ビームと分析光が同期したダブルデッカーパルスラジオリシスに成功した。(c)電子ビームの三次元形状制御により、物質中で分析光との重なりを最適化する等価速度分光法を高度化した。(d)フェムト秒パルスラジオリシスにより種々の量子ビーム誘起超高速現象を解明した。(1)電子ビームの低エミッタンス化とRF電子銃の高度化大阪大学産業科学研究所に設置されたSバンドフォトカソードRF電子銃加速器を用いて、フォトカソードにフェムト秒レーザー光パルスを励起し、RF電場やソレノイド磁場強度を最適化するにより、0.8mm-mrad以下の極低エミッタンス・フェムト秒電子ビームの発生に成功した。ライナック位相スキャンによるフェムト秒電子線パルスの測定方法を確立した。(2)サブフェムト秒・アト秒ビームラインの製作パルス圧縮における磁場高次効果によるパルス幅の増大を補正するために、四極電磁石4台と六極電磁石2台から構成されたサブフェムト秒・アト秒ビームラインを製作した。磁気パルス圧縮のシミュレーションにより750アト秒電子線パルスの生成方法を確立した。(3)世界最高240フェムト秒時間分解能を有するパルスラジオリシスの開発フォトカソードRF電子銃加速器を高度化し、フェムト秒短パルス電子ビームと分析用フェムト秒レーザーを安定化して、初めて0.1mmという薄いサンプルセルのパルスラジオリシスの測定に成功した。200フェムト秒短パルス電子ビームと100フェムト秒レーザー分析光パルスを用いて、世界最高240フェムト秒時間分解能を有するパルスラジオリシスの開発に成功し、初めてフェムト秒時間領域での量子ビーム誘起高速反応の測定が可能となった。また、フェムト秒パルスラジオリシスを利用して水和電子の生成過程とジェミネート再結合過程の観測と、ドデカン中カチオンラジカルの高励起状態の観測に成功した。等価速度分光法は、電子線パルス波面を回転し、物質中の電子線と分析光の速度差による時間分解能劣化の問題を解決して、パルスラジオリシスの時間分解能を向上させるものである。今年度は、電子線パルスの波而制御方法の確立と等価速度分光法パルスラジオリシスの構築の共に、パルスラジオリシスの測定波長拡張を行った。1.電子線パルスの波面制御電子線が発生するチェレンコフ光をイメージ転送しストリークカメラで測定することにより、フェムト秒電子線パルスの回転角度の測定方法を確立した。当初Deflecting空洞により電子線パルスを回転する計画であったが、電子ビームサイズを30μm以下にする必要があり、空間電荷効果により電子線パルスが広がることが判明した。そこで、加速管中の加速位相制御により、電子線パルス回転角を060°の範囲で制御することに成功した。しかし、従来の四極電磁石からなる磁気パルス圧縮器では波面回転時にパルス圧縮が困難であることも判明した。これらの問題を解決するために、マルチ遅延レーザーパルスにより角度付き電子線パルスを生成し、ビームラインに設置した高精度磁気パルス圧縮器を用いた電子線パルス波面制御技術を新たに考案し、その準備が整った。2.等価速度分光法パルスラジオリシスの構築と評価加速位相制御法により回転した電子線パルスと分析光パルスを、サンプルに入射した時、電子線パルス波面を回転した場合に時間分解能が1cmセルを使用した場合に4psの向上に成功した。等価速度分光法パルスラジオリシスによる、時間分解能向上の有効性を実証した。3.フェムト秒パルスラジオリシスの測定波長拡張パルスラジオリシスは物質中での活性種挙動の測定装置であり、多様な物質、様々な活性種を測定するために、測定波長領域を広く拡張した。波長可変レーザーの安定化、測定システムの多波長化により、415-1380nmまで測定可能とした。H23年度は、電子ビームのパルス圧縮と回転を両立したことによる等価速度分光法の原理実証と、ダブルデッカーフェムト秒電子ビーム発生によるパルスラジオリシス、およびフェムト秒パルスラジオリシスシステムの波長拡張と安定化等の高度化による放射線化学初期過程の研究を推進した。1.電子ビーム縦・横方向分布変調法を用いた等価速度分光法

