hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
デアミノノイラミン酸(KDN)残基をもつ新しい生理活性複合糖質の開発と応用-KDN特異的な転移酵素および加水分解酵素を用いたKDN複合糖質の合成経路の確

本研究はKDNがユニークな性質をもつ新規シアル酸であることを利用して、KDNをもつ新しい生理活性物質あるいは新しい有機素材を開発することを目的としており、研究期間において以下の実績を得た。1.KDNに特異的な転移酵素、加水分解酵素の開発を行い、(1)CMP-KDNを糖供与体とするニジマス由来の2種の転移酵素、α2→3-KDN転移酵素とα2→8-KDN転移酵素の部分精製酵素を用いて、KDN複合糖質が調整できることを明らかにし、また、(2)細菌由来のKDN特異的加水分解酵素(KDNase)の完全精製に成功し、KDN残基の特異的な除去反応が可能になった。この酵素のトランスグリコシレーション活性は低かった。3.新規KDN複合糖質の利用として、まず既知のシアロ複合糖質特異的レクチンとの相互作用を調べた。KDN残基を導入したヒトKDN-トランスフェリン、KDNラクトサミンを用いて、植物レクチン(SSA)の反応性を調べた結果、KDN残基はN-アセチルノイラミン酸残基と同等か僅かに強くSSAレクチンに結合することが明らかになった。現在のところ、KDN特異的なレクチンは見出されていない。4.KDN複合糖質を細胞表面に発現させる実験系の開発には、単糖KDNの生合成経路を理解することが重要であり、まず、単糖KDN産生の重要な中間体であるKDN9ーリン酸を合成するKDN9ーリン酸合成酵素の活性の存在を見出した。現在、この酵素のcDNAクローニングを目的としたタンパク質精製を行っているところである。本研究は、KDNがユニークな性質をもつ新規シアル酸であることを利用して、KDNをもつ新しい生理活性物質あるいは新しい有機素材を開発する目的で行い、今年度は以下の実績を得た。1.KDNに特異的な転移酵素、加水分解酵素の開発:(1)KDN転移酵素:CMP-KDNを糖供与体として利用する2種のKDN転移酵素α2→3KDN転移酵素とα2→8KDN転移酵素の完全精製には、まだ時間がかかるが、利用可能なKDN転移酵素活性画分が得られることが明らかになった。このことは、本研究の目的において大きな意義をもつ;(2)KDN特異的加水分解酵素(KDNase):KDN残基特異的加水分解酵素の完全精製に成功した。トランスグリコシレーション反応については、現在検討中である。2.新規KDN複合糖質の酵素的合成法の確立:KDN複合糖質合成には、KDN単糖、CMP-KDNの大量合成法を開発する必要がある。単糖KDNについては、本年度において生体内における生合成過程をつきとめることに成功したが、現時点ではこれら生体反応系を利用するよりも、先に我々が開発したアルドラーゼの逆反応を用いる方法が優れていることがわかった。その方法と、先に開発したニジマス精巣由来のCMP-KDN合成酵素を用いることによって、CMP-KDNが原料としてマンノース、ピルビン酸、CTPを供給するだけで一段階の操作でCMP-KDNが合成できる反応系を開発した。3.新規KDN複合糖質の利用:ニジマス精巣から調製したKDN糖脂質を用いて、既知のシアロ複合糖質のリセプター(レクチン)に対する相互作用が異なることが明らかにした。生体実験には量が必要であるため、上記1と2の実績をもとにKDN-糖鎖の合成系を確立することが急務であると考えている。本研究はKDNがユニークな性質をもつ新規シアル酸であることを利用して、KDNをもつ新しい生理性物質あるいは新しい有機素材を開発する目的で行い、今年度は以下の実績を得た。1.新規KDN複合糖質の合成系の確立と利用:昨年までにKDN残基の酵素的合成を目的として、KDN単糖の大量合成、さらに移転酵素の基質となるCMP-KDNの酵素的合成を確立した。

今年度は、最終段階のKDNの種々の糖鎖、糖タンパク質、糖脂質への取り込み反応の確立を目指した。その結果、CMP-KDNを基質として利用できる組み換え体酵素を含む数種のシアル酸転移酵素がみいだされ、それを用いて、新規KDN複合糖質の自在合成が可能であることを確認した。現在、幾つかの既知シアル酸転移酵素をcDNAから培養細胞系で発現させて利用する系の確立を急いでいる。2.KDN結合タンパク質の検索と利用:1.の合成系を利用して、KDN残基を導入したヒトKDN-トランスフェリン、KDNラクトサミンを用いて、既知のシアル酸特異的レクチン(SSA)の反応性を調べた結果、KDN残基はN-アセチルノイラミン酸残基と同等か僅かに強くSSAレクチンに結合することが明らかになった。現在のところ、KDN特異的なレクチンは見出されていない3.KDN複合糖質を細胞表面に発現される実験系の開発と応用:KDN残基の細胞系での発現を可能にするために、単糖KDNの生合成経路を理解することが重要であるとの見地に立って研究を進めた結果、KDNの発現レベルの高いニジマス精巣で、マンノース6ーリン酸とホスホエノールピルビン酸から単糖KDN産生の重要な中間体であるKDN 9ーリン酸を合成するKDN 9ーリン酸合成酵素の活性が存在することを見出した。現在、この酵素のcDNAクローニングを目的としたタンパク質精製を行っているところである。
睡眠における手続的記憶の再構築機能の検討

