hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新しい心腎連関機序：メガリンの発現抑制による腎保護を介した動脈硬化軽減作用の検証

また、同時に、もともとの動脈硬化の検討の中で、食事摂取の影響も同時に検討した。10週齢のApoE KOマウスに片腎摘出術を行い、2群に分けて、6週間カゼインを含む通常食の餌ないしカゼインの代わりに米タンパク質を含む餌を投与した。米タンパク質(植物性タンパク質)の摂取は、通常食であるカゼイン(動物性タンパク質)と比較して、腎障害にともなう動脈硬化病変を軽減した結果を得ている。他の知見を加えて、現在、論文を投稿準備中である。メガリン・アポEダブルKOマウスの樹立に成功した。21週齢メガリン・アポEダブルKOマウスでは、アポE KOマウスと比較して、大動脈の動脈硬化病変が軽減している傾向を認めた。また、腎障害における動脈硬化の検討の中で、食事摂取の影響も検討した。10週齢のアポE KOマウスに片腎摘出術を行い、2群に分けて、7週間カゼイン食ないし米タンパク質食を投与した。米タンパク質(植物性タンパク質)の摂取は、カゼイン(動物性タンパク質)と比較して、片腎摘出にて腎の容積減少によって増強された動脈硬化病変を軽減していた。アポEKOマウスとメガリンKOマウスのダブルノックアウトマウスの作製を着実に進める。培養細胞系の実験を早期に進められるように準備している。計画書通りに研究を進めていく。メガリン・アポEダブルKOマウスにおける腎傷害と動脈硬化病変の関係の検討、メガリンの機能抑制がISの血中・尿中濃度、大動脈の動脈硬化病変への蓄積に及ぼす影響の検討、メガリン・アポEダブルKOマウスの血清が血管内皮細胞に与える影響の検討、メガリン・アポEダブルKOマウスの血清がマクロファージに与える影響の検討、メガリン阻害薬Xあるいはバルドキソロンメチルの動脈硬化抑制作用の検討について、実験を順次進めていく。腎臓学進捗に若干の遅れがあったため、来年度に引き続き、ダブルノックアウト作製のため予算を繰り越した。3月中に納品、検収は完了したが、支払が4月になってしまうためダブルノックアウト作製のため、動物飼育費として使用する。3月中に納品、検収が修了した実験器具の支払に使用する
確率的挙動を示す学習アルゴリズムとそれによる学習概念のクラス分け

本研究では,計算論的学習理論をもとに,より高度・柔軟な機械学習を実現することを目指している.特に,計算量的な観点から機械学習する対象として,普遍的な幾何構造をとりあげ,それに対する確率的な近似学習アルゴリズムと,質問を用いた正確な学習に取り組んでいる.本年度の研究では,昨年度の成果をさらに拡張し,対象kラベル空間の学習の難しさの尺度を導入し,kラベル空間の近似学習可能性に関する定理を与えた.またニューラルネットワークの基本構造である3層のネットワークにより表される関数の質問を用いた正確な学習について成果を上げた.以下,この2点について述べる.(kラベル空間の学習理論)従来の例からの学習の最も基本的な枠組では,正例・負例の2種の例しか考えなかった.しかし,それではk種類の分類がある場合の概念クラスに対しては不十分であった.概念が幾何的に解釈できる場合,正例・負例からの学習について,VC次元という尺度が知られている.これに対して,本研究ではこのkラベル空間の次元を新たに導入し,この次元を用いて,Voronoi空間の複雑度を定義し,その応用を示した.これは,学習対象のコンパクトな表現を与えることにより汎化を実現するものである.(3層ネットワーク関数の質問を用いた学習)3層ニューラルネットの最も基本的なモデルは,d個の入力,n素子の中間層・l素子の出力層の各素子を線形のしきい値関数としたものである.本年度のこれまでの研究で,各素子として,同様に基本的な入力の和・積・線形・最小値をとるものを考え,それらの組合せとして表される関数の正確な学習について調べ,これらの関数が多くの場合質問を用いて(O(n^d)とかO(dn)回とかの質問で)正確に学習可能であり,またしきい値関数の場合の近似学習の限界について示した.本研究では,計算論的学習理論をもとに,より高度・柔軟な機械学習を実現することを目指している.特に,計算量的な観点から機械学習する対象として,普遍的な幾何構造をとりあげ,それに対する確率的な近似学習アルゴリズムと,質問を用いた正確な学習に取り組んでいる.本年度の研究では,昨年度の成果をさらに拡張し,対象kラベル空間の学習の難しさの尺度を導入し,kラベル空間の近似学習可能性に関する定理を与えた.またニューラルネットワークの基本構造である3層のネットワークにより表される関数の質問を用いた正確な学習について成果を上げた.以下,この2点について述べる.(kラベル空間の学習理論)従来の例からの学習の最も基本的な枠組では,正例・負例の2種の例しか考えなかった.しかし,それではk種類の分類がある場合の概念クラスに対しては不十分であった.概念が幾何的に解釈できる場合,正例・負例からの学習について,VC次元という尺度が知られている.これに対して,本研究ではこのkラベル空間の次元を新たに導入し,この次元を用いて,Voronoi空間の複雑度を定義し,その応用を示した.これは,学習対象のコンパクトな表現を与えることにより汎化を実現するものである.(3層ネットワーク関数の質問を用いた学習)3層ニューラルネットの最も基本的なモデルは,d個の入力,n素子の中間層・l素子の出力層の各素子を線形のしきい値関数としたものである.本年度のこれまでの研究で,各素子として,同様に基本的な入力の和・積・線形・最小値をとるものを考え,それらの組合せとして表される関数の正確な学習について調べ,これらの関数が多くの場合質問を用いて(O(n^d)とかO(dn)回とかの質問で)正確に学習可能であり,またしきい値関数の場合の近似学習の限界について示した.
九州大学文化史研究所所蔵琉球関係史料の研究