パルスラジオリシス等価速度分光法は、試料への斜入射と電子線パルスの回転により物質中の電子線と分析光の速度差による時間分解能劣化の問題を解決する手法であり、前年度まで電子線パルスの圧縮と回転の同時実現が非常に大きな困難であった。H23年度は、電子銃励起用レーザーの制御と収束電磁石および高精度パルス圧縮器による「電子ビームの縦・横方向分布変調法」を確立することにより、600fsへのパルス圧縮と1845°でのパルス回転の同時実現に成功した。これにより等価速度分光法が可能となり、前年度4.3psに留まっていた時間分解能は1.2psまで大幅な向上を達成した。2.ダブルデッカー電子ビーム発生とダプルデッカーパルスラジオリシスフォトカソード入射光学系のレーザー光を分岐し、時間遅延路により入射タイミングを調整することにより、空間的に4.7mm時間的に4.2ns離れたダブルデッカーフェムト秒電子ビームの発生と観測を達成した。さらに先行する電子線をチェレンコフ放射により分析光に変換することにより、電子線と分析光の同期時間ジッターがほぼゼロとなるダブルデッカーフェムト秒パルスラジオリシスシステムを構築し、水和電子の光吸収測定まで成功した。3.フェムト秒パルスラジオリシスの測定波長拡張による放射線化学初期過程研究の高度化パルスラジオリシスにより、多様な物質中の様々な活性種の時間挙動を測定するために、測定波長領域を紫外から赤外域まで広く拡張した。190nm-20μmで波長可変なコンピュータ制御のフェムト秒レーザー光源を導入し測定システムの多波長化を図ったことにより、生体中の放射線効果で特に重要なOHラジカル等を測定する準備が整った。平成25年度は、パルス電子ビームの発生・計測手法の最適化により、アト秒に迫る最短で約1 fsパルス幅の超短パルス電子ビーム発生に成功した。また、パルスラジオリシスシステムの安定化により、従来の1/10以下の強度(1 mO.D.以下)の過渡吸収が観測可能となった。さらに、紫外-赤外フェムト秒パルスラジオリシスにより、量子ビーム初期過程を明らかにした。以下に詳細を示す。1. 1フェムト秒電子ビーム発生:フェムト秒レーザーにより電子銃でフェムト秒電子パルスを発生し、加速位相と磁気パルス圧縮器の最適化を行った。同時に、従来よりも短パルス電子ビームが計測できるように、テラヘルツ自己相関法の改造を行った。その結果、最短1 fsの超短パルス電子ビームの発生・計測に成功した。2.パルスラジオリシスシステムの安定化と測定手法の高度化:これまでに導入したレーザー安定化装置、分析光輸送・光検出器配置、測定における統計処理等の最適化により、従来よりも10倍のS/N比の改善に成功した。また、この安定化により、今後のアト秒パルスラジオリシス実現のための重要な技術を確立した。3.フェムト秒パルスラジオリシスによる量子ビーム初期過程の研究:昨年度までの紫外-赤外分析光の拡張(波長:240-1600 nm)および本年度のシステムの安定化により、フェムト秒時間領域の凝縮相における量子ビーム初期過程を明らかにすることが可能となった。
抗生物質生産菌における新規二次代謝調節因子の分布と機能

1.青色色素生産誘導因子IMー2が、生産菌であるStreptomyces sp.FRIー5株にどのような影響を与えるかを知るるため、培養5時間目にIMー2を添加し、菌体生育、青色色素生産、抗生物質生産について経時的に検討した。IMー2添加時には、青色色素の生産は、添加後1時間で誘導され、3時間でピ-クに達した後、除々に減少するが、IMー2未添加の場合には、培養31時間まで全く青色色素の生産は見られず、この培養条件下では、内生のIMー2は生産されていないと結論される。菌体量は、IMー2未添加時には、12時間まで徐々に増加するが、IMー2添加により菌体増殖は即座に停止した。生産される抗生物質は、Bacillus subtilisを被検菌とするカップ法で測定したが、IMー2添加、未添加により、生じるクリア-ゾ-ンの形状に違いが見られ、異なった抗生物質が生産されている事が示唆された。2.IMー2未添加時に生産される抗生物質を同定するため、培養液5Lより4段階の精製操作を経て、13.5mgの抗生物質を単離した。NMR,IR,質量分析などの機器分析を行い、物性を決定した結果、Dーcycloserineであることが判明した。従って、本菌は、IMー2不在下では、Dーcycloserineを生産すると結論される。3.次に、IMー2添加時に生産される抗生物質を同定するために、培養液25Lより6段階の精製操作を経て2種類の抗生物質(2.7mgと30.mg)及び3種類の類縁体(1.3mg,1.4mg及び2.4mg)を単離した。NMR,IR,質量分析などの機器分析を行い、物生を決定した結果、いずれもヌクレオシド系抗生物質及びその類縁体と推定された。既知ヌクレオシド系抗生物質と比較したところ、抗菌活性をもつ化合物は各々showdomycin及びminimycinと一致した。3種類の類縁体は、同様にαーshowdomycin、αーminimycin及び5ーαーarabinofuranosylー1、3ーoxazinー2,4ーdioneと同定した。従って、本菌は、IMー2存在下では、ヌクレオシド系抗生物質を生産すると結論される。4.IMー2添加、未添加時に生産される抗生物質を経時的にHPLCを用いて定量したところ、IMー2添加によりDーcycloserineの生産は完全に抑制され、showdomycinやminimycinなどのヌクレオシド系抗生物質の生産が誘導される事が判明した。

