hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
変温下で農産物表面に形成されるバイオフィルムの特性把握と制御法の確立

本研究は、農産物の表面に付着している微生物が形成するバイオフィルムについて、それらの形成防止・除去法の確立を最終目的として、基礎的な特徴把握を試みたものである。検討の結果、微生物の種や属の多寡により、形成パターンが変動すること、また、変動する温度環境下でバイオフィルムを形成させた場合、一定温度で形成した場合より付着レベルが高まることが明らかとなった。青果物の流通では、周辺環境が非定常状態となるが、このような条件は微生物的な品質も大きく低下させる危険性が高まることが示された。農産物表面には様々な微生物が付着しているが、その様相は単純な付着ではなく、数種数十種、あるいはそれ以上の微生物で構成され、強度に密着したバイオフィルムとして存在し、外部ストレスに対して高度な防御能力を獲得していることが知られている。このようなバイオフィルムは、単純な洗浄処理では除去し難く、農産物の微生物的安全性上、大きな問題である。本研究では、このバイオフィルムの形成特性を把握することで、有効な除去法を提案することを目的とし、19年度は、異種微生物の共存パターンの違いがバイオフィルム形成に及ぼす影響、および変温条件がバイオフィルム形成に及ぼす影響について検討した。キュウリ果実を破砕し、平板培養によって単離した数種細菌をバイオフィルム形成試験に用いた。これらは16S-rDNA塩基配列を利用した解析により、その属・種を同定した。単独培養で強固なバイオフィルム形成能を示した種類(Pseudomonas、Comamonas)を共存培養させた場合、顕著なバイオフィルム形成は見られなかった一方、単独培養でバイオフィルムが形成され難い種類の共存培養では極めて強固なバイオフィルムを形成させることが明らかとなった。また、培養温度を530°Cまで隔日変動させた場合、その平均温度に近い15°C一定での形成結果と比較すると1.7倍の形成量増加であった。温度変動は青果物の生理活性を増大させ、鮮度保持期間の短縮を招くことは報告されているが、温度変動はバイオフィルム形成という、微生物的な品質も大きく低下させることが明らかとなった。前年度では、温度変動がバイオフィルム形成を促進させる場合もあることが明らかになったことから、20年度はバイオフィルムを形成する微生物叢の特定とともに、病原微生物を用いた検討も行った。キュウリ果実由来微生物群の形成能において、変温条件は15、30°Cの一定温度培養と同程度となることが明らかとなった。一方、キャベツ由来微生物群では、5°Cから30°Cへの温度上昇時に急激な形成能の増加が認められた。キャベツより検出された微生物は、キュウリ果実のものと比較すると、検出された属が多いことが特徴であり、キュウリ果実からはAcinetobacter属やPseudomonas属が多く検出された一方、キャベツではこれらに加え、腸内細菌下のErwinia属やKlebsiella属、Pantoea属等、更にグラム陽性細菌のStaphylococcus属も検出された。以上のことから、バイオフィルム形成の特徴の差は、構成する微生物叢の種類の多寡に影響されると考えられた。病原微生物については、5°Cから30°Cへ上昇させた場合、30°C一定温度区と比較して顕著な形成能の増加を示した。その後、培養温度を5°Cへ低下させたとしても形成能の低下は僅かであった。この傾向は供試した黄色ブドウ球菌とサルモネラ双方について同様であり、低温管理中の一時的な高温暴露はバイオフィルム形成を促進させる可能性があると考えられた。
大量退職時代における熟練教師から初任者教師への理科授業実践知識・技能の伝承モデル

今年度の研究実績は,次の通りである.(1)全体会議:研究代表者の総括のもとに,全体会議を開催した.代表者と分担者の定常的な連絡・協議については遠隔会議システムやSkype等を利用して行ったが,重要な局面では対面会議を開催した.(2)文献資料・関連事例の収集・データベース化:高度専門職業人の認知的特性に関する文献資料や国内外の関連事例を収集・データベース化した.(3)文献資料・関連事例の分析:収集・データベース化した文献資料・関連事例を対象として,熟練教師の認知的特性,初任者教師の認知的特性,理科の教師教育,職場における実践知識・技能の伝承等の視点から分析した.(4)理科授業実践知識・技能の伝承メカニズムを解明するための理論の精緻化:文献資料・関連事例の分析結果を統合して,理科授業実践知識・技能の伝承メカニズムを解明するための理論モデルの精緻化を行った.(5)理科授業実践知識・技能の伝承を支援するための方法論の精緻化:文献資料・関連事例の分析結果と理論モデルの成果を統合して,理科授業実践知識・技能の伝承を支援するための方法論の精緻化を行った.(6)研究成果発表:研究成果発表については,日本理科教育学会全国大会において成果を発表した.研究成果を整理・体系化して, Electronic Proceedings of the ESERA 2017Conferenceの審査付き論文,日本科学教育学会の学会誌『科学教育研究』の審査付き研究論文として公表した.また,2019KASE International Conferenceの招待講演において,研究成果の一部を公表した.(1)全体会議:研究代表者の総括のもとに,全体会議を開催した.代表者と分担者の定常的な連絡・協議については遠隔会議システムやSkype等を利用して行ったが,重要な局面では対面会議を開催した.(2)文献資料・関連事例の収集・データベース化:理科授業実践知識・技能の伝承メカニズムを解明するための理論の構築:高度専門職業人の認知的特性に関する文献資料や国内外の関連事例を収集・データベース化した.(3)文献資料・関連事例の分析:収集・データベース化した文献資料・関連事例を対象として,熟練教師の認知的特性,初任者教師の認知的特性,理科の教師教育,職場における実践知識・技能の伝承等の視点から分析した.(4)理科授業実践知識・技能の伝承メカニズムを解明するための理論の構築:文献資料・関連事例の分析結果を統合して,理科授業実践知識・技能の伝承メカニズムを解明するための理論モデルを構築した.(5)研究成果発表:研究成果発表については,日本科学教育学会および関連学会等において成果を発表した.発表先は,日本科学教育学会研究会,日本理科教育学会第66回全国大会,平成28年度日本理科教育学会近畿支部大会であった.年度内には国際会議に投稿し,中間的な成果の発表準備を実施した(投稿は本年度,実際の発表は翌年度になる).投稿先は,The 12th biannual conference of the European Science Education Research Association(ESERA2017)であった.審査の結果,採択が決定した.交付申請書に記載した研究目的については,平成28年度については順調に達成されている.理論の構築も順調であり,成果も一定程度のものが蓄積されているからである.本研究では,高齢者心理学,発達心理学,職場学習・企業人材育成と科学教育の研究者が学際的に共同し,教師の理科実践指導力の持続的発展に資するため,次の2点に取り組む.(1)熟練教師から初任者教師への実践知識・技能の伝承メカニズムを解明するための理論の確立,(2)伝承を支援する方法論の提案.今年度の研究実績は,次の通りである.(1)全体会議:研究代表者の総括のもとに,全体会議を開催した.代表者と分担者の定常的な連絡・協議については遠隔会議システムやSkype等を利用して行ったが,重要な局面では対面会議を開催した.(2)文献資料・関連事例の収集・データベース化:理科授業実践知識・技能の伝承メカニズムを解明するための理論の構築:高度専門職業人の認知的特性に関する文献資料や国内外の関連事例を収集・データベース化した.(3)文献資料・関連事例の分析:収集・データベース化した文献資料・関連事例を対象として,熟練教師の認知的特性,初任者教師の認知的特性,理科の教師教育,職場における実践知識・技能の伝承等の視点から分析した.(4)理科授業実践知識・技能の伝承を支援するための方法論の提案築:文献資料・関連事例の分析結果を統合して,理科授業実践知識・技能の伝承を支援するための方法論を提案した.(5)研究成果発表:研究成果発表については,ESERA2017,日本理科教育学会,日本科学教育学会において成果を発表した.発表先は,The 12th biannual conference of the European Science Education Research Association (ESERA2017),日本科学教育学会研究会,日本理科教育学会全国大会であった.また,研究成果を整理・体系化して,日本理科教育学会の学会誌『理科教育学研究』の原著論文として公表した.交付申請書に記載した研究目的については,平成29年度については順調に達成されている.理論の構築も順調であり,成果も一定程度のものが蓄積されているからである.今年度の研究実績は,次の通りである.(1)全体会議:研究代表者の総括のもとに,全体会議を開催した.代表者と分担者の定常的な連絡・協議については遠隔会議システムやSkype等を利用して行ったが,重要な局面では対面会議を開催した.(2)文献資料・関連事例の収集・データベース化:高度専門職業人の認知的特性に関する文献資料や国内外の関連事例を収集・データベース化した.

