hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
東アジア地区に多発している鼻腔NK/T細胞リンパ腫の分子病理学的・疫学的研究

遺伝子変異は5%と北京例に比べて有意に低い。k-ras遺伝子変異は5%、β-catenin変異は30%にみられた。以上述べた如く、鼻腔NK/T細胞リンパ腫の癌遺伝子、癌抑制遺伝子変異の頻度およびそのパターンには地域間で相違がみられるようである。現在、更に韓国およびインドネシアの症例について追加検討中である。2.鼻腔NK/T細胞リンパ腫の家族内発生について(研究発表6)沖縄の父子に発生した本疾患を報告した。本疾患は東アジア地区においても頻度の低いものであり、家族内発生は文献上最初のものであった。この父子はいづれも同じビニールハウスで大量の農薬を使用して野菜の栽培をしていたのが際立った特徴である。1、2に述べた成果を基盤として、農薬を含む生活環境要因と本疾患発生の関係を調べるためのアンケート用紙を作製し、本邦の10大学、3病院、韓国の2大学、中国の1大学での疫学調査を開始している。3.その他(1)鼻腔NK/T細胞リンパ腫患者とHLA(研究発表4)本疾患はEBV陽性であり、潜伏感染遺伝子の一つであるLMP-1を発現する。LMP-1は宿主のcytotoxic T-lymphocyte(CIL)のターゲットとなるが、その際HLA dass I分子のA2,11がCIL反応の効果的な誘導に必要であることが分かっている。そこで本疾患患者におけるHLAA2,11の頻度を本邦の健常人と比較したところ、HLAA0201の頻度が患者では有意に低いことが判明した。このことはHLAA0201拘束性のCIL反応が本疾患の発生を抑えていることを示唆するものであった。(2)鼻腔NK/T細胞リンパ腫におけるFas変異(研究発表8)Fasはアポトーシスシグナルを伝達する細胞表面レセプターである。Fas遺伝子の変異を14例の本疾患で調べたところ、7例に変異(4例はフレームシフト、2例はミスセンス、1例はサイレント)を認めた。マウスT細胞リンパ腫細胞にこの変異FAS遺伝子(フレームシフト)をトランスフェクトしたところ、Fas抗体によるアポトーシス誘導に抵抗性となった。以上の所見によりFas遺伝子変異によるlympholdoellの蓄積が本疾患の発生の基盤となっていることが示唆された。1.本邦(大阪,沖縄),中国(北京,成都)の鼻腔NK細胞リンパ腫につき、癌抑制遺伝子であるp53をPCR-SSCP法・ダイレクトシークエンス法により検討したところ、48%の症例に遺伝子変異を認めた。変異率は中国例において最も高く、大阪例では低かった。尚、全ての症例はEBウィルス陽性であった。2.本邦(大阪)および中国(北京,成都)の鼻腔リンパ腫につき、e-kit癌原遺伝子の変異を検討した。中国例では約70%の症例に変異を認めたが、本邦例では20%に陽性であり、地域差が明らかであった。以上の所見より、本邦と中国の症例では遺伝子変異率に明らかな差がみられたことから、異なる病因の存在が示唆された。鼻腔NK/T細胞リンパ腫は鼻腔を中心とする上気道に壊死性、肉芽性病変をきたす致死性疾患である。これまでの私共の疫学調査により本疾患は日本、韓国、中国を中心とする東アジア地区に多発していることが判明している。とりわけ韓国での発生は高く、本邦、中国の約8倍に達している。一方、本疾患はほぼEpstein-Barr(EB)ウィルス陽性であり、これは日本、韓国、中国例のいづれにおいてもそうである。
弱毒化サルモネラを担体とした経口ワクチンによる細胞性免疫の誘導

平成13年度、Salmonella typhimuriumのストレス応答プロテアーゼの病原性に及ぼす役割を解明し、その欠損株がワクチン担体として利用できることを明らかにした。すなわち、S. typhimuriumのストレス応答プロテアーゼは種々の病原遺伝子の発現を調節しており、clpPX及びIon欠損変異株は経口感染マウスにごくわずかな量持続的に感染する。しかし病原性は極めて低くマウスの体重増加などに全く影響を及ぼさなかった。そこで平成14年度、clpPXあるいはIon欠損変異株をマウスへ経口接種し、持続的にマウスのサルモネラに対する免疫応答を解析した。どちらの株においても接種マウスの血清中のLPS特異的IgG量の増加は接種後4週から顕著となり24週でも高い価を持続していた。胆汁中のLPS特異的IgA量は1週から段階的に増加し、4週でピークとなり24週でも高い価を持続していた。そこで4週と24週で強毒株で攻撃したところ免疫していないマウスは感染後1週間以内に全て死亡したが、免疫マウスは全て生存した。次に攻撃後5日でパイエル板、腸間膜リンパ節、脾臓、盲腸での菌数を測定したが、興味深いことに免疫マウスでは全ての組織から強毒株もワクチン株も検出されなかった。ワクチン株の経口接種とその後の強毒株の攻撃により血中のLPS特異的なIgG1量の増加は認められなかったが、IgG2a量の増加が認められた。また同時に脾臓でIFN-γ遺伝子の発現量の増加とIL-4遺伝子の発現量の減少が認められた。以上の結果よりclpPX及びIon欠損変異株は1回の経口接種により防御抗原特異的な強力な体液性免疫と細胞性免疫が誘導できワクチンおよびワクチン担体としての応用が可能と考えられた。本研究は次の2段階に分かれる。(1)抗原遺伝子の高発現系を遺伝子操作により弱毒化したサルモネラに導入しワクチン株を作製する。(2)作製したワクチン株をマウスへ経口投与することにより、効率良く細胞性免疫を誘導させる。サルモネラベクターは腸管粘膜を刺激し、菌より産生した抗原蛋白質のエピトープがT細胞に提示され、免疫系が誘導される。本年度はSalmonella typhimuriumのストレス応答プロテアーゼの病原性に及ぼす役割を解明し、その欠損株がワクチンベクターとして利用できることを明らかにした。すなわち、S.typhimuriumのストレス応答プロテアーゼは種々の病原遺伝子の発現を調節しており、clpPX及びlon欠損変異株は経口感染マウスにごくわずかな量持続的に感染する。しかし病原性は極めて低くマウスの体重増加などに全く影響を及ぼさない。in vitroの解析からclpPXを欠損した株はhyperflagellation(多鞭毛菌体)となり、lon欠損株はfilamentous cell(糸状菌体)を形成し通常の菌体の50倍にも膨張する。両変異株とも腸管上皮細胞への侵入性は野生株より増加するが食細胞に対する抵抗性が低下しているため生体内で増殖できない。我々が見出したclpPX及びlon欠損変異株はこれまで報告されているサルモネラベクター株に比較して単に弱毒化しているだけでなく、菌体の構造、分泌蛋白質、上皮細胞への侵入性等に既存の弱毒株には見られない非常にユニークな特徴を持っている。昨年度、Salmonella typhimuriumのストレス応答プロテアーゼの病原性に及ぼす役割を解明し、その欠損株がワクチン担体として利用できることを明らかにした。