2.C18逆相カラムを用い、CH_3CN20%→80%のグラディエント溶出条件下、各菌株の活性成分を分離した結果、S.canusとS.sclerogranulatusは1成分、S.lividus,S.tubercidicus,S.celluloflavus,S.sioyaensisは3成分、S.narbonensisは4成分の活性成分を持つことが判明した。このように、生産菌が一種類の活性物質ではなく、多種の活性成分を同時に生産する傾向が明らかとなったわけであり、これは、別の二次代謝調節因子virginiae butanolide(VB)の生産菌S.virginiaeがVBーAE5種類の因子を同時に生産するという現象ともよく符合する。従って、ホルモン様二次代謝調節因子を生産する放線菌は、一般に多種の成分よりなる一群の活性物質を生産すると結論される。3.2位鎖長の異なる各種IMー2誘導体を同一の逆相HPLCにかけ、その溶出時間と比較した結果、上記7菌株の生産する活性成分は鎖長C5、C6及びC7であるものが多数を占めることが明らかとなった。1.青色色素生産誘導因子IMー2が、生産菌であるStreptomyces sp.FRIー5株にどのような影響を与えるかを知るるため、培養5時間目にIMー2を添加し、菌体生育、青色色素生産、抗生物質生産について経時的に検討した。IMー2添加時には、青色色素の生産は、添加後1時間で誘導され、3時間でピ-クに達した後、徐〃に減少するが、IMー2未添加の場合には、培養31時間まで全く青色色素の生産は見られず、この培養条件下では、内生のIMー2は生産されていないと結論される。菌体量は、IMー2未添加時には、12時間まで徐〃に増加するが、IMー2添加により菌体増殖は即座に停止した。生産される抗生物質は、Bacillus subtilisを被検菌とするカップ法で測定したが、IMー2添加、未添加により、生じるクリア-ゾ-ンの形状に違いが見られ、異なった抗生物質が生産されている事が示唆された。2.IMー2未添加時に生産される抗生物質を同定するため、培養液5Lより4段階の精製操作を経て、13.5mgの抗生物質を単離した。NMR,IR,質量分析などの機器分析を行い、物性を決定した結果、Dーcycloserineであることが判明した。従って、本菌は、IMー2不在下では、Dーcycloserineを生産すると結論される。3.次に、IMー2添加時に生産される抗生物質を同定するために、培養液25Lより6段階の精製操作を経て2種類の抗生物質(2.7mgと3.0mg)及び3種類の類縁体(1.3mg,1.4mg及び2.4mg)を単離した。NMR,IR,質量分析などの機器分析を行い、物性を決定した結果、いずれもヌクレオシド系抗生物質及びその類縁体と推定された。既知ヌクレオシド系抗生物質と比較したところ、抗菌活性をもつ化合物は各々showdomycin及びminimycinと一致した。3種類の類縁体は、同様にαーshowdomycin、αーminimycin及び5ーαーarabinofuranosylー1,3ーoxazinー2,4ーdioneと同定した。従って、本菌は、IMー2存在下では、ヌクレオシド系抗生物質を生産すると結論される。4.IMー2添加、未添加時に生産される抗生物質を経時的にHPLCを用いて定量したところ、IMー2添加によりDーcycloserineの生産は完全に抑制され、showdomycinやminimycinなどのヌクレオシド系抗生物質の生産が誘導される事が判明した。
日本人若年発症2型糖尿病患者の臨床および遺伝的背景の歴史的変遷と将来

日本人2型糖尿病は欧米人にくらべ肥満歴も少なくやせ型のため、インスリン作用不全よりインスリン分泌不全のほうが発症機序に大きく関わっているといわれる。しかし、発症年齢や時代の変化による日本人2型糖尿病の臨床的特徴に変化があったのかどうかは明らかにされていない。1960年から2003年までに東京女子医科大学糖尿病センターを初診した30歳未満発見2型糖尿病患者における臨床的特徴の経年的変化を30歳未満発症1型糖尿病患者のそれと比較し、過去40年間の若年発見2型糖尿病の臨床的特徴の時代的変遷を明らかにする。【対象と方法】対象は1960年から2003年に東京女子医科大学糖尿病センターを初診した30歳未満発症1型糖尿病患者1675名および2型糖尿病患者2259名である。【結果】1.過去最大BMI20以下の2型糖尿病患者は、発見年齢が高齢になるほど、また時代が経るほどその比率は減少した。2.過去最大BMI30以上の2型糖尿病患者は、発見年齢が高齢になるほど、また時代を経るほどその比率は増加した。3.過去最大BMI20以下の2型糖尿病患者に限って、家族歴を調査した。時代を経るほど母親が2型糖尿病である率が有意に増加していた。父親にはこの傾向はみられなかった。4.30歳未満発見2型糖尿病患者の2001年1月1日時点の生命予後調査を行なったところ、非糖尿病者と比較してSMRは3.7であった。若年発症1型糖尿病調査ではわずかであった大血管障害による死因が2型糖尿病では約33%存在した。生存率カーブは1型糖尿病より悪かった。【結果】過去最大BMI20以下の2型糖尿病患者は、発見年齢が高齢になるほど、また時代が経るほどその比率は減少した。過去最大BMI30以上の2型糖尿病患者は、発見年齢が高齢になるほど、また時代を経るほどその比率は増加した。過去最大BMI20以下の2型糖尿病患者の家族歴には時代を経るほど母親が2型糖尿病である率が有意に増加していた。【結論と考察】発見年齢が高齢になるほど、また最近になるほど過去に肥満歴をもった患者が増加し、過去に肥満歴をもたない2型糖尿病患者には母系遺伝が強く関連していることが示唆された。本年度は、若年発症2型糖尿病患者の生命予後を調査した。1980年1月1日から1990年12月31日までに当センターを初診し、1年以上通院したことのある30歳未満発見2型糖尿病患者の2001年1月1日時点の生命予後調査を行なった。

