hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
RNA編集産物UBB+1の制御を標的とした新規脳梗塞治療

RNA編集により生じる変異ユビキチンUBB+1を候補分子として脳虚血におけるRNA編集機構とユビキチン・プロテアソーム系(UPS)の制御機構の解明を目的に研究を行った.砂ネズミー過性全脳虚血モデルによる海馬CA1領域における遅発性神経細胞死を作製し,CA1領域における変異ユビキチン(UBB+1)の局在と経時的変動を検討した.砂ネズミの両側総頚動脈を5分間結紮後に再灌流し,1,2,3,4,7日後に脳を取りだしUBB+1のmRNAと蛋白レベルについてRT-PCR法と免疫組織染色およびWestern Blotを用いて経時的に検討した.海馬CA1,CA3,歯状回において再灌流1日後よりUBB+1 mRNAの発現を確認した.UBB+1 mRNAの発現は経時的に変化をみとめず,7日後まで発現が持続した.UBB+1蛋白は,再灌流2日目にCA1,CA3,歯状回において合成を確認したが,3日目以降はCA1のみに蛋白合成が持続した.さらにCAIに合成をみとめたUBB+1蛋白は錐体細胞の形態学的変化に先行して観察され,細胞死のマーカーであるTUNEL染色に陽性を示す細胞に局在した.以上の研究結果より,脳虚血ストレスにより変異ユビキチンが発現・合成され,UPSを選択的に抑制することで遅発性神経細胞死が誘導される可能性が示唆された.本結果についてはNeuroscience誌に報告し,現在掲載予定となっている.また,ユビキチンの分解に関与するプロテアソームとの関連を神経培養系の低酸素負荷モデルを用い検討した.プロテアソームにより分解されるhypoxia-inducible factor-1 αと神経細胞保護の関連を証明し,Journal of Neurochemistry誌に報告し掲載された.今後,脳梗塞におけるRNA編集産物であるUBB+1をターゲットとした新規脳保護療法の開発に向けた研究を継続する.RNA編集により生じる変異ユビキチンUBB+1を候補分子として脳虚血におけるRNA編集機構とユビキチン・プロテアソーム系(UPS)の制御機構の解明を目的に研究を行った.砂ネズミー過性全脳虚血モデルによる海馬CA1領域における遅発性神経細胞死を作製し,CA1領域における変異ユビキチン(UBB+1)の局在と経時的変動を検討した.砂ネズミの両側総頚動脈を5分間結紮後に再灌流し,1,2,3,4,7日後に脳を取りだしUBB+1のmRNAと蛋白レベルについてRT-PCR法と免疫組織染色およびWestern Blotを用いて経時的に検討した.海馬CA1,CA3,歯状回において再灌流1日後よりUBB+1 mRNAの発現を確認した.UBB+1 mRNAの発現は経時的に変化をみとめず,7日後まで発現が持続した.UBB+1蛋白は,再灌流2日目にCA1,CA3,歯状回において合成を確認したが,3日目以降はCA1のみに蛋白合成が持続した.さらにCAIに合成をみとめたUBB+1蛋白は錐体細胞の形態学的変化に先行して観察され,細胞死のマーカーであるTUNEL染色に陽性を示す細胞に局在した.以上の研究結果より,脳虚血ストレスにより変異ユビキチンが発現・合成され,UPSを選択的に抑制することで遅発性神経細胞死が誘導される可能性が示唆された.本結果についてはNeuroscience誌に報告し,現在掲載予定となっている.また,ユビキチンの分解に関与するプロテアソームとの関連を神経培養系の低酸素負荷モデルを用い検討した.プロテアソームにより分解されるhypoxia-inducible factor-1 αと神経細胞保護の関連を証明し,Journal of Neurochemistry誌に報告し掲載された.今後,脳梗塞におけるRNA編集産物であるUBB+1をターゲットとした新規脳保護療法の開発に向けた研究を継続する.RNA編集により生じる変異ユビキチンUBB+1を候補分子として脳虚血におけるRNA編集機構とユビキチン・プロテアソーム系(UPS)の制御機構の解明を目的に研究を行った.砂ネズミ一過性全脳虚血モデルによる海馬CA1領域における遅発性神経細胞死を作製し,CA1領域における変異ユビキチン(UBB+1)の局在と経時的変動を検討した.砂ネズミの両側総頚動脈を5分間結紮後に再灌流し,1,2,3,4,7日後に脳を取りだしUBB+1のmRNAと蛋白レベルについてRT-PCR法と免疫組織染色およびWestern Blotを用いて経時的に検討した.海馬CA1,CA3,歯状回において再灌流1日後よりUBB+1 mRNAの発現を確認した.UBB+1 mRNAの発現は経時的に変化をみとめず,7日後まで発現が持続した.UBB+1蛋白は,再灌流2日目にCA1,CA3,歯状回において合成を確認したが,3日目以降はCA1のみに蛋白合成が持続した.

さらにCA1に合成をみとめたUBB+1蛋白は錐体細胞の形態学的変化に先行して観察され,細胞死のマーカーであるTUNEL染色に陽性を示す細胞に局在した.以上の研究結果より,脳虚血ストレスにより変異ユビキチンが発現・合成され,UPSを選択的に抑制することで遅発性神経細胞死が誘導される可能性が示唆された.本結果の要旨については第46回日本神経学会総会(平成17年5月)において発表した.また,脳梗塞急性期モデルであるマウス中大脳動脈閉塞再灌流モデルを用い,酸化ストレおよび炎症関連分子を制御する薬剤の脳保護メカニズムを解明し,研究成果をStroke誌およびJournal of Cerebral Blood Flow and Metabolism誌に報告し掲載された.今後,脳梗塞におけるRNA編集産物であるUBB+1をターゲットとした新規脳保護療法の開発に向けた研究を継続する.RNA編集により生じる変異ユビキチンUBB+1を候補分子として脳虚血におけるRNA編集機構とユビキチン・プロテアソーム系(UPS)の制御機構の解明を目的に研究を行った.砂ネズミ一過性全脳虚血モデルによる海馬CA1領域における遅発性神経細胞死を作製し,CA1領域における変異ユビキチン(UBB+1)の局在と経時的変動を検討した.砂ネズミの両側総頚動脈を5分間結紮後に再灌流し,1,2,3,4,7日後に脳を取りだしUBB+1のmRNAと蛋白レベルについてRT-PCR法と免疫組織染色およびWestern Blotを用いて経時的に検討した.海馬CA1,CA3,歯状回において再灌流1日後よりUBB+1mRNAの発現を確認した.UBB+1mRNAの発現は経時的に変化をみとめず,7日後まで発現が持続した.UBB+1蛋白は,再灌流2日目にCA1,CA3,歯状回において合成を確認したが,3日目以降はCA1のみに蛋白合成が持続した.さらにCA1に合成をみとめたUBB+1蛋白は錐体細胞の形態学的変化に先行して観察され,細胞死のマーカーであるTUNEL染色に陽性を示す細胞に局在した.以上の研究結果より,脳虚血ストレスにより変異ユビキチンが発現・合成され,UPSを選択的に抑制することで遅発性神経細胞死が誘導される可能性が示唆された.本結果についてはNeuroscience誌に報告し,現在掲載予定となっている.また,ユビキチンの分解に関与するプロテアソームとの関連を神経培養系の低酸素負荷モデルを用い検討した.プロテアソームにより分解されるhypoxia-inducible factor-1αと神経細胞保護の関連を証明し,Journal of Neurochemistry誌に報告し掲載された.今後,脳梗塞におけるRNA編集産物であるUBB+1をターゲットとした新規脳保護療法の開発に向けた研究を継続する.
マーク・トウェインにおける白人男性感傷研究

