hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
統合失調症における家系を用いたゲノムワイド相関研究のメタ解析

今回の研究では、上記の研究を大規模サンプルで追試し、現時点でのGWASの結果をより確実なものにしようと試みた。まず、これらの研究から、追試に値する結果を抽出した。その結果、12個のSingle Nucleotide Polymorphisms(SNPs)が選択された。対象は、日本人・統合失調症42家系(対象:115名、統合失調症:62名)、中国人・統合失調症163家系(対象:496名、統合失調症:175名)、台湾人・統合失調症332家系(対象:1022名、統合失調症:462名)、合計:536家系(対象:1633名、統合失調症:699名)である。日本人は日本大学・医学部・精神医学で、中国人は北京大学・医学部・精神医学で、台湾人は米国・国立衛生研究所(National Institute of Health: NIH)/National Institute of Mental Health(NIMH)で収集された。現在、これらのサンプルを日本大学・医学部・精神医学で保管している。本研究は日本大学・医学部、北京大学・医学部、NIMHの倫理委員会で承諾を受けている。SNPsのgenotypingはTaqMan SNP Genotyping Assayで行った。TaqManアッセイができなかったSNPsは、direct sequenceによりgenotypingした。現時点で、全対象において12 SNPsのgenotypingが終了している。【目的】現在、統合失調症の感受性遺伝子を検索するため、世界中でgenome-wide association study(GWAS)が行われている。現在までに7個の統合失調症のGWASが終了している。【方法】まず、7個のGWAS研究から、追試に値する結果を抽出した。【結果】全対象において12 SNPsのgenotypingが終了した。このデータを統計解析した結果、2個の遺伝子上のSNPと統合失調症との間に相関を確認できた。これらは、過去の研究で最も有望といわれている遺伝子である。現在、統合失調症の感受性遺伝子を検索するため、世界中でgenome-wide association study(GWAS)が行われている。また、これらとは別に、我々もinitial sampleでのGWASを終了させている。現時点で、日本人と中国人家系において12 SNPsの解析が終了している。台湾人家系も進行中である。「研究実績の概要」でも述べたが、現在、全対象において全SNPsのgenotypingが終了している。さらに、統計解析も、ほぼ終了している。よって、来年度には論文化できると思われる。これは、申請書の計画通りか、すこし早いペースである。「研究実績の概要」でも述べたが、現在、日本人と中国人家系において全SNPsの解析が終了している。このペースであれば、本年度中にgenotypingが終了し、来年度には論文化できると思われる。非常に良いペースで進んでいる。

よって、現在のペースを保っていくことで研究計画はスムーズに進行できると思われる。非常に良いペースで進んでいる。該当なし平成24年度には、台湾人家系のサンプル(332家系、1022人)に対して12 SNPsの解析を行う。これに必要な試薬の大部分を本研究費で賄えると思われる。
免疫シグナル伝達鎖DAP12を介した神経損傷後のミクログリア活性化機構の解析

DAP12は細胞外ドメインが短いため、細胞外ドメインが長くリガンド認識鎖として働く「DAP12共役受容体」と複合体を形成することで機能すると考えられている。前年度までに、既知のDAP12共役受容体のうちTREM2とSiglec-Hが脳内でミクログリア特異的に発現すること、また、TREM2/DAP12複合体を介するシグナルはミクログリアの炎症性作用を促進するのに対し、Siglec-H/DAP12複合体はミクログリアの炎症性作用を抑制することを見出した。TREM2に関してはリガンドが同定されているが、Siglec-Hについては同定されていない。そこで、本年度はSiglec-Hリガンドの同定を目指した。脳や初代培養神経細胞の抽出物からSiglec-Hと共沈するタンパク質を探索したが、リガンド候補タンパクは得られなかった。Siglecファミリー分子はシアル酸を含む糖鎖を主なリガンドとすることが知られている。そこで、他施設と共同で、リガンドの可能性を持つ糖鎖とSiglec-Hの結合を表面プラズモン共鳴実験により調べた結果、シアル酸含有糖鎖A2G'2FがSiglec-Hと結合することを見出した。A2G'2Fは発生期の脳で多量に含まれるため、発生期におけるミクログリアの機能制御にSiglec-Hが関与する可能性が示唆された。今後、A2G'2F糖鎖を持つコアタンパク質を同定することにより、Siglec-Hを介するミクログリア活性制御メカニズムの詳細が明らかになると期待される。神経損傷後のミクログリア活性化には、神経損傷を感知するミクログリアの膜上受容体が重要な役割を担うと考えられる。本研究では、ミクログリア活性化を制御する分子として、1回膜貫通型タンパクDAP12に着目した。DAP12は脳内でミクログリア特異的に発現することが知られている。DAP12は若年性認知症Nasu-Hakola病の原因遺伝子であることから、ミクログリアの活性制御に関わることが想定された。マウスL4脊髄神経の切断により神経因性疼痛モデルを作成し、DAP12を介するシグナルが、脊髄後角におけるミクログリア活性化と疼痛に与える影響を解析した。まず、L4神経切断後の脊髄後角においてDAP12がミクログリア特異的に発現していることを免疫組織化学で確認した。von Freyテストにより、野生型マウスに比べDAP12ノックアウトマウスでは疼痛が有意に軽減されることを明らかにした。その原因として、DAP12ノックアウトマウスでは、脊髄後角においてミクログリア数が減少すると共に炎症性サイトカインの発現が顕著に低下していることを見出した。DAP12は細胞外ドメインが短いため、リガンドを認識するDAP12共役受容体と複合体を形成し機能すると考えられている。そこで、ミクログリア活性化における機能的なDAP12共役受容体の特定を行った。免疫系で明らかにされているDAP12共役受容体のうち、脊髄後角においてミクログリア特異的に発現するTREM2に着目した。非損傷マウスの髄腔内へTREM2刺激抗体を投与した結果、脊髄後角において炎症性サイトカインの発現が上昇すると共に、足底に疼痛が現れた。DAP12ノックアウトマウスではその現象は見られなかったことから、TREM2/DAP12複合体を介するシグナルがミクログリア活性化を促進している可能性が示唆された。神経因性疼痛(アロディニア)モデルを用い、DAP12がミクログリアの数を増加させると同時に炎症性反応を強めることを明らかにした。また、DAP12はTREM2と共役して機能することを見出した。そして、それらの結果を論文発表した。当初の計画は十分に達成したと考えられる。本研究では、ミクログリア活性化を制御する分子として、ミクログリア特異的に発現する1回膜貫通型タンパクDAP12に着目した。既知のDAP12共役受容体のうち、前年度に機能解析したTREM2以外にSiglec-Hもミクログリアに発現することをすでに見出していた。そこで、神経損傷後のミクログリア活性化におけるSiglec-Hの機能を、Siglec-Hノックダウンマウスを用い解析した。マウスL4脊髄神経の切断により神経因性疼痛モデルを作成し、von Freyテストにより後肢の疼痛試験を行った結果、Siglec-Hノックダウンマウスでは疼痛が増悪することを見出した。さらに脊髄後角における分子発現を解析した結果、Siglec-Hノックダウンマウスでは野生型マウスに比べ、神経損傷後の炎症性サイトカインの発現上昇が顕著であることが判明した。これらの結果から、Siglec-H/DAP12複合体を介するシグナルはミクログリアの炎症性反応を抑制することが示唆された。脳内におけるSiglec-Hの発現特異性についても研究を進めた。Siglec-Hは胎生期を含めミクログリアに発現するが、汎用されるミクログリアマーカーIba1やCD11bとは異なり、脳内マクロファージや浸潤性単球には発現しないことを示した。さらに、Iba1やCD11bとは異なり、末梢神経系に存在するマクロファージにも発現しないことから、神経系において非常に特異性の高いミクログリアマーカーであることが明らかとなった。

