hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
近現代日本における「希望」の社会的位相-岩手県釜石地方を事例として-

本研究の目的は、伝統的な文献史学の手法にオーラル・ヒストリーの方法を組み合わせて様々な社会諸階層の人々のライフ・ヒストリーを辿ることを通して、「希望」の社会的位相を考えることにある。この課題に接近するため、昨年度は経済学や政治学、法学、社会学といった社会科学諸分野の研究者と共同して、かつて製鉄の町として栄えた岩手県釜石市をフィールドとする総合的な地域調査を実施した。本年度は釜石地域調査をディスカッションペーパーとしてまとめ、さらに『社会科学研究』59巻2号、3・4合併号で特集を組んで研究所の内外に発表した。具体的には以下のような内容である。「地方の希望-希望学・釜石調査の概要」(中村尚史)では、(1)ローカル・アイデンティティの再編、(2)希望の共有、(3)ネットワーク形成が、地方の希望を考える上で重要な論点であることが明らかにされた。また、「釜石製鐵所の経営合理化をめぐる労使の対応」(青木宏之)では、1960年代前半以降つづいた釜石製鐵所の厳しい合理化の中にあって労使関係は比較的安定しており、それが線材工場としての存続につながったことを、「組織の希望」という観点から明らかにした。「釜石市長としての鈴木東民」(宇野重規)では、1955年以降12年にわたって市長であった鈴木東民の仕事を<地域に根ざした福祉政治>、<開かれた土着主義>として、その意義を再評価した。「女性の現状と政策にみる地域の希望」(土田とも子)では、釜石市の男女共同参画政策が女性の直面する課題に届いていないことを明らかにし、女性の地位向上が地域の希望にとってのポテンシャルであることを析出した。以上のように釜石調査の結果をまとめたほか、今年度は外国と国内の文化人類学、社会学研究者との共同研究を行い、希望と社会の関係の解明に新しい地平の一端を切り開くことを試みた。釜石調査と国際共同研究の成果は今後書物にまとめる予定である。本研究の目的は、伝統的な文献史学の手法にオーラル・ヒストリーの方法を組み合わせて様々な社会諸階層の人々のライフ・ヒストリーを辿ることを通して、戦前、戦後における「希望」の社会的位相を考えることにある。この課題に接近するため、本年度は7月と9月に、経済学や政治学、法学、社会学といった社会科学諸分野の研究者と共同して、かつて製鉄の町として栄えた岩手県釜石市をフィールドとする総合的な地域調査を実施した。具体的には、まず中村、梅崎が新日鐵釜石製鉄所の労働者と現場管理者のOB 34人に、製銑、製鋼、圧延、工作、整備の各部門別で、かつ7080歳代と60歳代の二つの世代グループ別に、各時代(戦前-戦中期、戦後復興期、高度経済成長期)の各職場における技能形成のあり方や、1960年代における釜石製鉄所から東海製鉄-名古屋製鉄所への転出(労働者の社内配置転換)や1978年以後の合理化の過程における各自の対応と心情に焦点をあてたインタヴューを行い、世代や職場による「希望」のあり方の差異性と共通性を考えた。その記録(オーラル・ヒストリー集)は、現在、東京大学社会科学研究所のディスカッション・ペーパーというかたちで逐次、刊行中である。また中林と中村は、インタヴュー調査に並行して、新日鐵釜石製鉄所と釜石鉱山の文書史料調査に従事した。その結果、鉄の歴史館、釜石市郷土資料館、釜石製鉄所などが所蔵する膨大な史料のリスト作成と部分的な写真撮影を行うことができた。さらに平石と佐藤は釜石地域がこれまでにどのような地域文化を育み、それが同地域のローカル・アイデンティティの形成にいかなる影響を与えてきたのかについて、思想史的な考察を加えつつある。具体的には、二度にわたる現地調査で新聞、雑誌、同人誌といった文献史料を収集するとともに、釜石地域の地域文化形成に大きな影響を与えた知識人層に関する情報収集を行った。

「女性の現状と政策にみる地域の希望」(土田とも子)では、釜石市の男女共同参画政策が女性の直面する課題に届いていないことを明らかにし、女性の地位向上が地域の希望にとってのポテンシャルであることを析出した。以上のように釜石調査の結果をまとめたほか、今年度は外国と国内の文化人類学、社会学研究者との共同研究を行い、希望と社会の関係の解明に新しい地平の一端を切り開くことを試みた。釜石調査と国際共同研究の成果は今後書物にまとめる予定である。
ショウジョウバエ生殖細胞系列の運命決定機構および性差形成機構

本研究は、生殖細胞系列の発生運命決定機構、および生殖細胞系列の性決定機構をショウジョウバエにおいて解明することを目的とする。これまで、個体の性を決める遺伝子はいくつかの動物で明らかになっているが、生殖細胞の中で働いて卵になるか精子になるかを決定する遺伝子はこれまで不明であった。本研究の特筆すべき成果として、生殖細胞のメス化の鍵を握る遺伝子を同定することに成功した。これにより、動物における生殖細胞の性決定機構の新たな研究の扉を開くことができる。本研究は、生殖細胞系列の発生運命決定機構、および生殖細胞系列の性差形成機構を解明することを目的とする。平成21年度は、1)Nanos依存的に翻訳制御されるRNAをスクリーンする研究をほぼ終了した。その結果、Nanos依存的に翻訳抑制されるRNAとともに、Nanosにより翻訳が活性化されるRNAを同定することができた。今後は、この制御に関わるRNA配列を同定するとともに、これらRNAの機能解析を行なう。2)始原生殖細胞の性決定は、Sxlによる自律的な雌化と生殖巣による非自律的な雄化の2段階で進行すると考えられる。本年度は、Sxlにより始原生殖細胞の自律的な雌化が誘導されるか否かを解析した。雄の始原生殖細胞にSxlを強制発現させ、雌の生殖巣に移植すると、次世代を生み出すことができる完全に機能的な卵に分化することが明らかとなった。このことは、Sxlが、始原生殖細胞の雌化を引き起こすマスタージーンであることを強く示唆する。この成果は、論文投稿中である。平成22年度は、1)Nanos依存的に翻訳制御されるRNAのスクリーンにより、細胞分裂の制御に関わるtwins RNAがNanos依存的翻訳活性化を受けることを示唆する結果を得た。これまで、Nanosは、翻訳の抑制のみを行うと考えられてきたが、この成果により、Nanosの新たな機能が明らかとなった。これまでに、Sxlにより始原生殖細胞の自律的な雌化が誘導されることが明らかとなっている。平成22年度は、Sxlの機能を低下させた場合に、始原生殖細胞の雌化が阻害されることが明らかとなった。また、Sxlを強制発現させた雄始原生殖細胞が、雌の体細胞中において卵に分化することも種々の実験により確認された。以上のことは、Sxlが、始原生殖細胞の雌化を引き起こすために必要十分な機能を持つマスタージーンであることを示す。しかし、Sxlを強制発現させた雄の始原生殖細胞は、雄の体細胞中では精子に分化することから、雄の体細胞は、Sxlの働きをキャンセルすることが出来ることも明らかとなった。現在、雌特異的なSxlの活性化に関わる遺伝子や、Sxlにより活性化される遺伝子カスケードについても解析中である。平成23年度は、以下の成果を得た。1)始原生殖細胞の性決定は、sxlによる自律的な雌化と生殖巣による非自律的な雄化の2段階で進行すると考えられてきた。これまでの研究から、sxlが始原生殖細胞の雌化を引き起こすために必要十分な機能を持つマスタージーンであることが明らかとなった。そこで、雌特異的なsxlの活性化に関わる遺伝子について調べたところ、母性供給されるbHLHタンパク質Daughterless(Da)は、体細胞と同様に始原生殖細胞中においてもsxlの発現に関与するが、X染色体上にコードされるScやSis-Aタンパク質は始原生殖細胞内ではsxlの発現に関与しない。このことは、体細胞と始原生殖細胞ではsxl遺伝子の活性化、すなわち雌化の機構が異なる事を示しており、sxl活性化に関わるるX染色体上の新規遺伝子の単離を開始した。2)また、始原生殖細胞中で生殖細胞特異的な遺伝子発現の活性化に関わるovo遺伝子に関して、母性ovoの機能が始原生殖細胞の発生に必須であるとの結論を得た。これに関しては、現在論文作成中である。
学校所蔵資料による戦時下教育実態の解明とその成果の歴史教育の素材化

