hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
白血病幹細胞に対する骨髄微小環境を模した抗白血病薬感受性検査法の開発

白血病の治療には、抗白血病薬の的確な薬剤感受性検査法による評価が必要である。従来の通常酸素下での細胞培養系ではなく、生体内の骨髄微小環境を模した低酸素培養系の方が白血病幹細胞の薬剤感受性を的確に評価できるのではないかと考えた。本研究では、低酸素培養系が白血病幹細胞におけるHIF蛋白の発現誘導およびNotchシグナル、NF-?BシグナルおよびmTORシグナルに影響を及ぼすことを明らかにし、新規培養法を用いた薬剤感受性試験の基礎を築いた。本研究の目的は、白血病細胞の抗白血病薬感受性を調べるための培養検査法において、骨髄微小環境により近い条件で白血病細胞の培養を行い、生体内での現象をより正しく反映する検査法の開発を目指すことである。白血病幹細胞に限らず癌幹細胞は低酸素環境に存在すると報告されている。そこで、低酸素培養装置を用いて白血病細胞の培養を行い、WST-1アッセイ法により細胞増殖作用を、メチルセルロース培地におけるコロニーアッセイ法により自己複製能効果を、従来型培養装置を用いた方法とで比較検討した。その結果、低酸素刺激は白血病細胞に対して、短期的な増殖促進効果をもたらす一方で、自己複製能を低下させることがわかった。更に骨髄環境を模するため、遺伝子組み換え型Notchリガンド蛋白をコーティングした培養プレートを用いて低酸素培養装置にて培養を行ったが、従来型培養装置で見られる効果との有意な差異は認められなかった。現在は、これらの方法で培養した細胞を回収して、このような作用をもたらした遺伝子や蛋白の発現の変化を調べ、培養法により効果に違いを生じさせた分子機序に関しての検討を行っている。今後は、更に抗白血病薬存在下での培養を行うと共に、より生体環境に近い培養法の有用性を検討する予定である。この有用性が確立されれば、白血病患者の治療において薬剤感受性の予測や予後の推定が可能となり、臨床検査として大いに有用であると考えられる。本研究では、白血病細胞の抗白血病薬感受性を調べるための培養検査法において、骨髄微小環境により近い条件で培養を行い、生体内での現象をより正しく反映する検査法の開発を目指す。骨髄は低酸素下にあり、白血病幹細胞はNotchリガンド蛋白などを発現した骨髄支持細胞に接して存在すると報告されている。従来、細胞培養は細胞培養装置(炭酸ガス5%、酸素ガス21%)内の培養プレートで液体培養されてきたが、これは骨髄の環境とは大きく異なる。白血病幹細胞の薬剤感受性を細胞培養で解析するには、培養環境を骨髄微小環境に近い条件にした方が生体内での現象をより正しく反映すると考えられる。そこで、遺伝子組み換えNotchリガンドをコーティングした培養プレートを用い、低酸素培養装置にて細胞培養を行う新規培養法を生み出し、白血病幹細胞に対する薬剤感受性検査の臨床検査しての有用性を明らかにする。23年度に行った研究結果より、低酸素刺激は白血病細胞に対して短期的な増殖抑制効果をもたらす傾向が見られた。また、従来、白血病幹細胞は骨髄微小環境において、細胞周期を静止期に留めることにより自己複製能を高め、分化を抑制することによってその存在を維持していると報告されているが、自己複製能を評価するコロニーアッセイ実験では、従来の報告とは異なり、低酸素刺激によりコロニーの形成が抑制されるという結果が得られた。一方で、自己複製能に関与するとされるNotchシグナルが、低酸素刺激により活性化されることが遺伝子転写レベルで確認された。これまでにも、幹細胞の増殖動態を見るために低酸素培養装置を用いた研究は行われているが、臨床検査として低酸素培養を行うのは、検索する限り報告はない。本研究で、より生体環境に近い培養法の有用性が確立されれば、白血病患者の治療において薬剤感受性の予測や予後の推定が可能となり、臨床検査として有用であると考えられる。本研究では、白血病細胞の抗白血病薬剤感受性を調べるための培養検査法において、骨髄微小環境により近い条件で培養を行い、生体内での現象をより正しく反映する検査法の開発を目指すことを目的とする。本年度も白血病細胞株を研究対象とした。骨髄微小環境を模するため、Notchリガンドを底面にコーティングした培養プレートを使用し、低酸素培養装置にて細胞培養を行った。そして、低酸素刺激およびNotchリガンド刺激に伴う細胞内シグナル伝達関連分子の変化について、主に定量RT-PCR法およびイムノブロット法を用いて解析を行った。まず、低酸素刺激により発現が安定化し、がんの重症度への関与が示唆されているHypoxia Inducible Factor (HIF)蛋白について調べた。HIFは元来、通常酸素濃度下では常に分解作用を受けて不安定であるとされるが、白血病細胞株の中には通常酸素濃度下であってもHIF蛋白の恒常的な発現を示すものがあった。また、低酸素刺激により、従来の低酸素分野において研究が進んでいるHIF-1αよりもHIF-2αの発現が有意に誘導される細胞株があった。Notchシグナルの活性化に関しては、低酸素刺激により抑制傾向が見られた。

Notchシグナルは正常造血幹細胞のみならず白血病幹細胞の生存維持や自己複製能の亢進に働くと考えられているため、本研究で得られた結果は、既報の結果と異なる興味深いものである。また、低酸素刺激により、NotchシグナルのみならずNF-κBシグナル経路およびmTORシグナル経路においても抑制傾向が認められた。HIF蛋白はmTORシグナルの下流に存在し、そのシグナルの影響を受けると従来より報告されているが、本研究によりHIF蛋白がmTORシグナルに影響を与えるという逆方向の作用、または相互的に作用していることが明らかとなった。私のこれまでの研究で、白血病細胞の自己複製能、増殖、分化、アポトーシスにNotchシグナルが影響を与えることなどを報告してきた。これらの実験における方法論や手技などは習得済みであり、本研究へ発展させることによって新しい知見も得られおり、おおむね順調に進展していると考えられる。24年度が最終年度であるため、記入しない。骨髄環境を再現するため、本年度も引き続き遺伝子組み換えNotchリガンドをコーティングした培養プレートを用いて低酸素培養装置にて細胞培養を行う。従来型培養装置で見られる効果との差異を調べ、その差異をもたらした遺伝子や蛋白の発現の変化を検討することによって、培養法により効果に違いを生じさせた分子機序の解析を行う予定である。さらに、シトシンアラビノシドやイダルビシンなど抗白血病薬存在下での培養を行う予定である。更に本年度は、細胞株を用いて得たこれまでの知見を基にして、急性白血病患者の血液から分離した白血病細胞を用いて同様の解析を行う。従来の培養法での薬剤感受性の結果と、骨髄微小環境を模した新規培養法での薬剤感受性の結果の差異を比較検討する。
核内のヒストンアセチル化を時空間的に観察可能にする蛍光プローブの開発