対象患者は920名で、この中で糖尿病センターへの受診が1度のみの患者を除き、1年以上通院した642名(男性358名、女性284名)を本研究対象とした。追跡率は84.4%であった。本追跡率は、当センターの若年発症1型糖尿病患者の生命予後調査と比べて低い数字であった。その理由として治療中断患者が1型糖尿病患者より多いこと、大人2型糖尿病患者より転居の機会が多いことが考えられた。生存状況を確認することができた542名のうち、51名(9.4%)が死亡していた。男性35名、女性16名、糖尿病発見年齢は24.4±3.8歳(15.029.8歳)、当センター初診時年齢は37.1±10.5歳(18.363.4歳)、死亡年齢は48.2±1.0歳(29.371.1歳)、推定罹病期間は23.6±8.9年(6.545.0年)、当センター通院期間は8.3±4.4年(1.618.0年)であった。対象患者のSMRは3.7であった。年齢別でみると40歳代から50歳代前半でSMRは高かったが、年齢とともにSMRが高くなることはなかった。このSMRは当センターの若年発症1型糖尿病患者のSMR2.8より大きかった。さらに死因として、若年発症1型糖尿病調査ではわずかであった大血管障害による死因が約33%存在した。また、当センター初診後の観察期間から算出した累積生存率は10年で95.7%、20年で79.5%であった。これらはいずれも対象患者の発症年齢および観察期間の平均年齢が当センターの若年発症1型糖尿病患者のそれより高いことによると考えられた。本年度は、糖尿病合併症について、1型糖尿病と2型糖尿病を比較した。糖尿病合併症には大きく分類して、細小血管障害による合併症(主に、神経障害、網膜症、腎障害)と、大血管障害による合併症(脳梗塞、心筋梗塞、閉塞性動脈硬化症、足病変など)がある。細小血管障害による合併症のひとつである糖尿病性腎症にっいては、1型糖尿病患者より2型糖尿病患者のほうが、罹病期間が長くなるとともに、有意に腎症を発症しやすいことがわかった(YokoyamaH, et al.KidneyInternationa1,2000)。本年は、大血管障害のひとつである足病変を取り上げる。1998年から2005年に東京女子医科大学糖尿病センターに入院した8310名のうち、足病変合併の30歳未満発症および発見(ないし診断)糖尿病患者40名が対象である。対象40名のうち、18歳未満発症群は8名(1型5名、2型3名)、19-30歳未満群は32名(1型6名、2型26名)であった。足病変発症までに両群とも糖尿病発症から約20年を要したが、後者群の24%は10年以内に発症していた。糖尿病神経障害、網膜症、腎症は全例にあった。2型糖尿病患者に治療中断(医療機関未診が1年以上)例が目立ち、後者群2型の60%に治療中断があった。高血圧はどの群も60%以上が合併していた。高脂血症は前者群の12.5%、後者群の50%に認めた。幼少年齢で発症した患者が足病変まで合併する場合は、他のメジャーな糖尿病合併症がすでに合併していることが多い。しかし、20歳代で足病変を発症するのは、2型糖尿病に多く、罹病期間がより短く、高血圧、高脂血症の合併率が高く、治療中断率も高い。つまり、糖尿病以外の危険因子が足病変発症に大きく関与していることがわかった。
半乾燥地における水環境変動を克服しうる混作農法の創出

本研究は、申請代表らが提案した接触混植と亀裂施肥を基礎概念として、半乾燥地における洪水と干ばつの連続発生を克服しうる新規な農法を創出することを目指す。接触混植は、洪水環境では畑作物の耐湿性を、干ばつ環境では水田作物の耐乾性を強化する。また、亀裂施肥により、湿害ストレスが緩和されるという現象を利用し、マメ科作物を導入した接触混植に亀裂施肥を行えば、肥沃度を維持しつつ、極端な水環境の連続発生に対応できよう。そこで、ナミビアに造成した水環境制御圃場や農家圃場でイネとカウピー等を供試し、新規な農法を提案する。本研究実施により、気候変動に対応しうる穀物生産の国際協同研究拠点の形成にも貢献する。
総合診療専門医養成プログラムにおけるビデオレビューを用いた教育システムの構築

文献検索を行った結果、ある程度信頼性と妥当性が担保されている評価票を14ピックアップし、翻訳した。14の評価票の項目を分類し、カテゴリーごとに名前を付けた。平成30年12月2日、日本プライマリ・ケア連合学会の近畿支部会の会場である京都の歴彩館・稲森記念会館(京都府立大学)で、第1回のノミナルグループテクニックを用いて、上記の評価票の分類に基づき、データ収集した。医療面接のエキスパート3名の参加者があった。23タイトル80の評価項目が採取できた。平成31年2月2日、日本プライマリ・ケア連合学会冬季セミナー学会会場である東京大学医学図書館会議室で、第2回のノミナルグループテクニックを用いた情報収集を行った。8名の参加者があった。第1回の結果に、7タイトル66項目が加わった。結果として、30タイトル、146の評価項目が採取できた。データの収集と同時に、評価票の対象、目的、使用方法についても議論が深まり、今後の方向性について深い議論ができたことは大変有意義であった。平成30年4月7日、東京大学医学図書館会議室で、研究者の情報・意見交換と今後のスケジュールの確認のための会議を開催した。ビデオレビューという手法の歴史やその効果を改めて見直し、開発の意義を再確認した。会議の結果として、今回挙がった項目に関して、webアンケートを実施すること、アクショリサーチの手法を取り入れ、暫定評価票を使って実際に専攻医の医療面接で使用しながら、ブラッシュアップするという方向性が決定した。平成30年11月:項目の洗い出し→項目プールの作成平成30年12月:メンバーリクルート→ノミナルグループテクニックの実施平成31年3月:暫定版評価票の完成平成31年10月:webアンケートの実施→分析平成32年3月:評価票の完成当初の実施時期は上記のとおりであり、平成31年4月現在ノミナルグループテクニックを終え(暫定)評価項目が挙がっており、webアンケートの準備に入ることができているから。ノミナルグループディスカッションの際に、エキスパートからの指摘を受けて、対象、目的、使い方、の3点について一層の明確化が課題であることが分かった。以下に、それぞれに今後議論が必要と思われる内容について記載する。1.対象(専攻医もレベルがある。11年目からなのか3年目以降なのか2階層別の評価票にしてはどうか)2.目的(1総括評価として使うのか、形成評価として使うのか2身体診察は評価するのか3目的別-患者教育版・診断治療版-に作成してはどうか)3.使い方(1自己評価ができるようにするのか2ビデオは最後まで見るのか、一部を使用するのか)文献検索を行った結果、ある程度信頼性と妥当性が担保されている評価票を14ピックアップし、翻訳した。11年目からなのか3年目以降なのか2階層別の評価票にしてはどうか)2.目的(1総括評価として使うのか、形成評価として使うのか2身体診察は評価するのか3目的別-患者教育版・診断治療版-に作成してはどうか)3.使い方(1自己評価ができるようにするのか2ビデオは最後まで見るのか、一部を使用するのか)昨年度は、予定の海外での発表が行えなかったことと、ノミナルグループディスカッションへの参加者が予想より少なかったことで、予定の金額を消化しきれなかった。