本研究では九州文化史研究所に所蔵されている天草の石本家ならびに松木文庫(長崎平戸石本家)の琉球関係史料の情報化と実証的研究を目的とするもので,今年度はこれら史料の調査・撮影,目録のデータベース化の作業を中心に行なった。まず石本家文書についての目録にしたがって史料の調査作業を行なった結果,約40点の琉球関係文書が保存されていることが確認できた。これらの史料には砂糖・唐薬種などのいわゆる琉球産物の販売に関する記録類や長崎における商況を薩摩藩あてに伝える書状,そして長崎市場における琉球産物の販売をめぐる幕府・薩摩間の確執を伝える史料などが含まれている。いっぽう松木文庫の琉球関係史料としては『琉球産物切手本帳』や『琉球産物切本帳』などの西洋反布の見本帳を撮影することができた。これと同種・同系統の史料はハワイ大学所蔵の宝玲文庫や長崎県立図書館所蔵の村上家文書の中にも存在し,それらの比較検討を行なえば,また琉球反布の名が冠された西洋反布の生産と流通をめぐる九州・長崎商人,薩摩藩,琉球国三者の結び付き,さらにはオランダなどとの関わりなどが明らかになると思われる。以上,これら今年度収集の史料群によって琉球国を媒介にした環東シナ海地域間の物流システムの解明が可能となるにいたった。今後はこれらの史料を原稿化して広く活用できるようにするとともに,あわせて分析を行ないたい。
脂質代謝バランスの揺らぎと歯周疾患のパスウェイ解析

本研究課題では歯周病原細菌感染の脂質代謝への影響を解析した。その結果、歯周炎患者において脂質プロフィールが動脈硬化性に変化しているとともに、血中LDLコレステロールの制御に重要なPCSK9が上昇していることが明らかになった。また、マウス実験的歯周炎モデルにおいては、PCSK9をはじめとする脂質代謝制御に関連する遺伝子発現が動脈硬化性に変化するとともに、HDLコレステロールの低下が認められた。これらより、歯周病原細菌感染はコレステロールの排出抑制、LDL受容体の発現上昇による細胞内への取り込みの亢進により動脈硬化を促進することが明らかになった。本年度は日本人歯周炎患者における血清脂質プロフィールと感染・炎症マーカーとの関連を解析した。その結果、歯周炎患者において歯周炎を有しないコントロールと比較してHDLコレステロールは有意に低く、LDLコレステロールは高い傾向が認められた。炎症マーカーであるCRPは患者群で有意に高かった一方、TNF-αは患者群で有意に低かった。また、歯周病原細菌Porphyromonas gingivalis FDC381株、同W83株に対する抗体価は患者群で有意に上昇していた。以上より歯周病原細菌の感染により発症する歯周炎は全身の炎症を誘発するのみならず脂質プロフィールにも影響を与えることで動脈硬化症のリスクを高めることが示唆された。脂質代謝に及ぼす影響を分子レベルで検索するため、マウス実験的歯周炎モデルを構築した。C57BL/6J及び遺伝的背景の同じApoE変異型であるC57BL/6.KOR-ApoE^<shl>にP.gingivalis W83株を週に2回口腔感染し、4週間あるいは32週間後に顎骨の吸収、血中の炎症マーカーおよび脂質プロフィール、血管および肝臓における遺伝子発現プロフィールを解析した。その結果、マウスにおいてもP.gingivalisの口腔感染でヒトの歯周炎と同様の歯槽骨吸収を引き起こすことを確認し、血中炎症マーカーもヒト歯周炎患者と同様の上昇を示した。短期感染では脂質プロフィールはいずれのマウスにおいても変動はなかったが、長期感染では両系統のマウスでHDLコレステロールの低下を示し、加えてApoEマウスではLDL,VLDL,総コレステロールの上昇を示した。血管、肝臓の遺伝子発現プロフィールから血管においてproatherogenicに作用するEgr-1,MCP-1遺伝子の発現が上昇し、血管、肝臓においてコレステロール排出を制御するLXRs,ABCA1遺伝子の発現低下が顕著であった。さらに、肝臓においてはLDL受容体の発現を負に制御するIdo1遺伝子の発現も低下していた。以上より、歯周病原細菌感染はコレステロールの排出抑制、LDL受容体の発現上昇による細胞内への取り込みの亢進により動脈硬化を促進することが明らかになった。近年、歯周疾患が様々な全身疾患のリスク因子になることが報告されており、中でも虚血性の心疾患・脳血管疾患との関連が注目されている。それらの疾患の病理学的基盤は動脈硬化症である。動脈硬化症は血管壁への脂質の蓄積および炎症性細胞の浸潤と泡沫化という病理学的変化が重要である。しかし歯周病原細菌の感染がどのようなメカニズムで脂質代謝と炎症反応に関与しているかは不明である。全身の炎症と脂質レベルおよび炎症反応や脂質代謝に関連する遺伝子発現を網羅的に解析するとともに、培養細胞を用いたin vitro実験でそれら遺伝子の機能を解析する。これらにより慢性感染症の全身に与える影響の分子基盤を解明することを目的に研究を進めた。本年度はPorphyromonas gingivalis感染によるマウス実験的歯周炎モデルを用い、脂肪組織、肝臓における遺伝子発現解析、耐糖能異常を中心に解析した。その結果、脂肪組織において炎症性サイトカイン遺伝子の発現が上昇し、糖脂質代謝を改善する遺伝子群の発現が低下していた。また、肝臓においても炎症性サイトカイン遺伝子の発現が亢進し、遊離脂肪酸生成に関与する遺伝子の発現も上昇していた。実際、肝臓における中性脂肪量はP. gingivalis感染群において上昇していた。これら脂肪組織、肝臓における遺伝子発現の変化と関連して、耐糖能異常がグルコーストレランステストおよびインスリントレランステストで確認された。以上より、歯周病原細菌P. gingivalisを口腔内に接種することにより全身の炎症が亢進し、脂肪組織、肝臓において糖・脂質代謝に変化が生じ、動脈硬化性疾患の発症リスクを高めることが示唆された。本年度、日本人歯周炎患者におけるProprotein subtilisin/kexin type 9 (PCSK9)の血清中におけるレベルを健常者のそれと比較した。PCSK9は肝臓においてLDL受容体発現の制御に関わっており、この分子の発現上昇は血中LDLコレステロールの上昇と関連している。歯周炎患者ではPCSK9レベルが健常者のそれと比較して有意に高く、この傾向は年齢に関係がなかった。