蛋白質アセチル化は、ヒストンアセチル化酵素によって正に、ヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)によって負に、ダイナミックに制御されている。真核生物の染色体DNAは、クロマチンと呼ばれるDNAとヒストンからなる高次構造をとっている。そのクロマチン構造の変化が遺伝子発現のオン・オフを決める役割を果たしていると考えられており、ヒストンのアセチル化はクロマチン構造変化を制御する主要な翻訳後修飾である。そこで、細胞内におけるヒストンのアセチル化及び脱アセチル化を、生きたままの細胞で観察することができ、かつ時間・空間分解能をもった解析を可能にする蛍光プローブを開発した。この蛍光プローブは、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を起こす二つの蛍光蛋白質の間に、アセチル化される基質ドメインとアセチル化リジン結合ドメインがリンカー配列によって連結している。この蛍光プローブ内の基質ドメインがアセチル化されると、アセチル化リジン結合ドメインとアセチル化された基質ドメインとの結合により、蛍光プローブの構造が変化する。この構造変化により起こる二つの蛍光蛋白質間のFRETの変化を蛍光強度比変化として検出する。作製した蛍光プローブが生細胞内で内在性のヒストンH4と同様の挙動をし、蛍光プローブのアセチル化をFRET変化に伴う蛍光強度比変化として検出可能であることを示した。本年度、作製した蛍光プローブを用いて各種HDAC阻害剤による生細胞内でのピストンH4アセチル化誘導の違いを調べた。また、この蛍光プローブを用いて、有糸分裂過程におけるヒストンH4のアセチル化状態を観察した。染色体が凝集するとともにヒストンH4の脱アセチル化が起こり、分裂終期の後半には分裂前のアセチル化状態まで回復することがわかった。特定の核ドメインにおける転写制御の詳細な分子機構を解明するためには、生体内における核の特定の場所で起きる転写活性化を検出することが必要である。しかしながら、従来の生化学的な手法では困難であった。そこで本研究は、細胞を生きたままの状態で細胞内のヒストンのアセチル化を検出することの出来るFRETを原理とした蛍光プローブの開発を行うことを目的とした。アセチル化ヒストンを検出する蛍光プローブを作製するために、FRETを起こす蛍光ドナー蛋白質であるCFPにヒストンH4を連結した蛋白質と蛍光アクセプター蛋白質であるYFPにアセチル化ヒストンH4結合蛋白質を連結した蛋白質をリンカーで結ぶことによって、アセチル化依存的に分子内でFRET変化を起こすヒストンH4アセチル化の蛍光プローブを作製し、作製した蛍光プローブが、内在性のヒストンH4と同様にクロマチン内に取り込まれていることを確認した。ヒストン脱アセチル化阻害剤であるトリコスタチンA(TSA)による蛍光プローブのアセチル化の蓄積を,ウェスタンブロッティング法により検出した。さらに、蛍光プローブのアセチル化の蓄積する時間経過は内在性のヒストンH4のアセチル化の蓄積の時間経過と一致することを確認した。蛍光プローブを発現させた細胞にTSA処理すると、FRET変化が起きることを確認した。以上の結果から、作製した蛍光プローブは生細胞内で内在性のヒストンH4と同様の挙動を示し、蛍光プローブのアセチル化はFRET変化に伴う蛍光強度比変化として検出可能であることが分かった。
ノックアウトマラリアの作出(ネズミマラリアオーキネート特異抗原Pbs21の機能の解析)

1.オオキネートに特異的に発現される遺伝子をノックアウトしたマラリアを作出するため、ターゲットとなる遺伝子としてPbs21の他にCTRP(CS-TRAP Related Protein)を今回新たにクローニングした。3. CTRPタンパク質を大腸菌を用いてGST fusion proteinとして発現し、ポリクローナル/モノクローナル抗体を作製し、その発現時期と発現場所をしらべた。その結果、CTRPはookineteで蛋白質として発現していることを確認した。4. DHFR(dehydroforate reductase)遺伝子およびピリメサミ耐性遺伝子DHFR^★をPCRで増幅・クローニングした。5. CTRP遺伝子をノックアウトするためのDNAコンストラクトCTRP-DHFR^★を作製した。6.同調培養によって108のmerozoitesを調製し、DNAコンストラクトCTRP-DHFR^★をエレクトロポレーションによりトランスフェクションし、ネズミに導入した。7.ピリメサミン処理により耐性獲得原虫をスクリーニングし、殖えた原虫の遺伝子構造を解析し、CTRPノックアウトマラリアが作製されたことを確認した。8.このCTRPノックアウトマラリア原虫を用いて、現在CTRPの機能の解析を行なっている。2.原虫の種々発育時期のRNAを抽出し、Northern Blotting分析を行なった結果、CTRPmRNAはookineteに特異的にあることが判った。
細胞活性化時の生理機能変化を担う「分子レバレッジ機構」の解明

活性化による血小板細胞の機能変化は膜糖タンパクGPIIb/IIIaの細胞外ドメインの高次構造変化による。細胞内ドメイン・細胞膜貫通ドメイン・細胞外ドメインを統合したGPIIb/IIIaモデルを、分子を構成する全ての原子と周囲の水分子の位置座標から作成する。血小板細胞活性化に伴う細胞内環境のわずかな変化がGPIIb/IIIaの細胞外ドメインの大きな構造変化を惹起するメカニズムとして「分子レバレッジ機構」の解明を目指す。
細胞膜受容体サブタイプ特異的な新規アロステリック活性化方法の開発