すなわち、S. typhimuriumのストレス応答プロテアーゼは種々の病原遺伝字の発現を調節しており、clpPX及びlon欠損変異株は経口感染マウスにごくわずかな量持続的に感染する。しかし病原性は極めて低くマウスの体重増加などに全く影響を及ぼさなかった。そこで本年度、clpPXあるいはlon欠損変異株をマウスへ経口接種し、持続的にマウスのサルモネラに対する免疫応答を解析した。どちらの株においても接種マウスの血清中のLPS特異的lgG量の増加は接種後4週から顕著となり24週でも高い価を持続していた。胆汁中のLPS特異的lgA量は1週から段階的に増加し、4週でピークとなり24週でも高い価を持続していた。そこで4週と24週で強毒株で攻撃したところ免疫していないマウスは感染後1週間以内に全て死亡したが、免疫マウスは全て生存した。次に攻撃後5日でパイエル板、腸間膜リンパ節、脾臓、盲腸での菌数を測定したが、興味深いことに免疫マウスでは全ての組織から強毒株もワクチン株も検出されなかった。ワクチン株の経口接種とその後の強毒株の攻撃により血中のLPS特異的なlgG1量の増加は認められなかったが、lgG2a量の増加が認められた。また同時に脾臓でIFN-γ遺伝子の発現量の増加とIL-4遺伝子の発現量の減少が認められた。以上の結果よりclpPX及びlon欠損変異株は1回の経口接種により防御抗原特異的な強力な体液性免疫と細胞性免疫が誘導できワクチンおよびワクチン担体としての応用が可能と考えられた。
神経変性疾患におけるユビキチンプロテアソーム系の関与の解明

ユビキチンプロテアソームタンパク質分解系(UPS)を運動ニューロン特異的に欠損する遺伝子改変マウスを樹立した。このマウスは8週齢以降に振戦様の症状と運動能力の低下を認めた。神経病理学所見では、運動ニューロンにALS病因たんぱく質FUSの蓄積やTDP43の細胞質内封入体形成が認められた。以上より運動ニューロン特異的UPS欠損マウスはALSモデルとしての病態解明への応用が期待できる。パーキンソン病・アルツハイマー病・ハンチントン病・筋萎縮性側索硬化症など多くの神経変性疾患は異常タンパク質の蓄積に起因するコンフォメーション病と考えられている。さらに異常タンパク質蓄積の原因として、タンパク質分解障害が示唆されている。今回の研究において、我々は主要な異常タンパク質分解経路の一つであるユビキチンプロテアソームシステム(UPS)で、タンパク分解を担っている26SプロテアソームのサブユニットであるRpt3を部位特異的に欠損させるマウスを作製した。本研究は、神経特異的26Sプロテアソームノックアウトマウスが、神経変性疾患モデルとなりうるかどうか検証することを目的とした。Cre-loxPシステムを用いて、26Sプロテアソーム構成ユニットの一つであるRpt3にloxP配列を導入したマウス(floxed Rpt3マウス)を作製した。作製したfloxed Rpt3マウスへ運動神経特異的にCreを発現するVAChT-Creマウスとの交配を行い、産仔が正常に出生することを確認した。運動機能解析を行ったところ、8週齢において、前肢・後肢の握力測定、順方向のみのロタロッド測定ではコントロールと比較して差は認められなかったが、逆回転を含むロタロッド測定において、コントロールと比べて差が認められた。またコントロール群と比較して体重は減少傾向を認めた。8週齢以降のマウスにおいてコントロール個体と比較して異常なLimb Clasp反射を示し、運動ニューロン特異的なプロテアソームノックアウトで運動ニューロン変性が生じることが強く示唆された。主たる蛋白分解経路の一つであるユビキチンプロテアソーム系(UPS)は、それに関連する蛋白質の異常が多くの神経変性疾患において報告されており、神経変性疾患の有力な病因仮説の一つとして挙げられている。本研究において我々は、運動ニューロン特異的に組換え酵素であるCreを発現するVAChT-Cre. Fastマウスと、独自に作製した26Sプロテアソームの19S複合体部分のサブユニットRpt3をCre認識部位であるlox配列で取り囲んだfloxed-Rpt3マウスを掛け合わせることによって、筋萎縮性側索硬化症の標的部位となる、運動ニューロン特異的にプロテアソームサブユニットRpt3をノックアウト(KO)したマウスを作製した。VAChT-Cre-Fastマウスは生後5週までに40-70%の運動ニューロンにCreが発現する。運動ニューロン特異的Rpt3-KOマウスでは8週齢以降に振せん症状を呈し始め、12週より、下肢の運動機能低下が出現し、20週までは急速に、40週までは緩徐に進行することが確認されている。病理解析として、運動ニューロン特異的にRpt3の減少とともにユビキチンの蓄積が認められており、Rpt3の減少に伴うUPS破綻を示す結果を得た。つまり、UPS破綻に伴う蛋白質分解経路の異常は、進行性の行動異常を伴った神経変性疾患様症状を呈した。現在、引き続き本作製運動ニューロン特異的Rpt3-KOマウスを用いて、詳細解析を進めており、ALS病因因子やその他の蛋白分解系の動態を含め、検討を行っている。運動ニューロン疾患におけるタンパク分解に重要なプロテアソーム活性低下の意義を明らかにするため、昨年度までに運動ニューロン特異的にプロテアソームサブユニットRpt3をノックアウト(KO)したマウスを作製した。交配に用いたVAChT-Cre-Fastマウスは生後5週までに40-70%の運動ニューロンにCreが発現する。このCreの働きによって、運動ニューロン特異的にRpt3を欠損させる。この運動ニューロン特異的Rpt3-KOマウスでは、8週齢以降に振せん症状を呈し始め、12週より、下肢の運動機能低下が出現し、20週までは急速に、40週までは緩徐に進行することが確認されている。また、運動機能解析法の一つである、ロタロッド解析においても、12週以降より運動機能が低下していくことを確認した。6週、12週、40週で神経病理学的解析を行っており、6週の段階でRpt3の減少とともに分解シグナルであるユビキチンの蓄積を確認した。また、神経変性進行段階である12週において孤発例からALSの病因子の一つとして同定されたTDP43の蓄積、リン酸化および封入体を確認した。その他の病因子であるFUS、Optineurinの蓄積も認められた。さらに、この進行に伴い、運動ニューロン数の段階的減少を確認した。本マウスを用いることで、プロテアソームを介したタンパク分解系がALSにおいて深く関与していることを示唆した。

一方、我々はメダカの脳脊髄液には薬物注入が容易に行えることに着目し、プロテアソーム阻害薬、リソソーム阻害薬、小胞体ストレス誘発薬を注入したところ、いずれの場合も、ユビキチン化され、ときにはシヌクレインも含む封入体形成を伴う黒質ドパミンニューロン細胞死を観察した。このことより、タンパク質分解系の障害がパーキンソン病の発症に関与することが示唆された。
自閉症特性における広域表現型(BAP)を考慮した支援のあり方に関する研究