ミクログリアでは既知のDAP12共役受容体のうちTREM2とSiglec-Hが発現する。TREM2とSiglec-Hのミクログリア活性化における機能を神経因性疼痛(アロディニア)モデルを用い示した。DAP12はTREM2と複合体を形成した時にはミクログリアの活性化を促進するのに対して、Siglec-Hと複合体を形成した時にはミクログリアの活性化を抑制することが明らかにし、それらの結果を論文発表した。DAP12は細胞外ドメインが短いため、細胞外ドメインが長くリガンド認識鎖として働く「DAP12共役受容体」と複合体を形成することで機能すると考えられている。前年度までに、既知のDAP12共役受容体のうちTREM2とSiglec-Hが脳内でミクログリア特異的に発現すること、また、TREM2/DAP12複合体を介するシグナルはミクログリアの炎症性作用を促進するのに対し、Siglec-H/DAP12複合体はミクログリアの炎症性作用を抑制することを見出した。TREM2に関してはリガンドが同定されているが、Siglec-Hについては同定されていない。そこで、本年度はSiglec-Hリガンドの同定を目指した。脳や初代培養神経細胞の抽出物からSiglec-Hと共沈するタンパク質を探索したが、リガンド候補タンパクは得られなかった。Siglecファミリー分子はシアル酸を含む糖鎖を主なリガンドとすることが知られている。そこで、他施設と共同で、リガンドの可能性を持つ糖鎖とSiglec-Hの結合を表面プラズモン共鳴実験により調べた結果、シアル酸含有糖鎖A2G'2FがSiglec-Hと結合することを見出した。A2G'2Fは発生期の脳で多量に含まれるため、発生期におけるミクログリアの機能制御にSiglec-Hが関与する可能性が示唆された。今後、A2G'2F糖鎖を持つコアタンパク質を同定することにより、Siglec-Hを介するミクログリア活性制御メカニズムの詳細が明らかになると期待される。既知のDAP12共役受容体のうち、TREM2以外にSiglec-Hも脳内でミクログリア特異的に発現することを見出している。そこで、神経損傷後のミクログリア活性化におけるSiglec-Hの機能を、主にSiglec-Hノックダウンマウスを用い解析する。また、Siglec-Hは、良く用いられているミクログリアマーカーIba1やCD11bとは異なり、脳内マクロファージには発現しないという結果を得ている。信頼性の高いミクログリアマーカーと考えられるため、その発現特性についても詳細に解析を行う。最近TREM2に関してはリガンドが他グループから報告され、TREM2/DAP12複合体がAktーmTORシグナル経路を介してミクログリアを活性化することが示された。しかし、Siglec-Hに関しては現在のところリガンドが不明であり、分子メカニズムはほぼ解析されていない。そこで、生化学的手法などを用いリガンド探索を行う。さらに、同定されたリガンドがどのようにミクログリアを沈静化するのか、Siglec-H/DAP12複合体の下流で働く細胞内シグナルを明らかにする。計画通りに研究が遂行でき、実験の条件検討や人件費にあまり費用がかからなかったなかったため。
言語学的失語症学からみた時制表現に関する日英語文法対照研究

生成文法理論をもちいて、英語、日本語を含む諸言語の時制表現について、言語学的失語症学の立場から対照研究を行うことを目的とした。時制表現は、さまざまな言語事象のなかでも中核をなすものであり、その障害パターンの普遍性と個別性を明らかにすることは、人間言語の特徴の解明にとって大変有意義である。今年度の調査からは次のことが明らかになった。まず日本語ではHagiwara(1995)か産生と文容認性判断の調査によりIP(Inflection Phrase)内部の要素である時制TP(Tense Phrase)は保持されていること、一方、英語ではNadeau and Rothi(1992)が、フランス語ではNespoulous et al.(1984,1988,1990)がいずれも症例研究から、一致現象との対比において時制の障害を報告している。イタリア語ではMiceli,Silvery,Romani,and Caramaza(1989)が、20名の失文法患者の発話分析の結果、同様の結果を得ている。ヘブライ語でもFriedmann and Grodzinsky(1997)の症例報告では、一致現象は保たれているが、時制は失われていることが分かった。一見すると時制の保持/喪失に矛盾がみられるが、普遍文法を仮定することで統一的な説明が可能であることが分かった。それによると、(a)階層構造の上位に位置する要素が失われやすく、下位に位置する要素は保持されやすいこと、(b)階層性の喪失と障害の重症度との間には相関性がみられること、(c)神経心理学的データのみならず、脳生理学的実験からも(a)の傾向が観察された(萩原ら1997)。最後にこれらの結果はいづれもHagiwara(1995)の経済性の仮説を支持するものであることが分かった。
生殖機能中枢キスペプチンニューロンを制御する神経ネットワークの解明