(3)文献資料・関連事例の分析:収集・データベース化した文献資料・関連事例を対象として,熟練教師の認知的特性,初任者教師の認知的特性,理科の教師教育,職場における実践知識・技能の伝承等の視点から分析した.(4)理科授業実践知識・技能の伝承メカニズムを解明するための理論の精緻化:文献資料・関連事例の分析結果を統合して,理科授業実践知識・技能の伝承メカニズムを解明するための理論モデルの精緻化を行った.(5)理科授業実践知識・技能の伝承を支援するための方法論の精緻化:文献資料・関連事例の分析結果と理論モデルの成果を統合して,理科授業実践知識・技能の伝承を支援するための方法論の精緻化を行った.(6)研究成果発表:研究成果発表については,日本理科教育学会全国大会において成果を発表した.研究成果を整理・体系化して, Electronic Proceedings of the ESERA 2017Conferenceの審査付き論文,日本科学教育学会の学会誌『科学教育研究』の審査付き研究論文として公表した.また,2019KASE International Conferenceの招待講演において,研究成果の一部を公表した.平成29年度も当初の予定通り,全体会議,理科授業実践知識・技能の伝承を支援するための方法論の提案,研究成果発表などを実施する.平成30年度も当初の予定通り,全体会議,理科授業実践知識・技能の伝承を支援するための方法論の提案,研究成果発表などを実施する.研究成果発表が投稿段階であり,次年度に国際会議へ参加しなければならない.また,次年度においても文献資料の収集と国内外の事例に関する実地調査やデータベース化を継続的に実施する必要が生じたため.【理由】研究成果発表が投稿段階であり,次年度に成果発表のための旅費を支出しなければならない.また,次年度においても文献資料の収集と国内外の事例に関する実地調査やデータベース化を継続的に実施する必要が生じたため.【使用計画】物品費(図書費など),調査旅費,成果発表旅費,その他(国際会議参加費)等に使用する予定である.物品費(図書費など),調査旅費,成果発表旅費,その他(国際会議参加費)等に使用する予定である.
植民地の表象としての女性に関する通文明的比較研究

(1)若桑の研究成果。インドの独立運動において、とくにベンガル地方の文学と美術において女神カーリの復活または興隆があったことを明らかにした。この精神的起源として宗教家Vive kanandaによるカーリ崇拝の復興を指摘し、その信仰が男性的原理、暴力と国家主義の原理に支配されるイギリス帝国主義の男性性に対立するインドの女性性という対立軸の形成にあったことを示した。黒いカーリは先住民族の人種的出自を示すものであり、男性支配以前の母系制的インドの再支配を意味する。これは岡倉天心によって、西洋対東洋の図式に置き換えられ、汎アジア主義へと変容した。(2)池田の研究成果。植民期の日本絵画には「支那服を来た女性像」が頻出するが、それは植民地化された中国の可視化であり、植民され中国を「女性」として隠喩するものであった。また同様に日本女性が支那服を着る画像も生産されたが、それは西洋に対立する日本と中国を汎アジア化するものであった。これらがすべて女性像であったことは、これによって男性による日本帝国主義が、植民地と女性を統治し、自己の卓越性を表象するものであった。(3)栗田の研究マフデイー運動に参加した女性戦士は男装してそのジェンダーを隠蔽した。指導者は独立運動の展開のために女性のエネルギーを最大限必要としたにもかかわらず、女性が性別役割の境界線を超えることを欲しなかったためである。このことはインドにおいてガンジーらが女性のエネルギーを主軸として不買抵抗運動を成功させたことと対照的であり、ヒンズーの文化の基層をなす母系制的土台と、イスラームの父権主義の差異を示すものである。本研究が着手された2001年秋、ニューヨークの世界貿易センターへの自爆テロをきっかけとしてアメリカを中心とする反タリバン攻撃が開始されたが、これと同時に、タリバン政権の女性抑圧、とくにアフガン女性のヒジャーブ(頭被い)をタリバンの非人道的な女性抑圧と後進性のシンボルとして宣伝する言説が世界に流布した。それはアフガンにとどまらず、キリスト教・白人側の・イスラム教・有色人種の後進性・非近代性へと拡大された。これは本研究の目的であった、女性表象のポストコロニアル的開明に格好の現在進行的サンプルであった。このため研究グループはアフガン女性の頭被い即ちブルカをテーマとして、いわゆる非白人社会における女性の「民族衣装」をめぐる相反する意味決定に焦点をあてて研究と討議を行った。まずイスラーム担当の栗田が、ブルカを女性抑圧の象徴としてみる欧米の「文化帝国主義」に対して、イスラーム世界はこれを「伝統的文化」あるいは「民族的アイデンテイテイー」とすることを指摘したが、しかし、実は、現行のブルカは19世紀以前には固定しておらず、イスラムの教義から導き出されたものというよりは、商業資本の成長、国内市場の統一、繊維産業の発展という「近代化」とむすびついたすぐれて近代的な現象であることを、19世紀の旅行記および地誌著作者の史料によって証明しうるという結論に達した。いっぽう若桑は、明治の日本が近代国家を形成するにあたって、近代化のシンボルとして明治16年に皇后をはじめとする宮中・貴族女性の「洋装化」を断行したが、日清・日露以降は皇后・貴族女性とも和装に回帰し、その後は和洋一重服装を維持しつづけたことを指摘し、洋装によってはみずからをアジアの後進性からの脱却のシンボルとして機能せしめ、和装によって西洋への民族的アイデンテイテイーの象徴として機能せしめたことを指摘し、日本女性の重服制が中心である西欧への追随と国家主義との二重性によって構成される近代日本を表象するものであるとした。インド、韓国におけるサリー、チョゴリの着用もまた伝統の名のもとに近代国民国家の西欧への対抗的な民族性の近代的創出であったと結論した。