本研究は、アジア・太平洋戦争期の学校教育の実態を学校に保存されている資料から明らかにすることを第一の目標として行った。多くの証言によって、戦時中の教育の様相が語られているが、証言を支える客観的根拠は意外に少ない。公文書の多くは、戦後の資料廃棄指令によって失われたと考えられる。その欠を補うのが、学校に保存されている諸資料で、中でも「学校日誌」は地域の日常をも記録する貴重な歴史情報源と言える。宮城県内の小学校を中心に戦時中の教育実態、戦時下の地域の日常を復原するための、資料を多く収集することができた。宮城県気仙市内の小学校8校、宮城県白石市内の小学校3校で収集した昭和14年から昭和21年度までの学校日誌の記述を全文データベース化し、小学校における戦時下教育の変化について基礎的なデータを得ることができた。戦前の小学校は地域における公民館的役割を果たしており、戦争協力体制構築のための様々の働きかけが小学校を舞台に行われていた実態を具体的に知ることができる。学校教育そのものへの戦争の影響は、昭和18年頃に一つの転換点が求められる。校長の朝会訓話の内容に煽動的な言辞が盛り込まれて行く状況が明らかになった。また、満蒙開拓青少年義勇軍の募集に学校が積極的に取り組んでいた実態も知り得ることができた。募集業務の具体像が掴めることも重要な成果である。新たな資料収集は、気仙沼市内3校、宮城県村田町内5校、宮城県角田町内1校、山形県高畠町内3校で実施した。内容整理も行い、地域性は認められるものの、全体的傾向としてはほぼ一致していることがわかった。また、小学校資料が地域史研究に重要な資料となることを確認することができた。少子化傾向による小学校の統廃合が進んでおり、新たに資料収集した小学校の中には、統廃合の情報を得て緊急に実施した学校があった。こうした学校では、資料調査を行い、貴重な資料については、資料保存封筒・整理箱に収納し、学校・教育委員会に対し保存を依頼する活動も行った。調査及び資料整理は学生とともに実施し、資料調査の実地教育を行うとともに、内容整理の終わった学校から、学生に内容の精査を行わせ、歴史研究の実際を指導している。学生は自ら集めた資料をもとに歴史研究を行うことに関心を示し、積極的に取り組んでいる。昨年度は、3月11日に起こった東日本大震災の影響があり、研究を再開できたのは5月の連休明け後だった。まず、一昨年度末、震災発生直前に実施合意に達した、宮城県川崎町教育委員会との町内全小学校の所蔵資料調査と保全活動に着手した。同町では、2011年度中に3小学校と1分校の統廃合が決しており、廃校となる小学校に保存されている歴史的資料の目録作成、資料保存箱への保全処置を行い、さらに存続する小学校についても、同様の処置を行った。そして、新たに戦間期の学校日誌資料を3校分、収集することができた。次に宮城県涌谷町教育委員会と同町内全小学校の資料所在調査と目録作成作業を行い、ここでも戦間期の資料を3校分、収集することができた。資料収集には至らなかったが、震災直後には、南三陸町の津波被害を受けた小学校を訪問し、海水につかった資料の消毒作業も実施した。震災直後の混乱状態にあったため、調査を行うことはできなかったが、戦間期の資料も確認しており、今後、学校の状況が改善されてから資料収集を行わせていただきたいと考えている。調査・作業には、ゼミ所属の学生を同行し、資料調査の方法を実践的に指導した。収集した資料は、全文のデータベース化を行い、戦間期の教育実態を探るための貴重な史料を得ることができた。県内における地域的特色と統一的傾向を析出することができると考えている。また、データを、小学校教員を志望する学生、および歴史専攻の学生に提供し、前者に対しては、勤務校の資料を用いた歴史教育の実践を仮定した授業計画、後者には卒業研究を指導したが、いずれも良好な成果が得られ、学校資料の教育的利用方法について、検討を深めることができた。昨年度は、本研究の最終年度として、2年間の調査成果を整理し、収集資料の分析を中心に行い、成果を論文として発表することを予定していた。しかし、2011年3月11日に発生した東日本大震災による被災地域の資料調査・保全活動が依然として必要とされていたため、被災地域における資料の所在確認・保全作業を引き続き実施し、研究課題に対応する資料を発見した場合、その調査を実施することとした。まず一昨年度に津波による被災状況を確認していた南三陸町において、小学校の資料調査を行い、保全作業と目録作成作業を行った。