哺乳類の生殖機能に必須の神経ペプチド、キスペプチンを産生するキスペプチンニューロンへ投射している神経細胞集団を同定することを目的とした。WGAの弓状核への注入により、視床下部のいくつかの細胞集団が標識されたが、注入部位でのトレーサーの拡散範囲が広く、正確な投射元の集団を同定は困難であった。免疫組織化学によりVGAT、およびVGluT2陽性の点状構造がキスペプチンニューロンへ近接していることが確認されたことから、GABA作動性ニューロンとグルタミン酸作動性ニューロンがキスペプチンニューロンへ神経線維を投射している可能性が示唆された。キスペプチンは哺乳類の生殖機能に必須の神経ペプチドである。視床下部においてキスペプチンを産生するキスペプチンニューロンは生殖機能に影響をする様々な情報を統合していると考えられる。これまで性ステロイドホルモンによるキスペプチン発現の調節について多くの報告がなされてきたが、キスペプチンニューロンを取り巻く神経回路網については不明な点が多く残されている。本研究ではキスペプチンニューロンへ神経投射している神経細胞集団を同定し、それらの特徴を明らかにすることを目的としている。今年度は第1段階としてキスペプチンニューロンに特異的に遺伝子を発現させるアデノ随伴ウイルスの作製を試みた。ラットのキスペプチン遺伝子であるrKiss1の上流領域に続いてレポーター遺伝子としてEGFP遺伝子を含むコンストラクトの作製が終了した。しかしながら、アデノ随伴ウイルスの作製段階でITR間の長さに不都合があることが判明したため、性腺刺激ホルモン放出ホルモン(GnRH)ニューロンの可視化のために確立し使用実績のあるGnRHプロモーターとEGFP遺伝子を含む発現ベクターを利用して作製し直す方向に転換した。制限酵素サイトが限られていたため、作製したrKiss1上流領域とEGFP配列で構成されるインサートを一旦クローニングベクターに挿入し、再度切り出しGnRHニューロン用のベクターに挿入するという手法を用い、コロニーPCRによるセレクションを行ったが、現在までポジティブなクローンが得られておらず、ウイルスの作製までいたっていない。キスペプチン遺伝子上流領域とレポーター遺伝子を含むベクターの作製に一旦は成功したものの、ウイルス作製の段階でベクターを作製しなおす必要が生じた。すでに手元にあるベクターを改変して作製を試みたが、ポジティブなクローンが得られず、ウィルス作製までいたっていない。結果、当初計画していた動物への投与実験を実施できていないため。視床下部においてキスペプチンを産生する神経細胞、キスペプチンニューロンは生殖機能に関わる体外、体内からの様々な情報を統合し、生殖機能を調節していると考えられる。これまで、性ステロイドホルモンによるキスペプチン発現の調節については多くの報告がなされてきたが、他の神経細胞からキスペプチンニューロンへの神経入力については不明な点が残されている。そこで本研究では、キスペプチンニューロンへ投射している神経細胞集団を同定することを目的とした。キスペプチンニューロンへの投射線維を可視化するため、キスペプチン遺伝子のプロモーターによりレポーター遺伝子を発現するアデノ随伴ウィルスの作成を試みたが、目的のベクターの作製は叶わなかった。そこで、逆行性神経トレーサーを用いた解析を検討した。成体メスラットでキスペプチンニューロンが局在する弓状核に蛍光色素標識WGAを微量注入し、組織学的解析を行なった。視床下部のいくつかの細胞集団が蛍光標識されたが、注入部位周辺でのトレーサーの拡散範囲が広く、正確に投射元の集団を同定するためには、今後順行性トレーサーを用いたさらなる検討が必要である。また、免疫組織化学によりグルタミン酸作動性、およびGABA作動性神経終末マーカー陽性の点状構造がキスペプチンニューロンへ近接していることが確認されたことから、グルタミン酸作動性ニューロンとGABA作動性ニューロンがキスペプチンニューロンへ神経線維を投射している可能性が示唆された。引き続きベクターの作製を続けるとともに、並行して神経トレーサーによる神経投射の可視化と投射元の神経細胞集団の同定を試みる。具体的にはラットのキスペプチンニューロンの存在する前腹側室周囲核と弓状核に逆行性トレーサーを微量注入し、投射元の神経核を同定する。続いて、GAD、THなど各種神経伝達物質のマーカータンパク質との二重免疫染色により投射元集団候補の特徴を調べる。神経内分泌学当初の予定よりウイルス作製が遅れ、動物への投与実験など計画していた実験が行えなかったため。引き続きベクター、ウイルス作製に必要となる試薬類、実験動物、免疫組織化学に用いる抗体の購入に充てる予定である。
老化抑制遺伝子Klothoの発現調節に関する萌芽的研究

1)発現クロー二ング、サウズウエスタンスクリーニングによるklotho上流分子の探索昨年までのルシフェラーゼアッセイを用いた検討で、klotho遺伝子プロモーター応答領域は転写開始点から-98bp-68bpおよび-53bpから15bpに存在することを突き止めた。本年度は、培養液中の血清に有無によって両シスエレメントに結合する分子め存在をgel-shift assayで確認した。その結果、-98bp-68bpへの特異的な結合がprobe mutagenesis、非標識probeによる競合阻害によって証明された。一方、-53bpから15bpの領域は発現のベースラインの維持に必要と推測された。更にinvivoでの結合もクロマチン免疫沈降法(ChlP)で確認された。しかしながら、両領域には既知の転写因子結合モチーフは存在せず、転写因子の特定に至ることは出来なかった。2)リン、Vit.Dによるklotho転写制御の検討リンおよびVit.Dの投与によってklotho mRNA量が増加することをreal-time PCRで確認した。上記で同定したklothoプロモータコンストラクトを用いて、リン、Vit.Dの応答エレメントの同定を試みたが、結合部位および下流分子の同定にはいたらなかった。また、gel-shift assayおよびChlPによっても、リン、Vit.Dによって結合の増加する分子を特定することは出来なかった。初年度の今年は、klothoプロモーターの転写制御アッセイシステムを確立した。1)ルシフェラーゼアッセイシステムの構築まずヒトgenomic cDNAを用いたPCRにより約1.4kbのKlothoプロモーター領域を得た。これをルシフェラーゼレポーターベクターに組み込んだものをもとにしてプロモーターの5'側を段階的に欠失させたレポーターベクターを作成した。2)コアエンハンサー領域の同定1)で作成したプロモーターの活性を調べた結果、欠失させた領域が大きいほど転写活性は強くなり、作成した中で最も短い転写開始点から上流124bpのklothoプロモーターの転写活性が最も強かった。したがってklothoプロモーター内転写調節領域は転写開始点近傍に集中していると推測された。次いでヒトとマウスの転写開始点近傍の配列を比較し、2つの種間高度保存領域(-98bp-68bp、-53bpから15bp)を発見した。これらをA-box、B-boxと命名しそれぞれのタンデムコンストラクトを用いたルシフェラーゼアッセイを行ったところ、A-boxはそのコピー数に応じて転写活性の上昇を示したが、B-boxのタンデムコンストラクトでは活性の上昇は見られなかった。しかしA-boxのタンデムコンストラクトにB-boxをつないだ合成プロモーターはさらに転写活性の上昇を示したことからB-boxも転写調節領域として重要であると考えられる。このA-boxおよびB-boxをklotho遺伝子のプロモーター内コアエンハンサーとして同定たした。これを用いてさらに今後のアッセイを進めていく予定である。1)Klothoプロモーターの転写制御アッセイシステムの確立平成18年度に行った研究の結果、klotho遺伝子のプロモーターは、転写開始点から上流124bpという非常に短い領域で強い転写活性を有し、かつヒトとマウスのプロモーター配列の比較により、2つの種間高度保存領域(-98bp-68bp、-53bpから15bp)が存在することを突き止めた。これらをA-box、B-boxと呼ぶこととし、A-boxはそのコピー数に応じて転写活性の上昇を示したことから、より転写調節領域として重要であると考えられた。2)klotho上流分子の網羅的探索得られたエンハンサー配列を6個タンデムにつないだ配列(A-box×6)を用いたTet off発現クローニング及びファージディスプレイを用いたサウスウェスタンスクリーニングを行い、上流分子の候補の探索を行った。その結果、ミトコンドリアの内膜に存在することが知られている輸送タンパクであるSAMC及び、転写因子CEBPfamily分子であるCEBPDが同定された。SAMC及びCEBP familyに属する転写因子の発現ベクターを作成しルシフェラーゼアッセイを行ったところ、SAMC,CEBPB,CEBPD,CEBPEによりklothoの転写活性が上昇した。次いで、これらの発現ベクターを用いてHEK293、Huh-7、HeLa細胞に過剰発現させ、klothoのmRNA誘導能をreal time RT-PCR法により確認したところ、SAMCによるklothoのmRNA誘導能は認められなかったが、HeLa細胞にCEPPB,CEPPDを過剰発現させると、klothoのmRNAレベルは2倍程度に上昇することがわかった。今後、EMSA法、クロマチン免疫沈降法を用いて実際にプロモーター領域にこれらの分子が結合することを確認する予定である。