睡眠の機能についてはまだ分かっていないことが多い。我々は脳の可塑性における睡眠の機能に着眼し検討を進めてきた。fast spindleとslow spindleの構成波の電位振幅値の頭皮上の分布を検討し,視覚運動学習に関わる活動性変化(増強または減衰)を調べた。学習に伴う振幅変化を用いsLORETAにより電流発生源を推定したところ,fast spindleの学習に関連した活動性変化は左運動前野および左頭頂連合野の2部位に推定された。このfast spindleの活動性増大は,視覚運動学習に関連した睡眠中の脳の可塑性に関係すると考えられる。得られた成果はClinical Neurophysiologyに掲載された。睡眠紡錘波帯域に加え,徐波など他帯域の振動現象の手続的記憶固定化への関与についても,イメージング技法を用い検討を進めている。一方,宣言的記憶の固定化については徐波帯域の役割も大きいことが分かっている。そこで,記憶課題の成績と睡眠内容,睡眠中の振動現象との関係について,漢字二字熟語の対の学習課題を用いて検討した。その結果,(1)睡眠を挟むことで宣言的記憶の忘却は抑制されるということ,(2)この忘却抑制にはNREM睡眠もREM睡眠も関与する可能性があること,(3)NREM睡眠中の脳波活動としては0.5-1Hzの遅い周波数の活動と10-13Hzの睡眠紡錘波活動が関与し,左中心部,頭頂部,側頭部エリアにおける活性化が忘却抑制に貢献する可能性があることが示された。以上の得られた研究成果は,日本生理心理学会およびアジア睡眠学会にて発表した。本年度は,新しく獲得された手続的記憶の睡眠における再構築と定着のメカニズムについて睡眠紡錘波と徐波の活動に着目し検討を進めた。睡眠紡錘波はfast spindleとslow spindleの2種類に分類されるが,いずれの睡眠紡錘波が手続的記憶の定着に関与しているか明らかではない。そこで我々は,各spindleの活動性(出現数,出現密度,振幅値,持続時間)を,学習を行った条件(学習夜)と学習を行っていない条件(非学習夜)とで比較検討した。その結果fast spindleの出現密度,振幅値,持続時間と運動技能の課題成績の向上率との間に有意な正の相関関係が認められ,また学習夜で非学習夜と比較し,高振幅,長持続であった。一方で課題成績の向上率とslow spindleとの間に有意な関係はみられなかった。このことから2種類の睡眠紡錘波の中でもfast spindleの活動性が運動技能の向上に関与していると考えられた。この成果はJournal SLEEPに掲載された。さらにfast spindleを構成する波の電位振幅値の条件間の差分を求めsLORETAで電流発生源を推定したところ,左運動前夜および左頭頂連合野の2部位に推定された。この2部位は視覚運動学習に関わる部位であることからfast spindleの活動性増大は視覚運動技能の向上をもたらす脳の可塑的な変化に寄与すると考えられた。この成果はClinical Neurophysiologyに受理され,現在印刷中である。さらに,睡眠紡錘波に加え徐波活動の手続的記憶への貢献についてイメージング技法を用いて検討を進めている。脳磁図の活動と構造的MRI情報を組み合わせた,高い時間空間分解能を有する方法を採用し,より精度の高い推定を行っている。この成果はThe Society for Neuroscienceで発表した。
多重回折データを用いたセラミックス薄膜の結晶構造解析

多結晶薄膜などの試料においては、組織(あるいは配向)の解析が物性解明にとって非常に重要である。しかし従来のθ-2θ対称スキャン法においては、試料面に対して垂直方向の散乱ベクトルしか関与しないために、一軸方向の情報しか得ることができなかった。本研究で開発した多重回折データを用いる方法とは、以下のようなものである。固定入射角において入射させたX線を試料表面で回折させた後、非対称2θスキャン法を用いて広い角度範囲の回折データを測定する。この測定をある範囲にわたる複数の固定入射角において測定することにより、試料面に対して垂直方向とは異なる方向の散乱ベクトルが関与する回折データの組み合わせを得ることができる。これらを多重回折データとした時に、これら全てのデータを同時に解析することによって、組織の立体的な解析を高い精度で行うことを可能にする。本研究では、1)多重データ解析モデルの製作、2)解析用ソフトウェアの開発、3)実験装置の製作、および4)セラミックス薄膜材料への応用と解析手法の試験、の4段階から構成され、これらを2年間で行った。組織の方向に依存した分布関数としては、対称性の制限を取り込んだ調和展開関数を用いた。多結晶薄膜Bi_3Fe_5O_<12>ガーネットの結晶構造解析にこの方法を適用し、リートベルト法に基いた解析用ソフトウェアを用いて結晶構造および組織のパラメータの精密化を行った結果、所定の結果を得ることができた。本研究は、多重回折データを用いて薄膜試料の組織と結晶構造を同時に解析する方法を確立することを目的としている。ここで多重回折データとは、非対称反射法にて測定された、入射角が異なる複数の回折データの組を意味し、個々の回折データはそれぞれ試料組織の異なる断面を示していると言える。本研究は、1)多重データ解析モデルの製作、2)解析用ソフトウェアの開発、3)実験装置の製作、および4)セラミックス薄膜材料への応用と解析手法の試験、の4段階から構成され、これらを2年間で行う予定になっている。今年度は1)多重データ解析モデルの製作、および3)実験装置の製作を推進し、時間を要する装置整備を先行させた。回折実験においては平行ビーム光学系に基づいた回折装置の使用が必要不可欠であり、この光学系に基づいた薄膜用回折計の整備を進めた。多層膜ミラーを用いた装置を組み立て、その装置の基本性能に関して評価を進め、その結果、強度と分解能に関して解析に使用しえるデータの取得に見通しを得た。この結果に関して、1997年11月に開催された結晶学会にて「多層膜ミラーを用いた実験室系平行ビーム光学装置の開発とその評価」という表題にて研究成果の発表を行った。一方、解析用モデルに関しては、方向に依存した強度計算に対称化された調和球面関数が適していることを明らかにしている。現在、装置の改造を進めるとともに、解析用ソフトウェアの開発に着手している。
慢性呼吸不全患者の急性増悪認識AIを活用した遠隔看護モデルの構築

近年、ICT技術の進歩とともに遠隔医療は目覚ましい発展を遂げ、在宅療養中の慢性疾患患者のセルフマネジメント能力の維持のための方策として提供されている。特に慢性呼吸不全患者の急性増悪の約3割が原因不明であり、患者が身体状況の微妙な変化を認識する能力が予後を左右する。疾患の特性上、患者は高齢で自らの身体状況の変化に気づくことが困難な状況である。そこで、本研究では人工知能(AI)技術を用いて、入力された生活情報から慢性呼吸不全患者の急性増悪の兆候を速やかに認識することができるAIを開発、重症化を予防する新たな遠隔看護モデルの構築を目的とする。
STM複合TOF表面局所質量分析装置の開発及び材料機能評価への応用