本研究は、自閉スペクトラム症(ASD)児を持つ養育者に「安心感の輪」子育てプログラム(Circle of Security Parenting Program; COS-P)を実施することで、子どもの行動への理解及び養育者自身の心身状況に変化が見られるかを検討した。COS-P実施前後に質問紙に回答した31名の養育者のデータを解析した結果、子どもの行動を非活動的で一人を好むといった内向的側面としてとらえていた傾向が減少したとともに、子育て困難感の減少、乳児期の子どもの行動理解の促進が示唆され、加えて養育者自身のうつ傾向の改善が示唆された。ASD特性により養育者がとらえにくくなっていた子どものアタッチメント行動様式への理解が深まったことに伴い、子どもの行動のリフレーミングが示唆される。それに伴い、自身の子育てへの負担感やイライラといった困難感の減少とともに、自信につながったことが示唆される。加えて、全31組の親子の中から、養育者に自閉症広域表現型(Broad Autism Phenotype; BAP)が見られる親子2組、子どもの知的障害の程度がより重く言語未出の親子2組、養育者にBAPは見られず子どもも言語的コミュニケーションが可能な親子2組をそれぞれ抽出し、実施前後に測定した親子の自由遊び場面のビデオデータを観察指標により分析した。サンプル数の少なさや、群ごとの行動の生起回数に変動が見られたため、統計的に有意な差が認められたたわけではなかったが、全般的に養育者が子どもや子どもの操作する物に視線を向ける行動は増加していた。子どもの行動を見ると知的障害の重い子どもを除いて、養育者や養育者の操作する物に視線を向ける行動は増加していた。加えて子どもが養育者に快の情動を示す行動も増加していた。このように養育者と子どもの非言語的コミュニケーションにおいてプログラムの効果が示唆された。今後プログラムの効果検証を行うためのデータの蓄積が得られた。データ収集が終了し、今後は結果をもとに自閉症特性における広域表現型を考慮した養育者へのプログラム適用に必要な枠組みを提示すべく、最新の研究動向のレビューと合わせて精査し、得られた結果を取りまとめ、成果の発表を行う。自閉症スペクトラム障害(Autism Spectrum Disorder; ASD)の子どもを持つ養育者の自閉症広域表現型(Broad Autism Phenotype; BAP)の特性を抽出、検討することを目的に、予備分析として半構造化面接内容分析を行い、検査者とのやりとり場面の分析を行った。対象者は19名のASD児の父母であった。やりとりの特徴の分析において参照した自閉症診断に用いられる半構造化面接の下位項目を検討した結果、コミュニケーション領域で多数の人にスコアがついたものとして「相手に関する情報を要求するか否か」(63.2%)「協調された身ぶりや感情的な身ぶりが見られるか」(57.9%)があげられ、社会的相互作用領域では、「他人の感情についての共感を示すか否か」68.4%)、「自身に関する洞察」と「自身の感情を伝達するか否か」(63.2%)、「他者に多様な表情が向けられているか」(57.9%)などがあり、こういった側面においてやりとりの特徴がみられた。BAPとは自閉症様の特性と質的に類似する特性を有するものの、閾値下である場合に用いられる概念であり、1名を除いた18名は自閉症スペクトラム障害と判断される得点とはなっていない。その一方で、コミュニケーションや社会的相互作用において上記のような特徴を有することが明らかとなり、自身について情報発信する際や相手からの情報提供に対しての言語的・非言語的反応が乏しい傾向が示唆された。支援を行う際には、やりとりにおいてどのように自分に関する情報を発信するか、また相手から発信された情報の読み取り方について具体的に提示することが求められる。今後は自閉症診断に用いられる半構造化面接だけでは拾いきれないBAPの特徴を抽出するために、修正版人格測定票改訂版(Modified Personality Assessment Schedule Revised; MPASR)など、BAPの人々の特徴を精査する面接法を臨床群と定型群に対して用いて検討する。次にASD児とその養育者との関係性構築を検討することを目的として、アタッチメント理論に基づいて開発されたCircle of Security Parenting(COSP)集団子育てプログラムを就学前後のASD児の養育者に施行し、その効果測定を行うための質問紙および親子遊び場面の行動観察をプログラム前後に実施した。本年度はCOS本部から許可を得てバックトランスレーション作業を行ったParent Feedback Questionnaire(PFQ)をあわせてプログラム評価に用いた。本年度は計8名に対し2時間セッション8回を実施した。BAPQ-Jにおける全体得点のカットオフ得点を超えた者は3名おり、PFQではプログラム全体評価として5.4(6段階評定)、子育てへのストレス軽減度は2.6(3段階評定)、子どもとの良好な関係性構築は2.9(4段階評定)であり、一定の効果が示唆された。関係性に関してはより長期的な経過を考慮する必要性が考えられる。来年度以降もCOSPを実施し、データ収集を継続する。自閉症スペクトラム障害(ASD)の子どもを持つ養育者の自閉症広域表現型(Broad Autism Phenotype; BAP)の特性を抽出することを目的とした研究では、修正版人格測定票改訂版(MPASR)の臨床群4名への半構造化面接および質問紙調査を行った。加えて社会的やりとりの質や言葉の使い方を測定する観察評定尺度(PRS)を実施した。MPASRによる自身の特性の解析からは、他者に対する打ち解けなさや敏感さの欠如への自覚が主として認められた。

PRSにおける検証結果からは会話のキャッチボールのできなささの背景には、検査者の質問に対して的確な回答がなく、回答を得るために質問を重ねないと明確にならないという特徴が見出され、会話量に比して内容が乏しい傾向が見られた。加えて背景情報がないまま結論が述べられるなど過度に直接的であったり、簡潔な返答のみがみられる、あるいは詳細が求められる場面において、促されないと話さないといった傾向も認められた。次に、昨年度に引き続きASD児とその養育者との関係性構築支援を検討することを目的として、アタッチメント理論に基づいて開発された集団子育てプログラム「安心感の輪」子育てプログラム(COSP)を就学前後のASD児の養育者に施行し、その効果測定を行うための質問紙および親子遊び場面の行動観察をプログラム前後に実施した。本年度は計17名に対し、2時間セッション8回を実施した。本年度より、よりASDの特性が強い子どもを抱える養育者を対象に加えたところ、養育者のBAP特性、養育者自身の被養育体験に基づくアタッチメントの質という昨年度より伺われていた要因に加えて、子どもが“ASD児である"という認知バイアスが、子どもに対する養育者の養育機能に負の影響を与える可能性が参加者の語りから推察された。来年度以降もCOSPを実施し、データ収集を継続する。ASD児を持つ家族内や親族においてみられる特性であるBAPについて予備調査および本年度の調査によりある程度抽出され、子育て支援の心理教育プログラムを提供する上での工夫点を整理しつつプログラムを実施していく体制が整っている。自閉症スペクトラム障害(ASD)の子どもを持つ養育者の自閉症広域表現型(Broad Autism Phenotype: BAP)の特性として、他者との打ち解けなさや言葉の独特の使用、融通のきかなさ等があげられる。こうした特性を有する場合、心理教育プログラムの提供のあり方にも工夫が求められることとなる。本研究ではASD児とその養育者との関係性構築支援を検討することを目的として、アタッチメント理論に基づいて開発された集団で実施する心理教育プログラム「安心感の輪」子育てプログラム(COSP)を就学前後のASD児の養育者に施行し、その効果測定を行うための質問紙および親子遊び場面の行動観察をプログラム前後に実施した。本年度は1クール2名に対し、2時間セッション8回を実施した。今クールは少人数での実施であったことから、健常であってほしかったという養育者自身の思いの変遷が実直に語られることを通した養育者ー子の関係性構築の変容過程が見出され、こうした語りがプログラム前後に実施した自記式アンケートにも反映される結果となった。また養育者のBAPを考慮したプログラム提示の工夫として、概念の明確化および視覚提示の有効性が認められた。
イルハン国の交通システム