本研究では、我々が開発した金属錯体によるイオンチャネル型グルタミン酸受容体の人為的な活性化方法に関して、適用拡大を進めている。一昨年度には、class C GPCRである代謝型(GPCR)グルタミン酸受容体であるmGlu1に対する適用拡大に成功した。昨年度は、mGlu1のサブタイプであるmGlu5に対するさらなる適用拡大に成功した。すなわち、この方法を用いれば、遺伝子の相同性が高く、アゴニストでは区別できないサブタイプすら選択的に活性化できることが判明した。また、昨年度は、class A GPCRであるアデノシンA2A受容体の選択的な活性化に向けて、変異体作成を行った。今年度は、実際に、class A GPCRであるA2A受容体の金属錯体による人為的な活性化を評価した。昨年度に作成した変異体に対して、様々な金属イオンおよび金属錯体を用いて、promiscuous Gタンパク質として知られるGalpha15を発現させて、Ca2+イメージングからその効果を検討した。その結果、1つの変異体において、Cu2+添加でわずかに活性化することを見出せた。そこで、その活性化メカニズムの検討および活性化の最適化を行うために、Cu2+の配位に関わると考えられるアミノ酸を様々変異導入したところ、Cu2+でより強く活性化できるA2A受容体変異体を見いだすことに成功した。また、確かに、狙った場所にCu2+が配位することで人工的に構造変化が起こり活性化しているという機構も確認できた。class AGPCRは数百種類存在するが、本研究で我々が見出した方法はそれらに対してより広く適用できる可能性を秘めている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、我々がごく最近に見出した金属錯体によるAMPA型グルタミン酸受容体に対する人為的な活性化手法に関して、他の受容体ファミリーに対する適用拡大を進めた。イオンチャネル型受容体以外の受容体に対する適用を評価するために、細胞外にリガンド結合部位を有し、リガンド結合に伴いその構造が大きく変化することが知られるclass C GPCRに対する人為的な活性化を評価した。class c GPCRのリガンド結合部位の構造変化は、我々がこれまでに活性化に成功しているAMPA型グルタミン酸受容体と同様の機構であると報告されているので、我々の方法が適用できると考えられた。本年度はclass c GPCRに属するグルタミン酸受容体である代謝型グルタミン酸受容体(mGluR)に対する適用拡大を評価した。mGluRは7種類のサブタイプが知られるが、本年度はグルタミン酸有無のリガンド結合部位のX線結晶構造解析結果が報告されているmGlu1サブタイプに着目した。報告されているX線結晶構造解析結果に基づき、金属錯体が配位可能なヒスチジン残基を2箇所変異導入した変異体を計8種類構築した。金属錯体としてはAMPA受容体において活性化に成功しているPd(bpy)錯体を用いて、蛍光性カルシウムイオン指示薬であるFura2を用いて、mGlu1の人為的な活性化について評価した。その結果、3種類の変異体において、Pd(bpy)により人為的に活性化することに成功した。興味深いことに、mGlu1の際にはグルタミン酸の非添加時においてもPd(bpy)により活性化できることを見出した。本年度は、研究計画に記載した通り、我々がごく最近に見出した受容体活性化に対する適用拡大を進めた。実際にイオンチャネル型受容体とは大きく異なる代謝(GPCR)型グルタミン酸受容体(mGlu1)に対する人為的な活性化に成功した。以上より、研究は概ね順調に進んでいると判断した。本研究では、我々が開発した金属錯体による受容体の人為的な活性化手法に関して、適用拡大を進めている。昨年度は、代謝(GPCR)型グルタミン酸受容体であるmGlu1に対する適用拡大を進めて、人為的な活性化に成功した。本年度はmGlu1に対して相同性の高いmGlu5に対する活性化を検討した。従来は小さな規模の変異体ライラブラリーを作成し、そこから活性化体をスクリーニングしたが、本研究では、mGlu1とmGlu5のアミノ酸相同性に基づき変異体を設計した。相同性に基づくことで、1種類の変異体設計で活性化させることに成功した。これまで、相同性の高いmGlu1とmGlu5を見分けて選択的に活性化される薬剤は知られていない。本手法は、類似する受容体サブタイプを選択的に活性化できる新たなケモジェネティクス法になり得ることが示唆された。また、本年度は、class c GPCRとは異なり細胞外に明確なリガンド結合部位を有さないclass A GPCRに対する人為的な活性化方法の開発を進めた。class AGPCRはGPCRの中でも最も大きなファミリーを形成するため、汎用的な活性化方法が開発できれば、幅広い応用が期待される。我々は、最近のGPCR構造解析により明らかにされた膜貫通Helix VIの活性化時構造変化に着目し、その構造変化を金属錯体で人為的に制御することを目指した。本年度は、GPCRの中でもX線構造解析情報が豊富なアデノシン受容体A2aサブタイプを選択し、A2a変異体作成および変異体の細胞内評価系の構築を進めた。実際に8種類の変異体の作成に成功し、promiscuous Gタンパク質として知られるGalpha15を用いることで変異体評価系の構築にも成功した。

本年度は、我々の人為的な受容体の活性化方法に関して、他の代謝型グルタミン酸受容体ファミリーへの拡張にも成功した。特に類似する受容体に関しては、アミノ酸の相同性のみで適切な変異体を設計できるため、汎用性の高い手法と言える。また、GPCRに関して広く適用性を示すため、class A GPCRの評価系を構築した。金属錯体の評価は開始した段階であるが、来年度に予定する網羅的なスクリーニングに向けての準備が整った。本研究では、我々が開発した金属錯体によるイオンチャネル型グルタミン酸受容体の人為的な活性化方法に関して、適用拡大を進めている。一昨年度には、class C GPCRである代謝型(GPCR)グルタミン酸受容体であるmGlu1に対する適用拡大に成功した。昨年度は、mGlu1のサブタイプであるmGlu5に対するさらなる適用拡大に成功した。すなわち、この方法を用いれば、遺伝子の相同性が高く、アゴニストでは区別できないサブタイプすら選択的に活性化できることが判明した。また、昨年度は、class A GPCRであるアデノシンA2A受容体の選択的な活性化に向けて、変異体作成を行った。今年度は、実際に、class A GPCRであるA2A受容体の金属錯体による人為的な活性化を評価した。昨年度に作成した変異体に対して、様々な金属イオンおよび金属錯体を用いて、promiscuous Gタンパク質として知られるGalpha15を発現させて、Ca2+イメージングからその効果を検討した。その結果、1つの変異体において、Cu2+添加でわずかに活性化することを見出せた。そこで、その活性化メカニズムの検討および活性化の最適化を行うために、Cu2+の配位に関わると考えられるアミノ酸を様々変異導入したところ、Cu2+でより強く活性化できるA2A受容体変異体を見いだすことに成功した。また、確かに、狙った場所にCu2+が配位することで人工的に構造変化が起こり活性化しているという機構も確認できた。class AGPCRは数百種類存在するが、本研究で我々が見出した方法はそれらに対してより広く適用できる可能性を秘めている。今年度はmGlu1に対する人為的な活性化に成功した。次年度以降は他の受容体ファミリーに対する活性化も検討し、本手法の有用性を実証する。class A GPCRとしてアデノシンA2a受容体を標的としたGPCRの人為的な活性化評価法の検討を進める。また、脳から単離した初代培養細胞においても、本手法の適用を検討する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
乳癌抗体療法の臨床効果における免疫学的検討-併用免疫細胞療法有効性についての検討