本研究ではマーク・トウェインの主要作品において、登場人物である白人男性の感傷・共感がどのように機能するかについて、「境界線」をキーワードにしながら考察した。トウェイン小説の登場人物たちは、白人男性としての主体形成をする際、他者に共感することで、自分と他人を分別する境界線を乗り越えたり、引き直したりしている。従来の研究では感傷や共感を女性と結びつける傾向があるが、トウェイン作品において主要白人男性登場人物の主体形成に、人種、ジェンダーや階級上の他者への共感が大きく関わることを指摘し、本研究を遂行した。本研究「マーク・トウェインにおける白人男性感傷研究」は、これまでトウェイン研究において別々に論じられる傾向があった「感傷」(ジェンダー批評で論じられる)と「罪悪感」(人種論の対象となる)の問題を接合することを目的としている。2015年7月に米国ミズーリ州行われたクレメンズ・カンファレンスで、『ハックルベリー・フィンの冒険』の31章におけるハックの階級のポジションと黒人逃亡奴隷ジムに対する共感に焦点を当て、階級問題が人種問題といかに連動しているかを論じ、評価を得た。マーク・トウェイン研究および19世紀南北戦争前の米国における人種研究および階級研究をこれまで行い、その研究成果を米国の学会で報告した。その結果、そこでの基調講演で、階級というこれまであまり論じてこられなかった視点からトウェインの罪悪感問題に切り込んでいると、肯定的な評価を得ることができた。2016年11月5日に日本マーク・トウェイン協会主催の「トウェインと女たち」というシンポジウムに参加し、そこでの原稿に加筆、修正後、「ロクサーナの逸脱:『阿呆たれウィルソン』における感傷小説とスレイブナラティブの間」というタイトルで出版した(『マーク・トウェイン研究と批評』第16号、2017年4月、所収)。これまで人種の観点から議論されることの多かった『阿呆たれウィルソン』(1894)だが、本論文では、ジャンルの観点から作品に焦点を当て、トウェインの人種およびジェンダー観を詳らかにした。要約すると、『阿呆たれウィルソン』のなかでトウェインは、白人女性作家によって執筆されたジャンルである感傷小説を黒人女性ロキシーが体現するスレイブ・ナラティブによって相対化するが、さらにそれを白人男性主人公ウィルソンが代表する探偵小説というジャンルによって包摂してしまっていることを指摘し、最終的にトウェインの白人男性性を問題化した。これまでトウェインにおける「白人性」(whiteness)を問題にしてきたが、今回は人種だけでなく、ジャンルおよびジェンダーの視点を導入することで、白人性の問題意識を拡大し、その複雑な様相を解明することに成功した。トウェインの小説、作品、自伝、伝記研究が毎年数多く出版される上、19世紀後半のアメリカ南部の歴史および人種状況、ホワイトネス・スタディーズや男性性研究の研究書も読んで、多角的に検討する必要があるため。またこうした研究書、論文の中には国内では入手困難なものがあるため。本研究ではマーク・トウェインの主要作品において、男性感傷・共感がどのように機能するかについて、「境界線」をキーワードにしながら考察した。男性感傷・共感に関しては、Mary ChapmanとGlenn Hendlerが編集したSentimental Menというアンソロジーが出版されて以来、注目されるようになってきているが、トウェインに関しては言及がほぼ存在しない。しかしトウェイン作品において主要男性登場人物の主体形成に、他者への共感が大きく関わることを指摘し、本研究を遂行した。最終年度は、トウェインの代表作『ハックルベリー・フィンの冒険』の主人公ハックの感情に焦点を当てた。31章でジムに共感したハックが、自身の貧乏白人という出自を引き受け、それと同時に自身とジムとの間に引いていた人種上の境界線を取り消し、貧乏白人と中産階級の白人を分断する境界線を引き直し、つかの間とは言え、ジムに寄り添う決断を下していることを注目した。ミズーリ州のクレメンズ・カンファレンスで、海外の研究者と交流の機会を持ち、自分の研究に対し貴重な助言を得ることができた。彼、彼女たちの助言を活かして、学会発表原稿をリバイズ、英語論文化し、海外に発信していくことを目指す。国内外の研究者達とのコミュニケーションを取りながら現在取り組んでいる研究を論文化して、海外に投稿することを目指す。具体的には、『アーサー王宮廷のコネチカット・ヤンキー』を取り上げ、白人男性主人公ハンク・モーガンのリベラルな社会改革に焦点を当て、主人公の改革に対するトウェインの批評を考察する。19世紀アメリカ文学
微量で顕著な添加効果を示す貴金属修飾触媒の微細構造解析