モンゴル帝国の分国であるイルハン国の君主ウルジェイトゥは、国都をタブリーズからスルターニヤに遷すとともに、都と地方を結ぶ5本の公道、所謂シャーラーフを整備した。本研究は、これら5公道の機能を国事に関わる使者の旅行、国際交易商品の運送、遊牧民である支配者一族の移動経路、メッカ巡礼路等の諸視点から解明した。1)イルハン国の国道(シャーラーフ)に関する基本文献であるムスタウフィー・ガズヴーニーの『心魂の歓喜』「地理誌」のスルタニエ・タブリーズ間である北王道部分を刊本および写本写真版によって訳出し、これまでに行われた翻訳(英訳とロシア語訳)と比較した。アルメニア、アゼルバイジャン、イランの歴史地名、現代地名との対比を行い、文字の異同によって写本・刊本のテキストからは確認できない地名を推定することができた。2)ムスタウフィー・ガズヴーニーの活動に関わるイラン史研究家ウラディミール・ペトルーシェフスキイーの論文「13-14世紀イランの都市貴顕」(ロシア語)を訳出した。都市と都市を結ぶ街道運営には、都市共同体および都市貴顕出身のイラン人官僚の活動の重要性を改めて確認することができるが、この論文の中心は、スルタニエ・タブリーズ街道の1中心都市ガズヴィーンである。また、ペトルーシェフスキーが用いることのできなかった史料によってタブリーズの都市権門の一部をリスト化した。3)イスラーム教聖職者の動向に関しては、イブン・アル・ファウティーの人名辞典によって、北王道が走る北西イランにかかわり、イルハン国宰相ジュヴァイニー家、ラシード家との関係に関する個人名と活動地点を抜き出した。4)イルハン国の交通システムに関する実地調査資料であるイラン調査スライド(約1万枚)を作業上に設置した。シャーラーフと対応可能なものを選び出す作業に着手した。また、近年イランやアゼルバイジャンで関心を持たれているバーバクの山城など部分的に主題別アルバムをインターネットで公開する作業を開始した。1.ガズヴィーニー著『心魂の歓喜』「地理編」中の「シャーラーフ」関連部分とラシードッディーン著『集史』「ガザン・ハン紀」の駅逓制改革に関わる部分を対照し、イルハン国では最も重要な街道であるアーザルバーイジャーンとホラーサーンの間の公的使者(イルチ)特に緊急使者の往来について明らかにした。2.旧イラン陸軍編、アダメッツ編の地名辞典およびデフホダー・ペルシャ語辞典などにより、今日もイラン各地に「ヤーム」、「ヤームハーネ」などの地名が残ることを明らかにした。しかし、後代にもヤムチ制は残された。時代ごとにヤーム制を分析し、モンゴル帝国期に留まらず、西アジア中世史全期間の交通システムを解明する必要があることが分かった。3.イルハン国後期のシャーラーフ制には、駅逓としての「リバート」が重要であることが解明された。これは語義的には「ジハードの基地」・「スーフィーの道場」であるが、この時代のものは宮廷有力者や都市貴顕の資産運用上の施設としての意義が認められた。4.研究実施に当たっては、文献史料にのみよるのではなく、手持ちの現地調査スライド写真を使用した。当該年度は、特に、南西イランの諸地方に関して『ザグロス地方の史跡』を「eラーニング」教材として作成した。新学期までにアップリンクする手順である。(1)婚姻を通じて、イルハン家と強い関係を持つようになったファールス・サルグル朝、ケルマーン・カラキタイ朝等の領地や直轄地があった南イランや直轄地イスファハン地方を通過するシャーラーフの経路と今日残されているキャラヴァンサライや橋梁、給水施設などの遺跡分布の一致はイルハン国にとって、インド洋航路の港湾に接続する街道が重要であることを証明するものである。また、南イラン・ファールス地方踏査資料(写真・地図など)を利用して行うた、地政学的にイルハン国に類似するササン朝の遺跡分と交通地理上の考察によっても、このルートの重要性を確認することができた。(2)シャーラーフの諸街道の内、イルハン国の首都スルターニヤからアナトリアのカイサリヤにいたり、枝道によって黒海と地中海の港湾と連続する西王道の経路と駅逓の所在地を確定することが出来たが、更にこれは近世以降の主要東西交通ルートとも、アッバース朝のとも異なる独特のシステムであることを明らかにした。(3)イルハン国の財政に大きな寄与をしたイタリア商人の一人ペゴロッティの著した『商業指南』の中に見られるシヴァス(アナトリア)とタブリーズ(北西イラン)間の経路と宿泊地点のほぼ全てを解明する事が出来たが、イタリア商人の交通路はイルハン国官僚や諸王家使臣の旅行とは異なり、キャラヴァンサライの利用を絶対の条件とはせず、速度を重視した経済的に合理的なものであることが判った。
腎不全の副甲状腺 Ca-sensing receptor 発現を規定する因子の検討

8週後、non-DM群はDM群に比し、体重、血清Alb値は有意の高値を示し、血糖値はDM群で有意に上昇していた。血清P値は高P食群で高値の傾向を示したが、有意な変化ではなかった。腎機能、血清PTH値には4群間で差はみられなかった。血清1,25(OH)2VD3(VD)値はDM群で低下し、DM-PはDMに比し有意な低値を示した。4週後屠殺し、採血、副甲状腺摘除術を行った。血液生化学検査はNx、Nx-P群(腎摘群)でN、N-P群(腎機能正常群)に比して、有意にBUN、SCrは高値を示し、腎不全状態であった。また、高P食群(N-P、Nx-P群)では、高P血症を示した。血中PTH値は腎摘群で有意に上昇し、血中1,25D3値は有意に低下した。腎摘群、腎機能正常群とも高P食により、血中PTH値は上昇傾向、血中1,25D3値は低下傾向を示したが有意ではなかった。副甲状腺での増殖因子の検討では、各群ともKi-67、PCNA陽性細胞数には差は認められなかった。TUNEL法によるapoptosisに関する検討でも、明らかな差はみられなかった。これまでの検討から副甲状腺CaR発現には血中1,25D3値が重要な役割を果たしていることが示唆されたため、今後腎摘群に1,25D3投与時の副甲状腺CaR発現の変化の検討が必要である。
脳主幹動脈閉塞性病変による貧困灌流の新たな非侵襲的画像診断法の開発と臨床応用