一方、PCSK9レベルと血中LDLコレステロールレベルの間に相関は認められなかったが、慢性炎症がコレステロール代謝に影響を与える可能性が示唆された。マウスを用いた系ではPorphyromonas gingivalis口腔感染モデルにおいて肝臓および脂肪組織(マウス精巣上体脂肪組織)における代謝関連遺伝子の発現解析を重点的に行った。その結果、脂肪組織においてはIL-6, TNF-alpha, MCP-1の発現上昇が認められ、アディポネクチンと類似の作用を示すことが報告されているCTRP9遺伝子、糖代謝に関連するPPAR-gamma, PPAR-alpha遺伝子の発現が有意に低下していることが明らかになった。また、グルコーストランスポーターであるGLUT4の発現も低下していることが示された。感染後にグルコーストレランステスト、インスリントレランステストを行った結果、感染群において有意なインスリン抵抗性が誘導されることが明らかになった。これらの変化は短期の感染でも認められた。脂肪組織における炎症性サイトカインの発現上昇は肥満でも見られ、歯周炎と肥満の関連を考える上で重要なデータであると考えられる。P. gingivalisの口腔感染は全身の軽微な炎症を誘導し、その結果脂質代謝、糖代謝のバランスを崩すことで全身の様々な疾患と関連することが示唆された。平成23年度に予定していた歯周炎患者の解析、マウス歯周炎モデルを用いた短期感染実験は予定通り実施し、感染による炎症と脂質代謝に及ぼす影響を解析した。結果は概要に記載した通りである。さらに平成24年度に予定していた長期感染実験も行い、口腔感染により炎症反応の亢進に加えてHDLコレステロールの低下を来すことが明らかになった。マイクロアレイ解析結果からいくつかのターゲット遺伝子の候補を得た。25年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度実施予定であった、3d(TLR3,7,9ミュータント)、CD1dノックアウトマウスにおけるPophyromonas gingivalis口腔感染モデルを作成し、Cd1dノックアウトマウスに関しては解析がほぼ終了した。3dマウスについては現在解析中である。また、脂質代謝関連遺伝子についてはPCSK9に注目して解析を行い、歯周炎患者における解析が終了し、マウス実験的歯周炎モデルにおいてP.gingivalis感染のPCSK9発現と血中コレステロールレベルに及ぼす影響について解析が進んでいる。以上より、研究計画に対しておおむね順調に進展していると判断できる。今後は当初の予定通りin vitroにおいてP.gingivalis LPSを抗原として腹腔マクロファージによるコレステロールの取り込み、排出に及ぼす影響、その際の上記ターゲット遺伝子の動態を明らかにする。
睡眠管理を含めた複合的周術期疼痛管理戦略の構築

術後疼痛は睡眠障害を招き、睡眠障害は疼痛そのものを増強する。また、術後鎮痛に用いられるオピオイドは睡眠に影響を与える。本研究では術後睡眠に対する影響を考慮した適切な術後疼痛の管理方法を確立するための方法を探索する。<本研究の具体的な目的>1現在用いられている複合的術後鎮痛法(multimodal analgesia )を用いた術後疼痛患者の疼痛および睡眠の程度と状態・睡眠の質の実際を調査する。2術後疼痛の程度・睡眠状態・睡眠の質を分析し、疼痛が睡眠に及ぼす影響を調査する。3術後疼痛の軽減と睡眠の状態・質の改善に向けた適切な方法を探求する。
近世都市社会における「訴訟」の機能とその実態に関する研究

本年度は、昨年度に引き続き、本研究にとって不可欠でありながら、当該研究機関において備えられていない既に活字化されている近世裁判関係の図書ならびに史料集を購入した。また、これと並行して、東北大学付属図書館、京都大学付属図書館、大阪商業大学等を中心に史料調査を実施し、各機関に所蔵されている近世都市仙台、京都、大坂等の「訴訟」のあり方を窺い知ることができる近世史料をできる限り広く渉猟した。その後、それらの史料を筆写し、分析を試みた。その結果、江戸を考察の中心に据えながらも、京都、大坂、仙台等の近世都市においても江戸の場合と共通した「訴訟」の手続きやその特色を知ることができ、いわば近世都市全体に通底した「訴訟」のルールを導き出すことができたと思われる。そして、その具体的内容は、以下の通りである。(1)司法と行政は未分離の状態であり、両者を総称して「訴訟」と称する場合があったこと、(2)農村部と異なり、都市においては、行政的な「訴訟」が日常的に存在し、しかも極めて重要であると思われること、(3)行政的な「訴訟」に対して、町奉行所が独自な手続きによって対応していたこと、(4)従来の近世裁判研究は、行政的な「訴訟」へ射程を伸ばすことが欠落していたと思われること、上記の分析を元として、近世の行政と「訴訟」に関する論文をできる限り早く執筆し、最終的には著書の刊行を計画している。平成15年度は、本研究にとって不可欠でありながら、当該研究機関において備えられていない既に活字化されている近世裁判関係の図書を購入した。そして、これと並行して国立国会図書館、京都府立総合資料館(11月21日、22日)、東北大学附属図書館(1月15日)、名古屋大学附属図書館(3月3日)への史料調査を実施し、各機関に所蔵されている江戸、京都、大阪等いわゆる近世の巨大都市における「訴訟」のあり方を窺い知ることができる史料をできる限り広く渉猟した。そして、その史料を筆写し、データーとして利用しやすいように整理を進めている。その結果、近世の都市社会における「訴訟」の特色として、(1)司法と行政は未分化の状態であり、両者を総称して「訴訟」と表現する場合が多かったこと、(2)農村社会と異なり、都市においては行政的な「訴訟」が多く、しかも極めて重要であったと思われること、(3)行政的な「訴訟」については、町奉行所が独特な解決方法を用意していたと思われること、等の点を導き出すことができたと、考えている。上記の史料調査、史料分析を先にして、来年度は更に詳細な史料調査、分析を実施するとともに、近世都市社会における「訴訟」に関する論文を執筆し、最終的には著書刊行の準備をすることを予定している。(1)司法と行政は未分離の状態であり、両者を総称して「訴訟」と表現する場合があったこと、(2)農村部と異なり、都市にいては、行政的な「訴訟」が日常的に存在し、しかも極めて重要であると思われること、(3)行政的な「訴訟」に対して、町奉行所が独自な手続きによって対応していたこと、(4)従来の近世裁判研究は、行政的な「訴訟」へ射程を伸ばすことが欠落していたと思われること、上記の分析を元として、近世の行政と「訴訟」に関する論文をできる限り早く執筆し、最終的には著書の刊行を計画している。
羊膜由来間葉系幹細胞オルガノイドを利用した口蓋裂治療法の検討

口蓋裂に対する自家細胞由来の口蓋形成の実現化に向けて、羊膜由来上皮幹細胞をソースとして歯科印象採得にて作成したモールドを元にアルジネートスポンジゲル等を足場素材とした3次元培養し、in vitroにて上皮-間葉相互作用を利用した幹細胞口蓋オルガノイドを作製し閉創することにより、口蓋形成手術術後に問題となる瘢痕収縮を抑制し、正常組織に近い口蓋形成を目指す。
窒素に応答したサイトカイニン蓄積の分子機構