天然ガスやバイオマスを水素や合成ガス(一酸化炭素と水素の混合ガス)へと変換する触媒の開発において、主たる活性点となるニッケルの金属微粒子を微量の貴金属で表面修飾することで触媒性能が顕著に向上させることができる。本研究では、EXAFS(広域X線吸収端微細構造)により微量貴金属の局所構造を解析し、その局所構造の生成過程と添加効果発現機構を明らかにした。メタンの酸化リフォーミング反応やバイオマスの熱分解タールの水蒸気改質反応において、微量の貴金属で表面修飾した金属触媒の触媒特性(活性、選択性、安定性)が顕著に促進を受けることをこれまで明らかにしてきた。一方で、添加された貴金属の濃度が極めて低いため、それらのキャラクタリゼーション、特に貴金属の局所構造を解析することは容易ではない。本研究は、広域X線吸収端微細構造(EXAFS)により微量貴金属の局所構造解析及び化学状態分析等を行うことを目的とする。特に、貴金属の微量での表面修飾においては、調製法が構造に大きな影響を与える可能性が大きいため、調整法を変えた場合の構造及び触媒特性がどのように異なるかについて着目した。メタンの酸化リフォーミング反応に有効なPd-Ni系触媒については、QXAFS法を用いることにより、還元処理過程の微粒子成長に関する研究を行い、高性能な逐次含浸触媒においてはPd-Ni結合の出現がおきにくく、そのため表面にPd原子が偏在した微粒子が形成されることを明らかにした。一方、共含浸法で調製したバイメタル微粒子においてはPd原子が主に粒子内部に存在しやすく、微量では顕著な添加効果を示すことができないことも明らかにした。さらに、バイオマスタールの水蒸気改質反応に有効なNi/CeO_2/Al_2O_3触媒を貴金属で表面修飾した場合、Ptが他の貴金属と比較して顕著な添加効果を示すが、Pt L_3-edge EXAFS解析から、Pt-Ni結合が明確に観測され、表面合金が形成されていることを明らかにした。メタンの酸化リフォーミング反応やバイオマスの熱分解タールの水蒸気改質反応において、微量の貴金属で表面修飾したM触媒において、その触媒特性(活性、選択性、安定性)が顕著に促進を受けることを本研究代表者は明らかにしてきた。本研究は、EXAFS(広域X線吸収端微細構造)及びXANES法により微量貴金属の局所構造解析及び化学状態分析等を行うことを目的とする。ここでは特に添加した貴金属に対して大量のNiが共存する触媒を観察対象とする。本研究は、微量の貴金属で表面修飾されたNi系触媒において、貴金属周りの局所構造解析を行うと同時に触媒への添加効果との相関を明らかにすることを目的としている。Pt/Ni/CeO2/Al2O3触媒は、木質系バイオマス(具体的には杉粉)の熱分解タールの水蒸気改質反応に有効であり、高いガス生成速度(CO+H2+CH4)及び低いタール+コーク収率を与える触媒であることを見出してきたが、長時間反応の結果、Ni金属微粒子の凝集による活性劣化が顕著に観測されることを明らかにした。これに対して、MgOを導入することによりNiの分散性を向上すると同時に、凝集に対する耐性をもった触媒の開発を行った。さらに、析出炭素の燃焼除去+再還元処理による触媒の構造変化の可逆性についても検討した。また、メタンの酸化的水蒸気改質反応用触媒については、さまざまな貴金属で表面修飾したNi触媒のうち、微量Pdによる表面修飾がホットスポット生成抑制に対して有効であることを見出し、このとき、PdクラスターがNi金属微粒子表面上に形成していることを明らかにした。
植物ステロール代謝に関わる新奇制御因子HiSE1の機能解明

ステロールは生物にとって重要な脂質である.近年,植物に含まれるステロール(植物ステロール)は,摂取による健康増進効果が期待されており,増産技術の開発が求められている.よって,植物ステロール代謝の制御機構や制御因子の解明が急務である.申請者が発見したシロイヌナズナ変異体hise1(high sterol ester 1)の葉細胞では,ステロールエステルを主成分とするSterol Ester body(SEボディ)が増加する.申請者は,HiSE1が植物ステロール合成制御の鍵因子であることを示した.HiSE1の分子機構とSEボディ形成機構を解明し,植物ステロール増産のための新しい方法論を確立する.ステロールは生物にとって重要な脂質である.近年,植物に含まれるステロール(植物ステロール)は,摂取による健康増進効果が期待されており,増産技術の開発が求められている.よって,植物ステロール代謝の制御機構や制御因子の解明が急務である.申請者が発見したシロイヌナズナ変異体hise1(high sterol ester 1)の葉細胞では,ステロールエステルを主成分とするSterol Ester body(SEボディ)が増加する.申請者は,HiSE1が植物ステロール合成制御の鍵因子であることを示した.HiSE1の分子機構とSEボディ形成機構を解明し,植物ステロール増産のための新しい方法論を確立する.
観光資源としてのポピュラー音楽に関する実証的研究

本研究は、日本と米国におけるポピュラー音楽系博物館等展示施設を網羅的観点から展望し、基礎的なデータの収集を行なった。山田(2012)と山田(2013)によって、両国における展示施設の状況が、データを通した比較がある程度まで可能な形でまとめられ、日米の比較から、展示施設の規模、立地特性、展示戦略などの面における共通性と対称性が確認されたことは重要である。また、物象化、「可視化」の形態や過程には多様なものがあり、また、複数の様態をとる取り組みが相互に関連性ももちながら展開されていく中で、地域興しやまちづくりに資する社会的モメンタムが生じることが、現地における観察と聞き取りから浮き彫りになった。研究2年目にあたる平成24年度には、継続して日常的に関連する文献、資料等の収集にあたるとともに、日本国内および米国において、ポピュラー音楽に関わる各種の展示施設への訪問に重点を置いた現地調査を実施した。研究代表者・山田は、おもに国内で群馬県渋川市および新潟県新潟市(11月)、長野県中野市および野沢温泉村(12月)、沖縄県那覇市および沖縄市(1月)、兵庫県神戸市(3月)などで、ポピュラー音楽の歴史に関わる博物館、記念館、史跡などへの現地調査を継続し、各地の地元図書館・大学図書館等で資料収集にあたるとともに、博物館等の観光資源としての利用状況などについて、施設の観光資源としての活用に取り組んでいる地方公共団体やNPO法人の関係者などへの聞き取りをおこなった。研究分担者・東谷は、台湾で、中央研究院台湾史研究所・陳培豊氏との研究交流を行ない、また、現時点までに山田・東谷両名が収集してきた資料の分析にあたった。一連の調査や資料の検討を通して、展示施設等の観光資源化に関して、おもに日本国内における多様な取り組みについての知見が蓄積されることにより、前年度に知見を蓄積した米国の事例との比較検討を深めることができた。これらの研究成果の一部は、既に山田による学会発表および勤務校の紀要論文として年度内に公表されているが、さらに山田、東谷それぞれの論文の準備を進めている。しかし、遺憾ながら、教育・研究以外の本務校の業務との関係から、前年度の段階で計画していた米国における現地調査(フィールドワーク)は、十分な調査のための日程が捻出できず、実施することが叶わなかった。このため、この米国における現地調査は、最終年度である平成25年度に実施することとした。研究3年目の最終年度を迎えた平成25年度には、平成24年度に消化しきれなかった範囲を含め、継続的に関連文献や資料の収集にあたるとともに、日本国内および米国において、ポピュラー音楽にか交わる各種の展示施設への訪問と関係者へのインタビューに重点を置いた現地調査を実施した。研究代表者・山田は、国内では特に沖縄県沖縄市を事例研究対象地とし、6月と2月に現地での聞き取り調査を重ねるとともに、沖縄市への留学旅行を継続的に行なっている神奈川県の高等学校の実践について聞き取りを行なった。研究分担者・東谷は、収集資料の分析にあたるとともに、特に地域レベルの事例の国際比較の論考をまとめた。また、両名は10月に渡米し、カリフォルニア州などにおける個別の調査と併せて、合同での現地調査を米国東部ニューヨーク州などで行なった。一連の調査や収集した資料の検討を通して、展示施設等の観光資源化に関して知見を深めるとともに、政策的提言に向けた理論的枠組の構築に着手できた。これらの研究成果の一部は、山田による学会発表、東谷による研究論文として年度内に公表され、また、平成26年度秋刊行の山田による論文が受理されている。研究期間の3年間に行なった現地調査から得られた素材は、豊かな内容を含んでおり、現時点では十分には消化しきれていない部分もあり、また、学会発表に留まり論文としては未公刊の内容も残されている。特に、当初平成24年度に予定しながら平成25年度にずれ込んで実施した米国現地調査の成果は、現時点では学会発表準備中にとどまっている内容を含むものであり、今後その成果を学会発表、論文として公開していく。また、既に論文が公刊予定(受理)となっている理論的枠組を踏まえ、本研究の最終的な成果として沖縄県沖縄市を事例とする地域的ポピュラー音楽文化を資源としたまちづくりと観光振興についての提言を平成26年度中にまとめる予定である。研究初年度にあたる平成23年度には、日常的に関連する文献、資料等の収集にあたるとともに、日本国内および米国において、ポピュラー音楽に関わる各種の展示施設への訪問に重点を置いた現地調査を実施した。