戦時期の教育実態をうかがえる資料の発見には至らなかったが、1896年、1933年の三陸沖地震に伴う津波被災関連資料を発見し、学校資料の中に災害資料として使える資料が存在することを確認した。次に、登米市登米町の旧登米小学校木造校舎を利用した教育資料館の資料保全・調査を実施した。同資料館には、明治20年代から、昭和30年代までの登米小学校の資料が保管されているが、第三セクターによる管理は、保存上にも問題があったことから、まず資料を保存封筒に収め、目録を作成する作業を行った。続いて、明治以降の学校日誌全冊の前頁撮影を実施した。小学校だけでなく、実業補習学校・青年訓練所・青年学校の日誌も含まれており、貴重な資料を得ることができた。また、宮城県船岡町では、教育委員会の協力を得て、町内の全小学校の資料調査を実施し、船岡小学校の日誌からは、戦時中に置かれた海軍第一火薬廠への勤労動員に関する記述を発見することができた。同火薬廠への中等学校(中学・高等女学校)・高等学校の学徒勤労動員については、これまでも指摘がなされてきたが、小学校(高等科)の勤労奉仕については指摘がなく、今回の調査でその糸口をつかむことができた。3年間の調査で収集した日誌を全文データベース化し、小学校教員養成課程の授業で、日誌記述をもとに、「戦争中の暮らし」の授業計画・実践を行い、学校資料の歴史教材化についても考察を行うことができた。当初、学校資料の個人情報の集合体という「特殊性」から、調査実施に同意を得ることに苦労したが、教育委員会に丁寧に説明したところ、広域行政合併が進んだことによる、経費節減のための学校統廃合という現実問題に対処する必要もあり、次第に理解を得られ、調査協力を得られるようになった。逆に協力を求められることも多くなり、予想していた以上に資料収集を行うことができるようになった。当初予定していた以上に調査地域を広げることができるようになり、さらに調査地域を広げ、資料収集を行って、宮城県内全域の戦間期小学校の教育実態を比較的に検討する資料を収集したいと考えている。所在調査で発見した資料には、これまで周知されてこなかった貴重な資料が少なくなく、本研究によって発見した資料をいかに歴史研究の素材として紹介していきたいと思う。学校日誌の記述内容は地域の歴史資料として貴重で、特に、津波で壊滅的被害を受けた地域にとっては、数少ない地域の近現代史資料となってしまったものが少なくない。収集した日誌資料は全文データベース化を行っているが、個人情報保護という観点が、どこまで公表できるかという点について慎重に検討を行い、web上に公表したいと考えている。
日本の伝統装飾のアルゴリズム化とデジタル造形技術の併用による設計支援とその展開

本研究年度においては、前研究年度からの継続として、L-systemによる装飾表現に引き続き取り組んだ。なお、L-systemは文字列の変換ルールを定義することでデータを生成し、それを図形に置き換えることで複雑な形状表現が可能となる技法であり、樹木のCG表現などに多用される。前研究年度においては日本の伝統的な木工細工である組子の表現に取り組んだが、本研究年度においては日本の伝統的なカットグラスである切子の装飾文様のアルゴリズム化に取り組んだ。切子はその加工の特性上、ほとんどが直線を基調とした文様であり、文様同士の重なりによる遮蔽も考慮する必要がないため、手作業でも作図することは特に難しくない。しかし、L-systemにおいて文様の生成過程も記述することで、様々なコンテンツ応用が可能と考えた。そこで、江戸切子・薩摩切子においてよく使用される代表的なパターンをいくつか選出し、文献調査等によって様式を把握したうえでL-systemを用いて記述を行った。その結果、いずれの文様もわずか数行の変換ルールの記述によって表現できることが判明し、なおかつ出力された文様はいずれも伝統的に正確なものであることが確認できた。さらに、文様が成長していく様子もL-systemによって表現できることから、ルールを組み替えることで、職人が加工を施すプロセスも理論的に表現可能なことが確認できた。これは将来的に、デジタルアーカイブなどへの応用も期待できる。以上の成果を国際会議において発表し、同大会において技術面が評価され表彰を受けた。なお、本研究年度で得られた切子の表現に加え、前研究年度の組子の表現を組み合わせ、審美的なCGアニメーション作品を制作した。同作品は国内の公募展で最高賞に選ばれるなど、造形面でも本研究の取り組みが高く評価を受けた。本研究課題で取り上げた伝統装飾のアルゴリズム化は、その審美性・新規性について、学会のみならず美術系公募展においても高い評価を受けていることから、順調に進展していると判断できる。本研究年度までの成果を受けて、同様のアプローチをさらに他の装飾文様へ応用できないか試みる。また、今後は伝統文様の視覚的な正確性に留まらず、その加工プロセスまでも忠実に再現するためにアルゴリズムの高度化を目指すとともに、実体物として造形出力することも視野に入れた装飾生成アルゴリズムの応用性について検討することを試みる。以上の項目に加え、SIGGRAPH、SIGGRAPH Asia、Ars Electronica、South by Southwest等の関連する学会・大会の視察も検討し、研究の遂行に必要な資料収集を行うと同時に、得られた成果については国内外での発表を目指す。具体的発表形態は学会発表や論文執筆等に加え、発表予定の関連学会に併設されるアート系公募展等での審美的造形物としての発表も検討する。本研究年度においては対象とする装飾文様の選定と、その規則性の解明、および基礎的なアルゴリズム化に取り組んだ。研究課題申請時より候補としていた装飾を比較検討した結果、本研究年度では組子細工の文様を取り上げることとし、文献調査等により組子細工の幾何学的なパターンを分析した。その結果、組子におけるほとんどの図案は正平面充填内に展開されており、また生平面充填が可能な正多角形三種類を何等かのルールで加工した図案が多いことがわかった。また、曲線はほとんど使用されず、文様同士が重なり合うような表現もほとんどないことから、比較的単純なルールで表現できることが判明した。このような図案は通常であれば正多角形を再帰的に分割していくことで容易に再現できるが、本研究ではコンテンツ分野などへの応用性を考慮し、あえて文様の生成過程までも動画として再現しやすいL-Systemのアルゴリズムを用いることとした。L-Systemは文字列を任意のルールで置き換えていくことでデータを生成し、その結果に基づいて図案を描くことで樹木などの自然形状、およびその生成過程を描くことができるアルゴリズムである。これを組子細工に応用し、実在する組子の代表的文様をL-Systemで記述することを試みた。結果として精緻な組子の文様が広がっていく過程を単純な記述のみで表現することに成功し、CGアニメーション映像として出力を行った。以上の成果について、国内の学会で発表を行い、同大会における研究奨励賞を受賞した。本研究課題の申請時より購入予定であった機器の販売開始がメーカー都合により遅れることとなった。また、同機器の仕様変更により、研究課題の遂行に必要な基準を満たせない可能性が発生したため、同等物品の購入など代替手段を検討する必要性が発生している。このような理由により、本研究年度においては上記機器がなくても進められる部分から着手することとし、装飾のアルゴリズム化の部分に集中的に取り組むこととした。対象として取り上げた組子細工のアルゴリズム化については予想以上に良い成果が早期に出ており、対外的な発表も行うことができた。以上、一部に遅れは出ているが、総合的には順調に進展していると判断できる。