本研究では、超高感度かつ超高分解能で測定可能なナノ領域測定用TOF質量分析計を開発して、これを多機能超高真空走査トンネル分光装置(UHV-STS/STM)にオンライン結合することにより、材料表面のナノ局所場における原子・分子レベルでの化学組成分析、化学構造分析、化学状態分析が可能なTOF表面局所分析装置の開発を目的として研究をすすめた。初年度は、STM複合TOF質量分析装置の開発を中心に検討をすすめ、改良を重ねた後、装置を構築できた。次年度には、小型パルスイオン源を導入して、イオンビーム励起離脱によるTOF質量分析法について検討した。また、試料表面にパルスレーザーを照射するレーザーアシストイオン化法が可能な装置構成についても、検討の上構築した。特にその際、STM測定においては、バイアス電圧を広範囲に変化させて、試料-探針間の距離と電流の関係を測定して基礎データを収得した。また、レーザー励起法においては、YAGレーザーの3倍高調波を針先に集光するように入射させTOF検出器により、試料面より脱離するイオンの強度とレーザーパルス強度の関係を測定した。さらに、これらに基づいて、STM探針のバイアス電圧、電流をパラメータとして、レーザーパルスによる脱離イオン強度の相関を求め、各種材料に即した効率的イオン化法に関して一定の知見を得た。現在、TOF検出器の検出効率を挙げるため集束電場の構造を改良して最適条件を求め、検出感度の改善を図るとともに、探針を二次元的に走査して脱離イオンの分布を画像化する実験を行いつつある。本年度は、現有する多機能超高真空走査トンネル顕微鏡(UHV-STM/STS)により、シリコン清浄表面に蒸着したパラジウム、銀、白金などの金属シリサイド形成過程の表面構造変化について詳細に観察した。具体的には、Si(111)7X7構造表面上に、Pd、Ag、Ptを真空蒸着し、超高真空中で加熱処理による表面構造の変化や周期構造の形成をSTM測定により観察した。Pd蒸着の場合、室温ではクラスター状に吸着していたPd粒子が、200°C以上になると、周辺部のSi原子を取り込んで、パラジウムシリサイドの島状構造を形成する様子を観測した。表面構造の解析により、Pd_2Siの(0001)面が、Si(111)面に対して√3×√3R30°の構造でエピタキャル成長していることがわかった。その他の金属シリサイド形成過程についても数々の新しい知見が得られた。並行して、STM複合TOF質量分析装置の開発を行った。TOF分析チャンバーを製作してUHV-STMにオンライン結合し、種々の基礎データを得るとともに、TOF質量分析・解析システムのためのソフトウエアーの開発を行った。STM複合TOF質量分析システムの構築とソフトウエアーの開発に予定以上の研究期間を要したが、年度内に基本システムの完成とその基礎評価を終えることができた。来年度は、実試料による詳細な性能評価を行った上で、必要があれば改良を加え、STM結合TOF表面局所質量分析・解析システムを確立し、各種金属シリサイド形成過程の表面構造の化学分析等に適用する。本解析システムによる材料表面の原子レベルでの化学分析により、表面反応生成物のキャラクタリゼーションが飛躍的に進展する。今後、各種機能材料の表面構造と物性及び機能発現過程の相関の解明研究を推進し、各種先端材料の機能評価法の確立を図るべ研究を推進していく予定である。本年度は、まず、初年度に開発したSTM複合TOF質量分析装置を用いて、小型パルスイオン源を導入して、イオンビーム励起離脱によるTOF質量分析法について検討した。

また、試料表面にパルスレーザーを照射するレーザーアシストイオン化法が可能な装置構成についても、検討の上構築した。特にその際、STM測定においては、バイアス電圧を広範囲に変化させて、試料-探針間の距離と電流の関係を測定して基礎データを収得した。また、レーザー励起法においては、YAGレーザーの3倍高調波を針先に集光するように入射させTOF検出器により、試料面より脱離するイオンの強度とレーザーパルス強度の関係を測定した。さらに、これらに基づいて、STM探針のバイアス電圧、電流をパラメータとして、レーザーパルスによる脱離イオン強度の相関を求め、各種材料に即した効率的イオン化法に関して一定の知見を得た。現在、TOF検出器の検出効率を挙げるため集束電場の構造を改良して最適条件を求め、検出感度の改善を図るとともに、探針を二次元的に走査して脱離イオンの分布を画像化する実験を行いつつある。
台湾における民間演劇の社会的機能とその歴史的変遷・歌仔戯と布袋戯を中心に

本研究の当初の計画は、戦後台湾の民間演劇の変遷と機能とを析出することであった。しかし調査中に接触した台湾の研究者および行政担当者等知識人の民間演劇への関わり方、そして小西園、華洲園など布袋戯劇団の上演時の状況から、民間演劇をめぐるある二重構造を見出さざるをえなかった。それは、民間演劇を台湾独自の民俗文化として強力に価値付けようとする知識人達の言動に対し、一方でそうした知識人の言動に合わせ、より民俗的と考えられる上演の方法を採用しながら、また一方ではそれとは無関係に従来からの民間での需要に応え続けるという布袋戯劇団の上演の価値の二重性である。ここには知識人が自文化の純粋状態として理想視する民間、民俗と、そうではないありのままの民間、民俗との乖離、そしてこの二重性をそのまま反映した民間演劇の上演の様相が見出せる。台湾では1960年代から文化復興運動が繰り広げられ、それは台湾の政治状況、台湾ナショナリズムとも不可分な運動であったが、その潮流に乗った知識人達による価値観の操作が、民間演劇の劇団に上記の二重性を帯びさせることになったと考えられる。こうした状況を目の当たりにし、台湾のナショナリズムと不可分な形で展開される知識人の言説と、それに取り囲まれた民間演劇との相互作用の様相を、最終的なテーマとすべきであるとの認識に至ったわけである。今後は「演劇とナショナリズム」をテーマに、この事例を引き続き調査しつつ、筆者が以前に研究対象とした清朝末期の上海における知識人と演劇との関わりもひとくくりに視野に含み込み、近現代の中国社会における両者の関わりを分析してゆく計画である。また、以上の個人研究と並行して、1996年度より筆者を含めた複数の中国演劇研究者により開始される「中国近代都市芸能共同研究プロジェクト」の一端として今回の研究成果を位置付け、中国社会の中での演劇の姿をより多角的に把捉する方向へと発展させるつもりである。
古今和歌六帖の本文と享受に関する総合的研究

本研究は、平安中期に頃に成立したとされる類聚歌集、古今和歌六帖の校本作成をめざしたものである。当該歌集の伝本は、近世初期の写本群、及び刊本があるのみで、中古、中世の写本が伝存しない。しかし歌学書等から蒐集できる逸文は、必ずしも現存伝本と一致せず、また、収録歌及びその配列にも違いがある。そのため本研究では、現存写本群の中から十二本を選び、さらに刊本を加えた校本を作成し、肝要な情報である注記も正確に再現することで、古今和歌六帖本文の基礎資料を作成した。その結果は、最終年度に、データベースとして電子媒体で資料を公開するとともに、論文集として『古今和歌六帖研究』I、IIを刊行した(平成22、23年度)。22年度実施内容1、古今和歌六帖諸本のデータ入力神宮文庫蔵林崎本、同宮崎本、大久保正蔵榊原家旧蔵本、同岡田真旧蔵本、島原松平文庫本、和歌山大学蔵本、書陵部蔵御所本、兼築信行氏蔵本。以上8本。2、本研究準備段階でデータ化された本文の点検作業書陵部蔵桂宮本、寛文九年刊本、内閣文庫蔵和学講談所本、同林羅山旧蔵本。以上4本。3、諸本調査に基づく伝本分類(1)伝本の性格を検討した結果、寛文九年刊本の写しであることの判明したノートルダム清心女子大学蔵黒川本については、当該判断に至った分析結果を、報告書に発表した。同様の結論に至った伝本として、九州大学支子文庫蔵本がある。4、古今和歌六帖研究史の研究研究史については、年二回の会合において、討議を行った。22年度は主として伝本論が中心となった。なお、この過程でまとめた文献目録を、報告書に発表した。5、年度末に報告書「古今和歌六帖研究I」を作成した。今号には、上記3、4の研究結果と、古今和歌六帖歌と人麿集の関係について、景井雅詳氏に執筆を依頼した。平成23年度は、平成22年度に予定した(1)伝本の蒐集、及び、データベース化すべき伝本の選別、(2)諸本論の構築、(3)翻刻データの作成、をほぼ終えることが出来た。現在各伝本とも、点検作業中で、初校(8本)、再校(5本)の段階であり、24年度中には、本文集成が完成できる見込みである。(1)の作業の一環として、国文学研究資料館にマイクロフィルムとして収蔵されているものの、原本の所在が不明となっていた三本(榊原家旧蔵本、田林義信氏蔵本、岡田真旧蔵本)について、調査を行い、うち二本については、所在及び現所蔵者を特定することができた。また、事情により本文の公開が許可されない伝本(桃園文庫藏阿波国文庫旧蔵本}についても、閲覧調査を行い、その系統や本文の特性について見通しを示すことが可能になった。これらについては、23年度の成果報告書(『古今和歌六帖研究II』、平成23年3月31日発行)に調査報告を掲載した。また、今回本文集成に採用しなかった写本群についても、伝本調査は完了している。その上で、(2)の作業として、写本群を系統立て、各系統の特性等に関する論考を23年度成果報告書に掲載した。24年度以降は、本文集成の成果を参考にしつつ、逸文の蒐集や、異文の分析に入る予定であるが、その準備として、現在確認されている古今和歌六帖の古筆切の一覧をまとめ、これも成果報告書に掲載した。なお、研究計画の段階でめざしていた、連携研究者が専攻する時代における古今六帖の享受状況を検討し、それに基づく論考の作成は、データベース作成の作業に予想外に時間を要したため、全員の執筆は叶わなかった。しかし、古今和歌六帖の広本、あるいは異本が存在したとの旧説の実否を確認し、伝本研究の基礎を固めるため、とりあえず、夫木抄との関連について考察した。この成果は、本年度中に公刊の予定である。平成25年度は、本科研最終年度であり、調査した資料のデータベースに基づき、古今和歌六帖校本データの作成に一年を充てた。すでに室町末期から近世初期にかけての写本群を精査し、系統を分かつ作業は終了しているので、写本群の中から校本データとして使用すべき伝本を選択、これに近世の版本をあわせ、13本をデータベースに使用することが決定していた。これらの伝本の本文のデータベース化は、平成24年度までに完了していたので、これらを校本の形にするとともに、原本との最終的な照合に時間を費やした。