研究代表者・山田は、国内では岩手県北上市(7月)、福岡県大川市など西日本各地(8月)、米国ではクリーブランド、デトロイト等中西部の諸都市や、ミネソタ州、ニューヨーク州のアップステイト(ニューヨーク大都市圏外の内陸部)各地(9月)で、ポピュラー音楽の歴史に関わる博物館、記念館、史跡などのべ20館以上を現地調査し、各地の地元図書館・大学図書館等で資料収集にあたるとともに、博物館等の観光資源としての利用状況などについて施設関係者への聞き取りをおこなった。研究分担者・東谷は、山田とともにミネソタ州およびニューヨーク州で、資料収集、聞き取りを中心とした共同調査を行い、現地討論を重ねた。両者は、現地調査以外の機会にも研究連絡、討議の場を確保し、資料整理から得た知見の共有に努めている。こうした調査や資料の検討を通して、展示施設等の観光資源化に関して、米国における多様な取り組みについての知見が蓄積されるとともに、そこには多様性とともに、一定の類型化が可能な、複数の施設の間の共通性も見いだせることが明らかになってきた。これらの研究成果の一部は、既に山田による学会発表および勤務校の紀要論文として年度内に公表されているが、さらに山田、東谷それぞれの論文の準備を進めている。前年度に引き続き、本研究の推進に参考となる基礎的な文献については、おおむね順調に収集、消化できている。しかし、平成24年度においては、遺憾ながら、教育・研究以外の本務校の業務との関係から、前年度の段階で計画していた米国における現地調査(フィールドワーク)は、十分な調査のための日程が捻出できず、実施することが叶わなかった。このため、この米国における現地調査は、最終年度である平成25年度に先送りして実施することとした。平成23年度における米国の事案についての知見の蓄積に上乗せする形で、平成24年度には日本の事案に関する知見を蓄積し、特に日本における小規模施設の立地特性について検討した成果を論文にまとめ、刊行した。また、特に日本においては、博物館等展示施設と、地元地方公共団体や地域内に存在する各種の民間団体や、営利企業などとの連繋が、観光資源の掘り起こしという観点からみて、重大な鍵を握っているものと考えられることが示唆された。こうした理解の深まりを踏まえ、最終年度である平成25年に向けて、日米の事例から得られた知見に基づいて抽象化された理論的枠組の明確化を目指し、代表者・分担者の間の議論を通して共通の理解を深化させた。また、同様に最終年度に向け、より実際的な政策提言を検討する事例検討の対象地候補として、沖縄県那覇市および沖縄市、これと比較対象する事例検討の対象地候補として、兵庫県神戸市を選び、博物館等展示施設を中心に、既存の地域的音楽イベントや、コミュニティ放送局の活動などとの連繋も議論の射程に入れた検討を行うべく、予備調査として限られた数ながら関係団体等への聞き取りなどを行なった。予備調査を通して、それぞれの地域における現時点での取り組みの優れた点とともに、問題点や課題も含め、実効性のある政策提言に繋がる論点を明らかにできた。本研究の推進に参考となる基礎的な文献については、おおむね順調に収集、消化できている。ただし、観光研究が多分野にまたがる性格をもつことから、もとより網羅的な掌握は困難であり、また本研究においては先行研究文献の網羅的把握を目指すものではない。平成23年度においては、東日本大震災の影響等により、特に年度後半において、日程上、現地調査に割ける時間の確保が困難になった。このため、現地調査にかける日数の圧縮などがあり、やや不十分な現地調査体制となった咸が否めない。しかし、日本および米国における現地調査からは、事前の予想を超える豊かな知見が蓄積された。
グルココルチコイド作用調節機構に関する研究