しかし、L-systemにおいて文様の生成過程も記述することで、様々なコンテンツ応用が可能と考えた。そこで、江戸切子・薩摩切子においてよく使用される代表的なパターンをいくつか選出し、文献調査等によって様式を把握したうえでL-systemを用いて記述を行った。その結果、いずれの文様もわずか数行の変換ルールの記述によって表現できることが判明し、なおかつ出力された文様はいずれも伝統的に正確なものであることが確認できた。さらに、文様が成長していく様子もL-systemによって表現できることから、ルールを組み替えることで、職人が加工を施すプロセスも理論的に表現可能なことが確認できた。これは将来的に、デジタルアーカイブなどへの応用も期待できる。以上の成果を国際会議において発表し、同大会において技術面が評価され表彰を受けた。なお、本研究年度で得られた切子の表現に加え、前研究年度の組子の表現を組み合わせ、審美的なCGアニメーション作品を制作した。同作品は国内の公募展で最高賞に選ばれるなど、造形面でも本研究の取り組みが高く評価を受けた。本研究課題で取り上げた伝統装飾のアルゴリズム化は、その審美性・新規性について、学会のみならず美術系公募展においても高い評価を受けていることから、順調に進展していると判断できる。本研究年度までの成果を受けて、同様のアプローチを他の装飾文様へ応用できないか試みる。また、より正確性の高い文様の再現のためにアルゴリズムの高度化を目指すとともに、実体物として造形出力することで装飾生成アルゴリズムの応用性について検討することを試みる。以上の項目に加え、SIGGRAPH2018、SIGGRAPH Asia 2018等の関連学会の視察を通じ、研究の遂行に必要な資料収集を行うと同時に、得られた成果については国内外での発表を目指す。具体的発表形態は学会発表や論文執筆等に加え、発表予定の関連学会に併設されるアート系公募展等での審美的造形物としての発表なども考えられる。本研究年度までの成果を受けて、同様のアプローチをさらに他の装飾文様へ応用できないか試みる。また、今後は伝統文様の視覚的な正確性に留まらず、その加工プロセスまでも忠実に再現するためにアルゴリズムの高度化を目指すとともに、実体物として造形出力することも視野に入れた装飾生成アルゴリズムの応用性について検討することを試みる。以上の項目に加え、SIGGRAPH、SIGGRAPH Asia、Ars Electronica、South by Southwest等の関連する学会・大会の視察も検討し、研究の遂行に必要な資料収集を行うと同時に、得られた成果については国内外での発表を目指す。具体的発表形態は学会発表や論文執筆等に加え、発表予定の関連学会に併設されるアート系公募展等での審美的造形物としての発表も検討する。
尿路・性器感染症病原微生物の迅速かつ包括的遺伝子診断システムの開発

細菌の16s rRNA遺伝子に対するuniversal primerを用いたPCR法にて増幅されたDNA断片を、ヒトから検出される可能性のある各種の細菌のDNAを網羅したDNAチップ上でハイブリダイズさせることにより病原微生物を検出し、尿路・性器感染症すべての細菌感染症の遺伝子診断を可能とするシステムの構築を目的としている。その中心的な課題である細菌一般に共通するDNAの塩基配列(16s rRNA遺伝子)を対象としたuniversal primerを用いたPCR法の確立のための基礎実験を行った。Neisseriagonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma genitaliumなどの病原性が明らかな微生物に対しては、迅速に測定するために特異的なprimerを用いたreal time PCRによる検出系の開発を行い、また、尿を検体としてその中に含まれる最近の遺伝子のコピー数の定量測定を行った。淋菌については、抗菌剤に対する耐性化が進んでおり、耐性化に関わる遺伝子変異の迅速な検出系が求められており、そのための遺伝子診断システムを開発中である。細菌の16s rRNA遺伝子に対するuniversal primerを用いたPCR法にて増幅されたDNA断片を、ヒトから検出される可能性のある各種の細菌のDNAを網羅したDNAチッブ上でハイプリダイズさせることにより病原微生物を検出し、尿路・性器感染症すべての細菌感染症の遺伝子診断を可能とするシステムの構築を目的としている。その中心的な課題である細菌一般に共通するDNAの塩基配列(16s rRNA遺伝子)を対象としたuniversal primerを用いたPCR法の確立のための基礎実験を行っている。性器感染症を引き起こすhumanpapilloma virus、herpes simplex virus、Trichomonas vaginalisなどの細菌以外の微生物については、それぞれに特異的なprimerを同一条件下で効率よく遺伝子増幅が可能なように設計し、multiplex PCR法での遺伝子増幅系の検討を行っている。しかしながら、各病原体に対して感度および特異性に優れたPCR条件の確立には至っておらず、平成17年度においても検討を継続する予定である。Neisseriagonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma genitaliumなどの病原性が明らかな微生物に対しては、迅速に測定するために特異的なprimerを用いたreal time PCRによる検出系の開発を行っており、また、尿を検体としてその中に含まれる最近の遺伝子のコピー数の定量測定を行っている。
古墳祭祀の系譜についての研究

本研究は古墳への被葬者の埋葬に関連して執り行われた祭祀の実態とその系譜について研究したものである。まず、5世紀初めの兵庫県行者塚古墳における西側造出での発掘成果に検討を加えた結果、墳丘側に家形埴輪を置き、その前で高杯形土器と篭目土器に土製の供物を載せて捧げる行為が行われていたことが明らかになった。とくに家形埴輪は復原作業によって、墳頂部同様、十個近くの各形態のものが一定の範囲に整然と配置されていたことがわかった。この造出での土製供物を捧げる祭祀は行者塚古墳とほぼ同時代の兵庫県クワンス塚古墳、奈良県乙女山古墳や5世紀後半の群馬県舞台1号墳でも確認できる。この祭祀行為が初期人物埴輪群が表しているものと考えられる。次にこの種の古墳祭祀の系譜を探ってみた。すると4世紀後半の京都府作山1号墳、同溝谷1号墳などで同様の祭祀が古墳の墳頂で実施されていたことが知られた。さらに岐阜県長塚古墳に見られる墓壙内埋土中の赤色顔料が塗布された土器も同様な行為に用いられたものと考えられた。なお、作山1号墳ではその出土状況の分析により、かねてより注目されていた犬や猪などの動物形の土製品は、供献行為の行われた地点とは離れて、家形埴輪と一緒に出土していることが判明した。したがって、5世紀後半以後、島根県石屋古墳などで見られるような各種形象埴輪群は、始めから別次元の祭祀や場面を同時に表している可能性が強くなった。たとえば、供献祭祀の場面に加え、被葬者の来世での姿などが複合的に表されていると考えられるのである。なお、5世紀に各地で現れる人形、鏡形、盾形といった土製模造品は古墳とは関連がなく、大地や自然に対する祭りに用いられたものであることが確認された。
血管内皮障害による脳軟膜動脈側副血行発達障害の機序の解明と薬剤介入の検討