それは、主として、各伝本に注記された傍書、異本注記の確認である。傍書、異本注記等の書き入れは、文字情報だけではなく、その位置情報が極めて重要であるため、この点に細心の注意を払った。データベースの最終的な調整に際しては、システムを構築できる専門家に依頼をし、最終的にはPDFデータとして、電子媒体による公開をした。古今和歌六帖の伝本と享受に関する論文は、伝本研究に関しては、平成22年度、23年度に公刊した『古今和歌六帖研究』I、IIに掲載するとともに、他の学術誌上でも公表したが、今回の最終的な成果報告の中に、略解題として使用した13本について解説を付している。享受に関する研究は、すでに連携研究者が各自の専門とする時代、領域において行っている。最終的な校本データが完成した時点で、平安中期・末期の歌学、及び、近世の和歌研究に関わる問題点が明らかになった。校本データを活用することにより明確になる問題も多々あることが予想されるが、これらはなお今後の課題としたい。古今和歌六帖の主要伝本のうち、前年度までに、写本12本、版本1本の本文をデータ化した。事前に行った実地調査により明らかとなった各伝本の性格及び特色を考慮し、かつ、データ化に伴い、図るべき統一性を考慮し、凡例を作成した。これに基づき、データと原本の対照作業を行い、潜在する問題を洗い出す作業を行った。その結果各自から提出された問題点を検討し、校本とするための最終作業を経て、システム担当者にデータを提示した。その後、システム担当者からの意見を取り入れ、再度の是正を行い、年度末には、13本の伝本を一覧する校本形式のデータが完成した。これを初校とし、現在事務局(代表者・黒田、連携研究者・日比野浩信、中村文、蔵中さやか、研究協力者・濵中祐子)が中心となって、校正を行っている。最終年度に当たる25年度には、略解題を付した校本を公刊できる見通しである。また、当初所在不明であった伝本のうちの一本は、所在が判明したため、黒田、中村が実地調査を行うことが出来た。解題については、重要な伝本については、すでに、成果報告書「古今和歌六帖研究I」(22年度発行)、同II(23年度発行)に、メンバー各自の論考を掲載した。また、古写本の存在しない古今和歌六帖の資料的な欠落を補うために、残存する古筆切の解説を掲載した。24年度は、データ整備に専念したため、成果報告書は発行せず、24年度に進捗した内容については、本年度公刊予定の校本データ、及び、解題論文に集約させる予定である。データベース化の作業はほぼ予定通り進行しており、24年度中には最大の目的である本文集成公刊の見通しである。25年度が最終年度であるため、記入しない。各伝本のデータ化は、極めて順調に進んだ。但し、13本の伝本を一覧可能な校本形式にする際に、システム上の問題が若干生じ、これへの対応に時間を取られた面がある。研究史を踏まえた伝本論については、代表者の黒田が「広本古今六帖考」(『愛知文教大学比較文化研究』12号、2012年11月)を公刊するなど、享受史全般の研究はおおむね予定通り進捗している。24年度は、本文集成の完成・公刊を第一の目的とする。その上で、各連携研究者は、それぞれの専攻に即した、享受史及び影響についての各論に取り掛かる予定である。平成25年度は、現在初校の段階にある校本データを、システム担当者と協議しつつ、可能な限り閲覧しやすい形式に整えることを第一とする。当初の目的の一つに、異本注記の正確な再現というテーマがあったので、これについても、校正の過程で、問題点があれば、随時検討を加えて、再現性の高いものとしたい。
メコン地域３新興国における技術者高等教育プログラムの到達度と支援方法の検討

本研究は,近年,急速に民主化・経済改革が進み,日本企業の生産拠点や将来の市場として有望なメコン地域3新興国(カンボジア、ラオス、ミャンマー)の技術者高等教育プログラムについて調査・研究し,その達成度を国際的な視点で認識する事で,今後,日系企業の進出が盛んになると予想されるメコン地域3新興国における技術者教育システム全体の現状と課題を明らかとしようとするものである。さらに日系グローバル企業が求める現地の人材という観点から,“実践的技術者の育成"を教育目標とし,高専教育の海外展開を推進する国立高等専門学校機構が,メコン3新興国の実践的技術者育成のための支援方策を明らかとすることを目的とする。
看護実践能力育成のためのEQ加EBN教育方法と評価ツールの開発