しかしながら、両領域には既知の転写因子結合モチーフは存在せず、転写因子の特定に至ることは出来なかった。2)リン、Vit.Dによるklotho転写制御の検討リンおよびVit.Dの投与によってklotho mRNA量が増加することをreal-time PCRで確認した。上記で同定したklothoプロモータコンストラクトを用いて、リン、Vit.Dの応答エレメントの同定を試みたが、結合部位および下流分子の同定にはいたらなかった。また、gel-shift assayおよびChlPによっても、リン、Vit.Dによって結合の増加する分子を特定することは出来なかった。
神経細胞の極性獲得におけるＥｚｒｉｎ／Ｒａｄｉｘｉｎ／Ｍｏｅｓｉｎの機能解析

Ezrin、Radixin、Moesinの神経細胞の形態形成・極性獲得における役割を明らかにすることを目的とした。これまでそれぞれのノックダウン・ノックアウトマウスであるEzrin knockdown(EKD)、Radixin knockout(RKO)、Moesin knockout(MKO)マウスを用いた解析を行い、それぞれのマウス胎仔から調製した初代培養大脳皮質神経細胞における形態および極性異常を見出していた。1. Ezrin、Radixin、MoesinとRhoファミリーとの関連性についての解析:Rhotekin結合ドメインおよびPAK結合ドメインが結合したビーズを用いたプルダウンアッセイおよびウエスタンブロッティングを行ったところ、EKD神経細胞においてはRhoA活性の顕著な亢進(約3倍)が見出された。Rac1およびCdc42の活性について変化は見られなかった。一方でRKOおよびMKO神経細胞においてはRhoA、Rac1、Cdc42いずれについても変化は見られなかった。以上の結果から、Rhoファミリーの活性制御に対するEzrin、Radixin、Moesinの役割は異なるということが明らかになった。2. EKD神経細胞におけるRhoAシグナル伝達系の解析:EKD神経細胞においては神経細胞の発達初期で神経突起が形成されるときに重要とされているmyosin IIの構成サブユニットであるmyosin light chain 2(MLC2)のリン酸化が亢進していることが明らかになった。26年度が最終年度であるため、記入しない。
ＨＤＡＣ２選択的阻害薬の創製

アルツハイマー病などの老人性認知症の治療は、少子高齢化を迎える我が国が緊急に解決すべき問題の一つである。本研究では、アルツハイマー病などの老人性認知症の発症に関わることが示唆されている酵素HDAC2を標的とした選択的阻害薬の創製を目指した。本研究では、1) HDACリガンドを基にしたドラッグデザイン、2) HDAC2のX線結晶構造を基にしたドラッグデザイン、3)クリックケミストリーを利用したHDAC阻害薬ライブラリーの構築とスクリーニング、の3つの開発ステップを実施することによりHDAC2選択的阻害薬の創製を目指した。その結果、1) HDACリガンドを基にしたドラッグデザイン、2) HDAC2のX線結晶構造を基にしたドラッグデザイン、では、高いHDAC2阻害活性を有する化合物を見出すことはできなかったが、3)クリックケミストリーを利用したHDAC阻害薬ライブラリーの構築とスクリーニングにより、高いHDAC2阻害活性を示す化合物を見出した。本阻害薬は、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC7は、ほとんど阻害せず、これらのアイソザイムに対する選択性が高いことも分かった。26年度が最終年度であるため、記入しない。クリックケミストリーとは、簡単かつ短時間に複数の化合物を結合させる反応を利用して、新たな機能性分子を作り出す手法である。中でも銅触媒を利用したアジド-アルキン付加環化反応(CuAAC)によるanti-(1,4)-トリアゾール形成反応がクリックケミストリーの代表である。本研究では、クリックケミストリーを用いて、がんおよび神経変性疾患の治療を目指したヒストン脱アセチル化酵素2(HDAC2)選択的阻害薬を創製し、それらの治療薬としての可能性を確かめる。これまでに当研究室で見出されたHDAC阻害薬の構造を基に、2つのアルキン体を設計した。設計したアルキン化合物の合成ルートを考案し、目的の2化合物を合成した。さらに、既知のHDAC阻害薬とHDAC2のドッキングモデルを化学計算ソフトウェアMolegro Virtual Dockerを用いて作成し、その構造を基に、アジド体を20化合物設計した。設計したアジド化合物の合成ルートを考案し、目的の20化合物全てを合成した。また、比較対照化合物として、HDAC1/2選択的阻害薬、HDAC2/3選択的阻害薬も合成した。合成したアルキン体とアジド体は、平成25年度に行う予定の銅触媒アルキン-アジド環化付加反応を用いたトリアゾールライブラリーの作製に用いる予定である。トリアゾールライブラリーが作成できたら、Promega社のHDACアッセイキットを用いてスクリーニングを行うことにより、HDAC2選択的阻害薬の探索を試みる。