虚血性脳血管障害において、脳側副血管の発達(arteriogenesis)は重要であり、側副血管の発達に対する介入は今後の有望な治療ターゲットと考えられる。本研究の目的は、血管内皮障害による脳軟膜動脈側副血行発達障害の機序を明らかにし、血管リスクをもった状態でも脳側副血行の発達をうながすことが可能な薬剤介入を検討することである。本研究では、血管内皮機能障害モデルマウスとして、eNOS(endothelial nitric oxide synthase)ノックアウトマウスを用いた。今年度は、通常マウスおよびeNOSノックアウトマウスそれぞれを、総頸動脈閉塞術群とsham術群に割り付け、14日後に脳血管を可視化し、脳表面の脳軟膜動脈吻合血管の血管径を評価した。その結果、正常マウスでは既報と同様に、一側総頸動脈閉塞後の脳軟膜表面でのarteriogenesisの促進がみられた。一方、eNOSノックアウトマウスでは、一側総頸動脈閉塞後の脳軟膜表面でのarteriogenesisの促進がみられない個体も観察されたが、実験個体数を増やしていくと、eNOSノックアウトマウスでも正常マウスと同様にarteriogenesisの促進がみられる結果となった。ただし、通常マウスsham術群とeNOSノックアウトマウスsham術群を比較すると、eNOSノックアウトマウスsham術群の脳軟膜動脈吻合血管径が細いことが示された。以上から、当初の想定に反して、eNOS単一欠損のみでは脳軟膜表面でのarteriogenesisは完全には障害されないことがわかった。また一方で、eNOSはdevelopmentの段階で脳軟膜動脈吻合の発達に影響を与えている可能性が示唆された。一方、申請者らのこれまでの検討から、血管危険因子は脳側副血管の発達が障害される要因となる。実臨床において脳側副血管の発達が望まれるような患者は、血管内皮障害をきたす血管危険因子を有することがほとんどであり、血管内皮障害と脳軟膜動脈側副血行発達障害との関連を明らかにし、そのメカニズムを検討することが必要である。本研究では、血管内皮機能障害モデルマウスとして、eNOS(endothelial nitric oxide synthase)ノックアウトマウスを用いる。本年度は、これまで申請者らのグループが確立した脳軟膜動脈側副血管発達が観察可能な動物実験モデルをeNOSノックアウトマウスにおいて用いることが可能か検討するために、eNOSノックアウトマウスでのウィリス動脈輪の構造がこれまで用いてきた正常マウス(C57BL/6)と同様かを検討した。その結果、正常マウスとeNOSノックアウトマウスでは、ウィリス動脈輪の構造に特記すべき違いはないことがわかった。次に、通常マウスおよびeNOSノックアウトマウスそれぞれを、総頸動脈閉塞術群とsham術群に割り付け、14日後に脳血管を可視化し、脳表面の脳軟膜動脈吻合血管の血管径を評価した。その結果、正常マウスでは一側総頸動脈閉塞後の脳軟膜表面でのarteriogenesisの促進がみられたが、eNOSノックアウトマウスではarteriogenesisの促進がみられない個体が観察されることがわかった。eNOSノックアウトマウスにおいて、これまでの申請者らのグループにおける実験モデルが使用可能なことはすでに確認できた。また、eNOSノックアウトマウスでは、脳軟膜動脈吻合のarteriogenesisが促進されない個体がみられることも確認できており、その点においては順調に進んでいる。しかし、eNOSノックアウトマウスの妊娠効率の悪さなどからくる繁殖面の停滞があり、当初の計画よりも必要な個体を確保することが難しいことが判明し、計画していた脳軟膜動脈側副血行発達過程における同血管周囲に集積するマクロファージの免疫組織学的検討など、まだ十分にに行えていない。今後、繁殖ペースを増強し、必要な個体数を確保し実験を推進していく予定である。上記を考え、やや遅れていると評価した。

ただし、通常マウスsham術群とeNOSノックアウトマウスsham術群を比較すると、eNOSノックアウトマウスsham術群の脳軟膜動脈吻合血管径が細いことが示された。以上から、当初の想定に反して、eNOS単一欠損のみでは脳軟膜表面でのarteriogenesisは完全には障害されないことがわかった。また一方で、eNOSはdevelopmentの段階で脳軟膜動脈吻合の発達に影響を与えている可能性が示唆された。今後、eNOSノックアウトマウスの必要な個体数を確保することを推進するため、繁殖ケージを増加させる。そのうえで、eNOSノックアウトマウスにおける脳慢性低潅流に対する脳軟膜動脈吻合発達障害の検討を行い、脳血管arteriogenesisの過程における正常マウスとeNOSノックアウトマウスとの免疫組織的相違および遺伝子発現の相違を検討する。そして、血管内皮障害による脳血管arteriogenesisの障害を改善しうる薬剤を検討していく予定である。マウス用無加温型非観血式血圧計の購入を計画していたが、現在のところ購入できていないことが次年度使用額が生じた主な理由である。また、eNOSノックアウトマウスの個体数の確保に遅れがあったことから、マイクロアレイ解析費やその他の実験の消耗品についても予定より使用できていないことも理由としてあげられる。マウス用無加温型非観血式血圧計は引き続き購入を検討する予定である。またマイクロアレイ解析も次年度に行う予定である。
マウス胚着床を制御する白血病阻止因子の役割