我々は、看護学専攻学生が卒業時に求められる能力、特に看護実践能力育成のために理性と感性を複合した教育方法を考案し、併せて評価道具を開発することを目指して取り組んでいる。この研究においては、(1)臨床が求める能力と実際に学生が獲得している卒業時のコンピテンシーを明らかにし、そのギャップとそれを埋める教育としてのEQ(Emotional Quotient)加EBN(Evidence Based Nursing)教育方法モデルを開発する。(2)学生が大学入学時から職業人となって後も継続して使える看護実践能力評価の道具とシステム構築について検討する。ことを目的とした。初年度に医療機関及び教育機関を1ヶ所に限定して行った看護技術習得に関する調査研究からは、臨床の看護師が新卒看護師に望む技術の到達度と実際の新卒看護師および学生の習得度の傾向は一致していた。また、基礎実習から領域実習、卒業後の現任教育へと引き継ぎながら習得・成熟化させていく道具とシステム構築の必要性が示唆された。この結果を受けて、卒業直前の学生と教員、臨床の看護師を対象に同様の全国調査を行った。調査の結果からは卒業時に教員が必要と考えている技術項目でも3割以上の学生が学習・経験していない。また、教育機関によって学習・経験内容に差があること、卒業時の到達度に関する考え方が教員と臨床の看護師では乖離していることがわかった。教育機関による教育の差異は受け入れる医療機関が行う入職後の教育、例えば新卒看護師の習得状況に対応した多様な教育プログラムの必要性等が示唆された。一方、看護実践能力育成のための教育方法と評価に関する検討の一環として、看護提供場面を臨地と学内演習で再現しビデオ撮影をして、参加学生と共に再生・分析しては再度演習する方法を取り入れた。この方法は、正確でより安全・安楽を踏まえた技術の実施、看護実践力としての学びができる、学生が潜在的にもっている感性を活性化させるなど、教育技法として有効な方法である。今後、さらに分析を進めて課題達成に向けて研究をつづけたい。ことを目的とした。この研究は、看護学専攻者の卒業時に求められる能力、特に看護実践能力をいかに育成し、その質を保証して、臨床現場に継続できるかの仕組みづくりと獲得した看護技術の評価方法、理性と感性の教育方法と評価道具を開発しようとするものである。初年度の本年は、以下の2つについて取り組んだ。1)臨床現場が求める卒業時の看護実践能力に関する調査と看護教育者が考えている卒業時の看護技術の到達目標と到達度、学生自身が認識している基本的看護技術の到達状況についての全国調査を行い、現状を分析する。調査項目は、看護技術教育に関する先行研究論文や資料を基に抽出した。項目の妥当性については、研究者間で検討した上で、3人の識者に構成要素、項目、内容について検討してもらった。対象は、乱数表によって抽出した全国の100医療施設の各10名の看護師(計1,000名)、教師は、学士課程500名、准学士課程及び看護専修学校各500名。学生は、平成16年3月に卒業予定の看護学生1,500名倫理的配慮:調査依頼書とともに、当大学の医倫理委員会の審査結果等について記述した文書を同封し、研究への参加は返送用封筒の投函をもって参加の同意とさせていただくことを明示した。結果:3月卒業時を対象としているため、現在、回答が帰ってきている状況である。4月に統計処理を行い、3者間でどんな項目に認識の違いがあるのか、獲得している能力と現場の要求にどんな乖離があるのかを明らかにし、教育と評価について検討をしていく。

2)看護技術提供場面の映像を通した卒業時の看護実践能力の分析5人の仮想患者事例を設定し、包帯の巻き方、清拭とリネン交換、移動・移乗、導尿、輸液ポンプと輸液管理について演習をしている場面をビデオ撮影し、その映像を感性とEBNの側面から参加学生と教師で分析検討した。今後、事例を蓄積して、学生が獲得した看護技術の評価方法や教育方法について検討する資料とする。この研究は、看護学専攻学生が卒業時に求められる能力、特に看護実践能力をいかに育成し、その質を保障して、臨床現場に継続できるかの仕組みづくりと獲得した看護技術の評価方法、理性と感性の教育方法と評価道具を開発しようとするものである。2年目の本年度は以下の内容について取り組んだ。1)臨床現場が求める卒業時の看護実践能力に関する調査と看護教育者が考えている卒業時の看護技術の到達目標と到達度、学生自身が認識している基本的看護技術の到達状況についての全国調査の結果分析を行う。昨年3月卒業の学生とその人たちを受け入れる臨床看護師、教師を対象としたため、平成16年3月4月に質問紙を回収した。部分的には2つの学会で発表したが、現在総合的に分析中である。2)臨地実習で経験した看護技術提供場面を再現した映像を通した看護実践能力の分析。[対象]研究に同意が得られた看護学専攻1年生[方法]病院実習での受け持ち患者を通して経験した看護技術の中で、学生自身が上手くできなかったとした看護技術項目について再現し、ビデオ撮影した。自分で実践した基本的技術の映像を通して、感性とEBNの側面から参加学生と教師でディスカッションし、初回の検討をもとに再度技術を実践する方法を積み重ねている。[結果]初年度は医療短卒業時学生を対象に実施した。本年は看護学専攻の学生を対象とした。「映像を見て話し合うことでさまざまな気づきができ、正確で、効率性、安全、安楽の基本、患者の個別性について考えることができよい学習ができた。」というのが学生の主な反応である。学生が経験した事例に基づいた看護技術を再現し、参加者と教員で映像分析することは、学生に新たな気付きが生じる。それをグループでディスカッションし、検討することにより、看護技術を共有し、より正確で安全・安楽を踏まえた技術が実践できるようになることが確認された。今後、事例をさらに蓄積して教員の関りとEQ育成、学生が獲得した看護技術の評価方法について検討したい。この研究は、看護学専攻学生が卒業時に求められる能力、特に看護実践能力をいかに育成し、その質を保証して、臨床現場に継続できるかの仕組みづくりと獲得した看護技術の評価方法、理性と感性の教育方法と評価道具を開発しようとするものである。本年度は、(1)臨床現場が求める卒業時の看護実践能力に関する調査結果の検討、(2)看護提供の場面再現映像を用いた方法は看護技術及び実践能力習得や気づく力の育成に有効であるかを検討、の2つを研究の柱として実施した。
遺伝子免疫療法を用いた血液悪性腫瘍に対する治療法の開発