慢性脳主幹動脈閉塞狭窄性疾患の再発リスク予測のために広くPET,脳血流SPECT検査が行われているが、これらは特殊な設備・薬剤を必要としたり、薬剤(造影剤、アセタゾラミド)使用に対する副作用等が問題として挙げられている。そのため、非侵襲的な新たな脳循環代謝測定の開発が望まれるところであった。今回、脳循環測定のgold standardであるPET、脳血流SPECTを指標として、3T-MRSを用いた脳温測定、3T-MRIを用いた磁化率画像、イオマゼニールSPECT測定によって脳循環代謝測定を行い、その精度確認及び実臨床における使用の可能性について研究した。脳主幹動脈慢性閉塞狭窄性病変を持つ症例に対して、ガスPETによる脳酸素抽出率画像、3テスラMRIによる脳温度画像、3テスラMRSによる還元ヘモグロビン濃度画像、脳SPECTによるベンゾジアゼピン/脳血流画像、アセタゾラミド負荷脳血流SPECTの全てを、頸部頸動脈狭窄症例40例、頸部頸動脈狭窄症例以外の脳主幹動脈狭窄症例30例に行った。これらから得られたデータから病側大脳半球の脳酸素抽出率と脳温度画像、還元ヘモグロビン濃度、ベンゾジアゼピンレセプター/脳血流日との相関を解析、貧困還流を表す脳酸素抽出率の上昇の検出精度を算出している。この3つの方法論による貧困灌流測定精度とアセタゾラミド負荷脳血流SPECTと安静時脳血流SPECTから求められる脳循環予備能による貧困灌流診断精度とを比較している。最後に前述の3つの方法論の値と、頸部内頚動脈狭窄症に対する頸部内頚動脈血栓内膜摘出術周術期合併症の発生の有無とを比較し、その予測精度とを比較している(前述のものは平成26年度前半までデータ収集を行い、症例数を積み重ねてからデータ解析を行う予定である)。これまでに収集した検査データに基づいて解析を試行してみた所、ガスPETによる脳酸素抽出率を貧困灌流のゴールデンスタンダードとすると、他のいずれの検査法でもガスPETと有意な相関を認めており、新たな非侵襲的画像診断法が、貧困灌流検出予測に有用となるとみられる。脳主幹動脈慢性閉塞狭窄性病変を持つ症例に対して、ガスPETによる脳酸素抽出率画像、3テスラMRIによる脳温度画像、3テスラMRSによる還元ヘモグロビン濃度画像、脳SPECTによるベンゾジアゼピン/脳血流画像、アセタゾラミド負荷脳血流SPECTの全てを、対照正常者10例、頚部頚動脈狭窄症例45例、頚部頚動脈狭窄症例以外の脳主幹動脈閉塞狭窄症例40例に行った。これらから得られたデータから、病変側大脳半球の脳酸素抽出率と脳温度画像、還元ヘモグロビン濃度、ベンゾジアゼピンレセプター/脳血流比との相関を解析、貧困還流を表す脳酸素抽出率の上昇の検出精度を算出している。この3つの方法論による貧困下流測定精度とアセタゾラミド負荷脳血流SPECTと安静時脳血流SPECTから求められる脳循環予備能による貧困灌流診断精度とを比較している。最後に前述の3つの方法論の値と頚部内頚動脈血栓内膜摘出術周術期合併症の発生の有無とを比較し、その予測精度を算出している(前述のものは全て、データ収集最中であり、平成25年度以降も症例数を積み重ねる予定である)。脳主幹動脈慢性閉塞狭窄性病変を持つ症例に対して、ガスPETによる脳酸素抽出率画像、3テスラMRIによる脳温度画像、3テスラMRSによる還元ヘモグロビン濃度画像、脳SPECTによるベンゾジアゼピン/脳血流画像、アセタゾラミド負荷脳血流SPECTのすべてを、頸部頸動脈狭窄症例30例、頸部頸動脈狭窄症例以外の脳主幹動脈狭窄症例20例に行った。これらから得られたデータから、病側大脳半球の脳酸素抽出率の上昇の検出精度を算出している。この3つの方法論による貧困灌流測定精度とアセタゾラミド負荷脳血流SPECTと安静時脳血流SPECTからも求められる脳循環予備能による貧困灌流診断精度とを比較している。最後に前述の3つの方法論の値とお、頸部内頚動脈狭窄症に対する頸部内頚動脈血栓内膜摘出術周術期合併症の発生の有無とを比較し、その予測精度とを比較した。ガスPETによる脳酸素抽出率を貧困灌流のゴールデンスタンダードとすると、他のいずれの検査法でもガスPETと非常に有意な相関を認めた。新たな非侵襲的画像診断法が、貧困灌流検出予測に有用であると考える。脳神経外科当研究は3年計画であり、当初の症例予定数は対照正常者10例、頸部頸動脈狭窄症例100例、頸部頸動脈狭窄症例以外の脳主幹動脈閉塞症例100例である。

現在の所、対照正常者10例(目標症例数の100%)、頸部頸動脈狭窄症例85例(目標症例数の85%)、頸部頸動脈狭窄症例以外の脳主幹動脈閉塞症例85例(目標症例数の85%)に目的の検査を施行済みである。研究年限は今年1年であるが、上半期に症例数を確保し、下半期にはデータ解析、及び学会・論文等で結果発表を行う予定である。当研究は3年計画であり、当初の症例予定数は対照正常者10例、頚部頚動脈狭窄症例100例、頚部頚動脈狭窄症例以外の脳主幹動脈閉塞狭窄症例100例である。現在の所、対照正常者10例(目標症例数の100%)、頚部頚動脈狭窄症例45例(目標症例の45%)、頚部頚動脈狭窄症例以外の脳主幹動脈閉塞狭窄症例40例(目標症例の40%)に目的の検査を施行済みである。研究年限はあと2年あり、今後も順調に症例数が伸びることが想定されるため、必要なデータの渉猟、解析を行うことが可能であると推測されるため。新規の脳主幹動脈慢性閉塞狭窄性病変を持つ症例に対して、ガスPETによる脳酸素抽出率画像、3テスラMRIによる脳温度画像、3テスラMRSによる還元ヘモグロビン濃度画像、脳SPECTによるベンゾジアゼピン/脳血流画像、アセタゾラミド負荷脳血流SPECTの全てを、頸部頸動脈狭窄症例15例、頸部頸動脈狭窄症例以外の脳主幹動脈狭窄症例15例に対して行う予定である。これまでに得られているデータに加えて、今後得られるデータから病側大脳半球の脳酸素抽出率と脳温度画像、還元ヘモグロビン濃度、ベンゾジアゼピンレセプター/脳血流日との相関を解析、貧困還流を表す脳酸素抽出率の上昇の検出精度を算出する予定である。この3つの方法論による貧困灌流測定精度とアセタゾラミド負荷脳血流SPECTと安静時脳血流SPECTから求められる脳循環予備能による貧困灌流診断精度とを比較している。最後に前述の3つの方法論の値と、頸部内頚動脈狭窄症に対する頸部内頚動脈血栓内膜摘出術周術期合併症の発生の有無とを比較し、その予測精度を算出する予定である。新規の脳主幹動脈慢性閉塞狭窄性病変を持つ症例に対して、ガスPETによる脳酸素抽出率画像、3テスラMRIによる脳温度画像、3テスラMRSによる還元ヘモグロビン濃度画像、脳SPECTによるベンゾジアゼピン/脳血流画像、アセタゾラミド負荷脳血流SPECTの全てを、頚部頚動脈狭窄症例55例、頚部頚動脈狭窄症例以外の脳主幹動脈閉塞狭窄症例60例に対して行う予定である。これまでに得られているデータに加えて、今後得られるデータから、病変側大脳半球の脳酸素抽出率と脳温度画像、還元ヘモグロビン濃度、ベンゾジアゼピンレセプター/脳血流比との相関を解析、貧困還流を表す脳酸素抽出率の上昇の検出精度を算出する予定である。この3つの方法論による貧困下流測定精度とアセタゾラミド負荷脳血流SPECTと安静時脳血流SPECTから求められる脳循環予備能による貧困灌流診断精度とを比較する予定である。最後に前述の3つの方法論の値と頚部内頚動脈血栓内膜摘出術周術期合併症の発生の有無とを比較し、その予測精度を算出する予定である。ガスPETによる脳酸素抽出率画像、3テスラMRIによる脳温度画像、3テスラMRSによる還元ヘモグロビン濃度画像、脳SPECTによるベンゾジアゼピン/脳血流画像、アセタゾラミド負荷脳血流SPECTを撮影する際に必要なRIトレーサー、薬品等の購入、及びデータ解析に用いるコンピューター関係の消耗品等の購入に用いる予定である。データ解析がある程度まとまった段階で学会発表当を行い、広く社会に発信する予定であり、その際の学会参会費用、旅費等として使用する予定である。
人工制限酵素CRISPR/Cas9を利用したγアミノ酪酸高蓄積トマトの育種