当初予定していた通り、アジド体とアルキン体を分子設計し、合成することが出来た。当初手定していた通り、アジド体とアルキン体を分子設計、合成した後、銅触媒アジド-アルキン環化付加反応により、トリアゾール体を得ることが出来た。ここまで、予定通り順調に研究が進展している。平成25年度も、予定通り、HDAC阻害薬候補化合物ライブラリーを作製し、HDAC阻害活性評価を行う。平成26年度も、予定通り、HDAC阻害薬候補化合物ライブラリーのHDAC阻害活性評価を行い、HDAC2選択的阻害薬の創製を試みる。
初期近代における世界の多様性の認識――日中欧の比較研究

初年度は、初期近代の日中欧の思想について二つの研究会を開催した。まず、10月には、リヨン高等師範学校教授のヴォルピヤック=オジエ教授にモンテスキューの比較思想的方法論について講演して頂いた。2019年1月には、科研費研究会を開催し、分担研究者の前田教授が報告者となり、「武威」の徳川国家の正統化:山鹿素行『中朝事実』の仮想敵は誰か」と題する報告をおこなった。その後、川出・前田・伊東の3名で科研研究の細目について調整をおこなった。川出は18世紀の英仏関係についての論文をRoutledge社から刊行した論文集に発表した。前田は江戸の読書会についての単著を刊行し、大きな反響を得た。伊東は朱熹と王陽明の精神論についての国際学会(世界哲学大会)での学会報告をおこなった。あわせてチェコでも報告するなど、数多くの学会報告をおこなった。これらの業績については、先述の1月の研究会で3名の間で共有した。以上のような成果発表と同時に、各自は長期的視点で、以下の研究を進めた。代表者である川出はフランスにおける中国受容についての研究を進めた。モンテスキューの中国理解の主たるリソースであるDu Haldeの『中華帝国全誌』(Description del'empire de la Chine)に着目し、そこに展開する中国の宗教論・風土論についての分析に着手した。分担者の前田は、江戸期・幕末期の対外関係論について、中国の儒学・兵学の議論の枠組みがいかに活用され、またいかに改変されたかについて討究を進めた。さらに、海保青陵等、江戸期に活発化した商業論の特質をヨーロッパの同時代の商業論と比較する作業を開始した。分担者の伊東は、中国の日本研究と日本の中国研究とを比較する作業をおこなった。その成果は、本研究の方法論的基礎付けとなるものである。また、上述の朱熹と王陽明の精神論についての研究をさらに広げ、中国の身体論とヨーロッパの身体論との比較研究を推進した。海外からのゲストを招聘した共催による講演会と科研のプロジェクトに特化した第一回科研費研究会を開催した。各研究者はそれぞれの専門領域における論文や著書を積極的に刊行した他、専門学会で報告するなど、活発な活動を展開した。特に1月に開催した研究会では、相互の研究成果を共有し、それをいかなる形で最終的な成果に結びつけるかについて綿密に討議することができた。それぞれの講演会、研究会には科研のメンバー外の多数の出席者を得て、活発な質疑応答がなされ、科研のプロジェクトをさらに発展させる知的刺戟をうることができた。第一回科研費研究会において、自由な討論のなかで提出された共通テーマ案をそれぞれがもちかえり考察を進めた。検討の結果は、2019年5月に予定される第二回科研費研究会にて議論し、最終的な目標である共著の刊行を意識し、その具体的な骨格を固める。川出は7月に韓国で開催される東アジアと国際関係思想をテーマとする学会にて報告を予定している。伊東も秋に中国での招待講演をおこなう。前田は、引き続き江戸期の思想を論文や著書の形で刊行する。こうした成果を2018年度同様に各メンバー間で共有する。

各研究者はそれぞれの専門領域における論文や著書を積極的に刊行した他、専門学会で報告するなど、活発な活動を展開した。特に1月に開催した研究会では、相互の研究成果を共有し、それをいかなる形で最終的な成果に結びつけるかについて綿密に討議することができた。それぞれの講演会、研究会には科研のメンバー外の多数の出席者を得て、活発な質疑応答がなされ、科研のプロジェクトをさらに発展させる知的刺戟をうることができた。第一回科研費研究会において、自由な討論のなかで提出された共通テーマ案をそれぞれがもちかえり考察を進めた。検討の結果は、2019年5月に予定される第二回科研費研究会にて議論し、最終的な目標である共著の刊行を意識し、その具体的な骨格を固める。川出は7月に韓国で開催される東アジアと国際関係思想をテーマとする学会にて報告を予定している。伊東も秋に中国での招待講演をおこなう。前田は、引き続き江戸期の思想を論文や著書の形で刊行する。こうした成果を2018年度同様に各メンバー間で共有する。
脳転移癌の微小環境においてアストロサイトが果たす役割の研究