次年度は、海外での学会発表を積極的に行う予定をしている。また、研究者間の情報収集のための会議、成果の発表などを今年度にもまして行う予定にしており、その日当や交通費等に充てるつもりである。
内部アンテナ型大容積RFプラズマ源を用いた高性能プラズマイオン注入プロセスの開発

内部アンテナ方式による独自の誘導結合型放電技術を利用して、プラズマイオン注入プロセスによる機能性表面改質プロセスに適した高密度で大容積/大面積のプラズマ源に関する研究を行った。その際、プロセスの高品質化を目指して、ナノ構造化による超硬質機能発現を念頭においた超硬質表面改質法についても検討を行った。本研究により得られた知見を以下にまとめる。1)メートル級の大容積プラズマ容器を用いてマルチアンテナ型プラズマ源を構築し、アルゴン中で5x10^<11>cm^<-3>に達する高密度プラズマが得られ、プラズマイオン注入系としても十分なイオン電流を基材に照射可能であることが明らかとなった。2)アンテナ系の低インダクタンス化によりプラズマ電位を効果的に抑制可能であることが明らかとなった。3)プラズマイオンプロセスの表面改質への応用を検討するため、イオン化スパッタプロセスによる窒化物系ナノコンポジット薄膜形成における微細構造と超硬質性の発現性について調べ、膜中の組成とイオン衝撃効果がナノ構造形成に大いに影響を及ぼすことを明らかにすると共に、良好なナノ構造形成により超硬質性が発現することを明らかにした。4)個々のアンテナを独立に駆動するためのモジュールについて調べ、従来の受動素子を用いた制御の場合には定在波形成による不均一性が避けられなかったのに対し、予備実験ながら能動的な制御により電力値の設定精度を一桁以上も改善できることが明らかとなった。5)メートルサイズ以上の大面積/大容積プラズマの設計・構築を念頭に、電磁界コード、粒子コードに加えて、流体コードから構成される統合的なシミュレーションコード郡を開発し、3m級の超大型プラズマ源では、2.1mx2.6mの広い領域にわたって±10%以下の均一性を有する良好なプラズマ生成が可能であること示した。本年度は、低インダクタンスアンテナを用いた大容積高周波プラズマ源の構築に主眼を置いて、プラズマの特性に及ぼすアンテナ系の低インダクタンス化の効果を明らかにすると共に、表面改質プロセスならびに機能性薄膜の成膜プロセスヘの応用に向けた予備実験を中心に研究を行った。まず、直線状の低インダクタンスアンテナを内部アンテナとして備えたユニットを用いて、直径400mmの放電容器におけるマルチアンテナ型プラズマ源を構築し、アルゴン、窒素、水素ならびに酸素中でのプラズマ生成実験を行った。アルゴンでは10^<12>cm^<-3>に達する高密度プラズマが得られ、窒素、酸素ならびに水素中においても、10^<11>cm^<-3>程度の高密度プラズマを生成可能であることが明らかとなった。さらに、アンテナ系の低インダクタンス化により、アンテナに発生する高周波電圧を効果的に抑制することが可能であることと共に、プラズマ電位を効果的に抑制可能であることが明らかとなった。また、RF増幅器とアンテナとの結合について高周波回路特性を調べた結果、特に整合条件をさらに検討する必要があることが分かった。さらに、本年度に購入した内径750mm長さ948mmの大容積を有するプラズマ容器において、上記で検討を行った低インダクタンスICPモジュールを複数個装着したプラズマ源を構築し、アルゴンを放電ガスに用いた大容積プラズマの生成に成功した。また、低インダクタンスICPモジュールを用いて生成したプラズマ源を用いて、IV族元素薄膜の成膜プロセスと表面改質に関する予備実験を行い、高密度プラズマの生成と共に特にプラズマ電位の抑制効果により、良好な微細構造と特性を有する薄膜を合成可能であることが明らかになった。また、ナノコンポジット薄膜合成による表面改質プロセスヘの応用を検討するため、プラズマからのイオン衝撃を模擬した成膜予備実験を行い、薄膜の構造と特性に及ぼす成膜条件の影響について調べ、組成が薄膜の微結晶化に大いに影響を及ぼしていることが明らかとなった。