γアミノ酪酸(GABA)はは血圧抑制効果が期待でき、健康機能性成分として注目を集めている。GABAの代謝経路に関する研究が多数なされており、GABA合成酵素(GAD)およびGABA分解酵素GABAアミノ基転移酵素(GABA-T)が見出されてきた。GADはC末端に自己阻害ドメインを持ち、その切除の過剰発現によりGABAが高蓄積することも知られている。そこで、本研究では、ゲノム編集技術CRISPR/Cas9を用いて、GADのC末端を切除し、GABAが高蓄積するトマトを作出した。また、作出した系統のF1育種の親としての利用の可能性も評価した。GADはC末端にカルモジュリンバインディングサイトを持ち、カルシウムの結合によりGAD酵素活性を調整することが知られている。本研究では、C末端の切除を目指して、GADの高活性化及びトマトでのGABAの高蓄積を目指している。GABA合成酵素GAD2及びGAD3を標的としたCRISPR/Cas9ベクターを設計及び構築した。GAD2は、C末端側30アミノ酸残基(GAD2ΔC30)または、48アミノ酸残基(GAD2ΔC48)を標的とした。GAD3はC末端側37アミノ酸残基(GAD3ΔC37)を標的とすることとした。ベクターの設計にあたり、これらの部位で切断したGAD酵素活性がネイティブのものより上昇することを大腸菌のタンパク質発現系を用いて確認した。構築したCRIPSR/Cas9ベクターは、アグロバクテリウム法により、形質転換の容易なトマトのモデル品種へ形質転換し、T0世代をそれぞれ11(GAD2ΔC30)、11(GAD2ΔC48)、9個体(GAD3ΔC37)得た。標的部位の切断をCAPS解析及びシーケンスにより確認した。変異導入が確認できた個体が各系統GAD2ΔC30で9個体(変異導入率81.8%)、GAD2ΔC48で4個体(変異導入率36.3%)、GAD3ΔC37で9個体得られた(変異導入率100%)。標的部位により、変異導入効率が異なる可能性があることが示された。導入変異により、フレームシフトが起こりC末端側の標的部位にSTOPが挿入されているかを確認する。T0の果実についてはサンプリングずみであり、得られた導入個体がGABA高蓄積しているか確認するために、今後GABA含量を測定する予定である。T0世代で得られた変異が生殖細胞に導入された変異なのか、体細胞のみに導入された変異なのかを確認するために、T1世代で遺伝解析を行っていく予定である。GAD変異体作成及びGABA-T変異体作成のためのベクター構築を取り組むことにしていた。GADについては、GAD2及びGAD3を標的としたCRISPR/Cas9ベクターを設計及び構築した。当初計画より進んでいるといえる。当初計画ではGABA-Tもベクター構築まで進める予定であったが、所属研究室の変異体集団を用いた研究において、GABA-Tのみに変異を入れた場合には、個体の矮化及び成長異常が起きることが示された。GABAの代謝はGABA-TおよびSSADHにより行われておりシロイヌナズナを用いた先行研究では2つの遺伝子を潰した変異体において、形態異常を起こさずGABAを高蓄積することが報告されている。トマトにおいても同様な変異体を作出することを計画するなど、もう少し周辺情報を整理し当初計画を修正しつつ次年度以降にベクターの設計を行なっていきたいと考えている。γ-アミノ酪酸は,近年リラックス効果や血圧上昇抑制効果などから健康機能性成分として注目を集めている.高血圧症予備軍への血圧抑制は,薬剤投与よりも食習慣を通じて行うことが好ましい.発酵食品中にGABAが多く含まれることが知られているが,発酵食品を食する地域は限られている.このため,世界で広く利用される食物でのGABAの高蓄積が望ましい.トマトは世界中で広く利用される食物である.しかしながら,その蓄積量は十分でなくまた不安定的で,栽培条件などによって蓄積量が大きく変動することがある.GABAの蓄積量が栽培環境に作用される原因の一つにGABA生合成酵素(GAD)のC末端にある自己阻害機構の作用がある.GADはC末端が自己阻害作用をになっており,定常時にはGADの活性中心はC末端に覆われている.