本研究は生体におけるグルココルチコイドホルモン応答性調節機構を、1)グルココルチコイド受容体遺伝子の発現調節機構、2)グルココルチコイド受容体と転写因子の相互作用、3)グルココルチコイド作用発現におけるグルココルチコイド受容体と転写因子の意義、から解明することを目的とした。1)グルココルチコイド受容体遺伝子がグルココルチコイドによって負の調節を受けることを確認した。かかるグルココルチコイド受容体のdown-regulationとグルココルチコイドに対する生体の感受性には密接な関連が存在した。2)プロテインキナーゼAの核内メデイエーターである転写因子CREBとグルココルチコイド受容体の相互作用の生理的意義の一部を明確にした。また、グルココルチコイドの抗炎症・免疫抑制作用にグルココルチコイド受容体と転写因子AP-1(c-fos/c-jun)・NF-kBの負の相互作用が重要であることも示唆した。3)グルココルチコイド受容体において酸化ストレスによりDNA結合部分のシステインが酸化されDNA結合能を失うことが判明した(投稿中)。以上から、本研究成果は細胞レベルにおけるグルココルチコイドあるいはストレス応答の制御機構の概念に画期的な進歩をもたらすものと考える。さらに、かかる知見の発展的集積はグルココルチコイド作用のきわめて多彩な制御法開発、ひいては、グルココルチコイドの作用副作用の分離法開発にも直結する可能性が大であり、臨床医学的貢献度も高いと考える。本研究は(1)Glucocorticoid Receptor(GR)の発現調節機構,(2)GRと転写因子群の多様な相互作用,(3)GC作用発現におけるGRと転写因子の意義,の解明をとおしてGlucocorticoid(GC)作用調節機構を明らかにすることである。当該年度内に各プロジェクトに関して得られた実績を要約すると,(1)サイトカインであるTNF-αが転写因子SP-1を介してGR遺伝子発現を抑制する(未発表),(2)核に内在する負の転写調節作用を有する蛋白質によってGC作用発現(=GC応答性遺伝子の転写誘導)の閾値が規定されている(論文1),また,血清,ホルボールエステルなどによって誘導される転写因子AP-1の作用をGRはDNAとの直接の結合を介せずに抑制する(未発表),(3)GR蛋白のCysteine残基を重金属イオン,酸化剤などで修飾することによりGRの遺伝子転写調節機能を抑制する(論文2.3,未発表),である。今後,(1)論文発表,(2)論文発表,(3)GR蛋白のNMR解析(Sweden,Karolinska医学研究所との共同研究),を予定している。(1)グルココルチコイド受容体(GR)機能が多様な翻訳後修飾を受けることを明らかにした。中でも、金属イオン,酸化ストレスによってGRの主にシマライン残基が修飾され、GR機能を抑制することが明らかとなった。かかる知見は世界でも最初の報告であり持筆しうる業績といえる。(2)GRとAp-1,CREBの相互作用を明らかにした。GRはそのDNA結合部分を介してAp-1の作用を抑制していた。コラゲナーゼ遺伝子を用いた解析から、かかる相互作用の臨床的意義も追求した。一方、GRはCREBの作用をも修飾し、かかる相互作用が甲状腺疾患において重要であることを示す成績を得た。
有害VOC選択吸着機能を有する木質系炭素化物の炭素化条件とその機能発現機構の解析

【目的】室内空気調和材料として炭素化物を活用するたあ、空気環境中に混在する様々なVOCに対する木質系炭素化物の選択的吸着メカニズムを解析すると共に、その機能発現と炭素化条件との関係を明らかにする。【方法】スギ・ヒノキ間伐材粉砕物を、マッフル炉で窒素気流下、5001100°Cの所定温度にて1hr保持して炭素化した。これをトルエン/α-ピネン混合ガスに暴露し、GC/MS法により濃度変化を測定して各ガス成分の吸脱着挙動を調べた。また、炭素化雰囲気の変更やnmオーダーの微粉化処理による吸着挙動への影響も調べた。表面構造解析では、77Kでの窒素吸着等温線にMP法およびDH法を適用したマイクロ孔及びメソ孔の細孔分布測定、XRD測定、SEM観察などを行った。更に、様々なVOCについて吸着挙動の違いを調べ、吸着質の分子構造と炭素化物の表面構造との関係から、選択的吸着メカニズムを考察した。【成果】700°C炭でトルエン(吸着)とα-ピネン(非吸着)の著しい選択吸着が起こり、それ以上温度が高くなるとα-ピネンの吸着が始まった。XRDでは、700°C炭で既にπ電子共役系を持つトルエンの吸着に有利な化学構造、すなわち乱層構造炭素の発生を確認した。SEMでは、900°C炭において700°C炭では見られない数数十nmの孔が無数に観察され、細孔分布からも、900°C炭でより細孔径の大きなマイクロ孔と40nm付近にピークを持つメソ孔の発達が認められ、これらのサイズの細孔がα-ピネンの吸着に関与することが示唆された。微粉化炭での吸着挙動もこの結果を支持するものであった。選択吸着炭では、分子の大きさや分極とは別に、扁平な芳香族系や直鎖のエステル系分子を吸着し、嵩高い双環型モノテルペンは殆ど吸着しなかった。これは、スリット状細孔による、吸着質の分子形状に対する吸着選択性を示唆するものであった。
奈良時代における中央と在地の建築技術

おもに古代の文献史料を丹念に解読することで、中央、地方の両者の造営の技術者や造営体制、儀式などの建物の利用方法、さらには建てられた社会背景を描き出すことを目的とし、以下の成果をあげた。中央の造営体制について、『大日本古文書』を中心とした奈良時代の文献史料を用いて、令外官である造東大寺司の木工などの建築技術者とその技術力、さらには官の直接雇用ではない技術者について考察した。地方の造営体制について、六国史、類聚国史、日本紀略、類聚三代格、律令を解読し、地方の造営において、どのような技術者や労働者が従事していたかについて検討した。その結果について、日本建築学会2009年度学術講演大会において発表し、公開した。個別の国分寺の建物については創建年代の研究がなされてきたが、全国的に国分寺の造営の社会状況を捉えた研究は存在しない。そのため、全国的な造営計画がどのようになされたかということに焦点をしぼり、さらにその中で、国司が果たした役割や国司では対処しきれない問題が生じ、国師・郡司の協力が必要となってくる状況が読み取れた。そこから業務の内容および能力を考察した。具体的な建物の形態について、以下のような考察を行った。奈良時代の文献史料には、「双」という字を用いた建築が散見する。「双堂」「双倉」「双軒廊」といった具合である。しかしこの「双堂」「双倉」「双軒廊」といった「双」建築については、「双倉」正倉院正倉を対象にした論争と「双堂」について一部、考察されるものの、その多くは不明である。双堂を考察することは、仏堂の平面発展を考える上でも重要な意味を持っているため、「双」建築について考察した。また主に発掘史料を用いて、地方官衙の配置プランをもとに設計について考察し、地方官衙の前庭空間が内裏の朝庭空間に通じることを考察し、論文発表を行った。
エゾリスとノミ、リケッチアの疫学的関係の解明