本年度は、低インダクタンス内部アンテナを用いて生成した大容積高周波プラズマ源の特性解明とナノ微結晶複合構造(ナノコンポジット)薄膜の形成プロセスに主眼を置いて、メートル級の大容積プラズマの特性と低インダクタンスアンテナ周辺での電子加速特性を明らかにすると共に、イオン化スパッタによるナノコンポジット薄膜形成におけるナノ構造に及ぼす効果の解明を中心に研究を行った。まず、メートル級の真空容器に直線状の低インダクタンスアンテナを内部アンテナとして備えたマルチアンテナ型プラズマ源を構築しプラズマ生成実験を行った。アルゴンでは5x10^<11>cm^<-3>に達する高密度プラズマが得られ、プラズマ電位も効果的に抑制された良好な高密度プラズマ源であると共に、プラズマイオン注入系としても十分なイオン電流を基材に照射可能であることが明らかとなった。さらに、最適なアンテナ配置ならびにアンテナ設計において重要となるアンテナ周辺での電子加速特性を解明するため、粒子シミュレーション(PIC ; Particle in Cell)を実施して近接場である誘導電場による電子加速特性を調べ、放電ガス圧、高周波電流位相、アンテナ配置に対する影響を明らかにした。また、イオン化スパッタプロセスによるZrN/Cu系ナノコンポジット薄膜における、ナノ構造に及ぼす成膜条件の影響と超硬質性の発現性について調べ、膜中に混入させる微量のCu組成とイオン衝撃効果がナノ構造に大いに影響を及ぼすことを明らかにすると共に、良好なナノ構造を有する薄膜では超硬質性を発現することを明らかにした。最終年度にあたる本年度は、大容積プラズマ源でのプロセスと大型基板プロセスへの展開を図るため、特に大容積プラズマ源構造ならびにアンテナ構造の設計に欠かせないシミュレーションコードの開発に重点を置いて、メートル級の大容積プラズマ源の設計指針の確立と最適プロセスを目指した研究を中心に行った。まず、大容積高密度プラズマ源の均一性を制御するため、高周波増幅基板を個々のアンテナに設置したモジュールを試作し、制御特性を明らかにした。その結果、従来の受動素子(キャパシタ、リアクトル)を用いた制御の場合には、定在波の影響のため、電力分布に20%以上の不均一性を生じていたのに対し、予備実験ながら能動的な制御により電力値の設定精度を一桁以上も改善できることを明らかにした。さらに、シミュレーションコード開発では、メートルサイズ以上の大面積/大容積プラズマの設計・構築を念頭に、1)電磁界シミュレーション(FDTDコード)、2)粒子シミュレーション(PIC/MC、Monte Carlo)に加えて、3)流体シミュレーションコードを開発し、アンテナ周辺での電子加速機構に関する研究成果をもとにアンテナの設計指針を確立すると共に、アンテナ配置と電力分布によるプラズマ源の制御性能を明らかにした。特に、3,000mm x 3,000mmの超大型プラズマ源に対する流体シミュレーションから、2,100mm x 2,600mmの広い領域にわったって、均一性が10%以下の良好なプラズマ生成を行うことが可能であること示した。
ニコチアナ属植物をモデルとした異数性植物の育種への応用

はじめに、始原ゲノムを有すると考えられるNicotiana sylvestris(2n=24)の正2倍体および正半数体に同一余剰染色体が付加された場合に起きる遺伝子平衡の乱れを比較検討するため、各種異数性植物の育成を試みた。そこで3倍体と2倍体の交雑F_12倍体を戻交雑し、その後代から61個体のトリゾーミック個体を選抜した。得られたトリゾーミック植物は葉形および花器形態によって12型の完全シリーズに分類することができた。またこのシリーズの葯培養によってダイソーミック・ハプロイドが得られたのは7つのトリゾーミック系統からであった。一般に12染色体(n)を持つ正常半数性花粉起源の植物の出現頻度は13染色体(n+1)を持つ花粉起源のものより明らかに高い傾向を示した。しかし2つの系統、B220とQ480のトリゾーミック個体からは余剰染色体を持つ植物と持たない植物がほぼ同頻度で出現した。またこの2つの系統では花蕾の早い時期のものからはn植物、遅い時期のものからはn+1植物が高頻度で出現し、これはnとn+1の染色体を持つ花粉が葯内で同調的に発育しないためであることを示唆した。得られたダイソーミック・ハプロイドのうち生殖成長期に達したのは5系統のみであり、その中でB220トリゾーミック系統は正常2倍体より葉や花器が増大するのに対し、これから由来するダイソーミック・ハプロイドは著しい奇形でごく小さく、このことは同一余剰染色体が2倍体および半数体レベルで遺伝子平衡に関し大きく異なることを意味した。育種的に有用形質を持つB220の系統トリゾーミック種子生産を目的として25μmのナイロンメッシュで小粒花粉をふるい分けて受粉することによっ70.4%とトリゾーミックスの満足すべき種子生産を示した。なおX線によるB220系統の草勢や花器の増大を示す多面発現的余剰染色体断片の他染色体への転座固定に関する実験は断片染色体の作出にとどまって最終的成功を見ていない。Nicotiana sylvestrisの一次トリゾーミックの系統であるB220は一本の付隨染色体を余分に持つことによって花器や葉の著しい増大が見られ,他のトリゾーミック系統と異なり染色体レベルのバランスの良い系統であることが明らかとなった.しかしこの一本の過剰染色体の次世代への伝達率は非常に低く観賞用植物などとしての農業的有用性は低い.このB220系統を葯培養して得られた個体群を分析するとnとn+1花粉起源の個体が約1対1で生ずることから過剰染色体の減数分裂中における消失は無いものと考えられるが, 2n×2n+1における過剰染色体の伝達率は13.5%であった.これはn+1花粉が開葯時に未熟なため,完熟のn花粉より受精能力が低いためと推定された.この推定は開葯後2日目の花粉を遅延受粉することによって過剰染色体の伝達率を22.5%に増大させることが出来たことで証拠づけられた.また開葯時の花粉を水または520%の砂糖水に浮遊さた80×9で遠心したところ,沈澱花粉と上清中の花粉の平均直径はそれぞれ32.1μmと29.5μmであった.