これ以降の調査と考察は次年度に持ち越される。(1)インドの大英帝国の植民地支配に抵抗する独立運動は、ガンデイー指導の非暴力不服従と外国製品不買運動(swadeshi)に代表されるが、彼はこの運動にインドの全階層の女性を総動員した。その理由は第一に、非暴力忍従が女性の美徳であり、第二にswadeshiのインド国産織布生産販売運動が、紡ぎ・織りという伝統的な女性の仕事だったからである。総括すればインドは帝国を男性/暴力と規定するいっぽう、インドを女性化することで対抗したのである。このとき、swadeshiの女性表象として怒れる母女神カーリがベンガル中心に崇拝され、神殿、偶像、絵画が大量に生産された。黒い肌のカーリはインダス文明が白人の征服を受ける以前の民族神であり、征服されざるインドの象徴となった。このことが文学と絵画によって実証された。(2)日本の1920年代から40年代にかけて、日本には二つの異なった女性表象があった。一は日本の西洋化、近代化を表象する「都市空間の女」即ち「モダンガール」であり、二は植民地化された朝鮮、中国の「民族服の女」とくに「支那服の女」である。この二種類の女性像によって日本の近代絵画は帝国主義日本を卓越化し、朝鮮/中国を非文明化したのである。(3)1881年から98年のマフデイー運動において、伝統的にヴエールを被り公的世界に姿を表すことのなかったスーダンの女性は、エジプト支配、イギリス支配に抵抗する民族解放運動に参加し激烈に戦った。だが、そのとき彼女らは男装した。この「男装の聖戦士」は、しかし、歴史記述段階で男性によって隠蔽された。これは現代のスーダン・ナショナリズムの男性中心主義と女性を私的世界に幽閉するイスラームのジェンダー規範によるものである。男性の服装によって隠蔽され、歴史からも隠蔽されたスーダンの女性の存在が明らかになった。以上の論文は報告書によって公表される。
ウェーブレット解析による局所超解像度解析

一般化されたソボレフ空間におけるウェーブレットフレームについて研究し,リースポテンシャルに基づいたウェーブレットフレームの構成法を提案した.この提案したウェーブレットフレームは関数やデータを超局所成分に分解することができる.四元数値フーリエ変換と四元数値窓フーリエ変換について研究し,ひとつの不確定性原理を示した.スパース表現のための辞書の構成法を提案し,その能力について数値的に調べた.一般化されたソボレフ空間におけるウェーブレットフレームについて研究し,リースポテンシャルに基づいたウェーブレットフレームの構成法を提案した.この提案したウェーブレットフレームは関数やデータを超局所成分に分解することができる.四元数値フーリエ変換と四元数値窓フーリエ変換について研究し,ひとつの不確定性原理を示した.スパース表現のための辞書の構成法を提案し,その能力について数値的に調べた.信号処理や画像解析における重要なテーマのひとつとして,超解像度(super-resolution)がある.これは,信号や画像などの与えられたデータから,与えられたデータの解像度よりも高い解像度のデータを構成するという問題である.超解像度を使った解析は,観測衛星や人工地震によって得られる観測データのように,データを得ることが高価であったり困難である場合には本質的な役割を果たす.超解像度解析の研究は数多くあるが,本研究のテーマは局所超解像度解析であり,新たに観測などによって得られる情報を使って信号や画像の興味がある一部分の解像度を高くするという点が異なっている信号処理や画像解析における重要なテーマのひとつとして,超解像度がある.これは,信号や画像などの与えられたデータから,与えられたデータの解像度よりも高い解像度のデータを構成するという問題である.超解像度を使った解析は,観測衛星や人工地震によって得られる観測データのように,データを得ることが高価であったり困難である場合には本質的な役割を果たす.超解像度解析の研究は数多くあるが,本研究のテーマは局所超解像度解析であり,新たに観測などによって得られる情報を使って信号や画像の興味がある一部分の解像度を高くするという点が異なっている.本年度は,引き続きスパース表現(信号や画像を比較的少ない情報で表現すること)に関連し,逆問題の中心課題のひとつとなっている圧縮可能測定を研究し,得られた結果を投稿中である.一般化されたソボレフ空間において,超局所的に分解することができる隙間のないウェーブレットフレームが我々の構成法で構成できるようなソボレフ空間の重みはどのような重みであるか調べ,そのような重みを持った一般化されたソボレフ空間にウェーブレットフレームを構成し,その応用例としてある種のリースポテンシャルが超局所的に分解できることを示した.さらに,解析ウェーブレットを用いた適応型多重解像度解析の研究を進めている.3次元空間における物体の回転等を高速で計算できる四元数を使ったアルゴリズムがコンピュータグラフィックス等で実用化されていることに注目し,高速化手法の有力な候補として四元数値フーリエ変換の研究を行い,四元数値フーリエ変換の不確定原理の一つの形を与えた.これは,四元数値のフーリエ変換による超局所解析のひとつの理論的限界を与えるものである.さらに,四元数値フーリエ変換の研究をもとにして,四元数値短時間フーリエ変換および,四元数値ウェーブレット変換の基礎的研究も進めている.超解像度のための有力な手法と思われるスパース表現(信号や画像を比較的少ない情報で表現すること)に関して研究を進めている.特に逆問題の中心課題のひとつとなっているD. Donoho, E. Candes, J. Romberg, T. Tao達の圧縮測定(compressive sensing)を研究し,その成果として,論文が3編掲載された.計画当初の目論見とは違って難しい部分があり,困難な部分を克服するためにしばらく時間が必要である.しかし,研究の途中で当初の目論見になかったいくつかの結果が得られている点は評価できる.24年度が最終年度であるため、記入しない。違ったアプローチを考案して試す必要がある.24年度が最終年度であるため、記入しない。
義歯表面性状の違いによるデンチャープラーク付着の相違