既に具体的な抗原として血液悪性腫瘍に見られる再構成した遺伝子(BCR-ABL,PML-RARα,FLT3R)、私達が独自に発見したCEV14-PDGFRβ融合遺伝子、TEL-Syk融合遺伝子を用いて検討をおこなった。本研究においては、新規ターゲット遺伝子の検索と免疫療法の開発を中心におこなった。このようにして見つかった腫瘍特異抗原に対する遺伝子免疫療法をまず検討した。同種幹細胞移植を受けた造血器悪性腫瘍患者の移植後の血清(抗体)を用いて、SEREX法によるGVL効果およびGVHDの標的抗原の検索を行った。白血病細胞株(K562,MEG-A2)およびヒト精巣よりcDNAファージライブラリーを作成し、移植後の患者血清(抗体)による発現スクリーニングを繰り返した。抗体に陽性となるクローンを単離した後、塩基配列を決定し、GenBankによる解析を行った。作成したcDNAライブラリーを移植後の患者25人分の血清でスクリーニングしたところ、25個の陽性クローンを得た。遺伝子銃によるDNAワクチンは、ウイルス抗原などの遺伝子を用いて既に多くの実験が行われている。私達はヒト白血病において異常の見られるmutant FLT3遺伝子によって自律増殖能を獲得した32D細胞をもちいて、悪性腫瘍のDNAワクチン療法をおこなった。LacZ DNAを用いたin vivoの遺伝子導入実験にて導入部位に強く発色が観察された。このことからHeliosGene gunでの遺伝子導入が安定して行われていることが確認できた。腫瘍のチャレンジテストはDNAワクチンで3回免疫後に行ったが、FLT3/NEODNAで免疫したマウスでは全く腫瘍の生着、増殖が認められなかった。これらのマウスから32D/FLT3細胞に対する液性抗体が認められた。造血器悪性腫瘍に対する治療法は、制癌剤による化学療法が主体であるが、腸瘍特異抗原を用いた免疫療法も新しい治療法として開発されている。私達は非ウイルスベクターによる遺伝子導入法を開発してきたが、今年度の研究にて、マンノースを結合させたポリマーが単球系の細胞に遺伝子導入を起こす事を発見した。その他に静電的結合を利用する化合物質としては、ポリリジン、ポリアルギニンなどのポリカチオンやデンドリマー(ポリアミドアミン)などを検討した。ベクターの改良点は、哺乳動物細胞で高レベルの発現を得るために、Semliki Forest virus(SFV)の構造を基本構造とした新しいDNA型発現vectorを作製した。SFVはalphavirusの一種で、一本鎖のプラス鎖RNAをgenomeとして有し、その5'側の3分の2には非構造タンパク(replicase)が、3'側の3分の1には構造タンパクがコードされている。Replicaseにより構造タンパクのmRNAが大量に合成される事を確認した。導入する遺伝子をSEREX法にて分離を試みた。患者血清を用いて、スクリーニングをおこない腸瘍にのみ強く発現する遺伝子の配列を確認している。私達は、腫瘍特異抗原に対する遺伝子免疫療法をまず検討することにより、このような治療法が成り立つかを考えるためのproof of principalstudyとして検討した。CEV14のLZ domainなどを除いたコンストラクトを作成しリン酸化を検討したが、LZ domainの有無に関わらず自己リン酸化が認められた。またレトロウィルスベクターを用いてIL-3依存性のBaF3細胞株に感染させその増殖を検討したところ、低用量のIL-3において増殖に差異が認められた。以上の結果よりCEV14遺伝子のLZ domainはチロシンリン酸化に関与しないことが判明し、CEV14-PDGFRβ融合遺伝子は細胞の増殖能などを修飾しているのではないかと考えられた。

遺伝子銃によるDNAワクチンは、ウイルス抗原などの遺伝子を用いて既に多くの実験が行われている。私達はヒト白血病において異常の見られるmutant FLT3遺伝子によって自律増殖能を獲得した32D細胞をもちいて、悪性腫瘍のDNAワクチン療法をおこなった。LacZ DNAを用いたin vivoの遺伝子導入実験にて導入部位に強く発色が観察された。このことからHelios Gene gunでの遺伝子導入が安定して行われていることが確認できた。腫瘍のチャレンジテストはDNAワクチンで3回免疫後に行ったが、FLT3/NEODNAで免疫したマウスでは全く腫瘍の生着、増殖が認められなかった。これらのマウスから32D/FLT3細胞に対する液性抗体が認められた。
ニワトリ卵巣における小卵胞の急速成長相への転移機構

1、産卵鶏卵巣に存在する白色小卵胞の1個だけに起こる急速成長相への転移の判定指標として、数種類の脂溶性色素を交互に静注して卵胞内取り込みを経時的に調べる方法とともに、白色小卵胞における卵黄球層の形成状況を確認する方法も有効であることを見出した。これらの方法により、C_S放卵を9時10時50分(明開始6時、14時間明)に行なった産卵鶏においては、放卵後8-11時間に卵胞転移が高率で起こることを確認した。2、上記の状況でC_S放卵を行なった産卵鶏に対し、アミノグルテチミド(AG、ステロイド産生阻害剤)を放卵後2時間または放卵前2時間に投与し、血中エストラヂオール(E_2)濃度の推移とともに放卵後14時間で卵胞転移の有無を調べた。その結果、放卵後2時間でのAG投与により卵胞転移率は低下し、これらのE_2濃度は低くなっていた。他方、放卵前2時間でのAG投与は卵胞転移に影響がなかった。これらの結果は、転移直前期のE_2増加が卵胞転移に強く関与していることを示すものである。3、上と同条件の鶏を用い、C_S放卵後2または1時間にAGを投与し放卵後5および12時間で採取した小卵胞の卵胞膜をそれぞれ培養し、個々の小卵胞のE_2産生量を比較した。その結果、対象(Vehicle投与)・AG群ともにE_2産生能の著しく高い小卵胞が各卵巣に1個存在したが、AG投与鶏の各卵胞のE_2産生能は対照に比して低かった。4、上と同じ鶏の各小卵胞のエストロジェンレセプター(ER)を調べた結果、ER陽性細胞は卵胞膜外層に局在していた。しかし、放卵後14時間での転移小卵胞と転移していない小卵胞とのER反応には違いがみられなかった。そこで、産卵鶏にタモキシフェン(TAM、抗エストロジェン剤)を投与した結果、卵胞転移は全例で抑制され卵黄球の形成も阻害され、卵胞膜外層におけるER陽性細胞の反応は著しく強くなっていることが見出された。1.4卵以上の規則正しい連産を示す白色レグホン産卵鶏を用い、午前9時台にC_s放卵が行なわれた日に以下の通り実験材料を採取した。すなわち、C_s放卵後0、2、5、8および11時間に鶏卵巣を摘出し、まだ急速成長相に入っていない小卵胞のうちから湿重量順に上位5個を採取した。この条件下では、上位5個の小卵胞のうちの1個が放卵後811時間に高頻度で卵胞転移を起こすことがすでに確認されている(Imai et al., 1992)。採取した個々の卵胞は顆粒層および卵胞膜層に分離し、それぞれを1時間培養した後、培養液中のP_4およびE_2量を測定した。その結果、両ホルモンの産生能が他に比して高い1個の小卵胞が見出された。また、この卵胞における顆粒層のP_4ならびに卵胞膜層のE_2産生量の経時的推移から、P_4がE_2の高まりに先立つことが認められた。