PEPカルボキシラーゼをはじめとする多くのC_4光合成遺伝子は窒素栄養に応答した選択的な発現制御を受ける.我々はこの現象に対して,「窒素濃度の変動を感知して根で合成されたサイトカイニンは,導管を経由して葉へと輸送され,葉肉細胞においてC_4光合成遺伝子の転写を活性化する」との作業仮説を設定するに至っている.本研究では,サイトカイニン蓄積を担う代謝的要因の同定を最終的な目的として,以下のような成果を得た.(1)抗サイトカイニン抗体カラムによる分離後のELISAによる定量により,窒素欠乏状態にあるトウモロコシ個体への硝酸補填により根で含量が増える複数のサイトカイニン分子種のうちの一つは,イソペンテニルアデノシン-5'ーリン酸(iPMP)であると結論した.窒素補填1時間後からiPMP含量が増え始め,2時間後には補填前の100倍以上に上昇し,4時間後でもその蓄積量の減少は僅かなものであった.(2)窒素補填に伴うiPMPの短時間の蓄積には,サイトカイニン代謝系酵素の活性変動が関与しているのではないかと考え,窒素補填に伴う酵素活性の変動の有無を調べた.その結果、窒素補填過程においてもヒドロキシメチルグルタリルCoAレダクターゼ及びゼアチン-O-グルコシダーゼの活性に変動は見いだされず,それ以外の代謝系酵素(例えば,iPMP合成に関わるイソペンテニルトランスフェラーゼ等)の活性変動を調べる必要があると考えられた.(3)ディファレンシャルディスプレー法により,サイトカイニンによりトウモロコシ葉組織中で誘導されるcDNAを1種類(ZmCiP1)を得た.CIP1のアミノ酸配列は,大腸菌の走化性に関わる二成分情報伝達系のレシーバータンパク質であるCheYと高い相同性を示した.窒素欠乏状態のトウモロコシの根に硝酸にアンモニアを補填する一過的にZmCiP1mRNAの蓄積が葉組織中で観察されるが,窒素欠乏状態や窒素充足状態のままでは蓄積が見られなかった.さらに,根においては窒素栄養状態に関わらずZmCip1 mRNAは検出されていない.このCIP1は,サイトカイニンを結合したセンサータンパク質がリン酸化された後,そのリン酸基を下流のシグナル因子へと渡す仲立ちをしているのではないかと推定される.PEPカルボキシラーゼをはじめとする多くのC_4光合成遺伝子は窒素栄養に応答した選択的な発現制御を受ける.我々はこの現象に対して,「窒素濃度の変動を感知して根で合成されたサイトカイニンは,導管を経由して葉へと輸送され,葉肉細胞においてC_4光合成遺伝子の転写を活性化する」との作業仮説を設定するに至っている.本研究では,サイトカイニン蓄積を担う代謝的要因の同定を最終的な目的として,以下のような成果を得た.(1)抗サイトカイニン抗体カラムによる分離後のELISAによる定量により,窒素欠乏状態にあるトウモロコシ個体への硝酸補填により根で含量が増える複数のサイトカイニン分子種のうちの一つは,イソペンテニルアデノシン-5'ーリン酸(iPMP)であると結論した.窒素補填1時間後からiPMP含量が増え始め,2時間後には補填前の100倍以上に上昇し,4時間後でもその蓄積量の減少は僅かなものであった.(2)窒素補填に伴うiPMPの短時間の蓄積には,サイトカイニン代謝系酵素の活性変動が関与しているのではないかと考え,窒素補填に伴う酵素活性の変動の有無を調べた.その結果、窒素補填過程においてもヒドロキシメチルグルタリルCoAレダクターゼ及びゼアチン-O-グルコシダーゼの活性に変動は見いだされず,それ以外の代謝系酵素(例えば,iPMP合成に関わるイソペンテニルトランスフェラーゼ等)の活性変動を調べる必要があると考えられた.(3)ディファレンシャルディスプレー法により,サイトカイニンによりトウモロコシ葉組織中で誘導されるcDNAを1種類(ZmCiP1)を得た.CIP1のアミノ酸配列は,大腸菌の走化性に関わる二成分情報伝達系のレシーバータンパク質であるCheYと高い相同性を示した.窒素欠乏状態のトウモロコシの根に硝酸にアンモニアを補填する一過的にZmCiP1mRNAの蓄積が葉組織中で観察されるが,窒素欠乏状態や窒素充足状態のままでは蓄積が見られなかった.さらに,根においては窒素栄養状態に関わらずZmCip1 mRNAは検出されていない.このCIP1は,サイトカイニンを結合したセンサータンパク質がリン酸化された後,そのリン酸基を下流のシグナル因子へと渡す仲立ちをしているのではないかと推定される.
単一細胞における遺伝子発現の多面解析を用いた疾患の発症・進展因子の同定

【研究の目的】(1)シングルセルからの発現プロフィール解析法を最適化し、疾患や毒性の分子機作を明らかにすること。【研究の進め方】(1)癌やアレルギーなどの病態発症や排卵や分娩など生理維持に関与するプロスタノイド受容体に関して、受容体発現細胞を標的としてシングルセル発現プロフィール解析を行い、受容体の下流でどの様にその生理・病態作用を発揮するかという分子機作を明らかにする。【2002年度の研究当初計画】(1)解析の場となる生理・病態とプロスタノイド受容体の関係を明らかにする。(2)シングルセルRNA増幅法を最適化し、迅速なアレイ解析系を確立する。(3)受容体KOマウスで、緩和あるいは劇症化した発熱・大腸炎の各疾患モデル、ならびにKOマウスで毒性が認められた排卵、受精など生理プロセス異常について、その分子機作を解析する。【2002年度の成果】(1)EP4受容体がデキストラン硫酸誘発性の大腸炎の発症・進展に関与し、これは腸管上皮の保護作用ならびに腸管免疫の抑制作用の両作用を介することを見出した。(2)シングルセルRNA増幅法においてキャリアやT7増幅条件の改良により、組織上の細胞を初発材料として5ug以上のRNAを再現よく回収できるようになった。(3)発熱に関与するEP3ニューロン、EP2欠損マウスにおける受精障害を引き起こす卵丘細胞異常、またヒスタミン欠損マウスにおけるマスト細胞異常に関して発現プロフィール解析を行い、興味深い知見を得た。【達成できなかったこと、予想外の困難、今後の課題】(1)マスト細胞の同定に用いる一般染色がT7オリゴのハイブリダイゼーション中に消失し、細胞回収が困難となったこと。(2)コピー数の少ないRNAを再現よく増幅・検出するためにシングルセルRNAからのSAGE法やノーマライゼーション法の検討を加える必要がある。
高血圧の交感神経機能亢進における神経成長因子の関与に関する研究