ト走査型レーザー顕微鏡による義歯表面の微生物観察法-レジン付着カンジグの低倍率観察-レジン表面で培養したカンジダを蛍光染色し,共焦点レーザー走査顕微鏡を用いて観察することにより,低倍率で義歯表面上の菌の分布を観察する方法を確立することを試みた.その結果,最適染色条件は水溶性エオジン濃度0.01%,染色時間30秒,水洗時間60分であった.この方法は従来の方法に比べカンジダの分布状態を低倍率で鮮明に観察できることから義歯へのカンジダの付着を評価する場合に極めて有効な観察手段であると思われる2義歯表面性状の相違による初期プラーク付着の相違-原子間力顕微鏡による表面性状の観察-日常臨床で使用頻度の高い硬質裏装材の表面研磨条件を変え(#400,#1000,5μ)カンジダ付着の相違を観察した.付着カンジダのコロニー数測定はCFUとして,蛍光観察は共焦点レーザー走査顕微鏡により行った.また,表面性状観察は原子間力顕微鏡で行った.カンジダのコロニーは表面研磨が5μの研磨条件では全く観察されなかった.蛍光観察では5μ研磨でカンジダのわずかな付着が観察され,#400,#1000研磨ではかなりのカンジグ付着が観察された.また,原子間力顕微鏡観察では5μ研磨でも初期のバー研磨によると思われる研磨の溝が残っていた.このことより表面性状が疎であるほどとカンジグ付着が増加する傾向が示された.ト走査型レーザー顕微鏡による義歯表面の微生物観察法-レジン付着カンジグの低倍率観察-レジン表面で培養したカンジダを蛍光染色し,共焦点レーザー走査顕微鏡を用いて観察することにより,低倍率で義歯表面上の菌の分布を観察する方法を確立することを試みた.その結果,最適染色条件は水溶性エオジン濃度0.01%,染色時間30秒,水洗時間60分であった.この方法は従来の方法に比べカンジダの分布状態を低倍率で鮮明に観察できることから義歯へのカンジダの付着を評価する場合に極めて有効な観察手段であると思われる2義歯表面性状の相違による初期プラーク付着の相違-原子間力顕微鏡による表面性状の観察-日常臨床で使用頻度の高い硬質裏装材の表面研磨条件を変え(#400,#1000,5μ)カンジダ付着の相違を観察した.付着カンジダのコロニー数測定はCFUとして,蛍光観察は共焦点レーザー走査顕微鏡により行った.また,表面性状観察は原子間力顕微鏡で行った.カンジダのコロニーは表面研磨が5μの研磨条件では全く観察されなかった.蛍光観察では5μ研磨でカンジダのわずかな付着が観察され,#400,#1000研磨ではかなりのカンジグ付着が観察された.また,原子間力顕微鏡観察では5μ研磨でも初期のバー研磨によると思われる研磨の溝が残っていた.このことより表面性状が疎であるほどとカンジグ付着が増加する傾向が示された.走査型レーザー顕微鏡によるレジン付着カンジダの低倍率観察法I.方法2種類の硬質裏装材で試料片を作製し,表面研磨は#1000のエメリー紙で行った.被験微生物はCandida albicans (ATCC18804)を4%dextrose加Tryptic soybrothで前培養・本培養したものを使用した.ろ過滅菌したヒト唾液でカンジダ密度を10^5CFU/mlに調節した被験菌液を試料片上に100μl滴下し,その上に20.0mm×20.0mmのフィルムを密着させ覆い保湿箱にその試料を入れ,30°Cで3日間保った後,フィルムを除去し3.0%グルタールアルデヒド(pH7.4,0.1Mリン酸緩衝液)で固定した.蛍光観察は共焦点レーザー顕微鏡で,レーザー強度,ゲインなどの条件を一定にし観察を行った.比較用として,SEM観察とトルイジンブルー染色を行なった試料を光学顕微鏡により観察した.II.結果と考察共焦点レーザーによるカンジダの分布状態は20倍の倍率でも観察することができた.一方,SEM観察では500倍程度以上の倍率でないとカンジダを識別することができなかった.光学顕微鏡観察は,20倍では集落の識別が限界であり,50倍程度以上に拡大するとカンジダを識別することはできるが,鮮明さにおいて蛍光像よりも劣っていた.以上の結果から,本法の最適染色条件は,水溶性エオジン染色液濃度は0.01%,染色時間は30秒間,水洗は60分であった.本法は,従来の観察法に比べてカンジダの分布状態を低倍率で鮮明に観察できることから義歯へのカンジダの付着を評価する場合に極めて有効な観察手段である.義歯表面性状の相違による初期プラーク付着の相違〔方法〕日常臨床で頻繁に使用されている硬質裏装材(マイルドリベロン,トクソーリベース)で試料を作製し,研磨はエメリー紙#1000,#400,ラッピングフィルム5μの3種類とした.Candida albicans(ATCC18804)をろ過滅菌したヒト唾液でカンジダ密度を10^4と10^3CFU/mlに調節した被験液を試料片上に100μl滴下し,フィルムを密着させ保湿箱で30°C・3日間保った.付着カンジダ数測定は試料片を水洗しSCDLP

培地で洗い出し,カンジダGE培地で2日間培養しCFUとして測定した.蛍光観察には試料を固定後,0.01%エオジンで染色し共焦点レーザー走査顕微鏡で観察を行った.硬質裏装材表面の性状観察は,原子間力顕微鏡(SPM-9500)で行った.〔結果〕表面研磨の違いによるカンジダ付着の相違はコロニー数をCFUとして比較した.5μ研磨の試料ではカンジダは全く検出されず,#1000,#400研磨の試料との間に有意差が見られた.共焦点レーザー走査顕微鏡による観察では#1000,#400研磨の試料でかなりのカンジダ付着が観察され,酵母型と菌糸型のカンジダが混在していた.しかし5μ研磨の試料では全くカンジダ付着が観察されなかった.原子間力顕微鏡による観察では,#1000と5μ研磨表面性状に差が見られた.#400研磨の試料では表面が粗すぎ測定不可能であった.以上の実験結果から義歯表面性状が滑沢なほど,カンジダ付着が有意に少なくなることが示唆された.
海外労働者受け入れ制度に対する政策選好の推定