HER2受容体を分子標的とする抗腫瘍抗体Trastuzumabの宿主免疫系を介した作用機序についての検討を行った。in vitroにおいて健常人末梢血単球からIL-4, GM-CSFを用いた通法により誘導し、Trastuzumab添加HER2抗原により成熟させ得られたDCの解析を行った。Trastuzumab添加によって得られたDCは非添加例に比し、有意なIL-12p70の産生増加、IL-10の産生低下が認められ、HER2ペプタイド認識CTLの誘導能が有意に高かった。このことからTrastuzumabはDCを介した抗腫瘍細胞性免疫の誘導に効果的に働くことが示唆された。現在Trastuzumab治療患者の末梢血を用いた経時的腫瘍抗原特異的CTL precourserassayを行い、治療成績との相関についての検討を行っている。また我々は、HRE2陽性難治性(再発性)乳癌症例に対し、局所細胞免疫療法とTrastuzumab併用による第I/II相臨床試験を施行し、臨床的に重篤な副作用なく奏効例を経験した。今後引き続きTrastuzumab・細胞免疫療法併用症例を含めた臨床検体を用いた免疫学的検討を行い、臨床的パラメーターとの相関性について統計学的検討を行っていく予定である。今後引き続きTrastuzumab治療患者(HLA-A2,-A24症例),またTrastuzumab・免疫細胞療法併用症例の末梢血,組織切片等の臨床検体を用い,免疫学的検討を行っていく予定であるまた,FGR3遺伝子多型について,158VIFを含む領域を特異的プライマー・Taqmanプローブを用いたPCRにて増幅しgenotypeを決定する方法を,予備的検討において確立した。今後,Trastuzumab治療症例パラフィン切片からDNAを抽出。多型と臨床的治療効果,腫瘍マーカーを含む各種パラメーターとの相関性について,統計学的検討を行う予定である。HRE2陽性難治性(再発性)乳癌症例に対し、局所細胞免疫療法とTrastuzumab併用による第I/II相臨床試験を施行し、臨床的に重篤な副作用なく奏効例を得た。同併用療法を含めたTrastuzumabの宿主免疫系を介した作用機序について解析する目的で、in vitroにおいて健常人または乳癌患者末梢血単球からIL4, GM-CSFを用いた通法により誘導し、Trastuzumab添加HER2抗原により成熟させ得られたDCの解析を行った。Trastuzumab添加によって得られたDCは非添加例に比し、有意なIL-12p70の産生増加、更にIL-23の増加、IL-10の産生低下が認められた。同Trastuzumab添加により誘導されたDCは、非添加例に比しHER2ペプタイド認識CTLの誘導能が有意に高いことも示されており、TrastuzumabはDCを介した抗腫瘍細胞性免疫の誘導に効果的に働くことが示唆され、細胞免疫療法との併用による相加・相乗的治療効果が期待された(現在投稿準備中)。現在Trastuzumab治療患者(HLA-A2,-A24症例)の末梢血を用いた経時的腫瘍抗原特異的CTL precourser asayを行い、治療成績との相関についての検討を行っている。今後引き続きTrastuzumab・細胞免疫療法併用症例を含めた末梢血、組織切片等の臨床検体を用いた免疫学的検討を行い、臨床的パラメーターとの相関性について統計学的検討を行っていく予定である。
脂肪細胞におけるob gene調節機構の検討

肥満遺伝子(ob gene)は、最近クローニングされ、その遺伝子産物はレプチンleptinと呼ばれる蛋白である。レプチンは脂肪細胞で産生され、個体の体重を一定に保つ方向に作用することが知られている。すでにいくつかのホルモン因子がob gene発現を調節することが報告されているが、我々は、本研究において発現に最も影響を与える因子は何かを検討した。ラット副睾丸の脂肪細胞を採取、培養し、その系でインスリン、デキサメサゾン、β_3-アドレナリン受容体作働薬(CGP12177A)、8-bromo-cAMP、8-bromo-cGMP、1-メチル-3-イソブチルキサンチン(MIX)を作用させ、ob geneメッセンジャーRNAの発現量を定量化した。24時間インスリン(100nM)存在下での培養でob geneの発現は21.4倍も増加し、しかもインスリン濃度依存性が認められた。この濃度はまた、新生胎仔血清20%の効果と同等であった。デキサメサゾンは2.52.9倍も発現を増加させ、また、8-bromo-cGMPで2.4倍、MIXで2.8倍の発現の増加を示した。逆に、CGP1277A、8-bromo-cAMPは有意な発現の増加を示さなかった。MIXとデキサメサゾンの共存下での発現増加の効果は僅かで、単独の場合の相加分に相当する増加には至らなかった。我々の検討した系では、インスリンが最もob geneの発現を増加させる因子であった。
マツノザイセンチュウの病原因子の解明とその進化的起源の検証

昨年度取得したゲノム情報をもとに、マツノザイセンチュウとその近縁種であるオキナワザイセンチュウ(Bursaphelenchus okinawaensis)を使ってトランスジェニック線虫の作製手法の開発に取り組んだ。オキナワザイセンチュウは雌雄同体(マツノザイセンチュウは雌雄異体)の種であることからトランスジェニックや遺伝子破壊株作製手法の開発を行なう上で有用な線虫種である。まず、複数のオキナワザイセンチュウプロモーター配列および3'UTR配列をGFPとともにプラスミドに組み込みトランスジェニック線虫作製用コンストラクトを作製した。マイクロインジェクション法を用いてトランスジェニック線虫の作製を試みたがマツノザイセンチュウやその近縁種では本手法により良い結果が得られなかった。次に、パーティクルガンを用いた手法を試した。本手法ではオキナワザイセンチュウにおいて比較的効率良くGFPを発現するトランスジェニック線虫を分離できるようになった。現在では世代を超えて効率良く導入遺伝子が受け継がれるように手法の最適化を行っている。さらに今年度はトランスジェニック線虫作製手法の開発と併せてCRISPR/Cas9法を用いた標的遺伝子破壊法の開発にも取り組んできた。まず取得したゲノム情報を下にC. elegansのdpy変異体の原因遺伝子のホモログ分子をオキナワザイセンチュウにおいて探索し、2つのdpy様遺伝子を標的とするsgRNAを作出した。このコンストラクトをCas9タンパク質をコードするmRNAさらには精製タンパク質と同時に線虫体内に導入することにより標的遺伝子破壊株の作出を試みている。現在までに目的変異体の取得には成功していないが、上記のトランスジェニック線虫作出手法の最適化と併せて条件の最適化を継続することにより近い将来に変異体の分離が行えると考えている。26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度はマツノザイセンチュウにおける遺伝子破壊法の開発を中心とした、Bursaphelenchus属線虫の遺伝学基盤の確立に取り組んだ。最初に線虫C. elegans研究において長く利用されてきたTMP/UV法を使用した変異体作出を試みた。本手法ではゲノム中にランダムに欠失変異が起こるため、PCR法を用いて目的遺伝子に変異が起こつた株をスクリーニングした。条件検討を重ねた結果、本手法によって遺伝子欠失が誘導できることが確認できた。しかしながら、変異導入の効率が低く、また目的遺伝子の変異をホモに有する変異体を分離することが困難であった。そこで、遺伝子破壊法を最適化するために、マツノザイセンチュウの近縁種で雌雄同体の生殖様式を有するBursaphelenchus okinawaensisを用いることとした。手法の最適化の後、本線虫においては容易に変異体を作出が可能となった。現在では本線虫とマツノザイセンチュウの両方を用いて、標的遺伝子破壊法の開発を行つている。本年度中における別の成果として、マツノザイセンチュウ近縁種間における比較ゲノム解析が進行したことも挙げられる。H24年度中に、野外からの線虫の取得と一部のゲノム配列の取得が完了した。現在ではゲノム配列の取得を継続するとともに、取得された配列の解析を行っている。前年度に開始したBursaphelenchus属線虫における比較ゲノム解析を今年度も継続して行った。前年度中に各線虫ゲノムDNAのshort readsの取得は終了していたが、今年度はまず始めに3kbJumping libraryの作製およびシーケンス解析を行った。次に線虫mix stageおよびdauer stageからRNAを取得しRNA-seq解析を行った。現在までにこれら全ての取得配列を使って各線虫のゲノムアセンブリが終了している。現在はこれらのアノテーション作業を行っており、次年度中頃までには解析を終了する予定である。その後はこれらのゲノム配列情報を使ってマツノザイセンチュウが如何にして病原因子を獲得してきたのかを考察する予定である。また、本年度は雌雄同体の生殖様式を有するマツノザイセンチュウの近縁種であるオキナワザイセンチュウ(Bursaphelenchus okinawaensis)において遺伝学解析基盤の整備を行なった。この中で変異誘発剤EMSを使用した変異体分離手法の確立をし、形態および行動異常を示す多数の変異体の分離に成功した。この研究に関する論文を現在作成中である。また本年度終わりには雌雄同体のオキナワザイセンチュウを使って遺伝子組換え体作出手法の開発に取り組み始めた。