C末端は,カルモジュリンバインディングサイトを含み,植物がストレスを感受する条件において,発生するカルシウムイオンがこのカルシウムカルモジュリンバインディングサイトに結合する.カルシウムの結合により,GADのC末端が変形し,自己阻害作用が崩れてGADの活性中心が現れ,GADが活性化しGABA合成が促進される.これまでの知見から,トマトにはSlGAD1からSlGAD5までの5つのGADが存在することが報告されており,特にSlGAD2及びSlGAD3がトマト果実でのGABAの蓄積に関与することが示されていた.本年度は,トマトにおけるGABAの安定的高蓄積化を目指すために,ゲノム編集技術CRISPR/Cas9を用いてSlGAD2及びSlGAD3の自己阻害機構を含むC末端領域の直前に停止コドンを挿入し,SlGAD2およびSlGAD3のC末端を除去に取り組んだ.本研究により,GABAを安定的に高蓄積するトマトを作出することができれば,高血圧症予備軍への高血圧抑制に効果が期待できる.平成27度までに,SlGAD2についてC末端側30アミノ酸残基(GAD2ΔC30)および48アミノ酸残基(GAD2ΔC48),SlGAD3について,C末端37アミノ酸残基(SlGAD3ΔC37)を標的とするCRISPR/Cas9ベクターを構築しそれぞれマイクロトムへ形質転換した.SlGAD2ΔC30,SlGAD2ΔC48, SlGAD3ΔC37についてそれぞれ11個体,11個体,9個体のT0世代を得た.標的部位について変異の導入を確認したところ,それぞれ10個体,11個体,9個体で変異の導入が確認できた.赤熟果実でのGABA蓄積量を評価したところ野生型の10倍程度高蓄積する系統を見出した.平成28年度は引き続き世代を進めてT1個体を得て遺伝型を解析し,変異ホモ系統が得た.SlGAD2を標的とした個体においては,葉におけるGABA含量が向上しており,葉が黄緑色になる,背丈の極端な矮化,結実数の極端な現象など栄養成長における生育異常が認められた. SlGAD3を標的とした個体においては,栄養成長における生育異常は認められなかった.SlGAD3において,赤熟果実におけるGABA含量を測定したところ,GABAが高蓄積する系統があった.最大で野生型の15倍の高蓄積であった.このとき,血圧上昇抑制に必要十分な量を蓄積していた.以上のことから,本研究で得られたトマトは,血圧上昇抑制に効果があると考えられる.γアミノ酪酸(GABA)は、動物、微生物、植物と広範囲に存在する。特にヒトにおいては血圧抑制効果が期待でき、健康機能性成分として注目を集めている。トマトは、野菜類の中でも特にGABA含量が高いが、食生活の中で十分効果を得られるほどの濃度ではなく、さらなるGABAの高蓄積化が求められている。これまでの研究から、GABAはグルタミンからGABA合成酵素(GAD)を経て合成され、GABA分解酵素(GABA-T)により分解されることが明らかになっている。GABAの高蓄積のためには、GADの活性化か、GABA-Tの抑制が考えられる。以前のトマト('Micro-Tom')を用いた研究では、GABA-Tの発現抑制により果実にGABAを高蓄積させることに成功したが、矮化や不稔などの異常形質も現れた。そこで、GABA高蓄積についてはGADの活性化が有効であると考えられた。植物のGADはC末端に自己阻害ドメインを有しており、GADの活性を調整している。
視覚の空間情報の再現と視線運動の発現における前頭眼野と補足眼野領域の役割分担

ゆっくり動く視標追跡に必須な滑動性眼球運動は、輻輳運動、さらに前庭入力と干渉しながら正確な眼球運動を行う。前頭葉には前頭眼野と補足眼野が滑動性眼球運動の制御に関わることが知られている。今回は訓練したニホンザルを対象とし、同一の視標追跡課題を用いて、補足眼野の滑動性眼球運動関連ニューロンの応答特性を調べ、前頭眼野と比較した。前庭回転刺激を用いて眼窩内眼球運動と空間内眼球(視線)運動を乖離させて比較すると、いずれの領域も前庭刺激により90%以上の滑動性眼球運動関連ニューロンが応答したが、視線信号は補足眼野では殆ど再現されていなかった(17% vs 66%)。視標の視覚刺激に応答するニューロンも、補足眼野では少なかった(20% vs 53%)。3次元空間での視標追跡課題を用い、応答ニューロンについて、輻輳運動と滑動性眼球運動を個別に調べると、両者に応答したのは27%であり前頭眼野(66%)より有意に少なかった。さらに、補足眼野の滑動性眼球運動記録領域をmuscimolにより不活性化すると、これらの視標追跡眼球あるいは視線運動は障害されなかった。以上の結果は、補足眼野には前庭情報と輻輳運動信号が再現されているが、単純な視標追跡課題においては前頭眼野と補足眼野の役割は調べられないことを示唆する。日常生活ではゆっくり動く視覚対象の追跡は、背景の視覚入力の制御を要求するので、第2の実験としてランダムドットの静止背景下で視標追跡視線運動を行わせ、この機能に対する補足眼野の役割を、その領域の不活性化により調べた。前頭眼野の不活性化では、背景の有無に拘わらず視標追跡が障害されたのに対し、補足眼野では背景が有る場合のみ、上向き視標追跡の障害と下向き前庭動眼反射の抑制不全が再現した。以上の結果は、視覚背景の制御を伴う視線運動制御に補足眼野が関わる可能性を示唆する。
ポピュラー音楽のライヴ空間における「客席」の文化史

本研究を進めるにあたり、平成26年度は1950年代初頭から1960年代中頃にかけて日本で開催された外来のミュージシャンの来日公演を対象とし、新聞を中心とする文献調査を行った。本研究に着手した当初は1970年代以後のロック文化に主眼を置いていた。しかし、調査を進めるうちに戦後のポピュラー音楽公演においてはロック以前の諸ジャンルでも聴衆の動静が議論されてきたことを知り、その変容を考察するには、海外の著名なミュージシャンの来日を受けて1950年代ごろから盛んになったジャズ・コンサートにまで対象を広げ、より通ジャンル的に公演中の聴衆の動静を論じる必要があると判断した。そのため、本年度は公演についての情報が記載された新聞を中心とする文献史料の渉猟に専念し、1950年代から1960年代中頃までの縮刷版およびデータベースの調査を終えた。前年度までのロック公演を中心とする客席の文化史は、これまでの国際会議での発表をもとにした英語論文をまとめて『Trans-Asia Popular Music Studies』にて発表した。また、本年度の来日公演調査の成果については、現代風俗研究会東京の会にて「来日公演のライヴ文化史ー主権回復後からビートルズまで」と題した口頭発表にて報告した。本研究の対象は二年間の研究期間を通して、1970年代以降のロック文化を扱うものから、冷戦が激化していた頃の195060年代のポピュラー音楽文化を広く扱うものへと変容した。そのため、当初の研究計画よりも成果の発表が遅れてしまったが、今後はこれまでに整理した一次史料を整理した上で、通ジャンル的かつ環太平洋的な視座のもと、戦後ポピュラー音楽のライヴ文化がミュージシャンたちの国際的な活動のなかでどのように生成され、また「客席」に集った聴衆たちはどのように公演に臨んでいたのかを実証的に考察していきたい。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究<ポピュラー音楽のライヴ空間における「客席」の文化史>は、ライヴ・パフォーマンスをとりまくコンテクストの変容が、上演形式と観客の所作にどのような影響をあたえたのかをあきらかにするものである。本年度は、1960年代中頃に起こったロック・ミュージックの台頭を分水嶺とし、1970年代以後のロック公演における観客の動静を論じる研究発表と、ロック以前の来日公演全般に関する文献調査と公演情報のアーカイヴ化を行い、ロック前後の連続と断絶を検討した。ロックに関する研究の成果は、ロック公演において顕著な「スタンディング」と呼ばれる形式が日本でどのように広まったのかを論じた「Standing on the Verge : A Shift in Japanese Crowd Culture from Seat to Floor」をスペインのオビエド大学にて開催された国際ポピュラー音楽学会第17回大会にて、またロック公演でしばしば見られる観客の暴力的行為に着目した「Where the Violent Things Are : Cultural History of Japanese Rock Crowds」をシンガポール国立大学にて開催されたIACSの大学院生むけ会議にて、それぞれ口頭で発表した。ロック以前の来日公演の調査は、雑誌や新聞に掲載された公演情報のアーカイヴ化を中心に進めた。19501960年代を対象とし、来日したミュージシャンやバンド・公演の会場と日程・チケット代・席種といった情報を集積中である。これによって、これまで漠然としか言及されてこなかった来日公演の量的な変化を実証的に検証することを目指す。また、この時代に重要な役割を果たした<呼び屋>と称されるプロモーターの活動に着目した口頭発表「呼び屋と聴衆ー戦後日本のポピュラー音楽産業における招聘コンサートの文化史」を東海大学高輪キャンパスにて開催されたコンテンツ文化史学会2013年大会にて行った。