高血圧自然発症ラット(SHR)や本態性高血症において、交感神経活性の増加が指摘されている。特にSHRでは血管床の交感神経線維の密度が高いことや、ノルエピネフリン(NE)遊出が多いことが報告されている。SHRにおける交感神経活性亢進におけるNGFの役割を明かにするため、血管平滑筋細胞(VSMCs)からのNGF分泌を検討し、SHRおよび対照のWistar-Kyoto rat(WKY)の各種の組織内のNGF含量を測定した。また交感神経終末からのNE遊出に対するNGFの影響も検討した。NGFはマウス顎下腺よりBocchiniの方法で精製した。VSMCsはWKYの大動脈よりexplant法作成した。NGF活性はbioassayで、NGF含量はenzyme immunoassayで測定した。電気刺激によるNE遊出に及ぼすNGFの影響は腸間膜灌流標本で検討した。その結果、1)VSMCsの条件培養液は交感神経、知覚神経に対し、神経線維伸長活性を示し、この活性は抗NGF血清で阻害された。2)3週齢のSHRではWKYに比べ、脾臓、坐骨神経、腸間膜動脈のNGF含量が多かった。しかしこの差は12週齢では認められなかった。3)腸間膜動脈中膜でNGFmRNAの発現が高かった。4)腸間膜動脈および大動脈のNGF分泌量はSHRとWKYで差がなかった。5)NGFは電気刺激による交感神経終末からのNE遊出を用量依存性に抑制した。この反応は神経終末からの取り込みの抑制剤desipramine(5×10^<-8>M)でも同様に認められた。6)NGFの神経伝達抑制作用は4週齢のSHRで減弱していた。しかし12週齢ではSHR、WKY間で差を認めなかった。これらの異常は交感神経系の亢進を介し高血圧の成因に関与していると考えられる。高血圧自然発症ラット(SHR、岡本・青木)では、血管床の交感神経密度の増加がある。さらに、幼若SHRではノルエピネフリン(NE)遊離の亢進が認められ、高血圧発症の1要因と考えられている。神経成長因子(NGF)は、交感神経に作用する神経栄養因子であり、神経伸長作用がある。本研究ではSHRにおけるこれらの異常がNGFの増加によることを潅流標本および培養血管平滑筋を用いて明かにすることを目的とする。我々は、血管平滑筋細胞でのNGF産生、末梢交感神経終末でのNGFによるNE遊離抑制作用を示し、SHRでは血管床でのNGF含量が高く、NGFによるNE遊離抑制作用は、高血圧発症初期のSHRで低いことを明らかにした。今回は、14週齢SHRおよび対照のWistar-Kyotoラット(WKY)の大動脈培養平滑筋細胞を用い、平滑筋細胞あたりのNGF産生量を測定した。その結果、上清中のNGFは対数増殖期に一時的に増加し、その後漸減した。SHRにおけるNGF産生量は対数増殖期、静止期ともにSHRで低値であった。一方、細胞蛋白量はSHR、WKY間で差がなかった。続いて、NGF mRNAに対するprobeを用いてanti-sense cRNAを作成し、in situ hybrizationを施行した。その結果、大動脈、腸間膜動脈、腎動脈の中膜に集積が認められた。4週齢SHRの大動脈、腸間膜動脈、腎動脈の中膜において、対照のWKYと比較し、NGF産性能が亢進していることが確認できた。

一方、中枢神経系では海馬、皮質に陽性細胞を認めたが、SHRとWKYとの間に差はなかった。以上、SHRの血管平滑筋からのNGF産生は、培養細胞では低下しているが、生体内では逆に亢進していた。このことは、SHRでは生体内で何等かの刺激により血管平滑筋でのNGF産生が亢進している可能性が示唆された。高血圧の発症には一部交感神経系が関与するとされる。遺伝的高血圧発症モデルである高血圧自然発症ラット(SHR、岡本・青木)では、組織免疫学的に、動脈周囲の交感神経密度の増加があり、特に幼若SHRでは腸間膜動脈標本において電気刺激によるノルエピネフリン(NE)遊離が亢進していることを認めている。神経成長因子(NGF)は、交感神経に作用する神経栄養因子であり、中枢神経系および神経周囲組織において産生されるとされた。我々は、血管平滑筋細胞においてもNGFが産生されること、NE遊離抑制作用があることを示した。SHRにおいては血管床でのNGF含量が高く、NGFによるNE遊離抑制作用は、低いことを明かにした。さらに、NGFmRNAに対するprobeを用いてanti-sense cRNAを作成し、in situ hybridizationを施行し、4週齢SHRの大動脈、腸間膜動脈、腎動脈の中膜においてNGF産性能が亢進していることが確認できた。本年度は、神経終末の低親和性神経成長因子受容体(LNGFR)遺伝子の全翻訳領域の塩基配列を決定し、SHRにおける突然変異を明かにしようとした。8週齢のSHRおよび対照のWKYの脳基底核領域から調整した全RNAから逆転写酵素を用いてcDNAを作成した。数種のプライマーを用いてcDNAからLNGFR遺伝子の全翻訳領域を網羅するようにPCR法によりDNA断片を増幅した。これらをプラミドベクターに挿入後クローニングし、全翻訳領域の塩基配列を決定した。その結果、LNGFR蛋白のシグナルペプチドをコードする領域中に一箇所のグアニンからアデニンへの塩基置換を見いだした。このLNGFRタンパク質が交感神経系の異常を介して高血圧の発症に関与する可能性が示唆された。
体育科のボール運動における思考力に関するパフォーマンス評価法の開発