さらに今年度はトランスジェニック線虫作製手法の開発と併せてCRISPR/Cas9法を用いた標的遺伝子破壊法の開発にも取り組んできた。まず取得したゲノム情報を下にC. elegansのdpy変異体の原因遺伝子のホモログ分子をオキナワザイセンチュウにおいて探索し、2つのdpy様遺伝子を標的とするsgRNAを作出した。このコンストラクトをCas9タンパク質をコードするmRNAさらには精製タンパク質と同時に線虫体内に導入することにより標的遺伝子破壊株の作出を試みている。現在までに目的変異体の取得には成功していないが、上記のトランスジェニック線虫作出手法の最適化と併せて条件の最適化を継続することにより近い将来に変異体の分離が行えると考えている。26年度が最終年度であるため、記入しない。初年度に突然変異処理によるマツノザイセンチュウ変異体の分離に取り組んだ。目的の遺伝子に変異を導入することには成功したものの、雌雄異体の性質などによりその後の劣性ホモ変異体の分離が当初の想定以上に困難であった。そのために2年目に遺伝子の機能解析にはいることができなかった点では当初の計画より少し遅れているといえる。しかしながら、雌雄同体の近縁種であるオキナワザイセンチュウを利用して変異体の分離が容易にできるようになったことは非常に大きな前進といえる。この線虫を利用することにより、マツノザイセンチュウにおける様々な遺伝子の機能を詳細に調べることが今後可能になる。また、新たに開発されたCRISPR/Cas9法がマツノザイセンチュウにおけるノックアウト株作成手法として非常に有望であることから、当初の計画の突然変異を利用した変異体の分離手法の確立から標的遺伝子破壊手法に研究の方向性を変更することにした。将来的にはこの手法の確立により、当初の計画よりもさらによい成果が期待できる。2013年にCRISPR/Cas9システムによる標的遺伝子破壊法が開発され、あらゆる生物における遺伝子ノックアウトがより容易に行えるようになってきた。モデル生物の1種である線虫Caenorhabditis elegansにおいてCRISPR/Cas9システムもすでに複数報告されており、私が現在主に研究を行っている研究室もC. elegansにおいて最初にCRISPR/Cas9システムを利用した遺伝子ノックアウトを成功させた研究室の1つである。本手法ではこれまで私が利用してきたランダム変異法と異なり、蛍光マーカーを組み込むことができるために劣性ホモ変異体の分離が圧倒的に容易になると考えられる。現在すでにマツノザイセンチュウにおけるCRISPR/Cas9システムにむけたプラスミド作製や条件検討を行っており、今後はこの方法を使って変異体作製手法を確立し、当初の目的であるマツノザイセンチュウ病原候補因子破壊株の作製を行っていく。
核融合炉第一壁の寿命評価に関する研究

1.序トカマク核融合炉の機器の中で、第一壁構造物(第一壁,リミタ,ダイバータ)はとりわけ苛酷な環境下におかれる。従って、いかに長くその構造健全性を確保できる設計であるかが非常に重要である。一方、研究の現状は、第一壁構造物の寿命を定量的に評価するのは困難である。第一壁候補材の照射による材料強度やプラズマディスラプションに代表される異常運転時の諸現象に対する実験データが極めて不足している。ゆえに本研究では、プラズマディスラプションによって第一壁構造物に生ずる諸現象に着目し、設計に有用な資料を得ることを目的とした。2.研究の方法模擬実験に用いた熱源はパルスプラズマ溶接機(4.5KW)及び炭酸ガスレーザー溶接機(1KW)を使用し、供試材はSUS316冷間材4【mm^t】及び8【mm^t】の2種類である。実験条件は(1)熱負荷【10^2】J/【cm^2】【10^4】J/【cm^2】,(2)時定数5msec300Mses,(3)ビーム径0.2【mm^Φ】3【mm^Φ】である。溶融深さは溶融断面のマクロ・ミクロ組織観察から、蒸発熱は直示分析天秤を用い重量差から求めた。また、供試材に歪ゲージ及び熱電対を取付け、溶融・凝固時の動的な歪及び温度分布の時間変化を求めた。さらに、有限要素法を用いて溶融・凝固時の弾塑性解析を行った。3.研究の成果(1)有限要素法による熱伝導溶融解析コード及び材料物性の温度依存性を考慮できる弾塑性解析コードを作成した。(2)解析と実験結果は、比較的良い一致を示し、溶融した領域の応力解析について評価できる。(3)熱負荷と溶融深さとの関係が求められ、溶融が生じる限界熱量は約200J/【cm^2】付近にある。
不安定すべりの発生に先行する長期的な非地震性すべりの発展過程に関する理論的研究

岩石実験に基づく速度・状態依存摩擦則を用いた数値シミュレーションにより,不安定すべり発生に先行する非地震性すべりを調べる.これまで主に研究されてきた不安定すべり発生直前の破壊核形成に加え,それよりもかなり早い段階から発生している,より低速度の非地震性すべりの発生・伝播過程について特に注目し,このすべりについて周期的なすべり速度ゆらぎや,規模,伝播速度等の摩擦パラメター依存性を明らかにする.岩石実験に基づく速度・状態依存摩擦則を用いた数値シミュレーションにより,不安定すべり発生に先行する非地震性すべりを調べる.これまで主に研究されてきた不安定すべり発生直前の破壊核形成に加え,それよりもかなり早い段階から発生している,より低速度の非地震性すべりの発生・伝播過程について特に注目し,このすべりについて周期的なすべり速度ゆらぎや,規模,伝播速度等の摩擦パラメター依存性を明らかにする.
微小脳における学習・記憶の理論モデル