本年度は、昨年度収集したデータの分析を行い、研究成果の発信を行った。分析の結果、ランダム化コンジョイント実験は問題なく機能しており、統計的に明瞭な結果を得ることができていることが確認できた。さらに操作変数法を拡張した手法を用いることで、情報選好に応じた情報効果の異質性分析が可能であることが確認され、こちらについても有効に機能していることを確認した。このような分析により、とくに日本人人口や外国人労働者数に関する情報提供は、外国人労働者受け入れへの指示を有意に高め、その効果は当該情報に関心のない回答者についても同様であることが確認されたさらに別途各分野の専門家に対してプレゼンテーションを行い、多くの有益な示唆を得ることができた。最後に上記のセミナーや学会で用いたスライドやポスターをもとに、研究成果をDiscussion paperとしてまとめ、国際的学術誌への投稿の準備を行った。本年度は本研究課題のメインとなるインターネット調査の設計を行い、その後東京大学社会科学研究所倫理員会による審査、実際のアンケートの実施、データの収集も終了した。結果、欠損値も少ない質の高いデータが生成され、今後の分析結果についても、大きな期待が持てる。サーベイの設計に際しては、最新の学術知見を用いて、特に情報トリートメントについて入念な設計を行った。ここでは(1)日本における今後の人口推移、(2)財政状況、(3)現状の在留外国人数、(4)外国人による犯罪数、に関する情報を回答者にランダムに提示するデザインを採用した。また自身で閲覧したいデータを選べる回答者を、ランダムに選らび、近年その効果が大きな研究関心となっている"personalized news"(インターネット上などで、自身が見たいニュースのみを閲覧できる状況)が、政策選好に与える影響についても、分析可能なサーベイを設計した。本年度はさらに基礎的な分析の結果から、(1)有権者は外国人労働者受け入れ政策について、かなり"保守的"な選好を有している点、(2)情報トリートメントのいくつかは、政策選好に充てる影響は確認でき、とくに人口予測や外国人犯罪数が大きな影響を有しているいる点、(3)personalized newsの効果は不明瞭であること、が確認されている。しかしながらこれらの結果は、暫定的なものであり、今後はより詳細な信頼性の高い分析を行っていく。インターネット調査の設計、実施を終了し、結果質・良ともに十分なデータを収集でき、また基礎的な分析も終了した。また調査設計の段階で、先行研究のさらなるサーベイも集中的に行うことができた。今後は先のデータの解析を行い、論文の執筆を行う。またその過程のなかで、研究会や学会での報告を積極的に行い、他の研究者からのコメントをもとに、分析・論文の質的向上も図る。また分析過程の中で、補助的なデータが必要になった場合、追加的なインターネット調査を行う。
オートファジー制御による新しい心不全治療法の開発

飢餓ストレス誘発による心筋オートファジーは自己細胞内蛋白や細胞内小器官を分解しエネルギー産生を代償することで心機能を維持した。急性心筋梗塞においてオートファジーはエネルギー産生を代償し心筋細胞死を抑制することで梗塞サイズを縮小した。また慢性心筋梗塞においてリモデリング抑制と心機能改善に関与した。すなわちオートファジーは心保護的作用がありこれを促進させることは心筋梗塞の新しい治療手段となりうることが示唆された。急性ストレス下の心筋細胞オートファジーの病態生理・分子機構の解明○飢餓ストレス応答心疾患への治療応用に先立ち急性ストレス下の心筋細胞オートファジーの病態生理、分子機構について検討した。急性ストレスとしてまずオートファジー誘導としてよく知られた飢餓ストレスについて検討した。絶食12時間にて早くも心筋内でリソソームの活性化がみられ、その後のオートファゴゾームへの形態変化を超微形態にて確認しLC-3やcathepsinDなどオートファジーマーカーの亢進も確認した。飢餓により心機能が低下することはなかったが、Bafilomycin A1を用いてオートファジーを抑制したところ心機能が低下し心筋組織のアミノ酸・ATP低下を認めた。このことから心筋は飢餓ストレスに代償性にオートファジーを亢進させ細胞内ATP産生をすることで心機能維持したと考えられた。○急性虚血ストレス応答虚血は組織飢餓のひとつでありオートファジーの関与が想定されるためマウス急性心筋梗塞モデルを用い急性虚血におけるオートファジーの動態と役割を検討した。オートファジーは結紮後急性期には心室全体で亢進し、次第に梗塞境界領域に限局して亢進することを確認した。さらにオートファジーの役割を検討するため心筋梗塞前にBafilomycinA1を投与しオートファジーを抑制した群とrapamycinを投与しオートファジーを促進した群、心筋梗塞前に絶食状態としオートファジーを促進させた上で心筋梗塞とした群を作成し梗塞2日後に評価した。オートファジー抑制群はコントロール群と比較し有意に梗塞サイズは拡大したがオートファジー促進群は有意に縮小した。さらにin vitroでマウス幼若心筋細胞にATG5、LAMP-2のsiRNAを導入することでオートファジーを特異的に阻害し虚血状態をシュミレーションしたところコントロールと比較し細胞の生存率は有意に低下した。以上よりオートファジーは虚血に対し保護的に作用し、虚血細胞死を抑制することで心筋梗塞サイズを縮小させたと考えられた。○慢性心不全における心筋細胞オートファジー平成21年度までの研究により急性虚血ストレス化での心筋オートファジーはエネルギー産生を介した細胞の生存への代償機構と考えられた。そこで平成22年度はマウス大型心筋梗塞モデルを作成し慢性心不全状態での心筋オートファジーを検討した。心筋梗塞後亜急性期には心筋全体でオートファジーが亢進し、特に梗塞境界領域の心筋は巨大な空泡変性が目立ちオートファジーが亢進していた。慢性期へ移行すると境界領域のオートファジー亢進は低下し逆に梗塞遠隔領域での亢進を認めた。さらに心筋オートファジーの役割を検討するため、心筋梗塞後3週より7日間bafilomycin Aを投与しオートファジーを阻害した群、rapamycinを投与しオートファジーを促進した群を作成した。心エコー、心カテーテル法による心機能評価ではrapamycin投与により左室の縮小、収縮能・拡張能の改善を認め、ANPの発現も抑制されていた。これらの心筋ではautophagic vacuoleの増加しやLC3は強く発現しておりオートファジーの亢進が確認された。一方、bafilomycin Alの投与により左室は拡大し心機能の低下を認め、心筋ではオートファジーの抑制を認めた。心筋のエネルギー状態に注目しAMPKを評価したところ心筋梗塞による慢性心不全状態でリン酸化は亢進していた。rapamycinにより抑制され、bafilomycin Alにより亢進していた。以上より心筋オートファジーは心筋梗塞後慢性心不全においてエネルギー産生を代償的に亢進し左室リモデリングを抑制し心機能・心不全を改善していることが示唆された。
民間賃貸住宅の需給動向に関する地域構造の都市間比較

本研究の目的は、民間賃貸住宅の需給動向の地域的な構造をその地域の居住世帯との関係から把握し、これらを都市間で比較することにある。比較の対象として、「大都市圏」(7か所)及び「都市圏」(4か所)を取り上げた。データは、国勢調査(平成2年)、住宅統計調査(平成5年、昭和63年)、住宅着工統計(平成2年から平成7年までの6年分)を用い、市区町村単位で分析を行った。はじめに大都市圏及び都市圏ごとの民間賃貸住宅の実態を大まかに把握するため、住宅統計調査のデータを整理した。次に、各都市圏の中心からの距離帯別に住宅事情を検討した。さらに、幾つかの市区町村を取り上げ、規模別の住宅着工数等の経年変化をみた。最後に、大都市圏及び都市圏の民間賃貸住宅の新設住宅着工数、平均延べ床面積等を市区町村単位で地図化した。大都市圏は都市圏に比べ、民間賃貸住宅の全ストックにしめる割合が相対的に高く、特に札幌大都市圏では37%と高率である。民間賃貸住宅の平均延べ床面積は、京浜葉大都市圏と京阪神大都市圏が40平米以下と非常に狭いが、他の都市圏でも50平米以下であり、持ち家住宅に比べて規模が小さい。家賃水準は、どのタイプの住戸でも京浜葉大都市圏が突出して高くなっている。規模別の着工数の経年変化を市区町村別にみると、30平米以下の住宅が多く供給され続けてているところや、平成2年から7年にかけて、規模の比較的大きな住宅に供給がシフトしているところなど、地域別の特徴が明らかになった。また,都市圏では,中心市では民間賃貸住宅の新規供給が行われているが、周辺市区町村では供給されていないところが多いことなどが地図化によりヴィジュアルに把握できた。
スラブ内地震とゆっくりすべりとの関係