本研究は、学習指導要領改訂において、学習目標に思考力の育成が掲げられていることを踏まえ、小学校体育科のボール運動における授業の中での児童の思考力に関するパフォーマンス評価法を開発することが目的であった。研究を進めるにあたって、フラッグフットボールを単元として取り上げた。評価法としては、子どもたちのプレー場面を撮影した映像をもとにしたプレー選択における状況判断を評価する方法と学習カードに記述させて子どもの戦術的知識を評価する、質問紙による評価方法の2つを開発することとした。映像をもとにしたプレー選択の状況判断の評価については、適切なプレー選択ができているかどうかについて、味方や相手(ディフェンス)との関係でどのように動いているかで3段階による評価基準を設定した。また、質問紙による評価法については、実際の授業場面では、実際の実技で学んだ「情報」(ケルン、1998)も児童の思考には含まれていると考えらえる。そこで、子どもがよいと考える作戦について自由記述式でその理由を書かせる児童の思考力に関するパフォーマンス課題を開発し、ゲーム中の状況判断や動きのポイントなど、その作戦を成功させために必要な知識や、その作戦がうまくいかないときにどうすればいいかといった修正のための知識を活用した児童の思考力の評価を行った。Griffin et al. (2001)の戦術的知識に関する評価基準を参考にして、味方や相手のプレイヤーとの関係で記述できているかについて5段階の評価基準を設けた。研究の成果として、単元が進むにつれて、子どもたちの戦術的知識が増え、攻撃での適切なプレー選択の状況判断が増えた。その要因としては、授業の中での教師の指導や児童が練習と試合で学習した戦術的知識と状況判断が関係したのではないかと推察された。
シロイヌナズナを用いた表皮細胞分化と器官形成の制御機構の解明

シロイヌナズナのale1、ale2及びacr4変異体は地上部の器官の表皮細胞の形態及び機能の異常を示す。ALE1はズブチリシン様のセリンプロテアーゼホモログ、ALE2とACR4は受容体型プロテインキナーゼをコードすると予測されることから、これらの因子が表皮の分化及び機能を制御していると推察される。これまでに、ale1 acr4とale1ale2二重変異体はそれぞれの単独変異体よりも厳しい表皮の異常を示し、単独変異体では見られないような器官形成異常や原表皮特異的遺伝子の発現パターンの異常を示すことを明らかにしている(Watanabe et al., 2004, Tanaka et al.,未発表)。これらの因子が関与する原表皮特異的遺伝子の発現制御機構ついて知見を得るために、原表皮特異的レポーター遺伝子pPDF1::GFPの発現パターンを解析した。野生型ではpPDF1::GFPは茎頂メリステム周辺で強く発現し、若い葉では表皮細胞で均一な強さの蛍光が観察されたが、ale1 ale2二重変異体ではGFPの蛍光が検出されない個体や不規則にGFPを発現する個体が見られた。ALE1とALE2が転写レベルの遺伝子発現制御に必要であることが示唆される。また、受容体型プロテインキナーゼ遺伝子の変異体であるale2とacr4の二重変異体の表現型を解析し、acr4ホモ個体ではale2変異の表現型が半優性に現れるという遺伝学的相互作用を見いだした。ale2とacr4変異体の見かけが似ているだけでなく、両者が共通のプロセスに関わっていることが示唆される。これらの研究にはPCR反応等のために多くの液体操作が必須であり、マルチチャンネルピペットや分注器を購入した。また、形態観察及び交配操作に用いる実体顕微鏡を購入した。
並列情報処理用広帯域音響光学光集積回路の試作

1.光集積回路の情報処理への応用に関する調査研究LiNbO_3導波路とグレ-ティング素子を用いた光集積回路の光演算・光情報処理への応用に関して調査研究し、研究指針と将来の可能性についての知見を得た。2.光集積高周波スペクトルアナライザおよび光集積レ-ザプリンタヘッドの試作(1)試作2デバイスの再設計を行って仕様の細部を決定し帯域や分解点数などの性能限界を明らかにするとともに、作製手順を決定した。(2)音響光学変調・偏向部を電子ビ-ム直接描画・金属電極膜パタ-ニングで作製する技術を確立し、1GHzの音響光学帯域を達成した。(3)プロトン交換法によりLiNbO_3導波路に導波路フレネルレンズを作製する技術を確立した。(4)各素子を集積化して目的のデバイスを試作し、その動作を実験的に確認した。3.特性評価と改善(1)試作2デバイスの総合特性を評価し、性能を制限する重要な要因はグレ-ティングカップラの効率であることを明らかにした。(2)グレ-ティングカップラの効率改善のため、新たに高屈折率層装荷型カップラを提案し、理論解析を行って90%以上の効率が達成可能なことを明らかにし、設計デ-タを得た。また実際にこのグレ-ティングカップラを作製・評価して89%の効率値を達成した。4.将来の発展可能性の検討(1)音響光学コリレ-タの構成法を提案し、デバイスを試作してその動作を確認した。(2)光集積行列・ベクトル全並乗算器を提案し、2×2規模のデバイスを試作しその動作を確認した。(3)短波長光源の集積化のため、導波路型光第二高調波発生デバイスの理論設計を行い、デバイスを試作し、基本的な実験に成功した。(4)空間並列情報を光集積回路内に結合するための方法として、集光グレ-ティングカップラによる結像について理論的に検討し、素子設計を明らかにした。また実験的にその可能性を実証した。本年度は,研究計画当初からの提案である光集積高周波スペクトルアナライザと光集積プリンタ-ヘッドの2デバイスについて,目標性能達成のために必要な各構成ブロックごとの検討を行い以下の成果を得た。1.試作2デバイスの仕様の細部を決定し,帯域や分解点数などの性能限界と目標特性を明らかにした。また作製手順を決定した。2.音響光学変調・偏向部を電子ビ-ム直接描画・金属電極膜のパタ-ンニングにより作製する技術を確立し,1GHzの帯域を達成した。3.プロトン交換により導波路フレテルレンズを作製する技術を確立した。4.出力結合のためのグレ-ティングカップラの高効率化のため理論シミュレ-ションを行い90%程度の効率が達成可能なことを明らかにした。また実験においてもこれまでの結果を大幅に上回る効率を実現した。5.プロトン交換フレネルレンズ,音響光学変調・偏向部・集光グレ-ティングカップラを集積化したスペクトルアナライザ,プリンタヘッドを試作し,その動作を確認した。6.試作デバイスの詳細な特性測定・評価・改善を現在行っている。また,これらのデバイスの機能上の発展,または他デバイスへの本技術の応用のため,以下のような検討を行い,基礎的成果を得た。7.音響光学コリレ-タの構成法を提案し,プロトデバイスを試作して,その動作を確認した。