巨大脳については,例えば視覚系においては形態視が重視され,また学習については報酬学習のようなものが主役を果たすと考えられる.一方,微小脳については,視覚系においては運動視が主役で,学習についても定型行動の微調整や手続き的記憶が中心になるように思われる.人工ニューラルネット分野の言葉で言うと,前者は「空間的パターンの教師あり学習」相当し,後者は「時間的パターンの教師なし学習」にあたる.しかし,後者については,解析の困難さから,従来理論的研究は殆どなされてこなかった.本研究では,主に,ヘブ則および反ヘブ則による時間的パターンの学習について,その理論モデルを検討した.ヘブ学習・反ヘブ学習の最も典型的なものは,シナプス前後の発火が同時に起こった場合には,シナプス効率が増加あるいは減少するというものである.しかし,最近の神経生理学の知見によると,シナプス効率の変化はシナプス前後の発火の時間的関係に依存する.すなわち,シナプス前の発火が先行する場合にはLTPが生じ,逆の場合にはLTDが生じる.このような時間的に非対称な特性をもつ学習は,時系列パターンの学習に重要な意味を持っていると考えられる.本研究では,時間的に非対称なヘブ学習則を数学的に定式化し,それを用いて,振動的な振舞いをする回路,神経積分器,さらにはザリガニの視覚系に見られるような周期的刺激の周期やパターンを記憶する神経回路,等のモデルを示した.それにより,時間的に非対称なヘブ学習則の持つ機能的意味がある程度明らかになった.巨大脳については,例えば視覚系においては形態視が重視され,また学習については報酬学習のようなものが主役を果たすと考えられる.一方,微小脳については,視覚系においては運動視が主役で,学習についても定型行動の微調整や手続き的記憶が中心になるように思われる.人工ニューラルネット分野の言葉で言うと,前者は「空間的パターンの教師あり学習」相当し,後者は「時間的パターンの教師なし学習」にあたる.しかし,後者については,解析の困難さから,従来理論的研究は殆どなされてこなかった.本研究では,主に,ヘブ則および反ヘブ則による時間的パターンの学習について,その理論モデルを検討した.ヘブ学習・反ヘブ学習の最も典型的なものは,シナプス前後の発火が同時に起こった場合には,シナプス効率が増加あるいは減少するというものである.しかし,最近の神経生理学の知見によると,シナプス効率の変化はシナプス前後の発火の時間的関係に依存する.すなわち,シナプス前の発火が先行する場合にはLTPが生じ,逆の場合にはLTDが生じる.このような時間的に非対称な特性をもつ学習は,時系列パターンの学習に重要な意味を持っていると考えられる.本研究では,時間的に非対称なヘブ学習則を数学的に定式化し,それを用いて,振動的な振舞いをする回路,神経積分器,さらにはザリガニの視覚系に見られるような周期的刺激の周期やパターンを記憶する神経回路,等のモデルを示した.それにより,時間的に非対称なヘブ学習則の持つ機能的意味がある程度明らかになった.本研究の目標は,微小脳システムにおける学習のメカニズムを,理論モデルを用いて解明することにある.相互抑制結果からなるニューラルネットを取り上げ,そこで,ヘブ学習や反ヘブ学習を適用すると,どのような機能が獲得されるかを検討した.特に,比較的少数のニューロンからなる神経回路を対象として,動的パターン(特にリズムパターン)の生成・学習のモデルを検討した.動物には,歩行運動,口胃運動などさまざまな振動的な振る舞いが見られるが,それらは,通常,central pattern generator(CPG)と呼ばれる神経回路によって生成されている.CPGは基本的には,比較的少数のニューロンが抑制性シナップスによって結合された,相互抑制形の回路である.そのような回路は,さまざまな動的パターンを発生する潜在能力を持ち,実際の動物実験においても,上位中枢からの信号などの影響を受け,CPGがリズム周波数,振幅,さらにはリズムパターンそのものをも変えることが確認されている.本年度は,特に,相互抑制形のネットワークにおいて,反ヘブ学習が働くと,安定なリズムを発生する回路が自己組織的に形成されることを示した.巨大脳については,例えば視覚系においては形態視が重視され,また学習については報酬学習のようなものが主役を果たすと考えられる.一方,微小脳については,視覚系においては運動視が主役で,学習についても定型行動の微調整や手続き的記憶が中心になるように思われる.人工ニューラルネット分野の言葉で言うと,前者は「空間的パターンの教師あり学習」相当し,後者は「時間的パターンの教師なし学習」にあたる.しかし,後者については,解析の困難さから,従来理論的研究は殆どなされてこなかった.本研究では,微小脳における学習については後者が重要であるという認識のもとに,興味ある2,3の例を取り上げ,モデル解析を行った.・ザリガニの視覚系に見られるような,周期的刺激の周期やパターンを記憶するモデルについて検討をした.その結果,周期的時間パターンの記憶が,ヘブ形の学習によって行えることを確認した.・学習則として,ヘブ形の学習(LTP)と反ヘブ形の学習(LTD)がよく知られているが,ニューロンによっては,シナプス前後の活動電位のタイミングにより,LTPが生じたり逆にLTDが生じたりすることがある.この場合の学習は,信号の持つ空間的な性質のみならず時間的な性質にも依存する.

このような学習の持つ意味を理論的に解析した.巨大脳については,例えぱ視覚系においては形態視が重視され,また学習については報酬学習のようなものが主役を果たすと考えられる.一方,微小脳については,視覚系においては運動視が主役で,学習についても定型行動の微調整や手続き的記憶が中心になるように思われる.人工ニューラルネット分野の言葉で言うと,前者は「空間的パターンの教師あり学習」相当し,後者は「時間的パターンの教師なし学習」にあたる.しかし,後者については,解析の困難さから,従来理論的研究は殆どなされてこなかった.本研究では,主に,ヘブ則および反ヘブ則による時間的パターンの学習について,その理論モデルを検討した.ヘブ学習・反ヘブ学習の最も典型的なものは,シナプス前後の発火が同時に起こった場合には,シナプス効率が増加あるいは減少するというものである.しかし,最近の神経生理学の知見によると,シナプス効率の変化はシナプス前後の発火の時間的関係に依存する.すなわち,シナプス前の発火が先行する場合にはLTPが生じ,逆の場合にはLTDが生じる.このような時間的に非対称な特性をもつ学習は,時系列パターンの学習に重要な意味を持っていると考えられる.本研究では,時間的に非対称なヘブ学習則を数学的に定式化し,それを用いて,振動的振る舞いする回路,神経積分器,さらにはザリガニの視覚系に見られるような周期的刺激の周期やパターンを記憶する神経回路,等のモデルを示した.
毛細血管内におけるがん細胞流動の定量的な記述が可能なミクロ生体流動モデルの構築