本研究では,「ゆっくりすべり」のうち,短期的スロースリップおよび長期的スロースリップ発生域下のスラブ内地震の特徴を調べる.スロースリップの発生タイミング前後数ヶ月から数年の期間のデータを統合し,1)スラブ内の応力場の時間変化,2)スラブ内地震のb値等の時間変化について調べる.氏家恒太郎・筑波大学・准教授らは「石英脈の形成サイクルがゆっくりすべりの発生周期と関わる」とするモデルを提案しているが,石英脈の形成には流体の移動が関わると考えられている.そのため彼らと連携し,本研究の観測結果を使って「石英脈形成サイクルがゆっくりすべるの発生周期を作る」とするモデルとの議論・改良を行う.本研究では,「ゆっくりすべり」のうち,短期的スロースリップおよび長期的スロースリップ発生域下のスラブ内地震の特徴を調べる.スロースリップの発生タイミング前後数ヶ月から数年の期間のデータを統合し,1)スラブ内の応力場の時間変化,2)スラブ内地震のb値等の時間変化について調べる.氏家恒太郎・筑波大学・准教授らは「石英脈の形成サイクルがゆっくりすべりの発生周期と関わる」とするモデルを提案しているが,石英脈の形成には流体の移動が関わると考えられている.そのため彼らと連携し,本研究の観測結果を使って「石英脈形成サイクルがゆっくりすべるの発生周期を作る」とするモデルとの議論・改良を行う.
原型癌遺伝子bcl-2の遺伝子発現による神経細胞死の回避とその生理的意義

ラット褐色細胞腫由来のPC12細胞は血清を含む培地で培養すると増殖し、培地から血清を除くとポトーシスに陥ることが知られている。さらに、PC12細胞は血清非存在下で神経栄養因子(NGF)を添加した培地で培養すると、突起を伸展して神経細胞様に分化する。このような特徴を備えたPC12細胞に、細胞死を回避する原型癌遺伝子として知られるbcl-2遺伝子を過剰発現することによって、細胞死とその回避について検討した。発現ベクターに組み込んだヒトbcl-2遺伝子を燐酸カルシウム法により、PC12細胞に過剰発現させた。mRNAと蛋白レベルで検討し、bcl-2を発現した細胞株6種を得た。これらの株を用いて、血清存在下で培養すると野生株と同様に増殖した。無血清下で培養すると、野生株とベクターのみを組み込んだ細胞は24時間後には多くの細胞が死に、4日以内に全ての細胞が死んだ。しかし、bcl-2を組み込んだ細胞では4日後にみると、全ての株で80から100%の生存を示した。さらに、血清非存在下で2週間培養を続けた結果、bcl-2を発現した細胞は突起を伸展し、NGF存在下で培養した細胞と同様に神経細胞様に分化した。この細胞はニューロフィラメントM陽性であった。本実験結果から、bcl-2遺伝子を組み込んだ細胞は、血清存在下では野生株と同様に増殖するが、血清非存在下では野生株と異なり生存し、追には神経細胞様に分化することが明らかになった。今後、さらに、この系を用いて、分化因子の同定とbcl-2が細胞を如何に生存させるのかを検討する。
BCAP結合分子BB1による発がん制御機構の解明

フォスファチジルイノシトール3キナーゼ結合分子として単離されたアダプター分子BCAPの遺伝子欠損マウスでは、脾臓成熟B細胞の細胞死に対する感受性が亢進している。この背景にはNF-κBファミリーの構成員c-Re1の選択的減少を一因とする転写因子NF-κBの活性化障害が存在することを研究代表者は明らかにした。NF-κBはアポトーシスや細胞周期関連分子に加えて、癌転移に関連する一連の分子を誘導する。したがって、細胞の恒常性維持機構の分子論的理解の推進ひいてはがん治療の確立を念頭においた場合、NF-κB活性を適度なレンジに規定するメカニズムを解明し、人為的に制御することが必要不可欠である。そこでBCAPとNF-κBの機能的・物理的連関の分子基盤を解明するために、BCAPの機能ドメインの絞込みと当該領域の結合分子の単離を行った。κB配列を含むリポーターアッセイによって、BCAPのC末に位置するプロリンに富む配列を含む領域がNF-κBの活性化に必要とされることを見出した。この領域をベイトにした酵母two-hybridスクリーニングによってBB1(BCAP Binder 1)をクローニングし、RNA干渉によるノックダウン実験で、BB1のNF-κB活性化への関与を確認している。同様のアッセイでBB1のC末端の約100アミノ酸がNF-κBとの連携を担うことが判明した。BCAPの機能発現機構の包括的解明を目指してファミリー分子の探索も併行し、BANKとの構造上の類似性を見出した。BANK欠損マウスを樹立・解析し、当分子が共受容体CD40を介するシグナル伝達系を抑制して、Bリンパ球の過度の応答を防止する役割を担うことを明らかにした。以上からBCAPファミリーが細胞表面の分子イベントを転写因子の活性化へと変換する過程に、ひいては発がんの制御に寄与している可能性が示唆された。フォスファチジルイノシトール3キナーゼに結合する分子として単離されたアダプター分子BCAPの遺伝子欠損マウスでは、脾臓成熟B細胞の細胞死に対する感受性が亢進している。NF-κBファミリーの構成員であるc-Relの選択的減少を一因とする転写因子NF-κBの活性化障害が、その背景に存在することをこれまでに明らかにしてきた。NF-κBはアポトーシスや細胞周期関連分子に加えて、癌転移に密接に関連する一連の分子を標的として含み、発現誘導にかかわっている。したがって、細胞の恒常性維持機構の分子論的理解の推進ひいてはがん治療の確立を念頭においた場合、NF-κB活性を過不足無く適度なレンジに規定するメカニズムを解明し、人為的に制御することが必要不可欠である。BCAPとNF-κBの機能的・物理的連関の分子基盤を解明するために、BCAPの機能ドメインの絞込みと当該領域の結合分子の単離を行った。κB配列を含むリポータージーンアッセイによって、NF-κBの活性化には、BCAPのC末に位置するプロリンに富む配列を含む領域が必要とされることを見出した。加えて、この領域をベイトにした酵母two-hybridスクリーニングによってBB1(BCAP Binder 1)をクローニングし、RNA干渉によるノックダウン実験で、BB1のNF-κB活性化への関与を確認している。BCAPはBB1との結合を通して、細胞表面の分子イベントを転写因子NF-κBの活性化へと変換する過程に、ひいては発がんの制御に寄与していることが示唆された。