8.電気光学効果デバイスへの発展の例として,光集積マトリクス・ベクトル・全並列乗算器を提案し,2×2デバイスを試作・動作確認した。9.一次元並列光情報の結像,結合のための新しい導波形素子である線集光グレ-ティングカップラを作製し,その機能を確認した。10.光情報処理のための短波長光源の集積化のため,導波形第2高調波発生デバイスの理論設計を行い,基本的な実験に成功した。本年度は,計画当初からの試作デバイスであるスペクトルアナライザとレ-ザプリンタヘッドについて,昨年度の成果を基礎として性能評価・改善を行なうとともに,本研究の技術の発展応用の可能性に関する研究を行なった。得られた成果は次のとおりである。1.スペクトルアナライザ・プリンタヘッドの総合特性を評価し,性能を制限する重要な要因はキ-コンポ-ネントであるグレ-ティングカップラの効率であることを明らかにした。そこで効率改善のため,新たに高屈折率層装荷型カップラを提案し,理論解析で90%以上の効率が達成可能なことを明らかにし設計技術を確立した。また実際に試作・評価して,約89%の値を達成した。2.スペクトルアナライザを変形発展させて2軸性集光グレ-ティングカップラを用いた音響光学コリレ-タを設計・試作した。基礎実験により,音響光学セルと半導体レ-ザに入力した高周波信号が2軸性集光グレ-ティングカップラによる空間並列処理機能で相関演算されて出力が並列に得られることを確認した。3.空間並列情報を音響光学光集積回路内に結合するための一方法として,集光グレ-ティングカップラによる自由空間-導波路間の結像について理論的・実験的に検討した。結像特性を改善するための素子設計法を確立した。またガラス導波路を用いた実験で可能性を実証した。4.高周波信号,光並列情報の処理への光集積回路技術の応用の可能性について調査研究を行ない,現状と将来の可能性を明らかにした。
ゲノム比較による鱗翅目昆虫染色体進化の解明

本研究では、コナガ、コウモリガ、ヒゲナガカワトビケラのESTライブラリーを作製し、カイコ単一遺伝子オルソログ情報を取得し、後2種のBACライブラリーを新規作製した。3種のカイコオルソログを含むBACクローンを選抜し、FISHマッピング系を構築した。モデル鱗翅目昆虫カイコとの網羅的ゲノム比較により、コナガでは、シンテニー保存性が認められた。一方、毛翅目昆虫のヒゲナガカワトビケラでは鱗翅目昆虫とのゲノムワイドな染色体の対応関係は認められなかった。また、オオモンシロチョウとモンシロチョウ間では、染色体の対応関係が認められたが、これまで解析された鱗翅目昆虫のとのマクロシンテニーは認められなかった。当初計画通りオオモンシロチョウのFISHマッピングより着手し、卵母細胞および精母細胞減数第一分裂前期のパキテン期に認められる14対の常染色体上に合計42カイコ単一遺伝子のオルソログを含むBACのマッピングに成功した。14常染色体のうち12染色体上に複数オルソログを41マップした結果、マイクロシンテニーが認められたのは2組(計4オルソログ)で、レアレンジメントが起こったにも関わらず同一染色体上に対応関係を残すオルソログが1組(2個)認められた。少なくとも35/41の非相同染色体間のリアレンジメントがあった。オオモンシロチョウでは、他の鱗翅目昆虫で認められるシンテニーの崩壊が明らかとなった。コナガのカイコ単一遺伝子オルソログ保有BACによるFISHマッピングを開始した。しかしながら、分子連関解析によるコナガの遺伝子マッピング情報論文が発表され重要性がやや薄れた。故に、この研究を一時中断し、この時間を来年度に予定したヒゲナガカワトビケラの採集とBACライブラリー作成に当てた。ライブラリー作成に十分な個体数を確保できたため、一部cDNAライブラリーの作製にも振り分けた。コウモリガの採集と飼育は予定通り行い、ライブラリー作製に必要な蛹の凍結標本をストックした。この標本を使用して現在BACライブラリーの作製を行っている。当初申請した額よりも配分額がカットされたため、cDNAライブラリーの作製を外部委託するのに必要な資金確保が叶わず、ヒゲナガカワトビケラとコウモリガ双方のライブラリーを独自に作製し、現在シークエンスを行っている。コウモリガSTSプライマーを追加したBAC選抜から40カイコオルソログ含有BACクローンの選抜に成功した。それらをin silicoにてマッピングして、BAC-FISH系を構築した。これにより染色体標本に対するマッピング手法が確立した。今後は必要に応じて、採集、飼育、染色体標本作製ならびに特定の配列情報取得とBACクローン選抜、マッピングなどを行う。ヒゲナガカワトビケラのBACライブラリーを作製し、384x84のBACクローンをストックした。同時に構築したcDNAライブラリーの配列決定とKAIKOblast検索により206オルソログを決定した。この情報をもとにSTSプライマーを設計して、BAC選抜を行った結果、これまでに57クローンを選抜した。このBAC-DNAをプローブとしたFISHと鱗翅目昆虫におけるリプローブ法を改変して最大8回の同一標本へのFISHを可能とした。この手法を用いて、パキテン期染色体の個別認識を可能とするとともに毛翅目昆虫で初めてのカリオタイプに成功した。この研究進捗により、鱗翅目昆虫で適応可能であったin silico解析がヒゲナガカワトビケラの遺伝子マッピングには有効で無いことが明白となった。本研究では、カリオタイプをベースにした新たなBAC-FISHマッピング法を開発して、毛翅目昆虫での遺伝子マッピングを行うことに成功した。現在、カイコの約半数の染色体に対応する46オルソログに関して対応関係を比較可能とした。前年度に採集・飼育を行い蛹期に-80°Cに保存したコウモリガからHMW-DNAを抽出精製し、BACライブラリーを構築した。構築したライブラリーから214クローンをランダムに抽出しインサートサイズを評価したところ、平均長が66.6Kbであった。さらに10クローンのBACエンドシークエンス5,546bpの決定を行ったところ、CG含量は35.9%とゲノム情報の最も充実したカイコゲノム(37.7%)と類似する値であった。昨年度構築したコウモリガcDNAライブラリーから831種類の配列決定を行った。これらの情報をクエリーとしてカイコtBlastX検索を行ったところ約300の相同配列を得た。これらの結果を解析したところカイコ28染色体全てに対応する294の配列情報が得られていると考えられた。現在はSTSプライマーを作製しBAC選抜を行っており、31個のカイコ単一遺伝子オルソログを含むと考えられるBACクローンの選抜に成功した。今後は必要に応じて特定の配列情報取得とBACクローン選抜を行うこととする。