毛細血管内の血流は,観察的研究により定性的には理解されているが,ミクロンオーダーの流動であるため計測が困難で,定量的データはほとんど得られていない。一方,拡大モデルによる流体工学的実験では,計測は可能であるが,生体内のミクロ流動の状況を再現しているとは言い難い。生体内のミクロな血流の定量的理解は,がん細胞の転移の正確な予測などにおいて極めて重要である。これを可能とするために,ミクロな生体組織による生体工学的実験と,流体工学的モデル実験とを融合し,さらに計算機による数値シミュレーションを援用して,新たな解析手法を確立する。この研究は,ミクロな生体流動現象を定量的に理解する新たな学問分野としての「ミクロ生体流体工学」を体系化するための基礎を確立することを目的とする。初年度の赤血球を用いた実験を異なる条件下で行うとともに,対応する数値解析を行って,実験と数値解析の両面から,ミクロ生体流動モデルの構築を行った。実験装置には,前年度同様,現有の傾斜遠心顕微鏡(倍率1,000倍,回転数10,000rpm)を用いた。回転速度と試料の取り付け角度を変化させながら細胞を観察することにより,赤血球とガラス板間の摩擦特性を計測した。血管内の流動数値解析には,東北大学流体科学研究所のスーパーコンピュータ(現有,SGI社製ORIGIN2000,256CPU)を用いた。実験により得られた細胞間の摩擦特性を数値解析結果と比較することにより,ミクロ生体流動の数学モデルを得た。毛細血管内の血流は、観察的研究により定性的には理解されているが、ミクロンオーダーの流動であるため計測が困難で、定量的データはほとんど得られていない。一方、拡大モデルによる流体工学的実験では、計測は可能であるが、生体内のミクロ流動の状況を再現しているとは言い難い。生体内のミクロな血流の定量的理解は、がん細胞の転移の正確な予測などにおいて極めて重要である。これを可能とするために、ミクロな生体組織による生体工学的実験と、流体工学的モデル実験とを融合し、さらに計算機による数値シミュレーションを援用して、新たな解析手法を確立する。この研究は、ミクロな生体流動現象を定量的に理解する新たな学問分野としての「ミクロ生体流体工学」を体系化するための基礎を確立することを目的とする。本年度は、基礎的実験として、赤血球とガラス板との間の摩擦特性の測定を行った。実験装置には、試料に対する遠心力の方向が調節可能な傾斜遠心顕微鏡を用いた。回転速度と試料の取り付け角度を変化させながら赤血球の移動を観察することにより、赤血球とガラス板との摩擦特性を計測した。本年度の検討により、これまで測定例のない低速度域での摩擦特性を計測するための手法を確立した。今後は、対象を赤血球やがん細胞と内皮細胞との間の摩擦特性に拡張し、これらの基礎データをもとに毛細血管内の各種細胞の流動モデルを構築する。
アンテリアガイダンスがオールセラミッククラウン修復時の応力分布におよぼす影響

上顎前歯をオールセラミッククラウンで修復する場合を想定した応力解析をコンピュータ上で行った.かみ合わせの違いについての影響を調べるために,荷重を付与する部位を変えて応力解析をした.その結果,荷重位置の違いで応力の分布にはそれぞれが似た傾向をしめす部分と,違いがでる部分があることがわかった.上顎前歯をオールセラミッククラウンで修復する場合を想定した応力解析をコンピュータ上で行った.かみ合わせの違いについての影響を調べるために,荷重を付与する部位を変えて応力解析をした.その結果,荷重位置の違いで応力の分布にはそれぞれが似た傾向をしめす部分と,違いがでる部分があることがわかった.上顎前歯の口蓋側形態は臼歯の咬合面形態と同様に,顎口腔系の機能に深く関わっている.よってこの形態をクラウンで機能的な状態に修復した場合に,クラウンの機械的強度が損なわれないことが求められる.そこで本研究はオールセラミッククラウンを上顎前歯に応用したときに,クラウンの口蓋側形態が歯冠・歯根・歯周組織への応力分布にあたえる影響について三次元有限要素法をもちいて解析することを目的とする.解析結果を臨床的に適正なものとするためには,三次元モデルを解剖的に忠実に再現することが重要である.また本研究の注目点である口蓋側形態以外で,応力分布に影響をあたえる因子を排除する必要がある,これらを考慮し解析モデルの製作した.解析モデル製作用に上顎左側中切歯人工歯10歯を用意し,これらに対してオールセラミッククラウンのための支台歯形成を行った.支台歯形態も応力分布に影響することはすでにこれまでの発表で確認しているため,可及的に削除量が一定になるようにした.この試料と支台歯形成する前の人工歯が同じ位置に設置できるように設定したジグ上で,レーザ変位計で歯の中央断面形態を計測し最も均-な削除量であった支台歯を解析モデルとして採用した.次に支台歯形成を行う前の人工歯の形状から,光重合コンポジットレジンで口蓋側を平坦にした試料と,辺縁隆線を際だたせたシャベル状の形状の試料を製作した.これらの試料を今後マイクロCTでスキャニングし,クラウン形状とする予定である.上顎前歯の口蓋側形態は臼歯の咬合面形態と同様に,顎口腔系の機能に深く関わっている.よってこの形態をクラウンで機能的な状態に修復した場合に,クラウンの機械的強度が損なわれてしまわないことが求められる.そこで本研究はオールセラミッククラウンを上顎前歯に応用したときに,クラウンの口蓋側形態が歯への応力分布にあたえる影響について三次元有限素法をもちいて解析することを目的とした.有限要素解析モデルとして上顎左側中切歯を選択し,人工歯にオールセラミッククラウンのための支台歯形成を行った.このときの支台歯形態と装着されるクラウンの形態は応力分布に影響をおよぼすため,支台歯形成は可及的に削除量が一定になるようにおこなった.この試料をマイクロCTでスキャニングし,汎用有限要素解析プログラムにデータを入力し10節点四面体弾性要素で分割した解析モデルとした.解析モデルにおいてはクラウンをセラミックフレームにレイヤリング法で製作するオールセラミッククラウンとし,支台歯部は象牙質に近似した弾性率をもつコンポジットレジンを想定した.応力解析あたり,クラウンにかかる負荷を工夫することが本研究の特異な点であるため,下顎前が滑走運動時に上顎前歯口蓋側にかかる負荷を考慮した.具体的には切縁部,切縁から1/3の位置,切縁から2/3の位置とし歯軸に対して135゚の角度で圧縮力が加わるものと想定した.応力分布図からどの負荷条件においても荷重点には高い圧縮応力が発生し,その周囲に引張応力が発生した.
戦時・戦後日本社会の医療問題に関する政治・社会史的研究