この知見を基に、BB1の一連の欠失変異体を作成し、リポーターアッセイで検定したところ、BB1のC末端の約100アミノ酸がNF-κBとの連携を担う機能領域であることが判明した。フォスファチジルイノシトール3キナーゼ結合分子として単離されたアダプター分子BCAPの遺伝子欠損マウスでは、脾臓成熟B細胞の細胞死に対する感受性が亢進している。この背景にはNF-κBファミリーの構成員c-Relの選択的減少を一因とする転写因子NF-κBの活性化障害が存在することを研究代表者は明らかにした。NF-κBはアポトーシスや細胞周期関連分子に加えて、癌転移に関連する一連の分子を誘導する。したがって、細胞の恒常性維持機構の分子論的理解の推進ひいてはがん治療の確立を念頭においた場合、NF-κB活性を適度なレンジに規定するメカニズムを解明し、人為的に制御することが必要不可欠である。そこでBCAPとNF-κBの機能的・物理的連関の分子基盤を解明するために、BCAPの機能ドメインの絞込みと当該領域の結合分子の単離を行った。κB配列を含むリポーターアッセイによって、BCAPのC末に位置するプロリンに富む配列を含む領域がNF-κBの活性化に必要とされることを見出した。この領域をベイトにした酵母two-hybridスクリーニングによってBB1(BCAP Binder 1)をクローニングし、RNA干渉によるノックダウン実験で、BB1のNF-κB活性化への関与を確認している。同様のアッセイでBB1のC末端の約100アミノ酸がNF-κBとの連携を担うことが判明した。BCAPの機能発現機構の包括的解明を目指してファミリー分子の探索も併行し、BANKとの構造上の類似性を見出した。BANK欠損マウスを樹立・解析し、当分子が共受容体CD40を介するシグナル伝達系を抑制して、Bリンパ球の過度の応答を防止する役割を担うことを明らかにした。以上からBCAPファミリーが細胞表面の分子イベントを転写因子の活性化へと変換する過程に、ひいては発がんの制御に寄与している可能性が示唆された。
ミトコンドリア選択的オートファジー障害による先天性溶血性貧血の病態解析

赤血球分化成熟を制御する転写因子KLF1は、赤芽球系細胞において細胞周期制御遺伝子の発現を微調整する重要な機能を有していて、最終分化と脱核の制御にも関与している。先天性赤血球形成異常性貧血(CDA)IV型は、KLF1の2番目のZnフィンガーのヘテロ接合変異によって引き起こされる(c.973G> A、p.E325K)事が海外の症例で報告されていた。我々は最近、同一のミスセンス変異を有するIV型CDAの日本人女性患者を診断した。KLF1変異によって引き起こされる赤血球形成異常のメカニズムを理解するために、我々はCDA患者からiPS細胞(KLF1-iPSC)を生成した。KLF1-iPSCからin vitro分化誘導した赤芽球系細胞(KLF1-Ebl)は患者骨髄中赤芽球と同様の多核を示し、CD44発現低下、およびKLF1標的遺伝子発現の調節異常を示した。さらに、KLF1-Eblによるブロモデオキシウリジンの取り込みは、CD235a +/ CD71+段階で有意に減少し、マイクロアレイ分析は、CDKN2CおよびCDKN2Aなどの負の調節因子の発現の増加と共に、種々の細胞周期調節遺伝子に発現異常を認めた。KLF1_E325Kの誘導性発現はKLF1-EblにおいてG1期で細胞周期停止を引き起こした。KLF1-Ebl網羅的遺伝子発現レベルの解析では、EPB41、EPB42、GPI、GSRなど複数のKLF1標的遺伝子の発現低下が明らかになった。我々のデータは、KLF1のE325K変異が赤血球膜または酵素異常と関連して細胞周期調節因子の転写制御の破綻と関連していることが明らかになった。ミトファジー関連遺伝子を含む先天性溶血性貧血関連74遺伝子パネルを用いた次世代シークエンシング解析を続けているが、今年度はミトファジー異常による新規の先天性溶血性貧血症例を診断することが出来ず、研究計画に提示したスクリーニング方法の見直しが必要と考えている。全国の医療機関から依頼を受け、平成28年4月平成29年3月までの1年間で73例の先天性溶血性貧血症例の検査を実施した。その結果、全体の約80%の症例に診断を確定出来た。赤芽球分化過程におけるミトファジー関連遺伝子の発現変動を検討するため、iPS細胞を用いた分化誘導系を確立した。末梢血単核球より抗CD3抗体およびIL-2存在下で増幅したTリンパ球にセンダイウイルスを用いてリプログラミング4因子を導入した。得られたiPS細胞の品質評価のために、フローサイトメトリー解析および免疫蛍光染色により多能性マーカー発現に問題がないことを確認した。iPS細胞の赤芽球への分化誘導は、次のように2段階の方法で行った。1)胚様体形成法によりCD34陽性未分化造血細胞を分化誘導した。2)分離したCD34陽性細胞をサイトカインの存在下でさらに培養し、CD235a陽性細胞を得た。CD235a陽性細胞の発現遺伝子をSurePrint 3G Human GEマイクロアレイ(アジレント社)で検出し、GeneSpring GX 14.5ソフトウェアを用いて解析した。以上より、原因未確定の先天性溶血性貧血症例に対する変異解析の対象とするミトファジー関連遺伝子は、上記4種類の遺伝子とすることに決定できた。今後、遺伝子変異スクリーニングで候補遺伝子変異を同定出来た場合、正常iPS細胞へのゲノム編集により患者遺伝子変異を導入し、確立した赤芽球への分化誘導系により、変異の意義を検討することが可能になると考えられた。iPS細胞から赤芽球系への分化誘導系を確立し、遺伝子発現解析が可能になった。現在先天性溶血性貧血関連67遺伝子のターゲットシークエンシング解析を実施しているが、H28年度の研究成果により、今後ミトファジー関連遺伝子4種を追加する方針を決定することが出来た。成熟赤血球における残存ミトコンドリア、ミトコンドリア膜電位差およびオートファジーマーカーLC3の解析に関しては、機器の老朽化による測定不良で条件検討が遅れている。原因不明の溶血性貧血を対象に赤血球膜異常症、赤血球酵素異常症、ヘモグロビン異常症のスクリーニング検査を実施した。2016年2017年に解析した症例は1歳未満が36例、1歳以上が100例であり、そのうち診断を確定し得たのは1歳未満が19例(53%)、1歳以上が84例(84%)で、新生児から乳児期の先天性溶血性貧血に関しては診断率が低いことが明らかになった。我々は口唇赤血球症の一型である脱水型遺伝性有口赤血球症(dehydrated hereditary stomatocytosis; DHSt)の迅速診断法としてフローサイトメトリーによる定量的赤血球浸透圧脆弱性試験(FCM-OF)が有用であることを明らかにした。今回検討した1歳未満の先天性溶血性貧血36例中7例(19%)にはFCM-OFの異常高値が認められたため、そのうちの3例に対してDHStの病因遺伝子であるPIEZO1、KCNN4を含めた溶血性貧血関連68遺伝子を対象にしたTarget-captured sequencing(TCS)解析を実施したが、対象にした3症例にはPIEZO1/KCNN4を含めて溶血性貧血関連遺伝子に変異は同定出来なかった。