これらと同時並行的にコウモリガ幼虫の採集と飼育を再び行い、予定通り染色体標本の作製を行った。これら標本の評価のために、イBAC-FISHを行ったところマッピングに十分なシグナルが認められた。毛翅目昆虫の代表とするヒゲナガカワトビケラを用いた研究を本格的に開始した。盛岡周辺の河川において採集した蛹個体からHMW-DNA抽出用プラグを作製した。制限酵素処理とそのパルスフィールド電気泳動結果からBACライブラリー作製が可能である純度を持つと判断され、現在DACライブラリーの作製とクローンのシングルストックを行っている。また、cDNAライブラリーも作製を完了し、現在配列決定を行っている。また、コナガのBAC-FISHマッピングを行い、現在の知見を確認できた。盛岡周辺の河川において採集した毛翅目昆虫のヒゲナガカワトビケラ蛹個体からHMW-DNAプラグを作製した。制限酵素処理とそのパルスフィールド電気泳動(PFGE)結果からBACライブラリー作製が可能である純度を持つと判断された。PFGEゲルより2種類のHMW-DNAを切り出し、エレクトロポレーションにての形質転換を行った。3種類の方法で作製されたBACクローンは合計で、42,468形質転換コロニーが得られ、それぞれ32クローンのインサートサイズを求めた。インサートがないか極めて短いと判断された4クローンを除き、92クローンの平均インサートサイズは65.2Kbであった。最終的に32,256のシングルコロニーを385ウエルプレート84枚にストックし、ヒゲナガカワトビケラライブラリーが完成した。ヒゲナガワカトビケラcDNAライブラリーの配列情報から260個のカイコ単一遺伝子のヒゲナガカワトビケラオルソログを特定し、STSプライマーを用いたPCRによって57BACを選抜した。これらBACを用いて、Z染色体と12常染色体を同定し、さらに、毛翅目昆虫で初となるカリオタイプに成功した。ヒゲナガカワトビケラBAC-FISHマッピングデータとカイコゲノム情報に基づき、両者の染色体対応関係を明らかにした。ヒゲナガカワトビケラ卵原細胞と精原細胞の分裂中期における染色体数は、それぞれ2n=25とn=26とカウントされた。上記のZ染色体を同定できるBACを用いたFISHより、雌減数分裂における性染色体はユニバレントを形成しており、本種の性染色体構成が雌ではZ、雄ではZZであると判明した。これは雌雄における染色体数の差異と一致する結果である。26年度が最終年度であるため、記入しない。昆虫細胞遺伝学26年度が最終年度であるため、記入しない。当初予定した計画はコナガのマッピングを除き計画通りであり、コナガ分については25年度計画を繰り上げて実施しているため。対象とする鱗翅目昆虫ならびに毛翅目昆虫種において予定したBACライブラリー構築は完成し、評価を残すのみである。また、カイコオルソログ情報の取得に必須であるcDNAライブラリーの構築を終了し、STSプライマーによるBAC選抜も全ての対象種で進捗している。
単視点画像の根源的光学要素分解

単視点で撮影された画像を入力として、被写体の色や模様、形状、被写体を照らす光源に由来する成分に分解する基盤技術を開発し、それを応用することで、高精度な色付き三次元形状推定、動画の光学要素分解と再照明など、これまでにない革新的な技術を実現する。画像・映像編集、照明設計、単視点映像から物体認識を行うロボット制御やヒューマンコンピュータインタラクション、三次元モデルを必要とするAR/MR/VRなど、広範な分野での活用を目指す。
ウサギ脊髄虚血モデルを用いたMRIでの早期脊髄病変の検出

本研究は大血管手術の際に生じる脊髄虚血とそれに伴う対麻痺に関して症状出現前の画像的早期検出を目的としている。臓器障害に先んじて生じる酸化ストレス(活性酸素種の過剰産生)をMRIで検出することでそれを可能にする。ウサギの大動脈を遮断することで、脊髄虚血を発生させる。脊髄虚血により対麻痺を来たすが、そこにニトロキシルラジカルである3-carbamoyl PROXYLを投与しMRIを撮影することで、脊髄局所での酸化ストレスの状態(活性酸素種の過剰産生)の状態を視覚的に検出することが可能になると考えられる。これまではラットの骨格筋での酸化ストレスの評価は可能としてきたが、本研究においては、まずはウサギを用いての大動脈遮断モデルの作製から実験を開始した。大動脈遮断に関しては直接大動脈を遮断する方法と血管内にバルーンを挿入し内腔から遮断する方法があり、本研究申請者は大分以前に後者でのモデル作製を行ってきた。しかしながら、今回の実験においては当施設で近年より施行されている麻酔方法への変更もあり、三種混合麻酔で処置を施行した。処置前には三種混合麻酔での鎮静は十分と判断される様子であったが、実際の処置の際に大腿動脈を剥離露出すると、動脈攣縮の問題が発生し、大腿動脈が非常に細くなってしまい、穿刺しバルーンを大動脈内までに挿入することが困難であった。そのため現段階では、ウサギの脊髄虚血モデルの作製はまだ達成できておらず、今後麻酔方法の変更や、遮断方法の変更も考慮しなければならない状況である。本研究においては、まずはウサギを用いての大動脈遮断モデルの作製から実験を開始した。そのため現段階では、ウサギの脊髄虚血モデルの作製はまだ達成できていない。また、3-carbamoyl PROXYLがウサギにおいてどの程度血液脳関門を通過するかの検討も出来ていない。臨床用のMRIを使用しているとのこともあり、時間的制限もあるため、まずは確実なモデルの作製が必須である。再現性のあるウサギの脊髄虚血モデルのが必須である。血管攣縮を来さない麻酔方法の確立が必要であり、大動脈遮断の方法がバルーンによる血管内遮断が良いのか、開腹もしくは後腹膜アプローチの直接的大動脈遮断が良いのかを決定する。確実なモデルが作製できれば、MRIの撮影に研究を進めることが可能になる。その後は、当初の研究計画に基づき研究を遂行できると考えられる。

再現性のあるウサギの脊髄虚血モデルのが必須である。血管攣縮を来さない麻酔方法の確立が必要であり、大動脈遮断の方法がバルーンによる血管内遮断が良いのか、開腹もしくは後腹膜アプローチの直接的大動脈遮断が良いのかを決定する。確実なモデルが作製できれば、MRIの撮影に研究を進めることが可能になる。その後は、当初の研究計画に基づき研究を遂行できると考えられる。
水晶発振子を用いるバイオターゲッティングの定量的評価

本研究は、マイクロバランスとして知られる水晶発振子上にDNAを固定化し、ポリメラーゼや転写因子などのたんぱく質がDNA鎖の塩基配列を認識して結合する過程を振動数変化から定量することを目的として行い、以下の成果を得た。水晶発振子の表面に50bpのDNA二本鎖を固定化し、bZIPペプチドがATTC鎖を特異的に認識して結合し、その結合定数は10^8M^<-1>と大変大きいことを明らかにした。さらにポリメラーゼが二本鎖に結合してDNA鎖を重合していく過程も追跡できた。