本研究の目的は、戦後日本において、医療をふくむ生活問題を対象にした諸運動がもった意味について、明らかにすることである。その成果は、(1)1960年代後半から70年代に、主に主婦たちが、地域でグループを作り、食品の安全、医療、福祉問題などに取り組んだ生活学校運動の存在を明らかにしたこと、(2)埼玉県の大井医院を中心とする農村医療運動に注目し、1万5千点を超える大井医院関係史料の調査と整理を行ったことで、戦後日本の医療運動、戦後の地域社会の変容を検討するための基盤を整えたこと、である。本年度は研究の第1年目であったので、史料調査・収集を中心におこない、研究基盤の整備を進めた。第1に、戦時、戦後の岩手県における医療・生活問題に関わる史料を収集した。具体的にはJA岩手学園、岩手県国民健康保険組合連合会などでこれまで収集してきた史料に加えて、東北凶作に焦点をあてて、岩手県立図書館や国立国会図書館にて、雑誌・新聞・書籍類を、また国立公文書館、岩手県庁にて公文書を収集した。さらに、収集した史料を分析して、岩手県における「東北大凶作」の実態と対応について検証した。第2に、戦後の埼玉県を中心とした地域医療、医療運動に関する史料を数多く含んだ「大島慶一郎関係資料」(埼玉県ふじみ野市立大井郷土資料館所蔵)の整理を進めた。予想以上の史料数であったため、完全には整理を終わらせることができなかったが、1970年代までの医療関連の史料についてはほぼ終了した。新日本医師協会、医療民主化全国会議、全日本民主医療機関連合会などの機関紙、大会会議録などを収集できた。本研究の基盤となる史料群であるので、来年度も史料の整理を継続して、目録の作成を目指したい。第3に、日本赤十字社佐賀県支部が所蔵する史料を調査し確認をした。それを利用して、朝鮮戦争下に日赤看護婦が動員された事例に関する論文を執筆した。本年度は、研究の第2年目であった。今年度の成果は以下の通りである。第1に、初年度収集調査した史料を利用して、「東北大凶作」の実態とそれへの対応を保健衛生、医療問題、生活問題に注目して検証し、論文を執筆した(未発表)。食糧、衛生、「貧困」問題などに着目して凶作の影響を具体的に検証し、さらに、県、社会事業協会、岩手医専、日本赤十字社岩手県支部の医師や医学生、東北更新会などの凶作下の取り組みを分析することで、凶作下の地域の実態を明らかにした。第2に、戦後の埼玉県を中心とした地域医療、医療運動に関する史料を数多く含む「大島慶一郎関係資料」(埼玉県ふじみ野市立大井郷土資料館所蔵)の整理・目録化作業を進めた。最終段階で、大島医師個人の書簡などが大量に発見されたため、整理を終わらせることができなかった。医師、あるいは病院の史料は全国的にそれほど多くはなく貴重であることから、整理作業を継続した。今後、個人史料を含めて戦後医療運動、医療問題を検討する予定である。第3に、西日本地域の保健衛生・医療・生活問題を検討するための予備調査を行った。これまでの分析対象地は東日本地域に集中しており、地域社会のあり方などが大きく異なる西日本地域についての検討が必要であると考えているためである。今後、追跡調査する地域を決定し分析を進めたい。なお、初年度の調査・研究で、医療問題に集約するのではなく、生活環境を含めた検討が必要であることを確認しためで、2年目から医療運動、医療問題に限定しないで調査を行っている。本年度は、第1に、大島慶一郎関係資料の調査・整理を進め、仮目録を作成した。大島は、戦後初期から、埼玉県の農村地域での診療活動、全国的な医療運動に取り組みながら、村会議員、県会議員として地域政治にも力をいれた農村医師である。医師、診療所、医療運動に関するまとまった史料群は、戦後医療運動史研究にとどまらず、医療・福祉・「生活」問題といった視点から戦後日本の地域社会の変容過程を明らかにできる内容を含んでいる。今後、本格的に検討するための準備が整った。第2に、1960年代半ば70年代に、主に主婦を主体として取り組まれた生活学校運動について検討した。地域ごとに50100人程度で1つの学校を構成した主婦たちは、生活のなかから地域社会の課題(たとえば、食品の安全や地域医療体制など)をとりあげて、自ら学習し問題を明確にしたうえで、行政や業者といった異なる機能集団と「異質の対話」を行い、その後、「事後処理」といわれた実践活動を通じて問題の解決をはかった。新生活運動協会が主導して始まった生活学校であったが、70年代になると、各地の生活学校が主導して全国大会を開催することとなった。「生活」問題に注目して、高度成長期における新生活運動協会の動向と女性の主体化のあり方を検証した(鬼嶋淳「生活学校運動」

大門正克編『新生活運動と日本の戦後』日本経済評論社、2012年刊行予定)。第3に、戦時戦後にかけての保健衛生・医療・「生活」問題について検討するため、島根県を対象にして史料調査を行った。西日本では島根地域が、保健婦養成所を戦時の早い段階で開設し、保健衛生問題に取り組んでいる。さらに高度成長期には「過疎」問題に直面するなど、保健衛生・医療・「生活」問題が焦点化した地域である。具体的には、戦時期の保健婦養成所に関する調査、戦後初期の保健婦への聞き取り調査、病院関係の調査を行った。本年度は、最終年度であったので、研究成果の発表に力を注いだ。第1に、これまで整理作業を継続してきた大島慶一郎関係資料を主に利用して、埼玉県入間郡大井村に建設された大井医院による1950年代の医療運動の展開を分析して、戦後地域社会の変容過程について検討した。1950年代に大井医院は、医療の協同化を目指して、入間医療生活協同組合(長生き会)を設立し、住民、患者、病院関係者らの組合員による病院経営を開始した。当初、生活や健康を協同で守っていくために様々な活動が計画されたが、実際には、財政的問題から医者が少ない農村部に往診を行うといった診療活動が中心であった。だが、50年代後半以降、都市化の影響から近隣に大規模な公団住宅が造成されるなど、新住民が増加し、高度医療の要求が強まるなか、大井医院は都市部に分院を建設し、従来の往診を中心とする診療から、新住民を対象にする高度医療にも対応した診療方法へと転換していく。地域の社会構造の変化にともなう診療方法の変化により、大井医院は、財政的に余裕がうまれ、当初の計画通り、診療に限定されない活動にも力をいれることが可能となる。地域の衛生予防への取り組みであったり、地域の医療・福祉制度の充実にむけた積極的な活動などである。また、設立当初、医療を受けるためにだけ参加していた組合員のなかには、長生き会の活動を通じて、医療の協同化を理解し、診療に限定されない長生き会のあり方を考え、地域社会の保健衛生、福祉を考える主体となっていくものも現れた。50年代の医療運動は、高度経済成長期以降、地域における医療・福祉政策を構想する主体を生み出していったといえる。第2に、これまで検討してきた占領期から1950年代における青年による地域社会運動、および高度経済成長期の主婦による「生活学校運動」について論文を執筆した。基本史料と位置づけている大島慶一郎関係資料が、計画したときの想定を上回る分量であったため、その整理に時間を費やした。そのため、史料内容の分析まで進んでおらず、やや達成度に遅れがでている。24年度が最終年度であるため、記入しない。最終年度であることから、これまで史料の収集・分析を重ねてきた事例について研究成果を公表する。また、調査・整理・目録化作業を進めてきた「大島慶一郎関係資料」の本格的な分析に取りかかり、1950年代の医療運動について検証を進める。事例研究を積み重ね、基本資料の発掘・調査・整理作業を終えることに集中する。