マウスの妊娠確認後、EGFR阻害剤を持続投与し、妊娠5日目に着床数を計測したところ、EGFR阻害剤の有無により着床数に有意な変化は認められなかった。人工脱落膜化モデルマウスにEGFR阻害剤を投与したところ、ごま油投与2日後の子宮重量に変化は認められなかった。子宮内におけるEGFリガンド群の代償的発現上昇が認められたが、脱落膜マーカーであるBMP2の発現量は依然上昇した。これらの研究より子宮に存在するEGFRは必ずしも胚着床に必要ではない可能性が示唆される。人工脱落膜化モデルマウスの子宮管腔内にごま油を投与したところ、2時間後にはHB-EGFの発現上昇が認められた。HB-EGFと同じく着床部特異的局所発現性を有するEregの発現も上昇傾向を示したが、同じEGFファミリーに属するEGF、Aregの発現変動は認められなかった。このことから、ゴマ油投与による人工脱落膜化モデルは、正常子宮全体を用いた遺伝子発現解析では検出できなかった子宮上皮の局所反応を解析できるモデルである可能性が示唆された。このモデルマウスを用いて子宮組織における遺伝子発現プロファイルをDNAマイクロアレイ法を用いて検査したところ、ゴマ油投与子宮角特異的に発現変動する遺伝子が多数新たに見つかった。これらから29遺伝子を絞り込み、より精度の高いRT-PCR法により再検証したところ、12遺伝子がゴマ油投与子宮角特異的に発現変動する遺伝子として確定した。これら12遺伝子は着床部特異的局所発現性を有し、胚盤胞由来シグナルを子宮へ伝達する際に重要な役割を担う可能性がある。本研究は着床期子宮内膜における、白血病阻止因子(LIF)とプロジェステロンの相互作用の機序を明らかにすることを目的として行われた。着床期に起こるプロジェステロン作用部位の移行に対するLIFの役割を評価するため、卵巣除去マウスにリコンビナントLIFまたは子宮内LIFの発現誘導因子であるエストラジオール17βを投与後の子宮内膜を用い、プロジェステロン受容体に対する免疫組織化学を行った。結果、エストラジオール17βを投与後の子宮上皮ではプロジェステロン受容体が減少し、対照的に子宮間質では増加が認められた。これは着床期に起こる変化と同様である。しかし、リコンビナントLIF投与後の子宮内膜でプロジェステロン受容体の発現は変化せず、エストラジオール17βのプロジェステロン受容体調節作用はLIFを介さないことが示唆された。LIFは胚着床に必須であるため、着床期のプロジェステロン受容体の変動は劇的であるにも関わらず、胚着床の成否には重要ではないと考えられる。着床期、プロジェステロンの活性化に伴う子宮内プロジェステロン受容体複合体の構造変化を調査するため、Blue-Native PAGE-ウエスタンブロット法を用い、プロジェステロン受容体複合体の分子量を測定した。結果、着床期、非妊娠期に関わらず、分子量は約900kDaであることが明らかとなったが、活性化前後の複合体を分離することはできなかった。これは活性型複合体の存在比が小さいこと、もしくは活性化に伴う複合体構造の変化が分子量の顕著な増減を伴わないことに起因する可能性がある。そのため、プロジェステロン受容体複合体の構造に対するLIFの影響を評価するには、個々の複合体構成要素を標的とした調査がより有効であると考えられる。妊娠3日目から6日目のマウス子宮に対する抗STAT3抗体を用いた共免疫沈降を行ったが、STAT3-Smad1複合体の存在は確認できなかった。また、GFAPのmRNA及びタンパク質の着床期マウス子宮における存在も確認できなかった。これらのことからSTAT3、Smad1のアクチベーターであるLIF、BMP2はどちらも胚着床に不可欠な役割を持つが、アストロサイトの分化における場合と同様の協調作用は示さないことが示唆された。偽妊娠マウスに着床遅延モデルと同様の処置を施し、LIF投与24時間後のマウス子宮を用いてIhh標的遺伝子であるPtch1、COUP-TFII、EGFRの遺伝子発現量をリアルタイムRT-PCR法により調査した。結果、いずれの遺伝子もLIF投与後の発現変動が認められず、胚着床におけるLIFとプロジェステロン経路の相互作用点はEGFR以下の経路にあることが示唆された。着床期、EGFRのリガンドであるHB-EGFの発現は胚盤胞の存在する子宮上皮に限局する。胚着床に伴う子宮内の局所反応である血管透過性の亢進との時間的関連を調べたが、子宮全体を用いた解析では子宮上皮の局所反応を検出できないことが示唆された。また、同じサンプルを用いて子宮上皮のアポトーシスと関連するPrap1、子宮内膜間質の脱落膜反応と関連するBMP2の遺伝子動態も調査した結果、着床シグナルは血管透過性の亢進、上皮細胞のアポトーシス、脱落膜反応の進行の順に伝達されることが示唆された。マウスの膣栓確認日を妊娠1日目とし、妊娠3日目に着床遅延処置を施し、その3日後に酪酸ナトリウム20mg/頭を投与し、さらに3日後に胚着床の有無を確認した結果、胚着床が進行したことが確認された。さらに、胚には着床前には認められない内胚葉が存在した。このように、酪酸ナトリウムが新たな着床誘起物質として発見され、不妊治療や胚移植への応用が期待される。

マウスの妊娠確認後、EGFR阻害剤を持続投与し、妊娠5日目に着床数を計測したところ、EGFR阻害剤の有無により着床数に有意な変化は認められなかった。人工脱落膜化モデルマウスにEGFR阻害剤を投与したところ、ごま油投与2日後の子宮重量に変化は認められなかった。子宮内におけるEGFリガンド群の代償的発現上昇が認められたが、脱落膜マーカーであるBMP2の発現量は依然上昇した。これらの研究より子宮に存在するEGFRは必ずしも胚着床に必要ではない可能性が示唆される。人工脱落膜化モデルマウスの子宮管腔内にごま油を投与したところ、2時間後にはHB-EGFの発現上昇が認められた。HB-EGFと同じく着床部特異的局所発現性を有するEregの発現も上昇傾向を示したが、同じEGFファミリーに属するEGF、Aregの発現変動は認められなかった。このことから、ゴマ油投与による人工脱落膜化モデルは、正常子宮全体を用いた遺伝子発現解析では検出できなかった子宮上皮の局所反応を解析できるモデルである可能性が示唆された。このモデルマウスを用いて子宮組織における遺伝子発現プロファイルをDNAマイクロアレイ法を用いて検査したところ、ゴマ油投与子宮角特異的に発現変動する遺伝子が多数新たに見つかった。これらから29遺伝子を絞り込み、より精度の高いRT-PCR法により再検証したところ、12遺伝子がゴマ油投与子宮角特異的に発現変動する遺伝子として確定した。これら12遺伝子は着床部特異的局所発現性を有し、胚盤胞由来シグナルを子宮へ伝達する際に重要な役割を担う可能性がある。
体細胞クローン牛の生殖細胞形成過程におけるリプログラミング機構の解析