北海道十勝管内ののべ66個体のエゾリスから、血液41検体、脾臓29検体、及び体表のノミ475匹を採取した。エゾリスの血液及び脾臓からはリケッチア属細菌は検出されなかったが、種の同定が可能であったノミ342匹のうち69匹(20.2%)からリケッチアが検出された。4種類の遺伝子の部分配列を決定し、これらは全てRickettsiafelisと近縁であった。また、ノミ15匹からリケッチア属細菌の分離を試み、うち1匹からリケッチア属細菌の分離に成功した。北海道十勝管内の4市町および釧路管内の1町より、捕獲もしくは事故死体の受入れによりのべ66個体(最終年度50個体)のエゾリスを採取し、血液41検体(同29検体)、脾臓29検体(同27検体)、および体表のノミ475匹(同396匹)を採取した。エゾリスの血液および脾臓から抽出したDNAをリケッチア属特異的nested-PCRにかけたところ、血液は全て陰性であったが、脾臓は4検体(13.8%)が陽性を示した。また、種の同定が可能であったノミ342匹のうち、272匹はMonopsyllus属、69匹はAenigmopsylla grodekovi、1匹はCtenophthalmus属であった。ノミから抽出したDNA検体についてリケッチア属特異的nested-PCRを行ったところ、Monopsyllus属ノミでは14.3%、A. grodekoviでは43.5%が陽性であった。gltA遺伝子の部分配列を解析したところ、ノミ種が同じ検体の配列は一致したが、異なるノミ種の間では1ヵ所が異なっていた。上記結果から、エゾリスは主に2種のノミに寄生されており、これらのノミは種ごとに異なる株の、ヒトに病原性をもつR. felisに近縁なリケッチア属細菌を保有していることが明らかになった。北海道十勝地方において、シャーマントラップによりエゾリスの捕獲を試みた。また交通事故により帯広畜産大学に搬送されたエゾリスからも、サンプルを収集した(事故死していたものも含む)。罠により捕獲したエゾリスから血液および体表のノミを、また搬送されたエゾリスからは体表のノミを採取し、可能であれば心臓からの採血、脾臓の採取を行った。罠によりのべ11匹のエゾリスを捕獲し、血液サンプルを8検体、ノミを50匹採取した。また、帯広畜産大学に搬送されたエゾリス4匹より、血液4検体、ノミ31匹を採取した。血液12検体からDNAを抽出し、リケッチア属特異的nested-PCRにてリケッチア属細菌の検出を試みたが、全て陰性であった。採取したノミ81検体のうち64検体について、光学顕微鏡を用いて形態学的特徴から種の同定を試みた。ノミの種は、Monopsyllus indages indagesが大部分を占めていた。また、47匹のノミについて、DNA抽出を行った後、リケッチア属特異的nested-PCRにてリケッチア属細菌の検出を試みたところ、18匹が陽性を示した(18/47、38.3%)。このうち7検体をランダムに選んで配列決定を行ったところ、321bpの配列が得られ、7検体全て同じ配列を示した。BLASTサーチにより類似した配列を検索したところ、韓国で検出されたRickettsia felisのgltA遺伝子配列に99.4%一致した(317/319)。振興局への許可の申請(鳥獣の捕獲、および河川周囲の使用許可)に時間がかかり、エゾリスの捕獲開始時期が遅れたため。平成23年度と同様にエゾリスの捕獲を行い、体表の寄生虫の採取、採血を行っていく。PCRにてリケッチア属細菌が検出された検体については、gltA遺伝子の他に、rpoB遺伝子、16SrRNA遺伝子の配列決定を行い、検出されたリケッチア種の系統学的位置を決定する。同時にリケッチアを保有していたノミについても形態学的、および18SrRNA遺伝子配列決定により種を同定し、リケッチアのベクターとなるノミの種を明らかにする。また、ノミから検出されるリケッチア属細菌について、Vero細胞、L929細胞およびXTC細胞を用いて分離を試みる。また、リケッチア属細菌陽性であったエゾリスの全血を上記の培養細胞に接種し、リケッチア属細菌の分離を試みる。研究費は、リケッチア属細菌の検出・分離、遺伝子の配列決定のための、消耗品費および外部業者への外注に用いる。

また、リケッチア属細菌の分離を行う際に、帯広畜産大学内のP2施設を使用する必要があり、その際の施設使用費を予定している。また、研究成果を日本獣医学会に発表するための旅費を予定している。
内耳支持細胞におけるギャップジャンクションの生理学的機能についての基礎的研究

昨年度の研究で、モルモットの単離ダイテルス細胞の膜電流は主にカリウム電流で厚生されており、その大部分は電位依存性カリウムチャンネルのブロッカーであるテトラエチルアンモニウム(TEA)によりブロックされることを明らかにした。本年度はペアになったダイテルス細胞を使用し、膜容量の測定を行うことで、ギャップジャンクションの薬理学的特性を調べた。ペアになったダイテルス細胞の膜容量はギャップジャンクションのブロッカーである、カルベノキソロンの投与により、約半分に減少した。このことは、ダイテルス細胞間の結合が主にベノキソロン感受性のギャップジャンクションによって結合していることを意味する。別のギャップジャンクションブロッカーであるオクタノールの投与によっても同様の結果が得られた。しかしながら、1回の実験において、ペアになったダイテルス細胞は非常に少数であり、データを効率よく得るのは容易ではなかった。また、ギャップジャンクションに影響を与えることが知られているアミノ配糖体や一酸化窒素の阻害薬の効果も試してはみたが、はっきりとした薬剤の効果をみるには至らなかった。複数のダイテルス細胞のうち、隣接する2つのダイテルス細胞に対して、それぞれの細胞よりホールセルを記録し、そのコンダクタンスを調べる実験も試みたが、1つの細胞ではホールセル記録を行えるものの、2つの細胞で同時にホールセル記録を行うのは非常に確率が低く、その特性を検討するには至らなかった。1.モルモット及びマウネの内耳よりコルチ器を取り出し、内有毛細胞、外有毛細胞、ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞を酵素処理によって単離し、実験を行う条件を確立した。コルチ器の細胞単離を行うにあたって、collagenase 1mg/mlで15分間インキュベートすることが、細胞の収量及び生育の面から最適であった。2.ペアを形成した内耳支持細胞からホールセル記録を行うにあたって、2台の記録電極をセットし、ノイズとりを行った。ホールセル記録の際のノイズを20pA未満に抑制することが出来た。3.単離したヘンゼン細胞及びダイテルス細胞において静止膜電位、全細胞容量、電流-電圧曲線の測定を行った。また、脱分極の際の主な電流がカリウム電流であることをtetra ethylammoniumを細胞外投与することにより確認した。4.単離したヘンゼン細胞及びダイテルス細胞にATP及びアセチルコリンを局所投与した際の反応の記録を行った。ATP投与時には、ヘンゼン細胞、ダイテルス細胞の双方で内向き電流が記録された。一方、アセチルコリン投与時にはどちらの細胞でも応答は認められなかった。
HIF2αによるヒト腎細胞癌の増殖機構の解析と新規治療薬の開発