上記の結果に基づき、6卵以上の規則正しい連産を示す産卵鶏を用い、午前9時台のC_s放卵後2時間にAminoglutethimide(AG)を投与し、さらにAG投与後2、6、10時間に3種類の脂溶性色素のそれぞれを静注し、放卵後14時間に鶏卵巣を摘出して小卵胞の急速成長相への転移ならびにその時間帯を調べた。その結果、AG投与により卵胞転移の起こらなかった個体が50%を占め、転移の起こったものでもその時間が対照より遅延した場合が多くみられた。またAG投与後2時間で血中E_2濃度は対照群より有意に低下し、卵胞転移が起こらなかった個体では投与後12時間まで低レベルを持続したのに対し、転移が起こった個体では投与後10時間で対照群と同程度のホルモン濃度に回復していた。3.前記2の成果に基づき、AG投与後の個々の小卵胞におけるE_2産生能の経時的変化の様相を明らかにすることを目的として、現在研究しつつある。1.白色レグホン産卵鶏において、C_s卵が9時台(14L/10D、明開始5:00)に放卵された場合、放卵後811時間に卵胞転移が高頻度で起こることを以前の報告で見出したが、さらにC_s放卵が10時台であった個体の卵胞転移時間について追究した。得られた結果を総合し、C_s放卵が910時30分に起こった場合には卵胞転移時間帯が放卵後811時間であると結論した。2.実験当日のC_s放卵予想時間が9時10時30分である個体に対し、Aminoglutethimide (AG) 100mg/Kg体重を放卵前2時間に投与した。放卵後4、8および12時間に赤または黒のSudan色素を交互に静注し、放卵後14時間に卵胞を摘出して小卵胞への色素取り込みにより急速成長相への転移時間を判定した。その結果、放卵後2時間でのAG投与は卵胞転移に影響を及ぼさないことを見出した。AGによるステロイド産生阻害は投与後約4時間持続し、その後ホルモンレベルは回復することを血中ホルモン濃度の測定により確認したので、卵胞転移時間からみて本結果は妥当なものであると考えた。放卵後2時間でのAG投与により卵胞転移は約50%の個体で抑制され、また転移が起こった場合でも時間的に遅延した例が多くみられた昨年度の結果と考え合わせれば、ステロイド特にエストラヂオール(E_2)が卵胞転移に関与している重要性が一層示されたものといえる。3.上記と同様の動物に対しC_s放卵後2または1時間にAGを投与し、放卵後5および12時間で卵巣から転移以前の小卵胞のうち湿重量順に上位5個を採取した。個々の小卵胞の卵胞膜を1時間培養して培養液中のE_2濃度を測定した。その結果、AG投与鶏の卵胞におけるE_2産生能は対照(Vehicle投与)より有意に低かったものの、他に比して産生量の高い小卵胞が各卵巣に1個存在していた。1.卵胞採取日の9時10時50分(明開始6時、14時間明)にC_s放卵を行なった産卵鶏を用い、放卵後2、8、14時間で白色小卵胞を湿重量順に10個程度採取した。各卵胞の凍結切片を作成し、酸性ヘマチンテスト(AHT)により卵黄球を染色した。観察の結果、通常の小卵胞では白色卵黄球が不連続の層状に蓄積されていたのに対し、放卵後14時間でのみ卵黄膜直下に黄色卵黄球の形成されている小卵胞が各個体に1個だけ存在していた。この結果から、卵黄膜直下の黄色卵黄球層の存在を確認することは有効な卵胞転移の指標となることを見出した。2.上と同じ各卵胞の凍結切片に対し、抗ヒト・エストロジェンレセプター(ER)抗体を用いた免疫染色を施し、その隣接切片にはAHTを行なった。その結果、全ての小卵胞でER陽性細胞は卵胞膜外層に局在したが、放卵後14時間で転移が確認された小卵胞と転移しなかったものおよび他の時間の小卵胞の間で、ER陽性反応に関する違いはみられなかった。そこで、産卵鶏にタモキシフェン(TAM、抗エストロジェン剤)を投与し、同様の時間に採取した小卵胞を調べた結果、卵胞膜外層におけるER陽性細胞の反応は著しく強くなっていた。一方、卵胞転移は全例で抑制され、卵黄球の形成も阻害されていた。
機能未知トランスポーターの炎症応答における重要性・制御機構の解明

本研究では、炎症刺激時に発現量が大きく上昇するSLC-X (SLC2A6)の個体レベルでの重要性解析、及びその分子機構解析を目的としている。前年度までに、本トランスポーターに関して、ノックアウトにより、(1) lipopolysaccharide (LPS)の腹腔内投与時の生存が低下すること、(2)マウス腹腔内マクロファージにおいてLPS刺激による解凍系の亢進が減弱すること、などを見出している。最終年度である本年度は、上述のようなSLC2A6の機能が必要とされる環境に関する知見を得るべく解析に取り組んだ。SLC2A6はLPS刺激などの炎症刺激により、転写レベルで発現量が大きく上昇する。LPSはToll-like receptor (TLR)4の代表的なリガンドであることから、TLR4シグナリングの重要な効果器である転写因子RelAに着目した。GEO datasetより、マクロファージに対してLPSなどの炎症刺激をした際のRelAによるChIP-seqデータを入手し、SLC2A6遺伝子近傍を調査したところ、プロモーター領域近傍や、一部のイントロン領域にてRelAの結合が認められた。これらの領域ではH3K4のメチル化やH3K27のアセチル化が亢進しており、またDNase感受性であること、RNA polymerase IIの結合が認められたことから、エンハンサー領域であることが示唆された。本領域をルシフェラーゼアッセイに供したところ、確かにLPS依存的にルシフェラーゼの活性が認められたことから、本領域がSLC2A6の炎症刺激時における発現量を制御しているものと考えられる。これらの成果をまとめ、国際誌FEBS Lettersに投稿し、2019年1月に受理された。本研究では、炎症刺激時に発現量が大きく上昇するSLC-Xの個体レベルでの重要性解析、及びその分子機構解析を目的としている。本年度は以下のような知見を得た。SLC-Xの個体での重要性を評価すべく、炎症刺激として頻用されているlipopolysaccharide (LPS)を腹腔内投与し、生存率を評価したところ、KO群ではコントロール群に対し有意に生存率が低下した。同様にLPSを腹腔内投与した際の血漿中TNFaレベルを評価したところ、KO群では有意に上昇していたことから、LPS刺激に対する炎症応答がKOマウスでは過剰になっているものと推察される。分子機構を解明すべく、LPS刺激時にSLC-Xが強く発現誘導されるマウス腹腔内マクロファージ(MPMs)において炎症性サイトカインなどのmRNAレベルを評価したものの、KOマウス由来のMPMsにおいて変化は認められなかった他、ELISAを用いてタンパク質レベルで評価した際にも差は確認できなかった。in vivoで認められているフェノタイプをマクロファージの機能だけで説明することは困難であることが推察される。MPMsのメタボローム解析結果をpathway解析したところ、解糖系への影響が見出された。炎症刺激時には酸化的リン酸化が抑制され、解糖系が亢進するという代謝リプログラミングが起きることが広く知られており、この変化はマクロファージなどの免疫系細胞が正常に炎症応答するために必要である。解糖系の評価指標である細胞外への乳酸の分泌を評価したところ、コントロールマウス由来のMPMsではLPS刺激により乳酸分泌が増加するものの、KOマウス由来のMPMsではその増加の程度が減少していた。すなわちSLC-X KOにより、炎症刺激時の解糖系亢進という代謝リプログラミングに異常をきたしているものと考えられる。SLC-XのKOマウスを樹立し、本トランスポーターが実際に個体レベルで炎症応答の制御に関与していることを見出すことに成功した。しかしながらその分子機構解析に関しては、マクロファージにおいて炎症刺激時の代謝リプログラミングに関与することを見出したものの、in vivoのフェノタイプを説明する機構の発見には至っていない。特に分子機構に関しては、メタボローム解析を行ったものの、本トランスポーターの基質を見出すに至っておらず、今後の課題である。