現在FCM-OFで異常高値を呈した7例をフォローアップしているが、1歳を過ぎてから溶血所見が自然軽快している例が認められたことから、FCM-OF高値の7症例は、Infantile pyknocytosis(IP)に分類されると考えている。IPは新生児乳児期の原因不明先天性溶血性貧血の10%程度に認められる一過性の溶血性貧血であり、脱水を来した奇形赤血球(piknocyte)の存在が特徴である。今回の検討により、FCM-OFがIPの診断マーカーとなり得ることが示唆されたため、今後も先天性溶血性貧血の病因スクリーニングには、FCM-OFとTCS解析が必須と考えられた。iPS細胞樹立を担当する予定であった分担研究者が移籍のため共同研究の遂行が不可能となり、ミトファジー関連遺伝子変異を同定した3症例からのiPS細胞が得られていない。末梢血における赤血球ミトコンドリア数およびミトコンドリア機能の定量に関しては、正常対照を用いた基準値作成が進行中であり、次年度からは原因不明の先天性溶血性貧血症例を対象とした検討が可能な状況になっている。ミトコンドリア膜電位差の検討、オートファジーマーカーLC3の検出は未だ基礎的な検討が出来ていない。赤血球分化成熟を制御する転写因子KLF1は、赤芽球系細胞において細胞周期制御遺伝子の発現を微調整する重要な機能を有していて、最終分化と脱核の制御にも関与している。先天性赤血球形成異常性貧血(CDA)IV型は、KLF1の2番目のZnフィンガーのヘテロ接合変異によって引き起こされる(c.973G> A、p.E325K)事が海外の症例で報告されていた。我々は最近、同一のミスセンス変異を有するIV型CDAの日本人女性患者を診断した。KLF1変異によって引き起こされる赤血球形成異常のメカニズムを理解するために、我々はCDA患者からiPS細胞(KLF1-iPSC)を生成した。KLF1-iPSCからin vitro分化誘導した赤芽球系細胞(KLF1-Ebl)は患者骨髄中赤芽球と同様の多核を示し、CD44発現低下、およびKLF1標的遺伝子発現の調節異常を示した。さらに、KLF1-Eblによるブロモデオキシウリジンの取り込みは、CD235a +/ CD71+段階で有意に減少し、マイクロアレイ分析は、CDKN2CおよびCDKN2Aなどの負の調節因子の発現の増加と共に、種々の細胞周期調節遺伝子に発現異常を認めた。KLF1_E325Kの誘導性発現はKLF1-EblにおいてG1期で細胞周期停止を引き起こした。KLF1-Ebl網羅的遺伝子発現レベルの解析では、EPB41、EPB42、GPI、GSRなど複数のKLF1標的遺伝子の発現低下が明らかになった。我々のデータは、KLF1のE325K変異が赤血球膜または酵素異常と関連して細胞周期調節因子の転写制御の破綻と関連していることが明らかになった。ミトファジー関連遺伝子を含む先天性溶血性貧血関連74遺伝子パネルを用いた次世代シークエンシング解析を続けているが、今年度はミトファジー異常による新規の先天性溶血性貧血症例を診断することが出来ず、研究計画に提示したスクリーニング方法の見直しが必要と考えている。先天性溶血性貧血の特殊検査受託例を更に増やすと同時に、原因未確定例を対象としたターゲットシークエンシングを開始する。フローサイトメーターについては既にメンテナンスが終了している機器のため、早期に機種変更して、予定通りに研究を進めていく予定である。
表面配位不飽和空間を利用した配位高分子ナノ結晶の物性及び形態制御

配位高分子結晶の一つであるプルシアンブルー(PB)及びその誘導体(PBA)ナノ結晶に注目して研究を進めた。PBは、エレクトロクロミック素子、二次電池、酸化還元触媒、グルコースセンサなど、機能性材料としての研究が進められている。PB自体は、簡便・安価・大量合成できる一方で、溶媒に不溶であったことが、その実用化研究の大きな障害となっていた。本特定領域研究において、我々は、PBが1020nm程度のナノ微粒子の凝集体であることを初めて報告した。配位高分子結晶の表面には、活性な配位不飽和サイトが存在している。一つは他の配位子や金属錯体(または錯イオン)が配位(交換)可能なFe-OH^2サイト、もう一つは他遷移金属イオンが配位可能なFe-CNサイトである。ナノサイズの結晶では、その結晶表面の配位不飽和サイトの結晶全体に占める割合が極めて大きいため、その配位飽和サイト、つまり、配位高分子ナノ結晶の結晶表面に広がる配位空間を新しい反応場として利用することで、ナノ結晶の物性制御など新しい機能化が可能であると考えられる。Fe-OH^2サイトを利用しアルキルアミンで結晶表面修飾を行うと、PBのナノ微粒子個々は、その凝集状態が解かれ、トルエンなどの有機溶媒に安定に分散することが明らかになった。また、フェロシアン化イオンを修飾することで、水やアルコールに安定に分散するPBナノ微粒子を得ることに成功した。PBのみならず、NiやCoから構成されるPBAからも同様な表面修飾により、安定なナノ微粒子の有機溶媒・水分散液を作製することにも成功した。ナノ微粒子分散液の高速遠心分離により、粒子径分画が可能であることも分かった。配位高分子結晶の一つであるプルシアンブルー(PB)及びその誘導体(PBA)ナノ結晶に注目して研究を展開した。PBは、エレクトロクロミック素子、二次電池、グルコースセンサなど、その実用化研究が進められている。PB pigmentは、簡便・安価・大量合成できる一方で溶媒に不溶であるため、その機能化の研究が断念されてき。本研究において、我々は、PB pigmentが1020nm程度のナノ微粒子の凝集体であることを発見した。一つは他の配位子や金属錯体(または錯イオン)が配位(交換)可能なFe-OH_2サイト、もう一つは他遷移金属イオンが配位可能なFe-CNサイトである。Fe-OH_2サイトを利用しアルキルアミンを用いて結晶表面修飾を行うと、PB pigmentのナノ微粒子個々は、その凝集状態が解かれ、トルエンなどの有機溶媒に安定に分散することが明らかになった。このナノ微粒子分散液を使ってスピンコート法により、ITO電極上にPB薄膜の作製に成功し、ITO上のPB薄膜は極めて良好なエレクトロミック挙動を示すことを明らかにした。PBのみならず、NiやCoから構成されるPBAからも同様な表面修飾により、安定なナノ微粒子の有機溶媒分散液を作製することにも成功した。PB、Ni-PBA、Co-PBAはそれぞれ、青、黄色、赤色のナノ微粒子分散溶液を与えることから、フルカラー表示が可能なエレクトロクロミック素子の開発が期待できる。