今年度の研究では、pVHL(von Hippel-Lindau腫瘍抑制遺伝子産物)が正常に機能しておりHIF(Hypoxia Inducible Factor)1αとHIF2αのいずれもが低酸素環境下で誘導され得る腎細胞癌株ACHNを使用しました。この細胞にpBABE-vector(遺伝子を恒常的に発現し得るレトロウイルスベクター)とpRETRO-SUPER vector(shRNAを恒常的に発現するレトロウイルスベクター。いずれのベクターもProf. Kaelin(Dana-Farber Cancer Institute, USA)より譲渡)を用いて、HIFαのサブタイプを個々に発現増強もしくは発現抑制した細胞群(Polyclonal stable clones)を樹立しました。この細胞群をCell culturedishes上で培養し、その増殖速度を各細胞群間で比較してみましたが、有為な差は見られませんでした。これは既に他の研究室から報告されているHIFαの発現調整実験の結果と一致しています。現在この細胞群をヌードマウス皮下に投与しxenograftの成長速度を比較する実験を進めています。またこれらの細胞群でHIFにより転写が誘導される遺伝子の発現についてもウエスタンブロットによる比較を行いましたが、少なくともGlut-1(Glucose Transporter-1)についてはHIFαのサブタイプによる転写誘導の差は見られませんでした。他の転写誘導遺伝子についても現在ウエスタンブロットとリアルタイムPCRを用いて検討を行っています。現在進行中の実験結果を見た上で、マイクロアレイや2次元電気泳動+質量分析による未知のエフェクター遺伝子の同定を行っていく予定です。近年、癌の分子生物学的な手法を用いた研究が活発に行われてきました。腎細胞癌においても研究の結果、その約7から8割を占める淡明細胞型腎癌でvon Hippel-Lindau (VHL)腫瘍抑制遺伝子の機能が失われていることが報告されました。この機能の欠損により低酸素誘導因子(Hypoxia inducible factor/HIF)のαサブユニットが細胞内に蓄積し、様々な増殖因子を誘導していることが判明しました。しかしHIFαそのものは不可解な分子で、ある腫瘍では増殖を誘導し、別の腫瘍ではアポトーシスを誘導します。この現象についてはその分子種による効果の差であるという可能性が示唆されていました。今回当研究者はHIFαがその分子種によって腎癌細胞に対して増殖及びアポトーシスを誘導できるかについて検討を試みました。最初にHIF1αとHIF2αの機能の差を見る目的でそれぞれの分了種に対するshRNA発現ベクターを作製しました。このベクターに用いられたsiRNAの塩基配列の一部は既に効果が確認されており、これらをレトロウイルス型のベクター(pMSCV-retrovirus vector)に導入しました。同時にヒトには存在しない蛍光遺伝子ルシフェラーゼに対するsiRNAと全くランダムに、ヒトにはない配列として作製されたスクランブルsiRNAをコントロールとして同様にベクターに導入しました。現在これらのベクターを用いて安定的にsiRNAを発現させるウイルスを作製し、これらを腎細胞癌株(ACIIN,UMRC6)に感染させる実験を行っています。
高機能性有機金属活性種の構造の解明と新規反応剤創製への展開

高機能性有機金属活性種の創製、機能と構造、有機合成への活用を研究した成果を示す。1.二金属有機化合物の創製と有機合成への利用ジヨードメタンから有機二金属種、CH_2(ZnI)_2、が鉛触媒存在下に亜鉛を作用させると生成することを明らかにし、生成機構を解明した。この活性種の有機合成への利用について研究を進め、カルボニル化合物のオレフィン化や段階的置換反応を開拓した。2.有機希土類化合物の調製と有機合成への利用アキラルな1,1-ジヨードエタンをキラルなアルデヒド存在下に二ヨウ化サマリウムを作用させると、キラルな1-ヨードエチルサマリウムがアルデヒドに高立体選択的に反応した生成物が高収率で得られることを見いだし、新規不斉合成法を開拓した。またブロモ酢酸エステルから4-ジヨードサマリオー3-オキソブタン酸エステルが得られることを明らかにし、ジケトエステル合成法を開発した。3.有機ケイ素化合物の有機合成への利用シラシクロブタン、ジブロモメチルシラン、アシルシラン等のケイ素の特性を活用した炭素-炭素結合生成反応を研究し、新規有機合成法を開拓した。4.有機マンガン活性種の調製と利用有機マンガン化合物の不飽和結合への付加、マンガンアート錯体の還元性を利用した有機マンガン中間体の調製とこれら活性種の有機合成への利用に成果が見られた。0高機能性有機金属活性種の創製、機能と構造、有機合成への活用を研究した成果を示す。0平成6年度の研究計画は、ほぼ予定通りに進行しており、また新規な知見も得られており、平成7、8年度に大きく展開できる素地を作ったと言える。(1)ジハロアルカンと二ヨウ化サマリウムの反応で触媒量の塩化クロムを共存させることにより、ジメタル反応剤を得ることができた。この新規反応剤は、既存の反応剤では困難であったエノール化し易いケトンのアルキリデン化に有効である。本法は、有機金属活性種を合成する際に、さらに金属触媒を用いる新規な反応剤合成法である。亜鉛とジハロアルカンとの反応では、微量の鉛が溶媒により正の触媒にも負の触媒としても働き、ハロアルカンとの反応では、鉛は反応を抑制する。これらの電子移動を中心とする機構の詳細な検討は、平成7年度に行う計画である。(2)アキラルなジハロアルカンへの金属からの電子移動により生成するα-ハロアルキル金属活性種は不斉炭素原子をもつのでキラルに調製出来る可能性があるが、これまではこのような鏡像選択的反応は見いだされていない。今回光学活性アルデヒドとの反応で、二ヨウ化サマリウムを用いて、α-ハロアルキル基を光学活性体として反応に組み込むことに成功した。この新規立体選択的反応は、平成7年度に発展させる計画である。(3)アリルシラシクロブタンを高選択的アリル化反応剤として利用する新規反応をみいだした。アリルシラシクロブタンとアルデヒドとの反応は、触媒なしで熱反応で収率良く進行し、極めて高いanti選択性を示した。この反応においては高配位ケイ素が中間体として重要な役割を果たしている。中間体の構造の詳細な検討は、平成7年度に行う計画である。平成7年度の研究計画は、ほぼ予定通り進行しており、平成8年度の大きな展開の基となる結果を多数得ている。(1)臭化プロパルギルとの亜鉛と臭化プロパルギルとの反応により生成する有機亜鉛化合物の構造を測定温度を様々に変え、1H-NMRを測定した。-52°Cで測定するとはっきりとした四重線として観測され、このことからこの反応剤は-52°Cではプロパルギル型であり、アレン型のものは含まれていない。(2)硫黄原子により安定化された金属種であるα-チオアルキルサマリウム反応剤に関し検討を加えた。反応剤は1-クロロエチルフェニルスルフィドとニヨウ化サマリウムとから調製するが、この反応はGrignard型でも行える。これは中間体としてα-フェニルチオエチルサマリウムが比較的安定に存在することを示している。この反応剤をアルデヒドに作用させると、高いsyr選択性でβ-チオアルカノールが得られた。