そこでn+1花粉は未熟なため軽くさらに小さいものと考え, 30および25μmのナイロンメッシュで開葯時の小花粉を選抜し, 2n個体に受精したところ余剰染色体の伝達率は51.9および70.4%と増加した.すなわちB220トリゾーミック個体の出現率を小花粉を選抜し受粉することによって最高70.4%まで高めることが可能であることが実証された.これは農業的に有用なトリゾーミック植物の実際利用の種子生産にかなり十分な率と云えるであろう.さらに過剰染色体中の花器および葉を増大させる遺伝子あるいは染色体部位をX線照射によって他染色体へ転座させ固定させる試みにおいて,線量は6kR以下が望ましいことが判明したが,目的の転座系統を得るためには当初の考えよりかなり大規模な実験が必要であることが本年度の実験で予想された.Nicotiana sylvestrisのトリゾーミックB220系統は花器の各部は全て正常2倍体より大きく、また葉長が有意に長かった。これはいうまでもなく余剰染色体の影響によるものである。草丈と葉数は2倍体とほぼ同じであった。またこのB220系統の余剰染色体は顕微鏡観察の結果、付随染色体であることが確認された。またこの余剰染色体は葯培養による花粉起源植物へ約50%の頻度で伝達し、減数分裂過程で消去さることなく、しかも半数性花粉と同等の分化全能性を示した。B220系統の発育の時期および開葯後、0、1、2、3日後の花粉を2倍体に人工受粉すると、花蕾長40-70mmの葯内に含まれる2核期初期の未熟花粉ても稔性ある種子が得られた。この未熟花粉10%の蔗糖を含む寒天培地で25°Cの条件で発芽することから受精能力を持つことが明らかであった。しかし余剰染色体を持つ花粉の受精能力は極めて低かった。トリゾーミック個体の出現は花蕾長の増加と共に増加し、開葯1日後22.5%に達し、余剰染色体を持つ花粉は正常花粉に比較して発育が遅れ、開葯1日後に完熟するものと推定された。また30及び25μmのナイロンメッシュで花粉をふるい分けて小粒花粉を2倍体に受粉したところ51.9%および70.4%のトリゾーミック個体を得ることができ、トリゾーミック系統の種子生産にほぼ満足すべき結果を得ることができた。さらにB220トリゾーミック系統の葯に農業的有用な多面発現的遺伝子を含む染色体断片を転座固定する試みで0、1、3、6、kRのX線照射した。明らかに線量が増すほどに花粉起源の植物は減少し、6kRでは全く分化しなかった。また花粉の発育が進んでいるほどX線の花粉起源植物の分化への影響は小さかった。しかし、分化能力とX線による染色体異常との関係がパラレルであるとは認め難かった。顕微鏡観察の結果、X線照射により得られた染色体異常は染色体断片の出現のみで転座固定までは至らなかった。
ガムラン・ゴング・クビャールの伝統的学習法に基づく諸民族の音楽の指導法開発

1研究目的本研究は小学校音楽科における「諸民族の音楽」の指導について、インドネシア・バリに伝わるガムラン・ゴング・クビャール(以下、ガムラン)の伝統的な学習法を基にした授業開発を試み、実践場面における児童の音楽行為を省察することを通して、この学習法がもたらす学びの特質を明らかにする実践研究である。2研究方法ガムランの伝統的学習法では口頭性が重視され、師の行為を「なぞり」「かたどり」ながら、繰り返し模倣することで技の習得がなされる。この方法論を授業に適用することで、児童の音楽的観察力と、他者と積極的な関わりを繰り広げて演奏する力を育てると同時に、これまで音楽科で顧みられることが少なかった、音楽を学ぶ過程における身体性への視座を回復させることができると考えた。3研究成果(1)模倣による学習が児童自身の観察力を高め、技の理解を助けたこと技を自らの身体に記憶する過程で困難なことは、未経験の旋律を理解する方法である。その理解のために、旋律のまとまりを考え、声に出し、身体の運動として覚える等、児童は独自のアプローチを試みた。この行為を通じて、児童は次第に技に対するメタ的な認識を形成していった。(2)「教え-学ぶ」という同時体験が実現できたことすべての楽器を演奏するために、先にその楽器を演奏した児童が師となり、新たに挑戦する児童が弟子になる。このような一時的な徒弟制を繰り返すことによって、師となった者は、自分が弟子であったときの経験に基づき、わかりやすく教える方法を追求していくことができた。(3)様々な楽器の経験を通じてアンサンブルを鳥瞰的に理解し、フレキシブルな演奏を可能にできたこと楽譜に頼らず自らの身体に技を刻み、それをもとにアンサンブルに加わることで、他の楽器との関係性を経験的に理解でき、状況が変化しても安定したアンサンブルを行うことができた。
心筋細胞間の結合形成にいたる分子機構の発現過程にかんする研究