これまで、体細胞クローン動物には多くの発生異常が生じる事が報告されているが、通常の受精で生まれたその子孫には異常が起きない事が知られている。その原因は、クローン動物のエピジェネティックな異常が生殖系列を通過する際にリセットされるためであろうと考えられてきた。今回、体細胞クローン牛の精子・卵子を材料に、そのDNAメチル化状態を非クローン牛と比較したところ、解析した遺伝子・領域について両者で差異は認められなかった。体細胞クローン雄牛(9頭)およびコントロールの非クローン雄牛(8頭、いずれも黒毛和牛)から末梢血および精子DNAを回収し、DNAメチル化解析を行った。最終年度は、新たに全能性に関与するOCT3/4、NANOG遺伝子、またメスのX染色体不活化に関与するXIST遺伝子のメチル化をbisulfite sequence法により解析した。その結果、OCT3/4遺伝子はクローン牛・非クローン牛とも末梢血では平均75%のメチル化レベルであったものが、精子では5%以下の低メチル化状態にあった。NANOG遺伝子も同様に、末梢血では平均80%メチル化であるが精子では平均20%のメチル化レベルにあり、クローン牛・非クローン牛間に差はなかった。OCT3/4やNANOG遺伝子産物は、ノックアウトマウス等の実験から、哺乳類の初期発生に必須の役割を果たす事が明らかになっており、受精後すぐに発現する必要のあるこれら全能性に関与する遺伝子が、精子形成過程ですでに脱メチル化されているという知見を得る事ができた。X染色体不活化に関与するXIST遺伝子は、これまでの報告通りオスの末梢血では高度にメチル化されていた一方、精子ではほとんどメチル化が解除されている。体細胞クローン動物ではX染色体不活化に異常があり、マウスではその異常を抑制する事によるクローンマウスの作成率向上が報告されている。しかし、今回解析したかぎりでは、XIST遺伝子のメチル化程度にクローン牛と非クローン牛とで差は認められなかった。本研究課題の結果から、体細胞クローン牛の精子・卵子において、非クローン牛と比較してDNAメチル化の異常は検出されず、体細胞クローン牛の後代における健全性に寄与する成果を得る事ができた。体細胞クローン雄牛(9頭)、および非クローン雄牛(8頭)から末梢血および精子DNAを回収し、それぞれの遺伝子についてDNAメチル化の状態を解析した。その結果、反復配列であるSatelliteI領域は末梢血でクローン牛・非クローン牛とも90%程度のメチル化状態であったものが、精子では20-30%程度に脱メチル化されており、SatelliteII領域も同様に末梢血で70%程度のメチル化が精子では20%程度になっていることが分かった。このメチル化の状態にクローン牛・非クローン牛間での違いは無かった。父由来インプリント遺伝子であるH19は末梢血で30-40%のメチル化であったが精子ではクローン牛・非クローン牛ともにほぼ100%メチル化されていた。一方、母由来インプリント遺伝子であるPEG3は末梢血で60-70%程度のメチル化であったが精子ではクローン牛・非クローン牛ともほとんどメチル化されていないことが分かった。同様の解析を体細胞クローン雌牛の卵子を用いて行った。卵子の場合は、回収できるサンプル量が精子に比べて極めて少ないため(1頭あたり約20卵子をOPUにより回収)、反復配列のメチル化のみを解析した。SatelliteI領域は雄牛同様末梢血で90%程度のメチル化が、卵子では60-70%に低下していた。SatelliteII領域は末梢血で70-80%程度のメチル化が卵子では40%程度に低下していた。卵子でのメチル化状態にクローン牛・非クローン牛間での違いは無かった。これらの結果から、体細胞クローン牛の精子・卵子におけるDNAメチル化状態は、非クローン牛と同様のレベルにあることが明らかとなった。研究代表者が10月で独法研究所から国立大学法人へ異動したため、異動後の研究の立ち上げに時間がかかったものの、主なデータは異動前に解析を終えていたため、現在までの達成度については、おおむね順調に進展している。次年度は研究計画に記入した幼牛生殖細胞単離方法の開発を行い、精子や卵子が形成される前の幼牛から生殖細胞を単離する手法を確立する。そのために、生後直後の精巣はすでに入手しており、主にレーザーマイクロダイセクション法を用いて、精巣組織切片から生殖細胞(精原細胞)を単離してDNAを抽出し、インプリント遺伝子や反復配列などのDNAメチル化状態を解析する予定である。DNA抽出やバイサルファイト処理を行うためのキット・試薬類、PCRを行うためのDNA増幅酵素類、プラスチック製品などの消耗品を物品費から購入する。また、国内学会において研究成果を発表するための旅費を計上した。DNAシーケンス解析については、依頼分析を行う予定である。
Coilを用いた脳動脈瘤の塞栓術に関する基礎的研究

1.雑種成犬12頭を用い、ネンブタール麻酔下に頸部を切開し外頸静脈を約15mm採取した。この一端を結紮して盲端とし、他側を総頸動脈に端側吻合して動脈瘤を作成した。2.1週間後、大腿動脈から5Frカテーテルを挿入して総頸動脈撮影を行ったところ、12例中9例では動脈瘤は開存していたが、2例では閉塞しており、1例ではガイドワイヤー操作により動脈瘤が破裂した。4.Embolization後の血管撮影では、動脈瘤の完全閉塞を達成できた例はなく、全例でpartial fillingを認めた。特にneck部分は9例中7例で残存した。また3例では総頸動脈内にcoilが突出し、1週間後に再度血管撮影を行うと親動脈が閉塞していた。5.術後の塞栓症予防のために、ヘパリン、アルガトロバンの投与を試みたが、持続的な投与を行うことが出来なかったためそれらの薬剤による予防効果の判定は困難であった。
形成充填可能な自己硬化型多孔質骨充填材の創製

コラリンアパタイトが画期的な骨補填材として注目されているが、ジャングルジムのような骨梁構造を示すため、骨形成には極めて有利であるが、チッピングがおこりやすく加工性に劣る、という問題点が指摘されていた。申請者は骨欠損部に充填した後、体内で硬化してアパタイトフォームを形成するようなシステムが構築できないかと考えた。このアパタイトフォームは、骨梁構造を持ち、いかなる形状の骨欠損部にも充填可能となるため、理想的な骨充填材になることが期待される。本研究(計画)の目的は、1)硬化してアパタイトフォームを形成するシステムを提案するとともに、2)アパタイトフォーム形成機構を解明する。また、3)骨芽細胞および動物実験を用いてアパタイトフォームの有用性を検討する、ことである。平成16年度の研究では、1)1mm以下の大きさに小片化したα-TCPフォームと第1リン酸ナトリウム水溶液を反応させると、α-TCP表面に非常に長いDCPDの針状結晶が形成され、非常に長い針状結晶間の機械的絡み合いによって、小片化したα-TCPフォームを硬化可能であることが判明した。さらに、16年度の研究では小片化したアパタイトと蒸留水を用いた方法では硬化させることができなかったが、本年度の研究により200°Cで水熱処理をすることにより硬化可能であることが明らかになった。2種類の方法により小片化したα-TCPフォームを硬化させる事が可能になったが、α-TCPフォームと第1リン酸ナトリウム水溶液を用いた方法で作成した硬化体の方が高い圧縮強さを示した。この硬化体は、硬化後にアパタイトではなくDCPDが生成されるが、DCPDは非常に反応性に富み、体内では容易にアパタイトに変換される事が予想される。従って、小片化したα-TCPフォームと第1リン酸ナトリウム水溶液を用いて作成した硬化体は、優れた形成可能な自己硬化型多孔質骨補填材になる可能性があることが示唆された。本年度は本研究の目的のうち1)の硬化してアパタイトフォームを形成するシステムの構築を試みた。まず、第一段階として、アパタイトフォームを1mm以下に小片化し、その小片化したフォームを結合させて、形成可能な自己硬化性多孔質骨充填材が創製可能であるか検討した。1)アパタイトフォーム表面に石こうを被覆する方法、2)α-TCPフォームを用いて、α-TCPと蒸留水あるいはリン酸塩水溶液を反応させる方法でアパタイトフォームに自己硬化性が付与できるかを試みた。1)のアパタイトフォーム表面に石こうを被覆する方法は、硬化時に半水石膏と水が反応して2水石こうの針状結晶が形成されるが、針状結晶の長さが不足して十分な強度をもつ硬化体の作成が不可能であった。