癌は周辺の正常細胞に支援され悪性度を増すと示唆されている。本研究では脳転移頻度の高いヒト肺癌の細胞株を培養ラット脳スライスへ播種し脳細胞との相関を検討した。肺腺癌細胞はスライスへ生着後腺管構造を形成し、特異的に周辺に集積したアストロサイトとの相関が示唆された。より悪性度の高い肺小細胞癌細胞についても検討したが、スライスへ生着しなかった。次に癌の再発に関与すると示唆される薬剤排出能を持つ治療抵抗性の細胞を肺小細胞癌細胞から分取した。この細胞は自身および他種細胞を生み出す能力である自己複製能および分化能そして造腫瘍能を反映するコロニー形成能を所有しており、癌幹細胞を含むことが示唆された。下記項目について検討を行った。培養ラット海馬スライスにヒト肺腺癌細胞株A549および小細胞癌株PC 14、S2、87-5をそれぞれ播種したがA549のみ生着が確認されたのでこれを対象に解析を進める。播種したA549は増殖しコロニーを形成しその周辺に抗GFAP抗体に陽性反応を呈するアストロサイトが密集することを確認した。他方抗βIII-チューブリン抗体陽性の神経細胞およびその線維はA549周辺に偏在を認めていない。本解析系では種差を超え海馬においてヒト肺癌細胞およびラット・アストロサイトが呈する動態を検討することが出来る。癌幹細胞分取法として紫色レーザーによるHoechst 33342排出能を指標とするフローサイトメトリー解析法を開発した。従来のUVレーザーを用いた手法と同様に癌幹細胞を含むと示唆されるSP分画を子宮体癌細胞株において分取することに成功している。肺癌細胞株A549に対しこの方法およびCD133発現を指標とする細胞分取を行ったがこの2つの指標に基づき分取された癌幹細胞と想定される分画は一致しなかった。そこで幹細胞の分種には普遍性が高い指標であると報告されているALDEFLOUR (FITC標識aldehyde dehydrogenase)を用いA549の癌幹細胞分画特定を試みている。なお並行して癌幹細胞の判定に必要と成る造腫瘍能解析系を確立した。次にGFPをA549に導入し海馬スライスでの増殖を解析したが導入により増殖抑制が認められた。現在GFPを赤色蛍光を発するmCherryに変更し細胞への投与濃度を変化させ生細胞染色の最適化を図っている。mCherryを用いる理由は癌幹細胞を分取する指標として緑色蛍光を発するALDEFLUORの使用を決めたことに基づくものである。癌の最大の脅威はそれが持つ浸潤と転移の能力であり、近年周辺の間質細胞が癌細胞を支援することによりその悪性度が増すことが示唆されている。本研究では罹患率と脳転移頻度の高い肺癌を対象とした。肺腺癌および小細胞癌のヒト細胞株を培養ラット脳スライスへ播種することで、脳間質細胞であるアストロサイトとの相関を検討した。肺腺癌細胞についてはスライスへの生着が起こり、腺癌の特徴である腺管構造の形成を認めるなど生体に近い反応を観察することが出来た。癌細胞の周辺にはアストロサイトが集まり、両者の相関が示唆された。小細胞癌細胞については脳スライスへの生着がなされず、アストロサイトとの関連を解析するまでには至らなかった。治療抵抗性を持ち癌の再発を促す存在として、近年癌幹細胞が提唱されている。治療抵抗性の基盤と示唆される薬剤排出能を利用し、蛍光色素を取り込ませ紫色レーザーで励起した際放射光が低値であることを指標に細胞を分取することを試みた。腺癌細胞からの分取は不安定であり、小細胞癌細胞からは安定に分取が達成された。小細胞癌から分取した細胞を再度培養するとそれ自身が増殖する自己複製能、および薬剤排出能の低い細胞を出現させる分化能を確認することが出来た。この細胞は、コロニー形成能が顕著であった。幹細胞の特徴である自己複製能と分化能と同時に造腫瘍能を所有することから、分取した細胞は癌幹細胞を含むことが示唆された。本研究では、脳に転移した肺癌細胞と脳微小環境の相関を培養下で解析する系が構築された。生体内で困難な細胞の経時的観察を行えるなど利点のがあり、疾患の詳細な解析への応用が期待出来る。ただ、特に治療が困難な肺小細胞癌細胞と脳スライスの共培養は成功に至っていない。肺小細胞癌の細胞株からは安定して癌幹細胞と示唆される細胞が分取されたので、その脳スライスとの共培養が今後の課題である。

神経科学当初は本年度内に解析系を確立し培養ラット海馬スライスのアストロサイトおよびそこに播種したヒト肺癌細胞株および癌幹細胞での蛋白発現を解析する段階にいたることを予定していた。基本となる解析系の構築については異種間の共培養が達成され培養スライスでの肺癌細胞コロニーも認められたので予定の通りと考える。ただ臨床へのインパクトを想定すればより悪性度の高い小細胞癌株PC 14、S2、87-5の応用が望ましかったがスライスに生着せず肺腺癌細胞株A549のみの応用に留まった。これについての検討に時間を費やすことは避けることとする。癌幹細胞の分取については当初の予定より遅れていると言わざるを得ない。フローサイトトリーに用いるFACSAriaが故障し継続して使用出来なくなった結果数月の間作業を行えなかったことが大きく影響した。現在は平成26年4月より新規に導入したFACSAria IIIを用い検討を再開している。癌幹細胞の分取に関してHoechst 33342排出能とCD133発現を指標とする分取は双方の結果が全く一致しないのでこれらの手法は採用出来ないと考える。そこでALDEFLOURを用いてA549の癌幹細胞分画特定を開始した。GFPのA549への導入による増殖抑制が認められたことも遅延につながっている。癌幹細胞分取試薬として緑色蛍光を発するALDEFLUORを採用することから赤色蛍光を持つmCherryへと生細胞標識の素材を変更したのでその最適化に時間を費やしている。これらの理由から「研究の目的」の達成度は「やや遅れている」と判断した。新しくFACSAria IIIを導入したので解析の対象を肺腺癌細胞株A549に絞込み癌幹細胞分取を最優先として検討を進めて行く。これについては分取した細胞の癌幹細胞特性の確認が重要となるであろう。従って造腫瘍能解析等に時間を費やし慎重に進めて行きたいと考えている。培養スライスを用いた検討については順次使用する抗体を購入し先行してその使用最適化を図りながら進めて行く。鍵となる肺癌幹細胞の分取に先行しスライスに播種したA549それ自体およびアストロサイトでの蛋白発現を解析しようと考えている。なお生細胞染色についてはA549に与える影響を慎重に解析する。細胞動態の解析に決定的な影響があると推察されれば研究の最後の段階に検討することとなるだろう。癌幹細胞の分取に用いるフローサイトメトリー機器FACSAriaが故障し継続して使用することが出来なくなったので研究の進捗に遅れが生じた。この為直接経費の物品費の大半を費やす予定であった各種抗体の購入を遅延させたことが大きな理由である。抗体には推奨される使用期限が記載されているのでなるべく使用スケジュールが決まってから購入すべきとの判断である。癌幹細胞とアストロサイトの発現蛋白を検討する為に用いる各種の抗体・癌幹細胞であることを証明する造腫瘍能解析に使用する免疫不全マウス・フローサイトメトリーでの癌幹細胞の分取に用いるALDEFLUOR・培養スライス標本作製および癌細胞株の培養に必要な培地などの消耗品の購入に使用する。研究成果を発表する為の学会への参加旅費および論文の投稿料として使用する。
精妙なポリマーコンポジット作製方法の確立と機能発現