ギャップ結合の構成分子はコネキシン(Cx)と呼ばれ、一群のCx蛋白ファミリーが存在する。哺乳類心筋ではCx43が主体で、Northern blotではCx40、Cx45なども検出されている。本研究ではこれら異種ギャップ結合蛋白の心筋各種細胞での発現様態を解析するために、特異的な抗体を作成してその分布局在を調べた。◎方法:cDNAより得られたアミノ酸配列から、Cx43、Cx40、Cx45、の各々に特異的なペプチド配列(Cx43:107-119、Cx40:333-345、Cx45:385-396)にたいするウサギ抗血清を作成し、ラットとモルモット成獣の心臓凍結切片の免疫蛍光染色と免疫ブロット・RNAブロットなどによって発現を解析した。◎結果:心筋全体でCx43が免疫染色・免疫ブロットともに強く発現しており、とくに作業心筋の介在板部に特徴的に分布していた。しかしCx40やCx45も弱いながら作業筋でもCx43と重なって発現し、介在板でこれら3種のコネキシンが混在してギャップ結合を構成することが判明した。一方、房室束やブルキンエ線維などの刺激伝導系では、Cx43よりもむしろCx40が強く認められた。またラット・モルモットとも心房の洞房結節領域に、3種抗体のいずれによっても標識されない部分が認められ、その周辺域にはCx45の介在を認めた。◎結語:免疫標識により、作業心筋では3種のコネキシン蛋白が介在板で混在し、また特殊心筋ではギャップ結合の蛋白構成比が異なることが判明した。コンダクタンスはCx43:40-50pS、Cx40:160-195pS、Cx45:20-35pSであり、また電位依存特性も大きく異なっている。今後、これら各種のコネキシン分布の心筋機能に於ける意義、および発生分化過程における発現調節機構を明らかにするとともに、洞房結節に分布するコネキシンの同定をすすめていきたい。
哺乳類頭部神経堤細胞の移動開始から歯・骨・軟骨形成までを解析する長期培養系の開発

A.ラット胚全胚培養法と下顎器官培養法を組み合わせる長期培養系本研究では、確立されている哺乳類全胚培養法と下顎器官培養法を組み合わせた系を開発した。具体的には、神経堤細胞移動前のラット胚を2日間全胚培養後、下顎原基を摘出し器官培養を行った。この系では、全胚培養下では神経堤細胞の移動前の胚あるいは鰓弓形成期の若い胚に人為的操作を加えることが可能であり、さらに、下顎器官培養下では歯牙やメッケル軟骨や舌などの形態形成,組織分化を再現することが可能であった。B.神経堤細胞の歯胚形成への寄与:長期培養系の細胞追跡への応用頭部神経堤細胞は口腔顔面の形成や機能に深く関わっている。神経堤細胞は神経管が形成される時期に神経外胚葉から離れ、胚の中を移動し、移動した先で様々な組織に分化し複雑な形態形成をおこなう。顎顔面領域では、脳神経節の感覚神経とその支持細胞、頭蓋や顎の骨・軟骨・歯牙の象牙芽細胞などが頭部神経堤細胞に由来するとされている。しかし、哺乳類では、頭部神経堤細胞が実際に歯胚間葉に寄与することの直接的な証明はなかった。本研究では、確立した系にDiIによる神経堤細胞の細胞標識法を応用し、中脳後方から3ないし4体節期に移動を開始する神経堤細胞が、歯胚間葉に移動することを直接的に証明した。C.前腸内胚葉の歯胚形成への関与:組織特異的遺伝子導入への応用両生類を用いた移植実験では、歯胚形成の誘導には、口咽頭膜の外胚葉に加え、前腸内胚葉と外胚葉が必要であることが示されている。しかしながら、哺乳類の歯胚形成における前腸内胚葉の関与についてはこれまでのところまったく研究がなされていなかった。そこで、前述の長期培養系を利用して、レポーター遺伝子を組み込んだアデノウイルスによって内胚葉組織特異的に遺伝子導入を行うことによって、哺乳類胚の歯胚上皮に隣接して前腸内胚葉上皮が存在することを明らかにした。顎顔面の形態形成の研究には両生類および鳥類が実験材料として主に用いられている。しかし、鳥類には歯牙は存在せず、また、両生類の歯牙および両生類・鳥類の口腔顔面の形態は哺乳類とは大きく異なっている。したがって、哺乳類の顎顔面の形態形成の解析をする為には、哺乳類を実験材料とする必要性がある。哺乳類を用いた既存の培養系は、神経堤細胞の移動に始まる頭蓋・顎顔面原基形成期とそれら原基の組織分化期のいずれか一方の時期にのみ適応可能であり、これらを統合して検索することができない。そこで、本研究質では、ラット胚全胚培養と下顎器官培養を組み合わせることにより、哺乳類胚を材料として神経堤細胞の移動前から軟骨・歯牙・舌などの組織分化までをin vitroで再現することが可能な長期培養系を開発し、この系を応用して、歯胚、メッケル軟骨などを形成する頭部神経堤細胞の移動開始時期と位置を明らかにした上で、顎顔面原基形成前の若い胚に細胞増殖因子やホルモン等の生理活性物質を曝露して顎顔面の形態形成や組織分化に対する影響を検索する予定である。1)長期培養系の確立哺乳類前胚培養系と下顎器官培養系を組み合わせることにより、頭部神経堤細胞の移動時期から歯胚・メッケル軟骨・舌などの形態形成・組織分化が起こる時期までをin vitroで再現できる長期培養系を確立した。