2)α-TCPと蒸留水を反応させると、α-TCP表面にアパタイトの針状結晶が形成されるが、1)と同様に針状結晶の長さが不足していた。α-TCPと第1リン酸ナトリウム水溶液を反応させると、α-TCP表面に非常に長いDCPDの針状結晶が形成された。この非常に長い針状結晶間の機械的絡み合いによって、小片化したa-TCPフォームを硬化可能であることが判明した。コラリンアパタイトが画期的な骨補填材として注目されているが、ジャングルジムのような骨梁構造を示すため、骨形成には極めて有利であるが、チッピングがおこりやすく加工性に劣る、という問題点が指摘されていた。申請者は骨欠損部に充填した後、体内で硬化してアパタイトフォームを形成するようなシステムが構築できないかと考えた。このアパタイトフォームは、骨梁構造を持ち、いかなる形状の骨欠損部にも充填可能となるため、理想的な骨充填材になることが期待される。本研究(計画)の目的は、1)硬化してアパタイトフォームを形成するシステムを提案するとともに、2)アパタイトフォーム形成機構を解明する。また、3)骨芽細胞および動物実験を用いてアパタイトフォームの有用性を検討する、ことである。平成16年度の研究では、1)1mm以下の大きさに小片化したα-TCPフォームと第1リン酸ナトリウム水溶液を反応させると、α-TCP表面に非常に長いDCPDの針状結晶が形成され、非常に長い針状結晶間の機械的絡み合いによって、小片化したa-TCPフォームを硬化可能であることが判明した。さらに、16年度の研究では小片化したアパタイトと蒸留水を用いた方法では硬化させることができなかったが、本年度の研究により200°Cで水熱処理をすることにより硬化可能であることが明らかになった。2種類の方法により小片化したα-TCPフォームを硬化させる事が可能になったが、α-TCPフォームと第1リン酸ナトリウム水溶液を用いた方法で作成した硬化体の方が高い圧縮強さを示した。この硬化体は、硬化後にアパタイトではなくDCPDが生成されるが、DCPDは非常に反応性に富み、体内では容易にアパタイトに変換される事が予想される。従って、小片化したα-TCPフォームと第1リン酸ナトリウム水溶液を用いて作成した硬化体は、優れた形成可能な自己硬化型多孔質骨補填材になる可能性があることが示唆された。
ヒト肥満細胞のin vitro培養系の確立

ヒト成熟肥満細胞のin vitroでの分裂増殖系を確立することを目標に種々の検討を行った。1.Percoll比重遠心法を用いた簡便なラット腹腔肥満細胞の分離精製法を確立した。肥満細胞からのIgE依存性histamine遊離は精製によって著しく低下するが、分離した他の細胞を再構成すると再構成した細胞の数および再構成後の時間に依存して回復する。非肥満細胞および非肥満細胞を純化肥満細胞と混和したものの上清は純化肥満細胞からのhistamine遊離を回復させない。肥満細胞と非肥満細胞との直接的な相互作用が重要な役割を演ずると考えられるが、VLA-4などの接着分子の関与はないように思われる。2.stem cell factor(SCF)はラット腹腔肥満細胞からのhistamine遊離を惹起しないが、IgE依存性のhistamine遊離を増強する。抗SCF抗体はSCFによるhistamine遊離の増強を抑制するが、非肥満細胞による純化肥満細胞からのhistamine遊離の回復には影響を及ぼさない。3.免疫ラットの腹腔内で抗原抗体反応を惹起すると3週間後をピークとする肥満細胞の増多が観察される。in vivoでの肥満細胞増多には感作リンパ球からのfactorが重要な役割を演じると考えられる。4.免疫、感作したラット腹腔細胞を同一ラット脾細胞とともに4週間Matrigel上で抗原刺激を加えながら培養した。培養開始3および4週目に肥満細胞様の形態を有する細胞が多数観察された。5.ヒト肺肥満細胞のcollagenaseおよびhyaluronidase処理による分離法を検討した。細切したヒト肺組織からえられた単離細胞浮遊液には最大で5%程度の肥満細胞が含まれていた。肥満細胞の単離法がほぼ確立できたので、ヒト肺肥満細胞からのIgE依存性のhistamine遊離およびin vitroでの培養についての検討を計画している。本年度はin vitro肥満細胞培養法確立のための基礎的検討として、Percollを用いたラット腹腔肥満細胞の分離精製法を確立し、種々の刺激物質によるhistamine遊離を検討した。ついで、ラットの腹腔内で抗原抗体反応を惹起することによって、腹腔内肥満細胞増多がひき起こされることを確認した。ラット腹腔肥満細胞は60%Percollを用いる比重遠心により比較的容易に95%以上に純化された。純化した肥満細胞はcalcium ionophore A23187、compound 48/80およびsubstance Pによって、純化しない腹腔細胞を用いた場合と同等のhistamineを遊離したが、in vivoで感作し、純化した腹腔細胞を抗原、抗IgE抗体およびconcanavalinAで刺激した場合にはhistamine遊離は著しく減弱した。したがって、IgE抗体依存性の肥満細胞活性化は共存する他の細胞によって調節されているものと考えられる。あらかじめ抗体注射したラットにIgE抗体を腹腔内注射して感作し、2日後に抗原を腹腔内注射してin vivo histamine遊離を惹起した。腹腔内に検出される肥満細胞数は反応惹起後一過性に減少したが、3週間後には著明に増加した。なお、この肥満細胞の増加が腹腔内に分布していた肥満細胞が分裂増殖したものか、他から前駆細胞が供給されて増加したものかは不明である。これらの検討から、感作腹腔肥満細胞を抗原刺激下にin vitroで培養することにより、肥満細胞の分裂増殖を誘導することが可能であると考えられる。また、腹腔に共存している他の細胞がhistamine遊離にみられるように、肥満細胞の分裂増殖を支持する可能性も考えられる。