シンジオタクチックポリスチレン(SPS)の空隙を有する結晶であるδインターカレート型結晶とε型結晶をフィルム中の一定方向に配列させ、この空隙中で導電性ポリマーを重合させたり、有機金属錯体を配列させたりしてコンポジット化し、配列による特異な機能を発現させるというのが本計画の目標であり、本年度の成果は以下である。1SPSのトリクロロエチレン(TCE)溶液からキャストして作製するフィルムへの処理条件を検討し高配向性のε型結晶を高純度で作製する方法を開発し、更に、ε型結晶のチューブ状空隙にアニリンをゲスト分子として導入し、過硫酸アンモニウムの塩酸溶液に浸漬して酸化カップリング重合を起こし、反応温度・反応時間などを検討した結果、SPSフィルムのε型結晶中に30量体におよぶポリアニリン(PANI)を配列することに成功した。これらのフィルムは、絶縁体のSPS中のPANI含量が4重量%程度でも0.05 S/cmもの電導率を示した。21のフィルムの導電性を上げる試みとして塩化リチウム溶液への浸漬やヨウ素蒸気の曝露などを行い、10倍以上の電導率の増加が観測された。326種類の溶媒にSPSを溶解させて、キャストフィルムを作製し、生成する結晶形がδインターカレート型かδ包接型を調べ、キャストフィルムごとのWAXD(広角X線回折)測定をX線ビームの照射方向をフィルムの表裏方向(through)・側面方向(edge・end)と変えて測定・比較することで結晶の配向特性を調べ、結晶配列方向を制御する経験則を求めることに成功した。4新たに別方向からのアプローチを模索し、SPSのピリジンゲルをイオン液体に浸漬してピリジンをイオン液体に交換する方法を駆使して、粘弾性のあるSPSゲルだが、イオン液体やその混合溶媒と同じ電気伝導率を示す、導電性ソフトマテリアルの作製に成功した。申請計画に沿って総括すると、『フィルム作製時のキャスト溶媒の種類を20種類以上変化させてSPSのδインターカレート型とε型の、結晶化度と結晶配向性を制御する経験則作成を試みる』、という計画に関しては初年度で目処がついてきた。TCEだけでなく、トルエンやピリジン誘導体が、フィルムの厚さ方向に対して特異的に平行にSPS結晶のポリマー鎖(TTGGコンフォメーションの直線型螺旋構造)が配列し、一方、チオフェンやピリジンのようにフィルムの平面に平行にSPS結晶のポリマー鎖が配列するものがあることがわかり、しかもこれらは溶媒の分子体積に強く相関することがわかった。2019年度はこれらのキャストフィルムから、既に開発済みのε結晶化処理を行い、これらからコンポジットを作製したいと考えている。さらに『これらのコンポジットの物性を電導度測定や気体吸着測定などで数値化して評価することで有用なシステムを提言する』という目標についても、PANIに関していえば、低温などでの重合反応を模索することで、電導率の高いSPS/PANIコンポジットフィルムを作製することに成功し、さらに電導率を上げるために塩の導入やガスの曝露を行い、定量的な成果も現れている。PANIの導電性が電気絶縁体のSPSの被覆によっても阻害されないことから、SPSのイオン液体ゲルの創製と電導率測定にも取り組み、実際に、イオン液体の混合溶媒自体の電導率と、その組成の溶媒から形成されたSPSゲルの電導率がよく一致することも確認できた。こうした素材をもとにセンサーなどの機能発現をさらに定量化したいと考えている。以上、本研究は当初の計画よりも進行し、発展し、成功していると自己評価した。大きく2つの目標を掲げたい。一つは、(A)PANIだけではなく、結晶空隙内で重合するポリマーの種類も変化させて、このような結晶空隙という限定された空間で重合していく系の具体例を増やし、ここで提案している研究内容をより汎用化していく方向性の実現である。実は、フィルムの厚さ方向に平行にSPS鎖を配列させたSPSε型結晶中でアニリンを重合させると、いわば穴の空いたビーズを糸で縫うように、或いは重合して成長していくPANIポリマー鎖が、結晶を串刺しにしながら伸びていくため、ε型結晶が長くつながるとともに、この方向、即ちフィルムの厚さが増加していく現象が確認された。場合によっては2倍に厚さが広がった。このことは、コンポジットポリマーの重合を通じて結晶の配列を促すだけでなく、フィルムのマクロな形態をも変化させていることを意味する。例えば、水溶性ポリマーとなるモノマー分子をε型結晶空隙中に充填し、重合成長させてε型結晶をより長く連続化させた後で、水で水溶性ポリマーを除去すれば、細くて長い空隙チューブを結晶性フィルムに並べることができる可能性がある。このような将来性も兼ねて、ε型結晶空隙中で複数のポリマー重合を試みたい。(B)本申請の後半の研究計画は、(I) SPS結晶フィルムの結晶空隙中へ有機金属錯体を導入し配列してコンポジット化すること、(II)水をはじく筈のSPSフィルムを水溶液に浸漬しても重合反応などが起こっているので、水の挙動あるいは溶媒分子のSPSフィルム内での挙動を解明すること、である。ただし、(II)についての試みのひとつが、SPSのイオン液体ゲルの作製実験であった。SPSはイオン液体には溶けないが、ゲル内の溶媒中では、水分子もイオン液体も自由に移動することを本年証明したので、(I)・(II)についても十分な成果を得られると考えている。

シンジオタクチックポリスチレン(SPS)の空隙を有する結晶であるδインターカレート型結晶とε型結晶をフィルム中の一定方向に配列させ、この空隙中で導電性ポリマーを重合させたり、有機金属錯体を配列させたりしてコンポジット化し、配列による特異な機能を発現させるというのが本計画の目標であり、本年度の成果は以下である。1SPSのトリクロロエチレン(TCE)溶液からキャストして作製するフィルムへの処理条件を検討し高配向性のε型結晶を高純度で作製する方法を開発し、更に、ε型結晶のチューブ状空隙にアニリンをゲスト分子として導入し、過硫酸アンモニウムの塩酸溶液に浸漬して酸化カップリング重合を起こし、反応温度・反応時間などを検討した結果、SPSフィルムのε型結晶中に30量体におよぶポリアニリン(PANI)を配列することに成功した。これらのフィルムは、絶縁体のSPS中のPANI含量が4重量%程度でも0.05 S/cmもの電導率を示した。21のフィルムの導電性を上げる試みとして塩化リチウム溶液への浸漬やヨウ素蒸気の曝露などを行い、10倍以上の電導率の増加が観測された。326種類の溶媒にSPSを溶解させて、キャストフィルムを作製し、生成する結晶形がδインターカレート型かδ包接型を調べ、キャストフィルムごとのWAXD(広角X線回折)測定をX線ビームの照射方向をフィルムの表裏方向(through)・側面方向(edge・end)と変えて測定・比較することで結晶の配向特性を調べ、結晶配列方向を制御する経験則を求めることに成功した。4新たに別方向からのアプローチを模索し、SPSのピリジンゲルをイオン液体に浸漬してピリジンをイオン液体に交換する方法を駆使して、粘弾性のあるSPSゲルだが、イオン液体やその混合溶媒と同じ電気伝導率を示す、導電性ソフトマテリアルの作製に成功した。申請計画に沿って総括すると、『フィルム作製時のキャスト溶媒の種類を20種類以上変化させてSPSのδインターカレート型とε型の、結晶化度と結晶配向性を制御する経験則作成を試みる』、という計画に関しては初年度で目処がついてきた。TCEだけでなく、トルエンやピリジン誘導体が、フィルムの厚さ方向に対して特異的に平行にSPS結晶のポリマー鎖(TTGGコンフォメーションの直線型螺旋構造)が配列し、一方、チオフェンやピリジンのようにフィルムの平面に平行にSPS結晶のポリマー鎖が配列するものがあることがわかり、しかもこれらは溶媒の分子体積に強く相関することがわかった。2019年度はこれらのキャストフィルムから、既に開発済みのε結晶化処理を行い、これらからコンポジットを作製したいと考えている。さらに『これらのコンポジットの物性を電導度測定や気体吸着測定などで数値化して評価することで有用なシステムを提言する』という目標についても、PANIに関していえば、低温などでの重合反応を模索することで、電導率の高いSPS/PANIコンポジットフィルムを作製することに成功し、さらに電導率を上げるために塩の導入やガスの曝露を行い、定量的な成果も現れている。PANIの導電性が電気絶縁体のSPSの被覆によっても阻害されないことから、SPSのイオン液体ゲルの創製と電導率測定にも取り組み、実際に、イオン液体の混合溶媒自体の電導率と、その組成の溶媒から形成されたSPSゲルの電導率がよく一致することも確認できた。こうした素材をもとにセンサーなどの機能発現をさらに定量化したいと考えている。以上、本研究は当初の計画よりも進行し、発展し、成功していると自己評価した。大きく2つの目標を掲げたい。
バングラデシュ砒素汚染村における生産、消費、行動の相互関係に関する研究