これらの成果をまとめ、国際誌FEBS Lettersに投稿し、2019年1月に受理された。当初の計画通り個体でのフェノタイプ解析と分子機構解析を並行して進めている。In vivoとin vitroとのギャップを埋めるため、マクロファージという単一な集団ではなく、ヘテロな細胞系においてSLC-X欠損の効果を評価する予定である。現在マウス末梢血単核球(PBMC)に着目している。本画分では20-30%ほどが顆粒球によって占められているが、Immunological genome project (https://www.immgen.org/)などのデータベースより、SLC-Xが顆粒球にも強く発現していることを見出している。LPS腹腔内投与をした後のPBMC画分での血球細胞のポピュレーションの変化や炎症性サイトカインなどの変化をコントロール群、KO群間で比較・評価する予定である。また今回本トランスポーターが解糖系を制御するという知見を得たがその制御機構は不明である。詳細な分子機構解析を行うに辺り、遺伝子操作が容易でないマクロファージを用いることは適切ではないと考えられる。そこでSLC-Xが高発現し、かつ遺伝子操作が容易で詳細な分子機構解析を行うに適したモデル細胞をまず探索する予定である。当該細胞を用いてSLC-Xの基質同定など、分子機構解析に取り組み、詳細な分子機構の解明に取り組む。特に今年度の取り組みでデータ解析の技術を磨いているため、トランスクリプトーム解析などのオミックス解析に取り組む予定である。海外渡航費を計上していたが、招待講演となったため、費用の削減ができた。物品費としては主に本トランスポーターの詳細な作用機序解析を想定しており、特に抗体やトランスフェクション試薬などを計上していた。しかしながら本年度は既に取得済みであったメタボローム解析の結果をデータ解析することにより作用機序解析を進めることができたため、これらの物品費を抑制することができた。一方、詳細な分子機構はまだ見出せていない。本年度のメタボローム解析結果のデータ解析よりSLC-Xの作用機序の一端を見出すことができた経験から、個別解析よりもオミックス解析と引き続くデータ解析により研究を強力に推進可能であると期待される。そこでメタボローム解析とは異なる階層を評価可能なトランスクリプトーム解析に取り組みたいと考えている。次年度繰り越し分は解析の受託費用、得られるデータ解析に用いるパソコンなどの費用を物品費に加えて計上する予定である。
ストレス蛋白質誘導による心筋保護作用に及ぼす麻酔薬の影響

【平成13年度】GGA群は前処置として実験12時間前および開始直後に1mg/kg静脈内投与した。IP群は左冠動脈鈍縁枝の"5分間閉塞・15分間再灌流"を2サイクル行った。梗塞/梗塞危険領域比はコントロール群(n=7)59.2±18.3%,IP群(n=8)31.3±9.1%,GGA群(n=6)36.6±17.9%とコントロール群に比較してIP群およびGGA群において有意に低かった。後方散乱エコーの心周期変動は冠動脈閉塞後に各群で有意に低下したが,群間には有意差を認めなかった。GGA前投与は先行虚血と同様に心筋保護作用を生じ,その保護作用はセボフルランにより増強された。またこの心筋保護作用にはミトコンドリアK_<ATP>チャネルが関与することが示唆された。テブレノン(geranylgeranylacetone : GGA)前投与がストレス蛋白質を誘導し,先行虚血(ischemic preconditioning : IP)と同様に虚血再灌流後の心筋保護作用を示すかどうか,日本白色種ウサギを用いた虚血心モデルで検討した。GGA群は前処置として実験12時間前および開始直後にGGAをそれぞれ1mg/kg静脈内投与した。IP群は左冠動脈回旋枝の鈍縁枝の"5分間閉塞・15分間再灌流"を2サイクル行った。以下のポイントにおいて一般血行動態測定と同時に心臓の表面から超音波エコープローブを用いて乳頭筋レベルの左室短軸像を描出し,後方散乱エコーを記録した。(1)左冠動脈鈍縁枝閉塞60分前(Baseline),(2)閉塞直前,(3)閉塞30分後,(4)再灌流60分後,(5)120分後,(6)180分後。実験終了後Evans blue注入により心筋梗塞危険領域を同定し,続いて心臓を摘出し1% triphenyltetrazolium chlorideで染色して心筋梗塞範囲を同定した。心筋梗塞範囲,梗塞危険領域および全左室断面積をそれぞれ計測し,各容積および梗塞/梗塞危険領域比等を算出した。光磁気ディスク上の画像データから左室前側壁に関心領域を設定し,後方散乱エコーの心周期変動から心筋組織性状を解析した。各数値は平均値±標準偏差で示した。統計学的検討は分散分析およびSheffe's testにて行い,P<0.05をもって有意とした。梗塞/梗塞危険領域比はコントロール群(n=7)59.2±18.3%, IP群(n=8)31.3±9.1%, GGA群(n=6)36.6±17.9%とコントロール群に比較してIP群およびGGA群において有意に低かった。GGA前投与は先行虚血と同様に心筋保護作用を生じることが示唆された。テブレノン(geranylgeranylacetone : GGA)による心筋保護作用と揮発性麻酔薬との相互作用およびその作用機序をウサギ虚血心モデルを用いて検討した。GGA群は前処置として実験24時間前にGGA10mg/kgを静脈内投与した。GGA+SEV群はGGA前処置後,左冠動脈閉塞60分前から30分間セボフルラン0.5MACを吸入させ30分間のメモリー期をおいた。GGA+5HD群はGGA前処置後,冠動脈閉塞30分前にミトコンドリアK_<ATP>チャネル阻害薬(sodium 5-hydroxydecanoate 5mg/kg)を静脈内投与した。以下のポイントにおいて一般血行動態と心表面から乳頭筋レベル左室短軸像の後方散乱エコーを記録した。実験終了後Evans blue注入により心筋梗塞危険領域を同定し,続いて心臓を摘出し1%triphenyltetrazolium chloride染色により心筋梗塞範囲を同定した。心筋梗塞範囲梗塞危険領域および全左室重量を計測し、梗塞/梗塞危険領域比等を算出した。

梗塞/梗塞危険領域比はGGA群(n=8)38.5±9.9%,GGA+SEV群(n=8)26.9±19.7%,GGA+5HD群(n=8)55.2±13.7%,Vehicle群(n=7)59.2±9.4%とVehicle群,GGA+5HD群に比較してGGA群およびGGA+SEV群において有意に低かった。後方散乱エコーの心周期変動は各群で有意差を認めなかった。GGA前投与による心筋保護作用はセボフルランにより増強された。またこの心筋保護作用にはミトコンドリアK_<ATP>チャネルが関与することが示唆された。