(3)シラシクロブタンのシラシクロペンタンへの環拡大反応を二つ開発した。ひとつは、-(1-ヨードアルキル)シラシクロブタンをカリウム第三級ブトキシドあるいは酢酸銀で処理する方法であり、もう一つはエポキシ基をケイ素上に持つシラシクロブタンにリチウムイソプロキシドを作用させる方法である。(4)五塩化タンタルを亜鉛から得られる低原子価タンタルをアセチレンに作用させると、タンタル-アルキン錯体が生じる。この錯体は種々の立体選択的な合成反応の重要な中間体であるが、本研究により、錯体を結晶として単離することができ、X線回析により錯体の構造解析を行った。また、ホウ素の置換したgem-ジクロム反応剤を創製し、アルデヒドから(E)-アルケニルホウ酸エステルへの簡便な変換反応を開発した。金属または低原子価金属塩を用いて有機ハロゲン化合物を還元して得られる活性種の有機合成への活用を研究し、次のような成果を得た。(1)1,1-ジハロアルカンに二ヨウ化サマリウムを作用させて得られる活性種はアルデヒドと高立体選択的に反応してsyn-ヨードヒドリンを与える。キラルなα置換アルデヒドとの反応では、この活性種はキラルな1-ヨードアルキル基として反応する。(2)ブロモ酢酸エステルと二ヨウ化サマリウムとの反応を低温で行うと、高機能性有機金属活性種として4-ジョードサマリオー2-オキソブタン酸エステルが生成すること、この活性種と酸無水物との反応でジケトエステルが生成することが示された。(3)四塩化チタンを触媒として用いると、αハロアシルシラン、アリルシラン、カルボニル化合物の三成分を結合させることが可能になることを示し、炭素骨格構築の新手法を提供し手いる。(4)マンガン触媒の作用で、アリルマグネシウム化合物がアセチレンに付加すること、ジアリル化も可能であることを示し、有機マンガン中間体の機能性を明らかにした。(5)マンガンに塩化鉛を添加して有機ハロゲン化合物を還元して、新規炭素骨格形成に役立つ活性種を調製した。(6)ジハロアルカンから有機二金属反応剤の調製には、還元剤として用いる金属の選択が重要であるが、ジヨードメタンを基質として取り上げ、詳細に検討し、亜鉛化合物創製の場合には、亜鉛中に触媒量の鉛の存在が必要であることを明確にし、この活性種を純度高く調製する方法を確率した。次いでジヨードメタンを高純度亜鉛で還元して得られるヨードメチル亜鉛種を鉛を含む亜鉛で還元すると有機二金属種が生成する事を明らかにし、二金属種生成機構の一端を解明した。
歯痛適応漢方薬の作用機序解明と応用適応の検討

歯科疾患は疼痛を伴うものが多く,疼痛管理は患者の苦痛軽減に加え,予後を左右する重要な因子である.そのため鎮痛効果の高い酸性非ステロイド性鎮痛薬(NSAIDs)が頻用されるが,抗悪性腫瘍薬誘発性の口内炎などには無効である.そのようなNSAIDs抵抗性症例に対し,有効とされる漢方薬(立効散)の炎症性疼痛への鎮痛効果を動物実験にて定量評価したところ,アスピリン並びにアセトアミノフェンと同様の効果を示すことが明らかとなった.そこで次に,その薬物動態の解析と作用機序を明らかにし,適切な投薬ストラテジーの提案を行うこと.さらには代謝産物を抽出し,薬理効果の解析を目的とした.薬物動態解析を行うためHPLCを用いて評価してきたが,より詳細に検討するためにUPLCを用いることとした.解析を行うにあたり,実験動物の種類の選定,採血の方法,採血量の決定,採取サンプルを取り扱い,適切に保存する器具機材の材質,種類の選定,また,UPLCで解析する際の条件の検討を行い,精度の高い再現性を得られるための条件を探った.動物実験における鎮痛効果は,立効散経口投与後からの経過時間によって鎮痛効果の発現に違いが見られた.UPLCにおける解析においても,立効散投与後からの経過時間によって,クロマトグラム上に発現するピークに違いが見られた.また,投与濃度依存的に発現するピーク高さに変化が見られた.実験機器の故障や変更による実験環境の整備や対応はできたが,より精度の高い実験結果のの再現性を得るための条件や薬物濃度の選定に時間を要したため.実験機器の共用使用者の存在により実験条件の均一性を図るための時間を要した.また,実験機器を制御するコンピューターシステムのトラブルにより,データ抽出が一時できなかったため.ここまでで得られたデータの解析,及び,薬物動態の解析と代謝産物の抽出を行う.ラットの肝臓を摘出し得られたミクロソーム分画,または薬物代謝酵素キットを用い,立効散を添加し代謝産物を回収する.作用時間はin vivoでの検討で得られた時間を参考に20,40,90分とし,37°Cでインキュベーションを行い,代謝産物をUPLCを用いて解析する.作用時間により得られる代謝産物に違いがある場合には,それぞれをマクロファージに添加しCOX等の阻害に関与するかも検討する.その後は動物実験モデルによる鎮痛効果と治療効果への影響を,さらには生化学的,電気生理的ならびに解剖学的検討も進める.歯科疾患は疼痛を伴うものが多く,疼痛管理は患者の苦痛軽減に加え,予後を左右する重要な因子である.そのため鎮痛効果の高い酸性非ステロイド性鎮痛薬(NSAIDs)が頻用されるが,抗悪性腫瘍薬誘発性の口内炎などには無効である.そのようなNSAIDs抵抗性症例に対し,有効とされる漢方薬(立効散)の炎症性疼痛への鎮痛作用は動物実験にて定量評価したところ,アスピリンならびにアセトアミノフェンと同様の効果を示すことが明らかになった.次にその薬物動態の解析と作用機序を明らかにし,適切な投薬ストラテジーの提案を行うこと.さらには代謝産物を抽出し,薬理効果の解析を目的とした.薬物動態解析を行うためHPLCを用いて評価してきたが,より詳細に検討するためにUPLCを用いることとした.解析を行うにあたり,実験動物の種類の選定.採血の方法,採血量の決定.採取サンプルを取り扱い,保存する器具器材の材質,種類の選定.また,UPLCで解析する際の条件の検討を行うことにより,精度の高い再現性を得られるための条件を探った.実験機器の故障や変更等による実験環境の変化により分析条件が変わり,それに対応するための適正な実験環境の整備や対応が必要となった.それに伴い,分析条件についても以前の結果に相応,またはそれ以上の再現性を得られるための条件や薬剤の選定が必要となったため.歯科疾患は疼痛を伴うものが多く,疼痛管理は患者の苦痛軽減に加え,予後を左右する重要な因子である.そのため鎮痛効果の高い酸性非ステロイド性鎮痛薬(NSAIDs)が頻用されるが,抗悪性腫瘍薬誘発性の口内炎などには無効である.そのようなNSAIDs抵抗性症例に対し,有効とされる漢方薬(立効散)の炎症性疼痛への鎮痛効果を動物実験にて定量評価したところ,アスピリン並びにアセトアミノフェンと同様の効果を示すことが明らかとなった.