本研究ではバングラデシュ砒素汚染村において、農業センサスと代替水源の利用にかかわる社会的障壁の調査・分析を行った。農業センサスは砒素汚染よる被害の深刻な一村落全世帯を対象に行った。前回の科研研究では、砒素被害が経済的に弱い世帯でより深刻であるが、生活資源の脆弱性の故、このような世帯では有効に砒素汚染に対処することができないということが明らかになった。今回の研究では、村全体の余剰適応力を評価するため、農業生産に関する体系的なデータを収集した。データ分析では、村落を人間活動を含む文化生態系として捉え、その生態系内の生産と消費を解析することにより、砒素汚染という環境ストレスに対する生態基盤としての村落の適応力を評価した。その結果、主要食料源である米の需給関係から見ると、生態系としての村は、余剰生産力があり、その余剰資源を環境ストレスに対応するため投資する可能性があることがわかった。また、代替水源利用については、砒素を含まない安全な水を供給するために建設された改良型掘り抜き井戸や深井戸の利用状況を調査し、このような集団利用型代替水源の飲料水供給の効果とその問題点を分析した。それによると、集団型代替水源は建設個所が比較的少数で集落をカバーできるため、建設コストの費用対効果は高い。しかし、女性の徒歩による水汲みに限られるため、距離的な限界だけでなく、女性の社会的行動制限にも影響を受ける。また、代替水源は「中央」に立地しがちで、周縁部に居住する社会的弱者には使用しにくいものとなる。代替水源への距離が近くても、村内集団の関係から、利用しない・できない世帯も発生する。これらのことから、効果的な代替水源の立地には、目に見えない社会的、文化的要因を理解することが不可欠であり、様々な要因で利用できない世帯に安全な水を供給するためには、集団型だけでなく、個別世帯方の代替水源の開発も必要であることが明らかになった。本年度研究は前年までの科研研究「バングラデシュ・ベンガル地方の地下水砒素汚染に関する応用生態人類学的研究」の結果を受け、それを補足するための調査を引き続きバングラデシュ・ジョソール県の村落で行った。本年度中では平成12月平成1月にかけてと平成14年2月3月の2回現地調査を行った。1回目の現地調査では、7月から先行して現地調査補助員が行っていたシャムタにおける農業センサス調査について、現地調査補助員とその後の進行計画等について協議した。この農業センサスは前年度洪水のため完了しなかったシャムタ村全世帯を対象としたもので、世帯構成員のほか、農業用及びかんがい用井戸の所有及び使用、家畜、農業用生産機械、樹木、耕作地、耕作作物、作付けサイクル、収入の項目について、それぞれの世帯で聞き取り、調査票記入を行った。第2回調査時にはこの農業センサスは完了し、746世帯分の記録を終えた。また、シャムタ村に設置されたポンド・サンド・フィルター(PSF)の利用状況を把握するため、PSFに水汲みに来た利用者を記録するとともに、その利用世帯がどの程度の地理的な広がりを持っているかについても聞き取りを行った。また、シャムタ村との比較データ収集のため同じくジョソール県のマルア村で、村の一般的情報、本調査の可否などについての予備調査を行った。農業センサスの調査票はベンガル語で記入されているため、あらかじめ受け取った調査票の翻訳にも着手し約半数の翻訳を終えた。(624字)

本年度行った研究活動は農業センサスの分析と代替水源の利用にかかわる社会的障壁の分析である。農業センサスは砒素汚染よる被害の深刻な一村落全世帯を対象に行った。前回の科研研究では、砒素被害が経済的に弱い世帯でより深刻であるが、生活資源の脆弱性の故、このような世帯では有効に砒素汚染に対処することができないということが明らかになった。今回の研究では、村全体の余剰適応力を評価するため、農業生産に関する体系的なデータを収集した。データ分析では、村落を人間活動を含む文化生態系として捉え、その生態系内の生産と消費を解析することにより、砒素汚染という環境ストレスに対する生態基盤としての村落の適応力を評価した。その結果、主要食料源である米の需給関係から見ると、生態系としての村は、余剰生産力があり、その余剰資源を環境ストレスに対応するため投資する可能性があることがわかった。また、代替水源利用については、砒素を含まない安全な水を供給するために建設された改良型掘り抜き井戸や深井戸の利用状況を調査し、このような集団利用型代替水源の飲料水供給の効果とその問題点を分析した。それによると、集団型代替水源は建設個所が比較的少数で集落をカバーできるため、建設コストの費用対効果は高い。しかし、女性の徒歩による水汲みに限られるため、距離的な限界だけでなく、女性の社会的行動制限にも影響を受ける。また、代替水源は「中央」に立地しがちで、周縁部に居住する社会的弱者には使用しにくいものとなる。代替水源への距離が近くても、村内集団の関係から、利用しない・できない世帯も発生する。これらのことから、効果的な代替水源の立地には、目に見えない社会的、文化的要因を理解することが不可欠であり、様々な要因で利用できない世帯に安全な水を供給するためには、集団型だけでなく、個別世帯方の代替水源の開発も必要であることが明らかになった。(795字)