26年度が最終年度であるため、記入しない。ポピュラー音楽文化におけるロックの役割については、1960年代後半1980年代までに起こった主要な事例を網羅することができた。また、19501960年代のコンサートに関しても公演情報のアーカイヴ調査が順調に進んでおり、来日公演数の変化が概括するに十分なデータが集まっている。今後は戦後の来日公演と観客に焦点を絞って調査を進める。これまでの研究では観客の質的変化が顕著に見られる事例として、ロック公演で会場から椅子が取り払われ「スタンディング」に至る経緯に着目していた。しかし、調査を進めるなかで観客の騒がしい行動の是非に関する議論は戦前から続く様々なポピュラー音楽文化間で絶えず紛糾していることが自明となった。また、1950年代の上演形態には音楽の実演が映画上映の手前に「アトラクション」として披露されていた戦前の文化からの連続が見られ、これまで戦前と戦後で二分されてきたポピュラー音楽史を再検討する上でも重要な事例が散見する。次年度は戦前からの連続性を念頭に置いた上で、1950年代から60年代にかけて起こった技術的変化をふまえつつ観客文化がいかなる変容を遂げたのかを調査する。
腸管上皮細胞への指向性を誘起する緑膿菌の感知機構の解析

臨床上重要なグラム陰性の日和見感染症起因菌であるPseudomonas aeruginosa(緑膿菌)は、ムチンで覆われた上皮細胞層からなる粘膜上皮を越え(トランスロケーション)、重篤な血液感染症を引き起こすことがある。近年、薬剤耐性菌が世界的に増加しているが、この30年間、新たなタイプの抗菌薬開発は進んでおらず、薬剤耐性菌に対する新たな治療戦略が国際的に求められている。本研究では、宿主環境に応じた細菌の感染メカニズムに基づく新たな予防および治療法考案のためのターゲットバリデーションを目的に、緑膿菌の腸管腔からのトランスロケーション機構を解析した。これまでに我々は、緑膿菌トランスロケーションの過程を、1)上皮細胞の感知、2)上皮細胞への接近、3)上皮細胞への付着、4)上皮細胞層透過経路の形成、5)上皮細胞間隙の透過に分け、研究を進めてきた。最終年度は、緑膿菌トランスロケーションにおける阻害剤の探索にターゲットを絞り、緑膿菌によるムチン層透過に対する多機能性糖脂質の影響を検討した。その成果として多機能性糖脂質は、(1)緑膿菌の増殖速度に有意な影響を与えることなく、本菌によるムチン層透過菌数を65%減少させること、(2)緑膿菌のプロテアーゼ活性に有意な影響を与えることなく、べん毛依存性のswimming運動を62%減少させること、(3)緑膿菌のべん毛構築に影響を与えるこなく、ケモタキシスシグナル伝達cheR1、cheW、およびcheZ遺伝子の発現量をそれぞれ48%。42%、および46%減少させることを見出した。近年、緑膿菌のべん毛は、ワクチンや抗感染症薬のターゲットとして注目されており、ヒトでの臨床研究を含めて多くの研究が進行している。本研究成果は多機能性糖脂質が新たな感染症予防および治療に応用をできることを示すものであり、今後、新たな薬の開発につながることが期待できる。臨床上重要な日和見感染症起因菌であるPseudomonas aeruginosa (緑膿菌)は免疫力の低下した宿主の上皮を越えて血液中に移行(トランスロケーション)し、重篤な血液感染症を引き起こすことがある。我々は緑膿菌トランスロケーションの過程を、(1)上皮細胞の感知、(2)上皮細胞への接近、(3)上皮細胞への付着、(4)上皮細胞層透過経路の形成、(5)上皮細胞間隙透過に分けて解析してきた。本研究では、緑膿菌の腸管腔からのトランスロケーション機構を明らかにすることで、宿主環境に応じた細菌の感染メカニズムに基づく新たな予防および治療法考案のためのターゲットバリデーションを行なう。具体的には、緑膿菌トランスロケーションにおける「腸管上皮細胞の感知」にターゲットを絞り、(1)緑膿菌が感知する腸管上皮細胞培養上清成分の同定、(2)緑膿菌が腸管上皮細胞を感知する機構の解明、(3)腸管上皮細胞が緑膿菌のムチン層透過を亢進する機構の解明を目指す。申請時までに申請者は、ヒト結腸癌由来Caco-2細胞培養上清に含まれる10 kDa以下の成分が、緑膿菌によるムチン層透過を亢進することを見出していた。平成28年度は、この結果をもとに緑膿菌が感知する腸管上皮細胞培養上清に含まれる成分の同定を目指して解析を進めた。その結果、緑膿菌によるムチン層透過を亢進するCaco-2細胞培養上清成分の特徴として、(1)3-10 kDa以下のサイズであること、(2)タンパク質であること、(3)培養10日目以降のCaco-2細胞が分泌すること、(4)複数種類の成分が含まれること、(5)亢進する成分の一つがケモカインであること、をそれぞれ見出した。平成29年度は、培養15日目のCaco-2細胞培養上清中に含まれる3つの特異的なバンドの同定ならびに緑膿菌が腸管上皮細胞を感知する機構の解明を目指す。申請時までに申請者は、ヒト結腸癌由来Caco-2細胞培養上清に含まれる10kDa以下の成分が、緑膿菌のムチン層透過を亢進することを見出していた。平成28年度は、この結果をもとに、緑膿菌が感知する腸管上皮細胞培養上清中の物質を単離・同定することを目指し、概ね計画通りに研究を進めることができた。平成28年度に得られた結果を列挙すると、(1)緑膿菌が感知するCaco-2細胞培養上清の成分は、DNA、RNA、糖鎖、およびタンパク質のうち、タンパク質であること、(2)緑膿菌が感知する成分は、培養15日目以降のCaco-2細胞培養上清に含まれること、(3)培養15日目のCaco-2細胞培養上清中には、培養5日目ではみられない10 kDa以下のサイズに3つの特異的なバンドがみられること、(4)培養15日目のCaco-2細胞培養上清中には5つのケモカインが含まれ、このうちの1つが緑膿菌によるムチン層透過をCaco-2細胞培養上清と比べて70%亢進することである。これらの結果から、緑膿菌は上皮細胞が分泌するケモカインを含む複数種類の10 kDa以下のタンパク質を感知し、ムチン層を透過することが示唆された。